(57)【要約】  本発明は、ピラゾロピリダジン誘導体に関する。より詳細には、本発明は、式（Ｉ）の４−（ビフェニル−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン誘導体および薬学的に許容できるその塩に関する［式中、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、明細書において定義されているとおりである］。本発明のピラゾロピリダジン誘導体は、ＧＡＢＡＡ受容体の活性をモジュレートする。これらは、疼痛およびてんかんを含めた多くの状態の治療において有用であり得る。【化１】2018536677.tif 000017
2018536677.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物
【化１】
2018536677.tif 000014
［式中、
Ｘは、−Ｓ（Ｏ）２−および−Ｃ（Ｏ）−から選択され、
Ｒ１は、（Ｃ２〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルおよびメチル置換（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルから選択され、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＣＨ３およびＣＮから選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、ＣＨＦ２、ＯＣＨ３およびＣＮから選択され、
Ｘが−Ｓ（Ｏ）２−である場合、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキル、ＮＨ２およびＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、Ｒ５は、Ｈであるか、または
Ｒ４およびＲ５は一緒に、−ＣＨ２ＣＨ２−または−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−であり、
Ｘが、−Ｃ（Ｏ）−である場合、
Ｒ４は、ＮＨ２およびＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、Ｒ５は、Ｈであるか、または
Ｒ４およびＲ５は一緒に、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である］
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２】
式（ＩＡ）の、請求項１に記載の化合物
【化２】
2018536677.tif 000015
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に定義されているとおりであり、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキル、ＮＨ２およびＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、Ｒ５は、Ｈであるか、または
Ｒ４およびＲ５は一緒に、−ＣＨ２ＣＨ２−または−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である］
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項３】
Ｒ４が、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり、Ｒ５が、Ｈである、請求項２に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項４】
Ｒ４が、エチルである、請求項３に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項５】
式（ＩＢ）の、請求項１に記載の化合物
【化３】
2018536677.tif 000016
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１において定義されているとおりであり、
Ｒ４は、ＮＨ２およびＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、Ｒ５は、Ｈであるか、または
Ｒ４およびＲ５は一緒に、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である］
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項６】
Ｒ４およびＲ５が一緒に、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である、請求項５に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項７】
Ｒ１が、（Ｃ２〜Ｃ４）アルキルである、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項８】
Ｒ１が、エチルである、請求項７に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項９】
Ｒ２が、ＨおよびＦから選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１０】
Ｒ２が、Ｆである、請求項９に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１１】
Ｒ３が、ＨおよびＯＣＨ３から選択される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１２】
Ｒ３が、ＯＣＨ３である、請求項１１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１３】
４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロ−２’−メトキシビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン、
４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン、および
５−［５−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−４−イル）−２−フルオロフェニル］−６−メトキシ−２−メチル−２，３−ジヒドロイソインドール−１−オン
から選択される、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物と、薬学的に許容できる添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
医薬として使用するための、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
疼痛の治療において使用するための、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
てんかんの治療において使用するための、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
治療を必要とする対象に、有効量の請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、疼痛を治療する方法。
【請求項１９】
治療を必要とする対象に、有効量の請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、てんかんを治療する方法。
【請求項２０】
疼痛を治療するための、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
てんかんを治療するための、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２２】
疼痛を治療するための医薬を製造するための、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２３】
てんかんを治療するための医薬を製造するための、請求項１から１３のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項２４】
請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物と、第２の薬学的活性薬剤とを含む組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピラゾロピリダジン誘導体に関する。より詳細には、本発明は、４−（ビフェニル−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン誘導体に関する。本発明のピラゾロピリダジン誘導体は、ＧＡＢＡＡ受容体の活性をモジュレートする。これらは、疼痛およびてんかんを含めた多くの状態の治療において有用であり得る。
【背景技術】
【０００２】
ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）は、主要な抑制性神経伝達物質として同定されており、ＧＡＢＡ作動性神経伝達をモジュレートする薬剤は、てんかん、不安およびうつ病などの状態の治療において広く使用されている。ＧＡＢＡ受容体の２つのファミリーが記載されており、ＧＡＢＡＡおよびＧＡＢＡＢと呼ばれている。
【０００３】
ＧＡＢＡＡ受容体は、リガンド開口型イオンチャネルスーパーファミリーのメンバーである。機能性受容体は、一般に、いくつかのサブユニットを含む。６種のアルファサブユニット（α１〜６）、３種のベータサブユニット（β１〜３）、３種のガンマサブユニット（γ１〜３）、ならびにデルタ、イプシロン、パイおよびシータサブユニット（δ、ε、π、θ）を含めた少なくとも１６種のそのようなサブユニットが特徴づけられている。多くのＧＡＢＡＡ受容体は、２種のアルファ、２種のベータおよび１種のガンマサブユニットから構成される。いくつかの薬物結合部位が記載されている。これらには、内在性リガンド（ＧＡＢＡ）のための結合部位およびアロステリック結合部位が含まれる。アロステリック結合部位において結合する薬物は、応答性を増大させる陽性アロステリックモジュレーター、受容体応答性を低下させる陰性アロステリックモジュレーター、または中性であり得、この中性という用語は、その受容体の活性をモジュレートすることなくアロステリック結合部位に結合する化合物を指す。最近の証拠により、α２またはα３サブユニットのいずれかを含むＧＡＢＡＡ受容体（本明細書では、ＧＡＢＡＡα２／３受容体と呼ばれる）は、ある種の疼痛状態に関係し得ること、およびこれらの受容体の陽性アロステリックモジュレーターは、有用な鎮痛薬であり得ることが示唆されている（Ｍｉｒｚａ，Ｎ．Ｒ．およびＭｕｎｒｏ，Ｇ．、Ｄｒｕｇ  Ｎｅｗｓ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ、２０１０、２３（６）、３５１〜３６０）。
【０００４】
４−（ビフェニル−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン誘導体は、ＧＡＢＡＡα２／３受容体と相互作用を有するとは報告されていない。国際特許出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１３／６０６３１（ＷＯ２０１４／０９１３６８として公開）は、α２、α３および／またはα５サブユニットについて親和性を有する４−（ビフェニル−３−イル）−７Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリダジン誘導体を開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＧＡＢＡＡ受容体と相互作用する新たな化合物、特に、ベンゾジアゼピンなどの現在利用可能なＧＡＢＡＡモジュレーターに随伴する嗜眠などの有害事象の原因となる傾向が低い化合物の発見には、継続して関心が持たれている。これらの有害作用は、α１サブユニット含有受容体のモジュレーションの結果であり、したがって、好ましい化合物は、陽性アロステリックモジュレーターとして良好な有効性でα２／３サブユニット含有受容体について高い親和性を有する一方で、他のαサブユニットを有する受容体、特に、α１サブユニット含有受容体では低い有効性を有すると考えられる。
【０００６】
加えて、これらの薬物候補は、次の特性のうちの１つまたは複数を有するべきである：胃腸管から十分に吸収されること；代謝的に安定であること；とりわけ、形成される任意の代謝産物の毒性またはアレルゲン性に関して、良好な代謝プロファイルを有すること；またはその活性プロファイルをなお保持しつつ、好ましい薬物動態特性を有すること。これらは、非毒性であり、ほとんど副作用を示さないものであるべきである。理想的な薬物候補は、安定で、非吸湿性で、かつ容易に製剤化される物理的形態で存在すべきである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物
【０００８】
【化１】
2018536677.tif 000003
［式中、
Ｘは、−Ｓ（Ｏ）２−および−Ｃ（Ｏ）−から選択され、
Ｒ１は、（Ｃ２〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルおよびメチル置換（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルから選択され、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＣＨ３およびＣＮから選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｆ、ＣＨＦ２、ＯＣＨ３およびＣＮから選択され、
Ｘが−Ｓ（Ｏ）２−である場合、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキル、ＮＨ２およびＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、Ｒ５は、Ｈであるか、または
Ｒ４およびＲ５は一緒に、−ＣＨ２ＣＨ２−または−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−であり、
Ｘが、−Ｃ（Ｏ）−である場合、
Ｒ４は、ＮＨ２およびＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、Ｒ５は、Ｈであるか、または
Ｒ４およびＲ５は一緒に、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である］
または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【０００９】
式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容できる塩を、本明細書では、「本発明の化合物」と呼ぶ。上記の定義を、本明細書では、この態様の実施形態Ｅ１と呼ぶ。本発明のこの態様のさらなる実施形態を、以下に詳細に記載する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる添加剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、医薬として使用するための、上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。この態様による一実施形態では、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩は、疼痛の治療において使用するためのものである。この態様による別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩は、てんかんの治療において使用するためのものである。
【００１２】
