(57)【要約】  スニチニブのポリマーマトリクス中への封入又は組み込みを増加する方法を開発した。得られる製剤は、ＤＬＫに結合する、スニチニブ又はＪＮＫシグナル伝達の他の阻害剤のより持続した制御放出を提供する。装荷の増加は、アルカリ性溶媒系を使用して達成される。医薬組成物を、高い眼内圧に起因する神経細胞死を治療又は減少するために投与することができる。投与により、治療的利益をもたらすのに十分高いが、許容できないレベルの細胞毒性を回避するのに十分低い濃度で長時間に亘ってスニチニブ又は他の阻害剤が放出され、抱合体によらない阻害剤よりも更に長期の放出を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
制御放出又は持続放出の製剤中にて、ＤＬＫに結合することによるＪＮＫシグナル伝達阻害剤を有効量投与することを含む、上昇した眼内圧に起因する眼の神経損傷を減少する方法。
【請求項２】
前記阻害剤が、スニチニブ、ＳＲ８１６５、アキシチニブ、ボスチニブ、ネラチニブ、クリゾチニブ、トザセルチブ、レスタウルチニブ、フォレチニブ、ＴＡＥ−６８４、及びＫＷ−２４４９からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記阻害剤が、少なくとも１週間に亘って放出する持続放出製剤である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記製剤が、ポリマーマトリクス中への封入又は組み込みの際に溶液中の前記阻害剤のアルカリ度を増加させることによって作製される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記阻害剤が、ポリマーナノ粒子又はミクロ粒子に製剤化される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記阻害剤が、５重量％超、１０重量％超、又は１５重量％超の装荷で前記ポリマーに組み込まれる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記阻害剤がポリマーインプラントに組み込まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記製剤が、ポリ（ヒドロキシ酸）、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えばポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えばポリ（エチレングリコール）、ポリアルキレンオキシド、例えばポリ（エチレンオキシド）、ポリアルキレンテレフタレート、例えばポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリハロゲン化ビニル、例えばポリ（塩化ビニル）、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリスチレン、ポリウレタン及びそれらのコポリマー、セルロース、例えばアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシエチルセルロース、三酢酸セルロース及びセルロース硫酸ナトリウム塩（本明細書では総称して「セルロース」と呼ぶ）、エステル、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）及びポリ（オクタデシルアクリレート）（本明細書では総称して「ポリアクリル酸」と呼ぶ）を含むアクリル酸、メタクリル酸のポリマー又はそれらのコポリマー若しくは誘導体、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）及びポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、それらのコポリマー及びブレンドからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記阻害剤が式（１）：
【化１】
2018500394.tif 000008
（式中、
Ｒ１は、水素、ハロ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、−（ＣＯ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、−（ＣＨ２）ｒＲ１６及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、ハロ、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、シアノ、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、アリール、ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３Ｒ１４及び−ＳＯ２Ｒ２０（ここで、Ｒ２０はアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、−（ＣＯ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、アリール、ヘテロアリール、−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）２Ｒ１４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、及び−ＳＯ２Ｒ２０（ここで、Ｒ２０はアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ４は、水素、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、及び−ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ５は、水素、アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択され、
Ｒ６は、水素、アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択され、
Ｒ７は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択されるか、又は、
Ｒ６とＲ７とが結合して−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、及び−（ＣＨ２）６−からなる群から選択される基を形成してもよく（但し、Ｒ５、Ｒ６、又はＲ７の少なくとも１つが−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０でなくてはならない）、
Ｒ８及びＲ９は、水素、アルキル、及びアリールからなる群から独立して選択され、
Ｒ１０は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、−Ｎ（Ｒ１１）（ＣＨ２）ｎＲ１２、及び−ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１２は、−ＮＲ１３Ｒ１４、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、アリール、ヘテロアリール、−Ｎ＋（Ｏ−）Ｒ１３Ｒ１４、−Ｎ（ＯＨ）Ｒ１３、及び−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒａ（ここで、Ｒａは非置換のアルキル、ハロアルキル、又はアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、水素、アルキル、シアノアルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から独立して選択されるか、又は、
Ｒ１３とＲ１４とが結合して複素環基を形成してもよく、
Ｒ１５は、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、及びアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ１６は、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ１７は、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ２０は、アルキル、アリール、アラルキル、又はヘテロアリールであり、
ｎ及びｒは独立して１、２、３、又は４である）の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩である、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、それらの開示の全体が引用することにより本明細書の一部をなす、２０１４年１２月１５日付出願の米国仮特許出願第６２／０９２，１１８号「徐放性スニチニブ製剤（Controlled Release Sunitinib Formulations）」、及び２０１５年３月２７日付出願の米国仮特許出願第６２／１３９，３０６号「角膜血管新生の予防方法（Method Of Prevention Of Corneal Neovascularization）」の優先権及び利益を主張する。
【０００２】
［配列表の参照］
２０１５年１２月１５日付で作成され、７４６バイトのサイズを有する「ＪＨＵ＿Ｃ１３４９２＿ＰＣＴ＿ＳＴ２５」という名称のテキストファイルとして２０１５年１２月１５日に提出された配列表が、引用することにより本明細書の一部をなす。
【０００３】
本発明は、スニチニブ製剤、またその使用方法、特に眼の疾患及び他の神経障害の治療における使用の方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
緑内障にはいくつかのタイプがある。２つの主なタイプは、開放隅角及び閉塞隅角である。これらは、眼内圧（ＩＯＰ）、すなわち眼の内部の圧力の増加によって示される。
【０００５】
緑内障の全症例の少なくとも９０％を占める、緑内障の最も一般的な形態である開放隅角緑内障は、ゆっくりとした排水管の閉塞によってもたらされ、結果として眼圧の増加を生じる。開放隅角緑内障は虹彩と角膜との間の隅角が広く開いており、徐々に進行して生涯続く病状であり、症状及び損傷に気付かない。「開放隅角」は、虹彩が角膜と接する隅角が、あるべき様に広く開いていることを意味する。また、開放隅角緑内障は、原発性又は慢性緑内障とも呼ばれる。開放隅角緑内障は緑内障の最も一般的なタイプであり、約３００万人のアメリカ人がこの疾患に冒されている。
【０００６】
閉塞隅角緑内障は、あまり一般的ではない緑内障の形態である。閉塞隅角緑内障は、排水管の遮断によってもたらされ、結果として眼内圧が突然上昇し、虹彩と角膜との間の隅角が閉じ又は狭くなり、非常に急速に進行し、通常は非常に顕著な症状及び損傷があり、迅速な医学的処置を要する。閉塞隅角緑内障は、急性緑内障又は狭隅角緑内障とも呼ばれる。開放隅角緑内障とは異なり、閉塞隅角緑内障は虹彩と角膜との間の隅角の閉鎖の結果である。
【０００７】
正常眼圧緑内障（ＮＴＧ）又は低眼圧緑内障又は正常圧緑内障は、眼圧が非常に高いわけではないにも関わらず、視神経が傷害される。先天性緑内障は、出生前期に正しくない又は不完全な眼の排水管の発達がある場合に赤ん坊に起こる。これは、遺伝の可能性のある稀な病状である。無併発性である場合、マイクロサージャリー（microsurgery：顕微鏡下手術）によって、構造的上の欠陥を修正することができることが多い。他の症例は、薬物治療及び手術によって治療される。緑内障の他のタイプとして、続発性緑内障、色素性緑内障、偽落屑緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障、虹彩角膜内皮症候群（ＩＣＥ）、及びぶどう膜炎緑内障が挙げられる。
【０００８】
開放隅角緑内障は、緑内障の最も一般的な形態であり、約３００万人のアメリカ人がこの疾患に冒されている。開放隅角緑内障は、眼の排水管が経時的に閉塞すると起こる。眼の内部の圧力（眼内圧、すなわちＩＯＰ）は、正しい量の房水（fluid）を眼から排水することができないため上昇する。開放隅角緑内障の場合、排水管の入り口は明確であり、正常にはたらいているはずである。開放隅角緑内障が診断されず、治療されない場合、ゆるやかな視力の喪失をもたらす場合がある。このタイプの緑内障はゆっくりと、時に、長年に亘って目立った視力の喪失を伴わずに進行する。開放隅角緑内障は、通常、特に早期に発見され治療される場合には、薬物治療に対する反応性が良好である。
【０００９】
神経変性疾患である緑内障における視力喪失は世界的な不可逆的失明の主な原因であり、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の機能不全及び死に起因する。現在の治療法は、いずれも眼内圧（ＩＯＰ）を低下させることによるものである。しかしながら、減圧を達成することは困難であり、著しい眼圧の低下があってもＲＧＣの喪失が続く場合がある。したがって、ＲＧＣ細胞死プロセスを直接的に阻害することによってＩＯＰ低下を補う神経保護剤を開発する努力がなされてきたが、いまだに神経保護剤は臨床で使用されていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、ナノ粒子及びミクロ粒子を含むポリマーマトリクス中に、増加された装荷（loading）で緑内障及び神経損傷の治療に対する薬物を封入又は組み込む方法を提供することである。
【００１１】
本発明の更に別の目的は、改善された投薬製剤、延長された薬物動態、及びその使用方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
スニチニブのポリマーマトリクス中への封入又は組み込みを増加する方法を開発した。得られる製剤は、緑内障と関連する眼内圧の上昇に起因する神経細胞死の減少又は予防のためのスニチニブのより持続した制御放出を提供する。装荷の増加は、アルカリ性溶媒系を使用して達成される。
【００１３】
実施例により、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ（ＰＬＡ）及びＰＥＧ−ＰＬＧＡ／ブレンドのミクロ粒子等のポリエステルがスニチニブの持続放出を示すことが実証されている。シングルエマルジョン溶媒蒸発法を使用して、スニチニブで装荷された、ＰＬＧＡとＰＬＧＡ（分子量４５ｋＤａ）に共有結合的に共役したＰＥＧ（ＰＬＧＡ４５ｋ−ＰＥＧ５ｋ）とで構成されるポリマーミクロ粒子を作製した。最大装荷は、アルカリを添加しないわずか１％と比べて、スニチニブのアルカリ度をＰＥＧ−ＰＬＧＡによって最大１６．１％に増加することによって達成され、ＤＭＦの添加によって更に増加することができた。
【００１４】
薬物は、薬物の制御された送達に対して改善された特性を有するインプラント（例えば、ロッド、ディスク、ウェファー等）、ナノ粒子、又はミクロ粒子を形成するために使用され得る。スニチニブの制御放出のためインプラント（例えば、ロッド、ディスク、ウェファー等）、ナノ粒子、ミクロ粒子、又はそれらの組合せを含有する医薬組成物は、マトリクス中の薬物と、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤とを合わせることにより作製され得る。ナノ粒子、ミクロ粒子、又はそれらの組合せは、１つ以上の薬物、又は薬物と１つ以上のポリマーとのブレンドから形成され得る。
【００１５】
