(57)【要約】  本明細書では、アミノ酸を含んでなる組成物、ならびに運動、病気または傷害からの回復、運動中の性能、および極度の気候条件における生存を補助し、かつ疲労を減少するためのそのような組成物の使用が提供される。本開示は、汗中で損失したアミノ酸を補足する役割を果たし得るアミノ酸サプリメントに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒスチジン、セリンおよびリシンを含んでなるアミノ酸組成物であって、前記ヒスチジン、セリンおよびリシンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約２５％を構成する、アミノ酸組成物。
【請求項２】
前記ヒスチジン、セリンおよびリシンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約３０％を構成する、請求項１に記載のアミノ酸組成物。
【請求項３】
前記ヒスチジン、セリンおよびリシンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約３０％〜５０％を構成する、請求項１または２に記載のアミノ酸組成物。
【請求項４】
前記ヒスチジン、セリンおよびリシンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約３２％〜４７％を構成する、請求項３に記載のアミノ酸組成物。
【請求項５】
前記ヒスチジンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約１０％〜２１％を構成し、前記セリンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約１３％〜１６％を構成し、かつ前記リシンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約９％〜１０％を構成する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物。
【請求項６】
オルニチンおよびグリシンの少なくとも１種をさらに含んでなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物。
【請求項７】
存在する場合、前記オルニチンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約１２％を構成し、かつ前記グリシンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約８％を構成する、請求項６に記載のアミノ酸組成物。
【請求項８】
ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり、前記アミノ酸は、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約４０％を構成する、請求項６または７に記載のアミノ酸組成物。
【請求項９】
ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり、前記アミノ酸は、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約５０％〜８０％を構成する、請求項６または７に記載のアミノ酸組成物。
【請求項１０】
グルタミン、グルタミン酸、ロイシンおよびアスパラギン酸の少なくとも１種をさらに含んでなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物。
【請求項１１】
存在する場合、前記グルタミンおよび／またはグルタミン酸は、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約１０％を構成し、前記ロイシンは、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約１０％を構成し、かつ前記アスパラギン酸は、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約７％を構成する、請求項１０に記載のアミノ酸組成物。
【請求項１２】
ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンならびにアスパラギン酸を含んでなり、前記アミノ酸は、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約３５％を構成する、請求項１０または１１に記載のアミノ酸組成物。
【請求項１３】
前記ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンならびにアスパラギン酸は、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約４０％〜６０％を構成する、請求項１０または１１に記載のアミノ酸組成物。
【請求項１４】
ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンを含んでなるアミノ酸組成物であって、前記ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約３０％を構成する、アミノ酸組成物。
【請求項１５】
前記ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約６０％を構成する、請求項１４に記載のアミノ酸組成物。
【請求項１６】
前記ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約６４％を構成する、請求項１４に記載のアミノ酸組成物。
【請求項１７】
前記ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約７６％を構成する、請求項１４に記載のアミノ酸組成物。
【請求項１８】
セリン、アラニン、グリシン、ヒスチジンおよびプロリンを含んでなるアミノ酸組成物であって、前記セリン、アラニン、グリシン、ヒスチジンおよびプロリンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約２０％を構成する、アミノ酸組成物。
【請求項１９】
セリン、グルタミン酸、ヒスチジン、ロイシン、リシン、アスパラギン酸、アラニン、グリシン、フェニルアラニン、バリン、イソロイシン、プロリン、トレオニンおよびチロシンを含んでなるアミノ酸組成物。
【請求項２０】
ダイエタリーサプリメントである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物。
【請求項２１】
対象における運動、病気または傷害からの回復を促進または補助する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物。
【請求項２２】
高温気候における生存を補助する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物。
【請求項２３】
運動性能を促進または補助する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物。
【請求項２４】
対象における運動、病気または傷害からの回復を促進または補助するための方法であって、前記対象に、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項２５】
前記病気は、慢性疲労である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
高温気候における対象の生存を補助するための方法であって、前記対象に、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項２７】
対象における運動性能を促進または補助するための方法であって、前記対象に、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項２８】
対象の血液中ヘモグロビンおよび／またはヘマトクリットレベルを増加させるための方法であって、前記対象に、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項２９】
高齢者に栄養的サポートを提供するための方法であって、対象に、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項３０】
対象における疲労を低減させるための方法であって、前記対象に、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法。
【請求項３１】
前記対象は、ヒトである、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
投与される前記組成物は、ヒスチジン、リシン、セリン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり、前記アミノ酸は、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約５０％〜８０％を構成する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記対象は、ウマである、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
投与される前記組成物は、ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンならびにアスパラギン酸を含んでなり、前記アミノ酸は、前記組成物中のアミノ酸の全重量の約３５％〜６０％を構成する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
対象に投与されるダイエタリーサプリメントを決定するための方法であって、
ａ）前記対象に、汗を発生させるために十分な運動をさせるステップと；
ｂ）前記汗中のアミノ酸組成物を決定するステップと；
ｃ）前記汗中の全アミノ酸濃度に基づいて、前記対象の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールを決定するステップであって、約４，０００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、「低」プロフィールを表し、約４，０００〜１０，０００μモルＬ−１のアミノ酸濃度は、「中」プロフィールを表し、および約１０，０００μモルＬ−１より高いアミノ酸濃度は、「高」プロフィールを表す、ステップと
を含んでなり、前記低、中または高の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールとして前記対象を階層化することは、投与される前記サプリメントと、任意選択的に、投与される前記サプリメントの量または用量とを決定する、方法。
【請求項３６】
前記対象の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの前記決定は、前記汗中の個々のアミノ酸濃度を決定するステップをさらに含んでなり、（ｉ）前記「低」プロフィールは、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンが前記汗中のアミノ酸の少なくとも約５０％を構成し、セリンが前記汗の主要なアミノ酸成分であることによって表され；（ｉｉ）前記「中」プロフィールは、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンが前記汗中のアミノ酸の少なくとも約７０％を構成し、オルニチンが前記汗の主要なアミノ酸成分であることによって表され；かつ（ｉｉｉ）前記「高」プロフィールは、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンが前記汗のアミノ酸の少なくとも約６０％を構成し、ヒスチジンが前記汗の主要なアミノ酸成分であることによって表される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
「低」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンを含んでなる前記対象のためのアミノ酸サプリメントを示し、前記セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約６０％を構成する、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
「中」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンを含んでなる前記対象のためのアミノ酸サプリメントを示し、前記オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約６４％を構成する、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３９】
「高」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンを含んでなる前記対象のためのアミノ酸サプリメントを示し、前記ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約７６％を構成する、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項４０】
対象に投与されるダイエタリーサプリメント剤の必要条件を決定するための方法であって、
ａ）前記対象から血漿試料を採取するステップと；
ｂ）前記血漿中の全アミノ酸組成を決定するステップであって、約２，８００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、補足の必要を示すアミノ酸の「低」作用レベルを表す、ステップと
を含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、概して、アミノ酸を含んでなる組成物、ならびに汗で失われたアミノ酸を補足し、運動、病気または傷害からの回復、運動中の性能、および極度の気候条件における生存を補助するためのサプリメントとしてのそのような組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミノ酸は、生体内での構造的および機能的タンパク質の生合成のために使用される極めて重要な代謝物質である。特定の役割に応じて、種々の機能的タンパク質は、代謝制御を提供するための連続的ターンオーバー、ならびに運動、食物摂取、病原体攻撃および組織損傷の修復に由来する生理学的要求への適用を受ける。アミノ酸も「遊離」代謝物質としての広範囲の極めて重要な役割を有し、そのいくつかは、抑制性神経伝達物質（例えば、グリシン）として直接作用することができるか、またはホルモン（チロシンからのエピネフリンおよびノルエピネフリン）および神経伝達物質（グルタミン酸からのガンマアミノ酪酸）の合成のための前駆体として作用することができる。
【０００３】
哺乳動物による食物摂取後、タンパク質は消化され、得られた遊離アミノ酸および小ペプチドは、生体内での利用化のために吸収される。運動中、血液供給は、酸素を提供するために消化管から活動中の筋肉へと流れを変え、したがって、食物の消化を支持することができない。したがって、生体が運動しているとき、運動中およびその直後の両方において、非線維性筋肉貯蔵タンパク質を異化することにより、アミノ酸を遊離させて循環させることで減少が埋め合わせられる。これにより、血液中で循環し、エネルギー生産のための酸化的リン酸化またはグルコース−アラニンサイクルを含む代謝経路において使用可能であるアミノ酸が提供される。
【０００４】
容易に酸化可能なエネルギー源としての遊離アミノ酸の有益性のため、および組織異化の指標としての特定のアミノ酸残基の関連性のため、血漿アミノ酸レベルの測定は、運動に応じての運動選手の筋肉の状態、タンパク質ターンオーバーおよびエネルギー代謝への分析の潜在的に価値のある方法を表す。健康な休息中の成人において、血漿アミノ酸レベルは、組織取込みおよび体内からの排出に対して、栄養摂取と組織からの放出との間の非常に規律正しい恒常性を反映する。運動の開始は、筋肉のための代謝の必要条件を支持するために必要とされる休息中の恒常性に対する妨害を表す。運動前のプロフィールと比較して運動後の血漿プロフィールに変更をもたらす要求を支持するために、筋肉組織取込みおよび特定のアミノ酸の放出の速度における変化が生じる。
【０００５】
運動の停止時、組織から血漿へと放出された遊離アミノ酸は、理論的には、再取込みまたは排出および恒常性の回復のために利用可能である。アミノ酸および電解質は、汗および水による皮膚表面の浸潤により、皮膚の外側角質層から浸出する可能性がある。この浸出は、汗流体中のアミノ酸の濃度の純増加を導く。尿および汗中に排出されたアミノ酸レベルは、アミノ酸の純損失を表し、これは、食事の摂取によって最終的に補足されなければならない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、汗によって促進されたアミノ酸損失を埋め合わせるための特定のアミノ酸の組合せを含んでなる組成物および配合物の決定をもたらす、皮膚表面からの寄与による最終的な汗において優位を占めるアミノ酸の組合せに関する本発明者らの調査結果に基づくものである。さらに、汗によって促進されたアミノ酸損失のための特定のプロフィールまたは表現型の識別により、個々の必要に合わせて補足を調整する利益を有するアミノ酸補足のプロフィールまたは表現型によって方向付けられたアプローチを考案し、実施することが可能となる。
【０００７】
第１の態様において、本明細書では、ヒスチジン、セリンおよびリシンを含んでなるアミノ酸組成物であって、ヒスチジン、セリンおよびリシンが、一緒に、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約２５％を構成する、アミノ酸組成物が提供される。
【０００８】
一実施形態において、ヒスチジン、セリンおよびリシンは、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約３０％を構成し得る。別の実施形態において、ヒスチジン、セリンおよびリシンは、組成物中のアミノ酸の全重量の約３０％〜５０％を構成し得る。別の実施形態において、ヒスチジン、セリンおよびリシンは、組成物中のアミノ酸の全重量の約３２％〜４７％を構成し得る。
【０００９】
例示的な実施形態において、ヒスチジンは、組成物中のアミノ酸の全重量の約１０％〜２１％を構成し得、セリンは、組成物中のアミノ酸の全重量の約１３％〜１６％を構成し得、かつリシンは、組成物中のアミノ酸の全重量の約９％〜１０％を構成し得る。
【００１０】
第１の態様のアミノ酸組成物は、オルニチンおよびグリシンの少なくとも１種をさらに含んでなり得る。存在する場合、オルニチンは、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約１２％を構成し得、かつ／またはグリシンは、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約８％を構成し得る。組成物は、ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり得、これらのアミノ酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約４０％を構成するか、または組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約５０％〜８０％を構成する。
