(57)【要約】ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）をＣＤ２０に結合する抗体との組合せで投与する方法が提供される。本方法は、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体を、その必要のある人、例えばがん患者に投与することを含む。本発明は、対象（例えば治療の必要な対象）に治療有効量のＣＤ３７結合剤を投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。ある特定の実施形態では、がんは、Ｂ細胞悪性疾患である。ある特定の実施形態では、がんは、白血病またはリンパ腫である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞がんを有する患者を治療するための方法であって、治療を必要とする前記患者に
それぞれ配列番号４〜９に示す、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む抗体を含むＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート、ならびに
抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片
を投与することを含む、方法。
【請求項２】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲートは、配列番号１２および１５の配列を有する抗体の、ＣＤ３７への結合を競合的に阻害する抗体を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲートは、配列番号１２に示す可変重鎖配列および配列番号１５に示す可変軽鎖配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体が、ｈｕＣＤ３７−３である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記イムノコンジュゲートが、マイタンシノイドを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記マイタンシノイドが、ＤＭ１である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記イムノコンジュゲートが、切断不可能リンカーを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記リンカーが、ＳＭＣＣである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記イムノコンジュゲートが、ＩＭＧＮ５２９である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、リツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、およびベルツズマブからなる群より選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、ベルツズマブ（ｖｅｔｕｚｕａｍｂ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブおよびオビヌツズマブからなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、オファツムマブである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、オビヌツズマブである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩ抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブでない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、オファツムマブでない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩＩ抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、相乗効果を生成する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで少なくとも４の相乗スコアを生成する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記相乗スコアが、少なくとも１０である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記相乗スコアが、少なくとも２０である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記相乗スコアが、少なくとも３０である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記相乗スコアが、少なくとも４０である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、０．５未満の組合せ指数値を有する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片の投与が、ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート単独の投与より高い毒性を生成しない、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片の投与が、ＣＤ２０に結合する前記抗体単独の投与より高い毒性を生成しない、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片の投与が、Ｒ−ＣＨＯＰの投与より高い毒性を生成しない、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片の投与が、Ｒ−ＣＨＯＰの投与より低い毒性しか生成しない、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記がんが、白血病またはリンパ腫である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記がんが、ＮＨＬを含むＢ細胞リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫および成熟Ｂ細胞新生物、例えばＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、低悪性度、中悪性度、および高悪性度ＦＬを含む濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｆｏｌｌｉｃｌｅ  ｃｅｎｔｅｒ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴタイプ、結節性および脾性タイプ）、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ならびに未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）からなる群から選択される、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記がんが、ＮＨＬである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＮＨＬが、再発性または難治性ＮＨＬである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＮＨＬが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＤＬＢＣＬが、ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＤＬＢＣＬが、ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＮＨＬが、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＮＨＬが、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＮＨＬが、濾胞性リンパ腫である、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項４１】
前記がんが、ＭＹＣを過剰発現する、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記がんが、ＢＣＬ２を過剰発現する、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記がんが、ＭＹＣおよびＢＣＬ２を過剰発現する、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体が、同時に投与される、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が別々の医薬組成物中で投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が同じ医薬組成物中で投与される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、逐次的に投与される、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記イムノコンジュゲートが、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記イムノコンジュゲートが、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記イムノコンジュゲートが、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記イムノコンジュゲートが、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約１．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記イムノコンジュゲートが、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
前記イムノコンジュゲートが、約１．４ｍｇ／ｋｇ〜約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５４】
前記イムノコンジュゲートが、約１．４ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記イムノコンジュゲートが、約２．０ｍｇ／ｋｇ〜約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５６】
前記イムノコンジュゲートが、約０．７ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５７】
前記イムノコンジュゲートが、約１．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５８】
前記イムノコンジュゲートが、約１．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５９】
前記イムノコンジュゲートが、約１．６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６０】
前記イムノコンジュゲートが、約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６１】
前記イムノコンジュゲートが、約２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６２】
前記イムノコンジュゲートが、約２．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６３】
前記イムノコンジュゲートが、約２．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６４】
前記イムノコンジュゲートが、約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項４８に記載の方法。
【請求項６５】
前記イムノコンジュゲートが、約３．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記イムノコンジュゲートが、３週毎に１回投与される、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記イムノコンジュゲートが、２１日周期の１日目に投与される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、約３７５ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、毎週１回投与される、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、３週スケジュールの１週目の１日目に投与される、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、約５００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、２８日毎に１回投与される、請求項１〜６５および６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
ＣＤ３７に結合する前記イムノコンジュゲート、およびＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、静脈内投与される、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
さらに前記患者に副腎皮質ステロイドを投与することを含む、請求項１〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記副腎皮質ステロイドが、前記イムノコンジュゲートの前記投与前に投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記副腎皮質ステロイドが、前記イムノコンジュゲートの投与の約３０〜約６０分前に投与される、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記副腎皮質ステロイドが、周囲注入で投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
前記副腎皮質ステロイドが、前記イムノコンジュゲートの前記投与中に投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
前記副腎皮質ステロイドが、前記イムノコンジュゲートの投与の約１日〜約４日後に少なくとも１回の追加回数、投与される、請求項７５、７６、または７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記副腎皮質ステロイドが、前記イムノコンジュゲートの投与の約１日〜約３日後に少なくとも１回の追加回数、投与される、請求項７５、７６、または７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記副腎皮質ステロイドが、少なくとも２回の追加回数、投与される、請求項７５、７６、または７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記副腎皮質ステロイドがさらに、前記イムノコンジュゲートの投与後２日目および３日目に投与される、請求項７５、７６、または７８に記載の方法。
【請求項８３】
前記副腎皮質ステロイドが、前記イムノコンジュゲートの前記投与後に投与される、請求項７４に記載の方法。
【請求項８４】
前記副腎皮質ステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベクロメタゾン（ｂｅｃｌａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、およびトリアムシノロンからなる群より選択される、請求項７４〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記副腎皮質ステロイドが、デキサメタゾンである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
さらに、前記患者に増殖因子を投与することを含む、請求項１〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記増殖因子は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム、およびペグフィルグラスチムからなる群より選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記増殖因子が、Ｇ−ＣＳＦである、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記増殖因子が、周期初期〜周期中期に投与される、請求項８６〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記増殖因子が、前記イムノコンジュゲートの投与後１日目〜１２日目に少なくとも１回投与される、請求項８６〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記がんが、ＣＤ３７を発現する、請求項１〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記がんが、ＣＤ２０を発現する、請求項１〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記がんが、ＣＤ３７およびＣＤ２０を発現する、請求項１〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記イムノコンジュゲートが、ＩＭＧＮ５２９であり、前記イムノコンジュゲートが、３週毎に１回約０．７ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、リツキシマブであり、ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片が、３週スケジュールの１週目の１日目に約３７５ｍｇ／ｍ２の用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項９５】
医薬組成物を含むキットであって、前記キットが
それぞれ配列番号４〜９に示す、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む抗体を含むＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート、ならびに
前記イムノコンジュゲートおよび抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片を投与するための指示
を含む、キット。
【請求項９６】
医薬組成物を含むキットであって、前記キットが
抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片ならびに
前記抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片ならびにそれぞれ配列番号４〜９に示す、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む抗体を含むＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲートを投与するための指示
を含む、キット。
【請求項９７】
前記イムノコンジュゲートが、ＩＭＧＮ５２９である、請求項９５または９６に記載のキット。
【請求項９８】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、およびベルツズマブ（ｖｅｔｕｚｕａｍｂ）からなる群より選択される、請求項９５〜９７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項９９】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブ、およびオビヌツズマブからなる群より選択される、請求項９８に記載のキット。
【請求項１００】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブである、請求項９９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１０１】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩ抗体またはその抗原結合性断片であるである、請求項９５〜９７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１０２】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩＩ抗体またはその抗原結合性断片であるである、請求項９５〜９７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項１０３】
がんを有するヒト対象に指示を与える方法であって、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲートおよびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片でのがん治療を受けるように指示を提供することを含む、方法。
【請求項１０４】
前記イムノコンジュゲートが、ＩＭＧＮ５２９である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、およびベルツズマブ（ｖｅｔｕｚｕａｍｂ）からなる群より選択される、請求項１０３または１０４に記載のキット。
【請求項１０６】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブ、およびオビヌツズマブからなる群より選択される、請求項１０３または１０４に記載のキット。
【請求項１０７】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブである、請求項１０３または１０４に記載のキット。
【請求項１０８】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩ抗体またはその抗原結合性断片であるである、請求項１０３または１０４に記載のキット。
【請求項１０９】
ＣＤ２０に結合する前記抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩＩ抗体またはその抗原結合性断片であるである、請求項１０３または１０４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
先の出願への言及
この出願は、２０１５年１２月４日に出願された米国仮出願第６２／２６３，４４９号および２０１５年６月８日に出願された米国仮出願第６２／１７２，６７２号（これらの両方は、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
ＥＦＳ−ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表への言及
電子的に提出された配列表（名称：２９２１＿０７６ＰＣ０２＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：５４，４４０バイト；および作成日：２０１６年６月２日）の内容は、その全体が参考として本明細書に援用される。
【０００３】
本発明の分野は概して、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との相乗的組合せ、およびがんの治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
がんは、先進諸国における主な死亡原因の１つであり、米国だけでも百万人を超える人々が、がんと診断され、１年間に５００，０００人が死亡する。全体で、３人に１人超が生涯の間に、ある形態のがんを発達すると見積もられる。
【０００５】
白血球抗原ＣＤ３７（「ＣＤ３７」）は、ＧＰ５２−４０、テトラスパニン−２６、またはＴＳＰＡＮ２６としても公知であり、プレＢ細胞段階から末梢成熟Ｂ細胞段階中のＢ細胞上で発現されるが、形質細胞へ最終分化すると存在しなくなる（Ｌｉｎｋら、１９８７年、Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．、１５２巻：１２〜２１頁）。ＣＤ３７抗原は、Ｔ細胞、骨髄系細胞、および顆粒球上では弱く発現されるのみである（Ｓｃｈｗａｒｔｚ−Ａｌｂｉｅｚら、１９８８年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４０巻（３号）９０５〜９１４頁）。しかしながら、また、ＣＤ３７は、悪性Ｂ細胞、例えば非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）において見られる悪性Ｂ細胞上で発現される（Ｍｏｏｒｅら、１９８６年、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３７巻（９号）：３０１３〜８頁）。この発現プロファイルは、ＣＤ３７がＢ細胞悪性疾患に対する、見込みがある療法標的となることを示唆する。
また、ＣＤ２０は、膜貫通４ドメインサブファミリーＡメンバー１（ＭＳ４Ａ１）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、および白血球表面抗原Ｌｅｕ−１６としても公知であり、Ｂ細胞上でも発現される。リツキシマブ、オビヌツズマブ、およびオファツムマブを含む、いくつかの抗ＣＤ２０抗体は、ある特定のＢ細胞がんの治療に対して適応となる。しかしながら、多くの患者における多くのＢ細胞がんは、これらの治療に応答せず、初期に頻繁に応答するがんでさえも、再発するか、または続く療法に応答しない。例えば、転写因子ＭＹＣおよび抗アポトーシスタンパク質ＢＣＬ２を過剰発現するがんは、予後が不良であることを伴う。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｌｉｎｋら、Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．（１９８７年）１５２巻：１２〜２１頁
【非特許文献２】Ｓｃｈｗａｒｔｚ−Ａｌｂｉｅｚら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８年）１４０巻（３号）９０５〜９１４頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
Ｂ細胞がんを有する多くの患者の予後が不良であるままであることを考えると、Ｂ細胞悪性疾患のより有効な療法薬について明らかな未だ対処されていない医学的要求がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片との組合せが、本明細書で提供される。また、かかる組合せを使用してがんを有する患者を治療する方法が、本明細書で提供される。以下により詳細に説明するように、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片との組合せの抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の使用は、腫瘍に対して相乗的効力をもたらすことができる。抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片は、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の効力を増強することができ、および／または抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、抗ＣＤ２０抗体の効力を増強することができる。抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片との組合せを使用することにより、それらの効力の合計は、より少ない用量および／またはより少ない頻度の用量の抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および／または抗ＣＤ２０抗体もしくはその抗原結合性断片を使用した場合でさえも、達成することができる。さらに、この組合せは、抗ＣＤ２０抗体もしくはその抗原結合性断片単独、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）単独、および／または抗ＣＤ２０抗体もしくはその抗原結合性断片もしくは抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）のいずれか以下の毒性しか生成しない場合がある。
【０００９】
一例では、Ｂ細胞がんを有する患者を治療するための方法は、それを必要とする前記患者に、それぞれ配列番号４〜９に示す、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む抗体を含むＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート；ならびに抗ＣＤ２０抗体を投与することを含む。
【００１０】
一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲートは、配列番号１２および１５の配列を有する抗体の、ＣＤ３７への結合を競合的に阻害する抗体を含む。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲートは、配列番号１２に示す可変重鎖配列および配列番号１５に示す可変軽鎖配列を含む。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲートは、配列番号２２に示す可変重鎖配列および配列番号１５に示す可変軽鎖配列を含む。一例では、抗体は、ｈｕＣＤ３７−３である。
【００１１】
一例では、イムノコンジュゲートは、マイタンシノイドを含む。一例では、マイタンシノイドは、ＤＭ１である。
【００１２】
一例では、イムノコンジュゲートは、切断不可能なリンカーを含む。一例では、リンカーは、ＳＭＣＣである。
【００１３】
一例では、イムノコンジュゲートは、ＩＭＧＮ５２９である。
【００１４】
一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、およびベルツズマブ（ｖｅｔｕｚｕａｍｂ）からなる群より選択される。
【００１５】
一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、ベルツズマブ（ｖｅｔｕｚｕａｍｂ）である。
【００１６】
一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブおよびオビヌツズマブからなる群より選択される。
【００１７】
一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、オビヌツズマブである。
【００１８】
一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、およびオファツムマブからなる群より選択される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブである。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、オファツムマブである。  
【００１９】
一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩ抗体またはその抗原結合性断片である。
【００２０】
一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブではない。一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブと同一のエピトープには結合しない。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、オファツムマブではない。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩＩ抗体またはその抗原結合性断片である。
