(57)【要約】  本発明は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤ならびに療法におけるその使用に関し、特に、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはプロテオスタシス障害に関連する障害などの、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状の処置における使用に関する。本発明の化合物は、式ＩＡ（式中、Ｒ１ａ、Ｒ３ａ、Ｒ５ａ、ＸａおよびＹａは、本明細書において規定される）を有する化合物または薬学的に許容されるその塩を含む。2018517668.tif 000084【選択図】なし
2018517668.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＡ：
【化１】
2018517668.tif 000082
（式中：
Ｘａは、ＮまたはＣＲ２ａであり；
Ｙａは、ＮまたはＣＲ４ａであり；
Ｒ１ａは、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａは、各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表し；
但し：
ＸａおよびＹａがＣＨを表す場合：
Ｒ３ａおよびＲ５ａが両方ともＨを表すとき、Ｒ１ａはＦ、ＣｌまたはＢｒではなく；
Ｒ１ａがＣｌであり、Ｒ２ａがＨであるとき、Ｒ５ａはＦまたはＣｌではなく；
Ｒ１ａがＣｌであり、Ｒ５ａがＨであるとき、Ｒ３ａはＦではなく；
Ｒ１ａおよびＲ５ａが両方ともＨであるときまたはＲ１ａがＣｌであり、Ｒ５ａがＨであるとき、Ｒ３ａはＣｌではなく；
Ｒ１ａ、Ｒ３ａおよびＲ５ａは全てがＨではなく；または
Ｒ３ａがＨであり、Ｒ５ａがＦであるとき、Ｒ１ａはＣｌではなく；
ＸａがＣＨを表し、ＹａがＣＲ４ａ（式中、Ｒ４ａはＣｌである）を表す場合：
Ｒ１ａおよびＲ５ａは両方がＣｌではなく；
Ｒ１ａおよびＲ５ａがＣｌであるとき、Ｒ３ａはＣｌではなく；
ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表し、Ｒ２ａおよびＲ４ａが両方ともＣｌである場合、Ｒ１ａ、Ｒ３ａおよびＲ５ａは全てがＨではない）
の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項２】
ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表し、Ｒ２ａおよびＲ４ａが各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち３つがＣｌまたはＦを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つがＨを表し、任意選択で、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの少なくとも１つがＦである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち３つがＣｌを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つがＨを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３ａがＣｌまたはＦであり、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａがＨ、ＦおよびＣｌから独立に選択され、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つがＦおよびＣｌから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つがＨを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ５ａがＨを表す、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｅ−異性体形態である、請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
（Ｅ）−２−（（２，４−ジクロロピリミジン−５−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３，５−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，３，４−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（４−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−ブロモ−３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，３，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３，４−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３−クロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（４，５−ジクロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（（２−クロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，５−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，４−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３−クロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，３，６−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−４，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３，５−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
または薬学的に許容されるその塩から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状の処置における使用のための、式ＩＢ：
【化２】
2018517668.tif 000083
（式中：
Ｘｂは、ＮまたはＣＲ２ｂであり；
Ｙｂは、ＮまたはＣＲ４ｂであり；
Ｒ１ｂは、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂ、Ｒ５ｂは、各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表し；
但し：
ＸｂおよびＹｂが両方ともＮを表す場合、Ｒ１ｂおよびＲ３ｂは両方がＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、Ｒ２ｂがＣｌである場合、Ｒ１ｂはＢｒではなく；
Ｒ３ｂおよびＲ４ｂが両方ともＨである場合、Ｒ１ｂおよびＲ２ｂは両方がＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、Ｒ２ｂおよびＲ３ｂが両方ともＨである場合、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ４ｂはＦであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂである場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂは全てがＨではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂがＨである場合、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂおよびＲ４ｂがＨである場合、Ｒ５ｂがＦであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂ（式中、Ｒ２ｂはＣｌである）であり、ＹｂがＣＲ４ｂ（式中、Ｒ４ｂはＨである）である場合、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂがＨであり、またはＲ３ｂおよびＲ４ｂがＨであり、Ｒ５ｂがＣｌであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではない）
の化合物または薬学的に許容されるその塩。
【請求項１０】
ＸｂがＣＲ２ｂを表し、ＹｂがＣＲ４ｂを表し、Ｒ２ｂおよびＲ４ｂが各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表す、請求項９に記載の使用のための化合物。
【請求項１１】
Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち３つがＣｌまたはＦを表し、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つがＨを表し、任意選択で、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂの少なくとも１つがＦを表す、請求項９または１０に記載の使用のための化合物。
【請求項１２】
Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち３つがＣｌを表し、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つがＨを表す、請求項９または１０に記載の使用のための化合物。
【請求項１３】
Ｒ３ｂがＣｌまたはＦであり、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂがＨ、ＦおよびＣｌから独立に選択され、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つがＦおよびＣｌから選択され、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つがＨである、請求項９または１０に記載の使用のための化合物。
【請求項１４】
Ｒ５ｂがＨである、請求項９から１３のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項１５】
Ｅ−異性体形態である、請求項９から１４のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項１６】
（Ｅ）−２−（（４−クロロフェニル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３，５−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，３，４−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（４−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，３，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３，４−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３−クロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（４，５−ジクロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（（２−クロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２，５−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，４−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（３−クロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
（Ｅ）−２−（２−クロロ−４，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
または薬学的に許容されるその塩から選択される、請求項９に記載の使用のための化合物。
【請求項１７】
（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１に記載の化合物または請求項９に記載の使用のための化合物。
【請求項１８】
（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドまたは薬学的に許容されるその塩である、請求項１に記載の化合物または請求項９に記載の使用のための化合物。
【請求項１９】
ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはプロテオスタシス障害に関連する障害の処置における使用のための、請求項１から８、１７または１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
障害がＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂに関連する、請求項１９に記載の使用のための化合物。
【請求項２１】
障害がミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはプロテオスタシス障害に関連する障害である、請求項９から１８のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項２２】
障害がアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、他のポリグルタミン障害およびタウオパシーから選択される、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項２３】
請求項１から９、１７または１８のいずれか一項に記載の化合物を、薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物。
【請求項２４】
ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはプロテオスタシス障害に関連する障害を処置する医薬の調製における、請求項１から８、１７または１８のいずれか一項に記載の式ＩＡの化合物の使用。
【請求項２５】
請求項１から８、１７または１８のいずれか一項に記載の治療有効量の式ＩＡの化合物を投与するステップを含む、それを必要とする対象における、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはプロテオスタシス障害に関連する障害を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤ならびに療法におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質の可逆的なリン酸化により、細胞および生物体の機能の実質的に全ての側面が制御され、細胞はキナーゼおよびホスファターゼの拮抗作用を通した急激な変化に順応する。結果的に、リン酸化をターゲティングすることにより、幅広い治療機会が提供される、またキナーゼは、３０００種超の承認済み薬物と実験薬物を用いた今日の薬学的研究において最も普及している薬物標的として出現したものである。しかし、ホスファターゼをターゲティングすることは、原理的にキナーゼと同様に魅力的であると予想されるが、ホスファターゼの治療可能性は見過ごされてきた。タンパク質リン酸化の大多数はセリンおよびトレオニン上で発生し、選択的なセリン／トレオニン脱リン酸化は、何百という多様な調節サブユニットのうちの１つと組み合わせた、ほんのわずかな触媒サブユニットの１つから集合させた何百という異なる二量体または三量体ホロ酵素によって達成される（Ｈｅｒｏｅｓら、ＦＥＢＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２８０、５８４〜５９５、２０１２）。したがって、ＰＰ１ｃなどのホロ酵素の触媒要素の阻害は、何百というホスファターゼの阻害をもたらし、毒性である。選択性は薬物の開発に重要な特性であることから、触媒性ホスファターゼの乱雑性のためにそれらを薬として開発することが困難であるとの評判があがることになった。
【０００３】
ｅＩＦ２αのαサブユニットのリン酸化は、種々のストレスに対する防御の第一線であり、アンフォールドタンパク質応答（ＵＰＲ）および統合ストレス応答（ＩＳＲ）の２つの部分的にオーバーラップするシグナル伝達経路の中心的な要素である。ｅＩＦ２αリン酸化を逆転させるために、哺乳動物細胞は２つのｅＩＦ２αホスファターゼを有する。ｅＩＦ２αホスファターゼは、約２００の他のホスファターゼと触媒サブユニットＰＰ１ｃを共有する二量体ホロ酵素であり、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ（Ｎｏｖｏａら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１５３、１３４５〜１３５５、２００１）ストレス誘導性タンパク質または構成的に発現されるＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ（Ｊｏｕｓｓｅら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、１６３、７６７〜７７５、２００３）の２つの関連した調節サブユニットのうちの１つに結合される。
【０００４】
最近、選択的にセリン／トレオニンホスファターゼを阻害する実現可能性が実証された。グアナベンズ（Ｔｓａｙｔｌｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３３２、９１〜９４、２０１１；ＴｓａｙｔｌｅｒおよびＢｅｒｔｏｌｏｔｔｉ、ＦＥＢＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２８０、７６６〜７７０、２０１２）およびその誘導体は、セリン／トレオニンタンパク質ホスファターゼ１のストレス誘発性調節サブユニットである、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ／ＧＡＤＤ３４を選択的に阻害することが見出され、タンパク質のミスフォールディングストレスに関連する疾患の処置として提案され、そのいくつかはＷＯ２０１４１０８５２０（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ）に開示されている。
【０００５】
ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ阻害はＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰ１から構成されるストレス誘発性ｅＩＦ２αホスファターゼを選択的に阻害し、一方で、高度に関連する、構成的なホスファターゼＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ−ＰＰ１を節約する。ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ阻害は、ストレスを受けた細胞におけるｅＩＦ２αリン酸化を延長し、これによりストレスを受けた細胞において長期的な翻訳の減弱がもたらされる。結果として、シャペロン有効性がストレスを受けた細胞において増加する、その理由は、新しく合成されたタンパク質のフォールディングの補助に通常従事するシャペロンは翻訳が低下した場合に有効となるからである。これにより、タンパク質フォールディングが支持され、細胞をタンパク質プロテオスタシス欠陥からレスキューする。したがって、原理的に、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ阻害剤は、タンパク質のミスフォールディングストレスが関与する哺乳動物疾患を処置し得る。ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ／ＧＡＤＤ３４ノックアウトマウスが大部分は野生型マウスと区別不能であるので安全と予想されることから、哺乳動物におけるＰＰＰ１Ｒ１５Ａの阻害は魅力的な治療可能性を有する（Ｍａｒｃｉｎｉａｋら、Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、１８、３０６６〜３０７７、２００４）。しかし、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ阻害剤で処置できる治療適応の数は、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａが発現され、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａが疾患作用機序に存在する疾患に限定されると予想される。したがって、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａの阻害は、強力かつ安全であり得るが、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａが関与する疾患に限定される。
【０００６】
ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ阻害に関連する制限にかかわらず、シャペロン有効性を増加させるため翻訳を精密に調整することによってプロテオスタシスを回復させるアプローチは、ミスフォールドしたタンパク質が関与する広範囲の疾患を癒すため、理論上、強力であり、直接的であり、適用可能である。上記のように、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ阻害剤の使用は、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａが発現され、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａが疾患作用機序に存在する疾患に限定される。これは、重大な制限を表す。したがって、広い治療可能性の代替アプローチが必要とされ、本発明はこれらを提供しようとするものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂを阻害する化合物は、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａを選択的に阻害する化合物よりも、より広い範囲の疾患を処置するため有利に使用することができる。
【０００８】
第１の態様において、本発明は、式ＩＡ：
【０００９】
【化１】
2018517668.tif 000003
【００１０】
（式中：
Ｘａは、ＮまたはＣＲ２ａであり；
Ｙａは、ＮまたはＣＲ４ａであり；
Ｒ１ａは、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａは、各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表し；
但し：
ＸａおよびＹａがそれぞれＣＲ２ａおよびＣＲ４ａを表し、Ｒ２ａおよびＲ４ａが両方ともＨである場合：
Ｒ３ａおよびＲ５ａが両方ともＨを表すとき、Ｒ１ａはＦ、ＣｌまたはＢｒではなく；
Ｒ１ａがＣｌであり、Ｒ２ａがＨであるとき、Ｒ５ａはＦまたはＣｌではなく；
Ｒ１ａがＣｌであり、Ｒ５ａがＨであるとき、Ｒ３ａはＦではなく；
Ｒ１ａおよびＲ５ａが両方ともＨであるときまたはＲ１ａがＣｌであり、Ｒ５ａがＨであるとき、Ｒ３ａはＣｌではなく；
Ｒ１ａ、Ｒ３ａおよびＲ５ａは全てがＨではなく；
Ｒ３ａがＨであり、Ｒ５ａがＦであるとき、Ｒ１ａはＣｌではなく；
ＸａがＣＨを表し、ＹａがＣＲ４ａ（式中、Ｒ４ａはＣｌである）を表す場合：
Ｒ１ａおよびＲ５ａは両方がＣｌではなく；
Ｒ１ａおよびＲ５ａがＣｌであるとき、Ｒ３ａはＣｌではなく；
ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表し、Ｒ２ａおよびＲ４ａが両方ともＣｌである場合、Ｒ１ａ、Ｒ３ａおよびＲ５ａは全てがＨではない）
の化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００１１】
一実施形態において、ＸａはＣＲ２ａを表し、ＹａはＣＲ４ａを表し、ここで、Ｒ２ａおよびＲ４ａは各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表す。