【００１１】
第１の態様のアミノ酸組成物は、グルタミン、グルタミン酸、ロイシンおよびアスパラギン酸の少なくとも１種をさらに含んでなり得る。存在する場合、グルタミンおよび／またはグルタミン酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約１０％を構成し得、ロイシンは、組成物のアミノ酸の全重量の少なくとも約１０％を構成し得、かつ／またはアスパラギン酸は、組成物のアミノ酸の全重量の少なくとも約７％を構成し得る。組成物は、ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンならびにアスパラギン酸を含んでなり得、これらのアミノ酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約３５％を構成するか、または組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約４０％〜６０％を構成する。
【００１２】
例示的な実施形態において、アミノ酸組成物は、セリン、グルタミン酸、ヒスチジン、ロイシン、リシン、アスパラギン酸、アラニン、グリシン、フェニルアラニン、バリン、イソロイシン、プロリン、トレオニンおよびチロシンを含んでなり得る。そのような組成物は、ウマへの投与のために配合され得る。
【００１３】
第２の態様において、本明細書では、ヒスチジン、セリン、オルニチン、リシンおよびグリシンを含んでなるアミノ酸組成物であって、ヒスチジン、セリン、オルニチン、リシンおよびグリシンが、一緒に、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約３０％を構成する、アミノ酸組成物が提供される。
【００１４】
例示的な実施形態において、ヒスチジン、セリン、オルニチン、リシンおよびグリシンは、一緒に、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約６０％、少なくとも約６４％または少なくとも約７６％を構成し得る。
【００１５】
第３の態様において、本明細書では、セリン、アラニン、グリシン、ヒスチジンおよびプロリンを含んでなるアミノ酸組成物であって、セリン、アラニン、グリシン、ヒスチジンおよびプロリンが、一緒に、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約２０％を構成する、アミノ酸組成物が提供される。
【００１６】
一実施形態において、第３の態様のアミノ酸組成物は、女性対象への投与のために配合される。
【００１７】
典型的に、本明細書で開示されたアミノ酸組成物は、ダイエタリーサプリメントとして使用される。特定の実施形態において、本組成物は、対象における運動、病気もしくは傷害からの回復を促進もしくは補助するか、疲労を低減するか、高温気候における対象の生存を補助するか、または運動性能を促進もしくは補助する。
【００１８】
本明細書で開示された組成物は、明示されたアミノ酸を含んでなり得るか、またはそれからなり得るか、またはそれから本質的になり得る。
【００１９】
第４の態様において、本明細書では、対象における運動、病気または傷害からの回復を促進または補助するための方法であって、対象に、第１または第２の態様のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法が提供される。
【００２０】
第５の態様において、本明細書では、高温気候における対象の生存を補助するための方法であって、対象に、第１または第２の態様のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法が提供される。
【００２１】
第６の態様において、本明細書では、対象における運動性能を促進または補助するための方法であって、対象に、第１または第２の態様のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法が提供される。
【００２２】
第７の態様において、本明細書では、対象の血液中ヘモグロビンおよび／またはヘマトクリットレベルを増加させるための方法であって、対象に、第１または第２の態様のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法が提供される。
【００２３】
第８の態様において、本明細書では、高齢者に栄養的サポートを提供するための方法であって、対象に、第１または第２の態様のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法が提供される。
【００２４】
第９の態様において、本明細書では、対象における疲労を低減させるための方法であって、対象に、第１または第２の態様のアミノ酸組成物の有効量を投与するステップを含んでなる方法が提供される。
【００２５】
一実施形態において、対象は、慢性疲労を有し得る。対象は、慢性疲労症候群を患っていてもよい。対象が女性である実施形態において、投与されるアミノ酸組成物は、例えば、少なくともアスパラギン酸、アスパラギン、オルニチンおよびメチオニンを含んでなり得る。対象が男性である実施形態において、投与されるアミノ酸組成物は、例えば、少なくともセリン、アラニン、グリシン、アスパラギン酸、バリン、プロリン、チロシン、アスパラギンおよびメチオニンを含んでなり得る。
【００２６】
第４〜第９の態様の少なくとも１つの方法において、対象はヒトであり得、投与される組成物の有効量は、１日あたり約５０ｍｇ〜１０グラムであり得る。
【００２７】
第４〜第９の態様の少なくとも１つの方法において、対象はウマであり得、投与される組成物の有効量は、１日あたり約５〜５０グラムであり得る。
【００２８】
第１０の態様において、対象に投与されるダイエタリーサプリメントを決定するための方法であって、
ａ）対象に、汗を発生させるために十分な運動をさせるステップと；
ｂ）前記汗中のアミノ酸組成物を決定するステップと；
ｃ）前記汗中の全アミノ酸濃度に基づいて、対象の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールを決定するステップであって、約４，０００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、「低」プロフィールを表し、約４，０００〜１０，０００μモルＬ−１のアミノ酸濃度は、「中」プロフィールを表し、および約１０，０００μモルＬ−１より高いアミノ酸濃度は、「高」プロフィールを表す、ステップと
を含んでなり、低、中または高の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールとして対象を階層化することは、投与されるサプリメントの量（または用量）と、任意選択的に、投与される前記サプリメントの量または用量とを決定する、方法が提供される。
【００２９】
例示的な実施形態において、汗は、ステップｃ）におけるアミノ酸濃度の決定のため、対象の背部から収集される。
【００３０】
例示的な実施形態において、対象の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、汗中の個々のアミノ酸濃度を決定するステップをさらに含んでなり、（ｉ）「低」プロフィールは、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンが汗中のアミノ酸の約５０％を構成し、セリンが汗の主要なアミノ酸成分であることによって表され；（ｉｉ）「中」プロフィールは、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンが汗中のアミノ酸の約７０％を構成し、オルニチンが汗の主要なアミノ酸成分であることによって表され；かつ（ｉｉｉ）「高」プロフィールは、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンが汗のアミノ酸の約６０％を構成し、ヒスチジンが汗の主要なアミノ酸成分であることによって表される。
【００３１】
第１１の態様において、本明細書では、対象に投与されるダイエタリーサプリメント剤の必要条件を決定するための方法であって、
ａ）対象から血漿試料を採取するステップと；
ｂ）前記血漿中の全アミノ酸組成を決定するステップであって、約２，８００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、補足の必要を示すアミノ酸の「低」作用レベルを表す、ステップと
を含んでなる方法が提供される。
【００３２】
第１０および第１１の態様において、「低」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールは、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンを含んでなる対象のためのアミノ酸サプリメントを示し得、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンは、一緒に、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約６０％を構成する。
【００３３】
「中」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンを含んでなる対象のためのアミノ酸サプリメントを示し得、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンは、一緒に、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約６４％を構成する。
【００３４】
「高」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンを含んでなる対象のためのアミノ酸サプリメントを示し得、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約７６％を構成する。
【００３５】
本開示の実施形態は、次の図面を参照することにより、限定されない例としてのみ本明細書に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】組み合わせられたコホート（ｎ＝１９）からの汗中のアミノ酸の濃度に関するログ変換されたアミノ酸濃度データの主成分分析（ＰＣＡ）である。それぞれの運動選手は、低（Ｌ）、中（Ｍ）および高（Ｈ）の汗中の測定されたアミノ酸の全レベルとして定義された３つの集団の１つに分類された。それぞれの運動選手は、対応するアミノ酸プロフィールに従ってプロット上に配置される。ＳＦＬＡＡ群のそれぞれからの運動選手は色分けされ、各郡のメンバーが一緒に分類されることが明確である。これにより、アミノ酸組成特徴は、ＳＦＬＡＡによって定義された群内で類似であるという証拠が提供される。
【図２】血漿アミノ酸の対応する組成による、低、中および高ＳＦＬＡＡの集団からの汗中のアミノ酸の相対的なパーセント存在度の比較である。それぞれのアミノ酸に関して：前方のバー＝血漿；第２のバー＝汗の「低」ＳＦＬＡＡ；第３のバー＝汗の「中」ＳＦＬＡＡ；第４の（後方の）バー＝「高」ＳＦＬＡＡ。血漿レベルは、いずれの群からの対象間でも変化がなく、アラニン、グルタミン、バリンおよびプロリンが主成分として存在する。体の表面から収集された汗の組成は、異なるパターンの汗組成を示し、「低」ＳＦＬＡＡ集団に関して主成分はセリンであり、「中」ＳＦＬＡＡ集団に関して主成分はオルニチンであり、「高」ＳＦＬＡＡ集団に関して主成分はヒスチジンである。
【図３】対象がシャワーを浴び、１８〜２４℃で一晩休んだ１２時間後に皮膚表面の洗浄から得られたアミノ酸レベルと比較する、運動後の汗中の全アミノ酸濃度である。その後、対象にシャワーを浴びさせ、乾燥させ、新たに乾燥させた皮膚表面を洗浄することによって得られた第３の試料により、アミノ酸が皮膚表面の湿潤によって角質層から浸出する可能性があることを実証する。３つの試料の収集物を使用してデータを作成するが、それぞれの収集間は１週間である。これらの結果は、アミノ酸が皮膚の天然の湿潤因子の有意な部分として存在し、単純な加水によって表面から浸出することが可能であるという概念を支持する。
【図４】（ａ）運動後の汗（前方のバー）、（ｂ）運動後のシャワー後、１２時間休んだ後に採取された試料で観察されたレベル（第２のバー）、および（ｃ）シャワーおよび乾燥の直後（第３または後方のバー）におけるアミノ酸のパーセント相対存在度の比較である。値は、１人の男性参加者からの３回の別個のサンプリング事象からの平均である。運動後に採取された汗とのアミノ酸組成における類似性は、表面のクリーニングおよび乾燥の直後の皮膚からの表面洗浄液による組成プロフィールを反映する。類似性は、汗による皮膚の湿潤によるアミノ酸の損失に対する主要寄与因子として、浸出プロセスを支持する有力な証拠である。組み合わせた、汗中に排出された浸出物および量は、運動中に相当な潜在的損失になる。
【図５】（Ａ）４７人の健康な対象および７人の慢性疲労を有する対象からの汗中で測定されたアミノ酸の相対存在度からプロットされた主成分分析（ＰＣＡ）である。それぞれの場合に、郡内で自由度を最小化し、かつ群間での差異を最大化するために対象を群に分類する、Ｋ平均クラスタリングによって定義された４つの集団の１つに分類された。ＰＣＡ分析からの結果により、プロット上でそれぞれの群中からメンバーを明らかに分離することにより、Ｋ平均クラスタリング法を確認した。慢性疲労を有する対象は、１群または３群のいずれかのメンバーとして存在した。（Ｂ）集団分離へのアミノ酸の寄与を示す因子１および因子２のＰＣＡ負荷量である。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、一般に、本開示が属する技術分野における当業者によって理解されるものと同じ意味を有する。本開示全体を通して参照される全ての特許、特許出願、公開出願および刊行物、データベース、ウェブサイトならびに他の発表された資料は、他に指摘されない限り、参照によって全体として組み込まれる。用語に関する定義が複数ある場合、このセクションのものが優先される。
【００３８】
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的および科学的用語は、一般に、本開示が属する技術分野における当業者によって理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に説明されるものと類似するかまたは均等な任意の方法および材料を本開示の実施またはテストで使用することができるが、典型的な方法および材料が記述される。
【００３９】
冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、冠詞の文法的対象の１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）を意味するために使用される。例として、「要素」は、１つの要素または２つ以上の要素を意味する。
【００４０】
本明細書に関連して、「約」という用語は、当業者が、同一の機能または結果を達成することに関連して、引用された値と均等であると考えるであろう数値範囲を意味するものとして理解される。
【００４１】
本明細書およびそれに続く請求項全体で、文脈上他を必要としない限り、「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語および「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」または「含んでなっている（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、明記された整数もしくはステップ、または整数もしくはステップの群を含むが、いずれかの他の整数もしくはステップ、または整数もしくはステップの群の包含を暗示することが理解されるであろう。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、限定されないが、ヒト、（サラブレッドおよび他の競走馬などの）パフォーマンス動物、（ウシ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ブタおよびニワトリなどの）家畜および他の家畜、（ネコおよびイヌなどの）伴侶動物ならびに研究室試験動物を含む任意の哺乳動物を意味する。
【００４３】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、１つ以上の有益または望ましい結果をもたらすために十分な組成物またはサプリメントの量を意味する。「有効量」は、１回以上の投与において提供することができる。必要とされる正確な量は、利用される個々の善玉菌株の同一性および数、治療される対象、治療される対象が有する疾患または状態の性質、ならびに対象の年齢および健康全般、ならびに組成物が投与される形態などの因子に応じて異なるであろう。いずれの場合でも、適切な「有効量」は、定常的な実験のみを使用して当業者によって決定され得る。
【００４４】
本明細書で使用される場合、「運動」という用語は、汗を生じるために十分な激しい活動を含んでなる個人による任意の身体的運動を意味する。本明細書で使用される場合、「運動」という用語は、トレーニングまたはスポーツの試み、活動またはイベントへの正式参加によるいずれのスポーツ活動も含む。「運動」および「スポーツ」という用語は、本明細書では互換的に使用され得る。
【００４５】
運動からの回復と関連して、本明細書で使用される場合、「回復」という用語は、補足がない場合と比較して、本発明によるアミノ酸補足後の改善された回復時間を含み得る。生理的（例えば、血液酸素レベル、心拍数、ヘモグロビンレベル、ヘマトクリットレベル）、行動的および観察的を含む、種々のパラメーターは、回復時間の決定および判定に関して当該技術分野において既知である。
【００４６】
運動またはスポーツと関連して、本明細書で使用される場合、「性能」という用語は、例えば、強度および／または持久力を含む、実行される運動またはスポーツに適切な性能の任意のパラメーターを意味する。強化された性能は、筋肉疲労を克服する能力、より長い期間、活動を維持する能力、トレーニングもしくは運動活動の効率の改善、または筋肉量の維持もしくは発達によっても明らかにされ得る。
【００４７】
本明細書で使用される場合、「高温気候」という用語は、１年のうちの少なくとも一部中の熱が個人に不快感をもたらすため、アミノ酸損失を促進する汗が生じるように対象に汗を生じさせるために十分である任意の機構を意味する。例として、この気候は、２４℃、３０℃、３５℃、４０℃または４５℃を超える温度を経験し得る。
【００４８】
