(57)【要約】  本明細書に記載するような異なる機能性プロフィールを有する抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（抗ＣＤ４７ｍＡｂ）、抗ＣＤ４７ｍＡｂを作製する方法、並びに固形癌及び血液癌、虚血再灌流傷害、心血管疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患の予防及び治療のための治療薬、又は組織サンプル中のＣＤ４７のレベルを決定するための診断薬としてこれらの抗ＣＤ４７ｍＡｂを使用する方法が提供される。【選択図】図１Ａ，図１Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大すると共に；
ｄ．ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導する
ことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項２】
モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさない
ことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３】
請求項１乃至２の何れか１項に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、キメラ又はヒト化抗体であることを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項４】
請求項１乃至３の何れか１項に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、１又は複数種のＣＤ４７のホモログと交差反応を示すことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項５】
請求項１乃至４の何れか１項に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、ｈＲＢＣと結合しないことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項６】
請求項１乃至５の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変重鎖ＣＤＲ１、可変重鎖ＣＤＲ２、及び可変重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含み、ここで、前記可変重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１、配列番号２、配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変重鎖ＣＤＲ２は、配列番号４、配列番号５、配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
ことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項７】
請求項８に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変軽鎖ＣＤＲ１、可変軽鎖ＣＤＲ２、及び可変軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインをさらに含み、ここで、前記可変軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み：
前記可変軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
ことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項８】
請求項７に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、及び可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）の組合せを含み、ここで、前記組合せが、以下：
（ｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号８を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号２を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、配列番号９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６を含むＬＣＤＲ２、配列番号１９を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｖ）配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号６を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、配列番号２０を含むＬＣＤＲ３
からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項９】
請求項８に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号３９、及び配列番号４０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４９、配列番号５１、及び配列５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を任意選択で含むことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１０】
請求項９に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含み、前記組合せが、以下：
（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｖ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４９を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン
からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１１】
モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の少ない凝集を引き起こす
ことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項１２】
請求項１１に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、キメラ又はヒト化抗体であることを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項１３】
請求項１１又は１２に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、１又は複数種のＣＤ４７のホモログと交差反応を示すことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項１４】
請求項１１乃至１３の何れか１項に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、低いｈＲＢＣ結合を有することを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項１５】
請求項１１乃至１４の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変重鎖ＣＤＲ１、可変重鎖ＣＤＲ２、及び可変重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含み、ここで、前記可変重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１及び配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変重鎖ＣＤＲ２は、配列番号４及び配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７、配列番号８、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
ことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１６】
請求項１５に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変軽鎖ＣＤＲ１、可変軽鎖ＣＤＲ２、及び可変軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインをさらに含み、ここで、前記可変軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１及び配列番号１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５及び配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み：
前記可変軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８及び配列番号２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
ことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１７】
請求項１６に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、及び可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）の組合せを含み、ここで、前記組合せは、以下：
（ｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号８を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号６を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２０を含むＬＣＤＲ３
からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１８】
請求項１７に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、配列番号配列番号２４及び配列番号３７のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号４３及び配列番号５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を任意選択で含むことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項１９】
請求項１８に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含み、ここで、前記組合せは、以下：
（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；及び
（ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン
からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２０】
モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．低いヒト赤血球（ｈＲＢＣ）結合を有する
ことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項２１】
請求項２０に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、キメラ又はヒト化抗体であることを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項２２】
請求項２０又は２１の何れか１項に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、１又は複数種のＣＤ４７のホモログと交差反応を示すことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項２３】
請求項２０乃至２２の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変重鎖ＣＤＲ１、可変重鎖ＣＤＲ２、及び可変重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含み、ここで、前記可変重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１及び配列番号２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変重鎖ＣＤＲ２は、配列番号４及び配列番号５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７、配列番号８、及び配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
ことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２４】
請求項２３に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変軽鎖ＣＤＲ１、可変軽鎖ＣＤＲ２、及び可変軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメインをさらに含み、ここで、前記可変軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１、配列番号１２、及び配列番号１３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；
前記可変軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５及び配列番号１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み：
前記可変軽鎖ＣＤＲ３は、配列番号１８及び配列番号１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む
ことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２５】
請求項２４に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、及び可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）の組合せを含み、ここで、前記組合せは、以下：
（ｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号２を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、配列番号９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１９を含むＬＣＤＲ３
からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２６】
請求項２５に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、配列番号２６、配列番号２７、配列番号３３のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号４４及び配列４８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を任意選択で含むことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２７】
請求項２６に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含み、前記組合せが、以下：
（ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４４を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４４を含む軽鎖可変ドメイン及び
（ｉｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン
からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項２８】
モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさないと共に；
ｅ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）に結合しない
ことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項２９】
請求項２８に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、キメラ又はヒト化抗体であることを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３０】
請求項２８又は２９に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、１又は複数種のＣＤ４７のホモログと交差反応を示すことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３１】
請求項２８乃至３０の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、及び可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）の組合せを含み、ここで、前記組合せは、以下：
（ｉ）配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号６を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２０を含むＬＣＤＲ３
であることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３２】
請求項「Ｘ」に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０のアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号５１及び配列番号５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を任意選択で含むことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３３】
請求項８に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含み、前記組合せが、以下：
（ｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン及び
（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン
からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３４】
モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさないと共に；
ｅ．低いヒト赤血球（ｈＲＢＣ）結合を有する
ことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３５】
請求項３４に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、キメラ又はヒト化抗体であることを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３６】
請求項３４又は３５に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、１又は複数種のＣＤ４７のホモログと交差反応を示すことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項３７】
請求項３４乃至３６の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、及び可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）の組合せを含み、ここで、前記組合せは、以下：
（ｉ）配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号６を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号２０を含むＬＣＤＲ３
であることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３８】
請求項８に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含み、前記組合せは、以下：
（ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン
であることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項３９】
モノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
ＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片であって、前記抗体又はその抗原結合断片が、可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、及び可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）の組合せを含み、ここで、前記組合せは、以下：
（ｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号７を含むＨＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号８を含むＨＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号２を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、配列番号９を含むＨＣＤＲ３；
（ｉｖ）配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号６を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０を含むＨＣＤＲ３
からなる群から選択される
ことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４０】
請求項３９に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
（ｉ）配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号１２を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６を含むＬＣＤＲ２、配列番号１９を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６を含むＬＣＤＲ２、配列番号１９を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｖ）配列番号１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、配列番号２０を含むＬＣＤＲ３
からなる群から選択される可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）の組合せを含む軽鎖可変ドメインを含むことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４１】
請求項３９又は請求項４０に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
（ｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号８を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号２を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、配列番号９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６を含むＬＣＤＲ２、配列番号１９を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｖ）配列番号２を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、配列番号９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６を含むＬＣＤＲ２、配列番号１９を含むＬＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号６を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、配列番号２０を含むＬＣＤＲ３
からなる群から選択される可変重鎖ＣＤＲ配列の組合せ及び可変軽鎖ＣＤＲ配列の組合せを含むことを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４２】
請求項４１に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、以下：
（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４９を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｖ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖｉｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｘ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４４を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４４を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉｖ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｖ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｖｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｖｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｖｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉｘ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉｖ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｖｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｖｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４６を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５０を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉｘ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｘ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｘｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｘｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；及び
（ｘｘｘｉｖ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含み、
ここで、前記ＶＨアミノ酸配列は、それらと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有し、前記ＶＬアミノ酸配列は、それらと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有することを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４３】
請求項３９乃至４２の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、
（ｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６６を含む軽鎖；
（ｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６９を含む軽鎖；
（ｉｖ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｖ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｖｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｖｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖；
（ｖｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｉｘ）配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖；
（ｘｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖；
（ｘｉｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｉｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｉｖ）配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｘｖ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｖｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｖｉｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｖｉｉｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｉｘ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｘ）配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｘｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｉｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｉｉｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号３１を含む軽鎖；
（ｘｘｉｖ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｖ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖；
（ｘｘｖｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖；
（ｘｘｖｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１００を含む軽鎖；
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖；
（ｘｘｉｘ）配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｘ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｘｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｘｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｘｘｉｖ）配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｘｘｖ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
（ｘｘｘｖｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖
からなる群から選択される少なくとも１つの重鎖及び少なくとも１つの軽鎖を含み；
ここで、前記ＶＨアミノ酸配列は、それらと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一であり、ＶＬアミノ酸配列は、それらと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％同一であることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４４】
請求項１乃至４３の何れか１項に記載の抗体と同じエピトープに結合することを特徴とする、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４５】
請求項１乃至４４の何れか１項に記載のモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、ＮＯ経路阻害の完全な逆転を引き起こすことを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項４６】
請求項１乃至４４の何れか１項に記載の抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、ＮＯ経路阻害の中程度の逆転を引き起こすことを特徴とする、抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項４７】
請求項１乃至４４の何れか１項に記載の抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片が、ＮＯ経路阻害の逆転を引き起こさないことを特徴とする、抗体、又はその抗原結合断片。
【請求項４８】
請求項１乃至４７の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及びＣＤ４７発現癌細胞に対するＣ１ｑの結合から選択される１つ又は複数のエフェクター機能を呈示することを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項４９】
請求項１乃至４８の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片と、薬学的若しくは生理学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項５０】
請求項４９に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ヒトの治療に使用するためのものであることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５１】
請求項４９の何れかに記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、虚血再灌流傷害、又は自己免疫、自己炎症性、炎症性若しくは心血管疾患の軽減、予防、及び／又は治療に使用するためのものであることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５２】
請求項４９に記載の使用のためのモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、治療対象である前記被験者が、ヒト又はコンパニオン／ペット動物、使役動物、競技動物、動物園動物、あるいは飼育されている他の有用な動物であることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５３】
請求項５１に記載の使用のためのモノクローナル抗体、又はその抗原結合断において、前記虚血再灌流傷害が、臓器移植、急性腎傷害、心血管疾患、心臓／肺バイパス手術、肺高血圧、鎌状赤血球症、冠動脈性心疾患、冠動脈疾患、心筋梗塞、脳血管疾患、卒中、切除手術及び再建手術、付属物若しくは他の身体部分の再付着、皮膚移植、又は外傷に際して発生することを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断。
【請求項５４】
請求項１〜４９の何れか１項に記載の使用のためのモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、心不全の軽減、予防、及び／又は治療における使用のためであることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５５】