一実施形態において、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち３つはＣｌまたはＦを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨを表し、任意選択で、ここで、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの少なくとも１つはＦである。
【００１２】
一実施形態において、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち３つはＣｌを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨを表す。
一実施形態において、Ｒ３ａはＣｌまたはＦであり、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａはＨ、ＦおよびＣｌから独立に選択され、ここで、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＦおよびＣｌから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨである。
【００１３】
一実施形態において、Ｒ５ａはＨである。
一実施形態において、式ＩＡの化合物は、Ｅ−異性体形態である。
本発明の第２の態様は、式ＩＢ：
【００１４】
【化２】
2018517668.tif 000004
【００１５】
（式中：
Ｘｂは、ＮまたはＣＲ２ｂであり；
Ｙｂは、ＮまたはＣＲ４ｂであり；
Ｒ１ｂは、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂ、Ｒ５ｂは、各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表し；
但し：
ＸｂおよびＹｂが両方ともＮを表す場合、Ｒ１ｂおよびＲ３ｂは両方がＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、Ｒ２ｂがＣｌである場合、Ｒ１ｂはＢｒではなく；
Ｒ３ｂおよびＲ４ｂが両方ともＨである場合、Ｒ１ｂおよびＲ２ｂは両方がＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、Ｒ２ｂおよびＲ３ｂが両方ともＨである場合、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ４ｂはＦであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂである場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂは全てがＨではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂがＨである場合、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂおよびＲ４ｂがＨである場合、Ｒ５ｂがＦであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではない；）
の化合物または薬学的に許容されるその塩であって、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状の処置における使用のための、化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。
【００１６】
一実施形態において、ＸｂはＣＲ２ｂを表し、ＹｂはＣＲ４ｂを表し、ここで、Ｒ２ｂおよびＲ４ｂは各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表す。
一実施形態において、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち３つはＣｌを表し、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つはＨを表す。
【００１７】
一実施形態において、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち３つはＣｌまたはＦを表し、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つはＨを表し、任意選択で、ここで、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂの少なくとも１つはＦである。
【００１８】
一実施形態において、Ｒ３ｂはＣｌまたはＦであり、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂはＨ、ＦおよびＣｌから独立に選択され、ここで、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち３つはＦおよびＣｌから選択され、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂの１つはＨである。
【００１９】
一実施形態において、Ｒ５ａはＨである。
一実施形態において、式ＩＢの化合物は、Ｅ−異性体形態である。
本発明のさらなる態様は、療法における使用のための式ＩＡの化合物に関する。
【００２０】
本発明のさらなる態様は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状の処置における使用のための、式ＩＡまたは式ＩＢの化合物に関する。
本発明のさらなる態様は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状を処置する医薬の調製における、式ＩＡまたは式ＩＢの化合物の使用に関する。
【００２１】
本発明のさらなる態様は、治療有効量の式ＩＡまたはＩＢの化合物を投与するステップを含む、それを必要とする対象における、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状を処置する方法に関する。
【００２２】
一実施形態において、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状は、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはプロテオスタシス障害に関連する障害である。
【００２３】
さらなる実施形態において、疾患は、ハンチントン病、パーキンソン病、タウオパシー、タンパク質輸送疾患またはミエリン障害である。
別の実施形態において、疾患は、任意のポリグルタミン障害である。
【００２４】
さらなる実施形態において、疾患は、シャペロンＨＳＪ１において変異を有する遠位遺伝性運動性ニューロパシー（Ｄｉｓｔａｌ  ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ  ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）である。
【００２５】
本発明のさらなる態様は、適切な薬学的に許容される希釈剤、賦形剤または担体と混合された、上述した通りの式ＩＡまたは式ＩＢの化合物を含む医薬組成物に関する。
以下、本発明の特定の実施形態は、以下の図面を参照して、例としてのみ記載される：
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】実施例１のＲ１５Ｂ阻害剤とＲ１５Ｂ−ＰＰ１の選択的な結合をＲ１５Ａ−ＰＰ１と対比して示す図である。
【図２】実施例１の選択的なＲ１５Ｂ阻害剤が、ストレスの非存在下で細胞においてｅＩＦ２αの一過性のリン酸化を誘導し、細胞においてＲ１５Ａの発現を誘導することを示す図である。
【図３】実施例１の選択的なＲ１５Ｂ阻害剤が、ストレスから細胞を保護することを示す図である。
【図４】ストレスに続くｅＩＦ２αリン酸化における選択的なＲ１５Ｂ阻害剤の効果を示す図である。実施例１の化合物は、Ｒ１５Ａがまだ発現してない時間にストレスに続くｅＩＦ２αリン酸化を延長させる。
【図５】広範な組織分布を呈する、実施例１の化合物の組織分布を示す図である。
【図６】実施例１の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）でのマウスの処置が、毒性ではないことを示す図である。
【図７】実施例１の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ）でのマウスの処置が、グアナベンズの副作用を生じさせないことを示す図である。
【図８】実施例１の化合物での処置後の哺乳動物におけるＲ１５Ａの誘導を示す図である。
【図９】哺乳動物における疾患を予防することにおける、実施例１のＲ１５Ｂ阻害剤の有効性を示す図である。図８において使用される例は、マウスモデルＨＤ８２Ｇｌｎを使用したハンチントン病である（Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．、８、３８７〜４０７、１９９９）。ＷＴ：野生型マウス。Ｔｇ：ＨＤ８２Ｇｌｎ。
【図１０】ビヒクルまたは実施例１の化合物で処置された指示された遺伝子型における、培養された後根神経節（ＤＲＧ）からのミエリン節間を赤色（桿形状）および核を青色（球状の「斑点」形状）で示す図である。ＰＭＰ２２−変異体マウスにおけるミエリン節間は、より短い。実施例１の化合物での処置は、変異体ＤＲＧにおけるミエリン節間の長さを増加させたことから、ミエリン形成が改善されたことが明らかになる。
【図１１】実施例１の化合物での処置後の肥満マウスｄｂ／ｄｂ動物（１条件当たりｎ＝５）における血液グルコースレベルを示す図である。
【図１２】選択的なＲ１５Ａ阻害剤（第１カラム−グアナベンズ（ＧＢＺ））、選択的なＲ１５Ｂ阻害剤（第２カラム−化合物１６（ＴＳＴ３））、ＧＢＺおよびＴＳＴ３の組合せ（第３カラム）、およびＲ１５Ａ／Ｂ阻害剤（第４カラム−化合物１０）についてのタンパク質合成率を示す図である。図は、選択的なＲ１５Ａ阻害剤が、ストレスを受けていない細胞におけるタンパク質合成を阻害しないことを示す。選択的なＲ１５Ｂ阻害剤は、ストレスを受けていない細胞におけるタンパク質合成を一過性に阻害する。Ｒ１５ＡおよびＲ１５Ｂ阻害剤を組み合わせることにより、タンパク質合成の持続的な阻害がもたらされる。同様に、Ｒ１５Ａ／Ｂ阻害剤は、タンパク質合成を持続的に阻害する。Ｙ軸は、タンパク質合成の相対速度を示す。Ｘ軸は、化合物（１０μＭ）の添加に続く時間を時間（ｈ）で示す。
【図１３】Ｒ１５Ａ／Ｂ阻害剤（化合物１０を２０μＭ）が、ＡＴＦ４の発現を誘導することを示す免疫ブロットを示す図であり、化合物は目的に適った効果が確認される。培養中の細胞への化合物の添加後の時間は、ＡＴＦ４免疫ブロットの下に示される（０、２、５、７．５時間）。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
第１の態様において、本発明は、式ＩＡ：
【００２８】
【化３】
2018517668.tif 000005
【００２９】
（式中：
Ｘａは、ＮまたはＣＲ２ａであり；
Ｙａは、ＮまたはＣＲ４ａであり；
Ｒ１ａは、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａ、Ｒ５ａは、各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表し；
但し：
ＸａおよびＹａがそれぞれＣＲ２ａおよびＣＲ４ａを表し、Ｒ２ａおよびＲ４ａが両方ともＨである場合：
Ｒ３ａおよびＲ５ａが両方ともＨを表すとき、Ｒ１ａはＦ、ＣｌまたはＢｒではなく；
Ｒ１ａがＣｌであり、Ｒ２ａがＨであるとき、Ｒ５ａはＦまたはＣｌではなく；
Ｒ１ａがＣｌであり、Ｒ５ａがＨであるとき、Ｒ３ａはＦではなく；
Ｒ１ａおよびＲ５ａが両方ともＨであるときまたはＲ１ａがＣｌであり、Ｒ５ａがＨであるとき、Ｒ３ａはＣｌではなく；
Ｒ１ａ、Ｒ３ａおよびＲ５ａは全てがＨではなく；
Ｒ３ａがＨであり、Ｒ５ａがＦであるとき、Ｒ１ａはＣｌではなく；
ＸａがＣＨを表し、ＹａがＣＲ４ａ（式中、Ｒ４ａはＣｌである）を表す場合：
Ｒ１ａおよびＲ５ａは両方がＣｌではなく；
Ｒ１ａおよびＲ５ａがＣｌであるとき、Ｒ３ａはＣｌではなく；
ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表し、Ｒ２ａおよびＲ４ａが両方ともＣｌである場合、Ｒ１ａ、Ｒ３ａおよびＲ５ａは全てがＨではない）
の化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００３０】
一実施形態において、Ｒ１ａはＦ、ＣｌまたはＢｒである。
別の実施形態において、Ｒ３ａはＦまたはＣｌである。
別の実施形態において、Ｒ５ａはＨである。
【００３１】
一実施形態において、ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表す場合、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＣｌを表す。
一実施形態において、ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表す場合、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの１つはＣｌを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの１つはＦを表す。
【００３２】
一実施形態において、ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表す場合、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの１つはＣｌを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの１つはＢｒを表す。
【００３３】
一実施形態において、Ｒ１ａおよびＲ３ａは両方ともＣｌを表す。
一実施形態において、ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表す場合、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち３つはＣｌを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨを表す。
【００３４】
一実施形態において、ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表す場合、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＣｌを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの１つはＦを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨを表す。
【００３５】
一実施形態において、ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表す場合、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＦを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの１つはＣｌを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨを表す。
【００３６】
一実施形態において、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち３つはＣｌまたはＦを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨを表し、任意選択で、ここで、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの少なくとも１つはＦである。
【００３７】
一実施形態において、ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表す場合、Ｒ３ａはＣｌまたはＦであり、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＦおよびＣｌから選択され、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨを表す。
【００３８】
一実施形態において、ＸａがＮを表す場合、Ｒ１ａおよびＲ３ａは両方ともＣｌを表す。
一実施形態において、
ＸａはＣＲ２ａであり；
ＹａはＣＲ４ａであり；
Ｒ１ａは、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ２ａ、Ｒ３ａおよびＲ４ａは、各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表し；
Ｒ５ａはＨを表し；
但し：
ＸａおよびＹａがＣＨを表す場合：
Ｒ３ａおよびＲ５ａが両方ともＨを表すとき、Ｒ１ａはＦ、ＣｌまたはＢｒではなく；
Ｒ１ａがＣｌであり、Ｒ２ａがＨであるとき、Ｒ５ａはＦまたはＣｌではなく；
Ｒ１ａがＣｌであり、Ｒ５ａがＨであるとき、Ｒ３ａはＦではなく；
Ｒ１ａおよびＲ５ａが両方ともＨであるときまたはＲ１ａがＣｌであり、Ｒ５ａがＨであるとき、Ｒ３ａはＣｌではなく；
Ｒ１ａ、Ｒ３ａおよびＲ５ａは全てがＨではなく；
Ｒ３ａがＨであり、Ｒ５ａがＦであるとき、Ｒ１ａはＣｌではなく；
ＸａがＣＨを表し、ＹａがＣＲ４ａ（式中、Ｒ４ａはＣｌである）を表す場合：
Ｒ１ａおよびＲ５ａは両方がＣｌではなく；
Ｒ１ａおよびＲ５ａがＣｌであるとき、Ｒ３ａはＣｌではなく；
ＸａがＣＲ２ａを表し、ＹａがＣＲ４ａを表し、Ｒ２ａおよびＲ４ａが両方ともＣｌである場合、Ｒ１ａ、Ｒ３ａおよびＲ５ａは全てがＨではない。
【００３９】
一実施形態において、式ＩＡの化合物は、Ｅ−異性体形態である。
第２の態様において、本発明は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状の処置における使用のための、以下の式ＩＢの化合物または薬学的に許容されるその塩を提供する：
【００４０】
【化４】
2018517668.tif 000006
【００４１】
式中：
Ｘｂは、ＮまたはＣＲ２ｂであり；
Ｙｂは、ＮまたはＣＲ４ｂであり；
Ｒ１ｂは、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂ、Ｒ５ｂは、各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表し；
但し：
ＸｂおよびＹｂが両方ともＮを表す場合、Ｒ１ａおよびＲ３ｂは両方がＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、Ｒ２ｂがＣｌである場合、Ｒ１ｂはＢｒではなく；
Ｒ３ｂおよびＲ４ｂが両方ともＨである場合、Ｒ１ｂおよびＲ２ｂは両方がＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、Ｒ２ｂおよびＲ３ｂが両方ともＨである場合、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ４ｂはＦであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂである場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂは全てがＨではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂがＨである場合、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂおよびＲ４ｂがＨである場合、Ｒ５ｂがＦであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂ（式中、Ｒ２ｂはＣｌである）であり、ＹｂがＣＲ４ｂ（式中、Ｒ４ｂはＨである）である場合、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂがＨであり、またはＲ３ｂおよびＲ４ｂがＨであり、Ｒ５ｂがＣｌであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではない。
【００４２】
一実施形態において、ＸｂはＣＲ２ｂを表し、ＹｂはＣＲ４ｂを表す。代替の実施形態において、ＸｂおよびＹｂは両方ともＮを表す。代替の実施形態において、ＸｂはＮを表し、ＹｂはＣＲ４ｂを表す。
【００４３】
式ＩＢの化合物は、Ｒ１５ＡおよびＲ１５Ｂ阻害剤である。
一実施形態において、Ｒ１ｂはＦ、ＣｌまたはＢｒを表す。
別の実施形態において、Ｒ３ｂはＦまたはＣｌを表す。
【００４４】
別の実施形態において、Ｒ５ｂはＨである。
一実施形態において、ＸｂがＣＲ２ｂを表し、ＹｂがＣＲ４ｂを表す場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つはＣｌを表す。
【００４５】
一実施形態において、ＸｂがＣＲ２ｂを表し、ＹｂがＣＲ４ｂを表す場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂの１つはＣｌを表し、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂの１つはＦを表す。
【００４６】
一実施形態において、Ｒ１ｂおよびＲ３ｂは両方ともＣｌを表す。
一実施形態において、ＸｂがＣＲ２ｂを表し、ＹｂがＣＲ４ｂを表す場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち３つはＣｌを表す。
【００４７】
一実施形態において、ＸｂがＣＲ２ｂを表し、ＹｂがＣＲ４ｂを表す場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つはＣｌを表し、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂの１つはＦを表す。
【００４８】
一実施形態において、ＸｂがＣＲ２ｂを表し、ＹｂがＣＲ４ｂを表す場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂのうち２つはＦを表し、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂの１つはＣｌを表す。
【００４９】
一実施形態において、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち３つはＣｌまたはＦを表し、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａのうち２つはＨを表し、任意選択で、ここで、Ｒ１ａ、Ｒ２ａ、Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ５ａの少なくとも１つはＦである。
【００５０】
一実施形態において、ＸｂがＮを表す場合、Ｒ１ｂおよびＲ３ｂは両方ともＣｌを表す。
一実施形態において、
ＸｂはＣＲ２ｂであり；
ＹｂはＣＲ４ｂであり；
Ｒ１ｂは、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒであり；
Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂおよびＲ４ｂは、各々独立してＨ、ＦまたはＣｌを表し；
Ｒ５ｂはＨであり；
但し：
ＸｂおよびＹｂが両方ともＮを表す場合、Ｒ１ａおよびＲ３ｂは両方がＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、Ｒ２ｂがＣｌである場合、Ｒ１ｂはＢｒではなく；
Ｒ３ｂおよびＲ４ｂが両方ともＨである場合、Ｒ１ｂおよびＲ２ｂは両方がＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、Ｒ２ｂおよびＲ３ｂが両方ともＨである場合、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ４ｂはＦであるとき、Ｒ１ａはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂである場合、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂは全てがＨではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂがＨである場合、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂであり、ＹｂがＣＲ４ｂであり、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂおよびＲ４ｂがＨである場合、Ｒ５ｂがＦであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではなく；
