(57)【要約】  本発明は、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤とを含む、相乗的組合せ医薬に関する。本発明はさらに、この組合せ医薬の治療、特に増殖性疾患の治療への使用に関する。【選択図】図１
2018517744.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを含む、相乗的組合せ医薬。
【請求項２】
前記有機アルセノキシド化合物が、式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2018517744.tif 000009
［式中、
前記Ａｓ（ＯＨ）２基は、前記フェニル環上の前記Ｎ原子に対してパラ位にあり；
Ｒ１は、水素およびＣ１〜３アルキルから選択され；
Ｒ２およびＲ３は、同じものであっても異なるものであってもよく、水素および任意選択で置換されたＣ１〜３アルキルから独立して選択され；
Ｒ４およびＲ５は、同じものであっても異なるものであってもよく、水素および任意選択で置換されたＣ１〜３アルキルから独立して選択され；
ｍは１であり；
ｎは１であり；
＊はキラル炭素原子を表し；
任意選択の置換基はそれぞれ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシルまたはヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択される］；
その塩、鏡像異性体およびラセミ体である、請求項１に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項３】
Ｒ１が、水素、メチルおよびエチルから選択される、請求項２に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項４】
Ｒ２およびＲ３が、水素、メチル、エチル、ヒドロキシメチルおよびＣＦ３から独立して選択される、請求項２または３に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項５】
Ｒ４およびＲ５が、水素、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルおよびハロ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択される、請求項２〜４のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項６】
前記Ａｓ（ＯＨ）２が、前記フェニル環上の前記Ｎ原子に対してパラ位にあり、Ｒ１が水素またはメチルであり、Ｒ２およびＲ３が、水素、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルおよびハロ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択され、Ｒ４およびＲ５が、水素、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルおよびハロ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択され、ｍが１であり、ｎが１である、請求項２に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項７】
前記有機アルセノキシドが、以下の構造式：
【化２】
2018517744.tif 000010
またはその塩、鏡像異性体もしくはラセミ体を有する、請求項２〜６のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項８】
＊で表される前記キラル炭素における立体化学が（Ｓ）である、請求項７に記載の相乗的組合せ医薬およびその塩。
【請求項９】
前記ｍＴＯＲ阻害剤がラパログである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１０】
前記ラパログが、エベロリムス、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスからなる群より選択される、請求項９に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１１】
前記ラパログが、エベロリムスまたはテムシロリムスである、請求項９に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１２】
前記有機アルセノキシド化合物が、４−（Ｎ−（Ｓ−ペニクラミニルアセチル（ｐｅｎｉｃｌｌａｍｉｎｙｌａｃｅｔｙｌ））アミノ）フェニル亜アルシン酸（ＰＥＮＡＯ）またはその薬学的に許容される塩であり、前記ｍＴＯＲ阻害剤がラパログである、請求項１に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１３】
前記有機アルセノキシド化合物が、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩であり、前記ｍＴＯＲ阻害剤が、エベロリムス、テムシロリムスおよびデホロリムスからなる群より選択される、請求項１に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１４】
前記有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと前記ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグが単一剤形中に存在する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１５】
前記有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと前記ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグが別個の剤形中に存在する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１６】
併用指数（ＣＩ）が１未満である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１７】
ＣＩが０．８未満である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬。
【請求項１８】
有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを含む、医薬組成物。
【請求項１９】
前記有機アルセノキシド化合物が、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩であり、前記ｍＴＯＲ阻害剤が、エベロリムス、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスからなる群より選択されるラパログである、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
脊椎動物の細胞増殖性疾患を治療する方法であって、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬または請求項１８もしくは１９に記載の医薬組成物を前記脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法。
【請求項２１】
前記増殖性疾患が固形腫瘍である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
脊椎動物での血管新生を阻害する方法であって、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬の化合物または請求項１８もしくは１９に記載の医薬組成物を前記脊椎動物に有効量投与することを含む、方法。
【請求項２３】
脊椎動物の増殖細胞に選択的にミトコンドリア膜透過性遷移（ＭＰＴ）を誘導する方法であって、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬の化合物または請求項１８もしくは１９に記載の医薬組成物を前記脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法。
【請求項２４】
増殖哺乳動物細胞にアポトーシスを誘導する方法であって、アポトーシスを誘導する量の請求項１〜１７のいずれか１項に記載の相乗的組合せ医薬の化合物または請求項１８もしくは１９に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項２５】
脊椎動物の細胞増殖性疾患を治療する方法であって、有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグおよびｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグを前記脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法。
【請求項２６】
前記有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと前記ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグを同時に、別個に、または逐次的に投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと前記ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグを同時に投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
最初に前記有機アルセノキシド化合物、またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグを投与し、次いで前記ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグを投与する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
細胞増殖性疾患を治療する薬物の製造への有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグおよびｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用。
【請求項３０】
前記有機アルセノキシド化合物が、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の方法または請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記ｍＴＯＲ阻害剤が、ラパログまたはその薬学的に許容される塩である、請求項２０〜２８もしくは３０のいずれか１項に記載の方法または請求項２９に記載の使用。
