(57)【要約】  本発明は、3'-炭素及び5'-炭素を有する糖に結合した核酸塩基を含むモノヌクレオチドを特徴とし、ここで、5'-炭素は、リン酸基のリン(V)原子に酸素原子を介して結合し、リン(V)原子は、(i)ジスルフィド生体可逆性基に酸素原子を介して、及び(ii)(a)場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいアルコキシ、場合により置換されていてもよいアリールオキシ、もしくは場合により置換されていてもよいヘテロアリールオキシ、又は(b)3'-炭素に酸素原子を介して結合される。本発明はまた、モノヌクレオチドを細胞に送達するための方法、及びC型肝炎を有する対象を治療するための方法を特徴とする。【選択図】図１
2018503606.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
3'-炭素及び5'-炭素を有する糖に結合した核酸塩基を含むモノヌクレオチドであって、前記5'-炭素が、リン酸基のリン(V)原子に酸素原子を介して結合し、前記リン(V)原子が
(i)唯一のジスルフィド生体可逆性基に酸素原子を介して、及び
(ii)(a)場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、もしくは場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシに、又は
(b)前記3'-炭素に酸素原子を介して
結合しているモノヌクレオチド。
【請求項２】
前記リン酸基が、唯一のリン(V)原子を含む、請求項１に記載のモノヌクレオチド。
【請求項３】
前記リン(V)原子が、前記3'-炭素に前記酸素原子を介して結合している、請求項１又は２に記載のモノヌクレオチド。
【請求項４】
前記リン(V)原子が、場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシに結合している、請求項１又は２に記載のモノヌクレオチド。
【請求項５】
前記リン(V)原子が、場合により置換されていてもよいアミノ又は場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシに結合している、請求項４に記載のモノヌクレオチド。
【請求項６】
前記リン(V)原子が、場合により置換されていてもよいアミノに結合している、請求項５に記載のモノヌクレオチド。
【請求項７】
前記ジスルフィド生体可逆性基が、式(I):
G-S-S-(LinkA)-X      (I)
(式中、
Gは、機能性キャップ基であり、
LinkAは、28Da以上の分子量を有するリンカーであり、
Xは、前記リン酸基の酸素原子への結合である)
の構造を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項８】
式(II):
【化１】
2018503606.tif 000058
(式中、
Gは、機能性キャップ基であり、
LinkAはリンカーであり、
B1は、核酸塩基であり、
R1は、H、アジド、シアノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R2及びR3の各々は、独立してH、アミノ、アジド、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシであり、
G1は、場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシであり、R4は、ヒドロキシ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいアミノ、もしくはアジドであり、又はG1及びR4が組み合わさって-O-を形成し、
R5は、H、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、又はシアノであり、
R6は、H、アジド、シアノ、ハロ、場合より置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R7は、H又は場合により置換されていてもよいC1-6アルキルである)
の構造を有し、又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーである、請求項１に記載のモノヌクレオチド。
【請求項９】
Gがブロッキング基、送達ドメイン、又は色素である、請求項８に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１０】
式(II):
【化２】
2018503606.tif 000059
(式中、
Gは、場合により置換されていてもよいC3-10アルキル、場合により置換されていてもよいC3-10ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC6-14アリール、場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリルであり、
LinkAは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキレン、場合により置換されていてもよいC6-14アリーレン、場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリレン、場合により置換されていてもよいアザ、O、及びSからなる群から独立して選択される1つ、2つ、又は3つのモノマーからなり、ここで、LinkAは、O及びSからなる群から選択される2つの隣接する原子を含まず、前記リン酸基の酸素原子に結合したモノマーは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレンであり、
B1は、核酸塩基であり、
R1は、独立して、H、アジド、シアノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R2及びR3の各々は、独立してH、アミノ、アジド、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシであり、
G1は、場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいアルコキシ、場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシであり、R4は、ヒドロキシ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいアミノ、もしくはアジドであり、又はG1及びR4が組み合わさって-O-を形成し、
R5は、H、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、又はシアノであり、
R6は、H、アジド、シアノ、ハロ、場合より置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R7は、H又は場合により置換されていてもよいC1-6アルキルである)
で表されるモノヌクレオチド、又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマー。
【請求項１１】
R1がHである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１２】
R2が、場合により置換されていてもよいC1-6アルキルである、請求項８〜１１のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１３】
R3が、ヒドロキシ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ又はハロである、請求項８〜１２のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１４】
R3がハロである、請求項１３に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１５】
R5がHである、請求項８〜１４のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１６】
R6がHである、請求項８〜１５のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１７】
R7がH又はMeである、請求項８〜１６のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１８】
G1が、場合により置換されていてもよいアミノ、又は場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシである、請求項８〜１７のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項１９】
G1が、場合により置換されていてもよいアミノである、請求項１８に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２０】
R4がヒドロキシである、請求項８〜１９のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２１】
G1及びR4が組み合わさって-O-を形成する、請求項８〜２０のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２２】
Gが送達ドメインである、請求項７〜９のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２３】
前記送達ドメインが、ターゲティング部分、エンドソームエスケープ部分、又は細胞浸透性ペプチドを含む、請求項２２に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２４】
前記送達ドメインがターゲティング部分を含む、請求項２３に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２５】
前記ターゲティング部分が1〜10個の炭水化物を含む、請求項２４に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２６】
前記炭水化物のそれぞれが、独立してGalNAc又はマンノースである、請求項２５に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２７】
前記炭水化物がGalNAcである、請求項２６に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２８】
前記炭水化物がマンノースである、請求項２７に記載のモノヌクレオチド。
【請求項２９】
前記ターゲティング部分が脂質である、請求項２４に記載のモノヌクレオチド。
【請求項３０】
Gがブロッキング基である、請求項７〜９のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項３１】
Gが、場合により置換されていてもよいC3-10アルキル、場合により置換されていてもよいC3-10ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC6-14アリール、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリルである、請求項３０に記載のモノヌクレオチド。
【請求項３２】
LinkAが、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキレン、場合により置換されていてもよいC6-14アリーレン、場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリレン、場合により置換されていてもよいアザ、O、及びSからなる群から独立して選択される1つ、2つ、又は3つのモノマーからなり、ここで、LinkAは、O及びSからなる群から選択される2つの隣接する原子を含まず、前記リン酸基の酸素原子に結合したモノマーは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレンである、請求項７〜３１のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド。
【請求項３３】
LinkAが、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン、場合により置換されていてもよいC6- 14アリーレン、及びOからなる群から独立して選択される1つ、2つ、又は3つのモノマーからなる、請求項３２に記載のモノヌクレオチド。
【請求項３４】
LinkAが、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン及び場合により置換されていてもよいC6-14アリーレンからなる群から独立して選択される1つ又は2つのモノマーからなる、請求項３３に記載のモノヌクレオチド。
【請求項３５】
下記:
【化３】
2018503606.tif 000060
2018503606.tif 000061
で表されるモノヌクレオチド、又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマー。
【請求項３６】
4、6、7、8、9、10、16、もしくは18、又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーである、請求項３９に記載のモノヌクレオチド。
【請求項３７】
前記モノヌクレオチドが同位体濃縮されている、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のモノヌクレオチドを含む組成物。
【請求項３８】
前記モノヌクレオチドが15Nで濃縮されている、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記核酸塩基が環外アミノ基を含む、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記環外アミノ基が15Nで同位体濃縮されている、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記モノヌクレオチドが、
【化４】
2018503606.tif 000062
又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーである、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
請求項１〜３６のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド又は請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬組成物。
【請求項４３】
細胞にモノヌクレオチドを送達するための方法であって、前記細胞を請求項１〜３６のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド又は請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の組成物と接触させることを含む方法。
【請求項４４】
前記細胞が肝細胞である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
C型肝炎を有する対象を治療するための方法であって、前記対象に請求項１〜３６のいずれか一項に記載のモノヌクレオチド、請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項４２に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体可逆性ジスルフィド基を有するモノヌクレオチド及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトにおける疾患の治療のための有機リン酸塩の使用は、テノフォビル、ソホスブビル、及びシクロホスファミドの承認により近年増加している。いくつかの有機リン酸塩のインビボ活性は、リン酸塩が1つ以上の負電荷を伴って存在することを必要とする。しかしながら、薬物化合物中に負電荷を含めることは、細胞による一定の大きさの負に荷電した分子の不十分な取り込みのために、薬物の薬理学的有効性を低下させる可能性がある。このような薬物の薬理学的有効性を高めるための1つのアプローチにおいて、リン酸塩の負に荷電した酸素原子は、ホスホエステル又はホスファミドとしてマスクされる。このアプローチの課題は、細胞内の有機リン酸塩の酸素原子を迅速及び確実にアンマスキングし、早すぎる細胞外アンマスキングの防止が必要なことである。このアプローチの実施における試みは、主に加水分解性基の導入に焦点をあてた。しかしながら、これらの実施は、しばしば、リン酸塩をアンマスキングすることができる酵素の同時配置の必要性、アンマスキング反応副産物の毒性、及び細胞外エステラーゼのチオエステラーゼ活性に起因する早すぎるアンマスキング等の実質的な欠点を示す。
【０００３】
総合すると、これらの問題は創薬と薬の開発に数多くの課題を示す。理想的なプロドラッグ及びコンジュゲーションアプローチは、合成が容易であり、構造の多様性に耐え、組織間で普遍的であり、種間で一貫していなければならない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
依然として、有機リン酸塩の負電荷をマスキングすることを伴う薬物送達アプローチが必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
概して、本発明は、モノヌクレオチドをマスキングするためのアプローチを提供する。
【０００６】
第一の態様において、本発明は、3'-炭素及び5'-炭素を有する糖に結合した核酸塩基を含有するモノヌクレオチドであって、前記5'-炭素が、リン酸基のリン(V)原子に酸素原子を介して結合し、上記リン(V)原子が
(i)唯一のジスルフィド生体可逆性基に酸素原子を介して、及び
(ii)(a)場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、もしくは場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシに、又は
(b)上記3'-炭素に酸素原子を介して
結合しているモノヌクレオチドを提供する。
【０００７】
特定の実施形態において、上記リン酸基は、唯一のリン(V)原子を含有し得る。具体的な実施形態において、上記リン(V)原子は、3'-炭素に酸素原子を介して結合することができる。いくつかの実施形態において、リン(V)原子は、場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシに結合することができる。具体的には、リン(V)原子は、場合により置換されていてもよいアミノ又は場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシに結合することができる。例えば、リン(V)原子は、場合により置換されていてもよいアミノに結合することができる。
【０００８】
他の実施形態において、ジスルフィド生体可逆性基が、式(I):
G-S-S-(LinkA)-X      (I)
(式中、
Gは、機能性キャップ基であり、
LinkAは、28Da以上の分子量を有するリンカーであり、
Xは、前記リン酸基の酸素原子への結合である)
の構造を有することができる。
【０００９】
なお他の実施形態において、本発明のモノヌクレオチドは、式(II):
【００１０】
【化１】
2018503606.tif 000003
(式中、
Gは、機能性キャップ基であり、
LinkAはリンカーであり、
B1は、核酸塩基であり、
R1は、H、アジド、シアノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R2及びR3の各々は、独立してH、アミノ、アジド、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシであり、
G1は、場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシであり、R4は、ヒドロキシ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいアミノ、もしくはアジドである、又はG1及びR4が組み合わさって-O-を形成し、
R5は、H、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、又はシアノであり、
R6は、H、アジド、シアノ、ハロ、場合より置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R7は、H又は場合により置換されていてもよいC1-6アルキルである)
で表される化合物、又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーであり得る。
【００１１】
式(I)又は(II)のいくつかの実施形態において、Gはブロッキング基、送達ドメイン、又は色素であってもよい。
【００１２】
さらなる実施形態において、本発明のモノヌクレオチドは、式(II)の化合物、又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーであってもよく、
式中、
Gは、場合により置換されていてもよいC3-10アルキル、場合により置換されていてもよいC3-10ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC6-14アリール、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリルであり、
LinkAは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキレン、場合により置換されていてもよいC6-14アリーレン、場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリレン、場合により置換されていてもよいアザ、O、及びSからなる群から独立して選択される1つ、2つ、又は3つのモノマーを含有し、ここで、LinkAは、O及びSからなる群から選択される2つの隣接する原子を含まず、リン酸基の酸素原子に結合したモノマーは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレンであり、
B1は、核酸塩基であり、
R1は、H、アジド、シアノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R2及びR3の各々は、独立してH、アミノ、アジド、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシであり、
G1は、場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシであり、R4は、ヒドロキシ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいアミノ、もしくはアジドである、又はG1及びR4が組み合わさって-O-を形成し、
R5は、H、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、又はシアノであり、
R6は、H、アジド、シアノ、ハロ、場合より置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R7は、H又は場合により置換されていてもよいC1-6アルキルである。
【００１３】
式(II)のいくつかの実施形態において、R1は、Hであり得る、R2は、場合により置換されていてもよいC1-6アルキルであり得、R3は、ヒドロキシ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、又はハロ(例えば、R3はハロである)であり得、R5は、Hであり得、R6は、Hであり得、及び/又はR7は、H又はMe(例えば、R7はH)であり得る。
【００１４】
式(II)の他の実施形態において、G1は、場合により置換されていてもよいアミノ又は場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシであり得(例えば、G1は、場合により置換されていてもよいアミノであり)、及び/又はR4はヒドロキシであり得る。あるいは、G1とR4は組み合わさって-O-を形成し得る。
【００１５】
式(I)又は(II)の特定の実施形態において、Gは送達ドメインであり得る(例えば、Gは、ターゲティング部分、エンドソームエスケープ部分、又は細胞浸透性ペプチドを含有する送達ドメインである)。式(I)又は(II)の特定の実施形態において、ターゲティング部分は1〜10個の炭水化物を含有し得る。各炭水化物は、独立してGalNAc又はマンノースであり得る。あるいは、ターゲティング部分は、脂質であってもよい。
【００１６】
式(I)又は(II)のさらなる実施形態において、Gは、場合により置換されていてもよいC3-10アルキル、場合により置換されていてもよいC3-10ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC6-14アリール、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリル等のブロッキング基であり得る。
【００１７】
式(I)又は(II)のいくつかの実施形態において、LinkAは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキレン、場合により置換されていてもよいC6-14アリーレン、場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリレン、場合により置換されていてもよいアザ、O及びSからなる群から独立して選択される1つ、2つ、又は3つのモノマーを含有することができる、ただし、LinkAは、O及びSからなる群から選択される2つの隣接原子を含有せず、前記リン酸基の酸素原子に結合したモノマーは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレンである。例えば、LinkAは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン、場合により置換されていてもよいC6-14アリーレン、及びOからなる群から独立して選択される1つ、2つ、又は3つのモノマーを含有することができる。特に、LinkAは、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン及び場合により置換されていてもよいC6-14アリーレンからなる群から独立して選択される1つ又は2つのモノマーを含有することができる。
