(57)【要約】Ｎ末端欠失、点変異（複数可）またはこれらの組み合わせを有するＦＧＦ１変異体タンパク質等、ＦＧＦ１アナログを使用して、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する被験体において血中グルコースレベルを低下させる方法が、提供されている。斯かる変異体ＦＧＦ１タンパク質は、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質、ＦＧＦＲ１結合タンパク質、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質およびＦＧＦＲ１結合タンパク質、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１由来のＣ末端領域を含むキメラタンパク質の一部分であり得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する哺乳動物において血中グルコースを低下させる方法であって、
（ａ）前記哺乳動物に、治療有効量の変異した成熟線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）１タンパク質または前記変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸分子または前記核酸分子を含むベクターを投与し、これにより、前記血中グルコースを低下させるステップであって、
前記変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質が、
少なくとも６個連続したＮ末端アミノ酸の欠失、
少なくとも１個の点変異、
またはこれらの組み合わせ
を含む、ステップ、
（ｂ）前記哺乳動物に、治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）１ｃ結合タンパク質または前記ＦＧＦＲ１結合タンパク質をコードする核酸分子または前記核酸分子を含むベクターを投与し、これにより、前記血中グルコースを低下させるステップであって、前記ＦＧＦＲ１結合タンパク質が、ＦＧＦＲ１結合タンパク質の多量体を含む、ステップ、または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）を組み合わせて、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する前記哺乳動物において血中グルコースを低下させる、ステップ
を含む、方法。
【請求項２】
哺乳動物において、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を処置する方法であって、
（ａ）前記哺乳動物に、治療有効量の変異した成熟線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）１タンパク質または前記変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸分子または前記核酸分子を含むベクターを投与し、これにより、前記ステロイド誘導性糖尿病または高コルチゾール血症を処置するステップであって、
前記変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質が、
少なくとも６個連続したＮ末端アミノ酸の欠失、
少なくとも１個の点変異、
またはこれらの組み合わせ
を含む、ステップ、
（ｂ）前記哺乳動物に、治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）１結合タンパク質または前記ＦＧＦＲ１結合タンパク質をコードする核酸分子または前記核酸分子を含むベクターを投与し、これにより、前記ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を処置するステップであって、前記ＦＧＦＲ１結合タンパク質が、ＦＧＦＲ１結合タンパク質の多量体を含む、ステップ、または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）を組み合わせ
を含む、方法。
【請求項３】
（１）摂食時および／または空腹時血中グルコースを低下させる、（２）インスリン感受性を改善する、（３）耐糖能を改善する、または（４）これらの組み合わせを行う、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記哺乳動物が、１種または複数のグルココルチコイドにより以前に処置された、または現在処置されている、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記哺乳動物への治療有効量の前記タンパク質または前記核酸分子の投与の前に、その間にまたはその後に、前記哺乳動物に治療有効量の１種または複数のグルココルチコイドを投与するステップをさらに含む、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記１種または複数のグルココルチコイドが、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾンまたはこれらの組み合わせである、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記１種または複数のグルココルチコイドの前記治療有効量が、少なくとも０．１ｍｇである、請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記哺乳動物への治療有効量の前記タンパク質または前記核酸分子の投与の前に、その間にまたはその後に、前記哺乳動物に治療有効量の１種または複数の抗精神病薬を投与するステップをさらに含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記哺乳動物が、臓器移植を以前に受けたことがある、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記哺乳動物が、クッシング症候群、肺がん、下垂体もしくは副腎の腫瘍、腎不全、妊娠または外科手術のために高コルチゾール血症を有する、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記哺乳動物が、双極性障害を有する、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記哺乳動物が、慢性閉塞性肺疾患、急性痛風、がん、細菌性髄膜炎、特発性間質性肺炎、過敏性肺臓炎、サルコイドーシス、自己免疫性状態、神経性疾患、炎症性腸疾患、ハンセン病、呼吸器疾患、アレルギー、喘息、敗血症またはこれらの組み合わせを有する、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記哺乳動物が、がんを有し、前記哺乳動物が、化学療法、生物製剤、放射線療法またはこれらの組み合わせにより以前に処置された、または現在処置されている、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記哺乳動物への治療有効量の前記タンパク質または核酸分子の投与の前に、その間にまたはその後に、前記哺乳動物に治療有効量の化学療法、生物製剤、放射線療法またはこれらの組み合わせを投与するステップをさらに含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記タンパク質の前記治療有効量が、少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇである、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
躁うつ病または双極性障害を有する哺乳動物において血中グルコースを低下させる方法であって、
（ａ）前記哺乳動物に、治療有効量の変異した成熟線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）１タンパク質または前記変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸分子または前記核酸分子を含むベクターを投与し、これにより、前記血中グルコースを低下させるステップであって、
前記変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質が、
少なくとも６個連続したＮ末端アミノ酸の欠失、
少なくとも１個の点変異、
またはこれらの組み合わせ
を含む、ステップ、
（ｂ）前記哺乳動物に、治療有効量の線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）１結合タンパク質または前記ＦＧＦＲ１結合タンパク質をコードする核酸分子または前記核酸分子を含むベクターを投与し、これにより、前記血中グルコースを低下させるステップであって、前記ＦＧＦＲ１結合タンパク質が、ＦＧＦＲ１結合タンパク質の多量体を含む、ステップ、または
（ｃ）（ａ）および（ｂ）を組み合わせて、躁うつ病または双極性障害を有する前記哺乳動物において血中グルコースを低下させる、ステップ
を含む、方法。
【請求項１７】
前記投与が、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内または中枢神経系を介するものである、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記哺乳動物が、ネコまたはイヌである、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
追加的な治療化合物を投与するステップをさらに含む、請求項１〜１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記追加的な治療化合物が、インスリン、分泌促進物質、インクレチン模倣物、ＧＬＰ−１、ＤＰＰ４阻害剤、抗糖尿病剤、化学療法、放射線療法、生物製剤またはこれらの組み合わせである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
（１）ＧＣと、（２）変異体ＦＧＦ１タンパク質、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体またはこれらの組み合わせと、（３）薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
【請求項２３】
化学療法、放射線療法、生物製剤もしくはこれらの組み合わせ、または
抗精神病薬
をさらに含む、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質が、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個または少なくとも１３個連続したＮ末端アミノ酸の欠失を含み、前記変異したＦＧＦ１タンパク質が、野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質と比較して低下した分裂促進活性を有する、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法または請求項２２〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
前記変異体ＦＧＦ１タンパク質における前記少なくとも１個の点変異が、Ｋ９、Ｋ１０、Ｋ１２、Ｌ１４、Ｙ１５、Ｃ１６、Ｈ２１、Ｒ３５、Ｑ４０、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｓ４７、Ｅ４９、Ｙ５５、Ｍ６７、Ｌ７３、Ｃ８３、Ｌ８６、Ｅ８７、Ｈ９３、Ｙ９４、Ｎ９５、Ｈ１０２、Ａ１０３、Ｅ１０４、Ｋ１０５、Ｎ１０６、Ｆ１０８、Ｖ１０９、Ｌ１１１、Ｋ１１２、Ｋ１１３、Ｃ１１７、Ｋ１１８、Ｒ１１９、Ｇ１２０、Ｐ１２１、Ｒ１２２、Ｆ１３２、Ｌ１３３、Ｐ１３４、Ｌ１３５のうちの１個またはそれより多くにおける変異を含み、ナンバリングは、配列番号５に示す配列を参照し、前記変異したＦＧＦ１タンパク質が、野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質と比較して低下した分裂促進活性を有する、請求項１〜２１または２４のいずれかに記載の方法、または請求項２２〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
前記変異体ＦＧＦ１タンパク質における前記少なくとも１個の点変異が、表１に示す変異のうちの１個またはそれより多くを含み、前記変異したＦＧＦ１タンパク質が、野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質と比較して低下した分裂促進活性を有する、請求項１〜２１、２４または２５のいずれかに記載の方法、または請求項２２〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２７】
前記変異体ＦＧＦ１タンパク質における前記少なくとも１個の点変異が、
Ｋ１１２、Ｋ１１３およびＫ１１８（ナンバリングは、配列番号５を参照）における変異を含むか、または
アミノ酸配列ＩＬＦＬＰＬＰＶ（配列番号２および４のアミノ酸１４５〜１５２）を、ＡＡＡＬＰＬＰＶ（配列番号１４）、ＩＬＡＬＰＬＰＶ（配列番号１５）、ＩＬＦＡＰＬＰＶ（配列番号１６）またはＩＬＦＬＰＡＰＡ（配列番号１７）に置き換えることを含み、前記変異したＦＧＦ１タンパク質が、野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質と比較して低下した分裂促進活性を有する、
請求項１〜２１または２４〜２６のいずれかに記載の方法、または請求項２２〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
少なくとも６個連続したＮ末端アミノ酸の欠失が、前記欠失されたＮ末端アミノ酸のうちの少なくとも１個をＦＧＦ２１由来の相当するアミノ酸と置き換えることをさらに含む、請求項１〜２１または２４〜２７のいずれかに記載の方法、または請求項２２〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
前記野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質が、配列番号５を含む、請求項１〜２１または２４〜２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質が、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３〜１７５、１７７〜１７９、１８１〜１８３、１８５〜１８９、および１９１〜２３８のいずれか１つに対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を含む、請求項１〜２１または２４〜２９のいずれかに記載の方法、または請求項２２〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
前記変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質が、（ｉ）ＦＧＦ２１のＣ末端領域、（ｉｉ）ＦＧＦ１９のＣ末端領域、（ｉｉｉ）β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質、（ｉｖ）ＦＧＦＲ１結合タンパク質または（ｖ）ＦＧＦＲ１結合タンパク質およびβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質をさらに含むキメラタンパク質の一部分である、請求項１〜２１または２４〜３０のいずれかに記載の方法、または請求項２２〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
前記キメラタンパク質が、配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、または１８９を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＦＧＦＲ１結合タンパク質が、多量体を含み、前記多量体のうちの少なくとも１個の単量体が、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１９０に対し少なくとも９０％配列同一性を含む、請求項１〜２１または２４〜３２のいずれかに記載の方法、または請求項２２〜２３のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１５年１０月３０日に出願された米国仮出願第６２／２４８，９３５号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
政府の支援についての承認
この発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈによって付与された助成金第ＤＫ０５７９７８、ＨＬ０８８０９３、ＨＬ１０５２７８およびＥＳ０１０３３７号の下、政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
本願は、ＦＧＦ１アナログ（例えば、ＦＧＦ１突然変異体およびＦＧＦＲ１結合多量体）を使用して、ステロイドによる処置によって誘導された高血糖、または高コルチゾール血症状態を処置する方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
グルココルチコイド（ＧＣ）および抗精神病薬物療法は、多数の病理学的状態のために処方されるが、これらは、望まれない糖尿病誘発性副作用を生じ得る。例えば、ＧＣによる過剰または長期処置は、インスリンシグナリングを損なうことにより、末梢インスリン抵抗性を誘導し得る。よって、斯かる望まれない副作用を処置する方法および薬剤の同定が必要とされる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
ステロイドによる処置、高コルチゾール血症状態または抗精神病薬処置による糖尿病によって誘導された哺乳動物において血中グルコースを低下させるための、ＦＧＦ線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）１アナログ、例えば、分裂促進活性が低下または排除されたＦＧＦ１変異体、または操作されたＦＧＦＲ１結合タンパク質（例えば、受容体シグナリングを誘導するＦＧＦＲ１結合タンパク質の多量体）を使用する方法が、本明細書に提供されている。一部の例では、開示されている方法は、哺乳動物においてインスリン抵抗性の減少（例えば、インスリン感受性の改善）、高インスリン血症の低下、耐糖能の増加または高血糖の低下（例えば、摂食時および／または空腹時血中グルコースの低下）のうち１種または複数をもたらす。よって、開示されている方法を使用して、１種または複数のグルココルチコイドまたは抗精神病薬による処置を以前に受けたまたは現在受けている被験体を処置することができる。
【０００６】
例えば、分裂促進活性を低下または排除するために、少なくとも６個連続したＮ末端アミノ酸の欠失、少なくとも１個の点変異またはこれらの組み合わせを有する変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質等、開示されている変異体ＦＧＦ１タンパク質およびＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体（またはこれをコードする核酸分子）を使用する方法が提供されている。一部の例では、方法は、少なくとも５％の減少等、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する哺乳動物において血中グルコースを低下させるために、治療有効量の開示されている変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質（またはこれをコードする核酸分子）を投与するステップを含む。一部の例では、方法は、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を処置するために、治療有効量の開示されている変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体（またはこれをコードする核酸分子）を投与するステップを含む。一部の例では、開示されている方法により処置される被験体は、慢性閉塞性肺疾患、急性痛風、がん、細菌性髄膜炎、特発性間質性肺炎、過敏性肺臓炎、サルコイドーシス、自己免疫性状態（ループス等）、神経性疾患、炎症性腸疾患、ハンセン病、呼吸器疾患、アレルギー（季節性アレルギー等）、喘息、敗血症またはこれらの組み合わせを有する。一部の例では、これらの疾患のうち１種または複数は、開示されている方法と同時に処置される。一部の例では、開示されている方法により処置される被験体は、臓器移植（例えば、肝臓、腎臓、心臓または肺の移植）を以前に受けたことがある。一部の例では、開示されている方法により処置される被験体は、クッシング症候群、がん（肺がん等）、下垂体もしくは副腎の腫瘍、腎不全、妊娠または外科手術のために高コルチゾール血症を有する。一部の例では、開示されている方法により処置される被験体は、双極性障害を有する。
【０００７】
開示されている方法において有用な開示されているＦＧＦ１変異体は、Ｎ末端トランケーション、点変異（アミノ酸置換、欠失、付加またはこれらの組み合わせ等）またはこれらの組み合わせを有することができる。斯かるＦＧＦ１アナログは、単独で、またはチアゾリジンジオン等の他のグルコース低下剤等、他の薬剤と組み合わせて使用することができる。
【０００８】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体は、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１のＣ末端側の末端由来の少なくとも１０個、少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも４２個、少なくとも４３個、少なくとも４４個、少なくとも４５個、少なくとも４６個、少なくとも４７個、少なくとも４８個、少なくとも４９個または少なくとも５０個連続したアミノ酸を含む一部分等、キメラタンパク質の一部分である。
【０００９】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体は、配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５または１４６等、ベータ−Ｋｌｏｔｈｏ（β−Ｋｌｏｔｈｏ）に選択的に結合するタンパク質の少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１５０、少なくとも１８０または少なくとも２００アミノ酸（２０〜５００、２０〜２５０、３０〜２００、３５〜１８０、３７〜９０または３７〜１８０アミノ酸等）を含む一部分等、キメラタンパク質の一部分である。
【００１０】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体は、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７等、ＦＧＦＲ１に選択的に結合するタンパク質の少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１５０、少なくとも１８０または少なくとも２００アミノ酸（２０〜５００、２０〜２５０、３０〜２００、３５〜１８０、３７〜９０または３７〜１８０アミノ酸等）を含む一部等、キメラタンパク質の一部、または配列番号１９０等のこれらの多量体（例えば、二量体、三量体（ｔｉｍｅｒｓ））である。
【００１１】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体は、β−Ｋｌｏｔｈｏに選択的に結合するタンパク質の少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１５０、少なくとも１８０または少なくとも２００アミノ酸（２０〜５００、２０〜２５０、３０〜２００、３５〜１８０、３７〜９０または３７〜１８０アミノ酸等）を含み、配列番号１６８、１６９、１７０または１７１等、ＦＧＦＲ１に選択的に結合するタンパク質の少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１２０、少なくとも１５０、少なくとも１８０または少なくとも２００アミノ酸（２０〜５００、２０〜２５０、３０〜２００、３５〜１８０、３７〜９０または３７〜１８０アミノ酸等）を含む一部分等、キメラタンパク質の一部分である。
【００１２】
一部の例では、キメラタンパク質は、ＦＧＦ１変異体およびＦＧＦ１９、ＦＧＦ２１、ＦＧＦＲ１結合またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合配列の間にリンカーを含む。
【００１３】
一部の例における変異したＦＧＦ１タンパク質は、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％の低下等、成熟ＦＧＦ１（例えば、配列番号５）と比べて低下した分裂促進性を有する。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、例えば、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３または少なくとも２０個の連続したＮ末端アミノ酸の欠失を含み得る成熟タンパク質（例えば、配列番号５）のトランケートバージョンである。一部の例では、欠失されたＮ末端アミノ酸のうちの１個またはそれより多くは、ＦＧＦ２１（例えば、配列番号２１、２１９、２２１、２２２および２２３を参照）由来の少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０または少なくとも１５、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個の相当するアミノ酸等、ＦＧＦ２１（またはＦＧＦ３、ＦＧＦ５、ＦＧＦ７、ＦＧＦ９およびＦＧＦ１０を含む、ＦＧＦＲ４に対し低親和性を有するいずれかのＦＧＦ）由来の相当するアミノ酸と置き換えられる。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、表１に示すもののうちの１個またはそれより多く等、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０個のアミノ酸置換（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０または４１個の置換等）を含有する変異バージョン等、成熟タンパク質（例えば、配列番号５）の変異バージョンである。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、Ｎ末端トランケーションおよび点変異の両方を含む。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、ＦＧＦ１の（例えば、配列番号２または４の）アミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸を含む（これは一部の例では、置換、欠失または付加等、１〜２０個の点変異を含み得る）。
【００１４】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体は、ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１、ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９、ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質、ＦＧＦ１／ＦＧＦＲ１結合タンパク質またはＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質／ＦＧＦＲ１結合タンパク質等、キメラタンパク質の部分である。例えば、ＦＧＦ１変異体のＣ末端側の末端またはＮ末端側の末端は、それぞれ配列番号８６または１００等、ＦＧＦ２１またはＦＧＦ１９のＣ末端断片のＮ末端側の末端へと直接的にまたは間接的に連結することができる。同様に、ＦＧＦ１変異体のＣ末端側の末端は、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合ドメイン（配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、または配列番号１６８、１６９、１７０もしくは１７１のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合部分等）のＮ末端側の末端へと直接的にもしくは間接的に連結することができる、またはＦＧＦ１変異体のＮ末端側の末端は、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合ドメインのＣ末端側の末端へと直接的にもしくは間接的に連結することができる。加えて、開示されているＦＧＦ１変異体のＣ末端側の末端は、ＦＧＦＲ１結合ドメイン（配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１９０等）のＮ末端側の末端へと直接的にもしくは間接的に連結することができる、または開示されているＦＧＦ１変異体のＮ末端側の末端は、ＦＧＦＲ１結合ドメインのＣ末端側の末端へと直接的にもしくは間接的に連結することができる。一部の例では、開示されているＦＧＦ１変異体のＣ末端側の末端は、ＦＧＦＲ１結合ドメイン（配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１９０、または１６８、１６９、１７０もしくは１７１のＦＧＦＲ１結合部分のいずれか等）およびβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合ドメインへと直接的にもしくは間接的に連結することができ、開示されているＦＧＦ１変異体のＮ末端側の末端は、ＦＧＦＲ１結合ドメインおよびβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合ドメインのＣ末端側の末端へと直接的にもしくは間接的に連結することができる、またはその両方である（配列番号１６８、１６９、１７０または１７１等）。斯かるキメラタンパク質は、例えば、１つまたはそれより多くのグルココルチコイド、抗精神病薬の治療的投与によって、または高コルチゾール血症によって、哺乳動物において血中グルコースを低下させるために使用することができる。
【００１５】
開示されている方法および組成物において使用することができる特異的で例示的なＦＧＦ１変異体タンパク質は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８に示されており、これらは、本明細書中に提供されるいずれかのキメラの生成のために用いられ得る。開示されている方法および組成物において使用することができる特異的で例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラは、配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、２１９、２２１、２２２および２２３に示されている。開示されている方法および組成物において使用することができる特異的で例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラは、配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、２２０および２２４に示されている。特異的で例示的なＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラは、図８〜図１１（ならびに配列番号１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６および１８７）に示されている。開示されている方法および組成物において使用することができる特異的で例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦＲ１結合キメラは、図８Ｊおよび図９Ｊ（ならびに配列番号１８８および１８９）に示されている。開示されている方法および組成物において使用することができる、ＦＧＦ１変異体タンパク質のＮまたはＣ末端側の末端へと直接的にまたは間接的に連結することができる特異的で例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合キメラは、配列番号１６８、１６９、１７０および１７１に示されている。
【００１６】
開示されている方法において有用なＦＧＦＲ１結合タンパク質二量体および多量体（三量体等）（配列番号１９０も参照）も提供されている。
【００１７】
（１）１種または複数のグルココルチコイドと、（２）１種または複数の変異体ＦＧＦ１タンパク質、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体またはこれらの組み合わせと、（３）薬学的に許容される担体とを含む組成物も提供されている。
【００１８】
本開示の前述および他の目的および特色は、添付の図面を参照しつつ進められる次の詳細な説明から、より明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）、成熟ＦＧＦ１に為すことができるＮ末端欠失（配列番号７、８および９）、成熟ＦＧＦ１に為すことができる点変異（配列番号１０および１１）、およびＦＧＦ１のヘパラン結合ドメインに対する変異（配列番号１２および１３）を示す。
【００２０】
【図２Ａ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＦＧＦ１  Ｎ末端欠失および／または点変異（配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０および５１）と組み合わせることができる、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）が、ＦＧＦ１の熱安定性を増加させる変異を含むように変異され得る仕方（Ｍ１、Ｍ２およびＭ３欠失、それぞれ配列番号２２、２８および４０）を示す。
【図２Ｂ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＦＧＦ１  Ｎ末端欠失および／または点変異（配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０および５１）と組み合わせることができる、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）が、ＦＧＦ１の熱安定性を増加させる変異を含むように変異され得る仕方（Ｍ１、Ｍ２およびＭ３欠失、それぞれ配列番号２２、２８および４０）を示す。
【図２Ｃ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＦＧＦ１  Ｎ末端欠失および／または点変異（配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０および５１）と組み合わせることができる、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）が、ＦＧＦ１の熱安定性を増加させる変異を含むように変異され得る仕方（Ｍ１、Ｍ２およびＭ３欠失、それぞれ配列番号２２、２８および４０）を示す。
【図２Ｄ】図２Ａ〜図２Ｄは、ＦＧＦ１  Ｎ末端欠失および／または点変異（配列番号２３、２４、２５、２６、２７、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０および５１）と組み合わせることができる、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）が、ＦＧＦ１の熱安定性を増加させる変異を含むように変異され得る仕方（Ｍ１、Ｍ２およびＭ３欠失、それぞれ配列番号２２、２８および４０）を示す。
【００２１】
【図３Ａ】図３Ａ〜図３Ｂは、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）から、Ｎ末端欠失および／または点変異（配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５および６６）を含むように作製することができる、追加的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【図３Ｂ】図３Ａ〜図３Ｂは、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）から、Ｎ末端欠失および／または点変異（配列番号５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５および６６）を含むように作製することができる、追加的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【００２２】
【図４Ａ】図４Ａ〜図４Ｂは、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）から、Ｎ末端欠失および／または点変異（配列番号６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３および８４）を含むように作製することができる、追加的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【図４Ｂ】図４Ａ〜図４Ｂは、例示的な野生型成熟ＦＧＦ１配列（配列番号５）から、Ｎ末端欠失および／または点変異（配列番号６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３および８４）を含むように作製することができる、追加的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【００２３】
【図５Ａ】図５Ａ〜図５Ｂは、ベータ−ｋｌｏｔｈｏに結合するＦＧＦ２１（配列番号２０）およびＦＧＦ２１のＣ末端部分（配列番号８６）と、これらを本明細書に記載されているＦＧＦ１変異体に取り付けて、ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラタンパク質（配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７および９８）を形成することができる仕方を示す。図示されているＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラは、より長いグルコース低減持続期間を有するＫ１２ＶおよびＮ９５Ｖ  ＦＧＦ１非分裂促進的変異（または表１に収載されているもの等、本明細書に開示されている他の変異）のうちの１個またはそれより多くをさらに含むことができる。
【図５Ｂ】図５Ａ〜図５Ｂは、ベータ−ｋｌｏｔｈｏに結合するＦＧＦ２１（配列番号２０）およびＦＧＦ２１のＣ末端部分（配列番号８６）と、これらを本明細書に記載されているＦＧＦ１変異体に取り付けて、ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラタンパク質（配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７および９８）を形成することができる仕方を示す。図示されているＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラは、より長いグルコース低減持続期間を有するＫ１２ＶおよびＮ９５Ｖ  ＦＧＦ１非分裂促進的変異（または表１に収載されているもの等、本明細書に開示されている他の変異）のうちの１個またはそれより多くをさらに含むことができる。
【００２４】
【図６Ａ】図６Ａ〜図６Ｂは、ベータ−ｋｌｏｔｈｏに結合するＦＧＦ１９（配列番号９９）およびＦＧＦ１９のＣ末端部分（配列番号１００）と、これらを本明細書に記載されているＦＧＦ１変異体に取り付けて、ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラタンパク質（配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１および１１２）を形成することができる仕方を示す。図示されているＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラは、より長いグルコース低減持続期間を有するＫ１２ＶおよびＮ９５Ｖ  ＦＧＦ１非分裂促進的変異のうちの１個またはそれより多くをさらに含むことができる。
【図６Ｂ】図６Ａ〜図６Ｂは、ベータ−ｋｌｏｔｈｏに結合するＦＧＦ１９（配列番号９９）およびＦＧＦ１９のＣ末端部分（配列番号１００）と、これらを本明細書に記載されているＦＧＦ１変異体に取り付けて、ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラタンパク質（配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１および１１２）を形成することができる仕方を示す。図示されているＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラは、より長いグルコース低減持続期間を有するＫ１２ＶおよびＮ９５Ｖ  ＦＧＦ１非分裂促進的変異のうちの１個またはそれより多くをさらに含むことができる。
【００２５】
【図７】図７は、ネイティブＦＧＦ１配列（配列番号５）および８種のヘパラン結合変異体ＦＧＦ１  ＫＫＫアナログ（配列番号１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９および１２０）を示す。
【００２６】
【図８】図８〜図１１は、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラおよびＦＧＦＲ１結合タンパク質二量体の例示的な配置を示す。例示的な配列を配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９および１９０に示す。ＦＧＦＲ１またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質の単量体または二量体が示されているが、一部の例では、三量体等、より高次の多量体が使用される。加えて、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラは、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合部分をＦＧＦＲ１結合部分と置き換えることにより、ＦＧＦ１変異体／ＦＧＦＲ１ｃ結合キメラ中に作製することができる（例えば、ΔＮＴ  ＦＧＦ１に関する図８Ｊおよび図９Ｉに示す通り）。さらに、ＦＧＦＲ１結合部分（複数可）は、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラに含まれてよい（例えば、ΔＮＴ  ＦＧＦ１に関する図２３Ｋおよび図２４Ｊに示す通り）。Ｃ２２４０の配列を配列番号１２１に示し、Ｃ２９８７を配列番号１４８に示す。
