(57)【要約】  式(I)の化合物及び当該化合物を含む組成物でウイルス感染症を治療する方法を開示する。2018535993.tif 000090
2018535993.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式I:
【化１】
2018535993.tif 000088
[式中:
Xは、O又はCH2であり;
R1は、C1〜6アルキルであり、前記アルキルは、シクロアルキル部分を含有してもよく;
Wは、-CH=CH-、-C≡C-、C1〜3アルキレン、-CH2C(O)NH-、-NHC(O)-、-N(CH3)C(O)-、-N(CH3)C(O)CH2-、-C(O)-、-CH2C(O)-、又は-NHC(O)CH2-であり、各Wは、1個又は2個のメチル基により場合により置換されており;
R2は、H、C1〜6アルキル、C5〜14アリール、C3〜7シクロアルキル、C3〜7シクロアルケニル、C3〜9ヘテロ環、又はC5〜9ヘテロアリールであり、各R2基は、ハロ、C1〜6アルキル、C1〜6ヘテロアルキル、又はC1〜6アルキレン若しくはC1〜6ヘテロアルキレンから選択される1〜4個の置換基により場合により置換されており、前記C1〜6アルキレン又はC1〜6ヘテロアルキレンは、前記C5〜14アリール、C3〜7シクロアルキル、C3〜7シクロアルケニル、C3〜9ヘテロ環、又はC5〜9ヘテロアリール上で隣接する炭素原子に結合して縮合環を形成しており;
Lは、結合、-CH2(CO)-、-C1〜3アルキレン-、-SO2-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NH)-、-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)N-、-C(O)OCH2-、-C(O)O-、-C(O)C(O)-、-SO2-NH-、又は-CH2C(O)-であり;
R3は、H、CN、C1〜6アルキル、C5〜14アリール、CH2C5〜14アリール、CH2C3〜7シクロアルキル、C3〜7シクロアルキル、C3〜7スピロシクロアルキル、C3〜7シクロアルケニル、C3〜9ヘテロ環、若しくはC5〜9ヘテロアリール、オキソであるか、又はR3は、1個のR6と共に結び付いて縮合5〜7員環を形成してもよく、各R3基は、ハロ、オキソ、C1〜6アルキル、C3〜7シクロアルキル、C1〜3フルオロアルキル、-OC1〜6アルキル、-C(O)R4、-C(O)NR4、-C(O)NHR4、C5〜14アリール、C1〜6ヘテロアルキル、-B(OH)2、C3〜9ヘテロ環、C5〜9ヘテロアリール、-C(O)OC1〜6アルキルから選択される1〜4個の置換基により場合により置換されているか、又は2個の置換基は、共に結合して縮合環、スピロ環、若しくは架橋環を形成してもよく、その縮合環、スピロ環、若しくは架橋環は、R4で場合により置換されていてもよく;
R4は、CN、ハロ、-OC1〜6アルキル、C1〜6アルキル、C3〜7シクロアルキル、C3〜9ヘテロ環、又はC5〜14アリールであり;
各R5は、独立して、H、C1〜3アルキル、C3〜6シクロアルキル、CH2F、CHF2、又はCF3であり;
各R6は、独立して、H、又はC1〜3アルキル、C5〜14アリール、C3〜9ヘテロ環、C5〜9ヘテロアリール、-C(O)NR4、若しくは-C(O)NHR4であるか、又は両方のR6は共に、2〜4個の炭素原子を含み、共に結び付いて架橋環系を形成してもよく;
各ヘテロ環、ヘテロアリール、ヘテロアルキル及びヘテロアルキレンは、S、N、B、又はOから選択される1〜3個のヘテロ原子を含む]
の化合物。
【請求項２】
R1がC1〜6アルキルである、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
XがOである、請求項1又は2に記載の化合物。
【請求項４】
各R6がHである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項５】
R2が、場合により置換されたフェニルである、請求項1〜4のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項６】
R2が、フッ素、メチル、-CH2CH2CH2O-(前記-CH2CH2CH2O-は、前記フェニル上で隣接する炭素原子と結合して二環式環を形成する)、又は-NHCH2CH2O-(前記-NHCH2CH2O-は、前記フェニル上で隣接する炭素原子と結合して二環式環を形成する)から選択される1〜4個の置換基により置換されたフェニルである、請求項5に記載の化合物。
【請求項７】
R3が、C1〜6アルキル、フェニル、ナフチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ピリジル、又はテトラヒドロピラニルであり、これらはそれぞれハロゲン、C1〜6アルキル、-OC1〜6アルキル、C1〜3フルオロアルキル又はフェニルから選択される1〜3個の置換基により場合により置換されている、請求項1〜6のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項８】
各R5がメチルである、請求項1〜7のいずれか1項に記載の化合物。
【請求項９】
XR1が結合している炭素の立体化学が、以下に示す通りである、請求項1〜8のいずれか1項に記載の化合物。
【化２】
2018535993.tif 000089
【請求項１０】
請求項1〜9のいずれか1項に記載の化合物の薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
請求項1〜10のいずれか1項に記載の化合物又は塩を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
ウイルスのレトロウイルス科に属するウイルスによって少なくとも部分的に媒介された患者のウイルス感染症を治療する方法であって、前記患者に請求項11に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項１３】
前記ウイルス感染症が、HIVウイルスによって媒介される、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
薬物療法に使用するための、請求項1〜10のいずれか1項に定義される化合物又は塩。
【請求項１５】
ヒトにおけるウイルス感染症の治療に使用するための、請求項1〜10のいずれか1項に定義される化合物又は塩。
【請求項１６】
ヒトにおけるウイルス感染症の治療に使用するための医薬品の製造における、請求項1〜10のいずれか1項に定義される化合物又は塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、置換されたイソインドリン化合物、医薬組成物、及びこのような化合物を投与することにより、(i)HIVに感染した対象におけるHIV複製を阻害するか、又は(ii)HIVに感染した対象を治療するための、それらの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト免疫不全ウイルス1型(HIV-1)は、後天性免疫不全疾患(AIDS)の罹患をもたらす。HIVの症例数は増加し続け、現在、世界で2500万人以上が当該ウイルスに罹患している。今日、抗レトロウイルス薬によるウイルス複製の長期的な抑制が、HIV-1感染症の治療のための唯一の選択肢である。確かに、米国食品医薬品局は、6つの異なる阻害剤クラスに亘る25種類の薬物を承認し、この承認によって患者の生存及びQOLをかなり向上させた。しかし、望ましくない薬物間相互作用、薬物-食物相互作用、治療に対するノンアドヒアランス、及び酵素標的の変異による薬物耐性により、追加の治療が依然として必要とされている。
【０００３】
現在、ほとんど全てのHIV陽性患者が高活性抗レトロウイルス剤療法(「HAART」)と呼ばれる抗レトロウイルス薬の併用の治療方式で治療を受けている。しかし、HAART療法は、薬物耐性HIV-1変異株の急速な出現を避けるために、異なる薬物の組み合わせを患者に毎日投与しなければならないことが多いため、複雑になることが多い。HAARTが患者の生存に良い影響を与えるにもかかわらず、薬物耐性が依然として発生する可能性がある。多剤耐性HIV-1分離株の出現は、深刻な臨床結果を示し、サルベージ療法として知られている薬物による新治療方式で抑制しなければならない。
【０００４】
現在のガイドラインでは、サルベージ療法に少なくとも2つ、好ましくは3つの十分に活性な薬物を含めることを推奨している。典型的には、第一選択治療は、ウイルス逆転写酵素及びプロテアーゼを標的とする3〜4つの薬物を組み合わせる。サルベージ療法の1つの選択肢は、耐性分離株に対して活性を維持している、同じ機序的クラスからの異なる組み合わせの薬物を投与することである。しかし、耐性変異が同じクラスの異なる薬物に広範な交差耐性を頻繁に与えるために、サルベージ療法のアプローチの選択肢が限定的であることが多い。最近、代替治療戦略が融合、侵入及びインテグラーゼ阻害剤の開発で利用可能になってきている。しかし、3つの新薬クラス全てに対する耐性が、検査室と患者の両方で、既に報告されている。したがって、抗レトロウイルス薬によるHIV-1感染患者の持続的な好成績の治療には、新しい標的及び作用機序を有する新しい改良された薬物の継続的な開発が必要とされる。
【０００５】
例えば、過去10年間に亘るHIV阻害剤は、HIV-1インテグラーゼと水晶体上皮細胞由来増殖因子/p75(「LEDGF」)とのタンパク質間相互作用を標的とすることが報告されている。LEDGFは、組込み前複合体をクロマチンに繋ぎ止めることによって、逆転写ウイルスcDNAを宿主細胞のゲノムにウイルスで組み込むことを促進する、HIV-1インテグラーゼの細胞転写補助因子である。HIV複製の初期段階における決定的に重要な役割のために、LEDGFとインテグラーゼとの相互作用はHIV薬物治療の別の魅力的な標的でもある。
【０００６】
米国仮特許出願第62/027,359号は、以下の式:
【０００７】
【化１】
2018535993.tif 000003
を有する特定のイソインドリン化合物を開示している。
【発明の概要】
【０００８】
手短に言えば、一態様において、本発明は、式I:
【０００９】
【化２】
2018535993.tif 000004
[式中:
Xは、O又はCH2であり;
R1は、C1〜6アルキルであり、前記アルキルは、シクロアルキル部分を含有してもよく;
Wは、-CH=CH-、-C≡C-、C1〜3アルキレン、-CH2C(O)NH-、-NHC(O)-、-N(CH3)C(O)-、-N(CH3)C(O)CH2-、-C(O)-、-CH2C(O)-、又は-NHC(O)CH2-であり、各Wは、1個又は2個のメチル基により場合により置換されており;
R2は、H、C1〜6アルキル、C5〜14アリール、C3〜7シクロアルキル、C3〜7シクロアルケニル、C3〜9ヘテロ環、又はC5〜9ヘテロアリールであり、各R2基は、ハロ、C1〜6アルキル、C1〜6ヘテロアルキル、又はC1〜6アルキレン若しくはC1〜6ヘテロアルキレンから選択される1〜4個の置換基により場合により置換されており、前記C1〜6アルキレン又はC1〜6ヘテロアルキレンは、前記C5〜14アリール、C3〜7シクロアルキル、C3〜7シクロアルケニル、C3〜9ヘテロ環、又はC5〜9ヘテロアリール上で隣接する炭素原子に結合して縮合環を形成しており;
