(57)【要約】  ＮＴＢ−Ａに特異的に結合する抗体薬物複合体を含む抗体を開示する。抗ＮＴＢ−Ａ抗体を使用して、ＮＴＢ−Ａを発現している細胞の活性を検出または調節する（例えば、その増殖を阻害する）ため、ならびにＮＴＢ−Ａを発現している細胞と関連する疾患または障害（例えば、癌）、例えば、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、及び急性骨髄性白血病を診断または治療するための方法も開示する。【選択図】図５
2018520671.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＮＴＢ−Ａタンパク質に特異的に結合する抗体であって、前記抗体が、配列番号３の３つの重鎖相補性決定領域と、配列番号１３の３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、前記ＣＤＲが、ＫａｂａｔまたはＩＭＧＴによって定義される通りである、抗体。
【請求項２】
前記ＣＤＲがＩＭＧＴによって定義される通りである、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記ＣＤＲがＫａｂａｔ  ＣＤＲである、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
ヒト化抗体、キメラ抗体、またはベニヤ抗体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号８と少なくとも８０％同一である配列を有する成熟重鎖領域と、配列番号１８と少なくとも８０％同一である配列を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６】
配列番号８と少なくとも９０％同一である配列を有する成熟重鎖可変領域と、配列番号１８と少なくとも９０％同一である配列を有する成熟軽鎖可変領域と、を含む、ヒト化抗体である、請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
前記成熟重鎖可変領域が、配列番号８と少なくとも９５％同一である配列を有し、成熟軽鎖可変領域が、配列番号１８と少なくとも９５％同一である配列を有する、請求項６に記載の抗体。
【請求項８】
Ｈ２がＩによって占有され、Ｈ３８がＲまたはＫによって占有され、Ｈ４４がＤまたはＧによって占有され、Ｈ４６がＫまたはＥによって占有され、Ｈ６８がＶまたはＡによって占有され、Ｈ７３がＫによって占有され、Ｈ７６がＮまたはＳによって占有され、Ｈ９１がＹまたはＦによって占有され、Ｌ１がＱまたはＥによって占有され、Ｌ５がＳまたはＴによって占有され、Ｌ２１がＭまたはＬによって占有され、Ｌ４６がＰによって占有され、Ｌ４７がＷによって占有され、Ｌ５８がＶまたはＩによって占有され、Ｌ７１がＹによって占有され；付番がＫａｂａｔ付番方式による、請求項５〜７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９】
以下の可変領域フレームワーク位置が、規定のように占有される：Ｉによって占有されるＨ２、Ｒによって占有されるＨ３８、Ｄによって占有されるＨ４４、Ｋによって占有されるＨ４６、Ｖによって占有されるＨ６８、Ｋによって占有されるＨ７３、Ｎによって占有されるＨ７６、Ｙによって占有されるＨ９１、Ｑによって占有されるＬ１、Ｓによって占有されるＬ５、Ｍによって占有されるＬ２１、Ｐによって占有されるＬ４６、Ｗによって占有されるＬ４７、Ｖによって占有されるＬ５８、Ｙによって占有されるＬ７１；付番がＫａｂａｔ付番方式による、請求項５〜７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
以下の可変領域フレームワーク位置が、規定のように占有される：Ｉによって占有されるＨ２、Ｄによって占有されるＨ４４、Ｋによって占有されるＨ４６、Ｋによって占有されるＨ７３、Ｎによって占有されるＨ７６、Ｑによって占有されるＬ１、Ｓによって占有されるＬ５、Ｍによって占有されるＬ２１、Ｐによって占有されるＬ４６、Ｗによって占有されるＬ４７、Ｖによって占有されるＬ５８、Ｙによって占有されるＬ７１；付番がＫａｂａｔ付番方式による、請求項５〜７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
ＨＡＬＡ、ＨＡＬＢ、ＨＡＬＣ、ＨＡＬＤ、ＨＢＬＡ、ＨＢＬＢ、ＨＢＬＣ、ＨＢＬＤ、ＨＣＬＡ、ＨＣＬＢ、ＨＣＬＣ、ＨＣＬＤ、ＨＤＬＡ、ＨＤＬＢ、ＨＤＬＣ、ＨＥＬＡ、ＨＥＬＢ、ＨＥＬＣ、及びＨＥＬＤである、請求項１に記載の抗体。
【請求項１２】
前記成熟重鎖可変領域が重鎖定常領域に融合し、前記成熟軽鎖可変領域が軽鎖定常領域に融合する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３】
前記重鎖定常領域が、天然のヒト定常領域の突然変異形態であり、前記突然変異形態のＦｃガンマ受容体への結合が、前記天然のヒト定常領域と比較して減少している、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１４】
前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域である、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１５】
前記重鎖定常領域が、配列番号２９または配列番号３０を含むアミノ酸配列を有し、前記軽鎖定常領域が、配列番号２８を含むアミノ酸配列を有する、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１６】
ヒトまたはカニクイザルＮＴＢ−Ａについての解離定数が、２０Ｆ３の解離定数の５倍以内である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれかによって定義される成熟重鎖可変領域及び／または成熟軽鎖可変領域をコードする核酸。
【請求項１８】
前記抗体が、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬に複合体化される、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
前記細胞傷害性薬が、マイタンシノイド、アウリスタチン、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、またはオキサゾリジノベンゾジアゼピンである、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
前記細胞傷害性薬が、
【化１】
2018520671.tif 000026
［式中、添字ｎが１または３である。］
、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物である、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
下記式：
【化２】
2018520671.tif 000027
［式中、
添字ｎが１または３であり、
ＬＵが切断可能なリンカー単位であり、
Ａｂが請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体であり、
添字ｐが１〜４の整数である。］
を有する、抗ＮＴＢＡ抗体−薬物複合体化合物、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物。
【請求項２２】
下記式：
【化３】
2018520671.tif 000028
［式中、
添字ｎが１または３であり、
添字ｍが２〜５であり、
Ａｂが請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体であり、
添字ｐが１〜４の整数である。］
を有する、請求項２１に記載の抗ＮＴＢＡ抗体−薬物複合体化合物、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物。
【請求項２３】
下記式：
【化４】
2018520671.tif 000029
を有する、請求項２２に記載の抗体−薬物複合体化合物、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物。
【請求項２４】
下記式：
【化５】
2018520671.tif 000030
を有する、請求項２２に記載の抗体−薬物複合体化合物、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物。
【請求項２５】
ｎが１である、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体化合物。
【請求項２６】
ｎが３である、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体化合物。
【請求項２７】
ｍが５である、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体化合物。
【請求項２８】
Ａｂへの結合が、Ａｂの改変システイン残基の硫黄原子を介する、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体化合物。
【請求項２９】
Ａｂへの結合が、硫黄原子、またはＥＵインデックス付番方式に従う前記重鎖定常領域の位置２３９の改変システイン残基を介する、請求項２２〜２８のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体化合物。
【請求項３０】
ｐが２である、請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の抗体−薬物複合体化合物。
【請求項３１】
下記式：
【化６】
2018520671.tif 000031
［式中、
添字ｎが１〜３であり、
ＬＵが切断可能なリンカー単位であり、
Ａｂが請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体であり、
添字ｐが１〜４の整数である。］
を有する抗ＮＴＢ−Ａ抗体−薬物複合体分子、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物の集団を含む、抗体−薬物複合体組成物であって、前記組成物の平均薬物負荷が約２である、抗体−薬物複合体組成物。
【請求項３２】
下記式：
【化７】
2018520671.tif 000032
［式中、
添字ｎが１〜３であり、
添字ｍが２〜５であり、
Ａｂが請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体であり、
添字ｐが１〜４の整数である。］
を有する抗ＮＴＢ−Ａ抗体−薬物複合体分子、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物の集団を含み、前記組成物の平均薬物負荷が約２である、請求項３１に記載の抗体−薬物複合体組成物。
【請求項３３】
前記抗体−薬物複合体分子が、式：
【化８】
2018520671.tif 000033
、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物を有する、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記抗体−薬物複合体分子が、式：
【化９】
2018520671.tif 000034
、または薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物を有する、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】
ｎが１である、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
ｎが３である、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
ｍが５である、請求項３２〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
Ａｂへの結合が、Ａｂの改変システイン残基の硫黄原子を介する、請求項３２〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
Ａｂへの結合が、硫黄原子、またはＥＵインデックス付番方式に従う前記重鎖定常領域の位置２３９の改変システイン残基を介する、請求項３２〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
下記式：
【化１０】
2018520671.tif 000035
［式中、
添字ｎが１〜３であり、
添字ｍが２〜５であり、
Ａｂが請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体であり、
添字ｐが１〜４の整数である。］
を有する、抗ＮＴＢ−Ａ抗体−薬物複合体分子、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物の集団と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、前記組成物の平均薬物負荷が約２である、薬学的組成物。
【請求項４１】
前記抗体−薬物複合体分子が、式：
【化１１】
2018520671.tif 000036
、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物を有する、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
前記抗体−薬物複合体分子が、式：
【化１２】
2018520671.tif 000037
、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物を有する、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
ｎが１である、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４４】
ｎが３である、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４５】
ｍが５である、請求項４０〜４４のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
Ａｂへの結合が、Ａｂの改変システイン残基の硫黄原子を介する、請求項４０〜４５のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
Ａｂへの結合が、硫黄原子、またはＥＵインデックス付番方式に従う前記重鎖定常領域の位置２３９の改変システイン残基を介する、請求項４０〜４６のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
【請求項４８】
ＮＴＢ−Ａを発現する癌を有する患者の治療方法であって、請求項３１〜４７のいずれか一項に記載の組成物の有効なレジメンを前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項４９】
前記癌が、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、原発性アミロイドーシス、ワルデンストレームマクログロブリン血症、または意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記癌がＴ細胞リンパ腫である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
自己免疫疾患を有する患者の治療方法であって、請求項３１〜４７のいずれか一項に記載の組成物の有効なレジメンを前記患者に投与することを含む、方法。
【請求項５２】
請求項１〜１６のいずれかに記載の抗体、及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
配列表
配列表は、名称がＮＴＢＡ−００３０３ＰＲ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズが２９キロバイトであり、参照により本明細書に援用される。
【０００２】
ＳＬＡＭＦ６とも称される単回貫通Ｉ型膜糖タンパク質（ｓｉｎｇｌｅ−ｐａｓｓ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）であるＮＴＢ−Ａは、ＣＤ２／ＳＬＡＭサブファミリーに属する免疫グロブリンスーパーファミリー（Ｉｇ−ＳＦ）メンバーである。例えば、Ｂｏｔｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９４：２３５−２４６，２００１を参照されたい。ＮＴＢ−Ａは、その細胞外部分において、Ｎ末端Ｖ型ドメイン、続くＣ２型ドメインを特徴とするが、細胞質内部分は、２つの免疫受容体チロシン系スイッチモチーフ（ＩＴＳＭ、ＴｘＹｘｘＶ／Ｉ）、及び古典的免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ、Ｉ／Ｖ／Ｌ／ＳｘＹｘｘＬ）という、３つのチロシン系モチーフを含む。同文献を参照されたい。そのＩＴＳＭモチーフを通して、ＮＴＢ−Ａは、ＳＬＡＭ関連タンパク質ＳＨ２Ｄ１ＡのＳＨ２ドメイン、及び関係するユーイング肉腫活性化転写産物（ＥＡＴ）２と会合する。上記Ｂｏｔｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，、Ｆａｌｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：１６６３−１６７２，２００４、Ｆｌａｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：６５２４−６５２７，２００４を参照されたい。
【０００３】
ＮＴＢ−Ａは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫ様Ｔ細胞、Ｔ細胞、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、及び好酸球上で発現される。Ｓａｌｏｒｔ  ＪＤ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２９−１３６，２０１１、Ｍａｔｅｓａｎｚ−Ｉｓａｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０４−１１２，２０１１、Ｍｕｎｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７４：１１０−１１８，２００５、Ｂｏｔｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １９４（３）：２３５−２４６；２００１を参照されたい。ＮＴＢ−Ａは、同型相互作用（即ち、セルフリガンド等）を通して機能することができ、シグナル伝達によってＮＫ細胞機能の正の調節因子として作用して、ＮＫ細胞細胞毒性を誘導することが示されている。例えば、上記Ｂｏｔｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．、上記Ｆａｌｃｏ  ｅｔ  ａｌ．、上記Ｆｌａｉｇ  ｅｔ  ａｌ．を参照されたい。ＮＴＢ−Ａはまた、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）及びＢ細胞リンパ腫患者由来のＢ細胞上で発現することが示されている。Ｋｏｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １３７：３０７−３１８，２００７を参照されたい。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】マウス２０Ｆ３重鎖可変領域の配列アラインメント、ヒトアクセプター中のマウスＣＤＲ（囲み）に復帰突然変異がないヒト化配列、及びヒト化変異型であるＨＡ−ＨＥを示す。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって定義される通りである。
【図２】マウス２０Ｆ３軽鎖可変領域の配列アラインメント、ヒトアクセプター中のマウスＣＤＲ（囲み）に復帰突然変異がないヒト化配列、及びヒト化変異型であるＬＡ−ＬＤを示す。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって定義される通りである。
【図３】ＮＳＧマウスのＭＭ．１Ｒ細胞系における多発性骨髄腫播種性異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは、ヒト化２０Ｆ３  ＰＢＤ抗体薬物複合体である。
【図４】ＮＳＧマウスのＵ−２６６細胞系における多発性骨髄腫播種性異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは、ヒト化２０Ｆ３  ＰＢＤ抗体薬物複合体である。
【図５】ＮＳＧマウスのＥＪＭ細胞系における多発性骨髄腫播種性異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは、ヒト化２０Ｆ３  ＰＢＤ抗体薬物複合体である。
【図６】ＳＫＩＤマウスのＨＮＴ−３４細胞系におけるＡＭＬ皮下異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは、ヒト化２０Ｆ３  ＰＢＤ抗体薬物複合体である。
【図７】ＮＳＧマウスのＭＭ．１Ｒ細胞系における多発性骨髄腫播種性異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは、ヒト化２０Ｆ３アウリスタチン抗体薬物複合体である。
【図８】ＮＳＧマウスのＵ−２６６細胞系における多発性骨髄腫播種性異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは共に、ヒト化２０Ｆ３アウリスタチン抗体薬物複合体である。
【図９】ＮＳＧマウスのＥＪＭ細胞系における多発性骨髄腫播種性異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは共に、ヒト化２０Ｆ３アウリスタチン抗体薬物複合体である。
【図１０】ＳＫＩＤマウスのＨＮＴ−３４細胞系におけるＡＭＬ皮下異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは共に、ヒト化２０Ｆ３アウリスタチン抗体薬物複合体である。
【図１１】ＳＣＩＤマウスのＲａｊｉ細胞系における非ホジキンリンパ腫皮下異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは共に、ヒト化２０Ｆ３アウリスタチン抗体薬物複合体である。
【図１２】ＳＣＩＤマウスのＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞系における非ホジキンリンパ腫皮下異種移植片研究の結果を示す。用量は図に示される。ＡＤＣは共に、ヒト化２０Ｆ３アウリスタチン抗体薬物複合体である。
【０００５】
定義
「抗体−薬物複合体」は、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬に複合体化された抗体を指す。典型的には、抗体−薬物複合体は、細胞表面上の標的抗原（例えば、ＮＴＢ−Ａ）に結合した後、抗体−薬物複合体を細胞の中に内在化させ、薬物を放出する。
【０００６】
「ポリペプチド」または「ポリペプチド鎖」は、天然産生か合成産生かにかかわらず、ペプチド結合によって接合されるアミノ酸残基の重合体である。アミノ酸残基約１０個未満のポリペプチドは、一般に「ペプチド」と称される。
【０００７】
「タンパク質」は、１つ以上のポリペプチド鎖を含む高分子である。タンパク質はまた、炭水化物群等の非ペプチド性成分を含んでもよい。炭水化物及び非ペプチド性置換基は、タンパク質が中で産生される細胞によってタンパク質に添加され得、細胞の種類によって異なることになる。タンパク質は、そのアミノ酸骨格構造の観点から本明細書では定義され、炭水化物群等の置換基は、概して指定はされないが、それでも存在し得る。
【０００８】
「アミノ末端」及び「カルボキシル末端」という用語は、ポリペプチド内の位置を表す。文脈が許す場合、これらの用語は、近接性または相対的位置を表すためにポリペプチドの特定の配列または部分に関して使用される。例えば、ポリペプチド内で参照配列に対してカルボキシル末端に位置するある特定の配列は、参照配列のカルボキシル末端に近接して位置着けられるが、必ずしも完全ポリペプチドのカルボキシル末端にある必要はない。
【０００９】
「抗体」という用語は、抗原の存在に応答して体内で産生され、抗原に結合する免疫グロブリンタンパク質、ならびにその抗原結合部分及び操作された変異型を表す。したがって、「抗体」という用語は、例えば、無傷モノクローナル抗体（例えば、ハイブリドーマ技術を使用して産生される抗体）、ならびに抗原結合抗体断片、例えば、Ｆ（ａｂ’）２及びＦａｂ断片を含む。概して、操作された無傷抗体及び断片、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、単鎖Ｆｖ断片、単鎖抗体、ダイアボディ、ミニボディ、線形抗体、多価または多特異性（例えば、二重特異性）ハイブリッド抗体なども含まれる。よって、「抗体」は、抗体の抗原結合部位を含み、その抗原に特異的に結合することができるいずれのタンパク質も含むように広義に使用される。「抗体」という用語は、単独の抗体（「裸抗体」）または細胞増殖抑制薬または細胞傷害性薬と複合体化された抗体を含む。
【００１０】
「遺伝子操作された抗体」という用語は、アミノ酸配列を天然抗体のものとは異ならせた抗体を意味する。抗体の生成における組換えＤＮＡ技法の適用可能性により、天然抗体中で見い出されるアミノ酸の配列に限定される必要はなく、抗体は、所望の特徴が得られるように再設計することができる。可能性のある変形は多数あり、１つまたは少数のアミノ酸だけを変化させることから、例えば可変または定常領域の完全な再設計まで多岐にわたる。概して、定常領域を変化させることで、例えば、補体結合、細胞との相互作用、及び他のエフェクター機能といった特徴を改善または改変する。典型的には、可変領域を変化させることで、抗原結合特徴を改善し、可変領域の安定性を改善し、あるいは免疫原性の危険を低減する。
【００１１】
