(57)【要約】  本発明は、ベチベリルエステルの総重量に対して、少なくとも０．５重量パーセントの第２級アルコール化合物を含むベチベリルエステルと、ベチベリルエステルを製造するための方法であって、ベチバー油と、少なくとも１種の酵素調製物と、少なくとも１種のアシル化剤化合物と、を準備し、酵素調製物がベチバー油のアルコール化合物をアシル化剤化合物でエステル化できるだけの十分な時間を与えることを含む方法と、に関する。また、本発明は、上述した方法によって得られるベチベリルエステル、上述したベチベリルエステルを含むフレグランス組成物ならびに、上述したベチベリルエステルを香りのする製品の製造に用いる使用にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベチベリルエステルであって、前記ベチベリルエステルの総重量に対して、少なくとも０．５重量パーセントの第２級アルコール化合物を含む、ベチベリルエステル。
【請求項２】
前記第２級アルコール化合物は、１２−ノルジゼン−２β−オール、ジュネノール、ジザ−６（１３）−エン−３α−オール、クシアン−２−オール、ヌートカトール、β−ベチボール、β−イソヌートカトール、α−イソヌートカトールを含む群から選択される少なくとも１種のアルコールを含む、請求項１に記載のベチベリルエステル。
【請求項３】
前記ベチベリルエステルの総重量に対して、わずか５重量パーセントの第１級アルコール化合物しか含まない、請求項１または２に記載のベチベリルエステル。
【請求項４】
前記第１級アルコール化合物は、シクロコパカンファノールＡ、シクロコパカンファノールＢ、ベチセリネノール、クシモール、バレンセン−１２−オール、（Ｅ）−イソバレンセノール、スピロベチバジエン−１２−オールを含む群から選択される少なくとも１種のアルコールを含む、請求項３に記載のベチベリルエステル。
【請求項５】
前記ベチベリルエステルの総重量に対して、少なくとも２．５重量パーセントの第３級アルコール化合物を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載のベチベリルエステル。
【請求項６】
前記第３級アルコール化合物は、エレモール、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−１１−オール、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＡ、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＢ、１０−エピ−γ−オイデスモール、β−オイデスモール、１−エピ−クベノール、ヒネソール、α−カジノールエピマー、α−カジノール、バレリアノール、α−オイデスモール、インテルメデオール、ジュニペルカンファーを含む群から選択される少なくとも１種のアルコールを含む、請求項５に記載のベチベリルエステル。
【請求項７】
前記ベチベリルエステルの総重量に対して、約１から約５０重量パーセントのエステル化合物を含む、請求項１から６のいずれか１項に記載のベチベリルエステル。
【請求項８】
ベチベリルエステルを製造するための方法であって、
ベチバー油と、少なくとも１種の酵素調製物と、少なくとも１種のアシル化剤化合物と、を準備する工程と、
前記酵素調製物が、前記アシル化剤化合物および前記ベチバー油のアルコール化合物と反応して前記ベチバー油をエステル化できるだけの十分な時間を与えることを含む、方法。
【請求項９】
前記エステル化は、乾燥剤の存在下で行われる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記酵素調製物は、少なくとも１種のエステラーゼ、好ましくは少なくとも１種のリパーゼを含むおよび／または前記酵素調製物は、担持した酵素調製物である、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１種のアシル化剤化合物は、少なくとも１種のカルボン酸由来の官能基を含む、請求項８から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１種のカルボン酸由来の官能基は、カルボン酸エステル、好ましくは酢酸エチルを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項８から１３のいずれか１項に記載の方法によって得られる、ベチベリルエステル。
【請求項１４】
請求項１から７のいずれか１項に記載のベチベリルエステル、請求項８から１２のいずれか１項に記載の方法で製造されるベチベリルエステルまたは請求項１３に記載のベチベリルエステルを含む、香料組成物。
【請求項１５】
請求項１から７のいずれか１項に記載のベチベリルエステル、請求項８から１２のいずれか１項に記載の方法で製造されるベチベリルエステル、請求項１３に記載のベチベリルエステルまたは請求項１４に記載の香料組成物の、香りのする製品の製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ベチベリルエステル、ベチベリルエステルを製造する方法、ベチベリルエステルを含むフレグランス組成物ならびに、上記のベチベリルエステル、上記の方法によって製造されるベチベリルエステルまたは上記のフレグランス組成物を、香りのする製品に使用することに関する。
【背景技術】
【０００２】
ベチバー油は、Chrysopogon zizanioidesとも呼ばれる、カスカスガヤ（Vetiveria zizanioides）（イネ科）から抽出される組成物である。また、カスカスガヤ（イネ科）から得られる、チンキ、コンクリート、アブソリュート、エッセンシャルオイル、オレオレジン、テルペン、脱テルペン画分、ディスティレート、レジデューなどの抽出物および変調した抽出物も知られている（ＣＡＳ：８４２３８−２９−９；ＥＩＮＥＣＳ：２８２−４９０−８）。ベチバー油は、カスカスガヤエキス（ＣＡＳ：８４０８２−８４−８；ＥＩＮＥＣＳ：２８２−０３１−１）、酢酸ベチベリル（ＣＡＳ：６２５６３−８０−８；ＥＩＮＥＣＳ：２０４−２２５−７、２６３−５９７−９）、ベチベロール（ＣＡＳ：６８１２９−８１−７；ＥＩＮＥＣＳ：２６８−５７８−９）、酢酸ベチベロール（ＣＡＳ：６２５６３−８０−８；ＥＩＮＥＣＳ：２６３−５９７−９）、ベチバーオイル（ＣＡＳ：８０１６−９６−４；ＲＴＥＣＳ：ＹＹ３１８００００）などのフレグランス成分および組成物を提供するために基剤としても用いられている。
【０００３】
香水組成物および香料組成物に使用される、酢酸ベチベリルなどの公知のベチベリルエステルは、ベチバー油の化合物と無水物との化学反応、たとえばベチバー油のアルコール化合物を無水酢酸でアセチル化する反応で製造される生成物の混合物である。具体的には、scientific committee on consumer products of the European commission for health and consumer protection（健康および消費者保護のための欧州委員会の消費者製品科学委員会）の意見書ＳＣＣＰ／０９８４／０６に記載されているように、酢酸ベチベリルは通常、触媒の有無を問わず１２０℃まで加熱するか、室温でオルトリン酸を使用するか、または還流トルエン中で酢酸ナトリウムを使用するかして、ベチバー油またはベチベロールを無水酢酸で工業的にアセチル化した後、蒸留して製造される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