デュアルロイシンジッパーキナーゼ（ＤＬＫ）がスニチニブの主な神経保護薬標的であることが発見されている。いくつかの他の神経保護キナーゼ阻害剤もまたＤＬＫを阻害し、この知見を支持する。これらの化合物の持続制御放出製剤を投与して、眼内圧の上昇に起因する神経細胞死を治療又は減少することができる。実施例により、動物モデルにおいて、スニチニブ製剤が眼内圧の上昇に起因する視神経損傷の予防に有効であることが実証されている。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１Ａ】スニチニブが、７２時間培養後に、増加するスニチニブの用量で処理された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでのＲＧＣ生存、すなわちイムノパニングを行ったＲＧＣの生存を促進することを示すグラフである。
【図１Ｂ】ビヒクル（ｎ＝１０）、４４０ｎｇのスニチニブ（ｎ＝６）、又は３００ｎｇのＳＲ８１６５（ｎ＝１０）を含む硝子体内薬物溶出ミクロスフェアで予め処理したラットにおける視神経離断後のＲＧＣのパーセント生存のグラフである。
【図１Ｃ】ビヒクル（ｎ＝２９）、４４０ｎｇのスニチニブ（ｎ＝８）、又は１００ｎｇ（ｎ＝２４）、３００ｎｇ（ｎ＝２６）若しくは６００ｎｇ（ｎ＝２５）のＳＲ８１６５を含む硝子体内ミクロスフェアで予め処理したラットにおけるレーザー誘発性高眼圧後の視神経軸索数を示すグラフである。
【図２Ａ】ラット緑内障モデルにおけるレーザー誘発性高眼圧の概要である。
【図２Ｂ】線維柱帯へのダイオードレーザーの１回目の適用から２４時間後の平均ＩＯＰ増加のグラフである。
【図２Ｃ】治療群で分けたダイオードレーザーの１回目の適用から２４時間後のＩＯＰのグラフである。
【図３Ａ】培養７２時間後、増加する用量のＳＲ８１６５で処理したイムノパニングを行ったＲＧＣの生存を示す生存細胞のグラフである。最も有効な用量のスニチニブを比較として示す。
【図３Ｂ】培養７２時間後の増加する用量の様々なキナーゼ阻害剤で処理したイムノッパニングを行ったＲＧＣのＶＥＧＦＲ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＦＬＴ３、及びＰＤＧＦＲを標的とするキナーゼ阻害剤の神経保護活性の欠如を示す、生存細胞のグラフである。
【図３Ｃ】培養７２時間後の増加する用量の様々なキナーゼ阻害剤で処理したイムノッパニングを行ったＲＧＣのＶＥＧＦＲ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＦＬＴ３、及びＰＤＧＦＲを標的とするキナーゼ阻害剤の神経保護活性の欠如を示す、生存細胞のグラフである。
【図３Ｄ】培養７２時間後の増加する用量の様々なキナーゼ阻害剤で処理したイムノッパニングを行ったＲＧＣのＶＥＧＦＲ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＦＬＴ３、及びＰＤＧＦＲを標的とするキナーゼ阻害剤の神経保護活性の欠如を示す、生存細胞のグラフである。
【図３Ｅ】培養７２時間後の増加する用量の様々なキナーゼ阻害剤で処理したイムノッパニングを行ったＲＧＣのＶＥＧＦＲ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＦＬＴ３、及びＰＤＧＦＲを標的とするキナーゼ阻害剤の神経保護活性の欠如を示す、生存細胞のグラフである。
【図３Ｆ】培養７２時間後の増加する用量の様々なキナーゼ阻害剤で処理したイムノッパニングを行ったＲＧＣのＶＥＧＦＲ２、ｃ−Ｋｉｔ、ＦＬＴ３、及びＰＤＧＦＲを標的とするキナーゼ阻害剤の神経保護活性の欠如を示す、生存細胞のグラフである。
【図４Ａ】ＤＬＫ  ｓｉＲＮＡによるＤＬＫ  ｍＲＮＡ及びタンパク質のノックダウンのグラフである。ＲＧＣをＤＬＫ又はノンターゲッティング対照（ＮＴ）ｓｉＲＮＡで形質移入した。ｍＲＮＡレベルをＲＴ−ＰＣＲを使用して２４時間に定量した。
【図４Ｂ】対照（点線）又はＤＬＫ  ｓｉＲＮＡ（実線）により形質移入されたイムノパニングを行ったＲＧＣの生存を示すグラフである。
【図４Ｃ】傷害されていない対照マウス（ｎ＝６）に対して正規化された、Ｄｌｋｆｌ／ｆｌマウス（ｎ＝３）、ＡＡＶ２−Ｃｒｅで注射されたＤｌｋｆｌ／ｆｌａマウス（ｎ＝８）、又はＡＡＶ２−Ｃｒｅで注射されたＤｌｋ＋／＋マウス（ｎ＝９）における視神経挫滅の１０日後のＲＧＣのパーセント生存のグラフである。
【図４Ｄ】脱分極電流（左）又はグルタミン酸イオントフォレシス（右）に応じてＤＬＫ  ｓｉＲＮＡ及び／又はスニチニブにより維持されたＲＧＣからのパッチクランプ記録である。＊ｐ＜０．０５、＃ｐ＜０．００５；エラーバー、ｓ．ｄ．
【図５Ａ】ＤＬＫタンパク質は傷害に応答してＲＧＣにおいて発現上昇されることを示し、様々な培養時間後のＧＡＰＤＨに正規化されたＤＬＫ  ｍＲＮＡのレベルを示すグラフである。
【図５Ｂ】野生型（ＷＴ）又はキナーゼ欠損（kinase-dead）（ＫＤ）ＤＬＫを発現するアデノウイルス（ＭＯＩ  １０００）による形質導入から４８時間後のイムノパニングを行ったＲＧＣのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（ＣＴＧ）発光によって測定される生存のグラフである。＊ｐ＜０．０５；エラーバー、ｓ．ｄ．
【図６Ａ】培養７２時間後の増加する用量の指定のＤＬＫ阻害剤フォレチニブで処理したイムノパニングを行ったＲＧＣの生存のグラフである。
【図６Ｂ】培養７２時間後の増加する用量の指定のＤＬＫ阻害剤レスタウルチニブで処理したイムノパニングを行ったＲＧＣの生存のグラフである。
【図６Ｃ】培養７２時間後の増加する用量の指定のＤＬＫ阻害剤トザセルチブで処理したイムノパニングを行ったＲＧＣの生存のグラフである。
【図６Ｄ】培養７２時間後の増加する用量の指定のＤＬＫ阻害剤クリゾチニブで処理したイムノパニングを行ったＲＧＣの生存のグラフである。
【図６Ｅ】培養７２時間後の増加する用量の指定のＤＬＫ阻害剤ＫＷ−２４４９で処理したイムノパニングを行ったＲＧＣの生存のグラフである。
【図６Ｆ】培養７２時間後の増加する用量の指定のＤＬＫ阻害剤アキシチニブで処理したイムノパニングを行ったＲＧＣの生存のグラフである。
【図６Ｇ】培養７２時間後の増加する用量の指定のＤＬＫ阻害剤ボスチニブで処理したイムノパニングを行ったＲＧＣの生存のグラフである。
【図６Ｈ】生化学Ｋｄ（阻害剤の精製ＤＬＫに結合する能力）と細胞ＥＤ５０との関係のグラフである。
【図６Ｉ】トザセルチブは、ラットにおける緑内障の傷害からＲＧＣ軸索を保護することを示す生存のグラフである。
【図６Ｊ】ビヒクル（ｎ＝２９）、８２ｎｇ（ｎ＝２２）、又は２７５ｎｇ（ｎ＝２１）のトザセルチブを含む硝子体内薬物溶出ミクロスフェアで予め処理したラットにおけるレーザー誘発性高眼圧後の視神経軸索数のグラフである。他眼（fellow eyes）（ｎ＝１５７）を比較として示す。＃ｐ＜０．００５；エラーバー、ｓ．ｄ．
【発明を実施するための形態】
【００１７】
Ｉ．定義
本明細書で使用される「活性剤」は、身体で局所的に及び／又は全身に作用する生理学的又は薬理学的な有効成分を指す。活性剤は、疾患又は障害の治療（例えば治療剤）、予防（例えば予防剤）、又は診断（例えば診断剤）のため患者に投与される物質である。本明細書で使用される「眼科薬物」又は「眼科活性剤」は、眼の疾患若しくは障害の１つ以上の症状を緩和するため、発症を遅延するため、若しくは予防するため患者に投与される薬剤、又は画像化若しくはそれ以外の方法で眼を評価するのに有用な診断剤を指す。
【００１８】
本明細書で使用される「有効量」又は「治療的有効量」は、特に癌、又は目の疾患若しくは障害の１つ以上の症状の緩和、発症の遅延、又は予防に有効な薬物の量を指す。加齢黄斑変性の場合には、有効量の薬物は、患者の視力喪失を遅らせるか、減少させるか、又は予防する。
【００１９】
本明細書で使用される、「アルカリ」の用語は、酸性の陽子を受理することができるか、又はそれ以外の方法で組成物のｐＨを引き上げる化合物を指す。
【００２０】
本明細書で使用される「生体適合性の」、「生物学的に適合性の」は、一般に、任意の代謝産物又はその分解産物と共に、一般にレシピエントに無毒であり、レシピエントにいかなる著しい有害作用ももたらさない材料を指す。概して言えば、生体適合性材料は、患者に投与された場合に、著しい炎症又は免疫応答を誘発しない材料である。
【００２１】
本明細書で使用される「生分解性高分子」は、生理的条件下での酵素作用、及び／又は加水分解によって、被験体によって代謝されるか、排除されるか、又は排泄され得るより小さな単位又は化学種へと分解するか、又は崩壊するポリマーを一般に指す。分解時間は、ポリマー組成、多孔性、粒子寸法等の形態、及び環境に左右される。
【００２２】
本明細書で使用される「親水性」は、水に対して親和性を有する特性を指す。例えば、親水性ポリマー（又は親水性ポリマー）は水溶液において主として可溶性である、及び／又は、水を吸収する傾向を有する、ポリマー（又はポリマー）である。一般に、ポリマーがより親水性であれば、そのポリマーは、水に溶解する、水と混じる、又は水に濡れる傾向が強くなる。
【００２３】
本明細書で使用される「疎水性」は、水に対して親和性を欠くか、又は更には水をはじく特性を指す。例えば、ポリマー（又はポリマー）がより疎水性であれば、そのポリマー（又はポリマー）は、水に溶解しない、水と混じらない、又は水に濡れない傾向が強くなる。
【００２４】
親水性及び疎水性を、限定されないが、一群のポリマー又はポリマー内の親水性／疎水性のスペクトルのように相対的に述べることができる。２以上のポリマーが検討されているいくつかの実施形態では、「疎水性ポリマー」の用語は、もう一方のより親水性のポリマーと比較した場合のポリマーの相対的な疎水性に基づいて定義され得る。
【００２５】
本明細書で使用される「ミクロ粒子」は、約１ミクロン〜約１００ミクロン、好ましくは約１ミクロン〜約５０ミクロン、より好ましくは約１ミクロン〜約３０ミクロンの直径、例えば平均径を有する粒子を一般に指す。ミクロ粒子は任意の形状を有し得る。球形のミクロ粒子は、一般に「ミクロスフェア」と呼ばれる。
【００２６】
本明細書で使用される「分子量」は、一般に、別段の明示がない限り、塊状ポリマーの相対平均鎖長を指す。実際、分子量は、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）又は毛細管粘度測定を含む様々な方法を使用して、推定されるか、又は特性評価され得る。ＧＰＣ分子量は、数平均分子量（Ｍｎ）とは対照的に重量平均分子量（Ｍｗ）として報告される。毛細管粘度測定は、特定のセットの濃度、温度及び溶媒の条件を使用して希薄ポリマー溶液から特定された、固有粘度として分子量の推定値を提供する。
【００２７】
本明細書で使用される「平均粒子径」は、一般に、粒子の集団における粒子の統計学的平均粒子径（直径）を指す。本質的に球形の粒子の直径は、物理学的又は流体力学的な直径を指し得る。非球形粒子の直径は、流体力学的な直径を優先的に指し得る。本明細書で使用されるように、非球形粒子の直径は、粒子の表面の２点間の最大の直線距離を指す場合がある。平均粒子径は、動的光散乱等の当該技術分野で既知の方法を使用して測定され得る。
【００２８】
「単分散」及び「均質な粒度分布」は、本明細書において同じ意味で使用され、全ての粒子が同じ又はほぼ同じサイズであるナノ粒子又はミクロ粒子の集団を説明する。本明細書に使用されるように、単分散の分布は、９０％以上の分布がメジアン粒子径の１５％以内、より好ましくはメジアン粒子径の１０％以内、最も好ましくはメジアン粒子径の５％以内に含まれる粒子分布を指す。
【００２９】
本明細書で使用される「薬学的に許容可能」は、健全な医学の判断の範囲に含まれ、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、又は他の問題若しくは合併症のない人間及び動物の組織と接触する使用に適している、合理的なベネフィット／リスク比と釣り合った化合物、担体、賦形剤、組成物、及び／又は剤形を指す。
【００３０】
本明細書において一般的に使用される「インプラント」は、移植部位で長期間に亘って１つ以上の活性剤を放出することにより治療の利益を提供するように、好ましくは注射又は外科的移植によって身体の特定の領域に移植されるように組み立てられるか、大きさを合わせられるか、又は別様に構成される、ポリマーデバイス又は要素を指す。例えば、眼内インプラントは、好ましくは注射又は外科的移植によって眼に入れられるように、また長期間に亘って１つ以上の薬物を放出することにより１つ以上の眼の疾患又は障害を治療するように組み立てられ、大きさを合わせられ、又は別様に構成される、ポリマーデバイス又は要素である。眼内インプラントは、眼の生理学的条件と一般に生体適合性であり、有害な副作用を引き起こさない。一般に、眼内インプラントは眼の視野を妨げることなく、眼に入れることができる。
【００３１】
ＩＩ．組成物
Ａ．ＤＬＫ阻害剤
デュアル−ロイシンジッパーキナーゼ（ＤＬＫ）はスニチニブの主な神経保護薬標的であることが発見されている。いくつかの他の神経保護キナーゼ阻害剤もまたＤＬＫを阻害し、この知見を支持する。他の神経保護キナーゼ阻害剤として、ＳＲ８１６５、アキシチニブ、ボスチニブ、ネラチニブ、クリゾチニブ、トザセルチブ、レスタウルチニブ、フォレチニブ、ＴＡＥ−６８４、及びＫＷ−２４４９が挙げられる。
【００３２】
これらの化合物の持続制御放出製剤を投与して、眼内圧の上昇に起因する神経細胞死を治療又は減少することができる。
【００３３】
スニチニブは緑内障の治療に有用な可能性があることが示唆されている。スニチニブ（PfizerによってＳＵＴＥＮＴ（商標）として市販され、以前はＳＵ１１２４８として知られる）は、２００６年１月２６日付で腎細胞癌（ＲＣＣ）及びイマチニブ耐性消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）の治療に対してＦＤＡにより承認された、経口低分子マルチターゲット型受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤である。スニチニブは、２つの異なる適応症に対して同時に承認された最初の制癌薬であった。
【００３４】
スニチニブは、複数の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を標的とすることによって細胞シグナル伝達を阻害する。受容体チロシンキナーゼは、腫瘍血管形成及び腫瘍細胞増殖の両方において役割を果たす、全ての血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、及び血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）を含む。これらの標的の同時阻害は、腫瘍血管化の減少及び癌細胞死の両方を導き、最終的には腫瘍の縮小をもたらす。また、スニチニブはそのキナーゼ阻害活性のおかげで神経保護性である。
【００３５】
スニチニブは式（１）：
【化１】
2018500394.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、水素、ハロ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、−（ＣＯ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、−（ＣＨ２）ｒＲ１６及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、ハロ、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、シアノ、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、アリール、ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３Ｒ１４及び−ＳＯ２Ｒ２０（ここで、Ｒ２０はアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、−（ＣＯ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、アリール、ヘテロアリール、−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）２Ｒ１４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、及び−ＳＯ２Ｒ２０（ここで、Ｒ２０はアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ４は、水素、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、及び−ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ５は、水素、アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択され、