【請求項３２】
前記ラパログが、エベロリムス、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスからなる群より選択される、請求項３１に記載の方法または使用。
【請求項３３】
前記ラパログがエベロリムスまたはテムシロリムスである、請求項３２に記載の方法または使用。
【請求項３４】
前記増殖性疾患が固形腫瘍である、請求項２５〜２８もしくは３０〜３３のいずれか１項に記載の方法または請求項２９に記載の使用。
【請求項３５】
前記固形腫瘍が、肺癌；乳癌；結腸直腸癌；肛門癌；膵臓癌；前立腺癌；卵巣癌；肝臓および胆管癌；食道癌；非ホジキンリンパ腫；膀胱癌；子宮癌；神経膠腫、びまん性内在性橋膠腫、膠芽腫、髄芽腫をはじめとする脳の腫瘍；腎臓癌；頭頸部癌；胃癌；精巣癌；胚細胞腫瘍；神経内分泌腫瘍；子宮頸癌；口腔癌、消化管、乳腺をはじめとする器官のカルチノイド；印環細胞癌；肉腫、線維肉腫、血管腫、血管腫症、血管周囲細胞腫、偽血管腫様間質過形成、筋線維芽細胞腫、線維腫症、炎症性筋線維芽細胞腫、脂肪腫、血管脂肪腫、顆粒細胞腫、神経線維腫、シュワン細胞腫、血管肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、平滑筋腫または平滑筋肉腫を含めた間葉腫瘍からなる群より選択される、請求項３５に記載の方法または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤とを含む相乗的組合せ医薬に関する。本発明はさらに、この組合せ医薬の治療、特に増殖性疾患の治療への使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、疾患治療のための治療剤としてヒ素化合物が用いられてきた。しかし、ヒ素化合物には固有の毒性があるほか、その治療指数は一般に好ましくないため、医薬品として使用することはほぼ不可能であった。国際公開第０１／２１６２８号には有機アルセノキシド化合物が開示されている。このような化合物には増殖性疾患の治療に有用な抗増殖性特性があることが記載されている。国際公開第０４／０４２０７９号には、特に内皮細胞におけるミトコンドリア膜透過性伝達（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）（ＭＰＴ）の誘導への有機アルセノキシド化合物の使用ならびにアポトーシスおよび壊死の誘導への同化合物の使用が開示されている。
【０００３】
有機アルセノキシド化合物はさらに、国際公開第２００８／０５２２７９号にも開示されている。特に、国際公開第２００８／０５２２７９号には化合物４−（Ｎ−（Ｓ−ペニクラミニルアセチル（ｐｅｎｉｃｌｌａｍｉｎｙｌａｃｅｔｙｌ））アミノ）フェニル亜アルシン酸（ＰＥＮＡＯ）が開示されている。ＰＥＮＡＯはミトコンドリア代謝阻害剤の１つであり、オーストラリアの３か所の病院で、標準治療に抵抗性を示す固形腫瘍を有する患者を対象とする第１相臨床試験の最終段階にある。ＰＥＮＡＯはシステインを模倣する三価のヒ素化合物であり、有機イオン輸送体を介して細胞内に侵入してミトコンドリア基質に蓄積し、そこではヒ素化合物部分がアデニンヌクレオチド転移酵素（ＡＮＴ）の基質側でＣｙｓ１６０とＣｙｓ２５７とを架橋し、これにより輸送体が不活性化される（Ｄｉｌｄａら、２００９；Ｐａｒｋら、２０１２）。この不活性化により、酸化的リン酸化の一部に脱共役が起こり、スーパーオキシドの産生が増大し、増殖が停止し、最終的には細胞のアポトーシスに至る。増殖休止細胞ではＣｙｓ１６０とＣｙｓ２５７がジスルフィド結合しており、このためＰＥＮＡＯに対して反応を示さないように思われることから、細胞が増殖すると、ＰＥＮＡＯはＡＮＴとのみ反応する。
【０００４】
ラパマイシン哺乳動物（機構的）標的（ｍＴＯＲ）は、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２と呼ばれる２つの異なる複合体を形成するセリン／トレオニンキナーゼである。ラパマイシン（シロリムス）およびラパマイシンアナログ（ラパログ）は小型のタンパク質ＦＫＢＰ１２と複合体を形成し、これがｍＴＯＲＣ１のＦＫＢＰ１２−ラパマイシンドメインと不可逆的に結合し、そのキナーゼ活性を阻害する（Ｚａｙｔｓｅｖａら、２０１２）。ラパマイシンおよびラパログはｍＴＯＲの小分子阻害剤であり、現時点で、単独療法または併用療法の一環としてのラパログの様々な種類の癌に対する抗癌効果を評価する臨床試験が数件進行している。ラパログは一般に、癌患者での耐容性に優れている（Ｚａｙｔｓｅｖａら、２０１２）。このほか、ｍＴＯＲのＡＴＰ競合阻害剤の開発が進められている（Ｓｃｈｅｎｏｎｅら、２０１１）。この阻害剤は、キナーゼの活性部位との結合にＡＴＰと競合するものである。
【０００５】
癌（固形腫瘍を含む）およびそれに関連する病態などの増殖性疾患を治療するための治療法の改善が必要とされている。
【０００６】
驚くべきことに、ＰＥＮＡＯなどの有機アルセノキシド化合物をｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせることにより、増殖性疾患の治療における有機アルセノキシド化合物の効果が大幅に増大することがわかった。有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤のラパマイシンとの組合せが相乗的に作用して腫瘍細胞死を媒介することがわかった。
【発明の概要】
【０００７】
第一の態様では、本発明は、有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを含む、相乗的組合せ医薬に関する。一実施形態では、有機アルセノキシド化合物はＰＥＮＡＯである。一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスからなる群より選択されるラパログである。
【０００８】
第二の態様では、本発明は、有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを含む、医薬組成物に関する。
【０００９】
第三の態様では、本発明は、脊椎動物の細胞増殖性疾患を治療する方法であって、本発明の第一の態様の相乗的組合せ医薬または本発明の第二の態様の医薬組成物を脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。
【００１０】
第四の態様では、本発明は、脊椎動物での血管新生を阻害する方法であって、本発明の第一の態様の相乗的組合せ医薬または本発明の第二の態様の医薬組成物を脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。
【００１１】
第五の態様では、本発明は、脊椎動物の増殖細胞に選択的にミトコンドリア膜透過性遷移（ＭＰＴ）を誘導する方法であって、本発明の第一の態様の相乗的組合せ医薬または本発明の第二の態様の医薬組成物を脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。
【００１２】
第六の態様では、本発明は、増殖哺乳動物細胞にアポトーシスを誘導する方法であって、本発明の第一の態様の相乗的組合せ医薬または本発明の第二の態様の医薬組成物を脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。
【００１３】
第七の態様では、本発明は、脊椎動物の細胞増殖性疾患を治療する方法であって、有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグおよびｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグを脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。一実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤を同時に投与する。別の実施形態では、最初に有機アルセノキシド化合物を投与し、次いでｍＴＯＲ阻害剤を投与する。
【００１４】
さらに別の態様では、本発明は、細胞増殖性疾患を治療する薬物の製造への有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグおよびｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用に関する。
【００１５】
本発明の諸態様の一実施形態では、有機アルセノキシド化合物はＰＥＮＡＯである。本発明の諸態様の一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスからなる群より選択されるラパログである。本発明の諸態様の一実施形態では、細胞増殖性疾患は固形腫瘍である。
【００１６】
定義
以下に記載するのは、本発明の説明を理解するのに役立つと思われるいくつかの定義である。これらは一般的な定義を目的とするものであって、本発明の範囲が決してこれらの用語にのみ限定されるべきではないが、のちの説明の理解を深めるために記載する。
【００１７】
文脈上他の意味に解すべき場合または他の意味で明記されている場合を除き、本明細書に単数の整数、段階または要素として記載される本発明の整数、段階または要素は、記載される整数、段階または要素の単数形および複数形をともに包含することは明らかである。
【００１８】
本明細書全体を通じて、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という単語または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化形は、記載される段階、要素もしくは整数または段階、要素もしくは整数のグループを包含するが、それ以外の任意の段階、要素もしくは整数も、要素、段階もしくは整数のグループも除外されないことを意味するものと理解される。したがって、本明細書において、「〜を含む」という用語は、「〜を主として包含するが、必ずしもそれのみではない」ことを意味する。
【００１９】
本明細書で使用される「相乗作用」、「相乗的」、「相乗効果」および「相乗的組合せ」という用語は、２つ以上の異なる薬剤を組み合わせたときに、予想される前記薬剤の相加効果よりも程度の大きい抗増殖性活性または細胞毒性などの抗癌活性を示す、その薬剤の混合物を指す。この用語はほかにも、ある量の１つの治療剤を単独で投与しても有意な応答は得られないが、別の治療用化合物と併用投与すると、全体で第二の化合物単独で得られる応答よりも有意に大きい応答が得られるという複合効果を指す。薬物組合せの併用指数（ＣＩ）値はＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアを用いて算出したものである。ＣＩが１未満であることは、薬物組合せに相乗効果があることを示し、ＣＩが１であることは、薬物組合せに相加効果があることを示し、ＣＩが１を超えることは、薬物組合せに拮抗作用があることを示す（Ｃｈｏｕ、２０１０）。
【００２０】