【００２１】
一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、相乗効果を生成する。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで少なくとも４の相乗スコアを生成する。一例では、相乗スコアは、少なくとも１０である。一例では、相乗スコアは、少なくとも２０である。一例では、相乗スコアは、少なくとも３０である。一例では、相乗スコアは、少なくとも４０である。
【００２２】
一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、０．５未満の組合せ指数値を有する。
【００２３】
一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片の投与は、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）単独の投与より高い毒性を生成しない。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片の投与は、ＣＤ２０に結合する抗体単独の投与より高い毒性を生成しない。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片の投与は、Ｒ−ＣＨＯＰの投与より高い毒性を生成しない。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片の投与は、Ｒ−ＣＨＯＰの投与より低い毒性しか生成しない。
【００２４】
一例では、がんは、Ｂ細胞悪性疾患である。一例では、がんは、白血病またはリンパ腫である。一例では、がんは、ＮＨＬを含むＢ細胞リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫および成熟Ｂ細胞新生物、例えばＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、低悪性度、中悪性度、および高悪性度ＦＬを含む濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｆｏｌｌｉｃｌｅ  ｃｅｎｔｅｒ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴタイプ、結節性および脾性タイプ）、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ならびに未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）からなる群より選択される。一例では、がんは、ＮＨＬである。一例では、ＮＨＬは、再発性または難治性ＮＨＬである。一例では、ＮＨＬは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。一例では、ＤＬＢＣＬは、ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬである。一例では、ＤＬＢＣＬは、ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬである。一例では、ＮＨＬは、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。一例では、ＮＨＬは、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）である。一例では、ＮＨＬは、濾胞性リンパ腫である。
【００２５】
一例では、がんは、ＭＹＣを過剰発現する。一例では、がんは、ＢＣＬ２を過剰発現する。一例では、がんは、ＭＹＣおよびＢＣＬ２を過剰発現する。
【００２６】
一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、同時に投与される。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、別個の医薬組成物で投与される。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、同一の医薬組成物で投与される。一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、連続して投与される。
【００２７】
一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約１．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約０．７ｍｇ／ｋｇ〜約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約１．４ｍｇ／ｋｇ〜約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約１．４ｍｇ／ｋｇ〜約２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約２．０ｍｇ／ｋｇ〜約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約０．７ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約１．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約１．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約１．６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約２．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約２．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約２．４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約２．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、約３．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００２８】
一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、３週毎に１回投与される。一例では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、２１日周期の１日目に投与される。
【００２９】
一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、約３７５ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、毎週１回投与される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、３週スケジュールの１週目の１日目に投与される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、約５００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、２８日毎に１回投与される。
【００３０】
一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、静脈内投与される。
【００３１】
一例では、本方法はさらに、患者に副腎皮質ステロイドを投与することを含む。一例では、副腎皮質ステロイドは、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与前に投与される。一例では、副腎皮質ステロイドは、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約３０〜約６０分前に投与される。一例では、副腎皮質ステロイドは、周囲注入で（ｐｅｒｉ−ｉｎｆｕｓｉｏｎａｌｌｙ）投与される。一例では、副腎皮質ステロイドは、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中に投与される。一例では、副腎皮質ステロイドは、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約１日〜約４日後に少なくとも１回の追加回数、投与される。一例では、副腎皮質ステロイドは、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約１日〜約３日後に少なくとも１回の追加回数、投与される。一例では、副腎皮質ステロイドは、少なくとも２回の追加回数、投与される。一例では、副腎皮質ステロイドはさらに、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与後２日目および３日目に投与される。一例では、副腎皮質ステロイドは、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与後に投与される。一例では、副腎皮質ステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベクロメタゾン（ｂｅｃｌａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、およびトリアムシノロンからなる群より選択される。一例では、副腎皮質ステロイドは、デキサメタゾンである。
【００３２】
一例では、さらなるものは、患者に増殖因子を投与することを含む。一例では、増殖因子は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、フィルグラスチム、およびペグフィルグラスチムからなる群より選択される。一例では、増殖因子は、Ｇ−ＣＳＦである。一例では、増殖因子は、周期初期〜周期中期に投与される。一例では、増殖因子は、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与後１日目〜１２日目に少なくとも１回投与される。
【００３３】
一例では、がんは、ＣＤ３７を発現する。一例では、がんは、ＣＤ２０を発現する。一例では、がんは、ＣＤ３７およびＣＤ２０を発現する。
【００３４】
一例では、イムノコンジュゲートはＩＭＧＮ５２９であり、イムノコンジュゲートは、３週毎に１回約０．７ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブであり、かつＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、３週スケジュールの１週目の１日目に約３７５ｍｇ／ｍ２の用量で投与される。
【００３５】
一例では、キットは、それぞれ配列番号４〜９に示す、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む抗体を含むＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲートを含む医薬組成物；ならびにイムノコンジュゲートおよび抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片を投与するための指示を含む。一例では、キットは、抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片を含む医薬組成物；ならびに抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合性断片、およびそれぞれ配列番号４〜９に示すＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、およびＶＬ  ＣＤＲ３配列を含む抗体を含むＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲートを投与するための指示を含む。一例では、イムノコンジュゲートは、ＩＭＧＮ５２９である。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、およびベルツズマブ（ｖｅｔｕｚｕａｍｂ）からなる群より選択される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブおよびオビヌツズマブからなる群より選択される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブである。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩ抗体またはその抗原結合性断片である。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩＩ抗体またはその抗原結合性断片である。
【００３６】
一例では、がんを有するヒト対象に指示を与える方法は、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）およびＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片でのがん治療を受けるように指示を提供することを含む。一例では、イムノコンジュゲートは、ＩＭＧＮ５２９である。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、およびベルツズマブ（ｖｅｔｕｚｕａｍｂ）からなる群より選択される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブ、オファツムマブ、およびオビヌツズマブからなる群より選択される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブおよびオファツムマブからなる群より選択される。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、リツキシマブである。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩ抗体またはその抗原結合性断片である。一例では、ＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片は、タイプＩＩ抗体またはその抗原結合性断片である。
【００３７】
一例では、ＣＤ３７に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）とＣＤ２０に結合する抗体またはその抗原結合性断片との組合せの使用は、実施例１〜１１および図１〜１７に示すように、効力、相乗作用、および／または毒性の低減を達成する。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】図１のパネルＡ〜Ｆは、ＤＯＨＨ２（パネルＡ）、ＳＵＤＨＬ４（パネルＢ）、Ｕ２９３２（パネルＣ）、ＧＲＡＮＴＡ−５１９（パネルＤ）、ＪＶＭ２（パネルＥ）、およびＲａｍｏｓ（パネルＦ）細胞におけるＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブから得られたパーセント増殖阻害を示す。
【００３９】
【図２】図２のパネルＡ〜Ｆは、ＤＯＨＨ２（パネルＡ）、ＳＵＤＨＬ４（パネルＢ）、Ｕ２９３２（パネルＣ）、ＧＲＡＮＴＡ−５１９（パネルＤ）、ＪＶＭ２（パネルＥ）、およびＲａｍｏｓ（パネルＦ）細胞におけるＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブを使用して得られたアイソボログラムを示す。破線は相加性を示し、実線は増殖阻害（％）を示す。
【００４０】
【図３】図３のパネルＡおよびＢは、ＯＣＩ−Ｌｙ１８細胞においてＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブを使用して得られた、それぞれ、パーセント増殖阻害およびアイソボログラムを示す。図３のパネルＢでは、破線は相加性を示し、実線は増殖阻害（％）を示す。
【００４１】
【図４】図４は、様々な細胞株についてＩＭＧＮ５２９（黒色のバー）、ｈｕＣＤ３７−３（灰色のバー）、またはＤＭ１−Ｍｅ（白色のバー）との組合せでリツキシマブを使用して得られた相乗スコアを示す。
【００４２】
【図５】図５は、Ｆａｒａｇｅ生存モデルにおけるＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せの効力を示す。マウスを（ｉ）７日目に５ｍｇ／ｋｇのＩＭＧＮ５２９、（ｉｉ）７日目に２．５ｍｇ／ｋｇ用量のＩＭＧＮ５２９、（ｉｉｉ）７および２１日目に１０ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、（ｉｖ）７日目に５ｍｇ／ｋｇのＩＭＧＮ５２９ならびに７、１４、および２１日目に１０ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、（ｖ）７日目に２．５ｍｇ／ｋｇのＩＭＧＮ５２９ならびに７、１４、および２１日目に１０ｍｇ／ｋｇのリツキシマブ、または（ｖｉ）ビヒクル（陰性対照）で処置した。
【００４３】
【図６】図６は、ＳＵ−ＤＨＬ−４  ＤＬＢＣＬリンパ腫異種移植片を有するマウスを、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＩＭＧＮ５２９、リツキシマブ、ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せ（Ｒ＋ＩＭＧＮ５２９）、またはＲ−ＣＨＯＰで処置した結果を示す。Ｔ／Ｃ％は、腫瘍増殖阻害を表す。ＣＲは、完全応答を示す。ＴＦＳは、無腫瘍生存（ｔｕｍｏｒ  ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）を示し、ＢＷＬは、体重減少を示す。
【００４４】
【図７】図７は、ＤｏＨＨ２  ＦＬ異種移植片を有するマウスを、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＩＭＧＮ５２９、リツキシマブ、ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せ（Ｒ−ＩＭＧＮ５２９）、またはＲ−ＣＨＯＰで処置した結果を示す。Ｔ／Ｃ％は、腫瘍増殖阻害を表す。ＰＲは、部分応答を示す。ＣＲは、完全応答を示す。ＴＦＳは、無腫瘍生存を示す。ＬＣＫは、対数細胞殺滅（ｌｏｇ  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌｉｎｇ）を示し、ＢＷＬは、体重減少を示す。
【００４５】
【図８】図８のパネルＡ〜Ｅは、ｈｕＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（陰性対照）で処理した細胞における活性と比較した、リツキシマブ、ｈｕＣＤ３７−３抗体、ＩＭＧＮ５２９、ｈｕＣＤ３７−３抗体とリツキシマブとの組合せ、ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せ、またはスタウロスポリン（陽性対照）で処理した細胞におけるカスパーゼ３／７活性を示す。試験した細胞は、ＤＯＨＨ２（パネルＡ）、ＳＵ−ＤＨＬ−４（パネルＢ）、Ｕ２９３２（パネルＣ）、ＯＣＩ−Ｌｙ７（パネルＤ）、およびＦａｒａｇｅ（パネルＥ）細胞であった。
【００４６】
【図９】図９は、単一の薬剤（白色のバーのＩＭＧＮ５２９単独および灰色のバーのリツキシマブ単独）の活性と比較した、ＮＨＬ細胞株のパネルにおけるＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せ（黒色のバー）についての、細胞増殖阻害および相乗スコアのグラフを示す。
【００４７】
【図１０−１】図１０のパネルＡ〜Ｅは、様々な濃度のリツキシマブおよびＩＭＧＮ５２９での、ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せで処理した細胞株におけるパーセント増殖阻害を示す。試験した細胞は、Ｕ２９３２（パネルＡ）、ＯＣＩ−Ｌｙ−７（パネルＢ）、Ｆａｒａｇｅ（パネルＣ）、ＤＯＨＨ２（パネルＤ）、ＯＣＩ−Ｌｙ−１０（パネルＥ）であった。
【図１０−２】図１０のパネルＡ〜Ｅは、様々な濃度のリツキシマブおよびＩＭＧＮ５２９での、ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せで処理した細胞株におけるパーセント増殖阻害を示す。試験した細胞は、Ｕ２９３２（パネルＡ）、ＯＣＩ−Ｌｙ−７（パネルＢ）、Ｆａｒａｇｅ（パネルＣ）、ＤＯＨＨ２（パネルＤ）、ＯＣＩ−Ｌｙ−１０（パネルＥ）であった。
【００４８】
【図１１】図１１のパネルＡ〜Ｈは、様々な濃度のＩＭＧＮ５２９単独、リツキシマブ単独、またはＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せで処理した細胞における、カスパーゼ３／７活性化（パネルＡ〜Ｄ）およびＰＡＲＰ活性化（パネルＥ〜Ｈ）を示す。試験した細胞は、Ｕ２９３２（パネルＡおよびＥ）、ＯＣＩ−Ｌｙ７（パネルＢおよびＦ）、ＳＵ−ＤＨＬ−４（パネルＣおよびＧ）、ＤＯＨＨ−２（パネルＤおよびＨ）であった。
【００４９】
【図１２】図１２は、Ｕ２９３２  ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬ異種移植片を有するマウスを、ビヒクル（ＰＢＳ、陰性対照）、ＩＭＧＮ５２９（１０ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇで）、リツキシマブ（１０ｍｇ／ｋｇで）、ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せ（１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＭＧＮ５２９または５ｍｇ／ｋｇ  ＩＭＧＮ５２９のいずれかで）、またはＲ−ＣＨＯＰで処置した結果を示す。Ｔ／Ｃ％は、腫瘍増殖阻害を表す。ＰＲは、部分応答を示す。ＣＲは、完全応答を示す。
【００５０】
【図１３】図１３のパネルＡ〜Ｂは、１ｎＭ  ＩＭＧＮ５２９および２０μｇ／ｍＬリツキシマブの、単独または組合せで処理したＤＯＨＨ２およびＵ２９３２細胞における、抗アポトーシスタンパク質（パネルＡ）およびＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ軸と関連付けられるタンパク質（パネルＢ）の発現を示す。
【００５１】
【図１４】図１４は、ＯＣＩ−Ｌｙ１８二重ヒットＤＬＢＣＬ腫瘍異種移植片を有するマウスを、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＩＭＧＮ５２９、リツキシマブ、またはＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せ（Ｒ−ＩＭＧＮ５２９）で処置した結果を示す。Ｔ／Ｃ％は、腫瘍増殖阻害を表し、ＴＦＳは、無腫瘍生存を示し、ＬＣＫは、対数細胞殺滅を示し、ＢＷＬは、体重減少を示す。
【００５２】
【図１５】図１５は、単独またはＢ細胞標的化もしくは非標的化抗体との組合せの、ＣＤ３７細胞表面発現（細胞当たりの結合した抗体（ＡＢＣ））を、ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞について３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３処理＋／−抗ＣＤ１９抗体、リツキシマブ、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ２２抗体、または非標的化ＩｇＧ抗体（ｃｈＫＴＩ）により測定して示す。
【００５３】
【図１６】図１６は、リツキシマブ、Ｂ細胞標的化抗体（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２）、またはｃｈＫＴＩ抗体の共処理（ｃｏ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を伴う、プロセシングされた３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体の量を示す。
【００５４】
【図１７】図１７のパネルＡ〜Ｂは、リツキシマブおよび他の抗ＣＤ２０抗体（オファツムマブおよびオビヌツズマブ）で処理した場合の抗ＣＤ３７抗体ｈｕＣＤ３７−３、ならびにｈｕＣＤ３７−３抗体および抗ＣＤ１９抗体で処理した場合のリツキシマブの内部移行の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
本発明は、ＣＤ３７結合イムノコンジュゲートとＣＤ２０結合抗体との組合せ、およびその使用を提供する。
【００５６】
Ｉ．定義
本発明の理解を促進するために、いくつかの用語および句を以下に定義する。
【００５７】
「ＣＤ３７」という用語は、本明細書で使用されるとき、別に示されない限り、任意の天然ＣＤ３７ポリペプチドを指す。また、ＣＤ３７は、ＧＰ５２−４０、白血球抗原ＣＤ３７、およびテトラスパニン−２６とも呼ばれる。「ＣＤ３７」という用語は、「全長の」プロセシングされていないＣＤ３７ポリペプチド、および細胞内でのプロセシングから生じるＣＤ３７ポリペプチドの任意の形態またはアイソフォームを包含する。また、この用語は、ＣＤ３７ポリペプチドの天然に存在する改変体、例えばスプライス改変体および対立遺伝子改変体によりコードされるものを包含する。本明細書で説明するＣＤ３７ポリペプチドは、様々な供給源から、例えばヒト組織の種類から、もしくは別の供給源から単離するか、または組換えもしくは合成法により調製することができる。具体的に示される場合、「ＣＤ３７」は、ＣＤ３７ポリペプチドをコードする核酸を指すために使用することができる。
【００５８】
「ＣＤ２０」という用語は、本明細書で使用されるとき、別に示されない限り、任意の天然ＣＤ２０ポリペプチドを指す。また、ＣＤ２０は、膜貫通４ドメインサブファミリーＡメンバー１（ＭＳ４Ａ１）、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、および白血球表面抗原Ｌｅｕ−１６とも呼ばれる。「ＣＤ２０」という用語は、「全長の」プロセシングされていないＣＤ２０ポリペプチド、および細胞内でのプロセシングから生じるＣＤ２０ポリペプチドの任意の形態またはアイソフォームを包含する。また、この用語は、ＣＤ２０ポリペプチドの天然に存在する改変体、例えばスプライス改変体および対立遺伝子改変体によりコードされるものを包含する。本明細書で説明するＣＤ２０ポリペプチドは、様々な供給源から、例えばヒト組織の種類から、もしくは別の供給源から単離するか、または組換えもしくは合成法により調製することができる。具体的に示される場合、「ＣＤ２０」は、ＣＤ２０タンパク質をコードする核酸を指すために使用することができる。
【００５９】
「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を通して、標的、例えばタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または上記のものの組合せを認識し、特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、抗体が所望の生物学的活性を示す限り、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、多特異性抗体、例えば少なくとも２つの無傷の抗体から生産した二重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、および任意の他の改変した免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと呼ばれるそれらの重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、免疫グロブリンのいずれかの５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）のものである場合がある。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる、周知のサブユニット構造および三次元配置を有する。抗体は、そのままであってもよく、毒素、放射性同位体等の他の分子にコンジュゲートしてもよい。
【００６０】
「抗体断片」という用語は、無傷の抗体の一部を指す。「抗原結合性断片」は、抗原に結合する無傷の抗体の一部を指す。抗原結合性断片は、無傷の抗体の抗原決定可変領域を含有する場合がある。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片、直鎖抗体、ならびに単鎖抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６１】
「ブロッキング」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原、例えばＣＤ３７またはＣＤ２０の生物学的活性を阻害または低減する抗体である。一部の実施形態では、ブロッキング抗体またはアンタゴニスト抗体は、実質的にまたは完全に、抗原の生物学的活性を阻害する。生物学的活性は、１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはさらに１００％低減することができる。
【００６２】
「抗ＣＤ３７抗体」または「ＣＤ３７に結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ３７を標的化することにおける診断および／または療法剤として有用であるのに十分なアフィニティでＣＤ３７に結合することができる抗体を指す。無関係の非ＣＤ３７タンパク質への抗ＣＤ３７抗体の結合度は、例えば放射免疫測定法（ＲＩＡ）により測定すると、ＣＤ３７への抗体の結合の約１０％未満である場合がある。ある特定の実施形態では、ＣＤ３７に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。同様に、「抗ＣＤ２０抗体」または「ＣＤ２０に結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ２０を標的化することにおける診断および／または療法剤として有用であるのに十分なアフィニティでＣＤ２０に結合することができる抗体を指す。無関係の非ＣＤ２０タンパク質への抗ＣＤ２０抗体の結合度は、例えば放射免疫測定法（ＲＩＡ）により測定すると、ＣＤ２０への抗体の結合の約１０％未満である場合がある。ある特定の実施形態では、ＣＤ２０に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００６３】
「モノクローナル抗体」は、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な認識および結合に関連する均質な抗体集団を指す。これは、典型的に様々な抗原決定基を対象とする様々な抗体を含むポリクローナル抗体と対照的である。「モノクローナル抗体」という用語は、無傷のモノクローナル抗体および全長モノクローナル抗体の両方、ならびに抗体断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）突然変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む任意の他の改変免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、およびトランスジェニック動物による様式を含むが、これらに限定されない、任意の数の様式で作製されたかかる抗体を指す。
【００６４】