【図９】図８〜図１１は、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラおよびＦＧＦＲ１結合タンパク質二量体の例示的な配置を示す。例示的な配列を配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９および１９０に示す。ＦＧＦＲ１またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質の単量体または二量体が示されているが、一部の例では、三量体等、より高次の多量体が使用される。加えて、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラは、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合部分をＦＧＦＲ１結合部分と置き換えることにより、ＦＧＦ１変異体／ＦＧＦＲ１ｃ結合キメラ中に作製することができる（例えば、ΔＮＴ  ＦＧＦ１に関する図８Ｊおよび図９Ｉに示す通り）。さらに、ＦＧＦＲ１結合部分（複数可）は、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラに含まれてよい（例えば、ΔＮＴ  ＦＧＦ１に関する図２３Ｋおよび図２４Ｊに示す通り）。Ｃ２２４０の配列を配列番号１２１に示し、Ｃ２９８７を配列番号１４８に示す。
【図１０】図８〜図１１は、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラおよびＦＧＦＲ１結合タンパク質二量体の例示的な配置を示す。例示的な配列を配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９および１９０に示す。ＦＧＦＲ１またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質の単量体または二量体が示されているが、一部の例では、三量体等、より高次の多量体が使用される。加えて、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラは、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合部分をＦＧＦＲ１結合部分と置き換えることにより、ＦＧＦ１変異体／ＦＧＦＲ１ｃ結合キメラ中に作製することができる（例えば、ΔＮＴ  ＦＧＦ１に関する図８Ｊおよび図９Ｉに示す通り）。さらに、ＦＧＦＲ１結合部分（複数可）は、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラに含まれてよい（例えば、ΔＮＴ  ＦＧＦ１に関する図２３Ｋおよび図２４Ｊに示す通り）。Ｃ２２４０の配列を配列番号１２１に示し、Ｃ２９８７を配列番号１４８に示す。
【図１１】図８〜図１１は、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラおよびＦＧＦＲ１結合タンパク質二量体の例示的な配置を示す。例示的な配列を配列番号１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９および１９０に示す。ＦＧＦＲ１またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質の単量体または二量体が示されているが、一部の例では、三量体等、より高次の多量体が使用される。加えて、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラは、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合部分をＦＧＦＲ１結合部分と置き換えることにより、ＦＧＦ１変異体／ＦＧＦＲ１ｃ結合キメラ中に作製することができる（例えば、ΔＮＴ  ＦＧＦ１に関する図８Ｊおよび図９Ｉに示す通り）。さらに、ＦＧＦＲ１結合部分（複数可）は、ＦＧＦ１変異体／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラに含まれてよい（例えば、ΔＮＴ  ＦＧＦ１に関する図２３Ｋおよび図２４Ｊに示す通り）。Ｃ２２４０の配列を配列番号１２１に示し、Ｃ２９８７を配列番号１４８に示す。
【００２７】
【図１２】図１２は、Ｒ３５Ｅ置換を含む例示的なＦＧＦ１変異体配列（配列番号１９１〜１９８）を示す。
【００２８】
【図１３】図１３は、Ｒ３５Ｖ置換を含む例示的なＦＧＦ１変異体配列（配列番号１９９〜２０６）を示す。
【００２９】
【図１４】図１４は、例示的なＦＧＦ１変異体配列（配列番号２０７〜２１１）を示す。この遊離システイン（Ｃ１１７）は、タンパク質凝集をもたらす分子間ジスルフィド結合を形成する。バリンへの変異を設計して、安定性を改善し、したがって、これを他の点変異と組み合わせて導入する。ＫＫＫＲは、推定ヘパリン結合残基である。ＫＹ、ＫＥ、ＫＥＹ、ＫＮＹは、ＦＧＦ受容体と相互作用する残基への点変異の様々な組合せである（Ｋ＝Ｋ１２、Ｅ＝Ｅ８７、Ｙ＝Ｙ９４、Ｎ＝Ｎ９５）。
【００３０】
【図１５Ａ】図１５Ａ〜図１５Ｅは、（Ａ）安定性を増加させる（配列番号５４、２１２〜２１８および１１３）、（Ｂ）キメラになる（配列番号２１９〜２２４）、（Ｃ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２２５〜２２９）、（Ｄ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３０〜２３３）、および（Ｅ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３４〜２３８）ために変異させた例示的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【図１５Ｂ】図１５Ａ〜図１５Ｅは、（Ａ）安定性を増加させる（配列番号５４、２１２〜２１８および１１３）、（Ｂ）キメラになる（配列番号２１９〜２２４）、（Ｃ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２２５〜２２９）、（Ｄ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３０〜２３３）、および（Ｅ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３４〜２３８）ために変異させた例示的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【図１５Ｃ】図１５Ａ〜図１５Ｅは、（Ａ）安定性を増加させる（配列番号５４、２１２〜２１８および１１３）、（Ｂ）キメラになる（配列番号２１９〜２２４）、（Ｃ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２２５〜２２９）、（Ｄ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３０〜２３３）、および（Ｅ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３４〜２３８）ために変異させた例示的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【図１５Ｄ】図１５Ａ〜図１５Ｅは、（Ａ）安定性を増加させる（配列番号５４、２１２〜２１８および１１３）、（Ｂ）キメラになる（配列番号２１９〜２２４）、（Ｃ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２２５〜２２９）、（Ｄ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３０〜２３３）、および（Ｅ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３４〜２３８）ために変異させた例示的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【図１５Ｅ】図１５Ａ〜図１５Ｅは、（Ａ）安定性を増加させる（配列番号５４、２１２〜２１８および１１３）、（Ｂ）キメラになる（配列番号２１９〜２２４）、（Ｃ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２２５〜２２９）、（Ｄ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３０〜２３３）、および（Ｅ）安定性を増加させ、分裂促進性を減少させる（配列番号２３４〜２３８）ために変異させた例示的なＦＧＦ１変異体配列を示す。
【００３１】
【図１６】図１６は、ＦＧＦ１（配列番号５）およびＦＧＦ２（配列番号８５）のアラインメントを示し、ベータストランドを形成するアミノ酸を太字で示し、他の関連する残基を強調し、これらの相互作用を記述する。
【００３２】
【図１７】図１７Ａ〜図１７Ｄは、次のものを示す：（Ａ）３種の誘導培地（ＩＭ１、２および３）による逐次処置によって分化される、ｅＷＡＴの間質血管細胞群（ＳＶＦ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ脂肪細胞分化およびｒＦＧＦ１処置のスキーム。媒体またはｒＦＧＦ１（１００ｎｇ  ｍｌ−１）を、デキサメタゾン（２０ｎＭ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでインスリン抵抗性を誘導するため）と組み合わせて、ＩＭ３に４８時間添加した。（Ｂ）ＦＧＦ１ＷＴおよびＦＧＦ１ＫＯ  ＳＶＦに由来する初代脂肪細胞における媒体またはｒＦＧＦ１処置後のＨＳＬ（Ｌｉｐｅとしても公知）の発現。（Ｃ）ＳＶＦ由来脂肪細胞におけるアデノウイルスによる急性ｉｎ  ｖｉｔｒｏ遺伝子欠失のスキーム。（Ｄ）対照アデノウイルス（アデノ−ＧＦＰ）またはアデノウイルス発現ＣＲＥリコンビナーゼ（アデノ−ＣＲＥ）による感染と、その後の媒体またはｒＦＧＦ１処置による処置後の、Ｆｇｆｒ１  ｆｌｏｘ／ｆｌｏｘマウスに由来するＳＶＦから分化した初代脂肪細胞におけるＨＳＬの発現。＊ｐ＜０．０５、両側ｔ検定。データを平均±ＳＥＭとして示す。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
配列表
３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．  １．８２２に定義されている通り、核酸およびアミノ酸配列は、ヌクレオチド塩基の標準文字略語およびアミノ酸の３文字コードを使用して示す。各核酸配列の一方の鎖のみを示すが、相補鎖は、表示されている鎖のいずれかの参照によって含まれると理解される。２０１６年１０月２４日に作成され、２９１ＫＢのサイズの「ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と名付けられたテキストファイルの内容は、その全体が参考として本明細書に援用される。
【００３４】
配列番号１および２は、それぞれ例示的なヒトＦＧＦ１核酸およびタンパク質配列を示す。ソース：ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＣ０３２６９７．１およびＡＡＨ３２６９７．１。ヘパラン結合残基は、アミノ酸１２７〜１２９および１３３〜１３４である。
【００３５】
配列番号３および４は、それぞれ例示的なマウスＦＧＦ１核酸およびタンパク質配列を示す。ソース：ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＢＣ０３７６０１．１およびＡＡＨ３７６０１．１。
配列番号５は、例示的な成熟型のＦＧＦ１（１４０ａａ、本技術分野において、ＦＧＦ１  １５〜１５４と称される場合もある）を示す。
【００３６】
配列番号６は、Ｎ末端欠失を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００３７】
配列番号７は、Ｎ末端欠失を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１０〜１４０αα））を示す。
【００３８】
配列番号８は、Ｎ末端欠失を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１（ＦＧＦ１ΔＮＴ２（１４〜１４０αα））を示す。
【００３９】
配列番号９は、Ｎ末端欠失を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１２〜１４０αα））を示す。
【００４０】
配列番号１０は、分裂促進活性を低下させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００４１】
配列番号１１は、分裂促進活性を低下させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４６Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｐ１３４Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００４２】
配列番号１２および１３は、ヘパラン結合ドメインに変異（それぞれＫ１１８ＮまたはＫ１１８Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。一部の例では、これらの配列は、そのＮ末端にＭＦＮＬＰＰＧをさらに含む。斯かるタンパク質は、野生型ＦＧＦ１と比較して低下した分裂促進性を有する。
【００４３】
配列番号１４〜１７は、例示的な変異したＦＧＦ１核外移行配列を示す。
【００４４】
配列番号１８は、配列番号６のコード配列を示す。
【００４５】
配列番号１９および２０は、例示的なヒトＦＧＦ２１核酸およびタンパク質配列を示す。ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＹ３５９０８６およびＡＡＱ８９４４４．１から得られる。成熟型のＦＧＦ２１は、約アミノ酸２１〜２０８である。
【００４６】
配列番号２１は、４個のＮ末端アミノ酸がＦＧＦ２１に由来する（配列番号２０のアミノ酸４０〜４３）、例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００４７】
配列番号２２は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。Ｘｉａら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．７巻（１１号）：ｅ４８２１０頁、２０１２年より。
【００４８】
配列番号２３（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ１ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００４９】
配列番号２４（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１〜１４０αα）Ｍ１）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００５０】
配列番号２５（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）Ｍ１ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００５１】
配列番号２６（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１〜１４０αα）Ｍ１ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００５２】
配列番号２７（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）Ｍ１ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００５３】
配列番号２８（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ２）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。Ｘｉａら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．７巻（１１号）：ｅ４８２１０頁、２０１２年より。
【００５４】
配列番号２９（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ２ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００５５】
配列番号３０（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ２ｂ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００５６】
配列番号３１（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ２ｃ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００５７】
配列番号３２（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｍ２）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００５８】
配列番号３３（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１２〜１４０αα）Ｍ２）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００５９】
配列番号３４（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｍ２ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００６０】
配列番号３５（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１２〜１４０αα）Ｍ２ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００６１】
配列番号３６（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｍ２ｂ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００６２】
配列番号３７（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１２〜１４０αα）Ｍ２ｂ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００６３】
配列番号３８（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｍ２ｃ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５ＶおよびＣ１１７Ｖ、Ｆ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００６４】
配列番号３９（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１２〜１４０αα）Ｍ２ｃ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５ＶおよびＣ１１７Ｖ、Ｆ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００６５】
配列番号４０（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ３）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。Ｘｉａら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．７巻（１１号）：ｅ４８２１０頁、２０１２年より。
【００６６】
配列番号４１（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ３ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００６７】
配列番号４２（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ３ｂ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００６８】
配列番号４３（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｍ３ｃ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００６９】
配列番号４４（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１〜１４０αα）Ｍ３）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００７０】
配列番号４５（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）Ｍ３）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００７１】
配列番号４６（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１〜１４０αα）Ｍ３ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００７２】
配列番号４７（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）Ｍ３ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００７３】
配列番号４８（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１〜１４０αα）Ｍ３ｂ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００７４】
配列番号４９（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）Ｍ３ｂ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００７５】
配列番号５０（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１〜１４０αα）Ｍ３ｃ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００７６】
配列番号５１（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）Ｍ３ｃ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００７７】
配列番号５２（ＦＧＦ１（１〜１４０αα））は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５ＶおよびＫ１１８Ｎ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００７８】
配列番号５３（ＦＧＦ１（１〜１４０αα））は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５およびＫ１１８Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００７９】
配列番号５４  ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖは、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００８０】
配列番号５５（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、およびＫ１１８Ｎ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００８１】
配列番号５６（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、およびＫ１１８Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００８２】
配列番号５７（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１０〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２ＶおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００８３】
配列番号５８（ＦＧＦ１ΔＮＴ２（１２〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２ＶおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００８４】
配列番号５９（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１０〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００８５】
配列番号６０（ＦＧＦ１ΔＮＴ２（１２〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００８６】
配列番号６１（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１０〜１４０αα）は、点変異（Ｎ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００８７】
配列番号６２（ＦＧＦ１ΔＮＴ２（１２〜１４０αα）は、点変異（Ｎ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００８８】
配列番号６３（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１０〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５ＶおよびＫ１１８Ｎ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００８９】
配列番号６４（ＦＧＦ１ΔＮＴ２（１２〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５ＶおよびＫ１１８Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００９０】
配列番号６５（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１０〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１１８Ｎ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００９１】
配列番号６６（ＦＧＦ１ΔＮＴ２（１２〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１１８Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００９２】
配列番号６７（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ９ＴおよびＮ１０Ｔ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００９３】
配列番号６８（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ９Ｔ、Ｎ１０ＴおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００９４】
配列番号６９（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ９Ｔ、Ｎ１０ＴおよびＫ１１８Ｎ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００９５】
配列番号７０（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）は、変異体ＮＬＳ配列を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００９６】
配列番号７１（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１〜１４０αα）は、点変異（Ｑ４０ＰおよびＳ４７Ｉ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００９７】
配列番号７２（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）は、点変異（Ｑ４０ＰおよびＳ４７Ｉ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【００９８】
配列番号７３（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７ＩおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【００９９】
配列番号７４（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７ＩおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１００】
配列番号７５（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７ＩおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１０１】
配列番号７６（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１〜１４０αα）は、点変異（Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７ＩおよびＨ９３Ｇ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１０２】
配列番号７７（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）は、点変異（Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７ＩおよびＨ９３Ｇ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１０３】
配列番号７８（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３ＧおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１０４】
配列番号７９（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３ＧおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１０５】
配列番号８０（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３ＧおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１０６】
配列番号８１（ＦＧＦ１ΔＮＴ（１〜１４０αα）は、点変異（Ｃ１１７ＰおよびＫ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１０７】
配列番号８２（ＦＧＦ１ΔＮＴ３（１〜１４０αα）は、点変異（Ｃ１１７ＰおよびＫ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１０８】
配列番号８３（ＦＧＦ１（１〜１４０αα））は、点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＰおよびＫ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１０９】
配列番号８４（ＦＧＦ１（１〜１４０αα））は、点変異（Ｒ３５Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。斯かるアンタゴニストを使用して、低血糖またはＩ型糖尿病を処置することができる。
【０１１０】
配列番号８５は、ＦＧＦ２タンパク質配列の例示的な部分を示す。
【０１１１】
配列番号８６は、例示的なＣ末端ＦＧＦ２１タンパク質配列（Ｐ１６８−Ｓ２０９  ｈＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。この断片は、そのＮ末端において、本明細書に提供されているいずれかのＦＧＦ１変異体のＣ末端に取り付けて、ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラを作製することができる。
【０１１２】
配列番号８７は、Ｋ１２ＶおよびＮ９５Ｖ  ＦＧＦ１点変異を含有する例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラを示す。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１３６〜１７７である。
【０１１３】
配列番号８８は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（ＦＧＦ１ΔＮＴ−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１２７〜１６８である。
【０１１４】
配列番号８９は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（ＦＧＦ１ΔＮＴ３−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１２５〜１６６である。
【０１１５】
配列番号９０は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ１−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖを含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１２７〜１６８である。
【０１１６】
配列番号９１は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ１−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖを含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１２５〜１６６である。
【０１１７】
配列番号９２は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ１−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖを含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１３６〜１７７である。
【０１１８】
配列番号９３は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ２−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗを含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１２７〜１６８である。
【０１１９】
配列番号９４は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ２−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗを含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１２５〜１６６である。
【０１２０】
配列番号９５は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ２−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗを含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１３６〜１７７である。
【０１２１】
配列番号９６は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ３−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、変異Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４−１０６およびΔ１２０−１２２を含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１２１〜１６２である。
【０１２２】
配列番号９７は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ３−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、変異Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４−１０６およびΔ１２０−１２２を含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１１９〜１６０である。
【０１２３】
配列番号９８は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラ（Ｍ３−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、変異Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４−１０６およびΔ１２０−１２２を含む。ＦＧＦ２１部分は、アミノ酸１３０〜１７１である。
【０１２４】
配列番号９９は、例示的なＦＧＦ１９タンパク質配列を示す。成熟型のＦＧＦ１９は、アミノ酸２３〜２１６である。
【０１２５】
配列番号１００は、例示的なＣ末端ＦＧＦ１９タンパク質配列（Ｌ１６９−Ｋ２１６  ｈ  ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。この断片は、そのＮ末端において、本明細書に提供されているいずれかのＦＧＦ１変異体のＣ末端に取り付けて、ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラを作製することができる。
【０１２６】
配列番号１０１は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラを示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｋ１２ＶおよびＮ９５Ｖを含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１３６〜１８３である。
【０１２７】
配列番号１０２は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（ＦＧＦ１ΔＮＴ−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１２７〜１７４である。
【０１２８】
配列番号１０３は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（ＦＧＦ１ΔＮＴ３−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１２５〜１７２である。
【０１２９】
配列番号１０４は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ１−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖを含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１３６〜１８３である。
【０１３０】
配列番号１０５は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ１−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖを含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１２７〜１７４である。
【０１３１】
配列番号１０６は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ１−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖを含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１２５〜１７２である。
【０１３２】
配列番号１０７は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ２−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗを含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１３６〜１８３である。
【０１３３】
配列番号１０８は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ２−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗを含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１２７〜１７４である。
【０１３４】
配列番号１０９は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ２−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、点変異Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗを含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１２５〜１７２である。
【０１３５】
配列番号１１０は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ３−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、変異Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４−１０６およびΔ１２０−１２２を含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１３０〜１７７である。