本明細書全体を通じて、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「組合せ」という用語は、１単位投与剤形に固定された組合せまたは併用投与用の固定されていない組合せ（もしくはキット・オブ・パーツ（ｋｉｔ−ｏｆ−ｐａｒｔｓ））のいずれかを指し、この併用投与では、化合物と組合せ相手（例えば、別の薬物または治療剤）を独立して同時に投与するか、時間間隔内に別々に投与し、特にこれらの時間間隔によって組合せ相手が協同的効果、例えば相乗効果を示すことができる。本明細書で使用される「併用投与」という用語は、選択した組合せ相手をそれを必要とする単一の対象に投与することを意味し、その薬剤を必ずしも同じ経路で、または同時に投与するわけではない治療計画を包含するものとする。
【００２１】
当業者には、記載される特定の変形および修正以外の変形および修正を本明細書に記載される本発明に施し得ることが理解されよう。本発明にはこのような変形および修正をいずれも包含されることを理解するべきである。本発明はほかにも、本明細書で個別にまたはまとめて言及または記載される段階、特徴、組成物および化合物ならびに前記段階または特徴の任意のあらゆる組合せまたは任意の２つ以上のものをすべて包含する。
【００２２】
本明細書で使用される「Ｃ１〜３アルキル基」という用語の意味には、１〜３個の炭素原子を有する一価（「アルキル」）および二価（「アルキレン」）の直鎖状または分岐状の飽和脂肪族基が含まれる。したがって、例えば、Ｃ１〜３アルキルという用語は、メチル、エチル、１−プロピルおよびイソプロピルを包含する。
【００２３】
本明細書で使用される「アルコキシ」という用語は直鎖状または分岐状のアルキルオキシ（すなわち、Ｏ−アルキル）基を指し、ここでは、アルキルは上で定義される通りのものである。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシおよびイソプロポキシが挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用される「アミノ」という用語は−ＮＲａＲｂの形態の基を指し、式中、ＲａおよびＲｂは、水素、任意選択で飽和された（Ｃ１〜４）アルキル基、任意選択で置換された（Ｃ２〜４）アルケニル基、任意選択で置換された（Ｃ２〜４）アルキニル基、任意選択で置換された（Ｃ６〜１０）アリール基および任意選択で置換されたアラルキル基、例えばベンジルなどから個別に選択される。アミノ基は、第一級アミノ基、第二級アミノ基または第三級アミノ基であり得る。
【００２５】
本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸ならびにその置換変異体を包含する。したがって、「アミノ酸」という用語には、例えばαアミノ酸、βアミノ酸およびγアミノ酸が包含される。αアミノ酸が特に好ましい。このほか、（Ｌ）型および（Ｄ）型のアミノ酸が「アミノ酸」という用語の範囲内に含まれる。（Ｌ）−アミノ酸が好ましい形態である。例えば、「アミノ酸」という用語の範囲には、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、α−アミノ−β−ヒドロキシ−イソ吉草酸およびペニシラミンが含まれる。アミノ酸残基の骨格は、（Ｃ１〜６）アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、ヒドロキシ（Ｃ１〜６）アルキル、アリール、例えばフェニル、アリール（Ｃ１〜３）アルキル、例えばベンジルおよび（Ｃ３〜６）シクロアルキルから独立して選択される１つまたは複数の残基で置換されていてよい。
【００２６】
本明細書において、「アルセノキシド」という用語は「亜アルシン酸」と同義であり、Ａｓ＝Ｏとも表され得るＡｓ（ＯＨ）２部分を指す。
【００２７】
本明細書で使用される「ハロゲン」という用語または「ハロゲン化物」もしくは「ハロ」などの変形語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。
【００２８】
本明細書で使用される「任意選択で置換された」という用語は、この用語の指す基が、置換されていなくても、あるいはアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルキニル、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、チオアルコキシ、アルケニルオキシ、ハロアルコキシ、ハロアルケニルオキシ、ＮＯ２、ニトロアルキル、ニトロアルケニル、ニトロアルキニル、ニトロヘテロシクリル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルケニルアミン、アルキニルアミノ、アシル、アルケノイル、アルキノイル、アシルアミノ、ジアシルアミノ、アシルオキシ、アルキルスルホニルオキシ、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクロアミノ、ハロヘテロシクロアルキル、アルキルスルフェニル、アルキルカルボニルオキシ、アルキルチオ、アシルチオ、リン含有基（ホスホノおよびホスフィニルなど）、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アラルキル、アルキルへテロアリール、シアノ、シアナート、イソシアナート、ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（アルキル）および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（アルキル）２から独立して選択される１つまたは複数の基で置換されていてもよいことを意味する。一実施形態では、置換基としては、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、−ＣＨ２−（Ｃ１〜３）アルコキシ、Ｃ６〜１０アリール、−ＣＨ２−フェニル、ハロ、ヒドロキシル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキル（例えば、ＣＨ２ＯＨ）およびハロ（Ｃ１〜３）アルキル（例えば、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３）が挙げられる。特に好ましい置換基としては、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキル（例えば、ＣＨ２ＯＨ）およびハロ（Ｃ１〜３）アルキル（例えば、ＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３）が挙げられる。一実施形態では、任意選択の置換基は、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシルまたはヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキル（例えば、ＣＨ２ＯＨ）である。
【００２９】
本明細書において、「投与すること（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」という用語ならびに「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」および「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」を含めた用語の変化形は、任意のしかるべき手段によって本発明の化合物または組成物を生物体または表面に接触させる、塗布する、送達する、または供給することを包含する。
【００３０】
本明細書において、「脊椎動物」という用語は、ヒトのほか、特に限定されないが、ヒツジ類、ウシ類、ウマ類、ブタ類、ネコ類、イヌ類、霊長類（ヒトおよび非ヒト霊長類を含む）、げっ歯類、マウス類、ヤギ類、ウサギ類および鳥類に属するものを含めた社会、経済または研究に重要な任意の個々の種を包含する。脊椎動物はヒトであり得る。
【００３１】
本明細書において、「治療」という用語は、方法を問わず、病的状態または症状を改善する、疾患の確立を予防する、あるいは疾患をはじめとする望ましくない症状の進行を予防する、阻害する、遅らせる、または回復に向かわせる任意のあらゆる用途を指す。
【００３２】
本明細書において、「有効量」という用語の意味には、所望の効果を得るのに十分であるが毒性はない本発明の化合物または組成物の量が含まれる。したがって、「治療有効量」という用語の意味には、所望の効果を得るのに十分であるが毒性はない本発明の化合物または組成物の量が含まれる。正確に必要な量は、治療する種、対象の性別、年齢および全般的状態、治療する病態の重症度、投与する具体的な薬剤、投与様式などの因子に応じて対象ごとに異なるものとなる。したがって、正確な「有効量」を明記することは不可能である。しかし、いずれの場合も、当業者が慣例的な実験のみを用いて、しかるべき「有効量」を決定し得る。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】腫瘍細胞をＰＥＮＡＯとｍＴＯＲＣ１ラパログ阻害剤で処置すると細胞増殖に強力な相乗効果が得られることを示す図である。Ａ．Ｇ８９細胞を９６ウェルプレートに播き、２４時間付着させた後、ＰＥＮＡＯまたはテムシロリムスで７２時間処置した。生体染色色素であるＭＴＴを用いて生存細胞数を測定し、その結果を未処置対照に対する生存細胞の％で表した。データポイントおよび誤差は、二重測定値の平均および範囲である。結果は、２つの実験の代表的なものである。Ｂ．用いた薬物濃度は、７２時間のアッセイでの増殖停止のＩＣ５０値の倍数である（表１を参照されたい）。Ｇ８９細胞の併用指数は０．５２±０．１３であり、強力な相乗効果があることを示している（表２を参照されたい）。データポイントおよび誤差は、二重測定値の平均および範囲である。結果は、２つの実験の代表的なものである。
【図２】腫瘍細胞をＰＥＮＡＯとラパログで処置する順序が増殖に対する相乗効果に影響を及ぼすことを示す図である。播種から２４時間後、ＭｉａＰａｃａ２細胞をＰＥＮＡＯ（Ｐ、０．７５μＭ）およびエベロリムス（Ｅ、２２μＭ）で同時に、または逐次的に（２４時間および４８時間の時点で）処置した。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて５時間ごとに細胞増殖を記録した。データポイントおよび誤差は、三重測定値の平均およびＳＤである。結果は、２つの実験の代表的なものである。
【図３】ＰＥＮＡＯとラパログによる処置が腫瘍細胞のｍＴＯＲを枯渇させオートファジーおよびアポトーシスを誘導することを示す図である。Ａ．ＤＩＰＧ細胞をＰＥＮＡＯ（２μＭ）および／またはテムシロリムス（５μＭ）で４８時間処置し、ライセートのｍＴＯＲ、Ａｋｔおよび４ＥＢＰ１のタンパク質レベルをブロットした。組合せで処置すると、細胞内のｍＴＯＲタンパク質が除去されるが、ＡＫＴおよび４ＥＢＰ１は除去されない。負荷対照はＧＡＰＤＨである。示されるブロットは、複数の別個の実験の代表的なものである。Ｂ．卵巣ＳＫＯＶ３癌細胞をＰＥＮＡＯ（５μＭ）および／またはテムシロリムス（１０μＭ）で２４時間処置し、ライセートのオートファジー（ＬＣ３ＢＩ／ＩＩ）およびアポトーシス（ｃＰＡＲＰ−１）をブロットした。負荷対照はβアクチンである。示されるブロットは、２つの別個の実験の代表的なものである。Ｃ．ＳＫＯＶ−３細胞を未処置（ｉ）とするか、ＰＥＮＡＯ（５μＭ、ｉｉ）、テムシロリムス（１０μＭ、ｉｉｉ）または組合せ（ｉｖ）で２４時間処置した。酸性小胞（赤色蛍光）の蓄積がオートファジーを示す。画像は、２つの別個の実験の代表的な視野である。倍率は４００倍である。
