(57)【要約】  本発明は、患者のサンプル中のバイオマーカーの測定に基づき、ＩＢＤを有する患者の試料を同定する、又は、患者におけるＩＢＤの再発を予測するための方法、システム、及びキットに関する。バイオマーカーは、脂質若しくはアミノ酸、又はこれらの組み合わせとすることができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検体が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有するか否かを判定する生体外分析方法であって、
分離された生体試料を準備するステップと、
前記試料中の少なくとも２種のバイオマーカーの濃度を測定するステップと、を含み、
前記バイオマーカーの基準値よりも有意に低い、又は有意に高い濃度は、前記被検体が炎症性腸疾患を有することを示し、第１のバイオマーカーが、グリセロリン脂質、特にホスファチジルコリン、及びスフィンゴ脂質、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質であることと、少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、オルニチン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、及びバリン、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸であることと、を特徴とする、分析方法。
【請求項２】
前記バイオマーカーの基準値よりも有意に低い前記試料中の前記バイオマーカーの濃度が、前記被検体が炎症性腸疾患を有することを示す、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ホスファチジルコリンが、モノアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルコリン、及びアルキルアシルホスファチジルコリンからなる群から選択され、かつ／又はスフィンゴ脂質がスフィンゴミエリンである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも３、４種のバイオマーカーの濃度、又は５種のバイオマーカーの濃度が測定される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＩＢＤの再発を予測するための、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記バイオマーカーの基準値よりも有意に低い、前記被検体の前記試料中の前記バイオマーカーの濃度が、前記被検体がＩＢＤの再発を有するリスクが高いことを示す、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
１種の更なるバイオマーカーがアルギニンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、グリシン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
１種の更なるバイオマーカーがグリシンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
１種の更なるバイオマーカーがヒスチジンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
１種の更なるバイオマーカーがセリンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
１種の更なるバイオマーカーがトリプトファンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
１種の更なるバイオマーカーがフェニルアラニンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、及びトリプトファン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グルタミン、イソロイシン、セリン、及びスレオニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
各バイオマーカーが個々の組織において測定され、前記試料が、全血、血清、又は血漿、腸壁の組織、肝臓の組織、又は腸間膜脂肪からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
患者が、小児患者、成人患者、ＩＢＤの非急性期の患者、又はＩＢＤの急性期の患者である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記それぞれのバイオマーカーの濃度が、前記基準値よりも１０％、２０％、又は３０％低い、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＩＢＤへの介入を必要とする被検体の前記試料を識別するための、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のバイオマーカーの使用。
【請求項１９】
被検体が炎症性腸疾患を有するか否かを判定するためのシステムであって、前記システムは、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のバイオマーカーの濃度を測定するための手段と、コンピュータと、を備え、
ａ．前記コンピュータは、前記バイオマーカーの濃度の基準値を含むデータベースを記憶し、
ｂ．前記コンピュータは、
ｉ．被検体の前記試料のパラメータの測定値を受信し、かつ記憶するステップと、
ｉｉ．前記測定されたパラメータの値を、前記システムに記憶されている前記基準値と比較するステップと、
ｉｉｉ．前記測定値が前記基準値と異なる場合に、前記試料を、炎症性腸疾患を有する被検体のものとして示すステップと、
ｉｖ．ステップｉｉｉの結果を出力するステップとを、前記コンピュータに実行させる命令を有するソフトウェアプログラムを記憶している、システム。
【請求項２０】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載のバイオマーカーの濃度を測定するための試薬を含む、被検体が炎症性腸疾患を有するか否かを判定するためのキット。
【請求項２１】
前記試薬が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆｃフラグメントの群から選択され、かつこれらの試薬が、前記バイオマーカーに対して特異的である、請求項２０に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、結腸及び小腸の一群の炎症状態である。この疾患は、重篤な腹痛及び栄養上の問題の原因となることがある。ＩＢＤの主要なタイプは、クローン病（ＣＤ）及び潰瘍性大腸炎（ＵＣ）である。ＣＤ及びＵＣは、主としてこれらの炎症性変化の位置及び性質によって、異なる。ＣＤは、口腔から肛門に至る胃腸管のいずれの部分をも冒し得る。ＵＣは、結腸及び直腸に限定される。
【０００２】
この疾患の原因となる要因は、未だに明確には特定されていない。遺伝的背景、環境要因、及び免疫障害が、この疾患の原因であると推定される。
【０００３】
現在、栄養摂取がこの疾患にどのように関連しているのかは不明確である。身体は、栄養成分をより小さな単位、代謝産物へと代謝する。これらの代謝産物は、ＩＢＤの存在に対し、直接又は間接的な影響を及ぼす場合がある。したがって、これらの代謝産物の性質及び濃度と、この疾患の存在及び状態との間には、関連がある可能性がある。
【０００４】
例えば、食習慣は、非常に重要な環境要因であると考えられている。このため、栄養摂取は、疾患を回避する、又は、場合によっては疾患を治療する等の役割を果たし得るのではないかと推測される。プレバイオティクスとプロバイオティクスとの混合物が使用され、疾患を首尾よく治療してきた。Ｂｅａｔｔｉｅら（１９９４；Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．；８：１〜６）は、活動性小腸クローン病の小児７人の治療における、酸性カゼイン分画の使用について報告している。米国特許第５９５２２９５号は、胃腸管の炎症状態、特にＩＢＤの治療又は予防への、形質転換増殖因子β２（ＴＧＦ−β２）を多く含むカゼイン分画の使用について記載している。