【００１８】
式(II)の特定の実施形態において、R3は、H、アジド、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、ハロ、シアノ、ヒドロキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、及び/又はR2は、場合により置換されていてもよいC1-6アルキルである。
【００１９】
第1の態様のさらなる実施形態において、モノヌクレオチドは、
【００２０】
【化２】
2018503606.tif 000004
2018503606.tif 000005
又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーであってもよい。
【００２１】
第1の態様のモノヌクレオチドは、例えば、重同位体(例えば、15N)中の同位体濃縮された組成物の形態であってもよい。例えば、核酸塩基は、同位体濃縮された環外アミノ基(例えば、シトシン)を含み得る。
【００２２】
第2の態様において、本発明は、第1の態様のモノヌクレオチド又は同位体濃縮された組成物を含有する医薬組成物を提供する。第2の態様の特定の実施形態において、医薬組成物は、医薬として許容される担体を含有する。
【００２３】
第3の態様において、本発明は、細胞(例えば、肝細胞(hepatocyte))を第1の態様のモノヌクレオチド又は同位体濃縮された組成物と接触させることを含む、モノヌクレオチドを細胞に送達する方法を提供する。
【００２４】
第4の態様において、本発明は、RNAウイルス感染(例えば、C型肝炎)を有する対象(例えば、ヒト)を治療する方法であって、第1の態様のモノヌクレオチド又は同位体濃縮された組成物を対象に投与することを伴う方法を提供する。あるいは、第2の態様の医薬組成物は、対象に投与して、この対象におけるRNAウイルス感染(例えば、C型肝炎)を治療することができる。
【００２５】
定義
用語「約」は、本明細書で使用するとき、列挙された値の±10%である値を表す。
【００２６】
用語「アルカノイル」は、本明細書で使用するとき、カルボニル基を介して親分子基に結合した水素又はアルキル基を表し、ホルミル(すなわち、カルボキシアルデヒド基)、アセチル、プロピオニル、ブチリル、及びイソ-ブチリルによって例示される。非置換アルカノイル基は、1〜7つの炭素を含有する。アルカノイル基は、アルキル基について本明細書に記載されているように、非置換であってもよく又は置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいC1-7アルカノイルである)。語尾の「-オイル」は、「アリールオイル」、「シクロアルカノイル」及び「(ヘテロシクリル)オイル」を定義するために、本明細書において定義される別の基、例えばアリール、シクロアルキル及びヘテロシクリルに付加することができる。これらの基は、それぞれ、アリール、シクロアルキル、又はヘテロシクリルによって置換されるカルボニル基を表す。「アリールオイル」、「シクロアルカノイル」及び「(ヘテロシクリル)オイル」の各々は、「アリール」、「シクロアルキル」又は「ヘテロシクリル」について定義されるように、それぞれ非置換であってもよく又は置換されていてもよい。
【００２７】
用語「(Cx1-y1アリール)-Cx2-y2-アルキル」は、本明細書で使用するとき、x2〜y2の炭素原子のアルキレン基を介して親分子基に結合したx1〜y1の炭素原子のアリール基を表す。例示的な非置換(Cx1-y1アリール)-Cx2-y2-アルキル基は、7〜16個の炭素原子である。いくつかの実施形態において、アルキレン及びアリールは、各々、それぞれの基について本明細書において定義される1つ、2つ、3つ又は4つの置換基でさらに置換され得る。「アルキル」が後に続く他の基は、同じ方法で定義され、この場合、「アルキル」は、別段の記載がない限り、C1-6アルキレンを指し、結合した化学構造は本明細書において定義される通りである。
【００２８】
用語「アルケニル」という用語は、本明細書で使用するとき、1つ、2つ、又は3つの炭素-炭素二重結合を含有する非環式一価の直鎖又は分枝鎖炭化水素基を表す。アルケニル基の非限定的な例には、エテニル、プロパ-1-エニル、プロパ-2-エニル、1-メチルエテニル、ブタ-1-エニル、ブタ-2-エニル、ブタ-3-エニル、1-メチルプロパ-1-エニル、2-メチルプロパ-1-エニル、及び1-メチルプロパ-2-エニルが挙げられる。アルケニル基は、アルキルについて本明細書において定義されるように、場合により置換されていてもよい。
【００２９】
用語「アルケニレン」は、本明細書で使用するとき、1つの水素が除去された直鎖又は分枝鎖アルケニル基を指し、それによってこの基を二価にする。アルケニレン基の非限定的な例には、エテン-1,1-ジイル;エテン-1,2-ジイル;プロパ-1-エン-1,1-ジイル、プロパ-2-エン-1,1-ジイル;プロパ-1-エン-1,2-ジイル、プロパ-1-エン-1,3-ジイル;プロパ-2-エン-1,1-ジイル;プロパ-2-エン-1,2-ジイル;ブタ-1-エン-1,1-ジイル;ブタ-1-エン-1,2-ジイル;ブタ-1-エン-1,3-ジイル;ブタ-1-エン-1,4-ジイル;ブタ-2-エン-1,1-ジイル;ブタ-2-エン-1,2-ジイル;ブタ-2-エン-1,3-ジイル;ブタ-2-エン-1,4-ジイル;ブタ-2-エン-2,3-ジイル;ブタ-3-エン-1,1-ジイル;ブタ-3-エン-1,2-ジイル;ブタ-3-エン-1,3-ジイル;ブタ-3-エン-2,3-ジイル;ブタ-1,2-ジエン-1,1-ジイル;ブタ-1,2-ジエン-1,3-ジイル;ブタ-1,2-ジエン-1,4-ジイル;ブタ-1,3-ジエン-1,1-ジイル;ブタ-1,3-ジエン-1,2-ジイル;ブタ-1,3-ジエン-1,3-ジイル;ブタ-1,3-ジエン-1,4-ジイル;ブタ-1,3-ジエン-2,3-ジイル;ブタ-2,3-ジエン-1,1-ジイル;及びブタ-2,3-ジエン-1,2-ジイルが挙げられる。アルケニレン基は、アルキルについて記載されるように、非置換であってもよく又は置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいアルケニレンである)。
【００３０】
用語「アルコキシ」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、式-ORの化学的置換基を表し、この場合、Rは、C1-6アルキル基である。いくつかの実施形態において、アルキル基は、本明細書に定義されるように、さらに置換されていてもよい。用語「アルコキシ」は、「アリールアルコキシ」、「シクロアルキルアルコキシ」及び「(ヘテロシクリル)アルコキシ」基を定義するために、本明細書で定義される他の用語、例えばアリール、シクロアルキル又はヘテロシクリルと組み合わせることができる。これらの基は、それぞれ、アリール、シクロアルキル又はヘテロシクリルで置換されたアルコキシを表す。「アリールアルコキシ」、「シクロアルキルアルコキシ」及び「(ヘテロシクリル)アルコキシ」のそれぞれは、個々の部分ごとに本明細書で定義されるように、非置換であってもよく又は置換されていてもよい。
【００３１】
用語「アルキル」は、本明細書で使用するとき、別段の指定がない限り、非置換の場合には1〜12個の炭素を有する非環式の直鎖又は分枝鎖飽和炭化水素基を指す。特定の好ましい実施形態において、非置換アルキルは1〜6つの炭素を有する。アルキル基は、メチル;エチル;n-及びイソ-プロピル;n-、sec-、イソ-及びtert-ブチル;ネオペンチル等によって例示され、原子価が許容する範囲で、アミノ、アリール、アリールオキシ、アジド、シクロアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ハロ、ヘテロシクリル、(ヘテロシクリル)オキシ、ヒドロキシ、ニトロ、チオール、シリル、シアノ、=O、=S、=NR'(この場合、R'は、H、アルキル、アリール又はヘテロシクリルである)からなる群から独立して選択される、1つ、2つ、3つ、又は2つ以上の炭素のアルキル基の場合は4つの置換基で場合により置換されていてもよい。置換基の各々は、それ自体、非置換であってもよく、又は原子価が許容する範囲で、それぞれの基ごとに本明細書において定義される非置換の置換基で置換されていてもよい。
【００３２】
用語「アルキルアミノ」は、本明細書で使用するとき、式-N(RN1)2又は-NHRN1(式中、RN1は本明細書で定義のアルキルである)を有する基を指す。アルキルアミノのアルキル部分は、アルキルについて定義されるように、場合により置換されていてもよい。置換されたアルキルアミノ上の各任意の置換基は、それ自体、非置換であってもよく、又は原子価が許容する範囲で、それぞれの基ごとに本明細書において定義される非置換の置換基で置換されていてもよい。
【００３３】
用語「アルキレン」は、本明細書で使用するとき、少なくとも2つの水素原子の除去によって、直鎖又は分岐鎖飽和炭化水素から誘導される飽和二価、三価、又は四価炭化水素基を指す。アルキレンは、任意の置換基ではない1つのアザ基に結合している場合、三価であってよく、アルキレンは、任意の置換基ではない2つのアザ基に結合している場合、三価又は四価であってよい。本明細書において定義されるアルキレンの原子価は、任意の置換基を含まない。アルキレン基の非限定的な例には、メチレン、エタン-1,2-ジイル、エタン-1,1-ジイル、プロパン-1,3-ジイル、プロパン-1,2-ジイル、プロパン-1,1-ジイル、プロパン-2,2-ジイル、ブタン-1,4-ジイル、ブタン-1,3-ジイル、ブタン-1,2-ジイル、ブタン-1,1-ジイル、及びブタン-2,2-ジイル、ブタン-2,3-ジイルが挙げられる。用語「Cx-yアルキレン」は、x〜y個の間の炭素を有するアルキレン基を表す。xの値の例は、1、2、3、4、5、及び6であり、yの値の例は、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、及び12である。いくつかの実施形態において、アルキレンは、アルキル基について本明細書において定義される1つ、2つ、3つ、又は4つの置換基でさらに置換することができる。同様に、接尾辞「エン(ene)」は、本明細書において定義されるラジカルの名称と併せて使用される場合、本明細書において定義される対応する一価ラジカルの二価ラジカルを示す。例えば、アルケニレン、アリーレン、アリールアルキレン、シクロアルキレン、シクロアルキルアルキレン、シクロアルケニレン、ヘテロアリーレン、ヘテロアリールアルキレン、ヘテロシクリレン、及びヘテロシクリルアルキレンは、アルケニル、アルキニル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリルアルキルの二価形態である。アリールアルキレン、シクロアルキルアルキレン、ヘテロアリールアルキレン、及びヘテロシクリルアルキレンについて、この基における2つの原子価は、非環式部分にのみ位置し得、又は環式部分に1つ及び非環式部分に1つ位置し得る。
【００３４】
用語「アルキルスルフェニル」は、本明細書で使用するとき、式-S-(アルキル)の基を表す。アルキルスルフェニルは、アルキルについて定義されるように、場合により置換されていてもよい。
【００３５】
用語「アルキルスルフィニル」は、本明細書で使用するとき、式-S(O)-(アルキル)の基を表す。アルキルスルフィニルは、アルキルについて定義されるように、場合により置換されていてもよい。
【００３６】
用語「アルキルスルホニル」は、本明細書で使用するとき、式-S(O)2-(アルキル)の基を表す。アルキルスルホニルは、アルキルについて定義されるように、場合により置換されていてもよい。
【００３７】
用語「アルキニル」は、本明細書で使用するとき、少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を含有する2〜6個の炭素原子の一価の直鎖又は分岐鎖炭化水素基を表し、エチニル、1-プロピニル等によって例示される。アルキニル基は、アルキルについて定義されるように非置換であってもよく又は置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいアルキニルである)。
【００３８】
用語「アミノ」は、本明細書で使用するとき、-N(RN1)2又は-N(RN1)C(NRN1)N(RN1)2を表し、ここで、各RN1は、独立して、H、OH、-NO2、-N(RN2)2、-SO2ORN2、-SO2RN2、-SORN2、-COORN2、N-保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロアルキル、又はヘテロシクリルであり、各RN2は、独立して、H、アルキル、又はアリールである。いくつかの実施形態において、アミノは、-NH2又は-NHRN1であり、この場合、RN1は、独立して-OH、-SO2ORN2、-SO2RN2、-SORN2、-COORN2、アルキル又はアリールであり、各RN2は、アルキル又はアリールであってもよい。各RN1及びRN2は、存在する場合、独立して非置換である又は本明細書に記載されるように置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいアミノである)。いくつかの実施形態において、アミノは、アルキルアミノであってもよい。置換基の各々は、それ自体、非置換であってもよく、又はそれぞれの基ごとに本明細書で定義される非置換の置換基で置換されていてもよい。アミノが、本発明のモノヌクレオチドのリン(V)原子に連結した機能性キャップ基の一部である場合、アミノ基上の置換基のいずれか1つは、さらに、送達ドメイン、色素又はブロッキング基を含んでもよい。
【００３９】
用語「アリール」は、本明細書で使用するとき、1つ又は2つの芳香族環を有する単環式、二環式又は多環式炭素環系を表す。アリール基は、6〜14個の炭素原子(例えば、6〜10個の炭素原子)を含んでもよい。非置換炭素環式アリール基内の全ての原子は炭素原子である。炭素環式アリール基の非限定的な例として、フェニル、ナフチル、1,2-ジヒドロナフチル、1,2,3,4-テトラヒドロナフチル、フルオロレニル、インダニル、インデニル等が挙げられる。アリール基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルフェニル、アルキルスルホニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、アジド、シクロアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ハロ、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、(ヘテロシクリル)オキシ、ヒドロキシ、ニトロ、チオール、シリル、及びシアノからなる群から独立して選択される1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つの置換基で、場合により置換されていてもよい。置換基の各々は、それ自体、非置換であってもよく、又はそれぞれの基ごとに本明細書において定義される非置換の置換基で置換されていてもよい。
【００４０】
用語「アリールオキシ」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、式-OR(式中、Rはアリール基である)の化学的置換基を表す。いくつかの実施形態において、アリール基は、本明細書において定義されるようにさらに置換されていてもよい。
【００４１】
用語「アザ」は、本明細書で使用するとき、二価の-N(RN1)-基又は三価-N=基を表す。アザ基は、RN1がHであるもしくは存在しない場合、非置換であってもよく、又はRN1がHではないことを除いて、RN1が「アミノ」について定義した通りである場合、置換されていてもよい。2つのアザ基が連結して「ジアザ」を形成してもよい。
【００４２】
用語「アジド」は、本明細書で使用するとき、-N3基を表す。
【００４３】
用語「ブロッキング基」は、本明細書で使用するとき、生理学的条件下で不活性であり、少なくとも1個の炭素原子を有する化学基を指す。ブロッキング基の少なくとも1つの炭素原子は、ジスルフィド生体可逆性基の-S-S-に結合している。
【００４４】
用語「嵩高い基」は、本明細書で使用するとき、本明細書において定義される任意の置換基又は一群の置換基を表し、ここで、嵩高い基のラジカルは、このラジカルがsp3混成炭素である場合には1つの水素原子もしくはそれより少ない水素原子を有し、又はこのラジカルがsp2混成炭素である場合、水素を持たない。このラジカルは、sp混成炭素ではない。嵩高い基は、炭素原子のみを介して別の基に結合する。例えば、「ジスルフィド連結に結合した嵩高い基」、「ジスルフィド連結に結合した嵩高い基」、及び「ジスルフィド連結に連結した嵩高い基」という記述は、嵩高い基が炭素ラジカルを介してジスルフィド連結に結合していることを示す。
【００４５】
用語「炭素環式」は、本明細書で使用するとき、芳香族又は非芳香族であり得る環が炭素原子によって形成される、場合により置換されていてもよいC3-12単環式、二環式又は三環式構造を表す。炭素環構造には、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、及び特定のアリール基が含まれる。
【００４６】
用語「炭水化物」は、本明細書で使用するとき、各炭素原子に結合した酸素、窒素又は硫黄原子を有する少なくとも5つの炭素原子(直線状、分枝状又は環状であり得る)を有する1つ以上の単糖単位を含む化合物を表す。したがって、用語「炭水化物」は、単糖類、二糖類、三糖類、四糖類、オリゴ糖類、及び多糖類を包含する。代表的な炭水化物には、糖(約4-9個の単糖単位を含有するモノ-、ジ-、トリ-及びオリゴ糖)、並びにデンプン、グリコーゲン、セルロース及び多糖類ガム等の多糖類が含まれる。特定の単糖には、C5-6糖が含まれ、二糖類及び三糖は、2つ又は3つの単糖単位を有する糖類(例えば、C5-6糖)を含む。
【００４７】
用語「カルボニル」は、本明細書で使用するとき、C(O)基を表す。「カルボニル」を含む官能基の例には、エステル、ケトン、アルデヒド、無水物、塩化アシル、アミド、カルボン酸、及びカルボン酸塩が含まれる。
【００４８】
用語「シアノ」は、本明細書で使用するとき、-CN基を表す。
【００４９】
用語「シクロアルケニル」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、環に少なくとも1つの二重結合及び3〜10個の炭素を有する非芳香族炭素環式基(例えば、C3-C10シクロアルケニル)を指す。シクロアルケニルの非限定的な例には、シクロプロパ-1-エニル、シクロプロパ-2-エニル、シクロブタ-1-エニル、シクロブタ-1-エニル、シクロブタ-2-エニル、シクロペンタ-1-エニル、シクロペンタ-2-エニル、シクロペンタ-3-エニル、ノルボルネン-1-イル、ノルボルネン-2-イル、ノルボルネン-5-イル、及びノルボルネン-7-イルが挙げられる。シクロアルケニル基は、シクロアルキルについて記載されるように、非置換であってもよく又は置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいシクロアルケニルである)。
【００５０】
用語「シクロアルケニルアルキル」は、本明細書で使用するとき、シクロアルケニル基で置換されたアルキル基を表し、それぞれは本明細書において定義される通りである。シクロアルケニル及びアルキルの部分は、本明細書において定義される個々の基として置換されていてもよい。
【００５１】
用語「シクロアルケニレン」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、環に少なくとも1つの二重結合及び3〜10個の炭素を有する二価の炭素環式非芳香族基(例えば、C3-C10シクロアルケニレン)を指す。シクロアルケニレンの非限定的な例には、シクロプロパ-1-エン-1,2-ジイル;シクロプロパ-2-エン-1,1-ジイル;シクロプロパ-2-エン-1,2-ジイル;シクロブタ-1-エン-1,2-ジイル;シクロブタ-1-エン-1,3-ジイル;シクロブタ-1-エン-1,4-ジイル;シクロブタ-2-エン-1,1-ジイル;シクロブタ-2-エン-1,4-ジイル;シクロペンタ-1-エン-1,2-ジイル;シクロペンタ-1-エン-1,3-ジイル;シクロペンタ-1-エン-1,4-ジイル;シクロペンタ-1-エン-1,5-ジイル;シクロペンタ-2-エン-1,1-ジイル;シクロペンタ-2-エン-1,4-ジイル;シクロペンタ-2-エン-1,5-ジイル;シクロペンタ-3-エン-1,1-ジイル;シクロペンタ-1,3-ジエン-1,2-ジイル;シクロペンタ-1,3-ジエン-1,3-ジイル;シクロペンタ-1,3-ジエン-1,4-ジイル;シクロペンタ-1,3-ジエン-1,5-ジイル;シクロペンタ-1,3-ジエン-5,5-ジイル;ノルボルナジエン-1,2-ジイル;ノルボルナジエン-1,3-ジイル;ノルボルナジエン-1,4-ジイル;ノルボルナジエン-1,7-ジイル;ノルボルナジエン-2,3-ジイル;ノルボルナジエン-2,5-ジイル;ノルボルナジエン-2,6-ジイル;ノルボルナジエン-2,7-ジイル;及びノルボルナジエン-7,7-ジイルが挙げられる。シクロアルケニレンは、シクロアルキルについて定義されるように、非置換であってもよく又は置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいシクロアルケニレンである)。
【００５２】
用語「シクロアルコキシ」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、式-OR(式中、Rはシクロアルキル基である)の化学的置換基を表す。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、本明細書で定義されるようにさらに置換されていてもよい。
【００５３】
用語「シクロアルキル」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、3〜10個の炭素を有する環状アルキル基(例えば、C3-C10シクロアルキル)を意味する。シクロアルキル基は、単環式又は二環式であってもよい。二環式シクロアルキル基は、ビシクロ[p.q.0]アルキル型であってもよく、ここで、p及びqの各々は独立して1、2、3、4、5、6、又は7であり、ただし、p及びqの合計は2、3、4、5、6、7、又は8である。あるいは、二環式シクロアルキル基は、架橋されたシクロアルキル構造、例えば、ビシクロ[p.q.r]アルキル(式中、rは、1、2又は3であり、p及びqの各々は、独立して1、2、3、4、5、又は6であり、ただし、p、q及びrの合計は3、4、5、6、7、又は8である)である。シクロアルキル基は、スピロ環式基、例えば、p及びqのそれぞれが独立して2、3、4、5、6、又は7であるが、ただし、pとqの合計は4、5、6、7、8、又は9であるスピロ[p.q]アルキルであってもよい。シクロアルキルの非限定的な例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、1-ビシクロ[2.2.1.]ヘプチル、2-ビシクロ[2.2.1.]ヘプチル、5-ビシクロ[2.2.1.]ヘプチル、7-ビシクロ[2.2.1.]ヘプチル、及びデカリニルが含まれる。シクロアルキル基は、非置換であってもよく、又はアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルフェニル、アルキルスルホニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、アジド、シクロアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ハロ、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、(ヘテロシクリル)オキシ、ヒドロキシ、ニトロ、チオール、シリル、シアノ、=O、=S、=NR'(この場合、R'は、H、アルキル、アリール又はヘテロシクリルである)からなる群から独立して選択される1つ、2つ、3つ、4つ、もしくは5つの置換基で置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいシクロアルキルである)。置換基の各々は、それ自体、非置換であってもよく、又はそれぞれの基ごとに本明細書において定義される非置換の置換基で置換されていてもよい。
【００５４】
用語「シクロアルキルアルキル」は、本明細書で使用するとき、それぞれ本明細書において定義されるシクロアルキル基で置換されたアルキル基を表す。シクロアルキル及びアルキルの部分は、本明細書において記載される個々の基として置換されていてもよい。
【００５５】
用語「シクロアルキニル」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、1つ又は2つの非連続炭素-炭素三重結合を有し、及び8〜10個の炭素を有する一価炭素環式基(例えば、C8-C10シクロアルキニル)をいう。シクロアルキニルの非限定的な例としては、シクロオクチニル、シクロノニニル、シクロデシニル、及びシクロデカジニルが挙げられる。シクロアルキニル基は、シクロアルキルについて定義されるように、非置換であってもよく、又は置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいシクロアルキニルである)。
【００５６】
用語「シクロアルキニルアルキル」は、本明細書で使用するとき、シクロアルキニル基で置換されたアルキル基を表し、それぞれは本明細書で定義される通りである。シクロアルキニル及びアルキルの部分は、本明細書に記載される個々の基として置換されていてもよい。
【００５７】
用語「ジスルフィド生体可逆基」は、本明細書で使用するとき、ジスルフィド基(-S-S-)を含む部分を表す。ジスルフィド基は、例えば、細胞内環境又は細胞に存在する状態(例えば、還元的もしくは酸化的環境、又はグルタチオン等の細胞内種との反応)にこの基を曝露することにより、例えば、1種以上の細胞内酵素(例えば、細胞内レダクターゼ)の作用又は細胞内で受動的に切断されることにより、細胞内で能動的に切断され得る。
【００５８】
用語「エンドソームエスケープ部分」は、本明細書中で使用するとき、エンドソーム内容物の放出を増強する、又はエンドソーム等の細胞内コンパートメントからの分子のエスケープを可能にする部分を表す。
【００５９】
用語「ハロ」は、本明細書で使用するとき、臭素、塩素、ヨウ素及びフッ素から選択されるハロゲンを表す。
【００６０】
