(57)【要約】  本発明はナイシン由来新規抗微生物性化合物に関する。特に、本化合物は非置換ナイシン［１−１２］構造に基づき、ここで前記化合物は非置換ナイシン［１−１２］構造の活性を上回る抗微生物活性を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
2018505871.tif 000024
〔式中
Ｚは置換基ＮＨＲ１、ＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１およびＳＲ１のいずれか一つから選択され、Ｙは置換基ＮＨＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＮＨＣＲ３Ｒ４、ＮＨＣＯＲ３、ＮＨＣＳＲ３、ＮＨＯＲ３およびＮＨＣ（ＮＨＲ３ＮＨＲ４）のいずれか一つから選択され、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３および／またはＲ４はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから選択される置換されたまたは置換されていない置換基であり、ここで前記置換基は少なくとも２個、４個または６個の炭素原子かつ最大でも３０個、４０個または５０個の炭素原子を含み；
Ａ１およびＡ３は独立してＤ−アラニンまたはＤ−アミノ酪酸であり；
Ａ２およびＡ４はＬ−アラニンであり；
Ａ１＋Ａ２およびＡ３＋Ａ４は独立して（２Ｓ，６Ｒ）−ランチオニン結合または（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ）−メチルランチオニン結合を形成し；
Ｘ１〜Ｘ８はそれぞれ独立して天然または非天然アミノ酸から選択される。〕
の抗微生物性化合物。
【請求項２】
ＹおよびＺがそれぞれ１２００ダルトン未満の分子量を有する、請求項１に記載の抗微生物性化合物。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３および／またはＲ４がＣ４〜Ｃ５０アルキル、Ｃ２〜Ｃ５０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ５０アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから独立して選択される、置換されたまたは置換されていない置換基である、請求項１または２に記載の抗微生物性化合物。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２の双方ならびに／またはＲ３およびＲ４の双方が独立してＣ５〜Ｃ４０アルキル、Ｃ４〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ４〜Ｃ４０アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから選択される、置換されたまたは置換されていない置換基である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物。
【請求項５】
Ｘ８が側鎖に電荷を帯びていないアミノ酸である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物。
【請求項６】
Ｘ８が側鎖がアシル化またはアセチル化されたリシンである、請求項５に記載の抗微生物性化合物。
【請求項７】
Ｚが１０００ダルトン未満、好ましくは８００ダルトン未満、より好ましくは６００ダルトン未満の分子量を有する；および／またはＹが１０００ダルトン未満、好ましくは８００ダルトン未満、より好ましくは６００ダルトン未満の分子量を有する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物。
【請求項８】
ＹがＮＨ２ではなく、ＺがＯＨまたはＮＨＣＨ３ではない、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物。
【請求項９】
前記化合物が置換されていないナイシン［１−１２］構造の活性を上回る抗微生物活性を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物。
【請求項１０】
Ｚのアミド形態が独立して抗微生物活性を欠く、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物。
【請求項１１】
化合物が１００μｇ／ｍＬ未満、好ましくは７０μｇ／ｍＬ未満、５０μｇ／ｍＬ未満、２０μｇ／ｍＬ未満、および最も好ましくは１０μｇ／ｍＬ未満のＭＩＣ値を示す、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物。
【請求項１２】
細菌感染症の処置に使用するための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物、および薬学的に許容される希釈剤および／または担体を含む医薬組成物。
【請求項１４】
細菌感染症の処置に使用するための医薬の製造のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物の使用。
【請求項１５】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗微生物性化合物、または請求項１３に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、細菌感染症に罹患した対象を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬の分野に関する。より具体的には、本発明はナイシンに基づく抗微生物性化合物およびそれらの薬剤としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ナイシンは細菌ラクトコッカス・ラクティスによって産生される多環抗菌ペプチドである。その抗菌活性のため、プロセスチーズ、肉、牛乳のような食品中に添加物としてしばしば使用される。その元の形態において、ナイシンは端緒となる５７−ａａ前駆体ペプチドの翻訳後修飾で導入される珍しいランチオニン（Ｌａｎ）、メチルランチオニン（ＭｅＬａｎ）、ジデヒドロアラニン（Ｄｈａ）およびジデヒドロアミノ酪酸（Ｄｈｂ）を含む３４個のアミノ酸を有する。ナイシンは「ランチビオティック」と称される分子群の一員である。この群の他の分子はサブチリンおよびエピデルミンである。ナイシンは既に１９６０年代後半に食品での使用が承認された。そのＥ番号はＥ２３４である。その抗菌特性のため、抗生物質として想定もされた。しかしヒトに医薬抗生物質としてそれを使用することの主な欠点の１つは、ヒトの胃および血液中で比較的速やかに代謝されることである。
【０００３】
ナイシンの変化は文献で報告されている。国際公開２００７／１０３５４８号は、抗生部分、特にバンコマイシンとリンカーを経て結合している、本明細書でさらに「ナイシン［１−１２］」と称される、１２個のアミノ酸を含む構造を開示する。国際公開２０１４／０８５６３７号に、いくつかのアミノ酸を置換でき、かつさらに炭化水素置換基を含み得る５員環ナイシンに基づくランチビオティックが記載されている。国際公開２０１０／０５８２３８号に、広範な置換基、例えばＣ１〜Ｃ２０アルキルを含む４員環ランチビオティックが開示されている。さらにペプチド配列中に置換されたアミノ酸を少なくとも１つ有するナイシン誘導体が国際公開２００９／１３５４５号で開示された。これらの既知化合物の全てではないがほとんどは大きく、従ってタンパク質分解酵素の作用を経て速やかに分解される。微生物の広範な多様性に対して作用し、かつ循環に存在したら速やかに分解しない、新規抗生物質の継続的な必要性が存在することは言うまでもない。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は式（１）
【化１】
2018505871.tif 000002
〔式中、
Ｚは置換基ＮＨＲ１、ＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１およびＳＲ１のいずれか一つから選択され、かつＹは置換基ＮＨＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＮＨＣＲ３Ｒ４、ＮＨＣＯＲ３、ＮＨＣＳＲ３、ＮＨＯＲ３およびＮＨＣ（ＮＨＲ３ＮＨＲ４）のいずれか一つから選択され、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３および／またはＲ４はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、およびポリアリールから選択される置換されたまたは置換されていない置換基であって、ここで前記置換基は少なくとも２個、４個または６個の炭素原子かつ最大でも３０個、４０個または５０個の炭素原子を含み；
Ａ１およびＡ３は独立してＤ−アラニンまたはＤ−アミノ酪酸であり；
Ａ２およびＡ４はＬ−アラニンであり；
Ａ１＋Ａ２およびＡ３＋Ａ４は独立して（２Ｓ，６Ｒ）−ランチオニン結合または（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ）−メチルランチオニン結合を形成し；
Ｘ１〜Ｘ８はそれぞれ独立して天然または非天然アミノ酸から選択される。〕
の抗微生物性化合物に関する。
【０００５】
好ましい態様において、ＹおよびＺはそれぞれ１２００ダルトン未満の分子量を有する。さらに好ましい態様において、および本明細書に開示される全ての種々の抗微生物性化合物に関して、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ置換されたまたは置換されていない置換基であって、Ｃ４〜Ｃ５０アルキル、Ｃ２〜Ｃ５０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ５０アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから独立して選択される。別の好ましい態様において、Ｒ１およびＲ２の双方ならびに／またはＲ３およびＲ４の双方はＣ５〜Ｃ４０アルキル、Ｃ４〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ４〜Ｃ４０アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから選択される。
【０００６】