【０００５】
現在、コルチコステロイド薬又はメサラジンのような抗炎症薬、抗生物質、及び、非常に重症の場合には手術が、ＩＢＤの治療にとって好適な選択である。ほとんどの場合、上記の薬剤により、ＩＢＤの症状の寛解をもたらすことが既に可能であるが、一方、治療後に、症状の急性の再燃／再発が見られる場合がある。これらのいわゆる突然の再燃を確実に予測すること、又は、どの患者が再発を起こしやすいかを示すことは、未だに不可能である。例えば、小児において、クローン病は慢性の再発経過をたどり、最大で５０％の患者が、最終的には手術を必要とする（Ｄａｖｉｅｓ，Ｇら；１９９０；Ｂｒ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．；７７：８１〜９４）。
【０００６】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の自然な臨床経過は、一連の再発と寛解を特徴とする。ＩＢＤの主な治療目標は、腸の炎症過程の効果的な制御により、寛解をもたらすこと及び維持することである。この疾患の寛解をもたらす効果的な治療が存在するのにも関わらず、腸レベルでの炎症過程の消散のレベルの評価は、現在の臨床診療においては不確実である。潜在性炎症が、治療サイクルの終わりに依然として残存している場合があり、これらは、ともすれば、臨床的見地からは、好結果であるとみなされてしまう場合がある。炎症過程の「不完全な」生物学的寛解は、より早期の再発に対し、より高いリスクとなるものと考えられる。
【０００７】
本出願において、我々は、寛解期に発生する前に再発の尤度を予測する、血清代謝産物の濃度の変化について記載する。したがって、これによって、この患者集団において寛解の状態を維持するための、早期の薬理学的介入／栄養療法の可能性がもたらされる。
【０００８】
血清の検査マーカー及び糞便中のマーカーは、疾患活動性の潜在性検出及び短期又は中期の再発の予測のために提案されてきた。カルプロテクチン及び高感度Ｃ反応性タンパク質（ｈｓ−ＣＲＰ）が、疾患の再発を適切な感度及び特異性で予測する能力について調査されてきたが、これらは、医療において未だに完全には受け入れられていない。実際のところ、上記のバイオマーカーについては、活動性疾患と非活動性疾患を区別するためのカットオフ値は十分には明らかとなっていない。ｈｓ−ＣＲＰについては、いくつかの研究が、カットオフ値として１０ｍｇ／Ｌを提唱しているが、ほとんどの団体により、この値が受け入れられるには程遠い。患者の経過観察中の臨床的再発を予測するためのｈｓ−ＣＲＰの予知力は、限定されている。
【０００９】
したがって、ＩＢＤの診断手段として使用できるマーカーを特定し、それらのマーカーを栄養療法の有効性の評価に使用することが望ましい。
【００１０】
欧州特許第２３３０２１９号は、生体試料由来の小分子を同定する方法、及び異常な小分子特性を有する患者の治療法について概説している。しかしながら、この論文は、特定の代謝産物と特定の疾患との関連性については記載していない。国際公開第２０１００４５１８０号は、ＩＢＤに対するバイオマーカー及びこれを使用する方法を対象としている。しかしながら、この論文は、非常に多数の潜在的バイオマーカーに関しており、また、特定のバイオマーカーの血清中濃度が、ＩＢＤの状態と負又は正の相関があるのか否かについては明示していない。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、被検体が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有するか否か、又は被検体がＩＢＤを再発しやすいか否かを判定する分析方法を対象とし、分離された生体試料を準備し、試料中のバイオマーカーの濃度を測定し、当該バイオマーカーの基準値と比較してより低い、又は、より高い濃度は、被検体が炎症性腸疾患を有することを示し、バイオマーカーが、グリセロリン脂質、特にホスファチジルコリン、及びスフィンゴ脂質、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質であることを特徴とする。少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、オルニチン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、及びバリン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【００１２】
好ましい一実施形態において、被検体が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有するか否か、又は、被検体がＩＢＤを再発しやすいか否かを判定する分析方法は、分離された生体試料を準備するステップと、試料中のバイオマーカーの濃度を測定するステップと、を含み、当該バイオマーカーの基準値と比較してより低い、又は、有意により低い濃度は、被検体が炎症性腸疾患を有することを示し、バイオマーカーが、グリセロリン脂質、特にホスファチジルコリン、及びスフィンゴ脂質、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質であることを特徴とする。
【００１３】
上記のホスファチジルコリンは、モノアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルコリン、及びアルキルアシルホスファチジルコリンからなる群から選択することができる。上記のスフィンゴ脂質は、スフィンゴミエリンとすることができる。
【００１４】
好ましい一実施形態において、少なくとも１種の更なるバイオマーカーが測定される。
【００１５】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、好ましくは、アルギニン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、オルニチン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、及びバリン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【００１６】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択することができる。
【００１７】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、グリシン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたアルギニンとすることができる。
【００１８】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたグリシンとすることができる。
【００１９】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたヒスチジンとすることができる。
【００２０】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたセリンとすることができる。
【００２１】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたトリプトファンとすることができる。
【００２２】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、及びトリプトファン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたフェニルアラニンとすることができる。
【００２３】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グルタミン、イソロイシン、セリン、及びスレオニン、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択することができる。
【００２４】