Lは、結合、-CH2(CO)-、-C1〜3アルキレン-、-SO2-、-C(O)-、-C(S)-、-C(NH)-、-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-C(O)N-、-C(O)OCH2-、-C(O)O-、-C(O)C(O)-、-SO2-NH-、又は-CH2C(O)-であり;
R3は、H、CN、オキソ、C1〜6アルキル、C5〜14アリール、CH2C5〜14アリール、CH2C3〜7シクロアルキル、C3〜7シクロアルキル、C3〜7スピロシクロアルキル、C3〜7シクロアルケニル、C3〜9ヘテロ環、若しくはC5〜9ヘテロアリールであるか、又はR3は、1個のR6と共に結び付いて縮合5〜7員環を形成してもよく、各R3基は、ハロ、オキソ、C1〜6アルキル、C3〜7シクロアルキル、C1〜3フルオロアルキル、-OC1〜6アルキル、-C(O)R4、-C(O)NR4、-C(O)NHR4、C5〜14アリール、C1〜6ヘテロアルキル、-B(OH)2、C3〜9ヘテロ環、C5〜9ヘテロアリール、-C(O)OC1〜6アルキルから選択される1〜4個の置換基により場合により置換されているか、又は2個の置換基は、共に結合して縮合環、スピロ環、若しくは架橋環を形成してもよく、その縮合環、スピロ環、若しくは架橋環は、R4で場合により置換されていてもよく;
R4は、CN、ハロ、-OC1〜6アルキル、C1〜6アルキル、C3〜7シクロアルキル、C3〜9ヘテロ環、又はC5〜14アリールであり;
各R5は、独立して、H、C1〜3アルキル、C3〜6シクロアルキル、CH2F、CHF2、又はCF3であり;
各R6は、独立して、H、又はC1〜3アルキル、C5〜14アリール、C3〜9ヘテロ環、C5〜9ヘテロアリール、-C(O)NR4、若しくは-C(O)NHR4であるか、又は両方のR6は共に、2〜4個の炭素原子を含み、共に結び付いて架橋環系を形成してもよく;
各ヘテロ環、ヘテロアリール、ヘテロアルキル、及びヘテロアルキレンは、S、N、B、又はOから選択される1〜3個のヘテロ原子を含む]
の化合物を開示する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、式Iの化合物の薬学的に許容される塩を開示する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、式Iの化合物又はその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を開示する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、ウイルスのレトロウイルス(retrovirus)科に属するウイルスによって少なくとも部分的に媒介された患者のウイルス感染症を治療する方法であって、式Iの化合物又はその薬学的に許容される塩を含む組成物を当該患者に投与することを含む、方法を開示する。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症はHIVウイルスによって媒介される。
【００１３】
別の態様では、本発明の特定の実施形態は、HIVに感染した対象を治療する方法であって、治療有効量の式Iの化合物又はその薬学的に許容される塩を当該対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００１４】
さらに別の態様では、本発明の特定の実施形態はHIVに感染するリスクのある対象のHIV感染の進行を阻害する方法であって、治療有効量の式Iの化合物又はその薬学的に許容される塩を当該対象に投与することを含む、方法を提供する。これら及びその他の実施形態は以下にさらに記述する。
【００１５】
本発明の別の実施形態に従って、ウイルスのレトロウイルス科に属するウイルスによって少なくとも部分的に媒介された、哺乳動物のウイルス感染症を予防又は治療する方法を提供し、当該方法は、前記ウイルス感染症と診断された、又は前記ウイルス感染症を発現するリスクのある哺乳動物に、式Iに定義される化合物を投与することを含み、前記ウイルスはHIVウイルスであり、さらに、HIVウイルスに対して活性の治療有効量の1つ以上の薬剤を投与することを含み、HIVウイルスに対して活性の前記薬剤はヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、侵入、結合及び融合阻害剤、インテグラーゼ阻害剤、成熟阻害剤、CXCR4阻害剤、及びCCR5阻害剤から成る群から選択される。
【００１６】
［発明の詳細な説明］
好ましくは、R1は、C1〜6アルキルである。最も好ましくは、R1は、t-ブチルである。
【００１７】
好ましくは、Xは、Oである。
【００１８】
好ましくは、R2は、場合により置換されたフェニルである。最も好ましくは、R2は、フッ素、メチル、-CH2CH2CH2O-(前記-CH2CH2CH2O-は、前記フェニル上で隣接する炭素原子と結合して二環式環を形成する)、又は-NHCH2CH2O-(前記-NHCH2CH2O-は、前記フェニル上で隣接する炭素原子と結合して二環式環を形成する)から選択される1〜4個の置換基により置換されたフェニルである。
【００１９】
好ましくは、R3は、C1〜6アルキル、フェニル、ナフチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ピリジル、又はテトラヒドロピラニルであり、これらはそれぞれハロゲン、C1〜6アルキル、-OC1〜6アルキル、C1〜3フルオロアルキル又はフェニルから選択される1〜3個の置換基により場合により置換されている。
【００２０】
好ましくは、各R5は、メチルである。
【００２１】
好ましくは、各R6は、Hである。
【００２２】
好ましくは、XR1が結合している炭素の立体化学は、以下に示す通りである。
【００２３】
【化３】
2018535993.tif 000005
【００２４】
「薬学的に許容される塩」は、当該技術分野で周知の様々な有機及び無機対イオンから生じる薬学的に許容される塩を指し、例に過ぎないが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、及びテトラアルキルアンモニウムを含み、分子が塩基性官能基を有する場合は、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、及びシュウ酸塩等の有機酸又は無機酸の塩を含む。適切な塩として、P.Heinrich Stahl、Camille G.Wermuth(Eds.)、Handbook of Pharmaceutical Salts Properties,Selection,and Use;2002年に記載の塩が挙げられる。
【００２５】
[実施例]
本発明の化合物は、周知の標準的な合成方法を含む様々な方法によって作製することができる。例示的な一般合成方法を以下に示し、次いで本発明の特定の化合物を実施例で調製する。
【００２６】
以下の実施例は、上記の本発明の製造及び使用方法をより完全に説明するものである。これらの実施例は、本発明の真の範囲を限定するものでは決してなく、例証の目的のために提示されたものであることが理解される。以下の実施例及び上記の合成スキームにおいて、下記の略語は下記の意味を有する。略語が定義されていない場合は、略語はその一般に容認されている意味を有する。
aq.=水溶液
μL=マイクロリットル
μM=マイクロモル
NMR=核磁気共鳴
boc=tert-ブトキシカルボニル
br=広域
Cbz=ベンジルオキシカルボニル
d=二重線
δ=化学シフト
℃=摂氏度
DCM=ジクロロメタン
dd=二重線の二重線
DMEM=ダルベッコ変法イーグル培地
DMF=N,N-ジメチルホルムアミド
DMSO=ジメチルスルホキシド
EtOAc=酢酸エチル
g=グラム
h又はhr=時間
HCV=C型肝炎ウイルス
HPLC=高速液体クロマトグラフィー
Hz=ヘルツ
IU=国際単位
IC50=50%阻害の阻害濃度
J=結合定数(別段の定めがない限り、Hzで示される)
m=多重線
M=モーラー
M+H+=親マススペクトルピーク+H+
mg=ミリグラム
min=分
mL=ミリリットル
mM=ミリモーラー
mmol=ミリモル
MS=マススペクトル
nm=ナノモーラー
ppm=百万分率
q.s.=十分量
s=一重線
RT=室温
sat.=飽和
t=三重線
TFA=トリフルオロ酢酸
Z=ベンジルオキシカルボニル
【００２７】
【化４】
2018535993.tif 000006
【００２８】
[実施例1]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(フェニルエチニル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００２９】
【化５】
2018535993.tif 000007
【００３０】
ベンジルジ(ブタ-2-イン-1-イル)カルバメート
【００３１】
【化６】
2018535993.tif 000008
DMF(3.5L)中の1-ブロモブタ-2-イン(581g、2.2当量)の氷冷溶液に、NaH(60%、199g、2.5当量)を注意深く添加し、混合物を0℃、N2雰囲気下で15分間撹拌した。次に、DMF(500mL)中のベンジルカルバメート(300g、1.985mol、1当量)の溶液を、0℃で1時間滴下添加し、得られた混合物を周囲温度になるまで2時間置いておいた。H2Oを用いて注意してクエンチした後、反応物をエーテル(2回)で抽出した。有機層をH2O(3回)、ブラインで洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン中0〜5%EtOAc)により精製し、標題化合物を得た(398g、79%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.41 - 7.27 (m, 5H), 5.17 (s, 2H), 4.18 (s, 4H), 1.81 (t, J = 2.3 Hz, 6H). LC-MS (ESI+): m/z (M+H) =256.3
【００３２】
工程1:エチル2-ヒドロキシ-4-(トリメチルシリル)ブタ-3-イノエート。
【００３３】
【化７】
2018535993.tif 000009