【図４】ＰＥＮＡＯとラパログで処置すると腫瘍成長が相乗的に阻害されることを示す図である。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの近位正中に皮下ヒト膵臓ＭｉａＰａｃａ２腫瘍を確立した。約１００ｍｍ３の腫瘍を担持するマウスを無作為化により４つのグループ（１グループ当たりｎ＝８）に割り付け、側腹部に皮下（ＳＣ）微小浸透圧ポンプを埋植し、溶媒または０．２５ｍｇ／（ｋｇ・日）のＰＥＮＡＯを送達した。ポンプ埋植から４日後、マウスに５ｍｇ／（ｋｇ・日）のエベロリムスを図のように週５日経口投与（ＰＯ）した。腫瘍体積は、所与の時点の腫瘍体積を開始時の腫瘍体積で割った相対腫瘍体積で表されている。データポイントおよび誤差は、腫瘍体積の平均およびＳＥである。反復測定二元配置分散分析を用いて腫瘍成長曲線を比較した。＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１。
【図５】ＰＥＮＡＯとラパログで処置すると腫瘍壊死が起こることを示す図である。Ａ．ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの近位正中に皮下ヒト膵臓ＭｉａＰａｃａ２腫瘍を確立した。５０日後、大型の約６００ｍｍ３の腫瘍を担持するマウス５個体の側腹部に皮下（ＳＣ）微小浸透圧ポンプを埋植し、３ｍｇ／（ｋｇ・日）のＰＥＮＡＯを送達した。第５４日、マウスに７．５ｍｇ／（ｋｇ・日）のエベロリムスを７日間経口投与（ＰＯ）した。データポイントおよび誤差は、腫瘍体積の平均およびＳＥである。Ｂ．第６１日、腫瘍を摘出し固定した後、壊死を解析した。各グループの２つの代表的な腫瘍切片が示されている。Ｇｅｎｉｅ  Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＬＴＤパターン認識ソフトウェアを用いて、壊死領域（青）を定量化し生存腫瘍領域（赤）と比較した。Ｃ．腫瘍壊死の定量化を対照とＰＥＮＡＯ＋エベロリムスの組合せで処置した腫瘍とで比較したもの。バーおよび誤差は、対照腫瘍（ｎ＝８）および処置腫瘍（ｎ＝５）当たり２つの切片を解析した結果の平均およびＳＤである。＊＊：ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
（詳細な説明）
本発明は、ＰＥＮＡＯを含めた有機アルセノキシド化合物とラパマイシン哺乳類（機構的）標的（ｍＴＯＲ）阻害剤との相乗的組合せ医薬に関する。
【００３５】
驚くべきことに、ｍＴＯＲＣ１のラパログ阻害剤とＰＥＮＡＯが効率的に組み合わさってマウスの腫瘍細胞死を誘発することがわかった。この組合せは腫瘍細胞内のｍＴＯＲタンパク質を効率的に除去する。重要なのは、薬物の最大耐容量付近での併用療法がマウスで優れた耐容性を示し、中毒の徴候も症状も全く認められないということである。
【００３６】
有機アルセノキシド化合物
本発明の相乗的組合せ医薬の一実施形態では、有機アルセノキシド化合物は、リンカー基を介してフェニルアルセノキシド基と連結した任意選択で置換されたアミノ酸部分を含む。
【００３７】
本発明による有機アルセノキシド化合物は、置換されたアミノ酸部分または置換されていないアミノ酸部分を有する。アミノ酸部分の例としては、システイニル、置換されたシステイニル、例えばペニシルアミニル（β，β−ジメチルシステイニルまたは３−メルカプトバリニルとしても知られる）、任意選択で置換されたアラニニル、任意選択で置換されたメルカプトアラニニル、任意選択で置換されたバリニル、任意選択で置換された４−メルカプトバリニル、任意選択で置換されたロイシニル、任意選択で置換された３−、４−もしくは５−メルカプトロイシニル、任意選択で置換されたイソロイシニルまたは任意選択で置換された３−、４−もしくは５−イソロイシニルが挙げられる。本発明の好ましい実施形態では、アミノ酸部分はβ，β−ジメチルシステイニル（「ペニシルアミニル」）である。本発明の別の実施形態では、アミノ酸部分は（Ｓ）−ペニシルアミニルである。本発明の別の実施形態では、アミノ酸部分はシステイニルである。アミノ酸部分は、（Ｌ）、（Ｄ）、（Ｒ）または（Ｓ）立体配置を有し得る。任意選択の置換基としては、Ｃ１〜３アルキル、シクロプロピル、Ｃ１〜３アルコキシ、ＣＨ２−（Ｃ１〜３）アルコキシ、Ｃ６〜１０アリール、−ＣＨ２−フェニル、ハロ、ヒドロキシル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルおよびハロ（Ｃ１〜３）アルキル、例えばＣＦ３、ＣＨ２ＣＦ３が挙げられる。好ましい実施形態では、任意選択の置換基は、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、メチル、エチル、プロピル、シクロプロピル、ＣＨ２ＯＨおよびＣＦ３から独立して選択される。
【００３８】
本発明による有機アルセノキシド化合物のリンカー基は、置換されたアセトアミド基または置換されていないアセトアミド基である。一実施形態では、リンカー基は置換されていないアセトアミド基である。
【００３９】
本発明の相乗的組合せ医薬の一実施形態では、有機アルセノキシド化合物は式（Ｉ）のもの：
【化１】
2018517744.tif 000003
［式中、
Ａｓ（ＯＨ）２基は、フェニル環上のＮ原子に対してパラ位にあり；
Ｒ１は、水素およびＣ１〜３アルキルから選択され；
Ｒ２およびＲ３は、同じものであっても異なるものであってもよく、水素および任意選択で置換されたＣ１〜３アルキルから独立して選択され；
Ｒ４およびＲ５は、同じものであっても異なるものであってもよく、水素および任意選択で置換されたＣ１〜３アルキルから独立して選択され；
ｍは１であり；
ｎは１であり；
＊はキラル炭素原子を表し；
任意選択の置換基はそれぞれ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシルまたはヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択される］；
その塩、鏡像異性体およびラセミ体である。
【００４０】
式（Ｉ）の＊によって表されるキラル原子における立体化学は、（Ｒ）または（Ｓ）であり得る。本発明には、鏡像異性的に純粋な形態の式（Ｉ）の化合物、任意の比の鏡像異性体の混合物のほかにもラセミ体が含まれる。本発明の一実施形態では、式（Ｉ）の＊によって表されるキラル原子における立体化学は（Ｒ）である。本発明の別の実施形態では、式（Ｉ）の＊によって表されるキラル原子における立体化学は（Ｓ）である。
【００４１】
一般式（Ｉ）の化合物の好ましい実施形態を以下に記載する。本明細書に開示される実施形態（１つまたは複数）のいずれか１つまたは複数のものを、好ましい実施形態（１つまたは複数）を含めた任意の他の実施形態（１つまたは複数）と組み合わせ得ることを理解するべきである。
【００４２】
一実施形態では、Ｒ１は水素およびＣ１〜３アルキルから選択される。Ｒ１は、水素、メチルまたはエチルであり得る。一実施形態では、Ｒ１は水素である。
【００４３】
一実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、同じものであっても異なるものであってもよい。Ｒ２およびＲ３は、水素および任意選択で置換されたＣ１〜３アルキルから独立して選択され得る。一実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素、メチル、エチル、ヒドロキシメチルおよびＣＦ３から独立して選択される。さらなる実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルおよびハロ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択される。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は、水素、メチルおよびエチルから独立して選択され得る。別の実施形態では、Ｒ２はメチルであり、Ｒ３は水素である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３はともに水素である。
【００４４】
一実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、同じものであっても異なるものであってもよく、水素および任意選択で置換されたＣ１〜３アルキルから独立して選択される。一実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、水素、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルおよびハロ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択される。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５は、水素、メチル、エチルおよびＣＨ２ＯＨから独立して選択され得る。別の実施形態では、Ｒ４はメチルまたはエチルであり、Ｒ５は水素またはメチルである。別の実施形態では、Ｒ４はメチルであり、Ｒ５は水素である。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５はともに水素である。別の実施形態では、Ｒ４およびＲ５はともにメチルである。
【００４５】
一実施形態では、任意選択の置換基は、独立してＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルコキシ、ハロ、ヒドロキシルまたはヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルである。一実施形態では、任意選択の置換基は、ヒドロキシル、メトキシ、ハロ、メチル、エチル、プロピル、シクロプロピルおよびＣＨ２ＯＨから独立して選択される。一実施形態では、任意選択の置換基は存在しない。
【００４６】
式（Ｉ）の有機アルセノキシド化合物の一実施形態では、Ａｓ（ＯＨ）２基は、フェニル環上のＮ原子に対してパラ位にあり；Ｒ１は水素またはメチルであり；Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルおよびハロ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択され；Ｒ４およびＲ５は、水素、Ｃ１〜３アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１〜３）アルキルおよびハロ（Ｃ１〜３）アルキルから独立して選択され；ｍは１であり；ｎは１である。