別の好ましい態様において、Ｘ８は側鎖に電荷を帯びていないアミノ酸である。より好ましくは、Ｘ８は側鎖がアシル化またはアセチル化されたリシンである。さらにより好ましくは、Ｘ８は側鎖がアセチル化されたリシンである。本発明の極めて好ましい面において、本発明の構造は先行文献に知られている置換されていないナイシン［１−１２］構造の活性を上回る抗微生物性化合物を有する。
【０００７】
詳細な説明
本発明の目的は新規抗微生物性化合物を提供することである。本発明のナイシン由来化合物は抗微生物活性、特に抗菌活性を示す。さらに、本発明化合物は一般的に、薬剤耐性株、特にグラム陽性菌の薬剤耐性株を殺すことができる。本発明者らは驚くべきことに、殺菌メカニズムがナイシンのそれと異なることを発見した。本発明化合物はナイシンと同様に、細菌細胞壁の脂質IIのピロリン酸に結合できる。ナイシンはさらに細胞壁内に細孔を形成させ、一方、本発明化合物はそのような細孔形成を引き起こさない。さらに、ＺがＯＨ（Ｒ１が水素）であって、ＹがＮＨ２（Ｒ３およびＲ４が水素）である、先行文献に知られているナイシン［１−１２］構造は一般的に顕著な抗微生物活性を有さないことが注目される。従って、本発明化合物が高い抗微生物活性を示し、広範な細菌株に対して概して活性であると考えられることは驚くべきことであった。更なる利点は、ナイシンと比較したヒト血清中における本発明化合物の改善された安定性であると考えられる。
【０００８】
本発明は式（１）
【化２】
2018505871.tif 000003
〔式中、
Ｚは置換基ＮＨＲ１、ＮＲ１Ｒ２、ＯＲ１およびＳＲ１のいずれか一つから選択され、Ｙは置換基ＮＨＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＮＨＣＲ３Ｒ４、ＮＨＣＯＲ３、ＮＨＣＳＲ３、ＮＨＯＲ３およびＮＨＣ（ＮＨＲ３ＮＨＲ４）のいずれか一つから選択され、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３および／またはＲ４はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリール、およびポリアリールから選択される置換されたまたは置換されていない置換基であって、ここで前記置換基は少なくとも２個、４個または６個の炭素原子かつ最大でも３０個、４０個または５０個の炭素原子を含み；Ａ１およびＡ３は独立してＤ−アラニンまたはＤ−アミノ酪酸であって；Ａ２およびＡ４はＬ−アラニンであり；Ａ１およびＡ３は独立してＤ−アラニンまたはＤ−アミノ酪酸であり；Ａ２およびＡ４はＬ−アラニンであり；Ａ１＋Ａ２およびＡ３＋Ａ４は独立して（２Ｓ，６Ｒ）−ランチオニン結合または（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ）−メチルランチオニン結合を形成し；Ｘ１〜Ｘ８はそれぞれ独立して天然または非天然アミノ酸から選択される。〕
の抗微生物性化合物に関する。
【０００９】
好ましい態様において、ＹおよびＺはそれぞれ１２００ダルトン未満の分子量を有する。別の好ましい態様において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｃ４〜Ｃ５０アルキル、Ｃ２〜Ｃ５０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ５０アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから独立して選択される置換されたまたは置換されていない置換基である。特に好ましい態様において、Ｒ１およびＲ２の双方ならびに／またはＲ３およびＲ４の双方はＣ５〜Ｃ４０アルキル、Ｃ４〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ４〜Ｃ４０アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから独立して選択される、置換されたまたは置換されていない置換基である。さらに好ましい態様において、Ｘ８は側鎖に電荷を帯びていないアミノ酸、好ましくは側鎖がアシル化またはアセチル化されたリシンである。好ましくは、それはアセチル化されている。
【００１０】
特定の態様において、本発明は、本発明による抗微生物性化合物に関し、ここでＺは１０００ダルトン未満、好ましくは８００ダルトン未満、より好ましくは６００ダルトン未満の分子量を有する；および／またはＹは１０００ダルトン未満、好ましくは８００ダルトン未満、より好ましくは６００ダルトン未満の分子量を有する。ある特定の面において、ＹはＮＨ２ではなく、ＺはＯＨまたはＮＨ−ＣＨ３ではない、なぜならばこれらＹ基およびＺ基を有する式（１）による化合物は、置換されていないナイシン［１−１２］構造の抗微生物活性を上回らなかったことが見出されたからである。従って、極めて好ましい面において、本発明は、本発明による抗微生物性化合物に関し、ここで前記化合物は置換されていないナイシン［１−１２］構造の活性を上回る抗微生物活性を有する。好ましくは、Ｚのアミド形態は独立して抗微生物活性を欠く。
【００１１】
別の好ましい面において、本発明化合物は１００μｇ／ｍｌ未満、好ましくは７０μｇ／ｍｌ未満、５０μｇ／ｍｌ未満、２０μｇ／ｍｌ未満、および最も好ましくは１０μｇ／ｍｌ未満のＭＩＣ値を示す。
【００１２】
本発明はさらに、本発明による抗微生物性化合物の細菌感染症の処置における使用に関する。本発明はまた、本発明による抗微生物性化合物、および薬学的に許容される希釈剤および／または担体を含む医薬組成物に関する。
【００１３】
本発明はさらに、感染症、好ましくは細菌感染症の処置において使用するための医薬の製造のための、本発明による抗微生物性化合物の使用に関する。
【００１４】
さらに別の態様において、本発明は細菌感染症を有する対象を処置する方法であって、本発明による抗微生物性化合物、または本発明による医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法に関する。
【００１５】
本明細書に開示される好ましい化合物は（６）、（１０）、（１２）および（２０）である。特に好ましい化合物は（１０）、（１２）および（２０）である。本明細書に開示されるＲ１構造（ｅ）を有する化合物（２４）もまた好ましい。極めて好ましい化合物は化合物（１２）である。
【００１６】
本発明化合物に使用される好ましいアミノ酸は、既知のＡ型ランチオビティック、特にナイシン、サブチリン、ガリデルミンおよびエピデルミンに由来するアミノ酸である。本発明の特定の化合物およびそれらのアミノ酸配列を表１に例示する。本発明の好ましい態様は、Ｘ６がプロリンおよびＸ７がグリシンならびにＡ３がＤ−アミノ酪酸およびＡ４がＬ−アラニンである式（１）の化合物である。
【００１７】
本発明の好ましい態様において、式（１）の化合物において、Ｘ６はプロリン、Ｘ７はグリシン、Ａ３はＤ−アミノ酪酸およびＡ４はＬ−アラニンである。残りのアミノ酸は既知の天然または非天然アミノ酸のいずれでもあり得る。それらは当業者に知られている一般的方法によって組み込むことができる。このような方法の例は、例えばRink et al.（in Appl. Environ. Microbiol., Sept. 2007, pp. 5809-5816）から収集できる。
【表１】
2018505871.tif 000004
【００１８】
ある特定の態様において、本発明は１００μｇ／ｍｌ未満の最小阻害濃度（ＭＩＣ）値を有する抗微生物性化合物に関する。好ましくは、化合物は７０μｇ／ｍｌ未満、より好ましくは５０μｇ／ｍｌ未満、さらにより好ましくは２０μｇ／ｍｌ未満、および最も好ましくは１０μｇ／ｍｌ未満のＭＩＣを有する。ＭＩＣ値の決定は当業者によく知られている標準的な技術であり、特にＭＩＣ値は方法Ｍ０７−Ａ９（CLSI standard, January 2012, Vol.32, No.2, “Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically”）を使用して測定できる。
【００１９】
本発明化合物は、同一または異なってよいＹ置換基およびＺ置換基を含む。本発明の式（１）の化合物の置換基Ｚおよび／またはＹ、好ましくはＺの前駆体は、一般的にそれら自体が抗微生物活性を欠き、これは個々でのＺが抗微生物活性を欠くことを意味する。Ｚ置換基のこのような前駆体の例はＨ２ＮＲ１、ＨＮＲ１Ｒ２、ＨＯＲ１およびＨＳＲ１を含む。Ｙ置換基のこのような前駆体の例はＲ３ＨＣＯ、Ｒ３Ｒ４ＣＯ、Ｒ３ＣＯＯＨ、Ｒ３ＣＳＯＨおよびＲ３−Ｉを含む。前駆体は一般的に本発明の抗微生物性化合物の調製工程で使用できる。用語「抗微生物活性を欠く」とは、先行文献で知られている慣行の技術を用いて、関連する抗微生物活性または抗菌活性を全く測定できないことを意味する。置換基は従って別個の抗微生物性化合物またはその誘導体ではない。国際公開２００７／１０３５４８号に開示された（例えばＺがバンコマイシンである）化合物は本発明による抗微生物性化合物の一部であると見なされない。
【００２０】
本発明による化合物は、１２００ダルトン未満の分子量を有する置換基Ｚを含む。好ましくは、分子量は１０００ダルトン未満、より好ましくは８００ダルトン未満、および最も好ましくは６００ダルトン未満である。本発明化合物はさらに、１２００ダルトン未満の分子量を有する置換基Ｙを含む。好ましくは、分子量は１０００ダルトン未満、より好ましくは８００ダルトン未満、および最も好ましくは６００ダルトン未満である。このような比較的小さな置換基の利点は本発明化合物の調製が比較的単純であり、経済的および商業的関心を保持できることである。
【００２１】
本発明の抗微生物性化合物は元のナイシン［１−１２］構造に基づき、好ましくは置換基（Ｒ３および／またはＲ４を有する）Ｙおよび／またはＺ、好ましくは（Ｒ１および／またはＲ２を有する）Ｚを含み、置換されたまたは置換されていない置換基はＣ４〜Ｃ５０アルキル、Ｃ２〜Ｃ５０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ５０アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから独立して選択される。本発明の状況において、用語「置換された」とは、さらなる置換基を有する置換基の置換および／または、例えばＯ、Ｓ、Ｎのようなヘテロ原子を有する置換基の修飾を指す。好ましくは、Ｒ１およびＲ２の双方ならびに／またはＲ３およびＲ４の双方、さらにより好ましくはＲ１およびＲ２の双方は独立して、Ｃ５〜Ｃ４０アルキル、Ｃ４〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ４〜Ｃ４０アルキニル、シクロアルキル、アリールおよびポリアリールから選択される、置換されたまたは置換されていない置換基である。さらにより好ましくはアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、アリールまたはポリアリールから選択される置換されたまたは置換されていない置換基であって、ここで置換基は少なくとも４個の炭素原子、より好ましくは少なくとも５個の炭素原子および最も好ましくは少なくとも６個の炭素原子、かつ最大でも５０個の炭素原子、より好ましくは最大でも４０個の炭素原子、最も好ましくは最大でも３０個の炭素原子を含む。
