(57)【要約】  本出願は、座瘡及び脂漏症などの皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を予防又は処置するための、組成物、方法、及び、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化のポリペプチド又は抗体の阻害剤の使用を提供する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される組成物であって、該組成物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１に明記されるようなアミノ酸配列、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸位置２及び４にてリジン残基を保持するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１の保存的に置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド、及び、薬学的又は審美的に許容可能な担体を含む、組成物。
【請求項２】
ポリペプチドはリンカーを更に含む、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
組成物は、ポリペプチドに結合される細胞透過性ペプチド又は皮膚透過性ペプチドを更に含む、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２０の何れか１つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２０の何れか１つの保存的に置換されたアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１乃至３の何れか１つに記載の組成物。
【請求項５】
ポリペプチドは長さが最大２５のアミノ酸である、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１に明記されるようなアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
ポリペプチドは、単一の非保存的アミノ酸の置換、欠失、又は挿入を伴うＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列を有している、或いは、単一の非保存的アミノ酸の置換、欠失、又は挿入を伴うＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列を有しているアミノ酸配列を含み、ポリペプチドはＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化を阻害する、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列を含む、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２から成るアミノ酸配列を有している、ことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される組成物であって、該組成物は、ヒトＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化部位に結合する抗体、及び薬学的又は審美的に許容可能な担体を含む、組成物。
【請求項１５】
抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２１の何れか１つに明記されるようなアミノ酸配列を有しているポリペプチドに特異的である、ことを特徴とする請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に明記されるようなアミノ酸配列を有しているポリペプチドに特異的である、ことを特徴とする請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
薬学的又は審美的に許容可能な担体は局所的に許容可能な担体である、ことを特徴とする請求項１乃至１６の何れか１つに記載の組成物。
【請求項１８】
皮膚浸透促進剤を更に含む、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される局所用組成物であって、請求項１乃至１３の何れか１つに記載のポリペプチド、又は請求項１４乃至１６の何れか１つに記載の抗体を含む、局所用組成物。
【請求項２０】
皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾病を処置する方法であって、該方法は、処置を必要とする被験体に、請求項１乃至１３の何れか１つに記載のポリペプチド、又は請求項１４乃至１６の何れか１つに記載の抗体を投与する工程を含む、方法。
【請求項２１】
投与は局所投与である、ことを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
皮膚疾病は座瘡又は脂漏性湿疹である、ことを特徴とする請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
皮膚疾病は座瘡である、ことを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾病を処置するための、請求項１乃至１３の何れか１つに記載のポリペプチド又は請求項１４乃至１６の何れか１つに記載の抗体の使用。
【請求項２５】
皮膚疾病は座瘡又は脂漏性湿疹である、ことを特徴とする請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
皮膚疾病は座瘡である、ことを特徴とする請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
脂腺細胞による脂質産生を変更する方法であって、該方法は、請求項１乃至１３の何れか１つに記載のポリペプチド、又は請求項１４乃至１６の何れか１つに記載の抗体を、脂腺細胞に投与する工程を含む、方法。
【請求項２８】
投与はインビトロで行われる、ことを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
変更は、対照の脂腺細胞と比べた脂質産生の減少である、ことを特徴とする請求項２７又は２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２０１５年５月２９日出願の米国仮特許出願第６２／１６８，３７４の優先日の利益を主張するものであり、その内容は引用により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
技術分野
本出願は、全般的に脂質代謝に関連し、より具体的には、皮膚疾病を処置するための脂質代謝のメディエータの使用に関連する。
【背景技術】
【０００３】
ステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）は、コレステロール、脂肪酸、トリグリセリド、及びリン脂質の生合成に必要な遺伝子を活性化する役割が最も良く知られている、小胞体（ＥＲ）膜結合転写因子である。ＳＲＥＢＰ−１は主に、脂肪酸、リン脂質、及びトリグリセリドの合成に関与する遺伝子の調節に関係し、その一方でＳＲＥＢＰ−２は、コレステロール生合成経路における遺伝子の調節を行う（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２００６）。ＥＲ膜において、未成熟のＳＲＥＢＰは、ＳＲＥＢＰ切断活性化タンパク質（ＳＲＥＢＰ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＳＣＡＰ）との密な会合に存在する（Ｎｏｈｔｕｒｆｆｔ  ｅｔ  ａｌ．  １９９８）。ＳＣＡＰは、細胞のコレステロール値又は細胞のストレスに基づいてＳＲＥＢＰの運命を決定する。ステロールの枯渇／細胞のストレスの場合、ＳＣＡＰは、ＣＯＰＩＩコートタンパク質のメンバーと相互作用して、未成熟のＳＲＥＢＰ（完全長）をゴルジに送り、そこで未成熟のＳＲＥＢＰはタンパク質分解的に処理され、Ｎ末端が活性（成熟）転写因子として放たれる。細胞のコレステロール値が高いと（又は、細胞のストレスが無い時）、ＳＣＡＰは、Ｉｎｓｉｇ（２つのアイソフォーム、Ｉｎｓｉｇ−１とＩｎｓｉｇ−２が存在する）と称される別のＥＲ膜内在タンパク質（ＥＲ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｓｉｄｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｆｌｕｒｙ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５）に結合し、これはＥＲ膜においてＳＲＥＢＰ−ＳＣＡＰ複合体を保持する（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２００２；  Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．  ２００５）。コレステロールが枯渇した細胞において、Ｉｎｓｉｇ−１タンパク質は、リジン−１５６とリジン−１５８の上で急速にユビキチン化され、プロテアソームにより分解される（Ｇｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  ２００６；  Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００６ａ；  Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００６ｂ）。低浸透圧ショック及びＥＲストレスなどの細胞のストレスはまた、Ｉｎｓｉｇ−１の急速な代謝回転を介してＳＲＥＢＰを活性化する（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｙｅ  ２００４）。ＥＲにおけるＩｎｓｉｇ−１の分解は、未成熟のＳＲＥＢＰ−１の放出及びその後のゴルジにおけるタンパク質分解活性化に不可欠な決定工程である。
