(57)【要約】  本発明は、内皮機能を回復させることおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる、臓器障害の予防または処置のための化合物に関し、特に糖尿病性腎障害の予防または処置のための化合物に関する。具体的には、本発明は、内皮機能を回復させることおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる、臓器障害、特に糖尿病性腎障害の予防または処置での使用のための６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノンまたはＮ，６−ジヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミドもしくはその薬学的に許容される塩もしくは塩基に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
内皮機能を回復することおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる臓器障害の予防または処置における使用のための、式（ＩＩ）
【化１】
2018520106.tif 000014
による、もしくは式（ＩＩＩ）
【化２】
2018520106.tif 000015
による化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは塩基。
【請求項２】
前記臓器障害が糖尿病性臓器障害である、請求項１に記載の使用のための、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノンまたはＮ，６−ジヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド。
【請求項３】
前記臓器が腎臓である、請求項１または請求項２に記載の使用のための、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノンまたはＮ，６−ジヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド。
【請求項４】
内皮機能を回復することおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる臓器障害の予防または処置における使用のための、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−オール；（Ｓ）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸；（Ｒ）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸；６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；Ｎ−ブチル−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−Ｎ−イソプロピル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（Ｅ）−Ｎ−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（モルホリノ）メタノン；Ｎ−（４−フルオロベンジル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−Ｎ−（２−（メチルアミノ）エチル）クロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−Ｎ，２，５，７，８−ペンタメチル−Ｎ−（２−（メチルアミノ）エチル）クロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）クロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−Ｎ−（３−ニトロフェニル）クロマン−２−カルボキサミド；Ｎ−（４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；メチル４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキシアミド）ベンゾアート；（４−ブチルピペラジン−１−イル）（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）メタノン；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；（（２Ｓ，５Ｒ）−４−アリル−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル）（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）メタノン；Ｎ−（（Ｒ）−２−アミノ−２−オキソ−１−フェニルエチル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メタノン；Ｎ−（２−ブロモエチル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；Ｎ’−（２−シアノエチル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボヒドラジド；２−（（（４−フルオロベンジル）アミノ）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（ブチルアミノ）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボン酸；２−（ヒドロキシメチル）−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−６−オール；６−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｒ）−１−ヒドロキシプロパン−２−イル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（４−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；Ｎ−（２−シアノエチル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−Ｎ−（２−（（２−ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）エチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（Ｒ）−Ｎ，６−ジヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（Ｓ）−Ｎ，６−ジヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；２−（（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）アミノ）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２，５，７，８−テトラメチル−２−（ピペリジン−１−イルメチル）クロマン−６−オール；Ｎ，６−ジヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボキサミド；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジン−１−イル）メタノン；（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；２−（（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸；（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノン；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；２−（４−（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸；エチル２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセタート；（Ｓ）−２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸；（Ｒ）−２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸；（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２ーカルボン酸；（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸；（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸、およびその薬学的に許容される塩もしくは塩基からなる群から選択される化合物であって、好ましくは、前記臓器障害が糖尿病性臓器障害である、および／または前記臓器が腎臓である、化合物。
【請求項５】
内皮機能を回復することおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる臓器障害の予防または処置における使用のための、式（Ｉ）