別の態様では、本発明は、治療有効量の上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩を、そのような治療を必要とする個体に投与することを含む、疼痛を治療する方法を提供する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、治療有効量の上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩を、そのような治療を必要とする個体に投与することを含む、てんかんを治療する方法を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、疼痛を治療するための、上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩の使用を提供する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、てんかんを治療するための、上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩の使用を提供する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、疼痛を治療するための医薬を製造するための、上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩の使用を提供する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、てんかんを治療するための医薬を製造するための、上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩の使用を提供する。
【００１８】
別の態様では、本発明は、上記のとおりの、または好ましい実施形態のいずれか１つにおける式（Ｉ）の化合物、または薬学的に許容できるその塩と、第２の薬学的活性薬剤とを含む組み合わせを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
必要な数の炭素原子を含有するアルキル基は、非分枝または分枝であってよい。（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルには、メチル、エチル、ｎ−プロピル（１−プロピル）およびイソプロピル（２−プロピル、１−メチルエチル）、ｎ−ブチル（１−ブチル）、ｓｅｃ−ブチル（２−ブチル、１−メチルプロピル）、イソブチル（２−メチルプロピル）、およびｔｅｒｔ−ブチル（１，１−ジメチルエチル）が含まれる。
【００２０】
（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルには、シクロプロピル、シクロブチルおよびシクロペンチルが含まれる。メチル置換（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキルには、１−メチルシクロプロピル、２−メチルシクロプロピル、１−メチルシクロブチル、２−メチルシクロブチル、３−メチルシクロブチル、１−メチルシクロペンチル、２−メチルシクロペンチル、および３−メチルシクロペンチルが含まれる。
【００２１】
Ｒ４およびＲ５が一緒に、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である本発明の化合物では、−Ｎ（ＣＨ３）−が、Ｒ４に代わっており、−ＣＨ２−が、Ｒ５に代わっていることを理解すべきである。Ｘが−Ｓ（Ｏ）２−である場合、得られる化合物は、スルタム
【００２２】
【化２】
2018536677.tif 000004
であり、Ｘが−Ｃ（Ｏ）−である場合、得られる化合物は、ラクタム
【００２３】
【化３】
2018536677.tif 000005
である。
【００２４】
本発明の化合物のさらなる具体的な実施形態は、次のとおりである。
【００２５】
実施形態Ｅ２では、式（ＩＡ）の実施形態Ｅ１による化合物
【００２６】
【化４】
2018536677.tif 000006
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１に定義されているとおりであり、
Ｒ４は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ５）シクロアルキル、ＮＨ２およびＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、Ｒ５は、Ｈであるか、または
Ｒ４およびＲ５は一緒に、−ＣＨ２ＣＨ２−または−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である］
または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００２７】
実施形態Ｅ３では、Ｒ４が、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルであり、Ｒ５が、Ｈである、実施形態Ｅ２による化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００２８】
実施形態Ｅ４では、Ｒ４がエチルである、実施形態Ｅ３による化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００２９】
実施形態Ｅ５では、式（ＩＢ）の実施形態Ｅ１による化合物
【００３０】
【化５】
2018536677.tif 000007
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、請求項１において定義されるとおりであり、
Ｒ４は、ＮＨ２およびＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、Ｒ５は、Ｈであるか、または
Ｒ４およびＲ５は一緒に、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である］
または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００３１】
実施形態Ｅ６では、Ｒ４およびＲ５が一緒に、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２−である、実施形態Ｅ５による化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００３２】
実施形態Ｅ７では、Ｒ１が、（Ｃ２〜Ｃ４）アルキルである、実施形態Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５およびＥ６のいずれか１つによる化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００３３】
実施形態Ｅ８では、Ｒ１が、エチルである、実施形態Ｅ７による化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００３４】
実施形態Ｅ９では、Ｒ２が、ＨおよびＦから選択される、実施形態Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７およびＥ８のいずれか１つによる化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００３５】
実施形態Ｅ１０では、Ｒ２がＦである実施形態Ｅ９による化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００３６】
実施形態Ｅ１１では、Ｒ３がＨおよびＯＣＨ３から選択される実施形態Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、Ｅ８、Ｅ９およびＥ１０のいずれか１つによる化合物または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００３７】
実施形態Ｅ１２では、Ｒ３が、ＯＣＨ３である、実施形態Ｅ１１による化合物、または薬学的に許容できるその塩を提供する。
【００３８】
好ましい本発明の化合物には、
４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロ−２’−メトキシビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン、
４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン、および
５−［５−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−４−イル）−２−フルオロフェニル］−６−メトキシ−２−メチル−２，３−ジヒドロイソインドール−１−オン、
ならびに薬学的に許容できるその塩が含まれる。
【００３９】
ある種の式（Ｉ）の化合物は、１個または複数の不斉中心を含み、したがって、鏡像異性体およびジアステレオ異性体などの光学異性体として存在し得る。すべてのそのような異性体およびその混合物は、本発明の範囲内に含まれる。
【００４０】
本明細書において下記では、本発明の化合物に対する言及にはすべて、下記でより詳細に論じるとおり、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩、溶媒和物、もしくは多成分複合体、または式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容できる塩の薬学的に許容できる溶媒和物もしくは多成分複合体が含まれる。
【００４１】
好ましい本発明の化合物は、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩である。
【００４２】
適切な酸付加塩は、非毒性の塩を形成する酸から形成される。例には、酢酸塩、アジピン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、硫酸水素塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、シクラミン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロチン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、ピログルタミン酸塩、サッカリン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩およびキシノホ酸塩（ｘｉｎｏｆｏａｔｅ）が含まれる。
【００４３】
酸および塩基の半塩、例えば、半硫酸塩を形成することもできる。
【００４４】
上述の塩には、対イオンが光学的に活性であるもの、例えば、ｄ−乳酸塩もしくはｌ−リシン、またはラセミ体、例えばｄｌ−酒石酸塩もしくはｄｌ−アルギニンが含まれることを、当業者は認識している。
【００４５】
適切な塩についての総説に関しては、ＳｔａｈｌおよびＷｅｒｍｕｔｈによる「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｕｓｅ」（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、独国、２００２）を参照されたい。
【００４６】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容できる塩は、以下の３種の方法のうちの１種または複数により調製することができる：
（ｉ）式（Ｉ）の化合物を所望の酸または塩基と反応させることによる方法；
（ｉｉ）所望の酸または塩基を使用して、式（Ｉ）の化合物の適切な前駆体から、酸または塩基に不安定な保護基を除去することによる方法；または
（ｉｉｉ）適切な酸もしくは塩基と反応させることにより、または適切なイオン交換カラムを用いて、式（Ｉ）の化合物のある塩を別の塩に変換することによる方法。
【００４７】
３種の反応はすべて典型的には、溶液中で実施される。その結果生じた塩を沈殿させ、濾過により収集することができるか、または溶媒を蒸発させることにより回収することができる。その結果生じた塩におけるイオン化の程度は、完全なイオン化からほぼ非イオン化まで様々であってよい。
【００４８】
式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩は、非溶媒和形態および溶媒和形態の両方で存在し得る。用語「溶媒和物」を本明細書では、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩と、１種または複数の薬学的に許容できる溶媒分子、例えば、エタノールとを含む分子複合体を記載するために使用している。用語「水和物」は、前記の溶媒が水である場合に使用している。本発明による薬学的に許容できる溶媒和物には、結晶化の溶媒が同位体置換されていてよいもの、例えば、Ｄ２Ｏ、ｄ６−アセトンおよびｄ６−ＤＭＳＯが含まれる。
【００４９】
有機水和物に関して現在認められている分類体系は、孤立部位（ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｉｔｅ）水和物、チャネル水和物、または金属イオン配位水和物を定義する分類体系である。参照により本明細書に援用されるＫ．Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓによる「Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｌｉｄｓ」（Ｈ．Ｇ．Ｂｒｉｔｔａｉｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、１９９５）を参照されたい。孤立部位水和物は、その水分子が、有機分子の介在により、互いの直接的な接触から孤立している水和物である。チャネル水和物では、水分子は格子チャネル内に存在し、そこで他の水分子に隣接している。金属イオン配位水和物では、水分子は金属イオンに結合している。
【００５０】
溶媒または水が緊密に結合していると、複合体は、湿度とは関係なく、十分に定義される化学量論組成を有するはずである。しかしながら、チャネル溶媒和物および吸湿性化合物においてのように、溶媒または水の結合が弱い場合、水／溶媒含有率は、湿度および乾燥状態に左右される。このようなケースでは、非化学量論組成が標準となる。
【００５１】
本発明の化合物は、完全な非晶質から完全な結晶質までの範囲の連続した固体状態で存在し得る。用語「非晶質」は、物質が、分子レベルで長距離秩序を欠いていて、温度に応じて固体または液体の物理的特性を示し得る状態を指す。典型的には、このような物質は、特有のＸ線回折図を示さず、固体の特性を示しながらも、より形式的には液体として記載される。加熱すると、固体特性から液体特性への変化が生じ、これは、典型的には二次の状態変化により特徴づけられる（「ガラス遷移」）。用語「結晶質」は、物質が、分子レベルで規則的に配列している内部構造を有し、規定のピークを有する特有のＸ線回折図を示す固相を指す。このような物質は十分に加熱すると、液体の特性も示すが、固体から液体への変化は、典型的には一次の相変化により特徴づけられる（「融点」）。
【００５２】
薬物および少なくとも１種の他の成分が、化学量論的量または非化学量論的量で存在している式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容できるその塩の多成分複合体（塩および溶媒和物以外）も、本発明の範囲内に含まれる。このタイプの複合体には、クラスレート（薬物−ホスト包接複合体）および共結晶が含まれる。後者は典型的には、非共有結合相互作用を介して共に結合している中性分子成分同士の結晶複合体と定義されるが、中性分子と塩との複合体でもあり得る。溶融結晶化、溶媒からの再結晶化、または成分同士の物理的粉砕により、共結晶を調製することができる。参照により本明細書に組み込まれるＯ．ＡｌｍａｒｓｓｏｎおよびＭ．Ｊ．ＺａｗｏｒｏｔｋｏによるＣｈｅｍ  Ｃｏｍｍｕｎ、１７、１８８９〜１８９６（２００４）を参照されたい。多成分複合体の一般的総説については、参照により本明細書に組み込まれるＨａｌｅｂｌｉａｎによるＪ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、６４（８）、１２６９〜１２８８（１９７５年８月）を参照されたい。
【００５３】
本発明の化合物は、適切な条件に置いた場合に、中間状態（中間相または液晶）でも存在し得る。中間状態は、真の結晶状態と真の液体状態（溶融体または溶液）との中間である。温度変化の結果として生じる液晶性は、「サーモトロピック」と記載され、水または別の溶媒などの第２の成分を加えると生じる液晶性は、「リオトロピック」と記載される。リオトロピック中間相を形成する可能性のある化合物は、「両親媒性」と記載され、イオン性極性ヘッド基（−ＣＯＯ−Ｎａ＋、−ＣＯＯ−Ｋ＋、または−ＳＯ３−Ｎａ＋など）または非イオン性極性ヘッド基（−Ｎ−Ｎ＋（ＣＨ３）３など）を持つ分子からなる。さらなる情報については、参照により本明細書に組み込まれるＮ．Ｈ．ＨａｒｔｓｈｏｒｎｅおよびＡ．Ｓｔｕａｒｔによる「Ｃｒｙｓｔａｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｏｌａｒｉｚｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ」、第４版（Ｅｄｗａｒｄ  Ａｒｎｏｌｄ、１９７０）を参照されたい。
