(57)【要約】【化１】2018535968.tif 000024  本発明は、ホスホジエステラーゼ２（ＰＤＥ２）の阻害剤としての新規な［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−イル誘導体に関する。本発明はまた、この化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物を調製するための方法、ならびに神経疾患および精神疾患などの、ＰＤＥ２が関与する疾患の予防および治療のためのこのような化合物および組成物の使用にも関する。
2018535968.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
2018535968.tif 000023
で表される化合物またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
請求項１に記載の式（１）の化合物の塩酸塩。
【請求項３】
治療的に有効な量の請求項１または２に記載の化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項４】
薬剤として使用するための、請求項１または２に記載の化合物、または請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性疾患；症状として、注意および／または認識の不足を含む障害または病態；記憶の獲得および固定に関連する障害；脳卒中；および自閉性障害の群から選択される中枢神経系疾患を治療または予防するのに使用するための、請求項１または２に記載の化合物または請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記精神病性障害が、統合失調症；統合失調症様障害；統合失調性感情障害；妄想性障害；物質誘発性精神病性障害；妄想性人格障害；および統合失調症性人格障害の群から選択され；
前記不安障害が、パニック障害；広場恐怖症；特定恐怖症；対人恐怖症；強迫性障害；心的外傷後ストレス障害；急性ストレス障害；および全般性不安障害の群から選択され；
前記運動障害が、ハンチントン病およびジスキネジア；パーキンソン病；むずむず脚症候群および本態性振戦；トゥーレット症候群および他のチック障害の群から選択され；
前記物質関連障害が、アルコール乱用；アルコール依存症；アルコール離脱症状；アルコール離脱性せん妄；アルコール誘発性精神病性障害；アンフェタミン依存症；アンフェタミン離脱症状；コカイン依存症；コカイン離脱症状；ニコチン依存症；ニコチン離脱症状；オピオイド依存症およびオピオイド離脱症状の群から選択され；
前記気分障害が、鬱病；躁病；双極性Ｉ型障害、双極性ＩＩ型障害；気分循環性障害；気分変調性障害；大鬱病性障害；治療効果のない鬱病；および物質誘発性気分障害から選択され；
前記神経変性疾患が、パーキンソン病；ハンチントン病；認知症；アルツハイマー病；多発梗塞性認知症；ＡＩＤＳ関連認知症または前頭側頭認知症の群から選択され；
症状として、注意および／または認識の不足を含む前記障害または病態が、アルツハイマー病に関連する認知症；多発梗塞性認知症；レビー小体病による認知症；アルコール性認知症または物質誘発性持続性認知症；頭蓋内腫瘍または脳外傷に関連する認知症；ハンチントン病に関連する認知症；パーキンソン病に関連する認知症；ＡＩＤＳ関連認知症；ピック病による認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病による認知症；せん妄；健忘障害；心的外傷後ストレス障害；脳卒中；進行性核上まひ；精神遅滞；学習障害；注意欠陥・多動性障害（ＡＤＨＤ）；軽度の認識機能障害；アスペルガー症候群；加齢による認識機能障害；および知覚力、集中力、学習力または記憶力に関連する認識機能障害の群から選択され；
記憶の獲得および固定に関連する前記障害が、記憶障害から選択される、請求項５に記載の化合物または医薬組成物。
【請求項７】
薬学的に許容できる担体が、治療的に有効な量の請求項１または２に記載の化合物と均質に混合されることを特徴とする、請求項３に記載の医薬組成物を調製するための方法。
【請求項８】
請求項５〜６のいずれか一項に記載の病態の治療または予防に使用するための、さらなる医薬品と組み合わされた、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項９】
請求項５〜６のいずれか一項に記載の病態の治療または予防における同時使用、別々の使用または逐次使用のための組み合わされた製剤としての、
（ａ）請求項１または２に記載の化合物と；
（ｂ）さらなる医薬品と
を含む生成物。
【請求項１０】
精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性疾患；症状として、注意および／または認識の不足を含む障害または病態；記憶の獲得および固定に関連する障害；脳卒中；および自閉性障害の群から選択される疾患を治療する方法であって；それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の請求項１または２に記載の化合物または治療量の請求項３に記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホジエステラーゼ２（ＰＤＥ２）の阻害剤としての新規な［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−イル誘導体に関する。本発明はまた、この化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物を調製するための方法、ならびに神経疾患および精神疾患などの、ＰＤＥ２が関与する疾患の予防および治療のためのこのような化合物および組成物の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、２１種の遺伝子によってコードされる酵素のファミリーであり、構造特性および機能特性に応じて１１の独立したファミリーに細かく分類される。これらの酵素は、広く存在する細胞内セカンドメッセンジャー、３’，５’−環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）および３’，５’−環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）を代謝的に不活性化する。これらの２つのメッセンジャーは、炎症誘発性メディエータの産生および作用、イオンチャネル機能、筋収縮、学習、分化、アポトーシス、脂質生成、グリコーゲン分解、およびグルコース新生を含む様々な生物学的過程を調節する。これらのメッセンジャーは、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）およびプロテインキナーゼＧ（ＰＫＧ）の活性化、ひいては、転写因子および無数の生理反応を調節するイオンチャネルを含む様々な基質のリン酸化によってこれを行う。ニューロンにおいて、これは、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ依存性キナーゼの活性化ならびにシナプス伝達の急な調節ならびに神経分化および生存に関与するタンパク質の後続のリン酸化を含む。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰの細胞内濃度は、シクラーゼによる生合成の速度によって、およびＰＤＥによる分解の速度によって厳密に調節される。ＰＤＥは、３’−エステル結合の触媒的加水分解によってｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを不活性化する加水分解酵素であり、この不活性化により、不活性な５’−一リン酸が形成される（スキームＡ）。
スキームＡ
【化１】
2018535968.tif 000003
【０００３】
基質特異性に基づいて、ＰＤＥファミリーは、３つのグループに分類することができる：ｉ）ＰＤＥ４、７および８を含むｃＡＭＰ特異的ＰＤＥ；ｉｉ）ｃＧＭＰ選択的酵素ＰＤＥ５、６および９；およびｉｉｉ）二重基質（ｄｕａｌ−ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）ＰＤＥ、ＰＤＥ１、２および３、ならびにＰＤＥ１０および１１。
【０００４】
さらに、ＰＤＥは、中枢神経系を含め、生物全体にわたって異なった形で発現される。したがって、異なるＰＤＥアイソザイムは、異なる生理的機能を有し得る。ＰＤＥファミリーまたはアイソザイムを選択的に阻害する化合物は、特定の治療活性、より少ない副作用、またはその両方を示し得る。
【０００５】
ホスホジエステラーゼ２Ａ（ＰＤＥ２Ａ）は、分解によって（生体関連の二次メッセンジャーｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを加水分解して、それぞれ非シグナル伝達ＡＭＰおよびＧＭＰにすることによって）、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰによって仲介される環状ヌクレオチドシグナル伝達に依存する細胞内シグナル伝達機構を不活性化する。このようなシグナル伝達経路は、シナプス可塑性の誘導に関与する遺伝子の調節に役割を果たすことが知られている。
【０００６】
したがって、ＰＤＥ２の薬理学的阻害は、シナプス可塑性（学習および記憶の根本的な関連要因）のレベルの増加を引き起こし、これは、ＰＤＥ２Ａ調節が、例えば、統合失調症、アルツハイマー病、パーキンソン病および認知機能障害に関連する他の中枢神経系疾患などの疾患に罹患した人に見られる認知障害を軽減するための対象であり得ることを示唆している。
【０００７】
ホスホジエステラーゼ２Ａ（ＰＤＥ２Ａ）は、末梢組織と比べて脳においてより十分に発現される。辺縁系（同種大脳皮質、海馬、へんとう体、松果体、大脳基底核）におけるＰＤＥ２の高い発現は、ＰＤＥ２が、感情、認知、集中、学習および記憶に関与する神経シグナル伝達を調節し得ることを示唆する。さらに、ＰＤＥ２は、側坐核、嗅球、嗅結節およびへんとう体において発現され、これは、ＰＤＥ２が不安および鬱病にも関与し得るという示唆を裏付けている（例えば、Ｌａｋｉｃｓ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ｍＲＮＡ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒａｉｎ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．５９，３６７−３７４を参照）。
【０００８】
さらに、ＰＤＥ２阻害剤は、酸化的ストレス誘発性不安の軽減に有益であることが示されており、これは、アルツハイマー病、パーキンソン病および多発性硬化症などの、酸化的ストレスに関与する精神神経疾患および神経変性疾患における不安の治療へのＰＤＥ２阻害剤の使用を示唆している。
【０００９】
ＰＤＥ２阻害剤は、シナプス伝達の長期増強を促進し、物体認識および社会認識試験におけるラットの記憶の獲得および固定を向上させることが示されている。さらに、ＰＤＥ２阻害剤は、Ｔ迷路におけるマウスのＭＫ−８０１誘発性作業記憶障害を改善することが示されている。ＰＤＥ２阻害剤は、強制水泳試験および明暗箱モデルにおいて活性を示し；高架式十字迷路、ホールボードおよびオープンフィールドテストにおいて抗不安薬様の効果を示し、アポトーシスおよび行動のストレス誘発性の変化を防ぐことも示されている。
【００１０】
したがって、ＰＤＥ２阻害剤は、記憶障害、認知障害、不安、双極性障害および鬱病の治療に有用であり得る。
【００１１】
国際公開第２０１５／１６４５０８号パンフレット（Ｄａｒｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＬＬＣ）には、ＰＤＥ２阻害剤としての置換［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−イル化合物が開示されている。
【００１２】
例えば、ＰＤＥ２に対する選択性、良好な化学安定性ならびに関連する脳領域におけるＰＤＥ２の占有および環状ヌクレオチドレベルの増加によるターゲットエンゲージメントなどの特性の有利なバランスを有するＰＤＥ２阻害剤化合物が依然として必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、ＰＤＥ２酵素活性に関連する疾患の治療に潜在的に有用であり得るＰＤＥ２の新規な阻害剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
したがって、本発明は、化合物１
【化２】
2018535968.tif 000004
またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物に関する。
【００１５】
特定の実施形態において、薬学的に許容できる塩は、塩酸塩、より特定的に、．２ＨＣｌ塩である。
【００１６】
本発明の実例は、薬学的に許容できる担体および上記の化合物１、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物を含む医薬組成物である。本発明の実例は、上記の化合物１、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、および薬学的に許容できる担体を混合することによって作製される医薬組成物である。本発明の実例は、上記の化合物１、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、および薬学的に許容できる担体を混合する工程を含む、医薬組成物を作製するための方法である。
【００１７】
本発明のさらなる実例は、神経可塑性を高めるための方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の化合物１、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または上記の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００１８】
