(57)【要約】抗新生物剤および殺微生物剤であるアクリフラビンの局所送達製剤、ならびにそれを作製および使用する方法は、アクリフラビンの全身投与よりも、増殖性疾患を有する被験体のメジアン生存期間を増加させるのに有効である。アクリフラビンの局所送達製剤は、被験体のメジアン生存期間の用量依存性の増加を示す。局所送達形態は、その薬剤の全身投与と関連する毒性を伴うことなく、有効性の増加をもたらす。一局面では、固形腫瘍を有する被験体を治療するための組成物が提供され、この組成物は、アクリフラビンまたはその誘導体を、許容されない副作用を生じない投薬量の上記アクリフラビンの全身投与と比較して、腫瘍サイズの縮小および／または上記被験体の生存期間の延長を行うのに有効な量の上記アクリフラビンまたはその誘導体の制御局所投与のための局所送達製剤中に含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
固形腫瘍を有する被験体を治療するための組成物であって、アクリフラビンまたはその誘導体を、許容されない副作用を生じない投薬量の前記アクリフラビンの全身投与と比較して、腫瘍サイズの縮小および／または前記被験体の生存期間の延長を行うのに有効な量の前記アクリフラビンまたはその誘導体の制御局所投与のための局所送達製剤中に含む、組成物。
【請求項２】
前記局所送達製剤が、ポリマー移植片、ポリマー粒子、またはマイクロチップである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記局所送達製剤が、アクリフラビンまたはその誘導体を前記有効な量のアクリフラビンまたはその誘導体として約１０重量％〜７０重量％の間の濃度で含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記局所送達製剤が、アクリフラビンまたはその誘導体を前記有効な量のアクリフラビンまたはその誘導体として約２０重量％〜６０重量％の間の濃度で含むポリマーである、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
アルキル化剤、ニトロソ尿素、代謝拮抗物質、および放射線増感剤からなる群より選択される他の化学療法剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記他の化学療法剤が、テモゾロミド、５ＦＵ、ＦＵＤＲ、シスプラチン、カルボプラチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シタラビン、シクロホスファミド、パクリタキセル、ゲムシタビン、イホスファミド、カンプトテシン、例えばイリノテカン、メトトレキサート、プロカルバジン、ビンクリスチン、およびビンブラスチンからなる群より選択される、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記アクリフラビンまたはその誘導体が、腫瘍サイズを約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％縮小するのに有効な量である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記アクリフラビンまたはその誘導体が、前記被験体の生存期間を約１５日、３０日、１．５か月、２か月、２．５か月、３か月、３．５か月、４か月、４．５か月、５か月、５．５か月、６か月、６．５か月、７か月、７．５か月、８か月、８．５か月、９か月、９．５か月、１０か月、１０．５か月、１１か月、１１．５か月、１年、１．５年、２年、３年、４年、または５年延長させるのに有効な量である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物を投与することを含む、固形腫瘍を有する個体を治療する方法。
【請求項１０】
被験体が脳腫瘍を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
有効な量のアクリフラビンまたはその誘導体が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０週、またはそれを超える期間にわたって放出される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
被験体に追加の抗がん療法を施すことをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物が、被験体の前記腫瘍の付近の領域に投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物が、被験体の切除した腫瘍の領域に投与される、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１５年２月１１日に出願された米国仮出願第６２／１１４，６５２号「Ａｃｒｉｆｌａｖｉｎｅ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ＣＣＰ：ＳＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｇｌｉｏｍａ」（この開示は、その全体が参考として本明細書に援用される）への優先権および利益を主張する。
【０００２】
本発明は、概して、局所送達形態を使用した局所的薬物送達の分野に関する。薬物は高濃度で局所送達されて、薬物が全身に広がることが回避される。
【背景技術】
【０００３】
米国では２０１４年に、およそ２３，４００件の原発性悪性脳腫瘍および中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍の新たな症例が診断され、そのうちおよそ２，２４０件が０〜１４歳の小児において診断され、５４０件が１５〜１９歳の青年において診断されると見込まれている。全死亡率は、過去１０年間でそれほど変化していない。罹患率および死亡率はいずれも白人種の方が他の人種／民族の人よりも高い。すべての人種／民族において男性の罹患率および死亡率の方が女性よりも高い。脳腫瘍は、小児における固形腫瘍がんによる死亡の主因である。脳腫瘍およびＣＮＳ腫瘍は、すべての小児がんのうちおよそ２１％を占める。小児における脳がんおよびＣＮＳがんの罹患率は１９８０年代中頃から比較的安定しているが、死亡率はこの期間にわたって低下している。
【０００４】
多くの脳がんおよびＣＮＳがんの原因はわかっていない。しかしながら、ある特定の種類の脳腫瘍を発症する危険性が高まり得る要因としては、放射線への曝露、塩化ビニルへの曝露、およびある特定の遺伝的症候群を有することが挙げられる。脳がんおよびＣＮＳがんに対するスクリーニング試験は存在しない。成人の脳がんの標準的な治療としては、注意深い経過観察、外科手術、放射線療法、化学療法、および標的化療法が挙げられる。生物療法および陽子線照射療法などの成人の脳がんの新しい治療が、臨床試験において研究されている。罹患率および生存率が近年の傾向に追従すると考えると、米国では２０１４年に４９億ドルが脳がん治療に費やされることが見積もられている。
【０００５】
化学療法は、薬物を使用して、がん細胞を死滅させるかまたは細胞分裂を止めるかのいずれかによってがん細胞の成長を停止させるがん治療である。化学療法が、口からの服用、または静脈もしくは筋肉への注射による場合、薬物は血流に入り、全身のがん細胞に到達することができる（全身的化学療法）。化学療法が、脳脊髄液、器官、または体腔、例えば腹部に直接的に行われる場合、薬物は主として、これらの領域にあるがん細胞に効果を及ぼす（局部的化学療法）。組合せ化学療法は、複数の抗がん薬を使用する治療である。脳腫瘍を治療するために、腫瘍を外科手術によって除去した後に、溶解するウエハを使用して抗がん薬を脳腫瘍部位に直接的に送達してもよい。化学療法が行われる手段は、腫瘍の種類およびグレード、ならびに腫瘍が存在する脳内の場所に依存する。
