(57)【要約】  本発明で開示される主題は、或る特定の実施形態では、発毛を誘導するためのＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を阻害する組成物及び方法に関する。或る特定の実施形態では、本発明で開示される主題は、発毛を誘導するためのＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の低分子阻害剤による局所治療に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の被験体において毛の発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を前記被験体の毛包に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記毛包が休止中期相又は休止後期相にある場合に前記投与を行う、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験体が、アンドロゲン性脱毛症、休止期脱毛、円形脱毛症、頭部白癬、完全脱毛症、貧毛症、遺伝性単純型貧毛症、前頭部線維化性脱毛症、瘢痕性脱毛症、扁平毛孔性苔癬、リング型脱毛症、瘢痕化脱毛症、非瘢痕化脱毛症、化学療法による脱毛症、又は全身性脱毛症を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記阻害剤が、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、若しくはＯＳＭ−Ｒβをコードする遺伝子の発現を特異的に阻害するアンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体、又は低分子である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記阻害剤がルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記阻害剤がトファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記低分子が、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記阻害剤がＯＳＭ−Ｒβ抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記毛が頭皮若しくは顔にあるか、又は前記被験体の眉毛若しくは睫毛を構成するものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記毛が鼻毛である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記阻害剤が局所投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記阻害剤が経口投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
１以上の発毛バイオマーカーの発現レベルが、前記阻害剤を投与した後に変化する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記１以上の発毛バイオマーカーが、ＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記１以上のバイオマーカーの遺伝子発現の変化が定量的ＰＣＲ又はその変法によって検出される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記１以上のバイオマーカーの遺伝子発現の変化が酵素結合免疫吸着測定法又はその変法によって検出される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
哺乳動物の被験体において毛の発毛を促進する方法であって、前記被験体の毛包に治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項１９】
前記毛包が休止初期相以外の相にある場合に前記投与を行う、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記毛包が成長期相にある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体がアンドロゲン性脱毛症、休止期脱毛、円形脱毛症、頭部白癬、完全脱毛症、貧毛症、遺伝性単純型貧毛症、前頭部線維化性脱毛症、瘢痕性脱毛症、扁平毛孔性苔癬、リング型脱毛症、瘢痕化脱毛症、非瘢痕化脱毛症、化学療法による脱毛症、又は全身性脱毛症を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記阻害剤がＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、若しくはＯＳＭ−Ｒβをコードする遺伝子の発現を特異的に阻害するアンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体、又は低分子である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記阻害剤がルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記阻害剤がトファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記低分子が、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ４９４、ＡＴ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記阻害剤がＯＳＭ−Ｒβ抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記被験体がヒトである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
前記毛が頭皮若しくは顔にあるか、又は前記被験体の眉毛若しくは睫毛を構成するものである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
前記毛が鼻毛である、請求項１８に記載の方法。
【請求項３０】
前記阻害剤が局所投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項３１】
前記阻害剤が経口投与される、請求項１８に記載の方法。
【請求項３２】
１以上の発毛バイオマーカーの発現レベルが、前記阻害剤を投与した後に変化する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３３】
前記１以上のバイオマーカーが、ＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記１以上のバイオマーカーの遺伝子発現の変化が定量ＰＣＲ又はその変法によって検出される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記１以上のバイオマーカーの遺伝子発現の変化が酵素結合免疫吸着測定法又はその変法によって検出される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
毛乳頭の誘導力を促進する方法であって、被験体の毛包に由来する毛乳頭３Ｄスフェアに治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を投与することを含み、前記投与が被験体への前記毛乳頭スフェアの投与の前に行われる、方法。
【請求項３７】
前記毛乳頭３Ｄスフェアを続いて前記被験体に投与することで、アンドロゲン性脱毛症、休止期脱毛、円形脱毛症、頭部白癬、完全脱毛症、貧毛症、遺伝性単純型貧毛症、前頭部線維化性脱毛症、瘢痕性脱毛症、扁平毛孔性苔癬、リング型脱毛症、瘢痕化脱毛症、非瘢痕化脱毛症、化学療法による脱毛症、又は全身性脱毛症を治療する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記阻害剤が、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、若しくはＯＳＭ−Ｒβをコードする遺伝子の発現を特異的に阻害するアンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体、又は低分子である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記阻害剤がルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記阻害剤がトファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記低分子が、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記阻害剤がＯＳＭ−Ｒβ抗体である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記被験体がヒトである、請求項３６に記載の方法。
【請求項４４】
前記毛が頭皮若しくは顔にあるか、又は前記被験体の眉毛若しくは睫毛を構成するものである、請求項３６に記載の方法。
【請求項４５】
前記毛が鼻毛である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４６】
前記阻害剤が局所投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４７】
前記阻害剤が経口投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項４８】
１以上の発毛バイオマーカーの発現レベルが、前記阻害剤を投与した後に変化する、請求項３６に記載の方法。
【請求項４９】
前記１以上のバイオマーカーが、ＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７からなる群から選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記１以上のバイオマーカーの遺伝子発現の変化が定量的ＰＣＲ又はその変法によって検出される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
前記１以上のバイオマーカーの遺伝子発現の変化が酵素結合免疫吸着測定法又はその変法によって検出される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
哺乳動物の被験体において毛の発毛を誘導又は促進する治療法の効力を評価する方法であって、
（ａ）前記被験体から得られた毛包試料中の１以上の発毛バイオマーカーのレベルを判定することと、
（ｂ）前記治療法の間の１以上の時間点において前記被験体から得られた毛包試料中の１以上の発毛バイオマーカーのレベルを判定することと、
を含み、
第１の試料と比較して、第２の又はその後の試料中の前記１以上のバイオマーカーに変化がある場合に前記治療法が前記被験体において発毛を誘導又は促進するのに効果的であると評価する、方法。
【請求項５３】
前記１以上のバイオマーカーが、ＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７からなる群から選択される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記１以上のバイオマーカーの遺伝子発現の変化が定量的ＰＣＲ又はその変法によって検出される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記１以上のバイオマーカーの遺伝子発現の変化が酵素結合免疫吸着測定法又はその変法によって検出される、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
哺乳動物の被験体において毛の発毛を誘導又は促進するキットであって、
（ａ）Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤と、
（ｂ）薬学的に許容可能な担体と、
を備える、キット。
【請求項５７】
前記阻害剤が、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、若しくはＯＳＭ−Ｒβをコードする遺伝子の発現を特異的に阻害するアンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体、又は低分子である、請求項５６に記載のキット。
【請求項５８】
前記阻害剤がルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である、請求項５７に記載のキット。
【請求項５９】
前記阻害剤がトファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である、請求項５７に記載のキット。
【請求項６０】
前記低分子が、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである、請求項５７に記載のキット。
【請求項６１】
前記阻害剤がＯＳＭ−Ｒβ抗体である、請求項５７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１５年５月７日に出願された米国仮特許出願第６２／１５７，９５９号に対する優先権を主張する。上記の出願の全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする。
【０００２】
［政府利益情報］
本発明は、米国立衛生研究所により付与された認可番号Ｒ０１ＡＲ０５６０１６及びＲ２１ＡＲ０６１８８１の下で政府による支援を受けている。米国政府は本発明に対して一定の権利を有する。
【０００３】
１．緒言
本発明で開示される主題は、或る特定の実施の形態では、発毛を誘導するためにＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を阻害する組成物及び方法に関する。或る特定の実施の形態では、本発明で開示される主題は、発毛を誘導するためのＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の低分子阻害剤による局所治療に関する。
【背景技術】
【０００４】
２．背景技術
幾つかの発毛障害は、毛周期の成長相（成長期）に再エントリーすることができないことを特徴とする。これは、アンドロゲン性脱毛症の場合、毛包（ＨＦ：hair follicle）の小型化に起因するか、円形脱毛症の場合は免疫機能不全に起因する可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
現在のアンドロゲン性脱毛症に対する薬理学的治療法は、主に更なる脱毛の予防に焦点を当てているが、毛周期を再開するための薬剤に対するつかみどころのない探索は非常に不十分である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
３．発明の概要
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含む、方法に関する。
【０００７】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、毛包が休止中期相又は休止後期相にある場合に投与を行う、方法に関する。
【０００８】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、被験体が、アンドロゲン性脱毛症、休止期脱毛、円形脱毛症、頭部白癬、完全脱毛症、貧毛症、遺伝性単純型貧毛症、前頭部線維化性脱毛症、瘢痕性脱毛症、扁平毛孔性苔癬、リング型脱毛症（ring alopecia）、瘢痕化脱毛症、非瘢痕化脱毛症、化学療法による脱毛症、又は全身性脱毛症を有する、方法に関する。
【０００９】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、阻害剤が、Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、又はＯＳＭ−Ｒβをコードする遺伝子の発現を特異的に阻害するアンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、又はそれらの変異体若しくは修飾体、又は低分子である、方法に関する。
【００１０】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、阻害剤がルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である、方法に関する。
【００１１】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、阻害剤がトファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である、方法に関する。
【００１２】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、阻害剤が、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（partcitinib）（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ（cerdulatinib）、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス（lumbricus rebellus）抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである、方法に関する。
【００１３】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、阻害剤がＯＳＭ−Ｒβ抗体である、方法に関する。
【００１４】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、被験体がヒトである、方法に関する。
【００１５】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、毛が頭皮若しくは顔にあるか、又は被験体の眉毛若しくは睫毛を構成するものである、方法に関する。
【００１６】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、毛が鼻毛である、方法に関する。
【００１７】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、阻害剤が局所投与される、方法に関する。
【００１８】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、阻害剤が経口投与される、方法に関する。
【００１９】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、１以上のバイオマーカーの発現レベルが、阻害剤を投与した後に変化する、方法に関する。
【００２０】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を被験体の毛包に投与することを含み、１以上の発毛バイオマーカーが、ＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７からなる群から選択される、方法に関する。
【００２１】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を促進する方法であって、被験体の毛包に治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を投与することを含む、方法に関する。
【００２２】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を促進する方法であって、被験体の毛包にＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を投与することを含み、毛包が休止初期相以外の相にある、方法に関する。
