(57)【要約】【課題】過剰な粘液、又は粘弾性、粘着性、もしくは接着性特性が増加した粘液を有する患者において、粘液の液化を増加させる方法を提供する。【解決手段】  式（Ｉａ）〜（Ｉｄ）により表される粘液溶解剤が提供され、式中、構造変数Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５及びＲ６は、本明細書において定義される。また、式（Ｉａ）〜（Ｉｄ）により表される化合物の粘液溶解特性を利用する様々な処置の方法が提供される。本発明の１つの目的は、過剰な粘液、又は粘弾性、粘着性、もしくは接着性特性が増加した粘液を有する患者において、粘液の液化を増加させる方法に関する。方法は、異常又は過剰の粘液を有する患者の粘液を、ジチオール基を含有する粘液溶解化合物を含む組成物と接触させ、ムチンジスルフィド結合の還元により粘液粘弾性を減少させる工程を含む。【選択図】図１
2018505163.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉａ）−（Ｉｄ）：
【化１】
2018505163.tif 000098
（式中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、低級アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシル−低級アルキル、フェニル、（フェニル）−低級アルキル、（ハロフェニル）−低級アルキル、（（低級アルキル）フェニル）−低級アルキル、（（低級アルコキシ）フェニル）−低級アルキル、（ナフチル）−低級アルキル、又は（ピリジル）−低級アルキルであり；
各Ｒ５は、独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、非置換又は置換フェニル、低級アルキル−チオ、フェニル−低級アルキル−チオ、低級アルキル−スルホニル、又はフェニル−低級アルキル−スルホニル、ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【化２】
2018505163.tif 000099
−連結−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、又は−連結−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰであり、
ただし、少なくとも１つのＲ５基は、少なくとも１つの塩基性窒素を含有し；
各Ｒ６は、独立して、水素、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ７、又は天然立体配置のアミノアシルであり；
各Ｒ７は、独立して、水素、低級アルキル、フェニル、置換フェニル、低級アルキルフェニル、−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）ｍ−ＣＨ２ＯＲ８；２−フリル又は３−フリルであり；
各Ｒ８は、独立して、水素、低級アルキル、低級アルキルフェニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１１、グルクロニド、２−テトラヒドロピラニル、又は
【化３】
2018505163.tif 000100
であり；
各Ｒ９は、独立して、−ＣＯ２Ｒ７、−ＣＯＮ（Ｒ７）２、−ＳＯ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−ＣＯ２Ｒ１３、−ＣＯＮ（Ｒ１３）２、−ＳＯ２ＣＨ２Ｒ１３、又は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３であり；
各Ｒ１０は、独立して、−Ｈ、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、又は−ＣＨ２−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨであり；
各Ｚは、独立して、−（ＣＨＯＨ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−、−（Ｃ＝ＮＲ１０）−、−ＮＲ１０−、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨＮＲ１３Ｒ１３）−、−（Ｃ＝ＮＲ１３）−、又は−ＮＲ１３、−ＣＯ２Ｈであり；
各Ｒ１１は、独立して、水素、低級アルキル、フェニル低級アルキル又は置換フェニル低級アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立して、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−ＣＨ２（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＯ２Ｒ１３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、又は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３であり；
各Ｒ１３は、独立して、水素、低級アルキル、フェニル、置換フェニル又は−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）ｍ−ＣＨ２ＯＲ８、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−ＣＨ２−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１１Ｒ１１、−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１）＋、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ１１Ｒ１１、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１）＋、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７であり；
各ｇは、独立して、１〜６の整数であり；
各ｍは、独立して、１〜７の整数であり；
各ｎは、独立して、０〜７の整数であり；
各−Ｈｅｔ−は、独立して、−Ｎ（Ｒ７）−、−Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−；−Ｏ−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＲ７ＣＯ−、−ＣＯＮＲ７−、−Ｎ（Ｒ１３）−、−ＳＯ２ＮＲ１３−、−ＮＲ１３ＣＯ−、又は−ＣＯＮＲ１３−であり；
各連結は、独立して、−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｍ−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ７−、−ＳＯ２ＮＲ１０−、又は−Ｈｅｔ−であり；
各ＣＡＰは、独立して、
【化４−１】
2018505163.tif 000101
【化４−２】
2018505163.tif 000102
【化４−３】
2018505163.tif 000103
であり；
ただし、任意の−ＣＨＯＲ８−又は−ＣＨ２ＯＲ８基が互いに対して１，２−又は１，３−位に位置する場合、Ｒ８基は、任意選択により、一緒になって、環式一置換又は二置換１，３−ジオキサン又は１，３−ジオキソランを形成してもよい）により表される化合物；
ならびにそのラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、互変異性体、多形体、擬似多形体及び薬学的に許容される塩。
【請求項２】
粘膜表面から粘液を液化させる方法であって、
有効量の請求項１に記載の化合物を、対象の粘膜表面に投与する工程を含む方法。
【請求項３】
慢性気管支炎を処置する、気管支拡張症を処置する、嚢胞性線維症を処置する、慢性閉塞性肺疾患を処置する、喘息を処置する、肺線維症を処置する、副鼻腔炎を処置する、膣の乾燥を処置する、ドライアイを処置する、目の湿潤を促進する、角膜の湿潤を促進する、粘膜表面における粘液排除を促進する、シェーグレン病を処置する、遠位腸閉塞症候群を処置する、乾燥肌を処置する、食道炎を処置する、口の乾燥を処置する、鼻の脱水症を処置する、人工呼吸器誘発性肺炎を処置する、喘息を処置する、原発性線毛運動障害を処置する、中耳炎を処置する、診断目的のために痰を誘発する、シスチン症を処置する、肺気腫を処置する、肺炎を処置する、便秘を処置する、慢性憩室炎を処置する、及び／又は鼻副鼻腔炎を処置する方法であって、
有効量の請求項１に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法。
【請求項４】
眼漏の存在を特徴とする眼疾患を処置する方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法。
【請求項５】
眼疾患が、眼瞼炎、アレルギー、結膜炎、角膜潰瘍、トラコーマ、先天性単純ヘルペス、角膜剥離、眼瞼外反、眼瞼疾患、淋菌性結膜炎、ヘルペス性角膜炎、眼炎、シェーグレン症候群、スティーブンス−ジョンソン症候群からなる群から選択される１つ又は複数の状態である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
粘液線毛排除及び粘膜湿潤の増加により和らげられた疾患を処置する方法であって、粘液線毛排除及び粘膜湿潤の増加を必要とする対象に、有効量のオスモライト及び請求項１に記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項７】
疾患が、慢性気管支炎、気管支拡張症、肺線維症、嚢胞性線維症、喘息、副鼻腔炎、膣の乾燥、ドライアイ、シェーグレン疾患、遠位腸閉塞症候群、乾燥肌、食道炎、口の乾燥（口内乾燥）、鼻の脱水症、喘息、原発性線毛運動障害、中耳炎、慢性閉塞性肺疾患、肺気腫、肺炎、憩室炎、鼻副鼻腔炎、及び空気感染症からなる群から選択される１つ又は複数の状態である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
化合物が、オスモライトの投与に先立って投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
化合物が、オスモライトの投与と同時に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
化合物が、オスモライトの投与の後に投与される、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
オスモライトが、高張食塩水又はマンニトールである、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
オスモライトが、呼吸可能なサイズの微粉化粒子として送達される塩化ナトリウムである、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
有効量のオスモライト及び式（Ｉａ）〜（Ｉｄ）の化合物が、鼻腔又は肺気道に製剤を送達することができるデバイスを使用して、エアロゾル化により投与され、エアロゾルは、呼吸可能なサイズである、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）請求項１に記載の化合物及び（ｂ）浸透圧的に活性な化合物を含む組成物。
【請求項１５】
痰を誘発する方法であって、粘液線毛排除及び粘膜湿潤の増加を必要とする対象に、有効量のオスモライト及び請求項１に記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項１６】
病原体により引き起こされる疾患又は状態に対する、予防的、曝露後予防的、防止的又は治療的処置の方法であって、粘液線毛排除及び粘膜湿潤の増加を必要とする対象に、有効量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項１７】
病原体が、炭疽菌又はペストである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
必要とするヒトにおいて、放射性核種を含有する呼吸可能なエアロゾルにより引き起こされる呼吸気管及び／又は他の身体器官への確定的健康影響を防止、軽減及び／又は処置するための方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩を前記ヒトに投与する工程を含む方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の化合物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２０】
治療薬剤の粘液貫通を改善するための方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物及び第２の治療薬剤を投与する工程を含む方法。
【請求項２１】
治療薬剤が、オスモライト、ナトリウムチャネル遮断薬、分泌促進物質、気管支拡張剤、抗感染症薬、抗炎症薬、又は遺伝子担体である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
粘膜炎症を減少させるための方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項２３】
粘膜酸素フリーラジカルを減少させるための方法であって、有効量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を含む方法。
【請求項２４】
式：
【化５−１】
2018505163.tif 000104
【化５−２】
2018505163.tif 000105
により表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル（furmaric）酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸、マロン酸、スルホサリチル酸、グリコール酸、２−ヒドロキシ−３−ナフトエート、パモエート、サリチル酸、ステアリン酸、フタル酸、マンデル酸、及び乳酸からなる群から選択される無機酸又は有機酸の酸付加塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
式：
【化６−１】
2018505163.tif 000106
【化６−２】
2018505163.tif 000107
【化６−３】
2018505163.tif 000108
【化６−４】
2018505163.tif 000109
により表されるプロドラッグ化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
継続出願情報
本出願は、２０１５年１月３０日に出願され、参照により本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願第６２／１０９，９９９号の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、新規モノチオール粘液溶解剤に関する。本発明はまた、本発明のこれらの粘液溶解剤を使用する様々な処置の方法を含む。
【背景技術】
【０００３】
環境と身体の間の境界での粘膜表面は、いくつかの「先天的防御」、すなわち保護機構を進化させてきた。粘液輸送系は、吸入された粒子／感染性因子に対する気道の基本的な防御である。吸入された粒子は、粘液層内に捕捉され、その後粘液排除により肺から排出される。粘液輸送系には、線毛排除を促進するために粘液が十分に湿潤していることが必要である。十分な粘液湿潤がないと、粘液は過度に粘稠性及び接着性となり、これが気道粘液蓄積及び感染症につながる可能性がある。
【０００４】
典型的には、粘膜表面上の液体層の量は、しばしば水（及びカチオン対イオン）と結びついたアニオン（Ｃ１−及び／又はＨＣＯ３−）分泌を反映する上皮液体分泌と、しばしば水及び対アニオン（Ｃ１−及び／又はＨＣＯ３−）と結びついたＮａ＋吸収を反映する上皮液体吸収との間の均衡を反映する。粘膜表面の多くの疾患は、分泌（少なすぎる）と吸収（比較的多すぎる）との間の不均衡によりもたらされる、それらの粘膜表面上の少なすぎる保護液体により引き起こされる。これらの粘膜機能不全を特徴付ける塩輸送プロセスの欠陥は、粘膜表面の上皮層に存在する。
【０００５】
粘膜輸送系の異常は、嚢胞性線維症（CF）及び慢性気管支炎（CB）を含む複合した粘液閉塞性気道疾患を特徴付ける。正常な粘液排除には、１）気道表面の適切な湿潤、及び２）粘液と細胞表面との間の強い接着及び粘着相互作用がないことが必要である。湿潤は、線毛周囲及び粘液層におけるムチンの濃度により定義される。イオン輸送特性が、塩及び水（すなわち溶媒）の量を調整し、杯細胞及び腺が、気道表面上のムチンの量を制御する。嚢胞性線維症（CF）、煙草の煙への曝露に関連した慢性気管支炎、すなわちＣＯＰＤ、及び喘息を含む粘液閉塞性疾患に罹患した対象は、杯細胞及び腺肥大による気道湿潤の低減及びムチン過剰分泌の結果としての、％固体により定量化される粘液濃度の増加を示す（図１を参照されたい）。疾患の重症度に応じて、また同時に急性増悪において、上昇したムチン濃度は、上皮細胞に張り付き、排除を低下させて炎症反応及び気道壁損傷を誘引し、病原性微生物の成長培地として機能する接着性粘液を生成する。明らかに、そのような増粘／接着した粘液の気道からの排除を向上させることは、粘液閉塞性疾患に罹患した患者に有益となり得る。
【０００６】
慢性気管支炎の最も一般的な致死性の遺伝型である嚢胞性線維症（CF）を含む慢性気管支炎（CB）は、身体が肺から正常に粘液を排除することができないことを反映する疾患であり、これは、最終的に慢性気道感染症をもたらす。正常な肺において、慢性肺内気道感染症（慢性気管支炎）に対する一次防御は、気管支気道表面からの粘液の連続的排除により媒介される。この健康上の機能は、潜在的に有害な毒素及び病原体を肺から効果的に除去する。最近のデータは、ＣＢ及びＣＦの両方におけるそもそもの問題、すなわち「基本的欠陥」が、気道表面からの粘液排除の不良であることを示している。粘液排除の不良は、液体の量と気道表面上のムチンとの間の不均衡を反映している。この「気道表面液」（ASL）は、主に、血漿に類似した割合の塩及び水で構成される（すなわち等張性である）。ムチン巨大分子は、明確な「粘液層」に組織化し、これは通常、吸入された細菌を捕捉し、「線毛周囲液」（PCL）と呼ばれる水っぽい低粘度溶液をかき混ぜる線毛の作用により肺の外に輸送される。疾患状態においては、気道表面上の粘液及びＡＳＬの量に不均衡が存在する。これは、ＡＳＬの相対的な低減をもたらし、これが口内の粘液濃縮、ＰＣＬの潤滑活性の低減、及び線毛活動による粘液排除の不良につながる。肺からの粘液の機械的排除の低減は、気道表面に接着する粘液の慢性的な細菌コロニー形成につながる。細菌の慢性的な滞留、局部的抗菌物質が粘液に捕捉された細菌を慢性的に殺菌することができないこと、及びこの種の表面感染症に対する結果的な身体の慢性的炎症反応が、ＣＢ及びＣＦの症候群につながる。
【０００７】
米国における現在の罹患患者人口は、後天型（主に煙草の煙への曝露による）の慢性気管支炎が１２，０００，０００人、及び遺伝型の嚢胞性線維症が約３０，０００人である。欧州では、両方の人口がほぼ同数で存在する。アジアでは、ＣＦは少ないが、ＣＢの発生率は高く、世界のその他の国々と同様に増加している。
【０００８】
現在、ＣＢ及びＣＦを引き起こす基本的欠陥のレベルでこれらの疾患を特異的に処置する製品が医学的に極めて必要とされているが、まだ満たされていない。慢性気管支炎及び嚢胞性線維症の現在の治療法は、これらの疾患の症状の処置、及び／又は遅発効果に焦点を置いている。したがって、慢性気管支炎の場合、Β−作動薬、吸入ステロイド、抗コリン剤、ならびに経口テオフィリン及びホスホジエステラーゼ阻害剤が、全て開発中である。しかしながら、これらの薬物はいずれも、肺からの粘液排除不良の根本的問題に効果的に対処していない。同様に、嚢胞性線維症の場合、同じ範囲の薬理作用剤が使用される。これらの戦略は、接着性粘液物質中で成長する細菌を死滅させることを無駄に試みた好中球により肺内に堆積されたＤＮＡのＣＦ肺をきれいにするように設計されたより最近の戦略（「PULMOZYME」；GENENTECH）により、及び細菌の接着性粘液プラークを取り除く肺自体の死滅機構を増強するように設計された吸入抗生物質（「TOBI」）の使用によって補完されている。主とする一般的原理は、そもそもの病変、この場合粘液滞留／閉塞が処置されない場合、細菌感染症が慢性化し、抗菌療法がますます無効化することである。したがって、ＣＢ及びＣＦ肺疾患の両方に対して、気道粘液を流動化させ、細菌を含めてそれを肺から排除することを促進する効果的な手段が治療上極めて必要とされているが、まだ満たされていない。
【０００９】
体内及び体表における他の粘膜表面は、その表面上の保護表面液の通常の生理においてわずかな差しか示さないが、疾患の病態生理は、共通するテーマ、すなわち少なすぎる保護表面液及び粘液排除の低下を反映している。例えば、口内乾燥（口の乾燥）では、耳下、舌下及び顎下腺の液体分泌不良に起因して口腔から液体が枯渇する。同様に、乾性角結膜炎（ドライアイ）は、涙腺の液体分泌不良、又は過度の蒸発性液体損失から生じる不十分な涙液量により引き起こされる。鼻副鼻腔炎では、ＣＢのように、ムチン分泌、相対的な気道表面液体枯渇、及び粘液停滞の間の不均衡が存在する。最後に、胃腸管において、近位小腸におけるＣ１−（及び液体）の分泌不良は、回腸終端部における増加したＮａ＋（及び液体）吸収と併せて、遠位小腸閉塞症候群（DIOS）につながる。年配の患者においては、下行結腸における過度のＮａ＋（及び体積）吸収が、便秘及び憩室炎をもたらす。
【００１０】
急性気管支炎及び慢性気管支炎の両方の高い有病率は、この疾患症候群が、米国において主要な健康問題であることを示している。粘液閉塞性疾患の病因学における著しい進展にもかかわらず、ＣＦ及びＣＯＰＤ両方の薬物療法は、典型的には、維持のための吸入ステロイド及び気管支拡張剤、ならびに増悪に対する抗生物質及び高用量ステロイドを含む、一連の成熟した療法により特徴付けられる。明らかに、ＣＢ／ＣＦに罹患した患者の肺からの粘液排除を回復するのにより効果的な薬物が必要とされている。これらの新たな療法の価値は、ＣＦ及びＣＢ集団の両方の生活の質及び寿命の改善に反映される。
【００１１】
粘液排除を増加させるための１つのアプローチは、ポリマー粘液構造の破壊によりムチンの輸送可能性を向上させることである。ムチンタンパク質は、共有（ジスルフィド）及び非共有結合の形成により、高分子量ポリマーに組織化される。還元剤による共有結合の破壊は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの粘液の粘弾性特性を低減するための十分に確立された方法であり、粘液接着性を最小限化し、ｉｎ  ｖｉｖｏでの排除を改善すると予測されている。還元剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで粘液粘性を減少させることが周知であり、痰試料の処理の補助として一般的に使用されている（Hirsch, S.R.、Zastrow, J.E.、及びKory, R.C. Sputum liquefying agents: a comparative in vitro evaluation. J.Lab.Clin.Med. 1969. 74:346-353）。還元剤の例は、これらに限定されないが、Ｎ−アセチルシステイン、Ｎ−アシステリン（N-acystelyn）、カルボシステイン、システアミン、グルタチオン、及びチオレドキシン含有タンパク質を含むタンパク質ジスルフィド結合を還元することができるスルフィド含有分子を含む。
【００１２】
【化１】
2018505163.tif 000003
【００１３】
Ｎ−アセチルシステイン（NAC）は、粘質又は増粘気道粘液の低粘化のための胸部理学療法との併用に承認されている。ＣＦ及びＣＯＰＤにおける経口又は吸入ＮＡＣの効果を評価する臨床試験では、粘液のレオロジー特性の改善、ならびに肺機能の改善及び肺増悪の減少化への傾向が報告されている（Duijvestijn YCM及びBrand PLP.; Systematic review of N-acetylcysteine in cystic fibrosis. Acta Peadiatr 88: 38-41. 1999）。しかしながら、圧倒的多数の臨床データが、ＮＡＣは、経口的に、又は吸入エアロゾルとして投与された場合、せいぜい気道粘液閉塞の処置にわずかに効果的な治療薬剤にすぎないことを示唆している。ＮＡＣの使用に関する既存の臨床的文献の最近のコクランレビューは、ＣＦに対するＮＡＣの効能を裏付ける証拠を見出せなかった（Nash EF、Stephenson A、Ratjen F、Tullis E.; Nebulized and oral thiol derivatives for pulmonary disease in cystic fibrosis. Cochrane Database Syst Rev. 2009; 21（1）: CD007168）。
【００１４】
局所的肺治療薬剤としてのＮＡＣは、ムチンジスルフィド結合の還元に最適ではない。具体的には、ＮＡＣは、（１）気道表面環境において比較的非効率的な還元剤であり（例えばCF  ｐＨ６．５〜７．２）、また（２）急速に代謝され、気道表面から排除される（Jayaraman S、Song Y、Vetrivel L、Shankar L、Verkman AS. Noninvasive in vivo fluorescence measurement of airway-surface liquid depth, salt concentration, and pH. J Clin Invest. 2001; 107（3）: 317-24）ため、ＮＡＣは、効果的な肺疾患薬物の基本的特性を有さない。例えば、気道表面のｐＨ環境において（CF及びCOPD気道においてｐＨ６．０〜７．２の範囲で測定される）、ＮＡＣは、その一部のみがマイナス電荷チオレートとして反応性状態で存在する（Jayaraman S、Song Y、Vetrivel L、Shankar L、Verkman AS. Noninvasive in vivo fluorescence measurement of airway-surface liquid depth, salt concentration, and pH. J Clin Invest. 2001; 107（3）: 317-24）（図３）。さらに、動物試験において、吸入により投与された１４Ｃ標識化ＮＡＣは、約２０分の半減期での肺からの急速除去を示す（非公開の観察）。ＮＡＣ生理学的な気道ｐＨにおける比較的低い還元活性、及び肺表面上でのＮＡＣの短い半減期は、粘液閉塞性疾患における効果的な粘液還元の有力な臨床的証拠の欠落を説明している。
【００１５】
さらに、ＮＡＣは、濃縮吸入溶液として最も一般的に投与される（Mucomyst（登録商標）は、２０％又は１．２７Ｍ溶液である）。しかしながら、濃縮ＮＡＣ溶液の投与は、（１）不快な硫黄味／臭、ならびに（２）気管支拡張剤等の救急薬の同時投与を必要とし得る刺激及び気管支収縮を含む肺の副作用を際立たせるため、ＮＡＣの耐容性に影響する。Ｍｕｃｏｍｙｓｔは１９６３年にＦＤＡにより承認されたが、現在、粘液閉塞性疾患の処置に利用可能な、吸入エアロゾルとして投与される他の還元剤はない。低下した粘液排除を特徴とする疾患の処置のための、効果的、安全、及び十分耐容性のある還元剤が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の１つの目的は、過剰な粘液、又は粘弾性、粘着性、もしくは接着性特性が増加した粘液を有する患者において、粘液の液化を増加させる方法に関する。方法は、異常又は過剰の粘液を有する患者の粘液を、ジチオール基を含有する粘液溶解化合物を含む組成物と接触させ、ムチンジスルフィド結合の還元により粘液粘弾性を減少させる工程を含む。
【００１７】
本発明の目的は、Ｎ−アセチルシステイン（NAC）と比較してより効果的な、及び／又は粘膜表面からよりゆっくりと吸収される、及び／又は耐容性がより良好である粘液溶解化合物を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、気道表面の生理学的環境においてより活性な化合物を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的は、Ｎ−アセチルシステイン等の化合物と比較してより強力な、及び／又はよりゆっくりと吸収される化合物を提供することである。
【００２０】
したがって、そのような化合物は、ＮＡＣと比較して、粘膜表面上の延長された薬力学的半減期を提供する。
【００２１】
本発明の別の目的は、上述の化合物の薬理学的特性を利用する処置の方法を提供することである。
【００２２】
特に、本発明の目的は、粘膜表面からの粘液排除の促進に依存する処置の方法を提供することである。
【００２３】
本発明の目的は、既知の化合物と比較してより強力な、及び／又は粘膜表面からよりゆっくりと吸収される、及び／又はより可逆性の低い化合物を提供することである。
【００２４】
したがって、化合物は、既知の化合物と比較して、粘膜表面上の延長された薬力学的半減期を提供する。
【００２５】
本発明の別の目的は、（１）既知の化合物と比較して粘膜表面、特に気道表面からよりゆっくりと吸収される化合物を提供することであり、（２）本発明の別の目的は、ＮＡＣ等の化合物と比較してより強力な、及び／又はよりゆっくりと吸収される、及び／又はより低い可逆性を示す化合物を提供することである。したがって、そのような化合物は、以前の化合物と比較して、粘膜表面上の延長された薬力学的半減期を提供する。
【００２６】
本発明の別の目的は、上述の化合物の薬理学的特性を利用する処置の方法を提供することである。
【００２７】
特に、本発明の目的は、粘膜表面の再湿潤に依存する処置の方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
本発明の目的は、構造（Ｉａ）〜（Ｉｄ）：
【００２９】
【化２】
2018505163.tif 000004
（式中、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、低級アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシル−低級アルキル、フェニル、（フェニル）−低級アルキル、（ハロフェニル）−低級アルキル、（（低級アルキル）フェニル）−低級アルキル、（（低級アルコキシ）フェニル）−低級アルキル、（ナフチル）−低級アルキル、又は（ピリジル）−低級アルキルであり；
各Ｒ５は、独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、非置換又は置換フェニル、低級アルキル−チオ、フェニル−低級アルキル−チオ、低級アルキル−スルホニル、又はフェニル−低級アルキル−スルホニル、ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【００３０】
【化３】
2018505163.tif 000005
−連結−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、又は−連結−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰであり、
ただし、少なくとも１つのＲ５基は、少なくとも１つの塩基性窒素を含有し；
各Ｒ６は、独立して、水素、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ７、又は天然アミノ酸立体配置のアミノアシルであり；
各Ｒ７は、独立して、水素、低級アルキル、フェニル、置換フェニル、低級アルキルフェニル、−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）ｍ−ＣＨ２ＯＲ８、２−フリル又は３−フリルであり；
各Ｒ８は、独立して、水素、低級アルキル、低級アルキルフェニル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１１、グルクロニド、２−テトラヒドロピラニル、又は
【００３１】
【化４】
2018505163.tif 000006
であり；
各Ｒ９は、独立して、−ＣＯ２Ｒ７、−ＣＯＮ（Ｒ７）２、−ＳＯ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−ＣＯ２Ｒ１３、−ＣＯＮ（Ｒ１３）２、−ＳＯ２ＣＨ２Ｒ１３、又は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３であり；
各Ｒ１０は、独立して、−Ｈ、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、又は−ＣＨ２−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨであり；
各Ｚは、独立して、−（ＣＨＯＨ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−、−（Ｃ＝ＮＲ１０）−、−ＮＲ１０−、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨＮＲ１３Ｒ１３）−、−（Ｃ＝ＮＲ１３）−、又は−ＮＲ１３、−ＣＯ２Ｈであり；
各Ｒ１１は、独立して、水素、低級アルキル、フェニル低級アルキル又は置換フェニル低級アルキルであり；
各Ｒ１２は、独立して、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ７、−ＣＨ２（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＯ２Ｒ１３、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３Ｒ１３、又は−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３であり；
各Ｒ１３は、独立して、水素、低級アルキル、フェニル、置換フェニル又は−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）ｍ−ＣＨ２ＯＲ８、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ７、−ＣＨ２−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１１Ｒ１１、−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１）＋、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ１１Ｒ１１、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１）＋、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７であり；
各ｇは、独立して、１〜６の整数であり；
各ｍは、独立して、１〜７の整数であり；
各ｎは、独立して、０〜７の整数であり；
各−Ｈｅｔ−は、独立して、−Ｎ（Ｒ７）−、−Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−；−Ｏ−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＲ７ＣＯ−、−ＣＯＮＲ７−、−Ｎ（Ｒ１３）−、−ＳＯ２ＮＲ１３−、−ＮＲ１３ＣＯ−、又は−ＣＯＮＲ１３−であり；
各連結は、独立して、−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｍ−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ７−、−ＳＯ２ＮＲ１０−、又は−Ｈｅｔ−であり；
各ＣＡＰは、独立して、
【００３２】
【化５−１】
2018505163.tif 000007
【００３３】
【化５−２】
2018505163.tif 000008
【００３４】
【化５−３】
2018505163.tif 000009
であり、
ただし、任意の−ＣＨＯＲ８−又は−ＣＨ２ＯＲ８基が互いに対して１，２−又は１，３−位に位置する場合、Ｒ８基は、任意選択により、一緒になって、環式一置換又は二置換１，３−ジオキサン又は１，３−ジオキソランを形成してもよい）を含む式Ｉの化合物により表されるジチオールのクラス、ならびにそのラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、互変異性体、多形体、擬似多形体（pseudopolymorph）及び薬学的に許容される塩によって達成され得る。
【００３５】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００３６】
本発明はまた、粘膜防御を回復する方法であって、
それを必要とする対象に、粘液を、有効量の本明細書に記載の化合物と接触させる工程を含む方法を提供する。
【００３７】
本発明はまた、粘液粘弾性を減少させる方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、対象の粘膜表面に投与する工程を含む方法を提供する。
【００３８】
本発明はまた、粘膜表面上の粘液粘弾性を減少させる方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、対象の粘膜表面に投与する工程を含む方法を提供する。
【００３９】
本発明はまた、粘膜表面上のフリーラジカルを捕捉する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、対象の粘膜表面に投与する工程を含む方法を提供する。
【００４０】
本発明はまた、粘膜表面上の炎症を減少させる方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、対象の粘膜表面に投与する工程を含む方法を提供する。
【００４１】
本発明はまた、粘膜表面上の酸化性フリーラジカルをクエンチする方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、対象の粘膜表面に投与する工程を含む方法を提供する。
【００４２】
本発明はまた、粘膜表面上の炎症細胞を低減する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、対象の粘膜表面に投与する工程を含む方法を提供する。
【００４３】
本発明はまた、粘液閉塞性疾患を処置する方法であって、
それを必要とする対象に、粘液を、有効量の本明細書に記載の化合物と接触させる工程を含む方法を提供する。
【００４４】
本発明はまた、粘液接着を処置する方法であって、
それを必要とする対象に、粘液を、有効量の本明細書に記載の化合物と接触させる工程を含む方法を提供する。
【００４５】
本発明はまた、肺線維症を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００４６】
本発明はまた、慢性気管支炎を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００４７】
本発明はまた、嚢胞性線維症を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００４８】
本発明はまた、嚢胞性線維症の増悪を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００４９】
本発明はまた、肺線維症を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５０】
本発明はまた、気管支拡張症を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５１】
本発明はまた、慢性閉塞性肺疾患を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５２】
本発明はまた、慢性閉塞性肺疾患の増悪を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５３】
本発明はまた、喘息を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５４】
本発明はまた、喘息の増悪を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５５】
本発明はまた、食道炎を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５６】
本発明はまた、人工呼吸器誘発性肺炎を処置する方法であって、
本明細書に記載の効果的化合物を、人工呼吸器を用いて対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５７】
本発明はまた、原発性線毛運動障害を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５８】
本発明はまた、肺気腫を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００５９】
本発明はまた、肺炎を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００６０】
本発明はまた、鼻副鼻腔炎を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００６１】
本発明はまた、鼻の脱水症を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象の鼻腔に投与する工程を含む方法を提供する。
【００６２】
特定の実施形態において、鼻の脱水症は、乾燥酸素を対象に投与することにより引き起こされる。
【００６３】
本発明はまた、副鼻腔炎を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００６４】