Ｒ６は、水素、アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択され、
Ｒ７は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択されるか、又は、
Ｒ６とＲ７とが結合して−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、及び−（ＣＨ２）６−からなる群から選択される基を形成してもよく（但し、Ｒ５、Ｒ６、又はＲ７の少なくとも１つが−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０でなくてはならない）、
Ｒ８及びＲ９は、水素、アルキル、及びアリールからなる群から独立して選択され、
Ｒ１０は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、−Ｎ（Ｒ１１）（ＣＨ２）ｎＲ１２、及び−ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１２は、−ＮＲ１３Ｒ１４、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、アリール、ヘテロアリール、−Ｎ＋（Ｏ-）Ｒ１３Ｒ１４、−Ｎ（ＯＨ）Ｒ１３、及び−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒａ（ここで、Ｒａは非置換のアルキル、ハロアルキル、又はアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、水素、アルキル、シアノアルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から独立して選択されるか、又は、
Ｒ１３とＲ１４とが結合して複素環基を形成してもよく、
Ｒ１５は、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、及びアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ１６は、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ１７は、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ２０は、アルキル、アリール、アラルキル、又はヘテロアリールであり、
ｎ及びｒは独立して１、２、３、又は４である）を有するか、又はその薬学的に許容可能な塩である。
【００３６】
或る特定の実施形態において、式１の化合物は、式：
【化２】
2018500394.tif 000003
を有する。
【００３７】
以下の定義が本明細書において使用される。
【００３８】
「アルキル」は、１個〜２０個の炭素原子（数値範囲が、例えば「１〜２０」と本明細書で述べられる場合、その基、この場合アルキル基は１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等から最大２０個以下の炭素原子を含んでもよいことを意味する）の直鎖及び分岐鎖の基を含む飽和脂肪族炭化水素ラジカルを指す。１個〜４個の炭素原子を含むアルキル基は、低級アルキル基と呼ばれる。低級アルキル基が置換基を欠く場合、非置換低級アルキル基と呼ばれる。より好ましくは、アルキル基は１個〜１０個の炭素原子を有する中型アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、及びペンチルである。最も好ましくは、１個〜４個の炭素原子を有する低級アルキルは、例えばメチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、又はｔｅｒｔ−ブチルである。アルキル基は、置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、好ましくは１、２、又は３の基で置換されてもよいアリール、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、好ましくは１、２、又は３の基で置換されてもよいアリールオキシ、環中に１個〜３個の窒素原子を有し、環中の炭素が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、好ましくは１、２、又は３の基で置換されてもよい６員ヘテロアリール、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、好ましくは１、２、又は３の基で置換されてもよい５員ヘテロアリール、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子（存在する場合）が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、好ましくは１、２、又は３の基で置換されてもよい５員又は６員のヘテロ脂環式基、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である、１つ以上の基、好ましくは１、２、又は３の基で置換されてもよいアリールチオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（ここで、Ｒ１８及びＲ１９は、水素、非置換低級アルキル、トリハロメチル、非置換（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、非置換低級アルケニル、非置換低級アルキニルからなる群から独立して選択される）、並びに互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である、１つ以上の基、好ましくは１、２、又は３の基で置換されてもよいアリールからなる群から独立して選択される、好ましくは１つ以上、より好ましくは１〜３、更に好ましくは１又は２の置換基である。
【００３９】
好ましくは、アルキル基は、ヒドロキシ、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子（存在する場合）が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基若しくは非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、好ましくは１、２、若しくは３の基で置換されてもよい５員若しくは６員のヘテロ脂環式基、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子が互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基若しくは非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、好ましくは１、２、若しくは３の基で置換されてもよい５員ヘテロアリール、環中に１個〜３個の窒素原子を有し、環中の炭素が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基若しくは非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、好ましくは１、２若しくは３の基で置換されてもよい６員ヘテロアリール、又は−ＮＲ１８Ｒ１９（ここで、Ｒ１８及びＲ１９は、水素、非置換低級アルキルからなる群から独立して選択される）からなる群から独立して選択される１又は２の置換基で置換される。更に好ましくは、アルキル基は、互いに独立してヒドロキシ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノ、ピペラジノ、４−低級アルキルピペラジノ、フェニル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、オキサゾリル、及びトリアジニルである１又は２の置換基で置換される。
【００４０】
「シクロアルキル」は、３員〜８員の全てが炭素の単環式環、全てが炭素の５員環／６員環若しくは６員／６員の縮合二環式環、又は多環縮合環（「縮合」環系は該系の各環が、該系の互いの環と隣接する炭素原子対を共有することを意味する）の基であって、該環の１つ以上が１つ以上の二重結合を含むが、いずれの環も完全共役パイ電子系を有しない基を指す。シクロアルキル基の例は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、アダマンタン、シクロヘプタン、及びシクロヘプタトリエンである。シクロアルキル基は置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、好ましくは１又は２の基で置換されてもよいアリール、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、好ましくは１又は２の基で置換されてもよいアリールオキシ、環中に１個〜３個の窒素原子を有し、環中の炭素が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、好ましくは１又は２の基によって置換されてもよい６員ヘテロアリール、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、好ましくは１又は２の基によって置換されてもよい５員ヘテロアリール、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子（存在する場合）が互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、好ましくは１又は２の基によって置換されてもよい５員又は６員のヘテロ脂環式基、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、好ましくは１又は２の基によって置換されてもよいアリールチオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、上に定義される、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、並びに−ＮＲ１８Ｒ１９からなる群から独立して選択される、好ましくは１つ以上、より好ましくは１又は２の置換基である。
【００４１】
本明細書に定義されるように、「アルケニル」は、少なくとも２個の炭素原子、及び少なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなる低級アルキル基を指す。代表的な例として、限定されないが、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、及び１−、２−又は３−ブテニルが挙げられる。
【００４２】
本明細書に定義されるように、「アルキニル」は、少なくとも２個の炭素原子、及び少なくとも１つの炭素−炭素三重結合からなる低級アルキル基を指す。代表的な例として、限定されないが、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、及び１−、２−又は３−ブチニルが挙げられる。
【００４３】
「アリール」は、完全共役パイ電子系を有する１〜１２の炭素原子の全てが炭素の単環式基又は多環縮環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を指す。アリール基の例は、限定されないが、フェニル、ナフタレニル、及びアントラセニルである。アリール基は、置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、好ましくは、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（Ｒ１８及びＲ１９は上に定義される）からなる群から独立して選択される１つ以上、より好ましくは１個、２個、又は３個、更に好ましくは１個又は２個である。好ましくは、アリール基は、ハロ、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、Ｎ−アミド、モノ若しくはジアルキルアミノ、カルボキシ、又はＮ−スルホンアミドから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４４】
「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、又はＳから選択される１、２、又は３の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子がＣであり、さらに完全な共役パイ電子系を有する、５〜１２の環原子の単環基又は縮合環（すなわち、隣接する原子対を共有する環）基を指す。非置換ヘテロアリール基の例は、限定されないが、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、プリン、及びカルバゾールである。ヘテロアリール基は、置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、好ましくは、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（Ｒ１８及びＲ１９は上に定義される）からなる群から独立して選択される１つ以上、より好ましくは１個、２個、又は３個、更に好ましくは１個又は２個である。好ましくは、ヘテロアリール基は、ハロ、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、Ｎ−アミド、モノ若しくはジアルキルアミノ、カルボキシ、又はＮ−スルホンアミドから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４５】
「ヘテロ脂環式」は、５〜９の環原子の環（複数の場合がある）中に、１又は２の環原子がＮ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）ｎ（ここで、ｎは０〜２の整数である）から選択されるヘテロ原子を有し、残りの環原子がＣである、単環基又は縮合環基を指す。また、環は１つ以上の二重結合を有してもよい。しかしながら、環は完全な共役パイ電子系を有しない。非置換ヘテロ脂環式基の例は、限定されないが、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、及びホモピペラジノである。ヘテロ脂環式環は、置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、好ましくは非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（Ｒ１８及びＲ１９は上に定義される）からなる群から独立して選択される１つ以上、より好ましくは１個、２個、又は３個、更に好ましくは１個又は２個である。好ましくは、ヘテロ脂環式基は、ハロ、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、Ｎ−アミド、モノ若しくはジアルキルアミノ、カルボキシ、又はＮ−スルホンアミドから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４６】
