(57)【要約】  本発明は、ＦＧＦＲ４阻害を目的とした治療によって引き起こされる毒性作用の改善に関する。具体的には、本発明は、ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤の組み合わせ、および、疾患の治療でのその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患の治療での使用のための、
胆汁酸捕捉剤と組み合わせた抗ＦＧＦＲ４抗体である、ＦＧＦＲ４阻害剤。
【請求項２】
請求項１の使用のための組み合わせであって、
治療される前記疾患は、過剰増殖性の障害、心血管系の疾患、具体的には、高血圧、左室肥大および心肥大、慢性腎臓疾患、筋ジストロフィーおよび代謝疾患、具体的には、肥満および糖尿病から選択される、
組み合わせ。
【請求項３】
請求項１または２の使用のための組み合わせであって、
前記胆汁酸捕捉剤は、コレスチラミン、コレスチポールおよびコレセベラムから選択され、具体的にはコレスチラミンである、
組み合わせ。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体は、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸配列ＲＹＮＹを含むエピトープに対して向けられる、
組み合わせ。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体は、配列番号３に示されるＣＤＲＨ１、配列番号８に示されるＣＤＲＨ２、および、配列番号１５に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２３に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２５に示されるＣＤＲＬ２、および、配列番号３０に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖を含む、
組み合わせ。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体は、配列番号５４に係る重鎖可変領域またはそれから１または２アミノ酸異なる配列、および、配列番号６２に係る軽鎖可変領域またはそれから１または２アミノ酸異なる配列を含む、
組み合わせ。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記胆汁酸捕捉剤、具体的にはコレスチラミンは、１日あたり０．１〜１．０ｇ／ｋｇ体重、好ましくは１日あたり０．２〜０．６ｇ／ｋｇ体重、具体的には１日あたり０．３〜０．４ｇ／ｋｇ体重、例えば１日あたり約０．３５ｇ／ｋｇ体重の量で用いられる、
組み合わせ。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体および前記胆汁酸捕捉剤は、一緒または別々に投与され、
具体的には、前記抗ＦＧＦＲ４抗体は、静脈内投与されて、前記胆汁酸捕捉剤は、経口投与される、
組み合わせ。
【請求項９】
請求項１から８のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体および／または前記胆汁酸捕捉剤は、単回投与で、または、１日あたり２回または３回の投与に分割されて投与される、
組み合わせ。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体および前記胆汁酸捕捉剤は、別々に投与され、
ここで、前記抗ＦＧＦＲ４抗体は、単回投与で投与されて、前記胆汁酸捕捉剤は、１日あたり２回または３回の投与で投与される、
組み合わせ。
【請求項１１】
請求項２から１０のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
治療される前記の過剰増殖性の障害は癌であり、好ましくは、肝細胞癌腫、横紋筋肉腫、軟組織肉腫、頭頚部扁平上皮癌、肺腺癌、腎臓癌、膀胱癌、脳腫瘍、食道癌、胃癌、膵臓癌、小腸癌、大腸癌、乳癌、肺癌、肝臓癌、脾臓癌、甲状腺癌、下垂体癌、副腎癌、卵巣癌、頸部癌、精巣癌、前立腺癌、グリオーマ、メラノーマ、および白血病からなる群より選択され、特に、肝細胞癌腫である、
組み合わせ。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
さらなる治療手順または／およびさらなる薬剤、具体的には１つまたは複数のビタミン類と組み合わせる、
組み合わせ。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項の使用のための組み合わせであって、
１つまたは複数の脂溶性ビタミン、具体的には、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅおよび／またはＫの投与と組み合わせる、
組み合わせ。
【請求項１４】
医薬組成物またはキットであって、
抗ＦＧＦＲ４抗体であるＦＧＦＲ４阻害剤、および、胆汁酸捕捉剤、具体的にはコレスチラミンを、場合により、１つまたは複数の生理的に許容できる担体、希釈剤または／およびアジュバントと組み合わせて含む、
医薬組成物またはキット。
【請求項１５】
請求項１４の医薬組成物またはキットであって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体は、請求項４から６のいずれか一項に定義される、
医薬組成物またはキット。
【請求項１６】
請求項１４または１５の医薬組成物またはキットであって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体、および、前記胆汁酸捕捉剤、特にコレスチラミンは、単一組成物の形態または少なくとも２つの別個の組成物の形態で提供される、
医薬組成物またはキット。
【請求項１７】
請求項１４から１６のいずれか一項の医薬組成物またはキットであって、
１つまたは複数の脂溶性ビタミン、具体的にはビタミンＡ、Ｄ、Ｅおよび／またはＫをさらに含む、
医薬組成物またはキット。
【請求項１８】
疾患、具体的には、過剰増殖性の障害、心血管系の疾患、具体的には、高血圧  左室肥大および心肥大、慢性腎臓疾患、筋ジストロフィーまたは代謝疾患、具体的には、肥満または糖尿病を、予防、緩和または／および治療するための方法であって、
有効量の、抗ＦＧＦＲ４抗体であるＦＧＦＲ４阻害剤を、胆汁酸捕捉剤、具体的にはコレスチラミンと、同時投与で、それを必要とする対象に投与するステップを含む、
方法。
【請求項１９】
請求項１８の方法であって、
前記抗ＦＧＦＲ４抗体は、請求項４から６のいずれか一項に定義される、
方法。
【請求項２０】
請求項１８または１９の方法であって、
治療される前記の過剰増殖性の障害は、癌であり、好ましくは、肝細胞癌腫、横紋筋肉腫、軟組織肉腫、頭頚部扁平上皮癌、肺腺癌、腎臓癌、膀胱癌、脳腫瘍、食道癌、胃癌、膵臓癌、小腸癌、大腸癌、乳癌、肺癌、肝臓癌、脾臓癌、甲状腺癌、下垂体癌、副腎癌、卵巣癌、頸部癌、精巣癌、前立腺癌、グリオーマ、メラノーマ、および白血病からなる群より選択され、特に、肝細胞癌腫である、
方法。
【請求項２１】
請求項１８から２０のいずれか一項の方法であって、
さらなる治療手順、または／および、さらなる薬剤、具体的には１つまたは複数の脂溶性ビタミンを投与するステップさらに含む、
方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＦＧＦＲ４阻害を目的とした治療によって引き起こされる毒性作用の改善に関する。具体的には、本発明は、ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤の組み合わせ、および、疾患の治療でのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
可溶性線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）およびそれらの膜貫通受容体は、増殖、遊走、分化および生存を含む広範囲の細胞機能に関与する。４つの受容体ＦＧＦ１〜４は、チロシンキナーゼドメインを保有し、１つの１８の（ｏｎｅ  １８）分泌された糖タンパク質ＦＧＦの、それらの細胞外免疫グロブリンドメインに対する結合によって活性化される。リガンド（Ｌｉｇａｎ）結合は、ＦＧＦＲ二量体化、細胞内分割チロシンキナーゼドメインの自己リン酸化、および、ＲＡＳ−依存性分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路、ＡＫＴ依存性抗アポトーシス経路およびシグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）シグナル伝達のような、下流のシグナル伝達経路の活性化をもたらす。
【０００３】
ＦＧＦＲ４は、多くの腫瘍タイプにおいて重要であることが見いだされていて、前立腺癌、乳癌、膵臓癌、下垂体癌、肝細胞および婦人科の腫瘍において過剰発現が生じている。ＦＧＦＲ４は、乳癌細胞株において、癌遺伝子として認識されている。別の腫瘍タイプでは、ＦＧＦＲ４突然変異は稀であるが、一塩基多型ＦＧＦＲ４  Ｇ３８８Ｒは、安定性を増大させ、受容体の活性化を延長させ、および、メラノーマ、乳癌、前立腺癌および頭頚部癌の予後不良と関連する。様々な腫瘍疾患におけるＦＧＦＲ４の役割を考慮すると、ＦＧＦＲ４の阻害は、過剰増殖性の障害の治療のための可能なストラテジーとして、今現在、広く試験されている。
【０００４】