本発明はまた、便秘を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。この方法の一実施形態において、化合物は、経口的に、又は坐剤もしくは浣腸剤により投与される。
【００６５】
本発明はまた、遠位小腸閉塞症候群を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００６６】
本発明はまた、慢性憩室炎を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００６７】
本発明はまた、診断目的のために痰を誘発する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００６８】
本発明はまた、吸入された病原体を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００６９】
本発明はまた、吸入された刺激物質を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００７０】
本発明はまた、吸入された粒子を処置する方法であって、
有効量の本明細書に記載の化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。
【００７１】
特定の実施形態において、吸入された粒子は、粉塵、残屑、又は放射性物質を含む不溶性粒子である。
【００７２】
本発明の目的はまた、炭疽菌を処置する方法であって、有効量の本明細書において定義される式Ｉの化合物及びオスモライトを、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法によって達成され得る。
【００７３】
本発明の目的はまた、病原体、特に生物テロにおいて使用され得る病原体により引き起こされる疾患又は状態に対する、予防的、曝露後予防的、防止的又は治療的処置の方法であって、有効量の式Ｉの化合物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法によって達成され得る。
【００７４】
さらに、本発明の目的は、ＮＡＣ等の化合物と比較してより強力な、より特異的な、及び／又は粘膜表面からよりゆっくりと吸収される式Ｉの粘液溶解薬と併せたオスモライトの使用を含む処置を提供することである。
【００７５】
本発明の別の態様は、浸透圧上昇剤（osmotic enhancer）と共に投与された場合、ＮＡＣ等の化合物と比較してより強力な、及び／又はよりゆっくりと吸収される、及び／又はより低い可逆性を示す式Ｉの粘液溶解薬を使用する処置を提供することである。したがって、そのような粘液溶解薬は、オスモライトと併用された場合、単独で使用されたいずれの化合物と比較しても、粘膜表面への増加した薬力学的効果を提供する。
【００７６】
本発明の別の目的は、ＮＡＣよりも粘膜表面から、特に気道表面からゆっくりと吸収される、式Ｉの粘液溶解薬及びオスモライトを使用する処置を提供することである。本発明の別の目的は、式Ｉの粘液溶解薬及びオスモライトを含有する組成物を提供することである。
【００７７】
本発明の目的は、粘液排除及び粘膜湿潤の増加により和らげられた疾患を処置する方法であって、有効量の本明細書において定義される式Ｉの化合物及びオスモライトを、粘液線毛排除及び／又は粘膜湿潤の増加を必要とする対象に投与する工程を含む方法によって達成され得る。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】ＣＦ／ＣＯＰＤの発病順序における粘液脱水の役割を示す図である。
【図２】ＮＡＣに対する化合物７６の向上したムチン還元能力を示す図である。
【図３】還元活性の損失のない化合物７６の改質を示す図である。
【図４】当技術分野において知られている化合物と比べた還元活性を示す図である。
【図５】化合物７６置換体の利点を示す図である。
【図６】細胞透過性及び炎症促進効果を評価するための統合されたアッセイを示す図である。
【図７】化合物８６のプロドラッグを示す図である。
【図８】ＣＯＰＤ痰における化合物８５の代謝活性を示す図である。
【図９】初代ヒト気管支上皮細胞（HBE）培養物における粘液還元を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
本明細書において使用される場合、以下の用語が示されるように定義される。
【００８０】
「本発明の化合物」は、式Ｉの化合物又はその塩、特に薬学的に許容される塩を意味する。
【００８１】
「式Ｉの化合物」は、本明細書において式Ｉとして指定された構造式を有する化合物を意味する。式Ｉの化合物は、溶媒和物及び水和物（すなわち、式Ｉの化合物の溶媒との付加物）を含む。式Ｉの化合物が１つ又は複数のキラル中心を含むそれらの実施形態において、この語句は、光学異性体（鏡像異性体及びジアステレオマー）及び幾何異性体（シス−／トランス−異性）を含むそれぞれの個々の立体異性体、ならびに立体異性体の混合物を包含することを意図する。さらに、式Ｉの化合物はまた、示された式の互変異性体を含む。
【００８２】
説明及び例を通して、化合物は、標準ＩＵＰＡＣ命名原則を使用して命名され、可能な場合には、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ  Ｃｏｒｐ．／ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒにより販売されている、化合物命名のためのＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  １１．０ソフトウェアプログラムの使用を含んでいる。
【００８３】
炭素原子に４の原子価を生成するように示された十分な数の変数が付されていないいくつかの化学構造表現において、４の原子価を提供するのに必要とされる残りの炭素置換基は、水素であるとみなされるべきである。同様に、末端基を指定せずに結合が描かれているいくつかの化学構造において、そのような結合は、当技術分野において慣例的であるように、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）基を示す。
【００８４】
本発明は、式Ｉの化合物が、ＮＡＣ及びＤＴＴと比較してより強力で、及び／又はよりゆっくりと吸収され、より高い濃度を達成し、粘膜表面、特に気道表面におけるより高い滞留時間を有し、及び／又は耐容性がより良好であるという発見に基づいている。したがって、式Ｉの化合物は、ＮＡＣと比較して粘膜表面上でより高い活性を有し、及び／又はより低い細胞毒性をもたらす。
【００８５】
本発明は、式（Ｉ）の化合物が、ＮＡＣ等の化合物と比較してより強力である、及び／又は粘膜表面、特に気道表面からよりゆっくりと吸収される、及び／又は相互作用からの可逆性がより低いという発見に基づいている。
【００８６】
したがって、式（Ｉ）の化合物は、これらの化合物と比較して、粘膜表面上でより長い半減期を有する。
【００８７】
構造（Ｉａ）〜（Ｉｄ）：
【００８８】
【化６】
2018505163.tif 000010
を含む式Ｉで表される化合物において、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、水素、低級アルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、ヒドロキシル−低級アルキル、フェニル、（フェニル）−低級アルキル、（ハロフェニル）−低級アルキル、（（低級アルキル）フェニル）−低級アルキル、（（低級アルコキシ）フェニル）−低級アルキル、（ナフチル）−低級アルキル、又は（ピリジル）−低級アルキルであり；
Ｒ３及びＲ４は、それぞれ独立して、水素、低級アルキル、ヒドロキシル−低級アルキル、フェニル、（フェニル）−低級アルキル、（ハロフェニル）−低級アルキル、（（低級アルキル）フェニル）−低級アルキル、（（低級アルコキシ）フェニル）−低級アルキル、（ナフチル）−低級アルキル、又は（ピリジル）−低級アルキルであり；
各Ｒ５は、独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、非置換又は置換フェニル、低級アルキル−チオ、フェニル−低級アルキル−チオ、低級アルキル−スルホニル、又はフェニル−低級アルキル−スルホニル、ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【００８９】
【化７】
2018505163.tif 000011
−連結−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、又は−連結−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰであり、ただし、少なくとも１つのＲ５基は、少なくとも１つの塩基性窒素を含有する。
【００９０】
−Ｏ−グルクロニドという用語は、別段に指定されない限り、
【００９１】
【化８】
2018505163.tif 000012
（式中、
【００９２】
【化９】
2018505163.tif 000013
は、グリコシド連結が、環の面の上又は下にあってもよいことを意味する）により表される基を意味する。
【００９３】
−Ｏ−グルコースという用語は、別段に指定されない限り、
【００９４】
【化１０】
2018505163.tif 000014
（式中、
【００９５】
【化１１】
2018505163.tif 000015
は、グリコシド連結が、環の面の上又は下にあってもよいことを意味する）により表される基を意味する。
【００９６】
本発明の好ましい実施形態において、Ｒ５は、
水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、非置換又は置換フェニル、低級アルキル−チオ、フェニル−低級アルキル−チオ、低級アルキル−スルホニル、又はフェニル−低級アルキル−スルホニル、ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０Ｒ１０、−−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【００９７】
【化１２】
2018505163.tif 000016
の１つである。
【００９８】
好ましい実施形態において、各−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７は、上述の構造の範囲内に含まれ、独立して、
−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。
【００９９】
別の好ましい実施形態において、各−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７は、上述の構造の範囲内に含まれ、独立して、
−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ７）２、又は
−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨＮＨ２−ＣＯ２ＮＲ７Ｒ１０である。
【０１００】
別の好ましい実施形態において、Ｒ５は、−ＯＨ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（Ｚ）ｇＲ１２、−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＲ１３）−ＮＲ１３Ｒ１３、−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍＮＨ−Ｃ（＝ＮＲ１３）−ＮＲ１３Ｒ１３、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、連結−（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯＮＲ１３Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１２Ｒ１２、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍＮＲ１１Ｒ１１、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ＋−（Ｒ１１）３、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＲ１３）−ＮＲ１３Ｒ１３、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、又は−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８である。
【０１０１】
特に好ましい実施形態において、Ｒ５は、−連結−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰ、−連結−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＡＰ、又は−連結−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＡＰである。
【０１０２】
別の特に好ましい実施形態において、Ｒ５は、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０である。
【０１０３】
各Ｒ６は、独立して、水素、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ７、又は天然アミノ酸立体配置のアミノアシルである。
【０１０４】
好ましい実施形態において、Ｒ６は、Ｈ、イソブチル（isobutyrl）、プロピオニル（prpionyl）、又は２−フロイルである。
【０１０５】
特に好ましい実施形態において、Ｒ６は、アセチルである。
【０１０６】
別の好ましい実施形態において、Ｒ６は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨＮＨ２−（ＣＨ２）４ＮＨ２である。
【０１０７】
天然アミノ酸立体配置のアミノアシルは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、システイン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリン、セリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リシン、又はアルギニンを含む２０の天然に存在するアミノ酸を指す。例えば、リシンのＲ６＝アミノアシルを使用した式Ｉａの化合物の構造は、
【０１０８】
【化１３】
2018505163.tif 000017
であり、各Ｒ７は、独立して、水素、低級アルキル、フェニル、置換フェニル、低級アルキルフェニル、−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）ｍ−ＣＨ２ＯＲ８；２−フリル又は３−フリルである。
【０１０９】
好ましい実施形態において、Ｒ７は、イソプロピル、エチル、又は２−フリルである。
【０１１０】
特に好ましい実施形態において、Ｒ７は、Ｈ又はメチルである。
【０１１１】
本発明の化合物内の選択された置換基は、再帰的に存在する。これに関連して、「再帰的置換基（recursive substituent）」は、置換基がそれ自身の別の例を列挙し得ることを意味する。そのような置換基の再帰的性質のため、理論的に、所与の実施形態において多数の化合物が存在し得る。例えば、Ｒ９は、Ｒ１３置換基を含有する。Ｒ１３は、Ｒ１０置換基を含有し得、Ｒ１０は、Ｒ９置換基を含有し得る。医薬品化学の当業者には、そのような置換基の総数が、意図される化合物の所望の特性によりある程度制限されることが理解される。そのような特性は、限定ではなく例として、分子量、溶解度又はｌｏｇＰ等の物理的特性、意図される標的に対する活性等の適用性、ならびに合成の容易性等の実用性を含む。
【０１１２】
限定ではなく例として、Ｒ５、Ｒ１３及びＲ１０は、ある特定の実施形態において、再帰的置換基である。典型的には、これらはそれぞれ、所与の実施形態において、独立して２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、又は０回生じ得る。より典型的には、これらはそれぞれ、所与の実施形態において、独立して１２回以下生じ得る。さらに、より典型的には、Ｒ９は、所与の実施形態において０〜８回生じ、Ｒ１３は、所与の実施形態において０〜６回生じ、Ｒ１０は、所与の実施形態において０〜６回生じる。またさらにより典型的には、Ｒ９は、所与の実施形態において０〜６回生じ、Ｒ１３は、所与の実施形態において０〜４回生じ、Ｒ１０は、所与の実施形態において０〜４回生じる。
【０１１３】
再帰的置換基は、本発明の意図される態様である。医薬品化学の当業者には、そのような置換基の多様性が理解される。本発明の一実施形態において再帰的置換基が存在する程度まで、総数は、上に記載されたように決定される。
【０１１４】
各−Ｈｅｔ−は、独立して、−Ｎ（Ｒ７）−、−Ｎ（Ｒ１０）−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−；−Ｏ−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＲ７ＣＯ−、−ＣＯＮＲ７−、−Ｎ（Ｒ１３）−、−ＳＯ２ＮＲ１３−、−ＮＲ１３ＣＯ−、又は−ＣＯＮＲ１３−である。好ましい実施形態において、−Ｈｅｔ−は、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ７）−、又は−Ｎ（Ｒ１０）−である。最も好ましくは、−Ｈｅｔ−は、−Ｏ−である。
【０１１５】
各−連結−は、独立して、−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｍ−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ７−、−ＳＯ２ＮＲ１０−、又は−Ｈｅｔ−である。好ましい実施形態において、−連結−は、−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−である。
【０１１６】
各−ＣＡＰは、各ＣＡＰは、独立して、
各ＣＡＰは、独立して、
【０１１７】
【化１４−１】
2018505163.tif 000018
【０１１８】
【化１４−２】
2018505163.tif 000019
【０１１９】
【化１４−３】
2018505163.tif 000020
である。
【０１２０】
好ましい実施形態において、ＣＡＰは、
【化１５】
2018505163.tif 000021
である。
【０１２１】
各ｇは、独立して、１〜６の整数である。したがって、各ｇは、１、２、３、４、５、又は６であってもよい。
【０１２２】
各ｍは、１〜７の整数である。したがって、各ｍは、１、２、３、４、５、６、又は７であってもよい。
【０１２３】
各ｎは、０〜７の整数である。したがって、各ｎは、０、１、２、３、４、５、６、又は７であってもよい。
【０１２４】
各Ｚは、独立して、−（ＣＨＯＨ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−、−（Ｃ＝ＮＲ１０）−、−ＮＲ１０−、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨＮＲ１３Ｒ１３）−、−（Ｃ＝ＮＲ１３）−、ｏ−ＮＲ１３−、又はＣＯ２Ｈである。ある特定の実施形態において（Ｚ）ｇにより指定されるように、Ｚは、１、２、３、４、５又は６回出現してもよく、Ｚの各出現は、独立して、−（ＣＨＯＨ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−、−（Ｃ＝ＮＲ１０）−、−ＮＲ１０−、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨＮＲ１３Ｒ１３）−、−（Ｃ＝ＮＲ１３）−、又は−ＮＲ１３−である。したがって、限定ではなく例として、（Ｚ）ｇは、−（ＣＨＯＨ）−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−、−（ＣＨＯＨ）−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨＯＨ）−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨＯＨ）−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＮＲ１３Ｒ１３）−、−（ＣＨＯＨ）−（ＣＨＮＲ７Ｒ１０）−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＮＲ１３Ｒ１３）−Ｃ（＝Ｏ）−等であってもよい。
【０１２５】
−ＣＨＯＲ８−又は−ＣＨ２ＯＲ８基を含有する任意の変数において、任意の−ＣＨＯＲ８−又は−ＣＨ２ＯＲ８基が互いに対して１，２−又は１，３−位に位置する場合、Ｒ８基は、任意選択により、一緒になって、環式一置換又は二置換１，３−ジオキサン又は１，３−ジオキソランを形成してもよい。
【０１２６】
本明細書に記載の化合物は、遊離塩基として調製及び使用されてもよい。代替として、化合物は、薬学的に許容される塩として調製及び使用されてもよい。薬学的に許容される塩は、親化合物の所望の生物学的活性を保持又は向上させ、望ましくない毒性効果をもたらさない塩である。そのような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等と形成された酸付加塩；（ｂ）有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸、マロン酸、スルホサリチル酸、グリコール酸、２−ヒドロキシ−３−ナフトエート、パモエート、サリチル酸、ステアリン酸、フタル酸、マンデル酸、乳酸等と形成された塩；ならびに（ｃ）元素アニオン、例えば塩素、臭素及びヨウ素から形成された塩である。
【０１２７】
式Ｉ（Ｉａ〜Ｉｄ）の範囲内の化合物の全ての鏡像異性体、ジアステレオマー、及びラセミ混合物、互変異性体、多形体、擬似多形体及び薬学的に許容される塩が、本発明に包含されることに留意されたい。そのような鏡像異性体及びジアステレオマーの全ての混合物が、本発明の範囲内である。
【０１２８】
式Ｉの化合物及びその薬学的に許容される塩は、異なる多形体又は擬似多形体として存在してもよい。本明細書において使用される場合、結晶多形は、異なる結晶構造で存在する結晶性化合物の能力を意味する。結晶多形は、結晶充填の差異（充填多形）、又は同じ分子の異なる配座異性体間の充填の差異（配座多形）から生じ得る。本明細書において使用される場合、結晶擬似多形は、異なる結晶構造で存在する化合物の水和物又は溶媒和物の能力を意味する。本発明の擬似多形は、結晶充填の差異（充填擬似多形）により、又は同じ分子の異なる配座異性体間の充填の差異（配座擬似多形）により存在し得る。本発明は、式Ｉ〜ＩＩＩの化合物の全ての多形体及び擬似多形体、ならびにそれらの薬学的に許容される塩を含む。
【０１２９】
式Ｉの化合物及びその薬学的に許容される塩は、非晶質固体として存在してもよい。本明細書において使用される場合、非晶質固体は、固体中に原子の位置の長距離秩序が存在しない固体である。この定義は、結晶サイズが２ナノメートル以下の場合にも同様に適用される。溶媒を含む添加剤を使用して、本発明の非晶質形態を形成してもよい。本発明は、式Ｉ〜ＩＩＩの化合物の全ての非晶質形態、ならびにそれらの薬学的に許容される塩を含む。
【０１３０】
式Ｉの化合物は、異なる互変異性体形態で存在してもよい。当業者には、アミジン、アミド、グアニジン、尿素、チオ尿素、ヘテロ環等が、互変異性体形態で存在し得ることが理解される。式Ｉの実施形態の全てのアミジン、アミド、グアニジン、尿素、チオ尿素、ヘテロ環等の全ての可能な互変異性体形態が、本発明の範囲内である。
【０１３１】
「鏡像異性体」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。
【０１３２】
本明細書において使用される立体化学に関する定義及び規則は、全般的に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ  （１９８４）  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ならびにＥｌｉｅｌ，  Ｅ．及びＷｉｌｅｎ，  Ｓ．、Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  （１９９４）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性形態で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する上で、接頭辞Ｄ及びＬ又はＲ及びＳは、そのキラル中心の周りの分子の絶対配置を指定するために使用される。接頭辞ｄ及びｌ、Ｄ及びＬ、又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の記号を指定するために使用され、Ｓ、（−）、又はｌは、化合物が左旋性であることを意味し、一方Ｒ、（＋）、又はｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造に対して、これらの立体異性体は、互いに鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、鏡像異性体と呼ぶことができ、そのような異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と呼ばれ、これは、化学反応又はプロセスにおいて立体選択又は立体特異性が存在しなかった場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を有さない２つの鏡像異性体種の等モル混合物を指す。
【０１３３】
単一の立体異性体、例えば実質的にその立体異性体を含まない鏡像異性体は、光学活性分割剤を使用したジアステレオマーの形成等の方法を使用して、ラセミ混合物の分割により得ることができる（E. L. Elielによる「Stereochemistry of Carbon Compounds」、（1962）、McGraw Hill; Lochmuller, C.H.、（1975） J. Chromatogr.、113: （3） 283-302）。本発明のキラル化合物のラセミ混合物は、（１）キラル化合物によるイオン性ジアステレオマー塩の形成、及び分別結晶化又は他の方法による分離、（２）キラル誘導体化試薬によるジアステレオマー化合物の形成、ジアステレオマーの分離、及び純粋な立体異性体への変換、ならびに（３）直接的なキラル条件下での実質的に純粋な、又は濃縮された立体異性体の分離を含む、任意の好適な方法により分離及び単離され得る。
【０１３４】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル中心を有し、その分子が互いに鏡像ではない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動及びクロマトグラフィー等の高分解能分析手順下で分離し得る。
【０１３５】
いずれの特定の理論にも限定されないが、式（Ｉ）、式ＩＩ、又は式ＩＩＩの化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏで生物学的に低減するように機能すると考えられる。粘膜表面に存在する上皮ナトリウムチャネルを遮断することにより、式（Ｉ）、式ＩＩ又は式ＩＩＩの化合物は、粘膜表面による水の吸収を低減する。この効果は、粘膜表面上の保護液体の体積を増加させ、系を再び均衡化し、したがって疾患を処置する。
【０１３６】
本明細書に記載の化合物は、遊離塩基として調製及び使用されてもよい。代替として、化合物は、薬学的に許容される塩として調製及び使用されてもよい。薬学的に許容される塩は、親化合物の所望の生物学的活性を保持又は向上させ、望ましくない毒性効果をもたらさない塩である。そのような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等と形成された酸付加塩；（ｂ）有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸、マロン酸、スルホサリチル酸、グリコール酸、２−ヒドロキシ−３−ナフトエート、パモエート、サリチル酸、ステアリン酸、フタル酸、マンデル酸、乳酸等と形成された塩；ならびに（ｃ）元素アニオン、例えば塩素、臭素及びヨウ素から形成された塩である。
【０１３７】
式（Ｘの範囲内の化合物の全ての鏡像異性体、ジアステレオマー、及びラセミ混合物、互変異性体、多形体、擬似多形体及び薬学的に許容される塩が、本発明に包含されることに留意されたい。そのような鏡像異性体及びジアステレオマーの全ての混合物が、本発明の範囲内である。
【０１３８】
式Ｉの化合物及びその薬学的に許容される塩は、異なる多形体又は擬似多形体として存在してもよい。本明細書において使用される場合、結晶多形は、異なる結晶構造で存在する結晶性化合物の能力を意味する。結晶多形は、結晶充填の差異（充填多形）、又は同じ分子の異なる配座異性体間の充填の差異（配座多形）から生じ得る。本明細書において使用される場合、結晶擬似多形は、異なる結晶構造で存在する化合物の水和物又は溶媒和物の能力を意味する。本発明の擬似多形は、結晶充填の差異（充填擬似多形）により、又は同じ分子の異なる配座異性体間の充填の差異（配座擬似多形）により存在し得る。本発明は、式Ｉ〜ＩＩＩの化合物の全ての多形体及び擬似多形体、ならびにそれらの薬学的に許容される塩を含む。
【０１３９】
式Ｉの化合物及びその薬学的に許容される塩は、非晶質固体として存在してもよい。本明細書において使用される場合、非晶質固体は、固体中に原子の位置の長距離秩序が存在しない固体である。この定義は、結晶サイズが２ナノメートル以下の場合にも同様に適用される。溶媒を含む添加剤を使用して、本発明の非晶質形態を形成してもよい。本発明は、式Ｉの化合物の全ての非晶質形態、ならびにそれらの薬学的に許容される塩を含む。
【０１４０】
式Ｉの化合物は、異なる互変異性体形態で存在してもよい。当業者には、アミジン、アミド、グアニジン、尿素、チオ尿素、ヘテロ環等が、互変異性体形態で存在し得ることが理解される。式Ｉ〜ＩＶの実施形態の全てのアミジン、アミド、グアニジン、尿素、チオ尿素、ヘテロ環等の全ての可能な互変異性体形態が、本発明の範囲内である。
【０１４１】
「鏡像異性体」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。
【０１４２】
本明細書において使用される立体化学に関する定義及び規則は、全般的に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ  （１９８４）  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；ならびにＥｌｉｅｌ，  Ｅ．及びＷｉｌｅｎ，  Ｓ．、Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  （１９９４）  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性形態で存在し、すなわち、それらは、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する上で、接頭辞Ｄ及びＬ又はＲ及びＳは、そのキラル中心の周りの分子の絶対配置を指定するために使用される。接頭辞ｄ及びｌ、Ｄ及びＬ、又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の記号を指定するために使用され、Ｓ、（−）、又はｌは、化合物が左旋性であることを意味し、一方Ｒ、（＋）、又はｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造に対して、これらの立体異性体は、互いに鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体は、鏡像異性体と呼ぶことができ、そのような異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と呼ばれ、これは、化学反応又はプロセスにおいて立体選択又は立体特異性が存在しなかった場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を有さない２つの鏡像異性体種の等モル混合物を指す。
【０１４３】
単一の立体異性体、例えば実質的にその立体異性体を含まない鏡像異性体は、光学活性分割剤を使用したジアステレオマーの形成等の方法を使用して、ラセミ混合物の分割により得ることができる（E. L. Elielによる「Stereochemistry of Carbon Compounds」、（1962）、McGraw Hill; Lochmuller, C.H.、（1975） J. Chromatogr.、113: （3） 283-302）。本発明のキラル化合物のラセミ混合物は、（１）キラル化合物によるイオン性ジアステレオマー塩の形成、及び分別結晶化又は他の方法による分離、（２）キラル誘導体化試薬によるジアステレオマー化合物の形成、ジアステレオマーの分離、及び純粋な立体異性体への変換、ならびに（３）直接的なキラル条件下での実質的に純粋な、又は濃縮された立体異性体の分離を含む、任意の好適な方法により分離及び単離され得る。
【０１４４】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル中心を有し、その分子が互いに鏡像ではない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動及びクロマトグラフィー等の高分解能分析手順下で分離し得る。
【０１４５】
上述のように、本発明の組成物を調製するために使用される化合物は、薬学的に許容される遊離塩基の形態であってもよい。化合物の遊離塩基は、一般に、塩よりも水溶液中に溶解しにくいため、遊離塩基組成物は、肺への活性薬剤のより持続的な放出を提供するために使用される。溶液に溶解していない微粒子形態で肺に存在する活性薬剤は、生理学的反応を誘発するのに利用可能ではないが、溶液に徐々に溶解する生物学的に利用可能な薬物のデポとして機能する。
【０１４６】
好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１４７】
【化１６】
2018505163.tif 000022
である。
【０１４８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１４９】
【化１７】
2018505163.tif 000023
である。
【０１５０】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１５１】
【化１８】
2018505163.tif 000024
である。
【０１５２】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１５３】
【化１９】
2018505163.tif 000025
である。
【０１５４】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１５５】
【化２０】
2018505163.tif 000026
である。
【０１５６】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１５７】
【化２１】
2018505163.tif 000027
である。
【０１５８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１５９】
【化２２】
2018505163.tif 000028
である。
【０１６０】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１６１】
【化２３】
2018505163.tif 000029
である。
【０１６２】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１６３】
【化２４】
2018505163.tif 000030
である。
【０１６４】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１６５】
【化２５】
2018505163.tif 000031
である。
【０１６６】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１６７】
【化２６】
2018505163.tif 000032
である。
【０１６８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１６９】
【化２７】
2018505163.tif 000033
である。
【０１７０】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１７１】
【化２８】
2018505163.tif 000034
である。
【０１７２】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１７３】
【化２９】
2018505163.tif 000035
である。
【０１７４】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１７５】
【化３０】
2018505163.tif 000036
である。
【０１７６】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１７７】
【化３１】
2018505163.tif 000037
である。
【０１７８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１７９】
【化３２】
2018505163.tif 000038
である。
【０１８０】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１８１】
【化３３】
2018505163.tif 000039
である。
【０１８２】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１８３】
【化３４】
2018505163.tif 000040
である。
【０１８４】
特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１８５】
【化３５】
2018505163.tif 000041
である。
【０１８６】
別の特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１８７】
【化３６】
2018505163.tif 000042
である。
【０１８８】
別の特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１８９】
【化３７】
2018505163.tif 000043
である。
【０１９０】
別の特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、
【０１９１】
【化３８】
2018505163.tif 000044
である。
【０１９２】
モノチオール粘液溶解薬のプロドラッグ：
ハイスループットスクリーニング又はコンビナトリアルケミストリーにより、多くの最新薬が発見されている。これらの化合物は、多くの場合、その高い薬理学的効能のために選択されるが、意図せずに低い薬物様特性（例えば、溶解度、生物学的利用能、安定性）を有する。これらの物理化学的、生物薬剤学的、及び薬物動態学的な制限を克服するための１つの戦略は、化合物のプロドラッグ形態、すなわちｉｎ  ｖｉｖｏで酵素的又は化学的転換を生じるまで不活性である分子を使用することである。改質の種類に依存して、プロドラッグは、その活性相当物に勝る、以下の重要な利点を有し得る：（１）安定性及び保存期間の増加、（２）水溶性の増加、（３）生物学的利用能の改善、（４）脂溶性／透過性の増加、ならびに（５）非経口投与の改善。
【０１９３】
世界的に承認された薬物のうち、５〜７％がプロドラッグとして分類され得る。これらの薬物は、２つのカテゴリー、すなわち生物学的前駆体プロドラッグ又は担体連結プロドラッグに分類される。生物学的前駆体プロドラッグは、代謝的又は化学的転換により、薬理活性薬物に変換される。担体連結プロドラッグは、活性親分子に共有結合的に連結したプロ部分（promoiety）を有する。このプロ部分は、通常は酵素加水分解により放出され、治療場所に送達されると親分子を活性化する。プロドラッグ部分の設計は、通常、特定の分子、プロ部分に適した利用可能な官能基、及び標的器官又は組織における改善を必要とする薬物様特性に基づく。立体障害等の理由によりプロ部分が直接結合することができない場合、スペーサ又は連結基も付加される。十分耐容性となるためには、プロ部分は、非免疫原性で、治療組織に達するまで安定であり、親から切断されたら速やかに体内から排出されるべきである。エステルは、遍在的なエステラーゼ（例えば、アセチルコリンエステラーゼ、ブチリルコリンエステラーゼ、カルボキシルエステラーゼ、アリールエステラーゼ（arlesterase））により親薬物から容易に除去されること、電荷基、例えばカルボン酸及びホスフェート等をマスキングすることにより薬物溶解度を増加させることができること、ならびに比較的単純に合成されることから、最も一般的に使用されるプロ部分の１つである。プロ部分として利用されるいくつかの他の一般的な官能基は、カーボネート、カルバメート、アミド、ホスフェート、及びオキシムである。
【０１９４】
プロドラッグは、慢性気管支炎の最も一般的な致死性の遺伝型である嚢胞性線維症（CF）を含む慢性気管支炎（CB）等の粘液閉塞性呼吸器疾患用の吸入治療薬として特に有用となり得る。本発明者らはまた、追加的な分子特徴が、モノチオール粘液溶解薬の耐容性及び作用期間を改善することができると仮説を立てた。
【０１９５】
