(57)【要約】  本発明は、腫瘍および／または癌疾患の処置または予防に使用するためのＲＮＡ含有組成物、薬学的組成物、キット、並びに、腫瘍および／または癌疾患の処置または予防のためのＲＮＡ含有組成物の使用、に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つのＲＮＡを含んでいる、腫瘍および／または癌疾患の処置または予防に使用するための、ＲＮＡ含有組成物。
【請求項２】
上記ＲＮＡ含有組成物は、腫瘍内に投与されるものであり、特に腫瘍組織内への注射によって腫瘍内に投与されるものである、請求項１に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３】
上記少なくとも一つのＲＮＡは、コーディングＲＮＡおよびノンコーディングＲＮＡからなる群から選択されるものである、請求項１または２に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４】
上記コーディングＲＮＡは、少なくとも一つのペプチドまたはタンパク質をコードしている少なくとも一つのコード領域を含んだものであり、好ましくは、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、レトロウイルスＲＮＡ、およびレプリコンＲＮＡからなる群から選択されるものである、請求項３に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項５】
上記コーディングＲＮＡは、ｍＲＮＡである、請求項４に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項６】
上記少なくとも一つのペプチドまたはタンパク質は、サイトカイン、ケモカイン、自殺遺伝子産物、免疫原性のタンパク質もしくはペプチド、アポトーシス誘導因子、血管新生阻害因子、ヒートショックタンパク質、腫瘍抗原、β−カテニン阻害因子、ＳＴＩＮＧ経路の活性化因子、チェックポイント調節因子、自然免疫活性化因子、抗体、ドミナント・ネガティブ受容体およびデコイ受容体、骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子、ＩＤＯ経路阻害因子、ならびに、アポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質もしくはペプチド、からなる群から選択されるものであるか、または当該群に由来するものである、請求項４または５に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項７】
上記サイトカインは、インターロイキンであり、好ましくは、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８Ａ／Ｂ、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＬ−３５。
【請求項８】
上記インターロイキンは、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）である、請求項６または７に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項９】
上記サイトカインは、ＴＮＦファミリーのメンバーであり、好ましくは、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
ＴＮＦ、特にＴＮＦα、ＬＴα、ＬＴβ、ＬＩＧＨＴ、ＴＷＥＡＫ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、ＦＡＳＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫリガンド。
【請求項１０】
上記サイトカインは、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
ＦＬＴ３リガンド、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα／β／ω、ＩＦＮγ、ＬＩＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＦ、ＯＳＭ、幹細胞因子、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３、ＴＳＬＰリガンド。
【請求項１１】
上記ケモカインは、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＸ３ＣＬ１。
【請求項１２】
上記自殺遺伝子産物は、自殺酵素であり、好ましくはヌクレオチド代謝酵素である、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項１３】
上記ヌクレオチド代謝酵素は、以下の一覧から選ばれるものである、請求項１２に記載のＲＮＡ含有組成物：
チミジンキナーゼ、好ましくは単純ヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、好ましくは細菌のシトシンデアミナーゼまたは酵母のシトシンデアミナーゼ、デオキシヌクレオシドキナーゼ、好ましくはキイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）のデオキシヌクレオシドキナーゼ、デオキシシチジンキナーゼ、好ましくは哺乳類のデオキシシチジンキナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、好ましくは細菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ。
【請求項１４】
上記少なくとも一つの自殺遺伝子産物をコードしている少なくとも一つのＲＮＡは、上記自殺遺伝子産物の基質であるプロドラッグと組み合わせて使用される、請求項６、１２、１３の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項１５】
上記少なくとも一つのＲＮＡは、少なくとも一つのコネキシン、および、少なくとも一つの自殺遺伝子産物をコードしているものである、請求項６、１２〜１４の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項１６】
上記ＲＮＡ含有組成物は、少なくとも一つの自殺遺伝子産物をコードしている少なくとも一つのＲＮＡを含んでおり、
上記ＲＮＡ含有組成物は、少なくとも一つのコネキシンをコードしているさらなるＲＮＡ、および／または、コネキシンファミリーのタンパク質または当該タンパク質の一部もしくは断片、と組み合わせて使用される、請求項６、１２〜１４の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項１７】
上記免疫原性のタンパク質またはペプチドは、病原体のタンパク質またはペプチドであり、より好ましくは、ウイルスまたは細菌である病原体のタンパク質またはペプチドである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項１８】
上記免疫原性のタンパク質またはペプチドは、以下の一覧の、一つのウイルスまたは細菌の、少なくとも一つのタンパク質またはペプチドである、請求項１７に記載のＲＮＡ含有組成物：
Ａ型もしくはＢ型インフルエンザウイルスまたは任意の他のオルトミクソウイルス（Ｃ型インフルエンザ）、ピコルナウイルス、例えばライノウイルスまたはＡ型肝炎ウイルス、トガウイルス、例えばアルファウイルスまたはルビウイルス、例えばシンドビス、セムリキ森林もしくは風疹ウイルス（rubeolavirus）、風疹ウイルス（rubella virus）、コロナウイルス、特にサブタイプＨＣＶ−２２９ＥまたはＨＣＶ−ＯＣ４３、ラブドウイルス、例えば狂犬病ウイルス、パラミクソウイルス、例えばムンプスウイルス、レオウイルス、例えばＡ群、Ｂ群、またはＣ群ロタウイルス、ヘパドナウイルス、例えばＢ型肝炎ウイルス、パポウイルス（papovirus）、例えば任意のセロタイプのヒトパピローマウイルス、アデノウイルス、特に１型〜４７型、ヘルペスウイルス、例えば単純ヘルペスウイルス１、２、または３、サイトメガロウイルス、好ましくはＣＭＶｐｐ６５、エプスタインバーウイルス、ワクシニアウイルス、細菌のクラミドフィラ・ニューモニエ（Chlamydophila pneumoniae）、フラビウイルス、例えば１型〜４型のデングウイルス、黄熱ウイルス、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、カリシウイルス、フィロウイルス、例えばエボラウイルス、ボルナウイルス、ブニヤウイルス、例えばリフトバレー熱ウイルス、アレナウイルス、例えばリンパ球性脈絡骨髄膜炎ウイルスまたは出血熱ウイルス、レトロウイルス、例えばＨＩＶ、パルボウイルス。
【請求項１９】
上記免疫原性のペプチドまたはタンパク質は、インフルエンザ核タンパク質に由来するものである、請求項１７または１８に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項２０】
上記アポトーシス誘導因子は、Ｂｃｌ−２ファミリー、腫瘍抑制タンパク質ｐ５３、膜貫通型細胞死受容体のリガンド、特にＴＮＦ受容体遺伝子スーパーファミリーのリガンド、アポトーシス促進性（pro-apoptic）受容体アゴニスト、および、ベクリン−１からなる群から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項２１】
上記アポトーシス誘導因子は、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６または２０に記載のＲＮＡ含有組成物：
Ｂｃｌ−１０、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｄ、Ｂａｄ、Ｂｉｍ、Ｂｉｋ、Ｂｌｋ、シトクロムｃ，カスパーゼ、特にカスパーゼ３、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、デスドメイン、特にＦａｓ、好ましくはＦａｓＬ、ＴＮＦα、Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ、ＤＲ４および／またはＤＲ５のアゴニスト、Ａｐｏ３Ｌ、ＤＲ４アゴニスト抗体、ＤＲ５アゴニスト抗体、タンパク質キナーゼＲ（ＰＫＲ）、グランザイムＢ。
【請求項２２】
上記血管新生阻害因子は、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−１２、ＰＦ−４、ＴＮＦ−α、ｓＦＬＴ−１、ＦＬＫ−１、アンジオスタチン、エンドスタチン、バソスタチン、カンスタチン（Canstatin）、タムスタチン、１６ｋＤプロラシン（prolacin）断片、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、ＴＳＰ−１、ＴＳＰ−２、マスピン、ＰＥＸ、ｓＴｉｅ１、ｓＴｉｅ２、アンジオポエチン−１、アンジオポエチン−２、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、抗ＶＥＧＦ抗体および抗ＶＥＧＦＲ１抗体。
【請求項２３】
上記ヒートショックタンパク質は、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
ＨＳＰ２７、ＨＳＰ４７、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＣ７０、ＧＲＰ７８、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ１１０、ＧＲＰ９４、ＧＲＰ１７０、ＰＤＩ／ＰＤＩＡ、ＣＲＴ／ＣＡＬＲ。
【請求項２４】
上記腫瘍抗原は、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
１Ａ０１＿ＨＬＡ−Ａ／ｍ；１Ａ０２；５Ｔ４；ＡＣＲＢＰ；ＡＦＰ；ＡＫＡＰ４；アルファ−アクチン−＿４／ｍ；アルファ−メチルアシル−コエンザイム＿Ａ＿ラセマーゼ；ＡＮＤＲ；ＡＲＴ−４；ＡＲＴＣ１／ｍ；ＡＵＲＫＢ；Ｂ２ＭＧ；Ｂ３ＧＮ５；Ｂ４ＧＮ１；Ｂ７Ｈ４；ＢＡＧＥ−１；ＢＡＳＩ；ＢＣＬ−２；ｂｃｒ／ａｂｌ；ベータ−カテニン／ｍ；ＢＩＮＧ−４；ＢＩＲＣ７；ＢＲＣＡ１／ｍ；ＢＹ５５；カルレチクリン；ＣＡＭＥＬ；ＣＡＳＰＡ；カスパーゼ＿８；カテプシン＿Ｂ；カテプシン＿Ｌ；ＣＤ１Ａ；ＣＤ１Ｂ；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ１Ｄ；ＣＤ１Ｅ；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ２７６；ＣＤ３３；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４４＿アイソフォーム＿１；ＣＤ４４＿アイソフォーム＿６；ＣＤ５２；ＣＤ５５；ＣＤ５６；ＣＤ８０；ＣＤ８６；ＣＤ８Ａ；ＣＤＣ２７／ｍ；ＣＤＥ３０；ＣＤＫ４／ｍ；ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ；ＣＥＡ；ＣＥＡＭ６；ＣＨ３Ｌ２；ＣＬＣＡ２；ＣＭＬ２８；ＣＭＬ６６；ＣＯＡ−１／ｍ；コアクトシン（coactosin）様タンパク質；コラーゲン＿ＸＸＩＩＩ；ＣＯＸ−２；ＣＰ１Ｂ１；ＣＳＡＧ２；ＣＴ−＿９／ＢＲＤ６；ＣＴ４５Ａ１；ＣＴ５５；ＣＴＡＧ２＿アイソフォーム＿ＬＡＧＥ−１Ａ；ＣＴＡＧ２＿アイソフォーム＿ＬＡＧＥ−１Ｂ；ＣＴＣＦＬ；Ｃｔｅｎ；サイクリン＿Ｂ１；サイクリン＿Ｄ１；ｃｙｐ−Ｂ；ＤＡＭ−１０；ＤＥＰ１Ａ；Ｅ７；ＥＦ１Ａ２；ＥＦＴＵＤ２／ｍ；ＥＧＦＲ；ＥＧＬＮ３；ＥＬＦ２／ｍ；ＥＭＭＰＲＩＮ；ＥｐＣａｍ；ＥｐｈＡ２；ＥｐｈＡ３；ＥｒｂＢ３；ＥＲＢＢ４；ＥＲＧ；ＥＴＶ６；ＥＷＳ；ＥＺＨ２；ＦＡＢＰ７；ＦＣＧＲ３Ａ＿バージョン＿１；ＦＣＧＲ３Ａ＿バージョン＿２；ＦＧＦ５；ＦＧＦＲ２；フィブロネクチン；ＦＯＳ；ＦＯＸＰ３；ＦＵＴ１；Ｇ２５０；ＧＡＧＥ−１；ＧＡＧＥ−２；ＧＡＧＥ−３；ＧＡＧＥ−４；ＧＡＧＥ−５；ＧＡＧＥ−６；ＧＡＧＥ７ｂ；ＧＡＧＥ−８＿（ＧＡＧＥ−２Ｄ）；ＧＡＳＲ；ＧｎＴ−Ｖ；ＧＰＣ３；ＧＰＮＭＢ／ｍ；ＧＲＭ３；ＨＡＧＥ；ヘプシン；Ｈｅｒ２／ｎｅｕ；ＨＬＡ−Ａ２／ｍ；ホメオボックス＿ＮＫＸ３．１；ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５；ＨＰＧ１；ＨＳ７１Ａ；ＨＳ７１Ｂ；ＨＳＴ−２；ｈＴＥＲＴ；ｉＣＥ；ＩＦ２Ｂ３；ＩＬ−１０；ＩＬ−１３Ｒａ２；ＩＬ２−ＲＡ；ＩＬ２−ＲＢ；ＩＬ２−ＲＧ；ＩＬ−５；ＩＭＰ３；ＩＴＡ５；ＩＴＢ１；ＩＴＢ６；カリクレイン−２；カリクレイン−４；ＫＩ２０Ａ；ＫＩＡＡ０２０５；ＫＩＦ２Ｃ；ＫＫ−ＬＣ−１；ＬＤＬＲ；ＬＧＭＮ；ＬＩＲＢ２；ＬＹ６Ｋ；ＭＡＧＡ５；ＭＡＧＡ８；ＭＡＧＡＢ；ＭＡＧＥ−＿Ｂ１；ＭＡＧＥ−＿Ｅ１；ＭＡＧＥ−Ａ１；ＭＡＧＥ−Ａ１０；ＭＡＧＥ−Ａ１２；ＭＡＧＥ−Ａ２；ＭＡＧＥ−Ａ３；ＭＡＧＥ−Ａ４；ＭＡＧＥ−Ａ６；ＭＡＧＥ−Ａ９；ＭＡＧＥ−Ｂ１０；ＭＡＧＥ−Ｂ１６；ＭＡＧＥ−Ｂ１７；ＭＡＧＥ−Ｂ２；ＭＡＧＥ−Ｂ３；ＭＡＧＥ−Ｂ４；ＭＡＧＥ−Ｂ５；ＭＡＧＥ−Ｂ６；ＭＡＧＥ−Ｃ１；ＭＡＧＥ−Ｃ２；ＭＡＧＥ−Ｃ３；ＭＡＧＥ−Ｄ１；ＭＡＧＥ−Ｄ２；ＭＡＧＥ−Ｄ４；ＭＡＧＥ−Ｅ１＿（ＭＡＧＥ１）；ＭＡＧＥ−Ｅ２；ＭＡＧＥ−Ｆ１；ＭＡＧＥ−Ｈ１；ＭＡＧＥＬ２；マンマグロビン＿Ａ；ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ；ＭＡＲＴ−２；ＭＣ１＿Ｒ；Ｍ−ＣＳＦ；メソテリン；ＭＩＴＦ；ＭＭＰ１＿１；ＭＭＰ７；ＭＵＣ−１；ＭＵＭ−１／ｍ；ＭＵＭ−２／ｍ；ＭＹＯ１Ａ；ＭＹＯ１Ｂ；ＭＹＯ１Ｃ；ＭＹＯ１Ｄ；ＭＹＯ１Ｅ；ＭＹＯ１Ｆ；ＭＹＯ１Ｇ；ＭＹＯ１Ｈ；ＮＡ１７；ＮＡ８８−Ａ；Ｎｅｏ−ＰＡＰ；ＮＦＹＣ／ｍ；ＮＧＥＰ；Ｎ−ｍｙｃ；ＮＰＭ；ＮＲＣＡＭ；ＮＳＥ；ＮＵＦ２；ＮＹ−ＥＳＯ−１；ＯＡ１；ＯＧＴ；ＯＳ−９；オステオカルシン；オステオポンチン；ｐ５３；ＰＡＧＥ−４；ＰＡＩ−１；ＰＡＩ−２；ＰＡＰ；ＰＡＴＥ；ＰＡＸ３；ＰＡＸ５；ＰＤ１Ｌ１；ＰＤＣＤ１；ＰＤＥＦ；ＰＥＣＡ１；ＰＧＣＢ；ＰＧＦＲＢ；Ｐｉｍ−１＿−キナーゼ；Ｐｉｎ−１；ＰＬＡＣ１；ＰＭＥＬ；ＰＭＬ；ＰＯＴＥ；ＰＯＴＥＦ；ＰＲＡＭＥ；ＰＲＤＸ５／ｍ；ＰＲＭ２；プロステイン；プロテイナーゼ−３；ＰＳＡ；ＰＳＢ９；ＰＳＣＡ；ＰＳＧＲ；ＰＳＭ；ＰＴＰＲＣ；ＲＡＢ８Ａ；ＲＡＧＥ−１；ＲＡＲＡ；ＲＡＳＨ；ＲＡＳＫ；ＲＡＳＮ；ＲＧＳ５；ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８；ＲＨＯＣ；ＲＳＳＡ；ＲＵ１；ＲＵ２；ＲＵＮＸ１；Ｓ−１００；ＳＡＧＥ；ＳＡＲＴ−＿１；ＳＡＲＴ−２；ＳＡＲＴ−３；ＳＥＰＲ；ＳＥＲＰＩＮＢ５；ＳＩＡ７Ｆ；ＳＩＡ８Ａ；ＳＩＡＴ９；ＳＩＲＴ２／ｍ；ＳＯＸ１０；ＳＰ１７；ＳＰＮＸＡ；ＳＰＸＮ３；ＳＳＸ−１；ＳＳＸ−２；ＳＳＸ３；ＳＳＸ−４；ＳＴ１Ａ１；ＳＴＡＧ２；ＳＴＡＭＰ−１；ＳＴＥＡＰ−１；サバイビン；サバイビン−２Ｂ；ＳＹＣＰ１；ＳＹＴ−ＳＳＸ−１；ＳＹＴ−ＳＳＸ−２；ＴＡＲＰ；ＴＣＲｇ；ＴＦ２ＡＡ；ＴＧＦｂｅｔａ１；ＴＧＦＲ２；ＴＧＭ−４；ＴＩＥ２；ＴＫＴＬ１；ＴＰＩ／ｍ；ＴＲＧＶ１１；ＴＲＧＶ９；ＴＲＰＣ１；ＴＲＰ−ｐ８；ＴＳＧ１０；ＴＳＰＹ１；ＴＶＣ＿（ＴＲＧＶ３）；ＴＸ１０１；チロシナーゼ；ＴＹＲＰ１；ＴＹＲＰ２；ＵＰＡ；ＶＥＧＦＲ１；ＷＴ１；ＸＡＧＥ１。
【請求項２５】
上記β−カテニン阻害因子は、以下の一覧から選ばれるものである、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
ＴＡＴ−ＮＬＳ−ＢＬＢＤ−６、アキシン−１、ＴＣＦ−４、ＧＳＫ−３ｂ、ＤＫＫ−１、Ｄｖｌ−１。
【請求項２６】
上記ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）経路の活性化因子は、ＳＴＩＮＧ経路の活性化タンパク質または恒常的活性型タンパク質であり、好ましくはＤＤＸ４１、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＩＲＦ３、ＴＢＫ１またはＳＴＡＴ６の活性化タンパク質または恒常的活性型タンパク質である、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項２７】
上記チェックポイント調節因子は、以下のものの調節因子である、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物：
Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７／ＨＨＬＡ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ／ＩＧＰＲ−１、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＤＣＤ６、ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５／ＰＤ−１Ｈ、ＢＴＮ１Ａ１／ブチロフィリン、ＢＴＮ２Ａ１、ＢＴＮ２Ａ２／ブチロフィリン２Ａ２、ＢＴＮ３Ａ１／２、ＢＴＮ３Ａ２、ＢＴＮ３Ａ３、ＢＴＮＬ２／ブチロフィリン−様２、ＢＴＮＬ３、ＢＴＮＬ４、ＢＴＮＬ６、ＢＴＮＬ８、ＢＴＮＬ９、ＢＴＮＬ１０、ＣＤ２７７／ＢＴＮ３Ａ１、ＬＡＩＲ１、ＬＡＩＲ２、ＣＤ９６、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＣＲＴＡＭ、ＤＮＡＭ−１／ＣＤ２２６、ネクチン−２／ＣＤ１１２、ネクチン−３、ＴＩＧＩＴ、ＬＩＬＲＡ３／ＣＤ８５ｅ、ＬＩＬＲＡ４／ＣＤ８５ｇ／ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１／ＣＤ８５ｊ／ＩＬＴ２、ＬＩＬＲＢ２／ＣＤ８５ｄ／ＩＬＴ４、ＬＩＬＲＢ３／ＣＤ８５ａ／ＩＬＴ５、ＬＩＬＲＢ４／ＣＤ８５ｋ／ＩＬＴ３、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９／ＣＤ１３７、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン−アルファ／ＴＮＦ−ベータ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ−アルファ、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−３、ＴＩＭ−４、ＣＤ７、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＳＬＰ  Ｒ、または、これらの任意の組み合わせ。
