(57)【要約】  ＴＧＦβアンタゴニストを患者に静脈内投与することを含む、ＡＰＯＬ１バリアントを有する患者において原発性巣状分節性糸球体硬化症を処置する方法。
2018517721.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＰＯＬ１バリアントを有する患者において原発性巣状分節性糸球体硬化症（原発性ＦＳＧＳ）を処置する方法であって、ＴＧＦβアンタゴニストを患者に投与することを含む、上記方法。
【請求項２】
ＴＧＦβアンタゴニストが患者に静脈内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＡＰＯＬ１バリアントを有する患者において原発性巣状分節性糸球体硬化症（原発性ＦＳＧＳ）を処置する方法であって、治療有効量のＴＧＦβアンタゴニストを含む医薬製剤を患者に投与することを含む、上記方法。
【請求項４】
医薬製剤が患者に静脈内投与される請求項３に記載の方法。
【請求項５】
患者の糸球体濾過率を安定化する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ＴＧＦβアンタゴニストが、ＴＧＦβの活性アイソフォームを中和する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ＴＧＦβアンタゴニストがｐａｎ特異的ＴＧＦβアンタゴニストである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ｐａｎ特異的ＴＧＦβアンタゴニストがフレソリムマブである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
フレソリムマブを患者に投与することを含む、ＡＰＯＬ１バリアントを有する患者において原発性巣状分節性糸球体硬化症（原発性ＦＳＧＳ）を処置する方法。
【請求項１０】
フレソリムマブが患者に静脈内投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記患者の総体重に基づいて、フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが患者に静脈内投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが前記患者に月１回静脈投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが前記患者に２８日ごとに静脈内投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが前記患者に２１日ごとに静脈内投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが前記患者に１４日ごとに静脈内投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
ＡＰＯＬ１バリアントを有する患者において原発性巣状分節性糸球体硬化症（原発性ＦＳＧＳ）を処置する方法であって、治療有効量のフレソリムマブを含む医薬製剤を患者に投与することを含む、上記方法。
【請求項１７】
治療有効量が、前記患者の総体重に基いて、フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
医薬製剤が患者に静脈内投与される、請求項１６又は請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが患者に月１回静脈内投与される、請求項１６又は請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが患者に２８日ごとに静脈内投与される、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項２１】
フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが患者に２１日ごとに静脈内投与される、請求項１６又は請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇが患者に１４日ごとに静脈内投与される、請求項１６又は請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
医薬製剤が、注射用滅菌水（ｓＷＦＩ）で再構成された凍結乾燥フレソリムマブを含む、請求項１６〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
医薬製剤が、注射用滅菌水（ｓＷＦＩ）５．１ｍＬで再構成された凍結乾燥フレソリムマブ１〜４ｍｇ／ｋｇを含む、請求項１７〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
医薬製剤が、単回１００ｍＬ静脈内注入として静脈内投与される、請求項１６〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
単回１００ｍＬ静脈内注入が約１０分〜１時間の期間にわたって行われる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
単回１００ｍＬ静脈内注入が約３０分の期間にわたって行われる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
医薬製剤が、処置セッションの間の期間にわたって一連の注入で静脈内投与される、請求項１６〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
医薬製剤１００ｍＬが、処置セッションの間の期間にわたって一連の注入で静脈内投与される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
処置セッションの間の一連の注入の各注入が、約１０分〜１時間の期間にわたって行われる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
処置セッションの間の一連の注入の各注入が、約３０分の期間にわたって行われる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
一連の注入が１〜５０の処置セッションである、請求項１６〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
一連の注入が１〜１０の処置セッションである、請求項１６〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
一連の注入が１〜４の処置セッションである、請求項１６〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
フレソリムマブが、フレソリムマブのトラフ血清血漿レベル１０３〜５１，２０９ｎｇ／ｍＬを達成するために十分な用量で投与される、請求項８〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
フレソリムマブのトラフ血清血漿レベルが１，８１３〜５１，２０９ｎｇ／ｍＬである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
処置された患者が、Ｕｐ／Ｃ比（ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニン）のベースラインからの５０％又はそれ以上の減少を有する、請求項１〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
Ｕｐ／Ｃのベースラインからの減少は、≧０．３〜≦３．０ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンの範囲のレベルまでである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
処置された患者が、ベースラインから＜０．３ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンのレベルまでのＵｐ／Ｃ比の減少を有する、請求項１〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
ＡＰＯＬ１バリアントが、ＡＰＯＬ１  Ｇ１ハプロタイプ、ＡＰＯＬ−１  Ｇ２ハプロタイプ、又はＧ１及びＧ２ハプロタイプの両方を有するディプロタイプである、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
ＡＰＯＬ１バリアントは、ＡＰＯＬ１  Ｇ１ハプロタイプ（Ｇ１／Ｇ１）についてホモ接合陽性又はＧ１／−を含むＡＰＯＬ１  Ｇ１ハプロタイプ若しくはディプロタイプＧ１／Ｇ２についてヘテロ接合保因者である、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
ＡＰＯＬ１バリアントは、ＡＰＯＬ１  Ｇ２ハプロタイプ（Ｇ２／Ｇ２）についてホモ接合陽性又はＧ２／−を含むＡＰＯＬ１  Ｇ２ハプロタイプ若しくはディプロタイプＧ１／Ｇ２についてヘテロ接合保因者である、請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
患者から単離された血液サンプルにおいてＡＰＯＬ１  Ｇ１ハプロタイプの存在を同定することにより、該患者を遺伝子型同定することをさらに含む、請求項４０又は請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
患者から単離された血液サンプルにおいてＡＰＯＬ１  Ｇ１ホモ接合体の存在を同定することにより、該患者を遺伝子型同定することをさらに含む、請求項４０又は請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
患者から単離された血液サンプルにおいて、ＡＰＯＬ１  Ｇ１ヘテロ接合体（Ｇ１／−）の存在、ＡＰＯＬ１  Ｇ２ヘテロ接合体（Ｇ２／−）、又はディプロタイプＧ１／Ｇ２ヘテロ接合体（Ｇ１／Ｇ２）の存在を同定することにより、該患者を遺伝子型同定することをさらに含む、請求項４０又は請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
遺伝子型同定が患者から血液サンプルを単離することを含む、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
遺伝子型同定が処置の前に行われる、請求項４３〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
遺伝子型同定が処置の間に行われる、請求項４３〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
患者は、処置前にネフローゼ症候群を有すると診断される、請求項１〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
患者は、処置前にネフローゼタンパク尿症を有すると診断される、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
患者は、処置前に３０ｍＬ／分／１．７３ｍ２又はそれ以上のｅＧＦＲを有する、請求項１〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
患者は、処置前に、収集された少なくとも１つの尿サンプルにおいて３ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニン又はそれ以上のＵｐ／Ｃ比を有する、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
患者は、処置前に、収集された少なくとも２つの尿サンプルにおいて２ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニン又はそれ以上のＵｐ／Ｃを有する、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
原発性ＦＳＧＳがステロイド抵抗性原発性ＦＳＧＳである、請求項１〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
患者は、処置前にステロイド抵抗性原発性ＦＳＧＳを有する、請求項１〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
ステロイド抵抗性原発性ＦＳＧＳ患者は、処置前にステロイド療法に対して不耐容である原発性ＦＳＧＳ患者である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ステロイド抵抗性原発性ＦＳＧＳ患者が、処置の少なくとも４週前に、高用量ステロイド療法に対して不耐容である原発性ＦＳＧＳ患者である、請求項５５又は請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
患者は、処置前に、少なくとも４週間、安定用量でＡＣＥｉ、ＡＲＢ、又は両方で処置されていた、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
処置された患者の腎臓機能が安定化する、請求項１〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
処置された患者のｅＧＦＲが安定化する、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
安定化されたｅＧＦＲは、ベースラインレベルからのｅＧＦＲ中央値の１０％又はそれ以下の減少を含む、請求項１〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
処置された患者のｅＧＦＲ中央値は、ベースラインレベルから１０％又はそれ以下である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ｅＧＦＲは、処置の開始から１１２〜１４０日以内に、処置された患者において安定化する、請求項５９〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記処置された患者においてタンパク尿のレベルをベースラインから減少させる、請求項１〜６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
処置された患者が、２つの処置セッションの後に、ベースラインから≧０．３〜≦３．０ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンの範囲のレベルまでのＵｐ／Ｃ比の５０％又はそれ以上の減少を有する、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
処置された患者が、３つの処置セッションの後に、ベースラインから≧０．３〜≦３．０ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンの範囲のレベルまでのＵｐ／Ｃ比の５０％又はそれ以上の減少を有する、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
処置された患者が、４つの処置セッションの後に、ベースラインから≧０．３〜≦３．０ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンの範囲のレベルまでのＵｐ／Ｃ比の５０％又はそれ以上の減少を有する、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
