(57)【要約】絹マトリクスを用いた血管用パッチ及びその製造方法を開示する。前記血管用パッチは、カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクスが、前記第１厚さを有する２つ以上の所定の形状の絹マトリクス片に平面分割されている。さらに、その製造過程が比較的簡単で、通常の血管用パッチの単価に比べて一層低減でき、細胞培養能に優れるうえ、生体適合性を有する。【選択図】図８
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）が、前記第１厚さを有する２つ以上の所定の形状の絹マトリクス片に平面分割されている、絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項２】
カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクスが、前記第１厚さよりも薄い第２厚さを有する２つ以上の絹マトリクス部分に厚さ分割されている、絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項３】
カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクスが、前記第１厚さを有する２つ以上の所定の形状の絹マトリクス片に平面分割され、且つ、前記第１厚さを有する絹マトリクス片のそれぞれが前記第１厚さよりも薄い第２厚さを有する絹マトリクス片に厚さ分割されている、絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項４】
前記第１厚さを有する絹マトリクス片が滅菌処理されている、請求項１に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項５】
前記第２厚さを有する絹マトリクス部分が滅菌処理されている、請求項２に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項６】
前記第２厚さを有する絹マトリクス片が滅菌処理されている、請求項３に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項７】
前記第１厚さを有する絹マトリクス片がパッキングされている、請求項１に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項８】
前記第２厚さを有する絹マトリクス部分がパッキングされている、請求項２に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項９】
前記第２厚さを有する絹マトリクス片がパッキングされている、請求項３に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチ。
【請求項１０】
カイコから生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクスを、前記第１厚さを有する２つ以上の所定の形状の絹マトリクス片に平面分割する第１段階を含む、絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法。
【請求項１１】
カイコから生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクスを、前記第１厚さよりも薄い第２厚さを有する２つ以上の絹マトリクス部分に厚さ分割する第１段階を含む、絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法。
【請求項１２】
カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクスを、前記第１厚さを有する２つ以上の所定の形状の絹マトリクス片に平面分割する第１段階と、
前記第１厚さを有する絹マトリクス片のそれぞれを、前記第１厚さよりも薄い第２厚さを有する絹マトリクス片に厚さ分割する第２段階とを含んでなる、絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法。
【請求項１３】
前記第１段階で得られた前記第１厚さの絹マトリクス片をパッキングする第２段階をさらに含む、請求項１０に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法。
【請求項１４】
前記第１段階で得られた前記第２厚さの絹マトリクス部分をパッキングする第２段階をさらに含む、請求項１１に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法。
【請求項１５】
