(57)【要約】  本発明は、腫瘍関連炭水化物抗原に対する抗体またはその抗原結合部分を提供する。また、明細書にはさらに医薬組成物とそれを必要としている被験体に対する癌細胞を抑制する方法が開示される。その医薬組成物は抗体またはその抗原結合部分および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む。
2018536628.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭水化物抗原と結合、且つ重鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合部分であって、前記重鎖可変領域は３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有し、
前記抗体またはその抗原結合部分は以下のアミノ酸置換：
（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２８が、塩基性アミノ酸、セリン以外の中性アミノ酸または疎水性アミノ酸で置換、
（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３１が、塩基性アミノ酸で置換、
（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５７が、中性、塩基性または疎水性アミノ酸で置換、
（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６３が、中性アミノ酸、塩基性アミノ酸またはプロリン以外の疎水性アミノ酸で置換、および／または
（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基１０５が、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸または中性アミノ酸で置換、
の少なくとも１つを含むことを特徴とする、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
前記抗体またはその抗原結合部分は、さらに以下のフレームワーク：
（ａ）前記重鎖のリーダー配列とＣＤＲ１との間にある、配列番号：４と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、
（ｂ）前記重鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ２との間にある、配列番号：５と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、
（ｃ）前記重鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ２との間にある、配列番号：５と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、そのフレームワークにおけるアミノ酸残基４６がグリシンであり、且つ置換されていない、および／または
（ｄ）前記重鎖のＣＤＲ２とＣＤＲ３との間にある、配列番号：６と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、
の少なくとも１つを含むことを特徴とする、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３】
前記ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２８は、以下：
（ａ）リジンまたはアルギニンから選ばれた塩基性アミノ酸、
（ｂ）チロシンである中性アミノ酸、または
（ｃ）フェニルアラニンである疎水性アミノ酸、
のいずれか１つで置換されることを特徴とする、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
前記ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３１は、リジンまたはアルギニンから選ばれた塩基性アミノ酸で置換されることを特徴とする、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
前記ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５７は、以下：
（ａ）グルタミン、グリシンまたはセリンから選ばれた中性の酸、
（ｂ）ヒスチジンである塩基性アミノ酸、または
（ｃ）トリプトファンである疎水性アミノ酸、
のいずれか１つで置換されることを特徴とする、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
前記ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６３は、以下：
（ａ）チロシンである中性アミノ酸、
（ｂ）アラニン、ロイシンまたはバリンから選ばれた疎水性アミノ酸、または
（ｃ）ヒスチジンまたはアルギニンから選ばれた塩基性アミノ酸、
のいずれか１つで置換されることを特徴とする、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７】
前記ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基１０５は、以下：
（ａ）アルギニンまたはリジンから選ばれた塩基性アミノ酸、
（ｂ）グリシンまたはスレオニンから選ばれた中性アミノ酸、または
（ｃ）メチオニン、アラニン、イソロイシンまたはバリンから選ばれた疎水性アミノ酸、
のいずれか１つで置換されることを特徴とする、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８】
炭水化物抗原と結合、且つ軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合部分であって、前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８，９に示すアミノ酸配列と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有し、
前記ＣＤＲは以下のアミノ酸置換：
（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２４が、中性アミノ酸または疎水性アミノ酸で置換、
（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３２が、中性アミノ酸またはメチオニン以外の疎水性アミノ酸で置換、
（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基４９が、中性アミノ酸で置換、
（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５３が、中性アミノ酸または塩基性アミノ酸で置換、および／または
（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基９３が、アスパラギン以外の中性アミノ酸、塩基性アミノ酸または疎水性アミノ酸で置換、
の少なくとも１つを含むことを特徴とする、抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合部分は、さらに以下のフレームワーク：
（ａ）前記軽鎖のリーダー配列とＣＤＲ１との間にある、配列番号：１０と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、
（ｂ）前記軽鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ２との間にある、配列番号：１１と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、
（ｃ）前記軽鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ２との間にある、配列番号：１１と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、そのフレームワークにおけるアミノ酸残基４５がプロリンであり、且つ置換されていない、
（ｄ）前記軽鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ２との間にある、配列番号：１１と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、そのフレームワークにおけるアミノ酸残基４６がトリプトファンであり、且つ置換されていない、および／または
（ｅ）前記軽鎖のＣＤＲ２とＣＤＲ３との間にある、配列番号：１２と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、
の少なくとも１つを含むことを特徴とする、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０】
前記ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２４は、以下：
（ａ）グリシンまたはセリンから選ばれた中性アミノ酸、または
（ｂ）トリプトファンである疎水性アミノ酸、
のいずれか１つで置換されることを特徴とする、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１】
前記ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３２は、以下：
（ａ）グリシンまたはグルタミンから選ばれた中性アミノ酸、または
（ｂ）バリンである疎水性アミノ酸、
のいずれか１つで置換されることを特徴とする、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１２】
前記ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基４９は、グリシンである中性アミノ酸で置換されることを特徴とする、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１３】
前記ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５３は、以下：
（ａ）グリシンまたはスレオニンから選ばれた中性アミノ酸、または
（ｂ）リジンである塩基性アミノ酸、
のいずれか１つで置換されることを特徴とする、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１４】
前記ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基９３は、以下：
（ａ）グルタミン、セリンまたはスレオニンから選ばれた中性アミノ酸、
（ｂ）アルギニンである塩基性アミノ酸、または
（ｃ）フェニルアラニン、ロイシンまたはメチオニンから選ばれた疎水性アミノ酸、
のいずれか１つで置換されることを特徴とする、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１５】
炭水化物抗原と結合、且つ重鎖可変領域または軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗体結合部分であって、前記重鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有し、および／または前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８，９に示すアミノ酸配列と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有することを特徴とする、抗体またはその抗体結合部分。
【請求項１６】
前記抗体またはその抗体結合部分は、さらに以下のフレームワーク：
（ａ）配列番号：４と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する重鎖フレームワーク、
（ｂ）配列番号：５と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する重鎖フレームワーク、
（ｃ）配列番号：６と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する重鎖フレームワーク、
（ｄ）配列番号：５と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する重鎖フレームワーク、そのフレームワークにおけるアミノ酸残基４６がグリシンであり、且つ置換されていない、
（ｅ）配列番号：１０と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する軽鎖フレームワーク、
（ｆ）配列番号：１１と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する軽鎖フレームワーク、
（ｇ）配列番号：１２と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する軽鎖フレームワーク、
（ｈ）配列番号：１１と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する軽鎖フレームワーク、そのフレームワークにおけるアミノ酸残基４５がプロリンであり、且つ置換されていない、
（ｉ）配列番号：１１と約９０％〜約１００％相同のアミノ酸配列を有する軽鎖フレームワーク、そのフレームワークにおけるアミノ酸残基４６がトリプトファンであり、且つ置換されていない、
の少なくとも１つを含むことを特徴とする、請求項１５に記載の抗体またはその抗体結合部分。
【請求項１７】
前記炭水化物抗原は、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ、段階特異的胚抗原３（ＳＳＥＡ−３）、段階特異的胚抗原４（ＳＳＥＡ−４）、Ｇｂ４、Ｇｂ３、ｓＬｅｘ、Ｌｅｘ、ｓＬｅａ、Ｌｅａ、Ｌｅｙ、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ｓＴｎ、Ｔｎ、ＴＦ、ＧＤ１ａ、ＧＴ１ｂ、Ａ２Ｂ５、ＧＤ２、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＭ３またはＮｅｕ５ＧｃＧＭ３であることを特徴とする、請求項１、８、１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１８】
請求項１、８、１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分と、
薬学的に許容される担体と、を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１９】