処置された患者が、ベースラインから＜０．３ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンまでのＵｐ／Ｃ比の減少を有する、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
処置期間及び経過観察期間を含む、請求項１〜６８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
患者が、処置期間又は経過観察期間の間に、以下：
ｉ）  ベースラインから≧０．３〜≦３．０ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンの範囲のレベルまでのＵｐ／Ｃ比の少なくとも２つの５０％若しくはそれ以上の減少；又は
ｉｉ）  ベースラインから≧０．３〜≦３．０ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンの範囲のレベルまでのＵｐ／Ｃ比の少なくとも１つの５０％若しくはそれ以上の減少、かつＵｐ／Ｃ比が少なくとも１ヶ月間ベースラインレベルの少なくとも５０％若しくはそれ以下のままであること、
のうちの少なくとも１つを有する、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
患者が、処置の開始から１１２〜１４０日以内に、ベースラインから≧０．３〜≦３．０ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンの範囲のレベルまでのＵｐ／Ｃ比の少なくとも２つの５０％又はそれ以上の減少を有する、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
患者が、ベースラインから≧０．３〜≦３．０ｍｇタンパク質／ｍｇクレアチニンの範囲のレベルまでのＵｐ／Ｃ比の少なくとも１つの５０％又はそれ以上の減少を有し、かつＵｐ／Ｃ比は、処置の開始から１１２〜１４０日以内に少なくとも１ヶ月間ベースラインレベルの少なくとも５０％又はそれ以下のままである、請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
処置された患者がアフリカ出身である、請求項１〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７４】
処置された患者がラテンアメリカ出身である、請求項１〜７２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
処置された患者が、Ｇ１／Ｇ１、Ｇ１／−、Ｇ１／Ｇ２、Ｇ２／−、又はＧ２／Ｇ２を含むＡＰＯＬ１バリアントを有する、請求項１〜７４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７６】
ＡＰＯＬ１バリアントは、Ｇ１及びＧ２ハプロタイプ（−／−）の両方を欠失した患者と比較して、処置された患者の原発性ＦＳＧＳの発症のリスク又は原発性ＦＳＧＳを有する罹患率を増加させる、請求項７５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国仮出願第62/182,102号（2015年6月19日出願）より優先権の利益を主張する。前述の関連出願は、その全体として、参照により本明細書に加入され
る。
【０００２】
米国特許第7,723,486号、米国特許第8,383,780号、及び米国特許第8,591,901号は、各々参照により本明細書にそれら全体として加入される。
【０００３】
発明の分野
本発明は、原発性巣状分節性糸球体硬化症(原発性FSGS)を処置し、かつ／又は原発性FSGSに関連する1つ若しくはそれ以上の症状を改善する方法に関し、該方法は、TGFβアンタゴニストをそれを必要とする患者に投与することを含む。特に、本方法は、治療有効量のフレソリムマブ（fresolimumab）を含む医薬製剤を、原発性FSGSを有するか又は発症する増加したリスクに関連する遺伝子バリアント、例えば、APOL1遺伝子バリアントを有する患者のような、原発性FSGSを有する患者に投与することをに関し、その結果、患者はそれから利益を得る。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
巣状分節性糸球体硬化症(FSGS)は、糸球体の進行性線維症により腎機能に影響を及ぼす臨床実体である。FSGSは単一の疾患ではなく；むしろ、タンパク尿又はネフローゼ症候群を有する患者において一般的に行われる腎臓生検において同定される異種性臨床病理学的プロセスである。原発性(又は特発性)巣状分節性糸球体硬化症(本明細書では以後「原発性FSGS」と呼ばれる)は、臨床病理学的所見に基づいて診断される腎臓疾患である。原発性FSGSは、糸球体係蹄の一部のヒアリン化及び硬化、免疫複合体の最少沈着、及び臓側上皮細胞(ポドサイト)足突起の展退により特徴づけられる特徴的な組織病理学的外見を有する。FSGS症例の大部分は、進行性の腎線維症及び腎臓機能の着実な悪化を特徴とする。
【０００５】
巣状分節性糸球体硬化症は、古典的にネフローゼ症候群の症状を示す: 低アルブミン血症、浮腫及び高脂血症を含む徴候／症状を伴うタンパク尿 ≧3.0 g/24時間。微小変化型ネフローゼ、巣状糸球体硬化症、及び膜性腎症のような腎疾患を含むネフローゼ症候群の多くの具体的な原因がある。ネフローゼ症候群はまた、糖尿病、アミロイドーシス、及びエリテマトーデスのような腎臓に加えて他の器官に影響を及ぼす全身性疾患にも起因し得る。とりわけ、ネフローゼ症候群は、両方の性別及びいずれかの人種の成人及び小児に影響を及ぼし得る。
【０００６】
ネフローゼ症候群は腎臓に特異的な疾患である原発性であっても、又は全身性疾患の腎臓症状である続発性であってもよい。全ての症例において、糸球体に対する損傷が本質的特徴である。ネフローゼ症候群の原発性原因としては、おおよその頻度の順で、以下が挙げられる: 微小変化型ネフローゼ、巣状糸球体硬化症、膜性腎症、及び遺伝性腎障害。続発性原因としては、おおよその頻度の順で、以下が挙げられる: 真性糖尿病、エリテマトーデス、アミロイドーシス及び異常蛋白血症、ウイルス感染(例えば、B型肝炎、C型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス[HIV])、及び子癇前症。
【０００７】
原発性FSGSは、生活の質、罹患率及び死亡率に深刻な影響を有する進行性の疾患である。原発性FSGSの診断は、巣状(糸球体の一部を含むが全てではない)及び分節性(いずれか単一の糸球体の部分を含む)パターンの糸球体瘢痕を示す腎生検により確認される。患者は、運動性及び日常活動に影響を及ぼす数リットルの体液貯留を生じ得る深刻な浮腫を有し得る。未処置のままにした場合、原発性FSGSは、少数(＜5%)の患者でしか自然に寛解せず、そして典型的には、腎機能の比較的急速な減少をもたらて末期腎疾患(本明細書では以後「ESRD」と呼ぶ)を生じ、そして透析又は移植を必要とする。腎疾患進行は、高血圧及び心血管リスクのような併存症をもたらし、これらはネフローゼ症候群を有する患者において見られる高脂血症によりさらに増幅される。
【０００８】
ESRDへの急速な進行について最も重要な予後因子のうちの１つは、タンパク尿の程度である。タンパク尿は様々な形態及び様々な重篤度のレベルで発生し得る。例えば、タンパク尿は、排出されたタンパク質の量(ネフローゼ又は非ネフローゼ)、排出されたタンパク質の種類(アルブミン尿又は低分子量タンパク尿)、又は根底にある病理損傷(糸球体対非糸球体)に基づいて分類され得る。
【０００９】
非ネフローゼタンパク尿において、タンパク尿の量は＜3.0 g/24時間であり、かつ持続性である。これらの患者は、彼らが異常な顕微鏡検査結果及び／又は腎機能不全を有する場合、緊密な経過観察を必要とし、そして腎臓生検を必要とし得る。ネフローゼ範囲のタンパク尿は、タンパク質尿排出率≧3.0 g/24時間又はスポット尿タンパク質対クレアチニン比で≧3.0 g/gmクレアチニンとして定義される。この所見は、重大な糸球体疾患を示し、そして診断及び管理のために腎臓生検を必要とする。比較として、正常尿タンパク質排出は、一般的に約＜150 mg/24時間と考えられている。例えば、タンパク質アルブミンに関して、正常ヒトにおける毎日のアルブミン排出は、一般的には約＜30 mg./24時間と考えられている。
【００１０】
ネフローゼ範囲のタンパク尿の存在は不良な結果と関連しており、患者の約５０％は６〜８年かけてESRDに達するが、非ネフローゼタンパク尿を有する患者の約20% は約１０年でESRDに達する。より重篤なタンパク尿(＞10 g/24時間)は、より悪性の経過と関連し、その結果患者の大部分は３年でESRDに進行する(非特許文献１)。さらに、ESRDに進行して腎移植を受ける患者は、大量のタンパク尿及び移植不全の結果として、移植された移植片において再発性FSGSを発症する高いリスクを有する。
【００１１】
治療上の視点から、ネフローゼ症候群は、ステロイド感受性、ステロイド抵抗性、ステロイド依存性、又は頻繁に再発すると分類され得る。タンパク尿の寛解は、ESRDへの遅延した進行を予測するための因子として使用される。(非特許文献２)。現在は、ステロイド抵抗性患者において承認された治療はない。承認された治療が存在せず、多数の治療が試みられてきた。例えば、免疫抑制治療（例えば、シクロホスファミド及びシクロスポリンA)が、ネフローゼ及び腎不全に関連する腎機能低下及び病的状態を寛解する目的で寛解を誘導する試みにおいて使用されたが、どれも有益なベネフィット−リスク比を示さなかった。表示された適応症ではないが、高用量コルチコステロイド(例えば、プレドニゾン)もまた、この目的のために一般的に使用されたが、典型的には、比較的少ない割合の患者でしか有効ではなかった(非特許文献３)。例えば、高用量グルココルチコステロイドでの長期処置はより高い寛解率と関連したが、高血圧、高血糖、感染リスク、腫脹及び／又は体重増加を含むより頻繁な合併症に苦しんだ。付随する浮腫を減らすために、利尿薬がしばしば投与された。ネフローゼ範囲のタンパク尿及び非ネフローゼタンパク尿患者の両方におけるタンパク尿レベルの減少のために、アンジオテンシン変換酵素(ACE)阻害剤及びアンジオテンシンII遮断薬(ARB)が投与され、そして患者は低塩分食が出される。
【００１２】
これらの治療の多くは、ネフローゼ範囲タンパク尿を伴うFSGSを有し、ステロイド治療に抵抗性であるか又はステロイド治療に不耐容である患者でも試みられた。ステロイド抵抗性FSGSを有する患者を含むネフローゼ症候群を有する患者において、シクロスポリンAを用いた処置のような代替の免疫抑制治療が試みられた(非特許文献４; 非特許文献５; 非特許文献６; 非特許文献７; 非特許文献８; 非特許文献９; 非特許文献１０; 非特許文献１１; 非特許文献１２; 非特許文献１３; 非特許文献１４; 非特許文献１５; 非特許文献１６; 非特許文献１７）。しかしながら、治療中止後の再発は頻繁であり、そして毒性が懸念事項である。臓器拒絶の予防のために使用される場合、深刻な副作用としては、感染に対する増加した感受性、腫瘍、特にリンパ腫の発生、さらには皮膚癌、腎毒性及び高血圧が挙げられる。過去又は現在の治験の他の治療介入としては、ミコフェノール酸モフェチル(非特許文献１８; 非特許文献１９; 非特許文献２０)、リツキシマブ(非特許文献２１) ロシグリタゾン(非特許文献２２)、シロリムス(ラパマイシン)(非特許文献２３)及びシクロホスファミド(非特許文献２４)が挙げられる。これらの薬剤はどれも原発性FSGSの治療について承認されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Korbet S.、「Clinical picture and outcome of primary focal segmental glomerulosclerosis,」 Nephrol Dial Transplant.、1999; 14:68-73
【非特許文献２】Korbet S.、Nephrol Dial Transplant.、1999
【非特許文献３】Korbet SM.、「Angiotensin antagonists and steroids in the treatment of focal segmental glomerulosclerosis,」 Semin Nephrol.、2003; 23:219-28
【非特許文献４】Brandis、M. et al.、「Cyclosporine A for treatment of nephrotic syndromes」、Transplantation Proc. 1988; 20(S4):275-9
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【非特許文献６】Cattran、D.、et al.、「A controlled trial of cyclosporine in patients with progressive membranous nephropathy,」 Kidney Int. 1995; 47:1130-5
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【非特許文献１８】Briggs、WA.、et al.、「Successful mycophenolate mofetil treatment of glomerular disease,」 Am J Kidney Dis.、1998; 31:213-7
【非特許文献１９】Choi、MJ.、et al.、「Mycophenolate mofetil treatment for primary glomerular diseases,」 Kidney Int.、2002; 61:1098-114
【非特許文献２０】Cattran、DC.、et al.、「Mycophenolate mofetil in the treatment of focal segmental glomerulosclerosis,」 Clin Nephrol.、2004; 62(6):405-11
【非特許文献２１】Fernandez-Fernedo、G.、et al.、「Rituximab treatment of adult patients with steroid-resistant focal segmental glomerulosclerosis,」 Clin J Am Soc Nephrol.、2009; 4(8):1317-23
【非特許文献２２】Joy、MS.、et al.、「Phase I trial of rosiglitazone in FSGS: I. Report of the FONT Study Group,」 Clin J Am Soc Nephrol.、2009; 4:39-47
【非特許文献２３】Cho、ME.、et al.、「Sirolimus therapy of focal segmental glomerulosclerosis is associated with nephrotoxicity,」 Am J Kidney Dis.、2007; 49(2):310-17
【非特許文献２４】Ponticelli、C.、et al.、「Can prolonged treatment improve the prognosis in adults with focal segmental glomerulosclerosis?」 Am J Kidney Dis.、1999; 34(4):618-25
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