【００４７】
式（Ｉ）の有機アルセノキシド化合物の別の実施形態では、Ａｓ（ＯＨ）２基は、フェニル環上のＮ原子に対してパラ位にあり；Ｒ１は水素であり；Ｒ２は水素またはメチルであり；Ｒ３は水素であり；Ｒ４は水素またはメチルであり；Ｒ５は水素またはメチルであり；ｍは１であり；ｎは１である。
【００４８】
一実施形態では、有機アルセノキシド化合物は以下の構造式
【化２】
2018517744.tif 000004
またはその塩、鏡像異性体もしくはラセミ体を有する。この化合物は、本明細書では「ペニシラミン−アルセノキシド」または「ＰＥＮＡＯ」と称する。一実施形態では、＊で表されるキラル炭素における立体化学は（Ｓ）である。
【００４９】
本発明の相乗的組合せ医薬の一実施形態では、式（Ｉ）の有機アルセノキシド化合物は（Ｓ）−ペニシラミン−アルセノキシドである。別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は（Ｒ）−ペニシラミン−アルセノキシドである。別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、ペニシラミン−アルセノキシドの（Ｒ）鏡像異性体と（Ｓ）鏡像異性体の混合物を含む。別の実施形態では、ペニシラミン−アルセノキシドの（Ｒ）鏡像異性体と（Ｓ）鏡像異性体の混合物は、ラセミ混合物である。
【００５０】
ｍＴＯＲ阻害剤
本発明のラパマイシン哺乳類（機構的）標的（ｍＴＯＲ）阻害剤には、ラパマイシン（シロリムス）およびラパマイシンアナログ（ラパログ）が含まれる。ラパログの非限定的な例としては、エベロリムス、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスが挙げられる。ｍＴＯＲ阻害剤としてはほかにも、非ラパマイシン阻害剤、例えばＡＸＤ８０５５、選択的ＡＴＰ競合ｍＴＯＲキナーゼ阻害剤のほか、ＰＩ３ＫとｍＴＯＲの二重阻害剤であるＢＥＺ２３５などが挙げられる。本発明の相乗的組合せ医薬の好ましい実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤はラパログである。
【００５１】
本発明の相乗的組合せ医薬の一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリミウス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｉｕｓ）、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスからなる群より選択される。本発明の相乗的組合せ医薬の別の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリミウス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｉｕｓ）、テムシロリムスおよびデホロリムスからなる群より選択される。本発明の相乗的組合せ医薬のさらなる実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤はエベロリムスまたはテムシロリムスである。本発明の相乗的組合せ医薬の別の実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤はエベロリムスである。本発明の相乗的組合せ医薬のさらなる実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤はテムシロリムスである。
【００５２】
相乗的組合せ医薬
一態様では、本発明は、有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを含む、相乗的組合せ医薬に関する。このような組合せは、同時投与、個別投与または連続投与するものであり得る。このような組合せは、固形腫瘍を含めた増殖性疾患の治療に有用であり得る。
【００５３】
本発明の相乗的組合せ医薬の一実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤は単一剤形中に存在する。本発明の相乗的組合せ医薬の別の実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤は別個の剤形中に存在する。
【００５４】
一実施形態では、相乗的組合せ医薬は、式（Ｉ）の有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを含む。
【００５５】
別の実施形態では、相乗的組合せ医薬は、有機アルセノキシド化合物ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩と、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを含む。本発明の相乗的組合せ医薬のさらなる実施形態では、有機アルセノキシド化合物は４−（Ｎ−（Ｓ−ペニクラミニルアセチル（ｐｅｎｉｃｌｌａｍｉｎｙｌａｃｅｔｙｌ））アミノ）フェニル亜アルシン酸（ＰＥＮＡＯ）またはその薬学的に許容される塩であり、ｍＴＯＲ阻害剤はラパログである。
【００５６】
さらなる実施形態では、相乗的組合せ医薬は、有機アルセノキシド化合物ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩と、ラパログｍＴＯＲ阻害剤とを含む。別の実施形態では、相乗的組合せ医薬は、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩と、エベロリムス、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスからなる群より選択されるラパログとを含む。さらなる実施形態では、相乗的組合せ医薬は、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩と、エベロリムスおよびテムシロリムスからなる群より選択されるラパログとを含む。別の実施形態では、相乗的組合せ医薬は、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩と、エベロリムスとを含む。さらなる実施形態では、相乗的組合せ医薬は、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩と、テムシロリムスとを含む。
【００５７】
本明細書に提供される併用療法は、現在利用可能な癌治療法が奏効しない個体に対するそのような治療法の効果の改善および／または副作用の軽減に有用であり得る。
【００５８】
一実施形態では、ＰＥＮＡＯなどの有機アルセノキシド化合物をラパログなどのｍＴＯＲ阻害剤と組み合わせることによって、増殖性疾患の治療における有機アルセノキシド化合物の効果が大幅に増大する。一実施形態では、有機アルセノキシド化合物の治療効果は、約１０％〜約２０００％増大し得る。一実施形態では、治療効果は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、３００％、３５０％、４００％、４５０％、５００％、５５０％、６００％、６５０％、７００％、７５０％、８００％、８５０％、９００％、９５０％、１０００％、１０５０％、１１００％、１１５０％、１２００％、１２５０％、１３００％、１３５０％、１４００％、１４５０％、１５００％、１５５０％、１６００％、１６５０％、１７００％、１７５０％、１８００％、１８５０％、１９００％、１９５０％または約２０００％増大し得る。
【００５９】
本発明の組合せ医薬の一実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤は、併用指数（ＣＩ）が１未満である。ＣＩが１未満であることは、薬物組合せに相乗効果があることを示す。本発明の組合せ医薬の別の実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤は、ＣＩが０．８未満である。本発明の組合せ医薬のさらなる実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤は、ＣＩが０．７未満である。本発明の組合せ医薬の別の実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤は、ＣＩが０．５〜０．７である。本発明の組合せ医薬のさらなる実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤は、ＣＩが約０．５〜約０．８である。
【００６０】
本発明のさらなる態様は、有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを含む、医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物の一実施形態では、有機アルセノキシド化合物は、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩であり、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス、テムシロリムス、デホロリムスおよびゾタロリムスからなる群より選択されるラパログである。
【００６１】
治療応用（１つまたは複数）
本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物、例えばＰＥＮＡＯなどならびにその薬学的に許容される塩および水和物は、増殖内皮細胞内のミトコンドリアのアデニンヌクレオチドトランスロケーター（ＡＮＴ）のシステイン残基と結合することにより、ミトコンドリア膜透過性遷移（ＭＰＴ）を誘導することが可能である。したがって、本発明による式（Ｉ）の化合物は増殖停止および細胞死を引き起こし得る。式（Ｉ）の化合物は、内皮細胞増殖の選択的阻害剤となり得るという点で有利である。例えば、式（Ｉ）の化合物は、腫瘍細胞と比較して内皮細胞増殖の選択的阻害剤となり得る。したがって、式（Ｉ）の化合物は増殖性疾患の治療に有用であり得る。
【００６２】
したがって、本発明の他の態様では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤の相乗的組合せ医薬は、増殖性疾患の治療に有用であり得る。したがって、本発明の別の実施形態は、脊椎動物の細胞増殖性疾患を治療する方法であって、本発明の相乗的組合せ医薬を脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。細胞は内皮細胞であり得る。脊椎動物はヒトなどの哺乳動物であり得る。
【００６３】
本発明では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤を単一の医薬組成物として、別個の組成物として、または逐次的に投与し得る。
【００６４】
別の実施形態では、本発明は、脊椎動物での血管新生を阻害する方法であって、本発明の相乗的組合せ医薬を脊椎動物に有効量投与することを含む、方法に関する。
【００６５】
