(57)【要約】ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物、及びその使用方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物であって、前記ペプチド・ポリヌクレオチド複合体が、５０未満対１であるペプチド対ポリヌクレオチドの比率を含み、前記ペプチドが、（ａ）非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができ、ならびに（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記医薬組成物。
【請求項２】
前記オリゴヌクレオチドに対するペプチドの比率が、約５対１から約４５対１の間で選ばれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記オリゴヌクレオチドに対するペプチドの比率が、約５対１から約３５対１、約１０対１から約４０対１、または約１５対１から約４５対１である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４】
前記オリゴヌクレオチドに対するペプチドの比率が、約５対１から約３０対１、約１０対１から約３５対１、約１５対１から約４０対１、または約２０対１から約４５対１である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチドに対するペプチドの比率が、約５対１から約２５対１、約１０対１から約３０対１、約１５対１から約３５対１、もしくは約２０対１から約４０対１、または約２５対１から約４５対１である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記複合体が、直径が約５０ｎｍから約２００ｎｍのナノ粒子である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ペプチドが、配列番号１に対して、少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ペプチドが、少なくとも１つのカチオン領域、及び前記ペプチドの少なくとも１つのカチオン領域に隣接するか、またはその領域内に位置する、少なくとも１つのヒスチジン残基を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記ポリヌクレオチドが、核酸配列の発現を調節または阻害することができる、非コードＲＮＡである、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ポリヌクレオチドが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）である、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記複合体が、アルブミンで被覆される、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記複合体のポリヌクレオチドが、ＳＴＡＴ３、ＪＮＫ２、ｐ６５、及びｐ１００／５２からなる群から選ばれるタンパク質をコードする、少なくとも１つの核酸配列を破壊する、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
細胞の細胞質へ、ポリヌクレオチドを送達する方法であって、細胞をペプチド・ポリヌクレオチド複合体と接触させることを含み、前記ペプチド・ポリヌクレオチド複合体が、５０未満対１であるペプチド対ポリヌクレオチドの比率を含み、前記ペプチドが、（ａ）非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができ、ならびに（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、前記方法。
【請求項１４】
前記オリゴヌクレオチドに対するペプチドの比率が、約５対１から約４５対１の間から選ばれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記オリゴヌクレオチドに対するペプチドの比率が、約５対１から約３５対１、約１０対１から約４０対１、または約１５対１から約４５対１である、請求項１３または請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記オリゴヌクレオチドに対するペプチドの比率が、約５対１から約３０対１、約１０対１から約３５対１、約１５対１から約４０対１、または約２０対１から約４５対１である、請求項１３から１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記オリゴヌクレオチドに対するペプチドの比率が、約５対１から約２５対１、約１０対１から約３０対１、約１５対１から約３５対１、もしくは約２０対１から約４０対１、または約２５対１から約４５対１である、請求項１３から１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ポリヌクレオチドが、治療を必要とする対象において、細胞の細胞質へ送達され、及び前記ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む、治療に有効な量の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む、請求項１３から１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）前記ポリヌクレオチドが、通常、ＮＦκＢシグナル伝達経路に関連するヌクレオチドを破壊し、及び前記対象が、腫瘍に対する治療処置を必要としており、
（ｂ）前記ポリヌクレオチドが、通常、ＮＦκＢシグナル伝達経路に関連するヌクレオチドを破壊し、及び前記対象が、関節炎に対する治療処置を必要としており、
（ｃ）前記ポリヌクレオチドが、細胞における、ＳＴＡＴ３の発現を破壊し、及び前記対象が、血管新生を阻害する治療処置を必要としており、
（ｄ）前記ポリヌクレオチドが、細胞における、ＪＮＫ２の発現を破壊し、及び前記対象が、泡沫細胞形成を阻害する治療処置を必要としており、または
（ｅ）前記ポリヌクレオチドが、細胞における、ｐ６５の発現を破壊し、及び前記対象が、関節炎に対する治療処置を必要としている、請求項１３から１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
配列番号１に対して、少なくとも８０％の同一性を有し、ならびに非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができるペプチドをコードする、アミノ酸配列。
【請求項２１】
前記アミノ酸配列が、配列番号１に対して、少なくとも９０％の同一性を有する、請求項２０に記載のアミノ酸配列。
【請求項２２】
前記アミノ酸配列が、配列番号１に対して、少なくとも９５％の同一性を有する、請求項２０に記載のアミノ酸配列。
【請求項２３】
前記アミノ酸配列が、配列番号１からなる、請求項２０に記載のアミノ酸配列。
【請求項２４】
アミノ酸配列を含むペプチドであって、配列番号１に対して、少なくとも８０％の同一性を有し、非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができる、前記ペプチド。
【請求項２５】
前記ペプチドが、配列番号１に対して、少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載のペプチド。
【請求項２６】
前記ペプチドが、配列番号１に対して、少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載のペプチド。
【請求項２７】
前記ペプチドが、配列番号１を含む、請求項２４に記載のペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年７月２日に出願された、米国仮特許出願第６２／１８７，９７９号の利益を主張し、その内容全体は、参照により本明細書に援用される。
【０００２】
米国政府の権利
本発明は、国立衛生研究所（ＮＩＨ）によって授与された、助成金番号Ｕ０１ＣＡ１４１５４１及びＲ０１ＨＬ０７３６４６−０８の下で、米国政府の援助を受け成し遂げられた。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、医薬組成物として配合され得るペプチド・ポリヌクレオチド複合体、及びその使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を用いるＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、がん及び炎症性疾患を含む、無数の疾患に対して非常に有効な治療法として提案されている。しかしながら、２０年近い精力的な研究にもかかわらず、ｓｉＲＮＡ治療剤は、血清中における遊離ｓｉＲＮＡの、乏しい細胞取り込み及び不安定性に起因して、臨床応用への橋渡しにおいて、限られた成功しか示していない。カチオン性脂質及びポリマーは、ｓｉＲＮＡのトランスフェクションにうまく取り入れられてきたが、しかし容認できない細胞毒性を示し、及び活性酸素（ＲＯＳ）ならびにＣａ＋２漏出の発生を引き起こす可能性がある。さらに、細胞膜ペプチド（ＣＰＰ）に基づく、ｓｉＲＮＡトランスフェクション剤は、細胞毒性低下との関連が示されるものの、リソソーム捕捉のために、従来の脂質トランスフェクション剤での高効率化を達成していない。
【０００５】
したがって、当該技術分野において、疾患を治療するための効率的な細胞の取り込み、及び細胞質への送達を可能とする、新しいクラスの治療用ｓｉＲＮＡ組成物及びｓｉＲＮＡトランスフェクション剤が求められる。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む、医薬組成物を包含する。このペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、５０未満対１であるペプチド対ポリヌクレオチドの比率を含む。このペプチドは、（ａ）非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができ、ならびに（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。このポリヌクレオチドは、ＲＮＡ配列またはＤＮＡ配列である。一態様において、当該ペプチドは、少なくとも１つのカチオン領域、及びそのペプチドの少なくとも１つのカチオン領域に隣接する、少なくとも１つのヒスチジン残基を含む。他の態様において、当該ポリヌクレオチドは、核酸配列の発現を調節または阻害することができる、非コードＲＮＡである。
【０００７】
本発明はまた、細胞の細胞質に、ポリヌクレオチドを送達する方法を包含する。この方法は、細胞をペプチド・ポリヌクレオチド複合体と接触させることを含み、そのペプチド・ポリヌクレオチド複合体が、５０未満対１であるペプチド対ポリヌクレオチドの比率を含み、ここでそのペプチドが、（ａ）非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができ、ならびに（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする。一態様において、当該ペプチドは、少なくとも１つのカチオン領域、及びそのペプチドの少なくとも１つのカチオン領域に隣接する、少なくとも１つのヒスチジン残基を含む。他の態様において、当該ポリヌクレオチドは、核酸配列の発現を調節または阻害することができる、非コードＲＮＡである。
【０００８】
本発明はまた、治療を必要とする対象において、細胞の細胞質にポリヌクレオチドを送達する方法を包含する。当該方法は、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む、医薬組成物の治療に有効な量を、その対象に投与することを含み、そのペプチド・ポリヌクレオチド複合体が、５０未満対１であるペプチド対ポリヌクレオチドの比率を含み、ここでそのペプチドが、（ａ）非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができ、ならびに（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とする。一態様において、当該ペプチドは、少なくとも１つのカチオン領域、及びそのペプチドの少なくとも１つのカチオン領域に隣接するか、またはその領域内に位置する、少なくとも１つのヒスチジン残基を含む。他の態様において、当該ポリヌクレオチドは、核酸配列の発現を調節または阻害することができる、非コードＲＮＡである。
【０００９】
本発明はまた、配列番号１に少なくとも８０％の同一性を有し、及び非溶解性であり、ならびに細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができるペプチドをコードする、アミノ酸配列を包含する。
【００１０】
本発明はまた、配列番号１に少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ペプチドを包含し、ここでそのペプチドが、非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからの、ポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができることを特徴とする。
【００１１】
本発明のその他の態様及び反復を、以下により詳細に記述する。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、当該技術分野において公知の、ポリヌクレオチドのトランスフェクションのその他方法と比較して、細胞の細胞質への、細胞毒性の弱い、当該ポリヌクレオチドの効率的なトランスフェクションが可能な、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を提供する。有利なことに、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、血清の存在下において安定であり、及びしたがって、イン・ビボでの細胞の細胞質にポリヌクレオチドを効率的に送達することが可能である。したがって、本発明は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の調製法、当該ポリヌクレオチドを細胞の細胞質にトランスフェクションするための、本発明のペプチド・ポリヌクレオチドの使用法、及び本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を調製するためのキットを包含する。
【００１３】
Ｉ．ペプチド・ポリヌクレオチド複合体
本発明の１つの態様は、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を包含する。本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、そのペプチドに会合したポリヌクレオチドを、細胞の細胞質に効率的にトランスフェクションすることができる。当該ペプチド、当該ポリヌクレオチド、当該ペプチド・ポリヌクレオチド複合体、及び当該細胞を、以下に記述する。
【００１４】
（ａ）ペプチド
一態様において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、ペプチドを含む。一般に、及び実施例において説明されるように、本発明のペプチドは、メリチンに由来し、及び膜二重層と相互作用する傾向を維持しつつ、その細胞毒性を弱めるように改質される。さらに、当該ペプチドは、実質的に非溶解性であり、及び細胞に対して非細胞毒性である。好ましくは、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を有するペプチドと、実質的に類似する機能を有し、及び（２）配列番号１のアミノ酸配列との類似性または同一性を持つアミノ酸配列を有する、ペプチドを含む。
【００１５】
本明細書において使用される語句「配列番号１を含むペプチドと、実質的に類似する機能」とは、エンドソームからのポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができる、実質的に非溶解性及び／または非細胞毒性のペプチドを指す。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、非溶解性である。用語「非溶解性」とは、典型的に、細胞の脂質二重膜が、そのペプチドと接触したときに損なわれないことを意味する。この脂質二重膜の完全性は、細胞または細胞に入る細胞外成分の、不適切な出入りによって、評価され得る。例えば、細胞タンパク質及び／または細胞小器官は、損なわれた脂質二重膜を持つ細胞から、漏出することがある。あるいは、細胞外成分（すなわち、通常、ギャップ結合を介して進入しないもの）は、例えば、損なわれた脂質二重膜を持つ細胞に、進入することができる。しかしながら、当該ペプチドが、細胞の脂質二重膜を貫通して、及び細胞の内部に入り込むことが可能であっても、その際に脂質二重膜の完全性は、影響を受けないことに留意すべきである。その他の実施形態において、本発明のペプチドは、実質的に非細胞毒性である。用語「非細胞毒性」とは、細胞が典型的に、ペプチドとの接触時に、死滅させられないことを示す。典型的に、本発明のペプチドは、細胞の生存率を、わずか約１０％、より好ましくはわずか約７％、より好ましくはわずか約５％、またはより好ましくはわずか約３％、低下させるだけである。特定の実施形態において、本発明のペプチドは、非溶解性であり、及び非細胞毒性である。
【００１６】
後述のセクションＩ（ｂ）及び（ｃ）に記述のように、本発明のペプチドは、ポリヌクレオチドと会合することが可能である。したがって、１つの態様において、本発明のペプチドは、ポリヌクレオチドと相互作用する、少なくとも１つのカチオン領域を含む。典型的に、カチオン領域は、２つ以上連続した、塩基性アミノ酸を有する。重要なことは、本発明のペプチドはまた、エンドソーム溶解能力を持つことであり、それがエンドソームからのポリヌクレオチドの放出に影響を与えること、及び細胞の細胞質に入り込むことを可能にする。用語「エンドソーム溶解性」とは、エンドソームの溶解を、開始または促進する物質を記述するために使用することができる。実施例で記述するように、本発明のペプチドの、ヒスチジン残基のプロトン化が、当該ペプチド・ポリヌクレオチド複合体の分解を促進し、これにより、当該ペプチドが放出され、エンドソーム膜を透過してポリヌクレオチドを放出する。したがって、他の態様において、本発明のペプチドは、そのペプチドの少なくとも１つのカチオン領域に隣接するかまたはその領域内に位置する、１つ以上のヒスチジン残基を含む。非限定的な例示を用いて、仮に本発明のペプチドが、３つのカチオン領域を含む場合、当該ペプチドは、そのペプチドの第１カチオン領域に隣接するかまたはその領域内の、少なくとも１つのヒスチジン、そのペプチドの第２カチオン領域に隣接するかまたはその領域内の、少なくとも１つのヒスチジン、そのペプチドの第３カチオン領域に隣接するかまたはその領域内の、少なくとも１つのヒスチジン、そのペプチドの第１及び第２のカチオン領域の各々に隣接するかまたはその領域内の、少なくとも１つのヒスチジン、そのペプチドの第１及び第３のカチオン領域の各々に隣接するかまたはその領域内の、少なくとも１つのヒスチジン、そのペプチドの第２及び第３のカチオン領域の各々に隣接するかまたはその領域内の、少なくとも１つのヒスチジン、またはそのペプチドの第１、第２及び第３のカチオン領域の各々に隣接するかまたはその領域内の、少なくとも１つのヒスチジンを有していてよい。カチオン領域に隣接するヒスチジン残基は、そのカチオン領域の前後に位置してよい。いくつかの実施形態において、カチオン領域に隣接するヒスチジン残基は、その領域の直ぐ隣にある。その他の実施形態において、カチオン領域に隣接するヒスチジン残基は、その領域の直ぐ隣にはない。例えば、当該ヒスチジン残基は、そのカチオン領域から約２、３、４または５位以内であってよい。その他の実施形態において、ヒスチジン残基は、カチオン領域内にある。本発明のペプチドのエンドソーム溶解能力により、エンドソームからトランスフェクションされたポリヌクレオチドを放出し、細胞の細胞質へ送達するための、例えばクロロキン、膜融合ペプチド、不活化アデノウイルス及びポリエチレンイミンなどの、追加のエンドソーム溶解物質の必要性が取り除かれる。このような既知のエンドソーム溶解物質は、細胞に悪影響を及ぼし、及びトランスフェクション時に毒性を高めることがある。
【００１７】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、配列番号１を含む。その他の実施形態において、本発明のペプチドは、配列番号１から構成される。特定の実施形態において、本発明のペプチドは、配列番号１の変異体であり、ここでその変異体が、配列番号１の少なくとも１０個の連続したアミノ酸、及び配列番号１を含むペプチドと、実質的に類似する機能を含むことを特徴とする。例えば、本発明のペプチドは、配列番号１の、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の連続したアミノ酸を含んでよい。いくつかの実施形態において、本発明のペプチドは、表Ａから選択される。