しかし、原発性FSGS患者の大部分において、ステロイド及び他の治療的介入を用いた処置は、タンパク尿の一過性の改善しか生じず、疾患経過を変更しない。これは特に、FSGSをもたらす遺伝子変異を有する患者においてあてはまる。近年、アポリポタンパク質L1遺伝子座(本明細書以後で「APOL1」と呼ばれる)における変異が、欧州祖先の人々と比較して、近いアフリカ系祖先の集団におけるものを含めて、FSGS及び進行性非糖尿病性ネフローゼ他の関連する形態を発症する増加したリスクと関連するというということが発見された(Freedman、Barry I.、et al. 「Gene-Gene and Gene Environment Interactions in Apolipoprotein L1 Gene-Associated Nephropathy,」 Clin. J. Am. Soc. Nephrol.、2014、doi: 10.2215/CJN.01330214)。不良な腎臓予後及びステロイド抵抗性FSGSのようなFSGSを有する患者、又はFSGSに関連する遺伝子変異を有する患者のための実績のある処置がないことのために、この集団においてタンパク尿を減少させるか又はタンパク尿寛解を誘導することができ、かつ腎損傷の進行及びESRDへの進行を遅延させるか又は停止させることができる新しい処置に対する高い満たされていない医療ニーズがある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
発明の要旨
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性巣状分節性糸球体硬化症(原発性FSGS)を処置する方法に関し、該方法は、TGFβアンタゴニスト、又は治療有効量のTGFβアンタゴニストを含む医薬製剤を患者に投与することを含む。
【００１６】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、TGFβアンタゴニスト、又は治療有効量のTGFβアンタゴニストを含む医薬製剤を患者に静脈内投与することを含む。
【００１７】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、TGFβアンタゴニスト、又は治療有効量のTGFβアンタゴニストを含む医薬製剤を患者に静脈内投与することを含み、ここで該方法は患者の糸球体濾過率を安定化する。
【００１８】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ、又は治療有効量のフレソリムマブを含む医薬製剤を患者に投与することを含む。
【００１９】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ、又は治療有効量のフレソリムマブを含む医薬製剤を患者に静脈内投与することを含む。
【００２０】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ、又は治療有効量のフレソリムマブを含む医薬製剤を患者に静脈内投与することを含み、ここで該方法は、患者の糸球体濾過率を安定化することをさらに含む。
【００２１】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬組成物を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に投与することを含む。
【００２２】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、処置セッションの間の期間にわたる単回注入又は一連の注入で、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、フレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に静脈投与することを含む。
【００２３】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに、1〜10の処置セッション、又は1〜4の処置セッションのような1〜50の処置セッションにわたって患者に静脈内投与することを含む。
【００２４】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に静脈内投与することを含み、ここで処置された患者は、Up/C比(mgタンパク質/mgクレアチニン)のベースラインからの50％又はそれ以上の減少を有する。
【００２５】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬組成物を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に静脈内投与することを含み、ここで処置された患者は、ベースラインから≧0.3〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルまでのUp/C比の50%又はそれ以上の減少を有する。
【００２６】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に静脈内投与することを含み、ここで処置された患者は、ベースラインから＜0.3 mgタンパク質/mgクレアチニンのレベルまでのUp/C比の50%又はそれ以上の減少を有する。
【００２７】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、処置セッションの間の期間にわたる単回注入又は一連の注入で、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に静脈内投与することを含み、ここでAPOL1バリアントは、G1/-若しくはG1/G1のようなAPOL1 G1ハプロタイプ、G2/-若しくはG2/G2のようなAPOL-1 G2ハプロタイプ、又はG1/G2のようなディプロタイプを含む。
【００２８】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、処置セッションの間の期間にわたる単回注入又は一連の注入で、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬組成物を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に静脈内投与することを含み、ここでAPOL1バリアントは、APOL1 G1ハプロタイプ(すなわち、G1/G1)についてホモ接合陽性であり、又はAPOL1 G1ハプロタイプ(例えば、G1/-又はディプロタイプG1/G2)についてヘテロ接合保因者である。
【００２９】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、処置セッションの間の期間にわたる単回注入又は一連の注入で、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に静脈内投与することを含み、ここでAPOL1バリアントは、APOL1 G1ハプロタイプ(すなわち、G1/G1)についてホモ接合陽性であるか、又はAPOL1 G1ハプロタイプ(例えば、G1/-若しくはディプロタイプG1/G2)についてヘテロ接合保因者であり、そしてここで該方法は、該患者から単離された血液サンプルにおいてAPOL1 G1ハプロタイプ(例えば、G1/G1、G1/-、又はG1/G2)の存在を同定することにより患者を遺伝子型同定することをさらに含み、ここで遺伝子型同定は、処置の前、処置の間、又は処置の後に行われる。
【００３０】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤を、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に投与することを含み、ここで原発性FSGSはステロイド抵抗性原発性FSGSである。
【００３１】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤を患者に投与することを含み、ここで原発性FSGSはステロイド抵抗性原発性FSGSであり、そしてここでAPOL1バリアントは、G1/G1、G1/-、G1/G2、G2/-、又はG2/G2を含むAPOL1リスクバリアントである。
【００３２】
特定の実施態様は、APOL1バリアントを有する患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブ1〜4 mg/kg、又はフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬組成物を患者に投与することを含み、ここで原発性FSGSはステロイド抵抗性原発性FSGSであり、そしてここで処置された患者は、アフリカ出身又はラテンアメリカ出身である。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】治療割り付けごとの平均eGFR(1.73 m2あたりmL/分)の経時的なパーセント変化
【発明を実施するための形態】
【００３４】
発明の詳細な説明
形質転換増殖因子ベータ(TGFβ)は、細胞増殖及び分化の調節、細胞外マトリックス(ECM)産生、血管新生、創傷治癒、免疫調節、及び胚発生において重要な生理的役割を果たす、骨形成タンパク質及びアクチビンを含むリンガンドのスーパーファミリーに属する多面的サイトカインである。TGFβは腎線維症において重要な役割を果たし、そしてFSGSの前臨床モデルは、タンパク尿及び糸球体病理の予防、さらにはTGFβの阻害とともに既存のタンパク尿の減少を示したので、フレソリムマブがステロイド抵抗性原発性FSGSを有する患者において有効な治療であり得るということを信じる理由がある。
【００３５】
ヒトにおいて、TGFβは3つのアイソフォームで存在する: TGFβ1、β2、及びβ3。各アイソフォームは、個別の高度に保存された遺伝子によりコードされ、そして25キロダルトンのホモダイマー、ジスルフィド結合タンパク質である。TGFβは、潜在性関連タンパク質とのその結合のため、生物学的に不活性な「潜在形態」で細胞により分泌される。TGFβ/潜在性関連タンパク質「プロドラッグ」の多くは、細胞外マトリックス(ECM)に貯蔵される;他の重要な部位としては血小板顆粒及び制御性T細胞が挙げられる。活性TGFβの放出の機構は、酸性条件下(例えば、腫瘍内)又はトロンボスポンジン-1のようなプロテアーゼ、プラスミン、又は前立腺特異抗原の作用のいずれかにより発生し得る(Dallas SL、et al.、「Preferential production of latent transforming growth factor β-2 by primary prostatic epithelial cells and its activation by prostate-specific antigen,」 J Cell Physiol.、2005; 202:361-70)。
【００３６】
活性TGFβは、最初に2つの主要な受容体TGFβRII及びTGFβRIIIを介して細胞に結合し、これがSmad経路の活性化、遺伝子転写の誘導をもたらし得、そして細胞分化及び増殖を達成する。TGFβ/TGFβR/Smadは主なシグナル伝達経路であるが、TGFβはまた、エンドグリンのような他の受容体にも結合し、そしてERK、JNK、MAPK、PI3K、Rho-キナーゼ、Akt、及びGTPアーゼのような他のシグナル伝達経路も含まれ得る。これらの経路の下流エフェクターは、以下に記載される生理学的及び病理学的TGF媒介プロセスに至る(Blobe GC.、et al.、「Role of transforming growth factor β in human disease,」 N Engl J Med.、2000; 342:1350-8)。
【００３７】
正常状態下で、TGFβファミリーのメンバーは、多くの器官系におけるホメオスタシスを維持する。正常非癌性細胞において、TGFβは、上皮細胞、内皮細胞、神経細胞、及び造血細胞系の増殖を、抗増殖性及びアポトーシス応答により制限する。さらに、TGFβは、免疫機能、細胞増殖/機能的分化、細胞接着、細胞外マトリックス(ECM)産生、細胞運動性、血管新生、及びサイトカイン産生に影響を及ぼす潜在的な効果を及ぼす(Blobe GC.、N Engl J Med.、2000)。
【００３８】
生理的に重要であるが、TGFβの過剰発現は病理的であり得、そして腎線維症のような線維症に寄与し得る。例えば、TGFβの持続した過剰反応性は病理的であり、かつECMの過剰蓄積をもたらし、これは線維性疾患の特徴である。TGFβはまた、進行型の癌の増殖、進行、及び転移能における重要な因子、さらには免疫機能の重要な修飾因子として関与してきた。TGFβの抑制、中和、又は遮断は、過剰な線維症及び異常な細胞増殖を特徴とする病理状態、例えば原発性FSGSのようなFSGS、さらには腫瘍学において疾患進行を寛解し得る。特に、TGFβに特異的な抗体のようなTGFβアンタゴニストを用いてTGFβを中和又は遮断することは、不適切な線維症を特徴とする病理プロセス、例えば原発性FSGSのようなFSGSを修正し得、そして腎線維症の処置において新しい治療機会を提供し得る。
【００３９】
いくつかの動物モデルからの前臨床データは、TGFβの中和が組織線維症の発症を阻害し得るということを示す。腎線維症のラット片側尿管閉塞(UUO)モデルにおいて、形質転換増殖因子ベータ(TGFβ; β1、2、及び3)の3つの主要なアイソフォームに対するヒトpan特異的抗体のマウスアナログである1D11(最初はGC-1008と指定された)の投与は、コラーゲン沈着及びTGFβ発現の有意な減少を生じた(Miyajima A、et al.、「Antibody to tran
sforming growth factor-β ameliorates tubular apoptosis in unilateral ureteral obstruction,」 Kidney Int.、2000; 58:2301-13)。ピューロマイシンアミノヌクレオシド(PAN)誘導FSGSの一側性腎摘出ラットモデルにおいて、1D11及びGC-1008の両方が、タンパク尿及び糸球体病理の発症の予防において有効であった; また、1D11は、前から存在するタンパク尿を低減する際に有効であった。これらの結果は、TGFβ拮抗作用がFSGSの動物モデルにおいて前から存在するタンパク尿を予防及び低減する際に有効であり得るということの証拠を提供する。
【００４０】
フレソリムマブ (GC-1008)(本明細書以後では「フレソリムマブ」と呼び、米国特許第7,723,486号、米国特許第8,383,780号、及び米国特許第8,591,901号（これらはそれぞれ参照によりそれら全体として本明細書に加入される）に開示される)は、形質転換増殖因子ベータ(TGFβ; β1、2、及び3)の3つの主要なアイソフォームに特異的な、操作された免疫グロブリンサブクラスガンマ４(IgG4)ヒトモノクローナル抗体である。フレソリムマブの投与は、TGFβ中和及びTGFβ活性の抑制をもたらす。TGFβ抑制は、過剰線維症及び異常な細胞増殖を特徴とする病理状態、例えば原発性FSGSのようなFSGSにおける疾患進行を寛解し得る。
【００４１】