本発明のさらなる実施形態は、脊椎動物にＭＰＴを誘導する方法であって、本発明の相乗的組合せ医薬を脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。本明細書に開示される式（Ｉ）の化合物は、ミトコンドリアのアデニンヌクレオチドトランスロケーター（ＡＮＴ）上のシステイン残基と結合することによってＭＰＴを誘導し得る。
【００６６】
本発明の別の実施形態は、増殖哺乳動物細胞にアポトーシスを誘導する方法であって、アポトーシスを誘導する量の本発明の相乗的組合せ医薬を哺乳動物に投与することを含む、方法に関する。
【００６７】
本発明の別の実施形態は、脊椎動物の細胞増殖性疾患を治療する方法であって、有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグとを脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。一実施形態では、有機アルセノキシド化合物とｍＴＯＲ阻害剤を同時投与または共投与する。さらなる実施形態では、最初に有機アルセノキシド化合物を投与し、次いでｍＴＯＲ阻害剤を投与する。本発明の方法の別の実施形態では、ＰＥＮＡＯと、エベロリムス、テムシロリムスおよびデホロリムスからなる群より選択されるラパログとを同時投与または共投与する。一実施形態では、ＰＥＮＡＯと、エベロリムス、テムシロリムスおよびデホロリムスからなる群より選択されるラパログとを共投与したとき、両者が相乗的に作用する。本発明の方法のさらなる実施形態では、最初にＰＥＮＡＯを投与し、次いでエベロリムス、テムシロリムスおよびデホロリムスからなる群より選択されるラパログを投与して、相乗効果を得る。
【００６８】
一実施形態では、本発明は、脊椎動物の細胞増殖性疾患を治療する方法であって、ＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩と、エベロリムス、テムシロリムスおよびデホロリムスからなる群より選択されるラパログとを脊椎動物に治療有効量投与することを含む、方法に関する。
【００６９】
本発明はさらに、細胞増殖性疾患を治療する薬物の製造への有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグおよびｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用に関する。一実施形態では、本発明は、細胞増殖性疾患を治療する薬物の製造へのＰＥＮＡＯまたはその薬学的に許容される塩ならびにエベロリムス、テムシロリムスおよびデホロリムスからなる群より選択されるラパログの使用に関する。
【００７０】
本発明はさらに、有機アルセノキシド化合物またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグと、ｍＴＯＲ阻害剤またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはプロドラッグの組合せ医薬を含む、キットに関する。
【００７１】
一実施形態では、細胞増殖性疾患は固形腫瘍である。一実施形態では、固形腫瘍は、肺癌；乳癌；結腸直腸癌；肛門癌；膵臓癌；前立腺癌；卵巣癌；肝臓および胆管癌；食道癌；非ホジキンリンパ腫；膀胱癌；子宮癌；神経膠腫、びまん性内在性橋膠腫、膠芽腫、髄芽腫をはじめとする脳の腫瘍；腎臓癌；頭頸部癌；胃癌；精巣癌；胚細胞腫瘍；神経内分泌腫瘍；子宮頸癌；口腔癌、消化管、乳腺をはじめとする器官のカルチノイド；印環細胞癌；肉腫、線維肉腫、血管腫、血管腫症、血管周囲細胞腫、偽血管腫様間質過形成、筋線維芽細胞腫、線維腫症、炎症性筋線維芽細胞腫、脂肪腫、血管脂肪腫、顆粒細胞腫、神経線維腫、シュワン細胞腫、血管肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、平滑筋腫または平滑筋肉腫を含めた間葉腫瘍からなる群より選択される。
【００７２】
一実施形態では、固形腫瘍は、膵臓癌、卵巣癌および膠芽腫からなる群より選択される。
【００７３】
第三の活性薬剤を加えるさらなる組合せレジメンによって治療上の利点が得られる。併用療法では、各薬剤を同時に、または任意の順序で逐次的に投与し得る。このため、本発明による治療を放射線療法、化学療法、外科手術をはじめとする諸形態の医学的介入などの従来の治療法とともに適用し得る。追加の化学療法剤の例としては、アドリアマイシン、タキソール、フルオロウリシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒｉｃｉｌ）、メルファラン、シスプラチン、オキサリプラチン、αインターフェロン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、アンジオインヒビン、ＴＮＰ−４７０、多硫酸ペントサン、血小板因子４、アンジオスタチン、ＬＭ−６０９、ＳＵ−１０１、ＣＭ−１０１、Ｔｅｃｈｇａｌａｎ、サリドマイド、ＳＰ−ＰＧなどが挙げられる。その他の化学療法剤としては、アルキル化剤、例えば、メクロエタミン（ｍｅｃｈｌｏｅｔｈａｍｉｎｅ）、メルファン（ｍｅｌｐｈａｎ）、クロラムブシル、シクロホスファミドおよびイホスファミドを含めたナイトロジェンマスタード、カルムスチン、ロムスチン、セムスチンおよびストレプトゾシンを含めたニトロソウレア；ブスルファンを含めたスルホン酸アルキル；ジカルバジンを含めたトリアジン；チオテパおよびヘキサメチルメラミンを含めたエチエニミン（ｅｔｈｙｅｎｉｍｉｎｅ）；メトトレキサートを含めた葉酸アナログ；５‐フルオロウラシル、シトシンアラビノシドを含めたピリミジンアナログ；６−メルカプトプリンおよび６−チオグアニンを含めたプリンアナログ；アクチノマイシンＤを含めた抗癌抗生物質；ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシンＣおよびミトラマイシンを含めたアントラサイクリン；タモキシフェンおよびコルチオステロイド（ｃｏｒｔｉｏｓｔｅｒｏｉｄ）を含めたホルモンおよびホルモンアンタゴニストのほか、シスプラチンおよびブレキナルを含めた種々の薬剤ならびに諸レジメン、例えばＣＯＭＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、メトトレキサートおよびプレドニゾン）、エトポシド、ｍＢＡＣＯＤ（メトトレキサート、ブレオマイシン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびデキサメタゾン）およびＰＲＯＭＡＣＥ／ＭＯＰＰ（プレドニゾン、メトトレキサート（ロイコビン（ｌｅｕｃｏｖｉｎ）レスキューとともに）、ドキソルビシン、シクロホスファミド、タキソール、エトポシド／メクロレタミン、ビンクリスチン、プレドニゾンおよびプロカルバジン）などが挙げられる。
【００７４】
医薬製剤および／または治療用製剤
医学的使用には通常、本発明の化合物の塩は薬学的に許容される塩となるが、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の調製には、それ以外の塩も使用し得る。薬学的に許容される塩は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の中毒、刺激、アレルギー反応などを引き起こさずにヒトおよびこれより下等な動物の組織と接触させて使用するのに適しており、かつ妥当な利益／リスク比に見合う塩を意味する。薬学的に許容される塩は当該技術分野で周知である。
【００７５】
式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩は、当業者に公知の方法によって、例えば、（ｉ）式（Ｉ）の化合物と所望の酸もしくは塩基とを反応させることによって；（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物の適切な前駆物質から酸もしくは塩基に不安定な保護基を除去することによって、または適切な環状前駆物質、例えばラクトンもしくはラクタムに所望の酸もしくは塩基を用いる開環によって；あるいは（ｉｉｉ）しかるべき酸もしくは塩基との反応または適切なイオン交換カラムにより式（Ｉ）の化合物のある塩を別の塩に変換することによって調製し得る。
【００７６】
３種類の反応はいずれも、溶液中で実施するのが通常である。得られた塩は、沈殿させ、ろ過によって収集しても、あるいは溶媒の蒸発によって回収してもよい。得られる塩の電離の程度は、完全に電離しているものから、ほとんど電離していないものまで様々であり得る。
【００７７】
このため、例えば、薬学的に許容される酸、例えば塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、炭酸、酒石酸またはクエン酸などと、本発明の化合物とを混合することによって、本発明による化合物の適切な薬学的に許容される塩を調製し得る。したがって、本発明の化合物の適切な薬学的に許容される塩には酸付加塩が含まれる。
【００７８】
Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅらは、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６：１−１９に薬学的に許容される塩について詳細に記載している。これらの塩は、本発明の化合物の最終的な単離および精製の過程でｉｎ  ｓｉｔｕで調製することも、あるいは遊離塩基官能基と適切な有機酸とを反応させることによって別個に調製することもできる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどのほか、特に限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミン、トリエタノールアミンを含めた非毒性アンモニウム、第四級アンモニウムおよびアミンカチオンなどが挙げられる。
【００７９】
好都合な投与様式としては、注射（皮下、静脈内など）、経口投与、吸入、経皮適用、局所用のクリーム剤、ゲル剤もしくは散剤または経直腸投与が挙げられる。一実施形態では、投与様式は非経口投与である。別の実施形態では、投与様式は経口投与である。投与経路に応じて、化合物の治療活性を不活性化し得る酵素、酸をはじめとする天然の条件の作用から化合物を保護する材料で製剤および／または化合物をコーティングしてもよい。このほか、化合物を非経口投与または腹腔内投与してもよい。本発明の有機アルセノキシドとｍＴＯＲ阻害剤を異なる投与様式で投与してもよい。一実施形態では、有機アルセノキシドを皮下投与し、ｍＴＯＲ阻害剤を経口投与する。
【００８０】
このほか、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびその混合物ならびに油を用いて本発明による化合物の分散液剤を調製してもよい。製剤は、通常の保管条件および使用条件下で、微生物の増殖を防ぐ保存剤を含有してもよい。
【００８１】
注射に適した医薬組成物としては、無菌水溶液剤（水溶性の場合）または分散液剤および無菌注射用液剤または分散液剤の即時調製のための無菌散剤が挙げられる。理想的には、組成物は、製造および保管の条件下で安定であり、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して組成物を安定させる保存剤を含み得る。