前記第２段階で得られた前記第２厚さの絹マトリクス片をパッキングする第３段階をさらに含む、請求項１２に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法。
【請求項１６】
前記各段階の前または後に、滅菌処理を少なくとも１回行う段階をさらに含む、請求項１０〜１５のいずれか一項に記載の絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）を用いた血管用パッチ及びその製造方法に関し、より詳しくは、既存の血管用パッチと比較して、生体適合性があり、血管内径の維持に効果的であり、血管欠損部位における血管内皮細胞の成長を促進する、絹マトリクスを用いた血管用パッチ及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
口腔顎顔面外科領域における手術中の血管の損傷は、頸部郭清術、口腔腫瘍の除去または再建、顎顔面外傷、または主要血管に隣接している病巣の手術による除去の際に発生する可能性がある。血管損傷の際に行うことが可能な処置として、損傷した血管を結紮する方法や、損傷部位を直接縫合（ｄｉｒｅｃｔ  ｃｌｏｓｕｒｅ）する方法などが用いられている。しかし、頸部郭清術の際によく遭遇する頸動脈などの大きな血管は、結紮によって処置する場合には脳梗塞などの様々な合併症が高い頻度で発生することが報告されている。また、血管壁の欠損が激しい損傷を無理に直接縫合して処置する場合には、血管径が狭くなり、血管閉塞による脳梗塞や血管の機能低下による神経学的合併症などを引き起こすおそれがある。したがって、損傷した血管をより機能的に維持し且つ損傷部を再生させるための簡便な処置方法および材料の開発が臨床的に必要とされている。
【０００３】
血管用パッチは、直接縫合による血管径の減少に起因する血管閉塞などの合併症を減らすために、心血管系の血管損傷の処置に使われている。直接縫合による血管損傷の処置と、血管パッチを用いた血管損傷の処置とを比較した研究結果も多く報告されており、血管パッチによる処置がより良好な結果を示すという報告が優勢である。
【０００４】
しかし、合成高分子（ＰＥＴ、ｅＰＴＦＥ）またはＧｏｒｅ−Ｔｅｘで製作された既存の血管パッチは、血栓生成による血管閉塞現象と生体非適合性による石灰化現象のため、長期にわたって血管機能を行うことができない。さらに、非分解性材料であって生体適合性が高くないため炎症や組織壊死が起こる可能性があるという問題点があり、そのコストが高く、心血管に合わせて製作されるため口腔顎顔面領域の比較的薄い血管への適用が限られている。
【０００５】
そこで、天然物素材として生体適合性を有し、血管閉塞を引き起こすことなく血管形態を維持し得るようにする血管パッチに関する研究が継続的に行われている。
【０００６】
関連先行技術としては、韓国生物工学会、２００３学術発表（中間葉幹細胞と生分解性マトリクスを用いた血管パッチの開発）と韓国公開特許第１０−２０１３−００５１６０２号（真皮代替用３次元シルクナノ繊維膜及びその製造方法）などがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、生体に優しい材料からなり、既存の血管用パッチと比較して生体組織への異物反応が少なく、炎症反応が起こることなく内皮細胞を成長させて新しい血管壁を再生させ、血管内径の狭窄を低減させて血液流量の維持及び血管内径の維持に効果的である、絹マトリクスを用いた血管用パッチ及びその製造方法を提供することにある。
【０００８】
本発明の他の目的は、製造過程が容易なので、通常の血管パッチと比較してコストダウンが可能である、絹マトリクスを用いた血管用パッチ及びその製造方法を提供することにある。
【０００９】
本発明が解決しようとする技術的課題は上述した技術的課題に制限されず、上述していない別の技術的課題は以降の記載から本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者に明確に理解できるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するために、本発明は、カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）が、前記第１厚さを有する２つ以上の所定の形状の絹マトリクス片に平面分割されている、絹マトリクスを用いた血管用パッチを提供する。
【００１１】
また、本発明は、カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクスが、前記第１厚さよりも薄い第２厚さを有する２つ以上の絹マトリクス部分に厚さ分割されている、絹マトリクスを用いた血管用パッチを提供する。
【００１２】
