(57)【要約】  本発明は、上気道のウイルス感染症、例えば、ウイルス性呼吸器感染症または感冒などの予防および／または治療における使用のためのポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびエンドウマメデンプンのミクロ粒子を含む組成物、ならびに前記感染症または感冒を予防および／または治療するために必要とする患者による使用のための、前記組成物を含むデバイス、好ましくは経鼻デリバリーシステムに関する。
2018515530.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロ粒子中のポリイノシン酸−ポリシチジル酸とデンプンとの比が約１：１〜約１：５である、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを含む、マイクロ粒子。
【請求項２】
前記マイクロ粒子中のポリイノシン酸−ポリシチジル酸とデンプンとの比が約１：３〜約１：５である、請求項１に記載のマイクロ粒子。
【請求項３】
前記マイクロ粒子中のポリイノシン酸−ポリシチジル酸とデンプンとの比が約１：３または約１：５である、請求項２に記載のマイクロ粒子。
【請求項４】
前記デンプンがアルファ化デンプンである、請求項１から３のいずれか一項に記載のマイクロ粒子。
【請求項５】
前記デンプンがエンドウマメデンプンである、請求項１から４のいずれか一項に記載のマイクロ粒子。
【請求項６】
前記ポリイノシン酸−ポリシチジル酸の平均鎖長が、約３００塩基対〜６，０００塩基対である、請求項１から５のいずれか一項に記載のマイクロ粒子。
【請求項７】
前記ポリイノシン酸−ポリシチジル酸の平均分子量が、約１８０ｋＤａ〜３，６００ｋＤａである、請求項１から６のいずれか一項に記載のマイクロ粒子。
【請求項８】
前記ポリイノシン酸−ポリシチジル酸がナトリウム塩として存在する、請求項１から７のいずれか一項に記載のマイクロ粒子。
【請求項９】
水をさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載のマイクロ粒子。
【請求項１０】
ポリイノシン酸−ポリシチジル酸、デンプン、および水から本質的になる、請求項１から９のいずれか一項に記載のマイクロ粒子。
【請求項１１】
０．１μｍ〜１００μｍの間のサイズを有する、請求項１から１０のいずれか一項に記載のマイクロ粒子。
【請求項１２】
４μｍ〜２７μｍのサイズを有する、請求項１１に記載のマイクロ粒子。
【請求項１３】
２μｍ〜２０μｍのサイズを有する、請求項１１に記載のマイクロ粒子。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれか一項に記載の複数のマイクロ粒子を含む、組成物。
【請求項１５】
ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびデンプンを含むマイクロ粒子を含む、組成物。
【請求項１６】
前記組成物のマイクロ粒子が、０．１μｍ〜２００μｍのＤｖ５０を有する、請求項１４または１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物のマイクロ粒子が、１μｍ〜５０μｍのＤｖ５０を有する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物のマイクロ粒子が２μｍ〜２０μｍのＤｖ５０を有する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
液体である、請求項１４から１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
有機溶媒を含む、請求項１４から１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記有機溶媒が、グリセロール、エタノール、またはその組合せである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
リン酸緩衝食塩水を含む、請求項１４から１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
乾燥粉末である、請求項１４から１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記粒子が、１カ月間室温で貯蔵中安定している、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
上気道のウイルス感染症を治療または予防する方法であって、前記組成物を患者へ投与することを含む方法における使用のための、請求項１４から２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症またはインフルエンザウイルス感染症である、請求項２５に記載の使用のための組成物。
【請求項２７】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する患者において、上気道のウイルス感染症を予防する方法であって、前記組成物を患者に投与することを含む方法における使用のための、請求項１４から２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
上気道のウイルス感染症を治療または予防する方法における使用のための組成物であって、
前記組成物がマイクロ粒子を含み、
前記マイクロ粒子が、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびデンプンを、約１：１〜約１：５の比で含み、
前記方法が前記組成物を患者に投与することを含む、組成物。
【請求項２９】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する対象において、上気道のウイルス感染症を予防する方法における使用のための組成物であって、
前記組成物がマイクロ粒子を含み、
前記マイクロ粒子が、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびデンプンを、約１：１〜約１：５の比で含み、
前記方法が前記組成物を患者に投与することを含む、組成物。
【請求項３０】
前記組成物を投与することが経鼻投与を含む、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項３１】
対象においてウイルス感染症を治療または予防する方法であって、請求項１４から２４のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３２】
前記ウイルス感染症がヒトライノウイルス感染症またはインフルエンザウイルス感染症である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する対象において、上気道のウイルス感染症を予防する方法であって、請求項１４から２４のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項３４】
対象においてウイルス感染症を治療または予防する方法であって、マイクロ粒子を含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記マイクロ粒子が、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびデンプンを、約１：１〜約１：５の比で含む、方法。
【請求項３５】
前記ウイルス感染症が、ヒトライノウイルス感染症またはインフルエンザウイルス感染症である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する対象において、上気道のウイルス感染症を予防する方法であって、マイクロ粒子を含む組成物を前記対象に投与することを含み、前記マイクロ粒子が、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびデンプンを、約１：１〜約１：５の比で含む、方法。
【請求項３７】
前記組成物を投与することが経鼻投与を含む、請求項３１から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
請求項１４から３０のいずれか一項に記載の組成物を含む、経鼻デリバリーシステム。