【００２３】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を促進する方法であって、被験体の毛包にＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を投与することを含み、毛包が成長期相にある、方法に関する。
【００２４】
或る特定の実施の形態では、本開示は、毛乳頭の誘導力を促進する方法であって、被験体の毛包に由来する毛乳頭３Ｄスフェアに治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を投与することを含み、投与が被験体への毛乳頭スフェアの投与の前に行われる、方法に関する。
【００２５】
或る特定の実施の形態では、本開示は、毛乳頭の誘導力を促進する方法であって、被験体の毛包に由来する毛乳頭３Ｄスフェアに治療的有効量のＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤を投与することを含み、アンドロゲン性脱毛症、休止期脱毛、円形脱毛症、頭部白癬、完全脱毛症、貧毛症、遺伝性単純型貧毛症、前頭部線維化性脱毛症、瘢痕性脱毛症、扁平毛孔性苔癬、リング型脱毛症、瘢痕化脱毛症、非瘢痕化脱毛症、化学療法による脱毛症、又は全身性脱毛症の治療のため、投与が被験体への毛乳頭スフェアの投与の前に行われる、方法に関する。
【００２６】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導又は促進する治療法の効力を評価する方法であって、（ａ）被験体から得られた毛包試料中の１以上の発毛バイオマーカーのレベルを判定することと、（ｂ）治療法の間の１以上の時間点において被験体から得られた毛包試料中の１以上の発毛バイオマーカーのレベルを判定することとを含み、第１の試料と比較して、第２の又はその後の試料中の１以上のバイオマーカーに変化がある場合に治療法が被験体において発毛を誘導又は促進するのに効果的であると評価する、方法を更に提供する。
【００２７】
或る特定の実施の形態では、１以上のバイオマーカーが、ＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７からなる群から選択される。
【００２８】
或る特定の実施の形態では、本開示は、哺乳動物の被験体において発毛を誘導又は促進するキットであって、（ａ）Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤と、（ｂ）薬学的に許容可能な担体とを備える、キットを更に提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１Ａ〜図１Ｅ．ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の阻害は、野生型マウスにおいて成長期を再開する。図１Ａ．７週齢の野生型マウスを剃毛し、ビヒクル対照、ソニックヘッジホッグアゴニスト（ＳＡＧ）、３％のルキソリチニブ（ＪＡＫ１／２阻害剤）、トファシチニブ（ＪＡＫ３阻害剤）のいずれかの局所塗布で毎日治療した。皮膚を指定の時点で採取し、Ｈ＆Ｅで染色した。治療の２１日目にマウスの画像を撮影した。図１Ｂ．８．５週齢のマウスをルキソリチニブ、トファシチニブ又はビヒクル対照で５日間治療し、成長期の開始を示す皮膚色素沈着の出現についてマウスをモニターした。発毛なし（及び色素沈着なし）を任意値０に割り当てた。皮膚黒化には、より黒い皮膚／目に見える発毛を示す、より高い数字で０％〜１００％の値を与えた。１つの条件当たり５匹のマウスを使用した。ノンパラメトリック縦断的データ分析を治療後８日目〜１８日目に対して行い、対照対ルキソリチニブに関してｐ＝７．６×１０−３４、及び対照対トファシチニブに関してＰ＝１．５×１０−１０を生成した。図１Ｃ．４日間ビヒクル対照、ルキソリチニブ及びトファシチニブで治療したマウスに由来する全皮膚をマイクロアレイによって分析した。発現データを使用して、３つの各治療群のＴ０からＴ５の間で差次的に発現された遺伝子を同定した。１つの条件当たり３匹のマウスを使用して２つの時間点で生検を行った。図１Ｄ．Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ）を使用して差次的に発現した遺伝子の一覧の中で大きな比率を占める分子経路及び分子プロセスを同定した。差次的に発現された遺伝子一覧の比較は、ルキソリチニブ及びトファシチニブの両方によって調節される遺伝子のサブセットを明らかにした。赤＝薬物治療されたＴ５対Ｔ０において上方制御された遺伝子。緑＝薬物治療されたＴ５対Ｔ０において下方制御された遺伝子。図１Ｅ．８．５週齢のマウスの背部皮膚の片側をルキソリチニブ又はトファシチニブで治療し、反対側をビヒクル対照で治療した。治療の４時間後、Ｅｄｕを各マウスに注射し、１時間後に皮膚を採取した。治療を１回、２回、及び３回行い、Ｅｄｕ＋細胞の存在について皮膚を分析した。
【図２】図２Ａ〜図２Ｄ．ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路は、毛包サイクリング中に動力学的に調節される。図２Ａ．８週齢のＲａｇ１−／−マウス及びＴｃｒβ／δ−／−マウスをＪＡＫ阻害剤で毎日治療した。マウスを一週間治療し、毎日の治療を停止してから７日後に画像を撮影した。１つの遺伝子型当たり３匹のマウスの代表写真を示す。図２Ｂ．出生から１７日目（休止期）、２３日目（休止期）、２９日目（成長初期）及び３３日目（成長中期）にマウスから全皮膚を採取した。遺伝子発現の変化を、正規化対照と同様にＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路に関与する遺伝子を含むＪＡＫ−ＳＴＡＴｑＰＣＲアレイを使用して分析した（Qiagen）。１つの時間点当たり３匹のマウスを使用し、別々のｑＰＣＲプレートにそれぞれハイブリダイズした。毛周期に亘る遺伝子発現の動的な変化を可視化するため、遺伝子発現のＬｏｇ２倍変化を利用してＧＥＤＩ（gene expression dynamics inspector）自己編成マップ（ＳＯＭ：self-organizing map）を生成した。ＧＥＤＩは、それらの同様の経時的な発現パターンに基づいて転写産物をメタ遺伝子へとクラスター化し、５×６グリッドにそれらを配置する。対照試料（Ｄ１７）対実験の試料（それぞれＤ２３、Ｄ２９、Ｄ３３）において抑制されたメタ遺伝子は、青色から緑色であるのに対し、実験試料中で大きな比率を占めるメタ遺伝子は赤色である。２倍の変化に対応する上側閾値及び下側閾値。２倍よりも大きな／小さな変化を最大の色に設定する。図２Ｃ．Ａ（四角で囲まれたピクセル）で強調される抑制されたメタ遺伝子の内容を表に詳述する。四角で囲まれたピクセルの色は表中に並ぶ色に対応する。図２Ｄ．成長期（３０日目）、退行期（４２日目）及び休止期（Ｄ５０）の野生型マウスに由来する皮膚を採取し、固定し、抗リン酸ＳＴＡＴ３及び抗リン酸ＳＴＡＴ５、並びにＫｒｔ１５（毛隆起マーカー）及びＰ−カドヘリン（毛根マーカー）で染色した。リン酸ＳＴＡＴ３はＤＰ細胞（白色矢印）と同様に成長期中に外毛包細胞（extra-follicular cell）に発現される。退行期では、リン酸−ＳＴＡＴ３は、ＤＰ（赤色矢印）及び毛芽（オレンジ色矢印）に発現される。休止初期において、リン酸ＳＴＡＴ３は、ＤＰ（緑色矢印）に最も近い毛芽細胞に存在する。リン酸ＳＴＡＴ５は、退行期中にピークの発現を有し、毛周期を通してＤＰで強く発現される（黄色矢印）。リン酸−ＳＴＡＴ５もまた、退行期毛包の毛隆起（赤紫色矢印）に検出することができる。Zeiss共焦点顕微鏡において倍率４０倍で画像を撮影した。
【図３】図３Ａ〜図３Ｅ．ＪＡＫ−ＳＴＡＴの阻害は、ヒト組織における発毛を促進する。図３Ａ．ヒト頭皮皮膚をＳＣＩＤマウス上に移植し、４週間に亘りビヒクル対照、ルキソリチニブ又はトファシチニブで局所治療した。移植片の写真を３日毎〜５日毎に撮影した。ビヒクル治療側と薬物治療側との差を定量するため、ＩｍａｇｅＪを使用して移植片にわたる色素沈着の強度を測定した。各ヒストグラム上の垂直線はビヒクル治療と薬物治療との間の境界に対応する。図３Ｂ．個々のＨＦを成人ヒト頭皮組織から切り取り、ビヒクル対照、ルキソリチニブ及びトファシチニブの存在下で培養した。毛包の写真を２週間に亘って２日毎に撮影し、各毛包の長さを経時的に測定した。トファシチニブ及びルキソリチニブによる治療は、成長期の成長速度を有意に増加し（それぞれ、Ｐ＝０．０１７及びＰ＝０．０２５）、したがってＨＦの全長を増加させた。描写される実験を１つの条件当たり３個〜４個の毛包で１名のドナーに由来する毛包で行った。ノンパラメトリック縦断的データ分析を使用してＰ値を得た。図３Ｃ．ＤＰスフェアをビヒクル対照、ルキソリチニブ又はトファシチニブの存在下でハンギングドロップ（hanging drop）により生育させた後、マウス新生児角化細胞と合わせてｉｎ  ｖｉｖｏで注入した。図３Ｄ．グラフは、３名の個々のドナーから生成されたスフェアの３つの別々の実験を表す。ヒトＤＰスフェア及びマウス角化細胞スラリーの１回の注射を１つの条件当たり１名のＤＰドナー毎に行って、誘導された毛包を含む嚢胞を生じた。図３Ｅ．嚢胞を分離し後に誘導された毛包の数のグラフ、毛線維を顕微鏡で手作業により計数した。対照治療とトファシチニブ治療との差は統計的に有意である（Ｐ＝０．０００１３）。変量効果としてドナーを処理する線形混合効果分析を使用してＰ値を計算した。
【図４】図４Ａ〜図４Ｄ．トファシチニブは誘導性分子サインを増強する。図４Ａ．ビヒクル対照、ルキソリチニブ又はトファシチニブで治療したＤＰスフェアを、マイクロアレイを使用して分子的に特性を明らかにした。１条件当たり３名の個々のドナーに由来する細胞を使用した。遺伝子発現のＬｏｇ２倍変化を利用してＧＥＤＩプロットを生成し、薬物治療に対する遺伝子発現の動力学的変化を可視化した（Ｚ軸及びカラースケール）。メタ遺伝子へとグループ化された転写産物のクラスターを１８×１９グリッド（Ｘ、Ｙ）に置いた。ルキソリチニブ対対照、トファシチニブ対対照、及びルキソリチニブ対トファシチニブの３つの比較を示す。４つの目的の領域をプロット上で強調し、トファシチニブ治療によって抑制された遺伝子（領域１及び領域２）、及びトファシチニブ治療によって上方制御された遺伝子（領域３及び領域４）を反映する。図４Ｂ．領域１〜領域４から選択された遺伝子を表に提示する。図４Ｃ．遺伝子セット増幅分析は、以前にＤＰ誘導力に寄与することが示されたその遺伝子群を明らかにした（Higgins et al.（３５）によって同定されたＴ２及びＴ４内の遺伝子はトファシチニブ治療によって有意に増幅される（ｐ＝１．３×１０−５））。灰色の点線は、この分析において正規分布（増幅なし）がどのように見えるか示す。ｘ軸は、治療していない細胞に対してトファシチニブ治療した細胞を比較して、最も過剰発現したものから最も低発現のものを並べたアレイにおいて呼び出し（call）を経た全ての遺伝子の等級を記載する。ｙ軸は、所与の等級で合わせた遺伝子セットＴ２及びＴ４の増幅スコア（ＥＳ）をプロットする。正規化された増幅スコア（ＮＥＳ）は、報告された関連するｐ値と共に、無作為化されたデータで観察されたＥＳ分布を得るＺスコアの確率を反映する。Ｔ２及びＴ４内の遺伝子に対する個々の遺伝子等級はプロットの下のバーコードで黒色ハッシュとして表される。図４Ｄ．図３及び図４で得られた結果の要約：無傷のＤＰが完全に誘導性であるのに対し、毛乳頭をｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養する場合、毛包生育を誘導する可能性が失われる。本発明者らは、無傷のＤＰに関連する分子サインにおいて遺伝子のサブセットを調節することにより、スフェロイド培養でＤＰ細胞を生育させることが潜在的な誘導力（inductive potential）の一部を回復することを以前に示した（領域１及び領域３（Ｔ１及びＴ３））（３５）。三次元培養条件によって以前に変更されていない経路のうちのいくつかを標的化とすることにより、トファシチニブによるＤＰスフェアの治療は培養ＤＰの誘導力を増加させた（Ｔ２及びＴ４）。青＝非誘導状態に対応する領域内の遺伝子発現、赤＝誘導状態に対応する領域内の遺伝子発現。トファシチニブはＴ２及びＴ４内の遺伝子を回復するが、完全に無傷のＤＰ（明るい赤色の領域）と比較して、回復は不完全である。
【図５】図５Ａ〜図５Ｅ：ＪＡＫ阻害が媒介する発毛は内因性の発毛を繰り返し、休止期の持続期間に依存する。図５Ａ．休止期（８．５週）の野生型マウスを、４日間に亘ってビヒクル対照、２％トファシチニブ又は２％ルキソリチニブで治療した。皮膚を採取し、切片を作製して、Ｋｉ６７（増殖マーカー）及びＰ−カドヘリン（毛芽マーカー）で染色した。画像は１つの治療当たり３匹のマウスの代表である。図５Ｂ．７週齢の野生型マウスをビヒクル、トファシチニブ又はルキソリチニブで治療し、指定の時間点で皮膚を採取した。これらの時間点における毛包の数及び厚さを定量した。対照として、極めて型どおりに進行するプロセスである脱毛後の発毛を利用した（８）。図５Ｃ．７週齢のマウス又は８．５週齢の２群のマウスを剃毛し、ルキソリチニブ、トファシチニブ又はビヒクル対照で毎日治療した。マウスを一週間治療し、毎日の治療を停止してから７日後に画像を撮影した。皮膚は採取し、Ｈ＆Ｅで染色した。全てのマウスがまだ不応性休止期（refractory telogen）であったことを確認するため、抜毛（plucking）に続く発毛が両方の年齢集団中で同様の動態に従うことを示す。マウス及びＨ＆Ｅ染色の画像は、１つの群当たり３匹マウスによる２つの実験の代表である。図５Ｄ．７週齢のマウス（出生後４９日）を２４日間に亘ってルキソリチニブ、トファシチニブ、又はビヒクル対照で治療し、指定の時点で生検を行った。示されるように、ルキソリチニブによる１８日間の治療及びトファシチニブによる２１日間の治療によって、治療された毛包は成長期を再開する。図５Ｅ．８．５週齢のマウスを、対照（Ｃ左側）又はルキソリチニブ（Ｒ右側）で毎日治療した。治療後５日目から開始して毎日写真を撮影し、皮膚黒化レベルについて皮膚を採点した。治療後８日目、１２日目、１６日目のマウス（１治療群当たりマウス４匹）からの治療の代表写真を示す。
【図６】図６Ａ〜図６Ｃ：各ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害剤によって差次的に調節された遺伝子に富む分子の経路。図６Ａ．０日目（Ｔ０）又は４日目（Ｔ５）にルキソリチニブ及びトファシチニブで治療した全皮膚試料を、マイクロアレイ分析によって同定された選択された遺伝子について、ｑＰＣＲにより分析した。結果は３つの別々の実験の対応ｔ検定によって決定されるｐ値＞０．０５を表す。図６Ｂ．マイクロアレイ発現データを使用して、Ｔ０からＴ５の間で、ＤＭＳＯ治療群、ルキソリチニブ治療群、及びトファシチニブ治療群で差次的に発現した遺伝子を同定した。Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ）を使用して、全ての治療において、治療のサブセットにおいて、又は独占的に各条件によって差次的に調節された遺伝子を同定した。次に、ＩＰＡを利用して、差次的に発現した遺伝子の一覧の中で大きな比率を占めた分子経路及び分子プロセスを探索した。ルキソリチニブ治療によって増幅された経路を示す。図６Ｃ．トファシチニブ治療より増幅された経路。赤＝薬物治療試料において上方制御された遺伝子、緑色＝薬物治療試料において下方制御された遺伝子。
【図７】図７Ａ〜図７Ｃ：ＪＡＫ阻害の効果はＴ細胞に依存せず、代わりに細胞に本来備わった特性を表す。図７Ａ．リンパ球欠乏マウスにおいて毛サイクリングの異常があるかどうかを立証するため、本発明者らは、出生から３０日目（成長期）、４２日目（退行期）及び５０日目（休止初期）に、Ｂ細胞及びＴ細胞を欠乏するＲａｇ１−／−マウス、遊走Ｔ細胞及びレジデントＴ細胞を欠乏するＴｃｒβ／δ−／−マウス、並びにヘテロ接合対照から皮膚を採取して分析した。１つの遺伝子型当たり３匹のマウスの代表的なＨ＆Ｅ画像を示す。図７Ｂ．退行期からその後の成長期までの移行を表す時間点に亘る遺伝子発現の変化を選択された数の遺伝子に対してプロットした。図７Ｃ．リン酸−ＳＴＡＴ３及びリン酸−ＳＴＡＴ５のより低倍率の画像。画像をZeiss共焦点顕微鏡により倍率２０倍で撮影した。
【図８】図８Ａ〜図８Ｅ：ＪＡＫ−ＳＴＡＴの阻害はヒト毛包生育を促進する。図８Ａ．ヒト頭皮皮膚をスキッドマウスに移植し、４週間に亘ってビヒクル対照、ルキソリチニブ又はトファシチニブで局所治療した。皮膚の黒さの定量を経時的に示す。図８Ｂ．トファシチニブによるヒト胎児の頭皮皮膚の治療の第２の実施例。この場合、移植片は複数の治療を可能とするほど大きくなかったため、治療を同じ個体に由来する２つの別々の移植片に対して行った。図８Ｃ．臓器培養実験を２名の個体に由来する毛包を用いて繰り返した。トファシチニブ及びルキソリチニブによる治療は成長期の生育速度を増加させ、以前に観察された傾向を再現したが、結果は統計的有意差に達しなかった。図８Ｄ．成長期中のヒトＨＦをリン酸ＳＴＡＴ３、リン酸ＳＴＡＴ５又はアイソタイプ対照で染色した。画像をZeiss共焦点顕微鏡により倍率２０倍で撮影した。図８Ｅ．また、トファシチニブ治療によってＴ２を増幅したが、統計学的オーバーラップはわずかに有意であるにすぎなかった（Ｐ＝０．０３）。
【図９】図９Ａ〜図９Ｅ：ＯＳＭ及びＯＳＭ−Ｒβは、休止期中の毛隆起において活性化されたＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５と共局在化する。図９Ａ．リン酸化されたＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５のタンパク質は、休止初期及び休止中期（Ｐ４６、Ｐ６０）のＨＦＳＣコンパートメント中に存在し、休止後期（Ｐ８０）に減少する。ＯＳＭ免疫蛍光は、この間にＨＦＳＣに共局在化される。図９Ｂ．ＯＳＭの受容体（ＯＳＭ−Ｒβ）もまた、免疫組織化学によりＨＦＳＣ毛隆起コンパートメントに共局在化する。いずれの画像も倍率２０倍で撮影した。図９Ｃ．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養角化細胞において、ＯＳＭは、ＯＳＭ治療の１０分以内にＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５の転写因子を活性化し、これはトファシチニブ（ＴＯＦＡ）によって効率的に停止される。図９Ｄ．ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＴＯＦＡで治療した全皮膚もまた、ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５の活性化の有効な阻害を実証する。図９Ｅ．Ｐ６０の休止期の皮膚に対して毎日皮下注射されたＯＳＭ−Ｒβに対する中和抗体は局所の成長期を誘導する。ＰＢＳ対照、並びにＩＬ−６及びその受容体に対する中和抗体は効果を示さない。図９Ｆ．ｇｐ１３０もまた毛隆起において増幅される。
【図１０】図１０Ａ〜図１０Ｇ：ＯＳＭはマウス角化細胞に対して生育阻害特性を有し、毛隆起中のＨＦ幹細胞コンパートメントに対して作用する。図１０Ａ．休止期に採取したマウス角化細胞によるコロニー形成アッセイは、ＯＳＭが角化細胞に対し、トファシチニブの添加によって部分的に逆転される生育阻害効果を有することを示す。図１０Ｂ．トファシチニブ単独は角化細胞のコロニー数を増加する。図１０Ｃ．７．５週目及び８．５週目（Ｐ５６及びＰ６０）での第２の休止期に採取した皮膚を分離し、表皮及び真皮をｑＲＴ−ＰＣＲによって分析した。図１０Ｄ．ＯＳＭ−Ｒβは表皮によって優先的に発現されるのに対し、ＯＳＭが真皮で産生される。また、ＯＳＭ産生は、Ｐ５３からＰ６０の間に増加する。図１０Ｅ．表皮では、ＯＳＭ−Ｒβは毛隆起コンパートメントに増幅される。図１０Ｆ．ＣＤ３４＋ＩＴＧＡ６＋ＨＦＳＣを単離するためのマウス表皮に対する細胞選別戦略。図１０Ｇ．培養マウス角化細胞において、２０ｎｇ／ｍｌの組み換えマウスＯＳＭによる治療はＯＳＭ−Ｒβの発現を上方制御する。