【００２２】
本発明者らは、本発明の他の化合物の例外として、ＹがＮＨ２、かつＺがＯＨまたはＮＨ−ＣＨ３である式（１）の化合物は、ナイシン［１−１２］構造の抗微生物活性を上回る抗微生物活性を提供しないことを見出した。
【００２３】
本発明の好ましい態様において、本発明による抗微生物性化合物は表２に示す通りであり、上に示した基本的な式（１）によれば、Ｘ１＝Ｉｌｅ、Ｘ２＝Ｄｈｂ、Ｘ３＝Ｉｌｅ、Ｘ４＝Ｄｈａ、Ｘ５＝Ｌｅｕ、Ｘ６＝Ｐｒｏ、Ｘ７＝Ｇｌｙ；Ａ１＝Ｄ−Ａｌａ、Ａ２＝Ｌ−Ａｌａ、Ａ３＝Ｄ−ＡｂｕおよびＡ４＝Ｌ−Ａｌａであり、ＺはＮＨＲ１型の置換基であって、ＹはＮＨＲ３型の置換基であり、かつＸ８、Ｒ１およびＲ３は表２に提供する構造から選択され、式（２）〜（２３）と称する化合物に至る。
【表２】
2018505871.tif 000005
【００２４】
さらに別の好ましい態様によって、Ｚ置換基は表２に示す基から選択されるＲ１基を含み、Ｙ置換基はＮＨＲ３であり、ここでＲ３は水素である。
【００２５】
本発明による抗微生物性化合物の前駆体は、比較化合物Ｅである；式（１）によれば、ここでＲ１は以下の構造（ａ）を有する：
【化３】
2018505871.tif 000006
【００２６】
本発明はまた式（２４）
【化４】
2018505871.tif 000007
〔式中、
Ｙは置換基ＮＨＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＮＨＣＲ３Ｒ４、ＮＨＣＯＲ３、ＮＨＣＳＲ３、ＮＨＯＲ３およびＮＨＣ（ＮＨＲ３ＮＨＲ４）のいずれか一つから選択され、ここでＲ１、Ｒ３およびＲ４は独立して選択される、本明細書に開示される置換基であり；Ａ１、Ａ３は独立してＤ−アラニンまたはＤ−アミノ酪酸であり；Ａ２およびＡ４はＬ−アラニンであり；Ａ１＋Ａ２およびＡ３＋Ａ４は独立して（２Ｓ，６Ｒ）−ランチオニン結合または（２Ｓ，３Ｓ，６Ｒ）−メチルランチオニン結合を形成し；Ｘ１〜Ｘ８はそれぞれ独立して天然または非天然アミノ酸から選択される。〕
の抗微生物性化合物に関する。
【００２７】
好ましい態様において、ＹおよびＲ１はそれぞれ１２００ダルトン未満の分子量を有する。別の好ましい態様において、Ｘ８は側鎖に電荷を帯びていないアミノ酸である。より好ましくは、Ｘ８は側鎖がアシル化されたリシンであり、さらに好ましくは、Ｘ８は側鎖がアセチル化されたリシンである。
【００２８】
本発明はさらに、以下の４つの構造（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、および（ｅ）から選択されるＲ１基を含む式（２４）による抗微生物性化合物（下の表４も参照）に関する：
【化５】
2018505871.tif 000008
【００２９】
ある好ましい態様において、本発明は式（２４）の抗微生物性化合物に関し、ここでＲ１基は４つの構造（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、および（ｅ）から選択され、かつＹ置換基はＮＨＲ３であり、ここでＲ３は水素である。さらに好ましい態様において、本発明は式（２４）による抗微生物性化合物に関し、ここでＲ１基は構造（ｅ）であり、かつＹ置換基はＮＨ２である。
【００３０】
それらの示されたＲ基を有する式（１）〜（２４）による本発明の抗微生物性化合物は、好ましくは全て、置換されていないナイシン［１−１２］構造の活性を上回る抗微生物活性を示す。特に好ましい本発明の抗微生物性化合物は、式（６）、（７）、（８）、（９）、（１０）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１７）、（１８）、（２０）およびＲ１基として構造（ｅ）を有する式（２４）の化合物である。これらの化合物は特に本発明の他の化合物よりも、ヒト血清中で高い抗微生物活性および／もしくは安定性、ならびに／または低い溶血活性を提供する。極めて好ましくは式（１２）の抗微生物活性化合物である。
【００３１】
本発明化合物は共有結合を形成しているＺ置換基で求核剤前駆体またはアルキン前駆体とのカップリングによってＣ末端側で後に置換される塩基性ナイシンで出発することにより調製できる。塩基性ナイシン［１−１２］構造はナイシンを１２位で切断できる酵素でナイシンを処理することにより調製できる。このような酵素の例はトリプシンである。原料および方法は添付の実施例に提供する。
【００３２】
本発明はさらに、本発明の殺微生物性化合物と活性医薬成分の配合剤に関する。活性医薬化合物は当業者に知られているこのような化合物のいずれでもあり得る。好ましくは、活性医薬成分は第２の抗微生物性物質である。本出願の状況において用語「配合剤」とは、２以上の異なる組成物中に、本発明の抗微生物性化合物および活性医薬成分の双方を含む組成物、または抗微生物活性化合物および医薬成分の双方を含む複数の医薬組成物を指す。従って本発明はまた、抗微生物性化合物および活性医薬成分、特に第２の抗微生物性物質である医薬成分を含むパーツキットに関する。複数の本発明の組成物は患者に対して同時的および／または逐次的に投与できる。
【００３３】
このような抗微生物性物質の例はアミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシンおよびスペクチノマイシンのようなアミノグリコシド類；リファキシミン、ゲルダナマイシンおよびハービマイシンのようなアンサマイシン類；エルタペネム、ドリペネムおよびメロペネムのようなカルバペネム類；セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフィジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフィブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、セフタロリンフォサミルおよびセフトビプロールのようなセファロスポリン類；テイコプラニン、バンコマイシン、オリタバンシン、テラバンシン、ダルババンシンおよびラモプラニンのようなグリコペプチド類；クリンダマイシンおよびリンコマイシンのようなリンコサミド類；ダプトマイシンのようなリポペプチド類；アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、およびスピラマイシンのようなマクロライド類；アズトレナムのようなモノバクタム類；フラゾリドン、ニフロフラントインのようなニトロフラン類；リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリドおよびトレゾリドのようなオキサゾリジノン類；アモキシシリン、アンピシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メジオシリン、メシシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、テモシリン、チカルシリンのようなペニシリン類；アモキシシリン／クラブラナート、アンピシリン／サルバクタム、ピペラシン／タゾバクタムおよびチカルシリン／クラブラナートのようなペニシリン配合剤；バシトラシン、コリスチンおよびポリミキシンＢのようなポリペプチド類；シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ニリジックス酸、ノルフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシンおよびテマフロキサシンのようなキノロン類；マフェニド、スルファアセトアミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフィスオキサゾール、トリメトプリム−スルファメトキサゾール（コ−トリトキサゾール）、スルホンアミドクリソイジンのようなスルホンアミド類；デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリンのようなテトラサイクリン類；シオファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、シクロセリン、エタムブト、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピン、リファブチン、リファペンチンおよびストレプトマイシンのようなマイコバクテリアに対する薬剤；ならびにアルスフェナミン、クロラムフェニコール、フォスフォマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、チアムフェニコール、チゲサイクリン、チニダゾールおよびトリメトプリムを含む。
【００３４】
本発明のある態様において、抗微生物性化合物と活性医薬成分のモル比は最大でも１０：１、好ましくは最大でも５：１、最も好ましくは最大でも２：１、かつ一般的には少なくとも１：２０、好ましくは少なくとも１：１０、より好ましくは少なくとも１：５、および最も好ましくは１：２である。
【００３５】
本発明はさらに、抗微生物性化合物または本発明の配合剤、および薬学的に許容される希釈剤または担体を含む医薬組成物に関する。用語「医薬組成物」または「医薬製剤」とは、その中に含まれる活性成分の生物活性が有効であることを可能とし、かつ製剤を投与される対象にとって許容できない毒物である、付加的成分を全く含まない形態の製剤を指す。「薬学的に許容される希釈剤または担体」とは、活性成分以外の、対象に無毒な医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される希釈剤または担体は、限定されないが、水、緩衝液、賦形剤、安定剤、保存剤を含む。
【００３６】