【発明の概要】
【０００４】
本出願は全般的に、過剰な皮脂産生に関連した皮膚障害を処置するための、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化のポリペプチド及び抗体の阻害剤の使用、及び、ポリペプチド又は抗体の阻害剤を含む組成物の使用に関係する。
【０００５】
ヒトＩｎｓｉｇ−１（ＥｎｔｒｅｚＧｅｎｅ  ＩＤ：３６３８）は、リジン−１５６及びリジン−１５８上でのユビキチン化による分解のために標的とされる。本開示のポリペプチドは、少なくとも１つのＮ末端アミノ酸残基と１つのＣ末端アミノ酸残基に隣接しているアミノ酸残基であるリジン−１５６とリジン−１５８を含む、ヒトＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化部位から得られるアミノ酸配列を含む。脂腺細胞への適用に際して、このようなポリペプチドは、ユビキチン化の標的として自然のＩｎｓｉｇ−１タンパク質と競合し得、それによりＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化を減少、予防、又は阻害して；脂腺細胞内のＩｎｓｉｇ−１の減少、予防、又は阻害を引き起こして、ＳＲＥＢＰ−１経路に干渉する。本開示のポリペプチドは、リノール酸及び／又はテストステロンの存在下、及び不在下の両方で、脂腺細胞からの皮脂の脂質の産生を阻害すると実証されてきた。
【０００６】
本開示の実施形態は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される組成物であり、該組成物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１に明記されるようなアミノ酸配列、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸位置２及び４にてリジン残基を保持するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１の保存的に置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド、及び、薬学的又は審美的に許容可能な担体を含む。一実施形態において、薬学的又は審美的に許容可能な担体は、局所的に許容可能な担体である。更なる実施形態において、組成物は皮膚浸透促進剤を更に含む。
【０００７】
一実施形態において、ポリペプチドは更にリンカーを含む。
【０００８】
別の実施形態において、組成物は、ポリペプチドに結合された細胞透過性ペプチドを含む。一実施形態において、細胞透過性ペプチドは、随意にリンカーによって、ポリペプチドのＮ末端の端部に結合される。別の実施形態において、細胞透過性ポリペプチドは、随意にリンカーによって、ポリペプチドのＣ末端の端部に結合される。
【０００９】
一実施形態において、組成物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２０の何れか１つのアミノ酸配列又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２０の何れか１つの保存的に置換されたアミノ酸配列を含む、ポリペプチドを含んでいる。
【００１０】
一実施形態において、ポリペプチドは長さが最大２５のアミノ酸残基である。別の実施形態において、ポリペプチドは長さが最大４０のアミノ酸である。別の実施形態において、ポリペプチドは、長さが最大６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０のアミノ酸である。別の実施形態において、ポリペプチドは長さが５〜２１のアミノ酸である。別の実施形態において、ポリペプチドは、長さが少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、又は２５より上のアミノ酸である。
【００１１】
一実施形態において、ポリペプチドは、ヒトＩｎｓｉｇ−１の対応する部分のＮ末端及び／又はＣ末端に隣接する配列に由来するものではない１以上のアミノ酸によってＮ末端及び／又はＣ末端にて隣接している、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、７−１２、１４、１５、及び１８−２１の何れか１つのアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ヒトＩｎｓｉｇ−１の対応する部分のＮ末端及び／又はＣ末端に隣接する配列に由来するものではない、少なくとも１、２、又は３つのアミノ酸によってＮ末端及び／又はＣ末端にて隣接している、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、７−１２、１４、１５、及び１８−２１の何れか１つのアミノ酸配列を含む。
【００１２】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有しているアミノ酸を含む。
【００１３】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む。
【００１４】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む。
【００１５】
一実施形態において、ポリペプチドは、単一の非保存的アミノ酸の置換、欠失、又は挿入を伴うＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列を有している、或いは、単一の非保存的アミノ酸の置換、欠失、又は挿入を伴うＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列を有しているアミノ酸配列を含み、ポリペプチドはＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化を阻害することができる。
【００１６】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列を含む。
【００１７】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列を含む。
【００１８】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２から成るアミノ酸配列を有している。
【００１９】
別の実施形態は、本開示のポリペプチドを含む、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される局所用組成物である。
【００２０】
更なる実施形態は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される組成物であり、該組成物はヒトＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化部位に結合する抗体を含む。一実施形態において、皮膚疾患又は疾病は、座瘡又は脂漏性皮膚炎である。別の実施形態において、皮膚疾病は座瘡である。
【００２１】
一実施形態において、抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２１の何れか１つに明記されるようなアミノ酸配列を有しているポリペプチドに特異的である。別の実施形態において、抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又は２に明記されるようなアミノ酸配列を有しているポリペプチドに特異的である。
【００２２】
また別の実施形態は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾病を処置する方法であり、該方法は、処置を必要とする被験体に本開示のポリペプチド又は抗体を投与する工程を含む。一実施形態において、皮膚疾病は、座瘡又は脂漏性皮膚炎である。別の実施形態において、皮膚疾病は座瘡である。一実施形態において、投与は局所投与である。
【００２３】
また更なる実施形態は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾病を処置するための本開示のポリペプチド又は抗体の使用である。一実施形態において、皮膚疾病は、座瘡又は脂漏性皮膚炎である。一実施形態において、皮膚疾病は座瘡である。
【００２４】
別の実施形態は、本開示のポリペプチド又は抗体を脂腺細胞に投与することにより、脂腺細胞による脂質産生を変更する方法である。一実施形態において、投与はインビトロの投与である。一実施形態において、変更は、対照の脂腺細胞と比べた脂質産生の減少である。
【００２５】
１つの態様において、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾病を患う又はその疑いのある被験体を処置する方法が提供され、該方法は、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化を予防又は阻害することが可能な治療上有効な量の化合物を被験体に投与する工程を含む。化合物はペプチドでもよい。化合物は更にタンパク質導入ドメインを含んでもよい。化合物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドでもよい。化合物は抗体でもよい。化合物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドに対して生じる（ｒａｉｓｅｄ）、又はそれに結合する抗体であり得る。抗体は細胞内抗体でもよい。皮膚疾病は座瘡であり得る。
【００２６】
他の態様において、皮脂脂質を産生する細胞においてＳＲＥＢＰ−１を予防、阻害、又は減少する方法が提供され、該方法は、細胞を、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドと接触させる工程を含む。皮脂脂質を産生する細胞は脂腺細胞であり得る。
【００２７】