好ましくは、ヘテロ脂環式基は、ハロ、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、Ｎ−アミド、モノ若しくはジアルキルアミノ、カルボニル、又はＮ−スルホンアミドから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４７】
「複素環」は、１又は２の環原子がＮ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）ｎ（ここで、ｎは０〜２の整数である）から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、ここで１又は２のＣ原子がカルボニル基によって置換されてもよい、３〜８の環原子の飽和環状ラジカルを意味する。ヘテロシクリル環は、置換されてもよい低級アルキル（カルボキシ又はエステルから独立して選択される１又は２の置換基で置換される）、ハロアルキル、シアノアルキル、ハロ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アラルキル、ヘテロアラルキル、−ＣＯＲ（ここで、Ｒはアルキルである）、又は−ＣＯＯＲ（ここで、Ｒは（水素又はアルキル）である）から選択される１、２、又は３の置換基によって独立して置換されてもよい。より具体的にはヘテロシクリルの用語には、テトラヒドロピラニル、２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン、ピペリジノ、Ｎ−メチルピペリジン−３−イル、ピペラジノ、Ｎ−メチルピロリジン−３−イル、３−ピロリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオモルホリノ−１−オキシド、チオモルホリノ−１，１−ジオキシド、４−エチルオキシカルボニルピペラジノ、３−オキソピペラジノ、２−イミダゾリドン、２−ピロリジノン、２−オキソホモピペラジノ、テトラヒドロピリミジン−２−オン、及びそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは複素環基は、ハロ、非置換低級アルキル、カルボキシ、エステル、ヒドロキシ、モノ又はジアルキルアミノで置換された低級アルキルから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４８】
「ヒドロキシ」は−ＯＨ基を指す。
【００４９】
「アルコキシ」は、−Ｏ−（非置換アルキル）基と−Ｏ−（非置換シクロアルキル）基の両方を指す。代表例として、限定されないが、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、及びシクロへキシルオキシが挙げられる。
【００５０】
「アリールオキシ」は、本明細書に定義される、−Ｏ−アリール基及び−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を指す。代表例として、限定されないが、フェノキシ、ピリジニルオキシ、フラニルオキシ、チエニルオキシ、ピリミジニルオキシ、ピラジニルオキシ、及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００５１】
「メルカプト」は−ＳＨ基を指す。
【００５２】
「アルキルチオ」は、−Ｓ−（非置換アルキル）基及び−Ｓ−（非置換シクロアルキル）基の両方を指す。代表例として、限定されないが、例えば、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、ブチルチオ、シクロプロピルチオ、シクロブチルチオ、シクロペンチルチオ、及びシクロへキシルチオが挙げられる。
【００５３】
「アリールチオ」は、本明細書に定義される−Ｓ−アリール基及び−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を指す。代表例として、限定されないが、フェニルチオ、ピリジニルチオ、フラニルチオ、チエニルチオ、ピリミジニルチオ、及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００５４】
「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ’’基であって、式中、Ｒ’’は水素、非置換低級アルキル、トリハロメチル、非置換シクロアルキル、非置換低級アルキル、トリハロメチル、非置換低級アルコキシ、ハロ、及び−ＮＲ１８Ｒ１９基からなる群から選択される１つ以上の、好ましくは１、２、又は３の置換基によって置換されてもよいアリール、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、非置換低級アルコキシ、ハロ、及び−ＮＲ１８Ｒ１９基から選択される１つ以上の、好ましくは１、２、又は３の置換基によって置換されてもよいヘテロアリール（環炭素により結合される）、並びに非置換低級アルキル、トリハロアルキル、非置換低級アルコキシ、ハロ、及び−ＮＲ１８Ｒ１９基からなる群から選択される１つ以上の、好ましくは１、２、又は３の置換基によって置換されてもよいヘテロ脂環式（環炭素によって結合される）からなる群から選択される。代表的なアシル基として、限定されないが、アセチル、トリフルオロアセチル、及びベンゾイルが挙げられる。
【００５５】
「アルデヒド」はＲ’’が水素であるアシル基を指す。
【００５６】
「チオアシル」は−Ｃ（Ｓ）−Ｒ’’基（ここでＲ’’は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００５７】
「エステル」は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ’’基（ここでＲ’’は本明細書で規定されるとおりであるが、Ｒ’’は水素ではない）を指す。
【００５８】
「アセチル」基は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３基を指す。
【００５９】
「ハロ」基はフッ素、塩素、臭素又はヨウ素、好ましくはフッ素又は塩素を指す。
【００６０】
「トリハロメチル」基は−ＣＸ３基（ここでＸは本明細書で規定のハロ基である）を指す。
【００６１】
「トリハロメタンスルホニル」基はＸ３ＣＳ（＝Ｏ）２−基（ここでＸは上に規定されるとおりである）を指す。
【００６２】
「シアノ」は−Ｃ≡Ｎ基を指す。
【００６３】
「メチレンジオキシ」は−ＯＣＨ２Ｏ−基（ここで２つの酸素原子は隣接する炭素原子に結合している）を指す。
【００６４】
「エチレンジオキシ」基は−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ここで２つの酸素原子は隣接する炭素原子に結合している）を指す。
【００６５】
「Ｓ−スルホンアミド」は−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。「Ｎ−スルホンアミド」は−ＮＲ１８Ｓ（Ｏ）２Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００６６】
「Ｏ−カルバミル」基は−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。「Ｎ−カルバミル」はＲ１８ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１９−基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００６７】
「Ｏ−チオカルバミル」は−ＯＣ（Ｓ）ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。「Ｎ−チオカルバミル」はＲ１８ＯＣ（Ｓ）ＮＲ１９−基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００６８】
「アミノ」は−ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は両方とも水素である）を指す。
【００６９】
「Ｃ−アミド」は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。「Ｎ−アミド」はＲ１８Ｃ（Ｏ）ＮＲ１９−基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００７０】
「ニトロ」は−ＮＯ２基を指す。
【００７１】
「ハロアルキル」は、非置換アルキル、好ましくは、１つ以上の同一又は異なったハロ原子で置換される上に定義される非置換低級アルキル、例えば、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、及び−ＣＨ２ＣＣｌ３を意味する。
【００７２】
「アラルキル」は、非置換アルキル、好ましくは、上に定義されるアリール基で置換される、上に定義される非置換低級アルキル、例えば、−ＣＨ２フェニル、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２フェニル、及びそれらの誘導体を意味する。
【００７３】
「ヘテロアラルキル」基は、非置換アルキル、好ましくは、上に定義されるヘテロアリール基で置換される、上に定義される非置換低級アルキル、例えば、−ＣＨ２フェニル、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２フェニル、及びそれらの誘導体を意味する。
【００７４】
「ジアルキルアミノ」は、ラジカル−ＮＲＲであって、式中、Ｒがそれぞれ独立して上に定義される非置換アルキル又は非置換シクロアルキル基であり、例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノ、（１−メチルエチル）−エチルアミノ、シクロへキシルメチルアミノ、及びシクロペンチルメチルアミノを意味する。
【００７５】
「シアノアルキル」は、非置換アルキル、好ましくは、１又は２のシアノ基で置換される、上に定義される非置換低級アルキルを意味する。
【００７６】
「任意の」又は「任意に（してもよい）」は、その後に記載される事象又は状況が必ずしも起こらなくてもよく、その記載が当該事象又は状況が起こる例及びそれが起こらない例を含むことを意味する。例えば、「アルキル基によって置換されてもよい複素環基」は、アルキル基が必ずしも存在しなくてもよく、その記載は複素環基がアルキル基によって置換される状況と、複素環基がアルキル基によって置換されない状況とを含む。
【００７７】
Ｂ．封入ポリマー
ポリマービヒクル中１つ以上の薬物の送達に対する制御放出投薬製剤が、本明細書に記載される。ポリマーマトリクスは、非生分解性又は生分解性のポリマーから形成され得るが、該ポリマーマトリクスは生分解性であることが好ましい。上記ポリマーマトリクスは、送達のため、インプラント（例えば、ロッド、ディスク、ウェファー等）、ミクロ粒子、ナノ粒子、又はそれらの組合せに形成され得る。投与により、スニチニブ又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩は、ポリマーマトリクスの分解、ポリマーマトリクスからの１つ以上の阻害剤の拡散、又はそれらの組合せのいずれかにより、長期間に亘って放出される。上記薬物は、ポリマー中に分散されるか若しくは封入され、又はマトリクスを形成するのに使用されるポリマーに共有結合され得る。１つ以上のポリマーの分解プロファイルは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの活性剤の放出速度に影響を及ぼすように選択されてもよい。
【００７８】
上記ポリマーは、疎水性ポリマー、親水性ポリマー、親水性ポリマーと疎水性ポリマーとの複合物（すなわち、両親媒性ポリマー）、ブロックコポリマー、及びそれらのブレンドであってもよい。
【００７９】
好適な疎水性ポリマーの例として、限定されないが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はそれらのコポリマー、ポリカプロラクトン等のポリヒドロキシエステル、ポリセバシン酸無水物等のポリ無水物、及び上のいずれかのコポリマーが挙げられる
【００８０】
１つ以上の親水性ポリマーは、任意の親水性、生体適合性、非毒性のポリマー又はコポリマーであってもよい。或る特定の実施形態では、１つ以上の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等のポリ（アルキレングリコール）を含有する。特定の実施形態では、１つ以上の親水性ポリマーは、直鎖のＰＥＧ鎖である。
【００８１】
代表的な合成ポリマーとして、ポリ（ヒドロキシ酸）、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えばポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えばポリ（エチレングリコール）、ポリアルキレンオキシド、例えばポリ（エチレンオキシド）、ポリアルキレンテレフタレート、例えばポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリハロゲン化ビニル、例えばポリ（塩化ビニル）、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリスチレン、ポリウレタン及びそれらのコポリマー、セルロース、例えばアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシエチルセルロース、三酢酸セルロース及びセルロース硫酸ナトリウム塩（本明細書では総称して「セルロース」と呼ぶ）、エステル、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）及びポリ（オクタデシルアクリレート）（本明細書では総称して「ポリアクリル酸」と呼ぶ）を含むアクリル酸、メタクリル酸のポリマー又はそれらのコポリマー若しくは誘導体、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）及びポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、それらのコポリマー及びブレンドが挙げられる。本明細書で使用される「誘導体」は、置換、化学基、例えばアルキル、アルキレン等の付加、ヒドロキシル化、酸化、及び当業者によって日常的に行われる他の修飾を有するポリマーを含む。
【００８２】
好ましい天然ポリマーの例としては、アルブミン及びプロラミン、例えばゼイン等のタンパク質、並びにアルギネート、セルロース及びポリヒドロキシアルカノエート、例えばポリヒドロキシブチレート等の多糖が挙げられる。
【００８３】
好ましい非生分解性ポリマーの例としてはエチレン酢酸ビニル、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリアミド、コポリマー及びそれらの混合物が挙げられる。
【００８４】
Ｃ．アルカリ化剤
スニチニブの装荷は、封入の間、溶液中のスニチニブのアルカリ度を増加することによって増加され得ることが見出された。これは、溶媒の選択、溶媒へのアルカリ化剤の添加、又はスニチニブと共にアルカリ性薬物を包含することによって達成され得る。この目的で添加することができる化合物の例としてはＤＭＡ、ＤＭＴＡ、ＴＥＡ、アニリン、アンモニウム及び水酸化ナトリウム等の溶媒又は溶媒添加物、ビタミンＢ４、カフェイン、アルカロイド、ニコチン、鎮痛薬であるモルヒネ、抗菌剤であるベルベリン、抗癌化合物であるビンクリスチン、降圧剤であるレセルピン、コリン作動薬であるガランタミン、抗コリン作動薬であるアトロピン、血管拡張薬であるビンカミン、抗不整脈化合物であるキニジン、抗喘息治療薬であるエフェドリン、及び抗マラリア薬であるキニーネ等の薬物が挙げられる。