好ましい一実施形態において、被検体が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有するか否か、又は、被検体がＩＢＤを再発しやすいか否かを判定する分析方法は、分離された生体試料を準備するステップと、試料中の少なくとも２種のバイオマーカーの濃度を測定するステップと、を含み、当該バイオマーカーの基準値と比較してより低い、又は、有意により低い濃度は、被検体が炎症性腸疾患を有することを示し、第１のバイオマーカーが、グリセロリン脂質、特にホスファチジルコリン、及びスフィンゴ脂質、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される脂質であることと、少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、オルニチン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、及びバリン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択されるアミノ酸であることと、を特徴とする。
【００２５】
上記のホスファチジルコリンは、モノアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルコリン、及びアルキルアシルホスファチジルコリンからなる群から選択することができる。上記のスフィンゴ脂質は、スフィンゴミエリンとすることができる。
【００２６】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択することができる。
【００２７】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グルタミン、イソロイシン、セリン、及びスレオニン、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択することができる。
【００２８】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、グリシン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたアルギニンとすることができる。
【００２９】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたグリシンとすることができる。
【００３０】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたヒスチジンとすることができる。
【００３１】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたセリンとすることができる。
【００３２】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたトリプトファンとすることができる。
【００３３】
上記の少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、及びトリプトファン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される少なくとも１種の更なるバイオマーカーと組み合わされたフェニルアラニンとすることができる。
【００３４】
少なくとも２、３、４種のバイオマーカーの濃度、又は５種のバイオマーカーの濃度を測定することができる。
【００３５】
バイオマーカーのそれぞれは個々の組織において測定することができ、試料は、全血、血清、又は血漿、腸壁の組織、肝臓の組織、又は腸間膜脂肪からなる群から選択することができる。
【００３６】
患者は、小児患者、成人患者、ＩＢＤの非急性期の患者、又はＩＢＤの急性期の患者とすることができる。
【００３７】
当該バイオマーカーの基準値よりも有意に低い、又は有意に高い、被検体の試料中のバイオマーカーの濃度は、その被検体がＩＢＤの再発を有するリスクが高いことを示す。
【００３８】
それぞれのバイオマーカーの濃度は、基準値よりも、１０％、２０％、３０％、４０％、若しくは５０％低い、又は、高い場合があり、被検体がＩＢＤの急性期であること、又は、再発のリスクが高いことを示すことができる。
【００３９】
本発明はまた、ＩＢＤへの介入を必要とする被検体の試料を特定するための、上で規定されたバイオマーカー又はバイオマーカーの組み合わせを対象とする。
【００４０】
本発明はまた、被検体が炎症性腸疾患を有するか否かを判定するためのシステムを被検体とし、このシステムは、本発明のバイオマーカーの濃度を測定するための手段を備える。このシステムは、コンピュータを備えることができる。このコンピュータは、バイオマーカーの濃度の基準値を含むデータベースを記憶することができ、当該コンピュータは、被検体の試料のパラメータの測定値を受信し、かつ記憶するステップと、上記の測定されたパラメータの値を、このシステムに記憶されている基準値と比較するステップと、測定値が基準値と異なる場合に、その試料を、炎症性腸疾患を有する被検体のものとして示すステップと、測定値が基準値と異なる場合に、その試料を、炎症性腸疾患を有する被検体のものとして示す結果を出力するステップとを、コンピュータに実行させる命令を有するソフトウェアプログラムを記憶している。
【００４１】
本発明はまた、本発明のバイオマーカーの濃度を測定するための試薬を備える、被検体が炎症性腸疾患を有するか否かを判定するためのキットを対象とする。
【００４２】
これらの試薬は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆｃフラグメントの群から選択することができ、これらの試薬は、当該バイオマーカーに対して特異的である。
【００４３】
下記の略語一覧により、図に示された代謝産物を特定する。
Ｖａｌ−バリン、
ｘＬｅｕ−ロイシン及びイソロイシン、
Ｔｈｒ−スレオニン、
Ｐｒｏ−プロリン、
Ｓｅｒ−セリン、
Ａｒｇ−アルギニン、
Ｇｌｙ−グリシン、
Ｇｌｎ−グルタミン、
Ｍｅｔ−メチオニン、
Ｏｒｎ−オルニチン、
Ｈｉｓｔ−ヒスチジン、
Ｐｈｅ−フェニルアラニン、
Ｔｙｒ−チロシン、
Ｔｒｐ−トリプトファン、
ＰＣａａ−コリングリセロリン脂質、
ＬｙｓｏＰＣ−リゾホスホコリン、
ＰＣａｅ−エーテル結合を有するコリングリセロリン脂質、
ＳＭ（ＯＨ）−ヒドロキシ−スフィンゴミエリン。
ｌｙｓｏＰＣ．ａ．Ｃ１８．１−分子量５１９〜５２３ｇ／ｍｏｌの化合物で、モノアシルホスファチジルコリンである、
ｌｙｓｏＰＣ．ａ．Ｃ１８．２−分子量５１７〜５２１ｇ／ｍｏｌの化合物で、モノアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａａ．Ｃ２８．１−分子量６７４〜６７８ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａａ．Ｃ３０．０−分子量７０４〜７０８ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａａ．Ｃ３２．２−分子量７２８〜７３２ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａａ．Ｃ３４．２−分子量７５６〜７６０ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａａ．Ｃ３４．３−分子量７５４〜７５８ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａａ．Ｃ３６．２−分子量７８４〜７８８ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａａ．Ｃ３６．３−分子量７８２〜７８６ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａａ．Ｃ４２．６−分子量８６０〜８６４ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３０．０−分子量６９０〜６９４ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３４．２−分子量７４２〜７４６ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３６．２−分子量７７０〜７７４ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３８．２−分子量７９８〜８０２ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである、