本発明の例示は、ＰＤＥ２酵素によって仲介される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の化合物１、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または上記の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００１９】
本発明のさらなる例示は、ＰＤＥ２酵素を阻害する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の化合物１、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または上記の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２０】
本発明の一例は、神経疾患および精神疾患からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の化合物１、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または上記の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２１】
本発明の一例は、精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性疾患；症状として、注意および／または認識の不足を含む障害または病態；脳卒中；および自閉性障害から選択される神経疾患および精神疾患の群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の化合物１、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物または上記の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２２】
本発明の一例は、神経疾患および精神疾患からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の化合物１またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または上記の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２３】
本発明の一例は、精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性疾患；症状として、注意および／または認識の不足を含む障害または病態；脳卒中；および自閉性障害から選択される神経疾患および精神疾患の群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の化合物１またはその塩もしくは溶媒和物、または上記の医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２４】
また、本発明の例示は、薬剤として使用するための上記の化合物１またはその塩もしくは溶媒和物または医薬組成物である。
【００２５】
本発明のさらなる例示は、ヒトを含む哺乳動物における、ホスホジエステラーゼ２の機能不全に関連する様々な神経疾患および精神疾患のリスクの治療、予防、改善、制御または軽減に使用するための化合物１またはその塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物であり、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２の阻害によって影響または促進される。
【００２６】
本発明の一例は、精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性疾患；症状として、注意および／または認識の不足を含む障害または病態；脳卒中；および自閉性障害から選択される様々な疾患のリスクの治療、予防、改善、制御または軽減に使用するための本発明に係る化合物１またはその塩もしくは溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物である。
【００２７】
本発明の一例は、アルツハイマー病、軽度の認識機能障害、老化、認知症、レビー小体認知症、ダウン症、脳卒中に関連する認知症、パーキンソン病に関連する認知症およびβ−アミロイドに関連する認知症、好ましくはアルツハイマー病からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の上記の化合物１またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物、または医薬組成物を投与する工程を含む方法である。
【００２８】
本発明の別の例は、それを必要とする被験体における、（ａ）アルツハイマー病、（ｂ）軽度の認識機能障害、（ｃ）老化、（ｄ）認知症、（ｅ）レビー小体認知症、（ｆ）ダウン症、（ｇ）脳卒中に関連する認知症、（ｈ）パーキンソン病に関連する認知症、（ｉ）β−アミロイドに関連する認知症、（ｊ）抑鬱障害および（ｋ）不安障害を治療するのに使用するための上記の化合物１またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物である。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１ａ】スプラーグドーリーラットの海馬におけるｐＧｌｕ１レベルに対する化合物１の効果（１０ｍｇ／ｋｇおよび４０ｍｇ／ｋｇの化合物１）を示す。個々のラットからのウエスタンブロットが示される（処理当たりｎ＝５）（図１ａ）。
【図１ｂ】定量化（総Ｇｌｕ１レベルに対して正規化されたｐＧｌｕ１）が、図１ｂに示される。
【図２】化合物１によるＰＤＥ２の占有を示す。
【図３】苔状線維シナプスにおける基底シナプス伝達に対する化合物１の効果を示す。
【図４】苔状線維シナプスにおける基底シナプス伝達に対する化合物１の用量反応効果を示す。
【図５ａ】苔状線維シナプスにおける長期増強（ＬＴＰ）の弱いＨＦＳ誘導に対する化合物１の効果を示す。
【図５ｂ】苔状線維シナプスにおける長期増強（ＬＴＰ）の弱いＨＦＳ誘導に対する化合物１の効果を示す。
【図６】苔状線維シナプスにおける基底シナプス伝達に対する［ＣＡＳ  １３９４０３３−５４−５］１の効果を示す。
【図７】マーシャルビーグル犬のＣＳＦにおけるｃＧＭＰレベルの測定を示す。
【図８ａ】歯状回において記録された興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）の傾きについての入出力曲線を示し；試料の記録は、３０分間隔で平均集合スパイク傾き（ＰＳＡ）反応を示している。
【図８ｂ】高周波刺激（ＨＦＳ）によって誘導されるＬＴＰが、ビヒクル条件と比較して、有孔質路シナプスにおいて化合物１によって増強されたことを示し；ＨＦＳの前後の平均正規化ＰＳＡ傾きが、時間の関数としてプロットされ；挿入棒グラフは、テタヌス刺激手順の前後の３０分間隔での平均データを示す。
【図８ｃ】ｆＥＰＳＰ傾きの持続する増加を示す。＊ｐ＜０．０５、各３０分の時間間隔におけるビヒクルに対する化合物１。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
定義
本明細書において使用される際の「被験体」という用語は、治療、観察または実験の対象であるかまたは対象であった、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００３１】
本明細書において使用される際の「治療的に有効な量」という用語は、治療される疾病または疾患の症状の軽減を含む、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって探究されている、組織系、動物またはヒトにおける生物学的または医薬的応答を引き起こす活性化合物または医薬品の量を意味する。
【００３２】
本明細書において使用される際、「組成物」という用語は、所定の量の所定の成分を含む生成物、ならびに所定の量の所定の成分の組合せから直接または間接的に生じる任意の生成物を包含することが意図される。
【００３３】
「宿主」という用語は、哺乳動物、特に、ヒト、マウス、イヌおよびラットを指す。
【００３４】
「細胞」という用語は、ＰＤＥ２酵素を発現するかまたは組み込む細胞を指す。
【００３５】
本明細書において使用される際の「本発明の化合物」という用語は、化合物１、ならびにその塩および溶媒和物を含むことが意図される。
【００３６】
本明細書において使用される際、実線のくさび形結合または破線のくさび形結合としてではなく実線としてのみ示される結合を有する任意の化学式、あるいは１個以上の原子の周りに特定の配置（例えばＲ、Ｓ）を有するものとして示される任意の化学式は、それぞれの可能な立体異性体、または２つ以上の立体異性体の混合物を想定している。
【００３７】
絶対配置は、カーン・インゴルド・プレローグ則にしたがって規定される。不斉原子における配置は、ＲまたはＳのいずれかによって規定される。
【００３８】
特定の立体異性体が同定される場合、これは、前記立体異性体が他の立体異性体を実質的に含まない、すなわち５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、さらにより好ましくは５％未満、特に２％未満、最も好ましくは１％未満の他の立体異性体を伴うことを意味する。
【００３９】
さらに、本発明の化合物は、水との溶媒和物（すなわち、水和物）または一般的な有機溶媒との溶媒和物を形成してもよく、このような溶媒和物も、本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００４０】
医薬品に使用される際、化合物１の塩は、非毒性の「薬学的に許容できる塩」を指す。しかしながら、他の塩が、化合物１またはその薬学的に許容できる塩の調製に有用であり得る。化合物１の好適な薬学的に許容できる塩としては、例えば、本化合物の溶液を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸などの薬学的に許容できる酸の溶液と混合することによって形成され得る酸付加塩が挙げられる。薬学的に許容できる塩の調製に使用され得る代表的な酸としては、限定はされないが、以下のものが挙げられる：酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−ショウノウ酸、カンファースルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、桂皮酸、クエン酸、シクラミン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−グルタミン酸、β−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロチン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモン酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸、およびウンデシレン酸。
【００４１】
薬理学
本発明に係る化合物は、ＰＤＥ２酵素活性、特にＰＤＥ２Ａを阻害し、したがって、ＰＤＥ２を発現する細胞内のｃＡＭＰまたはｃＧＭＰのレベルを上昇させる。したがって、ＰＤＥ２の阻害酵素活性の阻害は、細胞中のｃＡＭＰまたはｃＧＭＰの不十分な量によって引き起こされる疾病の治療に有用であり得る。ＰＤＥ２阻害剤は、ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰの量を、通常のレベルを超えて上昇させると治療効果が得られる場合にも有用であり得る。ＰＤＥ２の阻害剤は、神経疾患および精神疾患を治療するのに使用され得る。
【００４２】
ここで、本発明は、医薬品として使用するための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物、ならびに薬剤の製造のための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物または本発明に係る医薬組成物の使用に関する。本発明は、ヒトを含む哺乳動物における病態の治療または予防、特に、治療に使用するための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物または本発明に係る医薬組成物にも関し、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２酵素の阻害によって影響または促進される。本発明は、ヒトを含む哺乳動物における病態の治療または予防、特に、治療のための薬剤の製造のための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物または本発明に係る医薬組成物の使用にも関し、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２酵素の阻害によって影響または促進される。
【００４３】
本発明は、ヒトを含む哺乳動物における、ホスホジエステラーゼ２の機能不全に関連する様々な神経疾患および精神疾患のリスクの治療、予防、改善、制御または軽減に使用するための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物、または本発明に係る医薬組成物にも関し、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２の阻害によって影響または促進される。
【００４４】
また、本発明は、ヒトを含む哺乳動物における、ホスホジエステラーゼ２の機能不全に関連する様々な神経疾患および精神疾患のリスクを治療、予防、改善、制御または軽減する薬剤の製造のための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物または本発明に係る医薬組成物の使用に関し、これらの治療または予防は、ホスホジエステラーゼ２の阻害によって影響または促進される。