APOL1遺伝子の特定のハプロタイプ及びディプロタイプ（本明細書ではAPOL1バリアント又はAPOL1リスクバリアントと呼ばれる）は、非糖尿病性腎症、例えば原発性FSGSのような腎症の増加した発生率又は発症する増加したリスクと関連しており、ここでAPOL1バリアント(又はAPOL1リスクバリアント)は、G1及びG2ハプロタイプの両方の欠失(すなわち、-/-、又は「野生型」と呼ばれることもある;これは、腎症、非糖尿病性腎症、又は原発性FSGSの増加した発生率又は発症する増加したリスクと関連しなかった)と比較して、APOL1 G1ハプロタイプ(例えば、G1/G1及びG1/-)、APOL1 G2ハプロタイプ(例えば、G2/G2及びG2/-)、又はAPOL1ディプロタイプ(すなわち、G1/G2)を含む(Freedman、Barry I.、et al. 「Gene-Gene and Gene Environment Interactions in Apolipoprotein L1 Gene-Associated Nephropathy,」 Clin. J. Am. Soc. Nephrol.、2014、doi: 10.2215/CJN.01330214)。
【００４２】
表１に示されるようなAPOL1 G1ハプロタイプは、APOL1遺伝子における２つの特定の遺伝子バリアント(すなわち、コードバリアント)の存在を指すと理解される。APOL1 G1ハプロタイプを有すると同定された人々、例えばアフリカ出身(又は人種若しくは民族)の人々は、原発性FSGSのようなFSGS疾患の増加したリスクと強く関連していた。ホモ接合における各位置での「G」ヌクレオチドの存在は、個体、例えばアフリカ出身の個体を、「APOL1
G1ハプロタイプについてホモ接合陽性」(すなわち、G1/G1)と同定し得、そして個体は原発性FSGS発症の増加したリスクを有し得る。バリアント位置のいずれか又は両方がヘテロ接合性(すなわち、A/G及びG/G;又はG/G及びT/G)と見出された場合、個体、例えばアフリカ出身の個体は、「APOL1 G1ハプロタイプについてヘテロ接合保因者」(例えば、G1/-、又はディプロタイプG1/G2)又は(A/G及びT/G)と同定され得、個体は、「APOL1 G1ハプロタイプについて潜在的ヘテロ接合保因者」(例えば、G1/-、又はディプロタイプG1/G2)と同定され得、そして個体は、原発性FSGSを発症する潜在的リスクを有する。これら２つのコードバリアント間には既知の完璧に近い連鎖不平衡があるが、バリアントが互いにcisではないという可能性が存在する。ホモ接合において各位置に「G」ヌクレオチドが存在しないことは、個体、例えばアフリカ出身の個体を、「APOL1 G1ハプロタイプについてホモ接合陰性」(すなわち、-/-)と同定し、そして個体は、原発性FSGSを発症する増加したリスクを有していないとみなされ得る。
【００４３】
【表１】
2018517721.tif 000003
【００４４】
表２に記載されるようなAPOL1 G2ハプロタイプは、APOL1遺伝子における特定の遺伝子バリアント（すなわち、コードバリアント）の存在を指すと理解される。APOL1 G2ハプロタイプを有すると同定された人々、例えば、アフリカ出身(又は人種若しくは民族)の人々は、原発性FSGSのようなFSGS疾患の増加したリスクと強く関連していた。ホモ接合におけるバリアント位置での６つの塩基の欠失は、個体、例えばアフリカ出身の個体を、「APOL1 G2ハプロタイプについてホモ接合陽性」(すなわち、G2/G2)と同定し得、そして個体は、原発性FSGSを発症する増加したリスクを有し得る。バリアント位置がヘテロ接合において発見された場合、個体は、「APOL1 G2ハプロタイプについて潜在的ヘテロ接合保因者」(例えば、G2/-、又はディプロタイプG1/G2)と同定され得、そして原発性FSGSを発症する潜在的リスクを有する。ホモ接合におけるバリアント位置での６つの塩基の存在は、個体、例えばアフリカ出身の個体を、「APOL1 G2ハプロタイプについてホモ接合陰性」(すなわち、-/-)と同定し得、そして原発性FSGSを発症する増加したリスクを有するとはみなされない。
【００４５】
【表２】
2018517721.tif 000004
【００４６】
表3)に示されるようにハプロタイプと関連しないAPOL1のSNPバリアントもある。例えば、APOL1遺伝子のSNPバリアントrs2239785のヘテロ接合保因者と同定された患者は、FSGS疾患を有するか又は発症するリスクの潜在的な増加を有するとみなされるが、APOL1遺伝子のSNPバリアントrs2239785のホモ接合保因者として同定された患者は、FSGS疾患を有するか又は発症する増加したリスクを有するとみなされる。
【００４７】
【表３】
2018517721.tif 000005
【００４８】
特定の実施態様において、処置方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを、非糖尿病性腎症、ネフローゼ症候群、ネフローゼタンパク尿、ネフローゼ範囲タンパク尿、FSGS、又は原発性FSGSを有すると診断された患者に投与することを含み、例えば、患者は、原発性FSGSを有すると診断されていた。
【００４９】
特定の実施態様において、患者、例えばアフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身(又は人種若しくは民族)の患者において原発性FSGSを処置する方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを患者に投与することを含み得、ここで患者は、処置前に、30 mL/分/1.73m2又はそれ以上のeGFR、集められた少なくとも１つの尿サンプルにおいて3 mgタンパク質/mgクレアチニン若しくはそれ以上のUp/C比、集められた少なくとも２つの尿サンプルにおいて2 mgタンパク質/mgクレアチニン若しくはそれ以上のUp/C、又はそれらの組み合わせを有する。
【００５０】
特定の実施態様において、本発明は、原発性FSGSに関連する1つ又はそれ以上の症状を改善する方法に関し、該方法は、pan特異的TGFβアンタゴニスト、例えば、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを、患者、例えばアフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身(又は人種若しくは民族)の患者に投与することを含み、ここで1つ又はそれ以上の症状の改善は、タンパク尿レベルを減少させること、Up/C比を減少させること、eGFRを安定化すること、低アルブミン血症若しくは高脂血症の重篤度を減少させること、浮腫症状を軽減すること、又はそれらの組み合わせを含む。
【００５１】
特定の実施態様において、本発明は、患者、例えばアフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身（又は人種若しくは民族）の患者において原発性FSGSを処置する方法に関し、該方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを患者に投与することを含み、ここで患者は、処置前にステロイド抵抗性原発性FSGS(ステロイド処置に反応性でない患者)を有するか、又は処置前にステロイド治療に対して不耐容であり、例えば、ステロイド抵抗性原発性FSGS患者は、処置前に少なくとも2週間、例えば3週間、4週間、又は5週間、高用量ステロイド治療に対して不耐容である。特定の実施態様において、TGFβアンタゴニストを用いて処置しようとする患者は、TGFβアンタゴニストでの処置の前、少なくとも2週間、例えば3週間、4週間、又は5週間、ACEi、ARB又は両方で処置されていた。特定の実施態様において、TGFβアンタゴニストで処置しようとする患者は、TGFβアンタゴニストを用いた処置の前、間又は後に免疫抑制治療で処置されていた。特定の実施態様において、TGFβアンタゴニストで処置しようとする患者は、TGFβアンタゴニストを用いた処置の前、間又は後に、別の治療(例えば、カルシニューリン治療、シクロスポリン、タクロリムス、シクロスポリンA、ミコフェノール酸モフェチル、リツキシマブ、ロシグリタゾン、シロリムス(ラパマイシン)、若しくはシクロホスファミド、又はそれらの組み合わせ)で処置されていた。特定の実施態様において、TGFβアンタゴニストで処置しようとする患者は、TGFβアンタゴニストを用いた処置の後に、別の治療(例えば、カルシニューリン治療、シクロスポリン、タクロリムス、シクロスポリンA、ミコフェノール酸モフェチル、リツキシマブ、ロシグリタゾン、シロリムス(ラパマイシン)、若しくはシクロホスファミド、又はそれらの組み合わせ)で処置されていた。特定の実施態様において、TGFβアンタゴニストで処置しようとする患者は、TGFβアンタゴニストを用いた処置の前、又は間に、別の治療(例えば、カルシニューリン治療、シクロスポリン、タクロリムス、シクロスポリンA、ミコフェノール酸モフェチル、リツキシマブ、ロシグリタゾン、シロリムス(ラパマイシン)、若しくはシクロホスファミド、又はそれらの組み合わせ)で処置されることを回避する。
【００５２】
特定の実施態様において、患者、例えばアフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身(又は人種若しくは民族)の患者、又はカフカス人のようなヨーロッパ系アメリカ人出身（又は人種若しくは民族）である患者において原発性FSGSを処置する方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを患者に投与することを含み得、ここで患者は、APOL1の遺伝子バリアント又は原発性FSGSを発症する患者のリスクを増加させる遺伝子バリアントを有する。特定の実施態様において、APOL1の遺伝子バリアントは、APOL1 G1ハプロタイプについてホモ接合陽性(すなわち、G1/G1)、APOL1 G1ハプロタイプについてヘテロ接合保因者(例えば、G1/-又はディプロタイプG1/G2)、又はAPOL1 G1ハプロタイプについてホモ接合陰性(すなわち、-/-)であり得る。特定の実施態様において、APOL1の遺伝子バリアントは、APOL1 G2ハプロタイプについてホモ接合陽性(すなわち、G2/G2)、APOL1 G2ハプロタイプについて潜在的ヘテロ接合保因者(例えば、G2/-又はディプロタイプG1/G2)、又はAPOL1 G2ハプロタイプについてホモ接合陰性(すなわち、-/-)であり得る。
【００５３】
特定の実施態様において、患者、例えばアフリカ出身(又は人種若しくは民族)、例えばアフリカ系アメリカ人集団の患者において原発性FSGSを処置する方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを患者に投与することを含み得、ここで患者は、原発性FSGSを発症する患者のリスクを増加させるAPOL1の遺伝子バリアントを有する。例えば、原発性FSGSを発症する患者のリスクを増加させるAPOL1遺伝子バリアントは、APOL1 G1ハプロタイプ(例えば、G1/G1又はG1/-)、APOL1 G2ハプロタイプ(例えば、G2/G2又はG2/-)、又は両方のハプロタイプ(すなわち、ディプロタイプ(G1/G2)であり得る。特定の実施態様において、原発性FSGSを発症させる患者のリスクを増加させるAPOL1遺伝子バリアントは、APOL1 G1ハプロタイプについてホモ接合陽性(G1/G1)又はAPOL1 G1ハプロタイプについてヘテロ接合保因者(G1/-又はディプロタイプG1/G2)であり得、例えば、APOL1遺伝子バリアントは、APOL1 G1ハプロタイプ(G1/G1)についてホモ接合陽性であり得る。特定の実施態様において、患者、例えばアフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身の患者において原発性FSGSを処置する方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを患者に投与することを含み得、ここで患者は、SNP ID rs73885319又はrs60910145を含むAPOL1 G1ハプロタイプバリアントを有する。特定の実施態様において、原発性FSGSを発症する患者のリスクを増加させるAPOL1遺伝子バリアントは、APOL1 G2ハプロタイプ(G2/G2)についてホモ接合陽性又はAPOL1 G2ハプロタイプ(G2/-又はディプロタイプG1/G2)について潜在的ヘテロ接合保因者であり得、例えば、APOL1遺伝子バリアントは、APOL1 G2ハプロタイプ(G2/G2)についてホモ接合陽性であり得る。特定の実施態様において、患者、例えばアフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身（又は人種若しくは民族）の患者において原発性FSGSを処置する方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを患者に投与することを含み得、ここで患者は、SNP ID rs71785313であるAPOL1 G2ハプロタイプバリアントを有する。特定の実施態様において、患者、例えばアフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身の患者において原発性FSGSを処置する方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを患者に投与することを含み得、ここで患者は、APOL1ハプロタイプと関連しない遺伝子バリアント、例えばSNP ID rs2239785を有するAPOL1遺伝子バリアントを有する。特定の実施態様において、患者はrs73885319、rs60910145、rs71785313、又はrs2239785からなる群より選択されるSNP IDを有する遺伝子バリアントを有する。
【００５４】
特定の実施態様において、患者は、APOL1の標示となる少なくとも１つのSNP、例えば、APOL1 SNPバリアントrs2239785、rs73885319、rs60910145、又はrs71785313を有することに基いて選択され得る。例えば、特定の実施態様において、患者は、APOL1 G1ハプロタイプを規定する標示となる少なくとも１つのAPOL1 SNP、例えばAPOL1 SNPバリアントrs73885319、又はAPOL1 SNPバリアントrs60910145を有することに基いて選択され得る。特定の実施態様において、患者は、APOL1 SNPバリアントrs71785313のようなAPOL1 G2ハプロタイプを規定する少なくとも１つの標示となるAPOL1 SNPを有することに基いて選択され得る。特定の実施態様において、患者は、対立遺伝子識別により評価され得る少なくとも１つの標示となるAPOL1 SNP、例えばAPOL1 SNPバリアントrs2239785を有することに基いて選択され得る。
【００５５】
特定の実施態様において、患者、例えばアフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身（又は人種若しくは民族）の患者において原発性FSGSを処置する方法は、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを患者に投与することを含み得、ここで該方法は、処置の前又は間に、患者を遺伝子型同定することをさらに含む。例えば、方法はさらに: 患者から生物学的サンプルを得ること、［ここで、該サンプルは、血液、血液由来産物(例えば、バフィーコート、血清、及び血漿)、リンパ、尿、涙、唾液、脳脊髄液、口腔粘膜検体、痰、毛根、白血球サンプル若しくは組織サンプル又はそれらのいずれかの組み合わせからなる群より選択される］、及び原発性FSGSを有するか又は発症するリスクを増加させる遺伝子バリアントのような原発性FSGSに関連する遺伝子バリアントの存在又は不在を同定することを含む、患者を遺伝子型同定することを含み得る。特定の実施態様において、原発性FSGSに関連する遺伝子バリアントの存在又は不在を同定することは、特異的直接ヌクレオチド配列決定により、特異的対立遺伝子識別SNP遺伝子型同定アッセイ、又はそれらの組み合わせにより、原発性FSGSに関連する遺伝子バリアントを検出することができる試薬と生物学的サンプルを接触させることを含み得る。特定の実施態様において、方法はさらに、患者から生物学的サンプルを得ること、及びAPOL1遺伝子バリアントの存在又は不在のような原発性FSGSに関連する遺伝子バリアントの存在又は不在を同定すること、例えば、該患者から得られた生物学的サンプルから、APOL1 G1ハプロタイプ又はAPOL1 G2ハプロタイプの存在又は不在を同定することを含む、処置の前又は間に患者を遺伝子同定することを含む。例えば、方法はさらに、患者から得られた生物学的サンプル、例えば該患者から単離された血液サンプルにおいて、APOL1 G1ホモ接合(G1/G1)の存在、APol1 G1ヘテロ接合(例えば、G1/-又はディプロタイプG1/G2)の存在、又はAPOL1 G2ヘテロ接合の存在(例えば、G2/-又はディプロタイプG1/G2)を同定することにより患者を遺伝子型同定することを含み得る。特定の実施態様において、遺伝子型同定は処置前に行われる。特定の実施態様において、遺伝子型同定は処置の間に行われる。