【０００６】
脳腫瘍および脊髄腫瘍を治療するために経口または経静脈で施される抗がん薬は、血液脳関門を越えて脳および脊髄を囲んでいる体液に進入することができない。代わりに、抗がん薬は体液で満ちた空間に注入され、そこに存在するがん細胞を死滅させる。これは髄腔内化学療法と呼ばれている。
【０００７】
生体分解性のポリ無水物であるポリ−（１，３ビス［ｐ−カルボキシフェノキシ］プロパン−ｃｏ−セバシン酸、またはｐ［ＣＰＰ：ＳＡ、２０：８０］を使用した局所的薬物持続放出により、脳腫瘍の治療のための一部の化学療法剤の抗神経膠腫への有効性が向上する。Ｐ［ＣＰＰ：ＳＡ、２０：８０］は脳内において生体適合性であり、全身毒性および局所毒性のエビデンスがないことが示されている、ＦＤＡに認可された局所的薬物送達方法であり、現在、ＢＣＮＵ（ＧＬＩＡＤＥＬ（登録商標））の局所送達のために臨床で使用されている。全身性のがんの生存率が大幅に改善されているにもかかわらず、原発性脳悪性疾患は依然として、５年生存率がヒトのすべてのがんの中で最も悪い（Ｍａｃｍｉｌｌａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｏｒｔ．  Ｌｉｖｉｎｇ  ａｆｔｅｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  −  ｍｅｄｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｔｉｍｅｓ：  Ａｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｌｏｎｄｏｎ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｈｙｇｉｅｎｅ  ａｎｄ  Ｔｒｏｐｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２０１１年）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
脳腫瘍または他の固形腫瘍を有する被験体のメジアン生存期間を延ばす有効な治療が依然として必要とされている。
【０００９】
したがって、本発明の目的は、増殖性疾患の治療、予防、または管理のための化学療法剤の局所送達形態を提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、局所送達製剤を作製する方法を提供することである。
【００１１】
本発明のさらに別の目的は、局所送達製剤の局所送達形態を使用する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
アクリフラビン（ＡＣＦ）またはその誘導体もしくは塩の生体適合性ポリマー局所送達形態を含有する組成物が、治療を必要とする個体に投与される。典型的には、治療を必要とする被験体は、原発性腫瘍、デノボ腫瘍、続発性腫瘍、または腫瘍転移を有するがんを有する。腫瘍は、典型的には、肉腫、癌腫、およびリンパ腫などの固形腫瘍である。好ましい実施形態では、治療される腫瘍は、脳腫瘍または中枢神経系の腫瘍である。
【００１３】
典型的に、本組成物は、アクリフラビンまたはその誘導体を、腫瘍サイズの縮小、被験体の生存期間の延長、および／または被験体における全身性副作用の低減を行うのに有効な量のアクリフラビンまたはその誘導体の持続性局所投与のための局所送達形態として含有する。局所送達形態は、典型的に、ポリマー移植片、粒子、またはマイクロチップの形態である。本組成物は、液剤として投与されるアクリフラビンと比較して、副作用の重症度、期間、または数の点で被験体における全身性副作用を低減させた。
【００１４】
一部の態様では、局所送達形態は、アクリフラビンまたはその誘導体を約１０重量％〜７０重量％の間の濃度で含有するポリマーである。好ましくは、局所送達形態は、アクリフラビンまたはその誘導体を約２０重量％〜６０重量％の間の濃度で含有するポリマーである。より好ましくは、局所送達形態は、アクリフラビンまたはその誘導体を約５０重量％の濃度で含有するポリマーである。
【００１５】
一部の実施形態では、本組成物は、テモゾロミドまたは他の化学療法剤をさらに含んでもよい。
【００１６】
本組成物は、被験体の腫瘍付近の領域または切除した腫瘍の領域に投与され得る。
【００１７】
実験的神経膠腫モデルにおいて、頭蓋内に移植したアクリフラビンの局所送達形態は、治療したすべての動物のうちの１００％または５０％の生存期間を、ポリマー中の薬物％に応じて３００日に延ばしたが、アクリフラビンの全身投与、またはテモゾロミドの１日経口用量を受けた治療群は、腫瘍により４０日以内に死亡した。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、ＡＣＦの異なる濃度における９Ｌラット神経膠肉腫細胞生存率（％）の線グラフである。ＡＣＦのＩＣ５０濃度は、９Ｌラット神経膠腫細胞では１．０７μＭであることがわかった。
【００１９】
【図２】図２は、対照ラットおよび２５％ＡＣＦウエハ（２．５ｍｇのＡＣＦを含有するウエハ）を用いたラットの時間（日）をわたっての生存率パーセント（％）の線グラフである（カプランマイヤー生存曲線）。対照動物のメジアン生存期間は、１１〜１２日の間であった。局所アクリフラビンで処置したラットは、１２０日後に生存率１００％であった（Ｐ＜．０００１、対照に対して）。
【００２０】
【図３】図３は、様々な処置群における時間（日）をわたっての９Ｌ神経膠肉腫を移植したＦ３４４ラットの生存率パーセント（％）の線グラフである（カプランマイヤー生存曲線）。処置群は、対照（丸）がｎ＝１６であり、全身ＡＣＦの０日目（三角）がｎ＝８であり、全身ＡＣＦの５日目（白四角）がｎ＝８であり、局所５０％ＡＣＦ（黒四角）がｎ＝１２であった。
【００２１】
【図４】図４は、様々な処置群における時間（日）をわたっての９Ｌ神経膠肉腫を移植したＦ３４４ラットの生存率パーセント（％）の線グラフである（カプランマイヤー生存曲線）。処置群は、対照（丸）がｎ＝２２であり、空のポリマー（白四角）がｎ＝１２であり、局所１０％ＡＣＦ（三角）がｎ＝９であり、局所２５％ＡＣＦ（黒四角）がｎ＝７であった。
【００２２】
【図５】図５は、様々な処置群における時間（日）をわたっての９Ｌ神経膠肉腫を移植したＦ３４４ラットの生存率パーセント（％）の線グラフである（カプランマイヤー生存曲線）。処置群は、対照（四角）がｎ＝１６であり、局所２５％ＡＣＦ（三角）がｎ＝１０であり、テモゾロミド（ＴＭＺ）（菱形）がｎ＝６であった。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
Ｉ．定義
本明細書に使用されるとき、「局所」療法は、外科手術によって、針もしくは容器を通じて、または皮下に、または筋肉内に、または腹腔内に、局所的に行われる治療法を指す。
【００２４】
本明細書に使用されるとき、「局所送達形態」という用語は、活性剤および／または活性剤製剤を封入する、カプセル封入する、または含浸させた、パッチ、ディスク（ウエハ）、ロッド、マイクロチップ、または粒子を指す。局所送達形態は、被験体の体の所望される部位に配置され、全身的な有効性または副作用を引き起こすには至らない投薬量で、これらの薬剤を局所的に放出する。
【００２５】
本明細書に使用されるとき、「延長放出」または「持続放出」は、治療有効量の活性剤が、数日、数週、数か月から数年の期間にわたって放出されることを指す。典型的には、放出は、移植後１週間またはそれを超える期間にわたって達成されるであろう。
【００２６】