また、本発明は、カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクスが、前記第１厚さを有する２つ以上の所定の形状の絹マトリクス片に平面分割され、且つ、前記第１厚さを有する絹マトリクス片のそれぞれが、前記第１厚さよりも薄い第２厚さを有する絹マトリクス片に厚さ分割されている、絹マトリクスを用いた血管用パッチを提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明による血管用パッチは、既存の血管用パッチと比較して、血管欠損部の縫合後に別途の除去過程を必要とせず、細胞培養能に優れるうえ、血液流量の維持及び血管内径の維持に効果的である。
【００１４】
さらに、本発明による血管用パッチの製造方法は、製造過程が容易であることにより、通常の血管パッチに比べて生産単価の低減が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の血管用パッチに使用される絹マトリクスがカイコから生成されている状態を示す図である。
【図２】本発明の血管用パッチに使用される絹マトリクスの厚さ別の形態（ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）の肉眼観察の結果を示す図である（（Ａ）：０．０１ｍｍ、（Ｂ）：０．７ｍｍ）。
【図３】本発明の実施例１に係る血管用パッチの製造過程を示す図である。
【図４】本発明の実施例２に係る血管用パッチの製造過程を示す図である。
【図５】本発明の実施例３に係る血管用パッチの製造過程を示す図である。
【図６】本発明の絹マトリクスを用いた血管用パッチと対照群として使用されたゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチの表面形態の走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）画像を示す図である。
【図７】本発明の血管用パッチ、対照群としてのゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチ、及び別の対照群としての直接縫合による血管欠損部の縫合写真である。
【図８】血管欠損部縫合１週間後と血管欠損部縫合３週間後との最大収縮速度値を比較して示すグラフである。
【図９】本発明の血管用パッチ、対照群であるゴアテックス血管パッチ、及び別の対照群である直接縫合によって血管欠損部を修復し、２週間後に組織の断面を撮影した写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
特に限定のない限り、本明細書に記載された用語、技術などは、本発明の属する技術分野で一般的に使用される意味で用いられる。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１７】
従来の人工血管パッチは、主にポリエステル及びＧｏｒｅ−Ｔｅｘ（ＰＴＦＥ材料）で作られている。人工パッチを使用する場合、感染、吻合後の血管拡張、血栓生成による血管閉塞、および縫合糸穴による出血などの可能性があり、操作の際に材料の特性を考慮して施術しなければならない。最近、米国Ｗ．Ｌ．Ｇｏｒｅ（Ｆｌａｇｓｔａｆｆ、ＡＺ、ＵＳＡ）社によってゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）パッチが開発されたが、まだ血管の拡張や新生内膜過増殖に関連した長期間の結果は報告されておらず、長期着用の際にこれによる生体に対する毒性が問題になったり、生体内に異物として残存したりするなどの問題点を抱えている。
【００１８】
そこで、本発明者らは、生体に優しい材料からなり、生体に適用するときに炎症反応を殆ど引き起こさずに、細胞付着能力および増殖効果に優れた特性のある絹マトリクスを用いた血管用パッチを製造するに至った。以下、これを様々な例示によって具体的に説明する。
【００１９】
まず、図３に示した本発明の実施例１に係る絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法を具体的に説明する。
【００２０】
１．第１段階：第１厚さの絹マトリクス片の製造
本段階では、カイコによって生産された第１厚さの断面を有する絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）を２つ以上の所定の形状に平面分割することにより、前記第１厚さの絹マトリクス片を製造することが特徴である。
【００２１】