ＸｂがＣＲ２ｂ（式中、Ｒ２ｂはＣｌである）であり、ＹｂがＣＲ４ｂ（式中、Ｒ４ｂはＨである）である場合、Ｒ３ｂ、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂがＨであり、またはＲ３ｂおよびＲ４ｂがＨであり、Ｒ５ｂがＣｌであるとき、Ｒ１ｂはＣｌではない。
【００５１】
一実施形態において、式ＩＡの化合物は、Ｅ−異性体形態である。
用語「ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ」は用語「Ｒ１５Ａ」と交換可能に使用され、用語「ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ」は用語「Ｒ１５Ｂ」と交換可能に使用される。ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤は、全体を通じて「Ｒ１５Ａ／Ｂ」、「Ｒ１５ＡＢ」または「ＡＢ」とも称され得る。
【００５２】
本明細書において記載される化合物には、以下のものが含まれる：
【００５３】
【表１−１】
2018517668.tif 000007
【００５４】
【表１−２】
2018517668.tif 000008
【００５５】
【表１−３】
2018517668.tif 000009
【００５６】
【表１−４】
2018517668.tif 000010
【００５７】
上記で列挙した化合物のＥ異性体形態が、特に好ましい：
【００５８】
【表２−１】
2018517668.tif 000011
【００５９】
【表２−２】
2018517668.tif 000012
【００６０】
【表２−３】
2018517668.tif 000013
【００６１】
【表２−４】
2018517668.tif 000014
【００６２】
【表２−５】
2018517668.tif 000015
【００６３】
【表２−６】
2018517668.tif 000016
【００６４】
【表２−７】
2018517668.tif 000017
【００６５】
【表２−８】
2018517668.tif 000018
【００６６】
【表２−９】
2018517668.tif 000019
【００６７】
【表２−１０】
2018517668.tif 000020
【００６８】
【表２−１１】
2018517668.tif 000021
【００６９】
式ＩＡの新規化合物には、以下のものが含まれる：
化合物２：２−（（２，４−ジクロロピリミジン−５−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３：２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物４：２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物５：２−（３，５−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物６：２−（２，３，４−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物７：２−（２，４−ジクロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物９：２−（２−ブロモ−３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１３：２−（２，４−ジクロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１４：２−（２，３−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１８：２−（４，５−ジクロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２０：２−（２−クロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２２：２−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２５：２−（２−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２７：２−（２−クロロ−３，４−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２９：２−（２−クロロ−３，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３２：２−（２−クロロ−４，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
式ＩＡの新規化合物は、以下のＥ異性体形態から選択されてもよい：
化合物２（Ｅ）：（Ｅ）−２−（（２，４−ジクロロピリミジン−５−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物４（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物５（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３，５−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物６（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，３，４−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物７（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物８（Ｅ）：（Ｅ）−２−（４−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物９（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−ブロモ−３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１０（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，３，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１１（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３，４−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１３（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１４（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１５（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３−クロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１６（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１８（Ｅ）：（Ｅ）−２−（４，５−ジクロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２０（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２１（Ｅ）：（Ｅ）−２−（（２−クロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２２（Ｅ）：（Ｅ）−２−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２３（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２４（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２５（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２６（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，５−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２７（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，４−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２９（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３０（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３−クロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３１（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，３，６−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３２（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−４，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３４（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３，５−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
好ましい実施形態において、式ＩＡの化合物は化合物３、すなわち２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド、および化合物４、すなわち２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドから選択され、特に式ＩＡの化合物は（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドおよび（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドから選択される。
【００７０】
一実施形態において、式ＩＡの化合物は、（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドである。
別の実施形態において、式ＩＡの化合物は、（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドである。
【００７１】
式ＩＢの化合物は、以下から選択されてもよい：
化合物１（Ｅ）：（Ｅ）−２−（（４−クロロフェニル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物４（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物５（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３，５−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物６（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，３，４−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物７（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物８（Ｅ）：（Ｅ）−２−（４−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１０（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，３，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１１（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３，４−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１２（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１３（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１４（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１５（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３−クロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１７（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１８（Ｅ）：（Ｅ）−２−（４，５−ジクロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２１（Ｅ）：（Ｅ）−２−（（２−クロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２２（Ｅ）：（Ｅ）−２−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２３（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２４（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２５（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２６（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２，５−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２７（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，４−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物２９（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３０（Ｅ）：（Ｅ）−２−（３−クロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物３２（Ｅ）：（Ｅ）−２−（２−クロロ−４，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
好ましい実施形態において、式ＩＢの化合物は、化合物３、すなわち（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド、および化合物４、すなわち（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドから選択される。
【００７２】
一実施形態において、式ＩＢの化合物は、（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドである。
別の実施形態において、式ＩＢの化合物は、（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドである。
【００７３】
一実施形態において、式ＩＢの化合物は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂを阻害する。ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害は、結合分析から決定することができる。例えば、結合をＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）を使用して分析してＫＤ値を得ることができる。ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、Ｒ１５ＡとＲ１５Ｂとの間のＫＤ値における差が約３倍以下である化合物として定義されてもよい。特に、Ｒ１５ＡとＲ１５Ｂとの間のＫＤ値における差は、約２倍以下である。例えば、１つの標的に対する親和性は他のものと対比して、約３倍未満、特に約２倍未満である。「選択的な阻害剤」は、Ｒ１５ＡとＲ１５Ｂとの間のＫＤ値における差が、３倍超またはなおより好ましくは１０または２０倍である化合物として定義されてもよい。
【００７４】
細胞において、式ＩＢの化合物は、タンパク質合成を阻害する。グアナベンズとは異なり、ストレスを受けていない細胞（Ｔｓａｙｔｌｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３３２、９１〜９４、２０１１）におけるタンパク質合成を阻害しないＲ１５Ａ阻害剤、またはタンパク質合成を一過性に阻害するＲ１５Ｂ阻害剤、Ｒ１５ＡおよびＲ１５Ｂ阻害剤の組合せにより、タンパク質合成の持続的な阻害がもたらされる（図１２）。同様に、Ｒ１５ＡおよびＲ１５Ｂの阻害剤（化合物１０）は、タンパク質合成を持続的に阻害する（図１２）。ＡＴＦ４はＲ１５ＡおよびＲ１５Ｂの阻害剤によって誘導されることから、その化合物は目的に適うことが確認される（図１３）。
【００７５】
ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ選択的な阻害剤として、以下の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩の使用が本明細書において記載される：
【００７６】
【化５】
2018517668.tif 000022
【００７７】
式中
ＸはＮまたはＣＲ２であり；
ＹはＮまたはＣＲ４であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、ＣｌまたはＦから独立に選択される；
但し：
ＸがＣＲ２であり、ＹがＣＲ４である場合、式Ｉの化合物は少なくとも一置換され；
Ｒ３がＣｌである場合、Ｒ２はＣｌではなく；
Ｒ１およびＲ４両方がＣｌである場合、Ｒ２はＣｌではなく；
式Ｉの化合物が二置換される場合、ＸはＣＲ２であり、ＹはＣＲ４であり、Ｒ１はＣｌであり、Ｒ３はＣｌではなく；
Ｒ４はＣｌであり、式Ｉの化合物が二置換される場合、Ｒ２はＣｌではなく；
Ｒ１がＦである場合、Ｒ２はＣｌではなく；
ＸまたはＹはＮであり、式Ｉの化合物が一置換される場合、Ｒ１はＣｌではなく；
ＸがＣＲ２であり、ＹがＣＲ４であり、式Ｉの化合物が一置換される場合、Ｒ１はＦまたはＣｌではない。
【００７８】
ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ選択的な阻害剤または薬学的に許容されるその塩は、以下から選択されてもよい：
【００７９】
【表３】
2018517668.tif 000023
【００８０】
塩およびエステル
本明細書において記載される化合物は、塩またはエステル、特に薬学的に許容される塩またはエステルとして存在し得る。
【００８１】
本明細書において記載される化合物の薬学的に許容される塩は、その適切な酸付加塩または塩基塩を含む。適切な薬学的塩の総説は、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、６６、１〜１９（１９７７）中に見出され得る。薬学的にまたは獣医学的に許容されない塩であっても、中間体として価値のあるものとなり得る。
【００８２】
エステルは、エステル化される官能基に応じて、有機酸またはアルコール／水酸化物のいずれかを使用して形成される。
鏡像異性体／互変異性体
先に論じた本発明の全ての態様において、本発明は、適切な場合、本発明の化合物の全ての鏡像異性体、ジアステレオ異性体および互変異性体を含む。当業者であれば、光学的性質（１つまたは複数のキラル炭素原子）または互変異性特性を保有する化合物を認識する。対応する鏡像異性体および／または互変異性体は、当技術分野において公知の方法によって単離／調製できる。鏡像異性体は、そのキラル中心の絶対配置によって特徴づけられ、Ｃａｈｎ、ＩｎｇｏｌｄおよびＰｒｅｌｏｇのＲおよびＳの順序付けルールにより表される。このような従来法は、当技術分野において周知である（例えば、「Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第３版、Ｍａｒｃｈ，Ｊ．、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８５を参照されたい）。
【００８３】
立体異性体および幾何異性体
本発明の化合物のいくつかは、立体異性体および／または幾何異性体として存在し得、例えば、それらは、１つまたは複数の不斉および／または幾何中心を保有し得るため、２以上の立体異性および／または幾何形態で存在し得る。本発明は、それらの阻害剤の個々の立体異性体および幾何異性体全て、ならびにそれらの混合物の使用を企図する。特許請求の範囲において使用される用語は、これらの形態が（必ずしも同程度までとは限らないが）適切な機能的活性を保持する限り、前記形態を包含する。
【００８４】
本発明は、薬剤または薬学的に許容されるその塩の全ての適切な同位体変種も含む。本発明の薬剤または薬学的に許容されるその塩の同位体変種は、少なくとも１個の原子が、同じ原子番号を有するが自然界において通常見られる原子質量とは異なる原子質量を有する原子によって置き換えられているものとして定義される。薬剤および薬学的に許容されるその塩に組み込まれ得る同位体の例は、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素および塩素の同位体を含む。薬剤および薬学的に許容されるその塩のある特定の同位体変種、例えば、３Ｈまたは１４Ｃ等の放射性同位体が組み込まれている変種は、薬物および／または基質組織分布研究において有用である。トリチウム化、すなわち３Ｈ、および炭素−１４、すなわち１４Ｃ同位体は、それらの調製の容易さおよび検出性によって特に好ましい。さらに、重水素、すなわち２Ｈ等の同位体による置換は、より優れた代謝安定性から生じるある特定の治療上の利点、例えば、インビボ半減期の増大または必要投薬量の低減を生じさせることができ、それ故、いくつかの状況においては好ましいことがある。例えば、本発明は、任意の水素原子が重水素原子によって置き換えられた式Ｉの化合物を含む。本発明の薬剤および本発明の薬学的に許容されるその塩の同位体変種は、概して、適切な試薬の適切な同位体変種を使用し、従来の手順によって調製され得る。
【００８５】
プロドラッグ
本発明は、プロドラッグ形態の本発明の化合物、すなわち、任意の例示的な化合物による活性親薬物をインビボで放出する共有結合化合物をさらに含む。そのようなプロドラッグは、概して、ヒトまたは哺乳類対象への投与時に修飾を逆転できるように１つまたは複数の適切な基が修飾された本発明の化合物である。逆転は通常、そのような対象において自然に存在する酵素によって実施されるが、逆転をインビボで実施するために、そのようなプロドラッグと一緒に第２の薬剤を投与することが可能である。そのような修飾の例は、エステル（例えば、上述したもののいずれか）を含み、ここで、逆転はエステラーゼ等によって行われ得る。他のそのようなシステムは、当業者には周知である。
【００８６】
溶媒和物
本発明は、本発明の化合物の溶媒和物形態も含む。特許請求の範囲において使用される用語は、これらの形態を包含する。
【００８７】
多形体
本発明は、その種々の結晶形態、多形体形態および（無水）水和形態である本発明の化合物にさらに関する。そのような化合物の合成的調製において使用される精製および／または溶媒からの単離の方法をわずかに変更することにより、化学化合物がそのような形態のいずれかで単離され得ることは、製薬業界内で十分に確立されている。
【００８８】
治療適用
本明細書において記載される化合物は、種々の疾患および障害を処置することおよび予防することにおいて、潜在的な治療適用を有する。
【００８９】
本発明の１つの態様は、療法における使用のための式ＩＡの化合物に関する。