【請求項２８】
上記チェックポイント調節因子は、アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、ドミナント・ネガティブ受容体、デコイ受容体、およびリガンドからなる群から選択されるものである、請求項６または２７に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項２９】
上記アンタゴニスト抗体は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＣＴＬＡ−４に対するものである、請求項２８に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３０】
上記アゴニスト抗体は、ＯＸ−４０に対するものである、請求項２８に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３１】
上記デコイ受容体は、可溶性ＰＤ−１受容体である、請求項２８に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３２】
上記抗体は、アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、または中和抗体である、請求項６に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３３】
上記抗体は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に対するものである、請求項６または３２に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３４】
上記コーディングＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）のコード領域のＧ／Ｃ含有量は、野生型ＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含有量と比較して増加しており、
上記Ｇ／Ｃ含有量が増加されたＲＮＡにコードされているアミノ酸配列は、上記野生型ＲＮＡにコードされているアミノ酸配列と比較して、好ましくは、変更されていない、請求項３〜３３の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３５】
上記コーディングＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）は、５’−ＵＴＲエレメント、および／または、３’−ＵＴＲエレメントをさらに含んでいるものである、請求項３〜３４の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３６】
上記コーディングＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）は、少なくとも一つのヒストンステム−ループをさらに含んでいるものである、請求項３〜３５の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３７】
上記コーディングＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）は、５’キャップ構造、および／または、ポリ（Ａ）配列、および／または、ポリ（Ｃ）配列、をさらに含んでいるものである、請求項３〜３６の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３８】
上記ノンコーディングＲＮＡは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）、環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）、リボザイム、アプタマー、リボスイッチ、免疫賦活性ＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、およびＰｉｗｉ−結合ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）からなる群から選択されるものである、請求項３に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項３９】
上記免疫賦活性ＲＮＡは、式（ＩＩＩ）（ＧｌＸｍＧｎ）、式（ＩＶ）（ＣｌＸｍＣｎ）、式（Ｖ）（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａ、および／または、式（ＶＩ）（ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ）ａにて示される少なくとも一つのＲＮＡ配列を含んでいるものである、請求項３８に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４０】
上記免疫賦活性ＲＮＡは、配列番号５、配列番号３９４、または、配列番号１００７２にて示される少なくとも一つのＲＮＡ配列を含んでいるものである、請求項３８または３９に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４１】
上記少なくとも一つのＲＮＡは、一つ以上のカチオン性またはポリカチオン性である化合物と複合体化されたものであり、好ましくは、カチオン性またはポリカチオン性であるポリマー、カチオン性またはポリカチオン性であるペプチドもしくはタンパク質と複合体化されたものであり、例えば、プロタミン、カチオン性またはポリカチオン性である多糖、および／または、カチオン性またはポリカチオン性である脂質と複合体化されたものである、請求項１〜４０の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４２】
上記カチオン性またはポリカチオン性である化合物は、ポリマー担体である、請求項４１に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４３】
上記ポリマー担体は、ジスルフィド架橋されたカチオン性の成分によって形成されたものであり、好ましくは、ジスルフィド架橋されたカチオン性のペプチドによって形成されたものであり、好ましくは、（ｉ）式ＶＩＩ、式ＶＩＩａ、および／または、式ＶＩＩｂにて示されるペプチド、および／または、（ｉｉ）式（ＶＩＩＩ）（Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ）にて示される化合物を含んだものである、請求項４２に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４４】
上記一つ以上のカチオン性またはポリカチオン性の化合物（好ましくはカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質）に対する上記少なくとも一つのＲＮＡのＮ／Ｐ比は、約０．１〜１０の範囲であり、当該範囲には、約０．３〜４、約０．５〜２、約０．７〜２、および、約０．７〜１．５の範囲が包含されている、請求項４１〜４３の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４５】
上記ＲＮＡ含有組成物は、一つ以上のカチオン性またはポリカチオン性の化合物と複合体化されている少なくとも一つのＲＮＡ、および、少なくとも一つの遊離ＲＮＡ（好ましくはコーディングＲＮＡ、より好ましくはｍＲＮＡ）を含んでいるものである、請求項１〜４４の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４６】
上記少なくとも一つのｍＲＮＡは、一つ以上の脂質と複合体化されており、それによって、リポソーム、脂質ナノ粒子、および／または、リポプレックスを形成している、請求項１〜４５の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４７】
上記ＲＮＡ含有組成物は、ポリマー担体によって形成されているポリマー担体カーゴ複合体を含んでおり、
上記ポリマー担体カーゴ複合体は、好ましくは、（１）ジスルフィド架橋されたカチオン性のペプチド（好ましくはＣｙｓ−Ａｒｇ１２、および／または、Ｃｙｓ−Ａｒｇ１２−Ｃｙｓ）、および、（２）免疫賦活性ＲＮＡ（好ましくは配列番号５、配列番号３９４、または、配列番号１００７２にて示されるＲＮＡ配列）を含んだものである、請求項１〜４６の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物。
【請求項４８】
請求項１〜４７の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物、ならびに、薬学的に許容される担体および／またはビヒクルを含んでいる、薬学的組成物。
【請求項４９】
腫瘍組織内への注射のために調製されている、請求項４８に記載の薬学的組成物。
【請求項５０】
請求項１〜４７の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物、または、請求項４８もしくは４９に記載の薬学的組成物、ならびに、任意で、投与および投与のための投薬量に関する情報を含んでいる技術的な指示書、を備えている、キットまたはキットの一部。
【請求項５１】
医薬として使するための、請求項１〜４７の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物、または、請求項４８もしくは４９に記載の薬学的組成物、または、請求項５０に記載のキットもしくはキットの一部。
【請求項５２】
腫瘍および／または癌疾患の処置または予防（好ましくは腫瘍内投与による、特に腫瘍組織内への注射による、腫瘍および／または癌疾患の処置または予防）に使用するための、請求項１〜４７の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物、または、請求項４８もしくは４９に記載の薬学的組成物、または、請求項５０に記載のキットもしくはキットの一部。
【請求項５３】
腫瘍および／または癌疾患の処置または予防（好ましくは腫瘍内投与による、特に腫瘍組織内への注射による、腫瘍および／または癌疾患の処置または予防）のための、請求項１〜４７の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物、または、請求項４８もしくは４９に記載の薬学的組成物、または、請求項５０に記載のキットもしくはキットの一部、の使用。
【請求項５４】
上記処置または予防は、少なくとも一つの付加的な薬学的に活性な化合物の投与を含んでいる、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
上記少なくとも一つの付加的な薬学的に活性な化合物は、サイトカイン、ケモカイン、自殺遺伝子産物、免疫原性のタンパク質もしくはペプチド、アポトーシス誘導因子、血管新生阻害因子、ヒートショックタンパク質、腫瘍抗原、β−カテニン阻害因子、ＳＴＩＮＧ経路の活性化因子、チェックポイント調節因子、自然免疫活性化因子、抗体、ドミナント・ネガティブ受容体およびデコイ受容体、骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子、ＩＤＯ経路阻害因子、アポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質もしくはペプチド、抗菌剤、抗ウイルス剤、薬剤、アジュバント剤、化学療法剤、ならびにキナーゼ阻害因子、からなる群から選択されるものである、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
上記処置は、放射線治療、および／または、外科手術をさらに含んでいる、請求項５４または５５に記載の使用。
【請求項５７】
上記チェックポイント調節因子は、請求項２７に記載の調節因子から選択される、請求項５５に記載の使用。
【請求項５８】
上記チェックポイント調節因子は、ＰＤ−１阻害因子、ＰＤ−Ｌ１阻害因子、ＣＴＬＡ−４阻害因子、ＬＡＧ３阻害因子、ＴＩＭ３阻害因子、ＯＸ−４０刺激因子、４−１ＢＢ刺激因子、ＣＤ４０Ｌ刺激因子、ＣＤ２８刺激因子、ＧＩＴＲ刺激因子、から選択されるものである、請求項５７に記載の使用。
【請求項５９】
上記ＰＤ−１阻害因子は、ＰＤ−１に対するアンタゴニスト抗体であり、
上記ＰＤ−Ｌ１阻害因子は、ＰＤ−Ｌ１に対するアンタゴニスト抗体である、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
上記抗体は、ＣＤ７３および／またはＣＤ１３７に対する抗体から選択されるものである、請求項５４に記載の使用。
【請求項６１】
腫瘍および／または癌疾患の処置（好ましくは腫瘍内投与による、特に腫瘍組織内への注射による、腫瘍および／または癌疾患の処置）のための医薬を調製するための、請求項１〜４７の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物、または、請求項４８もしくは４９に記載の薬学的組成物、または、請求項５０に記載のキットもしくはキットの一部、の使用。
【請求項６２】
腫瘍および／または癌疾患の処置方法（好ましくは腫瘍内投与による、特に腫瘍組織内への注射による、腫瘍および／または癌疾患の処置方法）であって、
請求項１〜４７の何れか一項に記載のＲＮＡ含有組成物、または、請求項４８もしくは４９に記載の薬学的組成物、または、請求項５０に記載のキットもしくはキットの一部、を用いる、腫瘍および／または癌疾患の処置方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔序論〕
本発明は、腫瘍および／または癌疾患の処置または予防に使用するための、ＲＮＡ含有組成物に関する。本発明はまた、薬学的組成物に関する。本発明はさらに、腫瘍および／または癌疾患の処置または予防のための、キットおよび上記ＲＮＡ含有組成物の使用に関する。
【０００２】
癌（悪性腫瘍としても知られている）とは、侵襲または身体の他の部位への転移の可能性を有する、異常な細胞増殖に関連する一群の疾患を表す。２０１２年においては、世界中で約１４１０万人の癌の新規患者が発生している（メラノーマ以外の皮膚癌を含まない）。
【０００３】
癌に対する標準的な処置には、化学療法、放射線および外科手術が含まれており、これらの処置は、単独で、または組み合わせて適用される。他の処置においては、癌に対して免疫療法を適用する。免疫療法は、ワクチン接種を介した免疫システムの活性化、または養子細胞免疫療法に着目して、抗癌応答を誘導する。
【０００４】
いくつかのアプローチにおいては、癌または他の腫瘍疾患の処置のために、遺伝子治療および遺伝的ワクチン接種が用いられる。遺伝子治療および遺伝的ワクチン接種は、患者の細胞中または組織中への核酸の導入を基礎とする、分子医学的方法である。その後、導入された上記核酸にコードされている情報が、生体中で処理される。すなわち、最終的に、治療効果のあるペプチドまたはタンパク質が発現する。あるいは、最終的に、上記核酸にコードされている抗体が発現する。
【０００５】
従来の遺伝子治療の方法（遺伝子治療および遺伝的ワクチン接種を含む）は、所望の遺伝情報を細胞中に運搬することを目的として、ＤＮＡ分子の使用を基礎としている。ＤＮＡを細胞内に導入するために、種々の方法が開発されてきた。例えば、リン酸カルシウム法、ポリベリン法、プロトプラスト融合法、エレクトロポレーション法、マイクロインジェクション法、およびリポフェクション法などである。ＤＮＡウイルスも同様に、非常に高いトランスフェクション率を達成するＤＮＡビヒクルとして、使用されうる。ＤＮＡの使用には、ホスト細胞のゲノムのインタクトな遺伝子に、（例えば、組み換えによって）当該ＤＮＡが挿入されるというリスクが必然的に伴う。この場合、影響を及ぼされた遺伝子は、変異を起こして不活性化するおそれがある。あるいは、誤った情報の原因となるおそれがある。ＤＮＡを医薬品として使用することによる他のリスクは、患者に、病原性の抗薬抗体（抗ＤＮＡ抗体）を誘導してしまうリスクである。これは、最終的に、（死に至る可能性のある）免疫応答を引き起こすおそれがある。
【０００６】
遺伝子治療剤または遺伝的ワクチンとしてのＲＮＡの使用は、概ね、より安全である。ＲＮＡは、ゲノムに組み込まれて、病原的で望ましくない抗薬抗体の産生を誘導するリスクを伴わないからである。
【０００７】
ｍＲＮＡまたはＲＮＡの一般的な不安定さが、ＲＮＡ発現系に基づく医学的方法の適用において課題となりうることが、従来技術において知られており、それどころか長らく当然視されてきた。しかし、上記に説明したように、遺伝子治療および遺伝的ワクチン接種において、ＲＮＡ発現系は、ＤＮＡ発現系よりも、かなりの利点を有している。
【０００８】
ＲＮＡの不安定さは、特に、ＲＮＡ分解酵素（リボヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅ）に起因する。ＲＮＡを不安定化させる、さらなるプロセスも多数存在する。その中でもＲＮＡとタンパク質との相互作用は、多くの場合、重要な役割を果たしていると思われる。ＲＮＡの安定性を向上させるための手段が、いくつか提案されてきた。その結果、遺伝子治療剤またはＲＮＡワクチンとしての、ＲＮＡの使用が可能となった。
【０００９】
ex vivoにおけるＲＮＡの安定性の課題を解決するために、欧州特許出願ＥＰ１，０８３，２３２Ａ１は、ＲＮＡ（特にｍＲＮＡ）を、細胞内および生体内に導入する方法を記載している。上記方法において、ＲＮＡは、カチオン性ペプチドまたはカチオン性タンパク質と複合体を形成している。
【００１０】
ｍＲＮＡは、癌の処置および／または予防のために適用されることが知られている。例えば、国際公開ＷＯ０３／０５１４０１Ａ２は、少なくとも１つのｍＲＮＡを含んでいる、薬学的組成物を記載している。上記ｍＲＮＡは、腫瘍に由来する抗原をコードしている少なくとも１つの領域を含んでおり、また、水性溶媒および好ましくはサイトカイン（例えばＧＭ−ＣＳＦ）と組み合わされている。上記薬学的組成物は、癌に対する処置および／または予防に使用するために提供されている。
【００１１】
国際公開ＷＯ２００６／００８１５４Ａ１は、腫瘍疾患に対するワクチン接種のためのｍＲＮＡ混合物を開示している。上記ｍＲＮＡ混合物において、少なくとも１種のｍＲＮＡは、少なくとも１種の腫瘍抗原をコードしている領域を含んでいる。また、少なくとも１種の他のｍＲＮＡは、少なくとも１種の免疫原性タンパク質をコードしている領域を含んでいる。
【００１２】
それでもなお、腫瘍疾患の効果的な処置に対する（とりわけ、癌疾患の処置に対する）要求が、依然として存在している。したがって、本発明の目的は、腫瘍組織および癌細胞が特異的に破壊される、腫瘍疾患の効果的な処置のためのアプローチを提供することにある。
【００１３】
上記目的は、特許請求の範囲に係る発明によって解決される。とりわけ、本発明の目的は、第１の態様によれば、腫瘍および／または癌疾患の処置または予防に使用するためのＲＮＡ含有組成物によって解決される。上記目的は、本発明のさらなる態様によれば、薬学的組成物、キットまたはキットの一部（kit of parts）、および腫瘍または癌疾患を処置する方法によって解決される。
【００１４】
〔定義〕
明確性および可読性のために、科学的な背景情報および定義を、以下に与える。本項目に関して開示されている任意の技術的特徴は、本発明のそれぞれの実施形態、および全ての実施形態の一部でありうる。さらなる定義および説明も、本開示との関係の中で与えられうる。