【００８２】
本発明の化合物（１つまたは複数）を、例えば不活性希釈剤または吸収可能な食用担体とともに経口投与してもよい。このほか、化合物（１つまたは複数）をはじめとする成分を硬殻ゼラチンカプセルまたは軟殻ゼラチンカプセルに封入しても、あるいは圧縮して錠剤にしても、あるいは個体の食餌に直接組み込んでもよい。経口治療投与には、化合物（１つまたは複数）を賦形剤と組み合わせ、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤などの形態で使用してもよい。適切には、このような組成物および調製物は活性化合物を少なくとも１重量％含有し得る。医薬組成物および調製物中の式（Ｉ）の化合物（１つまたは複数）の割合は、当然のことながら様々なものであり得、例えば、投与単位の重量の約２％〜約９０％、約５％〜約８０％、約１０％〜約７５％、約１５％〜約６５％；約２０％〜約６０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約４５％または約３５％〜約４５％の範囲内にあるのが好都合であり得る。治療上有用な組成物中の化合物の量は、適切な用量となる量である。
【００８３】
「薬学的に許容される担体」という用語は、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含するものとする。薬学的に活性な物質に対してこのような媒体および薬剤を使用するのは、当該技術分野では周知のことである。化合物との適合性がないものでなければ、任意の従来の媒体または薬剤を治療用組成物ならびに治療法および予防法に使用することが企図される。このほか、本発明による組成物に追加の活性化合物を組み込んでもよい。投与を容易にし、用量を一様にするには、投与単位形態の非経口組成物を製剤化するのが特に有利である。本明細書で使用される「投与単位形態」は、治療の対象となる個体に対する単位用量として適した物理的に別個の単位を指し、所定量の化合物（１つまたは複数）を含有する各単位は、必要とされる医薬担体と併せて所望の治療効果が得られるよう算出される。化合物（１つまたは複数）が有効量で簡便かつ効果的に投与されるよう、適切な薬学的に許容される担体とともに、許容される投与単位に製剤化し得る。追加の有効成分を含有する組成物の場合、前記成分の常用量および投与方法を参考にして用量を決定する。
【００８４】
一実施形態では、担体は経口投与可能な担体である。
【００８５】
医薬組成物の別の形態として、経口投与に適し腸溶コーティングされた顆粒剤、錠剤またはカプセル剤として製剤化される剤形がある。
【００８６】
本発明の範囲内に含まれるものとしてほかにも、遅延放出製剤がある。
【００８７】
このほか、本発明による式（Ｉ）の化合物を「プロドラッグ」の形態で投与してもよい。適切なプロドラッグとしては、化合物のエステル、ホスホン酸エステルなどが挙げられる。
【００８８】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物を注射により投与し得る。注射用液剤の場合、担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、その適切な混合物および植物油を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散剤の場合は必要とされる粒子径を維持することによって、また界面活性剤の使用によって維持することができる。様々な抗菌剤および／または抗真菌剤を含ませることによって、微生物の作用を防ぐことができる。適切な薬剤は当業者に周知であり、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ベンジルアルコール、アスコルビン酸、チメロサールなどがこれに含まれる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば糖、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトールなど）、塩化ナトリウムを含ませるのが好ましいものとなり得る。吸収を遅延させる物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含ませることによって、注射用組成物の持続的吸収をもたらすことができる。
【００８９】
無菌注射用液剤は、必要とされる量のアナログを、必要に応じて上記の成分の１つまたは組合せとともにしかるべき溶媒と組み合わせ、次いでろ過滅菌することによって調製することができる。分散液剤は一般に、基礎となる分散媒および上記のもので必要とされる他の成分を含有する無菌媒体にアナログを組み込むことによって調製される。
【００９０】
錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などはほかにも、以下のものを含有し得る：トラガントゴム、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチンなどの結合剤；第二リン酸カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、バレイショデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；およびスクロース、ラクトースもしくはサッカリンなどの甘味剤またはハッカ、ウインターグリーン油もしくはチェリー香味料などの香味剤。投与単位形態がカプセル剤である場合、上記の種類の原料に加えて液体担体を含有し得る。コーティングとして、あるいは別の方法で投与単位の物理的形態を修正するため、様々な他の原料が存在していてよい。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤をセラック、糖またはその両方でコーティングし得る。シロップ剤またはエリキシル剤は、アナログ、甘味剤のスクロース、保存剤のメチルおよびプロピルパラベン、色素およびチェリー香味料またはオレンジ香味料などの香味料を含有し得る。当然のことながら、任意の投与単位形態の調製に使用する原料はいずれも、薬学的に純粋であり、かつ用いる量で実質的に非毒性であるべきである。さらに、アナログを持続放出性の調製物および製剤に組み込んでもよい。
【００９１】
医薬組成物はさらに、酸加水分解を最小限に抑えるため、適切な緩衝剤を含み得る。適切な緩衝剤は当業者に周知であり、特に限定されないが、リン酸塩、クエン酸塩、炭酸塩およびその混合物がこれに含まれる。
【００９２】
本発明による化合物および／または医薬組成物の単回投与または複数回投与を実施し得る。当業者であれば、慣例的な実験によって、本発明の化合物および／または組成物の有効で無毒な投与量レベルならびに化合物および組成物を適用する疾患および／または感染症の治療に適すると考えられる投与パターンを決定することが可能であろう。
【００９３】
当業者にはさらに、治療過程を決定する従来の試験を用いて最適な治療過程、例えば、所定の日数にわたって１日当たりに実施する本発明の化合物または組成物の投与の回数などを確認することが可能であることが明らかであろう。
【００９４】
２４時間当たりの有効用量は一般に、体重１ｋｇ当たり約０．０００１ｍｇ〜約１０００ｍｇ；例えば、体重１ｋｇ当たり約０．００１ｍｇ〜約７５０ｍｇ；体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇ；体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ；体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約２５０ｍｇ；または体重１ｋｇ当たり約１．０ｍｇ〜約２５０ｍｇの範囲内であり得る。より適切には、２４時間当たりの有効用量は、体重１ｋｇ当たり約１．０ｍｇ〜約２００ｍｇ；体重１ｋｇ当たり約１．０ｍｇ〜約１００ｍｇ；体重１ｋｇ当たり約１．０ｍｇ〜約５０ｍｇ；体重１ｋｇ当たり約１．０ｍｇ〜約２５ｍｇ；体重１ｋｇ当たり約５．０ｍｇ〜約５０ｍｇ；体重１ｋｇ当たり約５．０ｍｇ〜約２０ｍｇ；または体重１ｋｇ当たり約５．０ｍｇ〜約１５ｍｇの範囲内であり得る。
【００９５】
あるいは、有効用量は最大約５００ｍｇ／ｍ２であり得る。例えば、有効用量は一般に、約２５〜約５００ｍｇ／ｍ２、約２５〜約３５０ｍｇ／ｍ２、約２５〜約３００ｍｇ／ｍ２、約２５〜約２５０ｍｇ／ｍ２、約５０〜約２５０ｍｇ／ｍ２および約７５〜約１５０ｍｇ／ｍ２の範囲内に収まるものと予想される。
【００９６】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物を１日当たり約１００〜約１０００ｍｇ、例えば、１日当たり約２００ｍｇ〜約７５０ｍｇ、１日当たり約２５０〜約５００ｍｇ、１日当たり約２５０〜約３００ｍｇまたは１日当たり約２７０ｍｇ〜約２８０ｍｇの範囲の量で投与し得る。
【００９７】
本発明による化合物を治療レジメンの一環として他の薬物とともに投与し得る。例えば、特定の疾患または病態を治療する目的には、活性化合物の組合せを投与することが望ましい場合がある。このため、少なくとも一方が本発明による式（Ｉ）の化合物を含有し、少なくとも一方がｍＴＯＲ阻害剤を含有する２つ以上の医薬組成物を、組成物の同時投与または連続投与に適したキットの形態で組合せ得ることが、本発明の範囲内に含まれる。
【００９８】
これより単なる説明を目的として、以下の実施例に関して本発明をさらに詳細に記載する。この実施例は、本発明を説明するのに用いるのが目的であって、本明細書全体にわたる記載の開示の普遍性を限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【００９９】
実施例１−腫瘍細胞をＰＥＮＡＯとｍＴＯＲＣ１ラパログ阻害剤で処置すると細胞増殖に強力な相乗効果が得られる。