【０１３６】
配列番号１１１は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ３−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、変異Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４−１０６およびΔ１２０−１２２を含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１２１〜１６８である。
【０１３７】
配列番号１１２は、例示的なＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ（Ｍ３−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）を示す。ＦＧＦ１部分は、変異Ｌ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Δ１０４−１０６およびΔ１２０−１２２を含む。ＦＧＦ１９部分は、アミノ酸１１９〜１６６である。
【０１３８】
配列番号１１３は、例示的なＦＧＦ１ヘパラン結合ＫＫＫ変異体アナログＫ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を示す。
【０１３９】
配列番号１１４は、変異Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１８Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＦＧＦ１ヘパラン結合ＫＫＫ変異体アナログを示す。
【０１４０】
配列番号１１５は、Ｎ末端トランケーションおよび変異Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＦＧＦ１ヘパラン結合ＫＫＫ変異体アナログを示す。
【０１４１】
配列番号１１６は、Ｎ末端トランケーションおよび変異Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＦＧＦ１ヘパラン結合ＫＫＫ変異体アナログを示す。
【０１４２】
配列番号１１７は、Ｎ末端トランケーションおよび変異Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１８Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＦＧＦ１ヘパラン結合ＫＫＫ変異体アナログを示す。
【０１４３】
配列番号１１８は、Ｎ末端トランケーションおよび変異Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１８Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＦＧＦ１ヘパラン結合ＫＫＫ変異体アナログを示す。
【０１４４】
配列番号１１９は、変異Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＦＧＦ１ヘパラン結合ＫＫＫ変異体アナログを示す。
【０１４５】
配列番号１２０は、変異Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１８Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＦＧＦ１ヘパラン結合ＫＫＫ変異体アナログを示す。
【０１４６】
配列番号１２１は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質二量体配列（Ｃ２２４０）を示す。
【０１４７】
配列番号１２２は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質配列を示す。
【０１４８】
配列番号１２３〜１３０は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質配列を示す。加えて、そのそれぞれは、リンカーを介して配列番号１２２に連結することができ、続いてその結果得られるキメラをそのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる。
【０１４９】
配列番号１３１〜１４０は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質配列を示す。
【０１５０】
配列番号１４１は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質配列を示す。加えて、これは、リンカーを介して配列番号１４２〜１４３のいずれかに連結することができ、続いてその結果得られるキメラをそのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる。
【０１５１】
配列番号１４２は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質配列を示す。加えて、これは、リンカーを介して配列番号１４１に連結することができ、続いてその結果得られるキメラをそのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる。
【０１５２】
配列番号１４３は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質配列を示す。加えて、これは、リンカーを介して配列番号１４１に連結することができ、続いてその結果得られるキメラをそのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる。
【０１５３】
配列番号１４４〜１４６は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質配列を示す。
【０１５４】
配列番号１４７は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なＦＧＦＲ１ｃ結合タンパク質配列を示す。加えて、これは、それと同じものに１回またはそれより多い回数連結して、二量体または三量体等、ＦＧＦＲ１ｃ多量体を作製することができる。
【０１５５】
配列番号１４８（Ｃ２９８７）は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なＦＧＦＲ１ｃ結合タンパク質配列を示す。加えて、これは、それと同じものに１回またはそれより多い回数連結して、二量体または三量体等、ＦＧＦＲ１ｃ多量体を作製することができる。
【０１５６】
配列番号１４９〜１６７は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なＦＧＦＲ１ｃ結合タンパク質配列を示す。加えて、そのそれぞれは、それと同じものに１回もしくはそれより多い回数連結して、二量体もしくは三量体等、ＦＧＦＲ１ｃ多量体を作製することができる、またはこれらの結合タンパク質の組合せは、共に連結することができる。
【０１５７】
配列番号１６８〜１７１は、そのＮまたはＣ末端において、本明細書に提供されているＦＧＦ１変異体のいずれかに直接的にまたは間接的に取り付けて、キメラタンパク質を作製することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ−ＦＧＦＲ１ｃ結合タンパク質配列を示す。
【０１５８】
配列番号１７２は、例示的なＷＴ−ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ａに表されている。
【０１５９】
配列番号１７３は、例示的なΔＮＴ  ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｂに表されている。
【０１６０】
配列番号１７４は、例示的なＦＧＦ１  ＫＮ／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｃに表されている。
【０１６１】
配列番号１７５は、例示的なＦＧＦ１ＫＫＫ／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｄに表されている。
【０１６２】
配列番号１７６は、２個のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分を有する例示的なＷＴ−ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｆに表されている。
【０１６３】
配列番号１７７は、２個のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分を有する例示的なΔＮＴ  ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｇに表されている。
【０１６４】
配列番号１７８は、２個のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分を有する例示的なＦＧＦ１  ＫＮ／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｈに表されている。
【０１６５】
配列番号１７９は、２個のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分を有する例示的なＦＧＦ１  ＫＫＫ／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｉに表されている。
【０１６６】
配列番号１８０は、例示的なＷＴ−ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１１Ａに表されている。
【０１６７】
配列番号１８１は、例示的なΔＮＴ  ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１１Ｂに表されている。
【０１６８】
配列番号１８２は、例示的なＦＧＦ１  ＫＮ／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１１Ｃに表されている。
【０１６９】
配列番号１８３は、例示的なＦＧＦ１ＫＫＫ／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１１Ｄに表されている。
【０１７０】
配列番号１８４は、２個のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分を有する例示的なＷＴ−ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１１Ｆに表されている。
【０１７１】
配列番号１８５は、２個のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分を有する例示的なｄＮＴ  ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１１Ｆに表されている。
【０１７２】
配列番号１８６は、２個のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分を有する例示的なＦＧＦ１  ＫＮ／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｈに表されている。
【０１７３】
配列番号１８７は、２個のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分を有する例示的なＦＧＦ１ＫＫＫ／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２２４０）を示す。これは、図１０Ｉに表されている。
【０１７４】
配列番号１８８は、例示的なΔＮＴ  ＦＧＦ１／ＦＧＦＲ１ｃ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２９８７）を示す。これは、図８Ｊに表されている。
【０１７５】
配列番号１８９は、例示的なΔＮＴ  ＦＧＦ１／ＦＧＦＲ１ｃ結合タンパク質キメラ配列（Ｃ２９８７）を示す。これは、図９Ｉに表されている。
【０１７６】
配列番号１９０は、例示的なＦＧＦＲ１ｃ二量体キメラ配列（Ｃ２９８７）を示す。これは、図１０Ｅに表されている。
【０１７７】
配列番号１９１（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｒ３５Ｅ、Ｃ１１７Ｖ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｒ３５ＥおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１７８】
配列番号１９２（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｒ３５Ｅ、Ｃ１１７Ｖ、ＫＫＫ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｒ３５Ｅ、Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７ＶおよびＫ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１７９】
配列番号１９３（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｒ３５Ｅ、Ｃ１１７Ｖ  Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｒ３５Ｅ、Ｎ９５ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１８０】
配列番号１９４（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｒ３５Ｅ、Ｃ１１７Ｖ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｒ３５ＥおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１８１】
配列番号１９５（ＦＧＦ１ΔＮＴＫＮ  ＫＫＫ（１０〜１４０αα））は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ、Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＲ３５Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１８２】
配列番号１９６（ＦＧＦ１  ＫＫＫ（ＫＮ）（１〜１４０αα））は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ、Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＲ３５Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１８３】
配列番号１９７（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｍ２ＫＮ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｒ３５Ｅ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１８４】
配列番号１９８（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｍ２ＫＮＫＫＫ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｒ３５Ｅ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１８５】
配列番号１９９（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｒ３５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｒ３５ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１８６】
配列番号２００（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｒ３５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、ＫＫＫ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｒ３５Ｖ、Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７ＶおよびＫ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１８７】
配列番号２０１（ＦＧＦ１（１〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｒ３５Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｒ３５Ｖ、Ｎ９５ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１８８】
配列番号２０２（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｒ３５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｒ３５ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１８９】
配列番号２０３（ＦＧＦ１ΔＮＴＫＮＫＫＫ（１０〜１４０αα））は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ  Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＲ３５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１９０】
配列番号２０４（ＦＧＦ１ ＫＫＫ（ＫＮ）（１〜１４０αα））は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ、Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＲ３５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１９１】
配列番号２０５（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｍ２ＫＮ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｒ３５Ｖ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１９２】
配列番号２０６（ＦＧＦ１ΔＮＴ１（１０〜１４０αα）Ｍ２ＫＮＫＫＫ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｒ３５Ｖ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０１９３】
配列番号２０７（ＦＧＦ１〜１４０αα）Ｃ１１７Ｖ、ＫＫＫＲは、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１８Ｖ、Ｒ１１９Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１９４】
配列番号２０８（ＦＧＦ１〜１４０αα）Ｃ１１７Ｖ、ＫＹは、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｙ９４Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１９５】
配列番号２０９（ＦＧＦ１〜１４０αα）Ｃ１１７Ｖ、ＫＥは、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１９６】
配列番号２１０（ＦＧＦ１〜１４０αα）Ｃ１１７Ｖ、ＫＥＹ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｙ９４Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１９７】
配列番号２１１（ＦＧＦ１〜１４０αα）Ｃ１１７Ｖ、ＫＮＹは、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｙ９４Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１９８】
配列番号２１２（ＦＧＦ１〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｌ４６Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｐ１３４Ｖ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための点変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４６Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｐ１３４Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０１９９】
配列番号２１３（ＦＧＦ１〜１４０αα）Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１８Ｖは、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｃ１１７ＶおよびＫ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２００】
配列番号２１４（ＦＧＦΔＮＴ１Ｃ  １０〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ１１７Ｖ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ８３ＴおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０２０１】
配列番号２１５（ＦＧＦΔＮＴ１Ｃ１０〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１６Ｔ、Ｃ８３Ｓ、Ｃ１１７Ａ）は、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１６Ｔ、Ｃ８３ＳおよびＣ１１７Ａ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０２０２】
配列番号２１６（ＦＧＦΔＮＴ１１０〜１４０αα）Ｈ２１Ｙ、Ｌ４４Ｆ、Ｈ１０２Ｙ、Ｆ１０８Ｙ、Ｃ１１７Ｖは、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｈ２１Ｙ、Ｌ４４Ｆ、Ｈ１０２Ｙ、Ｆ１０８ＹおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０２０３】
配列番号２１７（ＦＧＦΔＮＴ１１０〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｈ２１Ｙ、Ｌ４４Ｆ、Ｎ９５Ｖ、Ｈ１０２Ｙ、Ｆ１０８Ｙ、Ｃ１１７Ｖは、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｈ２１Ｙ、Ｌ４４Ｆ、Ｎ９５Ｖ、Ｈ１０２Ｙ、Ｆ１０８ＹおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０２０４】
配列番号２１８（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｈ２１Ｙ、Ｌ４４Ｆ、Ｎ９５Ｖ、Ｈ１０２Ｙ、Ｆ１０８Ｙ、Ｃ１１７Ｖは、分裂促進活性を低下させ、熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｈ２１Ｙ、Ｌ４４Ｆ、Ｎ９５Ｖ、Ｈ１０２Ｙ、Ｆ１０８ＹおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２０５】
配列番号２１９（ｗｔＦＧＦ１ΔＨＢＳ−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）は、βｋｌｏｔｈｏ依存性アゴニスト（ＦＧＦ２１）およびβｋｌｏｔｈｏ非依存性アゴニスト（ＦＧＦ１）の代謝上の利益を組み合わせる試薬を作製するために、Ｃ末端（アミノ酸１３６〜１７７）においてＦＧＦ２１の部分に融合された、血清半減期および受容体親和性に影響を与えるためのヘパリン結合部位の機能性を低下させる変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２０６】
配列番号２２０（ｗｔＦＧＦ１ΔＨＢＳ−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）は、βｋｌｏｔｈｏ依存性アゴニスト（ＦＧＦ１９）およびβｋｌｏｔｈｏ非依存性アゴニスト（ＦＧＦ１）の代謝上の利益を組み合わせる試薬を作製するために、Ｃ末端（アミノ酸１３８〜１８３）においてＦＧＦ１９の部分に融合された、血清半減期および受容体親和性に影響を与えるためのヘパリン結合部位の機能性を低下させる変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２０７】
配列番号２２１は、例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示し、１６個のＮ末端アミノ酸は、ＦＧＦ２１（配列番号２０のアミノ酸２８〜４３）に由来し、配列は、Ｃ１１７Ｖ変異を含む。
【０２０８】
配列番号２２２は、例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示し、４個のＮ末端アミノ酸は、ＦＧＦ２１（配列番号２０のアミノ酸４０〜４３）に由来し、配列は、Ｃ１１７Ｖ変異を含む。
【０２０９】
配列番号２２３（ｗｔＦＧＦ１−ＦＧＦ２１Ｃ−ｔａｉｌ）は、βｋｌｏｔｈｏ依存性アゴニスト（ＦＧＦ２１）およびβｋｌｏｔｈｏ非依存性アゴニスト（ＦＧＦ１）の代謝上の利益を組み合わせる試薬を作製するためにＣ末端（アミノ酸１３６〜１７７）においてＦＧＦ２１の部分に融合された、例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２１０】
配列番号２２４（ｗｔＦＧＦ１−ＦＧＦ１９Ｃ−ｔａｉｌ）は、βｋｌｏｔｈｏ依存性アゴニスト（ＦＧＦ１９）およびβｋｌｏｔｈｏ非依存性アゴニスト（ＦＧＦ１）の代謝上の利益を組み合わせる試薬を作製するためにＣ末端（アミノ酸１３８〜１８３）においてＦＧＦ１９の部分に融合された、例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２１１】
配列番号２２５（ＦＧＦΔＮＴ１Ｃ  １０〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖは、分裂促進性を低下させ、ＦＧＦ１の安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０２１２】
配列番号２２６（ＦＧＦ１  ＫＫＫ  １〜１４０αα）Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖは、分裂促進性を低下させ、ＦＧＦ１の安定性を増加させるための変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３ＱおよびＫ１１８Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２１３】
配列番号２２７（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３Ｇ、Ｎ９５Ｖは、分裂促進性を低下させ、ＦＧＦ１の熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３ＧおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２１４】
配列番号２２８（ＦＧＦΔＮＴ  １０〜１４０αα）Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３Ｇ、Ｎ９５Ｖは、分裂促進性を低下させ、ＦＧＦ１の熱安定性を増加させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３ＧおよびＮ９５Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０２１５】
配列番号２２９（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）Ｍ２ＫＮ  Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｆ１３２Ｗは、ＦＧＦ１の熱安定性を増加させずに分裂促進性を低下させる変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２１６】
配列番号２３０（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）Ｃ１１７Ｖは、ジスルフィド架橋した凝集タンパク質を形成し得る遊離システインを排除することによりＦＧＦ１の安定性を改善するための変異（Ｃ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２１７】
配列番号２３１（ＦＧＦ１  １〜１４０αα））ＫＫＫ（ＫＮ）Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ、Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖは、分裂促進性およびヘパラン結合を低下させ、ＦＧＦ１のタンパク質凝集の可能性を減少させるための変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１８Ｖ、Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２１８】
配列番号２３２（ＦＧＦ１  １０〜１４０αα）Ｍ２ＫＮ  Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｆ１３２Ｗは、熱安定性に影響を与えずに、分裂促進性を低下させ、ＦＧＦ１のタンパク質凝集の可能性を減少させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７ＶおよびＦ１３２Ｗ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０２１９】
配列番号２３３（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）Ｒ３５Ｅ、Ｃ１１７Ｖは、受容体結合親和性／特異性を操作し、ＦＧＦ１のタンパク質凝集の可能性を減少させるための変異（Ｒ３５ＥおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２２０】
配列番号２３４（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）ＫＹ  Ｋ１２Ｖ、Ｙ９４Ｖ、Ｃ１１７Ｖは、受容体結合親和性／特異性を操作し、ＦＧＦ１のタンパク質凝集の可能性を減少させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｙ９４ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２２１】
配列番号２３５（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）ＫＥ  Ｋ１２Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｃ１１７Ｖは、受容体結合親和性／特異性を操作し、ＦＧＦ１のタンパク質凝集の可能性を減少させるための変異（Ｋ１２Ｖ、Ｅ８７ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２２２】
配列番号２３６（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）ＫＫＫＲ  Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１８Ｖ、Ｒ１１９Ｖは、ヘパラン結合親和性／特異性を低減させ、ＦＧＦ１のタンパク質凝集の可能性を減少させるための変異（Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１３Ｑ、Ｃ１１７Ｖ、Ｋ１１８ＶおよびＲ１１９Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２２３】
配列番号２３７（ＦＧＦ１  １〜１４０αα）ＫＮ  Ｒ３５Ｅ、Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖは、受容体結合親和性／特異性を操作し、ＦＧＦ１のタンパク質凝集の可能性を減少させるための変異（Ｒ３５Ｅ、Ｋ１２Ｖ、Ｎ９５ＶおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的な成熟型のＦＧＦ１を示す。
【０２２４】
配列番号２３８（ＦＧＦ１  １０〜１４０αα）ＫＮ  Ｒ３５Ｅ、Ｃ１１７Ｖは、受容体結合親和性／特異性を操作し、ＦＧＦ１のタンパク質凝集の可能性を減少させるための変異（Ｒ３５ＥおよびＣ１１７Ｖ、ナンバリングは、配列番号５を参照）を有する例示的なＮ末端トランケート型のＦＧＦ１を示す。
【０２２５】
詳細な説明
用語および方法に関する次の説明は、本開示をより良く記載し、本開示の実施において当業者をガイドするために示されている。文脈がそれ以外を明らかに指示しない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、１または１より大を指す。例えば、用語「細胞を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ａ  ｃｅｌｌ）」は、単一または複数の細胞を含み、語句「少なくとも１個の細胞を含む」に等しいと考慮される。文脈がそれ以外を明らかに示さない限り、用語「または」は、記述されている二者択一の要素のうちの単一の要素または２個もしくはそれより多くの要素の組合せを指す。本明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」を意味する。よって、「ＡまたはＢを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、追加的な要素を除外することなく、「Ａ、Ｂ、またはＡおよびＢを含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」を意味する。本明細書に参照されているＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号の日付は、少なくとも２０１５年１０月３０日には利用できる配列である。本明細書に引用されているあらゆる参考文献およびＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号は、参照により援用する。
【０２２６】
他に説明がない限り、本明細書に使用されているあらゆる技術および科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者に一般的に理解されているものと同じ意義を有する。本開示の実施または検査において、本明細書に記載されているものと同様または均等な方法および材料を使用することができるが、適した方法および材料を後述する。材料、方法および例は、単なる説明目的であり、限定を企図するものではない。
本開示の様々な実施形態の概説を容易にするために、特異的な用語に関する次の説明を示す：
【０２２７】
投与：いずれか有効な経路によって、本明細書に開示されているグルココルチコイドまたはＦＧＦ１アナログ（例えば、変異したＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質）等、薬剤を被験体に提供するまたは与えること。例示的な投与経路として、経口、注射（皮下、筋肉内、皮内、腹腔内、静脈内および腫瘍内等）、舌下、直腸、経皮、鼻腔内、腟および吸入経路が挙げられるがこれらに限定されない。一部の例では、治療剤は、中枢神経系（例えば、頭蓋内、脳室内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）／脳室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）、脳内／実質内およびくも膜下腔内／硬膜外）に投与される。
【０２２８】
ベータ−Ｋｌｏｔｈｏ結合ドメインまたはタンパク質：β−Ｋｌｏｔｈｏ（ヒトβ−Ｋｌｏｔｈｏ、ＯＭＩＭ６１１３５、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）受託番号ＮＰ＿７８３８６４．１等）に選択的に結合するが、他のタンパク質には結合しないペプチド配列。β−Ｋｌｏｔｈｏは、ＦＧＦ２１活性の補助因子である。斯かる結合ドメインは、１個またはそれより多くの単量体（単量体は、同じまたは異なるβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質となることができる）を含み、これにより、多量体（二量体等）を作製することができる。具体例では、斯かるドメイン／タンパク質は、抗体ではない。例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質は、配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６および１６８〜１７１ならびに全てここに参照により援用する米国特許第８，３７２，９５２号、米国特許公開第２０１３／０１９７１９１号およびＳｍｉｔｈら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８巻：ｅ６１４３２頁、２０１３年に見出すことができる。
【０２２９】
解離定数（ＫＤ）が、少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１．５×１０−７、少なくとも約２×１０−７、少なくとも約２．５×１０−７、少なくとも約３×１０−７、少なくとも約少なくとも約５×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約５×１０−８、少なくとも約１×１０−９、少なくとも約５×１０−９、少なくとも約１×１０−１０または少なくとも約５×１０−１０Ｍである場合、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質は、β−Ｋｌｏｔｈｏに「特異的に結合」する。一実施形態では、ＫＤは、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質およびβ−Ｋｌｏｔｈｏにより行われる放射標識された抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。別の例では、ＫＤは、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。
【０２３０】
Ｃ末端部分：タンパク質のＣ末端残基でまたはその付近で始まる連続したアミノ酸ストレッチを含むタンパク質配列の領域。タンパク質のＣ末端部分は、連続したアミノ酸ストレッチ（例えば、多数のアミノ酸残基）によって定義することができる。
【０２３１】
がん：異常なまたは制御されない細胞成長によって特徴付けられる悪性腫瘍。がんに関連することが多い他の特色は、転移、隣接する細胞の正常機能への干渉、異常レベルでのサイトカインまたは他の分泌産物の放出、および炎症性または免疫学的応答の抑制または増悪、リンパ節等、周囲のまたは遠隔の組織または臓器の浸潤等を含む。「転移性疾患」は、本来の腫瘍部位を離れ、例えば、血流またはリンパ系を介して身体の他の部分へと遊走するがん細胞を指す。一例では、開示されている方法により処置される被験体は、がんを有し、ステロイド処置によって誘導された高血糖を有する。
【０２３２】
キメラタンパク質：全長の第１のタンパク質（例えば、ＦＧＦ１）の配列の少なくとも一部分および全長の第２のタンパク質（例えば、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２１、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質またはＦＧＦ１Ｒ結合タンパク質）の配列の少なくとも一部分を含むタンパク質であって、この第１および第２のタンパク質が異なる、タンパク質。キメラポリペプチドは、同じポリペプチドに由来する２個またはそれを超える非連続部分を含むポリペプチドも包含する。２個の異なるペプチドは、直接的にまたは例えばリンカーを使用して間接的に連結することができる。
【０２３３】
有効量または治療有効量：障害または疾患のいずれかの症状および／または根底にある原因の防止、処置（予防を含む）、低下および／または改善に十分な量である、本明細書に開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質（またはこれをコードする核酸）、抗精神病薬またはＧＣ等、薬剤の量。一実施形態では、変異したＦＧＦ１タンパク質（またはこれをコードする核酸）の「有効量」は、血中グルコースを低減するのに十分な量である。一実施形態では、変異したＦＧＦ１タンパク質（またはこれをコードする核酸）の「有効量」は、高コルチゾール血症を有する被験体においてコルチゾールを低下するのに十分な量である。
【０２３４】
線維芽細胞増殖因子１（ＦＧＦ１）：（例えば、ＯＭＩＭ１３２２０）。ＦＧＦ１核酸分子およびタンパク質を含む。ＦＧＦ受容体に結合し、酸性ＦＧＦとしても公知であるタンパク質。ＦＧＦ１配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）配列データベースから公表されている（例えば、受託番号ＮＰ＿００７９１およびＮＰ＿０３４３２７は、例示的なＦＧＦ１タンパク質配列を示すが、受託番号ＮＭ＿０００８００およびＮＭ＿０１０１９７は、例示的なＦＧＦ１核酸配列を示す）。当業者であれば、ＦＧＦ１バリアントを含む、追加的なＦＧＦ１核酸およびタンパク質配列を同定することができる。
【０２３５】