【図１１】図１１Ａ〜図１１Ｆ：ＪＡＫ阻害は、マウス皮膚におけるＯＳＭ−Ｒβの発現を抑制し、静止状態の喪失をもたらす可能性がある。図１１Ａ．既存のＪＡＫ阻害剤実験によるマイクロアレイデータを再度分析したところ、ＪＡＫ阻害は休止期の間に治療した全マウス皮膚ＯＳＭ−Ｒβの矛盾のない下方制御をもたらした。図１１Ｂ．５日間のトファシチニブ又はルキソリチニブの治療期間に亘って毎日全皮膚の生検材料を収集した場合のｉｎ  ｖｉｖｏのｑＲＴ−ＰＣＲで確認されたＯＳＭ−Ｒβの下方制御。図１１Ｃ．培養マウス角化細胞におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＯＳＭ−Ｒβ転写の下方制御。図１１Ｄ．ルキソリチニブで治療した休止期マウス皮膚から選別された角化細胞もまた、３日後にＯＳＭ−Ｒβの下方制御を示す。図１１Ｅ．ＪＡＫ２阻害剤であるルキソリチニブによるｉｎ  ｖｉｖｏ治療は、初期のＳＴＡＴ３／５阻害、その後のＡｋｔ経路及びＥＲＫ経路の活性化をもたらし、ＯＳＭ−Ｒβの下方制御を導く。図１１Ｆ．真皮コンパートメント、おそらく毛乳頭で産生されたＯＳＭが、生育及び分化を抑制するのと同時にＯＳＭ−Ｒβの発現を維持することによって、毛隆起中のＨＦＳＣに対してＯＳＭ−Ｒβを関与させて休止期中に静止状態を維持することを示す概要図。
【図１２】表１：本研究で使用した抗体及び希釈率の一覧である。
【図１３】表２：本研究で使用したｑＰＣＲプライマーの一覧である。
【図１４】表３：Ｔ２及びＴ４の領域内の遺伝子の一覧（Higgins et al., PNAS 2013から応用した）である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
５．詳細な説明
限定ではなく明確性のため、本発明の詳細な説明は、以下のサブセクションに分割される。
５．１  定義
５．２  ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路遺伝子
５．３  治療方法
５．４  医薬組成物及び投与
５．５  治療の効力をモニタリングする方法
５．６  キット
【００３１】
最近、本発明者らは、マウス及びヒトの両方において、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の薬理学的阻害が円形脱毛症（ＡＡ）における迅速な毛再成長を促進することを実証した（１）（Christiano, et al.の国際公開第２０１３１４９１９４号、引用することにより本明細書の一部をなす）。予想外に、ＡＡを有するマウスに関する一連の研究の間、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害剤による局所治療は異常にロバストな発毛をもたらしたことが観察され、毛周期の開始に対する局所効果を示唆した。本明細書に開示されるように、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の薬理学的阻害は、正常マウスにおいて毛周期を開始し、ヒトにおいて発毛を促進する。
【００３２】
上述の内容に照らして、本発明で開示される主題は、或る特定の実施形態では、発毛を誘導するためにＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路を阻害する組成物及び方法に関する。或る特定の実施形態では、本発明で開示される主題は、発毛を誘導するためのＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の低分子阻害剤による局所治療に関する。
【００３３】
５．１  定義
本開示によれば、「被験体」又は「患者」はヒト又は非ヒトの動物である。動物被験体はヒトであることが好ましいが、本発明の化合物及び組成物は、獣医学にも同様に適用され、例えば、イヌ、ネコ、ネズミ及び様々な他のペット等の飼い慣らされた種；ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ等の家畜種；並びに例えば野生又は動物園における野生動物、非ヒト霊長動物等の治療に適用される。
【００３４】
本明細書で使用される「医薬組成物」及び「医薬製剤」は、そこに含まれる有効成分の生物学的活性を有効にするような形態であり、該製剤が投与される患者に許容できない毒性のある追加成分を含んでいない、組成物を指す。
【００３５】
本明細書で使用される「薬学的に許容可能な」は、例えば、「薬学的に許容可能な担体」に関して、被験体に無毒である特性を指す。医薬製剤中の薬学的に許容可能な成分は、無毒な有効成分以外の成分であってもよい。薬学的に許容可能な担体はバッファー、賦形剤、安定剤、及び／又は防腐剤を含んでもよい。
【００３６】
本明細書で使用される「Ｊａｋ１阻害剤」は、Ｊａｋ１遺伝子、又はＪａｋ１のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、Ｊａｋ１によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００３７】
本明細書で使用される「Ｊａｋ２阻害剤」は、Ｊａｋ２遺伝子、又はＪａｋ２のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、Ｊａｋ２によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００３８】
本明細書で使用される「Ｊａｋ３阻害剤」は、Ｊａｋ３遺伝子、又はＪａｋ３のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、Ｊａｋ３によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。一実施形態では、Ｊａｋ３阻害剤はＪａｋ３調節化合物であってもよい。
【００３９】
本明細書で使用される「Ｔｙｋ２阻害剤」は、Ｔｙｋ２遺伝子、又はＴｙｋ２のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、Ｔｙｋ２によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。一実施形態では、Ｔｙｋ２阻害剤はＴｙｋ２調節化合物であってもよい。
【００４０】
本明細書で使用される「ＳＴＡＴ１阻害剤」は、ＳＴＡＴ１遺伝子、又はＳＴＡＴ１のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＳＴＡＴ１によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４１】
本明細書で使用される「ＳＴＡＴ２阻害剤」は、ＳＴＡＴ２遺伝子、又はＳＴＡＴ２のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＳＴＡＴ２によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４２】
本明細書で使用される「ＳＴＡＴ３阻害剤」は、ＳＴＡＴ３遺伝子、又はＳＴＡＴ３のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＳＴＡＴ３によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４３】
本明細書で使用される「ＳＴＡＴ４阻害剤」は、ＳＴＡＴ４遺伝子、又はＳＴＡＴ４のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＳＴＡＴ４によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４４】
本明細書で使用される「ＳＴＡＴ５ａ阻害剤」は、ＳＴＡＴ５ａ遺伝子、又はＳＴＡＴ５ａのタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＳＴＡＴ５ａによってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４５】
本明細書で使用される「ＳＴＡＴ５ｂ阻害剤」は、ＳＴＡＴ５ｂ遺伝子、又はＳＴＡＴ５ｂのタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＳＴＡＴ５ｂによってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４６】
本明細書で使用される「ＳＴＡＴ６阻害剤」は、ＳＴＡＴ６遺伝子、又はＳＴＡＴ６のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＳＴＡＴ６によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４７】
本明細書で使用される「ＯＳＭ阻害剤」は、ＯＳＭ遺伝子、又はＯＳＭのタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＯＳＭによってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４８】
本明細書で使用される「ｇｐ１３０阻害剤」は、ｇｐ１３０遺伝子、又はｇｐ１３０のタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ｇｐ１３０によってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００４９】
本明細書で使用される「ＬＩＦＲ阻害剤」は、ＬＩＦＲ遺伝子、又はＬＩＦＲのタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＬＩＦＲによってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００５０】
本明細書で使用される「ＯＳＭ−Ｒβ阻害剤」は、ＯＳＭ−Ｒβ遺伝子、又はＯＳＭ−Ｒβのタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、ＯＳＭ−Ｒβによってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００５１】
本明細書で使用される「Ｊａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤」は、Ｊａｋ１／Ｊａｋ２／Ｊａｋ３／Ｔｙｋ２／ＳＴＡＴ１／ＳＴＡＴ２／ＳＴＡＴ３／ＳＴＡＴ４／ＳＴＡＴ５ａ／ＳＴＡＴ５ｂ／ＳＴＡＴ６／ＯＳＭ／ｇｐ１３０／ＬＩＦＲ／ＯＳＭ−Ｒβ遺伝子、又はＪａｋ１／Ｊａｋ２／Ｊａｋ３／Ｔｙｋ２／ＳＴＡＴ１／ＳＴＡＴ２／ＳＴＡＴ３／ＳＴＡＴ４／ＳＴＡＴ５ａ／ＳＴＡＴ５ｂ／ＳＴＡＴ６／ＯＳＭ／ｇｐ１３０／ＬＩＦＲ／ＯＳＭ−Ｒβのタンパク質若しくはポリペプチドと相互作用し、その活性及び／又はその発現を阻害する化合物を指す。該化合物は、Ｊａｋ１／Ｊａｋ２／Ｊａｋ３／Ｔｙｋ２／ＳＴＡＴ１／ＳＴＡＴ２／ＳＴＡＴ３／ＳＴＡＴ４／ＳＴＡＴ５ａ／ＳＴＡＴ５ｂ／ＳＴＡＴ６／ＯＳＭ／ｇｐ１３０／ＬＩＦＲ／ＯＳＭ−Ｒβによってコードされるタンパク質の活性又は発現を減少させることができる。
【００５２】
本開示の阻害剤は、本明細書に開示される配列によってコードされるポリペプチドに対する抗体（モノクローナル、ポリクローナル、ヒト化、キメラ、又は完全ヒト）、又はそれらの結合フラグメント等のタンパク質であってもよい。抗体フラグメントは、全長形態以外の抗体の形態であってもよく、操作された抗体フラグメントに加えて全長抗体内に存在する部分又は構成要素を含む。抗体フラグメントは、限定されないが、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ（diabodies：二重特異性抗体）、Ｆｖ及び（Ｆａｂ’）２、トリアボディ（triabodies：三重特異性抗体）、Ｆｃ、Ｆａｂ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組み合わせ、可変領域、テトラボディ（tetrabodies：四重特異性抗体）、二官能性ハイブリッド抗体、フレームワーク領域、定常領域等が挙げられる（Maynard et al., (2000) Ann. Rev. Biomed. Eng. 2:339-76、Hudson (1998) Curr. Opin. Biotechnol. 9:395-402を参照されたい）。抗体は商業的に得ることができ、注文で生成されてもよく、又は当該技術において確立された方法（Janeway et al., (2001) Immunobiology, 5th ed., Garland Publishing）に従って目的の抗原に対して合成されてもよい。
【００５３】
本開示の阻害剤は、タンパク質に結合し、その機能を妨害する低分子であってもよい。低分子は、一般に低分子量を有する合成及び天然の物質の多様な群である。それらは天然の供給源（例えば植物、菌、微生物等）から単離されてもよく、商業的に得られてもよく及び／又はライブラリ若しくはコレクションとして利用可能であってもよく、又は合成されてもよい。コンビナトリアルライブラリのｉｎ  ｓｉｌｉｃｏスクリーニング又はハイスループット（ＨＴＰ）スクリーニングによって、タンパク質を調節する候補の低分子を同定してもよい。アスピリン、ペニシリン等の最も従来型の医薬品、及び多くの化学療法剤は、低分子であり、商業的に得ることができ、化学的に合成することができ、又はランダム若しくはコンビナトリアルのライブラリから得ることができる（Werner et al., (2006) Brief Funct. Genomic Proteomic 5(1):32-6）。幾つかの実施形態では、薬剤は、標的タンパク質又はＲＮＡを結合するか、それらと相互作用するか、又はそれらと会合する低分子である。かかる低分子は、標的が細胞内の標的である場合、標的と相互作用するために細胞の脂質二重層に浸透することができる有機分子であってもよい。低分子としては、限定されないが、毒素、キレート剤、金属、及びメタロイド化合物が挙げられる。低分子を、特定の細胞に対して該低分子を特異的に誘導するようにターゲッティング剤に付着させるか、又は複合体化させてもよい。
【００５４】
本明細書で使用される「治療的有効量」は、投与される組成物に含まれる本開示の阻害剤の量が、この場合、被験体の発毛を誘導又は促進する等の意図した目的を達成するために十分な量であることを指す。本開示では、発毛を測定する方法は、当該技術においてよく知られており、本明細書で繰り返す必要はない。発毛を誘導するための阻害剤の投与に関して、組成物の有効量は、毛包を成長期相へ再エントリーさせるのに十分な量である。成長期相において発毛を促進するための阻害剤の投与に関して、阻害剤の有効量は、発毛の速度を増加させるのに十分な量である。例えば、上記増加は、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、５００％、６００％、７００％、８００％、９００％、１０００％、５０００％、１００００％以上の発毛速度の増加であってもよい。各投与に対する治療的有効量は、１ｎｇ〜１μｇ、１μｇ〜１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、１ｇ以上の任意の量、又はそれらの任意の中間量であってもよい。治療的有効量を１回以上の投与で投与してもよい。治療的有効量の阻害剤を、局所的に、経口的に、又は静脈内で投与することができる。薬学的に許容可能な希釈剤、担体、又は賦形剤との混合物で使用される場合、阻害剤の有効量は０．１重量％、０．２重量％、０．３重量％、０．４重量％、０．５重量％、０．６重量％、０．７重量％、０．８重量％、０．９重量％、１重量％、２重量％、３重量％、４重量％、５重量％、６重量％、７重量％、８重量％、９重量％、１０重量％以上、又はそれらの任意の中間量であってもよい。
【００５５】
本明細書で使用される「成長期相」は毛包の活発な成長相を指す。成長期相では、典型的には、毛幹に加えて毛根の細胞が急速に分裂している。成長期相の終わりに、或る特定の生物学的シグナルが毛包を退行期相に入らせる。
【００５６】
本明細書で使用される「退行期相」は成長期相の終わりに生じる移行段階を指す。退行期相は毛の活性な生育の終了を伝える。
【００５７】
本明細書で使用される「休止期相」は毛包の静止相を指す。休止期相中、毛包は休止したままである。或る特定の生物学的シグナルの下で、毛包は成長期相に再エントリーして、再び生育し始める。休止初期相は、休止期相のはじめの期間の５％〜４０％を指す。休止後期相は、休止期相の終わりの期間の５％〜４０％を指す。休止中期相は、休止初期相と休止後期相との間の期間を指す。
【００５８】
本明細書で使用される「アンドロゲン性脱毛症」（男性型脱毛としても知られる）は、男性ホルモンの影響に起因する縮小（shrinkage）に対する毛包の潜在的な感受性により起こる脱毛である。
【００５９】
本明細書で使用される「休止期脱毛」は、休止期相（毛包の静止相）への毛の初期のエントリーによる薄毛又は毛の抜けかわりを特徴とする頭皮障害である。
【００６０】
本明細書で使用される「円形脱毛症」（円形脱毛（spot baldness）としても知られる）は、身体が自身の細胞を認識できず、その後の自身の組織の破壊に起因する、身体の一部又は全部の領域から毛が失われる自己免疫疾患である。
【００６１】
本明細書で使用される「頭部白癬」は頭皮の皮膚の真菌感染症（皮膚糸状菌症）である。該疾患は、主として、毛幹に侵入するトリコフィトン（Trichophyton）属及びミクロスポルム（Microsporum）属の皮膚糸状菌によって引き起こされる。臨床症状は、典型的には、炎症、スケーリング、膿疱、及び痒みを伴う場合があり、時に「ブラックドット（black dot）」パターンを伴う、（破断された毛（broken-off hairs）を伴うことが多い）単一又は複数のまだらな脱毛である。
【００６２】
本明細書で使用される「完全脱毛症」は全ての頭髪の喪失を指す。
【００６３】
本明細書で使用される「貧毛症」は、異常な毛パターンの状態、主に脱毛又は毛の減少を指す。
【００６４】
本明細書で使用される「遺伝性単純型貧毛症」は、他の外胚葉又は全身の異常がない状態で、構造の欠陥を伴わない、頭髪がまばら又は頭髪がないことを特徴とする遺伝性障害を指す。
【００６５】
本明細書で使用される、「前頭部線維化性脱毛症」は、頭皮の正面の毛マージンを冒す瘢痕化脱毛（scarring hair loss）の形態を指す。
【００６６】
本明細書で使用される「瘢痕性脱毛症（cicatricial alopecia）」は瘢痕化脱毛症（scarring alopecia）とも呼ばれ、毛包を破壊する一群の稀な障害を指す。毛包は瘢痕組織で置き換えられ、その結果永久脱毛を引き起こす。
【００６７】
本明細書で使用される「扁平毛孔性苔癬」は、扁平苔癬として知られる、比較的一般的な皮膚疾患が毛を有する皮膚の領域を冒す場合に起こる一種の瘢痕化脱毛である。扁平毛孔性苔癬は、毛包を破壊し、瘢痕化して置き換える。
【００６８】
本明細書で使用される「リング型脱毛症」は、頭を丸く囲むか、又は部分的に丸く囲む脱毛リング又は脱毛帯（band of alopecia）であり、後頭部後方（posterior occipital）の領域に沿って、耳の上の頭皮の側頭部分のまわり、又は額に及ぶ場合がある。
【００６９】
本明細書で使用される「化学療法による脱毛症」は、癌又は狼瘡及び関節リウマチ等の非癌疾患の治療に対する化学療法の後に起こる一種の脱毛である。
【００７０】
本明細書で使用される「全身性脱毛症」は、頭皮及び身体の完全な脱毛を特徴とする状態を指す。全身性脱毛症は、円形脱毛症の進行した形態であり、所々、丸く脱毛を引き起こす状態である。
【００７１】
５．２  ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路遺伝子
ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達経路は、細胞外の環境から核に生物学的シグナルを伝達し、分化、アポトーシス、免疫、増殖、及び腫瘍形成に関与する遺伝子のＤＮＡ転写及び発現をもたらす。該経路の３つの主な構成要素は、細胞表面受容体、ヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ：Janus kinase）、及びシグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）タンパク質である。
【００７２】
ＪＡＫは細胞内の非受容体型チロシンキナーゼのファミリーである。ＳＴＡＴは細胞内の転写因子のファミリーである。インターフェロン、インターロイキン、及び／又は増殖因子等のリガンドの細胞表面受容体への結合は関連するＪＡＫを活性化し、それは受容体上のチロシン残基をリン酸化して、ＳＨ２ドメインに対する結合部位を作り出す。その後、ＳＨ２ドメインを含むＳＴＡＴを受容体に動員させることによって、ＳＴＡＴもＪＡＫによりチロシン−リン酸化される。活性化ＳＴＡＴはヘテロダイマー又はホモダイマーを形成し、細胞核へと移動して標的遺伝子の転写を誘導する。また、ＳＴＡＴは、受容体型チロシンキナーゼ（例えば上皮細胞成長因子受容体）及び／又は非受容体型チロシンキナーゼ（例えばｃ−ｓｒｃ）によって直接チロシン−リン酸化されてもよい。