「抗体の抗原結合部位」は、その抗原に結合するのに足りる抗体の位置である。最低限のかかる領域は、典型的には、可変ドメインまたはその遺伝子操作された変異型である。単一ドメイン結合部位は、ラクダ化抗体（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ａｎｄ  Ｌａｕｗｅｒｅｙｓ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇ．１２：１３１−１４０，１９９９、Ｎｇｕｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９：９２１−９３０，２０００参照）、または単一ドメイン抗体を産生させるための他の種のＶＨドメイン（「ｄＡｂ」、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９、Ｗｉｎｔｅｒらの米国特許第６，２４８，５１６号参照）から生成され得る。一般に、抗体の抗原結合部位は、共通エピトープに結合する、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインの両方を含む。本発明の背景の中で、抗体は、抗原結合部位に加えて、例えば、抗体の第２の抗原結合部位（同じエピトープもしくは異なるエピトープ、または同じ抗原もしくは異なる抗原に結合し得る）、ペプチドリンカー、免疫グロブリン定常領域、免疫グロブリンヒンジ、両親媒性ヘリックス（Ｐａｃｋ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３１：１５７９−１５８４，１９９２参照）、非ペプチドリンカー、オリゴヌクレオチド（Ｃｈａｕｄｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４５０：２３−２６，１９９９参照）、細胞増殖抑制薬または細胞傷害性薬といった１つ以上の構成要素を含んでもよく、単量体または多量体タンパク質であってもよい。抗体の抗原結合部位を含む分子の例は当該技術分野で既知であり、例えば、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ融合物、二重特性（ｓｃＦｖ）４−ＩｇＧ、及二重特異性（ｓｃＦｖ）２−Ｆａｂが含まれる。（例えば、Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６、Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ３３：１３０１−１３１２，１９９６、Ｃａｒｔｅｒ  ａｎｄ  Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：４４９−４５４，１９９７、Ｚｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  １３：３６１−３６７，２０００、及びＬｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２６７：２１３−２２６，２００２を参照されたい。）
【００１２】
「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン遺伝子（複数可）によって実質的にコードされる１つ以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。免疫グロブリンの一形態は、脊椎動物における天然（即ち、自然）の抗体の基本構造単位を構成する。この形態は、四量体であり、免疫グロブリン鎖の２つの同一の対からなり、各対は、１本の軽鎖と１本の重鎖とを有する。各対において、軽鎖及び重鎖可変領域（ＶＬ及びＶＨ）は、一緒になって、抗原への結合の中心的役割を果たし、定常領域は、抗体エフェクター機能の中心的役割を果たす。免疫グロブリンタンパク質の５つのクラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）が高等脊椎動物において特定されている。ＩｇＧが主要なクラスを構成し、通常、血漿中に見い出される２番目に豊富なタンパク質として存在する。ヒトでは、ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４と表される４つのサブクラスからなる。各免疫グロブリン重鎖は、種における所与のサブクラスに関して本質的に不変である定常領域タンパク質ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３；ＩｇＧ３はＣＨ４ドメインも含む）からなる定常領域を保有する。ヒト及び非ヒト免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡは当該技術分野で既知である。（例えば、Ｅｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮＡ  １：１１−１８，１９８１、Ｅｌｌｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０：４０７１−４０７９，１９８２、Ｋｅｎｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７９：６６６１−６６６５，１９８２、Ｓｅｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１１：７１９−７２６，１９８３、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８、Ａｍｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．８：２０５５−２０６５，１９８０、Ｒｕｓｃｏｎｉ  ａｎｄ  Ｋｏｈｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：３３０−３３４，１９８５、Ｂｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：３７９１−３８０６，１９８４、Ｂｏｔｈｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２９８：３８０−３８２，１９８２、ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｌｏｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４２：３３３−３４１，１９９５、Ｋａｒｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．２２：１９５−２０８，１９８５、Ｋｉｎｄｓｖｏｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＤＮＡ  １：３３５−３４３，１９８２、Ｂｒｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １８：１６５−１７４，１９８２、Ｋｏｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２４５−２４９，１９９３、及びＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｊ００２２８を参照されたい。）免疫グロブリン構造及び機能の概説については、Ｐｕｔｎａｍ，Ｔｈｅ  Ｐｌａｓｍａ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ  Ｖ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，４９−１４０，１９８７、及びＰａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６９−２１７，１９９４を参照されたい。「免疫グロブリン」という用語は、その一般的な意味で本明細書で使用され、文脈に応じて、無傷抗体、その成分鎖、または鎖の断片を表す。
【００１３】
完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤａまたは２１４個のアミノ酸）は、アミノ末端で可変領域遺伝子によって（約１１０個のアミノ酸をコードする）、及びカルボキシル末端でカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によってコードされる。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋＤａまたは４４６個のアミノ酸）は、可変領域遺伝子（約１１６個のアミノ酸をコードする）、及びガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロン定常領域遺伝子（約３３０個のアミノ酸をコードする）によってコードされ、後者は、抗体のアイソタイプを、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥとして定義する。軽鎖及び重鎖内で、可変及び定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により結合され、重鎖も約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。（概して、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，２ｎｄ  ｅｄ．１９８９），Ｃｈ．７を参照されたい）。
【００１４】
免疫グロブリン軽鎖可変領域または重鎖可変領域（本明細書では、それぞれ、「軽鎖可変ドメイン」（「ＶＬドメイン」）または「重鎖可変ドメイン」（「ＶＨドメイン」）とも称される）は、３つの「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」によって遮られる「フレームワーク」領域からなる。フレームワーク領域は、抗原のエピトープへの特異的結合のためにＣＤＲを整合させる働きをする。よって、「ＣＤＲ」という用語は、抗原結合に中心的役割を果たす抗体のアミノ酸残基を指す。アミノ末端からカルボキシル末端まで、ＶＬドメインとＶＨドメインとの両方は、以下のフレームワーク（ＦＲ）及びＣＤＲ領域を含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。各可変領域ドメインへのアミノ酸の割当は、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７  ａｎｄ  １９９１）の定義に従う。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応する残基が同じ番号を割り当てられる、広く使用されている番付規則（Ｋａｂａｔ番付）も提供する。ＶＬドメインのＣＤＲ１、２、及び３は、本明細書では、それぞれ、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３と称され、ＶＨドメインのＣＤＲ１、２、及び３は、同様に、本明細書では、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３と称される。そのように記述されている場合には、ＣＤＲの割当は、Ｋａｂａｔの代わりにＩＭＧＴ（登録商標）（Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ＆  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２７：５５−７７；２００３）に従う。
【００１５】
文脈により別途示されない限り、「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術によって産生された抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、真核生物クローン、原核生物クローン、またはファージクローンを含む単一のクローンに由来する抗体を指し、それが産生される方法ではない。本明細書に記載される抗体は、モノクローナル抗体である。
【００１６】
「ヒト化ＶＨドメイン」または「ヒト化ＶＬドメイン」は、非ヒトドナー免疫グロブリン（例えば、マウスまたはラット）に完全にまたは実質的に由来する一部または全てのＣＤＲと、ヒト免疫グロブリン配列に完全にまたは実質的に由来する可変ドメインフレームワーク配列とを含む、免疫グロブリンＶＨまたはＶＬドメインを指す。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。場合によっては、ヒト化抗体は、適当な特徴を強化するために、ヒト可変ドメインフレームワーク領域内にいくつかの非ヒト残基を保持することになる（例えば、フレームワーク中の突然変異は、抗体がヒト化されるときに結合親和性を保存する必要があり得る）。
【００１７】
「ヒト化抗体」は、ヒト化ＶＨドメイン及びヒト化ＶＬドメインの一方または両方を含む抗体である。免疫グロブリン定常領域（複数可）は、存在する必要はないが、存在する場合には、ヒト免疫グロブリン定常領域に完全にまたは実質的に由来する。
【００１８】
ヒト化抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔ（またはＩＭＧＴ）により定義される通り）の少なくとも６０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一であるとき、非ヒト抗体において対応するＣＤＲに「実質的に由来」する。ＣＤＲが非ヒト免疫グロブリンに実質的に由来するヒト化ＶＨまたはＶＬドメインの特定の変形において、ヒト化ＶＨまたはＶＬドメインのＣＤＲは、対応する非ヒトＶＨまたはＶＬ  ＣＤＲに対して、３つ全てのＣＤＲにわたって、６個未満（例えば、５個未満、４個未満、３個未満、２個未満、または１個未満）のアミノ酸置換（好ましくは保存的置換）を有する。抗体ＶＨもしくはＶＬドメインの可変領域フレームワーク配列、または存在する場合には免疫グロブリン定常領域の配列は、Ｋａｂａｔにより定義される対応する残基の少なくとも約８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％が同一であるとき、それぞれ、ヒトＶＨもしくはＶＬフレームワーク配列またはヒト定常領域に「実質的に由来」する。したがって、ヒト化抗体のＣＤＲを除いた全ての部分は、自然のヒト免疫グロブリン配列の対応する部分に完全にまたは実質的に由来する。
【００１９】
抗体は、典型的には、単離された形態で提供される。これは、抗体が典型的には、その産生または精製から生じる妨害タンパク質及び他の汚染物の少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋であることを意味するが、その抗体がその使用を容易にすることを意図した過剰の薬学的に許容される担体（複数可）または他のビヒクルと組み合わされる可能性を除外しない。抗体は、産生または精製からの妨害タンパク質及び汚染物から少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５、または９９％ｗ／ｗ純粋である場合がある。単離された抗体を含む抗体は、細胞傷害性薬と複合体化され、抗体薬物複合体として提供され得る。
【００２０】
抗体の、その標的抗原への特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０Ｍ−１の親和性を意味する。特異的結合は、検出可能に規模が高く、少なくとも１つの無関係の標的に生じる非特異的結合から区別可能である。特異的結合は、特定の官能基間の結合の形成または特定の空間的適合（例えば、ロック・アンド・キータイプ）の結果であり得るが、非特異的結合は通常、ファンデルワース力の結果である。
【００２１】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接するアミノ酸、または１つ以上のタンパク質の３次折り畳みが並置される隣接しないアミノ酸に由来し得る。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは、典型的には、変性溶媒への曝露で保持され、一方で３次折り畳みによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒による処理で失われる。エピトープは、典型的には、少なくとも３個、更に通常は少なくとも５個または８〜１０個のアミノ酸を、固有の空間的構造で含む。エピトープの空間的構造を決定するための方法としては、例えば、Ｘ線結晶学及び２次元核磁気共鳴が挙げられる。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい。
【００２２】
同じであるかまたは重複しているエピトープを認識する抗体は、一方の抗体が標的抗原への他方の抗体の結合と競合する能力を示す単純な免疫アッセイにおいて特定することができる。抗体のエピトープも、接触残基を特定するためのその抗原に結合した抗体のＸ線結晶学によって定義することができる。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低下させるかまたは排除する抗原におけるアミノ酸突然変異が、他方の結合を低下させるかまたは排除する場合に（かかる突然変異が抗原構造の全体的な改変をもたらさないことを条件とする）、同じエピトープを有する。２つの抗体は、一方の抗体の結合を低下させるかまたは排除するいくつかのアミノ酸突然変異が他方の結合を低下させるかまたは排除する場合に、重複しているエピトープを有する。
【００２３】
抗体間の競合は、試験されている抗体が参照抗体の共通抗原への特異的結合を阻害するアッセイによって決定される（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１４９５，１９９０）。試験抗体は、過剰な試験抗体が参照抗体の結合を阻害する場合に、参照抗体と競合する。競合は、実施例で提供される形式に従って評定される。競合アッセイによって特定された抗体（競合抗体）は、参照抗体として同じエピトープに結合する抗体、及び立体障害が生じるように参照抗体に結合するエピトープの十分近位にある隣接するエピトープに結合する抗体を含む。競合アッセイによって特定される抗体は、標的タンパク質における構造変化を引き起こすことで、参照抗体が試験抗体と結合するエピトープとは異なるエピトープに結合することを防止することによって参照抗体と直接競合する抗体も含む。
【００２４】
「発現単位」及び「発現カセット」は、本明細書では、置き換え可能に使用され、目的のポリペプチドをコードし、宿主細胞中で核酸セグメントの発現をもたらすことができる核酸セグメントを表す。発現単位は、典型的には、転写プロモーター、目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、及び転写終結因子を、全て動作可能な構成で含む。転写プロモーター及び終結因子に加えて、発現単位は、例えば、エンハンサーまたはポリアデニル化シグナルなど、他の核酸セグメントを更に含んでもよい。
【００２５】
「発現ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、１つ以上の発現単位を含む線形または環形の核酸分子を指す。１つ以上の発現単位に加えて、発現ベクターはまた、例えば、１つ以上の複製起点または１つ以上の選択可能なマーカーなど、更なる核酸セグメントを含んでもよい。発現ベクターは、概して、プラスミドもしくはウイルスＤＮＡに由来するか、または両方の要素を含んでもよい。
【００２６】
本明細書に記載される抗体または他のタンパク質において、配列番号によって特定されるものに対応するアミノ酸残基は、かかる残基の翻訳後修飾を含む。
【００２７】
「患者」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳類対象を含む。
【００２８】
本明細書に記載の抗ＮＴＢ−Ａ抗体の投与によるＮＴＢ−Ａ発現障害の治療の背景における「有効量」は、ＮＴＢ−Ａ発現障害の１つ以上の症状の発現を阻害するかまたはそれを緩和するのに十分なかかる抗体の量を指す。有効量の抗体は、「有効なレジメン」で投与される。「有効なレジメン」という用語は、その障害の予防的または治療的処置を達成するのに十分な抗体の投与量及び投薬頻度の組み合わせを指す。
【００２９】
アミノ酸置換を保存的または非保存的として分類する目的で、以下のアミノ酸置換が保存的置換とみなされる：トレオニン、アラニン、またはアスパラギンによって置換されるセリン；プロリンまたはセリンによって置換されるトレオニン；アスパラギン酸、ヒスチジン、またはセリンによって置換されるアスパラギン；グルタミン酸またはアスパラギンによって置換されるアスパラギン酸；グルタミン、リジン、またはアスパラギン酸によって置換されるグルタミン酸；アルギニン、リジン、またはグルタミン酸によって置換されるグルタミン；チロシンまたはアスパラギンによって置換されるヒスチジン；リジンまたはグルタミンによって置換されるアルギニン；イソロイシン、ロイシン、またはバリンによって置換されるメチオニン；ロイシン、バリン、またはメチオニンによって置換されるイソロイシン；バリン、イソロイシン、またはメチオニンによって置換されるロイシン；チロシンまたはトリプトファンによって置換されるフェニルアラニン；トリプトファン、ヒスチジン、またはフェニルアラニンによって置換されるチロシン；トレオニンによって置換されるプロリン；セリンによって置換されるアラニン；グルタミン酸、グルタミン、またはアルギニンによって置換されるリジン；メチオニン、イソロイシン、またはロイシンによって置換されるバリン；及びフェニルアラニンまたはチロシンによって置換されるトリプトファン。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換も意味し得る。クラスは以下の通りである：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【００３０】
２つのアミノ酸配列は、２つのアミノ酸配列のアミノ酸残基が、最大限の対応を求めて整合させたときに同じである場合に、「１００％のアミノ酸配列同一性」を有する。配列比較は、ＤＮＡＳＴＡＲ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）によって生産されるＬＡＳＥＲＧＥＮＥバイオインフォマティクスコンピューティングスイートに含まれるものなどの標準的なソフトウェアプログラムを使用して行われ得る。最適な整合の決定によって２つの核酸またはアミノ酸配列を比較するための他の方法は、当該技術分野で周知である。（例えば、Ｐｅｒｕｓｋｉ  ａｎｄ  Ｐｅｒｕｓｋｉ，Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎｅｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９７）、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），“Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｕｐｅｒｈｉｇｈｗａｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｄａｔａｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２３−１５１（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９７）、Ｂｉｓｈｏｐ（ｅｄ．），Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ（２ｎｄ  ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．１９９８）を参照されたい。）２つのアミノ酸配列は、２つの配列が、互いに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する場合に「実質的な配列同一性」を有するとみなされる。
【００３１】
配列同一性パーセントは、Ｋａｂａｔ番付規則により最大限に整合された抗体配列により決定される。整合後、対象抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の可変ドメイン全体）が参照抗体の同じ領域と比較される場合、対象と参照抗体領域との間のパーセント配列同一性は、対象及び参照抗体領域の両方において同じアミノ酸により占められる位置の数を、２つの領域の整合された位置の総数で除し（ギャップは数えられない）、１００を乗じてパーセントに変換する。
【００３２】
１つ以上の列挙される要素を「含む」組成物または方法は、具体的に列挙されない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、抗体のみを含むか、または他の成分との組み合わせであり得る。
【００３３】
値の範囲の表示は、範囲内または範囲を定義する全ての整数を含む。
【００３４】
抗体エフェクター機能は、ＩｇのＦｃ領域が寄与する機能を指す。かかる機能は、例えば、抗体依存性細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用、または補体依存性細胞傷害性であり得る。かかる機能は、例えば、食作用もしくは溶解作用を有する免疫細胞上のＦｃ領域のＦｃ受容体への結合によって、またはＦｃ領域の補体系の構成要素への結合によって引き起こされ得る。典型的には、Ｆｃ結合細胞または補体成分が媒介する作用（複数可）により、ＮＴＢ−Ａ標的化細胞の阻害及び／または欠乏がもたらされる。抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）発現細胞を補充し、それらを抗体でコーティングされた標的細胞と並置し得る。ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ６４）を含む、ＩｇＧに対する表面ＦｃＲを発現している細胞は、ＩｇＧでコーティングされた細胞を破壊するためのエフェクター細胞として作用し得る。かかるエフェクター細胞としては、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及び好酸球が挙げられる。ＩｇＧによってＦｃγＲが従事することで、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）が活性化される。ＡＤＣＣは、膜孔形成タンパク質及びプロテアーゼの分泌を通してＣＤ１６＋エフェクター細胞によって媒介され、一方で食作用は、ＣＤ３２＋及びＣＤ６４＋エフェクター細胞によって媒介される（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  ｅｄ．，Ｐａｕｌ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｎ．Ｙ．，１９９７，Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ３，１７  ａｎｄ  ３０、Ｕｃｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．１９９：１６５９−６９，２００４、Ａｋｅｗａｎｌｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：４０６１−６５，２００１、Ｗａｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．５３：１９９−２０７，１９９９を参照されたい）。ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰに加えて、細胞に結合した抗体のＦｃ領域も、補体古典的経路を活性化して、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を励起することができる。補体系のＣ１ｑは抗体のＦｃ領域に結合し、この結合は、それらが抗原と複合体化されるときに生じる。Ｃ１ｑが細胞に結合した抗体に結合することで、Ｃ４及びＣ２のタンパク質分解活性化に関与する事象の連鎖が始動し、Ｃ３転換酵素を生成し得る。Ｃ３転換酵素によってＣ３がＣ３ｂに切断されることにより、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、及びＣ９を含む末端補体成分の活性化が可能となる。まとめて、これらのタンパク質は、抗体でコーティングされた細胞上に膜攻撃複合体孔を形成する。これらの孔が、細胞膜の統合性を分断して、標的細胞を殺滅する（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｊａｎｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２）。