請求項５０に記載の使用のためのモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、前記自己免疫、自己炎症性、又は炎症性疾患が、関節炎、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、狼瘡、全身性エリテマトーデス、若年性慢性関節リウマチ、若年性突発性関節炎、グレーブス病、橋本病、アジソン病、セリアック病、皮膚筋炎、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、シェーグレン症候群、Ｉ型糖尿病、脈管炎、ブドウ膜炎、アテローム性動脈硬化症及び強直性脊椎炎からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５６】
請求項４９に記載の使用のためのモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ヒト患者の癌の予防又は治療におけることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５７】
請求項５６に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、前記癌の腫瘍細胞の食作用を増大することを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５８】
請求項５６に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、前記癌が、リンパ腫、卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌（大腸癌）、直腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌（非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌）、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌、膀胱癌、胆管癌、食道癌、腎細胞癌、甲状腺癌、頭部及び頚部の扁平上皮癌（頭部及び頚部癌）、精巣癌、内分泌腺癌、副腎腺癌、脳下垂体癌、皮膚癌、軟組織の癌、血管の癌、脳腫瘍、神経癌、眼の癌、髄膜癌、中咽頭癌、下咽頭癌、子宮頸癌、及び子宮癌、膠芽腫、髄芽腫、星細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、ガストリノーマ、神経芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、並びに肉腫からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項５９】
請求項５８に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、前記白血病が、全身性肥満細胞症、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍、骨髄異形成症候群、単球性白血病、及びプラズマ細胞白血病病からなる群から選択され；前記リンパ腫が、ホジキンリンパ腫、並びに例えば、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大病変（ｂｕｌｋｙ  ｄｉｓｅａｓ）ＮＨＬ、及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ  Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）などの非ホジキンリンパ腫をはじめとする、組織球性リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択され；前記肉腫が、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、及び軟骨肉腫からなる群から選択されることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６０】
ヒト患者の虚血再灌流傷害、自己免疫、自己炎症性、炎症性若しくは心血管疾患を治療する方法において、請求項１乃至４９の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片の投与を含むことを特徴とする、方法。
【請求項６１】
ヒト患者の癌を治療する方法において、請求項１乃至４９の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片の投与を含むことを特徴とする、方法。
【請求項６２】
請求項１乃至４９の何れか１項に記載の使用のためのモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、ヒト患者の虚血再灌流傷害、自己免疫、自己炎症性、炎症性若しくは心血管疾患を予防、軽減、及び／又は治療するための薬剤の製造を目的とすることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６３】
請求項１乃至４９の何れか１項に記載の使用のためのモノクローナル抗体又はその抗原結合断片において、感受性癌を治療又は軽減するための薬剤の製造を目的とすることを特徴とする、モノクローナル抗体又はその抗原結合断片。
【請求項６４】
請求項１乃至４８の何れか１項に記載のモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を使用して、腫瘍及び／又は免疫細胞中のＣＤ４７発現を検定する方法において、配列番号６５の配列内のエピトープと特異的に結合することを特徴とする、方法。
【請求項６５】
請求項６４に記載の方法において、患者のサンプルを取得するステップ、配列番号６５の配列内のエピトープと特異的に結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片と前記患者のサンプルを接触させるステップ、及び前記抗体と前記患者のサンプルとの結合を検定するステップを含み、ここで、前記抗体と前記患者のサンプルとの結合が、患者のサンプル中のＣＤ４７発現を示すことを特徴とする、方法。
【請求項６６】
請求項６４に記載の方法において、前記腫瘍が、原発癌腫瘍又は転移性癌腫瘍であることを特徴とする、方法。
【請求項６７】
請求項６５に記載の方法において、前記抗体、又はその抗原結合断片と前記患者のサンプルとの結合を検定する前記ステップが、組織サンプルの免疫組織化学染色標識を使用することを特徴とする、方法。
【請求項６８】
請求項６５に記載の方法において、前記抗体又はその抗原結合断片と前記患者のサンプルとの結合を検定する前記ステップが、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用することを特徴とする、方法。
【請求項６９】
請求項６５に記載の方法において、前記抗体又はその抗原結合断片と前記患者のサンプルとの結合の前記アッセイが、フローサイトメトリーを使用することを特徴とする、方法。
【請求項７０】
請求項６５に記載の方法において、前記患者のサンプルが、腫瘍細胞を含み、前記アッセイが、前記抗体又はその抗原結合断片と前記患者のサンプル中の腫瘍細胞との結合を検定するステップを含むことを特徴とする、方法。
【請求項７１】
癌の治療に使用するためのモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片において、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片は、ヒト腫瘍細胞上のＣＤ４７に結合することによって、ＳＩＲＰαに対する前記ＣＤ４７の結合を妨げ、且つ、前記モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片は、前記ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導することを特徴とする、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年９月１８日に出願された米国仮出願第６２／２２０，６９１号明細書；２０１５年１２月４日に出願された同第６２／２６３，５４４号明細書；２０１５年９月２２日に出願された同第６２／２２１，８５２号明細書；２０１５年９月１８日に出願された同第６２／２２０，７２５号明細書；２０１５年９月２５日に出願された同第６２／２３２，６８１号明細書；２０１５年１１月６日に出願された同第６２／２５２，１７１号明細書；及び２０１６年６月２４日に出願された同第６２／３５４，５９２号明細書の利益を請求するものであり；これら開示物は全て、あたかも本明細書に記載されているかのようにその全体を参照により本明細書に組み込むものとする。
【０００２】
本開示は、概して、本明細書に記載するような異なる機能性プロフィールを有する抗ＣＤ４７モノクローナル抗体（抗ＣＤ４７ｍＡｂ）、抗ＣＤ４７ｍＡｂを作製する方法、並びに固形癌及び血液癌、虚血再灌流傷害、心血管疾患、自己免疫疾患、又は炎症性疾患の予防及び治療のための治療薬、又は組織サンプル中のＣＤ４７のレベルを決定するための診断薬としてこれらの抗ＣＤ４７ｍＡｂを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ４７は、細胞外ＩｇＶ群ドメイン、５貫膜ドメイン、及び代替的にスプライシングされる細胞質テールから構成される細胞表面受容体である。２つのリガンドは、ＣＤ４７：シグナル阻害受容体タンパク質α（ＳＩＲＰα）及びトロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）に結合する。ＣＤ４７発現及び／又は活性は、いくつかの疾患及び障害に関連している。従って、固形癌及び血液癌、虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）、心血管疾患、又は自己免疫若しくは炎症性疾患の予防及び治療をはじめとする、ヒト及び動物におけるＣＤ４７と関連する疾患及び病状を治療するための治療用組成物及び方法が求められている。また、腫瘍サンプルにおけるＣＤ４７発現のレベルを決定する診断用組成物及び方法も求められている。
【発明の概要】
【０００４】
本開示は、異なる機能プロフィールを有する抗ＣＤ４７ｍＡｂを記載する。これらの抗体は、以下から選択される特性の異なる組合せを有する：１）ＣＤ４７の１種若しくは複数種のホモログと交差反応性を示す；２）ＣＤ４７とそのリガンドＳＩＲＰα同士の相互作用を阻止する；３）ヒト腫瘍細胞の食作用を増大する、４）感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導する；５）ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導しない；６）ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）に対し低い結合を有する；７）ｈＲＢＣとの検出可能な結合がない；８）ｈＲＢＣの少ない凝集を有する；９）ｈＲＢＣの検出可能な凝集を引き起こさない；１０）一酸化窒素（ＮＯ）経路のＴＳＰ１阻害を逆転させる；及び／又は１１）ＮＯ経路のＴＳＰ１阻害を逆転させない。本開示の抗体は、固形癌及び血液癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、ＩＲＩ、及び心血管疾患の予防及び治療をはじめとする、ヒト及び動物におけるＣＤ４７と関連する疾患及び病状を治療するための様々な治療方法に有用である。本開示の抗体はまた、組織サンプル中のＣＤ４７発現のレベルを決定するための診断薬としても有用である。本開示の実施形態は、単離された抗体及びその免疫学的に活性な結合断片；１つ又は複数の抗ＣＤ４７モノクローナル抗体を含む医薬組成物、好ましくは、前記抗体のキメラ若しくはヒト化形態；そうした抗ＣＤ４７モノクローナル抗体の治療での使用方法；並びにこれらの抗ＣＤ４７モノクローナル抗体を産生する細胞株を含む。
【０００５】
本開示の実施形態は、ｍＡｂ、又はその抗原結合断片を含み、これらは、特定の構造的特徴、すなわちＣＤＲ又は全重鎖若しくは軽鎖可変領域の何れかの規定アミノ酸配列に準拠して定義される。これらの抗体の全てが、ＣＤ４７に結合する。
【０００６】
モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片は、本明細書に記載するように、少なくとも１つ、通常３つのＣＤＲ配列を、通常、ヒト可変領域又は単離されたＣＤＲペプチド由来のフレームワーク配列と組み合わせて含んでもよい。１部の実施形態では、抗体は、可変領域フレームワーク（限定はしないが、マウス又はヒト可変領域フレームワークであってもよい）に位置する本明細書に記載の３つの軽鎖ＣＤＲ配列を含む少なくとも１つの軽鎖と、可変領域フレームワーク（限定はしないが、ヒト又はマウス可変領域フレームワークであってもよい）に位置する本明細書に記載の３つの重鎖ＣＤＲ配列を含む少なくとも１つの重鎖とを含む。
【０００７】
好ましい実施形態は、可変重鎖ＣＤＲ１、可変重鎖ＣＤＲ２、及び可変重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメインを含む、抗ＣＤ４７ｍＡｂ、又はその抗原結合断片であり、ここで、前記可変重鎖ＣＤＲ１は、配列番号１、配列番号２、配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；前記可変重鎖ＣＤＲ２は、配列番号４、配列番号５、配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；前記可変重鎖ＣＤＲ３は、配列番号７、配列番号８、配列番号９及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【０００８】
重鎖可変ドメインは、可変重鎖ＣＤＲ２配列（ＨＣＤＲ２）の何れか１つ及び可変重鎖ＣＤＲ３配列（ＨＣＤＲ３）の何れか１つと組み合わせて、列記される可変重鎖ＣＤＲ１配列（ＨＣＤＲ１）の何れか１つを含んでもよい。しかし、単一共通ＶＨドメインに由来する、ＨＣＤＲ１及びＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３の特定の実施形態が特に好ましく、その例は本明細書に記載する。
【０００９】
抗体又はその抗原結合断片は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）をさらに含み得、これは、ＶＨドメインと対合して、抗原結合ドメインを形成する。好ましい軽鎖可変ドメインは、可変軽鎖ＣＤＲ１、可変軽鎖ＣＤＲ２、及び可変軽鎖ＣＤＲ３を含むものであり、ここで、前記可変軽鎖ＣＤＲ１は、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み；前記可変軽鎖ＣＤＲ２は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み：前記可変軽鎖ＣＤＲ３は、任意選択で、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１０】
軽鎖可変ドメインは、可変軽鎖ＣＤＲ２配列（ＬＣＤＲ２）の何れか１つ及び可変軽鎖ＣＤＲ３配列（ＬＣＤＲ３）の何れか１つと組み合わせて、列記される可変軽鎖ＣＤＲ１配列（ＬＣＤＲ１）の何れか１つを含んでもよい。しかし、単一共通ＶＬドメインに由来する、ＬＣＤＲ１及びＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３の特定の実施形態が特に好ましく、その例は本明細書に記載する。
【００１１】
ＶＬドメインと対合したＶＨドメインを含む何れか所与のＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片は、６つのＣＤＲ：可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）の組合せを含むであろう。上に挙げたＣＤＲ配列群から選択される６つのＣＤＲのあらゆる組合せが可能であり、本開示の範囲に含まれるが、６つのＣＤＲの特定の組合せが特に好ましい。
【００１２】
６つのＣＤＲの好ましい組合せとしては、限定されないが、以下：
（ｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号７を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号１を含むＨＣＤＲ１、配列番号４を含むＨＣＤＲ２、配列番号８を含むＨＣＤＲ３、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１５を含むＬＣＤＲ２、配列番号１８を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号２を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、配列番号９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１２を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６を含むＬＣＤＲ２、配列番号１９を含むＬＣＤＲ３；
（ｉｖ）配列番号２を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、配列番号９を含むＨＣＤＲ３、配列番号１３を含むＬＣＤＲ１、配列番号１６を含むＬＣＤＲ２、配列番号１９を含むＬＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号６を含むＨＣＤＲ２、配列番号１０を含むＨＣＤＲ３、配列番号１４を含むＬＣＤＲ１、配列番号１７を含むＬＣＤＲ２、配列番号２０を含むＬＣＤＲ３；
からなる群から選択される可変重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、可変重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）、可変重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）、可変軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、可変軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）、及び可変軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）の組合せが挙げられる。
【００１３】
さらに好ましい抗ＣＤ４７抗体は、以下：配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、及び配列番号４０のアミノ酸配列、並びに列挙した配列の１つと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインを含む、抗体又はその抗原結合断片を含む。これに代わり、又はこれに加えて、抗体又はその抗原結合断片をはじめとする好ましい抗ＣＤ４７抗体は、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４６、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、及び配列番号５２のアミノ酸配列、並びに列挙した配列の１つと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性を示すアミノ酸配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを含んでもよい。
【００１４】
上に挙げたＶＨ及びＶＬドメイン配列群から選択されるＶＨドメイン及びＶＬドメインの考えられる全ての対合は許容され、且つ本開示の範囲内であるが、ＶＨ及びＶＬドメインの特定の組合せが特に好ましい。従って、好ましいＣＤ４７抗体、又はその抗原結合断片は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の組合せを含むものであり、この組合せは、以下のものからなる群から選択される：
（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４９を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｖ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｖｉｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉｘ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４４を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４４を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉｖ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５２を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｖ）配列番号３６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｖｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｖｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｖｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｉｘ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘ）配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４７を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉｖ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｖ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｖｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４３を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｖｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４６を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５０を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｉｘ）配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｘ）配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｘｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｘｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号４８を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン；及び
（ｘｘｘｉｖ）配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインと、アミノ酸配列配列番号５１を含む軽鎖可変ドメイン。
【００１５】
好ましい抗ＣＤ４７抗体又はその抗原結合断片は、重鎖可変ドメインが、上の（ｉ）〜（ｘｘｘｉｖ）に示される重鎖アミノ酸配列と、少なくとも８５％の配列同一性、又は少なくとも９０％の配列同一性、又は少なくとも９５％の配列同一性、又は少なくとも９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するＶＨ配列を含み、並びに／又は軽鎖可変ドメインが、上の（ｉ）〜（ｘｘｘｉｖ）に示される軽鎖アミノ酸配列と、少なくとも８５％の配列同一性、又は少なくとも９０％の配列同一性、又は少なくとも９５％の配列同一性、又は少なくとも９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む、重鎖可変ドメインと軽鎖可変ドメインの組合せを含んでもよい。（ｉ）〜（ｘｘｘｉｖ）の特定のＶＨ及びＶＬ対合又は部分的組合せを、これらの基準配列に対して特定のパーセンテージの配列同一性を有するＶＨ及びＶＬドメイン配列を有する抗ＣＤ４７抗体のために維持してもよい。
【００１６】
抗体又はその抗原結合断片の重鎖及び／又は軽鎖可変ドメインが、基準配列に対する具体的な配列同一性パーセンテージによって定義される全ての実施形態について、ＶＨ及び／又はＶＬドメインは、相違がフレームワーク領域内にのみ存在するように、基準配列内に存在するＣＤＲ配列と同一のＣＤＲ配列を保持してもよい。
【００１７】
別の実施形態では、好ましいＣＤ４７抗体、又はその抗原結合断片は、重鎖（ＨＣ）と軽鎖（ＬＣ）の組合せを含むものであり、この組合せは、以下：
（ｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６６を含む軽鎖；
（ｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖；
（ｉｉｉ）配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６９を含む軽鎖；
（ｉｖ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｖ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｖｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｖｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖；
（ｖｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｉｘ）配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖；
（ｘｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７２を含む軽鎖；
（ｘｉｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｉｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｉｖ）配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７０を含む軽鎖；
（ｘｖ）配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｖｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｖｉｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｖｉｉｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｉｘ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｘ）配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７４を含む軽鎖；
（ｘｘｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｉｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｉｉｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号３１を含む軽鎖；
（ｘｘｉｖ）配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｖ）配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖；
（ｘｘｖｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号６８を含む軽鎖；
（ｘｘｖｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１００を含む軽鎖；
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７５を含む軽鎖；
（ｘｘｉｘ）配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｘ）配列番号９６のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｘｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｘｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７１を含む軽鎖；
（ｘｘｘｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｘｘｉｖ）配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号７３を含む軽鎖；
（ｘｘｘｖ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０１を含む軽鎖；
（ｘｘｘｖｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖と、アミノ酸配列配列番号１０３を含む軽鎖
からなる群から選択され；
ここで、ＶＨアミノ酸配列は、それらと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％同一であり、ＶＬアミノ酸配列は、それらと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％同一である。
【００１８】
本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体の好ましい実施形態はまた、ヒトの治療に使用するために提案される、従来技術の抗ＣＤ４７抗体では呈示されない特性の組合せも特徴とする。従って、本明細書に記載される好ましい抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大すると共に；
ｄ．感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すること
を特徴とする。
【００１９】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさないこと
を特徴とする。
【００２０】
本明細書に記載されるさらに別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の少ない凝集を引き起こすこと
を特徴とする。
【００２１】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．低いｈＲＢＣ結合を有すること
を特徴とする。
【００２２】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさないと共に；
ｅ．ｈＲＢＣと結合しないこと
を特徴とする。
【００２３】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさないと共に；
ｅ．低いｈＲＢＣ結合を有すること
を特徴とする。
【００２４】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片は、非ヒト霊長類ＣＤ４７にも特異的に結合し、ここで、非ヒト霊長類は、限定されないが、カニクイザル、ミドリザル、アカゲザル及びリスザルを含み得る。
【００２５】
本明細書に記載されるさらに別の好ましい実施形態では、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、及びラットＣＤ４７に結合する。
【００２６】
開示される抗ＣＤ４７ｍＡｂの様々な形態が本明細書で考慮される。例えば、抗ＣＤ４７ｍＡｂは、本明細書に開示されるように、ヒトフレームワークと、アイソタイプ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、より具体的には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の定常領域を有し、場合によっては、Ｆｃ受容体機能を改変する、若しくはＦａｂアーム交換を防止する様々な突然変異を有する完全長ヒト化抗体、又は抗体断片、例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ａｂ）断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）などであってよい。
【００２７】
本開示の好ましい実施形態は、本明細書に開示される１つ若しくは複数の抗ＣＤ４７ｍＡｂ又は断片、任意選択でキメラ若しくはヒト化形態、及び薬学的に許容される担体、希釈剤、若しくは賦形剤を含む、医薬組成物又は動物用医薬組成物を提供する。
【００２８】
本開示以前から、本明細書に記載するような機能プロフィールを有する抗ＣＤ４７ｍＡｂを同定することが求められていた。本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂは、異なる特性の組合せ、特に、ヒトの療法、とりわけ固形癌及び血液癌、虚血再灌流傷害、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患の予防及び／又は治療での使用に、ｍＡｂを特に有利若しくは好適にする特性の組合せを呈示する。
【００２９】
本開示の適用可能性のさらなる範囲は、以下に記載する詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、詳細な説明及び具体的な例は、本開示の好ましい実施形態を示してはいるが、本開示の精神及び範囲内の様々な変更及び修正は、詳細な説明から当業者に対して明らかになることから、あくまで例示として賦与されるに過ぎないことは理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
本開示の上記及びその他の態様、特徴、及び利点は、添付の図面と共に考慮される以下の詳細な説明からよりよく理解されよう。尚、これらの図面は全て、例示として賦与されるに過ぎず、本開示を限定するものではない。
【００３１】
【図１Ａ】図１Ａは、ヒトＣＤ４７を発現するヒトＯＶ１０細胞に対するＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂの結合を示す。ヒトＣＤ４７を発現するＯＶ１０細胞株（ＯＶ１０ｈＣＤ４７）セルベースＥＬＩＳＡを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ１、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ１、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ４  ＰＥ）の結合を決定した。ＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、アッセイの時点で密集とした。様々な濃度のｍＡｂを細胞に１時間かけて添加した。細胞を洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と一緒に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加した。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ヒトＣＤ４７を発現するヒトＯＶ１０細胞に対するＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂの結合を示す。ＯＶ１０  ＣＤ４７セルベースＥＬＩＳＡを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿１２  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿１３  ＩｇＧ４  ＰＥ）の結合を決定した。ＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、アッセイの時点で密集とした。様々な濃度のＶＬＸ４の代表的ｍＡｂを１時間かけて細胞に添加した。細胞を洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と一緒に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加した。