少なくとも１つの追加の治療剤をさらに含むことを特徴とする、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１、８、１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分の有効量を、それを必要としている被験体に投与して癌細胞の増殖を抑制することを特徴とする、癌細胞増殖を抑制する方法。
【請求項２１】
前記被験体は、ヒトであることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌は、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ発現癌であることを特徴とする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｇｌｏｂｏ  Ｈ発現癌は、肉腫、皮膚癌、白血病、リンパ腫、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、肺癌、乳癌、口腔癌、頭頸部癌、鼻咽頭癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆管癌、胆嚢癌、膀胱癌、膵臓癌、腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、精巣癌、頬癌、口腔咽頭癌、喉頭癌および前立腺癌から選ばれることを特徴とする、請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１５年１０月７日に出願する米国仮特許出願第６２／２３８６８０号の優先権を主張し、その全開示を参照により本明細書に組み入れることとする。
【０００２】
本発明は、腫瘍関連炭水化物抗原に対応の、未修飾抗体に関連するいくつか特定のアミノ酸置換を有する修飾抗体と、未修飾抗体に係る。本発明は、さらにそれらの抗体が疾患または障害の治療、予防または管理での使用、例えば癌や癌細胞の抑制に関連する。
【背景技術】
【０００３】
悪性腫瘍細胞には多数の表面炭水化物が表現される。例えば、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ（Ｆｕｃ  α１  −−＞  ２Ｇａｌs１  −−＞  ３ＧａｌＮＡｃs１  −−＞  ３Ｇａｌ  α１  −−＞  ４Ｇａｌs１  −−＞  ４Ｇｌｃ）は様々な上皮癌に過剰発現され、乳癌と小細胞肺癌における腫瘍の攻撃性および予後不良に関連していることが示されている。
【０００４】
これらの発見は、腫瘍関連炭水化物の活性に対抗するように設計された治療に、理論的な根拠を与えている。特に、腫瘍関連炭水化物と結合する抗体は、血漿中の半減期が長く、副作用が少ないため、多くの注目を集めている。いくつかの最も初期の抗体は、マウスモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）であり、これら腫瘍関連炭水化物で免疫したマウスのリンパ球から調製されたハイブリドーマによって分泌されるものである。しかしながら、ヒトにおけるマウス抗体の使用に関連する問題があり、例えば特定のヒトエフェクター機能を誘発できない、およびサイトカイン放出症候群を含む副作用を起す。非ヒト動物種由来の抗体は一般、エフェクター機能の有用性を高めるおよび／または副作用を軽減するためにヒト化（ｈｕｍａｎｉｚｅｄ）される。しかし、ヒト化された抗体は、ヒト化されていない抗体に匹敵する結合活性を有しない。
【０００５】
つまり、ヒト化された抗体の結合親和性を最適化にする需要は、未だに満たされていない。故にここで、本発明はこれらの需要に応じて、最適化の結合親和性を有する抗体を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第５，５８５，０８９号
【特許文献２】米国特許第５，２２５，５３９号
【特許文献３】米国特許第５，６９３，７６１号
【特許文献４】米国特許第５，６９３，７６２号
【特許文献５】欧州特許第５１９５９６号
【特許文献６】国際公開第ＷＯ８７／０２６７１号
【特許文献７】国際公開第ＷＯ１９８７００２６７１号
【特許文献８】国際公開第ＷＯ８６／０１５３３号
【特許文献９】欧州特許出願公開第１８４，１８７号
【特許文献１０】欧州特許出願公開第１７１，４９６号
【特許文献１１】欧州特許出願公開第１２５，０２３号
【特許文献１２】欧州特許出願公開第１７３，４９４号
【特許文献１３】米国特許第４，８１６，５６７号
【特許文献１４】国際公開第ＷＯ／２０１５／１５７６２９号
【特許文献１５】米国特許出願公開第２００４／００８７６５１号
【特許文献１６】国際公開第ＷＯ／２０１５／１５７６２９号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：５４４−５４６（１９８９）
【非特許文献２】Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８８，２４２：４２３−４２６
【非特許文献３】Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８８，８５：５８７９−５８８３
【非特許文献４】Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７：６０−６９
【非特許文献５】Ｋｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２２：２３８−２４４
【非特許文献６】Ｋａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．  ９１−３２４２
【非特許文献７】Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６：９０１−９１７
【非特許文献８】Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．  Ｌ．，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２２９：１２０２−１２０７
【非特許文献９】Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  ４：２１４
【非特許文献１０】Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２１：５５２−５２５
【非特許文献１１】Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９：１５３４
【非特許文献１２】Ｂｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １４１：４０５３−４０６０
【非特許文献１３】Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，  ８１：６８５１−６８５５（１９８４）
【非特許文献１４】Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９８８，  ２４０：１０４１−１０４３
【非特許文献１５】Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ，  １９８７  ８４：３４３９−３４４３
【非特許文献１６】Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １９８７，  １３９：３５２１−３５２６
【非特許文献１７】Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ，  １９８７，  ８４：２１４−２１８
【非特許文献１８】Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃ．  Ｒｅｓ．，  １９８７，  ４７：９９９−１００５
【非特許文献１９】Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ，  １９８５，  ３１４：４４６−４４９
【非特許文献２０】Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，  １９８８，  ８０：１５５３−１５５９
【非特許文献２１】Ｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ  ｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  ２００６．  ７：６１-８０）
【非特許文献２２】Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４７：  １３０６−１３１０（１９９０）
【非特許文献２３】Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４４：  １０８１−１０８５（１９８９）
【非特許文献２４】Ａｕｓｕｂｅｌ（ｅｄ．），  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．（１９９４）
【非特許文献２５】Ｔ．  Ｍａｎｉａｔｉｓ，  Ｅ．  Ｆ．  Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｊ．  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．（１９８９）
【非特許文献２６】Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２４３：３０７−３１（１９９４）
【非特許文献２７】Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−４５（１９９２）
【非特許文献２８】Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．（１９９１）
【非特許文献２９】Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”  Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｐａｕｌ，  Ｗ．  Ｅ．，  Ｅｄ．，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．（１９８４）
【非特許文献３０】Ｋｕｂｙ，  Ｊａｎｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．（１９９２）
【非特許文献３１】Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，（ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ（ＶＨ）ａｎｄ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ（ＶＬ）ｄｏｍａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）
【非特許文献３２】Ｂａｒｂａｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４、Ｓｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５
【非特許文献３３】Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５
【非特許文献３４】Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５
【非特許文献３５】Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２（ｒａｎｄｏｍ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ＣＤＲ  ａｎｄ／ｏｒ  ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ）
【非特許文献３６】Ｂａｌａｓｓｉａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  １０：７８５−７８８
【非特許文献３７】Ｔｈｏｒｎｅ，  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １２７：４８１−４９６
【非特許文献３８】Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  １３：９４３−９４７
【非特許文献３９】Ｄａ  Ｆｏｎｓｅｃａ，  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７０：２５９２６７
【非特許文献４０】Ｄａ  Ｆｏｎｓｅｃａ，  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｒｃｈ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  Ｅｘｐ．  ５６：２６７−２７６
【非特許文献４１】Ｈａｓｈｉｚｕｍｅ，  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎｅｕｒｏｎｃｏｌｏｇｙ  １０：１１２−１２０
【非特許文献４２】Ｂ．  Ｔｅｉｃｈｅｒ，  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｆｏｒ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２００６；  ５：  ２４３５−２４４３
【非特許文献４３】Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，  ２１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ
【非特許文献４４】Ｓｏｎｄｅｒｓｔｒｕｐ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｓｅｍ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．  ２５：  ３５−４５，  ２００３
【非特許文献４５】Ｎｉｋｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｈａｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ４（１２）：  １２３−５３，  ２０００
【発明の概要】
【０００８】