本発明の別の態様は、対象に、治療有効量の本発明の化合物を投与するステップを含む、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはタンパク質ホメオスタシスの混乱（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）に関連する障害を有する対象を処置する方法に関する。
【００９０】
本発明の別の態様は、対象に、治療有効量の本発明の化合物を投与するステップを含む、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状を有する対象を処置する方法に関する。
【００９１】
本発明のさらなる態様は、対象に、治療有効量の本発明の化合物を投与するステップを含む、対象における、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはタンパク質ホメオスタシスの混乱に関連する障害を予防する方法に関する。
【００９２】
本発明のさらなる態様は、対象に、治療有効量の本発明の化合物を投与するステップを含む、対象における、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状を予防する方法に関する。
【００９３】
本発明の別の態様は、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはタンパク質ホメオスタシスの混乱に関連する障害の処置または予防における使用のための、式ＩＡおよび式ＩＢの化合物に関する。
【００９４】
本発明の別の態様は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状の処置または予防における使用のための、式ＩＡまたは式ＩＢの化合物に関する。
【００９５】
本発明のさらに別の態様は、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはタンパク質ホメオスタシスの混乱に関連する障害の処置または予防のための医薬の製造における、式ＩＡおよび式ＩＢの化合物の使用に関する。
【００９６】
本発明のさらに別の態様は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状を処置または予防のための医薬の製造における、式ＩＡまたは式ＩＢの化合物の使用に関する。
【００９７】
ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ関連疾患は、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂを阻害することによって改善させることができる疾患である。これらには、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはタンパク質ホメオスタシス（プロテオスタシス）の混乱に関連する障害が含まれ、例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病、運動失調症および他のポリグルタミン障害ならびに網膜変性、緑内障、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）およびプリオン病；微小管結合タンパク質タウの凝集に関連する障害、ならびに、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症およびパーキンソン認知症症候群、嗜銀顆粒性疾患（ａｒｇｙｒｏｐｈｉｌｉｃ  ｇｒａｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）、慢性外傷性脳症、大脳皮質基底核変性症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病（ＤＮＴＣ）、ダウン症候群、家族性英国型認知症（ＦＢＤ）、家族性デンマーク型認知症（ＦＤＤ）、前頭側頭葉認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）および１７番染色体連鎖パーキンソン症候群（ＦＴＤＰ−１７）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカ病、グアドループパーキンソン症候群（Ｇａｕｄｅｌｏｕｐｅａｎ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ）、筋緊張性ジストロフィー、脳の鉄蓄積を伴う神経変性、Ｃ型ニーマンピック病、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン病（ｎｏｎ−Ｇｕａｍａｎｉａｎ  ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ  ｔａｎｇｌｅｓ）、ピック病、脳炎後パーキンソン症候群、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、ＳＬＣ９Ａ６関連性精神遅滞、亜急性硬化性全脳炎、神経原線維変化型認知症（ｔａｎｇｌｅ−ｏｎｌｙ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、および球状のグリア封入を伴う白質タウオパシー；ミエリン障害、例えば、多発性硬化症、ペリツェウスメルツバッハー病、白質消失病、急性散在性脳脊髄炎、脳室周囲白質軟化症、脳室周囲白質傷害、脊髄癆、デビック病、視神経炎、進行性多巣性白質脳症、横断性脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパシー（ａｎｔｉ−ＭＡＧ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、副腎脳白質ジストロフィー、副腎脊髄神経症、びまん性白質傷害（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｗｈｉｔｅ  ｍａｔｔｅｒ  ｉｎｊｕｒｙ）、ギランバレー症候群、橋中央ミエリン溶解、白質ジストロフィーなどの遺伝性脱髄疾患、およびシャルコ−マリートゥース病；小胞体（ＥＲ）において作られる任意のタンパク質のミスフォールディングまたは輸送欠陥によって引き起こされる疾患、例えば、嚢胞性線維症、先天性甲状腺機能低下性甲状腺腫（ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌ  ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉｄ  ｇｏｉｅｔｅｒ）、家族性神経下垂体性糖尿病（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｎｅｕｒｏｈｙｐｏｐｈｙｓｅａｌ  ｄｉａｂｅｔｅｓ）、骨形成不全を含むプロコラーゲン生合成障害、高コレステロール血症、アルファ−１アンチトリプシン欠損症、リソソーム障害（ｌｙｓｏｍａｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、網膜色素変性症（ｒｅｔｉｎｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）（ＲＰ）、および炎症性腸���患；代謝疾患、例えば、糖尿病、ウォルコットラリソン症候群、肥満症、インスリン抵抗性、高脂血症、脂肪肝およびアテローム性動脈硬化症；癌；老化；炎症；および関節リウマチ、１型糖尿病および白斑を含む他の障害が含まれる。
【００９８】
１つの好ましい実施形態において、本明細書において記載される化合物は、病理学的なＵＰＲまたはＩＳＲおよび／またはタンパク質ホメオスタシスにおける欠陥に関連する障害を処置することにおける使用のためのものである。
【００９９】
本明細書において使用する場合、用語「方法」は、化学、薬理学、生物学、生化学および医学技術分野の実務家に公知であるか、または該実務家によって公知の様式、手段、技術および手順から容易に開発されるかのいずれかである様式、手段、技術および手順を含むがこれらに限定されない、所与の作業を達成するための様式、手段、技術および手順を指す。
【０１００】
用語「治療有効量」は、治療されている疾患または障害の症状の１つまたは複数をある程度緩和するであろう、投与される化合物の量を指す。
本明細書において、用語「処置すること」は、疾患もしくは障害の進行を、抑止し、実質的に阻害し、遅らせ、もしくは逆行させること、疾患もしくは障害の臨床症状を実質的に改善させること、または疾患もしくは障害の臨床症状の出現を実質的に予防することを含む。
【０１０１】
語句「医薬の製造」は、さらなる活性剤についてのスクリーニングプログラムにおけるまたはそのような医薬の製造の任意の段階における、その使用に加えて、直接的に医薬としての上記の化合物を含む。
【０１０２】
作用機序において潜在的なタンパク質またはペプチドミスフォールディングおよび／または凝集を伴う疾患
疾患原因タンパク質（Ｄｉｓｅａｓｅ−ｃａｕｓｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）は、生涯を通じて発現されるが、変性疾患は主として遅発性である。このことは、異なる疾患原因タンパク質が、時間を経て次第に有害になることを示唆する。ミスフォールドしたタンパク質が別個の変性疾患の原因であることは現在十分に確立されているが、それらがなぜ蓄積するかは大部分が不確かなままである。細胞は、通常、タンパク質が、正確にフォールドし、実際全ての細胞が、数十年間も潜在的に有害なタンパク質を非常に効率的に取り扱う強力で洗練されたタンパク質品質管理システムを有することを保証するようにしている。しかし、タンパク質品質管理機構は年齢とともに次第に機能しないようであり、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積につながるとともに、細胞および生物にとって結果的に破局的な結末をもたらす。これらのミスフォールドした／凝集性のタンパク質またはペプチドは、細胞の内側または外側に存在することができ、あらゆる位置に見出され得る。原理的には、ミスフォールドしたタンパク質に対する自然の細胞防御をブーストすることは、ミスフォールドした／凝集傾向タンパク質がその病理に存在する多様なタンパク質ミスフォールディング疾患における病状を低減させるために、一般的なアプローチを提示するはずである。本発明は、そのようなアプローチを記載し、哺乳動物においてその安全性および有効性の両方を実証する。
【０１０３】
神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、運動失調症および他のポリグルタミン障害、タウオパシーならびに、網膜変性、緑内障、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）およびプリオン病は、致命的であり、加齢集団における多数の個体に影響を及ぼす。これらの疾患は、臨床的に多様であるが、共通の機構を共有する。それらは、異常型形状の特定のタンパク質の蓄積に起因して脳の選択的な領域中の特定の神経細胞の進行性の機能不全および死によって引き起こされる。ミスフォールドしたおよび凝集傾向タンパク質には、Ａβ４２、α−シヌクレイン、ＴＡＵ、ＴＤＰ−４３、ＴＬＳ／ＦＵＳ、ＳＯＤ１、ハンチントンおよびポリグルタミン伸張を有する他のタンパク質、プリオンおよびＣ９ＯＲＦ７２の翻訳産物が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０４】
出願人は、実施例１の化合物が、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ−ＰＰ１を選択的に阻害し、マウスにおけるタンパク質ミスフォールディング疾患を癒すことを実証した。したがって、本明細書において記載されるＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤は、ミスフォールドしたタンパク質が、特にミスフォールドしたタンパク質の蓄積を伴って関与する種々の疾患の処置に治療適用を有する。式ＩＢの化合物などのＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤もまた、ミスフォールドしたタンパク質が関与する疾患の処置に適用を有すると期待される。
【０１０５】
本発明は、ポリグルタミン障害の療法を提供する。
ハンチントン病は、無関係のタンパク質中でグルタミンに翻訳されるＣＡＧコドンの伸張を特徴とする「ポリグルタミン障害」という広範囲のグループの障害に属する。ハンチントン病は、ハンチントンをコードする遺伝子における伸張によって引き起こされ；脊髄性および延髄性筋萎縮、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、および脊髄小脳運動失調は、それぞれ、アンドロゲンレセプター、アトロフィン１、アタキシン１、２、３、α−電位依存性カルシウムチャネルサブユニットおよびＴＢＰをコードする遺伝子における伸張によって引き起こされる。ＣＡＧ伸張は、ポリグルタミンに翻訳され、影響を受けたタンパク質の凝集を引き起こす。したがって、これらのようなポリグルタミン障害の予防および／または処置は、本発明の範囲内である。
【０１０６】
例として、出願人は、実施例１の化合物が、哺乳動物においてハンチントン病を改善させることを示した。したがって、理論に縛られるものではないが、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤は、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、運動失調症および他のポリグルタミン障害ならびに、網膜変性、緑内障、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、タウオパシーおよびプリオン病が含まれるが、これらに限定されない、ミスフォールドした／凝集性タンパク質によって引き起こされる多様な疾患に対して保護作用を有することが考えられる。式ＩＢの化合物などのＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤は、同じ効果を有すると期待される。
【０１０７】
疾患は、ミスフォールディング／凝集が、今日公知のおよび上記のタンパク質とともに関与する任意の疾患を含むが、新しいタンパク質およびおそらく将来における新しい疾患にも適用される。
【０１０８】
好ましい実施形態において、本発明は、プロテオスタシス疾患の療法を提供する。
別の実施形態において、本明細書において記載される化合物は、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積が作用機序に関与する疾患を処置することにおける使用のためのものである。
【０１０９】
さらなる実施形態において、疾患または障害は、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、運動失調症または他のポリグルタミン障害、網膜変性、緑内障、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、タウオパシーまたはプリオン病である。
【０１１０】
特定の実施形態において、本明細書において記載される化合物は、ハンチントン病の処置における使用のためのものである。
別の特定の実施形態において、本明細書において記載される化合物は、パーキンソン病の処置における使用のためのものである。
【０１１１】
一実施形態において、疾患または障害は、微小管結合タンパク質タウの凝集に関連する。
出願人は、実施例１の化合物が、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ−ＰＰ１を選択的に阻害し、マウスにおけるタンパク質ミスフォールディング疾患を癒すことを実証した。ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、同じ機構であるミスフォールドしたタンパク質の蓄積によって引き起こされる疾患の進行を、予防または停止するのにも有用であり得る。式ＩＢの化合物などのＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤は、この適用を有することも期待される。
【０１１２】
そのような疾患の例には、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症および、パーキンソン症候群および認知症、嗜銀顆粒性疾患、慢性外傷性脳症、大脳皮質基底核変性症、石灰沈着を伴うびまん性神経原線維変化病（ＤＮＴＣ）、ダウン症候群、家族性英国型認知症（ＦＢＤ）、家族性デンマーク型認知症（ＦＤＤ）、前頭側頭葉認知症および１７番染色体連鎖パーキンソン症候群（ＦＴＤＰ−１７）（ＭＡＰＴ変異によって引き起こされる）、前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）（いくつかの事例はＣ９ＯＲＦ７２変異によって引き起こされる）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカ病、グアドループパーキンソン症候群、筋緊張性ジストロフィー、脳の鉄蓄積を伴う神経変性、Ｃ型ニーマンピック病、神経原線維変化を伴う非グアム型運動ニューロン病、ピック病、脳炎後パーキンソン症候群、プリオンタンパク質脳アミロイド血管症、進行性皮質下グリオーシス、進行性核上性麻痺、ＳＬＣ９Ａ６関連性精神遅滞、亜急性硬化性全脳炎、神経原線維変化型認知症、球状のグリア封入を伴う白質タウオパシーが含まれる。
【０１１３】
一実施形態において、疾患は、ミエリン障害である。
ミエリンは、中枢および末梢神経系の両方に豊富なタンパク質である。ミエリンは、末梢神経系中の中枢神経系中のオリゴデンドロサイトおよびシュワン細胞の２つの細胞型によって産生される。ミエリンは、軸索の周囲に鞘を形成して軸索に沿う電気的インパルスの伝導の速度を保証し、軸索からの散逸からの電流を防止する。ミエリン機能は、神経系にとって必須である。
【０１１４】
ミエリン障害は、世界中で２５０万人超に影響を及ぼし、ミエリンにおける損傷に関連する任意の疾患として定義される。ミエリン障害は、運動機能障害、感覚機能障害、認知機能不全、感情障害、および協調運動障害を含むが、これらに限定されない多様な症状によって顕在化する。
【０１１５】
多くの脱髄性障害が存在し、そのうちで最も共通するものは多発性硬化症（ＭＳ）である。多発性硬化症は、自己免疫疾患であり、脳および脊髄に影響を及ぼし、脳において脱髄を生じさせる。ＭＳに加えて、他の脱髄性障害には、ペリツェウスメルツバッハー病および白質消失病、急性散在性脳脊髄炎、脳室周囲白質軟化症、脳室周囲白質傷害、脊髄癆、デビック病、視神経炎、進行性多巣性白質脳症、横断性脊髄炎、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー、抗ＭＡＧ末梢性ニューロパシー、副腎脳白質ジストロフィー、副腎脊髄神経症、びまん性白質傷害、ギランバレー症候群、橋中央ミエリン溶解、白質ジストロフィーなどの遺伝性脱髄疾患、およびシャルコ−マリートゥース（ＣＭＴ）病を含むが、これらに限定されない。
【０１１６】
ＣＭＴ疾患は、いくつかの遺伝子中の変異によって引き起こされるミエリンニューロパシーのグループである。末梢性ミエリンタンパク質ＰＭＰ２２中の変異は、ＣＭＴの最も共通する原因である。ＰＭＰ２２（Ｔｒｅｍｂｌｅｒ−Ｊ）中の変異は、ＰＭＰ２２のミスフォールディングを引き起こし、末梢神経系中のミエリンにおける欠陥に起因して、マウスにおいてヒトにおけるＣＭＴに似た疾患をもたらす。出願人は、実施例１の化合物が、神経障害性マウスからの外植片におけるミエリン形成を改善することができることを実証した。出願人は、神経障害性マウスからの外植片におけるミエリン形成を改善することが、哺乳動物における有効性を予想することを実証した（Ｄａｓら  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１５）。したがって、実施例１の化合物は、機構が類似するおよびｅＩＦ２α経路が関与する（ＬｉｎおよびＰｏｐｋｏ、Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、１２、３７９〜３８５、２００９）ことが公知であるならびに式（Ｉ）の化合物などのＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤がＣＭＴを処置することにおいて有用であることも見込まれる、哺乳動物におけるＣＭＴおよび他のミエリン障害を処置することにおいて有用である。
【０１１７】
一実施形態において、本明細書において記載される化合物は、ミエリン障害を処置することにおける使用のためのものである。
別の実施形態において、本明細書において記載される化合物は、シャルコ−マリートゥース病を処置することにおける使用のためのものである。
【０１１８】
さらなる実施形態において、本明細書において記載される化合物は、多発性硬化症などの中枢神経系のミエリン障害を処置することにおける使用のためのものである。ＣＭＴおよびＭＳの機構がミエリン産生細胞（ＣＭＴにおいてシュワン細胞およびＭＳにおいてオリゴデンドロサイト（ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｅｃｙｔｅｓ））の消耗に類似し、ｅＩＦ２α−ＲＲＲ１Ｒ１５Ａ経路の病理学的なシグナル伝達が関与することが公知である（ＬｉｎおよびＰｏｐｋｏ、Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、１２、３７９〜３８５、２００９）。出願人は、実施例１が、髄鞘障害に有効であることを実証し、中枢および末梢神経系の両方における実施例１の化合物のバイオアベイラビリティーも実証したので（図５）、式ＩＢの化合物などのＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤ならびにＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤が、多発性硬化症を処置することにおいて有用であることが見込まれる。
【０１１９】
一実施形態において、疾患は、ミスフォールディングおよびミスロカリゼーションまたは輸送欠陥を生じさせるタンパク質における変異の結果として出現する疾患である。
出願人は、実施例１の化合物が、小胞体（ＥＲ）において合成される１つのミスフォールドしたタンパク質ＰＭＰ２２によって引き起こされる欠陥をレスキューすることができることを実証した。作用機序（フォールディングを増加させる翻訳の減少）に起因して、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤ならびにＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤が、膜貫通または分泌タンパク質を含む、ＥＲにおいて作られる任意のタンパク質のミスフォールディングまたは輸送欠陥に起因する疾患の処置に関しても有用である。
【０１２０】
そのような疾患の例には、膜貫通タンパク質（ＣＦＴＲ）のフォールディングを損なわせる変異によって引き起こされる嚢胞性線維症；ホルモン  チログロブリンのミスフォールディングおよび／または輸送欠陥に起因するチログロブリン欠乏を伴う先天性甲状腺機能低下性甲状腺腫；循環性アルギニンバソプレッシンのミスフォールディングおよび非存在によって引き起こされる家族性神経下垂体性尿崩症（これには、特定の形態の遺伝的に受け継いだ腎性尿崩症も含まれ得る）；疾患がコラーゲンのフォールド、集合および合成の失敗によって引き起こされるプロコラーゲン生合成障害、例えば、骨形成不全であるが、これに限定されない；より一般には、タンパク質のミスフォールディング／合成の欠乏またはミスロカリゼーションが作用機序に存在する結合組織の任意の遺伝的な疾患、例えば、細胞外マトリックスのタンパク質の欠陥に関連する成長板異形成；合成の欠乏、細胞内輸送の変化、または異常な機能の原因となるＬＤＬレセプターにおける変異によって引き起こされる分子の欠陥を伴う、高コレステロール血症；アルファ１アンチトリプシンのミスフォールディングに起因するアルファ−１アンチトリプシン欠損症；リソソーム機能に関連するタンパク質のミスフォールディングに起因するリソソーム障害（ｌｙｓｏｍａｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、例えば、ゴーシェ病、ニーマンピック病およびアンダーソンファブリー病；網膜色素変性症（ｒｅｔｉｎｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）（ＲＰ）、これはロドプシンタンパク質のミスフォールディング、それらのＥＲ滞留、そして結果的なＥＲストレスおよび細胞死によって引き起こされる遺伝性網膜変性の最も一般的な形態である；ならびにＥＲストレスに関連する炎症性腸疾患が含まれる。
【０１２１】