【化３】
2018520106.tif 000016
による化合物またはその薬学的な塩
（式中、Ｒ１およびＲ２は、同一であっても異なっていてもよく、Ｃ１〜Ｃ４の直鎖状または分枝状のアルキル基を表し；
Ｒ３は、水素または生体組織中で除去され得るプロドラッグ部分を表し、好ましくは、Ｒ３は、６−酸素とともにエステル基を形成し；
ｎは、０または１であってよく、および好ましくは１であり、
Ｒ４は、１〜２０個の炭素原子と少なくとも１つの窒素原子とを含む基であり、Ｒ４は、追加の複数の窒素原子、１または複数の酸素原子、ハロゲン、硫黄またはリン原子を含んでよく、およびＲ４は、芳香族基を含んでよく、Ｒ４の分子量は好ましくは３００Ｄａ未満である）。
【請求項６】
Ｒ３が、水素であるか、または１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、を有してよく、および１または複数のアミンまたは酸素原子を含んでよい、請求項５に記載の使用のための化合物。
【請求項７】
式（Ｉ）による前記化合物が５００Ｄａよりも低い分子量を有する、請求項５または請求項６に記載の使用のための化合物。
【請求項８】
式（Ｉ）による前記化合物が芳香族複素環を含まない、請求項５〜７のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項９】
Ｒ４が、カルボニル基、好ましくはトロロックス部分に結合したカルボニル基、を含む、請求項５〜８のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１０】
Ｒ４が、ＣＯ−Ｎ−Ｒ５であり、ここで前記Ｃ＝Ｏがトロロックス部分に結合しており、ならびにＲ５が、アルキル基であり、任意に、窒素および／または酸素で置換されており、前記アルキル基が１〜１２個の炭素原子を含み、窒素がアミン、第４級アミン、グアニジンもしくはイミンであってよく、酸素がヒドロキシル、カルボニルもしくはカルボン酸であってよく、酸素と窒素が一緒にアミド基、尿素基またはカルバマート基を形成してよい、請求項５〜９のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【請求項１１】
Ｒ５における前記アルキル基が、直鎖状、分枝状または環状であってよく、好ましくは少なくとも１つの環状構造を含む、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の使用のための化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、内皮機能を回復させることおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる、臓器障害の予防または処置のための化合物に関し、特に糖尿病性腎障害の予防または処置のための化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
結節性糖尿病性糸球体硬化症または毛細血管間糸球体腎炎としても知られている糖尿病性腎障害（糖尿病性腎症）は、腎糸球体の毛細管の血管障害に起因する進行性腎疾患である。この疾患は、ネフローゼ症候群およびびまん性糸球体硬化症によって特徴づけられている。糖尿病性腎症は一般に長期にわたる糖尿病に起因し、多くの先進諸国では透析の主要な指標である。
【０００３】
糸球体硬化症によって引き起こされる腎不全は、流体濾過障害および他の腎機能障害の原因となる。血圧が上昇し（高血圧）、浮腫を引き起こす体液貯留の増加と血漿膠質浸透圧の低下がある。他の合併症は、腎動脈の動脈硬化および尿中タンパク質でありえる。
【０００４】
第１の検査所見の異常は、一般に微量アルブミン尿検査の陽性である。糖尿病患者の一般尿検査が過度の尿中タンパク質を示す（タンパク尿）場合、診断は糖尿病性腎症が疑われる。特に血糖管理不良の場合、尿検査は尿中グルコースを示すこともある。腎障害が進行すると、血清クレアチニンおよび尿素窒素（ＢＵＮ）が増加することもある。症例が明確であり経時的に実証されるタンパク尿の進行および眼の網膜検査での糖尿病網膜症の存在を伴う場合は必ずしも必要ではないが、通常、腎生検により診断が確認される。
【０００５】
糸球体過剰濾過は、糖尿病性腎障害の基礎的な病態生理であり、糸球体内高血圧をもたらす。ＡＣＥ阻害剤は、この段階を妨げることによって糖尿病性腎障害を防止するのに役立つ。糸球体過剰濾過が進行すると、基底膜肥厚の段階に至る。これは、糖尿病性腎障害の経過で最も初期の検出可能な変化である。これに続いて、糸球体間質の膨張、最終的に結節硬化症が生じる。この段階で、腎臓は尿中に血清アルブミン（血漿タンパク質）を通常よりも多く漏出することがあり（アルブミン尿）、これはアルブミンの医療診断によって検出され得る。糖尿病性腎障害が進行すると、増え続ける糸球体は、進行性の結節性糸球体硬化によって破壊される。腎生検は、一般に糖尿病性腎障害を明らかにする。糖尿病性腎障害は、通常、糖尿病性網膜症が発症する前に起こり、網膜症のない腎障害のエビデンスは、腎機能障害が糖尿病それ自体によって引き起こされたのではなく、併存疾患（例えば糸球体腎炎）の結果であるという疑いを示す。
【０００６】
糖尿病性腎障害の処置の目標は、腎障害の進行を遅らせ、関連合併症を制御することである。一旦タンパク尿が確認されたならば、主要な処置はＡＣＥ阻害剤（ＡＣＥＩ）の使用であり、これは通常、タンパク尿レベルを低下させ、糖尿病性腎障害の進行を遅らせる。腎臓保護に寄与しうるＡＣＥＩのいくつかの効果は、ＡＣＥＩ療法に関連する乾性咳などのいくつかの副作用にも関与するキニンの上昇の関連性に関連していた。腎臓保護の効果は正常患者および高血圧患者において降圧作用に関連し、腎血管拡張は腎血流量の増加と糸球体輸出細動脈の拡張をもたらす。多くの試験は、関連薬、アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）に同様の利点があることを示している。
【０００７】
いくつかの化合物が糖尿病性腎障害のために開発中である。これらの化合物としては、バルドキソロンメチル、オルメサルタンメドキソミル、スロデキシド、ＮＯＸ−Ｅ３６、およびアボセンタンが挙げられる。
【発明の概要】
【０００８】
しかし、上述した説明にもかかわらず、当技術分野において糖尿病性腎障害または糖尿病性腎症の予防または処置のためのさらなる化合物が継続的に必要とされている。
【０００９】
他の目的の中でも本発明の目的は、当技術分野における上記の必要性を満たすことである。
【００１０】
本発明によれば、他の目的のなかでも上記の目的は、添付の請求項で概要を述べる化合物を提供することによって満たされる。
【００１１】
具体的には、他の目的のなかでも上記の目的は、内皮機能を回復することおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる、臓器障害の予防または処置での使用のための、下記式（Ｉ）による本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは塩基によって満たされ、好ましくは上記臓器障害が糖尿病性臓器障害でありおよび／または前記臓器が腎臓である。
【００１２】
【化１】
2018520106.tif 000002
（式中、Ｒ１およびＲ２は、同一であっても異なっていてもよく、Ｃ１〜Ｃ４の直鎖状または分枝状のアルキル基を表し；
Ｒ３は、水素または生体組織中で除去され得るプロドラッグ部分を表し；好ましくは、Ｒ３は６−酸素とともにエステル基を形成し、Ｒ３は、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子、を有してよく、１または複数のアミンまたは酸素原子を含んでよく；
ｎは、０または１であってよく、および好ましくは１であり；
Ｒ４は、１〜２０個の炭素原子と少なくとも１つの窒素原子とを含む基であり；Ｒ４は、追加の複数の窒素原子、１または複数の酸素原子、ハロゲン、硫黄またはリン原子を含んでよく、およびＲ４は、芳香族基を含んでよく、Ｒ４の分子量は好ましくは３００Ｄａ未満である。）
【００１３】
認識されるように、式（Ｉ）の化合物は、ビタミンＥの水溶性類似体であるトロロックスに由来する。トロロックスにおいて、Ｒ１およびＲ２はメチルであり、Ｒ２は水素であり、Ｒ４はカルボン酸である。
【００１４】
具体的には、他の目的のなかでも上記の目的は、内皮機能を回復することおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる、臓器障害の予防または処置における使用のための、下記式（ＩＩ）
【００１５】
【化２】
2018520106.tif 000003
による化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは塩基による、本発明によって満たされ、好ましくは前記臓器障害が糖尿病性臓器障害であり、および／または前記臓器が腎臓である。
【００１６】
本発明によれば、さらなる態様により、他の目的のなかでも上記の目的は、内皮機能を回復することおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる、臓器障害の予防または処置における使用のための、下記式（ＩＩＩ）
【００１７】
【化３】
2018520106.tif 000004
による化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは塩基によって満たされ、好ましくは前記臓器障害が糖尿病性臓器障害であり、および／または前記臓器が腎臓である。
【００１８】