本発明が提供する抗体またはその抗原結合部分は、炭水化物抗原またはその断片と結合する可変領域を含む。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一実施形態では、炭水化物抗原またはその断片と結合する本発明の抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、そのＣＤＲは以下から選ばれたアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２８が、塩基性アミノ酸、セリン以外を条件とする中性アミノ酸、または疎水性アミノ酸で置換、（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３１が、塩基性アミノ酸で置換、（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５７が、中性、塩基性または疎水性アミノ酸で置換、（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６３が、中性アミノ酸、塩基性アミノ酸またはプロリン以外を条件とする疎水性アミノ酸で置換、又は（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基１０５が、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸または中性アミノ酸で置換される。
【００１０】
他の実施形態では、炭水化物抗原またはその断片と結合する本発明の抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８，９に示すアミノ酸配列と約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、そのＣＤＲは以下から選ばれたアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２４が、中性または疎水性アミノ酸で置換、（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３２が、中性アミノ酸またはメチオニン以外の疎水性アミノ酸で置換、（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基４９が、中性アミノ酸で置換、（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５３が、中性または塩基性アミノ酸で置換、又は（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基９３が、アスパラギン以外の中性アミノ酸、塩基性アミノ酸または疎水性アミノ酸で置換される。
【００１１】
さらに他の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、
（ｉ）重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、そのＣＤＲは以下から選ばれたアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２８が、塩基性アミノ酸、セリン以外を条件とする中性アミノ酸、または疎水性アミノ酸で置換、（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３１が、塩基性アミノ酸で置換、（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５７が、中性、塩基性または疎水性アミノ酸で置換、（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６３が、中性アミノ酸、塩基性アミノ酸またはプロリン以外を条件とする疎水性アミノ酸で置換、又は（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基１０５が、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸または中性アミノ酸で置換される、および
（ｉｉ）軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８，９に示すアミノ酸配列と約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、そのＣＤＲは以下から選ばれたアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２４が、中性または疎水性アミノ酸で置換、（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３２が、中性アミノ酸またはメチオニン以外の疎水性アミノ酸で置換、（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基４９が、中性アミノ酸で置換、（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５３が、中性または塩基性アミノ酸で置換、又は（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基９３が、アスパラギン以外の中性アミノ酸、塩基性アミノ酸または疎水性アミノ酸で置換される。
【００１２】
第４の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、（ａ）重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、および／または（ｂ）軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８，９に示すアミノ酸配列と約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有する。
【００１３】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００１４】
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分の有効量を、それを必要としている被験体に投与する、癌細胞を抑制する方法をさらに提供する。一実施形態では、前記癌はＧｌｏｂｏ  Ｈ発現癌である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】図１Ａは未修飾ヒト化抗体の重鎖可変領域の例示的な実施例を示すアミノ酸配列（配列番号１３）であり、図１Ｂは未修飾ヒト化抗体の軽鎖可変領域の例示的な実施例を示すアミノ酸配列（配列番号１４）である。
【図１Ｂ】図１Ａは未修飾ヒト化抗体の重鎖可変領域の例示的な実施例を示すアミノ酸配列（配列番号１３）であり、図１Ｂは未修飾ヒト化抗体の軽鎖可変領域の例示的な実施例を示すアミノ酸配列（配列番号１４）である。
【図２】図２はキメラ抗体（重鎖：配列番号５７と軽鎖：配列番号５８）の例示的な実施例およびヒト化抗体（重鎖：配列番号１３と軽鎖：配列番号１４）の例示的な実施例の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図３】図３は包括的ポジショナルエボルーション（ＣＰＥ）およびコンビナトリアルタンパク質合成（ＣＰＳ）のプロセスを概略的に示す図である。
【図４Ａ】図４はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の重鎖可変領域の残基２８（図４Ａ）、残基３１（図４Ｂ）、残基５７（図４Ｃ）、残基６３（図４Ｄ）および残基１０５（図４Ｅ）に一つのアミノ酸（ＡＡ）置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図４Ｂ】図４はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の重鎖可変領域の残基２８（図４Ａ）、残基３１（図４Ｂ）、残基５７（図４Ｃ）、残基６３（図４Ｄ）および残基１０５（図４Ｅ）に一つのアミノ酸（ＡＡ）置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図４Ｃ】図４はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の重鎖可変領域の残基２８（図４Ａ）、残基３１（図４Ｂ）、残基５７（図４Ｃ）、残基６３（図４Ｄ）および残基１０５（図４Ｅ）に一つのアミノ酸（ＡＡ）置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図４Ｄ】図４はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の重鎖可変領域の残基２８（図４Ａ）、残基３１（図４Ｂ）、残基５７（図４Ｃ）、残基６３（図４Ｄ）および残基１０５（図４Ｅ）に一つのアミノ酸（ＡＡ）置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図４Ｅ】図４はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の重鎖可変領域の残基２８（図４Ａ）、残基３１（図４Ｂ）、残基５７（図４Ｃ）、残基６３（図４Ｄ）および残基１０５（図４Ｅ）に一つのアミノ酸（ＡＡ）置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図５Ａ】図５はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の軽鎖可変領域の残基２４（図５Ａ）、残基３２（図５Ｂ）、残基４９（図５Ｃ）、残基５３（図５Ｄ）および残基９３（図５Ｅ）に一つのアミノ酸置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図５Ｂ】図５はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の軽鎖可変領域の残基２４（図５Ａ）、残基３２（図５Ｂ）、残基４９（図５Ｃ）、残基５３（図５Ｄ）および残基９３（図５Ｅ）に一つのアミノ酸置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図５Ｃ】図５はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の軽鎖可変領域の残基２４（図５Ａ）、残基３２（図５Ｂ）、残基４９（図５Ｃ）、残基５３（図５Ｄ）および残基９３（図５Ｅ）に一つのアミノ酸置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図５Ｄ】図５はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の軽鎖可変領域の残基２４（図５Ａ）、残基３２（図５Ｂ）、残基４９（図５Ｃ）、残基５３（図５Ｄ）および残基９３（図５Ｅ）に一つのアミノ酸置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図５Ｅ】図５はヒト化抗体と野生型（ＷＴ）キメラ抗体の軽鎖可変領域の残基２４（図５Ａ）、残基３２（図５Ｂ）、残基４９（図５Ｃ）、残基５３（図５Ｄ）および残基９３（図５Ｅ）に一つのアミノ酸置換を有する修飾抗体の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示す図である。
【図６Ａ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｂ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｃ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｄ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｅ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｆ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｇ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｈ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｉ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｊ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｋ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｌ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｍ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｎ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｏ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｐ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図６Ｑ】図６は少なくとも２つのアミノ酸置換を有する修飾抗体（コンビナトリアルタンパク質合成変異体）の光学密度（ＯＤ４５０ｎｍ）を示し、それが野生型キメラ抗体より高いことを示す図である。
【図７】図７はハイブリドーマＶＫ９由来のキメラ抗体（Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ，  ＭＳＫＣＣ由来）、ハイブリドーマ２Ｃ２由来のキメラ抗体（配列番号：５７と５８）、および修飾抗体の例示的な一実施例（ヒト化Ｒ２８ｍＡｂｓ，配列番号：５９と６０）が、異なる濃度のＧｌｏｂｏ  Ｈでの解離定数（Ｋｄ）の比較を示す図である。
【図８】図８は正常食塩水、ハイブリドーマ２Ｃ２由来のキメラ抗体（配列番号：５７と５８）、ハイブリドーマ２Ｃ２由来のヒト化抗体（配列番号：１３と１４）、および修飾抗体の例示的な一実施例（ヒト化Ｒ２８ｍＡｂｓ，配列番号：５９と６０）が、マウス中の乳癌（ＭＣＦ７）体積に対する効果を示す線グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書で使用される冠詞「１つ」は、冠詞の文法対象の１個または１個以上（即ち、少なくとも１個）をいい得る。実施例を挙げると、「１つの構成要素」は、１個の構成要素または１個以上の構成要素を意味する。
【００１７】
本明細書で使用される「有効量」は、癌の症状と徴候の低減に十分である抗体または医薬組成物の用量を指し、癌の症状と徴候は、例えば、体重軽減、痛み、および臨床的にまたは種々の成像装置によって放射線学的に検出される触知可能な腫瘤を含む触知可能な腫瘤が挙げられる。用語「有効量」と「治療有効量」は、互換的に使用される。
【００１８】