「ヒト化抗体」という用語は、最小限の非ヒト（例えばマウス）配列を含有する、特異的免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはその断片である、非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。典型的に、ヒト化抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、アフィニティ、および能力を有する非ヒト種（例えばマウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲからの残基により置き換えられている（「ＣＤＲ移植」）ヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓら、１９８６年、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２〜５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８年、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２７頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９巻：１５３４〜１５３６頁）。一部の場合、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、所望の特異性、アフィニティ、および能力を有する非ヒト種からの抗体の対応する残基で置き換えられる。ヒト化抗体はさらに、抗体の特異性、アフィニティ、および／または能力を改良し、最適化するために、Ｆｖフレームワーク領域内、および／または置き換えられた非ヒト残基内のいずれかの追加の残基の置換により改変することができる。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てを含有する、少なくとも１つ、および典型的には２つまたは３つの可変ドメインの実質的に全てを含み、一方で、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の領域である。また、ヒト化抗体は、典型的にヒト免疫グロブリンの定常領域またはドメインである免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む場合がある。ヒト化抗体を生産するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｒｏｇｕｓｋａら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ、９１巻（３号）：９６９〜９７３頁（１９９４年）；およびＲｏｇｕｓｋａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、９巻（１０号）：８９５〜９０４頁（１９９６年）で説明されている。一部の実施形態では、「ヒト化抗体」は、再表面化抗体である。
【００６５】
抗体の「可変領域」は、単独または組合せいずれかの、抗体軽鎖の可変領域、または抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖および軽鎖の可変領域の各々は、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなり、超可変領域としても公知の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）により接続されている。各鎖内のＣＤＲは、ＦＲにより極めて接近して保持されており、他の鎖からのＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技術：（１）交差種配列可変性に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、（第５版、１９９１年、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．））；および（２）抗原抗体複合体の結晶学的研究に基づいたアプローチ（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら、（１９９７年）、Ｊ．  Ｍｏｌｅｃ．  Ｂｉｏｌ．、２７３巻：９２７〜９４８頁）がある。加えて、これらの２つのアプローチの組合せは、ときにはＣＤＲを決定するために本分野で使用される。
【００６６】
Ｋａｂａｔ番号付けシステムは一般的に、可変ドメインの残基（およそ軽鎖の残基１〜１０７および重鎖の残基１〜１１３）を言及するときに使用される（例えば、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．（１９９１年））。
【００６７】
Ｋａｂａｔのアミノ酸位置番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．（１９９１年）における、収集された抗体の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインについて使用される番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを使用して、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＣＤＲの短縮またはこれらへの挿入に対応する、より少ないまたは追加のアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸インサート（Ｋａｂａｔに従って残基５２ａ）、および重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（Ｋａｂａｔに従って例えば残基８２ａ、８２ｂ、および８２ｃ等）を含むことができる。残基のＫａｂａｔ番号付けは、所与の抗体について、抗体配列と「標準」Ｋａｂａｔ番号付け配列とのホモロジー領域での整列により、決定することができる。Ｃｈｏｔｈｉａは、その代わりに、構造ループの位置を指す（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年））。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、Ｋａｂａｔ番号付けの慣例を使用して番号付けすると、ループの長さによってＨ３２〜Ｈ３４の間で変動する（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームが、Ｈ３５ＡおよびＨ３５Ｂに挿入を置くためであり；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終了し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終了し；３５Ａおよび３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終了する）。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷案であり、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ  ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。
【表Ａ】
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【００６８】
「ヒト抗体」という用語は、ヒトにより生成される抗体、または本分野で公知の任意の技術を使用して作製されるヒトにより生成される抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。このヒト抗体の定義は、無傷もしくは全長の抗体、その断片、ならびに／または少なくとも１つのヒト重鎖および／もしくは軽鎖ポリペプチドを含む抗体、例えばマウス軽鎖およびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体を含む。
【００６９】
「キメラ抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つまたはそれ超の種に由来する抗体を指す。典型的に、軽鎖および重鎖両方の可変領域は、所望の特異性、アフィニティ、および能力を有する哺乳動物の１つの種（例えばマウス、ラット、ウサギ等）に由来する抗体の可変領域に対応し、一方で、定常領域は、別の種での免疫応答を誘発することを避けるためにその種（通常ヒト）に由来する抗体の配列に相同である。
【００７０】
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、本明細書で相互交換可能に使用され、特定の抗体が認識し、特異的に結合することができる抗原の部分を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは、隣接するアミノ酸、およびタンパク質の三次フォールディングにより並置される非隣接アミノ酸の両方から形成される場合がある。隣接するアミノ酸から形成されたエピトープは典型的に、タンパク質変性に際して保持されるが、一方で、三次フォールディングにより形成されたエピトープは典型的に、タンパク質変性に際して失われる。エピトープは典型的に、独特の空間的コンフォメーションに少なくとも３個の、より通常には少なくとも５個または８〜１０個のアミノ酸を含む。
【００７１】
「結合アフィニティ」は一般的に、分子（例えば抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合相互作用の総計の強さを指す。別に示されない限り、本明細書で使用されるとき、「結合アフィニティ」は、結合ペアのメンバー（例えば抗体および抗原）の間の１：１の相互作用を反映する本質的な結合アフィニティを指す。分子Ｘの、そのパートナーＹについてのアフィニティは一般的に、解離定数（Ｋｄ）により表すことができる。アフィニティは、本明細書で説明する方法を含む、本分野で公知の通常の方法により測定することができる。低アフィニティ抗体は一般的に、抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があり、一方で、高アフィニティ抗体は一般的に、抗原により速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合アフィニティを測定する様々な方法は、本分野で公知であり、そのうちのいずれかを本発明の目的のために使用することができる。特定の例示的な実施形態を以下に説明する。
【００７２】
「またはそれより優れた」は、結合アフィニティについて言及するために本明細書で使用されるとき、分子とその結合パートナーとの間のより強い結合を指す。「またはそれより優れた」は、本明細書で使用されるとき、より小さい数のＫｄ値により表される、より強い結合を指す。例えば、「０．６ｎＭまたはそれより優れた」抗原についてのアフィニティを有する抗体で、抗原についての抗体のアフィニティは、＜０．６ｎＭ、すなわち、０．５９ｎＭ、０．５８ｎＭ、０．５７ｎＭ等、または０．６ｎＭ未満の任意の値である。
【００７３】
「特異的に結合する」により、一般的に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、およびその結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間のいくらかの相補性を必要とすることを意味する。この定義に従って、抗体は、それがランダムな無関係のエピトープに結合するより容易に、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合するとき、そのエピトープに「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、ある特定の抗体がある特定のエピトープに結合する相対的アフィニティを認定するために本明細書で使用される。例えば、抗体「Ａ」は、所与のエピトープについて抗体「Ｂ」より高い特異性を有すると見なすことができるか、または抗体「Ａ」は、それが関連エピトープ「Ｄ」について有するより高い特異性でエピトープ「Ｃ」に結合すると言うことができる。
【００７４】
「優先的に結合する」により、抗体が関連する同様の相同な、または類似のエピトープに結合するより容易に、エピトープに特異的に結合することを意味する。したがって、所与のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、かかる抗体が関連するエピトープと交差反応し得るとしても、関連するエピトープよりそのエピトープにより結合しやすいであろう。
【００７５】
抗体は、それがエピトープへの参照抗体の結合をある程度までブロックするほど、そのエピトープに優先的に結合する場合、所与のエピトープへの参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合阻害は、本分野で公知の任意の方法、例えば競合ＥＬＩＳＡアッセイにより決定することができる。抗体は、所与のエピトープへの参照抗体の結合を少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると言うことができる。
【００７６】
「実質的に同様」または「実質的に同じ」という句は、本明細書で使用されるとき、当業者が２つの数値（一般的に、本発明の抗体と関連付けられる１つおよび参照／比較抗体と関連付けられる他方）の間の差が、前記値（例えばＫｄ値）により測定される生物学的特徴に関して生物学的および／または統計的有意性がほとんどまたは全くないものと考え得るほど十分に高い程度の、２つの数値の間の類似性を示す。前記２つの値の間の差は、参照／比較抗体についての値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、または約１０％未満である場合がある。
【００７７】
「単離された」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然で見られない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、もはやそれらが天然で見られる形態ではない程度まで精製されたポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。一部の実施形態では、単離された抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。
【００７８】
本明細書で使用されるとき、「実質的に純粋」は、少なくとも５０％純粋（すなわち、汚染物質を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋な物質を指す。
【００７９】
「イムノコンジュゲート」または「コンジュゲート」という用語は、本明細書で使用されるとき、細胞結合剤（すなわち、抗ＣＤ３７抗体またはその断片）に結合される化合物またはその誘導体を指し、一般式：Ｃ−Ｌ−Ａにより定義され、ここでＣ＝細胞毒、Ｌ＝リンカー、およびＡ＝抗ＣＤ３７抗体または抗体断片である。また、イムノコンジュゲートは、逆の順序の一般式：Ａ−Ｌ−Ｃにより定義することができる。
【００８０】
「ＩＭＧＮ５２９」という用語は、ｈｕＣＤ３７−３抗体（配列番号４〜９により表されるＣＤＲ、配列番号１２のＶＨ、および配列番号１５のＶＬを含む）と、ＳＭＣＣリンカーと、ＤＭ１マイタンシノイドとを含有する、本明細書で説明するイムノコンジュゲートを指す。
【００８１】
「リンカー」は、化合物、通常は薬物、例えばマイタンシノイドを、細胞結合剤、例えば抗ＣＤ３７抗体またはその断片に、安定な共有結合様式で、結合することができる任意の化学部分である。リンカーは、化合物または抗体が活性なままである条件で、例えばジスルフィド結合切断に感受性であるか、またはそれに対して実質的に抵抗性である場合がある。好適なリンカーは、本分野で周知であり、例えばジスルフィド基およびチオエーテル基を含む。
【００８２】
「がん」および「がん性」という用語は、細胞の集団が制御されていない細胞増殖により特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。がんの例として、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、および白血病が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｂ細胞がん」という用語は、Ｂ細胞の集団が制御されていない細胞増殖により特徴付けられる、哺乳動物における生理学的状態を指すか、または説明する。「腫瘍」および「新生物」は、前がん病変を含む、良性（非がん性）または悪性（がん性）いずれかの、過剰な細胞増殖または増殖から生ずる１つまたは複数の細胞を指す。処置および／または予防され得る「がん」および「腫瘍形成性」疾患の例としては、ＮＨＬを含むＢ細胞リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫および成熟Ｂ細胞新生物、例えばＢ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、低悪性度、中悪性度、および高悪性度ＦＬを含む濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｆｏｌｌｉｃｌｅ  ｃｅｎｔｅｒ  ｌｙｍｐｈｏｍａ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴタイプ、結節性および脾性タイプ）、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ならびに未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）が挙げられる。
【００８３】
「がん細胞」、「腫瘍細胞」という用語、および文法的等価物は、腫瘍または前がん性病変に由来する全細胞集団を指し、バルクの腫瘍細胞集団を含む非腫瘍形成性細胞および腫瘍形成性幹細胞（がん幹細胞）の両方を含む。本明細書で使用されるとき、「腫瘍細胞」という用語は、単に、再生し、分化してがん幹細胞からそれらの腫瘍細胞を区別する能力を欠く腫瘍細胞を指す場合、「非腫瘍形成性」という用語により修飾される。
【００８４】
「対象」という用語は、任意の動物（例えば哺乳動物）を指し、特定の治療の受容者になるヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類等を含むが、これらに限定されない。典型的に、「対象」および「患者」という用語は、ヒト対象に関連して本明細書で相互交換可能に使用される。
【００８５】
１つまたは複数のさらなる療法剤「との組合せの」投与は、同時の（併用の）投与および任意の順序の連続した投与を含む。
【００８６】
組合せ療法は、「相乗作用」を提供し、「相乗的である」と証明することができる、すなわち、活性成分が共に使用された場合に達成される効果が、これらの化合物を別々に使用したことから生じる効果の合計より大きい。相乗効果は、活性成分が：（１）組み合わせた単位投薬製剤中に共調合（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｅ）され、同時に投与もしくは送達される場合；（２）別々の製剤として逐次的に、交互に、もしくは並行して送達される場合；または（３）いくつかの他のレジメンによる場合に得ることができる。交互療法で送達される場合、相乗効果は、化合物が、例えば別々のシリンジ中の異なる注射により、連続して投与または送達される場合、得ることができる。「相乗スコア」は、以下の実施例１でより詳細に説明する、式、相乗スコア＝ｌｏｇ  ｆｘ  ｌｏｇ  ｆＹ  Σ  ｍａｘ（Ｏ，Ｉデータ）（Ｉデータ−ＩＬｏｅｗｅ）を使用して計算することができる。
【００８７】
「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、かつその製剤が投与されるであろう対象にとって許容できない毒性を有する追加の成分を含有しない調製物を指す。製剤は、無菌である場合がある。
【００８８】
本明細書で開示される抗体またはイムノコンジュゲートの「有効量」は、具体的に示される目的を行うのに十分な量である。「有効量」は、示される目的に関連して、経験的に、かつ慣例的な様式で決定することができる。
【００８９】
「治療有効量」という用語は、対象または哺乳動物において疾患または障害を「治療する」ために有効な抗体または他の薬物の量を指す。がんの場合、治療有効量の薬物は、がん細胞の数を低減し；腫瘍サイズもしくは負荷を低減し；周辺器官へのがん細胞浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、ある特定の実施形態では停止させ）；腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、ある特定の実施形態では停止させ）；腫瘍増殖をある程度阻害し；がんと関連付けられる症状の１つもしくは複数をある程度軽減し；および／または有利な応答、例えば無増悪生存（ＰＦＳ：ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）、無病生存（ＤＦＳ：ｄｉｓｅａｓｅ−ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）、もしくは全生存（ＯＳ：ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）の増大、完全応答（ＣＲ：ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、部分応答（ＰＲ：ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）、もしくは一部の場合安定病態（ＳＤ：ｓｔａｂｌｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）、進行性疾患（ＰＤ：ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ：ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）の低減、もしくはこれらの任意の組合せをもたらすことができる。「治療すること」の本明細書の定義を参照のこと。薬物が存在するがん細胞の増殖を妨げ、および／または殺滅することができる限り、薬物は細胞増殖抑制性および／または細胞毒性である場合がある。「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために、必要な投与量でかつ必要な期間の間の、有効な量を指す。必ずではないが、典型的に、予防的用量は、疾患の初期段階前または初期段階に対象において使用されるので、予防的有効量は、治療有効量より少ないであろう。
【００９０】
「化学療法剤」は、作用機構にかかわらず、がんの治療において有用な化学化合物である。化学療法剤として、例えばシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン（ｐｒｅｄｉｎｉｓｏｎｅ）、フルダラビン、エトポシド、メトトレキセート、レナリドミド、クロラムブシル、ベンダムスチン（ｂｅｎｔａｍｕｓｔｉｎｅ）、および／またはかかる化学療法剤の改変したバージョンが挙げられる。
【００９１】
「有利に応答する」という用語は一般的に、対象において有益な状態をもたらすことを指す。がん治療について、この用語は、対象に療法的効果を提供することを指す。がんにおける陽性の療法的効果は、いくつかの方法で測定することができる（Ｗ．Ａ．  Ｗｅｂｅｒ、Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．、５０巻：１Ｓ〜１０Ｓ（２００９年）を参照のこと）。例えば、腫瘍増殖阻害、分子マーカー発現、血清マーカー発現、および分子イメージング技術は、全て抗がん療法剤の療法的効力を評価するために使用することができる。腫瘍増殖阻害について、ＮＣＩ標準に従って、Ｔ／Ｃ≦４２％が、抗腫瘍活性の最低レベルである。Ｔ／Ｃ＜１０％は、高い抗腫瘍活性レベルと考えられ、Ｔ／Ｃ（％）＝治療される腫瘍体積の中央値／対照の腫瘍体積の中央値×１００である。有利な応答は、例えば無増悪生存（ＰＦＳ）、無病生存（ＤＦＳ）、もしくは全生存（ＯＳ）の増大、完全応答（ＣＲ）、部分応答（ＰＲ）、もしくは一部の場合安定病態（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ）の低減、またはこれらの任意の組合せにより評価することができる。
【００９２】
ＰＦＳ、ＤＦＳ、およびＯＳは、新規薬物の承認について国立がん研究所および米国食品医薬品局により定められた標準により測定することができる。Ｊｏｈｎｓｏｎら、（２００３年）、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２１巻（７号）：１４０４〜１４１１頁を参照のこと。
【００９３】
「無増悪生存」（ＰＦＳ）は、登録から疾患進行または死亡までの時間を指す。ＰＦＳは一般的に、カプラン・マイヤー法および固形腫瘍の応答評価基準（ＲＥＣＩＳＴ：Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ）１．１標準を使用して測定される。一般的に、無増悪生存は、患者が、がんが悪化せず生存している状況を指す。
【００９４】
「腫瘍進行までの時間」（ＴＴＰ）は、登録から疾患進行までの時間として定義される。ＴＴＰは一般的に、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準を使用して測定される。
【００９５】
「完全応答」または「完全寛解」または「ＣＲ」は、治療に応答した、腫瘍またはがんの全ての徴候の消失を示す。これは必ずしも、がんが治ったことを意味しない。
【００９６】
「部分応答」または「ＰＲ」は、治療に応答した、１つもしくは複数の腫瘍もしくは病変のサイズもしくは体積の減少、または体内のがんの程度の減少を指す。
【００９７】
「安定病態」は、進行または再発を伴わない疾患を指す。安定病態では、部分応答に認定するのに十分な腫瘍収縮も、進行性疾患として認定するのに十分な腫瘍増大もない。
【００９８】
「進行性疾患」は、もう１つの新しい病変もしくは腫瘍の出現、および／または存在する非標的病変の明白な進行を指す。また、進行性疾患は、腫瘍のかさの増大または腫瘍の広がりの増大いずれかのための、治療を開始して以来の２０パーセント超の腫瘍増殖を指す場合がある。
【００９９】
「無病生存」（ＤＦＳ）は、患者が疾患を有しないままである治療中および治療後の時間の長さを指す。
【０１００】
「全生存」（ＯＳ）は、患者の登録から死亡または最後に生存していたことが知られる日で打ち切ったときまでの時間を指す。ＯＳは、未処置または治療していない個体または患者と比較した、平均余命の延長を含む。全生存は、患者が、例えば診断または治療の時間から、規定された期間の間、例えば１年、５年等、生存したままである状況を指す。
【０１０１】
特定の腫瘍、組織、または細胞試料におけるＣＤ３７またはＣＤ２０の「過剰発現」という用語は、同じ種類または起源の非疾患組織または細胞に存在するより高いレベルで存在するＣＤ３７またはＣＤ２０（ＣＤ３７もしくはＣＤ２０ポリペプチドまたはかかるポリペプチドをコードする核酸）を指す。かかる過剰発現は、例えば突然変異、遺伝子増幅、転写の増大、または翻訳の増大により引き起こされる場合がある。
【０１０２】
「治療すること」もしくは「治療」もしくは「治療するため」または「緩和すること」もしくは「緩和するため」等の用語は、診断された病理的状態または障害を治す、減速させる、その症状を減らす、および／またはその進行を止める療法的手段を指す。したがって、治療の必要な者は、既に障害と診断されたか、または障害を有する疑いがある者を含む。ある特定の実施形態では、患者が以下の：がん細胞の数の低減もしくはがん細胞が完全にないこと；腫瘍負荷の低減；例えば軟組織および骨へのがんの広がりを含む、周辺器官へのがん細胞浸潤の阻害もしくはその浸潤がないこと；腫瘍転移の阻害もしくは腫瘍転移がないこと；腫瘍増殖の阻害もしくは腫瘍増殖がないこと；特定のがんと関連付けられる１つもしくは複数の症状の軽減；罹患率および死亡率の低減；クオリティ・オブ・ライフの改善；腫瘍の腫瘍形成能、腫瘍形成頻度、もしくは腫瘍形成能力の低減；腫瘍におけるがん幹細胞の数もしくは頻度の低減；腫瘍形成性細胞の非腫瘍形成状態への分化；無増悪生存（ＰＦＳ）、無病生存（ＤＦＳ）、もしくは全生存（ＯＳ）の増大、完全応答（ＣＲ）、部分応答（ＰＲ）、安定病態（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ）の低減、またはこれらの任意の組合せの１つまたは複数を示す場合、対象は、本発明の方法に従ってがんをうまく「治療される」。
【０１０３】
予防的または防止的手段は、標的化された病態または障害の発達を防止する、および／または遅延させる手段を指す。したがって、予防的または防止的手段の必要な者は、障害を有する傾向がある者、および障害が防止されるべき者を含む。
【０１０４】
「指示すること」という用語は、任意の手段により、例えば書面で、例えばパッケージインサートまたは他の書面の販売促進材料の形態で、適用可能な療法、薬物療法、治療、治療レジメン等についての指図を提供することを意味する。
【０１０５】
「事前治療する」および「事前治療」という用語は、抗ＣＤ３７療法剤および／または抗ＣＤ２０療法剤の投与前に起こる療法的手段を指す。例えば、本明細書でより詳細に説明するように、予防剤、例えばステロイド（例えば副腎皮質ステロイド）は、抗ＣＤ３７療法剤および／または抗ＣＤ２０療法剤の投与前の約１週間、約５日、約３日、約２日、または約１日もしくは２４時間以内に投与することができる。また、予防剤は、抗ＣＤ３７療法剤および／または抗ＣＤ２０療法剤と同じ日に抗ＣＤ３７療法剤および／または抗ＣＤ２０療法剤の前に投与することができる。
【０１０６】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、本明細書で相互交換可能に使用されて、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖であっても、分岐鎖であってもよく、改変されたアミノ酸を含んでもよく、非アミノ酸により中断されてもよい。また、この用語は、天然に、または介入、例えばジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化、もしくは任意の他の操作もしくは改変、例えば標識化成分とのコンジュゲートにより改変されたアミノ酸ポリマーを包含する。また、例えばアミノ酸の１つまたは複数のアナログ（例えば非天然アミノ酸等を含む）および本分野で公知の他の改変を含有するポリペプチドがこの定義に含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づいているので、ある特定の実施形態では、ポリペプチドは単鎖または会合鎖として生じる場合があることが理解される。
【０１０７】
２つまたはそれ超の核酸またはポリペプチドに関する「同一の」またはパーセント「同一性」という用語は、配列同一性の部分として任意の保存的アミノ酸置換を考慮せず、最大一致で（必要に応じてギャップを導入して）比較および整列した場合、同じであるか、または同じであるヌクレオチドもしくはアミノ酸残基の特定の割合を有する２つまたはそれ超の配列またはサブ配列を指す。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを使用して、または目視検査により測定することができる。アミノ酸またはヌクレオチド配列の整列を得るために使用され得る様々なアルゴリズムおよびソフトウェアは、本分野で公知である。かかる配列整列アルゴリズムの１つの非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎら、１９９０年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、８７巻：２２６４〜２２６８頁で説明され、Ｋａｒｌｉｎら、１９９３年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、９０巻：５８７３〜５８７７頁で改変され、かつＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９１年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５巻：３３８９〜３４０２頁）に組み込まれるアルゴリズムである。ある特定の実施形態では、ギャップＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５巻：３３８９〜３４０２頁で説明されるように使用することができる。ＢＬＡＳＴ−２、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９６年、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２６６巻：４６０〜４８０頁）、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ社）は、配列を整列させるために使用され得る追加の公に入手可能なソフトウェアプログラムである。ある特定の実施形態では、２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアのＧＡＰプログラムを使用して決定される（例えばＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、ならびに４０、５０、６０、７０、または９０のギャップ重みおよび１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して）。ある特定の代替の実施形態では、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムは、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．（４８巻）：４４４〜４５３頁（１９７０年））を組み込んでおり、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性を決定するために使用することができる（例えばＢｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重みおよび１、２、３、４、５の長さ重みを使用して）。あるいは、ある特定の実施形態では、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間のパーセント同一性は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ、４巻：１１〜１７頁（１９８９年））を使用して決定される。例えば、パーセント同一性は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を使用して、かつ残基表を有するＰＡＭ１２０、１２のギャップ長ペナルティ、および４の���ャップペナルティを使用して決定することができる。特定の整列ソフトウェアによる最大整列に適切なパラメータは、当業者が決定することができる。ある特定の実施形態では、整列ソフトウェアのデフォルトパラメータを使用する。ある特定の実施形態では、第１のアミノ酸配列の第２の配列アミノ酸に対する同一性割合「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、ここでＹは（目視検査または特定の配列整列プログラムにより整列される）第１および第２の配列の整列内の同一マッチとしてスコア付けされるアミノ酸残基の数であり、Ｚは第２の配列内の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列より長い場合、第１の配列の第２の配列に対するパーセント同一性は、第２の配列の第１の配列に対するパーセント同一性より長いであろう。