用語「ヘテロアルキル」は、本明細書で使用するとき、1つもしくは2つのヘテロ原子により1回;1つもしくは2つのヘテロ原子により、各回は独立して2回;1つもしくは2つのヘテロ原子により、各回は独立して3回;又は1つもしくは2つのヘテロ原子により、各回は独立して4回、中断されたアルキル、アルケニル、又はアルキニル基を指す。各々のヘテロ原子は、独立して、O、N、又はSである。いくつかの実施形態において、ヘテロ原子は、O又はNである。ヘテロアルキル基のいずれも、2つの連続する酸素原子又は硫黄原子を含まない。ヘテロアルキル基は、非置換であってもよく又は置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいヘテロアルキルである)。ヘテロアルキルが置換され、置換基がヘテロ原子に結合する場合、置換基は、ヘテロ原子の性質及び原子価に従って選択される。したがって、ヘテロ原子に結合する置換基は、原子価が許容する範囲で、=O、-N(RN2)2、-SO2ORN3、-SO2RN2、-SORN3、-COORN3、N保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ヘテロシクリル、又はシアノからなる群から選択され、この場合、各RN2は、独立して、H、アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロシクリルであり、各RN3は、独立して、アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、又はヘテロシクリルである。これらの置換基のそれぞれは、それ自体、非置換であってもよく、又はそれぞれの基について本明細書において定義される非置換の置換基で置換されていてもよい。ヘテロアルキルが置換され、置換基が炭素に結合する場合、置換基は、ヘテロ原子に結合した炭素原子上の置換基がCl、Br又はIでないという条件で、アルキルについて記載したものから選択される。炭素原子は、ヘテロアルキル基の末端に見出されることが理解される。
【００６１】
用語「ヘテロアリールオキシ」は、本明細書でするとき、Rがヘテロアリールである構造-ORを指す。ヘテロアリールオキシは、ヘテロシクリルについて定義されるように、場合により置換されていてもよい。
【００６２】
用語「ヘテロシクリル」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、窒素、酸素及び硫黄からなる群から独立して選択される1つ、2つ、3つ、又は4つのヘテロ原子を含有する、縮合又は架橋の5員、6員又は7員環を有する単環式、二環式、三環式又は四環式環系を表す。ヘテロシクリルは、芳香族又は非芳香族であり得る。非芳香族の5員ヘテロシクリルは、ゼロ又は1つの二重結合を有し、非芳香族6員及び7員ヘテロシクリル基は、0から2つの二重結合を有する。特定のヘテロシクリル基には、2〜12個の炭素原子が含まれる。他のこのような基は、最大9個までの炭素原子を含んでもよい。非芳香族ヘテロシクリル基には、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピペラジニル、ピリダジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニイル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロインドリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル等が挙げられる。複素環式環系が少なくとも1つの芳香族共鳴構造又は少なくとも1つの芳香族互変異性体を有する場合、このような構造は芳香族ヘテロシクリル(すなわちヘテロアリール)である。ヘテロアリール基の非限定的な例には、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、インドリル、イソインダゾリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、プリニル、ピロリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、キナゾリニル、キノリニル、チアジアゾリル(例えば、1,3,4-チアジアゾール)、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、テトラゾリルが挙げられる。用語「ヘテロシクリル」はまた、1つ以上の炭素及び/又はヘテロ原子が、単環式環の2つの隣接していないメンバー、例えば、キヌクリジン、トロパン又はジアザ-ビシクロ[2.2.2]オクタンを架橋する、架橋された多環式構造を有する複素環式化合物を表す。用語「ヘテロシクリル」には、上記複素環のいずれかが、1つ、2つ又は3つの炭素環、例えば、アリール環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環、シクロペンテン環、又は別の単環式複素環、に縮合した二環式、三環式及び四環式基が含まれる。縮合ヘテロシクリルの例には、1,2,3,5,8,8a-ヘキサヒドロインドリジン、2,3-ジヒドロベンゾフラン、2,3-ジヒドロインドール、及び2,3-ジヒドロベンゾチオフェンが含まれる。ヘテロシクリル基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルスルフィニル、アルキルスルフェニル、アルキルスルホニル、アミノ、アリール、アリールオキシ、アジド、シクロアルキル、シクロアルコキシ、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ハロ、ヘテロアルキル、ヘテロシクリル、(ヘテロシクリル)オキシ、ヒドロキシ、ニトロ、チオール、シリル、シアノ、=O、=S、=NR1(式中、R1は、H、アルキル、アリール又はヘテロシクリルである)からなる群から独立して選択され���1つ、2つ、3つ、4つ、又は5つの置換基で場合により置換されていてもよい。置換基の各々は、それ自体、非置換であってもよく、又はそれぞれの基ごとに本明細書において定義される非置換の置換基で置換されていてもよい。
【００６３】
用語「ヘテロシクリルアルキル」は、本明細書で使用するとき、それぞれ本明細書において定義されるヘテロシクリル基で置換されたアルキル基を表す。ヘテロシクリル及びアルキルの部分は、本明細書に記載される個々の基として置換されていてもよい。
【００６４】
用語「(ヘテロシクリル)オキシ」は、本明細書で使用するとき、別段の記載がない限り、式-OR(式中、Rはヘテロシクリル基である)の化学的置換基を表す。いくつかの実施形態において、ヘテロシクリル基は、本明細書において定義されるようにさらに置換されていてもよい。
【００６５】
用語「ヒドロキシル」及び「ヒドロキシ」は、本明細書において互換的に使用され、-OH基を表す。
【００６６】
用語「同位体濃縮された」は、本明細書で使用するとき、天然に見出されるよりも豊富なモノヌクレオチド中の同位体、例えば15Nを含む組成物を指す。典型的には、及び同位体に依存して、特定の同位体濃縮された組成物は、少なくとも5、少なくとも10、少なくとも50、少なくとも500、少なくとも2000、少なくとも3000、少なくとも6000、又は少なくとも6600の同位体濃縮因子を有してもよい。組成物が同位体濃縮されている場合、化合物は、好ましくは、重同位体、すなわち特定の元素の天然で最も豊富な同位体の同位体質量より大きい同位体質量を有する特定の元素の同位体で濃縮される。
【００６７】
用語「同位体濃縮因子」は、本明細書で使用するとき、特定の同位体の天然に存在する存在量と比較して、特定の組成におけるその同位体のモルパーセントを指す。
【００６８】
用語「モノヌクレオシド」は、本明細書中で使用するとき、糖-核酸塩基化合物を表す。モノヌクレオシドの非限定的な例としては、以下の化合物:ソホスブビル、VX-135、IDX21437、IDX20963、ACH3422、メリシタビン、バロピシタビン、バラピラビル、MK0608、GS-6620、IDX184、IDX19368、INX189、PSI938、PSI661、RS-1389、並びに国際公開第WO2005/003147号、同第WO2009/067409号、及び同第WO2010/108140号に開示されている化合物に見出され、それらのモノヌクレオシドが本明細書に組み込まれる。
【００６９】
用語「モノヌクレオチド」は、本明細書で使用するとき、5'-炭素がリン酸基に結合しているモノヌクレオシドを指す。
【００７０】
用語「ニトロ」は、本明細書で使用するとき、-NO2基を表す。
【００７１】
用語「核酸塩基」は、本明細書中で使用するとき、ヌクレオシドの糖の1'位に見出される窒素含有複素環式環系を表す。核酸塩基は、非修飾であってもよく、又は修飾されてもよい。本明細書で使用するとき、「非修飾の」又は「天然の」核酸塩基には、プリン塩基(例えば、アデニン(A)又はグアニン(G))又はピリミジン塩基(例えば、チミン(T)、シトシン(C)又はウラシル(U))が含まれる。修飾された核酸塩基は、1つ以上の酸素及び/もしくは窒素原子が適切な保護基で保護されている又はプロドラッグ部分として存在する、プリン又はピリミジン塩基の保護されたバージョンであり得る。修飾された核酸塩基は、プリン又はピリミジン塩基のO-又はN-アルキル化されたバージョンであり得る。修飾された核酸塩基は、アデニン、グアニン、チミン、シトシン及びウラシルのアザ-及びデアザ-修飾を含む。特に、アザ修飾には、プリン又はピリミジン塩基内の1つ以上の炭素原子を窒素原子で置換することが含まれる。デアザ-修飾には、プリン又はピリミジン塩基内の1つ以上の窒素原子を炭素原子で置換することが含まれる。非限定的な例において、プリン塩基は、アザ-及びデアザ-修飾を含むように修飾され得、それによって、ピロロ[2,1-f][1,2,4]トリアジンを形成する。付加的に又は代替的に、プリン又はピリミジン塩基の修飾は、塩基の不飽和度を初期塩基の不飽和度よりも高く又は低く変更させることを含み得る。付加的に又は代替的に、ピリミジン又はプリン塩基は、非置換のままでもよく、又は、適宜、アリールもしくはヘテロシクリルについて定義される置換基で置換されていてもよい。
【００７２】
用語「オキソ」は、本明細書で使用するとき、二価の酸素原子を表す(例えば、オキソの構造は=Oとして示すことができる)。
【００７３】
用語「Ph」は、本明細書で使用するとき、フェニルを表す。
【００７４】
用語「リン酸基」は、本明細書で使用するとき、リン(V)原子に結合した原子の総数が4に等しいという条件で、2つ、3つ又は4つの酸素原子、場合により1つの硫黄原子、及び場合により1つの窒素原子に結合したリン(V)原子を有する分子断片を指す。
【００７５】
用語「リン(V)原子」は、本明細書で使用するとき、ホルマール酸化状態(V)のリン原子を指す。本発明の化合物において、リン(V)原子は5つの原子価を有し、そのうちの2つは=O又は=Sによって占められ、残りの3価のうちの1つ又は2つはモノヌクレオシドに結合し、そして1つの原子価はジスルフィド生体可逆性基に結合する。リン(V)原子は、リン酸基の一部であってもよい。リン酸基の1つ又は2つの酸素原子は、モノヌクレオシドの一部である。
【００７６】
用語「生理学的条件」は、本明細書で使用するとき、生きた哺乳動物細胞(例えば、肝細胞)の内部に存在し得る状態を指す。生理学的条件には、約34℃〜約43℃(例えば、約35℃〜約42℃)の温度及び約6〜約8(例えば、約6.5〜約7.8)の水性pHが含まれる。
【００７７】
用語「保護基」は、本明細書で使用するとき、化学合成中に1つ以上の望ましくない反応の関与からヒドロキシ、アミノ、又はカルボニルを保護することが意図された基を表す。用語「O-保護基」は、本明細書で使用するとき、化学合成中に1つ以上の望ましくない反応の関与からヒドロキシ又はカルボニル基を保護することが意図された基を表す。用語「N-保護基」は、本明細書で使用するとき、化学合成中に1つ以上の望ましくない反応の関与から窒素含有(例えば、アミノ又はヒドラジン)基を保護することが意図された基を表す。一般的に使用されるO-及びN-保護基は、参照により本明細書に組み込まれるGreene, "Protective Groups in Organic Synthesis," 3rdEdition (John Wiley & Sons, New York, 1999)に開示されている。例示的なO-及びN-保護基には、アルカノイル、アリーロイル又はカルバミル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、t-ブチルアセチル、2-クロロアセチル、2-ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、o-ニトロフェノキシアセチル、α-クロロブチリル、ベンゾイル、4-クロロベンゾイル、4-ブロモベンゾイル、t-ブチルジメチルシリル、トリ-イソ-プロピルシリルオキシメチル、4,4'-ジメトキシトリチル、イソブチリル、フェノキシアセチル、4-イソプロピルフェノキシアセチル、ジメチルホルムアミジノ、及び4-ニトロベンゾイルが挙げられる。
【００７８】
カルボニル含有基を保護するための例示的なO-保護基には、限定されないが、アセタール、アシラール、1,3-ジチアン、1,3-ジオキサン、1,3-ジオキソラン、及び1,3-ジチオランが含まれる。
【００７９】
他のO-保護基には、限定されないが、置換されたアルキル、アリール及びアリール-アルキルエーテル(例えば、トリチル;メチルチオメチル;メトキシメチル;ベンジルオキシメチル;シロキシメチル;2,2,2-トリクロロエトキシメチル;テトラヒドロピラニル;テトラヒドロフラニル;エトキシエチル;1-[2-(トリメチルシリル)エトキシ]エチル;2-トリメチルシリルエチル;t-ブチルエーテル;p-クロロフェニル、p-メトキシフェニル、p-ニトロフェニル、ベンジル、p-メトキシベンジル及びニトロベンジル);シリルエーテル(例えば、トリメチルシリル;トリエチルシリル;トリイソプロピルシリル;ジメチルイソプロピルシリル;t-ブチルジメチルシリル;t-ブチルジフェニルシリル;トリベンジルシリル;トリフェニルシリル;及びジフェニルメチルシリル);カルボン酸塩(例えば、メチル、メトキシメチル、9-フルオレニルメチル;エチル;2,2,2-トリクロロエチル;2-(トリメチルシリル)エチル;ビニル、アリル、ニトロフェニル;ベンジル;メトキシベンジル;3,4-ジメトキシベンジル;及びニトロベンジル)が含まれる。
【００８０】
他のN-保護基には、限定されないが、キラル補助剤、例えば、保護されたもしくは保護されていないD,L又はD,L-アミノ酸、例えば、アラニン、ロイシン、フェニルアラニン等、スルホニル含有基、例えば、ベンゼンスルホニル、p-トルエンスルホニル等、カルバメート形成基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、p-クロロベンジルオキシカルボニル、p-メトキシベンジルオキシカルボニル、p-ニトロベンジルオキシカルボニル、2-ニトロベンジルオキシカルボニル、p-ブロモベンジルオキシカルボニル、3,4-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、3,5-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、2,4-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、4-メトキシベンジルオキシカルボニル、2-ニトロ-4,5-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、3,4,5-トリメトキシベンジルオキシカルボニル、1-(p-ビフェニリル)-1-メチルエトキシカルボニル、α,α-ジメチル-3,5-ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、t-ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、2,2,2,-トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、4-ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル-9-メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニル等、アリール-アルキル基、例えば、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル等、及びシリル基、例えば、トリメチルシリル等が含まれる。有用なN-保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、t-ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジル、t-ブチルオキシカルボニル(Boc)及びベンジルオキシカルボニル(Cbz)である。
【００８１】
用語「シリル」は、本明細書で使用するとき、各R'が、H、アルキル、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、ヘテロアルキル及びヘテロシクリルからなる群から独立して選択される構造-SiR'3を有する基を表す。シリル基は、非置換であってもよく、又は置換されていてもよい(例えば、場合により置換されていてもよいシリルである)。シリルが置換されている場合、少なくとも1つのR'は、対象の基について定義されたものから選択される少なくとも1つの非置換又は置換の置換基を含む。いくつかの実施形態において、各R'は、独立して非置換アルキル又は非置換アリールである。
【００８２】
用語「対象」は、本明細書で使用するとき、ヒト又は非ヒト動物(例えば、哺乳動物)を表す。いくつかの実施形態において、対象は、対象由来のサンプルの当該技術分野の実験室試験で公知である又は公知でない、有資格専門家(例えば、医師又は施術者)によって決定されるように、C型肝炎に罹患していてもよい。
【００８３】
用語「スルフィド」は、本明細書で使用するとき、二価の-S-又は=S基を表す。ジスルフィドは-S-S-である。
【００８４】
用語「ターゲティング部分」は、本明細書で使用するとき、受容体(例えば、細胞表面受容体)又は所与の標的細胞集団に関連する他の受容部分に、特異的に共有結合又は非共有結合する任意の部分を表す。
【００８５】
用語「治療上有効な用量」は、本明細書で使用するとき、疾患又は障害(例えば、C型肝炎)の症状を改善、治療、又は少なくとも部分的に阻止するのに必要な本発明のモノヌクレオチドの量を表す。この使用に有効な量は、疾患の重症度並びに対象の体重及び全身状態に依存する。典型的には、インビトロで使用される投薬量は、医薬組成物のインビボ投与に有用な量において有用な指針を提供し得、動物モデルは、特定の疾患(例えば、C型肝炎)の治療のための有効投薬量を決定するために使用され得る。
【００８６】
用語「チオカルボニル」は、本明細書で使用するとき、C(=S)基を表す。
【００８７】
用語「チオール」は、本明細書で使用するとき、-SH基を表す。
【００８８】
用語「治療すること」は、対象における障害に関して使用するとき、対象に治療薬(例えば、本発明のモノヌクレオチド)を投与することによって、障害の少なくとも1つの症状の軽減を指すことが意図される。
【００８９】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」及び「その(the)」は、文脈上明白に他の意味に解釈すべき場合を除いて、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「ターゲティング部分(a targeting moiety)」と言うとき、複数のこうしたターゲティング部分を含み、「その細胞(the cell)」と言うとき、当業者に公知の1つ以上の細胞を含む等である。
【００９０】
別に定義されていない限り、本明細書において使用される技術及び科学用語は全て、本開示が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載するものと類似の又は同等な方法及び材料を、開示された方法及び組成物の実施に用いることができるが、例示的方法、装置及び材料は本明細書に記載されている。
【００９１】
「含む(comprise)」、「含む(comprises)」、「含む(comprising)」、「含む(include)」、「含む(includes)」、及び「含む(including)」は、置換え可能であり、限定を意図するものではない。
【００９２】
様々な実施形態の説明が「含む(comprising)」という用語を使用する場合、当業者であれば、いくつかの特定の例において、「から本質的になる」又は「からなる」という言葉を使用して実施形態を代替的に説明できることを理解するであろうことをさらに理解されたい。
【００９３】
本開示において明示的に定義される任意の用語と同一である当該技術分野に存在する任意の用語については、本開示において提示される用語の定義が、全ての点において優先する。
【００９４】
本発明の化合物中の各位置は、それらの天然の同位体存在量の元素を含むことができる。あるいは、本発明の化合物中の1つ以上の位置は、天然に存在する元素又は合成同位体において濃縮された元素を含むことができる。例えば、水素を含む本発明の化合物の1つ以上の位置は、例えば、重水素又はトリチウムで濃縮されてもよい。いくつかの実施形態において、炭素を含む本発明の化合物の1つ以上の位置は、例えば、14C又は13Cで濃縮され得る。他の実施形態において、窒素を含む本発明の化合物の1つ以上の位置は、例えば、15Nで濃縮され得る。特定の実施形態において、酸素を含む本発明の化合物の1つ以上の位置は、例えば、18O、17O又は15Oで濃縮されてもよい。特定の実施形態において、フッ素を含む本発明の化合物の1つ以上の位置は、例えば、18Fで濃縮されてもよい。他の実施形態において、炭素を含む本発明の化合物の1つ以上の位置は、例えば、32S、33S、34S、35S又は36Sで濃縮されてもよい。さらに他の実施形態において、塩素を含む本発明の化合物の1つ以上の位置は、例えば、35Cl、36Cl又は37Clで濃縮されてもよい。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】C型肝炎ウイルス(HCV)レプリコンの構造を示す図である。HCVレプリコンは、HCVコア-ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ(NeoR)融合タンパク質の生成を駆動するHCVの5'末端(HCV内部リボソームエントリー部位、IRES及びHCVコアタンパク質の最初の数個のアミノ酸を有する)を含有する。EMCR IRESエレメント(E-1)は、HCV構造タンパク質NS3-NS5の翻訳を制御する。NS3タンパク質は、HCV複製に必要とされる成熟NS3、NS4A、NS4B、NS5A及びNS5Bタンパク質を放出するためにHCVポリタンパク質を切断する。レプリコンの3'末端には、HCVの真正3'NTRがある。
【図２】ヌクレオシドホスホエステルのマウス血清安定性を示すチャートである。
【図３】ヌクレオシドホスホエステルのラット血清安定性を示すチャートである。
【図４】ヌクレオシドホスホエステルのヒト血清安定性を示すチャートである。
【図５】Huh7細胞におけるインビトロでの活性ヌクレオシド三リン酸の細胞内レベルを示すチャートである。
【図６】初代ヒト肝細胞におけるインビトロでの活性ヌクレオシド三リン酸の細胞内レベルを示すチャートである。
【図７】ヌクレオシドホスホエステルで静脈内投与されたラットから単離されたラット肝ホモジネート中の活性ヌクレオシド三リン酸の細胞内レベルを示すチャートである。
【図８】ヌクレオシドホスホエステルで経口投与されたラットから単離されたラット肝ホモジネート中の活性ヌクレオシド三リン酸の細胞内レベルを示すチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００９６】
概して、本発明は、モノヌクレオチド中のリン酸塩をマスキングするためのアプローチに関する。本アプローチにおいて、モノヌクレオチド中のリン酸基の負電荷の1つは、ジスルフィド生体可逆性基でマスクされる。理論に束縛されるものではないが、ジスルフィド生体可逆性基は、細胞内媒体が細胞外媒体よりも還元性があり得るため、細胞内で迅速な硫黄-硫黄結合切断を受ける。細胞内還元への依存は、リン酸塩の早すぎる細胞外アンマスキングの課題を克服し得る。
【００９７】
本発明のモノヌクレオチドは、他のモノヌクレオチドプロドラッグと比較して、血清及び胃腸液における増大した安定性を有する。さらに、本発明のモノヌクレオチドは、他のモノヌクレオチドプロドラッグと比較してより高い効力を示す。
【００９８】
本発明は、3'-炭素及び5'-炭素を有する糖に結合した核酸塩基を含有するモノヌクレオチドを特徴とし、この場合、5'-炭素は、リン酸基のリン(V)原子に酸素原子を介して結合され、このリン(V)原子は、(i)ジスルフィド生体可逆性基に酸素原子を介して結合し、及び(ii)(a)場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいアルコキシ、もしくは場合により置換されていてもよいアリールオキシ、又は(b)3'-炭素に酸素原子を介して結合する。
【００９９】
ジスルフィド生体可逆性基
本発明のモノヌクレオチドに含まれるジスルフィド生体可逆性基は、-S-S-に近接する嵩高い基を含有することができる。-S-S-に近接する嵩高い基の包含は、硫黄-硫黄結合切断に起因する材料の有意な喪失なしに、本明細書に記載される本発明のモノヌクレオチドの調製を容易にすることができる。
【０１００】
ジスルフィド生体可逆性基の硫黄原子は、少なくとも2個の連続した原子によってリン酸基から分離することができる。いくつかの実施形態において、ジスルフィド生体可逆性基の-S-S-は、少なくとも3つの連続した原子によってリン酸基から分離することができる。理論に束縛されるものではないが、ジスルフィド基とリン酸基の間の分離は、リン酸基に連結された原子鎖の一部(例えば、-S-(LinkA)-)を押出及び環化を可能にし、これは、生細胞内の硫黄-硫黄結合の切断時に、マスクされていない又は部分的にマスクされていないリン酸基を有するモノヌクレオチドの同時放出を伴う。
【０１０１】
ジスルフィド生体可逆性基は、式(I):
G-S-S-(LinkA)-X        (I)
の構造を有することができ、ここで、
Gは第1の機能性キャップ基であり、
LinkAは、28Da以上の分子量を有するリンカーであり、
Xは、リン酸基の酸素原子への結合である。
【０１０２】
LinkA