カイコは、自己防衛のために熟蚕になると、繭づくりをしながら蛹に変わる準備を開始する。カイコは、蛹に変わるときに糸を吐き出して自分の体を囲んで作った細長い丸形の家（繭）を作る。この繭は、楕円形であって、カイコの種類に応じて様々な色を帯び、両方の頭が少し尖っており、その層が厚い。しかし、カイコの繭づくり過程でカイコが置かれた平面（平板）を動かしてカイコが正常な繭を作らないように妨害する場合には、カイコは繭づくりができなくなる。カイコが置かれた平面（平板）を動かす過程によって、カイコの吐糸を人為的に平面（平板）に誘導して繭糸を平面（ｓｈｅｅｔ）状に吐糸させる場合に絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）が生産される。
【００２２】
そこで、本発明者は、前述したような特徴を用いて、図１の一実施態様に示すように平面（平板）の上にカイコをのせた後、カイコが平板の外に落ちない程度の傾き（１５°〜３０°）を与えながら平板を動かしてカイコを平面（平板）上で強制的に動かして吐糸するように誘導させ、本発明の目的とする第１厚さの断面を有する絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ、図２）を製造した後、図３に示すように、適用用途に応じて２つ以上の適切な形態に平面分割することにより、第１厚さの絹マトリクス片２０を製造する。この際、前記採取された第１厚さの断面を有する絹マトリクスをナイフやハサミなどの切断道具によって平面分割することにより、適切な形態の第１厚さの絹マトリクス片２０に製造する。
【００２３】
この際、前記第１厚さの絹マトリクス片２０は、図２（Ａ）に示すように、第１厚さの絹マトリクス１０の状態が血管用パッチとして使用可能な厚さに生成されたものなので、前記第１厚さの絹マトリクス１０を平面分割して製造した適切な形態の第１厚さの絹マトリクス片２０は、そのまま使用が可能であり、必要に応じてはさらにパッキングまたは滅菌処理及び薬品処理を施して使用することもできる。例えば、血栓防止成分である４−ヘキシルレゾルシノールを処理して血栓生成を抑制することができる。
【００２４】
また、前記絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）のためにカイコが置かれる平面（平板）を動かす場合には、その動きは様々な方法で行うことができる。平面の動きは、平板を回転させるか、平板を上下および／または左右に繰り返し傾けるか、或いは平板に振動を付加するなどの多様な形態で実現できる。もちろん、平板の回転動きまたは上下左右への繰り返し傾動は複合的に行うことができる。動きまたは傾動の回数または速度は好ましい絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）の形状を確保するために適切に選択できる。
【００２５】
カイコが置かれる平面（平板）の形状には制限がない。円形であってもよく、四角形であってもよい。カイコが平板の動きに応えて正常な繭を作らない形状であれば有効である。
【００２６】
次に、他の変形例として、図４に示されている本発明の実施例２に係る絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法を具体的に説明する。
【００２７】
１．第１段階：第２厚さの絹マトリクスの製造
本段階では、カイコによって生産された第１厚さの絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）を用いるが、前記第１厚さの断面を有する前記絹マトリクスを、前記第１厚さよりも薄い第２厚さを持つように２つ以上に厚さ分割することにより、第２厚さの絹マトリクスを製造し、その一部を使用することが特徴である。
【００２８】
カイコによって生産された第１厚さの絹マトリクス１０は、図３の説明で述べた方式でカイコを平面（平板）上で強制的に動かして吐糸するように誘導させて製造される。このとき、前記第１厚さの絹マトリクス１０は、図２（Ｂ）に示すように、カイコの吐糸過程で吐糸された糸が高さ方向に積み重なって様々な厚さ（多層）に構成されることもある。
【００２９】
すなわち、前記第１厚さの絹マトリクス１０は、絹マトリクスの製造に使用されたカイコの数と、カイコを紡糸して吐糸する時間に応じて様々な厚さに生成できる。
【００３０】
このため、前記第１厚さの絹マトリクス１０の厚さが厚い場合には、図４に示すように、第１厚さの絹マトリクス１０を血管用パッチとして使用することができるように２つ以上に適切な厚さに厚さ分割することにより、第２厚さを有する絹マトリクス３０に製造して使用する。このとき、前記第２厚さは、厚さ分割によって第１厚さよりも薄くなるのが特徴である。
【００３１】
このように製造した第２厚さの絹マトリクス３０は、その状態のまま血管用パッチとして使用し、或いは用途に合わせてその大きさを調節して第２厚さの絹マトリクス３０の一部を使用し、必要に応じて、さらにパッキングまたは滅菌処理及び薬品処理を施して使用することもできる。例えば、血栓防止成分である４−ヘキシルレゾルシノールを処理して血栓生成を抑制することができる。