本発明によれば、さらなる態様により、他の目的のなかでも上記の目的は、内皮機能を回復することおよび／または活性酸素種産生を阻害することによる、臓器障害の予防または処置における使用のための、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−オール；（Ｓ）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸；（Ｒ）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸；６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；Ｎ−ブチル−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−Ｎ−イソプロピル−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（Ｅ）−Ｎ−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（モルホリノ）メタノン；Ｎ−（４−フルオロベンジル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−Ｎ−（２−（メチルアミノ）エチル）クロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−Ｎ，２，５，７，８−ペンタメチル−Ｎ−（２−（メチルアミノ）エチル）クロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）クロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−Ｎ−（３−ニトロフェニル）クロマン−２−カルボキサミド；Ｎ−（４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；メチル４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキシアミド）ベンゾアート；（４−ブチルピペラジン−１−イル）（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）メタノン；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；（（２Ｓ，５Ｒ）−４−アリル−２，５−ジメチルピペラジン−１−イル）（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）メタノン；Ｎ−（（Ｒ）−２−アミノ−２−オキソ−１−フェニルエチル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メタノン；Ｎ−（２−ブロモエチル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；Ｎ’−（２−シアノエチル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボヒドラジド；２−（（（４−フルオロベンジル）アミノ）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（ブチルアミノ）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボン酸；２−（ヒドロキシメチル）−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−６−オール；６−ヒドロキシ−Ｎ−（（Ｒ）−１−ヒドロキシプロパン２−イル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（４−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；Ｎ−（２−シアノエチル）−６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；６−ヒドロキシ−Ｎ−（２−（（２−ヒドロキシエチル）（メチル）アミノ）エチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（Ｒ）−Ｎ，６−ジヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；（Ｓ）−Ｎ，６−ジヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミド；２−（（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（（（Ｓ）−２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル）アミノ）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２，５，７，８−テトラメチル−２−（ピペリジン−１−イルメチル）クロマン−６−オール；Ｎ，６−ジヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボキサミド；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；２−（（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール；２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸；（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノン；（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン；２−（４−（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸；エチル２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセタート；（Ｓ）−２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸；（Ｒ）−２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸；（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２カルボン酸；（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸；（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸、およびその薬学的に許容される塩もしくは塩基からなる群、全体として「Ａ群」、から選択される化合物によって満たされ、好ましくは前記臓器障害が糖尿病性臓器障害であり、および／または前記臓器が腎臓である。
【００１９】
驚くべきことに、本発明者らは、式（Ｉ）による本化合物、および最も好ましくは、（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノンまたはＮ，６−ジヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボキサミドが、糖尿病のマウスモデルにおいて内皮機能を回復させることおよび／または活性酸素種を阻害することに対して顕著な効果を有し、臓器において、特に糖尿病性臓器障害または糖尿病性腎障害において内皮機能を回復することおよび／または活性酸素種産生を阻害することにより臓器障害の予防または処置においてそれらを好適にしていることを発見した。
【００２０】
本発明の好適な実施形態によれば、本予防または処置は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（ＩＩＩ）による、またはＡ群による化合物などの本化合物を治療有効用量で投与することを含む。
【００２１】
式（Ｉ）
【化４】
2018520106.tif 000005
による化合物は、好ましくは、以下の特性を有する：
Ｒ１およびＲ２は、同一であっても異なっていてもよく、Ｃ１〜Ｃ４の直鎖状または分枝状のアルキル基を表す。好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、メチル、エチルまたはイソプロピルであり、最も好ましくはＲ１およびＲ３は、同一であり、メチルまたはイソプロピルである。他の好適な基は、ｎ−ブチルおよびｔ−ブチルである。
Ｒ３は、水素または生体組織中で除去され得るプロドラッグ部分を表す。好ましくは、Ｒ３は、６−酸素とともにエステル基を形成する。Ｒ３は、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子を有してよく、および１または複数のアミンもしくは酸素原子を含みうる。６−酸素とともに好適な基としては、エチルエステル、ブチルエステル、ベンゾイルエステル、またはアミノ酸のエステル、もしくはアミノ基が１〜４個の炭素原子を有するアルキルカルボン酸でアミド化されているアミノ酸が挙げられる。好適な一実施形態において、Ｒ３は、水素である。
ｎは、０または１であってよく、および好ましくは１である；
Ｒ４は、１〜２０個の炭素原子と少なくとも１つの窒素原子とを含む基である。Ｒ４は、追加の複数の窒素原子、１または複数の酸素原子、ハロゲン、硫黄またはリン原子を含んでよく、およびＲ４は、芳香族基を含んでよい。
【００２２】