ネイティブＦＧＦ１配列の具体例は、配列番号１〜５に示されている。ネイティブＦＧＦ１配列は、タンパク質の正常活性（例えば、配列番号２、４または配列番号５の活性）を変更する変異を含まない配列である。変異したＦＧＦ１は、低下した分裂促進性等、異なるまたは変更された生物学的活性を有するＦＧＦ１のバリアントである（例えば、配列番号１〜５のいずれかに対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有するが、ネイティブ／野生型配列ではないバリアント等、配列番号１〜５のいずれかのバリアント）。一例では、斯かるバリアントは、ＦＧＦ１の分裂促進性を減少させる変化等、Ｎ末端トランケーション、少なくとも１個の点変異（表１に示すもののうちの１個またはそれより多く等）またはこれらの組合せを含む。変異したＦＧＦ１タンパク質は、ＦＧＦ１キメラ（例えば、ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ）を含む。具体的で例示的なＦＧＦ１変異体タンパク質は、配列番号６〜１３、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８において示される。
【０２３６】
線維芽細胞増殖因子１９（ＦＧＦ１９）：（例えば、ＯＭＩＭ６０３８９１）。ＦＧＦ１９核酸分子およびタンパク質を含む。ＦＧＦ１９は、胆汁酸合成を調節し、グルコースおよび脂質代謝に効果を有する。ＦＧＦ１９配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）配列データベースから公表されている（例えば、受託番号ＮＰ＿００５１０８．１およびＡＡＱ８８６６９．１は、例示的なＦＧＦ１９タンパク質配列を示すが、受託番号ＡＹ３５８３０２．１およびＮＭ＿００５１１７．２は、例示的なＦＧＦ１９核酸配列を示す）。当業者であれば、ＦＧＦ１９バリアントを含む、追加的なＦＧＦ１９核酸およびタンパク質配列を同定することができる。
【０２３７】
線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）：（例えば、ＯＭＩＭ６０９４３６）。ＦＧＦ２１核酸分子およびタンパク質を含む。ＦＧＦ２１は、脂肪細胞においてアップデートされたグルコースを刺激する。ＦＧＦ２１配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）配列データベースから公表されている（例えば、受託番号ＡＡＱ８９４４４．１、ＮＰ＿０６１９８６およびＡＡＨ４９５９２．１は、例示的なＦＧＦ２１タンパク質配列を示すが、受託番号ＡＹ３５９０８６．１およびＢＣ０４９５９２は、例示的なＦＧＦ２１核酸配列を示す）。当業者であれば、ＦＧＦ２１バリアントを含む、追加的なＦＧＦ２１核酸およびタンパク質配列を同定することができる。
【０２３８】
線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）結合ドメインまたはタンパク質：ＦＧＦＲ１（ヒトＦＧＦＲ１ｃ等、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１１６７５３６．１またはＮＰ＿０５６９３４．２またはヒトＦＧＦＲ１ｂ）に選択的に結合するが、他のタンパク質には結合しないペプチド配列。ＦＧＦＲ１は、ＦＧＦ２１活性の共受容体である。斯かる結合ドメインは、１個またはそれより多くの単量体（単量体は、同じまたは異なる配列となることができる）を含み、これにより、多量体（二量体等）を作製することができる。具体例では、斯かるドメイン／タンパク質は、抗体ではない。例示的なＦＧＦＲ１結合タンパク質は、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、ならびに１６８、１６９、１７０および１７１の一部分、または配列番号１９０等のこれらの多量体ならびに全てここに参照により援用する米国特許第８，３７２，９５２号、米国特許公開第２０１３／０１９７１９１号およびＳｍｉｔｈら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８巻：ｅ６１４３２頁、２０１３年に見出すことができる。よって、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体の参照は、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７および１９０のうちの１つまたはそれより多くに対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する２個またはそれより多くのペプチドを使用して作製されたタンパク質を含む。
【０２３９】
解離定数（ＫＤ）が、少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１．５×１０−７、少なくとも約２×１０−７、少なくとも約２．５×１０−７、少なくとも約３×１０−７、少なくとも約少なくとも約５×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約５×１０−８、少なくとも約１×１０−９、少なくとも約５×１０−９、少なくとも約１×１０−１０または少なくとも約５×１０−１０Ｍである場合、ＦＧＦＲ１結合タンパク質は、ＦＧＦＲ１に「特異的に結合」する。一実施形態では、ＫＤは、ＦＧＦＲ１結合タンパク質およびＦＧＦＲ１により行われる放射標識された抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。別の例では、ＫＤは、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定される。
【０２４０】
線維芽細胞増殖因子受容体１ｃ（ＦＧＦＲ１ｃ）：ＦＧＦＲ１アイソフォーム２としても公知。ＦＧＦＲ１ｃ核酸分子およびタンパク質を含む。ＦＧＦＲ１ｃおよびβ−Ｋｌｏｔｈｏは、ＦＧＦ２１と会合して、シグナリング複合体を形成することができる。ＦＧＦＲ１ｃ配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）配列データベースから公表されている（例えば、受託番号ＮＰ＿００１１６７５３６．１およびＮＰ＿０５６９３４．２は、例示的なＦＧＦＲ１ｃタンパク質配列を示す）。当業者であれば、ＦＧＦＲ１ｃバリアントを含む、追加的なＦＧＦＲ１ｃ核酸およびタンパク質配列を同定することができる。
【０２４１】
線維芽細胞増殖因子受容体４（ＦＧＦＲ４）：（例えば、ＯＭＩＭ１３４９３５）。ＦＧＦＲ４核酸分子およびタンパク質を含む。ＦＧＦＲ４は、ＦＧＦ１を含む一部のＦＧＦタンパク質に結合することができる。ＦＧＦＲ４配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）配列データベースから公表されている（例えば、受託番号ＮＭ＿００２０１１およびＡＡＢ２５７８８．１は、例示的なＦＧＦＲ４タンパク質配列を示すが、受託番号ＮＭ＿００２００２およびＬ０３８４０．１は、例示的なＦＧＦＲ４核酸配列を示す）。当業者であれば、ＦＧＦＲ４バリアントを含む、追加的なＦＧＦＲ４核酸およびタンパク質配列を同定することができる。
【０２４２】
グルココルチコイド（ＧＣ）：グルココルチコイド受容体（ＧＲ）に結合し、例えば、Ｂ細胞およびＴ細胞を含むリンパ球の機能および数を減少させることにより免疫抑制を引き起こす、ステロイドホルモンの１クラス。デキサメタゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロンおよびベクロメタゾン等の合成化合物、ならびにヒトにおけるコルチゾールおよび齧歯類におけるコルチコステロン等の天然化合物を含む。ヒドロコルチゾンは、コルチゾールの薬学的調製物に対して使用される名称である。
【０２４３】
天然ＧＣは、副腎皮質において産生され、グルコース恒常性および栄養素代謝の調節における役割を果たす。合成ＧＣは、その抗炎症性、抗アレルギー性および免疫抑制性効果のため、多数の病理学的状態のために広く処方されている。にもかかわらず、ＧＣは、グルコース恒常性の調節との相互作用により、望まれない糖尿病誘発性副作用を生じ得る。
【０２４４】
宿主細胞：ベクターを繁殖させ、そのＤＮＡを発現させることができる細胞。細胞は、原核生物または真核生物のものとなり得る。この用語は、対象宿主細胞のいずれかの後代も含む。複製の際に生じる変異が存在し得るため、あらゆる後代が、親細胞と同一となる訳ではないことが理解される。しかし、斯かる後代は、用語「宿主細胞」が使用される場合に含まれる。よって、宿主細胞は、本明細書に開示されている変異体ＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸分子等、細胞に導入された核酸分子を含むという点において、トランスジェニックとなり得る。
【０２４５】
高コルチゾール血症：副腎によって分泌されたグルココルチコイドである、循環コルチゾールの正常レベルを上回る増加。高コルチゾール血症を有する被験体の例は、クッシング症候群を有する被験体であり、これは、プレドニゾン等の過剰なコルチゾール様薬物療法、または過剰なコルチゾールを産生するもしくは副腎によるその産生をもたらす腫瘍のいずれかに起因し得る。一部の例では、高コルチゾール血症は、肺がん、下垂体もしくは副腎の腫瘍、腎不全、妊娠または外科手術に起因する。
【０２４６】
単離された：「単離された」生物学的構成成分（変異したＦＧＦ１タンパク質または核酸分子等）は、他の染色体および染色体外ＤＮＡおよびＲＮＡならびにタンパク質等、この構成成分が天然に存在する生物の細胞における他の生物学的構成成分から実質的に分離されている、それから離れて産生されている、またはそれから精製されている。よって、「単離された」核酸分子およびタンパク質は、標準精製方法によって精製された核酸およびタンパク質を含む。この用語は、宿主細胞における組換え発現によって調製された核酸分子およびタンパク質ならびに化学合成された核酸も包含する。精製または単離された細胞、タンパク質または核酸分子は、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％純粋となり得る。
【０２４７】
リポジストロフィー：脂肪性組織の異常または変性状態によって特徴付けられる状態であり、全身型リポジストロフィー、部分型リポジストロフィーおよび局在型リポジストロフィーを含む。本明細書に開示されている変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合多量体のいずれかを使用して、例えば、リポジストロフィーの症状（皮膚下からの脂肪の損失、他の区域における脂肪の堆積、体脂肪の損失、インスリン抵抗性、糖尿病、トリグリセリドレベル上昇および脂肪肝のうち１種または複数等）を少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％低下させることにより、リポジストロフィーを処置することができる。
【０２４８】
リンカー：例えば、キメラタンパク質を作製するために、単量体ドメイン等、２個またはそれを超える別個の離れたペプチドまたはタンパク質を連結または接続する部分または部分の群。一例では、リンカーは、実質的に直鎖状部分である。本明細書に提供されているキメラタンパク質の作製に使用することができる例示的なリンカーとして、ペプチド、核酸分子、ペプチド核酸および１個またはそれより多くの酸素原子が炭素骨格に取り込まれた任意選択で置換されたアルキレン部分が挙げられるがこれらに限定されない。リンカーは、ネイティブ配列、そのバリアントまたは合成配列の部分となり得る。リンカーは、天然に存在するアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸または両者の組合せを含むことができる。一例では、リンカーは、５〜１０、５〜２０または５〜５０アミノ酸等、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくとも２０アミノ酸で構成される。一例では、リンカーは、ポリアラニンである。
【０２４９】
哺乳動物：この用語は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物の両方を含む。同様に、用語「被験体」は、ヒトおよび獣医学被験体（ネコ、イヌ、ウシおよびブタ等）ならびに齧歯類（マウスおよびラット等）の両方を含む。
【０２５０】
Ｎ末端部分：タンパク質のＮ末端残基でまたはその付近で始まる連続したアミノ酸ストレッチを含むタンパク質配列の領域。タンパク質のＮ末端部分は、連続したアミノ酸ストレッチ（例えば、多数のアミノ酸残基）によって定義することができる。
【０２５１】
作動可能に連結した：第１の核酸配列が、第２の核酸配列と機能的関係性で配置されている場合、第１の核酸配列は、第２の核酸配列と作動可能に連結している。例えば、プロモーターが、コード配列（変異したＦＧＦ１コード配列等）の転写または発現に影響を与える場合、プロモーターは、コード配列に作動可能に連結している。一般に、作動可能に連結したＤＮＡ配列同士は、連続しており、２個のタンパク質コード領域を連結することが必要な場合、同じ読み枠にある。
【０２５２】
薬学的に許容される担体：本発明において有用な薬学的に許容される担体は、従来通りのものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｅ．  Ｗ．  Ｍａｒｔｉｎ著、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、第１５版（１９７５年）は、本明細書に開示されている、開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質およびＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体（またはこれをコードする核酸分子）の薬学的送達、ならびにＧＣの送達に適した組成物および製剤について記載する。
【０２５３】
一般に、担体の性質は、用いられている特定の投与様式に依存するであろう。例えば、非経口的製剤は、通常、媒体として、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールその他等、薬学的および生理学的に許容される流体を含む注射用流体を含む。固体組成物（例えば、粉末、丸薬、錠剤またはカプセル形態）のため、従来の無毒固体担体は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムを含むことができる。生物学的に中性の担体に加えて、投与するべき医薬組成物は、湿潤または乳化剤、保存料およびｐＨ緩衝剤その他、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレート等、少量の無毒補助的物質を含有することができる。
【０２５４】
プロモーター：核酸の転写を方向付ける核酸制御配列のアレイ。プロモーターは、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合のＴＡＴＡエレメント等、転写の開始部位付近に必要な核酸配列を含む。プロモーターは、転写の開始部位から数千塩基対も離れて配置することができる遠位エンハンサーまたはレプレッサーエレメントも任意選択で含む。
【０２５５】
組換え：組換え核酸分子は、天然に存在しない（例えば、変異したＦＧＦ１またはキメラタンパク質）配列を有する、または２個のそうしなければ離れていた配列セグメントの人為的な組合せによって作製された配列を有する核酸分子である。この人為的な組合せは、化学合成、または遺伝子工学技法等の単離された核酸セグメントの人為的操作等、慣用的な方法によって達成することができる。同様に、組換えタンパク質は、組換え核酸分子にコードされたタンパク質である。同様に、組換えまたはトランスジェニック細胞は、組換え核酸分子を含有し、組換えタンパク質を発現する細胞である。
【０２５６】
アミノ酸配列の配列同一性：アミノ酸（またはヌクレオチド）配列の間の類似性は、それ以外では配列同一性と称される配列の間の類似性の観点から表される。配列同一性は、多くの場合、パーセンテージ同一性（または類似性もしくは相同性）の観点から測定される；パーセンテージが高いほど、２配列はより類似している。ポリペプチドのホモログまたはバリアントは、標準方法を使用して整列した場合、相対的に高度な配列同一性を保有するであろう。
【０２５７】
比較のための配列のアラインメント方法は、本技術分野において周知である。様々なプログラムおよびアラインメントアルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖ．  Ａｐｐｌ．  Ｍａｔｈ．２巻：４８２頁、１９８１年；ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．４８巻：４４３頁、１９７０年；ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．８５巻：２４４４頁、１９８８年；ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ、Ｇｅｎｅ  ７３巻：２３７頁、１９８８年；ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ、ＣＡＢＩＯＳ  ５巻：１５１頁、１９８９年；Ｃｏｒｐｅｔら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １６巻：１０８８１頁、１９８８年；ならびにＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．８５巻：２４４４頁、１９８８年に記載されている。Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．６巻：１１９頁、１９９４年は、配列アラインメント方法および相同性計算に関する詳細な考察を示す。
【０２５８】
ＮＣＢＩ  Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２１５巻：４０３頁、１９９０年）は、配列解析プログラムｂｌａｓｔｐ、ｂｌａｓｔｎ、ｂｌａｓｔｘ、ｔｂｌａｓｔｎおよびｔｂｌａｓｔｘに関連した使用のために、国立バイオテクノロジー情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ＮＣＢＩ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）およびインターネット上を含むいくつかのソースから入手できる。このプログラムを使用して配列同一性を決定する仕方に関する説明は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイトにおいて入手できる。
【０２５９】
本明細書に開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質およびコード配列のホモログおよびバリアントは、典型的に、ＮＣＢＩ  Ｂｌａｓｔ２．０、デフォルトパラメータに設定されたギャップ付きｂｌａｓｔｐを使用して、アミノ酸配列による全長アラインメントにわたって計数される、少なくとも約８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性の保有によって特徴付けられる。約３０アミノ酸を超えるアミノ酸配列の比較のため、デフォルトパラメータ（ギャップ存在コスト１１および残基当たりのギャップコスト１）に設定されたデフォルトＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスを使用したＢｌａｓｔ２配列機能が用いられる。短いペプチド（３０アミノ酸前後よりも少ない）を整列する場合、アラインメントは、デフォルトパラメータ（オープンギャップ９、伸長ギャップ１ペナルティ）に設定されたＰＡＭ３０マトリックスを用いるＢｌａｓｔ２配列機能を使用して行うべきである。参照配列に対しさらにより大きい類似性を有するタンパク質は、この方法によって評価する場合、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性等、増加するパーセンテージ同一性を示すであろう。全体に満たない配列が、配列同一性に関して比較されている場合、ホモログおよびバリアントは、典型的に、１０〜２０アミノ酸の短いウィンドウにわたって少なくとも８０％配列同一性を保有し、参照配列に対するその類似性に応じて少なくとも８５％または少なくとも９０％または少なくとも９５％の配列同一性を保有することができる。斯かる短いウィンドウにわたり配列同一性を決定するための方法は、インターネット上のＮＣＢＩウェブサイトにおいて入手できる。当業者であれば、このような配列同一性範囲が、ガイダンスのためだけに提示されていることを認めるであろう；提示されている範囲の外側に収まる強く有意なホモログを得ることが十分に可能である。
【０２６０】
よって、本明細書に開示されている変異体ＦＧＦ１タンパク質は、配列番号５に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有することができるが、配列番号５ではない（これは一部の例では、表１および２に示す変異またはトランケーションのうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個等、１個またはそれより多くを有する）。加えて、例示的な変異したＦＧＦ１タンパク質は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８、および図８〜図１１に模式的に示す斯かる配列に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有し（例えば、配列番号１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７または１８８に対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性）、ｉｎ  ｖｉｖｏで血中グルコースレベルを低下させる能力を保持する。
【０２６１】
同様に、例示的な変異したＦＧＦ１コード配列は、一部の例では、配列番号１８に対し少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有する。
【０２６２】
同様に、本明細書に開示されている変異体ＦＧＦ１キメラにおいて使用することができる例示的なβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合ドメイン配列は、一部の例では、配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、または配列番号１６８、１６９、１７０もしくは１７１のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合部分に対し少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有する。
【０２６３】
同様に、本明細書に開示されている変異体ＦＧＦ１キメラにおいて使用することができる例示的なＦＧＦＲ１結合配列は、一部の例では、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、または配列番号１６８、１６９、１７０、１７１のＦＧＦＲ１ｃ結合部分、または配列番号１９０等の多量体に対し少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有する。
【０２６４】
ステロイド誘導性高血糖またはステロイド誘導性真性糖尿病（ＳＩＤＭ）：真性糖尿病の前病歴があるまたはない被験体におけるグルココルチコイドの使用（例えば、投与）に伴う血中グルコースの異常増加。斯かる被験体は、８時間空腹時血中グルコース≧７．０ｍｍｏｌ／Ｌ（１２６ｍｇ／ｄＬ）、７５ｇ経口耐糖能検査（ＯＧＴＴ）から２時間後≧１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）、ＨｂＡ１ｃ≧６．５％、または高血糖性の症状を有する患者において、ランダム血漿グルコース≧１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）を有することができる。累積用量を越えたステロイド誘導性糖尿病およびより長い持続時間のステロイド経過のリスク因子は、２型糖尿病の伝統的リスク因子：高齢、家族歴、高いボディマス指数およびグルコース寛容減損を含む。
【０２６５】
被験体：本明細書に提供されている変異したＦＧＦ１タンパク質またはキメラまたはＦＧＦＲ１結合タンパク質（例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質の多量体）（または相当する核酸分子）での処置等、特定の処置のレシピエントとなるべきヒト、非ヒト霊長類、ブタ、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコ、齧歯類その他等、いずれかの哺乳動物。２種の非限定例では、被験体は、ヒト被験体またはネズミ被験体である。一部の例では、被験体は、慢性閉塞性肺疾患、急性痛風、がん（例えば、がんであり、化学療法で処置されている）、細菌性髄膜炎、喘息、胎児肺成熟化を必要とする妊婦、特発性間質性肺炎、過敏性肺臓炎およびサルコイドーシス等の肺疾患；自己免疫性疾患（ループス、グレーブス病、クローン病、セリアック病、関節リウマチ、線維筋痛症、多発性硬化症およびシェーグレン症候群等）；重症筋無力症および多発性硬化症等の神経性疾患；炎症性腸疾患；ハンセン病；呼吸器；実質臓器移植（例えば、肝臓、肺、腎臓、膵臓、心臓）を受けたことがある；アレルギー（季節性アレルギー等）；喘息または敗血症等、ステロイドまたはＧＣにより処置することができる１種または複数の疾患を有する。よって、一部の例では、被験体は、グルココルチコイドの投与のために上昇した血中グルコースを有する。一部の例では、開示されている方法により処置される哺乳動物は、クッシング症候群、肺がん、下垂体もしくは副腎の腫瘍、腎不全、妊娠または外科手術等、高コルチゾール血症をもたらす疾患を有する。一部の例では、被験体は、双極性障害等、抗精神病薬により処置することができる１種または複数の疾患を有する。よって、一部の例では、被験体は、抗精神病薬の投与のために上昇した血中グルコースを有する。一部の例では、被験体は、Ｃ型肝炎ウイルスに感染している。
【０２６６】
形質導入および形質転換された：ウイルスまたはベクターは、核酸を細胞に移入する場合、細胞を「形質導入」する。細胞ゲノムへの核酸の取り込みまたはエピソーム複製のいずれかにより、ＤＮＡが、細胞によって安定的に複製されるようになった場合、細胞は、細胞に形質導入された核酸によって「形質転換」または「トランスフェクト」される。
【０２６７】
化学的方法（例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション）、物理的方法（例えば、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、微粒子銃）、融合（例えば、リポソーム）、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、ＤＮＡ−タンパク質複合体、ウイルスエンベロープ／カプシド−ＤＮＡ複合体）および組換えウイルス等のウイルスによる生物学的感染｛Ｗｏｌｆｆ，  Ｊ．  Ａ．編、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｂｉｒｋｈａｕｓｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＵＳＡ（１９９４年）｝等、多数のトランスフェクション方法が、当業者に公知である。レトロウイルスによる感染の場合、感染するレトロウイルス粒子は、標的細胞によって吸収され、レトロウイルスＲＮＡゲノムの逆転写およびその結果得られるプロウイルスの細胞ＤＮＡへの組み込みをもたらす。
【０２６８】
導入遺伝子：ベクターによって供給される外因的遺伝子。一例では、導入遺伝子は、変異したＦＧＦ１コード配列（キメラの一部分となり得る）またはＦＧＦＲ１結合タンパク質（例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質の多量体）コード配列を含む。
【０２６９】
腫瘍、新生物、悪性疾患またはがん：新生物は、過剰な細胞分裂に起因する組織または細胞の異常成長である。新生物的成長は、腫瘍を産生し得る。個体における腫瘍の量は、腫瘍の数、体積または重量として測定することができる「腫瘍負荷」である。転移しない腫瘍は、「良性」と称される。周囲の組織に浸潤するおよび／または転移することができる腫瘍は、「悪性」と称される。「非がん性組織」は、悪性新生物が形成された同じ臓器に由来する組織であるが、新生物の特徴的病理を持たない。一般に、非がん性組織は、組織学的に正常に見える。「正常組織」は、臓器由来の組織であり、この臓器は、該臓器のがんまたは別の疾患もしくは障害に罹患していない。「がんが無い」被験体は、該臓器のがんと診断されておらず、検出可能ながんを持たない。
【０２７０】
ステロイド誘導性高血糖の被験体が有し得る、がん等の例示的な腫瘍は、乳癌（例えば、小葉および腺管癌）、肉腫、肺の癌腫（例えば、非小細胞癌、大細胞癌、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）および腺癌）、肺の中皮腫、結腸直腸腺癌、胃癌、前立腺の腺癌、卵巣癌（漿液性嚢胞腺癌および粘液性嚢胞腺癌等）、卵巣生殖細胞腫瘍、精巣癌および生殖細胞腫瘍、膵臓腺癌、胆管腺癌、肝細胞癌、膀胱癌（例えば、移行細胞癌、腺癌および扁平上皮癌を含む）、腎細胞腺癌、子宮内膜癌（例えば、腺癌および混合型ミュラー管腫瘍（癌肉腫）を含む）、子宮管内膜、子宮頸膣部（ｅｃｔｏｃｅｒｖｉｘ）および腟の癌腫（これらそれぞれの腺癌および扁平上皮癌腫等）、皮膚の腫瘍（例えば、有棘細胞癌、基底細胞癌、悪性メラノーマ、皮膚付属物腫瘍、カポジ肉腫、皮膚リンパ腫、皮膚付属器腫瘍および様々な種類の肉腫ならびにメルケル細胞癌）、食道癌、上咽頭および中咽頭の癌腫（これらの扁平上皮癌および腺癌を含む）、唾液腺癌、脳および中枢神経系腫瘍（例えば、グリア、ニューロンおよび髄膜起源の腫瘍を含む）、末梢神経の腫瘍、軟部組織肉腫ならびに骨および軟骨の肉腫、ならびにリンパ性腫瘍（Ｂ細胞およびＴ細胞悪性リンパ腫を含む）等、固形腫瘍を含む。一例では、腫瘍は、腺癌である。
【０２７１】
方法を使用して、リンパ性、白血球または他の種類の白血病等、液性腫瘍を有するステロイド誘導性高血糖の被験体を処置することもできる。具体例では、腫瘍は、白血病（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ヘアリー細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、大型顆粒リンパ球性白血病および成人Ｔ細胞白血病）、リンパ腫（ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫等）および骨髄腫）等、血液の腫瘍である。
【０２７２】
ベクター：宿主細胞へと導入され、これにより形質転換された宿主細胞を産生する核酸分子。ベクターは、複製起点等、宿主細胞におけるその複製を可能にする核酸配列を含むことができる。ベクターは、１種またはそれより多くの変異したＦＧＦ１コード配列（キメラの一部分となり得る）、ＦＧＦＲ１結合タンパク質（例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質の多量体）および／または選択可能なマーカー遺伝子、ならびに本技術分野において公知の他の遺伝的エレメントを含むこともできる。ベクターは、細胞を形質導入、形質転換または感染させて、これにより、細胞に、細胞にとってネイティブな核酸および／またはタンパク質以外の核酸および／またはタンパク質を発現させることができる。ベクターは、ウイルス粒子、リポソーム、タンパク質コーティングその他等、細胞への核酸の侵入の達成に役立つ材料を任意選択で含む。
【０２７３】
概要
ステロイド誘導性高血糖またはステロイド誘導性真性糖尿病（ＳＩＤＭ）は、グルココルチコイド使用の認識された合併症である。抗精神病薬による処置も、一部の患者において糖尿病を引き起こす。本開示は、変異したＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質（例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質の多量体）等、治療有効量の１種または複数のＦＧＦ１アナログを投与することにより、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する哺乳動物において血中グルコースを低下させる方法を提供する。
【０２７４】
開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質およびキメラ（またはこれをコードする核酸分子）ならびにＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を使用する方法が、提供されている。本明細書に記されている通り、変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質は、少なくとも６個連続したＮ末端アミノ酸の欠失、少なくとも１個の点変異、またはこれらの組み合わせを含むことができる。例えば、斯かる方法は、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を含む治療有効量の開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質またはキメラタンパク質（少なくとも０．０１、少なくとも０．１ｍｇ／ｋｇまたは少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ等）（またはこれをコードする核酸分子）を投与して、例えば、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体なしの投与（例えば、ＰＢＳの投与）と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％または少なくとも５０％の血中グルコースの減少等、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する哺乳動物において血中グルコースを低下させるステップを含む。よって、本開示は、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を含む治療有効量の１種または複数の開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質またはキメラタンパク質を投与することにより、哺乳動物においてステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を処置する方法も提供する。
【０２７５】
一例では、方法は、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する被験体において、摂食時および空腹時血中グルコースを低下させる、インスリン感受性を増加させる、耐糖能を増加させる、インスリン抵抗性を低下させる、高インスリン血症を低下させる、高血糖を低下させる、またはこれらの組み合わせを行う。斯かる方法は、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を含む治療有効量の１種または複数の開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質またはキメラタンパク質（少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ等）（またはこれをコードする核酸分子）を投与して、摂食時および空腹時血中グルコースを低下させる、インスリン感受性を増加させる、耐糖能を増加させる、インスリン抵抗性を低下させる、高インスリン血症を低下させる、高血糖を低下させるステップ、またはこれらの組み合わせを行うステップを含むことができる。
【０２７６】
一部の例では、摂食時および空腹時血中グルコースは、処置された被験体において、ＦＧＦ１変異体および／またはＦＧＦＲ１−結合タンパク質多量体の投与の非存在と比べた場合に少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％だけ低下する。一部の例では、インスリン感受性および／または耐糖能は、処置された被験体において、処置された被験体において、ＦＧＦ１変異体および／またはＦＧＦＲ１−結合タンパク質多量体の投与の非存在と比べた場合に少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％だけ増大する。一部の例では、インスリン抵抗性は、ＦＧＦ１変異体および／またはＦＧＦＲ１−結合タンパク質多量体により、ＦＧＦ１変異体および／またはＦＧＦＲ１−結合タンパク質多量体の投与の非存在と比べた場合に少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％だけ低下する。一部の例では、高インスリン血症は、処置された被験体において、ＦＧＦ１変異体および／またはＦＧＦＲ１−結合タンパク質多量体の投与の非存在と比べた場合に少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％だけ低下する。一部の例では、これらの組み合わせが達成される。一部の例では、そのような達成は、処置の１２時間以内、２４時間以内または４８時間以内、例えば、ＦＧＦ１変異体および／またはＦＧＦＲ１−結合タンパク質多量体の投与の１２〜２４時間以内、１２〜３６時間以内、２４〜４８時間以内に到達される。
【０２７７】
投与方法は、慣用的なものであり、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内注射または中枢神経系を介するものを含むことができる。
【０２７８】
一部の例では、ヒト、ネコまたはイヌ等、哺乳動物は、１種または複数のグルココルチコイドにより以前に処置された、現在処置されている、または処置されるであろう（将来的に）。例えば、哺乳動物は、ＧＣにより以前に処置された、現在処置されている、または処置されるであろう哺乳動物となることができ、その結果、糖尿病を有する（またはＧＣを投与されたときに、糖尿病を発症する可能性が高くなるであろう）。
【０２７９】
一部の例では、方法は、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を含む治療有効量の変異したＦＧＦ１タンパク質またはキメラタンパク質の哺乳動物への投与の前に、その間にまたはその後に、治療有効量の１種または複数のＧＣを哺乳動物に投与するステップを含む。
【０２８０】
開示されている方法と共に使用することができる、または別の治療法の間に被験体が受けることができる（そしてステロイド誘導性糖尿病を引き起こす）ＧＣの例として、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾンまたはこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。一部の例では、ＧＣは、急性に（短期）、例えば、１〜１５日間、３〜１５日間または７〜１５日間等、１５日間未満の期間投与される。一部の例では、ＧＣは、慢性的に（長期間）、例えば、１５日間より多くの期間、例えば、少なくとも２０日間、少なくとも３０日間、少なくとも６０日間、少なくとも９０日間、少なくとも１８０日間、少なくとも１年間、少なくとも２年間またはそれより多く（例えば、３０〜９０日間、２１〜６０日間または６０〜３６５日間）にわたり投与される。一部の例では、被験体は、臓器移植（例えば、腎臓、心臓、肝臓または肺）、ループスまたはハンセン病を有する哺乳動物等、ステロイドによる慢性処置を必要とする障害を有する。一部の例では、ＧＣは、少なくとも０．１ｍｇ、例えば、少なくとも０．５ｍｇ、少なくとも０．７５ｍｇ、少なくとも１ｍｇ、少なくとも２ｍｇ、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも４０ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも６０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも１００ｍｇ、少なくとも２００ｍｇ、少なくとも２４０ｍｇの用量で投与される。一部の例では、投与されるＧＣの用量は、低い（例えば、毎日＜７．５ｍｇ）。一部の例では、ＧＣの用量は高く、例えば、毎日＞３０ｍｇである。一部の例では、ＧＣは、１〜１００ｍｇ（例えば、１０〜１００ｍｇ、２〜１５ｍｇ、２ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、７５ｍｇまたは１００ｍｇ）の用量で、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも１５日間または少なくとも１か月間にわたり投与される。一部の例では、ＧＣは、１００ｍｇ、７５ｍｇまたは４０ｍｇプレドニゾロン  毎日を４〜１５日間等、プレドニゾロンの急性用量である。内在性ＧＣレベルは、通常、早朝に（４ａｍ〜８ａｍ）高い。一部の例では、内在性レベルと等価な外因性ＧＣのレベルは、その日のより遅い時間に与えた場合、高血糖を誘導することができる。
【０２８１】
一例では、ＧＣは、デキサメタゾンであるかまたはこれを含む。デキサメタゾンは、経口または注射による（例えば、ＩＶおよびＩＭ；リン酸ナトリウムとしての注射）等、慣用的な方法を使用して投与することができる。一部の例では、被験体は、経口、ｉｖまたはｉｍで、６〜１２時間毎に分割用量で１日当たり０．７５〜９ｍｇデキサメタゾンを受ける。一部の例では、被験体は、ＩＭ（酢酸塩として）で、８〜１６ｍｇデキサメタゾンを受ける。一部の例では、被験体は、病巣内に（酢酸塩として）０．８〜１．６ｍｇの、関節内にまたは軟部組織へと（酢酸塩として）４〜１６ｍｇのデキサメタゾンを受ける。一部の例では、被験体は、関節内に、病巣内にまたは軟部組織へと（リン酸ナトリウムとして）、１日当たり０．４〜６ｍｇのデキサメタゾンを受ける。一部の例では、被験体は、初回１０ｍｇ  ＩＶを１回、続いて４ｍｇ  ＩＭを６時間毎に（例えば、脳浮腫のため）デキサメタゾンを受ける。一部の例では、被験体は、がんを有し、各処置日の処置１５〜３０分前に、経口またはＩＶで１０ｍｇ〜２０ｍｇの用量のデキサメタゾンを受けて、化学療法誘導性悪心／嘔吐を処置する。化学療法の持続注入のため：各処置日に１０ｍｇ経口またはＩＶを１２時間毎に。軽度に催嘔吐性の治療法のため：４ｍｇ経口、ＩＶまたはＩＭを４〜６時間毎に。遅延された悪心および嘔吐：８ｍｇ経口を１２時間毎に、２日間；次いで４ｍｇを１２時間毎に、２日間。あるいは、２０ｍｇ経口を化学療法１時間前に；次いで１０ｍｇ経口を化学療法１２時間後に；次いで８ｍｇ経口を１２時間毎に、４用量；次いで４ｍｇ経口を１２時間毎に、４用量。
【０２８２】
一例では、ＧＣは、プレドニゾロンであるかまたはこれを含む。プレドニゾロンは、経口または注射による（例えば、ＩＶおよびＩＭ）等、慣用的な方法を使用して投与することができる。一部の例では、被験体は、１〜４回／日の分割用量で１日当たり５〜６０ｍｇの経口プレドニゾロンを受ける。一部の例では、被験体は、４〜６０ｍｇ／日の静脈内または筋肉内プレドニゾロンを受ける。一部の例では、被験体は、４〜３０ｍｇプレドニゾロンの関節注射を受ける。
【０２８３】