【請求項３９】
マイクロ粒子を含む組成物を含む経鼻デリバリーシステムであって、前記マイクロ粒子が、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびデンプンを、約１：１〜約１：５の比で含む、経鼻デリバリーシステム。
【請求項４０】
上気道ウイルス感染症を予防および／または治療するための医薬の製造のための、請求項１４から２４のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項４１】
上気道ウイルス感染症を予防および／または治療するための医薬の製造のためのマイクロ粒子を含む組成物の使用であって、前記マイクロ粒子が、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびデンプンを、約１：１〜約１：５の比で含む、組成物の使用。
【請求項４２】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する対象において、上気道のウイルス感染症を予防するための医薬の製造のための、請求項１４から２４のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項４３】
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する対象において、上気道のウイルス感染症を予防するための医薬の製造のためのマイクロ粒子を含む組成物の使用であって、前記マイクロ粒子が、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびデンプンを、約１：１〜約１：５の比で含む、組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、２０１５年５月１１日に出願した欧州特許出願公開第１５１６７１２９．４号明細書の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
感冒（また、鼻咽頭炎、急性ウイルス性鼻咽喉炎、急性鼻感冒、または風邪としても公知）は、主にウイルスにより引き起こされる上部呼吸器系のウイルス感染症である。インフルエンザまたはインフルエンザ様疾患もまたウイルス感染症により引き起こされる。
【０００３】
感冒は上気道のウイルス感染症である。最も一般的に関係するウイルスは、９９種の公知の血清型を有するピコルナウイルスの１種類である、ライノウイルス（３０〜５０％）である。その他として、コロナウイルス（１０〜１５％）、インフルエンザ（５〜１５％）、ヒトパラインフルエンザウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、およびメタニューモウイルスが挙げられる。
【０００４】
全部で２００種を超える血清学的に異なるウイルス型が風邪を引き起こす。コロナウイルスは特に成人の風邪に関わっている。３０種を超えるコロナウイルスの中で、３または４種がヒトにおいて感染症を引き起こすが、これらは実験室で増殖させるのが難しく、したがってこれらの意義はあまりよく理解されていない。異なる型のウイルスが多数あること、およびこれらの連続的変異の傾向により、感冒に対して完全な免疫を得ることは不可能である。
【０００５】
上気道ウイルスの最初の徴候は、多くの場合、喉のヒリヒリまたはガラガラ感である。他の共通の症状は、鼻水、鼻閉、およびくしゃみである。これらは時折、結膜炎（はやり目）、筋肉痛、疲労、倦怠感、頭痛、衰弱、または食欲不振を伴う。咳および発熱は一般的に、約８０％の陽性適中率で、上気道ウイルスよりもむしろインフルエンザを示す。症状は乳児および幼児においてより重症となり得、これらの症例では、症状は発熱および発疹を含み得る。上気道ウイルスはまた喫煙者においてより重症となり得る。
【０００６】
ウイルス複製は、最初の接触から２〜６時間後に開始する。症状は通常、最初の感染から２〜５日後に開始するが、時にはわずか１０時間で生じる。症状は、症状発症から２〜３日後にピークに達するのに対して、インフルエンザの症状は一定で、即時型である。期間を短縮する公知の治療は現在のところ存在しない。しかし、症状は通常自然に７〜１０日で消滅し、一部の症状が３週間までおそらく持続することもある。小児では、３５〜４０％において咳が１０日間よりも長く持続し、症例の１０％において２５日間よりも長く継続する。感冒はヒトの最も頻度の高い感染症であり、平均的成人は１年に２〜４回感染症に罹り、平均的小児は年齢６〜１２才の間に年間数回感染症に罹る。
【０００７】
感冒は症状の最初の２〜３日の間に最も感染性を有するが、症状発症前の２〜３日間もまた感染性があり、症状が完全に解消されるまで依然としていくらか感染性を有し得る。
【０００８】
ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）はピコルナウイルス（Picornaviridae）科の中のエンテロウイルス（Enterovirus）属の構成員である。ＨＲＶ粒子は、４つのポリペプチド（ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、およびＶＰ４）からなる２７〜３０ｎｍの無エンベロープカプシドで構成される。ウイルスカプシドは約７２００塩基の一本鎖ＲＮＡゲノムを含有する。ウイルスにコードされたタンパク質（ＶＰｇ）は、ＲＮＡゲノムの５’末端に共有結合で結合している。ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）による感染症の臨床経過は十分特徴付けられている。ＨＲＶは上気道および下気道、鼻粘膜、副鼻腔ならびに中耳に感染する可能性があり、感染症は「感冒」の症状を生じる（上記を参照されたい）。感染症は自己限定性であり、通常上気道に限定される。末梢血白血球数は、感染の最初の２〜３日の間に上昇し得る。
【０００９】
ＨＲＶ感染症はまた、下気道の感染、中耳炎（特に、幼児）、および副鼻腔炎をもたらす可能性がある。ライノウイルス感染症からの重篤な合併症（例えば、肺炎など）は稀であるが、乳児および幼児、特に、潜在的状態、例えば、気管支肺異形成、先天性心疾患、未熟、および神経性の状態を有する者など、ならびに免疫不全の（骨髄移植レシピエント）成人において生じることが報告されてきた。ピコルナウイルス（Picornaviridae）科の他の構成員は中枢神経系に感染する可能性があるものの（すなわち、ポリオウイルス、エンテロウイルス）、ＨＲＶによるヒト中枢神経系の感染は報告されていない。
【００１０】
ライノウイルス感染症の治療または感冒の予防のための市販の抗ウイルス剤は存在しない。ライノウイルスにより引き起こされた上気道感染症の治療は、通常店頭の抗ヒスタミン剤、アスピリン、鎮咳薬、および鼻詰まりの薬を使用した、症状（くしゃみ、鼻閉、鼻漏、目への刺激、のどの痛み、咳、頭痛、発熱、悪寒）の対処に基づく。ＨＲＶ感染症のより重篤な合併症（例えば、肺炎）は、医学的に適当な医療基準を使用して対処する。
【００１１】
気道上皮細胞はライノウイルスおよびコロナウイルスなどの上気道（ＵＲＴ）感染体の主要な標的である。これらのウイルスによる感染は、感染細胞の免疫系による排除を反映する症状の発症以前に生じるので、直接的抗ウイルス剤の治療介入が非常に有効となる可能性は低い。加えて、鼻粘膜中で直接的抗ウイルス性化合物の活性レベルを実現および持続することは鼻粘膜の高い代謝回転により非常に困難である。他方では、身体自体の防御を利用し、鼻上皮細胞における抗ウイルス状態を誘発させることによる予防法は、その後のウイルス攻撃に対する有意な保護をもたらし、ならびに疾患関連の症状を低下させることがすでに示されている。
【００１２】
風邪は１週間または２週間しか持続しないこともあるが、重症の風邪は１カ月までにわたり持続し得る。年齢および曝露にも因るが、成人は年間平均２〜３回、小児は６〜１０回風邪をひく。何百種もの異なる血清型の風邪ウイルスが存在し、これにより、これらすべてに対して有効となる標準的なワクチン予防法を開発することが不可能となっている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