本発明の別の態様において、抗微生物性化合物または本発明の配合剤は２以上の医薬組成物に分けられ、ここで本発明の抗微生物化合物は１つの医薬組成物に含まれ、活性医薬成分は第２の医薬組成物に含まれる。このようにして、抗微生物性化合物および活性医薬成分は患者に逐次的に投与される。それはまた抗微生物性化合物および／または活性医薬成分の全量の一部を含む組成物を提供することが想定される。
【００３７】
ある態様において、本発明は抗微生物性化合物、本発明の配合剤または本発明の医薬組成物の医薬としての使用に関する。さらに別の態様において、本発明は抗微生物性化合物、本発明の配合剤または本発明の医薬組成物の、感染症、好ましくは細菌感染症の処置における使用に関する。
【００３８】
本明細書で使用される用語「感染症」とは、ヒトまたは動物の体が反応する、一般的には炎症反応を引き起こす細菌またはウイルスのような微生物によって引き起こされる疾患を指す。本発明の抗微生物性化合物は、特に細菌に対して効果的である。このような細菌はグラム陰性菌およびグラム陽性菌であり得る。特に興味深いものは前駆体が脂質IIである賄防壁を含む細菌株である。グラム陰性菌の例はヘモフィルス・インフルエンザ、ボルデテラ・ペルツシス、ブルセラ種、フランシセラ・ツラレンシス、パスツレラ・ムルトシダおよびレジオネラ・ニューモフィラのような球桿菌；ナイセリア・ゴノルロエ、ナイセリア・メニンジチディスおよびモラキセラ・カタルラリスのような球菌；クレブシエラ・ニューモニエ, シュドモナス・エルジノサプロテウス・ミラビリス、エンテロバクター・クロアセ、ヘリオバクター・ピロリ、セラチア・マルセッセンス、サルモネラ・エンテリチディス、サルモネラ・ティフィ；およびアシネトバクター・バウマニのような桿菌である。グラム陽性菌の例はスタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピデルミディスおよびスタフィロコッカス・サプロフィチカスのようなスタフィロコッカス；ストレプトコッカス・ヨゲニス、ストレプトコッカス・アガラクティエ、ストレプトコッカス・ニューモニエ、ヴィリダンス・ミュータンス、エンテロコッカス・フェカーリス、およびエンテロコッカス・フェシウムのようなストレプトコッカス；ミクロコッカス・ルテウスのようなミクロコッカス；コリネバクテリウム、マイコバクテリウム、ファーミキューテス、ストレプトマイセス、クロストリジウム、リステリアおよびバチルスを含む。
【００３９】
本発明の抗微生物性化合物は一般的に薬剤耐性細菌に対して活性である。従って本発明はまた、薬剤耐性細菌の処置における抗微生物性化合物の使用に関する。用語「薬剤耐性」とは、１以上の既存薬剤に対する耐性が存在することを意味する。さらに、本発明の抗微生物性化合物を含む医薬組成物および配合剤はまた、薬剤耐性細菌の処置に使用できる。
【００４０】
ある態様によって、薬剤耐性細菌はペニシリン、ベータ−ラクタム、バンコマイシン、リネゾリド、フルオロキノロン、クリンダマイシン、カルバペネム、イソニアジド、リファムピン、テトラサイクリン、セファロスポリン、アミノグリコシド、メチシリン、アンピシリンおよびダプトマイシンから成る群から選択される薬剤の少なくとも１つに対して耐性である。薬剤耐性細菌の例はメチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（ＶＲＳＡ）、ペニシリン耐性ストレプトコッカス・ヨゲネス、マクロライド耐性ストレプトコッカス・ヨゲネス、ペニシリン耐性ストレプトコッカス・ニューモニア、ベータ−ラクタム耐性ストレプトコッカス・ニューモニア、ペニシリン耐性エンテロコッカス・フェカーリス、バンコマイシン耐性エンテロコッカス・フェカーリス、リネゾリド耐性エンテロコッカス・フェカーリス、ペニシリン耐性エンテロコッカス・フェシウム、バンコマイシン耐性エンテロコッカス・フェシウム、リネゾリド耐性エンテロコッカス フェシウム、シュドモナス・エルジノサ・フルオロキノロン耐性クロストリジウム・ディフィシレ、クリンダマイシン耐性 クロストリジウム・ディフィシレ、フルオロキノロン耐性大腸菌、サルモネラ、アシネトバクター・バウマニ（ＭＲＡＢ）、カルバペネム耐性クレブシエラ・ニューモニエ、マイコバクテリウム・ツベルクロシス（ＸＤＲＴＢ）、イソニザジド耐性マイコバクテリウム・ツベルクロシス、リファムピン耐性マイコバクテリウム・ツベルクロシス、テトラサイクリン耐性ナイセリア・ゴノルロセ、アミノグリコシド耐性ナイセリア・ゴノルロセ、 セファロスポリン耐性ナイセリア・ゴノルロセ、およびペニシリン耐性ナイセリア・ゴノルロセを含む。
【００４１】
薬剤耐性細菌の特定の例は、ストレプトコッカス・ミュータンス（ＡＴＣＣ  ７００６１０）、ストレプトコッカス ミュータンス（Ｘｃ株）、ストレプトコッカス・ソブリナス （ＡＴＣＣ  ３３４７８）、ストレプトコッカス・ウベリス（１９７８株）、ストレプトコッカス ウベリス（１９７９株）、ストレプトコッカス ウベリス（１９８０株）、ストレプトコッカスウベリス（１９８１株）、ストレプトコッカス・ヨゲネス（５４４８株）、ストレプトコッカス・ヨゲネス（ＪＲＳ４株）、ストレプトコッカス・ヨゲネス（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−５９５）、ストレプトコッカス・ニューモニア、ストレプトコッカス・ミティス、ストレプトコッカス・サングイス、ストレプトコッカス・ボビス、ストレプトコッカス・サリバリウス、ストレプトコッカス・インテルメディウス、ストレプトコッカス・ビリダンス、ストレプトコッカス・オラリス、ストレプトコッカス・サリバラス、スタフィロコッカス・ラデュネシス、スタフィロコッカス・アウレウス（ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−１７１７）、スタフィロコッカス・アウレウス（ＡＴＣＣ  ２５９０４）、スタフィロコッカス・アウレウス（ＭＲＳＡ−１６株）、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｃｏｗａｎ株），スタフィロコッカス・カピティクス（Ｖ１９株）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（１５８７株）、スタフィロコッカス・ホミニス（Ｖ２７株）、スタフィロコッカス・ワルネリ（Ｖ６４株）、スタフィロコッカス・サプロフィチカス（ＮＣＴＣ  ７２９２株）、スタフィロコッカス・ヘモリティス（Ｖ８／１株）、サルモネラ・チフィムリウム、エンテロコッカス・フェシウム（ＡＴＣＣ  ７００２２１）、エンテロコッカス・フェシウム（ダプトマイシン耐性株）、エンテロコッカス・フェシウム（リネゾリド耐性株）、エンテロコッカス・フェシウム（アンピシリン耐性株）、エンテロコッカス・フェシウム（バンコマイシン耐性株Ｅ００１３、Ｅ００７２、Ｅ０３００、Ｅ０３２１、Ｅ０３３３、Ｅ０３３８、Ｅ０３４１、Ｅ０５０６、Ｅ０７４５、Ｅ１１３０、Ｅ１４４１、Ｅ１６７９、Ｅ１７６３、Ｅ２２９７、Ｅ２３５９、Ｅ２３６５、Ｅ２３７３、Ｅ６０１６、Ｅ７３１２、Ｅ７３１４、Ｅ７３１９、Ｅ７３２９、Ｅ７４０１、Ｅ７４０３、Ｅ７４１３、Ｅ７４２４、Ｅ７４６４、Ｅ８２１８、Ｅ８２３５、Ｅ８２３７）、エンテロコッカス・フェカーリス（ＡＴＣＣ  ７００８０２）、エンテロコッカス・フェカーリス（ＪＨ２−２株）、エンテロコッカス・フェカーリス（ＭＭＨ５９４株）、エンテロコッカス・フェカーリス（ＡＴＣＣ  ２９２１２）、エンテロコッカス・フェカーリス（ＡＴＣＣ  ４７０７７）、エンテロコッカス・ヒラエ、エンテロコッカス・カセリフラバス、エンテロコッカス・ガリナラム、エンテロコッカス・ラフィノサス、エンテロコッカス・アビウム、エンテロコッカス・セコラム、エンテロコッカス・サッカロミニマス、エンテロコッカス・コルムベ、エンテロコッカス・デュランス、クレブシエルサ・ニューモニア、ラクトバチルス・パラカセイ、クロストリジウム・テタニ、クロストリジウム・ボツリナム、クロストリジウム・ペルフリングス、クロストリジウム・ディフィシレ、バチルス・アントラクティスおよびリステリア・モノサイトゲネスを含む。上記薬剤耐性株はＵｔｒｅｃｈｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒで同定され、知られた。
【００４２】
本明細書で使用される「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（および「処置する（ｔｒｅａｔ）」もしくは「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」のようなその文法的変形）は、処置される個体または動物の自然経過を変える試みにおける臨床的介入を指し、予防のためにまたは臨床病理の経過中のどちらかで行うことができる。望む処置効果は、限定されないが、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患のなんらかの直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患の進行速度の低下、病態の改善または一時的緩和、および寛解または予後の改善を含む。
【００４３】
物質、例えば医薬製剤の「効果的な量」とは、望む治療的または予防的結果を達成するための、必要な投与量でおよび期間についての効果的な量を指す。
【００４４】
「天然または非天然アミノ酸」とは一般的に天然に存在するアミノ酸だけでなく、合成的に得ることができるまたは天然源から発生し得る、修飾された、誘導体化された、光学的な、稀なおよび／または異常なアミノ酸のいずれをも指す。天然に存在するアミノ酸はアラニン（Ａｌａ，Ａ）、システイン（Ｃｙｓ，Ｃ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ，Ｄ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ，Ｅ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ，Ｆ）、グリシン（Ｇｌｙ，Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ，Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ，Ｉ）、リシン（Ｌｙｓ，Ｋ）、ロイシン（Ｌｅｕ，Ｌ）、メチオニン（Ｍｅｔ，Ｍ）、アスパラギン（Ａｓｎ，Ｎ）、プロリン（Ｐｒｏ，Ｐ）、グルタミン（Ｇｌｎ，Ｑ）、アルギニン（Ａｒｇ，Ｒ）、セレノシステイン（Ｓｅｃ，Ｕ）、セリン（Ｓｅｒ，Ｓ）、スレオニン（Ｔｈｒ，Ｔ）、バリン（Ｖａｌ，Ｖ）、トリプトファン（Ｔｒｐ，Ｗ）、およびチロシン（Ｔｙｒ，Ｙ）を含む。修飾されたアミノ酸の例はヒドロキシプロリン、ヒドロキシリシン、アセチルリシン、デスモシン、イソデスモシン、ε−Ｎ−メチルリシン、ε−Ｎ−トリメチルリシン、メチルヒスチジン、デヒドロブチリン（Ｄｈｂ）、デヒドロアラニン（Ｄｈａ）、α−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、２，３−ジアミノプロピオン酸、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、ホモシステイン、ホモセリン、シトルリンおよびオルニチンを含む。