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３８．３−分子量７９６〜８００ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである、
ＳＭ（ＯＨ）Ｃ１４：１−分子量６８７〜６９１ｇ／ｍｏｌの化合物で、スフィンゴミエリンである。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】空腹段階の血漿中で観察された、ＩＢＤの小児（クローン病のみ）と非ＩＢＤの小児との代謝の差異を示す箱ひげ図である。箱ひげ図は、栄養療法前のＣＤの小児（ｎ＝１２、男児９人、女児３人）、及び非ＩＢＤの小児（ｎ＝２０、男児１０人、女児１０人）において、試験開始時の空腹時に標的ＵＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳメタボノミック分析（targeted UHPLC-ESI-MS/MS metabonomic analysis）によって測定された代表的なアミノ酸代謝産物及び脂質代謝産物の濃度レベル（ｎｇ／血漿１００μＬ）を示す。  有意差はマン・ホイットニーＵ検定によって評価し、次のように表示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図２】空腹段階の血漿中で観察された、ＩＢＤの小児（クローン病のみ）と非ＩＢＤの小児との代謝の差異を示す箱ひげ図である。  箱ひげ図は、栄養療法前のＣＤの小児（ｎ＝１２、男児９人、女児３人）、及び非ＩＢＤの小児（ｎ＝２０、男児１０人、女児１０人）において、試験開始時の空腹時に標的ＵＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳメタボノミック分析によって測定された代表的なアミノ酸代謝産物及び脂質代謝産物の濃度レベル（ｎｇ／血漿１００μＬ）を示す。  有意差はマン・ホイットニーＵ検定によって評価し、次のように表示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図３】空腹段階の血漿中で観察された、ＩＢＤの小児（クローン病のみ）と非ＩＢＤの小児との代謝の差異を示す箱ひげ図である。  箱ひげ図は、栄養療法前のＣＤの小児（ｎ＝１２、男児９人、女児３人）、及び非ＩＢＤの小児（ｎ＝２０、男児１０人、女児１０人）において、試験開始時の空腹時に標的ＵＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳメタボノミック分析によって測定された代表的なアミノ酸代謝産物及び脂質代謝産物の濃度レベル（ｎｇ／血漿１００μＬ）を示す。  有意差はマン・ホイットニーＵ検定によって評価し、次のように表示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図４】空腹段階の血漿中で観察された、ＩＢＤの小児（クローン病のみ）と非ＩＢＤの小児との代謝の差異を示す箱ひげ図である。  箱ひげ図は、栄養療法前のＣＤの小児（ｎ＝１２、男児９人、女児３人）、及び非ＩＢＤの小児（ｎ＝２０、男児１０人、女児１０人）において、試験開始時の空腹時に標的ＵＨＰＬＣ−ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳメタボノミック分析によって測定された代表的なアミノ酸代謝産物及び脂質代謝産物の濃度レベル（ｎｇ／血漿１００μＬ）を示す。  有意差はマン・ホイットニーＵ検定によって評価し、次のように表示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。
【００４５】
（定義）
バイオマーカーは、第２の表現型を有する（例えば、疾患を有しない）被検体又は被検体の集団由来の生体試料と比較して、第１の表現型を有する（例えば、疾患を有する）被検体又は被検体の集団由来の生体試料中に差次的に存在する（すなわち、増加又は減少した）化合物、好ましくは代謝産物、を意味する。バイオマーカーは任意のレベルで差次的に存在し得るものであり、概して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、少なくとも１５０％、若しくはそれを超えて増加したレベルで存在する、又は、概して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは１００％（すなわち、存在しない）減少したレベルで存在する。
【００４６】
有意性は、基準値からの差の妥当性を評価するために重要である。バイオマーカーは、好ましくは、統計学的に有意なレベルで差次的に存在する。例えば、統計学的に異なるとは、マン・ホイットニーＵ検定、ウェルチのｔ検定、又はウィルコクソンの順位和検定のいずれかを使用して求めるとき、ｐ値が０．０５未満、０．０１未満、又は０．００１未満であり、かつ／又はｑ値が０．１０未満であるという意味である。
【００４７】
１種以上のバイオマーカーのレベルとは、試料中のバイオマーカーの絶対量若しくは相対量、又は濃度を意味する。より低いレベルとは、基準値よりも低い数値を意味し、基準値は含まない。
【００４８】
試料又は生体試料は、被検体から分離された生体材料を意味する。生体試料は、所望のバイオマーカーの検出に好適な任意の生体材料を含み得、また、被検体由来の細胞及び／又は非細胞材料を含み得る。試料は、例えば、全血、血清、若しくは血漿、腸壁の組織、肝臓の組織、若しくは腸間膜脂肪、便、血液、血漿、血清、若しくは尿等の、任意の好適な生物組織又は体液から分離することができる。
【００４９】
被検体は任意の動物を意味するが、好ましくは、例えば、ヒト、サル、マウス、又はウサギ等の哺乳動物である。
【００５０】
バイオマーカーの基準レベル又は基準は、特定の疾患状態、又は表現型、特にＩＢＤがないことを示すレベルを意味する。したがって、これらのレベルは、概して健康な被検体に見られる。基準レベル又はデフォルトレベルは、通常、数値であり、濃度（ｇ／Ｌ、ｎｇ／μＬ、ｎｇ／１００μＬ）の形式で表される。
【００５１】
代謝プロファイルは、標的細胞、組織、臓器、生体、又はこれらの分画（例えば、細胞区画）内の小分子の、完全な、又は、部分的な一覧である。この一覧は、存在する小分子の量及び／又は種類を含む場合もある。特に好ましいのは、生化学的経路において代謝され、細胞の基本構成要素の役割を果たせる分子である。「代謝プロファイル」は、単一の手法又は複数の異なる手法を使用して求めることができる。
【００５２】
炎症性腸疾患又はＩＢＤは、消化管において炎症の原因となる疾患を指し、クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む。ＩＢＤの原因は不明で、症状としては、腹部けいれん、血性下痢、発熱、及び体重減少が挙げられる。
【００５３】
クローン病又はＣＤは、胃腸（ＧＩ）管の慢性炎症性障害を指す。クローン病は、胃腸管のいかなる部分にも発症し得るが、最も多くは、小腸及び／又は結腸を冒すのが見出される。潰瘍性大腸炎とは異なり、ＣＤは、腸壁の厚さ全体を冒し得る。
【００５４】
潰瘍性大腸炎又はＵＣは、結腸又は大腸の粘膜（最も内側の層）の炎症及び潰瘍を特色とする、慢性疾患を指す。ＵＣはＣＤと異なり、結腸のみに影響し、炎症は結腸に至るまでの直腸全体に連続的に影響し、病変領域が散在された正常な腸の領域はなく、また、ＵＣは、結腸の最も内側の層のみを冒す。
【００５５】
グリセロリン脂質は脂質であり、グリセロール部分及びホスフェートよりなる極性の先端部に結合した、少なくとも１つのＯ−アシル残基、又はＯ−アルキル残基、又はＯ−アルキ−１’−エニル残基を含む、ｓｎ−グリセロ−３−リン酸の任意の誘導体に関する。本発明の意味におけるグリセロリン脂質は、天然に（哺乳動物、特にヒトに）存在するグリセロリン脂質及びこれらの任意の誘導体である。
【００５６】