【００５４】
本発明の化合物はプロドラッグとして投与することができる。例えば、それ自体は薬理活性をほとんど、または全く有さなくてもよい式（Ｉ）の化合物のある種の誘導体は、体内または体表面に投与されると、例えば加水分解による切断により変換されて、所望の活性を有する式（Ｉ）の化合物になり得る。そのような誘導体が、「プロドラッグ」と称される。プロドラッグの使用に関するさらなる情報は、「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、第１４巻、ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ（Ｔ  ＨｉｇｕｃｈｉおよびＷ  Ｓｔｅｌｌａ）および「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ」、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７（Ｅ  Ｂ  Ｒｏｃｈｅ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）において見出すことができる。
【００５５】
例えば、式（Ｉ）の化合物中に存在する適切な官能基を、例えば、Ｈ  Ｂｕｎｄｇａａｒｄによる「Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５）に記載されているとおりの「プロ部分」として当業者に知られているある種の部分に置き代えることにより、プロドラッグを製造することができる。
【００５６】
プロドラッグの例には、二水素またはジアルキル（例えば、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル）ホスファートプロドラッグなどのホスファートプロドラッグが含まれる。上述の例による代替基のさらなる例および他のプロドラッグ種の例は、上述の参考文献において見出すことができる。
【００５７】
式（Ｉ）の化合物の代謝産物、すなわち、薬物を投与するとｉｎ  ｖｉｖｏで形成される化合物も本発明の範囲内に含まれる。本発明による代謝産物のいくつかの例には、式（Ｉ）の化合物がフェニル（Ｐｈ）部分を含有する場合、そのフェノール誘導体（−Ｐｈ＞−ＰｈＯＨ）が含まれる。
【００５８】
１個または複数の不斉炭素原子を含有する本発明の化合物は、２種以上の立体異性体として存在し得る。本発明の化合物の立体異性体およびその１種または複数の混合物のすべてが、本発明の範囲内に含まれる。
【００５９】
個々の鏡像異性体を調製／単離するための従来の技法には、適切な光学的に純粋な前駆体からのキラル合成または例えば、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用するラセミ体（または塩もしくは誘導体のラセミ体）の分割が含まれる。
【００６０】
別法では、ラセミ体（またはラセミ前駆体）を適切な光学的に活性な化合物、例えば、アルコールと、または式（Ｉ）の化合物が酸性もしくは塩基性部分を含有する場合には、１−フェニルエチルアミンもしくは酒石酸などの塩基もしくは酸と反応させることができる。その結果生じたジアステレオ異性体の混合物を、クロマトグラフィーおよび／または分別結晶化により分離し、ジアステレオ異性体の一方または両方を、当業者によく知られている手段により、対応する純粋な鏡像異性体（複数可）に変換することもできる。
【００６１】
クロマトグラフィー、典型的にはＨＰＬＣを不斉樹脂上で、炭化水素、典型的には、イソプロパノール０〜５０体積％、典型的には２〜２０体積％、およびアルキルアミン０〜５体積％、典型的にはジエチルアミン０．１体積％を含有するヘプタンまたはヘキサンからなる移動相と共に使用して、本発明のキラル化合物（およびそのキラル前駆体）を鏡像異性的に濃縮された形態で得ることができる。溶離液を濃縮すると、濃縮混合物が得られる。
【００６２】
立体異性体の混合物は、当業者に知られている従来の技法により分離することができる；例えば、Ｅ．Ｌ．ＥｌｉｅｌおよびＳ．Ｈ．Ｗｉｌｅｎによる「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」（Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９４）を参照されたい。
【００６３】
そのラセミ体およびラセミ混合物（コングロメレート）を含めた本発明の化合物の結晶形すべてが、本発明の範囲に含まれる。立体異性体のコングロメレートも、本明細書において直前に記載した従来の技法により分離することができる。
【００６４】
１個または複数の原子が、同じ原子番号を有するが、天然において優勢な原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子により置き換えられている薬学的に許容できる同位体標識された本発明の化合物のすべてが、本発明の範囲に含まれる。
【００６５】
本発明の化合物中に含まれるために適している同位体の例には、２Ｈおよび３Ｈなどの水素、１１Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃなどの炭素、３６Ｃｌなどの塩素、１８Ｆなどのフッ素、１３Ｎおよび１５Ｎなどの窒素、１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏなどの酸素、ならびに３５Ｓなどの硫黄の同位体が含まれる。
【００６６】
ある種の同位体標識された本発明の化合物、例えば、放射性同位体を導入されているものは、薬物および／または基質の組織分布研究において有用である。放射性同位体のトリチウム、すなわち３Ｈおよび炭素−１４、すなわち１４Ｃは、導入の容易さおよび検出の迅速な手段である点において、この目的のために特に有用である。ジュウテリウム、すなわち２Ｈなどの同位体での置換は、より大きな代謝安定性、例えば、インビボ半減期の増大または投薬量要求の低減から生じるある種の治療的利点をもたらし得るので、場合によっては好ましいことがある。１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎなどの陽電子放出同位体での置換は、基質受容体占有率を調べるための陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）研究において有用であり得る。
【００６７】
当業者に知られている従来の技法により、または以前に使用された非標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を使用する添付の実施例および調製例に記載のプロセスと同様のプロセスにより、同位体標識された式（Ｉ）の化合物を一般に調製することができる。
【００６８】
本明細書において下記で定義するとおりの中間体化合物、式（Ｉ）の化合物について本明細書において上記で定義したとおりのその塩、溶媒和物、および複合体のすべて、ならびにその塩の溶媒和物および複合体のすべても、本発明の範囲内である。本発明は、上述の種類の多形およびその晶癖のすべてを包含する。
【００６９】
本発明の化合物は、類似の構造の化合物を調製するために当技術分野で知られている任意の方法により調製することができる。特に、本発明の化合物は、下記のスキームを参照して記載する手順により、または実施例に記載する具体的な方法により、またはどちらかに類似のプロセスにより調製することができる。
【００７０】
当業者であれば、以下のスキームにおいて記載する実験条件は、示している変換を行うために適した条件の実例であり、式（Ｉ）の化合物を調製するために、使用する正確な条件を変えることが必要であるか、または望ましいこともあることを認識する。さらに、所望の本発明の化合物を得るために、スキームに記載されている順序とは異なる順序で変換を実施するか、または変換の１つもしくは複数を変更することが必要であるか、または望ましいことがあることを認識する。
【００７１】
加えて、当業者であれば、本発明の化合物を合成する任意の段階で、１個または複数の不安定な基を保護して、望ましくない副反応を防ぐことが必要であるか、望ましいことがあることを認識する。特に、アミノ基またはカルボン酸基を保護することが必要であるか、望ましいことがある。本発明の化合物の調製において使用される保護基は、従来の手法で使用することができる。例えば、参照により本明細書に援用されるＴｈｅｏｄｏｒａ  Ｗ  ＧｒｅｅｎｅおよびＰｅｔｅｒ  Ｇ  Ｍ  Ｗｕｔｓによる「Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第３版（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）、特に第７章（「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ａｍｉｎｏ  Ｇｒｏｕｐ」）および第５章（「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｂｏｘｙｌ  Ｇｒｏｕｐ」）に記載されている方法（そのような基を脱離するための方法も記載されている）を参照されたい。
【００７２】
式（Ｉ）のピラゾロピリダジン誘導体はすべて、下記に表す一般方法において記載する手順により、またはその常套的な改変により調製することができる。本発明はまた、本明細書において使用する任意の新規の中間体に加えて、式（Ｉ）のピラゾロピリダジン誘導体を調製するためのこれらのプロセスの任意の１種または複数を包含する。
【００７３】
第１のプロセスによれば、式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に図示されている方法によって調製することができる。
【００７４】
【化６】
2018536677.tif 000008
【００７５】
プロセスステップ（ａ）で、３，６−ジクロロピリダジンを、式（ＩＩ）の４−置換−３−ブロモヨードベンゼンにカップリングさせて、式（ＩＩＩ）の４−アリール−３，６−ジクロロピリダジンを得る。典型的には、３，６−ジクロロピリダジンを、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）などの適切な溶媒中で、ビス−（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン）亜鉛などの亜鉛試薬で最初に処理する。次いで、ブロモヨードベンゼン誘導体を、適切なカップリング触媒、典型的には、トリス−（２−フリル）ホスフィンなどのホスフィンリガンドと組み合わせたビス−（ジベンジリデンアセトン）パラジウムなどのパラジウム誘導体と一緒に添加し、反応が完了したと判断されるまで、混合物を撹拌し、生成物を、標準的な方法を使用して単離する。
【００７６】
プロセスステップ（ｂ）では、式（ＩＩＩ）の４−アリール−３，６−ジクロロピリダジンをヒドロキシメチル化して、式（ＩＶ）の４−アリール−３，６−ジクロロ−５−（ヒドロキシメチル）ピリダジンを提供する。典型的には、４−アリール−３，６−ジクロロピリダジンを、硫酸鉄（ＩＩ）などの鉄（ＩＩ）塩、過酸化水素および硫酸などの鉱酸の存在下でメタノールと反応させる。ジクロロメタンなどの共溶媒を使用することができる。反応混合物を一般に、還流するよう加熱し、反応が完了したと判断されるまで撹拌し、生成物を、標準的な方法を使用して単離する。
【００７７】
プロセスステップ（ｃ）では、式（ＩＶ）の４−アリール−３，６−ジクロロ−５−（ヒドロキシメチル）ピリダジンを酸化させて、式（Ｖ）の４−アリール−３，６−ジクロロピリダジン−５−カルバルデヒドを得る。様々な酸化剤は、第一級アルコールをアルデヒドに変換するために有用であることが知られている。例えば、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中のアルコールの溶液を、デスマーチン試薬（１，１，１−トリアセトキシ−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンズヨードキソール−３（１Ｈ）−オン）で処理することができる。反応混合物を一般に、反応が完了したと判断されるまで撹拌し、生成物を、標準的な方法を使用して単離する。
【００７８】
プロセスステップ（ｄ）では、式（Ｖ）の４−アリール−３，６−ジクロロ−ピリダジン−５−カルバルデヒドを、式（ＶＩ）のヒドラジン誘導体と反応させて、式（ＶＩＩ）の４−アリール−５−クロロピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジンを得る。ヒドラジン誘導体をシュウ酸塩などの適切な塩から、トリエチルアミンなどの塩基で処理することによって、その場で生成することができる。成分を、反応が完了したと判断されるまで、エタノールなどの適切な溶媒中で一緒に加熱し、生成物を、標準的な方法を使用して単離する。
【００７９】
プロセスステップ（ｅ）では、式（ＶＩＩ）の４−アリール−５−クロロピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジンを、式（ＶＩＩＩ）のアリールボロン酸誘導体とカップリングさせて、式（ＩＸ）の４−（ビフェニル−３−イル）−５−クロロピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジンを得る。ボロン酸誘導体は、遊離ボロン酸（Ｒ＝Ｈ）、または２，３−ジメチルブタン−２，３−ジオールで形成される環式ジエステルなどのそのジエステルの形態であってよい。
【００８０】
【化７】
2018536677.tif 000009
【００８１】
ピラゾロピリダジンおよびアリールボロン酸誘導体を、パラジウム触媒および塩基の存在下で適切な溶媒中で合わせる。適切な溶媒には、ジメチルホルムアミド、ならびに水およびジオキシンの混合物が含まれ得る。パラジウム触媒は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）など、予め形成されていてもよいし、または例えば、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）およびトリ（ｔｅｒｔ−ブチル）ホスフィンからその場で形成されてもよい。適切な塩基には、炭酸ナトリウムおよびフッ化セシウムが含まれ得る。成分を、反応が完了したと判断されるまで一緒に加熱し、生成物を、標準的な方法を使用して単離する。
【００８２】
プロセスステップ（ｆ）では、式（ＩＸ）の４−（ビフェニル−３−イル）−５−クロロピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジンを還元によって脱塩素化して、式（Ｉ）の４−（ビフェニル−３−イル）ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジンを得る。反応を典型的には、炭素に担持されたパラジウムなどの適切な触媒の存在下で、メタノール、エタノール、酢酸エチルおよびその混合物などの適切な溶媒中のクロロピラゾロピリダジンの溶液を水素化することによって達成する。これを、好都合には、連続的なフローデバイス中で実施してよい。水素化を、反応が完了したと判断されるまで継続し、生成物を、標準的な方法を使用して単離する。
【００８３】
３，６−ジクロロピリダジン、式（ＩＩ）の４−置換−３−ブロモヨードベンゼン、式（ＶＩ）のヒドラジン誘導体および、式（ＶＩＩＩ）のアリールボロン酸誘導体は、市販されている、および／またはそれらを、文献に記載されている方法によって調製することができる。
【００８４】
医薬的使用を意図されている本発明の化合物は、結晶質もしくは非晶質生成物として投与することができるか、または完全な非晶質から完全な結晶質までの範囲の連続する固体状態で存在してよい。これらは、沈殿、結晶化、凍結乾燥、噴霧乾燥、または蒸発乾燥などの方法により、例えば、固体プラグ、粉末、またはフィルムとして得ることができる。マイクロ波または高周波乾燥を、この目的のために使用することができる。
【００８５】
これらは、単独で、または１種もしくは複数の他の本発明の化合物と組み合わせて、または１種もしくは複数の他の薬物と組み合わせて（またはその任意の組合せとして）投与することができる。一般に、これらは、１種または複数の薬学的に許容できる添加剤と共に製剤として投与される。用語「添加剤」は本明細書では、本発明の化合物（複数可）以外の任意の成分を記載するために使用される。添加剤の選択は、特定の投与方式、溶解性および安定性に対する添加剤の作用、ならびに剤形の性質などの要因に大きく左右される。
【００８６】
別の態様では、本発明は、本発明の化合物を１種または複数の薬学的に許容できる添加剤と一緒に含む医薬組成物を提供する。