【００４５】
本発明が、例えば被験体、例えば哺乳動物の治療のための薬剤の製造のための、化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物または本発明に係る組成物の使用に関することが記載されている場合、このような使用は、例えば被験体の治療の方法であって、それ（例えば治療）を必要とする被験体に、有効な量の化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物または本発明に係る組成物を投与する工程を含む方法として、特定の司法権（ｊｕｒｉｓｄｉｃｔｉｏｎ）において解釈されることが理解される。
【００４６】
特に、単独でまたは他の薬剤と組み合わせて、ＰＤＥ２阻害剤で治療され得る適応症としては、以下に限定はされないが、大脳基底核、前頭前皮質および海馬によって部分的に仲介されると考えられる疾病が挙げられる。
【００４７】
これらの適応症としては、精神病性の障害および病態；不安障害；運動障害；薬物乱用；気分障害；神経変性疾患；症状として、注意および／または認識の不足を含む障害または病態；脳卒中；および自閉性障害または自閉症から選択される神経疾患および精神疾患が挙げられる。
【００４８】
特に、ＰＤＥ２の機能不全に関連する精神病性の障害および病態としては、以下の病態または疾病の１つ以上が挙げられる：例えば、妄想型、解体型、緊張型、非定型型または残遺型の統合失調症；統合失調症様障害；妄想型または鬱病型などの、統合失調性感情障害；妄想性障害；アルコール、アンフェタミン、大麻、コカイン、幻覚剤、吸入剤、オピオイド、またはフェンシクリジンによって誘発される精神病などの物質誘発性精神病性障害；妄想性人格障害；および統合失調症性人格障害。
【００４９】
特に、不安障害としては、パニック障害；広場恐怖症；特定恐怖症；対人恐怖症；強迫性障害；心的外傷後ストレス障害；急性ストレス障害；および全般性不安障害が挙げられる。
【００５０】
特に、運動障害としては、ハンチントン病およびジスキネジア；パーキンソン病；むずむず脚症候群および本態性振戦が挙げられる。さらに、トゥーレット障害および他のチック障害が含まれ得る。
【００５１】
特に、中枢神経系疾患は、アルコール乱用；アルコール依存症；アルコール離脱症状；アルコール離脱性せん妄；アルコール誘発性精神病性障害；アンフェタミン依存症；アンフェタミン離脱症状；コカイン依存症；コカイン離脱症状；ニコチン依存症；ニコチン離脱症状；オピオイド依存症およびオピオイド離脱症状の群から選択される物質関連障害である。
【００５２】
特に、気分障害および気分エピソードとしては、鬱病、躁病および双極性障害が挙げられる。好ましくは、気分障害は、双極性障害（ＩおよびＩＩ型）；気分循環性障害；鬱病；気分変調性障害；大鬱病性障害；治療効果のない鬱病；および物質誘発性気分障害の群から選択される。
【００５３】
特に、神経変性疾患としては、パーキンソン病；ハンチントン病；例えばアルツハイマー病などの認知症；多発梗塞性認知症；エイズ関連認知症または前頭側頭認知症が挙げられる。神経変性疾患または病態は、線条体中型有棘ニューロン応答の機能不全を含む。
【００５４】
特に、症状として、注意および／または認識の不足を含む障害または病態としては、アルツハイマー病などの認知症；多発梗塞性認知症；レビー小体病による認知症；アルコール性認知症または物質誘発性持続性認知症；頭蓋内腫瘍または脳外傷に関連する認知症；ハンチントン病に関連する認知症；パーキンソン病に関連する認知症；エイズ関連認知症；ピック病による認知症；クロイツフェルト・ヤコブ病による認知症が挙げられ；他の疾病としては、せん妄；健忘障害；心的外傷後ストレス障害；脳卒中；進行性核上まひ；精神遅滞；学習障害；注意欠陥・多動性障害（ＡＤＨＤ）；軽度認識障害；アスペルガー症候群；加齢による認識機能障害；および知覚力、集中力、学習力または記憶力に関連する認識機能障害が挙げられる。
【００５５】
特に、記憶の獲得および固定に関連する障害としては、加齢による記憶力低下、記憶力欠損などの記憶障害が挙げられる。
【００５６】
好ましくは、精神病性障害は、統合失調症、妄想性障害、統合失調性感情障害、統合失調症様障害および物質誘発性精神病性障害の群から選択される。
【００５７】
好ましくは、中枢神経系疾患は、強迫性人格障害および統合失調症、統合失調症性障害の群から選択される人格障害である。
【００５８】
好ましくは、中枢神経系疾患は、双極性（ＩおよびＩＩ型）障害、気分循環性障害、鬱病、気分変調性障害、大鬱病性障害；治療効果のない鬱病；および物質誘発性気分障害の群から選択される気分障害である。
【００５９】
好ましくは、中枢神経系疾患は、注意欠陥・多動性障害である。
【００６０】
好ましくは、中枢神経系疾患は、せん妄、物質誘発性持続性せん妄、認知症、ＨＩＶ疾患による認知症、ハンチントン病による認知症、パーキンソン病による認知症、アルツハイマー型の認知症、物質誘発性持続性認知症および軽度の認識機能障害の群から選択される認知障害である。
【００６１】
好ましくは、本発明の化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物によって治療される疾患は、統合失調症；強迫性障害；全般性不安障害；ハンチントン病；ジスキネジア；パーキンソン病；鬱病；双極性障害；アルツハイマー病などの認知症；注意欠陥・多動性障害；薬物乱用；脳卒中；および自閉症から選択される。
【００６２】
好ましくは、本発明の化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物によって治療される疾患は、統合失調症（その陽性症状および陰性症状を含む）、および注意障害または記憶障害などの認知障害である。
【００６３】
上記の疾患のうち、不安、強迫性障害、心的外傷後ストレス障害；全般性不安障害、統合失調症、鬱病、注意欠陥・多動性障害、アルツハイマー病、ハンチントン病による認知症、パーキンソン病による認知症、アルツハイマー型の認知症、物質誘発性持続性認知症および軽度の認識機能障害の治療が、特に重要である。
【００６４】
上記の疾患のうち、不安、強迫性障害、統合失調症、鬱病、注意欠陥・多動性障害、およびアルツハイマー病の治療が、特に重要である。
【００６５】
他の中枢神経系疾患としては、統合失調症性不安障害（ｓｃｈｉｚｏａｎｘｉｅｔｙ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、および併存する鬱病および不安、特に、併存する全般性不安障害、社会不安障害、またはパニック障害を伴う大鬱病性障害が挙げられ；併存する鬱病および不安が、不安抑鬱、混合型不安抑鬱、混合型不安抑鬱障害、または不安症状を伴う大鬱病性障害という用語（これらは、本明細書において区別なく使用される）によっても示され得ることが理解される。
【００６６】
現在、アメリカ精神医学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）のＤｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ＆  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ（ＤＳＭ−ＩＶ）の第４版に、本明細書に記載される疾患の同定のための診断手段が提供されている。当業者は、本明細書に記載される神経疾患および精神疾患の代替的な用語、疾病分類学、および分類体系が存在すること、およびこれらが医療および科学の進歩とともに発展することを認識するであろう。例えば、「アメリカ精神医学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）：Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＶＡ、アメリカ精神医学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、２０１３」（ＤＳＭ−５（商標））は、抑鬱障害、特に、大鬱病性障害、持続性抑鬱障害（気分変調症）、物質・医薬品誘発性抑鬱障害；神経認知障害（ＮＣＤ）（認知症および軽度認知障害の両方）、特に、アルツハイマー病による神経認知障害、血管型ＮＣＤ（多発性梗塞を呈する血管ＮＣＤなど）、ＨＩＶ感染によるＮＣＤ、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）によるＮＣＤ、パーキンソン病によるＮＣＤ、ハンチントン病によるＮＣＤ、前頭側頭型ＮＣＤ、プリオン病によるＮＣＤ、および物質・医薬品誘発性ＮＣＤ；神経発達障害、特に、知的障害、限局性学習障害、神経発達運動障害、コミュニケーション障害、および注意欠陥・多動性障害（ＡＤＨＤ）；物質関連障害および嗜癖障害、特に、アルコール使用障害、アンフェタミン使用障害、大麻使用障害、コカイン使用障害、他の幻覚剤使用障害、タバコ使用障害、オピオイド使用障害、およびフェンシクリジン使用障害；統合失調症スペクトラムおよび他の精神病性の障害、特に、統合失調症、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、妄想性障害、短期精神病性障害、物質・医薬品誘発性精神病性障害；および気分循環性障害（ＤＳＭ−５（商標）では、双極性障害および関連する障害のカテゴリーに入る）などの用語を用いる。このような用語は、本明細書において言及される疾病または病態のいくつかの代替的名称として、当業者によって使用され得る。さらなる神経発達障害としては、自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）が挙げられ、これは、ＤＳＭ−５（商標）によれば、早期幼児自閉症、小児自閉症、カナー型自閉症、高機能自閉症、非定型自閉症、特定不能の広汎性発達障害、小児期崩壊性障害、およびアスペルガー障害の名称で以前は知られていた障害を包含する。
【００６７】
したがって、本発明は、上述される疾病のいずれか１つの治療に使用するための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物にも関する。
【００６８】
本発明は、上述される疾病のいずれか１つを治療するのに使用するための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物にも関する。
【００６９】
本発明は、上述される疾病のいずれか１つの治療または予防、特に、治療のための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物にも関する。
【００７０】
本発明は、上述される病態のいずれか１つの治療または予防のための薬剤の製造のための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物の使用にも関する。
【００７１】
本発明は、上述される病態のいずれか１つの治療のための薬剤の製造のための、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物の使用にも関する。
【００７２】
本発明の化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物は、上述される疾病のいずれか１つの治療または予防のために、哺乳動物、好ましくはヒトに投与され得る。
【００７３】
本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物の有用性を考慮して、上述される疾患または疾病を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療的に有効な量の、本明細書に記載される化合物１のいずれかあるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物または医薬組成物を投与する工程を含む方法が提供される。
【００７４】
前記方法は、ヒトを含む温血動物への、治療的に有効な量の本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物の投与、すなわち、全身投与または局所投与、好ましくは経口投与を含む。
【００７５】
したがって、本発明は、上述される疾病のいずれか１つの予防および／または治療のための方法であって、治療的に有効な量の、本発明に係る化合物１あるいはその薬学的に許容できる塩または溶媒和物を、それを必要とする患者に投与する工程を含む方法にも関する。
【００７６】
本明細書に記載されるＰＤＥ２阻害剤は、単独で、組み合わせて、あるいは、統合失調症および双極性障害、強迫性障害、パーキンソン病、認識機能障害および／または記憶障害などの精神病の治療に使用される他の薬剤などの他の医薬品、例えばニコチン性α−７アゴニスト、ＰＤＥ４阻害剤（ロリプラム、ＧＥＢＲ−７ｂ、ＧＳＫ３５６２７８、ＧＳＫ２５６０６６、アプレミラスト、ＭＫ−０９５２、ロフルミラスト、ＡＮ２８９８、ＡＮ２７２８、アリフロ（シロミラスト）、ドトラベリン、ロノミラスト（エルビミラスト）、レバミラスト、テトミラスト、Ｅ６００５、ＧＤＰ−１１１６、ＨＴ０７１２、ＭＫ−０８７３）、ＰＤＥ５阻害剤（シルデナフィル、バルデナフィル、タダラフィル、ウデナフィル、アバナフィル、ミロデナフィル、ロデナフィル、ダサンタフィル、ＰＦ−００４８９７９１）、ＰＤＥ９（ＰＦ−０４４４７９４３）、他のＰＤＥ２阻害剤（Ｂａｙ  ６０−７５５０、ＰＦ−９９９、ＮＤ−７００１）、ＰＤＥ１０阻害剤（ＰＦ−０２５４５９２０、ＡＭＧ５７９）、ＰＤＥ２および１０阻害剤、カルシウムチャネル遮断薬、ムスカリン性ｍ１およびｍ２調節剤、アデノシン受容体調節剤、アンパキン（ａｍｐａｋｉｎｅ）、ＮＭＤＡ−Ｒ調節剤、ｍＧｌｕＲ調節剤、ドーパミン調節剤、セロトニン調節剤、カンナビノイド調節剤、ＨＤＡＣ阻害剤（ボリノスタットＳＡＨＡ、パノビノスタット、キシノスタット、バルプロ酸）およびコリンエステラーゼ阻害剤（例えばドネペジル、リバスチグミン、およびガランタミン）と組み合わせて使用され得る。このような組合せにおいて、本発明の化合物１またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物は、化合物１または他の薬剤が有用性を有し得る疾病または病態の治療、予防、制御、改善、またはリスクの低減において、１つ以上の他の薬剤と組み合わせて用いられてもよく、これらの薬剤を合わせた組合せは、いずれかの単独の薬剤より、安全であるかまたはより有効である。