【００３５】
「抗体依存性細胞傷害性」または「ＡＤＣＣ」は、抗体でコーティングされた標的細胞と溶解活性を保有する免疫細胞（エフェクター細胞とも称される）との相互作用に依存する細胞死を誘導するための機序である。かかるエフェクター細胞としては、ナチュラルキラー細胞、単球／マクロファージ、及び好中球が挙げられる。エフェクター細胞は、標的細胞に結合したＩｇのＦｃ領域に、それらの抗原結合部位を介して結合する。抗体でコーティングされた標的細胞の死滅は、エフェクター細胞活性の結果として生じる。
【００３６】
「抗体依存性細胞食作用」または「ＡＤＣＰ」という用語は、抗体でコーティングされた細胞が、ＩｇのＦｃ領域に結合する食作用免疫細胞（例えば、マクロファージ、好中球、及び樹状細胞）によって全てまたは部分的に内在化されるプロセスを指す。
【００３７】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」という用語は、標的に結合した抗体のＦｃ領域が一連の酵素反応を活性化して標的細胞膜における孔の形成をもたらす、細胞死を誘導するための機序を指す。典型的には、抗原−抗体複合体、例えば、抗体でコーティングされた標的細胞上にあるものが、補体成分Ｃ１ｑに結合してそれを活性化し、今度はこのＣ１ｑが標的細胞死につながる補体カスケードの活性化する。補体の活性化により、白血球上の補体受容体（例えば、ＣＲ３）の結合によってＡＤＣＣを促進する、標的細胞表面上の補体成分の堆積も生じ得る。
【００３８】
「細胞傷害性効果」は、標的細胞の枯渇、排除、及び／または殺滅を指す。「細胞傷害性薬」は、細胞に対して細胞傷害作用を有する薬剤を指す。細胞傷害性薬は、抗体に複合体化されるか、または抗体と組み合わせて投与され得る。
【００３９】
「細胞増殖抑制作用」は、細胞増殖の阻害を指す。「細胞増殖抑制薬」は、細胞に対して細胞増殖抑制作用を有することで、細胞の特定のサブセットの増殖及び／または拡大を阻害する薬剤を指す。細胞増殖抑制薬は、抗体に複合体化されるか、または抗体と組み合わせて投与され得る。
【００４０】
「薬学的に許容される」という用語は、米国の連邦もしくは州政府の規制機関により承認されたもしくは承認可能である、または動物、より具体的にはヒトにおいて使用するための米国薬局方もしくは他の一般的に認識されている薬局方に列記されていることを意味する。「薬学的に相溶性の成分」という用語は、抗ＮＴＢ−Ａ抗体と共に製剤化される薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。
【００４１】
「薬学的に許容される塩」という句は、薬学的に許容される有機塩または無機塩を指す。例示的な塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩（ｓａｃｃｈａｒａｔｅ）、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐトルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（即ち、１，１’メチレンビス−（２ヒドロキシ３ナフトエート））が含まれる。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンなどの別の分子の包含を伴ってもよい。対イオンは、親化合物上の電荷を安定させる任意の有機または無機の部分であり得る。更に、薬学的に許容される塩は、その構造内に２つ以上の荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合は、複数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有し得る。
【００４２】
文脈から別途明らかでない限り、値が「約」Ｘまたは「およそ」Ｘと表されるとき、Ｘの表示値は、±１０％の精度を持つと理解される。
【００４３】
グリコシル化は、抗体を発現させるために使用する宿主細胞に依存する。可能性のある治療薬としての組換え抗体の発現に使用される細胞型が天然の細胞であることは稀であり、抗体のグリコシル化パターンの顕著な変動が、非天然細胞において組換えによって発現された抗体と、同じ一次重鎖及び軽鎖配列の抗体との間で生じ得る。齧歯動物起源の哺乳動物細胞系（ＳＰ２／０、ＣＨＯ、またはＢＨＫなど）は、ヒトグリコシル化といくらかの類似性を有するグリコシル化を付与することができる。しかしながら、一部のヒト構成要素が不足している場合があり（２，６連結シアリル化など）、通常ヒトにおいては見られないいくつかの他の構成要素、例えば、通常ヒト細胞中に存在しない末端シアル酸（例えば、ＮｅｕＧｃ）、または通常ヒト細胞中に存在しない方法で別のガラクトースに連結する末端ガラクトース（Ｇａｌ−Ｇａｌ構造）が存在する場合がある。ＣＨＯ細胞中で発現される組換えＩｇＧは、概して、マウス骨髄腫細胞中で発現される組換え免疫グロブリンと比較してグリコシル化が低い。したがって、ＣＨＯ細胞中で産生される組換えＩｇＧは、マウス骨髄腫細胞系中で産生されるｒＩｇＧと比較して高いレベルのＧ０グリカンを含んでもよい。
【００４４】
抗体のグリコシル化構造は、炭水化物分析の従来的な技法によって分析することができ、これらの技法としては、レクチンクロマトグラフィー、ＮＭＲ、質量分析、ＨＰＬＣ、ゲル透過クロマトグラフィー、単糖組成分析、連続酵素消化、及び高ｐＨアニオン交換クロマトグラフィーを使用して、荷電に基づいてオリゴ糖を分離するパルスアンペロメトリック検出を伴う、高速アニオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。分析を目的としたオリゴ糖の放出方法には、酵素処理（一般にペプチド−Ｎ−グリコシダーゼＦ／エンド−ベータ−ガラクトシダーゼを使用して行われる）、厳しいアルカリ性環境を使用して、主にＯ連結構造を放出する排除、及び無水ヒドラジンを使用して、Ｎ連結オリゴ糖とＯ連結オリゴ糖との両方を放出する化学的方法が含まれる。
【００４５】
よって、組換えによって発現された抗体のグリコシル化パターンは、発現が行われる細胞型（例えば、ＣＨＯ）の特徴的あり得、上記の技法のいずれかによって、他の細胞型、特に、マウス及びヒトなどの他の種とは区別可能に異なり得る。
【００４６】
本発明の文脈における溶媒和物は、溶媒分子との調整を通して固体または液体状態において複合体を形成する本発明の化合物のそれらの形態である。水和物は、溶媒和物の１つの特定の形態であり、調整は水と行われる。本発明の文脈における好ましい溶媒和物は、水和物である。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
Ｉ．概要
本発明は、とりわけ、ＮＴＢ−Ａに特異的に結合する２０Ｆ３抗体、ならびにそのキメラ、ベニヤ、及びヒト化形態を提供する。２０Ｆ３抗体との結合に関して競合するか、または２０Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体も提供される。本抗体は、例えば、様々なＮＴＢ−Ａ発現癌の治療及び診断、ならびにＮＴＢ−Ａの検出（例えば、細胞上のＮＴＢ−Ａ発現の検出）に有用である。裸抗体及び複合体化抗体を含む本発明の抗体を使用する、かかる治療、診断、及びＮＴＢ−Ａ検出方法も提供される。
【００４８】
ＩＩ．標的分子
別途記載のない限り、ＮＴＢ−ＡはヒトＮＴＢ−Ａを意味する。例示的なヒト配列は、配列番号１（Ｓｗｉｓｓ−ＰｒｏｔＱ９６ＤＵ３）を割り当てられている。４つのスプライス変異体アイソフォームが既知である。成熟細胞外領域は、Ｑ９６ＤＵ３の残基２２〜２２６によって結合される。アイソフォーム４中のより短い細胞外ドメインは、Ｃ２ドメインと２つのＩＴＳＭモチーフを有し、免疫グロブリンドメインを含む残基１８〜１２１を欠く。
【００４９】
文脈から別途明らかでない限り、ＮＴＢ−Ａへの言及は、少なくとも、切断性シグナルペプチド以外の完全タンパク質に従うタンパク質の細胞外ドメイン（Ｑ９６ＤＵ３のアミノ酸１〜２１）を意味する。
【００５０】
カニクイザルＮＴＢ−Ａ（配列番号２）（ｃｙｎｏ−ＮＴＢ−Ａ）は、アミノ酸同一性が８４．６％であり、ヒトＮＴＢ−Ａ（配列番号１）とのアミノ酸類似性が９３．３％である。
【００５１】
ＩＩＩ．抗体
Ａ．  結合特異性及び機能特性
本開示は、とりわけ、名称２０Ｆ３のマウス抗体、及び２０Ｆ３抗体のキメラ、ベニヤ、及びヒト化形態、ならびにＮＴＢ−Ａとの結合に関して２０Ｆ３抗体と競合する抗体、及び２０Ｆ３抗体と同じエピトープに結合する抗体に言及する。２０Ｆ３抗体は、通常型のヒトＮＴＢ−Ａ（配列番号１）、ヒトアイソフォーム４、及びカニクイザルＮＴＢ−Ａに結合する。これらの結合特性により、そのエピトープは、アイソフォーム４に不在であるＮＴＢ−Ａのセグメントの外側であり（残基１２８〜２２６内）、ＮＴＢ−Ａのヒト型とカニクイザル型との間で完全にまたは実質的に保存されるエピトープに存在することが示唆される。
【００５２】
ヒト化ＨＤＬＤ  ２０Ｆ３抗体は、Ｒａｍｏｓ細胞上のヒトＮＴＢ−Ａアイソフォーム−１についてのＫｄが２ｎＭであり、２０Ｆ３抗体の他のヒト化形態は、好ましくは、ＫｄがＨＤＬＤ  ２０Ｆ３抗体のＫｄと実質的に同じか、その２、３、または５倍以内である。ヒト化ＨＤＬＤ抗体は、抗原結合競合アッセイにおいて、Ｒａｍｏｓ細胞上のヒトＮＴＢ−ＡについてのＥＣ５０が約１２ｎＭである。一部のヒト化抗体は、ＥＣ５０が、ＨＤＬＤヒト化２０Ｆ３抗体のＥＣ５０の２、３、５、または６倍以内である。好ましいヒト化２０Ｆ３抗体は、同じエピトープに結合し、かつ／またはヒトＮＴＢ−Ａとの結合についてマウス２０Ｆ３と競合する。本出願中の多箇所と同様に、ＥＣ５０及びＫｄは、実施例の方法に従って測定することができる。
【００５３】
Ｂ．  ヒト化抗体
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列にグラフトされる遺伝子組換えされた抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ，ＵＳ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９、Ｗｉｎｔｅｒ，ＵＳ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ，ＵＳ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ，ＵＳ５，８５９，２０５、ならびにＦｏｏｔｅ，ＵＳ６，８８１，５５７を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、かかる配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列であり得る。ヒトアクセプター配列は、アクセプターＣＤＲとドナーＣＤＲとの間で通常型が一致するように、可変領域フレームワークにおけるドナー配列との高い配列同一性を求めて選択され得る。２０Ｆ３の重鎖に好適なアクセプター配列には、ＩＧＨＶ７−４−１−ＩＧＨＪ６が含まれる。よって、ヒト化抗体は、完全にまたは実質的にドナー抗体ならびに可変領域フレームワーク配列及び定常領域に由来し、存在する場合、完全にまたは実質的にヒト抗体配列に由来するＣＤＲを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体重鎖ならびに重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域に由来し、存在する場合、実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に由来する通常３つ全てのＣＤＲを有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体軽鎖ならびに軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域に由来し、存在する場合、実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列に由来する通常３つ全てのＣＤＲを有する。ヒト化抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔにより定義される通り）の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一であるとき、非ヒト抗体において対応するＣＤＲに実質的に由来する。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、Ｋａｂａｔにより定義される対応する残基の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％が同一であるとき、それぞれ、実質的にヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域に由来する。
【００５４】
ヒト化抗体は、マウス抗体由来の６つ全てのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔｏｒ  ＩＭＧＴ（登録商標）により定義されるように）を組み込むことが多いが、それらは、マウス抗体からの全てより少ないＣＤＲ（例えば、少なくとも３つ、４つ、または５つ）とでも作製され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２、Ｖａｊｄｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５−４２８，２００２、Ｉｗａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９−１０９１，１９９９、Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２−１４４１，２０００）。
【００５５】
ヒト可変領域フレームワーク残基由来のある特定のアミノ酸は、ＣＤＲ構造及び／または抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づく置換に関して選択され得る。かかる可能な影響の研究は、モデル化、特定の位置でのアミノ酸の特性の検査、または特定のアミノ酸の置換もしくは突然変異誘発の作用の経験的観察によるものである。
【００５６】
例えば、アミノ酸がマウス可変領域フレームワーク残基と選択されたヒト可変領域フレームワーク残基との間で異なるとき、ヒトフレームワークアミノ酸は、マウス抗体由来の同等のフレームワークアミノ酸によって置換され得るが、これは、アミノ酸が、
（１）直接的に抗原に非共有結合する、
（２）ＣＤＲ領域に隣接する、
（３）さもなければＣＤＲ領域と相互作用する（例えば、ＣＤＲ領域の約６Å以内である）、
（４）重鎖と軽鎖との間の相互作用を媒介する、または
（５）マウス鎖における体細胞変異の結果である、
（６）グリコシル化の部位であることが、妥当に予期される場合である。
【００５７】
クラス（１）〜（３）からのフレームワーク残基は、代替的に、通常型及びベニヤ型残基と称される場合がある。ＣＤＲループの配座を決定するドナーＣＤＲループの通常型を定義するフレームワーク残基は、通常型残基と称される場合がある（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６，９０１−９１７（１９８７），Ｔｈｏｒｎｔｏｎ  ＆  Ｍａｒｔｉｎ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６３，８００−８１５，１９９６）。抗原結合ループ配座を支持するフレームワーク残基の層は、抗体の抗原に対する適合を微調整することにおいて役割を果たし、ベニヤ残基と称されることがある（Ｆｏｏｔｅ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９２，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏ．２２４，４８７−４９９）。
【００５８】
本発明は、２０Ｆ３抗体、ならびにそのヒト化、キメラ、及びベニヤ形態を提供する。本発明は、十分な結合によって異なる順列で組み合わされ得る、５つの例示されるヒト化重鎖成熟可変領域（ＨＡ、ＨＢ、ＨＣ、ＨＤ、及びＨＥ）（配列番号５〜９）と、４つの例示されるヒト化軽鎖（ＬＡ、ＬＢ、ＬＣ、及びＬＤ）（配列番号１５〜１８）とを含む、２０Ｆ３抗体のヒト化形態を提供する。これらの順列のうち、ＨＤＬＤが好ましく、これは、結合特性と許容可能な数の復帰突然変異との組み合わせが最も良好であることに起因する。ＨＤＬＤは、ｃｙｎｏ−ＮＴＢ−Ａへの結合も保持した。ＨＤＬＤはまた、細胞培養における収率が良好であり、凝集がわずかであった。ＥＣ５０がマウス２０Ｆ３のＥＣ５０倍以内であり、復帰突然変異がＨＤＬＤより少ない他の組み合わせとしては、ＨＣＬＢ、ＨＣＬＤ、ＨＤＬＢ、及びＨＥＬＢが挙げられる。
【００５９】
本発明は、抗体が、配列番号３の３つの重鎖ＣＤＲと配列番号１３の３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＲがＫａｂａｔによって定義される通りである、マウス２０Ｆ３抗体のヒト化形態を提供する。本発明はまた、抗体が、配列番号３の３つの重鎖ＣＤＲと配列番号１３の３つの軽鎖ＣＤＲとを含み、ＣＤＲがＩＭＧＴによって定義される通りである、マウス２０Ｆ３抗体のヒト化形態を提供する。Ｋａｂａｔ重鎖ＣＤＲは配列番号１０〜１２に示される通りであり、Ｋａｂａｔ軽鎖ＣＤＲは配列番号１９〜２１に示される通りである。ＩＭＧＴ（登録商標）重鎖ＣＤＲは配列番号２２〜２４に示される通りであり、ＩＭＧＴ（登録商標）軽鎖ＣＤＲは配列番号２５〜２７に示される通りである。
【００６０】
本発明は、軽鎖フレームワーク領域が、ヒト生殖系列ドナー配列ｖｈＩＧＫＶ３〜１１及びエクソンｈＩＧＫＪ４に由来し、重鎖が、ヒト生殖系列ドナー配列ｈＩＧＨＶ７−４−１及びエクソンｈＩＧＨＪ６に由来する、マウス２０Ｆ３抗体のヒト化形態を提供する。したがって、本明細書に開示のヒト化抗体は、軽鎖可変領域にはヒト生殖系列ドナー配列ｈＩＧＫＶ３−１１及びエクソンｈＩＧＫＪ４を使用し、重鎖可変領域にはヒト生殖系列ドナー配列ＩＧＨＶ７−４−１及びエクソンｈＩＧＨＪ６を使用して、ヒト化され得る。ＣＤＲは、ＫａｂａｔまたはＩＭＧＴによって定義される通りであり得る。
【００６１】
本発明は、ヒト化重鎖成熟可変領域が、配列番号８との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示し、ヒト化軽鎖成熟可変領域が、配列番号１８との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％，９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示す、ＨＤＬＤヒト化抗体の変異型を提供する。好ましくは、かかる抗体において、ＨＤＬＤにおける復帰突然変異の一部または全てが保持される。一部の抗体においては、以下の可変領域フレームワーク位置のうちの少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２個全てが、規定のように占有され：Ｉによって占有されるＨ２、Ｄによって占有されるＨ４４、Ｋによって占有されるＨ４６、Ｋによって占有されるＨ７３、Ｎによって占有されるＨ７６、Ｑによって占有されるＬ１、Ｓによって占有されるＬ５、Ｍによって占有されるＬ２１、Ｐによって占有されるＬ４６、Ｗによって占有されるＬ４７、Ｖによって占有されるＬ５８、Ｙによって占有されるＬ７１；付番はＫａｂａｔ付番方式による。かかるヒト化抗体のＣＤＲ領域は、好ましくは、Ｋａｂａｔによって定義されるＨＤＬＤのＣＤＲ領域と実質的に同一であることが好ましく、これは、マウスドナー抗体のものと同じである。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号８の３つのＣＤＲと、配列番号８の可変領域フレームワークと少なくとも９５％同一である可変領域フレームワークとを含む重鎖を含む。別の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１８の３つのＣＤＲと、配列番号１８の可変領域フレームワークと少なくとも９５％同一である可変領域フレームワークとを含む軽鎖を含む。
【００６２】
本発明は、ヒト化重鎖成熟可変領域が、配列番号８との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示し、ヒト化軽鎖成熟可変領域が、配列番号１８との少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％，９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を示す、ＨＤＬＤヒト化抗体の変異型を提供する。一部の抗体においては、以下の可変領域フレームワーク位置が規定のように占有され：Ｈ２がＩによって占有され、Ｈ３８がＲまたはＫによって占有され、Ｈ４４がＤまたはＧによって占有され、Ｈ４６がＫまたはＥによって占有され、Ｈ６８がＶまたはＡによって占有され、Ｈ７３がＫによって占有され、Ｈ７６がＮまたはＳによって占有され、Ｈ９１がＹまたはＦによって占有され、Ｌ１がＱまたはＥによって占有され、Ｌ５がＳまたはＴによって占有され、Ｌ２１がＭまたはＬによって占有され、Ｌ４６がＰによって占有され、Ｌ４７がＷによって占有され、Ｌ５８がＶまたはＩによって占有され、Ｌ７１がＹによって占有され；付番はＫａｂａｔ付番方式による。かかるヒト化抗体のＣＤＲ領域は、好ましくは、Ｋａｂａｔによって定義されるＨＤＬＤのＣＤＲ領域と実質的に同一であることが好ましく、これは、マウスドナー抗体のものと同じである。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号８の３つのＣＤＲと、配列番号８の可変領域フレームワークと少なくとも９５％同一である可変領域フレームワークとを含む重鎖を含む。別の実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号１８の３つのＣＤＲと、配列番号１８の可変領域フレームワークと少なくとも９５％同一である可変領域フレームワークとを含む軽鎖を含む。
【００６３】
ヒト化２０Ｆ３抗体が例示されるＨＤＬＤヒト化抗体からの任意の変形を示す限りにおいて、かかる追加の変形に関する１つの可能性は、可変領域フレームワークにおける追加の復帰突然変異である。他の例示されるヒト化重鎖または軽鎖成熟可変領域における復帰突然変異した位置のいずれかまたは全てが作製され得る（即ち、Ｋによって占有されるＨ３８、Ａによって占有されるＨ６８、Ｆによって占有されるＨ９１のうちの１つ、２つ、または３つ全て）。しかしながら、かかる追加の復帰突然変異は、これらが概して親和性を改善せず、より多くのマウス残基を導入することによって免疫原性のリスクが増大し得ることから、好ましくない。変異型としては、ＨＡＬＡ、ＨＡＬＢ、ＨＡＬＣ、ＨＡＬＤ、ＨＢＬＡ、ＨＢＬＢ、ＨＢＬＣ、ＨＢＬＤ、ＨＣＬＡ、ＨＣＬＢ、ＨＣＬＣ、ＨＣＬＤ、ＨＤＬＡ、ＨＤＬＢ、ＨＤＬＣ、ＨＥＬＡ、ＨＥＬＢ、ＨＥＬＣ、及びＨＥＬＤが挙げられる。
【００６４】
可能性のある別の変形は、マウス抗体のＣＤＲにおけるある特定の残基を、ヒトＣＤＲ配列由来、典型的には、例示されるヒト化抗体の設計に使用されるヒトアクセプター配列のＣＤＲ由来の対応する残基で置換することである。一部の抗体においては、ＣＤＲの一部のみ、つまり、ＳＤＲと呼ばれる、結合に必要なＣＤＲ残基のサブセットが、ヒト化抗体における結合を保持するために必要とされる。抗原と接触しておらず、ＳＤＲ中にないＣＤＲ残基は、これまでの研究に基づき、分子モデリングにより、及び／または実験的に特定することができる。１つ以上のドナーＣＤＲ残基が存在しない位置にあるかかるヒト化抗体では、その位置を占有しているアミノ酸は、アクセプター抗体配列中の対応する位置を占有しているアミノ酸であり得る。ＣＤＲにおけるドナーアミノ酸に対するアクセプターのかかる置換をいくつ含めるかは、競合する検討事項のバランスを反映する。かかる置換は、ヒト化抗体中のマウスアミノ酸の数を減少させること、ひいては可能性のある免疫原性を減少させることに有利である可能性がある。しかしながら、置換により親和性の変化も生じ得、著しい親和性の低下は回避することが好ましい。
【００６５】
好ましくはないが、他のアミノ酸置換を、例えば、ＣＤＲと接触していないフレームワーク残基、または更には一部の可能性のあるＣＤＲに接触しているＣＤＲ内の残基アミノ酸中で行うことができる。変異型ヒト化配列中で行われた代置は、代置されたＨＤＬＤアミノ酸に関して保存的であることが多い。好ましくは、ＨＤＬＤに対する代置（保存的であるか否かにかかわらない）は、ヒト化ｍＡｂの結合親和性または効力、つまり、ヒトＮＴＢ−Ａに結合し、癌細胞の増殖を阻害する能力に大きな影響を及ぼさない。
【００６６】
変異型は、典型的には、ＨＬＤの重鎖及び軽鎖成熟可変領域とは、少数（例えば、典型的には、軽鎖成熟可変領域か重鎖成熟可変領域かのいずれか、またはこれらの両方において、１、２、３、５、または１０未満）の代置、欠失、または挿入で異なる。
【００６７】
抗体の特異的結合は、従来的な方法によってアッセイすることができ、これらの方法としては、ウエスタンブロット、放射免疫測定、ＥＬＩＳＡ、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素アッセイ、ゲル内拡散沈降アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光免疫アッセイ、タンパク質Ａ免疫アッセイ、及び補体結合アッセイなどの技法を使用するアッセイ系を含む、免疫アッセイが挙げられる。かかるアッセイは、当該技術分野において日常的かつ周知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。実施例中の飽和結合プロトコルを使用して、特異的結合を決定することができる。