LinkAは、式(I)又は(II)の-O-に結合したsp3混成炭素原子を含むリンカーである。この構造的特徴により、式(I)又は(II)のリン(V)原子に連結された酸素原子からのLinkAの脱離が可能になる。LinkAは、O及びSから選択される2つの連続した原子を含有しない。LinkAは、28Da以上の(例えば、56Da以上の)分子量を有し得る。LinkAは、1000Da以下の(例えば、300Da以下の)分子量を有し得る。例えば、LinkAの分子量は、28Da〜1000Da(例えば、28Da〜300Da又は56Da〜300Da)であってもよい。LinkAは、式(I)又は(II)中のG-S-S-及び-O-を連結する鎖中にともに連結された1つ、2つ又は3つのモノマーを含み得る。これらのモノマーの各々は、独立して、場合により置換されていてもよいC1-6アルキレン、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキレン、場合により置換されていてもよいC6-14アリーレン、場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロシクリレン、場合により置換されていてもよいアザ、O又はSである。式(I)又は(II)中のG-S-S-及び-O-を連結するLinkAの原子の最短鎖は、2以上(例えば、3以上、好ましくは4以上)ものであってもよい。式(I)又は(II)中のG-S-S-及び-O-を連結するLinkAの原子の最短鎖は、10以下(例えば、6以下、好ましくは5以下)ものであってもよい。非限定的な例において、式(I)又は(II)中のG-S-S-及び-O-を連結するLinkA中の原子の最短鎖は、4又は5であり得る。LinkAの非限定的な例には、場合により置換されていてもよいC6-14アリールC1-6アルキレン、例えば、フェニレン-エチレン、及び場合により置換されていてもよいC2-10アルキレン、例えばブチレンが含まれる。LinkAは、ジスルフィド基に近接する嵩高い基を含み得る。
【０１０３】
機能性キャップ基
機能性キャップ基は、ブロッキング基、送達ドメイン、又は色素であり得る。本発明の機能性キャップ基は、1つ以上の所望の機能、例えば、本発明の化合物の合成中(例えば、嵩高いブロック基を含ませることにより)、リン(III)原子の反応性に対するジスルフィド基の保護を有することができる。所望の機能の他の非限定的な例には、(1)特定の組織に送達する能力を提供すること(例えば、ターゲティング部分を含ませることによる)、(2)本発明のモノヌクレオチドが送達される組織を視覚化する能力を提供する(例えば、色素を含ませることによる)、(3)エンドソーム等の細胞内コンパートメントからエスケープする能力を高める(例えば、エンドソームエスケープ部分を含ませることによる)、(4)標的細胞への膜貫通輸送の有効性を増強する(例えば、細胞浸透性ペプチドを含ませことによる)、ことを含む。機能性キャップ基はまた、モノヌクレオチドの溶解度又はバイオアベイラビリティを変更するために使用され得る。この機能は、本発明のモノヌクレオチドを特定の組織に送達する能力とは独立して達成することができる。機能性キャップ基は、送達ドメインのいずれかのコンジュゲーションの前の中間体であり得る。
【０１０４】
機能的キャップ基は、それぞれの所望の機能を提供する部分を組み込むことによって、これらの特徴の1つ以上を満たすことができる。全ての種類の機能性キャップ基(例えば、ブロッキング基又は送達ドメイン)は、リン(V)原子に結合した場合、インビボにおいて機能的キャップ基とリン(V)原子の間の結合の加水分解により放出されるモノヌクレオシドリン酸塩の負電荷をマスクする。
【０１０５】
糖
本発明のモノヌクレオチドに含まれる糖は、少なくとも5つの炭素原子を有する単糖であってもよく、直線状、分枝状又は環状であってもよい。特に、糖は、リボース又はその修飾体、例えば、2-デオキシリボース、2-メチルリボース、2-メチル-2-デオキシリボースであり得る。2-デオキシリボース糖は、2位にハロゲン(例えば、F)又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ(例えば、メトキシもしくはメトキシエトキシ)を含むことができる。糖は、式(III):
【０１０６】
【化３】
2018503606.tif 000006
(式中、
X1は、リン酸基のリン(V)原子への結合であり、
B1は、核酸塩基への結合であり、
R1は、H、アジド、シアノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R2及びR3の各々は、独立して、H、アミノ、アジド、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル(例えば、メチル)、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、ハロ(例えば、F)、シアノ、ヒドロキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシであり、
R4は、ヒドロキシ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ(例えば、=O及び/又はアミノ(例えば-NH2)で場合により置換されていてもよいアルコキシ)、場合により置換されていてもよいアミノ、アジド又は-O-X2(ここで、X2は、リン(V)原子に結合する)であり、
R5は、H、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル又はシアノであり、
R6は、H、アジド、シアノ、ハロ(例えば、F)、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R7は、H又は場合により置換されていてもよいC1-6アルキル(例えば、Me)である)
で表される化合物であってもよい。
【０１０７】
特定の実施形態において、R2及びR3の一方がハロである場合、他方はアミノ、ヒドロキシ及び場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシではない。他の実施形態において、R2及びR3の少なくとも一方はHではない。
【０１０８】
本発明のモノヌクレオチドは、式(II):
【０１０９】
【化４】
2018503606.tif 000007
(式中、
Gは、機能的キャップ基であり、
LinkAは、リンカーであり、
B1は、核酸塩基であり、
R1は、H、アジド、シアノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R2及びR3の各々は、独立して、H、アミノ、アジド、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル(例えば、メチル)、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル、ハロ(例えば、F)、シアノ、ヒドロキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシであり、
G1は、場合により置換されていてもよいアミノ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ、場合により置換されていてもよいC6-14アリールオキシ、又は場合により置換されていてもよいC1-9ヘテロアリールオキシであり、R4は、ヒドロキシ、場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ(例えば=O及び/又はアミノ(例えば、-NH2)で場合により置換されるアルコキシ)、場合により置換されていてもよいアミノ、又はアジドであるか、あるいはG1とR4が組み合わさって-O-を形成し、
R5は、H、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC1-6ヘテロアルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル、場合により置換されていてもよいC2-6アルキニル又はシアノであり、
R6は、H、アジド、シアノ、ハロ(例えば、F)、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル、場合により置換されていてもよいC2-6アルケニル又は場合により置換されていてもよいC2-6アルキニルであり、
R7は、H又は場合により置換されていてもよいC1-6アルキル(例えば、Me)である)
の構造を有し、又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーを有してもよい。
【０１１０】
特定の実施形態において、R2及びR3の一方がハロである場合、他方はアミノ、ヒドロキシ及び場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシではない。他の実施形態において、R2及びR3の少なくとも一方はHではない。
【０１１１】
核酸塩基
本発明のモノヌクレオチドに含まれる核酸塩基は、修飾された核酸塩基又は非修飾の核酸塩基であり得る。非修飾の核酸塩基は、プリン塩基(例えば、アデニン(A)又はグアニン(G))又はピリミジン塩基(例えば、チミン(T)、シトシン(C)又はウラシル(U))であり得る。修飾された核酸塩基は、1つ以上の酸素及び/又は窒素原子が適切な保護基で保護されている又はプロドラッグ部分として存在する、プリン又はピリミジン塩基の保護されたバージョンであり得る。非限定的な例において、核酸塩基は、ウラシル、シトシン、アデノシンもしくはグアノシン、又はその修飾体(例えば、2-アミノ-6-アルコキシプリン)であり得る。
【０１１２】
核酸塩基は、元素の原子量よりも重い同位体で濃縮された1つ以上の位置を含むことができる。例えば、核酸塩基は、15Nで濃縮された窒素原子位置を含むことができる。いくつかの実施形態において、核酸塩基は、15Nで濃縮された環外アミノ基を有するシトシンである。
【０１１３】
本発明のモノヌクレオチドは、硫黄-硫黄結合切断機構に実質的に影響を及ぼすことなく、分子の部分の変化(例えば、ターゲティング部分の包含等の機能的キャップ基の変化)を可能にするモジュラー構造を有する。本発明の化合物にターゲティング部分を含めることにより、モノヌクレオチドの医薬活性に必要とされる最小有効濃度を低下させることができる。例えば、肝細胞に特異的なターゲティング部分(例えば、GalNAc、マンノース又は脂質)を含むことにより、本発明の化合物は、全身投与(例えば、経口、局所又は静脈内)においてさえも、肝細胞に特異的に送達され得る。
【０１１４】
本発明のモノヌクレオチドの非限定的な例には、
【０１１５】
【化５】
2018503606.tif 000008
(式中、
Xは、F、OH、又は場合により置換されていてもよいC1-6アルコキシ(例えば、OMe)であり、
Rは、H、OH、又は場合により置換されていてもよいアミノ(例えば、NMe2)であり、
R0は、H又は場合により置換されていてもよいC1-6アルキル(例えば、Me)であり、
各R1は、独立して、ハロゲン、C1-6アルキル(例えば、Me)、C3-8シクロアルキル(例えば、シクロペンチル)、又はC1-9ヘテロシクリル(例えば、C5は1つのヘテロ原子:N、O又はSを含む)であり、
nは0、1、2、3又は4であり、
mは1、2又は3であり、
R2は、場合により置換されていてもよいC1-6アルキル(例えば、ベンジル又は(R)-1-イソプロポキシカルボニル-エチル)であり、
B1は、核酸塩基(例えば、ウラシル、シトシン、アデノシン、グアノシン、(2-アミノ-6-メトキシ)プリン-9-イル又は(2-アミノ-6-エトキシ)プリン-9-イル)である)
又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーが含まれる。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、mは、2である。
【０１１７】
特に、本発明のモノヌクレオチドは、以下の化合物:
【０１１８】
【化６】
2018503606.tif 000009
2018503606.tif 000010
の1つ、又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマーであってもよい。
【０１１９】
送達ドメインを含む本発明のモノヌクレオチドの非限定的な例は、以下の通りである。
【０１２０】
【化７】
2018503606.tif 000011
2018503606.tif 000012
又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマー。
【０１２１】
送達ドメインは、例えば、ターゲティング部分(例えば、GalNAc、マンノース、脂質等)、細胞浸透性ペプチド、又はエンドソームエスケープ部分であり得る。
【０１２２】
ブロッキング基
本発明の化合物に含まれるブロック基は、43Da以上の(例えば、57Da以上の)分子量を有することができる。ブロック基は、10kDa以下の(例えば、3kDa以下の、又は300Da以下の)分子量を有することができる。ブロッキング基内の構造は、細胞内生理学的条件下で自発的な反応性に対して不活性であり得る。ブロッキング基は、特に、ジスルフィドをリン(V)原子に連結するリンカー上のジスルフィドに近接した嵩高い基を欠失している本発明のモノヌクレオチドにおいて、ジスルフィドに近接した嵩高い基を含有することができる(例えば、ブロッキング基は、分岐状の、場合により置換されていてもよいC3-10アルキレンを含んでもよい(例えば、このブロッキング基は、分岐状の、場合により置換されていてもよいC3-10アルキルであってもよい))。保護基の非限定的な例には、場合により置換されていてもよいC3-10アルキル(例えば、t-Bu、2-ヒドロキシ-1,1-ジメチル-エチル、及び2-ジメチルアミノ-1,1-ジメチル-エチル)が挙げられる。
【０１２３】
送達ドメイン
本発明のモノヌクレオチドへの送達ドメインの包含は、特定の組織型のターゲティング、本発明のモノヌクレオチドの細胞取り込み、細胞内取り込み後の(例えば、エンドソーム等の細胞内コンパートメントからの)細胞内のモノヌクレオシド又はモノヌクレオシドリン酸塩の細胞内放出、及び標的細胞へのモノヌクレオシド又はモノヌクレオシドリン酸塩の送達の検出のうちの1つ以上を促進し得る。したがって、送達ドメインは、ターゲティング部分、色素、エンドソームエスケープ部分、又は細胞浸透性ペプチドであってもよい。
【０１２４】
ターゲティング部分(例えば、細胞外ターゲティング部分)は、所与の標的細胞集団(例えば、肝細胞又はリンパ球)に関連付けられる受容体もしくは他の受容部分と特異的に結合し、又は反応的に会合もしくは複合化する任意の部分である。肝細胞についてのターゲティング部分の非限定的な例には、炭水化物(例えば、GalNAc又はマンノース)及び脂質が挙げられる。リンパ球についてのターゲティング部分の非限定的な例には、抗CD3抗体(例えば、オテリキシズマブ、テプリズマブ、及びビジリズマブ)、抗CD4抗体(例えば、カリフォルニア州サンディエゴのeBioscienceから入手可能なOKT4又はRPA-T4)、抗CD8抗体(例えば、カリフォルニア州サンディエゴのeBioscienceから入手可能なOKT8又はSK1)、抗CD16抗体(例えば、カリフォルニア州サンディエゴのeBioscienceから入手可能なCB16又はB73.1)、及び抗CD19抗体(例えば、カリフォルニア州サンディエゴのeBioscienceから入手可能なHIB19)が挙げられる。他の細胞のためのターゲティング部分は、当該技術分野において公知である。本発明の細胞外ターゲティング部分のいくつかを本明細書に記載する。一実施形態において、ターゲティング部分は受容体結合ドメインである。別の実施形態において、ターゲティング部分は、インスリン、インスリン様増殖因子受容体1(IGF1R)、IGF2R、インスリン様増殖因子(IGF、例えば、IGF1又は2)、間葉上皮移行因子受容体(c-met、肝細胞増殖因子受容体(HGFR)としても知られる)、肝細胞増殖因子(HGF)、上皮細胞増殖因子受容体(EGFR)、上皮細胞増殖因子(EGF)、ヘレグリン、線維芽細胞増殖因子受容体(FGFR)、血小板由来増殖因子受容体(PDGFR)、血小板由来増殖因子(PDGF)、血管内皮増殖因子受容体(VEGFR)、血管内皮増殖因子(VEGF)、腫瘍壊死因子受容体(TNFR)、腫瘍壊死因子アルファ(TNF-α)、TNF-β、葉酸受容体(FOLR)、葉酸、トランスフェリン、トランスフェリン受容体(TfR)、メソセリン、Fc受容体、c-kit受容体、c-kit、インテグリン(例えば、α4インテグリン又はβ-1インテグリン)、P-セレクチン、スフィンゴシン-1-リン酸受容体-1(S1PR)、ヒアルロン酸受容体、白血球機能抗原-1(LFA-1)、CD4、CD11、CD18、CD20、CD25、CD27、CD52、CD70、CD80、CD85、CD95(Fas受容体)、CD106(血管細胞接着分子1(VCAM1))、CD166(活性化白血球細胞接着分子(ALCAM))、CD178(Fasリガンド)、CD253(TNF関連アポトーシス誘導リガンド(TRAIL))、ICOSリガンド、CCR2、CXCR3、CCR5、CXCL12(間質細胞由来因子1(SDF-1))、インターロイキン1(IL-1)、IL-1ra、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-8、CTLA-4、MART-1、gp100、MAGE-1、エフリン(Eph)受容体、粘膜アドレシン細胞接着分子1(MAdCAM-1)、癌胎児性抗原(CEA)、ルイスY、MUC-1、上皮細胞接着分子(EpCAM)、癌抗原125(CA125)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、TAG-72抗原を含む群から選択されるタンパク質及びそれらの断片に特異的に結合する。さらなる実施形態において、ターゲティング部分は、赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ(ErbB1)受容体(例えば、ErbB1受容体、ErbB2受容体、ErbB3受容体、及びErbB4受容体)である。他の実施形態において、ターゲティング部分は、アシアロ糖タンパク質受容体、マンノ受容体、又は葉酸受容体に選択的に結合し得る。具体的な実施形態において、ターゲティング部分は、1つ以上のN-アセチルガラクトサミン(GalNAc)、マンノース、又は葉酸リガンドを含有する。特定の実施形態において、葉酸リガンドは、構造:
【０１２５】
【化８】
2018503606.tif 000013
を有する。
【０１２６】
ターゲティング部分はまた、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、TGF-α及びTGF-β等の腫瘍増殖因子(TGF)、及びワクシニアウイルス増殖因子(VVGF)から選択することができる。また、非ペプチジルリガンドをターゲティング部分として使用することができ、例えば、ステロイド、炭水化物、ビタミン及びレクチンを含むことができる。ターゲティング部分はまた、例えば、ポリペプチド、例えば、ソマトスタチン(例えば、コア配列シクロ[Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys](配列番号6)を有するソマトスタチン、この場合、例えば、ソマトスタチン類似体のC末端は、Thr-NH2である)、ソマトスタチン類似体(例えば、オクトレオチド及びランレオチド)、ボンベシン、ボンベシン類似体、又は抗体、例えば、モノクローナル抗体から選択されてもよい。
【０１２７】
エンドソームエスケープ部分は、エンドソーム内容物の放出を増強する、又はエンドソーム等の内部細胞コンパートメントからの分子のエスケープを可能にする。例示的なエンドソームエスケープ部分には、化学療法剤(例えば、クロロキンのようなキノロン類);融合誘導性脂質(例えば、ジオレオイルホスファチジル-エタノールアミン(DOPE));及びポリマー、例えば、ポリエチレンイミン(PEI);ポリ(β-アミノエステル);ペプチド又はポリペプチド、例えば、ポリアルギニン(例えば、オクタアルギニン)及びポリリジン(例えば、オクタリジン);プロトンスポンジ、ウイルスカプシド、及び本明細書に記載されるペプチド導入ドメインが含まれる。例えば、融合誘導性ペプチドは、インフルエンザAウイルスのM2タンパク質、インフルエンザウイルス血球凝集素のペプチド類似体、インフルエンザCウイルスのHEFタンパク質、フィロウイルスの膜貫通糖タンパク質、狂犬病ウイルスの膜貫通糖タンパク質、水疱性口内炎ウイルスの膜貫通糖タンパク質(G)、センダイウイルスの融合タンパク質、Semliki森林ウイルスの膜貫通糖タンパク質、ヒト呼吸器合胞体ウイルス(RSV)の融合タンパク質、麻疹ウイルスの融合タンパク質;ニューカッスル病ウイルスの融合タンパク質、ビスナウイルスの融合タンパク質、マウス白血病ウイルスの融合タンパク質、HTLウイルスの融合タンパク質、及びサル免疫不全ウイルス(SIV)の融合タンパク質に由来し得る。エンドソームエスケープを促進するために使用することができる他の部分は、Dominska et al., Journal of Cell Science, 123(8):1183-1189, 2010に記載されている。エンドソームエスケープ部分の非限定的な例を表1に示す。
【０１２８】
細胞浸透性ペプチドは、本発明のモノヌクレオチドの細胞取り込みを促進する短鎖ポリペプチド(例えば、4〜50アミノ酸のポリペプチド)である。細胞浸透性ペプチドは、TAT又は(Arg8)(Snyder及びDowdy, 2005, Expert Opin. Drug Deliv. 2, 43-51)等のカチオン性ペプチド伝達ドメイン(PTD)を含有し得る。PTDは、本明細書に記載されるモノヌクレオチドを含む、多種多様なカーゴ(Schwarze et al., 1999, Science 285, 1569-1572、Eguchi et al., 2001, J. Biol. Chem. 276, 26204-26210、及びKoppelhus et al., 2002, Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 12, 51-63)を供給するために使用することができる。陽イオン性PTDは、マクロピノサイトーシスによって細胞に侵入し、これは、すべての細胞が行う特殊な形態の流体相取り込みである。細胞透過性ペプチドの非限定的な例を表1に示す。
【０１２９】
【表１】
2018503606.tif 000014
【０１３０】
色素
色素は、(例えば、蛍光退色後回復測定(Fluorescence Recovery After Photobleaching)(FRAP)を用いた)細胞内での本発明のモノヌクレオチドの取り込みの視覚化又はその動きのモニタリングのために、機能性キャップ基に含めることができる。当該技術分野で公知の色素は、機能的キャップ基に含まれてもよい。色素に含めることができる有用な構造の非限定的な例として、FITC、RD1、アロフィコシアニン(APC)、aCFTM色素(Biotium, Hayward, CA)、BODIPY (Invitrogen of Life Technologies, Carlsbad, CA)、AlexaFluor(登録商標) (Invitrogen of Life Technologies, Carlsbad, CA)、DyLight Fluor (Thermo Scientific Pierce Protein Biology Products, Rockford, IL)、ATTO (ATTO-TEC GmbH, Siegen, Germany)、FluoProbe (Interchim SA, Motlucon, France)及びAbberior Probes (Abberior GmbH, Gottingen, Germany)が挙げられる。
【０１３１】
モノヌクレオチドのアンマスキング
理論に束縛されるものではないが、本発明のモノヌクレオチドは、分子内環化後、ジスルフィドの細胞内還元によってアンマスキングされ得る。リン原子上の付加的な部分、例えばアルコキシ又はアミノは、既知の機構、例えば酵素的に(例えば、ホスホルアミダーゼ、ホスホジエステラーゼ又は一般的加水分解の作用によって)放出され得る。例えばマスクされていないモノヌクレオチドの、続く放出を伴う細胞内のジスルフィド結合切断の1つの非限定的な例をスキーム1に示す。
【０１３２】
【化９】
2018503606.tif 000015
【０１３３】
本発明のモノヌクレオチドの合成
本発明のモノヌクレオチドは、本明細書に記載される方法に従って、又は当該技術分野において公知の方法に従って調製することができる。本発明のモノヌクレオチドの合成の非限定的な例をスキーム2に示す。
【０１３４】
【化１０】
2018503606.tif 000016
【０１３５】
スキーム2において、HO-Nuc-ORAは、保護されていなくても(例えば、RAは、H又は場合により置換されていてもよいアルキルである)又はO-保護基で保護されていてもよいモノヌクレオシドである。当業者は、化合物Gの合成が、RAをHにする必要があることを認識するであろう。また、当業者は、化合物Fの合成が、RAを、所望により合成の終わりで除去され得るO-保護基を含む、本発明の範囲内の任意の基にすることを可能にすることも認識するであろう。
【０１３６】
スキーム2に示されるように、化合物Aを2,2'-ジピリジルジスルフィド(PyS-SPy)とのメタセシス反応に供して、混合したジスルフィド中間体を得ることができ、これは、求電子試薬(例えば、MeOTf)、続いて塩基(例えば、ヒューニッヒ塩基(DIEA)等のトリアルキルアミン塩基)の存在下でG-SHを用いた処置により、化合物Bを提供することができる。
【０１３７】
化合物Bを使用して、モノヌクレオシドに結合した1つのだけの原子価(例えば、化合物F)又は2つの原子価(例えば、化合物G)を有する、リン(V)原子を含む本発明の化合物を調製することができる。したがって、化合物Fの調製は、以下の反応順序に従って達成することができる。化合物Bは、塩基(例えば、ピリジン等の有機塩基)及び塩化ピバロイルの存在下で亜リン酸と反応させて化合物Cを得ることができ、これは、塩化ピバロイル及び塩基(例えば、ピリジン)の存在下での化合物Dとの反応により、化合物Eを生成することができる。化合物C中の対イオンは、反応に使用される塩基に由来し得る又はクエンチ時に提供され得る。化合物EをG1-H(Hは、N又はO等のヘテロ原子に結合している)で処理すると、化合物Fを得ることができる。化合物Gは、塩基(例えば、ヒューニッヒ塩基(DIEA)等のトリアルキルアミン塩基)、活性化剤(例えば、4,5-ジシアノイミダゾール)及びClP(NiPr2)2の存在下で化合物Bを化合物D(RA=H)と反応させることによって調製することができる。