別の態様において、被験体のＳＲＥＢＰ−１に関連した皮膚疾病を予防する方法が提供され、該方法は、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化を予防阻害することが可能な治療上有効な量の化合物を被験体に投与する工程を含む。化合物はペプチドでもよい。化合物は更にタンパク質導入ドメインを含んでもよい。化合物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドでもよい。化合物は抗体でもよい。化合物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドに対して生じる（ｒａｉｓｅｄ）、又はそれに結合する抗体であり得る。抗体は細胞内抗体でもよい。皮膚疾病は座瘡であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１Ａ】皮脂の脂質産生に対するＩＮＤＩＰペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）の効果。ＩＮＤＩＰペプチドの量の増大は、リノール酸及びテストステロンの不在下で、ＳＺ９５脂腺細胞に適用された。
【図１Ｂ】皮脂の脂質産生に対するＩＮＤＩＰペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）の効果。ＩＮＤＩＰペプチドの量の増大は、異なる量のリノール酸及びテストステロンの存在下で、ＳＺ９５脂腺細胞に適用された。
【図１Ｃ】皮脂の脂質産生に対するＩＮＤＩＰペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）の効果。ＩＮＤＩＰペプチドの量の増大は、異なる量のリノール酸及びテストステロンの存在下で、ＳＺ９５脂腺細胞に適用された。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本明細書中で直接定義されない任意の用語は、当該技術分野で理解されるような、それらに通常関連した意味を持つものと理解される。本明細書の全体にわたり利用されるように、以下の用語は、他に明示されない限りは、以下の意味を持つものと理解される。
【００３０】
本明細書で使用されるように、「ａ」、「ａｎ」、及び／又は「ｔｈｅ」は、１以上のものを含む。
【００３１】
本明細書で使用されるように、用語「約」は、値又はその範囲が、明示された値又はその範囲よりも１０％大きい又は１０％小さい場合があることを意味しているが、このより広範な定義にのみ値又はその範囲を制限するようには意図されていない。用語「約」が先行する値又はその範囲はそれぞれ、明示された絶対的な値又はその範囲を包含するようにも意図されている。
【００３２】
本明細書で使用されるように、用語「被験体」は、鳥類又は哺乳動物などの動物を指す。特異的な動物は、ラット、マウス、イヌ、ネコ、カウ、ヒツジ、ウマ、ブタ、又は霊長類を含む。被験体は更に、代替的に患者と称されるヒトでもよい。被験体は更にトランスジェニック動物でもよい。被験体は更に、マウス又はラットなどのげっ歯類でもよい。
【００３３】
用語「ＳＣＡＰ」は、ＥｎｔｒｅｚＧｅｎｅ  ＩＤ：２２９３７に対応する遺伝子によりコードされる、ＳＲＥＢＰ切断活性化タンパク質を指す。ＳＲＥＢＰ切断活性化タンパク質（ＳＣＡＰ）は、ステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）のタンパク質分解切断に必要な調節タンパク質である。ＳＣＡＰは小胞体（ＥＲ）にある必須の膜タンパク質である。ＳＣＡＰのサイトゾル領域の１つは、細胞のコレステロールを検出する機能を果たす、ヘキサペプチドアミノ酸配列（ＭＥＬＡＤＬ）を含んでいる。コレステロールが存在する時、ＳＣＡＰは、ＳＲＥＢＰを活性化するのを妨げる構造変化を受け、コレステロール合成は生じない。ＳＣＡＰには８つの膜貫通ドメインがあり、Ｎ末端とＣ末端は共に細胞質に面している。また、ＳＣＡＰは、そのＣ末端上での一連の連続するＷＤの繰り返しによりＳＲＥＢＰに結合する。
【００３４】
用語「ＳＲＥＢＰ１」は、代替的にＳＲＥＢＦ−１又はＳＲＥＢＰ−１と称され得る、ステロール調節エレメント結合タンパク質を指す。このタンパク質をコードする遺伝子は、ＥｎｔｒｅｚＧｅｎｅ  ＩＤ：６７２０に対応する。ＳＲＥＢＰは、転写因子のベーシック・ヘリックス・ループ・ヘリックスロイシンジッパークラスに属する。活性化されていないＳＲＥＢＰは、小胞体膜に結合される。低レベルのステロールを伴う細胞において、ＳＲＥＢＰは、核へと移動される水溶性Ｎ−末端ドメインに切断される。その後、このような活性化ＳＲＥＢＰは、ステロール生合成に関与する酵素の合成をアップレギュレートする特異的なステロール調節エレメントＤＮＡ配列に結合する。本明細書に記載されるように、ステロールは次にＳＲＥＢＰの切断を阻害し、したがって付加的なステロールの合成は、ネガティブフィードバックループを介して低減される。
【００３５】
用語「Ｉｎｓｉｇ−１」は、インスリン誘導遺伝子１（ＥｎｔｒｅｚＧｅｎｅ  ＩＤ：３６３８）のタンパク質生成物を指す。ポリペプチドは長さが２７７のアミノ酸である。このタンパク質は、ＳＲＥＢＰ切断活性化タンパク質（ＳＣＡＰ）とＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素のステロール感知ドメインに結合するものであり、２つのタンパク質のステロール媒介輸送に不可欠である。別個のアイソフォームをコードする、代替的にスプライスされた転写物変異体が観察された。ユビキチン介在性経路によるＩｎｓｉｇ−１の分解は、本明細書に記載されるようにＳＣＡＰ／ＳＲＥＢＰの調節に不可欠である。ヒトＩｎｓｉｇ−１は、リジン−１５６とリジン−１５８上でのユビキチン化による分解の標的とされる。本出願は、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化を調節するための様々な組成物と方法を提供する。
【００３６】
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は互換的に使用される場合があり、ペプチド結合、又は修飾されたペプチド結合（例えば、半減期の増大など、ペプチドに付加的な所望の特性をもたらすペプチド同配体（修飾されたペプチド結合））により共有結合される、少なくとも２つのアミノ酸残基で構成される化合物を指す。ペプチドは少なくとも２のアミノ酸を含み得る。本明細書に記載されるペプチド又はタンパク質を含むアミノ酸も、翻訳後プロセシングなどの自然過程、又は、当該技術分野で周知の化学修飾技術により修飾される場合がある。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、及びアミノ末端又はカルボキシル末端を含む、ペプチドのあらゆる場所で生じ得る。同じタイプの修飾は、与えられたペプチド中の様々な部位にて同じ又は異なる程度で存在し得ることが理解される。ペプチドへの修飾の例は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスフォチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）の共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合の架橋の組成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化（ｓｅｌｅｎｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニル化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ）などのアミノ酸のタンパク質への転移ＲＮＡ媒介性の付加、及びユビキチン化を含み得る。例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｔ．  Ｅ．  Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，  Ｗ．  Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９３  ａｎｄ  Ｗｏｌｄ  Ｆ，  Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ：  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ，  ｐｇｓ．  １−１２  ｉｎ  Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，  Ｂ．Ｃ．  Ｊｏｈｎｓｏｎ，  ｅｄ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８３；  Ｓｅｉｆｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｆａｃｔｏｒｓ，  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  （１９９０）  １８２：  ６２６−６４６  ａｎｄ  Ｒａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９２），  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：  Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ，”  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ６６３：  ４８−６２を参照。
【００３７】