具体的には、本発明者らは、酵素的に不安定なチオールキャッピング基を統合することにより、粘液溶解プロドラッグを開発した。これらのプロドラッグ粘液溶解剤は、１）それらが溶液中で完全に不活性であり、したがって自己酸化から保護される；２）チオール保護基は化合物を完全に無臭にする；及び３）分子はｉｎ  ｖｉｖｏでの活性化の速度を改変するように設計され得、したがって、化合物活性化を遅速化し、薬理学的作用の期間を延長するために使用され得るという点で、有利である。
【０１９６】
本発明は、細胞外環境中に存在する一般的な酵素（例えば、ヌクレオチダーゼ、ホスファターゼ、及びエステラーゼ）により活性化される一連の粘液溶解プロドラッグ（Ｒ６＝Ｈ以外を参照されたい）を提供する。概念実証として、活性化エステラーゼの存在下又は非存在下でのプロドラッグ化合物４６の還元反応速度を試験した。試験された条件下で、４６は単独ではジスルフィド結合を還元せず、一方親分子４７は、１０秒未満で全ての利用可能なジスルフィドを完全に還元する。
【０１９７】
【化３９】
2018505163.tif 000045
しかしながら、酵素的に４６を可能にする酵素の添加は、反応速度の濃度依存的な増加をもたらす。重要なことに、Ｐ−４６及び４７は両方とも、ヒト粘液試料においてＭＵＣ５Ｂを還元し、速度論は、上で予測されたものと類似しており、活性化に必要な酵素活性が粘液中に存在することを示している（図８及び９）。
【０１９８】
上述のように、本発明の組成物を調製するために使用される化合物は、薬学的に許容される遊離塩基又は酸付加塩の形態であってもよい。好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０１９９】
【化４０】
2018505163.tif 000046
である。
【０２００】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２０１】
【化４１】
2018505163.tif 000047
である。
【０２０２】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２０３】
【化４２】
2018505163.tif 000048
である。
【０２０４】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２０５】
【化４３】
2018505163.tif 000049
である。
【０２０６】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２０７】
【化４４】
2018505163.tif 000050
である。
【０２０８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２０９】
【化４５】
2018505163.tif 000051
である。
【０２１０】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２１１】
【化４６】
2018505163.tif 000052
である。
【０２１２】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２１３】
【化４７】
2018505163.tif 000053
である。
【０２１４】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２１５】
【化４８】
2018505163.tif 000054
である。
【０２１６】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２１７】
【化４９】
2018505163.tif 000055
である。
【０２１８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２１９】
【化５０】
2018505163.tif 000056
である。
【０２２０】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２２１】
【化５１】
2018505163.tif 000057
である。
【０２２２】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２２３】
【化５２】
2018505163.tif 000058
である。
【０２２４】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２２５】
【化５３】
2018505163.tif 000059
である。
【０２２６】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２２７】
【化５４】
2018505163.tif 000060
である。
【０２２８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２２９】
【化５５】
2018505163.tif 000061
である。
【０２３０】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２３１】
【化５６】
2018505163.tif 000062
である。
【０２３２】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２３３】
【化５７】
2018505163.tif 000063
である。
【０２３４】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２３５】
【化５８】
2018505163.tif 000064
である。
【０２３６】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２３７】
【化５９】
2018505163.tif 000065
である。
【０２３８】
別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２３９】
【化６０】
2018505163.tif 000066
である。
【０２４０】
特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２４１】
【化６１】
2018505163.tif 000067
である。
【０２４２】
別の特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２４３】
【化６２】
2018505163.tif 000068
である。
【０２４４】
別の特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２４５】
【化６３】
2018505163.tif 000069
である。
【０２４６】
別の特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）のプロドラッグ化合物は、
【０２４７】
【化６４】
2018505163.tif 000070
【０２４８】
本発明はまた、上述のように本明細書に記載の化合物の特性を利用する処置の方法を提供する。したがって、本発明の方法により処置され得る対象は、これらに限定されないが、嚢胞性線維症、肺線維症、喘息、原発性線毛運動障害、慢性気管支炎、気管支拡張症、慢性閉塞性気道疾患に罹患した患者、人工呼吸器につながれた患者、急性肺炎に罹患した患者等を含む。本発明は、活性化合物を患者の少なくとも一方の肺に投与し、次いでその患者から痰試料を誘発又は収集することにより、患者から痰試料を得るために使用され得る。典型的には、本発明は、液体エアロゾル、乾燥粉末、又は洗浄により呼吸器粘膜表面に投与される。
【０２４９】
また、本発明の方法により処置され得る対象は、補助酸素を経鼻的に投与されている患者（気道表面を乾燥させる傾向がある処方計画）；鼻気道表面に影響するアレルギー性疾患もしくは反応（例えば、花粉、粉塵、動物の毛もしくは粒子、昆虫もしくは昆虫粒子等へのアレルギー反応）に罹患した患者；鼻気道表面の細菌感染、例えば黄色ブドウ球菌感染等のブドウ球菌感染、インフルエンザ菌感染、肺炎連鎖球菌感染、緑膿菌（Pseudomonas aeuriginosa）感染等に罹患した患者；鼻気道表面に影響する炎症疾患に罹患した患者；又は副鼻腔炎（副鼻腔内の詰まった流体の排出を促進するのに有効な量を投与することにより、副鼻腔内の詰まった粘液性分泌物の排出を促進するために活性薬剤が投与される）もしくは複合的に鼻副鼻腔炎に罹患した患者を含む。本発明は、エアロゾル及び滴下を含む局所的送達により、鼻副鼻腔表面に投与され得る。
【０２５０】
本発明は、著しい疾病率及び死亡率につながる肺胞間質の進行性瘢痕を特徴とする肺疾患である線維化性特発性間質性肺炎（fIIP）を改善するために使用され得る。特発性肺線維症（IPF）は、平均生存期間が３年であるｆＩＩＰの最も一般的で最も重症の形態であり、米国において年間５０，０００人の個人が罹患し、我々の人口の年齢と共に有病率が増加する（G. Raghu、D. Weycker、J. Edelsberg、W. Z. Bradford、G. Oster、Incidence and prevalence of idiopathic pulmonary fibrosis. Am J Respir Crit Care Med 174、810（2006年10月1日））。重要なことに、以前に試行された治療のほとんどはＩＰＦにおける線維増殖性マトリックスを標的としていたが、これらは非効果的であることが証明された。稀な突然変異がＩＰＦに関連していたが、これらの変異は、寄与リスクのごく一部を説明するにすぎない。ＭＵＣ５Ｂは、確立されたＩＰＦの極めて有意及び一般的な遺伝的リスク因子であるという最近の発見（M. A. Seiboldら、A common MUC5B promoter polymorphism and pulmonary fibrosis. N Engl J Med 364、1503（2011年4月21日））は、ＭＵＣ５Ｂ変異が臨床前の又は軽度の疾患を検出する可能性を有することを示唆している。したがって、本発明は、肺線維症におけるＭＵＣ５Ｂの根本的欠陥を処置するために使用され得る。
【０２５１】
本発明はまた、気道表面以外の粘液排除を改善するために使用され得る。そのような他の粘膜表面は、胃腸管表面、口腔表面、尿道生殖器表面、及び眼表面又は目の表面を含む。例えば、本発明の活性化合物は、局部／局所的、経口的、又は経直腸的を含む任意の好適な手段により、有効量で投与され得る。
【０２５２】
別の態様において、空気感染する病原体からの感染症を処置するための、曝露後予防的処置又は治療的処置方法であって、有効量の式（Ｉ〜ＶＩＩ）の化合物を、空気感染する病原体からの感染症に対するそのような処置を必要とする個人の肺に投与する工程を含む方法が提供される。本発明の曝露後予防的、救命及び治療処置方法により防御され得る病原体は、口、鼻、又は鼻気道を通して体内に入り、したがって肺内に進入し得る任意の病原体を含む。典型的には、病原体は、天然に存在する、又はエアロゾル化による空気感染する病原体である。病原体は、天然に存在してもよく、又はエアロゾル化もしくは環境中に病原体を導入する他の方法の後に意図的に環境中に導入されてもよい。天然では空気中で伝染しない多くの病原体は、生物テロにおける使用のためにエアロゾル化されており、又はエアロゾル化され得る。本発明の処置が有用となり得る病原体は、これらに限定されないが、ＮＩＡＩＤにより規定されるようなカテゴリーＡ、Ｂ及びＣの重要病原体を含む。これらのカテゴリーは、疾病対策センター（CDC）により編纂されたリストに概して対応する。ＣＤＣにより定められるように、カテゴリーＡ媒介因子は、個人間で容易に伝播又は伝染する可能性のある媒介因子であり、高い死亡率をもたらし、公衆衛生に大きな影響を与える可能性を有する。カテゴリーＢ媒介因子は、次に重要であり、やや容易に伝播して、中程度の疾病率及び低い死亡率をもたらす媒介因子である。カテゴリーＣは、その利用可能性、生成及び伝播の容易性、ならびに高い疾病率及び死亡率の可能性のため、将来大規模伝播のために操作され得る新興病原体からなる。これらの病原体の特定の例は、炭疽菌及びペストである。防御され得る、又はその感染リスクが低減され得るさらなる病原体は、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス及び呼吸器合胞体ウイルス等を含む。防御され得るさらなる病原体は、重症急性呼吸器症候群（SARS）を引き起こすと考えられるコロナウイルスである。
【０２５３】
本発明はまた、放射性物質、特に、放射性物質散布装置（RDD）の爆破等の核攻撃、又は原子力発電所災害等の事故による、放射性核種を含有する呼吸可能なエアロゾルへの曝露により引き起こされる呼吸気管への確定的健康影響を防止、軽減及び／又は処置するための、式Ｉの粘液溶解剤、又はその薬学的に許容される塩の使用に関する。したがって、それを必要とするヒトを含む、それを必要とする受容者において、放射性核種を含有する呼吸可能なエアロゾルにより引き起こされる呼吸気管及び／又は他の身体器官への確定的健康影響を防止、軽減及び／又は処置するための方法であって、有効量の式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩をヒトに投与する工程を含む方法が、本明細書に記載される。
【０２５４】
放射性物質散布装置（RDD）の爆破等の核攻撃、又は原子力発電所災害等の事故による、放射性核種を含有する呼吸可能なエアロゾルへの一般人の曝露に対する結果管理計画に関連した大きな問題は、呼吸気管、主に肺への潜在的な確定的健康影響をどのように防止、軽減又は処置するかである。そのような極めて体内汚染された個人を管理及び処置するための薬物、技術及び手順、ならびに熟練した人員を備えることが必要である。
【０２５５】
体内に沈着した放射性核種により引き起こされる呼吸気管及び体内の様々な器官への潜在的損傷を防止、軽減又は処置するための手法を決定するために、研究が行われてきた。現在まで、研究上の関心はほとんど、その排出又は除去を迅速化することにより、体内に沈着した放射性核種からの健康影響を軽減するように設計された戦略に焦点が置かれていた。これらの戦略は、血流に到達することができ、所与の放射性元素に特異的な離れた全身部位に沈着する可溶性化学形態に焦点を置いていた。そのようなアプローチは、沈着した放射性核種が比較的不溶性形態である場合には役立たない。研究では、ＲＤＤからの分散した放射性核種の物理化学的形態のほとんどではないにしてもその多くが、比較的不溶性形態となることが示されている。
【０２５６】
吸入された不溶性放射性エアロゾルからの肺への放射線量を効果的に低減することが知られている唯一の方法は、気管支肺胞洗浄又はＢＡＬである。肺胞タンパク症に罹患した患者の処置に既に使用されているものから適合されたこの技術は、長期間にわたり行われても安全で反復可能な手順であることが示されている。手順にはバリエーションがあるが、ＢＡＬの基本的な方法は、対象を麻酔し、続いて、機能残余容量に達するまで１つの肺葉に等張食塩水を徐々に導入することである。次いで、さらなる体積が加えられ、重力により排出される。
【０２５７】
動物に対してＢＡＬを使用した研究の結果は、適度な一連のＢＡＬにより肺深部内容物の約４０％が除去され得ることを示している。いくつかの研究では、動物の間で、回収される放射性核種の量に著しい変動が見られた。この変動の理由は、現在解明されていない。
【０２５８】
さらに、動物に対する研究に基づいて、ＢＡＬ療法による著しい線量低減は、不溶性放射性核種の吸入による健康影響の軽減をもたらすと考えられる。この研究では、成犬が不溶性１４４Ｃｅ−ＦＡＰ粒子を吸入した。イヌの２つの群に、放射線肺臓炎及び肺線維症を引き起こすことが知られている肺内内容物の１４４Ｃｅ（約２ＭＢｑ／ｋｇ体重）を与え、一方の群は、曝露後２日目から５６日目の間に１０回の片側洗浄で処置し、他方の群は処置しなかった。第３の群を、処置後のＢＡＬ処置群において観察されるものに相当する１４４Ｃｅのレベル（約１ＭＢｑ／ｋｇ）で曝露したが、これらの動物は処置しなかった。全ての動物を寿命まで生存させ、１６年まで延びた。各群において、イヌの間で１４４Ｃｅの初期肺内含有量に変動性があるため、各群の線量率及び蓄積線量は重複する。それにもかかわらず、肺臓炎／線維症によるリスクの低減におけるＢＡＬの効果は、生存率曲線から明らかであった。１．５〜２．５ＭＢｑ／ｋｇの肺内含有量を有する未処置のイヌでは、平均生存期間は３７０±６５日であった。処置されたイヌの場合、平均生存は１２７０±２４０日であり、これは統計的に有意に異なっていた。０．６〜１．４ＭＢｑの１４４Ｃｅの肺内含有量を受けた第３の群は、１８００±２３０日の平均生存期間を有していたが、これは処置された群から統計的に異なっていなかった。増加した生存率と同等に重要なことに、高線量の未処置の群内のイヌは、肺に対する決定的影響（肺臓炎／線維症）により死亡し、一方処置されたイヌは死亡しなかった。その代わり、処置されたイヌは、低線量の未処置の群内のイヌと同様に、ほとんどが肺腫瘍（血管肉腫又は癌腫）を有していた。したがって、ＢＡＬ処置から得られた線量の低減は、肺が受けた放射線量に基づいて予測可能な肺内の生物学的効果を生成したと思われる。
【０２５９】
これらの結果に基づいて、肺からの粒子の排除を向上させるための任意の方法又は方法の組合せによりさらに残留放射線量を減少させることによって、肺への健康影響の可能性がさらに減少すると考えられる。しかしながら、ＢＡＬは、多くの欠点を有する手順である。ＢＡＬは、熟練した呼吸器科医により専門医療センターで行われなければならない極めて侵襲性の手順である。したがって、ＢＡＬ手順は費用を要する。ＢＡＬの欠点を考慮すると、これは、例えば核攻撃の場合等、放射性粒子の迅速な除去を必要とする人物に容易及び即時的に利用可能な処置の選択肢ではない。核攻撃又は原発事故の場合、曝露された人物又は曝露されるリスクを有する人物に対する、即時的及び比較的容易に施すことができる処置が必要とされる。吸入エアロゾルとして投与されるナトリウムチャネル遮断薬は、気道表面の湿潤を回復させることが示されている。そのような気道表面の湿潤は、蓄積した粘液分泌物及び関連した微粒子状物質を肺から排除する上で役立つ。したがって、いずれの特定の理論にも限定されないが、気道通路からの放射性粒子の除去を迅速化するために、ナトリウムチャネル遮断薬が本発明において説明される粘液溶解剤と組み合わせて使用され得ると考えられる。
【０２６０】
上述のように、汚い爆弾等の放射能攻撃後の肺への最大のリスクは、不溶性放射性粒子の吸入及び滞留から生じる。放射性粒子の滞留の結果として、肺への蓄積曝露が著しく増加し、最終的に肺線維症／肺臓炎及び死亡の可能性をもたらす。不溶性粒子は、溶液中にないため、これらの粒子はキレート剤により全身的に排除され得ない。現在まで、ＢＡＬによる微粒子状物質の物理的除去が、放射線誘発性肺疾患の軽減に効果的であることが示された唯一の治療計画である。上述のように、ＢＡＬは、体内に吸入された放射性粒子の影響を低減するための現実的な処置解決策ではない。したがって、気道通路から放射性粒子を排除する上で効果的に役立ち、また、ＢＡＬとは異なり、比較的投与が単純で大規模放射線曝露シナリオに拡張可能である治療計画を提供することが望ましい。さらに、治療計画が多くの人々に比較的短期間で容易に利用可能であることも望ましい。
【０２６１】
本発明の態様において、放射性核種を含有する呼吸可能なエアロゾルにより引き起こされる呼吸気管及び／又は他の身体器官への確定的健康影響を防止、軽減及び／又は処置するための方法は、有効量の式Ｉの粘液溶解剤又はその薬学的に許容される塩を、必要とする個人に投与する工程を含む。この態様の特徴において、粘液溶解剤は、オスモライトと併せて投与される。さらにこの特徴に関して、オスモライトは、高張食塩水である。さらなる特徴において、粘液溶解剤及びオスモライトは、イオン輸送調節剤と併せて投与される。さらにこの特徴に関して、イオン輸送調節剤は、β−作動薬、ＣＦＴＲ増強因子、プリン受容体作動薬、ルビプロストン、及びプロテアーゼ阻害剤からなる群から選択され得る。この態様の別の特徴において、放射性核種は、コバルト６０、セシウム１３７、イリジウム１９２、ラジウム２２６、リン３２、ストロンチウム８９及び９０、ヨウ素１２５、タリウム２０１、鉛２１０、トリウム２３４、ウラン２３８、プルトニウム、コバルト５８、クロム５１、アメリシウム及びキュリウムからなる群から選択される。さらなる特徴において、放射性核種は、放射性廃棄物処理装置からのものである。さらに別の特徴において、粘液溶解剤又はその薬学的に許容される塩は、個人が吸入する呼吸可能な粒子のエアロゾル懸濁液中で投与される。さらなる特徴において、粘液溶解剤又はその薬学的に許容される塩は、放射線核種への曝露後に投与される。
【０２６２】
本発明は、主にヒト対象の処置に関連するが、獣医学的な目的で、他の哺乳動物対象、例えばイヌ及びネコの処置にも使用され得る。
【０２６３】
本発明の別の態様は、薬学的に許容される担体（例えば水性担体溶液）中の式Ｉの化合物を含む医薬組成物である。一般に、式Ｉの化合物は、粘膜表面上の粘液の粘度を低減するのに効果的な量で組成物中に含まれる。
【０２６４】
粘液溶解剤の組合せ療法：
本発明の一態様は、本発明において説明される化合物の効能及び耐容性を改善するための、粘液溶解剤と他の薬物又は賦形剤との組合せである。
【０２６５】
本発明の一実施形態において、粘液溶解剤は、気道上皮への粘液層を介した他の治療薬剤へのアクセスを提供するために利用される。粘液は、治療分子がその意図される作用部位に到達するのを防止し得る拡散バリアを形成する。
【０２６６】
以下の治療薬剤の気道上皮における作用部位へのアクセスは、本発明において説明される粘液溶解剤による前処理又は同時処理により向上し得る。
【０２６７】
本発明の一実施形態において、粘液溶解剤は、有利な相加的又は相乗的利益を提供するために、他の療法又は小分子薬物と組み合わせて利用される。
【０２６８】
粘液溶解剤と浸透圧的に活性な薬剤との組合せ
本発明の別の態様は、オスモライトと組み合わせて還元剤を投与することである。粘液閉塞性疾患に罹患した対象における気道表面湿潤を回復するための単純な手段は、気道表面上に水を引き出す高張オスモライト溶液（最も多くは７％高張食塩水（HS））を吸入することである。気道表面の潤滑性線毛周囲層（PCL）の再湿潤は、粘液排除を促進し、したがって、吸入された感染性因子の除去を促進する。高張溶液の投与及び還元剤による粘液ポリマーの破壊により達成される粘液再湿潤は、粘液の粘度及び弾性の相乗的低減をもたらし、粘液の輸送可能性及び排除を改善すると推測される。
【０２６９】
吸入されたＨＳは、全国的にＣＦ患者の約６０％により使用されているため類のない治療薬剤であるが、肺疾患に対する毎日の使用に関してはＦＤＡにより承認されていない。したがって、ＨＳは、最も有効で十分に耐容性となる用量及び投薬頻度を特定するための厳しい臨床試験を受けていない。その代わり、ＨＳ処方計画は、患者及び医者により実践に最適化されている。最も一般的には、ＨＳは、処置当たり７％高張食塩水４ｍＬの２回の１５分吸入処置として投与される。患者により使用されるＨＳの張性（７％ＮａＣｌ）は、一般的に耐容性（すなわち、最小限の刺激又は気管支収縮）となる最大濃度として特定されている。
【０２７０】
式Ｉの化合物はまた、オスモライトと併せて使用されてもよく、したがって粘膜表面を湿潤させるのに必要な化合物の用量を低下させることができる。この重要な特性は、化合物が、望ましくない副作用を引き起こす、より低い傾向を有することを意味する。本発明の活性オスモライトは、浸透圧的に活性である（すなわち「オスモライト」である）分子又は化合物である。本発明の「浸透圧的に活性な」化合物は、気道又は肺上皮表面上で膜不透過性（すなわち本質的に非吸収性）である。「気道表面」及び「肺表面」という用語は、本明細書において使用される場合、気管支及び細気管支等の肺気道表面、肺胞表面、ならびに鼻腔及び副鼻腔表面を含む。本発明の活性化合物は、イオン性オスモライト（すなわち塩）であってもよく、又は、非イオン性オスモライト（すなわち糖、糖アルコール、及び有機オスモライト）であってもよい。天然でラセミ化合物である活性化合物の両方のラセミ形態が、本発明において有用な活性化合物の群に含まれることが、具体的に意図される。浸透圧的に活性な化合物の全てのラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、互変異性体、多形体及び擬似多形体、ならびにラセミ混合物が、本発明に包含されることに留意されたい。
【０２７１】
本発明の活性化合物は、イオン性オスモライト（すなわち塩）であってもよく、又は、非イオン性オスモライト（すなわち糖、糖アルコール、及び有機オスモライト）であってもよい。天然でラセミ化合物である活性化合物の両方のラセミ形態が、本発明において有用な活性化合物の群に含まれることが、具体的に意図される。浸透圧的に活性な化合物の全てのラセミ体、鏡像異性体、ジアステレオマー、互変異性体、多形体及び擬似多形体、ならびにラセミ混合物が、本発明に包含されることに留意されたい。
【０２７２】
イオン性オスモライトである本発明において有用な活性オスモライトは、薬学的に許容されるアニオン及び薬学的に許容されるカチオンの任意の塩を含む。好ましくは、アニオン及びカチオンのいずれか（又は両方）が、それらが投与される気道表面に対して非吸収性である（すなわち、浸透圧的に活性であり、急速な能動的輸送に供されない）。そのような化合物は、これらに限定されないが、ＦＤＡにより承認された市販の塩に含有されるアニオン及びカチオンを含み、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第ＩＩ巻、１４５７ページ（19.sup.th Ed. 1995）を参照されたく、また、それらの従来の組合せを含む任意の組合せにおいて使用され得る。
【０２７３】
本発明を実行するために使用され得る薬学的に許容される浸透圧的に活性なアニオンは、これらに限定されないが、酢酸イオン、ベンゼンスルホン酸イオン、安息香酸イオン、重炭酸イオン、重酒石酸イオン、臭化物イオン、エデト酸カルシウムイオン、カンシル酸イオン（カンファースルホン酸イオン）、炭酸イオン、塩化物イオン、クエン酸イオン、二塩酸塩イオン、エデト酸イオン、エジシル酸イオン（１，２−エタンジスルホン酸イオン）、エストレートイオン（ラウリル硫酸イオン）、エシレートイオン（１，２−エタンジスルホン酸イオン）、フマル酸イオン、グルセプト酸イオン、グルコン酸イオン、グルタミン酸イオン、グリコリルアルサニル酸イオン（glycollylarsanilate）（ｐ−グリコールアミドフェニルアルソン酸イオン）、ヘキシルレゾルシン酸イオン、ヒドラバミンイオン（Ｎ，Ｎ’−ジ（デヒドロアビエチル）エチレンジアミンイオン）、臭化水素酸イオン、塩酸イオン、ヒドロキシナフトエ酸イオン、ヨウ化物イオン、イセチオン酸イオン、乳酸イオン、ラクトビオン酸イオン、リンゴ酸イオン、マレイン酸イオン、マンデル酸イオン、メシル酸イオン、臭化メチルイオン、硝酸メチルイオン、硫酸メチルイオン、ムチン酸イオン、ナプシル酸イオン、硝酸イオン、亜硝酸イオン（ｎｉｔｒｔｅ）、パモ酸イオン（エンボン酸イオン）、パントテン酸イオン、リン酸又は二リン酸イオン、ポリガラクツロン酸イオン、サリチル酸イオン、ステアリン酸イオン、塩基性酢酸イオン、コハク酸イオン、硫酸イオン、タンニン酸イオン、酒石酸イオン、テオクル酸イオン（８−クロロテオフィリネートイオン）、トリエチオジドイオン、重炭酸イオン等を含む。特に好ましいアニオンは、塩化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、グルコン酸イオン、ヨウ化物イオン、重炭酸イオン、臭化物イオン、及びリン酸イオンを含む。
【０２７４】
本発明を実行するために使用され得る薬学的に許容されるカチオンは、これらに限定されないが、ベンザチン（Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン）、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルＤ−グルカミン）、プロカイン、Ｄ−リシン、Ｌ−リシン、Ｄ−アルギニン、Ｌ−アルギニン、トリエチルアンモニウム、Ｎ−メチルＤ−グリセロール等の有機カチオンを含む。特に好ましい有機カチオンは、３炭素、４炭素、５炭素及び６炭素有機カチオンである。本発明の実践において有用な金属カチオンは、これらに限定されないが、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛、鉄、アンモニウム等を含む。特に好ましいカチオンは、ナトリウム、カリウム、コリン、リチウム、メグルミン、Ｄ−リシン、アンモニウム、マグネシウム、及びカルシウムを含む。
【０２７５】
本発明を実行するために本明細書に記載のナトリウムチャネル遮断薬と共に使用され得る浸透圧的に活性な塩の具体例は、これらに限定されないが、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化コリン、ヨウ化コリン、塩化リチウム、塩化メグルミン、塩化Ｌ−リシン、塩化Ｄ−リシン、塩化アンモニウム、硫酸カリウム、硝酸カリウム、グルコン酸カリウム、ヨウ化カリウム、塩化第二鉄、塩化第一鉄、臭化カリウム等を含む。単一の塩又は異なる浸透圧的に活性な塩の組合せのいずれかが、本発明を実行するために使用され得る。異なる塩の組合せが好ましい。異なる塩が使用される場合、アニオン又はカチオンの１つが、異なる塩の中で同じであってもよい。
【０２７６】
本発明の浸透圧的に活性な化合物はまた、糖、糖アルコール、及び有機オスモライト等の非イオン性オスモライトを含む。本発明の実践において有用な糖及び糖アルコールは、これらに限定されないが、３炭素糖（例えば、グリセロール、ジヒドロキシアセトン）；４炭素糖（例えば、エリトロース、トレオース及びエリトルロースのＤ及びＬ型の両方）；５炭素糖（例えば、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、プシコース、フルクトース、ソルボース及びタガトースのＤ及びＬ型の両方）；ならびに６炭素糖（例えば、アルトース、アロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース及びタロースのＤ及びＬ型、ならびにアロ−ヘプツロース、アロ−ヘプロース、グルコ−ヘプツロース、マンノ−ヘプツロース、グロ−ヘプツロース、イド−ヘプツロース、ガラクト−ヘプツロース、タロ−ヘプツロースのＤ及びＬ型の両方）を含む。本発明の実践に有用なさらなる糖は、ラフィノース、ラフィノースシリーズオリゴ糖、及びスタキオースを含む。また、本発明において有用な各糖／糖アルコールの還元型のＤ及びＬ型の両方が、本発明の範囲内の活性化合物である。例えば、グルコースは、還元されると、ソルビトールになり、したがって、本発明の範囲内で、ソルビトール、及び糖／糖アルコールの他の還元型（例えば、マンニトール、ズルシトール、アラビトール）は、本発明の活性化合物である。
【０２７７】
本発明の浸透圧的に活性な化合物は、さらに、「有機オスモライト」と呼ばれる非イオン性オスモライトのファミリーを含む。「有機オスモライト」という用語は、一般に、腎臓における細胞内浸透圧を制御するために使用される分子を指すように使用される。例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、Ｊ．Ｓ．Ｈａｎｄｌｅｒら、Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ、１１７、３０１−３０６（１９９７）；Ｍ．Ｂｕｒｇ、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６８、Ｆ９８３−Ｆ９９６（１９９５）を参照されたい。本発明者は、本発明のいずれの特定の理論にも束縛されることを望まないが、これらの有機オスモライトは、気道／肺表面上の細胞外体積を制御する上で有用であると思われる。本発明における活性化合物として有用な有機オスモライトは、これらに限定されないが、ポリオール（多価アルコール）、メチルアミン、及びアミノ酸の３つの主要な化合物のクラスを含む。本発明の実践において有用と考えられるポリオール有機オスモライトは、これらに限定されないが、イノシトール、ミオイノシトール及びソルビトールを含む。本発明の実践において有用なメチルアミン有機オスモライトは、これらに限定されないが、コリン、ベタイン、カルニチン（Ｌ−、Ｄ−及びＤＬ型）、ホスホリルコリン、リゾホスホリルコリン、グリセロホスホリルコリン、クレアチン、及びリン酸クレアチンを含む。本発明のアミノ酸有機オスモライトは、これらに限定されないが、グリシン、アラニン、グルタミン、グルタメート、アスパルテート、プロリン及びタウリンのＤ−及びＬ−型を含む。本発明の実践において有用なさらなるオスモライトは、チフロース（tihulose）及びサルコシンを含む。哺乳動物有機オスモライトが好ましく、ヒト有機オスモライトが最も好ましい。しかしながら、ある特定の有機オスモライトは、細菌、酵母、及び海洋動物起源であり、これらの化合物もまた、本発明の範囲内の有用な活性化合物である。
【０２７８】
ある特定の状況において、オスモライト前駆体が対象に投与されてもよく、したがって、これらの化合物もまた、本発明の実践において有用である。「オスモライト前駆体」という用語は、本明細書において使用される場合、異化又は同化のいずれかの代謝工程によりオスモライトに変換される化合物を指す。本発明のオスモライト前駆体は、これらに限定されないが、グルコース、グルコースポリマー、グリセロール、コリン、ホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン及び無機ホスフェートを含み、これらはポリオール及びメチルアミンの前駆体である。本発明の範囲内のアミノ酸オスモライトの前駆体は、加水分解されてオスモライトアミノ酸を生成するタンパク質、ペプチド、及びポリアミノ酸、ならびに、アミノ基転移等の代謝ステップによりオスモライトアミノ酸に変換され得る代謝前駆体を含む。例えば、アミノ酸グルタミンの前駆体は、ポリ−Ｌ−グルタミンであり、グルタメートの前駆体は、ポリ−Ｌ−グルタミン酸である。
【０２７９】
粘液溶解剤とナトリウムチャネル遮断薬との組合せ：
気道上皮による協調的なイオン輸送は、粘膜表面の湿潤レベルを直接的に調整する。重要なことに、上皮ナトリウムチャネル（ENaC）を介したナトリウム吸収は、湿潤における律速工程を提供する。機能喪失を有するヒト対象において、ＥＮａＣの突然変異は、「濡れた」気道表面及び著しく速い粘液排除を有する（Keremら、N Engl J Med. 1999年7月15日; 341（3）: 156-62）。逆に、ＥＮａＣによる増加したナトリウム吸収は、粘液脱水及びＣＦ患者の肺における粘液栓形成の根本的原因であることが示されている。さらに、肺においてＥＮａＣを過剰発現する遺伝子導入マウスは、脱水した気道表面を有し、粘液排除が低減され／存在せず、これが死亡をもたらす（Hummlerら、Proc Natl Acad Sci USA. 1997年10月14日; 94（21）: 11710-5）。臨床及び実験データから予測されるように、ＥＮａＣの薬理学的遮断は、気道表面上の液体を保存し、粘液排除を増加させる（Hirshら、J Pharmacol Exp Ther. 2008; 325（1）: 77-88）。特定の例は、これらに限定されないが、以下を含む。
小分子チャネル遮断薬：小分子ＥＮａＣ遮断薬は、ＥＮａＣチャネルポアを介したナトリウム輸送を直接防止することができる。本発明の方法により投与され得るＥＮａＣ遮断薬は、これらに限定されないが、米国特許第６，８５８，６１４号、米国特許第６，８５８，６１５号、米国特許第６，９０３，１０５号、米国特許第６，９９５，１６０号、米国特許第７，０２６，３２５号、米国特許第７，０３０，１１７号、米国特許第７，０６４，１２９号、米国特許第７，１８６，８３３号、米国特許第７，１８９，７１９号、米国特許第７，１９２，９５８号、米国特許第７，１９２，９５９号、米国特許第７，２４１，７６６号、米国特許第７，２４７，６３６号、米国特許第７，２４７，６３７号、米国特許第７，３１７，０１３号、米国特許第７，３３２，４９６号、米国特許第７，３４５，０４４号、米国特許第７，３６８，４４７号、米国特許第７，３６８，４５０号、米国特許第７，３６８，４５１号、米国特許第７，３７５，１０７号、米国特許第７，３９９，７６６号、米国特許第７，４１０，９６８号、米国特許第７，８２０，６７８号、米国特許第７，８４２，６９７号、米国特許第７，８６８，０１０号、米国特許第７，８７５，６１９号、米国特許第７，９５６，０５９号、米国特許第８，００８，４９４号、米国特許第８，０２２，２１０号、米国特許第８，１２４，６０７号、米国特許第８，１４３，２５６号、米国特許第８，１６３，７５８号、米国特許第８，１９８，２８６号、米国特許第８，２１１，８９５号、米国特許第８，３２４，２１８号、米国特許第８，５０７，４９７号、米国特許第８，５７５，１７６号、米国特許第８，６６９，２６２号、米国特許第７，９５６，０５９号、米国特許第８，００８，４９４号、米国特許第８，０２２，２１０号、米国特許第８，１２４，６０７号、米国特許第８，１４３，２５６号、米国特許第８，１６３，７５８号、米国特許第８，１９８，２８６号、米国特許第８，２１１，８９５号、米国特許第８，３２４，２１８号、米国特許第８，５０７，４９７号、米国特許第８，５７５，１７６号、米国特許第８，６６９，２６２号、米国特許第７，９５６，０５９号、米国特許第８，００８，４９４号、米国特許第８，８４６，６８８号、米国特許第８，０２２，２１０号、米国特許第９，０２９，３８２号、米国特許第９，０７２，７３８号、米国特許第９，１０２，６３３号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０１４２１１８−Ａ１号、米国特許出願第ＵＳ２０１４０１７０２４４−Ａ１号、及び米国特許出願第ＵＳ２０１４０１７１４４７−Ａ１号において例示されるように、アミロリド、ベンザミル、フェナミル、及びアミロリド類似物を含む。
【０２８０】
粘液溶解剤とプロテアーゼ阻害剤との組合せ：
ＥＮａＣタンパク質分解は、ＥＮａＣを介したナトリウム輸送を増加させることが十分説明されている。プロテアーゼ阻害剤は、内因性気道プロテアーゼの活性を遮断し、それによりＥＮａＣの開裂及び活性化を防止する。ＥＮａＣを開裂させるプロテアーゼは、フリン、メプリン、マトリプターゼ、トリプシン、チャネル関連プロテアーゼ（ＣＡＰ）、及び好中球エラスターゼを含む。本発明の方法により投与され得るこれらのプロテアーゼのタンパク質分解活性を阻害し得るプロテアーゼ阻害剤は、これらに限定されないが、カモスタット、プロスタシン、フリン、アプロチニン、ロイペプチン、及びトリプシン阻害剤を含む。
【０２８１】
粘液溶解剤と核酸及び低分子干渉ＲＮＡ（siRNA）との組合せ：
本発明を実行するために、限定されないが、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ模倣薬、アンタゴｍｉｒ、リボザイム、アプタマー、及びデコイオリゴヌクレオチド核酸を含む、任意の好適な核酸（又はポリ核酸）を使用することができる。例えば、米国特許出願公開第２０１００３１６６２８号を参照されたい。一般に、そのような核酸は、１７もしくは１９ヌクレオチドの長さから、最大２３、２５もしくは２７ヌクレオチドの長さ、又はそれ以上であってもよい。
【０２８２】
任意の好適なｓｉＲＮＡ活性剤が、本発明を実行するために使用され得る。その例は、これらに限定されないが、米国特許第７，５１７，８６５号、ならびに米国特許出願第２０１００２１５５８８号、米国特許出願第２０１００３１６６２８号、米国特許出願第２０１１０００８３６６号及び米国特許出願第２０１１０１０４２５５号に記載されているものを含む。一般に、ｓｉＲＮＡは、１７もしくは１９ヌクレオチドの長さから、最大２３、２５もしくは２７ヌクレオチドの長さ、又はそれ以上である。
【０２８３】
粘液溶解剤と分泌促進物質との組合せ：
嚢胞性線維症（CF）遺伝子における突然変異は、呼吸器上皮を介したイオン輸送異常をもたらす（Matsuiら、Cell 1998; 95: 1005-15）。ＣＦに罹患した患者におけるナトリウムの過剰吸収及び気道上皮による塩化物の分泌不能により、不適切な塩吸収、気道粘液分泌物の脱水及びＰＣＬにおける液体体積の低減により生成された浸透圧勾配まで水分吸収が引き下げられる。ＣＯＰＤにおいて、煙草の煙はＣＦＴＲ機能を低下させ、したがって、ＣＦに類似した後天的な表現型を形成する。
【０２８４】
Ｐ２Ｙ２受容体作動薬：本発明において説明される方法及び分子と組み合わせて投与され得る薬剤は、Ｐ２Ｙ２作動薬の群を含む。プリン（P2Y2）受容体は、ヒト気管支上皮（HBE）の管腔表面上に豊富に存在し、Ｃｌ−分泌を刺激し、Ｎａ＋吸収を阻害することが知られている（Goralskiら、Curr Opin Pharmacol. 2010年6月; 10（3）: 294-9）。ＵＴＰは、塩化物分泌の安定した刺激、ナトリウム吸収の阻害、及び気道上皮における気道表面液体層の増加を提供し、したがって肺の主要な防御機構である粘液排除を増加させる、内因性Ｐ２Ｙ２受容体作動薬の一例である。エアロゾルによりＣＦ及び原発性線毛運動障害（PCD）患者の気道表面に送達されたウリジン−５−三リン酸（UTP）を使用した初期の研究では、ＭＣの向上、及び平均咳排除率（mean cough clearance rate）の改善におけるＵＴＰの有用性が示唆された。
【０２８５】
好適なＰ２Ｙ２受容体作動薬は、これらに限定されないが、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２６４，９７５号、米国特許第５，６５６，２５６号、米国特許第５，２９２，４９８号、米国特許第６，３４８，５８９号、米国特許第６，８１８，６２９号、米国特許第６，９７７，２４６号、米国特許第７，２２３，７４４号、米国特許第７，５３１，５２５号及び米国特許出願公開第２００９／０３０６００９号に記載されている。
【０２８６】
ＣａＣＣ及びＣｌＣ−２クラスチャネル等の代替の塩化物チャネルの活性剤：ＣａＣＣは、哺乳動物細胞において広く発現し、経上皮流体分泌、卵母細胞受精、嗅覚及び感覚信号伝達、平滑筋収縮、ならびに神経及び心臓興奮を含む広範な生理学的機能に関与する。全細胞電流分析では、膜の脱分極後のゆるやかな活性化、外向き整流定常電流、及び塩化物透過性よりも高いヨウ化物透過性を含む、ＣａＣＣサブファミリーの間でのいくつかの共通する特徴が示されている。単一チャネル分析では、４つ以上の異なるＣａＣＣサブクラスが示唆され、心筋細胞における２ｐＳ未満から、気道上皮細胞における５０ｐＳまでの広範な単一チャネルコンダクタンスが報告されている。