表Ａ
【表１】
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【００１８】
好ましい実施形態において、本発明のペプチドは、配列番号１に対して、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、ここでそのペプチドが、非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからのポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができる。当該ペプチドは、配列番号１に対して、少なくとも８０％の同一性を有し、配列番号１のアミノ酸配列に対して、約８０％、好ましくは約８５％、より好ましくは約９０％、さらに好ましくは約９５％の同一性を有し得る、アミノ酸配列を含む。配列番号１に対して、少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明のペプチドは、保存的置換された１つ以上のアミノ酸を含んでいてよい。例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以上のアミノ酸が、その得られるペプチドが、配列番号１を含むペプチドと、実質的に類似する機能を有する限りは、保存的置換されてよい。
【００１９】
他の態様において、本発明は、配列番号１に対して、少なくとも８０％の同一性を有し、ならびに非溶解性であり、及び細胞のエンドソームからのポリヌクレオチドの放出に影響を与えることができるペプチドをコードする、アミノ酸配列を提供する。いくつかの実施形態において、このアミノ酸配列は、配列番号１に対して、少なくとも８０％の同一性、少なくとも８５％の同一性、少なくとも９０％の同一性、または少なくとも９５％の同一性を有する。その他の実施形態において、当該アミノ酸配列は、配列番号１である。
【００２０】
本発明のペプチドは、当該技術分野で公知の種々の技術を用いて、作製することができる。当該ペプチドは、標準技術を用いて単離されてよく、標準技術を用いて合成されてよく、または受託機関から購入または入手されてもよい。
【００２１】
本発明のペプチドが、システイン残基の形態で、Ｃ末端チオールを含む場合、本発明のペプチドは、他の遊離チオール基、例えば、同一のまたは異なるペプチドからの遊離チオール基との、ジスルフィド結合を形成することができる。当業者は、ダイマー形成が、プラスミドＤＮＡの送達を改善するかどうかを、容易に決定することができる。理論に束縛されることを望まないが、ダイマー形成は、ＤＮＡ濃縮の改善によって、本発明の特定のペプチドのためのプラスミドＤＮＡの送達を改善する可能性がある。ダイマー化は、２４〜７２時間の、２０％ＤＭＳＯにおける遊離ペプチドのインキュベーションによって、または当該技術分野で公知のその他の方法によって、誘発され得る。非限定的な例示として、遊離チオールは、エルマン試薬を用いた比色アッセイにより、定量化することができる。
【００２２】
本発明のペプチドは、標識化されてよい。適切な標識の非限定的な例示には、蛍光標識、化学発光標識、放射性標識、比色標識、及び共鳴標識を含む。ペプチドを標識化する方法は、当該技術分野でよく知られている。
【００２３】
ペプチドをカーゴ複合体に結合させることができる。本明細書において使用される、用語「カーゴ複合体」とは、本発明のポリヌクレオチド以外のペプチドによって、またはそのペプチドと結合して運ばれ得る、任意の分子または物質を指し得る。他の方法として、本発明のペプチドは、本発明のポリヌクレオチドに添加して、カーゴ複合体に結合されてよい。例えば、カーゴ複合体は、画像用カーゴ体、治療用カーゴ体、細胞毒性用カーゴ体、または標的用カーゴ体であってよい。
【００２４】
画像用カーゴ分子及び物質の非限定的な例示には、検出可能な物理的または化学的性質を有する分子、物質、もしくは材料が含まれていてよい。そのような画像用カーゴ体は、蛍光イメージング、磁気共鳴画像法、陽電子放射断層撮影、ラマンイメージング、光コヒーレンス断層撮影、光音響イメージング、フーリエ変換赤外イメージング、または免疫アッセイの分野において、十分に開発されており、及び一般的に、このような方法において、最も有用な任意の標識が、本発明に適用されていてよい。利用可能な、様々な標識化またはシグナル生成システムの考察ついては、米国特許第４，３９１，９０４号が参照され、その内容全体が、参照として本明細書に組み入れられる。
【００２５】
治療用カーゴ体の非限定的な例示には、薬理剤などの生物学的活性を有する任意の物質が含まれてよい。このような治療用カーゴ体には、鎮痛薬、解熱薬、抗ぜんそく薬、抗生物質、抗うつ薬、抗糖尿病薬、抗真菌薬、降圧剤、非ステロイド及びステロイドを含む抗炎症薬、抗悪性腫瘍剤、抗不安薬、免疫阻害剤、片頭痛薬、鎮静薬、催眠薬、抗狭心症薬、抗精神病薬、抗躁薬、不整脈薬、関節炎薬、抗痛風薬、抗凝固薬、血栓溶解薬、抗線維素溶解薬、血行動態薬、抗血小板薬、抗けいれん薬、抗パーキンソン薬、抗ヒスタミン薬、抗再狭窄薬、かゆみ止め、カルシウム調節に有用な薬剤、抗細菌薬、抗ウイルス薬、抗菌薬、抗感染薬、気管支拡張薬、ステロイド化合物及びホルモン、ならびにそれらの組合せを含んでよい。あるいは、カーゴ複合体は、分子複合体または薬理学的に許容される塩の成分の形態であってよい。
【００２６】
細胞毒性カーゴ体とは、細胞に（例えば、死滅させるか、または損傷を与えて）有害である、分子または物質を指す。例示としては、タキソール（パクリタキセル、ドセタキセル）及びビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン）などの、抗微小管薬を含んでよい。例えば、例示には、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシ・アントラセンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、ならびそれらの類縁体、または同族体を含んでよい。
【００２７】
標的化カーゴ体は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を細胞に誘導する、任意の分子または物質であってよい。標的化カーゴ体は、真核生物の標的細胞、または原核生物の標的細胞に誘導されてよい。標的化する物質の非限定的な例示には、抗体もしくは抗体断片、受容体リガンド、小分子、ペプチド、ポリペプチド、脂質、炭水化物、核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、デンドリマー、マイクロバブル、またはアプタマーを含んでよい。
【００２８】
カーゴ複合体が、本発明のペプチドに結合する手段は、実施形態に応じて変化し得るものであり、実際に変化する。カーゴ複合体は、共有または非共有結合を含む、当該技術分野で公知の任意の手段によって、本発明のペプチドに結合されてよい。
【００２９】
（ｂ）ポリヌクレオチド
他の態様において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、ポリヌクレオチドを含む。ポリヌクレオチドは、一本鎖、二本鎖、またはそれらの組み合わせであってよい。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、二本鎖である。その他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、一本鎖である。そのうえその他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、一本鎖と二本鎖の組み合わせである。
【００３０】
本発明のポリヌクレオチドは、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ酸（ＤＮＡ）、またはＲＮＡとＤＮＡの組み合わせを含んでよい。さらに、ポリヌクレオチドは、改質されたＤＮＡ塩基または改質されたＲＮＡ塩基などの、改質核酸塩基を含んでいてよい。改質は、特に制約されるわけではないが、糖の２’位、ピリミジンのＣ−５位、及びプリンの８位で発生してよい。適切な改質ＤＮＡ塩基またはＲＮＡ塩基の例示には、２’−フルオロヌクレオチド、２’−アミノヌクレオチド、５’−アミノアリル−２’−フルオロヌクレオチド、及びホスホロチオエートヌクレオチド（モノチオリン酸塩及びジチオリン酸塩）を含む。あるいは、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド模倣体であってよい。ヌクレオチド模倣体の例示には、ロック核酸（ＬＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、及びホスホロジアミデート・モルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡとＤＮＡとの組み合わせである。その他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡを含む。ポリヌクレオチドがＤＮＡである場合、そのポリヌクレオチドは、発現カセットを含んでいてよい。本明細書において使用する、「発現カセット」とは、プロモーターに操作可能に連結された、タンパク質またはペプチドをコードする、核酸配列を含む核酸構築体である。特定の実施形態において、核酸構築体は、さらに追加の調節配列を含む。追加の調節配列の非限定的な例示には、転写終結配列を含む。その他の追加の調節配列は、当該技術分野で公知である。本明細書において使用される用語の、プロモーターとは、細胞内で標的核酸配列の発現を、付与または活性化することができる、合成または天然由来の分子を意味し得る。プロモーターは、通常、本発明のＤＮＡポリヌクレオチドに関連するプロモーターであってよいし、または異種プロモーターであってよい。異種のプロモーターは、ウイルス、細菌、菌類、植物、昆虫、及び動物などの原体から、誘導されてよい。プロモーターは、発現が発生する細胞、組織または臓器に関して、恒常的にまたは差次的にＤＮＡ配列の発現を調節することができる。または、プロモーターは、発育段階に関連し、または生理的ストレス、病原体、金属イオン、もしくは誘発物質または活性化因子（すなわち、誘発性プロモーターなど）などの、外的刺激に反応して、発現を調節することができる。プロモーターの非限定的な代表例には、バクテリオファージＴ７プロモーター、バクテリオファージＴ３プロモーター、ＳＰ６プロモーター、ＨＳＰ７０基本プロモーター、ｌａｃオペレータプロモーター、ｔａｃプロモーター、ＳＶ４０後期プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ＲＳＶ−ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶＩＥプロモーター、テトラサイクリン応答因子（ＴＲＥ）の核酸配列含むプロモーター、及びそのＣＭＶＩＥプロモーターを含んでよい。これらの実施形態のいくつかの選択肢において、本発明のＤＮＡポリヌクレオチドは、ベクターに取り込まれる。当業者は、標準的な組換え技術によって、ベクターを構築することができるであろう（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，２００１及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６を参照されたし。この両方を、参照として本明細書に組み入れる）。ベクターには、非限定的に、プラスミド、コスミド、転移因子、ウイルス（バクテリオファージ、動物ウイルス、及び植物ウイルス）、及び人工染色体（例えば、ＹＡＣ）、例えばレトロウイルスベクター（例えば、モロニーマウス白血病ウイルスベクター（ＭｏＭＬＶ）、ＭＳＣＶ、ＳＦＦＶ、ＭＰＳＶ、ＳＮＶなどに由来したもの）、レンチウイルスベクター（例えば、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＳＩＶ、ＢＩＶ、ＦＩＶなど）、複製可能型、複製欠損型、及びそれらのガットレス形態を含むアデノウイルスベクター（Ａｄ）、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、シミアンウイルス４０（ＳＶ−４０）ベクター、ウシ乳頭腫ウイルスベクター、エプスタイン・バーウイルス、ヘルペスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、ハーヴェイマウス肉腫ウイルスベクター、���ウス乳腺腫瘍ウイルスベクター、及びラウス肉腫ウイルスベクターを含む。
【００３２】
さらにその他の実施形態において、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡを含む。非限定的なＲＮＡ配列の例示には、タンパク質をコードすることが可能な、ｍＲＮＡ、及びｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ、及び長鎖非コードＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）などの、非コードＲＮＡを含んでよい。例えば、核酸は、ｍＲＮＡを含んでいてよい。好ましい実施形態において、核酸がｍＲＮＡを含む場合、そのｍＲＮＡ分子は、５’のキャップされた、ポリアデニル化された、またはキャップ及びポリアデニル化されたものであってよい。あるいは、ｍＲＮＡ分子は、そのｍＲＮＡの内部オープンリーディングフレームを翻訳するための、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含んでいてよい。
【００３３】
特定の実施形態において、ポリヌクレオチドは、細胞内で発現する核酸配列の発現を、調節または阻害することができる、非コードＲＮＡを含む。細胞内で発現する核酸配列の発現を調節または阻害することができる、非限定的な、非コードＲＮＡの例示には、マイクロＲＮＡ（または、ｍｉＲＮＡとして知られる）、ｓｉＲＮＡ、ｐｉＲＮＡ及びｌｎｃＲＮＡを含む。一般に、核酸配列の発現を調節または阻害することが可能な、非コードＲＮＡでの細胞のトランスフェクションは、その核酸配列の切断につながる可能性があり、核酸配列のタンパク質への翻訳を、増強、防止、または破壊することが可能であり、または核酸配列の転写を調節することが可能である。
【００３４】
好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、細胞内で発現する核酸配列の発現を破壊することができる、非コードＲＮＡを含む。本明細書において使用される、「核酸配列の発現を破壊すること」とは、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体で処理されなかった細胞における、核酸配列の発現レベルと比較した場合に、核酸配列のまたはその核酸配列から翻訳されたタンパク質の、発現レベルにおける、任意の低下を記述するために使用されてよい。実施形態のいくつかの選択肢において、ポリヌクレオチドは、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。
【００３５】
好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することができる、非コードＲＮＡを含む。他の好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、ＪＮＫ２をコードする核酸配列の発現を破壊することができる、非コードＲＮＡを含む。特定の好ましい実施形態において、この非コードＲＮＡは、ｓｉＲＮＡである。その他の好ましい実施形態において、当該非コードＲＮＡは、ｍｉＲＮＡである。さらにその他の好ましい実施形態において、当該非コードＲＮＡは、ｓｈＲＮＡである。
【００３６】
そのうえ他の好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＦκＢシグナル伝達経路に通常関連する核酸配列の発現を破壊することができる、非コードＲＮＡを含む。ＮＦκＢ経路の非限定的な例示には、古典的ＮＦκＢ経路、及び非古典的ＮＦκＢ経路を含んでよい。特定の好ましい実施形態において、この非コードＲＮＡは、ｓｉＲＮＡである。その他の好ましい実施形態において、当該非コードＲＮＡは、ｍｉＲＮＡである。さらにその他の好ましい実施形態において、当該非コードＲＮＡは、ｓｈＲＮＡである。
【００３７】
この古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路に通常関連する核酸配列の、非限定的な例示には、その古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、転写因子ｐ６５サブユニットをコードする核酸、及びその古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、転写因子ｐ１０５／ｐ５０サブユニットをコードする核酸を含んでよい。実施形態の１つの選択肢において、本発明のポリヌクレオチドは、当該古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ１０５／ｐ５０サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することができる、非コードＲＮＡを含む。実施形態の他の選択肢において、本発明のポリヌクレオチドは、当該古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ６５サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することができる、非コードＲＮＡを含む。例示的な実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１５の核酸配列（ＧＧＡＧＵＡＣＣＣＵＧＡＡＧＣＵＡＵＡ）を有する、ｓｉＲＮＡを含む。
【００３８】
当該古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路に通常関連する核酸配列の、非限定的な例示には、その非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路のｐ１００／ｐ５２サブユニットをコードする核酸、及びその非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路のＲｅｌＢサブユニットをコードする核酸を含んでよい。実施形態の１つの選択肢において、本発明のポリヌクレオチドは、当該非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ＲｅｌＢサブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することができる、非コードＲＮＡを含む。実施形態の他の選択肢において、本発明のポリヌクレオチドは、当該非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ１００／ｐ５２サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することができる、非コードＲＮＡを含む。例示的な実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１６の核酸配列（ＧＡＡＡＧＡＡＧＡＣＡＧＡＧＣＣＵＡＵ）を有する、ｓｉＲＮＡを含む。
【００３９】
いくつかの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、ＮＦκＢシグナル伝達経路に通常関連する核酸配列の発現を破壊することができる、２つ以上の非コードＲＮＡを含む。好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路に通常関連する核酸配列の発現を破壊することができる非コードＲＮＡ、及び非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路に通常関連する核酸配列の発現を破壊することができる非コードＲＮＡを含む。例示的な実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ６５サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することができる非コードＲＮＡ、及び古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ１００／ｐ５２サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することができる非コードＲＮＡを含む。
【００４０】