0℃の無水THF(2.5L)中のTMS-アセチレン(250g、2.55mol)の溶液に、内部温度を5℃未満に維持しながら、N2雰囲気下で3MのEtMgBr/エーテル(933mL、2.80mol)を滴下添加した。0℃で30分間の撹拌後、懸濁液を、無水THF(5L)中の50%グリオキシル酸エチル/トルエン(624g、3.05mol)の氷冷溶液に、カニューレを介して添加した。0℃で1時間の撹拌後、混合物を、飽和NH4Cl水溶液(3L)でクエンチし、EtOAc(1Lで2回)で抽出した。合わせたEtOAc溶液を、減圧下で濃縮した。残渣をEtOAc(3L)で希釈した。溶液を水(1Lで2回)及びブライン(1Lで2回)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製物質を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、0〜10%EtOAc/石油エーテル)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(285g、56%)。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 4.83 (d, J=7.3 Hz, 1H), 4.34 (qq, J=7.2, 10.8 Hz, 2H), 3.02 (d, J=7.3 Hz, 1H), 1.34 (t, J=7.2 Hz, 3H), 0.22 - 0.16 (m, 9H).
【００３４】
工程2:エチル2-アセトキシ-4-(トリメチルシリル)ブタ-3-イノエート
【００３５】
【化８】
2018535993.tif 000010
10LフラスコにEtOAc(7.5L)を入れ、続いてAc2O(400mL)を入れた。室温で30分間の撹拌後、混合物を0℃まで冷却し、さらなる分量のAc2O(2.1L)で処理した。0℃で1時間後、溶液を室温になるまで置いておいた。溶液に、エチル2-ヒドロキシ-4-(トリメチルシリル)ブタ-3-イノエート(520g、2.60mol)を添加した。室温で1時間の撹拌後、溶液を、1NのNaOH水溶液(3回、合計20L)で洗浄した。次に、溶液をブライン(5L)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、減圧下で濃縮乾固した。粗生成物を、フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、0〜5%EtOAc/石油エーテル)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(590g、94%)。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 5.69 (s, 1H), 4.36 - 4.21 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.32 (t, J=7.2 Hz, 3H), 0.25 - 0.15 (m, 9H).
【００３６】
工程3:(S)-エチル2-ヒドロキシ-4-(トリメチルシリル)ブタ-3-イノエート
【００３７】
【化９】
2018535993.tif 000011
アセトン(1.88L)及びリン酸緩衝液(pH7.2、7.5L)中のエチル2-アセトキシ-4-(トリメチルシリル)ブタ-3-イノエート(150g、0.620mol)の溶液に、Amano Lipase PS(75g)を添加した。20℃で終夜撹拌後、反応混合物を水(2.5L)で希釈し、EtOAc(3L)で抽出した。層を分離させ、有機層をブライン(3回、合計体積10L)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、0〜10%EtOAc/石油エーテル)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(55g、44%)。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 4.83 (d, J=7.3 Hz, 1H), 4.34 (qq, J=7.2, 10.8 Hz, 2H), 3.02 (d, J=7.3 Hz, 1H), 1.34 (t, J=7.2 Hz, 3H), 0.22 - 0.16 (m, 9H).
【００３８】
工程4:(S)-エチル2-(tert-ブトキシ)-4-(トリメチルシリル)ブタ-3-イノエート
【００３９】
【化１０】
2018535993.tif 000012
t-BuOAc(2.5L)中の(S)-エチル2-ヒドロキシ-4-(トリメチルシリル)ブタ-3-イノエート(100g、0.500mol)の溶液に、HClO4(41mL、0.500mol)を室温で滴下添加した。40分間の撹拌後、混合物をNaHCO3粉末でクエンチし、水(2L)で希釈し、EtOAc(2L)で抽出した。EtOAc溶液をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物を得た。この物質をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、0〜5%EtOAc/石油エーテル)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(103g、81%)。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 4.72 (s, 1H), 4.33 - 4.20 (m, 2H), 1.31 (t, J=7.2 Hz, 3H), 1.28 (s, 9H), 0.17 (s, 9H).
【００４０】
工程5:(S)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(トリメチルシリル)イソインドリン-2-カルボキシレート
【００４１】
【化１１】
2018535993.tif 000013
DCM(50mL)中の[Rh(cod)2]BF4(5g、12.313mmol、6.3%当量)及び(R)-BINAP(7.67g、6.3%当量)の混合物を、溶液が暗色に変化するまで、周囲温度、H2雰囲気下で6時間撹拌した。この混合物にN2を充填し、DCM(100mL)中の(S)-エチル2-tert-ブトキシ-4-(トリメチルシリル)ブタ-3-イノエート(50g、195mmol、1当量)の溶液を添加した。混合物を40℃に加熱した。DCM(400mL)中のベンジルジ(ブタ-2-イン-1-イル)カルバメート(100g、390mmol、2当量)の溶液を、上述の混合物に、N2雰囲気下で3時間滴下添加し、得られた混合物を、40℃で0.5時間撹拌し続けた。濃縮乾固した後、残渣を、カラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン中0〜15%EtOAc)により精製し、標題化合物を得た(69g、69%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.37 (ddd, J = 14.0, 9.2, 6.6 Hz, 5H), 5.60 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.74 - 4.61 (m, 4H), 4.24 (dd, J = 10.8, 7.1 Hz, 1H), 4.10 (s, 1H), 2.33 (d, J = 12.9 Hz, 3H), 2.21 (d, J = 10.6 Hz, 3H), 1.22 (td, J = 7.1, 1.1 Hz, 3H), 1.16 (s, 9H), 0.48 (s, 9H). LC-MS (ESI+): m/z (M+H) = 512.2
【００４２】
工程6:(S)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ヨード-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート
【００４３】
【化１２】
2018535993.tif 000014
氷冷してよく撹拌した、DCM(450mL)中の(S)-ベンジル5-(1-tert-ブトキシ-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(トリメチルシリル)イソインドリン-2-カルボキシレート(90g、175.9mmol、1当量)及び重炭酸ナトリウム(296g、20当量)の懸濁液に、DCM中のヨウ素一塩化物の溶液(1M、194mL、1.1当量)を、0℃、N2雰囲気下で添加した。得られた混合物を0℃で0.5時間撹拌した。飽和チオ硫酸ナトリウムでクエンチした後、反応混合物をEtOAc(1.5L)で抽出し、有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、ヘキサン中0〜15%EtOAc)により精製し、標題化合物を得た(74g、74%)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.45 - 7.29 (m, 5H), 5.87 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.69 (dd, J = 27.0, 15.3 Hz, 4H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 2.36 (d, J = 12.2 Hz, 3H), 2.29 (d, J = 10.7 Hz, 3H), 1.25 - 1.17 (m, 12H). LC-MS (ESI+): m/z (M+H) = 566.1
【００４４】
工程7:ベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(フェニルエチニル)イソインドリン-2-カルボキシレート
【００４５】
【化１３】
2018535993.tif 000015
TEA(3mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ヨード-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(200mg、0.35mmol)、エチニルベンゼン(145mg、1.41mmol)、Pd(dppf)Cl2(37.2mg、0.053mmol)及びCuI(20.2mg、0.106mmol)の混合物を、60℃、N2雰囲気下で終夜撹拌した。得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層を、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜20%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(35mg、18%収率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.58 - 7.50 (m, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 8H), 6.06 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.71 (d, J = 15.0 Hz, 4H), 4.22 - 4.08 (m, 2H), 2.41 (d, J = 11.6 Hz, 3H), 2.28 (d, J = 10.4 Hz, 3H), 1.25 (d, J = 1.2 Hz, 9H), 1.18 (td, J = 7.1, 2.1 Hz, 3H). LC/MS (m/z) ES+ = 540.6 (M+1).