【図２Ａ】図２Ａは、ヒトＲＢＣ（ｈＲＢＣ）に対するＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂの結合を示す。新しく単離したｈＲＢＣを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ１、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ１、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ４  ＰＥ）の結合を決定した。様々な濃度のＶＬＸ４ｍＡｂと一緒にｈＲＢＣを３７℃で６０分間インキュベートし、洗浄した後、ＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体と一緒に１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ヒトＲＢＣに対するＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂの結合を示す。新しく単離したｈＲＢＣを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿１２  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿１３  ＩｇＧ４  ＰＥ）の結合を決定した。様々な濃度のＶＬＸ４ｍＡｂと一緒にｈＲＢＣを３７℃で６０分間インキュベートし、洗浄した後、ＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体と一緒に１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図３Ａ】図３Ａは、ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞に対するＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂの結合を示す。ＯＶ１０ｈＣＤ４７セルベースＥＬＩＳＡを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ８  ＩｇＧ４  ＰＥキメラ（ｘｉ）又はヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０４  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ４  ＰＥ）の結合を決定した。ＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、アッセイの時点で密集とした。様々な濃度のＶＬＸ８の代表的ｍＡｂを１時間かけて細胞に添加した。細胞を洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と一緒に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加した。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞に対するＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂの結合を示す。ＯＶ１０ｈＣＤ４７セルベースＥＬＩＳＡを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ８キメラ又はヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ２、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ２、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２、及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ２）の結合を決定した。ＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、アッセイの時点で密集とした。様々な濃度のＶＬＸ８の代表的ｍＡｂを１時間かけて細胞に添加した。細胞を洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と一緒に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加した。
【図４Ａ】図４Ａは、ヒトＲＢＣに対するＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂの結合を示す。新しく単離したヒトＲＢＣを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ８  ＩｇＧ４  ＰＥｘｉ又はヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０３  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿１０  ＩｇＧ４  ＰＥ）の結合を決定した。様々な濃度のＶＬＸ８ｍＡｂと一緒にＲＢＣを３７℃で１時間インキュベートし、洗浄した後、ＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体と一緒に１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図４Ｂ】図４Ｂは、ヒトＲＢＣに対するＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂの結合を示す。新しく単離したヒトＲＢＣを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ８  ＩｇＧ４  ＰＥｘｉ又はヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ２、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ２、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ２）の結合を決定した。様々な濃度のＶＬＸ８ｍＡｂと一緒にＲＢＣを３７℃で１時間インキュベートし、洗浄した後、ＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体と一緒に１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図５Ａ】図５Ａは、ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞に対するＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂの結合を示す。ＯＶ１０ヒトＣＤ４７セルベースＥＬＩＳＡを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ９  ＩｇＧ２ｘｉ又はヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０３  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０４  ＩｇＧ２及びＶＬＸ９ｈｕｍ＿０５  ＩｇＧ２）の結合を決定した。ＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、アッセイの時点で密集とした。様々な濃度のｍＡｂを１時間かけて細胞に添加した。細胞を洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と一緒に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加した。
【図５Ｂ】図５Ｂは、ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞に対するＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂの結合を示す。ＯＶ１０ｈＣＤ４７セルベースＥＬＩＳＡを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ９  ＩｇＧ２ｘｉ又はヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ２及びＶＬＸ９ｈｕｍ＿１０  ＩｇＧ２）の結合を決定した。ＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞を９６ウェルプレートにプレーティングし、アッセイの時点で密集とした。様々な濃度のｍＡｂを１時間かけて細胞に添加した。細胞を洗浄してから、ＨＲＰ標識二次抗体と一緒に１時間インキュベートした後、ペルオキシダーゼ基質を添加した。
【図６】図６は、ヒトＲＢＣに対するＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂの結合を示す。新しく単離したヒトｈＲＢＣを用いて、ヒトＣＤ４７に対するＶＬＸ９  ＩｇＧ２ｘｉ又はヒト化ｍＡｂの結合を決定した。様々な濃度のＶＬＸ９ｍＡｂと一緒にＲＢＣを３７℃で６０分間インキュベートし、洗浄した後、ＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体と一緒に１時間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて抗体結合を測定した。
【図７】図７は、ＶＬＸ４、ＶＬＸ８及びＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂは、Ｊｕｒｋａｔ細胞のＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止することを示す。１０％培地を含むＲＰＭＩ中で、１．５×１０６個のＪｕｒｋａｔ細胞を５μｇ／ｍｌのＶＬＸ４、ＶＬＸ８及びＶＬＸ９  ＣＤ４７ヒト化ｍＡｂ（ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿１０  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿１１  ＩｇＧ４  ＰＥ、  ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０３  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ２、及びＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２）又は対照抗体と一緒に３７℃で３０分間インキュベートした。等量の蛍光標識ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質を添加し、３７℃でさらに３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーを用いて結合を評価した。
【図８】図８は、ＶＬＸ４  ＣＤ４７キメラｍＡｂは、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の食作用を増大することを示す。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり１×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間かけて付着させた。５×１０４個のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌのＶＬＸ４キメラｍＡｂをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。貪食されていないＪｕｒｋａｔ細胞を除去し、マクロファージ培養物を入念に洗浄した。マクロファージをトリプシン処理してから、ＣＤ１４について洗浄した。フローサイトメトリーを用いて、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージを決定した。
【図９Ａ】図９Ａは、ＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂは、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の食作用を増大することを示す。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり１×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間かけて付着させた。５×１０４個のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌの抗体をマクロファージ培養物に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。貪食されていないＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を除去し、マクロファージ培養物を入念に洗浄した。マクロファージをトリプシン処理してから、ＣＤ１４について洗浄した。フローサイトメトリーを用いて、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージを決定した。
【図９Ｂ】図９Ｂは、ＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂは、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の食作用を増大することを示す。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり１×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間かけて付着させた。５×１０４個のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌの抗体をマクロファージ培養物に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。貪食されていないＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を除去し、マクロファージ培養物を入念に洗浄した。マクロファージをトリプシン処理してから、ＣＤ１４について洗浄した。フローサイトメトリーを用いて、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージを決定した。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＶＬＸ８  ＣＤ４７キメラｍＡｂは、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の食作用を増大することを示す。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり１×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間かけて付着させた。５×１０４個のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌのＶＬＸ８キメラｍＡｂをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。貪食されていないＪｕｒｋａｔ細胞を除去し、マクロファージ培養物を入念に洗浄した。マクロファージをトリプシン処理してから、ＣＤ１４について洗浄した。フローサイトメトリーを用いて、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージを決定した。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂは、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞の食作用を増大することを示す。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり１×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間かけて付着させた。５×１０４個のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌの抗体をマクロファージ培養物に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。貪食されていないＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を除去し、マクロファージ培養物を入念に洗浄した。マクロファージをトリプシン処理してから、ＣＤ１４について洗浄した。フローサイトメトリーを用いて、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージを決定した。
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＶＬＸ９  ＣＤ４７キメラｍＡｂは、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の食作用を増大することを示す。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり１×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間かけて付着させた。５×１０４個のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌのＶＬＸ９キメラｍＡｂをマクロファージ培養物に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。貪食されていないＪｕｒｋａｔ細胞を除去し、マクロファージ培養物を入念に洗浄した。マクロファージをトリプシン処理してから、ＣＤ１４について洗浄した。フローサイトメトリーを用いて、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージを決定した。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂは、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の食作用を増大することを示す。ヒトマクロファージを９６ウェルプレートにおいてウェル当たり１×１０４細胞の濃度でプレーティングし、２４時間かけて付着させた。５×１０４個のＣＦＳＥ（１μＭ）標識ヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞と１μｇ／ｍｌの抗体をマクロファージ培養物に添加し、３７℃で２時間インキュベートした。貪食されていないＪｕｒｋａｔ  細胞を除去し、マクロファージ培養物を入念に洗浄した。マクロファージをトリプシン処理してから、ＣＤ１４について洗浄した。フローサイトメトリーを用いて、全ＣＤ１４＋集団中のＣＤ１４＋／ＣＦＳＥ＋細胞のパーセンテージを決定した。
【図１２Ａ】図１２Ａは、可溶性ＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂによるヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞での細胞死の誘導を示す。１ｍｌのＲＰＭＩ培地中で、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞（１×１０４）を１μｇ／ｍｌのＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂと一緒に３７℃で２４時間インキュベートした。次に、細胞をアネキシンＶについて染色し、フローサイトメトリーによりシグナルを検出した。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、可溶性ＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂによるヒトＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞での細胞死の誘導を示す。１ｍｌのＲＰＭＩ培地中で、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞（１×１０４）を１μｇ／ｍｌのＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂと一緒に３７℃で２４時間インキュベートした。次に、細胞をアネキシンＶについて染色し、フローサイトメトリーによりシグナルを検出した。
【図１３Ａ】図１３Ａは、可溶性ＶＬＸ８  ＣＤ４７キメラｍＡｂによるヒトＪｕｒｋａｔ細胞での細胞死の誘導を示す。１ｍｌのＲＰＭＩ培地中で、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ  ＡＬＬ細胞（１×１０４）を１μｇ／ｍｌのＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂと一緒に３７℃で２４時間インキュベートした。次に、細胞をアネキシンＶについて染色し、フローサイトメトリーによりシグナルを検出した。
【図１３Ｂ】図１３Ｂは、可溶性ＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂによるヒトＪｕｒｋａｔ細胞での細胞死の誘導を示す。１ｍｌのＲＰＭＩ培地中で、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ  ＡＬＬ細胞（１×１０４）を１μｇ／ｍｌのＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂと一緒に３７℃で２４時間インキュベートした。次に、細胞をアネキシンＶについて染色し、フローサイトメトリーによりシグナルを検出した。
【図１４Ａ】図１４Ａは、可溶性ＶＬＸ９マウス／ヒトキメラｍＡｂによるヒトＪｕｒｋａｔ細胞の細胞死の誘導を示す。０．１ｍｌのＲＰＭＩ培地中で、１×１０４個のＪｕｒｋａｔ細胞を１μｇ／ｍｌのＶＬＸ９  ＣＤ４７キメラｍＡｂと一緒に３７℃で２４時間インキュベートした。次に、細胞をアネキシンＶについて染色し、フローサイトメトリーによりシグナルを検出した。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、可溶性ＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂによるヒトＪｕｒｋａｔ細胞での細胞死の誘導を示す。１ｍｌのＲＰＭＩ培地中で、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ  ＡＬＬ細胞（１×１０４）を１μｇ／ｍｌのＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂと一緒に３７℃で２４時間インキュベートした。次に、細胞をアネキシンＶについて染色し、フローサイトメトリーによりシグナルを検出した。ＶＬＸ９  ＩｇＧ２（ｘｉ）は、マウス／ヒトキメラである。
【図１５Ａ】図１５Ａは、ＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂによるｈＲＢＣの凝集を示す。様々な濃度のヒト化ＶＬＸ４ｍＡｂ（２５μｇ／ｍＬ〜０．４ｎｇ／ｍＬ）とｈＲＢＣのインキュベーション後に、血球凝集を評価した。血液を希釈（１：５０）し、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＢＳＡで３回洗浄した。等量の抗体（７５μｌ）と一緒にｈＲＢＣをＵ底９６ウェルプレートに添加し、３７℃で３時間、次に４℃で一晩インキュベートした。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、ＶＬＸ８キメラ及びヒト化ｍＡｂによるｈＲＢＣの凝集を示す。様々な濃度のヒト化ＶＬＸ４ｍＡｂ（２５μｇ／ｍＬ〜０．４ｎｇ／ｍＬ）とｈＲＢＣのインキュベーション後に、血球凝集を評価した。血液を希釈（１：５０）し、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＢＳＡで３回洗浄した。等量の抗体（７５μｌ）と一緒にｈＲＢＣをＵ底９６ウェルプレートに添加し、３７℃で３時間、次に４℃で一晩インキュベートした。
【図１６】図１６は、ＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂによるヒトＲＢＣの凝集を示す。様々な濃度のＶＬＸ９  ＩｇＧ２キメラ（ｘｉ）及びヒト化ＶＬＸ９ｍＡｂとヒトＲＢＣのインキュベーション後に、血球凝集を評価した。血液を希釈（１：５０）し、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＢＳＡで３回洗浄した。等量の抗体（７５μｌ）と一緒にＲＢＣをＵ底９６ウェルプレートに添加し、３７℃で３時間、次に４℃で一晩インキュベートした。
【図１７】図１７は、ＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂは、ラージ（Ｒａｊｉ）異種移植片モデルにおいて腫瘍成長を抑制することを示す。５×１０６個のラージ（Ｒａｊｉ）腫瘍細胞の懸濁液を含有する０．１ｍＬの３０％ＲＰＭＩ／７０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）混合物を雌ＮＳＧマウスの右脇腹に皮下接種した。接種から５日後、腫瘍体積を測定し、３１〜７４ｍｍ３の触知可能な腫瘍体積を有するマウスをランダムに８〜１０匹／グループに分けた。この時点でＶＬＸ４ｈｕｍ＿０７又はＰＢＳ（対照）の投与を開始した。マウスは、抗体５Ｘ／週の腹腔内注射により４週間にわたって５ｍｇ／ｋｇの抗体で処置した。腫瘍体積及び体重を週２回記録した。
【図１８】図１８は、ＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂは、ラージ（Ｒａｊｉ）異種移植片モデルにおいて腫瘍成長を抑制することを示す。５×１０６個のラージ（Ｒａｊｉ）腫瘍細胞の懸濁液を含有する０．１ｍＬの３０％ＲＰＭＩ／７０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）混合物を雌ＮＳＧマウスの右脇腹に皮下接種した。接種から５日後、腫瘍体積を測定し、３１〜７４ｍｍ３の触知可能な腫瘍体積を有するマウスをランダムに８〜１０匹／グループに分けた。この時点でＶＬＸ８ｈｕｍ＿１０又はＰＢＳ（対照）の投与を開始した。マウスは、抗体５Ｘ／週の腹腔内注射により４週間にわたって５ｍｇ／ｋｇの抗体で処置した。腫瘍体積及び体重を週２回記録した。
【図１９】図１９は、ＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂは、ラージ（Ｒａｊｉ）異種移植片モデルにおいて腫瘍成長を抑制することを示す。５×１０６個のラージ（Ｒａｊｉ）腫瘍細胞の懸濁液を含有する０．１ｍＬの３０％ＲＰＭＩ／７０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）混合物を雌ＮＳＧマウスの右脇腹に皮下接種した。接種から５日後、腫瘍体積を測定し、３１〜７４ｍｍ３の触知可能な腫瘍体積を有するマウスをランダムに８〜１０匹／グループに分けた。この時点でＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２又はＰＢＳ（対照）の投与を開始した。マウスは、抗体５Ｘ／週の腹腔内注射により４週間にわたって５ｍｇ／ｋｇの抗体で処置した。腫瘍体積及び体重を週２回記録した。
【図２０Ａ】図２０Ａは、カニクイザルにヒト化ＶＬＸ９ｍＡｂを静脈内注入により投与した後の血中ヘモグロビンレベルを示す。ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２又はビヒクルを、１日目に５ｍｇ／ｋｇの用量及び１８日目に１５ｍｇ／ｋｇの用量で１時間の静脈内注入として投与した。全試験期間を通してヘモグロビンレベルをモニターし、対照値に対して正規化した。
【図２０Ｂ】図２０Ｂは、カニクイザルにヒト化ＶＬＸ９ｍＡｂを静脈内注入により投与した後の血中ＲＢＣレベルを示す。ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２又はビヒクルを、１日目に５ｍｇ／ｋｇの用量及び１８日目に１５ｍｇ／ｋｇの用量で１時間の静脈内注入として投与した。全試験期間を通してＲＢＣレベルをモニターし、対照値に対して正規化した。
【図２１】図２１は、抗マウス／ウサギキメラｍＡｂを用いたヒト腫瘍組織中のＣＤ４７の免疫組織化学染色を示す。ＶＬＸ４マウス／ウサギキメラｍＡｂを用いて、ＣＤ４７をヒト乳癌組織中に局在化した。パラフィン包埋組織を切片にし、４ｕｇ／ｍｌの精製抗体で染色した後、抗ウサギＨＲＰ二次抗体で局在化した。矢印は、ＣＤ４７染色の陽性領域を示す。
【図２２】図２２は、抗ＣＤ４７抗体特性の概要を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
定義
別に定義されない限り、本開示に関連して使用される科学及び技術用語は、当業者により一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈から別のことが要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。概して、細胞及び組織培養、分子生物学、並びにタンパク質及びオリゴ又はポリヌクレオチド化学に関して使用される命名法、並びにそれらの技術は、当技術分野で公知であり、一般に使用されている。
【００３３】
本明細書で使用されるとき、用語「ＣＤ４７」、「インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）」、「卵巣癌抗原ＯＡ３」、「Ｒｈ関連抗原」及び「ＭＥＲＧ」は、同意語であり、置き換え可能に使用され得る。
【００３４】
用語「抗ＣＤ４７抗体」は、治療又は診断薬としての使用を目的とし、従って、典型的には、治療及び／又は診断薬として有用である上で必要な結合親和性を有する本開示の抗体を指す。
【００３５】
本明細書で使用されるとき、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、すなわち抗原と特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子を指す。〜と、若しくは〜に対して「特異的に結合する」又は「免疫反応する」とは、抗体が、所望の抗原の１つ又は複数の抗原決定基と反応するが、他のポリペプチドとは反応しないか、又ははるかに低い親和性（Ｋｄ＞１０−６）で結合することを意味する。抗体としては、限定されないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、一本鎖Ｆｖ断片、及び単一アーム（ｏｎｅ−ａｒｍｅｄ）抗体が挙げられる。
【００３６】
本明細書で使用されるとき、用語「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、本開示の抗体化合物に適用される場合、例えば、任意の真核、原核、若しくはファージクローンをはじめとする単一コピー若しくはクローンから得られる抗体を指すものであり、それらを生成する方法ではない。本開示のｍＡｂは、均一又はほぼ均一の集団に存在するのが好ましい。完全なｍＡｂは、２つの重鎖と２つの軽鎖を含む。
【００３７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の１部分を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。
【００３８】
本明細書に開示されるように、「抗体化合物」は、ｍＡｂ及びその抗原結合断片を指す。本開示に従う類似の機能的特性を呈示する別の抗体化合物は、従来の方法により作製することができる。例えば、マウスをヒトＣＤ４７又はその断片で免疫し、得られた抗体を回収し、精製することができ、それらが本明細書に開示される抗体化合物と類似の、若しくは同じ結合及び機能的特性を有するか否かの決定は、以下の実施例３〜１１に開示される方法によって評価することができる。また、抗原結合断片も、従来の方法により調製することができる。抗体及び抗原結合断片を生成及び精製する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、以下：Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，第５〜８章及び第１５章に見出すことができる。
【００３９】
モノクローナル抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の１部分が、マウス抗体の対応する配列、特にマウスＣＤＲと同一、又は相同的であるが、鎖の残りは、ヒト抗体の対応する配列と同一、又は相同的である抗体を包含する。本開示の他の実施形態は、モノクローナル抗体と類似若しくは同一の結合及び生物学的特性を呈示するこれらのモノクローナル抗体の抗原結合断片を含む。本開示の抗体は、κ又はλ軽鎖定常領域、及び重鎖ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、若しくはＩｇＭ定常領域を含んでよく、そうしたものとして、ＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４のものがあり、これらは、場合によっては、Ｆｃ受容体機能を改変するための様々な突然変異を含む。
【００４０】
本明細書に開示されるマウスＣＤＲを含有するモノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ方法をはじめとする、当業者には周知の様々な方法の何れかによって調製することができる。
【００４１】
抗体改変及び改善のための最新の方法についての論評は、例えば、以下：Ｐ．Ｃｈａｍｅｓ，Ｅｄ．，（２０１２）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂｏｏｋ  ９０７），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，ＩＳＢＮ−１０：１６１７７９９７３４；Ｃ．Ｒ．Ｗｏｏｄ，Ｅｄ．，（２０１１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｏｏｋ  ４），Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｐｒｅｓｓ；Ｒ．Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｓ．Ｄｕｂｅｌ，Ｅｄｓ．，（２０１０）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ），Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ；並びにＷ．Ｓｔｒｏｈｌ  ａｎｄ  Ｌ．Ｓｔｒｏｈｌ（２０１２）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｕｔｕｒｅ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｄｒｉｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｒｅａ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｗｏｏｄｈｅａｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇに見出すことができる。
【００４２】
抗体及び抗原結合断片を生成及び精製する方法は、当技術分野で公知であり、例えば、以下：Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  （１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，第５〜８章及び第１５章に見出すことができる。
【００４３】
天然に存在する完全長抗体は、４つのポリペプチド鎖：ジスルフィド結合により互いに連結された２つの同じ重（Ｈ）鎖と２つの同じ軽（Ｌ）鎖を含む、「Ｙ」型の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子である。フラグメント抗原結合領域（ＦＡＢ）と呼ばれる各鎖のアミノ酸末端部分は、主として、そこに含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）を介した抗原認識を担う約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う定常領域（「Ｆｃ」領域）を画定する。
【００４４】
ＣＤＲには、フレームワーク（「ＦＲ」）と呼ばれる、より保存された領域が散在する。多くのＦＲのアミノ酸配列が当技術分野で公知である。各軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、次の順にアミノ末端からカルボキシ末端まで配列されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。軽鎖の３つのＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３」と呼ばれ、重鎖の３つのＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３」と呼ばれる。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を形成する残基のほとんどを含有する。ＬＣＶＲ及びＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号付け及び配置は、公知のＫａｂａｔナンバーリング則（Ｋａｂａｔ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ）Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２に従う。
【００４５】
本明細書に記載するように、「抗原結合部位」は、「超可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」として定義することができ、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７，１９８７）により定義される通りの抗体可変ドメインの構造的に超可変領域を指す。６つのＨＶＲがあり、そのうち、３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に存在する。本明細書では、延長されてＨ１を含むＨ−ＣＤＲ１を除き、Ｋａｂａｔにより定義されるＣＤＲを使用した。
【００４６】
ギリシャ文字α（アルファ）、δ（デルタ）、ε（イプシロン）、γ（ガンマ）、及びμ（ミュー）と称される５つのタイプの哺乳類免疫グロブリン（Ｉｇ）重鎖があり、これらは、それぞれ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、若しくはＩｇＭとして抗体のクラス又はアイソタイプを定義する。ＩｇＧ抗体は、サブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４にさらに区分され得る。
【００４７】
各重鎖タイプは、当技術分野で公知である配列を含み特定の定常領域を特徴とする。定常領域は、同じアイソタイプのあらゆる抗体で同一であるが、別のアイソタイプの抗体では異なる。重鎖γ、α、及びδは、３つのタンデム免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインから構成される定常領域と、柔軟性追加のためのヒンジ領域とを含む。重鎖μ及びεは、４つのＩｇドメインから構成される定常領域を有する。
【００４８】