同じ理由により、式ＩＢの化合物などのＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤またはＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤を使用して病理学的なＵＰＲおよび／または膜貫通タンパク質における欠陥に関連する以下の障害を処置することができる（ＬｉｎおよびＰｏｐｋｏ、Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、１２、３７９〜３８５、２００９）。これらの障害には、膜プロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）遺伝子における変異に関連するペリツェウスメルツバッハー病、および白質消失（ＶＷＭ）病ならびに多発性硬化症、一般的なミエリン障害が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２２】
一実施形態において、本明細書において記載される化合物は、タンパク質のミスフォールディングおよびミスロカリゼーションまたは輸送欠陥をもたらすタンパク質における変異から発生する疾患の処置における使用のためのものである。
【０１２３】
別の実施形態において、タンパク質のミスフォールディングおよびミスロカリゼーションまたは輸送欠陥をもたらすタンパク質における変異から発生する疾患は、嚢胞性線維症、先天性甲状腺機能低下性甲状腺腫、家族性神経下垂体性尿崩症、プロコラーゲン生合成障害、例えば、骨形成、高コレステロール血症、アルファ−１アンチトリプシン欠損症、リソソーム障害（ｌｙｓｏｍａｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、例えば、ゴーシェ病、ニーマンピック病およびアンダーソンファブリー病、網膜色素変性症（ｒｅｔｉｎｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）および炎症性腸疾患から選択される。
【０１２４】
一実施形態において、疾患は、代謝疾患である。
代謝疾患、例えば、糖尿病、肥満、インスリン抵抗性、高脂血症、肝脂肪疾患、およびアテローム性動脈硬化症が、病理学的なＥＲストレスに関連することが公知であり、ＵＰＲの薬理学的なモジュレーターが、治療の利益を有し得ることが考えられる（ＣａｏおよびＫａｕｆｍａｎ、２０１２、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ、ｖｏｌ．２２（１６））。しかし、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤が以前に利用可能ではなく、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害が有害であると予想されたので、さらにホスファターゼを阻害することが挑戦であったので、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂが代謝疾患における治療標的であり得るかについては不確かであった。
【０１２５】
本発明者らは、実施例１の化合物が、哺乳動物における代謝性障害を改善することができることを実証した（図１１）。したがって、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、例えば、糖尿病、肥満、肝脂肪疾患、およびアテローム性動脈硬化症に限定されない、代謝性障害を処置するため有用である。式（Ｉ）の化合物などのＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害剤が、代謝性障害を処置することにおいて有用であることも期待される。
【０１２６】
一実施形態において、本明細書において記載される化合物は、代謝性障害の処置における使用のためのものである。
好ましい実施形態において、代謝性障害は、糖尿病、肥満、肝脂肪疾患、およびアテローム性動脈硬化症から選択される。
【０１２７】
ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ選択的な阻害剤は、作用機序にＵＰＲが関与する、関節リウマチ、糖尿病、ウォルコットラリソン症候群（Ｗｏｌｋｏｔｔ  Ｒａｌｌｉｓｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、炎症性腸疾患および白斑を含む、他の障害の処置においても有用である（ＣａｏおよびＫａｕｆｍａｎ、２０１２、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ、ｖｏｌ．２２（１６））。式（Ｉ）の化合物などのＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤が、これらの障害の処置において有用であることも期待される。
【０１２８】
癌
一実施形態において、本明細書において記載される化合物は、癌を処置することにおける使用のためのものである。
【０１２９】
癌細胞は高い代謝要求を有し、これらの増殖は効率的なタンパク質合成に依存する。翻訳開始は、タンパク質ホメオスタシス、分化、増殖および悪性転換の制御に重要な役割を担う。翻訳開始を増加させることにより、癌開始（ｃａｎｃｅｒ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ）に寄与し、逆に、翻訳開始を減少させることにより、腫瘍成長を低減させることができた（Ｄｏｎｚｅら、１９９５、ＥＭＢＯ  Ｊ、１４、３８２８〜３４；Ｐｅｒｖｉｎら、２００８、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、６８、４８６２〜７４；Ｃｈｅｎら、２０１１、Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ、７、６１０〜６）。理論に縛られることを望まないが、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂを阻害することにより、腫瘍細胞において翻訳が低減され、したがって、腫瘍成長を低減されることが考えられる。
【０１３０】
加齢
タンパク質合成を低減させることにより、寿命が増加することを示す大量の文献がある（Ｔａｖｅｒｎａｒａｋｉｓ、２００８、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、１８（５）、２２８〜２３５）。したがって、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂを阻害することによってタンパク質合成を低減させると、寿命が増加すると予想することは合理的である。
【０１３１】
炎症
サルブリナルは、ｅＩＦ２ａリン酸化の誘導物質であり、未知の機構によってＲ１５ＡおよびＲ１５Ｂホスファターゼを阻害すると考えられる。サルブリナルは、炎症を抑制することが見出された（Ｈａｍａｍｕｒａら、２０１５、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ、２７（４）、８２８〜８３５）。しかし、サルブリナルは、毒性問題に起因してヒトにおいて使用することができない。本明細書において開示されるＲ１５Ａ／Ｂ阻害剤が、炎症が関与する疾患についての潜在的な治療であることが合理的に予測される。
【０１３２】
炎症に関連する疾患の例の非網羅的なセットは、関節炎、潰瘍性大腸炎および炎症性腸疾患、炎症に関連する感染症、線維症、炎症に関連する神経変性疾患または炎症に関連する広く任意のヒト疾患である。
【０１３３】
特に、炎症に関連する疾患には、関節リウマチ；多発性硬化症；炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、この用語は主に潰瘍性大腸炎およびクローン病の２つの条件を記載するために使用される；糖尿病；ループス腎炎；自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）；嚢胞性線維症；グレーブス病；心筋炎；自己免疫性肝炎；アルツハイマー病；パーキンソン病；強皮症；胆嚢疾患；橋本甲状腺炎；甲状腺酵素およびタンパク質に対する抗体によって誘発される腸に初発する自己免疫反応；ワクチン接種などの外部ストレスに対する自己免疫応答によってしばしば誘発される神経系のギランバレー自己免疫攻撃；リウマチ性多発筋痛；白血病；および喘息が含まれる。
【０１３４】
抗ウイルス剤
本明細書において記載される化合物は、抗ウイルス剤として使用され得る。タンパク質合成は、ウイルス複製に必要である。ＡＢ阻害剤がタンパク質合成を阻害することが示されたので、それらがウイルス複製をブロックし、ヒトにおいて感染症を予防するのに有用であると予測することは合理的である。実際、例として、ｅＩＦ２ａリン酸化の誘導物質であるサルブリナルが、単純ヘルペスウイルスの複製をブロックすることが以前に示されている（Ｂｏｙｃｅ，Ｍ．ら（２００５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０７（５７１１）、９３５〜９３９）。しかし、サルブリナルは、毒性問題に起因してヒトにおいて使用することができない。したがって、本明細書において開示されるＲ１５Ａ／Ｂ阻害剤は、他の翻訳阻害剤に対して治療上の利点を有し得る。
【０１３５】
出願人は、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤が、ハンチントン病を予防できることを示した。ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂは、構成的に発現され、したがって、疾患標的により広く適用可能である。標的を短いパルスによってのみ阻害するような用量で投与されるＡＢ阻害剤が、大部分の（全部ではないが）タンパク質ミスフォールディング疾患を予防すると予測することは合理的である。
【０１３６】
医薬組成物
本発明のさらなる態様によると、任意の薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルと組み合わせた治療における使用のための本明細書において記載される化合物を含む医薬組成物が提供される。
【０１３７】
用語「医薬組成物」は、本発明の文脈において、活性剤および追加の１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む組成物を意味する。
適切な薬学的に許容される賦形剤は、当業者に知られており、本発明の化合物を動物に投与するために適した許容される組成物、材料、担体、希釈剤またはビヒクルを一般に含む。
【０１３８】
一実施形態において、動物は哺乳動物である。別の実施形態において、哺乳動物はヒトである。
医薬製剤は、経口、局所（真皮、頬側、経眼および舌下を含む）、直腸または非経口（皮下、皮内、筋肉内および静脈内を含む）、例えば吸入による経鼻、眼内および経肺投与に適するものを含む。製剤は、適切な場合には、好都合なことに個別の投薬単位で提示されてよく、薬学技術分野において周知である任意の方法によって調製できる。
【０１３９】
投薬量は、患者の要求、処置される状態の重症度および採用される活性成分の特性に応じて変動してもよい。有効用量の決定は、過度の負荷なく当業者の権限の範囲内である。ヒトを含む哺乳動物への投与についての適切な剤形は、通常、最大で１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、または、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇであってもよい。
【０１４０】
本発明のさらなる態様によれば、活性化合物を、例えば混合によって担体と会合させるステップを含む、上述した通りの医薬組成物の調製のためのプロセスが提供される。
概して、製剤は、活性剤を液体担体もしくは微粉化した固体担体または両方と均一で密接に会合させ、次いで、必要ならば、生成物を成形することによって調製される。本発明は、本明細書において開示される化合物を薬学的に許容される担体またはビヒクルと併用するかまたはそれらと連携させるステップを含む、医薬組成物を調製するための方法にまで及ぶ。いずれの方法も、活性化合物を液体担体もしくは微粉化した固体担体または両方と会合させるステップと、次いで、必要ならば、生成物を所望の製剤に成形するステップとを含む。
【０１４１】
組合せ
特に好ましい実施形態において、１つまたは複数の本発明の化合物は、１つまたは複数の他の活性剤、例えば、市場で入手可能な既存の薬物と組み合わせて投与される。そのような事例では、本発明の阻害剤は、１つまたは複数の他の活性剤と連続的に、同時にまたは順次に投与され得る。
【０１４２】
Ｒ１５Ａ阻害剤である化合物とＲ１５Ｂ阻害剤である化合物との組合せは、Ｒ１５ＡおよびＲ１５Ｂ両方を阻害する化合物と同じ有利な特性をもたらす。したがって、本発明の一態様は、Ｒ１５Ａ阻害化合物およびＲ１５Ｂ阻害化合物の組合せを提供する。ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によって軽減される病状の処置における有用な組合せは、例えば、ミスフォールドしたタンパク質の蓄積またはプロテオスタシス障害に関連する障害である。組合せは、公知のＲ１５Ａ阻害剤グアナベンズおよびＲ１５Ｂ阻害剤（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド（化合物１６）であり得る。
【０１４３】
概して、薬物は組み合わせて使用するとより有効である。特に、主要な毒性、作用機序および耐性機序の重複を回避するために、併用療法が望ましい。さらに、大部分の薬物は、それらの最大忍容用量で、そのような用量間の時間間隔を最小にして投与することも望ましい。薬物を組み合わせることの主要な利点は、生化学的相互作用により相加作用または考えられる相乗作用を促進し得ること、また耐性の発生を減少させ得ることである。
【０１４４】
有益な組合せは、特定の障害の治療において価値があることが公知のまたは疑われる薬剤を有する、試験阻害剤の阻害活性を研究することによって示唆され得る。この手順を使用して、薬剤の投与順序、すなわち、送達の前か、同時か、後かを決定することもできる。そのようなスケジューリングは、本明細書において同定される全ての活性剤の特色となり得る。
【実施例】
【０１４５】
本発明による化合物の調製
本発明による化合物は、Ｅ異性体形態に関して示される以下の手順により調製することができる。これらの方法から、いかにして他の異性体形態またはラセミ化合物を得ることができるかは当業者に公知である。
【０１４６】
化合物１−（Ｅ）−２−（（４−クロロフェニル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１４７】
【化６】
2018517668.tif 000024
【０１４８】
実験の詳細：
計算：
【０１４９】
【表４】
2018517668.tif 000025
【０１５０】
手順：
エタノール（１ｍｌ）中の４−クロロベンズアルデヒドの溶液（０．０６０ｇ、０．０００４２ｍｏｌ）に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０４７ｇ、０．０００４２ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０３４ｇ、０．０００４２ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（０．０４０ｇ、４７．８％収率）。
【０１５１】
化合物２−（Ｅ）−２−（（２，４−ジクロロピリミジン−５−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
反応スキーム：
【０１５２】
【化７】
2018517668.tif 000026
【０１５３】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の化合物１４の溶液（０．１ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．５０ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで８０％変換を示した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、次に真空下で乾燥させた。得られた固形物を分取ＨＰＬＣ精製によってさらに精製して、標題化合物を黄色固体（０．０２８ｇ、２７．１２％）として得た。
【０１５４】
化合物３−（Ｅ）−２−（３，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１５５】
【化８】
2018517668.tif 000027
【０１５６】
実験の詳細：
計算：
【０１５７】
【表５】
2018517668.tif 000028
【０１５８】
手順：
エタノール（１ｍｌ）中の３，４，５−トリクロロベンズアルデヒドの溶液（０．０４０ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０２１ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０１５ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（０．０３６ｇ、７０．８８％収率）。1H-NMR (DMSO-d6): δ(ppm) 7.96 (s, 2H); 7.89 (s, 1H); 6.20 (brs, 2H); 5.69 (brs, 2H); MS (ESI+): m/z = 265.1 [M+H]+
化合物４−（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１５９】
【化９】
2018517668.tif 000029
【０１６０】
実験の詳細：
１，２，４−トリクロロ−５−ヨードベンゼン［中間体−１］の合成
【０１６１】
【化１０】
2018517668.tif 000030
【０１６２】
計算：
【０１６３】
【表６】
2018517668.tif 000031
【０１６４】
手順：
酢酸（８０ｍｌ）中の２，４，５−トリクロロアニリン（４．００ｇ、０．０２０５１ｍｏｌ）の懸濁液を、混合物が透明になるまで３５℃で加熱した。その後、得られた反応混合物を、２５℃に冷却させた。濃縮されたＨＣｌ（４ｍｌ）を２５℃で反応混合物に添加し、反応混合物を次の３０分間を同じ温度で撹拌した。その後、Ｄ．Ｍ．水（４．８ｍｌ）中のＮａＮＯ２の溶液（１．４１ｇ、０．０２０５１ｍｏｌ）を２５℃で反応混合物に添加し、得られた反応混合物を同じ温度で３０分間撹拌した。不溶物を、濾過によって除去し、酢酸（３×１５ｍｌ）で洗浄した。ＫＩ（３．７４ｇ、０．０２２５１ｍｏｌ）を、２５℃で合わせた透明な濾液に添加した。得られた混合物を２５℃で３０分間撹拌し、その後、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３．５Ｈ２Ｏ（１．５０ｇ、０．００６１０）を反応混合物に添加し、これを２５℃で３０分間さらに撹拌した。反応混合物中の最終的な不溶性固体を、濾過によって除去し、酢酸（３×１０ｍｌ）で洗浄した。合わせた透明な濾液を蒸発乾固させて中間体−１（５ｇ、７９．６％収率）を得て、これを何かさらに処理することなく次のステップに使用した。
【０１６５】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｅ）−３−（２，４，５−トリクロロフェニル）アクリレート［中間体−２］の合成
【０１６６】
【化１１】
2018517668.tif 000032
【０１６７】
計算：
【０１６８】
【表７】
2018517668.tif 000033
【０１６９】
手順：
ＤＭＦ（３０ｍｌ）中の中間体−１（５．００ｇ、０．０１６３４ｍｏｌ）の溶液に、順次にＴｅｒｔブチルアクリレート（８．３０ｇ、０．０６５３９ｍｏｌ）、トリブチルアミン（９．００ｇ、０．０４９０４ｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（０．４２ｇ、０．００１６２ｍｏｌ）および酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．７３ｇ、０．００３２５ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の３時間加熱した。反応完了を、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（９／１）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させた。得られた反応混合物を、蒸発乾固させた。得られた残留物を、Ｄ．Ｍ．水（２００ｍｌ）に懸濁し、酢酸エチル（３×２５０ｍｌ）で抽出した。得られた合わせた有機層を、ブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して所望の中間体−２（３．３ｇ、６５．９６％収率）を得、これを何かさらに処理することなく次のステップに使用した。
【０１７０】
２，４，５−トリクロロベンズアルデヒド［中間体−３］の合成
【０１７１】
【化１２】
2018517668.tif 000034
【０１７２】
計算：
【０１７３】
【表８】
2018517668.tif 000035
【０１７４】
手順：
中間体−２（０．２５ｇ、０．０００８１ｍｏｌ）をメタノール：ジクロロメタン（２：３）（５０ｍｌ）の混合物中に入れ、反応混合物をドライアイス／アセトン浴を用いて−７８℃に冷却した。オゾンガスを、反応物が青色になるまで、−７８℃で反応混合物にパージした。その後、酸素ガスを１０分間−７８℃で反応混合物にパージし、続いて−７８℃でジメチルスルフィド（０．３２ｍｌ）を添加した。得られた反応混合物を、次に室温に温め、１０分間撹拌させた。反応完了を、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（９／１）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、蒸発乾固させた。得られた残留物を、Ｄ．Ｍ．水（５０ｍｌ）に懸濁し、ジエチルエーテル（３×２０ｍｌ）で抽出した。得られた合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して所望の中間体−３（０．２５ｇ、定量）を得、これを何かさらに処理することなく次のステップに使用した。
【０１７５】
（Ｅ）−２−（２，４，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミドの合成
【０１７６】
【化１３】
2018517668.tif 000036
【０１７７】
計算：
【０１７８】
【表９】
2018517668.tif 000037
【０１７９】
手順：
エタノール（１ｍｌ）中の中間体−３（０．０４０ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）の溶液に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０２１ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０１５ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（０．０４ｇ、７８．７６％収率）。1H-NMR (DMSO-d6): δ(ppm) 8.43 (s, 1H); 8.12 (s, 1H); 7.77 (s, 1H); 6.33 (brs, 2H); 5.83 (brs, 2H); MS (ESI+): m/z =265.17 [M+H]+
化合物５−（Ｅ）−２−（３，５−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１８０】
【化１４】
2018517668.tif 000038
【０１８１】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の３，５−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒドの溶液（０．１ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．０４８ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで８０％変換を示した。反応混合物を冷却し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、真空下で乾燥させた。得られた固形物を分取ＨＰＬＣ精製によってさらに精製して、標題化合物を白色固体（０．０５６ｇ、５４．２４％）として得た。
【０１８２】
化合物６−（Ｅ）−２−（２，３，４−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１８３】