【０２８７】
ＣａＣＣ活性化の結果は、細胞型特異的であり、例えば、上皮細胞における塩化物分泌、嗅覚受容器ニューロンにおける活動電位生成、平滑筋収縮、及び卵母細胞における多精子進入（polyspermia）の防止がある。平滑筋細胞等のいくつかの細胞型においては、膜の脱分極が電位依存性のカルシウムチャネルを活性化し、細胞内カルシウム濃度を増加させる。ＣａＣＣは、ほぼ３０年前に機能的に特性決定されているが、その分子の正体は最近まで不明であり、考えられる候補には、ベストロフィン（BEST1〜BEST4）（Sunら、Proc Natl Acad Sci USA 99、4008~4013 （2002）及びTsunenariら、J Biol Chem 278、41114-41125 （2003））、カルシウム活性化塩化物チャネルＣｌＣＡファミリータンパク質（Gruberら、Genomics 1998; 54： 200-214）ならびにＣｌＣ３（Huang Pら（2001） Regulation of human CLC-3 channels by multifunctional Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase. JBC 276: 20093-100）が含まれる。３つの独立した研究室が、ＣａＣＣの強力な候補としてアノクタミン１とも呼ばれるＴＭＥＭ１６Ａを特定した（Yang YDら（2008）TMEM16A confers receptor-activated calcium-dependent chloride conductance. Nature. 455: 1210-15; Caputo Aら（2008） TMEM16A, a membrane protein associated with calcium-dependent chloride channel activity. Science. 322: 590-4; Schroeder BCら（2008） Expression cloning of TMEM16A as a calcium-activated chloride channel subunit. Cell. 134：1019-29）。以下の３つの異なる戦略が使用された：複数の膜貫通領域及び未知の機能を有する膜タンパク質のデータベース検索（Yang YDら（2008）TMEM16A confers receptor-activated calcium-dependent chloride conductance. Nature. 455： 1210-15）、インターロイキン４（Il4）処置された気管支上皮細胞が増加したＣａＣＣ活性を示すという観察の後の機能的ゲノム学（Caputo Aら（2008） TMEM16A, a membrane protein associated with calcium-dependent chloride channel activity.  Science. 322： 590-4）、ならびに内因性ＣａＣＣ活性を有さないアホロートル卵母細胞を使用した発現クローニング（Schroeder BCら（2008）Expression cloning of TMEM16A as a calcium-activated chloride channel subunit. Cell. 134: 1019-29）。その電気生理学的特性における天然ＣａＣＣとの類似性、様々なトランスフェクト細胞系におけるＣａＣＣ電流の出現、ＲＮＡｉノックダウン後のＣａＣＣ電流の低減、及びその組織分布を含む、ＴＭＥＭ１６ＡがＣａＣＣの重要な構成要素であることを示唆する強力な証拠がある。ＴＭＥＭ１６Ａは、８つの推定膜貫通領域を有し、明らかにカルシウム調整に関与するドメインを有さない。
【０２８８】
ＣｌＣ２は、細胞膨潤により活性化される、遍在的に発現した内向き整流性の塩化物チャネルである。ＣｌＣ２は、細胞体積調整に関与すると考えられていたが、多くの組織において特性決定されている、体積感受性塩化物チャネルとは異なる生物物理学的特徴を有する。好適な代替の塩化物チャネル活性剤は、米国特許第６０１５８２８号、米国特許第６１５９９６９号及び米国特許第７２５３２９５号に記載されている。ＣａＣＣ及びＣｌＣ−２クラスチャネル等の代替の塩化物チャネルの活性剤の治療上の効能は、本発明の化合物の投与及び本発明の方法により向上し得る。
【０２８９】
ＣＦＴＲ活性の調節剤  遺伝性の致命的疾患である嚢胞性線維症は、ＣＦＴＲタンパク質をコードしている遺伝子の突然変異、気道上皮において発現するｃＡＭＰ活性化塩化物チャネルにより引き起こされる。ＣＦＴＲにおける様々な突然変異が、ＣＦＴＲによる気道上皮の表面への塩化物イオン分泌を制限することにより、及びナトリウムカチオンの過剰吸収につながるナトリウムイオン吸収の調整不全により、イオン輸送機能不全を引き起こす。イオン輸送におけるこれらの欠陥は、気道表面液体層の湿潤低下をもたらし、粘液排除を減少させ、肺機能の進行性の喪失につながる。最近では、煙草の煙に曝露された組織においてＣＦＴＲ機能欠陥が存在することが示されており、したがってＣＯＰＤにおけるＣＦＴＲ機能不全の役割が暗示される。
【０２９０】
ＣＦＴＲにおいて１５００を超える推定突然変異が説明されているが、これらを遺伝子欠陥の分子機構に従ってクラスに分けることができる（Roweら、Pulm Pharmacol Ther.、23（4）: 268-78 （2010））。これらの突然変異のそれぞれの生物学の理解は、特定の突然変異型に基づく治療戦略につながった。クラスＩ突然変異は、ＣＦＴＲのコード領域内に中途終止コドン（PTC、例えばナンセンス突然変異）を含み、これは通常のタンパク質翻訳の早期切断を引き起こす。これらの突然変異は、ＣＦ患者の１０％に見られるが、アシュケナージ系ユダヤ人において特に一般的である（突然変異CFTR対立遺伝子の７５％）。クラスＩＩのＣＦＴＲ突然変異は、ヒトにおいて最も一般的な突然変異であるＦ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲを含む（対立遺伝子の７５％を占め、CF患者の約９０％に見られる）。５０８位におけるフェニルアラニンの欠失によって、ＣＦＴＲは、ヌクレオチド結合ドメイン１（NBD1）と膜貫通ドメインとの間のドメイン間相互作用による安定化不足を特徴とする、異常な折り畳みを示すことになる。異常な折り畳みを示すタンパク質は、小胞体（ER）内の細胞シャペロンにより認識され、プロテアソームに誘導され、細胞表面の活性部位に達する前に急速に分解される。異常な折り畳みを示すタンパク質の認識及び分解を担う細胞機構は、１００％効率的ではないため、特定の個人は、低いレベルのＦ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲの表面発現を示し、これは、Ｆ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲに対しホモ接合性の個人において観察される部分的ＣＦＴＲ活性（及びより穏やかなCF表現型）を説明し得、また、タンパク質修復により適した集団を示し得る。細胞表面であっても、Ｆ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲは、低減された通門を示し、これは、異常な折り畳みを示すＣＦＴＲがまた、低減されたＣＦＴＲイオンチャネル活性を示すことを示唆している。クラスＩＩＩ及びＩＶのＣＦＴＲ突然変異は、細胞表面に到達する全長ＣＦＴＲを特徴とするが、異常なチャネルゲーティングによる低減されたイオン輸送活性（クラスＩＩＩ、例えばG551D）又はイオンチャネルポアの低減された伝導性（クラスＩＶ、例えばR117H）を示す。同様に、スプライシング突然変異（クラスＶ）及びＣ−末端内の突然変異（クラスＶＩ）もまた全長であるが、原形質膜内の活性チャネルの低減された数により、低減された活性を示す。ＣＦＴＲ突然変異の分子基盤は複雑で今のところ不完全であるが、ＣＦＴＲ突然変異の分類は、開発中の薬剤の活性に基づいて、治療上関連のあるグループに単純化され得る。従来の、及びハイスループットの創薬プログラムの両方が、特定の突然変異ＣＦＴＲ対立遺伝子に対応する新規な化合物の発見をもたらした。これらの「ＣＦＴＲ調節剤」は、ＣＦＴＲタンパク質を修復することを意図した薬理学的薬剤であり、以降の各項において説明される。
【０２９１】
原形質膜に存在する機能不全ＣＦＴＲをもたらす細胞表面嚢胞性線維症膜コンダクタンス調整因子ＣＦＴＲ突然変異クラスの増強因子は、クラスＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、及びＶＩ突然変異を含み、ＣＦＴＲ活性剤の潜在的な標的を代表する。Ｇ５５１Ｄ  ＣＦＴＲは、正常な表面発現及び半減期を示すため、このカテゴリーの薬剤の原型ＣＦＴＲ対立遺伝子を示すが、ヌクレオチド結合ドメイン内のアデノシン三リン酸（ATP）結合ポケットにおけるアミノ酸置換により、チャネルゲーティングに重度の欠陥をもたらす（Gregory, R.J.ら（1991）Maturation and function of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator variants bearing mutations in putative nucleotide-binding domains 1 and 2. MCB 11: 3886-93; Bompadre, S.G.ら（2007） G551D and G1349D, two CF-associated mutations in the signature sequences of CFTR, exhibit distinct gating defects. Gen Physiol. 129: 285-298）。フラボノイドは、突然変異ＣＦＴＲの周知の活性剤であり、ヒト個人における有益な効果（局所投与を含む）に関して研究されるべき最初のものであった。ゲニステイン等の薬剤は、鼻気道における効能の欠如により影響を受けたが、より最近の研究では、鼻におけるフラボノイドケルセチンの活性が実証された。しかしながら、フラボノイド薬剤は、低い溶解度及び全身性吸収の問題があり、吸入治療薬としては低い開発候補である。より最近の発見戦略は、ＣＦＴＲ活性を「増強」し、潜在的に有害となり得る過度の構成的活性化（例えば、ある特定の下痢症において見られる過度のCFTR活性化）なしに内因性調整（例えば、環状アデノシン一リン酸（cAMP）依存的調整）及びイオン輸送を回復する化合物の特定に焦点を置いている。この種の薬剤の特定は、細胞ベーススクリーニングアッセイにおけるアニオンコンダクタンスに対する影響を測定することにより突然変異ＣＦＴＲを活性化する薬剤を発見するための、ハイスループットのスクリーニングに基づく戦略に適している。塩化物感受性染料、膜電位の蛍光共鳴エネルギー移動に基づく分析、及び気道単分子層の細胞コンダクタンスを含むいくつかの特定の戦略が、この種のスクリーニングに使用されている。突然変異ＣＦＴＲの小分子増強因子の特定及び特性決定は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び臨床において顕著な活性を有する薬剤の開発につながった。
【０２９２】
Ｆ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲの折り畳みを補正し、したがって異常な折り畳みを示すタンパク質へのイオンチャネル活性を回復するという目標に向けて、膨大な研究がなされてきた。ＣＦＴＲ生合成と相互作用することが現在知られている多数のタンパク質に対応して、多種多様な細胞標的が調査されてきた。４−フェニルブチレート等の薬剤は、折り畳みプロセスの中心となるＨｓｃ７０（又は他の細胞シャペロン）を下方制御し、臨床的に試験された化合物の初期の例を代表する。他のより最近の研究は、試験化合物のＦ５０８ｄｅｌ発現細胞とのインキュベーション後の塩化物チャネル機能のハイスループットライブラリスクリーニングから得られた。いくつかのこれらの戦略は、シャペロン経路を介した細胞生合成に対応し得るＦ５０８ｄｅｌ補正因子を特定した。そのような薬剤の薬理活性もまた、細胞処理機構の特徴に起因する改変された表面再循環、又は低減されたエンドサイトーシス輸送により、原形質膜におけるＦ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲ半減期を増強することが報告されている。このクラスの薬剤は、そのｉｎ  ｖｉｖｏでの安全性が確認されれば、潜在的な薬物開発候補となり得る。他の化合物は、ＣＦＴＲと直接相互作用し、細胞の折り畳み又は細胞品質管理の一般的態様を改変する薬剤よりも大きな特異性を提供し得る。異常な折り畳みを示すタンパク質に対する包括的な細胞反応もまた標的を示し得る。ヒストン脱アセチル化酵素（HDAC）は、遺伝子発現に対して広範囲にわたる効果を有し、ＨＤＡＣファミリーの特定のメンバーが、Ｆ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲの分解を促進するＥＲ関連分解経路に関与する。ＣＦ細胞のＨＤＡＣ阻害剤による処置は、ＥＲストレスを調節することができ、スベロイルアニリドヒドロキサム酸等のＨＤＡＣ、及びＨＤＡＣのｓｉＲＮＡサイレンシングは、細胞膜におけるＦ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲのレベルを増加させる。これらのようなアプローチの組合せは、Ｆ５０８ｄｅｌ補正のためのいくつかの潜在的な薬理作用剤を明らかにする。２つ以上のそのような戦略を使用した、相加的又は相乗的なＦ５０８ｄｅｌ  ＣＦＴＲの救済は、ＣＦ呼吸器上皮に正常な表現型をもたらすのに十分なイオン輸送活性を達成する期待を提供し得る。
【０２９３】
中途終止コドン（PTC）のリードスルーは、ＣＦ、及びＰＴＣにより引き起こされる多くの他の遺伝子疾患の根本的原因に対応する別の興味深いアプローチを示す。ある特定のアミノグリコシド及び他の薬剤は、リボソームサブユニット内の真核性ｒＲＮＡと相互作用する能力を有する。この相互作用は、原核生物において見られるものよりはるかに弱く、ヒト個人におけるアミノグリコシド毒性の主原因とは異なるが、リボソームの通常の校正機能に干渉することにより、真核性翻訳の忠実度を多少低減し得る。中途停止コドンでのほぼ同種のアミノ酸の挿入により、タンパク質翻訳は、ｍＲＮＡ転写の末端に通常存在するいくつかの停止コドンの１つに達し、適切に利用されるまで継続し得る。戦略の特異性は、ｍＲＮＡの真の末端におけるより高い停止コドン忠実度に起因し、天然停止コドンを超える検出可能な伸長を示さないことにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで確立されている。
【０２９４】
本発明において説明される方法及び分子と組み合わせて投与され得るＣＦＴＲ活性調節化合物は、これらに限定されないが、米国特許出願公開第２００９／０２４６１３７Ａ１号、米国特許出願公開第２００９／０２５３７３６Ａ１号、米国特許出願公開第２０１０／０２２７８８８Ａ１号、米国特許第７６４５７８９号、米国特許出願公開第２００９／０２４６８２０Ａ１号、米国特許出願公開第２００９／０２２１５９７Ａ１号、米国特許出願公開第２０１０／０１８４７３９Ａ１号、米国特許出願公開第２０１０／０１３０５４７Ａ１号、米国特許出願公開第２０１０／０１６８０９４Ａ１号、米国特許第７５５３８５５号、米国特許第７，７７２，２５９Ｂ２号、米国特許第７，４０５，２３３Ｂ２号、米国特許出願公開第２００９／０２０３７５２号、及び米国特許第７，４９９，５７０号に記載されている化合物を含む。
【０２９５】
粘液溶解剤と抗感染症薬剤との組合せ
慢性閉塞性肺疾患は、急性及び慢性細菌感染症の両方を伴う。急性及び慢性感染症は両方とも、肺増悪の形態の急性再発を有する慢性炎症につながる。根本的な炎症は、様々な吸入抗炎症薬剤により処置される。例えば、嚢胞性線維症において、慢性感染症を引き起こす最も一般的な細菌は、緑膿菌（P.aeruginosa）であり、この細菌に対して効果的である抗生物質は、処置の主要な構成要素である（Flume、Am J Respir Crit Care Med. 176（10）: 957-69 （2007））。また、黄色ブドウ球菌（S.aureus）、セパシア菌（B.cepacia）及び他のグラム陰性菌、ならびに嫌気性生物は、呼吸器分泌物から単離され、ＣＦに罹患した人々は、その肺の健康を維持するためのこれらの病原体の処置により利益を受けることができる。嫌気性細菌はまた、ＣＦ気道、慢性副鼻腔炎に罹患した対象の副鼻腔、及びおそらくはＣＯＰＤに罹患した対象の気道の特徴として認識される。同様に、特に高齢者集団及び睡眠中における呼吸又はマイクロアスピレーションは、化学肺臓炎、嫌気性感染症及びその後の気管支拡張症に関連する。呼吸関連肺臓炎及び嫌気性感染症の理想的な処置は、即時的処置である。したがって、肺増悪の間、及び長期抑制療法として、初期の感染症を根絶するために抗生物質が使用される。
【０２９６】
抗生物質活性の主な目安は、最小阻止濃度（MIC）である。ＭＩＣは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで微生物の増殖を完全に阻止する抗生物質の最低濃度である。ＭＩＣは、抗生物質の有効性の良好な指標であるが、抗菌活性の経時変化に関しては何も示さない。ＰＫパラメータは、抗生物質の肺組織レベル経時変化を定量化する。抗生物質の効能を評価するために最も重要である３つの薬物動態パラメータは、ピーク組織レベル（Cmax）、トラフレベル（Cmin）、及び組織濃度時間曲線下面積（AUC）である。これらのパラメータは組織レベル経時変化を定量化するが、抗生物質の殺活性を説明しない。
【０２９７】
ＰＫパラメータをＭＩＣと統合すると、抗生物質の活性を定量化する、ピーク／ＭＩＣ比、Ｔ＞ＭＩＣ、及び２４時間ＡＵＣ／ＭＩＣ比の３つのＰＫ／ＰＤパラメータが得られる。ピーク／ＭＩＣ比は、単に、ＣｐｍａｘをＭＩＣで除したものである。Ｔ＞ＭＩＣ（MICより上の時間）は、血清レベルがＭＩＣを超える投薬間隔のパーセンテージである。２４時間ＡＵＣ／ＭＩＣ比は、２４時間ＡＵＣをＭＩＣで除すことにより決定される。殺活性を最も良く説明する抗生物質の３つの薬力学的特性は、時間依存性、濃度依存性及び持続的効果である。死滅率は、死滅させるのに必要な時間の長さ（時間依存的）、又は濃度を増加させる効果（濃度依存的）のいずれかにより決定される。持続的効果は、後抗生物質効果（PAE）を含む。ＰＡＥは、抗生物質曝露後の細菌増殖の持続的抑制である。
【０２９８】
これらのパラメータを使用して、抗生物質は、以下の３つのカテゴリーに分けることができる。
【０２９９】
【表１】
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【０３００】
Ｉ型抗生物質（AG、フルオロキノリン、ダプトマイシン及びケトライド）の場合、理想的な投薬計画は濃度を最大化するが、これは濃度が高いほど死滅の程度がより広範囲でより速いためである。したがって、２４時間ＡＵＣ／ＭＩＣ比、及びピーク／ＭＩＣ比は、抗生物質の効能の重要な予測因子である。アミノグリコシドの場合、抵抗を防止するために、少なくとも８〜１０のピーク／ＭＩＣ比を有することが最も良い。フルオロキノロン対グラム陰性細菌の場合、最適な２４時間ＡＵＣ／ＭＩＣ比は約１２５である。対グラム陽性では、４０が最適と思われる。しかしながら、ＦＱに対する理想的な２４時間ＡＵＣ／ＭＩＣ比は、文献上では広く変動する。
【０３０１】
ＩＩ型抗生物質（β−ラクタム、クリンダマイシン、エリスロマイシン、カルバペネム及びリネゾリド）は、正反対の特性を示す。これらの抗生物質に対する理想的な投薬計画は、曝露期間を最大化する。Ｔ＞ＭＩＣは、効能と最も良く相関するパラメータである。β−ラクタム及びエリスロマイシンの場合、ＭＩＣより上の時間が投薬間隔の少なくとも７０％である場合に、最大死滅が見られる。
【０３０２】
ＩＩＩ型抗生物質（バンコマイシン、テトラサイクリン、アジスロマイシン及びダルホプリスチン−キヌプリスチンの組合せ）は、複合した特性を有し、時間依存的死滅及び中程度の持続的効果を有する。これらの抗生物質に対する理想的な投薬計画は、受容される薬物量を最大化する。したがって、２４時間ＡＵＣ／ＭＩＣ比は、効能と相関するパラメータである。バンコマイシンの場合、少なくとも１２５の２４時間ＡＵＣ／ＭＩＣ比が必要である。
【０３０３】
メロペネムに感受性がある細菌により引き起こされる呼吸器感染に罹患した、ＣＦ、ＣＯＰＤ、非ＣＦ気管支拡張症、誤嚥性肺炎、喘息及びＶＡＰ患者を含むがこれらに限定されない患者は、そのような処置から利益を得ることができる。カルバペナム抗生物質の例は、イミペナム、パニペナム、メロペナム、ドリペネム、ビアペナム、ＭＫ−８２６、ＤＡ−１１３１、ＥＲ−３５７８６、レナペナム、Ｓ−４６６１、ＣＳ−８３４（R-95867のプロドラッグ）、ＫＲ−２１０５６（KR-21012のプロドラッグ）、Ｌ−０８４（LJC11036のプロドラッグ）及びＣＸＡ−１０１である。説明された全ての抗感染症薬剤の治療上の効能は、本発明の化合物の事前又は同時投与及び本発明の方法により向上し得る。
【０３０４】
粘液溶解剤と例示的抗炎症薬剤との組合せ：
吸入コルチコステロイドは、気流制限につながる急性及び慢性炎症を特徴とする、喘息、ＣＯＰＤ及び他の呼吸器疾患に対する標準的な長期的ケアである。本発明において説明される方法及び分子と組み合わせた投与に好適な抗炎症薬剤の例は、ベクロメタゾン、ブデソニド及びフルチカゾン、ならびに、非ステロイド系抗炎症薬（NSAID）として知られる、ステロイドを含有しない抗炎症医薬の群を含む。
【０３０５】
アラキドン酸代謝産物、具体的にはロイコトリエン（LT）は、肺炎症に寄与する。システイニルロイコトリエン（LTC4、LTD4、及びLTE4）は、好酸球、肥満細胞、及びマクロファージにより主に産生される。本発明の方法による投与に好適なロイコトリエン改質剤の例は、モンテルカスト（monteleukast）、ジレウトン及びザフィルルカストを含む。
【０３０６】
肥満細胞安定剤は、ある特定のアレルギー性疾患を防止又は制御するために使用される、クロモリン（クロモグリク酸ナトリウム）等のクロモン医薬である。それらは、肥満細胞脱顆粒に不可欠なカルシウムチャネルを遮断し、細胞を安定化して、それによりヒスタミン及び関連メディエータの放出を防止する。それらは、喘息を処置するための吸入器として、花粉症（アレルギー性鼻炎）を処置するための鼻腔用スプレーとして、及びアレルギー性結膜炎用の点眼薬として使用される。最後に、それらは、肥満細胞症の稀な状態を処置するために経口形態で使用される。
【０３０７】
ＰＤＥ４阻害剤は、肺炎症を調節することが示されており、慢性閉塞性肺疾患の処置に使用されている。本発明において説明される方法及び分子と組み合わせた使用に好適なＰＤＥ４阻害剤の例は、これらに限定されないが、テオフィリン及びロフルミラストを含む。
【０３０８】
粘液溶解剤と例示的気管支拡張剤との組合せ：
酸化窒素（ＮＯ）供与体：ＮＯ、ＮＯ供与体、ＮＯ及びペルオキシ亜硝酸スカベンジャーならびに誘導性ＮＯシンターゼ活性調節剤。酸化窒素は、吸入により外部から投与され得る強力な内因性血管拡張剤及び気管支拡張剤である。これは、内皮細胞カルシウム依存性酵素酸化窒素シンセターゼによるＬ−アルギニンの末端グアニジン窒素原子の変換によって合成され、次いで細胞膜を介して拡散して、酵素グアニル酸シクラーゼを活性化する。この酵素は、環状グアノシン一リン酸（cGMP）の合成を向上させ、血管及び気管支平滑筋の弛緩ならびに血管の拡張をもたらす（Palmer、Circ Res.、82（8）: 852-61（1998））。
【０３０９】
血管の内側を被覆する内皮細胞において合成された酸化窒素は、健康な呼吸器及び心臓血管系を維持するために不可欠である広範な機能を有する（Megson ILら、Expert Opin Investig Drugs. 2002年5月; 11（5）: 587-601）。低減された酸化窒素の利用可能性は、多くの疾患の開始及び進行に関与し、疾患の進行の防止を助けるための補助的な酸化窒素の送達は、魅力的な治療選択肢である。酸化窒素供与薬物は、全身性酸化窒素送達の有用な手段を代表し、有機ニトレートは、何年もの間、狭心症の症状軽減のための効果的な治療法として使用されてきた。しかしながら、ニトレートには制限があり、酸化窒素が重要な生物学的メディエータであるという発見以来、いくつかの代替の酸化窒素供与体クラスが出現している。
【０３１０】
呼吸器管において、ＮＯは、常在及び炎症細胞により産生される（Ricciardolo FLら、Curr Drug Targets 2006年6月; 7（6）: 721-35）。ＮＯは、酵素ＮＯシンターゼ（NOS）により触媒されるＬ−アルギニンの酸化により生成される。ＮＯＳは、神経型ＮＯＳ（nNOS）、誘導性ＮＯＳ（iNOS）、及び内皮ＮＯＳ（eNOS）の３つの異なるアイソフォームで存在する。ＮＯＳの構成的アイソフォーム（nNOS及びeNOS）から得られるＮＯならびに他のＮＯ付加物分子（ニトロソチオール）は、気管支運動性緊張を調節することができる。ＮＦ−κＢ依存的経路を介して異なるサイトカインにより上方制御される、ＮＯシンターゼの誘導性アイソフォームから得られたＮＯは、免疫調節効果を有する炎症促進メディエータであると思われる。加齢ＣＦ患者において、ｉＮＯＳの発現は著しく低減される（Yoonら、J Clin Invest. 2006年2月; 116（2）: 436-46）。慢性ＣＦにおけるｉＮＯＳのこの低減された発現は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのムコイドｍｕｃ突然変異下位集団の出現に関連している。１５ｍＭのＮＯ２−が、ｐＨ６．５でＣＦ気道内のｍｕｃＡ  Ｐ．Ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを死滅させることが示唆されている。ＮＯ自体、又は鉄−ニトロシル種の前駆体としてのＮＯは、この抗菌効果に関与している。したがって、これに限定されないが吸入ＮａＮＯ２を含む吸入ＮＯ２−は、ＣＦ療法としての魅力を有する。酸化ストレス条件下でのＮＯの産生は、二次的に、喘息及びＣＯＰＤにおける炎症反応を増幅し得る強力な酸化剤（反応性窒素種）を生成する。さらに、ＮＯは吐き出すことができ、安定なアトピー性喘息において、ならびに喘息及びＣＯＰＤの両方における増悪の間、レベルが異常である。したがって、吐き出されたＮＯは、根本的な炎症プロセスを監視するための非侵襲性のツールとなり得る。ＮＯＳ調整は、喘息及びＣＯＰＤ等の気道の慢性炎症性疾患の防止及び処置における、新規な標的を提供することが示唆される。
【０３１１】
本発明において説明される方法及び分子と組み合わせた投与に好適なＮＯ、ＮＯ供与体及びＮＯシンターゼ活性調節剤の例は、Ｖａｌｌａｎｃｅら、Ｆｕｎｄａｍ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００３年２月；１７（１）：１−１０、Ａｌ−Ｓａ’ｄｏｎｉ  ＨＨら、Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２００５年３月；５（３）：２４７−５４、Ｍｉｌｌｅｒ  ＭＲら、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００７年６月；１５１（３）：３０５−２１．Ｅｐｕｂ  ２００７年４月２日及びＫａｔｓｕｍｉ  Ｈら、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２００７年７月；５（３）：２０４−８において開示されている吸入ＮＯ薬剤を含む。
【０３１２】
ある特定の条件下で、誘導性ＮＯシンターゼ活性はＮＯの過剰産生につながり、これは一方で炎症及び組織損傷を増加させる。これらの条件下では、本発明において説明される方法及び分子と組み合わせて投与される以下の誘導性ＮＯシンターゼ阻害剤、ＮＯスカベンジャー及びペルオキシ亜硝酸スカベンジャーが好適である：Ｂｏｎｎｅｆｏｕｓら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２００９、５２（９）、３０４７−３０６２ページ、Ｍｕｓｃａｒａら、ＡＪＰ−ＧＩ、１９９９年６月、第２７６巻第６号Ｇ１３１３−Ｇ１３１６、又はＨａｎｓｅｌら、ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ．２００３；１７：１２９８−１３００。
【０３１３】
β２−アドレナリン受容体作動薬：治療濃度を超える受容体作動薬の投与は、受容体脱感作及び効能の損失につながることが実証されている。例えば、この現象は、β２−アドレナリン受容体ベースの気管支拡張剤に関して説明されている（Duringerら、Br J Pharmacol.、158（1）: 169-79 （2009））。高濃度のこれらの受容体作動薬剤は、受容体リン酸化、内在化及び潜在的分解につながる。高速ネブライザを介したボーラス投与後に速成耐性を引き起こす受容体作動薬の、鼻腔カニューレを介した患者への８〜２４時間又は一晩にわたる吸入による投与は、速成耐性の程度を減少させることからそのような薬剤の効能を改善する。β２−アドレナリン受容体作動薬は、アルブテロール、レブアルブテロール、サルブタモール、プロカテロール、テルブタリン、ピルブテロール、及びメタプロテレノールを含む。β２−アドレナリン受容体作動薬の治療上の効能は、本発明の化合物の事前又は同時投与及び本発明の方法により向上し得る。
【０３１４】
粘液溶解剤と例示的遺伝子担体との組合せ：
遺伝子治療を施すための遺伝子担体の例は、ウイルス、ＤＮＡ：タンパク質複合体、プラスミド、ＤＮＡ、及びＲＮＡを含む。
【０３１５】
粘液溶解剤と他の例示的治療薬剤との組合せ：
本発明において説明される方法及び分子と組み合わせた投与に好適な治療薬剤の他のクラスの例は、リバビリン等の抗ウイルス剤、アンホテリシン、イトラコナゾール（intraconazol）及びボリコナゾール等の抗真菌剤、免疫抑制剤、シクロスポリン、タクロリムス及びシロリムス等の拒絶反応抑制剤、イプラトロピウム、チオトロピウム、アクリジニウム及びその他等の抗コリン剤を含むがこれに限定されない気管支拡張薬、ＰＤＥ５阻害剤ｓｉＲＮＡ、遺伝子療法ベクター、アプタマー、エンドセリン受容体拮抗薬、α１−抗トリプシン、プロスタサイクリン、ワクチン、ＰＤＥ−４及びＰＤＥ−５阻害剤、ならびにベクロメタゾン（beclamethasone）、ブデソニド、シクレソニド、フルニソリド、フルチカゾン、モメタゾン（memetasone）及びトリアムシノロン等のステロイドを含む。
【０３１６】
実験手順及び生物学的アッセイ：
材料及び方法
全ての市販の材料は、別段に指定されない限り、供給された状態で使用した。全ての溶媒は、試薬グレード又はＨＰＬＣグレードであった。無水ＴＨＦ、ＭｅＯＨ、ＣＨ２Ｃｌ２は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、それ以上乾燥させずに使用した。全ての反応は、事前に精製された乾燥Ａｒ（ガス）の雰囲気下で行った。別段に指定されない限り、ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ−４００機器で記録し、溶媒ＣＤＣｌ３、ＣＤ３ＯＤ及びＤＭＳＯ−ｄ６は、Ａｌｄｒｉｃｈ又はＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。多重度を説明するために、以下の略語を使用した：ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項、及びｂｒ＝ブロード。化学シフトは、内部標準としてのテトラメチルシラン（TMS）と比較してｐｐｍで報告される。マイクロ波反応は、Ｂｉｏｔａｇｅマイクロ波反応器で行った。全ての反応は、別段に指定されない限り、オーブン乾燥されたガラス器具内で、アルゴン雰囲気下で行った。反応は、可視化剤としてＵＶ光を、また現像剤としてニンヒドリン溶液及び熱を使用して、０．２５ｍｍ  Ｅ．Ｍｅｒｃｋシリカゲルプレート（60F-254）上で行われるＴＬＣにより監視した。極性化合物に対しては、反応は、ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳ分析により監視する。Ｅ．Ｍｅｒｃｋシリカゲル（６０、粒子サイズ０．０４０〜０．０６３ｍｍ）を、フラッシュカラムクロマトグラフィーに使用した。
【０３１７】
ＬＣＭＳ及びＨＰＬＣ法：
ＬＣＭＳ分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣＭＳ−ＬＣ−２０ＡＤで、（別段に指定されない限り）２５４ｎｍで検出されるＳｕｎｆｉｒｅ  Ｃ１８、２．１×５０ｍｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｏｌｕｍｎを使用して得られた。以下の時間プログラムを、毎分０．４０ｍＬの流速で使用した。
【０３１８】
ＨＰＬＣ分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＨＰＬＣシステムで、（別段に指定されない限り）２２０ｎｍで検出されるＸＴｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８  Ｃｏｌｕｍｎ  ５μ  ４．６×１５０ｍｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｏｌｕｍｎを使用して得られた。
【０３１９】
１．  Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルフラン−２−カルボチオエート塩酸塩（９）の調製
【０３２０】
【化６５】
2018505163.tif 000072
【０３２１】
メチル３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンゾエート（３）の調製。ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の化合物１（１０．５ｇ、６９．０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１９．０ｇ、１３８ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間撹拌した。上記反応混合物に、化合物２（２４．１ｇ、１０４ｍｍｏｌ）を投入し、反応混合物を室温で４８時間撹拌した。反応混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物３（１８．０ｇ、８９％）が白色の粘性物質として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．６２（ｄｔ，Ｊ＝８．０，１．３Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６〜７．５２（ｍ，１Ｈ）、７．３４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．１０〜７．０６（ｍ，１Ｈ）、５．０４（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．０６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．９０（ｓ，３Ｈ）、３．５８〜３．５０（ｍ，２Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２２】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（３−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）エチル）カルバメート（４）の調製。ＴＨＦ（５００ｍＬ）中の化合物３（１８．０ｇ、６１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化アルミニウムリチウム（３．５０ｇ、９１．５ｍｍｏｌ）を、０℃で１５分間にわたり少量ずつ添加しながら投入した。得られた反応混合物を０℃で１時間撹拌し、氷冷水で０℃でクエンチした。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過し、セライトパッドをＥｔＯＡｃ（２×３００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物４（１４．０ｇ、８６％）が粘性固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ  ７．２６（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６〜６．９０（ｍ，２Ｈ）、６．８０（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．１０（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．６５（ｓ，２Ｈ）、４．０１（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．５５〜３．４５（ｍ，２Ｈ）、１．９７（ｂｒｓ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２３】
Ｓ−３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンジルエタンチオエート（５）の調製。ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中の４（１４．０ｇ、５２．４ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２１．５ｍＬ、１５７ｍｍｏｌ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（６．００ｍＬ、７８．６ｍｍｏｌ）を０℃で投入し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮すると、メシル化生成物（２０．０ｇ、粗生成物）が黄色い油として得られ、これをそれ以上精製することなく次のステップに直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２４】
ＤＭＦ（５０ｍＬ）及びＴＨＦ（２５０ｍｌ）中の粗メシレート（２０．０ｇ）に、ＫＳＡｃ（９．００ｇ、７８．８ｍｍｏｌ）を投入し、室温で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物５（２２．０ｇ、２工程にわたり６２％）が黄色い固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ  ７．１９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．８７（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．８３〜６．８０（ｍ，１Ｈ）、６．７６（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．９９（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．０８（ｓ，２Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．５６〜３．４４（ｍ，２Ｈ）、２．３４（ｓ，３Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２５】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（３−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）カルバメート（６）の調製
ＴＨＦ（２０ｍＬ）、メタノール（２０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）の混合物中の５（４．００ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１．０６ｇ、２５．４ｍｍｏｌ）を投入し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。上記反応混合物に、ＴＣＥＰ・ＨＣｌ（１．８１ｇ、６．３４ｍｍｏｌ）を投入し、さらに１時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解し、溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４０ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濾過し、濃縮すると、粗チオール６（３．４０ｇ、９５％、黄色い液体）が得られ、これをそれ以上精製することなく次のステップに直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ  ７．２２（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．９１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８８〜６．８５（ｍ，１Ｈ）、６．７６（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．９８（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．０１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ）、３．７０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．５６〜３．４８（ｍ，２Ｈ）、１．７６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）；
ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２６】