【００４６】
工程8:(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(4,7-ジメチル-6-(フェニルエチニル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００４７】
【化１４】
2018535993.tif 000016
EtOH(0.8mL)及びH2O(0.4mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(フェニルエチニル)イソインドリン-2-カルボキシレート(35mg、0.065mmol)及びNaOH(78mg、1.95mmol)の混合物を、100℃で撹拌した。2時間後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、1N HClで酸性化し、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を黄色油状物として得て(25mg、定量的収率)、これはさらに精製することなく次の工程で使用した。LC/MS(m/z)ES+=378.4(M+1)。
【００４８】
工程9:(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(フェニルエチニル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００４９】
【化１５】
2018535993.tif 000017
EtOAc(2mL)中の(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(4,7-ジメチル-6-(フェニルエチニル)イソインドリン-5-イル)酢酸(19mg、0.05mmol)及び3-フルオロ安息香酸(14mg、0.1mmol)の溶液に、プロパンホスホン酸無水物(80mg、0.126mmol、50%EtOAc溶液)及びEt3N(15mg、0.15mmol)を添加した。1時間後、反応混合物を、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、粗生成物が得られ、これを逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の50〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を、凍結乾燥後に黄色粉末として得た(4.1mg、16%収率)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.29 (br, 1H), 7.49 (m, 9H), 5.87 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.83 (m, 4H), 2.28 (m, 6H), 1.18 (d, J = 7.1 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 500.7 (M+1).
【００５０】
[実施例2]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-エチニル-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【００５１】
【化１６】
2018535993.tif 000018
標題化合物を、工程7においてTMS-アセチレンを使用することを除いて、実施例1と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.47 (br, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.46 (m, 2H), 7.35 (m, 1H), 5.81 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.76 (m, 5H), 2.21 (m, 6H), 1.15 (d, J = 7.0 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 424.5 (M+1).
【００５２】
【化１７】
2018535993.tif 000019
【００５３】
[実施例3]
(S)-2-(6-ベンジル-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)-2-(tert-ブトキシ)酢酸
【００５４】
【化１８】
2018535993.tif 000020
【００５５】
工程1.(S)-ベンジル5-ベンジル-6-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート
【００５６】
【化１９】
2018535993.tif 000021
THF(1mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ヨード-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(135mg、0.24mmol)、Pd(PPh3)4(56mg、0.0478mmol)の氷冷溶液に、ベンジル亜鉛(II)臭化物(1M、0.48mL、0.48mmol)を添加し、反応混合物を65℃に加熱した。1時間後、反応混合物を、飽和NH4Cl水溶液の添加でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜30%EtOAc)により精製し、標題化合物を褐色油状物として得た(122mg、97%収率)。LC/MS(m/z)ES+=530.7(M+1)。
【００５７】
工程2:(S)-2-(6-ベンジル-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)-2-(tert-ブトキシ)酢酸
【００５８】
【化２０】
2018535993.tif 000022
EtOH(2mL)及びH2O(1mL)中のベンジル(S)-5-ベンジル-6-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(115mg、0.16mmol)及びNaOH(193mg、4.8mmol)の混合物を、100℃、N2雰囲気下で撹拌した。2時間後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、得られた混合物を1N HClで酸性化し、DCM/i-PrOH(85:15)で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を黄色油状物として得て(80mg、定量的収率)、これはさらに精製することなく次の工程で使用した。LC/MS(m/z)ES+=368.5(M+1)。
【００５９】
工程3:(S)-2-(6-ベンジル-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)-2-(tert-ブトキシ)酢酸
DCM(4mL)及びEtOAc(2mL)中の(S)-2-(6-ベンジル-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)-2-(tert-ブトキシ)酢酸(80mg、0.218mmol)及び3-フルオロ安息香酸(61mg、0.435mmol)の溶液に、プロパンホスホン酸無水物(346mg、0.544mmol、50%EtOAc溶液)及びEt3N(66mg、0.653mmol)を添加した。1時間後、反応混合物を、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の50〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(21mg、20%収率)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.40 (br, 1H), 7.51 (m, 3H), 7.34 (m, 1H), 7.12 (m, 5H), 5.33 (s, 1H), 4.80 (dd, J = 33.3, 22.2 Hz, 4H), 4.20 (m, 2H), 2.31 (d, J = 66.6 Hz, 3H), 1.83 (d, J = 64.5 Hz, 3H), 0.92 (s, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 490.6 (M+1).
【００６０】
【化２１】
2018535993.tif 000023
【００６１】
[実施例4]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(ピペリジン-1-イル)エチル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００６２】
【化２２】
2018535993.tif 000024
【００６３】
工程1:(S)-ベンジル5-アリル-6-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート
【００６４】
【化２３】
2018535993.tif 000025
DMF中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ヨード-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(1g、1.77mmol)、2-アリル-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン(386mg、2.3mmol)、Pd2(dba)3(324mg、0.35mmol)、PCy3(99mg、0.35mmol)及びK3PO4(1.1g、5.3mmol)の混合物を、80℃で撹拌した。18時間後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層を、ブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して粗生成物を得て、これをISCO(シリカゲル、PE中0〜20%EtOAc)により精製し、標題化合物を無色油状物として得た(680mg、80%収率)。LC/MS(m/z)ES+=480.6(M+1)。
【００６５】
工程2:(S)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソエチル)イソインドリン-2-カルボキシレート
【００６６】
【化２４】
2018535993.tif 000026
THF(8mL)及びH2O(4mL)中のベンジル(S)-5-アリル-6-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(680mg、1.4mmol)の溶液に、NaIO4(1.2g、5.7mmol)及びK2Os2O4(80mg、0.21mmol)を添加した。18時間後、反応混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層を、飽和Na2S2O3水溶液及びブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲル(シリカゲル、PE中0〜30%EtOAc)で精製し、標題化合物を無色油状物として得た(300mg、44%収率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.72 (s, 1H), 7.47 - 7.30 (m, 5H), 5.44 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.81 - 4.67 (m, 4H), 4.43 (dd, J = 18.0, 3.0 Hz, 1H), 4.22 - 4.13 (m, 1H), 4.07 - 3.97 (m, 1H), 3.87 (dd, J = 18.1, 4.1 Hz, 1H), 2.36 (d, J = 11.7 Hz, 3H), 2.04 (d, J = 12.5 Hz, 3H), 1.23 - 1.15 (m, 12H). LC/MS (m/z) ES+ = 482.4 (M+1).
【００６７】
工程3:(S)-2-(2-((ベンジルオキシ)カルボニル)-6-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【００６８】
【化２５】
2018535993.tif 000027
イソブテン(4mL)、THF(2mL)、t-BuOH(2mL)及びH2O(2mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソエチル)イソインドリン-2-カルボキシレート(300mg、0.62mmol)、NaClO2(449mg、4.96mmol)、NaH2PO4(446mg、3.7mmol)の混合物を、周囲温度で撹拌した。2時間後、反応混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層を、飽和Na2S2O3水溶液及びブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM中0〜10%MeOH)により精製し、標題化合物を無色油状物として得た(120mg、39%収率)。LC/MS(m/z)ES+=498.4(M+1)。
【００６９】
工程4:(S)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(ピペリジン-1-イル)エチル)イソインドリン-2-カルボキシレート
【００７０】
【化２６】
2018535993.tif 000028
DMF(2mL)中の(S)-2-(2-((ベンジルオキシ)カルボニル)-6-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸(50mg、0.1mmol)、ピペリジン(10mg、0.12mmol)、HBTU(59mg、0.15mmol)及びDIPEA(0.5mL)の混合物を、周囲温度で撹拌した。1時間後、得られた混合物を、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜30%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(40mg、70%収率)。LC/MS(m/z)ES+=565.7(M+1)。
【００７１】
工程5:(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(ピペリジン-1-イル)エチル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００７２】
【化２７】
2018535993.tif 000029
MeOH(4mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(ピペリジン-1-イル)エチル)イソインドリン-2-カルボキシレート(43mg、0.08mmol)及び10%Pd/C(43mg)の混合物を、H2雰囲気下(1気圧)で水素化した。1時間後、反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、残渣を減圧下で濃縮し、粗製の標題生成物を褐色油状物として得て(35mg、定量的収率)、これはさらに精製することなく次の工程で使用した。LC/MS(m/z)ES+=431.4(M+1)。
【００７３】
工程6:エチル(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(ピペリジン-1-イル)エチル)イソインドリン-5-イル)アセテート
【００７４】
【化２８】
2018535993.tif 000030
EtOAc(3mL)中の(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(ピペリジン-1-イル)エチル)イソインドリン-5-イル)酢酸(35mg、0.08mmol、前工程からの粗生成物)及び3-フルオロ安息香酸(25mg、0.16mmol)の溶液に、プロパンホスホン酸無水物(141mg、0.2mmol、50%EtOAc溶液)及びEt3N(0.1、0.49mmol)を添加した。1時間後、反応混合物を、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層を、半飽和クエン酸水溶液及びブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜30%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(22mg、50%収率)。LC/MS(m/z)ES+=553.8(M+1)。
【００７５】
工程7:(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(ピペリジン-1-イル)エチル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００７６】
【化２９】
2018535993.tif 000031
LiOH(0.24mL、2.5N)及びジオキサン(1.5mL)中のエチル(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(ピペリジン-1-イル)エチル)イソインドリン-5-イル)アセテート(22mg、0.04mmol)の混合物を、80℃で撹拌した。18時間後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、EtOAcで希釈し、1N HClで洗浄した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の40〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(9mg、44%収率)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.61 (br, 1H), 7.58 - 7.31 (m, 4H), 5.25 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 4.78 (dd, J = 35.2, 11.6 Hz, 4H), 3.69 - 3.37 (m, 6H), 2.27 (d, J = 66.5 Hz, 3H), 1.92 (d, J = 64.8 Hz, 3H), 1.66 - 1.37 (m, 6H), 1.06 (d, J = 6.9 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 525.6 (M+1).