一般に、ｓｉＲＮＡは、約１５から約２９ヌクレオチドの長さ範囲の、二本鎖ＲＮＡ分子を含む。いくつかの実施形態において、このｓｉＲＮＡは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９ヌクレオチドの長さであってよい。その他の実施形態において、当該ｓｉＲＮＡは、約１６から約１８、約１７から約１９、約２１から約２３、約２４から約２７、または約２７から約２９ヌクレオチドの長さであってよい。好ましい実施形態において、当該ｓｉＲＮＡは、約２１ヌクレオチドの長さであってよい。ｓｉＲＮＡは、任意でさらに１つまたは２つの一本鎖のオーバーハング、例えば、１つの一本鎖のまたは２つの一本鎖の５’末端のオーバーハング、１つの一本鎖のまたは２つの一本鎖の３’末端のオーバーハング、もしくはそれらの組み合わせを含んでよい。このｓｉＲＮＡは、共にハイブリダイズをする、２つのＲＮＡ分子から形成されてよく、あるいは、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）から生成されてもよい（以下を参照）。いくつかの実施形態において、当該ｓｉＲＮＡの２本の鎖は、完全に相補的であってよく、そのため、２つの配列間に形成された二本鎖に、ミスマッチやバルジが存在しない。その他の実施形態において、当該ｓｉＲＮＡの２本の鎖は、実質的に相補的であってよく、そのため、２つの配列間に形成される二本鎖に、１つ以上のミスマッチ及び／またはバルジが存在してもよい。特定の実施形態において、当該ｓｉＲＮＡの１つまたは両方の５’末端が、リン酸基を有していてよく、一方でその他の実施形態において、その１つまたは両方の５’末端が、リン酸基を欠いている。その他の実施形態において、当該ｓｉＲＮＡの１つまたは両方の３’末端が、ヒドロキシ基を有していてよく、一方でその他の実施形態において、その１つまたは両方の３’末端が、ヒドロキシ基を欠いている。
【００４１】
当該ｓｉＲＮＡの１つの鎖は、「アンチセンス鎖」または「ガイド鎖」と呼ばれ、標的転写産物とハイブリダイズをする部分を含む。標的転写産物とは、破壊されるべき所望の発現に対応して、細胞で発現される核酸配列を指す。本発明の治療用組成物という観点から、標的転写産物の発現を破壊することは、有益な効果をもたらす可能性がある。好ましい実施形態において、当該ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖は、その標的転写産物の領域と完全に相補的であってよく、すなわち、それは、約１５から約２９の間のヌクレオチドの長さ、好ましくは少なくとも１６ヌクレオチドの長さ、及びより好ましくは、約１８〜２０ヌクレオチドの長さの標的領域上に、単一のミスマッチまたはバルジのない、標的転写産物とハイブリダイズをする。その他の実施形態において、このアンチセンス鎖は、その標的領域と実質的に相補的であってよく、すなわち、そのアンチセンス鎖及び標的転写産物によって形成される二本鎖に、１つ以上のミスマッチ及び／またはバルジが存在していてよい。典型的に、ｓｉＲＮＡは、その標的転写産物のエクソンの配列を標的とする。当業者は、標的転写産物に対応したｓｉＲＮＡを設計する、プログラム、アルゴリズム、及び／または商用サービスに精通している。代表的な例示は、Ｒｏｓｅｔｔａ  ｓｉＲＮＡ設計アルゴリズム（Ｒｏｓｅｔｔａ  Ｉｎｐｈａｒｍａｔｉｃｓ、Ｎｏｒｔｈ  Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）、ＭＩＳＳＩＯＮ（登録商標）ｓｉＲＮＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、及びｓｉＧＥＮＯＭＥ  ｓｉＲＮＡ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）である。当該ｓｉＲＮＡは、当業者には公知の方法を用いて、イン・ビトロで酵素合成することが可能である。あるいは、当該ｓｉＲＮＡは、当該技術分野で公知である、オリゴヌクレオチド合成技術を用いて、化学的に合成することが可能である。
【００４２】
その他の実施形態において、当該非コードＲＮＡは、短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）であってよい。一般に、ｓｈＲＮＡは、（前述のように）ＲＮＡ干渉に介在するのに十分な長さの、二本鎖構造を形成するために、ハイブリダイズしているかまたはハイブリダイズが可能である、少なくとも２つの相補部分、及び二本鎖を形成するそのｓｈＲＮＡの領域と結合してループを形成する、少なくとも１つの一本鎖部分を含む、ＲＮＡ分子である。この構造体はまた、その二本鎖部分であるステムを持つ、ステムループ構造と呼ばれる。いくつかの実施形態において、この構造体の二本鎖部分は、完全に相補的であってよく、そのためそのｓｈＲＮＡの二本鎖領域に、ミスマッチやバルジが存在しない。その他の実施形態において、この構造体の二本鎖部分は、実質的に相補的であってよく、そのためそのｓｈＲＮＡの二本鎖部分に、１つ以上のミスマッチやバルジが存在してよい。当該構造体のループは、約１から約２０ヌクレオチドの長さ、好ましくは約４から約１０ヌクレオチドの長さ、及びより好ましくは約６から約９ヌクレオチドの長さで形成されてよい。当該ループは、その標的転写産物に相補的である領域の、５’または３’末端のいずれかに位置してよい。
【００４３】
当該ｓｈＲＮＡはさらに、その５’または３’末端に、オーバーハングを含んでいてよい。その任意のオーバーハングは、約１から約２０ヌクレオチドの長さ、及びより好ましくは約２から約１５ヌクレオチドの長さで形成されてよい。いくつかの実施形態において、このオーバーハングには、１つ以上のＵ残基、例えば、約１から約５のＵ残基を含んでいてよい。いくつかの実施形態において、当該ｓｈＲＮＡの５’末端は、リン酸基を有していてよく、一方、その他の実施形態においては、有していなくてもよい。その他の実施形態において、当該ｓｈＲＮＡの３’末端は、ヒドロキシ基を有していてよく、一方、その他の実施形態においては、有していなくてもよい。一般に、ｓｈＲＮＡは、保存された細胞ＲＮＡｉの機構によって、ｓｉＲＮＡにプロセッシングされる。したがって、ｓｈＲＮＡは、ｓｉＲＮＡの前駆体であり、及び同様にそのｓｈＲＮＡの一部分（すなわち、そのｓｈＲＮＡのアンチセンス部分）と相補的である、標的転写産物の発現を阻害することができる。当業者は、ｓｈＲＮＡの設計及び合成に対応した、利用可能な資源（詳細は上述）に精通している。代表的な例示は、ＭＩＳＳＩＯＮ（登録商標）のｓｈＲＮＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）である。
【００４４】
さらにその他の実施形態において、当該非コードＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）ＲＮＡｉ発現ベクターであってよい。典型的に、ＲＮＡｉ発現ベクターは、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡなどの、ＲＮＡｉ作用因子の細胞内（イン・ビボ）合成に用いることができる。１つの実施態様において、２つの別個の、相補的なｓｉＲＮＡ鎖を、２つのプロモーターを含む、単一のベクターを用いて転写することができ、その各々が、１つのｓｉＲＮＡ鎖の転写を誘導する（すなわち、各プロモーターは、そのｓｉＲＮＡの鋳型に操作可能に連結され、そのため転写が発生し得る）。この２つのプロモーターは、同じ配向性にあってよく、その場合、それぞれが相補的なｓｉＲＮＡ鎖の１つに対応した鋳型に操作可能に連結される。あるいは、その２つのプロモーターは、反対の配向性にあってよく、単一の鋳型に隣接し、そのため、そのプロモーターの転写が、２つの相補的なｓｉＲＮＡ鎖の合成をもたらす。他の実施形態において、当該ＲＮＡｉ発現ベクターは、２つの相補領域を含む、単一のＲＮＡ分子の転写を活発にさせる、プロモーターを含んでよく、そのため転写産物が、ｓｈＲＮＡを形成する。
【００４５】
一般的に言えば、１つ以上のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡの転写ユニットの、イン・ビボでの発現を誘導するために利用されるプロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（ＰｏｌＩＩＩ）のプロモーターであってよい。Ｕ６またはＨ１プロモーターなどの、特定のＰｏｌＩＩＩプロモーターは、転写された領域内で、ｃｉｓ作用する調節要素を必要とせず、及びしたがって、特定の実施形態において、好ましい。その他の実施形態において、ＰｏｌＩＩのプロモーターは、１つ以上のｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ転写単位の発現を活発にさせるために使用されてよい。いくつかの実施形態において、組織特異的、細胞特異的、または誘発性のＰｏｌＩＩプロモーターが使用されてよい。
【００４６】
ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡの合成のための、鋳型を提供する構築体は、標準的な組換えＤＮＡ法を用いて作製され、及び真核細胞の発現に適した、多種多様な異なるベクターのいずれかに挿入される。助言は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００３）、またはＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ＆  Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１）に見出せる。当業者はまた、ベクターが、追加の調節配列（例えば、終結配列、翻訳調節配列など）、ならびに選択可能なマーカー配列を含んでよいことは、理解されよう。ＤＮＡプラスミドは、ｐＢＲ３２２、ＰＵＣなどに基づくものなどを含んで、当該技術分野では公知である。多くの発現ベクターは、すでに適切な１つのプロモーターまたはプロモーター類を含んでいるので、プロモーター（複数可）に関した適切な位置で、目的とするＲＮＡｉ作用因子をコードする核酸配列を、挿入することだけが必要である。ウイルスベクターはまた、ＲＮＡｉ作用因子の細胞内発現を提供するために、使用されてよい。適切なウイルスベクターには、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクターなどを含む。好ましい実施形態において、当該ＲＮＡｉ発現ベクターは、ＭＩＳＳＩＯＮ（登録商標）ＴＲＣのｓｈＲＮＡ製品（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で提供されるものなどの、ｓｈＲＮＡレンチウイルス系ベクターまたはレンチウイルス粒子である。
【００４７】
本発明の核酸配列は、当該技術分野で公知の種々の異なる技術を用いて、得られてよい。その塩基配列、ならびに相同配列は、標準技術を用いて単離され、受託機関から購入または入手されてよい。一旦、当該塩基配列が得られれば、当該技術分野で公知の方法を使用して、多様な用途での使用に対応して、増幅されてよい。
【００４８】
（ｃ）ポリペプチド・ポリヌクレオチド複合体
本発明の他の態様において、本発明のポリペプチドとポリヌクレオチドは、会合して複合体を形成する。本明細書において使用される用語「会合する」は、非共有結合を介したペプチドとポリヌクレオチドとの相互作用、またはペプチドとポリヌクレオチドとの共有結合を指してよい。好ましい実施形態において、本発明のポリペプチド及びポリヌクレオチドは、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力に基づく結合、疎水結合、または静電相互作用などの、非共有結合を介して会合する。例えば、本発明のペプチドは、全体として正味の正電荷を有していてよく、これにより、静電相互作用を介して、本発明のポリヌクレオチドが、当該ペプチドと会合し、本発明の複合体を形成することができる。本発明のポリペプチド・ポリヌクレオチド複合体を形成する方法は、当該技術分野で公知であり、ならびにさらに、セクションＶ及び実施例にて記述される。
【００４９】
本発明のペプチドが、本発明のポリヌクレオチドと会合する場合の、ポリヌクレオチドに対するペプチドのモル比は、そのペプチド、そのポリヌクレオチド組成物、またはそのポリヌクレオチドの大きさに応じて変化し得るものであり、実際に変化し、及び実験的に決定されてよい。本質的に、本発明のポリヌクレオチドに対する本発明のペプチドの適切なモル比は、当該ペプチドが、当該ポリヌクレオチドを完全に複合化し、一方で、当該ペプチドへの対象の曝露を最小限にする、モル比であってよい。本発明において、この比率は、ペプチド対ポリヌクレオチドで、５０未満対１である。
【００５０】
例えば、本発明のペプチドは、ポリヌクレオチドに対するペプチドのモル比が、約１対１、５対１、１０対１、１５対１、２０対１、２５対１、３０対１、３５対１、４０対１、または約４５対１で、ポリヌクレオチドと会合してよい。いくつかの実施形態において、ペプチドと本発明のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドに対するペプチドのモル比が、約１対１、５対１、１０対１、１５対１、２０対１、２５対１、３０対１、３５対１、４０対１、または約４５対１で、会合する。その他の実施形態において、本発明のペプチドと本発明のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドに対するペプチドのモル比が、約５対１から約４５対１で、会合してよい。その他の実施形態において、本発明のペプチドと本発明のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドに対するペプチドのモル比が、約５対１から約３５対１、約１０対１から約４０対１、または約１５対１から約４５対１で、会合してよい。その他の実施形態において、本発明のペプチドと本発明のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドに対するペプチドのモル比が、約５対１から約３０対１、約１０対１から約３５対１、約１５対１から約４０対１、または約２０対１から約４５対１で、会合してよい。その他の実施形態において、本発明のペプチドと本発明のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドに対するペプチドのモル比が、約５対１から約２５対１、約１０対１から約３０対１、約１５対１から約３５対１、または約２０対１から約４０対１、または約２５対１から約４５対１で、会合してよい。
【００５１】
本発明のポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡである場合、そのｓｉＲＮＡポリヌクレオチドを完全に複合化できる、本発明のポリヌクレオチドに対する本発明のペプチドの適切なモル比は、５０未満対１である。他の方法として、いくつかの実施形態において、本発明のペプチドとｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのモル比は、約５対１から約４５対１の間であってよい。その他の実施形態において、本発明のペプチドとｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのモル比は、約５対１、約６対１、約７対１、約８対１、約９対１、約１０対１、約１１対１、約１２対１、約１３対１、約１４対１、または約１５対１であってよい。その他の実施形態において、本発明のペプチドとｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのモル比は、約１０対１、約１１対１、約１２対１、約１３対１、約１４対１、約１５対１、約１６対１、約１７対１、約１８対１、約１９対１、または約２０対１であってよい。そのうえその他の実施形態において、本発明のペプチドとｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのモル比は、約１５対１、約１６対１、約１７対１、約１８対１、約１９対１、約２０対１、約２１対１、約２２対１、約２３対１、約２４対１、または約２５対１であってよい。さらにその他の実施形態において、本発明のペプチドとｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのモル比は、約２０対１、約２１対１、約２２対１、約２３対１、約２４対１、約２５対１、約２６対１、約２７対１、約２８対１、約２９対１、約３０対１、３１対１、約３２対１、約３３対１、約３４対１、または約３５対１であってよい。その他の実施形態において、本発明のペプチドとｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのモル比は、約２５対１、約２６対１、約２７対１、約２８対１、約２９対１、約３０対１、約３１対１、約３２対１、約３３対１、約３４対１、または約３５対１であってよい。その他の実施形態において、本発明のペプチドとｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのモル比は、約３０対１、約３１対１、約３２対１、約３３対１、約３４対１、約３５対１、約３６対１、約３７対１、約３８対１、約３９対１、または約４０対１であってよい。その他の実施形態において、本発明のペプチドとｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのモル比は、約３５対１、約３６対１、約３７対１、約３８対１、約３９対１、または約４０対１、約４１対１、約４２対１、約４３対１、約４４対１、約４５対１、約４６対１、約４７対１、約４８対１、または約４９対１であってよい。
【００５２】
当該ペプチドが、当該ポリヌクレオチドを完全に複合化できるモル比を決定する方法は、当該技術分野で公知であり、及び実施例に記述のゲルシフトアッセイを含んでよい。当該ペプチドへの対象の暴露を最小にするモル比を決定する方法は、当該技術分野で公知であり、及び当該ポリペプチドの漸増用量を利用した、細胞毒性測定を含んでよい。
【００５３】
本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、直径が約５０ｎｍから約９９９ｎｍ、より好ましくは直径が約５０ｎｍから約５００ｎｍ、さらに好ましくは直径が約５０ｎｍから約２５０ｎｍであってよい。それゆえ、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体とは、「ナノ粒子」を指してよい。いくつかの実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、または約１２０ｎｍである。その他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、２００、２０５、２１０、２１５、または２２０ｎｍである。その他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約２２５、２３０、２３５、２４０、２４５、２５０、２５５、２６０、２６５、または２７０ｎｍである。その他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約２８０、２８５、２９０、２９５、３００、３１０、３１５、３２０、３２５、３３０、３３５、３４０、または３４５ｎｍである。その他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約３５０、３５５、３６０、３７０、３７５、３８０、３８５、３９０、３９５、４００、４０５、４１０、または４１５ｎｍである。その他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約４２０、４２５、４３０、４３５、４４０、４４５、４５０、４５５、４６０、４６５、４７０、４７５、４８０、４８５、４９０、４９５、または５００ｎｍである。その他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約５７０、５７５、５８０、５８５、５９０、５９５、６００、６０５、６１０、６１５、６２０、６２５、または６３０ｎｍである。
【００５４】