【００６８】
抗体のうちのいずれも、競合的結合アッセイまたは他のものによって、マウス２０Ｆ３抗体などの見本抗体と同じであるかまたは重複しているエピトープ特異性を有するように選択され得る。抗体間の競合は、試験抗体が、ヒトＮＴＢ−Ａへの特異的結合について、参照抗体、ここではマウス２０Ｆ３と競合する能力から評価される。マウス２０Ｆ３参照抗体は、配列番号３及び１３の重鎖及び軽鎖成熟可変領域を有し、ＩｇＧ１カッパアイソタイプのものである。好ましい抗体は、２０Ｆ３抗体と同じエピトープ特異性を有する。当業者は、様々な方法を使用して、抗体が結合するエピトープを特定することができる。例えば、アレイ系オリゴペプチドスキャニングまたはペプスキャン分析は、標的抗原の重複セグメント及び非重複セグメントに由来するオリゴ−ペプチド配列のライブラリを使用し、それらが目的の抗体と結合する能力を試験する。例えば、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ８１：３９９８−４００２（１９８４）を参照されたい。非線形エピトープは、例えば、アレイ系オリゴペプチドスキャニングの変形であるＣＬＩＰＳ（商標）技術を使用して特定され得る。例えば、Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｅｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｊ．２：５６−６７（２００９）を参照されたい。抗原タンパク質も、突然変異生成を行った後で使用して、目的の抗体による結合を評定することができる。タンパク質の系統的部位特異的突然変異生成を使用して、または突然変異のライブラリを作製し使用して、抗体結合をスクリーニングし得る。突然変異ライブラリは、例えば、Ｉｎｔｅｇｒａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒから購入可能である。アミド水素／重水素交換ＭＳを使用して、エピトープを特定することができる。目的の抗原を重水の中に置き、重陽子で標識する。次に、タンパク質をプロテアーゼで分解し、結果として得られたペプチド断片を質量分析に供する。抗原は、抗体の存在下で評定することもでき、ペプチド断片の標識の差異により、抗体結合の面積が示される。
【００６９】
ＩＶ．定常領域の選択
ＶＨ及び／またはＶＬドメインを含む抗ＮＴＢＡ抗体は、免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト免疫グロブリン定常領域）の少なくとも一部に連結され得る。例えば、一部の抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、第１及び第２のポリペプチド鎖を含み、第１のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域の少なくとも一部に連結した本明細書に記載のＶＨドメインを含み、第２のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域の少なくとも一部に連結した本明細書に記載のＶＬドメインを含む。典型的には、ＶＨドメインまたはＶＬドメインは、アミノ末端で免疫グロブリン定常領域またはその一部に連結する。第１及び第２のポリペプチド鎖を含む抗体の特定の変形においては、第１及び第２のポリペプチド鎖は、無傷の天然抗体の重鎖及び軽鎖に対応するドメイン構造、例えば、ＶＨ−ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３というアミノ末端からカルボキシル末端のドメイン構造を有する第１のポリペプチド（重）鎖、及びＶＬ−ＣＬというアミノ末端からカルボキシル末端ドメイン構造を有する第２のポリペプチド（軽）鎖を有する。
【００７０】
一部の抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、一本のポリペプチド鎖内で連結したＶＨドメイン、ＶＬドメイン、及び免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部（例えば、ＣＨ１ドメインを欠く重鎖定常領域）を含む単鎖抗体である。例えば、ＶＨ及びＶＬドメインは、ＶＨ／ＶＬ配向またはＶＬ／ＶＨ配向（アミノ末端／カルボキシル末端）のいずれかにある単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として構築されてもよく、このｓｃＦｖは、重鎖定常領域、例えば、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含むがＣＨ１ドメインを欠く定常領域などの重鎖定常領域に（典型的には、アミノ末端で）連結する。ｓｃＦｖは、典型的には、例えば免疫グロブリンヒンジ領域に由来するリンカーなどのリンカーを介して定常領域に連結する。
【００７１】
定常領域の選択は、一部、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用、及び／または補体依存性細胞傷害性が所望されるかどうかに依存し得る。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１及びＩｇＧ３は強い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２は弱い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトＩｇＧ４は補体依存性細胞傷害性を欠く。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも強い細胞媒介エフェクター機能も誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。例示的な重鎖及び軽鎖定常領域は、配列番号２７、２８、及び２９によって提供される。抗体は、例えば、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含む四量体として、別個の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖとして、または重鎖及び軽鎖可変ドメインがスペーサーを通して連結される単鎖抗体として発現され得る。加えて、所望の場合、定常領域を突然変異させることができる。いくつかの態様では、天然のヒト定常領域の突然変異形態は、Ｆｃγ受容体への結合が、天然のヒト定常領域と比較して低下することになる。
【００７２】
ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ多様性及びイソアロタイプ多様性を示す、つまり、定常領域は１つ以上の多型位置で異なる個体において異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つ以上の他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点でアロタイプとは異なる。
【００７３】
重鎖のＣ末端リジンなどの軽鎖及び／もしくは重鎖のアミノまたはカルボキシ末端の１個またはいくつかのアミノ酸は、ある比率で、もしくは分子の全てを欠損するか、または誘導体化され得る。置換は、補体媒介細胞傷害性もしくはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低減または増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏら、米国特許第５，８３４，５９７号；及びＬａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０３：４００５，２００６を参照されたい）、あるいはヒトにおける半減期を延長するために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照されたい）定常領域において行われ得る。
【００７４】
例示的な置換としては、アミノ酸位置２３４、２３５、２３７、２３９、２６７、２９８、２９９、３２６、３３０、または３３２で導入される天然のアミノ酸のシステイン残基へのアミノ酸置換、好ましくは、ヒトＩｇＧ１アイソタイプにおけるＳ２３９Ｃ突然変異が挙げられる（ＵＳ  ２０１００１５８９０９；Ｆｃ領域の付番はＥＵインデックスに従う）。いくつかの態様では、追加のシステイン残基の存在により、鎖間ジスルフィド結合形成が可能となる。かかる鎖間ジスルフィド結合形成により立体障害が生じることで、Ｆｃ領域−ＦｃγＲ結合相互作用の親和性が低下し得る。ＩｇＧ定常領域のＦｃ領域で導入されるかまたはそれに近接するシステイン残基（複数可）も、治療薬との複合体化（即ち、薬物のマレイミド誘導体などのチオール特異的試薬を使用した細胞傷害性薬物の結合）のための部位として機能し得る。治療薬の存在により立体障害が生じることで、Ｆｃ領域−ＦｃγＲ結合相互作用の親和性が更に低下し得る。位置２３４、２３５、２３６、及び／または２３７のうちのいずれかにおける他の置換により、Ｆｃγ受容体、特にＦｃγＲＩ受容体に対する親和性が低下する（例えば、ＵＳ  ６，６２４，８２１、ＵＳ  ５，６２４，８２１を参照されたい）。
【００７５】
抗体のインビボ半減期も、そのエフェクター機能に影響し得る。抗体の半減期を増大または減少させて、その治療活性を修飾することができる。ＦｃＲｎは、β２−ミクログロブリンと非共有的に会合するＭＨＣ  Ｃｌａｓｓ  Ｉ抗原と構造的に類似している受容体である。ＦｃＲｎは、ＩｇＧの異化及び組織を横断するそれらのトランスサイトーシスを調節する（Ｇｈｅｔｉｅ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９−７６６，２０００、Ｇｈｅｔｉｅ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２５：９７−１１３，２００２）。ＩｇＧ−ＦｃＲｎ相互作用は、ｐＨ６．０（細胞内ベシクルのｐＨ）で起きるがｐＨ７．４（血液のｐＨ）では起きない。この相互作用により、ＩｇＧを循環に戻して再利用することが可能となる（上記Ｇｈｅｔｉｅ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ，２０００；上記Ｇｈｅｔｉｅ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ，２００２）。ＦｃＲｎ結合に関与するヒトＩｇＧ１上の領域はマッピングされている（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６０４，２００１）。ヒトＩｇＧ１の位置Ｐｒｏ２３８、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｎ３１１、Ａｓｐ３１２、Ｇｌｕ３８０、Ｇｌｕ３８２、またはＡｓｎ４３４におけるアラニン置換により、ＦｃＲｎ結合が強化される（上記Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．）。これらの置換を含むＩｇＧ１分子はより長い血清半減期を有する。これらの修飾されたＩｇＧ１分子は、それらのエフェクター機能を実行することができるため、未修飾のＩｇＧ１と比較してより長期間にわたってそれらの治療効果を発揮し得る。ＦｃＲｎへの結合を増大させるための他の例示的な置換には、位置２５０のＧｌｎ及び／または位置４２８のＬｅｕが挙げられる。ＥＵ付番を定常領域中の全ての位置に使用する。
【００７６】
保存されたＡｓｎ２９７に共有結合したオリゴ糖は、ＩｇＧのＦｃ領域がＦｃγＲに結合する能力に関与する（Ｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：４９６３−６９，１９９６、Ｗｒｉｇｈｔ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：２６−３１，１９９７）。ＩｇＧ上のこの糖型を操作することで、ＩｇＧ媒介性ＡＤＣＣを顕著に改善することができる。この糖型にＮ−アセチルグルコサミンの二分修飾を加えること（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６−１８０，１９９９、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８−９４，２００１）、またはこの糖型からフコースを除去すること（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−４０，２００２、Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：６５９１−６０４，２００３、Ｎｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：２１２７−３３，２００４）が、ＩｇＧ  ＦｃとＦｃγＲとの間の結合を改善することでＩｇ媒介性ＡＤＣＣ活性を強化する、ＩｇＧ  Ｆｃ操作の２つの例である。
【００７７】
ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域の溶媒曝露アミノ酸の全身置換により、ＦｃγＲ結合親和性が改変されたＩｇＧ変異型が生成された（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６０４，２００１）。親ＩｇＧ１を比較すると、Ｔｈｒ２５６／Ｓｅｒ２９８、Ｓｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３、Ｓｅｒ２９８／Ｌｙｓ３３４、またはＳｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３／Ｌｙｓ３３４におけるＡｌａへの置換に関与するこれらの変異型のサブセットは、ＦｃγＲへの結合親和性とＡＤＣＣ活性との両方の増大を示す（上記Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−４９，２００４）。
【００７８】
抗体の補体結合活性（Ｃ１ｑ結合とＣＤＣ活性との両方）は、Ｌｙｓ３２６及びＧｌｕ３３３における置換によって改善させることができる（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１−２５７５，２００１）。ヒトＩｇＧ２骨格における同じ置換は、Ｃ１ｑに不良に結合し補体活性化活性が大幅に不足している抗体アイソタイプを、Ｃ１ｑへの結合とＣＤＣの媒介との両方を行うことができるものへと変換し得る（上記Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．）。いくつかの他の方法も、抗体の補体結合活性を改善するために適用されている。例えば、ＩｇＭの１８アミノ酸カルボキシル末端尾片をＩｇＧのカルボキシル末端へのグラフトすることで、それらのＣＤＣ活性が強化される。これは、通常はＣＤＣ活性が検出可能でないＩｇＧ４であっても観察される（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：２２２６−３６，１９９５）。また、ＩｇＧ１重鎖のカルボキシ末端の近くに位置するＳｅｒ４４４をＣｙｓで置換することで、ＣＤＣ活性が単量体ＩｇＧ１の２００倍の増加したＩｇＧ１の尾−尾二量体化が誘導された（Ｓｈｏｐｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２２，１９９２）。加えて、Ｃ１ｑへの特異性を有する二重特異性ダイアボディの構築によってもＣＤＣ活性が付与される（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６２９−３１，１９９７）。
【００７９】
補体活性は、重鎖のアミノ酸残基３１８、３２０、及び３２２のうちの少なくとも１つをＡｌａなどの異なる側鎖を有する残基に突然変異させることによって低下させることができる。３つの残基のうちのいずれかの代わりに、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、もしくはＶａｌなどの他のアルキル置換非イオン性残基、またはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、及びＰｒｏなどの芳香族非極性残基も、Ｃ１ｑ結合を低減または無効にする。Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、及びＭｅｔを残基３１８ではなく残基３２０及び３２２で使用して、Ｃ１ｑ結合活性を低減または無効にし得る。３１８（Ｇｌｕ）残基を極性残基によって代置することで、Ｃ１ｑ結合活性を無効にせずに修飾し得る。残基２９７（Ａｓｎ）をＡｌａで代置することにより、溶解活性が除去されるが、Ｃ１ｑに対する親和性はわずかに低下する（約３倍弱化する）するだけである。この改変により、グリコシル化部位が破壊され、補体活性化に必要とされる炭水化物の存在が破壊される。この部位における任意の他の置換でも、グリコシル化は破壊される。Ｄ２７０Ａ、Ｋ３２２Ａ、Ｐ３２９Ａ、及びＰ３１１Ｓの突然変異及びそれらの任意の組み合わせによっても、Ｃ１ｑ結合は低減する（ＷＯ  ０６／０３６２９１を参照されたい）。
【００８０】
ヒト定常領域への言及は、天然アロタイプにおける多型位置を占有している残基の任意の天然アロタイプまたは任意の順列を有する定常領域を含む。また、上記のものなどの突然変異が天然ヒト定常領域に対して最大１、２、５、または１０個存在して、Ｆｃガンマ受容体結合を低下させるか、またはＦｃＲｎへの結合を増大させてもよい。
【００８１】
Ｖ．核酸及び産生方法
本発明は、上記のＶＨ及び／またはＶＬドメインのうちのいずれかをコードする核酸を更に提供し、本核酸は、例えば、免疫グロブリン定常領域に対応するポリペプチドセグメント等の追加のポリペプチドセグメントに結合したＶＨ及び／またはＶＬドメインを含むポリペプチドを含む。典型的には、核酸は、ＶＨ及び／またはＶＬドメインを含む成熟ポリペプチドへのシグナルペプチド融合アミノ末端もコードする。核酸上のコード配列は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナルなど、コード配列の発現を確実にするために、調節配列と動作可能な連結にあり得る。核酸は単離された形態で生じるか、または１つ以上のベクターにクローニングされ得る。核酸は、例えば、固体状態の合成または重複オリゴヌクレオチドのＰＣＲにより合成され得る。ＶＨドメイン及びＶＬドメインの両方をコードする核酸（例えば、別個の重鎖及び軽鎖を含む抗体との関連において）は、例えば発現ベクター内で１つの隣接核酸として結合され得るか、または各々がそれ自体の発現ベクター内にクローニングされるなど、別個であり得る。
【００８２】
抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、典型的には、１つ以上の抗体鎖をコードする１つ以上の核酸の組換え発現によって産生される。組換えポリヌクレオチド構築物は典型的には、自然に会合したプロモーター領域または異種プロモーター領域を含む、ＶＨ及び／またはＶＬドメインを含む１つ以上のポリペプチド鎖のコード配列に動作可能に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクターにおける真核プロモーター系である。ベクターが適切な宿主内に組み込まれたら、宿主は高レベルのヌクレオチド配列の発現、ならびに交差反応抗体の回収及び精製に適した条件下で維持される。
【００８３】
第１及び第２のポリペプチド鎖（例えば、重鎖及び軽鎖）を含む抗体の発現について、２つのポリペプチド鎖を、抗体分子全体の発現のために宿主細胞中で別個のベクターから共発現させることができる。あるいは、２つのポリペプチド鎖は、抗体分子全体の発現のために宿主細胞中で同じベクターにおける別個の発現単位から共発現させることができる。
【００８４】
哺乳類細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現するための好ましい宿主である。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。無傷異種タンパク質をスクリーニングすることが可能ないくつかの好適な宿主細胞系が当該技術分野において開発されており、ＣＨＯ細胞系（例えば、ＤＧ４４）、様々なＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、及び非抗体産生骨髄腫（Ｓｐ２／０及びＮＳ０を含む）を含む。好ましくは、細胞は非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサー（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９，１９８６）などの発現制御配列、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位などの必要なプロセシング情報部位、ならびに転写終結配列を含み得る。好ましい発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９，１９９２を参照されたい。
【００８５】
発現されたら、抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む、当該技術分野の標準的な手順に従い精製され得る（一般的に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照されたい）。
【００８６】
ＶＩ．抗体−薬物複合体
抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、細胞傷害部分または細胞増殖抑制部分と複合体化されて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成し得る。抗体との複合体化に特定好適な部分は、細胞傷害性薬（例えば、化学療法薬）、プロドラッグ変換酵素、放射性同位体もしくは化合物、または毒素（治療薬と総称されるこれらの部分）である。例えば、抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、化学療法薬などの細胞傷害性薬、または毒素（例えば、細胞増殖抑制もしくは殺細胞薬、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、またはジフテリア毒素）と複合体化され得る。細胞傷害性薬の有用なクラスの例は、例えば、ＤＮＡ小溝結合、ＤＮＡアルキル化剤、及びチューブリン阻害剤を含む。例示的な細胞傷害性薬としては、例えば、アウリスタチン、カンプトテシン、カリチアマイシン、デュオカルマイシン、エトポシド、マイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ２、ＤＭ３、ＤＭ４）、タキサン、ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン二量体、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン二量体を含む、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン）、及びビンカアルカロイドが挙げられる。
【００８７】
抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、プロドラッグ変換酵素に複合体化され得る。プロドラッグ変換酵素は、既知の方法を使用して、抗体に組換えによって融合されるか、または抗体に化学的に複合体化され得る。例示的なプロドラッグ変換酵素は、カルボキシペプチダーゼＧ２、ベータ−グルクロニダーゼ、ペニシリン−Ｖ−アミダーゼ、ペニシリン−Ｇ−アミダーゼ、β−ラクタマーゼ、β−グルコシダーゼ、ニトロレダクターゼ、及びカルボキシペプチダーゼＡである。
【００８８】
治療薬をタンパク質、特に抗体と複合体化するための技法は周知である。（例えば、Ａｌｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１０  １４：１−９；Ｓｅｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．，２００８，１４（３）：１５４−１６９を参照されたい。）治療薬は、抗体から切断されない限り（例えば、加水分解、タンパク質分解、または切断剤によって）、その活性を低減する様式で複合体化され得る。いくつかの態様では、例えば、治療薬は、複合体が、ＮＴＢ−Ａ発現癌細胞によって内在化されるときに抗体から切断されるように（例えば、エンドソーム環境において、または例えば、ｐＨ感受性もしくはプロテアーゼ感受性により、リソソーム環境において、またはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａｒ）環境において）、ＮＴＢ−Ａ発現癌細胞の細胞内環境における切断に感受性であるが、細胞外環境に実質的に感受性ではない切断可能なリンカーによって抗体に結合される。いくつかの態様では、治療薬はまた、切断可能なリンカーによって抗体に結合され得る。
【００８９】
典型的には、ＡＤＣは、細胞傷害性薬または細胞増殖抑制薬と抗ＮＴＢ−Ａ抗体との間のリンカー領域を含む。上記のように、典型的には、リンカーは、リンカーの切断が細胞内環境（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａ）内）において抗体から治療薬を放出するように、細胞内条件下で切断可能であり得る。リンカーは、例えば、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含む、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素により切断されるペプチジルリンカーであり得る。切断剤は、カテプシンＢ及びＤ、ならびにプラスミンを含み得る（例えば、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３，１９９９を参照されたい）。最も典型的なのは、ＮＴＢ−Ａ発現細胞に存在する酵素により切断可能であるペプチジルリンカーである。例えば、癌性組織において高度に発現されるチオール依存性プロテアーゼカテプシンＢにより切断可能であるペプチジルリンカー（例えば、Ｐｈｅ−ＬｅｕまたはＶａｌ−Ｃｉｔペプチドを含むリンカー）を使用することができる。
【００９０】