本明細書に使用される「生体分解性」という用語は、一般に、生理学的条件下で分解または侵食されて、被験体により代謝、排除、または排出することができるより小さな単位または化学種になる材料を指す。分解時間は、組成と形態との関数である。分解時間は、数時間から数週間の範囲であり得る。
【００２７】
本明細書に使用されるとき、「有効量」または「治療有効量」という用語は、治療される疾患状態の１つもしくは複数の症状を治療、阻害、もしくは軽減するか、または所望される薬理学的および／もしくは生理学的効果を他にもたらすのに十分な投薬量を意味する。正確な投薬量は、被験体に依存する変数（例えば、年齢、免疫系の健康状態など）、疾患または障害、および施されている治療など、様々な要因に応じて変動するであろう。有効量の効果は、対照と比べたものであり得る。そのような対照は、当該技術分野で公知であり、また本明細書で論じられており、さらに、例えば、薬物もしくは薬物の組合せの投与前であるかもしくはその投与が存在しない被験体の状態であってもよく、または薬物の組合せの場合には、組合せの効果を、薬物のうちの１つだけの投与の効果と比較してもよい。
【００２８】
本明細書に使用されるとき、「メジアン生存期間」という用語は、がんなどの疾患の診断日または治療開始のいずれかから、疾患と診断された患者群の患者の半数がまだ生存している期間の長さを指す。
【００２９】
本明細書に使用されるとき、「有効性」とは、腫瘍サイズに影響を及ぼすこと、またはメジアン生存期間などの生存期間を延長することを指す。
【００３０】
「薬学的に許容される」という用語は、本明細書に使用されるとき、健全な医学的判断の範囲内で、米国食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）などの機関のガイドラインに従って、合理的なベネフィット／リスク比に見合って、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、人間および動物の組織と接触して使用するのに好適な化合物、材料、組成物、および／または剤形を指す。
【００３１】
「薬学的に許容される担体」とは、本明細書に使用されるとき、組成物のｉｎ  ｖｉｖｏ送達を容易にする、医薬製剤中のすべての成分を指す。薬学的に許容される担体としては、希釈剤、保存剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、膨張剤、充填剤、安定剤、およびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３２】
本明細書に使用されるとき、「抗新生物剤」とは、新生物の転移、移動、または増殖の低減、好転（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）、排除、または停止を目的とする任意の生物学的化合物または物質を指す。
【００３３】
ＩＩ．組成物
Ａ．ポリマー
アクリフラビンは、長期放出のためのポリマーマトリックスに製剤化される。このポリマーは、生体適合性でなければならない。好ましくは、このポリマーは加水分解により分解されるが、酵素分解性ポリマーを使用することもできる。好ましいポリマーは、合成のものであるが、天然のものであってもよい。ポリマーは、ホモポリマー、コポリマー、ブレンド、またはブロックコポリマーであり得る。
【００３４】
マトリックスを形成するために使用することができる代表的な合成ポリマーとしては、疎水性ポリマー、例えば、ポリ無水物、ポリ（ヒドロキシ酸）、およびポリエステルを含む生体侵食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）ポリマー、ならびにこれらのブレンドおよびコポリマーが挙げられる。代表的な生体侵食性ポリ（ヒドロキシ酸）およびそれらのコポリマーとしては、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（ヒドロキシ−酪酸）、ポリ（ヒドロキシ吉草酸）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ無水物、およびポリオルトエステルが挙げられ、これらを使用することができる。さらなる合成ポリマーとしては、ポリホスファゼン、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアクリルアミド、ポリシロキサン、ポリウレタン、およびこれらのコポリマーが挙げられる。加えて、本明細書に定義されるように、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、およびポリビニルハロゲン化物を含む、ポリビニルポリマーを使用してもよい。例示的なポリビニルポリマーとしては、ポリ（酢酸ビニル）、ポリビニルフェノール、およびポリビニルピロリドンが挙げられる。
【００３５】
組み込むことができる他のポリマーとしては、ポリエチレンおよびポリプロピレンなどのポリアルキレン、ポリスチレンなどのポリアリールアルキレン、ポリ（エチレングリコール）などのポリ（アルキレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）などのポリ（アルキレンオキシド）、およびポリ（エチレンテレフタレート）などのポリ（アルキレンテレフタレート）が挙げられる。
【００３６】
最も好ましいポリマーは、ポリ無水物およびポリヒドロキシ酸、特に、ポリ（乳酸−グリコール酸）コポリマーである。これらは、薬物の最適な組込みおよび放出が得られるように選択され得る。
【００３７】
好ましい実施形態では、ポリマーは、生体分解性ポリ無水物コポリマー、２０：８０のモル比のポリ［ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン：セバシン酸］である。
【００３８】
Ｂ．治療剤、予防剤、および診断剤
１．抗新生物剤
抗新生物剤としては、２つの密接に関係するアクリジン分子の混合物である、式Ｉによる構造を有する、アクリフラビン（３，６−ジアミノ−１０−メチルアクリジニウムクロリドを３，６−アクリジンジアミンと混合したもの）、
【化１】
2018505200.tif 000003
ならびにアクリフラビンの誘導体、例えば、プロフラビン（ｐｆｒｏｆｌａｖｉｎ）、プロフラビンヘミ硫酸塩、およびプロフラビン塩酸塩、ならびに他のプロドラッグまたはそれらの塩が挙げられる。
【００３９】
２つの密接に関係するアクリジン分子の混合物であるアクリフラビン（ＡＣＦ）は、およそ１００年前に発見されたものであり、幅広い臨床用途を有する。ＡＣＦは、その殺トリパノソーマ、抗菌、および防腐活性が知られており、ほとんどの場合、創傷治癒のために局所的に、ならびに淋病治療のために静脈内投与および経口投与の両方で全身的に使用されている。しかしながら、全身的使用は、毒性が生じるため極度に制限されている。
【００４０】
がん細胞に対するＡＣＦの効果は５０年前に初めて報告されたが、２００９年にＡＣＦが、３３６個のＦＤＡ認可薬のうちで最も強力な低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ−１α）阻害剤であることが示されたときに、関心が再び高まった。ＡＣＦは、ＨＩＦ−１αとＨＩＦ−１βとの二量体化を防止することによってＨＩＦ−１α転写活性を阻害することが示され、これにより血管形成性細胞の動員および腫瘍血管新生を低減させ、前立腺がん異種移植片において腫瘍成長の抑制が成功した（Ｌｅｅら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１０６巻（４２号）：１７９１０〜７９１５頁（２００９年））。最近の研究では、ＨＩＦ−１αの阻害がＡＣＦの唯一の作用機構ではなく、ＡＣＦはまた、がん細胞においてアポトーシスおよび自己貪食効果も誘導することができることが示された（Ｆａｎら、Ｔｕｍｏｕｒ  Ｂｉｏｌ、３５巻（１０号）：９５７１〜９５７６頁（２０１４年））。ＡＣＦは、広い範囲のがんに対して高度に有効な抗腫瘍活性を実証している（Ｈａｓｓａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１０２巻（１２号）：２２０６〜２１３頁（２０１１年）、Ｌｅｅら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３４巻（７号）：３５４９〜３５５６頁（２０１４年））。