ヒンジ領域は、抗体のＦｃ及びＦａｂ部分を連結させる柔軟なアミノ酸区間がある。この領域は、２つの重鎖を連結するジスルフィド結合を形成することができるシステイン残基を含有する。
【００４９】
重鎖の可変領域は、別のＢ細胞により産生される抗体では異なるが、単一Ｂ細胞又はＢ細胞クローンにより産生されるあらゆる抗体については同じである。各重鎖の可変領域は、約１１０アミノ酸長さであり、単一Ｉｇドメインから構成される。
【００５０】
哺乳類の場合、軽鎖は、カッパ（κ）又はラムダ（λ）として分類され、当技術分野において公知の特定の定常領域を特徴とする。軽鎖は、２つの連続的ドメイン：アミノ酸末端に１つの可変ドメインと、カルボキシ末端に１つの定常ドメインを有する。各抗体は、常に同一である２つの軽鎖を含み；哺乳類において、１抗体につき軽鎖κ又はλの１タイプしか存在しない。
【００５１】
抗体のクラスに応じて３つ又は４つの定常ドメインを提供する２つの重鎖から構成されるＦｃ領域は、免疫細胞の活性をモジュレートする上で役割を果たす。特定のタンパク質に結合することにより、Ｆｃ領域は、各抗体が所与の抗原に対して適切な免疫応答を生み出すことを確実にする。Ｆｃ領域はまた、Ｆｃ受容体などの様々な細胞受容体、並びに補体タンパク質などの他の免疫分子にも結合する。これによって、Ｆｃ領域は、オプソニン化、細胞溶解、並びに肥満細胞、好塩基球及び好酸球の脱顆粒を媒介する。
【００５２】
本明細書で使用されるとき、用語「エピトープ」は、抗体又は抗体断片が結合するペプチド若しくはタンパク質に位置するアミノ酸の具体的な配列を指す。エピトープは、多くの場合、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面集団からなり、特定の三次元構造特徴、並びに特定の電荷特徴を備える。エピトープは、線状、すなわち、アミノ酸の単一配列への結合を含むか、又は立体配座、すなわち、抗原（線状配列では必ずしも連続的ではなくてもよい）の様々な領域内のアミノ酸の２つ以上の配列への結合を含むかのいずれであってもよい。
【００５３】
本明細書で使用されるとき、用語「特異的に結合する」、「特異的に結合する」、「特異的結合」、及び本発明の抗体化合物に適用される同等の用語は、特定の結合物質（抗体など）が、特定の結合物質及び標的分子種が混合されている他の分子種との結合に優先して、標的分子種に結合する能力を指す。特定の結合物質は、標的と特異的に結合することができるとき、標的分子種を特異的に認識すると言える。
【００５４】
本明細書で使用されるとき、用語「結合親和性」は、当該分子上の１部位における１つの分子と別の分子の結合の強度を指す。特定の分子が別の特定の分子と特異的に結合するか、又は会合する場合、これらの２つの分子は、互いに結合親和性を呈示すると言える。結合親和性は、１対の分子の会合定数及び解離定数に関するが、これらの定数を測定又は決定することは、本明細書に記載の方法には重要ではない。それよりも、記載される方法の分子同士の相互作用を説明するために本明細書で用いられる親和性は、一般に、実験的試験で観測される見かけ上の親和性（別に明示されない限り）であり、これを用いて、１つの分子（例えば、抗体又は他の特異的結合相手）が、２つの他の分子（例えば、ペプチドの２つのバージョン又は変異体）に結合する相対強度を比較することができる。結合親和性、会合定数、及び解離定数の概念は、公知である。
【００５５】
本明細書で使用されるとき、用語「配列同一性」は、配列マッチングを最大にするように、すなわち、ギャップと挿入を計算に入れて、配列をアラインメントしたときの２つ以上の配列の対応する位置における同一のヌクレオチド又はアミノ酸残基のパーセンテージを意味する。同一性は、公知の方法によって容易に計算することができ、そうした方法として、限定されないが、以下のものが挙げられる：Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８８；  Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；並びにＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ．，ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）。同一性を決定する方法は、試験される配列同士の最大マッチを与えるように設計されている。さらに、同一性を決定する方法は、一般に入手可能なコンピュータプログラムにコード化されている。
【００５６】
比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズムにより、相同性アラインメントアルゴリズムにより、類似性の検索方法により、又はこれらアルゴリズムのコンピュータ用実装（ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  ＰａｃｋａｇｅのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＰＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ、Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａから入手可能）、又は肉眼検査により実施することができる。概要は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）及びＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２（１９９７）を参照されたい。
【００５７】
配列同一性及び配列類似性の割合（％）を決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎから一般に入手可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードと整列させた場合にいくつかの正の数の閾値スコアＴに一致するか、又はそれを満たすクエリー配列中の長さＷの短いワードの同定によって高スコアリング配列対（ＨＳＰ）を最初に同定するステップを含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（ｎｅｉｇｈｂｏｒｈｏｏｄ  ｗｏｒｄ  ｓｃｏｒｅ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）と呼ばれる。
【００５８】
これらの最初の隣接ワードヒットは、これらを含む、より長いＨＳＰを見出すための検索開始のシード（ｓｅｅｄ）として作用する。次に、累積アラインメントスコアを増加させることができる限り、ワードヒットを各配列に沿って両方向に伸長する。累積スコアは、ヌクレオチド配列の場合、パラメータＭ（１対のマッチする残基についての報酬スコア；常に；０）及びＮ（ミスマッチ残基のペナルティスコア；常に；０）を用いて計算する。アミノ酸配列の場合には、スコアリング行列を用いて累積スコアを計算する。各方向へのワードヒットの伸長は、以下の場合に停止する：累積アラインメントスコアが、その達成された最大値から量Ｘだけ低下した場合、１つ又は複数の負のスコアの残基アラインメントの累積によって累積スコアが０以下になる場合、又は何れかの配列の末端に到達する場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定付ける。ＢＬＡＳＴＮプログラムは（ヌクレオチド配列の場合）、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）：１１、期待値（Ｅ）：１０、カットオフ：１００、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列の場合、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）：３、期待値（Ｅ）：１０、及びＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列を使用する。
【００５９】
同一性の割合（％）の計算に加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列同士の類似性の統計解析を行う。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって得られる類似性の１つの尺度は、最小和確率（ｓｍａｌｌｅｓｔ ｓｕｍ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））であり、これによって、２つのヌクレオチド同士又はアミノ酸配列同士のマッチが偶然に起こる確率の指標が得られる。例えば、試験核酸配列と基準核酸配列を比較した最小和確率が、一実施形態で約０．１未満、別の実施形態で約０．０１未満、また別の実施形態で約０．００１未満である場合、試験核酸配列は基準配列に類似するとみなされる。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、用語「ヒト化（された）」、「ヒト化」などは、ヒトＦＲ及び定常領域に、本明細書に開示されるマウスモノクローナル抗体ＣＤＲを移植することを指す。これらの用語には、以下に説明するように、様々な抗体特性を改善する目的で、例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６（１）：２５−３４及びＨｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４４（１）：１１５−１２０に開示される方法によりそれぞれマウスＣＤＲ、及びヒトＦＲに対して可能なさらなる修飾も含まれる。
【００６１】
本明細書で使用されるとき、用語「ヒト化抗体」は、本明細書に開示される抗体化合物をはじめとする、本明細書に開示されるものと類似する開示に従う結合及び機能的特性を有し、且つＦＲと、非ヒト抗体由来の実質的にヒト又は完全にヒトの周囲ＣＤＲである定常領域とを有するｍＡｂ及び抗原結合断片を指す。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、用語「ＦＲ」又は「フレームワーク配列」は、ＦＲ１〜４の何れか１つを指す。本開示により包含されるヒト化抗体及び抗原結合断片は、ＦＲ１〜４の何れか１つ又は複数が、実質的又は完全にヒト由来である、すなわち、実質的又は完全にヒトのＦＲ１〜４の考えられる組合せの何れかが存在する、分子を含む。例えば、これは、ＦＲ１とＦＲ２、ＦＲ１とＦＲ３、ＦＲ１、ＦＲ２、及びＦＲ３などが実質的又は完全にヒト由来である分子を含む。実質的にヒトのフレームワークは、既知のヒト生殖細胞系フレームワーク配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、本明細書に開示されるフレームワーク配列、又は既知のヒト生殖細胞系フレームワーク配列と少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【００６３】
完全にヒトのフレームワークは、既知のヒト生殖細胞系フレームワーク配列と同じものである。ヒトＦＲ生殖細胞系配列は、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース及びＭａｒｉｅ−Ｐａｕｌｅ  Ｌｅｆｒａｎｃ  ａｎｄ  Ｇｅｒａｒｄ  Ｌｅｆｒａｎｃ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２００１によるＴｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ＦａｃｔｓＢｏｏｋから取得することができ、その内容は、全体として参照により本明細書に開示組み込む。
【００６４】
Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋは、ヒト抗体レパトアを作製するために使用されるヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子の概要であり、２０３の遺伝子と４５９の対立遺伝子のエントリーを含み、総計８３７の配列が展示されている。個々のエントリーは、全て、少なくとも１つの機能性又はオープンリーディングフレーム対立遺伝子を有し、且つ３つの主要遺伝子座に位置する、ヒト免疫グロブリン定常遺伝子、並びに生殖細胞系可変、多様性、及びジョイニング遺伝子を含む。例えば、生殖細胞系軽鎖ＦＲは、以下：ＩＧＫＶ３Ｄ−２０、ＩＧＫＶ２−３０、ＩＧＫＶ２−２９、ＩＧＫＶ２−２８、ＩＧＫＶ１−２７、ＩＧＫＶ３−２０、ＩＧＫＶ１−１７、ＩＧＫＶ１−１６、１−６、ＩＧＫＶ１−５、ＩＧＫＶ１−１２、ＩＧＫＶ１Ｄ−１６、ＩＧＫＶ２Ｄ−２８、ＩＧＫＶ２Ｄ−２９、ＩＧＫＶ３−１１、ＩＧＫＶ１−９、ＩＧＫＶ１−３９、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９及びＩＧＫＶ１Ｄ−３３並びにＩＧＫＪ１−５からなる群から選択することができ、また、生殖細胞系重鎖ＦＲは、以下：ＩＧＨＶ１−２、ＩＧＨＶ１−１８、ＩＧＨＶ１−４６、ＩＧＨＶ１−６９、ＩＧＨＶ２−５、ＩＧＨＶ２−２６、ＩＧＨＶ２−７０、ＩＧＨＶ１−３、ＩＧＨＶ１−８、ＩＧＨＶ３−９、ＩＧＨＶ３−１１、ＩＧＨＶ３−１５、ＩＧＨＶ３−２０、ＩＧＨＶ３−６６、ＩＧＨＶ３−７２、ＩＧＨＶ３−７４、ＩＧＨＶ４−３１、ＩＧＨＶ３−２１、ＩＧＨＶ３−２３、ＩＧＨＶ３−３０、ＩＧＨＶ３−４８、ＩＧＨＶ４−３９、ＩＧＨＶ４−５９及びＩＧＨＶ５−５１並びにＩＧＨＪ１−６からなる群から選択することができる。
【００６５】
実質的にヒトのＦＲは、既知のヒト生殖細胞系ＦＲ配列と少なくとも８０％の配列同一性を有するものである。好ましくは、実質的にヒトのフレームワークは、本明細書に開示されるフレームワーク配列、又は既知のヒト生殖細胞系フレームワーク配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。
【００６６】
本開示に含まれるＣＤＲは、本明細書に具体的に開示されるものだけではなく、本明細書に開示されるＣＤＲ配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するＣＤＲ配列も含む。あるいは、本開示に含まれるＣＤＲは、本明細書に具体的に開示されるものだけではなく、本明細書に開示されるＣＤＲ配列と比較して、対応する位置に１、２、３、４、又は５個のアミノ酸変更を有するＣＤＲ配列も含む。このような配列が同一、又はアミノ酸が修飾されたＣＤＲは、好ましくは、インタクトな抗体によって認識される抗原に結合する。
【００６７】
本明細書に開示されるもの以外に、本開示に従う類似の機能的特性を呈示するヒト化抗体は、いくつかの異なる方法：Ａｌｍａｇｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．（２００８）Ｊａｎ  １；１３：１６１９−３３を用いて作製することができる。一アプローチでは、親抗体化合物ＣＤＲは、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトフレームワークに移植される。新規フレームワークの配列同一性は、一般に、親抗体化合物中の対応するフレームワークの配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有する。１００アミノ酸残基未満を有するフレームワークの場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸残基を変更することができる。この移植によって、親抗体のそれと比較して結合親和性の低下が起こり得る。その場合には、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：２８６９により開示される具体的な基準に基づいて、いくつかの位置でフレームワークを親フレームワークに復帰突然変異させることができる。相同性及び復帰突然変異に基づいてヒト化変異体を作製する上で有用な方法を記載する別の参照文献としては、以下に記載されるものなどが挙げられる：Ｏｌｉｍｐｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１５  Ｆｅｂ  １；３１（３）：４３４−４３５及び米国特許第４，８１６，３９７号明細書、同第５，２２５，５３９号明細書、及び同第５，６９３，７６１号明細書；及びＷｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓの方法（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；並びにＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６。
【００６８】
ヒト化は、１９８０年代前半に開発された方法であるキメラ化（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，Ｍ．Ｊ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｌ．Ａ．Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ  ＆  Ｖ．Ｔ  Ｏｉ：Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔ  ｒｅｇｉｏｎ  ｄｏｍａｉｎｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，８１，６８５１−５（１９８４））から開始するが、これは、マウス抗体の可変（Ｖ）ドメインをヒト定常（Ｃ）ドメインと組み合わせることによって、ヒト内容物の約７０％を含む分子を作製することから成る。
【００６９】
いくつかの異なる方法を用いて、ヒト化抗体を作製することができ、これは本明細書に記載されている。一アプローチでは、親抗体化合物ＣＤＲは、親抗体化合物フレームワークと高い配列同一性を有するヒトＦＲに移植される。新たなＦＲの配列同一性は、一般に、親抗体化合物中の対応するＦＲの配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。１００アミノ酸残基未満を有するＦＲの場合、１、２、３、４、５個以上のアミノ酸残基を変更することができる。この移植によって、親抗体のそれと比較して結合親和性の低下が起こり得る。その場合には、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：２８６９により開示される具体的な基準に基づき、いくつかの位置で、ＦＲを親フレームワークに復帰突然変異させることができる。相同性及び復帰突然変異に基づいてヒト化変異体を作製する上で有用な方法を記載する別の参照文献としては、以下に記載されるものなどが挙げられる：Ｏｌｉｍｐｉｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２０１５  Ｆｅｂ  １；３１（３）：４３４−４３５及び米国特許第４，８１６，３９７号明細書、同第５，２２５，５３９号明細書、及び同第５，６９３，７６１号明細書；並びにＷｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓの方法（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；並びにＶｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６。
【００７０】
復帰突然変異のために考慮すべき残基の同定は、以下に記載するように実施することができる。アミノ酸が下記のカテゴリーに入るとき、使用されているヒト生殖細胞系配列のフレームワークアミノ酸（「アクセプターＦＲ」）は、親抗体化合物のフレームワーク由来のフレームワークアミノ酸（「ドナーＦＲ」）により置換される：
（ａ）アクセプターフレームワークのヒトＦＲ内のアミノ酸が、その位置のヒトフレームワークでは稀であるが、ドナー免疫グロブリン内の対応するアミノ酸は、その位置のヒトフレームワークでは典型的である；
（ｂ）アミノ酸の位置が、ＣＤＲの１つに隣接している；又は
（ｃ）フレームワークアミノ酸の何れかの側鎖原子が、三次元免疫グロブリンモデル中のＣＤＲアミノ酸の何れかの原子から約５〜６オングストローム（中心間）以内にある。
【００７１】
アクセプターフレームワークのヒトＦＲ内のアミノ酸の各々及びドナーフレームワーク内の対応するアミノ酸が、概して、その位置のヒトフレームワークでは稀であるとき、そのようなアミノ酸は、その位置のヒトフレームワークに典型的なアミノ酸により置換することができる。この復帰突然変異の基準によって親抗体化合物の活動を復帰させることが可能になる。
【００７２】
本明細書に開示される抗体化合物と類似の機能的特性を提示するヒト化抗体を作製する別のアプローチは、フレームワークを変更することなく、移植ＣＤＲ内でアミノ酸をランダムに突然変異させるステップ、次に、親抗体化合物のそれと同等又はより優れた結合親和性及びその他の機能的特性について、得られた分子をスクリーニングするステップを含む。さらに、単一の突然変異を各ＣＤＲ内の各アミノ酸位置に導入した後、結合親和性及びその他の機能的特性に対するそうした突然変異の作用を評価することもできる。改善された特性をもたらす単一突然変異を組み合わせて、相互の組合せの作用を評価することができる。
【００７３】
さらに、以上のアプローチの両方の組合せも可能である。ＣＤＲ移植後、ＣＤＲにアミノ酸変更を導入する以外に、特定のＦＲを復帰突然変異させることができる。この方法は、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１−１６２に記載されている。
【００７４】
本開示の教示を適用して、当業者は、例えば、部位指定突然変異誘発などの一般的技術を使用して、本明細書に開示されるＣＤＲ及びＦＲ配列内のアミノ酸を置換することにより、この配列に由来する別の可変領域アミノ酸配列を作製することができる。最大全部の天然に存在するアミノ酸を特定の置換部位に導入することができる。本明細書に開示される方法を用いて、これらの追加可変領域アミノ酸配列をスクリーニングすることにより、表示されるインビボ機能を有する配列を同定することができる。このようにして、本開示に従ってヒト化抗体及びその抗原結合部分を作製するのに好適なさらなる配列を同定することができる。フレームワーク内のアミノ酸置換は、本明細書に開示される４つの軽鎖及び／又は重鎖ＦＲの何れか１つ又は複数において１つ、２つ、３つ、４つ、若しくは５つの位置に制限するのが好ましい。ＣＤＲ内のアミノ酸置換は、３つの軽鎖及び／又は重鎖ＣＤＲの何れか１つ又は複数において１つ、２つ、３つ、４つ、若しくは５つの位置に制限するのが好ましい。前述したこれらのＦＲ及びＣＤＲ内の様々な変更の組合せも可能である。
【００７５】
上述のアミノ酸修飾を導入することにより作製した抗体化合物の機能的特性が、本明細書に開示される特定の分子により呈示されるものと一致することは、以下に開示する実施例の方法により確認することができる。
【００７６】
上に記載したように、患者にヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を誘発する問題を回避するために、マウス抗体を遺伝子操作し、ヒト免疫グロブリン分子の可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）フレームワーク上に、相補性決定領域（ＣＤＲ）を移植することによって、抗原結合部位の完全性に必須とみなされるこれらのマウスフレームワーク残基は維持しながら、そのマウス内容物をそのヒト対応部分に存在するアミノ酸残基で段階的に置換した。しかし、ヒト化抗体の異種ＣＤＲは、患者に抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）応答を引き起こし得る。
【００７７】
抗Ｉｄ応答を最小限にするために、ヒトフレームワークに、抗体−リガンド相互作用に最も重要なＣＤＲ残基だけを移植する（「ＳＤＲ移植」と呼ばれる）ことによって、異種抗体をヒト化する方法が開発されており、この方法では、ＣＤＲの必須特異性決定残基（ＳＤＲ）だけがヒトフレームワークに移植される。この方法は、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６（１）：２５−３４に記載されており、既知構造の抗原−抗体複合体の三次元構造のデータベースを用いた、又は抗体結合部位の突然変異分析によるＳＤＲの同定を含む。より多くのＣＤＲ残基の保持を含むヒト化のための別のアプローチは、「短縮」ＣＤＲ、すなわち、全てのＳＤＲを含むＣＤＲ残基の区間の移植に基づくものである。Ｋａｓｈｍｉｒｉらは、マウス抗体を投与された患者からの血清に対するヒト化抗体の反応性を評価する方法も開示している。
【００７８】
改善された免疫原性を有するヒト抗体変異体を構築する別の戦略は、Ｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）  Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４４（１）：１１５−１２０に開示されている。これらの著者らは、コンピュータ支援相同性モデル化により構築された４Ｃ８の分子モデルを用いるＣＤＲ移植により、４Ｃ８からのヒト化抗体、すなわち、マウス抗ヒトＣＤ３４モノクローナル抗体を開発した。この分子モデルを用いて、上記の著者らは、抗原結合に潜在的に重要なＦＲ残基を同定した。４Ｃ８のヒト化バージョンは、マウス抗体ＦＲに対する相同性に基づいて選択されたヒト抗体フレームワークにこれらの重要なマウスＦＲ残基を、マウスＣＤＲ残基と一緒に移植することによって作製された。得られたヒト化抗体は、本来のマウス抗体のそれと類似した抗原結合親和性及び特異性を有することが判明したが、これは、臨床的に常用されているマウス抗ＣＤ３４抗体の代替物となり得ることを示唆している。
【００７９】
本開示の実施形態は、考慮されるｍＡｂが、本明細書に開示される単一マウスｍＡｂ由来のＣＤＲのセット、又は開示されるマウスｍＡｂの２つ若しくは３つに由来する個別のＣＤＲを含むＣＤＲのセットを含有する軽鎖及び重鎖を含むことができるように、任意の組合せ形態で本明細書に開示されるＣＤＲを含むヒト免疫系による認識を回避するように作製された抗体を包含する。こうしたｍＡｂは、分子生物学の標準的技術により作製し、本明細書に記載されるアッセイを用いて、所望の活性についてスクリーニングすることができる。このようにして、本開示は、新たな、又は改善された治療活性を達成するために、開示されるマウスｍＡｂ由来のＣＤＲの混合物を含む新規のｍＡｂを作製する「ミックス及びマッチ（ｍｉｘ  ａｎｄ  ｍａｔｃｈ）」アプローチを提供する。
【００８０】
本明細書に開示される分子と「競合する」本開示により包含されるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、本開示の分子が結合する部位と同一であるか、又はそれとオーバーラップする部位でヒトＣＤ４７に結合するものである。競合するモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、例えば、抗体競合アッセイによって同定することができる。例えば、精製した、又は部分的に精製したヒトＣＤ４７細胞外ドメインのサンプルを固体支持体に結合することができる。次に、本開示の抗体化合物、又はその抗原結合断片並びにそのような開示抗体化合物と競合することができると思われるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を添加する。２つの分子のうちの一方を標識する。標識化合物及び非標識化合物が結合して、ＣＤ４７上の個別且つ独立の部位に結合すれば、標識化合物は、推定競合化合物が存在するか否かにかかわらず、同じレベルで結合するであろう。しかし、相互作用の部位が同一又はオーバーラップする場合には、非標識化合物は競合し、抗原に結合する標識化合物の量は低下するであろう。非標識化合物が過剰に存在する場合には、もしあるとしても、ごくわずかの標識化合物が結合するであろう。本開示の目的のために、競合モノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４７に対する本発明の抗体化合物の結合を約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％低減するものである。こうした競合アッセイを実施する方法の詳細は当技術分野で公知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙに見出すことができる。こうしたアッセイは、精製抗体を用いることによって、定量的にすることができる。標準曲線は、１つの抗体をそれ自体に対して力価測定することによって作成し、言い換えれば、同じ抗体を標識及び競合者の両方に使用する。非標識競合モノクローナル抗体又はその抗原結合断片が、プレートに対する標識分子の結合を阻害する能力を滴定する。結果をプロットして、所望の程度の結合阻害を達成するのに必要な濃度を比較する。
【００８１】
こうした競合アッセイで本開示の抗体化合物と競合するｍＡｂ又はその抗原結合断片が、本開示の抗体化合物と同じ若しくは類似の機能的特性を有するか否かは、これらの方法を、以下の実施例３〜５に記載する方法と組み合わせて、決定することができる。様々な実施形態では、本明細書に包含される治療方法に使用するための競合抗体は、本明細書に開示される抗体化合物のそれと比較して、約５０％〜約１００％又は約１２５％、若しくはそれ以上の範囲の本明細書に記載するような生物学的活性を有する。一部の実施形態では、競合抗体は、以下に記載する実施例に開示の方法により決定される通り、本明細書に開示される抗体化合物のそれと比較して、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は同一の生物学的活性を有する。
【００８２】
本組成物及び方法において有用なｍＡｂ若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、本明細書に記載されるアイソタイプのいずれであってもよい。さらに、これらのアイソタイプのいずれも、後述する通り、さらなるアミノ酸修飾を含んでもよい。
【００８３】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプであってよい。
【００８４】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体半減期を改変することができる。抗体半減期は、大部分が、新生児Ｆｃ受容体とのＦｃ依存性相互作用により調節される（Ｒｏｏｐｅｎｉａｎ  ａｎｄ  Ａｌｉｋｅｓｈ，２００７）。モノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、半減期を延長することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｎ４３４Ａ、Ｔ３０７Ａ／Ｅ３８０Ａ／Ｎ４３４Ａ（Ｐｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｙｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）；Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）；Ｔ２５０Ｑ／Ｍ４２８Ｌ（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）；及びＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ（Ｚａｌｅｖｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，２０１０）が挙げられる。
【００８５】
半減期の延長とは反対に、例えば、高い抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）抗体に関連する有害事象の可能性を低減するために、短い半減期が所望されるいくつかの状況がある（Ｐｒｅｓｔａ  ２００８）。本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、半減期を短縮する、及び／又は内在性ＩｇＧを低減することもでき、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｉ２５３Ａ（Ｐｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）；Ｐ２５７Ｉ／Ｎ４３４Ｈ、Ｄ３７６Ｖ／Ｎ４３４Ｈ（Ｄａｔｔａ−Ｍａｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）；及びＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ（Ｖａｃｃａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）が挙げられる。
【００８６】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を増大又は低減することができる。こうした抗体エフェクター機能として、限定されないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、Ｃ１ｑ結合、及びＦｃ受容体に対する結合の改変が挙げられる。
【００８７】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を増大することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４（Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）；Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ及びＳ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）；Ｆ２３４Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ、Ｆ２３４Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９３Ｌ、及びＦ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｖ３０５Ｉ／Ｐ３９６Ｌ（Ｓｔｅｖｅｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）；Ｇ２３６Ａ，Ｇ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、及びＧ２３６Ａ／Ｓ２３９Ｄ／Ａ３３０Ｌ／Ｉ３３２Ｅ（Ｒｉｃｈａｒｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）；Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ｓ及びＫ３２６Ｗ／Ｅ３３３Ｓ（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）；Ｓ２６７Ｅ及びＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）；Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ、Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ、Ｓ２６７Ｅ／Ｓ２３４Ｔ、及びＳ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ（Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０）；Ｓ２９８Ｇ／Ｔ２９９Ａ（Ｓａｚｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）；Ｅ３８２Ｖ／Ｍ４２８Ｉ（Ｊｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）が挙げられる。
【００８８】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を低減することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾Ｎ２９７Ａ及びＮ２９７Ｑ（Ｂｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｗａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）；Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）；Ｋ２１４Ｔ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６欠失／Ａ３２７Ｇ／Ｐ３３１Ａ／Ｄ３５６Ｅ／Ｌ３５８Ｍ（Ｇｈｅｖａｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）；Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ（ＭｃＥａｒｃｈｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）；Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ  （Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）が挙げられる。
【００８９】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ１定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を低減することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）；Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３０Ｒ、Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ３３０Ｓ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｄ／Ａ３３０Ｓ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ３３０Ｒ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｄ／Ａ３３０Ｒ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ、Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ（Ａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｉｍｏｔｏ，２０１３）が挙げられる。