切断可能なリンカーは、ｐＨ感受性、即ち、ある特定のｐＨ値での加水分解に感受性である。典型的には、ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解性である。例えば、リソソーム中で加水分解性である酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、アコニックアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）を使用することができる。（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号、第５，８２４，８０５号、第５，６２２，９２９号、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３，１９９９、Ｎｅｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３−１４６６１，１９８９を参照されたい。）かかるリンカーは、血液中などの中性ｐＨ条件下で比較的安定しているが、リソソームのおよそのｐＨであるｐＨ５．５または５．０未満で不安定である。
【００９１】
他のリンカーは還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。ジスルフィドリンカーには、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）及びＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢ、及びＳＭＰＴを使用して形成され得るものが挙げられる。（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：５９２４−５９３１，１９８７、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ  ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，１９８７、また米国特許第４，８８０，９３５号を参照されたい。）
【００９２】
リンカーは、マロン酸塩リンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：１３８７−９３，１９９５）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３：１２９９−１３０４，１９９５）、または３’−Ｎ−アミド類似体（Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３：１３０５−１２，１９９５）であり得る。
【００９３】
リンカーは、治療薬に直接結合され、抗体のタンパク質分解により解放されるマレイミド−アルキレンまたはマレイミド−アリールリンカーなどの切断不可能なリンカーでもあり得る。
【００９４】
典型的には、リンカーは、細胞外環境に実質的に感受性ではなく、これは、ＡＤＣが細胞外環境（例えば、血漿中）に存在するときに、ＡＤＣの試料中のリンカーの約２０％以下、典型的には約１５％以下、より典型的には約１０％以下、更により典型的には約５％以下、約３％以下、または約１％以下が切断されることを意味する。リンカーが細胞外環境に実質的に感受性でないかは、例えば、（ａ）ＡＤＣ（「ＡＤＣ試料」）及び（ｂ）等モル量の複合体化されていない抗体または治療薬（「対照試料」）の両方を、所定の期間（例えば、２、４、８、１６、または２４時間）、個別に血漿と共にインキュベートした後、例えば高速液体クロマトグラフィーによって測定して、ＡＤＣ試料中に存在する複合体化されていない抗体または治療薬を、対照試料中に存在するものと比較することによって決定され得る。
【００９５】
リンカーはまた、細胞内在化を促進し得る。リンカーは、治療薬と複合体化されたときに（即ち、本明細書に記載のＡＤＣまたはＡＤＣ誘導体のリンカー−治療薬部分の環境において）、細胞内在化を促進することができる。あるいは、リンカーは、治療薬及び抗ＮＴＢ−Ａ抗体の両方と複合体化されたときに（即ち、本明細書に記載のＡＤＣの環境において）、細胞内在化を促進することができる。
【００９６】
抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、抗体のヘテロ原子を介してリンカーと複合体化され得る。これらのヘテロ原子は、その天然の状態で抗体上に存在し得るか、または抗体に導入され得る。いくつかの態様では、ＮＴＢ−Ａ抗体は、リジン残基の窒素原子を介してリンカーと複合体化される。他の態様では、ＮＴＢ−Ａ抗体は、システイン残基の硫黄原子を介してリンカーと複合体化される。抗体とリンカー及び薬物リンカーを複合体化する方法は、当該技術分野において既知である。
【００９７】
例示的な抗体−薬物複合体は、アウリスタチン系抗体−薬物複合体を含む（つまり、薬物構成成分がアウリスタチン薬物である）。アウリスタチンは、チューブリンに結合し、微小管の動態ならびに核及び細胞分裂に干渉することが示されており、抗癌活性を有する。典型的に、アウリスタチン系抗体−薬物複合体は、アウリスタチン薬物と抗ＮＴＢ−Ａ抗体との間のリンカーを含む。リンカーは、例えば、切断可能なリンカー（例えば、ペプチジルリンカー）または切断不可能なリンカー（例えば、抗体の分解により解放されるリンカー）であり得る。アウリスタチンは、ＭＭＡＦ及びＭＭＡＥを含む。例示的なアウリスタチンの合成及び構造は、米国公開第７，６５９，２４１号、第７，４９８，２９８号、第２００９−０１１１７５６号、第２００９−００１８０８６号、及び第７，９６８，６８７号に記載されており、それらの各々は、その全体が参照により、及び全ての目的に関して、本明細書に組み込まれる。
【００９８】
他の例示的な抗体−薬物複合体は、メイタンシノイド抗体−薬物複合体（つまり、薬物構成成分がメイタンシノイド薬物である）、及びベンゾジアゼピン抗体薬物複合体（つまり、薬物構成成分がベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン二量体、インドリノベンゾジアゼピン二量体、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン二量体）である）を含む。
【００９９】
発明者らは、ＰＢＤ薬物−リンカーを含むヒト化ＮＴＢ−Ａ標的ＡＤＣが特に効果的であることを発見した。
【０１００】
本発明で使用するのに好ましいＰＢＤは、式Ｉによって表され、ＰＢＤ薬物成分の好ましい立体化学は、Ｉａに示される通りである：
【化１】
2018520671.tif 000003
【化２】
2018520671.tif 000004
または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり、式中、添字ｎは、１または３である。
【０１０１】
式Ｉ（またはその薬学的な塩、溶媒和物、塩の溶媒和物）のＰＢＤ二量体は、典型的には、リンカー単位ＬＵを介して抗体に連結される。リンカー単位は、式Ｉ（またはその薬学的な塩、溶媒和物、塩の溶媒和物）のＰＢＤ二量体を標的部位（例えば、癌細胞内部）で放出するように作用する。本発明において使用するためのＰＢＤ薬物−リンカー化合物は、式ＩＩにより以下に表され（好ましい立体化学はＩＩａに示される）、式中、ＬＵは、リンカー単位である。リンカー単位は、例えば、切断可能なペプチドリンカー単位（例えば、バリン−アラニンペプチドを含むリンカー）または切断可能なジスルフィドリンカー単位：
【化３】
2018520671.tif 000005
【化４】
2018520671.tif 000006
または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり、式中、添字ｎは、１または３である。
【０１０２】
本発明における使用に好ましいＰＢＤ薬物−リンカー化合物は、下式ＩＩＩ：
【化５】
2018520671.tif 000007
または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり得、式中、添字ｎは、１または３であり、添字ｍは、２〜５の整数である。
【０１０３】
薬物−リンカーのＰＢＤ薬物構成成分の好ましい立体化学は、下式ＩＩＩａに示される通りである。
【化６】
2018520671.tif 000008
【０１０４】
ＳＧＤ−１９１０ＰＢＤ薬物−リンカーのＰＢＤ薬物及びリンカーの構成成分の好ましい立体化学は、下式ＩＩＩｂに示される通りである。
【化７】
2018520671.tif 000009
【０１０５】
ＰＢＤ薬物−リンカーは、キメラ形態及びヒト化形態を含む２０Ｆ３抗体と複合体化されて、ＮＴＢ−Ａ標的抗体−薬物複合体を産生する。例えば、本抗体は、式ＩＩまたは式ＩＩＩの薬物−リンカーと複合体化され得る。例示的なＮＴＢ−Ａ標的抗体−薬物複合体は、以下に、式ＩＶ、ＩＶａ、及びＩＶｂ：
【化８】
2018520671.tif 000010
【化９】
2018520671.tif 000011
【化１０】
2018520671.tif 000012
または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を産生し、式中、添字ｎは、１または３であり、添字ｍは、２〜５の整数であり、添字ｐは、１〜４である。
【０１０６】
本発明は、本明細書で具体的に例示されるものを含む、抗ＮＴＢＡ抗体薬物複合体を含む薬学的組成物を含む組成物を提供する。本組成物は、典型的には、抗体薬物複合体分子の集団を含む。
【０１０７】
薬物負荷−「ｐ」
式ＩＶ、ＩＶａ、及びＩＶｂのＮＴＢ−Ａ標的−薬物複合体を参照すると、添字ｐは、抗体分子に対する薬物負荷（抗体分子に結合された薬物の分子数）を表し、整数値である。抗体−薬物複合体分子の集団を含む組成物において、平均薬物負荷（例えば、集団における抗体当たりの薬物−リンカー分子の平均数）は、標的細胞に送達され得る薬物の量を決定するため、重要な品質特性である。平均薬物負荷は、整数値または非整数値であってもよいが、典型的には非整数値である。
【０１０８】
抗体−薬物複合体組成物の不均質は、いくつかの態様では、薬物−リンカー分子を抗体分子と複合体化するために使用される複合体化技術に依存する。例えば、いくつかの態様では、薬物−リンカー分子を抗体分子と複合体化するために使用される複合体化技術は、抗体上での薬物−リンカー分子の分布に関して、及び／または抗体分子上での薬物−リンカーの数に関して不均一である抗体−薬物複合体組成物をもたらす（例えば、非部位特異的技術を使用して鎖間ジスルフィドを介して複合体化するとき）。他の態様では、薬物−リンカー分子を複合体化するために使用される複合体化技術は、リガンド分子上での薬物−リンカー分子の分布に関して、及び／または抗体分子上での薬物−リンカー分子の数に関して実質的に均一である抗体−薬物複合体組成物をもたらす（例えば、部位特異的複合体化技術を使用するとき）。部位特異的及び非部位特異的方法の両方で、非複合体化抗体分子のパーセントが低いこともある。非複合体化抗体分子のパーセントは、平均薬物負荷値に含まれる。
【０１０９】
本発明の好ましい態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団を含む組成物を指すとき、平均薬物負荷は、約２〜約１４、好ましくは約２〜約１０である。本明細書に例示されるものなど、ＰＢＤ抗体薬物複合体に関して、特に好ましい平均薬物負荷は、約２である。いくつかの態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団における個々の抗体分子の実際の薬物負荷は、１〜４、１〜３、または１〜２であり、主要薬物負荷は２である。好ましい態様では、２の平均薬物負荷は、部位特異的複合体化技法（例えば、ＥＵインデックス番付システムに従う位置２３９を含む抗体に導入された改変システミン）を介して得られる。
【０１１０】
本発明の他の態様では、ＰＢＤ抗体−薬物複合体化合物の集団を含む組成物を指すとき、平均薬物負荷は、約３〜約４であり、抗体−薬物複合体化合物の集団における個々の抗体分子の実際の薬物負荷は、１〜６、１〜５、１〜４、または１〜３である。
【０１１１】
複合体化反応からの製剤におけるリガンド単位当たりの薬物−リンカー単位の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＨＩＣ、及びＨＰＬＣなどの常法によって特性評価され得る。ｐに関するリガンド−リンカー−薬物複合体の量的分布も決定され得る。場合によっては，ｐが他の薬物負荷を有するリガンド−薬物複合体からの一定値である、均質のリガンド−薬物複合体の分離、精製、及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動等の手段によって達成され得る。
【０１１２】
ＶＩＩ．用途
本明細書に記載の抗ＮＴＢＡ−抗体は、裸抗体または抗体薬物複合体として、ＮＴＢ−Ａ発現細胞と関連する疾患または障害を治療するための方法において使用され得る。
【０１１３】
例えば、本明細書に記載の抗ＮＴＢＡ抗体は、裸抗体または抗体薬物複合体として、ＮＴＢ−Ａ発現癌の治療に使用され得る。いくつかのかかる癌は、タンパク質レベル（例えば、例示される抗体のうちの１つを使用する免疫アッセイによって）またはｍＲＮＡレベルのいずれかで測定された検出可能なレベルのＮＴＢ−Ａを示す。いくつかのかかる癌は、同じ種類、好ましくは同じ患者由来の非癌性組織と比較して上昇したレベルのＮＴＢ−Ａを示す。治療に適した癌細胞上のＮＴＢ−Ａの例示的なレベルは、細胞当たり５０００〜１５００００個のＮＴＢ−Ａ分子であるが、より高いレベルまたはより低いレベルも治療され得る。任意選択で、癌におけるＮＴＢ−Ａのレベルは、治療を行う前に測定される。
【０１１４】
ＮＴＢ−Ａ発現に関連し、本明細書に開示の裸抗体または抗体薬物複合体による治療に適した癌の例としては、Ｂ細胞、Ｔ細胞、及びＮＫ細胞悪性腫瘍を含む血液学的悪性腫瘍が挙げられる。ある実施形態では、本明細書に開示の裸抗体または抗体薬物複合体は、ＮＫ細胞上で受容体に結合することで、細胞溶解活性及び増殖を誘発し、これが、患者の免疫系の抗腫瘍活性を刺激する。一部の治療方法では、患者は、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｔ細胞白血病、例えば非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）などのＴ細胞もしくはＢ細胞リンパ腫、または原発性アミロイドーシス、ワルデンストレームマクログロブリン血症、もしくは高リスクＭＧＵＳ（意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症）などの骨髄腫関連性悪性腫瘍である、癌を有する。本治療は、これらの種類の原発性または転移性腫瘍を有する患者に適用され得る。本治療は、従来の治療が無効である患者、またはかかる治療への応答後に再発した患者にも適用され得る。
【０１１５】
本明細書に開示の抗ＮＴＢＡ抗体は、裸抗体または抗体薬物複合体として、自己免疫疾患及び炎症性疾患を治療するために使用され得る。本方法によって治療可能な疾患及び障害としては、Ｂ細胞に関連するもの、例えば、過剰な数のＢ細胞、過活性Ｂ細胞、またはＢ細胞機能不全を特徴とする疾患が挙げられる。これらの疾患としては、炎症性疾患及び自己免疫疾患が挙げられる。本方法によって治療可能な例示的な疾患としては、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、炎症性腸疾患、喘息、アレルギー、セリアック病、移植片対宿主病、及び移植片拒絶が挙げられる。
【０１１６】
ＮＴＢ−Ａに対する本抗体は、裸抗体または抗体薬物複合体として、単剤療法、または例えば、かかる疾患及び／もしくは障害の治療標準療法との併用療法において使用され得る。したがって、癌の治療方法は、有効量の本明細書に記載の裸抗体または抗体薬物複合体を、単剤療法として、または追加の抗癌剤または他の薬剤と組み合わせて、それを必要とする患者に投与し、癌の症状を緩和することを含む。自己免疫疾患の治療方法は、有効量の本明細書に記載の裸抗体または抗体薬物複合体を、単剤療法として、または自己免疫疾患を治療するための追加の治療薬と組み合わせて、それを必要とする患者に投与することを含む。炎症性疾患の治療方法は、有効量の本明細書に記載の裸抗体または抗体薬物複合体を、単剤療法として、または炎症性疾患を治療するための追加の治療薬と組み合わせて、それを必要とする患者に投与することを含む。
【０１１７】
併用療法の例示的な薬剤は、多発性骨髄腫を治療するために使用されるプロテアーゼ阻害剤であるカルフィルゾミブ（例えば、ＫＹＰＲＯＬＩＳ（登録商標））である（Ｓｉｅｇｅｌ  ＤＳ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ−ａｇｅｎｔ  ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ  （ＰＸ−１７１−００３−Ａ１）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１２；１２０：２８１７−２８２５を参照されたい）。カルフィルゾミブは、静脈内／ＩＶ注入として投与され得る。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１１８】
カルフィルゾミブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。カルフィルゾミブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、カルフィルゾミブは、レナリドミド及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｓｔｅｗａｒｔ  ＫＡ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ，ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２０１５；３７２：１４２−１５２を参照されたい）。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１１９】
カルフィルゾミブは、デキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｄｉｍｏｐｏｕｌｏｓ  ＭＤ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｖｅｒｓｕｓ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ（ＥＮＤＥＡＶＯＲ）：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ，ｐｈａｓｅ  ３，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ  ｓｔｕｄｙ．Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２０１６；１７：２７−３８を参照されたい）。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２０】
カルフィルゾミブは、パノビノスタットとも組み合わされてきた（Ｂｅｒｄｅｊａ  ＪＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈａｓｅ  Ｉ／ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ  ａｎｄ  ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ／ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ２０１５；１００：６７０−６７６を参照されたい）。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、パノビノスタット、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、パノビノスタット、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、パノビノスタット、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２１】
カルフィルゾミブは、ポマリドミド及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｓｈａｈ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ，ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（ＣＰＤ）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ／ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１５；１２６：２２８４−２２９０を参照されたい）。ある実施形態では、カルフィルゾミブは、ポマリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、ポマリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、カルフィルゾミブは、ポマリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２２】
併用療法の別の例示的な薬剤は、ＣＤ３８（多発性骨髄腫細胞上に高度に発現される糖タンパク質）に結合するヒトモノクローナル抗体であるダラツムマブ（例えば、ＤＡＲＺＡＬＥＸ（商標））である。ダラツムマブは、多発性骨髄腫を治療するために静脈内注入により患者に投与される（Ｌｏｋｈｏｒｓｔ  ＨＭ  ｅｔ  ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＣＤ３８  ｗｉｔｈ  ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ  ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１５；３７３：１２０７−１２１９を参照されたい）。ある実施形態では、ダラツムマブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２３】
ダラツムマブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。ダラツムマブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、ダラツムマブは、ボルテゾミブ及びレナリドミドと組み合わされてきた（Ｐｈｉｐｐｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｔｈｅｒ  Ａｄｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２０１５；６：１２０−１２７を参照されたい）。ある実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、レナリドミド、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、レナリドミド、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、レナリドミド、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２４】
ダラツムマブは、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｐｈｉｐｐｓ  Ｃらを参照されたい）。ある実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ダラツムマブは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２５】
併用療法の別の例示的な薬剤は、悪性多発性骨髄腫細胞のマーカーであるＣＤ３１９またはシグナル伝達リンパ球活性化分子Ｆ７（ＳＬＡＭＦ７）に結合するモノクローナル抗体である、エロツズマブ（例えば、ＥＭＰＬＩＣＩＴＩ（商標））である。エロツズマブは、多発性骨髄腫を治療するために静脈内注入により患者に投与され得る（Ｚｏｎｄｅｒ  ＪＡ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  １，ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ，ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ，ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．  Ｂｌｏｏｄ  ２０１２；１２０：５５２−５５９）を参照されたい）。ある実施形態では、エロツズマブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、エロツズマブは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、エロツズマブは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２６】
エロツズマブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。エロツズマブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、エロツズマブは、レナリドミド及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｌｏｎｉａｌ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１５；３７３：６２１−６３１；を参照されたい）。ある実施形態では、エロツズマブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、エロツズマブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、エロツズマブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２７】
併用療法の別の例示的な薬剤は、多発性骨髄腫を治療するために患者に与えられる免疫調節薬であるレナリドミド（例えば、ＲＥＶＬＩＭＩＤ（登録商標））である（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ＰＧ，Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２００６，１０８：３４５８−３４６４を参照されたい）。レナリドミドは、経口投与用にカプセル、ピル、または錠剤としてパッケージ化され得る。ある実施形態では、レナリドミドは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２８】