用語「被験体」は、癌を有する脊椎動物又は癌治療の必要があると見なされる脊椎動物をいい得る。被験体としては、すべての温血動物（例えば、霊長類の動物、より好ましくはヒトなどのような哺乳動物）を含む。非ヒト霊長類の動物は、同様に被験体である。用語「被験体」は、飼い慣らされた動物（例えば、ネコ、イヌなど）、家畜（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジやヤギなど）および実験動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、アレチネズミやモルモットなど）を含む。従って、獣医学的用途と医療用薬剤は、本明細書で企図される。
【００１９】
用語「抗体」は、抗体、消化断片、特定部分およびその変異体を包含することを意図し、抗体模倣物、或いは抗体の構造および／または機能を模倣する抗体の部分またはその特定の断片や部分を含み、単鎖抗体およびその断片を含み、それぞれ本発明の抗体に由来の少なくとも１つのＣＤＲを有する。抗体は、抗体断片、抗体変異体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体等を含む。抗体は、マウス、ウサギまたはヒトで生成され得る。
【００２０】
抗体は、完全長であってもよく、またはその抗原結合部分を有する抗体の断片（または複数の断片）を含むことができ、限定されないが、Ｆａｂ（例えば、パパイン消化による）Ｆａｂ’（例えば、ペプシン消化および部分還元による）、およびＦ（ａｂ’）２（例えば、ペプシン消化による）、ｆａｃｂ（例えば、プラスミン消化による）、ｐＦｃ’（例えば、ペプシンまたはプラスミン消化による）Ｆｄ（例えば、ペプシン消化、部分還元および再凝集による）、ＦｖまたはｓｃＦｖ（例えば、分子生物学技術による）、二価ｓｃＦｖ（ｂｉ−ｓｃＦｖ）、三価ｓｃＦｖ（ｔｒｉ−ｓｃＦｖ）、Ｆｄ、ｄＡｂ断片（例えば、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４１：５４４−５４６（１９８９））、単離されたＣＤＲ、ダイアボディー、トリアボディー、テトラボディー、線状抗体、単鎖抗体分子、抗体の断片から形成される二重特異性や重特異性抗体を含む。
【００２１】
組換え方法を用いて抗体断片を結合することにより作製した単鎖抗体、または合成リンカーも、本発明に包含される。Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９８８，  ２４２：４２３−４２６。Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  １９８８，  ８５：５８７９−５８８３。
【００２２】
多特異性または二重特異性抗体またはその断片は、１つの標的炭水化物（例えば、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ）の異なるエピトープに特異的、或いは２つ以上の標的炭水化物に特異的な抗原結合ドメイン（例えば、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ、ＳＳＥＡ−３およびＳＳＥＡ−４に特異的な抗原結合ドメイン）を含み得る。一実施形態では、多特異性抗体またはその抗原結合部分は少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別々の炭水化物抗原または同じ炭水化物抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７：６０−６９。Ｋｕｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００４，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２２：２３８−２４４。本発明の抗体は、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に結合または同時発現させることができる。例えば、抗体またはその断片は、１つまたは複数の他の分子実体、例えば別の抗体または抗体断片に機能的に連結（例えば、化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合または他の方法によって連結）することで、第二の結合特異性を有する二重特異性または多重特異性抗体を生成することができる。
【００２３】
抗体または抗原結合部分は、ペプチドであってもよい。このようなペプチドは、生物学的活性、例えば腫瘍関連炭水化物抗原への結合を示す、ペプチドの変異体、類似体、オルソログ、ホモログおよび誘導体を含むことができる。このペプチドは、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、天然に存在しないアミノ酸、無関係な生物系においてのみ天然に存在するアミノ酸、哺乳動物系からの修飾アミノ酸などを含む）、置換結合を有するペプチド、ならびに当該分野で公知の他の修飾を含む。
【００２４】
抗体またはその抗原結合部分は、誘導体化されまたは別の機能性分子に連結され得る。例えば、抗体は一つ以上の他の分子実体に機能的に連結（化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合性相互作用などによって連結）することができる。その分子実体は、例えば、別の抗体、検出可能な薬剤、細胞毒性剤、医薬品、他の分子との会合を媒介することができるタンパク質またはペプチド（例えば、ストレプトアビジンコア領域またはポリヒスチジンタグ）、アミノ酸リンカー、シグナル配列、免疫原性担体、またはタンパク質精製において有用なリガンド例えばグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ヒスチジンタグ、およびブドウ球菌プロテインＡを含む。誘導体化されたタンパク質の一種は、２つ以上のタンパク質（同じタイプまたは異なるタイプ）を架橋することによって産生される。適切な架橋剤には、ヘテロ二官能性のものであり、適切なスペーサー（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）またはホモ二官能性（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）によって分離された２つの異なる反応性基を有するものを含む。このようなリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌから購入できる。タンパク質が誘導体化（または標識化）され得る有用な検出可能な試薬には、蛍光化合物、様々な酵素、補欠分子族、発光物質、生物発光物質、および放射性物質を含む。例示的な蛍光検出可能な試薬としては、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、およびフィコエリトリンが挙げられる。タンパク質または抗体は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素で誘導体化することもできる。プロテインは、補欠分子族（例えば、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン）で誘導体化することもできる。
【００２５】
抗体の軽鎖または重鎖可変領域は、３つの超可変領域によって中断されたフレームワーク領域、すなわち相補性決定領域またはＣＤＲと呼ばれる領域を含む。本発明の１つの態様によれば、抗体またはその抗原結合部分は、以下の構造を有することができる：
リーダー配列−ＦＷ１−ＣＤＲ１−ＦＷ２−ＣＤＲ２−ＦＷ３−ＣＤＲ３−
そのうち、本発明のＦＷ１、ＦＷ２、ＦＷ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列は表１に示される。  本抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域は、非ヒトまたはヒト由来のものであり得る。本抗体またはその抗原結合部分のフレームワークは、ヒト、ヒト化、非ヒト（例えば、ヒトにおける抗原性を低下させるために修飾されたマウスフレームワーク）または合成フレームワーク（例えば、コンセンサス配列）であり得る。
【００２６】
本発明の抗体は、ハイブリドーマクローンの非ヒト（例えば、ネズミ）抗体から生成されたキメラ化またはヒト化されたモノクローナル抗体も含まれる。本発明もまた、抗体またはその抗原結合部分が本明細書に記載の一つ又は２つの可変領域を含み、その可変領域における特定の配列、例えばフレームワーク配列は、これらに限定されないが、ヒト、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ブタ、サル、類人猿、ゴリラ、チンパンジー、アヒル、ガチョウ、ニワトリ、両生類、爬虫類や他の動物を含む少なくとも一つの異なる種からの配列で置換されることを含む。
【００２７】
用語「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのヒトフレームワークと、最低１つ、好ましくはすべての非ヒト抗体由来のＣＤＲを含み、且つ存在する任意の定常領域が、ヒト抗体の定常領域と実質的に相同、例えば約８５−９０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％相同の抗体をいい得る。従って、おそらくＣＤＲを除いて、ヒト化抗体の全ての部分が、１つ以上のヒト抗体配列の対応部分と実質的に相同である。ヒト化抗体は、抗原結合に直接関与しない可変領域の配列（例えば、フレームワーク）を、ヒト可変領域からの等価な配列で置換することによって生成することができる。ヒト化抗体を得るための技術は、当業者に一般的に利用可能であり、特に、米国特許第５，２２５，５３９号、米国特許第６，５４８，６４０号、および米国特許第６，５４８，６４０号に記載されている。これらの技術は、当該分野において周知であり、重鎖または軽鎖の少なくとも１つから可変領域の全部または一部をコードする核酸配列を単離、操作、そして発現させることを含む。例えば、一旦非ヒト（例えばネズミ）抗体が得られると、可変領域を配列決定することができ、ＣＤＲおよびフレームワーク残基の位置が決定される。Ｋａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．  ９１−３２４２。Ｃｈｏｔｈｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  １９６：９０１−９１７。軽鎖および重鎖可変領域をコードするＤＮＡは、場合により、対応する定常領域に連結され、そして適切な発現ベクターにサブクローニングされ得る。ＣＤＲ移植抗体分子は、ＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって生成され得る。免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、または全てのＣＤＲを置換することができる。例えば、特定の抗体のＣＤＲの全ては、非ヒト動物の少なくとも一部（例えば、マウス由来の、表１に示されるＣＤＲなど）由来であってもよく、またはＣＤＲの一部のみが置換されてもよい。必要なのは、所定の炭水化物抗原（例えば、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ）への抗体の結合に必要なＣＤＲを保持することだけである。Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．  Ｌ．，  １９８５，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２２９：１２０２−１２０７。Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，  ４：２１４。米国特許５，５８５，０８９；  ５，２２５，５３９；  ５，６９３，７６１および５，６９３，７６２。欧州特許５１９５９６。Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８６，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３２１：５５２−５２５。  Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２３９：１５３４。  Ｂｅｉｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １４１：４０５３−４０６０。
【００２８】
キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ネズミｍＡｂおよびヒト免疫グロブリン定常領域に由来する可変領域を含み得る。ヒト定常領域ＤＮＡ配列は、種々のヒト細胞から周知の方法に従って単離することができる（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９１；  および  ＷＯ  ８７／０２６７１参照）。キメラ抗体は、組換えＤＮＡ技術によって生成され得る。Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，  ８１：６８５１−６８５５（１９８４）。例えば、ネズミ（または他の種）抗体分子をコードする遺伝子を制限酵素で消化してネズミＦｃをコードする領域を除去し、ヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の等価部分をその組換えＤＮＡ分子で置換する。キメラ抗体は、マウスＶ領域をコードするＤＮＡをヒト定常領域をコードするＤＮＡに連結できるという組換えＤＮＡ技術によっても作製することができる。Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １９８８，  ２４０：１０４１−１０４３。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ，  １９８７  ８４：３４３９−３４４３。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  １９８７，  １３９：３５２１−３５２６。Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．  ＰＮＡＳ，  １９８７，  ８４：２１４−２１８。Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃ．  Ｒｅｓ．，  １９８７，  ４７：９９９−１００５。Ｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ，  １９８５，  ３１４：４４６−４４９。Ｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，  １９８８，  ８０：１５５３−１５５９。国際特許公開番号ＷＯ１９８７００２６７１およびＷＯ８６／０１５３３。欧州特許出願番号１８４，１８７；  １７１，４９６；  １２５，０２３および１７３，４９４。米国特許第４，８１６，５６７号。
【００２９】