【００９０】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプであってもよい。
【００９１】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を増大又は低減することができる。こうした抗体エフェクター機能として、限定されないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及びＣ１ｑ結合、並びにＦｃ受容体に対する結合の改変が挙げられる。
【００９２】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を増大することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｋ３２６Ａ／Ｅ３３３Ｓ（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）が挙げられる。
【００９３】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を低減することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ  （Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）；Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｈ２６８Ｑ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ａ３３０Ｒ、Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ３３０Ｓ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｄ／Ａ３３０Ｓ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｑ／Ａ３３０Ｒ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｈ２６８Ｄ／Ａ３３０Ｒ／Ｖ３０９Ｌ／Ｐ３３１Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ、Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｒ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｄ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ、Ｐ２３８Ｄ／Ｅ２３３Ｄ／Ｇ２３７Ｄ／Ｈ２６８Ｑ／Ｐ２７１Ｇ／Ａ３３０Ｓ（Ａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｍｉｍｏｔｏ，２０１３）が挙げられる。
【００９４】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域を修飾して、アイソフォーム及び／又はアゴニスト活性を改変することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｃ１２７Ｓ（ＣＨ１ドメイン）、Ｃ２３２Ｓ、Ｃ２３３Ｓ、Ｃ２３２Ｓ／Ｃ２３３Ｓ、Ｃ２３６Ｓ、及びＣ２３９Ｓ（Ｗｈｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｌｉｇｈｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）が挙げられる。
【００９５】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、ヒトＩｇＧ３アイソタイプであってもよい。
【００９６】
モノクローナル抗体、若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ３定常領域であって、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片の前記ヒトＩｇＧ３定常領域を１つ又は複数のアミノ酸にて修飾して、抗体半減期、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、又はアポトーシス活性を増大することができる。
【００９７】
モノクローナル抗体、若しくはその抗原結合断片のヒトＩｇＧ３定常領域であって、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片の前記ヒトＩｇＧ３定常領域をアミノ酸Ｒ４３５Ｈにて修飾して、抗体半減期を延長することができる。
【００９８】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプであってもよい。
【００９９】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ４定常領域を修飾して、抗体エフェクター機能を低減することができる。こうした抗体エフェクター機能として、限定されないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）が挙げられる。
【０１００】
本明細書に記載されるモノクローナル抗体、その抗原結合断片、又は競合抗体のヒトＩｇＧ４定常領域を修飾して、Ｆａｂアーム交換を防止する、及び／又は抗体エフェクター機能を低減することができ、そのようなものとして、限定されないが、アミノ酸修飾：Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ（Ａｌｅｇｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）；Ｓ２２８Ｐ，Ｌ２３５Ｅ及びＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ（Ｒｅｄｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）が挙げられる。
【０１０１】
本明細書で使用されるとき、用語「腫瘍」は、悪性又は良性にかかわらず、あらゆる腫瘍細胞成長及び増殖、並びにあらゆる前癌及び癌性細胞と前癌及び癌性組織を指す。
【０１０２】
用語「癌」、「癌性」、及び「腫瘍」は、本明細書で使用される場合、互いに限定的ではない。用語「癌」及び「癌性」は、典型的には異常細胞成長／増殖を特徴とする、哺乳類における生理学的状態を指すか、又は記述する。癌の例として、限定されないが、癌腫、リンパ腫（すなわち、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられる。こうした癌の具体的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃腸の癌、膵臓癌、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌（ｌｉｖｅｒ  ｃａｎｃｅｒ）、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜若しくは子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌（ｈｅｐａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、白血病及びその他のリンパ増殖性障害、並びに多様なタイプの頭部及び頚部癌が挙げられる。
【０１０３】
用語「感受性癌」は、本明細書で使用されるとき、その細胞が、ＣＤ４７を発現し、且つ本開示の抗体若しくはその抗原結合断片、又は競合抗体若しくはその抗原結合断片による治療に対して応答性である癌を指す。
【０１０４】
用語「自己免疫疾患」は、本明細書で使用されるとき、身体の免疫系が自身に向かい、誤って健全な細胞を攻撃する場合を指す。
【０１０５】
用語「炎症性疾患」は、本明細書で使用されるとき、局所反応及びその結果生じる形態学的変化をはじめとする、物理的、化学的若しくは生物学的因子に起因する傷害又は異常刺激に応答して患部血管及び隣接組織に起こる組織学的に明らかな細胞学的変化、細胞浸潤、及びメディエータ放出の動的複合体を含む基本的病理過程である炎症；傷害性物質の破壊又は除去；並びに修復及び治癒をもたらす応答を特徴とする疾患を指す。
【０１０６】
用語「自己炎症性疾患」は、本明細書で使用されるとき、自然免疫系が、原因不明の炎症を引き起こす場合に起こる疾患を指す。
【０１０７】
本明細書で使用されるとき、用語「虚血」は、例えば、１つ若しくは複数の血管の収縮又は閉塞によって、身体の器官、組織、若しくは部分への血液供給の減少が起こる血管現象を指す。虚血は、場合によっては、血管収縮又は血栓症若しくは塞栓症によって起こる。虚血は、酸素供給の減少によって起こる細胞死のために、直接虚血性傷害、組織損傷を招き得る。虚血は、例えば、手術中、又は事故で受けた組織への外傷、傷害及び戦争状況によって、又は後の移植を目的とする臓器摘出後、急性に起こり得る。これは、血管の漸進的狭窄によって組織及び器官への不適切な血流が起こる、アテローム性動脈硬化性末梢血管疾患に認められるように、亜急性でも起こり得る。組織が虚血を被ると、最終的に細胞不全及び壊死を招き得る一連の化学事象が起こる。血流の回復によって虚血が停止すれば、第２の連続的傷害事象が続き、さらなる傷害を引き起こす。このように、被験者に血流の一時的減少又は中断がいつ起きても、その結果生じる傷害は、２つの構成要素、すなわち、虚血時間の間に起こる直接傷害と、それに続く間接的傷害又は再灌流傷害を伴う。
【０１０８】
「虚血性脳卒中」は、いくつかの異なる種類の疾患によって起こり得る。最も一般的な障害は、頸部及び頭部の動脈の狭窄である。これは、最も高頻度で、動脈硬化、又は漸次的コレステロール沈着によって起こる。動脈が狭くなりすぎると、血液細胞は、凝集し、血餅（血栓）を形成する可能性がある。これらの血餅は、それらが形成される動脈を閉塞する（血栓症）か、又は脳近傍の動脈内に移動し、そこに閉じ込められ得る（閉塞症）。脳卒中は、アテローム性動脈硬化性プラークが血管壁から部分的に分離し、血管を通る血液の流れを塞ぐとき起こり得る。
【０１０９】
本明細書で使用されるとき、用語「再灌流」は、血流の減少により虚血である組織に対する血流の回復を指す。再灌流は、生存可能な虚血組織を回復させて、それ以上の壊死を制限することによって、梗塞又はその他の虚血を治療する方法である。しかし、再灌流は、それ自体が虚血組織をさらに損傷させて、再灌流傷害を引き起こし得る。血流の不足の間に起こる即時傷害に加えて、「虚血／灌流傷害」は、血流が回復された後に起こる組織傷害も伴う。この傷害の多くは、虚血組織により放出される化学物質、遊離基、及び生理活性物質によって引き起こされると現時点では理解されている。
【０１１０】
「一酸化窒素（ＮＯ）供与体、前駆体、又は一酸化窒素生成局所薬」は、ＮＯを送達するか、又は酵素若しくは非酵素プロセスを介してＮＯに変換することができる化合物又は薬剤を指す。例として、限定されないが、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノシドノニミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチル−ペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、及びアルギニンが挙げられる。
【０１１１】
「可溶性グアニリルシクラーゼ（ｓＧＣ）」は、血管平滑筋中の一酸化窒素の受容体である。心血管系では、一酸化窒素は、Ｌ−アルギニンから内皮一酸化窒素シンターゼにより内在的に生成され、隣接する血管平滑筋細胞中の可溶性グアニリルシクラーゼを活性化してｃＧＭＰレベルを増大し、血管弛緩を誘導する。一酸化窒素は、可溶性グアニリルシクラーゼの通常減少したヘム部分に結合して、ＧＴＰからのｃＧＭＰの形成を増大し、これによって、細胞内カルシウムの減少、血管拡張、及び抗炎症作用をもたらす。ｓＧＣ上のヘム鉄の酸化によって、一酸化窒素に対する酵素の応答性が低減し、血管収縮を促進する。一酸化窒素−ｓＧＣ−ｃＧＭＰ経路は従って、心血管疾患において重要な役割を果たす。アジ化ナトリウム、亜硝酸ナトリウム、ヒドロキシルアミン、ニトログリセリン、及びニトロプルシドナトリウムなどの窒素含有化合物は、ｓＧＣを刺激して、ｃＧＭＰの増加、及び血管弛緩を引き起こすことがわかっている。還元ｓＧＣに結合するｓＧＣの刺激因子とは対照的に、ｓＧＣの活性化因子は、一酸化窒素に対して応答性ではない酸化又はヘム欠損ｓＧＣ酵素を活性化する、すなわち、これらの因子は、酸化還元状態とは独立にｓＧＣを刺激する。ｓＧＣの刺激因子は、一酸化窒素に対する還元ｓＧＣの感受性を増大することができるのに対し、ｓＧＣの活性化因子は、酵素が酸化されても、従って、一酸化窒素に対して低応答性又は不応答性であっても、ｓＧＣ酵素活性を増大することができる。このように、ｓＧＣ活性化因子は、非一酸化窒素を基材とする。Ｎｏｓｓａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１２，ａｒｔｉｃｌｅ  ２９０８０５，及びＤｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｌｅｔｔａ（２０１２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８１：５３３−５５９の論評に留意されたい。
【０１１２】
「可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤」は、例えば、有機硝酸塩（Ａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１８２５３−１８２５６）；プロトポルフィリンＩＸ（Ｉｇｎａｒｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７９：２８７０−２８７３）；ＹＣ−１（Ｋｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８４：４２２６−４２３３）；ＢＡＹ  ４１−２２７２及びＢＡＹ  ４１−８５４３（Ｓｔａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００１  Ｎａｔｕｒｅ  ４１０（６８２５）：２１２−５）、ＣＭＦ−１５７１、並びにＡ−３５０６１９（Ｅｖｇｅｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．５：７５５−７６８に論評）  ；ＢＡＹ  ５８−２６６７（Ｃｉｎａｃｉｇｕａｔ；  Ｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４８（１２）：１４００−１０）；ＢＡＹ  ６３−２５２１（Ｒｉｏｃｉｇｕａｔ；  Ｍｉｔｔｅｎｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．  （２００９）  Ｃｈｅｍｍｅｄｃｈｅｍ  ４  （５）：８５３−６５）を指す。それ以外の可溶性グアニリルシクラーゼ活性化因子は、Ｓｔａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １２３：２２６３−２２７３；Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｌｅｔｔａ  （２０１２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８１：５３３−５５９、及びＮｏｓｓａｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ２９０８０５，ｐａｇｅｓ  １−１２に開示されている。
【０１１３】
ｃＧＭＰは、ホスホジエステラーゼ阻害剤を用いて、分解を阻害することによっても増加し得る。「環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤」の例としては、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、及びシルデナフィルアバナフィルが挙げられる。
【０１１４】
本明細書で使用されるとき、用語「治療すること」又は「治療する」又は「治療」とは、徴候、症状、障害、病状、若しくは疾患の進行又は重症度を遅延、阻止、停止、制御、停止、低減、若しくは逆転させることを意味するが、必ずしも全ての疾患関連の徴候、症状、病状、若しくは障害の排除を意味するわけではない。用語「治療する（こと）」などは、発症開始後の疾患又は病状の徴候若しくは症状を改善する治療介入を指す。
【０１１５】
本明細書で使用されるとき、用語「有効量」は、患者又は臓器に対する１若しくは複数用量の投与時に、所望される治療若しくは予防をもたらす本開示の抗体化合物の量又は用量を指す。
【０１１６】
任意の特定の被験者に対する正確な有効量は、その大きさ及び健康状態、その病状の性質及び程度、並びに投与するために選択された治療薬又は治療薬の組合せに応じて変動する。所与の患者の有効量は、常用の実験により決定され、これは、臨床医の判断で行われる。本開示の抗体化合物の治療有効量はまた、摘出された臓器又は患者に投与される１用量当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、又は約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲の量を含み得る。公知の抗体系薬剤は、これに関してガイダンスを提供する。例えば、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）は、２１ｍｇ／ｍｌ溶液の静脈内注入により投与され、その場合、初期負荷投与が４ｍｇ／ｋｇ体重、毎週の維持投与が２ｍｇ／ｋｇ体重であり；Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）は、例えば、毎週３７５ｍｇ／ｍ２で投与される。
【０１１７】
任意の個別患者に対する治療有効量は、腫瘍退縮、循環腫瘍細胞、腫瘍幹細胞又は抗腫瘍応答に対する抗体化合物の作用をモニターすることによって、医療提供者が決定することができる。これらの方法で得られたデータの解析によって、療法中の治療レジメンの変更が可能になり、その結果、単独で若しくは互いに組み合わせて、又は別の治療薬と組み合わせて、あるいはその両方で使用されるかにかかわらず、本開示の抗体化合物の最適量が投与され、しかも、同様に治療期間も決定することができる。このようにして、投薬／治療レジメンを療法の過程で変更することでき、その結果、満足な効果を示す、単独で若しくは組み合わせて使用される最も低い量の抗体化合物が投与され、しかも、そうした化合物の投与は、患者の治療に成功するのに必要な期間だけ継続される。公知の抗体系薬剤は、例えば、薬剤が、毎日、毎週、毎月などで投与されるべきかにかかわらず、投与頻度に関するガイダンスを提供している。頻度及び投与量は、症状の重症度に応じても変動し得る。
【０１１８】
一部の実施形態では、本開示の抗体化合物は、ヒト及び動物医療における薬剤として使用することができ、限定されないが、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、腹腔内、髄腔内、心室内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、局所、皮下、腫瘍内、鼻内、腸内、舌下、膣内、小胞内又は直腸経路を含む様々な経路により投与される。組成物はまた、腫瘍などの病変に直接投与することもできる。投薬治療は、単回投与スケジュール又は複数回投与スケジュールのいずれであってもよい。さらに、医薬組成物を投与するために、Ｈｙｐｏスプレーを使用してもよい。典型的には、治療組成物は、溶液又は懸濁液の何れかの形態で、注射液として調製することができる。また、注射前の液体ビヒクル中の溶液又は懸濁液に好適な固体形態を調製することもできる。獣医学適用には、ネコ及びイヌなどのコンパニオン／ペット動物；盲導犬若しくは介助犬、及びウマなどの使役動物；ウマ及びイヌなどの競技動物；霊長類、ライオン及びトラなどのネコ科動物、クマなどを含む動物園動物；並びに飼育されている他の有用な動物の治療が含まれる。
【０１１９】
こうした医薬組成物は、当技術分野において公知の方法により調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔＥｄｉｔｉｏｎ（２００５），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡを参照されたい。また、医薬組成物は、本明細書に開示される１つ又は複数の抗体化合物、及び薬学的若しくは獣医学的に許容される、例えば、生理学的に許容される、担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。
【０１２０】
本開示は、異なる機能プロフィールを有する抗ＣＤ４７ｍＡｂを記載する。これらの抗体は、以下から選択される特性の異なる組合せを有する：１）１種若しくは複数種のＣＤ４７のホモログと交差反応性を示す；２）ＣＤ４７とそのリガンドＳＩＲＰα同士の相互作用を阻止する；３）ヒト腫瘍細胞の食作用を増大する、４）感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導する；５）ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導しない；６）ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）との結合が少ない；７）ｈＲＢＣとの検出可能な結合がない；８）ｈＲＢＣの凝集が少ない；９）ｈＲＢＣの検出可能な凝集を引き起こさない；１０）一酸化窒素（ＮＯ）経路のＴＳＰ１阻害を逆転する；及び／又は１１）ＮＯ経路のＴＳＰ１阻害を逆転しない。
【０１２１】
本開示の抗ＣＤ４７抗体及びその抗原結合断片は、従来技術の抗ＣＤ４７抗体とは異なる特性の組合せを有する。これらの特性及び特徴について以下にさらに詳しく説明していく。
【０１２２】
様々な種のＣＤ４７への結合
本開示の抗ＣＤ４７抗体、及びその抗原結合断片は、ヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、１種又は複数種のＣＤ４７のホモログ、例えば、非ヒト霊長類由来のＣＤ４７ホモログと交差反応性を示す。いくつかの実施形態では、本開示の抗ＣＤ４７抗体、及びその抗原結合断片は、ヒトＣＤ４７、並びに非ヒト霊長類、マウス、ラット、及び／又はウサギ由来のＣＤ４７に結合する。他の種のホモログとの交差反応性は、治療用抗体の開発及び試験に特に有用となり得る。例えば、治療用抗体の前臨床毒性試験は、限定されないが、カニクイザル、ミドリザル、アカゲザル及びリスザルをはじめとする、非ヒト霊長類種で実施されることが多い。従って、これらの種のホモログとの交差反応性は、臨床候補としての抗体の開発にとって特に有用となり得る。
【０１２３】
ＣＤ４７とＳＩＲＰα同士の相互作用の阻止及び食作用の促進
インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）としても知られるＣＤ４７は、細胞外Ｎ末端ＩｇＶドメイン、５膜通過貫膜ドメイン、及び代替的にスプライシングされている短いＣ末端細胞内テールから構成される５０ｋＤａの細胞表面受容体である。
【０１２４】
２つのリガンドが、ＣＤ４７：シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）及びトロンボスポンジン１（ＴＳＰ１）に結合する。ＴＳＰ１は、血漿中に存在し、血小板をはじめとする多くの細胞により合成される。ＳＩＲＰαは、造血細胞上に発現され、こうした細胞として、マクロファージ及び樹状細胞がある。
【０１２５】
食細胞上のＳＩＲＰαが標的細胞上のＣＤ４７に結合すると、この相互作用は、標的細胞の食作用を防止する。ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用は、実際に「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」シグナルを食細胞に送る（Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８８：２０５１−２０５４，２０００）。治療に際して、抗ＣＤ４７ｍＡｂによりＳＩＲＰαとＣＤ４７の相互作用を阻止すれば、宿主の免疫系による癌細胞の取り込み及びクリアランスを促進することによって、有効な抗癌治療を提供することができる。従って、いくつかの抗ＣＤ４７ｍＡｂの重要な機能的特性は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻止して、マクロファージによるＣＤ４７発現腫瘍細胞の食作用を達成する能力である。いくつかの抗ＣＤ４７ｍＡｂが、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻止することがわかっており、例えば、以下のものが挙げられる：Ｂ６Ｈ１２（Ｓｅｉｆｆｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ９４：３６３３−３６４３，１９９９；Ｌａｔｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２５４７−２５５４，２００１；Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １０７：２５４８−２５５６，２００６；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．  ２７７：１００２８−１００３６，２００２；Ｒｅｂｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０５：１８２−１９３，２００５）、ＢＲＩＣ１２６（Ｖｅｒｎｏｎ−Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：２１３０−２１３７，２０００；Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １０７：２５４８−２５５６，２００６）、ＣＣ２Ｃ６（Ｓｅｉｆｆｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ９４：３６３３−３６４３，１９９９）、及び１Ｆ７（Ｒｅｂｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０５：１８２−１９３，２００５）。また、Ｂ６Ｈ１２及びＢＲＩＣ１２６も、ヒト及びマウスマクロファージによるヒト腫瘍細胞の食作用を引き起こすことが明らかにされている（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０９（１７）：６６６２−６６６７，２０１２；Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １４２：６９９−７１３，２０１２；欧州特許第２  ２４２  ５１２  Ｂ１号明細書）。２Ｄ３などの他の既存の抗ＣＤ４７ｍＡｂは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻止せず（Ｓｅｉｆｆｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ９４：３６３３−３６４３，１９９９；Ｌａｔｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２５４７−２５５４，２００１；Ｒｅｂｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０５：１８２−１９３，２００５）、腫瘍細胞の食作用を引き起こさない（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０９（１７）：６６６２−６６６７，２０１２；Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  １４２：６９９−７１３，２０１２；欧州特許第２  ２４２  ５１２  Ｂ１号明細書）。
【０１２６】
本明細書で使用されるとき、用語「ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止する」は、抗ＣＤ４７ｍＡｂによる、Ｊｕｒｋａｔ細胞上のＣＤ４７に対するＳＩＲＰα−Ｆｃ結合の５０％超の低減を指す。
【０１２７】
本明細書に記載される開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻止して、ヒト腫瘍細胞の食作用を増大する。
【０１２８】
癌細胞の「食作用」は、マクロファージによるこうした細胞の貪食及び消化、並びにこれらの癌細胞の最終的な消化又は分解、並びにさらなるプロセシングに付すための消化又は分解細胞成分の細胞外、若しくは細胞内への放出を指す。ＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止する抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、癌細胞のマクロファージ食作用を増大する。そうでなければ、癌細胞上のＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合は、これらの細胞が、マクロファージ食作用を免れることを可能にするであろう。癌細胞は、生存能を有するか、又は生存癌細胞であり得る。
【０１２９】
腫瘍細胞の細胞死の誘導
いくつかの可溶性抗ＣＤ４７ｍＡｂは、腫瘍細胞上のＣＤ４７に結合すると細胞死プログラムを開始し、その結果、ミトコンドリア膜電位崩壊、ＡＴＰ生成能力の喪失、ホスホファチジルセリンの細胞表面発現の増大（アネキシンＶについての染色増加により検出される）及びカスパーゼの参加若しくはＤＮＡの断片化なしでの細胞死を引き起こす。このような可溶性抗ＣＤ４７ｍＡｂは、様々な固形及び血液癌を治療する可能性がある。いくつかの可溶性抗ＣＤ４７ｍＡｂが、腫瘍細胞死を誘導することがわかっており、例えば、ＭＡＢＬ−１，ＭＡＢＬ−２及びその断片（米国特許第８，１０１，７１９号明細書；Ｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．１７：１１８９−９４，２００７；Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１５：９１２−８，２００４），Ａｄ２２（Ｐｅｔｔｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１６６：４９３１−４９４２，２００１；Ｌａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２３９１５−２３９２１，２００３）、並びに１Ｆ７（Ｍａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３５４４−３５５３，２００３；Ｍａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４：１０２６−１０３６，２００４）が挙げられる。本明細書に記載される開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂの一部は、ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導する。
【０１３０】
用語「細胞死を誘導する（こと）」又は「殺傷する」などは、本明細書では置き換え可能に使用されて、培養した癌細胞に本開示の抗体化合物を添加することによって、これらの細胞に、細胞死に関連する定量化可能な特徴を呈示させることを意味し、こうした特徴は、以下に挙げる何れか１つ又は複数を含む：
１．フローサイトメトリー又は共焦点蛍光顕微鏡検査によって検出される、腫瘍細胞に対するアネキシンＶの結合の増加（カルシウムイオンの存在下で）；
２．腫瘍細胞による蛍光化合物ヨウ化プロピジウム（フローサイトメトリーにより検定）又は７−アミノアクチノマイシンＤ（フローサイトメトリーにより検定される７−ＡＡＤ）又はトリパンブルー（光学顕微鏡検査で評点）の取り込みの増加
３．いくつかの入手可能な尺度（ＤｉＯ−Ｃ６若しくはＪＣ１などの電位差滴定蛍光染料又はＭＴＴ若しくはＷＳＴ−１などのホルマザンベースのアッセイ）の１つによって検定される腫瘍細胞によるミトコンドリア機能及び膜電位の喪失。
【０１３１】
細胞死の誘導とは、本明細書に開示される可溶性抗ＣＤ４７抗体、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はその抗原結合断片（並びに競合抗体及びその抗原結合断片）のいくつかが、補体又は他の細胞、例えば、限定されないが、Ｔ細胞、好中球、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、若しくは樹状細胞の参加なしに、細胞自律機構を介して癌細胞を殺傷する能力を指す。量的に、細胞死の誘導は、限定されないが、負の対照抗体（ヒト化、アイソタイプ適合抗体）で得られたバックグラウンドと比較して、可溶性抗ＣＤ４７ｍＡｂによりもたらされるヒト腫瘍細胞のアネキシンＶ染色の２倍超の増加を含む。
【０１３２】
本開示のヒト化又はキメラｍＡｂのうち、ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導するものは、抗ＣＤ４７ｍＡｂＡｄ２２（Ｐｅｔｔｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１６６：４９３１−４９４２，２００１；Ｌａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２３９１５−２３９２１，２００３）；１Ｆ７（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３５４４−３５５３，２００３；Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：１０２６−１０３６，２００４）；並びにＭＡＢＬ−１及び２（米国特許第７，５３１，６４３Ｂ２号明細書；米国特許第７，６９６，３２５Ｂ２号明細書；米国特許第８，１０１７１９Ｂ２号明細書）について報告されている知見と同様に、アネキシンＶ結合の増加をもたらす。
【０１３３】
細胞生存能アッセイは、ＮＣＩ／ＮＩＨガイダンスマニュアルに記載されており、これは、ＣＤ４７抗体によって引き起こされる細胞死の誘導を評価するために使用することができる多様な細胞ベースのアッセイを記載している：“Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙｓ”，Ｔｅｒｒｙ  Ｌ  Ｒｉｓｓ，ＰｈＤ，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ａ  Ｍｏｒａｖｅｃ，ＢＳ，Ａｎｄｒｅｗ  Ｌ  Ｎｉｌｅｓ，ＭＳ，Ｈｅｌｅｎｅ  Ａ  Ｂｅｎｉｎｋ，ＰｈＤ，Ｔｒａｃｙ  Ｊ  Ｗｏｒｚｅｌｌａ，ＭＳ，ａｎｄ  Ｌｉｓａ  Ｍｉｎｏｒ，ＰｈＤ．  Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、２０１３年３月１日出版。
【０１３４】
ｈＲＢＣとの結合
ＣＤ４７は、ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）に発現される（Ｂｒｏｗｎ．Ｊ  ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１１１：２７８５−２７９４，１９９０；Ａｖｅｎｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．，（１９８８）２５１：４９９−５０５；Ｋｎａｐｐ．Ｂｌｏｏｄ，（１９８９）Ｖｏｌ．７４，Ｎｏ．４，１４４８−１４５０；Ｏｌｉｖｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １８１８：４８１−４９０，２０１２；Ｐｅｔｒｏｖａ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ４２７１）。抗ＣＤ４７ｍＡｂは、ＲＢＣに結合することがわかっており、そうしたものとして、以下：Ｂ６Ｈ１２（Ｂｒｏｗｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１９９０，Ｏｌｉｖｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ  １８１８：４８１−４９０，２０１２，Ｐｅｔｒｏｖａ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ４２７１）、ＢＲＩＣ１２５（Ａｖｅｎｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．，（１９８８）２５１：４９９−５０５）、ＢＲＩＣ１２６（Ａｖｅｎｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．，（１９８８）２５１：４９９−５０５；Ｐｅｔｒｏｖａ Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ４２７１）、５Ｆ９（Ｕｇｅｒ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４；７４（１９  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ５０１１，Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１５  Ｓｅｐ  ２１；１０（９）：ｅ０１３７３４５；Ｓｉｋｉｃ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１６；３４（ｓｕｐｐｌ；  ａｂｓｔｒａｃｔ  ３０１９））、米国特許出願公開第２０１４／０１６１７９９号明細書、国際公開第２０１４／０９３６７８号パンフレット、米国特許出願公開第２０１４／０３６３４４２号明細書に開示される抗ＣＤ４７抗体、並びにＣＣ２Ｃ６（Ｐｅｔｒｏｖａ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ４２７１，Ｕｇｅｒ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４；７４（１９  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ５０１１）が挙げられる。また、ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質は、他のヒト細胞と比較して、ヒトＲＢＣには低い結合を有することもわかっている（Ｕｇｅｒ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４；７４（１９  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ５０１１）。ＲＢＣとの結合は、ただ１つのＣＤ４７結合アームを有する二重特異性抗体の作製によって低減することができる（Ｍａｓｔｅｒｎａｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ２４８２）。