【００８７】
本発明の化合物を送達するために適した医薬組成物およびその調製方法は、当業者には容易に分かるであろう。そのような組成物およびそれらの調製方法は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、第１９版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５）において見出すことができる。
【００８８】
適切な投与方式には、経口、非経口、局所、吸入／鼻腔内、直腸／膣内、および眼／耳投与が含まれる。
【００８９】
上述の投与方式に適した製剤は、即時および／または調節放出であるように製剤化することができる。調節放出製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、ターゲット放出、またはプログラム放出が含まれる。
【００９０】
本発明の化合物は、経口投与することができる。経口投与は、化合物が胃腸管に入るような嚥下を伴ってもよいか、または化合物が口から直接、血流に入る頬側もしくは舌下投与を使用することもできる。経口投与に適している製剤には、錠剤などの固体製剤、粒子、液体、または粉末を含有するカプセル剤、ロゼンジ剤（液体充填を包含）、咀嚼剤、多粒子剤およびナノ粒子剤、ゲル剤、固溶体剤、リポソーム剤、フィルム剤、オビュール剤（ｏｖｕｌｅ）、噴霧剤、液体製剤ならびに頬側／粘膜付着性貼付剤が含まれる。
【００９１】
液体製剤には、懸濁剤、液剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。そのような製剤は、軟カプセル剤または硬カプセル剤中の充填剤として使用することもでき、典型的には、担体、例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切なオイル、ならびに１種または複数の乳化剤および／または懸濁化剤を含む。液体製剤はまた、固体、例えばサシェからの再構成により調製することもできる。
【００９２】
本発明の化合物はまた、ＬｉａｎｇおよびＣｈｅｎによるＥｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ、１１（６）、９８１〜９８６（２００１）に記載されているものなどの急速溶解、急速崩壊剤形で使用することができる。
【００９３】
錠剤剤形では、用量に応じて、薬物は、剤形の１重量％〜８０重量％、より典型的には剤形の５重量％〜６０重量％を構成していてよい。薬物に加えて、錠剤は一般に、崩壊剤を含有する。崩壊剤の例には、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、微結晶性セルロース、低級アルキル置換ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、α化デンプンおよびアルギン酸ナトリウムが含まれる。一般に、崩壊剤は、剤形の１重量％〜２５重量％、好ましくは５重量％〜２０重量％を構成している。
【００９４】
結合剤を一般に使用して、錠剤製剤に粘着性を付与する。適切な結合剤には、微結晶性セルロース、ゼラチン、糖、ポリエチレングリコール、天然および合成ゴム、ポリビニルピロリドン、α化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロースならびにヒドロキシプロピルメチルセルロースが含まれる。錠剤はまた、ラクトース（一水和物、噴霧乾燥一水和物、無水物など）、マンニトール、キシリトール、デキストロース、スクロース、ソルビトール、微結晶性セルロース、デンプンおよび二塩基性リン酸カルシウム二水和物などの希釈剤を含有してよい。
【００９５】
錠剤はまた、ラウリル硫酸ナトリウムおよびポリソルベート８０などの界面活性剤、ならびに二酸化ケイ素およびタルクなどの流動促進剤を場合によって含んでよい。存在する場合には、界面活性剤は、錠剤の０．２重量％〜５重量％を構成し、流動促進剤は、錠剤の０．２重量％〜１重量％を構成してよい。
【００９６】
錠剤はまた、一般に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、フマル酸ステアリルナトリウム、およびステアリン酸マグネシウムとラウリル硫酸ナトリウムとの混合物などの滑沢剤を含有する。滑沢剤は一般に、錠剤の０．２５重量％〜１０重量％、好ましくは０．５重量％〜３重量％を構成する。他の可能な成分には、抗酸化剤、着色剤、香料、防腐剤および矯味剤が含まれる。
【００９７】
例示的な錠剤は、薬物約８０％まで、結合剤約１０重量％〜約９０重量％、希釈剤約０重量％〜約８５重量％、崩壊剤約２重量％〜約１０重量％、および滑沢剤約０．２５重量％〜約１０重量％を含有する。錠剤ブレンドを、直接か、ローラーにより圧縮して、錠剤を形成することができる。別法では、錠剤ブレンドまたはブレンドの一部を湿式、乾式、もしくは溶融造粒するか、溶融凝固させるか、または押し出し、その後に錠剤化することができる。最終製剤は、１つまたは複数の層を含んでもよく、コーティングされていてもよいか、またはコーティングされていなくてもよく、さらにカプセル封入されていてもよい。錠剤の製剤化は、Ｈ．ＬｉｅｂｅｒｍａｎおよびＬ．Ｌａｃｈｍａｎによる「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ」、第１巻（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８０）において論じられている。
【００９８】
本発明の目的に適している調節放出製剤は、米国特許第６，１０６，８６４号に記載されている。高エネルギー分散液および浸透性コーティングされた粒子などの他の適切な放出技術の詳細は、Ｖｅｒｍａらによる「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｏｎ−ｌｉｎｅ」、２５（２）、１〜１４（２００１）において見出すことができる。制御放出を達成するためにチューインガムを使用することは、ＷＯ００／３５２９８に記載されている。
【００９９】
本発明の化合物はまた、血流、筋肉、または内臓に直接投与することもできる。非経口投与に適している手段には、静脈内、動脈内、腹腔内、髄腔内、心室内、尿管内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内および皮下が含まれる。非経口投与のための適切なデバイスには、針（微細針を包含する）注射器、無針注射器および注入技術が含まれる。
【０１００】
非経口製剤は典型的には、塩、炭水化物、および緩衝剤（好ましくは３〜９のｐＨに）などの添加剤を含有してよい水溶液であるが、いくつかの用途では、これらをより適切に、滅菌非水溶液として、または発熱物質不含の滅菌水などの適切なビヒクルと共に使用される乾燥形態として製剤化することができる。
【０１０１】
例えば、凍結乾燥による滅菌条件下での非経口製剤の調製は、当業者によく知られている標準的な製薬技術を使用して容易に達成することができる。
【０１０２】
非経口溶液の調製において使用される式（Ｉ）の化合物の溶解性は、溶解性増強剤を導入するなどの適切な製剤技術を使用することにより増大させることができる。非経口投与のための製剤は、即時および／または調節放出であるように製剤化することができる。調節放出製剤には、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、ターゲット放出およびプログラム放出が含まれる。したがって本発明の化合物を、活性化合物の調節放出をもたらす移植デポー剤として投与するための固体、半固体、またはチキソトロピー液として製剤化することができる。そのような製剤の例には、薬物コーティングされたステントおよびポリ（ｄｌ−乳酸−コグリコール酸）（ＰＧＬＡ）微小球が含まれる。
【０１０３】
本発明の化合物は、皮膚または粘膜に局所で、すなわち、皮膚に、または経皮的に投与することもできる。この目的のための典型的な製剤には、ゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏剤、散布剤、ドレッシング剤、フォーム剤、フィルム剤、皮膚貼付剤、ウェハー剤（ｗａｆｅｒ）、インプラント剤、スポンジ、繊維、包帯およびマイクロエマルション剤が含まれる。リポソームも使用することができる。典型的な担体には、アルコール、水、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールが含まれる。透過促進剤を導入することもできる。例えば、ＦｉｎｎｉｎおよびＭｏｒｇａｎによるＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ、８８（１０）、９５５〜９５８（１９９９年１０月）を参照されたい。
【０１０４】
局所投与の他の手段には、電気穿孔法、イオン泳動法、音波泳動法、ソノフォレーシス、および微細針または無針（例えば、Ｐｏｗｄｅｒｊｅｃｔ（商標）、Ｂｉｏｊｅｃｔ（商標）など）注射による送達が含まれる。
【０１０５】
本発明の化合物はまた、鼻腔内または吸入により、典型的には乾燥粉末の形態（単独で、混合物として、例えば、ラクトースとの乾燥ブレンドで、または混合成分粒子として、例えば、ホスファチジルコリンなどのリン脂質と混合して）で、乾燥粉末吸入器から、またはエアロゾル噴霧剤として、加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器（好ましくは、電磁流体力学を用いて微細な霧を生成する噴霧器）、またはネブライザから、１，１，１，２−テトラフルオロエタンもしくは１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパンなどの適切な噴射剤を使用して、もしくは使用せずに投与することができる。鼻腔内使用では、粉末は、生体接着剤、例えば、キトサンまたはシクロデキストリンを含んでよい。鼻腔内での使用では、散剤は、生体用粘着剤、例えば、キトサンまたはシクロデキストリンを含んでよい。
【０１０６】
加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器、またはネブライザは、例えば、エタノール、水性エタノール、または活性物質の分散、可溶化、もしくはその放出の延長のために適している代替薬剤、溶媒としての噴射剤、およびトリオレイン酸ソルビタン、オレイン酸、もしくはオリゴ乳酸などの任意選択の界面活性剤を含む本発明の化合物（複数可）の溶液または懸濁液を含有する。
【０１０７】
乾燥粉末または懸濁液製剤で使用する前に、薬物製品を、吸入により送達するために適したサイズ（典型的には５ミクロン未満）まで超微粉砕する。これは、スパイラルジェット粉砕、流動床ジェット粉砕、ナノ粒子を形成するための臨界流体加工、高圧均一化、または噴霧乾燥などの任意の適切な粉砕方法により達成することができる。
【０１０８】
吸入器または注入器で使用するためのカプセル剤（例えば、ゼラチン製またはヒドロキシプロピルメチルセルロース製）、ブリスターおよびカートリッジを、本発明の化合物、ラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤、およびｌ−ロイシン、マンニトール、またはステアリン酸マグネシウムなどの性能調節剤の粉末混合物を含有するように製剤化することができる。ラクトースは、無水であってよいか、または一水和物の形態であってよいが、後者が好ましい。他の適切な添加剤には、デキストラン、グルコース、マルトース、ソルビトール、キシリトール、フルクトース、スクロースおよびトレハロースが含まれる。
【０１０９】
電磁流体力学を用いて微細な霧を生成する噴霧器で使用するために適している溶液製剤は、動作１回当たり本発明の化合物１μｇ〜２０ｍｇを含有してよく、その動作体積は、１μｌ〜１００μｌまで変動してよい。典型的な製剤は、式（Ｉ）の化合物、プロピレングリコール、滅菌水、エタノールおよび塩化ナトリウムを含んでよい。プロピレングリコールの代わりに使用することができる代替溶媒には、グリセロールおよびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１１０】
メントールおよびレボメントールなどの適切なフレーバー、またはサッカリンもしくはサッカリンナトリウムなどの甘味料を、吸入／鼻腔内投与を意図されている本発明の製剤に加えることができる。
【０１１１】
乾燥粉末吸入器およびエアロゾルの場合、投薬単位は、計測量を送達するバルブにより決定される。本発明による単位は典型的には、式（Ｉ）の化合物１μｇ〜１００ｍｇを含有する計測用量または「パフ」を投与するように設計される。全一日用量は典型的には、１μｇ〜２００ｍｇの範囲であり、これを単回用量で、またはより通常は、一日を通して分割用量として投与することができる。
【０１１２】
本発明の化合物は、例えば、坐剤、膣坐剤、殺菌剤、膣用リング剤（ｖａｇｉｎａｌ  ｒｉｎｇ）または浣腸剤の形態で直腸または膣投与することができる。カカオバターは、慣用的な坐剤基剤であるが、様々な代替物を適宜使用することができる。
【０１１３】
本発明の化合物は、典型的には等張性ｐＨ調整滅菌生理食塩水中の超微粉砕された懸濁液または溶液の液滴の形態で、眼または耳に直接投与することもできる。眼および耳投与に適している他の製剤には、軟膏剤、生分解性（例えば、吸収性ゲルスポンジ、コラーゲン）および非生分解性（例えば、シリコーン）インプラント剤、ウェハー剤、レンズならびに粒子系またはニオソームもしくはリポソームなどの小胞系が含まれる。架橋ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、セルロース系ポリマー、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、もしくはメチルセルロース、またはヘテロ多糖ポリマー、例えば、ゲランゴムなどのポリマーを、塩化ベンザルコニウムなどの防腐剤と一緒に導入することができる。そのような製剤はまた、イオン泳動法により送達することができる。
【０１１４】
上述の投与方式のいずれかの使用について、それらの溶解性、溶解速度、矯味、生物学的利用能および／または安定性を向上させるために、本発明の化合物を、シクロデキストリンおよびその適切な誘導体などの溶解性高分子成分またはポリエチレングリコール含有ポリマーと組み合わせることができる。
【０１１５】
薬物−シクロデキストリン複合体は例えば、ほとんどの剤形および投与経路に一般に有用であることが分かっている。包接複合体および非包接複合体の両方を使用することができる。薬物との直接的な複合体形成の代わりに、シクロデキストリンを補助的添加剤、すなわち、担体、希釈剤、または可溶化剤として使用することができる。これらの目的のために最も一般に使用されるのは、アルファ−、ベータ−およびガンマ−シクロデキストリンであり、この例は、国際特許出願ＷＯ９１／１１１７２、ＷＯ９４／０２５１８およびＷＯ９８／５５１４８において見出すことができる。
【０１１６】
ヒト患者に投与するためには、本発明の化合物の全一日用量は典型的には、当然のことながら、投与方式および有効性に応じて０．１ｍｇ〜１０ｇ、１ｍｇ〜１ｇなど、例えば２．５ｍｇ〜５００ｍｇの範囲である。例えば、経口投与は、５ｍｇ〜１００ｍｇの全一日用量を必要とし得る。全一日用量を、単回投与で、または分割投与で投与することができ、全一日用量は、医師の裁量で、本明細書に示されている典型的な範囲を逸脱することもある。これらの投薬量は、約６０ｋｇ〜７０ｋｇの体重を有する平均的なヒト対象に基づく。医師であれば、乳児および高齢者などのこの範囲外に体重が該当する対象での用量を容易に決定することができる。
【０１１７】
本発明の化合物は、薬理活性、すなわち、ＧＡＢＡＡチャネルモジュレーションを示すので、有用である。より詳細には、本発明の化合物は、ＧＡＢＡＡチャネルの陽性アロステリックモジュレーターである。好ましい本発明の化合物は、α１、α４および／またはα６サブタイプにおいては低い有効性および／または親和性を有する、α２、α３および／またはα５サブタイプの選択的モジュレーターである。したがって、本発明の化合物は、ＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターが適応とされる動物における障害の治療において有用である。好ましくは、動物は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。
【０１１８】
本発明のさらなる態様では、医薬として使用するための本発明の化合物を提供する。
【０１１９】
本発明のさらなる態様では、ＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターが適応とされる障害を治療するための本発明の化合物を提供する。