【００３２】
次に、さらなる変形例として、図５に示した本発明の実施例３に係る絹マトリクスを用いた血管用パッチの製造方法を具体的に説明する。
【００３３】
１．第１段階：第１厚さの絹マトリクス片の製造
本段階では、カイコによって生産された第１厚さの絹マトリクス（Ｓｉｌｋ  Ｍａｔｒｉｘ）を用いるが、前記第１厚さの断面を有する前記絹マトリクスを２つ以上の適切な形態に平面分割することにより、前記第１厚さの絹マトリクス片２０を製造する。
【００３４】
このとき、図３の説明で述べた第１段階の製造方法と同様に、第１厚さの絹マトリクス片２０を製造する。
【００３５】
こうして製造された前記第１厚さの絹マトリクス片２０は、血管用パッチとして使用可能な厚さに生成される場合には、上述のようにそのまま使用してもよいが、その厚さが厚くてそのままの使用が難しい場合には、下記のとおり第２段階を経て血管用パッチとして使用可能な厚さを持つように別途の製造過程を経なければならない。次に、下記第２段階について説明する。
【００３６】
２．第２段階：第２厚さの絹マトリクス片（血管用パッチ）の製造
本段階では、血管用パッチの用途として使用可能な第２厚さの絹マトリクス片４０を製造するのが特徴である。
【００３７】
前記第１段階で製造された前記第１厚さの絹マトリクス片２０は、図２（Ｂ）に示すように、カイコの吐糸過程で吐糸された糸が高さ方向に積み重なって様々な厚さ（多層）に構成されることもある。
【００３８】
このとき、前記第１厚さの絹マトリクス片２０は、絹マトリクスの製造に使用されたカイコの数と、カイコが紡糸して吐糸する時間に応じて様々な厚さに生成できる。
【００３９】
このため、前記第１厚さの絹マトリクス片２０が、血管用パッチとして使用可能な厚さに生成される場合には、そのまま使用するが、その厚さが厚い場合には、図５に示すように、前記第１段階で製造された前記第１厚さの絹マトリクス片を、血管用パッチとして使用できるように２つ以上に適切な厚さに厚さ分割することにより、第２厚さを有する絹マトリクス片４０に製造して使用する。このとき、前記第２厚さは、厚さ分割によって第１厚さよりも薄くなるのが特徴である。
【００４０】
こうして製造した第２厚さの絹マトリクス片４０は、その状態のまま、血管用パッチとしていずれの用途にも使用可能であり、必要に応じて、さらにパッキングまたは滅菌処理及び薬品処理を施して使用することもできる。例えば、血栓防止成分である４−ヘキシルレゾルシノールを処理して血栓生成を抑制することができる。
【実施例】
【００４１】
以下、実施例及び実験例によって本発明についてさらに詳細に説明するが、これらの実施例及び実験例は、説明の目的のためのものに過ぎず、本発明の保護範囲を制限するものではない。
【００４２】
＜実施例１＞本発明の血管用パッチ１の製造
図１に示すように、平板上に熟蚕１５匹をのせて平板を地面に対して２０°の角度まで徐々に傾けた後、１時間後に再度徐々に反対方向に傾ける方式で、カイコが動きながら吐糸するようにして、図２（Ａ）に示されている形態の絹マトリクス１０を製造した。
【００４３】
このとき、１日間上記の傾動を与えた後、２日間平衡を維持し、しかる後に、再び上記の傾動を与えて約３日間カイコが絹マトリクスを生成するようにした。このとき、絹マトリクスの厚さは０．０１ｍｍ程度であった。
【００４４】
その後、図３に示すように、前記絹マトリクス１０を長方形の形状に平面分割されるようにハサミで切断して絹マトリクス片２０を製造した後、これを滅菌処理して本発明の血管用パッチ１を製造した。
【００４５】
＜実施例２＞本発明の血管用パッチ２の製造
図１に示すように、平板上に熟蚕３０匹をのせて平板を地面に対して２０°の角度まで徐々に傾けた後、１時間後に再度徐々に反対方向に傾ける方式で、カイコが動きながら吐糸するようにして、図２（Ｂ）に示されている形態の絹マトリクス１０を製造した。
【００４６】
このとき、１日間上記の傾動を与えた後、２日間平衡を維持し、しかる後に、再び上記の傾動を与えて約３日間カイコが絹マトリクスを生成するようにした。このとき、絹マトリクスの厚さは０．７ｍｍ程度であった。
【００４７】
こうして製造された厚さ０．７ｍｍの絹マトリクス１０は、図４に示されているように、厚さ分割されるように剥離して厚さ０．２ｍｍの絹マトリクス３０に製造した後、これを滅菌処理して本発明の血管用パッチ２を製造した。
【００４８】
＜実施例３＞本発明の血管用パッチ３の製造
図１に示すように、平板上に熟蚕３０匹をのせて平板を地面に対して２０°の角度まで徐々に傾けた後、１時間後に再度徐々に反対方向に傾ける方式で、カイコが動きながら吐糸するようにして、図２（Ｂ）に示されている形態の絹マトリクス１０を製造した。