【０１３５】
一部の抗ＣＤ４７ｍＡｂは、カニクイザルに投与すると、ＲＢＣの減少を引き起こすことが判明したため（Ｍｏｕｎｈｏ−Ｚａｍｏｒａ  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｓｔ，  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ｔｏ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１５；１４４（１）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ５９６：１２７，Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１５  Ｓｅｐ  ２１；１０（９）：ｅ０１３７３４５；Ｐｉｅｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ２４７０）、ＣＤ４７発現ＲＢＣに結合しない抗ＣＤ４７ｍＡｂを同定することが極めて望ましい。
【０１３６】
本明細書で使用されるとき、用語「赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ（ｓ））」及び「赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ（ｓ））」は同意語であり、本明細書では置き換え可能に使用される。
【０１３７】
本明細書で使用されるとき、用語「ｈＲＢＣへの低い結合」は、ヒト腫瘍細胞に関するＫｄに比して１０倍以上の、ｈＲＢＣに対する抗ＣＤ４７ｍＡｂ結合のＫｄを指し、ここで腫瘍細胞はＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞である。
【０１３８】
本明細書で使用されるとき、用語「結合がない」又は「ＮＢ」は、１００μｇ／ｍｌ以下の抗ＣＤ４７ｍＡｂ濃度でｈＲＢＣに対する測定可能な結合がないことを指す。
【０１３９】
本明細書に記載される開示以前に、ＣＤ４７を発現するヒトＲＢＣに結合しない抗ＣＤ４７ｍＡｂは、報告されていない。
【０１４０】
本明細書に開示される抗ＣＤ４７ｍＡｂの中には、ヒトＲＢＣへの結合が低いか、又は検出可能な結合がないものもある。
【０１４１】
ＲＢＣの凝集
赤血球（ＲＢＣ）凝集又は血球凝集は、ＲＢＣが、ＲＢＣ抗原に対する抗体及びＣＤ４７などの細胞表面タンパク質をはじめとする様々な物質とのインキュベーション後に、凝集する、又は互いに凝集するとき起こる同型相互作用である。多くの抗ＣＤ４７抗体は、濃度依存的に、単離されたヒトＲＢＣの血球凝集をインビトロで引き起こすことが報告されており、例えば、Ｂ６Ｈ１２、ＢＲＩＣ１２６、ＭＡＢＬ−１、ＭＡＢＬ−２、ＣＣ２Ｃ６、及び５Ｆ９（Ｕｇｅｒ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４；７４（１９  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ５０１１、米国特許第９，０４５，５４１号明細書、Ｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．１７：１１８９−９４，２００７；Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１５：９１２−８，２００４；Ｓｉｋｉｃ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１６；３４（ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒａｃｔ ３０１９））が含まれる。この機能的効果は、インタクトな二価抗体によるＲＢＣへの結合を必要とし、抗体断片、すなわち、Ｆ（ａｂ’）又はｓｖＦｖの何れか（Ｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．１７：１１８９−９４，２００７；Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１５：９１２−８，２００４）又はただ１つのＣＤ４７結合アームを有する二重特異性抗体（Ｍａｓｔｅｒｎａｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；  ７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ２４８２）を作製することにより低減若しくは排除することができる。細胞殺傷をはじめとするこれらの断片の他の機能的特性は、これらの断片において低下するか、又は保持されるかの何れかであることがわかっている（Ｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．１７：１１８９−９４，２００７；Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１５：９１２−８，２００４）。マウス抗体２Ｄ３は、赤血球上のＣＤ４７に結合する抗ＣＤ４７抗体の一例であるが、血球凝集を引き起こさない（米国特許第９，０４５，５４１号明細書、Ｐｅｔｒｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ４２７１）。
【０１４２】
血球凝集は、ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質を用いて、他の細胞ではなく、選択的にヒトＲＢＣとの結合を低減することにより、低減／排除されることが立証されている（Ｕｇｅｒ  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ２０１３；１２２（２１）：３９３５）。さらに、マウス抗ＣＤ４７ｍＡｂ２Ａ１及び２Ａ１のヒト化バージョンは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰαを阻止することが報告されているが、血球凝集活性を呈示しない（米国特許第９，０４５，５４１号明細書）。マウス抗ヒトＣＤ４７抗体の集団のうち少数（２３のうち３つ）は、ヒトＲＢＣの血球凝集を引き起こさないことが報告された（Ｐｉｅｔｓｃｈ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ２４７０）。従って、本明細書に記載される開示以前に、ＳＩＲＰα／ＣＤ４７結合を阻止し、ＲＢＣに対する検出可能な結合がないか、若しくは低く、且つ／又は血球凝集を引き起こさないＣＤ４７ｍＡｂを同定する必要があった。用語「凝集」は、細胞の凝集を指すが、用語「血球凝集」は、特定の細胞のサブセット、すなわち、ＲＢＣの凝集を指す。このように、血球凝集は、１タイプの凝集である。
【０１４３】
本明細書で使用されるとき、用語「少ない血球凝集」は、１．８５μｇ／ｍｌ超の抗ＣＤ４７ｍＡｂ濃度での測定可能なｈＲＢＣの凝集活性、及び１．８５μｇ／ｍｌ以下の濃度で測定可能な活性がないことを意味する。
【０１４４】
本明細書で使用されるとき、用語「検出可能な血球凝集がない」は、０．３ｐｇ／ｍＬ以上で、５０μｇ／ｍＬ以下の抗ＣＤ４７ｍＡｂ濃度でｈＲＢＣの測定可能な凝集活性がないことを指す。
【０１４５】
本明細書に記載される抗ＣＤ４７の一部は、ヒトＲＢＣの少ない血球凝集を引き起こすか、又は検出可能な血球凝集を引き起こさない。
【０１４６】
ＮＯ経路のモジュレーション
前述したように、ＴＳＰ１は、ＣＤ４７のリガンドでもある。ＴＳＰ１／ＣＤ４７経路は、限定されないが、血管細胞をはじめとする多くの細胞型におけるＮＯ経路の有益な作用を妨害する。ＮＯ経路は、基質としてアルギニンを用いて生物活性ガスＮＯを生成する３種の酵素（一酸化窒素シンターゼ、ＮＯＳＩ、ＮＯＳＩＩ及びＮＯＳＩＩＩ）の何れかから構成される。ＮＯは、それが生成される細胞内、又は隣接細胞中で作用して、メッセンジャー分子環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）を生成する酵素可溶性グアニリルシクラーゼを活性化することができる。ＮＯ／ｃＧＭＰ経路の適正な機能状態は、限定されないが、創傷、炎症、高血圧、代謝症候群、虚血、及びＩＲＩから生じるものをはじめとするストレスから心血管系を保護する上で必須である。これらの細胞ストレスに関連して、ＴＳＰ１／ＣＤ４７によるＮＯ／ｃＧＭＰ経路の阻害は、ストレスの作用を増悪させる。これは、ｃＧＭＰ及びｃＡＭＰの両方が、重要な保護の役割を果たす心血管系においてとりわけ問題である。虚血及び再灌流傷害が、疾患、外傷、及び手術の予後不良をもたらすか、又はそれらに寄与する多くの事例がある。
【０１４７】
本明細書に開示するように、キメラ又はヒト化抗ＣＤ４７抗体の１つ若しくは複数は、ｃＧＭＰ生成のＴＳＰ１阻害を逆転する。逆転は、完全な（＞８０％）又は中程度（２０％〜８０％）となり得る。ｃＧＭＰ生成のＴＳＰ１阻害のこの逆転は、抗ＣＤ４７ｍＡｂが、ＮＯシグナル伝達を高める能力を有することを証明するものであり、創傷、炎症、高血圧、代謝症候群、虚血、及び虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）から生じるものをはじめとするがこれらに限定されないストレスから心血管系を保護する上での有用性を示唆するであろう。別のアッセイ系、例えば、平滑筋細胞収縮も、キメラ又はヒト化抗体の一部が、ＮＯシグナル伝達の活性化によって起こる下流作用に対するＴＳＰ１の阻害作用を逆転することを示すと予想される。
【０１４８】
本明細書で開示されるように、「ＮＯ経路阻害の完全な逆転」は、負の対照であるヒト化アイソタイプ適合抗体と比較して、抗ＣＤ４７ｍＡｂによるＮＯシグナル伝達のＴＳＰ１阻害の８０％超の逆転を指す。
【０１４９】
本明細書で開示されるように、「ＮＯ経路阻害の中程度逆転」は、負の対照であるヒト化アイソタイプ適合抗体と比較して、抗ＣＤ４７ｍＡｂによるＮＯシグナル伝達のＴＳＰ１阻害の２０〜８０％の逆転を指す。
【０１５０】
本明細書で開示されるように、「ＮＯ経路阻害の逆転なし」は、負の対照であるヒト化アイソタイプ適合抗体と比較して、抗ＣＤ４７ｍＡｂによるＮＯシグナル伝達のＴＳＰ１阻害の２０％未満の逆転を指す。
【０１５１】
機能的特性の好ましい組合せ
抗ＣＤ４７ｍＡｂは、従来の技術では、本明細書に記載される機能的特徴の全部ではなく、一部の組合せと共に存在する。これまでに、ＡＢ６．１２  ＩｇＧ１、ＡＢ６．１２−ＩｇＧ４Ｐ、及びＡＢ６．１２−ＩｇＧ４ＰＥ（米国特許第９，０４５，５４１号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０１６１７９９号明細書、国際公開第２０１４／０９３６７８号パンフレット、米国特許出願公開第２０１４／０３６３４４２号明細書）並びに５Ｆ９（Ｍｏｕｎｈｏ−Ｚａｍｏｒａ  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｓｔ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ｔｏ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１５；１４４（１）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ５９６：１２７，Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１５  Ｓｅｐ  ２１；１０（９）：ｅ０１３７３４５）などのヒト化抗ＣＤ４７ｍＡｂは、ヒトＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻止して、ヒト腫瘍細胞の食作用を引き起こすことがわかっている。ヒト化ＣＤ４７ｍＡｂ  ＡＢ６．１２ＩｇＧ１、ＡＢ６．１２−ＩｇＧ４Ｐ、及びＡＢ６．１２−ＩｇＧ４ＰＥもまた、ヒトＲＢＣの血球凝集を引き起こさない（米国特許第９，０４５，５４１号明細書）。５Ｆ９ヒト化抗ＣＤ４７ｍＡｂは、ヒトＲＢＣに結合して、その血球凝集を引き起こす（Ｕｇｅｒ  Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１４；７４（１９  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ５０１１，Ｓｉｋｉｃ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１６；３４（ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒａｃｔ  ３０１９）。マウス抗ＣＤ４７ｍＡｂ  Ｂ６Ｈ１２、ＢＲＩＣ１２６、及びＣＣ２Ｃ６は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻止し、食作用を引き起こすと共に、ヒトＲＢＣに結合して、その血球凝集を引き起こす（Ｐｅｔｒｏｖａ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ４２７１，Ｓｅｉｆｆｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ９４：３６３３−３６４３，１９９９；Ｖｅｒｎｏｎ−Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：２１３０−２１３７，２０００；Ｌａｔｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２５４７−２５５４，２００１；Ｓｕｂｒａｍａｎｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  １０７：２５４８−２５５６，２００６；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１００２８−１００３６，２００２）。マウス抗ＣＤ４７ｍＡｂ  ＭＡＢＬ−１及びＭＡＢＬ−２は、ヒトＣＤ４７に結合し、腫瘍細胞死を誘導して、ＲＢＣ血球凝集を引き起こし（米国特許第８，１０１，７１９号明細書）；マウスｍＡｂ  Ａｄ２２は、ヒトＣＤ４７に結合して、腫瘍細胞死を誘導し（Ｐｅｔｔｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：４９３１−４９４２，２００１；Ｌａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７８：２３９１５−２３９２１，２００３）；マウスｍＡｂ  １Ｆ７は、ヒトＣＤ４７に結合し、ＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻止して、腫瘍細胞死を誘導する（Ｒｅｂｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０５：１８２−１９３，２００５；Ｍａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７０：３５４４−３５５３，２００３；Ｍａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６４：１０２６−１０３６，  ２００４）。
【０１５２】
本明細書に記載される抗ＣＤ４７抗体の好ましい実施形態は、さらに、ヒトの治療での使用に提案される従来技術の抗ＣＤ４７抗体により呈示されない特性の組合せも特徴とする。従って、本明細書に記載される好ましい抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大すると共に；
ｄ．感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すること
を特徴とする。
【０１５３】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさないこと
を特徴とする。
【０１５４】
本明細書に記載されるさらに別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の少ない凝集を引き起こすこと
を特徴とする。
【０１５５】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導すると共に；
ｅ．低いｈＲＢＣ結合を有すること
を特徴とする。
【０１５６】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさないと共に；
ｅ．ｈＲＢＣと結合しないこと
を特徴とする。
【０１５７】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、抗ＣＤ４７抗体は、以下：
ａ．ヒトＣＤ４７に特異的に結合し、
ｂ．ヒトＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を阻止し、
ｃ．ヒト腫瘍細胞の食作用を増大し、
ｄ．ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の凝集を引き起こさないと共に；
ｅ．低いｈＲＢＣ結合を有すること
を特徴とする。
【０１５８】
本明細書に記載される別の好ましい実施形態では、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片は、非ヒト霊長類ＣＤ４７にも特異的に結合し、ここで、非ヒト霊長類としては、限定されないが、カニクイザル、ミドリザル、アカゲザル及びリスザルが挙げられる。
【０１５９】
本明細書に記載されるさらに別の好ましい実施形態では、モノクローナル抗体、又はその抗原結合断片は、ヒト、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、及びラットＣＤ４７に結合する。
【０１６０】
本明細書には、異なる機能プロフィールを有する抗ＣＤ４７抗体が記載される。これらの抗体は、以下から選択される特性の異なる組合せを有する：１）１種若しくは複数種のＣＤ４７のホモログと交差反応性を示す；２）ＣＤ４７とそのリガンドＳＩＲＰα同士の相互作用を阻止する；３）ヒト腫瘍細胞の食作用を増大する、４）感受性ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導する；５）ヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導しない；６）ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）に対し低い結合を有する；７）ｈＲＢＣとの検出可能な結合がない；８）ｈＲＢＣの少ない凝集を引き起こす；９）ｈＲＢＣの検出可能な凝集を引き起こさない；１０）一酸化窒素（ＮＯ）経路のＴＳＰ１阻害を逆転する；及び／又は１１）ＮＯ経路のＴＳＰ１阻害を逆転しない。
【０１６１】
ＣＤ４７抗体
多くのヒトの癌は、ＣＤ４７の細胞表面発現を上方調節するため、最も高いレベルのＣＤ４７を発現する癌が、最も攻撃的で、患者の致死率が最も高いと思われる。増大したＣＤ４７発現は、ＣＤ４７担持細胞の食作用を妨げる阻害受容体であるＳＩＲＰαを介してマクロファージに「ｄｏｎ’ｔ  ｅａｔ  ｍｅ」シグナルを送ることにより、食作用によるクリアランスから癌細胞を保護すると考えられる（Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８８：２０５１−２０５４，２０００；Ｊａｉｓｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  １３８（２）：２７１−８５ｌ；Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２（６３）：６３ｒａ９４）。従って、多くの癌によるＣＤ４７発現の増大は、癌に「利己主義」の口実を与え、これが、マクロファージ及び樹状細胞による食作用によるそれらのクリアランスを遅らせる。
【０１６２】
ＣＤ４７を阻止し、ＳＩＲＰαへの結合を妨げる抗体は、マウス（異種移植片）腫瘍モデル中のヒト腫瘍において効果を示している。この特性を呈示する抗ＣＤ４７ｍＡｂをこのように阻止すると、マクロファージによる癌細胞の食作用が増大し、これによって、腫瘍負荷を減じることができ（Ｍａｊｅｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ  １３８（２）：２８６−９９；米国特許第９，０４５，５４１号明細書；Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０９（１７）：６６６２−６６６７；Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３６０：３０２−３０９；Ｃｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｅｌｌ  １４２：６９９−７１３；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２６：２５３８−２５４５）、最終的に、腫瘍に対する適応免疫応答の発生をもたらし得る（Ｔｓｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰＮＡＳ  １１０  （２７）：１１１０３−１１１０８；Ｓｏｔｏ−Ｐａｎｔｏｊａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７４  （２３）：６７７１−６７８３；Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１５）Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．２１  （１０）：１２０９−１２１５）。
【０１６３】
しかしながら、抗ＣＤ４７ｍＡｂが形質転換細胞を攻撃することができる機構があり、それらは、癌の治療にまだ利用されていない。多くのグループが、特定の抗ヒトＣＤ４７ｍＡｂがヒト腫瘍細胞の細胞死を誘導することを明らかにしている。抗ＣＤ４７ｍＡｂ  Ａｄ２２は、複数のヒト腫瘍細胞株の細胞死を誘導する（Ｐｅｔｔｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ．１６６：４９３１−４９４２，２００１；Ｌａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２３９１５−２３９２１，２００３）。ＡＤ２２は、早期のホスファチジルセリン曝露及びミトコンドリア膜電位の降下によって、急速なミトコンドリア不全及び急速な細胞死を誘導することがわかっている（Ｌａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２３９１５−２３９２１，２００３）。抗ＣＤ４７ｍＡｂ  ＭＡＢＬ−２及びその断片は、インビトロで、ヒト白血病細胞株の細胞死を誘導するが、正常細胞の細胞死は誘導せず、インビボ異種移植片モデルでは、抗腫瘍効果を有した（Ｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．  （２００７）Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．１７  （５）：１１８９−９４）。抗ヒトＣＤ４７ｍＡｂ  １Ｆ７は、ヒトＴ細胞白血病（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３５４４−５３）及び複数の乳癌（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６４（３）：１０２６−３６）の細胞死を誘導する。１Ｆ７は、補体の作用、又はＮＫ細胞、Ｔ細胞、若しくはマクロファージによる細胞媒介性殺傷なしで、ＣＤ４７担持腫瘍細胞を殺傷する。その代わり、抗ＣＤ４７ｍＡｂ  １Ｆ７は、ミトコンドリアへの直接のＣＤ４７依存的攻撃を伴う非アポトーシス機構を介して作用し、その膜電位を放出させ、細胞のＡＴＰ生成能力を破壊することにより、急速な細胞死を引き起こす。抗ＣＤ４７ｍＡｂ  １Ｆ７が、やはりＣＤ４７を発現する静止白血球を殺傷せず、形質転換により「活性化」される細胞だけを殺傷することは注目に値する。このように、正常な循環細胞（その多くが、ＣＤ４７を発現する）は、殺傷を免れるが、癌細胞は、腫瘍傷害性ＣＤ４７ｍＡｂにより選択的に殺傷される（Ｍａｎｎａ  ａｎｄ  Ｆｒａｚｉｅｒ（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３５４４−５３）。この機構は、単にＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合を阻止することによって食作用を起こす受動的機構とは対照的に、腫瘍細胞に対する率先した、選択的且つ直接的攻撃として考えることができる。重要なことには、ｍＡｂ  １Ｆ７は、ＳＩＲＰαとＣＤ４７の結合も阻止する（Ｒｅｂｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２０５：１８２−１９３，２００５）ことから、２つの機構：（１）直接の腫瘍毒性、及び（２）癌細胞の食作用の発生によって作用することができる。両方の機能を達成することができる単一ｍＡｂは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合だけを阻止するものより優れていると考えられる。
【０１６４】
組織虚血期間の後、血流の開始は、「虚血再灌流傷害」若しくは「ＩＲＩ」と呼ばれる損傷を引き起こす。ＩＲＩは、一定の時間にわたり血流を停止する必要があったためにＩＲＩが起こる様々な外科的処置において、治療介入により血流が止められ、後に回復される外傷の様々な形態／原因において、並びに臓器移植、心臓／肺バイパス手術、切断身体部分の再付着、再建及び美容手術、並びに血流の停止及び再開を伴う他の状況などに必要な処置において、予後不良に寄与する。虚血自体は、様々な生理学的変化を引き起こし、それ自体で、最終的には細胞及び組織壊死、ひいては死を招く。再灌流は、活性酸素種の発生、血栓症、炎症及びサイトカイン媒介性損傷をはじめとする、それ自体の一連の損傷事象を引き起こす。ＴＳＰ１−ＣＤ４７系により制限される経路は、ＮＯ経路をはじめとする、ＩＲＩの損傷に取り組む上でまさに最も有益なものである。このように、本明細書に開示される抗体を用いるなどしてＴＳＰ１−ＣＤ４７経路を阻止すれば、これらの内在性保護経路のより頑健な機能状態がもたらされるであろう。抗ＣＤ４７ｍＡｂは、腎温虚血（Ｒｏｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．２３：１５３８−１５５０，２０１２）、肝虚血再灌流傷害（Ｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｕｒｇｅｒｙ．１４４：７５２−７６１，２００８）、腎移植（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．９８：３９４−４０１，２０１４；Ｒｏｇｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒａｎｔｉｏｎａｌ．９０：３３４−３４７，２０１６））及び脂肪肝をはじめとする肝移植（Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｌｉｖｅｒ  Ｔｒａｎｓｐｌ．２１：４６８−４７７，２０１５；Ｘｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．１００：１４８０−１４８９，２０１６）のげっ歯類モデルにおいて臓器損傷を軽減することが立証されている。さらに、抗ＣＤ４７ｍＡｂは、肺動脈高血圧のモノクロタリンモデルにおいて、右心室収縮期圧及び右心室肥大の有意な軽減をもたらした（Ｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ．９３：６８２−６９３，２０１２）。皮膚弁モデルの研究は、抗ＣＤ４７ｍＡｂを用いるなどしたＣＤ４７のモジュレーションが、ＴＳＰ１媒介性ＣＤ４７シグナル伝達を阻害することを証明した。これによって、ＮＯ経路の活性が増大し、ＩＲＩの軽減をもたらした（Ｍａｘｈｉｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｌａｓｔ  Ｒｅｃｏｎｓｔｒ  Ｓｕｒｇ．１２４：１８８０−１８８９，２００９；Ｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．２７：２５８２−２５８８，２００７；Ｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ．９：８３３−８４１，２００８；Ｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎ  Ｓｕｒｇ．２４７：１８０−１９０，２００８）
【０１６５】
また、抗ＣＤ４７ｍＡｂは、他の心血管疾患のモデルにおいて効果的であることもわかっている。圧負荷左心室心不全のマウス大動脈縮窄モデルにおいて、抗ＣＤ４７ｍＡｂは、心筋肥大を軽減し、左心室線維症を低減し、左心室重量の増加を予防し、心室硬度を低下させると共に、圧容積ループプロフィールの変化を正常化した（Ｓｈａｒｉｆｉ−Ｓａｎｊａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃ．，２０１４）。抗ＣＤ４７ｍＡｂは、複数のマウスモデルにおいて動脈硬化を改善した（Ｋｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．，２０１６）。
【０１６６】
癌適用
限定されないが、下記を含む感受性血液癌及び固形腫瘍を有する患者に好ましくは非経口的に投与することができる癌治療薬として有効な抗ＣＤ４７ｍＡｂ及びその抗原結合断片が本明細書に開示される：全身性肥満細胞症、急性リンパ性（リンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄増殖性疾患／腫瘍、単球性白血病、及びプラズマ細胞白血病をはじめとする白血病；多発性骨髄腫（ＭＭ）；ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ  Ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）；ホジキンリンパ腫、並びに例えば、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大病変（ｂｕｌｋｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ）ＮＨＬなどの非ホジキンリンパ腫をはじめとする、組織球性リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫を含むリンパ腫；卵巣癌、乳癌、子宮内膜癌、結腸癌（大腸癌）、直腸癌、膀胱癌、尿路上皮癌、肺癌（非小細胞肺癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌）、気管支癌、骨癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、肝細胞癌（肝臓癌、肝癌）、胆嚢癌、胆管癌、食道癌、腎細胞癌、甲状腺癌、頭部及び頚部の扁平上皮癌（頭部及び頚部癌）、精巣癌、内分泌腺癌、副腎腺癌、脳下垂体癌、皮膚癌、軟組織の癌、血管の癌、脳腫瘍、神経癌、眼の癌、髄膜癌、中咽頭癌、下咽頭癌、子宮頸癌、及び子宮癌、膠芽腫、髄芽腫、星細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、ガストリノーマ、神経芽細胞腫、骨髄異形成症候群などの固形腫瘍、並びに限定されないが、骨肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、滑膜肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、横紋筋肉腫、及び軟骨肉腫などの肉腫；並びに黒色腫。
【０１６７】
癌の治療
当業者には公知のように、単剤療法又は処置が、疾患若しくは病状を治療する、又は治癒させる上で十分でない場合もあることから、癌治療には往々にして併用療法が使用される。従来の癌治療は、多くの場合、相加若しくは相乗効果を達成するための手術、放射線治療、細胞傷害性薬物の組合せの投与、並びにこれらのアプローチの何れか若しくは全部の組合せを含む。特に有用な化学療法及び生物学的療法の併用では、様々な作用機構を介して機能する薬物を使用して、癌細胞の制御若しくは殺傷を増大し、癌細胞の成長を制御する免疫系の能力を増大し、療法中の薬物耐性の可能性を低減すると共に、個々の薬物の低用量の使用を可能にすることによって、考えられる毒性の重複を最小限にする。
【０１６８】
本開示の方法に包含される併用療法に有用な従来の抗腫瘍／抗悪性腫瘍薬のクラスは、例えば、以下：Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｔｗｅｌｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１０）Ｌ．Ｌ．Ｂｒｕｎｔｏｎ，Ｂ．Ａ．Ｃｈａｂｎｅｒ，ａｎｄ  Ｂ．Ｃ．Ｋｎｏｌｌｍａｎｎ  Ｅｄｓ．，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ＶＩＩＩ，“Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ”，Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ６０−６３，ｐｐ．１６６５−１７７０，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹに開示されており、例えば、アルキル化剤、抗代謝薬、天然産物、様々な薬剤、ホルモン及びアンタゴニスト、標的薬、モノクローナル抗体並びに他のタンパク質治療薬が挙げられる。
【０１６９】
上記に加えて、本開示の方法は、癌適用の治療に関し、手術、放射線により、及び／又は限定されないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、核酸治療薬をはじめとする、腫瘍状態を治療するために通常使用されているか、若しくは現在開発中の化学小分子又は生物学的製剤を有効量で、そうした治療が必要な患者に投与することによって、患者を治療することをさらに含む。これは、本明細書に開示されるもの以外に、抗体及び抗原結合断片、サイトカイン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡが挙げられる。
【０１７０】
本明細書に開示され、請求される治療法は、本明細書に開示される抗体を単独で、及び／又は互いに組み合わせて、及び／又はＣＤ４７に結合する本開示のその抗原結合断片と一緒に、及び／又は適切な生物／治療活性を呈示する競合抗体と一緒に使用すること、並びに例えば最大の治療効果を達成するためのこれらの抗体化合物のあらゆる組合せの使用を含む。
【０１７１】
さらに、本開示の治療方法は、これらの抗体、その抗原結合断片、競合抗体及びそれらの組合せと、具体的な適用について所望の治療効果を達成するために適切に組み合わせた（１）手術、放射線、抗腫瘍薬、抗悪性腫瘍薬、及びこれらの何れかの組合せから選択される何れか１種若しくは複数種の抗腫瘍薬治療、又は（２）何れか１種若しくは複数種の抗腫瘍生物剤、又は（３）当業者には明らかな（１）若しくは（２）の何れかの同等物との併用も包含する。
【０１７２】