高温条件もしくは気候における運動中または身体運動の他の期間において、個人が汗を通してアミノ酸の有意量を失う可能性がある。対象が運動するとき、アミノ酸は、運動を支持する代謝に利用されるため、循環する血漿から除去される。汗による皮膚の湿潤時、流体は、アミノ酸組成が、皮膚表面から収集された汗流体において測定された主成分のプロフィールと類似である状態で、天然湿潤因子を生じる外側角質層からアミノ酸を浸出することが可能である（図４参照）。これを埋め合わせるために、アミノ酸は、通常、非線維性筋肉貯蔵から引き抜かれるであろう。しかしながら、対象が高強度の運動もしくはトレーニングまたはオーバートレーニングを受ける場合、非線維性筋肉貯蔵の欠乏が生じる可能性があり、次いで、身体が、アクチンおよびミオシンのタンパク質分解に関与する線維性異化に切り替わる以外に選択肢がなく、筋肉損傷、痛みおよび末梢疲労がもたらされる（例えば、Ｎｉｂｌｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００７；Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ  ａｎｄ  Ｒａｓｓｉｅｒ，２００２を参照されたい）。したがって、本明細書では、回復間の筋肉タンパク質貯蔵における潜在的要求を最小化するために、循環にアミノ酸を直接送達することを観点とした、運動中または運動直後の摂取のための、消化が必要とされないアミノ酸サプリメントが記載される。この戦略は、回復の重要な期間として、運動の終了後に続く筋肉組織における異化返答に及ぼす影響を最小化するように設計された。
【００４９】
同様に、消化機能の損傷を付随する進行中の慢性疲労または慢性疾患を有する患者は、汗および尿によってアミノ酸を損失し得、身体のアミノ酸に対する要求を達成するために持続的な異化プロセスが導かれ得る。高温気候において生活する個人も、頻繁な発汗を大量にもたらす比較的低レベルの運動または活動中のアミノ酸の周期的な欠乏からの悪影響を経験し得る。
【００５０】
本明細書に記載されたヒトおよびウマの調査において、血漿の対応するレベルと比較して、汗によって促進されたアミノ酸損失のプロフィールは、汗が血漿アミノ酸組成を単に反映したわけではないことを示した。理論に拘束されることを望まないが、データは、例えば、皮膚表面からのアミノ酸の浸出により、汗中の特定のアミノ酸の濃縮を容易にするための機構が適所でなされることを示唆する。本明細書に例示されるように、汗中の重要な損失成分として認識されたアミノ酸によるアミノ酸サプリメントの提供は、血漿アミノ酸濃度を、作業中の血漿アミノ酸の最大負荷量を表し得るレベルまで引き上げることが可能である。再び、理論によって拘束されることを望まないが、本発明者らは、アミノ酸の血漿濃度を増加することにより、より多くの基質が、筋肉貯蔵における要求を減少させながら、運動および回復を支持するために利用可能となることを示唆する。本明細書で例示されるように、本開示によるアミノ酸補足は、ヘモグロビンおよびヘマトクリットレベルを高めることが示された。
【００５１】
本明細書において記載され、かつ例示される汗によって促進されたアミノ酸損失「表現型」またはプロフィールを決定する能力は、高強度の運動、慢性不健康のレジーム、慢性疲労または高温条件への曝露下にあるアミノ酸支持を必要とするものの、識別における応用を見出し、運動、トレーニングおよび極端な気候条件の身体的に要求が厳しい条件下で最も効果的に生存する最も適切なものを決定することにおける補助となり得る。
【００５２】
本明細書において記載され、かつ例示される汗によって促進されたアミノ酸損失「表現型」またはプロフィールを決定する能力は、性別に基づいて特に設計されたアミノ酸サプリメント配合物の開発を促進する。したがって、本明細書では、特に男性ヒト対象による消費のために設計されたアミノ酸組成物が提供される。特に、男性ヒト対象のために配合されたアミノ酸サプリメントは、α−アミノ−アジピン酸、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒドロキシリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、オルニチン、フェニルアラニンおよびセリンからなる群から選択される１種以上のアミノ酸を含んでなり得る。男性の部分群に関して、アミノ酸サプリメントは、主要なアミノ酸成分として、例えば、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり得る。別の男性の部分群に関して、サプリメントは、主要なアミノ酸成分として、例えば、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンを含んでなり得る。男性用サプリメントは、特に、グルタミンおよび／またはグルタミン、プロリン、セリン、グリシン、アラニン、ヒスチジン、オルニチンおよび／またはリシンをさらに含んでなり得る。
【００５３】
本明細書では、特に女性ヒト対象による消費のために設計されたアミノ酸組成物も提供される。特に、女性ヒト対象による消費のために特に設計されたアミノ酸組成物は、セリン、アラニン、グリシン、ヒスチジン、アスパラギン酸、トレオニン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、バリンプロリン、チロシンおよびアスパラギンからなる群の１種以上を含んでなり得る。女性用サプリメントは、例えば、オルニチン、メチオニン、システイン、メチオニンをさらに含んでなり得る。特定のサプリメントは、例えば、セリン、アラニン、グリシン、ヒスチジン、プロリン、アスパラギン酸；アスパラギン、オルニチンおよびメチオニン；システインおよびメチオニンを主要なアミノ酸成分としてさらに含んでなり得る。
【００５４】
本明細書では、慢性疲労症候群などの慢性疲労を有する個人のために特に設計されたアミノ酸サプリメント配合物も提供される。そのような女性の慢性疲労対象のためのサプリメントは、組成物中の主要なアミノ酸として、アスパラギン酸、アスパラギン、オルニチンおよび／またはメチオニンを含んでなり得る。男性の慢性疲労対象のためのサプリメントは、主要なアミノ酸として、セリン、アラニン、グリシン、アスパラギン酸、バリン、プロリン、チロシン、アスパラギンおよび／またはメチオニンを含んでなり得る。
【００５５】
したがって、本明細書に記載される方法および組成物は、運動または他の形態の身体運動からの回復を促進または補助し、かつ／または前記運動または身体運動における性能を改善する、環境、職業および工業の範囲内の個人のためのサプリメントの判定または評価および提供における応用を見出す。本開示に従って、組成物は、運動または他の身体運動前、その間またはその後に、それを必要とする対象に投与され得る。適切な個人は、例えば、運動選手（プロ、セミプロまたはアマチュア）、パーソナルトレーナーまたはフィットネスもしくは減量プログラムを経験するもの、軍関係者、警察および他のセキュリティー労働者、消防士、建設、採鉱および関連産業の作業者、農夫および牧畜業者であり得る。当業者は、これが単に適当な個人の例示的なリストであり、本発明がそれに限定されるように意図されないことを認識するであろう。
【００５６】
上記のとおり、本明細書に記載される方法および組成物は、例えば、慢性疲労症候群、免疫欠乏などの慢性不健康を経験するもの、外傷または他の傷害を経験するもの、および消化機能が損傷したもののためのサプリメントの判定または評価および提供における応用を見出す。本開示に従って、組成物は、病気、外傷、傷害または消化損傷を患う前、間または後に、それを必要とする対象に投与され得る。当業者は、年齢によって消化効率が減少することを認識するであろう。したがって、本明細書に記載の方法および組成物のさらなる応用は、高齢者への栄養的サポートの提供である。
【００５７】
当業者が認識するであろうように、本明細書に記載される方法および組成物は、ヒト以外の対象のためのサプリメントの判定または評価および提供における応用を見出す。例示的なヒト以外の動物としては、（サラブレッドおよびスタンダードブレッド競走馬、作業馬などの）ウマ、（グレーハウンドを含むレース犬および作業犬などの）イヌ、ならびに高温状態において生活および／または作業をする他の動物の動物が含まれる。
【００５８】
当業者は、本明細書において開示された組成物およびサプリメントにおけるそれぞれのアミノ酸の割合が、例えば、特定の個人もしくは動物、または個人もしくは動物の群（例えば、運動選手、競走馬の群など）のいずれかの汗におけるそれらのアミノ酸に関して観察される相対的な損失を反映するように調整され得ることを認識するであろう。したがって、本開示は、組成物およびサプリメントを、特定の個人もしくは動物、または個人もしくは動物の群の必要に合わせて調製することを考慮する。汗中のアミノ酸の損失の決定は、本明細書に記載され、かつ例示されており、したがって、組成物およびサプリメントのための特定の配合の決定は、過度の実験の負担を必要とせずに当業者の能力の十分範囲内である。
【００５９】
当業者は、本明細書で開示された組成物およびサプリメントが、本明細書に記載されるアミノ酸を含んでなり得るか、またはそれからなり得るか、またはそれから本質的になり得ることも認識するであろう。
【００６０】
一態様において、本開示は、ヒスチジン、セリンおよびリシンを含んでなるアミノ酸組成物であって、ヒスチジン、セリンおよびリシンが、一緒に、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約２５％を構成する、アミノ酸組成物が提供される。特定の対象の必要条件に応じて、例えば、対象における汗によって促進されたアミノ酸損失の分析によって決定され得るように、これらのアミノ酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％または９０％を構成し得る。特定の対象の必要条件に応じて、例えば、対象における汗によって促進されたアミノ酸損失の分析によって決定され得るように、これらのアミノ酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の約３０％〜５０％、例えば、約３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％または５０％を構成し得る。
【００６１】
ヒスチジンは、組成物中のアミノ酸の全重量の約１０％〜２１％、例えば、約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％または２１％を構成し得る。セリンは、組成物中のアミノ酸の全重量の約１３％〜１６％、例えば、１３％、１４％、１５％または１６％を構成し得る。リシンは、組成物中のアミノ酸の全重量の約９％〜１０％を構成し得る。
【００６２】
組成物は、オルニチン、グリシン、グルタミン、グルタミン酸、ロイシンおよびアスパラギン酸の少なくとも１種をさらに含んでなり得る。存在する場合、オルニチンは、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約１２％を構成し得、かつ／またはグリシンは、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約８％を構成し得、グルタミンおよび／またはグルタミン酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約１０％を構成し得、ロイシンは、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約１０％を構成し得、かつ／またはアスパラギン酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約７％を構成し得る。例示的な実施形態において、組成物は、ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり、これらのアミノ酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％または８０％を構成する。別の例示的な実施形態において、組成物は、ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンおよびアスパラギン酸を含んでなり、これらのアミノ酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の少なくとも３５％、４０％、４５％、５０％、５５％または６０％を構成する。
【００６３】
さらなる態様において、本発明のアミノ酸組成物は、ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり、ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、組成物のアミノ酸の全重量の少なくとも約３０％を構成する。特定の対象の必要条件に応じて、例えば、対象における汗によって促進されたアミノ酸損失の分析によって決定され得るように、これらのアミノ酸は、組成物中のアミノ酸の全重量の３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％または７６％を構成し得る。
【００６４】
指定されたアミノ酸に加えて、本発明の組成物は、いずれかの１種以上の他のアミノ酸も含んでなり得、当業者は、本開示の範囲がいずれかの特定の追加的アミノ酸の包含によって限定されないことを認識するであろう。ウマの投与に適切な１つの例示的な実施形態において、本開示の組成物は、一緒に組成物中のアミノ酸の全重量の約６０％を表す、ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンおよびアスパラギン酸を含んでなり得、かつ一緒にアミノ酸の全重量の残り４０％を構成する、アラニン、グリシン、フェニルアラニン、バリン、イソロイシン、プロリン、トレオニンおよびチロシンをさらに含んでなり得る。
【００６５】
本発明の組成物は、（ミネラル、ビタミン、補酵素、脂肪酸、炭水化物、タンパク質またはペプチドなどの）他の適切な栄養成分、ならびに酸素代謝を改善する成分など、回復または性能に関する付随的な利益を活性化するための追加成分、酸化防止剤、直接的または間接的にラジカル掃去剤と関連するか、または心臓機能を改善する因子を含んでなり得る。そのような他の成分の量は、消費が安全であると考えられ、かつ適切な規制当局の容認可能なガイドラインによって認可されるいずれかの量であり得る。当業者は、そのような量を、望ましい結果を達成するように調節することができる。
【００６６】
本発明の組成物は、いずれかの適切な添加剤、担体、追加の治療剤、生物学的利用能促進剤、副作用抑制成分、希釈剤、緩衝剤、香料、結合剤、防腐剤または組成物の有効性に有害ではない他の成分も含み得る。
【００６７】
本発明の組成物は、医薬、栄養および栄養補助食品産業において周知の技術およびプロセスを使用して、当業者によって容易に製造可能であり、かつ経口投与のために適切に配合され得る。適切な経口剤形としては、液体、果粒、粉末、ゲル、ペースト、可溶性サッシェ、経口可溶性剤形、カプセル、カプレット、ロゼンジ、タブレット、発泡性タブレット、咀嚼錠、例えば、時間および／またはｐＨ依存性放出を有する多層タブレットを含み得る。
【００６８】
経口投与に適切な組成物は、例えば、粉末、果粒、ゲルとして、または水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として、組成物のそれぞれの成分の事前に決定された量を含有する個別の単位として示され得る。組成物は、以後例示される種々の飲料、食品、栄養補助食品、栄養サプリメント、食品添加物、医薬品および店頭販売配合物に好都合に組み込まれ得る。しかしながら、当業者は、組成物が当該技術分野において既知のいずれかの適切な形態において配合され得、かつ使用者に供給され得ることを認識するであろう。
【００６９】
組成物は、種々の飲料製品に好都合に組み込まれ得る。飲料の適切な種類の特定の例としては、限定されないが、水、炭酸飲料、スポーツドリンク、栄養飲料、フルーツジュース、野菜ジュース、ミルク、および水ベース、ミルクベース、ヨーグルトベース、他の乳製品ベース、ミルク代用品ベース（豆乳またはオート麦ミルクなど）またはジュースベース飲料である他の製品が含まれる。組成物は、使用者によって飲料に添加されるか、もしくは飲料中に予混合される粉末、顆粒もしくは他の固体形態で提供され得るか、または適切な飲料に添加される濃縮液、ゲルもしくはペーストの形態として提供され得る。あるいは、組成物は、適切な飲料と予混合された液体形態で使用者に提供され得る。１つの例示的な実施形態において、組成物は、飲料の厳密な特性および体積に応じて、約２０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇまたは２０００ｍｇもしくはそれを超える用量で水ベースの飲料（スポーツドリンクなど）に含まれ得る。
【００７０】
組成物は、種々の食品、栄養補助食品または食品添加物にも好都合に組み込まれ得る。食品または食品添加物は、粉末または液体形態などの固体形態であり得る。適切な食品としては、焼成品、例えば、クラッカー、パン、マフィン、ロール、ベーグル、ビスケット、シリアル、バー、例えば、ミューズリーバー、ヘルスフードバー、ドレッシング、ソース、カスタード、ヨーグルト、プディング、事前包装された冷凍食品、スープおよび菓子が含まれ得る。
【００７１】
別の実施形態において、組成物は、追加的な飲料または食品が存在しない状態で、単純に粉末、顆粒、ゲル、ペースト、固体剤形または濃縮液体の形態として消費され得る。カプセルまたはタブレットなどの他の固体剤形も考慮される。例えば、対象がウマなどの動物である場合、アミノ酸は、適切な割合で予混合され、かつ経口シリンジを介した投与のためのペースト送達系を形成することを補助するキサンタンガムなどの結合剤との適切な比率において（水などの）液体と組み合わせられ得る。当業者は、多くの他の経口送達系が対象の同一性および寛容性に応じて利用され得ることを認識するであろう。
【００７２】
組成物がカプセルとして配合される場合、組成物の成分は、でんぷん、ラクトース、微結晶性セルロースおよび／または二酸化シリコンなどの１種以上の薬学的に許容される担体と配合され得る。追加的成分としては、ステアリン酸マグネシウムおよび／またはステアリン酸カルシウムなどの潤滑剤が含まれ得る。カプセルは、任意選択的に、例えば、フィルムコーティングまたは腸溶コーティングでコーティングされ得、かつ／または組成物の持続放出または徐放が提供されるように配合され得る。
【００７３】
タブレットは、任意選択的に、１種以上の副成分と一緒に、圧縮または成形によって調製され得る。圧縮タブレットは、任意選択的に、結合剤、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム）、不活性希釈剤または表面活性／分散剤と混合して、粉末または顆粒などの自由流動性形態の組成物の成分を適切な機械中で圧縮することによって調整され得る。成形タブレットは、適切な機械中で、不活性液体希釈剤によって湿潤させた粉末状組成物の混合物を成形することによって製造され得る。タブレットは、任意選択的に、例えば、フィルムコーティングまたは腸溶コーティングでコーティングされ得、かつ／または組成物の持続放出または徐放が提供されるように配合され得る。
【００７４】