本発明に含まれる全ての抗体アイソタイプは、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（ＩｇＡ１，ＩｇＡ２）、ＩｇＤ又はＩｇＥを含む（すべてのクラスおよびサブクラスは本発明によって包含されることを意図する）。抗体またはその抗原結合部分は、哺乳類（例えば、マウス、ヒト）抗体またはその抗原結合部分であり得る。抗体の軽鎖はカッパ型またはラムダ型であってもよい。
【００３０】
用語「野生型抗体」および「未修飾抗体」は互換的に使用され、本明細書中で使用される場合、本明細書に開示される１つまたは複数のアミノ酸置換を欠くアミノ酸配列を含む抗体を指す。
【００３１】
「置換」という用語は、未修飾または野生型アミノ酸配列における特定の位置のアミノ酸の別のアミノ酸による置換を指すことができる。例えば、置換Ｓ２８Ｋは、カバットナンバリングシステムによる位置２８のセリンはリジンで置換されることを指す。
【００３２】
また、特定のアミノ酸が置換、欠失または付加された抗体またはその抗原結合部分も、本発明の範囲内にある。例示的な実施形態では、これらの交互作用（すなわち、保存的置換、保存的欠失または保存的付加）は、ペプチドのエフェクター機能または結合親和性という生物学的特性に実質的な影響を及ぼさない。アミノ酸の変化を保存的または非保存的として分類する目的で、アミノ酸は、疎水性、中性、酸性および塩基性に分類することができる（詳細は表２参照）。保存的置換は、同じ群のアミノ酸の間の置換を含む。非保存的置換は、これらの群の１つのメンバーを別の群のメンバーと交換することを意味する。Ｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ  ｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  ２００６．  ７：６１-８０）は、タンパク質機能を変化させることなく、当業者がアミノ酸置換を予測および選択することを可能にする様々なアミノ酸置換（ＡＡＳ）予測方法の概要を提供する。
【００３３】
別の例示的な実施形態において、抗体は、抗原に対する抗体の結合親和性を改善するために、ＣＤＲにアミノ酸置換を有し得る。さらに別の例示的な実施形態では、選択された少数のアクセプターフレームワーク残基を、対応するドナーアミノ酸によって置換することができる。ドナーフレームワークは、成熟または生殖系列のヒト抗体フレームワーク配列またはコンセンサス配列であり得る。表現型的にサイレントなアミノ酸置換を作製する方法に関する手引きは、Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４７：  １３０６−１３１０（１９９０）。Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４４：  １０８１−１０８５（１９８９）、Ａｕｓｕｂｅｌ（ｅｄ．），  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．（１９９４）、Ｔ．  Ｍａｎｉａｔｉｓ，  Ｅ．  Ｆ．  Ｆｒｉｔｓｃｈ  ａｎｄ  Ｊ．  Ｓａｍｂｒｏｏｋ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．（１９８９）、Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２４３：３０７−３１（１９９４）、Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−４５（１９９２）で提供される。
【００３４】
本発明の一態様によれば、本明細書に記載のアミノ酸置換は、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに対応する位置で生じる（すなわち、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．  ５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．（１９９１））。
【００３５】
本開示の抗体、またはその抗原結合断片、変異体もしくは誘導体は、抗原に対するそれらの結合親和性の面で記載または特定することもできる。「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、腫瘍関連炭水化物）との間の非共有結合相互作用の総和の強さを指す。他に示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含む当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。炭水化物抗原に対する抗体の親和性は、任意の適切な方法を用いて実験的に決定することができる、例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”  Ｉｎ  Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｐａｕｌ，  Ｗ．  Ｅ．，  Ｅｄ．，  Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．（１９８４）；  Ｋｕｂｙ，  Ｊａｎｉｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  Ｎ．Ｙ．（１９９２）、またはＥＬＩＳＡ法。
【００３６】
本抗体またはその抗原結合部分は、所望の抗体の軽鎖および重鎖（またはその一部）をコードするＤＮＡで形質転換された宿主細胞によって産生され得る。抗体は、これらの培養上清および／または細胞から、標準的な技術を用いて単離および精製することができる。例えば、宿主細胞は、抗体の軽鎖、重鎖、またはその両方をコードするＤＮＡで形質転換され得る。組換えＤＮＡ技術はまた、結合に必要でない軽鎖および重鎖の一方または両方をコードするＤＮＡの一部または全部、例えば定常領域を除去するために使用され得る。ＤＮＡは、細菌細胞（例えば、大腸菌）、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞などの原核細胞および真核細胞を含む、様々な適切な細胞で発現させることができる。幾つかの哺乳類細胞株が当技術分野で公知であり、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な不死化細胞系を含む。その細胞の非限定的な例としては、哺乳動物起源または哺乳動物様の特性を持つの全ての細胞系を含み、サル腎臓細胞の非修飾細胞、誘導体および／または修飾変異体（ＣＯＳ、例えば、ＣＯＳ−１、ＣＯＳ−７）、ＨＥＫ２９３、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ、例えばＢＨＫ２１）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＮＳ０、ＰｅｒＣ６、ＢＳＣ−１、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ２）、ＳＰ２／０、ＨｅＬａ、メイディン−ダービーウシ腎臓（ＭＤＢＫ）、骨髄腫およびリンパ腫細胞を含むが、これらに限定されない。修飾された修飾体は、例えば、グリカンプロファイル修飾および／または部位特異的な組込み部位誘導体を含む。
【００３７】
本明細書のすべての数値は、近似値であり、かつ「約」という単語によって修飾されている。
【００３８】
未修飾抗体
本発明は、本明細書に開示される少なくとも１つのアミノ酸置換（未修飾または野生型抗体）なしに、抗体またはその抗原結合部分を提供する。
【００３９】
本発明の一態様では、未修飾抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、未修飾抗体またはその抗原結合部分の重鎖可変領域は、さらに（ｉ）前記重鎖のリーダー配列とＣＤＲ１との間にある、配列番号：４と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、（ｉｉ）前記重鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ２との間にある、配列番号：５と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、（ｉｉｉ）前記重鎖のＣＤＲ２とＣＤＲ３との間にある、配列番号：６と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、から選ばれる少なくとも１つのフレームワークを含む。
【００４１】
他の実施形態では、その重鎖可変領域（配列番号．５）のフレームワーク２におけるアミノ酸残基４６（またはフレームワーク２のＣ末端から６番目のアミノ酸残基）がグリシンであり、且つ置換されていない。配列番号．５のアミノ酸残基の位置は以下に示す：
【００４２】
【表１】
2018536628.tif 000003
【００４３】
＊フレームワーク２（Ｗ）のアミノ酸残基３８は、ＣＤＲ１に隣接する残基またはフレームワーク２のＮ末端からの最初のアミノ酸残基である。
＊＊フレームワーク２（Ａ）のアミノ酸残基５１は、ＣＤＲ２に隣接する残基またはフレームワーク２のＣ末端からの最初のアミノ残基である。
【００４４】
本発明の別の態様では、未修飾抗体またはその抗原結合部分は、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８，９に示すアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有する。
【００４５】
いくつかの実施形態では、未修飾抗体またはその抗原結合部分の軽鎖可変領域は、さらに（ａ）前記軽鎖のリーダー配列とＣＤＲ１との間にある、配列番号：１０と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、（ｂ）前記軽鎖のＣＤＲ１とＣＤＲ２との間にある、配列番号：１１と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、（ｃ）前記軽鎖のＣＤＲ２とＣＤＲ３との間にある、配列番号：１２と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有するフレームワーク、から選ばれる少なくとも１つのフレームワークを含む。
【００４６】
他の実施形態では、その軽鎖（配列番号．１１）のフレームワーク２におけるアミノ酸残基４５（またはフレームワーク２のＣ末端から４番目のアミノ酸残基）がプロリンであり、および／またはその軽鎖のフレームワーク２におけるアミノ酸残基４６（フレームワーク２のＣ末端から３番目のアミノ酸残基）がトリプトファンであり、且つアミノ酸残基４５および／またはアミノ酸残基４６が置換されていないことを条件とする。配列番号．１１のアミノ酸残基の位置は以下に示す：
【００４７】
【表２】
2018536628.tif 000004
【００４８】
＊フレームワーク２（Ｗ）の３４位のアミノ酸は、ＣＤＲ１に隣接する残基またはフレームワーク２のＮ末端からの最初のアミノ酸残基である。
＊＊フレームワーク２（Ｙ）の４８位のアミノ酸は、ＣＤＲ２に隣接する残基またはフレームワーク２のＣ末端からの最初のアミノ酸残基である。
【００４９】
本発明の未修飾抗体には、腫瘍炭水化物またはその断片に結合するヒト化抗体も含まれる。一実施形態では、ヒト化抗体は、配列番号：１３と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または配列番号：１４と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む軽鎖可変領域を含む。
【００５０】
本発明の未修飾抗体はまた、腫瘍炭水化物またはその断片に結合するキメラ抗体を含む。一実施形態では、キメラ抗体は、配列番号：５７と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域、および／または配列番号：５８と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む軽鎖可変領域を含む。
【００５１】
いくつかの実施形態では、未修飾抗体またはその抗原結合部分は、２Ｃ２（ＡＴＣＣアクセッション番号：ＰＴＡ−１２１１３８として寄託）と称するハイブリドーマから得られた非ヒト抗体から産生される。ＰＣＴ／ＵＳ１５／２５３０５（その内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【００５２】
表１は、未修飾抗体の重鎖可変領域、軽鎖可変領域、ＣＤＲおよびＦＷのアミノ酸配列および修飾抗体の例示的な一の実施形態を示す。
【００５３】
【表３Ａ】
2018536628.tif 000005
【００５４】
【表３Ｂ】
2018536628.tif 000006
【００５５】
修飾抗体
本明細書および当該技術の教示に従い、いくつかの実施形態において、本発明の修飾抗体は、野生型対応抗体と比較して１つ以上の改変、例えば、１つまたは複数のＣＤＲにおける改変を含み得ることが企図される。修飾抗体は、それらに対応する未修飾の野生型と比較して、治療的有用性に必要とされる特性と実質的に同じ特性を保有する。しかしながら、未修飾野生型抗体と比べて、本明細書に記載の位置におけるアミノ酸残基の特定の改変は、腫瘍関連炭水化物に対する結合親和性を改善または最適化された修飾抗体をもたらすと考えられる。一実施形態では、本発明の修飾抗体は、「親和性成熟」な抗体である。
【００５６】
改変の一種は、修飾抗体を生成するために野生型／未修飾抗体のＣＤＲの１つ以上のアミノ酸残基を置換することを含む。そのような修飾抗体は、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて容易に生成され得る。つまり、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）が突然変異して、各部位にすべての可能なアミノ酸置換を生成する。このように生成された抗体は、繊維状ファージ粒子から、各粒子内にパッケージングされたファージコートタンパク質（例えば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ産物）の少なくとも一部に対する融合物として表示される。そして、ファージディスプレイされた変異体は、それらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。修飾のための候補超可変領域部位を特定するために、抗原結合に寄与する超可変領域残基を特定するように、突然変異誘発（例えば、アラニンスキャニング）を行うことができる。その代わりに、またはそれに加えて、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体と抗原との間の接触点を特定することも有益である。そのような接触残基および隣接残基は、本明細書に詳述されたものを含む当技術分野で公知の技術による置換の候補である。そのような修飾抗体が生成されると、変異体のパネルは、本明細書に記載のものを含む当技術分野で公知の技術を用いてスクリーニングされ、そして一つ以上の関連アッセイにおいて優れた特性を有する修飾抗体抗体が、さらなる開発のために選択することができます。