【０１３８】
上記の反応において、反応における望ましくない関与を避けるために、反応性官能基(例えば、ヒドロキシ、アミノ、チオ又はカルボキシ基)を保護することが必要な場合がある。このような基の組み込み、並びにそれらを導入及び除去するために必要な方法は、当業者に公知である(例えば、Greene、前掲)。脱保護工程は、保護基の除去により本発明の化合物が与えられるように、合成の最終ステップであってもよい。上記のスキームのいずれかにおいて使用される出発物質は、購入されてもよく、又は当業者に公知である方法を用いて、化学文献に記載された方法によってもしくはそれらの適合によって調製されてもよい。ステップが実施される順序は、導入される基及び使用される試薬に依存して変化し得るが、当業者には明らかである。
【０１３９】
医薬組成物
本明細書に記載される方法において使用される化合物は、好ましくは、インビボ投与に適した生物学的に適合した形態でヒト対象に投与するための医薬組成物に製剤化される。医薬組成物は、典型的には、本明細書に記載される化合物及び医薬として許容される賦形剤を含む。
【０１４０】
ヒト使用のために、本発明のモノヌクレオチドは、単独で、又は意図された投与経路及び標準的な調剤の実施に関して選択された医薬担体と混合して投与することができる。したがって、本発明による使用のための医薬組成物は、式(I)又は(II)の化合物の薬学的に使用することができる調製物への加工を促進する賦形剤及び補助剤を含む1つ以上の生理学的に許容される担体を用いて、従来通りに製剤化され得る。
【０１４１】
本発明はまた、1つ以上の医薬として許容される担体を含有することができる医薬組成物を含む。本発明の医薬組成物の製造において、有効成分は、典型的には、賦形剤と混合され、賦形剤によって希釈され、又は、例えばカプセル、サシェ、ペーパーもしくは他の容器の形態でこのような担体中に封入される。賦形剤が希釈剤として働く場合、それは、有効成分のためのビヒクル、担体又は媒体として作用する固体、半固体又は液体物質(例えば、通常の生理食塩水)であり得る。したがって、組成物は、錠剤、粉末、ロゼンジ、サシェ、カシェ、エリキシル剤、懸濁剤、エマルジョン、溶液、シロップ、並びに軟質及び硬質ゼラチンカプセルの形態であってもよい。当該技術分野において公知であるように、希釈剤のタイプは、意図される投与経路に依存して変化し得る。得られる組成物は、追加の薬剤、例えば防腐剤を含むことができる。
【０１４２】
賦形剤又は担体は、投与の様式及び経路に基づいて選択される。適切な医薬担体、並びに医薬製剤における使用のための医薬必需品は、この分野において周知な参考テキストであるRemington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005)及びUSP/NF (United States Pharmacopeia and the National Formulary)に記載されている。適当な賦形剤の例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、及びメチルセルロースである。製剤はさらに、潤滑剤、例えばタルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱油;湿潤剤;乳化剤及び懸濁化剤;保存剤、例えばメチル-及びプロピルヒドロキシ-ベンゾエート;甘味剤;及び香味剤を含んでもよい。他の例示的な賦形剤は、Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th Edition, Rowe et al., Eds., Pharmaceutical Press (2009)に記載されている。
【０１４３】
これらの医薬組成物は、従来の方法で、例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖衣錠製造、微粒子化、乳化、カプセル化、封入又は凍結乾燥プロセスによって製造することができる。製剤を製造するための当該技術分野において周知の方法は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21stEd., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005),及びEncyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New Yorkに見出される。適切な製剤は、選択された投与経路に依存する。このような組成物の処方及び調製は、医薬製剤の当業者に周知である。製剤を調製する際に、活性化合物を粉砕して、他の成分と組み合わせる前に適切な粒度を提供することができる。活性化合物が実質的に不溶性である場合、それを200メッシュ未満の粒度に粉砕することができる。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒子サイズは、製剤中に実質的に均一な分布、例えば約40メッシュを提供するように粉砕することによって調節することができる。
【０１４４】
投薬量
本明細書に記載される方法で使用される化合物又はその医薬組成物の投与量は、多くの因子に依存して変化させることができ、例えば、化合物の薬力学的特性;投与の様式;レシピエントの年齢、健康状態及び体重;症状の性質及び程度;治療の頻度;もしあれば併用療法のタイプ;並びに治療される動物における化合物のクリアランス速度が挙げられる。当業者は、上記因子に基づいて適切な投薬量を決定することができる。本明細書に記載される方法で使用される化合物は、臨床応答に依存して、必要に応じて調整することができる適切な投薬量で最初に投与されてもよい。一般的に、本発明のモノヌクレオチドの適切な1日用量は、治療効果を生じるために有効な最低用量である化合物の量である。このような有効用量は、一般的に上記の因子に依存する。
【０１４５】
本発明のモノヌクレオチドは、単回投薬又は複数回投薬で患者に投与することができる。複数回投薬が投与される場合、投薬は、例えば、1〜24時間、1〜7日間、1〜4週間、又は1〜12カ月間、互いに離れていてもよい。化合物はスケジュールに従って投与されてもよく、又は化合物は所定のスケジュールなしで投与されてもよい。活性化合物は、例えば、1日あたり1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11もしくは12回、2日ごと、3日ごと、4日ごと、5日ごともしくは6日ごと、1週あたり1回、2回、3回、4回、5回、6回もしくは7回、1月あたりに1回、2回、3回、4回、5回もしくは6回、又は1年あたり1回、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、10回、11回もしくは12回投与されてもよい。任意の特定の対象に対して、特定の投薬レジメンは、個々の必要性、及び組成物の投与を管理又は監督する者の専門的判断に従って経時的に調整されるすべきであることが理解される必要がある。
【０１４６】
主治医が最終的に適切な量及び投薬レジメンを決定する一方で、本発明のモノヌクレオチドの有効量は、例えば、本明細書に記載される化合物のいずれかの、例えば、0.05mg〜3000mgの間の1日の総投薬量であってもよい。あるいは、投薬量は、患者の体重を使用して計算することができる。このような投薬量範囲は、例えば、10〜1000mg(例えば、50〜800mg)の間を含み得る。いくつかの実施形態において、50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950又は1000mgの化合物が投与される。
【０１４７】
本発明の方法において、本発明のモノヌクレオチドの複数回投与が患者に投与される期間は変化し得る。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の化合物の用量は、1〜7日間、1〜12週間、又は1〜3カ月間の期間にわたって患者に投与される。他の実施形態において、化合物は、例えば4〜11カ月間又は1〜30年間の期間にわたって患者に投与される。他の実施形態において、化合物は、症状の発症時に患者に投与される。これらの実施形態のいずれにおいても、投与される化合物の量は、投与期間中に変化し得る。化合物を毎日投与する場合、投与は、例えば、1日当たり1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11又は12回行うことができる。
【０１４８】
製剤
本明細書に記載される方法のいずれかを使用して、本明細書に記載される状態のいずれかを治療することができると同定された化合物は、薬学的に許容される希釈剤、担体又は賦形剤を単位投薬形態で患者又は動物に投与することができる。このような治療に使用するための化合物は、医薬品化学の分野の者に公知である任意の標準的な技術によって製造し、単離することができる。従来の薬学的実施は、壊死が起こる疾患に罹患している患者に同定された化合物を投与するのに適した製剤又は組成物を提供するために使用され得る。患者に症状が現れる前に投与を開始することができる。
【０１４９】
化合物又はその医薬組成物は、当業者に理解されるように、選択された投与経路に応じて様々な形態で患者に投与することができる。本明細書に記載される方法において使用される化合物は、例えば、経腸又は非経口投与により投与することができる。経腸投与は、経口投与経路であり得る。非経口投与は、筋肉内、静脈内、動脈内、頭蓋内、皮下、眼窩内、脳室内、脊髄内、髄腔内、腹腔内、直腸及び局所の投与経路を含み得る。局所投与経路には、経皮、皮内、鼻内、肺内、口腔内、及び舌下の投与経路が含まれ得る。医薬組成物は、選択された投与経路に従って製剤化される。非経口投与は、選択された期間にわたる連続注入によるものであってもよい。化合物は、望ましくは、医薬として許容される担体とともに投与される。本明細書に記載される障害の治療用に製剤化された、本明細書に記載の化合物の医薬製剤もまた本発明の一部である。
【０１５０】
経口投与用の製剤
本発明によって企図される医薬組成物には、経口投与用に製剤化されたもの(「経口投薬形態」)が含まれる。経口投薬形態は、例えば、錠剤、カプセル、液体溶液又は懸濁液、粉末、又は液体もしくは固体結晶の形態であってもよく、これは、無毒性の医薬として許容される賦形剤との混合物中に有効成分を含有する。これらの賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤又は充填剤(例えば、ショ糖、ソルビトール、糖、マンニトール、微結晶セルロース、ジャガイモデンプンを含むデンプン、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムもしくはリン酸ナトリウム);顆粒及び崩壊剤(例えば、微晶質セルロースを含むセルロース誘導体、ジャガイモデンプンを含むデンプン、マルトデキストリン、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、もしくはアルギン酸);結合剤(例えば、ショ糖、グルコース、ソルビトール、アカシア、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、アルファ化デンプン、微晶質セルロース、ケイ酸アルミニウム・マグネシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はポリエチレングリコール);及び潤滑剤、流動促進剤、並びに付着防止剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油、又はタルク)であってもよい。他の医薬として許容される賦形剤は、着色剤、香味剤、可塑剤、保湿剤、緩衝剤等であってもよい。
【０１５１】
経口投与のための製剤はまた、チュアブル錠として、有効成分が不活性な固体希釈剤(例えば、ジャガイモデンプン、乳糖、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム又はカオリン)と混合される硬質ゼラチンカプセルとして、あるいは有効成分が水又は油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合される軟質ゼラチンカプセルとして提供されてもよい。粉剤、顆粒剤及びペレットは、例えば、ミキサー、流動床機器又は噴霧乾燥装置を用いる慣用の方法で錠剤及びカプセルに覆われた上記の成分を用いて調製することができる。
【０１５２】
経口使用のための制御放出組成物は、活性薬剤物質の溶解及び/又は拡散を制御することによって活性薬物を放出するように構築することができる。制御放出及び標的血漿濃度対時間プロフィールを得るために、多数の戦略のいずれも追求することができる。一例において、制御放出は、例えば、様々なタイプの制御放出組成物及びコーティングを含む、様々な製剤パラメータ及び成分の適切な選択によって得られる。例としては、単一又は複数単位の錠剤又はカプセル組成物、油性溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロカプセル、マイクロスフェア、ナノ粒子、パッチ及びリポソームが挙げられる。特定の実施形態において、組成物は、生分解性、pH及び/又は温度感受性ポリマーコーティングを含む。
【０１５３】
溶解又は拡散制御放出は、化合物の錠剤、カプセル、ペレット又は顆粒製剤の適切なコーティングによって、又は化合物を適切なマトリックスに組み込むことによって達成することができる。制御放出コーティングは、上記のコーティング物質並びに/又は、例えば、シェラック、蜜ロウ、グリコワックス、キャスターワックス、カルナバワックス、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリン、エチルセルロース、アクリル樹脂、dl-ポリ乳酸、セルロースアセテートブチレート、ポリ塩化ビニル、ポリビニルアセテート、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メチルメタクリレート、2-ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートハイドロゲル、1,3-ブチレングリコール、エチレングリコールメタクリレート、及び/もしくはポリエチレングリコールの1つ以上を含み得る。制御放出マトリックス製剤において、マトリックス材料はまた、例えば、水和メチルセルロース、カルナバワックス及びステアリルアルコール、カルボポール934、シリコーン、グリセリルトリステアレート、メチルアクリレート-メチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン及び/又はハロゲン化フルオロカーボンを含み得る。
【０１５４】
本発明の化合物及び組成物を経口投与するために組み込むことができる液体形態は、水溶液、好適には風味を付けたシロップ、水性又は油性懸濁液、及び食用油を含む風味を付けたエマルジョン、例えば、綿実油、ゴマ油、又はピーナッツ油、並びにエリキシル剤及び同様の医薬用ビヒクルが挙げられる。
【０１５５】
口腔内投与のための製剤
口腔内又は舌下投与のための投薬量は、典型的には、必要に応じて単回用量あたり0.1〜500mgである。実際には、医師は、個々の患者に最も適した実際の投薬レジメンを決定し、投薬量は、特定の患者の年齢、体重、及び応答によって変化する。上記投与量は、平均的な症例の例であるが、特定の個々の例では、より高い又はより低い投与量が妥当であり、このようなものは本発明の範囲内である。
【０１５６】
口腔内投与について、組成物は、従来の方法で製剤化された錠剤、ロゼンジ等の形態をとり得る。ネブライザー、液体スプレー装置及び電気流体力学(EHD)エアロゾル装置とともに使用するのに適した液体薬物製剤は、典型的には、医薬として許容される担体を有する本発明のモノヌクレオチドを含むであろう。好ましくは、医薬として許容される担体は、液体、例えば、アルコール、水、ポリエチレングリコール、又はペルフルオロカーボンである。場合により、本発明の化合物の溶液又は懸濁液のエアロゾル特性を変更するために、別の材料を添加してもよい。望ましくは、この材料は、液体、例えば、アルコール、グリコール、ポリグリコール又は脂肪酸である。エアロゾル装置で使用するのに適した液体薬剤溶液又は懸濁液を製剤化する他の方法は、当業者に公知である(例えば、それぞれが、参照により本明細書に組み込まれるBiesalski、米国特許第5,112,598号、及びBiesalski、米国特許第5,556,611号を参照されたい。)。
【０１５７】
経鼻又は吸入投与のための製剤
化合物はまた、経鼻投与のために製剤化されてもよい。経鼻投与のための組成物はまた、エアロゾル、点滴剤、ゲル及び粉末として簡便に製剤化することができる。製剤は、単回又は複数回投薬形態で提供することができる。点眼薬又はピペットの場合、適切な予め定められた容量の溶液又は懸濁液を患者が投与することによって投薬を達成することができる。スプレーの場合、これは、例えば、計量噴霧スプレーポンプによって達成することができる。
【０１５８】
化合物は、吸入による、及び鼻腔内投与を含む、特に気道へのエアロゾル投与のために製剤化され得る。化合物は、一般的に、例えば、5ミクロン以下のオーダーの小さな粒子サイズを有するであろう。このような粒径は、当該技術分野で公知の手段、例えば微粉化によって得ることができる。有効成分は、適切な噴射剤、例えば、クロロフルオロカーボン(CFC)、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、又はジクロロテトラフルオロエタン、又は二酸化炭素、又は他の適切な気体で加圧パック内に提供される。エアロゾルは、好都合には、界面活性剤、例えば、レシチンを含むことができる。薬剤の用量は、計量バルブによって制御することができる。あるいは、有効成分は、例えば、ラクトース、デンプン、デンプン誘導体(例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース)、又はポリビニルピロリドン(PVP)等の適切な粉末ベース中に化合物の粉末混合物等の乾燥粉末の形態で提供することができる。粉末担体は、鼻腔内でゲルを形成するであろう。粉末組成物は、単位剤形で、例えば、ゼラチン又はブリスターパックのカプセル又はカートリッジ中に存在させることができ、そこから粉末を吸入器によって投与することができる。
【０１５９】
エアロゾル製剤は、典型的には、生理学的に許容される水性又は非水性溶媒中の活性物質の溶液又は微細懸濁液を含み、通常、噴霧装置とともに使用するために、カートリッジ又はリフィルの形態をとることができる密封容器中に、滅菌形態で単回又は複数回の量で存在する。あるいは、密封された容器は、単一用量の鼻腔吸入器又は使用後に処分が意図された計量バルブが取り付けられたエアロゾルディスペンサー等の単一の分注装置であってもよい。剤形がエアロゾルディスペンサーを含む場合、それは、圧縮ガス、例えば、圧縮空気又は有機噴霧剤、例えば、フルオロクロロ炭化水素であってよい噴霧剤を含有するであろう。エアロゾル剤形はまた、ポンプ噴霧器の形態をとり得る。
【０１６０】
非経口投与のための製剤
本発明の方法において使用するための本明細書に記載される化合物は、本明細書に記載される医薬として許容される非経口(例えば、静脈内又は筋肉内)製剤で投与することができる。医薬製剤はまた、従来の無毒性の医薬として許容される担体及びアジュバントを含有する剤形又は製剤で非経口(静脈内、筋肉内、皮下等)に投与することができる。特に、非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を意図されたレシピエントの血液と等張にする溶質を含有することができる水性及び非水性の滅菌注射溶液、並びに懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性の滅菌懸濁液が挙げられる。例えば、このような組成物を調製するために、本発明の化合物は、非経口的に許容される液体ビヒクル中に溶解又は懸濁され得る。使用され得る、許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、適切な量の塩酸、水酸化ナトリウム又は適切な緩衝液の添加によって適切なpHに調節された水、1,3-ブタンジオール、リンガー溶液及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。水性製剤はまた、1つ以上の防腐剤、例えば、p-ヒドロキシ安息香酸メチル、エチル又はn-プロピルを含有してもよい。非経口製剤に関するさらなる情報は、例えば、参照により本明細書に組み入れられる米国薬局方-国民医薬品集(USP-NF)において見出すことができる。
【０１６１】
非経口製剤は、非経口投与に適したものとしてUSP-NFによって同定された5つの一般的なタイプの調製物のいずれかであってもよい:
(1)「薬物注入」:製剤原料(例えば、式(I)又は(II)の化合物)である液体調製物、又はその溶液、
(2)「注射用薬剤」:薬物注射として非経口投与用の適切な無菌ビヒクルと組み合わせられる乾燥固体としての製剤原料(例えば、式(I)又は(II)の化合物)、
(3)「薬剤注入可能なエマルジョン」:適切なエマルジョン媒体に溶解又は分散された製剤原料(例えば、式(I)又は(II)の化合物)の液体調製物、
(4)「薬物注射可能な懸濁液」:適切な液体媒体中に懸濁された製剤原料(例えば、式(I)又は(II)の化合物)の液体調製物、
(5)「注射可能な懸濁液のための薬物」:薬物の注射可能な懸濁液として非経口投与のための適切な無菌ビヒクルと組み合わせられる乾燥固体としての製剤原料(例えば、式(I)又は(II)の化合物)。
【０１６２】
非経口投与のための例示的な製剤は、界面活性剤、例えばヒドロキシプロピルセルロースと適切に混合された、水中で調製された化合物の溶液を含む。分散剤はまた、アルコールを含む又は含まない、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、DMSO及びそれらの混合物中、及び油中で調製することができる。保存及び使用の通常の条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するために防腐剤を含有してもよい。適切な製剤の選択及び調製のための従来の手順及び成分は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Gennaro, Ed., Lippencott Williams & Wilkins (2005)、及び2013年に出版されたThe United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 36 NF31)に記載されている。
【０１６３】
非経口投与のための製剤は、例えば、賦形剤、滅菌水又は生理食塩水、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリエチレングリコール、植物起源の油、又は水素化ナフタレンを含有してもよい。生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド/グリコリドコポリマー、又はポリオキシエチレン-ポリオキシプロピレンコポリマーを使用して、化合物の放出を制御することができる。化合物の他の潜在的に有用な非経口送達システムには、エチレン-酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入システム、及びリポソームが含まれる。吸入用の製剤は、賦形剤、例えばラクトースを含有してもよく、又は、例えばポリオキシエチレン-9-ラウリルエーテル、グリココール酸塩及びデオキシコレートを含有する水溶液であってもよく、又は点鼻薬の形態でもしくはゲルとして投与する油性溶液であってもよい。
【０１６４】
非経口製剤は、化合物の即時放出のため又は持続/長期放出のために製剤化することができる。化合物の非経口放出のための例示的な製剤は、水溶液、再構成のための粉末、共溶媒溶液、油/水エマルジョン、懸濁液、油性溶液、リポソーム、ミクロスフェア及びポリマーゲルを含む。
【０１６５】
治療法
本発明のモノヌクレオチドは、インビボでアンマスキングされると、疾患又は状態(例えば、RNAウイルス感染(例えば、HIV又はC型肝炎))を治療することが公知であるモノヌクレオシド又はモノヌクレオシドを含み得るため、本発明のモノヌクレオチドは、モノヌクレオチド又はモノヌクレオシド治療によって治療可能な疾患又は状態(例えば、RNAウイルス感染(例えば、HIV又はC型肝炎))の治療に使用され得る。本発明の方法は、本発明のモノヌクレオシド又は本発明の医薬組成物をそれを必要とする対象(例えば、ヒト)に投与することによって、モノヌクレオチド又はモノヌクレオシド治療によって治療可能な疾患又は状態(例えば、RNAウイルス感染(例えば、HIV又はC型肝炎))を治療する方法を含む。製剤、投与経路、及び投薬量は、上記の通りであり得る。本発明の方法はまた、細胞を本発明のモノヌクレオチドと接触させることによって、モノヌクレオシド又はモノヌクレオチドを細胞(例えば、肝細胞又はリンパ球)に送達する方法を含む。
【実施例】
【０１６６】
以下の実施例は、本発明を例示することを意味する。それらは、決して本発明を限定することを意味しない。
【０１６７】
実施例1−本発明の化合物の調製
化合物1
【０１６８】
【化１１】
2018503606.tif 000017
【０１６９】
メタノール(200mL)中のジチオジピリジン(52.0g、236.3mmol)及び酢酸(3.0mL)の溶液に室温で2-(2-ヒドロキシエチル)チオフェノール(14.6g、94.5mmol)のメタノール溶液(50mL)を添加し、一晩撹拌した。揮発性物質を除去し、残留物に100mLのジエチルエーテルを加え、分離した固体を濾過し、ジエチルエーテル(3×50mL)で洗浄した。合わせたエーテル洗浄液を蒸発させて、粗生成物を得、これをISCOコンパニオン(酢酸エチル/ヘキサン、0〜50%)を用いるフラッシュシリカゲルカラム精製により、2-(2-ヒドロキシエチル)フェニルピリジルジスルフィドを14.1g(57%)得た。1H NMR (500MHz, CDCl3): δ8.48 (1H, d, J 5.0Hz), 7.65-7.60 (3H, m), 7.25-7.18 (3H, m), 7.13-7.10 (1H, m), 3.96 (2H, t, J 6.5Hz), 3.17 (1H, t, J 6.5Hz)
【０１７０】