【００１５】
［免疫システム］
免疫システムは、生体を感染から防御しうる。病原体が生体の物理防壁を破り、当該生体に侵入すると、自然免疫システムは、迅速だが非特異的な応答を与える。この迅速な応答から病原体が逃れた場合、脊椎動物は、第２の防壁である適応免疫システムを備えている。上記免疫システムは、感染の際にその応答を適応させ、上記病原体の認識を向上させる。その後、この向上した応答は、上記病原体が排除されるまで持続する（免疫記憶のかたちとして）。そして、適応免疫システムは、同じ病原体と遭遇するたびに、より迅速かつより強力な攻撃を展開することが可能になる。以上によると、免疫システムには、先天的免疫システムと、適応免疫システムとが包含されている。これら２つはいずれも、いわゆる体液成分および細胞成分を含んでいる。
【００１６】
［免疫応答］
免疫応答は、通常、（１）特定の抗原に対する適応免疫システムの特異的な応答（いわゆる、特異的免疫応答または適応免疫応答）、または、（２）先天的免疫システムの非特異的応答（いわゆる、非特異的免疫応答または先天的免疫応答）、のいずれかでありうる。
【００１７】
［適応免疫システム］
適応免疫システムは、高度に特殊化した全身性細胞と、病原体の増殖を排除または防止するプロセスと、から構成されている。適応免疫応答により、脊椎動物の免疫システムは、特定の病原体を認識および記憶することが可能となる（免疫性を生じさせることが可能となる）。また、上記病原体と遭遇するたびに、強力な攻撃を展開することが可能となる。上記システムは、非常に適応的である。これは、体細胞超突然変異（体細胞変異の頻度を上昇させるプロセス）、およびＶ（Ｄ）Ｊ再構成（抗原受容体遺伝子セグメントの、不可逆的な遺伝的再構成）のに起因している。この機構により、少数の遺伝子から、大量の異なる抗原受容体を生み出すことができる。その後、これらの抗原受容体はそれぞれ、個別のリンパ球上に固有に発現する。遺伝子の再配置は、それぞれの細胞のＤＮＡに不可逆な変化をもたらすため、当該細胞の全ての子孫は、同じ特異性を有する受容体をコードしている遺伝子を受け継いでいる。この特徴は、長期的な特異的免疫性に重要な役割を果たす、記憶Ｂ細胞および記憶Ｔ細胞においても該当する。免疫ネットワーク理論とは、適応免疫システムが如何に機能するかという理論であり、（１）Ｔ細胞の受容体の可変領域、（２）Ｂ細胞、および、（３）可変領域を有しているＴ細胞およびＢ細胞から作られる分子、の間の相互作用に基礎をおいている。
【００１８】
［適応免疫応答］
適応免疫応答は、通常、抗原特異的であると理解されている。抗原特異性により、特定の抗原、病原体または病原体に感染した細胞に適合した応答を、生じさせることができる。上記の適合した応答を展開する能力は、体内で、「記憶細胞」によって維持されている。万が一、身体に病原体が２回以上感染すると、上述の特異的な記憶細胞を用いて、速やかにこれを排除する。これに関して、適応免疫応答の第１段階は、（１）抗原特異的なナイーブＴ細胞、または、（２）抗原提示細胞により抗原特異的免疫応答を誘導することのできる、異なる免疫細胞、の活性化である。この活性化は、リンパ系組織、およびナイーブＴ細胞が定常的に通過する器官において発生する。抗原提供細胞として働くことのできる細胞の種類には、特に、樹状細胞、マクロファージおよびＢ細胞がある。それぞれの細胞が、免疫応答の誘導において、異なる機能を有している。樹状細胞は、ファゴサイトーシスおよびマクロピノサイトーシスによって抗原を取り込む。また樹状細胞は、例えば外来抗原との接触により刺激され、局所リンパ組織に移動し、そこで成熟樹状細胞に分化する。マクロファージは、粒子状の抗原（細菌など）を取り込み、病原菌または他の適当な刺激によって誘導されて、ＭＨＣ分子を発現する。受容体を介して水溶性タンパク質抗原を結合および吸収するという、Ｂ細胞に固有の能力もまた、Ｔ細胞の誘導に重要でありうる。ＭＨＣ分子上に抗原を提示することによって、Ｔ細胞が活性化され、Ｔ細胞の増加と、強化されたエフェクターＴ細胞への分化とが誘導される。エフェクターＴ細胞の最も重要な機能は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞によって感染細胞を殺傷すること、および、Ｔｈ１細胞によってマクロファージを活性化させることである。これらは共に、細胞媒介性免疫を構成している。他のエフェクターＴ細胞の最も重要な機能として、Ｔｈ２細胞およびＴｈ１細胞の両方によりＢ細胞を活性化して、異なるクラスの抗体を産生させることがある。このようにして、体液性免疫応答が作用する。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体により抗原を認識する。Ｔ細胞受容体は、抗原を直接認識せず、直接結合もしない。その代わり、他の細胞表面のＭＨＣ分子に結合している、短いペプチド断片（例えば、病原体由来のタンパク質抗原の）を認識する。
【００１９】
［細胞性免疫／細胞性免疫応答］
細胞性免疫は、通常、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球の活性化、および、抗原に応答した種々のサイトカインの放出と関係がある。より一般的な点では、細胞性免疫は、抗体と関係がなく、免疫システムの細胞の活性化と関係がある。細胞性免疫応答は、例えば、下記（１）〜（３）によって特徴づけられる。（１）抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球の活性化。抗原特異的細胞傷害性Ｔリンパ球は、表面に抗原のエピトープを提示している体細胞（ウイルス感染している細胞、細胞内細菌を伴っている細胞、および腫瘍抗原を提示している癌細胞など）における、アポトーシスを誘導することができる；（２）マクロファージおよびナチュラルキラー細胞の活性化。これによって、上記の細胞は病原体を破壊することができる；（３）細胞を刺激して種々のサイトカインを分泌させること。これらのサイトカインは、適応免疫応答および先天的免疫応答に関わっている、他の細胞の機能に影響を及ぼす。
【００２０】
［体液性免疫／体液性免疫応答］
体液性免疫とは、通常、抗体産生、およびそれに伴う場合のある補助的なプロセスのことを表す。通常、体液性免疫は、例えば、Ｔｈ２の活性化およびサイトカイン産生、胚中心の形成およびアイソタイプスイッチ、アフィニティ成熟、ならびに記憶細胞の発生によって特徴づけられうる。体液性免疫はまた、通常、抗体のエフェクター機能をも指しうる。エフェクター機能は、病原体および毒素の中和、古典的な補体の活性化、ならびに、オプソニンに促進されるファゴサイトーシスおよび病原体の排除、が含まれる。
【００２１】
［先天的免疫システム］
先天的免疫システム（非特異的免疫システムとしても知られる）は、他の生命体による感染から、非特異的な様式で宿主を防衛する、細胞および機構を包含している。これは、先天的システムの細胞は、包括的な様式で病原体を認識し、応答していることを意味する。しかし、適応免疫システムとは異なり、宿主に対して長期的免疫または防御免疫を与えない。先天的免疫システムは、例えば、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）受容体（例えば、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ））のリガンドによって、または他の補助的な物質によって活性化されうる。上記他の補助的な物質の例としては、リポ多糖、ＴＮＦ−α、ＣＤ４０リガンド、またはサイトカイン、モノカイン、リンフォカイン、インターロイキンもしくはケモカイン、免疫賦活性核酸、免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）、ＣｐＧ−ＤＮＡ、抗生物質、または抗ウイルス剤がある。通常、先天的免疫システムの応答には、下記（１）〜（５）が含まれる。（１）化学的因子（サイトカインと呼ばれる特殊化した化学的媒体を含む）の産生を通した、免疫細胞の感染部位への誘導；（２）補体カスケードの活性化；（３）特殊化した白血球による、生体内、組織内、血液中およびリンパ液中に存在している外来物質の、同定および除去；（４）抗原提示として知られるプロセスを通じた、適応免疫システムの活性化；および／または（５）病原菌に対する、物理的または化学的バリアとしての働き。
【００２２】
［アジュバント／アジュバント成分］
通常、アジュバントまたはアジュバント成分は、最も広義には、他の薬剤（薬またはワクチンなど）の効果を改変しうる（例えば増強する）、（例えば薬理的または免疫学的）薬剤または組成物である。本発明との関係においては、慣例的に、「アジュバント／アジュバント成分」とは、免疫原および／または薬学的な有効成分のために、担体または補助的な物質として機能する化合物または組成物を表す。アジュバントは広義に解釈されるべきである。また、アジュバントは、当該アジュバントに組み込まれた、または共に投与された抗原の免疫原性を増加させることのできる物質を、広範に表す。本発明との関係においては、アジュバントは、本発明の有効成分の、特異的な免疫原性効果を増強することが好ましい。通常、「アジュバント」または「アジュバント成分」は同じ意味であり、相互に使用できる。アジュバントは、例えば、免疫賦活剤、抗原送達システム、またはそれらの組み合わせに分類されうる。
【００２３】
用語「アジュバント」は、通常、それ自身として免疫を与える物質を含まない、と理解されている。アジュバントは、免疫システムを非特異的に補助して、抗原特異的な免疫応答を増強する（例えば、免疫システムに対する抗原の提示を促進することによって。あるいは、非特異的な先天的免疫応答の誘導によって）。また、好ましくは、アジュバントは、例えば、Ｔｈ２に基づく抗原特異的応答が優勢であるのを、Ｔｈ１に基づく抗原特異応答がより増えるよう変化させることによって（あるいはその逆によって）、例えば抗原特異的免疫応答を調節しうる。したがって、アジュバントは、サイトカインの発現／分泌、抗原提示、免疫応答の種類、などを有利に調節しうる。
【００２４】
［免疫賦活性ＲＮＡ／免疫賦活化ＲＮＡ］
本発明との関係において、免疫賦活性ＲＮＡ／免疫賦活化ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）は、通常、それ自身として先天的免疫応答を誘導することのできる、ＲＮＡでありうる。ｉｓＲＮＡは、通常、オープンリーディングフレームを有していない。したがって、ペプチド性の抗原または免疫原を与えるのではなく、先天的免疫応答を誘導する（例えば、特定の種類のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、または他の適切な受容体に対して結合することによって）。したがって、免疫賦活性ＲＮＡ／免疫賦活化ＲＮＡは、ノンコーディングＲＮＡであることが好ましい。しかしながら、勿論、オープンリーディングフレームを有しており、ペプチド／タンパク質（例えば、抗原性機能）をコードしているｍＲＮＡもまた、先天的免疫応答を誘導しうる。
【００２５】
［抗原］
用語「抗原」は、通常、免疫システムによって認識されうる、抗原特異的免疫応答を引き起こす（例えば、適応免疫応答の一環としての、抗体または抗原特異的Ｔ細胞の形成によって）ことのできる物質を表す。抗原は、タンパク質またはペプチドでありうる。これに関して、適応免疫応答の第１段階は、抗原提示細胞による、抗原特異的なナイーブＴ細胞の活性化である。この活性化は、リンパ系組織、およびナイーブＴ細胞が定常的に通過する器官において発生する。３種類の細胞が、抗原提供細胞として働くことができる。すなわち、樹状細胞、マクロファージおよびＢ細胞である。それぞれの細胞が、免疫応答の誘導において、異なる機能を有している。組織の樹状細胞は、ファゴサイトーシスおよびマクロピノサイトーシスによって抗原を取り込む。また、樹状細胞は感染により刺激され、局所リンパ組織に移動し、そこで成熟樹状細胞に分化する。マクロファージは、粒子状の抗原（細菌など）を取り込み、病原菌によって誘導されて、ＭＨＣクラスＩＩ分子を発現する。受容体を介して水溶性タンパク質抗原を結合および吸収するという、Ｂ細胞に固有の能力は、Ｔ細胞の誘導に重要でありうる。ＭＨＣ分子上に抗原を提示することによって、Ｔ細胞が活性化され、Ｔ細胞の増加と、強化されたエフェクターＴ細胞への分化とが誘導される。エフェクターＴ細胞の最も重要な機能は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞によって感染細胞を殺傷すること、および、Ｔｈ１細胞によってマクロファージを活性化させることである。これらは共に、細胞媒介性免疫を構成している。他のエフェクターＴ細胞の最も重要な機能に、Ｔｈ２細胞およびＴｈ１細胞の両方によりＢ細胞を活性化して、異なるクラスの抗体を産生させることがある。このようにして、体液性免疫応答が作用する。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体により抗原を認識する。Ｔ細胞受容体は、抗原を直接認識せず、直接結合もしない。その代わり、他の細胞表面のＭＨＣ分子に結合している、短いペプチド断片（例えば、病原体のタンパク質抗原の）を認識する。
【００２６】
Ｔ細胞は２つのクラスに大別され、それぞれ異なるエフェクター機能を有している。２つのクラスは、細胞表面タンパク質である、ＣＤ４およびＣＤ８の発現によって区別される。これら２種類のＴ細胞は、認識するＭＨＣ分子のクラスが異なっている。ＭＨＣ分子には２つのクラス（ＭＨＣクラスＩ分子およびＭＨＣクラスＩＩ分子）があり、構造および身体の組織における発現パターンが異なっている。ＣＤ４＋Ｔ細胞はＭＨＣクラスＩＩ分子に対して結合し、ＣＤ８＋Ｔ細胞はＭＨＣクラスＩ分子に対して結合する。ＭＨＣクラスＩ分子とＭＨＣクラスＩＩ分子とは、細胞間で異なる分布を有しており、これは、それぞれの分子を認識するＴ細胞の異なるエフェクター機能を反映している。ＭＨＣクラスＩ分子は、（例えば病原体、通常はウイルスに由来する）細胞質ペプチドおよび核由来ペプチドを、ＣＤ８＋Ｔ細胞に提示する。そしてＣＤ８＋Ｔ細胞は、特異的に認識するあらゆる細胞を殺傷することに特化した、細胞傷害性Ｔ細胞に分化する。ほぼ全ての細胞がＭＨＣクラスＩ分子を発現しているが、恒常的な発現のレベルは細胞の種類によって異なる。また、ウイルス由来の病原性ペプチドのみがＭＨＣクラス１分子によって提示されるのではなく、自己抗原（腫瘍抗原など）もまた、提示される。ＭＨＣクラス１分子はペプチドと結合する。上記ペプチドは、細胞質で分解されたタンパク質に由来し、小胞体内に輸送されたものである。感染細胞の表面でＭＨＣクラス１−ペプチド複合体を認識するＣＤ８＋細胞は、外来性ペプチドを提示しているあらゆる細胞を殺傷することに特化している。そして、ウイルスおよび他の細胞質性病原体に感染した細胞を、身体から駆除する。ＭＨＣクラスＩＩ分子を認識するＣＤ４＋Ｔ細胞（ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞）の主な機能は、免疫システムの他のエフェクター細胞を活性化させることである。したがって、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、通常、Ｂリンパ球、樹状細胞およびマクロファージ（つまり、免疫応答に参加する細胞）に見られるが、他の組織の細胞には見られない。例えば、マクロファージは活性化されて、自身が取り込んだ小胞内の病原体を殺傷する。また、Ｂ細胞は活性化されて、外来分子に対する免疫グロブリンを分泌する。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、小胞体内のペプチドと結合することができない。そのため、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、エンドソーム内で分解されたタンパク質由来のペプチドと結合する。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、（１）マクロファージの小胞システムに入った、病原体由来のペプチド、（２）未成熟樹状細胞に取り込まれた、抗原由来のペプチド、または、（３）Ｂ細胞の免疫グロブリン受容体、を捕捉することができる。マクロファージおよび樹状細胞の小胞内に大量に病原体が蓄積した結果、Ｔｈ１細胞の分化が促される。一方、細胞外の抗原は、結果としてＴｈ２細胞の産生を促す。Ｔｈ１細胞は、マクロファージの殺菌作用を活性化させ、Ｂ細胞によるＩｇＧ抗体の産生を誘導する。ＩｇＧ抗体は、細胞外病原体をオプソニン化して、食細胞により取り込ませるために非常に有効である。一方Ｔｈ２細胞は、ナイーブＢ細胞を活性化させてＩｇＭを分泌させることによって、体液性応答を開始させる。そして、オプソニン化能の弱い抗体（例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３（マウス）、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４（ヒト）、ならびにＩｇＡおよびＩｇＥ（マウスおよびヒト））の産生を誘導する。
【００２７】
［エピトープ（「抗原決定部位」とも呼ばれる）］
Ｔ細胞のエピトープは、断片（好ましくは、約６〜約２０またはそれ以上のアミノ酸長を有している）を含んでいてよい。上記断片は、例えば、下記（１）または（２）でありうる。（１）処理され、ＭＨＣクラスＩ分子により提示されている断片。好ましくは、約８〜約１０アミノ酸長（例えば、８、９、１０、または１１もしくは１２アミノ酸）の断片；または（２）処理され、ＭＨＣクラスＩＩ分子により提示されている断片。好ましくは、約１３アミノ酸長以上（例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上のアミノ酸長）の断片である。このとき、上述の断片は、アミノ酸配列の任意の部分から選択されてよい。これらの断片は、通常、ペプチド断片およびＭＨＣ分子からなる複合体の形で、Ｔ細胞によって認識される。Ｂ細胞のエピトープは、通常、（本来の）タンパク質またはペプチド抗原の外表面に位置する、断片である。
【００２８】
［ワクチン］
ワクチンとは、通常、少なくとも１つの抗原または抗原性機能を提供する、予防用または治療用の物質であると理解される。上記抗原または抗原性機能は、身体の適応免疫システムを刺激して、適応免疫応答を与えうる。
【００２９】
［抗原提供ｍＲＮＡ(Antigen-providing mRNA)］
抗原提供ｍＲＮＡは、通常、当該ｍＲＮＡを与えられた細胞または生物によって翻訳されることができる、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを有しているｍＲＮＡでありうる。この翻訳の産物は、抗原として（好ましくは免疫原として）機能しうる、ペプチドまたはタンパク質である。上記産物はまた、２つ以上の免疫原から構成される融合タンパク質でありうる。上記融合タンパク質は、例えば、２つ以上のエピトープ、ペプチドまたはタンパク質からなる融合タンパク質である（ここで、上記エピトープ、ペプチドまたはタンパク質は、リンカー配列によって連結されていてよい）。
【００３０】
［二シストロン性ｍＲＮＡ／多シストロン性ｍＲＮＡ］
二シストロン性ｍＲＮＡ／多シストロン性ｍＲＮＡは、通常、２つ（二シストロン性）またはそれ以上（多シストロン性）のコーディング配列（ＣＤＳ；しばしば、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）とも表記される）を有していてよい。これに関して、コーディング配列／オープンリーディングフレームとは、ペプチドまたはタンパク質に翻訳されることのできる、いくつかのヌクレオチド・トリプレット（コドン）の配列である。このようなｍＲＮＡを翻訳することにより、２種類（二シストロン性）またはそれ以上（多シストロン性）の異なる翻訳産物が得られる（複数のコーディング配列／ＯＲＦが、同一でないとすれば）。真核生物における発現については、このようなｍＲＮＡは、例えば、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含んでいてもよい。