【００５７】
修飾抗体は、例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２，（ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ（ＶＨ）ａｎｄ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ（ＶＬ）ｄｏｍａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）、或いはＢａｒｂａｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４、Ｓｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５、Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５、およびＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２（ｒａｎｄｏｍ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ＣＤＲ  ａｎｄ／ｏｒ  ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ）に記載された方法により製造することができる。
【００５８】
本発明の一態様では、本発明の修飾抗体またはその抗原結合部分は、重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、そのうちアミノ酸残基２８、３１、５７、６３または１０５から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が、未修飾抗体とは別のアミノ酸で置換されることで、未修飾抗体の結合親和性を約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１５０％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、または約７００％増加させる。
【００５９】
一実施形態では、修飾抗体の重鎖可変領域は以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：
（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２８（セリン）が、塩基性アミノ酸、セリン以外の中性アミノ酸または疎水性アミノ酸で置換、
（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３１（スレオニン）が、塩基性アミノ酸で置換、
（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５７（アスパラギン酸）が、中性、塩基性または疎水性アミノ酸で置換、
（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６３（プロリン）が、中性アミノ酸、塩基性アミノ酸またはプロリン以外の疎水性アミノ酸で置換、または
（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基１０５（アスパラギン酸）が、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸または中性アミノ酸で置換される。
【００６０】
２０個のアミノ酸は、その側鎖に従って４つのクラス（塩基性、中性、疎水性および酸性）に分けられる。表２は、４つのクラスのアミノ酸を列挙する。
【００６１】
【表４】
2018536628.tif 000007
【００６２】
実施形態では、重鎖領域において以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを有する修飾抗体を含む：（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２８（またはＣＤＲ１のＮ末端から３番目のアミノ酸残基）が、塩基性アミノ酸、セリン、グリシン、またはグルタミン以外の中性アミノ酸、またはイソロイシン、ロイシン、メチオニンまたはトリプトファン以外の疎水性アミノ酸で置換、（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３１（またはＣＤＲ１のＮ末端から６番目のアミノ酸残基）が、ヒスチジン以外の塩基性アミノ酸で置換、（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５７（またはＣＤＲ２のＮ末端から６番目のアミノ酸残基）が、アスパラギンまたはスレオニン以外の中性アミノ酸、塩基性アミノ酸またはイソロイシン、プロリンまたはバリン以外の疎水性アミノ酸で置換、（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６３（またはＣＤＲ２のＣ末端から５番目のアミノ酸残基）が、アスパラギン、グルタミンまたはスレオニン以外の中性アミノ酸、塩基性アミノ酸、またはプロリン或いはメチオニン以外の疎水性アミノ酸で置換、または（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基１０５（またはＣＤＲ３のＮ末端から６番目のアミノ酸残基）が、塩基性アミノ酸、中性アミノ酸またはロイシン以外の疎水性アミノ酸で置換される。
【００６３】
表３は、修飾抗体の重鎖可変領域のアミノ酸置換の例を提供する。各置換について、最初の文字は未修飾抗体のアミノ酸を示し、数字はＫａｂａｔ番号付けスキームによる位置を示し、２番目の文字は改変抗体のアミノ酸を示す。例えば、アミノ酸残基２８のセリンはリジン（Ｓ０２８Ｋ）またはアルギニン（Ｓ０２８Ｒ）、チロシン（Ｓ０２８Ｙ）、フェニルアラニン（Ｓ０２８Ｆ）で置換され、アミノ酸残基３１のトレオニンはリシン（Ｔ０３１Ｋ）またはアルギニン（Ｔ０３１Ｒ）で置換され、アミノ酸残基５７のアスパラギン酸がグリシン（Ｄ０５７Ｇ）、セリン（Ｄ５７Ｓ）、グルタミン（Ｄ０５７Ｑ）、ヒスチジン（Ｄ０５７Ｈ）またはトリプトファン（Ｄ５７Ｗ）で置換され、アミノ酸残基６３のプロリンはヒスチジン（Ｐ０６３Ｈ）、アルギニン（Ｐ０６３Ｒ）、チロシン（Ｐ０６３Ｙ）、アラニン（Ｐ０６３Ａ）、ロイシン（Ｐ０６３Ｌ）またはバリン（Ｐ０６３Ｖ）で置換され、アミノ酸残基１０５のアスパラギン酸はアルギニン（Ｄ１０５Ｒ）、グリシン（Ｄ１０５Ｇ）、スレオニン（Ｄ１０５Ｔ）、メチオニン（Ｄ１０５Ｍ）、アラニン（Ｄ１０５Ａ）、イソロイシン（Ｄ１０５Ｉ）、リジン（Ｄ１０５Ｋ）またはバリン（Ｄ１０５Ｖ）で置換される。
【００６４】
【表５】
2018536628.tif 000008
【００６５】
本発明の別の態様では、本発明の修飾抗体またはその抗原結合は、軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８および９に示すアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、そのうちアミノ酸残基２４、３２、４９、５３または９３から選ばれる少なくとも１つのアミノ酸残基が、未修飾抗体とは別のアミノ酸で置換されることで、未修飾抗体の結合親和性を約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１５０％、約２００％、約３００％、約４００％、約５００％、約６００％、または約７００％増加させる。
【００６６】
一実施形態では、修飾抗体の軽鎖可変領域は以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：
（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２４（またはＣＤＲ１のＮ末端から１番目のアミノ酸残基）（アルギニン）が、中性アミノ酸または疎水性アミノ酸で置換、
（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３２（またはＣＤＲ１のＣ末端から２番目のアミノ酸残基）（メチオニン）が、中性アミノ酸またはメチオニン以外の疎水性アミノ酸で置換、
（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基４９（またはＣＤＲ２のＮ末端から１番目のアミノ酸残基）（アラニン）が、中性アミノ酸で置換、
（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５３（またはＣＤＲ２のＮ末端から５番目のアミノ酸残基）（ロイシン）が、中性アミノ酸または塩基性アミノ酸で置換、または
（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基９３（またはＣＤＲ３のＮ末端から６番目のアミノ酸残基）（アスパラギン）が、アスパラギン以外の中性アミノ酸、塩基性アミノ酸または疎水性アミノ酸で置換される。
【００６７】
実施形態は、軽鎖領域において以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを有する修飾抗体を含む：（ａ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２４が、スレオニン以外の中性アミノ酸またはメチオニン、プロリンまたはバリン以外の疎水性アミノ酸で置換、（ｂ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３２が、セリンまたはスレオニン以外の中性アミノ酸またはメチオニン、ロイシンまたはトリプトファン以外の疎水性アミノ酸で置換、（ｃ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基４９が、アスパラギンまたはスレオニン以外の中性アミノ酸で置換、（ｄ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５３が、アスパラギンまたはセリン以外の中性アミノ酸またはアルギニン以外の塩基性アミノ酸で置換、または（ｅ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基９３が、アスパラギン以外の中性アミノ酸、塩基性アミノ酸またはバリン以外の疎水性アミノ酸で置換される。
【００６８】
表４は、修飾抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸置換の例を提供する。例えば、Ｋａｂａｔ番号付けスキームを用いたアミノ酸残基２４は、グリシン（Ｒ０２４Ｇ）、セリン（Ｒ０２４Ｓ）またはトリプトファン（Ｒ０２４Ｗ）で置換され、アミノ酸残基３２はグリシン（Ｍ０３２Ｇ）、グルタミン（Ｍ０３２Ｑ）またはバリン（Ｍ０３２Ｖ）で置換され、アミノ酸残基４９はグリシン（Ａ０４９Ｇ）で置換され、アミノ酸残基５３はリジン（Ｌ０５３Ｋ）、グルタミン（Ｌ０５３Ｇ）、またはスレオニン（Ｌ０５３Ｔ）で置換され、アミノ酸残基９３はアルギニン（Ｎ０９３Ｒ）、グルタミン（Ｎ０９３Ｑ）、セリン（Ｎ０９３Ｓ）、スレオニン（Ｎ０９３Ｔ）、フェニルアラニン（Ｎ０９３Ｆ）、ロイシン（Ｎ０９３Ｌ）、メチオニン（Ｎ０９３Ｍ）で置換される。
【００６９】
【表６】
2018536628.tif 000009
【００７０】
一実施形態では、修飾抗体は、
（ａ）重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、且つ以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：
（ｉ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２８が、リジン（Ｓ０２８Ｋ）、アルギニン（Ｓ０２８Ｒ）、チロシン（Ｓ０２８Ｙ）またはフェニルアラニン（Ｓ０２８Ｆ）で置換、
（ｉｉ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３１が、リジン（Ｔ０３１Ｋ）またはアルギニン（Ｔ０３１Ｒ）で置換、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５７が、ヒスチジン（Ｄ０５７Ｈ）、グリシン（Ｄ０５７Ｇ）、セリン（Ｄ０５７Ｓ）、グルタミン（Ｄ０５７Ｑ）またはトリプトファン（Ｄ０５７Ｗ）で置換、
（ｉｖ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６３が、ヒスチジン（Ｐ０６３Ｈ）、アルギニン（Ｐ０６３Ｒ）、チロシン（Ｐ０６３Ｙ）、アラニン（Ｐ０６３Ａ）、ロイシン（Ｐ０６３Ｌ）またはバリン（Ｐ０６３Ｖ）で置換、
（ｖ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基１０５が、アルギニン（Ｄ１０５Ｒ）、グリシン（Ｄ１０５Ｇ）、スレオニン（Ｄ１０５Ｔ）、メチオニン（Ｄ１０５Ｍ）、アラニン（Ｄ１０５Ａ）、イソロイシン（Ｄ１０５Ｉ）、リジン（Ｄ１０５Ｋ）またはバリン（Ｄ１０５Ｖ）で置換され、および／または
（ｂ）軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８および９に示すアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、且つ以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：
（ｉ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２４が、グリシン（Ｒ０２４Ｇ）、セリン（Ｒ０２４Ｓ）またはトリプトファン（Ｒ０２４Ｗ）で置換、
（ｉｉ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３２が、グリシン（Ｍ０３２Ｇ）、グルタミン（Ｍ０３２Ｑ）またはバリン（Ｍ０３２Ｖ）で置換、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基４９が、グリシン（Ａ０４９Ｇ）で置換、
（ｉｖ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５３が、リジン（Ｌ０５３Ｋ）、グルタミン（Ｌ０５３Ｇ）、またはスレオニン（Ｌ０５３Ｔ）で置換、
（ｖ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基９３が、アルギニン（Ｎ０９３Ｒ）、グルタミン（Ｎ０９３Ｑ）、セリン（Ｎ０９３Ｓ）、スレオニン（Ｎ０９３Ｔ）、フェニルアラニン（Ｎ０９３Ｆ）、ロイシン（Ｎ０９３Ｌ）またはメチオニン（Ｎ０９３Ｍ）で置換される。
【００７１】
他の実施形態では、修飾抗体は、
（ａ）重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：１，２および３に示すアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、且つ以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：