Ｓ−３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンジルフラン−２−カルボチオエート（７）の調製。ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中の化合物６（３．４０ｇ、１２０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５．０５ｍＬ、３６．０ｍｍｏｌ）の溶液に、２−フロイルクロリド（１．７８ｍＬ、１８．０ｍｍｏｌ）を０℃で滴下により添加し、室温で１時間撹拌した。反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濾過し、濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物７（４．４０ｇ、９７％）が無色の液体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ  ７．５８〜７．５４（ｍ，１Ｈ）、７．２４〜７．１７（ｍ，２Ｈ）、６．９５（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２〜６．８８（ｍ，１Ｈ）、６．７７（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．５２（ｄｄ，Ｊ＝３．５，１．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．９９（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．２５（ｓ，２Ｈ）、４．００（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５６〜３．３７（ｍ，２Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３７８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２７】
Ｓ−３−（２−アミノエトキシ）ベンジルフラン−２−カルボチオエート塩酸塩（８）の調製。化合物７（４．４０ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（５０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を１時間撹拌した。濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃと研和し、濾過により単離すると、塩酸塩８（３．４０ｇ、９３％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．７７〜７．７４（ｍ，１Ｈ）、７．２６（ｄｄ，Ｊ＝３．９，１．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．０４〜７．０２（ｍ，１Ｈ）、７．００（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．８９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，２．７，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．６４（ｄｄ，Ｊ＝３．７，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．２７（ｓ，２Ｈ）、４．２１（ｄｄ，Ｊ＝４．８，２．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．３４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．２Ｈｚ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２７８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３２８】
Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルフラン−２−カルボチオエート塩酸塩｛（９）｝の調製
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン８（１．００ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−グルコース（２．３０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７６ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８００ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を投入し、得られた反応混合物を５０℃に加熱し、５０℃で４時間撹拌した。追加のＤ−グルコース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を５０℃でさらに１時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を、Ｃ１８  Ｇｏｌｄカラムを使用した逆相クロマトグラフィーにより精製した。４Ｎ  ＨＣｌ水溶液を使用して生成物分画のｐＨをｐＨ＝３に調節し、次いで合わせて、凍結乾燥により溶媒を除去すると、ＨＣｌ塩９（１．２０ｇ、５９％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．７６〜７．７４（ｍ，１Ｈ）、７．２７（ｄｄ，Ｊ＝３．４，１．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．０１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．５，２．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．６４（ｄｄ，Ｊ＝３．８，１．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．４４〜４．３８（ｍ，２Ｈ）、４．２７（ｓ，２Ｈ）、４．２６〜４．１８（ｍ，２Ｈ）、３．９７〜３．５０（ｍ，１６Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．８５〜８．６８（ｍ，１Ｈ）、８．０３（ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ）、７．２６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．００（ｄ，Ｊ＝８．０，１．５Ｈｚ，２Ｈ）、６．９１（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．７６（ｄｄ，Ｊ＝３．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、５．２１〜４．５０（ｍ，１１Ｈ）、４．４４〜４．３１（ｍ，２Ｈ）、４．２８（ｓ，２Ｈ）、４．２３〜４．１６（ｍ，１Ｈ）、４．１３〜３．９９（ｍ，２Ｈ）、３．８４〜３．２２（ｍ，１６Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ６０６［Ｃ２６Ｈ３９ＮＯ１３Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３２９】
２．  化合物Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルフラン−２−カルボチオエート塩酸塩（１０）の調製
【０３３０】
【化６６】
2018505163.tif 000073
【０３３１】
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン８（１．００ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−マンノース（２．３０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７６ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８００ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を投入し、得られた混合物を５０℃で４時間加熱及び撹拌した。追加のＤ−マンノース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を５０℃でさらに１時間加熱した。その時点で、追加のＤ−マンノース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、水（２０ｍＬ）を添加し、減圧下で溶媒を除去した後に、追加の水を添加（２０ｍＬ）すると、固体沈殿物が溶液から沈降し、これをろ紙で濾過して水／メタノールで洗浄すると、１０の遊離塩基が得られた。次いで、遊離塩基を水中の４Ｎ  ＨＣｌで酸性化してＨＣＬ塩を形成し、凍結乾燥すると、１０（１．３８ｇ、６７）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．７７〜７．７４（ｍ，１Ｈ）、７．２７（ｄｄ，Ｊ＝３．８，０．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．０６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．９４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．６４（ｄｄ，Ｊ＝３．９，１．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．４６〜４．３６（ｍ，２Ｈ）、４．２７（ｓ，２Ｈ）、４．１９〜４．０８（ｍ，２Ｈ）、３．９４〜３．５９（ｍ，１４Ｈ）、３．５５〜３．４３（ｍ，２Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．８７〜８．６８（ｍ，１Ｈ）、８．０５〜８．０１（ｍ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．２６（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０５〜７．００（ｍ，１Ｈ）、６．９９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６〜６．８９（ｍ，１Ｈ）、６．７５（ｄｄ，Ｊ＝３．７，１．９  Ｈ，１Ｈ）、５．４０〜４．５２（ｍ，８Ｈ）、４．４６〜４．３３（ｍ，２Ｈ）、４．２８（ｓ，２Ｈ）、４．２２〜３．８２（ｍ，５Ｈ）、３．９７〜３．１６（ｍ，１５Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ６０６［Ｃ２６Ｈ３９ＮＯ１３Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３３２】
３．  Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−エンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（１４）の調製
【０３３３】
【化６７】
2018505163.tif 000074
【０３３４】
Ｓ−３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート（１２）の調製
ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の化合物６（２．６０ｇ、９．１８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３．７５ｍＬ、２７．５ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化イソブチリル（１１、１．４５ｍＬ、１３．８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下により添加し、室温で１時間撹拌した。反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濾過し、濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物１２（３．００ｇ、９３％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ  ７．１９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）、６．８８（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．８２（ｔ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．７６（ｄｄ，Ｊ＝８．２，２．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．９８（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．０６（ｓ，２Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ）、３．５５〜３．４５（ｍ，２Ｈ）、２．２６（ｓｅｐ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．２０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３３５】
Ｓ−３−（２−アミノエトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（１３）の調製
化合物１２（３．００ｇ、８．４０ｍｍｏｌ）をジオキサン（３０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を１時間撹拌した。濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃと研和すると、塩酸塩１３（２．２５ｇ、９３％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９７〜６．９４（ｍ，１Ｈ）、６．８８（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｄｄ，Ｊ＝７．９，２．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．２１（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．０８（ｓ，２Ｈ）、３．３５（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．７５（ｓｅｐ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、１．１６（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３３６】
Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−エンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（１４）の調製の調製
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン１３（９３５ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−グルコース（２．３０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７６ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８００ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を投入し、得られた反応混合物を５０℃で４時間加熱及び撹拌した。追加のＤ−グルコース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を５０℃で１時間加熱撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を、Ｃ１８  Ｇｏｌｄカラムを使用した逆相クロマトグラフィーにより精製した。４Ｎ  ＨＣｌ水溶液を使用して生成物分画のｐＨをｐＨ＝３に調節し、次いで合わせて、凍結乾燥により溶媒を除去すると、１４（１．５０ｇ、７６％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２３（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．９７（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｔｄ，Ｊ＝７．４，２．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．４４〜４．３６（ｍ，２Ｈ）、４．２９〜４．１８（ｍ，２Ｈ）、４．０８（ｓ，２Ｈ）、３．９３〜３．５０（ｍ，１６Ｈ）、２．７５（ｓｅｐ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．７２（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６〜６．８７（ｍ，３Ｈ）、５．４２〜４．８９（ｍ，１０Ｈ）、４．４２〜４．３１（ｍ，２Ｈ）、４．２４〜４．１４（ｍ，１Ｈ）、４．１２〜４．０３（ｍ，２Ｈ）、４．０８（ｓ，２Ｈ）、３．７８〜３．６４（ｍ，４Ｈ）、３．６２〜３．５５（ｍ，２Ｈ）、３．５５〜３．２７（ｍ，１０Ｈ）、２．７７（ｓｅｐ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、１．１２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５８２［Ｃ２５Ｈ４３ＮＯ１２Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３３７】
４．  Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（１５）の調製
【０３３８】
【化６８】
2018505163.tif 000075
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン１３（９３５ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−マンノース（２．３０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７６ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８００ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を投入し、得られた反応混合物を５０℃で４時間加熱及び撹拌した。追加のＤ−マンノース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を５０℃でさらに１時間加熱した。１時間後、追加のＤ−マンノース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、水を添加し（２０ｍＬ）、減圧下で溶媒を除去し、続いて追加の水（２０ｍＬ）を添加した。沈殿した固体を濾過し、水／メタノールで洗浄すると、遊離塩基１５のホウ素錯体が得られた。次いで、遊離塩基を水中の４Ｎ  ＨＣｌで酸性化して塩を形成し、次いで凍結乾燥すると、１５ａ（１．２５ｇ、６３％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９９〜６．９６（ｍ，１Ｈ）、６．９５〜６．９０（ｍ，２Ｈ）、４．４３〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．２０〜４．０９（ｍ，２Ｈ）、４．０８（ｓ，２Ｈ）、３．９３〜３．６１（ｍ，１４Ｈ）、３．５５〜３．４４（ｍ，２Ｈ）、２．７５（ｓｅｐ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．５２（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．９８〜６．８８（ｍ，３Ｈ）、５．２９〜４．５４（ｍ，１０Ｈ）、４．４２〜４．３３（ｍ，２Ｈ）、４．２４〜３．９１（ｍ，５Ｈ）、４．０８（ｓ，２Ｈ）、３．８１〜３．２１（ｍ，１４Ｈ）、２．７７（ｓｅｐ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、１．１２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５８２［Ｃ２５Ｈ４３ＮＯ１２Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３３９】
５．  Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルエタンチオエート塩酸塩（１７）の調製
【０３４０】
【化６９】
2018505163.tif 000076
【０３４１】
Ｓ−３−（２−アミノエトキシ）ベンジルエタンチオエート塩酸塩（１６）の調製。化合物５（４．００ｇ、粗化合物、１２．７ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（４０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を１時間撹拌した。濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃと研和し、次いで濾過により単離すると、塩酸塩１６（２．６０ｇ、７９％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６〜６．９４（ｍ，１Ｈ）、６．９３（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，２．５，１．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．２０（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、３．３５（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．３２（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３４２】
Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルエタンチオエート塩酸塩（１７）の調製
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン１６（８３５ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−グルコース（２．３０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７６ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８００ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を投入し、得られた反応混合物を５０℃で４時間加熱した。追加のＤ−グルコース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を５０℃で１時間加熱した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を、Ｃ１８  Ｇｏｌｄカラムを使用した逆相クロマトグラフィーにより精製した。水中の４Ｎ  ＨＣｌにより生成物分画のｐＨをｐＨ＝３に調節し、次いで合わせて、凍結乾燥により溶媒を除去すると、１７（１．１０ｇ、５８％）が白色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．９９〜６．９６（ｍ，１Ｈ）、６．９５〜６．８９（ｍ，２Ｈ）、４．４２〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．２８〜４．１８（ｍ，２Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、３．９２〜３．５０（ｍ，１６Ｈ）、２．３２（ｓ，３Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．６６（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６〜６．８７（ｍ，３Ｈ）、５．８９〜５．１６（ｍ，２Ｈ）、４．６３〜４．１５（ｍ，１０Ｈ）、４．１３〜４．０１（ｍ，３Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、３．７８〜３．６６（ｍ，４Ｈ）、３．６３〜３．５５（ｍ，２Ｈ）、３．５４〜３．２６（ｍ，１０Ｈ）、２．３５（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５５４［Ｃ２３Ｈ３９ＮＯ１２Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３４３】
６．  Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルエタンチオエート（１８）の調製
【０３４４】
【化７０】
2018505163.tif 000077
【０３４５】
化合物１８の調製
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン１６（８３５ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−グルコース（２．３０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７６ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８００ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を投入し、得られた混合物を５０℃で４時間加熱した。追加のＤ−グルコース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃で１時間加熱した。第２の等量のＤ−マンノース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、水を添加し、減圧下で溶媒を除去した後に、さらなる水を添加すると、固体が沈殿し、これを水／メタノールで洗浄しながら濾過すると、遊離塩基のホウ素錯体１８が得られた。次いで、遊離塩基錯体を水中の４Ｎ  ＨＣｌで酸性化してＨＣＬ塩を形成し、凍結乾燥すると、１８（ＨＰＬＣにより９０％純粋）がオフホワイトの固体として得られた。固体を、Ｃ１８  Ｇｏｌｄカラムを使用した逆相クロマトグラフィーによりさらに精製すると、１８（４５０ｍｇ、２４％）が白色の固体として得られ、また、ＨＰＬＣにより＜９５％純度の追加の１．００ｇの１８が同様に単離された。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．９９〜６．９７（ｍ，１Ｈ）、６．９５〜６．９０（ｍ，２Ｈ）、４．４２〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．１９〜４．１１（ｍ，２Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、３．９４〜３．６１（ｍ，１４Ｈ）、３．５５〜３．４４（ｍ，２Ｈ）、２．３２（ｓ，３Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．４２（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９３〜６．８６（ｍ，３Ｈ）、５．７１〜５．５７（ｍ，１Ｈ）、５．５４〜５．４２（ｍ，１Ｈ）、４．９２〜４．１５（ｍ，１１Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、４．０５〜３．８７（ｍ，３Ｈ）、３．７７〜３．２１（ｍ，１４Ｈ）、２．３５（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５５４［Ｃ２３Ｈ３９ＮＯ１２Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３４６】
７．  （２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｓ，５’Ｓ）−６，６’−（（２−（３−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン−１，２，３，４，５−ペンタオール）塩酸塩（１９）の調製
【０３４７】
【化７１】
2018505163.tif 000078
水（１５ｍＬ）中の９（３５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６９ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を投入し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。混合物にＴＣＥＰ・ＨＣｌ（１５４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）を投入し、１時間撹拌した。４Ｎ  ＨＣｌ水溶液により反応物のｐＨをｐＨ＝２とし、溶媒を除去した。同様に、３３５ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）の１４及び１５０ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）の１７を、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ、ＴＣＥＰ・ＨＣｌで処理し、４Ｎ  ＨＣｌによる酸性化の後、９からの生成物と合わせ、逆相カラムクロマトグラフィーにより精製し、次いで凍結乾燥すると、５５０ｍｇ（７５％）の純化合物１９が吸湿性の白色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０５〜７．０１（ｍ，１Ｈ）、６．９８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．４０〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．３０〜４．１７（ｍ，２Ｈ）、３．９６〜３．４８（ｍ，１８Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．６７（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０１〜６．９８（ｍ，１Ｈ）、６．９６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、４．７２〜４．１５（ｍ，１０Ｈ）、４．１４〜４．０２（ｍ，２Ｈ）、３．７８〜３．６６（ｍ，７Ｈ）、３．６４〜３．５５（ｍ，２Ｈ）、３．５３〜３．２８（ｍ，１１Ｈ）、２．８８（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５１２［Ｃ２１Ｈ３７ＮＯ１１Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３４８】
８．  （２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）−６，６’−（（２−（３−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン−１，２，３，４，５−ペンタオール）塩酸塩（２０）の調製
【０３４９】
【化７２】
2018505163.tif 000079
水（１５ｍＬ）中の１０（３５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６９ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を投入し、混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物にＴＣＥＰ・ＨＣｌ（３０．０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を投入し、１時間撹拌した。４Ｎ  ＨＣｌ水溶液により上記反応混合物のｐＨをｐＨ＝２とし、溶媒を除去した。同様に、２２０ｍｇ（０．３５ｍｍｏｌ）の１５及び１．００ｇ（１．７０ｍｍｏｌ）の１８を、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ、ＴＣＥＰ・ＨＣｌで処理し、４Ｎ  ＨＣｌによる酸性化の後、１０から得られた生成物と合わせ、逆相カラムクロマトグラフィーにより精製し、凍結乾燥すると、７５０ｍｇ（５３％）の純化合物２０が吸湿性の白色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２３（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．０４（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．４６〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．２２〜４．０９（ｍ，２Ｈ）、３．９６〜３．６１（ｍ，１６Ｈ）、３．５６〜３．４４（ｍ，２Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．５４（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、７．０１（ｔ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．８８（ｄｄ，Ｊ＝７．９，２．５Ｈｚ，１Ｈ）、５．３５〜４．７１（ｍ，１０Ｈ）、４．４７〜４．２８（ｍ，２Ｈ）、４．０９〜３．９３（ｍ，２Ｈ）、３．７８〜３．２３（ｍ，１７Ｈ）、２．８８（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５１２［Ｃ２１Ｈ３７ＮＯ１１Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３５０】
９．  Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルプロパンチオエート塩酸塩（２４）の調製
【０３５１】
【化７３】
2018505163.tif 000080
【０３５２】
Ｓ−３−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンジルプロパンチオエート（２２）の調製。ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中の化合物６（２．７０ｇ、９．５４ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３．９０ｍＬ、２８．６ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化プロピオニル（２１、１．２９ｍＬ、１４．３ｍｍｏｌ）を０℃で滴下により添加し、次いで室温で１時間撹拌した。固体を濾過し、濾液を濃縮した。反応混合物に水（２０ｍＬ）を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物２２（３．００ｇ、２工程にわたり９３％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ  ７．１９（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．８８（ｄｄ，Ｊ＝７．７，１．３Ｈｚ，１Ｈ）、６．８２（ｔ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．７６（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．９８（ｂｒｓ，１Ｈ）、４．０８（ｓ，２Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．５６〜３．４６５（ｍ，２Ｈ）、２．５９（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．１９（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３５３】
Ｓ−３−（２−アミノエトキシ）ベンジルプロパンチオエート塩酸塩（２３）の調製。化合物２２（３．００ｇ、８．８４ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（３０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を１時間撹拌した。濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃと研和し、濾過により単離すると、塩酸塩２３（２．２０ｇ、９１％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．９５（ｔ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ）、６．９２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．８８（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，２．５，０．７Ｈｚ，１Ｈ）、４．２１（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、３．３５（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ）、２．５９（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．４４（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３５４】
Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルプロパンチオエート塩酸塩（２４）の調製
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン２３（８８０ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−グルコース（２．３０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７６ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８００ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を投入し、得られた混合物を５０℃で４時間加熱及び撹拌した。追加のＤ−グルコース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃で１時間加熱した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を、Ｃ１８  Ｇｏｌｄカラムを使用した逆相クロマトグラフィーにより精製した。水中の４Ｎ  ＨＣｌにより生成物分画のｐＨをｐＨ＝３に調節し、次いで合わせて、凍結乾燥により除去すると、２４（１．６７ｇ、８８％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２２（ｔ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．９９〜６．９６（ｍ，１Ｈ）、６．９６〜６．８９（ｍ，２Ｈ）、４．４３〜４．３７（ｍ，２Ｈ）、４．２９〜４．１７（ｍ，２Ｈ）、４．１０（ｓ，２Ｈ）、３．９３〜３．５１（ｍ，１６Ｈ）、２．５９（ｑ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ）、１．１５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，３Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．７４（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．９６〜６．８５（ｍ，３Ｈ）、４．８３（ｂｒｓ，７Ｈ）、４．４４〜４．３１（ｍ，２Ｈ）、４．２４〜４．１４（ｍ，１Ｈ）、４．１３〜４．０７（ｍ，４Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、３．７８〜３．２５（ｍ，１６Ｈ）、２．６１（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．０７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５６８［Ｃ２４Ｈ４１ＮＯ１２Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３５５】