【００４１】
アクリフラビンは、ＨＩＦ−１の下流にある血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を阻害する。ＨＩＦ−１はまた、解糖表現型の持続にも役立つため、それを阻害することにより解糖からミトコンドリア呼吸に戻る切替えを容易にし、ワールブルク効果（高い解糖速度でエネルギーを生成し、続いて細胞質で乳酸発酵が起こる）を妨害することができる（Ａｌｆａｒｏｕｋら、Ｏｎｃｏｓｃｉｅｎｃｅ、１巻（１４号）：７７７〜８０２頁（２０１４年））。アクリフラビンは、ＨＩＦ−２の結合ドメインに干渉し、それによって、その下流での血管形成因子および解糖因子の機能を妨げる。加えて、ＨＩＦ−２の阻害はｐ５３軸を促進し、それにより解糖表現型を低減させることが示されている（Ｂｅｒｔｏｕｔら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１０６巻：１４３９１〜１４３９６頁（２００９年））。
【００４２】
アクリフラビンはまた、トポイソメラーゼＩおよびＩＩを阻害する（Ｈａｓｓａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、１０２巻（１２号）：２２０６〜２１３頁（２０１１年））。これらの酵素は、複製時のＤＮＡのらせんに関与する。トポイソメラーゼＩＩを標的とするがん薬物は、複製時の腫瘍細胞にＤＮＡ損傷をもたらすことが公知である（Ｎｉｔｉｓｓ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ、９巻（５号）、３３８〜３５０頁（２００９年））。アクリフラビンはまた、細胞増殖経路において重要な役割を果たすプロテインキナーゼｃ（ＰＫＣ）を阻害する（Ｋｉｍら、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ、２６巻（１号）：６６〜７２頁（１９９８年））。
【００４３】
全身送達されるアクリフラビンは、広い範囲のがんに対して高度に有効な抗腫瘍活性を示している。これまでのところ、神経膠腫細胞株または脳腫瘍モデルにおけるその有効性を報告した研究はない。アクリフラビンが実証した低酸素誘導因子（ＨＩＦ）およびトポイソメラーゼの阻害のため、アクリフラビンは、多形膠芽細胞腫（ＧＢＭ）の治療のための良好な候補となっている。しかしながら、脳腫瘍療法の主要な課題の１つは、固有の解剖学的および生理学的障壁である血液脳関門（ＢＢＢ）であり、これにより、ほとんどの化学療法剤が、脳に治療用量で浸透することが妨げられる。ＡＣＦは、高い全身バイオアベイラビリティを阻止する物理化学的および薬物動態学的特徴を有し、ならびにＢＢＢに良好に浸透して腫瘍組織に到達する（Ｆａｎら、Ｔｕｍｏｕｒ  Ｂｉｏｌ、３５巻（１０号）：９５７１〜９５７６頁（２０１４年））。代わりに、ＡＣＦは、動物モデルにおいて神経膠腫および腫瘍の境界に関する組織学的情報を提供するため（Ｍａｒｔｉｒｏｓｙａｎら、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｆｏｃｕｓ、３６巻（２号）：Ｅ１６、（２０１４年））、ならびに頭蓋内新生物の診断のため（Ｆｏｅｒｓｃｈら、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、７巻（７号）：ｅ４１７６０（２０１２年））の急速に作用する蛍光色素として使用されている。
【００４４】
好ましい実施形態では、この薬剤は、アクリフラビンおよびその誘導体である。これらは、典型的に、３重量％〜７０重量％の間の濃度範囲で、ポリマーマトリックスにおいて提供される。好ましい実施形態では、この薬剤は、５％〜６０％の間の濃度範囲で提供される。
【００４５】
２．追加の薬剤
他の化学療法剤を、抗新生物剤と共に局所送達形態に添加してもよい。他の化学療法剤としては、典型的に、アルキル化剤、ニトロソ尿素、および代謝拮抗物質が挙げられる。特定の例としては、５ＦＵ、ＦＵＤＲ、シスプラチン、カルボプラチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シタラビン（ｃｙｔｏａｒａｂｉｎｅ）、シクロホスファミド、パクリタキセル、ゲムシタビン、イホスファミド、カンプトテシン、例えばイリノテカン、メトトレキサート、プロカルバジン、ビンクリスチン、およびビンブラスチンが挙げられる。
【００４６】
テモゾロミド（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ製のＴｅｍｏｄａｒ（登録商標）カプセル）は、新たに診断されたＧＢＭを有する成人患者の、放射線療法（ＲＴ）と同時、またその後の維持治療としての、米国食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）に認可された治療である。テモゾロミド（ＴＭＺ）は、以前、難治性未分化星状細胞腫を有する成人患者の治療用に、１９９９年に急速な認可を受けた。この治療の適応症もまた、以下に記載されるＧＢＭ研究の結果に基づき、完全な認可に変換されている。
【００４７】
欧州がん研究治療機関（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ）（ＥＯＲＴＣ）により、新たに診断されたＧＢＭ患者において行われた第ＩＩＩ相研究では。メジアン生存期間は、ＴＭＺおよびＲＴの治療では１４．６か月であり、対してＲＴ治療単独では１２．１か月であった。本明細書に開示される局所送達形態は、アクリフラビンを、単独またはＴＭＺとの組合せで含み得、ＧＭＢを治療するために使用することができる。局所送達形態は、メジアン生存期間を０．１倍〜１００倍の間で延ばすことができる。
【００４８】
抗新生物剤と共に局所送達形態に組み込むことができる追加の薬剤としては、鎮痛剤、抗けいれん薬、抗線維化剤（ａｎｔｉ−ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、抗感染症薬、抗菌薬、抗真菌薬、抗血栓剤、抗炎症剤、例えば、ＴＮＦ−α阻害剤、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、アスピリンおよびイブプロフェン、Ｊａｋおよび／またはＳｔａｔ阻害剤、ならびにＮＫＧ２Ｄ阻害剤、中枢神経系刺激薬、コリンエステラーゼ阻害剤、ドーパミン受容体アゴニスト、ホルモン、免疫調節薬、免疫抑制薬、偏頭痛剤（ｍｉｇｒａｉｎｅ  ａｇｅｎｔ）、非ステロイド性（ｎｏｎ−ｓｔｅｒｉｏｄａｌ）抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ヌクレオシド類似体、抗神経変性剤（ａｎｔｉ−ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）（例えば、Ｌ−ＤＯＰＡ）が挙げられる。
【００４９】