【００４５】
本発明は以下の非限定的な実施例に例示される。
【実施例】
【００４６】
実施例１．ナイシン由来抗微生物性化合物の調製
使用された全ての試薬はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＡＣＳ）等級またはそれ以上であり、特に断らない限りさらに精製することなく使用した。フラッシュクロマトグラフィーはＭｅｒｃｋ  ｔｙｐｅ  ６０、２３０−４００メッシュシリカゲルを使用して実施した。ペプチドはＲｅｐｒｏｓｐｈｅｒ  １００  Ｃ８−Ａｑｕａカラム（１０μｍ，２５０×２０ｍｍ）上で、流速１２ｍＬ／分で精製した。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）分析はＥＳＩ−ＴＯＦ  ＬＣ／ＭＳ装置を使用して実施した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、４００ＭＨｚでトリメチルシラン（ＴＭＳ）に対する百万分率（ｐｐｍ）ダウンフィールドで報告された化学シフトで記録した。１Ｈ  ＮＭＲデータは以下の順序で報告する。：多重度（ｓ，一重項；ｄ，二重項；ｔ，三重項；ｑ，四重項；ｑｎ，五重項およびｍ，多重項）、プロトン数、ヘルツ（Ｈｚ）でのカップリング定数（Ｊ）。適切なときは、多重度はシグナルが広範であることを示すｂｒによって先行される。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは１００ＭＨｚで使用した溶媒の残留炭素共鳴に対して報告された化学シフトで記録した。全ての文献化合物は指定された構造と一致する１Ｈ  ＮＭＲ、および質量スペクトルを有した。
【００４７】
ナイシン［１−１２］構造（比較化合物Ａ）の調製
ナイシン（６００ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）を２５０ｍＬのトリス緩衝液（２５ｍｍｏｌ  ＮａＯＡｃ，５ｍｍｏｌ  トリスアセテート，５ｍｍｏｌ  ＣａＣｌ２，ｐＨ７）に溶解し、溶液を氷上で１５分間冷却した。トリプシン（５０ｍｇ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌した。混合液をその後３０℃で１６時間撹拌し、アリコートをＨＰＬＣによって分析した。さらにトリプシン５０ｍｇを添加し、さらに２４時間後、ＨＰＬＣから明らかなとおり、反応が完結した。反応液を塩酸（１Ｎ）でｐＨ４まで酸性にし、溶媒を真空中で除去した。ナイシン［１−１２］構造は分取ＨＰＬＣによって混合物から単離した。生成物のフラクションを凍結乾燥し、白色粉末（８０ｍｇ，３９％）を得た。
【００４８】
（G M Coppola and M Prashad, Synthetic Communications 23, no. 4 (1993): 535−41に従った）ファルネシルアミンの調製
リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（７．７ｍＬ；ＴＨＦに１．０Ｍ）をｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ−ファルネシルブロミド（６．７ｍｍｏｌ，１．９ｇ）にアルゴン雰囲気下で添加し、１６時間撹拌し、その後飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。混合物をＭＴＢＥで２回抽出し、有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。この油状物質に３１ｍＬのＭｅＯＨおよび４ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を添加し、得られた溶液を室温で１６時間撹拌した。真空下で溶媒を除去し、生成物として褐色固体（１．５ｇ，定量的）を得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ５．２８−５．２４（ｍ，１Ｈ）、５．１２−５．０７（ｍ，２Ｈ）、３．２９−３．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、２．１０−１．９５（ｍ，８Ｈ）、１．６７−１．５９（ｍ，１２Ｈ）、１．１２（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１３７．８、１３５．２、１３１．３、１２５．４、１２４．３、１２３．９、３９．７、３９．５、２６．７、２６．４、２５．７、１７．６、１６．１、１６．０。
【００４９】
２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  ペント−４−インオエート
４−ペンチン酸（２．００ｇ，２０．３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、ＥＤＣＩ（５．８４ｇ，２９．８４ｍｍｏｌ，１．５当量）およびＮＨＳ（４．６８ｇ，４０．７６ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌した。ＤＭＦの蒸発後、残渣をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）に希釈し、ＮＨ４Ｃｌ（１Ｍ，１２０ｍＬ）で２回洗浄し、飽和ＮａＨＣＯ３（１２０ｍＬ）で２回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ＰＥ）を用いて精製し、所望の活性化エステルを白色粉末（３．３ｇ，８３％）として得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ２．８９−２．８３（ｍ，４Ｈ）、２．６３−２．５９（ｍ，４Ｈ）、１．５５（ｂｓ，１Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１６８．８、１６７．０、８０．８、７０．０、３０．３、２５．５、１４．１。
【００５０】
ジデシル−アルキンの調製
ジデシルアミンを使用し、方法３（ｐ３）によって調製した。
収量：１０５ｍｇ、３０％
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ３．３１−３．２７（ｍ，２Ｈ）、３．２２−３．１８（ｍ，２Ｈ）、２．５４（ｍ，４Ｈ）、１．９５（２，１Ｈ）、１．５６−１．４８（ｍ，４Ｈ）、１．２７−１．２５（ｍ，２８Ｈ）、０．９０−０．８５（ｍ，６Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７０．０、８３．８、６８．５、４７．８、４６．１、３２．１、３１．９、２９．６、２９．５、２９．３、２２．７、１４．６、１４．１；ＨＲＭＳ  Ｃ２５Ｈ４８ＮＯ  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３７８．３７３６、測定値３７８．３７４３。
【００５１】
オクタデシル−アルキンの調製
オクタデシルアミンを使用し、方法３（ｐ３）によって調製した。
収率：５６０ｍｇ、５２％
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ５．６１（ｂｓ，１Ｈ）、３．２７−３．２１（ｍ，２Ｈ）、２．５３−２．５０（ｍ，２Ｈ）、２．３９−２．３４（ｍ，２Ｈ）、１．９９−１．９７（ｍ，１Ｈ）、１．４７−１．４７（ｍ，３Ｈ）、１．２７−１．２４（ｍ，３２Ｈ）、０．８８−０．８４（ｍ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７０．７、８３．０、６９．２、３９．６、３５．４、３１．９、２９．７、２９．６、２９．５、２９．３、２６．９、２２．７、１５．０、１４．１； ＨＲＭＳ  Ｃ２３Ｈ４４ＮＯ  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３５０．３４２３、測定値３５０．３４３０。
【００５２】
ファルネシル−アルキンの調製
ファルネシルアミンを使用し、方法３（ｐ３）によって調製した。
収量：５４０ｍｇ、６０％
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ５．６９（ｂｓ，１Ｈ）、５．１９−５．１５（ｍ，１Ｈ）、５．０６−５．０４（ｍ，２Ｈ）、４．１２−４．０８（ｍ，２Ｈ）、３．８５−３．８２（ｍ，２Ｈ）、２．７８（ｓ，１Ｈ）、２．５０−２．４８（ｍ，４Ｈ）、２．３８−２．３４（ｍ，４Ｈ）、１．６４（ｓ，９Ｈ）、１．５７（ｓ，３Ｈ）、１．２５−１．２１（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ１７０．５、１４０．２、１３５．４、１３１．４、１２４．２、１２３．７、１１９．７、８３．０、６９．２、３９．７、３９．５、３７．６、３５．４、２６．７、２６．３、２５．７、１７．７、１６．３、１６．０、１４．９；ＨＲＭＳ  Ｃ２０Ｈ３２ＮＯ  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３０２．２４８４、測定値３０２．２４７４。
【００５３】
テルフェニル−アルキンの調製