【０１２０】
本発明のさらなる態様では、ＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターが適応とされる障害を治療するための医薬を調製するための本発明の化合物の使用を提供する。
【０１２１】
本発明のさらなる態様では、ＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターが適応とされる動物（好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒト）における障害を治療する方法であって、前記動物に、治療有効量の本発明の化合物を投与することを含む方法を提供する。
【０１２２】
式（Ｉ）のＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターは、ＣＮＳ過興奮が機能障害をもたらす状態の治療において有効であり得る。
【０１２３】
式（Ｉ）のＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターは：
・例えば、以下でさらに検討するとおり、急性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、侵害受容性（炎症性を含む）疼痛、体性疼痛、内臓疼痛、および機能障害性疼痛を含めた疼痛を治療するための、ならびに特に、根底にある機序に脳または脊髄成分が存在する疼痛状態のための鎮痛薬として；
・例えば、Ｌｅｎｎｏｘ−Ｇａｓｔａｕｔ症候群、Ｄｒａｖｅｔ病、および熱性発作陽性（ＧＥＦＳ＋）の全身てんかんを含めたてんかんおよびてんかん関連障害を治療するための抗痙攣薬として；
・例えば、パニック障害、全般性不安障害、心的外傷後ストレス障害、急性ストレス障害および物質誘発性ストレス障害などのストレス障害、広場恐怖症、社会恐怖症および動物恐怖症などの恐怖症、ならびに強迫性障害を治療するための抗不安薬として；ならびに
・例えば、筋肉痙攣、ジストニア、痙縮（全身および限局性痙縮を含む）および本態性振戦を治療するための筋弛緩薬として使用することができる。
【０１２４】
式（Ｉ）のＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターはまた、自閉症を治療するために、または例えば、統合失調症を治療するための抗精神病薬として使用することができる。
【０１２５】
式（Ｉ）のＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターについての他の治療適応には、例えば、抑うつ障害および双極性障害ならびに感情循環を治療するための抗うつ薬としての使用；例えば、化学療法または放射線誘発性嘔吐、術後悪心および嘔吐、ならびに乗物酔いを治療するための制吐薬としての使用；例えば、アルツハイマー病および脳虚血などの神経変性障害を治療するための認知改善薬としての使用；例えば、不眠症および時差ぼけなどの概日リズム障害などの睡眠障害を治療するための、または麻酔もしくは内視鏡検査の前の術前投薬として使用するための睡眠改善薬としての使用；ならびにアルコール中毒などの中毒表現型、アンジェルマン症候群、注意欠陥多動性障害、膀胱切迫感、腸異常、神経性食欲不振および神経性過食症などの摂食障害、脆弱Ｘ症候群、耳鳴りおよび加齢性聴力機能障害などの聴力障害、多発性硬化症、ノイローゼ、感覚障害を伴う過活動膀胱、月経前症候群、レストレスレッグ症候群、および尿失禁などの治療における使用が含まれる。
【０１２６】
式（Ｉ）の化合物の好ましい使用は、疼痛の治療である。疼痛は、急性または慢性のいずれであってもよく、加えて、中枢由来および／または抹消由来のものであってよい。疼痛は、身体系または内臓系のいずれかに影響を及ぼす疼痛、さらには、複数の系に影響を及ぼす機能障害性疼痛などの神経障害性および／または侵害受容性および／または炎症性のものであってよい。
【０１２７】
生理学的疼痛は、外部環境からの有害な可能性のある刺激による危険を警告するように設計された重要な防御機構である。このシステムは、一次感覚ニューロンの特異的なセットを介して作動し、末梢導入機構を介して、有害な刺激により活性化される（Ｍｅｙｅｒら、２００６、Ｗａｌｌ  ａｎｄ  Ｍｅｌｚａｃｋ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｉｎ（第５版）、第１章を参照されたい）。これらの感覚線維は、侵害受容器として知られており、ゆっくりとした伝導速度を伴う特徴的に小さな直径の軸索であり、それらには、２つの主な種類、Ａ−デルタ線維（有髄）およびＣ線維（無髄）がある。侵害受容器は、侵害刺激の強度、持続時間および質をコード化し、脊髄へのそれらの組織分布的に整理された投射により、刺激の位置をコード化する。侵害受容器入力により生成した活性は、後角での複雑なプロセシングの後に、直接か、または脳幹中継核を介して、基底腹側視床に、次いで、疼痛の感覚が生じる皮質に移る。
【０１２８】
疼痛は一般に、急性または慢性として分類され得る。急性疼痛は突然に始まり、短期間である（通常は１２週間以下）。急性疼痛は、常にではないが通常は、既定の損傷などの特定の原因に関連し、多くの場合に鋭く重度であり、外科手術、歯科作業、挫傷または捻挫などの多数の由来により生じ得る。急性疼痛は一般に、任意の持続性の心理学的応答をもたらさない。疾患または外傷により体組織に重大な損傷が生じたときに、侵害受容器活性化の特徴は、末梢に、損傷周囲に局所的に、および侵害受容体が終結する中枢に感作が起こるようなものに変わる可能性がある。これらの作用は、疼痛感覚の増大をもたらす。急性疼痛では、これらの機構は、修復プロセスをより良好に起こさせ得る防御的行動を促進するのに有用であり得る。一旦損傷が治癒すれば、感受性は正常に戻ると、ふつうは予測される。しかしながら、多くの慢性疼痛状態では、過敏性は、治癒プロセスよりはるかに長く続き、多くの場合、適応不良および異所性活性に関係し得る神経系損傷または変化のためである（Ｗｏｏｌｆ  ＆  Ｓａｌｔｅｒ、２０００、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２８８、１７６５〜１７６８）。このように、慢性疼痛は、典型的には、３カ月超にわたって持続し、重大な心理的および情動的問題につながる長期疼痛である。慢性疼痛の一般的な例は、神経障害性疼痛（例えば、有痛性糖尿病性神経障害または帯状疱疹後神経痛）、手根管症候群、背部痛、頭痛、癌性疼痛、関節炎疼痛および慢性手術後疼痛であるが、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｐａｉｎ（Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｐａｉｎ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉａｓｐ−ｐａｉｎ．ｏｒｇから無償でダウンロードできる刊行物）により記載されているものなど、任意の系に影響を及ぼす任意の慢性有痛性状態が含まれ得る。
【０１２９】
患者の症状において不快感および異常な感受性が特色になっている場合に、疼痛の臨床症状が存在する。患者はかなり不均一である傾向があり、様々な疼痛症状を示し得る。そのような症状には：１）鈍い、焼けつくような、または刺すようなものであり得る自発痛；２）有害刺激に対する過大疼痛応答（痛覚過敏）；および３）正常無害性刺激により生成される疼痛（異痛症）が含まれ得る（Ｍｅｙｅｒら、２００６、Ｗａｌｌ  ａｎｄ  Ｍｅｌｚａｃｋ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｉｎ（第５版）、第１章）。様々な形態の急性および慢性疼痛に罹患している患者は同様の症候を有し得るが、発生機序は異なり、したがって異なる治療ストラテジーを必要とし得る。急性または慢性とは別に、疼痛はまた、（組織損傷および免疫細胞の浸潤に関連して）本質的に炎症性であり得る、身体系または内臓系のいずれかに影響を及ぼす侵害受容性疼痛と、または神経障害性疼痛とに広く分類され得る。
【０１３０】
侵害受容性疼痛は、強い熱的、機械的、または化学的刺激が侵害受容器と呼ばれる末梢神経線維の分集団により検知されるプロセスと定義され得、また、組織損傷により、または損傷の原因となる可能性のある強い刺激により誘発され得る。疼痛求心性神経は、損傷の部位での侵害受容器による刺激の伝達により活性化され、それらの終結のレベルでの脊髄中のニューロンを活性化する。次いで、これは、脊髄路を上って脳に中継され、そこで疼痛が感知される（Ｍｅｙｅｒら、２００６、Ｗａｌｌ  ａｎｄ  Ｍｅｌｚａｃｋ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｉｎ（第５版）、第１章）。有髄Ａ−デルタ線維は迅速に伝導し、鋭利で刺すような疼痛感覚に関与する一方で、無髄Ｃ線維はより遅い速度で伝導し、鈍いか、またはうずくような疼痛を伝達する。中等度から重度の急性侵害受容性疼痛は、挫傷／捻挫、熱傷、心筋梗塞、および急性膵臓炎からの疼痛、術後痛（任意の種類の外科手術後の疼痛）、外傷後疼痛、通風、癌性疼痛、および背部痛に関連する疼痛の顕著な特徴である。癌性疼痛は、腫瘍関連疼痛（例えば、骨疼痛、頭痛、顔面痛または内臓痛）または癌療法に関連した疼痛（例えば、化学療法、免疫療法、ホルモン療法または放射線療法に応答した疼痛）などの慢性疼痛であり得る。背部痛は、椎間板ヘルニアもしくは椎間板破裂、または腰椎椎間関節、仙腸関節、傍脊椎筋もしくは後縦靭帯の異常のせいであり得る。背部痛は、自然に消散し得るが、それが１２週間にわたって継続する一部の患者では、特に衰弱性であり得る慢性状態になる。
【０１３１】
侵害受容性疼痛は、炎症状態にも関連し得る。炎症プロセスは、組織損傷または外来物質の存在に応じて活性化して、腫脹および疼痛をもたらす一連の複雑な生化学および細胞事象である（ＭｃＭａｈｏｎら、２００６、Ｗａｌｌ  ａｎｄ  Ｍｅｌｚａｃｋ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｉｎ（第５版）、第３章）。疼痛に関連する一般的な炎症状態は関節炎である。ほぼ２千７百万人のアメリカ人が症候性変形性関節症（ＯＡ）または変形性関節疾患を有すると推定されており（Ｌａｗｒｅｎｃｅら、２００８、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ、５８、１５〜３５）；変形性関節症の患者の多くが、随伴する疼痛により、医学的処置を求めている。関節炎は、心理社会的および物理的機能に重大な衝撃を有し、後半生における身体障害の主な原因であることが知られている。関節リウマチは、末梢滑膜関節に主に影響を及ぼす免疫媒介性で慢性の炎症性多発性関節炎疾患である。これは、先進国における最も一般的な慢性炎症状態の１つであり、疼痛の主な原因である。
【０１３２】
内臓由来の侵害受容性に関しては、内臓疼痛は、胸部、骨盤、または腹部臓器の侵害受容器の活性化から生じている（ＢｉｅｌｅｆｅｌｄｔおよびＧｅｂｈａｒｔ、２００６、Ｗａｌｌ  ａｎｄ  Ｍｅｌｚａｃｋ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐａｉｎ（第５版）、第４８章）。これには、生殖器、脾臓、肝臓、胃腸管、尿路、気道構造、心臓血管系、および腹腔内に含まれる他の臓器が含まれる。したがって、内臓疼痛は、有痛性膀胱症候群、間質性膀胱炎、前立腺炎、潰瘍性大腸炎、クローン病、腎仙痛、過敏性腸症候群、子宮内膜症、および月経困難などの、そのような臓器の状態に関連する疼痛を指す（Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｐａｉｎ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉａｓｐ−ｐａｉｎ．ｏｒｇにおいて入手可能）。現在、内臓疼痛状態に対する神経障害性の寄与の可能性（中枢変化または神経損傷／障害のいずれかを介する）は、不十分にしか理解されていないが、特定の状態において役割を果たし得る（Ａｚｉｚら、２００９、Ｄｉｇ  Ｄｉｓ  ２７、Ｓｕｐｐｌ  １、３１〜４１）。
【０１３３】
神経障害性疼痛は現在、体性感覚系に影響を及ぼす病変または疾患の直接的な帰結として生じる疼痛として定義されている。神経損傷は、外傷および疾患に起因し得、したがって、用語「神経障害性疼痛」は、多様な病因を有する多くの障害を内包する。これらには、これらだけに限定されないが、末梢神経障害、糖尿病性神経障害、ヘルペス後神経痛、三叉神経痛、背部痛、癌神経障害、ＨＩＶ神経障害、幻肢痛、手根管症候群、中枢性卒中後痛ならびに慢性アルコール中毒、甲状腺機能低下症、尿毒症、多発性硬化症、脊髄損傷、パーキンソン病、てんかんおよびビタミン欠乏に関連する疼痛が含まれる。神経障害性疼痛は、防御的役割を有さない場合は、病的である。神経障害性疼痛は多くの場合に、元々の原因が消失した後もかなり存在し、一般に数年間持続して、患者の生活の質を大いに低減する（Ｄｗｏｒｋｉｎ、２００９、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ、１２２、Ｓ１−Ｓ２；Ｇｅｂｅｒら、２００９、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ、１２２、Ｓ３〜Ｓ１２；Ｈａａｎｐａａら、２００９、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ、１２２、Ｓ１３〜Ｓ２１）。神経障害性疼痛の症状は、多くの場合に同一疾患を有する患者の間でさえ不均一であるため、治療が難しい（Ｄｗｏｒｋｉｎ、２００９、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ、１２２、Ｓ１〜Ｓ２；Ｇｅｂｅｒら、２００９、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ、１２２、Ｓ３〜Ｓ１２；Ｈａａｎｐａａら、２００９、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ、１２２、Ｓ１３〜Ｓ２１）。これらには、自発的疼痛（継続性であり得る）、ならびに痛覚過敏症（有害刺激に対する感受性増大）および異痛症（正常無害性刺激に対する感受性）などの発作性または異常惹起性疼痛が含まれる。
【０１３４】
いくつかの種類の疼痛は多数の病因を有し、したがって複数の領域に分類され、例えば、背部痛、癌性疼痛および偏頭痛でさえ、侵害受容性および神経障害性成分の両方を含み得るということに留意すべきである。
【０１３５】
同様に、他の種類の慢性疼痛は、十分には理解されていないかもしれないが、侵害受容性または神経障害性の極度に単純化された定義によっては、容易に定義されない。そのような状態には、特に、線維筋痛症および慢性局所疼痛症候群が含まれ、これらは多くの場合に、機能障害性疼痛状態、例えば、線維筋痛症または複合性局所疼痛症候群と記載されるが（Ｗｏｏｌｆ、２０１０、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、１２０、３７４２〜３７４４）、これらは、慢性疼痛状態の分類に含まれる（Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｐａｉｎ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉａｓｐ−ｐａｉｎ．ｏｒｇにおいて入手可能）。
【０１３６】
ＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターは、特に、疼痛の治療において、別の薬理学的に活性な化合物と、または２種以上の他の薬理学的に活性な化合物と有用に組み合わせることができる。そのような組み合わせは、患者の服薬遵守、投薬の容易さ、および相乗的活性を含めた有意な利点の可能性を示す。
【０１３７】
次の組み合わせでは、本発明の化合物を、他の１種または複数の治療薬と組み合わせて同時に、逐次に、または別々に投与することができる。
【０１３８】
疼痛の治療では、上記で定義したとおりの式（Ｉ）のＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーターまたは薬学的に許容できるその塩を、以下から選択される１種または複数の薬剤と組み合わせて投与することができる：
・ＷＯ２００８／１１８７５８に開示されている化合物などの選択的Ｎａｖ１．３チャネルモジュレーター；