画像化剤もまた、局所送達形態に組み込まれ得る。画像化剤としては、１つまたは複数の放射性核種、光学的トレーサー、例えば、生物発光性、化学発光性、蛍光性、または他の吸光係数が高いかもしくは量子収率が高い光学的トレーサー、重金属クラス（ガドリニウムもしくはジスプロシウム）のＴ１磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）剤、Ｔ２造影剤（酸化鉄もしくは酸化マンガン）、あるいはヨウ化薬剤（ｉｏｄｉｎａｔｅｄ  ａｇｅｎｔ）が挙げられる。
【００５０】
Ｃ．薬学的に許容される担体
ポリマー製剤または保管容器は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含み得る。薬学的に許容される担体としては、希釈剤、保存剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、膨張剤、充填剤、安定剤、およびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
ＩＩＩ．作製の方法
局所送達形態は、典型的に、移植片、例えば、ロッド、ディスク（ウエハ）、もしくはマイクロチップの形態、または粒子の形態、例えば、マイクロ粒子もしくはナノ粒子の形態の生体分解性ポリマー単位である。局所送達形態は、典型的に、組織内への移植に好適な寸法を有する。例えば、ディスクは、１ｍｍ〜１０ｍｍの間の直径および０．５ｍｍ〜３ｍｍの間の厚さを有し得る。ロッドは、１ｍｍ〜１０ｍｍの間の長さおよび０．５ｍｍ〜３ｍｍの間の幅を有し得る。
【００５２】
ナノ粒子およびマイクロ粒子は、一般に、球形状であり得るが、他の形状もまた企図される。ナノ粒子は、一般に、約１０ｎｍ〜１０００ｎｍの間、好ましくは約６０ｎｍ〜約４５０ｎｍの間の直径を有する。マイクロ粒子は、一般に、約１マイクロメートル〜３００マイクロメートルの間、好ましくは約２０マイクロメートルから１００の間の直径を有する。
【００５３】
Ａ．ポリマー移植片を作製する方法
好ましい実施形態では、薬物は、およそ直径１．４５ｃｍかつ厚さ１ｍｍのウエハに均一に分散される。典型的に、ポリマーは、ＦＤＡに認可されている溶媒、例えば、塩化メチレン中に溶解され、薬物が、所望される重量百分率、典型的には１０〜９０重量％の間、より典型的には４０〜７０％の間、最も好ましくは約５０％まで添加され、生成物を噴霧乾燥するか、溶液流延を行うか、またはダイカストを行い、ポリマー移植片が形成される。溶媒を蒸発によって除去し、得られた移植片を、窒素または別の不活性ガス下で箔または耐光性ブリスターパックに封止する。
【００５４】
Ｂ．マイクロ粒子を作製する方法
一般に、マイクロスフェアは、ナノメートル範囲から最大約３００ミクロン、最も好ましくは４０〜８０ミクロンの直径を有する。マイクロ粒子は、構造的完全性と、小円鋸歯状（ｃｒｅｎｕｌａｔｅｄ）の外表面および高度に多孔質または柱状の内側の両方を含む最適な表面積とを両方有する必要がある。内部の空洞が、体内に注射する前に、互いに、またマイクロスフェア表面に、相互接続されるように、内側の多孔度が設計されている。
【００５５】
一実施形態では、マイクロスフェアは、溶媒蒸発、ホットメルトマイクロカプセル封入、または噴霧乾燥を含む方法を使用して、製造することができる。ビス−カルボキシフェノキシプロパンおよびセバシン酸またはポリ（フマル酸−ｃｏ−セバシン酸）から作製されたポリ無水物などの熱可塑性ポリマーから作製されたマイクロ粒子は、ホットメルトまたは溶媒蒸発マイクロカプセル封入によって調製することができる。ポリスチレンおよびポリヒドロキシ酸のマイクロスフェアは、溶媒蒸発によって調製することができる。ヒドロゲルマイクロスフェアは、国際公開第９３／２１９０６に開示されるように、アルギナート、キトサン、アルギナート／ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、およびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）などのポリマー溶液を、リザーバからマイクロ液滴形成デバイスを通じて撹拌イオン浴に滴下することによって、調製することができる。
【００５６】
１．溶媒蒸発
溶媒蒸発技法を使用してマイクロスフェアを形成するための方法は、Ｅ．  Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら、Ｊ．  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ、４巻：３２９頁（１９９０年）、Ｌ．  Ｒ．  Ｂｅｃｋ  ら、Ｆｅｒｔｉｌ．  Ｓｔｅｒｉｌ．、３１巻：５４５頁（１９７９年）、およびＳ．  Ｂｅｎｉｔａら、Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．、７３巻：１７２１頁（１９８４年）に記載されており、これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。ポリマーを、塩化メチレンなどの揮発性有機溶媒中に溶解させる。組み込む物質を溶液に添加し、この混合物を、ポリ（ビニルアルコール）などの表面活性剤を含有する水溶液中に懸濁させる。得られたエマルジョンを、有機溶媒の大半が蒸発するまで撹拌すると、固体のマイクロスフェアが残る。様々なサイズ（１〜１０００ミクロン）および形態を有するマイクロスフェアを、この方法により得ることができる。この方法は、ポリエステルおよびポリスチレンのような比較的安定なポリマーに有用である。しかしながら、ポリ無水物などの不安定なポリマーは、水の存在に起因して、製造プロセス中に分解する可能性がある。これらのポリマーについては、完全に無水の有機溶媒中で行われる以下の方法のうちのいくつかが、より有用である。
【００５７】
２．ホットメルトマイクロカプセル封入
マイクロスフェアは、ポリエステルおよびポリ無水物などのポリマーから、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら、Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、６巻：２７５頁（１９８７年）に記載されるホットメルトマイクロカプセル封入法を使用して形成することができ、この開示は、参照により本明細書に組み込まれる。この方法では、分子量が３〜７５，０００ダルトンの間のポリマーを使用することが好ましい。この方法では、ポリマーをまず溶融させた後、組み込む物質の固形粒子（５０ミクロン未満にふるいをかけたもの）と混合する。この混合物を、非混和性溶媒（シリコン油など）中に懸濁させ、撹拌を継続しながら、ポリマーの融点よりも５℃高くまで加熱する。エマルジョンを安定化させた後、ポリマー粒子が固化するまでそれを冷却する。得られたマイクロスフェアを、石油エーテルでのデカンテーションによって洗浄して、流動性粉末を得る。１〜１０００ミクロンの間のサイズを有するマイクロスフェアが、この方法で得られる。
【００５８】
３．溶媒抽出
この技法は、例えば、ＰＣＴ国際公開第９３／２１９０６号に記載されている。組み込む物質を、塩化メチレンなどの揮発性有機溶媒中の選択したポリマーの溶液に、分散または溶解させる。
【００５９】
この混合物を、シリコン油などの有機油中で撹拌することによって懸濁させて、エマルジョンを得る。１〜３００ミクロンの間の範囲のマイクロスフェアを、この手順によって得ることができる。
【００６０】
４．噴霧乾燥
噴霧乾燥技法を使用してマイクロスフェアを形成するための方法は、米国特許第６，２６２，０３４号に記載されている。ポリマーを、塩化メチレンなどの有機溶媒中に溶解させる。既知量の組み込む物質を、ポリマー溶液中に懸濁（不溶性剤）または共溶解（可溶性剤）させる。次いで、溶液または分散物を、噴霧乾燥させる。典型的には１〜１０ミクロンの間の範囲のマイクロスフェアが得られる。
【００６１】
５．相反転