当業者は、対象の必要性および治療される対象の状態に応じて必要とされると決定された用量レベルおよび投与レジームで、本明細書に開示された組成物の単回または複数回投与を実行できることを認識するであろう。当業者は、適切な用量レジームを容易に決定することができる。広範囲の用量が適用可能であり得る。用量レジメンは、最適応答を提供するように調整され得る。当業者は、投与の正確な量およびレートが、組成物が投与される形態を含む投与される特定の組成物、対象の年齢、体重、健康全般、性別および栄養必要量、ならびに組成物と組み合わせて、または同時に使用されるいずれの薬物または薬剤などの多数の因子に依存するであろうことを認識するであろう。例えば、複数の分割量が毎時間、毎日、毎週、毎月もしくは他の適切な時間間隔で投与され得るか、または状況の要求によって示されるように、用量は相対的に減少され得る。本明細書における教示に基づき、当業者は、定常的な試験および実験により、事例毎に適切な用量レジームを決定することができるであろう。
【００７５】
一般に、本開示の組成物は、健康補助食品、栄養補助食品、食品添加物および／または治療剤として、望ましい健康状態を達成するために有効であるいずれかの適切な用量で投与され得る。
【００７６】
対象がヒトであるいくつかの実施形態において、有効用量は、約５０ｍｇ〜１５ｇ、約１００ｍｇ〜１５ｇ、約２００ｍｇ〜１５ｇ、約４００ｍｇ〜１５ｇ、約６００ｍｇ〜１５ｇ、約８００ｍｇ〜１５ｇ、約１０００ｍｇ〜１５ｇ、約２ｇ〜１５ｇ、約３ｇ〜１５ｇ、約４ｇ〜１５ｇ、約５ｇ〜１５ｇ、約６ｇ〜１５ｇ、約７ｇ〜１５ｇ、約８ｇ〜１５ｇ、約９ｇ〜１５ｇ、約１０ｇ〜１５ｇ、約１１ｇ〜１５ｇ、約１２ｇ〜１５ｇ、約１３ｇ〜１５ｇまたは約１４ｇ〜１５ｇの範囲であり得る。有効用量は、約５０ｍｇ〜１４ｇ、約５０ｍｇ〜１３ｇ、約５０ｍｇ〜１２ｇ、約５０ｍｇ〜１１ｇ、約５０ｍｇ〜１０ｇ、約５０ｍｇ〜９ｇ、約５０ｍｇ〜８ｇ、約５０ｍｇ〜７ｇ、約５０ｍｇ〜６ｇ、約５０ｍｇ〜５ｇ、約５０ｍｇ〜４ｇ、約５０ｍｇ〜３ｇ、約５０ｍｇ〜２ｇ、約５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、約５０ｍｇ〜８００ｍｇ、約５０ｍｇ〜６００ｍｇ、約５０ｍｇ〜４００ｍｇ、約５０ｍｇ〜２００ｍｇまたは約５０ｍｇ〜１００ｍｇの範囲であり得る。そのような用量は、毎日、または必要とされる基準に応じて投与され得る。対象の必要性および投与される組成物の形態に応じて、組成物の定用量、例えば、１日あたり約５０ｍｇ、１日あたり約１００ｍｇ、１日あたり約２００ｍｇ、１日あたり約４００ｍｇ、１日あたり約６００ｍｇ、１日あたり約８００ｍｇ、１日あたり約１０００ｍｇ、１日あたり約１２００ｍｇ、１日あたり約１４００ｍｇ、１日あたり約１６００ｍｇ、１日あたり約１８００ｍｇ、１日あたり約２ｇ、１日あたり約２．２ｇ、１日あたり約２．４ｇ、１日あたり約２．６ｇ、１日あたり約２．８ｇ、１日あたり約３ｇ、１日あたり約３．２ｇ、１日あたり約３．４ｇ、１日あたり約３．６ｇ、１日あたり約３．８ｇ、１日あたり約４ｇ、１日あたり約４．２ｇ、１日あたり約４．４ｇ、１日あたり約４．６ｇ、１日あたり約４．８ｇ、１日あたり約５ｇ、１日あたり最高約６ｇ、１日あたり約７ｇ、１日あたり約８ｇ、１日あたり約９ｇ、１日あたり約１０ｇ、１日あたり約１１ｇ、１日あたり約１２ｇ、１日あたり約１３ｇ、１日あたり約１４ｇまたは１日あたり約１５ｇが経時的に投与され得る。小児用量は、成人服用量の１５％〜９０％の範囲であり得る。
【００７７】
対象がウマである、いくつかの実施形態において、有効用量は、約１ｇ〜５０ｇ、約５ｇ〜５０ｇ、約１０ｇ〜５０ｇ、約１５ｇ〜５０ｇ、約２０ｇ〜５０ｇ、約２５ｇ〜５０ｇ、約３０ｇ〜５０ｇ、約３５ｇ〜５０ｇ、約４０ｇ〜５０ｇまたは約４５ｇ〜５０ｇの範囲であり得る。有効用量は、約１ｇ〜４５ｇ、約１ｇ〜４０ｇ、約１ｇ〜３５ｇ、約１ｇ〜３０ｇ、約１ｇ〜２５ｇ、約１ｇ〜２０ｇ、約１ｇ〜１５ｇ、約１ｇ〜１０ｇまたは約１ｇ〜５ｇの範囲であり得る。ウマ対象の必要性に応じて、組成物の定用量、例えば、約１ｇ、１日あたり約２ｇ、１日あたり約４ｇ、１日あたり約６ｇ、１日あたり約８ｇ、１日あたり約１０ｇ、１日あたり約１２ｇ、１日あたり約１４ｇ、１日あたり約１６ｇ、１日あたり約１８ｇ、１日あたり約２０ｇ、１日あたり約２２ｇ、１日あたり約２４ｇ、１日あたり約２６ｇ、１日あたり約２８ｇ、１日あたり約３０ｇ、１日あたり約３２ｇ、１日あたり約３４ｇ、１日あたり約３６ｇ、１日あたり約３８ｇ、１日あたり約４０ｇ、１日あたり約４２ｇ、１日あたり約４４ｇ、１日あたり約４６ｇ、１日あたり約４８ｇまたは１日あたり約５０ｇが経時的に投与され得る。
【００７８】
対象のアミノ酸レベルが通常のまたは容認できるレベルにあるか、またはそれまで回復した事象において、本開示は、対象のアミノ酸レベルを通常のまたは容認できるレベルに維持するか、または維持することを補助するように設計された用量における本明細書に開示された組成物の投与を考慮する。そのような維持用量は、アミノ酸を通常のもしくは容認できるレベルまで回復するために必要とされる用量、または対象の回復を補助するために必要とされる用量より低くなり得るが、なお典型的に、本明細書に例示される用量の範囲内に含まれるであろう。例えば、対象がヒトである場合、本開示の組成物は、容認できるまたは通常のアミノ酸レベルを維持するために、１日あたり約５０ｍｇ、１日あたり約１００ｍｇ、１日あたり約１５０ｍｇ、１日あたり約２００ｍｇ、１日あたり約２５０ｍｇ、１日あたり約３００ｍｇ、１日あたり約３５０ｍｇ、１日あたり約４００ｍｇ、１日あたり約４５０ｍｇ、１日あたり約５００ｍｇ、１日あたり約５５０ｍｇ、１日あたり約６００ｍｇ、１日あたり約６５０ｍｇ、１日あたり約７００ｍｇ、１日あたり約７５０ｍｇ、１日あたり約８００ｍｇ、１日あたり約８５０ｍｇ、１日あたり約９００ｍｇ、１日あたり約９５０ｍｇ、１日あたり約１０００ｍｇ、１日あたり約２ｇ、１日あたり最高約１０ｇの用量で対象に投与され得る。さらに、対象がウマである場合、本開示の組成物は、容認できるまたは通常のアミノ酸レベルを維持するために、１日あたり約１ｇ、１日あたり２ｇ、１日あたり３ｇ、１日あたり４ｇ、１日あたり５ｇ、１日あたり６ｇ、１日あたり７ｇ、１日あたり８ｇ、１日あたり９ｇ、１日あたり１０ｇ、１日あたり１１ｇ、１日あたり１２ｇ、１日あたり１３ｇ、１日あたり１４ｇ、１日あたり１５ｇ、１日あたり最高約３０ｇの用量で対象に投与され得る。このような維持用量は、例えば、運動、トレーニングまたは競技時間またはスケジュール以外のヒト運動選手またはウマにも適切であり得る。
【００７９】
本発明は、対象に投与される組成物の最も適切なアミノ酸構成、および最も適切な用量レベルを決定するための方法も提供する。典型的に、そのような決定は、いずれかの対象に対する汗によって促進されたアミノ酸損失、および／または対象から得られた血漿試料中の全アミノ酸濃度の分析に基づく。例えば、本明細書において例示されるように、一実施形態において、本発明は、対象に投与されるダイエタリーサプリメントを決定するための方法であって、
ａ）対象に、汗を発生させるために十分な運動をさせるステップと；
ｂ）前記汗中のアミノ酸組成を決定するステップと；
ｃ）前記汗中の全アミノ酸組成に基づいて、対象の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールを決定するステップであって、約４，０００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、「低」プロフィールを表し、約４，０００〜１０，０００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、「中」プロフィールを表し、および約１０，０００μモルＬ−１より高いアミノ酸濃度は、「高」プロフィールを表す、ステップと
を含んでなり、低、中または高の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールとして対象を階層化することは、投与されるサプリメントと、任意選択的に、投与される前記サプリメントの量または用量とを決定する、方法を提供する。
【００８０】
低、中または高の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールとして対象を階層化することは、例えば、高性能運動選手または動物の場合、あるいは重症の病気もしくは傷害の対象、または重症の病気もしくは傷害になりやすい対象において望ましいことがあり得る。
【００８１】
また、本明細書において、対象に投与されるダイエタリーサプリメント剤の必要条件を決定するための方法であって、
ａ）対象から血漿試料を採取するステップと；
ｂ）前記血漿中の全アミノ酸組成を決定するステップであって、約２，８００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、補足の必要を示すアミノ酸の「低」作用レベルを表す、ステップと
を含んでなる方法も提供される。
【００８２】
本明細書において例示されるように、対象の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、汗中の個々のアミノ酸濃度を決定するステップをさらに含んでなり得、（ｉ）「低」プロフィールは、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンが汗中のアミノ酸の少なくとも約５０％を構成し、セリンが汗の主要なアミノ酸成分であることによって表され；（ｉｉ）「中」プロフィールは、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンが汗中のアミノ酸の少なくとも約７０％を構成し、オルニチンが汗の主要なアミノ酸成分であることによって表され；かつ（ｉｉｉ）「高」プロフィールは、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンが汗のアミノ酸の少なくとも約６０％を構成し、ヒスチジンが汗の主要なアミノ酸成分であることによって表される。
【００８３】
さらに、本明細書において例示されるように、本発明は、投与のためのアミノ酸サプリメントを決定するときに、対象の結晶中の全アミノ酸レベルを決定するための血液または血漿試験の利用を考慮する。
【００８４】
記載された方法は、例えば、現在および過去の性能レベルおよび作業量、対象の状態および将来的な必要条件を考慮に入れて、対象のための適切なアミノ酸補足プログラムの開発および実施を促進するために継続的に使用可能である。これには、投与されるサプリメントの特定のアミノ酸構成を考案すること、および／または種々の時間において利用される適切な用量を決定することが関与し得る。
【００８５】
本開示の組成物および方法は、運動、病気、外傷もしくは傷害からの回復を促進もしくは補助するため、または運動もしくはスポーツ性能を促進もしくは補助するための他のサプリメントプログラム、あるいは他の療法または治療への補助として利用され得る。したがって、本明細書に開示される組成物および方法は、望ましい結果を促進し得る他の薬剤と一緒に同時投与され得る。「同時投与」とは、同一もしくは異なるルートによる同一配合物中もしくは２種の異なる配合物中での同時投与、または同一もしくは異なるルートによる連続投与を意味する。「連続」投与とは、薬剤、組成物または治療剤の投与間の数秒、数分、数時間または数日の時間差を意味する。連続投与は、いずれの順番でもあり得る。
【００８６】
いずれの従来の刊行物（もしくはそれから得られる情報）、または既知であるいずれかの事項への本明細書の参照は、知識もしくは容認、または従来の刊行物（もしくはそれから得られる情報）、または既知の事項も、本明細書が関連する開発分野における共通の一般知識の一部を形成するいずれかの示唆の形態として受け取られず、かつ受け取られるべきではない。
【００８７】
ここで、本開示は、以下の特定の実施形態を参照にして説明されるが、これは、本発明の範囲を決して限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【００８８】
次の実施例は、本発明を説明し、かつ本明細書全体の記載の開示の一般的性質を決して限定するものとして解釈されるべきではない。
【００８９】
実施例１  −  男性運動選手における運動中の汗によって促進されたアミノ酸損失
本発明者らは、アミノ酸の有意量が、定義された運動条件ならびに一定温度および湿度下において汗中で損失するかどうかを調査した。以下に記載されるように、制御された運動および環境条件下で２つの別個の調査を実行し、合計１９人の参加者からの汗の提供を得た。第１の調査では、アミノ酸の汗組成との比較のため、対応する運動後の血液血漿試料を１１人の対象から得た。第２の調査では、３２〜３４℃および２０〜３０％の相対湿度（ＲＨ）における運動レジーム下の全アミノ酸濃度および１時間あたりの流体損失などの汗の特徴に基づき、運動選手のサブグループを描写することができるかどうかを決定するため、追加の８つの汗試料を得た。本調査は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認され、全参加者は、調査に参加する前に書面によるインフォームドコンセントが提供された。
【００９０】
調査参加者
過去２年間で５ｋｍの競技ランニングを少なくとも１０回完走したことのある１１人の十分にトレーニングした男性の持久力のある運動選手（年齢：２９±９歳、身長：１７９±７、体重：７３±１０ｋｇ、Σ７皮下脂肪：５８±２４ｍｍ）から構成される調査群が募集された。運動中に有害事象を経験するリスクを増加させる（心臓血管、筋骨格または代謝の）いずれかの医学的状態が報告された場合、潜在的参加者は除外された。参加者は、７日間の間隔を空けて、高温環境（３２〜３４℃および２０〜３０％ＲＨ）を提供するための環境チャンバー中で、種々の冷却インターベンションを用いて、モーターを備えていないトレッドミル上での３回のシミュレートされた５ｋｍの自己ペースのタイムトライアルを実行した。参加者は、反復５ｋｍの自己ペースのタイムトライアルをランダムに完走し、このとき、参加者は、氷スラリー摂取による予冷［ランニングの３０分前に７．５ｇ．ｋｇ−１．ＢＭ−１の氷スラリー（−１℃）（Ｇａｔｏｒａｄｅ，ＰｅｐｓｉＣｏ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ）］、メントールマウスリンスによる中間冷却［口中を５秒間、２５ｍＬのＬ−メントール溶液（濃度０．０１％；２２℃；Ｍｅｎｔｈａ  Ａｒｖｅｎｓｉｓ，Ｎｅｗ  Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓ，Ｓｙｄｎｅｙ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）で洗い流し、その後、バケツに吐き出す］を経験したか、またはインターベンションを行わなかった。
【００９１】
８人の男性トライアスロン選手から構成される追加調査群を募集し、汗組成特徴の拡張されたサブグループ評価を容易にするための汗試料を提供させた。これらの運動選手は、年齢が２５歳〜３５歳であり、１２カ月以内にオリンピック距離のトライアスロンを完走していた（年齢：２９．６±３．４歳、体重（ＢＭ）：７７．８±１１．１ｋｇ、ＶＯ２ｍａｘ：６２．１±４９ｍＬ  ｋｇ−１分−１、最近１２カ月におけるオリンピック距離トライアスロン時間：２：１０：１２±０：９：１２時間：分：秒、平均±ＳＤ）。運動中に有害事象を経験するリスクを増加させる（心臓血管、筋骨格または代謝の）いずれかの医学的状態が報告された場合、潜在的参加者は除外された。参加者は、７日間の間隔を空けて、高温環境（３２〜３４℃および２０〜３０％ＲＨ）を提供するための環境チャンバー中で、２回のシミュレートされたオリンピック距離トライアスロン試験を実行した。トライアスロンは、５０ｍ屋内プールでのスイム（１５００ｍ）、サイクルエルゴメータ（Ｌｏｄｅ  Ｅｘｃａｌｉｂｕｒ  Ｓｐｏｒｔ，Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）でのサイクル（１時間）およびモーターを備えたトレッドミル（Ｐｏｗｅｒｊｏｇ  ＪＭ１００，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｆｉｔｎｅｓｓ  ＵＫ，Ｍｉｄ  Ｇｌａｍｏｒｇａｎ，Ｗａｌｅｓ）での１０ｋｍの自己ペースのタイムトライアルを含む、３種の標準化された行程から構成された。サイクルおよびランニング行程は環境チャンバー内で実行された。それぞれの参加者は、水分補給をして運動トライアルを開始することが要求され、運動開始直前に体重測定した。サイクル構成要素中、参加者は、１０ｇ．ｋｇＢＭ−１の氷スラリー（＜１℃）または室温（３２〜３４℃）のスポーツ飲料（Ｇａｔｏｒａｄｅ，Ｐｅｐｓｉｃｏ，Ｃｈａｔｓｗｏｏｄ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）のいずれかを摂取した。これらの冷却戦略間では汗組成物に影響はなかった。
【００９２】
汗収集および分析
角質層からの潜在的な寄与を評価するために、週に１度の間隔で３回、皮膚から汗および水洗浄液を収集した。皮膚水洗浄液から収集された試料との比較のために、標準化された３０分の運動定常課程後に１人の追加男性（年齢５７歳）の背部から汗を収集した。運動は、２８〜３２℃の早朝に行われ、次いで、参加者はシャワーを浴び、１８〜２４℃の範囲の温度において一晩休んだ。運動の１２時間後、洗浄試料を、殺菌検体容器中で少なくとも１ｍＬの収集のために液滴を生成するために十分に背部の皮膚上にろ過水を噴霧することによって収集した。次いで、対象はシャワーを浴び、完全に乾燥させ、その直後、噴霧および皮膚からの液滴の収集により第２の試料を収集した。このアプローチは、浸出が生じている場合に予想されるであろうように、角質層が皮膚表面での湿潤にアミノ酸を寄与することができたかどうかを示すように設計された。このプロジェクトは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって別個に承認され（承認番号：Ｈ−２０１５−０５３４）、参加者は、調査に参加する前に書面によるインフォームドコンセントを提供した。
【００９３】
運動前および後のサンプリング時間に、主要調査群から血漿試料を採取した。繰り返しセッションにおけるそれぞれの参加者からの複数の血漿試料の結果は平均化され、調査におけるそれぞれ個人からの単一の代表値を提供した。汗試料を殺菌７０ｍＬ検体ジャー（Ｓａｒｓｔｅｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中に直接収集することによって両方の試験中に収集した。コホート１において、８人の運動選手のうちの５人が２つの状況において汗試料を提供し；１つは冷スラリーの提供の状態下であり、もう１つは周囲温度流体の提供下であった。３人の運動選手は、冷スラリーまたは周囲温度流体の提供下で１つのみの汗試料を提供した。コホート２において、１１人の運動選手のそれぞれが全３つの状況において汗試料を提供した。汗は、それぞれの参加者の背部中央上部、三頭筋および前頭の皮膚上にスキージーをこすり、即座に殺菌容器中に汗を移すことにより、トレッドミルランの直後に調査員によって収集された。それぞれの参加者からの複数の汗試料からの結果は平均化され、調査におけるそれぞれ個人からの単一の代表値を提供した。運動定常課程後、対象をタオルで乾燥させ、運動レジーム中の全流体損失を決定するために体重を測定した。全汗量は、シミュレートされたトライアスロンにわたる流体および食物摂取に関して修正された、トライアスロンを通して損失された全体重として算出された。汗試料を４℃に保持し、収集の６０分以内に冷凍した。汗試料は、Ｅｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８によって以前に記載されたように、ガスクロマトグラフィー／水素炎イオン化検出（ＧＣ／ＦＩＤ）によるアミノ酸の分析のためのＥＺ：Ｆａａｓｔ（商標）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｉｎｃ．）誘導体化キットを使用するアミノ酸組成物のための分析まで−８０℃で貯蔵した。