・ＷＯ２０１０／０７９４４３に開示されている化合物などの選択的Ｎａｖ１．７チャネルモジュレーター、例えば、４−［２−（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−４−クロロフェノキシ］−５−クロロ−２−フルオロ−Ｎ−１，３−チアゾール−４−イルベンゼンスルホンアミドもしくは４−［２−（３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−４−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５−クロロ−２−フルオロ−Ｎ−１，３−チアゾール−４−イルベンゼンスルホンアミド、または薬学的に許容できるいずれかの塩；
・選択的なＮａｖ１．８チャネルモジュレーター；
・選択的なＮａｖ１．９チャネルモジュレーター；
・ブピバカイン、カルバマゼピン、ラモトリジン、リドカイン、メキシレチンまたはフェニトインなどの非選択的モジュレーターを含めた、１種を超えるＮａｖチャネルにおいて活性をモジュレートする化合物；
・ＮＧＦに結合して、ＮＧＦシグナル伝達により媒介されるＮＧＦ生物学的活性および／または下流の経路（複数可）を阻害する薬剤（例えば、タネズマブ）、ＴｒｋＡアンタゴニストもしくはｐ７５アンタゴニスト、またはＮＧＦ刺激ＴｒｋＡまたはＰ７５シグナル伝達に関する下流のシグナル伝達を阻害する薬剤などの神経成長因子（ＮＧＦ）シグナル伝達の任意の阻害薬；
・その阻害が、（ａ）神経成長因子（ＮＧＦ）（例えば、タネズマブ、ファシヌマブ（ｆａｓｉｎｕｍａｂ）またはフルラヌマブ（ｆｕｌｒａｎｕｍａｂ））、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）もしくはニューロトロフィン−４（ＮＴ−４）に結合する薬剤、または１種を超える上述のニューロトロフィンに結合する薬剤（例えば、可溶性Ｐ７５）；または（ｂ）オルソステリック部位においてか、アロステリック部位においてか、または受容体（複数可）の触媒活性の阻害により、ＴｒＫＡ、ＴｒＫＢ、ＴｒＫＣまたはＰ７５の１種または複数において受容体機能を阻害する薬剤により達成される神経栄養経路の阻害薬；
・脂肪酸アミドヒドロラーゼ阻害（ＦＡＡＨ）活性またはモノアシルグリセロールリパーゼ（ＭＡＧＬ）活性を有する化合物などの、エンドカンナビノイドのレベルを上昇させる化合物；
・鎮痛薬、特に、パラセタモール；
・ブプレノルフィン、ブトルファノール、コカイン、コデイン、ジヒドロコデイン、フェンタニール、ヘロイン、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レバロルファン  レボルファノール、メペリジン、メタドン、モルヒネ、ナルメフェン、ナロルフィン、ナロキソン、ナルトレキソン、ナルブフィン、オキシコドン、オキシモルホン、プロポキシフェンまたはペンタゾシンなどのオピオイド鎮痛薬；
・ＴＲＶ１３０など、ベータアレスチン動員とは対照的に、特異的細胞内経路、例えば、Ｇタンパク質を優先的に刺激するオピオイド鎮痛薬；ノルアドレナリン（ノルエピネフリン）再取り込み阻害（ＮＲＩ）活性（例えば、タベンタドール）；セロトニンおよびノルエピネフリン再取り込み阻害（ＳＮＲＩ）活性（例えば、トラマドール）；またはノシセプチン受容体（ＮＯＰ）アゴニスト活性（ＧＲＴ６００５など）などの追加の薬理を有するオピオイド鎮痛薬；
・非選択的シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害薬などの非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、アスピリン、ジクロフェナク、ジフルシナル、エトドラク、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェニサル、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、ニメスリド、ニトロフルルビプロフェン、オルサラジン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、スルファサラジン、スリンダク、トルメチンもしくはゾメピラク；またはＣＯＸ−２選択的阻害薬、例えば、セレコキシブ、デラコキシブ、エトリコキシブ、マヴァコキシブ（ｍａｖａｃｏｘｉｂ）またはパレコキシブ；
・プロスタグランジンＥ２サブタイプ４（ＥＰ４）アンタゴニスト；
・ミクロソームプロスタグランジンＥシンテターゼ１型（ｍＰＧＥＳ−１）阻害薬；
・グルテチミド、メプロバメート、メタクワロンまたはジクロラールフェナゾンなどの鎮静薬；
・クロルジアゼポキシド、アルプラゾラム、ジアゼパム、ロラゼパム、オキサゼパム、テマゼパム、トリアゾラム、クロナゼパムまたはクロバザムなどの、ベンゾジアゼピン結合部位により媒介される幅広いサブタイプモジュレート効果を有するＧＡＢＡＡモジュレーター；
・ＴＰＡ０２３、ＴＰＡ０２３Ｂ、Ｌ−８３８，４１７、ＣＴＰ３５４またはＮＳＤ７２などの、有害作用の低減を伴う、ベンゾジアゼピン結合部位により媒介されるサブタイプ選択的モジュレート効果、例えば、鎮静を有するＧＡＢＡＡモジュレーター；
・バルビツレート、例えば、アモバルビタール、アプロバルビタール、ブタビタール（ｂｕｔａｂｉｔａｌ）、メホバルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルチタール（ｐｈｅｎｏｂａｒｔｉｔａｌ）、セコバルビタール、またはチオペンタールなどの受容体上の代替的結合部位により作用するＧＡＢＡＡモジュレーター；アルファキサロン、アルファドロンまたはガナキソロン（ｇａｎａｘｏｌｏｎｅ）などの神経ステロイド；エチホキシンなどのβ−サブユニットリガンド；またはガボキサドール（ｇａｂｏｘａｄｏｌ）などのδ−選択的リガンド；
・ＧｌｙＲ３アゴニストまたは陽性アロステリックモジュレーター；
・骨格筋弛緩薬、例えば、バクロフェン、カリソプロドール、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、メタキソロン（ｍｅｔａｘｏｌｏｎｅ）、メトカルバモールまたはオルフレナジン（ｏｒｐｈｒｅｎａｄｉｎｅ）；
・ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストなどのグルタミン酸受容体アンタゴニストまたは陰性アロステリックモジュレーター、例えば、デキストロメトルファン、デキストロルファン、ケタミン、もしくはメマンチン；またはｍＧｌｕＲアンタゴニストもしくはモジュレーター；
・クロニジン、グアンファシンまたはデクスメタトミジン（ｄｅｘｍｅｔａｔｏｍｉｄｉｎｅ）などのアルファ−アドレナリン作用薬；
・プロプラノロールなどのベータ−アドレナリン作用薬；
・三環系抗うつ薬、例えば、デシプラミン、イミプラミン、アミトリプチリンまたはノルトリプチリン；
・アプレピタントまたはマロピタント（ｍａｒｏｐｉｔａｎｔ）などのタキキニン（ＮＫ）アンタゴニスト；
・ムスカリン様アンタゴニスト、例えば、オキシブチニン、トルテロジン、プロピベリン、塩化トロプシウム（ｔｒｏｐｓｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ダリフェナシン、ソリフェナシン、テミベリンおよびイプラトロピウム；
・イスプロニクリン（ＴＣ−１７３４）、バレニクリンまたはニコチンなどのコリン作動性（ニコチン作動性）鎮痛薬；
・一過性受容体電位Ｖ１（ＴＲＰＶ１）受容体アゴニスト（例えば、レシンフェラトキシン（ｒｅｓｉｎｆｅｒａｔｏｘｉｎ）またはカプサイシン）またはアンタゴニスト（例えば、カプサゼピンまたはマヴァトラップ（ｍａｖａｔｒａｐ））；
・一過性受容体電位Ａ１（ＴＲＰＡ１）受容体アゴニスト（例えば、シンナムアルデヒドまたはカラシ油）またはアンタゴニスト（例えば  ＧＲＣ１７５３６またはＣＢ−６２５）；
・一過性受容体電位Ｍ８（ＴＲＰＭ８）受容体アゴニスト（例えば、メントールまたはイシリン（ｉｃｉｌｉｎ））またはアンタゴニスト；
・一過性受容体電位Ｖ３（ＴＲＰＶ３）受容体アゴニストまたはアンタゴニスト（例えば、ＧＲＣ−１５３００）；
・デキサメタゾンなどのコルチコステロイド；
・エレトリプタン、スマトリプタン、ナラトリプタン、ゾルミトリプタンまたはリザトリプタンなどの５−ＨＴ受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、特に、５−ＨＴ１Ｂ／１Ｄアゴニスト；
・５−ＨＴ２Ａ受容体アンタゴニスト；
・シルデナフィル、タダラフィルまたはバルデナフィルなどのＰＤＥＶ阻害薬；
・ガバペンチン、ガバペンチンエナカルビルまたはプレガバリンなどのアルファ−２−デルタリガンド；
・セルトラリン、デメチルセルトラリン、フルオキセチン、ノルフルオキセチン、フルボキサミン、パロキセチン、シタロプラム、デスメチルシタロプラム、エスシタロプラム、ｄ，ｌ−フェンフルラミン、フェモキセチン、イフォキセチン（ｉｆｏｘｅｔｉｎｅ）、シアノドチエピン、リトキセチン（ｌｉｔｏｘｅｔｉｎｅ）、ダポキセチン、ネファゾドン、セリクラミン（ｃｅｒｉｃｌａｍｉｎｅ）およびトラゾドンなどのセロトニン再取り込み阻害薬（ＳＲＩ）；
・マプロチリン、ロフェプラミン、ミルタゼピン（ｍｉｒｔａｚｅｐｉｎｅ）、オキサプロチリン、フェゾラミン（ｆｅｚｏｌａｍｉｎｅ）、トモキセチン、ミアンセリン、ブプロプリオン、ブプロプリオン代謝産物ヒドロキシブプロプリオン、ノミフェンシンおよびビロキサジンなどのＮＲＩ、特に、レボキセチンなどの選択的ノルアドレナリン再取り込み阻害薬；
・ベンラファキシン、Ｏ−デスメチルベンラファキシン、クロミプラミン、デスメチルクロミプラミン、デュロキセチン、ミルナシプランおよびイミプラミンなどのＳＮＲＩ；
・誘導型酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）阻害薬；
・ロイコトリエンＢ４アンタゴニスト；
・ジロートンなどの５−リポキシゲナーゼ阻害薬；
・ＫＣＮＱ／Ｋｖ７の開口薬または陽性モジュレーターなどのカリウムチャネル開口薬または陽性モジュレーター（例えば、レチガビンまたはフルピルチン）、サブファミリーＡ（例えば、Ｋｖ１．１）、サブファミリーＢ（例えば、Ｋｖ２．２）またはサブファミリーＫ（例えば、ＴＡＳＫ、ＴＲＥＫまたはＴＲＥＳＫ）のメンバーなどのＧタンパク質共役型内向き整流性カリウムチャネル（ＧＩＲＫ）、カルシウム活性化カリウムチャネル（Ｋｃａ）またはカリウム電位開口型チャネル；
・Ｐ２Ｘ３受容体アンタゴニスト（例えば、ＡＦ２１９）、またはＰ２Ｘ２／３ヘテロマー受容体などの、そのサブユニットの１つとしてＰ２Ｘ３サブユニットを含有する受容体のアンタゴニスト；
・ジコノチドなどのＣａＶ２．２カルシウムチャネル遮断薬（Ｎ型）；ならびに
・エトスクシミドなどのＣａＶ３．２カルシウムチャネル遮断薬（Ｔ型）。
【０１３９】
てんかんの治療では、上記で定義したとおりの式（Ｉ）のＧＡＢＡＡ陽性アロステリックモジュレーター、または薬学的に許容できるその塩を、以下から選択される１つまたは複数の薬剤と組み合わせて投与することができる：
・フェナセミドまたはフェネトライドなどのアセチル尿素；
・ガバペンチンまたはプレガバリンなどのアルファ−２−デルタリガンド；
・バルベキサクロン、エテロバルブ、メホバルビタール、メタルビタールもしくはフェノバルビタールなどのバルビツレート、またはプリミドンなどのデオキシバルビツレート；
・クロバザム、クロナゼパムまたはニトラゼパムなどのベンゾジアゼピン；
・４−アミノ−３−ヒドロキシ酪酸、プロガビド、チアガビンまたはビガバトリンなどのガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）類似体；
・カルバマゼピン、エスリカルバゼピン酢酸塩またはオキスカルバゼピンなどのイミノスチルベン；
・エトトイン、メフェニトイン、フェニトインまたはフェニトインナトリウムなどのヒダントイン；
・エタジオン、パラメタジオン、トロキシドンなどのオキサゾリジンジオン
・エトスクシミド、メスクシミドまたはフェンスクシミドなどのスクシンイミド
・バルプロアートナトリウム、バルプロ酸またはバルプロミドなどのバルプロアート；
・アセタゾラミド；ベクラミド、フェルバメート、ラコサミド、ラモトリジン、レベチラセタム、ミラセミド、ナフィミドン、ペランパネル、ピラセタム、レチガビン、ルフィナミド、スチリペントール、スルチアム、トピラマートまたはゾニサミド。
【０１４０】
本発明の化合物と、本発明の化合物の代謝速度を遅延させ、それによって、患者における暴露を増大させる１種または複数の追加の治療薬との本発明の組み合わせも、本発明の範囲内に含まれる。そのような手法での暴露の増大は、ブースティングとして知られている。これは、本発明の化合物の有効性を増大させるという利益か、またはブースティングされていない用量と同じ有効性を達成するために必要とされる用量の低減を示す。本発明の化合物の代謝には、Ｐ４５０（ＣＹＰ４５０）酵素、特に、ＣＹＰ３Ａ４により実行される酸化プロセス、およびＵＤＰグルクロノシルトランスフェラーゼによる共役および酵素の硫酸化が含まれる。したがって、本発明の化合物に対する患者の暴露を増大させるために使用することができる薬剤には、シトクロムＰ４５０（ＣＹＰ４５０）酵素の少なくとも１個のアイソフォームの阻害薬として作用し得るものがある。有益に阻害され得るＣＹＰ４５０のアイソフォームには、これらだけに限定されないが、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９およびＣＹＰ３Ａ４が含まれる。ＣＹＰ  ３Ａ４を阻害するために使用することができる適切な薬剤には、リトナビル、サクイナビル、ケトコナゾール、Ｎ−（３，４−ジフルオロベンジル）−Ｎ−メチル−２−｛［（４−メトキシピリジン−３−イル）アミノ］スルホニル｝ベンズアミド、およびＮ−（１−（２−（５−（４−フルオロベンジル）−３−（ピリジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセチル）ピペリジン−４−イル）メタンスルホンアミドが含まれる。
【０１４１】
そのうちの少なくとも１種が本発明の化合物を含有する２種以上の医薬組成物を、組成物の同時投与に適したキットの形態で好都合に組み合わせることができることは本発明の範囲内である。したがって、本発明のキットは、そのうちの少なくとも１種が本発明の化合物を含有する２種以上の別個の医薬組成物、および前記の組成物を別々に保持するための容器、分割ボトル、または分割ホイルパケットなどの手段を含む。このようなキットの例は、錠剤、カプセル剤などの包装のために使用される、よく知られているブリスターパックである。本発明のキットは、異なる剤形を例えば経口および非経口で投与するために、異なる投与間隔で別個の組成物を投与するために、または互いに対して別個の組成物を用量決定するために特に適している。服薬遵守を助けるために、キットは典型的には、投与のための使用説明書を含み、いわゆるメモリーエイドを装備していてよい。
【０１４２】
別の態様では、本発明は、ＧＡＢＡ―Ａモジュレーターが適応とされる障害の治療において同時に、別々に、または逐次に使用するための組み合わせ製剤として、本発明の化合物を１種または複数の追加の治療的活性薬剤と一緒に含む医薬製品（キットの形態においてなど）を提供する。
【０１４３】
本明細書における治療に関する言及はすべて、治癒的、姑息的および予防的治療を含むことは認められるべきである。
【０１４４】
本明細書において下記で提示する非限定的実施例および調製例において、かつ上述のスキームにおいて、次の略語、定義および分析手順に言及することがある：
ｂｒは、ブロードであり；
℃は、摂氏温度であり
ＣＤＣｌ３は、重水素−クロロホルムであり；
ＣＤ３ＯＤは、ペルジュウテロメタノールであり：
δは、化学シフトであり；
ｄは、二重線であり；
ＤＣＭは、ジクロロメタン；塩化メチレンであり；
ｄｄは、二重−二重線であり；
ｄｄｄは、二重−二重−二重線であり；
ＤＭＦは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり；
ＤＭＳＯ−ｄ６は、ペルジュウテロ―ジメチルスルホキシドであり；
ＥＬＳＤは、蒸発光散乱検出器であり；
ＥｔＯＡｃは、酢酸エチルであり；
ＥｔＯＨは、エタノールであり；
ｇは、グラムであり；
ＨＰＬＣは、高圧液体クロマトグラフィーであり；
Ｌは、リットルであり
ＬＣＭＳは、液体クロマトグラフィー質量分析法（Ｒｔ＝保持時間）であり；
ｍは、多重線であり；
Ｍは、モル濃度であり；
ＭｅＣＮは、アセトニトリルであり；
ＭｅＯＨは、メタノールであり；
ｍｇは、ミリグラムであり；
ＭＨｚは、メガヘルツであり；
ｍｉｎは、分であり；
ｍＬは、ミリリットルであり；
ｍｍｏｌは、ミリモルであり；
ｍｏｌは、モルであり；
ＭＳ  ｍ／ｚは、質量スペクトルピークであり；
ＮａＨＣＯ３は、炭酸水素ナトリウムであり；
Ｎａ２ＣＯ３は、炭酸ナトリウムであり；
ＮＭＲは、核磁気共鳴であり；
Ｐ（２−ｆｕｒｙｌ）３は、トリス（２−フリル）ホスフィンであり