一般に、ベチバー油のエステル化反応は、オイルの匂い特性を変化させるためになされる。しかしながら、更に容易に感知できて且つ繊細な、香調の組み合わせを有するベチベリルエステル組成物を提供する需要がずっと存在する。また、公知のベチベリルエステルは、安定性が極めて低いことが多い。さらに、公知のベチベリルエステルを製造する公知のプロセスには、持続性と環境への影響の点で改善が求められている。これらのプロセスにおけるマイナスの影響は、石油化学で製造される有機溶媒を使用したり、過剰な化学量論量、化学量論量または準化学量論量で用いられる添加剤を使用したりするため、多くの場合に大量の廃棄物が出ることにある。たとえば、無水酢酸によるアセチル化は一般に、この試薬を過剰に用いて行われるが、形成されるエステルあたり１当量以上の酢酸が形成される。これらのプロセスでは通常、所望の反応温度に達するまで、あるいはワークアップ時の蒸留工程の間のエネルギー消費量が大きい。一般的なプロセスでは、アシル化剤として合成カルボン酸無水物を使用し、添加剤には普通の化学物質を用いるようになっているため、得られるベチベリルエステルは合成製品として分類される。
【０００５】
したがって、持続可能な方法で製造される、特有の匂い特性を持つベチベリルエステルを提供することにずっと需要がある。
【０００６】
本開示の目的は、香りが強く、要素間のバランスが良く、且つ心地よい、香調の組み合わせを有する、より優れた品質のベチベリルエステルを提供することである。本開示の別の目的は、より安定したベチベリルエステルを提供することである。本開示のさらなる目的は、天然のベチベリルエステルを提供することにある。本開示のさらなる目的は、あまりエネルギーを要せず、より再現性があり、より環境に優しい、ベチベリルエステルの製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
第１の態様によれば、上述した目的及びさらに別の利点は、ベチベリルエステルの総重量に対して少なくとも０．５重量％の第２級アルコール化合物を含むベチベリルエステルによって達成される。
【０００８】
第２の態様によれば、第１の態様のベチベリルエステルなどのベチベリルエステルの製造方法であって、ベチバー油と、少なくとも１種の酵素調製物と、少なくとも１種のアシル化剤化合物と、を準備し、酵素調製物がベチバー油のアルコール化合物をアシル化剤化合物でエステル化できるだけの十分な時間をとることを含む方法によって、上述した目的のうち１つ以上が達成される。
【０００９】
第３の態様によれば、第２の態様の方法によって得られるベチベリルエステルによって、上述した目的のうち１つ以上が達成される。
【００１０】
本発明によれば、本発明のベチベリルエステルは、ベチバー油から得られるものであり、ベチバー油中に存在する実質的にすべての第１級アルコール化合物がエステル化されるため、第１級アルコール化合物を実質的に含まず（たとえば、ベチベリルエステルの総重量に対して、第１級アルコール化合物が５重量パーセントに過ぎないなど）、ベチバー油中に存在する第２級アルコール化合物と実質的に同量の第２級アルコール化合物を含む（たとえば、ベチバー油中に存在する第２級アルコール化合物の量に対して、重量パーセントの絶対偏差で±５の第２級アルコール化合物がベチベリルエステルに存在する）とともに、ベチバー油中に存在する第３級アルコール化合物の量と実質的に同量の第３級アルコール化合物を含む（たとえば、ベチバー油中に存在する第３級アルコール化合物の量に対して、重量パーセントの絶対偏差で±５の第３級アルコール化合物がベチベリル中に存在する）ものであってもよい。
【００１１】
第４の態様によれば、第１の態様のベチベリルエステル、第２の態様の方法で製造されるベチベリルエステルまたは第３の態様のベチベリルエステルを含む香料組成物によって、上述した目的のうち１つ以上が達成される。
【００１２】
第５の態様によれば、第１の態様のベチベリルエステル、第２の態様の方法で製造されるベチベリルエステル、第３の態様のベチベリルエステルまたは第４の態様のフレグランス組成物を、香り付けされる製品の製造に用いることによって、上述した目的のうち１つ以上が達成される。
【００１３】
上記の態様による本開示の実施形態は、添付の特許請求の範囲に規定される。
【００１４】
本開示の他の態様および利点は、以下の図面、説明、添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
本開示は、より完全に理解されるであろうし、他の利点および実施形態は、添付の図面を参照しつつ、単に例示のためであって何ら限定するものではない以下の説明を読むことにより明らかになるであろう。
【００１６】
【図１ａ】図１ａは、ハイチ産ベチバーエッセンシャルオイルのクロマトグラムを示す。
【図１ｂ】図１ｂは、本開示の１つ以上の実施形態によるベチベリルエステルのクロマトグラムを示す。
【００１７】
【図２ａ】図２ａは、ベチベロールのクロマトグラムを示す。
【図２ｂ】図２ｂは、本開示の１つ以上の実施形態によるベチベロールエステルのクロマトグラムを示す。
【図２ｃ】図２ｃは、化学的にアセチル化したベチベロールのクロマトグラムを示す。
【００１８】
【図３ａ】図３ａは、本開示の１つ以上の実施形態による、ベチベリルエステルから単離したエステル画分のクロマトグラムを示す。
【図３ｂ】図３ｂは、図３ａによる単離したエステル画分の鹸化生成物のクロマトグラムを示す。
【００１９】
【図４ａ】図４ａは、本開示の１つ以上の実施形態によるベチベリルエステルの包括的二次元ガスクロマトグラフィ−質量分析クロマトグラムを示す。
【図４ｂ】図４ｂは、ハイチ産ベチバーエッセンシャルオイルの包括的二次元ガスクロマトグラフィ−質量分析クロマトグラムを示す。
【図４ｃ】図４ｃは、市販の酢酸ベチベリルの包括的二次元ガスクロマトグラフィ−質量分析クロマトグラムを示す。
【図４ｄ】図４ｄは、化学合成によって得られる酢酸ベチベリルの包括的二次元ガスクロマトグラフィ−質量分析クロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本開示の実施形態を、添付の図面を参照して詳細に説明する。本開示の実施形態の以下の詳細な説明では、本開示についてのより完全な理解を与えるために、多数の具体的な詳細事項が記載される。しかしながら、これらの具体的な詳細事項がなくても本開示を実施できることは、当業者であれば自明であろう。他の例では、説明を不必要に複雑にせずにすむように、周知の特徴を詳細に説明することはしていない。
【００２１】
本明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ／ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ／ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ／ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」と同義であり（同じことを意味し）、他のものを含み得る、すなわちオープンエンドであって、言及されていない追加の要素を排除しない。さらに、本明細書において、「約」および「実質的に」という用語は、各々の値に対して前後２０パーセントの幅があるのと同義である（同じことを意味する）。「重量パーセント」という用語は、基準物質の重量で割った、問題の化合物の重量に用いられる。基準物質は、特に明記しないかぎり、ほとんどの場合はベチベリルエステルである。また、さらに広げて、「重量パーセント」という用語は、水素炎イオン化型検出器（ＦＩＤ）あるいは、既存または将来に開発されてＦＩＤと同等またはこれより優れた性能を持つ任意のタイプの定量的検出器を用いるガスクロマトグラフで決定される、基準物質全体の組成物中における問題の化合物の割合に対しても用いられる。基準物質は、特に明記しないかぎり、ほとんどの場合はベチベリルエステルである。さらに、比較のために、「重量パーセント」という用語は、表１に示すような、質量分析計を備えた包括的二次元ガスクロマトグラフ（ＧＣ×ＧＣ−ＭＳ）など、質量分析計を備えたガスクロマトグラフ（ＧＣ−ＭＳ）で決定される、基準物質全体の組成物中における問題の化合物の割合に対しても用いられる。基準物質は、特に明記しないかぎり、ほとんどの場合はベチベリルエステルである。
【００２２】