好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約５０から約２５０ｎｍである。例えば、本発明のナノ粒子は、直径が約５０、約５１、約５２、約５３、約５４、約５５、約５６、約５７、約５８、約５９、約６０、約６１、約６２、約６３、約６４、約６５、約６６、約６７、約６８、約６９、約７０、約７１、約７２、約７３、約７４、約７５、約７６、約７７、約７８、約７９、約８０、約８１、約８２、約８３、約８４、約８５、約８６、約８７、約８８、約８９、約９０、約９１、約９２、約９３、約９４、約９５、約９６、約９７、約９８、約９９、約１００、約１０１、約１０２、約１０３、約１０４、約１０５、約１０６、約１０７、約１０８、約１０９、約１１０、約１１１、約１１２、約１１３、約１１４、約１１５、約１１６、約１１７、約１１８、約１１９、約１２０、約１２１、約１２２、約１２３、約１２４、約１２５、約１２６、約１２７、約１２８、約１２９、約１３０、約１３１、約１３２、約１３３、約１３４、約１３５、約１３６、約１３７、約１３８、約１３９、約１４０、約１４１、約１４２、約１４３、約１４４、約１４５、約１４６、約１４７、約１４８、約１４９、約１５０、約１５１、約１５２、約１５３、約１５４、約１５５、約１５６、約１５７、約１５８、約１５９、約１６０、約１６１、約１６２、約１６３、約１６４、約１６５、約１６６、約１６７、約１６８、約１６９、約１７０、約１７１、約１７２、約１７３、約１７４、約１７５、約１７６、約１７７、約１７８、約１７９、約１８０、約１８１、約１８２、約１８３、約１８４、約１８５、約１８６、約１８７、約１８８、約１８９、約１９０、約１９１、約１９２、約１９３、約１９４、約１９５、約１９６、約１９７、約１９８、約１９９、約２００、約２０１、約２０２、約２０３、約２０４、約２０５、約２０６、約２０７、約２０８、約２０９、約２１０、約２１１、約２１２、約２１３、約２１４、約２１５、約２１６、約２１７、約２１８、約２１９、約２２０、約２２１、約２２２、約２２３、約２２４、約２２５、約２２６、約２２７、約２２８、約２２９、約２３０、約２３１、約２３２、約２３３、約２３４、約２３５、約２３６、約２３７、約２３８、約２３９、約２４０、約２４１、約２４２、約２４３、約２４４、約２４５、約２４６、約２４７、約２４８、約２４９、または約２５０ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約５０から約２００ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約５０から約１５０ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約５０から約１００ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約７５から約１２５ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約１００から約１５０ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約１２５から約１７５ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約１５０から約２００ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約１７５から約２２５ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約２００から約２５０ｎｍである。他の好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約１８０から約２００ｎｍである。
【００５５】
特定の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、直径が約５から約３０ｎｍの、小粒子の凝集体を含んでいてよい。それゆえ、本発明のナノ粒子は、直径が約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または約３０ｎｍの小粒子の凝集体を含んでいてよい。いくつかの実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、直径が約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または約１５ｎｍの、小粒子の凝集体を含む。その他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、直径が約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または約２０ｎｍの、小粒子の凝集体を含む。そのうえその他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、直径が約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または約２５ｎｍの、小粒子の凝集体を含む。その他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、直径が約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または約３０ｎｍの、小粒子の凝集体を含む。
【００５６】
本発明のナノ粒子は、このナノ粒子の安定性を高めるために、さらに改質されてよい。例えば、本発明のナノ粒子は、安定性を高めるために、アルブミンで被覆されてよい。アルブミンで被覆された本発明のナノ粒子は、直径が約５から約９０ｎｍ、またはそれ以上であってよい。それゆえ、本発明のナノ粒子は、直径が約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、約８０、約８５、または約９０ｎｍの粒子を含んでいてよい。いくつかの実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約５、約１０、約１５、約２０、約２５、または約３０ｎｍの粒子を含む。その他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約３０、約３５、約４０、約４５、約５０、または約５５ｎｍの粒子を含む。そのうえその他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約５５、約６０、約６５、約７０、約７５、または約８０ｎｍの粒子を含む。その他の実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約８０、約８５、または約９０ｎｍ、もしくはそれ以上の粒子を含む。好ましい実施形態において、本発明のナノ粒子は、直径が約３５、約４０、約４５、約５０、約５５、約６０、約６５、約７０、または約７５ｎｍの粒子を含む。
【００５７】
粒子径は、当該技術分野で公知の方法を用いて評価されてよい。粒子の大きさを測定する方法の、非限定的な例示には、動的光散乱、レーザー回折、エレクトロゾーン（電気センシングゾーン）、光遮断−または別名フォトゾーン、及び単粒子光センシング（ＳＰＯＳ）、ふるい解析、空気力測定、透気度の直径、沈降、粒子のゼータ電位の測定、またはそれらの組み合わせを含んでよい。好ましい実施形態において、粒子径は、動的光散乱により評価される。他の好ましい実施形態において、粒子径は、その粒子のゼータ電位を測定することにより評価される。そのうえ他の好ましい実施形態において、粒子径は、動的な光散乱により、またはその粒子のゼータ電位を測定することによって評価される。
【００５８】
本発明のナノ粒子は、約−１５から約２０ｍＶ、好ましくは約０ｍＶ、またはそれ以上のゼータ電位を有していてよい。例えば、ナノ粒子は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、または約２０ｍＶ、もしくはそれ以上のゼータ電位を有していてよい。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、約１、約２、約３、約４、または約５ｍＶのゼータ電位を有する。その他の実施形態において、ナノ粒子は、約１０、１１、１２、１３、または約１４ｍＶのゼータ電位を有する。そのうえその他の実施形態において、ナノ粒子は、約１１、約１２、約１３、約１４、または約１５ｍＶのゼータ電位を有する。例示的な実施形態において、ナノ粒子は、約１、約２、約３、約４、または約５ｍＶのゼータ電位を有する。その他の実施形態において、ナノ粒子は、約１０、約１１、１２、約１３、または約１４ｍＶのゼータ電位を有する。例示的な実施形態において、ナノ粒子は、約３．７２ｍＶのゼータ電位を有する。他の実施形態において、ナノ粒子は、約１２ｍＶのゼータ電位を有する。そのうえ他の実施形態において、ナノ粒子は、約１３．１ｍＶのゼータ電位を有する。
【００５９】
本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、約１対１から約３０対１、好ましくは約５対１から約２５対１の、負電荷に対する正電荷の比率を有していてよい。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、約４対１、約５対１、約６対１、約７対１、または約８対１の、負電荷に対する正電荷の比率を有する。その他の実施形態において、ナノ粒子は、約１０対１、約１１対１、約１２対１、約１３対１、または約１４対１の、負電荷に対する正電荷の比率を有する。そのうえその他の実施形態において、ナノ粒子は、約２２対１、約２３対１、約２４対１、約２５対１、または約２６対１の、負電荷に対する正電荷の比率を有する。
【００６０】
セクションＩ（ａ）に記述されるように、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、細胞の細胞質へ、当該ポリヌクレオチドを効率的に放出することができる。ペプチド・ポリヌクレオチド複合体はまた、対象における投与時の分解から、当該ポリヌクレオチドを保護することができる。それゆえ、本発明のペプチド・ポリヌクレオチドのナノ粒子は、血清の存在下で、安定的に維持され得る。ナノ粒子は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０分、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９時間、約１、２、３、４、５、６、７日またはそれ以上の間、血清の存在下で安定的に維持され得る。ナノ粒子は、約５０、１００、１５０、２００、または約３００μｇ／ｍｌ、もしくはそれ以上のヒト血清アルブミンの存在下で、安定的に維持され得る。ナノ粒子の安定性は、そのナノ粒子の当該ペプチド・ポリヌクレオチド複合体のポリヌクレオチドの活性を維持する、ナノ粒子の能力を測定することによって、あるいは時間の経過とともに、ナノ粒子の大きさの変化を測定することによって、決定されてよい。ナノ粒子の大きさを測定する方法は、このセクションで記述した通りであり得る。
【００６１】
本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を調製する方法は一般に、本発明のペプチドを、本発明のポリヌクレオチドと接触させて、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を形成することを含む。典型的には、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体の形成に適した条件下でインキュベーションすることによって、ペプチドとポリヌクレオチドとが接触させられる。ペプチド・ポリヌクレオチド複合体の形成に適した条件は、実施例で記述される通りである。典型的に、そのような条件は、約３０℃から約４０℃の温度、及び約２０秒から約６０分間、またはそれ以上のインキュベーション時間を含み得る。適切な温度はまた、約３０℃より低くてよい。例えば、インキュベーションは、氷上で行われてよい。当業者は、インキュベーションの長さと温度は、当該ペプチド及び当該ポリヌクレオチドに応じて、変化し得るものであり、実際に変化し、及び実験的に決定されてよいことを理解されよう。
【００６２】
本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、そのナノ粒子の安定性を高めるためにさらに改質されてよい。例えば、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、ナノ粒子の安定性を高めるために、架橋されてよい。当業者は、適切な架橋剤は、当該ナノ粒子の組成物及びその抗体または抗体断片に応じて、変化し得るものであり、実際に変化することを認識されよう。いくつかの態様において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、グルタルアルデヒド、ビスカルボン酸スペーサー、ビスカルボン酸・活性エステルなどの化学架橋剤を用いて、カルボジイミド・カップリングの手順による、ビスリンカーアミン／酸を用いて、またはクリック化学の手順、カルボジイミド・カップリング化学、アシル化、活性エステルカップリング、もしくはアルキル化を用いて、化学的に架橋されてよい。
【００６３】
あるいは、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、ナノ粒子の安定性を高めることができる化合物で被覆されてよい。安定性を高めるためのナノ粒子を改質する方法は、当該技術分野において公知であり、及びＮｉｃｏｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３  Ａｃｔａ  Ｂｉｏｍａｔｅｒ．９：４７５４−４７６２に記述の通りでよく、その開示は、その内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
【００６４】
本明細書におい使用される用語「被覆」は、非共有結合を介した化合物とペプチド・ポリヌクレオチド複合体との相互作用、または、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体と化合物との共有結合を指してよい。好ましい実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体と被覆化合物とを、水素結合、イオン結合、ファンデルワールス力に基づく結合、疎水性結合、または静電相互作用などの、非共有結合を介して会合する。例えば、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、全体として正味の正電荷を有していてよく、及び被覆化合物は、当該ペプチド・ポリヌクレオチド複合体及び化合物を、静電相互作用を介して会合させ、本発明の複合体を形成することを可能にし得る、全体として負電荷を有していてもよい。
【００６５】
当該ナノ粒子の安定性を高めるために、ナノ粒子の被覆に使用されてよい化合物の、非限定的な例示には、アルブミン、オレイン酸などの脂肪酸、ポリエチレングリコール、キトサンなどの多糖類、ヘパリンもしくはヘパラン、及びその他のグリコサミノグリカン、または当業者に公知の、その他の公開された被覆材料を含む。いくつかの実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の安定性は、ナノ粒子を脂肪酸で被覆することにより高められてよい。その他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の安定性は、ナノ粒子を多糖類で被覆することにより高められてよい。
【００６６】
好ましい実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子の安定性は、ナノ粒子をアルブミンで被覆することにより高められてよい。アルブミンは、血清で一般に見出される、負に荷電された球状タンパク質である。理論に束縛されることを望まないが、本発明のナノ粒子のアルブミンでの被覆は、凝集を防止することによりナノ粒子の安定性を高められ得ると考えられる。好ましくは、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子を被覆するために使用され得るアルブミンは、血清アルブミンであり、ならびにウシ血清アルブミン及びヒト血清アルブミンを含んでよい。例示的な実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子の安定性は、ヒト血清アルブミンでナノ粒子を被覆することにより高められてよい。
【００６７】
本質的に、ナノ粒子は、アルブミンを含む溶液で、そのナノ粒子をインキュベーションすることにより、アルブミンで被覆される。ナノ粒子は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、または約１ｍｇ／ｍｌ、もしくはそれ以上のアルブミンを含む溶液中で、インキュベーションされてよい。いくつかの実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、約０．１、０．１５、０．２、０．２５、または約０．３ｍｇ／ｍｌのアルブミンを含む溶液中で、インキュベーションされてよい。その他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、約０．３、０．３５、０．４、０．４５、または約０．５ｍｇ／ｍｌのアルブミンを含む溶液中で、インキュベーションされてよい。そのうえその他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、約０．５、０．５５、０．６、０．６５、または約０．７ｍｇ／ｍｌのアルブミンを含む溶液中で、インキュベーションされてよい。その他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、約０．７、０．７５、０．８、０．８５、または約０．９ｍｇ／ｍｌのアルブミンを含む溶液中で、インキュベーションされてよい。追加の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、約０．９、０．９５、１、または約１．５ｍｇ／ｍｌのアルブミンを含む溶液中で、インキュベーションされてよい。好ましい実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むナノ粒子は、約０．４、０．４５、０．５、０．５５、または約０．６ｍｇ／ｍｌのアルブミンを含む溶液中で、インキュベーションされてよい。
【００６８】
ペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、そのペプチド・ポリヌクレオチド複合体を被覆するために、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または約６０分間、もしくはそれ以上にわたって、アルブミンと共にインキュベーションされてよい。いくつかの実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む粒子は、約５、１０、１５、または約２０分間、アルブミンと共にインキュベーションされる。その他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む粒子は、約２０、２５、３０、または約３５分間にわたって、アルブミンと共にインキュベーションされる。さらにそのうえその他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む粒子は、約３５、４０、４５、または約５０分間にわたって、アルブミンと共にインキュベーションされる。その他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む粒子は、約５０、５５、または約６０分、もしくはそれ以上の間にわたって、アルブミンと共にインキュベーションされる。好ましい実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む粒子は、約２５、３０、または約３５分間にわたって、アルブミンと共にインキュベーションされる。
【００６９】
（ｄ）細胞
本発明の他の態様において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、細胞の細胞質に当該ポリヌクレオチドをトランスフェクションさせることができる。いくつかの実施形態において、細胞は、原核細胞である。好ましい実施形態において、細胞は、真核細胞である。細胞は、イン・ビトロ、イン・ビボ、イン・サイチュ、またはエクス・ビボにあってよい。細胞は、単一の細胞であってよく、また組織もしくは臓器を含んでいてもよい。用語「細胞」はまた、対象における細胞を指す。
【００７０】
本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体のポリヌクレオチドのトランスフェクションに適した条件下で、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の存在下で細胞をインキュベーションすることにより、イン・ビトロで細胞に投与されてよい。ペプチド・ポリヌクレオチド複合体におけるポリヌクレオチドのトランスフェクションに適した条件は、実施例に記述の通りであってよい。当業者は、インキュベーションの長さが、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体、及び細胞に応じて変化し得るものであり、実際に変化することを理解されよう。典型的に、このような条件には、約１０分から２４時間のインキュベーション時間を含んでよい。より好ましくは、トランスフェクションの条件は、約１５分から３時間のインキュベーション時間を含んでよい。
【００７１】
本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む組成物を、対象に投与することにより、イン・ビボで（すなわち、対象体内の）細胞に投与されてよい。適切な組成物は、後述のセクションＩＩでさらに詳しく記述される。