さらに、ＦＧＦＲ４の阻害は、さらなる疾患、具体的には、心血管系の疾患、例えば、高血圧、左室肥大（Ｆａｕｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｕｎｖｅｓｔ，２０１１；１２１（１１）：４３９３−４４０８）、慢性腎臓疾患（Ｊｉｍｂｏ  ａｎｄ  Ｓｈｉｍｏｓａｗａ，Ｉｎｔ．Ｊ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２０１４）、筋ジストロフィー（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ；２００６，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８１，４２９−４３８）および代謝疾患、具体的には、肥満または糖尿病（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ；２０１３，ＰＬｏｓ  ＯＮＥ，８（７）：ｅ６６９２３）の治療に成功的であると期待されている。
【０００５】
腫瘍および他の疾患の進行の一部を果たすのに加えて、ＦＧＦＲ４は、胆汁酸ホメオスタシスの制御において、重要なホメオスタシスの生理学的役割を果たす。ＦＧＦＲ４を介したＦＧＦ１５／１９シグナル伝達は、肝臓におけるデノボ（ｄｅ  ｎｏｖｏ）の胆汁酸産生を抑制し、これらの洗浄剤のような分子の肝臓および全身レベルを生理学的閾値でしっかり維持する。このことは、胆汁うっ滞性の（ｃｏｌｅｓｔａｔｉｃ）肝臓損傷および胆汁酸性下痢のような、上昇した胆汁酸レベルの病理学的合併症を防ぐ。
【０００６】
非特異的なＦＧＦＲ４に向けられた治療が現在までにヒトで試験されていて、サルにおいては、直接的なＦＧＦＲ４阻害およびその副作用に関する利用可能なデータはなかった。マウスの実験から、そのリガンドの１つであるＦＧＦ１９による肝臓におけるＦＧＦＲ４活性化は、肝細胞における胆汁酸合成の律速ステップを触媒する酵素−Ｃｙｐ７Ａ１の発現を低減させることが分かった（Ｉｎａｇａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５），Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．２，２１７−２２５）。したがって、これは、次々に、胆汁酸合成の抑制をもたらす。ＦＧＦＲ４ノックアウトマウスは、小さな枯渇された胆嚢、および、野生型動物と比較して胆汁酸分泌の２〜３倍の増加によって特徴付けられ（Ｙｕ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（２０００），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５，１５４８２−９）、一方で、毒性作用は解明されなかった。カニクイザルでは、ＦＧＦ１９に対する抗体が試験されて、胆汁酸レベルの増大に起因する重度の下痢および体重減少を誘導することが見いだされた。３ｍｇ／ｋｇよりも多い抗体を投与された全ての動物は、屠殺しなければならなかった（Ｐａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．１２６，４４６−４５６）。線維芽細胞増殖因子１９の、抗体が仲介する阻害は、カニクイザルにおいて、胆汁酸合成の増加および胆汁酸の回腸吸収不良をもたらした。胆汁酸は発癌物質であり（Ｊａｎｓｅｎ  ＰＬ，Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ  ２００７；４７；４３４−５）、胆汁酸の調節不全は、肝細胞癌腫の進行に寄与することが知られている。
【０００７】
最近のレビュー文献（Ｍｅｌｌｏｒ  Ｈ．Ｒ．２０１４，Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔ．，２０１４，１−９）では、肝細胞癌腫を有する患者におけるＦＧＦ１９−ＦＧＦＲ４遮断の、可能性のある病態生理学的結果が議論されている。著者らは、肝細胞癌腫患者の肝臓において、抗ＦＧＦ１９によって治療された霊長類において観察される用量制限毒性も引き起こさずに、悪性腫瘍に良い影響を十分に与えるように、ＦＧＦ１９−ＦＧＦＲ１４軸を阻害するのは不可能であろうと結論付ける。胆汁酸吸収不良によって影響を受けた患者に見られる下痢の症候を緩和するために、胆汁酸捕捉剤の投与が述べられている。予期される副作用、例えば、小分子脂溶性化合物を標的化する経口投与されたＦＧＦ１９−ＦＧＦＲ４の全身曝露および胃腸吸収に対する、胆汁酸捕捉剤の他薬併用（ｃｏ  ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ）の悪影響のせいで、著者らは、このアプローチについて批判的である。従来技術は、高い胆汁酸レベルに起因して見られる毒性作用を緩和して同時にＦＧＦＲ４シグナル伝達経路を効果的に阻害する方法の、一般に適用可能なストラテジーを提供することができない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明では、驚くべきことに、ＦＧＦＲ４阻害剤による線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）の阻害によって与えられる毒性の副作用は、ＦＧＦＲ４阻害剤が、胆汁酸レベルを低下させることが可能なさらなる活性剤と組み合わされると、防止または治療され得ることが見いだされた。胆汁酸レベルを下げるＦＧＦＲ４の生物学的機能に起因して、この受容体の阻害は、胆汁酸レベルの上昇をもたらし、その結果、腸および肝臓に毒性作用をもたらすことが観察された。したがって、胆汁酸レベルの増大は、本発明によれば、胆汁酸捕捉剤を用いて腸内の胆汁酸を結合することによって防ぐことができ、それは続いて、結合した胆汁酸と一緒に排泄される。同時に、共投薬（ｃｏ  ｍｅｄｉｃａｔｅｄ）のＦＧＦＲ４阻害剤の所望の活性は損なわれない。このアプローチは、患者の治療の成功を妨害しうる過度に毒性の副作用が観察されずにＦＧＦＲ４に向けられた治療を用いるのを可能にさせる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の第１の態様は、疾患、具体的には、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または過剰活性と関連する疾患の、予防、軽減または／および治療での使用のための、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤と組み合わせたＦＧＦＲ４阻害剤に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ビリルビン、γ−グルタミルトランスフェラーゼおよびアルカリフォスファターゼの血清レベル。結果を、Ｕ４−３単独（●）、Ｕｒｓｏｆａｌｋ（商標）と組み合わせたＵ４−３（■）および、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）と組み合わせたＵ４−３（▲）の投与について示す。縦破線：Ｕ４−３投与、緩和療法を０日目にＵ４−３を用いて開始して、投与後の最初の測定は１日目であった。
【図２】カニクイザルの血清中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＡＴ）。正常上限（ＵＬＮ）：８１  ＵＩ／Ｉ。結果を、雄ザルについて図２ａ、雌ザルについて図２ｂに示す。●として示される値はＵ４−３単独の投与を表わし、■はＵｒｓｏｆａｌｋ（商標）と組み合わせたＵ４−３を表わし、▲はＱｕａｎｔａｌａｎ（商標）と組み合わせたＵ４−３を表わす。点線はＵ４−３投与の時間を示す。
【図３】肝機能の指標としての、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）のレベル。結果を、Ｕ４−３単独の投与（●）、Ｕｒｓｏｆａｌｋ（商標）と組み合わせたＵ４−３（■）、および、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）と組み合わせたＵ４−３（▲）について示す。縦破線はＵ４−３投与の時間を示す。
【図４】カニクイザルの血清中の総胆汁酸レベル。ＵＬＮ：雄では１３．９１、雌では７．８５。結果を、雄の動物について図４ａ、雌について図４ｂに示す。●はＵ４−３単独について得られた値を表わし、■はＵｒｓｏｆａｌｋ（商標）と組み合わせたＵ４−３を表わし、▲はＱｕａｎｔａｌａｎ（商標）と組み合わせたＵ４−３を表わす。点線はＵ４−３投与の時間を示す。
【図５】カニクイザルの血清中のＦＧＦ１９。結果を、雄の動物について図５ａ、雌について図３ｂに示し、組み合わせた結果を図５ｃに示す。●によって示される値はＵ４−３単独の投与を表わし、■はＵｒｓｏｆａｌｋ（商標）と組み合わせたＵ４−３を表わし、▲はＱｕａｎｔａｌａｎ（商標）と組み合わせたＵ４−３を表わす。点線はＵ４−３投与の時間を示す。
【図６】サル血清中のヒトＩｇＧ。示される結果は、雄および雌の動物の組み合わせについて得られた。●によって示される値はＵ４−３単独の投与を表わし、■はＵｒｓｏｆａｌｋ（商標）と組み合わせたＵ４−３を表わし、▲はＱｕａｎｔａｌａｎ（商標）と組み合わせたＵ４−３を表わす。点線はＵ４−３投与の時間を示す。
【図７】試験の最後における肝臓Ｃｙｐ７Ａの遺伝子発現。結果を、Ｕ４−３単独の投与（●）、Ｕｒｓｏｆａｌｋ（商標）と組み合わせたＵ４−３（■）、および、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）と組み合わせたＵ４−３（▲）について、未処置のコントロール群（▼）と比較して示す。
【図８】試験の最後における回腸ＦＧＦ１９遺伝子発現。結果を、Ｕ４−３単独の投与（●）、Ｕｒｓｏｆａｌｋ（商標）と組み合わせたＵ４−３（■）、および、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）と組み合わせたＵ４−３（▲）について、未処置のコントロール群（▼）と比較して示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
治療される疾患は、具体的には、過剰増殖性の障害、心血管系の疾患、具体的には、高血圧、左室肥大、心肥大、慢性腎臓疾患、筋ジストロフィーおよび代謝疾患、具体的には、肥満および糖尿病である。
【００１２】