【００７７】
実施例5〜7を、実施例4に記載の手順と同様に調製した。
【００７８】
[実施例5]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-(シクロヘキシルアミノ)-2-オキソエチル)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【００７９】
【化３０】
2018535993.tif 000032
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.29 (br, 1H), 7.54 (dd, J = 13.7, 8.0 Hz, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.35 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 5.30 (m, 2H), 4.76 (d, J = 34.8 Hz, 4H), 3.97 (m, 1H), 2.26 (d, J = 67.1 Hz, 3H), 2.00 (m, 5H), 1.49 (m, 7H), 1.10 (d, J = 8.6 Hz, 9H), 0.86 (m, 1H). LC/MS (m/z) ES+ = 539.3 (M+1).  
【００８０】
[実施例6]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-オキソ-2-(フェニルアミノ)エチル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００８１】
【化３１】
2018535993.tif 000033
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.41 (br, 1H), 9.79 (br, 1H), 7.62 - 7.50 (m, 3H), 7.50 - 7.42 (m, 2H), 7.35 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 13.5, 7.5 Hz, 2H), 6.98 (dd, J = 12.5, 6.7 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 16.7 Hz, 1H), 4.92 - 4.68 (m, 4H), 4.16 - 3.80 (m, 2H), 2.37 - 1.93 (m, 6H), 1.05 (d, J = 8.0 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 533.1 (M+1).
【００８２】
[実施例7]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-(ネオペンチルアミノ)-2-オキソエチル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００８３】
【化３２】
2018535993.tif 000034
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.45 (br, 1H), 8.20 (br, 1H), 7.57 - 7.51 (m, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 2H), 7.35 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 5.36 (d, J = 13.8 Hz, 1H), 4.88 - 4.67 (m, 4H), 4.01 - 3.72 (m, 2H), 2.88 (d, 2H), 2.34 - 1.92 (m, 6H), 1.10 (d, J = 8.7 Hz, 9H), 0.82 (d, J = 9.2 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 527.2 (M+1).
【００８４】
【化３３】
2018535993.tif 000035
【００８５】
[実施例8]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００８６】
【化３４】
2018535993.tif 000036
【００８７】
工程1:(S)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-2-カルボキシレート
【００８８】
【化３５】
2018535993.tif 000037
トルエン(6mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ヨード-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(300mg、0.53mmol)、4-メチルベンズアミド(143mg、1.06mmol)、N1,N2-ジメチルエタン-1,2-ジアミン(18mg、0.21mmol)、CuI(20mg、0.11mmol)及びK3PO4(338mg、1.59mmol)の混合物を、110℃で撹拌した。24時間後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、EtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜30%EtOAc)により精製し、標題化合物を淡黄色油状物として得た(80mg、48%収率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.46 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.46 - 7.28 (m, 7H), 5.41 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.82 - 4.67 (m, 4H), 4.02 - 3.91 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.34 (d, J = 11.6 Hz, 3H), 2.12 (d, J = 11.2 Hz, 3H), 1.27 - 1.18 (m, 12H). LC/MS (m/z) ES+ = 573.7 (M+1).
【００８９】
工程2:(S)-エチル2-(tert-ブトキシ)-2-(4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-5-イル)アセテート
【００９０】
【化３６】
2018535993.tif 000038
MeOH(6mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-2-カルボキシレート(80mg、0.14mmol)及び10%Pd/C(80mg)の混合物を、H2雰囲気下(1気圧)で水素化した。1時間後、得られた混合物をセライトのパッドを通して濾過し、残渣を減圧下で濃縮し、粗製の標題生成物を褐色油状物として得て(50mg、81%収率)、これはさらに精製することなく次の工程で使用した。LC/MS(m/z)ES+=439.5(M+1)。
【００９１】
工程3:エチル(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-5-イル)アセテート
【００９２】
【化３７】
2018535993.tif 000039
EtOAc(3mL)中のエチル(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-5-イル)アセテート(50mg、0.11mmol、前工程からの粗生成物)及び3-フルオロ安息香酸(32mg、0.23mmol)の溶液に、プロパンホスホン酸無水物(181mg、0.29mmol、50%EtOAc溶液)及びEt3N(87mg、0.86mmol)を添加した。2時間後、反応混合物を、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層を、半飽和クエン酸水溶液及びブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜40%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(35mg、55%収率)。LC/MS(m/z)ES+=561.6(M+1)。
【００９３】
工程4:(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-5-イル)酢酸
【００９４】
【化３８】
2018535993.tif 000040
ジオキサン(2mL)及びH2O(0.5mL)中のエチル(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-5-イル)アセテート(35mg、0.06mmol)及びLiOH(23mg、0.94mmol)の混合物を80℃で撹拌した。18時間後、得られた混合物を、EtOAcで希釈し、1N HClで酸性化した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の0〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(13mg、39%収率)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.62 (br, 1H), 9.73 (br, 1H), 7.90 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.53 (m, 3H), 7.34 (m, 3H), 5.35 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 4.82 (dd, J = 31.7, 5.6 Hz, 4H), 2.33 (m, 6H), 1.97 (d, J = 62.2 Hz, 3H), 1.09 (d, J = 5.6 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 533.6 (M+1).
【００９５】
実施例9〜11を、実施例8に記載の手順と同様に調製した。
【００９６】
[実施例9]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-シクロヘキシルアセトアミド)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【００９７】
【化３９】
2018535993.tif 000041
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.32 (br, 1H), 9.12 (br, 1H), 7.54 (dd, J = 13.8, 7.4 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.35 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 5.31 (s, 1H), 4.78 (d, J = 32.2 Hz, 4H), 2.23 (m, 5H), 1.94 (d, J = 63.4 Hz, 3H), 1.70 (m, 6H), 1.11 (m, 14H). LC/MS (m/z) ES+ = 539.8 (M+1).
【００９８】
[実施例10]
(S)-2-(6-ベンズアミド-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)-2-(tert-ブトキシ)酢酸
【００９９】
【化４０】
2018535993.tif 000042
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.66 (br, 1H), 8.13 (m, 3H), 7.53 (m, J = 26.7, 13.8, 7.6 Hz, 6H), 7.35 (t, J = 8.5 Hz, 1H), 5.23 (s, 1H), 4.82 (m, 4H), 2.28 (d, J = 65.3 Hz, 3H), 1.98 (d, J = 62.2 Hz, 3H), 1.00 (s, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 519.6 (M+1).
【０１００】
[実施例11]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(ピペリジン-1-カルボキサミド)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１０１】
【化４１】
2018535993.tif 000043
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.49 (br, 1H), 8.36 (br, 1H), 7.54 (m, 1H), 7.46 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.35 (dd, J = 9.7, 7.3 Hz, 1H), 5.30 (m, 1H), 4.77 (m, 4H), 3.42 (m, 4H), 2.24 (d, J = 65.7 Hz, 3H), 1.92 (d, J = 67.1 Hz, 3H), 1.57 (m, 6H), 1.12 (d, J = 6.3 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 526.6 (M+1).