誘導体は、１部分（又は残基）が除去される、修飾される、又は、元のグリセロリン脂質に付加されることで、元のグリセロリン脂質と異なる。
【００５７】
本発明の意味におけるコリン（複数可）は、化合物コリン（２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルエタンアミニウム、別名ビリノイリン（２−ヒドロキシエチル）トリメチルアンモニウム）それ自体、及びこれらの誘導体を含む。本発明の意味におけるコリン誘導体は、グリセロール又はリン酸化グリセロールに共有結合した、２−ヒドロキシ−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルエタンアミニウムである。グリセロール骨格は、脂肪酸に共有結合することができる。本発明の意味におけるコリン誘導体は、天然に（哺乳動物、特にヒトに）存在するリン脂質である。
【００５８】
ホスファチジルコリンは、コリンを先端基として組み込む、グリセロリン脂質のサブクラスである。リン脂質は、コリンの先端基と、様々なアシル残基又はアルキル残基を有するグリセロリン酸と、からなる。
【００５９】
ホスファチジルコリンは、合計１〜５０個の炭素原子をアシル残基中に有し得る、又は、合計３〜５０個の炭素原子をアシル残基中に、かつ合計１〜８個の二重結合をアシル残基中に有し得る。
【００６０】
モノアシルホスファチジルコリン（別名リゾホスファチジルコリン）は、１個のＯ−アシル残基を含むホスファチジルコリンである。
【００６１】
ジアシルホスファチジルコリンは、２個のＯ−アシル残基を含むホスファチジルコリンである。
【００６２】
アルキルアシルホスファチジルコリンは、１個のＯ−アシル残基及び１個のＯ−アルキル残基を含むホスファチジルコリンである。
【００６３】
スフィンゴ脂質は、スフィンゴイド塩基の骨格と、スフィンゴシンを含む一組の脂肪族アミノアルコールと、を含む脂質である。スフィンゴシン骨格は、エタノールアミン、セリン、又はコリン等の、（通常は）帯電している先端基にＯ−結合している。この骨格はまた、脂肪酸等のアシル基にアミド結合している。
【００６４】
スフィンゴ脂質は、アシル鎖中に総数１０〜３０個の炭素原子を有し得る、又は、アシル鎖中に総数１０〜３０個の炭素原子、及び１〜５個の二重結合を有し得る。
【００６５】
本発明の意味におけるスフィンゴミエリンは、以下のように定義されるスフィンゴミエリンである：スフィンゴミエリンは、スフィンゴシン（Ｄ−エリスロ−２−アミノオクタデス−４−エン−１，３−ジオール）を含む。脂肪酸は、スフィンゴシンのＣ２アミノ基に、アミド結合を介して共有結合している。リン酸基は、スフィンゴシンのＣ１ヒドロキシル基に、リン酸エステル結合を介して共有結合している。更に、本発明の意味におけるスフィンゴミエリンはまた、スフィンゴミエリン誘導体を包含する、すなわち、追加の残基を意味する。
【００６６】
ＰＣａａは、コリングリセロリン脂質である。
【００６７】
ＬｙｓｏＰＣは、リゾホスホコリンである。
【００６８】
ＰＣａｅは、エーテル結合を有するコリングリセロリン脂質である。
【００６９】
ＳＭ（ＯＨ）は、ヒドロキシ−スフィンゴミエリンである。ヒドロキシスフィンゴミエリンは、アシル残基中に総数１０〜３０個の炭素原子を有し得る。
【００７０】
ｌｙｓｏＰＣ．ａ．Ｃ１８．１は分子量５１９〜５２３ｇ／ｍｏｌの化合物で、モノアシルホスファチジルコリンである。
【００７１】
ｌｙｓｏＰＣ．ａ．Ｃ１８．２は分子量５１７〜５２１ｇ／ｍｏｌの化合物で、モノアシルホスファチジルコリンである。
【００７２】
ＰＣ．ａａ．Ｃ２８．１は分子量６７４〜６７８ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである。
【００７３】
ＰＣ．ａａ．Ｃ３０．０は分子量７０４〜７０８ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである。
【００７４】
ＰＣ．ａａ．Ｃ３２．２は分子量７２８〜７３２ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである。
【００７５】
ＰＣ．ａａ．Ｃ３４．２は分子量７５６〜７６０ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである。
【００７６】
ＰＣ．ａａ．Ｃ３４．３は分子量７５４〜７５８ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである。
【００７７】
ＰＣ．ａａ．Ｃ３６．２は分子量７８４〜７８８ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである。
【００７８】
ＰＣ．ａａ．Ｃ３６．３は分子量７８２〜７８６ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである。
【００７９】
ＰＣ．ａａ．Ｃ４２．６は分子量８６０〜８６４ｇ／ｍｏｌの化合物で、ジアシルホスファチジルコリンである。
【００８０】
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３０．０は分子量６９０〜６９４ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである。
【００８１】
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３４．２は分子量７４２〜７４６ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである。
【００８２】
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３６．２は分子量７７０〜７７４ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである。
【００８３】
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３８．２は分子量７９８〜８０２ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである。
【００８４】
ＰＣ．ａｅ．Ｃ３８．３は分子量７９６〜８００ｇ／ｍｏｌの化合物で、アルキルアシルホスファチジルコリンである。
【００８５】
ＳＭ（ＯＨ）Ｃ１４：１は分子量６８７〜６９１ｇ／ｍｏｌの化合物で、スフィンゴミエリンである。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
項の見出しは主題を明確化するためのものであり、主題を限定するものと解釈すべきではない。値の範囲が開示されている場合、各個別の値、特に各整数は、その範囲に含まれるものとみなされる。特に記載がない場合、％で表す値は、重量／重量（ｗ／ｗ）の値に関する。
【００８７】
本発明者らは、ＩＢＤの患者において、同年齢の対照とは異なる、代謝の特徴を特定した。臨床症状の不在下でこれらの代謝産物の濃度が低下するのは、臨床的寛解中の潜在性炎症の残存又は再活動化によるものと予測される。したがって、ＩＢＤ患者におけるこれらの代謝物の濃度の低下は、同年齢の対照と比較すると、綿密なモニタリングにとってますます必要であり、かつ／又は寛解の状態を維持するための薬理学的介入／栄養療法にとって必要である、臨床的再発の予測因子となる。更に、代謝プロファイルの不均衡が残存する場合、疾患の重篤な特徴を有する患者であること、すなわち、より高い再発率、及び／又は疾患症状のより高い重症度、及び／又は臨床的寛解のより低い導入を有し得ることを示すことができる。
【００８８】
測定方法
任意の好適な方法を使用して生体試料を分析し、試料中の１種以上のバイオマーカーのレベル（複数可）を測定することができる。好適な方法としては、クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣ、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー）、質量分析法（例えば、ＭＳ、ＭＳ−ＭＳ）、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、抗体結合、その他の免疫化学的手法、及びこれらの組み合わせが挙げられる。更に、１種以上のバイオマーカーのレベル（複数可）は、例えば、測定が所望されるバイオマーカー（複数可）のレベルと相関している化合物（又は複数の化合物）のレベルを測定するアッセイを使用することによって、間接的に測定することができる。