Ｒ４の分子量は、好ましくは３００Ｄａ未満である。
【００２３】
好ましくは、式（Ｉ）による化合物は、５００Ｄａよりも低い分子量を有する。
【００２４】
好ましくは、式（Ｉ）による化合物は、芳香族複素環を含まない。
【００２５】
好ましくは、Ｒ４は、カルボニル基、最も好ましくはトロロックス部分に結合したカルボニル基、を含む。
【００２６】
好適な一実施形態において、Ｒ４は−ＣＯ−Ｎ−Ｒ５であり、ここで前記Ｃ＝Ｏはトロロックス部分に結合しており、およびＲ５はアルキル基であり、任意に、窒素または酸素で置換されており、アルキル基は１〜１２個の炭素原子を含み、窒素はアミン、第４級アミン、グアニジンもしくはイミンであってよく、酸素はヒドロキシル、カルボニルもしくはカルボン酸であってよい。酸素および窒素は一緒にアミド基、尿素基またはカルバマート基を形成してよい。
【００２７】
Ｒ５のアルキル基は、直鎖状、分枝状または環状でありえ、好ましくは少なくとも１つの環状構造を含む。
【００２８】
式（Ｉ）によって示される化合物は、既知の化学合成によって調製され得る。
【００２９】
例えば、グアニジン基、またはアルキル基を介してトロロックス部分に結合されるピペラジン基を含む化合物は、欧州特許第２０２５８０号に記載されている。類似合成を用いることができ、ここで６−酸素は保護され、合成後遊離される、またはプロドラッグ部分で保護されている。
【００３０】
例えば、置換基としてニコチン酸基を有する化合物が米国特許第４６１８９０号に記載さている。トロロックス部分の６−酸素に結合したニコチン酸基はプロドラッグ部分として作用でき、これはｉｎ  ｖｉｖｏで遊離ヒドロキシル基に加水分解される。
【００３１】
例えば、好適な化合物は、国際公開第８８／０８４２４号、実施例１８〜２３および７８〜１６４に記載されている。
【００３２】
例えば、好適な化合物は、国際公開第９７／４１１２１号、製法１、６、７、１２〜１５、２１、２４および２７に記載されており、ここではベンゾイル基が除去されてよく、またはプロドラッグ部分として作用できる。
【００３３】
さらなる化合物は、例えば国際公開第０３／０２４９４３号において記載される化合物９〜１１、２５〜２８、１０９〜１１２、１１９〜１２２などのようなものである。
【００３４】
例えば、第４級アンモニウム基を有する化合物は、国際公開第２０１４／０１１０４７号に、実施例中に合成の説明を含み記載されている。
【００３５】
本発明は、下記の実施例で、さらに詳述する。実施例において、図面を参照する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】ＳＵＬ１２１処置された糖尿病マウスおよび非糖尿病マウスの代謝データを示す。Ａ）体重、Ｂ）水分摂取量、Ｃ）尿排出量、Ｄ）非空腹時血漿グルコース値、Ｅ）血圧。＊ｐ＜０．０５糖尿病ＳＵＬ１２１群対糖尿病対照群。
【図２】終了時の臓器重量を示す。＊ｐ＜０．０５糖尿病ＳＵＬ１２１群対糖尿病対照群。＃ｐ＜０．０５糖尿病群対野生型対照群。
【図３】糖尿病動物に関する尿中アルブミン排出率とＡＣＲ比率を示す。＊＃ｐ＜０．０５糖尿病ＳＵＬ１２１群対糖尿病対照群。
【図４】糖尿病動物においてＦＧＳスコアがＳＵＬ１２１処置によって有意に低下したことを示す。
【図５】ＳＵＬ１２１処置が内皮介在弛緩を回復させることを示す。
【図６】ＳＵＬ１２１処置が糖尿病の血漿Ｈ２Ｏ２レベルを正常化したことを示す。
【図７】ＳＵＬ１２１処置が高グルコース誘発性細胞内ＲＯＳ産生を正常化したことを示す。
【図８】異なるパラメータ間の相関性を示す。
【実施例】
【００３７】
実施例１：数種の化合物の合成
本発明による化合物は、当業者に周知の標準合成方法に従って合成され得る。ＳＵＬ−００８３、ＳＵＬ−００８４とＳＵＬ−００８５は、市販されている。下記の表１は、本明細書で用いた本化合物と互換性のある任意表示（コード）として本化合物の概要を提示する。
【００３８】
【表１】
2018520106.tif 000006
2018520106.tif 000007
2018520106.tif 000008
【００３９】
ＳＵＬ０８９〜１１２、１１４〜１１７、１２０〜１２６、１２８〜１３０、１３２、１３４〜１３５、１３８、および１４０の合成
トロロックスのアミド化は、アミド形成のための標準的なカップリング試薬、例えばＨＡＴＵおよびＣＤＩの存在下で適切なアミンとの反応によって、行なった。形成されたアミドをＢＨ３で還元して、対応するアミンを調製した。ヒドロキサム酸誘導体は、ヒドロキシルアミン／ＣＤＩとの反応によって調製した。トロロックスのカルボヒドラジド類似体の合成は、ヒドラジンとの反応（置換）によって行なった。エナンチオマー／ジアステレオマー化合物は、鏡像異性的に純粋な（Ｒ）−トロロックスもしくは（Ｓ）−トロロックスから出発して、またはキラルクロマトグラフィーによって調製した。
【００４０】
【化５】
2018520106.tif 000009
【００４１】
ＳＵＬ−１１８、ＳＵＬ−１１９およびＳＵＬ−１４６の合成
サレンリガンドとコバルトとの配位複合体であるサルコミンを用いて市販のプロポフォールを酸化した後に、ＮａＢＨ４で還元し、２，６−ジイソプロピルベンゼン−１，４−ジオールを得た。続いて、ＨＣＯ／ＳｎＣｌ２／ＨＣｌを用いるメチル化およびメタクリル酸メチルとの反応により、ＳＵＬ−１４６（メチル６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボキシラート）を得た。ＬｉＯＨで加水分解し、カルボン酸ＳＵＬ−１１８（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボン酸）を得た。アルコールＳＵＬ−１１９（２−（ヒドロキシメチル）−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−６−オール）は、ＳＵＬ−１４６をＬｉＡｌＨ４で還元することによって得た。
【００４２】
【化６】
2018520106.tif 000010
【００４３】
ＳＵＬ−１３１、ＳＵＬ−１３３、ＳＵＬ  １３７およびＳＵＬ−１４６の合成
カルボン酸ＳＵＬ−１１８（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボン酸）から出発し、カップリング試薬としてＣＤＩを用いるヒドロキシルアミンとの反応によりそのヒドロキシルアミンを得た。化合物ＳＵＬ１３３（（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−イル）（４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル）メタノン）およびＳＵＬ１３７（（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノン）は、ＳＵＬ−１１８と適切なピペラジン誘導体との反応により調製した。カップリング試薬ＨＡＴＵおよびＣＤＩの両方は良好な収率をもたらした。ＳＵＬ１３９（２−（４−（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸は、ＳＵＬ１３７（（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノン）をグリオキサル酸で還元的アミノ化することで調製した。
【００４４】
【化７】
2018520106.tif 000011
【００４５】
ＳＵＬ−１３６、ＳＵＬ−１４１およびＳＵＬ−１４２の合成
Ｎ２雰囲気下で、ＳＵＬ−１４０（エチル２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）アセタート）の加水分解により、ＳＵＬ−１３６（２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸）を高収率で得た。鏡像異性体ＳＵＬ−１４１およびＳＵＬ−１４２は、上記の条件に従って調製した。
【００４６】
【化８】
2018520106.tif 000012
【００４７】
ＳＵＬ  １４３、１４４および１４５の合成
（Ｓ）−メチルピロリジン−２−カルボキシラート（Ｌ−プロリンメチルエステル）でトロロックスをアミド化し、カラムクロマトグラフィー後に、２つのジアステレオ異性体を得た。続いて個々のジアステレオ異性体を加水分解して、ＳＵＬ−１４４（（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸、ジアステレオマー１）と、ＳＵＬ−１４５（（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸、ジアステレオマー２）とを得た。ラセミ類似体、ＳＵＬ−１４３（（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸）は、個々のジアステレオ異性体のエステルを混合し、続いてＬｉＯＨを用いてエステル部分を加水分解することにより得た。
【００４８】
【化９】
2018520106.tif 000013
【００４９】
トロロックスのアミド化（一般例）
ＳＵＬ−１０８（（４−ブチルピペラジン−１−イル）（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）メタノン）ＨＣｌ