以下、「ベチベリルエステル」とは、ベチバー油のエステル化によって生成する組成物を意味する。以下、「天然化合物」とは、生物から抽出されるか生物が作り出す化学物質から変性しない方法で得られる化合物を意味する。以下、「アシル化剤化合物」とは、式ＲＣＯＸで表される化合物を意味し、式中、Ｒは水素原子であるか、直鎖状、環状または分枝鎖状の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ２０有機置換基であり、Ｘは脱離基である。１つ以上の実施形態において、Ｃ１〜Ｃ２０有機置換基は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルチオ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルアミノ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルアミド、Ｃ２〜Ｃ２０ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ２０ハロアルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ４〜Ｃ２０ヘテロアリール、Ｃ７〜Ｃ２０アルキルアリール、Ｃ７〜Ｃ２０アリールアルキル、Ｃ８〜Ｃ２０アリールアルケニル、Ｃ８〜Ｃ２０アリールアルキニル、Ｃ６〜Ｃ２０ハロアリール、Ｃ２〜Ｃ２０アルキルケトン、Ｃ２〜Ｃ２０アルキルチオン、Ｃ２〜Ｃ２０アルキルカーボネートを含む群から選択される。１つ以上の実施形態において、Ｃ１〜Ｃ２０有機置換基は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキルである。１つ以上の実施形態において、Ｃ１〜Ｃ２０有機置換基は、メチル基またはエチル基などのＣ１〜Ｃ４アルキルである。１つ以上の実施形態において、脱離基は、アルコキシド（ＯＲ’）、ヒドロキシド、カルボキシレート（ＯＣＯＲ’）、アルコキシアルキル、スルホネート、パーフルオロアルキルスルホネート（ＯＳＯ２Ｒ’Ｆ）、トシレート、メシレート、ヨージド、ブロミド、クロリド、フルオリド、ニトレート、ホスフェート、チオレート（ＳＲ’２＋）、アミン（ＮＲ’２、ＮＲ’３＋）、アンモニア、二窒素（ジアゾ）を含む群から選択され、式中、Ｒ’は同一であるか異なっており、各々が直鎖状、環状または分枝鎖状の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ２０有機置換基であり、Ｒは先に定義したとおりであるか、水素原子である。１つ以上の実施形態において、脱離基は、アルコキシド、ヒドロキシド、カルボキシレートを含む群から選択される。１つ以上の実施形態において、脱離基は、アルコキシドである。１つ以上の実施形態において、脱離基は、エチレートである（ＣＨ３ＣＨ２Ｏ）。
【００２３】
本発明者らは、酵素によるエステル化によって新規なベチベリルエステルを得るための新規な方法を開発した。本発明のベチベリルエステルは、ベチバー油中に存在する実質的にすべての第１級アルコール化合物がエステル化されるため、第１級アルコール化合物を実質的に含まず（たとえば、ベチベリルエステルの総重量に対して、第１級アルコール化合物がわずか５重量パーセントであるなど）、ベチバー油中に存在する第２級アルコール化合物および第３級アルコール化合物の量と各々実質的に同量の第２級アルコール化合物および第３級アルコール化合物を含む（たとえば、ベチバー油中に存在する第２級アルコール化合物の量に対して、重量パーセントの絶対偏差で±１０または±５の第２級アルコール化合物がベチベリルエステル中に存在し、ベチバー油中に存在する第３級アルコール化合物の量に対して、重量パーセントの絶対偏差で±１０または±５の第３級アルコール化合物がベチベリル中に存在する）。
【００２４】
本開示は、第１の態様によって、ベチベリルエステルの総重量に対して、少なくとも０．５重量パーセントの第２級アルコール化合物を含むベチベリルエステルを提供する。この組成物は、香粧品市場の商業的な重要性を増すことなどに鑑みて、こうした製品の製造に用いることができる。さらに、これらのベチベリルエステルは、グレープフルーツ様、サンダルウッド様、シダーウッド様、スモーキーでパウダリーな、香りが強く、要素間のバランスが良く、且つ心地よい、香調の組み合わせを有することが見いだされた。
【００２５】
１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して約０．５重量パーセントから約１５重量パーセントの第２級アルコール化合物を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約１重量パーセントから約１０重量パーセントの第２級アルコール化合物を含む。
【００２６】
１つ以上の実施形態において、第２級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、１２−ノル−ジゼン−２β−オール、ジュネノール、ジザ−６（１３）−エン−３α−オール、クシアン−２−オール、ヌートカトール、β−ベチボール、β−イソヌートカトールおよびイソヌートカトールから選択される少なくとも１種のアルコールを含む。１つ以上の実施形態では、第２級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、ジュネノール、イソセドラノール、ジザ−６（１３）−エン−３α−オール、クシアン−２−オール、ヌートカトール、β−イソヌートカトール、β−ベチボール、１２−ノル−ジゼン−２β−オール、１２−ノル−ジゼン−α−オール、α−イソヌートカトールから選択される少なくとも１種のアルコールを含む。１つ以上の実施形態において、第２級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、α−イソヌートカトール（１）、β−ベチボール（２）、ジザ−６（１３）−エン−３α−オール（３）、ジザ−６（１３）−エン−３β−オール（４）、ジュネノール（５）から選択される少なくとも１種のアルコールを含む。１つ以上の実施形態において、第２級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、以下に示すような、α−イソヌートカトール（１）、β−ベチボール（２）、ジザ−６（１３）−エン−３α−オール（３）、ジュネノール（５）から選択される少なくとも１種のアルコールを含む。
【化１】
2018517835.tif 000002
【００２７】
１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．５重量パーセントから約７．５重量パーセントのα−イソヌートカトール（１）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、当該ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．５重量パーセントから約４．５重量パーセントのβ−ベチボール（２）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．２重量パーセントから約３．３重量パーセントのジザ−６（１３）−エン−３α−オール（３）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．２重量パーセントから約２．４重量パーセントのジザ−６（１３）−エン−３α−オール（３）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．１重量パーセントから約５重量パーセントのジザ−６（１３）−エン−３β−オール（４）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．０重量パーセントから約３．０重量パーセントのジュネノール（５）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．１重量パーセントから約３．１重量パーセントのジュネノール（５）を含む。