【化１５】
2018517668.tif 000039
【０１８４】
実験の詳細：
計算：
【０１８５】
【表１０】
2018517668.tif 000040
【０１８６】
手順
エタノール（１ｍＬ）中の中間体１（０．１ｇ、０．０００４７ｍｏｌ）および中間体２（０．０５２ｇ、０．０００４７ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＡｃ（０．０３９ｇ、０．０００４７ｍｏｌ）を添加し、８０℃で４時間加熱した。反応の進行を、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨを移動相として使用したＴＬＣでモニターした。ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）の冷溶液を、反応混合物に添加し、１０分撹拌した。沈殿物を、濾過し、水（２×１０ｍＬ）で綿密に洗浄し、減圧下で乾燥して純粋な生成物を得、これを分析に供した（０．０９７ｇ、７６．９８％収率）。
【０１８７】
化合物７−（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１８８】
【化１６】
2018517668.tif 000041
【０１８９】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の２，４−ジクロロ−５−フルオロベンズアルデヒドの溶液（０．１ｇ、０．５２ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．０４６ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応混合物を冷却し、メタノールを減圧下で除去して粗生成物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で結晶化して固形物を得た。得られた固形物を分取ＨＰＬＣ精製によってさらに精製して、標題化合物をオフホワイトの固体（０．１ｇ、９６．８６％）として得た。
【０１９０】
化合物８−（Ｅ）−２−（４−クロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１９１】
【化１７】
2018517668.tif 000042
【０１９２】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の４−クロロ−３−フルオロベンズアルデヒドの溶液（０．１ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．０５６ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで９０％変換を示した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、真空下で乾燥させた。得られた固形物のさらなる精製を、シリカゲル（１００−２００）および８％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーで行ってオフホワイトの固体（０．０５９ｇ、５４．４８％）として標題化合物を得た。
【０１９３】
化合物９−（Ｅ）−２−（２−ブロモ−３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１９４】
【化１８】
2018517668.tif 000043
【０１９５】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の２−ブロモ−３−クロロベンズアルデヒドの溶液（０．６３ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで９０％変換を示した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、真空下で乾燥させた。固形物の精製を、シリカゲル（１００−２００）および８．５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーで行って標題化合物を得た。
【０１９６】
化合物１０−（Ｅ）−２−（２，３，５−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０１９７】
【化１９】
2018517668.tif 000044
【０１９８】
実験の詳細：
計算：
【０１９９】
【表１１】
2018517668.tif 000045
【０２００】
手順：
エタノール（１ｍｌ）中の２，３，５−トリクロロベンズアルデヒドの溶液（０．０４０ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０２１ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０１５ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（０．０３６ｇ、７０．８８％収率）。
【０２０１】
化合物１１−（Ｅ）−２−（３，４−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２０２】
【化２０】
2018517668.tif 000046
【０２０３】
実験の詳細：
計算：
【０２０４】
【表１２】
2018517668.tif 000047
【０２０５】
手順：
エタノール（１ｍｌ）中の３，４−ジクロロベンズアルデヒドの溶液（０．０３０ｇ、０．０００１７ｍｏｌ）に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０１９ｇ、０．０００１７ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０１４ｇ、０．０００１７ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（０．０３５ｇ、８８．２％収率）。
【０２０６】
化合物１２−（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
化合物１２の以下の合成は、Ｎｇｕｙｅｎら、２０１４、５（１０）、１０７５〜１０８２に記載される。
合成スキーム：
【０２０７】
【化２１】
2018517668.tif 000048
【０２０８】
プロトコール：
ＥｔＯＨ（２ｍｌ）中の３，５−ジクロロベンズアルデヒド（ｄｉｃｈｌｏｒｏｂｅｎｚａｌｄｅｎｈｙｄｅ）（１．０ｍｍｏｌ、１７５ｍｇ）およびアミノグアニジン塩酸塩（１．０ｍｍｏｌ、１１０ｍｇ）を、還流して１２時間振盪した。室温で冷却後、最終的な化合物を、濾過後に沈殿物として回収した。標題化合物を、白色粉末（２１０ｍｇ、７９％）として回収した。
【０２０９】
化合物１３−（Ｅ）−２−（２，４−ジクロロ−３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２１０】
【化２２】
2018517668.tif 000049
【０２１１】
実験の詳細：
計算：
【０２１２】
【表１３】
2018517668.tif 000050
【０２１３】
手順：
エタノール（１ｍＬ）中の中間体１（０．１ｇ、０．０００５１ｍｏｌ）および中間体２（０．０５７ｇ、０．０００５１ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＡｃ（０．０４２ｇ、０．０００５１ｍｏｌ）を添加し、８０℃に４時間加熱した。反応の進行を、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨを移動相として使用したＴＬＣでモニターした。ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）の冷溶液を、反応混合物に添加し、１０分撹拌した。沈殿物を、濾過し、水（２×１０ｍＬ）で綿密に洗浄し、減圧下で乾燥して純粋な生成物を得、これを分析に供した（０．０５ｇ；３８．７５％収率）。
【０２１４】
化合物１４−（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２１５】
【化２３】
2018517668.tif 000051
【０２１６】
実験の詳細：
計算：
【０２１７】
【表１４】
2018517668.tif 000052
【０２１８】
手順：
エタノール（０．５ｍＬ）中の中間体１（０．０５ｇ、０．０００２５ｍｏｌ）および中間体２（０．０２８ｇ、０．０００２５ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＡｃ（０．０２１ｇ、０．０００２５ｍｏｌ）を添加し、８０℃に４時間加熱した。反応の進行を、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨを移動相として使用したＴＬＣでモニターした。ＮａＨＣＯ３（２．５ｍＬ）の冷溶液を、反応混合物に添加し、１０分撹拌した。沈殿物を、濾過し、水（２×５ｍＬ）で綿密に洗浄し、減圧下で乾燥して純粋な生成物を得、これを分析に供した（０．０４３ｇ、６７．１８％収率）。
【０２１９】
化合物１５−（Ｅ）−２−（３−クロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２２０】
【化２４】
2018517668.tif 000053
【０２２１】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の３−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒドの溶液（０．１ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．０８７ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで８０％変換を示した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、真空下で乾燥させた。得られた固形物のさらなる精製を、シリカゲル（１００−２００）および８％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーで行ってオフホワイトの固体（０．０５３ｇ、３９．１５％）として標題化合物を得た。
【０２２２】
化合物１６−（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
手順：
エタノール（３００ｍＬ）中の２，３−ジクロロベンズアルデヒドの溶液（１当量）に、順次に塩酸アミノグアニジン（１当量）および酢酸ナトリウム（１当量）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の約６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（７００ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（１００ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２５ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（８５％収率）、（モノアセタート塩と考慮）ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２３１．２３（Ｍ＋Ｈ）。1H-NMR (DMSO-d6): δ(ppm) 11.85 (brs, 1H); 8.35 (s, 1H); 8.19-8.21 (dd, 1H); 7.56-7.59 (dd, 1H); 7.32-7.36 (t, 1H); 7.04 (brs, 4H); 1.84 (s, 3H); MS (ESI+): m/z = 231.23 [M+H]+
化合物１７−（Ｅ）−２−（２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２２３】
【化２５】
2018517668.tif 000054
【０２２４】
手順：
エタノール（３００ｍｌ）中の２−フルオロベンズアルデヒドの溶液（１当量）に、順次に塩酸アミノグアニジン（１当量）および酢酸ナトリウム（１当量）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の約６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（７００ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（１００ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２５ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た。
【０２２５】
化合物１８−（Ｅ）−２−（４，５−ジクロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２２６】
【化２６】
2018517668.tif 000055
【０２２７】
実験の詳細：
ステップ−１：
【０２２８】
【表１５】
2018517668.tif 000056
【０２２９】
ステップ−２：
【０２３０】
【表１６】
2018517668.tif 000057
【０２３１】
ステップ−３：
【０２３２】
【表１７】
2018517668.tif 000058
【０２３３】
ステップ−４：
【０２３４】
【表１８】
2018517668.tif 000059
【０２３５】
化合物２０−（Ｅ）−２−（２−クロロ−５−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２３６】
【化２７】
2018517668.tif 000060
【０２３７】
実験の詳細：
計算：
【０２３８】
【表１９】
2018517668.tif 000061
【０２３９】
手順：
エタノール（１ｍＬ）中の中間体１（０．１ｇ、０．０００６３ｍｏｌ）および中間体２（０．０６９ｇ、０．０００６３ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＡｃ（０．０５１ｇ、０．０００６３ｍｏｌ）を添加し、８０℃に４時間加熱した。反応の進行を、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨを移動相として使用したＴＬＣでモニターした。ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）の冷溶液を、反応混合物に添加し、１０分撹拌した。沈殿物を、濾過し、水（２×１０ｍＬ）で綿密に洗浄し、減圧下で乾燥して純粋な生成物を得た（０．０８６ｇ、６３．０７％収率）。
【０２４０】
化合物２２−（Ｅ）−２−（（２，６−ジクロロピリジン−３−イル）メチレン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
反応スキーム：
【０２４１】
【化２８】
2018517668.tif 000062
【０２４２】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の２，６−ジクロロニコチンアルデヒドの溶液（０．１ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．０７９ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで８０％変換を示した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗残留物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、真空下で乾燥させた。固形物のさらなる精製を、シリカゲル（１００−２００）および５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーで行って黄色固体（０．０４０ｇ、３０．９９％）として所望の化合物を得た。
【０２４３】
化合物２３−（Ｅ）−２−（３−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２４４】
【化２９】
2018517668.tif 000063
【０２４５】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の３−フルオロベンズアルデヒドの溶液（０．１ｇ、０．８１ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．０４７ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで９０％変換を示した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗残留物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、真空下で乾燥させた。固形物のさらなる精製を、シリカゲル（１００−２００）および６．５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーで行い、オフホワイトの固体（０．０６９ｇ、６６．８３％）として所望の化合物を得た。
【０２４６】
化合物２４−（Ｅ）−２−（３−クロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２４７】
【化３０】
2018517668.tif 000064
【０２４８】
実験の詳細：
計算：
【０２４９】
【表２０】
2018517668.tif 000065
【０２５０】
手順：
エタノール（１ｍｌ）中の３−クロロベンズアルデヒドの溶液（０．０５０ｇ、０．０００３５ｍｏｌ）に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０３９ｇ、０．０００３５ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０２８ｇ、０．０００３５ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（０．０３５ｇ、５０．１９％収率）。
【０２５１】
化合物２５−（Ｅ）−２−（３−クロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２５２】
【化３１】
2018517668.tif 000066
【０２５３】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の２−クロロ−３−フルオロベンズアルデヒドの溶液（０．１ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．０８７ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで９０％変換を示した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、真空下で乾燥させた。固形物の精製を、シリカゲル（１００−２００）および８．５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーで行ってオフホワイトの固体（０．０８８ｇ、６８．１９％）として標題化合物を得た。
【０２５４】
化合物２６−（Ｅ）−２−（２，５−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２５５】
【化３２】
2018517668.tif 000067
【０２５６】
実験の詳細：
計算：
【０２５７】
【表２１】
2018517668.tif 000068
【０２５８】
手順：
エタノール（１ｍｌ）中の２，５−ジクロロベンズアルデヒドの溶液（０．０４５ｇ、０．０００２５ｍｏｌ）に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０２８ｇ、０．０００２５ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０２０ｇ、０．０００２５ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（０．０３９ｇ、６５．５５％収率）。
【０２５９】
化合物２７−（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，４−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２６０】
【化３３】
2018517668.tif 000069
【０２６１】
実験の詳細：
計算：
【０２６２】
【表２２】
2018517668.tif 000070
【０２６３】
手順：
エタノール（０．４ｍＬ）中の中間体１（０．０４ｇ、０．０００２２ｍｏｌ）および中間体２（０．０２５ｇ、０．０００２２ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＡｃ（０．０１８ｇ、０．０００２２ｍｏｌ）を添加し、８０℃に４時間加熱した。反応の進行を、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨを移動相として使用したＴＬＣでモニターした。ＮａＨＣＯ３（２．５ｍＬ）の冷溶液を、反応混合物に添加し、１０分撹拌した。沈殿物を、濾過し、水（２×５ｍＬ）で綿密に洗浄し、減圧下で乾燥して純粋な生成物を得、これを分析に供した（０．０６３ｇ、９５．４３％収率）。
【０２６４】
化合物２９−（Ｅ）−２−（２−クロロ−３，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２６５】
【化３４】
2018517668.tif 000071
【０２６６】
実験の詳細：
計算：
【０２６７】
【表２３】
2018517668.tif 000072
【０２６８】
手順：
エタノール（０．６ｍＬ）中の中間体１（０．０６ｇ、０．０００３３ｍｏｌ）および中間体２（０．０３７ｇ、０．０００３３ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＡｃ（０．０２７ｇ、０．０００３３ｍｏｌ）を添加し、８０℃に４時間加熱した。反応の進行を、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨを移動相として使用したＴＬＣでモニターした。ＮａＨＣＯ３（２．７ｍＬ）の冷溶液を、反応混合物に添加し、１０分撹拌した。沈殿物を、濾過し、水（２×２．７ｍＬ）で綿密に洗浄し、減圧下で乾燥して純粋な生成物を得、これを分析に供した（０．０４ｇ、５０．６３％収率）。
【０２６９】
化合物３０−（Ｅ）−２−（３−クロロ−２−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２７０】
【化３５】
2018517668.tif 000073
【０２７１】
実験の詳細：
メタノール（２ｍＬ）中の３−クロロ−２−フルオロベンズアルデヒドの溶液（０．１ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）に、塩酸アミノグアニジン（０．０８７ｇ、０．７９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、６５〜７０℃で２時間撹拌した。反応は、ＴＬＣで９０％変換を示した。反応混合物を減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これを酢酸エチル（３０ｍＬ）で撹拌して固形物を得て、これを濾過し、真空下で乾燥させた。固形物の精製を、シリカゲル（１００−２００）および８．５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを溶離液として使用するカラムクロマトグラフィーで行って標題化合物を得た。
【０２７２】
化合物３１−（Ｅ）−２−（２，３，６−トリクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２７３】
【化３６】
2018517668.tif 000074
【０２７４】
実験の詳細：
エタノール（１ｍｌ）中の２，３，６−トリクロロベンズアルデヒドの溶液（０．０４０ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０２１ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０１５ｇ、０．０００１９ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た。