【００５６】
特定の実施態様において、処置する方法はa) ≧3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンのタンパク尿レベルを有する一群の患者を選択すること; b)APOL1遺伝子の遺伝子座における該患者の遺伝子型を得ること; c) 治療有効量の、pan-特異的TGFβアンタゴニスト、例えば、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを該患者に投与すること; d) 処置された患者におけるタンパク尿、eGFR、又は両方のレベルを測定すること; e) タンパク尿、eGFR、又は両方の統計的に関連する改善されたレベルを示す患者を同定することにより、工程ｄ）の患者を応答者及び非応答者の部分群にさらに分類すること; 並びにf) 工程e)において同定された応答者及び非応答者の部分集団の遺伝子座のDNA配列を分析し、そして応答者のAPOL1遺伝子の遺伝子座にのみ存在するSNPを選択又は照合すること; 並びにg)
選択又は照合されたSNPの存在の、工程d)のタンパク尿、eGFR、又は両方のレベルの結果との相関を示すことにより、ヘテロ接合又はホモ接合の標示となるSNPバリアントを同定することを含む、APOL1遺伝子の標示となるSNPの同定を含み得る。
【００５７】
特定の実施態様において、処置する方法は、処置期間の前、間、又は後に患者を遺伝子型同定することを含み得る。（SNPの遺伝子型同定のような)遺伝子型同定を行うための方法としては、限定されないが、DNA配列決定、ハイブリダイゼーション技術、PCRベースのアッセイ、蛍光色素及び消光剤ベースのPCRアッセイ(Taqman PCR検出システム)、RFLPベースの技術、一本鎖高次構造多型分析(SSCP)、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動法(DGGE)、温度勾配ゲル電気泳動法(TGGE)、化学的ミスマッチ切断(CMC)、ヘテロ二本鎖分析ベースのシステム、質量分析に基づく技術、侵襲性切断アッセイ（invasive cleavage assay）、多型比配列決定(PRS)、マイクロアレイ、ローリングサークル型伸長アッセイ、HPLCベースの技術、DHPLCベースの技術、オリゴヌクレオチド伸長アッセイ(OLA)、伸長ベースのアッセイ(ARMS、(増幅不応性変異システム（Amplification Refractory Mutation System）)、ALEX(増幅不応性変異線状伸長（Amplification Refractory Mutation Linear Extension）)、SBCE(単一塩基鎖伸長)、分子ビーコンアッセイ、インベーダー(Third wave technologies)、リガーゼ連鎖反応アッセイ、5'-ヌクレアーゼアッセイベースの技術、ハイブリダイゼーションキャピラリーアレイ電気泳動 (CAE)、ピロシーケンス、タンパク質トランケーションアッセイ(PTT)、イムノアッセイ、ハプロタイプ分析、及び固相ハイブリダイゼーション(ドットブロット、逆ドットブロット、チップ)が挙げられる。
【００５８】
特定の実施態様において、処置方法は、pan特異的TGFβアンタゴニスト、例えばフレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを、静脈内注入として投与することを含み得る。例えば、静脈内注入は、処置セッションの間の期間にわたって単回注入又は一連の注入として行われ得る。特定の実施態様において、処置方法は、注射用滅菌水(sWFI)で再構成されたフレソリムマブを含む医薬組成物50〜200 mL、例えば、50〜100 mL、100〜150 mL、75〜125 mL、又は150〜200  mL、例えば、患者の総体重に基いてフレソリムマブ1〜4 mg/kgの、処置セッションの間の期間にわたる単回注入又は一連の注入を含み得る。特定の実施態様において、処置方法は、sWFIで再構成された患者の総体重に基づいてフレソリムマブ1〜4 mg/kgを含む医薬製剤100 mLの単回注入を含み得る。特定の実施態様において、静脈内注入は、約10分から1時間、例えば約20分、約30分、約45分、又は約1時間かかり得る。例えば、静脈内中注入は、処置セッションの間の期間にわたって単回注入又は一連の注入として行われ得、ここで処置セッションの間の一連の注入の各注入は、約10分から1時間、例えば、約20分、約30分、約45分、又は約1時間かかり得る。
【００５９】
特定の実施態様において、処置方法は、最初の処置セッションのように1つ若しくはそれ以上の処置セッションにおいて、又は各処置セッションにおいて患者の総体重を測定して、患者の総体重に基いてフレソリムマブ1〜4 mg/kgの投薬を達成するようにsWFIで再構成される凍結乾燥フレソリムマブの量を決定することを含み得る。
【００６０】
特定の実施態様において、処置方法は、pan特異的TGFβアンタゴニスト、例えば、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを、月1回、2週間に1回、又は定期的に静脈内注入として投与することを含み得る。例えば、特定の実施態様において、フレソリムマブは、患者の総体重に基いて1〜4 mg/kgの用量で、月1回患者に静脈内投与され得、例えば、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに患者に静脈内投与され得る。
【００６１】
特定の実施態様において、治療有効量のフレソリムマブを、月1回、二週間に1回、又は定期的に、例えば28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに、静脈内注入として投与することを含み得る。特定の実施態様において、月1回、二週間に1回、又は定期的に、例えば28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに静脈内投与されるフレソリムマブの治療有効量は、患者の総体重に基いてフレソリムマブ1〜4 mg/kgの用量であり、例えば、治療有効量は、患者の総体重に基いて、フレソリムマブ2 mg/kg、3 mg/kg、又は4 mg/kgのようなフレソリムマブ1 mg/kgの用量である。特定の実施態様において、治療有効量のフレソリムマブは、医薬製剤として静脈内投与される。
【００６２】
特定の実施態様において、フレソリムマブを含む医薬組成物は、1〜4 mg/kg患者の総体重で、処置セッションの間の期間にわたって単回注入として又は一連の注入として、患者に月1回静脈内投与され得、例えば、28日ごと、21ごと、又は14日ごとに、処置セッションの間の期間にわたって単回の注入として又は一連の注入として患者に静脈内投与され得る。特定の実施態様において、処置方法は、pan特異的TGFβアンタゴニスト、例えば、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを、単回の処置セッション時に又は一連の処置セッションにわたって、数ヶ月又は数年にわたって静脈内投与することを含み得る。特定の実施態様において処置方法は、処置期間の間に患者にフレソリムマブを静脈内投与することを含み得、その後、経過観察期間が続き、その間、フレソリムマブは患者に投与されず、そして患者はタンパク尿レベルの減少、eGFRの安定化、若しくは浮腫の減少、又はそれらの組み合わせのような疾患に関連する症状の軽減における進行をモニタリングされる。例えば、特定の実施態様において、処置方法は、1ヶ月から5年の期間にわたって、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに一連の処置セッションを含む処置期間の間、例えば、1ヶ月〜4年、1ヶ月〜3年、1ヶ月〜2年、1ヶ月〜1年、1ヶ月〜12ヶ月、1ヶ月〜11ヶ月、1ヶ月〜10ヶ月、1ヶ月〜9ヶ月、1ヶ月〜8ヶ月、1ヶ月〜7ヶ月、1ヶ月〜6ヶ月、1ヶ月〜5ヶ月、1ヶ月〜4ヶ月、1ヶ月〜3ヶ月、1ヶ月〜2ヶ月、2ヶ月〜3ヶ月、2ヶ月〜4ヶ月、2ヶ月〜5ヶ月、2ヶ月〜6ヶ月、2ヶ月〜7ヶ月、2ヶ月〜8ヶ月、3ヶ月〜4ヶ月、3ヶ月〜5ヶ月、3ヶ月〜6ヶ月、4ヶ月〜7ヶ月、4ヶ月〜9ヶ月、又は5ヶ月〜10ヶ月にわたって、月に1回、28日ごとに、21日ごとに、又は14日ごとに、一連の処置セッションにわたって、患者にフレソリムマブを静脈内投与することを含み得る。例えば、特定の実施態様において、処置方法は、12ヶ月にわたって月１回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに、一連の処置セッションにわたって、例えば、11ヶ月、10ヶ月、9ヶ月、8ヶ月、7ヶ月、6ヶ月、5ヶ月、4ヶ月、3ヶ月、2ヶ月、又は1ヶ月にわたって、月１回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに、一連の処置セッションにわたって、フレソリムマブを患者に静脈内投与することを含み得る。
【００６３】
特定の実施態様において、処置方法は、一連の処置セッションにわたって、月１回、28日ごと、21日ごと、又は14日毎に、続いて処置休みがあり、次いでさらなる一連の処置セッションにわたって、月１回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに、フレソリムマブを患者に静脈内投与することを含み得る。特定の実施態様において、処置方法は、1〜10年、例えば、1〜5年又は1〜3年のように1〜7年の間、一連の処置セッション、続いて処置休みの交互順序を繰り返すことを含み得る。例えば、特定の実施態様において、処置方法は、１２ヶ月にわたる一連の処置セッションにわたって、12ヶ月 月１回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとにフレソリムマブを患者に静脈内投与し、続いて3ヶ月〜5年の処置休み、次いでさ１２ヶ月にわたるさらなる一連の処置セッションにわたって、月１回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとにフレソリムマブを患者に静脈内投与することを含み得る。例えば、最初の一連の処置とさらなる一連の処置との間の処置休みは、3ヶ月〜5年、例えば、3ヶ月〜3年、3ヶ月〜2年、3ヶ月〜1年、3ヶ月〜9ヶ月、又は3ヶ月〜6ヶ月のような3ヶ月〜4年であり得る。
【００６４】
特定の実施態様において、処置方法は、pan特異的TGFβアンタゴニスト、例えばフレソリムマブのようなGFβアンタゴニストを、単回処置セッションで、又は一連の処置セッションにわたって、1ヶ月〜5年にわたって、月に１回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに、例えば、一連の1〜50の処置セッション、such 1〜40の処置セッション、1〜30の処置セッション、1〜20の処置セッション、1〜15の処置セッション、1〜10の処置セッション、1〜9の処置セッション、1〜8の処置セッション、1〜7の処置セッション、1〜6の処置セッション、1〜5の処置セッション、1〜4の処置セッション、1〜3の処置セッション、1〜2の処置セッション、2〜10の処置セッション、2〜8の処置セッション、2〜6の処置セッション、2〜5の処置セッション、2〜4の処置セッション、3〜10の処置セッション、3〜8の処置セッション、3〜6の処置セッション、3〜5の処置セッション、3〜4の処置セッション、4〜10の処置セッション、4〜8の処置セッション、4〜7の処置セッション、4〜6の処置セッション、4〜5の処置セッション、5〜10の処置セッション、7〜15の処置セッション、又は15〜20の処置セッションにわたって、1ヶ月〜5年の間、月に１回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに静脈内投与することを含み得る。特定の実施態様において、処置方法は、単回処置セッションで、又は一連の10の処置セッション、9つの処置セッション、8つの処置セッション、7つの処置セッション、6つの処置セッション、5つの処置セッション、4つの処置セッション、3つの処置セッション、若しくは2つの処置セッションのような一連の処置セッションにわたって、1ヶ月〜5ヶ月の間、月1回、28日ごと、21日ごと、又は14日ごとに、フレソリムマブを静脈内投与することを含み得る。
【００６５】
特定の実施態様において、処置方法は、投与の時から21〜42日、28〜49日、35〜56日、又は49〜84日の範囲内のような、投与の時から21〜84日の範囲内に、フレソリムマブのトラフ血清血漿レベル100〜51,500 ng/mL、例えば、投与の時から21〜42日、28〜49日、35〜56日、又は49〜84日の範囲内のような、投与の時から21〜84日の範囲内に、200〜51,500 ng/mL、500〜51,500 ng/mL、1,000〜51,500 ng/mL、5,000〜51,500 ng/mL、10,000〜51,500 ng/mL、25,000〜51,500 ng/mL、100〜30,000 ng/mL、100〜15,000 ng/mL、103〜51,209 ng/mL、又は10,000〜40,000 ng/mLを達成するために十分な用量でフレソリムマブを静脈内投与することを含み得る。例えば、特定の実施態様において、処置される患者のフレソリムマブのトラフ血清血漿レベルは、投与の時から21〜42日、28〜49日、35〜56日、又は49〜84日の範囲内のような、投与の時から21〜84日の範囲内に、1,000〜51,500 ng/mL、1,000〜45,000 ng/mL、1,000〜35,000 ng/mL、1,000〜25,000 ng/mL、1,000〜15,000 ng/mL、5,000〜40,000 ng/mL、10,000〜51,500 ng/mL、15,000〜51,500 ng/mL、1,813〜51,209 ng/mL又は2,000〜51,500 ng/mLである。
【００６６】