本明細書で使用されるように、「タンパク質導入ドメイン」とも称される、用語「細胞透過性ペプチド」は、例えばＮａｓｒｏｌｌａｈｉ  ｅｔ  ａｌ（２０１２），  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ  ８０：  ６３９−６４６に記載されるような、細胞膜にわたってペプチドなどの大きな巨大分子を運ぶことが可能なペプチドを指す。細胞透過性ペプチドは、比較的短く（長さが最大３０のアミノ酸）、水溶性の、陽イオン性及び／又は両親媒性のペプチドであり、これはポリペプチドが細胞膜を通過する能力を高めるために、例えば組み換え発現、共有結合、又はペプチド合成を介してポリペプチドに結合され得る。細胞透過性ペプチドは、随意にリンカーにより、ポリペプチドのＮ末端の端部又はポリペプチドのＣ末端の端部の何れかに結合され得る。細胞透過性ペプチドはまた、皮膚浸透を促進すると示された。本明細書で使用されるように、用語「細胞透過性ペプチド」はまた、例えばＭｅｎｅｇａｔｔｉ  ｅｔ  ａｌ  （２０１６），  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，  ５（５）：６０２−６０９及びＫｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ  （２０１５）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １９９：１６８−１７８に記載されるように、皮膚透過性ペプチドを含むように意図される。細胞透過性及び皮膚透過性ペプチドは当該技術分野で既知であり、Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎ、Ｔａｔ、Ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎ、ＭＡＰ、ＫＡＬＡ、Ｐ１、ＭＰＧ、Ｐｅｐ−１、ポリアルギニン、ポリリシン、ｈＣＴ、ＳＰＡＣＥ、及びＴＤ−１を含む。
【００３８】
本明細書で使用されるように、用語「リンカー」は、ペプチドリンカー及び化学クロスリンカーを含むように意図される。ペプチドリンカーは比較的短いアミノ酸配列であり、１つのポリペプチド配列を別のものに結合するために使用される。典型的に、ペプチドリンカーは長さが約１〜約３０のアミノ酸である。ペプチドリンカーは、グリシンが豊富な配列を持つ可撓性のリンカーであり得る。例えば、リンカーは、一連の１〜５の、又はそれ以上のグリシン残基を含む場合もある。ポリペプチドを共有結合するための化学クロスリンカーは当該技術分野で周知であり、限定されないが、アミン−アミンのクロスリンカー、スルフヒドリル−スルフヒドリルのクロスリンカー、アミン−スルフヒドリルのクロスリンカー、インビボの架橋試薬、及びカルボキシル−アミンのクロスリンカーを含む。
【００３９】
「実質的に同様の」アミノ酸配列は、１以上の保存的置換により参照配列とは異なるが、例えば別の実質的に同様の配列と機能的に相同し得る、アミノ酸配列である。置換され得る本出願のペプチドの個々のアミノ酸の態様は、当業者により認識される。
【００４０】
アミノ酸配列の類似性又は同一性は、ＢＬＡＳＴ（ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ）の２．０アルゴリズムを利用するＢＬＡＳＴＰ及びＴＢＬＡＳＴＮのプログラムの使用により、算出され得る。アミノ酸配列の類似性又は同一性を算出するための技術は当業者に周知であり、ＢＬＡＳＴアルゴリズムの使用は、ＡＬＴＳＣＨＵＬ  ｅｔ  ａｌ．  １９９０，  Ｊ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：  ４０３−  ４１０及びＡＬＴＳＣＨＵＬ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７），  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：  ３３８９−３４０２に記載されている
【００４１】
アミノ酸は、例えば、極性、無極性、酸性、塩基性、芳香性、又は中性として記載される場合がある。極性アミノ酸は、生物学的な又はほぼ中性のｐＨでの水素結合により水と相互に作用するアミノ酸である。アミノ酸の極性は、生物学的な又はほぼ中性のｐＨでの水素結合の程度の指標である。極性アミノ酸の例は、セリン、プロリン、トレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リジン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸塩、チロシン、及びグルタミン酸塩を含む。無極性アミノ酸の例は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、及びトリプトファンを含む。酸性アミノ酸は、中性ｐＨで実効負電荷を持つ。酸性アミノ酸の例は、アスパラギン酸塩とグルタミン酸塩を含む。塩基性アミノ酸は、中性ｐＨで実効正電荷を持つ。塩基性アミノ酸の例は、アルギニン、リジン、及びヒスチジンを含む。芳香族アミノ酸は通常、無極性であり、疎水的相互作用に関係し得る。芳香族アミノ酸の例は、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンを含む。チロシンはまた、芳香族側鎖上でのヒドロキシル基を介した水素結合に関与し得る。中性の脂肪族アミノ酸は通常、無極性及び疎水性である。中性アミノ酸の例は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、及びメチオニンを含む。アミノ酸は、１より多くの記述的範疇により説明されてもよい。一般的な記述的範疇を共有するアミノ酸は、ペプチドにおいて互いに置換可能な場合もある。
【００４２】
本出願のペプチド化合物を説明するために使用される学名（Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ）は一般的実務に従うものであり、ここでは、アミノ基は左に、そしてカルボキシル基は各アミノ酸残基の右に提示される。本出願の選択された特異的な実施形態を表わす配列において、アミノ末端基とカルボキシ末端基は、具体的に示されていないが、別段の定めがない限り生理的なｐＨ値であると仮定される形態であることが理解される。アミノ酸構造の式において、残基はそれぞれ全般的に、以下の表１に従い、アミノ酸の慣用名に対応する１文字又は３文字の名称により表わされる場合もある：
【００４３】
【表１】
2018517767.tif 000003
【００４４】
アミノ酸のヒドロパシー指標は、水性環境（負の値）又は疎水性環境（正の値）をアミノ酸が求める傾向を示す尺度である（ＫＹＴＥ  ＆  ＤＯＯＬＩＴＴＬＥ  １９８２．  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １５７：１０５−１３２）。標準のアミノ酸のヒドロパシー指数は、アラニン（１．８）、アルギニン（−４．５）、アスパラギン（−３．５）、アスパラギン酸（−３．５）、システイン（２．５）、グルタミン（−３．５）、グルタミン酸（−３．５）、グリシン（−０．４）、ヒスチジン（−３．２）、イソロイシン（４．５）、ロイシン（３．８）、リジン（−３．９）、メチオニン（１．９）、フェニルアラニン（２．８）、プロリン（−１．６）、セリン（−０．８）、トレオニン（−０．７）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、及びバリン（４．２）を含む。同様のヒドロパシー指数を持つアミノ酸は、ペプチドにおいて互いに置換可能な場合もある。
【００４５】
本明細書に記載されるペプチド内に含まれるアミノ酸は、Ｌ−構成又はＤ−構成にあると理解される。本出願のペプチドとペプチド模倣体において、Ｄ−アミノ酸はＬ−アミノ酸と置換可能な場合もある。本出願ペプチド内、及び特にカルボキシ末端又はアミノ末端に含まれるアミノ酸は、メチル化、アミド化、アセチル化、又は、それらの生物活性に悪影響を及ぼすことなくペプチドの循環する半減期を変更し得る他の化学基との置換により修飾される場合がある。加えて、ジスフィルド結合は、本出願のペプチドに存在する、又は存在しない場合もある。
【００４６】
非標準のアミノ酸は自然に生じ、及び、遺伝的にコードされる又はコードされない場合もある。遺伝的にコードされた非標準のアミノ酸の例は、通常は停止コドンであるＵＧＡコドンにて幾つかのタンパク質に時々組み込まれるセレノシステイン、又は、通常は停止コドンであるＵＧＡコドンにて幾つかのタンパク質に時に組み込まれるピロリシンを含む。遺伝的にコード化されない幾つかの非標準のアミノ酸は、ペプチドに既に組み込まれる標準のアミノ酸の修飾から結果として生じ、又は、例えば代謝中間体或いは前駆物質であり得る。非標準のアミノ酸の例は、４−ヒドロキシプロリン、５−ヒドロキシリジン、６−Ｎ−メチルリシン、ガンマ−カルボキシグルタマート、デスモシン、セレノシステイン、オルニチン、シトルリン、ランチオニン、１−アミノシクロプロパン−１−カルボン酸、ガンマ−アミノ酪酸、カルニチン、サルコシン、又はＮ−ホルミルメチオニンを含む。標準及び非標準のアミノ酸の合成変異体も知られており、化学的に誘導されたアミノ酸、識別又はトラッキングのために標識化されたアミノ酸、又はアルファ炭素上に様々な側鎖基を持つアミノ酸を含み得る。そのような側鎖基の例は当該技術分野で既知であり、脂肪族、単一芳香族、多環芳香族、ヘテロ環式、複素環式、アミノ、アルキルアミノ、カルボキシル、カルボキサミド、カルボキシルエステル、グアニジン、アミジン、ヒドロキシル、アルコキシ、メルカプト含有側鎖、アルキルメルカプト含有側鎖、又は他のヘテロ原子含有側鎖を含み得る。他の合成アミノ酸は、アルファ−イミノ酸、及び、ベータ−アミノ酸、ｄｅｓ−カルボキシ、又はｄｅｓ−アミノ酸などの非アルファ−アミノ酸を含み得る。アミノ酸の合成変異体は、当該技術分野で既知の一般法を使用して合成され、又は、例えばＲＳＰ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ＬＬＣ（Ｓｈｉｒｌｅｙ，  ＭＡ）といった商用の供給業者から購入され得る。
【００４７】
本出願のポリペプチドは分離しており、或いは、トレーサー化合物、タンパク質導入ドメイン又は配列、リポソーム、炭水化物担体、ポリマー担体、又は当業者に明白な他の薬剤或いは賦形剤に結合されるか、又はそれらと組み合わせられ得る。代替的な実施形態において、このようなペプチドは、それらが薬理学的に有効な量で存在し得る薬物を含み得る。
【００４８】