トロロックス（１１ｇ、０．０４４ｍｏｌ、１当量）をアセトニトリル（１００〜１５０ｍｌ）中に懸濁させた。ＣＤＩ（８．６ｇ、０．０５３ｍｏｌ、１．２当量）を少しずつ加えた。反応混合物を室温で０．５〜１時間攪拌した。１−ブチルピペラジン（６．９ｇ、０．０４８ｍｏｌ、１．１当量）を添加した後、反応混合物を２５〜３０℃で週末に亘り撹拌した。反応混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ（２００ｍｌ）を加え、水層をＥｔＯＡｃで抽出した（４×）。有機層を合わせて乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／１０％ＭｅＯＨ）により精製して、目的とする化合物（９ｇの生成物、純度８２％）を得た。ＥｔＯＡｃ／ヘプタンから結晶化して、ＳＵＬ−１０８（６ｇ、０．０１６ｍｏｌ、収率３６％、純度９０％）を白色固形物として得た。得られた物質をＤＣＭ（５０〜１００ｍｌ）中に溶解した。ＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、８．８ｍｌ、０．００３５ｍｏｌ、２．２当量）を加え、反応混合物を室温で週末にかけて撹拌した。混合物を濾過し、ＤＣＭですすぎ、乾燥させて、ＳＵＬ−１０８のＨＣｌ塩（６．３ｇ、純度９７〜９８％）を白色固形物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ｉｎ  ｐｐｍ）：０．９３（ｔ，３Ｈ），１．３８（ｍ，２Ｈ），  １．５８（ｓ，３Ｈ），１．６７（ｍ，２Ｈ），２．０９（ｓ，３Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ），  ２．１５（ｓ，３Ｈ），２．５０〜３．２０（ｍ，１４Ｈ）．Ｍ＋＝３７５．３
【００５０】
トロロックスアミドの還元（一般例）
ＳＵＬ−１２８（２−（（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メチル）−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−６−オール）ＨＣｌ
ＴＨＦ中のＢＨ３．ＴＨＦ（１６ｍｌ、０．０１５６ｍｏｌ、２当量）をＴ＝０℃に冷却した。ＴＨＦ（５０ｍｌ）中のＳＵＬ−１１２（（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メタノン；２．６ｇ、０．００７８ｍｏｌ、１当量）の溶液を滴下し、反応混合物を１時間還流し、室温へと一晩冷却した。反応混合物を氷浴上で冷却し、ＨＣｌ（６Ｍ、２５ｍｌ）を滴下した。ＤＣＭ（１００ｍｌ）を加え、層を分離した。水層をＤＣＭで抽出した（３×）。有機層を合わせて、ガス形成が認められなくなるまで、Ｋ２ＣＯ３上で乾燥させた。有機相を濾過し、濃縮した。粗生成物を氷浴上で冷却し、ＮａＯＨ（６Ｍ、５０ｍｌ）を滴下した。添加後、反応混合物を１時間撹拌し、ＤＣＭで抽出した（４×）。ＤＣＭ層を合わせて乾燥させ、濾過し、濃縮して１．６ｇの粗生成物（純度２０〜４０％）を得た。この物質をカラムクロマトグラフィーで精製して、ＳＵＬ−１２８（３００ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ、収率１２％、純度９０％）を得た。これをＤＣＭ（１０ｍｌ）中に溶解し、Ｔ＝０℃（氷浴）に冷却した。ＨＣｌ（ジオキサン中４Ｍ、０．３ｍＬ、０．９４ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。形成された固形物を濾過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、ＳＵＬ−１２８のＨＣｌ塩（３００ｍｇ、純度９０％）を白色固形物（ジアステレオマーの混合物）として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ｉｎ  ｐｐｍ）：１．２０−１．９０（ｍ，７Ｈ），２．１２  （ｓ，６Ｈ），２．１７（ｓ，３Ｈ），２．２０−２．９０（ｍ，９Ｈ），３．４−３．６５  （ｍ，２Ｈ）．Ｍ＋＝３２０．１
【００５１】
２，６−ジイソプロピルシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンの合成
プロポフォール（１００ｇ、５６１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２５０ｍＬ）中に溶解した。溶液を攪拌しながら０℃に冷却した。サルコミン（１６．６ｇ、５１ｍｍｏｌ；９ｍｏｌ％）を加え、得られた反応混合物を室温に加温しながら１１２時間撹拌した。反応混合物を水（７Ｌ）の中に注いだ。得られたスラリーをヘプタン（５×１Ｌ）で抽出した。有機抽出物を合わせてＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を真空下で濃縮して粗２，６−ジイソプロピルシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（６２．５ｇ、３２５ｍｍｏｌ、収率５８％）を油状物として得た。生成物をさらに精製することなく次の段階で使用した。
【００５２】
２，６−ジイソプロピルベンゼン−１，４−ジオールの合成
粗２，６−ジイソプロピルシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（６２．５ｇ、３２５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３００ｍＬ）およびメタノール（１００ｍＬ）中に溶解した。溶液を氷浴で０℃に冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（４．５ｇ、１８２ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。添加が完了したら、反応混合物を室温で一晩撹拌した。アセトン（１５０ｍＬ）を加えて過剰の水素化ホウ素ナトリウムを急冷した。３０分間撹拌した後に、２ＮのＨＣｌ水溶液（２００ｍＬ）を添加した。４５分間攪拌した後に、混合物を酢酸エチルで抽出した（４×４００ｍＬ）。有機層を合わせてＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶液を真空下で濃縮して、粗２，６−ジイソプロピルベンゼン−１，４−ジオール（６４ｇ、３３０ｍｍｏｌ）を赤色油状物として定量的収率で得た。生成物をさらに精製することなく次の段階で使用した。
【００５３】
３，５−ジイソプロピル−２−メチルベンゼン−１，４−ジオールの合成
２，６−ジイソプロピルベンゼン−１，４−ジオール（６４ｇ、０．３３ｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（９．８ｇ、０．３２７ｍｏｌ）、ＳｎＣｌ２（２１７．９ｇ、１．１５ｍｏｌ）、３７％のＨＣｌ濃縮水溶液（０．６Ｌ）およびジイソプロピルエーテル（２．５Ｌ）の混合物を４時間加熱還流した。一晩室温に冷却した後に、二相混合物を分離した。水層をＴＢＭＥ（２０００ｍＬ）で抽出した。有機画分を合わせて１ＮのＨＣｌ水溶液（１０００ｍＬ）、水（１０００ｍＬ）および塩水（１０００ｍＬ）で洗浄した。有機画分をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、ＧＣＭＳ分析により、３，５−ジイソプロピル−２−メチルベンゼン−１，４−ジオールと、２，６−ジイソプロピル−３，５−ジメチルベンゼン−１，４−ジオールとの５０：３５混合物（６１ｇの油状物）を得た。酢酸エチル／ヘプタン＝９７．５：２．５（４０００ｍＬ）、９５：５（４０００ｍＬ）で溶離するシリカゲル（１２００ｍＬ）のクロマトグラフィーにより精製して、３，５−ジイソプロピル−２−メチルベンゼン−１，４−ジオール６（１６．６ｇ、７９．８ｍｍｏｌ、２４％、純度８３％）を油状物として得た。
【００５４】
メチル６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボキシラートの合成
メタクリル酸メチル（２０ｍＬ、１８６ｍｍｏｌ）中に３，５−ジイソプロピル−２−メチルベンゼン−１，４−ジオール（１０．６ｇ、５０．９ｍｍｏｌ、純度８３％）を溶解した。この溶液をＢｅｒｇｈｏｆ反応器内のテフロン（Ｒ）チューブに移した。
ホルムアルデヒド水溶液（１０ｍＬ；１０〜１５％のＭｅＯＨで安定化した３７重量％の溶液）を添加し、密閉反応器中で反応混合物を攪拌しながら１８０℃（内部温度）に５時間加熱した。約４０℃に冷却した後に、反応混合物をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中に注ぎ、混合物を真空下で濃縮した。酢酸エチル／ヘプタン＝９５：５（５０００ｍＬ；ＴＬＣ：Ｒｆ約０．２；ヨウ素蒸気でスポット染色）で溶離するシリカゲル（６００ｍＬ）でのクロマトグラフィーにより精製して、所望の純粋な生成物、６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボキシラート（１０．０ｇ、３１．３ｍｍｏｌ、６１％）を得た。
【００５５】
６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボン酸（ＳＵＬ−１１８）の合成