【０１０２】
【化４２】
2018535993.tif 000044
【０１０３】
[実施例12]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(N,4-ジメチルベンズアミド)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１０４】
【化４３】
2018535993.tif 000045
【０１０５】
工程1:(S)-エチル2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(N,4-ジメチルベンズアミド)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)アセテート
【０１０６】
【化４４】
2018535993.tif 000046
THF(2mL)中のエチル(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルベンズアミド)イソインドリン-5-イル)アセテート(50mg、0.09mmol)の氷冷溶液を、NaH(60%、18mg、0.45mmol)で処理した。30分後、MeI(126mg、0.89mmol)を添加し、反応混合物を周囲温度まで温めた。1時間後、反応混合物を、飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜30%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(30mg、59%収率)。LC/MS(m/z)ES+=575.8(M+1)。
【０１０７】
工程2:(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(N,4-ジメチルベンズアミド)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１０８】
【化４５】
2018535993.tif 000047
ジオキサン(3mL)及びH2O(0.7mL)中のエチル(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(N,4-ジメチルベンズアミド)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)アセテート(60mg、0.10mmol)及びLiOH(38mg、1.57mmol)の混合物を、80℃で撹拌した。18時間後、反応混合物を、EtOAcで希釈し、1N HClで酸性化した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の0〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(24mg、41%収率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.47 (m, 3H), 7.34 (m, 1H), 7.29 (m, 3H), 7.19 (m, 1H), 5.62 (s, 1H), 5.00 (d, J = 11.1 Hz, 2H), 4.73 (m, 2H), 3.36 (m, 3H), 2.26 (m, 9H), 1.25 (d, J = 7.2 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 547.6 (M+1).
【０１０９】
[実施例13]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-シクロヘキシル-N-メチルアセトアミド)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１１０】
【化４６】
2018535993.tif 000048
標題化合物を、実施例12と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.07 (br. 1H), 7.54 (m, 1H), 7.46 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 7.35 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 5.13 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.80 (m, 4H), 2.97 (d, J = 11.6 Hz, 3H), 2.31 (m, 5H), 1.94 (d, J = 63.7 Hz, 3H), 1.60 (m, 5H), 1.17 (m, 12H), 0.84 (m, 3H). LC/MS (m/z) ES+ = 553.7 (M+1).
【０１１１】
【化４７】
2018535993.tif 000049
【０１１２】
[実施例14]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-シクロヘキシルビニル)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１１３】
【化４８】
2018535993.tif 000050
【０１１４】
工程1:(S,E)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-(2-シクロヘキシルビニル)-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート
【０１１５】
【化４９】
2018535993.tif 000051
Et3N(3mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ヨード-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(300mg、0.53mmol)、ビニルシクロヘキサン(292mg、2.7mmol)、Pd(OAc)2(24mg、0.11mmol)及びPPh3(56mg、0.21mmol)の混合物を、100℃で撹拌した。18時間後、反応混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の65〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(12mg、4%収率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43 - 7.33 (m, 5H), 6.40 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 5.72 - 5.63 (m, 1H), 5.59 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.69 (d, J = 16.7 Hz, 4H), 4.24 - 4.06 (m, 2H), 2.27 - 2.09 (m, 7H), 1.91 - 1.76 (m, 4H), 1.25 - 1.10 (m, 18H). LC/MS (m/z) ES+ = 548.8 (M+1).
【０１１６】
工程2:(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-シクロヘキシルビニル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１１７】
【化５０】
2018535993.tif 000052
NaOH(0.15mL、5N)及びEtOH(0.3mL)中の(S,E)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-(2-シクロヘキシルビニル)-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(12mg、0.02mmol)の混合物を100℃で撹拌した。18時間後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、1N HClで中和し、DCM/i-PrOH(85:15)で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得て(10mg、定量的収率)、これはさらに精製することなく次の工程で使用した。LC/MS(m/z)ES+=386.4(M+1)。
【０１１８】
工程3:(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-シクロヘキシルビニル)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１１９】
【化５１】
2018535993.tif 000053
EtOAc(0.5mL)及びDCM(1mL)中の(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-シクロヘキシルビニル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸(10mg、0.026mmol)及び3-フルオロ安息香酸(7.3mg、0.05mmol)の溶液に、プロパンホスホン酸無水物(41mg、0.065mmol、50%EtOAc溶液)及びEt3N(16mg、0.16mmol)を添加した。1時間後、反応混合物を、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、DCMで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の60〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(5.5mg、42%収率)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.32 (br, 1H), 7.54 (m, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.34 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 6.43 (m, 1H), 5.66 (m, 1H), 5.47 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 4.77 (m, 4H), 2.10 (m, 6H), 1.72 (m, 5H), 1.19 (m, 15H). LC/MS (m/z) ES+ = 508.6 (M+1).
【０１２０】
【化５２】
2018535993.tif 000054
【０１２１】
[実施例15]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ビニル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１２２】
【化５３】
2018535993.tif 000055
【０１２３】
トリフェニル((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)ホスホニウム
【０１２４】
【化５４】
2018535993.tif 000056
標題化合物を、J.Med.Chem.2008年、51、4340〜4345頁及びその参照に記載される公知の手順から調製した。
【０１２５】
工程1:(S)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-ビニルイソインドリン-2-カルボキシレート
【０１２６】
【化５５】
2018535993.tif 000057
DMF(110mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ヨード-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(10g、17.7mmol)、ビニルBF3K(3.8g、28.3mmol)、Pd2(dba)3(3.2g、3.54mmol)、MePhos(1.3g、3.54mmol)及びK3PO4(11g、53.1mmol)の混合物を、80℃で撹拌した。18時間後、反応混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液をEtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜30%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色固体として得た(6.1g、67%収率)。LC/MS(m/z)ES+=466.4(M+1)。
【０１２７】
工程2:(S)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ホルミル-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート
【０１２８】
【化５６】
2018535993.tif 000058
THF(4mL)及びH2O(2mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-ビニルイソインドリン-2-カルボキシレート(300mg、0.64mmol)、NaIO4(413mg、1.93mmol)及びK2Os2O4(24mg、0.064mmol)の混合物を、周囲温度で撹拌した。18時間後、反応混合物を、飽和Na2S2O3水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜40%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(170mg、56%収率)。LC/MS(m/z)ES+=490.6(M+Na)。
【０１２９】
工程3:(S,E)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ビニル)イソインドリン-2-カルボキシレート
【０１３０】
【化５７】
2018535993.tif 000059
THF(2mL)中のトリフェニル((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)ホスホニウムヨージド(409mg、0.84mmol)の-78℃懸濁液を、LiHMDS(0.8mL、0.8mmol、1.0M)で処理した。30分後、THF中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ホルミル-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(98mg、0.21mmol)の溶液を滴下添加した。反応混合物を周囲温度まで温め、飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜30%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色油状物として得た(50mg、43%収率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.42 - 7.34 (m, 5H), 6.48 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 5.72 - 5.65 (m, 1H), 5.54 (s, 1H), 5.22 (s, 2H), 4.73 - 4.65 (m, 4H), 4.22 - 4.09 (m, 2H), 4.07 - 4.00 (m, 2H), 3.50 (td, J = 11.8, 1.2 Hz, 2H), 2.53 - 2.45 (m, 1H), 2.27 (d, J = 10.9 Hz, 3H), 2.11 (d, J = 12.3 Hz, 3H), 1.77 - 1.64 (m, 4H), 1.20 - 1.11 (m, 12H). LC/MS (m/z) ES+ = 550.7 (M+1).
【０１３１】
工程4:(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(4,7-ジメチル-6-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ビニル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１３２】
【化５８】
2018535993.tif 000060
EtOH(1.1mL)及びH2O(0.55mL)中の(S,E)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-(2-シクロヘキシルビニル)-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(50mg、0.09mmol)及びNaOH(108mg、2.7mmol)の混合物を、100℃、N2雰囲気下で終夜撹拌した。室温に冷却した後、得られた混合物を1N HClで中和し、DCM/i-PrOH(85:15)で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を得て(31mg、89%収率)、これはさらに精製することなく次の工程で使用した。LC/MS(m/z)ES+=388.3(M+1)。
【０１３３】
工程5:(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ビニル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１３４】
【化５９】
2018535993.tif 000061
EtOAc(2mL)及びDCM(2mL)中の(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(4,7-ジメチル-6-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)ビニル)イソインドリン-5-イル)酢酸(31mg、0.08mmol)及び3-フルオロ安息香酸(22mg、0.16mmol)の溶液に、プロパンホスホン酸無水物(127mg、0.2mmol、50%EtOAc溶液)及びEt3N(29mg、0.48mmol)を添加した。1時間後、得られた混合物を、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、DCMで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の50〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(10mg、24%収率)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.55 (br, 1H), 7.59 - 7.50 (m, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 2H), 7.34 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 15.9, 13.0 Hz, 1H), 5.76 - 5.62 (m, 1H), 5.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.90 - 4.57 (m, 4H), 3.89 (dd, J = 9.3, 4.7 Hz, 2H), 3.45 - 3.36 (m, 3H), 2.30 - 1.94 (m, 6H), 1.78 - 1.61 (m, 2H), 1.50 - 1.35 (m, 2H), 1.05 (d, J = 7.7 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 510.2 (M+1).