【００７７】
当業者は、治療的に有効な量の、本発明のＰＤＥ２阻害剤が、ＰＤＥ２酵素を阻害するのに十分な量であることおよびこの量が、特に、疾病の種類、治療製剤中の化合物の濃度、および患者の病態に応じて変わることを認識するであろう。一般に、本明細書に記載される疾患などの、ＰＤＥ２酵素の阻害が有益である疾病を治療するための治療剤として投与されるＰＤＥ２阻害剤の量は、担当医によって個別的に決定されるであろう。
【００７８】
一般に、好適な用量は、０．５ｎＭ〜２００μＭ、より一般的に５ｎＭ〜５０μＭの範囲の、治療部位におけるＰＤＥ２阻害剤の濃度が得られる用量である。これらの治療濃度を得るために、治療を必要とする患者は、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ体重、特に、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜２．５０ｍｇ／ｋｇ体重、特に、０．０１〜１．５ｍｇ／ｋｇ体重、特に、０．１ｍｇ／ｋｇ〜０．５０ｍｇ／ｋｇ体重で投与される可能性がある。治療効果を得るために必要な、本明細書において活性成分とも呼ばれる本発明に係る化合物の量は、当然ながら、個別的に異なり、特定の化合物、投与経路、レシピエントの年齢および病態、および治療される特定の疾患または疾病によって異なる。治療の方法は、１日当たり１〜４回の吸入の処方計画で活性成分を投与する工程も含み得る。治療のこれらの方法では、本発明に係る化合物は、吸入（ａｄｍｉｓｓｉｏｎ）の前に製剤化されるのが好ましい。本明細書に後述されるように、好適な医薬製剤は、周知の容易に入手可能な成分を用いて、公知の手順によって調製される。
【００７９】
医薬組成物
本発明は、神経疾患および精神疾患などの、ＰＤＥ２の阻害が有益である疾病を予防または治療するための組成物も提供する。前記組成物は、治療的に有効な量の化合物１および薬学的に許容できる担体または希釈剤を含む。
【００８０】
活性成分は単独で投与されるのが可能であるが、それを医薬組成物として示すのが好ましい。したがって、本発明は、本発明に係る化合物を、薬学的に許容できる担体または希釈剤とともに含む医薬組成物をさらに提供する。担体または希釈剤は、組成物の他の成分と適合し、そのレシピエントに有害でないという意味で「許容できる」必要がある。
【００８１】
本発明の医薬組成物は、薬学の技術分野において周知の全ての方法によって調製され得る。活性成分としての、塩基形態または付加塩形態における治療的に有効な量の特定の化合物は、投与に望ましい製剤の形態に応じて様々な形態をとり得る、薬学的に許容できる担体との密接な混合物で組み合わされる。これらの医薬組成物は、好ましくは、経口、経皮または非経口投与などの全身投与；あるいは吸入による、鼻用スプレー、点眼剤またはクリーム、ジェル、シャンプーなどによる局所投与に好適な単一の剤形であるのが望ましい。例えば、経口剤形における組成物を調製する際、懸濁液、シロップ、エリキシル剤および溶液などの経口液体製剤の場合、例えば、水、グリコール、油、アルコールなど：または粉剤、丸薬、カプセル剤および錠剤の場合、でんぷん、糖、カオリン、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの固体担体などの通常の薬剤媒体のいずれかが、用いられ得る。投与し易さのために、錠剤およびカプセル剤は、最も有利な経口投与単位形態であり、その場合、固体医薬担体が明らかに用いられる。非経口組成物の場合、担体は、通常、少なくとも大部分において、滅菌水を含むが、例えば、溶解性を補助するための他の成分が含まれてもよい。注射用溶液が、例えば、調製されてもよく、その場合、担体は、生理食塩溶液、グルコース溶液または生理食塩水とグルコース溶液との混合物を含む。また、注射用懸濁液が、調製されてもよく、その場合、適切な液体担体、懸濁化剤などが用いられ得る。経皮投与に好適な組成物では、担体は、皮膚への著しい有害作用を生じない、少量の任意の性質の好適な添加剤と任意に組み合わされた、浸透促進剤および／または好適な展着剤（ｗｅｔｔａｂｌｅ  ａｇｅｎｔ）を任意に含む。前記添加剤は、皮膚への投与を容易にすることができ、および／または所望の組成物を調製するのに役立ち得る。これらの組成物は、例えば、経皮貼布剤として、スポットオン剤（ｓｐｏｔ−ｏｎ）としてまたは軟膏として、様々な方法で投与され得る。
【００８２】
投与し易さおよび投与量の均一性のために、投与単位形態で上記の医薬組成物を製剤化するのが特に有利である。本明細書および本発明の特許請求の範囲において使用される際の投与単位形態は、単一の投薬量として好適な物理的に分かれた単位を指し、各単位は、所要の医薬担体に関連する所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の活性成分を含有する。このような投与単位形態の例は、錠剤（分割錠またはコーティング錠を含む）、カプセル剤、丸薬、粉末パケット、ウエハー、注射用溶液または懸濁液、茶さじ１杯、大さじ１杯など、およびそれらの分けられた複数回分（ｍｕｌｔｉｐｌｅ）である。
【００８３】
投与形態に応じて、医薬組成物は、０．０５〜９９重量％、好ましくは０．１〜７０重量％、より好ましくは０．１〜５０重量％の活性成分、および、１〜９９．９５重量％、好ましくは３０〜９９．９重量％、より好ましくは５０〜９９．９重量％の薬学的に許容できる担体を含み、全てのパーセンテージは、組成物の総重量を基準にしている。
【００８４】
本発明の化合物は、経口、経皮または非経口投与などの全身投与；あるいは吸入による、鼻用スプレー、点眼剤またはクリーム、ジェル、シャンプーなどによる局所投与に使用され得る。化合物は、好ましくは経口投与される。
【００８５】
当業者に周知のように、正確な投与量および投与の頻度は、使用される化合物１、治療される特定の病態、治療される病態の重症度、特定の患者の年齢、体重、性別、疾患の程度および全身的な身体状態ならびに個体が摂取している可能性がある他の薬剤に応じて決まる。さらに、前記有効な１日の量が、治療される被験体の応答に応じて、および／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、減少または増加されてもよいことが明らかである。
【００８６】
単一の剤形を生成するために担体材料と組み合わされ得る化合物１の量は、治療される疾病、哺乳類種、および特定の投与形態に応じて変わり得る。しかしながら、一般的な指針として、本発明の化合物の好適な単位用量は、例えば、好ましくは０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇの活性化合物を含有し得る。好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約５００ｍｇである。より好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約３００ｍｇである。さらにより好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約１００ｍｇである。このような単位用量は、７０ｋｇの成人の合計投与量が、１回の投与当たり、被験体の体重１ｋｇ当たり０．００１〜約１５ｍｇの範囲になるように、１日２回以上、例えば、１日２回、３回、４回、５回または６回投与されてもよいが、１日１回または２回が好ましい。好ましい投与量は、１回の投与当たり、被験体の体重１ｋｇ当たり０．０１〜約１．５ｍｇであり、このような治療は、数週間または数カ月、場合によっては数年間にわたり得る。しかしながら、当業者によって十分に理解されるように、任意の特定の患者の特定の用量レベルが、用いられる特定の化合物の活性；治療される個体の年齢、体重、全身的な健康、性別および食事；投与時間および投与経路；排せつ速度；以前に投与された他の薬剤；および治療を行う特定の疾病の重症度を含む様々な要因に左右されることが理解されるであろう。
【００８７】
典型的な投与量は、１日１回、または、１日複数回摂取される１ｍｇ〜約１００ｍｇまたは１ｍｇ〜約３００ｍｇの１つの錠剤、あるいは１日１回摂取され、比例的により高い含量の活性成分を含有する１つの徐放性カプセル剤または錠剤であり得る。徐放性の効果は、様々なｐＨ値で溶解するカプセル剤材料によって、浸透圧によってゆっくりと放出するカプセル剤によって、または制御放出の任意の他の公知の手段によって得られる。
【００８８】
当業者に明らかであるように、場合によってはこれらの範囲外の投与量を使用する必要があり得る。さらに、臨床医または治療医が、個々の患者の応答に合わせて治療を開始、中断、調整、または終了する方法および時期を認識するであろうことが留意される。
【００８９】
上で提供される組成物、方法およびキットについて、当業者は、それぞれに使用するのに好ましい化合物が、本明細書に示される化合物であることを理解するであろう。
【実施例】
【００９０】
実験部分
本明細書において使用される際、「ＡＣＮ」という用語は、アセトニトリルを意味し、「ＡｃＯＨ」は、酢酸を意味し、「ＤＭＡＰ」は、４−ジメチルアミノピリジンを意味し、「ＤＳＣ」は、示差走査熱量測定を意味し、「ＬＣＭＳ」は、液体クロマトグラフィー／質量分析法を意味し、「ＨＰＬＣ」は、高速液体クロマトグラフィーを意味し、「ＲＰ  ＨＰＬＣ」は、逆相高速液体クロマトグラフィーを意味し、「ａｑ．」は、水性を意味し、「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンを意味し、「ＤＩＰＥ」は、ジイソプロピルエーテルを意味し、「ＤＩＰＥＡ」は、ジイソプロピルエチルアミンを意味し、「ＤＭＦ」は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し、「ＥｔＯＨ」は、エタノールを意味し、「Ｅｔ２Ｏ」は、ジエチルエーテルを意味し、「ＥｔＯＡｃ」は、酢酸エチルを意味し、「Ｅｔ３Ｎ」は、トリエチルアミンを意味し、「ＨＢＴＵ」は、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ，’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートを意味し、「ＴＨＦ」は、テトラヒドロフランを意味し、「ｍｉｎ」は、分を意味し、「ｈ」は、時間を意味し、「ＭｅＯＨ」は、メタノールを意味し、「ｉＰｒＯＨ」は、２−プロパノールを意味し、「ＲＭ」は、反応混合物を意味し、「ＲＴ」は、室温を意味し、「ＯＬ」は、有機層を意味し、「Ｒｔ」は、保持時間（分）を意味し、「ｑｕａｎｔ．」は、定量的を意味し、「ｓａｔ．」は、飽和を意味し、「ｓｏｌ．」は、溶液を意味し、「ｍ．ｐ．」は、融点を意味し、「ｑ．ｓ．」は、適量を意味する。
【００９１】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、試薬グレードの溶媒を用いて、シリカゲル６０  Ｆ２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ）において行った。オープンカラムクロマトグラフィーを、標準的な技術と用いて、メッシュ２３０〜４００の粒度および６０Åの孔径のシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ）において行った。自動フラッシュカラムクロマトグラフィーを、Ａｒｍｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ製のＳＰＯＴまたはＬＡＦＬＡＳＨシステムにおける不規則なシリカゲル、粒度１５〜４０μｍ（順相用の使い捨てのフラッシュカラム）において、Ｍｅｒｃｋ製のすぐに接続できる（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｃｏｎｎｅｃｔ）カートリッジを用いて行った。
【００９２】
化合物の一部の絶対立体化学配置を、振動円二色性（ＶＣＤ）を用いて決定した。溶媒としてＣＤ２Ｃｌ２を用いたＫＢｒ液体細胞中で、ＰＭＡ  ３７を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｅｑｕｉｎｏｘ  ５５において、それらを測定した（ＰＥＭ：１３５０ｃｍ−１、ＬＩＡ：１ｍＶ、分解能：４ｃｍ−１）。絶対配置の決定のためのＶＣＤの使用についての説明は、Ｄｙａｔｋｉｎ  Ａ．Ｂ．ｅｔ．ａｌ，Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ，１４：２１５−２１９（２００２）に見出され得る。
【００９３】
第一原理計算：徹底的な配座探索を、ＯＰＬＳ−２００５力場で混合ねじれ／低モードサンプリング（ｍｉｘｅｄ  ｔｏｒｓｉｏｎａｌ／ｌｏｗ−ｍｏｄｅ  ｓａｍｐｌｉｎｇ）を行うＭａｃｒｏｍｏｄｅｌを用いて、分子力学レベルで行う。突き止めた最小値は、ＪａｇｕａｒをＢ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊＊レベルで使用し、ジクロロメタン溶媒を模倣するＰｏｉｓｓｏｎ−Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ連続溶媒和モデルを用いて最適化した。１０ｋＪ／ｍｏｌ以内の間隔の全ての配座を用いて、ＶＣＤおよびＩＲスペクトルをシミュレートした。双極子強度および旋光強度を、同じＢ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊＊レベルで、Ｊａｇｕａｒを用いて計算した。０．９７倍だけ周波数をスケーリングし、ローレンツ帯形状（Ｌｏｒｅｎｔｚｉａｎ  ｂａｎｄｓｈａｐｅ）に変換し、ボルツマンアンサンブル（Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ  ｅｎｓｅｍｂｌｅ）を取る各配座異性体の寄与を合計した後に生成された、計算されたＶＣＤスペクトルを、正確な立体化学を割り当てるために実験スペクトルと視覚的に比較した。