【０１０８】
非限定的な例として、任意の特定のポリヌクレオチドが、参照配列に対してある特定の配列同一性割合を有する（例えば少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一、および一部の実施形態では、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である）かどうかは、ある特定の実施形態では、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｕｎｉｘ（登録商標）用バージョン８、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ  ５３７１１）を使用して決定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ、２巻：４８２〜４８９頁（１９８１年）の局所ホモロジーアルゴリズムを使用して、２つの配列間の最も良いホモロジーの区分を見つける。特定の配列が、例えば本発明に従う参照配列に対して９５％同一であるかどうかを決定するためにＢｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列整列プログラムを使用する場合、パラメータは、同一性の割合が参照ヌクレオチド配列の全長にわたり計算され、参照配列のヌクレオチドの総数の最大５％のホモロジーにおけるギャップが許容されるように設定される。
【０１０９】
一部の実施形態では、本発明の２つの核酸またはポリペプチドは、実質的に同一であり、このことは、それらは、最大一致について比較および整列した場合、配列比較アルゴリズムを使用してまたは目視検査により測定すると、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、および一部の実施形態では、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のヌクレオチドまたはアミノ酸残基同一性を有することを意味する。同一性は、長さが少なくとも約１０、約２０、約４０〜６０残基、またはその間の任意の整数値の配列の領域にわたり存在することができ、６０〜８０残基より長い領域、例えば少なくとも約９０〜１００残基にわたり存在することができ、一部の実施形態では、配列は、比較される配列、例えばヌクレオチド配列のコード領域の全長にわたり実質的に同一である。
【０１１０】
「保存的アミノ酸置換」は、１つのアミノ酸残基が、同様の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置き換えられる置換である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、本分野で定義されており、塩基性側鎖（例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。例えば、チロシンのフェニルアラニンでの置換は、保存的置換である。一部の実施形態では、本発明のポリペプチドおよび抗体の配列内の保存的置換は、アミノ酸配列を含有するポリペプチドまたは抗体の、抗原（複数可）、すなわち、ポリペプチドまたは抗体が結合するＣＤ３７またはＣＤ２０への結合を抑止しない。抗原結合を除去しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を特定する方法は、本分野で周知である（例えばＢｒｕｍｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、３２巻：１１８０〜１１８７頁（１９９３年）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、１２巻（１０号）：８７９〜８８４頁（１９９９年）；およびＢｕｒｋｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９４巻：４１２〜４１７頁（１９９７年）を参照のこと）。
【０１１１】
本開示および特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに別に示さない限り、複数形を含む。
【０１１２】
実施形態が、本明細書で「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語で説明される場合、そうでなければ「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」および／または「から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」の用語で説明される類似の実施形態もまた提供されることが理解される。
【０１１３】
本明細書の「Ａおよび／またはＢ」等の句で使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」、および「Ｂ」を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」等の句で使用される「および／または」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）の各々を包含することが意図される。
【０１１４】
ＩＩ．抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート
本明細書で説明する方法は、ＣＤ３７に特異的に結合するイムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）を投与する方法を提供する。これらの薬剤は、「ＣＤ３７イムノコンジュゲートまたは抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート」と本明細書で呼ばれる。ヒト、マカク、およびマウスＣＤ３７の全長アミノ酸配列は、本分野で公知であり、またそれぞれ、配列番号１〜３により表すように、本明細書で提供する。
【０１１５】
ヒトＣＤ３７：
【０１１６】
【化１】
2018517714.tif 000003
【０１１７】
マカクＣＤ３７：
【０１１８】
【化２】
2018517714.tif 000004
【０１１９】
マウスＣＤ３７（ＮＰ＿０３１６７１）：
【０１２０】
【化３】
2018517714.tif 000005
【０１２１】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、抗体、例えばヒト化抗体であるＣＤ３７結合剤を含有する。
【０１２２】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３７結合剤（例えばＩＭＧＮ５２９）は、以下の効果：腫瘍細胞の増殖を阻害すること、腫瘍内のがん幹細胞の頻度を低減させることにより腫瘍の腫瘍形成能を低減させること、腫瘍増殖を阻害すること、生存を増大させること、腫瘍細胞の細胞死を誘発すること、腫瘍形成性細胞を非腫瘍形成状態へと分化させること、または腫瘍細胞の転移を防止することの１つまたは複数を有する。
【０１２３】
ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ３７に特異的に結合するイムノコンジュゲートまたは他の薬剤（例えばＩＭＧＮ５２９）は、細胞毒性剤を介して細胞死を誘発する。例えば、ある特定の実施形態では、ヒトＣＤ３７抗体に対する抗体がマイタンシノイドにコンジュゲートされ、これはタンパク質内部移行によりＣＤ３７を発現する腫瘍細胞で活性化される。ある特定の代替の実施形態では、薬剤または抗体はコンジュゲートされない。
【０１２４】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３７結合剤（例えばＩＭＧＮ５２９）は、腫瘍増殖を阻害することができる。ある特定の実施形態では、ＣＤ３７結合剤は、ｉｎ  ｖｉｖｏで（例えば異種移植片マウスモデルで、および／またはがんを有するヒトで）腫瘍増殖を阻害することができる。
【０１２５】
ＣＤ３７結合剤は、米国特許公開公報第２０１１／０２５６１５３号で以前に説明される抗体ｈｕＣＤ３７−３ならびにその断片、改変体および誘導体を含み、当該公報は、その全体を参照により本明細書に組み込む。また、ＣＤ３７結合剤は、ｈｕＣＤ３７−３と同じＣＤ３７エピトープに特異的に結合するＣＤ３７結合剤を含む。また、ＣＤ３７結合剤は、ｈｕＣＤ３７−３を競合的に阻害するＣＤ３７結合剤を含む。
【０１２６】
また、ＣＤ３７結合剤は、ｈｕＣＤ３７−３の重鎖および軽鎖ＣＤＲ配列を含むＣＤ３７結合剤を含む。ｈｕＣＤ３７−３のＣＤＲ配列は、以下の表１および２で説明する。
【表１】
2018517714.tif 000006
【表２】
2018517714.tif 000007
【０１２７】
ＣＤ３７結合分子は、１つのＣＤＲ当たり最大４個（すなわち、０、１、２、３、または４個）の保存的アミノ酸置換を有するマウス、キメラ、またはヒト化ＣＤ３７−３のＣＤＲを含むＣＤ３７に特異的に結合する抗体または抗原結合性断片である場合がある。一部の実施形態では、ＣＤ３７結合剤は、配列番号４、５、および６を含む可変重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびに配列番号７、８、および９を含む可変軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。
【０１２８】
ポリペプチドは、本明細書で説明する可変軽鎖または可変重鎖を含む場合がある。また、抗体およびポリペプチドは、可変軽鎖および可変重鎖の両方を含む場合がある。マウス、キメラ、およびヒト化ＣＤ３７−３抗体の可変軽鎖および可変重鎖配列を、以下の表３および４に示す。
【表３】
2018517714.tif 000008
【表４−１】
2018517714.tif 000009
【表４−２】
2018517714.tif 000010
【０１２９】
また、（ａ）配列番号１０〜１２および２２の１つに対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するＶＨポリペプチド、ならびに／または（ｂ）配列番号１３〜１５の１つに対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するＶＬポリペプチドを含む、抗体およびその抗原結合性断片が提供される。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１０〜１２および２２の１つに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するＶＨポリペプチド、ならびに（ｂ）配列番号１３〜１５の１つに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するＶＬポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１０〜１２および２２の１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶＨポリペプチド、ならびに（ｂ）配列番号１３〜１５の１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶＬポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１０〜１２および２２の１つのアミノ酸配列を有するＶＨポリペプチド、ならびに（ｂ）配列番号１３〜１５の１つのアミノ酸配列を有するＶＬポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ３７に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ３７に特異的に結合するマウス、キメラ、またはヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ３７に特異的に結合するヒト抗体である。ある特定の実施形態では、配列番号１０〜１２および２２ならびに１３〜１５に対してある特定の割合の配列同一性を有するポリペプチドを含有する抗体または抗原結合性断片は、保存的アミノ酸置換によってのみ配列番号１０〜１２および１３〜１５とは異なる。
【０１３０】
また、抗体およびその抗原結合性断片は、軽鎖および重鎖の両方を含む場合がある。マウス、キメラ、およびヒト化ＣＤ３７−３抗体の軽鎖および可変鎖配列を、以下の表５および６に示す。
【表５−１】
2018517714.tif 000011
【表５−２】
2018517714.tif 000012
【表６】
2018517714.tif 000013
【０１３１】
また、（ａ）配列番号１６〜１８および３７の１つに対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチド、ならびに（ｂ）配列番号１９〜２１の１つに対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む、抗体およびその抗原結合性断片が提供される。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１６〜１８および３７の１つに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチド、ならびに配列番号１９〜２１の１つに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。したがって、ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１６〜１８および３７の１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチド、ならびに／または（ｂ）配列番号１９〜２１の１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１６〜１８および３７の１つのアミノ酸配列を有するポリペプチド、ならびに／または（ｂ）配列番号１９〜２１の１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ３７に特異的に結合するマウス、キメラ、またはヒト化抗体または断片である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、保存的アミノ酸置換によってのみ配列番号１６〜１８および３７ならびに１９〜２１とは異なるポリペプチドを含む。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、２０１０年２月１８日に、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０に位置するアメリカンタイプカルチャーコレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）（ＡＴＣＣ）に寄託されたＡＴＣＣ寄託名称ＰＴＡ−１０６６４からなる群より選択されるハイブリドーマから生成される抗体である場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、ＰＴＡ−１０６６４からなる群より選択されるハイブリドーマから生成した抗体のＶＨ−ＣＤＲおよびＶＬ−ＣＤＲを含む。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、組換えプラスミドＤＮＡｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（２０１０年３月１８日にＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ寄託名称ＰＴＡ−１０７２２）によりコードされる軽鎖を含む場合がある。ある特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、組換えプラスミドＤＮＡｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（２０１０年３月１８日にＡＴＣＣに寄託されたＡＴＣＣ寄託名称ＰＴＡ−１０７２３）によりコードされる重鎖を含む場合がある。ある特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、組換えプラスミドＤＮＡｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（ＰＴＡ−１０７２２）によりコードされる軽鎖、および組換えプラスミドＤＮＡｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（ＰＴＡ−１０７２３）によりコードされる重鎖を含む場合がある。ある特定の実施形態では、ＣＤ３７抗体は、組換えプラスミドＤＮＡｐｈｕＣＤ３７−３ＬＣ（ＰＴＡ−１０７２２）によりコードされるＶＬ−ＣＤＲ、および組換えプラスミドＤＮＡｐｈｕＣＤ３７−３ＨＣｖ．１．０（ＰＴＡ−１０７２３）によりコードされるＶＨ−ＣＤＲを含む場合がある。
【０１３４】
また、抗体および他のタンパク質を精製するための本分野で公知の方法は、例えば米国特許公開公報第２００８／０３１２４２５号、同第２００８／０１７７０４８号、および同第２００９／０１８７００５号で説明する方法を含み、当該公報の各々は、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【０１３５】
また、薬物またはプロドラッグに結合またはコンジュゲートした、本明細書で開示する抗ＣＤ３７抗体、抗体断片、およびそれらの機能的等価物を含むコンジュゲート（本明細書でイムノコンジュゲートとも呼ばれる）を、本明細書で説明する。好適な薬物またはプロドラッグは、本分野で公知である。薬物またはプロドラッグは、細胞毒性剤である場合がある。本発明の細胞毒性コンジュゲートで使用される細胞毒性剤は、細胞死をもたらす、もしくは細胞死を誘発する、または一部の様式で細胞生存率を減少させる、任意の化合物である場合があり、例えばマイタンシノイドおよびマイタンシノイドアナログを含む。かかるコンジュゲートは、薬物またはプロドラッグを抗体または機能的等価物に結合するために結合基を使用することにより調製することができる。好適な結合基は、本分野で周知であり、例えばジスルフィド基およびチオエーテル基を含む。
【０１３６】
薬物またはプロドラッグは、例えばジスルフィド結合を通して抗ＣＤ３７抗体またはその断片に結合することができる。リンカー分子または架橋剤は、抗ＣＤ３７抗体またはその断片と反応することができる反応性化学基を含む。細胞結合剤との反応のための反応性化学基は、Ｎ−スクシンイミジルエステルおよびＮ−スルホスクシンイミジルエステルである場合がある。加えて、リンカー分子は、ジチオピリジル基であり得る反応性化学基を含み、これは薬物と反応してジスルフィド結合を形成することができる。リンカー分子は、例えばＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（例えばＣａｒｌｓｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．、１７３巻：７２３〜７３７頁（１９７８年）を参照のこと）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）（例えば米国特許第４，５６３，３０４号を参照のこと）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）（米国特許公開公報第２００９０２７４７１３号を参照のこと）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）（例えばＣＡＳ登録番号３４１４９８−０８−６を参照のこと）、２−イミノチオラン、またはアセチルコハク酸無水物を含む。例えば、抗体または細胞結合剤は、架橋試薬で改変することができ、これに由来する遊離の、または保護されたチオール基を含有する抗体または細胞結合剤を、その後ジスルフィドまたはチオール含有マイタンシノイドと反応させて、コンジュゲートを生成する。コンジュゲートは、非限定的にＨＰＬＣ、サイズ排除、吸着、イオン交換、およびアフィニティ捕捉を含むクロマトグラフィー、透析、またはタンジェント流濾過（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ  ｆｌｏｗ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）により精製することができる。
【０１３７】
また、切断不可能リンカーを有する抗体−マイタンシノイドコンジュゲートを、調製することができる。かかる架橋剤は、本分野で説明されており（米国特許公開公報第２００５／０１６９９３３号を参照のこと）、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）を含むが、これに限定されない。一部の実施形態では、抗体を、文献で説明されるように、架橋試薬、例えばスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スルホ−ＳＭＣＣ、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、スルホ−ＭＢＳ、またはスクシンイミジル−ヨードアセテートで改変して、１〜１０個の反応基を導入する（Ｙｏｓｈｉｔａｋｅら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０１巻：３９５〜３９９頁（１９７９年）；Ｈａｓｈｉｄａら、Ｊ．  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、５６〜６３頁（１９８４年）；およびＬｉｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１８巻：６９０〜６９７頁（１９７９年））。改変した抗体をその後、チオール含有マイタンシノイド誘導体と反応させてコンジュゲートを生成する。コンジュゲートは、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５カラムを通したゲル濾過により、または透析もしくはタンジェント流濾過により精製することができる。改変した抗体を、チオール含有マイタンシノイド（１〜２モル当量／マレイミド基）で処理し、抗体−マイタンシノイドコンジュゲートを、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを通したゲル濾過、セラミックヒドロキシアパタイトカラム上でのクロマトグラフィー、透析もしくはタンジェント流濾過、またはこれらの方法の組合せにより精製する。典型的に、抗体当たり平均１〜１０個のマイタンシノイドが結合される。１つの方法は、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）で抗体を改変してマレイミド基を導入し、続いて改変した抗体をチオール含有マイタンシノイドと反応させてチオエーテル結合コンジュゲートを得ることである。ここでもまた、抗体分子当たり１〜１０個の薬物分子を有するコンジュゲートが得られる。抗体、抗体断片、および他のタンパク質のマイタンシノイドコンジュゲートは、同じ方法で製造される。
【０１３８】
一部の実施形態では、リンカーは、例えば米国特許公開公報第２０１２／０２８２２８２号で説明される少なくとも１つの荷電基を含有するリンカーであり、当該公報の内容は参照により全体として本明細書に組み込む。一部の実施形態では、荷電架橋剤または前荷電架橋剤（ｐｒｏ−ｃｈａｒｇｅｄ  ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｒ）は、とりわけ、抗体当たり２〜２０個の薬物が結合したモノクローナル抗体−薬物コンジュゲートについては、改変された細胞結合剤および細胞結合剤−薬物コンジュゲートの溶解度を顕著に増大させるスルホネート、ホスフェート、カルボキシル、または４級アミン置換基を含有する架橋剤である。前荷電部分を含有するリンカーから調製したコンジュゲートは、コンジュゲートが細胞内で代謝された後、１つまたは複数の荷電部分を生成する。一部の実施形態では、リンカーは、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホペンタノエート（スルホ−ＳＰＰ）およびＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）からなる群より選択される。
【０１３９】
本明細書で開示するリンカーの多くは、米国特許公開公報第２００５／０１６９９３３号、同第２００９／０２７４７１３号、および同第２０１２／０２８２２８２号で、ならびにＷＯ２００９／１３４９７７で詳細に説明されており、当該公報の内容は、参照によりそれらの全体を本明細書に組み込む。
【０１４０】
本発明は、約２〜約８個の薬物分子（「薬物ロード」）、例えばマイタンシノイドが、抗ＣＤ３７抗体またはその断片に結合され、このコンジュゲートの抗腫瘍効果が、より少ないまたはより多い数の薬物が同じ細胞結合剤に結合された薬物ロードと比較して、はるかにより有効である、態様を含む。「薬物ロード」は、本明細書で使用されるとき、細胞結合剤（例えば抗ＣＤ３７抗体またはその断片）に結合することができる薬物分子（例えばマイタンシノイド）の数を指す。一態様では、細胞結合剤に結合することができる薬物分子の数は、平均すると約２〜約８（例えば１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１）個である場合がある。Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシン（ＤＭ１）を使用することができる。
【０１４１】
抗ＣＤ３７抗体またはその断片は、二官能性架橋試薬を抗ＣＤ３７抗体またはその断片と反応させ、これにより抗ＣＤ３７抗体またはその断片へのリンカー分子の共有結合をもたらすことにより改変することができる。本明細書で使用されるとき、「二官能性架橋試薬」は、細胞結合剤を薬物、例えば本明細書で説明する薬物に共有結合する任意の化学部分である。別の方法では、結合部分の一部は、薬物により提供される。この点で、薬物は、細胞結合剤を薬物に接合するために使用される、より大きなリンカー分子の部分である結合部分を含む。例えば、マイタンシノイドＤＭ１を形成するために、マイタンシンのＣ−３ヒドロキシル基の側鎖は、遊離スルフヒドリル基（ＳＨ）を有するように改変される。このマイタンシンのチオール化形態は、改変した細胞結合剤と反応して、コンジュゲートを形成することができる。それゆえ、最終的なリンカーは、２つの構成成分から組み立てられ、そのうちの１つは架橋試薬により提供され、一方で、他方はＤＭ１の側鎖により提供される。
【０１４２】
したがって、一態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり１個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり２個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり３個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり４個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり５個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり６個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり７個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり８個のマイタンシノイドを含む。
【０１４３】
一態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり約１〜約８個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり約２〜約７個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり約２〜約６個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり約２〜約５個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり約３〜約５個のマイタンシノイドを含む。別の態様では、イムノコンジュゲートは、抗体当たり約３〜約４個のマイタンシノイドを含む。
【０１４４】
一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約２〜約８（例えば１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、８．０、８．１）個の結合した薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約１〜約８個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約２〜約７個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約２〜約６個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約２〜約５個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約３〜約５個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約３〜約４個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。
【０１４５】
一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約２±０．５、約３±０．５、約４±０．５、約５±０．５、約６±０．５、約７±０．５、または約８±０．５個の結合した薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。一態様では、イムノコンジュゲートを含む組成物は、抗体当たり平均約３．５±０．５個の薬物分子（例えばマイタンシノイド）を有する。
【０１４６】
また、薬物分子は、中間担体分子（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙ  ｃａｒｒｉｅｒ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）、例えば血清アルブミンを通して抗体分子に結合することができる。
【０１４７】
本明細書で使用されるとき、「細胞結合剤に結合した」または「抗ＣＤ３７抗体もしくは断片に結合した」という表現は、好適な結合基を介して細胞結合剤抗ＣＤ３７抗体もしくは断片に結合した少なくとも１つの薬物誘導体を含むコンジュゲート分子、またはその前駆体を指す。１つの結合基は、ＳＭＣＣである。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、本発明において有用な細胞毒性剤は、マイタンシノイドおよびマイタンシノイドアナログである。好適なマイタンシノイドの例として、マイタンシノールのエステルおよびマイタンシノールアナログが挙げられる。微小管形成を阻害し、かつ哺乳動物細胞に対して高い毒性を有する任意の薬物が含まれ、マイタンシノールおよびマイタンシノールアナログも含まれる。