１０．  Ｓ−３−（２−（ビス（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルプロパンチオエート塩酸塩（２５）の調製
【０３５６】
【化７４】
2018505163.tif 000081
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン２３（８８０ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−マンノース（２．３０ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７６ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８００ｍｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を投入し、得られた混合物を５０℃で４時間加熱及び撹拌した。追加のＤ−マンノース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を５０℃で１時間加熱した。追加分のＤ−マンノース（０．５８ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１９ｍＬ、３．２０ｍｍｏｌ）及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２００ｍｇ、３．２０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を５０℃で１時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、水を添加（２０ｍＬ）し、減圧下で溶媒を除去した後に、追加の水（２０ｍＬ）を添加し、得られた固体を濾過し、水／メタノールで洗浄すると、２５の遊離塩基が得られた。次いで、遊離塩基を水中の４Ｎ  ＨＣｌで酸性化してＨＣＬ塩を形成し、凍結乾燥すると、２５（１．３０ｇ、６７％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．００〜６．９６（ｍ，１Ｈ）、６．９６〜６．９０（ｍ，２Ｈ）、４．４４〜４．１１（ｍ，２Ｈ）、４．２２〜４．１１（ｍ，２Ｈ）、４．１０（ｓ，２Ｈ）、３．９４〜３．６１（ｍ，１４Ｈ）、３．５７〜３．４４（ｍ，２Ｈ）、２．５９（ｑ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ）、１．１５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，３Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．７４（ｂｒｓ，１Ｈ）、７．２４（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．９８〜６．８８（ｍ，３Ｈ）、５．０２〜４．４６（ｍ，５Ｈ）、４．４５〜４．３０（ｍ，４Ｈ）、４．２３〜３．８９（ｍ，８Ｈ）、３．８４〜３．１９（ｍ，１６Ｈ）、２．６１（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．０８（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５６８［Ｃ２４Ｈ４１ＮＯ１２Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３５７】
１１．  Ｓ−（（６−（３−アミノプロピル）キノキサリン−２−イル）メチル）エタンチオエート塩酸塩（３５）の調製、及びＳ−（（７−（３−アミノプロピル）キノキサリン−２−イル）メチル）エタンチオエート塩酸塩（３８）の調製
【０３５８】
【化７５】
2018505163.tif 000082
【０３５９】
エチル６−ブロモキノキサリン−２−カルボキシレート（２８）及びエチル７−ブロモキノキサリン−２−カルボキシレート（２９）の調製
１−メチル−２−ピロリジノン（５０ｍＬ）中の４−ブロモ−ｏ−フェニレンジアミン（１０．０ｇ、５４．０５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、窒素下で、ブロモピルビン酸エチル２７（２０．９ｇ、１０８．１ｍｍｏｌ）を室温で滴下により添加した。２０時間後、反応混合物を水（１００ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ）との間で分配した。有機相を分離し、水相を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、濾過し、濾液を濃縮した。粗生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、位置異性体２８及び２９の６０：４０％混合物（６．５０ｇ、４３％）が得られ、これをＨＰＬＣ及びＬＣ−ＭＳ分析により特性決定し、次の工程に直接使用した。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ２８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３６０】
エチル６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）キノキサリン−２−カルボキシレート（３１）及びエチル７−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）キノキサリン−２−カルボキシレート（３２）の調製
無水ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の化合物３０（３．６４ｇ、２３．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、９−ＢＢＮ（ＴＨＦ中０．５Ｍ、１１６ｍＬ、５８．０５ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した後、化合物２８及び２９（６．５０ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（８１４ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）及び２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）を室温で添加した。得られた混合物を１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、真空下で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、続いてキラルＨＰＬＣ（ＯＤ）により溶離液としてヘプタン中１０％エタノールで精製すると、５．１０ｇ、６１％（２．５０ｇの３２及び１．７５ｇの３１）が得られ、これを１Ｈ  ＮＭＲ及びＬＣ−ＭＳ分析により特性決定した。
（３１）１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δ  ９．５０（ｓ，１Ｈ）、８．２２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．９５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．７２〜７．６８（ｍ，１Ｈ）、４．６２〜４．５５（ｍ，３Ｈ）、３．２８〜３．２１（ｍ，２Ｈ）、２．９３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．０２〜１．９１（ｍ，２Ｈ）、１．５０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ３６０（Ｍ＋Ｈ）＋。
（３２）１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δ  ９．４８（ｓ，１Ｈ）、８．０５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．７６〜７．７２（ｍ，１Ｈ）、４．６２〜４．５３（ｍ，３Ｈ）、３．２４〜３．１７（ｍ，２Ｈ）、２．９２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．０５〜１．９１（ｍ，２Ｈ）、１．５０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）。ＥＳＩ−ＬＣＭＳ  ｍ／ｚ  ３６０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０３６１】
ｔｅｒｔ−ブチル（３−（２−（ヒドロキシメチル）キノキサリン−６−イル）プロピル）カルバメート（３３）の調製
ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中の化合物３１（１．７５ｇ、４．８７ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（９２６ｍｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を０℃で投入した。得られた反応混合物を室温で３時間撹拌し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濾過し、真空下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物３３（１．１０ｇ、７１％）が褐色の液体として得られ、これをすぐに次の工程に使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６２】
Ｓ−（（６−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）キノキサリン−２−イル）メチル）エタンチオエート（３４）の調製
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の３３（１．１０ｇ、３．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（０．６ｍＬ、４．１６ｍｍｏｌ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（４９０ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ）を０℃で投入し、次いで室温で２時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮すると、メシル化生成物（１．４０ｇ、粗生成物）が黄色い油として得られ、これをそれ以上精製することなく次のステップに直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３９６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６３】
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の粗メシレート（１．４０ｇ、３．５４ｍｍｏｌ）に、ＫＳＡｃ（１．０２ｇ、８．８５ｍｍｏｌ）を投入し、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物３４（７００ｍｇ、２工程にわたり５４％）が黄色い固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ８．８４（ｓ，１Ｈ）、７．９５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．８６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．６１〜７．５９（ｍ，１Ｈ）、４．５７  ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．４４（ｓ，２Ｈ）、３．２３〜３．１６（ｍ，２Ｈ）、２．８８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．４０（ｓ，３Ｈ）、１．９６〜１．８９（ｍ，２Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３７６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６４】
Ｓ−（（６−（３−アミノプロピル）キノキサリン−２−イル）メチル）エタンチオエート塩酸塩（３５）の調製
化合物３４（５００ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、続いてジオキサン（５ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌを室温で滴下により添加し、次いで溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサンと研和し、次いで濾過により単離すると、塩酸塩３５（３００ｍｇ、８３％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．８７（ｓ，１Ｈ）、８．０１〜７．９１（ｍ，２Ｈ）、７．７６〜７．７３（ｍ，１Ｈ）、４．４６（ｓ，２Ｈ）、３．０３〜２．９６（ｍ，４Ｈ）、２．３８（ｓ，３Ｈ）、２．１４〜２．０７（ｍ，２Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．９１（ｓ，１Ｈ）、７．９９〜７．９１（ｍ，５Ｈ）、７．７７〜７．７１（ｍ，１Ｈ）、４．４７（ｓ，２Ｈ）、２．９５〜２．７７（ｍ，４Ｈ）、２．３９（ｓ，３Ｈ）、２．０５〜１．９２（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２７６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６５】
ｔｅｒｔ−ブチル（３−（３−（ヒドロキシメチル）キノキサリン−６−イル）プロピル）カルバメート（３６）の調製
ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中の化合物３２（１．１５ｇ、３．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（６０８ｍｇ、１６．０ｍｍｏｌ）を０℃で投入した。得られた反応混合物を室温で３時間撹拌し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、真空下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物３６（８００ｍｇ、７９％）が褐色の液体として得られ、これをすぐに次の工程に使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６６】
（７−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）キノキサリン−２−イル）メチルメタンスルホネートの調製
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の３６（８００ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（０．４４ｍＬ、３．０２ｍｍｏｌ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（３５６ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ）を０℃で投入し、次いで室温で２時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮すると、メシル化生成物（６８０ｍｇ、６８％粗生成物）が黄色い油として得られ、これをそれ以上精製することなく次のステップに直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３９６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６７】
Ｓ−（（７−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）キノキサリン−２−イル）メチル）エタンチオエート（３７）の調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の粗生成物３６（６８０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ、粗生成物）に、ＫＳＡｃ（４９０ｍｇ、４．３０ｍｍｏｌ）を投入し、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物３７（４２０ｍｇ、６６％）が黄色い固体として得られた。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３７６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６８】
Ｓ−（（７−（３−アミノプロピル）キノキサリン−２−イル）メチル）エタンチオエート塩酸塩（３８）の調製
化合物３７（１５０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、続いてジオキサン（５ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌを室温で滴下により添加し、溶液を同じ温度で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサンで洗浄し、次いで濾過により単離すると、塩酸塩３８（６６ｍｇ、６１％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．８５（ｓ，１Ｈ）、８．０６〜７．９９（ｍ，１Ｈ）、７．８８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．７４〜７．７１（ｍ，１Ｈ）、４．４７（ｓ，２Ｈ）、３．０３〜２．９６（ｍ，４Ｈ）、２．３８（ｓ，３Ｈ）、２．１５〜２．０７（ｍ，２Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．８９（ｓ，１Ｈ）、８．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．９６〜７．８１（ｍ，４Ｈ）、７．７３〜７．７７（ｍ，１Ｈ）、４．４７（ｓ，２Ｈ）、２．９２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．８５〜２．７８（ｍ，２Ｈ）、２．３８（ｓ，３Ｈ）、２．０４〜１．９３（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２７６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３６９】
１２．  Ｓ−４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）ベンジルエタンチオエート塩酸塩（４５）及び（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｓ，５’Ｓ）−６，６’−（（６−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）ヘキシル）アザンジイル）ビス（ヘキサン−１，２，３，４，５−ペンタオール）塩酸塩（４７）の調製
【０３７０】
【化７６】
2018505163.tif 000083
【０３７１】
エチル４−（（６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキシル）オキシ）ベンゾエート（４１）の調製
ＤＭＦ（８０ｍＬ）中の化合物３９（３．００ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１１．７ｇ、３６．１ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間撹拌した。上記反応混合物に、化合物４０（１０．１ｇ、３６．１ｍｍｏｌ）を投入し、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物４１（４．６５ｇ、７０％）が白色の粘性物質として得られ、これを次のステップに直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３６６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７２】
ｔｅｒｔ−ブチル（６−（４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）ヘキシル）カルバメート（４２）の調製。ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の化合物４１（４．６０ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化アルミニウムリチウム（５１５ｍｇ、１５．１ｍｍｏｌ）を０℃で少しずつ投入した。得られた反応混合物を０℃で１時間撹拌し、氷冷水で０℃でクエンチした。反応混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過し、セライトパッドをＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物４２（３．１０ｇ、７６％）が粘性固体として得られ、これを次のステップに直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７３】
４−（（６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキシル）オキシ）ベンジルメタンスルホネート（４３）の調製
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の４２（３．１０ｇ、９．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１．６６ｍＬ、１１．５ｍｍｏｌ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（１．３５ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を０℃で投入し、次いで室温で２時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮すると、メシル化生成物４３（３．４０ｇ、８９％）が黄色い油として得られ、これをそれ以上精製することなく次のステップに直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ４０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７４】
Ｓ−４−（（６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキシル）オキシ）ベンジルエタンチオエート（４４）の調製
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の上記生成物４３（３．４０ｇ、８．４７ｍｍｏｌ）に、ＫＳＡｃ（２．４１ｇ、２１．１ｍｍｏｌ）を投入し、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を水（１００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物４４（２．８０ｇ、８７％）が黄色い固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．１８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．４９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０７（ｓ，２Ｈ）、３．９１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．１５〜３．０７（ｍ，２Ｈ）、２．３３（ｓ，３Ｈ）、１．７７〜１．７２（ｍ，２Ｈ）、１．５１〜１．３４（ｍ，１５Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３８１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７５】
Ｓ−４−（（６−アミノヘキシル）オキシ）ベンジルエタンチオエート塩酸塩（４５）の調製
化合物４４（２．８０ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）をジオキサン（２０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＥｔＯＡｃと研和し、次いで濾過すると、塩酸塩４５（１．８０ｇ、８７％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．１７（ｄ，Ｊ＝８．８，２Ｈ）、６．８０（ｄ，Ｊ＝８．８，２Ｈ）、４．０５（ｓ，２Ｈ）、３．９６（ｔ，Ｊ＝８．８，６．２，２Ｈ）、２．９２（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ）、２．３０（ｓ，３Ｈ）、１．８３〜１．６３（ｍ，４Ｈ）、１．５９〜１．４３（ｍ，４Ｈ）、１Ｈ  ＮＭＲ  ３００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ７．８８（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、７．１９（ｄ，Ｊ＝８．８，２Ｈ）、６．８４（ｄ，Ｊ＝８．８，２Ｈ）、４．０４（ｓ，２Ｈ）、３．９３（ｔ，Ｊ＝６．４，２Ｈ）、２．７５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、２．３４（ｓ，３Ｈ）、１．７３〜１．５１（ｍ，４Ｈ）、１．４２〜１．３３（ｍ，４Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７６】
Ｓ−４−（（６−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）ヘキシル）オキシ）ベンジルエタンチオエート塩酸塩（４６）の調製
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン４５（５００ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−グルコース（９６０ｍｇ、５．３３ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．３２ｍＬ、５．３３ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（３３５ｍｇ、５．３３ｍｍｏｌ）を投入し、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。追加のＤ−グルコース（６４０ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（０．２１ｍＬ、３．５６ｍｍｏｌ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２２３ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）を投入し、混合物を室温で２４時間撹拌した。さらなるＤ−グルコース（９６０ｍｇ、５．３３ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（０．３２ｍＬ、５．３３ｍｍｏｌ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（３３５ｍｇ、５．３３ｍｍｏｌ）を投入し、混合物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を除去した後、反応混合物をＮａＨＣＯ３溶液で中和し、逆相クロマトグラフィーにより精製すると、純粋な４６（７１０ｍｇ、６６％）が白色固体として得られた。
【０３７７】
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｓ，５’Ｓ）−６，６’−（（６−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）ヘキシル）アザンジイル）ビス（ヘキサン−１，２，３，４，５−ペンタオール）塩酸塩（４７）の調製
水（２０ｍＬ）中の化合物４６（７１０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１９５ｍｇ、４．６６ｍｍｏｌ）を投入し、反応混合物を室温で１時間撹拌し、その後固体ＴＣＥＰ・ＨＣｌ（１６５ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応物を４Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩４７（４２０ｍｇ、６４％）が無色の粘性固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２２（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．８３（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、４．１６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．９８〜３．９６（ｍ，２Ｈ）、３．８３〜３．７２（ｍ，４Ｈ）、３．７１〜３．５９（ｍ，８Ｈ）、３．５１〜３．３６（ｍ，５Ｈ）、１．９０〜１．７２（ｍ，４Ｈ）、１．６４〜１．４３（ｍ，４Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ  ３００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．７４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．２２（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．８４（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、５．４５〜５．４０（ｍ，２Ｈ）、４．７９〜４．４５（ｍ，８Ｈ）、４．００〜３．９１（ｍ，４Ｈ）、３．７０〜３．６４（ｍ，４Ｈ）、３．６２〜３．５６（ｍ，２Ｈ）、３．５１〜３．３８（ｍ，７Ｈ）、３．２６〜３．１４（ｍ，５Ｈ）、２．７３（ｔ，Ｊ＝７．４，１Ｈ）、１．７７〜１．６４（ｍ，４Ｈ）、１．４９〜１．２９（ｍ，４Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５６８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３７８】
１３．  化合物４８及び４９の調製
【０３７９】
【化７７】
2018505163.tif 000084
【０３８０】
化合物４８及び４９の調製
水（５０ｍＬ）中の４５（２００ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１２０ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ）を投入し、室温で１時間撹拌し、続いてＴＣＥＰ・ＨＣｌ（４０６ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応の完了後、これを１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、逆相クロマトグラフィーにより精製すると、化合物４８（８０ｍｇ、４７％）及び４９（５０ｍｇ、２５％）がオフホワイトの固体として得られた。
：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２２（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．８２（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、３．９６（ｔ，Ｊ＝６．２，２Ｈ）、３．６７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、２．９２（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ）、１．８４〜１．６３（ｍ，４Ｈ）、１．５９〜１．４６（ｍ，４Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ  ３００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ７．８５（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、７．２２（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．８５（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、３．９３（ｔ，Ｊ＝６．６，２Ｈ）、３．６７（ｄ，Ｊ＝７．２，２Ｈ）、２．７８〜２．７１（ｍ，３Ｈ）、１．７４〜１．５１（ｍ，４Ｈ）、１．４６〜１．３４（ｍ，４Ｈ）。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
（４９）：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２１（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．８２（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、３．９４（ｔ，Ｊ＝６．４，２Ｈ）、３．６７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．１６（ｔ，Ｊ＝６．６，２Ｈ）、１．９１（ｓ，３Ｈ）、１．７８〜１．７１（ｍ，２Ｈ）、１．５８〜１．３６（ｍ，６Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ  ３００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ７．７５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．２１（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．８４（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、３．９２（ｄ，Ｊ＝６．６，２Ｈ）、３．６７（ｄ，Ｊ＝７．６，２Ｈ）、３．０４〜２．９７（ｍ，３Ｈ）、２．７２（ｔ，Ｊ＝７．２，１Ｈ）、１．７７（ｓ，３Ｈ）、１．７１〜１．６６（ｍ，２Ｈ）、１．４１〜１．３４（ｍ，６Ｈ）。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８１】
１４．  Ｓ−４−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（５６）、Ｓ−４−（２−（ビス（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（５９）、及び（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）−６，６’−（（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン−１，２，３，４，５−ペンタオール）塩酸塩（５８）の調製
【０３８２】
【化７８】
2018505163.tif 000085
【０３８３】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）カルバメート（５１）の調製
ＴＨＦ（３０ｍＬ）、メタノール（３０ｍＬ）及び水（３０ｍＬ）の混合物中の５０（４．００ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１．５５ｇ、３６．９ｍｍｏｌ）を投入し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物にＴＣＥＰ・ＨＣｌ（７．０６ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）を投入し、１時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に溶解し、溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濾過し、濃縮すると、粗生成物の５１（３．００ｇ、黄色い液体）が得られ、これをそれ以上精製することなく次のステップに直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８４】
Ｓ−４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート（５４）の調製
ＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）中の化合物５１（３．００ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１．７８ｍＬ、１２．７２ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化イソブチリル（１．３４ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を０℃で滴下により添加し、室温で１時間撹拌した。反応混合物に水（１００ｍＬ）を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮すると、５４（２．６０ｇ、２工程にわたり６０％）が無色の液体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．２０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、６．８０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．９６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０５（ｓ，２Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５３〜３．４７（ｍ，２Ｈ）、２．７７〜２．６９（ｍ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）、１．２０（ｓ，３Ｈ）、１．１８（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８５】
Ｓ−４−（２−アミノエトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（５５）の調製
化合物５４（２．６０ｇ、７．３６ｍｍｏｌ）をジオキサン（２６ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を２時間撹拌した。濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃと研和し、次いで濾過により単離すると、塩酸塩５５（１．５０ｇ、８１％）がオフホワイトの固体として得られた。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８６】
Ｓ−４−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（５６）の調製
メタノール（７５ｍＬ）中のアミン５５（１．７０ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−グルコース（２．４１ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．８２ｍＬ、１３．４ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（８４６ｍｇ、１３．４ｍｍｏｌ）を投入し、得られた混合物を室温で２時間５５℃で撹拌した。追加のＤ−グルコース（０．８５ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（０．４１ｍＬ、３，３６ｍｍｏｌ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（４２３ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）を投入し、混合物を５５℃で２時間撹拌した。さらに、追加のＤ−グルコース（０．８５ｇ、３．３６ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（０．４１ｍＬ、３，３６ｍｍｏｌ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（４２３ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）を投入し、混合物を５５℃で２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した後、残渣を、Ｃ１８  Ｇｏｌｄカラムを使用した逆相クロマトグラフィーにより精製すると、純粋な５６（１．６５ｇ、４２％）が白色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．９５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．４２〜４．３５（ｍ，２Ｈ）、４．２７〜４．１７（ｍ，２Ｈ）、４．０５（ｓ，２Ｈ）、３．９３〜３．４９（ｍ，１６Ｈ）、２．７７〜２．７０（ｍ，１Ｈ）、１．１６（ｓ，３Ｈ）、１．１５（ｓ，３Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．６４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．２２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．９４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．３７〜４．２９（ｍ，３Ｈ）、４．２６〜３．８２（ｍ，１２Ｈ）、３．７６〜３．５６（ｍ，７Ｈ）、３．５４〜３．２７（ｍ，１０Ｈ）、２．７８〜２．７２（ｍ，１Ｈ）、１．１２（ｓ，３Ｈ）、１．１０（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８７】