マイクロスフェアは、相反転法を使用して、ポリマーから形成することができ、この方法では、ポリマーを良溶媒中に溶解させ、薬物などの組み込む物質の微細な粒子を、ポリマー溶液中に混合または溶解させ、この混合物を、ポリマーの強力な非溶媒に注ぎ入れると、好ましい条件下でポリマーマイクロスフェアが自発的に生成され、ここで、ポリマーは、粒子にコーティングされているか、または粒子がポリマー中に分散しているかのいずれかである。この方法は、例えば、約１００ナノメートル〜約１０ミクロンを含む、広範なサイズでマイクロ粒子を生成するために使用することができる。使用することができる例示的なポリマーとしては、ポリビニルフェノールおよびポリ乳酸が挙げられる。組み込むことができる物質としては、例えば、蛍光色素などの画像化剤、またはタンパク質もしくは核酸などの生物学的に活性な分子が挙げられる。
【００６２】
６．マイクロスフェアの低温キャスティング
制御放出マイクロスフェアの超低温キャスティングのための方法は、Ｇｏｍｂｏｔｚらに対する米国特許第５，０１９，４００号に記載されている。ポリマーを、組み込む物質を溶解または分散させたものと一緒に溶媒中に溶解させ、この混合物を、ポリマー−物質溶液の凝固点よりも低い温度で、液体非溶媒を入れた容器中に噴霧し、それによってポリマー液滴を凍結させる。
【００６３】
ポリマーの液滴および非溶媒が温まるにつれて、液滴中の溶媒が解凍され、非溶媒中に抽出され、結果として、マイクロスフェアの硬化がもたらされる。
【００６４】
７．二重壁マイクロカプセル
多重壁のポリマーマイクロスフェアを調製するための方法の一実施形態では、２種類の親水性ポリマーを、水溶液中に溶解させる。組み込む物質を、ポリマー溶液中に分散または溶解させ、この混合物を、連続相中に懸濁させる。次いで、溶媒がゆっくりと蒸発し、一方のポリマーによって形成される内部コアと、第２のポリマーの外層とを有するマイクロスフェアができる。連続相は、第１のポリマー混合物とは不溶性の第３のポリマーを含有する有機油、揮発性有機溶媒、または水溶液のいずれかであり得、これは、混合物を撹拌すると最初の２種類のポリマーの相分離をもたらす。
【００６５】
多重層ポリマー送達デバイスを、この方法を使用して、２種類またはそれ超の親水性ポリマーから調製することができる。相図に示される特定の濃度において互いには不溶性の任意の２種類またはそれ超の異なる生体分解性または非分解性の水溶性ポリマーを、使用することができる。第１のポリマーでできたポリマーコアおよび第２のポリマーの均一なコーティング、ならびにこれらのポリマーのうちの少なくとも一方に組み込まれた物質を含有するマイクロスフェアは、米国特許第４，８６１，６２７号に記載されるように作製することができる。
【００６６】
Ｃ．移植可能なマイクロチップ
複数回用量送達用のポリマーマイクロチップは、Ｒｉｃｈａｒｄｓら、Ｎａｔ  Ｍａｔｅｒ．（２００３年）２巻（１１号）：７０９〜１０頁およびＫｉｍら、Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ．（２００７年）１２３巻（２号）：１７２〜８頁に記載されている。生体分解性ポリマーマイクロチップは、長期間、例えば、１４２日間にわたる活性物質（ａｃｔｉｖｅ）の放出に関してこれらの研究に記載されるように、製造することができる。これらの文献に記載されているように、マイクロチップは、直径１．２ｃｍ、厚さ４８０〜５６０ミクロンであり、それぞれに異なる化学物質を充填することができる３６個のリザーバを有していた。このデバイスは、ポリ（Ｌ−乳酸）から製造され、リザーバを覆う異なる分子質量のポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）の膜を有していた。
【００６７】
薬物送達系は、膜に異なる分子質量または材料を使用することによって、患者への移植後、間隔をおいて異なる薬物のパルスを放出するように設計することができる。このデバイスはまた、ポリマー薬物送達マイクロチップに、異なるポリマー組成および／または分子量、例えば、生体適合性ポリ（乳酸）およびポリ（グリコール酸）ホモポリマーおよびコポリマーを使用して、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏで差次的分解速度を有するように設計することもできる。米国特許第６，４９１，６６６号、同第６，５２７，７６２号、同第６，９７６，９８２号、同第７，２２６，４４２号、および同第７，６０４，６２８号を参照されたい。好適なデバイスは、Ｍｉｃｒｏｃｈｉｐｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈから入手することができる。
【００６８】
ＩＶ．キット
典型的な実施形態では、有効な投薬単位は、腫瘍を切除した後に外科医が使用するためのブリスターパックまたは滅菌封止された容器で提供される。粒子は、容器内の凍結乾燥形態で提供されてもよく、その場合、粒子は、投与の時点で再懸濁される。
【００６９】
所定の量のアクリフラビン、またはアクリフラビンと追加の化学療法剤もしくは他の薬剤とが充填された、様々な形状の複数の局所送達形態を含む、キットが提供されてもよい。
【００７０】
キットはまた、局所送達形態を投与するための滅菌の送達用カテーテル、シリンジ、および針も含み得る。
【００７１】
Ｖ．使用の方法
局所送達形態は、治療を必要とする部位において、被験体に局所投与される。
【００７２】
Ａ．投与
局所送達形態の投与は、直視下手術後の移植によるもの、または最小限に侵襲性の注射もしくは挿入によるものであり得る。典型的には、投与により、組成物を、腫瘍の近傍に、腫瘍の上に、または切除した腫瘍の部位に配置する。
【００７３】
Ｂ．投薬量および投与レジメン
任意の数の局所送達形態が、一度に投与されてもよい。局所送達形態の数は、疾患を治療するのに必要とされる薬剤の投薬量に応じて、変動するであろう。例えば、それぞれが１０ｍｇの活性剤を含有する１、２、５、または１０個の局所送達形態が、それぞれ、有効用量１０ｍｇ、２０ｍｇ、５０ｍｇ、または１００ｍｇの活性剤を持続放出するために、切除した腫瘍の部位に投与されてもよい。あるいは、１０ｍｇ、２０ｍｇ、５０ｍｇ、または１００ｍｇの活性剤を含有する１つの局所送達形態を、それぞれ、有効用量１０ｍｇ、２０ｍｇ、５０ｍｇ、または１００ｍｇの活性剤を送達するために投与してもよい。したがって、有効用量の活性剤は、投与する局所送達形態の数を変化させることによって、局所送達形態のそれぞれに含まれる薬剤の量を変化させることによって、またはこれらの両方によって、送達することができる。有効量の活性剤は、２〜３週間から３〜６か月の期間にわたって、放出され得る。
【００７４】
有効投薬量は、薬物の既知の薬物動態、ＧＬＩＡＬＤＥＬ（登録商標）を使用したこれまでの研究、および本明細書に記載されるものなどの動物研究に基づいて、当業者によって決定され得る。一部の実施形態では、有効投薬量は、腫瘍サイズを約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％縮小するのに有効な活性剤の量である。一部の実施形態では、有効投薬量は、全身的な化学療法による治療と比べて、被験体のメジアン生存期間を、約１５日、３０日、１．５か月、２か月、２．５か月、３か月、３．５か月、４か月、４．５か月、５か月、５．５か月、６か月、６．５か月、７か月、７．５か月、８か月、８．５か月、９か月、９．５か月、１０か月、１０．５か月、１１か月、１１．５か月、１年、１．５年、２年、３年、４年、または５年延長させるのに有効な活性剤の量である。
【００７５】