【０１４９】
好適なマイタンシノールエステルの例として、改変した芳香環を有するもの、および他の位置に改変を有するものが挙げられる。かかる好適なマイタンシノイドは、米国特許第４，４２４，２１９号、同第４，２５６，７４６号、同第４，２９４，７５７号、同第４，３０７，０１６号、同第４，３１３，９４６号、同第４，３１５，９２９号、同第４，３３１，５９８号、同第４，３６１，６５０号、同第４，３６２，６６３号、同第４，３６４，８６６号、同第４，４５０，２５４号、同第４，３２２，３４８号、同第４，３７１，５３３号、同第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、同第５，４７５，０９２号、同第５，５８５，４９９号、同第５，８４６，５４５号、同第６，３３３，４１０号、同第７，２７６，４９７号、および同第７，４７３，７９６号で開示されている。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、本発明のイムノコンジュゲートは、細胞毒性剤として、正式にはＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−マイタンシンと呼ばれるチオール含有マイタンシノイド（ＤＭ１）を利用する。ＤＭ１は、以下の構造式（Ｉ）：
【化４】
2018517714.tif 000014
により表される。
【０１５１】
別の実施形態では、本発明のコンジュゲートは、細胞毒性剤として、チオール含有マイタンシノイドＮ２’−デアセチル−Ｎ２’（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（例えばＤＭ４）を利用する。ＤＭ４は、以下の構造式（ＩＩ）：
【化５】
2018517714.tif 000015
により表される。
【０１５２】
立体障害チオール結合を含有する側鎖を含む別のマイタンシノイドは、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−マイタンシン（ＤＭ３と呼ばれる）であり、以下の構造式（ＩＩＩ）：
【化６】
2018517714.tif 000016
により表される。
【０１５３】
また、米国特許第５，２０８，０２０号および同第７，２７６，４９７号で教示されるマイタンシノイドの各々は、本発明のコンジュゲートで使用することができる。この点で、第５，２０８，０２０号および第７，２７６，６９７号の全開示は、参照により本明細書に組み込む。
【０１５４】
マイタンシノイドの多くの位置は、結合部分を化学的に結合するための位置として働くことができる。例えば、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで改変したＣ−１４位、ヒドロキシで改変したＣ−１５位、およびヒドロキシ基を有するＣ−２０位は、全て有用であると期待される。一部の実施形態では、Ｃ−３位は、結合部分を化学的に結合するための位置として働き、一部の特定の実施形態では、マイタンシノールのＣ−３位は、結合部分を化学的に結合するための位置として働く。
【０１５５】
いくつかのコンジュゲートの構造描写を以下：
【化７】
2018517714.tif 000017
【化８】
2018517714.tif 000018
【化９】
2018517714.tif 000019
【化１０】
2018517714.tif 000020
に示す。
【０１５６】
また、上記のいずれかの構造により示される任意の化合物またはコンジュゲートの任意の立体異性体およびその混合物が本発明に含まれる。
【０１５７】
かかる抗体−マイタンシノイドコンジュゲートの生成のためのいくつかの説明は、米国特許第６，３３３，４１０号、同第６，４４１，１６３号、同第６，７１６，８２１号、および同第７，３６８，５６５号で示され、当該特許の各々は、その全体を本明細書に組み込む。
【０１５８】
一般的に、水性緩衝液中の抗体溶液を、反応基を有するジスルフィド部分を有するモル過剰量のマイタンシノイドとインキュベートすることができる。反応混合物を、過剰のアミン（例えばエタノールアミン、タウリン等）の添加によりクエンチすることができる。マイタンシノイド−抗体コンジュゲートをその後、ゲル濾過により精製することができる。
【０１５９】
抗体分子当たりの結合したマイタンシノイド分子の数は、２５２ｎｍおよび２８０ｎｍの吸光度の比を分光光度的に測定することにより決定することができる。マイタンシノイド分子／抗体の平均数は、例えば１〜１０または２〜５である場合がある。マイタンシノイド分子／抗体の平均数は、例えば約３〜約４である場合がある。マイタンシノイド分子／抗体の平均数は、約３．５である場合がある。
【０１６０】
マイタンシノイドまたは他の薬物との抗体のコンジュゲートは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで様々な望まれない細胞株の増殖を抑制するそれらの能力について評価することができる。例えば、ヒトリンパ腫細胞株Ｄａｕｄｉおよびヒトリンパ腫細胞株Ｒａｍｏｓ等の細胞株は、これらの化合物の細胞毒性の評価のために容易に使用することができる。評価するべき細胞を、化合物に４〜５日間曝露し、細胞の生存の割合を公知の方法による直接アッセイで測定することができる。その後、アッセイの結果からＩＣ５０値を計算することができる。
【０１６１】
イムノコンジュゲートは、本明細書で説明する一部の実施形態に従って、細胞内に内部移行することができる。それゆえ、イムノコンジュゲートは、それがＣＤ３７発現細胞により取り込まれまたは内部移行された場合、療法的効果を発揮することができる。一部の特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、切断可能なリンカーにより細胞毒性剤に結合された抗体、抗体断片、またはポリペプチドを含み、それがＣＤ３７発現細胞により内部移行されると、この細胞毒性剤は、抗体、抗体断片、またはポリペプチドから切断される。
【０１６２】
ＩＩ．ＣＤ２０結合剤
本明細書で説明する方法は、ＣＤ２０に特異的に結合する薬剤を投与する方法を提供する。これらの薬剤は、本明細書で「ＣＤ２０結合剤」と呼ばれる。ヒトＣＤ２０の全長アミノ酸配列を、配列番号３６：
【化１１】
2018517714.tif 000021
として本明細書で示す。
【０１６３】
ある特定の実施形態では、ＣＤ２０結合剤は、以下の効果：腫瘍細胞の増殖を阻害すること、腫瘍内のがん幹細胞の頻度を低減させることにより腫瘍の腫瘍形成能を低減させること、腫瘍増殖を阻害すること、生存を増大させること、腫瘍細胞の細胞死を誘発すること、腫瘍形成性細胞を非腫瘍形成状態へと分化させること、または腫瘍細胞の転移を防止することの１つまたは複数を有する。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、ＣＤ２０結合剤は、腫瘍増殖を阻害することができる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２０結合剤は、ｉｎ  ｖｉｖｏで（例えば異種移植片マウスモデルで、および／またはがんを有するヒトで）腫瘍増殖を阻害することができる。
【０１６５】
抗ＣＤ２０抗体およびその抗原結合性断片は、本明細書で説明する可変軽鎖または可変重鎖を含むポリペプチドを含む場合がある。また、抗ＣＤ２０抗体およびポリペプチドは、可変軽鎖および可変重鎖の両方を含む場合がある。抗ＣＤ２０抗体の可変軽鎖および可変重鎖配列を、以下の表７および８に示す。
【表７−１】
2018517714.tif 000022
【表７−２】
2018517714.tif 000023
【表８】
2018517714.tif 000024
【０１６６】
（ａ）配列番号２３〜２９の１つに対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するＶＨポリペプチド、および／または（ｂ）配列番号３０〜３５の１つに対して少なくとも約９０％の配列同一性を有するＶＬポリペプチドを含む、抗ＣＤ２０抗体およびその抗原結合性断片が、本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２３〜２９の１つに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するＶＨポリペプチド、および（ｂ）配列番号３０〜３５の１つに対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性を有するＶＬポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２３〜２９の１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶＨポリペプチド、および（ｂ）配列番号３０〜３５の１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するＶＬポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２３〜２９の１つのアミノ酸配列を有するＶＨポリペプチド、および（ｂ）配列番号３０〜３５の１つのアミノ酸配列を有するＶＬポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２０に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２０に特異的に結合するマウス、キメラ、またはヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＣＤ２０に特異的に結合するヒト抗体である。ある特定の実施形態では、配列番号２３〜２９および３０〜３５に対してある特定の割合の配列同一性を有するポリペプチドを含有する抗体または抗原結合性断片は、保存的アミノ酸置換によってのみ配列番号２３〜２９および３０〜３５とは異なる。
【０１６７】
抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）との組合せで使用され得る抗ＣＤ２０抗体は、例えばＢｏｒｏｓｓら、Ａｍ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２巻：６７６〜６９０頁（２０１２年）；Ｒｏｂａｋら、ＢｉｏＤｒｕｇｓ、２５巻：１３〜２５頁（２０１１年）；およびＬｉｍら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ、９５巻：１３５〜１４３頁（２０１０年）で示され、当該文献の全ては、それらを全体として参照により本明細書に組み込む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲートとの組合せで使用される抗ＣＤ２０抗体は、ＷＯ２０１１／１００３９８またはＷＯ２０１１／１００４０３で説明される抗ＣＤ２０抗体であり、当該公報の両方は、それらを全体として参照により本明細書に組み込む。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲートとの組合せで使用される抗ＣＤ２０抗体は、オクレリズマブ、ＴＲＵ−０１５、ベルツズマブ（ＩＭＭＵ−１０６）、リツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ（ＧＡ１０１；ＲＯ５０７２７５９）、イブリツモマブチウキセタン、トシツモマブ、ＡＭＥ−１３３ｖ（ＬＹ２４６９２９８）、オクレリズマブ、ｈｕＣＤ２０−４（ＷＯ２０１１／１００３９８で説明される）、ｈｕＣＤ２０−７（ＷＯ２０１１／１００４０３で説明される）、およびＰｒｏ１３１９２１からなる群より選択される。
【０１６８】
抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）との組合せで使用され得る抗ＣＤ２０抗体は、例えばタイプＩ抗体またはタイプＩＩ抗体である場合がある（例えばＢｅｅｒｓら、Ｂｌｏｏｄ、１１２巻：４１７０〜４１７７頁（２００８年）およびＰｅｒｓら、Ａｎｎ．  Ｒｈｅｕｍ．  Ｄｉｓ．、７０巻：Ａ７３（２０１１年）を参照のこと）。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、タイプＩ抗ＣＤ２０抗体との組合せで使用される。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、タイプＩ抗ＣＤ２０抗体との組合せで使用される。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、タイプＩ抗体ではない抗ＣＤ２０抗体との組合せで使用される。したがって、一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブではない。一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと同じエピトープに結合しない。一部の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、オファツムマブではない。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、タイプＩＩ抗ＣＤ２０抗体との組合せで使用される。
【０１６９】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）との組合せで使用される抗ＣＤ２０抗体は、ベルツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、およびオビヌツズマブからなる群より選択される。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）との組合せで使用される抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ、オファツムマブ、およびオビヌツズマブからなる群より選択される。
【０１７０】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）との組合せで使用される抗ＣＤ２０抗体は、ベルツズマブである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）との組合せで使用される抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）との組合せで使用される抗ＣＤ２０抗体は、オファツムマブである。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）との組合せで使用される抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブである。
【０１７１】
ＩＶ．使用方法および医薬組成物
本明細書で提供されるように、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体は、がん性細胞を枯渇させるために組合せで使用することができる。がん性細胞は、Ｂ細胞（Ｂ細胞悪性疾患）である場合がある。一部の実施形態では、Ｂ細胞は、ＣＤ３７を発現する。一部の実施形態では、Ｂ細胞は、ＣＤ３７を過剰発現する。
【０１７２】
本明細書で提供されるように、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体は、がんを治療するために組合せで使用することができる。がんは、Ｂ細胞がんである場合がある。がんは、白血病またはリンパ腫である場合がある。一部の実施形態では、がんは、ＣＤ３７を発現する。一部の実施形態では、がんは、ＣＤ３７を過剰発現する。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、腫瘍増殖を阻害するのに有用である。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、腫瘍細胞の分化を誘導するのに有用である。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、腫瘍体積を減少するのに有用である。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、腫瘍の腫瘍形成性を低減するのに有用である。使用の方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏの方法であり得る。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）単独および抗ＣＤ２０抗体単独の効力の合計より大きな効力を生成する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、より少ない用量および／またはより少ない頻度の用量の抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および／または抗ＣＤ２０抗体を使用して、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）単独および抗ＣＤ２０抗体単独の効力の合計の効力を生成する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）単独および抗ＣＤ２０抗体単独の毒性の合計より低い毒性しか生成しない。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、抗ＣＤ２０抗体の効力を増強する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の効力を増強する。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）とリツキシマブとの組合せは、リツキシマブの効力を増強するのに十分な量の抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）を含有する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）とリツキシマブとの組合せは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の効力を増強するのに十分な量のリツキシマブを含有する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）とリツキシマブとの組合せは、効力に必要な抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の量を低減させ、かつそれゆえ抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と関連付けられる毒性を低減させるのに十分な量のリツキシマブを含有する。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、相乗効果を生成する。一部の実施形態では、この組合せについての相乗スコアを、例えば細胞生存率に対するこの組合せの効果に基づいて計算する。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも４である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも５である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも１０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも１５である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも２０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも２５である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも３０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも３５である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも４０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも４５である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも５０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも５５である。一部の実施形態では、相乗スコアは、少なくとも６０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、４〜１００である。一部の実施形態では、相乗スコアは、４〜８０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、４〜６５である。一部の実施形態では、相乗スコアは、１０〜１００である。一部の実施形態では、相乗スコアは、１０〜８０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、１０〜６５である。一部の実施形態では、相乗スコアは、２０〜１００である。一部の実施形態では、相乗スコアは、２０〜８０である。一部の実施形態では、相乗スコアは、２０〜６５である。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）と抗ＣＤ２０抗体との組合せは、１未満の組合せ指数を生成する。一部の実施形態では、組合せ指数は、０．４未満である。一部の実施形態では、組合せ指数は、０．３未満である。一部の実施形態では、組合せ指数は、０．２未満である。一部の実施形態では、組合せ指数は、０．２〜０．４である。一部の実施形態では、組合せ指数は、０．２〜０．３である。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体の投与は、ＣＤ２０に結合する抗体の投与より高い毒性を生成しない。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体の投与は、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与より高い毒性を生成しない。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）または抗ＣＤ２０抗体のいずれかの投与より高い毒性を生成しない。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体の投与は、Ｒ−ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾン）の投与より高い毒性を生成しない。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体の投与は、Ｒ−ＣＨＯＰの投与より低い毒性しかもたらさない。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．１〜３．０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）のＣＤ３７結合剤である。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり０．４〜０．８ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり０．７〜１．８ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり０．８〜１．４ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり０．８〜１．２ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり１．０〜３．０ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり１．０〜２．８ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり１．０〜１．４ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり１．４〜２．０ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．４〜約３．０ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．４〜約２．８ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．０〜約２．８ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．０〜約３．０ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、体重１ｋｇ当たり約０．２ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．３ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．４ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．６ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．７ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．８ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．９ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．０ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約。１．１ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．２ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．３ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．４ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．５ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．６ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．７ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．８ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約１．９ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．０ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．１ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．２ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．３ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．４ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．５ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．６ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．７ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．８ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約２．９ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、体重１ｋｇ当たり約３．０ｍｇである。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、ＣＤ３７への結合を飽和させるために十分である。ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与量は、ＣＤ３７への結合を過飽和させるために十分である。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の投与量は、（例えばＮＨＬの治療のために）約３７５ｍｇ／ｍ２である。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の投与量は、（例えばＣＬＬの治療のために）第１の周期で約３７５ｍｇ／ｍ２、および周期２〜６（２８日毎）で約５００ｍｇ／ｍ２である。ある特定の実施形態では、リツキシマブの投与量は、（例えばＮＨＬの治療のために）約３７５ｍｇ／ｍ２である。ある特定の実施形態では、リツキシマブの投与量は、（例えばＣＬＬの治療のために）第１の周期で約３７５ｍｇ／ｍ２、および周期２〜６（２８日毎）で約５００ｍｇ／ｍ２である。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の投与量は、周期１の１日目に約１００ｍｇ、周期１の２日目に約９００ｍｇ、周期１の８および１５日目に約１０００ｍｇ、ならびに周期２〜６（２８日周期）の１日目に約１０００ｍｇである。ある特定の実施形態では、オビヌツズマブの投与量は、周期１の１日目に約１００ｍｇ、周期１の２日目に約９００ｍｇ、周期１の８および１５日目に約１０００ｍｇ、ならびに周期２〜６（２８日周期）の１日目に約１０００ｍｇである。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の投与量は、約３００ｍｇである。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の投与量は、（例えば以前に治療していないＣＬＬの治療のために）最小で最も良い応答までの３周期または最大で１２周期の間、周期１の１日目に約３００ｍｇ、続いて８日目に１，０００ｍｇ、続く２８日周期の１日目に約１，０００ｍｇである。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体の投与量は、（例えば難治性ＣＬＬのために）約３００ｍｇの開始用量、続いて１週間後に２，０００ｍｇを毎週、７回用量、続いて４週間後に２，０００ｍｇを４週毎に、４回用量である。ある特定の実施形態では、オファツムマブの投与量は、約３００ｍｇである。ある特定の実施形態では、オファツムマブの投与量は、（例えば以前に治療していないＣＬＬの治療のために）最小で最も良い応答までの３周期または最大で１２周期の間、周期１の１日目に約３００ｍｇ、続いて８日目に１，０００ｍｇ、続く２８日周期の１日目に約１，０００ｍｇである。ある特定の実施形態では、オファツムマブの投与量は、（例えば難治性ＣＬＬのために）約３００ｍｇの開始用量、続いて１週間後に２，０００ｍｇを毎週、７回用量、続いて４週間後に２，０００ｍｇを４週毎に、４回用量である。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、３週毎に１回投与される。
【０１８５】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、毎週１回投与される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、３週スケジュールの１週目の１日目に投与される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、毎週１回、４〜８回用量投与される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、毎週１回、４回用量投与される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、化学療法との周期で、例えば化学療法の各周期の１日目に最大８回用量投与される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、化学療法後に、例えば毎週１回、４回用量を、６ヶ月間隔で最大１６回用量まで投与される。ある特定の実施形態では、リツキシマブは、毎週１回投与される。ある特定の実施形態では、リツキシマブは、３週スケジュールの１週目の１日目に投与される。ある特定の実施形態では、リツキシマブは、毎週１回、４〜８回用量投与される。ある特定の実施形態では、リツキシマブは、毎週１回、４回用量投与される。ある特定の実施形態では、リツキシマブは、化学療法との周期で、例えば化学療法の各周期の１日目に最大８回用量投与される。ある特定の実施形態では、リツキシマブは、化学療法後に、例えば毎週１回、４回用量を、６ヶ月間隔で最大１６回用量まで投与される。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、２８日周期で投与される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、２８日周期で、第１の周期の１、２、８、および１５日目に、ならびに周期２〜６の１日目に投与される。ある特定の実施形態では、オビヌツズマブは、２８日周期で投与される。ある特定の実施形態では、オビヌツズマブは、２８日周期で、第１の周期の１、２、８、および１５日目に、ならびに周期２〜６の１日目に投与される。