【００９４】
データおよび統計的分析
ＡＮＯＶＡによって評価されるように、異なる冷却処置は、血漿または汗試料のアミノ酸組成に影響を与えなかった。それぞれの運動選手の汗および運動前または後の血漿試料の複製は、したがって、それぞれの運動選手の１つの代表値を含むように平均化された。データセットは、一方向のＡＮＯＶＡによって運動前および後の血漿アミノ酸プロフィールを比較するために構成され、統計的有意性のレベルはＰ＜０．０５に設定された。加えて、汗中の全アミノ酸濃度に基づき定義された群間の血漿および汗組成もＡＮＯＶＡによって評価された。汗排出集団は、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ（商標）Ｖ１２ソフトウェア（Ｓｔａｔｓｏｆｔ）を使用して、主成分分析、識別関数分析および相関分析を使用して分析された。
【００９５】
結果
主要な運動選手群１（ｎ＝１１）から収集した汗中で２６種のアミノ酸が検出された。これらは、運動時間前および後に採取された対応する血漿アミノ酸との比較のために表１で要約される。アスパラギン酸およびヒドロキシリシンは、汗中に存在したが、運動前および後の血漿試料の両方において存在しなかった。汗中のアミノ酸の平均全濃度は、血液血漿中で観察されたものより３倍以上高かった。全１３種のアミノ酸が、運動後の血漿において記録されたものよりも有意に高い濃度で存在した。これらは、α−アミノ−アジピン酸、アスパラギン、アスパルテート、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシリシン、イソロイシン、ロイシン、リシン、オルニチン、フェニルアラニンおよびセリンから構成された。４種のアミノ酸が、運動後の血漿と比較して有意に低い濃度で汗中に存在した。これらは、α−アミノ−酪酸、グルタミン、シスチンおよびプロリンから構成された。運動後の血漿アミノ酸は、アラニンにおいて統計的に有意な増加を示し、アスパラギン、リシン、オルニチン、セリンおよびトレオニンにおいて有意な減少を示した。したがって、運動レジームは、単純に、例えば、血液の体積の変化によって説明することができない、循環している血漿のアミノ酸組成に対して影響を有したと結論付けることができた。
【００９６】
汗のアミノ酸組成は、第２の運動選手群（ｎ＝８）に対して決定され、第一次群（ｎ＝１１）のデータと比較したところ、２つの群間の汗中のアミノ酸の全レベルにおける有意差がなかったことが明らかになった。一緒に汗の組成の５％を表す３種のみのアミノ酸が、主要および第２の調査群間で統計学的に異なっていた。これらの３種のアミノ酸は、主要運動選手群の２９５±１５８μＭ対第２の群の１０６±２８μＭで測定されたロイシン；７４．５±２３μＭ対６．５±０．６μＭのα−アミノ−アジピン酸；および１５．６±７．４μＭ対１２７±３２μＭのチロシンからなった（Ｐ＜０．０５）。したがって、対象は、汗アミノ酸濃度に関して得られた高い相違を決定および説明しようとする試みにおいて、より多いデータセット（ｎ＝１９）を形成するために組み合わせられた。このデータは、アミノ酸濃度、汗体積および汗による全アミノ酸損失などの発汗特徴における明白な差異に関して評価された。汗中の全アミノ酸濃度を基準にして個人をランク付けした場合、汗によって促進されたアミノ酸損失（ＳＦＬＡＡ）によって特徴付けられた３つの別個の集団またはサブグループ中に運動選手として配置することが可能であった：１）「低」集団は、２．４±０．７ｍＭの平均±ＳＤを有し、４．０ｍＭより高い汗中の全アミノ酸濃度を有すると定義された（ｎ＝８）；２）「中」集団は、５．９±１．７ｍＭの平均を有し、４．０〜１０．０ｍＭと定義された（ｎ＝７）；「高」集団は、１５．２±３．３ｍＭの平均を有し、１０．０ｍＭより高いと定義された（ｎ＝４）。（全アミノ酸レベルを除いて）アミノ酸濃度の汗プロフィールは、主成分分析（ＰＣＡ）を行って、汗中のプロフィールが集団メンバーを客観的に区別するために使用されることができたかどうかを決定した。図１で表される分析は、ＰＣＡによって生じた因子が、それぞれの個人からの汗中のアミノ酸組成のパターンに基づいた３つの集団のメンバーを完全に分解したことを明らかに示す。
【００９７】
【表１】
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【００９８】
３つの集団のそれぞれからの汗の汗特徴およびアミノ酸組成を表２に要約した。「低」ＳＦＬＡＡ群は、２．３Ｌ／時間の最も高い１時間あたりの推定された汗体積および２．４μＭの最も低い汗中の全アミノ酸濃度を示し、１時間あたりの汗を介したアミノ酸損失の推定量は５．５ミリモルであった。それとは対照的に、「高」ＳＬＡＡ群は、１．５Ｌ／時間の最も低い１時間あたりの推定された汗体積および１５．２ｍＭの最も高いアミノ酸濃度を示し、１時間あたりの汗を介したアミノ酸損失の推定量は２２．８ミリモルであった（表３）。「中」ＳＦＬＡＡ群の１．８Ｌ／時間の１時間足りの汗体積および５．９ｍＭの汗アミノ酸濃度は、「高」および「低」群の値間に含まれ、１時間あたりの汗を介した損失の推定量は１０．６ミリモルであった。アミノ酸は、「低」集団からの汗中で測定された最も高い濃度を有する成分の順にランク付けされ、３つの集団間のアミノ酸プロフィールにおける差異は、濃度およびプロフィール中の相対存在度に関して明白であった。
【００９９】
「低」ＳＦＬＡＡ集団は、汗のアミノ酸組成の５７％を構成する主要なアミノ酸成分として、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンを有することによって特徴付けられ；「中」集団は、汗のアミノ酸組成の７１％を構成する主要なアミノ酸成分として、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンを有し；かつ「高」集団は、汗のアミノ酸組成の６２％を構成するヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンを有した。「中」および「高」集団の汗アミノ酸の大部分は、血漿に関して観察されるものより高い濃度で存在したが、グルタミンおよびプロリンは、全ての群に関して、常に汗中でより低い濃度で存在した。バリンは、血漿と比較して「中」および「低」集団に関して汗中でより低く、かつアラニンおよびトリプトファンも、血漿と比較して「低」集団に関して汗中でより低かった。アスパラギン酸は血漿中で検出されなかったが、「低」集団からの汗中では６番目に最も豊富なアミノ酸として存在し、残りの群に関してより高濃度で観察された。休息血漿レベルにおける全アミノ酸は、「低」集団において最高であり、「高」集団において最低であった。差異が有意ではなかったが、休息全血漿濃度と全汗濃度との間に強い逆相関が観察された（ｒ２＝−０．９９）（すなわち、汗中のアミノ酸の濃度が高いほど、血漿中のアミノ酸の休息濃度が低い）。
【０１００】
【表２】
2018520204.tif 000003
【０１０１】
汗プロフィールにおけるアミノ酸のパーセンテージ相対存在度の分析でも、３つの群間の組成における実質的な質的差異を示した。これは、汗中のそれぞれのＳＦＬＡＡ集団のアミノ酸の％相対存在度（図２Ａ）が、血漿中の対応するレベル（図２Ｂ）に対して比較のためにプロットされた図２において例示される。この評価から、全３つの群において、セリン、グリシン、ヒスチジンおよびオルニチンが汗中の主要成分を表すが、それぞれの群は、支配的な成分として異なるアミノ酸：「低」の集団に関してはセリン、中の集団に関してはオルニチン、および高の集団に関してはヒスチジンによって特徴付けられることは明白である。アラニンおよびリシンも５％より高いレベルで汗中に存在することがわかった。対照的に、対応する運動後の血漿中のアミノ酸の６０．１％を表す主要成分は、２２．３％のアラニン、１７％のグルタミン、１１．５％のバリンおよびン９．３％のプロリであり、これらの全てはＣ群アミノ酸として存在した。
【０１０２】
皮膚表面自体からの汗中のアミノ酸負荷量への潜在的な寄与を調査するために、別の調査が実行された。アミノ酸のレベルは、３つの別の状況における１人の男性参加者による夕方の運動セッション後に測定され、４．５±１．２ｍＭの平均全アミノ酸濃度が得られた。汗の運動収集後、男性はシャワーを浴び、１２時間、１８〜２４℃において一晩休息し、その後、水の噴霧によって背部の皮膚表面を湿潤し、即座に表面流体を収集することによって水洗浄試料を収集した。運動およびシャワーの１２時間後に採取された表面洗浄試料は、初期の運動後汗試料の２７％に等しい１．２ｍＭの全アミノ酸含有量を有することがわかった。第２の水洗浄試料は、シャワーおよび乾燥の直後に再び水の噴霧によって皮膚表面を湿潤させることによって採取された。この試料は、運動後の汗試料の４％に等しい約０．１８ｍＭの全アミノ酸含有量を含有することがわかった（図３）。これらの３種の試料に関する相対存在度（図２）により、新たに洗浄された皮膚表面からの流体のアミノ酸組成プロフィールは、運動後の汗の組成プロフィールを反映することが示された（図４）。
【０１０３】
理論によって拘束されることを望まないが、本発明者らは、運動中の発汗が、休息状態との比較において、アミノ酸損失の追加的経路、エネルギー代謝のための超過アミノ酸利用、組織修復および回復の追加的経路を表すことを提案する。アミノ酸損失のプロセスは、発汗による皮膚の浸潤において生じるアミノ酸の浸出による皮膚表面からの汗への寄与を伴うであろう。本調査におけるセリン、アスパルテート、グリシン、オルニチンおよびアラニンの高い損失は、生体によって合成可能であるアミノ酸を表すが、運動中のこれらの代謝生成物の生体内合成は、必ずしも要求を満たし得ない。長期間および激しい運動条件下において、または高温気候において、アミノ酸の損失は、非線維性貯蔵からそれらにアクセスするか、または新規にそれらを合成する身体の能力を超過し得る。これらの貯蔵が汗を通して代謝酸化および損失によって欠乏すると、線維性タンパク質がアミノ酸に対する要求を満たすために異化を受け、潜在的な筋肉ダメージがもたされ得る。この形態の線維性異化は、筋肉が効果的に機能することを不可能にさせ、末梢疲労として知られている状態を導く可能性がある。慢性筋肉異化は、サルコペニア、慢性疲労、長期不活動性および種々の他の疾患状態などの状態に不可欠なプロセスであり、高強度運動およびオーバートレーニングに付随する。汗によって損失したアミノ酸の量は、平均１日摂取の比較的小さい割合を表し得るが、受けた損失（１時間あたり０．３〜１．３ｇ、または５．５〜２２．８ミリモル）は、身体の貯蔵が異化反応によって利用される場合の高い要求時に迅速となるであろう。世界保健機構（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ）によって推奨される１日の必要摂取量に基づいて、本発明者らは、「高」ＳＦＬＡＡ集団メンバーの運動レジーム中の汗中のヒスチジンの損失が、１０ｍｇ．ｋｇ−１．日−１のＲＤＡの最高４０％に相当し得ることを算出した。類似の方法において、消化機能の損傷を付随する進行中の慢性疾患を有する患者は、汗および尿を介してアミノ酸を損失し、アミノ酸に対する身体の要求を満たすための持続的な異化プロセスをもたらし得る。高温気候に住む人々も、頻繁な発汗を大量にもたらす比較的低レベルの運動または活動中のアミノ酸の周期的な欠乏からの悪影響を経験し得る。集団メンバーシップを誘導するために本調査において使用された方法は、高強度の運動または慢性不健康のレジーム下でアミノ酸サポートを必要とするものを識別するためのさらなる調査でも利用され得、これにより、より高温の条件下で効率的に生存および運動するために最も適切であるものを決定することを補助することが可能であった。
【０１０４】
実施例２  −  運動中の汗のアミノ酸の排出は、コラーゲンターンオーバーが男性より成人ヒト女性においてより高いことを示唆する
本発明者らは、汗の組成における性別的差異、および損失の汗アミノ酸パターンが窒素収支における有意な影響を表すかどうかを評価するために、一般集団からの成人からの汗のアミノ酸組成の特徴を決定した。慢性疲労対象がアミノ酸排出のより高いレートを示し、陰性窒素収支をもたらすかどうかを調査するために、慢性疲労対象のコホートからの汗も測定された。
【０１０５】
参加者は、一般集団、ならびに慢性疲労症候群と診断された個人の小集団（ｎ＝７）から房州された成人男性および女性であった。２１人の女性および３３人の男性から構成される合計５４人のヒト対象から汗を収集した。４人の女性および３人の男性は、３年以上にわたり慢性疲労を患っていることを報告した。運動後、皮膚表面上で前腕から穏やかにこすり落とされ、殺菌検体ジャー（７０ｍＬ、Ｓａｒｓｔｅｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して健康コホートから汗を収集した。疲労コホートの前腕から汗を収集した。これは、暖かい場所で休息して座りながら、ひじの下に確保されたプラスチック袋に封入された。汗試料を４℃で貯蔵し、ガスクロマトグラフィー水素炎イオン化検出（ＧＣ−ＦＩＤ；ＥＺ：Ｆａａｓｔ（商標））による分析のため、市販のキットを使用して、受け取りから４８時間以内に処理した。本調査は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｅｔｈｉｃｓ  ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された（Ｈ−２０１４−００８６）。
【０１０６】
汗アミノ酸相対存在度データは、正規性を改善するために逆正弦変換された。ＣＦおよび健康群からのデータを組み合わせ、ｋ平均クラスタリング分析を受けさせ、汗アミノ酸プロフィールに基づく別々の群が認識できるかどうかを決定した。ｋ平均クラスタリングによって作成されたそれぞれの群からのアミノ酸濃度データを、等しくない試料サイズに関して、ＡＮＯＶＡおよびＴｕｋｅｙ  ＨＳＤを使用して比較した。主成分分析は、逆正弦変換されたアミノ酸データにおいて実行された。全ての統計は、Ｄｅｌｌ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａバージョン１３（Ｄｅｌｌ  Ｉｎｃ．２０１５）を使用して実行した。
【０１０７】
結果
アミノ酸組成は、５４人の対象の汗から決定された。個別のアミノ酸レベルの最初の評価は、健康でありかつ慢性疲労が報告されていない３０人の男性および１７人の女性からのアミノ酸の汗組成を比較することに焦点が置かれた。表３Ａに結果を要約した。これによると、男性と比較して女性の汗中で有意により高い濃度を有するアミノ酸が示される。女性より男性において有意により高いアミノ酸はなかった。健康な女性の汗中の全アミノ酸レベルは、健康な男性で観察されたものより１．５倍高かった（Ｐ＜０．０５）。女性の汗では、ヒドロキシプロリン、シスチンおよびメチオニンは、それぞれ対応する男性の汗中のレベルよりも３．８、２．８および２．５倍高く、ヒスチジン以外の他のアミノ酸は、女性の汗では、男性に対して測定されたレベルよりも１．８〜２．２倍より濃厚であった（Ｐ＜０．０５）。女性のグルタミンのレベルは９５±１６μモル／Ｌであり、男性に関して７９±１４μモル／Ｌであった。パーセンテージ相対存在度データは、健康男性対健康女性コホートに関してアミノ酸アラニン、グリシンヒスチジン、プロリンおよびヒドロキシプロリンでも有意差を示した。
【０１０８】
慢性疲労が報告された対象の汗中のアミノ酸組成は、女性および男性に関して別々に比較した（表３Ｂ）。慢性疲労群の低い再現数により、分散は高かったが、有意差は明白であった。慢性疲労を有する女性は、一般に、測定されたほとんどのアミノ酸レベルが健康な女性よりも高かったが、アスパラギン酸、アスパラギン、オルニチンおよびメチオニンが有意により高いレベルであった（Ｐ＜０．０５）。慢性疲労を有する男性は、健康な男性の汗と比較して汗中のアミノ酸の全負荷量が有意に増加したが、特に、セリン、アラニン、グリシン、アスパラギン酸、バリン、プロリン、チロシン、アスパラギン、ヒドロキシプロリンおよびメチオニンにおいて増加が見られた（Ｐ＜０．０５）。
【０１０９】
アミノ酸濃度データを、相対的（パーセンテージ）存在度に変換し、多変量統計分析のために逆正弦変換した。Ｋ平均クラスタリング分析により、ｎ＞６で４つの集団が形成され得ることが明らかにされた（表４）。女性は集団３でより多く観察され、同等数の男性および女性が集団１で観察された。集団２は、主に男性からなり、集団４は完全に男性からなった。
【０１１０】
それぞれの集団のアミノ酸組成は、それぞれの集団の４つの主成分によって独占されており、これらは、一緒にアミノ酸の５７〜６１％を構成した。セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジン／アスパラギン酸は、集団１、２および３の汗プロフィールにおいて主要なアミノ酸であった。ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、集団４の最も豊富なアミノ酸であった（表４）。
【０１１１】
【表３】
2018520204.tif 000004
【０１１２】
【表４】
2018520204.tif 000005
【０１１３】
集団１は、他の集団と比較して有意により高い濃度の必須アミノ酸を含む汗中で最高濃度のアミノ酸を有することによって特徴付けられた（Ｐ＜０．０５）。これと同一集団において、汗中の全アミノ酸負荷量の上昇は、主に、セリン、グリシン、アラニン、アスパラギン酸、オルニチンおよびヒスチジンの高濃度によって引き起こされた。集団３も、集団２と比較してより高レベルのグリシン、アラニンおよびバリンを有した。集団１および２は、汗中にヒドロキシプロリンおよびプロリンを有したが、集団２および４は有さなかった。集団４は、ヒスチジン、リシンおよびオルニチンの最高濃度を有することによって特徴付けられた。集団２は、ほとんどのアミノ酸に関して高い分散を示し、より綿密な検査により、男性（ｎ＝１１）は、１１，１４４（±５，２９４）の女性と比較して３，８５１（±８５６）の汗中の全アミノ酸レベルを有していたことが明らかになった。
【０１１４】
アミノ酸の相対存在度データに、主成分分析（ＰＣＡ）を受けさせ、その事例は、ｋ平均クラスタリングによって決定されるように群メンバーシップに基づいて色分けされた。それぞれの集団からの事例が互いに良好に分解したことは、図５Ａの散布図から明確であった。図５Ｂにおいて因子負荷量で示されるように、集団４における事例は、因子１に沿って拡散し、ヒスチジン、オルニチンおよびリシンからの寄与に対して整列した。
【０１１５】
健康な女性からの汗の１３種のアミノ酸の濃度は、男性において測定された対応するレベルよりも高く、女性からの汗中の有意により高い全アミノ酸負荷量がもたらされた。グルタミン酸（８．１倍）、ヒスチジン（７．３倍）およびグリシン（７．２倍）も、血漿と比較して汗中で実質的に濃厚であった。これらの結果は、角質層の皮膚表面で見られる天然湿潤因子（ＮＭＦ）からのアミノ酸の浸出プロセスを介して、これらのアミノ酸が汗中で濃厚化し得るという提案と一貫している。
【０１１６】