【００４９】
このとき、１日間上記の傾動を与えた後、２日間平衡を維持し、しかる後に、再び上記の傾動を与えて約３日間カイコが絹マトリクスを生成するようにした。このとき、絹マトリクスの厚さは０．７ｍｍ程度であった。
【００５０】
その後、前記絹マトリクスを長方形の形状に平面分割されるように切断して絹マトリクス片２０を製造した。
【００５１】
こうして製造された厚さ０．７ｍｍの絹マトリクス片２０は、図５に示されているように、厚さ分割されるように剥離して厚さ０．２ｍｍの絹マトリクス片４０に製造した後、この１０ｇの絹マトリクス片４０を血栓防止剤としての４−ヘキシルレゾルシノール３％溶液に入れて２４時間浸漬した。その後、４−ヘキシルレゾルシノールが浸透した絹マトリクス４０を４５℃の乾燥オーブンに入れてアルコールを全て蒸発させた。アルコール蒸発後の重量は１０．３ｇであった。その後、滅菌処理（エチレンオキシド（ＥＯ）ガス）を行って本発明の血管用パッチ３を製造した。
【００５２】
＜実施例４＞本発明の血管用パッチ４の製造
実施例３と同様の方法で製造するが、厚さ０．３ｍｍの絹マトリクス片４０からなる本発明の血管用パッチ４を製造した。
【００５３】
＜実施例５＞本発明の血管用パッチ５の製造
実施例３と同様の方法で製造するが、厚さ０．５ｍｍの絹マトリクス片４０からなる本発明の血管用パッチ５を製造した。
【００５４】
＜実験例１＞本発明の血管用パッチに使用された絹マトリクスの形態確認
１．実験方法
図２に示されている絹マトリクスの形態を観察するために、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で拡大撮影し、対照群として市販のゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチの表面を撮影した。
【００５５】
２．実験結果
図６から分かるように、本発明と対照群の血管用パッチの形態を走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で撮影したとき、空隙の形態または膜の表面において形態的な差異を確認することができた。ゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）素材の血管パッチは、平面からなる膜の表面から、一定の間隔及び大きさを有する空隙が観察された。
【００５６】
これに対し、本発明の血管用パッチの表面は、多様な太さの繊維ストランドが反復的かつ不規則的に積層されており、積層されている繊維ストランド同士の間に存在する多くの空隙を観察することができた。よって、本発明の血管用パッチは、多孔性を有する構造であるため、血液流量及び血管内径の維持に効果的であると考えられる。
【００５７】
＜実験例２＞本発明の血管用パッチの機械的物性測定
本発明の絹マトリクスを用いた血管用パッチの機械的物性を測定するために、万能試験機（ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅ、ＤＡＥＹＥＯＮＧ、韓国）を用いて引張試験を行った。
【００５８】
分析のための試験片は２．５×０．０７（横×縦）ｍｍに製作し、１０ｍｍの標点距離、１０ｍｍ／分の速度で製作された膜を引っ張って測定した。その測定結果は下記表１のとおりである。
【００５９】
【表１】
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【００６０】
表１から分かるように、本発明の血管用パッチは、厚さによる引張強度及び延伸率の差があるが、引張強度と延伸率は、厚さが増加するほど優れている。
【００６１】
＜実験例３＞超音波分析
１．実験方法
（１）血管欠損部の縫合
実施例３で製造された血管用パッチを用いて血管欠損部を縫合した。実験動物としては７匹の白ラットを使用した。まず、白ラットの右頸動脈部位の毛を全て除去した後、皮膚を消毒した。露出した右頸動脈部位にマイクロ剪刀（ｍｉｃｒｏｓｃｉｓｓｏｒ）を用いてサイズ０．５×１ｍｍの血管欠損部を形成した。形成された欠損部を前記製造された血管用パッチを用いて再建し、血管用パッチを１０−０モノフィラメントナイロン（１０−０  ｍｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔ  ｎｙｌｏｎ、Ａｉｌｅｅ、韓国）を用いて固定した。
【００６２】
対照群１として市販のゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチを使用し、上記の方法で血管欠損部を縫合した。
【００６３】
対照群２として１０−０モノフィラメントナイロン（１０−０  ｍｏｎｏｆｉｌａｍｅｎｔ  ｎｙｌｏｎ、Ａｉｌｅｅ、韓国）を用いて直接縫合によって血管欠損部を縫合した。