レナリドミドは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。レナリドミドは、多発性骨髄腫を治療する様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、レナリドミドは、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ，ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１０；１１６：６７９−６８６を参照されたい）。ある実施形態では、レナリドミドは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１２９】
レナリドミドは、カルフィルゾミブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｓｔｅｗａｒｔ  ＫＡらを参照されたい）。ある実施形態では、レナリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３０】
レナリドミドは、ダラツムマブ及びボルテゾミブとも組み合わされてきた（Ｐｈｉｐｐｓ  Ｃらを参照されたい）。ある実施形態では、レナリドミドは、ダラツムマブ、ボルテゾミブ、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、ダラツムマブ、ボルテゾミブ、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、ダラツムマブ、ボルテゾミブ、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３１】
レナリドミドは、エロツズマブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｌｏｎｉａｌ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１５；３７３：６２１−６３１を参照されたい）。ある実施形態では、レナリドミドは、エロツズマブ、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、エロツズマブ、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、レナリドミドは、エロツズマブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３２】
併用療法の別の例示的な薬剤は、多発性骨髄腫及びマントル細胞リンパ腫を治療するために患者に与えられるプロテアソーム阻害剤であるボルテゾミブ（例えば、ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））である（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ，ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２００３；３４８：２６０９−２６１７を参照されたい）。ボルテゾミブは、静脈内注射により患者に投与され得る。ある実施形態では、ボルテゾミブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３３】
ボルテゾミブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。ボルテゾミブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、ボルテゾミブは、サリドマイド及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｋａｐｏｏｒ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｓｅｍｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２０１２；３：２２８−２４２を参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、サリドマイド、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、サリドマイド、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、サリドマイド、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３４】
ボルテゾミブは、デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、及びエトポシドとも組み合わされてきた（Ｋａｐｏｏｒ  Ｐらを参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシド、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシド、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、デキサメタゾン、サリドマイド、シスプラチン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、エトポシド、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３５】
ボルテゾミブは、ダラツムマブ及びレナリドミドとも組み合わされてきた（Ｐｈｉｐｐｓ  Ｃらを参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、ダラツムマブ、レナリドミド、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、ダラツムマブ、レナリドミド、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、ダラツムマブ、レナリドミド、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３６】
ボルテゾミブは、レナリドミド及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ＰＧ  ｅｔ  ａｌ．２０１０を参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３７】
ボルテゾミブは、パノビノスタット及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．ＰＡＮＯＲＡＭＡ  ２：ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２２：２３３１−２３３７を参照されたい）。ある実施形態では、ボルテゾミブは、パノビノスタット、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、パノビノスタット、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ボルテゾミブは、パノビノスタット、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１３８】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（多発性骨髄腫、白血病、及びリンパ腫を含む）、炎症、アレルギー、及び悪心を治療するために使用されるグルココルチコステロイドであるデキサメタゾン（例えば、ＤＥＣＡＤＲＯＮ（登録商標））である。デキサメタゾンは、経口投与用の錠剤、ピル、もしくはカプセルとして、または静脈内注入により投与され得る。ある実施形態では、デキサメタゾンは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、デキサメタゾンは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、デキサメタゾンは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。デキサメタゾンは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。
【０１３９】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（特に、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫、乳癌、ならびに肺癌を含む）を治療するために使用されるアルキル化剤であるシクロホスファミド（例えば、ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））である。シクロホスファミドは、注射、注入により、経口投与用の錠剤、ピル、もしくはカプセルとして、または筋肉内、腹膜内、もしくは肺膜内への注射により投与され得る。ある実施形態では、シクロホスファミドは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、シクロホスファミドは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、シクロホスファミドは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。シクロホスファミドは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。
【０１４０】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（多発性骨髄腫及び卵巣癌を含む）を治療するために使用されるアルキル化剤であるメルファランである。メルファランは、経口で、注射剤または点滴として投与され得る。ある実施形態では、メルファランは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、メルファランは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、メルファランは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。メルファランは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。
【０１４１】
併用療法の別の例示的な薬剤は、多発性骨髄腫を治療するために使用される免疫調節薬であるポマリドミド（例えば、ＰＯＭＡＬＹＳＴ（登録商標））である。ポマリドミドは、経口投与用にカプセル、ピル、または錠剤として投与され得る。ある実施形態では、ポマリドミドは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１４２】
ポマリドミドは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。ポマリドミドは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。ポマリドミドは、デキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ａｌｏｎｅ  ｏｒ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｌｏｗ−ｄｏｓｅ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｈａｓｅ  ２  ｓｔｕｄｙ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１４；１２３：１８２６−１８３２を参照されたい）。ある実施形態では、ポマリドミドは、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミド  は、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１４３】
ポマリドミドは、カルフィルゾミブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｓｈａｈ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ，ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ，ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ（ＣＰＤ）ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ／ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１５；１２６：２２８４−２２９０を参照されたい）。ある実施形態では、ポマリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ポマリドミドは、カルフィルゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１４４】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（多発性骨髄腫を含む）を治療するために使用されるヒストン脱アセチル化（ＨＤＡＣ）阻害剤であるパノビノスタット（例えば、ＦＡＲＹＤＡＫ（登録商標））である（Ｗｏｌｆ  ＪＬ  ｅｔ  ａｌ．Ａ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ（ＬＢＨ５８９）ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ．ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，２００８を参照されたい）。パノビノスタットは、経口投与用に、ピル、カプセル、または錠剤として投与され得る。ある実施形態では、パノビノスタットは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１４５】
パノビノスタットは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。パノビノスタットは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、パノビノスタットは、カルフィルゾミブと組み合わされてきた（Ｂｅｒｄｅｊａ  ＪＧらを参照されたい）。ある実施形態では、パノビノスタットは、カルフィルゾミブ及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、カルフィルゾミブ及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、カルフィルゾミブ、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１４６】
パノビノスタットは、ボルテゾミブ及びデキサメタゾンとも組み合わされてきた（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．２０１３を参照されたい）。ある実施形態では、パノビノスタットは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、パノビノスタットは、ボルテゾミブ、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１４７】
併用療法の別の例示的な薬剤は、癌（多発性骨髄腫を含む）を治療するために使用されるプロテアソーム阻害剤であるイキサゾミブ（ＮＩＮＬＡＲＯ（登録商標））である。イキサゾミブは、経口投与され得る。ある実施形態では、イキサゾミブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、イキサゾミブは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、イキサゾミブは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１４８】
イキサゾミブは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体、及び追加の薬剤との併用療法で投与することもできる。イキサゾミブは、多発性骨髄腫を治療するための様々な追加の薬剤と組み合わされてきた。例えば、イキサゾミブは、レナリドミド及びデキサメタゾンと組み合わされてきた（Ｍｏｒｅａｕ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｘａｚｏｍｉｂ，ａｎ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｏｒａｌ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ  ｅｘｔｅｎｄｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ／ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ｔｈｅ  ｐｈａｓｅ  ３  ｔｏｕｒｍａｌｉｎｅ−ＭＭ１  ｓｔｕｄｙ．ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ，２０１５を参照されたい）。ある実施形態では、イキサゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、イキサゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、イキサゾミブは、レナリドミド、デキサメタゾン、及び本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１４９】
併用療法（特に非ホジキンリンパ腫の治療におけるもの）のための他の例示的な薬剤としては、抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ、イブリツモマブチウキセタン、トシツモマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ、及びオビヌツズマブを含む）、抗ＣＤ５２抗体（アレムツズマブを含む）、抗ＰＤ１抗体（ニボルマブピディリズマブ及びペンブロリズマブを含む）、抗ＰＤＬ１抗体（デュルバルマブ及びアテゾリズマブを含む）、ブレンツキシマブベドチン、ベンダムスチン、及びボルテゾミブを含む。ある実施形態では、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、ブレンツキシマブベドチン、ベンダムスチン、及びボルテゾミブのうちの１つは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、ブレンツキシマブベドチン、ベンダムスチン、及びボルテゾミブのうちの１つは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ５２抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体、ブレンツキシマブベドチン、ベンダムスチン、及びボルテゾミブのうちの１つは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１５０】
加えて、併用療法用の他の薬剤としては、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾン）；ＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、及びプレドニゾン）；ＲＣＶＰ（リツキシマブ＋ＣＶＰ）；ＲＣＨＯＰ（リツキシマブ＋ＣＨＯＰ）；ＲＣＨＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、及びプレドニゾン）；ＲＩＣＥ（リツキシマブ＋イフォサミド（ｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、カルボプラチン、エトポシド）；ＲＤＨＡＰ（リツキシマブ＋デキサメタゾン、シタラビン、シスプラチン）；ＲＥＳＨＡＰ（リツキシマブ＋エトポシド、メチルプレドニゾロン、シタラビン、シスプラチン）；Ｒ−ＢＥＮＤＡ（リツキシマブ及びベンダムスチン）、ＲＧＤＰ（リツキシマブ、ゲムシタビン、デキサメタゾン、シスプラチン）などの化学療法レジメンが挙げられる。ある実施形態では、ＣＨＯＰ、ＣＶＰ、ＲＣＶＰ、ＲＣＨＯＰ、ＲＣＨＰ、ＲＩＣＥ、ＲＤＨＡＰ、ＲＥＳＨＡＰ、Ｒ−ＢＥＮＤＡ、及びＲＧＤＰのうちの１つは、本発明のＮＴＢ−Ａ指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ＣＨＯＰ、ＣＶＰ、ＲＣＶＰ、ＲＣＨＯＰ、ＲＣＨＰ、ＲＩＣＥ、ＲＤＨＡＰ、ＲＥＳＨＡＰ、Ｒ−ＢＥＮＤＡ、及びＲＧＤＰのうちの１つは、本発明のヒト化２０Ｆ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、ＣＨＯＰ、ＣＶＰ、ＲＣＶＰ、ＲＣＨＯＰ、ＲＣＨＰ、ＲＩＣＥ、ＲＤＨＡＰ、ＲＥＳＨＡＰ、Ｒ−ＢＥＮＤＡ、及びＲＧＤＰのうちの１つは、本発明のｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）との併用療法で投与される。
【０１５１】
裸抗体または抗体薬物複合体としての抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、有効なレジメン、つまり、癌の少なくとも１つの徴候または症状の発症を遅延する、その重症度を低減する、その更なる悪化を阻害する、及び／またはそれを寛解する投薬量、投与経路、及び投与頻度で投与される。場合によっては、治療効果は、個々の患者において、同じ患者の歴史的対照または過去の経験と比較して観察され得る。他の場合では、治療効果は、治療を受けた患者集団の前臨床または臨床試験において、治療を受けていない患者の対照集団と比較して示され得る。
【０１５２】
抗ＮＴＢ−Ａ裸抗体の例示的な投薬量は、患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、より典型的には、１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇ、もしくは１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ１、または２ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇ、もしくは２ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ〜１２ｍｇ／ｋｇ、もしくは３ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。
【０１５３】
抗ＮＴＢＡ抗体薬物複合体の例示的な投薬量は、１．０μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、１．０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、１．０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ〜１．０ｍｇ／ｋｇ、もしくは約１．０μｇ／ｋｇ〜５００．０μｇ／ｋｇ、または約．０μｇ／ｋｇ〜８０．０、１００．０、もしくは２００．０μｇ／ｋｇである。
【０１５４】
ＮＴＢ−Ａ指向ＰＢＤ複合体の例示的な投薬量は、一般的に、約１．０μｇ／ｋｇ〜１．０ｍｇ／ｋｇ、もしくは約１．０μｇ／ｋｇ〜５００．０μｇ／ｋｇ、または約．０μｇ／ｋｇ〜８０．０、１００．０、もしくは２００．０μｇ／ｋｇであるが、代替の投薬量が想定される。
【０１５５】
投与は、典型的には非経口である。投与は、腫瘍に直接局所化させることもできる。静脈内投与または皮下投与による体循環への投与が好ましい。静脈内投与は、例えば、３０〜９０分などの期間にわたる注入により、または単一ボーラス注射によるものであり得る。
【０１５６】
投与頻度は、因子の中でも、循環中の抗体または複合体の半減期、患者の状態、及び投与経路による。頻度は、患者の状態または治療される癌の進行の変化に応じて、毎日、毎週、毎月、３ヶ月ごと、または不規則な間隔であり得る。静脈内投与の例示的な頻度は、継続的な治療過程にわたって週に２回〜３ヶ月ごとであるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。静脈内投与の他の例示的な頻度は、継続的な治療過程にわたって毎週、または４週間ごとのうち３週間であるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。皮下投与に関して、例示的な投薬頻度は、毎日〜毎月であるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。
【０１５７】
投薬回数は、一部には、障害の性質（例えば、急性症状を示しているか慢性症状を示しているか）及び障害の治療に対する応答による。急性障害、または慢性障害の増悪には、１〜１０回の投与が十分である場合が多い。任意に分割形態での単回ボーラス投薬が、急性障害、または慢性障害の増悪に十分である場合もある。治療は、急性障害または急性増悪の再発に対して繰り返され得る。慢性障害に対して、抗体は、少なくとも１、５、もしくは１０年間、または患者の生涯にわたって、一定間隔で、例えば、毎週、隔週、毎月、３カ月ごと、６カ月ごとに投与され得る。
【０１５８】
非経口投与用の薬学的組成物は、好ましくは、無菌かつ実質的に等張性であり、ＧＭＰ状態下で製造される。薬学的組成物は、単位剤形で（即ち、単一投与用の投薬量）提供され得る。薬学的組成物は、１つ以上の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、または助剤を使用して製剤化され得る。製剤は、選択される投与経路による。注射に関して、抗体は、水性溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、もしくは生理食塩水などの生理学的に適合性の緩衝液、または酢酸緩衝液（注射部位の不快感を低減するため）に製剤化され得る。溶液は、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤などの製剤用作用物質を含有し得る。あるいは、抗体薬物複合体は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、減菌発熱物質不含水で構築するために、凍結乾燥形態であり得る。液体製剤中の抗体の濃度は、例えば、１０ｍｇ／ｍｌなど１〜１００ｍｇ／ｍｌであり得る。
【０１５９】