汗中のグリシン、セリンおよびアラニンの高濃度および高い排出損失の可能性は、高強度の競技トレーニング、高温への長期暴露、傷害および病原体攻撃の条件下での代謝恒常性に関して起こり得る問題を表す。これは、汗を介したそれらの損失が、一般的なタンパク質合成および細胞分割と関連する維持、修復および回復プロセスを制限し得るためである。例えば、これらのアミノ酸は、プロリンと一緒に、比較的高い割合でコラーゲンタンパク質の合成のために必要とされる。したがって、グリシンおよびセリンの非常に高いレベルの汗によって促進された損失は、特に女性においてコラーゲン合成を制限する可能性がある。女性の汗中のプロリンの濃度は、男性において測定されたものの２倍であり、これにより、コラーゲン合成の減少した能力へのさらなる女性の感受性を示すことができた。男性は、汗を介したプロリンの損失を制限するいくらかの能力を有するが、女性は有さない。より高レベルのプロリンは、女性に関して、単純にコラーゲン分解のより高いレートおよびプロリンのその後の放出を反映し得る。コラーゲン異化中にも放出される女性におけるヒドロキシプロリンの排出は、男性の汗において測定されたもののほぼ４倍であり、女性におけるコラーゲン総取引高のより高い速度を示した。したがって、コラーゲンターンオーバーのより高いレートは、プロリンおよびグリシン、アラニンおよびセリンを維持するためのより低い能力と関連しており、これは、女性がより遅い筋肉組織回復および修復レートを有し得ることを示唆する。
【０１１７】
女性は、男性と比較して、一貫して汗中のアミノ酸損失のより高いレートを示した。さらに、慢性疲労を有する個人は、同性の健康な個人よりも高い汗中のアミノ酸の量を示した。グリシンおよびヒスチジンは、汗中で見られた主成分であり、理論によって拘束されることを望まないが、本発明者らは、汗中のアミノ酸損失は、タンパク質ターンオーバーを維持し、代謝、修復および回復プロセスを支持するための成分の制限を表す。女性および慢性疲労対象からの汗中のプロリンおよびヒドロキシプロリンのより高いレベル（濃度および相対存在度）は、これらの対象のコラーゲンターンオーバーの一般により高いレートを示した。汗中のグルタミン濃度は、一貫して低く、天然湿潤因子の一部として、グルタミン酸およびピログルタミン酸を製造するために角質層において脱アミノがおそらくあったことを示唆する。
【０１１８】
尿中のアミノ酸濃度を汗中のものおよび文献値血漿濃度と比較した（表４）。尿中の平均の１日あたり損失を評価するために、ヒトにおける平均の１日あたり尿排泄レートを表す１，５００ｍＬの体積を採取し；これにより、循環血漿および汗の全アミノ酸負荷量との比較が可能となった。汗レートは、性別、温度および湿度、ならびに活性レベル、ならびにＢＭＩおよびフィットネスレベルなどの身体特徴を調節する根本的な遺伝因子に応じて異なるであろう。最大発汗レートは、運動中、１時間あたり１〜２Ｌで確立された。これらのレートは、１日あたり１０〜１２Ｌの汗が損失される長期の高温条件の労働者において観察された。１９℃〜３３℃の範囲の温度におけるほとんどのスポーツのトレーニングおよび競技は、男性および女性に関して、１時間あたり０．７〜２Ｌの汗レートを生じることが可能であるが、漕艇は、１０℃において１時間あたり０．８Ｌを生じることが示された。したがって、０．５Ｌ〜２Ｌの汗の１日あたり体積に対しての尿量および血漿濃度に対する比較のために、汗中の潜在的損失を表すことが合理的であるとみなされた（表３）。これらの比較は、運動なしと一貫した１日あたり発汗レートの比較的控えめな推定に基づく全アミノ酸損失は、尿損失と比較してより低い量のアミノ酸が損失することを明らかにした。汗損失は、男性と比較して女性でより高いことがわかった。これらの比較も、全アミノ酸が尿および汗中で等しく損失するわけではないことを明示した。腎臓再吸収のプロセスは、分子鎖アミノ酸およびプロリンのために非常に効率的であるが、ヒスチジンおよびグリシンは、血漿で測定された濃度の４倍以上尿中に損失した。汗とは対照的に、エクリン汗腺から排出された汗のアミノ酸組成は、血漿に関して以前に見られたものと同様であったが、角質層におけるＮＭＦの浸出によって濃縮されて、セリン、アラニン、グリシン、ヒスチジンおよびアスパラギン酸の損失の実質的な可能性があることが提案された。したがって、発汗は、皮膚表面におけるＮＭＦの機能と関連するこれらのアミノ酸の損失の主要経路を表すことが結論付けられた。
【０１１９】
汗レートが、日中での運動を含むことを説明するために２Ｌまで上昇された場合、アミノ酸の損失のためのモデルは、男性の尿における損失のほぼ２倍、女性の尿における損失の３倍であった。男性において、血漿中で循環するアミノ酸の全負荷量の７８％は、汗の全Ｌに対して損失し、女性では血漿負荷量の１１６％が汗１Ｌ中で損失する。これは、身体によって維持されなければならないアミノ酸の血漿リソースにおける相当な需要を表す。食物摂取ができない運動中、血漿中のアミノ酸恒常性を保証するために、アミノ酸は、非筋原繊維タンパク質のタンパク質分解によって誘導されて、エネルギー、回復および修復のためにアミノ酸が提供される。新たなタンパク質合成のための必要条件は、運動選手では２４〜３６時間後、訓練されていない個人では最高４８時間後まで高く維持される可能性がある。したがって、女性は、運動、高温気候条件への暴露、貧しい食生活、ストレス、傷害または病原性攻撃の結果として、正味の陰性窒素収支を展開することにより感応性であろうことが結論付けられる。
【０１２０】
実施例３  −  ウマにおけるアミノ酸の汗によって促進された損失およびアミノ酸補足
本発明者らは、運動から生じる汗によって促進されたアミノ酸損失に対する可能性を評価するために、ウマの汗のアミノ酸組成の特徴決定を行い、補足を介したアミノ酸置換がトレーニングの期間にウマの状態を改善する可能性を調査した。
【０１２１】
本調査は、有意な疾患の病歴、または調査開始時にいずれかの有意な病気または傷害のない、年齢３歳〜５歳の５〜６頭のスタンダードブレッドハーネス去勢競走馬の２つのコホートから構成された。本調査は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認された。
【０１２２】
第１のコホート
第１のコホート（ｎ＝５）において、全てのウマは、１人のトレーナーの監督下で同一トレーニングスケジュールに従い、調査過程を通してレースに積極的に従事していた。サンプリングは、ウマの通常のトレーニングレジームに組み合わされて、高強度トラック運動を含むセッションと同時に予定された。結果として、試料は、３週間の期間で週に１回収集され、ウマ１頭あたり最大で５つの運動前および後の試料が提供された。それぞれのトレーニングセッション前に、ウマにはＧＰＳ／心拍数モニタリングデバイスが装備されて、スピード、距離、動力および回復の測定が可能であった。ウマは、補足および飼料を受ける前に、月曜日から土曜日まで（レース日は除く）毎朝、毎日トレーニングを行った。ウマは、朝の運動の後および再び夜に１ｋｇのＨｙｇａｉｎ  Ｐｏｗａｔｏｒｑｕｅ（粗タンパク質１７％、粗脂肪１０％、最大粗繊維１０％、追加セール１．５％、カルシウム１．５％、リン０．６％、リシン１１ｇ／ｋｇ、ビタミンＥ  １０００ＩＵ／ｋｇ、セレン１．５ｍｇ／ｋｇ；Ｈｙ  Ｇａｉｎ  Ｆｅｅｄｓ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ．，Ｖｉｃｔｏｒｉａ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を受けた。ウマは、それぞれの動物に関して、大きさおよび状態に応じて、２．５〜４．５ｋｇのＨｙｇａｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂａｒｌｅｙ（登録商標）（粗タンパク質１１％、粗脂肪２％、最大粗繊維９％）も受けた。全てのウマは、コムギもみ殻およびルツェルンもみ殻の自由量を受け、この摂食レジームは、ベースライン、補足および最終検査期間を通して一定のままであった。他のビタミンまたはサプリメントは、実験期間中に提供されなかった。日曜日にウマは開放パドックの芝生上で食料を探すことが許された。
【０１２３】
アミノ酸補足のため、ウマには、３４日間（レース日の制限を例外として）、毎日、複合アミノ酸サプリメント（Ｆａｔｉｇｕｅ  Ｒｅｖｉｖａ（商標）；Ｔｏｐ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ）が提供され、その後、２週間の補足後のサンプリングおよび評価を開始した。アミノ酸サプリメントは、２０種のＬ−アミノ酸（グリシン、プロリン、グルタミン、カルニチン、トレオニン、リシン、アラニン、バリン、タウリン、セリン、システイン、アルギニン、ヒスチジン、イソロイシン、フェニルアラニン、ロイシン、メチオニン、グルタミン酸、アスパラギン酸およびチロシン）、フルクト−オリゴ糖、リンゴ酸、クエン酸、コハク酸、リボースおよび１３種のミネラルおよび１３種のビタミンから構成された。配合物は、再シール可能なプラスチック容器中で提供されて、６０ｍＬプラスチック注射器による経口送達前に、ペーストを形成するためにＭＣＴ（中央鎖トリグリセリド）油と１：１で毎日混合された。ヒトの用量を適切にウマに対して調節して、３０ｇのＦａｔｉｇｕｅ  Ｒｅｖｉｖａ（商標）がそれぞれのウマに毎日提供され（レースの場合は除く）、これにより、１４．１ｇのアミノ酸が送達された。３４日間の補足後、補足を続けながら、２週間の期間にわたる３つの別々の状況において、ハードなトレーニングセッションの前後に血液および汗試料を採取した。
【０１２４】
第２のコホート
ウマの第２のコホートは、異なる動物の試料を使用して、第１のコホートからの汗組成の分析を繰り返すことの観点で調査された。再び、全てのウマは、同一トレーナーの監督下で同一トレーニングスケジュールに従い、調査過程を通してレースに積極的に従事していた。ウマは、ベースライン基準を得るために、最初の２週間間にわたって４回試料が採取され、６４日間のトレーニングおよびレース中にアミノ酸サプリメント（以下参照）が提供された。それまでのサプリメント試行の２週間にわたって、それぞれのウマから４つの汗および血漿試料が採取された。２頭のウマは、ステージ１ベースライン試験後および補足前に傷害のために打ち切られ、別のスタンダードブレッドウマに取り替えられた。これにより、ステージ１評価のために６頭の動物が提供され、４頭は、４０日間のトレーニングおよびレース中にサプリメントが提供された。補足後の血液試料は、ハードなトレーニングセッションの前後に採取したが、汗試料は、補足を継続しながら２週間かけて、４つの別個の状況においてトレーニング後に採取した。試料収集期間は、悪天候に起因する遅れのために延長された。休息血漿試料は、トレーナーの敷地において７頭のウマの集合から評価され、作業していない（４カ月〜７年）、年齢が３〜１４歳の範囲のウマとして評価された（６頭の去勢ウマおよび１頭の繁殖用雌ウマ）。これらのウマは、検査前に少なくとも４カ月間、Ｈｙｇａｉｎの高タンパク質含有量飼料のいずれも提供されておらず、パドックにおいて芝生の上で食料を探した。これらのウマは、高タンパク質食餌性サポートを受けていなかったため、それらは血漿中のアミノ酸レベルにおける比較のための参照群として使用された。
【０１２５】
このようなウマの第２のコホートには、汗中で損失した主要なアミノ酸成分（セリン、グルタミン酸、ヒスチジン、ロイシン、リシン、アスパラギン酸、アラニン、グリシン、フェニルアラニン、バリン、イソロイシン、プロリン、トレオニンおよびチロシン）を表すものとして識別された１４種のみのアミノ酸を含有するように配合されたサプリメント（Ｈｙｇａｉｎ  Ｏｍｉｎａ  Ｒ３，Ｈｙ  Ｇａｉｎ  Ｆｅｅｄｓ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ）が提供された。アミノ酸の割合は、これらの動物の汗中のアミノ酸に関して観察された相対的な損失を反映するように調整された。これらのアミノ酸は、適切な割合で予混合され、Ａｑａ  Ｇｅｌベース製品１：１（ＨｙＧａｉｎ  Ｆｅｅｄｓ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ）と組み合わせて、動物に良好に受け取られる６０ｍＬの注射器を介したペースト送達系が形成された。ペーストは、１回あたり３０ｍｌのＡｑｕａ  Ｇｅｌ中に５００ｍｇのグルコースと一緒に３０ｇのアミノ酸を含んでなった。
【０１２６】
実験手順
両方のウマのコホートに関して、運動セッションは、馬がレースに出なかった場合、１週間に２回のハードなセッション、または１回のハードなセッションおよびレースを伴った。ウマは、平均で３週間に１回のレースに出た。ハードなセッションは、引いている間に、サルキーおよび御者を引きながら、全レースハーネスで約７００ｍのトラックを側対速歩することを含んだ。それぞれのセッションは、中程度のペースでのトラックの約２．５「ウォームアップ」ラップ、３〜４ラップのレース速度への加速、最終「ウォームダウン」としての２．５ラップの減速から構成された。全ての試料は、早朝のハードなセッションの前および後かつ飼料またはサプリメントの提供前に採取された。軽いトレーニングセッションは、中程度のペースでのトラックの約２．５「ウォームアップ」ラップ、次いで、９〜１２ｋｍの約１９ｋｍ／時間での軽いジョギングから構成された。ウマ間およびサンプリング事象間のトレーニングテンポおよび要求の一貫性を提供するために、全てのウマに対して全てのセッションで同一御者が使用された。継続時間、セッション時間、距離、速度および心拍パラメーターを含むトレーニングの種々の態様は、ウマ間および補足前および後の段階プロジェクト間の一貫性を評価するために、規則的に第１のコホートにおいて監視された。
【０１２７】
それぞれのウマは、ベースラインおよび補足後段階の両方において、運動前血液および血漿、ならびに運動後血液、血漿および汗の評価のため、繰返し試料が採取された。それぞれの試験段階の繰返し試料を、ベースラインおよびその後の補足後段階の両方におけるそれぞれの動物の単一の代表血液、血漿または汗試料を表すために平均化した。両方のコホートのデータセットを別々に分析して、２つの異なる動物のコホートにおける汗中のアミノ酸組成の一貫性およびアミノ酸補足に対する応答を評価した。補足の開始前に、それぞれのウマの血漿アミノ酸のベースラインレベルは、４または５つの別個の状況における運動トレーニングレジーム前およびその直後に血液試料を採取することによって確立された。第１のコホートにおける３５日間の補足後、血漿および汗の補足後の組成を確立するため、ウマにサプリメントを与え続けながら、３つの別個の状況において試料の第２セットを採取した。第２のコホートに同一アプローチを実行し、補足前の４つの別個のサンプリング事象中、それぞれのウマに対するベースラインレベルが確立された。第２のコホートのための４０日間の補足後、血漿および汗の補足後の組成を確立するため、ウマにサプリメントを与え続けながら、４つの別個の状況において試料の第２セットを採取した。
【０１２８】
血液は、それぞれのウマの頚静脈から２０ｍｌ注射器中に収集されて、標識化９ｍＬナトリウムヘパリンＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）に直接移された。汗は、それぞれのウマのトレーニングセッションの完了時、流体が容器中に流れ込むことが可能となるように、ウマの外皮の表面上を上方へ動かして、殺菌７０ｍＬ試料ジャーをこすることによって収集された。第１のコホートにおいて、組み合わせた汗試料は３つの身体部分：前肢間かつその直上の胸；胴の側面および下腹部；ならびに後肢の上部の内側から収集された。第２のコホートにおいて、汗は、身体の異なる位置において、アミノ酸の汗組成におけるいずれかの差異が生じたかどうかを決定するために同一の３領域から別個に収集された。収集したら、それぞれの汗試料を殺菌Ｍｏｎｏｖｅｔｔｅ（登録商標）管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  Ａｕｓｔｒａｌｉａ  Ｐｔｙ  Ｌｔｄ）に移し、収集直後、研究所への輸送のために冷凍容器に貯蔵された。全ての血液試料は補足および飼料前に収集された。
【０１２９】
血液引抜き後、１００μＬの全血試料を、ヘパリン添加された毛管（Ｂａｃｔｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌｉｖｅｒｐｏｏｌ，ＮＳＷ）に引き抜いた。試料は、即座に毛管からｉＳＴＡＴ  ＣＧ８＋カートリッジの試料ウェルに排出された。全ての気泡は、カートリッジを閉じる前に試料から除去された。カートリッジは、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）、ヘモグロビン（Ｈｂ）、イオン化カルシウム（ｉＣａ）、グルコース（Ｇｌｕ）、ナトリウム（Ｎａ）、カリウム（Ｋ）、ｐＨ、炭酸水素塩（ＨＣＯ３）、血液ガス（ｐＯ２、ｐＣＯ２、ＴＣＯ２、ｓＯ２）および塩基過剰の測定のためにｉＳＴＡＴ臨床分析器によって分析された。それぞれの試験セッション前に、ｉ−ＳＴＡＴ分析器は、電子刺激およびレベル２  ｉ−ＳＴＡＴ制御ソルーション（ｉ−ＳＴＡＴ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）により、製造業者の仕様書に従って校正された。カートリッジは、製造業者の指示に従って使用前に貯蔵され（２〜８℃）、使用の約５分前に室温に戻された。
【０１３０】
血漿フラクションは、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分）によって血液試料から単離され、血漿上清を、その後、殺菌２ｍＬエッペンドルフ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）管に移した。汗試料のアリコートをＭｏｎｏｖｅｔｔｅ（登録商標）菅から取り出し、５分間、２０００ｒｐｍにおいて遠心分離機にかけた。透明な上清を抽出のためにクリーンな管に移した。試料のアミノ酸組成は、ＥＺ：Ｆａａｓｔ（商標）誘導体化（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｉｎｃ．）、それに続くＧＣ／ＦＩＤ分析によって決定した。ＥＺ：Ｆａａｓｔ（商標）手順は、固相抽出ステップと、それに続く誘導体化および液体／液体抽出とからなる。全ての試料は、次の変更を伴って製造業者のプロトコルに従って誘導された：ｉ）全血漿試料のための初期反応混合物への２００μＬの殺菌脱イオン水の添加；ｉｉ）全ての汗試料のための初期反応混合物への２００μＬの０．１Ｍ  ＨＣｌの添加。ＥＺ：Ｆａａｓｔ（商標）誘導化試料の分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｉｎｃ．によって供給される水素炎イオン化検出器およびＺＢ−ＰＡＡＣ−ＭＳカラム（１０ｍ×内径０．２５ｍｍ）を備えたＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ＨＰ  ６８９０シリーズＧＣシステムにおいて実行された。機器方法は、注射器温度２５０℃およびカラム流速０．５ｍｌ／分である状態で、分割注入（比率１５：１）を含んでなった。注入量は、全ての試料に関して２．５μＬに設定された。オーブンプログラムは、１１０℃の初期温度、３２℃／分で３２０℃までの増加（実行時間＝８．５６分）を含んでなった。標的化合物は、分析標準のあらかじめ確立された滞留時間に従って識別されて、内標準の信号応答に対して定量化校正された。
【０１３１】
統計分析