【００６４】
図７はそれぞれの方法による血管欠損部の縫合写真を示す。
【００６５】
（２）超音波分析方法
縫合された血管欠損部の血行及び挟窄を確認するための超音波分析を行った。超音波因子として最大収縮速度（Ｐｅａｋ  Ｓｙｓｔｏｌｉｃ  Ｖｅｌｏｃｉｔｙ、ＰＳＶ）を測定して血管の機能的再生がなされたかを確認した。
【００６６】
２．実験結果
図８は血管欠損部縫合１週間後と血管欠損部縫合３週間後との最大収縮速度値を比較して示すグラフである。図８の１週間経過後のグラフを参照すると、血管欠損部縫合後１週間が経過した状態で測定された最大収縮速度値は、本発明の血管用パッチの場合には３７．２６±７．２６ｃｍ／ｓであり、対照群１であるゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチを用いた群の場合には３２．７４±１０．５０ｃｍ／ｓであり、直接縫合した場合には７５．２３±２７．０５ｃｍ／ｓであった。分散分析（Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉａｎｃｅ、ＡＮＯＶＡ）で検証した結果、３群間の差異は統計的に有意であった（ｐ＝０．００７）。
【００６７】
図８の３週間経過後の最大収縮速度値を比較したグラフを参照すると、血管欠損部縫合後３週間が経過した状態で測定された最大収縮速度値は、本発明の血管用パッチでは３５．６７±２．６２ｃｍ／ｓであり、ゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチを用いた対照群１では３５．３６±７．２７ｃｍ／ｓであり、直接縫合した対照群２では４８．３６±６．１５ｃｍ／ｓであった。分散分析（Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｖａｒｉａｎｃｅ、ＡＮＯＶＡ）で検証した結果、３群間の差異は統計的に有意であった（ｐ＝０．００７）。
【００６８】
血管用パッチを移植した後、血管の最大収縮速度の変化率を算出した結果、本発明の血管用パッチは、白ラットの外頚動脈に移植した後、血管の最大収縮速度（ｃｍ／ｓ）変化率が２０％以下であり、具体的に、前記変化率は１％〜２０％の範囲であった。よって、本発明の絹マトリクスを用いた血管用パッチは、血管の最大収縮速度の変化率が安定的に維持されることが確認された。
【００６９】
＜実験例４＞組織学的分析
１．実験方法
縫合された血管欠損部の血管壁の厚さ及び血管径を確認し、血管パッチによる異物反応有無などを確認するために、組織学的分析を行った。血管径を維持するために血管の両側を結紮し、血管内に血液を維持させた状態で両側の血管を切って標本を得た。得られた標本をアルコールで固定した。標本の染色にはヘマトキシリン及びエオシンを使用した。固定及び染色された血管標本は、横断切片（ｃｒｏｓｓ  ｓｅｃｔｉｏｎ）を作成して観察した。図９は本発明による血管用パッチ（実施例３）、対照群１であるゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチ、及び対照群２である直接縫合によって縫合された血管の２週間経過後に組織の断面を撮影した写真である。
【００７０】
２．実験結果
実験結果、図９に示すように、組織学的所見上、本発明の絹マトリクスを用いた血管用パッチの周辺に別の異物反応は観察されなかった。また、再建された血管壁は、周辺組織とは特に区別されておらず、血管内径もよく維持されていた。ゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチを用いた対照群も、全般的に血管内径がよく維持されていたが、一部の試片では血管内壁の過成長を示した。これに比べて、直接縫合した群は血管内径の重度の狭窄を示した。
【００７１】
よって、本発明に係る血管用パッチは、従来のゴアテックス（Ｇｏｒｅ−Ｔｅｘ）血管パッチ及び直接縫合による方法に比べて、血管壁の過成長及び血管内径の狭窄を著しく減少させ、血液流量の維持及び血管内径の維持に効果的に作用することができることを確認した。
【００７２】
以上、本発明の好適な実施例及び実験例について説明の目的で開示したが、当業者であれば、添付した請求の範囲に開示された本発明の精神と範囲から逸脱することなく、様々な変更、追加および置換を加え得ることを理解するであろう。本発明の範囲は上述の説明ではなく請求の範囲に示されており、それらと同等の範囲内のあらゆる差異点は本発明に含まれるものと理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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