Ｓ−４−（２−（ビス（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート（５７）の調製
メタノール（７５ｍＬ）中のアミン５５（１．５０ｇ、５．９２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−マンノース（２．１３ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．７２ｍＬ、１１．８ｍｍｏｌ）を、続いてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（７３５ｍｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を投入し、得られた混合物を室温で２時間５５℃で撹拌した。追加のＤ−マンノース（１．０７ｇ、５．９３ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（０．３６ｍＬ、５．９３ｍｍｏｌ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（３６８ｍｇ、５．９３ｍｍｏｌ）を投入し、混合物を５５℃で２時間撹拌した。さらに追加のＤ−マンノース（１．０７ｇ、５．９３ｍｍｏｌ）、ＡｃＯＨ（０．３６ｍＬ、５．９３ｍｍｏｌ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（３６８ｍｇ、５．９３ｍｍｏｌ）を投入し、混合物を５５℃で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、反応混合物を水：メタノール（１００：２０ｍＬ）から結晶化させると、遊離塩基のホウ素錯体５７（２．２５ｇ、６６％）が白色固体として得られた。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８８】
Ｓ−４−（２−（ビス（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジル２−メチルプロパンチオエート塩酸塩（５９）の調製
化合物５７（５００ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）を４Ｎ  ＨＣｌ水溶液（０．８５ｍＬ）に室温で溶解し、溶液を水で希釈し、凍結乾燥すると、塩酸塩５９（４９０ｇ、９２％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．９６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．４２〜４．３６（ｍ，２Ｈ）、４．１８〜４．０１（ｍ，４Ｈ）、３．９３〜３．５８（ｍ，１４Ｈ）、３．５３〜３．４４（ｍ，２Ｈ）、２．７７〜２．７０（ｍ，１Ｈ）、１．１６（ｓ，３Ｈ）、１．１５（ｓ，３Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．６２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．２３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．９５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．３７（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）、４．２４〜３．７７（ｍ，１６Ｈ）、３．７６〜３．１５（ｍ，１８Ｈ）、２．７８〜２．７２（ｍ，１Ｈ）、１．１２（ｓ，３Ｈ）、１．１０（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３８９】
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｒ，５’Ｒ）−６，６’−（（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン−１，２，３，４，５−ペンタオール）塩酸塩（５８）の調製
水（５０ｍＬ）中の化合物５７（１．８０ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（５２０ｍｇ、１２．３９ｍｍｏｌ）を投入し、反応混合物を室温で１時間撹拌し、その後固体ＴＣＥＰ・ＨＣｌ（８８ｍｇ、０．３０９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了後、これを４Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩５８（１．４５ｇ、９１％）が無色の粘性固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．９８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．４３〜４．３６（ｍ，２Ｈ）、４．２１〜４．０７（ｍ，２Ｈ）、３．９４〜３．６２（ｍ，１６Ｈ）、３．５７〜３．４２（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９０】
一般手順：全ての試薬及び溶媒は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．及びＴＣＩ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｃｏ．  Ｌｔｄから購入した。ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＣ  ４００（１Ｈ  ＮＭＲ、４００ＭＨｚ）又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＣ  ３００（１Ｈ  ＮＭＲ、３００ＭＨｚ）のいずれかで得られた。溶媒ＣＤＣｌ３、ＣＤ３ＯＤ及びＤＭＳＯ−ｄ６は、別段に指定されない限り、Ａｌｄｒｉｃｈ又はＣａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｉｓｏｔｏｐｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。化学シフトは、内部標準としてのテトラメチルシラン（TMS）と比較してｐｐｍで報告される。データは、以下のように報告される：化学シフト、積分、多重度（ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｂｒ＝ブロード、ｍ＝多重項）、及び結合定数（Ｈｚ）。フラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲルカラム（Redi Sep. Rf、Teledyne Isco）又は逆相カラム（High performance C18 Goldカラム）を備えたＣｏｍｂｉｆｌａｓｈシステム（Combiflash Rf、Teledyne Isco）で行った。ＥＳＩ質量スペクトルは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣＭＳ−２０１０  ＥＶ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで得られた。ＨＰＬＣ分析は、  Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ  ＨＰＬＣシステムで、（別段に指定されない限り）２２０ｎｍで検出されるＷａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８  ５μｍ  ４．６×１５０ｍｍ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｏｌｕｍｎを使用して得られた。全ての反応は、ＴＬＣ及びＬＣＭＳにより監視し、極性化合物に対しては、反応は、ＨＰＬＣ及びＬＣＭＳ分析により監視する。
【０３９１】
１５．  （Ｓ）−Ｓ−４−（２−アミノエトキシ）ベンジル２，６−ジアミノヘキサンチオエートの塩酸塩（６４）の調製
【０３９２】
【化７９】
2018505163.tif 000086
【０３９３】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）カルバメート（６１）の調製
ＴＨＦ（５０ｍＬ）、メタノール（１０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）の混合物中の６０（５００ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２５８ｍｇ、６．１５ｍｍｏｌ）を投入し、続いてＴＣＥＰ・ＨＣｌ（８８０ｍｇ、３．０６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了後、これを４Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、残渣を飽和水（１０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濾過し、濃縮すると、化合物６１（３８０ｍｇ、８８％）がオフホワイトの粘性固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．８３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．９７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．００（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７０（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．５４〜３．５０（ｍ，２Ｈ）、１．７２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９４】
（Ｓ）−Ｓ−４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンジル２，６−ビス（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンチオエート（６３）の調製
化合物６１（３２０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）及び酸６２（４３２ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（３２６ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（７．０ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を室温で少しずつ添加した。反応の完了後、反応混合物を室温で１６時間撹拌し、溶液を速やかに飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）で、続いてブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物６３（６２０ｍｇ、８９％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．１８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．８０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、５．１１〜４．９８（ｍ，２Ｈ）、４．５４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０５（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５３〜３．４５（ｍ，２Ｈ）、３．１２〜３．０８（ｍ，２Ｈ）、１．８８〜１．７８（ｍ，１Ｈ）、１．５３〜１．３２（ｍ，３４Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ６１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９５】
（Ｓ）−Ｓ−４−（２−アミノエトキシ）ベンジル２，６−ジアミノヘキサンチオエートの塩酸塩（６４）の調製
化合物６３（５５０ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）をジオキサン（１０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を同じ温度で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩５６４（１９０ｍｇ、５０％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．３１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．９６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．２９〜４．１８（ｍ，５Ｈ）、３．３５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．９２（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．０６〜１．９０（ｍ，２Ｈ）、１．７３〜１．４８（ｍ，４Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．７０（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、８．２８（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、８．０６（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、７．２９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．９５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．２２〜４．１５（ｍ，５Ｈ）、３．２１〜３．１４（ｍ，２Ｈ）、２．７４〜２．６６（ｍ，２Ｈ）、１．８６〜１．７７（ｍ，２Ｈ）、１．６１〜１．４９（ｍ，２Ｈ）、１．４４〜１．２７（ｍ，２Ｈ）。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９６】
１６．  （Ｒ）−Ｓ−４−（２−（２，６−ジアミノヘキサンアミド）エトキシ）ベンジルエタンチオエートの塩酸塩（６８）の調製
【０３９７】
【化８０】
2018505163.tif 000087
【０３９８】
（Ｒ）−Ｓ−４−（２−（２，６−ビス（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンアミド）エトキシ）ベンジルエタンチオエート（６７）の調製
化合物６５（１．００ｇ、４．４４ｍｍｏｌ）及び酸６６（１．６９ｍｇ、４．８８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（１．１４ｇ、８．８８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２．５３ｇ、６．６６ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、溶液を速やかに飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１００ｍＬ）で、続いてブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物６７（１．６０ｇ、６７％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．１９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．５２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．０７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．５３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０８〜３．９５（ｍ，５Ｈ）、３．６８〜３．６０（ｍ，２Ｈ）、３．１１〜３．０１（ｍ，２Ｈ）、２．３３（ｓ，３Ｈ）、２．０４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．８９〜１．５６（ｍ，４Ｈ）、１．５３〜１．１９（ｍ，２４Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９９】
（Ｒ）−Ｓ−４−（２−（２，６−ジアミノヘキサンアミド）エトキシ）ベンジルエタンチオエートの塩酸塩（６８）の調製
化合物６７（３００ｍｇ、０．５４２ｍｍｏｌ）をジオキサン（１０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を同じ温度で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩６８（１５０ｍｇ、６０％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８５（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．０８〜４．０５（ｍ，４Ｈ）、３．８５（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ）、３．７１〜３．６６（ｍ，１Ｈ）、３．５９〜３．５４（ｍ，１Ｈ）、２．８５〜２．８１（ｍ，２Ｈ）、２．３３（ｓ，３Ｈ）、１．８９〜１．８１（ｍ，２Ｈ）、１．６８〜１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．４９〜１．４３（ｍ，２Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．７５（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．９１（ｂｒ  ｓ，５Ｈ）、７．２１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．０５〜３．９９（ｍ，４Ｈ）、３．６９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、３．５２〜３．４２（ｍ，２Ｈ）、２．６９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．３３（ｓ，３Ｈ）、１．７２〜１．６６（ｍ，２Ｈ）、１．５６〜１．５１（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４００】
１７．（Ｒ）−２，６−ジアミノ−Ｎ−（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）ヘキサンアミドの塩酸塩（６９）の調製
【０４０１】
【化８１】
2018505163.tif 000088
【０４０２】
（Ｒ）−２，６−ジアミノ−Ｎ−（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）ヘキサンアミドの塩酸塩（６９）の調製
化合物６７（３５０ｍｇ、０．６３２ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、続いてイソプロパノール（２０ｍＬ）中の６Ｎ  ＨＣｌを室温で滴下により添加し、溶液を同じ温度で１２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩６９（２０７ｍｇ、９２％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．０９〜４．０３（ｍ，２Ｈ）、３．８８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．７１〜３．５５（ｍ，４Ｈ）、２．８１（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、１．９２〜１．８２（ｍ，２Ｈ）、１．６８〜１．６２（ｍ，２Ｈ）、１．５０〜１．３９（ｍ，２Ｈ）；１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．８５（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、８．３０〜８．０４（ｍ，６Ｈ）、７．２６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．０２（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．７７〜３．６７（ｍ，３Ｈ）、３．５２〜３．４１（ｍ，３Ｈ）、２．８０〜２．６８（ｍ，３Ｈ）、１．７６〜１．６９（ｍ，２Ｈ）、１．６０〜１．５１（ｍ，２Ｈ）、１．３９〜１．２９（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０３】
１８．  （Ｓ）−Ｓ−４−（２−（（Ｒ）−２−アミノ−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンアミド）エトキシ）ベンジル２，６−ジアミノヘキサンチオエートの塩酸塩（７３）の調製
【０４０４】
【化８２】
2018505163.tif 000089
【０４０５】
（Ｒ）−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（６−（（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）アミノ）−６−オキソヘキサン−１，５−ジイル）ジカルバメート（７０）の調製
ＴＨＦ（５０ｍＬ）、メタノール（１０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）の混合物中の６７（７００ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）の溶液に、固体ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２１２ｍｇ、５．０６ｍｍｏｌ）を投入し、続いてＴＣＥＰ・ＨＣｌ（７２０ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応の完了後、これを１Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、残渣を飽和水（１０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）との間で分配した。有機層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濾過し、濃縮すると、化合物７０（５００ｍｇ、７８％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．８３（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．５８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．１０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．５５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０８〜３．９７（ｍ，３Ｈ）、３．７２〜３．５８（ｍ，４Ｈ）、３．１１〜２．９８（ｍ，２Ｈ）、１．９０〜１．５３（ｍ，６Ｈ）、１．５１〜１．１７（ｍ，２５Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０６】
（Ｓ）−Ｓ−４−（２−（（Ｒ）−２，６−ビス（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンアミド）エトキシ）ベンジル２，６−ビス（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンチオエート（７２）の調製
化合物７０（５００ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）及び酸７１（３７２ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解し、ＥＤＣ．ＨＣｌ（２７７ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（６．０ｍｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）を室温で少しずつ添加した。反応の完了後、反応混合物を室温で１２時間撹拌し、溶液を速やかに飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×５０ｍＬ）で、続いてブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物７２（６５０ｍｇ、８０％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．１８（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．７９（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．５３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．１０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．５７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．３２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．０８〜３．９８（ｍ，５Ｈ）、３．６８〜３．６０（ｍ，２Ｈ）、３．１４〜３．０１（ｍ，４Ｈ）、１．９０〜１．７３（ｍ，２Ｈ）、１．６７〜１．６０（ｍ，３Ｈ）、１．５２〜１．３０（ｍ，４５Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ８４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０７】
（Ｓ）−Ｓ−４−（２−（（Ｒ）−２−アミノ−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンアミド）エトキシ）ベンジル２，６−ジアミノヘキサンチオエートの塩酸塩（７３）の調製
化合物７２（６５０ｍｇ、０．７７３ｍｍｏｌ）をジオキサン（１０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を同じ温度で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩７３（３００ｇ、６６％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２７（ｄ，Ｊ＝８．４，２Ｈ）、６．８９（ｄ，Ｊ＝８．４，２Ｈ）、４．２５（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、４．０７（ｔ，Ｊ＝５．４，２Ｈ）、３．９１（ｔ，Ｊ＝６．６，１Ｈ）、３．７０〜３．５９（ｍ，３Ｈ）、２．９６〜２．８０（ｍ，４Ｈ）、２．０６〜１．８０（ｍ，４Ｈ）、１．７８〜１．６１（ｍ，４Ｈ）、１．５７〜１．４０（ｍ，４Ｈ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．９０（ｔ，Ｊ＝５．４，１Ｈ）、８．７３（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、８．３３（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、８．０８（ｂｒ  ｓ，６Ｈ）、７．２７（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．９０（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、４．２１（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、４．０７〜３．９６（ｍ，２Ｈ）、３．７７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．５６〜３．４１（ｍ，２Ｈ）、２．７０（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）、１．８４〜１．６９（ｍ，４Ｈ）、１．６４〜１．４８（ｍ，４Ｈ）、１．４７〜１．３４（ｍ，４Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０８】
１９．  Ｓ−４−（２−（（Ｒ）−２−アミノ−６−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−ｌ）ペンタンアミド）ヘキサンアミド）エトキシ）ベンジルエタンチオエートの塩酸塩（７８）の調製
【０４０９】
【化８３】
2018505163.tif 000090
【０４１０】
（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−６−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ヘキサン酸（７５）の調製
化合物７４（９００ｍｇ、２．６３ｍｍｏｌ）及び酸６６（９７３ｍｇ、３．９５ｍｍｏｌ）をジオキサン（５０ｍＬ）に溶解し、６Ｎ  ＮａＯＨ（１０ｍＬ）を室温で滴下により添加した。反応混合物を室温で１２時間撹拌し、反応の完了後、これをＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１００ｍＬ）で、続いてブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物７５（７００ｍｇ、５６％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ４．５３〜４．４９（ｍ，１Ｈ）、４．３４〜４．３０（ｍ，１Ｈ）、４．０６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．２５〜３．１５（ｍ，３Ｈ）、２．９７〜２．９１（ｍ，１Ｈ）、２．７１〜２．６８（ｍ，１Ｈ）、２．２３〜２．１７（ｍ，２Ｈ）、１．８０〜１．５０（ｍ，８Ｈ）、１．４５（ｓ，１３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ４７３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４１１】
Ｓ−４−（２−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−６−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ヘキサンアミド）エトキシ）ベンジルエタンチオエート（７７）の調製
化合物７５（７００ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）及びアミン７６（３６７ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（３８１ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（８４３ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で１２時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、溶液を速やかに飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１００ｍＬ）で、続いてブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物７７（７２５ｍｇ、７１％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．１８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、７．１１（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、６．０９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、５．３６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．２４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．４６（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．３０（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ）、４．０６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．０１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．６２（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．２３〜３．１１（ｍ，３Ｈ）、２．９５〜２．６６（ｍ，２Ｈ）、２．３２（ｓ，３Ｈ）、２．１９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．８２〜１．５７（ｍ，８Ｈ）、１．５５〜１．３１（ｍ，１５Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５４０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４１２】
Ｓ−４−（２−（（Ｒ）−２−アミノ−６−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ヘキサンアミド）エトキシ）ベンジルエタンチオエートの塩酸塩（７８）の調製
化合物７７（２５０ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ）をジオキサン（５ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を同じ温度で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩７８（１５０ｍｇ、７０％）が吸湿性のオフホワイトの粘性物質として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．５７〜４．５０（ｍ，１Ｈ）、４．３８〜４．３１（ｍ，１Ｈ）、４．０６（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）、３．８７〜３．７９（ｍ，１Ｈ）、３．７７〜３．５０（ｍ，４Ｈ）、３．２７〜３．１６（ｍ，１Ｈ）、３．１４〜３．０５（ｍ，２Ｈ）、２．９９〜２．６７（ｍ，２Ｈ）、２．３１（ｓ，３Ｈ）、２．２４〜２．１５（ｍ，２Ｈ）、１．９０〜１．７７（ｍ，２Ｈ）、１．７６〜１．５６（ｍ，４Ｈ）、１．５５〜１．３１（ｍ，６Ｈ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．６８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、８．１１（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、７．７２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．２１（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．３８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３２〜４．２６（ｍ，１Ｈ）、４．１４〜４．０８（ｍ，１Ｈ）、４．０７〜３．９６（ｍ，４Ｈ）、３．７５〜３．６８（ｍ，２Ｈ）、３．５６〜３．４６（ｍ，３Ｈ）、３．１３〜３．０５（ｍ，１Ｈ）、２．９９〜２．９０（ｍ，２Ｈ）、２．８４〜２．７８（ｍ，１Ｈ）、２．５９〜２．５４（ｍ，１Ｈ）、２．３３（ｓ，３Ｈ）、２．０３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．７０〜１．１９（ｍ，１２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ６１６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４１３】
２０．  （Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）−６−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ヘキサンアミド塩酸塩（７９）の調製
【０４１４】
【化８４】
2018505163.tif 000091
【０４１５】
（Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）−６−（５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド）ヘキサンアミド塩酸塩（７９）の調製
化合物７７（４７５ｍｇ、０．６９９ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶解し、続いてイソプロパノール（１５ｍＬ）中の６Ｎ  ＨＣｌを室温で滴下により添加し、溶液を同じ温度で１２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩７９（２６０ｍｇ、６９％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．４９〜４．４６（ｍ，１Ｈ）、４．３０〜４．２７（ｍ，１Ｈ）、４．０８〜４．０５（ｍ，２Ｈ）、３．８０（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、３．７３〜３．６８（ｍ，３Ｈ）、３．５９〜３．５３（ｍ，１Ｈ）、３．２１〜３．１７（ｍ，１Ｈ）、３．０９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．９４〜２．８９（ｍ，１Ｈ）、２．６９（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．１７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．８４〜１．３５（ｍ，１２Ｈ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．６８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．０９（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、７．７３（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．３６（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．３０（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．１３〜３．９７（ｍ，３Ｈ）、３．７５〜３．６２（ｍ，３Ｈ）、３．５７〜３．４２（ｍ，２Ｈ）、３．１７〜３．０５（ｍ，１Ｈ）、２．９７〜２．９１（ｍ，２Ｈ）、２．８４〜２．７０（ｍ，２Ｈ）、２．５７（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．０４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．６９〜１．４２（ｍ，６Ｈ）、１．４１〜１．１９（ｍ，６Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５７４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４１６】