保存的置換：保存的置換は、ポリペプチドの三次元構造又は機能を妨害することなく、ポリペプチドのアミノ酸配列において行われ得ることが、当業者に理解される。従って、本出願は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１とＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチドを含んでいる。保存的置換は、互いに同様の疎水性、極性、及びＲ鎖長を持つアミノ酸を置換することにより、当業者によって達成される。加えて、異なる種からの相同タンパク質の位置合わせされた配列を比較することにより、保存的置換は、コードされたタンパク質の基本機能を変えることなく、種の間に突然変異されたアミノ酸残基を位置付けることにより識別され得る。表２は、保存的置換の典型的なリストを提供する。
【００４９】
【表２】
2018517767.tif 000004
【００５０】
本明細書で使用されるような用語「薬物」は、患者又は試験被験体に投与され得、且つ患者又は試験被験体において効果をもたらすことができる組成物を指す。効果は化学的、生物学的、又は物理的な場合があり、患者又は試験被験体は、ヒト、或いは、げっ歯類又はトランスジェニックマウス、又はイヌ、ネコ、カウ、ヒツジ、ウマ、ハムスター、モルモット、ウサギ、又はブタなどの非ヒト動物でもよい。薬物は、有効な化学物質のみで、又は、薬学的に許容可能な賦形剤と組み合わせて構成されてもよい。
【００５１】
用語「薬学的に許容可能な賦形剤」は、生理学的に適合可能な、任意の及び全ての溶媒、分散液媒体、コーティング、制菌性、抗菌性、及び抗真菌性の薬剤、等張剤及び吸収遅延剤を含んでもよい。賦形剤は、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、脊髄腔内、局所、又は経口の投与に適していてもよい。賦形剤は、滅菌の注入可能な溶液又は分散液の即席の調製のために、滅菌水溶液又は分散液を含んでもよい。薬物の調製のためのそのような媒体の使用は、当該技術分野で既知である。
【００５２】
用語「皮膚浸透促進剤」は、生理学的に適合性である任意の及び全ての皮膚浸透促進剤を含み得る。皮膚浸透促進剤の例は、アルコール、アミド、エステル、エーテルアルコール、脂肪酸、グリコール、ピロリドン、スルホキシド、界面活性剤、及びテルペンを含む。局所送達系の製剤のためのそのような皮膚浸透促進剤の使用は、当該技術分野で既知である。
【００５３】
本明細書で使用されるように、用語「皮脂の過剰産生に関連する皮膚障害」は、脂線による過度の皮脂産生により引き起こされる又は悪化すると考えられる皮膚疾病を含む。皮脂は脂線により生成され、角質、脂肪、及び細胞破片から成る。皮脂の過剰産生に関連する皮膚障害は、座瘡と脂漏を含み；脂漏性皮膚炎（乳痂、頭部粃糠疹）、うっ血性脂漏症（ｓｅｂｏｒｒｈｅａ  ｃｏｎｇｅｓｔｉｖｅａ）、脂漏性眼瞼炎、及び脂漏性角化症を含む。
【００５４】
本明細書で使用されるような用語「処置」又は「処置すること」は、臨床結果を含む、有益又は所望の結果を得るための手法を意味する。処置は治療的処置と予防的処置を含む。有益又は所望の臨床結果は、検出可能又は検出不可能なものにかかわらず、限定されないが、１以上の症状又は状態の緩和又は寛解、疾患の範囲の減少、疾患の安定（即ち、悪化しない）状態、又は疾患進行の遅延又は減速、疾患状況の改善又は軽減、及び寛解（部分的又は全体的にかかわらず）を含む。用語「処置」又は「処置すること」は、幾つかの実施形態において、亜臨床的段階で疾患を予防することを意味する。
【００５５】
本開示の組成物の「治療上有効な量」、「有効な量」、又は「十分な量」という用語は、哺乳動物（例えばヒト）を含む被験体に投与された時に、臨床結果を含む有益又は所望の結果を達成するのに十分な質量であり、そのため、「有効な量」又はその同意語は、適用される文脈に依存する。疾患の文脈において、治療上有効な量の薬剤は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚障害などの、疾患、疾病、又は障害を処置し、調節し、弱め、逆転し、又は影響を及ぼすために使用される。「有効な量」は、そのような疾患、疾病、又は障害を処置、予防、又は阻害するのに十分な組成物の量を意味するように意図されている。そのような量に相当する、与えられた薬剤の量は、様々な要因、例えば与えられた薬剤、医薬製剤、投与経路、疾病、疾患、又は障害のタイプ、処置される被験体又は宿主の同一性などによって変動するが、それにもかかわらず、当業者により慣例的に決定され得る。本明細書で定義されるように、薬剤の治療上有効な量は、当該技術分野で既知の慣例的な方法により当業者によって容易に決定されてもよい。
【００５６】
更に、治療上有効な量の薬剤を受ける被験体の「処置」又は「予防」のレジメンは、単一の投与から成るか、又は代替的に一連の適用を含み得る。例えば、薬剤は少なくとも週に１回投与され得る。しかし、別の実施形態において、薬剤は、与えられた処置のために週に１回〜１日約２回、被験体に投与され得る。処置期間の長さは、疾患の重症度、被験体の年齢、薬剤の濃度と活性、又はそれらの組み合わせなどの様々な要因に依存する。処置又は予防のために使用される薬剤の有効な投与量は、特定の処置又は予防のレジメンにわたって増加又は減少し得ることも、認識される。投与量の変化は、当該技術分野で既知の標準の診断アッセイにより結果として生じ、且つ明白となり得る。幾つかの例において、長期投与が必要とされる場合もある。
【００５７】
用語「投与すること」は、当業者に知られているように、例えば皮膚の疾病、疾患、又は障害を処置する際の使用のための、被験体への薬剤の投与の従来の経路として定義される。これは、例えば局所投与を含み得る。他の実施形態において、投与は、非経口投与（即ち、皮下、皮内、筋肉内、静脈内など）、経口投与、舌下投与、又は粘膜投与などを含み得る。薬剤の用量は、皮膚疾病の重症度、及び、被験体の健康、年齢、体重、及び／又は性別などの要因に従って変動し得る。投薬レジメンは、最適な用量をもたらすように調整され得る。当業者は、不当な試験を行うことなく投薬レジメンが決定及び／又は最適化され得ることを認識する。
【００５８】
本明細書で使用されるように、脂腺細胞の「脂質産生を変更すること」は、本開示のポリペプチド又は抗体が投与されていない対照の脂腺細胞と比べた、脂腺細胞による脂質産生の変化を含む。脂質産生の変化は、例えば、脂質産生の割合、脂質産生の量、又は細胞により生成された脂質の特性における変化であり得る。幾つかの例において、この変化は、脂腺細胞により生成された脂質の割合及び／又は量の減少である。
【００５９】
細胞への組成物の投与は、インビボ、エキソビボ、及びインビトロの投与を含む。
【００６０】
本開示のポリペプチドと抗体は、滅菌水溶液として投与され得、又は、脂溶性の賦形剤、或いは適切なものとして別の溶液、懸濁液、パッチ、錠剤、又はペーストの様式で投与されてもよい。本開示の組成物は、吸入による投与のために製剤される場合もある。例えば、ポリペプチドは、エアロゾル中の分散液を可能にするために賦形剤と組み合わせられる場合もある。吸入製剤の例は当業者に既知である。他の薬剤は、制御放出製剤などにおいて、摂取又は代謝、或いは宿主内での分散の遅延を支援するために、本開示のポリペプチドと組み合わせて含まれていてもよい。制御放出製剤の例は、当業者に既知であり、マイクロカプセル化、炭水化物又はポリマーマトリクス内での塞栓形成などを含み得る。製剤を作成するための、当該技術分野で既知の他の方法は、例えば“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，  （１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ），  ｅｄ．  Ａ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，  １９９５，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａに見出される。
【００６１】
本開示のポリペプチドは、化粧用組成物に含まれてもよい。例えば、本開示のポリペプチドは、美容マスク、メイク（ｍａｋｅ−ｕｐ）、化粧用パッチ、及びクリーム又はローションなどの化粧品に含まれてもよい。
【００６２】
用語「薬学的に許容可能な」は、ヒト及び動物の処置との適合性を意味する。
【００６３】
用語「審美的に許容可能な」は、ヒト及び動物への審美的用途との適合性を意味する。
【００６４】
合理的に有効な方法での細胞へのポリペプチドなどの生物活性分子の送達は、細胞上へのネイキッドペプチドの適用、又は患者又は試験被験体へのネイキッドペプチドの投与だけでなく、それ以上を要求し得る。薬理学的に有効な量などの有効な量をもたらすように、適切な様式での細胞への生物活性分子の送達を可能にする薬剤は、当該技術分野で既知であり、例えばＤＩＥＴＺ  ｅｔ  ａｌ  ２００４．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２７：８５−１３１に記載されている。そのような薬剤の例は、生物活性分子、ウイルスベクター、及びタンパク質導入ドメイン（ＰＴＤ）に結合され得る、リポソーム、抗体、又は受容体リガンドを含む。ＰＴＤの例は、Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメイン（ＰＥＲＥＺ  ｅｔ  ａｌ  １９９２  Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  １０２：７１７−７２２）、トランスポータン（ＰＯＯＧＡ  ｅｔ  ａｌ  １９９８  ＦＡＳＥＢ  Ｊ  １２：６７−７７）、ジフテリア毒素（ＳＴＥＮＭＡＲＫ  ｅｔ  ａｌ  １９９１  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １１３：１０２５−１０３２；ＷＩＥＤＬＯＣＨＡ  ｅｔ  ａｌ  １９９４  Ｃｅｌｌ  ７６：１０３９−１０５１）、炭疽毒素（ＢＡＬＬＡＲＤ  ｅｔ  ａｌ  １９９８  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ  ６６：６１５−６１９；ＢＬＡＮＫＥ  ｅｔ  ａｌ  １９９６  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ９３：８４３７−８４４２）、及び緑膿菌外毒素Ａ（ＰＲＩＯＲ  ｅｔ  ａｌ  １９９２  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３１：３５５５−３５５９）の転位ドメイン、プロテグリン誘導体、例えばダーマセプチンＳ４（ＨＡＲＩＴＯＮ−ＧＡＺＡＬ  ｅｔ  ａｌ  ２００２  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４１：９２０８−９２１４）、ＨＳＶ−１  ＶＰ２２（ＤＩＬＢＥＲ  ｅｔ  ａｌ  １９９９  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．