【０１３５】
[実施例16]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(4,4-ジメチルペンタ-1-エン-1-イル)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１３６】
【化６０】
2018535993.tif 000062
標題化合物を、工程3において(3,3-ジメチルブチル)トリフェニルホスホニウムを使用する(WO200463179A1)ことを除いて、実施例15と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.79 (br, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 7.35 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.29 - 7.26 (m, 1H), 7.22 - 7.15 (m, 1H), 6.50 - 6.41 (m, 1H), 5.96 - 5.83 (m, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.03 - 4.88 (m, 2H), 4.74 - 4.64 (m, 2H), 2.29 - 2.03 (m, 8H), 1.14 (d, J = 7.6 Hz, 9H), 0.96 (d, J = 7.6 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 496.2 (M+1).
【０１３７】
[実施例17]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-スチリルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１３８】
【化６１】
2018535993.tif 000063
標題化合物を、工程3においてベンジルトリフェニルホスホニウムブロミドを使用することを除いて、実施例15と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.41 (s, 1H), 7.42 (m, 10H), 6.62 (m, 1H), 5.48 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.82 (m, 4H), 2.18 (m, 6H), 1.05 (t, J = 8.9 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 502.5 (M+1).
【０１３９】
【化６２】
2018535993.tif 000064
【０１４０】
[実施例18]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-フェネチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１４１】
【化６３】
2018535993.tif 000065
MeOH(1mL)中の(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-スチリルイソインドリン-5-イル)酢酸(20mg、0.04mmol)及び10%Pd/C(20mg)の混合物を、H2雰囲気下(1気圧)で水素化した。1時間後、得られた混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、残渣を減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLCにより精製し、標題化合物を白色粉末として得た(12mg、60%収率)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.51 (br, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.46 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.35 (m, 5H), 7.21 (m, 1H), 5.41 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 4.79 (m, 4H), 2.98 (m, 4H), 2.24 (m, 6H), 1.19 (d, J = 8.3 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 504.5 (M+1).
【０１４２】
【化６４】
2018535993.tif 000066
【０１４３】
[実施例19]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルスチリル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１４４】
【化６５】
2018535993.tif 000067
【０１４５】
工程1:(S,E)-ベンジル5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルスチリル)イソインドリン-2-カルボキシレート
【０１４６】
【化６６】
2018535993.tif 000068
DMF(1.5mL)中のベンジル(S)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-6-ヨード-4,7-ジメチルイソインドリン-2-カルボキシレート(150mg、0.27mmol)、(E)-(4-メチルスチリル)ボロン酸(87mg、0.53mmol)、Pd(dppf)Cl2(22mg、0.127mmol)、KOAc(80mg、0.81mmol)の混合物を、80℃で撹拌した。18時間後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、得られた混合物をEtOAcとH2Oとの間で分配した。層を分離させ、有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜20%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色固体として得た(120mg、82%収率)。LC/MS(m/z)ES+=556.4(M+1)。
【０１４７】
工程2:(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(4,7-ジメチル-6-(4-メチルスチリル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１４８】
【化６７】
2018535993.tif 000069
EtOH(3mL)及びH2O(1.5mL)中のベンジル(S,E)-5-(1-(tert-ブトキシ)-2-エトキシ-2-オキソエチル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルスチリル)イソインドリン-2-カルボキシレート(160mg、0.29mmol)及びNaOH(346mg、8.64mmol)の混合物を、100℃で撹拌した。18時間後、反応混合物を周囲温度まで冷却し、6N HClで酸性化し、DCM/i-PrOH(85:15)で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物を褐色油状物として得て(110mg、定量的収率)、これはさらに精製することなく次の工程で使用した。LC/MS(m/z)ES+=394.4(M+1)。
【０１４９】
工程3.(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルスチリル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１５０】
【化６８】
2018535993.tif 000070
DCM(3mL)中の(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(4,7-ジメチル-6-(4-メチルスチリル)イソインドリン-5-イル)酢酸(115mg、0.29mmol)及び3-フルオロ安息香酸(82mg、0.58mmol)の溶液を、プロパンホスホン酸無水物(464mg、0.73mmol、50%EtOAc溶液)及びEt3N(118mg、1.17mmol)で処理した。30分後、得られた混合物を、飽和NaHCO3水溶液でクエンチし、DCMで抽出した。有機層を、半飽和クエン酸水溶液及びブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を逆相HPLC(C18、0.1%のギ酸を含むH2O中の50〜100%MeCN)により精製し、標題化合物を白色粉末として得た(70mg、47%収率)。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.46 (br, 1H), 7.55 (dd, J = 13.9, 7.6 Hz, 1H), 7.46 (m, 4H), 7.32 (m, 2H), 7.21 (m, 2H), 6.57 (m, 1H), 5.49 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.79 (m, 4H), 2.22 (m, 9H), 1.03 (d, J = 7.5 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 516.6 (M+1).
【０１５１】
[実施例20]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(4-メチルフェネチル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１５２】
【化６９】
2018535993.tif 000071
標題化合物を、実施例18と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.44 (br, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.46 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.35 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 7.21 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.12 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 5.41 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 4.79 (d, J = 36.1 Hz, 4H), 2.86 (m, 4H), 2.26 (m, 9H), 1.20 (d, J = 12.4 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 518.5 (M+1).
【０１５３】
[実施例21]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(2-フェニルプロパ-1-エン-1-イル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１５４】
【化７０】
2018535993.tif 000072
標題化合物を、工程1においてプロパ-1-エン-2-イルベンゼンを使用することを除いて、実施例14と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.33 (br, 1H), 7.46 (m, 9H), 6.86 (m, 1H), 5.37 (m, 1H), 4.79 (m, 4H), 2.08 (m, 9H), 1.09 (m, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 516.6 (M+1).
【０１５５】
[実施例22]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(1-フェニルプロパ-1-エン-2-イル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１５６】
【化７１】
2018535993.tif 000073
標題化合物を、工程1において(Z)-4,4,5,5-テトラメチル-2-(1-フェニルプロパ-1-エン-2-イル)-1,3,2-ジオキサボロランを使用する(J.Org.Chem.2013年、78、12837)ことを除いて、実施例19と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.37 (br, 1H), 7.41 (m, 9H), 6.24 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 4.79 (m, 4H), 2.15 (m, 9H), 1.12 (d, J = 8.7 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 516.6 (M+1).
【０１５７】
[実施例23]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-(3-フェニルブタ-2-エン-2-イル)イソインドリン-5-イル)酢酸
【０１５８】
【化７２】
2018535993.tif 000074
標題化合物を、工程1において(Z)-4,4,5,5-テトラメチル-2-(3-フェニルブタ-2-エン-2-イル)-1,3,2-ジオキサボロランを使用する(J.Am.Chem.2012年、134、15168)ことを除いて、実施例19と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.38 (br, 1H), 7.41 (m, 9H), 5.33 (dd, J = 18.8, 4.2 Hz, 1H), 4.79 (m, 4H), 2.20 (m, 6H), 1.67 (m, 6H), 1.21 (m, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 530.6 (M+1).
【０１５９】
【化７３】
2018535993.tif 000075
【０１６０】
(Z)-2-(1-(8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)プロパ-1-エン-2-イル)-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン
【０１６１】
【化７４】
2018535993.tif 000076
【０１６２】
工程1.((8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)エチニル)トリメチルシラン
【０１６３】
【化７５】
2018535993.tif 000077
Et3N(20mL)中の8-フルオロ-6-ヨード-5-メチルクロマン(2.5g、8.59mmol)、エチニルトリメチルシラン(4.2g、43mmol)、Pd(dppf)Cl2(600mg、0.859mmol)及びCuI(326mg、1.72mmol)の混合物を、周囲温度で撹拌した。18時間後、反応混合物を、セライトのパッドを通して濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーISCO(PE中0〜5%EtOAc)により精製し、標題化合物を黄色固体として得た(2.0g、90%収率)。LC/MS(m/z)ES+=263.1(M+1)。
【０１６４】
工程2.6-エチニル-8-フルオロ-5-メチルクロマン
【０１６５】
【化７６】
2018535993.tif 000078
MeOH(20mL)中の((8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)エチニル)トリメチルシラン(2.0g、8mmol)の溶液を、K2CO3(2.2g、16mmol)で処理した。3時間後、反応混合物を濾過し、濾液を真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜10%EtOAc)により精製し、標題化合物を白色固体として得た(1.2g、75%収率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.05 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.26 - 4.13 (m, 2H), 3.18 (s, 1H), 2.66 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.30 (d, J = 0.6 Hz, 3H), 2.17 - 2.02 (m, 2H). LC/MS (m/z) ES+ = 191.4 (M+1).