【０１８７】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、２８日周期で投与される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、最小で３周期または最大で１２周期の間、周期１の１および８日目に、ならびに続く２８日周期の１日目に、投与される。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２０抗体は、毎週１回投与される。ある特定の実施形態では、オファツムマブは、２８日周期で投与される。ある特定の実施形態では、オファツムマブは、最小で３周期または最大で１２周期の間、周期１の１および８日目に、ならびに続く２８日周期の１日目に、投与される。ある特定の実施形態では、オファツムマブは、毎週１回投与される。
【０１８８】
本発明は、対象（例えば治療の必要な対象）に治療有効量のＣＤ３７結合剤を投与することを含む、がんを治療する方法を提供する。ある特定の実施形態では、がんは、Ｂ細胞悪性疾患である。ある特定の実施形態では、がんは、白血病またはリンパ腫である。ある特定の実施形態では、がんは、Ｂ細胞リンパ腫、ＮＨＬ、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫および成熟Ｂ細胞新生物、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、小細胞性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、低悪性度、中悪性度、および高悪性度（ＦＬ）を含む濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴタイプ辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾性タイプ辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ヘアリーセル白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性障害、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、および未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、がんは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、不特定のＮＨＬ、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）、および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、がんは、ＮＨＬである。ある特定の実施形態では、がんは、再発性または難治性ＮＨＬである。ある特定の実施形態では、がんは、ＣＬＬである。ある特定の実施形態では、がんは、難治性ＣＬＬである。ある特定の実施形態では、がんは、以前に治療していないＣＬＬである。ある特定の実施形態では、対象は、ヒトである。
【０１８９】
ある特定の実施形態では、がんは、転写因子ＭＹＣを過剰発現する。ある特定の実施形態では、ＭＹＣを過剰発現するがんは、ＤＬＢＣＬである。ある特定の実施形態では、がんは、抗アポトーシスタンパク質ＢＣＬ２を過剰発現する。ある特定の実施形態では、ＢＣＬ２を過剰発現するがんは、ＤＬＢＣＬである。ある特定の実施形態では、がんは、ＭＹＣおよびＢＣＬ２を過剰発現する。ある特定の実施形態では、ＭＹＣおよびＢＣＬ２を過剰発現するがんは、ＤＬＢＣＬである。ある特定の実施形態では、ＭＹＣおよびＢＣＬ２を過剰発現するがんは、ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬである。ある特定の実施形態では、ＭＹＣおよびＢＣＬ２を過剰発現するがんは、ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬである。ＭＹＣおよび／またはＢＣＬ−２過剰発現は、予後が不良であることと関連付けられる。過剰発現は、非限定的に免疫組織化学（ＩＨＣ）を含む、タンパク質レベルを検出するために使用される任意の方法によって検出することができる。一部の実施形態では、ＭＹＣおよび／またはＢＣＬ−２過剰発現は、タンパク質過剰発現を引き起こすゲノム変化のためである。かかる場合、例えばＦＩＳＨによるゲノム変化の検出を使用することができる。ＭＹＣおよび／またはＢＣＬ−２の過剰発現は、当業者が決定することができる（例えばＧｒｅｅｎら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、３０巻：３４６０〜３４６７頁（２０１２年）；Ｈｕら、Ｂｌｏｏｄ、１２１巻：４０２１〜４０３１頁（２０１３年）；およびＦｒｉｅｄｂｅｒｇ、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、３０巻：３４３９〜３４４３頁（２０１２年）を参照のこと）。
【０１９０】
加えて、本発明は、対象に治療有効量の抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体を投与することを含む、対象において腫瘍の腫瘍形成能を低減させる方法を提供する。ある特定の実施形態では、腫瘍は、がん幹細胞を含む。ある特定の実施形態では、腫瘍内のがん幹細胞の頻度は、薬剤の投与により低減される。
【０１９１】
本発明はさらに、抗ＣＤ２０抗体との組合せで使用される本明細書で説明する抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の１つまたは複数を含む医薬組成物を提供する。本発明はさらに、抗ＣＤ３７抗体との組合せで使用される本明細書で説明する抗ＣＤ２０抗体の１つまたは複数を含む医薬組成物を提供する。本発明はさらに、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体を含む医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態では、本医薬組成物はさらに、薬学的に許容されるビヒクルを含む。ある特定の実施形態では、本医薬組成物はさらに、保存剤を含む。これらの医薬組成物は、ヒト患者における腫瘍増殖の阻害およびがんの治療において使用を見出す。
【０１９２】
本明細書で提供される使用のための医薬組成物は、局所治療または全身治療のいずれかのための任意の数の方法で投与することができる。投与は、局所、例えば経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、ドロップ、坐剤、スプレー、液体、および粉末；肺（例えば、噴霧器によるものを含む、粉末またはエーロゾルの吸入またはガス注入による；気管内、鼻内、表皮、および経皮）；経口；または静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、もしくは筋内注射もしくは注入を含む非経口；または頭蓋内（例えば髄腔内または脳室内）投与である場合がある。一部の実施形態では、投与は静脈内である。
【０１９３】
一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）および抗ＣＤ２０抗体は、第３、第４、または追加の化合物と、医薬組合せ製剤、または組合せ療法としての投薬レジメンで組合せることができる。
【０１９４】
一部の実施形態では、本方法はさらに、患者に副腎皮質ステロイドを投与することを含む。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベクロメタゾン（ｂｅｃｌａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、およびトリアムシノロンからなる群より選択され得る。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、デキサメタゾンである場合がある。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、事前治療として、すなわち、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与前に、投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中に投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約１日後〜約５日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約１日後〜約４日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約１日後〜約３日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約１日後〜約２日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約２日後〜約５日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約２日後〜約４日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約２日後〜約３日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約２日後および約３日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与中、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約２日後および約３日後に少なくとも１回の追加回数投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、周囲注入により投与することができる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の３０〜６０分前に投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の３０〜６０分前、および抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与後１〜３日目に少なくとも１回の追加回数投与される。事前注入静脈内ステロイド投与は、サイトカイン媒介有害作用を除去することが分かった。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、注入後２および３日目の少なくとも１つに投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の３０〜６０分前にＩＶにより、ならびに注入後２および３日目に経口投与される。
【０１９５】
一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、ＩＶにより投与される。一部の実施形態では、ステロイドは、経口投与される。
【０１９６】
一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の３０〜６０分前に静脈内投与され、副腎皮質ステロイドは、３週の抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）投与周期の２および３日目に経口投与される。
【０１９７】
一部の実施形態では、投与される副腎皮質ステロイドは、デキサメタゾンである場合がある。一部の実施形態では、投与される副腎皮質ステロイドは、メチルプレドニゾロンである場合がある。一部の実施形態では、投与される副腎皮質ステロイドは、プレドニゾロンである場合がある。
【０１９８】
一部の実施形態では、約５ｍｇ〜約１０ｍｇのデキサメタゾンが投与される。一部の実施形態では、約８ｍｇ〜約１０ｍｇのデキサメタゾンが投与される。一部の実施形態では、約１０ｍｇのデキサメタゾンが投与される。一部の実施形態では、約８ｍｇのデキサメタゾンが投与される。一部の実施形態では、約１０ｍｇのデキサメタゾンが、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の３０〜６０分前にＩＶにより投与される。一部の実施形態では、約１０ｍｇのデキサメタゾンが、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の時間に、および再び抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の約１〜約５日後に、ＩＶにより投与される。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の３０〜６０分前にＩＶにより投与され、１用量の８ｍｇのデキサメタゾンは、注入後２および３日目に経口送達される。
【０１９９】
一部の実施形態では、１０ｍｇのデキサメタゾンは、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与の３０〜６０分前に静脈内投与され、８ｍｇのデキサメタゾンは、３週の抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）投与周期の２および３日目に経口投与される。
【０２００】
一部の実施形態では、本方法はさらに、患者に増殖因子を投与することを含む。白血球増殖因子を投与する方法は、例えばＳｍｉｔｈら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．、２４巻：３１８７〜３２０５頁（２００６年）で概略されており、当該文献はその全体を参照により本明細書に組み込む。増殖因子治療は、好中球減少症の可能性を減少させることができる。一部の実施形態では、増殖因子は、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）である場合がある。一部の実施形態では、増殖因子は、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である場合がある。一部の実施形態では、増殖因子は、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）である場合がある。一部の実施形態では、増殖因子は、フィルグラスチムである場合がある。一部の実施形態では、増殖因子は、ペグ化されたもの、例えばペグ化Ｇ−ＣＳＦである場合がある。一部の実施形態では、増殖因子は、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標）として市販されているペグフィルグラスチムである場合がある。
【０２０１】
一部の実施形態では、増殖因子は、事前治療として、すなわち、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）の投与前に投与することができる。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、３週（約２１日）周期で投与され、増殖因子は、この３週（約２１日）周期中のいずれの点でも投与することができる。一部の実施形態では、抗ＣＤ３７イムノコンジュゲート（例えばＩＭＧＮ５２９）は、３週（約２１日）周期で投与され、増殖因子は、この３週（約２１日）周期の周期初期〜周期中期に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約２１日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約２０日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約１９日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約１８日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約１７日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約１６日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約１４日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約１２日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の１日目〜約８日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の約１５日目〜約２１日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の約３日目〜約１０日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の約３日目〜約１０日目の少なくとも２回に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の約３日目〜約１０日目の少なくとも３回に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の約４日目〜約１０日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の約５日目〜約８日目の少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の約５日目、約６日目および約８日目から選択される少なくとも１日に投与することができる。一部の実施形態では、増殖因子は、３週（約２１日）周期の約５日目、約６日目および約８日目に投与することができる。
【０２０２】
一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、増殖因子が投与される日当たり、約１μｇ／体重ｋｇ〜約１５μｇ／体重ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、約５μｇ／ｋｇ／日の用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、約１０μｇ／ｋｇ／日の用量で投与される。
【０２０３】
一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、１日当たり約２００μｇ〜約６００μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、１日当たり約３００μｇ〜約５００μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、１日当たり約３００μｇ〜約４８０μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、１日当たり約３００μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、１日当たり約４００μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、１日当たり約４８０μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、１日当たり約５００μｇの用量で投与される。
【０２０４】
一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、増殖因子が投与される日当たり、約１００μｇ／ｍ２〜約５００μｇ／ｍ２の用量で投与される。一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、約２５０μｇ／ｍ２／日の用量で投与される。
【０２０５】
一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、１日当たり約２００μｇ〜約６００μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、１日当たり約３００μｇ〜約５００μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、１日当たり約３００μｇ〜約４８０μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、１日当たり約３００μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、Ｇ−ＣＳＦは、１日当たり約４００μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、１日当たり約４８０μｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ＧＭ−ＣＳＦは、１日当たり約５００μｇの用量で投与される。
【０２０６】
一部の実施形態では、ペグフィルグラスチムは、１周期当たり約６ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ペグフィルグラスチムは、１周期当たり約１０μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ペグフィルグラスチムは、１周期当たり約１０μｇ／ｋｇ〜約４００μｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ペグフィルグラスチムは、１周期当たり約５０μｇ／ｋｇ〜約３００μｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ペグフィルグラスチムは、１周期当たり約５０μｇ／ｋｇ〜約２００μｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ペグフィルグラスチムは、１周期当たり約５０μｇ／ｋｇ〜約１５０μｇ／ｋｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ペグフィルグラスチムは、１周期当たり約１００μｇ／ｋｇの用量で投与される。
【０２０７】
一部の実施形態では、投薬プロトコールへの副腎皮質ステロイドおよび／またはＧ−ＣＳＦの投与は、より高い用量が投与されることを可能にする。一部の実施形態では、患者は、副腎皮質ステロイドおよび／またはＧ−ＣＳＦの投与のためにより長く治療にとどまる。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドおよび／またはＧ−ＣＳＦの投与のために、より少ない好中球減少症しか観察されない。一部の実施形態では、副腎皮質ステロイドおよび／またはＧ−ＣＳＦの投与のために、より臨床的な利益が観察される。
【０２０８】
本開示の実施形態はさらに、本開示のある特定の抗体の調製および本開示の抗体を使用するための方法を詳細に説明する、以下の非限定的な実施例を参照して画定することができる。材料および方法の両方に対する多くの改変は、本開示の範囲から逸脱することなく実行することができることが、当業者に明らかであろう。
【実施例】
【０２０９】
本明細書に記載された実施例および実施形態は、説明の目的のみのためであり、それに照らした様々な修正または変更が当業者に示唆され、本出願の精神および範囲内に含まれるものであることが理解される。
【０２１０】
（実施例１）
ＩＭＧＮ５２９は、ＮＨＬ細胞株のパネルにわたって抗ＣＤ２０抗体と相乗的に作用する
ＩＭＧＮ５２９は、メイタンシノイド抗有糸分裂薬、ＤＭ１にコンジュゲートしたＣＤ３７結合抗体を含むＣＤ３７標的化抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。ＩＭＧＮ５２９はｈｕＣＤ３７−３−ＳＭＣＣ−ＤＭ１であり、ｈｕＣＤ３７−３抗体は配列番号１２のアミノ酸配列を有する可変重鎖および配列番号１５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖を含む。
【０２１１】
ＩＭＧＮ５２９は、７２時間の処理時間にわたって８×６または８×８の組合せ用量応答マトリックスを使用して、２０の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞株のパネルにわたって１０４の化合物（エンハンサー化合物と呼ぶ）と組み合わせた。本試験においては、５種のＮＨＬサブタイプを代表させた：胚中心Ｂ細胞びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（Ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ；ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ）、活性化Ｂ細胞びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ；ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）およびバーキットリンパ腫。各々のＮＨＬサブタイプを代表する細胞株については、表９を参照のこと。
【表９】
2018517714.tif 000025
１ＤＯＨＨ２は文献において、一般に濾胞性リンパ腫モデルとして記載されているが、細胞の起源を決定するための遺伝的特徴付けはＤＯＨＨ２がＤＬＢＣＬであることを示した。
【０２１２】
各々の化合物およびＩＭＧＮ５２９と各々の化合物の組合せの細胞生存率に対する効果を評価するために、抗増殖アッセイを行った。３８４−または１５３６−ウェルの組織培養処理プレート中の適切な増殖培地に、２００〜１５００の範囲の細胞密度で、各々の細胞株の倍化時間に基づいて、細胞を播種した。細胞を遠心分離によってアッセイプレート中で平衡化し、処理前に２４時間３７℃で投薬モジュールに取り付けたインキュベーターに設置した。ＩＭＧＮ５２９およびエンハンサー化合物を細胞株に同時に添加した。処理の時点で、（処理を受けなかった）一式のアッセイプレートを収集し、ＡＴＰＬｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加することによってＡＴＰレベルを測定した。これらのＴｚｅｒｏ（Ｔ０）プレートは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー上で、超高感度発光を使用して読み取られた。処理したアッセイプレートを化合物と共に７２時間インキュベートした。７２時間後、ＡＴＰＬｉｔｅを使用したエンドポイント分析のためにプレートを展開した。全てのデータポイントは、自動化されたプロセスによって収集され、品質管理され、Ｈｏｒｉｚｏｎ  ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘ専売ソフトウェアを使用して分析された。アッセイプレートは、以下の品質管理標準を満たしている場合に、受容された：相対ルシフェラーゼ値は実験全体にわたって一貫しており、Ｚ因子スコアは０．６より大きく、未処理／ビヒクル対照はプレート上で一貫して挙動していた。相乗スコアの計算は、以下に記載される。
【０２１３】
Ｈｏｒｉｚｏｎ  ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘは、細胞生存率の尺度として増殖阻害（ＧＩ）を利用する。ビヒクルの細胞生存率は、投薬時（Ｔ０）および７２時間後（Ｔ７２）に測定される。Ｈｏｒｉｚｏｎ  ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘは以下の試験と方程式を適用することにより、ＧＩを計算する。
【数１】
2018517714.tif 000026
ここで、Ｔは試験品についてのシグナル測定値、Ｖはビヒクル処理された対照測定値、Ｖｏは時間ゼロでのビヒクル対照測定値である。この式は、国立がん研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）のＮＣＩ−６０ハイスループットスクリーニングで使用されている増殖阻害計算から導き出されたものである。全ての組合せデータ分析は、この増殖阻害の測定値を使用して行った。
【０２１４】
０％のＧＩ読み取り値は増殖阻害を示さない、すなわち化合物で処理した細胞およびＴ７２ビヒクルシグナルは一致している。ＧＩ  １００％は完全な増殖阻害を表す。すなわち、化合物により処理された細胞およびＴ０ビヒクルシグナルは一致している。１００％のＧＩは、処理期間の間にウェル中の細胞数が増加しなかったことを示し、この効果レベルでプラトーに到達する化合物についての細胞増殖抑制効果を示唆し得る。ＧＩ  ２００％は、培養ウェル中の全ての細胞の完全な死滅を表す。ＧＩ  ２００％の活性プラトーに到達する化合物は、細胞傷害性であると考えられる。
【０２１５】
細胞増殖抑制性および細胞傷害性処理の両方が、１００％の阻害率をもたらすことができる。阻害率は以下のように計算される：
【数２】
2018517714.tif 000027
ここで、Ｔは処理されたもので、Ｕは未処理のものである。
【０２１６】
Ｌｏｅｗｅ相加性を上回る組合せ効果を測定するために、相乗的相互作用の強さを特徴付けるスカラー尺度であるＨｏｒｉｚｏｎ  ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘの相乗スコア計算を使用した。相乗スコアは以下のように計算された：
相乗スコア＝ｌｏｇ  ｆｘ  ｌｏｇ  ｆＹ  Σ  ｍａｘ（Ｏ，Ｉデータ）（Ｉデータ−ＩＬｏｅｗｅ）
【０２１７】
マトリックス中の各々の成分薬剤および組合せ点についての部分阻害（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）を、全てのビヒクル処理対照ウェルの中央値と比較して計算した。相乗スコア方程式は、相加性のためのＬｏｅｗｅモデルを使用して、成分薬剤の活性から数値的に由来するモデル表面を超えるマトリックスの各々の点における実験的に観察された活性量（ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｖｏｌｕｍｅ）を積分する。相乗スコア方程式（上記）の追加の項は、個々の薬剤に使用される様々な希釈係数を正規化し、実験全体にわたる相乗スコアの比較を可能にするために使用された。陽性阻害ゲーティングまたはＩデータ乗数を含めることにより、ゼロ効果レベル近辺のノイズを除去し、高活性レベルで生じる相乗的相互作用の結果を偏らせる。より高い最大ＧＩ効果との組合せまたは低濃度で相乗的である組合せは、より高い相乗スコアを有するであろう。ベースラインの自己交差値（ｓｅｌｆ−ｃｒｏｓｓ  ｖａｌｕｅ）と統計的に取って代わる相乗スコアとのそれらの組合せは、相乗的であるとみなすことができる。各々の細胞株において互いに組み合わされた２５の化合物を使用して、自己交差値を生成した。
【０２１８】
効力のシフトは、アイソボログラムを使用して評価した。これは、所望の効果レベルを達成するために組み合わせて使用するときの、その効果に達するのに必要な単剤用量と比較した場合の薬物の減少を示す。指定された阻害レベルの横断に対応する濃度の位置を特定することにより、イソボログラムを描いた。これは、他の単剤の濃度を横切る用量マトリックス中の各々の単剤濃度の交点を見いだすことによって行われた。実際には、各々の垂直濃度ＣＹは固定されたままにしておき、二等分アルゴリズムを使用して、応答面Ｚ（ＣＸ，ＣＹ）における選択された効果レベルを与える、その垂直用量と組み合わせた水平濃度ＣＸを同定した。その後、これらの濃度は、線形内挿によって結ばれ、アイソボログラムディスプレイを生成する。相乗的相互作用については、アイソボログラムの輪郭は、相加性閾値を下回り、原点に近づき、拮抗的相互作用は、相加性閾値を上回るだろう。エラーバーは、アイソボログラムを生成するために使用される個々のデータポイントから生じる不確実性を表す。濃度を求めるための二分法を使用して応答誤差から各々の交点の不確実性を推定する。ここで、Ｚ−σＺ（ＣＸ，ＣＹ）およびＺ＋σＺ（ＣＸ，ＣＹ）は、Ｉｃｕｔを横断し、σＺは効果スケール上の残余誤差の標準偏差である。