【００７３】
ＪＡＫファミリー遺伝子は、ヤーヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１、ＧｅｎＢａｎｋ番号：３７１６）、ヤーヌスキナーゼ２（ＪＡＫ２、ＧｅｎＢａｎｋ番号：３７１７）、ヤーヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３、ＧｅｎＢａｎｋ番号：３７１８）、及びチロシンキナーゼ２（ＴＹＫ２、ＧｅｎＢａｎｋ番号：７２９７）を含む。
【００７４】
ＳＴＡＴファミリー遺伝子は、シグナル伝達性転写因子１（ＳＴＡＴ１、ＧｅｎＢａｎｋ番号：６７７２）、シグナル伝達性転写因子２（ＳＴＡＴ２、ＧｅｎＢａｎｋ番号：６７７３）、シグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３、ＧｅｎＢａｎｋ番号：６７７４）、シグナル伝達性転写因子４（ＳＴＡＴ４、ＧｅｎＢａｎｋ番号：６７７５）、シグナル伝達性転写因子５Ａ（ＳＴＡＴ５Ａ、ＧｅｎＢａｎｋ番号：６７７６）、シグナル伝達性転写因子５Ｂ（ＳＴＡＴ５Ｂ、ＧｅｎＢａｎｋ番号：６７７７）、及びシグナル伝達性転写因子６（ＳＴＡＴ６、ＧｅｎＢａｎｋ番号：６７７８）を含む。
【００７５】
オンコスタチンＭ（ＯＳＭ、ＧｅｎＢａｎｋ番号：５００８）は、白血病阻止因子／オンコスタチン−Ｍ（ＬＩＦ／ＯＳＭ）のタンパク質ファミリーのメンバーをコードする遺伝子である。コードされたプレプロタンパク質はタンパク分解処理され、成熟したタンパク質を生成する。このタンパク質は、多くの腫瘍細胞株の増殖を阻害する、分泌されたサイトカイン及び成長調節因子である。また、このタンパク質は、内皮細胞においてインターロイキン６、顆粒球コロニー刺激因子、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を含む他のサイトカインの産生を調節する。ＯＳＭは、２つの異なるヘテロダイマー受容体を通してその生物学的活性を媒介する。ｇｐ１３０受容体は、白血病阻止因子受容体（ＬＩＦＲ）、又はＯＳＭ受容体β（ＯＳＭ−Ｒβ）のいずれかと二量体化してＩ型及びＩＩ型のＯＳＭ受容体をそれぞれ生成する共通の構成要素である。Ｉ型及びＩＩ型の両方のＯＳＭ受容体がＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル経路を活性化した。
【００７６】
糖タンパク質１３０（ｇｐ１３０、ＧｅｎＢａｎｋ番号：３５７２、インターロイキン６シグナルトランスデューサー、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ６−ベータ又はＣＤ１３０としても知られる）は、インターロイキン６（ＩＬ６）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、白血病阻止因子（ＬＩＦ）、及びオンコスタチンＭ（ＯＳＭ）を含む多くのサイトカインによって共有される膜貫通型シグナルトランスデューサータンパク質である。このタンパク質は、サイトカイン受容体複合体の一部として機能する。このタンパク質の活性化は、それらの受容体へのサイトカインの結合に依存する。
【００７７】
ＯＳＭ受容体β（ＯＳＭ−Ｒβ、ＧｅｎＢａｎｋ番号：９１８０、オンコスタチンＭ受容体、すなわちＯＳＭＲとしても知られる）は、Ｉ型サイトカイン受容体ファミリーのメンバーをコードする遺伝子である。コードされるタンパク質は、ｇｐ１３０と共にヘテロ二量体化してＩＩ型オンコスタチンＭ受容体を形成し、インターロイキン３１受容体Ａと共にヘテロ二量体化しインターロイキン３１受容体を形成することによって、オンコスタチンＭ及びインターロイキン３１によって誘導されるシグナル伝達現象を伝達する。
【００７８】
白血病阻止因子受容体（ＬＩＦＲ、ＧｅｎＢａｎｋ番号：３９７７、白血病阻止因子受容体アルファとしても知られる）は、Ｉ型サイトカイン受容体ファミリーに属するタンパク質をコードする遺伝子である。このタンパク質は、高親和性のコンバーターサブユニットであるｇｐ１３０と合わさって、成体及び胎児における細胞の分化、増殖、及び生存に関与する多機能性のサイトカインである白血病阻止因子の作用を媒介する受容体複合体を形成する。
【００７９】
５．３  治療方法
発毛を誘導又は促進する方法
本開示は、発毛を誘導又は促進するための治療的有効量の１以上のＪＡＫ／ＳＴＡＴタンパク質（例えばＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ又はＯＳＭ−Ｒβ）の阻害剤（例えばルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、ＣＹＴ３８７、ＳＢ１５１８、ＬＹ３００９１０４、ＴＧ１０１３４８、ＢＭＳ−９１１５４３、ＣＥＰ−７０１、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、レスタウルチニブ、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、又はハイパーフォリン）の使用に関する。かかる発毛の誘導又は促進が望まれる非限定的な状況としては、限定されないが、被験体がアンドロゲン性脱毛症、休止期脱毛、円形脱毛症、頭部白癬、完全脱毛症、貧毛症、遺伝性単純型貧毛症、前頭部線維化性脱毛症、瘢痕性脱毛症、扁平毛孔性苔癬、リング型脱毛症、瘢痕化脱毛症、非瘢痕化脱毛症、化学療法による脱毛症、又は全身性脱毛症を有する状況が挙げられる。或る特定の実施形態では、毛包が休止中期相又は休止後期相にある場合に被験体の毛包に上記阻害剤を投与する。特定の実施形態では、阻害剤は局所的に又は経口で投与される。
【００８０】
或る特定の実施形態では、本開示は、発毛を誘導する必要のある被験体において発毛を誘導する方法であって、治療的有効量のＪａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。或る特定の実施形態では、Ｊａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤は、Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質又はそのフラグメントに特異的に結合する抗体；Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質をコードする遺伝子の発現を減少させるアンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、又はそれらの変異体若しくは修飾体；Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質の発現を減少させるアンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、又はそれらの変異体若しくは修飾体；低分子；又はそれらの組み合わせである。或る特定の実施形態では、阻害剤は、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である。或る特定の実施形態では、阻害剤はトファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である。或る特定の実施形態では、阻害剤は、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである。或る特定の実施形態では、阻害剤は、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、ＯＳＭ−Ｒβ、又はそれらの任意の組み合わせに対する抗体である。
【００８１】
低分子、アンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、又はそれらの変異体若しくは修飾体を送達する方法は、必要に応じて変えてもよい。或る特定の実施形態では、選択された薬剤の成分を１以上のプラスミド中のＤＮＡコンストラクトとして送達する。或る特定の実施形態では、上記成分はウイルスベクターによって送達される。一般的な送達方法としては、限定されないが、電気穿孔、マイクロインジェクション、遺伝子銃、インペールフェクション（impalefection）、静水圧、持続注入、超音波処理、マグネトフェクション（magnetofection）、アデノ随伴ウィルス、ウイルスベクターのエンベロープタンパク質シュードタイピング（pseudotyping）、複製可能（replication-competent）ベクターシス及びトランス作用因子、単純ヘルペスウイルス、及び化学ビヒクル（例えばオリゴヌクレオチド、リポプレックス、ポリマーソーム（polymersomes）、ポリプレックス、デンドリマー、無機ナノ粒子、及び細胞透過性ペプチド）が挙げられる。
【００８２】
或る特定の実施形態では、１以上の発毛バイオマーカーの遺伝子発現レベルに関する。本明細書で使用される発毛バイオマーカーは、表３に列挙される遺伝子、すなわちＷｎｔ経路、Ｓｈｈ経路、毛発生経路及びメラニン形成経路における任意の遺伝子、並びにＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７を含む群の任意の遺伝子を含む。或る特定の実施形態では、１以上のバイオマーカーの発現レベルが表３に列挙される遺伝子からなる群から選択される。
【００８３】
或る特定の実施形態では、１以上のバイオマーカーの発現レベルは、ＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７からなる群から選択される。
【００８４】
或る特定の実施形態では、１以上のバイオマーカーは、上記阻害剤の投与後に変化する、Ｗｎｔ経路、Ｓｈｈ経路、毛発生経路、メラニン形成経路、又はそれらの任意の組み合わせにおける遺伝子から選択される。
【００８５】
Ｗｎｔ及びＳｈｈのシグナル経路は、細胞表面受容体を通して細胞へとシグナルを通過させる細胞シグナル経路である。Ｗｎｔ経路に関与する遺伝子としては、限定されないが、Ａｅｓ（ＴＬＥ／Ｇｒｏｕｃｈｏ）、Ａｐｃ、Ａｘｉｎ１、Ｂｃｌ９、Ｃｓｎｋ１ａ１、Ｃｓｎｋ１ｄ、Ｃｓｎｋ１ｇ１、Ｃｓｎｋ２ａ１、Ｃｔｂｐ１、Ｃｔｂｐ２、Ｃｔｎｎｂ１、Ｃｔｎｎｂｉｐ１（Ｉｃａｔ）、Ｃｘｘｃ４、Ｄｉｘｄｃ１、Ｄｋｋ１、Ｄｖｌ１、Ｄｖｌ２、Ｅｐ３００、Ｆｒａｔ１、Ｆｚｄ１、Ｆｚｄ２、Ｆｚｄ３、Ｆｚｄ４、Ｆｚｄ５、Ｆｚｄ６、Ｆｚｄ７、Ｆｚｄ８、Ｇｓｋ３ａ、Ｇｓｋ３ｂ、Ｌｅｆ１、Ｌｒｐ５、Ｌｒｐ６、Ｎｋｄ１、Ｐｏｒｃｎ、Ｐｐｐ２ｃａ、Ｐｐｐ２ｒ１ａ、Ｐｙｇｏ１、Ｓｅｎｐ２、Ｓｆｒｐ１、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ１７、Ｔｃｆ７、Ｔｃｆ７ｌ１、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ１、Ｗｎｔ１０ａ、Ｗｎｔ１６、Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ２ｂ、Ｗｎｔ３、Ｗｎｔ３ａ、Ｗｎｔ４、Ｗｎｔ６、Ｗｎｔ７ａ、Ｗｎｔ７ｂ、及びＷｎｔ８ａが挙げられる。Ｗｎｔ経路に関与する遺伝子としては、限定されないが、Ｄｈｈ、Ｈｈａｔ、Ｈｈｉｐ、Ｉｈｈ、Ｓｈｈ、Ｓｉａｈ１、Ｃ１８ｏｒｆ８、Ｃ６ｏｒｆ１３８、Ｎｐｃ１、Ｎｐｃ１ｌ１、Ｐｔｃｈ１、Ｐｔｃｈ２、Ｐｔｃｈｄ１、Ｐｔｃｈｄ２、Ｐｔｃｈｄ３、Ｇｌｉ１、Ｇｌｉ２、Ｇｌｉ３、Ｇｓｋ３ｂ、Ｓｍｏ、Ｓｕｆｕ、Ｃｄｏｎ、Ｃｅｐ７６（Ｃ１８ｏｒｆ９）、Ｆｇｆ９、Ｆｋｂｐ８、Ｉｆｔ５２、及びＯＴＸ２が挙げられる。
【００８６】
毛発生経路は、Ｗｎｔ、Ｓｈｈ、Ｎｏｔｃｈ、ＢＭＰ、及び毛包形態形成を担う他のシグナル経路を含む。毛発生経路に関与する遺伝子としては、限定されないが、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、及びＧｌｉ２が挙げられる。
【００８７】
メラニン形成経路は、メラノサイトの形成及び成熟を担う細胞シグナル経路を含む。メラニン形成経路に関与する遺伝子としては、限定されないが、Ｓｏｘ１０、ｐ３００ファミリー、Ｂｃｌ２、ＭＡＰキナーゼ、ＰＯＭＣ、Ｌｅｆ−１、Ｔｙｒｐ１、Ｔｒｐ１、Ｔｒｐ２、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７が挙げられる。
【００８８】
或る特定の実施形態では、本開示は、発毛を誘導する必要がある被験体において発毛を誘導する方法であって、毛包が休止中期相又は休止後期相にある場合に、阻害剤、すなわち治療的有効量のＪａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤を被験体の毛包に投与することを含む、方法に関する。或る特定の実施形態では、Ｊａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤は、Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質若しくはそのフラグメントに特異的に結合する抗体；Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質をコードする遺伝子の発現を減少させるアンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体；Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質の発現を減少させるアンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体；低分子；又はそれらの組み合わせ、毛包が休止中期相又は休止後期相にある場合に、被験体の毛包に投与される阻害剤である。或る特定の実施形態では、毛包が休止中期相又は休止後期相にある場合に被験体の毛包に投与される阻害剤は、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である。或る特定の実施形態では、毛包が休止中期相又は休止後期相にある場合に被験体の毛包に投与される阻害剤は、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である。或る特定の実施形態では、毛包が休止中期又は休止後期相にある場合に被験体の毛包に投与される阻害剤は、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである。
【００８９】
或る特定の実施形態では、本開示は、発毛の促進を必要とする被験体において発毛を促進する方法であって、治療的有効量のＪａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤を被験体に投与することを含む、方法に関する。或る特定の実施形態では、Ｊａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤は、休止初期相以外の相で投与される。或る特定の実施形態では、Ｊａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤は、成長期相で投与される。或る特定の実施形態では、Ｊａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤は、Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質若しくはそのフラグメントに特異的に結合する抗体；Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質をコードする遺伝子の発現を減少させるアンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体；Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質の発現を減少させるアンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体；低分子；又はそれらの組み合わせである。或る特定の実施形態では、阻害剤はルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である。或る特定の実施形態では、阻害剤はトファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である。或る特定の実施形態では、阻害剤は、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである。
【００９０】
毛乳頭の誘導力を促進する方法
本開示は、更に、毛乳頭の誘導力の促進ための１以上のＪＡＫ／ＳＴＡＴタンパク質（例えばＪａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ又はＯＳＭ−Ｒβ）の阻害剤（例えばルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせ）の使用に関する。或る特定の実施形態では、本開示は毛乳頭の誘導力を促進する方法であって、被験体の毛包に由来する毛乳頭３Ｄスフェアに治療的有効量のＪａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤を投与することを含む、方法に関する。毛包では、毛包由来の真皮細胞は局所上皮と相互作用して、様々な無毛のレシピエント皮膚部位において毛包を新たに誘導することができることが当該技術で知られている（Higgins, et, al., Proc Natl Acad Sci U S A 110, 19679 (Dec 3, 2013)、引用することにより本明細書の一部をなす）。ヒト毛乳頭細胞は、３Ｄスフェロイドとして生育した場合に、ヒト皮膚において新たに毛包を誘導することができることも当該技術において知られている（Higgins, et, al.; Y. Zheng et al., J Invest Dermatol 124, 867 (May, 2005)、引用することにより本明細書の一部をなす）。或る特定の実施形態では、その後、毛乳頭３Ｄスフェアを被験体に投与することで、アンドロゲン性脱毛症、休止期脱毛、円形脱毛症、頭部白癬、完全脱毛症、貧毛症、遺伝性単純型貧毛症、前頭部線維化性脱毛症、瘢痕性脱毛症、扁平毛孔性苔癬、リング型脱毛症、瘢痕化脱毛症、非瘢痕化脱毛症、化学療法による脱毛症、又は全身性脱毛症を治療する。
【００９１】
５．４  医薬組成物及び投与
或る特定の実施形態では、本開示のＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害剤組成物を、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤との混合によって医薬組成物又は医薬製剤として製剤化することができる。或る特定の実施形態では、医薬製剤は、治療的有効量のＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害剤と、生理学的に許容可能な希釈剤又は担体とを含んでもよい。或る特定の実施形態では、医薬組成物は、１以上の追加の治療成分及び／又はアジュバントを更に含んでもよい。
【００９２】
或る特定の実施形態では、医薬製剤は固体剤形であってもよい。或る特定の実施形態では、固体剤形は錠剤又はカプセル剤であってもよい。
【００９３】
或る特定の実施形態では、医薬製剤は液体製剤であってもよい。或る特定の実施形態では、液体製剤は経口溶液又は経口懸濁液であってもよい。
【００９４】
或る特定の実施形態では、医薬製剤は、経皮薬物送達システム、例えばパッチ、クリーム、ジェル、及び／又はマイクロエマルジョンであってもよい。
【００９５】
或る特定の実施形態では、医薬製剤は、リポソーム、ナノ粒子、及び／又は他の担体を含んでもよい。或る特定の実施形態では、医薬製剤は、アジュバント又は賦活薬、例えば酵素阻害剤を含んでもよい。
【００９６】
或る特定の実施形態では、医薬製剤は直接注入剤であってもよい。或る特定の実施形態では、医薬製剤は埋め込みデバイスであってもよい。
【００９７】
多くの方法を使用して本明細書に記載される製剤を導入することができ、これらとして、限定されないが、経口、局所、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、及び肺内の経路が挙げられる。かかる経路はいずれもこれらの組成物の投与に適しており、患者、及び症状が存在する場合には治療される症状、並びに同様の要因に応じて主治医によって選択され得る。投与に望ましい経路によれば、本開示の組成物は、例えば液体、粉末、エアゾール剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤若しくはカプセル剤、又は坐剤の形態に調製される。