【０１６６】
工程3.8-フルオロ-5-メチル-6-(プロパ-1-イン-1-イル)クロマン
【０１６７】
【化７７】
2018535993.tif 000079
THF(8mL)中の6-エチニル-8-フルオロ-5-メチルクロマン(600mg、3.15mmol)の-30℃溶液を、n-BuLi(2.5M、1.86mL、4.7mmol)で処理した。30分後、ヨードメタンを添加し、反応混合物を周囲温度まで温めた。2時間後、反応混合物を、飽和NH4Cl水溶液でクエンチし、EtOAcで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜10%EtOAc)により精製し、標題化合物を白色固体として得た(560mg、87%収率)。LC/MS(m/z)ES+=205.3(M+1)。
【０１６８】
工程4.(Z)-2-(1-(8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)プロパ-1-エン-2-イル)-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン
【０１６９】
【化７８】
2018535993.tif 000080
THF中のCuCl(20mg、0.196mmol)、PPh3(51.5mg、0.196mmol)及びt-BuONa(226mg、2.35mmol)の混合物を、周囲温度で撹拌した。30分後、8-フルオロ-5-メチル-6-(プロパ-1-イン-1-イル)クロマン(400mg、1.96mmol)の溶液を添加し、続いてMeOH(157mg、3.92mmol)を添加した。18時間後、得られた混合物を、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜5%EtOAc)により精製し、標題化合物を白色固体として得た(200mg、31%収率)。LC/MS(m/z)ES+=333.4(M+1)。
【０１７０】
[実施例24]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(1-(8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)プロパ-1-エン-2-イル)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１７１】
【化７９】
2018535993.tif 000081
標題化合物を、工程1において(Z)-2-(1-(8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)プロパ-1-エン-2-イル)-4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロランを使用することを除いて、実施例19と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.80 (br, 1H), 7.46 (dd, J = 13.6, 7.8 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 - 7.26 (m, 1H), 7.19 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 6.89 (dd, J = 20.1, 8.3 Hz, 1H), 6.29 (s, 1H), 5.52 (s, 1H), 5.10 - 4.87 (m, 2H), 4.71 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 4.22 (dd, J = 9.7, 4.6 Hz, 2H), 2.69 (dd, J = 11.3, 5.6 Hz, 2H), 2.38 - 2.03 (m, 14H), 1.40 - 1.11 (m, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 604.7 (M+1).
【０１７２】
【化８０】
2018535993.tif 000082
【０１７３】
(E)-(2-(クロマン-6-イル)ビニル)ボロン酸
THF(2.5mL)中の6-エチニルクロマン(200mg、1.27mmol)(WO200876043/A1に従って作製)の溶液を、カテコールボラン(303mg、2.53mmol)で処理し、70℃に加熱した。1.5時間後、反応混合物を、MeOH(1mL)でクエンチし、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(PE中0〜10%EtOAc)により精製し、標題化合物を白色固体として得た(90mg、37%収率)。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.17 (dd, J = 8.5, 2.0 Hz, 1H), 7.14 - 7.09 (m, 2H), 6.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.22 - 4.14 (m, 2H), 2.78 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.03 - 1.97 (m, 5H), 1.56 (s, 3H), 1.30 (s, 12H). LC/MS (m/z) ES- = 249.3 (M+HCOOH-1).
【０１７４】
[実施例25]
(S,E)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-(クロマン-6-イル)ビニル)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１７５】
【化８１】
2018535993.tif 000083
標題化合物を、工程1において(E)-(2-(クロマン-6-イル)ビニル)ボロン酸を使用することを除いて、実施例19と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.75 (br, 1H), 7.50 - 7.40 (m, 1H), 7.36 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 4.9 Hz, 2H), 7.24 - 7.11 (m, 2H), 7.01 (dd, J = 16.4, 12.4 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 8.4, 5.6 Hz, 1H), 6.72 - 6.53 (m, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.09 - 4.87 (m, 2H), 4.80 - 4.60 (m, 2H), 4.21 (dd, J = 9.8, 4.2 Hz, 2H), 2.81 (dd, J = 11.8, 6.0 Hz, 2H), 2.35 - 1.98 (m, 8H), 1.12 (d, J = 8.1 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 558.6 (M+1).
【０１７６】
【化８２】
2018535993.tif 000084
【０１７７】
(E)-(2-(8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)ビニル)ボロン酸。
THF(3mL)中の6-エチニル-8-フルオロ-5-メチルクロマン(200mg、1.05mmol)の溶液に、カテコールボラン(235mg、2.10mmol)を添加し、70℃に加熱した。1.5時間後、得られた混合物を、MeOH(1mL)でクエンチし、EtOAcとH2Oとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(シリカゲル、PE中0〜10%EtOAc)により精製し、標題化合物を白色固体として得た(50mg、22%収率)。LC/MS(m/z)ES-=281.4(M+HCOOH-1)。
【０１７８】
[実施例26]
(S)-2-(tert-ブトキシ)-2-(6-(2-(8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)ビニル)-2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１７９】
【化８３】
2018535993.tif 000085
標題化合物を、工程1において(E)-(2-(8-フルオロ-5-メチルクロマン-6-イル)ビニル)ボロン酸を使用することを除いて、実施例19と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.80 (br, 1H), 7.51 - 7.41 (m, 1H), 7.36 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 7.31 - 7.28 (m, J = 1.5 Hz, 1H), 7.25 - 7.15 (m, 2H), 7.09 - 6.84 (m, 2H), 5.78 (s, 1H), 5.12 - 4.87 (m, 2H), 4.80 - 4.64 (m, 2H), 4.23 (dd, J = 9.7, 4.0 Hz, 2H), 2.70 (dd, J = 10.7, 6.4 Hz, 2H), 2.41 - 1.96 (m, 11H), 1.14 (d, J = 6.9 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 590.4 (M+1).
【０１８０】
[実施例27]
(S,Z)-2-(tert-ブトキシ)-2-(2-(3-フルオロベンゾイル)-4,7-ジメチル-6-スチリルイソインドリン-5-イル)酢酸
【０１８１】
【化８４】
2018535993.tif 000086
標題化合物を、工程1において(Z)-スチリルボロン酸を使用する(J.Am.Chem.Soc.2015年、137、3233〜3236頁)ことを除いて、実施例19と同様に作製した。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.56 (br, 1H), 7.54 - 7.26 (m, 4H), 7.23 - 7.08 (m, 4H), 7.01 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.84 - 6.50 (m, 2H), 5.63 (d, J = 48.8 Hz, 1H), 5.11 - 4.61 (m, 4H), 2.43 - 1.83 (m, 6H), 1.14 (d, J = 10.7 Hz, 9H). LC/MS (m/z) ES+ = 502.1 (M+1).
【０１８２】
抗HIV活性
MT4アッセイ
表1の本発明の化合物についての抗ウイルスHIV活性及び細胞毒性の値は、既述された方法に基づいて、HTLV-1形質転換細胞株MT-4において並行して測定した(Hazenら、2007年、「他の抗レトロウイルスと組み合わせた、一団のプロテアーゼ阻害耐性HIV剤に対する、新規のチロシル系ヒト免疫不全ウイルス(HIV)1型プロテアーゼ阻害剤ブレカナビル(GW640385)のインビトロ抗ウイルス活性」(Hazenら、「In vitro antiviral activity of the novel,tyrosyl-based human immunodeficiency virus (HIV) type 1 protease inhibitor brecanavir (GW640385)in combination with other antiretrovirals and against a panel of protease inhibitor-resistant HIV)」、Antimicrob.Agents Chemother.2007年、51:3147〜3154頁;及びPauwelsら、「Sensitive and rapid assay on MT-4 cells for the detection of antiviral compounds against the AIDS virus」、J.of Virological Methods 1987年、16:171〜185頁)。
【０１８３】
ルシフェラーゼ活性は、cell titer glo(Promega、Madison、Wis.)を添加することにより、96時間後に測定した。細胞保護阻害率(%)のデータを、化合物を含まない対照に対してプロットした。同じ条件下で、化合物の細胞毒性は、cell titer Glo(商標)(Promega、Madison、Wis)を用いて決定した。IC50は、各化合物について3〜4倍の連続希釈を用いて10点用量反応曲線から決定し、濃度範囲は1000倍超である。
【０１８４】
これらの値は、標準的な4パラメータロジスティック方程式を用いて化合物のモル濃度に対してプロットする:
y=((Vmax*x∧n)/(K∧n+x∧n))+Y2
式中:
Y2=最小のy、n=傾斜因子
Vmax=最大のy、x=化合物濃度[M]
K=EC50
【０１８５】
MT4アッセイで試験したとき、化合物は、表1に示したIC50の値を有することが分かった。
【０１８６】
【表１】
2018535993.tif 000087
【国際調査報告】
2018535993.tif 000091
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