【００８９】
比較方法
１種以上のバイオマーカーのレベル（複数可）は、生体試料中の１種以上のバイオマーカーのレベル（複数可）を、炎症性腸疾患陽性の基準レベル及び／又は炎症性腸疾患陰性の基準レベルに簡易的に比較する（例えば、手作業による比較）等の、様々な手法を使用して炎症性腸疾患の基準レベルと比較してもよい。生体試料中の１種以上のバイオマーカーのレベルはまた、１種以上の統計解析（例えば、マン・ホイットニーＵ検定、ｔ検定、ウェルチのｔ検定、ウィルコクソンの順位和検定、ランダムフォレスト）を使用して、炎症性腸疾患の基準レベルと比較してもよい。
【００９０】
生体試料中の１種以上、好ましくは少なくとも２種のバイオマーカーのレベル（複数可）の測定後、レベル（複数可）をＩＢＤの基準レベルと比較し、被検体が炎症性腸疾患を発症しやすいか否かを予測する、又は、被検体がＩＢＤを有するか否かを判定する。生体試料中の１種以上、好ましくは少なくとも２種のバイオマーカーのレベルが基準レベルよりも低い場合は、被検体が炎症性腸疾患を発症しやすいことを示す。生体試料中の１種以上、好ましくは少なくとも２種のバイオマーカーのレベルが基準レベルよりも低くない場合は、被検体が炎症性腸疾患を有していない、又は、発症しやすくないことを示す。
【００９１】
バイオマーカー
本発明は、特定のバイオマーカー及びバイオマーカーの特定の組み合わせが、ＩＢＤ又はＩＢＤの再発の判定に好適であるという知見に基いている。バイオマーカーは、脂質又は／及びアミノ酸とすることができる。これらのバイオマーカーは、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、及びこれらの組み合わせのような脂質とすることができる。
【００９２】
好ましくは、グリセロリン脂質はホスファチジルコリンである。
【００９３】
好ましくは、バイオマーカーのホスファチジルコリンは、モノアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルコリン、及びアルキルアシルホスファチジルコリン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択されるバイオマーカーである。
【００９４】
好ましくは、ホスファチジルコリン／モノアシルホスファチジルコリン／ジアシルホスファチジルコリン／アルキルアシルホスファチジルコリンは、合計１〜５０個の炭素原子をアシル残基中に有する、又は、合計３〜５０個の炭素原子をアシル残基中に、かつ合計１〜８個の二重結合をアシル残基中に有する。
【００９５】
好ましくは、モノアシルホスファチジルコリンは、ｌｙｓｏＰＣ．ａ．Ｃ１８．１及びｌｙｓｏＰＣ．ａ．Ｃ１８．２、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００９６】
好ましくは、ジアシルホスファチジルコリンは、ＰＣ．ａａ．Ｃ２８．１、ＰＣ．ａａ．Ｃ３０．０、ＰＣ．ａａ．Ｃ３２．２、ＰＣ．ａａ．Ｃ３４．２、ＰＣ．ａａ．Ｃ３４．３、ＰＣ．ａａ．Ｃ３６．２、ＰＣ．ａａ．Ｃ３６．３、ＰＣ．ａａ．Ｃ４２．６、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００９７】
好ましくは、アルキルアシルホスファチジルコリンは、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３０．０、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３４．２、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３６．２、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３８．２、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３８．３、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００９８】
好ましくは、スフィンゴ脂質は、スフィンゴミエリンである。より好ましくは、スフィンゴミエリンは、ヒドロキシ−スフィンゴミエリン、又はより好ましくは、ＳＭ（ＯＨ）Ｃ１４：１である。
【００９９】
スフィンゴ脂質、特にスフィンゴミエリンは、アシル鎖中に総数１０〜３０個の炭素原子を有し得る、又は、アシル鎖中に総数１０〜３０個の炭素原子、及び１〜５個の二重結合を有し得る、ヒドロキシスフィンゴミエリンは、アシル残基中に総数１０〜３０個の炭素原子を有し得る。
【０１００】
アミノ酸は、アルギニン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、オルニチン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、及びバリン、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択することができる。
【０１０１】
好ましいアミノ酸は、実施例により、ＩＢＤに罹患している小児と同年齢の対照との間で、有意差ｐ＜０．００１が認められたものである。したがって、好ましいアミノ酸は、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【０１０２】
好ましいアミノ酸はアルギニンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、グリシン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【０１０３】
好ましいアミノ酸はグリシンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、ヒスチジン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【０１０４】
好ましいアミノ酸はヒスチジンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、セリン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【０１０５】
好ましいアミノ酸はセリンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、トリプトファン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【０１０６】
好ましいアミノ酸はトリプトファンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、及びフェニルアラニン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【０１０７】
好ましいアミノ酸はフェニルアラニンであり、かつ少なくとも１種の更なるバイオマーカーが、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、セリン、及びトリプトファン、又はこれらの任意の組み合わせからなるアミノ酸の群から選択される。
【０１０８】
特に好ましいのは、アルギニン、グルタミン、イソロイシン、セリン、及びスレオニン、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸である。
【０１０９】
同様に好ましいのは、上記のアミノ酸の２、３、又は４種からなる任意の組み合わせ、及び上記のアミノ酸の５種全てを含む組み合わせである。上記の組み合わせにおけるアミノ酸の任意の可能な入れ替えが、本発明によって開示されることが考慮される。
【０１１０】
バイオマーカーは、好ましくは、リン脂質及びアミノ酸を含む一組のバイオマーカーである。
【０１１１】
判定／診断方法