６：１２−２１）、ＰＥＰ−１（ＭＯＲＲＩＳ  ｅｔ  ａｌ  ２００１  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １９：１１７３−１１７６）、塩基性ペプチド、例えばポリ−Ｌ及びポリ−Ｄ−リジン（ＷＯＬＦＥＲＴ  ｅｔ  ａｌ  １９９６  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ３：２６９−２７３  ；  ＲＹＳＥＲ  ｅｔ  ａｌ  １９８０  Ｃａｎｃｅｒ  ４５：１２０７−１２１１；  ＳＨＥＮ  ｅｔ  ａｌ  １９７８  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ７５：１８７２−１８７６）、ＨＳＰ７０（ＦＵＪＩＨＡＲＡ  ｅｔ  ａｌ  １９９９  ＥＭＢＯ  Ｊ  １８：４１１−４１９）、及びＨＩＶ−ＴＡＴ（ＤＥＭＡＲＣＨＩ  ｅｔ  ａｌ  １９９６  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７０：４４２７−４４３７）を含む。そのようなタンパク質導入ドメインの他の例、及び関連する詳細は、上記のＤＩＥＴＺ及びその中の引用文献に記載されている。一実施形態において、本開示の組成物は送達剤を含んでもよい。
【００６５】
本明細書で使用されるような用語「抗体」は、異物（抗原）に応じて生成される、免疫グロブリンと呼ばれる免疫系タンパク質を指す。抗体は典型的に、２つの重鎖と２つの軽鎖を含み、これらは結合されている。このような鎖の構造の変異性は抗原特異性もたらし、即ち、個々の抗体が特異性抗原を認識することを可能にする。用語「抗体」は、ポリクローナル及びモノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、又はヒト化抗体を含み、同様に、Ｆａｂ又は他の免疫グロブリン発現ライブラリの生成物を含むＦａｂ又はＦ（ａｂ）２フラグメントを含む場合がある。そのような抗体又はフラグメントを作る方法は、当該技術分野で既知であり、例えばＨＡＲＬＯＷ，  Ｅ  ａｎｄ  ＬＡＮＥ  Ｄ．  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．  １９８８．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓに見出され得る。
【００６６】
幾つかの実施形態に係る抗体は細胞内抗体でもあり得、時にイントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ）と呼ばれる。そのような抗体を使用、作成、及び／又は設計する方法は、当該技術分野、例えばＬｅｃｅｒｆ  ｅｔ  ａｌ．  ２００１；  Ｈｕｄｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓｏｕｒｉａｕ  ２００３に記載されている。タンパク質、又はタンパク質のアイソフォームを区別する、抗体の産生のためのエピトープとして使用される特異的なペプチドの選択又は識別は、配列の比較を用いて行われ得、当業者は、所望の選択性を持つ抗体を生成するのに有用であり得る適切なペプチド又はタンパク質配列を識別することができる。ポリクローナル抗体は、異なるＢ細胞株由来の抗体である。これらは、特異的な抗原に対して分泌された免疫グロブリン分子の混合物であり、各々異なるエピトープを認識している。このような抗体は典型的に、マウス、ウサギ、又はヤギなどの適切な哺乳動物の免疫化により生成される。採取可能な血清の量がより多いことから、より大きな哺乳動物が頻繁に好まれる。抗原は哺乳動物に注入される。これによりＢリンパ球を誘発し、抗原に特異的なＩｇＧ免疫グロブリンを生成する。このＩｇＧは、哺乳動物の血清から精製される。対照的に、モノクローナル抗体は単細胞株に由来する。
【００６７】
アジュバントが、抗原に対する免疫応答を改善又は増強するために使用されてもよい。特定の実施形態において、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドに対して生じる、又はそれに結合する抗体が提供される。そのような抗体を利用する、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化を阻害又は予防する方法も提供される。そのような抗体を使用して、被験体における多くの疾患を処置又は予防する方法も提供される。
【００６８】
本開示のポリペプチドと組成物は、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化を阻害し、それによりＳＲＥＢＰ−１を阻害することが可能な場合もある。そのようなポリペプチドの例は、表３に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み、同様に、表３に記載されるアミノ酸配列の保存的に置換された誘導体を含む。そのようなポリペプチドの例は、結果として生じるポリペプチドがＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化を阻害する能力を保持している場合、表３に記載されるアミノ酸配列の単一のアミノ酸の置換（保存的又は非保存的）、欠失、或いは挿入を持つポリペプチドも含む。そのようなポリペプチドの例は、引用により本明細書に組み込まれるＷＯ２００９１２１１７６Ａ１に記載されるものを付加的に含む。
【００６９】
【表３】
2018517767.tif 000005
【００７０】
本開示のポリペプチドは、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化を予防又は阻害し、それによりＳＲＥＢＰ−１を阻害することが可能な場合もある。そのようなポリペプチドの例は、以下の実施例１の作業に示されている。Ｉｎｓｉｇ−１タンパク質のユビキチン化領域との実質的な類似性を持つペプチドに由来するペプチドは、本明細書においてＩＮＤＩＰペプチドと称される。用語「ＩＮＤＩＰペプチド」は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２１を含むポリペプチド、及び保存的に置換されたＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２１を含むポリペプチドを含んでいる。概して言えば、ＩＮＤＩＰペプチドは、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化領域の短いフラグメントを含み、及び、ＰＴＤが融合したＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化領域のペプチドを生成するためにＴＡＴタンパク質導入ドメインなどのタンパク質導入ドメインに結合されてもよい（例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２を参照）。ＩＮＤＩＰペプチドは以前に説明されている（ＷＯ２００９１２１１７６Ａ１）。
【００７１】
本開示の実施形態は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される組成物であり、該組成物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１に明記されるようなアミノ酸配列、又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１のアミノ酸位置２及び４にてリジン残基を保持するＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２１の保存的に置換されたアミノ酸配列を含むポリペプチド、及び、薬学的又は審美的に許容可能な担体を含む。一実施形態において、薬学的又は審美的に許容可能な担体は、局所的に許容可能な担体である。更なる実施形態において、組成物は皮膚浸透促進剤を更に含む。
【００７２】
一実施形態において、ポリペプチドは更にリンカーを含む。
【００７３】
別の実施形態において、組成物は、ポリペプチドに結合された細胞透過性ペプチドを含む。一実施形態において、細胞透過性ペプチドは、随意にリンカーによって、ポリペプチドのＮ末端の端部に結合される。別の実施形態において、細胞透過性ポリペプチドは、随意にリンカーによって、ポリペプチドのＣ末端の端部に結合される。
【００７４】
一実施形態において、組成物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２０の何れか１つのアミノ酸配列又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２０の何れか１つの保存的に置換されたアミノ酸配列を含む、ポリペプチドを含んでいる。
【００７５】
一実施形態において、ポリペプチドは長さが最大２５のアミノ酸残基である。別の実施形態において、ポリペプチドは長さが最大４０のアミノ酸である。別の実施形態において、ポリペプチドは、長さが最大６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、又は４０のアミノ酸である。別の実施形態において、ポリペプチドは長さが５〜２１のアミノ酸である。別の実施形態において、ポリペプチドは、長さが少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、又は２５より上のアミノ酸である。
【００７６】