【００９４】
以下の実施例は、本発明の範囲を限定するのではなく、例示することが意図される。特に断りのない限り、全ての出発材料を、商業的な供給業者から入手し、さらに精製せずに使用した。
【００９５】
Ａ．中間体の合成
【化３】
2018535968.tif 000005
手順ａ：４−メチル−３−ピリジンカルボン酸塩酸塩（１：１）（４０ｇ、２３０．４ｍｍｏｌ）を、硫酸（２０ｍＬ）とＭｅＯＨ（４００ｍＬ）との還流混合物に加えた。混合物を一晩還流させ、次に、それを蒸発させ、得られたスラリーを、水（３６０ｍＬ）中のＮａＨＣＯ３（６４ｇ）の冷溶液に加えた。生成物をＤＣＭで抽出し、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させ、中間体１（２８．７０ｇ、８３％）を得た。
【００９６】
手順ｂ：金属製の反応器に、３−ブロモ−４−メチル−ピリジン（２００ｇ、０．１１６ｍｏｌ）、およびＤＭＦ／ＭｅＯＨ（１Ｌ／１Ｌ）の混合物を充填した。これに、Ｅｔ３Ｎ（４００ｇ、０．３９５ｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（８ｇ、０．０３６ｍｏｌ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン（１６ｇ、０．０２９ｍｏｌ）を加えた。反応器を閉め、ＣＯガス（３ＭＰａ）で加圧し、反応混合物を撹拌し、１４０℃で一晩加熱した。反応混合物（ＲＭ）を冷却し、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィー（グラジエント溶離剤：１／１から１／０のＥｔＯＡｃ／石油エーテル）によって精製した。生成物画分を収集し、溶媒を蒸発させて、所望の中間体１（９０ｇ、５１％）を得た。
【００９７】
【化４】
2018535968.tif 000006
手順ａ：水素化フラスコに、ＡｃＯＨ（５００ｍＬ）を充填し、次に、ＰｔＯ２（１５．０２ｇ、６６．２ｍｍｏｌ）を加えた。中間体１（５０ｇ、３３０．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で７日間水素化した。反応混合物をｄｉｃａｌｉｔｅ（登録商標）上でろ過し、ろ液を蒸発させて、中間体２（５２ｇ）を得て、それをさらに精製せずに次の工程に使用した。
【００９８】
手順ｂ：酸化白金（５ｇ、０．０２２ｍｏｌ）を、中間体１（９０ｇ、０．５９５ｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（１Ｌ）の溶液に加えた。反応混合物を撹拌し、３．５ｋＰａの圧力下で、５０℃で５日間水素化した。冷却された反応混合物を減圧下で濃縮して、酢酸塩としての中間体２（１４０ｇ、９７％、１Ｈ−ＮＭＲによって測定される９０％の純度）を得た。
【００９９】
【化５】
2018535968.tif 000007
手順ａ：ＤＣＭ（８６９ｍＬ）中の中間体２（５２ｇ、３３０．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（８５．５ｇ、６６１．５ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４．０４ｇ、３３．０８ｍｍｏｌ）を加えた。次に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（７２．１９ｇ、３３０．８ｍｍｏｌ）を、少しずつこの溶液に加え、反応物を室温（ＲＴ）で１時間撹拌した。反応混合物を水および塩水で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。生成物を、カラムクロマトグラフ（シリカゲル、溶離剤：ＤＣＭ、ＤＣＭ中１％のＭｅＯＨ、２％、４％）によって精製した。所望の画分を蒸発させて、中間体３（６４．１ｇ、７５％）を得た。
【０１００】
手順ｂ：ＤＣＭ（１．５Ｌ）中の中間体２（１４０ｇ、０．５９５ｍｏｌ）の撹拌および冷却された（０℃）溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１３０ｇ、０．５９６ｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（２２５ｇ、１．７４ｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１０ｇ、０．０８２ｍｏｌ）を連続して加え、撹拌を室温で２時間続けた。反応混合物をＨ２Ｏ（５００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、溶媒を蒸発させて、粗中間体３（１５０ｇ、９０％、１Ｈ−ＮＭＲによって測定される９０％の純度）を得て、それを次の反応工程にそのまま使用した。
【０１０１】
【化６】
2018535968.tif 000008
手順ａ：中間体３（６４．１ｇ、２４９．１ｍｍｏｌ）を、室温でＭｅＯＨ（５００ｍＬ）中で撹拌した。ＮａＯＨ（２Ｍ、７４７．３ｍＬ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＨＣｌ  １Ｎで酸性化し、生成物をＥｔ２Ｏで抽出した。有機層（ＯＬ）を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、中間体４（５９．７０ｇ）を白色の固体として得た。
【０１０２】
手順ｂ：ＭｅＯＨ（０．９Ｌ）中の中間体３（１５０ｇ、９０％純粋、０．５２４ｍｏｌ）の撹拌溶液に、２ＭのＮａＯＨ溶液（１．８ｍｏｌ）の溶液を加えた。室温で１４時間後、反応混合物をＭＴＢＥ（２×０．８Ｌ）で抽出した。水層を１０％のクエン酸で酸性化し、次に、ＥｔＯＡｃ（４×１Ｌ）で抽出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して、粗中間体４（１４２ｇ、１Ｈ−ＮＭＲによって測定される９０％の純度、１００％）を得て、それを次の反応工程にそのまま使用した。
【０１０３】
【化７】
2018535968.tif 000009
手順ａ：ＴＨＦ（８００ｍＬ）中の中間体４（５９．７ｇ、０．２５ｍｏｌ）の溶液に、ジ−１Ｈ−イミダゾール−１−イル−メタノン（５４ｇ、０．３３ｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。別のフラスコ中で、ＡＣＮ（５００ｍＬ）中のＮ−メトキシ−メタンアミン塩酸塩（１：１）（３２．９３ｇ、０．３４ｍｏｌ）の懸濁液に、トリメチルアミン（３５．７５ｇ、０．３５ｍｏｌ）を加えた。両方の混合物を組み合わせて、監視しながら５０℃で撹拌した。中間生成物が、反応混合物から晶出し、これは、所望の生成物を形成するようにＮ−メトキシ−メタンアミンと反応しなかった。中間体が溶解されるまでＤＣＭを加えた。反応物を、８０℃で１週間撹拌させておいた。溶媒を蒸発させた。残渣をＤＣＭに溶解させ、水、２０％のＡｃＯＨ溶液および最後に飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。生成物を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離剤：ＤＣＭ中２％のＭｅＯＨ、４％）によって精製した。純粋な画分を蒸発させて、中間体５（７０ｇ、定量的）を得た。
【０１０４】
手順ｂ：ＤＣＭ（２Ｌ）中の中間体４（１４０ｇ、０．５１８ｍｏｌ）の撹拌および氷冷された溶液に、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（１１３ｇ、１．１６ｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１１３ｇ、１．７９ｍｏｌ）を加えた。次に、ＨＡＴＵ（２３５ｇ、０．６１８ｍｏｌ）を加え、撹拌を１４時間続けた。溶媒を蒸発させ、ＮａＨＣＯ３溶液（０．５Ｌ）を加え、次に、ＤＣＭ（３×１Ｌ）で抽出した。組み合わされた有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を石油エーテル中１〜１０％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、中間体５（１５２ｇ、１００％）を得た。
【０１０５】
【化８】
2018535968.tif 000010
手順ａ：ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中の中間体５（７０ｇ、２４４．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下でフラスコに充填し、−１５℃に冷却した。メチルマグネシウムブロミド（トルエン／ＴＨＦ  ７５／２５中１．４Ｍ、２０６ｍＬ）を、温度が０℃を超えないように、滴下して加えた。添加後、反応混合物を室温で１時間撹拌した。次に、反応混合物を、２０ｍＬのＡｃＯＨとともに氷上に注いだ。生成物をＥｔ２Ｏで抽出し、有機層を５％のＮａＨＣＯ３溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、中間体６（５３．３５ｇ、９０％）を得た。
【０１０６】
手順ｂ：ＴＨＦ（２Ｌ）中の中間体５（１５０ｇ、０．５２４ｍｏｌ）の撹拌および冷却された溶液（０℃）に、ＴＨＦ（０．７５Ｌ、２．２５ｍｏｌ）中３Ｍのメチルマグネシウムブロミド溶液を滴下して加え、撹拌を室温で２時間続けた。反応混合物をＮＨ４Ｃｌ水溶液に注ぎ、ＤＣＭで抽出した。組み合わされた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、石油エーテル中１〜５％のＥｔＯＡｃで溶離するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、中間体６（１２０ｇ、９５％）を得た。
【０１０７】
【化９】
2018535968.tif 000011
中間体６（５３．３５ｇ、０．２２ｍｏｌ）を、Ｎ２下で、０℃でトルエン（１５００ｍＬ）中で撹拌した。カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３４．１４ｇ）を、０〜５℃で加え、２，２−ジフルオロ−酢酸エチルエステル（３３．０１ｇ、０．２７ｍｏｌ）を、０〜５℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に、水中１０％のＨ２ＳＯ４で洗浄し、有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、中間体７（７０．５０ｇ、定量的）を得た。
【０１０８】
【化１０】
2018535968.tif 000012
中間体７（７０．５ｇ、２２０．８ｍｍｏｌ）、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−アミン塩酸塩（１：１）（５３．２２ｇ、４４１．５２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１５００ｍＬ）を、８０℃で２４時間撹拌した。Ｅｔ３Ｎ（２０ｇ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２０ｇ）を加えた。混合物を３０分間撹拌し、蒸発させ、次に、ＥｔＯＡｃに溶解させ、水および塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。４つの異性体が観察された。第１の画分が、Ｅｔ２Ｏから結晶化された。結晶をろ過して取り出し、乾燥させて、中間体８（２４．６０ｇ、３０％）を得た。母液は、化合物の第２の画分を生じた。結晶をろ過して取り出し、乾燥させて、中間体８（２．５３ｇ、３％）を得た。Ｎ．Ｂ．「ＲＳ」は、中間体が、トランス相対配置の２つの鏡像異性体のラセミ混合物であることを意味する。
【０１０９】
【化１１】
2018535968.tif 000013
ＭｅＯＨ（３５０ｍＬ）中の中間体８（２４．６ｇ、６７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＣｌ−ｉＰｒＯＨ（３５０ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、生成物がＥｔＯＨから結晶化された。結晶をろ過して取り出し、乾燥させ、２０．３３ｇの粗生成物を得て、それに、水、Ｎａ２ＣＯ３およびＤＣＭを加えた。有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、１２．８０ｇの中間体９を得た。この遊離塩基を、分取ＳＦＣ（固定相：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ  ３０×２５０ｍｍ；、移動相：ＣＯ２、（０．４％のｉＰｒＮＨ２とともに（ＭｅＯＨ−ｉＰｒＯＨ  ５０／５０））による精製によって鏡像異性体９ａおよび９ｂへと分離して、中間体９ａ（５ｇ、１９％、Ｒｔ＝７．５７分）および中間体９ｂ（５．１３ｇ、１９％、Ｒｔ＝９．３６分）を得た。
【０１１０】
中間体９ａおよび９ｂを遊離塩基として単離し、あるいは、それらをＭｅＯＨに溶解させた後、ＨＣｌ／ｉ−ＰｒＯＨを加え、混合物を蒸発させた。塩酸塩（いずれの場合も、．ＨＣｌ）を、ＡＣＮから結晶化させ、ろ過して取り出し、乾燥させた。
【０１１１】
Ｂ−最終化合物の合成
【化１２】
2018535968.tif 000014