【００９８】
本開示のプライミング組成物に対する適切な投薬量の選択は、哺乳動物、特に該哺乳動物の健康全般及び体重を含む健康状態に基づいてもよい。有効投薬量のかかる選択、及び上方又は下方への調節は、当該技術に含まれる。
【００９９】
本開示の医薬組成物は、無菌の水性又は非水性の溶液、懸濁液、及びエマルジョンを更に含んでもよい。該組成物は、当該技術で知られている助剤又は賦形剤を更に含んでもよい。例えば、Berkow et al., eds., The Merck Manual, 15th edition, Merck and Co., Rahway, N.J. (1987)、Goodman et al., eds., Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th edition, Pergamon Press, Inc., Elmsford, N.Y. (1990)、Avery's Drug Treatment: Principles and Practice of Clinical Pharmacology and Therapeutics, 3rd edition, ADIS Press, LTD., Williams and Wilkins, Baltimore, Md. (1987)、Osol, A., ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co, Easton, Pa. pp. 1324-1341 (1980)、Katzung, ed. Basic and Clinical Pharmacology, Fifth Edition, Appleton and Lange, Norwalk, Conn. (1992)を参照されたい。その参照及びそこに引用される参照が、それらが技術水準を示すようにその全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０１００】
或る特定の実施形態では、非経口投与用の調剤は、無菌の水性又は非水性の溶液、懸濁液、及び／又はエマルジョンを含み、当該技術において知られている助剤又は賦形剤を含んでいてもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイル等の植物油、及びオレイン酸エチル等の注射用有機酸エステルである。担体又は閉鎖包帯（occlusive dressings）を、皮膚浸透性を増加させ、吸収を増強するために使用することができる。経口投与用の液体剤形は、一般的に、液体剤形を含むリポソーム溶液を含んでもよい。リポソームを懸濁するのに適した形態として、エマルジョン、懸濁液、溶液、シロップ剤、及び精製水等の当該技術で一般的に使用される不活性希釈剤を含むエリキシル剤が挙げられる。また、不活性希釈剤の他に、かかる組成物は、アジュバント、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、又は甘味料、香味料若しくは賦香剤を含んでもよい。例えば、下記のBerkow、下記のGoodman、下記のAvery's、下記のOsol、及び下記のKatzung（引用することにより本明細書の一部をなす）を参照されたい。
【０１０１】
或る特定の実施形態では、個体への投与に使用される本開示の組成物は、組成物の効力の改善に望ましい塩、防腐剤、化学安定剤、バッファー、アジュバント、又は他の物質を更に含んでもよい。典型的には、安定剤、アジュバント、及び防腐剤は、標的のヒト又は動物における効力について最良の製剤となるように最適化される。好適な例示的な防腐剤として、クロロブタノールソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化硫黄、プロピルガレート、パラベン、エチルバニリン、グリセリン、フェノール、及びパラクロロフェノールが挙げられる。使用することができる好適な安定化成分として、例えば、カザミノ酸、スクロース、ゼラチン、フェノールレッド、Ｎ−Ｚアミン、モノカリウム二リン酸、ラクトース、ラクトアルブミン水解物、及び粉乳が挙げられる。通常は、アジュバント及び組成物を与えられる前に混合するか、又は別々であるが哺乳動物の同じ部位に与えられる。かかるアジュバントとして、中でも、ＭＰＬ（３−Ｏ−脱アセチル化モノホスホリルリピドＡ；モンタナ州ハミルトンのRIBI ImmunoChem Research, Inc.）、鉱物油及び水、水酸化アルミニウム、Ａｍｐｈｉｇｅｎ、Ａｖｒｉｄｉｎｅ、Ｌ１２１／スクワレン、Ｄ−ラクチド−ポリラクチド／グリコシド、プルロニックプリオイス（pluronic plyois）、ムラミルジペプチド、死滅ボルデテラ属（Bordetella）及びＱｕｉｌ  Ａ又はＳｔｉｍｕｌｏｎ  ＱＳ−２１（マサチューセッツ州フレイミングハムのAquila Biopharmaceuticals, Inc.）等のサポニン、及びコレラ毒素（野生型の形態、又は国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９９／２２５２０（引用することにより本明細書の一部をなす）に従って、例えば、２９位のアミノ酸のグルタミン酸が別のアミノ酸、好ましくはヒスチジンで置換される突然変異体形態のいずれか）が挙げられる。本開示の組成物における使用に適した材料の追加の例は、Osol, A., ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co, Easton, Pa. (1980), pp. 1324-1341に提供される。その参照は全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０１０２】
５．５  治療の効力をモニタリングする方法
本開示は、更に哺乳動物の被験体の発毛を誘導又は促進する治療の効力を評価する方法に関する。或る特定の実施形態では、上記方法は、（ａ）被験体から得られた毛包試料中の１以上の発毛バイオマーカーのレベルを判定すること、及び（ｂ）治療法の間に１以上の時間点において被験体から得られた毛包試料中の１以上のバイオマーカーのレベルを判定することを含み、ここで、第１の試料と比較して、第２の試料又はその後の試料中の１以上のバイオマーカーの変化が存在する場合、該治療法が被験体の発毛の誘導又は促進に効果的である。或る特定の実施形態では、バイオマーカーは、Ｗｎｔ経路、Ｓｈｈ経路、毛発生経路、メラニン形成経路、又はそれらの任意の組み合わせから選択される。或る特定の実施形態では、バイオマーカーは、ＣＤ３４、Ｌｈｘ２、ＮＦＡＴｃ１、Ａｘｉｎ２、ＦｏｘＣ１、ＯＳＭＲ、ＯＳＭ、Ｊａｋ３、ＦＡＳ、Ｉｒｆ１、Ｉｆｎａｒ１、Ｎｒ３ｃ１、Ｓｔａｔ５Ａ、Ｉｌ６ｓｔ、Ｐｔｐｒｃ、Ｇｈｒ、ＩＬ１０ｒａ、Ｉｌ２ｒｇ、Ｐｄｇｆｒａ、Ｓｐｆｉ１、Ｓｏｃｓ２、Ｓｔａｔ５ｂ、Ｃｒｐ、Ｉｌ４、Ｐｒｌｒ、Ｉｎｓｒ、ＩＬ２ｒａ、Ｃｅｂｐｄ、Ｓｔａｔ３、Ｊａｋ１、Ａｃｖｒ２ａ、Ｓｆｒｐ４、Ｓｏｘ５、Ｃｄｈ２、Ｆｚｄ５、Ｗｉｆ１、Ｗｎｔ２、Ｆｚｄ８、Ａｐｃ、Ｓｏｘ９、Ｉｌｋ、Ｓｈｈ、Ｋｒｔ２５、Ｄｌｘ２、Ｐｒｏｍ１、Ｓ１００ａ９、Ｖｅｇｆｃ、Ｐｔｇｆｒ、Ｐｄｇｆｒｌ、Ｉｇｆｂｐ４、Ｇｌｉ２、Ｔｙｒｐ１、Ｓｙｔ４、Ｍｌａｎａ、Ｐｍｅｌ、Ｄｃｔ、Ｔｙｒ、Ｓｏｓ１、Ｄｂｆ４、Ｐａｘ３、ＰＩＫ３ｃａ、Ｒｐｓ６ｋｂ１、Ｍｌｐｈ、及びＳｔｘ１７からなる群から選択される。
【０１０３】
発毛バイオマーカーは、核酸又はペプチド／タンパク質であってもよい。核酸バイオマーカーの発現レベルを定性的及び定量的に検出及び／又は判定する方法として、限定されないが、従来のｑＰＣＲ及びデジタルＰＣＲを含むポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（例えば、限定されないが蛍光Ｉｎ  Ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（「ＦＩＳＨ」））、ゲル電気泳動法、シーケンシング及び配列分析、マイクロアレイ分析、並びに当該技術で知られている他の技術が挙げられる。
【０１０４】
或る特定の実施形態では、検出の方法は、リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）、定量的ＰＣＲ、蛍光ＰＣＲ、ＲＴ−ＭＳＰ（ＲＴメチル化特異的ポリメラーゼ連鎖反応）、ＤＮＡのＰｉｃｏＧｒｅｅｎ（商標）（オレゴン州ユージーンのMolecular Probes）検出、放射免疫測定法、又はＤＮＡの直接放射性標識であってもよい。例えば、限定ではないが、核酸バイオマーカーをｃＤＮＡへ逆転写した後、ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を行ってもよく、又は米国特許第５，３２２，７７０号に記載される両方の工程に単一の酵素を使用してもよく、又はR. L. Marshall, et al., PCR Methods and Applications 4: 80-84 (1994)に記載されるように、バイオマーカーをｃＤＮＡへ逆転写した後、対称なギャップリガーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＡＧＬＣＲ）を行ってもよい。
【０１０５】
或る特定の実施形態では、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を使用して、バイオマーカーのｍＲＮＡレベルを評価する。バイオマーカー及び対照のｍＲＮＡのレベルを、癌の組織又は細胞、及び隣接する良性組織で定量してもよい。或る特定の実施形態では、１以上のバイオマーカーのレベルを生体試料において定量してもよい。
【０１０６】
非限定的な実施形態では、本発明の検出の方法は、増幅によらずに、例えば、標的配列のいかなるコピー又は複製物も生成せずに、いかなるポリメラーゼの関与もなしに、又はいかなる熱サイクルの必要もなしに、実行することができる。或る特定の実施形態では、本発明の検出を、２００６年６月１９日付で出願された米国特許出願第１１／４７１，０２５号（引用することにより本明細書の一部をなす）に記載されるＱｕａｎｔｉＧｅｎｅ（商標）法に述べられる原理を使用して行うことができる。
【０１０７】
或る特定の実施形態では、放射性標識されたアンチセンスＲＮＡプローブが生体試料、例えば生検試料の切片とハイブリダイズされ、洗浄され、ＲＮａｓｅによって切断され、オートラジオグラフィー用の感光乳剤に曝露される、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの可視化を採用してもよい。試料をヘマトキシリンで染色して試料の組織学的組成を示してもよく、好適な光フィルターによる暗視野画像化は現像された乳剤を示す。また、ジゴキシゲニン等の非放射性標識を使用してもよい。
【０１０８】
或る特定の非限定的な実施形態では、核酸バイオマーカー発現の評価は、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によって行うことができる。ＦＩＳＨは、細胞中のＤＮＡ又はＲＮＡの特定領域を直接同定することができる技術であることから、組織試料中のバイオマーカー発現の視覚的な判定を可能にする。ＦＩＳＨ法は、より客観的なスコアリングシステム、及び同じ試料中の全て非新生物細胞に存在するバイオマーカー遺伝子シグナルからなる予め備わった内部対照の存在の利点を有する。ＦＩＳＨは、比較的迅速で高感度となり得る、また自動化可能な直接ｉｎ  ｓｉｔｕ技術である。バイオマーカーの発現レベルをＦＩＳＨ単独によって判定するのが難しい場合、免疫組織化学をＦＩＳＨ法と併用してもよい。
【０１０９】
或る特定の実施形態では、核酸バイオマーカーの発現を、ｑＰＣＲアレイ、ＤＮＡアレイ、チップ、又はマイクロアレイ上で検出することができる。バイオマーカー（複数の場合がある）に対応するオリゴヌクレオチドをチップ上で固定化し、その後、それを被験体から得られた生体試料、例えば腫瘍試料の標識化された核酸とハイブリダイズする。陽性ハイブリダイゼーションシグナルは、バイオマーカーの転写産物を含む試料により得られる。ＤＮＡアレイを作製する方法及びそれらの使用方法は、当該技術においてよく知られている（例えば、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす、米国特許第６，６１８，６７９６号、米国特許第６，３７９，８９７号、米国特許第６，６６４，３７７号、米国特許第６，４５１，５３６号、米国特許第５４８，２５７号、米国特許出願公開第２００３０１５７４８５号、並びにSchena et al. 1995 Science 20:467-470、Gerhold et al. 1999 Trends in Biochem. Sci. 24, 168-173、及びLennon et al. 2000 Drug discovery Today 5: 59-65を参照されたい）。また、遺伝子発現連鎖解析（ＳＡＧＥ：Serial Analysis of Gene Expression）を行ってもよい（例えば、米国特許出願公開第２００３０２１５８５８号を参照されたい）。
【０１１０】
或る特定の実施形態では、核酸バイオマーカーをモニターするため、試験される生体試料からｍＲＮＡを抽出し、逆転写して、蛍光標識されたｃＤＮＡプローブを生成してもよい。その後、標識化ｃＤＮＡプローブをバイオマーカーにハイブリダイズ可能なマイクロアレイに適用し、マイクロアレイに対してプローブをハイブリダイゼーションさせ、そのスライドをスキャンして蛍光強度を測定する。この強度は、ハイブリダイゼーション強度及びバイオマーカーの発現レベルと相関する。
【０１１１】
核酸バイオマーカーの検出用プローブの種類として、ｃＤＮＡ、リボプローブ、合成オリゴヌクレオチド、及びゲノムプローブが挙げられる。使用されるプローブの種類は、一般に、例えば、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションに対してリボプローブ、及びノーザンブロッティングに対してｃＤＮＡ等、特定の状況によって指定される。或る特定の非限定的な実施形態では、プローブは、特定のバイオマーカーＲＮＡに特有のヌクレオチド領域に向けられる。プローブは、特定のバイオマーカーのｍＲＮＡ転写産物を差次的に認識するのに必要な長さであれば短くてもよく、例えば１５塩基の短さであってもよい。また、少なくとも１７塩基、１８塩基及び２０塩基のプローブを使用することもできる。或る特定の実施形態では、プライマー及びプローブは、ストリンジェントな条件の下で、標的遺伝子に対応するヌクレオチド配列を有する核酸フラグメントに特異的にハイブリダイズする。本明細書で使用される「ストリンジェントな条件」の用語は、配列間に少なくとも９５％、又は少なくとも９７％の同一性が存在する場合にのみハイブリダイゼーションが起こることを意味する。
【０１１２】
プローブを標識化する形態は、適切な任意のものであってもよく、放射性同位元素、例えば３２Ｐ及び３５Ｓ、又は蛍光物質の使用等であってもよい。プローブが化学的に合成されるか、生物学的に合成されるかにかかわらず、好適に標識された塩基の使用により、放射性同位元素による標識化を達成することができる。
【０１１３】
タンパク質バイオマーカーのレベルを検出及び／又は判定する方法は、当業者においてよく知られており、限定されないが、質量分析技術、１−Ｄ又は２−Ｄゲルベース分析システム、クロマトグラフィー、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、ウェスタンブロッティング、免疫沈降、及び免疫組織化学が挙げられる。これらの方法は、タンパク質を検出するため抗体、若しくは抗体等価物を使用するか、又は生物物理学的技術を使用する。また、抗体アレイ又はプロテインチップを採用してもよく、例えば、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす、米国特許出願公開第２００３／００１３２０８号、米国特許出願公開第２００２／０１５５４９３号、米国特許出願公開第２００３／００１７５１５号、並びに米国特許第６，３２９，２０９号及び米国特許第６，３６５，４１８号を参照されたい。
【０１１４】
或る特定の非限定的な実施形態では、タンパク質バイオマーカー発現を測定するための検出方法は、生体試料、例えば組織試料をバイオマーカーに選択的に結合する抗体又はその変異体（例えばフラグメント）と接触させる工程と、抗体又はその変異体が上記試料に結合されるかどうかを検出する工程とを含む。上記方法は、上記試料を二次抗体、例えば標識化抗体と接触させることを更に含んでもよい。上記方法は、例えば、１以上の試薬を除去するために１以上の洗浄工程を更に含んでもよい。
【０１１５】
或る特定の非限定的な実施形態では、ウェスタンブロッティングをバイオマーカータンパク質の発現レベルを検出し、定量するために使用することができる。細胞を溶解バッファーにホモジナイズして溶解物を形成した後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、ニトロセルロースフィルター等のメンブレンにブロッティングすることができる。その後、抗体（標識化されていない）をメンブレンと接触させ、標識化されたプロテインＡ又は抗免疫グロブリン（１２５Ｉ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及びアルカリフォスファターゼを含む好適な標識）等の二次的な免疫学的試薬によってアッセイする。また、クロマトグラフィー検出を使用してもよい。或る特定の実施形態では、増強された化学発光システム（例えば、マサチューセッツ州ボストンのPerkinElmer Life Sciences製）を使用して、バイオマーカーに対する抗体による免疫検出を行うことができる。その後、メンブレンを剥がして、対照タンパク質、例えばアクチンに特異的な対照抗体で再度ブロッティングすることができる。
【０１１６】
免疫組織化学を、例えば生検試料中のバイオマーカーの発現及び／又は存在を検出するために使用することができる。好適な抗体を、例えば細胞の薄層と接触させた後、非結合抗体を除去するために洗浄し、その後、二次標識化抗体と接触させることができる。標識化は、蛍光マーカー、ペルオキシダーゼ等の酵素、アビジン、又は放射能標識によってもよい。顕微鏡を使用してアッセイを視覚的に採点することができ、結果を定量することができる。また、機械による又は自動画像化のシステムを使用してバイオマーカーに対する免疫染色の結果を測定することができる。
【０１１７】
免疫組織化学の使用に適した様々な自動化試料処理、スキャニング、及び分析のシステムが当該技術において利用可能である。かかるシステムとして、自動染色（例えば、Ventana Medical Systems, Inc.のＢｅｎｃｈｍａｒｋシステムを参照されたい）及び顕微鏡スキャン、コンピューター画像分析、連続切片比較（試料の方向及びサイズの変化を制御するため）、デジタルレポート作成（digital report generation）、並びに試料の記録及び追跡（組織切片が置かれるスライド等）が挙げられる。免疫染色された試料を含む細胞及び組織に対する定量分析を行うためのデジタル画像処理システムと従来の光学顕微鏡とを組み合わせる細胞画像化システムは商業的に入手可能である。例えば、ＣＡＳ−２００システム（Becton, Dickinson & Co.）を参照されたい。
【０１１８】
また、バイオマーカーに対する標識化抗体を、例えば、被験体の細胞におけるバイオマーカーの存在を検出するため、画像化目的に使用することができる。好適な標識として、放射性同位元素、ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９ｍＴｃ）、フルオレセイン及びローダミン等の蛍光標識、並びにビオチンが挙げられる。酵素抗体的相互作用を、ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ等の種々の酵素、又はＤＡＢ、ＡＥＣ若しくはＦａｓｔ  Ｒｅｄ等の種々の色素原を使用して可視化することができる。標識化された抗体又は抗体フラグメントは、優先的にバイオマーカーを含む細胞の場所で蓄積する。その後、標識化された抗体又はそれらの変異体、例えば抗体フラグメントを既知の技術を使用して検出することができる。