対症治療は、一般的に睡眠誘導性経口抗ヒスタミンおよび／または刺激性副作用を有する血管収縮性鼻詰まり薬を使用することを含む。これはほんのわずか有効であるにすぎず、これらの副作用は、多くの場合、感染症それ自体と同じ位衰弱させる。予防は理想的解決策であるにもかかわらず、上記に言及された理由から、すべての異なる血清型に対して幅広く有効なワクチンを得るチャンスは、近い将来には極めてあり得ない。よって、隔離なしでは、人々は、定期的に、特に「風邪のシーズン」中これらの感染物質に曝露されることになるので、幅広く有効な、好都合な、副作用のない予防薬は公衆衛生および職場における生産性に大きな影響力を有するであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、ウイルス性呼吸器感染症または感冒などの感染症の治療および／または予防における使用のためのポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびエンドウマメデンプンポリマーのミクロ粒子を含む組成物、ならびに前記感染症または感冒を予防および／または治療するために必要とする患者による使用のための、前記組成物を含むデバイス、好ましくは、経鼻デリバリーシステムに関する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】標識したパネル（Ａ）およびパネル（Ｂ）の２つのパネルからなる。各パネルは、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリＩＣ）およびエンドウマメデンプン（Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標））を、１：３（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／３）、１：５（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／５）、または１：１２（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／１２）の比で含むマイクロ粒子、ならびに陰性対照（プラセボデンプンＬｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０）が投与されたマウスに対する関心領域（ＲＯＩ）の放射輝度を表すグラフである。マウスはインターフェロンβ（ＩＮＦ−β）遺伝子座にホタルルシフェラーゼ遺伝子を含んでいた、したがって、放射輝度はＩＮＦ−β発現と相関する。パネルＡおよびＢは、線形ｙ軸（Ａ）または対数ｙ軸（Ｂ）のいずれかを用いてプロットした同じデータを表している。
【図２】標識したパネル（Ａ）およびパネル（Ｂ）の２つのパネルからなる。各パネルは、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリＩＣ）およびエンドウマメデンプン（Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標））を含むマイクロ粒子の投与の２〜３時間前（パネル（Ａ））またはマイクロ粒子の投与の２４時間後（パネル（Ｂ））のいずれかにルシフェリンが投与された、インターフェロンβ（ＩＮＦ−β）遺伝子座にホタルルシフェラーゼに対する遺伝子を含むマウスの画像を含有している。パネル（Ａ）および（Ｂ）の中の１番上の列の４つの画像は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリＩＣ）およびエンドウマメデンプン（Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標））を、１：３（各画像の左側のマウス）、１：５（各画像の中央のマウス）、または１：１２（各画像の右側のマウス）の比で含むマイクロ粒子が投与されたマウスの複製である。中央の列の４つの画像は、対照マウスの２つの画像（左の画像および中央右の画像）（これらはそれぞれ別個に画像化された）、およびそれぞれ３匹のマウスの２つの画像（中央左の画像および右の画像）（１番上の列と同じ順序）を表している。１番下の列の３つの画像は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリＩＣ）およびエンドウマメデンプン（Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標））を１：３の比で含むマイクロ粒子が投与されたマウス（左の画像および中央の画像、それぞれ３匹のマウスを表す）、およびエンドウマメデンプンのみを含む（Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標）；右の画像、３匹のマウスを表している）マイクロ粒子が投与されたマウスからなる。
【図３】標識したパネル（Ａ）およびパネル（Ｂ）の２つのパネルからなる。各パネルは、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリＩＣ）およびエンドウマメデンプン（Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標））を、１：３（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／３）、１：５（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／５）、または１：１２（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／１２）の比で含むマイクロ粒子、ならびに陰性対照（プラセボデンプンＬｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０）が投与されたマウスに対する関心領域（ＲＯＩ）の放射輝度を表すグラフである。マウスはインターフェロンβ（ＩＮＦ−β）遺伝子座にホタルルシフェラーゼ遺伝子を含んでおり、したがって、放射輝度はＩＮＦ−β発現と相関する。パネルＡおよびＢは、線形ｙ軸（Ａ）または対数ｙ軸（Ｂ）のいずれかを用いてプロットした同じデータを表している。図３は、図１の結果が再現可能かどうかを決定するように設計された第２の実験に基づく。
【図４】標識したパネル（Ａ）およびパネル（Ｂ）の２つのパネルからなる。各パネルは、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリＩＣ）およびエンドウマメデンプン（Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標））を、１：３（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／３）、１：５（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／５）、または１：１２（ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０、１／１２）の比で含むマイクロ粒子、ならびに陰性対照（プラセボデンプンＬｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０）が投与されたマウスに対する関心領域（ＲＯＩ）の放射輝度を表すグラフである。マウスはインターフェロンβ（ＩＮＦ−β）遺伝子座にホタルルシフェラーゼ遺伝子を含んでおり、したがって、放射輝度はＩＮＦ−β発現と相関する。パネルＡおよびＢは、線形ｙ軸（Ａ）または対数ｙ軸（Ｂ）のいずれかを用いてプロットした同じデータを表している。図４は、図１および３ならびに第３の実験におけるデータ点を含む、プールしたデータに基づく。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の様々な態様は、例えば、２〜３日毎に、１週間に１回、またはさらには２〜３週間毎に、測定および制御ができるように使用して、先天免疫系を初回刺激し、ウイルス感染症から保護することができる誘発性分子（ポリ（Ｉ：Ｃ））の製剤に関する。以下に概説されている手法は、効力は実証されているが、実行可能ではない既存の薬剤、ポリ（Ｉ：Ｃ）を利用し、これを、製剤科学を使用して好都合および有効なものにする。
【００１７】
Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）は、ヒトにおいて、ＴＬＲ３遺伝子によってコードされているタンパク質である。ＴＬＲ３は、病原体認識および先天性免疫の活性化において基本的役割を果たす先天免疫系のパターン認識受容体のＴｏｌｌ様受容体ファミリーの構成員である。ＴＬＲは、ショウジョウバエ属（Drosophila）からヒトまで高度に保存されており、構造的および機能的類似点を共有している。ＴＬＲは、感染物質上に発現される病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、有効な免疫の発生のために必要なサイトカインの産生を媒介する。様々なＴＬＲは、異なる発現パターンを示す。このＴＬＲ３受容体は、気道上皮細胞によっても発現され、これは白血球樹状亜集団に限定される。
【００１８】
ＴＬＲ３は二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を認識する。二本鎖ＲＮＡは、ウイルス複製サイクル中に形成され得る２本の相補鎖を有するＲＮＡである。認識すると、ＴＬＲ３は、ＮＦ−κＢおよびインターフェロン調節因子３（ＩＲＦ３）のような転写因子の活性化を誘発させて、これらの抗ウイルス防御を増加させるように他の細胞に合図するＩ型インターフェロンの産生を増加させる。
【００１９】
ＴＬＲ３の構造は、隣接する馬蹄に接触した大きな馬蹄形状を形成し、２つの馬蹄の「ダイマー」を形成する。ＴＬＲ３タンパク質表面の大半は糖分子で覆われており、これによって糖タンパク質とされているが、１つの面には（２つの馬蹄の間の提示された境界面を含む）、大きな糖を含まない表面が存在する。この表面はまた正に荷電したアミノ酸が豊富な２つの異なるパッチを含有し、これらは負に荷電した二本鎖のＲＮＡに対する結合部位となり得る。
【００２０】
ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））は、例えば、３，６００，０００ダルトンまでのＭＷ分布を有する二本鎖ＲＮＡ分子である。ポリ（Ｉ：Ｃ）は、ウイルスＲＮＡを模倣するＴｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）リガンドであり、先天性免疫応答の公知の刺激剤である。経鼻的に投与された場合、ポリ（Ｉ：Ｃ）は、鼻の上皮においてインターフェロンαおよびβのような抗ウイルスタンパク質の発現を誘発する。ポリ（Ｉ：Ｃ）は、ライノウイルス感染症の数および重症度を減少させることが実証されている。
【００２１】
ポリ（Ｉ：Ｃ）は通常、既定の水溶液中の不安定な分子である。現在のところ、有効な療法的効果または予防効果を達成するためには、ポリ（Ｉ：Ｃ）は、使用直前に再溶解し、２時間毎に投与する必要がある。患者コンプライアンスを改善し、投与頻度を減少させるために、安定しており、増強した効力を示す新規の製剤が開発されている。
【００２２】
ここでポリ（Ｉ：Ｃ）は、鼻上皮上での滞留時間を長引かせ、先天免疫系をより有効で制御可能に刺激することができる生体接着性ポリマーのエンドウマメデンプンを用いて、本発明において製剤化された。
【００２３】
本発明は、驚くべきことに、ほとんど無制限に室温で貯蔵できると思われ、先天免疫系刺激活性を保持する独特な製剤を特定する。
【００２４】
本発明の製剤は、水溶性エンドウマメデンプンを含有し、低粘度特性という利点を有する。
【００２５】
エンドウマメデンプンを、ポリ（Ｉ：Ｃ）を含む組成物の製剤に使用すると、このような組成物は、驚くべきことに、このようなバイアル、チューブまたはデバイスに本発明の組成物を充填しなければならない場合、同じ目的のための使用した任意の他のデンプンと比較して、バイアル、チューブまたはデバイス（噴霧など）の内側への低い粘着性挙動を示す。これに従い点鼻薬デバイスの内側に粘着する組成物がより少量であることから、この技術的利点は、前記ポリ（Ｉ：Ｃ）の用量を、必要とされる患者に、より正確に投与することができることである。
【００２６】
加えて、製剤は、ポリ（Ｉ：Ｃ）の効力を増強し、さらにより大きなＴＬＲ３刺激活性を有することで、ずっと頻度の低い投与が可能となる。
【００２７】
したがって本発明は、ポリ（Ｉ：Ｃ）対エンドウマメデンプン比１：３のポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびエンドウマメデンプンポリマーのミクロ粒子を含む組成物に関する。
【００２８】
本発明で得たおよび使用したミクロ粒子は、０．１μｍ〜１００μｍの間の平均粒径を有する粒子である。好ましくは、担体ポリマーは、植物属レンリソウ（Lathyrus）、より具体的にはエンドウマメから得たデンプンである。
【００２９】
組成物中に含まれるポリ（Ｉ：Ｃ）−担体ポリマーマイクロスフェア、またはいわゆるミクロ粒子は、噴霧乾燥プロセスなどの粒子形成プロセスの手段により生成される。
【００３０】
本発明による組成物中のミクロ粒子のＤｖ５０（＝粒子の体積ベースの５０％積算ふるい下）は、０．１μｍ〜２００μｍ、好ましくは１μｍ〜５０μｍ、より好ましくは２μｍ〜４０μｍ、さらにより好ましくは２μｍ〜２０μｍ、および最も好ましくは１０μｍ〜２０μｍの範囲である。
【００３１】
本発明による組成物中のミクロ粒子のＤｖ５０（＝粒子の体積ベースの５０％積算ふるい下）が、１３、１４または１５μｍであることが、最も良い性能を得るために極めて好ましい。
【００３２】
本発明の組成物は、有機溶媒を含む２位相懸濁液または液体組成物であることができ、この有機溶媒はグリセロールまたはエタノールまたはその組合せに基づく。同じ目的を果たす他の有機溶媒は、トリフルラン（trifluranes）または他のエーテルの噴霧剤である。
【００３３】
本発明の組成物は、好ましくは、ヒト上気道のウイルス感染症、例えば、いわゆる「感冒」の予防および／または治療における使用のために、ヒトおよび／または動物用医薬において使用することができる。
【００３４】
動物への使用については、本発明による組成物は、例えば畜舎、納屋、ニワトリの群れなどにおいてエアゾール製剤として使用することができる。
【００３５】
本組成物は、喘息および／またはＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）を患っている患者が、これから起きる感冒症状または疾患を潜在的に予防および／または治療するため、したがってこれらの潜在的な疾患／症状の悪化を予防するために使用することができる。
【００３６】
上気道感染症を予防および／または治療する好ましい方式は、本発明の組成物の経鼻投与により実施される。
【００３７】
ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））およびエンドウマメデンプンポリマーのミクロ粒子を含む本発明の組成物は、（ウイルス性）感染症または感冒の治療および／または予防のために使用することができ、この組成物は、１日〜１カ月の範囲、より好ましくは２〜３日毎、またはさらに１週間に１回または隔週の間隔で、経鼻適用により投与される。
【００３８】
０．１μｍ〜２００μｍ、好ましくは１μｍ〜５０μｍ、より好ましくは２μｍ〜４０μｍ、さらにより好ましくは２μｍ〜２０μｍ、および最も好ましくは１０μｍ〜２０μｍの範囲であり、極めて好ましいのが１３、１４または１５μｍである組成物中ミクロ粒径と組み合わせて、ポリ（Ｉ：Ｃ）／エンドウマメデンプン比が１／３である上述の組成物は、（ウイルス性）感染症または感冒の治療および／または予防のために使用することができ、前記組成物は、１日〜１カ月の範囲、より好ましくは２〜３日毎、またはさらに１回または隔週の間隔で、経鼻適用により投与される。
【００３９】
本発明の一部はまた、本明による組成物を含むデバイス、特に経鼻デリバリーシステムである。
【００４０】
本発明に従い、ポリ（Ｉ：Ｃ）は、経鼻投与のための乾燥粉末として製剤化される。安定性を改善するために、ポリ（Ｉ：Ｃ）は、エンドウマメデンプンおよびポリ（Ｉ：Ｃ）を含有する水性混合物から噴霧乾燥される。
【００４１】
デンプンは二重の機能を有すると考えられている：（１）鼻内で生体接着剤として作用する、（２）およびポリ（Ｉ：Ｃ）を安定化させるための保護的マトリックスとしての役目を果たす。デンプン、特にエンドウマメデンプンは、蓄積がアミラーゼを介した分解により阻止されるので、経鼻適用に対して好ましい添加剤である。
【００４２】