【０２７５】
化合物３２−（Ｅ）−２−（２−クロロ−４，５−ジフルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２７６】
【化３７】
2018517668.tif 000075
【０２７７】
実験の詳細：
計算：
【０２７８】
【表２４】
2018517668.tif 000076
【０２７９】
手順：
エタノール（１ｍＬ）中の中間体１（０．１ｇ、０．０００５６ｍｏｌ）および中間体２（０．０６２ｇ、０．０００５６ｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＡｃ（０．０４６ｇ、０．０００５６ｍｏｌ）を添加し、８０℃に４時間加熱した。反応の進行を、ＤＣＭ中の２０％ＭｅＯＨを移動相として使用したＴＬＣでモニターした。ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）の冷溶液を、反応混合物に添加し、１０分撹拌した。沈殿物を、濾過し、水（２×１０ｍＬ）で綿密に洗浄し、減圧下で乾燥して純粋な生成物を得、これを分析に供した（０．１１７ｇ、８９．３１％収率）。
【０２８０】
化合物３４−（Ｅ）−２−（３，５−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
合成スキーム：
【０２８１】
【化３８】
2018517668.tif 000077
【０２８２】
実験の詳細：
計算：
【０２８３】
【表２５】
2018517668.tif 000078
【０２８４】
手順：
エタノール（１ｍｌ）中の３，５−ジクロロベンズアルデヒドの溶液（０．０３０ｇ、０．０００１７ｍｏｌ）に、順次に塩酸アミノグアニジン（０．０１９ｇ、０．０００１７ｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０１３ｇ、０．０００１７ｍｏｌ）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（１０ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（５ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、標題化合物を得た（０．０３８ｇ、９５．８％収率）。
一般的手順Ａ：
【０２８５】
【化３９】
2018517668.tif 000079
【０２８６】
エタノール（３００ｍｌ）中のベンズアルデヒドの溶液（１当量）に、順次に塩酸アミノグアニジン（１当量）および酢酸ナトリウム（１当量）を２５℃で添加した。得られた反応混合物を、８０℃で次の約６時間加熱した。反応完了を、ジクロロメタン／メタノール（８／２）を移動相として使用したＴＬＣでモニターした。反応の完了後、反応混合物を、２５℃に冷却させ、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（７００ｍｌ）に入れた。得られた沈殿物を、真空下で濾別し、水（１００ｍｌ）で洗浄した。得られた固形物を、ジエチルエーテル（２×２５ｍｌ）で粉砕して、真空下で乾燥して、所望の置換されたアミノグアニジン誘導体を得た。
【０２８７】
以下の化合物を、一般的手順Ａにより調製した：
実施例１（化合物１６（Ｅ））：（Ｅ）−２−（２，３−ジクロロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
一般的手順Ａに従って２，３−ジクロロベンズアルデヒドから８５％収率で調製した（モノアセタート塩と考慮）ＬＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝２３１．２３（Ｍ＋Ｈ）。1H-NMR (DMSO-d6): δ(ppm) 11.85 (brs, 1H); 8.35 (s, 1H); 8.19-8.21 (dd, 1H); 7.56-7.59 (dd, 1H); 7.32-7.36 (t, 1H); 7.04 (brs, 4H); 1.84 (s, 3H); MS (ESI+): m/z = 231.23 [M+H]+
実施例２：（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロベンジリデン）ヒドラジン−１−カルボキシイミドアミド
一般的手順Ａに従って２−クロロ−４−フルオロベンズアルデヒドから６７％収率で調製した。1H-NMR (DMSO-d6): δ(ppm) 5.80 (brs, 2H); 5.84 (brs, 2H); 7.19-7.34 (m, 4H); 8.16 (s, 1H); MS (ESI+): m/z = 215.1 [M+H]+
実施例Ａのプロトコールおよびアッセイを、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害との関係で行った。しかし、本明細書において記載される方法が、ＰＰＰ１Ｒ１５ＡおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤を同定する／分析することに等しく適用可能であることが理解されよう。
【０２８８】
実施例Ａ
タンパク質発現、精製および表面プラズモン共鳴による分析
タンパク質発現および精製
ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ３２５−６３６およびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ３４０−６９８を発現させ、次の通り精製した：ＰＰＰ１Ｒ１５Ａの３２５−６３６およびＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの３４０−６９８のアミノ酸をコードするｃＤＮＡをＨｉｓ−タグ化し、ｐＭＡＬ−ｃ５ｘにクローニングした。組換えＰＰＰ１Ｒ１５Ａ／ＢをＢＬ２１−Ｇｏｌｄ細胞において発現させ、ＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、続いてＭＢＰＴｒａｐ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）におけるアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。タンパク質を、ＢＯＬＴ  ＳＤＳ−ＰＡＧＥ  ４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で分析し、ＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ  ＳａｆｅＳｔａｉｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。ヒトＰＰ１γをコードするｃＤＮＡを、バキュロウイルストランスファーベクターｐＤＷ４６４にクローニングしてビオチンアクセプターペプチド（ＢＡＰ）を付加した。ベクターは、大腸菌ビオチンホロ酵素合成酵素（ＢｉｒＡ）もコードするため、ＢＡＰ−タグ化タンパク質をＳｐｏｄｏｐｔｅｒｅ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ９）昆虫細胞中でインビボでビオチン化することができる（Ｄｕｆｆｙら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２６２、１２２〜１２８、１９９８）。Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃバキュロウイルス発現システム（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して組換えバクミドＤＮＡを生成し、Ｓｆ９昆虫細胞を使用してウイルスストックを増幅した。培養物を１，２００ｇで１５分間遠心分離することによって採取し、細胞ペレットを溶解緩衝剤（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ、５％グリセロール、１ＰｉＣ錠剤（Ｒｏｃｈｅ）／５０ｍｌおよび０．２ｍＭ  ＰＭＳＦ）に再懸濁し、続いて穏やかに超音波処理した。タンパク質を最初に５ｍｌ  ＨｉＴｒａｐ  Ｑ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、続いてＨｉＬｏａｄ  １６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロットによって確認された陽性画分を、プールし、約１μＭに濃縮し、−８０℃で貯蔵した。
【０２８９】
ＳＡセンサーチップにおけるビオチン−ＰＰ１の捕捉
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）システムを全ての実験に使用し、ビオチン化ＰＰ１をセンサーチップＳＡ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＢＲ−１００５−３１）を使用して捕捉した。ストレプトアビジンでコーティングした表面を、５０ｍＭ  ＮａＯＨおよび１Ｍ  ＮａＣｌの溶液の１分間注入によって活性化した。ビオチン−ＰＰ１を、ランニング緩衝剤（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で希釈し、およそ３００ｎＭ濃度で、直接的にストレプトアビジンでコーティングした表面に１００秒または約７０００ＲＵに対応するビオチン−ＰＰ１の固定化レベルに達するまで注入した。ブランク固定化を、参照として使用するため、ＳＡセンサーチップ表面の１つについて実施した。
【０２９０】
ビオチン−ＰＰ１表面を使用した小分子とｅＩＦ２αホロホスファターゼ複合体の定常状態の結合定数の決定
軽微な偏りはあるが、同じ手順および条件を全ての結合実験に使用した。小分子を、１００％ＤＭＳＯ中に５０ｍＭ貯蔵溶液として貯蔵した。結合定数の決定の前、化合物の１２または８つの濃度のいずれかの連続希釈を、９６ウェルプレートのランニング緩衝剤で調製した。各々の化合物希釈系列より前に、調節サブユニットＲ１５ＡまたはＲ１５Ｂを、ランニング緩衝剤で１５μＭに希釈し、ビオチン−ＰＰ１表面に捕捉させ、センサーチップ表面にホロホスファターゼ複合体を形成させた。次いで、表面を再生することなく、化合物希釈系列をチップの表面上に注入した。センサーグラムをＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００査定ソフトウェアを使用して分析し、結合定数を定常状態モデルに基づいて決定した。速度実験は異なる濃度の化合物を使用して行い、それらそれぞれの平衡結合レベルを決定した。これらの平衡応答レベル（Ｒｅｑ）は、濃度に対してプロットされ、グローバルフィットを使用してフィッティングされ、これにより定常状態親和性定数を決定できる（すなわち、５０％飽和での濃度がＫＤである）（Ｆｒｏｓｔｅｌｌ−Ｋａｒｌｓｓｏｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、４３、１９８６〜１９９２、２０００）。
【０２９１】
哺乳動物細胞培養
ＨｅＬａ細胞を、それぞれ、ペニシリン、ストレプトマイシンを補充し、５％および１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有する、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。ＭＥＦ細胞を、ペニシリン、ストレプトマイシン、グルタミン、５５μＭ  β−メルカプトエタノール、１×非必須アミノ酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｄｒｉｃｈ）および１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ中で培養した。示される場合、細胞を、２．５μｇ／ｍｌツニカマイシン、１ｍＭ  ＤＴＴ（Ｓｉｇｍａ−Ａｄｒｉｃｈ）および／または示した化合物を示した濃度で処理した。
【０２９２】
免疫ブロットによるタンパク質分析
免疫ブロットに関して、ＨｅＬａ細胞（細胞８０，０００個／ｍｌ）を、各実験の２４時間前に１２ウェルプレートにプレーティングした。示した処理の直後、細胞を、７５μｌ  Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝剤に溶解し、９５℃で５分間ボイルし、超音波処理した。タンパク質を、分離し、ホスホ−ｅＩｆ２α［ｐＳ５２］およびＰＰＰ１Ｒ１５Ａ／ＧＡＤＤ３４（１０４４９−１−ＡＰ；ＰｒｏｔｅｉｎＴｅｃｈ  Ｇｒｏｕｐ、１／１０００希釈）およびＡＴＦ４（Ｓｃ−２００  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）の抗体で記載（Ｔｓａｙｔｌｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３３２、９１〜９４、２０１１）の通り分析した。
【０２９３】
細胞生存度の評価
細胞を、処理の２４時間前に１５，０００（ＨｅＬａ）または細胞１２，０００個／ｍｌ（ＭＥＦｓ）の密度で２４ウェルプレートにプレーティングした。ＥＲストレスを、２．５μｇ／ｍｌツニカマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する新鮮な培地を添加することによって誘発した。実施例１の化合物を、ＤＭＳＯに溶解し、示される通り添加した。ＤＭＳＯを、模擬処理として使用した。細胞生存度を、ツニカマイシン処理の４８時間後、供給者の推奨に従ってＣｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（Ｄｏｊｉｎｄｏ）を使用してＷＳＴ−８［２−（２−メトキシ−４−ニトロフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム］のホルマザンへの還元を測定することによって評価した。
【０２９４】
化合物の毒性は、Ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（Ｄｏｊｉｎｄｏ）を使用してまたは位相差およびＩｎｃｕＣｙｔｅ（商標）Ｃｙｔｏｔｏｘ緑色試薬の両方を使用してＩｎｃｕｃｙｔｅ（Ｅｓｓｅｎｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）において評価される。
【０２９５】
動物試験
全ての動物ケアおよび手順を、地域の倫理的な承認を受けた研究における動物の使用における規則（１９８６の英国動物科学的処置法）に準拠して実施した。
【０２９６】
体重における実施例１の化合物の効果を研究するため、Ｃ３Ｈ／Ｂ６マウスに実施例１の化合物を１日に１回経口的に強制飼養し、マウス体重を２週間毎日記録した。
疾患表現型の改善における実施例１の化合物の有効性を評価するため、２８日齢のトランスジェニックマウスまたは同腹仔対照に実施例１の化合物（２ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクルを経口的に４週の期間毎日投与した。疾患進行を、処置の間にマウスを秤量することおよび処置の４週後のそれらの運動能力を評価することによって査定した。
【０２９７】
実施例１の化合物がグアナベンズの副作用を有するかどうかを評価するため、マウス（ｎ＞３）に１０ｍｇ／ｋｇの化合物またはグアナベンズを経口的に強制飼養させた。それらの活性を、投薬に続いて３０分間モニターした。グアナベンズ処置マウスは、グアナベンズの降圧活性に起因して、未処置マウスと同程度に活動的であった実施例１の化合物で処置されたマウスとは対照的に、投薬後の３０分間動かなかった。
【０２９８】
８週齢ＨＤ−Ｎ１７１−８２Ｑマウスおよびそれらの野生型同腹仔を、最初に静止したローターに１分、そして定常速度（４ｒｐｍ）に１分で慣れさせた。慣れを反復させた。試験セッションは、１５分の間隔を間においた４回の試行から構成された。各々の試行について、５匹のマウスを加速させたローター（４〜４０ｒｐｍ）に配置し、個々の動物に関して最大限度を３００ｓにセットして、落下するまでの反応時間を記録した。
【０２９９】
代謝性障害の処置に関して、Ｄｂ／ｄｂ動物（条件あたりｎ＝５）を、１日に１回で１ｍｇ／ｋｇの実施例１の化合物を３週間処置した。血液グルコースレベルを、９〜１０ａｍの間に血液グルコースメーター（ＤＳＩ）で測定した。データは平均＋／−Ｓ．ｅ．ｍ．である。
【０３００】
定量的ＲＴ−ＰＣＲ
脳からのＲＮＡを、トリゾール（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に抽出した。ＲＮＡ濃度をＮＡＮＯＤＲＯＰ１０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して測定し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して１μｇをｃＤＮＡに逆転写した。プライマーＧＡＰＤＨ（ｆ）：ＡＣＣＡＣＡＧＴＣＣＡＴＧＣＣＡＴＣＡＣ、ＧＡＰＤＨ（ｒ）：ＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＣＴＧＴＡ、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ（ｆ）：ＣＣＴＣＣＴＧＡＡＡＣＴＴＧＧＧＧＡＣＴ；およびＰＰＰ１Ｒ１５Ａ（ｒ）：ＧＣＴＧＴＧＡＴＧＴＧＧＧＡＴＡＡＧＣＧでの定量的ＰＣＲを、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｓｅｌｅｃｔ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ｒｅｆ４４７２９０８、ａｐｐｌｉｅｄ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）をＣｏｒｂｅｔｔ  Ｒｏｔｏｒ−Ｇｅｎｅバージョン６０００に使用して実施した。各遺伝子の発現を、ハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨに対して標準化し、Ｐａｆｆｌ式を使用して計算される倍率変化として表した。
【０３０１】
ＤＲＧ培養
１３．５での胚または発生（Ｅ１３．５）の野生型のまたはＰｍｐ２２Ｔｒ−Ｊ（ＰＭＰ２２変異体）（Ｈｅｎｒｙら、Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．、４２、６８８〜７０６、１９８３）から解剖した後根神経節（ＤＲＧ）を、４ｇ／ｌグルコース、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、２％Ｂ２７サプリメントおよび５０ｎｇ／ｍｌニューロン成長因子（ＮＧＦ）を補充した神経基礎（ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ）培地中でコラーゲンでコーティングしたカバーガラスにおいて７日間培養した。シュワン細胞を分化させ、ミエリン形成を誘導させるため、培養したＤＲＧを、次にＣ−培地（４ｇ／ｌグルコース、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％ＦＣＳ、５０ｎｇ／ｍｌ  ＮＧＦを補充したＭＥＭ培地）において維持した。Ｃ−培地を、新たに添加した５０μｇ／ｍｌアスコルビン酸±５ｎＭの実施例Ｉの化合物で１日おきに置き換え、シュワン細胞によるミエリン形成のために１４日間培養した。培養したＤＲＧを、次に４％パラホルムアルデヒド中で固定し、ＭＢＰ（ラットミエリン塩基性タンパク質、１／２５０希釈、ａｂ７３４９８）で免疫染色した。
【０３０２】
マウスに関する参照は、ＰｕｂｍｅｄのＩＤ：６３１３８６である。
生化学的アッセイ
アッセイ１：選択的なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ−ＰＰ１に選択的に結合する（図１）。
【０３０３】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して、化合物とＰＰＰ１Ｒ１５Ａ／Ｂ−ＰＰ１ホスファターゼ複合体との結合親和性を測定した。ビオチンアクセプターペプチド（ＢＡＰ）をＰＰ１γのＮ−末端に融合した、これによりＳｆ９昆虫細胞においてＢＡＰ−タグ化タンパク質のビオチン化が可能となる。精製後、ＢＡＰ−ＰＰ１γタンパク質を、約５．０００ＲＵの応答レベルまでストレプトアビジンセンサーチップ（ＳＡ−チップ、ＧＥ  ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に捕捉した。制御されたビオチン化を使用することにより、センサーチップ表面において方向づけられた、均一な固定化が可能となる。次いで、ＰＰ１γを使用してＰＰＰ１Ｒ１５Ａ／Ｂを捕捉し、ストレプトアビジンチップの表面にホロホスファターゼ複合体を形成させた。次に、この複合体を、化合物の試験結合のために使用することができる。１０μＭのＰＰＰ１Ｒ１５Ａ／Ｂタンパク質濃度を使用して、８０ｓ注入の間にホロホスファターゼ複合体を形成させた。ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ／Ｂを捕捉させた後、化合物の濃度系列がチップの表面に注入され、化合物とホロホスファターゼの結合が測定された。濃度系列（８または１２の濃度）を完了した後、表面は３Ｍ  ＮａＣｌで再生され、Ｒ１５Ａ／Ｂを再び捕捉して新たなホロホスファターゼ複合体を形成させて別の化合物の濃度系列の結合を測定することができる。平衡結合のレベルを濃度の関数として分析することにより、相互作用親和性または定常状態の結合親和性（ＫＤ）が得られる。
【０３０４】
図１は、実施例１の化合物に関するＫＤ値を示す。ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ−ＰＰ１について０．０３５μＭおよびＰＰＰ１Ｒ１５Ａ−ＰＰ１について１μＭのＫＤは、実施例１の化合物が、ＰＰ１Ｒ１５Ｂ−ＰＰ１複合体に選択的に結合するが、結合はＰＰＰ１Ｒ１５Ａ−ＰＰ１複合体に対するよりも有意に低いことを実証する。
【０３０５】
アッセイ２：選択的なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、ストレスの非存在下で、細胞においてｅＩＦ２αの一過性のリン酸化を誘導する（図２ＡおよびＢ）
実施例１の化合物の選択性は、組換えタンパク質でのインビトロ結合アッセイを使用して明らかにされた。しかし、結合アッセイを使用してＰＰＰ１Ｒ１５Ｂに結合する選択的な化合物に関するスクリーニングに使用することができるが、化合物の特性は必ずしも結合アッセイによって予想されない。したがって、化合物がＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ機能を阻害するかどうかを評価するため他のアッセイが必要とされる。
【０３０６】
ヒト細胞をＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤で処置し、ｅＩＦ２αリン酸化を長期にわたりモニターした。ストレスの非存在下（細胞がＰＰＰ１Ｒ１５Ａを発現しない条件下）、実施例１の化合物での細胞の処置がｅＩＦ２αリン酸化を誘導することを本発明者らは見出した。これは、実施例１の化合物の添加後の１〜７．５時間の間で顕在化した。しかし、実施例１の化合物の添加後１０時間では、ｅＩＦ２αリン酸化は基礎レベルに戻った。このことは、この時点で活性なｅＩＦ２αホスファターゼが存在することを示唆した。実際、本発明者らは、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａが、実施例１の化合物の添加に続く遅い時点で誘導されることに気が付いた（アッセイ３を参照されたい）。ｅＩＦ２αリン酸化の一過性の誘導は、化合物が細胞におけるＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの選択的な阻害剤であることを実証する。このことは、実施例１の化合物が、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａをスペアすることをさらに確立する。このアッセイは、他の選択的なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤の同定に貢献することができる。
【０３０７】
アッセイ３：選択的なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、細胞におけるＰＰＰ１Ｒ１５Ａの発現を誘導する（図２ＡおよびＢ）