【００２８】
１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、わずか５重量パーセントの第１級アルコール化合物しか含まない。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約１重量パーセントから約５重量パーセント、たとえば約１．２５重量パーセントから約２．５重量パーセント、たとえば約１．５重量パーセントから約２．５重量パーセントの第１級アルコール化合物を含む。
【００２９】
１つ以上の実施形態において、第１級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、シクロコパカンファノールＡ、シクロコパカンファノールＢ、ベチセリネノール、クシモール、バレンセン−１２−オール、（ｌ）−イソバレンセノール、スピロベチバジエン−１２−オールから選択される少なくとも１種のアルコールを含む。１つ以上の実施形態において、第１級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、シクロコパカンファノールＡ、シクロコパカンファノールＢ、ベチセリネノール、クシモール、バレンセン−１２−オール、（Ｅ／Ｚ）−イソバレンセノール、スピロベチバジエン−１２−オールから選択される少なくとも１種のアルコールを含む。１つ以上の実施形態において、第１級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、以下に示すような、クシモール（６）、（Ｅ／Ｚ）−イソバレンセノール、ベチセリネノール（８）、スピロベチバ−３，７（１１）−ジエン−１２−オール（９）、シクロコパカンファノールＡ（１０）、シクロコパカンファノールＢ（１１）から選択される少なくとも１種のアルコールを含む。１つ以上の実施形態において、第１級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、以下に示すような、クシモール（６）、（Ｅ）−イソバレンセノール（７）、ベチセリネノール（８）、スピロベチバ−３，７（１１）−ジエン−１２−オール（９）、シクロコパカンファノールＡ（１０）、シクロコパカンファノールＢ（１１）から選択される少なくとも１種のアルコールを含む。
【化２】
2018517835.tif 000003
【００３０】
１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０重量パーセントから約１重量パーセントのクシモール（１）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０重量パーセントから約２重量パーセントの（Ｅ／Ｚ）−イソバレンセノール（７）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０重量パーセントから約１重量パーセントの（Ｅ）−イソバレンセノール（７）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０重量パーセントから約１重量パーセントのベチセリネノール（８）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０重量パーセントから約１重量パーセントのスピロベチバ−３，７（１１）−ジエン−１２−オール（９）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０重量パーセントから約１重量パーセントのシクロコパカンファノールＡ（１０）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０重量パーセントから約１重量パーセントのシクロコパカンファノールＢ（１１）を含む。
【００３１】
１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、少なくとも２．５重量パーセントの第３級アルコール化合物を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約２．５重量パーセントから約２５重量パーセントの第３級アルコール化合物を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、少なくとも１０重量パーセントの第３級アルコール化合物を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約１０重量パーセントから約２０重量パーセントの第３級アルコール化合物を含む。
【００３２】
１つ以上の実施形態において、第３級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、エレモール、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−１１−オール、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＡ、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＢ、１０−エピ−γ−オイデスモール、β−オイデスモール、１−エピ−クベノール、ヒネソール、α−カジノールエピマー、α−カジノール、バレリアノール、α−オイデスモール、インテルメデオール、ジュニペルカンファーから選択される少なくとも１種のアルコールを含む。１つ以上の実施形態において、第３級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、β−エレモール、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−１１−オール、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＡ、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＢ、１０−エピ−γ−オイデスモール、β−オイデスモール、１−エピ−クベノール、α−カジノールエピマー、α−カジノール、バレリアノール、α−オイデスモール、ジュニペルカンファーから選択される少なくとも１種のアルコールを含む。１つ以上の実施形態において、第３級アルコール化合物は、以下のリストすなわち、以下に示すような、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−１１−オール（１２）、１０−エピ−γ−オイデスモール（１３）、ｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＡおよびＢ（１４）、ジュニペルカンファー（１５）、α−オイデスモール（１６）、α−カジノール（１７）から選択される少なくとも１種のアルコールを含む。
【化３】
2018517835.tif 000004
【００３３】
１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．５重量パーセントから約３重量パーセントのｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−１１−オール（１２）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．０重量パーセントから約２．５重量パーセントの１０−エピ−γ−オイデスモール（１３）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．２５重量パーセントから約２．５重量パーセントの１０−エピ−γ−オイデスモール（１３）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．５重量パーセントから約９重量パーセントのｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＡおよびＢ（１４）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．５重量パーセントから約４重量パーセントのｃｉｓ−オイデスマ−６−エン−４−オールＡおよびＢ（１４）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．２５重量パーセントから約３重量パーセントのジュニペルカンファー（１５）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０重量パーセントから約１重量パーセントのα−オイデスモール（１６）を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約０．７５重量パーセントから約４．５重量パーセントのα−カジノール（１７）を含む。