本明細書において用いられる「過剰増殖性の疾患」または「過剰増殖性の障害」は、任意の異常増殖、すなわち、機能障害または／および増殖制御の喪失に依存し得る動物内の組織の任意の異常な新生物を含む。過剰増殖性の障害は、腫瘍疾患および／または癌、例えば、癌腫、腺腫および肉腫のような固形腫瘍、または、白血病のような非固形腫瘍を含む。過剰増殖性の障害は、好ましくは、ＦＧＦＲ４過剰発現、すなわち、正常組織と比較して増大したＦＧＦＲ４発現によって特徴付けられる。
【００１３】
本発明では、過剰増殖性の障害は、好ましくは癌であり、より好ましくは、過剰増殖性の障害は、肝細胞癌腫、横紋筋肉腫、軟組織肉腫、頭頚部扁平上皮癌、肺腺癌、腎臓癌、膀胱癌、脳腫瘍、食道癌、胃癌、膵臓癌、小腸癌、大腸癌、乳癌、肺癌、肝臓癌、脾臓癌、甲状腺癌、下垂体癌、副腎癌、卵巣癌、頸部癌、精巣癌、前立腺癌、グリオーマ、メラノーマ、または／および白血病から選択され、特に、肝細胞癌腫である。
【００１４】
好ましい実施態様では、癌は、非転移性癌、具体的には、ＦＧＦＲ４−３８８Ｇｌｙ対立遺伝子または／およびＦＧＦＲ４−３８８Ａｒｇ対立遺伝子を有する患者における非転移性癌である。さらなる実施態様では、癌は、転移性癌、具体的には、ＦＧＦＲ４−３８８  Ａｒｇ対立遺伝子を有する患者における転移性癌である。
【００１５】
転移性癌の場合では、本発明は、転移、転移形成または／および転移進行、具体的には微小転移における、好ましくは、上記に定義した過剰増殖性の障害における治療に適切である。転移、具体的には微小転移は、外科的処置によってアクセス可能でないことが多く、薬理学的または／および照射治療が必要である。
【００１６】
別の実施態様によれば、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または過剰活性と関連する疾患は、代謝疾患であり、具体的には、メタボリック症候群または肥満である。
【００１７】
また、本発明のさらなる実施態様によれば、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現および／または過剰活性と関連する疾患は、心室肥大、心肥大または慢性腎臓疾患である。
【００１８】
本発明の、ＦＧＦＲ４阻害剤と組み合わせる、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤は、好ましくは、コレスチラミン、コレスチポールおよび／またはコレセベラムのような、胆汁酸捕捉剤である。ウルソデオキシコール酸のような胆汁酸のクリアランスを促進することが可能な薬剤は、驚くべきことに、本発明の目的に適切でないことが見いだされた。本発明の特に好ましい態様によれば、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤は、胆汁酸捕捉剤、具体的にはコレスチラミンである。驚くべきことに、コレスチラミンは、胆汁酸のクリアランスを促進することが可能な他の胆汁酸捕捉剤および薬剤よりも優れていることが見いだされた。ＦＧＦＲ４シグナル伝達経路を阻害する所望の活性に悪影響を及ぼさずに、ＦＧＦＲ４阻害剤に起因する毒性を引き起こすことが特に適切である。
【００１９】
また、本発明は、上記に定義されるように胆汁酸レベルを下げることが可能な少なくとも２つの薬剤の投与も包含する。特に、胆汁酸レベルを下げることが可能な２、３、４または５つの薬剤。特に、２またはそれよりも多くの胆汁酸捕捉剤を組み合わせることができる。
【００２０】
胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤としてコレスチラミンを用いて、１日あたり０．１〜１．０ｇ／キログラム体重の量が、ＦＧＦＲ４の阻害剤と組み合わせた場合、特に適切な投与量であることが見いだされた。好ましくは、１日あたり０．２〜０．６ｇ／キログラム体重、具体的には、１日あたり０．３〜０．４ｇ／キログラム体重、例えば、１日あたり約０．３５ｇ／キログラム体重が、適切であることが見いだされた。
【００２１】
本明細書において用いられる、同時投与（併用治療または併用療法とも呼ばれる）は、本発明のＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤の、それらが同時に活性であるような投与を指す。
【００２２】
同時投与は、単一組成物の形態または別個の組成物の形態、好ましくは少なくとも２つの別個の組成物、より好ましくは２つの別個の組成物での、ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（例えば、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）の投与を含む。同時投与は、同時（すなわち、同じ時）の、または連続した、すなわち、間隔をあけた、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）およびＦＧＦＲ４阻害剤の投与を含む。
【００２３】
「間隔をあけた」同時投与は、最大で１時間、最大で６時間、最大で１２時間、最大で１日、または、最大で１ヶ月の間隔以内の、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）およびＦＧＦＲ４阻害剤の投与を含む。また、間隔をあけた同時投与は、毎日、毎週または毎月ベースでの同一または異なるスケジュールでの、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）およびＦＧＦＲ４阻害剤の投与も含み、それは、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤およびＦＧＦＲ４阻害剤の剤形に依存してもよく、迅速放出剤形、制御放出剤形または／およびデポー形態のように、同一または異なってもよい。例えば、同時投与は、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）およびＦＧＦＲ４阻害剤の投与に関する異なるスケジュールを含む。
【００２４】
胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）およびＦＧＦＲ４阻害剤は、一緒または別々に投与されてよい。ＦＧＦＲ４阻害剤および酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）は、２つの別個の組成物として別々に投与することが特に好ましい。
【００２５】
ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）は、単回投与で、または、１日あたり２回以上、具体的には、２回または３回の投与に分けて投与することが可能である。ＦＧＦＲ４阻害剤については、１日あたり単回投与で投与することが好ましい。胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤については、１日あたり２回または３回の投与が特に好ましい。
【００２６】
本発明の一実施態様では、ＦＧＦＲ４阻害は、特異的な阻害である。「特異的な阻害」は、ＦＧＦＲ４活性の選択的な阻害である。ＦＧＦＲ４の特異的な阻害では、他の細胞構成要素、具体的には受容体（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２または／およびＦＧＦＲ３）の活性は有意に阻害されず、すなわち、他の細胞構成要素に対する、特異的なＦＧＦＲ４阻害剤のＩＣ５０値は、ＦＧＦＲ４に対するＩＣ５０値よりも、少なくとも１０倍（ａ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｆ  １０）、好ましくは１００倍、より好ましくは１０００倍大きい。本発明によれば、特異的なＦＧＦＲ４阻害剤を使用することが好ましい。ＦＧＦＲ４の非特異的な阻害は可能であるが、より好ましくない。
【００２７】
本発明のＦＧＦＲ４阻害剤は、好ましくは、ＦＧＦＲ４の細胞外ドメインに特異的に結合する分子である。
【００２８】
本発明のＦＧＦＲ４阻害剤は、直接的な阻害剤または間接的な阻害剤であってよい。ＦＧＦＲ４の直接的な阻害剤は、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ４転写または／およびＦＧＦＲ４遺伝子を直接的に阻害して、それにより、ＦＧＦＲ４活性を低下させる。
【００２９】
間接的なＦＧＦＲ４阻害剤は、上述のようにＦＧＦＲ４を直接的に阻害しないが、ＦＧＦＲ４、例えば、ＦＧＦＲ４リガンド、例えば、ＦＧＦ１、−２、−４、−６、−８、−１６、−１７、−１８または−１９、下流ターゲット、例えば、ＢｃｌＸＬ、または、ＭＡＰキナーゼカスケードにおけるタンパク質、例えば、Ｅｒｋ１または／およびＥｒｋ２と相互作用するターゲットに作用する。さらに、ＦＧＦＲ４の間接的な阻害は、転写または翻訳の阻害剤または輸送経路または脂質ラフトの阻害剤によってもたらされ得る。
【００３０】
本明細書において用いられる「ＦＧＦＲ４活性」は、ＦＧＦＲ４ポリペプチドが生理学的または病態生理学的効果、具体的には、アポトーシスに対する細胞の耐性を産生する能力を含む。
【００３１】
本発明では、ＦＧＦＲ４の活性は、核酸レベルで、例えば遺伝子レベルで、または転写レベルで阻害され得る。遺伝子レベルの阻害は、例えば遺伝子破壊による、部分的または完全な遺伝子不活性化を含んでよい。また、阻害は、ＦＧＦＲ４  ｍＲＮＡ、ＦＧＦＲ４リガンドｍＲＮＡに対して、または／および、下流ターゲットのｍＲＮＡに対して向けられ得る、例えばアンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ分子の投与によって、転写レベルでも生じ得る。適切なアンチセンス分子は、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子および核酸アナログから選択され得る。リボザイムは、ＲＮＡ分子および核酸アナログから選択され得る。ＲＮＡ干渉が可能な小さな二本鎖ＲＮＡ分子（ｓｉＲＮＡ分子）は、ＲＮＡ分子および核酸アナログから選択され得る。好ましい二本鎖ｓｉＲＮＡ分子は、１９〜２５個のヌクレオチドの鎖長および場合により少なくとも１つの３’突出を有する。適切なｓｉＲＮＡ分子は、例えば、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  ４１１（２００１），４９４−４９８）、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖ．１５（２００１），１８８−２００）、または、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．（ＥＭＢＯＪ．２０（２００１），６８７７−６８９８）に従って得てよい。これらの文献の内容は、参照により本明細書中に援用される。