特定の実施態様において、処置方法は、該処置された患者におけるタンパク尿のレベルのベースラインからの減少を生じ得る。特定の実施態様において、処置方法は、2つの処置セッションの後に、例えば、3、4、5、6、7、8、9、又は10の処置セッションの後に、尿総タンパク質：クレアチニン比(mgタンパク質/mgクレアチニン)（「Up/C比」とも呼ばれる）のベースラインからの40%又はそれ以上の減少、例えば、Up/C比のベースラインからの45%若しくはそれ以上、例えば50%若しくはそれ以上、55%若しくはそれ以上、60%若しくはそれ以上、65%若しくはそれ以上、又は70%若しくはそれ以上の減少を有する処置された患者を生じ得る。特定の実施態様において、処置方法は、2つの処置セッションの後に、例えば、3、4、5、6、7、8、9、又は10の処置セッションの後に、Up/C比のベースラインからの40%又はそれ以上の減少、例えば、Up/C比のベースラインからの50%又はそれ以上の減少を有する処置された患者を生じ得、そしてUp/C比は、 2つの処置セッションの後に、例えば、3、4、5、6、7、8、9、又は10の処置セッションの後に、≧0.3〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルになり、例えばUp/C比は、2つの処置セッションの後に、例えば、3、4、5、6、7、8、9、又は10の処置セッションの後に、≧0.3〜≦2.0、≧0.5〜≦1.5、≧1.0〜≦2.0、≧1.5〜≦2.5、≧1.0〜≦3.0、又は≧2.0〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンのような≧0.3〜≦1.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルになる。
【００６７】
特定の実施態様において、処置方法は、Up/C比のベースラインからの40%又はそれ以上の減少、例えばUp/C比のベースラインからの50%又はそれ以上の減少を有する処置された患者を生じ得、そしてUp/C比は、＜0.3 mgタンパク質/mgクレアチニンになる。特定の実施態様において、処置方法は、2つの処置セッションの後に、例えば、3、4、5、6、7、8、9、又は10の処置セッションの後に、≧0.3〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルまでの、Up/C比のベースラインからの40%又はそれ以上の減少、例えばUp/C比のベースラインからの50%又はそれ以上の減少を有する処置された患者を生じ得る。特定の実施態様において、処置方法は、経過観察期間（すなわち処置期間の後に発生する）の間に、≧0.3〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルまでの、Up/C比のベースラインからの40%又はそれ以上の減少、例えばUp/C比のベースラインからの50%又はそれ以上の減少を有する処置された患者を生じ得る。特定の実施態様において、処置方法は、2つの処置セッションの後に、例えば、3、4、5、6、7、8、9、又は10の処置セッションの後に、＜0.3 mgタンパク質/mgクレアチニンのレベルまでの、Up/C比のベースラインからの40%又はそれ以上の減少、例えばUp/C比のベースラインからの50%又はそれ以上の減少を有する処置された患者を生じ得る。特定の実施態様において、処置方法は、経過観察期間（すなわち処置期間の後に発生する）の間に、＜0.3 mgタンパク質/mgクレアチニンのレベルまでの、Up/C比のベースラインからの40%又はそれ以上の減少、例えばUp/C比のベースラインからの50%又はそれ以上の減少を有する処置された患者を生じ得る。
【００６８】
特定の実施態様において、処置方法は、処置期間又は経過観察期間の間に、以下の少なくとも１つを有する処置された患者を生じ得る: i) ベースラインから≧0.3〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルへのUp/C比の少なくとも２つの50%若しくはそれ以上の減少; 又はii) ベースラインから≧0.3〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルまでのUp/C比の少なくとも１つの50%若しくはそれ以上の減少、かつUp/C比が少なくとも1ヶ月間、ベースラインレベルの少なくとも50%若しくはそれ以上のままであること。例えば、特定の実施態様において、処置方法は、ベースラインから≧0.3〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルまでのUp/C比の少なくとも２つの50%又はそれ以上の減少を有する処置された患者を生じ得、例えば、Up/C比は、処置の開始から112〜196日、112〜168日、又は112〜140日のような、処置の開始から112〜224日以内に、≧0.3〜≦2.0、≧0.5〜≦1.5、≧1.0〜≦2.0、≧1.5〜≦2.5、≧1.0〜≦3.0、又は≧2.0〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンのような、≧0.3〜≦1.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルになる。
【００６９】
例えば、特定の実施態様において、処置方法は、ベースラインから≧0.3〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルまでのUp/C比の少なくとも１つの50%又はそれ以上の減少を有する患者を生じ得、例えば、Up/C比は、処置の開始から112〜224日以内に、例えば処置の開始から、112〜196日、112〜168日、又は112〜140日以内に、≧0.3〜≦2.0、≧0.5〜≦1.5、≧1.0〜≦2.0、≧1.5〜≦2.5、≧1.0〜≦3.0、又は≧2.0〜≦3.0 mgタンパク質/mgクレアチニンのような≧0.3〜≦1.0 mgタンパク質/mgクレアチニンの範囲のレベルになり、かつUp/C比は、少なくとも2週間、例えば少なくとも3週間、例えば少なくとも1ヶ月間、少なくとも5週間、少なくとも6週間、少なくとも8週間、又は少なくとも12週間、ベースラインの少なくとも50%又はそれ以下のままである。
【００７０】
特定の実施態様において、処置方法は、処置された患者の腎臓機能の安定化、例えば処置された患者の推定糸球体濾過(「eGFR」と呼ばれる)の安定化を生じ得る。特定の実施態様において、処置された患者のeGFRの安定化は、処置された患者のeGFR中央値がベースラインレベルから15%又はそれ以下減少する場合に、例えば、処置された患者のeGFR中央値が、ベースラインレベルから15%未満減少する、例えば12%未満減少する、10%未満減少する、9%未満減少する、8%未満減少する、7%未満減少する、6%未満減少する、5%未満減少する、4%未満減少する、又は2%未満減少する場合に達成される。特定の実施態様において、処置された患者のeGFR中央値は、ベースラインレベルから15%未満、例えば10%未満安定化し、そしてeGFR安定化は、処置の開始から112〜224日以内、例えば処置の開始から112〜196日、112〜168日、又は112-140日以内に起こる。
【００７１】
特定の実施態様において、処置方法は、低アルブミン血症、浮腫、又は高脂血症を含む、原発性FSGSのようなネフローゼ症候群に関連する1つ又はそれ以上の症状の重篤度を軽減又は最少にすることを生じ得る。例えば、処置方法は、ネフローゼ範囲のタンパク尿(例えば、≧3.0g/24時間又は≧3.0 mgタンパク質/mgクレアチニン)又はより重篤なタンパク尿(例えば、≧10g/24時間)を有する患者において原発性FSGSに関連する1つ又はそれ以上の症状の重篤度を軽減するか又は最少にすることを生じ得る。
【００７２】
特定の実施態様において、処置された患者は、アフリカ系アメリカ人集団のようなアフリカ出身(又は人種若しくは民族)の患者、カフカス人のようなヨーロッパ系アメリカ人出身(又は人種若しくは民族)である患者、又はラテンアメリカ出身(又は人種若しくは民族）の患者であり得る。
【００７３】
医薬製剤
特定の実施態様において、処置方法は、pan特異的TGFβアンタゴニスト、例えば、フレソリムマブのようなTGFβアンタゴニストを医薬製剤として投与することを含み得る。特定の実施態様において、医薬製剤は、sWFIで再構成されるTGFβアンタゴニスト製品のような凍結乾燥TGFβアンタゴニスト製品を含み得る。特定の実施態様において、医薬製剤は、4.0〜8.0 mL sWFIで再構成された、4.0〜6.0 mL sWFIで再構成された、4.5〜5.5 mL sWFIで再構成された、4.0 mL sWFIで再構成された、5.0〜5.5 mL sWFIで再構成された、5.0〜5.3 mL sWFIで再構成された、5.0 mL sWFIで再構成された、5.1 mL sWFIで再構成された、5.2 mL sWFIで再構成された、5.3 mL sWFIで再構成された、5.4 mL sWFIで再構成された、5.5 mL sWFIで再構成された、又は6.0 mL sWFIで再構成されたような3.0〜10.0 mL sWFIで再構成された、例えば、sWFIで再構成された凍結乾燥フレソリムマブを含み得る。特定の実施態様において、凍結乾燥フレソリムマブは、バイアル、例えば、50 mg/バイアルで貯蔵され、そして3.0〜10.0 mL sWFIで再構成され得、そして例えば、50 mg/バイアルで貯蔵され、そして5.0〜5.3 mL sWFI、例えば5.0 mL sWFI、5.1 mL sWFI、5.2 mL
sWFI、又は5.3 mL sWFIで再構成され得る。特定の実施態様において、凍結乾燥フレソリムマブは、5.1 mL sWFIで50 mg/バイアルにて再構成され得る。
【実施例】
【００７４】
試験品は、TGFβの全ての哺乳動物アイソフォーム(すなわち、β1、2、及び3)を中和することができる操作されたヒトIgG4カッパモノクローナル抗体のフレソリムマブを指す。
【００７５】
試験医薬製剤は、注射用滅菌水(sWFI)5.1 mL(50 mg/バイアル)で再構成された凍結乾燥フレソリムマブ散剤の静脈内製剤を指し、ここで凍結乾燥フレソリムマブ散剤の有効成分含量1 mg/kg又は4 mg/kgは、各来診時の患者の総体重に基づく。凍結乾燥フレソリムマブ散剤の組成を表4に挙げる。
【００７６】
【表４】
2018517721.tif 000006
【００７７】
投与前に、凍結乾燥フレソリムマブを、sWFI5.1 mL (50 mgバイアル)を用いて再構成して、5 mM塩化ナトリウム、3%マンニトール、1%スクロース、及び0.01%ポリソルベート80を含有する50 mMリン酸ナトリウム緩衝液pH 7.1中約10 mg/mLのタンパク質濃度とした。バイアルから再構成された薬品を取り出すためにフィルターニードルを使用してはならない。しかし、タンパク質の性質及びそれらの沈殿能に起因して、この製品（注入用の液剤として希釈された）を投与する場合は、0.22μm低タンパク質結合インラインフィルターの使用が必要とされた。再構成されたフレソリムマブから調製された試験医薬製剤の組成を表5に挙げる。
【００７８】
【表５】
2018517721.tif 000007
【００７９】
フレソリムマブを入れたバイアルは、2〜8℃(35.6〜46.4 °F)で注入のための準備まで貯蔵されなければならない。再構成されたフレソリムマブは、sWFIで再構成された後安定であり、例えば、室温又は冷蔵庫(2〜8℃又は35.6〜46.4 °Fの間)のいずれでも、sWFIでの再構成の２４時間後まで安定である。これらの条件下で２４時間まで安定であるが、sWFI中のフレソリムマブはすぐに使用されるべきである。水中5%デキストロースで0.3 mg/mLから7 mg/mLの濃度に希釈されたsWFIで再構成されたフレソリムマブは室温で２４時間まで安定である。
【００８０】
プラセボ製剤は、注射用滅菌水(sWFI)5.1 mL (50 mg/バイアル)で再構成された凍結乾燥プラセボ製品(試験品と視覚的に合致する)の静脈内製剤を指す。
【００８１】
投与経路は、約３０分間にわたって投与される単回100 mL静脈内注入として行われる。
【００８２】
投薬レジメンは、1日目、28日目、56日目、及び84日目に注入による試験製剤又はプラセボ製剤の四回（４）の月１回の投与を含んでおり、ここで有効成分含量は、各来診時の患者の総体重に基づいて計算された。
【００８３】
実施例1:
ステロイド抵抗性FSGSを有する患者における２つの用量の試験医薬製剤又はプラセボの二重盲検、並行投薬、無作為化研究、ここでこの研究は３つの期間に分けられた:
1. スクリーニング(来診1、6週まで);
2. 処置期間(1日目/来診2、28日目/来診3、56日目/来診4、84日目/来診5、及び112日目/来診6);及び
3. 経過観察期間(140日目/来診7、168日目/来診8、及び252日目/来診9)。
【００８４】
1日目/来診2、28日目/来診3、56日目/来診4、及び84日目/来診5に、患者は、診療所で、単回静脈内(IV)試験医薬製剤又はプラセボ注入を受けた。注入時間は約３０分であり、その後、患者は少なくとも３０分の観察時間のために診療所に留まった。患者は、経過観察来診のために112日目/来診6から252日目/来診9に診療所に戻るよう予定を決められた。
【００８５】
腎臓評価(タンパク尿、血清クレアチニン、及びeGFR)、血清脂質、血清アルブミン、及び体重を各来診時に集めた。患者報告アウトカムを、1日目/来診2、56日目/来診4、112日目/来診6/早期終了(ET)、及び252日目/来診9に全て記入された質問票に基づいて評価した。安全性検査評価、身体検査、及びバイタルサインを含む安全性データが研究を通して集められた。全ての有害事象(AE)及び併用薬を処置期間の間に集めた。薬物関連及び試験実施計画書関連の重篤有害事象(SAE)並びに全ての目的の医療事象(MEOI)のみを、経過観察期間の間に集められるよう予定を決めた。FSGSを処置するための投薬のみが経過観察期間の間に集められた。
【００８６】
試験品血清濃度の測定のための血液サンプルを各処置期間及び経過観察期間の来診時に集めた。
【００８７】
抗フレソリムマブ抗体の可能性のある開発も、1日目/来診2、112日目/来診6/ET、140日目/来診7、168日目/来診8、及び252日目/来診9に評価した。
【００８８】
処置抵抗性FSGSを有する合計で36人の患者を、試験医薬製剤1 mg/kg(n=14)、試験医薬製剤4 mg/kg(n=12)、又はプラセボ製剤(n=10)での処置に無作為に選んだ。患者の大部分(92%)は、全ての４つの研究注入を完了し、そして処置期間の間に研究を中止した患者はいなかった。試験医薬製剤1 mg/kgアームの１人の患者は３つの注入を完了し、試験医薬製剤4 mg/kgアームの１人の患者は３つの注入を完了し、そして試験医薬製剤4 mg/kgアームの１人の患者は２つの注入を完了した。全ての研究処置を完了しなかった理由には、試験医薬製剤1 mg/kgアームの患者については医師の決定(別の治療を開始するため)、及び試験医薬製剤4 mg/kgアームの２人の患者では軽度肝臓酵素異常及び腎不全の有害事象(両方とも処置に関連しないと評価された)が含まれた。全36人の患者が、処置期間(112日目/来診6まで)を完了した。１人(試験医薬製剤4 mg/kgアームに割り当てられ、そして252日目の研究の結論の前の経過観察がなかった)を除く全ての患者は、経過観察期間の間の研究来診を完了した。ネフローゼタンパク尿を伴うステロイド抵抗性原発性FSGSを有する患者の診断及び鍵となる組み入れ基準は、以下を含んでいた:
【００８９】
i)  患者は、協力的であり、かつ署名したインフォームドコンセントを提出でき、そして同意した時点で18歳又はそれ以上の男性又は女性であった。
ii)  患者の腎臓生検が評価され、そして全ての組織学的サブタイプを含めて原発性FSGSの診断と一致していた。
iii)  患者は、来診1で、計算されたeGFR ≧30 mL/分/1.73 m2を有していた。
iv)  患者は、スクリーニング期間の間に集められた尿サンプルの少なくとも１つにおいてUp/C比≧3(mgタンパク質/mgクレアチニン)、及びスクリーニング期間の間に２つのサンプルにおいてUp/C比≧2(mgタンパク質/mgクレアチニン)を有していた。
v)  治験責任医師の見解で、患者がステロイド抵抗性FSGSを有していた。患者は、期間中最少4週間の高用量ステロイド治療の過程でFSGSの処置を受けていなければならず、又はスクリーニング来診の前にステロイドに対して不耐容であることがわかった。