高いアミロペクチン含有量を有するデンプンまたは化工デンプンは、良好な粘膜接着を示す。具体的には、ヒドロキシプロピル化（アルファ化）エンドウマメデンプン（化工物）が本発明で使用される。これが冷水膨潤性であり、かつ冷水溶解性の画分を含有する結果、ポリ（Ｉ：Ｃ）と低い剪断力で混合した場合、均質な分散液を生じるからである。生成されたデンプン分散液は、低粘度から中間の粘度を有し、これによって、高いデンプン比でも、噴霧乾燥して均質な粉末となることが可能となる。
【００４３】
経鼻投与は、単回用量粉末経鼻デバイス（Ａｐｔａｒ  Ｐｈａｒｍａ  Ｇｅｒｍａｎｙから供給される単位用量デバイス）を使用して好ましくは達成される。単位用量デバイスは、能動的デリバリーシステムであり、患者は吸入する必要がなく、性能が患者に依存しないことを意味する。投与は作動により実施され、この作動は過圧により制御される。ひと吹き当たりの用量は、噴霧乾燥粉末中のポリ（Ｉ：Ｃ）の濃度および放出された粉末の重量により決定される。粉末は、各外鼻孔に、ひと吹き毎に新しいデバイスを使用して投与されることになる。
【００４４】
上述されているように、ポリ（Ｉ：Ｃ）は、イノシン酸およびシチジル酸のナトリウム塩の反平行ポリヌクレオチド鎖で構成される合成二本鎖ＲＮＡである。その鎖同士は、イノシンとシトシン塩基の間に形成される水素結合によって非共有結合で結合している。
【００４５】
ポリ（Ｉ：Ｃ）に対する平均鎖長は、３００〜６，０００塩基対の間の範囲であり、これは、約１８０，０００〜約３，６００，０００ダルトンに対応する。分子式は、（Ｃ１０Ｈ１０Ｎ４ＮａＯ７Ｐ）ｘ・（Ｃ９Ｈ１１ＮａＮ３Ｏ７Ｐ）ｘである。
【００４６】
【化１】
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【００４７】
ポリ（Ｉ：Ｃ）は購入することができるが、任意選択で、社内で、例えば以下の手順を使用して作製することもできる。二重鎖生成物ポリ（Ｉ：Ｃ）は、ポリイノシン（Ｉ）およびポリシチジン（Ｃ）の個々のホモポリマーから製造される。ポリＩおよびポリＣは、ポリヌクレオチドホスホリラーゼ（ＰＮＰａｓｅ）の存在下でヌクレオシドジホスフェートのイノシンおよびシチジンを個々に重合化することによって合成される。各ヌクレオシドジホスフェートは、生成されるリボ核酸ポリマーの長さを制御するために、２０〜２４時間にわたりＰＮＰａｓｅで個々に重合する。次いで、酵素、タンパク質キナーゼを加えて、重合反応を終結させる。生成されたホモポリマー（すなわち、一本鎖ＲＮＡ分子）は、各ポリマー生成物の分子量範囲を特定の範囲内に制御するために加水分解する。加水分解した生成物をエタノールで処理して、一本鎖ＲＮＡ分子（ｓｓＲＮＡ）を溶液から沈殿させる。沈殿物を上清から分離し、水に溶解する。次いで、ｓｓＲＮＡの溶液を濾過して、微粒子を除去し、限外濾過して、低分子量夾雑物を除去し、次いで、凍結乾燥させる。凍結乾燥されたｓｓＲＮＡ生成物は、純度、分子量、および他の品質特性について個々に試験して、生成物が規格内であることを確定する。
【００４８】
個々の一本鎖ホモポリマー（ポリＩおよびポリＣ）は、０．０１５Ｍ塩化ナトリウムに個々に溶解し、次いで鎖同士をアニーリングするように組み合わせて、二本鎖の二重鎖生成物（ポリＩ：ポリＣ）を形成する。混合後、生成した溶液を濾過する。濾液を限外濾過して、低分子量夾雑物を除去する。次いで、限外濾過した生成物を凍結乾燥する。生成した二重鎖生成物は−２０℃で貯蔵する。凍結乾燥されたｄｓＲＮＡ生成物は、純度、分子量、および他の品質特性について試験して、生成物が規格内であることを保証する。
【００４９】
一部の態様では、本発明は、１／３（ｗ／ｗ）の比のポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））とエンドウマメデンプンのミクロ粒子を含む組成物に関する。ポリ（Ｉ：Ｃ）−エンドウマメデンプンミクロ粒子は、例えば、噴霧乾燥プロセスなどの粒子形成プロセスの手段により生成し得る。ミクロ粒子のＤＶ５０は０．１μｍ〜２００μｍの範囲でもよい。組成物は、例えば、グリセロールもしくはエタノールまたはその組合せに基づく、有機溶媒を含む液体組成物でもよい。一部の実施形態では、本発明は、組成物を含むデバイス、例えば、経鼻デリバリーデバイスなどを提供する。組成物は、例えば、感染症、感冒またはインフルエンザ様疾患の治療および／または予防において、医薬に使用することができる。組成物は、経鼻投与により、上気道感染症を予防および／または治療するための医薬の製造のために使用することができる。
【００５０】
一部の態様では、本発明は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを含むマイクロ粒子に関する。
【００５１】
好ましい実施形態では、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、１：９より大きい比で含む。例えば、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：１〜約１：８、例えば、約１：１〜約１：７、約１：１〜約１：６、約１：１〜約１：５、約１：１〜約１：４、約１：１〜約１：３、約１：２〜約１：８、約１：２〜約１：７、約１：２〜約１：６、約１：２〜約１：５、約１：２〜約１：４、約１：２〜約１：３、約１：３〜約１：８、約１：３〜約１：７、約１：３〜約１：６、約１：３〜約１：５、または約１：３〜約１：４などの比で含み得る。好ましい実施形態では、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：１〜約１：７の比で含む。より好ましい実施形態では、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：１〜約１：６の比で含む。さらにより好ましい実施形態では、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：２〜約１：５の比で含む。最も好ましい実施形態では、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：３〜約１：５の比で含む。
【００５２】
マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、約１：７、または約１：８の比で含み得る。好ましい実施形態では，マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、約１：６、または約１：７の比で含む。より好ましい実施形態では、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：１、約１：２、約１：３、約１：４、約１：５、または約１：６の比で含む。さらにより好ましい実施形態では、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：２、約１：３、約１：４、または約１：５の比で含む。最も好ましい実施形態では、マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸およびデンプンを、約１：３、約１：４、または約１：５の比で含む。
【００５３】
デンプンは、トウモロコシデンプン（すなわち、コーンスターチ）、小麦デンプン、ジャガイモデンプン、またはエンドウマメデンプンでもよい。デンプンは、バナナデンプン、米デンプン、オオムギデンプン、ライムギデンプン、雑穀デンプン、カラスムギデンプン、ヤムデンプン、サツマイモデンプン、キャッサバデンプン（すなわち、タピオカデンプン）、サゴデンプン、アロールートデンプン、ソラマメデンプン、レンズマメデンプン、ヤエナリデンプン、またはヒヨコマメデンプンでもよい。デンプンは、１つより多くの供給源由来のデンプンを含み得る、例えば、デンプンはエンドウマメデンプン、ジャガイモデンプン、小麦デンプン、および／またはトウモロコシデンプンを含み得る。上記デンプンのそれぞれおよびその組合せは、本発明の各実施形態において、エンドウマメデンプンと交換可能であり、本発明の任意の実施形態では、エンドウマメデンプンは、任意の起源のデンプン（またはデンプンの組合せ）で代用してもよい。好ましい実施形態では、デンプンは、エンドウマメデンプンを含む、またはさらにエンドウマメデンプンからなる、またはエンドウマメデンプンから本質的になる。一部の好ましい実施形態では、デンプンはトウモロコシデンプン（例えば、ろう状トウモロコシデンプン）を含む、またはさらにトウモロコシデンプン（例えば、ろう状トウモロコシデンプン）から本質的になる。