【０１１９】
抗体として、天然又は合成、全長又はそのフラグメント、モノクローナル又はポリクローナルに関わらず、検出されるバイオマーカーに十分に強く特異的に結合する任意の抗体が挙げられる。抗体は、多くても約１０−６Ｍ、１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、及び１０−１２ＭのＫｄを有し得る。「特異的に結合する」の文節は、例えば、同一又は同様のエピトープ、抗原又は抗原決定基の第２の調剤で置き換えられる又はそれと競合することができるようなエピトープ又は抗原又は抗原決定基への抗体の結合を指す。
【０１２０】
使用可能な抗体及びその誘導体は、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体、合成抗体及び操作された抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、霊長類化（ＣＤＲ移植）抗体、ベニヤ化（veneered）抗体又は単鎖抗体、相産生抗体（phase produced antibodies）（例えばファージディスプレイライブラリー由来）、及び抗体の機能性結合フラグメントを包含する。例えば、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２のフラグメントを含む、バイオマーカーに結合することができる抗体フラグメント又はその部分を使用することができる。酵素による切断、又は組み換え技術によってかかるフラグメントを生産することができる。
【０１２１】
或る特定の非限定的な実施形態では、ペプチド等の抗体以外のポリペプチドに特異的に結合する薬剤が使用される。特異的に結合するペプチドは、当該技術において知られている任意の手段、例えばペプチドファージディスプレイライブラリによって同定され得る。一般には、バイオマーカーの存在が検出及び／又は定量されるように、バイオマーカーポリペプチドを検出することができる薬剤を使用することができる。本明細書に定義されるように「薬剤」は、生体試料中のバイオマーカーを同定又は検出することができる物質を指す（例えば、バイオマーカーのｍＲＮＡ、バイオマーカーのＤＮＡ、バイオマーカーのタンパク質を同定又は検出する）。
【０１２２】
さらに、ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ（飛行時間型）、ＳＥＬＤＩ／ＴＯＦ、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）、高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＨＰＬＣ−ＭＳ）、キャピラリー電気泳動−質量分析、核磁気共鳴分光測定、又はタンデム型質量分析（例えばＭＳ／ＭＳ、ＭＳ／ＭＳ／ＭＳ、ＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳ等）等の質量分析を使用してバイオマーカーを検出することができる。例えば、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす、米国特許出願公開第２００３／０１９９００１号、米国特許出願公開第２００３／０１３４３０４号、米国特許出願公開第２００３／００７７６１６号を参照されたい。
【０１２３】
質量分析法は、当該技術においてよく知られており、タンパク質等の生体分子を定量及び／又は同定するため使用されている（例えば、Li et al. (2000) Tibtech 18:151-160、Rowley et al. (2000) Methods 20: 383-397、及びKuster and Mann (1998) Curr. Opin. Structural Biol. 8: 393-400を参照されたい）。さらに、単離したタンパク質の少なくとも部分的なｄｅ  ｎｏｖｏシーケンシングを可能とする質量分析技術が開発された。Bergman, EXS 88:133-44 (2000)において概説されるChait et al., Science 262:89-92 (1993)、Keough et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96:7131-6 (1999)。
【０１２４】
バイオマーカー又は他の物質の存在の検出は、典型的にはシグナル強度の検出を含む。これは、同様に、基質に結合したペプチドの量及び性質を反映することができる。例えば或る特定の実施形態では、第１の試料及び第２の試料のスペクトルによるピーク値のシグナル強度を（例えば視覚的に又はコンピューター分析によって）比較して、特定のバイオマーカーの相対量を特定することができる。Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  Ｗｉｚａｒｄプログラム（カリフォルニア州フリーモントのCiphergen Biosystems, Inc.）等のソフトウェアプログラムを使用して質量スペクトルの分析を補助することができる。
【０１２５】
試料中で核酸及び／又はタンパク質のバイオマーカー発現を判定する更なる方法は、例えば、米国特許第６，２７１，００２号、米国特許第６，２１８，１２２号、米国特許第６，２１８，１１４号、及び米国特許第６，００４，７５５号、並びにWang et al, J. Clin. Oncol., 22(9): 1564-1671 (2004)、及びSchena et al, Science, 270:467-470 (1995)に記載され、いずれもそれらの全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【０１２６】
５．５  キット
本開示は、更に、哺乳動物の被験体の発毛を誘導又は促進するキットに関する。或る特定の実施形態では、該キットは（ａ）Ｊａｋ１、Ｊａｋ２、Ｊａｋ３、Ｔｙｋ２、ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５ａ、ＳＴＡＴ５ｂ、ＳＴＡＴ６、ＯＳＭ、ｇｐ１３０、ＬＩＦＲ、及び／又はＯＳＭ−Ｒβの阻害剤と、（ｂ）薬学的に許容可能な担体とを備える。或る特定の実施形態では、Ｊａｋ／ＳＴＡＴ阻害剤は、Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質又はそのフラグメントに特異的に結合する抗体；Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質をコードする遺伝子の発現を減少させるアンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体；Ｊａｋ／ＳＴＡＴタンパク質の発現を減少させるアンチセンスＲＮＡ、アンチセンスＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、若しくはそれらの変異体若しくは修飾体；低分子；又はそれらの組み合わせである。或る特定の実施形態では、阻害剤はルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）である。或る特定の実施形態では、阻害剤はトファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）である。或る特定の実施形態では、阻害剤は、ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ  ０１８４２４）、トファシチニブ（ＣＰ６９０５５０）、ＡＧ４９０、モメロチニブ（ＣＹＴ３８７）、パートシチニブ（ＳＢ１５１８）、バリシチニブ（ＬＹ３００９１０４）、フェドラチニブ（ＴＧ１０１３４８）、ＢＭＳ−９１１５４３、レスタウルチニブ（ＣＥＰ−７０１）、フルダラビン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、バリシチニブ、モメロチニブ、パクリチニブ、ペフィシチニブ、ＡＢＴ  ４９４、ＡＴ  ９２８３、デセルノチニブ、フィルゴチニブ、ガンドチニブ、ＩＮＣＢ  ３９１１０、ＰＦ  ４９６５８４２、Ｒ３４８、ＡＺＤ  １４８０、ＢＭＳ  ９１１５４３、セルデュラチニブ、ＩＮＣＢ  ０５２７９３、ＮＳ  ０１８、Ｃ  ４１０、ＣＴ  １５７８、ＪＴＥ  ０５２、ＰＦ  ６２６３２７６、Ｒ  ５４８、ＴＧ  ０２、ルンブリカス・レベルス抽出物、ＡＲＮ  ４０７９、ＡＲ  １３１５４、ＵＲ  ６７７６７、ＣＳ５１０、ＶＲ５８８、ＤＮＸ  ０４０４２、若しくはハイパーフォリン、又はそれらの組み合わせである。
【実施例】
【０１２７】
６．実施例
以下の実施例は、限定されないが、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の阻害剤の投与による発毛を誘導する組成物及び方法を含む、本発明で開示される主題を如何にして作製し使用するかの十分な開示及び説明を当業者に提供するように述べる。以下の実施例は、本発明で開示される主題の範囲を限定することは意図されない。上に提供される全般的な記載を考慮して、様々な他の実施形態が実行され得ることが理解される。
【０１２８】
６．１  実施例１：ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の薬理学的阻害は発毛を促進する
結果
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害はマウスにおける発毛の迅速な開始をもたらす。はじめに、休止期のＣ５７／Ｂ６マウスの背後部の半分を、ビヒクル対照（陰性対照、左側）、以前に成長期開始を促進することが示された（２）ソニックヘッジホッグ（Ｓｈｈ）アゴニスト（陽性対照）、又はトファシチニブ（ＪＡＫ１／３＞ＪＡＫ２＞ＴＹＫ２）（３）及びルキソリチニブ（ＪＡＫ１／２＞Ｔｙｋ２＞ＪＡＫ３）（４〜７）（右側）を含むいくつかのＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の低分子阻害剤のいずれかで３週間治療した（図１（Ａ））。予想されたように、Ｓｈｈアゴニストによる治療の７日以内に成長期へのエントリーがはっきりと表れたのに対し、ビヒクル治療マウスは実験期間に亘って休止期のままであった。興味深いことに、ＪＡＫ阻害剤による治療はＳｈｈアゴニストに類似する動態で毛周期への迅速な再エントリーをもたらした（図１（Ａ））。幹細胞活性化に対する直接効果を調べるため、休止期のマウスを４日の短期間に亘りトファシチニブ又はルキソリチニブで治療した。著しい増殖が薬物治療ＨＦの毛芽コンパートメント（Ｐ−ｃａｄ＋）内に認められ（図５（Ａ））、前駆細胞集団の活性化を示した。皮膚ホメオスタシスに対する薬物治療効果の定量は、薬物誘発性発毛が正常な発毛を再現することを実証した（図５（Ｂ））。まとめると、これらのデータは、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の局所阻害が発毛の迅速な開始をもたらすことを示唆する。
【０１２９】
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害の効果は休止期の持続期間に依存する。Ｃ５７／Ｂ６マウスにおける最初の出生後の毛周期は、正確な時間経過に従う。その後、再生（成長期再エントリー）は、１２週齢〜１３週齢ごろに開始して自発的にまばらな波で起こる（８、９）。ＪＡＫ阻害剤による休止期のマウスの治療は、一貫して初期の均質な発毛をもたらしたが（図１（Ａ））、成長期を再開するのに必要な治療の持続期間は不可解なことに変動した。この問題に取り組むため、休止初期（７週齢）又は休止中期（８．５週齢）のマウスを治療した。治療は、７週齢マウスにおいて生育をもたらさなかったが、８．５週齢マウスは成長期の迅速な開始を示した（図５（Ｃ））。８．５週齢で治療したマウスが、成長期再エントリーの伝播を阻止する休止期の不応期に未だあった（９、１０）ことを確認するため、７週齢及び８．５週齢においてマウスから抜毛したところ、抜毛後の発毛は両方の時間点で同様の動態に従った（図５（Ｃ））。特に、１８日間〜２１日間の７週齢マウスのより長い治療は、最終的には発毛を誘導したが、治療したマウスが８．５週齢に達した後にだけ発毛したに過ぎなかった（図５（Ｄ））。この知見は、休止期の初期段階でＪＡＫ阻害は静止状態を促進する微小環境を無視することができないが（９、１０）、休止期の後期段階で発毛を促進するのに十分であることを示唆する。
【０１３０】
８．５週齢のＪＡＫ阻害剤による治療から得られた発毛の頑強性及び再現性を実証するため、Ｃ５７／Ｂ６マウスにおける発毛の代用として皮膚黒化を使用した（１１）。実際、５日間に亘ってルキソリチニブ又はトファシチニブで治療した８．５週齢のマウスの約９０％は、治療開始から１０日間以内に皮膚黒化及び発毛を示したのに対し、対照治療マウスでは発毛は明らかでなかった（ルキソリチニブ治療に対してＰ＜０．０００１、トファシチニブ治療に対してｐ＝０．０４）（図１（Ｂ）及び図５（Ｅ））。
【０１３１】
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害の後の発毛は、Ｗｎｔ及びＳｈｈのシグナル伝達経路の活性化により正常な成長期開始を模倣する。ＪＡＫ阻害剤による治療後の成長期開始が正常な成長期開始に分子的に類似するかどうか調べるため、４日間に亘ってビヒクル対照、ルキソリチニブ、又はトファシチニブで治療した８．５週齢（毛芽において増殖が始まったが、発毛は未だ明らかではない時間点）のマウスに対してマイクロアレイ実験を行った（図５（Ａ））。治療の０日目（Ｔ０）及び４日目（Ｔ５）に採取した全皮膚間で差次的に発現された遺伝子一覧の比較は、両方のＪＡＫ阻害剤によって調節される遺伝子のサブセットを明らかにする（図１（Ｃ））。Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ）ソフトウェアを使用する経路分析は、ビヒクル治療ではなくルキソリチニブ治療及びトファシチニブ治療の両方においてメラニン形成及びＷｎｔ経路を増幅したことを示した。両方の薬物治療において差次的に発現した遺伝子の更なる分析は、ＪＡＫ阻害剤で治療した皮膚において著しく上方制御されるＳｈｈ及びＰｒｏｍ１等の他の重要な毛周期調節因子（２、１２〜１６）を同定した（図１（Ｄ））。主要遺伝子の差次的な調節をｑＰＣＲによって確認した（図６（Ａ））。Ｗｎｔ及びＳｈｈの経路の上方制御は、成長期開始及びメラノサイト幹細胞の活性化の中心であることから（１６、１７）、これらの知見は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の遮断が毛周期の正常な進行を可能とすることを示唆する。薬物治療のうちわずか１つによって調節される遺伝子の更なる分析は、別の分子サインを明らかにした（図６（Ｂ）及び図６（Ｃ））。ルキソリチニブ治療は、どちらも以前に毛周期調節に関与することが示されている（１２、１８〜２０）ｍＴＯＲ及びＮｆｋＢの経路に関して増幅させたのに対し、トファシチニブ治療は細胞の運動及び遊走に関与するＲｈｏ及びインテグリンシグナル伝達等の経路に関して増幅させた。興味深いことに、ＳＴＡＴ３−／−角化細胞は、刺激に応じた遊走が不完全であることが以前に示され（２１、２２）、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路が休止期と成長期との間の移行において細胞運動性に不可欠であることを示唆した。
【０１３２】
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害は、毛包前駆細胞の活性化を引き起こす。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害に続くＨＦ活性化を担う細胞機構を調査するため、休止期のマウスをルキソリチニブ、トファシチニブ又はビヒクル対照で治療し、１回目、２回目及び３回目の治療の５時間後に皮膚を採取した（図１（Ｅ）、概略図）。各時点で採取する１時間前に毎日ＥＤＵを注射し、皮膚試料をＥＤＵ＋（増殖）細胞の存在について分析した。ルキソリチニブ及びトファシチニブで治療した皮膚の両方において、３回の治療後、Ｅｄｕ＋細胞は毛芽（Ｐ−カドヘリン＋）コンパートメント内にはっきりと見えるが、対照で治療した皮膚では見られなかった（図１（Ｅ））。この知見は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害後のＨＦの活性化は、毛芽増殖が毛隆起（bulge）幹細胞の増殖に先行する（２３）正常な成長期開始の動態に従うことを示唆する。まとめると、上記データは、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達は成長期再エントリーを妨げるように正常に作用し、ＪＡＫ遮断がこの阻害を取り除いて正常な毛周期進行を可能とすることを示唆する。
【０１３３】
ＪＡＫ阻害の毛誘導効果は、リンパ球の活性に依存しない。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路はＴ細胞生物学において顕著な役割を果たすことが知られており（２４）、ＨＦ微小環境は、レジデントＴ細胞及び遊走Ｔ細胞の実質的集団を含む。最近の研究は、毛サイクリング面に加えて、ガンマデルタＴ細胞がマウスにおいてＨＦネオゲネシスを調節する因子を分泌することを示唆した（２５、２６）。さらに、本発明者らは、ＡＡでは、ＨＦ微小環境から細胞毒性Ｔ細胞を取り除くようにＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害剤が作用すること、すなわち毛の再成長開始の本質的なプロセスを以前に実証した。
【０１３４】
ＪＡＫ阻害剤による治療に続く正常な発毛がＴ細胞によって媒介されるかどうかを評価するため、局所薬物治療の効果を２つの異なるリンパ球欠乏マウスモデルに対して検討した。Ｂ細胞及びＴ細胞を欠乏するＲａｇ１−／−マウス、及び遊走及びレジデントＴ細胞を欠乏するＴｃｒβ／δ−／−マウスは、薬物治療に対するそれらの反応（図２（Ａ））と同様に、それらの毛周期にエントリーする能力（図７（Ａ））の点から、概して対照と判別不能であった。これは、正常な皮膚においてＪＡＫ阻害剤の毛を誘導する効果が、リンパ球の活性に依存しないことを示唆する。本発明者らは、マクロファージ等の毛周期に影響する（２７）、又は骨髄樹状細胞等のＪＡＫ阻害によって攪乱される（２８）ことが知られている他の免疫細胞に対するＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害剤の効果を除外していないが、この結果は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害の成長期誘導効果が毛に本来備わった特性を表す可能性があることを示唆する。
【０１３５】
ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路は、毛周期を超えて動力学的に調節される。ＨＦの発生及びサイクリングにおけるＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の動態を調べるため、成長期から休止期への移行の間の全皮膚において遺伝子発現の変化を調べた（２９）。ｑＰＣＲアレイを利用して、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路と関係する遺伝子の発現を測定した。遺伝子発現の動力学的な変化を、ｑＰＣＲアレイ上の各遺伝子に対する発現値をそれらの一時的な発現プロファイル中の類似性に基づいてメタ遺伝子カテゴリーへとクラスター化するアルゴリズムであり、５×６グリッド上の３０の場所のうちの１つにそれらを置く、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ  Ｉｎｓｐｅｃｔｏｒ（ＧＥＤＩ）を使用して可視化した。退行期（１７日目）と成長初期（２９日目）との比較は、毛周期が進行するにつれて抑制されるメタ遺伝子のクラスターを明らかにした（四角で囲まれたピクセル、図２（Ｂ））。抑制されたメタ遺伝子の含有量の調査は、ＳＴＡＴ５Ａ／Ｂ、ＳＴＡＴ３、Ｊａｋ１、Ｊａｋ３、及びＳｏｃｓ２／３等のＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の主要メンバーが退行期及び休止期中に高レベルで発現され、成長初期において抑制されたことを明らかにした（図２（Ｂ）、図２（Ｃ）及び図７（Ｂ））。
【０１３６】