テルフェニルカルボン酸（２５０ｍｇ，１．０当量）および塩化チオニル（カルボン酸１ｍｍｏｌにつき１０ｍＬ）の混合物を、全ての固体が溶解するまで還流し、続いてさらに１６時間加熱した。減圧下で過剰の塩化チオニルを蒸発させた後、得られた酸クロリドを真空中で乾燥させた。酸クロリドを１５ｍＬのＤＣＭに溶解し、プロパルギルアミンＨＣＬ（１８３ｍｇ，２．０当量）を添加した。ＴＥＡ（５５８μＬ，４．０当量）の添加で、溶液は濃い白色懸濁液へ変化した。撹拌を容易にするため、５ｍＬのＤＣＭを添加した。３時間後、ＴＬＣは変換をほとんど示さなかった。ピリジン（７９０μＬ，１０当量）を添加し、混合物を加熱還流した。２時間後、反応が完結した。真空下溶媒を除去し、残渣をＣＨＣｌ３に懸濁した。沈殿物をろ過によって回収し、ＭｅＯＨで洗浄し、真空下で乾燥した。収量：１８９ｍｇ、６３％。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ８．９８（ｓ，１Ｈ）、７．９７−７．９５（ｍ，２Ｈ）、７．８４−７．７１（ｍ，４Ｈ）、７．４８−７．３７（ｍ，３Ｈ）、４．０７（ｓ，１Ｈ）、３．３１（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１６６．０、１４２．８、１４０．２、１３９．９、１３８．６、１３３．１、１２９．５、１２８．５、１２７．８、１２７．７、１２７．１、１２６．９、８１．８、７３．３、２９．０；ＨＲＭＳ  Ｃ２２Ｈ１８ＮＯ  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３１２．１３８８、測定値３１２．１３６１。
【００５４】
Ｂｏｃ−ナイシン［１−１１］Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（比較化合物Ｆ）の調製
Ｂｏｃ２Ｏ（５０ｍｇ，２２９μｍｏｌ）とＤＩＰＥＡ（５１μＬ，２９３μｍｏｌ）をナイシン［１−１２］（１００ｍｇ，８６．９μｍｏｌ）の乾燥ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）溶液に添加し、混合物を４．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ／ＴＦＡ（７０／３０／０．１）に再度溶解し、Ｃ１８  Ｍａｉｓｃｈ  ２５０×２２ｍｍを使用した分取ＨＰＬＣによって精製して、６８．９ｍｇ（５１．０μｍｏｌ）の白色粉末（収率５７％）を得た。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ６１Ｈ９９ＯＮ１３Ｏ１７Ｓ２  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値１３５０．６７９６、測定値１３５０．６８１８。
【００５５】
（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−デシル−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）プロパンアミド）の調製
Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨを使用して方法７（ｐ７）に従って調製した。収率＝８８％
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ７．５５（ｄ，７．８８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２９（ｄ，８．１２Ｈｚ，１Ｈ）、７．０４（ｔ，７．５０Ｈｚ，２Ｈ）、６．９６  （ｔ，７．４２Ｈｚ，１Ｈ）、３．５５（ｔ，６．７２Ｈｚ，１Ｈ）、３．１４−２．９１（ｍ，４Ｈ）、１．３２−１．００（ｍ，１６Ｈ）、０．９０−０．８２（ｔ，６．６４Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ１７６．７０、１３８．１、１２８．８、１２４．７、１２２．４、１１９．８、１１９．５、１１２．３、１１１．１、５７．０、４０．４、３３．０、３２．３、３０．５、３０．１、２７．９、２３．７、１８．２、１４．５。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ２１Ｈ３３Ｎ３Ｏ  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値３４４．２６、測定値３４４．１５。
【００５６】
（（Ｓ−２−アミノ−Ｎ−デシル−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド）の調製
Ｂｏｃ−Ｔｙｒ−ＯＨを使用して方法７（ｐ７）に従って調製した。収率＝３１％
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ８．１７−８．１０（ｍ，１Ｈ）、７．０４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．７４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．９０（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ）、３．２５−３．１１（ｍ，２Ｈ）、３．０８−２．８６（ｍ，２Ｈ）、１．３９−１．３６（ｍ，２Ｈ）、１．３５−１．０９（ｍ，１４Ｈ）、０．８７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ１６８．０、１５６．８、１３０．１、１２４．６、１１５．３、５４．６、３９．２、３６．６、３１．６、２９．３、２９．２、２９．０、２８．９、２８．７、２６．５、２２．３、１３．０。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ３２Ｎ２Ｏ２  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：３２１．２５３７、測定値３２１．７５。
【００５７】
（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−デシル−３−フェニルプロパンアミド）の調製
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨを使用して方法７（ｐ７）に従って調製した。収率＝３％
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ７．３９−７．２３（ｍ，５Ｈ）、３．９９（ｔ，Ｊ＝７．４８Ｈｚ，１Ｈ）、３．２４−３．０１（ｍ，４Ｈ）、１．４３−１．１３（ｍ，１６Ｈ）、０．９０（ｔ，Ｊ＝６．８６Ｈｚ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ１３５．７、１３０．５、１３０．０、１２８．８、５５．９、４０．６、３８．８、３３．１、３０．５、３０．１、２７．９、２３．７、１４．４。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１９Ｈ３２Ｎ２Ｏ  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値３０５．２５、測定値３０５．１５。
【００５８】
（（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−デシル−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロパンアミド）の調製：
Ｂｏｃ−Ｈｉｓ−ＯＨを使用して方法７（ｐ７）に従って調製した。収率＝定量的
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）：δ８．８４（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｂｓ，１Ｈ），７．０７（ｂｓ，１Ｈ），４．１８−４．１２（ｍ，１Ｈ），３．３１−３．２７（ｍ，２Ｈ）、３．１８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．３１−１．２３  （ｍ，１６Ｈ）、０．８７（ｔ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ；ＣＤ３ＯＤ）：δ１４３．９、１４０．８、１１８．１、５２．３、３９．４、３１．６、２９．２、２９．０、２８．９、２８．８、２８．７、２６．５、２２．３、１３．０。ＥＳＩ−ＭＳ：Ｃ１６Ｈ３０Ｎ４Ｏ  ［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値：２９５．２４９２、測定値２９５．２０。
【００５９】
（ｔｅｒｔ−ブチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（デシルアミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−１−オキソプロパン−２−イル）カーバメート）の調製
Ｈ−Ｔｒｐ−Ｃ１０（１．０ｇ，２．９１ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ（１．１当量）、ＢＯＰ（１．１当量）およびＤＩＰＥＡ（３．３当量）のＣＨ２Ｃｌ２溶液を室温で１時間撹拌した。反応混合液を濃縮し、ＥｔＯＡｃに取り込み、１Ｍ  ＫＨＳＯ４と飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮してＢｏｃ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃ１０（１．４５ｇ，２．３０ｍｍｏｌ、収率：７９％）を黄色固体泡状物質として得た。この物質（０．５ｇ，０．９５ｍｍｏｌ）をＴｉＳ（０．１９５ｍＬ，０．９５ｍｍｏｌ）存在下、室温で１時間、ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２で処理した。濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃに取り込み、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮してＨ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃ１０（１．４５ｇ，２．３０ｍｍｏｌ，定量的な収率）を油状物質として得た。ＭＳ分析によってＢｏｃ基の除去を確認し、本物質はさらに精製することなく使用した。Ｂｏｃ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃ１０  １Ｈ  ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）：δ８．７３（ｓ，１Ｈ），８．４３（１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．４２（ｄ，＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．