【００３４】
１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約１から約５０重量パーセントのエステル化合物を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約２５から約４５重量パーセントのエステル化合物を含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、ベチベリルエステルの総重量に対して、約３５から約４５重量パーセントのエステル化合物を含む。
【００３５】
１つ以上の実施形態において、エステル化合物は、以下のリストすなわち、１２−ノルジゼン−２β−イルアセテート、１２−ノルジゼン−２α−イルアセテート、オイデスマ−６−エン−４−イルアセテート、オイデスマ−４（１５），６−ジエン−３β−イルアセテート、シクロコパカンファニルアセテートＡ、シクロコパカンファニルアセテートＢ、クシアン−２−イルアセテート、ジゼン−３α−イルアセテート、ジゼン−３β−イルアセテート、ベチセリネニルアセテート、酢酸クシミル、スピロベチバジエン−２−イルアセテート、イソヌートカチルアセテート、スピロベチバジエン−１２−イルアセテート、（Ｅ）−イソバレンセニルアセテート、（Ｚ）−イソバレンセニルアセテートから選択される少なくとも１種のエステルを含む。１つ以上の実施形態において、エステル化合物は、以下のリストすなわち、１２−ノルジゼン−２β−イルアセテート、１２−ノルジゼン−２α−イルアセテート、シクロコパカンファニルアセテートＡ、シクロコパカンファニルアセテートＢ、クシアン−２−イルアセテート、ジゼン−３α−イルアセテート、ジゼン−３β−イルアセテート、ベチセリネニルアセテート、酢酸クシミル、スピロベチバジエン−２−イルアセテート、イソヌートカチルアセテート、スピロベチバジエン−１２−イルアセテート、（Ｅ）−イソバレンセニルアセテート、（Ｚ）−イソバレンセニルアセテートから選択される少なくとも１種のエステルを含む。１つ以上の実施形態において、エステル化合物は、以下のリストすなわち、シクロコパカンファニルアセテートＡ、シクロコパカンファニルアセテートＢ、ベチセリネニルアセテート、酢酸クシミル、スピロベチバジエン−１２−イルアセテート、（Ｅ）−イソバレンセニルアセテート、（Ｚ）−イソバレンセニルアセテートから選択される少なくとも１種のエステルを含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、当該ベチベリルエステルの総重量に対して、約２５重量パーセントから約４０重量パーセントのシクロコパカンファニルアセテートＡ、シクロコパカンファニルアセテートＢ、ベチセリネニルアセテート、酢酸クシミル、スピロベチバジエン−１２−イルアセテート、（Ｅ）−イソバレンセニルアセテートおよび（Ｚ）−イソバレンセニルアセテートを含む。１つ以上の実施形態において、ベチベリルエステルは、当該ベチベリルエステルの総重量に対して、約３５重量パーセントから約４０重量パーセントのシクロコパカンファニルアセテートＡ、シクロコパカンファニルアセテートＢ、ベチセリネニルアセテート、酢酸クシミル、スピロベチバジエン−１２−イルアセテート、（Ｅ）−イソバレンセニルアセテートおよび（Ｚ）−イソバレンセニルアセテートを含む。これらの実施形態では、１種以上のエステル化合物は、アセテートに代えて、段落００１９に記載したようなアシル基（ＲＣＯ）を含んでもよい。これらの実施形態では、１つ以上のエステル化合物は、アセテートに代えて、ホルメートおよび／またはプロピオネートを含んでもよい。
【００３６】
本開示によるベチベリルエステルを手ごろな価格で製造するための原子経済的かつ生物工学的な方法の開発も、本明細書において提供される。第２の態様によれば、本開示は、ベチバー油と、少なくとも１種の酵素調製物と、少なくとも１種のアシル化剤化合物と、を準備し、酵素調製物がアシル化剤化合物をベチバー油のアルコール化合物でエステル化するのに十分な時間を与えることを含む、第１の態様のベチベリルエステルを製造するための方法を提供する。実際、ベチバー油の工業的アセチル化などの化学合成による環境への影響に配慮して、再生可能な天然資源を用いることに立脚した、上述の持続可能な酵素による方法を用いることで、第１の態様のベチベリルエステルが合成物として提供できることが判明した。上述したように、本発明の方法を用いると、ベチバー油中に存在する第１級アルコール化合物が実質的にすべてエステル化されるため、第１級アルコール化合物を含まず（たとえば、ベチベリルエステルの総重量に対して、第１級アルコール化合物がわずか５重量パーセントであるなど）、ベチバー油中に存在する第２級アルコール化合物および第３級アルコール化合物の量と各々実質的に同量の第２級アルコール化合物と第３級アルコール化合物を含む（たとえば、ベチバー油中に存在する第２級アルコール化合物の量に対して、重量パーセントの絶対偏差で±１０または±５の第２級アルコール化合物がベチベリルエステル中に存在し、ベチバー油中に存在する第３級アルコール化合物の量に対して、重量パーセントの絶対偏差で±１０または±５の第３級アルコール化合物がベチベリル中に存在する）、ベチベリルエステルを得ることができるようになる。
【００３７】
さらに、酵素による方法の生産性の低さと総コスト、及び酵素の熱安定性と化学的安定性が低いことは、生物触媒の工業的な応用に伴うよく知られた欠点であるが、本開示の１つ以上の実施形態による方法では、高い収率と生産性で、エネルギー消費量を抑えてベチベリルエステルが提供できる。事実、天然抽出物の変換を扱うにあたって、酵素はかつてあまり用いられていなかった。天然抽出物の化学組成が非常に複雑であり、あとから酵素が阻害される危険性がある上、非特異的な反応が起こりやすいことが、その理由である。実際、科学文献には、エッセンシャルオイルを酵素で修飾する希少な例が報告されている。たとえば、本開示の発明者らは、Chem. Biodiv., 2013, 10(12), 2291-2301において、遊離リパーゼで触媒してパルマローザエッセンシャルオイルをアセチル化するには、飽和現象のために、大量の酵素が必要になることを述べている。本開示の発明者らによってMolecules 2014, 19(7), 9203-9214に記載されているように、報告がなされているほとんどの事例では、酵素処理は天然抽出物の製造前になされており、酵素の役割は、加水分解活性（セルラーゼ、グリコシダーゼ）によって原料を前処理することにある。
【００３８】
１つ以上の実施形態において、エステル化は、乾燥剤の存在下で行われる。１つ以上の実施形態において、乾燥剤は、水素化カルシウム、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、五酸化リン、微細孔アルミノシリケートを含む群から選択される。１つ以上の実施形態において、乾燥剤は、モレキュラーシーブなどの微細孔アルミノシリケートを含む。１つ以上の実施形態において、モレキュラーシーブは、細孔サイズが１オングストロームから５オングストロームの範囲である。１つ以上の実施形態において、モレキュラーシーブは、細孔サイズが約３オングストロームである。実際、本方法を微細孔アルミノシリケートなどの乾燥剤の存在下で実施すると有益であることが、見いだされた。なぜなら、反応媒体に残る水分は低レベルに維持できるため、本方法の実施時またはベチベリルエステルのエージングの際に、生成物の匂い特性を損なう原因になりかねないカルボン酸（たとえば、酢酸）が望ましくない状態で発生するのを避けられるからである。