Ｐｄ（ｄｂａ）２は、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）であり；
Ｐｄ２（ｄｂａ）3は、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）であり；
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４は、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）であり；
ｐＨは、水素イオン指数であり；
ｐｐｍは、百万分率であり；
ｑは、四重線であり；
ｓは、一重線であり；
ｔは、三重線であり； 
ＴＥＡは、トリメチルアミンであり；
ＴＨＦは、テトラヒドロフランであり；
ＴＬＣは、薄層クロマトグラフィーであり；
μＬは、マイクロリットルであり；
μｍｏｌは、マイクロモルである。
【０１４５】
以下の調製例および実施例で、本発明を例示するが、それらは、本発明を何ら限定するものではない。すべての出発物質は、市販されているか、または文献に記載されている。すべての温度は、℃での温度である。シリカゲルカラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０（９３８５）を使用して実施した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０プレート（５７２９）で実施した。１Ｈ−および１９Ｆ−ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００もしくは４００ＭＨｚ、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ４００ＭＨｚ  ＮＭＲ、またはＪｅｏｌ  ＥＣＸ  ４００ＭＨｚで記録した。ピークの多重性を報告する場合は、次の略語を使用している：ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｍ＝多重線、ｂｒ＝幅広、ｄｄ＝二重二重線、ｄｔ＝二重三重線。
【０１４６】
ＬＣＭＳは、液体クロマトグラフィー質量分析法（Ｒｔ＝保持時間）を示す。溶媒の比が示されている場合は、その比は、体積による比である。
【０１４７】
質量スペクトル（ＭＳ）は、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）または大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）のいずれかを使用して記録した。質量分析を、Ｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｎａｖｉｇａｔｏｒシングル四重極エレクトロスプレー質量分析計、Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ａＱａ  ＡＰＣＩ質量分析計、またはＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ  Ｑ−Ｔｒａｐを使用して実施した。
【０１４８】
化合物を、先行する調製例または実施例について記載した手法において調製したと述べている場合に、当業者であれば、反応時間、試薬の当量数および反応温度を特定の反応ごとに変えることができること、また、それにもかかわらず、異なる後処理または精製条件を使用することが、必要であるか、または望ましいことがあることを認識する。
【実施例】
【０１４９】
調製例１
４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−３，６−ジクロロピリダジン
市販用に調製された２，２，６，６−ビス（テトラメチルピペリジン）亜鉛リチウムクロリド錯体の溶液（０．３５Ｍ、４１ｍＬ、１４．３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２４ｍＬ）中の３，６−ジクロロピリダジン（２ｇ、１３ｍｍｏｌ）の溶液でゆっくり処理し、混合物を室温で３０分間撹拌した。ＴＨＦ（２４ｍＬ）中のＰｄ（ｄｂａ）２（２２５ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、Ｐ（２−フリル）３（１８１ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）、および３−ブロモ−４−フルオロヨードベンゼン（５．１ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウム上で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、薄茶色の固体８．９ｇを得た。粗製物をメタノール（１０ｍＬ）中で１時間スラリー化し、次いで、濾過して、表題化合物をベージュ色の固体（１．６１ｇ、３８％）として得た。
LCMS: AP+ (M+H)+
321.0/323.0 (100% ELSD) Rt = 0.94分 (1.5分の操作時間)
1H NMR
(500 MHz, CD3OD) δ
7.90 - 7.97 (m, 2 H) 7.63 (ddd, J=8.54, 4.51, 2.32 Hz, 1 H) 7.41 (t, J=8.54 Hz,
1 H) ppm
【０１５０】
調製例２
［５−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−３，６−ジクロロピリダジン−４−イル］メタノール
ＤＣＭ（７５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１２５ｍＬ）中の４−（３−ブロモ−４−フルオロ−フェニル）−３，６−ジクロロ−ピリダジン（調製例１、１ｇ、３．１ｍｍｏｌ）の溶液を、水（２．５ｍＬ）中の硫酸鉄（ＩＩ）（１．２ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）の溶液で、続いて、濃硫酸（０．７５ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を還流するよう加熱し、次いで、過酸化水素水溶液（３０％、５．０ｍＬ、４９．３ｍｍｏｌ）で滴下処理した。混合物を２、４、２２、および２７時間後に、さらなる酸化剤５ｍＬで処理した。合計３０時間後に、出発物質が消費されたら、混合物を室温に冷却し、発泡が止まるまで飽和炭酸カリウム水溶液で慎重に処理した。混合物を減圧下で濃縮して、有機溶媒を除去し、ＤＣＭに抽出した（３回）。合わせた有機物を硫酸マグネシウム上で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、薄茶色の油状物１．１６ｇを得、これを、中圧クロマトグラフィー（２４ｇシリカ、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、１２カラム体積）を使用して精製した。生成物画分を減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の泡（４２６ｍｇ、３９％）として得た。
LCMS: ES+ (M+H)+ 351.0/353.0, Rt
= 0.81分 (1.5分の操作時間)
1H NMR
(500 MHz, CDCl3) δ7.59
(dd, J=6.22, 2.07 Hz, 1 H) 7.23 - 7.39 (m, 2 H) 4.56 (m, 2 H) 3.24 (br. s., 1
H) ppm
【０１５１】
調製例３
５−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−３，６−ジクロロピリダジン−４−カルバルデヒド
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の［５−（３−ブロモ−４−フルオロ−フェニル）−３，６−ジクロロ−ピリダジン−４−イル］−メタノール（調製例２、２３８ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液をデスマーチン試薬（３３２ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液および飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液（それぞれ６ｍＬ）でクエンチし、３０分間撹拌した。層を分離し、水性層をＤＣＭでさらに２回抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウム上で脱水し、濾過し、減圧下で濃縮して、黄色の油状物２０８ｍｇを得た。粗製の物質を、中圧クロマトグラフィー（１２ｇシリカ、０〜３０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、２４カラム体積）を使用して精製した。生成物画分を合わせ、減圧下で濃縮して、表題化合物を黄色のフィルム状物（１５０ｍｇ、６３％）として得た。
LCMS: AP+ (M+H)+
349.0/351.0, Rt = 0.86/0.91分 (1.5分の操作時間)
1H NMR
(500 MHz, CDCl3) δ10.07
(s, 1 H) 7.52 (dd, J=6.34, 2.20 Hz, 1 H) 7.26 - 7.33 (m, 1 H) 7.21 - 7.26 (m, 1
H) ppm
【０１５２】
調製例４
４−（３−ブロモ−４−フルオロフェニル）−５−クロロ−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン
ＥｔＯＨ（５ｍＬ）中の５−（３−ブロモ−４−フルオロ−フェニル）−３，６−ジメトキシ−ピリダジン−４−カルバルデヒド（調製例３、１５０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）、シュウ酸エチルヒドラジン（７１ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．２ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）の溶液を室温で１時間撹拌し、次いで、マイクロ波で１０分間、１２０℃に加熱した。粗製物を、中圧クロマトグラフィー（１２ｇシリカ、０〜２５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、２５カラム体積）を使用して精製した。生成物画分を合わせ、減圧下で濃縮して、表題化合物を黄色の固体（８４ｍｇ、収率５５％）として得た。
LCMS: ES+ (M+H)+
357.0 (100% ELSD) 0.98分 (1.5分の操作時間)
1H NMR
(500 MHz, CDCl3) δ7.96
(s, 1 H) 7.87 (dd, J=6.34, 2.20 Hz, 1 H) 7.60 (ddd, J=8.48, 4.57, 2.32 Hz, 1 H)
7.35 (t, J=8.29 Hz, 1 H) 4.82 (q, J=7.16 Hz, 2 H) 1.65 (t, J=7.20 Hz, 3 H) ppm
【０１５３】
調製例５
５−クロロ−４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロ−２’−メトキシビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン
ジオキサン（４ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の２−（４−エタンスルホニル−２−メトキシ−フェニル）−４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン（４４ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、４−（３−ブロモ−４−フルオロ−フェニル）−５−クロロ−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（調製例４、４４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、およびＮａ２ＣＯ３（４０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液を窒素で脱気し、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）で処理し、還流するよう１５時間加熱した。混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮して、茶色の油状物１８４ｍｇを得、これを、中圧クロマトグラフィー（１２ｇシリカ、０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、２５カラム体積）を使用して精製した。生成物画分を合わせ、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体（３９ｍｇ、６６％）として得た。
LCMS: ES+ (M+H)+
475.2, Rt = 0.92分
(1.5分の操作時間)
1H NMR
(500 MHz, CDCl3) δ8.02
(s, 1 H) 7.69 - 7.76 (m, 2 H) 7.58 - 7.63 (m, 1 H) 7.54 - 7.58 (m, 1 H) 7.53
(d, J=1.71 Hz, 1 H) 7.35 - 7.42 (m, 1 H) 4.81 (q, J=7.32 Hz, 2 H) 3.95 (s, 3 H)
3.19 (q, J=7.32 Hz, 2 H) 1.64 (t, J=7.20 Hz, 3 H) 1.36 (t, J=7.44 Hz, 3 H) ppm
【０１５４】
調製例６
５−クロロ−４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン
ジオキサン（４ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の４−（エチルスルホニル）ベンゼンボロン酸（２９ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、４−（３−ブロモ−４−フルオロ−フェニル）−５−クロロ−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（調製例４、４３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、およびＮａ２ＣＯ３（４０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液を窒素で脱気し、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１５ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）で処理し、１５時間、還流するよう加熱した。混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮して、黄色の油状物を得、これを、中圧クロマトグラフィー（１２ｇシリカ、０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、２０カラム体積）を使用して精製した。生成物画分を合わせ、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体（４０ｍｇ、７４％）として得た。
LCMS: ES+ (M+H)+
445.2 (100% ELSD), Rt = 0.92分 (1.5分の操作時間)
1H NMR
(500 MHz, CDCl3) δ8.03
(d, J=8.54 Hz, 2 H) 7.99 (s, 1 H) 7.81 (dd, J=8.54, 1.46 Hz, 2 H) 7.78 (dd,
J=7.20, 2.32 Hz, 1 H) 7.71 (ddd, J=8.48, 4.57, 2.32 Hz, 1 H) 7.44 (dd, J=10.00,
8.54 Hz, 1 H) 4.82 (q, J=7.16 Hz, 2 H) 3.18 (q, J=7.40 Hz, 2 H) 1.61 - 1.68 (m,
3 H) 1.34 (t, J=7.44 Hz, 3 H) ppm
【０１５５】
調製例７
５−［５−（５−クロロ−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−４−イル）−２−フルオロフェニル］−６−メトキシ−２−メチル−２，３−ジヒドロイソインドール−１−オン