【００７２】
ＩＩ．医薬組成物
本発明の他の態様において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、投与に適した医薬組成物に組み込まれてよい。本発明の医薬組成物は、通常、細胞内で発現する２種以上の核酸配列の発現を破壊するために使用されてよい。例えば、本発明の医薬組成物は、通常、細胞内で発現する１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上の核酸配列の発現を破壊するために使用されてよい。当業者は、医薬組成物は、疾患を治療したり、疾患を予防したり、または健康を増進したりするために、投与されることを理解するであろう。それゆえ、本発明の医薬組成物は、通常、細胞内で発現する任意の核酸配列の発現を、破壊するために使用されてよく、そのため発現が破壊されたことによって、その組成物を投与された対象に対して、測定可能でかつ有益な効果（すなわち顕著な効果）をもたらす。
【００７３】
いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、通常、細胞内で発現する１つの核酸配列の発現を破壊するために使用される。好ましい態様において、本発明の医薬組成物は、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊するために使用される。他の好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、ＪＮＫ２をコードする核酸配列の発現を破壊するために使用される。そのうえ他の好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ６５サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊するために使用される。他の好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ１００／ｐ５２サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊するために使用される。
【００７４】
その他の実施形態において、本発明の医薬組成物は、通常、細胞内で発現する２つの核酸配列の発現を破壊するために使用される。好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ６５サブユニットをコードする核酸配列、及び古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、ｐ１００／ｐ５２サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊するために使用される。
【００７５】
本発明の医薬組成物が、通常、細胞内で発現する、２つ以上の核酸配列の発現を破壊するために使用される場合、医薬組成物は、２つ以上のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の混合物を使用して、配合されてよく、ここで各複合体は、通常、細胞内で発現する異なる核酸配列の発現を破壊することができるポリヌクレオチドを含む。あるいは、２つ以上のポリヌクレオチドが、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体の混合物を生成するために使用されてよく、ここで各ポリヌクレオチドは、通常、細胞内で発現する異なる核酸配列の発現を破壊することができる。
【００７６】
本発明の医薬組成物はまた、必要に応じて、１つ以上の無毒の薬学的に許容されるキャリアー、補助剤、賦形剤、及びベヒクルを含んでいてよい。本明細書で使用される用語「薬学的に許容されるキャリアー」とは、医薬品管理に適合した、任意の及びすべての溶媒、分散媒体、被覆剤、抗菌・防カビ剤、等張剤及び吸収遅延剤などを含むことを意図している。薬学的に活性な物質に対して、このような媒体及び薬剤を用いることは、当該技術分野においては公知である。任意の従来の媒体または薬剤は、本発明のナノ粒子と非適合性である場合を除き、それらの当該組成物中での使用が考慮される。補充の活性化合物もまた、当該組成物に組み込まれてよい。
【００７７】
本発明の医薬組成物は、その目的の投与経路に適合するように、配合されてよい。適切な投与経路には、非経口、経口、肺内、経皮、経粘膜、直腸投与を含む。本明細書において使用される用語の非経口には、皮下、静脈内、筋肉内、髄腔内、または胸骨内注射、または点滴技術を含む。
【００７８】
非経口、皮内、または皮下適用に使用される溶液または懸濁液には、滅菌希釈剤、例えば注射用の水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶媒など、抗菌剤、例えばベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなど、キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸など、緩衝剤、例えば酢酸、クエン酸塩またはリン酸塩など、及び緊張を調整する薬剤、例えば塩化ナトリウムやブドウ糖などの成分を含むことができる。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの、酸または塩基で調整されてよい。非経口製剤には、アンプル、使い捨て注射器またはガラスもしくはプラスチック製の多数回投与バイアル瓶を含んでよい。
【００７９】
経口用組成物は一般に、不活性な希釈剤または食用キャリアーを含んでいてよい。経口用組成物は、ゼラチンカプセルに封入し、または錠剤に圧縮されてよい。経口治療投与の目的に対しては、その活性化合物は、賦形剤が組み込まれ、及び錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用されてよい。経口用組成物はまた、うがい薬として使用する流体キャリアーを用いて調製されてよく、ここでその流体キャリアー中の化合物は、経口で適用され、及びうがいで、ならびに吐き出してまたは飲み込んでよい。薬学的に適合性のある結合剤及び／または補助材料は、当該組成物の一部として含まれてよい。錠剤、丸薬、カプセル、トローチなどは、結合剤、例えば微結晶セルロース、トラガカントガムもしくはゼラチンなど、賦形剤、例えば澱粉もしくは乳糖など、崩壊剤、例えばアルギン酸、プリモゲル、もしくはトウモロコシ澱粉など、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステロートなど、滑剤、例えばコロイド状の二酸化ケイ素、甘味料、例えばショ糖もしくはサッカリンなど、または香料、例えばペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香料などの成分、または類似の性質の化合物のいずれかを含んでいてよい。吸入による投与に対応した、当該化合物は、適切な推進剤、例えば、二酸化炭素などの気体を含む、圧力容器またはディスペンサー、または噴霧器からのエアゾールスプレーの形態で送達される。
【００８０】
好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、非経口投与に適合するように配合される。例えば、注射剤への利用に適した医薬組成物は、滅菌された水溶液（水溶性の場合）または分散液、及び滅菌注射液もしくは分散液の即時調製に対応した、無菌粉末を含むことができる。静脈内投与に対応した、適切なキャリアーには、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（ＢＡＳＦ；Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。例示的な実施形態において、本発明の医薬組成物は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が配合される。
【００８１】
すべての場合において、組成物は、無菌であってよく、及び容易に注射針を通過するようになる程度に、流動性があってよい。組成物は、製造及び貯蔵条件下で安定であり得て、ならびに細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して、保護されていてよい。当該キャリアーは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、及び液状ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適切な混合物を含む、溶媒または分散媒であってよい。適切な流動性は、例えば、レシチンなどでの被覆を利用することにより、分散液の場合には、必要な粒子径の維持により、及び界面活性剤を用いることにより、維持され得る。微生物作用の防止は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどの、種々の抗菌剤及び防カビ剤によって達成されてよい。多くの場合、当該組成物中に、等張剤、例えば糖類、つまり多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことが、好ましい。注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの物質を、当該組成物中に含ませることによって、もたらされるであろう。
【００８２】
滅菌注射用液剤は、必要に応じて、上記で列挙した成分を１種または組み合わせて、次いで濾過殺菌を行い、適切な溶媒に、必要量の当該活性化合物を組み込んで、調製されてよい。一般に、分散液は、基本的な分散媒、及び上記に列挙したものからの必要なその他成分を含む無菌ベヒクルに、当該活性化合物を組み込んで、調製される。滅菌注射液の調製に対応した、滅菌粉末の場合において、調製の好ましい方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、当該活性成分に、上記の事前に滅菌ろ過した溶液からの任意の追加の必要成分を加えた粉末を生成する。
【００８３】
全身投与はまた、経粘膜または経皮的手段によって行われてよい。経粘膜または経皮投与に対応して、浸透させる障壁に対する適切な浸透剤が、当該配合に使用される。このような浸透剤は一般に、当該技術分野で知られており、及び例えば、経粘膜投与に対しては、洗浄剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体などが、含まれてよい。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用によって達成されてよい。経皮投与に対応して、当該活性化合物は、当該技術分野で一般に知られている、軟膏、塗り薬、ゲル、またはクリームに配合される。当該化合物はまた、坐剤（例えば、ココアバター及びその他のグリセリドなどの、従来の坐剤用基剤と共に）、または直腸送達のための停留浣腸の形態で、調製されてよい。
【００８４】
１つの実施形態において、当該活性化合物は、体内からの迅速な排出に対応して、インプラント及びマイクロカプセル送達システムを含む、放出調節配合物などの、当該化合物を保護するキャリアーと共に調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの、生分解性、生体適合性ポリマーが、使用されてよい。このような配合物の調製法は、当業者には明らかである。これらは、当業者に公知の方法にしたがって、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記述されているように、調製されてよい。
【００８５】
医薬組成物の追加配合調合物は、例えば、Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５）、及びＬｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．ａｎｄ  Ｌａｃｈｍａｎ，Ｌ．，Ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８０）に記述されている。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．，１６Ｅｄ  ＩＳＢＮ：０−９１２７３４−０４−３、この全体が、参照により本明細書に組み込まれるが、その最新版は、開業医に一般的に知られるような、配合化技術の大要を提供している。
【００８６】
当業者は、医薬組成物における本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の濃度は、一部として、投与経路、その対象、及びその投与の理由に応じて、変化し得るものであり、実際に変化し、ならびに実験的に決定され得る、ことを認識されよう。医薬組成物における本発明のナノ粒子などの、活性薬剤の濃度を実験的に決定する方法は、当該技術分野で公知である。一般に、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約０．１ｎＭから約５０μＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。例えば、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約０．１ｎｍ、０．２ｎｍ、０．３ｎｍ、０．４ｎｍ、０．５ｎｍ、０．６ｎｍ、０．７ｎｍ、０．８ｎｍ、０．９ｎｍ、１ｎｍ、２ｎｍ、３ｎｍ、４ｎｍ、５ｎｍ、６ｎｍ、７ｎｍ、８ｎｍ、９ｎｍ、１０ｎｍ、１１ｎｍ、１２ｎｍ、１３ｎｍ、１４ｎｍ、１５ｎｍ、１６ｎｍ、１７ｎｍ、１８ｎｍ、１９ｎｍ、２０ｎｍ、２１ｎｍ、２２ｎｍ、２３ｎｍ、２４ｎｍ、２５ｎｍ、２６ｎｍ、２７ｎｍ、２８ｎｍ、２９ｎｍ、３０ｎｍ、３１ｎｍ、３２ｎｍ、３３ｎｍ、３４ｎｍ、３５ｎｍ、３６ｎｍ、３７ｎｍ、３８ｎｍ、３９ｎｍ、４０ｎｍ、４１ｎｍ、４２ｎｍ、４３ｎｍ、４４ｎｍ、４５ｎｍ、４６ｎｍ、４７ｎｍ、４８ｎｍ、４９ｎｍ、５０ｎｍ、５１ｎｍ、５２ｎｍ、５３ｎｍ、５４ｎｍ、５５ｎｍ、５６ｎｍ、５７ｎｍ、５８ｎｍ、５９ｎｍ、６０ｎｍ、６１ｎｍ、６２ｎｍ、６３ｎｍ、６４ｎｍ、６５ｎｍ、６６ｎｍ、６７ｎｍ、６８ｎｍ、６９ｎｍ、７０ｎｍ、７１ｎｍ、７２ｎｍ、７３ｎｍ、７４ｎｍ、７５ｎｍ、７６ｎｍ、７７ｎｍ、７８ｎｍ、７９ｎｍ、８０ｎｍ、８１ｎｍ、８２ｎｍ、８３ｎｍ、８４ｎｍ、８５ｎｍ、８６ｎｍ、８７ｎｍ、８８ｎｍ、８９ｎｍ、９０ｎｍ、９１ｎｍ、９２ｎｍ、９３ｎｍ、９４ｎｍ、９５ｎｍ、９６ｎｍ、９７ｎｍ、９８ｎｍ、９９ｎｍ、１００ｎｍ、１０１ｎｍ、１０２ｎｍ、１０３ｎｍ、１０４ｎｍ、１０５ｎｍ、１０６ｎｍ、１０７ｎｍ、１０８ｎｍ、１０９ｎｍ、１１０ｎｍ、１１１ｎｍ、１１２ｎｍ、１１３ｎｍ、１１４ｎｍ、１１５ｎｍ、１１６ｎｍ、１１７ｎｍ、１１８ｎｍ、１１９ｎｍ、１２０ｎｍ、１２１ｎｍ、１２２ｎｍ、１２３ｎｍ、１２４ｎｍ、１２５ｎｍ、１２６ｎｍ、１２７ｎｍ、１２８ｎｍ、１２９ｎｍ、１３０ｎｍ、１３１ｎｍ、１３２ｎｍ、１３３ｎｍ、１３４ｎｍ、１３５ｎｍ、１３６ｎｍ、１３７ｎｍ、１３８ｎｍ、１３９ｎｍ、１４０ｎｍ、１４１ｎｍ、１４２ｎｍ、１４３ｎｍ、１４４ｎｍ、１４５ｎｍ、１４６ｎｍ、１４７ｎｍ、１４８ｎｍ、１４９ｎｍ、１５０ｎｍ、１５１ｎｍ、１５２ｎｍ、１５３ｎｍ、１５４ｎｍ、１５５ｎｍ、１５６ｎｍ、１５７ｎｍ、１５８ｎｍ、１５９ｎｍ、１６０ｎｍ、１６１ｎｍ、１６２ｎｍ、１６３ｎｍ、１６４ｎｍ、１６５ｎｍ、１６６ｎｍ、１６７ｎｍ、１６８ｎｍ、１６９ｎｍ、１７０ｎｍ、１７１ｎｍ、１７２ｎｍ、１７３ｎｍ、１７４ｎｍ、１７５ｎｍ、１７６ｎｍ、１７７ｎｍ、１７８ｎｍ、１７９ｎｍ、１８０ｎｍ、１８１ｎｍ、１８２ｎｍ、１８３ｎｍ、１８４ｎｍ、１８５ｎｍ、１８６ｎｍ、１８７ｎｍ、１８８ｎｍ、１８９ｎｍ、１９０ｎｍ、１９１���ｍ、１９２ｎｍ、１９３ｎｍ、１９４ｎｍ、１９５ｎｍ、１９６ｎｍ、１９７ｎｍ、１９８ｎｍ、１９９ｎｍ、２００ｎｍ、２０１ｎｍ、２０２ｎｍ、２０３ｎｍ、２０４ｎｍ、２０５ｎｍ、２０６ｎｍ、２０７ｎｍ、２０８ｎｍ、２０９ｎｍ、２１０ｎｍ、２１１ｎｍ、２１２ｎｍ、２１３ｎｍ、２１４ｎｍ、２１５ｎｍ、２１６ｎｍ、２１７ｎｍ、２１８ｎｍ、２１９ｎｍ、２２０ｎｍ、２２１ｎｍ、２２２ｎｍ、２２３ｎｍ、２２４ｎｍ、２２５ｎｍ、２２６ｎｍ、２２７ｎｍ、２２８ｎｍ、２２９ｎｍ、２３０ｎｍ、２３１ｎｍ、２３２ｎｍ、２３３ｎｍ、２３４ｎｍ、２３５ｎｍ、２３６ｎｍ、２３７ｎｍ、２３８ｎｍ、２３９ｎｍ、２４１ｎｍ、２４２ｎｍ、２４３ｎｍ、２４４ｎｍ、２４５ｎｍ、２４６ｎｍ、２４７ｎｍ、２４８ｎｍ、２４９ｎｍ、２５１ｎｍ、２５２ｎｍ、２５３ｎｍ、２５４ｎｍ、２５５ｎｍ、２５６ｎｍ、２５７ｎｍ、２５８ｎｍ、２５９ｎｍ、２６１ｎｍ、２６２ｎｍ、２６３ｎｍ、２６４ｎｍ、２６５ｎｍ、２６６ｎｍ、２６７ｎｍ、２６８ｎｍ、２６９ｎｍ、２７１ｎｍ、２７２ｎｍ、２７３ｎｍ、２７４ｎｍ、２７５ｎｍ、２７６ｎｍ、２７７ｎｍ、２７８ｎｍ、２７９ｎｍ、２８１ｎｍ、２８２ｎｍ、２８３ｎｍ、２８４ｎｍ、２８５ｎｍ、２８６ｎｍ、２８７ｎｍ、２８８ｎｍ、２８９ｎｍ、２９１ｎｍ、２９２ｎｍ、２９３ｎｍ、２９４ｎｍ、２９５ｎｍ、２９６ｎｍ、２９７ｎｍ、２９８ｎｍ、２９９ｎｍ、３００ｎｍ、３０１ｎｍ、３０２ｎｍ、３０３ｎｍ、３０４ｎｍ、３０５ｎｍ、３０６ｎｍ、３０７ｎｍ、３０８ｎｍ、３０９ｎｍ、３１０ｎｍ、３１１ｎｍ、３１２ｎｍ、３１３ｎｍ、３１４ｎｍ、３１５ｎｍ、３１６ｎｍ、３１７ｎｍ、３１８ｎｍ、３１９ｎｍ、３２０ｎｍ、３２１ｎｍ、３２２ｎｍ、３２３ｎｍ、３２４ｎｍ、３２５ｎｍ、３２６ｎｍ、３２７ｎｍ、３２８ｎｍ、３２９ｎｍ、３３０ｎｍ、３３１ｎｍ、３３２ｎｍ、３３３ｎｍ、３３４ｎｍ、３３５ｎｍ、３３６ｎｍ、３３７ｎｍ、３３８ｎｍ、３３９ｎｍ、３４０ｎｍ、３４１ｎｍ、３４２ｎｍ、３４３ｎｍ、３４４ｎｍ、３４５ｎｍ、３４６ｎｍ、３４７ｎｍ、３４８ｎｍ、３４９ｎｍ、３５０ｎｍ、３５１ｎｍ、３５２ｎｍ、３５３ｎｍ、３５４ｎｍ、３５５ｎｍ、３５６ｎｍ、３５７ｎｍ、３５８ｎｍ、３５９ｎｍ、３６０ｎｍ、３６１ｎｍ、３６２ｎｍ、３６３ｎｍ、３６４ｎｍ、３６５ｎｍ、３６６ｎｍ、３６７ｎｍ、３６８ｎｍ、３６９ｎｍ、３７０ｎｍ、３７１ｎｍ、３７２ｎｍ、３７３ｎｍ、３７４ｎｍ、３７５ｎｍ、３７６ｎｍ、３７７ｎｍ、３７８ｎｍ、３７９ｎｍ、３８０ｎｍ、３８１ｎｍ、３８２ｎｍ、３８３ｎｍ、３８４ｎｍ、３８５ｎｍ、３８６ｎｍ、３８７ｎｍ、３８８ｎｍ、３８９ｎｍ、３９０ｎｍ、３９１ｎｍ、３９２ｎｍ、３９３ｎｍ、３９４ｎｍ、３９５ｎｍ、３９６ｎｍ、３９７ｎｍ、３９８ｎｍ、３９９ｎｍ、４００ｎｍ、４０１ｎｍ、４０２ｎｍ、４０３ｎｍ、４０４ｎｍ、４０５ｎｍ、４０６ｎｍ、４０７ｎｍ、４０８ｎｍ、４０９ｎｍ、４１０ｎｍ、４１１ｎｍ、４１２ｎｍ、４１３ｎｍ、４１４ｎｍ、４１５ｎｍ、４１６ｎｍ、４１７ｎｍ、４１８ｎｍ、４１９ｎｍ、４２０ｎｍ、４２１ｎｍ、４２２ｎｍ、４２３ｎｍ、４２４ｎｍ、���２５ｎｍ、４２６ｎｍ、４２７ｎｍ、４２８ｎｍ、４２９ｎｍ、４３０ｎｍ、４３１ｎｍ、４３２ｎｍ、４３３ｎｍ、４３４ｎｍ、４３５ｎｍ、４３６ｎｍ、４３７ｎｍ、４３８ｎｍ、４３９ｎｍ、４４０ｎｍ、４４１ｎｍ、４４２ｎｍ、４４３ｎｍ、４４４ｎｍ、４４５ｎｍ、４４６ｎｍ、４４７ｎｍ、４４８ｎｍ、４４９ｎｍ、４５０ｎｍ、４５１ｎｍ、４５２ｎｍ、４５３ｎｍ、４５４ｎｍ、４５５ｎｍ、４５６ｎｍ、４５７ｎｍ、４５８ｎｍ、４５９ｎｍ、４６０ｎｍ、４６１ｎｍ、４６２ｎｍ、４６３ｎｍ、４６４ｎｍ、４６５ｎｍ、４６６ｎｍ、４６７ｎｍ、４６８ｎｍ、４６９ｎｍ、４７０ｎｍ、４７１ｎｍ、４７２ｎｍ、４７３ｎｍ、４７４ｎｍ、４７５ｎｍ、４７６ｎｍ、４７７ｎｍ、４７８ｎｍ、４７９ｎｍ、４８０ｎｍ、４８１ｎｍ、４８２ｎｍ、４８３ｎｍ、４８４ｎｍ、４８５ｎｍ、４８６ｎｍ、４８７ｎｍ、４８８ｎｍ、４８９ｎｍ、４９０ｎｍ、４９１ｎｍ、４９２ｎｍ、４９３ｎｍ、４９４ｎｍ、４９５ｎｍ、４９６ｎｍ、４９７ｎｍ、４９８ｎｍ、４９９ｎｍ、５００ｎｍ、５０１ｎｍ、５０２ｎｍ、５０３ｎｍ、５０４ｎｍ、５０５ｎｍ、５０６ｎｍ、５０７ｎｍ、５０８ｎｍ、５０９ｎｍ、５１０ｎｍ、５１１ｎｍ、５１２ｎｍ、５１３ｎｍ、５１４ｎｍ、５１５ｎｍ、５１６ｎｍ、５１７ｎｍ、５１８ｎｍ、５１９ｎｍ、５２０ｎｍ、５２１ｎｍ、５２２ｎｍ、５２３ｎｍ、５２４ｎｍ、５２５ｎｍ、５２６ｎｍ、５２７ｎｍ、５２８ｎｍ、５２９ｎｍ、５３０ｎｍ、５３１ｎｍ、５３２ｎｍ、５３３ｎｍ、５３４ｎｍ、５３５ｎｍ、５３６ｎｍ、５３７ｎｍ、５３８ｎｍ、５３９ｎｍ、５４０ｎｍ、５４１ｎｍ、５４２ｎｍ、５４３ｎｍ、５４４ｎｍ、５４５ｎｍ、５４６ｎｍ、５４７ｎｍ、５４８ｎｍ、５４９ｎｍ、５５０ｎｍ、５５１ｎｍ、５５２ｎｍ、５５３ｎｍ、５５４ｎｍ、５５５ｎｍ、５５６ｎｍ、５５７ｎｍ、５５８ｎｍ、５５９ｎｍ、５６０ｎｍ、５６１ｎｍ、５６２ｎｍ、５６３ｎｍ、５６４ｎｍ、５６５ｎｍ、５６６ｎｍ、５６７ｎｍ、５６８ｎｍ、５６９ｎｍ、５７０ｎｍ、５７１ｎｍ、５７２ｎｍ、５７３ｎｍ、５７４ｎｍ、５７５ｎｍ、５７６ｎｍ、５７７ｎｍ、５７８ｎｍ、５７９ｎｍ、５８０ｎｍ、５８１ｎｍ、５８２ｎｍ、５８３ｎｍ、５８４ｎｍ、５８５ｎｍ、５８６ｎｍ、５８７ｎｍ、５８８ｎｍ、５８９ｎｍ、５９０ｎｍ、５９１ｎｍ、５９２ｎｍ、５９３ｎｍ、５９４ｎｍ、５９５ｎｍ、５９６ｎｍ、５９７ｎｍ、５９８ｎｍ、５９９ｎｍ、６００ｎｍ、６０１ｎｍ、６０２ｎｍ、６０３ｎｍ、６０４ｎｍ、６０５ｎｍ、６０６ｎｍ、６０７ｎｍ、６０８ｎｍ、６０９ｎｍ、６１０ｎｍ、６１１ｎｍ、６１２ｎｍ、６１３ｎｍ、６１４ｎｍ、６１５ｎｍ、６１６ｎｍ、６１７ｎｍ、６１８ｎｍ、６１９ｎｍ、６２０ｎｍ、６２１ｎｍ、６２２ｎｍ、６２３ｎｍ、６２４ｎｍ、６２５ｎｍ、６２６ｎｍ、６２７ｎｍ、６２８ｎｍ、６２９ｎｍ、６３０ｎｍ、６３１ｎｍ、６３２ｎｍ、６３３ｎｍ、６３４ｎｍ、６３５ｎｍ、６３６ｎｍ、６３７ｎｍ、６３８ｎｍ、６３９ｎｍ、６４０ｎｍ、６４１ｎｍ、６４２ｎｍ、６４３ｎｍ、６４４ｎｍ、６４５ｎｍ、６４６ｎｍ、６４７ｎｍ、６４８ｎｍ、６４９ｎｍ、６５０ｎｍ、６５１ｎｍ、６５２���ｍ、６５３ｎｍ、６５４ｎｍ、６５５ｎｍ、６５６ｎｍ、６５７ｎｍ、６５８ｎｍ、６５９ｎｍ、６６０ｎｍ、６６１ｎｍ、６６２ｎｍ、６６３ｎｍ、６６４ｎｍ、６６５ｎｍ、６６６ｎｍ、６６７ｎｍ、６６８ｎｍ、６６９ｎｍ、６７０ｎｍ、６７１ｎｍ、６７２ｎｍ、６７３ｎｍ、６７４ｎｍ、６７５ｎｍ、６７６ｎｍ、６７７ｎｍ、６７８ｎｍ、６７９ｎｍ、６８０ｎｍ、６８１ｎｍ、６８２ｎｍ、６８３ｎｍ、６８４ｎｍ、６８５ｎｍ、６８６ｎｍ、６８７ｎｍ、６８８ｎｍ、６８９ｎｍ、６９０ｎｍ、６９１ｎｍ、６９２ｎｍ、６９３ｎｍ、６９４ｎｍ、６９５ｎｍ、６９６ｎｍ、６９７ｎｍ、６９８ｎｍ、６９９ｎｍ、７００ｎｍ、７０１ｎｍ、７０２ｎｍ、７０３ｎｍ、７０４ｎｍ、７０５ｎｍ、７０６ｎｍ、７０７ｎｍ、７０８ｎｍ、７０９ｎｍ、７１０ｎｍ、７１１ｎｍ、７１２ｎｍ、７１３ｎｍ、７１４ｎｍ、７１５ｎｍ、７１６ｎｍ、７１７ｎｍ、７１８ｎｍ、７１９ｎｍ、７２０ｎｍ、７２１ｎｍ、７２２ｎｍ、７２３ｎｍ、７２４ｎｍ、７２５ｎｍ、７２６ｎｍ、７２７ｎｍ、７２８ｎｍ、７２９ｎｍ、７３０ｎｍ、７３１ｎｍ、７３２ｎｍ、７３３ｎｍ、７３４ｎｍ、７３５ｎｍ、７３６ｎｍ、７３７ｎｍ、７３８ｎｍ、７３９ｎｍ、７４０ｎｍ、７４１ｎｍ、７４２ｎｍ、７４３ｎｍ、７４４ｎｍ、７４５ｎｍ、７４６ｎｍ、７４７ｎｍ、７４８ｎｍ、７４９ｎｍ、７５０ｎｍ、７５１ｎｍ、７５２ｎｍ、７５３ｎｍ、７５４ｎｍ、７５５ｎｍ、７５６ｎｍ、７５７ｎｍ、７５８ｎｍ、７５９ｎｍ、７６０ｎｍ、７６１ｎｍ、７６２ｎｍ、７６３ｎｍ、７６４ｎｍ、７６５ｎｍ、７６６ｎｍ、７６７ｎｍ、７６８ｎｍ、７６９ｎｍ、７７０ｎｍ、７７１ｎｍ、７７２ｎｍ、７７３ｎｍ、７７４ｎｍ、７７５ｎｍ、７７６ｎｍ、７７７ｎｍ、７７８ｎｍ、７７９ｎｍ、７８０ｎｍ、７８１ｎｍ、７８２ｎｍ、７８３ｎｍ、７８４ｎｍ、７８５ｎｍ、７８６ｎｍ、７８７ｎｍ、７８８ｎｍ、７８９ｎｍ、７９０ｎｍ、７９１ｎｍ、７９２ｎｍ、７９３ｎｍ、７９４ｎｍ、７９５ｎｍ、７９６ｎｍ、７９７ｎｍ、７９８ｎｍ、７９９ｎｍ、８００ｎｍ、８０１ｎｍ、８０２ｎｍ、８０３ｎｍ、８０４ｎｍ、８０５ｎｍ、８０６ｎｍ、８０７ｎｍ、８０８ｎｍ、８０９ｎｍ、８１０ｎｍ、８１１ｎｍ、８１２ｎｍ、８１３ｎｍ、８１４ｎｍ、８１５ｎｍ、８１６ｎｍ、８１７ｎｍ、８１８ｎｍ、８１９ｎｍ、８２０ｎｍ、８２１ｎｍ、８２２ｎｍ、８２