方法は、生体外分析法とすることができる。本発明は、被検体が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有するか否かを判定する、又は、被検体がＩＢＤを（場合により、ＩＢＤの非急性期中に）再発しやすいことを示す方法を対象とし、分離された生体試料を準備し、試料中のバイオマーカーの濃度を測定し、当該バイオマーカーの基準値よりも低い、特に有意に低い濃度は、被検体がＩＢＤを有すること、又はＩＢＤの再発を有する見込みであることを示し、バイオマーカーは脂質又はアミノ酸であることを特徴とする。
【０１１２】
ＩＢＤは、クローン病（ＣＤ）又は潰瘍性大腸炎（ＵＣ）であり得る。
【０１１３】
脂質は、コリン、コリン誘導体、スフィンゴミエリン、及びスフィンゴミエリン誘導体からなる群から選択することができる。脂質は、コリン又はスフィンゴミエリンとすることができる。
【０１１４】
特に考慮されるのは、コリングリセロリン脂質（ＰＣａａ）、エーテル結合を有するコリングリセロリン脂質（ＰＣａｅ）、及びリゾホスホコリン（ＬｙｓｏＰＣ）、並びにこれらの組み合わせからなる群から選択されるコリンである。同様に好ましいのは、上記の脂質のうちの２種からなる組み合わせであり、上記の３種の脂質による、任意の可能な組み合わせが考慮される。同様に考慮されるのは、上記のアミノ酸のうちの３種からなる組み合わせである。驚くべきことに、ＩＢＤの再発又はＩＢＤの存在が、上記のバイオマーカーを使用して予測できることが判明した。
【０１１５】
上記の方法を実施する際、脂質マーカーではない追加のマーカーを、上記の一連のマーカーに組み込むことを考慮することができる。追加のマーカーは、被検体に存在する任意の代謝産物とすることができる。特に好ましいバイオマーカーは、バイオマーカーに関する項に記載したアミノ酸又はアミノ酸の組み合わせである。
【０１１６】
この方法の精度は、少なくとも２、３、４、又は５種のバイオマーカーの濃度を測定することによって向上させることができる。更に、この方法は、１〜１０種、２〜９種、３〜８種、４〜７種、５〜６種のバイオマーカーの濃度、又は、表示された下限及び上限によって網羅される範囲内の任意の値を測定するステップを含むことができる。
【０１１７】
特に、この方法は、ＩＢＤの再発を予測するための方法である。ＩＢＤの再発は、以前に（以下の症状：腹痛、嘔吐、下痢、直腸の出血、骨盤の領域における重篤な内臓のけいれん／筋けいれん、体重減少、並びに様々な関連の愁訴、又は関節炎、壊疽性膿皮症、及び原発性硬化性胆管炎のような疾患のうちの１つにより）ＩＢＤであると診断されたことがあり、しかし、現在ではＩＢＤの症状を呈していない被検体において発生し得る。
【０１１８】
バイオマーカーは、１種類の試料又は数種類の試料において測定することができる。試料の種類は、全血、血清、又は血漿、腸壁の組織、肝臓の組織、又は腸間膜脂肪からなる群から選択することができる。あるいは、バイオマーカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０種の異なる種類の試料において測定される。ＩＢＤ又はＩＢＤの再発を示す第１のバイオマーカーの濃度の差が、第１の種類の試料中で、より顕著であり、一方、第２以降のバイオマーカーの同様の差が、第１の種類の試料と異なる試料中で、より顕著である場合、異なる試料を使用するのが賢明である。
【０１１９】
患者は、ヒトの患者とすることができる。患者は、１〜１７歳の患者（小児患者）、又は１８歳以上の患者（成人患者、好ましくは６７歳までの患者）とすることができる。
【０１２０】
患者は、ＩＢＤの急性期の患者、又はＩＢＤの非急性期の患者とすることができる。ＩＢＤの非急性期には、以下の症状がない：腹痛、嘔吐、下痢、直腸の出血、骨盤の領域における重篤な内臓のけいれん／筋けいれん、体重減少、並びに様々な関連の愁訴、又は関節炎、壊疽性膿皮症、及び原発性硬化性胆管炎のような疾患。
【０１２１】
それぞれのバイオマーカーの濃度は、基準値の濃度よりも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％低い場合がある。それぞれのバイオマーカーの濃度は、基準値よりも５％〜５０％、１０％〜４０％、２０％〜３０％、又は、表示したこれらの下限及び上限の任意の組み合わせ分だけ低い場合がある。基準値は、米国、ＥＵ、スイス、又はドイツにおける科学文献又は医療機関によって提供された値とすることができる。基準値はまた、当該の値を、ＩＢＤに罹患していないことが既知の少なくとも１、２、５、又は１０人の被検体において測定し、測定値の平均を算出することによって決定することができる。
【０１２２】
基準値は、各患者集団（小児、成人、又はその他）について個々に決定することができる。
【０１２３】
システム
上記の方法はまた、システム又はデバイスの支援によって実施することができ、方法は機械上で実施される。
【０１２４】
このように、本発明はまた、被検体が炎症性腸疾患を有するか否かを判定する、又は、ＩＢＤの再発を予測するためのシステムを対象とし、システムは、上記のバイオマーカーの濃度を測定するための手段を備え、システムはコンピュータを備え、当該コンピュータは、バイオマーカーの濃度の基準値を含むデータベースを記憶し、当該コンピュータは、被検体の試料のパラメータの測定値を受信し、かつ記憶するステップと、上記の測定されたパラメータの値を、このシステムに記憶されている基準値と比較するステップと、測定値が基準値と異なる場合に、その試料を、炎症性腸疾患を有する被検体のものとして示すステップと、測定値が基準値と異なる場合に、その試料を、炎症性腸疾患を有する被検体のものとして、又は、ＩＢＤを再発しやすい被検体のものとして示す結果を出力するステップとを、コンピュータに実行させる命令を有するソフトウェアプログラムを記憶している。
【０１２５】
バイオマーカーは、脂質又はアミノ酸とすることができる。好ましくは、少なくとも２種のバイオマーカーを測定する。好ましくは、第１のバイオマーカーは、脂質とすることができ、少なくとも１種の更なるバイオマーカーは、アミノ酸とすることができる。
【０１２６】
これらの脂質のバイオマーカーは、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、及びこれらの組み合わせのような脂質とすることができる。
【０１２７】
好ましくは、グリセロリン脂質はホスファチジルコリンである。
【０１２８】
好ましくは、バイオマーカーのホスファチジルコリンは、モノアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルコリン、及びアルキルアシルホスファチジルコリン、又はこれらの組み合わせからなる群から選択されるバイオマーカーである。
【０１２９】
好ましくは、モノアシルホスファチジルコリンは、ｌｙｓｏＰＣ．ａ．Ｃ１８．１及びｌｙｓｏＰＣ．ａ．Ｃ１８．２、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１３０】
好ましくは、ジアシルホスファチジルコリンは、ＰＣ．ａａ．Ｃ２８．１、ＰＣ．ａａ．Ｃ３０．０、ＰＣ．ａａ．Ｃ３２．２、ＰＣ．ａａ．Ｃ３４．２、ＰＣ．ａａ．Ｃ３４．３、ＰＣ．ａａ．Ｃ３６．２、ＰＣ．ａａ．Ｃ３６．３、ＰＣ．ａａ．Ｃ４２．６、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１３１】
好ましくは、アルキルアシルホスファチジルコリンは、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３０．０、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３４．２、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３６．２、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３８．２、ＰＣ．ａｅ．Ｃ３８．３、又はこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０１３２】
好ましくは、スフィンゴ脂質は、スフィンゴミエリンである。より好ましくは、スフィンゴミエリンは、ヒドロキシ−スフィンゴミエリン、又はより好ましくは、ＳＭ（ＯＨ）Ｃ１４：１である。
【０１３３】