試料セット間の血液パラメーター、運動レジームおよびアミノ酸濃度の比較は、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ（商標）１２を使用した一方向ＡＮＯＶＡ（Ｓｔａｔｓｏｆｔ，Ｔｕｌｓａ，ＯＫ，ＵＳＡ）によって完了した。効果量を計算し、それに応じて、ベースラインおよび補足後に評価されたヘマトクリットおよびヘモグロビンの平均間の差異の大きさを評価するためにインタプリートされた（コーエン（Ｃｏｈｅｎ）のｄ；小＝０．２〜０．４９、中＝０．５〜０．７９、大≧０．８）。両方のコホートからの試料は、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａの対試料ｔ試験を使用して、休息血漿中の全アミノ酸の補足前および後のレベルの比較のためにプールされた。Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａを使用して、ベースラインおよび再度のその後の補足期間におけるウマの血漿休息血漿レベルならびに対応するヘマトクリットおよびヘモグロビンレベルにおいて、相関分析が実行された。統計的有意性のレベルはｐ＜０．０５に設定された。
【０１３２】
結果
トレーニングレジームは、補足の前後に実行された様々な測定間で有意義な比較が可能となるように、実験期間を通して可能な限り一貫するように保持されたた。トレーニングレジームからのパラメーターの範囲は、第１のコホートに関する２段階間の運動負荷量における潜在的な変動を識別するために客観的に評価された。データは表５で要約される。測定されたパラメーターの７５％が検査の２段階間に有意差を示さなかったことは明白であった。トレーニング平均速度およびセッション距離が、一般的季節、天候およびトラック条件に基づいて、ある程度変化するであろうことが予測された。これを考慮に入れて、トレーニングレジームは、比較が実行される研究の補足アームの前および後の間で十分に一貫していたことが結論付けられた。類似のレジームが第２のコホートに適用された。
【０１３３】
コホート１におけるそれぞれの動物の３つの収集部位から収集された汗は、それぞれの馬に関してプールされて、アミノ酸濃度における高い変動性を示した（表６）。コホート２試料のそれぞれの試料部位から収集された汗を別個に分析したところ、２，７７７±４２８μモル／Ｌの下腹部および１，８７６±３１５μモル／Ｌの後肢と比較して、胸部試料は３，２１４±４１１μモル／Ｌの全アミノ酸濃度を有することが明らかになった（Ｐ＜０．０５）。胸部の汗は、セリン、ヒスチジンおよびトレオニンの最高レベルを有し、かつ動物調教師にとって最も容易かつ最も安全な収集場所であると思われた。したがって、コホート２の汗データの報告のために、このサンプリング部位が使用された。ベースラインにおいて、コホート２の運動中に生じる体重の平均損失は５．１±０．７ｋｇであった。
【０１３４】
【表５】
2018520204.tif 000006
【０１３５】
ウマから採取された運動後血漿中で２２種のアミノ酸が検出され、定量化された。コホート１およびコホート２からの血漿組成間の比較により、平均血漿プロフィールパターンは２つの調査において類似しており（表６）、主要成分としてグリシン、それに続いてアラニン、グルタミン、バリンおよびセリンが血漿アミノ酸の６１〜６４％を構成していたことが明らかになった。２つのコホートからの血漿中のアミノ酸の全レベルは、個別のアミノ酸の量および分布の両方において類似であった。
【０１３６】
汗のアミノ酸組成は、両方のコホートの対応する血漿試料のものと有意に異なった（表６）。汗試料中のアミノ酸の平均全濃度は、コホート１に関して血漿のものの２倍（Ｐ＜０．０５）、コホート２では１．２倍高かったが、この後者の差異は統計的有意性のレベルに達しなかった。汗は、両方の調査コホートに関する対応する血漿レベルと比較して、汗中でより高い濃度で一貫して存在した５種のアミノ酸を含有し、セリン（３．９〜５．４倍高い）、グルタミン酸（７．０〜９．５倍高い）、ヒスチジン（４．３〜４．５倍高い）、フェニルアラニン（１．９〜３．４倍高い）およびアスパラギン酸を含んだ。
【０１３７】
アスパラギン酸は、コホート１のウマからの血漿中に検出されなかったが、汗中には２６２±２９μモル／Ｌで存在した。同様に、それは、汗中の対応する１５４±２１μモル／Ｌと比較して、コホート２からの血漿中では２±２μモル／Ｌで測定された。アラニン、ロイシン、バリン、プロリンおよびチロシンは、コホート２ではなく、コホート１において血漿と比較して汗中でより高かった。バリンおよびオルニチンの両方がコホート１において血漿と比較して汗中でより高濃度であったが、コホート２では汗中でそれほど高濃度ではなかった。グルタミン、シスチン、メチオニンおよびアスパラギンは、両方のコホートにおいて、血漿と比較して汗中で濃度が一貫してより低かった。グリシンおよびトリプトファンは、コホート２において血漿と比較して汗中でより低く、コホート１では両方のマトリックスにおいて均等なレベルで存在した。
【０１３８】
【表６】
2018520204.tif 000007
【０１３９】
休息血液、血漿および汗の補足後の変化
平均アミノ酸レベルは、ベースラインおよびアミノ酸補足後、アミノ酸補足に続く代謝恒常性の潜在的変化を評価するために休息血漿試料において評価された（表７）。コホート１は、２，０４４±１３５μモル／Ｌのコホート２と比較して、２，２９３±６８μモル／Ｌにおいて全血漿アミノ酸のより高い平均ベースラインレベルを有したが、休息レベルは、２年間の類似のプロフィール特徴を示した。補足後、平均全血漿アミノ酸レベルは、それぞれ２，６７４±４１μモル／Ｌおよび２，６６３±１２４μモル／Ｌのそれらの対応する平均ベースラインレベルと比較して、両方のコホートにおいて増加した（Ｐ＜０．０５）。したがって、血漿中のアミノ酸の平均全レベルは、補足後の２つのコホートに関して均等であった。２つのコホートは、ボンフェローニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）校正が行われたベースラインおよびサプリメント後の血漿アミノ酸濃度を比較するために、対試料ｔ試験を実行するためにプールされた。グリシン（ベースライン：５８２μモル／Ｌ対サプリメント後：７６９μモル／Ｌ）、トレオニン（９３μモル／Ｌ対１１８μモル／Ｌ）、セリン（１７５μモル／Ｌ対３１２μモル／Ｌ）およびグルタミン（２１３μモル／Ｌ対３４３μモル／Ｌ）に関して、ベースラインレベルと比較して補足期間後の休息血漿において有意な増加が観察された（ｎ＝９、Ｐ＜０．００２）。補足後の血漿中の平均全アミノ酸濃度（平均＝２，６６９μモル／Ｌ、ＳＤ＝１６５）も対試料ｔ試験を使用して評価され、補足前に観察されたレベル（平均＝２，１３８μモル／Ｌ、ＳＤ＝３１３）と比較して有意に高いことがわかった（ｔ（８）＝−４．２９、Ｐ＜０．００３）。このデータは、運動直後のアミノ酸補足のプロセスが休息血漿におけるアミノ酸レベルの循環レベルの増加をもたらすことを示した。
【０１４０】
ベースラインにおいてより低い血漿全アミノ酸含有量を有することに加えて、コホート２は、５，６９６±９３２μモル／Ｌのコホート１レベルと比較して、３，２１３±４１１μモル／Ｌの汗中のより低い初期平均全アミノ酸レベルを有した（表８）。補足後、平均全汗アミノ酸レベルは、６，２２８±５４６μモル／Ｌのコホート１に関して有意に増加しなかったが、しかし、８，６８２±５６３μモル／Ｌのコホート２に関して濃度が２倍以上になった（Ｐ＜０．０５）。測定された全アミノ酸は、コホート２に関して、ベースラインレベルと比較してサプリメント後の汗中でより高レベルで観察された（Ｐ＜０．０５）。
【０１４１】
【表７】
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【０１４２】
【表８】
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【０１４３】
平均休息ヘマトクリットおよびヘモグロビンレベルは、補足プログラムを完了したベースラインの４頭のコホート２のウマに関して、それぞれ０．４１±０．０２５および１４１±８．６ｇ／Ｌであった。補足後、大増加（コーエン（Ｃｏｈｅｎ）のｄ＞０．８）が両方のパラメーターに関して観察され、休息ヘマトクリットは０．４６±０．０１５に増加し、ヘモグロビンは１５５±５．３ｇ／Ｌに増加した。血漿アミノ酸の休息レベルの相関分析は、トレオニンがヘモグロビンの休息血液レベルに強い相関関係を有する唯一のアミノ酸であったことを示した。補足期間後、多くのアミノ酸がヘモグロビンとの強い会合を示し、ヒスチジン、バリン、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミンおよびリシンがＲ２＞０．９８を示した。初期の低ヘモグロビン（１１７ｇ／Ｌ）を有する追加のウマにおいて、動物は、汗中で損失した主要なアミノ酸成分（セリン、グルタミン酸、ヒスチジン、ロイシン、リシン、アスパラギン酸、アラニン、グリシン、フェニルアラニン、バリン、イソロイシン、プロリン、トレオニンおよびチロシン）を表すものとして識別された１４種のみのアミノ酸を含有するように配合されたアミノ酸サプリメントを１日あたり３０ｇ与えられた。アミノ酸の割合は、これらの動物の汗中のアミノ酸に関して観察された相対的な損失を反映するように調整された。これらのアミノ酸は、適切な割合で予混合され、動物に良好に受け取られる６０ｍＬの注射器を介したペースト送達系の形成を補助するために添加されたキサンタンガムと一緒に、水３：１と組み合わせた。ペーストは、１回あたり５００ｍｇのグルコースと一緒に３０ｇのアミノ酸を含んでなった。ヘモグロビンは、４日間の補足後、１２５ｇ／Ｌまで増加した。ヘモグロビンは、１３日間の補足後、さらに１３２ｇ／Ｌまで増加した。１３日間の期間中、赤血球数も６．９×１０１２／Ｌから７．７×１０１２／Ｌまで増加した。これらのデータは、特に出発レベルが１４０ｇ／Ｌより低い場合、アミノ酸補足がヘモグロビンレベルの増加を高めることが可能であることを支持する。
【０１４４】
第１のコホートからの性能評価により、運動完了の１０分後に測定された平均回復心拍数は、補足前の８３．３±５．６から補足期間後の７７．２±４．３ｂｐｍ（Ｐ＜０．０５）に減少したことが明らかとなった。動物の状態は、実験期間を通して監視され、トレーナーは、表９で要約される両方の調査コホートに関しての動物のそれぞれについての貴重なフィードバックを提供した。馬のトレーナーによって主観的に評価され、報告された主な特徴は、健康、幸福および性能を含めて、補給が広範囲の改善をもたらすことであった。特に、試験期間の改善された外皮、明るい目、ならびにレースコンディションの良好な維持、および筋肉量の発達に関するコメントが特に留意された。
【０１４５】
２つのコホートに関する分析により、汗によって促進されたアミノ酸損失（ＳＦＬＡＡ）が、ウマが推定１．６〜３ｇの遊離アミノ酸を損失するトレーニングまたは運動レジーム中に実質的となる可能性があることが明らかにされた。この損失は、異化反応によるアミノ酸の筋肉貯蔵の使用に対する要求の即座の増加をもたらすであろう。これに関して、ウマの血漿体積は、種属ならびにフィットネスおよび水分補給のレベル間で変動するが、平均４５０ｋｇの馬は、赤血球体積約２０Ｌに相当する約１６Ｌの血漿体積を有するであろう。したがって、１６Ｌの血漿体積中の全アミノ酸負荷量は、本研究のウマの２つのコホートにわたって３．８〜４．３ｇとして計算された。上記の計算に基づいて、アミノ酸の血漿負荷量の約４０〜７０％は、運動中に汗を通して損失し得、これにより、発汗を介して１％の体重減少がもたらされ得る。これは、発汗により、アミノ酸が筋肉貯蔵タンパク質の異化ターンオーバーによって循環に入るための必要条件を増加したことを示した。したがって、汗を介したアミノ酸の損失が、エネルギー産生（グルコース−アラニンサイクル）、酸素送達、筋肉修復および回復を含む代謝プロセスを支持するために必要とされる血漿レベルを補充するために、筋肉貯蔵における追加的な要求を与えるであろうことが議論された。
【０１４６】
【表９】
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【０１４７】
遊離アミノ酸の１．６〜３ｇのこのような損失は、異化反応によるアミノ酸の筋肉貯蔵の使用に対する要求の即座の増加をもたらすであろう。タンパク質分解は、エネルギー産生（グルコース−アラニンサイクル）、酸素送達および筋肉修復回復を含む代謝プロセスを支持するために必要とされるアミノ酸の置換を可能にするであろう。汗中のアミノ酸プロフィールと血漿中の対応するレベルとの比較により、両方の調査において血漿中の対応するレベルと比較して実質的により高い濃度で汗中に存在するＡ型と呼ばれる６種のアミノ酸の群および１つの調査において血漿と比較して汗中で実質的により高いＢ型アミノ酸が明らかになった。これらのアミノ酸のいくつかは、必須アミノ酸ではなく、ウマは合成することができるが、長期の運動または熱暴露の条件下で合成が需要を達成することができない場合、これらの代謝物質は条件付きで必須となり得る。セリンは、汗中で測定された主要なアミノ酸であった。タンパク質合成のためのその必要条件に加えて、セリンおよびその誘導体は、ホスファチジルセリン、ホスホチジルコリンおよびホスホチジルエタノールアミンなどの重要な膜ホスホリピドにおいて官能基を形成する。セリンは、ウマ血漿で最も豊富なアミノ酸であるグリシンの合成のための直接的な前駆体である。セリンからのグリシンの形成は、核酸の合成に不可欠であるテトラヒドロ葉酸からメチレン−テトラヒドロ葉酸も生成する。したがって、実質的に汗によって促進されたセリンの損失は、身体の供給が需要を達成することができない場合、性能および回復に対する影響を有する広範囲の代謝欠乏を導く可能性がある。
【０１４８】
第１のコホートで使用される補足は、ヒトにおいて疲労に対処するために設計された商用アミノ酸サプリメントを利用したのに対して（Ｄｕｎｓｔａｎ  ２０１３，２０１４）、第２のコホートは、Ａ型アミノ酸として識別されたアミノ酸を供給することにより、ウマにおける発汗を介した損失に特に対処するために設計されたサプリメントを試験した。配合物は、血漿と比較して汗中で最も高い濃度の６種のアミノ酸：セリン、リシン、ヒスチジン、ロイシン、グルタミン酸およびアスパラギン酸を含んだ。ウマの汗中で損失する主成分として、これらのアミノ酸は、残りの４０％を構成するアラニン、グリシン、フェニルアラニン、バリン、イソロイシン、プロリン、トレオニンおよびチロシンと一緒に、配合物中でアミノ酸の６０％を表した。バリンは、潜在的に高損失の必須アミノ酸として含まれ、グリシンは、汗中のその濃度は血漿中の濃度と均等であるが、汗中の第２または第３に最も豊富なアミノ酸損失を表すことから含まれた。
【０１４９】
４０日間かけてのアミノ酸補足の重要な結果は、両方の生成物がそれぞれ２，６７４±４１μモルＬ−１および２，６６３±１２４μモルＬ−１への休息血漿レベルの上昇をもたらしたことであった。この結果は、補足プロセスが両方のコホートのウマにおいてアミノ酸恒常性を変更することに有効であったことを実証した。理論に拘束されることを望まないが、同レベルまでの平均全アミノ酸濃度の上昇は、トレーニングおよび通常作業条件下での補足によってさらに増加し得ないアミノ酸の血漿最適化レベル（ＰＯＬＡＡ）が存在するという仮説を暗示する。作業から休息したウマからのデータは、血漿中の全アミノ酸濃度が、作業しているマウでの補足後に評価されたＰＯＬＡＡよりも約３０％高いレベルまで増加したことを明らかにした。これは、通常強度のトレーニングおよびレースの条件下で、動物が、より低レベルの循環血漿アミノ酸によって異なる恒常性に基づいて機能したことを反映すると解釈された。高強度のトレーニング条件下で、運動の継続的な毎日のサイクルは、筋肉貯蔵からアミノ酸を提供するための異化応答の活性化を必要とする。運動後、馬は、全身代謝のためにアミノ酸の送達に過度の需要を置く可能性のある補充および回復の限定時間を有する。休息期間後、貯蔵は補充され、作業していないウマで観察されるように、恒常性は血漿アミノ酸濃度のより高いレベルにシフトする。理論によって拘束されることを望まないが、本発明者らは、オーバートレーニングまたは感染性攻撃のいずれかによって促進された長期の異化が、身体が新規合成によって需要を達成することができない減少したアミノ酸貯蔵を導く可能性があることを示唆する。同じく理論によって拘束されることを望まないが、本発明者らは、アミノ酸の全レベルに対する単純な血液血漿試験が、トレーニングおよびレースの期間の性能および状態を最適化するための補給必要条件を決定するためのウマのアミノ酸ステータスの指標を提供するであろうことを示唆する。これは、トレーニング期間を通した用量レベルの管理および最適化のためのツールを提供するであろう。
【０１５０】
本明細書に記載される結果は、１４種のアミノ酸の単純化された配合物が、２０種のアミノ酸、フルクト−オリゴ糖（ＦＯＳ）、リンゴ酸、クエン酸、コハク酸、リボース、１３種のミネラルおよび１３種のビタミンを含有する、より複雑なＦａｔｉｇｕｅ  Ｒｅｖｉｖａ（商標）配合物と同程度でＰＯＬＡＡを達成することに効果があったことを示した。第２のコホートに使用されたサプリメントでは、ウマが、動物の健康のために潜在的な利益を有するであろうプロリン、ロイシン、トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン、シスチンおよびアスパラギン酸を含む、配合物中に含まれる重要なアミノ酸のより高レベルを有するという結果になった。
【０１５１】
補足後、汗中のアミノ酸の対応するレベルも実質的に増加した。これは、第２のコホートにおいてより顕著であり、補足後、３，２１３±４１１μモルＬ−１から８，６８２±５６３μモルＬ−１に増加した（表８）。汗中のアミノ酸のより高いレベルは、主に、第２のサプリメントの主成分であったセリン、グリシン、アラニン、ロイシン、リシンおよびグルタミン酸における差異に起因した。これらの結果は、汗によって促進された損失をベースにして配合されたサプリメントが、アミノ酸の送達において極めて効率的であったことを示していると解釈された。補足後の汗中のアミノ酸組成における増加も、ウマから収集された汗中で測定されたアミノ酸が代謝恒常性およびウマの栄養状態を反映することを示唆する。
【０１５２】
両方のコホートからのトレーナーからのフィードバックは、馬の全身状態、筋肉量の支持発達、光沢のある外皮、明るい目およびより長く懸命に作業する能力に関して補足が利益を提供したという極めて重要な主観的な証拠を提供した。理論によって拘束されることを望まないが、血漿アミノ酸のより高いレベルが、作業およびタンパク質合成間のエネルギー供給をより良好に支持し、酸素送達、筋肉成長および運動からの回復のプロセスを支持することが潜在的に可能であろうことが示唆される。これは、補足期間の体重の維持を示し、２頭のウマが補足期間後にヘモグロビンレベルの増加を示す、表９の結果によって証拠付けられる。
【０１５３】
参考文献