（ｉ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２８が、アルギニン（Ｓ０２８Ｒ）で置換、
（ｉｉ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３１が、アルギニン（Ｔ０３１Ｒ）で置換、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５７が、グリシン（Ｄ０５７Ｇ）で置換、
（ｉｖ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基６３が、チロシン（Ｐ０６３Ｙ）で置換、
（ｖ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基１０５が、アルギニン（Ｄ１０５Ｒ）で置換され、および／または
（ｂ）軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は３つのＣＤＲであるＣＤＲ１、ＣＤＲ２とＣＤＲ３を含み、それぞれ配列番号：７，８および９に示すアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、且つ以下のアミノ酸置換の少なくとも１つを含む：
（ｉ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基２４が、トリプトファン（Ｒ０２４Ｗ）で置換、
（ｉｉ）ＣＤＲ１におけるアミノ酸残基３２が、グルタミン（Ｍ０３２Ｑ）で置換、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基４９が、グリシン（Ａ０４９Ｇ）で置換、
（ｉｖ）ＣＤＲ２におけるアミノ酸残基５３が、リジン（Ｌ０５３Ｋ）で置換、
（ｖ）ＣＤＲ３におけるアミノ酸残基９３が、アルギニン（Ｎ０９３Ｒ）で置換される。
【００７２】
さらに別の実施形態では、本発明は、修飾抗体またはその抗原結合部分を提供し、その修飾抗体またはその抗原結合部分は、
（ａ）重鎖および軽鎖を含み、前記重鎖は配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９から選ばれるアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有し、および／または
（ｂ）軽鎖を含み、前記軽鎖は配列番号：配列番号．４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５または配列番号５６から選ばれるアミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、約１００％相同のアミノ酸配列を有する。
【００７３】
他の実施形態では、本明細書に記載の修飾抗体またはその抗原結合部分の可変領域は、図５に列挙されたアミノ酸置換を含まない。
【００７４】
種々の腫瘍関連炭水化物抗原のいずれか、特にＧｌｏｂｏ  Ｈは、本発明の実施に使用することができる。腫瘍関連炭水化物抗原の例として、限定されないが、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ、段階特異的胚抗原３（ＳＳＥＡ−３）（Ｇｂ５とも呼ばれる）、段階特異的胚抗原４（ＳＳＥＡ−４）、Ｇｂ４およびＧＤ３などのＧｌｏｂｏ抗原と、ｓＬｅｘ、Ｌｅｘ、ｓＬｅａ、ＬｅａおよびＬｅｙなどのルイス抗原と、ｓＴｎ、Ｔｎおよびトムセン−フリーデンライヒ抗原（ＴＦ）などのムチングリカンと、ＧＤ１ａ、ＧＴ１ｂ、Ａ２Ｂ５、ＧＤ２、ＧＤ３、フコシルＧＭ１、ＧＭ１、ＧＭ２、ＧＭ３、Ｎｅｕ５ＧｃＧＭ３およびポリシアル酸（ＰＳＡ）などのガングリオシドと、６Ｇａｌ−ＨＳＯ３−ＳｉａＬｅｘおよび６ＧｌｕＮＡｃ−ＨＳＯ３−ＳｉａＬｅｘなどのスルフィド抗原とを含む。他の炭水化物抗原として、限定されないが、α−Ｇａｌａｃｔｏｓｅ、α−Ｍａｎ−６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ、α−Ｌ−Ｒｈａｍｎｏｓｅ，α−ＧａｌＮＡｃ（Ｔｎ）、α−ＮｅｕＡｃ−ＯＣＨ２Ｃ６Ｈ４−ｐ−ＮＨＣＯＯＣＨ２、Ｆｕｃα１−２Ｇａｌβ１−４ＧａｌＮＡｃβ（Ｈ  ｔｙｐｅｓ３）、ＮｅｕＡｃα２−８ＮｅｕＡｃα，（ＮｅｕＡｃα２−８）２ポリシアル酸、ＮｅｕＡｃａ２−６Ｇａｌｂ、ＮｅｕＡｃｂ２−６Ｇａｌａ（ＳＴｎ）、Ｇａｌａ１−３Ｇａｌｂ１−４ＧｌａＮＡｃｂ（ＮｅｕＡｃａ２−８）３、ＧａｌＮＡｃαａ−３（Ｆｕｃα１−２）Ｇａｌβ（血液グループＡ）、Ｇａｌα１−３（Ｆｕｃα１−２）Ｇａｌβ（血液グループＢ）、６Ｇａｌ−ＨＳＯ３−ＳｉａＬｅｘ、６ＧｌｕＮＡｃ−ＨＳＯ３−ＳｉａＬｅｘおよびα２−６シアリル化ジエンタナリーＮ−グリカンを含む。
【００７５】
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、インビトロおよびインビボの治療、予防および／または診断的有用性を有する。例えば、これらの抗体は、癌のような疾患を治療、阻害、再発防止、および／または診断するために、培養中の細胞（インビトロまたはエキソビボ）、または被験体（インビボ）に投与することができる。
【００７６】
抗体またはその抗原結合部分は、培養中の細胞、例えばインビトロまたはエキソビボで使用することができる。例えば、細胞は培養培地中でインビトロで培養され、抗体またはその抗原結合部分と接触され得る。この方法は、インビボ（例えば、治療または予防）プロトコルの一部として、被験体に存在する細胞に対して実施することができる。インビボの実施形態では、接触工程は被験体において行われ、抗体またはその抗原結合部分を被験体における１つ以上の癌細胞、例えば乳癌細胞において発現される腫瘍関連炭水化物抗原（例えば、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ）に結合させるのに有効な条件下で、被験体に投与することを含む。
【００７７】
癌細胞を抑制する方法
本発明の抗体またはその抗原結合部分は、インビトロ、インサイチュ及び／又はインビボで少なくとも１つの腫瘍関連炭水化物抗原またはその断片を変調、低減、拮抗、軽減、緩和、遮断、阻害、抑止および／または妨害することができる。
【００７８】
本発明はまた、インビトロ、エキソビボまたはインビボでの細胞の増殖を抑制する方法を提供し、そのうち癌細胞などの細胞は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分の有効量と接触させる  。過剰増殖性細胞または組織などの病理学的細胞または組織は、本発明の抗体またはその抗原結合部分の有効量をその細胞または組織と接触させることによって治療することができる。癌細胞などの細胞は、原発性癌細胞、またはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）などの組織バンクから入手可能な培養細胞であり得る。病理学的細胞は、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ発現癌、神経膠腫、髄膜腫、下垂体腺腫の細胞、または全身性癌、肺癌、前立腺癌、乳癌、造血癌または卵巣癌からのＣＮＳ転移細胞であり得る。細胞は、脊椎動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒト由来であってもよい。米国特許公開第２００４／００８７６５１号。Ｂａｌａｓｓｉａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  １０：７８５−７８８。Ｔｈｏｒｎｅ，  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １２７：４８１−４９６。Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  １３：９４３−９４７。Ｄａ  Ｆｏｎｓｅｃａ，  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ７０：２５９２６７。Ｄａ  Ｆｏｎｓｅｃａ，  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ａｒｃｈ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  Ｅｘｐ．  ５６：２６７−２７６。Ｈａｓｈｉｚｕｍｅ，  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｎｅｕｒｏｎｃｏｌｏｇｙ  １０：１１２−１２０。一実施形態では、前記癌はＧｌｏｂｏ  Ｈ発現癌である。他の実施形態では、前記癌はＳＳＥＡ−３発現癌である。さらに別の実施形態では、前記癌はＳＳＥＡ−４発現癌である。Ｇｌｏｂｏ  Ｈ発現癌、ＳＳＥＡ−３発現癌およびＳＳＥＡ−４発現癌は、肉腫、皮膚癌、白血病、リンパ腫、脳腫瘍、神経膠芽細胞腫、肺癌、乳癌、口腔癌、頭頸部癌、鼻咽頭癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆管癌、胆嚢癌、膀胱癌、膵臓癌、腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、卵巣癌、精巣癌、頬癌、口腔咽頭癌、喉頭癌および／または前立腺癌の一つ以上を含む。一態様では、本方法は、乳房、卵巣、肺、膵臓、腹部（胃）、結腸直腸、前立腺、肝臓、子宮頸部、食道、脳、口腔および／または腎臓癌の１つ以上から選択された試料のアッセイを含む。
【００７９】
本発明の抗体またはその抗原結合部分のインビトロでの有効性は、当技術分野で周知の方法を用いて決定することができる。ＭＴＴアッセイは、代謝的に活性な細胞によるＭＴＴ（テトラゾリウム塩）の取り込みの原理に基づいており、それが青色のホルマザン生成物に代謝されることで、分光分析で読み取ることができる。Ｊ．  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：  ５５  ６３，  １９８３。本発明の抗体またはその抗原結合部分の細胞毒性は、コロニー形成アッセイによって調べることができる。Ｇｌｏｂｏ  Ｈ抗原に結合するための機能的アッセイは、ＥＬＩＳＡによって行うことができる。抗体またはその抗原結合による細胞周期ブロックは、標準的なヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色およびフローサイトメトリーによって研究することができる。浸潤抑制は、ボイデンチャンバーによって研究することができる。このアッセイでは、再構成された基底膜であるマトリゲルの層が走化性フィルター上にコーティングされ、ボイデンチャンバー内の細胞の移動に対する障壁として働く。浸潤能を有する細胞のみがマトリゲル障壁を通過することができる。他のアッセイは、細胞生存度アッセイ、アポトーシスアッセイ、および形態学的アッセイを含むが、これらに限定されない。これらのアッセイは、ネズミモデルを用いてインビボで行うこともできる。例えば、Ｂ．  Ｔｅｉｃｈｅｒ，  Ｔｕｍｏｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｆｏｒ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２００６；  ５：  ２４３５−２４４３を参照されたい。
【００８０】
医薬組成物
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。薬学的に許容される担体は、生理学的に適合する任意および全ての溶媒、分散媒、等張および吸収遅延剤などを含む。一実施形態では、医薬組成物は、被験体の癌細胞を抑制するのに有効である。
【００８１】
本医薬組成物の投与経路としては、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、経口、局所、皮下、皮内、経皮、真皮下、非経口、直腸、脊髄または表皮投与を含むが、これらに限定されない。
【００８２】
本発明の医薬組成物は、注射剤として、液体溶液または懸濁液、または注射前に液体担体中の溶液または懸濁液に適した固体形態として調製することができる。医薬組成物はまた、固体形態、乳化または活性成分がリポソーム担体または持続的送達のために使用される他の微粒子担体にカプセル化された形態で調製することができる。例えば、医薬組成物は、油エマルジョン、油中水エマルジョン、水中油中水エマルジョン、部位特異的エマルジョン、長滞留エマルジョン、粘着エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、リポソーム、微粒子、微小球、ナノスフェア、ナノ粒子の形態、および医薬組成物の持続放出を可能にする様々な天然または合成ポリマー、例えばエチレンビニルアセテートコポリマーおよびＨｙｔｒｅｌ(R)コポリマーなどの非吸収性不透過性ポリマー、ヒドロゲルなどの膨潤性ポリマー、またはコラーゲンなどの再吸収可能なポリマー、および再吸収性縫合糸を作るために使用される特定のポリ酸またはポリエステルの形態であり得る。
【００８３】
当然ながら、インビボ投与に使用される医薬組成物は無菌でなければならない。滅菌は、従来の技術、例えば滅菌濾過膜を通した濾過によって達成することができる。いわゆる高濃度液体製剤（ＨＣＬＦ）になるように抗体の濃度を増加させることも有用である。そのようなＨＣＬＦを生成するための様々な方法がすでに開示されている。
医薬組成物は、単独投与および／または別の治療薬、例えば第２のモノクローナルまたはポリクローナル抗体またはその抗原結合部分、またはＤＮＡ損傷またはチューブリン結合剤などの抗癌剤、または血管新生、シグナル伝達経路または有糸分裂チェックポイントを阻害する薬剤と混合投与される。組合せ製品は、２つの成分の混合物であってもよく、またはそれらが共有結合していてもよい。一例では、Ｇｌｏｂｏ  Ｈに特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）またはその抗原結合部分と組合せる。別の例では、第２の薬剤は化学療法剤（例えば、シクロホスファミド、５−フルオロウラシルまたはアクチノマイシンＤ）である。抗体は、癌ワクチン、例えばジフテリア毒素と結合したＧｌｏｂｏ  Ｈおよびサポニンアジュバントと組み合わせて投与することもできる。追加の治療剤は、同じ医薬製剤の一つの成分として本発明に請求された抗体と同時に投与、または投与前や投与後に投与することができる。そのような剤形を調製する実際の方法は、当業者に公知または変更され得るものであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，  ２１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎに参照されたい。
【００８４】