本明細書に開示の裸抗体または抗体薬物複合体を用いた治療は、化学療法、放射線、幹細胞治療、外科手術、及び治療される障害に対して有効な他の治療と組み合わせることができる。抗ＮＴＢ−Ａ抗体または抗体薬物複合体と共に投与することができる他の薬剤の有用なクラスとしては、例えば、癌細胞上で発現される他の受容体に対する抗体、抗チューブリン薬（例えば、アウリスタチン）、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、モノ（白金）、ビス（白金）、ならびに三核白金錯体及びカルボプラチンなどの白金錯体）、アントラサイクリン、抗生物質、抗葉酸剤、代謝拮抗薬、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ化ピリミジン、イオノフォア、レキシトロプシン、ニトロソウレア、プラチノール、予備形成化合物、プリン代謝拮抗薬、ピューロマイシン、放射線増感剤、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイドなどが挙げられる。
【０１６０】
上記の他の薬剤もしくはレジメンのうちのいずれかを単独でまたは抗体薬物複合体として任意に組み合わせた、裸抗体または抗ＮＴＢ−Ａ抗体薬物複合体を用いた治療により、ＮＴＢ−Ａ発現癌（例えば、多発性骨髄腫、ＡＭＬ、ＮＨＬ）に罹患する患者の無増悪生存期間中央値または全生存期間は、特に再発性または難治性である場合に、同じ治療（例えば、化学療法）であるが抗ＮＴＢ−Ａ抗体を単独でまたは複合体として含まないものと比較して、少なくとも３０％または４０％、好ましくは５０％、６０％〜７０％、または更には１００％以上増加し得る。加えてまたはあるいは、抗ＮＴＢ−Ａ複合体を含む治療（例えば、標準的な化学療法）により、ＮＴＢ−Ａ発現癌に罹患する患者の完全奏功率、部分奏功率、または客観的奏効率（完全＋部分）は、同じ治療（例えば、化学療法）であるが抗ＮＴＢ−Ａ抗体を含まないものと比較して、少なくとも３０％または４０％、好ましくは５０％、６０％〜７０％、または更には１００％増加し得る。
【０１６１】
典型的には、臨床試験（例えば、第ＩＩ相、第ＩＩ／ＩＩＩ相、または第ＩＩＩ相試験）では、標準的療法に加えて抗ＮＴＢ−Ａ抗体を用いて治療した患者の平均無増悪生存率及び／または奏功率中央値を、標準的な療法（またはそれにプラセボを加えたもの）を受けた患者の対照群と比較した場合の前述した増加は、統計的に有意であり、例えば、ｐ＝０．０５もしくは０．０１、または更には０．００１レベルであった。完全奏功率及び部分奏功率は、癌臨床試験で一般に使用される客観的基準、例えば、国立がん研究所及び／または食品医薬品局が記載しているかまたは認めているものによって決定される。
【０１６２】
他の用途では、本明細書に開示の抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、臨床診断もしくは治療または研究との関連において、ＮＴＢ−Ａの検出に使用され得る。癌におけるＮＴＢ−Ａの発現は、その癌が本発明の抗体による治療に適していることを示す。本抗体は、ＮＴＢ−Ａを保有する細胞及び様々な刺激に対するそれらの応答の検出に関する研究のための研究用試薬としても販売され得る。かかる使用においては、抗ＮＴＢ−Ａ抗体は、蛍光分子、スピン標識分子、酵素、またはラジオアイソタイプ（ｒａｄｉｏｉｓｏｔｙｐｅ）によって標識され得、ＮＴＢ−Ａのアッセイを行うために必要な試薬全てを含むキットの形態で提供され得る。本抗体を使用して、ＮＴＢ−Ａを、例えば親和性クロマトグラフィーによって精製することもできる。
【０１６３】
以上または以下に列挙される全ての特許申請、他の刊行物、受入番号などは、個々の事項の各々が、参照により同様に組み込まれることが具体的かつ個別に示される場合と同じ程度に、全ての目的においてそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。異なるバージョンの配列が、異なる時期の受入番号と関連する場合、本出願の有効出願日での受入番号と関連するバージョンが意味される。有効出願日は、出願日、または該当する場合にはその受入番号に言及する優先出願の出願日のいずれか早い方を意味する。同様に、異なるバージョンの刊行物が異なる時期に刊行される場合、別途記載のない限り、本出願の有効出願日の時点で直近に刊行されたバージョンが意味される。本発明の任意の特徴、工程、要素、実施形態、または態様は、具体的に別途記載のない限り、任意のそのその他と組み合わせて使用され得る。本発明は、明確性及び理解の目的のため、図示及び例によりある程度詳細に記載されてきたが、ある特定の変更及び修正が付属の特許請求の範囲の範囲内で実践され得ることは明らかであろう。
【実施例】
【０１６４】
以下の実施例に記載の細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）またはＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ（ＤＭＳＺ）によって規定される条件に従って、または既知の通りに、培養中に維持した。
【０１６５】
実施例１：抗体の選択
ＮＴＢ−Ａ抗体産生マウスの脾臓及びリンパ節から採取したリンパ球を骨髄腫細胞に融合させた。融合させた細胞をハイブリドーマ増殖培地中で一晩回復させた。回復したら細胞を遠沈させ、続いて半固体培地にプレーティングした。ハイブリドーマをインキュベートし、ＩｇＧ産生ハイブリドーマクローンを選抜した。２０Ｆ３抗体は、ＡＤＣとして強力な細胞傷害を示し、カニクイザルＮＴＢ−Ａに結合した少数の抗体のうちの１つであった。
【０１６６】
実施例２：ヒト化抗体の設計
ヒト化抗体はマウス２０Ｆ３抗体に由来した。５つのヒト化重鎖（ＨＡ−ＨＥ）及び４つのヒト化軽鎖（ＬＡ−ＬＤ）を、復帰突然変異を異なる位置に組み込んで作製した。場合によっては、復帰突然変異はマウス生殖系列と一致することになるが、他の場合には一致しない（体細胞変異がある場合など）。ヒト化重鎖とヒト化軽鎖とを対にした。配列アラインメントに関する図１及び２、ならびに表１〜４を参照されたい。
【表１】
2018520671.tif 000013
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【０１６７】
実施例３：ＥＣ５０及びＫｄの測定
ＥＣ５０を決定するために、３点用量漸増を行った未標識のヒト化抗ヒトＮＴＢ−Ａ抗体を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７と複合体化した定濃度（最終５ｎＭ）のマウス２０Ｆ３抗体と混合した。抗原陽性Ｒａｍｏｓ細胞を、ウェル当たり１×１０５細胞で、９６ウェルＶ底プレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）にプレーティングした。５０倍連続希釈の抗体を、ＦＡＣ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ウシ胎仔血清）中で調製し、２回繰り返して細胞に添加した。抗体を、遮光しながら１時間氷上で細胞と共にインキュベートした。細胞を、ＦＡＣ緩衝液で２回洗浄し、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で分析した。ＥＣ５０値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）によって決定した。結果を表５に示す。
【表５】
2018520671.tif 000017
【０１６８】
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７と複合体化した用量漸増を行った抗ヒトＮＴＢ−Ａ抗体（ｈ２０Ｆ３＿ＨＤＬＤ−ＡＦ６４７）を使用して、飽和結合曲線を生成した。抗原陽性Ｒａｍｏｓ細胞を、ウェル当たり１×１０５細胞で、９６ウェルＶ底プレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）にプレーティングした。３倍連続希釈の２倍濃縮抗体を、ＦＡＣ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ウシ胎仔血清）中で調製し、２回繰り返して細胞に添加した。抗体を、遮光しながら１時間氷上で細胞と共にインキュベートした。細胞を、ＦＡＣ緩衝液で２回洗浄し、ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で分析した。ＫＤ値をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）によって決定した。抗ヒトＮＴＢ−Ａ抗体ｈ２０Ｆ３＿ＨＤＬＤ及びキメラ２０Ｆ３を、カニクイザル−ＮＴＢ−Ａを過剰発現している２９３−Ｆ１７細胞への結合について試験した。２９３−Ｆ１７／カニクイザル−ＮＴＢ−Ａ細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ウシ胎仔血清＋０．０２％アジド）中で、５×１０５細胞／ウェルでプレーティングし、３０分間氷上で２０μｇ／ｍＬの抗体と共にインキュベートした。細胞を２回洗浄し、遮光しながら氷上で３０分間、３０μｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）によって染色した。細胞を再度ＦＡＣ緩衝液で２回洗浄した。染色した細胞を、ＦＡＣｓ  Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で分析した。結果を表６に示す。
【表６】
2018520671.tif 000018
【０１６９】
実施例４：エフェクター機能
補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）：正常なヒトＴ細胞（Ａｌｌ  Ｃｅｌｌｓ，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）または癌細胞系（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を５μＭのＳｙｔｏｘ  Ｇｒｅｅｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）によって標識標識した後、ＲＰＭＩ１６４０培地＋１０２０％ヒト血清（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｙｌｅｒ，ＴＸ、またはＳｏｌｏｍｏｎ  Ｐａｒｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｋｉｒｋｌａｎｄ，ＷＡ）中で、連続用量漸増を行った抗ヒトＮＴＢ−Ａ  ｈ２０Ｆ３抗体またはＰＢＤ二量体ＡＤＣ（０．０２〜５０μｇ／ｍＬ）と結合させた。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートし、溶解した細胞からの蛍光を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）によって測定した。データは、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で処理した細胞（Ｓｉｇｍａ，ＳＴ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）の陽性対照を用いて決定した最大細胞溶解率として表す。
【０１７０】
正常なヒトＴ細胞、ＷＩＬ２−Ｓ細胞、及びＲａｊｉ細胞という３つの細胞型を分析に使用した。各細胞型における関連受容体の発現は表７に示し、細胞１個当たりの受容体の数として示す。
【表７】
2018520671.tif 000019
【０１７１】
以下の表８から分かるように、ヒト化２０Ｆ３−ＨＤＬＤｗｔ  ＩｇＧ１抗体及びｅｃ変異型（位置２３９にシステインを有する抗体はｅｃの表示を伴う）は、正常な休止Ｔリンパ球、ＷＩＬ２−Ｓ、及びＲａｊｉ細胞系に対してＣＤＣ活性を有しない。同様の結果がｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＡＤＣについて観察された。
【表８】
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【０１７２】
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）活性アッセイ：ＡＤＣＣ細胞傷害活性を、エフェクターナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が標的細胞上の抗体またはＡＤＣへの結合を介して標的細胞を殺滅する（溶解させる）クロム−５１放出によって測定した。ＷＩＬ２−Ｓ細胞を、クロム−５１で標識し、抗体（０．１ｎｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ）と結合させた後、ＮＫ細胞と共に、エフェクター対標的比１０：１で、３７℃、５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。上清をフィルタプレートに取り、クロム−５１の数をＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて測定した。データは、１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００で処理した細胞（Ｓｉｇｍａ，ＳＴ．ＭＯ）の陽性対照を用いて決定した最大特異的細胞溶解率として表す。
【０１７３】
フローサイトメトリーに基づくアッセイを使用して、正常なヒトＴ細胞上のＡＤＣＣ活性を測定した。ＰＫＨ２で標識した正常なヒトＴ細胞標的を、漸増する抗体（０．１ｎｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ）と結合させた後、エフェクターＮＫ細胞と共に、エフェクター対標的比１０：１で、３７℃、５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。生存率を、ＦＡＣｓＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で測定した７−ＡＡＤの組み込みによって決定した。
【０１７４】
以下の表９から分かるように、ヒト化２０Ｆ３−ＨＤＬＤｗｔ抗体及びｅｃ変異型は、低度〜中程度のＡＤＣＣ活性を有する。ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣは、複合体化されていないｈ２０Ｆ３ｅｃ抗体と比較して低下したＡＤＣＣ活性を呈した。受容体の数を表７に開示する。
【表９】
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【０１７５】
ＮＴＢ−Ａ媒介性ＡＤＣＰ活性を評定するために、正常なＴリンパ球または腫瘍細胞を赤色蛍光膜色素ＰＫＨ２６によって標識した後、２μｇ／ｍＬから開始する５点の１０倍連続希釈で抗体またはＡＤＣによって標識した。次に細胞を３０分間氷上でインキュベートし、ＰＢＳで２回洗浄した。細胞を、３７℃で１時間、単球由来マクロファージと混合した。次に、細胞混合物を、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８複合体化マウス抗ＣＤ１１ｂによって染色してマクロファージを標識し、フローサイトメトリーによって分析して、ＰＫＨ２６＋ＣＤ１１ｂ＋二重標識蛍光細胞を検出した。食作用活性を（ＰＫＨ２６＋ＣＤ１１ｂ＋パーセント）／（ＣＤ１１ｂ＋細胞パーセント）×１００として計算した。
【０１７６】
以下の表１０から分かるように、ヒト化２０Ｆ３−ＨＤＬＤｗｔ抗体及びｅｃ変異型は、癌細胞系上のリツキシマブ及びキャンパス抗体対照よりも中程度に低いＡＤＣＰ活性を有する。同様の結果がｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＡＤＣについて観察された。
【表１０】
2018520671.tif 000022
【０１７７】
実施例５：ＡＤＣ内在化
多発性骨髄腫細胞系（ＭＭ．１ＲまたはＵ−２６６）を飽和濃度のＡＤＣ（１０μｇ／ｍＬ）と結合させ、培地で洗浄し、３７℃または４℃でインキュベートした。試料をＰＥ標識ヤギ抗ヒト抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）によって染色した時点を収集し、１％ＰＦＡ／ＰＢＳ中で固定した。全ての時点を収集したら、平均蛍光強度を、ＦＡＣｓ  Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で測定した。抗ＮＴＢ−Ａ  ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣはＭＭ．１Ｒ細胞中に急速に内在化し、ＡＤＣの８０％が３７℃のインキュベーションで４時間以内に内在化した。ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＡＤＣの２０％のみが、細胞を４℃の対照条件下に保った４時間目に内在化した。
【０１７８】
ＭＭ．１Ｒ中のＡＤＣの細胞表面及び細胞内局在性も、ｈ２０Ｆ３ｅｃ抗体に特異的なマウス抗イディオタイプ抗体で検出された。ＡＤＣを３０分間４℃でＭＭ．１Ｒ細胞に結合させると、ＡＤＣが、リソソームに急速に内在化したことが認められた。
【０１７９】
実施例６：ＭＭ癌細胞系に対するＡＤＣの細胞傷害性
ヒト化抗体（ＨＤＬＤ）をＰＢＤ及びアウリスタチン抗体薬物複合体として試験した。抗有糸分裂剤モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を、カテプシン切断性バリン−シトルリン（ｖｃ）リンカーを介して抗ＮＴＢ−Ａ  ｍＡｂに複合体化した。第２のアウリスタチンであるアウリスタチン−２を、ペプチドリンカーを介して抗ＮＴＢ−Ａ  ｍＡｂに複合体化した。ＰＢＤ複合体について、薬物−リンカーＳＧＤ−１９１０を、抗体のＩｇＧ１鎖の位置２３９（付番はＥＵインデックスに従う）に導入されたシステイン残基のチオール基を介して抗ＮＴＢＡ抗体と複合体化すると、平均薬物負荷は抗体当たり約２薬物となった。位置２３９にシステインを有する抗体は、ＥＣの表示を伴う。調製は、本明細書に記載の抗ＮＴＢＡ抗体を使用して、ＷＯ２０１１／１３０６１３に記載されている通りに行った。ＡＤＣを培地に３倍に連続希釈して、１０点用量曲線（１，０００ｎｇ／ｍＬ〜０．０５０８１ｎｇ／ｍＬ）を得て、９６ウェルアッセイプレート中で培養された多発性骨髄腫細胞に適用した。細胞系を、４回繰り返して抗ＮＴＢ−Ａ  ＡＤＣで処理し、３７℃、５％ＣＯ２で９６時間インキュベートした。細胞の生存性を、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ発光細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してアッセイし、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用してデータ収集した。用量効果曲線及びＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して計算した。結果を表１１及び１２に示す。
【０１８０】
ＭＭ．１Ｒ細胞に対する作用機序も分析した。ＭＭ．１Ｒ細胞をＡＤＣで処理し、ＡＴＲ及びＡＴＭキナーゼの活性化を、ホスホ−エピトープ特異的抗体を用いるウエスタンブロッティングによって定量化した。ＡＤＣは、ＡＴＭ／ＡＴＲレベルを遊離ＰＢＤ二量体薬物とほぼ同等に活性化したため、ＭＭ細胞におけるＤＮＡ損傷応答を活性化する。
【表１１】
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【表１２】
2018520671.tif 000024
【０１８１】
実施例７：ヒトリンパ球に対するＡＤＣの細胞傷害性
休止ヒトＴ及びＢリンパ球に対する抗ＮＴＢ−Ａ  ＡＤＣの細胞傷害作用を評定するため、精製した細胞を黒色の９６ウェルアッセイプレートに播種した。次に細胞を、１０ｕｇ／ｍＬから開始して合計８の希釈点で５倍に漸減させた抗ＮＴＢ−Ａ  ＡＤＣで処理した。遊離薬物処理のため、細胞に、それぞれ１，０００ｎＭ及び１００ｎＭから開始して合計８の希釈点で５倍に漸減させたＭＭＡＥ及び遊離ＰＢＤ二量体を投与した。プレートを、３７℃、５％ＣＯ２で９６時間インキュベートした後、室温に平衡化させた。等体積のＣｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬を各ウェルに添加し、プレートを室温で更に３０分間インキュベートした。次に、プレートをＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで読み取った。用量効果曲線及びＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して計算した。結果を表１３に示す。
【表１３】
2018520671.tif 000025
【０１８２】
休止ヒトＴリンパ球は、９６時間の細胞傷害性アッセイにおいて、ＰＢＤ二量体またはアウリスタチンキメラ２０Ｆ３  ＡＤＣの影響を受けない。遊離ＰＢＤ二量体は、休止Ｔリンパ球に対して細胞傷害性であり、このＤＮＡ損傷薬に感受性であることが示された。したがって、ＮＴＢ−Ａの細胞表面レベルは、ｃ２０Ｆ３−１９１０（２）ＡＤＣが休止Ｔリンパ球を殺滅するのに十分なＰＢＤを内在化させるには低すぎる。対照的に、ＭＭＡＥ遊離薬物もｃ２０Ｆ３−ｖｃＭＭＡＥ（４）ＡＤＣも、休止Ｔリンパ球に対して強力ではなかった。休止ヒトＢリンパ球は、遊離薬物ＭＭＡＥ及びＰＢＤ二量体の両方に感受性である。しかしながら、ｃ２０Ｆ３−１９１０（２）ＡＤＣが高いＡＤＣ濃度（１，０００ｎｇ／ｍＬ超）でのみ休止Ｂリンパ球に細胞傷害作用を有した一方、ｃ２０Ｆ３−ｖｃＭＭＡＥ（４）ＡＤＣは細胞傷害作用を有しなかった。したがって、ＮＴＢ−Ａの細胞表面レベルは、Ｂリンパ球が、ＰＢＤ二量体またはアウリスタチンｃ２０Ｆ３  ＡＤＣのいずれかによる強力な細胞傷害作用を媒介するには低すぎる。
【０１８３】
実施例８：インビボＭＭ異種移植片研究
ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり１００万個のＭＭ．１Ｒ細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、治療群当たりｎ＝１０マウスに、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣまたは非結合対照ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣの単一腹腔内注射を行った。検査したＰＢＤ  ＡＤＣ用量レベルは、３３３μｇ／ｋｇ、１１１μｇ／ｋｇ、及び３７μｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図３に示されるように、ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣは、全ての用量レベル（単一用量）で１０頭中１０頭のマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらし、一方、非結合対照ＰＢＤ  ＡＤＣ投薬マウスは、研究の８０日目までに、疾患により全て屠殺した。ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＡＤＣ群（３７μｇ／ｋｇ）と対照ｈＩｇＧｅｃ−１９１０群（２）ＡＤＣ（３３３μｇ／ｋｇ）群との間の統計的に有意な差（Ｐ＜０．０００１、Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ試験）を得た。
【０１８４】
ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり５００万個のＵ−２６６細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、治療群当たりｎ＝１０マウスに、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣまたは非結合対照ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣの単一腹腔内注射を行った。検査したＰＢＤ  ＡＤＣ用量レベルは、１１１μｇ／ｋｇ、５６μｇ／ｋｇ、及び２８μｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図４に示されるように、ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣは、１１１μｇ／ｋｇ（単一用量）で１０頭中９頭のマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらした。より低い用量レベル（２８及び５６μｇ／ｋｇ）では、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）は、ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）（１１１μｇ／ｋｇ）対照ＰＢＤ  ＡＤＣと比較して、疾患発症の顕著な（Ｐ＜０．０００１、Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ試験）遅延をもたらした。
【０１８５】
ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり１０００万個のＥＪＭ細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、治療群当たりｎ＝１０マウスに、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣまたは非結合対照ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣの単一腹腔内注射を行った。検査したＰＢＤ  ＡＤＣ用量レベルは、３３３μｇ／ｋｇ、１１１μｇ／ｋｇ、及び３７μｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図５に示されるように、ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣは、３３３μｇ／ｋｇ（単一用量）で１０頭中８頭のマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらした。より低い用量レベル（３７及び１１１μｇ／ｋｇ）では、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）は、ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）（３３３μｇ／ｋｇ）対照ＰＢＤ  ＡＤＣと比較して、疾患発症の顕著な（Ｐ＜０．０００１、Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ試験）遅延をもたらした。
【０１８６】