【００３１】
［５’キャップ構造］
５’キャップは、通常、ｍＲＮＡ分子の５’末端に付加される、修飾ヌクレオチド（キャップアナログ）、特にグアニンヌクレオチドである。５’キャップは、５’−５’三リン酸結合（ｍ７ＧｐｐｐＮとも言う）用いて、付加されていることが好ましい。５’キャップ構造のさらなる例には、以下が含まれる：グリセリル、逆位デオキシ脱塩基残基（部位）、４’，５’メチレンヌクレオチド、１−（β−Ｄ−エリトロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環状ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、α−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環状３’，４’−セコヌクレオチド、非環状３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環状３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆位ヌクレオチド部位、３’−３’−逆位脱塩基部位、３’−２’−逆位ヌクレオチド部位、３’−２’−逆位脱塩基部位、１，４−ブタンジオールホスファート、３’−ホスホロアミダート、ヘキシルホスファート、アミノヘキシルホスファート、３’−ホスファート、３’ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、または、結合性もしくは非結合性メチルホスホナート部位。本発明に関して、上述の修飾された５’キャップ構造は、本発明の組成物のｍＲＮＡ配列を修飾するために用いられうる。本発明に関して用いられうる、さらなる修飾された５’キャップ構造には、以下がある：ＣＡＰ１（ｍ７ＧｐｐｐＮに隣接しているヌクレオチドのリボースの、追加のメチル化）、ＣＡＰ２（ｍ７ＧｐｐｐＮから下流に２つ目のヌクレオチドのリボースの、追加のメチル化）、ＣＡＰ３（ｍ７ＧｐｐｐＮから下流に３つ目のヌクレオチドのリボースの、追加のメチル化）、ＣＡＰ４（ｍ７ＧｐｐｐＮから下流に４つ目のヌクレオチドのリボースの、追加のメチル化）、ＡＲＣＡ（抗逆方向キャップアナログ）、修飾ＡＲＣＡ（例えば、ホスホチオアート修飾ＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、および２−アジド−グアノシン。
【００３２】
本発明に関連して、５’キャップ構造はまた、ＲＮＡ化学合成によって形成されてもよいし、キャップアナログを用いたin vitroのＲＮＡ転写（共転写キャッピング）によって形成されてもよい。あるいは、キャップ構造は、キャッピング酵素（例えば、市販のキャッピングキット）を用いて、in vitroにて形成されてもよい。
【００３３】
［キャップアナログ］
キャップアナログとは、キャップ機能性を有している、重合できないジヌクレオチドを表す。キャップ機能性とは、ＲＮＡ分子の５’末端に組み込まれたときに、翻訳もしくは局在を促すこと、および／または、当該ＲＮＡ分子の分解を防ぐことである。「重合できない」とは、キャップアナログが、５’末端にのみ組み込まれることを意味する。なぜならば、キャップアナログは５’位の三リン酸を有しておらず、それゆえ、鋳型依存性ＲＮＡポリメラーゼによって３’方向に伸長できないからである。
【００３４】
キャップアナログには、以下の群から選択される化学構造が含まれるが、これらに限定されない：ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７ＧｐｐｐＡ、ｍ７ＧｐｐｐＣ；非メチル化キャップアナログ（例えば、ＧｐｐｐＧ）；ジメチル化キャップアナログ（例えば、ｍ２，７ＧｐｐｐＧ）、トリメチル化キャップアナログ（例えば、ｍ２，２，７ＧｐｐｐＧ）、ジメチル化対称キャップアナログ（例えば、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ）、または抗逆方向キャップアナログ（例えば、ＡＲＣＡ；ｍ７，２’ＯｍｅＧｐｐｐＧ、ｍ７，２’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ７，３’ＯｍｅＧｐｐｐＧ、ｍ７，３’ｄＧｐｐｐＧ、およびこれらの三リン酸化誘導体）（Stepinski et al., 2001. RNA 7(10):1486-95）。
【００３５】
また、キャップアナログは、既に記載されている（ＵＳ７，０７４，５９６、ＷＯ２００８／０１６４７３、ＷＯ２００８／１５７６８８、ＷＯ２００９／１４９２５３、ＷＯ２０１１／０１５３４７およびＷＯ２０１３／０５９４７５）。Ｎ７−（４−クロロフェノキシエチル）置換されたジヌクレオチドキャップアナログの合成が、近年記載されている（Kore et al. (2013) Bioorg. Med. Chem. 21(15): 4570-4）。
【００３６】
［タンパク質の断片］
本発明に関して、タンパク質またはペプチドの「断片」とは、通常、本明細書に規定されている一連のタンパク質またはペプチドを包含しうる。ここで、上記タンパク質またはペプチドは、そのアミノ酸配列（またはそれをコードしている核酸分子）に関して、元の（天然の）タンパク質（またはそれをコードしている核酸分子）のアミノ酸配列と比較すると、アミノ末端および／またはカルボキシル末端が切断されている。このような切断は、アミノ酸レベルでも、対応する核酸レベルでも、いずれでも起こりうる。したがって、本明細書に規定されている上記断片に関する配列同一性は、好ましくは、本明細書に規定されているタンパク質またはペプチドの全長、または、上記タンパク質またはペプチドの（コーディング）核酸分子の全長を参照していてよい。抗原に関して、上記断片は、約６〜約２０アミノ酸長、またはそれ以上のアミノ酸長でありうる。例えば、処理され、ＭＨＣクラスＩ分子により提示されている断片であって、好ましくは、約８〜約１０アミノ酸長（例えば、８、９もしくは１０、または６、７、１１もしくは１２アミノ酸）の断片でありうる。あるいは、処理され、ＭＨＣクラスＩＩ分子により提示されている断片であって、好ましくは、約１３アミノ酸長以上（例えば、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上のアミノ酸長）の断片である。このとき、上述の断片は、アミノ酸配列の任意の部分から選択されてよい。これらの断片は、通常、ペプチド断片およびＭＨＣ分子からなる複合体の形で、Ｔ細胞によって認識される。すなわち、上記断片は、通常、それ自体としては認識されない。（例えば抗原に関して、）タンパク質またはペプチドの断片は、当該タンパク質またはペプチドのエピトープを、少なくとも１つ含んでいてもよい。また、タンパク質のドメイン（細胞外ドメイン、細胞内ドメインまたは膜貫通ドメインなど）、および、タンパク質が短縮または切断されたものも、タンパク質の断片に包含されると理解されうる。タンパク質の断片には、タンパク質の機能性断片が含まれることが好ましい。これは、上記断片が、自身が由来する全長タンパク質と同じ効果または機能性を発揮することを意味する。
【００３７】
［タンパク質のバリアント］
本発明に関して規定されているタンパク質またはペプチドの「バリアント」は、１つ以上の変異（１つ以上の置換、挿入および／または欠失されたアミノ酸など）において元の配列とは異なっているアミノ酸配列を有するものとして、生じうる。これらの断片および／またはバリアントは、天然の全長タンパク質と比較して、同じ生物学的機能または特定の活性（例えば、特定の抗原性の性質）を有していることが好ましい。本発明に関して規定されているタンパク質またはペプチドの「バリアント」は、天然の配列と比較して、保存的アミノ酸置換（すなわち、生理的に変異していない）を含んでいてよい。特に、これらのアミノ酸配列（およびそれをコードしているヌクレオチド配列）は、本明細書によって規定される「バリアント」の用語に該当する。同じクラスに由来するアミノ酸が、相互に交換される置換を、保存的置換と呼ぶ。上記アミノ酸は、特に、脂肪族の側鎖を有するアミノ酸、正または負に帯電した側鎖を有するアミノ酸、側鎖に芳香族を有するアミノ酸、または、側鎖が水素結合を形成しうるアミノ酸（例えば、ヒドロキシル基を有する側鎖）である。これは、（１）例えば、極性の側鎖を有するアミノ酸は、同様に極性の側鎖を有する他のアミノ酸によって置換されること、または、（２）例えば、疎水性の側鎖を有するアミノ酸は、同様に疎水性の側鎖を有するアミノ酸によって置換されることを意味する（例えば、セリンがトレオニンによって（トレオニンがセリンによって）、または、ロイシンがイソロイシンによって（イソロイシンがロイシンによって））。特に、三次元構造に変化を及ぼさない配列中の位置において、または、結合部位に影響を及ぼさない配列中の位置においては、挿入および置換があってよい。挿入または欠失による三次元構造の変化は、例えばＣＤスペクトル（円二色性スペクトル）を用いて、容易に決定することができる（Urry, 1985, Absorption, Circular Dichroism and ORD of Polypeptides, in: Modern Physical Methods in Biochemistry, Neuberger et al. (ed.), Elsevier, Amsterdam）。
【００３８】
タンパク質またはペプチドの「バリアント」は、当該タンパク質またはペプチドの１０、２０、３０、５０、７５または１００アミノ酸長に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のアミノ酸同一性を有していてよい。
【００３９】
また、本明細書において規定されているタンパク質またはペプチドのバリアントは、核酸分子によってコードされていてもよく、以下の配列をも包含していてもよい。すなわち、コードしている核酸配列のヌクレオチドが、遺伝暗号の縮重に従って交換されているが、上記タンパク質またはペプチドのそれぞれのアミノ酸配列の変化は生じさせない（つまり、当該アミノ酸配列または少なくともその一部は、上述の意味において、元の配列から変化していない）配列をも包含していてもよい。
【００４０】
タンパク質のバリアントは、当該タンパク質の機能バリアントを包含していることが好ましい。これは、上記バリアントが、自身が由来するタンパク質と同じ効果または機能性を発揮することを意味する。
【００４１】
［配列の同一性］
２つの配列（例えば、本明細書に規定されている核酸配列またはアミノ酸配列。好ましくは、本明細書に規定されているポリマー担体の核酸配列にコードされているアミノ酸配列、またはアミノ酸配列そのもの）が同一である割合を決定する目的で、引き続いて互いに比較するために、当該配列を整列させることができる。したがって、例えば、第１の配列のある位置を、第２の配列の対応する位置と比較してよい。第１の配列のある位置が、同様に、第２の配列のある位置と同じ成分（残基）によって占められているならば、その位置において２つの配列は同一である。もしもそうでないならば、上記２つの配列は、その位置において異なっている。第１の配列と比較して、第２の配列に挿入が発生しているならば、上記第１の配列にギャップを挿入して、さらに整列させることができる。第１の配列と比較して、第２の配列に欠失が発生しているならば、上記第２の配列にギャップを挿入して、さらに整列させることができる。そして、２つの配列が同一である割合は、同じである位置の数を、全ての位置（一方の配列のみによって占められている位置も含む）の数で割った関数である。２つの配列が同一である割合は、数学的アルゴリズムを用いて決定できる。使用できる数学的アルゴリズムの好適な例は、［Karlin et al. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877］または［Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res., 25:3389-3402］のアルゴリズムである。（ただし、これには限定されない）。上記アルゴリズムは、ＢＬＡＳＴプログラムに統合されている。本発明の配列と一定程度同じである配列は、このプログラムによって特定できる。
【００４２】
［単シストロンｍＲＮＡ］
単シストロンｍＲＮＡは、通常、コーディング配列（オープンリーディングフレーム）を１つだけ含んでいる、ｍＲＮＡでありうる。これに関して、コーディング配列／オープンリーディングフレームとは、ペプチドまたはタンパク質に翻訳されることのできる、いくつかのヌクレオチド・トリプレット（コドン）の配列である。
【００４３】
［核酸］
用語「核酸」は、任意のＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を意味し、「ポリヌクレオチド」の同義語として用いられる。（１）核酸、または（２）特定のタンパク質および／またはペプチドをコードしている核酸配列について、本明細書のどこで言及されていても、当該核酸または核酸配列は、それぞれ、調節配列も含んでいることが好ましい。調節配列によって、適切な宿主（例えば人間）において、特定のタンパク質またはペプチドをコードしている核酸配列が、発現（すなわち、転写および／または翻訳）することができる。
【００４４】
［ペプチド］
ペプチドとは、アミノ酸モノマーの重合体である。通常、上記モノマーは、ペプチド結合によって連結されている。用語「ペプチド」は、アミノ酸のポリマー鎖の長さを限定しない。本発明のいくつかの実施形態において、ペプチドは、例えば、５０未満のモノマー単位を含んでいてもよい。より長いペプチドのことは、「ポリペプチド」とも呼ぶ。ポリペプチドは、通常、５０〜６００のモノマー単位、より具体的には５０〜３００のモノマー単位を有している。
【００４５】
［薬学的に効果のある量］
本発明に関して、「薬学的に効果のある量」とは、通常、免疫応答を誘導するため、または、所望の治療効果を引き起こすために充分な量として理解される。
【００４６】
［タンパク質］
タンパク質は、通常、ペプチドおよび／またはポリペプチドの１つ以上からなる。また、当該ペプチドおよび／またはポリペプチドは、三次元的な形状に折り畳まれており、生物学的機能を促進する。
【００４７】
［ポリ（Ｃ）配列］
ポリ（Ｃ）配列は、通常、シトシンヌクレオチドの長い配列である。上記配列は、通常は約１０〜約２００個のシトシンヌクレオチドであり、好ましくは約１０〜約１００個のシトシンヌクレオチドであり、より好ましくは約１０〜約７０個、または、より一層好ましくは約２０〜約５０個、または、さらに好ましくは約２０〜約３０個のシトシンヌクレオチドである。ポリ（Ｃ）配列は、好ましくは、核酸に含まれているコーディング領域の、３’に位置していてよい。
【００４８】
［ポリ（Ａ）テール］
ポリ（Ａ）テールは、「３’ポリ（Ａ）テール」または「ポリ（Ａ）配列」とも呼ばれる。ポリ（Ａ）テールは、通常、アデノシンヌクレオチドが最大４００個のアデノシンヌクレオチドまで単独重合された長い配列で、ｍＲＮＡの３’末端に付加されている。ポリ（Ａ）テールの長さは、例えば、約２５〜約４００個、好ましくは約５０〜約４００個、より好ましくは約５０〜約３００個、より一層好ましくは約５０〜約２５０個、最も好ましくは約６０〜約２５０個のアデノシンヌクレオチドである。本発明に関して、ｍＲＮＡのポリ（Ａ）テールは、ＤＮＡの鋳型から、in vitroＲＮＡ転写によって生じることが好ましい。あるいは、ポリ（Ａ）配列は、ＤＮＡ先駆体から転写する必要のない従来の化学合成法によって、in vitroで得ることもできる。さらに、ポリ（Ａ）配列またはポリ（Ａ）テールを、酵素によるＲＮＡのポリアデニル化によって生成してもよい。
【００４９】
［安定化核酸］
安定化核酸は、通常、in vivoでの分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる分解）、および／または、ex vivoでの分解（例えば、ワクチン投与に先立つ製造プロセス（例えば、投与すべきワクチン溶液の調製過程における）による）に対する抵抗が増加するような、変化を有している。ＲＮＡの安定化は、例えば、５’キャップ構造、ポリ（Ａ）テール、または他の任意のＵＴＲ改変を与えることによって達成されうる。ＲＮＡの安定化はまた、バックボーン修飾、または、核酸のＧ／Ｃ含有量もしくはＣ含有量の調整によっても達成されうる。他の種々の方法が周知であり、本発明に関して想定されうる。
【００５０】
［担体／ポリマー担体］
本発明に関して、担体とは、通常、他の化合物の輸送および／または複合体形成を促進する、化合物であってよい。上記担体は、上記他の化合物と、複合体を形成していてよい。ポリマー担体とは、ポリマーの形状を成している担体である。
【００５１】
［カチオン性成分］
用語「カチオン性成分」は、通常、下記のｐＨ値において正に帯電している、帯電分子（カチオン）を表す：通常はｐＨ約１〜９、好ましくはｐＨ９未満（例えば５〜９）またはｐＨ８未満（例えば５〜８）またはｐＨ７未満（例えば５〜７）、最も好ましくは生理的なｐＨ値（例えば約７．３〜７．４）。したがって、本発明に係るカチオン性ペプチド、カチオン性タンパク質またはカチオン性ポリマーは、生理的条件において（特にin vivo細胞の生理的食塩水条件において）、正に帯電している。カチオン性ペプチドまたはタンパク質は、他のアミノ酸残基よりも、より多くのカチオン性アミノ酸（例えば、より多くのＡｒｇ、Ｈｉｓ、ＬｙｓまたはＯｒｎ）を含んでいることが好ましい。特に、アニオン性アミノ酸残基（ＡｓｐまたはＧｌｕなど）よりも、より多くのカチオン性アミノ酸を含んでいることが好ましい。あるいは、カチオン性ペプチドまたはタンパク質は、カチオン性アミノ酸残基によって大部分が形成されている部分を含んでいることが好ましい。「カチオン性」の定義は、「ポリカチオン性」成分にも参照されうる。
【００５２】
［ビヒクル］
ビヒクルとは、個体に対する薬学的組成物またはワクチンの成分の投与を容易にするために、当該薬学的組成物またはワクチンに含ませて、通常用いられうる物質（例えば担体）である。
【００５３】
［３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）］
３’−ＵＴＲは、通常、ｍＲＮＡの一部であって、当該ｍＲＮＡのタンパク質をコードしている領域（すなわちオープンリーディングフレーム）と、ポリ（Ａ）配列との間に位置している。ｍＲＮＡの３’−ＵＴＲは、アミノ酸配列に翻訳されない。一般的に、３’−ＵＴＲ配列は、遺伝子の発現過程においてそれぞれのｍＲＮＡに転写される遺伝子によって、コードされている。まず、遺伝子配列が転写されて、任意に含まれるイントロンを含んでいる未成熟ｍＲＮＡとなる。その後、未成熟ｍＲＮＡは、成熟過程においてさらにプロセシングされて、成熟ｍＲＮＡとなる。この成熟過程には、５’キャッピングの過程、未成熟ｍＲＮＡをスプライシングして任意に含まれるイントロンを切除する過程、３’末端を修飾する過程（例えば、未成熟ｍＲＮＡの３’末端のポリアデニル化、および任意に含まれる、エンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼによる切断、など）、が含まれる。本発明に関して、成熟ｍＲＮＡの３’−ＵＴＲに該当する配列は、タンパク質をコードしている領域のストップコドンの３’側に位置しており、当該タンパク質をコードしている領域のストップコドンの３’に隣接していることが好ましい。また、３’−ＵＴＲに該当するｍＲＮＡの配列は、ポリ（Ａ）配列の５’側まで伸長しており、ポリ（Ａ）配列の５’に隣接しているヌクレオチドまで伸長していることが好ましい。ここで、用語「該当する」とは、上記３’−ＵＴＲ配列が、ｍＲＮＡ配列中において３’−ＵＴＲ配列の規定に用いられるようなＲＮＡ配列（または、そのようなＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列）でありうることを意味する。本発明に関して、用語「遺伝子の３’−ＵＴＲ」（「アルブミン遺伝子の３’−ＵＴＲ」など）とは、当該遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡ（すなわち、上記遺伝子を転写し、未成熟ｍＲＮＡを成熟させることにより得られるｍＲＮＡ）の、３’−ＵＴＲに該当する配列である。用語「遺伝子の３’−ＵＴＲ」には、当該３’−ＵＴＲのＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列が含まれる。