２，６−ジメチルピリジン−４−カルボン酸（１．８４ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中で撹拌し、ＤＩＰＥＡ（６．３１ｇ、４８．８ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（４．６３ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を室温で０．５時間続けた。中間体９ｂ（３．２６ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を溶液に加え、撹拌を室温で５時間続けた。ＮａＯＨ  １Ｎ溶液を加え、５分間撹拌した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。生成物を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離剤：ＤＣＭ中１％のＭｅＯＨ、２％、４％）によって精製した。純粋な画分を蒸発させ、生成物をＤＩＰＥから結晶化させ、ろ過して取り出し、乾燥させて、化合物１（３．８５ｇ、７９％）を得た。
【０１１２】
化合物の別個のバッチを、Ｅｔ２ＯからＨＣｌ塩として結晶化させて、化合物１を塩酸塩（．２ＨＣｌ）（収量：１７５ｍｇの中間体９ｂ．ＨＣｌから出発して１７５ｍｇ、７０％）として得た。
【０１１３】
化合物１の立体配置を、振動円二色性（ＶＣＤ）によって確認した。
【０１１４】
分析部分
融点
値は、ピーク値または溶融範囲のいずれかであり、この分析方法に通常に伴う実験的不確定性を有して得られる。
【０１１５】
ＤＳＣ８２３ｅ（ＤＳＣとして示される）
ＤＳＣ８２３ｅ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）を用いて融点を測定した。１０℃／分の温度勾配を用いて融点を測定した。最高温度は３００℃であった。
【０１１６】
【表１】
2018535968.tif 000015
【０１１７】
旋光度
旋光度は、ナトリウムランプを備えたＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１旋光計で測定し、以下のように報告した：［α］°（λ、ｃ  ｇ／１００ｍｌ、溶媒、Ｔ℃）。
［α］λＴ＝（１００α）／（ｌ×ｃ）：式中、ｌが経路長（ｄｍ）であり、ｃが、温度Ｔ（℃）および波長λ（ｎｍ）における試料の濃度（ｇ／１００ｍｌ）である。使用される光の波長が５８９ｎｍ（ナトリウムＤ線）である場合、記号Ｄが代わりに使用されることがある。旋光度の符号（＋または−）が、常に記載されるものとする。この式を使用する場合、濃度および溶媒が、回転の後に括弧内に常に示される。旋光度は、度を用いて報告され、濃度の単位は示されない（それはｇ／１００ｍｌであると仮定される）。
【０１１８】
【表２】
2018535968.tif 000016
【０１１９】
ＳＦＣ−ＭＳ方法
ＳＦＣ測定は、二酸化炭素（ＣＯ２）および調整剤を供給するためのバイナリポンプ、オートサンプラ、カラムオーブン、４００バールまで耐用する高圧フローセルを備えたダイオードアレイ検出器によって構成される分析超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）システムを用いて行った。質量分析計（ＭＳ）を備える場合、カラムからの流れを、（ＭＳ）に送った。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば走査範囲、滞留時間・・・）を設定することは、当業者の知識の範囲内である。適切なソフトウェアを用いてデータ取得を行った。
【０１２０】
【表３】
2018535968.tif 000017
【０１２１】
【表４】
2018535968.tif 000018
【０１２２】
ＬＣ／ＭＳ方法
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定は、それぞれの方法について規定される、ＬＣポンプ、ダイオードアレイ（ＤＡＤ）またはＵＶ検出器およびカラムを用いて行った。必要に応じて、さらなる検出器も含まれた（以下の方法の表を参照）。
【０１２３】
カラムからの流れを、大気圧イオン源を備える質量分析計（ＭＳ）に送った。化合物の公称モノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、滞留時間・・・）を設定することは、当業者の知識の範囲内である。適切なソフトウェアを用いてデータ取得を行った。
【０１２４】
化合物は、それらの実験保持時間（Ｒｔ）およびイオンで表される。データの表に別段記載されていない場合、報告される分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化分子）に相当する。化合物が直接イオン化できなかった場合、付加物のタイプが記載される（すなわち、［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−など）。複数の同位体パターンを有する分子（Ｂｒ、Ｃｌ）については、報告される値は、最低同位体質量について得られたものである。全ての結果は、使用される方法に通常に伴う実験的不確定性を有して得られた。
【０１２５】
以後、「ＳＱＤ」は、シングル四重極検出器を意味し、「ＭＳＤ」は、質量選択検出器を意味し、「ＲＴ」は、室温を意味し、「ＢＥＨ」は、架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッドを意味し、「ＤＡＤ」は、ダイオードアレイ検出器を意味し、「ＨＳＳ」は、高強度シリカを意味する。
【０１２６】
【表５】
2018535968.tif 000019
【０１２７】
【表６】
2018535968.tif 000020
【０１２８】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）
４００ＭＨｚで動作し、標準的なパルスシーケンスを有する、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−４００分光計のいずれかにおいて、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを記録した。化学シフト（δ）を、百万分率で報告する。
化合物番号１：１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、１２０℃）δ  ｐｐｍ  ０．８１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）１．４３（ｑｄ，Ｊ＝１２．４、４．４Ｈｚ、１Ｈ）１．８９（ｂｒ  ｄｑ，Ｊ＝１３．４、３．１Ｈｚ、１Ｈ）２．４４（ｓ，６Ｈ）２．４９−２．５３（ｍ，１Ｈ）３．１１（ｔ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ、１Ｈ）３．３５（ｄｄ，Ｊ＝１２．９、１１．１Ｈｚ、１Ｈ）３．５７（ｔｄ，Ｊ＝１０．８、４．１Ｈｚ、１Ｈ）４．００−４．２７（ｍ，２Ｈ）６．９８（ｔ，Ｊ＝５４．２Ｈｚ、１Ｈ）７．００（ｓ，２Ｈ）７．５３（ｓ，１Ｈ）８．６８（ｓ，１Ｈ）
【０１２９】
薬理学的実施例
本発明に提供される化合物は、ＰＤＥ２、特に、ＰＤＥ２Ａの阻害剤である。いくつかの薬理学的アッセイにおける試験化合物１の結果が、以下に示される。
【０１３０】
インビトロアッセイＰＤＥ２Ａ
組み換えｒＰＤＥ１０Ａバキュロウイルス構築物を用いて、ヒト組み換えＰＤＥ２Ａ（ｈＰＤＥ２Ａ）を、Ｓｆ９細胞中で発現させた。感染の４８時間後に細胞を採取し、ｈＰＤＥ２Ａタンパク質を、Ｎｉ−セファロース６ＦＦにおける金属キレートクロマトグラフィーによって精製した。試験される化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させ、アッセイにおける最終濃度の１００倍の濃度に希釈した。化合物の希釈物（０．４μｌ）を、３８４ウェルプレート中で、２０μｌのインキュベーション緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）、８．３ｍＭのＭｇＣｌ２、１．７ｍＭのＥＧＴＡ）に加えた。インキュベーション緩衝液中の１０μｌのｈＰＤＥ２Ａ酵素を加え、１０μＭのｃＧＭＰおよび０．０１μのＣｉ  ３Ｈ−ｃＧＭＰの最終濃度まで１０μｌの基質を加えることによって、反応を開始させた。反応物を室温で４５分間インキュベートした。インキュベーションの後、２００ｍＭのＺｎＣｌ２が補充された１７．８ｍｇ／ｍｌのＰＤＥ  ＳＰＡシンチレーション近接アッセイ）ビーズからなる２０μｌの停止液を用いて、反応を停止させた。３０分間ビーズを沈降させた後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔシンチレーションカウンターにおいて放射能を測定し、結果をｃｐｍとして表した。ブランク値のために、酵素を反応から除外し、インキュベーション緩衝液で置き換えた。化合物の代わりに１％の最終濃度のＤＭＳＯを加えることによって、対照値を得た。最小平方和法（ｍｉｎｉｍｕｍ  ｓｕｍ  ｏｆ  ｓｑｕａｒｅｓ  ｍｅｔｈｏｄ）によって、化合物濃度に対するブランク値を差し引いた対照値の％のプロットに最良適合曲線を合わせて、この曲線から、半数阻害濃度（ＩＣ５０）値を導き出す。
【０１３１】
インビトロアッセイＰＤＥ３Ａ
ヒト組み換えＰＤＥ３Ａ（ｈＰＤＥ３Ａ）は、Ｓｃｏｔｔｉｓｈ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌによって部分的に精製された昆虫細胞溶解物として供給され、それを、ヒト脳からクローン化し、Ｓｆ９細胞中で発現させた。試験される化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させ、アッセイにおける最終濃度の１００倍の濃度に希釈した。化合物の希釈物（０．４μｌ）を、３８４ウェルプレート中で、２０μｌのインキュベーション緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）、８．３ｍＭのＭｇＣｌ２、１．７ｍＭのＥＧＴＡ）に加えた。インキュベーション緩衝液中の１０μｌのｈＰＤＥ３Ａ酵素を加え、０．４μＭのｃＡＭＰおよび２．４μＣｉ／ｍｌの［３Ｈ］−ｃＡＭＰの最終濃度まで１０μｌの基質を加えることによって、反応を開始させた。反応物を室温で６０分間インキュベートした。インキュベーションの後、２００ｍＭのＺｎＣｌ２が補充された１７．８ｍｇ／ｍｌのＰＤＥ  ＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）ビーズからなる２０μｌの停止液を用いて、反応を停止させた。３０分間ビーズを沈降させた後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔシンチレーションカウンターにおいて放射能を測定し、結果をｃｐｍとして表した。ブランク値のために、酵素を反応から除外し、インキュベーション緩衝液で置き換えた。化合物の代わりに１％の最終濃度のＤＭＳＯを加えることによって、対照値を得た。最小平方和法（ｍｉｎｉｍｕｍ  ｓｕｍ  ｏｆ  ｓｑｕａｒｅｓ  ｍｅｔｈｏｄ）によって、化合物濃度に対するブランク値を差し引いた対照値の％のプロットに最良適合曲線を合わせて、この曲線から、半数阻害濃度（ＩＣ５０）値を導き出す。
【０１３２】
インビトロアッセイＰＤＥ１０Ａ
組み換えｒＰＤＥ１０Ａバキュロウイルス構築物を用いて、ラット組み換えＰＤＥ１０Ａ（ｒＰＤＥ１０Ａ２）を、Ｓｆ９細胞中で発現させた。感染の４８時間後に細胞を採取し、ｒＰＤＥ１０Ａタンパク質を、Ｎｉ−セファロース６ＦＦにおける金属キレートクロマトグラフィーによって精製した。試験される化合物を、１００％のＤＭＳＯに溶解させ、アッセイにおける最終濃度の１００倍の濃度に希釈した。化合物の希釈物（０．４μｌ）を、３８４ウェルプレート中で、２０μｌのインキュベーション緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．８）、８．３ｍＭのＭｇＣｌ２、１．７ｍＭのＥＧＴＡ）に加えた。インキュベーション緩衝液中の１０μｌのｒＰＤＥ１０Ａ酵素を加え、６０ｎＭのｃＡＭＰおよび０．００８μのＣｉ  ３Ｈ−ｃＡＭＰの最終濃度まで１０μｌの基質を加えることによって、反応を開始させた。反応物を室温で６０分間インキュベートした。インキュベーションの後、１７．８ｍｇ／ｍｌのＰＤＥ  ＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）ビーズからなる２０μｌの停止液を用いて、反応を停止させた。３０分間ビーズを沈降させた後、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔシンチレーションカウンターにおいて放射能を測定し、結果をｃｐｍとして表した。ブランク値のために、酵素を反応から除外し、インキュベーション緩衝液で置き換えた。化合物の代わりに１％の最終濃度のＤＭＳＯを加えることによって、対照値を得た。最小平方和法によって、化合物濃度に対するブランク値を差し引いた対照値の％のプロットに最良適合曲線を合わせて、この曲線から、半数阻害濃度（ＩＣ５０）値を導き出す。
【０１３３】
【表７】
2018535968.tif 000021
【０１３４】
【表８】
2018535968.tif 000022
【０１３５】
ＧＬＵＲ１リン酸化のウエスタンブロット検出
ＰＤＥ２は、主に、海馬、大脳皮質および線条体において発現され、ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを加水分解することができる。ＡＭＰＡ−Ｒ輸送は、ＰＫＡ（ｃＡＭＰによる）またはｃＧＫＩＩ（ｃＧＭＰによる）の活性化によって調節され得る。ＡＭＰＡ−ＲのＧｌｕ１サブユニットのリン酸化は、ＬＴＤ（減少）およびＬＴＰ（増加）発現および記憶の保持に重要であることが示されている。
【０１３６】
方法
化合物１（１０％のＣＤ＋１ＨＣｌに溶解された）を、スプラーグドーリーラットにｐ．ｏ．（経口）投与し（１８０〜２００ｇ；１０および４０ｍｇ／ｋｇ）、２時間後、動物を断頭によって殺処分した。海馬を切開し、組織を瞬間凍結させ、−８０℃で貯蔵した。
【０１３７】