ＳＣＩＤ（Ｃ．Ｂ−１７／Ｓｚ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ）マウスに、動物当たり５００万個のＨＮＴ−３４急性骨髄性白血病細胞を皮下移植した。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達したとき、治療群当たりｎ＝１０のマウスに、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣまたは非結合対照ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣの単一腹腔内注射を行った。検査したＰＢＤ  ＡＤＣ用量レベルは、３３３μｇ／ｋｇ、１１１μｇ／ｋｇ、及び３７μｇ／ｋｇであった。個々のマウスを、皮下ＨＮＴ−３４腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達したときに屠殺した。図６に示されるように、ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣは、３３３μｇ／ｋｇ及び１１１μｇ／ｋｇの用量レベル（単一用量）で全てのマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらした。３７μｇ／ｋｇのより低い用量レベルで、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）は、強い腫瘍遅延、及び２／１０頭中２頭の持続的な完全奏功をもたらした。ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）対照ＰＢＤ  ＡＤＣは、３３３μｇ／ｋｇで１０頭中０頭の完全奏功をもたらした。
【０１８７】
ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり１００万個のＭＭ．１Ｒ細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、治療群当たりｎ＝１０マウスに、ｈ２０Ｆ３−アウリスタチン２（８）ＡＤＣまたは非結合対照ｈＩｇＧ−アウリスタチン２（８）ＡＤＣの単一腹腔内注射を行った。検査したアウリスタチンＡＤＣ用量レベルは、３．０ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図７に示すように、ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３−アウリスタチン２（８）ＡＤＣは、播種性ＭＭ．１Ｒモデルにおいて、対照ｈＩｇＧ−アウリスタチン２（８）ＡＤＣ（３．０ｍｇ／ｋｇ）と比較して、３．０ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで顕著な（Ｐ＜０．０００１、Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ試験）腫瘍遅延をもたらした。
【０１８８】
ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり５００万個のＵ−２６６細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、治療群当たりｎ＝１０のマウスに、抗ＮＴＢ−Ａ  ＡＤＣのｈ２０Ｆ３−ｖｃＭＭＡＥ（４）、ｈ２０Ｆ３−アウリスタチン２（８）、または非結合対照ＡＤＣのｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＥ（４）及びｈＩｇＧ−アウリスタチン２（８）のいずれかの単一腹腔内注射を行った。検査したＡＤＣ用量レベルは、３．０ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図８に示されるように、ｈ２０Ｆ３−ｖｃＭＭＡＥ（４）ＡＤＣは、３．０ｍｇ／ｋｇ用量レベルの１０頭中８頭のマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらした。ｈ２０Ｆ３−アウリスタチン２（８）ＡＤＣは、１．０ｍｇ／ｋｇ及び３．０ｍｇ／ｋｇ両方の用量レベルで１０頭中１０頭の持続的な完全奏功をもたらした。抗ＮＴＢ−Ａアウリスタチン２  ＡＤＣは、特に１．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、ｖｃＭＭＡＥ（４）ＡＤＣよりも優れた抗腫瘍活性を有した。
【０１８９】
ＮＳＧ（ＮＯＤ  ｓｃｉｄガンマ；ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）マウスに、動物当たり１０００万個のＥＪＭ細胞を静脈内移植し、多発性骨髄腫の播種性モデルを生成した。腫瘍細胞移植５日後に、治療群当たりｎ＝１０のマウスに、抗ＮＴＢ−Ａ  ＡＤＣのｈ２０Ｆ３−ｖｃＭＭＡＥ（４）、ｈ２０Ｆ３−アウリスタチン２（８）、または非結合対照ＡＤＣのｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＥ（４）及びｈＩｇＧ−アウリスタチン２（８）のいずれかの単一腹腔内注射を行った。検査したＡＤＣ用量レベルは、３．０ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇであった。進行した腫瘍負荷のマウスは、後肢麻痺、頭蓋腫大、及び／または瀕死の症状を示したときに屠殺した。図９に示されるように、ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３−ｖｃＭＭＡＥ（４）ＡＤＣは、ｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＥ（４）対照ＡＤＣと比較して、３．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで顕著な（Ｐ＝０．０００２、Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ試験）腫瘍遅延をもたらした。ｈ２０Ｆ３−アウリスタチン２（８）ＡＤＣは、１．０ｍｇ／ｋｇ及び３．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで１０頭中２頭または１０頭中９頭の持続的な完全奏功をもたらした。抗ＮＴＢ−Ａアウリスタチン２  ＡＤＣは、１．０ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＝０．０００２、Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ試験）及び３．０ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０００１、Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ試験）の用量レベルで、ｖｃＭＭＡＥ（４）ＡＤＣよりも著しく優れた抗腫瘍活性を有した。
【０１９０】
ＳＣＩＤ（Ｃ．Ｂ−１７／Ｓｚ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ）マウスに、動物当たり５００万個のＨＮＴ−３４急性骨髄性白血病細胞を皮下移植した。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達したとき、治療群当たりｎ＝１０のマウスに、抗ＮＴＢ−Ａ  ＡＤＣのｈ２０Ｆ３−ｖｃＭＭＡＥ（４）、ｈ２０Ｆ３−アウリスタチン２（８）、または非結合対照ＡＤＣのｈＩｇＧ−ｖｃＭＭＡＥ（４）及びｈＩｇＧ−アウリスタチン２（８）のいずれかの単一腹腔内注射を行った。検査したＡＤＣ用量レベルは、３．０ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇであった。個々のマウスを、皮下ＨＮＴ−３４腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達したときに屠殺した。図１０に示すように、ｖｃＭＭＡＥ（４）及びアウリスタチン２（８）ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３  ＡＤＣの両方は、ＨＮＴ−３４皮下ＡＭＬモデルにおいて極めて活性であった。ｈ２０Ｆ３−ｖｃＭＭＡＥ（４）ＡＤＣは、それぞれ、１．０ｍｇ／ｋｇまたは３．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで、１０頭中４頭または１０頭中９頭のマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらした。ｈ２０Ｆ３−アウリスタチン２（８）ＡＤＣは、１．０ｍｇ／ｋｇまたは３．０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで１０頭中３頭または１０頭中９頭の持続的な完全奏功をもたらした。
【０１９１】
実施例９：インビボ非ホジキンリンパ腫異種移植片研究
ＳＣＩＤ（Ｃ．Ｂ−１７／Ｓｚ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ）マウスに、動物当たり５００万個のＲａｊｉ非ホジキンリンパ腫細胞を皮下移植した。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達したとき、治療群当たりｎ＝１０のマウスに、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣまたは対照ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣの単一腹腔内注射を行った。検査したＰＢＤ  ＡＤＣ用量レベルは、１００μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、及び２５μｇ／ｋｇであった。個々のマウスを、皮下Ｒａｊｉ腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達したときに屠殺した。図１１に示されるように、ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣは、１００μｇ／ｋｇの用量レベルで全てのマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらした。加えて、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣは、５０ｕｇ／ｋｇの用量レベルで６頭中４頭のマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらし、一方、腫瘍成長の遅延は、２５ｕｇ／ｋｇの用量レベルで観察された。ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）対照ＰＢＤ  ＡＤＣは、１００ｕｇ／ｋｇで抗腫瘍活性を有さず、６頭中０頭で完全奏功をもたらした。
【０１９２】
ＳＣＩＤ（Ｃ．Ｂ−１７／Ｓｚ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ）マウスに、動物当たり５００万個のＷＳＵ−ＤＬＣＬ２非ホジキンリンパ腫細胞を皮下移植した。平均腫瘍体積が１００ｍｍ３に達したとき、治療群当たりｎ＝８のマウスに、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣまたは対照ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣの単一腹腔内注射を行った。検査したＰＢＤ  ＡＤＣ用量レベルは、１００μｇ／ｋｇ、５０μｇ／ｋｇ、及び２５μｇ／ｋｇであった。個々のマウスを、皮下ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２腫瘍体積が１，０００ｍｍ３に達したときに屠殺した。図１２に示されるように、ＨＤＬＤ  ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ二量体ＡＤＣは、１００μｇ／ｋｇの用量レベルで８頭中２頭のマウスにおいて持続的な完全奏功をもたらした。２５ｕｇ／ｋｇ及び５０ｕｇ／ｋｇのより低い用量レベルで、ｈ２０Ｆ３ｅｃ−１９１０（２）ＰＢＤ  ＡＤＣは、未処理マウスと比較して測定可能な腫瘍成長の遅延をもたらした。ｈＩｇＧｅｃ−１９１０（２）対照ＰＢＤ  ＡＤＣは、１００ｕｇ／ｋｇで抗腫瘍活性を有さず、８頭中０頭で完全奏功をもたらした。
【０１９３】
配列表
SEQ ID NO:1 is the amino acid sequence of human NTB-A.
MLWLFQSLLFVFCFGPGNVVSQSSLTPLMVNGILGESVTLPLEFPAGEKVNFITWLFNETSLAFIVPHETKSPEIHVTNPKQGKRLNFTQSYSLQLSNLKMEDTGSYRAQISTKTSAKLSSYTLRILRQLRNIQVTNHSQLFQNMTCELHLTCSVEDADDNVSFRWEALGNTLSSQPNLTVSWDPRISSEQDYTCIAENAVSNLSFSVSAQKLCEDVKIQYTDTKMILFMVSGICIVFGFIILLLLVLRKRRDSLSLSTQRTQGPAESARNLEYVSVSPTNNTVYASVTHSNRETEIWTPRENDTITIYSTINHSKESKPTFSRATALDNVV
SEQ ID NO:2 is the amino acid sequence of cynomolgus NTB-A.
MLWLFQSLLFVFCFGPGNLVSQSSSTPLMVNGVLGESVILPLELSAGEMIASITWLCNGTSLAFIEPSETKSPNIRVTHPKQRKRLNFTQSYSLKLSNLEMEDTGSYSAQITTETSVKLSSYTLRIFRQLRSIQVNNYSQLFQNRTCEIHLTCSVEDADDNVSFRWEALGSTLSSEPNITTSWDPRISGEQDYTCIAENAVSNLSFSVSAQKLCGDVKIQYTDTKMILFVVFGICIVTGFIIMLLLVLRKRRDSLPLSTQRTQGPAEPAGNIEYVSVSPVNNTVYASVTHSNRETEISTPIKNATVTIYSTVNHSKESKPTFSRATALDNVV
SEQ ID NO:3 is the amino acid sequence of the mature heavy chain variable region of murine 20F3.
QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGKDLKWMGWINTYSGEPRYADDFKGRFAFSLEKSANTAYLQINNLKNEDMATYFCARDYGRWYFDVWGTGTTVTVSS
SEQ ID NO:4 is the amino acid sequence of the mature heavy chain variable region of humanized 20F3 with no back mutations and with murine CDRs, as defined by Kabat.
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYSGEPRYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYGRWYFDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:5 is the amino acid sequence of the mature heavy chain variable region of humanized 20F3 HA.
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYSGEPRYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYGRWYFDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:6 is the amino acid sequence of the mature heavy chain variable region of humanized 20F3 HB.
QIQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYSGEPRYADDFKGRFVFSLDKSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYGRWYFDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:7 is the amino acid sequence of the mature heavy chain variable region of humanized 20F3 HC.
QIQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQDLEWMGWINTYSGEPRYADDFKGRFVFSLDKSVNTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYGRWYFDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:8 is the amino acid sequence of the mature heavy chain variable region of humanized 20F3 HD.
QIQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQDLKWMGWINTYSGEPRYADDFKGRFVFSLDKSVNTAYLQISSLKAEDTAVYYCARDYGRWYFDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:9 is the amino acid sequence of the mature heavy chain variable region of humanized 20F3 HE.
QIQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVKQAPGQDLKWMGWINTYSGEPRYADDFKGRFAFSLDKSVNTAYLQISSLKAEDTAVYFCARDYGRWYFDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:10 is the amino acid sequence of CDR-H1 of murine and humanized 20F3, as defined by Kabat.
NYGMN
SEQ ID NO:11 is the amino acid sequence of CDR-H2 of murine and humanized 20F3, as defined by Kabat.
WINTYSGEPRYADDFKG
SEQ ID NO:12 is the amino acid sequence of CDR-H3 of murine and humanized 20F3, as defined by Kabat.
DYGRWYFDV
SEQ ID NO:13 is the amino acid sequence of the mature light chain variable region of murine 20F3.
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSHMHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSSTPRTFGGGTKLEIKR
SEQ ID NO:14 is the amino acid sequence of the mature light chain variable region of humanized 20F3 with no back mutations and with murine CDRs, as defined by Kabat.
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSHMHWYQQKPGQAPRLLIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSTPRTFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:15 is the amino acid sequence of the mature light chain variable region of humanized 20F3 LA.
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSHMHWYQQKPGQAPRLLIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSTPRTFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:16 is the amino acid sequence of the mature light chain variable region of humanized 20F3 LB.
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSHMHWYQQKPGQAPRPWIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSTPRTFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:17 is the amino acid sequence of the mature light chain variable region of humanized 20F3 LC.
QIVLSQSPATLSLSPGERATLSCRASSSVSHMHWYQQKPGQAPRPWIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSTPRTFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:18 is the amino acid sequence of the mature light chain variable region of humanized 20F3 LD.
QIVLSQSPATLSLSPGERATMSCRASSSVSHMHWYQQKPGQAPRPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTDYTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSSTPRTFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:19 is the amino acid sequence of CDR-L1 of murine and humanized 20F3, as defined by Kabat.
RASSSVSHMH
SEQ ID NO:20 is the amino acid sequence of CDR-L2 of murine and humanized 20F3, as defined by Kabat.
ATSNLAS
SEQ ID NO:21 is the amino acid sequence of CDR-L3 of murine and humanized 20F3, as defined by Kabat.
QQWSSTPRT
SEQ ID NO:22 is the amino acid sequence of CDR-H1 of murine 20F3, as defined by IMGT.
GYTFTNYG
SEQ ID NO:23 is the amino acid sequence of CDR-H2 of murine 20F3, as defined by IMGT.
INTYSGEP
SEQ ID NO:24 is the amino acid sequence of CDR-H3 of murine 20F3, as defined by IMGT.
ARDYGRWYFDV
SEQ ID NO:25 is the amino acid sequence of CDR-L1 of murine 20F3, as defined by IMGT.
SSVSH
The amino acid sequence of CDR-L2 of murine 20F3, as defined by IMGT is:
ATS
SEQ ID NO:26 is the amino acid sequence of CDR-L3 of murine 20F3, as defined by IMGT.
QQWSSTPRT
SEQ ID NO:27 is the amino acid sequence of a human light chain constant region.
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:28 is the amino acid sequence of a naturally occcuring human heavy chain constant region.
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
SEQ ID NO:29 is the amino acid sequence of a variant human heavy chain constant region (S239C).
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPCVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
【図１】
2018520671.tif 000038
【図２】
2018520671.tif 000039
【図３】
2018520671.tif 000040
【図４】
2018520671.tif 000041
【図５】
2018520671.tif 000042
【図６】
2018520671.tif 000043
【図７】
2018520671.tif 000044
【図８】
2018520671.tif 000045
【図９】
2018520671.tif 000046
【図１０】
2018520671.tif 000047
【図１１】
2018520671.tif 000048
【図１２】
2018520671.tif 000049
【配列表】
2018520671000001.app
【国際調査報告】
2018520671.tif 000050
2018520671.tif 000051