【００３２】
さらに、ＦＧＦＲ４活性は、例えば、特異的なＦＧＦＲ４阻害をもたらす化合物の投与によって、タンパク質レベルで阻害され得る。タンパク質レベルでの阻害は、例えば、抗体または抗体フラグメントの適用を含んでよい。具体的には、これらの抗体または抗体フラグメントは、ＦＧＦＲ４に対して、好ましくはＦＧＦＲ４の細胞外ドメインに対して、またはＦＧＦＲ４リガンドに対して、または／および、下流ターゲットに対して、特異的に向けられる。抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体、組み換え抗体、例えば単鎖抗体、または、少なくとも１つの抗原結合部位、例えばタンパク質分解の抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２フラグメントまたは組み換え抗体フラグメント、例えば、ｓｃＦｖフラグメントを含む、そのような抗体のフラグメントであってよい。治療的目的のためには、特にヒトの治療のためには、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体の投与が特に好ましい。
【００３３】
例示的な、本発明に従って用いることのできる抗ＦＧＦＲ４抗体は、例えば、ＷＯ２０１４／１０５８４９、ＷＯ２０１２／１３８９７５およびＷＯ２０１０／００４２０４に記載される。
【００３４】
本発明の特に好ましい実施態様によれば、ＦＧＦＲ４阻害剤は、ヒト抗ＦＧＦＲ４抗体である。用語「ヒト抗体」は、完全なヒト抗体またはヒト化抗体を包含し、完全なヒト抗体が好ましい。ヒト抗体は、遺伝学的に操作された動物、例えば、異種免疫系を含む動物から、または、公知技術による抗体ディスプレイライブラリーから調製され得る。ヒト抗体は、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ（Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１））およびＬｏｎｂｅｒｇ（Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８））に一般的に記載される。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、無傷のヒト抗体またはヒト可変領域を有する無傷の抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製され得る。そのような動物は、典型的に、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、または、染色体外に存在し、または動物の染色体中にランダムに組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含む。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に不活化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法のレビューについては、例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照。そのような動物によって生産された無傷の抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変され得る。
【００３５】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作ることもできる。ヒトモノクローナル抗体の生産のための、ヒト骨髄腫およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３を参照）。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生産されるヒト抗体は、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  １０３：３５５７−３５６２（２００６）にも記載される。
【００３６】
ヒト抗体は、ファージディスプレイ法によって生産してもよい（例えば、米国第６，２４８，５１６号、米国第５，４０３，４８４号、米国第５，９６９，１０８号、米国第５，８８５，７９３号、米国第６，６９６，２４８号、米国第５，８４９，５００号を参照）。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術は、当技術分野で知られている（例えば、Ｃａｒｍｅｎ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ（２００２），１（２），ｐ．１８９−２０３；および、Ｓｉｒｉｗａｒｄｅｎａ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（２００２）１０９（３），ｐ．４２７−４３１を参照）。例えば、ヒト抗体可変領域を単鎖抗体（ｓｃＦｖ）としてファージ表面上に発現させるステップ、および、抗原に結合するファージを選択するステップを含む、ファージディスプレイ法を用いることができる（Ｎａｔｕｒｅ（１９９１），３５２，（６３３６），ｐ．６２４−６２８，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９２），２２７，（２），ｐ３８１−３８８、および、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５），２３，（９），ｐ．１１０５−１１１６）。同様に、ヒト抗体Ｆａｂ（抗原−結合フラグメント）をファージの表面上に発現させるステップ、および、抗原に結合するファージを選択するステップを含む、別のファージディスプレイ法を用いることもできる（ＷＯ９７／０８３２０およびＷＯ０１／０５９５０）。抗原結合に基づいて選択されたファージの遺伝子が分析されて、それにより、抗原に結合するヒト抗体可変領域をコードするＤＮＡ配列を決定することができる。抗原に結合するＦａｂまたはｓｃＦｖのＤＮＡ配列が明らかにされたら、ＣＤＲ配列がそこから抽出されて、その配列を有する発現ベクターを調製して適切な宿主に導入して、その後に遺伝子発現を続けて、ヒト抗体を得ることができる（ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／２０７９１、ＷＯ９３／０６２１３、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９３／１９１７２、ＷＯ９５／０１４３８、ＷＯ９５／１５３８８、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９４）１２，ｐ．４３３−４５５、および、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３（９），ｐ．１１０５−１１１６）。
【００３７】
また、ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生産してもよい。そのような可変ドメイン配列を、それから、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術は、当技術分野で知られている。
【００３８】
ヒト化抗体は、公知技術によるモノクローナル抗体のヒト化によって調製され得る。典型的に、非ヒト抗体は、親の非ヒト抗体の特異性および親和性を維持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるためにヒト化される。ヒト化抗体およびその作製方法は、例えば、Ａｌａｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）にレビューされる。ヒト抗体のフラグメント、例えば、少なくとも１つの抗原結合部位を含む上述の抗体の部分を使用することも可能である。抗体フラグメントの例は、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディまたは単鎖抗体分子、および、ヒトＦＧＦＲ４に結合する所望の能力を示す限り他のフラグメントを含む。特定の抗体フラグメントのレビューに関しては、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｔ．９：１２９−１３４（２００３）を参照。
【００３９】
ダイアボディは、二価または二重特異性であってよい２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）を参照。単鎖抗体は、抗体の軽鎖可変ドメインの全部または一部または重鎖可変ドメインの全部または一部を含む抗体フラグメントである。抗体フラグメントは、制限されないが、無傷の抗体のタンパク質分解ならびに本明細書に記載の組み換え宿主（例えばＥ．ｃｏｌｉまたはファージ）による生産を含む、様々な技術によって作ることができる。
【００４０】
特定の実施態様では、本発明によって使用される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に関して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。