【００８５】
ＩＩＩ．ミクロ粒子、ナノ粒子、及びインプラントを形成する方法
Ａ．ミクロ粒子及びナノ粒子の形成
ミクロ粒子及びナノ粒子は、当該技術分野で知られているポリマーミクロ粒子、又はナノ粒子の形成に適した任意の方法を使用して形成され得る。粒子形成に使用される方法は、所望の粒子径及び粒度分布と共に、薬物又はポリマーマトリクス中に存在するポリマーの特性を含む様々な要因に依存する。いくつかの薬物が或る特定の溶媒の存在下、或る特定の温度範囲、及び／又は或る特定のｐＨ範囲で不安定であることから、粒子中に組み込まれる薬物の種類（複数の場合がある）もまた要因となる可能性がある。
【００８６】
１０ｎｍ〜１０００ミクロンの平均粒子径を有する粒子は、本明細書に記載される組成物において有用である。好ましい実施形態では、粒子は、１０ｎｍ〜１００ミクロン、より好ましくは約１００ｎｍ〜約５０ミクロン、より好ましくは約２００ｎｍ〜約５０ミクロンの平均粒子径を有する。粒子は任意の形状を有することができるが、一般的には球形である。
【００８７】
１つ以上の薬物から形成される粒子は、それらの表面にかなりの量のＰＥＧ等の親水性ポリマーを含むことが好ましい。粒子の単分散集団が望ましい状況では、上記粒子は、ナノ粒子の単分散集団を生産する方法を使用して形成されてもよい。代替的には、多分散ナノ粒子集団を生産する方法を使用してもよく、粒子形成後のふるい分け等の当該技術分野で既知の方法を使用して粒子を分離し、所望の平均粒子径及び粒度分布を有する粒子の集団を提供することができる。
【００８８】
ミクロ粒子及びナノ粒子を作製する一般的な技法として、限定されないが、溶媒蒸発、ホットメルト粒子形成、溶媒除去、噴霧乾燥、転相、コアセルベーション、及び低温焼結（low temperature casting）が挙げられる。粒子製剤化の好適な方法を以下に簡潔に記載する。ｐＨ調節剤、崩壊剤、防腐剤、及び抗酸化剤を含む薬学的に許容可能な賦形剤を粒子形成の間に粒子に組み込んでもよい。
【００８９】
１．溶媒蒸発
この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス及び１つ以上の薬物）を、塩化メチレン等の揮発性有機溶媒に溶解する。その後、薬物を含有する有機溶液を、ポリ（ビニルアルコール）等の界面活性剤を含む水溶液中に懸濁する。得られるエマルジョンを大半の有機溶媒が蒸発して固体ナノ粒子を残すまで撹拌する。得られたナノ粒子を水で洗浄し、凍結乾燥器で一晩乾燥させる。種々のサイズ及び形態のナノ粒子をこの方法によって得ることができる。
【００９０】
或る特定のポリ無水物等の不安定なポリマーを含有する薬物は、水の存在により製造過程で分解する可能性がある。これらのポリマーに対しては、完全に無水の有機溶媒中で行われる以下の２つの方法を使用することができる。
【００９１】
２．溶媒除去
また、溶媒除去を使用して加水分解に不安定な薬物から粒子を作製することができる。この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス、及び１つ以上の薬物）を塩化メチレン等の揮発性有機溶媒中に分散させるか、又は溶解させる。その後、この混合物を有機性油（シリコンオイル等）中に撹拌することによって懸濁させ、エマルジョンを形成する。エマルジョンから形成される固体粒子は、その後上清から単離され得る。この技法により製造された球体の外部の形態は、薬物のアイデンティティに大きく依存する。
【００９２】
３．噴霧乾燥
この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス及び１つ以上の薬物）を、塩化メチレン等の有機溶媒に溶解する。圧縮ガスの流れによって制御される微細化ノズルにより溶液を噴出させ、得られたエアロゾルを加熱された気体のサイクロンに漂わせて、微小滴から溶媒を蒸発させて粒子を形成させる。この方法を使用して、０．１ミクロン〜１０ミクロンの範囲の粒子を得ることができる。
【００９３】
４．転相
粒子を転相法（phase inversion method）を使用して、薬物から形成することができる。この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス及び１つ以上の薬物）を「良好な」溶媒に溶解し、好ましい条件下で、薬物が自発的にミクロ粒子又はナノ粒子を生じるように、該溶液を強い非溶媒（non solvent）へと注ぐ。上記方法を使用して、例えば、典型的には狭い粒度分布で、約１００ナノメートル〜約１０ミクロンを含む広範囲のサイズのナノ粒子をもたらすことができる。
【００９４】
５．コアセルベーション
コアセルベーションを使用する粒子形成技法は、当該技術分野で、例えば英国特許第９２９４０６号、英国特許第９２９４０１号、並びに米国特許第３，２６６，９８７号、同第４，７９４，０００号、及び同第４，４６０，５６３号において知られている。コアセルベーションは、２つの非混和液相への薬物（又はポリマーマトリクス、及び１つ以上の薬物）溶液の分離を含む。１つの相は、高濃度の薬物を含有する濃厚なコアセルベート相であるのに対し、第２相は低濃度の薬物を含む。濃厚なコアセルベート相内では、薬物はナノスケール又はマイクロスケールの小滴を形成し、それらは硬化して粒子となる。コアセルベーションは、温度変化、非溶媒の添加若しくはミクロ塩（micro-salt）の添加（単純コアセルベーション）により、又は別のポリマーの添加により誘導されて高分子間錯体を形成することができる（複合コアセルベーション）。
【００９５】
６．低温焼結
制御放出ミクロスフェアの極低温焼結に関する方法は、Gombotz et al.に対する米国特許第５，０１９，４００号に記載される。この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス及びスニチニブ）は溶媒中に溶解される。その後、混合物を、薬物小滴を凍結する薬液の氷点を下回る温度で液状の非溶媒の入った容器に微粒化する。薬物に対する小滴及び非溶媒が温められるにつれて、小滴中の溶媒は溶けて、非溶媒中に抽出されてミクロスフェアを硬化する。
【００９６】
Ｄ．インプラント
薬物を封入する、及び／又は分散させるインプラントが形成され得る。好ましい実施形態では、インプラントは眼内インプラントである。好適なインプラントとして、限定されないが、ロッド、ディスク、及びウェファーが挙げられる。マトリクスは、上に記載されるいずれかの非生分解性又は生分解性の高分子で形成され得るが、生分解性高分子が好ましい。ポリマーマトリクスの組成は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性に必要な時間、すなわち、送達が望まれる部位への分布に必要なその時間、及び送達に望ましい時間に基づいて選択される。
【００９７】
インプラントは、ファイバー、シート、フィルム、マイクロスフェア、球体、円盤、ロッド、又はプラーク（plaques）等の任意の幾何学形状であってもよい。インプラントのサイズは、インプラントに対する忍容性、インプラントの位置、インプラント挿入の推奨される方法を考慮したサイズ制限、扱いやすさ等の因子によって決定される。
【００９８】
シート又はフィルムを採用する場合、シート又はフィルムは、扱いやすいように、約０．１ｍｍ〜１．０ｍｍの厚さで少なくとも約０．５ｍｍ×０．５ｍｍ、通常約３ｍｍ〜１０ｍｍ×５ｍｍ〜１０ｍｍの範囲である。ファイバーを採用する場合、繊維径は、一般に約０．０５ｍｍ〜３ｍｍの範囲であり、繊維長は、一般に約０．５ｍｍ〜１０ｍｍの範囲である。
【００９９】
また、移植部位で放出の速度、治療期間、及び薬物濃度を制御するためインプラントのサイズ及び形状を使用することができる。より大きなインプラントは、比例してより多量の用量を伝送達するが、表面対質量比に依存して、より遅い放出速度を有する場合がある。インプラントの特定のサイズ及び幾何形状は、移植の部位に適するように選択される。
【０１００】
眼内インプラントは、球形であってもよく、又は非球形であってもよい。球形インプラントに対して、インプラントは、約５μｍ〜約２ｍｍの最大寸法（例えば直径）、又は針による投与に対して約１０μｍ〜約１ｍｍ、外科的移植による投与に対して１ｍｍ超、若しくは２ｍｍ超、例えば３ｍｍ若しくは最大１０ｍｍを有する場合がある。インプラントが非球形である場合、インプラントは、約５μｍ及び約２ｍｍの最大寸法若しくは最小寸法、又は針による投与に対して約１０μｍ〜約１ｍｍ、外科的移植による投与に対して１ｍｍ超、若しくは２ｍｍ超、例えば３ｍｍ若しくは最大１０ｍｍを有する場合がある。
【０１０１】
ヒトの硝子体腔は、例えば１ｍｍ〜１０ｍｍの長さを有する、変化する幾何形状の比較的大きなインプラントを適応することができる。インプラントは、約２ｍｍ×０．７５ｍｍの直径の寸法を有する円筒状ペレット（例えばロッド）であってもよい。インプラントは、長さ約７ｍｍ〜約１０ｍｍ、直径約０．７５ｍｍ〜約１．５ｍｍの円筒状のペレットであってもよい。或る特定の実施形態では、インプラントは、直径約０．５ｍｍ、長さ約６ｍｍ、及び重量およそ１ｍｇを有する押出しフィラメントの形態である。いくつかの実施形態では、寸法は、針による眼内注射に対して既に承認されたインプラントであるか、又はそれに類似する、すなわち直径４６０ミクロン及び長さ６ｍｍ、並びに直径３７０ミクロン及び長さ３．５ｍｍである。
【０１０２】
また、眼内インプラントは、硝子体液等の眼の中へのインプラントの挿入、及びその後のインプラントの適応の両方を容易にするように、少なくとも或る程度柔軟であるように設計され得る。インプラントの全重量は、通常約２５０μｇ〜５０００μｇ、より好ましくは約５００μｇ〜１０００μｇである。或る特定の実施形態では、眼内インプラントは、約５００μｇ、７５０μｇ又は１０００μｇの質量を有する。
【０１０３】
２．製造方法
インプラントは、当該技術で知られている任意の好適な技法を使用して製造され得る。インプラントの作製に適した技法の例として、溶媒蒸発法、相分離法、界面法、成型法、射出成型法、押出法、共押出方法、カーバープレス法、打抜き法、熱圧縮、及びそれらの組合せが挙げられる。インプラントの製造に適した方法は、インプラント中に存在するポリマー（単数／複数）の特性、インプラント中に存在する１つ以上の薬物の特性、及びインプラントの所望の形状及びサイズを含む多くの因子を考慮して選択され得る。インプラントの作製に適した方法が、例えば、米国特許第４，９９７，６５２号、及び米国特許出願公開第２０１０／０１２４５６５号に記載されている。
【０１０４】
或る特定の場合、インプラント製造中の溶媒の必要を回避するため、押出法を使用してもよい。押出法を使用する場合、ポリマー（単数／複数）及び薬物は、製造に必要な温度、通常、少なくとも約８５℃で安定しているように選択される。しかしながら、ポリマー成分、及び１つ以上の薬物の性質に応じて、押出法は、約２５℃〜約１５０℃、より好ましくは約６５℃〜約１３０℃の温度を採用することができる。インプラントは、該インプラントの表面の全て又は一部を覆うコーティングを提供するために共押出しされてもよい。かかるコーティングは、浸食性又は非浸食性であってもよく、薬物、水、又はそれらの組合せに対して不浸透性、半浸透性、又は浸透性であってもよい。かかるコーティングは、インプラントからの薬物の放出を更に制御するために使用され得る。
【０１０５】
圧縮法を使用してインプラントを作製してもよい。圧縮法は、頻繁に、押出法より速い放出速度を有するインプラントを生じる。圧縮法は、約５０ｐｓｉ〜１５０ｐｓｉ、より好ましくは約７０ｐｓｉ〜８０ｐｓｉ、更に好ましくは約７６ｐｓｉの圧力を採用してもよく、約０℃〜約１１５℃、より好ましくは約２５℃の温度を使用してもよい。
【０１０６】
ＩＶ．医薬製剤
Ａ．薬学的賦形剤
医薬製剤は、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤と組み合わせてスニチニブを含む。代表的な賦形剤として、溶媒、希釈剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤、懸濁化剤、湿潤剤、粘度調整剤、等張化剤、安定剤及びそれらの組合せが挙げられる。好適な薬学的に許容可能な賦形剤は、好ましくは一般に安全であると認定され（ＧＲＡＳ）、望ましくない生物学的副作用又は不要な相互作用を生じることなく個体に投与され得る材料から選択される。
【０１０７】
いくつかの場合、上記医薬製剤は、薬物の制御放出に対する１種類のみの抱合体又はポリマー粒子を含む（例えば、医薬製剤に組み込まれた薬物粒子が同じ組成を有する、薬物粒子を含む製剤）。他の実施形態では、医薬製剤は、薬物の制御放出に対する、２以上の異なる種類の抱合体、又はポリマー粒子を含む（例えば、医薬製剤が、異なる化学組成、異なる平均粒子径、及び／又は異なる粒度分布を有する、２以上の薬物粒子の集団を含む）。
【０１０８】
薬物から形成された粒子は、好ましくは眼又は腫瘍等の組織への注射用の溶液又は懸濁液として製剤化される。
【０１０９】
眼投与用医薬製剤は、好ましくはスニチニブ又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩から形成された粒子の無菌水溶液又は懸濁液の形態である。許容可能な溶媒としては、例えば、水、リンゲル液、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、及び等張食塩水が挙げられる。また、上記製剤は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒、例えば１，３−ブタンジオール中の無菌液、懸濁液、又はエマルジョンであってもよい。
【０１１０】
いくつかの例では、上記製剤は、液状形態で分配されるか、又は包装される。代替的には、眼投与用製剤を、例えば好適な液状製剤の凍結乾燥によって得られる固体として包装することができる。固体は、投与に先立って適切な担体又は希釈剤により再構成され得る。
【０１１１】
眼の投与に対する溶液、懸濁液又はエマルジョンは、眼の投与に適したｐＨを維持するのに必要な有効量のバッファーで緩衝されてもよい。好適なバッファーは、当業者によく知られており、有用なバッファーのいくつかの例は酢酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、クエン酸塩、及びリン酸塩のバッファーである。
【０１１２】
また、眼の投与に対する溶液、懸濁液又はエマルジョンは、製剤の等張の範囲を調整するために１つ以上の等張化剤を含んでもよい。好適な等張化剤は当該技術分野でよく知られており、いくつかの例としてグリセリン、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム及び他の電解質が挙げられる。
【０１１３】
また、眼の投与に対する溶液、懸濁液又はエマルジョンは、眼科用調合薬の細菌汚染を予防するための１つ以上の防腐剤を含んでもよい。好適な防腐剤は当該技術分野において知られており、ポリヘキサメチレンビグアニジン（ＰＨＭＢ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）、安定化オキシクロロ錯体（別名Ｐｕｒｉｔｅ（商標）として知られる）、酢酸フェニル水銀、クロロブタノール、ソルビン酸、クロルヘキシジン、ベンジルアルコール、パラベン、チメロサール及びそれらの混合が挙げられる。
【０１１４】
また、眼の投与に対する、溶液、懸濁液又はエマルジョンは、分散剤、湿潤剤、及び懸濁化剤等の当該技術分野で知られている１つ以上の賦形剤を含んでもよい。
【０１１５】
Ｂ．追加の活性剤