【００５４】
［５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）］
５’−ＵＴＲは、通常、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の特定の領域であると理解される。５’−ＵＴＲは、ｍＲＮＡのオープンリーディングフレームの５’に位置している。通常、５’−ＵＴＲは、転写開始点から始まり、オープンリーディングフレームの開始コドンの１ヌクレオチド前で終わる。５’−ＵＴＲは、遺伝子発現を調節するための因子（調節因子とも呼ぶ）を含んでいてもよい。このような調節因子は、例えば、リボソーム結合部位、または５’末端オリゴピリミジン配列でありうる。５’−ＵＴＲは、転写後の修飾を受けてもよい（例えば５’キャップの付加により）。本発明に関して、成熟ｍＲＮＡの５’−ＵＴＲに該当する配列は、５’キャップと開始コドンとの間に位置している。５’−ＵＴＲは、５’キャップの３’側に位置するヌクレオチドから（好ましくは、上記５’キャップの３’に隣接するヌクレオチドから）、タンパク質をコードしている領域の開始コドンの５’側に位置するヌクレオチドまで（好ましくは、上記タンパク質をコードしている領域の開始コドンの５’に隣接するヌクレオチドまで）、伸長している配列に該当することが好ましい。成熟ｍＲＮＡの、上記５’キャップの３’に隣接するヌクレオチドは、通常、転写開始点に該当する。ここで、用語「該当する」とは、上記５’−ＵＴＲ配列が、ｍＲＮＡ配列中において５’−ＵＴＲ配列の規定に用いられるようなＲＮＡ配列（または、そのようなＲＮＡ配列に対応するＤＮＡ配列）でありうることを意味する。本発明に関して、用語「遺伝子の５’−ＵＴＲ」（「ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲ」など）とは、当該遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡ（すなわち、上記遺伝子を転写し、未成熟ｍＲＮＡを成熟させることにより得られるｍＲＮＡ）の、５’−ＵＴＲに該当する配列である。用語「遺伝子の５’−ＵＴＲ」には、当該５’−ＵＴＲのＤＮＡ配列およびＲＮＡ配列が含まれる。
【００５５】
［５’末端オリゴピリミジン配列（ＴＯＰ）］
５’末端オリゴピリミジン配列（ＴＯＰ）とは、通常、核酸分子の５’末端領域に位置する、ピリミジンヌクレオチドの連続配列である。上記核酸分子の５’末端領域とは、特定のｍＲＮＡ分子の５’末端領域、または機能単位の５’末端領域（例えば、特定の遺伝子の転写領域）などである。上記配列はシチジンから始まり（通常は転写開始点に該当する）、通常は約３〜３０個のピリミジンヌクレオチドの連続配列が続く。ＴＯＰは、例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個またはそれ以上のヌクレオチドを含んでいてよい。ピリミジンの連続配列は（したがって５’ＴＯＰは）、ＴＯＰの下流に位置する最初のプリンヌクレオチドから、１ヌクレオチド５’側で終了する。５’末端オリゴピリミジン配列を含んでいるｍＲＮＡを、通常、ＴＯＰ  ｍＲＮＡと呼ぶ。したがって、そのようなｍＲＮＡを産生する遺伝子を、ＴＯＰ遺伝子と呼ぶ。ＴＯＰ配列は、例えば、ペプチド伸長因子およびリボソームタンパク質をコードしている遺伝子およびｍＲＮＡで見つかっている。
【００５６】
［ＴＯＰモチーフ］
本発明に関して、ＴＯＰモチーフとは、上記に規定されている５’ＴＯＰに対応する、核酸配列である。したがって、本発明に関してＴＯＰモチーフは、３〜３０個のヌクレオチド長のピリミジンヌクレオチドの連続配列であることが好ましい。ＴＯＰモチーフは、少なくとも３個のピリミジンヌクレオチドから構成されており、好ましくは少なくとも４個のピリミジンヌクレオチド、好ましくは少なくとも５個のピリミジンヌクレオチド、より好ましくは少なくとも６個のピリミジンヌクレオチド、より好ましくは少なくとも７個のピリミジンヌクレオチド、最も好ましくは少なくとも８個のピリミジンヌクレオチドから構成されていることが好ましい。このとき、ピリミジンヌクレオチドの連続配列は、５’末端にシトシンヌクレオチドを伴って始まることが好ましい。ＴＯＰ遺伝子およびＴＯＰ  ｍＲＮＡにおいて、ＴＯＰモチーフは、５’末端に転写開始点を伴って始まることが好ましい。また、ＴＯＰモチーフは、上記遺伝子またはｍＲＮＡのＴＯＰの最初のプリンヌクレオチド残基から、１ヌクレオチド５’側で終了することが好ましい。本発明の意味におけるＴＯＰモチーフは、５’−ＵＴＲを表す配列の５’末端、または５’−ＵＴＲをコードしている配列の５’末端、に位置していることが好ましい。したがって、３個以上のピリミジンヌクレオチドの連続配列が、それぞれの配列（本発明のｍＲＮＡ、本発明のｍＲＮＡの５’−ＵＴＲ因子、または、本明細書に記載されているＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲに由来する核酸配列など）の５’末端に位置しているならば、当該連続配列を、本発明の意味における「ＴＯＰモチーフ」と呼ぶことが好ましい。換言すると、３個以上のピリミジンヌクレオチドの連続配列であって、５’−ＵＴＲまたは５’−ＵＴＲ因子の５’末端に位置しておらず、５’−ＵＴＲ内または５’−ＵＴＲ因子内のどこかに位置しているものは、「ＴＯＰモチーフ」と呼ばないことが好ましい。
【００５７】
［ＴＯＰ遺伝子］
ＴＯＰ遺伝子は、通常、５’末端オリゴピリミジン配列の存在によって特徴づけられる。また、ほとんどのＴＯＰ遺伝子は、成長関連の翻訳調節によって特徴づけられる。しかし、組織特異的な翻訳調節を伴うＴＯＰ遺伝子も知られている。上述したように、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲは、ＴＯＰ遺伝子に由来する成熟ｍＲＮＡの５’−ＵＴＲ配列（５’キャップの３’側に位置するヌクレオチドから、開始コドンの５’側に位置するヌクレオチドまで伸長していることが好ましい）に対応している。ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲは、通常、開始コドンを全く含んでいない（好ましくは、上流のＡＵＧ（ｕＡＵＧ）または上流のオープンリーディングフレーム（ｕＯＲＦ）を含んでいない）。ここで、上流のＡＵＧおよび上流のオープンリーディングフレームは、通常、翻訳されるべきオープンリーディングフレームの開始コドン（ＡＵＧ）の５’側に存在している、ＡＵＧおよびオープンリーディングフレームであると理解される。一般的に、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲは、やや短い。ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲの長さは、２０ヌクレオチド〜５００ヌクレオチドの間で変化しうる。上記長さは、通常は約２００ヌクレオチド未満であり、好ましくは約１５０ヌクレオチド未満であり、より好ましくは約１００ヌクレオチド未満である。本発明の意味におけるＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲの代表例は、国際公開ＷＯ２０１３／１４３７００の、配列番号１〜１３６３、１３９５、１４２１および１４２２に係る配列において、第５位のヌクレオチドから、開始コドン（例えばＡＴＧ）の５’側に隣接するヌクレオチドまで伸長している核酸配列、またはそのホモログもしくはバリアントである（上記開示は、参照により本明細書に組み込まれる）。これに関して、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲの特に好適な断片は、５’−ＴＯＰモチーフを欠失している、ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲである。用語「ＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲ」とは、好ましくは、自然に存在するＴＯＰ遺伝子の５’−ＵＴＲを表す。
【００５８】
［ＲＮＡの化学合成］
所定の化学構造を有している比較的短いオリゴヌクレオチド断片の化学合成によって、所望の配列を有している特注のオリゴヌクレオチドが、迅速かつ廉価に入手できる。ＤＮＡおよびＲＮＡの酵素合成は、５’から３’へ向かう方向のみである。これに対し、オリゴヌクレオチドの化学合成には、上記の制限はない（とは言うものの、ほとんどの場合は、逆方向（すなわち３’から５’へ向かう方向）にて行われる）。近年では、上述の製造方法は、（１）ホスホラミダイト法、および、（２）保護ヌクレオシド（Ａ、Ｃ、ＧおよびＵ）または化学修飾されたヌクレオシドに由来するホスホラミダイト・ビルディングブロック、を用いる固相合成として実施されている。
【００５９】
所望のオリゴヌクレオチドを得るために、ビルディングブロックを、伸長中のオリゴヌクレオチド鎖に対して、固相上で連続的に連結する。上記連結は、完成品の配列に要求される順序で、完全に自動化されたプロセスで行われる。鎖の組み立てが完了すると、固相から溶液中に産物を切り離し、脱保護化し、回収する。副反応が存在するため、合成オリゴヌクレオチドの長さには、実用上の限界がある（最大で約２００ヌクレオチド残基）。なぜならば、合成されるオリゴヌクレオチドの長さと共に、エラーの数が増加するからである。産物は通常、ＨＰＬＣによって分離され、所望のオリゴヌクレオチドを高純度で得る。
【００６０】
化学合成されたオリゴヌクレオチドは、分子生物学および医学において、様々に応用されている。最も広く用いられているのは、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ、ＤＮＡの配列決定用および増幅用のプライマー、分子ハイブリダイゼーションにより相補的ＤＮＡまたはＲＮＡを検出するためのプローブ、変異および制限部位を標的箇所に導入するための道具、および、人工遺伝子の合成用である。
【００６１】
［ＲＮＡのin vitro転写］
用語「ＲＮＡのin vitro転写」または「in vitro転写」とは、無細胞系（in vitro）にてＲＮＡを合成するプロセスを表す。ＤＮＡ（特にプラスミドＤＮＡ）が、ＲＮＡ転写を発生させる鋳型として用いられる。適切なＤＮＡ鋳型（本発明に関しては、線形化されたプラスミドＤＮＡ鋳型が好ましい）を、ＤＮＡ依存的にin vitro転写することによって、ＲＮＡを得てもよい。in vitro転写を調節するプロモーターは、任意のＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼのための、任意のプロモーターでありうる。ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの具体例としては、Ｔ７、Ｔ３およびＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼがある。ＲＮＡのin vitro転写のためのＤＮＡ鋳型は、核酸（特に、in vitro転写されるべきそれぞれのＲＮＡに対応する、ｃＤＮＡ）のクローニングによって得てもよい。上記ＤＮＡ鋳型は、in vitro転写のための適切なベクターに（例えば、プラスミドＤＮＡ中に）導入されてもよい。本発明の好ましい実施形態において、ＤＮＡ鋳型は、in vitro転写される前に、適切な制限酵素によって線形化される。ｃＤＮＡは、ｍＲＮＡの逆転写、または化学合成によって得てもよい。また、in vitro転写のためのＤＮＡ鋳型は、遺伝子合成によって得てもよい。
【００６２】
in vitro転写の方法は、周知である（例えば、［Geall et al. (2013) Semin. Immunol. 25(2): 152-159］、［Brunelle et al. (2013) Methods Enzymol. 530:101-14］を参照）。上述の方法において、通常用いられる試薬には、以下が含まれる：
１）プロモーター配列を含む、線形化されたＤＮＡ鋳型。上記ＤＮＡ鋳型は、それぞれのＲＮＡポリメラーゼ（バクテリオファージ型ＲＮＡポリメラーゼなど）に対する、高い結合アフィニティを有している；
２）４種類の塩基（アデニン、シトシン、グアニンおよびウラシル）について、リボヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）；
３）任意で、上述のキャップアナログ（例えば、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（ｍ７Ｇ））；
４）ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ７、Ｔ３またはＳＰ６ＲＮＡポリメラーゼ）。上記ポリメラーゼは、上記線形化されたＤＮＡ鋳型内の、上記プロモーター配列に結合することができる；
５）任意で、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）阻害剤。混入した任意のＲＮａｓｅを不活性化させるためのもの；
６）任意で、ピロリン酸（転写を阻害する）を分解するための、ピロホスファターゼ；
７）ポリメラーゼの補助因子であるＭｇ２＋イオンを供給する、ＭｇＣｌ２；
８）適切なｐＨ値を保つための緩衝液。上記緩衝液には、酸化防止剤（例えばＤＴＴ）および／またはポリアミン（スペルミジンなど）を、最適の濃度で含ませることができる。
【００６３】
［ＲＮＡ、ｍＲＮＡ］
ＲＮＡは、リボ核酸(ribonucleic acid)の慣例的な略語である。ＲＮＡは核酸分子である。すなわち、ヌクレオチドモノマーからなるポリマーである。これらのヌクレオチドは、通常、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）モノマー、ウリジン一リン酸（ＵＭＰ）モノマー、グアノシン一リン酸（ＧＭＰモノマー）およびシチジン一リン酸（ＣＭＰ）モノマー、またはそのアナログである。これらのモノマーは、いわゆるバックボーンに沿って、互いに連結されている。バックボーンは、第１のモノマーの糖（すなわちリボース）と、隣接する第２のモノマーのリン酸部分との間の、リン酸ジエステル結合によって形成されている。特定のモノマーの順序（すなわち、糖／リン酸バックボーンに結合している塩基の順序）は、ＲＮＡ配列と呼ばれる。通常、ＲＮＡは、ＤＮＡ配列の転写によって得られうる（例えば、細胞内で）。真核細胞においては、転写は、通常、核内またはミトコンドリア内で行われる。in vivoでは、通常、ＤＮＡが転写されると、いわゆる未成熟ＲＮＡ（ｐｒｅ−ｍＲＮＡ、前駆体ｍＲＮＡまたはヘテロ核ＲＮＡとも呼ばれる）になる。未成熟ＲＮＡは、いわゆるメッセンジャーＲＮＡ（通常はｍＲＮＡと略記される）にプロセシングを受けねばならない。未成熟ＲＮＡのプロセシング（例えば、真核生物における）には、種々の異なる転写後修飾が含まれる（例えば、スプライシング、５’キャッピング、ポリアデニル化、核外またはミトコンドリア外への輸送、など）。これらの全過程を、ＲＮＡの成熟とも呼ぶ。成熟メッセンジャーＲＮＡは、通常、特定のペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列に翻訳されうる、ヌクレオチド配列を提供する。通常、成熟ｍＲＮＡは、５’キャップ、任意で５’−ＵＴＲ、オープンリーディングフレーム、任意で３’−ＵＴＲ、およびポリ（Ａ）テールを含んでいる。
【００６４】
メッセンジャーＲＮＡに加えて、ノンコーディング型のＲＮＡも、いくつか存在する。ノンコーディング型のＲＮＡは、転写および／または翻訳の調節、ならびに免疫賦活に関わりうる。本発明においては、用語「ＲＮＡ」には、公知である任意の種類の一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）分子または二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子が、さらに包含される。このようなＲＮＡには、ウイルスＲＮＡ、レトロウイルスＲＮＡ、およびレプリコンＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）、環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）、リボザイム、アプタマー、リボスイッチ、免疫賦活化ＲＮＡ／免疫賦活性ＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、およびＰｉｗｉ−結合ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）などがある。
【００６５】
［核酸配列の断片（特にＲＮＡ）］
核酸配列の断片は、ヌクレオチドの連続配列からなり、全長のヌクレオチド配列内のヌクレオチドの連続配列と対応している。上記全長のヌクレオチド配列は、上記断片のヌクレオチド配列の基準となる。また、上記断片は、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、より一層好ましくは少なくとも６０％、より一層好ましくは少なくとも７０％、より一層好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％の、全長の核酸配列に相当している。本発明に関して、このような断片は、全長の核酸配列の機能性断片であることが好ましい。
【００６６】
［核酸配列のバリアント（特にＲＮＡ）］
核酸配列のバリアントとは、核酸配列の基準となっている核酸配列の、バリアントを表す。例えば、バリアント核酸配列は、当該バリアントが由来する核酸配列と比較して、１つ以上のヌクレオチドの欠失、挿入、付加および／または置換を有していてもよい。核酸配列のバリアントは、当該バリアントが由来する核酸配列に対して、少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも６０％、より好ましくは少なくとも７０％、より一層好ましくは少なくとも８０％、より一層好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％、同一であることが好ましい。バリアントは、機能性バリアントであることが好ましい。核酸配列の「バリアント」は、連続する１０、２０、３０、５０、７５または１００個のヌクレオチドのヌクレオチド配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のヌクレオチド同一性を有していてもよい。
【００６７】
［腫瘍内投与／腫瘍内適用］
用語「腫瘍内投与／腫瘍内適用」は、（１）癌または腫瘍の内部または近隣、および／または（２）癌または腫瘍のすぐ近く、への、薬学的組成物の直接的な送達を表す。癌または腫瘍の離れた領域への、複数回の注入も含まれる。さらに、腫瘍内投与／腫瘍内適用には、１つ以上の転移への、薬学的組成物の送達も含まれる。
【００６８】
薬を腫瘍内投与する方法は、公知である（Brincker, 1993. Crit. Rev. Oncol. Hematol. 15(2):91-8; Celikoglu et al., 2008. Cancer Therapy 6, 545-552）。例えば、従来の針による注射、無針ジェット注射もしくはエレクトロポレーション、またはこれらの組み合わせによって、薬学的組成物を、癌組織または腫瘍組織内に投与することができる。コンピュータ断層撮影、超音波、ガンマカメライメージング、ポジトロン断層撮影、または磁気共鳴腫瘍イメージングを用いることにより、薬学的組成物を、腫瘍または癌（組織）内に、高い正確性をもって直接的に注入することができる。さらなる手段は、以下による直接的な腫瘍内注入を含む群から選択されるが、これらに限定されない：内視鏡、気管支鏡、膀胱鏡、大腸内視鏡、腹腔鏡およびカテーテル法。
【００６９】