【００４１】
特定の実施態様では、結合特異性の一方はＦＧＦＲ４に関し、他方は任意の他の抗原に関する。
【００４２】
特定の実施態様では、二重特異性抗体は、ＦＧＦＲ４の２つの異なるエピトープに結合し得る。また、二重特異性抗体は、細胞傷害性の作用物質を、ＦＧＦＲ４を発現する細胞に局所化するために用いてもよい。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメントとして調製することができる。
【００４３】
多重特異性抗体を作製する技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの組み換え共発現、および、「ｋｎｏｂ  ｉｎ  ｈｏｌｅ」エンジニアリングを含む。また、多重特異性抗体は、説明されるように、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果を設計することにより；２つまたはそれより多くの抗体またはフラグメントを架橋することにより；ロイシンジッパーを用いて二重特異性抗体を生産することにより；二重特異性抗体を作製するための「ダイアボディ」技術を用いることにより、および、単鎖Ｆｖを用いて三重特異性抗体を準備することにより、作製してもよい。「オクトパス抗体」を含む、３つまたはそれより多くの機能性抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書中に含まれる。
【００４４】
本発明における使用に特に好ましいのは、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸１１９〜２８４の間のエピトープに対して向けられた抗体であり、または、それらの機能性フラグメントまたは機能性誘導体は、治療的および診断的用途に特に有用である。特に好ましいものは、ヒトＦＧＦＲ４のアミノ酸１５２〜２４０の間、より好ましくはアミノ酸２３０および２４０の間のエピトープに対して向けられる、ヒト抗体である。特に好ましい実施態様によれば、本発明の抗体は、アミノ酸配列ＲＹＮＹを含む、から本質的になる、またはからなる、エピトープに対して向けられる。
【００４５】
本発明のヒト抗体により認識されるエピトープは、好ましくは、ヒトＦＧＦＲ４のＩｇ様ドメイン２内に位置する。
【００４６】
本発明の抗体は、様々な免疫グロブリン（Ｉｇ）型、例えばＩｇＡ−、ＩｇＤ−、ＩｇＥ−、ＩｇＧ−またはＩｇＭ−型、好ましくはＩｇＧ−またはＩｇＭ−型であってよく、制限されないが、ＩｇＧ１−、ＩｇＧ２−、ＩｇＧ３−、ＩｇＧ４−、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２−型を含む。好ましい一実施態様では、抗体はＩｇＧ１型である。
【００４７】
本発明の特定の実施態様では、抗体は、本明細書において後述する特定の重鎖相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２および／またはＣＤＲＨ３を含んでよい。
【００４８】
一実施態様では、ヒト抗体は、配列番号１〜６のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）を含む。
【００４９】
さらなる実施態様では、抗体は、配列番号７〜１２のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）を含む。
【００５０】
また、さらなる実施態様では、抗体は、配列番号１３〜２０のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）を含む。
【００５１】
また、本発明によって用いられる抗体は、特定の軽鎖相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２および／またはＣＤＲＬ３を含んでもよい。
【００５２】
したがって、一実施態様では、抗体は、配列番号２１〜２３および６８のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）を含む。
【００５３】
さらなる実施態様では、抗体は、配列番号２４〜２７のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）を含む。
【００５４】
また、さらなる実施態様では、抗体は、配列番号２８〜３５のいずれか１つに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する、軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＬ３）を含む。
【００５５】
本発明での使用のための抗体は、好ましくは、１つの重鎖内に、ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）の特定の組み合わせを含んでよい。
【００５６】
したがって、好ましい一実施態様では、抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含む重鎖を含み、ここで、ＣＤＲＨ１は、配列番号１〜６に示される配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列から選択され、ＣＤＲＨ２は、配列番号７〜１２に示される配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列から選択され、ＣＤＲＨ３は、配列番号１３〜２０に示される配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列から選択される。
【００５７】
最も好ましくは、本発明での使用のための抗体は、３つのＣＤＲを含む重鎖を含み、ここで、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３の組み合わせは、表１に示されるものから選択される。この表の各列は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３の１つの特定の組み合わせを表わすことが理解されよう。
【００５８】
【表１】
2018520990.tif 000002
【００５９】
本発明によれば、抗体は、１つの軽鎖内に、ＣＤＲ（すなわち、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３）の特定の組み合わせを含むことがさらに好ましい。
【００６０】
したがって、好ましい一実施態様では、抗体は、相補性決定領域ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３を含む軽鎖を含み、ここで、ＣＤＲＬ１は、配列番号２１〜２３および６８のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２は、配列番号２４〜２７のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３は、配列番号２８〜３５のいずれかに示されるアミノ酸配列、またはそれから１または２アミノ酸が異なるアミノ酸配列を有する。
【００６１】
最も好ましくは、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む軽鎖を含み、ここで、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３の組み合わせは、表２に示されるものから選択される。この表の各列は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３の１つの特定の組み合わせを表わすことが理解されよう。
【００６２】
【表２】
2018520990.tif 000003
【００６３】
上述のように、抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、フレームワーク領域が隣接してよい。３つのＣＤＲを含む抗体の重鎖または軽鎖は、例えば４つのフレームワーク領域を含む。
【００６４】
さらに、本発明は、上記の重鎖および／または軽鎖ＣＤＲによって特徴付けられる特定の抗体と同一のヒトＦＧＦＲ４上のエピトープを認識する抗体も包含する。これらの抗体の機能性フラグメントおよび機能性誘導体もまた、本発明の範囲内である。抗体によって認識されるＦＧＦＲ４上のエピトープを決定するために、ヒトＦＧＦＲ４の細胞外ドメインのアミノ酸配列由来の、化学的に調製されたタンパク質配列アレイ由来の短いペプチドを用いて、抗体エピトープの位置特定および同定をすることができる（Ｒｅｉｎｉｃｋｅ  Ｗ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００４，２４８：４４３−６３）。本発明の抗体により結合されるＦＧＦＲ４細胞外ドメイン内のエピトープをマッピングするためのさらなる方法は、Ｓｎａｐｓ／ＳＥＬＤＩ（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，２００１，Ｊｕｎｅ  １５；９２（６）：８７１−６）を含み、または、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるような日常的なクロスブロッキングアッセイを行なうことができる。
【００６５】
特に好ましい実施態様によれば、本発明による使用のためのヒト抗体は、
（ａ）配列番号１〜６に示されるＣＤＲＨ１、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＨ１配列、
（ｂ）配列番号７〜１２に示されるＣＤＲＨ２、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＨ２配列、および
（ｃ）配列番号１３〜２０に示されるＣＤＲＨ３、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＨ３配列、
からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む重鎖、
および／または、
（ｄ）配列番号２１〜２３または６８に示されるＣＤＲＬ１、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＬ１配列、
（ｅ）配列番号２４〜２７に示されるＣＤＲＬ２、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＬ２配列、および
（ｆ）配列番号２８〜３５に示されるＣＤＲＬ３、またはそれから１または２アミノ酸が異なるＣＤＲＬ３配列
からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲを含む軽鎖、
を含む。
【００６６】
本発明の好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５２〜５９のいずれか１つに示される重鎖可変領域（ＶＨ）またはそれから１または２アミノ酸が異なる配列を含む。さらに、本発明のヒト抗体は、好ましくは、配列番号６０〜６７のいずれか１つに示される軽鎖可変領域（ＶＬ）またはそれから１または２アミノ酸が異なる配列を含む。特に好ましいものは、配列番号５２〜５９のいずれか１つに示される重鎖可変領域および配列番号６０〜６７のいずれか１つに示される軽鎖可変領域を含む、ヒト抗体である。特に、以下に開示される抗体Ｕ４−１〜Ｕ４−９のいずれか１つを使用することが好ましい。
【００６７】
特に好ましいものは、配列番号１に示されるＣＤＲＨ１、配列番号７に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１３に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２１に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号２８に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−１）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５２に係る重鎖可変領域および配列番号６０に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５２および６０に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も適切である。
【００６８】
特に好ましいものは、配列番号２に示されるＣＤＲＨ１、配列番号７に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１４に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号２９に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−２）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５３に係る重鎖可変領域および配列番号６１に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５３および６１に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も適切である。
【００６９】
特に好ましいものは、配列番号３に示されるＣＤＲＨ１、配列番号８に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１５に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２３に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２５に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３０に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−３）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５４に係る重鎖可変領域および配列番号６２に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５４および６２に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も適切である。
【００７０】
特に好ましいものは、配列番号４に示されるＣＤＲＨ１、配列番号９に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１６に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３１に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−４）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５５に係る重鎖可変領域および配列番号６３に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５５および６３に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も適切である。
【００７１】
特に好ましいものは、配列番号５に示されるＣＤＲＨ１、配列番号１０に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１７に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３２に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−５）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５６に係る重鎖可変領域および配列番号６４に係る軽鎖可変領域を含む。また重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５６および６４に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も適切である。
【００７２】
特に好ましいものは、配列番号６に示されるＣＤＲＨ１、配列番号１２に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１９に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２６に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３４に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−６）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５８に係る重鎖可変領域および配列番号６６に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５８および６６に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も適切である。
【００７３】
特に好ましいものは、配列番号３に示されるＣＤＲＨ１、配列番号７に示されるＣＤＲＨ２および配列番号２０に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号６８に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２７に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３５に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−７）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５９に係る重鎖可変領域および配列番号６７に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５９および６７に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も適切である。
【００７４】
特に好ましいものは、配列番号４に示されるＣＤＲＨ１、配列番号１１に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１８に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号２２に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２４に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３３に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−８）である。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５７に係る重鎖可変領域および配列番号６５に係る軽鎖可変領域を含む。また、重鎖および／または軽鎖の可変領域の配列が、配列番号５７および６５に示されるものから１または２アミノ酸異なるヒト抗体も適切である。
【００７５】