一実施形態において、ポリペプチドは、ヒトＩｎｓｉｇ−１の対応する部分のＮ末端及び／又はＣ末端に隣接する配列に由来するものではない１以上のアミノ酸によってＮ末端及び／又はＣ末端にて隣接している、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、７−１２、１４、１５、及び１８−２１の何れか１つのアミノ酸配列を含む。一実施形態において、ポリペプチドは、ヒトＩｎｓｉｇ−１の対応する部分のＮ末端及び／又はＣ末端に隣接する配列に由来するものではない、少なくとも１、２、又は３つのアミノ酸によってＮ末端及び／又はＣ末端にて隣接している、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、７−１２、１４、１５、及び１８−２１の何れか１つのアミノ酸配列を含む。
【００７７】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有しているアミノ酸を含む。
【００７８】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む。
【００７９】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有している、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有しているアミノ酸配列を含む。
【００８０】
一実施形態において、ポリペプチドは、単一の非保存的アミノ酸の置換、欠失、又は挿入を伴うＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列を有している、或いは、単一の非保存的アミノ酸の置換、欠失、又は挿入を伴うＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列を有しているアミノ酸配列を含み、ポリペプチドはＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化を阻害することができる。
【００８１】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列、或いは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の保存的に置換されたアミノ酸配列を含む。
【００８２】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸配列を含む。
【００８３】
一実施形態において、ポリペプチドは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２から成るアミノ酸配列を有している。
【００８４】
別の実施形態は、本開示のポリペプチドを含む、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される局所用組成物である。
【００８５】
更なる実施形態は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾患又は疾病を処置するために使用される組成物であり、該組成物はヒトＩｎｓｉｇ−１のユビキチン化部位に結合する抗体を含む。一実施形態において、皮膚疾患又は疾病は、座瘡又は脂漏性皮膚炎である。別の実施形態において、皮膚疾病は座瘡である。
【００８６】
一実施形態において、抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１〜２１の何れか１つに明記されるようなアミノ酸配列を有しているポリペプチドに特異的である。別の実施形態において、抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又は２に明記されるようなアミノ酸配列を有しているポリペプチドに特異的である。
【００８７】
また別の実施形態は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾病を処置する方法であり、該方法は、処置を必要とする被験体に本開示のポリペプチド又は抗体を投与する工程を含む。一実施形態において、皮膚疾病は、座瘡又は脂漏性皮膚炎である。別の実施形態において、皮膚疾病は座瘡である。一実施形態において、投与は局所投与である。
【００８８】
また更なる実施形態は、皮脂の過剰産生に関連した皮膚疾病を処置するための本開示のポリペプチド又は抗体の使用である。一実施形態において、皮膚疾病は、座瘡又は脂漏性皮膚炎である。一実施形態において、皮膚疾病は座瘡である。
【００８９】
別の実施形態は、本開示のポリペプチド又は抗体を細胞に投与することにより、脂腺細胞による脂質産生を変更する方法である。一実施形態において、投与はインビトロの投与である。一実施形態において、変更は、対照の脂腺細胞と比べた脂質産生の減少である。
【００９０】
別の実施形態において、ＳＲＥＢＰ−１に関連した皮膚疾病を患う又はその疑いのある被験体を処置する方法が提供され、該方法は、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化を予防又は阻害することが可能な治療上有効な量の化合物を被験体に投与する工程を含む。化合物はペプチドでもよい。化合物は更にタンパク質導入ドメインを含んでもよい。化合物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドでもよい。化合物は抗体でもよい。化合物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドに対して生じる（ｒａｉｓｅｄ）、又はそれに結合する抗体であり得る。抗体は細胞内抗体でもよい。皮膚疾病は座瘡であり得る。
【００９１】
別の態様において、被験体のＳＲＥＢＰ−１に関連した皮膚疾病を予防する方法が提供され、該方法は、Ｉｎｓｉｇ−１のユビキチン化を予防阻害することが可能な治療上有効な量の化合物を被験体に投与する工程を含む。化合物はペプチドでもよい。化合物は更にタンパク質導入ドメインを含んでもよい。化合物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドでもよい。化合物は抗体でもよい。化合物は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と実質的に同様のアミノ酸組成を持つポリペプチドに対して生じる、又はそれに結合する抗体であり得る。抗体は細胞内抗体でもよい。皮膚疾病は座瘡であり得る。
【実施例】
【００９２】
以下の限定されない例は、本開示の例示である。
【００９３】
実施例１−インビトロでのＳＺ９５脂腺細胞へのＩＮＤＩＰペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）の適用は、脂質産生の有意な減少を引き起こす
ＳＺ９５は、インビトロのヒト脂腺細胞モデルとして広く使用される、不死化されたヒト脂腺細胞株である。培養されたＳＺ９５脂腺細胞は、皮脂腺タンパク質マーカーの発現、及びアンドロゲンとレチノイドに対する予期された生体応答を含む、正常なヒト脂腺細胞の主要な特徴を保持すると示されている（Ｚｏｕｂｏｕｌｉｓ  ＣＣ，  Ｓｅｌｔｍａｎｎ  Ｈ，  Ｎｅｉｔｚｅｌ  Ｈ，  Ｏｒｆａｎｏｓ  ＣＥ．  Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｂａｃｅｏｕｓ  ｇｌａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  （ＳＺ９５）  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １９９９；１１３：１０１１−１０２０  ａｎｄ  Ｗｒｏｅｂｅｌ  Ａ，  Ｓｅｌｔｍａｎｎ  Ｈ，  Ｆｉｍｍｅｌ  Ｓ，  Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｄｅｃｋｅｒ  Ｋ，  Ｔｓｕｋａｄａ  Ｍ，  Ｂｏｇｄａｎｏ  ＶＢ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ  ｓｅｂｏｃｙｔｅｓ．  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ２００３；１２０：１７５−１８１）。
【００９４】
方法
細胞培養。正常な脂腺細胞の主要な特徴を保存すると示されている、不死化されたヒトの顔のＳＺ９５脂腺細胞［Ｚｏｕｂｏｕｌｉｓ，  Ｃｈ．  Ｃ．  ，  Ｓｅｌｔｍａｎｎ，  Ｈ．，  Ｎｅｉｔｚｅｌ，  Ｈ．  ＆  Ｏｒｆａｎｏｓ，  Ｃ．  Ｅ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１３，１０１１−１０２０］を、３７℃で５％のＣＯ２の湿った大気中、５ｎｇ／ｍｌのヒト上皮成長因子（Ｓｉｇｍａ）、１０％の熱不活性化ＦＣＳ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ  ＧｍｂＨ，  Ｂｅｒｌｉｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）、５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン（ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ）、及び１ｍＭのＣａ２＋で補足された、Ｓｅｂｏｍｅｄ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ，  Ｂｅｒｌｉｎ）の中で維持した。実験を行う直前に、ＢＳＡ培地［１ｍｇ／ｍｌの脂肪酸の無いＢＳＡ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）、１ｍＭのＣａ２＋、及び１０−６Ｍのリノール酸（Ｓｉｇｍａ）で補足されたＳｅｂｏｍｅｄ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍから構成される］、又はＳｅｂｏｍｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ）を、細胞に加えた。実験のために使用されたＳＺ９５ヒト脂腺細胞は、継代３１と３５の間であった。細胞を６０−７０％のコンフルエンスで二次培養した。培養物を、湿らされた５％のＣＯ２インキュベーターの中、３７℃で維持して、２−３日ごとに培地を交換した。