２９−７．００（ｍ，６Ｈ），６．７３−６．６３（ｍ，３Ｈ）、６．４０（ｓ，１Ｈ）、６．３３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、４．９０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、４．６６（ｍ，１Ｈ）、４．２６（ｍ，１Ｈ）、３．４５−３．３３（ｍ，２Ｈ）、３．１３−３．０８（ｍ，２Ｈ）、２．９９−２．９６（ｍ，１Ｈ）、２．５８−２．５４（ｍ，１Ｈ）、１．４６−１．０２（ｍ，２５Ｈ）、０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。１３Ｃ  ＮＭＲ：（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ１７１．９、１７１．１、１５５．９、１３６．７、１３６．３、１２７．６、１２７．４、１２３．６、１２３．５、１２２．８、２２．３、１２０．１、１１９．７、１１９．０、１１８．４、１１１．７、１１１．４、１０９．８、５５．７、５３．８、３９．９、３２．０、２９．７、２９．６、２９．４、２９．４、２９．２、２７．９、２６．９、２２．８、１４．２。ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋計算値６３０．４０１４；測定値６２９．８９．Ｈ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ｃ１０：ＭＳ  ［Ｍ＋Ｈ］＋計算値５３０．３４９０；測定値５３０．１０。
【００６０】
（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル  ３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）プロパンオエート）
ＤＣＣ（５．５ｇ，２６．６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）溶液をＢｏｃ−β−Ａｌａ−ＯＨ（５．０ｇ，２６．４ｍｍｏｌ）およびＮＨＳ（３．１ｇ，２６．９ｍｍｏｌ）の混合物のＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）溶液に添加した。白色懸濁液を室温で終夜撹拌し、その後セライトでろ過した。透明なろ液を濃縮し、ＭＴＢＥ／ヘキサンから再結晶させ、白色結晶（６．０５ｇ，２１．１ｍｍｏｌ）を得た。
収率：８０％。１Ｈ  ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ３）：δ５．１４（ｂｒ，１Ｈ），３．４８−３．４６（ｍ，２Ｈ）、２．８１−２．７９（ｍ，６Ｈ）、１．４０（ｓ，９Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ：（１００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ３）：δ１６９．２、１６７．６、１５５．８、７９．７、３６．２、３２．２、２８．４、２５．６．ＭＳ：［Ｍ−ｔＢｕ＋Ｈ］＋計算値２２９．０４５５；測定値２３０．７１．
【００６１】
方法１（ｐ１）：アミド結合脂質−ナイシン
得られたナイシン［１−１２］構造の粉末をＤＭＦまたはＴＨＦ（２４０μｌ）に溶解し、対応する脂質アミン（５９当量）、ＢＯＰ（２当量）およびＤｉＰＥＡ（４当量）を添加した。反応を２０分撹拌し、続いて４ｍＬの緩衝液Ａ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＣＮ，９５：５＋０．１％ＴＦＡ）でクエンチした。不溶性の物質を除去するために溶液を５０００ｒｐｍで遠心分離し、上清を分取ＨＰＬＣによって精製した。生成物フラクションを凍結乾燥し、最終生成物を得た。
【００６２】
方法２（ｐ２）：クリック脂質−ナイシン
硫酸銅の１０倍ストック溶液（１ｍＬの水に１６．２μｍｏｌ、２．５９ｍｇ）、アスコルビン酸ナトリウムの１０倍ストック溶液（１ｍＬの水に３２．４μｍｏｌ、６．４２
ｍｇ）およびＴＢＴＡの１０倍ストック溶液（１ｍＬのＤＭＦに４．１μｍｏｌ、２．１８ｍｇ）を調製した。表３に示すように方法１（ｐ１）を使用してナイシン［１−１２］−アジド（比較化合物Ｅ）を調製した。ナイシン［１−１２］−アジド（８．１μｍｏｌ，１０ｍｇ）をＤＭＦ（２００ｍＬ）に溶解した。脂質−アルキンをマイクロウェーブ容器に加えた。ナイシン［１−１２］−アジド溶液を１００μＬのＴＢＴＡストック溶液、１００μＬのアスコルビン酸ナトリウムストック溶液および１００μＬの硫酸銅ストック溶液とともに添加した。容器をマイクロウェーブに入れ、８０℃で２０分間反応させた。終了後、反応混合物を４ｍＬの緩衝液Ｂ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＣＮ，５：９５＋０．１％ＴＦＡ）でクエンチし、分取ＨＰＬＣによって精製した。
【００６３】
方法３（ｐ３）：脂質−アルキン
脂質−アミン（３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、撹拌しながら２，５−ジオキソピロリジン−１−イル  ペント−４−インオエート（２．０ｍｍｏｌ，３９０ｍｇ）を添加し、反応を１６時間行った。ＤＭＦの濃縮後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ＰＥ，１：４）で精製し、最終生成物を得た。
【００６４】
方法４（ｐ４）：ｂｏｃ保護ナイシン［１−１２］に結合したアミン
脂質−アミン（１．２当量）、ＢＯＰ（１．２当量）およびＤｉＰＥＡ（３当量）をＢｏｃ−ナイシン［１−１１］Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（１当量）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２μｍｏｌ／ｍＬ）溶液に添加した。化合物の溶液に数滴のＤＭＦを添加した。混合物を４５分間撹拌し、濃縮し、残渣をＴＦＡ／ＴｉＳ／Ｈ２Ｏ（９５／２．５／２．５）で１時間処理し、ＭＴＢＥ／ヘキサン（１：１）で沈殿させ、遠心分離（４５００回転／分で５分間）した。沈殿物をＨ２Ｏ／ｔ−ＢｕＯＨ（１：１）に溶解し、凍結乾燥した。凍結乾燥した粉末を４ｍＬの緩衝液Ｂ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＣＮ，５：９５＋０．１％ＴＦＡ）に溶解し、分取ＨＰＬＣによって精製した。
【００６５】
方法５（ｐ５）：Ｌｙｓ１２アシル化化合物
ナイシン［１−１２］をＤＭＦ／ＴＨＦ（１／１）に溶解し、４当量のＤｉＰＥＡを添加した。ＴＨＦに溶解した１当量のカルボン酸活性エステルの溶液を滴下して、リシン側鎖の好ましいアシル化が得られた。１当量を超える活性化エステルの添加はＮ−末端およびＬｙｓ１２側鎖の両方のアシル化をもたらした。１．５時間後、反応混合物を濃縮し、Ｍａｉｓｃｈ  Ｒｅｐｒｏｓｐｈｅｒ  １００  Ｃ８−Ａｑｕａ、２５０ｍｍ×２０ｍｍを使用して精製した。脂質−アミン（１．２当量）、ＢＯＰ（１．２当量）およびＤｉＰＥＡ（３当量）をアシル化ナイシン［１−１２］のＤＭＦ／ＴＨＦ（２μｍｏｌ／ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物液を４５分間撹拌し、濃縮し、ＭＴＢＥ／ヘキサン（１：１）で沈殿させ、遠心分離（４５００回転／分で５分間）した。ペレットをＨ２Ｏ／ｔ−ＢｕＯＨ（１：１）に溶解し、凍結乾燥した。凍結乾燥した粉末を４ｍＬの緩衝液Ｂ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＣＮ，５：９５＋０．１％ＴＦＡ）に溶解し、分取ＨＰＬＣによって精製した。注記：ナイシン［１−１２］−Ｃ１２のモノおよびビスβ−Ａｌａアシル化変型体は前記のように、それぞれのＢｏｃ保護前駆体をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ（９５／２．５／２．５）で処理し、続いてＭＴＢＥ／ヘキサンで沈殿させ、分取ＨＰＬＣ精製することによって得られた。
【００６６】
方法６（ｐ６）：アミノ−酸−脂質
Ｂｏｃ保護されたアミノ酸（Ｂｏｃ−ＡＡ−ＯＨ）をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、０℃に冷却した。ＥＤＣ（２．５当量）、ＨＯＢＴ（２．５当量）、デシルアミン（１．５当量）およびトリエチルアミン（１．５当量）を添加し、室温まで昇温させながら混合物を一晩撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏ、１Ｍ  ＮａＯＨおよび１Ｍ  ＨＣｌで洗浄した。再結晶（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）またはシリカゲルカラムクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ）による精製でＢｏｃ−ＡＡ−デシルアミン中間体を得た。Ｂｏｃ−アミノ酸−デシルアミン化合物をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、ＴｉＳ（２当量）およびＴＦＡをＣＨ２Ｃｌ２：ＴＦＡ（２：１）の比に達するように添加し、混合物を１時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、脱保護されたアミノ酸−Ｃ１０を任意に酢酸エチルに取り込み、飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。濃縮により、脂質化アミノ酸が油状物質として得られた。さらなる試験に使用される化合物は表３および表４に示すように調製した。表中に、使用される前駆体ならびにその方法で使用される特定の物質を示す。
【表３−１】
2018505871.tif 000009
【表３−２】
2018505871.tif 000010
【表３−３】
2018505871.tif 000011
【００６７】
【表４】
2018505871.tif 000012
【００６８】