脱気ＤＭＦ（１．４ｍＬ）中の６−メトキシ−２−メチル−２，３−ジヒドロイソインドール−１−オン５−イルボロン酸（３７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、４−（３−ブロモ−４−フルオロ−フェニル）−５−クロロ−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（調製例４、５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（６．４ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）、トリ（ｔｅｒｔ−ブチル）ホスフィンテトラフルオロボラート（８．２ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）および新たに摩砕されたフッ化セシウム（８５ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液を室温、窒素下、密閉バイアル内で２４時間撹拌し、次いで、６時間、５０℃で、次いで１８時間、８０℃で、最後に２４時間、１１０℃で加熱し、次いで、室温に冷却し、水で希釈した。固体物質を濾取し、濾液を濃縮し、次いで、再び濾過した。合わせた固体を、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）を使用して精製した。生成物画分を合わせ、減圧下で濃縮して、表題化合物を無色の固体（１６ｍｇ、２５％）として得た。
[M+H+] = 452.1 (ES+)
1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ8.03 (s, 1H), 7.73 (dd, J = 6.8, 2.3 Hz,
1H), 7.70 (ddd, J = 7.4, 4.5, 2.3 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.37 (t,
J = 8.9 Hz, 1H), 4.81 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 4.38 (s, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.23 (s,
3H), 1.64 (t, J = 7.2 Hz, 3H) ppm
【０１５６】
（実施例１）
４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロ−２’−メトキシビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン
【０１５７】
【化８】
2018536677.tif 000010
炭素に担持された１０％パラジウム５ｍｇを、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の５−クロロ−４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロ−２’−メトキシ−ビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（調製例５、３９ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）の溶液で処理し、混合物をＨ−Ｃｕｂｅデバイスに、７０℃、炭素カートリッジに担持されたパラジウム、１ｍＬ／分、全Ｈ２（無圧）でポンプに通した。混合物を減圧下で濃縮して、緑色がかった油状物３７ｍｇを得、これを、中圧クロマトグラフィー（１２ｇシリカ、０〜８０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、２８カラム体積）を使用して精製した。生成物画分を合わせ、濃縮して、表題化合物を無色の固体（３．６ｍｇ、１０％）として得た。
LCMS: ES+ (M+H)+
441.3 (100% ELSD) Rt = 0.85分 (1.5分の操作時間)
1H NMR
(500 MHz, CDCl3) δppm
9.25 (s, 1 H) 8.29 (s, 1 H) 7.82 - 7.91 (m, 2 H) 7.60 - 7.66 (m, 1 H) 7.53 -
7.59 (m, 2 H) 7.38 - 7.46 (m, 1 H) 4.87 (q, J=7.24 Hz, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 3.21
(q, J=7.56 Hz, 2 H) 1.66 (t, J=7.32 Hz, 3 H) 1.38 (t, J=7.44 Hz, 3 H) ppm
【０１５８】
（実施例２）
４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン
【０１５９】
【化９】
2018536677.tif 000011
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中の５−クロロ−４−（４’−エタンスルホニル−６−フルオロ−ビフェニル−３−イル）−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（調製例６、４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｈ−Ｃｕｂｅに、連続ループで、７０℃、炭素カートリッジに担持されたパラジウム、１ｍＬ／分、全Ｈ２（無圧）で通した。３０ｍＬの合計体積を、１ｍＬ／分で４時間＝カートリッジ約８回の通過でポンプ通過させた。混合物を、中圧クロマトグラフィー（１２ｇシリカ、０〜６５％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、１８カラム体積）を使用して精製した。生成物画分を合わせ、濃縮して、表題化合物を無色の固体（３．５ｍｇ、１０％）として得た。
LCMS: ES+ (M+H)+
411.2 (100% ELSD) Rt = 0.85分 (1.5分の操作時間)
1H NMR
(500 MHz, CDCl3) δppm
9.28 (s, 1 H) 8.32 (s, 1 H) 8.06 (d, J=8.54 Hz, 2 H) 7.86 - 7.94 (m, 2 H) 7.83
(dd, J=8.42, 1.34 Hz, 2 H) 7.49 (dd, J=9.76, 8.54 Hz, 1 H) 4.89 (q, J=7.32 Hz,
2 H) 3.20 (q, J=7.32 Hz, 2 H) 1.67 (t, J=7.32 Hz, 3 H) 1.36 (t, J=7.44 Hz, 3
H).
【０１６０】
（実施例３）
５−［５−（１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−４−イル）−２−フルオロフェニル］−６−メトキシ−２−メチル−２，３−ジヒドロイソインドール−１−オン
【０１６１】
【化１０】
2018536677.tif 000012
ＥｔＯＨ（７７ｍＬ）中の５−［５−（５−クロロ−１−エチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−４−イル）−２−フルオロフェニル］−６−メトキシ−２−メチル−２，３−ジヒドロイソインドール−１−オン（調製例７、３５ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（３９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液を炭素に担持されたパラジウム上で、高圧フロー反応器内で水素化し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣を、酢酸エチルに溶解し、濾過し、次いで、クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ、次いで、ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ  ９／１）によって精製した。生成物画分を合わせ、濃縮して、表題化合物を無色の固体（１０ｍｇ、３１％）として得た。
[M+H+] = 418.8 (ES+)
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ9.47 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.14 - 8.07 (m,
1H), 8.06 - 7.99 (m, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.56 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 7.38 (s, 1H),
4.77 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.46 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.11 (s, 3H), 1.54 (t, J =
7.2 Hz, 3H).
【０１６２】
アッセイ方法
細胞系の構築および維持
ヒト胎児由来腎臓（ＨＥＫ）細胞に、標準的な技法を使用してＧＡＢＲＡ２−ＧＡＢＲＢ２−ＧＡＢＲＧ２構築物をトランスフェクトした。ＧＡＢＲＡ２−ＧＡＢＲＢ２−ＧＡＢＲＧ２構築物を安定発現する細胞を、ジェネテシンＧ−４１８（３２０μｇ／ｍｌ）、ハイグロマイシン（１６０μｇ／ｍｌ）およびゼオシン（４０μｇ／ｍｌ）に対するそれらの耐性により同定した。クローンを、ＢＤ  Ｐａｔｈｗａｙ  ８５５イメージングシステム（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＵＳＡ）およびＱ  Ｐａｔｃｈ自動電気生理プラットフォーム（Ｓｏｐｈｉｏｎ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）を使用して、発現についてスクリーニングした。
【０１６３】
細胞培養
ＧＡＢＲＡ２−ＧＡＢＲＢ２−ＧＡＢＲＧ２を安定的にトランスフェクトしたＨＥＫ細胞を、ジェネテシンＧ−４１８（３２０μｇ／ｍｌ）、ハイグロマイシン（１６０μｇ／ｍｌ）およびゼオシン（４０μｇ／ｍｌ）と共にＥａｒｌｅ塩、１０％ＦＢＳ、１×Ｌ−Ｇｌｕｔａｍａｘ、１％  ｍＭ非必須アミノ酸（ＭＥＭ）、および１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含むＭＥＭ培地中、インキュベーター内、３７℃において、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下で維持した。Ｑ  Ｐａｔｃｈ電気生理試験のために、細胞を、酵素的解離によりフラスコから採取し、血清非含有培地に再懸濁させた。細胞を典型的には、分割後２４〜７２時間以内に、電気生理学的実験のために使用した。
【０１６４】
結合アッセイ
被験化合物の親和性を、既知の化合物［３Ｈ］Ｒｏ−１５−１７８８（フルマゼニル）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、８５．４Ｃｉ／ｍｍｏｌ）、ならびにアルファ２、ベータ２、およびガンマ２サブユニットを含有するヒト組換えＧＡＢＡ  Ａ受容体を使用して放射性リガンド競合結合アッセイにより決定した。
【０１６５】
膜を、ｈＧＡＢＡ  Ａ  アルファ２ベータ２ガンマ２受容体を発現するＨＥＫ細胞から調製し、新たな化合物を試験するために使用する前に、タンパク質濃度、受容体発現を確認し、フルマゼニルのＫｄ、さらには化合物の標準セットのＫｉを決定するために検証した。
【０１６６】
アッセイを、９６ウェルプレート内で実施した；１９ｕＭ最高濃度からの１０ポイント半ログ希釈範囲を使用して、化合物を試験した。被験化合物１ｕｌを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌおよび０．０５％Ｆ１２７中の放射性リガンド１００ｕｌおよび膜１００ｕｌを２時間にわたってインキュベートして、反応物が平衡を達成することを可能にし、次いで、フィルタープレート上で採取し、乾燥させ、ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴ上でカウントした。データを解析し、Ｋｉ値を、少なくとも２回の反復試験の相乗平均として表示した。
【０１６７】
電気生理学的記録
ＧＡＢＲＡ２−ＧＡＢＲＢ２−ＧＡＢＲＧ２を発現するＨＥＫ細胞を含有する細胞懸濁液を、血清非含有培地中で、Ｑ  Ｐａｔｃｈ機器の細胞攪拌機内に設置した。この機器は、細胞外緩衝液を使用して細胞を一度洗浄し、次いで、それらを、３〜４００００００／ｍｌの濃度で、Ｑ  Ｐｌａｔｅ  ＨＴ測定プレートに分配した。細胞外溶液は、次の組成からなった：１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、１．８ｍＭ  ＣａＣｌ２、４ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭグルコース、および１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、ＮａＯＨ含有、３００〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇ。Ｑ  Ｐｌａｔｅ測定プレートの内側に、次の組成の細胞内溶液を充填した：９０ｍＭ  ＫＣｌ、５０ｍＭ  ＫＦ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１１ｍＭ  ＥＧＴＡ、および２ｍＭ  Ｍｇ−ＡＴＰ、ｐＨ７．３５、ＫＯＨ含有、２９５〜３０５ｍＯｓｍ／ｋｇ。記録はすべて、室温（２２〜２４℃）において取った。
【０１６８】
ＨＥＫ細胞におけるＧＡＢＲＡ２−ＧＡＢＲＢ２−ＧＡＢＲＧ２クロリド電流を、パッチクランプ技法の全細胞構成（Ｈａｍｉｌｌら、１９８１）を使用して測定した。電流の記録を１ＫＨｚにおいて得、Ｂｅｓｓｅｌフィルターを使用して０．３ＫＨｚにおいてフィルタリングした。直列抵抗補償は、Ｑ  Ｐａｔｃｈソフトウェアにおいて８０％に設定した。
【０１６９】
すべての化合物をジメチルスルホキシドに溶かして、３０ｍＭまたは１０ｍＭ原液を作製し、次いで、これを、ジメチルスルホキシド中で１０００倍の所望の最終濃度まで希釈した。これらを、細胞外溶液で希釈して、所望の最終濃度を達成した。ジメチルスルホキシドの最終濃度（＜０．１％ジメチルスルホキシド）は、ＧＡＢＲＡ２−ＧＡＢＲＢ２−ＧＡＢＲＧ２クロリド電流に対して有意な効果を有さないことが見出された。このジメチルスルホキシド濃度が、すべての試料において存在した。電流を、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）のほぼＥＣ１０濃度を使用して−６０ｍＶにおいて記録した。このガンマ−アミノ酪酸の用量を、６秒間にわたって適用し、記録されない適用として細胞外緩衝液を使用し、Ｑ  Ｐａｔｃｈ機器のピペット操作系を使用して洗い流した。次いで、同じ用量のガンマ−アミノ酪酸を９秒間にわたって適用し、次いで、被験化合物をこの用量のガンマ−アミノ酪酸と共に、１５秒間にわたって同時適用し、細胞外溶液を使用し、Ｑ  Ｐａｔｃｈ機器のピペット操作系を使用して洗い流した。
【０１７０】
化合物の効果（ガンマ−アミノ酪酸電流の増強％）を、次の式を使用して算出した：
［（（モジュレーター電流振幅のピーク−漏れ）−（ＧＡＢＡ電流振幅−漏れ））／（ＧＡＢＡ電流振幅−漏れ）］×１００
［式中、「漏れ」は、−６０ｍＶにおける漏れ電流であり、「モジュレーター電流振幅のピーク」は、ガンマ−アミノ酪酸および被験化合物の同時適用により誘発された電流であり、「ＧＡＢＡ電流振幅」は、ガンマ−アミノ酪酸の単独適用により誘発された電流である］。
【０１７１】
α１サブユニットを発現するＧＡＢＡチャネル（またはＧＡＢＲＡ１）をモジュレートする式（Ｉ）の化合物の能力も、上記のアッセイと類似のアッセイを使用して、ただし、ＧＡＢＲＡ２−ＧＡＢＲＢ２−ＧＡＢＲＧ２遺伝子構築物をＧＡＢＲＡ１−ＧＡＢＲＢ３−ＧＡＢＲＧ２遺伝子構築物に代えて測定することができる。他の条件はすべて、同じ細胞系および細胞成長についての条件を含めて、同じままである。ＧＡＢＲＡ１−ＧＡＢＲＢ３−ＧＡＢＲＧ２構築物を使用するアッセイにおいて生成した増強％値を、ＧＡＢＲＡ２−ＧＡＢＲＢ２−ＧＡＢＲＧ２構築物を使用して生成した結果と比較して、所与の化合物の選択性を決定することができる。
【０１７２】
結果
【０１７３】
【表１】
2018536677.tif 000013
【国際調査報告】
2018536677.tif 000018
2018536677.tif 000019