【０２１９】
１０４種のエンハンサー化合物とともにＩＭＧＮ５２９を用いて生成された全ての相乗スコアを調査することにより、抗ＣＤ２０抗体で最も高い相乗スコアが得られることが示された。３つの抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ、オビヌツズマブ（ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、およびオファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）の平均相乗スコアは、他のエンハンサー化合物について得られた平均相乗スコアよりほぼ３倍高かった。相乗作用は、ＮＨＬにおいて使用される他の標準治療処置を含む複数のクラスのエンハンサー化合物にわたって見られたが、全ての標準治療薬剤で見られるわけではなかった。例えば、ドキソルビシン（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）およびエトポシド（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）のようなトポイソメラーゼＩＩ阻害剤は、ＩＭＧＮ５２９と組み合わせた場合に相乗作用を示さなかった。
【０２２０】
ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブ、ＩＭＧＮ５２９＋オビヌツズマブ、およびＩＭＧＮ５２９＋オファツムマブの組合せについて得られた相乗スコアを表１０に示す。影付きボックスの相乗スコアは、平均自己交差プラス標準偏差の２倍（２σ）に取って代わるものを表す。統計的に有意な相乗スコアの範囲は４．０７〜６２．９である。３つの抗ＣＤ２０抗体は全て、ＮＨＬの全てのサブタイプを代表する１１種の細胞株にわたって有意な相乗作用を示した。抗増殖アッセイを、ＮＨＬ細胞株のサブセットにおいて、ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブ、ＩＭＧＮ５２９＋オビヌツズマブ、およびＩＭＧＮ５２９＋オファツムマブの組合せについて繰り返した。ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの細胞生存率の低下に対する相乗効果が再現され、相乗スコアが統計的に有意であることが確認された。３つの追加的な細胞株において、オファツムマブおよびリツキシマブについてもまた、有意な相乗作用が観察された。
【表１０】
2018517714.tif 000028
影付きボックスは、自己交差×２標準偏差を超える相乗スコアを示す
【０２２１】
ＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブについての組合せデータは、ＮＨＬの各々のサブタイプを代表する５つの細胞株について提供される。データは、ＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブの各々の用量でのパーセント（％）増殖阻害（図１、パネルａ−ｆ）、アイソボログラム（図２、パネルａ−ｆ）、および最良の組合せ指数（ＣＩ）値（表１１）として示す。この試験の条件下で達成できる最大増殖阻害は２００％である。
【表１１−１】
2018517714.tif 000029
【表１１−２】
2018517714.tif 000030
【０２２２】
１未満のＣＩ値は、相乗作用を示す；ＣＩ＝１は相加性を示す；１より大きいＣＩは拮抗作用を示す。代表的なアイソボログラムは、全て相乗的な相互作用を示し（アイソボログラムの輪郭が相加性閾値を下回る）、各々の組合せの最良のＣＩ値は０．４未満である。
【０２２３】
ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せもまた、その分子特性に基づいて治療することが困難なＤＬＢＣＬ患者集団を表すＯＣＩ−Ｌｙ１８細胞株モデルにおいて試験した。この細胞株は、転写因子ＭＹＣおよび抗アポトーシスタンパク質ＢＣＬ２を過剰発現し、この発見は、ＩＨＣを使用して内部で確認された（ＢＣＬ２についてのＨスコア２７５およびＭＹＣについてのＨスコア２３０）。Ｈスコアは、染色強度スコア（例えば、０から３のスコア。ここで、０は無染色を表し、３は強い染色を表す）を染色について陽性である細胞の百分率と組み合わせる（すなわち、均一性）。Ｈスコアは、以下のように計算することができる：
Ｈスコア＝［０＊（強度０で染色された細胞の百分率）］＋［１＊（強度１で染色された細胞の百分率）］＋［２＊（強度２で染色された細胞の百分率）］＋［３＊（強度３で染色された細胞の百分率）］。
したがって、Ｈスコアは、０（細胞染色なし）から３００（強度３での全細胞染色）の範囲であり得る。予後不良のＤＬＢＣＬ患者においては、ＭＹＣとＢＣＬ２の両方の過剰発現が記載されている。ＯＣＩ−Ｌｙ１８におけるリツキシマブ＋ＩＭＧＮ５２９の組合せについて得られた相乗スコアは１１．３であり、これは、統計学的に有意である。図３、パネルＡおよびＢに示されるアイソボログラムおよびパーセント増殖阻害は相乗作用を示し、最良のＣＩは０．２３として決定された。
【０２２４】
ＩＭＧＮ５２９の個々の成分の寄与を見るために、ＩＭＧＮ５２９、非コンジュゲート細胞透過性ＤＭ１−Ｍｅ、およびｈｕＣＤ３７−３抗ＣＤ３７抗体と組み合わせたリツキシマブを、以下の代表的細胞株：ＤＯＨＨ２、ＧＲＡＮＴＡ−５１、ＯＣＩ−Ｌｙ１８、ＳＵＤＨＬ−４およびＵ２９３２において、評価するための実験を行った。図４の棒グラフは、得られた相乗スコアを示す。統計的に有意な相乗スコアをアスタリスクで示す。リツキシマブは、試験した５つの細胞株全てにおいて、ＩＭＧＮ５２９との相乗作用を示す。ｈｕＣＤ３７−３抗体は、試験した５つの細胞株のいずれにおいても統計的に有意な相乗作用を示さなかった。ＤＭ１−Ｍｅコンジュゲートは、２つの細胞株：ＳＵＤＨＬ−４およびＵ２９３２において有意な相乗作用を示したが、より少ない程度であった。これらのデータは、完全な相乗作用のために、ＩＭＧＮ５２９におけるｈｕＣＤ３７−３抗体およびＤＭ１−Ｍｅ活性の両方が必要とされることを示唆している。
【０２２５】
ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブの組合せの相乗作用がいずれかの単剤活性によって引き起こされたか否かを同定するために、いずれかの単剤の活性を、ＮＨＬ細胞株のパネルについての相乗スコアと比較した。Ｈｏｒｉｚｏｎ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙによる７２時間生存度アッセイ（ＡＴＰ  ｌｉｔｅ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して、ＮＨＬ細胞株のパネルの感度を決定した。
【０２２６】
応答曲線の曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して、細胞株の感受性を測定した。黒色の３８４ウェル組織培養処理プレート中の増殖培地に、ウェル当たり５００個の細胞で細胞を播種した。処理時（播種４８時間後（Ｔ０））、一式のアッセイプレート（処理を受けていない）を集め、ＡＴＰＬｉｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加することにより、ＡＴＰレベルを測定した。これらのＴｚｅｒｏ（Ｔ０）プレートは、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー上で、超高感度発光を使用して読み取られた。処理したアッセイプレートを化合物と共に７２時間インキュベートした。１２０時間後、ＡＴＰＬｉｔｅを使用してエンドポイント分析のためにプレートを展開した。全てのデータポイントは、自動化されたプロセスによって収集され、品質管理され、Ｈｏｒｉｚｏｎ  ＣｏｍｂｉｎａｔｏＲｘ専売ソフトウェアを使用して分析された。下記の品質管理標準を満たした場合に、アッセイプレートを受け入れた：（１）実験全体を通して一貫した相対ルシフェラーゼ値、（２）０．６より大きいＺ因子スコア、および（３）プレート上で一貫した未処理／ビヒクル対照。ＧＩを細胞生存率の尺度として利用した。ビヒクルの細胞生存率は、投薬時（Ｔ０）および１２０時間後（Ｔ７２）に測定した。
【０２２７】
図９に示すように、ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの組合せの相乗作用は、いずれの薬物の単剤活性によっても予測されず、合成−致死型相互作用を示唆している。
【０２２８】
細胞生存率を低下させることについてのＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せは、Ｕ２９３２（ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬ）、Ｆａｒａｇｅ（ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ）、ＯＣＩ−Ｌｙ−７（ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ）、ＯＣＩ−Ｌｙ−１０（ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬ）およびＤＯＨＨ２（ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ）細胞株において再現した。結果を図１０、パネルＡ〜Ｅに示す。高い相乗スコアの細胞株（例えば、Ｕ２９３２、ＯＣＩ−Ｌｙ７、およびＦａｒａｇｅ、図１０、パネルＡ〜Ｃ）においては、低用量のリツキシマブは、最大の細胞殺滅に必要となるＩＭＧＮ５２９の用量を減少させた。これらの結果はまた、ＡＢＣおよびＧＣＢ  ＤＬＢＣＬサブタイプの両方におけるＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの組合せによる強力な細胞殺滅能力を示唆する。低い相乗スコアの細胞株（例えば、ＤＯＨＨ２、図１０、パネルＤ）においては、リツキシマブと比較して用量依存的な相乗作用があった。低い／有意でない相乗作用を有する細胞株（例えば、ＯＣＩ−Ｌｙ−１０、図１０、パネルＥ）においては、リツキシマブの添加による利益はなかった。
【０２２９】
（実施例２）
ｉｎ  ｖｉｖｏ効力  ＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブ組合せ療法
ｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍負荷を低下させる能力についてのＩＭＧＮ５２９の効力を試験するために、以下のプロトコールに記載されるように、播種性腫瘍生存モデルを使用した。
【０２３０】
雌ＳＣＩＤマウスに、それぞれ、１×１０７個のＦａｒａｇｅ細胞、ヒトＤＬＢＣＬ細胞株を、側方尾静脈に静脈内接種した。接種後７日目に、マウスを群に分け、以下の表１２に概説するようにＩＭＧＮ５２９単独またはリツキシマブと組み合わせて静脈内注射により処置した。ＩＭＧＮ５２９を７日目に２．５または５ｍｇ／ｋｇの用量で１回投与した。リツキシマブは、単独療法アームでは接種後７日目および２１日目に、組合せアームでは７、１４および２１日目に投与した。動物を毎日モニターし、測定されたエンドポイントは生存であった。後肢麻痺が存在し、体重が処置前体重の＞２０％だけ減少したときか、または何らかの苦痛の徴候が見られたときに動物を屠殺した。
【０２３１】
結果を図５に示す。ビヒクル処置動物の生存期間中央値は２７日間であった。単独療法としてのリツキシマブは、生存期間中央値を３２日に延長した。２．５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇで投与された単独療法としてのＩＭＧＮ５２９は、生存中央値をそれぞれ、３４．５および４２日に延長させた。リツキシマブとＩＭＧＮ５２９の組合せで処置した動物の生存期間中央値は決定されなかった。リツキシマブと組み合わせて２．５ｍｇ／ｋｇでのＩＭＧＮ５２９で処置した１０匹の動物のうち７匹およびリツキシマブと組み合わせて５ｍｇ／ｋｇでのＩＭＧＮ５２９で処置した１０匹の動物のうち１０匹が、Ｆａｒａｇｅ細胞の接種後９０日目に生存していたからである。したがって、ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せは、生存期間を劇的に延長した。
【表１２】
2018517714.tif 000031
【０２３２】
（実施例３）
ＳＵ−ＤＨＬ−４、ＤＬＢＣＬモデルにおけるＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブ組合せ療法の改善された効力および毒性
ＩＭＧＮ５２９の抗腫瘍活性は、ＳＵ−ＤＨＬ−４  ＤＬＢＣＬリンパ腫異種移植片を有する雌ＳＣＩＤマウスにおける、単独療法として、およびリツキシマブとの組合せとして、およびＲ−ＣＨＯＰ組合せ化学療法として評価された。マウスを腫瘍体積により群へ無作為化し（群当たりｎ＝８）、続いて、接種後２０日目に投与した。これらの群は、ビヒクル（ＰＢＳ）を投与された対照群、１０ｍｇ／ｋｇで投与されたＩＭＧＮ５２９単剤群、１０ｍｇ／ｋｇで投与された単剤リツキシマブ群、１０ｍｇ／ｋｇ用量のＩＭＧＮ５２９と１０ｍｇ／ｋｇのリツキシマブの単回用量との組合せからなるＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブ組合せ群、およびＲ−ＣＨＯＰ組合せ化学療法を併用した群を含んだ。Ｒ−ＣＨＯＰ化学療法レジメンは、単一の１０ｍｇ／ｋｇ用量のＣＤ２０標的化抗体リツキシマブ、単一の３０ｍｇ／ｋｇ用量のＤＮＡアルキル化剤シクロホスファミド、単一の２．５ｍｇ／ｋｇ用量のＤＮＡインターカレート剤ドキソルビシン、単一の０．３７５ｍｇ／ｋｇ用量の微小管阻害剤ビンクリスチン、および５回の毎日０．１５ｍｇ／ｋｇ用量の、副腎皮質ステロイドであるプレドニゾンからなった。
【０２３３】
腫瘍体積は、週に１〜２回、キャリパーを使用して３次元で測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝長さ×幅×高さ×１／２を使用して、ｍｍ３で表された（ＴｏｍａｙｋｏおよびＲｅｙｎｏｌｄｓ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２４巻：１４８〜５４頁（１９８９年））。試験薬剤の毒性の大まかな指標として、体重を週に２回測定した。活性は、Ｂｉｓｓｅｒｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１巻：４８４５〜５２頁（１９９１年）に記載されているように評価した。
【０２３４】
腫瘍増殖阻害（Ｔ／Ｃ値）もまた、以下の式を使用して評価した：
Ｔ／Ｃ（％）＝処置の腫瘍体積中央値／対照の腫瘍体積中央値×１００
腫瘍体積は、ＰＢＳ対照の腫瘍体積が所定の大きさに達したときに、処置（Ｔ）群およびＰＢＳ対照（Ｃ）群について同時に決定した。（Ｂｉｓｓｅｒｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１巻：４８４５〜５２頁（１９９１年）。）腫瘍を含まないマウス（０ｍｍ３）を含む、各々の処置群の日々の腫瘍体積中央値を測定した。ＮＣＩ基準に従うと、Ｔ／Ｃ≦４２％が抗腫瘍活性の最小レベルである。Ｔ／Ｃ＜１０％は、高い抗腫瘍活性レベルと考えられる。
【０２３５】
腫瘍増殖遅延（Ｔ−Ｃ）もまた、評価した。腫瘍増殖遅延（Ｔ−Ｃ）計算について、ＴおよびＣは、それぞれ処置群（Ｔ）およびＰＢＳ対照（Ｃ）群の腫瘍が所定の大きさに達するのに必要な時間（日）の中央値である。腫瘍のない生存者は計算から除外される。
【０２３６】
腫瘍倍化時間（Ｔｄ）もまた、ＰＢＳ対照群の日々の腫瘍体積中央値の非線形指数関数曲線フィッティングから推定される。
【０２３７】
対数細胞殺滅（ＬＣＫ）も評価した。皮下増殖腫瘍について、全対数細胞殺滅（ＬＣＫ）は、以下の式から計算される：
ＬＣＫ＝（日数でのＴ−Ｃ値）／（３．３２×Ｔｄ）
ここで、Ｔ−Ｃは、上に記載のような腫瘍増殖遅延であり、Ｔｄは、日数での腫瘍体積倍加時間である。対数細胞殺滅値は、サザン研究施設（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；ＳＲＩ）の基準に従って、活性評点に変換することができる。
【表Ｂ】
2018517714.tif 000032
【０２３８】
腫瘍退縮もまた、評価した。腫瘍体積が５０％またはそれを超えて減少した場合、対象は部分的退縮（ＰＲ）を有するとみなされ、触知できる腫瘍が検出されなかった場合、完全な腫瘍退縮（ＣＲ）を有するとみなされた。無腫瘍生存者（ＴＦＳ）の数は、試験終了時（接種後９０日）に無腫瘍であった対象の数である。全てのマウスの体重を薬物毒性の指標として１週間に１から２回測定した。
【０２３９】
ＩＭＧＮ５２９は、単独療法（１６％のＴ／Ｃ、１／８  ＣＲおよび０／８  ＴＦＳ）として活性であった。単回用量リツキシマブもまた、単独療法（４２％のＴ／Ｃ、２／８  ＣＲおよび２／８  ＴＦＳ）として活性であった。Ｒ−ＣＨＯＰ療法は、モデル（２５％  Ｔ／Ｃ、２／８  ＣＲおよび１／８  ＴＦＳ）において、活性であった。ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの組合せは非常に活性であった（０％  Ｔ／Ｃ、５／８  ＣＲおよび４／８  ＴＦＳ）。単剤療法ならびにＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブ組合せ療法は、最小限の最下点体重減少（ＢＷＬ）をもたらした（ＩＭＧＮ５２９、リツキシマブおよびＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブ群においては、それぞれ２．５、１．４および２．０％）。Ｒ−ＣＨＯＰ処置は、ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの組合せ（２．０％）と比較して、最下点で認識できるほど大きなＢＷＬ（７．５％）をもたらした（図６）。
【０２４０】
（実施例４）
ＤＯＨＨ２、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）モデルにおけるＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブ組合せ療法の効力の改善
ＩＭＧＮ５２９の抗腫瘍活性は、ＤｏＨＨ２  ＦＬ異種移植片を有する雌ＳＣＩＤマウスにおける単独療法として、およびリツキシマブと組み合わせて評価した。マウスを腫瘍体積により群（群当たりｎ＝８）へ無作為化し、続いて接種後１０日目に投与した。これらの群は、ビヒクル（ＰＢＳ）を投与した対照群、１０ｍｇ／ｋｇを３週毎に１回（ｑｗｘ３）および５ｍｇ／ｋｇをｑｗｘ３で投与した２つのＩＭＧＮ５２９単剤群、１０ｍｇ／ｋｇをｑｗｘ３で投与したリツキシマブ単剤群、Ｒ−ＣＨＯＰ群、ならびに１０ｍｇ／ｋｇをｑｗｘ３または５ｍｇ／ｋｇをｑｗｘ３でのＩＭＧＮ５２９と組み合わせて１０ｍｇ／ｋｇをｑｗｘ３用量のリツキシマブを投与された２つのＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブ組合せ群を含んだ。Ｒ−ＣＨＯＰ化学療法レジメンは、単一の１０ｍｇ／ｋｇ用量のＣＤ２０標的化抗体リツキシマブ、単一の３０ｍｇ／ｋｇ用量（ｉｖ）のＤＮＡアルキル化剤シクロホスファミド、単一の２．５ｍｇ／ｋｇ用量（ｉｖ）のＤＮＡインターカレート剤ドキソルビシン、単一の０．３７５ｍｇ／ｋｇ用量の微小管阻害剤ビンクリスチン（ｉｖ）、および５回の毎日０．１５ｍｇ／ｋｇ用量（ｑｄｘ５ｐｏ）の、副腎皮質ステロイドであるプレドニゾンからなった。
【０２４１】
腫瘍体積および体重を上に記載のように測定した。
【０２４２】
図７にデータを提示する。ＩＭＧＮ５２９は、それぞれ１０および５ｍｇ／ｋｇ  ｑｗｘ３用量について、１４％および３０％  Ｔ／Ｃ、１．１４および２．１３  ＬＣＫ、１／８および０／８  ＰＲ、１／８および０／８  ＣＲ、１／８および０／８  ＴＦＳでの用量依存活性を示した。ＩＭＧＮ５２９の両方の用量は、Ｔ／Ｃ値によって活性であった。ＳＲＩ基準を用いると、５ｍｇ／ｋｇは＋であり、１０ｍｇ／ｋｇは＋＋であった。単独療法として、リツキシマブもまた、１０ｍｇ／ｋｇ  ｑｗｘ３（１３％  Ｔ／Ｃ、１．６９ＬＣＫ、３／８  ＰＲ、３／８  ＣＲ、および２／８  ＴＦＳ）で活性であった。１０ｍｇ／ｋｇリツキシマブｑｗｘ３と５ｍｇ／ｋｇ  ｑｗｘ３  ＩＭＧＮ５２９との組合せは、単独療法ＩＭＧＮ５２９またはリツキシマブ（１８％  Ｔ／Ｃ、１．６９  ＬＣＫ、１／８  ＰＲ、１／８  ＣＲ、０／８  ＴＦＳ）と同じくらい活性であった。単独療法（４％  Ｔ／Ｃ、２．１３  ＬＣＫ、７／８  ＰＲ、７／８  ＣＲ、７／８  ＴＦＳ）として投与された薬剤よりも１０ｍｇ／ｋｇリツキシマブｑｗｘ３と１０ｍｇ／ｋｇ  ｑｗｘ３  ＩＭＧＮ５２９との組合せがより活性であった。この組合せはＳＲＩ標準によると＋＋＋活性であった。したがって、ＬＣＫ＋＋活性用量のＩＭＧＮ５２９（１０ｍｇ／ｋｇ）およびリツキシマブの組合せは高度に有効であった。Ｒ−ＣＨＯＰを本試験の比較のために使用した。両方の薬剤を１０ｍｇ／ｋｇ  ｑｗｘ３で投与した場合の組合せＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの活性は、Ｒ−ＣＨＯＰ（４％対０％  Ｔ／Ｃ、２．１３対３．１１  ＬＣＫ、７／８対８／８  ＰＲ、７／８対８／８  ＣＲ、７／８対５／８  ＴＦＳ）と同等であった。ＩＭＧＮ５２９対リツキシマブの組合せ処置マウスは、Ｒ−ＣＨＯＰ処置マウスよりも、わずかに軽い体重減少を示した（３％対５％）。
【０２４３】
（実施例５）
ＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブはカスパーゼ活性化によるアポトーシスを誘導する
ＩＭＧＮ５２９およびｈｕＣＤ３７−３の両方とも、架橋の非存在下、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでアポトーシスを誘導することができる。ＩＭＧＮ５２９は、抗体成分の機能的活性と標的化ＤＭ１ペイロード送達とを組み合わせるため、細胞殺滅活性の増強を示す。ＩＭＧＮ５２９単独またはリツキシマブと組み合わせた細胞殺滅の機構を、カスパーゼ３および７の活性の誘導を評価することによって試験した。
【０２４４】
これらの試験においては、加湿した３７℃のインキュベーター内で、１日間、様々な処理の存在下、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地１００μＬ中で、ウェル当たり１０，０００細胞で細胞をインキュベートした。処理は、１０ｎＭのｈｕＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体、１０ｎＭのリツキシマブ、１０ｎＭのｈｕＣＤ３７−３抗体、１ｎＭのＩＭＧＮ５２９、またはそれらの組合せであった。アポトーシスの強力な誘導物質であるスタウロスポリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を、２μＭ濃度で、陽性対照として使用した。Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、製造業者の取扱説明書に従いカスパーゼ３／７活性を検出した。簡潔には、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７緩衝液および凍結乾燥Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７基質を、使用前に室温（ＲＴ）に平衡化し、次いで完全に混合した。アッセイプレートをインキュベーターから取り出し、室温に平衡化させ、１００μＬのＣａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７試薬を各々のウェルに添加した。プレートを、オービタルプレートシェーカーを使用して３０秒間穏やかに混合し、細胞溶解を誘導した。アッセイプレートをホイルで覆って、室温で１時間インキュベートした。各々の試料の発光をＶｉｃｔｏｒ３マイクロプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で相対発光単位（ＲＬＵ）において測定した。対照試料からの平均ＲＬＵで割った各々の処理についての平均ＲＬＵとして、ｈｕＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体処理試料と比較した各々の処理について、カスパーゼ３／７の倍数誘導（ｆｏｌｄ−ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）を計算した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ５（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．）を使用してデータをプロットした。
【０２４５】
これらのアッセイの結果は、図８、パネルＡ〜Ｅに表されている。ＩＭＧＮ５２９はＣＤ３７＋ヒトリンパ腫細胞株のパネルにおいて、カスパーゼ３／７活性を誘導した。ＩＭＧＮ５２９処理は、ＤＯＨＨ２、Ｆａｒａｇｅ、ＳＵ−ＤＨＬ−４、Ｕ２９３２およびＯＣＩ−Ｌｙ７細胞におけるｈｕＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体によって誘導される活性より、およそ１．８から２．５倍高いカスパーゼ３／７活性をもたらした。リツキシマブと組み合わせて、ＩＭＧＮ５２９のカスパーゼ３／７活性の誘導は、これらの細胞株において上昇し、対照抗体によって誘導された活性よりも３．４から５．２倍の範囲高いものであった。これらの結果は、ＩＭＧＮ５２９誘導細胞死がカスパーゼ媒介経路と関連していることを示している。これは、細胞死のアポトーシス機構と一致し、タイプ１抗ＣＤ２０抗体の例であるリツキシマブの存在によって、活性を増強することができる。
【０２４６】
カスパーゼ３／７活性化に対するＩＭＧＮ５２９とリツキシマブの組合せ効果もまた、ＤＯＨＨ−２、ＯＣＩ−Ｌｙ７、ＳＵ−ＤＨＬ−４、およびＵ２９３２細胞株中、用量−組合せマトリックスとしてのゼロを含む一連の濃度で、単剤についておよび２つの薬剤の対での組合せについて、反復して測定した。４×１０−８Ｍの４×作業ストックとして、両方の単剤を調製した。完全ＲＰＭＩ−１６４０培地において、ＩＭＧＮ５２９の１／３連続希釈およびリツキシマブについての１／４連続希釈液を生成した。試験試料（ＩＭＧＮ５２９、リツキシマブまたは両方）を、白壁の９６ウェルアッセイプレート（Ｃｏｓｔａ  ３９１７）に、２５μＬ／ウェルで二連で加えた。未処理の細胞を有するウェルを増殖対照として使用した。指数関数的に増殖する細胞を、完全ＲＰＭＩ１６４０培地中で３×１０５個／ｍＬで再懸濁し、５０μＬ／ウェルをアッセイプレートに添加した。最終アッセイ条件は、１×１０−８Ｍから１．４×１０−１１ＭまでのＩＭＧＮ５２９を有し、１×１０−８Ｍから３．９×１０−１１Ｍまでのリツキシマブを有する／有さない、ウェル当たり１５，０００個の細胞に対応した。プレートを、加湿した３７℃インキュベーター中で１日（２４時間）、示したようにインキュベートした。この試験を通して、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｃａｔ＃ＰＡＧ８０９２）を使用して、カスパーゼ３／７活性を製造業者の取扱説明書に従って検出した。図１１、パネルＡ〜Ｄにおけるこれらの実験の結果は、ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブでの処理が劇的なカスパーゼ３／７活性化をもたらし、細胞死を導くことを示している。
【０２４７】
ＰＡＲＰ切断もまた、ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブによる処理後に調べた。指数関数的に増殖する細胞を、１，２００ｒｐｍで５分間、室温で遠心分離することにより回収し、完全ＲＭＰＩ−１６４０培地中で０．５×１０６個／ｍＬで再懸濁した。１ペトリ皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ４３０１６７）当たり１０ｍＬ、５×１０６細胞／皿に等しくなるように細胞を移した。ＩＭＧＮ５２９またはリツキシマブまたはその両方を、各々の細胞株について、Ｃａｓｐａｓｅ−Ｇｌｏ（登録商標）３／７アッセイの結果に基づく濃度で添加した。０．５時間、２時間および１８時間のインキュベーションの後、試料を収集し、１０ｍＬの氷冷１×ＰＢＳで洗浄した。Ｐａｔｈｓｃａｎストレスおよびアポトーシスシグナル伝達抗体アレイキットおよびＰａｔｈＳｃａｎ細胞内シグナル伝達アレイキット（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃１２８５６および＃７３２３）を、製造業者の取扱説明書に従って使用して、処理により影響を受けたシグナル伝達分子を検出した。簡潔に述べると、Ｈａｌｔプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテル（ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ｐｒｏｄ＃１８６１２８１）とともにキットにより提供された溶解緩衝液を用いて、細胞を溶解した。溶解物を１ｍｇ／ｍＬに標準化し、５０〜７５μＬの溶解物をアレイ膜とともにインキュベートした。アレイを、室温で１時間、検出抗体カクテルとともにインキュベートし、続いて室温で３０分間、ＨＲＰ結合ストレプトアビジンとともにインキュベートした。スライドをＬｕｍｉＧｌｏ／ペルオキシド試薬とともにインキュベートし、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ｃｈｅｍｉＤｏｃ  ＭＰ画像システムを使用してイメージングした。デンシトメトリー分析を行い、データをエクスポートしてマイクロソフトＥｘｃｅｌで分析した。未処理の対照試料に対する各々の処理についてのＲＬＵを、各々の時点での各々の処理についての平均ＲＬＵから、未処理試料の平均ＲＬＵを引いたものとして計算した。図１１、パネルＥ〜Ｈに示すように、ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブと細胞の１８時間のインキュベーションにより、ＰＡＲＰの切断が増加し、細胞がアポトーシスを受けていることを示した。
【０２４８】
（実施例６）
再発性または難治性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を有する患者におけるリツキシマブと組み合わせたＩＭＧＮ５２９の試験
ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せは、ヒト患者における再発性および／または難治性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および他の形態の非ホジキンリンパ腫に対するその効力および耐容性について試験される。
【０２４９】
試験デザイン
オープンラベル、多施設、非無作為化フェーズＩＩ（安全性ランイン（ｒｕｎ−ｉｎ）フェーズとともに）試験において、ＩＭＧＮ５２９は、再発性および／または難治性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）および他の形態の非ホジキンリンパ腫を有する患者に、リツキシマブと組み合わせて投与される。この試験は、スクリーニング期間、治療期間、治療来診の終了、およびフォローアップ期間からなる。ＤＬＢＣＬ、濾胞性ＮＨＬ（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、または辺縁帯／粘膜関連リンパ組織（ＭＺＬ／ＭＡＬＴ）、または他のＮＨＬサブタイプを有する患者は、試験の安全性ランインフェーズに登録する資格がある。安全性ランインの間、少なくとも６人のＤＬＢＣＬ患者および６人のＦＬ  ＮＨＬ患者が登録されている。試験のフェーズ２においては、患者は疾患の診断に従って、２つの並行したコホートに登録される：コホート１、Ｒ／Ｒ  ＤＬＢＣＬ（およそ３０人の患者；新規またはがん化）およびコホート２、Ｒ／Ｒ  ＮＨＬの他のサブタイプ（およそ３０人の患者）。
【０２５０】
ＩＭＧＮ５２９注入のおよそ３０〜６０分前に、１０ｍｇでのデキサメタゾンＩＶ（または同等のもの）、抗ヒスタミン薬および解熱薬を患者に投与する。患者は、注入後２日目および３日目に経口デキサメタゾンを８ｍｇ／日で服用するように指示される。必要であれば、患者は顆粒球増殖因子補助物で治療される。顆粒球増殖因子補助物が与えられる場合、それは、好中球減少症を緩和するために治療医師が必要と考える日数の間、各々の周期の６〜１０日目の間に開始して投与される。高い腫瘍負荷および／または高い循環リンパ球数（＞２５×１０９個／Ｌ）を有する患者は、腫瘍崩壊症候群（ＴＬＳ）のリスクが高く、治療の前、１２〜２４時間に開始して十分に水分補給させる。患者は施設のガイドラインに従って、予防的抗ウイルス治療を受ける。