【００３９】
１つ以上の実施形態において、酵素調製物は、少なくとも１種のエステラーゼを含む。１つ以上の実施形態において、エステラーゼは、リパーゼである。リパーゼは一般に安全と認められる（ＧＲＡＳ）ため、リパーゼを使用すると本方法を安全に行うことができる。実際、リパーゼは現在、乳製品処理において工業的に用いられている。１つ以上の実施形態では、エステラーゼは、ブタ（ｐｉｇ）肝臓エステラーゼ、Bacillus subtilisエステラーゼ、Bacillus stearothermophilusエステラーゼ、Rhizopus oryzaeエステラーゼ、Candida lipolyticaエステラーゼ、Mucor mieheiエステラーゼ、Saccharomyces cerevisiaeエステラーゼ、ウマ肝臓エステラーゼ、ブタ（ｈｏｇ）肝臓エステラーゼ、Pseudomonas fluorescensエステラーゼ、Candida rugosaリパーゼ（旧Candida cylindraceaリパーゼ）、Pseudomonas cepaciaリパーゼ、Aspergillus sp.リパーゼ、Mucor mieheiリパーゼ、Pseudomonas fluorescensリパーゼ、Rhizopus arrhizusリパーゼ、Rhizopus niveusリパーゼ、ブタ膵臓由来リパーゼ、Aspergillus oryzaeリパーゼ、Mucor javanicusリパーゼ、Penicillium roquefortiリパーゼ、小麦胚芽由来リパーゼ、Rhizopus oryzaeリパーゼ、膵臓リパーゼなどのヒトリパーゼ、Candida antarticaリパーゼを含む群から選択され、いずれも純度を問わず天然源からの抽出物であってもよいし、Escherichia coli、Aspergillus nigerまたは他の任意の宿主などの組み換え生物によって異種的に発現させたものであってもよい。１つ以上の実施形態において、リパーゼは、Candida antarticaリパーゼＢである。
【００４０】
１つ以上の実施形態において、酵素調製物は、担持した酵素調製物である。１つ以上の実施形態において、担持した酵素調製物は、樹脂に担持した酵素調製物である。１つ以上の実施形態において、樹脂に担持した酵素調製物は、アクリル樹脂に担持した酵素調製物など、有機樹脂に担持した酵素調製物である。１つ以上の実施形態において、担持した酵素調製物は、活性が少なくとも１０００Ｕ／ｇである。１つ以上の実施形態において、担持した酵素調製物は、活性が少なくとも５０００Ｕ／ｇである。担持した酵素を使用すると、バイオ触媒のリサイクルが可能になるだけでなく、プロセスの連続実施も可能になる。これは、公知のプロセスと比較して、持続性のみならず環境への影響の点でも改善点である。さらに、担持した酵素の大幅に改善された熱安定性と化学的安定性と、通常は酵素反応に不可欠な溶媒である水ではなく、食品グレードの溶媒で反応を実施できる可能性がゆえに、ベチバー油の濃度をたとえば２５０ｇ／Ｌに高めることで、生産性の大幅な増加が可能になった。
【００４１】
１つ以上の実施形態において、ベチバー油は、チンキ、コンクリート、アブソリュート、エッセンシャルオイル、オレオレジン、テルペン、脱テルペン画分、超臨界ＣＯ２抽出物、ＨＦＣ抽出物、ディスティレート、カスカスガヤからの抽出レジデューを含む群から選択される。１つ以上の実施形態において、ベチバー油は、ベチバーエッセンシャルオイルである。１つ以上の実施形態において、ベチバー油は、ベチバーの根から得られる。１つ以上の実施形態において、ベチバー油は、天然ベチバー油である。１つ以上の実施形態において、ベチバー油は、ベチベロール画分油（すなわち、ベチバー油のアルコール画分）である。これらの実施形態によれば、この方法によって、ベチベロールエステル（すなわち、ベチバー油のエステル化したアルコール画分）を提供してもよい。
【００４２】
１つ以上の実施形態において、アシル化剤化合物は、カルボン酸、カルボン酸無水物、アシルハライド、カルボン酸エステル、カルボン酸チオエステルおよびカルボン酸エノールエステルを含む群から選択される。たとえば、アシル化剤化合物のアシル基のラジカルは、直鎖状、環状または分枝鎖状で、飽和であっても不飽和であってもよい。たとえば、アシル化剤化合物は、Ｃ１〜Ｃ２０のカルボン酸由来であってもよい。１つ以上の実施形態において、アシル化剤化合物は、少なくとも１種のカルボン酸エステルを含む。１つ以上の実施形態において、カルボン酸エステルは、メチル、エチルおよび／またはプロピルホルメート、アセテート（すなわち、メチル、エチルおよび／またはプロピルエタノエート）および／またはプロピオネートを含む。
【００４３】
１つ以上の実施形態において、アシル化剤化合物は、天然物である。たとえば、アシル化剤化合物は、天然のカルボン酸エステルである。１つ以上の実施形態において、アシル化剤化合物は、天然の酢酸エチルである。さらに、１つ以上の実施形態によれば、ベチバー油、アシル化剤化合物、酵素調製物、任意の溶媒は、天然化合物から選択される。したがって、１つ以上の実施形態において、この方法は、天然のベチベリルエステルを提供し、天然材料のバイオテクノロジー処理によって行われる。
【００４４】
１つ以上の実施形態において、エステル化は溶媒の存在下で行われる。１つ以上の実施形態において、溶媒は、炭化水素（ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、すべての異性体のオクタン、石油エーテルなど）、酸素化溶媒（ジアルキルエーテル、環状エーテル、カルボン酸エステル、ラクトン、ジアルキルカーボネート、環状カーボネート、アルコール、ポリオール、グリセロールおよび誘導体、グリコールおよび誘導体、グリコールエーテルなど）、ハロゲン化溶媒（クロロホルム、ジクロロメタン、塩化メチル、四塩化炭素、クロロベンゼン、１個以上の水素原子が、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素などの１個以上のハロゲンで置換された任意の炭化水素）、含窒素溶媒（ピリジン、アミン、ピロリジン、ジメチルホルムアミド、ニトロメタン、アセトニトリルなど）、硫化溶媒（ジメチルスルホキシド、スルホラン、二硫化炭素）、超臨界流体（ＣＯ２、ＣＨ４、水、臨界点を超えた任意の流体）、イオン性液体（室温を含む反応温度の液体であって、イミダゾリウムまたはピリジニウムなどの有機カチオンと、ブロミド、テトラフルオロボレート、ヘキサフルオロホスフェート、ビストリフルオロスルホニルイミド、トリフルオロメタンスルホネートなどのアニオンとで構成される）、水を含む群から選択される。１つ以上の実施形態において、溶媒は、酢酸エチルを含む。１つ以上の実施形態において、溶媒は、天然の酢酸エチルを含む。さらに、１つ以上の実施形態において、アシル化剤化合物は、溶媒として作用する。たとえば、アシル化剤化合物は、独特の溶媒として作用することができる。
【００４５】
１つ以上の実施形態において、酵素調製物を、少なくとも１時間、アシル化剤化合物およびベチバー油またはベチバー油のアルコール化合物と反応させる。１つ以上の実施形態において、酵素調製物を、少なくとも１時間から約７日間、たとえば約３時間から約７時間（約５時間など）、アシル化剤化合物およびベチバー油またはベチバー油のアルコール化合物と反応させる。
【００４６】