別途記載されない限り、試薬および化学薬品はいずれも、Ｓｉｇｍａ社（セントルイス、ミズーリ州）のものであった。ＰＥＮＡＯは、既に記載されている（国際公開第２００８／０５２２７９号）通りに調製した。別途記載されない限り、細胞はＡＴＣＣ（ベセスダ、バージニア州）のものであり、培地、血清、抗生物質およびサプリメントはいずれも、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社（マルグレーブ、ビクトリア州、オーストラリア）製のものである。いずれの培養物にも、２０単位／ｍＬのペニシリンおよび２０単位／ｍＬのストレプトマイシンを入れた。１０％ｖ／ｖウシ胎仔血清および２ｍＭグルタミンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地でＡｓＰＣ１細胞（ヒト膵臓腺癌、転移部位由来、Ｋｒａｓ変異Ｇ１２Ｄ）、ＳＫＯＶ３細胞（ヒト類内膜卵巣癌）およびＵ２５１ＭＧ細胞（ヒト膠芽腫星状細胞腫）細胞を培養した。２ｍＭグルタミンを含有するＤＭＥＭでＰａｎｃ１（ヒト膵臓腺癌、Ｋｒａｓ変異Ｇ１２Ｄ）細胞を培養した。２０％ｖ／ｖウシ胎仔血清および２ｍＭグルタミンを含有するＩＭＤＭでＣａｐａｎ１（ヒト膵臓腺癌、転移部位由来、Ｋｒａｓ変異Ｇ１２Ｖ）細胞を培養した。１０％ｖ／ｖウシ胎仔血清、２．５％ｖ／ｖウマ血清および２ｍＭグルタミンを含有するＤＭＥＭでＭｉａＰａｃａ２細胞（ヒト膵臓腺癌、Ｋｒａｓ変異Ｇ１２Ｃ）を培養した。新たにプレコーティングしたマトリゲル（リン酸緩衝生理食塩水で１：１００に希釈、Ｆａｌｃｏｎ社、Ｃｏｒｎｉｎｇ社）上で２０ｎｇ／ｍＬのＥＧＦおよびＦＧＦを含む無血清培地（ＲＨＢ−Ａ、Ｃｅｌｌａｒｔｉｓ、タカラバイオ株式会社）を用いてＧ８９（原発性膠芽腫の患者に由来する細胞、未メチル化ＭＧＭＴプロモーター）細胞を培養した。コンフルーエントに達した後の継代は、リン酸緩衝生理食塩水（５ｍＬ）で２回洗浄し、次いでアキュターゼ（Ｔ７５フラスコ１個当たり２ｍＬ）で処置した後、トリプシンインヒビター（アキュターゼの半分の体積）で不活化する。Ｋｅｒｒｉｅ  ＭｃＤｏｎａｌｄ准教授からＧ８９細胞を入手した。いずれの細胞系もマイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）菌種による汚染の検査結果は陰性であり、ＣＯ２５％、相対湿度９５％、３７℃に制御された環境で維持した。
【０１００】
ＭｉａＰａｃａ２細胞、ＡｓＰＣ１細胞、Ｐａｎｃ１細胞、Ｃａｐａｎ１細胞、ＳＫＯＶ３細胞およびＵ２５１ＭＧ細胞を４×１０３細胞／ウェルの密度で、Ｇ８９細胞を１×１０４細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播いた。細胞を５％ＣＯ２、９５％空気雰囲気下、３７℃で２４時間付着させた後、化合物で７２時間処置した（詳細については表１および図１を参照されたい）。生体染色色素であるＭＴＴを製造業者の指示通りに用いて生存細胞数を測定した。
【０１０１】
ＭｉａＰａｃａ２細胞をＥ−プレート９６  ＰＥＴに４×１０３細胞／ウェルの密度で播き、ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＲＴＣＡ  ＭＰ機器（Ｒｏｃｈｅ社）を製造業者の指示通りに用いてリアルタイムの増殖をモニターした。細胞を５％ＣＯ２、９５％空気雰囲気下、３７℃で２４時間付着させた後、ＰＥＮＡＯおよびエベロリムスで同時に、または逐次的に最大１００時間処置した（詳細については図２を参照されたい）。
【０１０２】
結果：ＰＥＮＡＯとｍＴＯＲＣ１のラパログ阻害剤（テムシロリムス、エベロリムスおよびデホロリムス）は相乗的に作用して、培養した様々なヒト膵臓腫瘍細胞、卵巣腫瘍細胞および脳腫瘍細胞の増殖を阻害する（表１および２、図１）。０．５２（Ｇ８９）〜０．８９（ＡｓＰＣ１）の範囲の併用指数が観察された。１未満の指数は、相乗効果があることを示す。ＡＴＰ競合ｍＴＯＲ阻害剤であるＡＺＤ８０５５およびＢＥＺ２３５には、ＰＥＮＡＯ、ラパログ阻害剤のみとの相乗効果は一切みられなかった。
【０１０３】
ＰＥＮＡＯとｍＴＯＲＣ１のラパログ阻害剤は相乗的に作用して、培養したヒト腫瘍細胞の増殖を阻止し、同細胞のオートファジーおよび死を誘導する。ＡＴＰ競合ｍＴＯＲ阻害剤には、ＰＥＮＡＯ、ラパログ阻害剤のみとの相乗効果は一切みられなかった。
【０１０４】
表１．ＰＥＮＡＯとｍＴＯＲＣ１阻害剤は膵臓腫瘍、卵巣腫瘍および脳腫瘍から樹立された細胞系の増殖停止を誘導する。腫瘍細胞系を９６ウェルプレートに播き、２４時間付着させた後、化合物で７２時間処置した。生体染色色素であるＭＴＴを用いて生存細胞数を測定した。増殖停止のＩＣ５０値は、三重反復で実施した少なくとも２つの実験の平均値±ＳＤである。脳Ｇ８９細胞の細胞増殖の結果の例については図１Ａを参照されたい。ｎ．ｄ．は、未測定であることを表す。
【表１】
2018517744.tif 000005
【表２】
2018517744.tif 000006
【０１０５】
表２．ＰＥＮＡＯとｍＴＯＲＣ１ラパログ阻害剤は相乗作用して、膵臓腫瘍、卵巣腫瘍および脳腫瘍から樹立された細胞系の増殖を阻止する。腫瘍細胞系を９６ウェルプレートに播き、２４時間付着させた後、単一薬剤または比を固定した組合せの化合物で７２時間処置した。生体染色色素であるＭＴＴを用いて生存細胞数を測定した。ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアを用いて、有効量の５０％（ＥＤ５０）における併用指数（ＣＩ）の値を求めた。ＣＩ値は少なくとも２つの実験の平均値±ＳＤである。脳Ｇ８９細胞の細胞増殖に対する相乗作用の結果の例については図１Ｂを参照されたい。ｎ．ｄ．は、未測定であることを表す。
【表３】
2018517744.tif 000007
【表４】
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【０１０６】
実施例２−腫瘍細胞をＰＥＮＡＯとラパログで処置する順序が増殖に対する相乗効果に影響を及ぼす
最初にＰＥＮＡＯを添加し、次いでラパログ（エベロリムス）を添加すると、同化合物を同時に加えたときと同等のレベルでヒト膵臓ＭｉａＰａｃａ２細胞の増殖が相乗的に阻害される（図２）。これに対し、ＰＥＮＡＯの前にエベロリムスを添加した場合、相乗作用はみられない。
【０１０７】
腫瘍細胞を処置する順序が増殖に対する効果に影響を及ぼし、ＰＥＮＡＯ、次いでラパログを添加すると、同化合物を同時に投与したときと同等の相乗作用が得られる。最初にラパログを投与し、次いでＰＥＮＡＯを投与した場合、２つの化合物の相乗作用はみられない。
【０１０８】
実施例３−ＰＥＮＡＯとラパログによる処置が腫瘍細胞のｍＴＯＲを枯渇させオートファジーおよびアポトーシスを誘導する
ＳＫＯＶ３細胞溶解物由来のタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ＬＣ３Ｂ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社）、ｃＰＡＲＰ−１（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社）、ｍＴＯＲ、Ａｋｔ、３ＥＢＰ１、βアクチンまたはＧＡＰＤＨ（Ａｂｃａｍ社）を認識する抗体でイムノブロットした。ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ  ＬＡＳ  ４０００システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）を用いて画像を取得した。化合物曝露から２４時間後、Ａｃｒｉｄｉｎｅ  Ｏｒａｎｇｅ（０．２５μｇ／ｍＬ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）で１５分間染色することにより、オートリソソームの検出を実施した。Ｚｅｎ２０１２  Ｃａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ−ＡｘｉｏＶｅｒｔ．Ａ．１蛍光顕微鏡を用いて、緑（ＢＰ５３０〜５８５ｎｍ）および赤（ＢＰ４５０〜４９０ｎｍ）の蛍光チャンネルで画像を取得した（Ｋｌｉｏｎｓｋｙら、２０１２；Ｌｅｎａら、２００９）。
【０１０９】
結果：ＰＥＮＡＯとラパログの組合せで処置することにより、ヒトびまん性内在性橋膠腫（ＤＩＰＧ）細胞のｍＴＯＲタンパク質が除去されるが、経路内の他のタンパク質（ＡＫＴおよび４ＥＢＰ１）は除去されない（図３Ａ）。ヒト卵巣腫瘍細胞を組合せで処置すると、細胞のオートファジーおよびアポトーシスが生じる（図３Ｂおよび図３Ｃ）。
【０１１０】
実施例４−マウスをＰＥＮＡＯとラパログで処置すると腫瘍成長の阻害および腫瘍の壊死が相乗的に起こる
６〜８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの近位正中の皮下に膵臓癌腫ＭｉａＰａｃａ２細胞を４×１０６個注射した。約１００ｍｍ３の腫瘍を担持するマウスを無作為化により４つのグループ（１グループあたりｎ＝８）に割り付け、側腹部に皮下Ａｌｚｅｔ微小浸透圧モデル１００４ポンプを埋植し、溶媒または０．２５ｍｇ／（ｋｇ・日）のＰＥＮＡＯを送達した。ポンプ埋植から４日後、マウスに５ｍｇ／（ｋｇ・日）のエベロリムスを週５日経口投与した。
【０１１１】
別の場合には、大型の約６００ｍｍ３のＭｉａＰａｃａ２腫瘍を担持するマウス５個体の側腹部に皮下微小浸透圧モデル２００２ポンプを埋植し、３ｍｇ／（ｋｇ・日）のＰＥＮＡＯを送達した。４日後、マウスに７．５ｍｇ／（ｋｇ・日）のｍＴＯＲＣ１阻害剤エベロリムスを７日間経口投与した。長さ×高さ×幅×０．５２３の関係を用いて腫瘍体積を算出し、所与の時間における腫瘍体積を開始時の腫瘍体積で割った相対腫瘍体積として表した。この値の平均値を用いて、薬物効果の尺度となる対照腫瘍と処置腫瘍との間の比を算出した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を用いた反復測定二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて腫瘍成長曲線を比較した（Ｔｓｅｎｇら、２０１０）。
【０１１２】
腫瘍壊死の評価には、対照腫瘍および処置腫瘍をホルマリンで固定し、パラフィンで包埋し、切片を切り、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。生存腫瘍組織および壊死の自動定量的評価にＧｅｎｉｅ  Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＬＴＤパターン認識ソフトウェア（Ａｐｅｒｉｏ  Ｓｃａｎｓｃｏｐｅ、Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ビスタ、カリフォルニア州、米国）を用いて腫瘍壊死の割合を測定した（Ｂｅｌｏｕｅｃｈｅ−Ｂａｂａｒｉら、２０１３）。腫瘍壊死の割合の変化をマン・ホイトニーの検定で評価した。
【０１１３】
いずれの分析もＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ社、サンディエゴ、カリフォルニア州）を用いて実施した。統計的有意性の検定はいずれも両側とし、ｐ値０．０５未満を統計的に有意であるとした。
【０１１４】
結果：免疫不全マウスのヒト膵臓腫瘍をＰＥＮＡＯまたはエベロリムス単独で処置したところ、腫瘍成長速度が抑制された（図４）。同化合物を同時に投与したところ、腫瘍成長がさらに大きく抑制された。処置マウスには中毒の徴候も症状も一切認められなかった。
【０１１５】
免疫不全マウスの大型のヒト膵臓腫瘍を最大耐容量レベル付近のＰＥＮＡＯとエベロリムスで処置したところ、腫瘍壊死が生じた（図５）。処置マウスには中毒の徴候も症状も一切認められなかった。
【０１１６】
ＰＥＮＡＯとラパログで処置すると、マウスのヒト腫瘍の成長速度が相乗的に抑制され、腫瘍壊死が誘発される。この併用療法は耐容性に優れており、中毒の徴候も症状も一切認められない。
【０１１７】
参考文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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