また、配列番号３に示されるＣＤＲ１、配列番号８に示されるＣＤＲＨ２および配列番号１５に示されるＣＤＲＨ３を含む重鎖、および、配列番号６８に示されるＣＤＲＬ１、配列番号２７に示されるＣＤＲＬ２および配列番号３５に示されるＣＤＲＬ３を含む軽鎖、を含む、ヒト抗体（Ｕ４−９）も好ましい。また、ＣＤＲの１つまたは複数が１または２アミノ酸異なるヒト抗体、または、ヒトＦＧＦＲ４上の同一エピトープを認識する抗体も適切である。特に好ましい実施態様では、ヒト抗体は、配列番号５４に係る重鎖可変領域および配列番号６７に係る軽鎖可変領域を含む。抗体Ｕ４−９は、好ましくは、抗体Ｕ４−３に関して特定される重鎖、および、抗体Ｕ４−７に関して特定される軽鎖、を含む。
【００７６】
さらに、可溶性ＦＧＦＲ４受容体、例えば、膜アンカードメインがない受容体フラグメント、アンタゴニストＦＧＦＲ４リガンドムテイン、例えば、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８またはＦＧＦ１９のムテイン、ペプチドまたは低分子量ＦＧＦＲ４阻害剤を、本発明において使用してよい。ＦＧＦＲ４の低分子量阻害剤の例は、インドリノン類（Ｍｏｈａｍｍａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：９５５−９６０）、ＳＵ５４０２、ＳＵ４９８４、および、ＰＤ１７３０４（Ｋｏｚｉｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．（２００４），Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９，５０００４−５００１１）である。
【００７７】
また、本発明は、上記に定義した少なくとも２つのＦＧＦＲ４阻害剤、具体的には、２つ、３つ、４つ、または５つのＦＧＦＲ４阻害剤の投与も包含する。
【００７８】
本発明さらなる態様は、上記に定義した、ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤を含む、医薬組成物またはキットを指す。加えて、医薬組成物またはキットは、場合により、１つまたは複数の生理的に許容できる担体、希釈剤および／またはアジュバントを含んでよい。
【００７９】
本発明での使用に適切な医薬組成物またはキットは、有効成分がその使用目的を達成する有効量で含まれる組成物またはキットを含む。治療的に効果的な投与量は、上記に定義した過剰増殖性の障害を患っている患者における症候の改善または生存の延長をもたらす化合物の量を指す。
【００８０】
ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤の毒性および治療的有効性は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％にとって致死の投与量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に効果的な投与量）を決定するための、細胞培養または実験的動物における標準的な調剤手順によって決定することができる。本発明で用いられる任意の化合物に関して、治療的に効果的な投与量は、はじめに、細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、投与量は、動物モデルにおいて、細胞培養で決定されたＩＣ５０を含む循環濃度範囲を達成するように処方することができる（すなわち、増殖因子受容体活性の最大半量の阻害を達成する試験化合物の濃度）。そのような情報は、ヒトにおける有用な投与量をより正確に決定するために用いることができる。毒性および治療的効果の間の投与量の比は、治療的指標であり、ＬＤ５０およびＥＤ５０の間の比として表すことができる。高い治療的指標を示す化合物が好ましい。正確な処方、投与経路および用量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る（例えば、Ｆｉｎｇｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９７５，「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，Ｃｈ．１，ｐ．１を参照）。投与用量および間隔は、受容体調節効果を維持するのに十分な活性部分の血漿レベル、または最小有効濃度（ＭＥＣ）を与えるように、個々に調節してよい。ＭＥＣは、それぞれの化合物に関して異なるが、インビトロデータ、例えば、本明細書に記載のアッセイを用いて受容体の５０〜９０％阻害を達成するのに必要な濃度から推定することができる。化合物は、１０〜９０％、好ましくは３０〜９０％、最も好ましくは５０〜９０％の割合（ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｉｍｅ）でＭＥＣよりも高い血漿レベルを維持するレジメンを用いて投与すべきである。ＭＥＣを達成するのに必要な用量は、個々の特性および投与経路に依存する。局所投与または選択的取り込みの場合、薬の効果的な局所濃度は、血漿濃度に関係しなくてよい。
【００８１】
本発明の医薬組成物またはキットは、本明細書に規定される疾患の治療での使用に適切である。具体的には、医薬組成物またはキットは、ＦＧＦＲ４発現、過剰発現または過剰活性と関連する疾患の、予防、軽減および／または治療での使用に適切である。本発明の医薬組成物またはキットを用いて治療することのできる疾患は、過剰増殖性の障害、心血管系の疾患、具体的には、高血圧、左室肥大、心肥大、慢性腎臓疾患、筋ジストロフィーおよび代謝疾患、具体的には、肥満および糖尿病を含む。最も好ましくは、本発明の医薬組成物またはキットは、本明細書において上記に定義される過剰増殖性の障害の治療での使用に適切である。
【００８２】
投与される医薬組成物またはキットの実際の量は、治療される対象、対象の体重、苦痛の重症度、投与経路および処方する医師の判断に依存する。抗体または治療的に活性の核酸分子、および他の化合物については、例えば、１日あたり０，００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、具体的には０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの毎日の用量が適切である。
【００８３】
適切な投与経路は、例えば、経口、直腸、経粘膜または腸投与；筋肉内、皮下、髄内注入、ならびに、髄腔内、直接的な心室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内または眼球内注入を含む、非経口送達を含む。胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤、具体的には胆汁酸捕捉剤（例えばコレスチラミン）に関しては、経口投与が好ましい。ＦＧＦＲ４阻害剤、具体的には抗ＦＧＦＲ４抗体（例えばＵ４−３）に関しては、静脈内投与が好ましい。
【００８４】
あるいは、本発明の医薬組成物またはキットは、体系的よりむしろ局所的な様式で、例えば、化合物の注入を介して、固形腫瘍中に直接的に、しばしばデポーまたは徐放性製剤で投与し得る。
【００８５】
さらに、本発明の医薬組成物またはキットは、標的化した薬物輸送システムで、例えば、腫瘍特異的抗体によってコーティングされたリポソームで投与し得る。リポソームは、腫瘍に標的化されて、選択的に取り込まれる。
【００８６】
本発明の医薬組成物またはキットでは、ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）は、１つの医薬組成物で提供され得て（単回投与形態）、または、異なる組成物（別個投与形態）、好ましくは、少なくとも２つの別個の組成物、より好ましくは２つの別個の組成物で提供され得る。具体的には、本発明の医薬組成物またはキットの別個の組成物は、同一の経路または異なる経路によって投与され得る。
【００８７】
本発明のさらに別の態様は、有効量のＦＧＦＲ４阻害剤を、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には、１つまたは複数の胆汁酸捕捉剤）と同時投与で、それを必要とする対象に投与するステップを含む、疾患を予防、緩和または／および治療するための方法である。具体的には、疾患は、過剰増殖性の障害、心血管系の疾患、具体的には、高血圧、左室肥大および心肥大、慢性腎臓疾患、筋ジストロフィーおよび代謝疾患、具体的には、肥満および糖尿病であってよい。本発明の好ましい態様は、本明細書において上記に記載の過剰増殖性の障害を、予防、緩和または／および治療するための方法である。
【００８８】
予防、軽減または／および治療を必要とする対象は、過剰増殖性の障害、心血管系の疾患、具体的には、高血圧または慢性腎臓疾患を患い得る任意の動物であってよく、具体的には哺乳類、より具体的には人間である。
【００８９】
本発明の別の態様によれば、ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤の組み合わせは、さらなる治療的手順と組み合わせることができる。
【００９０】
ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤と組み合わせられる治療的手順は、過剰増殖性の障害の予防、軽減または／および治療に適切な、具体的には、過剰増殖性の細胞／癌細胞におけるアポトーシスの誘導に適切な、任意の適切な治療的手順を含む。したがって、治療的手順は、過剰増殖性の障害の予防、軽減または／および治療のための薬剤を用いた（抗癌薬、具体的には、アポトーシス誘導剤を用いた）治療または／および照射を含んでよい。好ましい実施態様では、過剰増殖性の障害の予防、軽減または／および治療のための治療的手順は、照射療法、より好ましくは、γ照射療法である。放射線治療レジメンは、当業者に公知である。技術水準の癌治療の用量は、ＦＧＦＲ４阻害剤および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤の投与と組み合わせた場合、減らしてよい。
【００９１】