【０２５１】
少なくとも１つであるが６つを超えない先行療法／前治療レジメン（単独または組合せの、先行の抗ＣＤ２０療法が許可される）を受けていた、難治性または再発性ＤＬＢＣＬ、ＦＬ、ＭＺＬ／ＭＡＬＴ、ＭＣＬ、または他の形態のＮＨＬを有する成人患者が登録される。患者は、リンパ腫のための国際ワーキンググループガイドライン（Ｃｈｅｓｏｎら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．２５巻（５号）、２００７年）に従って、評価可能または測定可能な疾患を有していなければならない。ＦＤＧ−ａｖｉｄ疾患を有する患者は、ベースラインから試験の終了までＰＥＴ−ＣＴによって追跡が可能であるべきである。患者は、十分な血球数と器官機能を有していなければならず、試験登録以前の年内に収集された生検材料から保存組織が利用可能でない限り、新鮮な腫瘍生検を提供する意思が無ければならない。原発性の難治性疾患は、最初の療法においてのＰＲ未満の達成、または安全性ランインフェーズのみについて６ヶ月以内の第一選択療法への応答からの再発と定義される。以前の同種幹細胞移植を受けた患者は、試験の安全性ランインフェーズから除外されている；しかしながら、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が管理され、試験依頼者が承認した場合、フェーズ２に登録することが認められている。≧グレード２末梢神経障害、妊娠、授乳、または活動性肝炎Ａ、Ｂ、もしくはＣ感染または他の制御されていない間質性疾患を有する患者は除外される。他の抗ＣＤ３７標的化抗体薬物コンジュゲートでの先行療法を受けた患者は除外される。
【０２５２】
ＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブは、それぞれ、フェーズＩ  ＩＭＧＮ５２９試験で定義される最大耐用量（ＭＴＤ）（０．７ｍｇ／ｋｇまたは試験の期間中に安全性データのレビューを担当する参加サイトからのメディカルディレクターおよび研究者で構成された安全審査委員会（ＳＲＣ）によって決定される代替用量）、および３７５ｍｇ／ｍ２で、３週スケジュールの１週目の１日目（すなわち、Ｑ３Ｗ）に静脈内投与される。安全性ランインフェーズに登録された患者に発生する治療中に発生した有害事象（ＴＥＡＥ）は、ＳＲＣによってレビューされ、組合せ治療の安全性プロファイルを決定する際に考慮される。フェーズ２の用量がＳＲＣによって決定されると、コホート１および２が同時に開かれて（ｏｐｅｎ）登録され、リツキシマブおよびＩＭＧＮ５２９は安全性ランインフェーズで使用されるものと同じスケジュールで投与される。組合せ療法は、容認できない毒性、疾患の進行または同意の撤回がない場合に、耐容される限り提供される。この試験の主な目的は、ＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブ組合せレジメンによる治療の抗腫瘍活性および耐容性を、客観的応答率（ＯＲＲ）および有害事象の発生率によって評価されるように、決定することである。抗腫瘍活性は、ルガーノ分類（Ｌｕｇａｎｏ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）によって評価される。有害事象を等級付けするためには、ＣＴＣＡＥバージョン４．０３を使用することとなるであろう。
【０２５３】
胸部、頸部、腹部、および骨盤のＣＴ／ＰＥＴスキャンを使用した疾患評価は、ベースライン時（試験治療の初回用量前２８日以内）に行われ、周期１、１日目から開始して６週間±１週間ごとに繰り返し評価が行われ、試験治療の遅延を、結果としてシフトせず、治療終了時（ＥＯＴ、試験治療の最後の投与の２８日後）に行われる。あまり好ましくはないが、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）は許容される。ＦＤＧ−ａｖｉｄ疾患の患者には、［１８Ｆ］−ＦＤＧ−ＰＥＴスキャンによって追跡される。必要に応じてＰＥＴを繰り返す。組み入れ前の３ヶ月以内に行われない場合、骨髄生検はベースラインで行われる。完全応答（ＣＲ）を確認するためにベースラインで含まれる場合にのみ、それは繰り返される。療法の終了時に、応答者は、進行性疾患が記録されるかまたは新たなリンパ腫特異的療法が開始されるかのいずれかが先に起きた時まで、１２週間ごとに腫瘍評価を継続する（＋／−３（±４週間））。全ての患者を、少なくとも２４ヶ月間の生存について追跡する。
【０２５４】
安全性データ
バイタルサイン、身体検査、ＥＣＯＧパフォーマンスステータス（ＰＳ）、および実験室安全性試験は、全患者の試験を通して、薬物投与の前に、および指定間隔で得られる。血液学、血液化学、バイタルサイン、およびＥＣＧ結果におけるベースラインからの変化は、治療によって要約される。血液学および血液化学におけるベースライン値からのシフトが要約される。血漿もまた、ヒト化抗ＣＤ３７抗体成分またはＤＭ１成分に対する液性応答の存在について評価される。有害事象は、規制活動のための医学辞典（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ）でコード化され、器官別大分類（ｓｙｓｔｅｍ  ｏｒｇａｎ  ｃｌａｓｓ）（ＳＯＣ）ごとに要約される。併用薬は世界保健機関薬物辞典を使用してコード化される。薬物動態は、治療中に指定された間隔で行われる。ＰＫパラメータ（Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、終末半減期（ｔ１／２）、定常状態での分布体積（Ｖｓｓ）、クリアランス（Ｃｌ）、ＡＵＣ０−ｔ、ＡＵＣｉｎｆ）は、実際のサンプリング時間を使用して、ＩＭＧＮ５２９、総ヒト化ＣＤ３７モノクローナル抗体、ＤＭ１、および総リツキシマブの血漿濃度から由来する。個々の血漿濃度対各々の患者および処理の実時間プロファイルならびに、平均（＋／−ＳＴＤ）血漿濃度対各々の用量レベルの予定時間プロファイルは、通常および半対数スケールでグラフ表示される。腫瘍組織試料は、患者の腫瘍の特徴付けおよび疾患結果との相関付けのために使用される。
【０２５５】
効力データ
データを分析して、第１および第２の目的を評価する。第１の目的は、リツキシマブと組み合わせたＩＭＧＮ５２９の効力および耐容性の決定である。客観的応答率（ＯＲＲ）は、各々の評価可能患者についての研究者によって、完全応答（ＣＲ）、部分応答（ＰＲ）、安定病態（ＳＤ）、または再発性疾患／進行性疾患（ＰＤ）と決定される。応答は、割り当てられた用量コホート、ならびに９５％信頼区間（ＣＩ）とともに応答が生じた用量によって表にされている。応答−評価可能の定義を満たすために、患者は、ベースライン時に放射線の評価を受けていた必要があり、少なくとも１用量のＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブを受けており、少なくとも１つの用量後の腫瘍評価を受けていた必要がある。第２の目的には、組合せレジメンの薬物動態および薬力学の特徴が含まれる。患者を評価し、無増悪生存（ＰＦＳ）、進行までの時間（ＴＴＰ）、および全生存（ＯＳ）の増加を実証する。ＰＦＳはＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ方法を使用して分析されるであろう。ＰＦＳ中央値および９５％ＣＩ（もし実行可能であるならば）ならびに６ヶ月でのＰＦＳ率およびその９５％ＣＩを推定し、提示する。ＯＳはＫａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ方法を使用して解析されるであろう。ＯＳ中央値および９５％信頼間隔（もし実行可能であるならば）が提示される。９５％ＣＩとともに１年でのＯＳ率を推定し、提示する。応答までの時間と応答持続時間（ＤＯＲ）もまた、評価する。ＤＯＲは、客観的な反応（ＰＲまたはＣＲ）を達成する全ての評価可能な患者について推定される。持続時間中央値および関連する９５％ＣＩが提示される。探索の目的としては、ＣＤ３７とＣＤ２０抗原の発現との組合せレジメンの抗腫瘍活性とＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブの抗腫瘍活性との相関関係を調査すること、ならびに、起源分類（ｏｒｉｇｉｎ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）の細胞、ＭＹＣ、ＢＣＬ２、およびＩｇＶＨ状態、発現プロファイリングおよび関連遺伝子の突然変異分析ならびにＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡ遺伝子型を含むが、これらに限定されない、可能性のある予測および予後バイオマーカーを探索することが挙げられる。
【０２５６】
（実施例７）
Ｕ２９３２腫瘍細胞を有するＳＣＩＤマウスにおけるＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブ組合せ療法の改善された効力
Ｕ２９３２腫瘍細胞、ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬモデルを有する雌ＳＣＩＤマウスにおいて、Ｒ−ＣＨＯＰと比較した単独またはリツキシマブと組み合わせた様々な用量のＩＭＧＮ５２９の抗腫瘍活性を評価した。接種の１３日後、マウスを腫瘍体積により７つの群（群当たりｎ＝８）に無作為化した。これらの群は、ビヒクル（ＰＢＳ）を投与した対照群、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのＩＭＧＮ５２９、１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＷｘ３のリツキシマブ、１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＷｘ３のリツキシマブと組み合わせた５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇのＩＭＧＮ５２９、およびＲ−ＣＨＯＰ化学療法レジメン（単一の１０ｍｇ／ｋｇ用量のＣＤ２０標的化抗体リツキシマブ、単一の３０ｍｇ／ｋｇ用量（ｉｖ）のＤＮＡアルキル化剤シクロホスファミド、単一の２．５ｍｇ／ｋｇ用量（ｉｖ）のＤＮＡインターカレート剤ドキソルビシン、単一の０．３７５ｍｇ／ｋｇ用量（ｉｖ）の微小管阻害剤ビンクリスチン、５回の毎日０．１５ｍｇ／ｋｇ用量（ｑｄｘ５ｐｏ）の、副腎皮質ステロイドであるプレドニゾンからなる）を含んだ。
【０２５７】
腫瘍体積および体重を上に記載のように測定し、その結果を図１２に示す。簡潔に述べると、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇでのＩＭＧＮ５２９単独療法は、このモデルでは不活性であった。５ｍｇ／ｋｇでのＩＭＧＮ５２９単独療法は、試験終了時に６２％のＴ／Ｃ、０／８  ＰＲおよび０／８  ＣＲであった。１０ｍｇ／ｋｇでのＩＭＧＮ５２９は、試験終了時に５５％のＴ／Ｃ、０／８  ＰＲおよび０／８  ＣＲであった。リツキシマブ１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＷｘ３単独療法は、試験終了時に３２％のＴ／Ｃ、０／８  ＰＲおよび０／８  ＣＲで活性であった。ＩＭＧＮ５２９  ５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇとリツキシマブ１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＷｘ３の組合せアームは、このモデルにおいて、両方とも非常に活性であった。リツキシマブ１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＷｘ３と組み合わせた５ｍｇ／ｋｇでのＩＭＧＮ５２９は、試験終了時に２％のＴ／Ｃ、７／８  ＰＲ、および６／８  ＣＲであった。リツキシマブ１０ｍｇ／ｋｇ  ＱＷｘ３と組み合わせた１０ｍｇ／ｋｇでのＩＭＧＮ５２９は、試験終了時に８％のＴ／Ｃ、４／８  ＰＲおよび４／８  ＣＲであった。標準治療としてのＲ−ＣＨＯＰもまた、このモデルにおいて、試験終了時に１２％のＴ／Ｃ、４／８  ＰＲ、および２／８  ＣＲを有して活性であった。Ｒ−ＣＨＯＰ（４％最下点）においては、平均体重減少が観察されたが（データは示さず）、単独療法アームまたは組合せ療法アームにおいては、観察されなかった。
【０２５８】
この試験の結果および実施例２から４の試験は、ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの組合せが、ＤＬＢＣＬのＡＢＣおよびＧＣＢサブタイプの両方において有効であることを示唆している。
【０２５９】
（実施例８）
ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブの組合せは、ＡＢＣおよびＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ  ＮＨＬ細胞株両方における抗アポトーシスタンパク質および増殖シグナル伝達を下方制御する
ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブとの組合せは、腫瘍増殖阻害に対して相乗効果を有する。この相乗作用の根底にある分子機構は、ＤＯＨＨ２（ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ）およびＵ２９３２（ＡＢＣ  ＤＬＢＣＬ）細胞株の両方における様々な抗アポトーシスおよび増殖性分子シグナル伝達経路のレベルおよび活性によって評価された。
【０２６０】
１×１０７個の細胞をＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブを単独または組み合わせて２４時間処理した。細胞をＰＢＳで洗浄し、遠心分離によって集めた。細胞は、周期的にボルテックスを行いながら、４℃で１０分間、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤の両方を含むＭ−ＰＥＲ（Ｐｉｅｒｃｅ）中で再懸濁および溶解した。タンパク質溶解物を遠心分離して残渣を除去し、タンパク質濃度を、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して測定した。ウェスタンブロッティングのために、ＸＴ−試料緩衝液とＸＴ−還元剤（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、ヒートブロック上、１００℃で１０分間加熱することにより、等量の直鎖状タンパク質を調製した。ゲル電気泳動およびウェスタンブロッティングを、Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎゲルおよび装置（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、製造業者の取扱説明書に記載されているように実行した。タンパク質をＰＶＤＦ膜に移し、適切な一次および二次抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してタンパク質レベルを評価した。等しいタンパク質ローディングは、参照遺伝子ＧＡＰＤＨおよびベータ−アクチンのブロッティングによって確認された。結果を図１３、パネルＡおよびＢに示す。
【０２６１】
細胞をそれぞれ１ｎＭおよび２０μｇ／ｍＬのＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブで処理した。ＧＣＢ  ＤＬＢＣＬ細胞株ＤＯＨＨ２およびＡＢＣ  ＤＬＢＣＬ細胞株Ｕ２９３２において、ＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブの組合せは、抗アポトーシスタンパク質（ＢＣＬ−ＸＬ、ＢＣＬ−２、ＭＣＬ−１）発現を単剤活性単独よりも大きな程度まで減少させた（図１３、パネルＡ）。同様に、組合せ処理は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ軸の活性（ホスホ−ＡＫＴおよびホスホ−Ｓ６レベルによって測定される）を、単剤処理よりも大きな程度まで下方制御した（図１３、パネルＢ）。
【０２６２】
（実施例９）
ＯＣＩ−Ｌｙ１８二重ヒットＤＬＢＣＬ腫瘍異種移植片におけるＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブ組合せ療法の改善された効力
ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブの組合せの抗腫瘍活性を、ＯＣＩ−Ｌｙ１８二重ヒットＤＬＢＣＬ腫瘍異種移植片を有する雌ＳＣＩＤマウスにおいて評価した。マウスを腫瘍体積により群に無作為化し（群当たりｎ＝８）、続いて接種後１２日目に投与した。全ての処置は、単回投与からなっていた。これらの群には、ビヒクル（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ））を投与した対照群、１０ｍｇ／ｋｇで投与したＩＭＧＮ５２９単剤群、１０ｍｇ／ｋｇで投与したリツキシマブ単剤群、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇで投与したＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブ群が含まれていた。
【０２６３】
腫瘍体積は、キャリパーを使用して週に１から２回、３次元で測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝長さ×幅×高さ×１／２を使用してｍｍ３で表した（Ｔｏｍａｙｋｏ  １９８９年）。試験薬剤の毒性の大まかな指標として、体重を週に２回測定した。活性は、Ｂｉｓｓｅｒｙら（１９９１年）において記載されているように評価した。
【０２６４】
ＩＭＧＮ５２９単剤は不活性であった（８８％のＴ／Ｃ、０／８  ＣＲおよび０／８  ＴＦＳ）。リツキシマブ単剤は活性であった（１２％のＴ／Ｃ、０／８  ＣＲおよび０／８  ＴＦＳ）。ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの組合せは非常に活性であった（０．１％のＴ／Ｃ、２／８  ＣＲおよび１／８  ＴＦＳ）。ＩＭＧＮ５２９＋リツキシマブの組合せは、全ての単剤処置よりも活性であった（図１４を参照されたい）。
【０２６５】
（実施例１０）
ＩＭＧＮ５２９とリツキシマブ組合せ療法のｉｎ  ｖｉｔｒｏプロセシングモデルは、リツキシマブ共処理により、プロセシングされている抗ＣＤ３７抗体の量が増加することを示す
ＩＭＧＮ５２９単独およびリツキシマブとの組合せでの細胞上標的結合、取り込みおよびリソソーム分解を評価するために、以前に記載された３Ｈ−プロピオンアミド標識抗体プロセシング方法を使用した（Ｌａｉら、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２０１５年１１月；３２巻（１１号）：３５９３〜６０３頁）。このモデルを使用して、ＩＭＧＮ５２９、ｈｕＣＤ３７−３抗体の抗ＣＤ３７標的化部分を、リシン残基を介してトリチウム化プロピオネートで微量標識した。本発明者らは以前に、細胞の結合、取り込み、およびリソソームへの輸送の際に、［３Ｈ］プロピオネート標識Ａｂ（３Ｈ−Ａｂ）が分解され、リシン−［３Ｈ］プロピオンアミドが放出されることを示した。この単一異化代謝産物は、ＩＭＧＮ５２９のようなＡｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１コンジュゲートからのｌｙｓ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１単一異化代謝産物と同様の量で同定および定量されている。したがって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＩＭＧＮ５２９＋／−リツキシマブ細胞プロセシングを調べるために、ＤＬＢＣＬ細胞株のパネルを［３Ｈ］プロピオネート標識ｈｕＣＤ３７−３抗体で処理した。
【０２６６】
以下のＤＬＢＣＬ細胞株、Ｕ２９３２、ＯＣＩ−Ｌｙ７、ＳＵ−ＤＨＬ−４、ＳＵ−ＤＨＬ−６、ＦａｒａｇｅおよびＤＯＨＨ２を、結合曲線を介した抗原飽和の決定の後、１０ｎＭの３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体で処理した。一部の細胞を、５００ｎＭ（５０×）の非標識ｈｕＣＤ３７−３抗体で事前ブロックし、一方、他は処理しなかった。追加の複製物を、抗ＣＤ１９特異的抗体、抗ＣＤ２０特異的抗体（リツキシマブまたはＧＡ１０１）、および抗ＣＤ２２特異的抗体、または非標的化アイソタイプ対照Ａｂ（ｃｈＫＴＩ）のいずれかと共処理した。ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２は、ＤＬＢＣＬ細胞上で共発現されるＢ細胞マーカーである。先に記載したように、細胞を試薬でパルス処理した。簡潔に述べると、スピンさせ、新鮮な培地で３回洗浄する前に、細胞を３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体＋／−Ａｂ（ｓ）と共に３０分間インキュベートした。細胞を６ウェルプレートに播き、３７℃、５％ＣＯ２で終夜インキュベートした。２０−２４時間のインキュベーション後、細胞を収集し、タンパク質を４：３体積のアセトン：培地／細胞混合物で沈殿させた。試料を解凍し、遠心分離により分離する前に、−８０℃で最低１時間凍結した。ペレットをＴｒｉ−Ｃａｒｂ液体シンチレーションカウンター（ＬＳＣ）中で５分間カウントする前に、タンパク質を可溶化処理した。製造業者のプロトコールに従って、１ｍＬのＳＯＬＶＡＢＬＥ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を各々のペレット試料に添加し、５０℃の水浴中で終夜インキュベートした。試料を水浴から取り出し、２０ｍＬのガラスシンチレーションバイアルに移し、ＥＤＴＡおよびＨ２Ｏ２を試料に添加し、続いて１時間５０℃で追加のインキュベーションを行った。試料をＨＣｌでクエンチし、１５ｍＬのＯｐｔｉｍａ  Ｇｏｌｄ液体シンチレーション液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を添加し、試料を十分にボルテックスした。ＬＳＣによるカウントの前に、試料を暗所で最低４時間保持した。タンパク質を含まないアセトン抽出試料を、真空下で１ｍＬ未満の体積まで乾燥させ、ＬＳＣの前に上に記載のようにＳｏｌｖａｂｌｅを使用して加工処理した。結合し、分解し、無傷の標識抗体の量を、得られた試料ＣＰＭ値から計算した。
【０２６７】
３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体を単独でまたはＢ細胞標的化または非標的化抗体と組み合わせてパルス処理すると、ＣＤ３７の細胞表面発現（細胞当たりに結合した抗体（ＡＢＣ））は一定のままであった。ＧＣＢサブタイプの、ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞での結果を、図１５に示す。ＧＣＢサブタイプＳＵ−ＤＨＬ−６、Ｆａｒａｇｅ、ＤＯＨＨ２、ＯＣＩ−Ｌｙ７およびＡＢＣサブタイプＵ２９３２細胞で、同様の結果が見られた。これらの結果は、３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体結合によって測定された、ＣＤ３７の細胞表面発現が、Ｂ細胞標的化または無関係なＡｂとの共処理にかかわらず、パルス処理の過程で同じのままであることを実証する。
【０２６８】
３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体単独あるいはＢ細胞または非標的化抗体との組合せのプロセシングレベルを、パルス処理および３７℃での終夜のインキュベーション後に決定した。３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体プロセシングは、大過剰の非標識ｈｕＣＤ３７−３抗体での前処理によって完全にブロックすることもできた。試験した細胞株に依存して、中程度の８〜２５％の結合した３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体が、単剤パルス処理の下で２４時間後にプロセシングされた。このレベルは、タイプＩＩ抗ＣＤ２０抗体、ＧＡ１０１、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２２抗体、またはｃｈＫＴＩ  Ａｂとの共処理の際に同様のままであった。しかしながら、試験した６種の細胞株（ＯＣＩ−Ｌｙ７、ＳＵＤＨＬ−４、ＳＵＤＨＬ−６、Ｕ２９３２、およびＦａｒａｇｅ）のうち５種におけるリツキシマブ共インキュベーションでレベルがさらに８〜２１％上昇し、プロセシングされた３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体全体において１．４から３．４倍の増加がもたらされした。ＤＯＨＨ２細胞において、３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体単独またはリツキシマブ（ｒｉｘｕｔｉｍａｂ）とのプロセシングのレベルは同様であった：それぞれ２５％および２９％。ＳＵ−ＤＨＬ−４細胞のプロセシング結果の説明については、図１６を参照されたい。これらの結果は、リツキシマブ（タイプ１抗ＣＤ２０抗体）の共処理では、内部移行および分解された受容体結合３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体の量が増加するが、他のＢ−細胞発現抗体または非標的化ｃｈＫＴＩ抗体での共処理では増加しないことを実証する。
【０２６９】
リツキシマブ共処理によるプロセシングの増加がＣＤ３７抗原に特有であるか否かを探索するために、本発明者らは、放射性標識抗ＣＤ１９特異的抗体を用いた同じ一連の実験を行った。標識抗ＣＤ１９抗体を単独、またはＢ細胞標的化抗体または非標的化抗体と組み合わせてパルス処理したＳＵ−ＤＨＬ−４細胞（および他の細胞株で観察された、データは示さず）において、ＣＤ１９の表面発現は一定のままであった。パルス処理後にプロセシングされた標識抗ＣＤ１９抗体のパーセントは、単独または、ＧＡ１０１、ｈｕＣＤ３７−３抗体、抗ＣＤ２２抗体、またはｃｈＫＴＩ抗体との組合せでインキュベーションしたものと同様のままであった（データは示さず）。これらの結果は、上に記載された３Ｈ−ｈｕＣＤ３７−３抗体＋リツキシマブの観察が、抗ＣＤ３７抗体／リツキシマブに特異的であり、抗ＣＤ１９抗体／リツキシマブに特異的ではないことを実証している。
【０２７０】
（実施例１１）
フローサイトメトリーに基づく内部移行実験は、リツキシマブとの共処理の際の抗ＣＤ３７抗体の内部移行の増加を実証する
ｈｕＣＤ３７−３抗体、抗ＣＤ１９特異的抗体、およびリツキシマブＡｌｅｘａ４８８抗体コンジュゲートを、製造業者の取扱説明書（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）に従ってＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８テトラフルオロフェニルエステルを使用し、生成した。コンジュゲートを、アジ化ナトリウムを含まないＰＢＳ、ｐＨ７．２中に溶出し、内部移行アッセイができるようにした。標識の濃度および程度は、２８０ｎｍおよび４９４ｎｍでの吸収測定値から計算した。Ａｌｅｘａ４８８標識が標的結合に悪影響を及ぼさないことを確証するために、ＦＡＣＳ結合アッセイを行った。
【０２７１】
Ｕ２９３２、ＯＣＩ−Ｌｙ７、ＳＵ−ＤＨＬ−４、ＳＵ−ＤＨＬ−６、ＦａｒａｇｅおよびＤＯＨＨ２細胞を、氷上または３７℃で指定された時間の長さの間、飽和濃度の指定されたＡｌｅｘａ４８８標識抗体単独または非標識の抗ＣＤ３７、抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２０（リツキシマブ、オファツムマブまたはオビヌツズマブ）または非結合アイソタイプ対照抗体（ｃｈＫＴＩ）との組合せで処理した。細胞を氷冷したＰＢＳで２回洗浄し、複製ウェルを３００ｎＭの抗Ａ４８８抗体なし（クエンチしない試料）またはあり（クエンチした試料）で、氷冷したＰＢＳに再懸濁した。全ての試料を氷上で３０分間インキュベートした。その後、細胞をペレット化し、１％パラホルムアルデヒドで固定した。細胞をフローサイトメトリーで分析した。抗Ａｌｅｘａ４８８抗体の存在下、氷上で３０分間インキュベートした細胞の蛍光は、クエンチ不能な蛍光画分を表しており、内部移行を計算する前に、他の全ての試料から差し引かれた。内部移行は、クエンチしない細胞の蛍光（全蛍光）で割った不完全な表面クエンチ（細胞内蛍光）で補正したクエンチした試料の蛍光として計算した。
【０２７２】
抗ＣＤ２０抗体、リツキシマブのＩＭＧＮ５２９の内部移行に対する効果を評価するために、ＤＬＢＣＬ細胞株を、Ａｌｅｘａ４８８で標識したｈｕＣＤ３７−３抗体、ＩＭＧＮ５２９の抗ＣＤ３７標的化部分、単独またはリツキシマブまたは非標的化アイソタイプ対照抗体（ｃｈＫＴＩ）との組合せとインキュベートした。示された時間に、全体の蛍光および細胞内蛍光について、フローサイトメトリーによって細胞を評価した。２時間の間、単独でインキュベートした場合、全ｈｕＣＤ３７−３抗体−Ａｌｅｘａ４８８の約１８％がＦａｒａｇｅ細胞内に内部移行された（図１７、パネルＡを参照されたい）。内部移行された量は、非標的化対照抗体（ｃｈＫＴＩ）で共処理した場合にも同様のままであった。細胞をｈｕＣＤ３７−３抗体−Ａｌｅｘａ４８８およびリツキシマブと共インキュベートした場合は、ｈｕＣＤ３７−３抗体の内部移行は約３５％まで増加した（図１７、パネルＡを参照されたい）。ｈｕＣＤ３７−３抗体の内部移行の増加は、タイプＩＩ（オビヌツズマブ）抗ＣＤ２０抗体とは反対に、タイプＩ（リツキシマブおよびオファツムマブ）でインキュベートした場合に最大であった（図１７、パネルＡを参照されたい）。興味深いことに、リツキシマブの存在下においては、Ｂ細胞標的化抗ＣＤ１９抗体の内部移行の増加はなかった（データは示さず）。ｈｕＣＤ３７−３抗体の内部移行の増加が３０分後に観察され、実験の経過中、維持された。リツキシマブでの細胞の処理が、ｈｕＣＤ３７−３抗体の内部移行を増加させた一方で、単独またはｈｕＣＤ３７−３抗体、抗ＣＤ１９抗体、または非標的化抗体の存在下でインキュベートしても、リツキシマブの内部移行は変化しなかった（図１７、パネルＢを参照されたい）。ＤＬＢＣＬ−ＧＣＢサブタイプＳＵ−ＤＨＬ−６、Ｆａｒａｇｅ、ＤＯＨＨ２、ＯＣＩ−Ｌｙ７およびＤＬＢＣＬ−ＡＢＣサブタイプＵ２９３２細胞株において、リツキシマブとインキュベートした場合、ｈｕＣＤ３７−３抗体内部移行における同様の増加が観察された。ＩＭＧＮ５２９の効力は、抗体薬物コンジュゲートの内部移行、細胞内輸送、および分解に依存する。ＩＭＧＮ５２９およびリツキシマブ共処理の効力の増加は、より多量の細胞傷害性異化代謝産物の生成をもたらす可能性がある、ＩＭＧＮ５２９の内部移行の増加によって部分的に説明することができる。
【０２７３】
「発明の概要」および「要約」の節ではなく、「発明を実施するための形態」の節は、特許請求の範囲を解釈するために使用されると意図されることが理解されるべきである。「発明の概要」および「要約」の節は、発明者（複数可）により企図される本発明の１つまたは複数の、しかし全てではない、例示的な実施形態を示し、したがって、本発明および添付の特許請求の範囲をいかなるようにも限定するとは意図されない。
【０２７４】
本発明は、特定の機能の実行およびそれらの関係を例示する機能的構築ブロックを補助として、上記に説明されている。これらの機能的構築ブロックの境界は、説明の便利のために本明細書で任意に画定されている。特定の機能およびそれらの関係が適切に行われる限り、代替の境界を画定することができる。
【０２７５】
特定の実施形態の上記説明は、本発明の一般的性質を完全に明らかにするので、当業者の技術の範囲内の知識を適用することにより、本発明の一般的概念から逸脱することなく、過度の実験を行うことなく、かかる特定の実施形態を様々な適用に容易に改変および／または適合することが可能である。それゆえ、かかる適合および改変は、本明細書で示す教示およびガイダンスに基づいて、開示される実施形態の均等物の意味および範囲内であることが意図される。本明細書中の語法または用語法は、本明細書の用語法または語法が教示およびガイダンスに照らして当業者により解釈されるように説明する目的のためであり、限定の目的のためではないことが理解されるべきである。
【０２７６】
本発明の幅および範囲は、上記に説明する例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではないが、以下の特許請求の範囲およびそれらの均等物に従ってのみ画定されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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