一例では、ＧＣは、ヒドロコルチゾンであるかまたはこれを含む。ヒドロコルチゾンは、注射（例えば、ＩＶおよびＩＭ）等、慣用的な方法を使用して投与することができる。一部の例では、被験体は、投与経路の組み合わせによりヒドロコルチゾンを受ける（例えば、１００ｍｇ  ＩＶボーラス、次いで３００ｍｇ／日を分割用量で８時間毎に、または４８時間の持続注入として）。患者が安定的である場合、経口、５０ｍｇを８時間毎に、６用量、次いで３０〜５０ｍｇ／日へと漸減させる。斯かる仕方は、一部の例では、急性副腎不全を有する被験体において使用することができる）。一部の例では、被験体は、経口、ＩＭまたはＩＶで、１５〜２４０ｍｇ／日のヒドロコルチゾンを受ける（例えば、抗炎症薬として）。一部の例では、被験体は、持続的静脈内注入によって、１日当たり２００ｍｇのヒドロコルチゾンを受ける（例えば、ショックを処置するため）。
【０２８４】
一例では、ＧＣは、コルチゾンであるかまたはこれを含む。コルチゾンは、例えば、１日当たり２５ｍｇ〜３００ｍｇで、１〜２分割用量で（例えば、副腎機能不全、関節炎、ループスまたはリンパ腫を有する被験体において）、経口またはＩＭ等、慣用的な方法を使用して投与することができる。
【０２８５】
一例では、ＧＣは、メチルプレドニゾロンであるかまたはこれを含む。メチルプレドニゾロンは、注射または経口等、慣用的な方法を使用して投与することができる。一部の例では、被験体は、８０〜１２０ｍｇ  ＩＭ（例えば、アレルギー性鼻炎を処置するため）、４〜１２０ｍｇ  ＩＭもしくは関節内（例えば、関節リウマチを処置するため）、３０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶを４〜６時間毎に反復、または１００〜２５０ｍｇ  ＩＶを２〜６時間毎に反復（例えば、ショックを処置するため）の、メチルプレドニゾロンＩＭを受ける。一部の例では、被験体は、１日当たり４〜４８ｍｇ経口；１日当たり２〜２．５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶもしくはＩＭ、２〜３週間かけてゆっくり漸減させる、または２５０〜１，０００ｍｇ  ＩＶ毎日１回もしくは隔日を３〜５用量の用量等、免疫抑制のためにメチルプレドニゾロンを受ける。一部の例では、被験体は、経口またはＩＶにより急性喘息増悪のためにメチルプレドニゾロンを受ける：４０〜８０ｍｇ／日、分割用量で１〜２回／日、または４０〜６０ｍｇ／日の経口メチルプレドニゾロンを分割用量で１〜２回／日を３〜１０日間受ける。一部の例では、被験体は、１回用量として２４０ｍｇのメチルプレドニゾロンＩＭ（酢酸塩）を受ける。一部の例では、被験体は、朝にまたは１日おきに単一用量として与えられる、毎日７．５〜６０ｍｇのメチルプレドニゾロン経口を受ける（例えば、喘息管理のため）。
【０２８６】
一例では、ＧＣは、ベタメタゾンであるかまたはこれを含む。ベタメタゾンは、注射または経口等、慣用的な方法を使用して投与することができる。一部の例では、被験体は、ＩＭで１平方ｃｍ当たり０．２ｍＬの用量のベタメタゾンを受け、最大用量は１ｍＬ／週である（例えば、皮膚科学的障害のため）。一部の例では、被験体は、３〜７日間の間隔で０．２５〜０．５ｍＬのベタメタゾンを受ける（例えば、滑液包炎のため）。一部の例では、被験体は、３〜７日間の間隔で罹患した足に０．５〜１ｍＬのベタメタゾンを受ける（例えば、痛風関節炎のため）。一部の例では、被験体は、酢酸塩とリン酸塩の０．２５〜２ｍｌのベタメタゾンを受ける（例えば、変形性関節症のため）。一部の例では、被験体は、０．６〜７．２ｍｇ／日のベタメタゾン経口を受ける（例えば、抗炎症薬として）。一部の例では、被験体は、１２〜２４時間毎に分割された、最大９ｍｇ／日のベタメタゾンＩＶまたは０．６〜９ｍｇ／日のＩＭを受ける。一部の例では、被験体は、６〜１２時間毎に分割された０．０１７５〜０．１２５ｍｇベース／ｋｇ／日のベタメタゾンＩＭ、または６〜８時間毎に分割された０．０１７５〜０．２５ｍｇ／ｋｇ／日の経口を受ける。
【０２８７】
一例では、ＧＣは、トリアムシノロンであるかまたはこれを含む。トリアムシノロンは、経口等、慣用的な方法を使用して投与することができる。一部の例では、被験体は、毎日４〜１２ｍｇ経口のトリアムシノロンを受ける（例えば、副腎皮質機能不全のため）。一部の例では、被験体は、１２時間毎に等しい分割用量で投与される、１日当たり８ｍｇ〜１６ｍｇ経口または１日当たり３ｍｇ〜４８ｍｇ  ＩＭのトリアムシノロンを受ける（例えば、滑液包炎、変形性関節症、関節リウマチのため）。一部の例では、被験体は、毎日８〜１２ｍｇ経口のトリアムシノロンを受ける（例えば、アレルギー性鼻炎のため）。
【０２８８】
一例では、ＧＣは、ベクロメタゾンであるかまたはこれを含む。ベクロメタゾンは、吸入等、慣用的な方法を使用して投与することができる。一部の例では、被験体は、４０ｍｃｇ／ｉｎｈおよび８０ｍｃｇ／ｉｎｈ吸入エアロゾルのベクロメタゾンを受ける：２吸入（各４０ｍｃｇ）１日２回または２吸入（各８０ｍｃｇ）毎日２回を、吸入ステロイドを以前に受けた患者において使用することができる（例えば、喘息のため）。
【０２８９】
一部の例では、方法は、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を含む治療有効量の変異したＦＧＦ１タンパク質またはキメラタンパク質の哺乳動物への投与の前に、その間にまたはその後に、治療有効量の１種または複数の抗精神病薬を哺乳動物に投与するステップを含む。開示されている方法と共に使用することができる、または別の治療法の間に被験体が受けることができる（そして糖尿病を誘導する）抗精神病薬の例として、クエチアピン（例えば、Ｓｅｒｏｑｕｅｌ（登録商標））、ＯＦＣ（オランザピン・フルオキセチン組み合わせ）、フェノチアジン系（クロルプロマジンおよびチオリダジン等）およびクロザピンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２９０】
一部の例では、方法は、インスリン、分泌促進物質、インクレチン模倣物（ｉｎｃｒｅｔｉｎ  ｍｉｍｅｔｉｃ）、抗糖尿病剤またはこれらの組み合わせ等、治療有効量の１種または複数の追加的な治療化合物を哺乳動物に投与するステップを含む。
【０２９１】
一部の例では、被験体は、がんを有し、方法は、治療有効量の化学療法、生物療法（例えば、モノクローナル抗体）、放射線療法またはこれらの組み合わせの哺乳動物に投与するステップを含む。投与することができる化学療法剤の例として、アルキル化剤、代謝拮抗薬、天然産物またはホルモンおよびこれらのアンタゴニストが挙げられる。アルキル化剤の例としては、ナイトロジェンマスタード類（メクロレタミン、シクロホスファミド、メルファラン、ウラシルマスタードまたはクロラムブシルなど）、アルキルスルホネート類（ブスルファンなど）、ニトロソウレア類（カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシンまたはダカルバジンなど）が挙げられる。代謝拮抗物質の例としては、葉酸類似体（メトトレキサートなど）、ピリミジン類似体（５−ＦＵまたはシタラビンなど）、およびメルカプトプリンまたはチオグアニンなどのプリン類似体が挙げられる。天然物の例としては、ビンカアルカロイド類（ビンブラスチン、ビンクリスチンまたはビンデシン）、エピポドフィロトキシン類（エトポシドまたはテニポシド）、抗生物質（ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシンまたはマイトマイシンＣなど）および酵素（Ｌ−アスパラギナーゼなど）が挙げられる。雑多な薬剤の例としては、白金錯体化合物（シスプラチンとしても公知である、シス−ジアミン−ジクロロ白金ＩＩ）、置換尿素（ヒドロキシウレアなど）、メチルヒドラジン誘導体（プロカルバジンなど）および副腎皮質抑制剤（ａｄｒｅｎｏｃｒｏｔｉｃａｌ  ｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔｓ）（ミトタンおよびアミノグルテチミドなど）が挙げられる。ホルモンおよびアンタゴニストの例としては、副腎皮質ステロイド類（プレドニゾンなど）、プロゲスチン類（カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲステロール（ｍａｇｅｓｔｒｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）など）、エストロゲン類（ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオールなど）、抗エストロゲン類（タモキシフェンなど）およびアンドロゲン類（プロピオン酸テストステロン（ｔｅｓｔｅｒｏｎｅ  ｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ）およびフルオキシメステロンなど）が挙げられる。一般的に使用される化学療法薬物の例としては、アドリアマイシン、アルケラン、Ａｒａ−Ｃ、ＢｉＣＮＵ、ブスルファン、ＣＣＮＵ、カルボプラチン（Ｃａｒｂｏｐｌｕｔｉｎｕｍ）、シスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、サイトキサン、ダウノルビシン、ＤＴＩＣ、５−ＦＵ、フルダラビン、ハイドレア、イダルビシン、イホスファミド、メトトレキサート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ナイトロジェンマスタード、タキソール（またはドセタキセルなどのタキサン）、ベルバン、ビンクリスチン、ＶＰ−１６が挙げられ、そのうえいくつかのより新しい薬物としては、ゲムシタビン（ジェムザール）、ハーセプチン（登録商標）、イリノテカン（カンプトサール、ＣＰＴ−１１）、ロイスタチン、ナベルビン、リツキサン、ＳＴＩ−５７１、タキソテール、トポテカン（ハイカムチン）、ゼローダ（カペシタビン）、ゼヴァリン（Ｚｅｖｅｌｉｎ）およびカルシトリオールが挙げられる。使用され得る免疫調節剤の非限定的な例としては、ＡＳ−１０１（Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ  Ｌａｂｓ．）、ブロピリミン（Ｕｐｊｏｈｎ）、ガンマインターフェロン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ＩＬ−２（Ｃｅｔｕｓ  ｏｒ  Ｈｏｆｆｍａｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）、ヒト免疫グロブリン（Ｃｕｔｔｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ）、ＩＭＲＥＧ（Ｉｍｒｅｇ  ｏｆ  Ｎｅｗ  Ｏｒｌｅａｎｓ，Ｌａ．から）、ＳＫ＆Ｆ  １０６５２８およびＴＮＦ（腫瘍壊死因子；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）が挙げられる。一例では、追加的な治療剤は、セツキシマブ、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍａｍａｂ）、ザルツムマブ、ニモツズマブ、マツズマブ（ｍａｔｕｚｕｍａ）、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ペルツズマブ、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；リツキシマブ（リツキサン、マブセラ）；イブリツモマブチウキセタン（ゼヴァリン、例えば、イットリウム−９０またはインジウム−１１１療法と組み合わせて）、ダクリズマブ（ゼナパックス）、ゲムツズマブ（マイロターグ、例えば、カリチアマイシン療法と組み合わせて）、アレムツズマブ（キャンパス）、ＣＥＡ−ｓｃａｎ（Ｆａｂ断片）、ｃｏｌｏ１０１、ＯＣ１２５（モノクローナル抗体）、ａｂ７５７０５（Ａｂｃａｍから入手可）、Ｂ３（ヒト化）、Ｂ７２．３（モノクローナル抗体）およびベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））のうち１種または複数等、生物薬剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ａｇｅｎｔ）（例えば、ｍＡｂ）または小分子である。一例では、追加的な薬剤は、ＰＤ−１アンタゴニストまたはＣＴＬＡ−４アンタゴニストとなることができる。実施形態では、阻害性核酸、例えば、阻害性核酸、例えば、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはリボザイムを使用して、ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４の発現を阻害することができる。他の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストまたはＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、抗体（例えば、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０およびＭＤＸ−１０１とも称され、ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）として販売されている；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）およびトレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒから入手できるＩｇＧ２モノクローナル抗体、以前はチシリムマブ（ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）として公知、ＣＰ−６７５，２０６）である。
【０２９２】
一部の例では、開示されている方法により処置される哺乳動物は、慢性閉塞性肺疾患、急性痛風、がん（がんであり、化学療法により処置されている）、細菌性髄膜炎、喘息を有する、または胎児肺成熟化を必要とする妊婦である。一部の例では、斯かる適応症（増悪された状態等）は、短期急性ステロイド療法により処置され、被験体は、糖尿病を発症する（またはその結果、糖尿病を発症する可能性が高い）。例えば、被験体は、がんを有し、ステロイド（ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロンまたはデキサメタゾン等）により処置して、例えば、化学療法を受けている場合は疾病を軽減（ｒｅｌｉｖｅ）して食欲（ａｐｐｅｔｉｅ）を増進する、炎症を低下させる、免疫応答を低下させる（例えば、骨髄（ｂｏｎｅ  ｍａｒｏｏｗ）または幹細胞移植後に）、またはこれらの組み合わせであってもよい。斯かる被験体は、ステロイド療法の結果として、糖尿病を発症し得るまたは発症する可能性が高い。一部の例では、がんを有する被験体は、また、化学療法または他のがん処置（例えば、生物製剤、照射療法）により処置されている。具体例では、がんを有する被験体は、Ｒ−ＣＨＯＰ併用化学療法（リツキシマブ＋シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）を受ける。
【０２９３】
一部の例では、開示される方法で処置される哺乳動物は、特発性間質性肺炎、過敏性肺臓炎およびサルコイドーシス等の肺疾患；自己免疫性疾患（ループス、グレーブス病、クローン病、セリアック病、関節リウマチ、線維筋痛症、多発性硬化症およびシェーグレン症候群等）；重症筋無力症および多発性硬化症等の神経性疾患；炎症性腸疾患；ハンセン病；呼吸器を有するか、または実質臓器移植（例えば、肝臓、肺、腎臓、膵臓、心臓）を受けたことがある。一部の例では、斯かる適応症は、慢性グルココルチコイド療法により処置され、被験体は、糖尿病を発症する（またはその結果、糖尿病を発症する可能性が高い）。
【０２９４】
一部の例では、開示されている方法により処置される哺乳動物は、アレルギー（季節性アレルギー等）、喘息、自己免疫性疾患または敗血症等、過活動免疫系に起因する疾患を有する。一部の例では、斯かる適応症は、グルココルチコイド療法により処置され、被験体は、糖尿病を発症する（またはその結果、糖尿病を発症する可能性が高い）。
【０２９５】
一部の例では、開示されている方法により処置される哺乳動物は、クッシング症候群、肺がん、下垂体もしくは副腎の腫瘍、腎不全、妊娠または外科手術等、高コルチゾール血症をもたらす疾患を有する。高コルチゾール血症の結果として、一部の例では、被験体は、糖尿病または上昇した空腹時血中グルコースを有する。
【０２９６】
一部の例では、開示されている方法により処置される哺乳動物は、双極性障害または躁うつ病等、抗精神病薬により処置される疾患を有する。
【０２９７】
開示されている方法において有用な開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質は、Ｎ末端欠失、１個もしくはそれより多くの点変異（アミノ酸置換、欠失、付加またはこれらの組合せ等）またはＮ末端欠失および点変異の組合せを含むことができる。斯かる変異したＦＧＦ１タンパク質は、ＦＧＦ２１もしくはＦＧＦ１９のＣ末端部分（例えば、それぞれ配列番号８６または１００）、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質（例えば、配列番号１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６および１８７）またはＦＧＦＲ１結合タンパク質（例えば、配列番号１８８および１８９を参照）またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質およびＦＧＦＲ１結合タンパク質の両方（例えば、配列番号１６８、１６９、１７０または１７１のいずれかへと直接的にまたは間接的に連結）等、キメラタンパク質の一部分となることができる。よって、変異したＦＧＦ１タンパク質（複数可）を本明細書において参照する場合、斯かる参照は、変異したＦＧＦ１／ＦＧＦ２１、変異したＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラ、変異したＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合キメラ、変異したＦＧＦ１／ＦＧＦ１Ｒ結合キメラまたは変異したＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦ１Ｒｃ結合キメラの参照も含む。
【０２９８】
一部の例では、ＦＧＦ１における変異は、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％の低下等、成熟野生型ＦＧＦ１（例えば、配列番号５）の分裂促進性を低下させる。例えば、変異したＦＧＦ１は、改変なしのＦＧＦ１タンパク質（例えば、ネイティブまたは野生型ＦＧＦ１タンパク質）と比較して、ヘパリンおよび／またはヘパラン硫酸に対する結合親和性を減少させるように変異させることができる。分裂促進性を測定する方法は、本技術分野において公知である。  
【０２９９】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、例えば、成熟ＦＧＦ１のＮ末端５〜１０、５〜１３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２または１３アミノ酸等、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５または少なくとも２０個の連続したＮ末端アミノ酸の欠失を含むことができる、成熟タンパク質（例えば、配列番号５）のトランケートバージョンである。一部の例では、斯かるＮ末端欠失されたＦＧＦ１タンパク質は、野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質と比較して低下した分裂促進活性を有する。
【０３００】
一部の例では、欠失されたＮ末端アミノ酸のうちの１個またはそれより多くは、ＦＧＦ２１由来の１〜５、１〜４、２〜４、４〜６、４〜９、３〜１０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の相当するアミノ酸等、ＦＧＦ２１由来の少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくとも２０アミノ酸等、ＦＧＦ２１（例えば、配列番号２０を参照）由来の相当するアミノ酸と置き換えられる。ＦＧＦ２１由来の４個の相当するＮ末端アミノ酸を有するＮ末端欠失を有するＦＧＦ１変異タンパク質の例を、配列番号２１および２２２に示す。ＦＧＦ２１由来の１６個のＮ末端アミノ酸を有するＮ末端欠失を有するＦＧＦ１変異タンパク質の例を、配列番号２２１に示す。当業者であれば、ＦＧＦ３、ＦＧＦ５、ＦＧＦ７、ＦＧＦ９およびＦＧＦ１０を含むＦＧＦＲ４に対し低親和性を有するアミノ酸を含む、ＦＧＦ２１に加えて他のＦＧＦ由来のアミノ酸を使用してよいことが認められよう。ＦＧＦ１のＮ末端残基は、ＦＧＦＲ４結合部位を含み、ＦＧＦＲ４シグナリングは、分裂促進活性に関連する。対照的に、ＦＧＦ２１は、ＦＧＦＲ４に対し低親和性を有する。よって、ＦＧＦ１のＦＧＦＲ４結合残基をＦＧＦ２１由来の残基と置き換えることを使用して、その結果得られるＦＧＦ１変異体タンパク質の分裂促進性を低下させることができる。
【０３０１】
一部の例では、ＦＧＦ１における変異は、ネイティブＦＧＦ１と比較して少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％の増加等、成熟またはトランケートＦＧＦ１（例えば、配列番号５）の熱安定性を増加させる。変異したＦＧＦ１の熱安定性の増加に使用することができる例示的な変異として、Ｋ１２Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｃ１１７Ｐ、Ｃ１１７Ｔ、Ｃ１１７Ｓ、Ｃ１１７ＡおよびＰ１３４Ｖ（Ｍ１変異と称される）、Ｌ４４Ｆ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ８３Ｓ、Ｃ８３Ａ、Ｃ８３Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｃ１１７Ｐ、Ｃ１１７Ｔ、Ｃ１１７Ｓ、Ｃ１１７ＡおよびＦ１３２Ｗ（Ｍ２変異と称される）ならびにＬ４４Ｆ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｃ１１７Ｖ、Ｃ１１７Ｐ、Ｃ１１７Ｔ、Ｃ１１７Ｓ、Ｃ１１７Ａ、Ａ１０３Ｇ、Ｒ１１９Ｇ、Ｒ１１９Ｖ、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２（Ｍ３欠失と称される）（ナンバリングは、配列番号５を参照）（例えば、Ｘｉａら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．７巻：ｅ４８２１０頁、２０１２年を参照）のうちの１個またはそれより多くが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、変異したＦＧＦ１は、改変なしのＦＧＦ１タンパク質（例えば、配列番号５）と比較してタンパク質の熱安定性を増加させるように変異させることができる。熱安定性を測定する方法は、本技術分野において公知である。一例では、Ｘｉａら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．７巻：ｅ４８２１０頁、２０１２年に示されている方法が使用される。
【０３０２】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、１〜２０、１〜１０、４〜８、５〜２５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６または３７個のアミノ酸置換（表１に示す置換等）等、少なくとも１、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４または少なくとも２５個のアミノ酸置換を含有するタンパク質等、成熟タンパク質（例えば、配列番号５）の変異バージョンである。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、１〜１０、４〜８、５〜１０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のアミノ酸欠失の欠失等、１個またはそれより多くのアミノ酸の欠失を含む。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、１〜１０個の置換と１〜１０個の欠失等、少なくとも１個の置換および少なくとも１個の欠失等、アミノ酸置換および欠失の組合せを含む。
【０３０３】
配列番号２または５のいずれかに参照されるアミノ酸を用いて、例示的な変異を下表１に示す。当業者であれば、これらの変異を単一でまたは組み合わせて（これらのアミノ酸置換および／または欠失のうちの１〜２０、１〜１０、４〜８、５〜２５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０または４１個等）使用できることを認識できよう。加えて、斯かる変異体ＦＧＦ１タンパク質は、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２１、β−Ｋｌｏｔｈｏに選択的に結合するタンパク質またはＦＧＦＲ１（ＦＧＦＲ１ｂまたはＦＧＦＲ１ｃ等）に選択的に結合するタンパク質との等、キメラタンパク質の一部分である。
【表１−１】
2018535964.tif 000002
【表１−２】
2018535964.tif 000003
【０３０４】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、次の位置のうちの１個またはそれより多くに変異を含む：次の位置のうちの１〜５、２〜５、３〜６、３〜８、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または全４２個等、Ｋ９、Ｋ１０、Ｋ１２、Ｋ１１２、Ｋ１１３のうちの１個またはそれより多く等、Ｋ９、Ｋ１０、Ｋ１２、Ｌ１４、Ｙ１５、Ｃ１６、Ｈ２１、Ｒ３５、Ｑ４０、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｓ４７、Ｅ４９、Ｙ５５、Ｍ６７、Ｌ７３、Ｃ８３、Ｌ８６、Ｅ８７、Ｈ９３、Ｙ９４、Ｎ９５、Ｈ１０２、Ａ１０３、Ｅ１０４、Ｋ１０５、Ｎ１０６、Ｆ１０８、Ｖ１０９、Ｌ１１１、Ｋ１１２、Ｋ１１３、Ｃ１１７、Ｋ１１８、Ｒ１１９、Ｇ１２０、Ｐ１２１、Ｒ１２２、Ｆ１３２、Ｌ１３３、Ｐ１３４、Ｌ１３５。一例では、Ｋ９およびＫ１０は、ＤＱ（変異した核局在化配列におけるような）またはＦＧＦ２１由来の等しい残基（またはＦＧＦＲ４に結合しない別のＦＧＦ）と置き換えられる（ナンバリングは、配列番号５を参照）。
【０３０５】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、次の位置のうちの１、２、３または４個に変異を含む：Ｙ１５Ｆ、Ｙ１５Ａ、Ｙ１５Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｅ８７Ａ、Ｅ８７Ｓ、Ｅ８７Ｔ、Ｎ９５Ｖ、Ｎ９５Ａ、Ｎ９５Ｓ、Ｎ９５Ｔ、Ｙ９４Ｖ、Ｙ９４ＦおよびＹ９４Ａのうちの１個またはそれより多く（これらの変異のうちの１、２、３または４個等）等、Ｙ１５、Ｅ８７、Ｙ９４およびＮ９５（ナンバリングは、配列番号５を参照）。例えば、Ｅ８７またはＮ９５は、無電荷アミノ酸と置き換えることができる。加えて、Ｙ１５およびＹ９４は、疎水性相互作用を不安定化するアミノ酸と置き換えることができる。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、次の位置のうちの１、２、３または４個における変異等、Ｌ１４、Ｃ１６、Ｈ９３およびＴ９６のうちの１個またはそれより多く等、Ｙ１５、Ｅ８７、Ｙ９４およびＮ９５のいずれかの側の変異を含む。
【０３０６】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、次の位置のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個に変異を含む：Ｙ１５Ｆ、Ｙ１５Ａ、Ｙ１５Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｅ８７Ａ、Ｅ８７Ｓ、Ｅ８７Ｔ、Ｈ９３Ａ、Ｎ９５Ｖ、Ｎ９５Ａ、Ｎ９５Ｓ、Ｎ９５Ｔ、Ｙ９４Ｖ、Ｙ９４ＦおよびＹ９４Ａのうちの１個またはそれより多く（これらの変異のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個等）等、Ｙ１５、Ｃ１６、Ｅ８７、Ｈ９３、Ｙ９４およびＮ９５（ナンバリングは、配列番号５を参照）。
【０３０７】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、次の位置のうちの１個またはそれより多くに変異を含む：Ｃ１６Ｖ、Ｃ１６Ａ、Ｃ１６Ｔ、Ｃ１６Ｓ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ８３Ｓ、Ｃ８３Ａ、Ｃ８３Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｃ１１７Ｐ、Ｃ１１７Ｔ、Ｃ１１７ＳおよびＣ１１７Ａのうちの１個またはそれより多く（これらの変異のうちの１、２または３個等）等、Ｃ１６、Ｃ８３およびＣ１１７（ナンバリングは、配列番号５を参照）。
【０３０８】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、次の位置のうちの１または２個のみに変異を含む：Ｅ８７Ｖ、Ｅ８７Ａ、Ｅ８７Ｓ、Ｅ８７Ｔ、Ｙ９４Ｖ、Ｙ９４Ｆ、Ｙ９４Ａ、Ｎ９５Ｖ、Ｎ９５Ａ、Ｎ９５ＳおよびＮ９５Ｔのうちの１または２個等、Ｅ８７、Ｙ９４およびＮ９５（ナンバリングは、配列番号５を参照）。
【０３０９】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、次の位置のうちの１、２または３個に変異を含む：Ｋ１２Ｖ、Ｋ１２Ｃ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ８３Ｓ、Ｃ８３Ａ、Ｃ８３Ｖ、Ｃ１１７Ｖ、Ｃ１１７Ｐ、Ｃ１１７Ｔ、Ｃ１１７ＳおよびＣ１１７Ａのうちの１個またはそれより多く（Ｋ１２Ｖ、Ｃ８３ＴおよびＣ１１７Ｖ等、これらの変異のうちの１、２または３個等）等、Ｋ１２、Ｃ８３およびＣ１１７（ナンバリングは、配列番号５を参照）。
【０３１０】
図１６は、その活性を変更するためにＦＧＦ１において変異させることができる位置の具体例を示す。例えば、ＦＧＦ１受容体と相互作用する残基は、Ｙ１５、Ｅ８７、Ｙ９４およびＮ９５を含む。よって、一部の例では、これらの位置のうちの１、２、３または４個が変異され、例えば、配列番号５の位置８７および／または９５におけるアミノ酸は、Ｖ、Ａ、ＳまたはＴに変化させることができる。一部の例では、配列番号５の位置１５および／または９５におけるアミノ酸は、Ｖ、ＡまたはＦに変化させることができる。一部の例では、これらの変化の組合せが為される。
【０３１１】
図１６は、ＦＧＦ１のＫ１２が、受容体界面に存在すると予測されることも示す。よって、配列番号５のＫ１２は、例えば、ＶまたはＣに変異させることができる。図３１は、アミノ酸Ｋ１１２、Ｋ１１３およびＫ１１８が、ヘパリン結合部位の一部分であり、よって、例えば、位置Ｋ１１８におけるＮ、ＥまたはＶならびに位置Ｋ１１２およびＫ１１３におけるＤ、ＥまたはＱ等、Ｅ、Ｑ、Ｎ、ＶまたはＤに変異させることができることも示す。図３１は、ＦＧＦ受容体のＤ２ドメインと塩橋を形成する配列番号５のアミノ酸Ｒ３５が、よって、例えば、ＥまたはＶに変異させることができることも示す。
【０３１２】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、Ｋ１２Ｖ、Ｌ４６Ｖ、Ｒ３５Ｅ、Ｒ３５Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｋ１１８Ｎ、Ｋ１１８Ｅ、Ｃ１１７ＶおよびＰ１３４Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）のうちの１個またはそれより多くを含む。一部の例では、点変異は、アミノ酸配列ＩＬＦＬＰＬＰＶ（配列番号２および４のアミノ酸１４５〜１５２）を、ＡＡＡＬＰＬＰＶ（配列番号１４）、ＩＬＡＬＰＬＰＶ（配列番号１５）、ＩＬＦＡＰＬＰＶ（配列番号１６）またはＩＬＦＬＰＡＰＡ（配列番号１７）に置き換えることを含む。一部の例では、１個またはそれより多くの点変異を有する斯かるＦＧＦ１タンパク質は、野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質と比較して低下した分裂促進活性を有する。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、Ｒ３５Ｅ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を含む。
【０３１３】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、ＦＧＦ１（例えば、配列番号２または４）のアミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸を含む（これは一部の例では、さらなるＮ末端アミノ酸１〜２０の欠失および／または置換、欠失もしくは付加等の点変異を含むことができる）。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、配列番号２もしくは４のアミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸または配列番号５由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸等、ＦＧＦ１のアミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０または少なくとも１３０個の連続したアミノ酸を含む。
【０３１４】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、Ｎ末端トランケーションおよび点変異の両方を含む。具体的で例示的なＦＧＦ１変異体タンパク質は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８に示される。一部の例では、ＦＧＦ１変異体は、Ｎ末端欠失を含むが、Ｎ末端の位置にメチオニンを保持する。一部の例では、ＦＧＦ１変異体は、１２０〜１４０または１２５〜１４０アミノ酸の長さである。
【０３１５】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、キメラタンパク質の一部分である。例えば、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質の一端は、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１のＣ末端領域等、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１の末端へと直接的にまたは間接的に連結することができる。一部の例では、キメラの変異したＦＧＦ１部分は、キメラのＮ末端に存在し、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１部分は、キメラのＣ末端である。しかし、キメラの変異したＦＧＦ１部分が、キメラのＣ末端となり、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１部分が、キメラのＮ末端となるように、これは反転していてもよい。例えば、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１の少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、少なくとも５０または少なくとも６０個のＣ末端アミノ酸（Ｃ末端６０、５５、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３５、３０、２５、２０、１５または１０アミノ酸等）は、キメラの一部分となり得る。使用することのできるＦＧＦ２１およびＦＧＦ１９のＣ末端断片の例を、それぞれ配列番号８６および１００に示す。一部の例では、変異体ＦＧＦ１およびＦＧＦ２１またはＦＧＦ１９部分は、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくとも２０アミノ酸で構成されたリンカー等、リンカーの使用により間接的に連結される。一例では、リンカーは、ポリアラニンである。
【０３１６】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質とのキメラタンパク質の一部分である。例えば、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質の一端は、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質の末端へと直接的にまたは間接的に連結することができる（例えば、図２３〜図２６を参照）。一部の例では、キメラの変異したＦＧＦ１部分は、キメラのＮ末端に存在し、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分は、キメラのＣ末端である（例えば、それぞれ図２３Ｂ〜図２３Ｄ、図２３Ｇ〜図２３Ｉおよび図２５Ｂ〜図２５Ｄ、図２５Ｇ〜図２５Ｉを参照）。しかし、キメラの変異したＦＧＦ１部分が、キメラのＣ末端となり、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分が、キメラのＮ末端となるように、これは反転していてもよい（例えば、図２４Ｂ〜図２４Ｄ、図２４Ｆ〜図２４Ｈおよび図２６Ｂ〜図２６Ｄ、図２６Ｆ〜図２６Ｈを参照）。使用することができるβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質の例を、配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５および１４６、ならびに配列番号１６８、１６９、１７０および１７１のβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合部分に示す。一部の例では、変異体ＦＧＦ１およびβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質部分は、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくとも２０アミノ酸で構成されたリンカー等、リンカーの使用により間接的に連結される。一例では、リンカーは、ポリアラニンである。
【０３１７】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、ＦＧＦＲ１結合タンパク質とのキメラタンパク質の一部分である。例えば、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質の一端は、ＦＧＦＲ１結合タンパク質の末端へと直接的にまたは間接的に連結することができる。一部の例では、キメラの変異したＦＧＦ１部分は、キメラのＮ末端に存在し、ＦＧＦＲ１結合タンパク質部分は、キメラのＣ末端である（例えば、図８Ｊを参照）。しかし、キメラの変異したＦＧＦ１部分が、キメラのＣ末端となり、ＦＧＦＲ１結合タンパク質部分が、キメラのＮ末端となるように、これは反転していてもよい（例えば、図９Ｉを参照）。使用することができるＦＧＦＲ１結合タンパク質の例を、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６および１６７、ならびに１６８、１６９、１７０および１７１のＦＧＦＲ１結合部分に示す。一部の例では、変異体ＦＧＦ１およびＦＧＦＲ１結合タンパク質部分は、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくとも２０アミノ酸で構成されたリンカー等、リンカーの使用により間接的に連結される。一例では、リンカーは、ポリアラニンである。
【０３１８】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、いずれかの順序のＦＧＦＲ１結合タンパク質およびβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質の両方とのキメラタンパク質の一部分である。例えば、変異体ＦＧＦ１変異体タンパク質の一端は、ＦＧＦＲ１結合／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合キメラタンパク質の末端へと直接的にまたは間接的に連結することができる。一部の例では、キメラの変異したＦＧＦ１部分は、キメラのＮ末端に存在し、ＦＧＦＲ１結合／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合キメラタンパク質部分は、キメラのＣ末端である（例えば、図８Ｋを参照）。しかし、キメラの変異したＦＧＦ１部分が、キメラのＣ末端となり、ＦＧＦＲ１結合／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合キメラタンパク質部分が、キメラのＮ末端となるように、これは反転していてもよい（例えば、図９Ｊを参照）。一例では、ＦＧＦＲ１結合／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合キメラタンパク質は、配列番号１６８、１６９、１７０および１７１に示す配列のうちのいずれか１種である。一部の例では、変異体ＦＧＦ１およびＦＧＦＲ１結合／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合キメラタンパク質部分は、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくとも２０アミノ酸で構成されたリンカー等、リンカーの使用により間接的に連結される。一例では、リンカーは、ポリアラニンである。
【０３１９】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質またはそのようなものを含むキメラは、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８に少なくとも８０％の配列同一性を有する。したがって、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８に少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有し得る（しかし、配列番号５などのネイティブＦＧＦ１配列ではない）。一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８を含むか、またはそれらからなる。本開示は、１〜８、２〜１０、１〜５、１〜６、または５〜１０個の変異、例えば、保存的アミノ酸置換を有する、開示されるＦＧＦ１変異体タンパク質のバリアント、例えば、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８を包含する。