本発明によれば、ビタミン類、具体的には脂溶性ビタミンの投与によって、ＦＧＦＲ４阻害剤（具体的には抗ＦＧＦＲ４抗体）および胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的には胆汁酸捕捉剤）の組み合わせによる上述の治療を補充することが好ましい。胆汁酸捕捉剤は、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥおよびビタミンＫのような脂溶性ビタミンと結合することが見いだされた。この作用は、ビタミン不足をもたらし得るので、これらのビタミン類による補充は、有益であることが分かる。ビタミン類および胆汁酸捕捉剤の投与の間の適切な間隔に注意すべきである。
【００９２】
本発明は、以下の図および実施例によってさらに説明される。
【実施例】
【００９３】
胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤の存在および不存在における、ＦＧＦＲ４阻害剤の毒性。
ＦＧＦＲ４阻害の任意の毒性の副作用が、胆汁酸レベルの上昇に起因するかどうかを解明するために、胆汁酸レベルを妨げる薬剤の共投与の効果を試験した。抗ＦＧＦＲ４抗体Ｕ４−３を、ＦＧＦＲ４活性の阻害剤として使用した（試験項目：ＴＩ）。胆汁酸レベルの低減については、胆汁酸捕捉剤コレスチラミン（Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標））を用いた。ウルソデオキシコール酸（Ｕｒｓｏｆａｌｋ（商標））は、肝臓の外の胆汁酸の輸送を増大させるための第二の化合物として用いた。ウルソデオキシコール酸は、肝臓における細胞膜転座および胆汁酸トランスポーター発現を増大させる親水性胆汁酸である（緩和化合物１および２）。
【００９４】
試験デザインは、グループあたり４匹のカニクイザル（雄２匹、雌２匹）を含んだ。動物を、以下のグループに割り当てた。
【表３】
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【００９５】
投与
試験項目（Ｕ４−３）
経路：静脈内、ゆっくりのボーラス注入。
持続時間および頻度：７日間隔で３回投与（すなわち、０日目、７日目および１４日目）。投与の最初の日を０日目と指定した。最後の投与後に、少なくとも２８日の処置なし期間、動物を維持した。
方法：エチルアルコール水溶液を用いた局所的消毒後に静脈中に導入された、ポンプシステムおよびマイクロフレックス注入セットを用いた、静脈内注入（ゆっくりのボーラス）。注入後、静脈に滅菌生理食塩水を流した。
３つの静脈を交替で使用した：
−右外伏在静脈：部位１
−左外伏在静脈：部位２
−右橈側皮静脈：部位３
投与された容量：９．５２ｍＬ／ｋｇ／日。個々の投与容量は、最近の体重を用いて計算した。
投与の持続時間：およそ１５分。
投与経路の選択の理論的根拠：静脈内経路を、ヒトでの潜在的な投与経路であるので、選択した。
【００９６】
緩和化合物およびビヒクル
経路：経口。
頻度：８時間±１時間おいて、毎日２回。
持続時間：０日目から処置なし期間の最終日までのそれぞれの日、すなわち、少なくとも４１日の投与。
方法：経鼻カテーテル（動物は、処置の開始の５日前に、この投与経路に慣れさせた）。
果物または野菜を、毎日の投与の前に与えた；ペレット状の食物を、毎日の投与の後に与えた。緩和化合物は、投与１５分前から、および投与中、磁気撹拌下で維持した。
投与された容量：２．５ｍＬ／ｋｇ／ａｄｍ。個々の投与容量は、最近の体重を用いて計算した。
投与経路の選択の理論的根拠：経口経路を、ヒトでの投与経路であるので、選択した。
【００９７】
観察
試験動物を、臨床的兆候、肝臓酵素、胆汁酸レベルおよびＦＧＦ１９について試験した。ＦＧＦ１９血清レベルは、製造元の説明書に従って、ＲＮＤ由来のｑｕａｎｔｉｑｕｉｎｅ  ｈｕｍａｎ  ＦＧＦ１９  ＥＬＩＳＡを用いて決定した。Ｃｙｐ７Ａ１（肝臓）およびＦＧＦ１９（回腸）に関する、カニクイザル（ｃｙｎｏ）肝臓および回腸サンプルのＲＮＡ発現を、Ｈｉｇｈ−Ｃａｐａｃｉｔｙ  ＲＮＡ−ｔｏ−ｃＤＮＡ  Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて決定して、その後の定量的リアルタイムＰＣＲを続けた。結果を図１〜８および以下の表１に示す。
【００９８】
カニクイザルの血清中の肝臓酵素レベルを決定して、ビリルビン、γ−グルタミルトランスフェラーゼおよびアルカリフォスファターゼの酵素レベルは、胆汁酸変性剤を伴うまたは伴わないＦＧＦＲ４阻害剤の投与によって、影響を受けないことが示された（図１）。上昇したレベルの肝臓酵素（ＡＬＡＴ）、胆汁酸およびＦＧＦ１９は、カニクイザル血清において、胆汁酸レベル制御におけるＦＧＦＲ４の示唆された生物学的機能と一致して、Ｕ４−３投与後に見られた。また、一部の動物は、肝臓の病理組織学的試験後に、最小限の胆管過形成を示した。これらの増大および変化の全ては、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）（コレスチラミン）の同時投与によって消失した。Ｕｒｓｏｆａｌｋ（商標）では、効果はあまりはっきりしなかった（ｌｅｓｓ  ｐｒｏｎｏｕｎｃｅｄ）（図２〜５）。血清中のヒトＩｇＧレベルは、全ての処置グループにおいて等しく、共処置が効く、異なる臓器区画によって予測され得るように、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）およびＵｒｓｏｆａｌｋ（商標）は、血清抗体レベルを単純に下げることによっては効くわけではない（図６）ことを示した（肝臓のような血液がアクセス可能な臓器におけるＦＧＦＲ４（ＦＧＦＲ４  ｉｎ  ｂｌｏｏｄ  ａｃｃｅｓｓｉｂｌｅ  ｏｒｇａｎｓ  ｌｉｋｅ  ｔｈｅ  ｌｉｖｅｒ）、一方で、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）およびＵｒｓｏｆａｌｋ（商標）は、経口化合物であり、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）は、血流を渡ることなく直接的に排泄される）。試験の最後における上昇した肝臓Ｃｙｐ７Ａ遺伝子発現は、ＦＧＦＲ４抗体が、全ての処置グループにおいて、試験の最後まで肝臓ＦＧＦＲ４を阻害することを示し、抗体のＦＧＦＲ４阻害機能が、共投与された化合物によって変わらないことをさらにサポートする（図７）。また、ＦＧＦＲ４抗体とＱｕａｎｔａｌａｎ（商標）（コレスチラミン）の共投与は、ＦＧＦＲ４抗体単独と比較して、回腸において、ＦＧＦ１９発現レベルの上昇も防ぐ。このことは、胆汁酸が、胃腸においてＦＧＦ１９を上方制御することの繰り返しである（図８）。
【００９９】
【表４】
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【０１００】
結論
規定の実験条件下では、７日おきに、１００ｍｇ／ｋｇの投与量レベルで、単独または２つの異なる緩和化合物（２０ｍｇ／ｋｇ／日のＵｒｓｏｆａｌｋ（商標）または３５０ｍｇ／ｋｇ／日のＱｕａｎｔａｌａｎ（商標）；８時間おいて、１日２回の経口投与）と関連する、Ｕ４−３の３つの静脈内投与は、臨床的兆候、局所反応、食物消費または体重に対する影響もなく、臨床的に良好に耐容性であった。上昇した血清胆汁酸および肝臓酵素レベル（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼおよびアラニンアミノトランスフェラーゼ）は、ＦＧＦＲ４阻害剤を、単独または緩和化合物１、Ｕｒｓｏｆａｌｋ（商標）と一緒に摂取した動物において顕著であった。
【０１０１】
緩和化合物２、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）と関連する試験項目による処置は、一過的なアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ活性を誘導しただけだった。４週の処置なし期間の最後には、効果は可逆であった。Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）の添加は、胆汁酸濃度（図２）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ活性（図３）を正常範囲内に維持することを可能にして、病理組織学的変化は存在しなかった。
【０１０２】
病理組織学的試験は、項目に関連するいかなる知見も明らかにしなかった。
【０１０３】
補助治療としてのＵｒｓｏｆａｌｋ（商標）またはＱｕａｎｔａｌａｎ（商標）の投与は、Ｕ４−３に対する全身性曝露に対して影響を与えなかった。
【０１０４】
これらの知見に基づいて、１００ｍｇ／ｋｇの投与量レベルでの試験項目Ｕ４−３は、緩和化合物２、Ｑｕａｎｔａｌａｎ（商標）を伴って投与された場合に、より良好に耐容性であると考えられた。
【０１０５】
したがって、当該試験は、ＦＧＦＲ４阻害剤（Ｕ４−３）の投与の副作用が、胆汁酸レベルを下げることが可能な薬剤（具体的にはコレスチラミン）をさらに投与することによって、有意に低減することができることを確認した。Ｕ４−３およびコレスチラミンの併用療法は、毒性学的知見（臨床的兆候、血液学、血液科学および組織病理学）をもたらさず、一方で、これらのパラメーターは、Ｕ４−３単独を用いた治療後に上昇することが見いだされている。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2018520990.tif 000013
【図５Ｃ】
2018520990.tif 000014
【図６】
2018520990.tif 000015
【図７】
2018520990.tif 000016
【図８】
2018520990.tif 000017
【配列表】
2018520990000001.app
【国際調査報告】
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2018520990.tif 000019
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