好ましい実施形態では、被験体はまた、がん患者、特にＧＢＭ患者の放射線治療のための標準的な技法を使用して治療され得る。例えば、Ｃｈａｎｇら、ＪＡＭＡ２９３巻（２０号）：５５７〜５６４頁（２００５年）、Ｒａｚａら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｔｈｅｒ．５巻（４号）：４７７〜４９４頁（２００５年）、およびＣａｓｔｒｏら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．９８巻（１号）：７１〜１０８頁（２００３年）を参照されたい。
【００７６】
Ｃ．治療される疾患
局所送達形態は、治療を必要とする被験体の器官または組織に適用される。典型的には、治療を必要とする被験体は、原発性腫瘍、デノボ腫瘍、続発性腫瘍、または腫瘍転移を有するがんを有する。腫瘍は、典型的には、肉腫、癌腫、およびリンパ腫などの固形腫瘍である。好ましい実施形態では、治療される腫瘍は、脳腫瘍である。
【００７７】
脳腫瘍は、原発性、転移性、悪性、または良性であり得る。脳腫瘍は、すべての原発性中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍のうちの８５％〜９０％を占める。一般に、原発性ＣＮＳ腫瘍の発生数は、黒人種よりも白人種の方が高く、死亡率は、女性よりも男性の方が高い。原発性脳腫瘍としては、頻度の高いものから順に、次のものが挙げられる：未分化星状細胞腫および膠芽細胞腫（原発性脳腫瘍の３８％）、髄膜腫および他の間葉腫瘍（原発性脳腫瘍の２７％）、下垂体腫瘍、神経鞘腫、ＣＮＳリンパ腫、乏突起神経膠腫、上衣腫、ならびに低悪性度の星細胞腫、ならびに髄芽腫。原発性脊髄腫瘍としては、頻度の高いものから順に、次のものが挙げられる：神経鞘腫、髄膜腫、および上衣腫（原発性脊髄腫瘍の７９％）、肉腫、星細胞腫、血管腫瘍、ならびに脊索腫。
【００７８】
多形膠芽細胞腫（ＧＢＭ）は、成人において最も一般的な脳腫瘍である悪性脳腫瘍の急速に広がっている種類である。２０１０年には、２２，０００を上回るアメリカ人が診断を受けたと推測され、１３，１４０人が、脳がんおよび他の中枢神経系がんで死亡していると推測されていた。１つのＧＢＭは、すべての脳腫瘍のうち約１５パーセントを占め、４５〜７０歳の成人に生じる。ＧＢＭを有する患者は、予後が良好でなく、診断後のメジアン生存期間は１５か月に満たない。現在のところ、この疾患には有効な長期治療は存在しない。
【００７９】
本発明は、以下の比較例を参照することによりさらに理解されるであろう。
【実施例】
【００８０】
（実施例１  アクリフラビンのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性）
材料および方法
【００８１】
ＡＣＦの細胞傷害性を、齧歯類の９Ｌ神経膠肉腫（脳腫瘍研究センター（Ｂｒａｉｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ）、カリフォルニア大学サンフランシスコ校から入手）細胞株およびＦ９８神経膠腫（Ｒ．Ｂａｒｔｈ、オハイオ州立大学から寄贈）細胞株、ならびにそれぞれ市販および原発性のヒト膠芽腫の細胞株であるＵ８７（ＡＴＣＣ）およびＧＢ１Ａにおいて分析した。細胞を、４×１０３細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種し、２４時間培養し、ＡＣＦ（０．２μＭ〜２５μＭの濃度範囲）で処置した。培地中でＡＣＦと共に２４時間共インキュベーションした後、ＣＣＫ−８アッセイ（同仁化学研究所、熊本県、日本）を製造業者のプロトコールに従って使用して、細胞成長を評価した。データは、平均±標準誤差として示し、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）＋９５％信頼区間およびＲ２を報告する。
【００８２】
以下の濃度：０．０２４９μＭ、０．１２４５μＭ、０．２４９μＭ、２．５μＭ、２５μＭ、５０μＭ、５００μＭ、および１０００μＭのアクリフラビンを試験した。ＣＣＫ−８アッセイをウェルに添加し、光学密度を４５０ｎｍでマイクロプレートリーダーにより読み取った。
【００８３】
結果
ｉｎ  ｖｉｔｒｏデータから、ＡＣＦが、試験したすべての神経膠腫細胞株において用量依存的に増殖を阻害したことが示された。
【００８４】
アクリフラビンのＩＣ５０濃度は、９Ｌラット神経膠腫細胞では１．０７μＭであることがわかった（Ｒ２＝０．９１４）（図１）。
【００８５】
（実施例２  ＡＣＦの局所ｉｎ  ｖｉｖｏ送達は、生存率１００％をもたらす）
材料および方法
【００８６】
Ｓｉｐｏｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３９巻（５号）：３８３〜３８９頁、１９９７年、ＰＭＩＤ  ９０５４９５１により示されるように、ＡＣＦ−ｐ［ＣＰＰ：ＳＡ、２０：８０］ウエハを次のように調製した。ＣＰＰ：ＳＡコポリマーを、Ｃｈａｓｉｎら、Ｂｉｏｐｈａｒｍ  Ｍａｎｕｆａｃｔ、１巻：３３頁（１９８８年）に記載されるように、２０：８０のモル比の１，３−ビス−（ｐ−カルボキシフェノキシプロパン）（ＣＰＰ）およびセバシン酸（ＳＡ）から合成した。ＡＣＦ粉末を、７０℃で３０秒間溶融ポリマーに溶融混合し、均一な混合物を厚さ１ｍｍのフィルムにキャスティングすることによって、ディスク型のポリマー移植片（直径３ｍｍ、高さ１ｍｍ、各１０ｍｇ）を調製した。３ｍｍの孔開け器（ｂｏｒｅ）を用いて、フィルムをディスクに切断した。
【００８７】
ラットに、その侵襲的かつ急速な成長パターンを特徴とする実験的神経膠腫モデルである９Ｌ腫瘍を移植した。ポリマーウエハによって局所送達されるアクリフラビンの有効性を、９Ｌ腫瘍保持ラットにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで試験した。ポリマー送達のために、アクリフラビンを、１０ｍｇの移植可能なポリ無水物ＣＰＰ：ＳＡポリマーに、異なる濃度比のＡＣＦ／ＰＣＰＰ：ＳＡ、例えば、５％（０．５ｍｇＡＣＦ）、１０％（１ｍｇＡＣＦ）、２５％（２．５ｍｇＡＣＦ）、および５０％（５ｍｇＡＣＦ）で組み込んだ。
【００８８】
０日目に、ラットに９Ｌ腫瘍を移植し、実験群（ｎ＝１２）と対照（ｎ＝１６）とに分けた。実験群では、各動物を、０日目に、腫瘍腔（ｔｕｍｏｒ  ｃａｖｉｔｙ）に、１０％または５０％充填したＡＣＦ／ＰＣＰＰ：ＳＡポリマーを含有する１つのウエハを送達して処置した。
【００８９】
動物の手術および腫瘍の移植は、Ｓｉｐｏｓら、１９９７年に記載されるように行った。
【００９０】
具体的には、体重２００〜２５０ｇの雄性Ｆｉｓｃｈｅｒ  ３４４ラットを、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）から入手し、ジョンズホプキンス大学医学部動物管理使用委員会（Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）の実験室動物の取扱いの方針および原理に従って保管した。９Ｌ神経膠肉腫片の、ラットの左頭頂葉への定位的注入を、Ｊｕｄｙら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ、８２巻：１０３頁（１９９５年）に記載されるように実行した。これらの腫瘍片の移植により、頭蓋内腫瘍の形成がもたらされ、これは、処置しない場合、未処置動物では１２〜１４日で一様に致死的なものであった。
【００９１】
有効性研究に登録したすべての動物を、成長障害および神経学的欠損を含む毒性の兆候に関して、少なくとも１２０日間毎日、続いて１２０日以降は周期的に、注意深く監視した。生存を評価し、未処置動物の脳ならびに処置動物の脳を取り出し、組織学的分析のために１０％ホルマリン中で保管した。
【００９２】
結果