【０３２０】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラタンパク質は、配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、２１９、２２１、２２２または２２３に対し少なくとも８０％配列同一性を有する。よって、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラタンパク質は、配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、２１９、２２１、２２２または２２３に対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有することができる。一部の例では、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラタンパク質は、配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、２１９、２２１、２２２または２２３を含むかまたはそれからなる。本開示は、保存的アミノ酸置換等、１〜８個の変異を有する配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、２１９、２２１、２２２または２２３等、開示されている変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラタンパク質のバリアントを包含する。
【０３２１】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラタンパク質は、配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、２２０または２２４に対し少なくとも８０％配列同一性を有する。よって、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラタンパク質は、配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、２２０または２２４に対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有することができる。一部の例では、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラタンパク質は、配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、２２０または２２４のいずれかを含むかまたはそれからなる。本開示は、保存的アミノ酸置換等、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の変異を有する配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、２２０または２２４等、開示されている変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラタンパク質のバリアントを包含する。
【０３２２】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラは、配列番号１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６または１８７に対し少なくとも８０％配列同一性を有する。よって、変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏキメラタンパク質は、配列番号１１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６または１８７に対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有することができる。一部の例では、変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏキメラタンパク質は、配列番号１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６または１８７を含むかまたはそれからなる。本開示は、保存的アミノ酸置換等、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の変異を有する配列番号１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６または１８７等、開示されている変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏキメラタンパク質のバリアントを包含する。
【０３２３】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１Ｒ結合タンパク質キメラは、配列番号１８８〜１８９のいずれかに対し少なくとも８０％配列同一性を有する。よって、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１Ｒ結合タンパク質キメラは、配列番号１８８または１８９に対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有することができる。一部の例では、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１Ｒ結合タンパク質キメラは、配列番号１８８〜１８９のいずれかを含むかまたはそれからなる。本開示は、保存的アミノ酸置換等、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の変異を有する配列番号１８８または１８９等、開示されている変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１Ｒ結合タンパク質キメラのバリアントを包含する。
【０３２４】
一例では、キメラのＦＧＦＲ１結合／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合またはβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合タンパク質部分は、配列番号１６８、１６９、１７０または１７１に対する少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性等、配列番号１６８、１６９、１７０または１７１に対し少なくとも８０％配列同一性を含む。
【０３２５】
一例では、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体は、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９または１７０のＦＧＦＲ１部分に対する少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性等、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９または１７０のＦＧＦＲ１結合部分に対し８０％配列同一性を有する少なくとも１個の単量体を含む。一例では、ＦＧＦＲ１結合タンパク質二量体は、配列番号１９０に対する少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性等、配列番号１９０に対し少なくとも８０％配列同一性を含む。
【０３２６】
開示された変異されたＦＧＦ１タンパク質およびキメラをコードする単離された核酸分子、例えば、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する（しかし、ネイティブＦＧＦ１配列ではない）タンパク質をコードする核酸分子もまた提供される。例示的なコード配列の１種を配列番号１８に示す；よって、本開示は、配列番号１８のいずれかに対し少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有する配列を提供する。斯かる核酸分子を含むベクターおよび細胞も提供される。例えば、斯かる核酸分子を細菌または酵母細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）等、宿主細胞において発現させて、これにより、変異したＦＧＦ１タンパク質の発現を可能にすることができる。その結果得られる変異したＦＧＦ１タンパク質は、細胞から精製することができる。
【０３２７】
開示されている方法と共に使用することができる治療組成物も提供されている。一部の例では、組成物は、（１）１種または複数のＧＣ（デキサメタゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロンおよびベクロメタゾンのうち１種または複数等）と、（２）本明細書に提供されている１種または複数の変異体ＦＧＦ１タンパク質、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体またはこれらの組み合わせと、（３）薬学的に許容される担体とを含む。一部の例では、組成物は、（１）１種または複数の抗精神病化合物（クエチアピン（例えば、Ｓｅｒｏｑｕｅｌ（登録商標））、ＯＦＣ（オランザピン・フルオキセチン組み合わせ）、フェノチアジン系（クロルプロマジンおよびチオリダジン等）およびクロザピンのうち１種または複数等）と、（２）本明細書に提供されている１種または複数の変異体ＦＧＦ１タンパク質、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体またはこれらの組み合わせと、（３）薬学的に許容される担体とを含む。一つの例では、組成物は、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９または１７０のＦＧＦＲ１結合部分と８０％の配列同一性、例えば配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９または１７０のＦＧＦＲ１ｃ部分と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有する少なくとも１つの単量体を含む。一つの例では、組成物は、配列番号１９０と少なくとも８０％の配列同一性、例えば、配列番号１９０と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するＦＧＦＲ１結合タンパク質二量体を含む。一つの例では、組成物は、変異ＦＧＦ１タンパク質（例えば、表１および２に示される配列を使用して生成されるタンパク質、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８と少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％の配列同一性を有するタンパク質をコードするもの）を含む。
【０３２８】
変異したＦＧＦ１タンパク質
本開示は、Ｎ末端欠失、１個もしくはそれより多くの点変異（アミノ酸置換、欠失、付加またはこれらの組合せ等）またはＮ末端欠失および点変異の組合せを含むことができる変異したＦＧＦ１タンパク質を提供する。斯かるタンパク質および相当するコード配列を本明細書に提供されている方法において使用することができる。一部の例では、開示されているＦＧＦ１変異体タンパク質は、少なくとも２０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％または少なくとも９０％の低下等、成熟ネイティブＦＧＦ１（例えば、配列番号５）と比較して低下した分裂促進性を有する。例えば、変異したＦＧＦ１は、改変なしのネイティブＦＧＦ１タンパク質と比較して、ヘパリンおよび／またはヘパラン硫酸に対する結合親和性を減少させるように変異させることができる。分裂促進性を測定する方法は、本技術分野において公知である。
【０３２９】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、例えば、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５または少なくとも２０個の連続したＮ末端アミノ酸の欠失を含むことができる、成熟タンパク質（例えば、配列番号５）のトランケートバージョンである。よって、一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、配列番号５に示すＮ末端５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸の欠失等、成熟タンパク質（例えば、配列番号５）のトランケートバージョンである。Ｎ末端トランケートされたＦＧＦ１タンパク質の例を、配列番号６、７、８、９、２１、２４、２５、２６、２７、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、７１、７２、７４、７５、７６、７７、７９、８０、８１、８２、１９４、１９５、１９７、１９８、２０２、２０３、２０５、２０６、２１４、２１５、２１６、２１７、２２１、２２２、２２５、２２８、２３２および２３８に示す。一部の例では、ＦＧＦ１変異体は、Ｎ末端欠失を含むが、Ｎ末端の位置にメチオニンを保持する。一部の例では、斯かるＮ末端欠失されたＦＧＦ１タンパク質は、野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質と比較して低下した分裂促進活性を有する。
【０３３０】
一部の例では、欠失されたＮ末端アミノ酸のうちの１個またはそれより多くは、ＦＧＦ２１由来の１〜５、１〜４、２〜４、４〜６、４〜９、３〜１０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の相当するアミノ酸等、ＦＧＦ２１由来の少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５または少なくとも２０アミノ酸等、ＦＧＦ２１（例えば、配列番号２０を参照）由来の相当するアミノ酸と置き換えられる。ＦＧＦ２１由来の４個の相当するＮ末端アミノ酸を有するＮ末端欠失を有するＦＧＦ１変異したタンパク質の例を、配列番号２１に示す。ＦＧＦ１のＮ末端残基は、ＦＧＦＲ４結合部位を含み、ＦＧＦＲ４シグナリングは、分裂促進活性に関連する。対照的に、ＦＧＦ２１は、ＦＧＦＲ４に対し低親和性を有する。よって、ＦＧＦ１のＦＧＦＲ４結合残基をＦＧＦ２１（またはＦＧＦ３、ＦＧＦ５、ＦＧＦ７、ＦＧＦ９およびＦＧＦ１０を含む、ＦＧＦＲ４に対し低親和性を有する別のＦＧＦ）由来の残基と置き換えることを使用して、その結果得られるＦＧＦ１変異体タンパク質の分裂促進性を低下させることができる。
【０３３１】
よって、一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、ＦＧＦ１（例えば、配列番号２または４）のアミノ酸５〜１４１または５〜１５５由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸を含む（これは一部の例では、さらなるＮ末端アミノ酸１〜２０の欠失および／または置換、欠失もしくは付加等の点変異を含むことができる）。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、ＦＧＦ１（例えば、配列番号５）のアミノ酸１〜１４０由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸を含む（これは一部の例では、さらなるＮ末端アミノ酸１〜２０の欠失および／または置換、欠失もしくは付加等の点変異を含むことができる）。よって、一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、配列番号２または４のアミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０、少なくとも１２１、少なくとも１２２、少なくとも１２３、少なくとも１２４、少なくとも１２５、少なくとも１２６、少なくとも１２７、少なくとも１２８、少なくとも１２９、少なくとも１３０、少なくとも１３１、少なくとも１３２、少なくとも１３３、少なくとも１３４、少なくとも１３５、少なくとも１３６、少なくとも１３７、少なくとも１３８、少なくとも１３９または少なくとも１４０個の連続したアミノ酸（配列番号２または４のアミノ酸５〜１４１由来の１２０〜１３０、１２０〜１３５、１３０〜１３５、１３０〜１４０または１２０〜１４０個の連続したアミノ酸等）等、ＦＧＦ１のアミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸を含む。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、配列番号２もしくは４のアミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸または配列番号５由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸等、ＦＧＦ１のアミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０または少なくとも１３０個の連続したアミノ酸を含む。よって、一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、配列番号５由来の少なくとも１２０、少なくとも１２１、少なくとも１２２、少なくとも１２３、少なくとも１２４、少なくとも１２５、少なくとも１２６、少なくとも１２７、少なくとも１２８、少なくとも１２９、少なくとも１３０、少なくとも１３１、少なくとも１３２、少なくとも１３３、少なくとも１３４、少なくとも１３５、少なくとも１３６、少なくとも１３７、少なくとも１３８、少なくとも１３９または少なくとも１４０個の連続したアミノ酸（配列番号５由来の１２０〜１３０、１２０〜１３５または１２０〜１４０個の連続したアミノ酸等）を含む。変異体ＦＧＦ１タンパク質の作製に使用することができるＦＧＦ１のアミノ酸５〜１４１由来の少なくとも１２０個の連続したアミノ酸の例として、配列番号５、ならびに配列番号６、７、８および９のいずれかに示すタンパク質配列のアミノ酸４〜１４０が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３３２】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、１〜２０、１〜１０、４〜８、５〜１２、５〜１０、５〜２５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個のアミノ酸置換等、少なくとも１、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または少なくとも２０個のアミノ酸置換を含有するタンパク質等、成熟タンパク質（例えば、配列番号５）の変異バージョンまたは成熟タンパク質のＮ末端トランケーション（例えば、配列番号７、８、９）である。例えば、点変異をＦＧＦ１配列に導入して、分裂促進性を減少させる、安定性を増加させる、ヘパリンおよび／もしくはヘパラン硫酸に対する結合親和性を減少させる（改変なしのネイティブＦＧＦ１タンパク質の部分と比較して）またはこれらの組合せを為すことができる。使用することができる特異的で例示的な点変異を上の表１に示し、例示的な組合せを図１、図３Ａ〜図３Ｄ、図４Ａ〜図４Ｂ、図５Ａ〜図５Ｂ、図６Ａ〜図６Ｂ、図７および図１２〜図１５に示す。
【０３３３】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、次の位置、Ｋ９、Ｋ１０、Ｋ１２、Ｌ１４、Ｙ１５、Ｃ１６、Ｈ２１、Ｒ３５、Ｑ４０、Ｌ４４、Ｌ４６、Ｓ４７、Ｅ４９、Ｙ５５、Ｍ６７、Ｌ７３、Ｃ８３、Ｌ８６、Ｅ８７、Ｈ９３、Ｙ９４、Ｎ９５、Ｈ１０２、Ａ１０３、Ｅ１０４、Ｋ１０５、Ｎ１０６、Ｆ１０８、Ｖ１０９、Ｌ１１１、Ｋ１１２、Ｋ１１３、Ｃ１１７、Ｋ１１８、Ｒ１１９、Ｇ１２０、Ｐ１２１、Ｒ１２２、Ｆ１３２、Ｌ１３３、Ｐ１３４、Ｌ１３５のうちの１個またはそれより多くに変異（置換または欠失等）を含み、これは、Ｋ９、Ｋ１０、Ｋ１２、Ｋ１１２、Ｋ１１３のうちの１個またはそれより多く等、これらの位置のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１または全４２個等である。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、Ｋ９Ｔ、Ｋ１０Ｔ、Ｋ１２Ｖ、Ｌ１４Ａ、Ｙ１５Ｆ、Ｙ１５Ａ、Ｙ１５Ｖ、Ｃ１６Ｖ、Ｃ１６Ａ、Ｃ１６Ｔ、Ｃ１６Ｓ、Ｈ２１Ｙ、Ｒ３５Ｅ、Ｒ３５Ｖ、Ｑ４０Ｐ、Ｌ４４Ｆ、Ｌ４６Ｖ、Ｓ４７Ｉ、Ｅ４９Ｑ、Ｅ４９Ａ、Ｙ５５Ｆ、Ｙ５５Ｓ、Ｙ５５Ａ、Ｍ６７Ｉ、Ｌ７３Ｖ、Ｃ８３Ｔ、Ｃ８３Ｓ、Ｃ８３Ａ、Ｃ８３Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｅ８７Ａ、Ｅ８７Ｓ、Ｅ８７Ｔ、Ｈ９３Ｇ、Ｈ９３Ａ、Ｙ９４Ｖ、Ｙ９４Ｆ、Ｙ９４Ａ、Ｎ９５Ｖ、Ｎ９５Ａ、Ｎ９５Ｓ、Ｎ９５Ｔ、Ｈ１０２Ｙ、Ａ１０３Ｇ、Δ１０４〜１０６、Ｆ１０８Ｙ、Ｖ１０９Ｌ、Ｌ１１１Ｉ、Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１２Ｅ、Ｋ１１２Ｑ、Ｋ１１３Ｑ、Ｋ１１３Ｅ、Ｋ１１３Ｄ、Ｃ１１７Ｖ、Ｃ１１７Ｐ、Ｃ１１７Ｔ、Ｃ１１７Ｓ、Ｃ１１７Ａ、Ｋ１１８Ｎ、Ｋ１１８Ｅ、Ｋ１１８Ｖ、Ｒ１１９Ｇ、Ｒ１１９Ｖ、Ｒ１１９Ｅ、Δ１２０〜１２２、Ｆ１３２Ｗ、Ｌ１３３Ａ、Ｌ１３３Ｓ、Ｐ１３４Ｖ、Ｌ１３５Ａ、Ｌ１３５Ｓ（ナンバリングは、配列番号５を参照）のうちの１個またはそれより多くを有し、これは、これらの変異のうちの１〜５、１〜１０、２〜５、２〜１０、２〜２０、５〜１０、５〜４０または５〜２０個等、これらの変異のうちの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個等である。
【０３３４】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、Ｋ１２Ｖ、Ｒ３５Ｅ、Ｒ３５Ｖ、Ｌ４６Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｃ１１７Ｖ／Ａ、Ｋ１１８Ｎ、Ｋ１１８Ｅ／ＶおよびＰ１３４Ｖ（ナンバリングは、配列番号５を参照）のうちの１個またはそれより多く（２、３、４、５または６個等）を含む。一部の例では、点変異は、アミノ酸配列ＩＬＦＬＰＬＰＶ（配列番号２および４のアミノ酸１４５〜１５２）を、ＡＡＡＬＰＬＰＶ（配列番号１４）、ＩＬＡＬＰＬＰＶ（配列番号１５）、ＩＬＦＡＰＬＰＶ（配列番号１６）またはＩＬＦＬＰＡＰＡ（配列番号１７）に置き換えることを含む。一部の例では、１個またはそれより多くの点変異を有する斯かるＦＧＦ１タンパク質は、野生型成熟ＦＧＦ１タンパク質と比較して低下した分裂促進活性を有する。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、Ｒ３５Ｅ（ナンバリングは、配列番号５を参照）を含む。点変異を含有するＦＧＦ１変異体タンパク質の例として、配列番号１０、１１、１２、１３、２２、２３、２８、２９、３０、３１、４０、４１、４２、４３、４２、５３、５４、５５、５６、６７、６８、６９、７０、７３、７８、８３、８４、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１９１、１９２、１９３、１９６、１９９、２００、２０１、２０４、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１８、２２６、２２７、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６および２３７に示すタンパク質配列が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３３５】
一部の例では、ＦＧＦ１における変異は、成熟またはトランケートされたネイティブＦＧＦ１の熱安定性を増加させる。例えば、変異は、次の位置のうちの１個またはそれより多くに為すことができる。変異したＦＧＦ１の熱安定性を増加させるために使用することができる例示的な変異として、Ｋ１２、Ｃ１１７、Ｐ１３４、Ｌ４４、Ｃ８３、Ｆ１３２、Ｍ６７、Ｌ７３、Ｖ１０９、Ｌ１１１、Ａ１０３、Ｒ１１９、Δ１０４〜１０６およびΔ１２０〜１２２、Ｑ４０、Ｈ９３、Ｓ４７のうちの１個またはそれより多くが挙げられるがこれらに限定されない（ナンバリングは、配列番号５を参照）（例えば、Ｘｉａら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．７巻：ｅ４８２１０頁、２０１２年を参照）。一部の例では、ＦＧＦ１の熱安定性は、次の変異のうちの１個またはそれより多くを使用することにより増加される：Ｑ４０ＰおよびＳ４７ＩまたはＱ４０Ｐ、Ｓ４７ＩおよびＨ９３Ｇ（またはこれらの変異の他のいずれかの組合せ）。
【０３３６】
一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、キメラタンパク質の一部分である。例えば、本明細書に提供されているいずれかの変異体ＦＧＦ１タンパク質は、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質、ＦＧＦＲ１結合タンパク質、β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質およびＦＧＦＲ１結合タンパク質の両方、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１のＣ末端領域等、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１の末端へと直接的にまたは間接的に連結することができる。例えば、ＦＧＦ１９またはＦＧＦ２１の少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも４１、少なくとも４２、少なくとも４３、少なくとも４４、少なくとも４５、少なくとも４６、少なくとも４７、少なくとも４８、少なくとも４９、少なくとも５０または少なくとも６０個のＣ末端アミノ酸（Ｃ末端６０、５５、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３５、３０、２５、２０、１５または１０アミノ酸等）は、キメラの一部分となり得る。使用することができるＦＧＦ２１およびＦＧＦ１９のＣ末端断片の例を、それぞれ配列番号８６および１００に示す。使用することができるβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質の例を、配列番号１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５および１４６に示す。使用することができるＦＧＦＲ１結合タンパク質の例を、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６および１６７に示す。変異体ＦＧＦ１タンパク質に直接的にまたは間接的に取り付けることができるβ−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合タンパク質キメラの例を、配列番号１６８、１６９、１７０および１７１に示す。
【０３３７】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、Ｎ末端トランケーションおよび点変異の両方を含む。特異的で例示的なＦＧＦ１変異体タンパク質を、配列番号６〜１３、２１〜８４、１１３〜１２０、１９１〜２１８および２２５〜２３８に示す。一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、配列番号６〜１３、２１〜８４、１１３〜１２０、１９１〜２１８および２２５〜２３８のいずれかに対し少なくとも８０％配列同一性を含む。よって、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、配列番号６〜１３、２１〜８４、１１３〜１２０、１９１〜２１８および２２５〜２３８のいずれかに対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有することができる。一部の例では、ＦＧＦ１変異体タンパク質は、配列番号６〜１３、２１〜８４、１１３〜１２０、１９１〜２１８および２２５〜２３８のいずれかを含むかまたはそれからなる。本開示は、保存的アミノ酸置換等、１〜２０、１〜１５、１〜１０、１〜８、２〜１０、１〜５、１〜６、２〜１２、３〜１２、５〜１２または５〜１０個の変異を有する配列番号６〜１３、２１〜８４および１１３〜１２０、１９１〜２１８および２２５〜２３８のいずれか等、開示されているＦＧＦ１変異体タンパク質のバリアントを包含する。斯かる変異体ＦＧＦ１タンパク質を使用して、ＦＧＦ１変異体キメラを作製することができる。
【０３３８】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、そのＮ末端にメチオニンを有する。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、１２０〜１６０、１２５〜１６０、１３０〜１６０、１５０〜１６０、１３０〜２００、１３０〜１８０、１３０〜１７０または１２０〜１６０アミノ酸の長さ等、少なくとも１２５、少なくとも１３０、少なくとも１３５、少なくとも１４０、少なくとも１４５、少なくとも１５０、少なくとも１５５、少なくとも１６０または少なくとも１７５アミノ酸の長さ等、少なくとも１２０アミノ酸の長さである。
【０３３９】
ＦＧＦ１変異体タンパク質を作製するために使用され得る例示的なＮ末端トランケートＦＧＦ１配列およびＦＧＦ１点変異は、表１および２（ならびに配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８のいずれかにおいて提供されるもの）に示される。当業者であれば、表２におけるいずれかのＮ末端トランケーション（ならびに配列番号６、７、８、９、２１、２４、２５、２６、２７、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、７１、７２、７４、７５、７６、７７、７９、８０、８１、８２、１９４、１９５、１９７、１９８、２０２、２０３、２０５、２０６、２１４、２１５、２１６、２１７、２２１、２２２、２２５、２２８、２３２および２３８のいずれかに示すトランケーション）を、表１または表２におけるいずれかのＦＧＦ１点変異と組み合わせて、ＦＧＦ１変異体タンパク質を作製することができ、斯かるＦＧＦ１変異体タンパク質を直接的に使用してもよく、または変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラ、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦＲ１結合タンパク質キメラ、変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質／ＦＧＦＲ１結合タンパク質キメラ、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１もしくは変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラの一部分として使用してもよいことが認められよう。加えて、本明細書に記されている変異のうちの１個またはそれより多く（保存的アミノ酸置換、欠失または付加等、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のアミノ酸置換等）等、変異を表に示す配列に為すことができる。
【表２−１】
2018535964.tif 000004
【表２−２】
2018535964.tif 000005
【０３４０】
例示的な変異体ＦＧＦ１タンパク質は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８に、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１キメラは、配列番号８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、２１９、２２１、２２２および２２３に、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラは、配列番号１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、２２０および２２４に、変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合タンパク質キメラは、配列番号１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６および１８７に、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦＲ１結合タンパク質キメラは、配列番号１８８および１８９に示す。当業者であれば、タンパク質の機能（血中グルコースを低下させるその能力等）に有害な影響を与えることなく、これらの配列に僅かな変異を為すことができることを認識できよう。例えば、変異体ＦＧＦ１タンパク質のバリアントは、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８���２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有するバリアントを含む（ただし、ネイティブＦＧＦ１配列、例えば、配列番号５ではない）が、哺乳動物（ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病の哺乳動物等）における血中グルコースを減少させる能力を保持する。したがって、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を保持する配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８のバリアントは、開示される方法において有用である。
【０３４１】
ＦＧＦ１
タンパク質の分裂促進性を制御して（例えば、低下させて）（例えば、核局在化配列（ＮＬＳ）もしくはヘパラン硫酸結合領域またはその両方を変異させることにより）、タンパク質にグルコース低減能力をもたらすように、成熟型のＦＧＦ１（配列番号２または４等）を変異させることができる。タンパク質の安定性および受容体結合選択性に影響を与える変異を野生型成熟ＦＧＦ１配列に導入することもできる。
【０３４２】
例示的な全長ＦＧＦ１タンパク質を配列番号２（ヒト）および４（マウス）に示す。一部の例では、ＦＧＦ１は、配列番号２または４を含むが、Ｎ末端メチオニンがない（よって、１５４ａａ  ＦＧＦ１タンパク質をもたらす）。加えて、成熟／活性型のＦＧＦ１は、配列番号２または４由来のＮ末端１５、１６、２０または２１アミノ酸等、Ｎ末端の一部分が除去されたＦＧＦ１である。よって、一部の例では、活性型のＦＧＦ１は、配列番号２または４のアミノ酸１６〜１５５または２２〜１５５を含むかまたはそれからなる（例えば、配列番号５を参照）。一部の例では、変異させることができる成熟型のＦＧＦ１は、Ｎ末端にメチオニンを付加した配列番号５を含む（斯かる配列は、本明細書に記されている通りに変異させることができる）。よって、変異した成熟ＦＧＦ１タンパク質は、Ｎ末端トランケーションを含むことができる。
【０３４３】
変異は、野生型ＦＧＦ１（配列番号２、４または５等）に導入することができる。一部の例では、本明細書に開示されている複数の種類の変異をＦＧＦ１タンパク質に為すことができる。下の変異は、特定のアミノ酸、例えば配列番号２、４または５のアミノ酸によって記述されているが、当業者であれば、いずれかのＦＧＦ１配列における相当するアミノ酸を変異させることができることが認められよう。例えば、配列番号５のＱ４０は、配列番号２および４のＱ５５に相当する。
【０３４４】
一例では、変異は、配列番号２または４の最初の１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０アミノ酸の欠失（配列番号２または４の少なくとも最初の１５、少なくとも１６、少なくとも２０、少なくとも２５または少なくとも２９アミノ酸の欠失等、配列番号２または４の少なくとも最初の１４アミノ酸の欠失等）、配列番号５の最初の８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０アミノ酸の欠失等、ＦＧＦ１（配列番号２、４または５等）のＮ末端領域に為される（例えば、配列番号７、８および９ならびに図１を参照）。
【０３４５】
変異は、その分裂促進活性を低下させるためにＦＧＦ１（配列番号２、４または５等）に為すことができる。一部の例では、斯かる変異は、変異なしのネイティブＦＧＦ１タンパク質と比較して、分裂促進活性を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％低下させるまたはさらには検出可能な分裂促進活性の完全な排除を為す。変異したＦＧＦ１で刺激した血清飢餓細胞（例えば、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞）におけるＤＮＡへのチミジン取り込み、メチルチアゾールテトラゾリウム（ＭＴＴ）アッセイ（例えば、変異したＦＧＦ１で血清飢餓細胞を２４時間刺激し、続いて生細胞を測定することによる）、細胞数定量化またはＢｒｄＵ取り込み等、分裂促進活性を測定する方法は、本技術分野において公知である。一部の例では、Ｆｕら、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０巻：３５９０〜６頁、２００４年；Ｋｌｉｎｇｅｎｂｅｒｇら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７４巻：１８０８１〜６頁、１９９９年；Ｓｈｅｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ．８１巻：１１９〜２５頁、２０１１年またはＺｏｕら、Ｃｈｉｎ．  Ｍｅｄ．  Ｊ．１２１巻：４２４〜４２９頁、２００８年によって提供されるアッセイを使用して、分裂促進活性を測定する。斯かる変異の例として、Ｋ１２Ｖ、Ｒ３５Ｅ、Ｌ４６Ｖ、Ｅ８７Ｖ、Ｎ９５Ｖ、Ｋ１２Ｖ／Ｎ９５Ｖ（例えば、そのＮ末端にメチオニンを含むこともできる配列番号１０を参照）およびＬｙｓ１２Ｖａｌ／Ｐｒｏ１３４Ｖａｌ、Ｌｙｓ１２Ｖａｌ／Ｌｅｕ４６Ｖａｌ／Ｇｌｕ８７Ｖａｌ／Ａｓｎ９５Ｖａｌ／Ｐｒｏ１３４Ｖａｌ（例えば、そのＮ末端にメチオニンを含むこともできる配列番号１１を参照）（ナンバリングは、配列番号５に示す配列を参照）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の例では、配列番号５のアミノ酸１〜９等、連続したＮ末端残基の一部分が除去されて、非分裂促進型のＦＧＦ１を産生する。一例を配列番号９に示す。
【０３４６】
例えば、パラクリンＦＧＦ由来のヘパラン結合残基をＦＧＦ１へと置換することにより、ヘパラン結合親和性を低下させる変異（例えば、変異なしのネイティブＦＧＦ１タンパク質と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％または少なくとも７５％の低下等）を使用して、分裂促進活性を低下させることもできる。一部の例では、分裂促進性は、ＦＧＦ１のＮ末端領域（ＦＧＦ４に結合する領域等）を欠失させ、欠失されたアミノ酸の一部または全体をＦＧＦ２１由来の相当する残基と置き換えることにより、低下または排除される。
【０３４７】
例えば、変異なしのネイティブＦＧＦ１タンパク質と比較して分裂促進性を低下させるために、変異をＦＧＦ１の核局在化部位（ＮＬＳ１、配列番号２のアミノ酸２４〜２７およびＮＬＳ２、配列番号４のアミノ酸１１５〜１２８）の一方または両方に導入することもできる。ＦＧＦ１に為すことができるＮＬＳ変異の例として、ＮＬＳ１の全体もしくは一部分の欠失もしくは変異（リシンの欠失または変異等）、１１５ＫＫ……１２７ＫＫ……等、ＮＬＳ２におけるリシンの欠失もしくは変異、またはこれらの組合せ（ナンバリングは、配列番号２に示す配列を参照）が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、２４Ｋ、２５Ｋ、２７Ｋ、１１５Ｋ、１２７Ｋまたは１２８Ｋ（ナンバリングは、配列番号２に示す配列を参照）のうちの１個またはそれより多くを変異させることができる（例えば、アラニンへの変化または欠失）。ＮＬＳ２（ＫＫＮ…ＫＲ）ドメインにおけるヘパラン結合部位に為すことができる斯かる変異の特定の例を配列番号１２および１３に示す（それぞれＫ１１８ＮまたはＫ１１８Ｅ、ナンバリングは、配列番号５を参照）。
【０３４８】
例えば、核シグナリングに影響を与えるための構成的に活性または不活性な変異体を作製するために、変異をＦＧＦ１のリン酸化部位に導入することができる。
【０３４９】
一部の例では、例えば、核におけるＦＧＦ１の量を減少させ、培養細胞におけるチミジン取り込みアッセイによって測定されるその分裂促進性を低下させるために、ＦＧＦ１核外移行配列に変異が導入される（例えば、Ｎｉｌｓｅｎら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２８２巻（３６号）：２６２４５〜５６頁、２００７年を参照）。核外移行配列への変異は、ＦＧＦ１誘導性増殖を減少させる（例えば、Ｎｉｌｓｅｎら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２８２巻（３６号）：２６２４５〜５６頁、２００７年を参照）。［３５Ｓ］メチオニン標識ＦＧＦ１の測定またはプロテアソーム阻害剤の存在もしくは非存在下でのＦＧＦ１の定常状態レベルのイムノブロッティング等、ＦＧＦ１分解を測定する方法は、本技術分野において公知である。一例では、Ｎｉｌｓｅｎら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２８２巻（３６号）：２６２４５〜５６頁、２００７年またはＺａｋｒｚｅｗｓｋａら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２８４巻：２５３８８〜４０３頁、２００９年によって提供されるアッセイを使用して、ＦＧＦ１分解を測定する。
【０３５０】
ＦＧＦ１核外移行配列は、配列番号２および４のアミノ酸１４５〜１５２または配列番号５のアミノ酸１３０〜１３７を含む。為すことができるＦＧＦ１核外移行配列変異の例として、配列ＩＬＦＬＰＬＰＶ（配列番号２および４のアミノ酸１４５〜１５２）の、ＡＡＡＬＰＬＰＶ（配列番号１４）、ＩＬＡＬＰＬＰＶ（配列番号１５）、ＩＬＦＡＰＬＰＶ（配列番号１６）またはＩＬＦＬＰＡＰＡ（配列番号１７）への変化が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３５１】
一例では、変異を導入して、ＦＧＦ１の安定性を改善する。一部の例では、配列ＮＹＫＫＰＫＬ（配列番号２のアミノ酸２２〜２８）は変更されず、一部の例では、ＦＧＦ１の構造的完全性を確実にし、ＦＧＦ１受容体との相互作用を増加させる。１．５Ｍ尿素の存在下における５倍モル濃度過剰のヘパリンの非存在および存在下での蛍光および円二色性によるＦＧＦ１もしくは変異体の変性または塩酸グアニジンによる等温性平衡変性の測定等、ＦＧＦ１安定性を測定する方法は、本技術分野において公知である。一例では、Ｄｕｂｅｙら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．３７１巻：２５６〜２６８頁、２００７年によって提供されるアッセイを使用して、ＦＧＦ１安定性を測定する。タンパク質の安定性の増加に使用することができる変異の例として、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７ＩおよびＨ９３Ｇ（ナンバリングは、配列番号５に示す配列を参照）のうちの１個またはそれより多くが挙げられるがこれらに限定されない。
【０３５２】