【００５４】
デンプンは、少なくとも約２０％のアミロース、例えば、少なくとも約２５％のアミロースまたは少なくとも約３０％のアミロースを含み得る。特定の実施形態では、デンプンは少なくとも約２５％のアミロースを含む。デンプンは、約２０％のアミロース〜約８５％のアミロース、例えば、約２０％〜約４０％、約３０％〜約５０％、約４０％〜約６０％、約５０％〜約７０％、約６０％〜約８０％、約２０％〜約３０％、約２５％〜約３５％、約３０％〜約４０％、約３５％〜約４５％、約４０％〜約５０％、約４５％〜約５５％、約５０％〜約６０％、約５５％〜約６５％、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７５％、約７０％〜約８０％、または約７５％〜約８５％のアミロースを含み得る。デンプンは、０％〜約１０％のアミロース、例えば、０％〜約５％、０％〜約４％、０％〜約３％、０％〜約２％、または０％〜約１％などのアミロースを含み得る。デンプンは高アミロースデンプン、例えば、高アミローストウモロコシデンプン（例えば、ＥＵＲＹＬＯＮ（登録商標））を含み得る。一部の好ましい実施形態では、デンプンは約１５％のアミロース〜約５０％のアミロース、より好ましくは約２０％のアミロース〜約４５％のアミロース、および最も好ましくは約２５％のアミロース〜約４０％のアミロースを含む。他の好ましい実施形態では、デンプンは約５％未満のアミロース、例えば、４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満などのアミロースを含み得る。アミロースではないデンプンの画分は好ましくはアミロペクチンであり、例えば、約２０％〜約４０％のアミロースを含み、好ましくは約６０％〜約８０％のアミロペクチンを含むデンプン、および０％〜約１０％のアミロースを含み、好ましくは約９０％〜１００％のアミロペクチンを含むデンプンである。
【００５５】
デンプンは、約１５％〜約８０％のアミロペクチン、例えば、約２０％〜約４０％、約３０％〜約５０％、約４０％〜約６０％、約５０％〜約７０％、約６０％〜約８０％、約１５％〜約２５％、約２０％〜約３０％、約２５％〜約３５％、約３０％〜約４０％、約３５％〜約４５％、約４０％〜約５０％、約４５％〜約５５％、約５０％〜約６０％、約５５％〜約６５％、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７５％、または約７０％〜約８０％などのアミロペクチンを含み得る。デンプンは、約９０％〜１００％のアミロペクチン、例えば、約９５％〜１００％、約９６％〜１００％、約９７％〜１００％、または約９８％〜１００％などのアミロペクチンを含み得る。一部の好ましい実施形態では、デンプンは、約５０％〜約８５％のアミロペクチン、より好ましくは約５５％〜約８０％のアミロペクチン、および最も好ましくは約６０％〜約７５％のアミロペクチンを含む。一部の好ましい実施形態では、デンプンは、少なくとも約９０％のアミロペクチン、例えば、少なくとも約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または少なくとも約９９％などのアミロペクチンを含む。アミロペクチンではないデンプンの画分は、好ましくはアミロースであり、例えば、約６０％〜約７０％のアミロペクチンを含み、好ましくは約３０％〜約４０％のアミロースを含むデンプンであり、および約９５％〜１００％のアミロペクチンを含み、好ましくは０％〜約５％のアミロースを含むデンプンである。
【００５６】
一部の好ましい実施形態では、デンプンはアルファ化デンプンである。例えば、ある特定の、好ましい実施形態では、デンプンは、アルファ化エンドウマメデンプンまたはアルファ化トウモロコシデンプン（例えば、アルファ化した、ろう状トウモロコシデンプン）でもよい。デンプン糊化はデンプンの溶解度を増加させることができる。
【００５７】
デンプンは加工デンプン、例えば、デキストリン、酸処理デンプン、アルカリ処理デンプン、漂白デンプン、酸化デンプン、酵素処理デンプン、モノスターチホスフェート、ジスターチホスフェート、リン酸化ジスターチホスフェート、アセチル化ジスターチホスフェート、酢酸デンプン、アセチル化ジスターチアジペート、ヒドロキシプロピルデンプン、ヒドロキシプロピルジスターチホスフェート、ヒドロキシプロピルジスターチグリセロール、オクテニルコハク酸デンプンナトリウム、オクテニルコハク酸デンプンアルミニウム、アセチル化酸化デンプン、カチオン性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、またはカルボキシメチル化デンプンなどでもよい。修飾は、デンプンの疎水性、親水性、充填量、吸湿性、粘度、および／または溶解度を変化させることができる。Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標）は、例えば、アルファ化ヒドロキシプロピルエンドウマメデンプンであり、エンドウマメデンプンのヒドロキシル基の一部がヒドロキシプロピル基で置換されている。一部の実施形態では、デンプンのヒドロキシル基の０％〜約４０％、例えば、１％〜約２０％、または約２％〜約１０％がヒドロキシプロピル化されている。一部の実施形態では、デンプンのヒドロキシル基の０％〜約４０％、例えば、１％〜約２０％、または約２％〜約１０％などがヒドロキシエチル化されている。ある特定の好ましい実施形態では、デンプンはヒドロキシプロピルデンプン、例えば、ヒドロキシプロピルエンドウマメデンプンなどである。ある特定の好ましい実施形態では、デンプンはアルファ化ヒドロキシプロピルデンプン、例えば、アルファ化ヒドロキシプロピルエンドウマメデンプンである。ある特定の好ましい実施形態では、デンプンはヒドロキシエチルデンプン、例えば、ヒドロキシエチルトウモロコシデンプンである。ある特定の好ましい実施形態では、デンプンはアルファ化ヒドロキシエチルデンプン、例えば、アルファ化ヒドロキシエチルトウモロコシデンプンである。
【００５８】
一部の実施形態では、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸の平均鎖長は約３００塩基対〜６，０００塩基対である。例えば、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸は、約３００ヌクレオチド〜６，０００ヌクレオチドの平均鎖長を有するポリイノシン酸および約３００ヌクレオチド〜６，０００ヌクレオチドの平均鎖長を有するポリイノシン酸を含み得る。一部の実施形態では、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸の平均分子量は約１８０ｋＤａ〜３，６００ｋＤａである。ポリイノシン酸−ポリシチジル酸は、ナトリウム塩などの塩として存在し得る。
【００５９】
一部の実施形態では、マイクロ粒子は水を含み得る。マイクロ粒子はポリイノシン酸−ポリシチジル酸、デンプン、および水から本質的になり得、例えば、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸はナトリウムまたは別のカチオンを含む。マイクロ粒子は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸、デンプン、および水からなり得る。
【００６０】
マイクロ粒子は、０．１μｍ〜２００μｍ、好ましくは１μｍ〜５０μｍ、より好ましくは２μｍ〜４０μｍ、さらにより好ましくは２μｍ〜２０μｍ、および最も好ましくは１０μｍ〜２０μｍのサイズを有し得る。マイクロ粒子は、約２μｍ〜約３０μｍ、例えば、約４μｍ〜約３０μｍ、約５μｍ〜約３０μｍ、または約６μｍ〜約３０μｍなどのサイズを有し得る。マイクロ粒子は、約２μｍ〜約２７μｍ、例えば、約４μｍ〜約２７μｍ、約５μｍ〜約２７μｍ、または約６μｍ〜約２７μｍなどのサイズを有し得る。マイクロ粒子は、約２μｍ〜約２０μｍ、例えば、約４μｍ〜約２０μｍ、約５μｍ〜約２０μｍ、または約６μｍ〜約２０μｍなどのサイズを有し得る。マイクロ粒子は、約２μｍ〜約１０μｍ、例えば、約４μｍ〜約１０μｍ、約５μｍ〜約１０μｍ、または約６μｍ〜約１０μｍなどのサイズを有し得る。