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）、ＴＨＦ（１００ｍＬ）および水（２５ｍＬ）中の精製メチル６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボキシラート（８．３ｇ、２５．９ｍｍｏｌ）および水酸化リチウム一水和物（４．３ｇ、１０２．５ｍｍｏｌ、４当量）の混合物を、６０℃の温水浴中で、ロータリーエバポレーターで回転させながら、周囲圧力で３０分間加熱した。有機溶媒を真空下で蒸発させた。水（１５０ｍＬ）を残渣に加えた後に、酢酸（１０ｍＬ）を加えた。淡い橙色の混合物が得られた。酢酸エチルで抽出し（３×１００ｍＬ）、有機画分を合わせてＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮して、粗生成物を橙色の固形物として得た。この固形物をｔＢＭＥ（１５０ｍＬ）とともに撹拌した。ベージュ色の固形物が沈殿し、橙色の溶液が得られた。ヘプタン（２５０ｍＬ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。混合物をガラスフィルターで濾過した。残留固形物を吸引下、フィルター上でヘプタン（２×５０ｍＬ）を用いて洗浄した。６０℃、真空下で固形物を乾燥させて、純粋な６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボン酸（ＳＵＬ−１１８）を灰白色の固形物として得た（３．１ｇ、１０．１３ｍｍｏｌ；３９％、純度１００％）。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ｉｎ  ｐｐｍ）：１．３８（ｔ，１２Ｈ），１．５２（ｓ，３Ｈ），１．８７（ｍ，１Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），２．３０（ｍ，１Ｈ），３．２０（ｍ，１Ｈ），３．３８（ｍ，１Ｈ）．Ｍ＋＝３０７．１０
【００５６】
ＳＵＬ１１９（２−（ヒドロキシメチル）−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−６−オール）の合成
ＴＨＦ（１２ｍＬ）中のメチル６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボキシラート（５００ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）の溶液を不活性窒素雰囲気下で、乾燥した１００ｍＬの３つ口丸底フラスコ中に予め秤量したＬｉＡｌＨ４（２３８ｍｇ、６．２６ｍｍｏｌ、４当量）にゴム隔膜を介してシリンジで５分間かけて、室温で撹拌しながら加えた。エステルの発熱性添加はガス発生を伴った。添加が完了した後、得られた灰色の懸濁液を加熱還流した。３時間後に、加熱を停止し、ＥｔＯＡｃ（６ｍＬ；発熱性）を滴下して反応を急冷させた。水（５ｍＬ）を少量ずつ加え、続いて２ＮのＨＣｌ（２ｍＬ）を加えてから、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）を加えた。混合物をＮａ２ＳＯ４（約５０ｇ）に注ぎ、淡黄色の有機層を二相混合物から分離した。水相をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗浄し、有機画分を合わせて真空下で濃縮して、粗アルコール（５３０ｍｇ）を透明な油状物として得た。ヘプタン（１００ｍＬ）を加え、真空下で濃縮した後に、２−（ヒドロキシメチル）−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−６−オール（２４８ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ、５４％、ＬＣＭＳ：純度９５．５％）を得た。
Ｍ＋＝２９３．２
【００５７】
ＳＵＬ１３９（２−（４−（６−ヒドロキシ−５，７−ジイソプロピル−２，８−ジメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸の合成
ＳＵＬ−１３７（４４０ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、１当量）をＭｅＯＨ（５０ｍL）中に溶解し、グリオキサル酸（２１６ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、続いてＮａＢＨ３ＣＮ（１８３ｍｇ、２．９４ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。酢酸（数ｍＬ）を加え、室温で０．５〜１時間撹拌した後に、反応混合物を濃縮した。得られた残渣をＥｔＯＡｃ中に溶解し、Ｈ２Ｏで洗浄し（２×）、乾燥させ、濾過し、濃縮して、ＳＵＬ−１３９（５００ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ、９８％、純度９１〜９２％）を淡黄色固形物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，ｉｎ  ｐｐｍ）：１．３３（ｄｄ，１２Ｈ），１．５９（ｓ，３Ｈ），１．６２（ｍ，１Ｈ），２．０９（ｓ，３Ｈ），２−５−３．０（ｍ，７Ｈ），３．１−３．６（ｍ，４Ｈ），３．８１（ｂｓ，２Ｈ），４．２８（ｂｓ，２Ｈ）．Ｍ＋＝４３３．２．
【００５８】
ＳＵＬ１３６（２−（４−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピペラジン−１−イル）酢酸）の合成
２つの隔膜（左と右）およびコックを備えた２５０ｍＬの三つ口フラスコに、ＳＵＬ−１３６（１５．５ｇ、３８．４ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ／水（２４０ｍｌのＴＨＦ＋８０ｍＬの水）を加えた。この透明な溶液を、左隔膜を介して長いシリンジ針を備えた注入チューブを用いるアルゴンバブリングによって少なくとも３０分間撹拌し、脱気した。右隔膜は短い針を備え、排出口として機能した。脱気した溶液（アルゴン下で維持されている）を氷浴中で０℃に冷却し、固形の無水ＬｉＯＨ（２．３ｇ、９６ｍｍｏｌ、２．５当量）を一度に加えた。得られた反応混合物を０℃で２時間撹拌した後に、Ｄｏｗｅｘ−５０ＷＸ８−２００イオン交換樹脂のＭｅＯＨ／水（３／１、ｖ／ｖ）スラリーを加えて中和した。最終ｐＨは約６であった。Ｄｏｗｅｘ樹脂を吸引濾過し、ＭｅＯＨ／水（３／１、ｖ／ｖ）で３回すすいだ。濾液を真空下で減らし、湿った生成物に約１００ｍＬの水を加えた。得られた白色の水性懸濁液を一晩凍結乾燥させて、ＳＵＬ−１３６（１３．４８ｇ、９３％、ＬＣＭＳ：９９．６％）を白色固形物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，ｉｎ  ｐｐｍ））：１．６０（ｓ，３Ｈ），１．６５（ｍ，１Ｈ），  ２．０５（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｓ，６Ｈ），２．５５（ｍ，２Ｈ），２．６２（ｍ，１Ｈ），  ３．０，（ｂｓ，４Ｈ），３．４０（ｂｓ，２Ｈ），３．６５（ｂｓ，２Ｈ），４．２５（ｂｓ，２Ｈ）．Ｍ＋＝３７７．１
【００５９】
ＳＵＬ１４４（（２Ｓ）−１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボン酸）の合成
（２Ｓ）−メチル１−（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボニル）ピロリジン−２−カルボキシラート（ジアステレオマー１、３．５ｇ、９．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（６０／２０ｍＬ）中に溶解した。溶液にＮ２のバブリングを１時間行なった。混合物を氷浴中で冷却し、ＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（１．０１ｇ、２４．２ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。反応混合物を室温、Ｎ２下で一晩撹拌した。ｐＨ＝６になるまでＤｏｗｅｘ−５０ＷＸ８−２００（ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：１）で４回洗浄）をＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：１）中のスラリーとして加えた。混合物を濾過し、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３：１）で洗浄し、真空下で濃縮した。この濃縮物に脱塩Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）を加え、この溶液を凍結乾燥させて、ＳＵＬ−１４４（３．４ｇ、９．７ｍｍｏｌ、定量的、純度９９．７％）を灰白色の発泡体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１．６０（ｓ，３Ｈ），１．６５−２．３０（ｍ，１４Ｈ），  ２．６０（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｍ，１Ｈ），３．４９（ｍ，１Ｈ），４．０１（ｔ，１Ｈ），  ４．５０（ｄ，１Ｈ）．＋＝３４８．１
【００６０】
実施例２
緒言
（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノンまたはＳＵＬ１２１は、ラット腎臓において虚血および再潅流障害を軽減するのに非常に効果的であることが示されている。このモデルでは、腎臓への血流を長期間停止しその後血流を回復した。このモデルは、腎臓のＲＯＳ（活性酸素種）産生を強力に誘発することが知られている。ＳＵＬ１２１は、Ｈ２Ｓ誘発物質、すなわち呼吸鎖の阻害を含み、それによってＲＯＳの形成を軽減する種々の作用を有する化合物であると考えられている。基礎をなす機構の１つは、Ｈ２Ｓ生成酵素ＣＢＳの誘発およびＧＤＦ１５の発現増加でありえる。