一例では、変異が導入されて、変異なしのネイティブＦＧＦ１タンパク質と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも５０％または少なくとも７５％の増加等、ＦＧＦ１の熱安定性を改善する（例えば、Ｘｉａら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１２年；７巻（１１号）：ｅ４８２１０頁およびＺａｋｒｚｅｗｓｋａ、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２８４巻：２５３８８〜２５４０３頁、２００９年を参照）。一例では、変異が導入されて、ＦＧＦ１のプロテアーゼ抵抗性を増加させる（例えば、Ｋｏｂｉｅｌａｋら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｅｐｔ  Ｌｅｔｔ．２１巻（５号）：４３４〜４３頁、２０１４年を参照）。ＦＧＦ１に為すことができる他の変異は、Ｌｉｎら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７１巻（１０号）：５３０５〜８頁、１９９６年に提供されている変異を含む。
【０３５３】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質またはキメラは、Ｎ９５等、１個またはそれより多くの位置がペグ化される（例えば、ここに参照により援用するＮｉｕら、Ｊ．  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．１３２７巻：６６〜７２頁、２０１４年の方法を参照）。ペグ化は、表面残基および／またはＮ末端アミノ基へのポリエチレングリコール基の共有結合からなる。Ｎ９５は、受容体結合に関与することが公知であり、よって、フォールディングしたタンパク質の表面に存在する。表面露出した残基への変異は、免疫原性配列を潜在的に作製し得るため、ペグ化は、特異的相互作用を抑止するための代替方法である。ペグ化は、受容体結合および／またはタンパク質分解に関係付けられるいずれかの表面露出した部位のための選択肢である。ペグ化は、機能的アミノ酸、例えば、Ｎ９５を「網羅」することができると共に、血清安定性を増加させる。
【０３５４】
一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質またはキメラは、免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）ＦＣドメインを含む（例えば、ここに参照により援用するＣｚａｊｋｏｗｓｋｙら、ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．４巻：１０１５〜２８頁、２０１２年を参照）。抗体の保存されたＦＣ断片は、変異体ＦＧＦ１タンパク質またはキメラのＮ末端またはＣ末端のいずれかに取り込むことができ、タンパク質の安定性、したがって血清半減期を増強することができる。ＦＣドメインは、プロテインＡまたはプロテインＧセファロースビーズにおいてタンパク質を精製するための手段として使用することもできる。これにより、ヘパリン結合変異を有するＦＧＦ１変異体の精製がより容易となる。
【０３５５】
バリアント配列
表１および２に示される配列のバリアント、ならびに配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８のバリアントをはじめとするバリアントＦＧＦ１タンパク質は、１またはそれより多くの変異、例えば、単一挿入、単一欠失、単一置換を含み得る。一部の例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質は、１〜２０個の挿入、１〜２０個の欠失、１〜２０個の置換またはこれらのいずれかの組合せ（例えば、単一の挿入と共に１〜１９個の置換）を含む。一部の例では、本開示は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のアミノ酸変化を有するいずれかの開示されている変異体ＦＧＦ１タンパク質のバリアントを提供する。一部の例では、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８は、１〜８個の挿入、１〜１５個の欠失、１〜１０個の置換またはそれらの任意の組合せ（例えば、１〜１０個、１〜５個または１〜７個のアミノ酸置換と一緒の、１〜１５個、１〜４個、または１〜５個のアミノ酸欠失）を含む。一部の例では、本開示は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０個のアミノ酸の変化を有する、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８のいずれかのバリアントを提供する。一例では、斯かるバリアントペプチドは、部位特異的変異誘発またはＰＣＲ等、標準手順を使用して、ペプチドをコードするヌクレオチド配列を操作することにより産生される。斯かるバリアントは、化学合成することもできる。配列番号１９０のＦＧＦＲ１ｃ二量体に同様の変化を為すこともできる（１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のアミノ酸変化）。
【０３５６】
１種類の改変（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）または変異（ｍｕｔａｔｉｏｎ）は、同様の生化学的性質を有するアミノ酸残基に代わるアミノ酸の置換、すなわち、保存的置換（１〜４、１〜８、１〜１０または１〜２０個の保存的置換等）を含む。典型的には、保存的置換は、その結果得られるペプチドの活性に影響が殆どない〜全くない。例えば、保存的置換は、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８における、このペプチドが、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する哺乳動物等、哺乳動物において血中グルコースを低減させる能力に実質的に影響を与えないアミノ酸置換である。アラニンスキャンを用いて、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８などの変異体ＦＧＦ１タンパク質中のどのアミノ酸残基がアミノ酸置換に耐えられるかを同定し得る。一例では、ＦＧＦ１または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８のうちののいずれかの血中グルコース低下活性は、アラニンまたは他の保存的アミノ酸で１〜４、１〜８、１〜１０または１〜２０個のネイティブアミノ酸を置換した場合に２５％超、例えば２０％超、例えば１０％超は変更されない。タンパク質における本来のアミノ酸に対し置換することができ、保存的置換として考慮されるアミノ酸の例として、次のものが挙げられる：Ａｌａに対するＳｅｒ；Ａｒｇに対するＬｙｓ；Ａｓｎに対するＧｌｎまたはＨｉｓ；Ａｓｐに対するＧｌｕ；Ｃｙｓに対するＳｅｒ；Ｇｌｎに対するＡｓｎ；Ｇｌｕに対するＡｓｐ；Ｇｌｙに対するＰｒｏ；Ｈｉｓに対するＡｓｎまたはＧｌｎ；Ｉｌｅに対するＬｅｕまたはＶａｌ；Ｌｅｕに対するＩｌｅまたはＶａｌ；Ｌｙｓに対するＡｒｇまたはＧｌｎ；Ｍｅｔに対するＬｅｕまたはＩｌｅ；Ｐｈｅに対するＭｅｔ、ＬｅｕまたはＴｙｒ；Ｓｅｒに対するＴｈｒ；Ｔｈｒに対するＳｅｒ；Ｔｒｐに対するＴｙｒ；Ｔｙｒに対するＴｒｐまたはＰｈｅ；およびＶａｌに対するＩｌｅまたはＬｅｕ。
【０３５７】
例えば、（ａ）例えば、シートもしくはヘリックス高次構造としての、置換の区域におけるポリペプチド骨格の構造；（ｂ）標的部位におけるポリペプチドの電荷もしくは疎水性；または（ｃ）側鎖の容積の維持におけるその効果がより有意に異なる残基を選択する、保存性の低い置換を使用することにより、より実質的な変化を為すことができる。ポリペプチド機能に最大の変化を生じることが一般に予想される置換は、（ａ）親水性残基、例えば、セリンもしくはスレオニンが、疎水性残基、例えば、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、バリンもしくはアラニンの代わりに使用される（またはそれによって置換される）；（ｂ）システインもしくはプロリンが、他のいずれかの残基の代わりに使用される（またはそれによって置換される）；（ｃ）正電荷側鎖を有する残基、例えば、リシン、アルギニンもしくはヒスチジンが、負電荷残基、例えば、グルタミン酸もしくはアスパラギン酸の代わりに使用される（またはそれによって置換される）；または（ｄ）容積が大きい側鎖を有する残基、例えば、フェニルアラニンが、側鎖がない残基、例えば、グリシンの代わりに使用される（またはそれによって置換される）置換である。これらのアミノ酸置換（または他の欠失もしくは付加）の影響は、バリアントタンパク質が哺乳動物において血中グルコースを低下させる能力を分析することにより、変異体ＦＧＦ１タンパク質、例えば、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８のいずれかの機能を分析することによって評価され得る。
【０３５８】
タンパク質の作製
組換えにより発現される変異したＦＧＦ１タンパク質の単離および精製は、調製用クロマトグラフィーおよび免疫学的分離等、従来の手段によって行うことができる。発現されると、変異したＦＧＦ１タンパク質は、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィーその他を含む、本技術分野の標準手順に従って精製することができる（全般的に、Ｒ．  Ｓｃｏｐｅｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．、１９８２年を参照）。少なくとも約９０〜９５％均質性の実質的に純粋な組成物が本明細書に開示されており、９８〜９９％またはそれを超える均質性を医薬品目的に使用することができる。
【０３５９】
組換え方法に加えて、本明細書に開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質は、標準ペプチド合成を使用して、全体的または部分的に構築することもできる。一例では、変異したＦＧＦ１タンパク質は、より短い断片のアミノおよびカルボキシル末端の縮合により合成される。カルボキシル末端側の末端の活性化（カップリング試薬Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ｄｉｃｙｌｏｈｅｘｙｌｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ）の使用による等）によりペプチド結合を形成する方法が、本技術分野において周知である。
【０３６０】
ＦＧＦ１変異体およびＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体
核酸分子およびベクター
変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸分子は、本開示に包含される。遺伝暗号に基づき、表１および２に示す配列を使用して作製された配列等、いずれかの変異したＦＧＦ１配列をコードする核酸配列は、慣用的に作製することができる。同様に、変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦＲ１結合、変異体ＦＧＦ１／β−Ｋｌｏｔｈｏ結合／ＦＧＦＲ１結合、変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ２１または変異体ＦＧＦ１／ＦＧＦ１９キメラは、本明細書に提供されているアミノ酸配列に基づく慣用的な方法を使用して作製することができる。一部の例では、斯かる配列は、変異体ＦＧＦ１タンパク質の発現に使用される宿主細胞等、宿主細胞における発現のために最適化される。配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１９０のいずれかの多量体をコードする核酸分子等、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体をコードする核酸分子、ならびに斯かる核酸を含む細胞およびベクターも提供される。
【０３６１】
一例では、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７または２３８への少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９９％または少なくとも９９％の配列同一性を有する変異体ＦＧＦ１タンパク質（またはそのようなタンパク質を含むキメラ）をコードする核酸配列は、本明細書中に提供されるアミノ酸配列およびその遺伝暗号を用いて、当業者によって容易に生成され得る。加えて、当業者であれば、配列が異なるが、同じ変異体ＦＧＦ１タンパク質配列をコードする核酸等、機能的に等価な核酸を含有する種々のクローンを容易に構築することができる。一例では、変異体ＦＧＦ１核酸配列は、配列番号１８に対し少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％配列同一性を有する。
【０３６２】
一例では、核酸配列は、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１９０に対し少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９９％または少なくとも９９％配列同一性を有するペプチド配列を使用して作製されたＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体をコードする。
【０３６３】
核酸分子は、変異したＦＧＦ１ペプチドをコードするＤＮＡ、ｃＤＮＡおよびＲＮＡ配列を含む。コード配列におけるサイレント変異は、２種以上のコドンが同じアミノ酸残基をコードすることができる遺伝暗号の縮重（すなわち、冗長性）に起因する。よって、例えば、ロイシンは、ＣＴＴ、ＣＴＣ、ＣＴＡ、ＣＴＧ、ＴＴＡまたはＴＴＧにコードされることができ；セリンは、ＴＣＴ、ＴＣＣ、ＴＣＡ、ＴＣＧ、ＡＧＴまたはＡＧＣにコードされることができ；アスパラギンは、ＡＡＴまたはＡＡＣにコードされることができ；アスパラギン酸は、ＧＡＴまたはＧＡＣにコードされることができ；システインは、ＴＧＴまたはＴＧＣにコードされることができ；アラニンは、ＧＣＴ、ＧＣＣ、ＧＣＡまたはＧＣＧにコードされることができ；グルタミンは、ＣＡＡまたはＣＡＧにコードされることができ；チロシンは、ＴＡＴまたはＴＡＣにコードされることができ；イソロイシンは、ＡＴＴ、ＡＴＣまたはＡＴＡにコードされることができる。標準遺伝暗号を示す表は、様々なソースに見出すことができる（例えば、Ｓｔｒｙｅｒ、１９８８年、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第３版、Ｗ．Ｈ．  ５  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、ＮＹを参照）。
【０３６４】
特定の種のコドン優先度およびコドン使用表を使用して、斯かる特定の種のコドン使用優先度を活用して、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする単離された核酸分子（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする核酸分子等）を作出することができる。例えば、本明細書に開示されているＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体および変異したＦＧＦ１タンパク質は、目的の特定の生物によって優先的に使用されるコドンを有するように設計することができる。
【０３６５】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異体ＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする核酸等）は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、転写に基づく増幅系（ＴＡＳ）、自立式配列複製系（３ＳＲ）およびＱβレプリカーゼ増幅系（ＱＢ）等、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法によってクローニングまたは増幅することができる。多種多様なクローニングおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅方法論は、当業者に周知である。加えて、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異体ＦＧＦ１タンパク質をコードする配列をコードする核酸（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする核酸等）は、クローニング技法によって調製することができる。適切なクローニングおよび配列決定技法の例、ならびにクローニングにより当業者を方向付けるために十分な説明書は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（編）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版、１〜３巻、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ，  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９年およびＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７年）、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．に見出される。
【０３６６】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸配列（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする核酸配列等）は、例えば、適切な配列のクローニング、またはＮａｒａｎｇら、Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８巻：９０〜９９頁、１９７９年のホスホトリエステル方法；Ｂｒｏｗｎら、Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８巻：１０９〜１５１頁、１９７９年のホスホジエステル方法；Ｂｅａｕｃａｇｅら、Ｔｅｔｒａ．  Ｌｅｔｔ．２２巻：１８５９〜１８６２頁、１９８１年のジエチルホスホラミダイト方法；例えば、Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２巻：６１５９〜６１６８頁、１９８４年に記載されている、例えば、自動合成機を使用したＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｕｔｈｅｒｓ、Ｔｅｔｒａ．  Ｌｅｔｔｓ．２２巻（２０号）：１８５９〜１８６２頁、１９８１年に記載されている固相ホスホラミダイトトリエステル方法；および米国特許第４，４５８，０６６号の固体支持体方法等の方法による直接的化学合成を含む、いずれかの適した方法によって調製することができる。化学合成は、一本鎖オリゴヌクレオチドを産生する。これは、相補的配列とのハイブリダイゼーションまたは鋳型として一本鎖を使用したＤＮＡポリメラーゼによる重合により、二本鎖ＤＮＡに変換することができる。当業者であれば、ＤＮＡの化学合成は、一般に、約１００塩基の配列に限定されるが、より短い配列のライゲーションによってより長い配列を得ることができることを認識できよう。
【０３６７】
一例では、変異体ＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）は、変異体ＦＧＦ１タンパク質をコードするｃＤＮＡをベクターに挿入することにより調製される。変異体ＦＧＦ１タンパク質が産生されるように、変異体ＦＧＦ１タンパク質がインフレームで読み取れるように、挿入を為すことができる。ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体のために、同様の方法を使用することができる。
【０３６８】
変異したＦＧＦ１タンパク質の核酸コード配列（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする配列等）は、発現ベクターに挿入することができ、発現ベクターとして、配列の挿入または取り込みが可能となるように操作することができ、原核生物または真核生物のいずれかにおいて発現させることができる、プラスミド、ウイルス、または他の媒体が挙げられるがこれらに限定されない。宿主は、微生物、酵母、昆虫、植物および哺乳動物生物を含むことができる。原核生物において真核生物またはウイルス配列を有するＤＮＡ配列を発現させる方法は、本技術分野において周知である。宿主において発現および複製できる生物学的に機能的なウイルスおよびプラスミドＤＮＡベクターは、本技術分野において公知である。ベクターは、チミジンキナーゼ遺伝子等、選択可能なマーカーをコードすることができる。ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体のために、同様の方法を使用することができる。
【０３６９】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸配列（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする核酸配列等）は、発現制御配列に操作可能に連結することができる。ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質コード配列に操作可能に連結した発現制御配列は、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異体ＦＧＦ１タンパク質コード配列の発現が、発現制御配列と適合性の条件下で達成されるようにライゲーションされる。発現制御配列として、適切なプロモーター、エンハンサー、転写ターミネーター、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質コード遺伝子の前の開始コドン（すなわち、ＡＴＧ）、イントロンのスプライシングシグナル、ｍＲＮＡの適切な翻訳を可能にするための該遺伝子の正確な読み枠の維持、および終止コドンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０３７０】
一実施形態では、ベクターは、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓまたはＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ等、酵母における発現のために使用される。数種類のプロモーターが、構成的プロモーター、細胞膜Ｈ＋−ＡＴＰａｓｅ（ＰＭＡ１）、グリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＰＤ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ−１（ＰＧＫ１）、アルコール脱水素酵素−１（ＡＤＨ１）および多面発現性薬物抵抗性ポンプ（ＰＤＲ５）等、酵母発現系において役立つことが公知である。加えて、ＧＡＬ１〜１０（ガラクトースによって誘導）、ＰＨＯ５（低い細胞外無機リン酸塩によって誘導）およびタンデム熱ショックＨＳＥエレメント（３７℃への温度上昇によって誘導）等、多くの誘導性プロモーターが役立つ。滴定できる誘導因子に応答して可変性発現を方向付けるプロモーターは、メチオニン応答性ＭＥＴ３およびＭＥＴ２５プロモーターならびに銅依存性ＣＵＰ１プロモーターを含む。これらのプロモーターのいずれかは、マルチコピー（２μ）またはシングルコピー（ＣＥＮ）プラスミドにクローニングして、発現レベルにおける追加的なレベルの制御を得ることができる。プラスミドは、酵母における選択のための栄養マーカー（ＵＲＡ３、ＡＤＥ３、ＨＩＳ１その他等）、および細菌における繁殖のための抗生物質抵抗性（ＡＭＰ）を含むことができる。ｐＫＬＡＣ１等、Ｋ．ｌａｃｔｉｓにおける発現のためのプラスミドが公知である。よって、一例では、細菌における増幅後に、プラスミドは、細菌形質転換と同様の方法によって、相当する酵母栄養要求株に導入することができる。ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸分子（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もし��は２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする核酸分子等）は、昆虫細胞において発現するように設計することもできる。
【０３７１】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）は、種々の酵母株において発現させることができる。例えば、７種の多面発現性薬物抵抗性トランスポーター、ＹＯＲ１、ＳＮＱ２、ＰＤＲ５、ＹＣＦ１、ＰＤＲ１０、ＰＤＲ１１およびＰＤＲ１５は、これらの活性化転写因子、ＰＤＲ１およびＰＤＲ３と共に、酵母宿主細胞において同時に欠失されて、その結果得られる株を薬物に対し感受性にする。エルゴステロール生合成ができないｅｒｇ６変異体等、細胞膜の脂質組成が変更された酵母株を利用することもできる。タンパク質分解に対し高度に感受性のタンパク質を、他の液胞型ヒドロラーゼの活性化を制御する、主要液胞型エンドペプチダーゼＰｅｐ４を欠く酵母細胞において発現させることができる。相当するヌル変異体が生存不能である場合、遺伝子の温度感受性（ｔｓ）アレルを保有する株における異種性発現を用いることができる。
【０３７２】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードするウイルスベクター（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードするウイルスベクター等）を調製することもできる。例示的なウイルスベクターは、鳥類、ネズミおよびヒト起源のポリオーマ、ＳＶ４０、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ＨＳＶおよびＥＢＶを含むヘルペスウイルス、シンドビスウイルス、アルファウイルスならびにレトロウイルスを含む。バキュロウイルス（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ多核性多角体病（ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ）ウイルス；ＡｃＭＮＰＶ）ベクターも本技術分野において公知であり、商業的供給源から得ることができる。他の適したベクターは、レトロウイルスベクター、オルソポックスベクター、トリポックスベクター、鶏痘ベクター、カプリポックスベクター、スイポックスベクター、アデノウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アルファウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクターおよびポリオウイルスベクターを含む。特異的で例示的なベクターは、ワクシニアウイルス、鶏痘ウイルスおよび高度に弱毒化されたワクシニアウイルス（ＭＶＡ）等、ポックスウイルスベクター、アデノウイルス、バキュロウイルスその他である。役立つポックスウイルスは、オルソポックス、スイポックス、トリポックスおよびカプリポックスウイルスを含む。オルソポッ���スは、ワクシニア、エクトロメリアおよびアライグマポックス（ｒａｃｃｏｏｎ  ｐｏｘ）を含む。役立つオルソポックスの一例は、ワクシニアである。トリポックスは、鶏痘、カナリアポックスおよびハトポックス（ｐｉｇｅｏｎ  ｐｏｘ）を含む。カプリポックスは、山羊痘および羊痘を含む。一例では、スイポックスは、豚痘である。使用することができる他のウイルスベクターは、ヘルペスウイルスおよびアデノウイルス等の他のＤＮＡウイルス、ならびにレトロウイルスおよびポリオ等のＲＮＡウイルスを含む。
【０３７３】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードするウイルスベクター（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードするウイルスベクター等）は、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸配列に稼働的に連結した（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ）少なくとも１個の発現制御エレメントを含むことができる。発現制御エレメントは、核酸配列の発現を制御および調節するためにベクターに挿入される。これらのベクターにおいて役立つ発現制御エレメントの例として、ｌａｃ系、ファージラムダのオペレーターおよびプロモーター領域、酵母プロモーター、ならびにポリオーマ、アデノウイルス、レトロウイルスまたはＳＶ４０に由来するプロモーターが挙げられるがこれらに限定されない。追加的な稼働的エレメントとして、リーダー配列、終結コドン、ポリアデニル化シグナル、ならびに宿主系における変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸配列の適切な転写およびその後の翻訳に必要な他のいずれかの配列が挙げられるがこれらに限定されない。発現ベクターは、宿主系における核酸配列を含有する発現ベクターの移入およびその後の複製に必要な追加的なエレメントを含有することができる。斯かるエレメントの例として、複製起点および選択可能なマーカーが挙げられるがこれらに限定されない。当業者であれば、斯かるベクターが、従来方法（Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７年）「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐ��ｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．）を使用して容易に構築でき、また、市販されていることがさらに理解されよう。
【０３７４】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする異種性ＤＮＡ配列（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする配列等）を含有する組換えＤＮＡウイルスを調製するための基本的技法が公知である。斯かる技法は、例えば、ドナープラスミドにおけるＤＮＡ配列に隣接するウイルスＤＮＡ配列および親ウイルスに存在する相同配列の間の相同組換えを伴う。ベクターは、例えば、親ウイルスベクターに天然に存在するまたは人為的に挿入された特有の制限エンドヌクレアーゼ部位を使用して、異種性ＤＮＡを挿入することによる等、本技術分野において公知のステップにより構築することができる。
【０３７５】
宿主が真核生物である場合、リン酸カルシウム共沈殿、マイクロインジェクション等の従来の機械的手順、エレクトロポレーション、リポソームに包まれたプラスミドの挿入またはウイルスベクター等、ＤＮＡトランスフェクション方法を使用することができる。真核細胞は、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする配列等）および単純ヘルペスチミジンキナーゼ遺伝子等、選択可能な表現型をコードする第２の外来ＤＮＡ分子で同時形質転換することもできる。別の方法は、サルウイルス４０（ＳＶ４０）またはウシパピローマウイルス等、真核生物ウイルスベクターを使用して、真核細胞を一過的に感染または形質転換して、タンパク質を発現させることである（例えば、Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ  Ｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｇｌｕｚｍａｎ編、１９８２年を参照）。当業者であれば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＨｅＬａおよび骨髄腫細胞株等、高等真核細胞を含む細胞における変異したＦＧＦ１タンパク質の産生において役立つプラスミドおよびベクター等、発現系を容易に使用することができる。
【０３７６】
変異したＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を発現する細胞
本明細書に開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質（または変異体ＦＧＦ１を含むキメラタンパク質）または本明細書に開示されているＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体をコードする核酸分子を使用して、細胞を形質転換し、形質転換細胞を作製することができる。よって、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体（配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１９０に対し少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有するペプチドを使用して作製されたＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体等）または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）を発現する細胞が開示されている。本明細書に開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質を発現するまたはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を発現する細胞は、真核生物または原核生物のものとなり得る。斯かる細胞の例として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ等）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（Ｅ．ｃｏｌｉ等）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、ＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓまたはＰｉｃｈｉａ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたはＰ．ｐａｓｔｏｒｉｓ等）、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、ＳＦ９細胞、Ｃ１２９細胞、２９３細胞、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａならびに不死化哺乳動物骨髄系およびリンパ系細胞株等、細菌、古細菌、植物、真菌、酵母、昆虫および哺乳動物細胞が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３７７】
変異したＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を発現する細胞は、形質転換または組換え細胞である。斯かる細胞は、変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする少なくとも１種の外因的核酸分子、例えば、表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質をコードする分子を含むことができる。斯かる細胞は、配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１９０に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する２個またはそれを超えるペプチドを使用して作製されたタンパク質をコードする分子等、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体をコードする少なくとも１種の外因的核酸分子を含むことができる。複製の際に生じる変異が存在し得るため、あらゆる後代が、親細胞と同一となる訳ではないことが理解される。宿主細胞において外来ＤＮＡが継続的に維持されることを意味する安定的移入方法は、本技術分野において公知である。
【０３７８】
組換えＤＮＡによる宿主細胞の形質転換は、周知の従来技法によって行うことができる。宿主がＥ．ｃｏｌｉ等の原核生物である場合、対数増殖期後に収集した細胞から、ＤＮＡ取り込みができるコンピテント細胞を調製し、その後、本技術分野において周知の手順を使用したＣａＣｌ２方法によって処理することができる。あるいは、ＭｇＣｌ２またはＲｂＣｌを使用することができる。必要に応じて宿主細胞のプロトプラストを形成した後に、またはエレクトロポレーションにより、形質転換を行うこともできる。培養における哺乳動物細胞の繁殖のための技法は周知である（ＪａｋｏｂｙおよびＰａｓｔａｎ（編）、１９７９年、Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、５８巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．、Ｈａｒｃｏｕｒｔ  Ｂｒａｃｅ  Ｊｏｖａｎｏｖｉｃｈ、Ｎ．Ｙ．を参照）。一般的に使用される哺乳動物宿主細胞株の例は、ＶＥＲＯおよびＨｅＬａ細胞、ＣＨＯ細胞ならびにＷＩ３８、ＢＨＫおよびＣＯＳ細胞株であるが、より高い発現、望ましいグリコシル化パターンまたは他の特色をもたらすように設計された細胞等の細胞株を使用することができる。ポリエチレングリコール形質転換、プロトプラスト形質転換および遺伝子銃等、酵母細胞の形質転換のための技法も本技術分野において公知である。
【０３７９】
変異したＦＧＦ１分子および／またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を含む医薬組成物
１つまたはそれより多くの変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）を含むか、あるいは配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６または１６７、配列番号１９０等（または配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１９０に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列）の多量体等、１個またはそれより多くのＦＧＦＲ１ｃ結合タンパク質多量体、またはこれらのタンパク質をコードする核酸、ならびにグルココルチコイド、化学療法、生物療法および／または抗精神病薬物療法（本明細書において提供されるものの１つまたはそれより多く等）を含む医薬組成物は、選ばれた特定の投与様式に応じて、適切な薬学的に許容される担体と共に製剤化することができる。同様に、本開示は、
【０３８０】
一部の実施形態では、医薬組成物は、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１に示す配列、配列番号２１〜８４のいずれかにおける配列を使用して作製されたタンパク質、または配列番号６〜１３、２１〜８４、８７〜９８、１０１〜１１２、１７３〜１７５、１７７〜１７９、１８１〜１８３、１８５〜１８９および１９１〜２３８のいずれかに対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質等）（または斯かるタンパク質をコードする核酸）ならびにグルココルチコイドまたは抗精神病薬物療法と、薬学的に許容される担体とから本質的になる。このような実施形態では、追加的な治療的に有効な薬剤は、本組成物に含まれない。
【０３８１】
組成物中に含まれ得る例示的なＧＣとして、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロンおよびベクロメタゾンのうち１種または複数（１、２、３または４種等）が挙げられるがこれらに限定されない。一部の例では、組成物中のＧＣは、少なくとも０．１ｍｇ、例えば、少なくとも０．５ｍｇ、少なくとも０．７５ｍｇ、少なくとも１ｍｇ、少なくとも２ｍｇ、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、少なくとも３０ｍｇ、少なくとも４０ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも６０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ、少なくとも１００ｍｇ、少なくとも２００ｍｇ、少なくとも２４０ｍｇ、例えば、１〜１００ｍｇ、１０〜１００ｍｇ、２〜１５ｍｇ、２ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、７５ｍｇまたは１００ｍｇの用量で存在する。
【０３８２】
一部の実施形態では、医薬組成物は、糖尿病の処置のための薬剤等、追加的な治療剤をさらに含む。斯かる薬剤の例として、Ｎｅｍｏ結合ドメイン等、抗アポトーシス性物質ならびにサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）−６、ＣＤＫ−４およびサイクリンＤ１等、増殖を誘導する化合物が限定することなく挙げられる。抗糖尿病剤、例えば、メトホルミン、スルホニル尿素（例えば、グリベンクラミド、トルブタミド、グリメピリド）、ナテグリニド、レパグリニド、チアゾリジンジオン（例えば、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン）、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）−ガンマ−アゴニスト（Ｃ１２６２５７０、アレグリタザル、ファルグリタザル、ムラグリタザール、テサグリタザルおよびＴＺＤ等）およびＰＰＡＲ−γアンタゴニスト、ＰＰＡＲ−ガンマ／アルファモジュレーター（ＫＲＰ２９７等）、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ボグリボース）、ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）−ＩＶ阻害剤（ＬＡＦ２３７、ＭＫ−４３１等）、アルファ２−アンタゴニスト、血糖を低減するための薬剤、コレステロール吸収阻害剤、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−コエンザイムＡ（ＨＭＧＣｏＡ）還元酵素阻害剤（スタチン等）、インスリンおよびインスリンアナログ、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１アナログ（例えば、エキセンディン−４）またはアミリン等、他の活性薬剤を利用することができる。追加的な例として、抗ＣＤ３  ｍＡｂ等の免疫調節因子、ＨＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ラクトゲンおよびＰＴＨｒＰ等の増殖因子が挙げられる。一部の例では、医薬組成物は、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ１９もしくはその両方等、治療有効量の他のＦＧＦ、ヘパリンまたはこれらの組合せをさらに含むことができる。