［デコイ受容体］
デコイ受容体は、特定の成長因子またはサイトカインを、高いアフィニティおよび特異性にて認識する。しかし、デコイ受容体は、構造的に、シグナル伝達ができない、または、シグナル受容体複合体に対するアゴニストの提供ができない。デコイ受容体は、アゴニストおよびシグナル受容体成分に対する、分子トラップとして働く。デコイ受容体（または吸込み受容体(sink receptor)）は、リガンドに結合し、リガンドが正常な受容体に対して結合するのを阻害する受容体である。例えば、ＶＥＧＦＲ−１受容体は、血管内皮成長因子（ＶＧＥＦ）がＶＥＧＦＲ−２に対して結合するのを、阻害することができる。
【００７０】
［ドミナント・ネガティブ受容体］
ドミナント・ネガティブ受容体は、ドミナント・ネガティブ（ＤＮ）変異を有している、特定の受容体のバリアントである。その結果、変異ポリペプチドが過剰に発現した場合、野生型受容体の活性を阻害する。
【００７１】
〔発明の詳細な説明〕
本発明に係るＲＮＡ含有組成物は、少なくとも１つのＲＮＡを含んでおり、特に、腫瘍および／または癌疾患の、処置または予防に使用するために提供される。ここで、上記ＲＮＡ含有組成物は、腫瘍内に適用／投与されることが好ましい。上記ＲＮＡ含有組成物は、腫瘍組織内に直接的に注入されることが、特に好ましい。あるいは、上記ＲＮＡ含有組成物は、腫瘍組織および／または転移の近隣に注入されること、または、すぐ近くに注入されることが、特に好ましい。
【００７２】
本発明者らは、腫瘍内適用として、本発明に係るＲＮＡ含有組成物をそれぞれ投与することにより、腫瘍疾患および／または癌疾患、ならびにその関連障害を効果的に処置できることを見出した。腫瘍内適用が、腫瘍の大きさを減少させることにおいて、驚くほど効果的であることが示された。また、本発明に係るＲＮＡ含有組成物の投与により、動物モデルにおいて生存率を上昇させることができた。
【００７３】
上記ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、以下からなる群より選択されてよい：化学修飾されているＲＮＡまたは化学修飾されていないＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡまたは二本鎖ＲＮＡ、コーディングＲＮＡまたはノンコーディングＲＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴリボヌクレオチド、ウイルスＲＮＡ、レトロウイルスＲＮＡ、レプリコンＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、免疫賦活性ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、低分子ヘアピン型（ｓｈ）ＲＮＡ、リボスイッチ、ＲＮＡアプタマー、ＲＮＡデコイ、アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）リボザイム、またはこれらの任意の組み合わせ。
【００７４】
特定の実施形態において、上記ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、コーディングＲＮＡまたはノンコーディングＲＮＡから選択される。
【００７５】
［コーディングＲＮＡ］
本発明の好ましい実施形態によれば、上記ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードしている、少なくとも１つのコーディング領域を含んでいる。
【００７６】
上記コーディングＲＮＡは、ｍＲＮＡ、ウイルスＲＮＡ、レトロウイルスＲＮＡおよびレプリコンＲＮＡからなる群より選択されることが好ましい。
【００７７】
本発明の好ましい実施形態において、上記ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、以下をコードしている：（１）少なくとも１つのサイトカイン、および／または、（２）少なくとも１つのケモカイン、および／または、（３）少なくとも１つの自殺遺伝子産物、および／または、（４）少なくとも１つの免疫原性のタンパク質もしくはペプチド、および／または、（５）少なくとも１つの細胞死／アポトーシス誘導因子、および／または、（６）少なくとも１つの血管新生阻害因子、および／または、（７）少なくとも１つのヒートショックタンパク質、および／または、（８）少なくとも１つの腫瘍抗原、および／または、（９）少なくとも１つのβ−カテニン阻害因子、および／または、（１０）少なくとも１つのＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激因子）経路の活性化因子、および／または、（１１）少なくとも１つのチェックポイント調節因子、および／または、（１２）少なくとも１つの自然免疫活性化因子、および／または、（１３）少なくとも１つの抗体、および／または、（１４）少なくとも１つのドミナント・ネガティブ受容体、および／または、（１５）少なくとも１つのデコイ受容体、および／または、（１６）少なくとも１つの骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子、および／または、（１７）少なくとも１つのＩＤＯ経路阻害因子、および／または、（１８）少なくとも１つのアポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質もしくはペプチド、または、その断片もしくはバリアント。これらについては、以下により詳細に説明する。
【００７８】
＜１．サイトカイン＞
本発明のＲＮＡ含有組成物の好ましい実施形態において、上記ＲＮＡは、少なくとも１つのサイトカイン（またはその断片もしくはバリアント）をコードしている、少なくとも１つのコーディング領域を含んでいる。
【００７９】
サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）であることが好ましい。１つ以上のインターロイキンを、例えば以下の一覧から選択してもよい：ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ（アンタゴニスト）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８Ａ／Ｂ、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＬ−３５。また、サイトカインは、ＴＮＦファミリーから選択される１つ以上のサイトカインであってもよい。このとき、例えば以下の一覧から選択される：ＴＮＦ（特にＴＮＦα）、ＬＴα、ＬＴβ、ＬＩＧＨＴ、ＴＷＥＡＫ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＦＡＳＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫリガンド。好ましいサイトカインのさらなる例を、以下の一覧から選択してもよい：ＦＬＴ３リガンド、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα／β／ω、ＩＦＮγ、ＬＩＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＦ、ＯＳＭ、幹細胞因子、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３、ＴＳＬＰリガンド。
【００８０】
以下の一覧から選択されるサイトカインが、特に好ましい：ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１８、ＩＦＮα、ＩＬ−１β、ＩＬ−３２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ。
【００８１】
本発明の特に好ましい実施形態において、本発明の組成物のＲＮＡは、インターロイキン−１２またはＣＤ４０Ｌをコードしている。本発明のアプローチで適用した場合、これらのサイトカインをコードしているｍＲＮＡが特に効果的であることを、本発明者らは示した。以下の配列番号に係る、ＩＬ−１２をコードしているＲＮＡ配列が、特に好ましい：配列番号１、３、４１９４、４１９５、４１９６、４１９７、４１９８、４１９９、４２００。また、以下の配列番号に係る、ＣＤ４０ＬをコードしているＲＮＡ配列も、特に好ましい：配列番号３８９８、３８９９、３９００、３９０１、３９０２、３９０３、３９０４、１００７３。
【００８２】
本発明に関する好ましい実施形態によれば、サイトカインは、以下からなる群より選択される、任意のサイトカインから選択されうる（好ましくは、表１に開示されている通り）：４−１ＢＢＬ；Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ；ＡＰＲＩＬ；ＢＡＦＦ；ＣＤ２７Ｌ；ＣＤ３０Ｌ；ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）；ＣＸＣＬ８；ＥＬ−１７Ｃ；ＦａｓＬ；ＦＬＴ３リガンド；Ｇ−ＣＳＦ；ＧＩＴＲＬ；ＧＭ−ＣＳＦ；ＩＦＮα；ＩＦＮＢ；ＩＦＮＧ；ＩＦＮω；ＩＬ−１α；ＩＬ−１β；ＩＬ−１０；ＩＬ−１１；ＩＬ−１２；ＩＬ−１２Ａ；ＩＬ−１３；ＩＬ−１４；ＩＬ−１５；ＩＬ−１６；ＩＬ−１７Ａ；ＩＬ−１７Ｂ；ＩＬ−１７Ｄ；ＩＬ−１７Ｆ；ＩＬ−１８；ＩＬ−１９；ＩＬ−１ｒａ（アンタゴニスト）；ＩＬ−２；ＩＬ−２０；ＩＬ−２１；ＩＬ−２２；ＩＬ−２３；ＩＬ−２４；ＩＬ−２５；ＩＬ−２６；ＩＬ−２７Ａ；ＩＬ−２７Ｂ；ＩＬ−２８Ａ；ＩＬ−２８Ｂ；ＩＬ−２９；ＩＬ−３；ＩＬ−３１；ＩＬ−３２；ＩＬ−３３；ＩＬ−３７；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−６；ＩＬ−７；ＩＬ−９；ＬＩＦ；ＬＩＧＨＴ；ＬＴα；ＬＴβ；Ｍ−ＣＳＦ；ＭＩＦ；ＯＳＭ；ＯＸ４０Ｌ；ＲＡＮＫリガンド；幹細胞因子；ＴＧＦβ１；ＴＧＦβ２；ＴＧＦβ３；ＴＬ１Ａ；ＴＮＦ；ＴＷＥＡＫ。これに関して、表１に係る、サイトカインをコードしているＲＮＡ配列が特に好ましい。
【００８３】
【表１】
2018517674.tif 000002
【００８４】
2018517674.tif 000003
【００８５】
2018517674.tif 000004
【００８６】
2018517674.tif 000005
【００８７】
2018517674.tif 000006
【００８８】
2018517674.tif 000007
【００８９】
2018517674.tif 000008
【００９０】
2018517674.tif 000009
【００９１】
2018517674.tif 000010
【００９２】
本発明によれば、より好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１つのＲＮＡを含んでいる。好ましくは、上記ＲＮＡは、少なくとも１つのサイトカインまたはその断片もしくはバリアントをコードしている、少なくとも１つのコーディング領域を含んでいるｍＲＮＡである。ここで、上記少なくとも１つのコーディング領域は、表１に開示されている配列番号に係るＲＮＡ配列に対して、全く同一か、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一である、ＲＮＡ配列を含んでいる。
【００９３】
＜２．ケモカイン＞
本発明のＲＮＡ含有組成物の、さらに好ましい実施形態において、上記ＲＮＡは、少なくとも１つのケモカイン（またはその断片もしくはバリアント）をコードしている、少なくとも１つのコーディング領域を含んでいる。
【００９４】
ケモカインは、走化性サイトカイン（"chemo"tactic cyto"kines"）であり、免疫細胞の移動パターンおよび配置を制御する。このことは、［Griffith et al., 2014. Annu. Rev. Immunol. 32:659-702 (PMID 24655300)］によって概説されている。ケモカインの機能は、全ての免疫細胞の移動にとって重要であり、免疫細胞の発生およびホメオスタシスに要求される移動から、一次および二次の細胞性／体液性免疫応答の開始に要求される移動、病気の際の病理的な免疫細胞の増加まで及んでいる。ケモカインは、サイトカインにおける最大のファミリーを構成しており、ヒトおよびマウスにおいては、約５０の内因性ケモカインリガンドから構成されている。
【００９５】
本発明に関する好ましい実施形態によると、ケモカインは、以下からなる群より選択される任意のケモカインから選択されうる（好ましくは、表２に開示されている通り）：ＣＣＬ１；ＣＣＬ１１；ＣＣＬ１２；ＣＣＬ１３；ＣＣＬ１４；ＣＣＬ１５；ＣＣＬ１６；ＣＣＬ１７；ＣＣＬ１８；ＣＣＬ１９；ＣＣＬ２；ＣＣＬ２０；ＣＣＬ２１；ＣＣＬ２２；ＣＣＬ２４；ＣＣＬ２５；ＣＣＬ２６；ＣＣＬ２７；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３；ＣＣＬ４；ＣＣＬ５；ＣＣＬ６；ＣＣＬ７；ＣＣＬ８；ＣＣＬ９；ＣＸ３ＣＬ１；ＣＸＣＬ１；ＣＸＣＬ１０；ＣＸＣＬ１１；ＣＸＣＬ１２；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１５；ＣＸＣＬ２；ＣＸＣＬ３；ＣＸＣＬ４；ＣＸＣＬ５；ＣＸＣＬ６；ＣＸＣＬ７；ＣＸＣＬ８；ＣＸＣＬ９；ＸＣＬ１；ＸＣＬ２。これに関して、表２に係る、ケモカインをコードしているＲＮＡ配列が特に好ましい。
【００９６】
【表２】
2018517674.tif 000011
【００９７】
2018517674.tif 000012
【００９８】
2018517674.tif 000013
【００９９】
2018517674.tif 000014
【０１００】
これに関して、以下の一覧から選択されるケモカインが特に好ましい：ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＣＬ５、ＸＣＬ１、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ１６およびＣＸＣＬ１２。
【０１０１】
本発明によれば、より好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１つのＲＮＡを含んでいる。好ましくは、上記ＲＮＡは、少なくとも１つのケモカインまたはその断片もしくはバリアントをコードしている、少なくとも１つのコーディング領域を含んでいるｍＲＮＡである。ここで、上記少なくとも１つのコーディング領域は、表２に開示されている配列番号に係るＲＮＡ配列に対して、全く同一か、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一である、ＲＮＡ配列を含んでいる。
【０１０２】
＜３．自殺遺伝子産物＞
本発明のＲＮＡ含有組成物の、さらに好ましい実施形態において、上記ＲＮＡは、少なくとも１つのいわゆる自殺遺伝子産物（特に自殺酵素、好ましくはヌクレオチド代謝酵素）をコードしている。上記ＲＮＡは、自殺遺伝子産物（特に自殺酵素）の基質となり、かつ、当該自殺遺伝子によって細胞傷害性化合物に変換されるプロドラッグとの組み合わせで、用いられることが好ましい。適切なプロドラッグを、本発明のＲＮＡ組成物に加えてもよいし、患者に対して別々に投与してもよい。
【０１０３】
１つ以上の好ましい自殺酵素は、以下の一覧から選択されてよい：チミジンキナーゼ（好ましくはウイルス性チミジンキナーゼ、より好ましくは単純ヘルペスウイルス（Herpes simplex）のチミジンキナーゼ、水痘帯状疱疹ウイルス（Varicella zoster）のチミジンキナーゼ）；植物性チミジンキナーゼ（好ましくはトマトチミジンキナーゼ）；シトシンデアミナーゼ（好ましくは細菌のシトシンデアミナーゼまたは酵母のシトシンデアミナーゼ）；デオキシヌクレオシドキナーゼ（好ましくはキイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）のデオキシヌクレオシドキナーゼ）；デオキシシチジンキナーゼ（好ましくは哺乳類性デオキシシチジンキナーゼ）；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（好ましくは細菌性プリンヌクレオシドホスホリラーゼ）。
【０１０４】
自殺遺伝子療法は癌に対する有望な処置であることが、既に知られている（Ardiani et al., 2012. Curr. Gene Ther. 12(2):77-91. PMID: 22384805）。このアプローチは、腫瘍細胞において、自殺遺伝子を送達および発現させることに成功したことに基づいている。自殺遺伝子は、プロドラッグを活性化させる、特有の能力を有する酵素をコードしている（上記プロドラッグは、プロドラッグによらないと効果を示さない）。トランスフェクションした細胞における自殺遺伝子の発現に引き続いて、適切なプロドラッグを投与する。そして、上記プロドラッグは、上記自殺遺伝子の産物の作用によって、細胞傷害性化合物に変換される。ほとんどの自殺遺伝子は、ヌクレオチド代謝酵素の一群に属する酵素をコードしているので、活性化されたプロドラッグの一般的な作用の様式は、ＤＮＡ合成を阻害し、結果としてアポトーシスを誘導するものである。これらの薬の効能は、癌細胞において最大化される。これは、正常な細胞と比較して、癌細胞の増殖率が非常に高いためである。腫瘍細胞へ好適に遺伝子を送達することが期待できるため、この戦略は、選択的に腫瘍を殺傷する一方で、正常細胞にはほとんど影響しない可能性がある。これは、標準的な化学療法および放射線治療のアプローチでは、一般的に達成できていない特徴である。
【０１０５】
下記表３（Ardiani et al., 2012. Curr. Gene Ther. 12(2):77-91. PMID: 22384805）に、本発明のアプローチにおいて用いることのできる、好ましいヌクレオチド代謝酵素をまとめている。下記表には、タンパク質工学の戦略によって生み出された、上記酵素のバリアントおよび変異型が含まれている。
【０１０６】
【表３】
2018517674.tif 000015
【０１０７】
2018517674.tif 000016
【０１０８】
単純ヘルペス（Herpes Simplex）ウイルス１型チミジンキナーゼ（ＨＳＶＴＫ、EC 2.7.1.21）は、分子量４５ｋＤａのサブユニット分子のホモダイマーであり、チミジン、デオキシシチジン、デオキシチミジル酸（ｄＴＭＰ）、ならびに種々の薬学的に重要なピリミジンアナログおよびグアノシンアナログの、リン酸化を担っている。特に注目すべきなのは、ＨＳＶＴＫが、抗ウイルス性グアノシンアナログであるアシクロビル（ＡＣＶ）およびガンシクロビル（ＧＣＶ）の、初期および律速段階のリン酸化を担っていることである。これらのアナログが一リン酸化されると、合成中のＤＮＡに組み込まれる前に、内在性の酵素（グアニル酸キナーゼおよびヌクレオシドジホスホキナーゼ）によって、さらにリン酸化されうる。その結果、二重らせんが不安定化され、その後細胞死につながる。
【０１０９】
また、水痘帯状疱疹（Varicella zoster）ウイルスチミジンキナーゼ（ＶＺＶ−ｔｋ）を、例えば、プロドラッグの６−メトキシプリンアラビノシド（ａｒａ−Ｍ）または１−（２’−デオキシ−２−フルオロ−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（ＦＩＡＵ）と共に用いてもよい。他の例としては、アリューシャン病ウイルス（ＡＤＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）およびサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）のチミジンキナーゼが挙げられる。
【０１１０】