１つ以上の実施形態において、酵素調製物を、約−２０℃から約８０℃の範囲の温度で、アシル化剤化合物およびベチバー油またはベチバー油のアルコール化合物と反応させる。１つ以上の実施形態において、酵素調製物を、約１０℃から約４０℃の範囲の温度、たとえば室温で、アシル化剤化合物およびベチバー油またはベチバー油のアルコール化合物と反応させる。
【実施例】
【００４７】
本開示の１つ以上の実施形態による例示的なベチベリルエステルと、これを製造するための例示的な方法を、以下に記載する。
【００４８】
ベチベリルエステル
【００４９】
表１ａ〜ｈは、ハイチ産ベチバーエッセンシャルオイル、市販の酢酸ベチベリル、化学合成によって得られる酢酸ベチベリル、本開示の１つ以上の実施形態によるベチベリルエステルの化学組成を示す。表１ａ〜１ｅのガスクロマトグラフの結果に示されるように、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルの化学組成は、エステル化合物が含まれる点でベチバー油の化学組成とは異なる。実際、酢酸ベチベリルは、酢酸ベチベリルの総重量に対して、少なくとも１重量％のエステル化合物を含んでもよい。さらに、表１ａ〜１ｈに示されるように、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルの化学組成は、酢酸ベチベリルの総重量に対して少なくとも０．５重量％の第２級アルコール化合物が含まれる点で、市販の酢酸ベチベリルや化学合成によって得られる酢酸ベチベリルの化学組成とは異なる。
【００５０】
たとえば、表１ａ〜ｈは、第２級アルコールであるジザ−６（１３）−エン−３ａ−オール（表の５２欄）が、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルの総重量に対して、少なくとも０．１重量％の量で含まれていることを示している（たとえば、少なくとも０．５重量パーセントの第２級アルコールを示す５４、６１、６８欄も参照のこと）。一方、ジザ−６（１３）−エン−３ａ−オール（５２欄）などの第２級アルコールは、市販の酢酸ベチベリルおよび化学合成によって得られる酢酸ベチベリルの総重量に対して、最大０．１重量％で含まれているにすぎない（たとえば、６１、６６、６８欄も参照のこと）。また、表１ａ〜ｈは、酢酸クシミル（９５欄）などのエステルが、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルの総重量に対して、少なくとも９重量パーセントの量で含まれることも示している（たとえば、９２、９７、９８、１００欄も参照のこと）。一方、酢酸クシミル（９５欄）などのエステルは、ハイチ産ベチバー油には含まれない（たとえば、９２、９７、９８、１００欄も参照のこと）。最後に重要なことであるが、表１ａ〜ｈは、第１級アルコールの総量が、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルの総重量に対して、わずか５重量パーセントであることも示している（たとえば、４７、４９、７２、７８、８４、８５欄を参照のこと）。一方、第１級アルコールの総量は、ベチバー油の総重量に対して、２０重量パーセントを超える（たとえば、４７、４９、７２、７８、８４、８５欄を参照のこと）。
【００５１】
本開示の１つ以上の実施形態によるベチベリルエステルとベチバー油との上述した化学組成の違いについては、大量の第１級アルコールを含むとともにエステル化合物を含まないハイチ産ベチバーエッセンシャルオイルのクロマトグラムを示す図１ａと、第１級アルコールを非常に少量しか含まず、エステル化された第１級アルコール化合物を多量に含む本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルのクロマトグラムを示す図１ｂとを比較すれば明らかである。
【００５２】
本開示の１つ以上の実施形態によるベチベリルエステル、ベチバー油、市販の酢酸ベチベリル、化学合成によって得られる酢酸ベチベリルの上述した化学組成の違いについては、エステル化合物を含まないベチベロールのクロマトグラムを示す図２ａならびに、エステル化された第２級アルコール化合物を多量に含み、よって第２級アルコール化合物を少量しか含まない、化学的にアセチル化したベチベロールのクロマトグラムを示す図２ｃと、第２級アルコール化合物とエステル化された第１級アルコール化合物をそれぞれ多量に含み、エステル化された第２級アルコール化合物を極めて少量しか含まない本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベロールのクロマトグラムを示す図２ｂを比較すれば明らかである。
【００５３】
本開示の１つ以上の実施形態によるベチベリルエステル、市販の酢酸ベチベリルならびに化学合成によって得られる酢酸ベチベリルの上述した化学組成の違いについては、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルの単離されたエステル画分のクロマトグラムを示す図３ａと、図３ａの単離されたエステル画分の鹸化生成物のクロマトグラムを示す図３ｂにも示されている。図３ａおよび図３ｂに鑑みると、酢酸ベチベリルが、シクロコパカンファニルアセテートＡ、シクロコパカンファニルアセテートＢ、ベチセリネニルアセテート、酢酸クシミル、（Ｅ）−イソバレンセニルアセテート、（Ｚ）−イソバレンセニルアセテートなど、第１級アルコール化合物のエステルを主に含むことが明らかになる。
【００５４】
本開示の１つ以上の実施形態によるベチベリルエステル、ハイチ産ベチバーエッセンシャルオイル、市販の酢酸ベチベリル、化学合成によって得られる酢酸ベチベリルの上述した化学組成の違いについては、それぞれの包括的二次元ＧＣ−ＭＳクロマトグラムを示す図４ａから図４ｄにも示されている。図４ａを図４ｂと比較すると、ベチバー油中に存在する実質的にすべての第１級アルコール化合物がエステル化されること（たとえば、わずか５重量パーセント）、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルが、本開示による方法でエステル化されなかった多量の第２級アルコール化合物を含むこと（たとえば、少なくとも０．５重量パーセント）、酢酸ベチベリルが、ベチバー油中に存在する第３級アルコール化合物の量と実質的に同量の第３級アルコール化合物（たとえば、ベチバー油中に存在する第３級アルコール化合物の量に対して、±５重量パーセントの第３級アルコール化合物）を含むこと、が明らかである。また、図４ａを図４ｃおよび図４ｄと比較すると、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルが、市販の酢酸ベチベリル（図４ｃ）および化学合成によって得られる酢酸ベチベリル（図４ｄ）と比較して、多量の第２級アルコール化合物（たとえば、少なくとも０．５重量パーセント）と第３級アルコール化合物（たとえば、少なくとも２．５重量パーセント）を含むことも明らかである。包括的二次元ＧＣ−ＭＳクロマトグラフィは、極めて高信頼度かつ正確な決定システムであるため、イソセドラノール、ジゼン−３β−オール、プレジザエン−７β−オールなどの別の第２級アルコール化合物および第３級アルコール化合物を同定することもできる。
【００５５】
上述した相違の結果として、本開示の１つ以上の実施形態によるベチベリルエステルは、香りが強く、要素間のバランスが良く、長く続いて、安定した、心地よい香調の組み合わせを有する。たとえば、訓練された調香師による嗅覚評価で、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルについて、匂いの香調と強さの独特の組み合わせが確認された。具体的には、酢酸ベチベリル（エタノール中１．４パーセント）と標的市場における市販の酢酸ベチベリルのストリップサンプルを試験したところ、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルは、「トップノートは、力強さがわずかに弱いが、よりバランスがとれており、ウッディノートが顕著で、スパークリンググレープフルーツ様の効果が非常に良く、シダーウッド様のノートがスモーキーで、その後、サンダルウッド様のアンダートーン、パウダリー様のノートがあり、ハートノートも十分にバランスしている」と説明するのが最良であるような、似つかわしくない香調を有することがわかった。一方、市販品は、非常にスモーキーかつシダーウッド様で、サンダルウッド様はそれほどなく、グレープフルーツ様の香りとパウダリー様の面が少ないことがわかった。