【００６１】
一部の態様では、本発明は、本明細書中に記載されているような複数のマイクロ粒子（例えば、上記を参照）を含む組成物に関する。組成物は、約１μｍ〜約２００μｍ、例えば、約１μｍ〜約５０μｍ、約２μｍ〜約４０μｍ、約２μｍ〜約２０μｍ、または約１０μｍ〜約２０μｍなどのＤｖ５０を有し得る。組成物は、約４μｍ〜約２０μｍ、約５μｍ〜約２０μｍ、約６μｍ〜約２０μｍ、約７μｍ〜約２０μｍ、約８μｍ〜約２０μｍ、約９μｍ〜約２０μｍ、または約１０μｍ〜約２０μｍのＤｖ５０を有し得る。
【００６２】
複数のマイクロ粒子を含む組成物は液体または乾燥粉末でもよい。複数のマイクロ粒子を含む組成物は、有機溶媒、例えば、グリセロール、エタノール、またはその組合せなどを含み得る。複数のマイクロ粒子を含む組成物はリン酸緩衝食塩水をさらに含み得る。好ましい実施形態では、複数のマイクロ粒子を含む組成物は、少なくとも１カ月、例えば、少なくとも２カ月、少なくとも３カ月、少なくとも４カ月、少なくとも５カ月、少なくとも６カ月、少なくとも７カ月、少なくとも８カ月、少なくとも９カ月、少なくとも１０カ月、少なくとも１１カ月、または少なくとも１２カ月などの間室温で貯蔵中は安定している。複数のマイクロ粒子を含む組成物は、約１カ月、約２カ月、約３カ月、約４カ月、約５カ月、約６カ月、約７カ月、約８カ月、約９カ月、約１０カ月、約１１カ月、または約１２カ月の間室温で貯蔵中は安定となり得る。
【００６３】
一部の態様では、本発明は、本明細書中に記載されているようなマイクロ粒子（例えば、上記を参照）を含む組成物を含む経鼻デリバリーシステムに関する。
【００６４】
一部の態様では、本発明は、上気道感染症を予防および／または治療する医薬の製造のための、本明細書中に記載されているような複数のマイクロ粒子を含む組成物の使用に関する。一部の実施形態では、本発明は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する対象において、上気道ウイルス感染症を予防する医薬の製造のための、本明細書中に記載されているようなマイクロ粒子を含む組成物の使用に関する。
【００６５】
本明細書中に記載されているような複数のマイクロ粒子を含む組成物は、上気道のウイルス感染症、例えば、ライノウイルス感染症またはインフルエンザウイルス感染症などの治療または予防に有用となり得る。ウイルス感染症は、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス）、コロナウイルス、インフルエンザウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、またはメタニューモウイルスが引き起こし得る。本明細書中に記載されているような複数のマイクロ粒子を含む組成物は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、またはその症状を有する対象において、上気道ウイルス感染症を予防するのに有用となり得る。方法は、例えば、経鼻投与により対象に組成物を投与することを含み得る。対象はヒトまたは動物でもよく、好ましくはヒトである。
【００６６】
一部の態様では、本発明は、対象においてウイルス感染症を治療または予防する方法であって、本明細書中に記載されているような複数のマイクロ粒子を含む組成物をこの対象に投与することを含む、方法に関する。ウイルス感染症は、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス）、コロナウイルス、インフルエンザウイルス、ヒトパラインフルエンザウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、またはメタニューモウイルスが引き起こし得る。ある特定の好ましい実施形態では、ウイルス感染症はライノウイルス感染症またはインフルエンザウイルス感染症である。組成物を投与することは、例えば、経鼻投与を含んでもよい。対象はヒトまたは動物でもよく、好ましくはヒトである。
【００６７】
一部の態様では、本発明は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有する対象において上気道ウイルス感染症を予防する方法であって、本明細書中に記載されているような複数のマイクロ粒子を含む組成物をこの対象に投与することを含む、方法に関する。組成物を投与することは、例えば、経鼻投与を含んでもよい。対象はヒトまたは動物でもよく、好ましくはヒトである。
[実施例]
【実施例１】
【００６８】
マイクロ粒子を調製し、特性決定する方法
エンドウマメデンプンを用いたポリ（Ｉ：Ｃ）の噴霧乾燥
Ｂｕｃｈｉ  Ｂ２９０小型噴霧乾燥機（Ｂｕｃｈｉ、Ｆｌａｗｉｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で噴霧乾燥プロセスを実施した。ヌクレアーゼ非含有水をガラスビーカーに加え、混合中にエンドウマメデンプンを加えながら、デンプンが完全に分散するまで電磁撹拌機を使用して混合する。ポリ（Ｉ：Ｃ）をヌクレアーゼ非含有水に溶解し、ポリ（Ｉ：Ｃ）が完全に溶解するまで電磁撹拌機で撹拌する。溶解したポリ（Ｉ：Ｃ）を分散したエンドウマメデンプンに加え、室温で一晩撹拌する。全固体濃度４．７％（ｗ／ｗ）およびポリ（Ｉ：Ｃ）／エンドウマメデンプン比、１／３（ｗ／ｗ）を適用した。
【００６９】
蠕動ポンプにより、溶液を、噴霧乾燥機の先端部の２つの液体ノズル（直径：０．７ｍｍ）に供給した。噴霧乾燥機を並流の窒素流モードで作動させた。噴霧乾燥した粒子をサイクロンに取り付けられたリザーバー内に収集した。粒子の収集後、ガラスシリンダーおよびサイクロンを室温に冷却した。収集した粉末を琥珀色のガラスビンに移し、このビンをアルミニウムベーパーロックバッグ内に配置した。バイアルを室温で貯蔵した。
【００７０】
走査型電子顕微鏡法
試料を、直径＋／−３０〜５０ｎｍの金粒子でスパッタリングした。画像を、Ｅｖｅｒｈａｒｔ  Ｔｈｏｒｎｌｅｙ検出器を備えたＦＥＩ走査型電子顕微鏡−Ｑｕａｎｔａ  ２００Ｆ型を使用して生成した。
【００７１】
含水量−カールフィッシャー滴定
コンセプトの含水量を、直接的容積測定のカールフィッシャー滴定により決定した。ＫＦ  ＴＩＴＲＡＴＯＲ  Ｖ３０を使用する（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ、ＵＳ）。粉末（５０〜１００ｍｇ）を、Ｈｙｄｒａｎａｌ（登録商標）Ｍｅｔｈａｎｏｌ  Ｄｒｙ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する滴定容器に移し、３００秒間撹拌した。５ｍｌビュレットを使用して、濃度２ｍｇ／ｍｌで、Ｈｙｄｒａｎａｌ（登録商標）Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ  ２（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で滴定を実施した。終了させるために、１５μｇ／分のストップドリフトを適用した。試料は三重反復試験で分析した。
【００７２】
粒径の決定
目的の生成物の体積分布だけに基づいて、粒径分布データを評価する傾向が存在する。よって、評価は多くの場合、Ｄｖ１０、Ｄｖ５０およびＤｖ９０積算ふるい下の比較に制限される。しかし、ｄｖｘ積算ふるい下を比較することは、異なる技術および装置が異なる結果を容易にもたらすという事実から、必ずしも単純ではあり得ない。加えて、粒径（または形状）分布データから、そのデータを異なる観点から見ることによって（すなわち、他のパラメーターを使用する）、より多くの情報を得ることができる。
【００７３】
粒径分布の決定のために、レーザー回折試験法を使用した。分析は、Ｈｙｄｒｏ２０００Ｓ湿式分散モジュール（または同等の系）を備えたＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  ２０００  レーザー回折計で実施した。２０ｎｍ〜２ｍｍのサイズ範囲において、青色光ＯＮ検出モードで装置を使用した。測定した本発明の体積粒径分布は、Ｄｖ１０に対して４μｍであり、Ｄｖ５０に対して１４μｍである一方、Ｄｖ９０に対しては２７μｍである。
【実施例２】
【００７４】
インフルエンザマウスモデルにおける製剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験