調製した化合物の分析を表５および表６に示す。保持時間（Ｒｔ）はＤｒ．Ｍａｉｓｃｈ  Ｃ８カラム（２５０×４．６ｍｍ，３００Å，１０μｍ）を使用して、１．０ｍＬ／分の流速および以下の勾配：（ａ）５〜６０％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で４０分；（ｂ）；５〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で４０分、および（ｃ）５〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で６０分；または１．０ｍＬ／分の流速および以下の勾配；（ｄ）５〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で４０分；（ｅ）５〜９５％ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で６０分を使用して、Ｄｒ．Ｍａｉｓｃｈ  Ｃ１８カラム（２５０×４．６ｍｍ，３００Å，１０μｍ）を使用して測定した。
【表５−１】
2018505871.tif 000013
【表５−２】
2018505871.tif 000014
【００６９】
【表６】
2018505871.tif 000015
【００７０】
実施例２．ＭＩＣアッセイにおける抗微生物性化合物の分析
（グリセロールストックからの）種々の微生物を血清寒天上に播種し、３７℃で２４時間インキュベートした。コロニーを選択し、２×５ｍＬのＴＳＢを接種した。試料および無菌対照を３７℃で１６〜２０時間培養した。比較化合物Ｂは対照として作用するナイシンである。比較化合物Ｃもまた、対照として作用するバンコマイシンである。比較化合物Ａ、ＤおよびＥもまた、本発明の一部ではない対照化合物である。
【００７１】
１００μＬの化合物（２）〜（２３）、およびＲ１基（ｂ）〜（ｅ）を有する化合物（２４）、ならびに比較化合物Ａ、ＤおよびＥ（１２８μｇ／ｍＬ，２％ＤＭＳＯのＴＳＢ溶液）、１００μＬのナイシン陽性対照（比較化合物Ｂ）およびバンコマイシン（比較化合物Ｃ）（２μｇ／ｍＬ，２％ＤＭＳＯのＴＳＢ溶液）ならびに１００μＬの陰性対照（２％ＤＭＳＯのＴＳＢ溶液）を９６ウェルプレートの最上列、残りのウェルに５０μＬのＴＳＢを添加し、化合物を連続的に希釈した。一晩の培養液をＴＳＢに０．５×１０６ＣＦＵまで希釈した。５０μＬの細菌溶液を各ウェルに添加し、プレートを接着性の膜で密封し、３７℃で１６時間インキュベートした。翌日、細菌生育についてプレートを視覚的に観察した。
【００７２】
種々の細菌についてのＭＩＣアッセイの結果を表７に示す。表８は、多数の種々のＶＲＥ株に対する化合物（１０）の活性を示し、それぞれ４および８であったＭＩＣ５０およびＭＩＣ９０の決定を可能とした。比較化合物Ｂ（ナイシン）について同一の値が見られ、新規化合物の有効性を示している。
【表７−１】
2018505871.tif 000016
【表７−２】
2018505871.tif 000017
【００７３】
【表８】
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【００７４】
実施例３．モデル膜内の脂質II結合
０．２％脂質IIでスパイクした１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）から成る大型単層小胞（ＬＵＶｓ）にカルボキシフルオレセイン（ＣＦ）を充填した。ＣＦ流出は４９２ｎｍで励起とともに、５１５ｎｍで蛍光強度の増加を測定することにより観察した。キュベット中で、緩衝液（トリスＨＣｌ、ｐＨ７．０，１００ｍＭ  ＮａＣｌを含む）のＣＦ添加小胞（２０μＭ最終濃度）の溶液（１ｍＬ）を調製し、化合物（６）、（１０）、および（１２）の相対最終濃度、ならびにＲ１基（ｅ）を有する化合物（２４）もまた添加し、混合物を１分間撹拌し、蛍光（Ａ０）を記録した。約１０秒後、ナイシン（比較化合物Ｂ）を添加（５ｎＭ最終濃度）し、安定化するまで蛍光（Ａｓｔａｂｌｅ）を追跡し、その後記録した。Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００（最終濃度０．１％）の添加により全膜漏出を誘導し、蛍光を記録した（Ａｔｏｔａｌ）。百分率値を：
【数１】
2018505871.tif 000019
によって計算した。
【００７５】
化合物（６）、（１０）および（１２）での処置およびＲ１基（ｅ）を有する化合物（２４）での処置は検出可能な色素漏出を示さなかったが、一方ナイシン（比較化合物Ｂ）は５ｎＭの濃度でＣＦ色素の約５０％の漏出を示した。競合アッセイでは、Ｒ１基（ｅ）を有する化合物（２４）以外、ナイシンよりも１０倍高い濃度で投与されたとき、各化合物が効率的に、ナイシン誘発膜漏出に拮抗し、等モル濃度で色素漏出を阻害し、このモデルにおいてナイシンと同程度の脂質II結合親和性を示していることが示唆された。
【００７６】
実施例４．血清安定性
２ｍｇ／ｍＬのペプチド溶液をＭｉｌｌｉＱ中２６％ＤＭＳＯで調製した。４２ｍＬのペプチド溶液と５１８ｍＬのヒト血清を用いて複製サンプルを調製し、最終ＤＭＳＯ濃度を２％とした。試料を３７℃でインキュベートし、試料をｔ＝０時間、１時間、２時間、４時間、２４時間で以下のように採取した：１００μＬヒト血清に、２００μＬ  ＭｅＯＨ（内部標準物質として０．０７５ｍｇ／ｍＬのエチルパラベンを含む）を添加してタンパク質を沈殿させた。試料を簡単にボルテックス処理し、室温で１０分間静置させた。試料をその後１３，０００回転／分で５分間遠心分離し、上清を取り、分析まで−２０℃で保存した。各試料はＣ４カラム上でＨＰＬＣによって分析した。ピークを積分し、内部標準に対して標準化した。
【００７７】
ヒト血清における化合物（６）、（１０）および（１２）の安定性およびＲ１基（ｅ）を有する化合物（２４）の安定性をナイシン［１−１２］（化合物Ｂ）の安定性と比較した。新規化合物の安定性は５０％を優に超え、化合物Ｂの安定性を大きく上回った。すなわち、ナイシンの３３％しか２４時間後に無傷のままではなく、一方化合物（６）の９４％が２４時間後に無傷のままであった。
【００７８】
実施例５．溶血アッセイ
ヒト全血を６００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿およびヘマトクリットのレベルをチューブ上に記録した。血漿を除去し、ＰＢＳを用いて赤血球を３回洗浄（６００×ｇで１５分間遠心分離）した。上清を廃棄した後、血球（packed cell）を氷上で保存した。１００μＬのペプチド（ＰＢＳに１２８μｇ／ｍＬ，２％ＤＭＳＯ）ならびにＰＢＳ中２％ＤＭＳＯを含む対照溶液を、ポリプロピレン製の丸底９６ウェルプレートの最上列に添加し、５０μＬのＰＢＳを残りのウェルに添加した。ペプチドおよびＤＭＳＯ対照溶液をその後下列方向に順番に希釈した。血球２００μＬをＰＢＳ（１０ｍＬ）に添加し、この懸濁液５０μＬを各ウェルに添加した。０．１％トリトンＸ−１００を含む脱イオン水を使用するカラムを１００％溶解対照として使用し、連続的希釈ＰＢＳ（１．０％ＤＭＳＯ）対照を含むカラムは０％溶解対照としての役割を果たした。細胞を３７℃で１時間インキュベートした。インキュベート後、プレートを遠心分離（８００×ｇ，５分間）し、平底プレート（ポリスチレン）内で２５μＬの上清を１００μＬの脱イオン水に加えた。遊離ヘモグロビン量を測定するために、４１４ｎｍでの吸収を記録した。化合物（６）、（１０）、（１２）および（２０）の溶血およびＲ１基（ｅ）を有する化合物（２４）の溶血を、比較化合物ＢおよびＣと比較した。全ての新規化合物は３２μｇ／ｍＬと同程度の高い濃度で１５％未満の溶血レベルを示した。比較化合物ＢおよびＣは３２μｇ／ｍＬで無視できる溶血を示した。化合物（２０）は最も高い試験濃度（６４μｇ／ｍＬ）まで検出できる溶血を全く示さなかったが、これは溶血を防ぐための、Ｌｙｓ１２の正電荷の好ましいマスキングを示している。
【００７９】
実施例６．エンテロコッカス・フェシウムを用いたバイオスクリーン生育アッセイ
エンテロコッカス・フェシウムの生育に対する化合物（６）、（１０）、（１２）および（２０）の効果およびＲ１基（ｅ）を有する化合物（２４）、または比較化合物Ｂ（ナイシン）の効果（各化合物は固定濃度５μＭで投与した）を観察するために、ＢｉｏＳｃｒｅｅｎ  Ｃ装置（Ｏｙ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｃｕｒｖｅｓ  ＡＢ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ）を使用した。エンテロコッカス・フェシウム株を０．０５の初期ＯＤ６６０で、１％ＤＭＳＯおよび１％グルコースを含む３００μｌのＴＳＢまたは抗生物質化合物を５μＭの最終濃度で含む同一の培地に接種した。培養液を連続的に振盪しながらＢｉｏＳｃｒｅｅｎ  Ｃ系中３７℃でインキュベートし、生育／阻害効果を決定するために６００ｎｍでの吸収（Ａ６００）を１５分ごとに、１５時間記録した。
【００８０】
これらの実験で使用されるエンテロコッカス・フェシウム株は、エンテロコッカス・フェシウムＥ７４５（バンコマイシン−アンピシリン耐性院内集団感染株）、エンテロコッカス・フェシウムＥ９８０（バンコマイシン−アンピシリン感受性ヒト共生単離株）、エンテロコッカス・フェシウムＥ１１３３（バンコマイシン−アンピシリン耐性院内集団感染株）、およびエンテロコッカス・フェシウムＥ１１６２（バンコマイシン感受性アンピシリン耐性院内単離株）。各株のＢｉｏＳｃｒｅｅｎ生育アッセイは化合物（６）、（１０）、（１２）およびまたＲ１基（ｅ）を有する化合物（２４）だけでなくナイシン（比較化合物Ｂ）についても決定され、非処理株と比較し、結果を以下の表９〜１２に示す。
【表９】
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【００８１】
【表１０】
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【００８２】
【表１１】
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【００８３】
【表１２】
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【００８４】
結論は、本発明に従い産生および製造された全ての化合物ならびにナイシンは、全ての試験されたエンテロコッカス・フェシウム株の生育の遅延だけでなく阻害も示したということである。化合物（６）および（１０）ならびにまたＲ１基（ｅ）を有する式（２４）の化合物、および特に化合物（１２）は極めて高い生育阻害作用を示した。
【国際調査報告】
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