30.0mLのジクロロメタン中の2-(2-ヒドロキシエチル)フェニルピリジルジスルフィド(4.5g、17.0mmol)の溶液に、MeOTfを室温で滴下添加した。反応混合物を10分間撹拌した後、tert-ブチルメルカプタン(1.9mL、17.0mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(6.0mL、34.0mmol)を加えた。反応混合物を室温でさらに30分間撹拌した後、減圧下で濃縮した。粗混合物を酢酸エチル/ヘキサン溶媒系(Combi Flash Rf Instrumentで0-30%勾配)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物1を無色油状物として得た(2.5g、収率61%)。1H NMR (500MHz):  δ7.84 (1H, d, J 5.0Hz), 7.25-7.13 (3H, m), 3.92 (2H, t, J 7.0Hz), 3.12 (2H, t, J 7.0Hz), 1.30 (9H, s)
【０１７１】
化合物2
【０１７２】
【化１２】
2018503606.tif 000018
【０１７３】
亜リン酸(1.69g、20.6mmol)は、無水のピリジンを用いて3回共蒸発させた後、10mLの無水ピリジンに再溶解した。混合物にアルコール1(0.5g、2.06mmol)を加え、得られた混合物を10分間撹拌し、次に0℃に冷却した。ピバロイルクロライド(1.37g、11.33mmol)を反応混合物に加え、室温に温め、さらに3時間撹拌した。反応をトリエチルアンモニウム重炭酸塩緩衝液(5.0mL、1M)でクエンチし、酢酸エチル(30.0mL)で希釈した。酢酸エチル(3×20.0mL)で抽出した後、合わせた有機層をトリエチルアンモニウム重炭酸塩緩衝液(5.0mL、0.5M)で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。揮発性物質を真空中で除去して残渣を得、これをISCOコンパニオン(1%トリエチルアミンを含有する0-10%メタノール/ジクロロメタン)を用いるフラッシュシリカゲルカラム精製に供して、0.49g(58%)の化合物2を白色固体として得た。1H NMR (500 Hz, CDCl3): δ12.15 (1H, s), 7.80 (1H, d, J 8.5Hz), 7.20 (2H, t, J 6.5 Hz), 7.11 (1H, t, J 6.5 Hz), 6.81 (1H, d, J 6.5 Hz), 4.18 (2H, m), 3.21 (2H, t, J 7.0Hz), 3.07 (6H, m), 1.35 (9H, t, J 7.0Hz), 1.29 (9H, s). 31P NMR (202MHz, CDCl3): δ10.3 (s)
【０１７４】
化合物3
【０１７５】
【化１３】
2018503606.tif 000019
【０１７６】
化合物2(0.49g、1.20mmol)及び2'-Me-2'-F-デオキシウリジン(0.26g、1.0mmol)の溶液を無水ピリジンで2回共蒸発させ、残渣を15.0mLの無水ピリジンに再溶解し、-15℃に冷却した。この混合物に塩化ピバロイル(0.25mL、2mmol)を滴下添加し、-15℃で1.5時間撹拌を続けた。反応混合物をジクロロメタン(30.0mL)で希釈し、塩化アンモニウム水溶液(0.5M、20.0mL)でクエンチした。有機層を分離し、水層をジクロロメタン(2×20.0mL)で抽出した。合わせた有機層を塩化アンモニウム水溶液(0.5M)及びブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。揮発性物質を真空中で除去して残渣を得、これをISCOコンパニオン(1%酢酸を含有する2-10%メタノール/ジクロロメタン)でのフラッシュシリカゲルカラム精製に供して、0.24g(44%)の化合物3を白色固体として得た。1H NMR (500 Hz, CDCl3): δ8.25 (1H, s), 7.84 (1H, d, J 8.5Hz), 7.56 (1H, d, J 8.5 Hz), 7.39 (1H, dd, J 6.5, 3.5 Hz), 7.27 (1H, m), 7.17 (2H, m), 6.85 (1H, d, J 710Hz), 5.70 (1H, dd, J 8.0Hz), 4.42-4.25 (4H, m), 4.04 (1H, d, J 9.0Hz), 5 3.90 (1H, m), 3.27 (2H, t, J 6.5Hz), 1.40 (3H, d, J 22.0 Hz), 1.30 (9H, s).  31P NMR (202MHz, CDCl3): δ14.25 (s), 14.21 (s)
【０１７７】
化合物4
【０１７８】
【化１４】
2018503606.tif 000020
【０１７９】
ジクロロメタンと四塩化炭素の混合物(v/v=1:1.4mL)中の3(0.14g、0.26mmol)の溶液にベンジルアミン(0.14mL、1.28mmol)を滴下添加し、得られた混合物を3時間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去して残渣を得、これをISCOコンパニオン(1-8%メタノール/ジクロロメタン)でフラッシュシリカゲルカラム精製に供して、0.069g(41%)の化合物4(ジアステレオマーの混合物)を白色固体として得た。C29H37FN3O7PS2についてのESI MS 計算値653.7, 実測値654.7 [M+H]+.  31P NMR (202MHz, CDCl3): δ15.3 (s), 15.1 (s)
【０１８０】
化合物6
【０１８１】
【化１５】
2018503606.tif 000021
【０１８２】
-78℃で乾燥ジクロロメタン(3.0mL)中の2'-Me-2'-F-デオキシウリジン(0.13g、0.5mmol)の溶液に、ビス-(N,N-ジイソプロピルアミノ)-クロロホスフィン(0.13g、0.5mmol)の乾燥ジクロロメタン(2.0mL)溶液、続いてN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.094mL、0.55mmol)を滴下添加した。反応混合物を室温まで温め、さらに1時間撹拌した。この混合物に、乾燥アセトニトリル(3.0mL)中の4,5-ジシアノイミダゾール(0.054g、0.5mmol)の溶液を添加し、得られた混合物を1時間撹拌し、続いて、アルコール5(0.097g、0.5mmol)のアセトニトリル(5.0mL)溶液、4,5-ジシアノイミダゾール(0.054g、0.5mmol)を加え、撹拌を一晩続けた。この溶液に、t-ブチルヒドロペルオキシド(0.1mL、デカン中5-6M)を加え、混合物をさらに30分間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去して残留物を得、これをHPLC精製(アセトニトリル/H2O、15%-65%、30分間)に供して、2種の異性体(0.028gの極性が高いジアステレオマー6A及び0.041gの極性が低いジアステレオマー6B)を白色固体として得た。
【０１８３】
化合物6A:1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ8.50 (1H, s), 7.18 (1H, d, J 8.0Hz), 6.38 (1H, d, J 19.0Hz), 5.82 (1H, d, J 7.5Hz), 4.68 (1H, m), 4.55 (1H, m), 4.36 (1H, m), 4.25-4.15 (3H, m), 2.73 (2H, t, J 6.5Hz), 1.87-1.77 (4H, m), 1.47 (3H, d, J 20.0Hz), 1.33 (9H, s).  C18H28FN2O7PS2についてのESI MS 計算値498.5, 実測値497.4 [M-H]+.  31P NMR (202MHz, CDCl3) δ1.7 (s)
【０１８４】
化合物6B:1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ7.65-7.60 (2H, m),  6.35 (1H, d, J 21.0Hz), 5.76 (1H, s, br), 4.671 (1H, m), 4.60 (1H, m), 4.32 (1H, m), 4.25-4.18 (3H, m), 2.78 (2H, t, J 6.5Hz), 1.92-1.78 (4H, m), 1.46 (3H, d, J 22.0Hz), 1.33 (9H, s).  C18H28FN2O7PS2についてのESI MS 計算値498.5, 実測値497.4 [M-H]+.  31P NMR (202MHz, CDCl3) δ0.6(s)
【０１８５】
化合物7
【０１８６】
【化１６】
2018503606.tif 000022
【０１８７】
乾燥ジクロロメタン(2.0mL)中のビス-(N,N-ジイソプロピルアミノ)-クロロホスフィン(0.13g、0.5mmol)の溶液を2-Me-2'-F-ウリジン(0.13g、0.5mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.094mL、0.55mmol)の乾燥ジクロロメタン(3.0mL)溶液に-78℃で滴下添加した。反応混合物を室温に温め、1時間撹拌した。乾燥アセトニトリル(3.0mL)中の4,5-ジシアノイミダゾール(0.054g、0.5mmol)の溶液を加え、得られた混合物を1時間撹拌した。これに、アセトニトリル(5.0mL)中のアルコール1(0.12g、0.5mmol)及び4,5-ジシアノイミダゾール(0.054g、0.5mmol)の溶液を添加し、得られた混合物を一晩撹拌した。t-ブチルヒドロペルオキシド溶液(0.1mL、デカン中5-6M)を加え、混合物をさらに30分間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去して残渣を得、これをHPLC精製(アセトニトリル/H2O、20%〜75%、30分)に供して、0.011gの極性が高いジアステレオマー7A及び0.039gの極性が低いジアステレオマー7Bを白色固体として得た。
【０１８８】
化合物7A:1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ8.68 (1H, s), 7.83 (1H, d, J 8.0Hz), 7.30-7.15 (3H, m), 7.04 (1H, s), 6.29 (1H, d, J 20.0Hz), 6.02 (1H, s), 4.55-4.43 (3H, m), 4.21 (1H, td, J 10.0, 4.5Hz), 3.95-3.50 (2H, m), 3.40-3.25 (2H, m), 1.29 (9H, s),  1.29 (3H, m).  C22H28FN2O7PS2についてのESI MS 計算値546.6, 実測値545.6 [M-H]+.  31P NMR (202MHz, CDCl3): δ -2.2 (s)
【０１８９】
化合物7B:1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ8.45 (1H, s), 7.83 (1H, d, J 8.0Hz), 7.29-7.20 (1H, m), 7.20-7.13 (3H, m), 6.35 (1H, d, J 18.5Hz), 5.82 (1H, d, J 7.0Hz), 4.60-4.40 (4H, m), 4.32-4.15 (2H, m), 3.32-3.23 (2H, m), 1.45 (3H, d, J 20.0Hz),  1.30 (9H, s).  C22H28FN2O7PS2についてのESI MS 計算値546.6, 実測値545.5 [M-H]+.  31P NMR (202MHz, CDCl3) δ1.1 (s)
【０１９０】
化合物8
【０１９１】
【化１７】
2018503606.tif 000023
【０１９２】
乾燥ジクロロメタン(0.5mL)中のビス-(N,N-ジイソプロピルアミノ)-クロロホスフィン(0.27g、1.0mmol)の溶液を2-Me-2'-OH-ウリジン(0.26g、1.0mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.19mL、1.1mmol)の乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(2.0mL)の溶液に-78℃で滴下添加した。反応混合物を室温まで温め、1時間撹拌した。乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(0.5mL)中の4,5-ジシアノイミダゾール(0.11g、1.0mmol)の溶液を加え、得られた混合物をさらに1時間撹拌した。乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(1.0mL)中のアルコール1(0.24g、1.0mmol)及び4,5-ジシアノイミダゾール(0.11g、1.0mmol)の溶液を加え、得られた混合物を一晩撹拌した。t-ブチルヒドロペルオキシド(0.2mL、デカン中5-6M)の溶液を加え、混合物を30分間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去して残渣を得、これをHPLC精製(アセトニトリル/H2O、20%-60%、30分)に供して、0.023gの極性が高い異性体8A及び0.012gの極性が低い異性体8Bを白色粉末(7%)として得た。
【０１９３】
化合物8A:1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ7.86 (1H, dd, J 8.0, 1.0Hz), 7.38 (1H, d, J 7.5Hz), 7.33-7.28 (2H, m), 7.24 (1H, td, J 7.0, 1.0Hz), 6.04 ( 1H, s), 5.84 (1H, d, J 7.0Hz), 4.59 (1H, d, J 23.0Hz), 4.41 (1H, t, J 6.5Hz), 4.40 (1H, t, J  6.5Hz), 4.28-4.19 (2H, m), 3.83 (1H, d,  J 7.5Hz), 3.33 (2H, t, J 6.5Hz), 1.29 (9H, s),  1.16 (3H, s).  C22H29N2O8PS2についてのESI MS 計算値544.6, 実測値543.6 [M-H]+.  31P NMR (202MHz, CD3OD) δ-0.46 (s)
【０１９４】
化合物8B:1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ7.84 (1H, dd, J 8.0, 1.0Hz), 7.58 (1H, d, J 8.0Hz), 7.29-7.25 (2H, m), 7.21 (1H, m), 6.09 (1H, s), 5.74 (1H, d, J 8.0Hz), 4.59-4.50 (2H, m), 4.43-4.35 (3H, m), 4.30 (1H, d, J 10.0Hz), 3.33 (2H, t, J 6.5Hz), 1.29 (9H, s),  1.26 (3H, s).  C22H29N2O8PS2についてのESI MS 計算値544.6, 実測値543.6 [M-H]+.  31P NMR (202MHz, CD3OD) δ1.2 (s)
【０１９５】
化合物9
【０１９６】
【化１８】
2018503606.tif 000024
【０１９７】
乾燥ジクロロメタン(0.5mL)中のビス-(N,N-ジイソプロピルアミノ)-クロロホスフィン(0.27g、1.0mmol)の溶液を2-Me-2'-F-シチジン(0.26g、1.0mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.19mL、1.1mmol)の乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(2.0mL)の溶液に-78℃で滴下添加した。反応混合物を室温まで温め、1時間撹拌した。乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(0.5mL)中の4,5-ジシアノイミダゾール(0.11g、1.0mmol)の溶液を加え、得られた混合物をさらに1時間撹拌した。乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(1.0mL)中のアルコール1(0.24g、1.0mmol)及び4,5-ジシアノイミダゾール(0.11g、1.0mmol)の溶液を加え、得られた混合物を一晩撹拌した。t-ブチルヒドロペルオキシド(0.2mL、デカン中5-6M)の溶液を加え、混合物を30分間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去して残渣を得、これをHPLC精製(アセトニトリル/H2O、20%-60%、30分)に供して、0.023g(47%)の極性が高い異性体9A及び0.017gの極性が低い異性体9Bを白色粉末として得た(7%)。
【０１９８】
化合物9A:1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ7.86 (1H, dd, J 8.0, 1.0Hz), 7.73 (1H, m), 7.32-7.28 (2H, m), 7.23 (1H, td, J 7.0, 1.0Hz), 6.30 ( 1H, d, J 18.0Hz), 6.20 (1H, s, br), 4.64 (1H, s, br), 4.44-4.25 (2H, m), 4.44 (1H, t, J 7.0Hz), 4.43 (1H, t, J 7.0Hz), 4.09-4.01 (1H, m), 3.35 (2H, t, J 7.0Hz), 1.40 (3H, d, J 20.0Hz), 1.30 (9H, s).  C22H29FN3O6PS2についてのESI MS 計算値545.6, 実測値544.4 [M-H]+.  31P NMR (202MHz, CD3OD) δ1.09 (s)
【０１９９】
化合物9B:1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ7.85 (1H, d, J 1.0Hz), 7.84 (1H, s), 7.30-7.25 (2H, m), 7.21 (1H, td, J 7.0, 1.0Hz), 6.31 ( 1H, d, J 18.0Hz), 6.13 (1H, d, J 8.0Hz), 4.60 (1H, s, br), 4.50-4.30 (2H, m), 4.43 (1H, t, J 7.0Hz), 4.40 (1H, t, J 7.0Hz), 3.31 (2H, t, J 7.0Hz), 1.45 ( 3H, d, J 20.0Hz), 1.30 (9H, s).  C22H29FN3O6PS2についてのESI MS 計算値545.6, 実測値544.5 [M-H]+.  31P NMR (202MHz, CD3OD) δ0.63(s)
【０２００】
化合物10
【０２０１】
【化１９】
2018503606.tif 000025
【０２０２】
乾燥ジクロロメタン(0.5mL)中のビス-(N,N-ジイソプロピルアミノ)-クロロホスフィン(0.27g、1.0mmol)の溶液を乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(2.0mL)中の2-Me-2'-OH-シチジン(0.26g、1.0mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.19mL、1.1mmol)の溶液に-78℃で滴下添加した。反応混合物を室温まで温め、1時間撹拌した。乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(0.5mL)中の4,5-ジシアノイミダゾール(0.11g、1.0mmol)の溶液を加え、得られた混合物をさらに1時間撹拌した。乾燥N,N-ジメチルホルムアミド(1.0mL)中のアルコール1(0.24g、1.0mmol)及び4,5-ジシアノイミダゾール(0.11g、1.0mmol)の溶液を加え、得られた混合物を一晩撹拌した。t-ブチルヒドロペルオキシド(0.2mL、デカン中5-6M)の溶液を加え、混合物を30分間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去して残渣を得、これをHPLC精製(アセトニトリル/H2O、20%-60%、30分)に供して、0.042g(47%)の極性が高い異性体10A及び0.007gの極性が低い異性体10Bを白色粉末として得た(9%)。
【０２０３】
化合物10A:1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ7.86 (1H, dd, J 8.0, 1.0Hz), 7.70 (1H, d, J 6.5Hz), 7.32-7.28 (2H, m), 7.23 (1H, td, J 7.0, 1.0Hz), 6.20 ( 1H, d, J 7.0Hz), 6.05 (1H, s), 4.62 (1H, d, J 22.0Hz), 4.41 (1H, t, J 6.5Hz), 4.40 (1H, t, J 6.5Hz), 4.35-4.25 (2H, m), 3.86 (1H, s), 3.34 (2H, t, J 6.5Hz), 1.29 (9H, s), 1.18 (3H, s); C22H30N3O7PS2についてのESI MS 計算値543.6, 実測値542.5 [M-H]+; 31P NMR (202MHz, CD3OD) δ-0.50 (s)
【０２０４】
化合物10B:1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ 7.84 (1H, dd, J 8.0, 1.0Hz), 7.84 (1H, s), 7.30-7.27 (2H, m), 7.21 (1H, td, J 7.5, 1.0Hz), 6.15-6.07 (2H, m), 4.60-4.52 (2H, m), 4.48-4.39 (3H, m), 4.26 (1H, d, J 9.0Hz), 3.34 (2H, t, J 6.5Hz), 1.30 (9H, s), 1.26 (3H, s); C22H30N3O7PS2についてのESI MS 計算値543.6, 実測値542.9 [M-H]+; 31P NMR (202MHz, CD3OD) δ1.25 (s)
【０２０５】
化合物16
【０２０６】
【化２０】
2018503606.tif 000026
【０２０７】
化合物13の合成
【０２０８】
【化２１】
2018503606.tif 000027
【０２０９】
(3R,4S,5R)-5-((ベンゾイルオキシ)メチル)-3-メチルテトラヒドロフラン-2,3,4-トリチルトリベンゾエート11(2.9g、5mmol)及び2,6-ジアミノプリン12(0.83g、5.5mmol)の無水アセトニトリル(30mL)撹拌懸濁液に、-78℃でDBU(2.3mL、15.0mmol)を加え、続いてTMSOTf(3.8mL、20.0mmol)をゆっくり加えた。反応混合物を65℃に加熱し、一晩撹拌し、室温に冷却し、ジクロロメタン(200mL)で希釈した。得られた混合物を飽和NaHCO3水溶液で洗浄した。有機層を分離し、水層をジクロロメタン(2×20mL)で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。揮発性物質を減圧下で除去して残渣を得、これをISCOコンパニオン(2-10%メタノール/酢酸エチル)でフラッシュシリカゲルカラム精製して、1.5g(49%)の化合物13を白色固体として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3): δ8.15-8.17 (2H, m), 7.97-8.02 (4H, m), 7.77 (1H, s), 7.45-7.61 (5H, m), 7.32-7.37 (4H, m), 6.62 (1H, s), 6.53 (1H, d, J 6.5Hz), 5.91 (2H, s), 5.04-5.10 (3H, m), 4.82-4.86 (1H, m), 4.70-4.74 (1H, m), 1.62 (3H, s); C32H28N6O7についてのESI MS 計算値608.6, 実測値609.2 [M+H]+
【０２１０】
化合物14の合成
【０２１１】
【化２２】
2018503606.tif 000028
【０２１２】
THF(10mL)中の13(1.0g、1.64mmol)の溶液にBoc無水物(2.15g、9.86mmol)及びDMAP(0.040g、0.33mmol)を加え、混合物を24時間撹拌した。揮発性物質を減圧下で除去して残渣を得、これをISCOコンパニオン(0-40%酢酸エチル/ヘキサン)上でのフラッシュシリカゲルカラム精製に供し、1.2g(73%)の化合物14を白色固体として得た。1H NMR (500 Hz, CDCl3): δ8.37 (1H, s), 8.17 (2H, d, J 7.5Hz), 8.07 (2H, d, J 7.5Hz), 7.87 (2H, d, J 7.5Hz), 7.61- 7.55 (2H, m), 7.52- 7.47 (3H, ), 7.43 (2H, t, J 7.5Hz), 7.27 (2H, t, J 7.5Hz), 6.74 (1H, s), 6.00 (1H, d, J 5.0Hz), 4.97-4.91 (2H, m), 4.73 (1H, q, J 5.0Hz), 1.58 (3H, s), 1.43 (18H, s), 1.37 (18H, s)
【０２１３】
化合物15の合成
【０２１４】
【化２３】
2018503606.tif 000029
【０２１５】
メタノール(40mL)中の14(1.15g、1.14mmol)の溶液にナトリウムメトキシド(4.37M、0.23mL、1.0mmol)の溶液を加え、混合物を30分間撹拌した。反応混合物をDowex(登録商標)レジン(H+型)をpH=7.0まで少しずつ加えて中和し、レジンを濾過し、メタノールで洗浄した。濾液を蒸発させて残渣を得、これをISCOコンパニオン(30-100%酢酸エチル/ヘキサン)でのフラッシュシリカゲルカラム精製に供して、0.65g(73%)の化合物15を白色固体として得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ9.09 (1H, s), 6.19 (1H, s), 4.22 (1H, d, J 8.8Hz), 4.03-4.11 (2H, m), 3.89 (1H, dd, J 12.5, 3.0Hz), 1.41 (18H, s), 0.92 (3H, s); C31H48N6O12についてのESI MS 計算値696.7, 実測値697.4 [M+H]+