アクリフラビンのウエハを移植した１２匹のラットは、１２０日後に生存率１００％を示したが、対照のメジアン生存期間は、１１〜１２日であった（対照に対して、Ｐ＜０．０００１、図２）。
【００９３】
ポリマーによるアクリフラビンの局所送達は、ＧＢＭを有するラットには非常に有効であると見られた。アクリフラビンのウエハは、ポリ無水物であるポリ［１，３−ビス（カルボキシフェノキシ）プロパン−ｃｏ−セバシン酸］（ＣＰＰ：ＳＡ）、特に、ＣＰＰ：ＳＡ（２０：８０）の製剤系から構成されていた。アクリフラビン／ＣＰＰ：ＳＡ製剤は、局所移植後に脳内で有効かつ持続的な薬物の放出をもたらした。全身送達は、アクリフラビンが肝臓内に蓄積することによる危険性をもたらす可能性がある。
【００９４】
実験的神経膠腫モデルにおいて単独療法で使用される、頭蓋内に移植したＡＣＦ生体分解性ウエハの安全性および有効性を実証する。このＡＣＦの局所移植により、驚くことに生存率１００％が最大１２０日間達成され（ｐ＜０．０００１）、一方で全身投与したＡＣＦは、対照と比較して生存上の利点をもたらさなかった（実施例３）。これらの研究は、生体分解性ポリマーによる組織内局所療法が、脳腫瘍療法においてＡＣＦを使用する可能性に関して、有効な戦略を表すことを示した。
【００９５】
（実施例３  ＡＣＦの全身ｉｎ  ｖｉｖｏ送達は、脳腫瘍治療において有効性を有さない）
材料および方法
【００９６】
複数のｉｎ  ｖｉｖｏ研究を行って、局所送達ＡＣＦの有効性を全身ＡＣＦと比較して評価し、ＡＣＦポリマーの有効性を、漸減ＡＣＦ濃度で、未処置動物、空のポリマーを受けた動物および広く使用されている膠芽腫の化学療法であるテモゾロミド（ＴＭＺ）を受けた動物と比較して、評価した。
【００９７】
毒性研究を行って、Ｆｉｓｈｅｒ  ３４４（Ｆ３４４）ラットにおける全身ＡＣＦの最大耐容量（ＭＴＤ）を評価した。動物群に、腹腔内で漸増投薬量のＡＣＦを受けさせた。処置の間、すべての動物は３日毎に秤量し、処置後最大３０日まで全身毒性の臨床兆候に関して監視した。
【００９８】
有効性研究を行って、頭蓋内脳腫瘍を有する動物に対する全身送達ＡＣＦの効果を評価した。この有効性を、ＡＣＦポリマーの充填濃度５０％（１０ｍｇポリマー中５ｍｇＡＣＦ）で、局所送達したＡＣＦポリマーの有効性と比較した。合計４４匹のラットに、これまでに説明されているように（Ｒｅｃｉｎｏｓら、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ、６６巻：５３０〜５３７頁（２０１０年））、頭蓋内に９Ｌ腫瘍片を移植させ、４つの群に無作為化した；処置を受けなかった対照、０日目の腫瘍移植と同時に局所５０％ＡＣＦを受けた群、および０日目または５日目のいずれかに開始し、死亡するまで全身ＡＣＦ（５ｍｇ／ｋｇ／日）を受けた２つの群。長期生存個体（ＬＴＳ）は、腫瘍移植後少なくとも１２０日間生存した動物として定義した。
【００９９】
結果
腫瘍移植後０日目または５日目のいずれかに初回投与を行った全身送達ＡＣＦは、それぞれ、対照と比較して生存における利点をもたらさなかった（メジアン１４日間に対してメジアン１３．５日間）（図３）。局所アクリフラビンポリマーで処置した動物のうちの８０％超が、腫瘍移植後４００日間を越えて生存した。
【０１００】
（実施例４  ＡＣＦの局所ｉｎ  ｖｉｖｏ送達は、９Ｌ神経膠肉腫を有するラットの生存の用量依存性の増加を示す）
【０１０１】
材料および方法
有効性研究を行って、未処置動物および０日目に空のポリマーで処置した動物の両方と比較して、さらなる漸減投薬量のＡＣＦを評価した。合計５０匹のラットに、９Ｌ神経膠肉腫を移植し、処置なしか、または０日目に空（０重量％）（０ｍｇＡＣＦ）、１０重量％ＡＣＦ（１ｍｇＡＣＦ）、もしくは２５重量％ＡＣＦ（２．５ｍｇＡＣＦ）のいずれかのポリマーの頭蓋内移植を受けた４つの群に無作為化した。単一のポリマー（１０ｍｇ）を、０日目に頭蓋内に移植した。
【０１０２】
結果
局所送達した１０％ＡＣＦポリマーは、未処置または空のポリマーを受けたいずれかの動物と比較して、有意に長いメジアン生存期間を示し（ｐ＜０．０００１）、長期生存個体は５０％であった（図４）。
【０１０３】
５０％および２５％の両方の充填投薬量で局所ＡＣＦポリマーを受けた動物は、一貫して、対照群と比較して有意に改善されたメジアン生存期間を示し（ｐ＜０．０００１、図３および４）、局所５０％または２５％ＡＣＦポリマーで処置した動物のうちの８０％〜１００％は、合計２８匹のラットのうち３匹の事例で腫瘍が再発したことを除き、すべての有効性研究において１年を上回る長期生存を示した。
【０１０４】
（実施例５  アクリフラビンの局所剤形送達は、テモゾロミドで毎日経口処置するよりも、生存期間の増加に有効である）
材料および方法
【０１０５】
また、有効性研究を行って、２５％ＡＣＦポリマーでの処置を、経口テモゾロミドでの処置と比較した。合計３２匹のラットに、９Ｌ神経膠肉腫を移植し、処置なしか、５〜９日目に５０ｍｇ／ｋｇ／日の経口テモゾロミド、または０日目に２５％ＡＣＦポリマーの頭蓋内移植のいずれかを受けた３つの群に無作為化した。
【０１０６】
結果
ＡＣＦウエハの局所移植は、未処置対照（メジアン生存期間は１３日間であった）、およびテモゾロミドの全身送達により処置した群（メジアン生存期間は２８日間であった）と比較して、生存期間が有意に延長した（図５）。２５％ＡＣＦポリマーで処置した動物のうちの８０％超が、腫瘍移植後４００日間を越えて生存した。
【０１０７】
（実施例６  ＭＲＩ監視および組織学的評価により、ＡＣＦウエハで処置した動物では、腫瘍塊または生存能力のある腫瘍細胞の不在が認められる）
材料および方法
【０１０８】
実施例４の有効性研究に登録した動物を、５つの経過観察時点で、Ｔ１強調ＭＲＩを使用して監視した。
【０１０９】
ガドリニウム投与の前および後の連続冠状面および軸方向の画像を、移植後２、７、および１５日においてすべての動物において行った。局所２５％ＡＣＦおよび１０％ＡＣＦで処置した動物は、移植後３０日および６０日などのその後の時点でも画像化した。
【０１１０】
ラットの脳の冠状断面の組織学的試験を、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を使用して行った。冠状断面は、処置なしのラットからのもの、および局所１０％ＡＣＦまたは局所２５％ＡＣＦで処置したラットからのものであった。ラットの脳を、腫瘍移植後７、１５、および６０日で収集した。
【０１１１】
結果
ＭＲＩでの経過観察および神経病理学的試験の両方（後者は、２人の独立かつ盲検の神経病理学者によって行われた）により、すべての未処置動物において腫瘍塊の存在が確認されたが、局所１０％ＡＣＦポリマーまたは２５％ＡＣＦポリマーのいずれかを受けた動物から画像化し、その後で採取した脳は、腫瘍塊のない手術腔を示し、目に見えるポリマー残渣があり、いくらかの炎症反応があり、生存能力のある腫瘍細胞はなかった。
【０１１２】
腫瘍移植部位の周囲１．５ｍｍ以内で撮影したＨ＆Ｅ画像は、対照動物が、腫瘍移植後７および１５日で広範囲の腫瘍塊を有していたことを示した。処置動物の切片では、７、１５、および６０日において、画像により、腫瘍塊のない手術腔が示され、生存能力のある腫瘍細胞はなく、局所１０％ＡＣＦまたは局所２５％ＡＣＦ処置によるＡＣＦウエハの断片が存在していた。
【０１１３】
これらの研究により、生体分解性ポリマーにより送達されるＡＣＦを用いた組織内局所療法が、脳腫瘍療法におけるＡＣＦの局所剤形の可能性のある使用の有効な戦略を表すことが示され、脳腫瘍の治療におけるＡＣＦの局所剤形の高い有効性が示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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