３ｎｍ、８２４ｎｍ、８２５ｎｍ、８２６ｎｍ、８２７ｎｍ、８２８ｎｍ、８２９ｎｍ、８３０ｎｍ、８３１ｎｍ、８３２ｎｍ、８３３ｎｍ、８３４ｎｍ、８３５ｎｍ、８３６ｎｍ、８３７ｎｍ、８３８ｎｍ、８３９ｎｍ、８４０ｎｍ、８４１ｎｍ、８４２ｎｍ、８４３ｎｍ、８４４ｎｍ、８４５ｎｍ、８４６ｎｍ、８４７ｎｍ、８４８ｎｍ、８４９ｎｍ、８５０ｎｍ、８５１ｎｍ、８５２ｎｍ、８５３ｎｍ、８５４ｎｍ、８５５ｎｍ、８５６ｎｍ、８５７ｎｍ、８５８ｎｍ、８５９ｎｍ、８６０ｎｍ、８６１ｎｍ、８６２ｎｍ、８６３ｎｍ、８６４ｎｍ、８６５ｎｍ、８６６ｎｍ、８６７ｎｍ、８６８ｎｍ、８６９ｎｍ、８７０ｎｍ、８７１ｎｍ、８７２ｎｍ、８７３ｎｍ、８７４ｎｍ、８７５ｎｍ、８７６ｎｍ、８７７ｎｍ、８７８ｎｍ、８７９ｎｍ、８８０ｎｍ、８８１ｎｍ、８８２ｎｍ、８８３ｎｍ、８８４ｎｍ、８８５ｎｍ、８８６ｎｍ、８８７ｎｍ、８８８ｎｍ、８８９ｎｍ、８９０ｎｍ、８９１ｎｍ、８９２ｎｍ、８９３ｎｍ、８９４ｎｍ、８９５ｎｍ、８９６ｎｍ、８９７ｎｍ、８９８ｎｍ、８９９ｎｍ、９００ｎｍ、９０１ｎｍ、９０２ｎｍ、９０３ｎｍ、９０４ｎｍ、９０５ｎｍ、９０６ｎｍ、９０７ｎｍ、９０８ｎｍ、９０９ｎｍ、９１０ｎｍ、９１１ｎｍ、９１２ｎｍ、９１３ｎｍ、９１４ｎｍ、９１５ｎｍ、９１６ｎｍ、９１７ｎｍ、９１８ｎｍ、９１９ｎｍ、９２０ｎｍ、９２１ｎｍ、９２２ｎｍ、９２３ｎｍ、９２４ｎｍ、９２５ｎｍ、９２６ｎｍ、９２７ｎｍ、９２８ｎｍ、９２９ｎｍ、９３０ｎｍ、９３１ｎｍ、９３２ｎｍ、９３３ｎｍ、９３４ｎｍ、９３５ｎｍ、９３６ｎｍ、９３７ｎｍ、９３８ｎｍ、９３９ｎｍ、９４０ｎｍ、９４１ｎｍ、９４２ｎｍ、９４３ｎｍ、９４４ｎｍ、９４５ｎｍ、９４６ｎｍ、９４７ｎｍ、９４８ｎｍ、９４９ｎｍ、９５０ｎｍ、９５１ｎｍ、９５２ｎｍ、９５３ｎｍ、９５４ｎｍ、９５５ｎｍ、９５６ｎｍ、９５７ｎｍ、９５８ｎｍ、９５９ｎｍ、９６０ｎｍ、９６１ｎｍ、９６２ｎｍ、９６３ｎｍ、９６４ｎｍ、９６５ｎｍ、９６６ｎｍ、９６７ｎｍ、９６８ｎｍ、９６９ｎｍ、９７０ｎｍ、９７１ｎｍ、９７２ｎｍ、９７３ｎｍ、９７４ｎｍ、９７５ｎｍ、９７６ｎｍ、９７７ｎｍ、９７８ｎｍ、９７９ｎｍ、９８０ｎｍ、９８１ｎｍ、９８２ｎｍ、９８３ｎｍ、９８４ｎｍ、９８５ｎｍ、９８６ｎｍ、９８７ｎｍ、９８８ｎｍ、９８９ｎｍ、９９０ｎｍ、９９１ｎｍ、９９２ｎｍ、９９３ｎｍ、９９４ｎｍ、９９５ｎｍ、９９６ｎｍ、９９７ｎｍ、９９８ｎｍ、９９９ｎｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１１μｍ、１２μｍ、１３μｍ、１４μｍ、１５μｍ、１６μｍ、１７μｍ、１８μｍ、１９μｍ、２０μｍ、２１μｍ、２２μｍ、２３μｍ、２４μｍ、２５μｍ、２６μｍ、２７μｍ、２８μｍ、２９μｍ、３０μｍ、３１μｍ、３２μｍ、３３μｍ、３４μｍ、３５μｍ、３６μｍ、３７μｍ、３８μｍ、３９μｍ、４０μｍ、４１μｍ、４２μｍ、４３μｍ、４４μｍ、４５μｍ、４６μｍ、４７μｍ、４８μｍ、４９μｍ、または約５０μｍのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約０．１ｎＭか��約１．０ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１ｎＭから約１０ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１ｎＭから約１００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１ｎＭから約２００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１ｎＭから約５０ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１０ｎＭから約１００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１０ｎＭから約２００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約５０ｎＭから約１００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約５０ｎＭから約２００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１００ｎＭから約２００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１５０ｎＭから約２００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約２００ｎＭから約１００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約５００ｎＭから約１０００ｎＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体において、約１μＭから約５０μＭのポリヌクレオチドを含むように、配合されてよい。本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体におけるペプチドの濃度は、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体における、望ましいポリヌクレオチドの濃度、及びポリヌクレオチドに対するペプチドの比率に基づいて算出されてよい。
【００８７】
医薬組成物はまた、約３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、または約７００μｇ／ｍｌ、もしくはそれ以上の、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むように配合されてよい。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または約１００μｇ／ｍｌの、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むように配合されてよい。その他の実施形態において、医薬組成物は、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、または約３００μｇ／ｍｌの、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むように配合されてよい。そのうえその他の実施形態において、医薬組成物は、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、または約５００μｇ／ｍｌの、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むように配合されてよい。さらにその他の実施形態において、医薬組成物は、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、または約７００μｇ／ｍｌ、もしくはそれ以上の、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含むように配合されてよい。
【００８８】
ＩＩＩ．使用法
他の態様において、本発明は、当該ポリヌクレオチドを、細胞の細胞質にトランスフェクションするための、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の使用法を包含する。いくつか実施形態において、当該細胞は、イン・ビトロにある。その他の実施形態において、当該細胞は、イン・ビボにある。したがって、本発明はまた、治療を必要とする対象において、細胞の細胞質に、当該ポリヌクレオチドをトランスフェクションするための、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の使用法を提供する。一般的に言えば、本発明の方法は、ポリヌクレオチドのトランスフェクションに適した条件下で、細胞を本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体と接触させることを含む。適切な細胞及び条件は、上述のセクションＩにおいて、記述されている。細胞がイン・ビボにある実施形態において、本発明の方法は、典型的に、治療を必要とする対象に、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物を投与することを含む。適切な医薬組成物については、セクションＩＩで記述される。
【００８９】
他の態様において、本発明は、対象の病態の治療法を包含する。この方法は、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む、医薬組成物の治療に有効な量を、それらを必要とする対象に投与することを含む。本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、当該ペプチド・ポリヌクレオチド複合体のポリヌクレオチドを、対象の細胞に効率的にトランスフェクション、または送達することができる。
【００９０】
いくつかの実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、細胞内で発現する核酸配列の発現を、調節または阻害することができる、非コードＲＮＡを含む。細胞内で発現する核酸配列の発現を、調節または阻害することができるポリヌクレオチドを、効率的にトランスフェクションすることによって、本発明の方法は、通常、細胞内で発現する核酸配列の発現を、調節または阻害することによって、治療され得る任意の病態の治療に使用されてよい。いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、対象において、ＮＦκＢ介在性病態の治療に、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を、対象に投与する方法を包含する。その他の好ましい実施形態において、本発明は、対象において、ＳＴＡＴ３異常調節に関連する病態の治療に、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を、対象に投与する方法を包含する。その他の好ましい実施形態において、本発明は、ＪＮＫ２調節異常に関連する病態の治療に、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を、対象に投与する方法を包含する。特定の病気とは？
【００９１】
その他の実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、その対象に不完全なまたは欠失しているタンパク質をコードする、ＤＮＡを含む。対象において、不完全なまたは欠失しているタンパク質によって特徴づけられる、疾患の非限定的な例示には、下位運動ニューロン疾患、ポンペ病、リソソーム蓄積症、及び多形性膠芽腫を含む。好ましい実施形態において、本発明のポリヌクレオチドは、リソソーム蓄積症を有する対象において、不完全なまたは欠失しているタンパク質をコードするＤＮＡを含む。酵素補充療法は、特にリソソーム蓄積症に十分に適しており、及び本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、リソソーム蓄積症を有する対象において、不完全なまたは欠失しているタンパク質をコードする、発現カセットまたはベクターを、その対象の細胞質にトランスフェクションするために、使用されてよい。リソソーム蓄積症には、活性化因子欠損症／ＧＭ２ガングリオシドーシス、アルファ−マンノシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、コレステロールエステル蓄積症、慢性ヘキソサミニダーゼ欠損症、シスチン症、ダノン病、ファブリ病、ファーバー病、フコシドーシス、ガラクトシアリドーシス、ゴーシェ病（Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型）、ＧＭ１ガングリオシドーシス（乳児型、遅発乳児型／若年型、成人型／慢性）、Ｉ細胞病／ムコリピドーシスＩＩ、乳児型遊離シアル酸蓄積症／ＩＳＳＤ、若年型ヘキソサミニダーゼ欠損症、クラッベ病（乳児発症型、遅発型）、異染性白質萎縮、ムコ多糖蓄積症（偽ハーラー多発性ジストロフィー／ムコリピドーシスＩＩＩＡ）、ＭＰＳＩハーラー症候群、ＭＰＳＩシャイエ症候群、ＭＰＳＩハーラー・シャイエ症候群、ＭＰＳＩＩハンター症候群、サンフィリポ症候群Ａ型／ＭＰＳ  ＩＩＩＡ、サンフィリポ症候群Ｂ型／ＭＰＳ  ＩＩＩＢ、サンフィリポ症候群Ｃ型／ＭＰＳＩＩＩＣ、サンフィリポ症候群型Ｄ型／ＭＰＳ  ＩＩＩＤ、モルキオ病Ａ型／ＭＰＳ  ＩＶＡ、モルキオ病Ｂ型／ＭＰＳ  ＩＶＢ、ＭＰＳ  ＩＸヒアルロニダーゼ欠損症、ＭＰＳ  ＶＩマロトー・ラミー症候群、ＭＰＳ  ＶＩＩスライ症候群、ムコリピドーシスＩ／シアリドーシス、ムコリピドーシスＩＩＩＣ、ムコリピドーシスＩＶ型）、多重スルファターゼ欠損症、ニーマン・ピック病（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型）、神経セロイドリポフスチン症（ＣＬＮ６病（非定型後期乳児型、後期発症変異型、早期若年型）、バッテン・シュピールマイアー・フォークト／若年性ＮＣＬ／ＣＬＮ３病、フィンランドバリアント後期乳児型ＣＬＮ５、ヤンスキー・ビールショウスキー病／後期乳児型ＣＬＮ２／ＴＰＰ１病、クフス病／成人発症型ＮＣＬ／ＣＬＮ４病、北部てんかん／バリアント後期乳児型ＣＬＮ８、サンタブオリ・ハルチア病／乳児型ＣＬＮ１／ＰＰＴ病、ベータ−マンノシドーシス、ポンペ病／糖原病ＩＩ型、濃化異骨症、サンドホフ病／成人発症型／ＧＭ２ガングリオシドーシス、サンドホフ病／ＧＭ２ガングリオシドーシス−乳児型、サンドホフ病／ＧＭ２ガングリオシドーシス−若年型、シンドラー病、サラ病／シアル酸蓄積症、テイ・サックス病／ＧＭ２ガングリオシドーシス、ウォルマン病を含むが、それらに限定されない。例示的な実施形態において、当該対象は、ゴ��シェ病、ファブリ病、ＭＰＳ  Ｉ、ＭＰＳ  ＩＩ]、ＭＰＳ  ＶＩ及び糖原病ＩＩ型からなる群から選択される、疾患に対する治療を必要としている。
【００９２】
当該ペプチド、当該ポリヌクレオチド及びペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、セクションＩに記述の通りであってよい。本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物は、セクションＩＩに記述の通りであってよい。本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を投与する方法、及び病態を治療する方法は、後述される。
【００９３】
（ａ）治療を必要とする対象への投与
一態様において、本発明は、治療を必要とする対象に対して、治療に有効な量の医薬組成物を投与することを包含する。本明細書において使用される用語、「治療を必要とする対象」とは、予防または治療処置を必要とする対象を指す。対象は、げっ歯類、ヒト、家畜動物、愛玩動物、または、動物学上の動物であってよい。１つの実施形態において、対象は、げっ歯類、例えばマウス、ラット、モルモットなどであってよい。他の実施形態において、対象は、家畜動物であってよい。適切な家畜動物の非限定的な例示には、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ラマ及びアルパカを含む。さらに他の実施形態において、対象は、愛玩動物であってよい。愛玩動物の非限定的な例示には、イヌ、ネコ、ウサギ、及び鳥類などのペットが含まれてよい。そのうえ他の実施形態において、対象は、動物学上の動物であってよい。本明細書において使用される、「動物学上の動物」とは、動物園において見られる動物をいう。そのような動物には、非ヒト霊長類、大型ネコ、オオカミ、及びクマを含む。好ましい実施形態において、対象は、マウスである。他の好ましい実施形態において、対象は、ヒトである。
【００９４】
セクションＩＩで記述されたように、本発明の医薬組成物は、その目的の投与経路に適合するように配合される。適切な投与経路には、非経口、経口、肺内、経皮、経粘膜、及び直腸投与を含む。好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、注射により投与される。
【００９５】
当業者は、対象に投与される、当該組成物の量及び濃度は、一部としてその対象及びその投与目的に依存することを、認識されよう。最適な量を決定する方法は、当該技術分野では公知である。一般に、医薬組成物における、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体の濃度は、セクションＩＩに記述された通りであってよい。
【００９６】
本発明の組成物は、典型的に、対象に利益を与えるのに十分な量で、治療を必要とする対象に投与される。この量は、「治療に有効な量」と定義される。治療に有効な量は、特定の組成物の効力または効能、治療されている疾患、投与の期間または頻度、投与の方法、及びその対象の特定の治療反応を含む、対象の体格及び病態によって、決定されてよい。治療に有効な量は、当該技術分野で公知の方法を用いて決定されてよく、及びマウスなどのモデル動物において決定される、治療に有効な量から誘導され、またはそれらの組み合わせで、実験的に決定されてよい。さらに、投与経路は、その治療に有効な量を決定する際に、考慮されてよい。治療的に有効な量の決定において、当業者はまた、特定の対象における特定の化合物の投与に伴う、副作用の有無、性質、及びその程度を考慮することができる。
【００９７】