【００９５】
脂質の検出。細胞を２日間、１つのウェルにつき２，０００の細胞の密度で、９６ウェルの組織培養プレートにおいて培養した。その後、ウェルをＰＢＳで洗浄し、Ｓｅｂｏｍｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍを加えた。２日後、培地を採取し、リノール酸（５×１０−５及び１０−４Ｍ）とテストステロン（２×１０−８Ｍ）の存在下及び不在下で、０、０．１、１、１０、又は２０μＭの濃度でＩＮＤＩＰペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）を含まない、或いはそれを含む新鮮培地を、細胞に与えた。上清を２４又は４８時間後に採取し、ウェルをＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ中の１０μｇ／ｍｌのナイルレッド溶液１００μｌを、各ウェルに加えた。掻き混ぜられたＩＮＤＩＰペプチド（即ち、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２の掻き混ぜられたバージョン）１０μＭを、負の対照のペプチドとして使用した。その後、プレートを３７℃で３０分間インキュベートし、放たれた蛍光を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳＰＥＣＴＲＡｍａｘ  Ｇｅｍｉｎｉ分光蛍光計上で読み出した。中性脂質には４８５ｎｍの励起及び５６５ｎｍの発光のフィルタを、及び極性脂質には５４０ｎｍの励起及び６２０ｎｍの発光のフィルタを使用して、対照と比較した絶対的な蛍光単位のパーセンテージとして結果を提示する。実験を３回繰り返し、１０のウェルを各実験の各データポイントのために評価した。
【００９６】
増殖と細胞数の分析。細胞を２日間、１つのウェルにつき２，０００の細胞の密度で、９６ウェルの組織培養プレートにおいて培養した。その後、ウェルをＰＢＳで洗浄し、活性化合物を含む又は含まないＢＳＡ培地を加えた。４−メチルウンベリフェリルヘプタノアートの蛍光アッセイを使用して細胞増殖を処理し、前述のように自動的に測定した［Ｚｏｕｂｏｕｌｉｓ，  Ｃｈ．  Ｃ．，  Ｇａｒｂｅ，  Ｃ．，  Ｋｒａｓａｇａｋｉｓ，  Ｋ．，  Ｋｒｕｇｅｒ，  Ｓ．，  Ｓｃｈｒｏｄｅｒ，  Ｋ．  ＆  Ｏｒｆａｎｏｓ，  Ｃ．  Ｅ．  （１９９１）  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｒｅｓ．  １，  ９１−９５．］。簡潔に、培地の除去後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ中の１００μｇ／ｍｌの４−メチルウンベリフェリルヘプタノアート溶液１００μｌを、各ウェルに加えた。その後、プレートを３７℃で３０分間インキュベートし、細胞数を表す放たれた蛍光を、３５５ｎｍの励起と４６０ｎｍの発光のフィルタを使用してＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳＰＥＣＴＲＡｍａｘ  Ｇｅｍｉｎｉ分光蛍光計上で読み出した。相対的な細胞数を「細胞の量」としてプロットした。実験を４回繰り返し、１０のウェルを各実験の各データポイントのために評価した。
【００９７】
結果
図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃは、ＳＺ９５脂腺細胞のインビトロの細胞培養へのＩＮＤＩＰペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）の添加の結果を示す。図１Ａは、刺激物質（ｓｔｉｍｕｌａｎｔｓ）であるリノール酸とテストステロンが添加されないＩＮＤＩＰペプチドの適用の結果を示し、一方で図１Ｂと１Ｃは、異なる濃度のリノール酸とテストステロンの存在下でのＩＮＤＩＰペプチドの増加する濃度の適用の結果を示している。２０μＭ、及び時々の１０μＭの濃度のＩＮＤＩＰペプチドでは、中性（皮脂）脂質の産生は経時的に有意に減少し、時間が進むにつれより大きな効果を確認した（２４対４８時間）。このような結果は、リノール酸とテストステロンの不在下、又はそれらの存在下で確認された。極性脂質の随伴的な減少は、膜合成の並列的な（ｐａｒｒａｌｌｅｌ）減少、即ち細胞の合成活性の減少を示す。このことは、組み合わせたリノール酸とテストステロンの刺激的効果を伴い、及びそれを伴わずに、試験された全ての条件でＩＮＤＩＰペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２）が皮脂の分化を低減することができることを示している。
【００９８】
本開示は特定の例に関して説明されているが、本開示は開示された例に限定されないことを理解されたい。それと反対に、本開示は、添付された請求項の趣旨と範囲内に含まれる、様々な修飾及び同等の配置を包含するように意図される。
【００９９】
全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも個々の刊行物、特許、又は特許出願が引用によって全体が組み込まれるよう具体的且つ個別に示されるかのように、同じ程度まで引用により全体が本明細書に組み込まれている。
【０１００】
参考文献
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Ｇｏｎｇ，  Ｙ．，  Ｊ．  Ｎ．  Ｌｅｅ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）．  “Ｓｔｅｒｏｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｓｉｇ−１  ｃｒｅａｔｅｓ  ａ  ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｕｐｔａｋｅ．”  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  ３（１）：  １５−２４．
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Ｌｅｅ，  Ｊ．  Ｎ．，  Ｙ．  Ｇｏｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００６ａ）．  “Ｐｒｏｔｅａｓｏｍａｌ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｅｄ  Ｉｎｓｉｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｓ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｂｙ  ｓｅｒｉｎｅ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ  ｆｌａｎｋｉｎｇ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｅｄ  ｌｙｓｉｎｅｓ．”  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０３（１３）：  ４９５８−６３．
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Ｌｅｅ，  Ｊ．  Ｎ．  ａｎｄ  Ｊ．  Ｙｅ  （２００４）．  “Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｔｒｅｓｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｓｉｇ−１．”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９（４３）：  ４５２５７−６５．
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Ｓｕｎ，  Ｌ．  Ｐ．，  Ｌ．  Ｌｉ，  ｅｔ  ａｌ．  （２００５）．  “Ｉｎｓｉｇ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｓｔｅｒｏｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｃａｐ／ＳＲＥＢＰ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ＣＯＰＩＩ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８０（２８）：  ２６４８３−９０．
Ｗｒｏｂｅｌ  Ａ，  Ｓｅｌｔｍａｎｎ  Ｈ，  Ｆｉｍｍｅｌ  Ｓ，  Ｍｕｌｌｅｒ−Ｄｅｃｋｅｒ  Ｋ，  Ｔｓｕｋａｄａ  Ｍ，  Ｂｏｇｄａｎｏ  ＶＢ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄ  ｓｅｂｏｃｙｔｅｓ．  Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ２００３；１２０：１７５−１８１
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Ｚｏｕｂｏｕｌｉｓ，  Ｃｈ．  Ｃ．，  Ｇａｒｂｅ，  Ｃ．，  Ｋｒａｓａｇａｋｉｓ，  Ｋ．，  Ｋｒｕｇｅｒ，  Ｓ．，  Ｓｃｈｒｏｄｅｒ，  Ｋ．  ＆  Ｏｒｆａｎｏｓ，  Ｃ．  Ｅ．  （１９９１）  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｒｅｓ．  １，  ９１−９５．
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【図１Ａ】
2018517767.tif 000006
【図１Ｂ】
2018517767.tif 000007
【図１Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2018517767.tif 000010
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