成長期、退行期、及び休止期におけるＨＦの免疫蛍光研究は、活性化（リン酸化）ＳＴＡＴ３が、一部の外毛包細胞である毛乳頭（ＤＰ）、及び表皮基底において増殖する細胞において発現されることを確認した（図２（Ｄ）及び図７（Ｃ））。退行期及び休止期では、リン酸−ＳＴＡＴ３もまた毛芽の細胞で検出することができる。活性化リン酸−ＳＴＡＴ５は、毛隆起でも検出することができる退行期中にピークのある発現と共に、毛周期を通じてのＤＰで強く発現される（図２（Ｄ））。休止期中の主要なＨＦ幹細胞コンパートメントにおける目立った発現パターンのリン酸−ＳＴＡＴ５は、静止状態の調節において潜在的に重要な役割を強調する。
【０１３７】
トファシチニブ治療は、ヒト毛包の生育を促進する。発毛に対するＪＡＫ阻害の効果をヒト組織で検討した。マウスとは対照的に、ヒト頭皮ＨＦは非同期的に成長し、それらの９０％は任意の所定時間において毛周期の成長期相にある（３４）。したがって、ヒトにおける休止期から成長期への移行を判断するのは非常に難しく、分析は毛線維生育速度の測定に制限される。ヒト胎児の頭皮皮膚をＳｃｉｄマウスに移植し、少なくとも６週間に亘って回復させた。その後、各移植片の片側にビヒクル対照、もう片側にトファシチニブ（図３（Ａ））又はルキソリチニブ（図８（Ａ））のいずれかを毎日局所塗布して治療した。小さなＨＦは移植片内に既に存在したことから、本発明者らは、ＨＦネオゲネシスに対してではなく、終毛（terminal hairs）へと進行している胎児ＨＦの発生に対するＪＡＫ阻害の効果を試験した。対照と比較して、トファシチニブ治療はより密集したＨＦの生育をもたらし、トファシチニブ治療が毛伸長の速度を増加させたことを示唆した。この成果を定量するため、本発明者らは、白色マウスに移植した濃い色の毛の密度を代用として色素沈着の強度を測定し、トファシチニブ／ビヒクルの比率が治療日数に伴って増加したことを示す。異なるドナーに由来する皮膚で実験を行ったところ同様の結果であった（図８（Ｂ））。
【０１３８】
毛幹伸長に対するＪＡＫ阻害の効果を、広く利用されるヒトＨＦ器官培養モデルを使用して更に分析した。個々のＨＦをヒト成人頭皮組織から顕微解剖し、ビヒクル対照、ルキソリチニブ、及びトファシチニブと共に培養した（図３（Ｂ））。ルキソリチニブ及びトファシチニブで治療した場合、ＪＡＫ阻害剤による治療は毛幹の長さを有意に増加させ、毛伸長の速度に対するプラスの効果を示した（それぞれ、トファシチニブに対してＰ＝０．０２３及びルキソリチニブに対してＰ＝０．０２５）。２名の追加のドナーに由来するＨＦによる実験は同様の傾向をもたらした（図８（Ｃ））。まとめると、上記データは、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害が器官培養モデルにおいてより速い毛線維生育を促進することを示唆する。
【０１３９】
トファシチニブ治療は、毛乳頭の誘導力を促進する。リン酸−ＳＴＡＴ５は、退行期及び休止期のマウスＤＰで強く発現され（図２（Ｄ））、リン酸ＳＴＡＴ３は成長期のヒトＨＦの真皮毛根鞘及びＤＰに存在することが確認され、またリン酸ＳＴＡＴ５発現は弱いが、ＤＰの上部に存在する（図８（Ｄ））。
【０１４０】
本発明者らは、３ＤスフェアでヒトＤＰ細胞を育てることがＨＦ生育を誘導する能力を改善することを最近実証した（３５）。ＨＦ誘導の有効性に対するＪＡＫ阻害の効果を検討するため、ヒトＤＰスフェアをビヒクル対照、ルキソリチニブ、又はトファシチニブと共に培養し、その後、新生仔マウス角化細胞と合わせてヌードマウスに注入した。このパッチアッセイは、ＨＦ形態形成を再現することを示し、発毛促進（trichogenic）能を評価する役目を果たす（３６）。トファシチニブで治療したヒトＤＰスフェアは、より大きく、著しくより多くのＨＦを全体的に誘導し（Ｐ＝０．０００１３）（図３（Ｄ））、ヒトＤＰの誘導力がＪＡＫ１／３シグナル伝達阻害によって増強されることを示唆した。
【０１４１】
トファシチニブ治療は完全に誘導性の毛乳頭に増幅されるターゲッティング遺伝子によって発毛を促進する。トファシチニブ治療がＤＰ誘導力を改善する機構を調査するため、対照、ルキソリチニブ及びトファシチニブで治療したＤＰスフェアに対してマイクロアレイ実験を行った。遺伝子発現におけるＬｏｇ２倍変化を使用して、ＧＥＤＩプロットを生成した。遺伝子発現の関連する変化を分析するため、本発明者らは、対照に対してルキソリチニブ治療（増強された誘導力を与えなかった）、対照に対してトファシチニブ治療（誘導力を増強した）、及び互いに対してルキソリチニブ及びトファシチニブの治療を比較した。これは、両方の薬物によって提供されるＪＡＫ阻害から得られた遺伝子発現の変化を調べることを可能とし、トファシチニブ治療に特有であった変化に注目する。ＧＥＤＩアルゴリズムは、全てのマイクロアレイにわたる同様の発現パターンに基づいて差次的に発現した転写産物をメタ遺伝子へとクラスター化した。ｚ軸及び色が遺伝子発現の変化に対応し、Ｘ軸、Ｙ軸が１８×１９グリッドにプロットされたＧＥＤＩメタピクセルの座標に相当する、３Ｄ形態でデータを提示する（図４（Ａ））。グラフのトポグラフィーに基づいて、目的の４つの領域を選択した（領域１〜領域４）。
【０１４２】
興味深いことに、両方の治療で抑制されたが、トファシチニブ治療（領域１）においてより低かった遺伝子は、ＦＧＦＲ１、ＡＣＶＲＬ１、ＩＧＦＲ１、ＯＳＭＲ、及びＰＴＧＦＲ等のＤＰ誘導力の調節に関与することが知られている受容体であった（３２、３７〜４１）。ルキソリチニブ治療によって上方制御されたが、トファシチニブ治療によって下方制御された遺伝子を含む領域では、ＢＡＸ、ＢＣＬ２Ｌ１１、及びＣＡＳＰ１２等のアポトーシス促進遺伝子が同定された（領域２）。トファシチニブ治療によって上方制御された遺伝子（領域３及び４）は、以前に毛乳頭の誘導力に重大な役割を果たすことが示された（４０〜４４）、ＴＧＦβ経路及びＢＭＰ経路のメンバーを含んだ。真皮−表皮の相互作用を調節することが知られているＬＥＦ１等のＷＮＴ経路の主要な調節因子（４５、４６）、及びＨＦの運命を制御することが知られているＮＯＴＣＨ経路のメンバー（４７、４８）は、トファシチニブ治療において大きな比率を占めた。まとめると、これは、培養毛乳頭の誘導機能及び生存の両方を調節することによって、トファシチニブ治療が誘導力を促進することを示唆する。
【０１４３】
ＤＰ誘導力に対するトファシチニブ治療と公開された研究とを直接比較するため、本発明者らは、新たに単離したヒトＤＰ（発毛を誘導する能力が保持する）、培養ＤＰ（誘導の潜在能力を失う）、及び培養真皮スフェロイド（本来の誘導力を回復した）の間の分子の差を調査した先の研究に目を向け、各状態と関連する特有の遺伝子サインを同定した（３５）。これらの遺伝子は、共発現によって領域（Ｔ１〜Ｔ４）と呼ばれる４つのカテゴリーへクラスター化した。Ｔ１及びＴ３は、その発現が培養では下方制御され、スフェロイドでの生育によって回復される遺伝子を含むのに対し、Ｔ２及びＴ４は、その発現がスフェロイド培養によって回復されなかった遺伝子を含むことが分かった（３５）。Ｔ２内の遺伝子（培養細胞では上方制御され、スフェア形成によって回復されなかった）及びＴ４（培養細胞で下方制御され、スフェア形成によって回復されなかった）は、完全に誘導性のＤＰに必要であると思われる分子サインを表す。
【０１４４】
トファシチニブ治療が発毛を増強したことから、本発明者らは、治療していない試料に対してトファシチニブで治療した試料を比較する場合、Ｔ１〜Ｔ４内の遺伝子発現が統計学的に有意に増幅されるかどうかをアッセイした。これらの治療群で差次的に発現した遺伝子に対するｐ値によって最高から最低の発現に等級が付される遺伝子セット増幅分析（４９）は、領域Ｔ４がトファシチニブで治療したスフェアで有意に増幅されたことを明らかにした（Ｐ＝２×１０−６、表３に提供される遺伝子一覧）（図４（Ｃ）及び図４（Ｄ））。また、Ｔ２もトファシチニブ治療によって増幅されたが、統計学的オーバーラップはわずかに有意であるに過ぎなかった（Ｐ＝０．０３）（図８（Ｅ））。Ｔ２及びＴ４内の遺伝子の全てが先の研究によって予測されたように変化されたわけではなく、トファシチニブ治療による誘導力の回復に十分（complete）ではない可能性があることを示唆した。トファシチニブ治療は、いずれも発毛の調節因子として知られている（４０、４１）ＬＥＦ１、ＷＩＦ１、及びＣＤ１３３等の遺伝子の発現を上方制御し、なぜトファシチニブ治療が誘導力の改善に成功したかに関して機械論的な説明を提供する。興味深いことに、図２（Ｂ）では利用されるｑＰＣＲマイクロアレイによって同定されたＴ２及びＴ４の全てのＪＡＫ  ＳＴＡＴ遺伝子の増幅スコアの分析は、非常に統計学的に有意なオーバーラップを明らかにし（１．４５×１０−７、表１に提供される遺伝子一覧）、Ｔ２及びＴ４の誘導性サインに対して主要なＪＡＫ−ＳＴＡＴ構成要素が存在することを示唆した。
【０１４５】
考察
本明細書に提示される知見は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の阻害が発毛を促進することを実証する。これらの所見は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴと抗発毛パターンとの関連（２９）、成体マウスの正常な毛周期の進行におけるＳＴＡＴ３の役割を立証する証拠（２１、２２）と一致する。さらに、最近の研究は、老齢マウスにおけるＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の増加が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＨＦ幹細胞機能を阻害すること（５０）、及びＳＴＡＴ５シグナル伝達が妊娠及び乳汁分泌中のＨＦ幹細胞静止状態を制御すること（５１）を示した。
【０１４６】
ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナルの阻害が幹細胞／前駆細胞の活性化又は分化を促進することができるという観察は、ＨＦに特有ではない。造血幹細胞におけるＳＴＡＴ５の喪失は、静止した状態から出ることを誘導し、放射線照射の後の骨髄の再増殖能力の増加をもたらす（５２）。ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の阻害は、対称なサテライト細胞の拡大を促進すること、及び筋形成に対する関与の減少によって、老齢マウスにおける骨格筋再生を改善する（５３、５４）。したがって、静止状態の促進におけるＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の役割は、成体幹細胞集団において一般化された機構を表す可能性がある。
【０１４７】
この研究では、本発明者らは、ＪＡＫ阻害剤媒介発毛がＴリンパ球機能に依存せず、おそらく毛に本来備わった特性を表すことを観察した。本発明者らは、一部、ＣＤ８＋ＮＫＧ２Ｄ＋細胞毒性Ｔ細胞の浸潤のクリアランスにより（しかしＨＦに対する直接の効果を除外しない）、ＪＡＫ阻害剤によるＡＡ患者の治療が毛の再成長をもたらすことを最近実証した（１）。ＡＡ患者における発毛を二段階機構と考えると、第１に上皮細胞に対するＴ細胞媒介免疫攻撃が排除されなければならず、第２に成長期の生育が再開されなければならないという、これらの２つの所見に一致する（５５）。本発明者らは、ＪＡＫ阻害剤による局所治療は、特にそれがＨＦ微小環境における薬物の局所濃度を増加させて両方の作用を生じさせることから、ＡＡにおける全身治療よりも、ロバストな発毛をもたらすことを観察した。冒されていない個体又は正常なマウスでは、ＪＡＫ阻害剤による治療は、毛周期（マウスにおける）を再開するか又は発毛（ヒトにおける）を促進するのに十分である可能性がある。
【０１４８】
マウスにおいて、ＪＡＫシグナル伝達の抑制は、休止期中に生育促進／抗静止状態シグナルを活性化することにより（９、５６、５７）、成長期への再エントリーを可能とする。本発明者らは、前駆細胞を含む毛芽コンパートメントの活性化はＪＡＫ阻害媒介発毛において初期の現象であることを観察し、成長初期において活性化された経路がＪＡＫ阻害の後に上方制御されることに注目した。これらの結果は、ＪＡＫ阻害が媒介する発毛が、正常な増殖パターンの恒常性毛サイクリングに従うことを示唆する（１６、２３）。
【０１４９】
上記データは、マウスが休止初期ではなく休止中期に治療される場合、薬物治療に続いて成長期への再エントリーが起こることを示し、ＪＡＫ阻害が、休止初期における静止状態を促進する微小環境を無視することができないことを示唆する。幾つかの重大な分子現象が、休止初期と休止中後期とを識別する。ＢＭＰ阻害剤及びＷｎｔアゴニストは休止期に亘って上昇し、ＨＦ幹細胞活性化に必要な閾値を減少させる（９）。毛乳頭中のＴｇｆβ２及びＦｇｆ７／１０の上方制御は、静止状態／活性化工程におけるＢＭＰシグナル伝達を減衰させて、初期の成長期開始に寄与する（２３、４４）。休止期が進行するにつれ、毛芽は、細胞周期及びシグナル伝達へのエントリーに関与する遺伝子を上方制御する（２３）。したがって、ＨＦ幹細胞の活性化は、微小環境内において全体的な反応状態に達することに依存する。
【０１５０】
トファシチニブによる治療は、ヒトＤＰスフェアにおけるＴＧＦβ２、ＢＭＰ６、及びＬＥＦ１の発現を上方制御し、ＪＡＫ阻害がＤＰを活性化する可能性のある機構を提供した。したがって、毛周期の明確な活性化は、おそらくは活性化シグナルと抑制シグナルとのバランスによって支配され、単一の細胞型又は入力によらない。したがって、休止期の初期段階での反対のシグナルにより、ＤＰ（又は毛芽）のＪＡＫ阻害が和らげられることはあり得るが、環境がより寛容になるにつれて、シグナルは活性化を誘導することができる。
【０１５１】
ヒトにおいて、上記データは、トファシチニブ治療によるＪＡＫ３阻害が成長期毛幹の成長速度を増加させて（皮膚移植片及び器官培養アッセイ）、ヒトＤＰスフェアの誘導力を増強する（ネオゲネシスアッセイ）ことを示唆する。トファシチニブ治療の分子効果の調査は、治療が、培養では妨げられるが、完全誘導性のＤＰ細胞に存在する遺伝子のサブセットの分子回復を引き起こし得ることを明らかにした（図４（Ｃ）、図４（Ｄ））。この知見は、トファシチニブ治療が、脱毛の治療に対する自己由来の細胞移植アプローチ等の適用を強めることができることを示唆する。
【０１５２】
材料及び方法
実験計画．  ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の阻害が、マウスにおける毛周期へのエントリーを促進することが仮定された。成長期の開始を判定するため、背部皮膚の毛を電気カミソリにより刈り込み、成長期へのＨＦのエントリーを皮膚の黒化、及び毛の再成長の出現によって観察した。図１（Ａ）に記載される毛周期実験のため、生検材料を１時点当たり２匹のマウスから採取し、３セットの同腹仔に対して実験を繰り返した。図１（Ｂ）においてグラフに提示されるデータは、図５（Ｅ）に示されるように、治療後の経時的な皮膚の黒化を観察することによって生成された。補足の図１（Ｃ）及び図１（Ｄ）に記載される実験について、１つの群（７週対８．５週）当たり３匹〜４匹のマウスを使用し、実験を３回繰り返した。図１（Ｂ）及び図５（Ｅ）に記載される実験に対し、４匹のマウスを対照（背部皮膚の半分）及びルキソリチニブ（背部皮膚の半分）で治療し、４匹のマウスを対照（背部皮膚の半分）及びトファシチニブ（背部皮膚の半分）で治療した。図１（Ｅ）に提示される実験を、１条件当たり３匹のマウスで独立して一回行った。図２（Ａ）に記載される実験では、１遺伝子型当たり３匹のマウスを利用し、２セットの同腹仔に対して実験を繰り返した。
【０１５３】
８．５週齢のＢ６／Ｃ５７雌性マウス１２匹に由来する全皮膚生検材料に対して遺伝子発現プロファイリングを行った。実験の０日目（Ｔ０）に背部皮膚から生検材料を採取した。マウスを１日目〜４日目にＤＭＳＯ、ルキソリチニブ、及びトファシチニブで毎日治療し、５日目（Ｔ５）に治療したマウスから２回目の生検材料を採取した。「http://arrayanalysis.org/.」によるａｆｆｙ  ａｎａｌｙｓｉｓＱＣパッケージを使用して品質管理を行った。品質管理に失敗したため、ＤＭＳＯ１  Ｔ５及びＲＵＸＯ３  Ｔ５の２つの試料を、更に下流の分析から取り除いた。ａｆｆｙＡｎａｌｙｓｉｓＱＣで実行されるＧＣＲＭＡ法を使用してデータを正規化した。倍変化＝１．５及びＰ＜０．０５の閾値を使用して、各治療群（ＤＭＳＯ、ＲＵＸＯ、及びＴＯＦＡ）に対してＴ５及びＴ０の試料間で差次的に発現した遺伝子を同定するため多層モデルによりＬＩＭＭＡを使用した。各治療群に対して差次的に発現した遺伝子の一覧の各々において大きな比率を占めた分子経路を同定するため、差次的発現分析による結果をＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ）にアップロードした。
【０１５４】
ＤＰスフェアマイクロアレイ分析のため、３名の異なるドナーから細胞を準備し、ＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘヒトＨＧ−Ｕ１３３  ＰＬＵＳ  ２．０アレイをＣＵＭＣゲノミクスの施設でハイブリダイズした。上に記載されるように、品質管理及びデータの正規化を行った。器官培養実験に対して、各回１名の個体に由来するＨＦを使用して３セットの反復を行った。
【０１５５】
マウス．  この研究（成体及び新生仔）の野生型マウスはいずれもＣ５７／Ｂ６バックグラウンドであり、研究所で交配したか、又はJackson Laboratoryから購入した。移植実験用のＩＣＲ−ＳＣＩＤマウス（ＩｃｒＴａｃ：ＩＣＲ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ）をTaconicから購入した。ヘアパッチ（hair patch）アッセイ用の無胸腺ヌードマウスをCharles Riverから購入した。Ｒａｇ１−／−及びＴｃｒβ／δ−／−のマウスをJackson laboratory（それぞれ品番００２２１６及び品番００２１２２）から購入した。全ての動物をコロンビア大学における比較医学のＡＡＡＬＡＣ研究所で維持した。処置は、委員会に承認された施設内動物飼育及び使用のプロトコルを使用して行った。
【０１５６】
ヒト標本．  移植実験用の頭皮皮膚をAdvanced Bioscience Resources(ABR) Inc.から得た。コロンビア大学の施設内倫理委員会による４５ＣＦＲ４６の免除を受けた後、ヘルシンキ宣言に従って、後頭部の頭皮毛包を植毛術手術中に廃棄された組織から得た。
【０１５７】
この研究で使用されるＪＡＫ−ＳＴＡＴの薬理学的阻害剤及び他の薬物．  ルキソリチニブ（ＩＮＣＢ０１８４２４）をChemieTek（カタログ番号ＣＴ−ＩＮＣＢ）から購入した。トファシチニブをAbMole BioScience（カタログ番号４７７６００−７５−２）から購入した。ヘッジホッグアゴニスト（ＳＡＧ）をEMD Millipore（カタログ番号５６６６６０）から購入した。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ阻害剤をＤＭＳＯに溶解し、指示されるようにｉｎ  ｖｉｖｏ実験に対して２％〜３％で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験に対して４００ｎＭで使用した。Paladini et al（２）に記載されるように、ＳＡＧを１２０μＭで使用した。
【０１５８】
抗体及び免疫蛍光法．  以前（１）に記載されたように、マウス皮膚の新鮮な凍結切片上で免疫蛍光法を行った。全ての蛍光画像をZeissのＬＳＲ励起共焦点顕微鏡で撮影した。全ての明視野像をＺｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｌａｎ  ２システムで撮影した。使用する一次抗体及び希釈率は表１に見られる。核を４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）を使用して染色した。
【０１５９】