シトシンデアミナーゼ（ＣＤ；EC 3.5.4.1）は、ピリミジンサルベージ経路において、シトシンを脱アミノ化し、ウラシルおよびアンモニアの形成を触媒する酵素である。大腸菌（E. coli）由来のＣＤ（ｂＣＤ）は、４８ｋＤａのサブユニットの六量体であって、触媒金属として鉄を含んでいる。この酵素は、哺乳動物には存在せず、菌類および細菌に固有に存在する。上記酵素は、抗菌剤である５−フルオロシトシン（５−ＦＣ）を脱アミノ化して、強力な抗新生物剤である５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）とすることができるため、自殺遺伝子療法に用いられている。ＵＰＲＴ（ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼ）を、促進剤として用いてもよい。
【０１１１】
サッカロマイセス・セレヴィシエ（Saccharomyces cerevisiae）または酵母のシトシンデアミナーゼ（ｙＣＤ、EC 3.5.4.1）は、１７．５ｋＤａのサブユニットのホモダイマーである。ｙＣＤは、ｂＣＤよりも５ＦＣに対する活性がより高く（Ｋｍが２２倍低い）、かつ、通常の基質であるシトシンと比較して５ＦＣに対する触媒効率（ｋｃａｔ／Ｋｍ）が僅かによいことが判っている。
【０１１２】
キイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）のジオキシリボヌクレオシドキナーゼ（Ｄｍ−ｄＮＫ；EC 2.7.1.145）は、２９ｋＤａのホモダイマーであり、複数の基質を有するキナーゼである。上記キナーゼは、ＤＮＡの合成に必要とされる、４種類すべての天然に存在するデオキシリボヌクレオシドをリン酸化できる。広い基質特異性に加えて、Ｄｍ−ｄＮＫは、哺乳類性デオキシヌクレオシドキナーゼと比較した場合、天然に存在するデオキシヌクレオシドおよび何種類かのヌクレオシドアナログに対する高い触媒率を示す。このような独特の特徴点のため、Ｄｍ−ｄＮＫは、本発明の自殺遺伝子療法への適用に関して、特に好ましい酵素である。
【０１１３】
ヒトデオキシシチジンキナーゼ（ｄＣＫ；EC 2.7.1.74）は、デオキシリボヌクレオシドのサルベージ経路における、３０．５のホモダイマー酵素である。上記酵素は、ＤＮＡ合成の前駆体としての、全ての天然に存在するデオキシリボヌクレオチドの活性化を担っている（チミジンを除く）。その広い基質特異性のため、ｄＣＫは、異なる種類の癌に対して効果的である、複数種類のヌクレオシドアナログを活性化することができる。しかし、野生型のｄＣＫは元来、回転率の低い比較的触媒能の低い触媒であって、プロドラッグの活性化はｄＣＫの発現レベルに依存する。確かに、ｄＣＫの基質として有効なヌクレオシドアナログ（シタラビン（ＡｒａＣ）、フルダラビン（Ｆ−ＡｒａＡ）、クラドリビン（ＣｄＡ）およびゲムシタビン（ｄＦｄＣ）など）は、高いｄＣＫ発現レベルを示しているリンパ芽球にとって、有効な抗白血病薬である。一方で、ｄＣＫ活性を欠いている癌細胞は、上述の同じアナログに対して抵抗性を有している。したがって、ｄＣＫは、本発明のアプローチに関して、特に好ましい酵素である。
【０１１４】
本発明のＲＮＡ含有組成物のＲＮＡは、処置における細胞傷害効果を促進する、さらなる成分と組み合わせて用いられることが好ましい。上記ＲＮＡを、コネキシンおよび／またはコネキシン・ファミリーのタンパク質、またはその一部もしくは断片をコードしているＲＮＡと、組み合わせて用いることが特に好ましい。コネキシンは、細胞間のギャップ結合を形成している、膜貫通タンパク質である。コネキシンは、隣り合う細胞間で、例えば分子を通過させることができる。これにより、細胞傷害性物質を輸送することが可能になる。
【０１１５】
自殺遺伝子療法は、非常に新しい抗癌アプローチであるが、２０年以上前の１９８６年にMooltenによって、元となる構想が報告されている（Moolten, 1986. Cancer Res. 46(10):5276-81）。彼はまた、今日ではバイスタンダー効果として知られるものの存在を提唱した。この効果は、自殺遺伝子療法の成功に欠かせないものとして、今日広く認識されている。その名の通り、バイスタンダー効果は、細胞傷害効果を、トランスフェクションされた細胞から、近隣のトランスフェクションされていない細胞へと拡張する。これにより、腫瘍細胞のうちのごく一部分だけがトランスフェクションに成功した場合であっても、腫瘍の完全な縮小が観察される。この現象は、今日の自殺遺伝子療法の全ての効果に対して、非常に重要である。なぜならば、現在利用できる送達システムによると、低いトランスフェクション効率しか達成されないためである。
【０１１６】
バイスタンダー効果は、２つの主要な機構（局所的な機構および免疫媒介性の機構）によって起こると考えられている。局所的な機構では、ギャップ結合、アポトーシス小胞、または可溶性の殺傷性代謝物の拡散を介した、傷害性物質または自殺酵素の輸送によって、近隣のトランスフェクションされていない細胞の殺傷を引き起こす。ギャップ結合は、細胞間相互作用に重要であり、隣接する細胞への、イオン、ヌクレオチドおよび小分子の輸送を担っている。しかし、ギャップ結合を通じた傷害性薬物の輸送は、ある種の腫瘍では、利用できない場合がある。そのような腫瘍では、ギャップ結合を介した細胞間の連絡が縮小され、組織立っておらず、機能を有さないギャップ結合が存在する。この問題を解決するために、いくつかの研究では、ギャップ結合の基本単位であるコネキシンの発現量を増加させた。その結果、バイスタンダー効果および細胞傷害効果の促進が達成されたことを報告している。
【０１１７】
in vivoでの実験によって集められた証拠によると、免疫媒介性のバイスタンダー効果も、腫瘍の縮小において重要な役割を果たしていることが示唆される。炎症性浸潤物、ケモカインおよびサイトカインの存在により、自殺免疫療法を施された免疫能を有する動物では、腫瘍の縮小が促進されることが見出された。これらのサイトカインおよびケモカインはさらに、免疫調節分子の産生を誘導し、より強力な抗癌効果を促すことができる。これに加えて、トランスフェクションされた細胞の死はアポトーシスによるものであるため、多数の炎症性シグナルが放出され、強い免疫応答が引き起こされうる。したがって、本発明の組成物と、コネキシンまたはコネキシンをコードしているＲＮＡとの組み合わせは、特に好ましい。なぜならば、バイスタンダー効果が強化され、これによって本発明のＲＮＡ含有組成物の効果が増強されるからである。
【０１１８】
本発明に関する好ましい実施形態によると、自殺遺伝子産物は、以下からなる群より選択される任意の自殺遺伝子産物から選択されうる（好ましくは、表４に開示されている通り）：Cytosine_Deaminase_codA；Cytosine_Deaminase_fcy1；Deoxy-cytidine_Kinase_dCK；Deoxynucleoside_Kinase_dNK；Purine_Nucleoside_Phosphorylase_deoD；Thymidine_Kinase_TK。これに関して、表４に係る、自殺遺伝子産物をコードしているＲＮＡ配列が特に好ましい。
【０１１９】
【表４】
2018517674.tif 000017
【０１２０】
2018517674.tif 000018
【０１２１】
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【０１２２】
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【０１２３】
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【０１２４】
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【０１２５】
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【０１２６】
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【０１２７】
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【０１２８】
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【０１２９】
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【０１３０】
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【０１３１】
本発明によれば、より好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１つのＲＮＡを含んでいる。好ましくは、上記ＲＮＡは、少なくとも１つの自殺遺伝子産物またはその断片もしくはバリアントをコードしている、少なくとも１つのコーディング領域を含んでいるｍＲＮＡである。ここで、上記少なくとも１つのコーディング領域は、表４に開示されている配列番号に係るＲＮＡ配列に対して、全く同一か、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一である、ＲＮＡ配列を含んでいる。
【０１３２】
＜４．免疫原性のタンパク質またはペプチド＞
本発明のＲＮＡ組成物のＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）は、好ましくは、免疫原性のタンパク質もしくはペプチド（特に、病原体（好ましくは、ウイルス病原体）のタンパク質またはペプチド）、または、その断片もしくはバリアントを少なくとも一つコードしている。（好ましくは、病原性抗原である）免疫原性のタンパク質またはペプチドをコードするＲＮＡを用いることにより、腫瘍および／または癌疾患の処置のための抗原等に対する、予め存在している免疫性を使用することができる。記憶免疫応答が引き起こされ、腫瘍細胞を攻撃するための免疫系が強化される。
【０１３３】
本発明の本実施形態は、原則として免疫系を有するすべての生物は、特定の外来分子（抗原）、例えば、タンパク質（特にウイルスタンパク質または細菌タンパク質）に「記憶免疫反応」を示すという認識に基づいている。生物がその時以前に抗原にすでに感染している場合、例えばウイルスタンパク質に対する免疫応答は、この感染によってすでに引き起こされている。上記免疫系は、この反応を「記憶」し、その記憶を保持する。上記抗原の再感染の結果、上記免疫応答は再活性化される。このような再活性化は、ＲＮＡ（好ましくは、上記抗原をコードしているｍＲＮＡ）の投与によって引き起こされ得るが、ここで、本発明に係る好ましい腫瘍内投与が特に効果的である。例えばウイルス病原体に対する記憶免疫応答の再活性化により、腫瘍細胞を効果的に破壊できる。
【０１３４】
本発明の本実施形態に対して好ましい免疫原性のタンパク質またはペプチドの例は、広く感染する病原体、すなわち、すべての生物（特に、哺乳類（好ましくはヒト））が一生の間に少なくとも一度は感染する可能性が高い病原体のタンパク質またはペプチドである。これらは、例えば、
−インフルエンザＡ型ウイルスまたはＢ型ウイルスまたは任意の他のオルトミクソウイルス（インフルエンザＣ型）、
−ピコルナウイルス、例えば、ライノウイルスまたはＡ型肝炎ウイルス、
−トガウイルス、例えば、アルファウイルスまたはルビウイルス（例えば、シンドビス、セムリキ森林、またはルベオラウイルス（rubeolavirus）(麻疹ウイルス））、
−風疹ウイルス（ドイツ麻疹ウイルス（German measles virus））、
−コロナウイルス、特にＨＣＶ−２２９ＥサブタイプまたはＨＣＶ−ＯＣ４３サブタイプ、
−ラブドウイルス、例えば、狂犬病ウイルス、
−パラミクソウイルス、例えば、ムンプスウイルス、
−レオウイルス、例えば、Ａ群、Ｂ群またはＣ群ロタウイルス、
−ヘパドナウイルス、例えば、Ｂ型肝炎ウイルス、
−パポウイルス（papoviruses）、例えば、任意の血清型のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、特に１から７５、
−アデノウイルス、特に１型から４７型、
−ヘルペスウイルス、例えば、単純ヘルペスウイルス１，２または３、
−サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、好ましくはＣＭＶｐｐ６５、
−エプスタインバレーウイルス（ＥＢＶ）、 
−ワクシニアウイルスおよび、
−真正細菌Chlamydophila pneumoniae（Chlamydia pneumoniae）
の任意の構造タンパク質もしくは非構造タンパク質またはペプチドを含んでいる。
【０１３５】
好ましい免疫原性のタンパク質またはペプチドのさらなる例は、生物にほとんど感染しない病原体のタンパク質またはペプチドである。それにも関わらず、一つまたは複数のこれらのタンパク質またはペプチドをコードするＲＮＡは、本発明のアプローチにおいて効果的であり得る。このようなタンパク質またはペプチドは、例えば、
−フラビウイルス、例えば、デングウイルス１型から４型、黄熱ウイルス、ウエストナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、
−Ｃ型肝炎ウイルス、
−カリシウイルス、
−フィロウイルス、例えば、エボラウイルス、
−ボルナウイルス、
−ブニヤウイルス、例えば、リフトバレー熱ウイルス、
−アレナウイルス、例えば、ＬＣＭＶ（リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス）または出血熱ウイルス、
−レトロウイルス、例えば、ＨＩＶ、および、
−パルボウイルス
の任意の構造タンパク質もしくは非構造タンパク質またはペプチドを含んでいる。
【０１３６】
好ましくは、本発明のｍＲＮＡ組成物のＲＮＡは、インフルエンザ核タンパク質（ＮＰ）をコードしている。インフルエンザ核タンパク質をコードしているｍＲＮＡを含んでいる組成物の使用が本発明のアプローチに関して行われる時、腫瘍サイズを縮小することに特に効果的であることが、発明者らによって示されている。この関連において、配列番号６のインフルエンザ核タンパク質をコードしているｍＲＮＡが特に好ましい。
【０１３７】
＜５．細胞死誘導因子およびアポトーシス誘導因子＞
アポトーシス誘導因子または細胞死誘導因子は、広義には、オートファジー、角化、興奮毒性、ネクローシス、ウォラー変性、エントーシス、分裂期細胞死、ネクロトーシスおよびピロトーシスを引き起こす分子として理解されているであろう（Kroemer, G., et al. "Classification of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2009." Cell Death & Differentiation 16.1 (2009): 3-11.において説明される）。
【０１３８】
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、ＲＮＡは、好ましくは、Ｂｃｌ−２ファミリー、腫瘍抑制因子ｐ５３、膜貫通型細胞死受容体（特に、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）受容体遺伝子スーパーファミリー）、アポトーシス促進性受容体アゴニストおよびベクリン−１からなる群より選択される少なくとも一つのアポトーシス誘導因子をコードしている。
【０１３９】
本発明に関して、特に好ましいアポトーシス誘導因子は、（ＢＥＣＮ１遺伝子に由来する）ベクリン−１である。ベクリン−１は、Ｂｃｌ−２、ＢＣＬ２Ｌ２、ＧＯＰＣおよびＭＡＰ１ＬＣ３Ａと相互作用し、オートファジーおよび細胞死を制御することが当該分野において知られている。
【０１４０】
アポトーシスにより、癌に対する重要な防壁が築かれる。しかし、特定の変異（例えば、腫瘍抑制遺伝子ｐ５３の変異）により、いくつかの腫瘍細胞はアポトーシス性の細胞死を逃れ、悪性化が進む。少なくとも一つのアポトーシス誘導因子をコードしているｍＲＮＡを使うことによって、癌細胞を排除するための、重要かつ効果的な生物のシステムであるアポトーシスを再活性化することができる。
【０１４１】
アポトーシス誘導因子の好ましい例は、以下のリストより選択され得る：Ｂｃｌ−１０、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｄ、Ｂａｄ、Ｂｉｍ、Ｂｉｋ、Ｂｌｋ、シトクロムｃ、カスパーゼ（特に、カスパーゼ３、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９）、細胞死ドメイン（特にＦａｓ（好ましくは、ＦａｓＬ）の細胞死ドメイン）、ＴＮＦα、Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ、ＤＲ４および／またはＤＲ５のアゴニスト、Ａｐｏ３Ｌ、ＤＲ４アゴニスト抗体、ＤＲ５アゴニスト抗体、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）（好ましくは、恒常的活性型ＰＫＲ）、グランザイムＢ。
【０１４２】
二つのシグナル経路がアポトーシスを引き起こす：内因性経路は、細胞内Ｂｃｌ−２タンパク質を介して作用し、外因性経路は、細胞表面アポトーシス促進性受容体を介して作用する。
【０１４３】
プログラム細胞死の内因性シグナル経路は、非受容体介在型細胞内シグナルを伴い、これによってアポトーシスを開始するミトコンドリアにおいて活性を誘導する。内在性経路への刺激は、細胞へのウイルス感染または毒素、フリーラジカルもしくは放射線による細胞への損傷を含んでいる。また、細胞内ＤＮＡへの損傷によって、プログラム細胞死の内在性経路の活性化を誘導できる。これらの刺激は、膜貫通電位の浪費を引き起こす、ミトコンドリア内膜の変化を誘導し、アポトーシス促進性タンパク質の細胞質への放出を引き起こす。アポトーシス促進性タンパク質は、複数の経路を介して、細胞の崩壊を仲介するカスパーゼを活性化する。これらのタンパク質も細胞核へと移動し、アポトーシスの目印であるＤＮＡ断片化を誘導する。ミトコンドリアにおけるアポトーシス促進性の現象の制御は、Ｂｃｌ−２タンパク質ファミリーのメンバーおよび腫瘍抑制タンパク質ｐ５３の活性化を介して起きる。Ｂｃｌ−２タンパク質ファミリーのメンバーは、アポトーシス促進性または抗アポトーシス性であってもよい。抗アポトーシス性タンパク質としては、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘ、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−ＸＳ、Ｂｃｌ−ｗおよびＢＡＧが挙げられる。アポトーシス促進性タンパク質としては、Ｂｃｌ−１０、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｄ、Ｂａｄ、Ｂｉｍ、ＢｉｋおよびＢｌｋ（Elmore, 2007. Toxicol Pathol. 35(4):495-516 (PMID: 17562483)）が挙げられ、これらは、本発明のアプローチに特に好ましい。
【０１４４】
アポトーシスを誘導する外因性シグナル経路は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体遺伝子スーパーファミリーのメンバーである膜貫通型細胞死受容体を含んでいる。この受容体ファミリーのメンバーは、外因性リガンドに結合し、最終的に細胞の崩壊を引き起こす細胞内シグナルを伝達する。これまでに最もよく特徴付けられているこれらの受容体のリガンドは、ＦａｓＬ、ＴＮＦα、Ａｐｏ２ＬおよびＡｐｏ３Ｌである。対応する受容体は、ＦａｓＲ、ＴＮＦＲ１、ＤＲ３およびＤＲ４／ＤＲ５である。これらのアポトーシス促進性タンパク質の活性を刺激するか、これらの受容体を活性化する分子は、癌（例えば、血液性悪性腫瘍）の処置における治療の可能性の評価を近年行っているところである（Elmore, 2007. Toxicol Pathol. 35(4):495-516 (PMID: 17562483)）。これらの外因性リガンドは、本発明のアプローチにおける使用のさらに特に好ましい例である。
【０１４５】