上記ポリマー粒子中に存在するスニチニブ又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩に加えて、上記製剤は、１つ以上の追加の治療剤、診断剤、及び／又は予防剤を含んでもよい。活性剤は、酵素若しくはタンパク質、ポリペプチド又は核酸等の低分子活性剤又は生体分子であってもよい。好適な低分子活性剤として、有機化合物、及び有機金属化合物が挙げられる。いくつかの例では、低分子活性剤は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、より好ましくは約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、最も好ましくは約１２００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する。低分子の活性剤は、親水性、疎水性、又は両親媒性の化合物であってもよい。
【０１１６】
いくつかの場合、１つ以上の追加の活性剤は、粒子中に封入されてもよく、分散されてもよく、又は他の場合には粒子と混ざってもよい。また、或る特定の実施形態では、１つ以上の追加の活性剤は、薬学的に許容可能な担体に溶解されてもよく、又は懸濁されてもよい。
【０１１７】
眼疾患の治療に対する医薬組成物の場合、上記製剤は１つ以上の眼科薬物を含んでもよい。特定の実施形態では、眼科薬物は、後眼部の疾患又は障害を治療、予防、又は診断するために使用される薬物である。眼科薬物の非限定的な例として、緑内障治療剤、血管形成抑制剤、感染症治療剤、抗炎症剤、増殖因子、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、及びそれらの組合せが挙げられる。
【０１１８】
代表的な緑内障治療剤として、プロスタグランジン類縁体（トラボプロスト、ビマトプロスト及びラタノプロスト等）、ベータアドレナリン受容体アンタゴニスト（チモロール、ベタキソロール、レボベタキソロール及びカルテオロール）、アルファ−２アドレナリン受容体アゴニスト（ブリモニジン及びアプラクロニジン等）、炭酸脱水酵素阻害剤（ブリンゾラミド、アセタゾラミド及びドルゾラミド等）、縮瞳薬（すなわち、ピロカルピン及びエコチオパート等の副交感神経刺激薬）、セロトニン作動薬、ムスカリン作動薬、ドパミン作動薬、及びアドレナリン作動薬（アプラクロニジン、及びブリモニジン等）が挙げられる。
【０１１９】
代表的な血管形成抑制剤として、限定されないが、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））及びｒｈｕＦＡｂ  Ｖ２（ラニビズマブ、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（商標））等の血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に対する抗体、及びアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（商標））を含む他の抗ＶＥＧＦ化合物；ＭＡＣＵＧＥＮ（商標）（ペガプタニブナトリウム、抗ＶＥＧＦアプタマー又はＥＹＥ００１）（Eyetech Pharmaceuticals）；色素上皮由来因子（複数の場合がある）（ＰＥＤＦ）；セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標））及びロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ（商標））等のＣＯＸ−２阻害剤；インターフェロンアルファ；インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）；レナリドマイド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（商標））等のサリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（商標））及びその誘導体；スクアラミン；エンドスタチン；アンジオスタチン；ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（商標）（Sirna Therapeutics）等のリボザイム阻害剤；ＮＥＯＶＡＳＴＡＴ（商標）（AE-941）（カナダ国ケベックシティのAeterna Laboratories）等の多機能の抗血管形成剤；スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（商標））等の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（商標））及びエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））等のチロシンキナーゼ阻害剤；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標））及びセツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標））等の上皮増殖因子受容体に対する抗体、また同様に当該技術分野で知られている他の血管形成抑制剤が挙げられる。
【０１２０】
感染症治療薬として、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗寄生虫薬及び抗真菌剤が挙げられる。代表的な抗ウイルス剤として、ガンシクロビル及びアシクロビルが挙げられる。代表的な抗生物質として、ストレプトマイシン、アミカシン、ゲンタミシン、及びトブラマイシン等のアミノグリコシド、ゲルダナマイシン及びハービマイシン等のアンサマイシン、カルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、バンコマイシン、テイコプラニン及びテラバンシン等の糖ペプチド、リンコサミド、ダプトマイシン等のリポペプチド、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン及びエリスロマイシン等のマクロライド、モノバクタム、ニトロフラン、ペニシリン、バシトラシン、コリスチン及びポリミキシンＢ等のポリペプチド、キノロン、スルホンアミド及びテトラサイクリンが挙げられる。
【０１２１】
いくつかの場合、活性剤は、オロパタジン及びエピナスチン等の抗アレルギー剤である。
【０１２２】
抗炎症剤は、非ステロイド系及びステロイド系の双方の抗炎症剤を含む。好適なステロイドの活性剤として、グルココルチコイド、プロゲスチン、鉱質コルチコイド及びコルチコステロイドが挙げられる。
【０１２３】
眼科薬物は、その中性の形態で、又は薬学的に許容可能な塩の形態で存在し得る。いくつかの場合、増強された安定性、又は望ましい溶解度、又は溶解プロファイル等の塩の１つ以上の有利な物理的特性により、活性剤の塩を含む製剤を作製することが望ましい場合がある。
【０１２４】
一般に、薬学的に許容可能な塩は、水中若しくは有機溶媒中、又は２者の混合物中（一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール又はアセトニトリルのような非水性媒質が好まれる）における、遊離酸又は塩基の形態の活性剤と化学量の適切な塩基又は酸との反応によって作製され得る。薬学的に許容可能な塩として、薬物と好適な有機リガンド（例えば、第四級アンモニウム塩）との反応によって形成された塩と同様に、無機酸、有機酸、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩に由来する活性剤の塩が挙げられる。好適な塩の一覧は、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2000, p. 704に見られる。薬学的に許容可能な塩の形態で投与される場合もある眼科薬物の例として、マレイン酸チモロール、酒石酸ブリモニジン及びジクロフェナクナトリウムが挙げられる。
【０１２５】
いくつかの場合、活性剤は、眼の画像化又は他の場合には眼を評価する診断剤である。例示的な診断剤として、常磁性分子、蛍光性化合物、磁気分子及び放射性核種、ｘ線造影剤及び造影剤が挙げられる。
【０１２６】
或る特定の実施形態では、上記医薬組成物は、１つ以上の局所麻酔薬を含む。代表的な局所麻酔薬として、テトラカイン、リドカイン、アメソカイン、プロパラカイン、リグノカイン及びブピバカインが挙げられる。また、いくつかの場合、局所麻酔薬の分散を加速及び改善するため、ヒアルロニダーゼ酵素等の１つ以上の追加の薬剤が上記製剤に添加される。
【０１２７】
Ｖ．使用方法
緑内障にはいくつかのタイプがある。２つの主なタイプは、開放隅角及び閉塞隅角である。これらは、眼内圧（ＩＯＰ）、すなわち眼の内部の圧力の増加によって示される。
【０１２８】
緑内障の全症例の少なくとも９０％を占める、緑内障の最も一般的な形態である開放隅角緑内障は、ゆっくりとした排水管の閉塞によってもたらされ、結果として眼圧の増加を生じる。開放隅角緑内障は虹彩と角膜との間の隅角が広く開いており、徐々に進行して生涯続く病状であり、症状及び損傷に気付かない。「開放隅角」は、虹彩が角膜と接する隅角が、あるべき様に広く開いていることを意味する。また、開放隅角緑内障は、原発性又は慢性緑内障とも呼ばれる。開放隅角緑内障は緑内障の最も一般的なタイプであり、約３００万人のアメリカ人がこの疾患に冒されている。
【０１２９】
閉塞隅角緑内障は、あまり一般的ではない緑内障の形態である。閉塞隅角緑内障は、排水管の遮断によってもたらされ、結果として眼内圧が突然上昇し、虹彩と角膜との間の隅角が閉じ又は狭くなり、非常に急速に進行し、通常は非常に顕著な症状及び損傷があり、迅速な医学的処置を要する。閉塞隅角緑内障は、急性緑内障又は狭隅角緑内障とも呼ばれる。開放隅角緑内障とは異なり、閉塞隅角緑内障は虹彩と角膜との間の隅角の閉鎖の結果である。
【０１３０】
正常眼圧緑内障（ＮＴＧ）又は低眼圧緑内障又は正常圧緑内障は、眼圧が非常に高いわけではないにも関わらず、視神経が傷害される。先天性緑内障は、出生前期に正しくない又は不完全な眼の排水管の発達がある場合に赤ん坊に起こる。これは、遺伝の可能性のある稀な病状である。無併発性である場合、マイクロサージャリーによって、構造的上の欠陥を修正することができることが多い。他の症例は、薬物治療及び手術によって治療される。緑内障の他のタイプとして、続発性緑内障、色素性緑内障、偽落屑緑内障、外傷性緑内障、血管新生緑内障、虹彩角膜内皮症候群（ＩＣＥ）、及びぶどう膜炎緑内障が挙げられる。
【０１３１】
開放隅角緑内障は、緑内障の最も一般的な形態であり、約３００万人のアメリカ人がこの疾患に冒されている。開放隅角緑内障は、眼の排水管が経時的に閉塞すると起こる。眼の内部の圧力（眼内圧、すなわちＩＯＰ）は、正しい量の房水を眼から排水することができないため上昇する。開放隅角緑内障の場合、排水管への入り口は明確であり、正常にはたらいているはずである。開放隅角緑内障が診断されず、治療されない場合、ゆるやかな視力の喪失をもたらす場合がある。このタイプの緑内障はゆっくりと、時に、長年に亘って目立った視力の喪失を伴わずに進行する。開放隅角緑内障は、通常、特に早期に発見され治療される場合には、薬物治療に対する反応性が良好である。
【０１３２】
神経変性疾患である緑内障における視力喪失は世界的な不可逆的失明の主な原因であり、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の機能不全及び死に起因する。現在の治療法は、いずれも眼内圧（ＩＯＰ）を低下させることによるものである。しかしながら、減圧を達成することは困難であり、著しい眼圧の低下があってもＲＧＣの喪失が続く場合がある。したがって、ＲＧＣ細胞死プロセスを直接的に阻害することによってＩＯＰ低下を補う神経保護剤を開発する努力がなされてきたが、いまだに神経保護剤は臨床で使用されていない。実施例に記載されるように、初代ＲＧＣ培養に基づくハイコンテント表現型スクリーン（high-content phenotypic screen）を使用することにより、予想外にも、ＦＤＡ承認薬であるスニチニブが齧歯類の緑内障及び外傷性視神経障害モデルにおいてＲＧＣ生存を強力に促進することがわかった。スニチニブがＲＧＣ生存を促進する分子標的（複数の場合がある）を同定するため、ハイスループットＲＮＡ干渉に基づくアッセイを開発し、全マウスカイノームをスクリーニングするために使用した。上記スクリーニングによって、スニチニブの主な神経保護薬標的としてデュアル−ロイシンジッパーキナーゼ（ＤＬＫ）が同定された。いくつかの他の神経保護キナーゼ阻害剤もまたＤＬＫを阻害し、この知見を支持する。他の神経保護キナーゼ阻害剤として、ＳＲ８１６５、アキシチニブ、ボスチニブ、ネラチニブ、クリゾチニブ、トザセルチブ、レスタウルチニブ、フォレチニブ、ＴＡＥ−６８４、及びＫＷ−２４４９が挙げられる。
【０１３３】
本明細書は主にスニチニブに関して記載されるが、スニチニブに代えてこれらの他の化合物が使用され得ることが理解される。さらに、ＤＬＫが傷害に応答してロバストな転写後の発現上昇を経て、これがＲＧＣ細胞死に必要かつ十分であることが示された。併せて、結果は、緑内障において薬物／薬物標的コンビネーションを確立し、ＲＧＣ傷害に対する可能性のあるバイオマーカーを示唆して、緑内障及び他の形態の視神経疾患の治療に対するより特異的な神経保護性ＤＬＫ阻害剤の開発の出発点を提供する。
【０１３４】
上記製剤は、緑内障と関連する上昇した眼内圧に起因する神経細胞死の減少又は予防に対してスニチニブ及び同様の化合物のより持続した制御放出を提供する。投与により、スニチニブ又は他の薬剤は、治療利益をもたらすのに十分高いが、細胞毒性を回避するのに十分低い濃度で長期にわたって放出される。
【０１３５】
眼に投与された場合、上記粒子は、好ましくは、３日超、７日超、１０日超、１５日超、２１日超、２５日超、３０日超、４５日超の長期間に亘って低用量の１つ以上の活性剤を放出する。暗順応ＥＲＧ  ｂ波振幅の減少、及び／又は網膜変性等の副作用を最小化しながら、長期間に亘って眼に治療的有効量の１つ以上の活性剤を投与するため、薬物の構造又はポリマーマトリクスの構成、粒子の形態、及び投与する粒子の用量を適合させることができる。
【０１３６】
制御放出のための粒子を含む医薬組成物を、１つ以上の眼の疾患又は障害を治療又は予防するため、それを必要とする患者の眼に投与することができる。いくつかの場合には、眼の疾患又は障害は、後眼部を冒す。本明細書で使用される後眼部は、前部硝子体膜と、硝子体液、網膜、脈絡膜、及び視神経等のその後ろの全ての光学構造体を含む、眼の後ろ３分の２を指す。
【０１３７】
１．投与方法
本明細書に記載される製剤は、硝子体内注射（例えば、前部、中部、又は後部の硝子体注射）、結膜下注射、前房内注射、側頭部角膜輪部を介する前眼房への注射、角膜実質内注射、脈絡膜下腔への注射、角膜間注射、網膜下注射、及び眼内注射によって眼に局所的に投与され得る。好ましい実施形態では、上記医薬組成物は硝子体内注射によって投与される。
【０１３８】
本明細書に記載されるインプラントは、当該技術において既知の移植に適した方法を使用して、眼に投与され得る。或る特定の実施形態では、インプラントは２２−ゲージ針等の針を使用して水晶体内に注入される。水晶体内のインプラントの配置は、インプラントのサイズ、インプラントの形状、及び治療される疾患若しくは障害を考慮して変化され得る。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物、及び／又はインプラントは、１つ以上の追加の活性剤と同時投与される。本明細書で使用される「同時投与」は、異なる剤形を同時に、又は本質的に同時に使用する投与と同様に、同じ剤形内の１つ以上の追加の活性剤との１つ以上の薬物の制御放出製剤の投与を指す。本明細書で使用される「本質的に同時に」は、一般的に、１０分以内、好ましくは５分以内、より好ましくは２分以内、最も好ましくは１分以内を意味する。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物、及び／又はインプラントは、眼の血管新生の疾患又は障害に対する１つ以上の追加の治療と同時投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物、及び／又はインプラントは、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））、ラニビズマブ、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（商標）又はアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（商標））のような１つ以上の抗血管形成剤と同時投与される。