Ｄｕｎｓｔａｎ，Ｒ．Ｈ．，Ｓｐａｒｋｅｓ，Ｄ．Ｌ．，Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｔ．Ｋ．，Ｃｒｏｍｐｔｏｎ，Ｍ．Ｊ．，Ｇｏｔｔｆｒｉｅｓ，Ｊ．，＆Ｄａｓｃｏｍｂｅ，Ｂ．Ｊ．（２０１３）．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，Ｆａｔｉｇｕｅ  ＲｅｖｉｖａＴＭ，ｆｏｒ  ｏｒａｌ  ｉｎｇｅｓｔｉｏｎ：ｉｎｉｔｉａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｃｏｎｃｅｐｔ  ａｎｄ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｎ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｏｆ  ｓｕｂ−ｈｅａｌｔｈ  ｉｎ  ａ  ｇｒｏｕｐ  ｏｆ  ｍａｌｅｓ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ｊｏｕｒｎａｌ，１２（１），１１５．
Ｄｕｎｓｔａｎ，Ｒ．Ｈ．，Ｓｐａｒｋｅｓ，Ｄ．Ｌ．，Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｔ．Ｋ．，＆Ｄａｓｃｏｍｂｅ，Ｂ．Ｊ．（２０１４）．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ，ｆａｔｉｇｕｅ  ｒｅｖｉｖａＴＭ，ｔｏ  ｒｅｄｕｃｅ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｉｎ  ａ  ｇｒｏｕｐ  ｏｆ  ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  ｍａｌｅ  ａｔｈｌｅｔｅｓ  ａｎｄ  ａ  ｇｒｏｕｐ  ｏｆ  ｍａｌｅｓ  ｒｅｃｒｕｉｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｐｕｂｌｉｃ．ＦＮＳ，５，２３１−２３５．
Ｅｖａｎｓ，Ｃ．Ｒ．Ｈｕｇｈ  Ｄｕｎｓｔａｎ，Ｔｏｎｙ  Ｒｏｔｈｋｉｒｃｈ，Ｔｉｍ  Ｋ．Ｒｏｂｅｒｔｓ１，Ｋａｒｌ  Ｌ．Ｒｅｉｃｈｅｌｔ，Ｒｏｂｙｎ  Ｃｏｓｆｏｒｄ，Ｇａｒｙ  Ｄｅｅｄ，Ｌｉｂｂｙ  Ｂ．Ｅｌｌｉｓ，Ｄｉａｎｅ  Ｌ．Ｓｐａｒｋｅｓ．（２００８）Ａｌｔｅｒｅｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｗｉｔｈ  ａｕｔｉｓｍ，Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １１  （１），９−１７．ＩＦ＝１．３
Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ，Ｂ．Ｒ．，＆Ｒａｓｓｉｅｒ，Ｄ．Ｅ．（２００２）．Ｗｈａｔ  ｉｓ  ｆａｔｉｇｕｅ？  Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２７（１），４２−５５．
ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｒ．Ｅ．，Ｆｌｅｍｉｎｇ，Ｒ．Ｉ．，Ｂｅｅｌｅｙ，Ｊ．Ｇ．，Ｂｏｖｅｌｌ，Ｄ．Ｌ．，Ｌｕ，Ｊ．Ｒ．，Ｚｈａｏ，Ｘ．，．．．Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｍ．Ｗ．（２００９）．Ｌａｔｈｅｒｉｎ：Ａ  ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｈｏｒｓｅ  ｓｗｅａｔ  ａｎｄ  ｓａｌｉｖａ．ＰＬＯＳ  Ｏｎｅ，４（５），ｅ５７２６．
Ｎｉｂｌｅｔｔ，Ｓ．Ｎ．（２００７）．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ａｎｄ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ  ａｎｏｍａｌｉｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｅｘｐ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ，２３２，１０４１−１０４９．
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年3月7日(2018.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒスチジン、セリンおよびリシンを含んでなる遊離アミノ酸からなる組成物であって、前記ヒスチジン、セリンおよびリシンは、一緒に、前記組成物の全重量の少なくとも約２５％を構成する、組成物。
【請求項２】
前記ヒスチジン、セリンおよびリシンは、前記組成物の全重量の少なくとも約３０％、少なくとも約５５％または少なくとも約６５％を構成する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ヒスチジン、セリンおよびリシンは、前記組成物の全重量の約３０％〜５０％を構成する、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒスチジン、セリンおよびリシンは、前記組成物の全重量の約３２％〜４７％を構成する、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒスチジンは、前記組成物の全重量の約１０％〜２１％を構成し、前記セリンは、前記組成物の全重量の約１３％〜１６％を構成し、かつ前記リシンは、前記組成物の全重量の約９％〜１０％を構成する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
オルニチン、グリシンおよびアスパラギン酸の少なくとも１種をさらに含んでなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
存在する場合、前記オルニチンは、前記組成物の全重量の少なくとも約１２％を構成し、前記グリシンは、前記組成物の全重量の少なくとも約８％を構成し、かつ前記アスパラギン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約７％を構成する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり、前記アミノ酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約４０％を構成する、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項９】
ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチンおよびグリシンを含んでなり、前記アミノ酸は、前記組成物の全重量の約５０％〜８０％を構成する、請求項６または７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ヒスチジンは、前記組成物の全重量の約２１％を構成し、前記セリンは、前記組成物の全重量の約１６％を構成し、前記リシンは、前記組成物の全重量の約１０％を構成し、前記オルニチンは、前記組成物の全重量の少なくとも約１２％を構成し、前記グリシンは、前記組成物の全重量の少なくとも約８％を構成し、かつ前記アスパラギン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約７％を構成する、請求項６〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
グルタミン、グルタミン酸、ロイシンおよびアスパラギン酸の少なくとも１種をさらに含んでなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
存在する場合、前記グルタミンおよび／またはグルタミン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約１０％を構成し、前記ロイシンは、前記組成物の全重量の少なくとも約１０％を構成し、かつ前記アスパラギン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約７％を構成する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンならびにアスパラギン酸を含んでなり、前記アミノ酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約３５％を構成する、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンならびにアスパラギン酸は、前記組成物の全重量の約４０％〜６０％を構成する、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ヒスチジンは、前記組成物の全重量の約１７％を構成し、前記セリンは、前記組成物の全重量の約１６％を構成し、前記リシンは、前記組成物の全重量の約１０％を構成し、前記グルタミンおよび／またはグルタミン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約１０％を構成し、前記ロイシンは、前記組成物の全重量の少なくとも約１０％を構成し、かつ前記アスパラギン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約７％を構成する、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンを含んでなる遊離アミノ酸からなる組成物であって、前記ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物の全重量の少なくとも約３０％、少なくとも約６０％、少なくとも約６４％または少なくとも約７６％を構成する、組成物。
【請求項１７】
ヒスチジン、セリン、リシン、オルニチン、グリシンおよびアスパラギン酸を含んでなる遊離アミノ酸からなる組成物であって、前記ヒスチジン、セリン、オルニチン、およびグリシンは、一緒に、前記組成物の全重量の少なくとも約８０％を構成する、組成物。
【請求項１８】
前記ヒスチジンは、前記組成物の全重量の約２１％を構成し、前記セリンは、前記組成物の全重量の約１６％を構成し、前記リシンは、前記組成物の全重量の約１０％を構成し、前記オルニチンは、前記組成物の全重量の少なくとも約１２％を構成し、前記グリシンは、前記組成物の全重量の少なくとも約８％を構成し、かつ前記アスパラギン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約７％を構成する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンならびにアスパラギン酸を含んでなる遊離アミノ酸からなる組成物であって、前記ヒスチジン、セリン、リシン、グルタミンおよび／またはグルタミン酸、ロイシンならびにアスパラギン酸は、一緒に、前記組成物の全重量の少なくとも約６０％を構成する、組成物。
【請求項２０】
前記ヒスチジンは、前記組成物の全重量の約１７％を構成し、前記セリンは、前記組成物の全重量の約１６％を構成し、前記リシンは、前記組成物の全重量の約１０％を構成し、前記グルタミンおよび／またはグルタミン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約１０％を構成し、前記ロイシンは、前記組成物の全重量の少なくとも約１０％を構成し、かつ前記アスパラギン酸は、前記組成物の全重量の少なくとも約７％を構成する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
ダイエタリーサプリメントである、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
対象における運動、病気または傷害からの回復を促進または補助する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
高温気候における生存を補助する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
運動性能を促進または補助する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
粉末、果粒、発泡性タブレットもしくは他の固体、液体、ゲルまたはペーストとして配合される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
ヒトまたはウマへの投与のために配合される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物を含んでなる、飲料、食品または飼料サプリメント。
【請求項２８】
炭酸飲料またはスポーツドリンクの形態である、請求項２７に記載の飲料。
【請求項２９】
ウマ摂取のために配合される、請求項２７に記載の飼料サプリメント。
【請求項３０】
対象における運動、病気または傷害からの回復を促進または補助するための組成物を製造するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の飲料、食品もしくは飼料サプリメントの有効量の使用。
【請求項３１】
前記病気は、慢性疲労である、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
高温気候における対象の生存を補助するための組成物を製造するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の飲料、食品もしくは飼料サプリメントの有効量の使用。
【請求項３３】
対象における運動性能を促進または補助するための組成物を製造するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の飲料、食品もしくは飼料サプリメントの有効量の使用。
【請求項３４】
対象の血液中ヘモグロビンおよび／またはヘマトクリットレベルを増加させるための組成物を製造するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の飲料、食品もしくは飼料サプリメントの有効量の使用。
【請求項３５】
高齢者に栄養的サポートを提供するための組成物を製造するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の飲料、食品もしくは飼料サプリメントの有効量の使用。
【請求項３６】
対象における疲労を低減させるための組成物を製造するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の飲料、食品もしくは飼料サプリメントの有効量の使用。
【請求項３７】
前記対象は、ヒトまたはウマである、請求項３０〜３６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３８】
対象に投与されるダイエタリーサプリメントを決定するための方法であって、
ａ）前記対象に、汗を発生させるために十分な運動をさせるステップと；
ｂ）前記汗中のアミノ酸組成物を決定するステップと；
ｃ）前記汗中の全アミノ酸濃度に基づいて、前記対象の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールを決定するステップであって、約４，０００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、「低」プロフィールを表し、約４，０００〜１０，０００μモルＬ−１のアミノ酸濃度は、「中」プロフィールを表し、および約１０，０００μモルＬ−１より高いアミノ酸濃度は、「高」プロフィールを表す、ステップと
を含んでなり、前記低、中または高の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールとして前記対象を階層化することは、投与される前記サプリメントと、任意選択的に、投与される前記サプリメントの量または用量とを決定する、方法。
【請求項３９】
前記対象の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの前記決定は、前記汗中の個々のアミノ酸濃度を決定するステップをさらに含んでなり、（ｉ）前記「低」プロフィールは、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンが前記汗中のアミノ酸の少なくとも約５０％を構成し、セリンが前記汗の主要なアミノ酸成分であることによって表され；（ｉｉ）前記「中」プロフィールは、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンが前記汗中のアミノ酸の少なくとも約７０％を構成し、オルニチンが前記汗の主要なアミノ酸成分であることによって表され；かつ（ｉｉｉ）前記「高」プロフィールは、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンが前記汗のアミノ酸の少なくとも約６０％を構成し、ヒスチジンが前記汗の主要なアミノ酸成分であることによって表される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
投与される前記サプリメントは、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物または請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の飲料、食品もしくは飼料サプリメントを含んでなる、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
「低」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンを含んでなる前記対象のためのアミノ酸サプリメントを示し、前記セリン、グリシン、アラニンおよびヒスチジンは、一緒に、前記組成物の全重量の少なくとも約６０％を構成する、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４２】
「中」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンを含んでなる前記対象のためのアミノ酸サプリメントを示し、前記オルニチン、セリン、ヒスチジンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物の全重量の少なくとも約６４％を構成する、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４３】
「高」の汗によって促進されたアミノ酸損失プロフィールの決定は、ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンを含んでなる前記対象のためのアミノ酸サプリメントを示し、前記ヒスチジン、セリン、オルニチンおよびグリシンは、一緒に、前記組成物の全重量の少なくとも約７６％を構成する、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４４】
対象に投与されるダイエタリーサプリメント剤の必要条件を決定するための方法であって、
ａ）前記対象から血漿試料を採取するステップと；
ｂ）前記血漿中の全アミノ酸組成を決定するステップであって、約２，８００μモルＬ−１未満のアミノ酸濃度は、補足の必要を示すアミノ酸の「低」作用レベルを表す、ステップと
を含んでなる方法。
【国際調査報告】
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