医薬組成物は、被験体の年齢、体重および状態、使用される特定の組成物、および投与経路、医薬組成物が予防目的または治癒目的などに使用されるかどうかなどの状況に適した、単回投与処置またはスケジュールおよび期間にわたる複数回投与処置で投与することができる。例えば、一実施形態では、本発明による医薬組成物は、月に１回、月に２回、月に３回、１週間おき（ｑｏｗ）、週に１回（ｑｗ）、週に２回（ｂｉｗ）、週に３回（ｔｉｗ）、週に４回、週に５回、週に６回、隔日（ｑｏｄ）、毎日（ｑｄ）、１日２回（ｑｉｄ）、または１日３回（ｔｉｄ）に投与することができる。
【００８５】
本発明による抗体の投与期間、例えば、医薬組成物が投与される期間は、様々な要因のいずれか、例えば被験体の反応などに応じて変化し得る。例えば、医薬組成物は、約１秒以上から１時間以上、１日〜約１週間、約２週間〜約４週間、約１ヶ月〜約２ヶ月、約２ヶ月〜約４ヶ月、約４ヶ月〜約６ヶ月、約６ヶ月〜約８ヶ月、約８ヶ月〜約１年、約１年〜約２年、または約２年〜約４年、またはそれ以上の範囲の期間にわたって投与することができる。
【００８６】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態の経口または非経口医薬組成物を使用することができる。本明細書で使用される投薬単位形態とは、治療される被験体の単位用量として適した、物理的に分離した単位であり、各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。
【００８７】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトでの使用のための投与量範囲を処方するのに使用することができる。一実施形態では、このような化合物の投与量は、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、使用される投与形態および利用される投与経路に依存して、この範囲内で変化し得る。別の実施形態では、治療有効用量は、最初に細胞培養アッセイから推定することができる。細胞培養で決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の最大半分の抑制を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、用量を動物モデルで処方することができる。Ｓｏｎｄｅｒｓｔｒｕｐ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｓｅｍ．  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．  ２５：  ３５−４５，  ２００３。Ｎｉｋｕｌａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｈａｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ４（１２）：  １２３−５３，  ２０００。
【００８８】
本発明の抗体または抗原結合部分の治療上または予防上有効な量の例示的で非限定的な範囲は、約０．００１〜約６０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．５〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約１０〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．７５〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約２〜約９ｍｇ／ｋｇ体重、約１〜約２ｍｇ／ｋｇ体重、約３〜約８ｍｇ／ｋｇ体重、約４〜約７ｍｇ／ｋｇ体重、約５〜約６ｍｇ／ｋｇ体重、約８〜約１３ｍｇ／ｋｇ体重、約８．３〜約１２．５ｍｇ／ｋｇ体重、約４〜約６ｍｇ／ｋｇ体重、約４．２〜約６．３ｍｇ／ｋｇ体重、約１．６〜約２．５ｍｇ／ｋｇ体重、約２〜約３ｍｇ／ｋｇ体重、または約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００８９】
医薬組成物は、有効量の本発明の抗体またはその抗原結合部分を含有するように処方され、その量は、治療される動物および治療される状態に依存する。一の実施形態において、本抗体又はその抗原結合部分の用量は、約０．０１ｍｇから約１０ｇ、約０．１ｍｇ〜約９ｇ、約１ｍｇ〜約８ｇ、約２ｍｇ〜約７ｇ、約３ｍｇ〜約６ｇ、約１０ｍｇ〜約５ｇ、約２０ｍｇ〜約１ｍｇ、約５０ｍｇ〜約８００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約０．０１μｇ〜約１０ｇ、約０．０５μｇ〜約１．５ｍｇ、約１０μｇ〜約１ｍｇのタンパク質、約３０μｇ〜約５００μｇ、約４０μｇ〜約３００μｇ、約０．１μｇ〜約２００μｇ、約０．１μｇ〜約５μｇ、約５μｇ〜約１０μｇ、から約１０μｇ〜約２５μｇ、約２５μｇ〜約５０μｇ、約５０μｇ〜約１００μｇ、約１００μｇ〜約５００μｇ、約５００μｇ〜約１ｍｇ、約１ｍｇ〜約２ｍｇの範囲で投与される。任意の特定の被験体の具体的な用量レベルは、特定のペプチドの活性、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路、および排泄速度、薬物の組み合わせならびに治療を受けている特定の疾患の重症度に依存し、過度の実験をすることなく当業者によって決定され得る。
【００９０】
本発明の抗体、抗原結合部分、医薬組成物および使用方法は、すべての脊椎動物に適用可能であり、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、サル、類人猿、ゴリラ、チンパンジー、ウサギ、アヒル、ガチョウ、ニワトリを含む哺乳動物および非哺乳動物、両生類、爬虫類や他の動物に使用することができる。
【００９１】
本発明を実施するための特定の態様である以下の実施例は、例示の目的にのみ提供され、決して本発明の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００９２】
実施例１：修飾抗体の生成
配列番号１３を含む重鎖可変領域と配列番号１４を含む軽鎖可変領域を有する野生型ヒト化抗体と、配列番号５７を含む重鎖可変領域と配列番号５８を含む軽鎖可変領域を有する野生型キメラ抗体とは、ハイブリドーマ２Ｃ２の非ヒト抗体由来のものである。図１は、未修飾ヒト化抗体の重鎖可変領域（図１Ａ：１２６アミノ酸残基）および軽鎖可変領域（図１Ｂ：９６アミノ酸残基）のアミノ酸配列を示す。実験手順の詳細については、ＰＣＴ特許出願（出願番号：ＰＣＴ／ＵＳ１５／２５３０５）を参照されたい。
【００９３】
本発明の修飾抗体は、以下の２つの工程を用いて作製される：（１）包括的ポジショナルエボルーション（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）と、それに続く（２）コンビナトリアルタンパク質合成（Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）。
実施例２：キメラ抗体とヒト化抗体の結合親和性比較
ＥＬＩＳＡを用いて、実施例１からの未修飾キメラおよびヒト化抗体の結合親和性のインビトロ評価を行った。図２は、キメラ抗体（重鎖：配列番号５７および軽鎖：配列番号５８）およびヒト化抗体（重鎖：配列番号１３および軽鎖：配列番号１４）のＯＤ４５０ｎｍを示す。キメラ抗体（重鎖：配列番号５７および軽鎖：配列番号５８）のＯＤ値は０．８９であり、ヒト化抗体（重鎖：配列番号１３および軽鎖：配列番号１４）のＯＤ値はわずか０．３４であった。ヒト化抗体のＯＤ値が低いことは、未修飾ヒト化抗体の以下のＣＤＲ配列修飾／突然変異が必要であることを示した。
実施例３：包括的ポジショナルエボルーション
図３を参照すると、未修飾ヒト化抗体（配列番号１〜３および７〜８）の３つの重鎖および軽鎖ＣＤＲ内の各アミノ酸残基に対して少なくとも１０個のアミノ酸変異／置換が、包括的ポジショナルエボリューション技術（ＢｉｏＡｔａｌａ、ＵＳＡ）を用いて作成された。軽鎖ＣＤＲ中の２６個のアミノ酸残基および重鎖ＣＤＲ中の４１個のアミノ酸残基が特定され、合計６７０個の包括的ポジショナルエボリューション突然変異体が作成され、そのうち２６０個が軽鎖ＣＤＲに含まれ、４１０個が重鎖ＣＤＲに含まれている。
【００９４】
図４Ａ〜４Ｅは、重鎖可変領域の残基２８（図４Ａ）、残基３１（図４Ｂ）、残基５７（図４Ｃ）、残基６３（図４Ｄ）および残基１０５（図４Ｅ）における単一の包括的ポジショナルエボルーションアミノ酸変異体置換を有する修飾抗体および野生型キメラ抗体のＯＤ４５０ｎｍを示す。図５Ａ〜５Ｅは、軽鎖可変領域の残基４９（図５Ａ）、残基３２（図５Ｂ）、残基４９（図５Ｃ）、残基５３（図５Ｄ）および残基９３（図５Ｅ）における単一の包括的ポジショナルエボルーションアミノ酸変異体置換を有する修飾抗体および野生型キメラ抗体のＯＤ４５０ｎｍを示す。
【００９５】
Ｇｌｏｂｏ−Ｈセラミドへの結合活性および発現スクリーニングに基づいて、以下１０個の包括的ポジショナルエボリューション突然変異体を、コンビナトリアルタンパク質合成を行うために選択した：重鎖（ＨＣ）−Ｓ０２８Ｒ、ＨＣ−Ｔ０３１Ｒ、ＨＣ−Ｄ０５７Ｇ、ＨＣ−Ｐ０６３Ｙ、ＨＣ−Ｄ１０５Ｒ、軽鎖（ＬＣ）−Ｒ０２４Ｗ、ＬＣ−Ｍ０３２Ｑ、ＬＣ−Ａ０４９Ｇ、ＬＣ−Ｌ０５３ＫおよびＬＣ−Ｎ０９３Ｒ。
実施例４：コンビナトリアルタンパク質合成
実施例３における１０個の選択された包括的位置進化突然変異体のコンビナトリアルタンパク質合成ライブラリーが作成された。これら１０個の選択された包括的ポジショナルエボリューション突然変異体（合計９３０個のコンビナトリアルタンパク質合成突然変異体）の全ての可能な組み合わせが含まれる。
【００９６】
その９３０個のコンビナトリアルタンパク質合成突然変異体を９６ウェルフォーマットでＣＨＯ−Ｓ細胞にトランスフェクトし、１０％血清を含むＤＭＥＭ中で３７℃で培養し、完全長ＩｇＧ１分子として発現させた。トランスフェクションの４８時間後に上清を回収した。上清中のＩｇＧの濃度を、ヒトＩｇＧ定量のためのＥＬＩＳＡプロトコルを用いて測定した。細胞培養上清中のＩｇＧを、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ抗体でプレート上に捕捉した。結合したＩｇＧを、ＨＲＰと結合した抗ヒトＩｇＧ（Ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）で検出した。ＩｇＧの濃度は、標準として市販のヒトＩｇＧを用いて計算した。上清を５０ｎｇ／ｍｌに調整し、親和性ＥＬＩＳＡプロトコルを用いてＧｌｏｂｏ−Ｈセラミドへの結合について試験した。未修飾キメラ抗体を、ＥＬＩＳＡプレート中の対照として用いた。ＴＭＢをウェルに加えた後、反応を１Ｎ  ＨＣｌで停止し、直ちに読みとった。反応のＯＤ４５０ｎｍ値をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｐｌｕｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、ＵＳＡ）で測定した。
【００９７】
図６は、未修飾キメラ抗体（重鎖：配列番号５７および軽鎖：配列番号５８）よりも高いＯＤ４５０ｎｍ値を有する６６９のコンビナトリアルタンパク質合成突然変異体を示した。より高いＯＤ値は、Ｇｌｏｂｏ  Ｈに対する強い結合親和性を示す。
【００９８】
図７は、ハイブリドーマＶＫ９（Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ、ＭＳＫＣＣ由来）から得られたキメラ抗体、ハイブリドーマ２Ｃ２由来のキメラ抗体（重鎖のアミノ酸は配列番号５７、軽鎖のアミノ酸配列は配列番号５８）、および修飾抗体の例示的な実施例（ヒトＲ２８ｍＡｂ、重鎖のアミノ酸配列は配列番号５９、および軽鎖のアミノ酸配列は配列番号６０）の解離定数（Ｋｄ）を示す。その結果、ハイブリドーマ２Ｃ２に由来するキメラ抗体（８．６０Ｅ−０７）およびヒト化Ｒ２８ｍＡｂ（５．０４Ｅ−０７）が、ＶＫ９（１．２１Ｅ−０５）抗体と比較してより良好な結合親和性を有することを示す。
実施例５：抗Ｇｌｏｂｏ  Ｈ抗体のインビボ抗腫瘍評価
ヒト乳癌（ＭＣＦ７）異種移植を有する体重２７ｇのヌードマウスに、ハイブリドーマ２Ｃ２由来のキメラ抗体（配列番号５７および５８）、ハイブリドーマ２Ｃ２のヒト化抗体（配列番号１３および１４）またはヒト化Ｒ２８抗体（配列番号５９および６０）を５ｍｇ／ｋｇ注射した。そのマウスを１８日間腫瘍容積について観察し、その結果を記録して図８にまとめた。腫瘍体積は、式：（長さ×幅）２／２によって計算した。図８に示すように、修飾抗体（キメラ２Ｃ２、ヒト化２Ｃ２およびヒト化Ｒ２８）の腫瘍体積は、８日目以降対照群（担体のみ）（Ｐ＜０．０５）の腫瘍体積に比べて大幅に減少した。
【産業上の利用可能性】
【００９９】
本発明の具体的な態様が既に叙述と描写されてきたが、このような態様は、単なる本発明の記述であって、添付の特許請求の範囲に従って解釈される本発明を制限しないとみなされるべきである。本明細書に引用したすべての参考文献及び特許出願は、それぞれ個別の参考文献または特許出願がすべての目的のためにこの引用によりその全体が組み込まれると特定かつ個別に指定されたかのように、この引用によりその全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる。上述の発明は、理解を明瞭にする目的のために記述及び例示の方式により一部詳細の記述を行ってきたが、この発明の教示を踏まえると、添付の特許請求の範囲の精神または範疇から離脱されることなく、いくつかの変更及び修飾を行うことができることは、当該技術分野における通常の知識を有する者には容易に明らかであろう。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図６Ｈ】
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【図６Ｉ】
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【図６Ｊ】
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【図６Ｋ】
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【図６Ｌ】
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【図６Ｍ】
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【図６Ｎ】
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【図６Ｏ】
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【図６Ｐ】
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【図６Ｑ】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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