ｑＰＣＲアレイによる差次的遺伝子発現の分析．  製造業者の指示に従ってＲＮｅａｓｙミニキット（Qiagen）を使用することによって、指定の時間点でマウス背部皮膚からトータルＲＮＡを単離した。皮膚を１時間点当たり３匹のマウスから採取し、４つの時間点を試験した（１２匹の個々のマウスを分析に利用した）。トータルＲＮＡ（２μｇ）をオリゴ（ｄＴ）プライマー及びＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ（Invitrogen）により逆転写した。各試料から得られたｃＤＮＡを単一のＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達ｑＰＣＲアレイ（Qiagen/SABbioscience  カタログ番号ＰＡＭＭ−０３９、オンラインで提供される遺伝子一覧）に等分した。アレイは、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路と関係する８４個の遺伝子と、５個のハウスキーピング遺伝子及び品質対照とを含む。リアルタイムＰＣＲをＡＢＩ  ７３００（Applied Biosystems）で行った。SABioscienceによって提供されるＲＴ２  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ  ＰＣＲ  Ａｒｒａｙデータ分析ソフトウェアを使用してデータ分析を行った。ΔΔＣｔ法を使用して発現の倍変化を特定し、下流の分析で利用した値は、１時間点当たり３つの生物学的複製の倍変化の平均をとることにより得た。
【０１６０】
ＧＥＤＩ．  自己組織化マップアルゴリズム（self-organizing map algorithm）により同定される「メタ遺伝子」が試料にわたってどのように変化するのかを可視化するため、出生後１７日目（休止初期）と比較した−ＤＤＣｔを使用して遺伝子発現動態インデックス（ＧＥＤＩ：Gene Expression Dynamic Index）分析を行ったように、平均ｌｏｇ２ＦＣに対する値を計算した。メタ遺伝子は、試料にわたって類似の一時的な発現パターンを示し（６１）、二次元グリッドにおいて単一ピクセルに割り当てられる遺伝子のクラスターである。隣接するピクセルは、互いに類似する発現パターンを実証する。その後、レベルプロット関数を使用して自己組織化マップをＲ中のラティス（lattice）パッケージに与えた。
【０１６１】
増殖実験．  ８．５週齢のＣ５７／Ｂ６マウスを、局所のビヒクル対照（左側）又はＪＡＫ阻害剤（右側）のいずれかで背後部の半分を治療した。治療の４時間後、各マウスは２０ｍｇ／ｋｇの５−エチニル−２’−デオキシウリジン（ＥｄＵ）（Invitrogen）の単回注射を受けた。注射の１時間後、皮膚を採取し、固定し、製造業者の指示に従ってＣｌｉｃｋ−ｉＴ  ＥｄＵ  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｋｉｔ（Life Technologies）を使用して染色し、更にＰ−カドヘリンに対して共染色した。１時間点当たり１匹のマウスで１回実験を行った。
【０１６２】
マイクロアレイ分析．  トータルＲＮＡをQiagenのＲＮＡｅａｓｙ  ｍｉｃｒｏ  ｋｉｔを使用して抽出した。Ｏｖａｔｉｏｎ  ＲＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Nugen）を使用してマイクロアレイ分析用の増幅されたｃＤＮＡを生成した。使用したアレイは、ＣＵＭＣマイクロアレイ施設でハイブリダイズされたＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ｍｏｕｓｅ  ４３０  ２．０であった。ｑＰＣＲ分析をＡＢＩ  ７３００  ｃｙｃｌｅｒで行った。表２において利用可能なプライマー配列を示す。
【０１６３】
ＤＰスフェアマイクロアレイ分析のため、トータルＲＮＡをQiagenのＲＮＡｅａｓｙ  ｍｉｃｒｏ  ｋｉｔを使用して、３名の各ドナーに由来する、ＤＭＳＯ、ルキソリチニブ、又はトファシチニブ中で培養されたＤＰスフェアから抽出した。Ｏｖａｔｉｏｎ  ＲＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Nugen）を使用して、マイクロアレイ分析用の増幅されたｃＤＮＡを生成した。固定効果として、治療及び遮断因子すなわちドナーの両方を処理する線形モデルによりＬＩＭＭＡを使用した。処理間の目的のコントラストを使用して、ＤＭＳＯ、ＲＵＸＯ、及びＴＯＦＡの治療に対する治療対の間で差次的に発現された遺伝子を同定した。絶対倍変化＝１．５及びＰ＜０．０５の閾値を使用した。ＧＳＥＡのため、「ftp.broad.mit.edu//pub/gsea/annotations/」からダウンロードされたＨＧ＿Ｕ１３３＿Ｐｌｕｓ＿２．０チップアノテーションファイルを使用してＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＰｒｏｂｅＳｅｔｓにアノテーションを行い、所与の遺伝子記号に対して重複するプローブセットを除去した。各遺伝子記号について観察された最大絶対倍変化に基づいて重複を除去した。ＬＩＭＭＡによって返された調整ｔ−検定を使用して、目的の各処理コントラストに対して予め等級を付した遺伝子の一覧を生成した。各一覧（ＥＳ  ｐ値０．０１）で大きな比率を占めるＫＥＧＧ経路を同定するため、これらの一覧に対してＧＳＥＡを行った。
【０１６４】
遺伝子セット増幅分析．  差次的発現（ｐ値）及び倍変化の方向（上又は下）によって等級が付された検出された全ての転写産物の一覧を生成することによって、トファシチニブ治療細胞と対照細胞とを比較する遺伝子セット増幅分析（gene set enrichment analysis）を行った。この等級を付された一覧を、以前に記載（３５）されたように領域２及び領域４（表３に提供される遺伝子一覧）の融合の増幅に関して試験した。標準化増幅スコア（ＮＥＳ）及びその関連するｐ値を算定するための帰無分布を、遺伝子ランキングを無作為化するためラベルシャッフリングによって得た。その後、帰無分布を生成するため、これらの無作為化したセットを５０００の繰り返しに対する帰無増幅スコアを算定するために使用した。観察されたリーディングエッジ増幅スコアをこの分布に対して正規化し、両側ｐ値をこのＮＥＳに対して生成した。
【０１６５】
ヒト毛包器官培養アッセイ．  成人ヒト毛包を以前に記載される無菌条件下で後頭部の皮膚から顕微解剖した。ＤＭＳＯ、ルキソリチニブ、又はトファシチニブ（４００ｎＭ）の存在下で、ヒドロコルチゾン、インスリン及びグルタミンで補ったＷｉｌｌｉａｍｓ  Ｅ培地（６２）を入れた２４ウェル組織培養プレートに個々の毛包を入れた。培地を２日毎に交換し、個々の毛包の画像を２日毎に撮影した。各毛包の成長速度の分析をＩｍａｇｅ  Ｊを使用して行った。
【０１６６】
毛乳頭スフェアによるパッチアッセイ．  以前に記載（３５）されたようにＤＰ細胞をスフェアで生育させた。ＤＭＳＯ、ルキソリチニブ、又はトファシチニブを培地（４００ｎＭ）に添加した。ハンギングドロップは各々１０００個の細胞を含み、それらは２４時間後に凝集してＤＰスフェロイドを形成した。播種の４８時間後に、各条件において５００個のスフェアを収集してパッチアッセイに使用した。各実験を単一の個体に由来する細胞で行い、４つの別々の実験を実行した。Lichti et al（６３）によって概説されるプロトコルに従って新生仔マウスから角化細胞を単離した。細胞をパッチアッセイ用に採取するのに先立って２日間〜４日間、ｄｋＳＦＭ中で培養した。その後、１×１０６個の新生仔マウス角化細胞を、各条件において５００個のヒトＤＰスフェアと共に混合し、ヌードマウスの背部皮膚に皮膚下注射した。注射を行った１２日後に真皮で嚢胞が発生し、一部はＨＦ及び毛線維を含んだ。これらの嚢胞を収集し、写真撮影をした後、０．３５％コラゲナーゼ中で消化した。消化スラリーをスライドガラス上に広げ、実体顕微鏡のもと手作業で毛線維の計数を行った。
【０１６７】
ヒト皮膚移植アッセイ．  ヒト胎児の頭皮皮膚（１６週齢）、直径略２ｃｍ×２ｃｍをＳＣＩＤマウスの背部に移植した。マウスに包帯をし、移植片を６週間に亘って放置し回復させた。６週間後、移植片上に少量の毛を観察することができた。ビヒクル対照、ルキソリチニブ、又はトファシチニブの局所塗布により移植片を毎日治療した。治療を４週間に亘って継続し、写真を３日〜５日毎に撮影した。実験を３名の別々のドナーに由来する皮膚を用いて行った。
【０１６８】
ＩｍａｇｅＪを使用して発毛の定量を行った。ドナーの毛の色が濃く、移植されたマウスが白色であったという事実を利用して、色素沈着の強度をＨＦの密度の代用として測定した。対照治療及び実験治療を同じ移植片に対して行ったため、各画像はビヒクル治療皮膚と薬物治療皮膚との直接の比較を可能とする。強度を１画像当たり３本の線を横切って採点し、図３（Ａ）及び図８（Ａ）に示されるヒストグラムを生成するために平均した。より暗い領域は明るい領域より低い値が与えられる。対照で治療した側に対する強度値を平均することによって、また薬物で治療された側に対する強度値によって、比率を計算し、移植片上での発毛における治療前の差異、及び経時的に起こる毛密度の変化を説明した。
【０１６９】
統計学的分析．  ｐ＝０．０５の有意水準を全ての試験に使用した。器官培養縦断的研究（図３（Ｂ）及び図３（Ｃ））及び皮膚色素沈着研究（図１（Ｂ））の両方について、治療対の比較のため、時間交互作用による治療が存在する、すなわち、時間プロファイルは並列ではないという仮説を検証するため、ＲパッケージｎｐａｒＬＤを使用してノンパラメトリック縦断的データ分析を行った。器官培養研究では、Ｆ１−ＬＤ−Ｆ１デザインを採用した。皮膚色素沈着研究では、対応デザインを説明するためＲＵＸＯ対対照、及びＴＯＦＡ対対照の比較に対してＬＤ−Ｆ２モデルを行い、またＴＯＦＡ対ＲＵＸＯの比較にはデータが対応していなかったため、Ｆ１−ＬＤ−Ｆ１モデルを使用した。ＡＮＯＶＡ型統計をアルファ＝０．０５での有意差に関して検定した（ヒト毛乳頭スフェアパッチアッセイ（図３（Ｅ））を分析するため無作為化完備型配置（randomized complete block design）を使用した）。３つの各治療を各々３名のドナーに由来するＤＰスフェアに適用した。ドナーを固定ブロック因子として処理した。統計分析の単位は観察された毛包の数である。変量効果としてブロック因子であるドナーを処理する線形混合効果モデルを使用してデータを分析した。固定因子である治療が観察された毛包の数に有意に寄与するかどうかを調べるため、また治療手段のポストホック比較を行うため、Ｒパッケージのｌｍｅ４及びｌｍｅｒＴｅｓｔを使用した。ｌｍｅｒＴｅｓｔのパッケージは、ｐ値及び分母自由度を得るためにサタスウェイト（Satterthwaite）近似を採用した。
【０１７０】
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【０１７１】
６．２  実施例２：オンコスタチンＭはＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達を介する毛包幹細胞の静止状態を促進する
緒言
ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達はネズミ科の毛周期の休止期（静止相）中に毛包幹細胞（ＨＦＳＣ）の静止状態の維持に関与する。ＪＡＫ阻害が野生型マウス休止期皮膚において成長期を開始することができることが実証されている（１）。遺伝子発現及び細胞動態分析を使用することにより、増殖の最初の徴候が毛乳頭に隣接する二次毛芽（secondary hair germ）で観察され、このプロセスが本来の毛周期の初期の現象を再現したことを示した。ＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達は複雑にサイトカインシグナル伝達と関連することが示唆される。特に、サイトカインのＩＬ−６ファミリーは成長期に拮抗し、マウス皮膚の退行期／休止期を促進することが示されている。サイトカインのＩＬ−６ファミリーのうち、オンコスタチンＭ（ＯＳＭ）は、他の系の幹細胞、主に筋幹細胞での静止状態の維持と密接に結び付けられている。免疫蛍光研究を使用して、本発明者らは、ネズミ科の毛包の二次毛芽において、このコンパートメントの静止状態の維持においてＯＳＭに対する自己分泌の役割を示唆する、活性化（リン酸化）ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５のシグナル伝達分子に相補的なパターンのＯＳＭ及びその受容体（ＯＳＭ−Ｒβ）の共発現を見出した。これらの観察は、培養マウス角化細胞に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験で確認された。ＯＳＭ及びＯＳＭ−Ｒβと共にＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の構成要素の時間的及び空間的なコンディショナルノックアウトを使用することにより、本発明者らは、ＯＳＭ及びその受容体が二次毛芽、及びおそらくＨＦの他の幹細胞におけるＨＦＳＣの静止状態に必要十分であるかどうかを試験した。ＨＦＳＣの静止状態の促進における活性なＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達の驚くべき役割は、休止期の維持におけるＢＭＰシグナル伝達及びＷｎｔ阻害等の経路と並ぶものである。
【０１７２】
結果
リン酸化されたＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５タンパク質が休止初期及び休止中期（Ｐ４６、Ｐ６０）の間ＨＦＳＣコンパートメントに検出され、これは休止後期（Ｐ８０）に減少した（図９（Ａ））。ＯＳＭ免疫蛍光は、この間にＨＦＳＣに共局在化された。ＯＳＭ受容体（ＯＳＭ−Ｒβ）もまた、免疫組織化学によりＨＦＳＣ毛隆起コンパートメントへ共局在化することがわかった（図９（Ｂ））。いずれの画像も倍率２０倍で撮影した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養角化細胞では、ＯＳＭは、ＯＳＭ治療の１０分以内にＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ３、及びＳＴＡＴ５の転写因子を活性化し、これはトファシチニブ（ＴＯＦＡ）によって効率的に停止された（図９（Ｃ））。ＴＯＦＡで治療したｉｎ  ｖｉｖｏでの全皮膚もまた、ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５の活性化の有効な阻害を実証する（図９（Ｄ））。Ｐ６０の休止期皮膚に毎日皮下注射したＯＳＭ−Ｒβに対する中和抗体は局所の成長期を誘導し、ＨＦＳＣコンパートメントのＯＳＭ−Ｒβ活性化が休止期中に静止状態を維持するのに必要であったことを示唆した（図９（Ｅ））。ＰＢＳ対照、及びＩＬ−６とその受容体に対する中和抗体には効果がなかった（図９（Ｅ））。図９（Ｆ）は、ｇｐ１３０も毛隆起において増幅されたことを示す。
【０１７３】
休止期に採取されたマウス角化細胞によるコロニー形成アッセイは、ＯＳＭが角化細胞に対して生育阻害効果を有し、それはトファシチニブの添加によって部分的に逆転されたことを示した（図１０（Ａ））。また、トファシチニブ単独も角化細胞のコロニー数を増加させることが示され（図１０（Ｂ））、先の知見（４）と一致した。７．５週及び８．５週（Ｐ５６及びＰ６０）の第２の休止期で採取した皮膚を分離し、表皮及び真皮をｑＲＴ−ＰＣＲによって分析した。Ｄ  ＯＳＭ−Ｒβが表皮によって優先的に発現されたのに対し、ＯＳＭは真皮で産生された（図１０（Ｃ））。また、ＯＳＭ産生は、Ｐ５３からＰ６０の間に増加した。表皮では、ＯＳＭ−Ｒβは毛隆起コンパートメントにおいて増幅され、ＯＳＭシグナル伝達が休止期中にこの集団の静止状態を維持していたことを更に示唆した（図１０（Ｅ））。図１０（Ｆ）は、ＣＤ３４＋ＩＴＧＡ６＋ＨＦＳＣを単離するためのマウス表皮に対する細胞選別戦略が（５）から応用されたことを示す。培養マウス角化細胞において、２０ｎｇ／ｍｌの組み換えマウスＯＳＭによる治療は、ＯＳＭ−Ｒβの発現を上方制御した（図１０（Ｇ））。これは、正のフィードバック機構がＨＦＳＣの静止状態を維持したことを示唆する。
【０１７４】
先に存在するＪＡＫ阻害剤実験によるマイクロアレイデータ（１、２）を再度分析したところ、ＪＡＫ阻害が休止期に治療した全マウス皮膚において矛盾しないＯＳＭ−Ｒβの下方制御をもたらした（図１１（Ａ））。ＯＳＭ−Ｒβの下方制御は、５日間のトファシチニブ又はルキソリチニブの治療期間に亘って毎日、全皮膚の生検材料を収集した場合にｉｎ  ｖｉｖｏ  ｑＲＴ−ＰＣＲで確認された（図１１（Ｂ））。また、ＯＳＭ−Ｒβ転写の下方制御が培養マウス角化細胞においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで見られた（図１１（Ｃ））。ルキソリチニブで治療した休止期マウス皮膚に由来する選別された角化細胞もまた、３日後にＯＳＭ−Ｒβの下方制御を示した（図１１（Ｄ））。ＪＡＫ２阻害剤であるルキソリチニブによるｉｎ  ｖｉｖｏでの治療は、初期のＳＴＡＴ３／５阻害の後にＡｋｔ経路及びＥＲＫ経路の活性化をもたらし、ＯＳＭ−Ｒβの下方制御を導いた（図１１（Ｅ））。上記データは、真皮コンパートメント、おそらく毛乳頭で産生されたＯＳＭが、ＯＳＭ−Ｒβの発現を維持すると同時に、生育及び分化を抑制することによって毛隆起中のＨＦＳＣに対してＯＳＭ−Ｒβを関与させて休止期中に静止状態を維持することを示唆する。ＪＡＫ阻害は、おそらくこの正のフィードバックループを破壊し、毛包を成長期へと送る。
【０１７５】
参照文献
1.  Harel S, Higgins CA, Cerise JE, et al. Science Adv 1(9), October 2015
2.  Xing L, Dai Z, Jabbari A et al., Nat Med 20, September 2014
3.  Blau HM, Cosgrove BD, Ho AT. Nat Med 21(8), August 2015
4.  Doles J, Storer M, Cozzuto L, et al. Genes Development 26(19), October 2012
5.  Woo SH, Stumpfova M, Jensen UB, et al. Development 137(23), December 2010
【０１７６】
様々な出版物、特許及び特許出願が本明細書に引用され、それらの内容は、全体が引用することにより本明細書の一部をなす。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１４−３】
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【図１４−４】
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【図１４−５】
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【図１４−６】
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【図１４−７】
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【図１４−８】
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【図１４−９】
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【図１４−１０】
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【図１４−１１】
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【図１４−１２】
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【図１４−１３】
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【図１４−１４】
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【図１４−１５】
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【図１４−１６】
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【図１４−１７】
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【図１４−１８】
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【図１４−１９】
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【国際調査報告】
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