vi)  患者は、不耐容又は禁忌でなければ、来診2(処置開始)前最少4週間安定用量のACEi及び／又はARBで処置されていた。
【００９０】
患者人口動態: 患者集団の年齢中央値は41歳(19〜77歳の範囲に及ぶ)であり、そして53%男性及び47%女性からなっていた。患者集団の人種は、約83%白人及び約17%黒人であり、そして民族は約31%ヒスパニック又はラテンアメリカ系及び約69%非ヒスパニック又は非ラテンアメリカ系からなっていた。人口動態及び臨床特徴、さらにはベースラインタンパク尿及びeGFRによる腎機能は、３つの処置アームにわたって全体的にバランスがとれていた。試験医薬製剤4 mg/kgアーム(75%)又はプラセボ(90%)と比較して、試験医薬製剤1 mg/kgアーム(57.1%)では、過去にカルシニューリン(CNI)治療を受けた患者が少なかった。試験医薬製剤1 mg/kgアームに血栓症の病歴(ネフローゼ症候群に関連するより重篤な疾患を示す可能性がある)を有する3人の患者がおり、他の２つの処置割り当てにはいなかった。
【００９１】
患者集団の最初の腎臓生検診断からの時間中央値は3.0年であり(0.1〜16.8年の範囲に及ぶ)、そして患者の約72%は、彼らのFSGS疾患についてカルシニューリン治療を以前に受けたことがあった。大部分の患者は、高用量コルチコステロイド治療に加えて様々な種類の免疫抑制薬物療法の複数回の治療を受けており、そして処置の約3分の2は「不応答」に終わったと報告され、残りは一過性及び／又は部分的応答として報告された。FSGS組織学的サブタイプは、３つの処置アーム間で適度に十分バランスがとれていた。
【００９２】
FSGSについての過去及び現在の投薬使用並びに応答: 全ての患者は、FSGS疾患のために高用量コルチコステロイド治療を≧4週間受けていた。36人の無作為化された患者のうち、合計で123のコルチコステロイド処置過程があり、66(53.7%)は「不応答」と報告され、36(29.3%)は「一時的部分的応答」と報告され、8(6.5%)は「持続性部分応答」と報告され、2(1.6%)は一時的完全応答と報告され、そして11(8.9%)は「薬物に不耐容な患者」と報告された。以前の応答型は、３つの処置アームにわたって意味があるほど変わらなかった。
【００９３】
他の非ステロイド免疫抑制投薬使用は、多数の薬物治療(カルシニューリン阻害剤シクロスポリン及びタクロリムスを含む)からなり、一部の患者は、いくつかの異なる種類を以前に受けており、全ての登録した患者において「不応答」として分類された処置過程の大部分で全体に不十分なタンパク尿減少(107のうち72又は67.3%)であった。非ステロイド免疫抑制薬物療法に対する以前の応答型は、３つの処置アームにわたって意味があるほど変わらなかった。
【００９４】
人口動態及びベースライン疾患特徴を列挙した、研究に含まれた患者の特徴を表６に示す(結果を中央値(最小、最大)又はn(%)として示す)。
【００９５】
【表６】
2018517721.tif 000008
【００９６】
【表７】
2018517721.tif 000009
【００９７】
遺伝子型同定データ: APOL1遺伝子型同定を、以下に詳述される遺伝子型同定手順(A)又は手順(B)のいずれかを使用して、36人の無作為化された患者のうち35人において行った(患者4Aの遺伝子型は得られなかった)。
【００９８】
遺伝子型同定手順(A) - 対立遺伝子識別:
特異的対立遺伝子識別SNP遺伝子型同定アッセイ(Applied Biosystems、Inc.)によるFSGSに関連するAPOL1の８つの遺伝子バリアントの決定及び評価(Bostrom、M.A.、et al.、「Genetic association and gene-gene interaction analyses in African American dialy
sis patients with nondiabetic nephropathy,」 Am J Kidney Dis.、2012、59、210-221.;及びGenovese、G.、et al.、「A risk allele for focal segmental glomerulosclerosis in African Americans is located within a region containing APOL1 and MYH9,」 Kidney Int.、2010、78、698-704)の概要を表７に示す：
【００９９】
【表８】
2018517721.tif 000010
【０１００】
表７に詳述される８つの遺伝子バリアントを決定するために利用されるさらなる試薬には以下が含まれる:
各バリアントについて３つの可能性のある遺伝子型を表すことが既知であるゲノムDNA又はプラスミドサンプルをPCR対照として利用した。試験するサンプルを２年間まで適切に使用した。
【０１０１】
2X TaqMan(R) Universal PCRマスターミックス(Applied Biosystems、Inc、カタログ番号4326708 Carlsbad、CA)。
【０１０２】
ヌクレアーゼ非含有水(Ambion、カタログ番号AM9932又は等価物Carlsbad、CA)。
【０１０３】
40X TaqMan SNP遺伝子型同定アッセイ単回使用アリコート(12 μL)。
【０１０４】
2X TaqMan Universal PCRマスターミックス単回使用アリコート(650 μL)。
【０１０５】
利用された備品: Applied Biosystems配列検出ソフトウェアバージョン2.4又は等価物(Applied Biosystems)を備えたApplied Biosystems 7900リアルタイムPCRシステム。
【０１０６】
手順: 一般に、手順は、患者由来のゲノムDNAを最終濃度5 ng/mLに希釈することを含み、次いでこれを、製造者により提供される指示に従って、そしてさらに以下に詳述されるように、単回SNP遺伝子同定アッセイ及び2X TaqMan Universal PCRマスターミックスの存在下で40サイクル定量的PCRのためのテンプレートとして使用する。遺伝子型の決定は、Quantstudio 12K FlexリアルタイムPCR機器によりソフトウェアv1.2.2 (LifeTechnologies)を実行して生成される。手順はさらに以下の工程を含む(遺伝子型同定実行は完了までに約1.5時間かかる):
1 - 全血サンプルを患者から集める(採血)。
2 - DNAの単離のために全血サンプルを処理して、可能な場合は２つのDNAアリコートを製造する。
3 - 対立遺伝子識別アッセイロットの資格を検証する。
4 - サンプル及び対照を、分析前にヌクレアーゼ非含有水で5 ng/μLに希釈する。
5 - ３つの特徴づけされたDNAサンプルは、利用可能な場合、目的の各SNPについての対照として役立つ。各々が特定の遺伝子型の代表である: ホモ接合対立遺伝子「1」、ヘテロ接合、及びホモ接合対立遺伝子「2」。ポジティブコントロールを各SNPについて１回実行する。
6 - 各患者について、以下のサンプリング計画に従って８つのSNPの各々を遺伝子型同定する: ２つのDNAアリコートが利用可能な場合、各アリコートを１回サンプリング及び分析する; １つのDNAアリコートのみが利用可能な場合、二連でサンプリング及び分析する。
7 - マスターミックスを準備し、そして以下の試薬体積（単回反応体積として提供される）を使用してプレPCRフードで短時間ボルテックスして混合する: 40x ABI SNP遺伝子型同定アッセイ(0.63 μL); 2X TaqMan Universal PCRマスターミックス(12.50 μL);及びヌクレアーゼ非含有水(9.90 μL);その結果最終体積は23.03 μLであった。
8 - 2X TaqMan(R)Universal PCRマスターミックスの瓶を短時間穏やかにボルテックスして混合する。
9 - 40X遺伝子型同定アッセイ混合物を、5〜10秒ボルテックスし、そして5〜10秒間ナノフュージして（nanofuged）、内容物をチューブの底に戻す。
10 - 試薬をヌクレアーゼ非含有チューブ中で合わせて、短時間ボルテックスして混合する。
11 - サンプル及び対照の位置を示す。プレートマップを準備して完成させる。
12 - 適切なマスターミックスのアリコート23 μLを、完成したプレートマップに従って各実験ウェルに入れる。
13 - 2 μL水ブランク(NTC)を、プレートマップに基いて適切なウェルに加える。
14 - プレートを密封し、そして1,250±250gで15〜30秒間遠心分離する。
15 - サンプル添加: 各サンプルについて新しいピペットチップを使用して、DNA 2.0 μL(5 ng/μLに希釈)をピペットで取って、完成したプレートマップに基いて適切なウェルに加える。ピペットで混合する。
16 - 各SNPアッセイに特定の各対照2 μL(5 ng/μLに希釈)を、プレートマップを参照して適切なウェルに加える。ピペットで上下させて混合する。
17 - 光学プレートを、光学接着膜を使用して密封し、次いで1,250±250gで15〜30秒間遠心分離した。
18 - データ収集: QuantStudioTM 12K FlexリアルタイムPCR機器におけるプレートアダプタにそれを設置する前に、粉塵もデブリもプレートの外側に混入しないことを確実にするために圧縮空気(Whooshダスター)を使用する。
19 - 新しい遺伝子型同定「実験」ファイル(.eds)を作成し、そして以下のように基底された設定パラメーターを使用して実行する(機器のタッチパネルを使用するか又は機器の制御コンピュータ上のQuantStudioTM 12K Flexソフトウェアから): ウェルあたりの反応体積(25 μL)、先行読み取り段階(60.0° 30秒間); ホールド段階(95.0℃ 10分間); PCR段階 工程1(95.0° 15秒間); PCR段階 工程2(60.0° 1分間); 読み取り後段階(60.0° 30秒間); サイクル数(40); オートデルタ（Auto Delta）(使用不可能)、及び開始サイクル(1)。
【０１０７】
遺伝子型同定手順(B) - 配列決定:
遺伝子特異的プライマーを用いてAPOL1遺伝子バリアントを含有するゲノム領域をPCR増幅するための手順を使用する特異的直接ヌクレオチド配列決定によるFSGSに関連するAPOL1の４つの遺伝子バリアント(Kopp、J.B.、et al.、「APOL1 genetic variants in focal segmental glomerulosclerosis and HIV-associated nephropathy,」 J Am Soc Nephrol.、2011、22、2129-2137 (G1/G2対立遺伝子についての命名を記載する))の決定及び評価の概略を表8に示す:
【０１０８】
【表９】
2018517721.tif 000011
【０１０９】
表８に詳述される４つの遺伝子バリアントを決定するために利用されたさらなる試薬には以下が含まれる:
表９に示されるように、0.2μMスケールHPLC精製(eurofins MWG Operon Huntsville、AL)として製造された、オリゴヌクレオチドポリメラーゼ連鎖反応(「PCR」)プライマー(5'-3'方向で示される配列):
【０１１０】
【表１０】
2018517721.tif 000012
【０１１１】
目的のAPOLl領域を増幅することが既知であるゲノムDNAをPCR対照として利用した。
【０１１２】
Platinum Taqポリメラーゼ(Invitrogen、カタログ番号10966-034 Carlsbad、CA)。
【０１１３】
50mM塩化マグネシウム(MgC12)(Invitrogen、カタログ番号Y02016 Carlsbad、CA)。
【０１１４】
10 mMデオキシリボヌクレオシド三リン酸(「dNTPs」)、PCR等級(Invitrogen、カタログ番号18427-013又は等価物Carlsbad、CA)。
【０１１５】
10x PCR 緩衝剤(Invitrogen、カタログ番号Y02028 Carlsbad、CA)。
【０１１６】
ヌクレアーゼ非含有水(Ambion、カタログ番号AM9932又は等価物Carlsbad、CA)。
【０１１７】
Tris/EDTA (「TE」)緩衝剤(10 mM Tris-HCl、1.0 mM EDTA)、pH 8.0(Ambion、カタログ番号AM9849又は等価物Carlsbad、CA)。
【０１１８】
臭化エチジウム溶液10 mL(10mg/mL)(Invitrogenカタログ番号15585-011、又は等価物、Carlsbad、CA)。
【０１１９】
100塩基対(「bp」) DNAラダー(Invitrogen #15628-019 Carlsbad、CA)。
【０１２０】
Latitude HTプレキャストゲル- 2%アガロース(Lonza #57246又は等価物Hopkinton、MA)。
【０１２１】
脱イオン水。
【０１２２】
以下の試薬も利用した: 100 μMオリゴヌクレオチドプライマーストック、10 μMオリゴヌクレオチドプライマーストック、50 μg L-1臭化エチジウム1X Trisホウ酸EDTAランニングバッファ、1Xブロモフェノールブルーアガロースゲル ローディングダイストック、1Xアガロースゲルローディングダイ、及び0.1 μg/μL 100塩基対DNAラダー。
【０１２３】
利用した備品: Eppendorf Mastercycler PCR機器(Eppendorf)。
【０１２４】
手順: 一般に、APOL1 G1/G2遺伝子型を表す３つのAPOL1バリアント(rs73885319、rs60910145、及びrs71785313)を含む標的領域を、表９に示される遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプライマーついを使用してPCR増幅した。以下にさらに詳述されるように、得られた生成物を精製し、そして蛍光ジ-デオキシヌクレオチドDNA配列決定にかける。生成物を、電気泳動図ファイルとして配列を集めるためにABI3730 48-キャピラリアレイに流す。各個々のエクソンについての電気泳動図ファイルをエクスポートし、そしてバイオインフォマティクスソフトウェア・パッケージSequencher(GeneCodes Corporation)バージョン4.10.1を使用して可視化する。各サンプルからの遺伝子配列をコンセンサス配列と比較して、APOL1バリアント位置rs73885319、rs60910145、及びrs71785313での遺伝子型を決定する。APOL1についてのヌクレオチド番号付けは、それぞれNCBI参照配列NM_003661.3、及びNM_014625.2に基づく。全てのタンパク質結果はヌクレオチド変化に基いて推測され、そして実験的には検証されない。手順は、さらに以下の工程を含む:
1 - 全血サンプルを患者から集める(採血)。
2 - DNAの単離のために全血サンプルを処理して、可能な場合は２つのDNAアリコートを製造する。
3 - オリゴヌクレオチドプライマーロットの資格を検証する。
4 - サンプル及び対照を、分析前にヌクレアーゼ非含有水で5 ng/μLに希釈する。
5 - 無テンプレートコントロール(NTC)ブランクは各バリアントアッセイについての予備（primary）PCRに含まれず、これはいずれかのサンプル又はポジティブコントロールの代わりにヌクレアーゼ非含有水を含む。NTCを各予備PCR設定について１回実行する。
6 - 各患者サンプルについて、以下のサンプリング計画に従って４つのバリアントの各々を遺伝子型同定する: ２つのDNAアリコートが利用可能な場合、各アリコートを１回サンプリング及び分析する; １つのDNAありコートのみが利用可能な場合、二連でサンプリング及び分析する。