【０１４１】
ｂ．投薬
上記粒子は、長期間に亘って、有効量のスニチニブ又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩を放出することが好ましい。好ましい実施形態では、粒子は、少なくとも２週の期間に亘り、より好ましくは少なくとも４週の期間に亘り、より好ましくは少なくとも６週の期間に亘り、最も好ましくは少なくとも８週の期間に亘り有効量のスニチニブを放出する。いくつかの実施形態では、上記粒子は、３ヶ月以上の期間に亘って有効量のスニチニブを放出して神経細胞死、特に上昇した眼内圧に起因する視神経の神経細胞死を減少又は予防する。
【０１４２】
眼を参照して記載されるが、上記製剤は、脳を含む神経細胞を保護するため他の部位に投与されてもよいことが理解される。
【０１４３】
本発明は、以下の非限定的な実施例の参照により更に理解される。
【実施例】
【０１４４】
実施例１．スニチニブ封入ミクロ粒子の作製及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ特性評価
材料及び方法
スニチニブ封入ミクロ粒子の作製
スニチニブリンゴ酸塩を含む若しくは含まない、ＰＬＧＡ及び／又はＰＬＧＡとＰＬＧＡ（分子量４５ｋＤａ）に共有結合的に共役したＰＥＧとのジブロックコポリマー（ＰＬＧＡ４５ｋ−ＰＥＧ５ｋ）のポリマーミクロ粒子を、シングルエマルジョン溶媒蒸発法を使用して作製した。簡潔には、ＰＬＧＡ及び／又はＰＬＧＡ−ＰＥＧを最初にジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶解し、所定の濃度でスニチニブリンゴ酸塩をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。ポリマー溶液及び薬液を混合して均質な溶液（有機相）を形成した。有機相を１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（Polysciences、分子量２５ｋＤａ、８８％加水分解）の水溶液に添加し、Ｌ５Ｍ−Ａ実験室用ミキサー（マサチューセッツ州イーストロングメドーのSilverson Machines Inc.）を使用して５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズしてエマルジョンを得た。
【０１４５】
その後、エマルジョン中の溶媒を含むミクロ粒子を室温で２時間超に亘って撹拌することによりＤＣＭを蒸発させ、硬化させた。ミクロ粒子を沈降及び遠心分離によって収集し、水中で３回洗浄し、凍結乾燥によって乾燥させた。
【０１４６】
カチオン性界面活性剤及びイオン性界面活性剤の両方、すなわちドデシル硫酸ナトリウム（「ＳＤＳ」）、及びヘキサデシルトリメチルアンモニウム（「ＨＤＴＡ」）を上記溶媒に添加して粒子を作製した。これらを非イオン性溶媒、ポリビニルアルコール（「ＰＶＡ」）で代用した。スニチニブ遊離塩は結晶化し、利用することができなかった。ＤＭＳＯを、単独で、及び界面活性剤と組み合わせて溶媒に添加した。
【０１４７】
遠心分離によって粒子を収集し、洗浄し、投与前に再構成される粉末まで凍結乾燥した。平均粒子径及び粒度分布をＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒを使用して特定した。ＰＢＳ及び硝子体液疑似液中３７℃で無限の沈下条件での薬物放出動態を特定した。
【０１４８】
薬物装荷の特定
薬物装荷をＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法によって特定した。スニチニブを含むミクロ粒子（総重量１０ｍｇ）を無水ＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解し、薬物の濃度が薬物のＵＶ吸光度の標準曲線の比例領域に含まれるまで更に希釈した。標準曲線に対してＵＶ吸光度を比較することにより、薬物の濃度を特定した。薬物装荷は、ミクロ粒子に対する薬物の重量比として定義される。
【０１４９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物放出
６ｍＬガラスバイアル中、１％のＴＷＥＥＮ（商標）  ２０を含有する４ｍＬのＰＢＳにスニチニブを含むミクロ粒子（総重量１０ｍｇ）を懸濁し、１５０ｒｐｍで振蕩しながら３７℃でインキュベートした。所定の時間点において、バイアルの底に粒子が沈澱した後３ｍＬの上清を取り出し、３ｍＬの新たな放出媒質と交換した。上清中の薬物含有量をＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法又はＨＰＬＣによって特定した。
【０１５０】
ミクロ粒子の平均径及び粒度分布の測定
数ミリグラムのミクロ粒子を最初に水に懸濁し、ＩＳＯＴＯＮ（商標）希釈剤中に分散させた。ＣＯＵＬＴＥＲ  ＭＵＬＴＩＳＩＺＥＲ  ＩＶ（カリフォルニア州ブレアのBeckman Coulter, Inc.）を使用して平均粒子径及び分布を特定した。
【０１５１】
結果
ドデシル硫酸ナトリウム（「ＳＤＳ」）、及びヘキサデシルトリメチルアンモニウム（「ＨＤＴＡ」）等のカチオン性界面活性剤及びイオン性界面活性剤の両方を上記溶媒に添加して粒子を作製した。装荷は非常に低かった（ＳＤＳで０．２０％、及びＨＤＴＡで０．２７％）。ポリビニルアルコール（「ＰＶＡ」）等の非イオン性溶媒に代えることで装荷を１最大１．１％に増加した。スニチニブ遊離塩基は結晶化し、より高い装荷を得るために利用することができなかった。ＤＭＳＯを使用することにより、装荷は更に、最大およそ５％まで増加した。
【０１５２】
【表１】
2018500394.tif 000004
【０１５３】
実施例２．スニチニブの封入効率に対する水性ｐＨの影響
材料及び方法
水溶液中でのスニチニブの溶解度がｐＨ依存性であることが示されているため、スニチニブを封入するミクロ粒子製剤を様々なｐＨ値の水相に作製して薬物封入に対する水性ｐＨの影響を調べた。
【０１５４】
結果
表２に示されるように、薬物装荷及び封入の効率は、水性ｐＨが４から７．４に増加した場合に著しく増加した。しかしながら、ｐＨを１０に調整して水溶液がより塩基性になると、多くの粒子の形態は球形から不規則な形状へと変化し、一部の粒子は凝集塊を形成し、高ｐＨの水溶液もまたスニチニブの高装荷及び高品質の粒子を生産するのに不利であることを示唆した。
【０１５５】
【表２】
2018500394.tif 000005
【０１５６】
実施例３．緑内障治療に対するスニチニブの試験
材料及び方法
試薬
スニチニブ、レスタウルチニブ、クリゾチニブ、アキシチニブ、ボスチニブ、イマチニブ、タンデュチニブ、バンデタニブ、ソラフェニブ、及びバタラニブをLC labsから購入し、フォレチニブ、ＫＷ−２４４９をSelleckchemから購入し、トザセルチブをBiovision life scienceから購入した。
【０１５７】
ＰＬＧＡミクロスフェア
スニチニブ、ＳＲ８１６５、又はトザセルチブで装荷されたポリマーミクロ粒子を、シングルエマルジョン溶媒蒸発法を使用して作製した。簡潔には、４ｍＬの塩化メチレンに溶解した２００ｍｇのポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ５０：５０、２Ａ、０．１５ｄＬ／ｇ〜０．２５ｄＬ／ｇ、分子量１５０００〜１７０００、アラバマ州バーミンガムのLakeshore Biomaterials）を、ＤＭＳＯ中に溶解した様々な薬物（１ｍＬ  ＤＭＳＯ中４０ｍｇのスニチニブ、０．５ｍＬ  ＤＭＳＯ中４０ｍｇのＳＲ８１６５、１ｍＬ  ＤＭＳＯ中４０ｍｇのトザセルチブ）のうちの１つと混合することによって溶液を作製した。上記混合物を、１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ、分子量＝２５ｋＤａ、ペンシルベニア州ワーリントンのPolysciences）を含む水溶液中に１分間に亘って４０００ｒｐｍ（英国バッキンガムシャー州チェサムのSilverson製ホモジナイザー、モデルＬ４ＲＴ）でホモジナイズした。その後、粒子を２時間撹拌して硬化させ、５０００ｇで５分間の遠心分離によって収集し、脱イオン水で３回洗浄して、投与前に再構成され得る粉末まで凍結乾燥した。ミクロ粒子のサイズをＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩｅ（カリフォルニア州フラートンのBeckman-Coulter Inc.）を使用して特定した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの薬物放出速度を特定するため、５ｍｇの薬物装荷粒子を２ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）に懸濁し、ローテーター上で３７℃にてインキュベートした。選択した時間点で、ミクロ粒子を遠心分離によって沈澱させ、上清を除去し、２ｍＬの新たなリン酸バッファーに交換した。スニチニブ及びＳＲ８１６５に対して４２０ｎｍ、トザセルチブに対して２５２ｎｍで分光光度法により上清を分析した。
【０１５８】
統計学的分析
全ての統計学的分析を独立マン−ホイットニー−ウィルコクソン検定により行った。
【０１５９】
ＲＧＣ精製、培養、スクリーニング、及び画像化
全ての動物の使用は、動物の使用に関するＡＲＶＯの声明に従い、全ての実験手順をジョンズホプキンズ大学のＩＡＣＵＣによって承認された動物プロトコルに従って行った。出生後０日目〜５日目のマウスから網膜を摘出し、パパインで解離させた。ミクログリアをＤｙｎａｂｅａｄｓに共役させた抗ＣＤ１１ｂで免疫枯渇させた。抗Ｔｈｙ１．２抗体（Serotec、ＭＣＡ０２８）及び抗マウスＩｇＭで予め共役させたプレート上、室温（ＲＴ）にて網膜細胞の懸濁液にイムノパニングを行った。洗浄後、セルリフター（cell lifter）によりプレートからＲＧＣを離し、計数し、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ、Ｂ２７、Ｎ２サプリメント、Ｌ−グルタミン、及びペニシリン／ストレプトマイシンで構成される培地中、９６ウェルプレートにおいて１ウェル当たり１００００の密度で蒔いた。３７℃で７２時間の培養後、ＲＧＣをカルセインＡＭ、エチジウムホモダイマー、及びＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２で染色した。Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  Ｋｉｎｅｔｓｃａｎを用いて各ウェルの部分より画像を撮影し、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｆｉｌｉｎｇパッケージのアルゴリズムにより細胞生存を定量し、計数した。示されるように、代替的にはＲＧＣ生存能力をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（Promega）によって測定した。
【０１６０】
ｓｉＲＮＡに基づくスクリーニングのため、Ｓｉｇｍａ  Ｍｉｓｓｉｏｎマウスカイノームライブラリ由来のｓｉＲＮＡを、最終濃度２０ｎＭでＮｅｕｒｏＭａｇ（Oz Biosciences）と複合体化させた。その後、ＲＧＣを固定磁石に逆形質移入し、７２時間後の生存についてアッセイした。ノンターゲッティングｓｉＲＮＡから３ＳＤ超の生存を与えるオリゴヌクレオチドを神経保護性とした（１０６  ｓｉＲＮＡ、５．４％）。確証的なｓｉＲＮＡをDharmacon及びAmbionの両方から得た。低分子に基づくスクリーニングのため、ＤＭＳＯ中に段階希釈した化合物を、それぞれの化合物濃度に対して最終濃度０．０５７％ＤＭＳＯで、２３ｎＬのピンツールアレイ（カリフォルニア州サンディエゴのKalypsys）によって１５３６ウェルアッセイプレートに移した。ＲＧＣを４８時間培養し、生物発光ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（Promega）アッセイを使用して、プレートリーダー（ViewLux、Perkin Elmer）上で細胞生存能力を分析した。ＣｕｒｖｅＦｉｔ（NIH NCATS）を使用して濃度反応曲線を作成した。スクリーニングしたライブラリは、修正したＴｏｃｒｉｓｃｒｅｅｎ（１３９５個の化合物）コレクション、ＦＤＡ承認薬（２８１４個の化合物）、ＬＯＰＡＣ（１２０８個の化合物）、及びＰＴＬ２／ＰＴＬ３（プテリジン、ピリミジン、及びキナゾリンのスキャフォルドに基づく；２３１９個の化合物）を含む。
【０１６１】
ラット硝子体内注射
６週齢の雄性Ｗｉｓｔａｒラットをケタミン／キシラジンで麻酔した。部分的角膜周囲切開を行って強膜を露出させた。注射部位は、鋸状縁のおよそ１ｍｍ後ろであり、水晶体の傷害を回避するため注射ガラスピペットを視神経乳頭に対して角度調整した。５μＬ（１０μｇ）のＰＬＧＡミクロスフェアをガラスピペット及びＨａｍｉｌｔｏｎシリンジで注入した。
【０１６２】
ラット視神経離断
視神経を部分的角膜周囲切開及び外眼筋の眼窩内切開によって露出させた後、２５ゲージ針で離断した。その後、４−Ｄｉ−１０−ＡＳＰを近位神経断端（proximal nerve stump）に塗布した。離断中、血管傷害を回避するように注意し、網膜灌流を神経離断後に検査した。離断から２週間後、ラットを屠殺し、眼球摘出した。網膜をフラットマウント（flatmounted）し、共焦点顕微鏡検査で画像化し、ＲＧＣ形態を有する４−Ｄｉ−１０−ＡＳＰ標識細胞の数を定量した。ＲＧＣ生存の画像化及び定量をマスク方式（masked fashion：盲検）で行った。
【０１６３】
ラットのレーザー誘発性高眼圧
眼内圧（ＩＯＰ）を先に記載７されるように線維柱帯のレーザー処理によって片側性に評価した。簡潔には、６週齢のＷｉｓｔａｒ雄性ラットをケタミン／キシラジンで麻酔した。連続する２週間で、４０個〜５０個の５３２ｎｍのダイオードレーザースポットを縁前領域（prelimbal region）に適用した（直径５０μｍ、６００ｍＷパワー、及び０．６秒間）。レーザー処理の１日後及び３日後、ＴｏｎｏＬａｂを用いて麻酔下でレーザー処理した眼及び他眼のＩＯＰを測定した。レーザー処理から４週間後、ラットを４％パラホルムアルデヒドのリン酸バッファーで灌流した。視神経を摘出し、１％四酸化オスミウムで後固定を行い、エポキシ樹脂に包埋して、１％トルイジンブルーで染色した。１０個の無作為の重複しない視野からの画像を１００倍の油相コントラスト対物レンズで撮影した。視神経全体の断面の領域を倍率１０倍で画像化し、１０個の視野からの軸索数と共に使用して、１つの神経当たりの軸索数を得た。レーザー処理及び視神経画像の取得をマスク方式で行った。
【０１６４】
マウス硝子体内注射及び視神経挫滅
３ヶ月齢の雄性Ｃ５７ＢＬ／６及びＤｌｋのｌｏｘＰ導入（floxed）マウス（ＢＬ／６バックグラウンド）をケタミン／キシラジンで麻酔し、ニワトリβ−アクチンプロモーター由来のＣｒｅリコンビナーゼを発現するキャプシド変異体（Ｙ４４４、５００、７３０Ｆ）ＡＡＶ２の１０１０  ＤＮＡ含有粒子を用いて硝子体内注射を行った。７日後、視神経を外科的に露出させ、眼球の後ろ１ｍｍで３秒間、Ｎ５自閉鉗子を用いて挫滅した。神経挫滅の１０日後、眼を摘出し、固定し、βＩＩＩ−チューブリン及びＢｒｎ３に対するフラットマウント免疫染色によりＲＧＣ生存を測定した。硝子体内注射、視神経挫滅、免疫蛍光法、及びＲＧＣカウンティングをマスク方式で行った。