【０２１６】
化合物16の合成
【０２１７】
【化２４】
2018503606.tif 000030
【０２１８】
乾燥ジクロロメタン(2.0mL)中のビス-(N,N-ジイソプロピルアミノ)-クロロホスフィン(0.25g、0.94mmol)の溶液を15(0.65g、0.94mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.176mL、1.03mmol)の乾燥ジクロロメタン(5.0mL)の溶液に-78℃で滴下添加した。反応混合物を室温に温め、1時間撹拌した。乾燥アセトニトリル(3mL)中の4,5-ジシアノイミダゾール(0.11g、0.94mmol)の溶液を加え、得られた混合物を1時間撹拌した。これに、アセトニトリル(5mL)中のアルコール1(0.23g、0.94mmol)及び4,5-ジシアノイミダゾール(0.11g、0.94mmol)の溶液を添加し、得られた混合物を一晩撹拌した。t-ブチルヒドロペルオキシド溶液(0.19mL、デカン中5-6M)を加え、混合物をさらに30分間撹拌した。揮発物を真空中で除去して残渣を得、これを4mLのTFA/DCM(1:1)混合物で処理した。得られた混合物を2時間撹拌した。揮発性物質を真空中で除去して残渣を得、これをHPLC精製(アセトニトリル/H2O、20%-55%、30分)に供して、0.022gの極性が高いジアステレオマー16A及び0.008gの極性が低いジアステレオマー16Bを白色固体として得た。
【０２１９】
化合物16A:1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ7.87 (1H, dd, J 8.0, 1.0Hz), 7.84 (1H, s), 7.31 (1H, d, J 7.5Hz), 7.28 (1H, td, J 7.5, 1.0Hz), 7.22 (1H, td, J 7.5, 1.0Hz), 5.97 ( 1H, s),  4.66-4.60 (1H, m), 4.48-4.32 (5H, m), 3.36 (2H, t, J 6.5Hz), 1.27 (9H, s), 1.00 (3H, s); C23H31N6O6PS2についてのESI MS 計算値582.6, 実測値581.6 [M-H]+; 31P NMR (202MHz, CD3OD) δ-0.28 (s)
【０２２０】
化合物16B:1H NMR (500 MHz, CD3OD): δ7.86 (1H, d, J 8.0Hz), 7.77 (1H, s), 7.32 (1H, d, J 7.5Hz), 7.28 (1H, td, J 7.5, 1.0Hz), 7.21 (1H, td, J 7.5, 1.0Hz), 5.95 ( 1H, s),  4.66-4.58 (1H, m), 4.48-4.32 (5H, m), 3.36 (2H, t, J 7.0Hz), 1.27 (9H, s), 1.00 (3H, s); C23H31N6O6PS2についてのESI MS 計算値582.6, 実測値581.5 [M-H]+; 31P NMR (202MHz, CD3OD) δ2.0(s)
【０２２１】
化合物18
【０２２２】
【化２５】
2018503606.tif 000031
【０２２３】
化合物18の2つのジアステレオマーは、TBDMS保護ジスルフィド17を用いた化合物7について報告したのと同じ手順を使用して合成し、続いてTHF中のTBAFを用いて脱保護した。化合物18A:C23H30FN2O8PS2についてのESI MS  計算値576.6,実測値577.5[M+H]+、化合物18B:C23H30FN2O8PS2についてのESI MS  計算値576.6、実測値577.3[M+H]+。
【０２２４】
化合物19
【０２２５】
【化２６】
2018503606.tif 000032
2018503606.tif 000033
【０２２６】
化合物20の合成
シチジン(10.0g、41.1mmol)をピリジン(2×20mL)と共沸させ、40.0mLのピリジンに懸濁させた。この懸濁液にテトライソプロピルジシロキサン二塩化物(14.3g、45.2mmol)を15分かけて滴下添加した。得られた懸濁液を室温で約16時間撹拌した。反応混合物を注意深く水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をヘキサンで粉末にして化合物20を白色固体として得た。C21H39N3O6Si2についてのESI MS  計算値485.7、実測値486.2[M+H]+。
【０２２７】
化合物21の合成
化合物20を200mLのエタノールに溶解し、20.0mLの無水酢酸で処理した。反応混合物を加熱還流し、3時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。得られた残渣を氷浴中で0℃に冷却し、飽和NaHCO3で処理し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗混合物を酢酸エチル/ヘキサン溶媒系(Combi Flash Rf Instrumentで0-70%勾配)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、9.0gの生成物21を白色固体として得た(2ステップ全体で42%)。C23H41N3O7Si2についてのESI MS  計算値527.7、実測値528.3[M+H]+。
【０２２８】
化合物22の合成
200mLのジクロロメタン中の化合物21(8.6g、16.3mmol)の溶液を氷浴で0℃に冷却し、デス-マーチンペルヨージナン(17.4g、40.8mmol)で処理した。得られた混合物を室温で約16時間撹拌し、ジエチルエーテルで希釈した。溶液を飽和NaHCO3及び10%チオ硫酸ナトリウムの混合物(v/v=1:1)で洗浄した。有機層を無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。粗混合物を酢酸エチル/ヘキサン溶媒系(Combi Flash Rf Instrumentで0-60%勾配)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、6.0gの生成物22を淡黄色泡状物(72%)として得た。
C23H39N3O7Si2についてのESI MS  計算値525.7、実測値526.2[M+H]+。
【０２２９】
化合物23の合成
150mLのテトラヒドロフラン中の臭化メチルトリフェニルホスホニウム(16.2g、45.4mmol)の懸濁液にKHMDS溶液(トルエン中0.5M、87.0mL、43.3mmol)をアルゴン下で滴下添加した。反応混合物を室温で30分間攪拌し、氷浴中で0℃に冷却し、40.0mLのテトラヒドロフラン中の化合物22(6.0g、11.4mmol)の溶液で滴下して処理した。得られた混合物を室温に温め、4時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗混合物を酢酸エチル/ヘキサン溶媒系(Combi Flash Rf Instrumentで0-50%勾配)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、4.7gの化合物23を白色泡状物(79%)として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3):  δ9.96 (1H, s), 8.0 (1H, d, J 7.5Hz), 7.43 (1H, d, J 7.5Hz), 6.61 (1H, d, J 1.0Hz), 5.71 (1H, d, J 1.5Hz), 5.39 (1H, t, J 2.0Hz), 4.81 (1H, dd, J 9.0, 1.0Hz), 4.2 (1H, dd, J 13.5, 1.5 Hz), 4.05 (1H, dd, J 13.0, 2.5Hz), 3.73 (1H, dd, J 9.0, 4.5Hz), 2.27 (s, 3H), 1.12-1.02 (m, 28H); C24H41N3O6Si2についてのESI MS 計算値523.7, 実測値524.2 [M+H]+
【０２３０】
化合物25
【０２３１】
【化２７】
2018503606.tif 000034
【０２３２】
N,N-ビス(3,5-ジ-tert-ブチルサリチリデン)-1,1,2,2-テトラメチルエチレンジアミン(24、0.73g、1.3mmol)を10.0mLのエタノールに懸濁させた。得られた懸濁液を80℃に加熱し、アルゴンバルーン下で5分間撹拌した。酢酸コバルト(II)(0.24g、1.3mmol)を加え、反応混合物を80℃でさらに2時間撹拌した。紅赤色の懸濁液を氷浴中で室温まで冷却し、濾過した。回収した赤色固体を真空下で乾燥させて0.70gの化合物25(87%)を得た。
【０２３３】
【化２８】
2018503606.tif 000035
【０２３４】
化合物26の合成
化合物23(4.7g、9.0mmol)及び化合物25(0.19g、0.3mmol)を4-メチルベンゼンスルホニルアジド(28.4g、144mmol)に溶解し、反応混合物を室温で5分間撹拌した。30.0mLのエタノール中のフェニルシラン(1.17g、10.8mmol)の溶液を滴下添加し、反応混合物をさらに40分間撹拌させた。反応物をブラインでクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗混合物を酢酸エチル/ヘキサン溶媒系(Combi Flash Rf Instrumentで0-30%勾配)を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、3.34gの生成物26を淡黄色固体(66%)として得た。1H NMR (500 MHz, CDCl3):  δ9.78 (1H, br), 8.18 (1H, d, J 7.5Hz), 7.43 (1H, d, J 7.5Hz), 5.9 (1H, s), 4.24 (1H, d, J 13.5Hz), 4.17-4.12 (m, 2H), 4.04 (1H, d, J 13.5Hz), 2.27 (s, 3H), 1.40 (s, 3H), 1.12-1.02 (m, 28H); C24H42N6O6Si2についてのESI MS 計算値566.8, 実測値567.3 [M+H]+
【０２３５】
化合物27の合成
化合物26(3.34g、5.9mmol)を25.0mLのテトラヒドロフランに溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウム(THF中1.0M、11.8mL、11.8mmol)の溶液で処理した。反応混合物を室温で1時間撹拌し、真空中で濃縮した。得られた残渣を30%アンモニア水(15.0mL)とメチルアミン(15.0mL)の混合物に溶解し、3時間撹拌し、真空中で濃縮した。粗混合物をメタノール/ジクロロメタン系(Combi Flash Rf Instrumentで0-20%勾配)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、1.2gの生成物27を白色固体(72%)として得た。1H NMR (500 MHz, CD3OD):  δ8.56 (1H, d, J 8.0Hz), 6.09 (1H, d, J 7.5Hz), 5.86 (1H, s), 4.09 (1H, d, J 9.5Hz), 4.01-3.96 (2H, m), 3.80 (1H, d, J 13.0 Hz), 1.39 (3H, s); C10H14N6O4についてのESI MS 計算値282.2, 実測値283.5 [M+H]+
【０２３６】
化合物28
【０２３７】
【化２９】
2018503606.tif 000036
【０２３８】
10.0mLの無水THF(4Åモレキュラーシーブ上)中の2-クロロフェニルホスホロジクロリデート(2.0g、8.3mmol)の溶液を氷浴で冷却し、5.0mLのTHF中の化合物1(2.0g、8.3mmol)をアルゴン下で加え、続いて2,6-ルチジン(0.89g、8.3mmol)を滴下添加した。反応混合物を室温に温め、さらに3時間撹拌した。懸濁液を濾過し、濾液を真空中で濃縮し、残渣を酢酸エチル/ヘキサン溶媒系(Combi Flash Rf Instrumentで0-30%勾配)を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、2.5gの生成物28を無色油状物(68%)として得た。
1H NMR (500 MHz, CDCl3):  δ7.81 (1H, d, J 8.0Hz), 7.37 (1H, d, J 8.0Hz), 7.29-7.07 (6H, m), 4.41 (2H, t, J 7.0Hz), 4.12 (2H, t, J 7.0Hz), 1.27 (9H, s)
【０２３９】
【化３０】
2018503606.tif 000037
【０２４０】
化合物29の合成
1.0mLの無水THF(4Åモレキュラーシーブ上)中の化合物27(0.10g、0.35mmol)の溶液を氷浴で冷却し、1.0mLの1-メチルイミダゾールを添加した。反応混合物を、透明な反応溶液が形成するまで15分間撹拌し、続いて1.0mLのTHF中の化合物28(0.17g、0.39mmol)の溶液を滴下添加した。反応混合物を室温に温め、さらに2時間撹拌し、反応を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和塩化アンモニウム及びブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をメタノール/ジクロロメタン溶媒系(Combi Flash Rf Instrumentで0〜15%勾配)を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、0.050gの生成物29を無色油状物(20%)として得た。C28H34ClN6O7PS2についてのESI MS  計算値697.1、実測値697.8[M+H]+。
【０２４１】
化合物30の合成
1.0mLの無水THF(4Åモレキュラーシーブ上)中の化合物29(0.025g、0.035mmol)の溶液を氷浴で冷却し、カリウムt-ブトキシド(0.008g、0.071mmol)を一度に加えた。反応混合物を室温に温め、さらに15分間撹拌させた。反応を0℃で飽和塩化アンモニウムでクエンチし、減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、無水Na2SO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。ジアステレオ異性体30A及び30Bの粗混合物を精製することなく次のステップで使用した。C2H29N6O6PS2についてのESI MS  計算値568.6、実測値569.4[M+H]+。
【０２４２】
化合物19の合成
THF/水(4:1、v/v)の1.0mL混合物中の化合物30Aと30Bの溶液に、トリフェニルホスフィン(0.009g、0.035mmol)を加え、反応混合物を室温で16時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をメタノールで希釈し、分取HPLC(C18カラム、アセトニトリル/H2O/0.1%TFA)により精製して、0.004gの生成物19A(極性がより高い)及び0.001gの生成物19B(極性の低い)を白色固体として得た。
【０２４３】
化合物19A:1H NMR (500 MHz, CD3OD):  δ7.87 (1H, d, J 7.5Hz), 7.73 (1H, m), 7.33-7.23 (3H, m), 6.15-6.13 (2H, m), 4.72 (1H, dd, J 23, 4.5Hz), 4.47 (2H, m), 4.32 (2H, m), 4.21 (1H, m), 3.36 (2H, m), 1.30 (9H, s), 1.25 (3H, s); C22H31N4O6PS2についてのESI MS 計算値542.6, 実測値543.2 [M+H]+; 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ -7.07 (s)
【０２４４】
化合物19B:1H NMR (500 MHz, CD3OD):  δ7.85 (1H, d, J 7.5Hz), 7.70 (1H, m), 7.30-7.20 (3H, m), 6.19 (1H, m), 6.03 (1H, m), 4.68-4.65 (3H, m), 4.48-4.42 (3H, m), 3.31 (2H, m), 1.33 (3H, s), 1.30 (9H, s); 31P NMR (202 MHz, CDCl3) δ -4.38 (s)
【０２４５】
化合物31
シチジンファルマコフォアは、脱アミノプロセスを介してウリジンに代謝されることが知られている。この変換は、シチジンファルマコフォアの薬理学的転帰を損なう可能性がある。一実施形態において、代謝活性を減速させ又は停止さえする重原子アプローチを採用することによって、例えば、15Nをシチジン塩基に挿入することによって、この代謝負担を軽減することができる。
【０２４６】
【化３１】
2018503606.tif 000038
【０２４７】
化合物31は、化合物7について記載した調製と同様の手順を用いて調製することができる。
【０２４８】
以下の化合物は、本明細書に記載されている方法に従って調製することができる。
【０２４９】
【化３２】
2018503606.tif 000039
2018503606.tif 000040
【０２５０】
又はその医薬として許容される塩もしくはリンジアステレオマー。
【０２５１】
コンジュゲート
細胞浸透性ペプチド(タンパク質導入ドメイン)の合成
ペプチド合成:
合成:Rinkアミドポリスチレンレジン(0.080g、0.61mmol/g)を反応容器に添加し、ジメチルホルムアミド(5容量)中で7分間3回膨潤させた。各回、窒素バブリングを行い、次に排水する。ペプチドのアセンブリは、以下のサイクルを使用し、標準的なFmoc化学を採用して行った:
・ジメチルホルムアミド(DMF)中の20%ピペリジンによるFmoc脱保護、3×4分間、
・レジンをDMFで6×1分間、洗浄した。
・カップリングは5当量の保護されたアミノ酸、15当量のN-メチルモルホリン(NMM)、及び5当量のHCTUを用いた。カップリング溶液を加えた後、反応を2×20分間進行させた。
・カップリングの完了時に、レジンをDMFで6×1分間、洗浄した。
・最終アセンブリステップについて、カイザー(ニンヒドリン)試験によって確認されるように、N末端に、DMF中の5当量のFmoc-6-ヒドラジノニコチン酸、5当量のHATU及び15当量のNMMを加え、反応が完了するまで(約1時間)混合することによってキャッピングした。DMF中の20%ピペリジンの3×4分間によりFmocを除去した、並びに
・完成したレジン結合ペプチドをDMFで3回、ジクロロメタン(DCM)で3回洗浄し、次いで真空下で乾燥させた。
【０２５２】
切断:以下の溶液:トリフルオロ酢酸/ジチオスレイトール/水/アセトン/トリイソプロピルシラン(10ml、90/3/2/3/2)を用いて、2時間撹拌しながら、ペプチドをレジンから切断/脱保護した。レジンを中程度のフリット、シリンジフィルターを介して濾過し、純粋なトリフルオロ酢酸(TFA)で2回洗浄した。濾液を合わせ、蒸発により体積を半分に減らした。TFA溶液を撹拌し、4倍量の氷冷エーテルをゆっくりと加えて、粗ペプチドを沈殿させた。沈殿した粗ペプチドを濾過により回収した。
【０２５３】
精製:粗物質を、Phenomenex Luna C18(100×4.6mm 5μ)カラムを使用して、20分かけて15-75%B(A =0.1%トリフルオロ酢酸/水、B=0.1%トリフルオロ酢酸/アセトニトリル)を使用するLC/MSによって分析した。調製した細胞透過性ペプチドを表1に列挙する。
【０２５４】
ターゲティング部分の合成
GalNAc(NAG)リガンド合成:
【０２５５】
【化３３】
2018503606.tif 000041
【０２５６】
D-ガラクトサミンペンタアセテート(NAG2)の調製。D-ガラクトサミン(25.0g、116mmol)を無水ピリジン(250mL)に懸濁し、不活性雰囲気下で0℃に冷却した。無水酢酸(120mL、1160mmol)を2時間かけて加えた。一晩撹拌した後、反応混合物を真空中で濃縮した。メタノールを添加すると、白色固体が沈殿し、濾過により回収して、所望の生成物を得た(42.1g、収率93%)。1H NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 5.69 (d, 1H, J 9.0 Hz), 5.40 (m, 1H), 5.37 (d, 1H, J 3.0 Hz), 5.08 (dd, 1H, J 3.0 Hz, 11 Hz), 4.44 (dt, 1H, J 9.5 Hz, 11 Hz), 4.17 (dd, 1H, J 7.0 Hz, 11.5 Hz), 4.11 (dd, 1H, , J 7.0 Hz, 11.5 Hz), 4.01 (t, 1H, J 7.0 Hz), 2.17 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.94 (s, 3H), 1.57 (s, 3H).
【０２５７】
ベンジル5-ヒドロキシペンタノエート(NAG5)の調製。水(100mL)中のデルタ-バレロラクトン(10.0g、100mmol)及びNaOH(4.00g、100mmol)の溶液を70℃で一晩撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、真空中で濃縮して白色固体のNAG4を得た。この固体をアセトン(100mL)に懸濁し、臭化ベンジル(20.5g、120mmol)及び臭化テトラブチルアンモニウム(1.61g、0.50mmol)と一緒に一晩還流した。アセトンを真空中で除去して油性残渣を得、これをEtOAcに溶解し、飽和NaHCO3(水溶液)及びブラインで洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥させ、真空中で濃縮して油状生成物NAG5を得た(17.1g、収率82%)。1H NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 7.35 (m, 5H), 3.64 (q, 2H, J 6 Hz, 11.5 Hz), 2.41 (t, 2H, J 7.5 Hz), 1.75 (m, 2H), 1.60 (m, 2H), 1.44 (t, 1H, J 6 Hz).
【０２５８】
ベンジルオキシカルボニルブチル2-デオキシ2-N-アセチル-3,4,6-トリ-O-アセチル-β-D-ガラクトピラノシド(NAG7)の調製-方法A。不活性雰囲気下、TMSOTf(8.56g、38.4mmol)を周囲温度でDCE(100mL)中のNAG2(10.0g、25.6mmol)の溶液に加えた。混合物を55℃で2時間撹拌し、熱を除き、一晩撹拌した。反応混合物を氷冷飽和NaHCO3(水溶液)上に注ぎ、CH2Cl2で抽出した。有機層をNa2SO4上で乾燥させ、真空中で濃縮してシロップNAG6を得た。DCE(60mL)中の溶液NAG6にアルコールNAG5(8.00g、38.4mmol)及びモレキュラーシーブを入れた。混合物を不活性雰囲気下に置き、TMSOTf(2.85g、12.8mmol)で処理し、室温で一晩撹拌した。混合物を氷冷飽和NaHCO3(水溶液)上に注ぎ、CH2Cl2で抽出した。有機層をNa2SO4上で乾燥させ、真空中で濃縮してシロップを得た。この粗物質をSiO2ゲルクロマトグラフィーで精製し、グリコシドNAG7(3.3g、収率24%)を得た。1H NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 7.35 (m, 5H), 5.98 (d, 1H, J 7.0 Hz), 5.57 (m, 1H), 5.34 (d, 1H, J 3.0 Hz), 5.25 (dd, 1H, J 3.0 Hz, 11 Hz), 5.10 (s, 2H), 4.63 (d, 1H, J 8.5 Hz), 4.11 (m, 2H), 3.95 (m, 1 H), 3.88 (m, 2H), 3.49 (m, 1H), 2.37 (m, 2H), 2.13 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.70 (m, 2H), 1.61 (m, 2H).
【０２５９】
ベンジルオキシカルボニルブチル2-デオキシ2-N-アセチル-3,4,6-トリ-O-アセチル-β-D-ガラクトピラノシド(NAG7)の調製-方法B。DCE(50mL)中のNAG2(5.00g、12.8mmol)及びアルコールNAG5(5.33g、25.6mmol)にSc(OTf)3(0.44g、0.90mmol)を一度に加えた。混合物を不活性雰囲気下に置き、3時間還流した。冷却した後、混合物をCH2Cl2で希釈し、飽和NaHCO3(水溶液)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、真空中で濃縮した。SiO2ゲルクロマトグラフィーによる精製により、グリコシドNAG7(5.53g、収率80%)を得た。
【０２６０】
カルボキシブチル2-デオキシ2-N-アセチル-3,4,6-トリ-O-アセチル-β-D-ガラクトピラノシド(NAG8)の調製。グリコシドNAG7(1.50g、2.41mmol)のEtOH(25mL)溶液を真空下で脱気し、アルゴンでパージした。パラジウム触媒(活性炭上の10重量%、0.50g)を一度に加え、混合物を真空下で脱気し、アルゴンでパージした。不均一混合物にシクロヘキセン(25mL)を入れ、6時間還流した。冷却すると、触媒は濾過によって除去され、母液は真空中で濃縮された。粗製物をSiO2ゲルクロマトグラフィーで精製して、白色泡状のNAG8(0.76g、収率70%)を得た。1H NMR (CDCl3, 500 MHz): δ 5.72 (d, 1H, J 8.5 Hz), 5.35 (d, 1H, J 3.5 Hz), 5.26 (dd, 1H, J 3.5 Hz, 11.5 Hz), 4.67 (d, 1H, J 8.5 Hz), 4.17 (dd, 1H, J 6.5 Hz, 11.5 Hz), 4.12 (dd, 1H, 6.5 Hz, 11.5 Hz), 4.00 (dt, 1H, J 8.5 Hz, 11.5 Hz), 3.92 (m, 2H), 3.53 (m, 1H), 2.39 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.71 (m, 2H), 1.65 (m, 2H).