7 - サンプル及び対照の位置を示すプレートマップを準備して完成させる。
8 - 以下の各々を室温で解凍する: 10X PCR緩衝液、50 mM MgC12、10 mM dNTP、10 μM順方向及び逆方向プライマー(目的のバリアントについて)。Platinum TaqTM DNAポリメラーゼを冷凍庫から取り出し氷上に置く。
9 - マスターミックスを準備し、そしてプレPCRフードで以下の試薬体積(単回反応体積/最終濃度として示される)を使用して短時間ボルテックスして混合する: ヌクレアーゼ非含有水(17.75μL／--)、10X PCR緩衝液2.5 μL／1X); 50 mM MgC12 (0.75 μL／1.5 mM)、10 mM dNTPミックス(0.25 μL／0.1 mM)、10 mM順方向プライマー(0.5 μL／0.1 mM)、10 mM逆方向プライマー(0.5 μL／0.1 mM)、Platinum Taqポリメラーゼ(0.25 μL／1.25単位); 最終体積22.5 μLとなるように。
10 - マスターミックスのアリコート22.50 μLを各実験ウェルに入れて密封し、そして指定されたサンプル添加フードに移動し、次いで封を取り外した。
11 - サンプル添加: 各サンプルに新しいピペットチップを使用して、DNA 2.50 μL(5 ng/μLに希釈)を、完成したプレートマップに基いて適切なウェルにピペットで取る。ヌクレアーゼ非含有水2.50 μLをピペットで取ってネガティブコントロールウェルに加える。ピペットで上下させて混合する。
12 - プレートをPCRプレート接着膜で密封し、1250±250gで5〜10秒遠心分離する。
13 - プレートをEppendorf Mastercycler PCR機器に置き、蓋を閉め、そして適切な「APOL1」プロトコルを、以下の設定を有するサイクリングプログラムの利用可能なリストから選択する: 工程1、94℃2分間; 工程2(30サイクル): 94℃20秒間、58℃30秒、72℃30秒間;
工程3、72℃4分;及び工程4、4℃で保持。
14 - 熱サイクリングプログラムが終了した後、プレートをサーマルサイクラーから取り外し、そして全てのサンプル及び対照のPCR産物を、アガロースゲル電気泳動により分析する。
15 - 一次PCRアンプリコンの評価:
i)  プレキャストゲル(Lonza)及びプラスチックトレイを、密封したバッグから取り出し、ゲルボックスに移し、ゲルをTruBandTMアンカーで覆い(ウェルを開口部と整列する)、そして臭化エチジウムを含む十分な1X TBE(約1L)を、ゲル及びトレイを完全に浸すがTruBandTMアンカーは浸らないように加える;
ii)  分析された全てのサンプルについて、5 μL 1Xブロモフェノールブルーローディングダイを、Falcon 3911 U底96ウェルトレイの各ウェルにピペットで取り、各PCRサンプル10 μLをローディングダイを含むウェル中にピペットで取り、そして穏やかに２〜３回ピペットで上下して混合する;
iii)  準備した100bp DNAラダー(0.1 μg/μLストック)3 μLをゲルの各列の少なくとも１つのウェルにロードする;
iv)  各サンプルの体積全体(又は12 μLまで、どちらか小さい方)を適切なウェルにアガロースゲル上にロードした;
v)  TruBandTMアンカーをスライドさせてウェルを覆い、そしてゲルを約180Vで約２０分間又はブロモフェノールブルーダイ前部がウェルの次の列までの少なくとも2/3もしくはゲルの底に移動するまで流した;
vi)  ゲルをゲルボックスから取り除き、Alphainnotechゲル画像化システム(SCI-IM-195)を使用して撮影し、２つの感熱紙画像を得る: (1)構成(フレームを満たすために必要に応じてズームする)及び露出(必要に応じて焦点を調整)について最適化された画像、並びに(2) 元の画像の3D画像; 各ゲル画像ファイルを専用機器コンピューターのC:\ドライブに保存する;
vii)  ゲル画像上の対照及びサンプルを、表10に詳述される合否基準に従ってPCRが成功であったかどうかを評価する。ネガティブコントロール(NTC)における増幅された産物の存在は失敗したアッセイという結果となり、そして全てのサンプル及び対照を直ちに再増幅することが必要となり、そしてサンプルの両方の複製物が期待されるサイズのバンドを生成することが必要とされる(増幅に失敗するいずれのサンプル複製物も再増幅を必要とする(二連で))。
【０１２５】
【表１１】
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【０１２６】
16 - 配列決定によるサンプルのPCR産物の分析: (1)各サンプルのPCR産物を、Exo-SAP-IT精製試薬を用いて精製する; (2)サンプルのPCR産物についての配列決定反応を以下のように行った: 各「Exosap処理した（Exosapped）」産物を、表１１に示される体積（１反応体積）を使用して順方向及び逆方向反応の両方で1回増幅し、所望の量の各マスターミックスを準備し、次いで精製されたアンプリコンを配列決定し、そして解釈する。
【０１２７】
【表１２】
2018517721.tif 000014
【０１２８】
17 - APOL1配列決定についてのデータ解析:
i)  ABI 3730実行フォルダーからのAB1配列ファイルをGene Codes Sequencherソフトウェアにインポートする;
ii)  各対照サンプルについての得られた順方向及び逆方向配列を、参照配列ファイルに対して整列させる;
iii)  各サンプルの順方向及び逆方向反応についての配列を精査し、そして各サンプル複製物についてのバリアント配列を、表８に示されるように、ホモ接合結果又はヘテロ接合結果のいずれかとして記録する(１つの反応（順方向又は逆方向）により不十分な質の配列が得られる場合、他方を使用して配列を読み取り得るが、ただし配列は高品質のものである)。試験サンプルの両方の複製物が同一の配列結果を生じることが必要である。結果が複製物間で不一致である場合、サンプルを再評価し、そして複製物がいずれも増幅がないか、不十分な増幅に起因して不成功である場合、結果は確認結果が得られるまで記録されない。
【０１２９】
APOL1遺伝子型同定:
１本のチューブの全血を各患者から集め、そして二連で抽出してゲノムDNAの２つのアリコートを生成する。表12に示されるように、各アリコートを分析して、各患者のAPOL1遺伝子型を、上で詳述される遺伝子型同定手順(A)又は手順(B)のいずれかを使用して決定した:
【０１３０】
【表１３】
2018517721.tif 000015
【０１３１】
処置された患者の各々についてのAPOL1遺伝子型同定結果を処置群ごとに表13〜15にまとめ、そして人種及び以前のカルシニューリン阻害剤(CNI)治療ごとに階層化した:
【０１３２】
【表１４】
2018517721.tif 000016
【０１３３】
【表１５】
2018517721.tif 000017
【０１３４】
【表１６】
2018517721.tif 000018
【０１３５】
アフリカ出身の人々においてFSGSについての増加したリスクと関連するAPOL1 G1及びG2ハプロタイプは、合計で6人の研究被験体に存在した(5人の黒人被験体及び1人の非黒人ヒスパニック系被験体)。ホモ接合APOL1 G1所見(G1/G1)は、「アフリカ系アメリカ人集団においてFSGS疾患と強く関連する」と解釈され、一方でAPOL1 G1保因者(G1/-又はG1/G2)及び／又はAPOL1 G2保因者(G2/-又はG1/G2)結果は、「アフリカ系アメリカ人集団において潜在的リスク」と解釈される。米国からの1人の非黒人ヒスパニック系の患者(4016-0001)は、APOL-1 G1保因者であり;患者がアフリカ系祖先を有するかどうかはわからない。
【０１３６】
投薬量及び持続期間: 36人の無作為化された患者の各々は少なくとも１つの研究処置を受け、そして全員安全性データ・セットに含まれた。プラセボ製剤アームにおいて、10人の患者(100%)は全て４つの研究処置を完了した。試験医薬製剤1 mg/kgアーム(n=14)において、13人の患者(93%)が全て４つの研究注入を完了し、そして1人(7.1%)は３つの注入を完了した。試験医薬製剤4 mg/kgアーム(n=12)において、10人の患者(83%)が全て４つの研究処置を完了し、1人の患者(8.3%)は3つの研究処置を完了し、そして1人の患者(8.3%)は２つの研究処置を完了した。
【０１３７】
統計法: 有効性分析を、最大の解析集団（Full Analysis (FA) Set）(少なくとも１つの用量の研究薬で処置され、かつ少なくとも１つのベースライン後Up/c評価を有していた全ての無作為化された患者)を使用して行った。一次有効性に限定された、プロトコル適合(PP)を使用した解析セット(有効性分析に影響を及ぼす可能性があるとみなされる有意な偏差を有さない全てのFAS評価可能な患者)は、PPSがFASの80%未満である場合に計画された; 基準に合わなかったため、PPS分析は行われなかった。
【０１３８】
Up/C比及びeGFRの連続パラメーターを、処置群ごとにまとめて以下の表16〜51に示す(
表16〜29: 試験医薬製剤1 mg/kg; 表30〜41: 試験医薬製剤4 mg/kg; 及び表52〜51: プラセボ製剤)。研究注入を来診2〜5(「V2-V5)に行い、そして経過観察期間は来診6〜9(「V6-V9」)に行った。免疫抑制薬物治療は、経過観察期間の間許可された。各患者について全来診について２つの別々の日に集められた最初の2回の朝のボイド測定の平均を、Up/C比の全ての有効性分析において使用した。各パラメーターについて、ベースラインから112日目/ETまでのパーセント変化の比較を、混合モデル反復測定アプローチを使用して行った。混合モデル頒布測定モデルは、以前のCNI治療(有り、無し)、処置群、人種(黒人、非黒人)、ベースラインUp/C比及び共変量としてベースラインeGFRを含んでいた。このモデルをSAS PROC MIXED手順を使用してフィッティングし、そして時点での処置差異を見積もり、そしてモデルから試験した。ノンパラメトリック分析もまた、Up/C比、eGFR、及び尿タンパク質排出率の112日目までのパーセント変化についてノンパラメトリックANCOVAを使用して行った。
【０１３９】
【表１７】
2018517721.tif 000019
【０１４０】
【表１８】
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【０１４１】
【表１９】
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【０１４２】
【表２０】
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【０１４３】
【表２１】
2018517721.tif 000023
【０１４４】
【表２２】
2018517721.tif 000024
【０１４５】
【表２３】
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【０１４６】
【表２４】
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【０１４７】
【表２５】
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【０１４８】
【表２６】
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【０１４９】
【表２７】
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【０１５０】
【表２８】
2018517721.tif 000030
【０１５１】
【表２９】
2018517721.tif 000031
【０１５２】
【表３０】
2018517721.tif 000032
【０１５３】
【表３１】
2018517721.tif 000033
【０１５４】
【表３２】
2018517721.tif 000034
【０１５５】
【表３３】
2018517721.tif 000035
【０１５６】
【表３４】
2018517721.tif 000036
【０１５７】
【表３５】
2018517721.tif 000037
【０１５８】
【表３６】
2018517721.tif 000038
【０１５９】
【表３７】
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【０１６０】
【表３８】
2018517721.tif 000040
【０１６１】
【表３９】
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【０１６２】
【表４０】
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【０１６３】
【表４１】
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【０１６４】
【表４２】
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【０１６５】
【表４３】
2018517721.tif 000045
【０１６６】
【表４４】
2018517721.tif 000046
【０１６７】
【表４５】
2018517721.tif 000047
【０１６８】
【表４６】
2018517721.tif 000048
【０１６９】
【表４７】
2018517721.tif 000049
【０１７０】
【表４８】
2018517721.tif 000050
【０１７１】
【表４９】
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【０１７２】
【表５０】
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【０１７３】
【表５１】
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【０１７４】
【表５２】
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【０１７５】
研究252日目まで(又は来診9まで)の経時的な平均eGFR(1.73 m2あたりmL/分)の安定化に対する一般的傾向は、能動的に処置された群(試験医薬製剤1 mg/kg及び試験医薬製剤4 mg/kg)において観察され、一方でプラセボ群(プラセボ製剤で処置された)における平均eGFRレベル(1.73 m2あたりmL/分)は時間とともに次第に減少した。これらの一般的な傾向を図１において示し、そして各特定の研究日でのグループ分けされたデータ点に含まれる患者の数を表52に示す。
【０１７６】
【表５３】
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【０１７７】
本明細書において言及された全ての刊行物及び特許出願は、各個々の刊行物又は特許出願がそれら全体として参照により加入されると具体的かつ個別に示されると同じ程度まで、それら全体として参照により本明細書に加入される。
【０１７８】
本発明の好ましい実施態様が本明細書に示され記載されてきたが、このような実施態様が例としてのみ提供されるということは当業者に明らかだろう。以下の特許請求が本発明の範囲を規定するということ、並びにこれらの特許請求の範囲内の方法及び構造及びそれらの等価物がそれにより網羅されるということが意図される。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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