【０１６５】
ウェスタンブロット、免疫蛍光法、及びＲＴ−ＰＣＲ
標準的なプロトコルに従ってウェスタンブロットを行った。次の抗体はCell Signaling Technology製であった：ホスホ−ＪＮＫ、Ｔｈｒ１８３／Ｔｙｒ１８５（４６７１）；ＪＮＫ（９２５８）；ホスホ−ＭＫＫ７（４１７１）、及びＭＫＫ７（４１７２）。モノクローナル抗アルファ−チューブリン抗体（Ｔ６０７４）をSigmaから購入した。ＤＬＫウサギポリクローナルはS. Hiraiから提供された。
【０１６６】
網膜免疫蛍光法を標準的なプロトコルに従って行った。次の抗体を使用した：マウス神経細胞クラスβＩＩＩチューブリン（クローンＴＵＪ１、１：５００、Covance）、ウサギポリクローナル抗ＤＬＫ（１：２００、S. Hirai）、及びヤギポリクローナルＢｒｎ３（Ｃ−１３、１：１００）、ウサギ抗Ｃｒｅ（１：１００、Novus）。
【０１６７】
Ｄｌｋ  ｍＲＮＡレベルを次のプライマーセットを用いてＲＴ−ＰＣＲにより測定した：５’−ＡＴＴＣＣＴＣＡＧＣＣＡＴＣＡＴＣＴＧＧ−３’（配列番号１）、及び５’−ＡＴＴＴＣＧＴＧＧＴＴＴＧＣＴＧＴＴＣＣ−３’（配列番号２）。
【０１６８】
電気生理学検査
Ａｘｏｐａｔｃｈ  ２００Ｂによる電流固定及び電圧固定の両方のモードで全細胞パッチクランプ法を使用して記録を行った。データを１ｋＨｚ（Bessel）で低域フィルタし、１０ｋＨｚでサンプリングした。−２ｍＶの液相界面電位を補正し、得られた電位を−６２±２．２ｍＶ（平均±ＳＥＭ、ｎ＝１３）と推定した。記録ピペットを次の細胞内溶液（ｍＭ単位）で満たした：１００  Ｋ−グルコン酸、５０  ＫＣｌ、２０  ＨＥＰＥＳ、１０  ＥＧＴＡ、５  ＭｇＣｌ２、２  ＡＴＰ、０．１  ＧＴＰ（ｐＨをＫＯＨで７．３３に調整した）。細胞を持続的に１４０  ＮａＣｌ、５  ＫＣｌ、１  ＭｇＣｌ２、２．５  ＣａＣｌ２、１０  グルコース、１０  ＨＥＰＥＳ（ｐＨをＮａＯＨで７．４に調整した）で灌流した（ｍＭ単位）。
【０１６９】
ＡＡＶベクターの産生
修正した２プラスミド同時形質移入法２３によりＡＡＶベクター調製物を産生する。簡潔には、約１０９個のＨＥＫ  ２９３細胞を５％ウシ胎仔血清及び抗生物質を含むＤＭＥＭ中で培養する。その後、ＣａＰＯ４沈澱による２つのベクタープラスミドのＤＮＡ形質移入を６０時間に亘って７％ＣＯ２中３７℃でインキュベートした。その後、細胞を採取し、３回の凍結／解凍サイクルによって溶解させ、粗溶解物を遠心分離によって清澄にし、得られたベクター含有上清を不連続なイオジキサノールステップグラジエントに供した。ベクター含有画分を更に精製し、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＡＫＴＡ  ＦＰＬＣシステムを使用して５ｍｌ容のＨｉＴｒａｐ  Ｑ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムでのカラムクロマトグラフィーによって濃縮した。２１５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０を使用してカラムからベクターを溶離し、ＡＡＶピークを収集し、濃縮して、バッファーを０．０１４％のＴｗｅｅｎ  ２０を含むＡｌｃｏｎ  ＢＳＳに交換した。放出の前、許容可能な範囲において陰性バイオバーデン試験である銀染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及びエンドトキシン試験によりベクター純度を評価した。最後に、参照ＡＡＶベクタースタンダードと比較したリアルタイムＰＣＲによりＤＮａｓｅ耐性ベクターゲノムに対してベクターの力価を特定した（titered）。
【０１７０】
結果
ハイコンテント、ハイスループット、表現型スクリーニング
複数用量５での６０００を超える特定の化合物を繰り返しスクリーニングすることにより、スニチニブ及び関連するオキシインドール類縁体が非常に神経保護性であることを同定した。スニチニブ処理は、０．５μＭ〜１μＭの最大活性を伴って初代ＲＧＣの生存能力の用量依存的増加をもたらした（図１Ａ）。増加した生存は、カスパーゼ活性化、核の凝縮及び断片化を含むアポトーシスのマーカーの対応する減少と関連した。
【０１７１】
視神経離断に応答するＲＧＣ死の回復
視神経離断に応答するｉｎ  ｖｉｖｏでのＲＧＣ死の回復に対するスニチニブの能力を試験した。スニチニブ、又はそのビヒクル対照をポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）系の遅延溶出（slow-eluting）ミクロスフェア中にパッケージングし、Ｗｉｓｔａｒラットに硝子体内注射した。７日後、視神経を離断し、近位神経断端に４−Ｄｉ−１０−ＡＳＰを塗布することによってＲＧＣを逆行標識した。離断後２週間目に、対照動物と比較したスニチニブ処理は、３倍〜４倍のＲＧＣ生存における増加を示した（図１Ｂ）。緑内障モデルにおけるスニチニブの神経保護活性を評価するため、ラットを硝子体内ビヒクル又はスニチニブ溶出ミクロスフェアで予め処理した後、線維柱帯のダイオードレーザー処理を使用してＩＯＰを増加した（図２Ａ〜図２Ｃ）。対照ミクロスフェアで注射された眼において、１ヶ月目で視神経軸索の５８％の減少があった。しかしながら、スニチニブ溶出ミクロスフェアで処理された眼において、軸索喪失は４０％減少した（ｐ＜０．０５、図１Ｃ）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてより大きな効能を有することがわかったスニチニブ類縁体であるＳＲ８１６５（図５Ａ）は、ＰＬＧＡミクロスフェアからの送達の際に同様の神経保護を与えた（図１Ｃ）。あわせて、これらの結果は、スニチニブ、及び関連するオキシインドール類縁体を緑内障の神経保護剤として確立する。
【化３】
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【０１７２】
キナーゼ阻害がこれらのオキシインドールキナーゼ阻害剤の神経保護活性を媒介したことを確認するため、スニチニブの神経保護性類縁体であるＳＵ６６５６の活性を、水素のメチル基への置換がキナーゼＡＴＰ結合ポケットへの結合を妨げると予測される別の同じ誘導体であるＳＲ８０２０のものと比較した。ＳＲ８０２０は生存促進活性を示すことができなかったため、スニチニブ及びその類縁体の神経保護活性はＡＴＰ競合的キナーゼ阻害によって媒介されることが示唆された。神経保護的濃度において、スニチニブは２００近いキナーゼを阻害する。
【０１７３】
【表３】
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【０１７４】
キナーゼのうち、強力に阻害したのは、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ｃ−Ｋｉｔ、ＦＬＴ３、及び血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）である。しかしながら、イマチニブ、ソラフェニブ、タンデュチニブ、バンデタニブ、及びバタラニブを含む、１つ以上のそれらの同じ受容体チロシンキナーゼを阻害することが知られている他の低分子は、全て神経保護活性を欠く（図３Ｂ〜図３Ｆ）。これらの結果は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの神経保護に必要とされる比較的高濃度とあわせて、その阻害がＲＧＣ生存を促進するキナーゼ（複数の場合がある）は、スニチニブの１つ以上の低親和性標的であることを示唆した。関連するキナーゼ（複数の場合がある）を同定するため、初代ＲＧＣプラットフォームを全マウスカイノームの不偏的ＲＮＡ干渉に基づくスクリーニングに適合させた。そのノックダウンがＲＧＣ生存を増加したキナーゼは、神経保護性のキナーゼ阻害に関連する可能性のある標的を表すであろうと推論される。従来の形質移入の手順が最小のＲＧＣの形質移入をもたらすか、又は毒性であったことから、培養された初代ＲＧＣに対して効率的なｓｉＲＮＡ送達を提供する磁性ナノ粒子に基づくハイスループット法が開発された。その後、１８６９のｓｉＲＮＡの整列されたライブラリを、６２３個のキナーゼに対してスクリーニングし、マウスカイノームの３倍の網羅範囲を提供した。
【０１７５】
３つ全てのｓｉＲＮＡが著しく神経保護性であった２つのみのキナーゼは、マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼキナーゼ１２／デュアル−ロイシンジッパーキナーゼ（Ｍａｐ３ｋ１２／Ｄｌｋ）、及びその唯一既知の基質であるマイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ７（Ｍａｐ２ｋ７／Ｍｋｋ７）であった。両方のキナーゼの関与を、ｓｉＲＮＡの独立集合を使用して二次スクリーニングにおいてその後確認した。ＭＫＫ７及びそのホモログであるＭＫＫ４は、ＲＧＣ細胞死の主要なメディエーターであるｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ１−３）の標準的な活性化因子である。上記結果は、ＤＬＫがＲＧＣにおけるＪＮＫ活性化及び細胞死のいまだ同定されていないトリガーであるかもしれないことを示す。実際、ＤＬＫは、末梢の運動ニューロン及び感覚ニューロンにおける発生上のアポトーシスを媒介することが示されているが、成人ＣＮＳ神経変性における役割は明確には確立されていない。
【０１７６】
ＲＧＣ死の媒介におけるＤＬＫの役割を探索するため、イムノパニングを行ったＲＧＣをＤＬＫ  ｓｉＲＮＡ又はノンターゲッティグ対照で形質移入し、経時的な生存を追跡した。予測したように、ＤＬＫ  ｓｉＲＮＡはＤＬＫのｍＲＮＡ及びタンパク質のレベルをノックダウンし、ＪＮＫ下流シグナル伝達の活性化のマーカーであるＪＮＫのリン酸化を阻害した（図４Ａ）。ノンターゲッティングｓｉＲＮＡを形質移入した細胞が７２時間までに死んだのに対し、ＤＬＫ  ｓｉＲＮＡで形質移入したＲＧＣは３週間超に亘って生存した（図４Ｂ）。ＤＬＫ  ｓｉＲＮＡ又はスニチニブ処理によって長期間に亘り生存し続けるＲＧＣが機能を維持したままであるかどうかを判定するため、培養２週間目にパッチクランプ記録を行った。持続する機能性と一致して、ＲＧＣは、脱分極電流に応答して活動電位を伝導し、外因的に適用されたグルタミン酸に対して応答性であった。軸索損傷に応答するｉｎ  ｖｉｖｏでのＤＬＫの役割を試験するため、Ｐ１バクテリオファージリコンビナーゼＣｒｅを発現するキャプシド改変アデノ随伴ウイルス２（ＡＡＶ２）を用いて、Ｄｌｋ１のｌｏｘＰ導入アレルを保有するマウスに硝子体内注射した。ＤｌｋのＣｒｅ媒介欠失に十分な時間の後、眼を視神経挫滅に供した。ＡＡＶ２−Ｃｒｅが注入されたＤｌｋ＋／＋マウス又はＣｒｅ不在のＤｌｋｆｌ／ｆｌマウスに比較して、ＡＡＶ２−Ｃｒｅが注入されたＤｌｋｆｌ／ｆｌマウスは、ＲＧＣ喪失において７５％の減少を有した（図４Ｃ及び図４Ｄ）。
【０１７７】
ＤＬＫはｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏでのＲＧＣ細胞死の重大なメディエーターのようであるため、ＤＬＫの調節機構を調べた。驚いたことに、ＪＮＫカスケードの他のメンバーと異なり、ＤＬＫタンパク質はｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方の傷害されていないＲＧＣにおいて検出不可能である（図５Ａ）。しかしながら、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのイムノパニング（ＲＧＣが必ず軸索切断され傷害される場合）、視神経挫滅、又はｉｎ  ｖｉｖｏでの視神経の離断の後、ＤＬＫタンパク質のロバストな発現上昇がある。対照的に、Ｄｌｋ転写産物のレベルは傷害後、比較的一定であり（図５Ａ）、ＤＬＫ発現上昇を媒介する機構として翻訳の増加及び／又はタンパク質代謝回転の減少を示した。
【０１７８】
増加したＤＬＫタンパク質はＲＧＣ細胞死を引き起こし得るという仮説を直接的に試験するため、アデノウイルスを使用してＧＦＰ、ＤＬＫ、又はキナーゼ欠損（ＫＤ）型ＤＬＫ（Ｋ１８５Ｒ）を過剰発現させた。初代ＲＧＣを感染させ、４８時間後に生存を測定した。モデルと一致して、野生型ＤＬＫ過剰発現は細胞死を促進したのに対し、Ｋ１８５Ｒ  ＤＬＫの過剰発現は、ＪＮＫリン酸化によって判断されるドミナントネガティブとして機能し、実際に生存を増加した（図５Ｂ）。
【０１７９】
スニチニブ処理及びＤＬＫノックダウンの両方がＲＧＣ生存を促進することから、スニチニブの神経保護活性は、少なくとも一部は、ＤＬＫ経路阻害によって媒介された。ＲＧＣにおけるＤＬＫシグナル伝達に対するスニチニブの効果を判断するため、イムノパニングを行った細胞を増加する量のスニチニブの存在下で培養した。ＲＧＣ生存を増加するのと同じ濃度は、ＭＫＫ７及びＪＮＫを含むＤＬＫの下流の標的のリン酸化の減少をもたらした。
【０１８０】
広い治療濃度域を有するスニチニブ類縁体であるＳＲ８１６５は、ＤＬＫの毒性を減少させた。ＤＬＫに結合すると報告される９つの他の化合物（アキシチニブ、ボスチニブ、ネラチニブ、クリゾチニブ、トザセルチブ、レスタウルチニブ、フォレチニブ、ＴＡＥ−６８４及びＫＷ−２４４９）を試験した。ナノモル用量での毒性によって制限されたネラチニブ及びＴＡＥ−６８４を除き、残りのキナーゼ阻害剤は、それらの精製ＤＬＫに対する生化学的親和性とおおよそ相関する神経保護的用量で、いずれも培養における初代ＲＧＣの生存を促進した（図６Ａ〜図６Ｈ）。これらのｉｎ  ｖｉｖｏでの所見を確認するため、硝子体内での遅延放出製剤のトザセルチブを試験し、視神経離断及び緑内障のモデルの両方においてＲＧＣを保護したことがわかった（図６Ｉ及び図６Ｊ）。
【０１８１】
ハイスループットスクリーニングは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び緑内障の齧歯類モデルを含むｉｎ  ｖｉｖｏでのＲＧＣ生存を促進することができる新規な神経保護剤としてスニチニブを同定した。最初は逆説的な所見であったが、薬物の増殖受容体シグナル伝達及びアポトーシスの刺激の阻害を考慮すると、おそらくはスニチニブの神経保護活性は、ＤＬＫ経路を介するＪＮＫシグナル伝達の阻害によって媒介されるという所見は、スニチニブの神経保護活性に対する機構的な説明を提供する。これらの結果は、緑内障及び関連する視神経症の治療に対する治療戦略を確立し、また他のＣＮＳ神経変性に対する関連性も有する可能性がある。
【０１８２】
スニチニブ製剤及びその使用方法の修正及び変更は、当業者に明らかであり、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
2018500394.tif 000013
【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
2018500394.tif 000015
【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図６Ｈ】
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【図６Ｉ】
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【図６Ｊ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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