【０２６１】
三価GalNAcターゲティング部分(NAG21)の合成
【化３４】
2018503606.tif 000042
【０２６２】
トリス-(カルボキシエトキシメチル)-メチルアミド-ドデカンジオエートメチルエステル(NAG14)の調製。HATU(122mg、0.50mmol)及びDIEA(218μL、1.25mmol)で活性化されたドデカン二酸メチルエステル(211mg、0.42mmol)のDMF(2mL)溶液に、トリスリンカーNAG12を加えた。1時間後、反応混合物を真空中で濃縮し、SiO2ゲルクロマトグラフィーで精製してNAG13(214mg、収率70%)を得た。MALDI-TOF質量計算値C38H69NO12:731.48、実測値:755.10[M+Na]。トリスt-ブチルエステルNAG13をTFA:TIPS:DCM(9:0.25:1)カクテル(10.25mL)で4時間加水分解し、真空中で濃縮してトリス酸NAG14を得た。MALDI-TOF質量計算値C26H45NO12:563.29、実測値:565.33[M+H]。
【０２６３】
トリス-(アミノプロパミド-エトキシメチル)-メチルアミド-ドデカンジオエートメチルエステル(NAG16)の調製。DMF(4mL)中のHATU(557mg、1.35mmol)及びDIEA(470μL、2.70mmol)で活性化させたトリス酸NAG14(230mg、0.41mmol)の溶液に、モノBoc 1,3-ジアミノプロパン(250mg、1.44mmol)を加えた。1時間後、反応物を真空中で濃縮し、SiO2ゲルクロマトグラフィーで精製して、NAG15(335mg、収率79%)を得た。MALDI-TOF質量計算値C50H93N7O15:1031.67、実測値:1056.40[M+Na]。トリスBocリンカーNAG15をTFA:TIPS:DCM(9:0.25:1)カクテル(10.25mL)で1時間処理し、真空中で濃縮してトリスアミンNAG16を得た。MALDI-TOF質量計算値C35H69N7O9:731.51、実測値:733.18[M+H]。
【０２６４】
トリス-GalNAc(NAG18)の調製:DMF(2mL)中のHATU(163mg、0.43mmol)及びDIEA(150μL、0.86mmol)で単糖NAG8(192mg、0.43mmol)を処理した。30分後、DMF(1mL)中のNAG16(80mg、0.11mmol)の溶液を加え、混合物を1時間撹拌した。粗混合物をSiO2ゲルクロマトグラフィーで精製して、NAG17(82mg、収率37%)を得た。質量計算値C92H150N10O39:2019.00、実測値:2041.85[M+Na]。THF:H2O(3:1)溶液(8mL)中のLiOH・H2O(34mg、0.81mmol)を用いた処理により、過アセチル化トリマーGalNAc(82mg、0.04mmol)を加水分解してNAG18を得た。MALDI-TOF質量計算値C73H130N10O30:1626.89、実測値:1634.52[M+Li]。
【０２６５】
【化３５】
2018503606.tif 000043
【０２６６】
アジド-Peg3三量体GalNAc(NAG21)の調製。GalNAc三量体カルボン酸NAG18(60mg、0.03mmol)、アジド-Peg3-アミンNAG20(45.6mg、0.21mmol)、TBTU(23.8mg、0.07mmol)、HOBt(11.5mg、0.03mmol)及びDIEA(34μL)をDMSO(0.5mL)に溶解し、2時間撹拌した。塩基を真空中で除去し、粗製物をRP-HPLCにより精製して、NAG21(24mg、44%)を得た。AP-ESI+質量計算値C81H146N14O32:1827.02、実測値:914.8[M+2H]2+。
【０２６７】
六価マンノースターゲティング部分(M9)の合成
【化３６】
2018503606.tif 000044
【０２６８】
Lys6-Peg24-アジド(M8)の調製。HCTUカップリング及び20%ピペリジン脱保護を用いて、Rinkアミドレジン(0.61mmol/g)上の標準Fmoc化学により、ペプチドスキャホールドを合成した。手短に言うと、ペプチドM1は、100μmolスケールの自動合成機で調製された。Lys(Mtt)の脱保護後、アジド-Peg24酸をカップリングさせてM7を得た。カクテルTFA:TIPS:H2O(92.5:2.5:5)を使用してレジンからペプチドを放出させ、M8(167.0mg)を得た。MALDI TOF質量計算値C87H174N16O31:1940.4、実測値:1941.1。
【０２６９】
Man6-Lys6-Peg24-アジド(M9)の調製。DMSO(2mL)中のペプチドスキャホールドM4(167.0mg)をマンノースイソチオシアネート及びNMM(500μL)で処理した。反応物を37℃で撹拌し、所望の生成物への完全な変換が達成されるまでMALDI TOFによってモニターした(合計58mgのマンノースイソチオシアネートを添加した)。最終生成物をRP-HPLCにより精製して、M9(22mg)を得た。MALDI-TOF質量計算値C165H264N22O67S6:3820.37、実測値:3843.79[M+Na]。
【０２７０】
三価マンノースターゲティング部分(M15)の合成
【０２７１】
【化３７】
2018503606.tif 000045
【０２７２】
アジドトリ-マンノース(M15)の調製:D-マンノースをピリジン中Ac2Oで一晩過アセチル化した。ロータリーエバポレーターで濃縮し、続いてPhMeと共沸させると、ペンタアセテート(M8)が定量的収率で得られた。市販のアジド-Peg2アルコールの存在下でのSc(OTf)3によるM8の活性化により、アジド-Peg2マンノシド(M9)が得られ、これを定量的にアミン(M10)に水素化した。その間、トリスリンカーのメチルエステル(NAG13)を加水分解して選択的に酸(M11)にした。TBTU活性化によって市販のアジドPeg3アミンをM11にカップリングさせると、アジドトリスリンカー(M12)が得られた。トリ-t-ブチルエステルM12をTFAで処理すると、三酸M13が得られた。M10のM13へのカップリングはHATUによって媒介され、粗混合物は全体的に脱アセチル化されて、アジドトリ-マンノース(M15)を得た。
【０２７３】
六価マンノースターゲティング部分(M30)の合成
【０２７４】
【化３８】
2018503606.tif 000046
【０２７５】
N-カルボベンジルオキシトリス-(t-ブトキシカルボエトキシメチル)-メチルアミド(M22)の調製:氷浴で冷却したCH2Cl2(12mL)中のNAG12(3.55g、7.02mmol)の溶液にCbz-Cl(PhMe中35%、7.3mL)及びTEA(3.9mL)を加えた。反応物を室温まで温め、一晩撹拌した。混合物をCH2Cl2で希釈し、飽和NaHCO3(水溶液)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、真空中で濃縮した。粗油状物をSiO2クロマトグラフィーで精製して、M22を得た(0.98g、収率22%)。AP-ESI+質量計算値C33H53NO11:639.4、実測値:662.4[M+Na]+。
【０２７６】
N-カルボベンジルオキシトリス-((2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-1-O-α-D-マンノピラノシル)-Peg3-アミドエトキシメチル)-メチルアミド(M24)の調製: CH2Cl2(5mL)中のトリス-t-ブチルエステルM22(0.97g、1.51mmol)及びTIPS(0.93mL、4.55mmol)をTFA(20mL)で5時間処理した。混合物を真空中で濃縮し、油状残渣をヘキサンで洗浄し、高真空下で乾燥してM23を得た。AP-ESI+質量計算値C21H29NO11:471.2、実測値:493.9[M+Na]+。
【０２７７】
DMF(5mL)中の粗M23を氷浴上で冷却し、HATU(0.62g、1.63)及びDIEA(0.65mL、3.71mmol)で処理した。20分間撹拌した後、DMF(5mL)中のM10(0.89g、1.86mmol)の溶液を加え、混合物を室温に温め、3時間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、粗製物をEtOAcに溶解し、飽和NaHCO3(水溶液)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、真空中で濃縮した。SiO2クロマトグラフィーで精製して、M24を得た(0.49g、収率62%)。MALDI-TOF質量計算値C81H122N4O44:1854.74、実測値:1850.14。
【０２７８】
トリス-((2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-1-O-α-D-マンノピラノシル)-Peg3-アミドエトキシメチル)-メチルアミン(M25)の調製:HOAc(0.2mL)とともにEtOAc(50mL)に溶解したM24(0.49g、0.26mmol)の溶液を真空下で脱気し、Ar(g)でパージした。活性炭上のPd(0.16g)を加え、混合物を排気し、次にH2(g)で3回パージした。反応物を2日間撹拌し、触媒を濾過により除去し、母液を真空中で濃縮して、M25を得た。AP-ESI+質量計算値C73H116N4O42:1720.7、実測値:1723.42。
【０２７９】
【化３９】
2018503606.tif 000047
【０２８０】
N-Fmocビス-イミノ-(アセトアミド-Peg4 t-ブチルエステル)(MA13)の調製。N-Fmocイミノ二酢酸であるMA11(107mg、0.30mmol)をMA12(212mg、0.66mmol)、DMF中のTBTU(193mg、0.60mmol)、HOBt(92mg、0.60mmol)、及びDIEA(209μL、1.20mmol)で2時間処理した。反応物を真空中で濃縮し、SiO2ゲルクロマトグラフィーで精製して、MA13(250mg、91%)を得た。AP-ESI+質量計算値C49H75N3O16:961.51、実測値:962.6[M+H]+、984.6[M+Na]+。
【０２８１】
【化４０】
2018503606.tif 000048
【０２８２】
アジド-Peg4-イミド-ビス-(アセトアミド-Peg4-t-ブチルエステル)(M27)の調製:CH2Cl2中のN-Fmoc MA13(0.72g、0.75mmol)をピペリジン(0.75mL)で1時間処理した。HPLCMSは、M26への完全な変換を示した。AP-ESI+質量計算値C34H65N3O14:739.4、実測値:740.5[M+H]+。混合物を真空中で濃縮し、PhMeと共沸させた。粗M26をDMF(5mL)中のアジドPeg4酸(0.44g、1.51mmol)、HATU(0.57g、1.51mmol)及びDIEA(0.52mL)の溶液と1時間反応させた。真空中で溶媒を除去した後、粗製物をEtOAcに溶解し、飽和NaHCO3(水溶液)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、真空中で濃縮した。SiO2クロマトグラフィーで精製して、M27を得た(0.71g、収率93%、2工程)。AP-ESI+質量計算値C45H84N6O19:1012.6、実測値:1013.6[M+H]+。
【０２８３】
アジド-Peg4-イミド-ビス-(トリマーマンノース)(M30)の調製:イミドリンカーM27(0.69g、0.68mmol)をTIPS(0.28mL、1.36mmol)及びTFA(10mL)で処理して、トリ酸M28を得た。AP-ESI+質量計算値C37H68N6O19:900.5、実測値:900.9[M+H]+、922.9[M+Na]+。揮発性物質を真空中で除去し、M28を高真空下で乾燥させた。0℃で、DMF(2mL)中のHATU(75mg、0.2mmol)及びDIEA(0.28mL)を用いて、二酸M28(82.0mg、0.09mmol)を活性化した。30分後、DMF(2mL)中のM25(0.26mmol)の溶液を加え、混合物を室温に温め、2時間撹拌した。RP-HPLCMSは、M29への完全な変換を示した。質量計算値C183H296N14O101:4305.84。MALDI-TOF実測値:4303.36 AP-ESI +実測値:1436.1[M+3H]3+、1077.3[M+4H]4+。反応物をCH2Cl2で希釈し、飽和NaHCO3(水溶液)で洗浄し、Na2SO4上で乾燥させ、真空中で濃縮した。MeOH(20mL)に溶解した粗製M29油(538mg)をNaOMe(MeOH中25重量%、0.5mL)で1時間処理した。RP-HPLCMSは、M30への完全な変換を示した。中和するためにDowex H+レジンの添加により反応をクエンチした。粗物質をHPLCで精製して、M30を得た(38.1mg、3工程全体で収率13%)。質量計算値C135H248N14O77:3297.59、MALDI-TOF実測値:3318.61[M+Na]+ AP-ESI +実測値:1100.0[M+3H]3+、825.3[M+4H]4+。
【０２８４】
送達ドメインのコンジュゲーション
銅-THPTA複合体の調製:
硫酸銅5水和物(CuSO4・5H2O)の5mM水溶液及びトリス(3-ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル)アミン(THPTA)の10mM水溶液を1:1(v/v)(モル比1:2)で混合し、室温で1時間放置する。この複合体は、例えば、以下のコンジュゲーションスキームに示される反応において、ヒューズゲン付加環化を触媒するために使用することができる。
【０２８５】
【化４１】
2018503606.tif 000049
【０２８６】
上記のコンジュゲーションスキームに示すように、送達ドメインは、例えば、付加環化反応(例えば、ヒューズゲン付加環化)を用いて、本発明のモノヌクレオチドに結合させることができる。ヒューズゲン付加環化は、銅-THPTA触媒を用いて行うことができる(上記参照)。
【０２８７】
以下のコンジュゲートは、本明細書に記載されている方法を用いて調製することができる。
【０２８８】
【化４２】
2018503606.tif 000050
【０２８９】
送達ドメインは、例えば、ターゲティング部分(例えば、GalNAc、マンノース、脂質等)、細胞浸透性ペプチド、又はエンドソームエスケープ部分であり得る。
【０２９０】
実施例2−HCV複製アッセイ
試験化合物の抗ウイルス活性は、表2a及び2bに列挙される野生型GT1b(Con1)、GT1a(H77)及びGT1b/2a、GT1b/3a、GT1b/4a及びGT1b/5a NS5Bキメラレプリコン、並びにNS5B変異レプリコンにおいて評価された。
【０２９１】
HCV NS5Bキメラレプリコンを作製するために、GT1bレプリコンを臨床分離株由来のGT2a、GT3a、GT4a及びGT5aのNS5B遺伝子で置換した、NS5B遺伝子を有する骨格として使用した。これらのNS5B遺伝子をGT1b骨格にクローニングし、配列決定により確認した。
【０２９２】
HCVレプリコン変異体は、部位特異的突然変異誘発(SDM)によって作製された。SDMをPCRによって行い、PCR断片を骨格レプリコン構築物に挿入した。挿入されたPCR断片及び変異体を配列決定によって確認した。
【０２９３】
すべてのレプリコンアッセイは、安定したフォーマット(GT1b及びGT1a)において、又はエレクトロポレーションによる一過性トランスフェクション(キメラ及び変異型レプリコン)によって、Huh-7細胞に基づくルシフェラーゼであった。標準的なHCVレプリコンアッセイのために、安定又は一過性にトランスフェクトされたHuh-7細胞を96ウェルプレート(5,000細胞/ウェル)に播種し、10%FBSを含有するDMEM中で培養し、37℃、5%CO2でインキュベートした。翌日、試験化合物をアッセイ培地で希釈し、適切なウェルに加えた(細胞培地中の最終DMSO濃度は0.5%であった)。アッセイ実施を確実にするために、アッセイ参照陽性対照を各実験に含めた。細胞を37℃、5%CO2下で72時間インキュベートし、その時点で細胞は依然としてサブコンフルエントであった。抗ウイルス活性は、供給業者(Promega)によって提供されたプロトコールに従って、Bright Gloキットを用いてレプリコンレポーターホタルルシフェラーゼ活性を測定することによって決定した。試験化合物の毒性をCytoTox-1細胞増殖アッセイ(Promega)により評価した。GraphPad Prismソフトウェアを用いて、半最大有効濃度(EC50)及び半最大毒性濃度(TC50)値を計算した。
【０２９４】
【表２】
2018503606.tif 000051
【０２９５】
【表３】
2018503606.tif 000052
【０２９６】
血清中のヌクレオシドホスホエステル安定性:
モノヌクレオチドのストック溶液をDMSO中に10mMで調製した。各ストック溶液の10μLを1mLの血清(マウス、ラット及びヒト)に添加して、100μMの最終化合物濃度を得た。サンプルを37℃でインキュベートした。選択された時点で100μLアリコートを取り出し、200μLの冷アセトニトリルに直接添加してタンパク質を沈殿させた。サンプルを4℃で30分間、14K RPMで遠心分離した。100μLの得られた上清を100μLの水+0.1%ギ酸と併せ、以下に記載するようにLCMS分析に供した。
LCMS条件は、以下の通りであった:
カラム:Phenomenex Kinetex 5u C18、2.1×50mm、
移動相A:水+0.1%ギ酸、
移動相B:アセトニトリル+0.1%ギ酸、
流速:0.4mL/分、
注入量:10μL、
勾配:5-95%、
2.5分でB、
検出:ESI陽性及び陰性m/z 250-800。
【０２９７】
抽出されたイオンクロマトグラムは、各ヌクレオチドプロドラッグのインタクトな理論MWのM+1H又はM-1Hイオンを用いて作製し、LCMS処理ソフトウェアを用いて積分ピーク面積を測定した。定量化は、適切な血清にスパイクされた化合物の外部標準曲線との比較によって行われ、上記のように処理された。データプロットをt=0の時点と比較して残っている化合物の比率として表した。
【０２９８】
この試験の結果を図2、3、及び4に示す。
【０２９９】
別の試験では、モノヌクレオチドのストック溶液をDMSO中に10mMで調製し、10μLの各ストック溶液を1mLのウシ胎児血清(FBS)に添加して、100μMの最終化合物濃度を得た。これらのサンプルを37℃の水浴中で24時間インキュベートし、100μLのアリコートをt=0、1、2、4、6及び24時間で取り出した。個々のサンプルを200μLの冷アセトニトリルで沈殿させ、破片を14K RPMで4℃で30分間、ペレット化し、上清を取り出し、以下に記載するようにLCMS分析に供した。
LCMS法:
カラム:Kinetex 5u C8 100A、2.1×50mm
移動相A:95:5のH2O:アセトニトリル、10mM酢酸アンモニウム、0.01%ギ酸
移動相B:95:5のアセトニトリル:H2O、10mM酢酸アンモニウム、0.01%ギ酸
流速:0.4mL/分
注入量:7.5μL
勾配:2.5分で0-100%B
検出:A254、m/z 100-1000(coneV=30)
【０３００】
各化合物について、M+1H及びアンモニウム付加物を用いて作製した、抽出されたイオンクロマトグラム。
【０３０１】
この試験の結果を表4、5、及び6に示す。
【０３０２】
【表４】
2018503606.tif 000053
【０３０３】
表4は、ソホスブビルのウシ胎児血清安定性データを示す。ESI+、EIC:m/z=530[M+H]+及び547[M+NH4+]。
【０３０４】
【表５】
2018503606.tif 000054
【０３０５】
表5は、化合物4のウシ胎児血清安定性データを示す。ESI+、EIC:m/z=654[M+H]+及び671[M+NH4+]。
【０３０６】
【表６】
2018503606.tif 000055
【０３０７】
表6は、化合物7Aのウシ胎児血清安定性データを示す。ESI+、EIC:m/z=547[M+H]+及び564[M+NH4+]。
【０３０８】
実施例3．インビトロ及びインビボでのヌクレオシド三リン酸の測定
インビトロ実験のために、約5,000,000個の単離された肝細胞をコラーゲン被覆したディッシュ上にプレーティングし、6時間接着させた。増殖培地中のヌクレオチドプロドラッグを含有する投薬溶液を細胞に最大24時間曝露した。ディッシュからこすり落として細胞を回収し、ペレット化し、氷上に維持した。インビボ実験のために、個々のマウス又はラットを生理食塩水の静脈内尾静脈注射により、又はPEG-メチルセルロース混合物の経口胃管栄養法(PO投薬)により、ヌクレオチドプロドラッグに曝露した。選択した時点で、動物をCO2過剰投与により安楽死させ、肝臓を切開し、200mgの肝臓切片を液体窒素中で急速冷凍した。
【０３０９】
上記の肝細胞又は肝臓組織を冷60%メタノール、10mM EDTA及び50mM酢酸アンモニウム中に懸濁し、ビーズ破壊を用いてホモジナイズした。破片をペレット化し、上清を下記のように陰イオン交換LCMSで直接分析した。
【０３１０】
LCMS条件は以下の通りであった:カラム-Thermo BioBasic AEX、5μm、2.1×100mm;移動相A-30:70のアセトニトリル:50mM酢酸アンモニウムpH=6、移動相B-30:70のアセトニトリル:10mM酢酸アンモニウムpH=10;流速-0.4mL/分;注入量:25-100μL;勾配:2分間で30-95%B、追加の3分間で95%Bに保持;検出:ESI陰性m/z 250-800。三リン酸化合物のインタクトな理論的MWのM-1Hイオンを用いて、抽出されたイオンクロマトグラムを作製し、LCMS処理ソフトウェアを用いて積分ピーク面積を測定した。ブランクマトリックスにスパイクされた適切な三リン酸化合物の外部標準曲線との比較によって、定量が行われる。
【０３１１】
結果を図5、6、7、及び8に示す。
【０３１２】
実施例4．模擬胃液中のヌクレオシドホスホエステル安定性
2μMの試験化合物を模擬胃液(SGF、0.7%(v/v)塩酸、脱イオン水中の0.2%(w/v)塩化ナトリウム、0.3%ペプシン(w/v)、pH1.2)とともに37℃でインキュベートした。二重サンプルを使用した。0、15、30、60、120、360及び1440分でサンプルを取り出し、直ちに内部標準(IS)を含有する冷アセトニトリルと混合し、分析前に-80℃で保存した。オメプラゾールを陽性対照として用いた。サンプルをLC/MS/MS法で分析し、分析物/ISのピーク面積比を比較することにより試験化合物の消失を評価し、各時点で残っている試験化合物%として報告した。
【０３１３】
結果を表7に示す。
【０３１４】
【表７】
2018503606.tif 000056
【０３１５】
実施例5．模擬腸液中のヌクレオシドホスホエステル安定性
2μMの試験化合物を、超純水(pH6.8)中の0.68%(w/v)一塩基性リン酸カリウム及び1%(w/v)パンクレアチンを含有する模擬腸液(SIF)とともに37℃でインキュベートした。二重サンプルを使用した。0、15、30、60、120、360及び1440分でサンプルを取り出し、直ちに内部標準(IS)を含有する冷アセトニトリルと混合し、分析前に-80℃で保存した。クロラムブシルを陽性対照として用いた。サンプルをLC/MS/MS法で分析し、分析物/ISのピーク面積比を比較することにより試験化合物の消失を評価し、各時点で残っている試験化合物%として報告した。
【０３１６】
結果を表8示す。
【０３１７】
【表８】
2018503606.tif 000057
【０３１８】
他の実施形態
本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく、本発明の記載された組成物及び方法の様々な修正及び変形が当業者には明らかとなるであろう。本発明を特定の実施形態に関連して説明してきたが、特許請求される本発明はこのような特定の実施形態に不当に限定されるべきではないことを理解されたい。実際に、当業者に明らかな本発明を実施するための記載された様式の様々な修正は、本発明の範囲内であることが意図されている。
【０３１９】
他の実施形態は特許請求の範囲に含まれる。
【図１】
2018503606.tif 000063
【図２】
2018503606.tif 000064
【図３】
2018503606.tif 000065
【図４】
2018503606.tif 000066
【図５】
2018503606.tif 000067
【図６】
2018503606.tif 000068
【図７】
2018503606.tif 000069
【図８】
2018503606.tif 000070
【配列表】
2018503606000001.app
【国際調査報告】
2018503606.tif 000071
2018503606.tif 000072
2018503606.tif 000073