すべての動物研究は倫理委員会により承認され、国内および国際ガイドラインに従い実施した。週齢８〜１２週の雌のＳｗｉｓｓマウス（Ｊａｎｖｉｅｒ）を使用した。すべての鼻腔内治療はイソフルラン麻酔下で実施した。ある量の液体を投与するために、小滴を外鼻孔の上に直接適用し、口を閉じることによって、外鼻孔を介してこの液滴を鼻腔内に入れた。噴霧乾燥させたポリ（Ｉ：Ｃ）−エンドウマメデンプン粉末は各実験の直前に新たに調製し、粉末用先端デバイスを用いて投与した。製剤化されていないポリ（Ｉ：Ｃ）を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に濃度１ｍｇ／ｍｌで投与した。
【００７５】
異なる比（１／３、１／５、１／１２）のポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（＝エンドウマメデンプン）に関するＩＦＮ−β誘発能の試験
インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）遺伝子活性化に対するルシフェラーゼリポーターは、異なるポリＩＣ製剤での刺激後のＩＦＮ−βの活性化を見抜くことができる。ポリＩＣは、パターン認識受容体（ＰＲＲ）を介した先天免疫系の刺激により、ｄｓＲＮＡウイルスを模倣する合成類似体である。ポリＩＣがそのＰＲＲ（ＴＬＲ３）に結合すると、ＲＩＧ−１および／またはＭＤＡ  ５、すなわち、シグナル伝達カスケードが開始され、Ｉ型インターフェロン（ＩＦＮ−βがその代表である）の活性化をもたらす。ヘテロ接合性ＩＦＮ−β＋／Δβ−ｌｕｃアルビノ（Ｔｙｒｃ２Ｊ）Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、ＩＦＮ−βの遺伝子座での標的変異により、ＩＦＮ−βプロモーターで駆動されたホタルルシフェラーゼを産生する。光学的画像化のため、ルシフェリンが全身投与され、ＩＶＩＳ２００系（ＣａｌｉｐｅｒＬＳ）を使用してフォトン発光がモニターされる。
【００７６】
乾燥粉末製剤中の化合物のＩＦＮ−β誘発能が、異なるポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（＝エンドウマメデンプン）比、１／３、１／５、および１／１２で試験された。エンドウマメデンプンのみの製剤を陰性対照として含めた。各化合物は、ＩＦＮ−βリポーターマウスに鼻腔内投与され、ｉｎ  ｖｉｖｏでの画像化を投与の前および２４時間後に実施した。
【００７７】
実験プロトコル
マウス。ＩＦＮ−βリポーターマウスの生成は以前に記述されている（Lienenklausら、2009年）。簡単に説明すると、マウスは、ＩＦＮ−β遺伝子座での標的変異により、ＩＦＮ−βプロモーターにより駆動されたホタルルシフェラーゼを産生する。この実験で使用したマウスは、ヘテロ接合性ＩＦＮ−β＋／Δβ−ｌｕｃアルビノ（Ｔｙｒｃ２Ｊ）Ｃ５７ＢＬ／６であった。週齢１２〜１４週の間の雄および雌を使用した。動物はＩＶＣラック内で飼育し、これらには食物および水を自由に摂取させる。
【００７８】
化合物の投与。３１匹の週齢８〜１２週の雄のおよび雌のヘテロ接合性ＩＦＮ−β＋／Δβ−ｌｕｃアルビノ（Ｔｙｒｃ２Ｊ）Ｃ５７ＢＬ／６を使用した。すべての鼻腔内投与は注射麻酔（ケタミン／キシラジン）下で実施した。自家製先端デバイスを使用して、乾燥粉末を投与した。先端デバイスを使用して、２ｍｍ粉末を左の外鼻孔に投与し、追加の２ｍｍの粉末を鼻に投与した。粉末の投与後、マウスを赤ランプの下に配置して、目覚めさせた。
【００７９】
マウスの画像化。ｉｎ  ｖｉｖｏでの画像化のため、Ｄ−ルシフェリン、ホタル、カリウム塩（ＰＢＳ中３０ｍｇ／ｍｌ；１００μｌ／２０ｇマウス）をマウスにｉ．ｖ．注射した。マウスをイソフルランで麻酔下に置き、ルシフェリン注射の約５分後、ＩＶＩＳ２００系（ＣａｌｉｐｅｒＬＳ）を使用して、フォトン発光をモニターした。画像化は、化合物投与の４時間前（バックグランド信号）および２４時間後に実施した。ルシフェリン投与と画像化の間の時間間隔に対して、データ補正を行った：補正されたフラックス＝全フラックス＋Δｔ［ｍｉｎ］＊（０．０４５９＊全フラックス）。
【００８０】
結果
実際のデータの統計分析は、ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（＝エンドウマメデンプン）１／３対１／１２の群の間で、またポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０  １／３対プラセボデンプンＬｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０の群の間で有意な相違点を示した（図１）。ログ変換されたデータの統計分析は、ポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０  １／３群対プラセボデンプンＬｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０の群の間で、１／５群対プラセボ群の間で、および１／１２群対プラセボ群の間で有意な相違点を示した（図２）。結論として、製剤の活性（ＩＦＮ応答）と、製剤中のポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０の比の間で良好な相関関係が存在する。より高い比のポリＩＣ／Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０デンプンが使用された場合、ＩＦＮ応答は増加する。
【実施例３】
【００８１】
ｉｎ  ｖｉｖｏ試験の再現性
実施例２の方法を繰り返した。図２は、マイクロ粒子を投与する前（図２Ａ）および後の（図２Ｂ）ルシフェラーゼ活性について画像化したマウスを表している。図３は、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸とデンプン（Ｌｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０（登録商標））とを、１：３、１：５、もしくは１：１２のいずれかの比で含む、または陰性対照（プラセボデンプンＬｙｃｏａｔ  ＲＳ７８０）を含むマイクロ粒子を投与した後のマウスの測定した放射輝度を表している。放射輝度の線形分析では統計的有意性は観察されなかったが（図３Ａ）、データ上で対数変換を実施した後、１：３群と陰性対照（ｐ＝０．０００２）との間で、および１：５群と陰性対照（ｐ＝０．０００６）の間で統計的有意性が観察された（図３Ｂ）。しかし、高い応答マウス（ｐ＝０．１８９７）に関連するデータ点を消去すると、１：５群と陰性対照との間の統計的有意性は失われた。
【００８２】
実施例２および３からのデータを、第３の、同様に実施した実験からのデータと共にプールした（図４）。線形分析を使用してデータを分析した場合、１：３群と陰性対照との間で（ｐ＝０．０００２）、１：３群と１：１２群との間で（ｐ＝０．００６０）、および１：５群と陰性対照との間で（ｐ＝０．００２０）、統計的有意性が観察された。対数変換を実施した後でデータを分析した場合、１：３群と陰性対照との間で（ｐ＜０．０００１）、１：３群と１：１２群との間で（ｐ＝０．００１７）、１：５群と陰性対照との間で（ｐ＜０．０００１）、１：５群と１：１２群との間で（ｐ＜０．０００１）、および１：１２群と陰性対照との間で（ｐ＜０．０００１）統計的有意性が観察されたが、１：３群と１：５群との間では（ｐ＝０．７０６４）観察されなかった。
【００８３】
本発明の開示は、その特定の実施形態を参照して記載されているが、本開示の真の精神および範囲から逸脱することなく、様々な変更がなされ、同等物が置換され得ることを当業者は理解すべきである。加えて、多くの修飾がなされることによって、本発明の開示の目的、精神および範囲に対して、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセスステップまたはステップを適応させることができる。すべてのこのような修飾は、本開示の範囲内であることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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