本発明の医薬組成物が、注射により対象に投与される場合、組成物は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０、または約１００ｍｇ／ｋｇ、もしくはそれ以上の量を、ボーラス投与で、その対象へ投与されてよい。いくつかの実施形態において、本発明の医薬組成物は、約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、または約５ｍｇ／ｋｇの量で、対象に投与される。その他の実施形態において、本発明の医薬組成物は、約５、５．５、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、または約１５ｍｇ／ｋｇの量で、対象に投与される。そのうえその他の実施形態において、本発明の医薬組成物は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または約３０ｍｇ／ｋｇの量で、対象に投与される。その他の実施形態において、本発明の医薬組成物は、約３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、または約４５ｍｇ／ｋｇの量で、対象に投与される。追加の実施形態において、本発明の医薬組成物は、約４５、４６、４７、４８、４９、５０、６０、７０、８０、９０、または約１００ｍｇ／ｋｇもしくはそれ以上の量で、対象に投与される。好ましい実施形態において、医薬組成物は、約０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、または約１．５ｍｇ／ｋｇの量を、ボーラス投与で、対象に投与される。
【００９８】
組成物はまた、一定期間にわたって、当該対象への２回以上のボーラス投与の注入で、投与されてよい。例えば、組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上のボーラス投与の注入で、当該対象に投与されてよい。いくつかの実施形態において、組成物は、１、２、３、４、または５回のボーラス投与の注入で、当該対象に投与される。その他の実施形態において、組成物は、５、６、７、８、９、１０回もしくはそれ以上のボーラス投与の注入で、当該対象に投与される。好ましい実施形態において、組成物は、２，３、または４回のボーラス投与の注入で、当該対象に投与される。このボーラス投与は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１時間毎、もしくは約１２時間毎に注入されてよく、またはそれらは、約１、２、３、４、５、６日毎、もしくは約７日毎に注入されてよい。好ましい実施形態において、ボーラス投与は、ほぼ毎日注入されてよい。
【００９９】
（ｂ）ＮＦκＢ介在性病態の治療
前述のように、本発明の方法は、対象におけるＮＦκＢ介在性病態の治療に使用されてよい。本発明の方法は、ＮＦκＢシグナル伝達経路に通常関連する核酸配列の発現を破壊することによって、対象におけるＮＦκＢ介在性病態の治療に、使用されてよい。本発明の方法は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路、非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路、または古典的及び非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の両方に通常関連する核酸配列の発現を破壊することによって、対象におけるＮＦκＢ介在性病態の治療に、使用されてよい。実施例において記述されるように、本出願者らは驚くことに、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路及び非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路に通常関連する核酸配列の発現を破壊することが、相乗効果を発揮することを、発見した。用語「相乗効果を発揮する」とは、２つ以上の物質が、各物質の効果を個別に加算した以上の効果を生成するように、相乗効果を発揮して作用する場合の、その効果を指す。相乗作用の１つの尺度は、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ併用指数法によって示され得る。このＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ指数法は、メジアン効果方程式に基づいており、及び質量作用法の原理から派生したもので、１つのエンティティと複数のエンティティ、及び最初の次数と高次の次数の動力学をリンクする理論であり、ミカエリス・メンテン、ヒル、ヘンダーソン・ハッセルバルヒ、スキャッチャードの式を包含している。このＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ併用指数法は、相加作用は、ＣＩ＝１となり、相乗作用は、ＣＩ＜１となり、及び交互作用は、ＣＩ＞１となるような、併用指数（ＣＩ）となる。Ｔｉｎｇ−Ｃｈａｏ  Ｃｈｏｕ、２００８、Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｖｅｒｓｕｓ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ、Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ＆  Ｌｙｍｐｈｏｍａ、４９：２０５９−２０８０を参照されたし。
【０１００】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路と通常関連する核酸配列の発現を破壊することにより、対象におけるＮＦκＢ介在性病態の治療に使用される。実施形態の例示的な選択肢において、対象におけるＮＦκＢ介在性病態は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、転写因子ｐ６５サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することにより治療される。
【０１０１】
その他の実施形態において、本発明の方法は、非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路と通常関連する核酸配列の発現を破壊することにより、対象におけるＮＦκＢ介在性病態の治療に使用される。実施形態の例示的な選択肢において、対象におけるＮＦκＢ介在性病態は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、転写因子ｐ１００／ｐ５２サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することにより治療される。
【０１０２】
好ましい実施形態において、本発明の方法は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路と通常関連する核酸配列、及び非古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路と通常関連する核酸配列の発現を破壊することにより、対象におけるＮＦκＢ介在性病態の治療に使用される。実施形態の例示的な選択肢において、対象におけるＮＦκＢ介在性病態は、古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、転写因子ｐ６５サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊すること、及び古典的ＮＦκＢシグナル伝達経路の、転写因子ｐ１００／ｐ５２サブユニットをコードする核酸配列の発現を破壊することにより治療される。
【０１０３】
用語「ＮＦκＢ介在性病態）」は、ＮＦκＢシグナル伝達経路における、シグナル伝達の異常調節によって引き起こされる可能性がある、任意の病態を記述するために使用され得る。ＮＦκＢ介在性症状の、非限定的な例示には、炎症性疾患、自己免疫疾患、移植拒絶反応、骨粗鬆症、がん、関節炎、アルツハイマー病、関節炎、アテローム性動脈硬化症、ウイルス感染症、または毛細血管拡張性運動失調症を含んでよい。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、炎症性疾患の治療に使用される。その他の実施形態において、本発明の方法は、自己免疫疾患の治療に使用される。そのうえその他の実施形態において、本発明の方法は、移植拒絶反応の治療に使用される。その他の実施形態において、本発明の方法は、骨粗鬆症の治療に使用される。追加の実施形態において、本発明の方法は、アルツハイマー病の治療に使用される。その他の実施形態において、本発明の方法は、アテローム性動脈硬化症の治療に使用される。その他の実施形態において、本発明の方法は、ウイルス感染症の治療に使用される。さらにその他の実施形態において、本発明の方法は、毛細血管拡張性運動失調症の治療に使用される。
【０１０４】
ｉ．がんの治療
好ましい実施形態において、本発明の方法は、新生物またはがんの治療に使用される。当該新生物は、悪性または良性であってよく、当該がんは、原発性または転移性であってよく、当該新生物またはがんは、初期段階または後期段階であってよい。がんまたは新生物は、対象のがん腫瘍に、核酸配列を送達することによって治療されてよい。当該がんまたは新生物は、がん細胞の成長を遅らせるか、またはがん細胞を死滅させることによって治療されてよい。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体のポリヌクレオチドは、イン・ビボで、対象におけるがん細胞に、当該ナノ粒子のポリヌクレオチドを送達することにより、がんまたは新生物を治療することができる。本発明の方法で治療され得る新生物またはがんの、非限定的な例示には、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、星細胞腫（小児小脳型または大脳型）、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳幹神経膠腫、脳腫瘍（小脳星細胞腫、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、視覚経路膠腫と視床下部膠腫）、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍（小児型、消化管型）、原発部位不明のがん、中枢神経系リンパ腫（原発性）、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頸がん、小児がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、大腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、線維形成性小円形細胞腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、ユーイングファミリー腫瘍のユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫（小児型）、性腺外胚細胞腫瘍、肝臓外胆管がん、眼腫瘍（眼内黒色腫、網膜芽細胞腫）、胆嚢がん、胃（腹部）がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、生殖細胞腫瘍（小児頭蓋外型、性腺外型、卵巣型）、妊娠絨毛腫瘍、神経膠腫（成人型、小児脳幹型、小児大脳星細胞、小児視覚経路型及び視床下部型）、胃カルチノイド、有毛細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、視床下部及び視覚経路神経膠腫（小児型）、眼内黒色腫、膵島細胞がん、カポジ肉腫、腎がん（腎細胞がん）、喉頭がん、白血病（急性リンパ性、急性骨髄性、慢性リンパ性、慢性骨髄性、毛細胞性）、口唇及び口腔内がん、肝臓がん（原発性）、肺がん（非小細胞、小細胞）、リンパ腫（ＡＩＤＳ関連型、バーキット型、皮膚Ｔ細胞型、ホジキン型、非ホジキン型、原発性中枢神経系）、マクログロブリン血症（ワルデンストレーム）、骨／骨肉腫の悪性線維性組織球腫、髄芽腫（小児型）、黒色腫、眼内黒色腫、メルケル細胞がん、中皮腫（成人悪性型、小児型）、原発不明転移性扁平上皮性頸部がん、口腔がん、多発性内分泌腫瘍症候群（小児型）、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病（慢性）、骨髄性白血病（成人急性、小児急性）、多発性骨髄腫、骨髄増殖性疾患（慢性）、鼻腔及び副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん、中咽頭がん、骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫、卵巣がん、卵巣上皮がん（表面上皮間質腫瘍）、卵巣胚芽細胞腫、卵巣低悪性度腫瘍、膵がん、膵がん（膵島細胞）、副鼻腔及び鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体星細胞腫、松果体胚腫、松果体芽腫及びテント上原始神経外胚葉性腫瘍（小児型）、下垂体腺腫、形質細胞性腫瘍、胸膜肺芽腫、原発中枢神経系リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん（腎がん）、腎盂及び尿管の移行上皮がん、横紋筋肉腫（小児型）、唾液腺がん、肉腫（ユーイング家族腫瘍型、カポジ型、軟組織型、子宮型）、セザリー症候群、皮膚がん（非黒色腫、黒色腫）、皮膚がん（メルケル細胞）、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、扁平上皮がん、原発不明扁平上皮性頸部がん（転移性）、胃がん、テント上原始神経外胚葉性腫瘍（小児型）、Ｔ細胞リンパ腫（皮膚）、Ｔ細胞白血病及びリンパ腫、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫（小児型）、胸腺腫及び胸腺がん、甲状腺がん、甲状腺がん（小児型）、腎骨盤及び尿管の移行上皮がん、絨毛腫瘍（妊娠性）、原発不明な部位（成人型、小児型）、尿管及び腎盂の移行上皮がん、尿道がん、子宮がん（内膜）、子宮肉腫、膣がん、視覚経路及び視床下部膠腫（小児型）、外陰がん、ワルデンストレーム型マクログロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍（小児型）を含んでよい。好ましい実施形態において、本発明の方法は、Ｔ細胞白血病及びリンパ腫の治療に使用される。例示的な実施形態において、本発明の方法は、ヒトＴリンパ好性ウイルス−１（ＨＴＬＶ−１）誘発性成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫（ＡＴＬＬ）の治療に使用される。
【０１０６】
その他の実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体のポリヌクレオチドは、イン・ビトロで、がん細胞に送達されてよい。例えば、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体のポリヌクレオチドは、イン・ビトロでがん細胞株に送達されてよい。がん細胞は、イン・ビトロで培養された、がん細胞株であってよい。実施形態のいくつかの選択肢において、がん細胞株は、いまだに記述されていない初代細胞株であってよい。初代がん細胞株を作製する方法は、当業者に公知の標準的な技術を利用する。その他の選択肢において、がん細胞株は、樹立されたがん細胞株であってよい。がん細胞株は、接着性もしくは非接着性であってよく、または細胞株は、当業者に公知の標準技術を用いた、接着性、非接着性もしくは器官型増殖を高める条件下で、成長してよい。がん細胞株は、接触阻害または非接触阻害していてよい。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、当該がん細胞株は、腫瘍由来の樹立されたヒト細胞株であってよい。腫瘍由来のがん細胞株の非限定的な例示には、骨肉腫細胞株の１４３Ｂ、ＣＡＬ−７２、Ｇ−２９２、ＨＯＳ、ＫＨＯＳ、ＭＧ−６３、Ｓａｏｓ−２、及びＵ−２ＯＳ、前立腺がん細胞株のＤＵ１４５、ＰＣ３及びＬｎｃａｐ、乳がん細胞株のＭＣＦ−７、ＭＤＡ−ＭＢ−４３８及びＴ４７Ｄ、骨髄性白血病細胞株のＴＨＰ−１、神経膠芽腫細胞株のＵ８７、神経芽腫細胞株のＳＨＳＹ５Ｙ、骨がん細胞株のＳａｏｓ−２、大腸がん細胞株のＷｉＤｒ、ＣＯＬＯ３２０ＤＭ、ＨＴ２９、ＤＬＤ−１、ＣＯＬＯ２０５、ＣＯＬＯ２０１、ＨＣＴ−１５、ＳＷ６２０、ＬｏＶｏ、ＳＷ４０３、ＳＷ４０３、ＳＷ１１１６、ＳＷ１４６３、ＳＷ８３７、ＳＷ９４８、ＳＷ１４１７、ＧＰＣ−１６、ＨＣＴ−８ＨＣＴ１１６、ＮＣＩ−Ｈ７１６、ＮＣＩ−Ｈ７４７、ＮＣＩ−Ｈ５０８、ＮＣＩ−Ｈ４９８、ＣＯＬＯ３２０ＨＳＲ、ＳＮＵ−Ｃ２Ａ、ＬＳ１８０、ＬＳ１７４Ｔ、ＭＯＬＴ−４、ＬＳ５１３、ＬＳ１０３４、ＬＳ４１１Ｎ、Ｈｓ６７５．Ｔ、ＣＯ８８ＢＶ５９−１、Ｃｏ８８ＢＶ５９Ｈ２１−２、Ｃｏ８８ＢＶ５９Ｈ２１−２Ｖ６７−６６、１１１６−ＮＳ−１９−９、ＴＡ９９、ＡＳ３３、ＴＳ１０６、Ｃａｃｏ−２、ＨＴ−２９、ＳＫ−ＣＯ−１、ＳＮＵ−Ｃ２Ｂ及びＳＷ４８０、Ｂ１６−Ｆ１０、ＲＡＷ２６４．７、Ｆ８細胞株、ならびに膵がん細胞株のＰａｎｃ１を含んでよい。例示的な実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、Ｆ８細胞株に投与されてよい。他の例示的な実施形態において、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、Ｂ１６−Ｆ１０細胞株に投与されてよい。
【０１０８】
ｉｉ．関節炎の病態の治療
その他の好ましい実施形態において、本発明の方法は、関節炎の病態の治療に使用される。関節炎の病態の非限定的な例示には、変形性関節症、関節リウマチ、痛風及び擬痛風、敗血症性関節炎、強直性脊椎炎、若年性特発性関節炎、スティル病、狼瘡、または感染もしくは治療によって引き起こされた関節炎を含む。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、変形性関節症の治療に使用される。その他の実施形態において、本発明の方法は、関節リウマチの治療に使用される。そのうえその他の実施形態において、本発明の方法は、痛風の治療に使用される。その他の実施形態において、本発明の方法は、擬痛風の治療に使用される。追加の実施形態において、本発明の方法は、敗血症性関節炎の治療に使用される。その他の実施形態において、本発明の方法は、強直性脊椎炎の治療に使用される。さらにその他の実施形態において、本発明の方法は、若年性特発性関節炎の治療に使用される。その他の実施形態において、本発明の方法は、スティル病の治療に使用される。追加の実施形態において、本発明の方法は、狼瘡の治療に使用される。そのうえその他の実施形態において、本発明の方法は、感染または治療によって引き起こされた関節炎の治療に使用される。例えば、本発明の方法は、コラーゲン抗体誘発性関節炎によって引き起こされた、関節炎の治療に使用される。
【０１０９】
本明細書において使用される用語「関節炎の病態を治療すること」は、関節炎の症状の緩和を記述するために使用されてよい。関節炎の症状の、非限定的な例示には、リウマチの種類によらず、様々な疼痛のレベル、腫れ、関節のこわばり、手の使用または歩行の困難、倦怠感及び疲れ、体重減少、睡眠不足、筋肉痛及び疼痛、圧痛、及び関節を動かすことの困難などを含む。関節炎の症状を測定する方法は、当該技術分野では公知であり、及び関節炎スコアを用いて、または画像に基づく測定法を用いて、足首などの関節炎の関節の厚みを測定することを含んでよい。
【０１１０】
いくつかの実施形態において、関節炎の症状は、足首の厚みによって測定される。それゆえ、本発明の方法を用いて、関節炎の病態を治療することは、当該医薬組成物で治療されていない対象と比較した場合に、本発明の医薬組成物で治療された対象において、足首の厚みの増加を防止することであってよい。
【０１１１】
その他の実施形態において、関節炎の症状は、関節炎スコアを用いて測定される。関節炎スコアを測定する方法は、当該技術分野で知られており、及び米国リウマチ学会（ＡＣＲ）スコア、関節リウマチ重症度尺度（ＲＡＳＳ）、またはＡＣＲ／ＥＵＬＡＲ関節リウマチ分類基準を含んでよい。それゆえ、本発明の方法を用いて関節炎の病態を治療することは、当該医薬組成物で治療されていない対象と比較した場合に、本発明の医薬組成物で治療された対象において、関節炎スコアの上昇を防止することであってよい。例えば、本発明の方法を用いて関節炎の病態を治療することは、ＡＣＲ／ＥＵＬＡＲ関節リウマチ分類基準を用いて、約１、２、３、４、５、６、７、８、または９を上回る、関節炎スコアの上昇を防ぐことであってよい。好ましい実施態様において、本発明の方法を用いて関節炎の病態を治療することは、約１、２、または約３を上回る、関節炎スコアの上昇を防ぐことであってよい。
【０１１２】