【０３８３】
一部の実施形態では、医薬組成物は、がんの処置のための追加的な治療剤をさらに含む。斯かる薬剤の例は、本明細書に開示されているもの等、１種または複数の化学療法薬、生物製剤および／または照射療法を限定することなく含む。
【０３８４】
本開示において有用な薬学的に許容される担体および賦形剤は、従来通りである。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、編集者、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、第２１版（２００５年）を参照されたい。例えば、非経口的製剤は、通常、水、生理食塩水、他の平衡塩類溶液、水性デキストロース、グリセロールその他等、薬学的および生理学的に許容される流体媒体である注射用流体を含む。固体組成物（例えば、粉末、丸薬、錠剤またはカプセル形態）のため、従来の無毒固体担体は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムを含むことができる。生物学的に中性の担体に加えて、投与するべき医薬組成物は、湿潤または乳化剤、保存料、ｐＨ緩衝剤その他、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレート等、少量の無毒補助的物質を含有することができる。含むことができる賦形剤は、例えば、ヒト血清アルブミンまたは血漿調製物等、他のタンパク質である。
【０３８５】
一部の実施形態では、組成物は、制御放出製剤、例えば、マイクロカプセル化製剤に含まれる。様々な種類の生分解性および生体適合性ポリマー、方法を使用することができ、種々の合成化合物、タンパク質および核酸をカプセルに包む方法は、本技術分野において十分に記載されている（例えば、米国特許公開第２００７／０１４８０７４号；同第２００７／００９２５７５号；および同第２００６／０２４６１３９号；米国特許第４，５２２，８１１号；同第５，７５３，２３４号；および同第７，０８１，４８９号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ／２００６／０５２２８５；Ｂｅｎｉｔａ、Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第２版、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、２００６年を参照）。
【０３８６】
一部の実施形態では、組成物は、は、ナノ分散（ｎａｎｏｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）系の一部である。ナノ分散系および斯かるナノ分散物を産生するための方法は、当業者に周知である。例えば、米国特許第６，７８０，３２４号；米国特許公開第２００９／０１７５９５３号を参照されたい。例えば、ナノ分散系は、生物学的に活性な薬剤および分散剤（ポリマー、コポリマーまたは低分子量サーファクタント等）を含む。例示的なポリマーまたはコポリマーは、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（エチレングリコール）を含む。例示的な低分子量サーファクタントは、ドデシル硫酸ナトリウム、ヘキサデシルピリジニウムクロリド、ポリソルベート、ソルビタン、ポリ（オキシエチレン）アルキルエーテル、ポリ（オキシエチレン）アルキルエステルおよびこれらの組合せを含む。一例では、ナノ分散系は、ＰＶＰおよびＯＤＰまたはこれらのバリアント（８０／２０ｗ／ｗ等）を含む。一部の例では、ナノ分散物は、溶媒蒸発方法を使用して調製され、例えば、Ｋａｎａｚｅら、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．  Ｉｎｄｕｓ．  Ｐｈａｒｍ．３６巻：２９２〜３０１頁、２０１０年；Ｋａｎａｚｅら、Ｊ．  Ａｐｐｌ．  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉ．１０２巻：４６０〜４７１頁、２００６年を参照されたい。核酸投与に関して、核酸を投与するためのアプローチの１種は、哺乳動物発現プラスミド等、プラスミドＤＮＡによる直接的処置である。上述の通り、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）をコードするヌクレオチド配列は、タンパク質の発現を増加させるためのプロモーターの制御下に置くことができる。
【０３８７】
多くの種類の放出送達系が利用でき、公知である。例として、ポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキサレート（ｃｏｐｏｌｙｏｘａｌａｔｅ）、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド（ｐｏｌｙｅｓｔｅｒａｍｉｄｅ）、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリヒドロキシ酪酸およびポリ酸無水物等、ポリマーに基づく系が挙げられる。薬物を含有する前述のポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国特許第５，０７５，１０９号に記載されている。送達系は、コレステロール、コレステロールエステルおよび脂肪酸等のステロールまたはモノ、ジおよびトリグリセリド等の中性脂肪を含む脂質；ハイドロゲル放出系；サイラスティック（ｓｉｌａｓｔｉｃ）系；ペプチドに基づく系；ワックスコーティング；従来の結合剤および賦形剤を使用した圧縮錠剤；部分的に融合されたインプラント；その他等、非ポリマー系も含む。具体例として、（ａ）タンパク質または活性薬剤が、米国特許第４，４５２，７７５号；同第４，６６７，０１４号；同第４，７４８，０３４号；同第５，２３９，６６０号；および同第６，２１８，３７１号に記載されているもの等、マトリックス内の形態で含有された侵食系、ならびに（ｂ）活性構成成分が、米国特許第３，８３２，２５３号および同第３，８５４，４８０号に記載されているもの等、ポリマーから制御された速度で透過する拡散系が挙げられるがこれらに限定されない。加えて、ポンプに基づくハードウェア送達系を使用することができ、そのいくつかは、植え込みに適応される。
【０３８８】
長期徐放インプラントの使用は、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、および抗精神病薬物療法による糖尿病等、慢性状態の処置に特に適することができる。長期放出は、本明細書において、インプラントが、治療レベルの活性成分を少なくとも３０日間、好ましくは、６０日間送達するように構築および配置されることを意味する。長期徐放インプラントは、当業者に周知であり、上述の放出系の一部を含む。これらの系は、核酸による使用のために記載されてきた（米国特許第６，２１８，３７１号を参照）。ｉｎ  ｖｉｖｏでの使用のため、核酸およびペプチドは、分解（エンドおよびエキソヌクレアーゼによる等）に対し相対的に抵抗性であり得る。よって、Ｃ末端アミドの包含等、開示されている変異したＦＧＦ１タンパク質の改変を使用することができる。
【０３８９】
医薬組成物の剤形は、選ばれた投与様式によって決定することができる。例えば、注射用流体に加えて、外用、吸入、経口および坐薬製剤を用いることができる。外用調製物は、点眼薬、軟膏、スプレー、パッチその他を含むことができる。吸入調製物は、液体（例えば、溶液または懸濁液）となることができ、ミスト、スプレーその他を含む。経口製剤は、液体（例えば、シロップ、溶液または懸濁液）または固体（例えば、粉末、丸薬、錠剤またはカプセル）となり得る。坐薬調製物は、固体、ゲルまたは懸濁液形態となることもできる。固体組成物のため、従来の無毒固体担体は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、セルロース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムを含むことができる。斯かる剤形を調製する実際の方法は、公知である、または当業者には明らかであろう。
【０３９０】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）を含む医薬組成物は、正確な投薬量の個々の投与に適した単位剤形で製剤化することができる。非限定的な一例では、単位投薬量は、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約２５０ｍｇ〜約７５０ｍｇまたは約４００ｍｇ〜約６００ｍｇ等、約１ｍｇ〜約１ｇのＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）を含有する。他の例では、治療有効量のＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。他の例では、治療有効量のＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約２ｍｇ／ｋｇである。特定の例では、治療有効量のＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）は、約２ｍｇ／ｋｇ等、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇを含む。
【０３９１】
変異したＦＧＦ１またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体を使用した処置
開示されているＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体（配列番号１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７または１９０に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する２個またはそれを超えるペプチドを使用して作製されたタンパク質等）ならびに変異したＦＧＦ１タンパク質およびキメラ（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）または斯かるタンパク質をコードする核酸を被験体に投与して、例えば、哺乳動物において摂食時および空腹時血中グルコースを低下させる、インスリン感受性を改善する、耐糖能を改善する、またはこれらの組合せにより、例えば、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する哺乳動物において血中グルコースを低下させることができる。
【０３９２】
ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）（またはこのような分子をコードする核酸）を含む本開示の組成物は、経口、静脈内、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、皮内、くも膜下腔内、皮下、吸入による、坐薬によるまたは中枢神経系による手段を含むいずれかの手段により、ヒトまたは他の哺乳動物に投与することができる。非限定的な一例では、組成物は、注射により投与される。一部の例では、例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）（またはこのような分子をコードする核酸）を膵臓組織に投与することにより（例えば、ポンプを使用することにより、または膵臓の部位における緩徐放出形態の植え込みにより）、組成物の部位特異的投与を使用することができる。特定の投与様式および投薬量レジメンは、症例の詳細（例えば、被験体、疾患、関与する病状、特定の処置および処置が予防的であるか否か）を考慮に入れた主治臨床医によって選択されるであろう。処置は、数日間から数カ月間またはさらには数年間の期間にわたる毎日のまたは毎日複数回の（ｍｕｌｔｉ−ｄａｉｌｙ）または毎日よりも少ない頻度（ｌｅｓｓ  ｔｈａｎ  ｄａｉｌｙ）（毎週または毎月等）用量を伴い得る。例えば、治療有効量のＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少な��とも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）は、単一用量で、１日２回、毎週もしくは複数用量で、例えば、毎日、または処置経過において投与することができる。特定の非限定例では、処置は、１日１回用量または１日２回用量を伴う。
【０３９３】
投与されるＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）の量は、処置されている被験体、苦痛の重症度および投与様式に左右され得、最善には、処方臨床医の判断に委ねられる。これらの制約内で、投与するべき製剤は、処置されている被験体における所望の効果の達成に有効な量の、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質の含量を含有するであろう。治療有効量のＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）は、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する哺乳動物における血中グルコースレベルの低下（例えば、変異体ＦＧＦ１またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体の投与なしと比べて、例えば、少なくとも５％、少なくとも１０％または少なくとも２０％の低下）に必要な、変異体ＦＧＦ１タンパク質もしくはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体またはこれらの分子をコードする核酸の量となることができる。
【０３９４】
ウイルスベクターが、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）をコードする核酸の投与に利用される場合、レシピエントは、より低いまたは高い用量を投与してもよいが、約１０５〜約１０１０プラーク形成単位／ｍｇ哺乳動物の範囲内の、組成物における各組換えウイルスの投薬量を受けることができる。哺乳動物に組成物を投与するための方法の例として、ｅｘ  ｖｉｖｏでの組換えウイルスへの細胞の曝露または罹患組織への組成物の注射、またはウイルスの静脈内、皮下、皮内もしくは筋肉内投与が挙げられるがこれらに限定されない。あるいは、組換えウイルスベクターまたは組換えウイルスベクターの組合せは、薬学的に許容される担体における膵臓への直接的注射によって局所的に投与することができる。
【０３９５】
一般に、投与するべきＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）の核酸配列を保有する組換えウイルスベクターの含量は、ウイルス粒子の力価に基づく。投与するべき例示的な範囲は、ヒト等、哺乳動物１個体当たり１０５〜１０１０ウイルス粒子である。
【０３９６】
一部の例では、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）、またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸は、糖尿病またはインスリン抵抗性の処置において有用な薬剤等、１種またはそれより多くの他の薬剤と組み合わせて（逐次的にまたは同時にまたは同時期に等）投与される。
【０３９７】
抗糖尿病剤は、一般に、６クラスにカテゴリー化される：ビグアナイド（例えば、メトホルミン）；チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ（登録商標））、ピオグリタゾン（Ａｃｔｏｓ（登録商標））、リボグリタゾンおよびトログリタゾンを含む）；スルホニル尿素；炭水化物吸収の阻害剤；脂肪酸オキシダーゼ阻害剤および抗脂肪分解性薬物；ならびに減量剤。これらの薬剤のいずれかは、本明細書に開示されている方法と組み合わせて使用することもできる。抗糖尿病剤は、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ、２２巻（４号）：６２３〜６３４頁に開示されている薬剤を含む。役立つ抗糖尿病剤の１クラスは、インスリンの分泌を増加させ、肝グルコース生成を減少させ、インスリン受容体感受性を増加させると考えられる、スルホニル尿素である。抗糖尿病剤の別のクラスは、高インスリン血症を誘導することなく、肝グルコース産生および腸吸収を減少させ、末梢性グルコース取り込みおよび利用を増加させる、ビグアナイド血糖降下薬を使用する。
【０３９８】
一部の例では、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）は、有効用量の抗糖尿病剤（ビグアナイド、チアゾリジンジオンまたはインクレチン等）と組み合わせて投与することができる。用語「組み合わせた投与」または「同時投与」は、活性薬剤の同時発生的および逐次的投与の両方を指す。ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）、または斯かるＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異体ＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸の投与は、身体活動性増加、低脂肪食、低糖食および禁煙等、ライフスタイル改善と組み合わせることもできる。
【０３９９】
開示されているＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体および変異したＦＧＦ１タンパク質と組み合わせて使用することができる追加的な薬剤は、Ｎｅｍｏ結合ドメイン等の抗アポトーシス性物質、ならびにサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）−６、ＣＤＫ−４およびサイクリンＤ１等の増殖を誘導する化合物を限定することなく含む。抗糖尿病剤、例えば、メトホルミン、スルホニル尿素（例えば、グリベンクラミド、トルブタミド、グリメピリド）、ナテグリニド、レパグリニド、チアゾリジンジオン（例えば、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン）、ペルオキシソーム増殖剤活性化受容体（ＰＰＡＲ）−ガンマ−アゴニスト（Ｃ１２６２５７０等）およびアンタゴニスト、ＰＰＡＲ−ガンマ／アルファモジュレーター（ＫＲＰ２９７等）、アルファ−グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボース、ボグリボース）、ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ）−ＩＶ阻害剤（ＬＡＦ２３７、ＭＫ−４３１等）、アルファ２−アンタゴニスト、血糖を低減させるための薬剤、コレステロール吸収阻害剤、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−コエンザイムＡ（ＨＭＧＣｏＡ）還元酵素阻害剤（スタチン等）、インスリンおよびインスリンアナログ、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−１アナログ（例えば、エキセンディン−４）またはアミリン等、他の活性薬剤を利用することができる。一部の実施形態では、薬剤は、抗ＣＤ３  ｍＡｂ等の免疫調節因子、ＨＧＦ、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ラクトゲンまたは副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）等の増殖因子である。一例では、変異したＦＧＦ１タンパク質は、治療有効量の、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ１９もしくはその両方等、別のＦＧＦ、ヘパリンまたはこれらの組合せと組み合わせて投与される。
【０４００】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）、またはＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質をコードする核酸を含む治療有効量の組成物を被験体に投与することにより、被験体におけるステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または精神病薬処置による糖尿病を処置するための方法が提供される。被験体は、ヒト被験体ならびにネコおよびイヌ等の獣医学被験体を含むいずれかの哺乳動物被験体となり得る。被験体は、小児または成体となり得る。被験体には、インスリンを投与することもできる。方法は、血中グルコースレベルを測定するステップを含むことができる。
【０４０１】
一部の例では、方法は、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または精神病薬処置による糖尿病の被験体、またはステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病のリスクのある被験体を選択するステップを含む。これらの被験体は、開示されているＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）またはこれをコードする核酸分子での処置のために選択することができる。
【０４０２】
一部の例では、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病の被験体は、７５グラム（ｇ）負荷による経口耐糖能検査（ＯＧＴＴ）の約２時間後における１リットル当たり７．０ミリモル（ｍｍｏｌ／Ｌ）（１デシリットル当たり１２６ミリグラム（ｍｇ／ｄＬ））を超えるもしくはそれに等しい空腹時血漿グルコース（ＦＰＧ）濃度、または１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）を超えるもしくはそれに等しい血漿グルコース濃度によって、あるいは高血糖もしくは高血糖性急性発症の古典的症状、１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ（２００ｍｇ／ｄＬ）を超えるもしくはそれに等しいランダム血漿グルコース濃度、または６．５％を超えるもしくはそれに等しいＨｂＡ１ｃレベルを有する患者において診断することができる。他の例では、前糖尿病の被験体は、グルコース寛容減損（ＩＧＴ）によって診断することができる。１４０ｍｇ／ｄＬを超えるもしくはそれに等しく２００ｍｇ／ｄＬ（７．８〜１１．０ｍＭ）未満のＯＧＴＴ  ２時間血漿グルコース、または１００ｍｇ／ｄＬを超えるもしくはそれに等しく１２５ｍｇ／ｄＬ（５．６〜６．９ｍｍｏｌ／Ｌ）未満の空腹時血漿グルコース（ＦＰＧ）濃度、または５．７％を超えるもしくはそれに等しく６．４％（５．７〜６．４％）未満のＨｂＡ１ｃレベルは、ＩＧＴであると考慮され、被験体が前糖尿病であることを示す。追加的な情報は、Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  ｉｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  −  ２０１０年（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ３３巻：Ｓ１１〜６１頁、２０１０年）に見出すことができる。
【０４０３】
一部の例では、開示されている組成物および方法で処置される被験体は、６．５％を超えるまたは７％を超えるＨｂＡ１Ｃを有する。
【０４０４】
一部の例では、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病の処置は、被験体における耐糖能の増加（例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異体ＦＧＦ１の投与なしと比べて、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％または少なくとも５０％の増加等）、インスリン抵抗性の減少（例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異体ＦＧＦ１の投与なしと比べて、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％または少なくとも５０％の減少等、例えば、血漿グルコースレベルの減少、血漿インスリンレベルの減少またはこれらの組合せ）およびＨｂＡ１ｃレベルの減少（例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体または変異体ＦＧＦ１の投与なしと比べて、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも１．５％、少なくとも２％または少なくとも５％の減少等）のうちの１つまたはそれより多くを含む。一部の実施形態では、開示されている方法は、被験体における耐糖能、インスリン抵抗性、血漿グルコースレベル、血漿インスリンレベル、および／またはＨｂＡ１ｃレベルを測定するステップを含む。
【０４０５】
一部の例では、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）またはこれをコードする核酸分子の投与は、０．５％〜０．８％、０．５％〜１％、１〜１．５％または０．５％〜２％の減少等、少なくとも０．５％、少なくとも１％または少なくとも１．５％の低下等、ＨｂＡ１Ｃを減少させることにより、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を処置する。一部の例では、ＨｂＡ１Ｃの標的は、約４〜６％、４〜６．４％または４〜６．２％等、約６．５％未満である。一部の例では、斯かる標的レベルは、約２６週間以内、約４０週間以内または約５２週間以内に達成される。ＨｂＡ１Ｃを測定する方法は慣用的であり、本開示は、特定の方法に限定されない。例示的な方法は、ＨＰＬＣ、イムノアッセイおよびボロネート（ｂｏｒｏｎａｔｅ）アフィニティークロマトグラフィーを含む。
【０４０６】
一部の例では、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）またはこれをコードする核酸分子の投与は、例えば、被験体における血中グルコースレベル（ＯＧＴＴにおける２時間血漿グルコースまたはＦＰＧ等）を減少させることにより、耐糖能を増加させることによりステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を処置する。一部の例では、方法は、対照（インスリン、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）またはこれをコードする核酸分子のいずれの投与もなし等）と比較して、血中グルコースを少なくとも５％（少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％またはそれを超える等）減少させるステップを含む。特定の例では、血中グルコースレベルの減少は、被験体の出発血中グルコースレベル（例えば、ＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくは変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）またはこれをコードする核酸分子での処置前）と比べて決定される。他の例では、被験体の血中グルコースレベルの減少は、出発点（例えば、約１２６ｍｇ／ｄＬを超えるＦＰＧまたは約２００ｍｇ／ｄＬを超えるＯＧＴＴ  ２時間血漿グルコース）から標的レベル（例えば、１２６ｍｇ／ｄＬ未満のＦＰＧまたは２００ｍｇ／ｄＬ未満のＯＧＴＴ  ２時間血漿グルコース）への血中グルコースの低下を含む。一部の例では、標的ＦＰＧは、１００ｍｇ／ｄＬ未満となり得る。他の例では、標的ＯＧＴＴ  ２時間血漿グルコースは、１４０ｍｇ／ｄＬ未満となり得る。被験体（例えば、被験体由来の血液試料）における血中グルコースレベルを測定するための方法は、慣用的である。
【０４０７】
他の実施形態では、開示されている方法は、対照（インスリン、いずれかのＦＧＦＲ１結合タンパク質多量体もしくはいずれかの変異したＦＧＦ１タンパク質（表１および２に示す配列、配列番号２１〜８４、１１３〜１２０および１９１〜２３８のいずれかにおける配列、または配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７もしくは２３８に対し少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％配列同一性を有するタンパク質をコードする配列を使用して作製されたタンパク質等）またはこれをコードする核酸分子のいずれの投与もなし等）に対し、糖尿病の１種またはそれより多くの指標（耐糖能、トリグリセリドレベル、遊離脂肪酸レベルまたはＨｂＡ１ｃレベル等）を比較するステップを含み、対照（上述）と比べた特定の指標の増加または減少は、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病の有効な処置を示す。対照は、被験体におけるステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病の指標を比較するためのものに対する任意の適した対照となり得る。一部の実施形態では、対照は、健康な被験体（ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病ではない被験体等）から得られる試料である。一部の実施形態では、対照は、経歴的（ｈｉｓｔｏｒｉｃａｌ）対照または標準参照値または値の範囲（ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病の被験体の群またはステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病ではない被験体由来の試料の群等、以前に検査された対照試料等）である。さらなる例では、対照は、当業者によって使用される正常個体の集団から得られる標準値等、参照値である。対照集団と同様に、被験体由来の試料の値は、平均参照値または参照値の範囲（参照群における高いおよび低い値等または９５％信頼区間）と比較することができる。他の例では、対照は、クロスオーバー研究において、治療化合物で処置した同じ被験体（または被験体群）と比較される、プラセボで処置した被験体（または被験体群）である。さらなる例では、対照は、処置前の被験体（または被験体群）である。
【０４０８】
本開示を、次の非限定的な実施例により説明する。
【実施例】
【０４０９】
（実施例１）
変異したＦＧＦ１タンパク質の調製
変異したＦＧＦ１タンパク質は、公知の方法を使用して作製することができる（例えば、Ｘｉａら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．７巻（１１号）：ｅ４８２１０頁、２０１２年を参照）。例を下に示す。
【０４１０】
簡潔に説明すると、ＦＧＦ１変異体タンパク質をコードする核酸配列（例えば、配列番号６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１７３、１７４、１７５、１７７、１７８、１７９、１８１、１８２、１８３、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７および２３８のいずれか）は、可撓性２０アミノ酸リンカー（ｐＢＡＣ−３のＳ−タグ配列に由来する）およびＮ末端（Ｈｉｓ）６タグによって先行されるエンテロキナーゼ（ＥＫ）認識配列（Ａｓｐ４Ｌｙｓ）の下流に融合することができる。その結果得られる発現された融合タンパク質は、効率的な精製のために（Ｈｉｓ）６タグを利用し、その後、ＥＫ消化によって処理して、変異体ＦＧＦ１タンパク質を得ることができる。
【０４１１】
変異体ＦＧＦ１タンパク質は、イソプロピル−β−Ｄ−チオ−ガラクトシドによる誘導後に、Ｅ．ｃｏｌｉ宿主から発現させることができる。発現されたタンパク質は、逐次的なＮｉ−ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）親和性樹脂におけるカラムクロマトグラフィーと、続くＴｏｙｏＰｅａｒｌ  ＨＷ−４０Ｓサイズ排除クロマトグラフィーを利用して精製することができる。精製されたタンパク質をＥＫで消化して、Ｎ末端（Ｈｉｓ）６タグ、２０アミノ酸リンカーおよび（Ａｓｐ４Ｌｙｓ）ＥＫ認識配列を除去することができる。その後の第２のＮｉ−ＮＴＡクロマトグラフィーステップを利用して、放出されたＮ末端変異体ＦＧＦ１タンパク質（いずれかの切断されていない融合タンパク質と共に）を除去することができる。最終精製は、５０ｍＭ  Ｎａ２ＰＯ４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．１ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、５ｍＭ  Ｌ−メチオニン、ｐＨ６．５（「ＰＢＸ」バッファー）に平衡化されたＨｉＬｏａｄ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５サイズ排除クロマトグラフィーを使用して行うことができる；Ｌ−メチオニンがＰＢＸバッファーに含まれて、反応性チオールの酸化および他の潜在的酸化的分解を制限してもよい。
【０４１２】
一部の例では、エンテロキナーゼは使用されず、代わりに、ＦＧＦ１変異体タンパク質（Ｎ末端メチオニンを含むもの等）は、ヘパリンアフィニティークロマトグラフィーを使用して作製および精製することができる。
【０４１３】
貯蔵および使用のため、精製された変異体ＦＧＦ１タンパク質は、０．２２ミクロンフィルターを通して滅菌濾過し、Ｎ２でパージし、ドライアイスにおいて即時（ｓｎａｐ）凍結し、使用に先立ち−８０℃で貯蔵することができる。変異体ＦＧＦ１タンパク質の純度は、クーマシーブリリアントブルーおよびＳｉｌｖｅｒ  Ｓｔａｉｎ  Ｐｌｕｓ（ＢＩＯ−ＲＡＤ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ  ＣＡ）の両方で染色したドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ  ＰＡＧＥ）によって評価することができる。変異体ＦＧＦ１タンパク質は、ヘパリンの非存在下で調製することができる。ＩＶボーラスに先立ち、ヘパリンまたはＰＢＳをタンパク質に加えることができる。
【０４１４】
（実施例２）
マウスにおいて血中グルコースを低下させるＦＧＦ１アナログおよびＦＧＦＲ１多量体の検査
動物モデルを使用して、ステロイド誘導性糖尿病、高コルチゾール血症、または抗精神病薬処置による糖尿病を有する動物における血中グルコースを低下させる、変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合多量体の能力を実証することができる。
【０４１５】
動物
１２時間の明／１２時間の暗サイクルによる温度制御された環境にマウスを収容し、米国の立法（Ｕ．Ｓ．  ｌｅｇｉｓｌａｔｉｏｎ）を遵守した施設のガイドラインに従って取り扱う。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、標準または高脂肪飼料（ＭＩ実験用齧歯類飼料５００１、Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ；高脂肪（６０％）飼料Ｆ３２８２、Ｂｉｏ−Ｓｅｒｖ）および酸性化水を自由に与える。高コルチゾール血症のモデルとして、マウスのクッシングモデルを使用することもできる（例えば、Ｈｅｌｓｅｔｈら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌ．、１４０巻：１０７１〜８０頁、１９９２年を参照）。
【０４１６】
ＧＣおよびＦＧＦタンパク質の投与
ＧＣコルチコステロン（１００μｇ／ｍｌ）は、飲料水を介して投与される。あるいは、プレドニゾロン（１０ｍｇ／ｋｇ／日ｉ．ｐ．）は、２ヶ月間の高脂肪食に続く最後の７日間送達される。
【０４１７】
マウスＦＧＦ１（Ｐｒｏｓｐｅｃ、Ｎｅｓｓ  Ｚｉｏｎａ、Ｉｓｒａｅｌ）、ヒトＦＧＦ１（Ｐｒｏｓｐｅｃ、Ｎｅｓｓ  Ｚｉｏｎａ、Ｉｓｒａｅｌ）または本明細書に記載されているいずれかの変異体ＦＧＦ１もしくはＦＧＦＲ１結合多量体の０．１ｍｇ／ｍｌのＰＢＳ中溶液は、ＳＱ注射される（０．５ｍｇ／ｋｇを１日おきに）。
【０４１８】
一部の例では、ＧＣは、変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合多量体の前に投与される（少なくとも２時間前等）。一部の例では、ＧＣは、変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合多量体と同時にまたは同時期に投与される。一部の例では、ＧＣは、変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合多量体の後に投与される（少なくとも２時間後等）。
【０４１９】
血中グルコースは、ＧＣおよび変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合多量体の投与０〜１２０時間後に測定することができる。
【０４２０】
血清解析
自由な摂食状態で、または一晩絶食後のいずれかで、尾出血により血液を採取する。メーカーの説明書に従って酵素比色分析方法を使用して、遊離脂肪酸（Ｗａｋｏ）、トリグリセリド（Ｔｈｅｒｍｏ）およびコレステロール（Ｔｈｅｒｍｏ）を測定する。超高感度インスリンＥＬＩＳＡキット（Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｃｈｅｍ）を使用して、血清インスリンレベルを測定する。Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘ（商標）ＭＡＰおよびＢｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｐｒｏ（商標）キット（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅおよびＢｉｏ−Ｒａｄ）を使用して、血漿アディポカインおよびサイトカインレベルを測定する。
【０４２１】
代謝試験
ｏ／ｎ絶食後に耐糖能検査（ＧＴＴ）を行う。マウスに、１ｇグルコース／ｋｇ体重をｉ．ｐ．注射し、ＯｎｅＴｏｕｃｈ  Ｕｌｔｒａグルコメーター（ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ）（Ｌｉｆｅｓｃａｎ  Ｉｎｃ）を使用して、０、１５、３０、６０および１２０分目に血中グルコースをモニターする。３時間絶食後に、インスリン耐性検査（ＩＴＴ）を行う。マウスに、２Ｕインスリン／ｋｇ体重（Ｈｕｍｕｌｉｎ  Ｒ；Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）をｉ．ｐ．注射し、ＯｎｅＴｏｕｃｈ  Ｕｌｔｒａグルコメーター（Ｌｉｆｅｓｃａｎ  Ｉｎｃ）を使用して、０、１５、３０、６０および９０分目に血中グルコースをモニターする。
【０４２２】
Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）においてリアルタイム代謝解析を行う。ＣＯ２産生、Ｏ２消費、ＲＱ（炭水化物対脂肪酸化の相対速度）および歩行（ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ）カウントを、データ記録前に適応のための少なくとも２４時間を入れて６連続昼夜にわたり決定する。ＥｃｈｏＭＲＩ−１００（商標）（Ｅｃｈｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＬＬＣ）を使用して、総体組成解析を行うことができる。
【０４２３】
（実施例３）
ＦＧＦ１は、ＨＳＬの発現を低下させる
本実施例は、ＦＧＦ１が、間質血管細胞群（ＳＶＦ）から分化した脂肪細胞におけるＬｉｐｅ（タンパク質ホルモン感受性リパーゼ、ＨＳＬをコードする）の発現を低下させることの実証に使用される方法について記載する。Ｌｉｐｅは、遊離脂肪酸を放出するための脂肪性組織におけるトリグリセリドの脂肪分解に必要とされる。脂肪分解のインスリン駆動抑制は、低下した肝グルコース産生、ひいては血清グルコースレベルの低下と機能的に関係付けられてきた（Ｐｅｒｒｙら、Ｃｅｌｌ、１６０巻：７４５〜７５８頁、２０１５年）。
【０４２４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法の概要は、図１７Ａに示されている。ＦＧＦ１野生型またはＦＧＦ１ノックアウトマウス由来の間質血管細胞群を、３種の誘導培地（ＩＭ１、２および３）による逐次処置によって脂肪細胞に分化させ、デキサメタゾン（２０ｎＭ、分化９日目）による処置によってインスリン抵抗性にした。インスリン抵抗性脂肪細胞（ａｐｉｄｏｃｙｔｅ）を、媒体またはｒＦＧＦ１（ヒト、１００ｎｇ  ｍｌ−１）で４８時間処置した。図１７Ｂに示す通り、ｒＦＧＦ１は、インスリン感受性（対照）脂肪細胞におけるＨＳＬ（Ｌｉｐｅとしても公知）の発現を低下させることができた。注目すべきことに、より顕著なＨＳＬ発現抑制が、インスリン抵抗性脂肪細胞（すなわち、Ｄｅｘ処置細胞）において達成された。媒体による処置には効果がなかった。
【０４２５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法の概要は、図１７Ｃに示されている。ＦＧＦＲ１にｌｏｘＰが導入された（ｆｌｏｘｅｄ）（ＦＧＦＲ１  ｆ／ｆ）マウス由来の間質血管細胞群を、上述の通り脂肪細胞に分化させた。分化後（７日目）に、ＧＦＰ（アデノ−ＧＦＰ、対照）またはＣＲＥリコンビナーゼ（アデノ−ＣＲＥ、ＦＧＦＲ１発現を欠失させるため）を発現するアデノウイルスで脂肪細胞を処置し、その後、デキサメタゾン（２０ｎＭ、分化９日目）による処置によってインスリン抵抗性にした。次に、ＦＧＦＲ１発現ありおよびなしのインスリン抵抗性脂肪細胞を、媒体またはｒＦＧＦ１で処置した。図１７Ｄに示す通り、ｒＦＧＦ１は、媒体処置細胞と比較して、野生型脂肪細胞（アデノＧＦＰで処置）におけるＨＳＬの発現を抑制するが、ＦＧＦＲ１を欠く脂肪細胞（アデノＣＲＥ処置細胞）には効果がない。
【０４２６】
これらの観察に基づき、本明細書に開示されている変異体ＦＧＦ１タンパク質またはＦＧＦＲ１結合多量体のいずれかを使用して、インスリン抵抗性（例えば、ステロイドによる処置に起因する）を処置し、Ｌｉｐｅ発現を例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％低下させることができる（例えば、リポジストロフィーを処置するために）。
【０４２７】
本開示の原理を適用することができる多くの可能な実施形態を考慮すると、説明されている実施形態が、本開示の単なる例であり、本発明の範囲を限定するものと解釈するべきではないことが認識できよう。そうではなく、本開示の範囲は、次の特許請求の範囲によって定義される。したがって、本出願人らは、自身の発明として、特許請求の範囲および精神内に収まる全てを主張する。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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