通常、細胞および生物は、欠損を補償する機構を有する。したがって、本発明者らは、細胞が、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａを誘導することによってＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害に関して補償し得るかどうかを考えた。ＰＰＰ１Ｒ１５Ａレベルが、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂノックアウトマウスの肝臓中で増加することが以前に報告されていた（Ｈａｒｄｉｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、１０６、１８３２〜１８３７、２００９）。この代償性応答が、肝臓に特異的であるかまたは細胞または他の組織において起こり得るかは未知である。さらに、この研究よりも前に、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ誘導が、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの薬理学的な阻害に際して観察することができるかどうかは未知であった、その理由は、この研究よりも前に、それらはＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの選択的な阻害剤とされてはいなかったからである。
【０３０８】
図２Ｂは、実施例１の化合物で処置された細胞が、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａを誘導することが見出されたことを示す。この特性（ＰＰＰ１Ｒ１５Ａの誘導）は、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤に関してスクリーニングする方法として使用することができる、その理由は、細胞においてＰＰＰ１Ｒ１５Ａ発現を誘導する化合物が、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害特性を保有するからである。例えば、レポーター遺伝子に融合されたＰＰＰ１Ｒ１５Ａ遺伝子またはプロモーターを使用するアッセイを、設計し、ＨＴＳスクリーニングへと開発して、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａを誘導する化合物を同定することができる。
【０３０９】
アッセイ４：選択的なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、ストレスから細胞を保護する（図３）
図３は、選択的なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤がストレスから細胞を保護することを示す。ここで、細胞は、０．２〜５□Ｍの実施例１の化合物の存在下で、ツニカマイシン（２．５ｕｇ／ｍｌ）でストレスを受けた。細胞生存度を、処置の３日後に測定した。
【０３１０】
実施例１の阻害剤は、ツニカマイシンによって引き起こされる細胞傷害性ストレスから細胞を保護する。ＥＲストレスに対する細胞保護作用は、適切なアッセイによって測定することができる。この実例において、Ｎ−グリコシル化をブロックすることによりタンパク質フォールディングを阻害し、アンフォールドタンパク質応答を誘導する薬物であるツニカマイシンを含有する培地の添加によってＥＲストレスが誘発されたＨｅＬａ細胞で、細胞保護作用が測定された。次いで、Ｄｏｊｉｎｄｏの標準的な細胞生存度キットであるＣｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８を使用してＷＳＴ−８からホルマザンへの還元を測定することによって設定期間後に実施例１の化合物の存在下および非存在下で細胞生存度を検出した。ＥＲストレスからの細胞保護作用を、ＥＲストレス後の生細胞（対照との比較）における百分率増加の観点で測定した。
【０３１１】
アッセイ５：選択的なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、ストレス−回復の間のｅＩＦ２ａリン酸化を延長させる（図４）
本発明者らは、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤が、ストレスに続いてｅＩＦ２αリン酸化を延長することに理由を付けた。この活性を明らかにするため、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａが発現されず、交絡する効果を回避する、条件を探索することが重要であった。本発明者らは、ＤＴＴによるストレス誘導の速い速度および可逆性（Ｂｅｒｔｏｌｏｔｔｉら、Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、２、３２６〜３３２、２０００；Ｊｏｕｓｓｅら、２００３）を利用し、１ｍＭ  ＤＴＴで３０分間処理し、洗い流した後に細胞中のｅＩＦ２αリン酸化をモニターした。ＤＴＴを洗い流した後に通常発生するｅＩＦ２αリン酸化における減退が遅延し、これがＰＰＰ１Ｒ１５Ａの何らかの実質的な誘導の前に発生することを本発明者らは見出した。したがって、本明細書において記載されるものなどのストレス−回復パラダイムの初期相におけるｅＩＦ２α脱リン酸化の動態の慎重なモニタリングを使用して他のＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤を同定することができる。
【０３１２】
マウスにおいて実施例１の化合物（図５）は、良好な組織分布を有する
実施例１の化合物の経口での強制飼養後の異なる時間でのマウス組織（血漿、脳、脊髄、膵臓、肝臓）の分析は、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤が広範な組織分布を有し、したがって、異なる臓器に影響を及ぼす種々の疾患および障害の処置において適用を示すことを明らかにした。
【０３１３】
実施例１の化合物でのマウスの処置は、マウスに対して毒性ではない（図６）
実施例１でマウスを処置し、任意の臨床的症状を検出するために厳重にモニターした。１日に１回の実施例１の化合物１０ｍｇ／ｍｇまで２週間処置されたマウスが、プラセボで処置されたマウスと区別がつかないことおよびマウスが通常どおり体重を増すことが見出された（図６）。これにより、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害が毒性ではないことが確立される。これは驚くべきかつ予期しないことであった、その理由は、この研究の前には、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、治療可能性も有することはないほどに有害であると予想されたであろうからである。
【０３１４】
実施例１の化合物でのマウスの処置は、グアナベンズによって引き起こされる副作用を生じない（図７）
ヒトにおいて、グアナベンズのアドレナリン作動性アゴニスト活性は、高用量で傾眠および昏睡を含む副作用を有する（Ａ．Ｈ．Ｈａｌｌ、Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １０２；７８７〜７８８；１９８５）。これらの副作用に起因して、グアナベンズは、もはやヒトでは使用されない。グアナベンズ誘導体が、アルファ−２アドレナリン作動性活性に関連する、グアナベンズの副作用を有することが見込まれる。グアナベンズとアルファ−２アドレナリン作動性レセプターとの構造−活性相関は入手不可能であるが、本発明者らは驚くべきことに本発明において実施例１が、構造的に非常に類似するが、グアナベンズの副作用を欠いていることを見出した。
【０３１５】
アッセイ６：実施例１の化合物での処置後の哺乳動物におけるＰＰＰ１Ｒ１５Ａの誘導（図８）
ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ誘導を、示される用量の実施例１の化合物で処置されたマウスの脳から抽出されたトータルｍＲＮＡにおけるｑＰＣＲによって評価した。
【０３１６】
細胞において認められていたことに類似して、マウスが実施例１の化合物での処置後にＰＰＰ１Ｒ１５Ａを誘導することおよびこの誘導が用量依存的であることが見出された。これにより、なぜ選択的なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤が、マウスでは許容されるかが説明される：ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ誘導がｅＩＦ２αを脱リン酸化し、実施例１の化合物によるＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害からもたらされるｅＩＦ２αリン酸化がわずか一過性であることが保証される。これは重要であり、その理由は、ｅＩＦ２αの持続性のリン酸化は有害であるからである。ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤によるインビボでのＰＰＰ１Ｒ１５Ａの誘導は、前臨床または臨床研究において哺乳動物におけるＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤の有効性および効能を査定するために使用することができる薬力学的パラメータである。
【０３１７】
実施例１の化合物は、哺乳動物における疾患を予防する（図９）
ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂの阻害によりフォールディングを増加させることは、非常に広範囲のヒトの病理に利益がある可能性がある。このことを試験するため、本発明者らは、ミスフォールドしたタンパク質、変異体ハンチントンの蓄積によって引き起こされるプロテオスタシス疾患であるハンチントン病（ＨＤ）に注目した。変異体ハンチントンがＵＰＲを誘導することを示すいくつかの報告がある（ＤｕｅｎｎｗａｌｄおよびＬｉｎｄｑｕｉｓｔ、Ｇｅｎｅ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、２２、３３０８〜３３１９、２００８；Ｎｉｓｈｉｔｏｈら、Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、１６、１３４５〜１３５５、２００２）。しかし、本発明者らはハンチントン病のモデルにおいてＰＰＰ１Ｒ１５Ａを検出することに失敗し、このことからＰＰＰ１Ｒ１５ＡがＨＤに関する治療標的ではないことが示唆された。ＨＤは現在まで救済法はないので、本発明者らは、ＨＤがＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害によって予防できるかどうかを試験した。本発明者らは、２ｍｇ／ｋｇの実施例１の化合物でのＨＤマウスの処置が、運動能力機能障害を予防することを見出した（図９）。これは、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂが有効な治療標的であること、したがって、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害が疾患の処置および予防において有用であることを示す。
【０３１８】
本明細書において実証された通り、疾患がＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害によって予防または改善することができるかどうかを決定するため、マウスモデルまたはヒトを容認できる用量の阻害剤で処置することができる。インビボでの標的阻害を立証するため、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ経路のマーカーをモニターし、薬力学的マーカーとして使用することができる。そのようなマーカーは、本明細書において示されるように、ＰＰＰ１Ｒ１５Ａ（図８）または任意の他の経路上の標的、例えば、ＵＰＲまたはＩＳＲマーカー（ｅＩＦ２αリン酸化、ＣＨＯＰ、ＡＴＦ４が含まれるが、これらに限定されない）であり得る。実施例１の化合物に伴って本明細書において示されるように、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は、安全である限り治療のために有用であり、これはＰＰＰ１Ｒ１５Ｂに対する化合物の選択性によって決定される。
【０３１９】
神経障害性マウスからの外植片におけるミエリン形成（図１０）
ＣＭＴは、いくつかの遺伝子中の変異によって引き起こされるミエリンニューロパシーのグループである。末梢性ミエリンタンパク質ＰＭＰ２２中の変異は、ＣＭＴの最も共通する原因である。ＰＭＰ２２（Ｔｒｅｍｂｌｅｒ−Ｊ）中の変異は、ＰＭＰ２２のミスフォールディングを引き起こし、末梢神経系中のミエリンにおける欠陥に起因して、マウスにおいてヒトにおけるＣＭＴに似た疾患を引き起こす。ＰＭＰ２２変異体マウスからの外植片は、ヒト疾患において観察される重篤なミエリン形成不全を繰り返す。本発明者らは、ＰＭＰ２２変異体マウスからの後根神経節培養物（ＤＲＧ）の処置が、ミエリン形成を改善することを見出した。変異体マウスからのＤＲＧ培養物が、化合物の治療有効性を予想するための有用なモデルであることが以前に見出された。したがって、本明細書において提示されるデータは、実施例１の化合物が、ＣＭＴ疾患などのＰＭＰ２２の変異または過剰産生によって引き起こされる疾患を処置するために有用であることを実証する。実施例１の化合物はまた、他のミエリン障害の処置において有用である。
【０３２０】
代謝疾患におけるＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ有効性の評価（図１１）
代謝疾患、例えば、糖尿病、肥満、肝脂肪疾患、およびアテローム性動脈硬化症が、病理学的なＥＲストレスに関連することが公知であり、ＵＰＲの薬理学的なモジュレーターが、治療の利益を有し得ることが考えられる。本研究の前には利用可能なＰＰＰ１Ｒ１５Ｂ阻害剤は存在しなかったので、ＰＰＰ１Ｒ１５Ｂが代謝疾患における治療標的であり得るかについては不確かであった。本発明者らはこの可能性を試験して、実施例１の化合物での肥満マウスの処置が、これらの哺乳動物において病理学的な高い血液グルコースを低減させることを見出した（図１１）。これにより、実施例１の化合物での処置が、代謝性障害を改善できることが示される。
【０３２１】
１つの疾患モデルにおいて、実施例１の化合物での処置が有益であることが示されたので、本発明の化合物が、他の哺乳動物の代謝性障害、例えば、糖尿病、肥満、肝脂肪疾患、およびアテローム性動脈硬化症に対し有益であることが明白である。
【０３２２】
実施例Ｂ
タンパク質発現および精製
ＭＢＰ−Ｒ１５Ａ３２５−６３６−ＨｉｓおよびＭＢＰ−Ｒ１５Ｂ３４０−６９８−Ｈｉｓを、発現させ、前の記載（Ｄａｓら  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１５）の通り精製した。ヒトＰＰ１γをコードするｃＤＮＡを、バキュロウイルストランスファーベクターｐＤＷ４６４にクローニングしてＮ末端ビオチンアクセプターペプチド（ＢＡＰ）を付加した。ベクターは、大腸菌ビオチンホロ酵素合成酵素（ＢｉｒＡ）もコードするため、ＢＡＰ−タグ化タンパク質をＳｐｏｄｏｐｔｅｒｅ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ９）昆虫細胞中でインビボでビオチン化（ｂｉｏ−ＰＰ１ｃ）することができる（Ｄｕｆｆｙら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２６２、１２２〜１２８、１９９８）。Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃバキュロウイルス発現システム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して組換えバクミドＤＮＡを生成し、Ｓｆ９昆虫細胞を使用してウイルスストックを増幅した。タンパク質を、Ｉｎｓｅｃｔ−Ｘｐｒｅｓｓ培地（Ｌｏｎｚａ）中でＳｆ９昆虫細胞を使用して産生した。ｂｉｏ−ＰＰ１ｃを、ＨｉＴｒａｐ  Ｑ  ＨＰカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）において陰イオン交換クロマトグラフィー（ｃｈｒｏｍｏｔｏｇｒａｐｈｙ）、続いてゲル濾過（ＨｉＬｏａｄ  １６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ  ２００カラム、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製した。タンパク質を、ＢＯＬＴ  ＳＤＳ−ＰＡＧＥ  ４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で分析し、ＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅ（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ）で染色し、ビオチン化ＰＰ１の存在をＰｉｅｒｃｅ  Ｈｉｇｈ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＨＲＰ抗体（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用したウエスタンブロットによって確認した。これは部分的に純粋なタンパク質をもたらし、完全な精製は、ビオチンとストレプトアビジンの高親和性および特異性に起因して後の段階で達した（ＳＰＲチップにおいて）。
【０３２３】
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）
ＳＡセンサーチップにおけるｂｉｏ−ＧＢＺまたはｂｉｏ−ＰＰ１ｃの捕捉
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）システムを全ての実験に使用し、ビオチン化ＧＢＺ（ｂｉｏ−ＧＢＺ）｛Ｔｓａｙｔｌｅｒ：２０１１ｊｉ｝またはｂｉｏ−ＰＰ１をセンサーチップＳＡ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に捕捉した。ストレプトアビジンでコーティングした表面を、５０ｍＭ  ＮａＯＨおよび１Ｍ  ＮａＣｌの溶液での３回、流速１０μｌ／分での１分間注入によって活性化した。ｂｉｏ−ＧＢＺまたはｂｉｏ−ＰＰ１ｃを、ランニング緩衝剤（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．１％ＤＭＳＯ）で希釈し、およそ３００ｎＭ濃度で流速１０μｌ／分で直接的にストレプトアビジンでコーティングした表面に注入して、それぞれ約２００および６０００ＲＵに相当するｂｉｏ−ＧＢＺまたはｂｉｏ−ＰＰ１ｃの固定化レベルに達した。ブランク固定化を、参照として使用するため、ＳＡセンサーチップ表面の１つについて実施した。
【０３２４】
ｂｉｏ−ＰＰ１ｃ表面を使用した小分子とＲ１５ホロホスファターゼ複合体の定常状態の結合定数の決定
小分子を、１００％ＤＭＳＯ中に５０ｍＭ貯蔵溶液として貯蔵した。結合定数の決定の前、化合物の１２または８つの濃度のいずれかの連続希釈を、９６ウェルプレートのランニング緩衝剤中に調製した。各々の化合物希釈系列より前に、調節サブユニットＭＢＰ−Ｒ１５Ａ３２５−６３６−ＨｉｓまたはＭＢＰ−Ｒ１５Ｂ３４０−６９８−Ｈｉｓを、ランニング緩衝剤で１０μＭに希釈し、流速３０μｌ／分で１分間ｂｉｏ−ＰＰ１ｃ表面に捕捉し、ホロホスファターゼ複合体をセンサーチップ表面に形成させた。これを、続いて１分間の安定化期間をおき、任意の非特異的な結合物を洗い流した。次いで、表面を再生することなく、化合物希釈系列を、チップの表面に流速３０μｌ／分で１分間注入し、続いて２分間の解離時間をおいた。各々の希釈系列の後に、表面を３Ｍ  ＮａＣｌを使用して９０秒間再生した。再生後、ＳＰＲ応答は一般的には基礎レベルに戻り、ｂｉｏ−ＰＰ１ｃ表面は次の化合物希釈系列のために整えられた。サンプル間のＤＭＳＯ濃度における小さな変動を補正可能にするために、０．０６〜８％ＤＭＳＯの範囲の８つの溶媒サンプルを５０サイクルごとに注入した。フローセル温度は、１０℃であった。
【０３２５】
データ分析
センサーグラムをＢｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００査定ソフトウェアを使用して分析し、結合定数を定常状態モデルに基づいて決定した。速度実験は異なる濃度の化合物を使用して行い、それらそれぞれの平衡結合レベルを決定した。これらの平衡応答レベル（Ｒｅｑ）は、濃度に対してプロットされ、グローバルフィットを使用してフィッティングされ、これにより定常状態親和性定数を決定できる（すなわち、５０％飽和での濃度がＫＤである）。ＫＤ値を表１に示す。
【０３２６】
ＥＲストレスに対する細胞保護作用の測定
ＨｅＬａ細胞（細胞４０，０００個／ｍｌ）を、９６ウェルプレートにプレーティングし、２５０ｎｇ／ｍｌのツニカマイシンの存在下で７２時間、示される通りの異なる濃度（０〜２０μＭ）の化合物で処置した。細胞死をモニターするため、１／２０００希釈のＣｅｌｌＴｏｘ緑色色素（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、培地に添加した。細胞の成長を、長期にわたりモニターし、ＩｎｃｕＣｙｔｅ  ＺＯＯＭシステムで２時間ごとに写真をとり、ＩｎｃｕＣｙｔｅ  ＺＯＯＭソフトウェア（Ｅｓｓｅｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）によって分析した。表１は、ツニカマイシンによって引き起こされる細胞傷害性ストレスから細胞を防御する化合物の能力を示す。ＥＲストレスに対する細胞保護作用は、適切なアッセイによって測定することができる。この実例において、細胞保護作用をツニカマイシンを含有する培地の添加によってＥＲストレスが誘発されたＨｅＬａ細胞において測定した、該薬物はＮ−グリコシル化をブロックし、それにより、タンパク質フォールディングを阻止し、アンフォールドタンパク質応答を誘導する。次いで、細胞生存度を、設定期間後に表１に列挙される化合物の存在下および非存在下で、長期にわたり細胞成長をモニターすることによって検出した。ＥＲストレスからの細胞保護作用を、ＥＲストレス後の生細胞（対照との比較）における百分率増加の観点で測定した。
【０３２７】
【数１】
2018517668.tif 000080
【０３２８】
ＥＣ５０
ＥＣ５０を、細胞死における用量反応実験から外挿した。ＩｎｃｕＣｙｔｅからのデータを、プロットし、Ｐｒｉｓｍにおいて分析した。各々のデータポイントについて「細胞死の％」。各濃度について、時間に対する細胞死の％をとり、曲線下面積をとり、ｌｏｇ  ｃｏｎｃ＝＞ＥＣ５０をプロットした（Ｐｒｉｓｍにおける分析）。
【０３２９】
翻訳率の評価
細胞（細胞９０，０００個／ｍｌ）を、１２ウェルプレートにプレーティングし、示される通り処置し、１００μＣｉ／ｍｌ  ３５Ｓ−メチオニン（Ｈａｒｔｍａｎｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃ）で１０分間３７℃で標識し、氷冷ＰＢＳで洗浄し、１２０μｌ  Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝剤中で溶解した。溶解物を、９５℃で５分間ボイルし、超音波処理し、４〜１２％Ｂｏｌｔ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  Ｐｌｕｓ  Ｇｅｌｓ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で分離した。次いで、ゲルを、ＩｎｓｔａｎｔＢｌｕｅ（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ）で染色し、蛍光イメージングによって分析し、ＩｍａｇｅＪを使用して定量した。
【０３３０】
上記の通り翻訳率をモニターすることにより、Ｒ１５Ａ、Ｒ１５ＢおよびＲ１５Ａ／Ｂ阻害剤の活性を、下記の通り定義することができる（図１２にも示される）。Ｒ１５Ａ阻害剤は、ストレスを受けていない細胞における翻訳に効果がないが、ストレス後に翻訳減弱を延長させる。選択的なＲ１５Ｂ阻害剤はタンパク質合成を一過性に減弱させる、その原因は、Ｒ１５ＡがＲ１５Ｂの阻害を補償するからである。Ｒ１５Ａ／Ｂ阻害剤は、タンパク質合成を持続的に阻害する。
【０３３１】
翻訳は、多くのレベルで阻害することができる。Ｒ１５ＡおよびＢ阻害剤が目的に適うことを保証するため、本発明者らは、化合物で処置した細胞においてＡＴＦ４のレベルをモニターする。Ｒ１５Ａ／Ｂ阻害剤はｅＩＦ２αリン酸化を持続性に誘導し、ｅＩＦ２αリン酸化はＡＴＦ４翻訳をもたらす。本発明者らは、Ａ／Ｂ阻害剤がＡＴＦ４を実際に誘導し、細胞において標的エンゲージメントが確認されたことを本明細書において示す。
【０３３２】
【表２６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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