解凍後、５ｍＭのＥＤＴＡおよびプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤混合物が補充された組織抽出試薬（Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ）中で、組織溶解を行った。タンパク質試料を、ＬＤＳ試料緩衝液および還元剤（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）によって変性させ、最後に、５０μｇのタンパク質を充填し、９０〜１６０Ｖで１０％のＢｉｓ−Ｔｒｉｓポリアクリルアミドゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて電気泳動させた。次に、ゲル上のタンパク質を、Ｔｒａｎｓ−ｂｌｏｔ  Ｔｕｒｂｏ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて、Ｔｒａｎｓ  ｂｌｏｔ  ｔｕｒｂｏ  ０．２μｍのニトロセルロース膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）にエレクトロブロットした。膜を、５％の脱脂粉乳（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｌｌａｓ，ＴＸ，ＵＳＡ）を含有するＴｗｅｅｎ−２０  Ｔｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ−Ｔ：１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％のＴｗｅｅｎ−２０）中で、室温で１時間ブロックし、穏やかに振とうしながら、４℃で一晩、一次抗体とともにインキュベートした（総Ｇｌｕ１  Ａｂｃａｍ  ３１２３２、Ｓｅｒ８４５  ｐＧｌｕ１  Ａｂｃａｍ  ７６３２１、両方の希釈率１／１０００）。ブロットを、ＴＢＳ−Ｔ緩衝液で５回洗浄し、室温で１時間、二次抗体とともにインキュベートした（二次ロバ抗ウサギＨＲＰ結合、希釈率１／１０００）。ＴＢＳＴ緩衝液での洗浄後、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  Ｗｅｓｔ  Ｆｅｍｔｏ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｒａｍｌｉｎｇｔｏｎ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）による免疫染色を繰り返した。シグナルを捕らえ、化学発光（Ｇ−ｂｏｘ  Ｓｙｎｇｅｎｅ，Ｓｙｎｇｅｎｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）によって定量した。
【０１３８】
この試験の結果は、図１に示される。
【０１３９】
化合物１によるＰＤＥ２占有
方法
放射性リガンド（Ｂｕｉｊｎｓｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ，ａｎｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ＰＤＥ２  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ．ＡＣＳ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．５（９）：１０４９−５３における化合物１２）として［３Ｈ］Ｂ−１７ａ（国際公開第２０１３／０００９２４号パンフレットに記載される）を用いて、エクスビボオートラジオグラフィーによって、ＰＤＥ２Ａの占有を評価した。雄Ｗｉｓｔａｒラット（２００〜２５０ｇ）を、ビヒクルまたは漸増用量の［３Ｈ］Ｂ−１７ａの経口投与によって処理し、１時間後に殺処分した。脳を頭蓋骨から直ぐに取り出し、ドライアイスで冷却した２−メチルブタン（−４０℃）中で急速に凍結させた。厚さ２０μｍの線条体切片を、Ｌｅｉｃａ  ＣＭ  ３０５０  ｃｒｙｏｓｔａｔ−ｍｉｃｒｏｔｏｍｅ（ｖａｎ  Ｈｏｐｐｌｙｎｕｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて切り出し、顕微鏡スライド（ＳｕｐｅｒＦｒｏｓｔ  Ｐｌｕｓ  Ｓｌｉｄｅｓ，ＬａｂｏＮｏｒｄ，Ｆｒａｎｃｅ）に解凍−マウント（ｔｈａｗ−ｍｏｕｎｔｅｄ）し、使用するまで−２０℃で貯蔵した。
【０１４０】
解凍後、切片を、冷気流下で乾燥させ、０．３％のＢＳＡを含有するＴｒｉｓ−ＨＣｌ（５０ｍＭ、ｐＨ７．４）中の３０ｎＭの［３Ｈ］Ｂ−１７ａとともに１分間インキュベートした。薬剤処理されたおよびビヒクル処理された動物からの脳切片を、並行してインキュベートした。非特異的な結合が、ＰＤＥ２Ａ酵素を含有しない脳領域である小脳切片において測定された。インキュベーションの後、過剰な［３Ｈ］Ｂ−１７ａを、氷冷緩衝液で、１０分間で２回洗い落とした後、蒸留水中に迅速に浸漬させた。次に、切片を、冷気流下で乾燥させた。
【０１４１】
脳切片を、４時間にわたってβ−ｉｍａｇｅｒ（Ｂｉｏｓｐａｃｅ，Ｐａｒｉｓ）に充填し、明確な脳領域から出る放射能を、Ｂｅｔａ  ｖｉｓｉｏｎ  ｐｒｏｇｒａｍ（Ｂｉｏｓｐａｃｅ，Ｐａｒｉｓ）を用いて定量した。非特異的な結合が、線条体における全体的な結合と、小脳における非特異的な結合の差として測定された。動物に投与された薬剤の受容体占有パーセンテージは、１００％から、処理された動物において標識された受容体パーセンテージを差し引いた値に相当していた。ＥＤ５０値の決定については、受容体占有のパーセンテージを、用量に対してプロットし、最良の当てはめのシグモイドｌｏｇ用量効果曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｐｒｏｇｒａｍを用いて、非線形回帰分析によって計算した。９５％の信頼限界を有するＥＤ５０（５０％の受容体占有をもたらす薬剤用量）を、用量反応曲線から計算した。
【０１４２】
この試験の結果は、図２に示される。
【０１４３】
シナプス伝達に対する化合物１の効果
重要な試薬
スクロース解剖緩衝液は、（ｍＭ単位で）スクロース（１５０）、ＮａＣｌ（４０）、ＫＣｌ（４）、ＮａＨ２ＰＯ４．Ｈ２Ｏ（０．３）、ＭｇＣｌ．６Ｈ２Ｏ（７）、ＮａＨＣＯ３（２６）、ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（０．５）、Ｄ−グルコース（１０）を含有しており、これを９５％のＯ２および５％のＣＯ２ガス混合物で平衡化した。平衡化および記録の際に使用される人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）は、（ｍＭ単位で）：ＮａＣｌ（１２４）、ＫＣｌ（２．７）、ＮａＨ２ＰＯ４．Ｈ２Ｏ（１．２５）、ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ（１．３）、ＮａＨＣＯ３（２６）、ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（２）、Ｄ−グルコース（１０）、アスコルビン酸（２）を含有しており、これを９５％のＯ２および５％のＣＯ２ガス混合物で平衡化した。ＣＮＱＸおよびキヌレン酸を、それぞれ５０μＭおよび１ｍＭの濃度で、ＡＣＳＦ中で調製した。化合物１を、ＡＣＳＦ中でおよび０．１％を超えない最終ＤＭＳＯ濃度を有するストック溶液（ＤＭＳＯを含む）から新たに調製した。全ての試薬は、特に示されない限り、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製であった。
【０１４４】
動物（種、体重、および性別）
使用した動物は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｇｅｒｍａｎｙによって提供される、１４５〜２００ｇの体重範囲の雄スプラーグドーリーラットであった。
【０１４５】
海馬スライスの準備
標準的なプロトコルにしたがってイソフルランで麻酔した雄スプラーグドーリーラットの中間から腹側海馬から、水平な脳スライス（３００μｍ）を得た。０．１ｍｍ／秒の速度で、低温（４℃）スクロース解剖緩衝液中で振動組織スライサ（Ｌｅｉｃａ  ＶＴ１２００Ｓ）を用いて、スライスを切断した。切断後、スライスを、３５℃で２０分間平衡化させ、次に、人工脳脊髄液（ＡＣＳＦ）中で、室温で少なくとも１時間回復させた。３〜４つのスライスを１つの脳から準備した。
【０１４６】
試験システム
全てのデータは、６０チャネルＡ／Ｄカードに連結された４チャネル刺激発生器および６０チャネル増幅器ヘッドステージから構成された、ＭｕｌｔｉＣｈａｎｎｅｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＣＳ  ＧｍｂＨ（Ｒｅｕｔｌｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から市販されているＭＥＡ設備を用いて記録した。刺激、記録および分析のためのソフトウェアは、それぞれＭｕｌｔｉ  Ｃｈａｎｎｅｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ：ＭＣ  Ｓｔｉｍ（ＩＩ  ２．０．０リリース）およびＭＣ  Ｒａｃｋ（３．８．１．０リリース）から市販されているものである。実験の全ては、１００μｍ間隔を空けた６０の先端形状および６０μｍ高さの電極からなる３次元ＭＥＡ（Ａｙａｎｄａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓ．Ａ．，ＣＨ−１０１５  Ｌａｕｓａｎｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて行った。ＭＥＡ電極は、６００ｋΩ＜インピーダンス＜９００ｋΩを有する白金で作製されている。
【０１４７】
実験計画
シナプス伝達に対する化合物１の効果を、海馬スライスにおける細胞外電場電位を記録することによって調べた。シナプス伝達が、記録電極を囲むニューロンの集団における同期されたシナプス活性を反映する細胞外電場電位の偏向（ｄｅｆｌｅｃｔｉｏｎ）を生じ得ることは十分に確立されている。
【０１４８】
細胞外電場電位の記録。回復後、脳スライスを、顕微鏡下でＭＥＡチップに装着し、６０の記録電極を、海馬の苔状線維シナプス（歯状回−ＣＡ３）領域に配置した。ＡＣＳＦ溶液を、２ｍＬ／分の速度で、連続的にかん流させた。ＭＥＡチャンバの温度を、ＭＥＡ増幅器ヘッドステージに配置されたペルチェ素子を用いて３２±０．１℃に維持した。全てのデータは、ＭｕｌｔｉＣｈａｎｎｅｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＣＳ  ＧｍｂＨ（Ｒｅｕｔｌｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から市販されているＭＥＡ設備を用いて記録した。チップの２つの隣接する電極を、歯状回の門部における苔状線維を刺激するように選択し、海馬のＣＡ３領域の末端領域部位におけるｆＥＰＳＰを記録した。電場細胞外シナプス後電位（ｆＥＰＳＰ）を、３０ｍ秒の間隔を空けて、６０秒毎に繰り返される２つの連続する電気パルス（パルス幅１００μ秒、および電流刺激強度（μＡ）４０％の相対最大振幅）を有する苔状線維入力の刺激によって誘起した。ビヒクル（ＤＭＳＯ）で処理されるように無作為に割り当てられたスライスからの対照実験を同時に行った。Ｎはスライスの数を表し、１匹の動物につき通常３〜４つのスライスを使用した。シナプス後ニューロンレベル（ｆＥＰＳＰ）で誘起された反応は、それらが、正確な位置、安定したベースライン（連続１０分間で＋／−１０％以内の変動、１００μＶ超の振幅を含む一定の品質基準を満たす場合に記録される。選択された電極からのｆＥＰＳＰを、５ｋＨｚで取り、オフライン分析のためにＰＣのハードディスクに記録した。並行して、選択された電極のｆＥＰＳＰ振幅を、（ＭＣ  Ｒａｃｋプログラムを用いて）オンラインでコンパイルして、実験の品質を監視し、追跡した。データは、オフライン分析のためにスプレッドシートファイルにおいてプロットされる。
【０１４９】
弱い長期増強（ＬＴＰ）を、単一の高周波刺激（ＨＦＳ）によって誘起して、ｆＥＰＳＰの最大以下の増強をもたらした。
【０１５０】
この試験の結果は、基底シナプス伝達に対する化合物１の効果については図３および４に示され、弱い長期増強プロトコルによるＬＴＰの誘導の促進に対する化合物１の効果については図５に示される。興味深いことに、同様の結果が、４−（１−アゼチジニル）−７−メチル−５−［１−メチル−５−［５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン［ＣＡＳ  １３９４０３３−５４−５］（国際公開第２０１２１１４２２２号パンフレット、Ｐｆｉｚｅｒ）などの他のＰＤＥ２阻害剤で得られた（図６を参照）。
【０１５１】
単回投与ＰＫ／ＰＤ  ＰＤＥ２ｉイヌ試験
これらの試験では、雄および雌マーシャルビーグル犬（１〜６歳）を使用した：１つの処理群につき２匹の雄および２匹の雌。脳脊髄液（ＣＳＦ）を、装置を装着された意識のある動物においてニードルガイドカニューレを介して側脳室から採取した。
【０１５２】
ベースラインＣＳＦおよび血液試料を、投与の２〜５日前に採取した。イヌに一晩絶食させ、翌朝、空腹時に（強制経口）投与した。投与後の所定の時点で、血液および／またはＣＳＦを、化合物レベルおよびｃＧＭＰの測定のために採取した。ｃＧＭＰの分析を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって行った：２５μｌのＣＳＦを、１２５μｌの人工ＣＳＦ（ＳＴＩＬ（２０ｎｇ／ｍｌ））で希釈し、遠心分離し、２５μｌを注入した。使用したシステムは以下のとおりであった：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＳＩＬ−３０  ＵＰＬＣ−システム（Ｈｙｐｅｒｃａｒｂ（５０ｍｍ×１ｍｍ（３μｍ））カラム、塩基性（１０ｍＭの炭酸アンモニウム）水溶液−アセトニトリル勾配（５．５分で５％〜９８％）２５０μｌ／分の流量で）およびＥＳＩ源を備えたＡＰＩ  Ｓｃｉｅｘ  ５５００システム（選択的ＭＲＭトランジション（ｍ／ｚ  ３４６．１−＞１５２．１（７５ｍ秒の滞留時間））。この試験の結果は、図７にまとめられている。化合物１の単回投与の後、以下の観察がなされた：０．５ｍｇ／ｋｇで、３／８の動物で軽度から中程度の振戦；１ｍｇ／ｋｇで、７匹中６匹の動物で鎮静および／または振戦（１匹の動物は、化合物の限られたストックのため投与されなかった）。血漿薬物動態は、用量線形性を示さなかった。ＣＳＦにおいてｃＧＭＰの用量依存性の増加があった。分析誤差のため、ＰＤＥ２  Ｈ−２のビヒクル群（１、４および８時間でｎ＝２）における限られた個体データ。