【００６１】
腎虚血および再潅流のモデルにおけるその有効性を考慮して、化合物ＳＵＬ１２１はまた肥満によって誘発される２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）の実験モデルにおいて腎臓を保護するのではとの仮定をたてた。したがって、マウス２型糖尿病モデルにおいてアルブミン尿と腎障害の発症に対するＳＵＬ１２１の影響を検討した。本検討のために、ｄｂ／ｄｂマウスモデルを用いた。ｄｂ／ｄｂマウスは、機能的レプチン受容体がなく、したがって肥満誘発糖尿病を発症する。糖尿病は６〜８週齢で始まり、腎障害およびアルブミン尿の適当なレベルが１８週齢で観察できる。
【００６２】
ＳＵＬ１２１の糖尿病の発症に対する影響を検討するために、ＳＵＬ１２１による処置を１０週齢から開始し、１８週齢まで続けた。加えて、ＳＵＬ１２１の健常な動物に対する影響を検討するために、対照マウスを同様に処置した。健常な無処置対照として役立たせるために、無処置対照群を本検討に組み入れた。埋め込んだ浸透圧ミニポンプによって薬物と媒体を１０週齢および１４週齢で投与した。
【００６３】
物質および方法
化学物質と製剤
細胞培養グレードのＤＭＳＯをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｚｗｉｊｎｄｒｅｃｈｔ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から入手した。０．９％無菌生理食塩水はＢａｘｔｅｒ（Ｕｔｒｅｃｈｔ，）から入手した。（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）（ピペラジン−１−イル）メタノン（ＳＵＬ１２１）は、Ｓｕｌｆａｔｅｑ  ＢＶ，Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから、１７７ｇ／Ｌに相当する１００％ＤＭＳＯ中に溶解した５００ｍＭの製剤で供給された。浸透圧ミニポンプ（Ａｌｚｅｔ，ＵＳＡ）は、ＤＭＳＯ濃度≦５０％に対して抵抗性がある。したがって、ＳＵＬ１２１の溶解度は、生理食塩水中の５０％ＤＭＳＯ中で試験した。ＳＵＬ１２１は、１２．６ｇ／Ｌの濃度まで、５０％ＤＭＳＯ中で完全に可溶であった。Ａｌｚｅｔモデル２００４ポンプには２００μＬの１２．６ｇ／Ｌ  ＳＵＬ１２１溶液または２００μＬの５０％ＤＭＳＯ溶液（媒体）を装入した。ポンプの仕様書に従って６μＬのＳＵＬ１２１を毎日投与し、３５グラムのマウスの場合、一日用量は２．２ｍｇ／ｋｇ／日になった。
【００６４】
試験動物
雄のｄｂ／ｄｂマウス（ｎ＝１６）とやせた（ｌｅａｎ）ヘテロ接合対照動物（ｎ＝１６）は、Ｈａｒｌａｎ  ＵＫ（ＪＡＸ０００６４２系統）から購入した。すべてのマウスは、個別に収容した。水および飼料は、自由摂食させた。以下の４群のマウスを調査した。
１）ｄｂ／ｄｂ＋媒体（糖尿病対照群）
２）ｄｂ／ｄｂ＋Ｓｕｌ１２１（糖尿病処置群）
３）野生型＋媒体（非糖尿病対照群）
４）野生型＋Ｓｕｌ１２１（薬物だけの影響を検討する）
【００６５】
埋め込んだ浸透圧ミニポンプによって薬物と媒体を、１０週齢（ｔ＝０）および１４週齢（ｔ＝４）で投与した。代謝ケージと血圧測定は、２週間毎に行なった。血液サンプルを頬穿刺によって採取できなかったので、血液は後眼窩叢から１０週齢（ｔ＝０）と１２週齢（ｔ＝２）に採取した。１８週齢（ｔ＝８）で、すべての動物を終了させ、血液を心臓穿刺によって採取した。
【００６６】
尿測定
尿サンプルを−２０℃で保管した後、尿中グルコース濃度を２４時間蓄尿から特異的電極を用いるグルコースオキシダーゼ方法で測定した。尿中クレアチニン濃度は、標準実験方法（脱タンパクを含まないＪａｆｆｅ方法、ＤｉａＳｙｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｈｏｌｚｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で測定した。２４時間蓄尿の中央値およびアルブミン対クレアチニンの比率の中央値を算出した。加えて、尿中のマウスアルブミンレベルは、マウスアルブミンＥｌｉｓａキット（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を使用して、手動で決定した。尿中過酸化水素レベルは、Ａｍｐｌｅｘ  Ｒｅｄ  Ｈ２Ｏ２アッセイキット（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｌｅｕｓｄｅｎ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用して決定した。
【００６７】
血圧測定
動脈血圧は、麻酔下のマウス（２％イソフルラン）においてテールカフ方法（ＰＳ−２００Ａ；Ｒｉｋｅｎ−Ｋａｉｈａｔｓｕ；Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）で測定した。各動物について、血圧値は、単一セッションで得られた３〜１０の記録の平均値を表す。
【００６８】
組織学的検査
パラホルムアルデヒドで固定した腎臓をα平滑筋アクチン（α−ＳＭＡ）染色に用いた。抗原賦活化のために４マイクロメートル切片を切断し、脱パラフィンし、水和して、１ｍｍｏｌ／ＥＤＴＡ（ｐＨ  ９．０）で処理した。すべての段階は、Ｖｅｃｔｏｒ  ＭＯＭキットのプロトコルに従った。糖尿病損傷後の前線維症を評価するために、切片を、ＭＯＭ希釈液を用いて１：１００希釈でα−ＳＭＡ（マウスモノクローナル抗α平滑筋アクチン；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）染色し、ネガティブ染色を証明した。
【００６９】
ペルオキシダーゼ活性はＡＥＣ（Ｄａｋｏ）とのインキュベーションにより発色させた。−ＳＭＡ発現を、コンピュータ支援形態計測を使用して測定した。総染色は、×２００倍率で評価した。糸球体および動脈は、測定値から除外した。α−ＳＭＡ染色を測定面積で割って、パーセンテージで表した。少なくとも１０の皮質野を測定して、動物当たりの平均スコアを求めた。
【００７０】
糖尿病損傷後の腎臓の損傷を評価するために、切片を尿細管障害のマーカーであるＫＩＭ−１（ウサギポリクローナル、Ｄｒ．Ｈ．ｖａｎ  Ｇｏｏｒ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ）染色した。パラフィン切片は脱脂し、８０℃で一晩インキュベートすることで０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ９）中での抗原賦活化に供した。２段階免疫ペルキオシダーゼ技術を用いた。一次抗体をＰＢＳと交換した対照スライドは、一貫して陰性だった。染色分析および形態計測分析の評価は、盲検下で行なった。
【００７１】
摘出した大動脈のｏｒｇａｎ  ｂａｔｈ実験
新たに摘出した胸大動脈輪（長さ１．５〜２ｍｍ）を個々のミオグラフバス（Ｄａｎｉｓｈ  Ｍｙｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ａａｒｈｕｓ，Ｄｅｎｍａｒｋ）中の２００μｍのステンレスワイヤー上に載せた。手短に言うと、６ｍＬのＫｒｅｂｓ溶液を含有するバスを３７℃に温めて、事前に平衡化し、９５％  Ｏ２−５％ＣＯ２で連続通気を行いｐＨを７．４に維持した。大動脈の小片の長さを顕微鏡で評価した。大動脈輪は、ベースラインで安定するまで、４０分間平衡化した。次いで輪を、ＫＣｌ（６０ｍＭ）による２連続刺激によって刺激し、生存度を確認し、続いて洗浄し、安定化を再生して、再現性のある収縮反応を得た。
【００７２】
血管プロトコル
収縮反応は、フェニルエフリン（ＰＥ；１０ｎＭ〜１００μＭ）に続く単一濃度のＫＣｌ（９０ｍＭ）に対する累積的濃度反応曲線として測定した。内皮依存性弛緩は、ＰＥ（１μＭ）で事前に収縮させた輪においてＡＣｈ（１０ｎＭ〜３００μＭ）への濃度反応曲線を得ることによって評価し、続いて最大の内皮依存性拡張を評価するために、高濃度のＮＯドナーニトロプルシドナトリウム（ＳＮＰ；０．１ｍＭ）で刺激した。
【００７３】
血管収縮影響下での内皮の役割を検討するために、湿らせたワイヤーで血管の内腔側を擦ることによって内皮細胞層を取り除いて輪を剥皮させた。血管収縮反応の調節および内皮依存性弛緩の介在における異なる内在由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）の寄与を調べるために、ＰＧ合成とＮＯ合成の阻害剤を使用した。この目的で、ＰＧ成分を、非特異的シクロオキシゲナーゼ阻害剤インドメタシン（１０μＭ）とともに輪をプレインキュベートすることにより評価した。ＮＯ成分は、ＮＯ合成阻害剤ＮＧ−モノメチル−Ｌ−アルギニン（Ｌ−ＮＭＭＡ；１μＭ）とインドメタシンの両方とともにその後のインキュベーションによって調べた。残りのＡＣｈ介在性弛緩は、未確認のＥＤＨＦに起因すると考えた。
【００７４】
形態学的解析
巣状糸球体硬化症（ＦＧＳ）および尿細管損傷の定量化のために、厚さ４マイクロメートルのホルマリン固定切片を脱パラフィンして、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）染色した。ＦＧＳは、盲検下で、糸球体内の各四分円におけるメサンギウム拡大および巣状接着のレベルを決定することによって半定量的にスコア化し、０〜４のスケールで表した。糸球体の２５％が影響を受けている場合、１として、５０％の場合は２として、７５％の場合は３として、１００％の場合は４としてスコア化した。総計で、腎臓当たり５０の糸球体を分析し、総ＦＧＳスコアは、スコアに同じＦＧＳスコアを有する糸球体のパーセンテージを掛けることによって算出した。したがって、総ＦＧＳスコアは、０〜２００の範囲に及んだ。