２１．  （４−（２−アミノエトキシ）フェニル）メタンチオール塩酸塩（８４）の調製及びＳ−４−（２−アミノエトキシ）ベンジルエタンチオエート塩酸塩（７６）の調製
【０４１７】
【化８５】
2018505163.tif 000092
【０４１８】
エチル４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンゾエート（８２）の調製
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の化合物８０（８．００ｇ、４８．２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２６．６ｇ、１９２．８ｍｍｏｌ）を投入し、室温で５分間撹拌した。上記反応混合物に、化合物２１（２１．５ｇ、９６．３ｍｍｏｌ）を投入し、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物を水（３００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物８２（１０．２ｇ、６９％）が白色の粘性物質として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ７．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、６．９０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）、５．０３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．３７〜４．３１（ｍ，２Ｈ）、４．０７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５７〜３．５３（ｍ，２Ｈ）、１．４５（ｓ，９Ｈ）、１．３７（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４１９】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（４−（ヒドロキシメチル）フェノキシ）エチル）カルバメート（８３）の調製
ＴＨＦ（５００ｍＬ）中の化合物８２（１０．０ｇ、３２．３ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化アルミニウムリチウム（ジエチルエーテル中の１Ｍ溶液、６６．４ｍＬ、３２．３ｍｍｏｌ）を０℃で滴下により投入した。得られた反応混合物を０℃で１時間撹拌し、氷冷水で０℃でクエンチした。反応混合物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、セライトパッドで濾過し、セライトパッドをＥｔＯＡｃ（２×３００ｍｌ）で洗浄した。濾液を真空下で濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物８３（６．１０ｇ、７１％）が粘性固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ  ７．２７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、５．０５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．６０（ｓ，２Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５４〜３．４６（ｍ，２Ｈ）、２．０３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４２０】
Ｓ−４−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）エトキシ）ベンジルエタンチオエート（６０）；ＳＧ−ＳＵＲ−Ｇ−４８／５１の調製
ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中の２３（６．１０ｇ、２２．８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２．７６ｇ、２７．４ｍｍｏｌ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（３．１２ｇ、２７．４ｍｍｏｌ）を０℃で投入し、室温で２時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮すると、メシル化生成物（８．２０ｇ、粗生成物）が黄色い油として得られ、これをそれ以上精製することなく次のステップに直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４２１】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の上記粗生成物（８．２０ｇ、粗生成物）に、ＫＳＡｃ（６．７０ｇ、５９．４ｍｍｏｌ）を投入し、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を水（１００．０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物１（４．８０ｇ、２工程にわたり６５％）が黄色い固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ６．９１（ｓ，２Ｈ）、４．１０（ｓ，４Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，４Ｈ）、３．４１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，４Ｈ）、２．３１（ｓ，６Ｈ）、１．４３（ｓ，１８）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４２２】
（４−（２−アミノエトキシ）フェニル）メタンチオール塩酸塩（８４）の調製
化合物６０（３２５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶解し、続いてイソプロパノール（１．０ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）中の６Ｎ  ＨＣｌを室温で滴下により添加し、溶液を同じ温度で４８時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＥｔＯＡｃと研和すると、塩酸塩８４（１９０ｍｇ、８７％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２８（ｄ，Ｊ＝８．６，３．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．９３（ｄ，Ｊ＝８．６，３．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．２０（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６９（ｓ，２Ｈ）、３．３４（ｄｄ，Ｊ＝５．０，４．０Ｈｚ，２Ｈ）。
４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ７．９０（ｂｒｓ，３Ｈ）７．２８（ｄ，Ｊ＝８．８，３．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．９２（ｄ，Ｊ＝８．８，３．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．１３（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．６９（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．１９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．７７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  １８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４２３】
Ｓ−４−（２−アミノエトキシ）ベンジル  エタンチオエート塩酸塩（７６）の調製
化合物６０（５．００ｇ、１５．４ｍｍｏｌ）をジオキサン（２０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌに室温で溶解し、溶液を１時間撹拌した。濃縮後、残渣をＭＴＢＥと研和すると、塩酸塩７６（３．６ｇ、９０％）がオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２３（ｄ，Ｊ＝８．５，３．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．９２（ｄ  Ｊ＝８．５，３．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．２０（ｄｄ，Ｊ＝５．２，４．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．０７（ｓ，２Ｈ）、３．３４（ｄｄ，Ｊ＝５．１，４．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．３１（ｓ，３Ｈ）；
４００ＭＨｚ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．１５（ｂｒｓ，３Ｈ）７．２３（ｄ，Ｊ＝８．４，３．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．９１（ｄ，Ｊ＝８．４，３．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．１５（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．０６（ｓ，２Ｈ）、３．１８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．３３（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４２４】
２２．  Ｓ−４−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルエタンチオエート（２５）；ＳＧ−ＳＵＲ−Ｇ−０５；ＡＬＢ１８７３２６の調製及び（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｓ，５’Ｓ）−６，６’−（（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン−１，２，３，４，５−ペンタオール）の塩酸塩（８６）の調製
【０４２５】
【化８６】
2018505163.tif 000093
【０４２６】
Ｓ−４−（２−（ビス（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−２，３，４，５，６−ペンタヒドロキシヘキシル）アミノ）エトキシ）ベンジルエタンチオエート（８５）の調製
メタノール（５０ｍＬ）中のアミン７６（３００ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｄ−グルコース（７２０ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）及び酢酸（０．３ｍＬ）を連続して投入し、室温で１０分間撹拌した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２５２ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を上記反応混合物に添加し、得られた反応混合物を室温で２４時間撹拌した。追加のＤ−グルコース（２．０当量）、ＡｃＯＨ（０．３ｍＬ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２．０当量）を投入し、混合物をさらに２４時間撹拌した。さらに追加のＤ−グルコース（３．０当量）、ＡｃＯＨ（０．３ｍＬ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（３．０当量）を投入し、混合物をさらに４８時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した後、残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で中和し、Ｃ１８  Ｇｏｌｄカラムを使用した逆相クロマトグラフィーにより精製すると、純粋な８５（４５０ｍｇ、６１％）が白色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．１９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．８９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．１６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．０６（ｓ，２Ｈ）、３．９７（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．８０〜３．７３（ｍ，４Ｈ）、３．７２〜３．５９（ｍ，７Ｈ）、３．３４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．２５〜３．１２（ｍ，２Ｈ）、２．９６（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、２．３０（ｓ，３Ｈ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．２３〜７．１８（ｍ，２Ｈ）、６．９２〜６．８７（ｍ，２Ｈ）、４．２０〜４．１４（ｍ，１０Ｈ）、４．１１〜３．９３（ｍ，５Ｈ）、３．７６〜３．５３（ｍ，６Ｈ）、３．５１〜３．３３（ｍ，８Ｈ）、２．９５〜２．８４（ｍ，１Ｈ）、２．７２〜２．５４（ｍ，２Ｈ）、２．３２（ｓ，３Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５５４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４２７】
（２Ｒ，２’Ｒ，３Ｒ，３’Ｒ，４Ｒ，４’Ｒ，５Ｓ，５’Ｓ）−６，６’−（（２−（４−（メルカプトメチル）フェノキシ）エチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン−１，２，３，４，５−ペンタオール）の塩酸塩（８６）の調製
化合物８５（２００ｍｇ、０．３６１ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶解し、続いてイソプロパノール（１５ｍＬ）中の６Ｎ  ＨＣｌを室温で滴下により添加し、溶液を同じ温度で１２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩８６（５０ｍｇ、２８％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２７（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．９６（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、４．３９（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．２１（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．８３（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、３．８０〜３．７３（ｍ，３Ｈ）、３．７１〜３．６０（ｍ，１０Ｈ）、３．５９〜３．４７（ｍ，４Ｈ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．５６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．５５（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、６．９４（ｄ，Ｊ＝８．６，２Ｈ）、５．５３〜５．４０（ｍ，２Ｈ）、４．８０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．６３〜４．２８（ｍ，８Ｈ）、４．０６（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、３．７４〜３．５７（ｍ，８Ｈ）、３．５４〜３．３６（ｍ，１０Ｈ）、２．７６（ｔ，Ｊ＝７．４，１Ｈ）。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ５１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４２８】
２３．  Ｓ−（（５−（３−アミノプロピル）ピラジン−２−イル）メチル）エタンチオエート塩酸塩（９３）の調製、及び（５−（３−アミノプロピル）ピラジン−２−イル）メタンチオール塩酸塩（９４）の調製
【０４２９】
【化８７】
2018505163.tif 000094
【０４３０】
メチル５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）ピラジン−２−カルボキシレート（８９）の調製
無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の化合物８８（１．２０ｇ、７．６４ｍｍｏｌ）の溶液に、９−ＢＢＮ（THF中０．５Ｍ、３８ｍＬ、１９．１ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した後、化合物２７（１．０４ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（３１１ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）及び２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）を室温で添加した。得られた混合物をさらに１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、真空下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物８９（９００ｍｇ、５３％）が褐色の液体として得られ、これを次の工程に直接使用した。ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４３１】
ｔｅｒｔ−ブチル（３−（５−（ヒドロキシメチル）ピラジン−２−イル）プロピル）カルバメート（９０）の調製
ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中の化合物８９（９００ｍｇ、３．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（４００ｍｇ、１５．２５ｍｍｏｌ）を０℃で投入した。得られた反応混合物を室温で３時間撹拌し、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）との間で分配した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、真空下で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物９０（５５０ｍｇ、６８％）が褐色の液体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ  ７．２７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、５．０５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．６０（ｓ，２Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５４〜３．４６（ｍ，２Ｈ）、２．０３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４３２】
（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）ピラジン−２−イル）メチルメタンスルホネート（９１）の調製
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中の９０（２６０ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（１１７ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（１３２ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を０℃で投入し、室温で２時間撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮すると、９１（２１０ｍｇ、６３％）が黄色い油として得られ、これをそれ以上精製することなく次のステップに直接使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ   ８．６２（ｓ，１Ｈ）、８．４６（ｓ，１Ｈ）、５．３３（ｓ，２Ｈ）、４．６３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、３．２３〜３．１６（ｍ，２Ｈ）、３．１１（ｓ，３Ｈ）、２．８８（ｔ，Ｊ＝７．４，２Ｈ）、２．００〜１．９１（ｍ，２Ｈ）、１．４４（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４３３】
Ｓ−（（５−（３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロピル）ピラジン−２−イル）メチル）エタンチオエート（９２）の調製
ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の９１（２１０ｍｇ、０．６０８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＫＳＡｃ（１７３ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を投入し、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を水（１００．０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物９２（１４０ｍｇ、２工程にわたり７１％）が黄色い固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３Ｃｌ）δ   ８．５２（ｓ，１Ｈ）、８．３６（ｓ，１Ｈ）、４．６５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、４．２２（ｓ，２Ｈ）、３．２１〜３．１５（ｍ，２Ｈ）、２．８２（ｔ，Ｊ＝７  ．４，２Ｈ）、２．３６（ｓ，３Ｈ）、１．９７〜１．８７（ｍ，２Ｈ）、１．４３（ｓ，９Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４３４】
Ｓ−（（５−（３−アミノプロピル）ピラジン−２−イル）メチル）エタンチオエート塩酸塩（９３）の調製
化合物９２（１４０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、続いてジオキサン（２ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌを室温で滴下により添加し、溶液を同じ温度で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩９３（８０ｍｇ、７１％）が吸湿性のオフホワイトの固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．６２（ｓ，１Ｈ）、８．５１（ｓ，１Ｈ）、４．２７（ｓ，２Ｈ）、３．０４〜２．９２（ｍ，４Ｈ）、２．３５（ｓ，３Ｈ）、２．１２〜２．０７（ｍ，２Ｈ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．５６（ｓ，１Ｈ）、８．５０（ｓ，１Ｈ）、８．１０（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、４．２４（ｓ，２Ｈ）、２．８７〜２．７８（ｍ，４Ｈ）、２．３６（ｓ，３Ｈ）、２．０３〜１．９０（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４３５】
（５−（３−アミノプロピル）ピラジン−２−イル）メタンチオール塩酸塩（３４）の調製
化合物９２（６００ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）に溶解し、続いてイソプロパノール（３０ｍＬ）中の６Ｎ  ＨＣｌを室温で滴下により添加し、溶液を同じ温度で１２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残渣を逆相カラムクロマトグラフィーにより精製すると、塩酸塩９４（２９０ｍｇ、８５％）が吸湿性の青緑色の粘性物質として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ８．６３（ｓ，１Ｈ）、８．４８（ｓ，１Ｈ）、３．８８（ｓ，２Ｈ）、３．０５〜２．９２（ｍ，４Ｈ）、２．１５〜２．０５（ｍ，２Ｈ）；
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ８．６１（ｓ，１Ｈ）、８．４８（ｓ，１Ｈ）、７．９３（ｂｒ  ｓ，３Ｈ）、３．８５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．０３（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．０５〜２．９２（ｍ，４Ｈ）、２．１５〜２．０５（ｍ，２Ｈ）；ＥＳＩ  ＭＳ  ｍ／ｚ  １８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４３６】
ＤＴＮＢアッセイ：本特許において説明されるモノチオール粘液溶解剤等のチオール含有化合物は、ＤＴＮＢ（５，５−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸））と反応して、その単一のＳ−Ｓ結合の開裂を生じることができる。ＤＴＮＢアッセイは、（１）粘液溶解化合物の「活性濃度」（どれほどの量の反応中の化合物がＳ−Ｓ結合を開裂することができるか）を決定するために、及び（２）化合物がＳ−Ｓ結合を開裂することができる速度を評価するために使用され得るため、本発明者らのモノチオール化合物の分析において２つの目的を果たす。開裂の際、得られた化合物ＮＴＢ（２−ニトロ−５−チオベンゾエート）は、４１２ｎｍの吸光度（Abs412）で分光学的に測定される有色の生成物である。ＮＴＢのモル吸光係数及び測定された最大Ａｂｓ４１２を使用して、本発明者らの粘液溶解剤と反応したＤＴＮＢのモル量を計算することができる。モノチオール粘液溶解化合物は、ＤＴＮＢと１：１化学量論比で反応する（すなわち、１モルのＤＴＮＢが１モルのモノチオール還元剤と反応した場合、１モルのＮＴＢが生成される）。化合物の活性濃度を定義するために、２２．５μＭの最終濃度の粘液溶解還元剤を、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍＬ中の過剰のＤＴＮＢ（１００μＭ）と合わせた。最大Ａｂｓ４１２を測定し、次いで活性濃度を計算するために利用した。観察された活性濃度が推定活性濃度と５％超異なる場合、各反応に添加された化合物の量は、次の工程において還元速度を速度論的に試験するために適宜調節した。粘液溶解還元活性の速度を決定するために、２２．５μＭの活性還元剤を、ｐＨ範囲（６．０〜７．５）にわたって５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ緩衝液１ｍＬ中の４５μＭのＤＴＮＢと合わせた。Ａｂｓ４１２は、化合物の添加後にリアルタイムで記録し、速度は、２次反応速度パラメータを使用して計算した。結果を表１に示す。
【０４３７】
【表２】
2018505163.tif 000095
【０４３８】
プロドラッグＤＴＮＢアッセイ：このアッセイは、本発明者らのモノチオール粘液溶解化合物上に付加されたプロドラッグキャップが分子から開裂し得るかどうかを決定するように設計された。開裂し得る場合、結果は、ＤＴＮＢ内のＳ−Ｓ結合を還元することができる「活性」化合物である。上述のＤＴＮＢアッセイの活性濃度の場合と同様に、モノチオールプロドラッグを、２２．５μＭの最終濃度で、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍＬ中の過剰のＤＴＮＢ（最終濃度１００μＭ）と混合し、最大Ａｂｓ４１２を測定した。精製された加水分解酵素（例えばブタ肝臓エステラーゼ；Ｓｉｇｍａ）の非存在下、観察されたＤＴＮＢ開裂の量は、プロドラッグ化合物上のキャップの安定性の指標である（すなわち、プロドラッグが溶液中で無傷のままである場合、Ａｂｓ４１２＝０）。次に、エステラーゼ５ｕＬ（後にエステラーゼを単離するために遠心分離され、次いでアッセイの前に反応緩衝液に溶解される硫酸アンモニウム懸濁液として購入）を、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．５）１ｍＬ中の過剰のＤＴＮＢ（最終濃度１００μＭ）及び２２．５μＭのプロドラッグと合わせる。プロドラッグキャップの開裂は、エステラーゼ遊離モノチオール分子によるＡｂｓ４１２でのＤＴＮＢ開裂によりリアルタイムで可視化され得る。結果を表２に示す。
【０４３９】
【表３】
2018505163.tif 000096
【０４４０】
並行人工膜透過性（PAMPA）アッセイ：このアッセイは、ｉｎ  ｖｉｖｏ薬物透過性の予測を補助するために、人工リン脂質膜を介した小分子の透過性を測定する。まず、５００μＭの原液をＰＢＳ中で作製し、化合物活性濃度を決定するためにＤＴＮＢアッセイ（上述）により試験した。次に、供与体及び受容体プレートにそれぞれウェル当たり５００μＭの化合物原液３００μＬ及びＰＢＳ  ２００ｕＬを添加した（BD Gentest（商標）Pre-Coated PAMPA Plate System）。次いで、受容体プレートを供与体プレートの上に設置し、室温で５時間インキュベートした。インキュベーション後、供与体及び受容体プレートを分離した。各反応に対して、受容体及び供与体プレートの両方から試料を採取し、ＤＴＮＢと合わせてから、分光学的に読み出した（最大Abs412）。プロドラッグ試料に対しては、ウェル当たり精製エステラーゼ（ブタ肝臓エステラーゼ；Sigma）１μＬを添加し、試料を室温で５分間インキュベートして、プロドラッグキャップを開裂させてから、ＤＴＮＢを添加した。各試料に対して供与体及び受容体プレートの両方において特定された化合物の濃度を使用して、ＢＤ  Ｇｅｎｔｅｓｔ（商標）Ｐｒｅ−Ｃｏａｔｅｄ  ＰＡＭＰＡ  Ｐｌａｔｅ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｍａｎｕａｌに概説される式に従い、化合物透過性パラメータを計算した。
【０４４１】
ムチンアガロースゲルウェスタンブロット：本発明者らのモノチオール粘液溶解化合物で処理された様々なムチン含有基質（例えば、唾液、回収されたＨＢＥ粘液、及び疾患痰）を、任意の残留活性化合物をアルキル化し、さらなるムチン還元を防止するために、処理期間の完了後に１０倍過剰のＮ−エチルマレイミドでクエンチする。１０倍濃縮試料を含む緩衝液を各試料に希釈する（１×TAE／５％グリセロール／０．１％SDS／ブロモフェノールブルー）。１×ＴＡＥ／０．１％ＳＤＳからなる緩衝系を使用して、試料（５０μｇ）を０．９％アガロースゲル上での電気泳動により分析した。アガロースゲルを、１０ｍＭのＤＴＴを含有する４×ＳＳＣ（０．６Ｍ  ＮａＣｌ、６０ｍＭクエン酸三ナトリウム無水物）中に１５分間含浸してから、バキュームブロッターにより試料をゲルからニトロセルロース膜上に移した。Ｍｕｃ５Ｂに対するポリクローナル抗体を使用して、還元されていない、及び還元されたＭｕｃ５ＢをＬｉＣｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙ画像化検出システム上で可視化した。
【０４４２】
ＢｉＰ誘導：ｐＨ７．５に緩衝された５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ中で還元剤を作製した。各化合物溶液（１０ｍＭの化合物１５μＬ）を、初代ＨＢＥの頂端表面に２４時間加えた。次いで、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Roche）及び１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリドを添加したＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）／１５０ｍＭのＮａＣｌ／１．０％ＮＰ−４０／０．５％デオキシコール酸ナトリウム／０．１％ＳＤＳ）中で、細胞を溶解させた。同じタンパク質総量を含有するように試料を正規化し、続いて２×ＳＤＳ試料緩衝液（１００ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ６．８）／４％ＳＤＳ／０．０５％ブロモフェノールブルー／２０％グリセロール）を添加した。試料（２０μｇ）を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上での電気泳動により分析し、ニトロセルロース膜に移した。ＢｉＰに対するポリクローナル抗体及びＬｉＣｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙ画像化検出システムを使用して、ＢｉＰレベルを可視化した。タプシガルギン（TG、２．５μＭ）及びＤＴＴは、ＢｉＰ誘導の陽性対照として機能する。
【０４４３】
ＩＬ−８分泌：ｐＨ７．５に緩衝された５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ中で還元剤を作製した。各化合物溶液（１０ｍＭの化合物１５μＬ）を、初代ＨＢＥの頂端表面に加えた。
【０４４４】
ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃヒトＩＬ−８  ＥＬＩＳＡキットを使用して、投薬から２４時間後基底外側ＨＢＥ培地からＩＬ−８分泌を測定した。試料を１：５０に希釈し、次いで各希釈物５０μＬをＥＬＩＳＡプレートに加えた。キットのマニュアルに概説される通りの標準反応条件に従い、試料の複製を完了した。吸光度は、４５０ｎｍで測定した。既知量のヒトＩＬ−８を用いた標準から作成された標準曲線を使用して、未知試料中のＩＬ−８量を計算した。嚢胞性線維症痰から精製された粘液膿性物質からの上澄み（SMM）を、ＩＬ−８分泌の陽性対照として使用した。
【０４４５】
これらのアッセイを使用したデータを、図２〜９にまとめ、以下で詳細に説明する。
【０４４６】
図２に示されるように、ＮＡＣに比べて向上した化合物７６のムチン還元能力が提供される。新規な粘液溶解剤は、いくつかの特徴を組み込んで、現在利用可能な薬剤に比べて有利な特性を有する治療薬剤を生成する。吸入が承認されている唯一の粘液溶解剤であるＮＡＣの１つの制限は、その非常に遅い還元反応速度であり、非常に高い薬物濃度と共に長期のインキュベーション期間を必要とする。新規の粘液溶解弾頭（warhead）である化合物７６は、ＮＡＣに比べて著しく向上した反応速度を示す。アガロースゲルウェスタンブロットにより示されるように、ＮＡＣに対して等モル濃度（５０ｍＭ）の７６は、ＮＡＣと比較して大幅により速くより完全な唾液Ｍｕｃ５ｂの還元をもたらす。さらに、７６は、５分の１の低い濃度（１０ｍＭ）で、ＮＡＣに比べより大きなＭｕｃ５ｂ還元をもたらす。したがって、７６は、ＮＡＣと比較してより活性な還元剤の特性を示す。
【０４４７】
図３に示されるように、還元活性を喪失させることなく化合物７６の改質を達成することができる。誘導体８６、６９、及び４７により示されるように、７６の機能的置換体は、７６の還元容量を保持する。図に示されるように、全ての化合物がＭｕｃ５Ｂの還元においてＮＡＣよりも大幅に活性である（ウェスタンブロットにおける高分子量Muc5bバンドの喪失により示される）。
【０４４８】
図４において、当技術分野において知られた化合物に対する化合物８６の還元活性。アガロースゲルウェスタンブロットにより、８６は、ＮＡＣ及び当技術分野において知られた別の薬剤（ＷＯ２０１４１５３００９に記載の化合物９５）に比べて優れたＭｕｃ５ｂ還元活性を示す。８６のみが３０ｍＭで完全なＭｕｃ５ｂ還元を、及び３ｍＭで部分的還元をもたらし、一方、他の化合物は、試験された最高濃度（３０ｍＭ）で部分的なＭｕｃ５ｂ還元をもたらすのみである。
【０４４９】
【化８８】
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【０４５０】
図５は、化合物７６置換体の利点を示す。肺粘液溶解剤としてのＮＡＣの主な制限は、気道表面薬物滞留が制限されていることである（Mucomystの製品説明書は、２０分の肺表面半減期を説明している）。図に示されるように、７６弾頭は、比較的脂溶性であり、ＰＡＭＰＡアッセイを使用して測定された場合、膜透過性である。しかしながら、置換された７６分子、例えば８６及び８５（NACに比べて７６の向上した活性を保持する）は、より極性でより脂溶性が低く、低い膜透過性をもたらす。したがって、データは、８６及び８５が、肺表面上での向上した化合物滞留を有利に示すことを予測している。
【０４５１】
図６は、細胞透過性及び炎症促進効果を評価するための統合されたアッセイを示す。極性ＨＢＥ細胞の頂端表面上で、１０ｍＭで２４時間化合物をインキュベートし、（Ａ）ＢｉＰタンパク質又は（Ｂ）ＩＬ−８分泌物の誘導を測定した。ＢｉＰタンパク質の誘導は、タンパク質合成中にジスルフィド結合形成の阻害により引き起こされ得る、小胞体（ER）ストレスのマーカーである。８６は、細胞透過性が低いことが予測されたため、この化合物はＥＲに到達せず、したがってＢｉＰ発現を誘導しないと推測された。パネルＡ：８６及び６９は、ビヒクル対照（破線）に比べてＢｉＰ発現を誘導せず、一方、透過性還元剤（DTT）及びタプシガルギン（thapasgargin）（TG）は誘導する。したがって、データは、８６及び６９が頂端区画に加えられた場合、細胞内に大きく内在化しないことを示している。パネルＢ：化合物の潜在的炎症促進特性を評価するために、２４時間の化合物インキュベーション後にＩＬ−８分泌を測定した。意味深いことに、８６は、ＩＬ−８の変化が見られないことにより証明されるように、炎症促進効果のいかなる証拠ももたらさなかった。しかしながら、６９は、陽性対照（SMM）と共にＩＬ−８分泌を増加させた。８６及び６９は共通の弾頭、すなわちＩＬ−８分泌を増加させなかった７６を共有するため、８６ではなく６９上の置換がこの効果を担うと結論付けられる。
【０４５２】
図７は、８６のプロドラッグを示す。８５は、８６のチオアセテート誘導体である。重要なことに、プロドラッグ部分は、８５を無臭化及び不活性化する（化合物が代謝的に活性化されるまで）。図は、ＤＴＮＢアッセイにおける８６を示し、これはＤＴＮＢ（左パネル）を急速に開裂する。逆に、８５はＤＴＮＢを開裂せず（中央のパネル）、化合物が不活性であることを示している。しかしながら、エラスターゼの添加は代謝的に８５を８６に変換し、ＤＴＮＢの加水分解を可能にする（右側パネル）。       
【０４５３】
図８は、ＣＯＰＤ痰における８５の代謝活性化を示す。粘液溶解プロドラッグの重要な態様は、それらが肺表面上の粘液中で活性化されなければならないことである。代謝活性化及び反応速度を評価するために、８６（活性代謝産物）及び８５（プロドラッグ）を、ＣＯＰＤに罹患した患者からの自発的に誘導された痰からインキュベートした。図に示されるように、８６は、アガロースゲルウェスタンブロットにより評価されるように、痰内のＭｕｃ５ｂを急速に還元した。８５は、同様にＭｕｃ５ｂを還元するが、８６に比べて反応速度が遅い（これは、８５から８６の酵素代謝の要件を反映する）。重要なことに、これらのデータは、ヒトの痰が、８５等のチオエーテルを含有する化合物を活性化するために必要な酵素を含有することを示している。
【０４５４】
図９は、初代ヒト気管支上皮細胞（HBE）培養物に対する粘液還元を示す。ムチン還元反応速度は、ＨＢＥ培養物の頂端表面への粘液溶解剤の添加後の示された時間でのウェスタンブロットにより評価した。８６は、粘液の急速な還元をもたらし、これは投薬から２４時間後に実質的に回復する。８５は、より遅い還元反応速度（例えば１〜２時間）を示すが、潜在的により長い作用期間を示す（例えば２４時間）。重要なことに、データは、粘液を有するヒト気道上皮が、８５プロドラッグを活性な８６粘液溶解剤に代謝し得ることを示している。
【０４５５】
上で引用された参考文献はそれぞれ、本出願を通して、参照により本明細書に組み込まれる。上記説明と参考文献との間で矛盾が生じる場合、本明細書に記載の説明が優先される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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