【０１５３】
ＰＤＥ２阻害が、麻酔ラットにおけるシナプス可塑性を促進した：化合物１を用いたケースパイロット試験
導入
シナプス可塑性は、多くの神経生物学的機能のための基本的機構である。海馬ならびに大脳皮質におけるシナプス強度の長く続く高度に局在した増加の形態である長期増強（ＬＴＰ）は、記憶および学習のためのシナプス基質である（Ｃｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｂｌｉｓｓ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ．２００５；６（１）：２５−３４）。シナプス強度の増加および減少は、シナプス前およびシナプス後ニューロンの活性、脳内のネットワークが、記憶中の複数の項目の知覚表示（ｓｅｎｓｏｒｙ  ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）の設定、および適切な運動反応の生成の際にどのように機能するかに左右される。無傷の脳における、これらのシナプス調節の様々な特徴は、様々なタイプのネットワークの動作およびいくつかの異なる脳の回路系の動作に極めて重要である。したがって、ＬＴＰは、アルツハイマー病などの加齢性の精神疾患および神経変性疾患において損なわれていることが予想される（Ｂｅｒｇａｄｏ  ａｎｄ  Ａｌｍａｇｕｅｒ，Ｎｅｕｒａｌ  Ｐｌａｓｔ．２００２；９（４）：２１７−３２；Ｒｏｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ．２００５；３３：５６３−７）。動物において、無傷の高度に相互接続された脳領域において麻酔下で行われる手術（ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ）は、単一パルスまたはペアドパルスで供給される低周波および高周波を有するテタヌス電気刺激後の海馬−大脳皮質回路における有効な接続性および可塑性の持続的変化を調べるための強力な手段である（Ａｌｂｅｎｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ．２００７；２０４：１−１３）。研究は、シナプス強度の低下の発生の根底にある神経回路の理解を深め、すなわち、直接回線経路およびシナプスの弱化を媒介する特定の領域間のネットワーク接続が有する特定の生物学的標的の役割を決定するのに役立つ。手術は、病理学的形態の神経可塑性を回復させ、例えば、シナプス効力を増大することによって、ＬＴＰおよびネットワーク接続性の欠陥を改善する（これは、関連する認知および学習能力に対する有益な効果を有することが予想される）ことを目的とした薬剤の試験を可能にする（Ｃｏｏｋｅ  ａｎｄ  Ｂｌｉｓｓ，２００５；Ａｌｂｅｎｓｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。
【０１５４】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、二次メッセンジャー３’，５’−環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）および３’，５’−環状グアノシン一リン酸の代謝的不活性化に関与する酵素の種類である（ｃＧＭＰ）（Ｆｒａｎｃｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ．２０１１，９：６５１−９０）。ＰＤＥの最大で１１のファミリーが、それらの構造特性、酵素的特性および分布に基づいて分類された（Ｏｍｏｒｉ  ａｎｄ  Ｋｏｔｅｒａ  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００７；１００：３０９−２７）。環状ヌクレオチドシグナル伝達の増大におけるＰＤＥの役割により、これらの酵素は、興奮性を調節し、ニューロン間コミュニケーションの効果を高めるための魅力的な標的になっている。脳において、ＰＤＥ２は、主に、大脳皮質、海馬および線条体において発現され、そこで、ｃＡＭＰの加水分解を制御する。ここ数年にわたって、研究グループは、可塑性および認識過程に作用するように細胞内二次メッセンジャー、ｃＧＭＰおよびｃＡＭＰを調節する方法として、ＰＤＥ２阻害剤の開発に焦点を当てている（Ｄｕｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．２０１５；２１：３８１３−２８；Ｇｏｍｅｚ  ａｎｄ  Ｂｒｅｉｔｅｎｂｕｃｈｅｒ，Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  Ｌｅｔｔ．２０１３；２３：６５２２−７；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．２０１５；３６：９５５−７０；Ｂａｒｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ２００３；７：１０１−１１４）。
【０１５５】
本研究において、化合物１を用いたＰＤＥ２阻害が、麻酔成体スプラーグドーリーの歯状回において、興奮性、またはシナプス増強を発現する能力の変化をもたらすかどうかを調べた。
【０１５６】
材料および方法
動物
本実験は、国際実験動物ケア評価認証協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）（ＡＡＡＬＡＣ）の指針、および１９８６年１１月２４日の欧州委員会理事会指令（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅ）（８６／６０９／ＥＥＣ）に厳密にしたがって行われ、地方倫理委員会によって承認されたものである。手術の時点で１７０〜２００ｇの重量の）スプラーグドーリーラットを、制御された環境条件下に維持された動物施設から到着した後、１２時間の明／暗サイクル（０７：００ＡＭに点灯）で配置された換気したケージ内で集団で飼育した。
【０１５７】
手術および電気生理学
ラットに、ウレタン１．５ｇ／ｋｇ体重の腹腔内注射で麻酔をかけた。動物を、電極の挿入のために定位固定フレームに設置し、それらの体温を、直腸プローブによって常に監視し、加熱パッドで３７℃に維持した。全身麻酔を確実にするために必要に応じてウレタン（０．２〜０．５ｇ／ｋｇ）の追加投与を行った。刺激および記録電極のために左海馬構造の位置で頭蓋骨に２つの小さい孔（直径１ｍｍ）を空けた。双極刺激電極；水平に０．１２５μｍ離れた先端を有する撚り対線のステンレス鋼ポリイミド被覆ワイヤ（ＭＳ３０３／１３−Ｂ．ＰｌａｓｔｉｃｓＯｎｅ）を、内側貫通路（ｍＰＰ）に位置決めし（ＡＰ−７．５、ＭＬ−３．８、ＤＶ−２．５）、ステンレス被覆記録電極（ＭＳ３０３Ｔ−２−ＡＩＵ、０．００８〜０．００５）を、背側海馬の歯状回（ＤＧ）部位に位置決めした（ＡＰ−２．８、ＭＬ−３．８、ＤＶ−３．８）。両方の孔を通して硬膜に穿孔し、刺激および記録電極を、大脳皮質および海馬の上側層を通して、背側海馬のｍＰＰおよびＤＧへと非常にゆっくりと下げた（０．２ｍｍ／分）。手術中、動物の苦しみを最小限に抑えるようにあらゆる努力をした。
【０１５８】
興奮性シナプス後場電位（ｆＥＰＳＰ）傾きが、興奮性シナプス伝達の尺度として使用される。定電流ユニット（ＭＣ，Ｇｅｒｍａｎｙ）によって生成される単一の単相矩形０．１または０．２ｍ秒波パルスが、例えばｍＰＰに印加され、誘起された反応が、ＤＧにおいて生成される。細胞外電場電位が増幅され；１Ｈｚ〜２ｋＨｚでバンドパスフィルタ処理され、デジタル化され、特注のソフトウェアを用いて分析される。最大反応を有する陰性波ｆＥＰＳＰが観察されるまで電極を下げた。最小３０分間が、測定前に安定した興奮性を確実にするために許容される。次に、５０〜５００μＡの範囲の刺激強度を有する単相定電流パルスを供給して、入力／出力（Ｉ／Ｏ）曲線を作成し、最大ＰＳＡおよびｆＥＰＳＰ傾きを決定し、次に、最大反応の５０％を生成した刺激強度（すなわち、試験パルス）を後の実験に使用した。
【０１５９】
ＬＴＰ誘導：次に、試験刺激を、テタヌス刺激の前および後に５分毎に加えた。反応を、高周波刺激によって誘起した（２０矩形波パルスの１０連発刺激、２００Ｈｚで０．２ｍ秒の持続時間、５ｍ秒の刺激間隔、２秒の連発刺激間隔）。５つの誘起された反応を、実験の際に測定された各時点、ベースライン記録の半時間、薬剤適用またはテタヌス刺激の直前（ＬＴＰ誘導の対照）について平均した。シナプス増強の大きさが、振幅ＤＧ集合スパイク（ＰＳＡ）、ならびに安定した３０分間の薬理学的期間にわたって平均された傾きに対する、テタヌス刺激後の時間間隔におけるｆＥＰＳＰ傾きの増加のパーセンテージとして表される。
【０１６０】
選択されたパルス強度における反応を収集し、テタヌス刺激後の最大で１３０分まで平均した。集合スパイクの振幅は、第１のポジティブピーク（ａ）から第１のネガティブピーク（ｂ）への振幅、およびこのネガティブピーク（ｂ）から第２のポジティブピーク（ｃ）への振幅の平均として定義された：［（ａ−ｂ）／（ｃ−ｂ）］／２。ｆＥＰＳＰの傾きの定量のため、波形（ΔＶ／Δｔ）のごく初期の成分のみを測定して、集合スパイクによる汚染を回避した。
【０１６１】
組織学
電気生理学的試験の最後に、２０秒間にわたる５００μＡの電気刺激を供給して、刺激および記録電極の先端に損傷を生じさせ、電極配置の組織学的検証のために脳を採取した。脳切片（２０ｍｍ）を、光学顕微鏡を用いて調べた。不適切な電極配置を有する動物を、試験から除外した。
【０１６２】
薬剤
化合物１を、皮下（ＳＣ）投与のために１０％のシクロデキストリン（ＣＤ）＋１ＨＣｌ＋ＮａＣｌに溶解させた。
【０１６３】
統計
各動物について、３０分間にわたる安定したベースライン（テタヌス刺激前）反応を平均し、平均を、１００％であるものとして正規化し、テタヌス刺激後反応データを、ベースライン平均に対して表した。テタヌス刺激後のビヒクルおよび化合物１の効果の比較を、順位に基づく一元配置反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて３０分間隔で行った後、ベースライン（１００％の値）に対するダネットの事後比較を行った。個別の時点での処理間の差を、両側スチューデントｔ検定を用いて調べた。全ての統計学的手順は、ＳｔａｔＥｘａｃｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて行った。
【０１６４】
結果
ベースラインのテタヌス刺激前のビヒクル処理された対照との間で著しい変化は見られなかったため、基底シナプス伝達は、化合物１によって影響されなかった（図８ｂ）。ＬＴＰ誘導パラダイム中、化合物１（４０ｍｇ／ｋｇ）の皮下投与は、持続的な（＞２時間）シナプス増強を促進した（図８ｂ）。テタヌス刺激の完了の０〜３０分後、ＰＳＡ傾きは、ビヒクルレベル１２４±５％と比較して１６４±１３％、ｐ＜０．０５）であった。テタヌス刺激の９０〜１２０分後の時点で、ＰＳＡ振幅は依然として高かった（ビヒクルレベル１１６±１７％と比較して１７９±２０％、ｐ＜０．０５）。同様に、刺激反応曲線の分析により、ビヒクル条件と比較してｆＥＰＳＰ傾きの著しい持続的増加が示された（９０〜１２０分：ビヒクルレベル９４±７％と比較して１３７±２４％、ｐ＜０．０５）（図８ｃ）。
【０１６５】
概して、化合物１は、インビボでＬＴＰを促進するが、基底シナプス伝達に影響を与えない。
【０１６６】
理論上の組成物実施例
これらの実施例全体を通して使用される際の「活性成分」は、化合物１、その薬学的に許容できる塩、またはその溶媒和物に関する。
【０１６７】
本発明の製剤の処方の典型例は以下のとおりである：
１．錠剤
化合物１：５〜５０ｍｇ
リン酸二カルシウム：２０ｍｇ
ラクトース：３０ｍｇ
滑石：１０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム：５ｍｇ
ジャガイモでんぷん：２００ｍｇになるまでの量
【０１６８】
２．懸濁液
それぞれ１ミリリットルが、１〜５ｍｇの、化合物１の１つ、５０ｍｇのナトリウムカルボキシメチルセルロース、１ｍｇの安息香酸ナトリウム、５００ｍｇのソルビトールおよび１ｍｌになるまでの水を含有するように、水性懸濁液を、経口投与用に調製する。
【０１６９】
３．注入物質
１．５重量％の本発明の化合物１を、水中１０体積％のプロピレングリコール中で撹拌することによって、非経口組成物を調製する。
【０１７０】
４．軟膏
化合物１：５〜１０００ｍｇ
ステアリルアルコール：３ｇ
ラノリン：５ｇ
白色ワセリン：１５ｇ
水：１００ｇになるまでの量
【０１７１】
適度な変動は、本発明の範囲からの逸脱とみなされるべきではない。このように記載される本発明は、当業者によって多くの方法で変更され得ることが明らかであろう。
【図１ａ】
2018535968.tif 000025
【図１ｂ】
2018535968.tif 000026
【図２】
2018535968.tif 000027
【図３】
2018535968.tif 000028
【図４】
2018535968.tif 000029
【図５ａ】
2018535968.tif 000030
【図５ｂ】
2018535968.tif 000031
【図６】
2018535968.tif 000032
【図７】
2018535968.tif 000033
【図８ａ】
2018535968.tif 000034
【図８ｂ】
2018535968.tif 000035
【図８ｃ】
2018535968.tif 000036
【国際調査報告】
2018535968.tif 000037
2018535968.tif 000038