【００７５】
尿細管形態の組織学的変化は、障害の４つのマーカー、すなわち尿細管壊死、刷子縁の損失、基底膜の裸出、および管腔内円柱のアセスメントによって評価した。各パラメータは、損傷の程度により０〜３のスケールで段階分けした（０：＜５％、１：５〜２５％、２：２５〜７５％、３：＞７５％）。総計で、腎臓当たり３０の細管を分析し、組織学的なスコアを算出した。したがって、総組織学的スコアは、０〜９０の範囲に及んだ。
【００７６】
データ処理
ＫＣＩ収縮およびＰＥ収縮は、ミリニュートンで示す。ＡＣｈおよびＳＮＰに対する弛緩反応は、ＰＥによる事前収縮のパーセンテージとして表す。それに加えて、個々の曲線下面積（ＡＵＣ；任意単位で）をＡＣｈ誘発弛緩について決定した（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ第１０．０版，Ｓｙｓｔａｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）。ＡＵＣを用いて総内皮依存性弛緩を示し、それに続いて阻害剤存在の有り無しの両方でのＡＣｈ介在性弛緩の差異の分析に関して、異なるＥＤＲＦ、すなわちインドメタシンによるシクロオキシゲナーゼ阻害に対する感受性の部分に関するＰＧ、Ｌ−ＮＭＭＡによるＮＯＳ阻害に対する感受性の部分に関するＮＯ、およびＰＧとＮＯの除外による内皮由来過分極因子（ＥＤＨＦ）の寄与を推定した（３４）。
【００７７】
統計的評価
データは平均値±ＳＥとして示し、ｎは各群の動物の数を指す。統計的分析は、ＳＰＳＳ  Ｗｉｎｄｏｗｓ版１６．０．２（ＳＰＳＳ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）で行なった。全濃度反応曲線間の差異は反復分散分析で検定し、ポイント間の差異は一元配置分散分析で検定した。Ｐ値＜０．０５（両側の）を、統計的に有意であるとみなした。
【００７８】
結果
代謝データ
代謝データを図１に示す。予想通りに、糖尿病マウスは、やせた対照マウスと比較して、体重がかなり高かった（図１、パネルＡ）。糖尿病マウスは、４週目以降から徐々に体重が減った。ＳＵＬ１２１処置は、いずれの時点でも体重に影響を及ぼさなかった。
【００７９】
水分摂取量および尿排出量（図１、パネルＢおよびＣ）は密接に関連し、糖尿病マウスにおいてかなり高かった。８週目に、ＳＵＬ１２１処置した糖尿病マウス、次いで糖尿病対照マウスは、尿産生および水分摂取量がかなり低下した（糖尿病対照マウスとＳＵＬ１２１処置糖尿病マウスそれぞれについて尿２３．１±２．５と１１．２±３．８ｇ、水分摂取量２２．５±２．５と１０．９±３．９ｇ）。他の全ての時点で、ＳＵＬ１２１は尿排出量と水分摂取量に顕著な影響を及ぼさなかった。
【００８０】
非空腹時血糖値は、野生型対照マウスと比較して、糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおいてかなり高かった（図１、パネルＤ）。実験中に、糖尿病動物における非空腹時血糖値は、２７．５±２．５と２７．２±１．３（それぞれ糖尿病対照群と糖尿病ＳＵＬ１２１処置群）から３５．８±２．４と３５．３±１．１ｍＭに上昇し、糖尿病状態が重症で進行性であることを示していた。ＳＵＬ１２１による処置は、血糖値に影響を及ぼさなかった。
【００８１】
０週目、２週目および６週目に血圧を測定した（図１、パネルＥ）。０週目に、糖尿病動物の平均血圧は、非糖尿病野生型マウスにおけるよりも高かった。ＳＵＬ１２１処置は、２週目に非糖尿病野生型マウスの血圧を下げた。ＳＵＬ１２１処置は、６週目に血圧に影響を及ぼさなかった。糖尿病マウスにおいて、ＳＵＬ１２１処置は、血圧に影響を及ぼさなかった。
【００８２】
ＳＵＬ１２１処置の臓器重量に対する影響
８週目の処置後、マウスを終了させ、臓器重量を計量した（図２）。糖尿病対照マウスにおいて、左右両方の腎臓重量はかなり増加し、腎肥大を示していた。ＳＵＬ１２１処置は、腎臓重量を非糖尿病対照の値に正常化した。
【００８３】
ＳＵＬ１２１の腎機能に対する影響
ＳＵＬ１２１処置が腎障害を軽減させることができるかどうかを試験するために、尿へのアルブミン漏出を糖尿病動物についてすべての時点で測定した。一日当たりの総アルブミン排出（ＡＥＲ）は、尿中アルブミン濃度に毎日の尿排出量を掛けることによって算出した（図３Ａ）。ＳＵＬ１２１による処置は、６週目と８週目に糖尿病動物のＡＥＲの進行を阻止した。非糖尿病対照マウスのＡＥＲは、８週目でのみ測定し、糖尿病動物のＡＥＲよりもかなり低かった（非糖尿病対照群：３３．８±５．１ｍｇ／日、非糖尿病ＳＵＬ１２１処置群：３１．３±４．６ｍｇ／日）。ＳＵＬ１２１処置は、非糖尿病動物でのＡＥＲに影響を及ぼさなかった。
【００８４】
加えて、アルブミン／クレアチニン比（ＡＣＲ）は、６週目と８週目に決定した（図３Ｂ）。６週目で、ＳＵＬ１２１処置した糖尿病マウスのＡＣＲは、糖尿病対照マウス中よりもかなり低かった（糖尿病対照マウス群と糖尿病ＳＵＬ１２１処置群それぞれ、１１０７±１３０と５３４±７９μｇ／ｍｇ）。８週目でも、ＳＵＬ１２１処置動物のＡＣＲは糖尿病対照マウス中よりも低かったが、統計的有意性には達しなかった（糖尿病対照群と糖尿病ＳＵＬ１２１処置群それぞれ、１０８４±１５６と８６６±９１μｇ／ｍｇ）。
【００８５】
８週目での野生型動物におけるＡＣＲは、糖尿病動物についてよりもかなり低く、ＳＵＬ１２１処置による影響を受けていなかった（野生型対照群と野生型ＳＵＬ１２１処置群それぞれ、７１±９と５５±６μｇ／ｍｇ）。
【００８６】
ＳＵＬ１２１の腎組織構造に対する影響
ＳＵＬ１２１がアルブミン尿に重大な影響を及ぼしたので、ＰＡＳ染色を行ない、すべての動物においてＳＵＬ１２１の巣状糸球体硬化症（ＦＧＳ）への影響を調査した（図４）。予想通り、ＦＧＳスコアは糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおいて上昇した。ＳＵＬ１２１による処置により、糖尿病マウスのＦＧＳスコアはかなり低下した。
【００８７】
糖尿病における血管機能
内皮からの弛緩因子の放出障害（内皮機能不全）は、糖尿病ｄｂ／ｄｂモデルにおいて確証されている現象である。ＳＵＬ１２１処置の内皮機能への影響を確証するために、マウス大動脈輪をフェニルエフリン（ＰＥ）で事前に収縮させ、続いてアセチルコリン（ＡＣｈ）の濃度を高めることで弛緩させた。用量作用曲線を作成し（図５Ａ）、対照群と比較してｄｂ／ｄｂマウスにおけるＡＣｈに対する弛緩障害を示した（ｄｂ／ｄｂ群と対照群それぞれのＰＥの最大弛緩３９．２±６．５と９．２±１．６％）。ＳＵＬ１２１処置糖尿病群において、弛緩は対照レベル（１１．３±２．３％）まで回復された。非糖尿病対照マウスにおいて、ＳＵＬ１２１処置は、血管弛緩に影響を及ぼさなかった（９．２±１．６％）。総合すると、これらのデータは、ＳＵＬ１２１処置が糖尿病のｄｂ／ｄｂモデルにおいて内皮機能不全の発症を防止できたことを示している。
【００８８】
血管弛緩に関与する内皮成分をさらに調査するために、ｅＮＯＳ（Ｌ−ＮＭＭＡ）とシクロオキシゲナーゼ（インドメタシン）に特異的な阻害剤を使用して用量反応曲線を作成し、各成分の相対寄与を算出した（図５Ｂ）。糖尿病動物において、ＳＵＬ１２１は、ＥＤＨＦをかなり増加させることによって、総弛緩を改善した。加えて、ＳＵＬ１２１はＮＯおよびプロスタグランジン成分の非有意な（ｐ＝０．０６）増加を引き起こした。
【００８９】
糖尿病におけるＳＵＬ１２１のＲＯＳ産生に対する影響
活性酸素種（ＲＯＳ）産生の促進は、糖尿病において十分に確証された現象である。ＳＵＬ１２１処置のＲＯＳ産生への影響を検討するために、ＲＯＳの安定な代謝産物である過酸化水素を血漿中で測定した（図６）。ＳＵＬ１２１処置は、血漿中のＨ２Ｏ２レベルを正常化した。
【００９０】
糖尿病におけるＳＵＬ１２１介在保護のｉｎ−ｖｉｔｒｏアセスメント
ＳＵＬ１２１が糖尿病において腎臓保護を介在する機構をさらに調査するために、糖尿病のｉｎ−ｖｉｔｒｏモデルを使用した。このために、マウス腎メサンギウム細胞を、２型糖尿病をシミュレートする条件（高グルコースとインスリン）に曝した。高グルコース／インシュリンに曝露すると、細胞内ＲＯＳレベルが約７０％上昇した（図７）。興味深いことに、細胞をＳＵＬ１２１で前処置すると、この上昇を実質的に阻害できた（ｐ＜０．０５）。ＳＵＬ１２１単独では、細胞内ＲＯＳ産生に影響を及ぼさなかった。
【００９１】
相関性
腎肥大が腎臓の機能変化に関連があるかどうか決定するために、すべての糖尿病動物を合わせて、腎臓重量とアルブミン排出との間の相関分析を行なった（図８、パネルＡ）。有意な正相関が両方のマーカー間で認められた（ｐ＜０．０５）。ＳＵＬ１２１が糖尿病動物において内皮機能を正常化したので、最大弛緩レベルは腎臓重量（図８、パネルＢ）およびアルブミン排出（図８、パネルＣ）に対するアセチルコリンに相関していた。両方の相関性は有意であった（ｐ＜０．０５）。
【００９２】
ＳＵＬ１２１が血漿中のＨ２Ｏ２レベルを阻害したので、Ｈ２Ｏ２もアルブミン排出（図８、パネルＤ）および腎臓重量（図８、パネルＥ）に相関した。両方の相関性は有意であった（ｐ＜０．０５）。血漿中のＨ２Ｏ２レベルは、アセチルコリンに対する最大弛緩レベルと相関しなかった（データは図示せず）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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