腫瘍抗原に対するＴ細胞応答に影響を与える共刺激若しくは阻害相互作用をモジュレートすることによって癌への免疫応答を増大する抗体及び小分子薬物（免疫チェックポイントの阻害剤及び共刺激分子のモジュレータなど）もまた、本開示に包含される併用療法に関して特に有利であり、このようなものとして、限定されないが、他の抗ＣＤ４７抗体がある。ＣＤ４７タンパク質に結合する治療薬、例えば、ＣＤ４７に結合して、ＣＤ４７及びＳＩＲＰα同士の相互作用を防止する抗体又は小分子の投与を患者に投与すると、食作用による癌細胞のクリアランスが起こる。ＣＤ４７タンパク質に結合する治療薬は、以下：ＣＤ７０（クラスター分類７０）、ＣＤ２００（ＯＸ−２膜糖タンパク質、クラスター分類２００）、ＣＤ１５４（クラスター分類１５４、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４０リガンド、クラスター分類４０リガンド）、ＣＤ２２３（リンパ球活性化遺伝子３、ＬＡＧ３、クラスター分類２２３）、ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）、ＧＩＴＲ（ＴＮＦＲＳＦ１８、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲ関連タンパク質、活性化誘導性ＴＮＦＲファミリー受容体、ＡＩＴＲ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１８）、ＣＤ２８（クラスター分類２８）、ＣＤ４０（クラスター分類４０、Ｂｐ５０、ＣＤＷ４０、ＴＮＦＲＳＦ５、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５、ｐ５０）、ＣＤ８６（Ｂ７−２、クラスター分類８６）、ＣＤ１６０（クラスター分類１６０、ＢＹ５５、ＮＫ１、ＮＫ２８）、ＣＤ２５８（ＬＩＧＨＴ、クラスター分類２５８、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１４、ＴＮＦＳＦ１４、ＨＶＥＭＬ、ＨＶＥＭリガンド、ヘルペスウイルスエントリーメディエータリガンド、ＬＴｇ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４、ヘルペスウイルスエントリーメディエータ、クラスター分類２７０、ＬＩＧＨＴＲ、ＨＶＥＡ）、ＣＤ２７５（ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳリガンド、誘導性Ｔ細胞共刺激リガンド、クラスター分類２７５）、ＣＤ２７６（Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７ホモログ３、クラスター分類２７６）、ＯＸ４０Ｌ（ＯＸ４０リガンド）、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ホモログ４、ＶＴＣＮ１、Ｖセットドメイン含有Ｔ細胞活性化阻害剤１）、ＧＩＴＲＬ（グルココルチコイド誘導腫瘍壊死因子受容体−リガンド、グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲリガンド）、４−１ＢＢＬ（４−１ＢＢリガンド）、ＣＤ３（クラスター分類３、Ｔ３Ｄ）、ＣＤ２５（ＩＬ２Ｒα、クラスター分類２５、インターロイキン−２受容体α鎖、ＩＬ−２受容体α鎖）、ＣＤ４８（クラスター分類４８、Ｂリンパ球活性化マーカ、ＢＬＡＳＴ−１、シグナル伝達リンパ球活性化分子２、ＳＬＡＭＦ２）、ＣＤ６６ａ（Ｃｅａｃａｍ−１、癌胎児性抗原関連細胞接着分子１、胆汁糖タンパク質、ＢＧＰ、ＢＧＰ１、ＢＧＰＩ、クラスター分類６６ａ）、ＣＤ８０（Ｂ７−１、クラスター分類８０）、ＣＤ９４（クラスター分類９４）、ＮＫＧ２Ａ（ナチュラルキラー群２Ａ、キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーＤメンバー１、ＫＬＲＤ１）、ＣＤ９６（クラスター分類９６、ＴＡｃｔＩＬＥ、Ｔ細胞活性化増大後期発現）、ＣＤ１１２（ＰＶＲＬ���、ネクチン、ポリオウイルス受容体関連２、ヘルペスウイルスエントリーメディエータＢ、ＨＶＥＢ、ネクチン−２、クラスター分類１１２）、ＣＤ１１５（ＣＳＦ１Ｒ、コロニー刺激因子１受容体、マクロファージコロニー刺激因子受容体、Ｍ−ＣＳＦＲ、クラスター分類１１５）、ＣＤ２０５（ＤＥＣ−２０５、ＬＹ７５、リンパ球抗原７５、クラスター分類２０５）、ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ１、クラスター分類２２６、ＤＮＡＸ補助分子−１、ＰＴＡ１、血小板及びＴ細胞活性化抗原１）、ＣＤ２４４（クラスター分類２４４、ナチュラルキラー細胞受容体２Ｂ４）、ＣＤ２６２（ＤＲ５、ＴｒａｉｌＲ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１０ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、クラスター分類２６２、ＫＩＬＬＥＲ、ＴＲＩＣＫ２、ＴＲＩＣＫＢ、ＺＴＮＦＲ９、ＴＲＩＣＫ２Ａ、ＴＲＩＣＫ２Ｂ）、ＣＤ２８４（トール様受容体−４、ＴＬＲ４、クラスター分類２８４）、ＣＤ２８８（トール様受容体−８、ＴＬＲ８、クラスター分類２８８）、ＴＮＦＳＦ１５（腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１５、血管内皮細胞増殖因子、ＶＥＧＩ、ＴＬ１Ａ）、ＴＤＯ２（トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ、ＴＰＨ２、ＴＲＰＯ）、ＩＧＦ−１Ｒ（１型インスリン様増殖因子）、ＧＤ２（ジシアロガングリオシド２）、ＴＭＩＧＤ２（貫膜及び免疫グロブリンドメイン含有タンパク質２）、ＲＧＭＢ（ＲＧＭドメインファミリー、メンバーＢ）、ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶ−ドメイン免疫グロブリン含有抑制物質、Ｂ７−Ｈ５、Ｂ７ホモログ５）、ＢＴＮＬ２（ブチロフィリン様タンパク質２）、Ｂｔｎ（ブチロフィリンファミリー）、ＴＩＧＩＴ（Ｉｇ及びＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体、Ｖｓｔｍ３、ＷＵＣＡＭ）、シグレック（Ｓｉｇｌｅｃ）（シアル酸結合Ｉｇ様レクチン）、ニューロフィリン（Ｎｅｕｒｏｐｈｉｌｉｎ）、ＶＥＧＦＲ（血管内皮細胞増殖因子受容体）、ＩＬＴファミリー（ＬＩＲ、免疫グロブリン様転写物ファミリー、白血球免疫グロブリン様受容体）、ＮＫＧファミリー（ナチュラルキラー群ファミリー、Ｃ型レクチン貫膜受容体）、ＭＩＣＡ（ＭＨＣクラスＩポリペプチド関連配列Ａ）、ＴＧＦβ（トランスフォーミング増殖因子β）、ＳＴＩＮＧ経路（インターフェロン遺伝子経路の刺激因子）、アルギナーゼ（Ａｒｇｉｎａｓｅ）（アルギニンアミジナーゼ、カナバナーゼ、Ｌ−アルギナーゼ、アルギニントランスアミジナーゼ）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮成長因子受容体変異体ＩＩＩ）、及びＨＨＬＡ２（Ｂ７−Ｈ７、Ｂ７ｙ、ＨＥＲＶ−Ｈ  ＬＴＲ結合タンパク質２、Ｂ７ホモログ７）のうち１つ又は複数の別の細胞標的に対する本明細書に開示の抗体、化学小分子若しくは生物学的製剤などの治療薬と併用され、また、以下：ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１、ＰＤ−１、ＣＤ２７９、クラスター分類２７９）、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７ホモログ１、プログラム細胞死リガンド１、ＣＤ２７４、クラスター分類２７４）、ＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ、プログラム細胞死１リガンド２、ＰＤＣＤ１ＬＧ２、ＣＤ２７３、クラスター分類２７３）、ＣＴＬＡ−４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４、ＣＤ１５���、クラスター分類１５２）、ＢＴＬＡ（Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ、ＣＤ２７２、クラスター分類２７２）、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ、ＩＤＯ１）、ＴＩＭ３（ＨＡＶＣＲ２、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体２、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−３、ＫＩＭ−３、肝障害分子３、ＴＩＭＤ−３、Ｔ細胞免疫グロブリンムチン−ドメイン３）、Ａ２Ａアデノシン受容体（ＡＤＯ受容体）、ＣＤ３９（細胞外ヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼ１、クラスター分類３９、ＥＮＴＰＤ１）、並びにＣＤ７３（細胞外５’−ヌクレオチダーゼ、５’−ヌクレオチダーゼ、５’−ＮＴ、クラスター分類７３）、ＣＤ２７（クラスター分類２７）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８、クラスター分類２７８、誘導性Ｔ細胞共刺激因子）、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ、クラスター分類１３７、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９、ＴＮＦＲＳＦ９）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４、クラスター分類１３４）、並びにＴＮＦＳＦ２５（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー２５）の阻害剤も、抗体、小分子、及びアゴニストを含め、本発明で特に考慮される。さらに別の薬剤として、ＩＬ−１０（インターロイキン−１０、ヒトサイトカイン合成阻害因子、ＣＳＩＦ）及びガレクチンがある。
【０１７３】
ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）（イピリムマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）は、承認された抗ＣＴＬＡ−４抗体の一例である。
【０１７４】
ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）（ペムブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ）及びＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ）は、承認された抗ＰＤ−１抗体の一例である。
【０１７５】
ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（商標）（アテゾリズマブ；Ｒｏｃｈｅ）は、承認された抗ＰＤ−Ｌ１抗体の一例である。
【０１７６】
虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）関連、自己免疫、自己炎症性、炎症性、心血管状態及び疾患
本明細書に開示されるＣＤ４７ｍＡｂ又はその抗原結合断片の投与を用いて、ＩＲＩが寄与する特徴であるいくつかの疾患及び病状を治療し、様々な自己免疫、自己炎症性、炎症性及び心血管疾患を治療することができる。これらには、以下のものが含まれる：臓器摘出前に本発明のｍＡｂ若しくはその抗原結合断片がドナー、臓器保存液中の摘出ドナー臓器、レシピエント患者、又はそれらの任意の組合せに投与される臓器移植；皮膚移植；ｍＡｂ若しくは断片が、患部組織に注射により局所的に、又は患者に非経口的に投与される、外科的切除又は組織再建；身体部分の再付着；外傷の治療；肺高血圧；肺動脈高血圧；鎌状赤血球症（発症）；心筋梗塞；脳血管疾患；卒中；手術により誘導された虚血；急性腎臓疾患／腎不全；ＩＲＩが発生し、疾患の病因に寄与する他の状態；関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、狼瘡、全身性エリテマトーデス、若年性関節リウマチ、若年性突発性関節炎、グレーブス病、橋本病、アジソン病、セリアック病、皮膚筋炎、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、シェーグレン症候群、Ｉ型糖尿病、脈管炎、ブドウ膜炎及び強直性脊椎炎などの自己免疫及び炎症性疾患；家族性地中海熱、新生児発症多臓器性炎症性疾患、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体関連周期性発熱症候群、インターロイキン１受容体アンタゴニストの欠損、ベーチェット病などの自己免疫疾患；冠状動脈性心疾患、冠動脈疾患、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全、及び左心室心不全などの心血管疾患。
【０１７７】
本発明の抗ＣＤ４７ｍＡｂ及びその抗原結合断片はまた、治療を必要とする被験者における組織灌流を増大するために使用することもできる。こうした被験者は、増大した組織灌流の必要性を示す診断方法によって特定することができる。さらに、組織灌流の必要性は、皮膚手術、軟組織手術、複合組織手術、皮膚移植手術、固形臓器の切除、臓器移植手術、又は再付着又は付属器若しくは他の身体部分から選択される手術を被験者が受けた、受けている、受ける予定がある理由によっても生じ得る。
【０１７８】
虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）関連適用治療
本開示の方法、例えば、ＩＲＩ関連適用の治療に関する方法は、ＣＤ４７タンパク質に結合する有効量の治療薬と一酸化窒素供与体、前駆体、若しくはその両方；一酸化窒素生成局所薬；可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤；環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤；又は上記の何れかの任意の組合せを、治療が必要な患者に投与することをさらに含んでもよい。
【０１７９】
これらの方法では、一酸化窒素供与体又は前駆体は、ＮＯガス、二硝酸イソソルビド、亜硝酸塩、ニトロプルシド、ニトログリセリン、３−モルホリノシドノニミン（ＳＩＮ−１）、Ｓ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（ＳＮＡＰ）、ジエチレントリアミン／ＮＯ（ＤＥＴＡ／ＮＯ）、Ｓ−ニトロソチオール、Ｂｉｄｉｌ（登録商標）、及びアルギニンから選択することができる。
【０１８０】
可溶性グアニリルシクラーゼを活性化する薬剤は、血管細胞中のｃＧＭＰレベルを高める非ＮＯ（一酸化窒素）ベースの可溶性グアニリルシクラーゼ化学活性化物質であってよい。このような薬剤は、ＮＯ結合モチーフ以外の領域内の可溶性グアニリルシクラーゼと結合して、局所ＮＯ又は活性酸素ストレス（ＲＯＳ）とは関係なく酵素を活性化する。可溶性グアニリルシクラーゼの化学活性化物質の非限定的例としては、有機硝酸塩（Ａｒｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：１８２５３−１８２５６）；プロトポルフィリンＩＸ（Ｉｇｎａｒｒｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７９：２８７０−２８７３）；ＹＣ−１（Ｋｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８４：４２２６−４２３３）；ＢＡＹ  ４１−２２７２及びＢＡＹ  ４１−８５４３（Ｓｔａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００１  Ｎａｔｕｒｅ  ４１０（６８２５）：２１２−５）、ＣＭＦ−１５７１、及びＡ−３５０６１９（Ｅｖｇｅｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．５：７５５−７６８に論評）；ＢＡＹ  ５８−２６６７（Ｃｉｎａｃｉｇｕａｔ；Ｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４８（１２）：１４００&#8211;１０）；ＢＡＹ  ６３−２５２１（Ｒｉｏｃｉｇｕａｔ；Ｍｉｔｔｅｎｄｏｒｆ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ｃｈｅｍｍｅｄｃｈｅｍ  ４（５）：８５３&#8211;６５）が挙げられる。さらに別の可溶性グアニリルシクラーゼ活性化物質は、Ｓｔａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １２３：２２６３−２２７３；Ｄｅｒｂｙｓｈｉｒｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｌｅｔｔａ（２０１２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８１：５３３−５５９、及びＮｏｓｓａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ２９０８０５，ｐａｇｅｓ  １−１２に開示されている。
【０１８１】
環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼを阻害する薬剤は、タダラフィル、バルデナフィル、ウデナフィル、シルデナフィル及びアバナフィルから選択することができる。
【０１８２】
自己免疫、自己炎症性、炎症性疾患及び心血管疾患の治療
自己免疫、自己炎症性、炎症性疾患及び／又は心血管疾患の治療のためのＣＤ４７タンパク質に結合する治療薬は、抗体、化学小分子などの１種又は複数種の治療薬、又は生物学的若しくは医療若しくは外科的処置と組み合わせることができ、そうしたものとして、限定されないが、下記のものが挙げられる。自己免疫、自己炎症性及び炎症性疾患の治療の場合、併用療法薬は、以下の通りである：ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、メトトレキサート、ミノシクリン、スルファサラジン、アバタセプト、リツキシマブ、トシリズマブ、抗ＴＮＦ阻害剤若しくは遮断薬（アダリムマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブ）、非ステロイド性抗炎症薬、グルココルチコイド、コルチコステロイド、静注用免疫グロブリン、アナキンラ、カナキヌマブ、リロナセプト、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、ベリムマブ、βインターフェロン、グラチラマー酢酸塩、フマル酸ジメチル、フィンゴリモド、テリフルノミド、ナタリズマブ、５−アミノサリチル酸、メサラミン、シクロスポリン、タクロリムス、ピメクロリムス、ベドリズマブ、ウステキヌマブ、セクキヌマブ、イキセキズマブ、アプレミラスト、ブデソニド及びトファシチニブ。アテローム性動脈硬化症の治療の場合には、併用療法薬又は処置は、次の通りである：経皮的冠動脈インターベンション（冠動脈形成術及びステント挿入）、冠動脈バイパス移植術、及び頸動脈血管内膜切除術をはじめとする医療処置及び／又は手術；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（ラミプリル、キナプリル、カプロプリル、及びエナラプリルなど）、カルシウムチャネル遮断薬（アミオジピン、ニフェジピン、ベラパミル、フェロジピン及びジルチアゼムなど）、アンギオテンシン受容体遮断薬（エポサルタン、オルメサルテン、アジルサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、ロサルタン、カンデサルタン、及びイルベサルタンなど）、エゼチミブとシムバスタチンの組合せ、ＰＣＳＫ９阻害剤（アリロクマブ及びエボロクマブなど）、アナセトラピブ、及びＨＭＧ−ＣｏＡ阻害剤（アトルバスタチン、プラバスタチン、シムバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチン、ロバスタチン及びフルバスタチンなど）をはじめとする、治療薬。心不全の治療の場合、併用療法薬は次の通りである：ＡＣＥ阻害剤、アンギオテンシン受容体阻害剤、アンギオテンシン受容体ネプリルシン阻害剤（サクビトリルとバルサルタンの組合せなど）、利尿薬、ジゴキシン、循環作動薬、β遮断薬及びアルドステロンアンタゴニスト。肺高血圧の治療の場合には、併用療法薬は次の通りである：シルデナフィル、タダラフィル、アンブリセンタン、ボセンタン、マシテンタン、リオシグアト、トレプロスチニル、エポプロステノール、イロプロスト、及びセレキシパグ。
【０１８３】
本明細書に開示される通り、抗ＣＤ４７ｍＡｂは、併用療法薬又は医療若しくは外科的処置の前、それと同時、又はその後に投与する。
【０１８４】
本発明で考慮される併用療法のための別の有用なクラスの化合物としては、ＳＩＲＰαとＣＤ４７の結合を阻害、若しくは妨害する、ＳＩＲＰαに対する抗体などのＳＩＲＰα／ＣＤ４７結合のモジュレータ、並びにこのリガンドの可溶性タンパク質断片、又はＣＤ４７自体が挙げられる。本発明に包含される治療方法が、本明細書に開示される抗体単独での使用、互いに組み合わせた使用、及び／又はその抗体結合断片と組み合わせた使用、例えば、これらの抗体化合物の考えられるあらゆる組合せを含むことに留意すべきである。
【０１８５】
これらの事例は、本開示の様々な実施形態を示すが、これらの具体的に開示される実施形態のみに本開示を限定するものとみなすべきではない。
【０１８６】
ＣＤ４７発現の診断薬
診断薬（補完的及びコンパニオンを含む）は、腫瘍学の分野における重点分野であった。Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｔａｒｃｅｖａ（ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｉｒｅｓｓａ（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、及び（Ｅｒｂｉｔｕｘ  Ｉｍｃｌｏｎｅ／Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）などの標的治療薬のために、多数の診断アッセイが開発されている。本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂ抗体は、診断薬用途での使用に特に適している。従って、本開示は、本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂを用いた腫瘍及び／又は免疫細胞におけるＣＤ４７発現を測定する方法を提供する。
【０１８７】
本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂは、患者の腫瘍サンプル中に存在する腫瘍及び／又は免疫細胞中のＣＤ４７発現を測定するための診断アッセイ及び／又はインビトロ方法で使用してもよい。特に、本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂは、基準レベルと比較して、患者のサンプル中に存在する腫瘍及び／又は免疫細胞の約１％以上のＣＤ４７に結合し得る。別の実施形態では、抗ＣＤ４７ｍＡｂは、例えば、基準レベルと比較して、患者のサンプル中に存在する腫瘍及び／又は免疫細胞の約５％以上のＣＤ４７を結合し得るか、あるいは、基準レベルと比較して、少なくとも１０％、又は少なくとも２０％、又は少なくとも３０％、又は少なくとも４０％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも６０％、又は少なくとも７０％、又は少なくとも８０％、又は少なくとも９０％、又は１０〜１００％に結合する。また別の実施形態では、抗ＣＤ４７ｍＡｂは、患者のサンプル中に存在する腫瘍及び／又は免疫細胞のＣＤ４７に、基準レベルと比較して少なくとも約２倍まで、あるいは基準レベルと比較して、少なくとも約３倍、又は少なくとも約４倍、又は少なくとも約５倍又は少なくとも約１０倍増加まで、又は２倍〜１０倍以上結合し得る。本明細書に記載されるように、患者のサンプル中のＣＤ４７発現の測定は、候補薬療法の開発及び使用、特にＣＤ４７受容体が特定の役割を果たす固形及び血液癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、アテローム性動脈硬化症、心不全を治療するための抗ＣＤ４７抗体の使用に関する意思決定を可能にする生物学的及び／又は臨床的情報を提供する。
【０１８８】
一実施形態では、インビトロ方法は、患者のサンプルを取得するステップ、配列番号６５の配列内のエピトープと特異的に結合するモノクローナル抗体、又はその抗原結合断片を患者のサンプルと接触させるステップ、及び患者のサンプルに対する抗体の結合についてアッセイするステップを含み、ここで、患者のサンプルに対する抗体の結合が、患者のサンプル中のＣＤ４７発現を示している。
【０１８９】
別の実施形態では、インビトロ方法のための好ましいＣＤ４７抗体、又はその抗原結合断片は、以下の組合せから挙げられる重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）の組合せ：
（ｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１０１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖と配列番号１０３のアミノ酸配列を含む軽鎖；
を含むものであり、ここで、ＶＨアミノ酸配列は、それと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％同一であり、ＶＬアミノ酸配列は、それと少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％若しくは９９％同一である。
【０１９０】
従って、本開示の診断アッセイは、患者のサンプル中の腫瘍及び／又は免疫細胞を抗ＣＤ４７ｍＡｂ、又はその抗原結合断片と接触させるステップ、並びに患者の腫瘍サンプルに対する抗ＣＤ４７ｍＡｂの結合をアッセイするステップを含んでもよく、ここで、患者の腫瘍サンプルに対する抗ＣＤ４７ｍＡｂの結合が、ＣＤ４７発現を示している。好ましくは、患者のサンプルは、腫瘍細胞を含むサンプルである。この場合、腫瘍細胞に対する本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂ、又はその抗原結合断片の結合をＣＤ４７発現について評価することができる。患者の腫瘍サンプルの腫瘍細胞及び／又は免疫細胞によるＣＤ４７発現のレベルから、患者の臨床転帰を予測し得る。
【０１９１】
患者のサンプル中の細胞に対する抗ＣＤ４７ｍＡｂの結合増加は、ＣＤ４７発現の増大と関連している。一実施形態では、本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂは、患者のサンプル中の腫瘍細胞の約５％以上に結合し得るが、これは、患者が、固形及び血液癌に対する迅速な介入から利益を受け得ることを示すと考えられる。この種の診断アッセイは、本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂとの比較的高い結合、すなわち、ＣＤ４７発現の増大を有する固形及び血液癌のために好適な治療レジメンを決定するために使用してもよい。
【０１９２】
本明細書に開示される診断アッセイは、多数の利点を有することが理解されよう。これらの利点の最も重要なものは、本開示の診断アッセイが、腫瘍及び／又は免疫細胞中のＣＤ４７発現のより大きな信頼度をユーザに賦与し得ることである。本開示の診断アッセイの感度が向上したことにより、これまでよりも低いレベルで患者のサンプル中のＣＤ４７の検出が可能となる。
【０１９３】
本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂは、様々な形態の癌に関する診断アッセイとして使用することができる。ＣＤ４７発現について有利に調べることができる具体的な形態の癌としては、限定されないが、白血病、リンパ腫、及び固形腫瘍をはじめとする、感受性血液癌及び固形腫瘍が挙げられる。
【０１９４】
本開示の診断アッセイでは、ＣＤ４７発現を測定するために、抗ＣＤ４７ｍＡｂの結合を検出する任意の好適な手段を使用してもよい。好適な方法は、本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂを標識するために使用される任意のリポータ部分の性質に基づいて選択してもよい。好適な技術としては、何ら限定されないが、フローサイトメトリー、及び酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）並びにナノ粒子を使用するアッセイが挙げられる。本発明の診断アッセイは、腫瘍サンプルを本開示の抗ＣＤ４７ｍＡｂに曝露した後、免疫組織化学によって細胞標識のレベルを評価する免疫組織化学を含むものであるのが特に好ましい。
【実施例】
【０１９５】
実施例１
アミノ酸配列
軽鎖ＣＤＲ
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【０１９６】
重鎖ＣＤＲ
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【０１９７】
マウス軽鎖可変ドメイン
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【０１９８】
マウス重鎖可変ドメイン
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【０１９９】
ヒト軽鎖可変ドメイン
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【０２００】
ヒト重鎖可変ドメイン
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【０２０１】
ヒトＩｇＧ−Ｆｃ
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【０２０２】
ウサギＩｇＧ−Ｆｃ
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【０２０３】
キメラ及びヒト軽鎖
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【０２０４】
キメラ及びヒト重鎖
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【０２０５】
実施例２
ＣＤ４７抗体の生成
本明細書に開示されるキメラ抗体は、ヒトκ又はヒトＦｃＩｇＧ１、ＩｇＧ１−Ｎ２９７Ｑ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ、及びＩｇＧ４  ＰＥ定常ドメインとそれぞれ組み合わせた、マウス重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む。これらは、分泌シグナルを組み込むように設計し、哺乳類発現系にクローニングした後、キメラ（マウス−ヒト）抗体を産生するようにＣＨＯ細胞にトランスフェクトした。キメラ変異体は、完全長ＩｇＧ分子として発現させ、培地に分泌させた後、プロテインＡを用いて精製した。
【０２０６】
このように、本明細書に開示されるヒト化抗体は、ヒトゲノムに由来するフレームワークを含む。この集団は、ヒト生殖細胞系配列に見出される多様性を含み、インビボで機能的に発現される抗体を産生する。マウス及びキメラ（マウス−ヒト）の軽鎖及び重鎖可変領域における相補性決定領域（ＣＤＲ）が本明細書に記載されており、これらは、“Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ”，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ，ｅｄｓ．Ｓ．Ｄｕｅｂｅｌ  ａｎｄ  Ｒ．Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（２００１））に開示されている一般に認められた法則により決定した。次に、ヒト軽鎖可変ドメインを設計した。続いて、ヒト化可変ドメインを分泌シグナル並びにヒトκ及びヒトＦｃＩｇＧ１、ＩｇＧ１−Ｎ２９７Ｑ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ及びＩｇＧ４  ＰＥ定常ドメインと組み合わせて、哺乳類発現系にクローニングした後、ヒト化ｍＡｂを産生するようにＣＨＯ細胞にトランスフェクトした。ヒト化変異体は、完全長ＩｇＧ分子として発現させ、培地に分泌させた後、プロテインＡを用いて精製した。
【０２０７】
アスパラギンをグルタミンに変更する重鎖２９７位の部位指定突然変異誘発によって、非グリコシル化バージョン（ＩｇＧ１−Ｎ２９７Ｑ）を作出した（ヒトＦｃＩｇＧ１−Ｎ２９７Ｑ、配列番号５４）。セリンをプロリンに変更し、これによりインビボＦａｂアーム交換を防止するように、２２８位での部位指定突然変異誘発によって、ＩｇＧ４変異体を作出した。Ｆａｂアーム交換を妨げると共に、Ｆｃエフェクター機能をさらに低減するように、２２８位（セリンからプロリン）及び２３５位（ロイシンからグルタミン）での部位指定突然変異誘発によってＩｇＧ４二重突然変異体を作出した。ヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ、及びＩｇＧ４ＰＥ定常ドメインと同じフレーム内で重鎖可変ドメインをクローニングすることによって、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ、及びＩｇＧ４ＰＥアイソタイプを構築した（ヒトＦｃ−ＩｇＧ２、配列番号５５；ヒトＦｃ−ＩｇＧ３、配列番号５６；ヒトＦｃ−ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ、配列番号５８；ヒトＦｃ−ＩｇＧ４ＰＥ、配列番号５９）。
【０２０８】
実施例３
ＣＤ４７モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の結合
本開示のキメラ（マウス−ヒト）及びヒト化抗体の結合は、ヒトＣＤ４７でトランスフェクトしたＯＶ１０細胞（ＯＶ１０ｈＣＤ４７）又は新しく単離したヒト赤血球（ｈＲＢＣ）（その表面にＣＤ４７を展示する）を用いたＥＬＩＳＡにより決定した（Ｋａｍｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｌｏｏｄ．Ｔｒａｎｓｆｕｓ．８（４）：２６０−２６６）。
【０２０９】
細胞表面ヒトＣＤ４７を発現するヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞によるセルベースＥＬＩＳＡアッセイを用いて、ＶＬＸ４、ＶＬＸ８、及びＶＬＸ９キメラ（マウス−ヒト）並びにヒト化ｍＡｂの結合活性を決定した。１０％熱不活性化ウシ胎仔血清（ＢｉｏＷｅｓｔ；Ｓ０１５２０）を含有するＩＭＤＭ培地中で、ＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞を増殖させた。アッセイの１日前に、３×１０４個の細胞を９６ウェルセルバインドプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ♯３３００，ＶＷＲ  ♯６６０２５−６２６）にプレーティングして、アッセイ時に９５〜１００％密集とした。細胞を洗浄し、様々な濃度の精製抗体を９５％Ｏ２／５％ＣＯ２下、３７℃で１時間ＩＭＤＭ中に添加した。次に、細胞を培地で洗浄し、培地で１／２５００倍希釈したＨＲＰ標識二次抗ヒト抗体（Ｐｒｏｍｅｇａ）と一緒に３７℃でさらに１時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで３回洗浄してから、ペルオキシダーゼ基質３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンを添加した（Ｓｉｇｍａ；カタログ＃Ｔ４４４４）。０．７ＮまでのＨＣｌの添加によって反応を停止させた後、ＴｅｃａｎモデルＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００プレートリーダを用いて、４５０ｎＭでの吸光度を決定する。ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞に対するこれらのクローンの見かけ結合親和性を、非線形フィット（Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）によって決定した。
【０２１０】
また、ｈＲＢＣのヒトＣＤ４７に対するキメラ（マウス−ヒト）及びヒト化ＶＬＸ４、ＶＬＸ８、及びＶＬＸ９ｍＡｂの結合活性も、フローサイトメトリーを用いて決定した。リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．２、２．５ｍＭ  ＥＤＴＡ（ＰＢＳ＋Ｅ）の溶液中様々な濃度のキメラ又はヒト化抗体と一緒に、ｈＲＢＣを３７℃で６０分間インキュベートした。次に、細胞を常温ＰＢＳ＋Ｅで洗浄してから、ＰＢＳ＋Ｅ中のＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ；Ｃａｔａｌｏｇｕｅ♯７０９−０９６−１４９）と一緒に氷上でさらに１時間インキュベートした。細胞をＰＢＳ＋Ｅで洗浄し、Ｃ６  Ａｃｃｕｒｉ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて抗体結合を分析し、様々な抗体濃度で、蛍光強度中央値の非線形フィット（Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）によって見かけ結合親和性を決定した。
【０２１１】
ＶＬＸ４キメラ（マウス−ヒト）ｍＡｂは全て、ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞と、ピコモル（ｐＭ）範囲の見かけ親和性で結合した（表１）。
【０２１２】
同様に、ヒト化ＶＬＸ４ｍＡｂは、濃度依存的様式で（図１Ａ及び図１Ｂ）ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞と、ピコモルから低ナノモル範囲の見かけ親和性で結合した（表２）。
【０２１３】
キメラＶＬＸ４ｍＡｂは全て、ヒトＲＢＣと、ピコモル範囲の見かけＫｄ値で結合し、これらは、ＥＬＩＳＡによりＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞について得られたＫｄ値と類似していた（表１）。
【０２１４】
ヒト化ＶＬＸ４ｍＡｂ：ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｑ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｑ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿１２  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿１３  ＩｇＧ４は、ＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞について得られた値と類似するＫｄ値で、ヒトＲＢＣと結合したが、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ４  ＰＥ及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥは、ｈＲＢＣに対して低い結合を示した（図２Ａ、図２Ｂ、及び表２）。ＶＬＸ４  ＩｇＧ４ＰＥキメラｍＡｂは、腫瘍及びＲＢＣ  ＣＤ４７の両方と、同様の見かけＫｄ値で結合した（表１）ため、腫瘍細胞及びＲＢＣに対するヒト化ｍＡｂのこの結合の差は予想外であった。
【０２１５】
表１に示すように、ＶＬＸ８キメラ（マウス−ヒト）ｍＡｂは全て、濃度依存的様式でヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞と、ピコモル（ｐＭ）範囲の見かけ親和性で結合した。
【０２１６】
同様に、ヒト化ＶＬＸ８ｍＡｂは、濃度依存的様式で（図３Ａ及び図３Ｂ）ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞と、ピコモル範囲の見かけ親和性で結合した（表２）。
【０２１７】
ＶＬＸ８キメラｍＡｂは全て、ｈＲＢＣと、ピコモル範囲の見かけＫｄ値で結合し、これらは、ＥＬＩＳＡによりＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞について得られたＫｄ値と類似していた（表１）。
【０２１８】
ＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂ：ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０３  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０４  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０５  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿１１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ２、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ２、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０８並びにＶＬＸ８ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ２  ＩｇＧ２は、ＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞について得られた値と類似するＫｄ値で、ヒトＲＢＣと結合したが、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿１０  ＩｇＧ４  ＰＥは、ｈＲＢＣに対し、より低い、しかし測定可能な結合を示した（図４Ａ、図４Ｂ、及び表２）。ＶＬＸ８  ＩｇＧ４ＰＥキメラｍＡｂは、腫瘍及びＲＢＣ  ＣＤ４７の両方と、同様の見かけＫｄ値で結合した（表１）ため、腫瘍細胞及びＲＢＣに対するヒト化ｍＡｂのこの結合の差は予想外であった。
【０２１９】
表１は、ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７細胞及びヒトＲＢＣに対するＶＬＸ９マウス−ヒトキメラｍＡｂの見かけ結合親和性を示す。キメラｍＡｂは全て、ＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞と、ピコモル範囲の見かけＫｄ値で結合した。同様に、ヒト化ＶＬＸ９ｍＡｂは、濃度依存的様式で（図５Ａ及び図５Ｂ）ヒトＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞と、ピコモルからナノモル範囲の見かけ親和性で結合した（表２）。
【０２２０】
ＶＬＸ９キメラｍＡｂは全て、ｈＲＢＣと、ピコモル範囲の見かけＫｄ値で結合し、これらは、ＥＬＩＳＡによりＯＶ１０ｈＣＤ４７腫瘍細胞について得られたＫｄ値と類似していた（表１）。キメラｍＡｂとは対照的に、ＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂ：ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ２及びＶＬＸ９ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ２は、ヒトＲＢＣに対して低いが、測定可能な結合を示した（図６、表２）。ヒト化ｍＡｂＶＬＸ９ｈｕｍ＿０３、０４、０５、０６、０８、０９及び１０ＩｇＧ２は、ＲＢＣに対して測定可能な結合を全く示さなかった（表２）。ＶＬＸ９  ＩｇＧ２キメラｍＡｂは全て、腫瘍及びＲＢＣ  ＣＤ４７の両方と、同様の見かけＫｄ値で結合した（表１）ため、腫瘍細胞及びＲＢＣに対するヒト化ｍＡｂのこの結合の差は予想外であった。
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【０２２１】
フローサイトメトリーを用いて、ヒト化ＶＬＸ４、ＶＬＸ８、及びＶＬＸ９ｍＡｂの異種間結合を決定した。リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．２、２．５ｍＭ  ＥＤＴＡ（ＰＢＳ＋Ｅ）の溶液中の様々な濃度のヒト化抗体と一緒に、マウス、ラット、ウサギ又はカニクイザルＲＢＣを３７℃で６０分間インキュベートした。次に、細胞を常温ＰＢＳ＋Ｅで洗浄してから、ＰＢＳ＋Ｅ中のＦＩＴＣ標識ロバ抗ヒト抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ；カタログ＃７０９−０９６−１４９）と一緒に氷上でさらに１時間インキュベートした。細胞をＰＢＳ＋Ｅで洗浄し、Ｃ６  Ａｃｃｕｒｉ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて抗体結合を分析した。
【０２２２】
表３は、様々な抗体濃度で、蛍光強度中央値の非線形フィット（Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）によって決定したマウス、ラット、及びカニクイザル由来のＲＢＣに対するヒト化ＶＬＸ４及びＶＬＸ８ｍＡｂの見かけ結合親和性を示す。このデータは、ヒト化ＶＬＸ４及びＶＬＸ８ｍＡｂが、マウス、ラット、ウサギ（データを示していない）又はカニクイザルＲＢＣと、ピコモルからナノモル範囲の見かけＫｄ値で結合することを明らかにしている（表４）。
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【０２２３】
実施例４
ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合を阻止する
インビトロでＣＤ４７とＳＩＲＰαの結合に対するヒト化ＣＤ４７ｍＡｂの作用を評価するために、ＣＤ４７を発現するＪｕｒｋａｔＴ細胞への蛍光標識ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質の結合を用いて、次の方法を使用した。
【０２２４】
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）抗体標識キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃａｔ  Ｎｏ．Ａ２０１８６）を用いて製造者の明細書に従い、ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｃａｔ＃４５４６−ＳＡ）を標識した。１．５×１０６個のＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞を、１０％培地を含有するＲＰＭＩ中のヒト化ｍＡｂ（５μｇ／ｍｌ）、ヒト対照抗体、又は培地のみと一緒に３７℃で３０分インキュベートした。等量の蛍光標識ＳＩＲＰα−Ｆｃ融合タンパク質を添加し、３７℃でさらに３０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで１回洗浄し、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞に結合した標識ＳＩＲＰα−Ｆｃの量をフローサイトメトリーにより分析した。
【０２２５】
図７に示すように、ヒト化ＶＬＸ４、ＶＬＸ８及びＶＬＸ９ｍＡｂは、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞に発現されたＣＤ４７とＳＩＲＰαの相互作用を阻止したが、ヒト対照抗体（ＣＤ４７と結合しない）又は培地のみは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を阻止しなかった。
【０２２６】
実施例５
ＣＤ４７抗体は、食作用を増大する
インビトロでマクロファージによる腫瘍細胞の食作用に対するキメラ（マウス−ヒト）及びヒト化ＶＬＸ４、ＶＬＸ８、及びＶＬＸ９ＣＤ４７ｍＡｂの作用を評価するために、フローサイトメトリーを用いて、次の方法を使用した（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １０９（１７）：６６６２−７及びＴｓｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １１０（２７）：１１１０３−８）。
【０２２７】
ヒト由来のマクロファージを健常なヒト末梢血の白血球除去から取得し、ＡＩＭ−Ｖ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に７〜１０日にわたってインキュベートした。インビトロ食作用アッセイの場合、９６ウェルプレート内の１００ｕｌのＡＩＭ−Ｖ培地中にウェル当たり１×１０４細胞の濃度でマクロファージを再プレーティングし、２４時間にわたって付着させた。一旦エフェクターマクロファージが培養皿に付着したら、標的ヒト癌細胞（Ｊｕｒｋａｔ）を１μＭの５（６）−カルボキシフルオレセイン二酢酸Ｎ−サクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で標識してから、１ｍｌのＡＩＭ−Ｖ培地中に５×１０４細胞の濃度で（５：１の標的：エフェクター比）マクロファージ培養物に添加した。標的とエフェクター細胞の混合直後に、ＶＬＸ４、ＶＬＸ８、及びＶＬＸ９ＣＤ４７ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）を添加して、３７℃で２〜３時間インキュベートさせた。２〜３時間後、全ての貪食されていない細胞を除去し、残った細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ；Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で３回洗浄した。次に、細胞をトリプシン処理し、微小遠心管中に収集して、１００ｎｇのアロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識ＣＤ１４抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で３０分間インキュベートし、１回洗浄してから、完全な食作用を示すＣＦＳＥ＋でもあるＣＤ１４＋細胞のパーセンテージについてフローサイトメトリー（Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６；ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析した。
【０２２８】
図８に示すように、ＶＬＸ４キメラ（マウス−ヒト）ｍＡｂ：ＶＬＸ４  ＩｇＧ１、ＶＬＸ４  ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｑ、ＶＬＸ４  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ４  ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を阻止することによってヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞の食作用を増大したが、この増大した食作用は、Ｆｃ機能とは独立している。
【０２２９】
同様に、図９Ａ及び図９Ｂに示すように、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ１、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿１２  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿１３  ＩｇＧ４  ＰＥは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を阻止することによってヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞の食作用を増大した。
【０２３０】
図１０Ａに示すように、ＶＬＸ８キメラ（マウス−ヒト）ｍＡｂ：ＶＬＸ８  ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｑ及びＶＬＸ８  ＩｇＧ４  ＰＥは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を阻止することによってヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞の食作用を増大するが、この増大した食作用は、Ｆｃ機能とは独立している。
【０２３１】
同様に、図１０Ｂに示すように、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０３  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ４  ＰＥは、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を阻止することによってヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞の食作用を増大したが、この増大した食作用は、Ｆｃ機能とは独立している。
【０２３２】
図１１Ａに示すように、ＶＬＸ９  ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｑ、ＶＬＸ９  ＩｇＧ２及びＶＬＸ９  ＩｇＧ４  ＰＥキメラｍＡｂは全て、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を阻止することによってヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の食作用を増大したが、この増大した食作用は、Ｆｃ機能とは独立している。同様に、図１１Ｂに示すように、ヒト化ＶＬＸ９  ＩｇＧ２ｍＡｂは全て、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の食作用を増大した。
【０２３３】
実施例６
可溶性ＣＤ４７抗体による細胞死の誘導
一部の可溶性ＣＤ４７抗体は、腫瘍細胞の選択的細胞死を誘導することがわかっている。この癌細胞に対する選択的毒性という追加的特性は、ＣＤ４７へのＳＩＲＰαの結合を阻止するだけのｍＡｂと比較して、利点を有することが期待される。
【０２３４】
可溶性抗ＣＤ４７ｍＡｂによる細胞死の誘導は、インビトロで測定される（Ｍａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０７（７）：３５４４−５３）。インビトロでの細胞死アッセイの場合、１×１０５個の形質転換ヒトＴ細胞（Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞）を可溶性ヒト化ＶＬＸ４、ＶＬＸ８、及びＶＬＸ９ＣＤ４７ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）と一緒に３７℃で２４時間インキュベートした。細胞死が起こると、ミトコンドリア膜電位が低下し、細胞膜の内葉が反転して、ホスファチジルセリン（ＰＳ）が曝露され、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）が核ＤＮＡに組み込まれることが可能になる。これらの細胞の変化を検出するために、続いて、細胞を蛍光標識アネキシンＶ及びＰＩ又は７−アミノアクチノマイシンＤ（７−ＡＡＤ）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した後、Ａｃｃｕｒｉ  Ｃ６フローサイトメータ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、シグナルを検出した。ＰＳ曝露の増加は、アネキシンＶシグナルの増加率（％）を測定することにより決定し、細胞死率（％）は、ＰＩ又は７−ＡＡＤシグナルの増加率（％）を測定することにより決定する。治療目的のために重要なことには、これらのｍＡｂが、腫瘍細胞の細胞死を直接誘導し、殺傷のために補体又は他の細胞（例えば、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、若しくはマクロファージ）の介入を必要としないことである。このように、この機構は、他の細胞及びＦｃエフェクター機能とは独立している。従って、これらのｍＡｂから作製される治療用抗体は、ＡＤＣＣ及びＣＤＣなどのＦｃエフェクター機能を低減し、それによって、インタクトなＦｃエフェクター機能を有するヒト化ｍＡｂに共通する副作用の可能性を制限するように改変することができる。
【０２３５】
図１２Ａ及び図１２Ｂに示すように、可溶性ＶＬＸ４ヒト化ｍＡｂは、アネキシンＶ染色及び７−ＡＡＤ染色（図示していない）の増加により測定して、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ  ＡＬＬ細胞の細胞死を誘導した。ヒト化ｍＡｂ：ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ１、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ１、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿１２  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿１３  ＩｇＧ４  ＰＥは、細胞死を引き起こした。対照的に、ヒト化ｍＡｂ：ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ４  ＰＥ及びＶＬＸ４ｈｕｍ＿１１  ＩｇＧ４  ＰＥは、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の細胞死を引き起こさなかった。細胞死の誘導及び感受性癌細胞の食作用の促進は、癌の治療において付加的な望ましい抗体特性及び治療利益をもたらす。
【０２３６】
図１３Ａ及び図１３Ｂに示すように、可溶性ＶＬＸ８キメラ及びヒト化ｍＡｂは、アネキシンＶ染色及び７−ＡＡＤ染色（図示していない）の増加により測定して、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ  ＡＬＬ細胞の細胞死を誘導した。キメラｍＡｂであるＶＬＸ８  ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｑ（ｘｉ）及びＶＬＸ８  ＩｇＧ４  ＰＥ、並びにヒト化ｍＡｂであるＶＬＸ８ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ４  ＰＥは、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ  ＡＬＬ細胞の細胞死を引き起こした。対照的に、ヒト化ｍＡｂ：ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ４  ＰＥ及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿０４  ＩｇＧ４  ＰＥは、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞の細胞死を引き起こさなかった。細胞死の誘導及び感受性癌細胞の食作用の促進は、癌の治療において追加的な望ましい抗体特性及び治療利益をもたらす。
【０２３７】
図１４Ａに示すように、可溶性ＶＬＸ９キメラ抗体は、アネキシンＶ染色及び７−ＡＡＤ染色（図示していない）の増加により測定して、Ｊｕｒｋａｔ細胞の細胞死を誘導した。さらに、図１４Ｂに示すように、キメラＶＬＸ９  ＩｇＧ２ｘｉｍＡｂ並びにヒト化ｍＡｂ：ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０６  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２、及びＶＬＸ９ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ２は、Ｊｕｒｋａｔ細胞の細胞死を誘導した（アネキシンＶ染色の２倍超の増加）。対照的に、ヒト化ｍＡｂ：ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０３  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０４  ＩｇＧ２、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０５  ＩｇＧ２及びＶＬＸ９ｈｕｍ＿０１０  ＩｇＧ２は、Ｊｕｒｋａｔ細胞の細胞死を引き起こさなかった。細胞死の誘導及び感受性癌細胞の食作用の促進は、癌の治療において付加的な望ましい抗体特性及び治療利益をもたらす。
【０２３８】
実施例７
ヒト赤血球（ｈＲＢＣ）の血球凝集
Ｂ６Ｈ１２、ＢＲＩＣ１２６、ＭＡＢＬ１、ＭＡＢＬ２、ＣＣ２Ｃ６、５Ｆ９をはじめとする、多くのＣＤ４７抗体は、インビトロ又はインビボで洗浄済ＲＢＣの血球凝集（ＨＡ）を引き起こすことがわかっている（Ｐｅｔｒｏｖａ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１５；７５（１５  Ｓｕｐｐｌ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ｎｒ  ４２７１；米国特許第９，０４５，５４１号明細書；Ｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．１７：１１８９−９４，２００７；Ｋｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１５：９１２−８，２００４；Ｓｉｋｉｃ  Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１６；３４（ｓｕｐｐｌ；ａｂｓｔｒａｃｔ  ３０１９））。原則的にＫｉｋｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ（２００４）３１５：９１２−９１８により記載されるように、様々な濃度のキメラ及びヒト化ＶＬＸ４、ＶＬＸ８、及びＶＬＸ９ｍＡｂと一緒にｈＲＢＣをインキュベートした後、ｈＲＢＣの血球凝集を評価した。健常なドナーから血液を採取し、ＰＢＳ／１ｍＭ  ＥＤＴＡ／ＢＳＡで希釈（１：５０）した後、ＰＢＳ／ＥＤＴＡ／ＢＳＡで３回洗浄した。等量の抗体（各７５μｌ）と一緒にＵ底９６ウェルプレートにｈＲＢＣを添加し、３７℃で３時間、次に４℃で一晩インキュベートした。
【０２３９】
図１５Ａ並びに表１及び２に示すように、ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ１  Ｎ２９７Ｑは、ｈＲＢＣの血球凝集を引き起こしたが、ヒト化ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥｍＡｂは起こさなかった（ｍＡｂ濃度：５０μｇ／ｍｌ〜０．３ｎｇ／ｍｌ）。ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥによる血球凝集の欠如は、癌の治療において付加的な望ましい抗体特性及び治療利益をもたらす。
【０２４０】
図１５Ｂ並びに表１及び２に示すように、キメラ抗体ＶＬＸ８  ＩｇＧ４  ＰＥ（ｘｉ）及びヒト化抗体ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０９  ＩｇＧ４  ＰＥ、及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿０１０  ＩｇＧ４  ＰＥは、ｈＲＢＣの血球凝集を引き起こしたが、ＶＬＸ８ヒト化ｍＡｂ：ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０３  ＩｇＧ４  ＰＥ及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿１１  ＩｇＧ４  ＰＥは、起こさなかった（ｍＡｂ濃度：５０μｇ／ｍｌ〜０．３ｎｇ／ｍｌ）。
【０２４１】
ヒト化抗体：ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０１  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０２  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿０３  ＩｇＧ４  ＰＥ及びＶＬＸ８ｈｕｍ＿１１  ＩｇＧ４  ＰＥによる血球凝集の欠如は、癌の治療において付加的な望ましい抗体特性及び治療利益をもたらす。
【０２４２】
図１６Ａ及び図１６Ｂに示すように、キメラ抗体ＶＬＸ９  ＩｇＧ２は、ｈＲＢＣの血球凝集を引き起こしたが、ヒト化ＶＬＸ９ｍＡｂは全て、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ２を除いて、引き起こさなかった（ｍＡｂ濃度：５０ｕｇ／ｍｌ〜０．３ｐｇ／ｍｌ）。しかし、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０７によって引き起こされた血球凝集の量は、ＶＬＸ９  ＩｇＧ２キメラｍＡｂと比較して低かった。ここでも、ＶＬＸ９ヒト化ｍＡｂによる血球凝集の欠如は、癌の治療において付加的な望ましい抗体特性及び治療利益をもたらす。
【０２４３】
実施例８
インビボでの抗腫瘍活性
この実験の目的は、ＶＬＸ４＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥ、ＶＬＸ８＿１０  ＩｇＧ４  ＰＥ及びＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２により例示されるＶＬＸ４、ＶＬＸ８及びＶＬＸ９ヒト化抗体が、リンパ腫のマウス移植片モデルにおける腫瘍負荷をインビボで低減することを証明することであった。
【０２４４】
５％ＣＯ２雰囲気内の１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Ｏｍｅｇａ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｔａｒｚａｎａ，ＣＡ）を添加したＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｏｎｚａ；Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）中でラージ（Ｒａｊｉ）ヒトバーキットリンパ腫細胞（ＡＴＣＣ  ♯ＣＣＬ−８６，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を維持した。培養物を組織培養フラスコ中で拡大した。
【０２４５】
５〜６週齢の雌ＮＳＧ（ＮＯＤ−Ｃｇ−ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＩ１２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ）をＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から取得した。処置前に、マウスを順化させてから、特定の病原体フリー条件下でマイクロアイソレータケージ（Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｓｅａｆｏｒｄ，ＤＥ）内に収容した。マウスにはＴｅｋｌａｄ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｄｉｅｔ（登録商標）２９２０ｘ照射済実験動物試料（Ｅｎｖｉｇｏ，Ｆｏｒｍｅｒｌｙ  Ｈａｒｌａｎ；Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を給餌し、オートクレーブ処理済の水を無制限に供給した。手順は全て、動物実験ガイドライン（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ）に従って実施した。
【０２４６】
５×１０６個のラージ（Ｒａｊｉ）腫瘍細胞の懸濁液を含有する０．１ｍＬの３０％ＲＰＭＩ／７０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）混合物を雌ＮＳＧマウスの右脇腹に皮下接種した。接種から５日後、デジタルカリバーを用いて、腫瘍の短径及び長径を測定した。式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（ａ×ｂ２／２）（式中、「ｂ」は、最小直径であり、「ａ」は、最大直径である）を使用して、腫瘍体積を計算した。３１〜７４ｍｍ３の触知可能な腫瘍体積を有するマウスをランダムに８〜１０匹／グループに分け、この時点でＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８又はＰＢＳ（対照）の投与を開始した。マウスは、５ｍｇ／ｋｇの抗体５×／週の腹腔内注射により４週間にわたって処置した。腫瘍体積及び体重を週２回記録した。
【０２４７】
図１７に示すように、ヒト化ＶＬＸ４ｈｕｍ＿０７  ＩｇＧ４  ＰＥによる処置は、ラージ（Ｒａｊｉ）腫瘍の腫瘍成長を有意に抑制し（ｐ＜０．０５、二元ＡＮＯＶＡ）、インビボでの抗腫瘍効果を示している。
【０２４８】
図１８に示すように、ヒト化抗ＣＤ４７ｍＡｂ、ＶＬＸ８ｈｕｍ＿１０  ＩｇＧ４  ＰＥによる処置は、ラージ（Ｒａｊｉ）腫瘍の腫瘍成長を有意に抑制し（ｐ＜０．０００１、二元ＡＮＯＶＡ）、インビボでの抗腫瘍効果を示している。
【０２４９】
図１９に示すように、ヒト化抗ＣＤ４７ｍＡｂ、ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２による処置は、ラージ（Ｒａｊｉ）腫瘍の腫瘍成長を有意に抑制し（ｐ＜０．０５、ＡＮＯＶＡ）、インビボでの抗腫瘍効果を示している。
【０２５０】
実施例９
循環赤血球パラメータに対する作用
この実験の目的は、ヒトＲＢＣにインビトロで結合しないＶＬＸ９ヒト化抗体（表２）（ｈｕｍ１０１７＿０８ＩｇＧ２により例示）が、カニクイザルへの投与後、ヘモグロビン（Ｈｇ）又は循環ＲＢＣのいずれにも減少を引き起こさないことを立証することである。
【０２５１】
雌チャイニーズカニクイザル（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）２．５〜３ｋｇを動物実験ガイドライン（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ）に従って使用した。ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２又はビヒクル（ＰＢＳ）を１日目に５ｍｇ／ｋｇの用量で、１８日目に１５ｍｇ／ｋｇの用量で、１時間の静脈内注入として投与した（３匹／グループ）。試験全体を通して、−７、−３、３、８、１２、１８日目（投与前）、２０、２５、２９、３５及び４１日目に血液パラメータを測定し、対照動物の平均値と比較／正規化した。ＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２グループにおける０日目の処置前ＲＢＳ及びＨｇ値は対照グループより低かった。何れかの用量のＶＬＸ９ｈｕｍ＿０８  ＩｇＧ２での処置後、対照と比較して、Ｈｇ（図２０Ａ）又はＲＢＣ数（図２０Ｂ）にわずかな変化（＜１０％）があったが、これは、インビトロでヒトＲＢＣに結合しない抗体が、カニクイザルに投与されたとき、ＲＢＣ血液パラメータの減少を引き起こさないことを示している。
【０２５２】
実施例１０
ＣＤ４７の免疫組織化学染色
マウス／ウサギキメラ抗ＣＤ４７ｍＡｂを用いて、いくつかの種類の癌を有する患者由来のホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）ブロック（市販の供給源から取得）において、ＣＤ４７発現の局在化を決定した。３〜４ミクロンの切片をＦＦＰＥブロックから切断し、抗原賦活化溶液で処理した。次に、切片を４μｇ／ｍｌの一次抗ＣＤ４７マウス／ウサギキメラｍＡｂと一緒に１時間、続いて、抗ウサギＨＲＰ標識二次抗体と一緒に２０分間インキュベートした。ヒトＣＤ４７に結合した抗ＣＤ４７抗体は、ペルオキシダーゼ基質、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンを用いて視覚化した。切片をヘマトキシリンで対比染色してから、標準的な光学顕微鏡法を用いて評価した。図２１からわかるように、ＶＬＸ４マウス／ウサギキメラｍＡｂにより例示されるＣＤ４７マウス／ウサギキメラｍＡｂを用いて、ヒト乳癌組織に高いＣＤ４７発現が検出された（矢印で示す暗い箇所により表示される通り）。これは、診断アッセイにおいてＦＦＰＥブロックから得られる腫瘍組織切片中でのヒトＣＤ４７の免疫組織化学局在化のために、これらのｍＡｂを用いることができることを明らかにしている。
【０２５３】
実施例１１
ＣＤ４７に対する抗体は、一酸化窒素シグナル伝達を調節する
ＣＤ４７へのＴＳＰ１結合は、ヘテロ三量体Ｇタンパク質Ｇｉを活性化し、これは、細胞内環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）レベルの抑制をもたらす。さらに、ＴＰＳ１／ＣＤ４７経路は、あらゆる血管細胞中の一酸化窒素（ＮＯ）経路の有益な作用を妨害する。ＮＯ経路は、基質としてアルギニンを用いて生物活性ガスＮＯを生成する３つの一酸化窒素シンターゼ酵素（ＮＯＳＩ、ＮＯＳＩＩ及びＮＯＳＩＩＩ）の何れかから構成される。ＮＯは、それが生成される細胞内又は隣接細胞中で作用して、メッセンジャー分子環状ＧＭＰ（ｃＧＭＰ）を生成する酵素可溶性グアニリルシクラーゼを活性化することができる。ＮＯ／ｃＧＭＰ経路の適正な機能状態は、限定されないが、創傷、炎症、高血圧、代謝症候群、虚血、及び虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）から起こるストレスをはじめとするストレスから心血管系を保護する上で不可欠である。これらの細胞ストレスに関して、ＴＰＳ１／ＣＤ４７系によるＮＯ／ｃＧＭＰ経路の阻害は、ストレスの作用を悪化させる。これは、ｃＧＭＰ及びｃＡＭＰの両方が、重要な保護の役割を果たす心血管系に特有の問題である。虚血及び再灌流傷害が、疾患、外傷、及び外科的処置の予後不良を引き起こすか、又はそれに寄与する多くの事例がある。
【０２５４】
これらの実験の目的は、本開示のヒト化抗ＣＤ４７ｍＡｂが、例えば、Ｉｓｅｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１：２６０６９−８０により開示されるようにＣＤ４７に対するマウスモノクローナル抗体を用いて以前記載されている通り、ＮＯ刺激ｃＧＭＰ合成のＴＳＰ１媒介性阻害、あるいは、ＮＯシグナル伝達の他の下流マーカ又はＮＯシグナル伝達によって生じる作用、例えば、Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｂｒ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１５９：１５４２−１５４７により以前記載されているように平滑筋細胞弛緩若しくは血小板凝集を逆転させる能力を示すことを証明することであろう。
【０２５５】
使用される方法は、製造者により記載される（ＣａｔｃｈＰｏｉｎｔ  Ｃｙｃｌｉｃ−ＧＭＰ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）ようにｃＧＭＰを測定するものであろう。Ｊｕｒｋａｔ  ＪＥ６．１細胞（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ；カタログ＃ＴＩＢ−１５２）又は培養して増殖させるとＮＯ／ｃＧＭＰシグナル伝達経路を保持し、しかもＣＤ４７のＴＳＰ１連結に対する頑健且つ再生可能な阻害応答を呈示する他の細胞型が使用される。細胞は、５％（ｖ／ｖ）熱不活性化ウシ胎仔血清（ＢｉｏＷｅｓｔ；カタログ＃Ｓ０１５２０）、１００単位／ｍＬペニシリン、１００μｇｍＬのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ；カタログ＃Ｐ４２２２）を含有するイスコフ改変ダルベッコ培地中で細胞を１×１０６細胞／ｍＬ未満の密度で増殖させる。ｃＧＭＰアッセイの場合、９６ウェル組織培養プレートにおいて、５％（ｖ／ｖ）熱不活性化ウシ胎仔血清（ＢｉｏＷｅｓｔ；カタログ＃Ｓ０１５２０）、１００単位／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ；＃Ｐ４２２２）を含有するイスコフ改変ダルベッコ培地中で細胞を１×１０５細胞／ｍＬの密度で２４時間にわたり増殖させた後、無血清培地に一晩移す。
【０２５６】
実施例３に記載したＣＨＯ細胞への一過性トランスフェクションから精製した本明細書に開示のヒト化抗体、並びに対象キメラ抗体は、２０ｎｇ／ｍｌの最終濃度で添加し、その１５分後に、０又は１μｇ／ｍｌのヒトＴＳＰ１（Ａｔｈｅｎｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ａｔｈｅｎｓ，ＧＡ，カタログ＃１６−２０−２０１３１９）を添加する。さらに１５分後、ＮＯ供与体であるジエチルアミン（ＤＥＡ）ＮＯＮＯａｔｅ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ，Ｃａｔａｌｏｇ♯８２１００）を１μＭの最終濃度でウェルの半分に添加する。５分後、ｃＧＭＰキットに供給された緩衝液で細胞を溶解させ、各ウェルのアリコートをｃＧＭＰ含量についてアッセイする。
【０２５７】
キメラ又はヒト化抗体の一部は、ｃＧＭＰのＴＳＰ１阻害を逆転することが予想される。逆転は、完全（＞８０％）又は中程度（２０％〜８０％）であり得る。ｃＧＭＰのＴＳＰ１阻害のこの逆転は、それらがＮＯシグナル伝達を増大する能力を有することを示し、限定されないが、創傷、炎症、高血圧、代謝症候群、虚血、及び虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）に起因するものをはじめとするストレスから心血管系を保護する上での有用性を示唆する。また、別のアッセイ系、例えば、平滑筋細胞収縮も、キメラ又はヒト化抗体クローンの一部が、ＮＯシグナル伝達の活性化によって生じる下流効果に対するＴＳＰの阻害作用を逆転することを明らかにすると予想される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ−９Ｂ】
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【図１０Ａ−１０Ｂ】
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【図１１Ａ−１１Ｂ】
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【図１２Ａ−１２Ｂ】
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【図１３Ａ−１３Ｂ】
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【図１４Ａ−１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ−１６Ｂ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ−２０Ｂ】
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【図２１】
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【図２２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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