同様に好ましいのは、上記の脂質のうちの２種からなる組み合わせであり、３、４、５、６種以上の脂質による、任意の可能な組み合わせが考慮される。同様に考慮されるのは、上記のアミノ酸のうちの３、４、又は５種からなる組み合わせである。驚くべきことに、ＩＢＤの再発又はＩＢＤの存在が、上記のバイオマーカーを使用して予測できることが判明した。
【０１３４】
上記の方法を実施する際、脂質マーカーではない追加のマーカーを考慮することができる。追加のマーカーは、被検体に存在する任意の代謝産物とすることができる。特に好ましいバイオマーカーは、バイオマーカーに関する項に記載したアミノ酸又はアミノ酸の組み合わせである。
【０１３５】
この方法の精度は、少なくとも２、３、４種のバイオマーカーの濃度、又は５種のバイオマーカーの濃度を測定することによって向上させることができる。更に、この方法は、１〜１０種、２〜９種、３〜８種、４〜７種、若しくは５〜６種のバイオマーカー、又は、表示された下限及び上限によって網羅される任意の他の範囲内の濃度を測定するステップを含むことができる。
【０１３６】
特に、この方法は、ＩＢＤの再発を予測するための方法である（被検体がＩＢＤを再発しやすいか否かを示す）。ＩＢＤの再発は、以前に（以下の症状：腹痛、嘔吐、下痢、直腸の出血、骨盤の領域における重篤な内臓のけいれん／筋けいれん、体重減少、並びに様々な関連の愁訴、又は関節炎、壊疽性膿皮症、及び原発性硬化性胆管炎のような疾患のうちの１つにより）ＩＢＤであると診断されたことのある被検体において発生し得る。
【０１３７】
バイオマーカーは、全血、血清、又は血漿、腸壁の組織、肝臓の組織、又は腸間膜脂肪からなる群から選択される１種類の試料中において測定することができる。あるいは、バイオマーカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０種の異なる種類の試料において測定される。ＩＢＤ又はＩＢＤの再発を示す第１のバイオマーカーの濃度の差が、第１の種類の試料中で、より顕著であり、一方、第２以降のバイオマーカーの同様の差が、第１の種類の試料と異なる試料中で、より顕著である場合、異なる試料を使用するのが賢明である。
【０１３８】
患者は、ヒトの患者とすることができる。患者は、１〜１７歳の患者（小児患者）、又は１８歳以上の患者（成人患者、好ましくは６７歳までの患者）とすることができる。
【０１３９】
患者は、ＩＢＤの急性期の患者、又はＩＢＤの非急性期の患者とすることができる。ＩＢＤの非急性期には、以下の症状がない：腹痛、嘔吐、下痢、直腸の出血、骨盤の領域における重篤な内臓のけいれん／筋けいれん、体重減少、並びに様々な関連の愁訴、又は関節炎、壊疽性膿皮症、及び原発性硬化性胆管炎のような疾患。
【０１４０】
それぞれのバイオマーカーの濃度は、基準値よりも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％低い場合がある。それぞれのバイオマーカーの濃度は、基準値よりも５％〜５０％、１０％〜４０％、２０％〜３０％、又は、表示したこれらの下限及び上限の任意の組み合わせ分だけ低い場合がある。基準値と測定値との差は、プログラムにより、減算によって算出することができる。マン・ホイットニーＵ検定、ｔ検定、ウェルチのｔ検定、ウィルコクソンの順位和検定、及びランダムフォレストからなる群から選択される検定のうちの１つが差を有意であると示す場合、差は有意であると判定される。基準値は、米国、ＥＵ、スイス、又はドイツにおける科学文献又は医療機関によって提供された値とすることができる。基準値はまた、当該の値を、ＩＢＤに罹患していないことが既知の少なくとも１、２、５、又は１０人の被検体において測定し、測定値の平均を算出することによって決定することができる。
【０１４１】
基準値は、各患者集団（小児、成人、又はその他）について個々に決定することができる。
【０１４２】
出力はディスプレイ上、プリントアウト上、又はデータキャリア上とすることができ、当該キャリアは、ローカルの物理的なデバイスとすることができる、又は、更なる実コンピュータ若しくは仮想コンピュータ中に含むことができる。
【０１４３】
キット
本発明はまた、本発明のバイオマーカーの濃度を測定するための試薬を含む、被検体が炎症性腸疾患を有するか否かを判定するためのキットを対象とする。
【０１４４】
試薬は、脂質又はアミノ酸の濃度の測定に使用できる。
【０１４５】
特に好ましいバイオマーカーは、バイオマーカーに関する項に記載した脂質又は脂質の組み合わせである。
【０１４６】
キットは、脂質マーカーではないバイオマーカー用の試薬を含むことができる。追加のマーカーは、被検体に存在する任意の代謝産物とすることができる。特に好ましいバイオマーカーは、バイオマーカーに関する項に記載したアミノ酸又はアミノ酸の組み合わせである。
【０１４７】
試薬は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単鎖抗体、Ｆｃフラグメントからなる群から選択することができる。試薬は、当該バイオマーカーに特異的であることを特徴とする。
【実施例】
【０１４８】
実施例１：
腸の炎症の活性化は、腸の粘膜固有層に広がり、活発に炎症性メディエーターを分泌して組織の損傷を来す、免疫細胞群の病的な活性化に左右される。免疫系のこの局所的な活性化は、次いで、ＩＢＤにおける肝臓及び腸間膜脂肪組織によって産生される、急性期の反応メディエーターによって示されるように、炎症過程の全身的な活性化をもたらす。
【０１４９】
前述の免疫／炎症の活性化の結果、腸及び全身の免疫系、腸壁、肝臓、及び腸間膜脂肪組織による代謝要求が上昇する。異なる組織の上昇した代謝要求に加え、活性化した細胞が、疾患の活動期中に、異なるパターンの代謝産物を産生する場合がある。特定の栄養不足と、異なる組織によって産生された、変化した代謝産物のプロファイルとが共に組み合わされることにより、ＩＢＤにおいては今までのところ特性が十分に解明されていない、全体的な代謝の変化が引き起こされる。実際に、全体的な代謝の変化の認識が、疾患の活性化の重要なバイオマーカー、更に、疾患の進展の予測因子となり得る。
【０１５０】
上述の可能性を考慮し、我々は、ＩＢＤの小児患者の代謝プロファイルを評価した。小児ＣＤ患者のコホートを、１２週間前向きに追跡した。患者背景及び同年齢の対照の背景を、表１に要約する。
【０１５１】
【表１】
2018503093.tif 000002
【０１５２】
ＩＢＤ患者及び同年齢の対照の血漿生化学的組成を、メタボノミクス法によって分析した。１つの方法は、製造業者の使用説明書に従い、Ｂｉｏｃｒａｔｅｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＡｂｓｏｌｕｔｅＩＤＱＴＭキットを使用することを含んだ。これらの代謝産物の濃度を、類似の年齢範囲の非ＩＢＤの小児において検出された濃度と比較した。有意差を、マン・ホイットニーＵ検定によって評価し、選択した代謝産物の結果を図１〜４に示した。代謝の差異により、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、アルギニン、グリシン、グルタミン、オルニチン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファンを含む、ほとんどのアミノ酸の循環濃度の明白な減少が実証された。この減少はまた、リゾホスホコリン、ジアシルエーテル脂質及びアシルエーテル脂質を含む、大半の脂質でも認められた。
【０１５３】
我々は、これらの提唱された代謝産物（単独又は組み合わせの）の絶対的な減少により、介入なしには、疾患の再発を来し得る、疾患の悪化を予測できるものと考える。
【０１５４】
現在のところ、我々は、血漿中のこれらの代謝産物の減少が、ＩＢＤの再発を予測できることを実証又は主張する、いかなる研究も認識していない。
【図１】
2018503093.tif 000003
【図２】
2018503093.tif 000004
【図３】
2018503093.tif 000005
【図４】
2018503093.tif 000006
【国際調査報告】
2018503093.tif 000007
2018503093.tif 000008
2018503093.tif 000009
2018503093.tif 000010