そのうえその他の実施形態において、関節炎の症状は、画像に基づく測定法を用いて測定される。画像に基づく測定法を利用して、関節炎の症状を測定する方法は、当該技術分野で公知であり、及びＨｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１  Ｊ  Ａｃｏｕｓｔ  Ｓｏｃ  Ａｍ．１２９：３７５６、Ｈｕｇｈｅｓ  ２０１１  ＩＥＥＥ  Ｔｒａｎｓ  Ｕｌｔｒａｓｏｎ  Ｆｅｒｒｏｅｌｅｃｔｒ  Ｆｒｅｑ  Ｃｏｎｔｒｏｌ．５８：２３６１−２３６９、Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．３３：１２３６−１２４３、  Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃｏｕｓｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ．１２１：３５４２−３５５７、  Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３  Ｊ  Ａｃｏｕｓｔ  Ｓｏｃ  Ａｍ．１３３：２８３−３００、Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃｏｕｓｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ．１２６：２３５０−２３５８に記述されているような、超音波分子画像の使用を含んでよく、それらの開示は、その内容全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１３】
（ｃ）ＳＴＡＴ３異常調節に関連する病態の治療
いくつかの実施形態において、本発明は、対象おいて、ＳＴＡＴ３異常調節に関連する病態の治療に対して、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を、その対象に投与する方法を包含する。いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、対象において、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することにより、その対象におけるＳＴＡＴ３異常調節に関連する病態の治療に、使用される。例えば、本発明の方法は、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することにより、がんの治療に使用されてよい。がんまたは新生物は、セクションＩＩＩ（ｃ）ｉに記述される通りであってよい。当該がんまたは新生物は、がん細胞の成長を遅らせることによって、または血管新生を防ぐことによって、治療されてよい。いくつかの実施形態において、当該がんまたは新生物は、がん細胞の成長を遅らせることによって治療される。その他の実施形態において、当該がんまたは新生物は、血管新生を防止することにより治療される。用語「血管新生」とは、組織中の新しい血管の形成、増殖するための内皮細胞の刺激、または増殖する内皮細胞の生存の促進を意味する。好ましい実施形態において、本発明は、対象において、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することにより、その対象のがんの治療に使用される。例示的な実施形態において、本発明は、がん細胞の成長を遅らせることにより、対象におけるＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することによって、その対象のがんの治療に使用される。他の実施形態において、本発明は、血管新生を防止することにより、対象におけるＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することによって、その対象のがんの治療に使用される。
【０１１４】
ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、ＳＴＡＴ３タンパク質の発現レベルを低下させることができる。ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することでも、ＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡのレベルを低下させることができる。例えば、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、ＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡのレベルを、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または約１０倍、もしくはそれ以上、低下させることができる。いくつかの実施形態において、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、ＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡのレベルを、約１、２、３、４、または約５倍、低下させる。その他の実施形態において、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、ＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡのレベルを、約５、６、７、８、９、または約１０倍、もしくはそれ以上、低下させる。
【０１１５】
一般に、通常、細胞内で発現する核酸配列の発現の破壊に対応した、本発明の医薬組成物の効力を測定する滴定曲線が、ＩＣ５０の決定に、作成されてよい。例えば、細胞内でＳＴＡＴ３の発現を破壊することができる、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物のＩＣ５０は、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または約１００ｎＭ、もしくはそれ以上であってよい。いくつかの実施形態において、細胞内でＳＴＡＴ３の発現を破壊することができる、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物のＩＣ５０は、約１０、１５、２０、２５、または約３０ｎＭである。その他の実施形態において、細胞内でＳＴＡＴ３の発現を破壊することができる、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物のＩＣ５０は、約３０、３５、４０、４５、５０、５５、または約６０ｎＭである。そのうえその他の実施形態において、細胞内でＳＴＡＴ３の発現を破壊することができる、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物のＩＣ５０は、約６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または約１００ｎＭ、もしくはそれ以上である。好ましい実施形態において、細胞内でＳＴＡＴ３の発現を破壊することができる、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を含む医薬組成物のＩＣ５０は、約４０、４５、５０、５５、または約７０ｎＭである。
【０１１６】
ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、血管新生を防ぐことができる。血管新生を測定する方法は、当該技術分野で知られており、及び実施例に記述の通りであってもよく、ならびにマトリゲルチューブ形成アッセイ、及びトランスウェル細胞遊走アッセイを含んでよい。ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、マトリゲルチューブ形成を、約３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、または約９５％、もしくはそれ以上、低下させることができる。いくつかの実施形態において、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、マトリゲルチューブ形成を、約３０、３５、４０、４５、または約５０％、低下させる。その他の実施形態において、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、マトリゲルチューブ形成を、約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、または約９５％、もしくはそれ以上、低下させる。好ましい実施形態において、ＳＴＡＴ３をコードする核酸配列の発現を破壊することで、マトリゲルチューブ形成を、約５０、５５、６０、６５、または約７０％低下させる。
【０１１７】
（ｄ）ＪＮＫ２異常調節に関連する病態の治療
その他の実施形態において、本発明は、対象における、ＪＮＫ２異常調節に関する病態の治療に対して、本発明のペプチド・ポリヌクレオチド複合体を、対象に投与する方法を包含する。例示的な実施形態において、本発明は、対象における、ＪＮＫ２をコードする核酸配列の発現を破壊することによって、その対象のＪＮＫ２異常調節に関する病態の治療に、使用される。例えば、本発明の方法は、JＮＫ２をコードする核酸配列の発現を破壊することによって、アテローム性動脈硬化症の治療に、使用されてよい。いくつかの好ましい実施形態において、アテローム性動脈硬化症は、泡沫細胞形成を遮断することにより治療される。泡沫細胞形成は、アテローム斑の特徴であり、及びそれらが、特定の病巣に蓄積し、結果としてアテローム性動脈硬化症の壊死中心を形成する場合に、問題になる可能性がある。例示的な実施形態において、当該複合体のポリヌクレオチドが抗ＪＮＫ２のｓｉＲＮＡである、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体は、泡沫細胞形成を遮断するために使用される。
【０１１８】
ＩＶ．キット
本発明の他の態様は、キットを包含する。このキットは、本発明のペプチドを含む第１の組成物、及び必要に応じてポリヌクレオチドを含む第２の組成物を含む。あるいは、目的とするポリヌクレオチドは、当該キットの利用者によって提供されていてよい。キットにより提供される説明書に従うことにより、当該キットの利用者は、本発明のペプチドを含む組成物と、ポリヌクレオチドを含む組成物とを混合し、ペプチド・ポリヌクレオチド複合体を形成することができる。当該キットの説明書には、当該ペプチドと当該ポリヌクレオチドとを、適当な割合で混合する指示が含まれていてよい。適切な割合は、セクションＩで前述されている。当該キットにはまた、適当な緩衝液、水、架橋試薬またはアルブミンを含んでよい。
【０１１９】
定義
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指して、本明細書では同義に使用される。当該用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、天然に存在するアミノ酸、ならびに、天然に存在するアミノ酸ポリマー、変性残基を含むもの、及び非天然のアミノ酸ポリマーに相応する、人工化学的な模倣体であるアミノ酸ポリマーに適用される。
【０１２０】
２つ以上のペプチドに関連して、用語「相同の」、「同一の」、またはパーセントの「同一性」とは、以下に記述されるデフォルトのパラメータを伴った、ＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用して、または手動によるアライメント及び目視検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイト  ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／などを参照）による測定で、同一（すなわち、比較ウィンドウまたは指定領域にわたり、最大の一致に対応して、比較及びアライメントさせた場合、特定の領域にわたり約６０％の同一性、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは、それ以上の同一性）であるアミノ酸残基の、特定の割合を有する、２つ以上の配列または部分配列を指す。この定義にはまた、欠失及び／または付加を有する配列、ならびに置換、同様に自然発生の、例えば、多形またはアレル変異体、及び人工変異体を有する配列を含む。以下に記述されるように、好ましいアルゴリズムは、ギャップなどを考慮することができる。
【０１２１】
用語「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」とは、自然の状態で見出されれば、通常、伴っている成分を、実質的にまたは本質的に含まない物質を指す。純度及び同質性は、典型的に、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高性能液体クロマトグラフィーなどの、分析化学技術を使用して決定される。調製物中に存在する、主要な種であるタンパク質または核酸は、実質的に精製される。いくつかの実施形態における、用語「精製された」とは、核酸またはタンパク質が、電気泳動ゲルにおいて、本質的に１つのバンドを生じることを意味する。好ましくは、それは、核酸またはタンパク質が、少なくとも純度８５％、より好ましくは、少なくとも純度９５％、及び最も好ましくは、少なくとも純度９９％であることを意味する。その他の実施形態における、「精製する」または「精製」は、精製された組成物から、少なくとも１つの混入物質を除去することを意味する。この意味において、精製は、その精製された化合物が、同質であること、例えば、純度１００％である必要はない。
【０１２２】
以下の実施例は、本開示の好ましい実施形態の提示を含んでいる。以下に続くこれらの実施例において開示される技術は、本開示の実践において良好に機能する、本発明者らによって発見された技術を表し、及びしたがって、その実践に対しては、より好ましい方法が構成されると考え得ることを、当業者には、理解されるものとする。しかしながら、本開示に照らして、開示された特定の実施形態において、多くの変更が可能であり、及び本開示の趣旨及び範囲を逸脱することなく、なお類似のまたは同様の結果を得ることができることを、当業者には、理解されるものとする。
【実施例】
【０１２３】
実施例１：ｓｉＲＮＡによるノックダウンのスクリーニング
ＧＦＰ−ＰＥＳＴを安定的に発現するＢ１６細胞をノックダウンすることにより、ＧＦＰ発現を、効果的にｓｉＲＮＡでノックダウンしているかの、迅速なスクリーニングが可能になった。その理由は、そのＰＥＳＴ配列が、ＧＦＰ半減期を、２６から１０時間に短縮するためである。細胞毒性を低下させるとともに、オリゴヌクレオチドとの相互作用を改善するように設計した改変に基づいて、メリチン誘導体を選定した。Ｂ１６ＧＦＰ細胞において、ＧＦＰのノックダウンのための、ＧＦＰｓｉＲＮＡを送達する能力に対して、これらのペプチドをスクリーニングした（表１、図１）。メリチン自体は、この濃度範囲で毒性がありすぎた一方で、ｐ５ＲＨＨは、ペプチド対ポリヌクレオチドの比率が、５０対１から２００対１の間で使用された場合に、トランスフェクションすることができ、及びＧＦＰノックダウンを示した。驚いたことに、ｐ５ＲＷＲＨは、５０対１の比率では作用せず、しかしペプチド対ポリヌクレオチドの比率が、５０未満対１で使用された場合、トランスフェクションすることができた。
【表２】
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【０１２４】
実施例２：ペプチド／ｓｉＲＮＡナノ集合体の調製及び分析
当該メリチン誘導体を、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）によって配合し、ＲＮＡｓｅ／ＤＮＡｓｅ非含有水（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）に１０ｍＭで溶解し、及び使用するまで、４μｌに分注し、−８０℃で保管した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｓｉｇｍａ）に、ペプチドを１対２００で希釈し、３０秒間ボルテックスミキサーで攪拌し、次いで適量のｓｉＲＮＡ（１倍のｓｉＲＮＡ緩衝液中（Ｔｈｅｒｍｏ）１０μＭのストック濃度）を加え、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ  Ｒで振とうしながら、３７℃で４０分間インキュベーションすることによって、トランスフェクション複合体を調製した。得られたナノ粒子を、１２％ポリアクリルアミドゲル上で分離し、次いでエチジウムブロマイド染色を行うことによってｓｉＲＮＡの組込みを解析した。Ｚｅｔａ  Ｐｌｕｓ粒度計測器（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、ＭＡ）を使用して、動的光散乱（ＤＬＳ）及びゼータ電位測定を実施した。１０ｍｇ／ｍｌのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、Ｓｉｇｍａ）中にて、新たに形成されたペプチド／ｓｉＲＮＡナノ粒子を一晩インキュベーションすることにより、血清の安定性分析を実施し、次いでＤＬＳ及びゼータ電位測定を行った。
【０１２５】
実施例３：ｓｉＲＮＡトランスフェクション
Ｂ１６Ｆ１０及びＲＡＷ２６４．７細胞株（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）は、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）を補給したＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）中に、標準細胞インキュベーション条件（加湿インキュベーター中で、３７℃及び５％ＣＯ２）の下で保持することができる。ＧＦＰを安定的に発現するＢ１６Ｆ１０細胞は、以下のようにして作製することができる。Ｂ１６Ｆ１０に、ｐＥＦ６Ｖ５ＨｉｓＴＯＰＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中において、ＥＧＦＰ（ｐＥＧＦＰ−Ｎ１、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）と、マウスのオルニチン脱炭酸酵素（Ｓ４２１−Ｖ４６１）からのＰＥＳＴ配列との融合物を、トランスフェクションすることができる。細胞は、抗生物質の選抜試薬を加えることなく、フローサイトメトリーによる、４ラウンドの細胞の選別で、選択する。典型的に、一分注量の細胞は、ＥＧＦＰ発現レベルの顕著な変更なしに、連続培養おいて１か月間、維持できる。ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、Ｌｉｆｅｌｉｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ）から購入することができ、及び製造者の指示にしたがった、５ｎｇ／ｍＬのＥＧＦ、５ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦ、１５ｎｇ／ｍＬのＩＧＦ−１、５０μｇ／ｍＬのアスコルビン酸、１μｇ／ｍＬのヘミコハク酸ヒドロコルチゾン、０．７５Ｕ／ｍＬのヘパリン硫酸、１０ｍＭのＬ−グルタミン、２％のウシ胎児血清を補給した、ＶａｓｃｕＬｉｆｅ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｌｉｆｅｌｉｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において、培養可能である。
【０１２６】
トランスフェクションに対応して、細胞は、トランスフェクションの１２時間前に、６ウェルプレートに移植し、及び標準細胞培養条件下で培養することができる。ペプチド／ｓｉＲＮＡナノ粒子を調製し、及び最終容量が１ｍｌのＯｐｔｉｍｅｍＩ（Ｇｉｂｃｏ）、または１０％のＦＢＳを補給した適切な培地で、４時間、細胞と共にインキュベーションする。トランスフェクションは、細胞培養の表面積に基づいて、１２ウェルプレートに移植された細胞に応じて、スケーリングする。トランスフェクション後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、及び分析前のさらに２４〜７２時間で、標準細胞培養培地でインキュベーションする。リポフェクトアミン２０００は、製造者の手順にしたがって使用することができる。簡単に説明すると、リポフェクトアミン２０００を、ＯｐｔｉｍｅｍＩで希釈して、最終濃度を８．４μｇ／ｍｌとし、及び室温で１５分間インキュベーションする。その後、ｓｉＲＮＡを、希釈された脂質に添加し、及びトランスフェクションに対応して、ＯｐｔｉｍｅｍＩで合計容量を１ｍＬに希釈する前に、さらに４０分間インキュベーションする。適当なｅＧＦＰのｓｉＲＮＡは、Ｓｉｇｍａから購入することができる。ｓｉＧＥＮＯＭＥマウスのＭＡＰＫ９のｓｉＲＮＡ１、ｓｉＧＥＮＯＭＥマウスのＳＴＡＴ３のｓｉＲＮＡ２、及びｓｉＧＥＮＯＭＥヒトのＳＴＡＴ３のｓｉＲＮＡ２の遺伝子特異的ｓｉＲＮＡは、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、ＣＯ）から購入することができる。スクランブルｓｉＲＮＡは、Ｑｉａｇｅｎ（Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）から購入することができる。
【０１２７】
トランスフェクションは、当該技術分野で公知の、ウェスタンブロット法、リアルタイムＰＣＲ、共焦点顕微鏡、フローサイトメトリー、またはその他の適切なアッセイによって、評価され得る。
【配列表】
2018520154000001.app
【国際調査報告】
2018520154.tif 000004
2018520154.tif 000005
2018520154.tif 000006