【００５６】
ベチベリルエステルを製造するための方法
【００５７】
１０ｇ／Ｌのモレキュラーシーブ（３Ａ）を含む食品グレードの酢酸エチルにベチバー油を溶解して、ベチバー油の濃度が１０ｇ／Ｌである混合物を得た。アクリル樹脂に吸着させたCandida antarticaリパーゼ（活性＞５０００Ｕ／ｇ）を、ベチバー油の総重量に対して３０重量％の量で、混合物に導入した。この混合物を、オービタルシェーカーを用いて２５０ｒｐｍで５時間、室温にて撹拌した。混合物を綿パッドで濾過した。３５℃、１５０ｍｂａｒの条件下で溶媒を除去し、酢酸ベチベリルを十分量得た。担持した酵素を回収し、アセトンで洗浄し、減圧下で乾燥させ、低温（一般に０℃未満）で保存した。
【００５８】
定量分析方法および定性分析方法
【００５９】
ベチベリルエステルの化学組成は、一次元または二次元の液体クロマトグラフィおよびガスクロマトグラフィ、たとえばガスクロマトグラフィと質量分析の併用（ＧＣ−ＭＳ）、ガスクロマトグラフィと炎イオン化型検出器との併用（ＧＣ−ＦＩＤ）、ガスクロマトグラフィと熱伝導度型検出器との併用（ＧＣ−ＴＣＤ）または質量分析および炎イオン化型検出器を用いる包括的二次元ガスクロマトグラフィ（ＧＣ×ＧＣ−ＦＩＤ／ＭＳ）を含む群から選択される技術などの定性的および／または定量的クロマトグラフィ技術で決定することができる。選択された分析条件に応じて共溶できる約１００以上の化合物を含む、本開示の１つ以上の実施形態による酢酸ベチベリルを示す表１ａ〜ｈに示されるように、ベチベリルエステルの化学組成は、ベチベリルエステルの化学組成を正確かつ高信頼度で決定するためのえり抜きの技術である、ＧＣ×ＧＣ−ＦＩＤ／ＭＳなどの包括的二次元ガスクロマトグラフィによって決定することができる。
【００６０】
また、一連の直鎖アルカンとの比較によってリテンションインデックスを求めた表１ａ〜１ｈに示されるように、ベチベリルエステルの標的成分は、ＧＣ−ＭＳで推定することができる。共溶出の主な事例はＧＣ×ＧＣ−ＭＳによって同定されたものであり、表に示してある。たとえば、１つ以上の実施形態において、ベチバー油のクシモールおよび酢酸ベチベリルの酢酸クシミルなどの化合物のレスポンスファクターを、トリデカンを内部基準として用いて決定した。本発明者らが以前にChem. Biodiversity 2014, 11, (11), 1821-1842にて説明したように、油から抽出したジザン酸のＬｉＡｌＨ４還元により、本物のクシモール試料を得た。酢酸クシミルは、標準的なアセチル化手順を用いてクシモールをアセチル化することによって得られた。基準化合物の純度（９７パーセントを超える）は、キャリブレーション実験に使用する前にＧＣおよびＮＭＲ分析によって調整した。
【００６１】
定量化の目的で、Ｃｈｒｏｍｐａｃｋ  ＶＦ１−ＭＳキャピラリーカラム（３０μｍ×０．２５ｍｍ；膜厚０．２５μｍ）を備え、かつ炎イオン化型検出器を取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ  ６８９０Ｎガスクロマトグラフを用いて、ＧＣ分析を実施した。流量を一定の０．８ｍＬ／分にして水素をキャリアガスとして使用し、スプリット比を１：１０として分析を行った。ＧＣオーブンについては、１００℃（５分間の等温保持）を５℃／分で２５０℃まで上昇させるようにプログラムした。
【００６２】
Ｊ＆Ｗ  ＨＰ−１  ＭＳ（６０μｍ×０．２５ｍｍ；膜厚０．２μｍ）を取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ  ６８９０Ｎ／５９７３Ｎ  ＧＣ−ＭＳシステムを用いて、１Ｄ−ＧＣ−ＭＳ分析を行った。カラム流（Ｈｅ）１．０ｍＬ／分；スプリット比１／１００；温度プログラム：１００℃（５分間の等温保持）を５℃／分（最終等温線４．５分）で、２５０℃まで上昇させた。質量分析計については、３５〜３５０ｍ／ｚの範囲にわたって７０ｅＶで動作させた。エッセンシャルオイル成分は、一連のｎ−アルカンから計算した各々のリテンションインデックスと、市販のライブラリ（Ｗｉｌｅｙ２７５、ＮＩＳＴ０８）または文献情報から構築した社内のＭＳデータベースおよび単離物質または合成物質にマッチした各々のマススペクトルとの相互相関に基づいて同定した。
【００６３】
極低温ＧＣ×ＧＣ  ＺＯＥＸキットを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  ６８９０Ｎ／５９７３Ｎ  ＧＣ−ＭＳシステムを用いて、包括的二次元ガスクロマトグラフィ−質量分析（ＧＣ×ＧＣ−ＭＳ）を行った。二次元ＧＣカラムセットは、Ｃｈｒｏｍｐａｃｋ  ＶＦ−５ＭＳ（３０μｍ×０．２５ｍｍ；膜厚０．２μｍ）とＪ＆Ｗ  ＤＢ−Ｗａｘ（１．２５μｍ×０．１０ｍｍ；膜厚０．１μｍ）を低温変調器にループとして設置された不活性化溶融シリカキャピラリーチューブ（１．２５ｍ×０．１０ｍｍ）を介して連結して構成した。カラム流（Ｈｅ）０．７ｍＬ／分；スプリット比１／１００；メインオーブン温度プログラム：５０℃から１４０℃までは１０℃／分、１４０℃から１８８℃までは１℃／分、１８８℃から２００℃までは２℃／分、その後、２００℃から２５０℃までは２０℃分（最終等温線４．５分）。二次オーブン温度プログラム：５０℃から１４０℃までは１０℃／分、１４０℃から１５０℃までは１．２５℃／分、１５０℃から２５０℃までは３℃／分。変調周期、ＰＭ：５．５秒。質量分析計については、取り込みレート２４．６７Ｈｚに相当する５０〜２８０ａｍｕの範囲にわたって高速走査モードにて７０ｅＶで動作させた。エッセンシャルオイル成分は、一連のｎ−アルカンから計算した各々のリテンションインデックスと、市販のライブラリ（Ｗｉｌｅｙ２７５、ＮＩＳＴ０８）または文献情報から構築した社内のＭＳデータベース、及び単離物質または合成物質にマッチしたマススペクトルとの相互相関で同定した。
【００６４】
ベチベリルエステルに応用できる別の例示的な化学組成決定技術は、本開示の発明者らによって、J. Chromatogr. A 2013, 1288, 127-148の実験部分に説明されている。
【００６５】
上述の実施形態について詳細に説明したが、本開示の別の実施形態を想定してもよいことは、理解できよう。したがって、たとえば、１つ以上の実施形態において、Candida antarticaリパーゼ以外の酵素調製物および／または担持されていない酵素調製物を用いて、この方法を実施する。また、１つ以上の実施形態において、アシル化剤化合物は酢酸エチル以外の化合物である。また、１つ以上の実施形態において、モレキュラーシーブ（３Ａ）などの乾燥剤の存在は不要である。同様に、１−Ｄおよび／または２−Ｄ液体およびガスクロマトグラフィ以外の分析方法を用いて、ベチベリルエステル組成物を同定してもよい。
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【図１ａ−１ｂ】
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【図２ａ−２ｃ】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図４ｃ】
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【図４ｄ】
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【国際調査報告】
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