新たな分子についての見識により、アポトーシス促進性受容体アゴニスト（ＰＡＲＡ）（例えば、組換えヒトタンパク質アポトーシスリガンド２／ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ））の開発が促されている。さらに、このシグナル受容体ＤＲ４（ＴＲＡＩＬＲ１）およびＤＲ５（ＴＲＡＩＬＲ２）に対するアゴニストモノクローナル抗体が、開発中である。マパツムマブ（Mapatumumab）がＤＲ４アゴニスト抗体の例である。ＤＲ５アゴニスト抗体の例としては、レクサツムマブ（Lexatumumab）、アポマブ（Apomab）、ＡＭＧ６５５、ＣＳ−１００８およびＬＢＹ−１３５（Ashkenazi, 2008. Nat. Rev. Drug Discov. 7(12):1001-12 (PMID: 18989337)）が挙げられる。
【０１４６】
以下の表５に、いくつかの好ましいアポトーシス誘導因子をまとめる。
【０１４７】
【表５】
2018517674.tif 000029
【０１４８】
本発明の好ましい実施形態によると、アポトーシス誘導因子は、（好ましくは、表６に記載されているような）Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ；Ａｐｏ３Ｌ；Ｂａｄ；Ｂａｋ；Ｂａｘ；Ｂｃｌ−１０；Ｂｉｄ；Ｂｉｋ；Ｂｉｍ；Ｂｌｋ；カスパーゼ＿３；カスパーゼ＿６；カスパーゼ＿７；カスパーゼ＿８；カスパーゼ＿９；シトクロム＿ｃ；ＦａｓＬ；グランザイム＿Ｂ；ＴＮＦからなる群より選択される任意のアポトーシス誘導因子より選択されてもよい。これに関して特に好ましいのは、表６のアポトーシス誘導因子をコードしているＲＮＡ配列である。
【０１４９】
【表６】
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【０１５０】
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【０１５１】
2018517674.tif 000032
【０１５２】
本発明によると、より好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも一つのアポトーシス誘導因子もしくは細胞死誘導因子、または、その断片もしくはバリアントをコードしている少なくとも一つのコード領域を含んでいる少なくとも一つのＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）を含んでおり、上記少なくとも一つのコード領域は、表６に開示された配列番号のＲＮＡ配列と同一、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＲＮＡ配列を含んでいる。
【０１５３】
＜６．血管新生阻害因子＞
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、少なくとも一つのＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）は、少なくとも一つの血管新生調節因子もしくは阻害因子（好ましくは、外因性血管新生阻害因子）、または、その断片もしくはバリアントをコードしている。腫瘍の成長および生存は、腫瘍細胞に酸素および栄養を運ぶためのルートを提供する血管の新生に依存する。本発明のアプローチに係る少なくとも一つの血管新生阻害因子をコードしているＲＮＡを用いることによって、局所的な様式において（すなわち、腫瘍組織内において）、血管新生を阻害でき、それによって、腫瘍成長を止め、腫瘍体積を縮小させる効果的な方法を提供する。本発明の血管新生阻害因子の好ましい例は、以下のリストより選択されてもよい：インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、（インターフェロンベータ）ＩＦＮ−β、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、血小板第４因子（ＰＦ−４）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、水溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ（ｓＦＬＴ−１）、胎児肝臓キナーゼ１（ＦＬＫ−１）、アンジオスタチン、エンドスタチン、バソスタチン、カンスタチン、タムスタチン、１６ｋＤプロラクチン断片、組織メタロプロテアーゼ阻害物質１（ＴＩＭＰ−１）、組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ−２）、組織メタロプロテアーゼ阻害物質３（ＴＩＭＰ−３）、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ−１）、トロンボスポンジン２（ＴＳＰ−２）、マスピン、ＰＥＸ、水溶性チロシンタンパク質キナーゼ受容体１（ｓＴｉｅ１）、水溶性アンジオポエチン−１受容体２（ｓＴｉｅ２）、アンジオポエチン−１、アンジオポエチン−２、抗血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）抗体（例えば、アラシズマブ、ラムシルマブ）、抗内皮細胞増殖因子受容体（ＶＥＧＦ）抗体（例えば、ブロルシズマブ（Brolucizumab）、ラニビズマブ、ベバシズマブ）、および抗内皮細胞増殖因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）抗体（例えば、イクルクマブ）。
【０１５４】
血管再生のこの過程がなければ、腫瘍成長は１から２ｍｍ２（酸素の拡散限界）に抑えられる。すでに１９７１年には、Folkmanが、血管新生を阻害することによって腫瘍成長を止めることができるであろうことを示唆していた（Folkman, 1972. N. Engl. J. Med. 285(21):1182-6）。
【０１５５】
血管新生は、内皮細胞（ＥＣ）の活性化、増殖および移動、血管基底膜の崩壊、組織の細胞外マトリックスのリモデリング、血管および血管系の形成、支持細胞（平滑筋細胞および周皮細胞等）の補充、並びに、元からある血管系への結合等の、元からある脈管構造から新たな血管を形成する複数の工程を含んでいる。
【０１５６】
特定の微小環境において、血管新生反応は、腫瘍細胞およびストロマの構成因子の両方によって分泌される、血管新生促進因子と抗血管新生因子とのバランスの結果起こる；前者の広がりが「血管新生スイッチ」を決定し、腫瘍の異常増殖（tumor outgrowth）の後、血管新生の活性を引き起こす（Hanahan and Folkman, 1996. Cell 86(3):353-64）。
【０１５７】
血管新生阻害の戦略を基にした遺伝子治療および特に本発明に係るアプローチは、抗血管新生薬を投与する従来の方式に比べて、いくつかの利点を有する。まず、病的血管新生の効果的な抑制は、長期にわたる処置をゆくゆくは必要とするため、本発明に係る遺伝子治療戦略は、病的な組織への選択的な輸送および治療剤の延長された発現を達成するのに有益である。一般的に、遺伝子治療は、安定性および溶解性などの、種々の組換えタンパク質の産生における問題を回避するための方法をも意味する；組換え法による、抗血管新生因子の好適な製造には、しばしば（例えば、アンジオスタチンに対して）問題があり、臨床適用を制限し得る。さらに、遺伝子運搬の使用により、タンパク質因子（proteic agents）が生理学的環境において集まるため、in vivoでの、これらの正常な折り畳みおよびこれらの安定性をもたらす。本発明のアプローチの特に魅力的な特徴は、選択的な組織（すなわち、腫瘍組織）への遺伝子輸送を目標とし、それゆえ、治療剤の全身レベルを上げることなく、局所的な遺伝子発現および局所的に高い薬剤濃度を実現し、それゆえに、向上した治療指数をもたらすという可能性である。
【０１５８】
血管新生阻害因子は、由来および性能が均一ではなく、これらの増加するリストは、種々の機能を有するより大きな分子のタンパク質分解生成物（例えば、アンジオスタチン、エンドスタチンおよびバソスタチン）、血管内皮増殖因子活性の制御因子（例えば、水溶性ＦＬＴ−１（ｓＦＬＴ−１））並びに、著しい抗内膜活性を有するいくつかのサイトカイン／ケモカイン（例えば、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−αおよびＣＸＣＬ１０）を含んでいる。（Persano et al.、2007. Mol. Aspects Med. 28(1):87-114. PMID: 17306361から改良される）以下の表８は、本発明のアプローチにおいて使用されてもよい好ましい血管新生阻害因子をまとめている。
【０１５９】
本発明に関して好ましい実施形態によると、血管新生阻害因子は、（好ましくは、表７に開示されているような）アンジオポエチン−２；アンジオスタチン；カンスタチン；ＣＸＣＬ１０；ＣＸＣＬ４；ＣＸＣＬ９；エンドスタチン；ＦＬＫ−１；ＩＦＮアルファ；ＩＦＮＢ；ＩＦＮＧ；ＩＬ−１２；ＰＥＸ；ＰＲＬ；ＳＥＲＰＩＮＢ５；ｓＦＬＴ−１；ｓＴｉｅ２；ＴＩＭＰ−１；ＴＩＭＰ−２；ＴＩＭＰ−３；ＴＮＦ；ＴＳＰ−１；ＴＳＰ−２；タムスタチン；バソスタチンからなる群より選択される任意の外因性血管新生阻害因子より選択されてもよい。これに関して特に好ましくは、表７の血管新生阻害因子をコードしているＲＮＡ配列である。
【０１６０】
【表７】
2018517674.tif 000033
【０１６１】
2018517674.tif 000034
【０１６２】
2018517674.tif 000035
【０１６３】
本発明によると、より好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも一つの血管新生阻害因子またはその断片もしくはバリアントをコードしている少なくとも一つのコード領域を含んでいる少なくとも一つのＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）を含んでおり、上記少なくとも一つのコード領域は、表７に開示された配列番号のＲＮＡ配列と同一、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＲＮＡ配列を含んでいる。
【０１６４】
＜７．ヒートショックタンパク質＞
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、ＲＮＡは、ヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）またはその断片もしくはバリアントを少なくとも一つコードしている。好ましくは、上記ヒートショックタンパク質は、以下のリストより選択されてもよい：ＨＳＰ２７、ＨＳＰ４７（セルピンＨ１）、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＣ７０、ＧＲＰ７８（ＢｉＰ）、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ１１０、ＧＲＰ９４（ｇｐ９６）、ＧＲＰ１７０（ＯＲＰ１５０）、ＰＤＩ／ＰＤＩＡ、ＣＲＴ／ＣＡＬＲ。
【０１６５】
Graner et al.（Graner MW, Lillehei KO, Katsanis E. Endoplasmic reticulum chaperones and their roles in the immunogenicity of cancer vaccines. Front Oncol. 2015 Jan 6; 4:379. doi: 10.3389/fonc.2014.00379）に説明されるように、ヒートショックタンパク質は、必須の細胞ハウスキーピング機能（cellular housekeeping functions）を担っており、タンパク質分解だけでなく、タンパク質合成、フォールディング、細胞内膜を越える輸送の間に不可欠である。ＨＳＰは、ＨＳＰ２７、ＨＳＰ４７（セルピンＨ１）、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＣ７０、ＧＲＰ７８（ＢｉＰ）、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ１１０、ＧＲＰ９４（ｇｐ９６）、ＧＲＰ１７０（ＯＲＰ１５０）、ＰＤＩ／ＰＤＩＡ、ＣＲＴ／ＣＡＬＲからなる（が、これらに限定されない）シャペロンのマルチタンパク質ファミリーに属する。シャペロンとしての細胞内機能に加えて、（特に、腫瘍環境における）免疫反応のシミュレーターとして重要な細胞内での役割を果たすことが示されている。種々の文献の報告により、腫瘍由来のＨＳＰ−ペプチド複合体は、抗腫瘍免疫応答を非常に効果的に誘導することが実証された。これらの観察の分子メカニズムが解明されつつある。シャペロンとしてのＨＳＰは、抗原性のこれらの変性ペプチドに結合する能力を有し、これらの複合体は、抗原提示および免疫性の誘導を徐々に引き起こす抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって内在化される。これらのシャペロン機能に加えて、ＨＳＰは、腫瘍微小環境において危険なシグナルを引き起こし、それによって、マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）を刺激し、炎症性サイトカインを生成し、誘導された免疫応答を増強することが示されている。
【０１６６】
本発明に関して好ましい実施形態によると、ヒートショックタンパク質は、（好ましくは、表８に記載されるような）カルレティキュリン；ＧＲＰ１７０＿（ＯＲＰ１５０）；ＧＲＰ７８＿（ＢｉＰ）；ＧＲＰ９４＿（ｇｐ９６）；ＨＳＣ７０；ＨＳＰ１１０；ＨＳＰ２７；ＨＳＰ４７＿（セルピン＿Ｈ１）；ＨＳＰ６０；ＨＳＰ７０；ＨＳＰ９０；ＰＤＩ／ＰＤＩＡからなる群より選択される任意のヒートショックタンパク質より選択されてもよい。これに関して特に好ましくは、表８のヒートショックタンパク質をコードしているＲＮＡ配列である。
【０１６７】
【表８】
2018517674.tif 000036
【０１６８】
本発明によると、より好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも一つのヒートショックタンパク質またはその断片もしくはバリアントをコードしている少なくとも一つのコード領域を含んでいる少なくとも一つのＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）を含んでおり、上記少なくとも一つのコード領域は、表８に開示された配列番号のＲＮＡ配列と同一、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＲＮＡ配列を含んでいる。
【０１６９】
＜８．腫瘍抗原＞
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、組成物は、腫瘍抗原またはその断片もしくはバリアントの少なくとも一つをコードするＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）を含んでいてもよく、これらは、本発明に係る適応免疫応答を誘導するためのワクチン注射に使用される。
【０１７０】
これに関して、腫瘍抗原は、本発明のＲＮＡ組成物に含まれるＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）にコードされていることが特に好ましい。本発明のＲＮＡ組成物は、少なくとも一つの腫瘍抗原またはその断片もしくはバリアントをコードしている、少なくとも一つのＲＮＡを含んでいることが特に好ましい。
【０１７１】
腫瘍抗原は、好ましくは、（腫瘍）細胞の表面に局在している。腫瘍抗原も、正常細胞と比較して腫瘍細胞において過剰発現されているタンパク質から選択されてもよい。さらに、腫瘍抗原には、それ自体（または、本来はそれ自体ではない）は変性しない（変性しなかった）が、想定上の腫瘍（the supposed tumor）に関連している細胞に発現されている抗原も含まれる。腫瘍に供給する血管またはこれらの（再）構成に関連する抗原、特に、血管新生に関連するこれらの抗原（例えば、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ等のような増殖因子）も本明細書中に含まれる。腫瘍に結合した抗原は、さらに、細胞または組織（具体的には、腫瘍を組み込んでいる細胞または組織）由来の抗原を含んでいる。さらに、いくつかの物質（一般的には、タンパク質またはペプチド）は、癌疾患に（わかっていながらか、わかっていないながら）罹患している対象にて発現され、これらは、当該対象の体液において濃度が増大している。これらの物質は、「腫瘍抗原」とも言われるが、これらは、免疫応答を誘導する物質という厳密な意味での抗原ではない。腫瘍抗原は、さらに、腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）および腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に分けることができる。ＴＳＡは、腫瘍細胞によってのみ提示され得、正常な「健康な」細胞によって提示されない。これらは一般的には、腫瘍特異的変異に起因する。ＴＡＡは、より一般的であり、腫瘍細胞と健康な細胞との両方に通常提示される。これらの抗原は認識され、抗原提示細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞に破壊され得る。さらに、腫瘍抗原は、例えば、変異した受容体の形で、腫瘍の表面に生じ得る。この場合、これらは、抗体によって認識され得る。
【０１７２】
さらに、腫瘍関連抗原は、組織特異抗原（メラノサイト特異抗原、癌・精巣抗原および腫瘍特異抗原とも呼ばれる）として分類され得る。癌・精巣抗原は、多種多様な腫瘍において活性化され得る生殖細胞関連遺伝子のペプチドまたはタンパク質であると一般的に解される。ヒトの癌・精巣抗原は、Ｘ染色体にコードされる抗原（いわゆる、ＣＴ−Ｘ抗原）、および、Ｘ染色体にコードされないこれらの抗原（いわゆる、非Ｘ  ＣＴ抗原）に、さらに細分化され得る。Ｘ染色体にコードされる癌・精巣抗原としては、例えば、メラノーマ抗原遺伝子ファミリー（いわゆる、ＭＡＧＥファミリー）を挙げることができる。ＭＡＧＥファミリーの遺伝子は、共通のＭＡＧＥホモロジードメイン（ＭＨＤ）によって特徴付けられ得る。これらの各抗原（すなわち、メラノサイト特異抗原、癌・精巣抗原、および、腫瘍特異抗原）は、自家細胞性免疫応答および体液性免疫応答を刺激し得る。ゆえに、本発明の核酸配列によってコードされる腫瘍抗原は、好ましくは、メラノサイト特異抗原、癌・精巣抗原または腫瘍特異抗原であり、好ましくは、ＣＴ−Ｘ抗原、非Ｘ  ＣＴ抗原、ＣＴ−Ｘ抗原の結合パートナーもしくは非Ｘ  ＣＴ抗原の結合パートナー、または、腫瘍特異抗原であり、より好ましくは、ＣＴ−Ｘ抗原、非Ｘ  ＣＴ抗原の結合パートナー、または、腫瘍特異抗原である。
【０１７３】
特に好ましい腫瘍抗原は、５Ｔ４、７０７−ＡＰ、９Ｄ７、ＡＦＰ、ＡｌｂＺＩＰ ＨＰＧ１、アルファ−５−ベータ−１−インテグリン、アルファ−５−ベータ−６−インテグリン、アルファ−アクチニン−４／ｍ、アルファ−メチルアシル−コエンザイムＡラセマーゼ、ＡＲＴ−４、ＡＲＴＣ１／ｍ、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥ−１、ＢＣＬ−２、ｂｃｒ／ａｂｌ、ベータ−カテニン／ｍ、ＢＩＮＧ−４、ＢＲＣＡ１／ｍ、ＢＲＣＡ２／ｍ、ＣＡ １５−３／ＣＡ ２７−２９、ＣＡ １９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡ１２５、カルレティキュリン、ＣＡＭＥＬ、ＣＡＳＰ−８／ｍ、カテプシンＢ、カテプシンＬ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤＥ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ８０、ＣＤＣ２７／ｍ、ＣＤＫ４／ｍ、ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、ＣＭＬ２８、ＣＭＬ６６、ＣＯＡ−１／ｍ、コアクトシン様タンパク質、コラーゲンＸＸＩＩＩ、ＣＯＸ−２、ＣＴ−９／ＢＲＤ６、Ｃｔｅｎ、サイクリンＢ１、サイクリンＤ１、ｃｙｐ−Ｂ、ＣＹＰＢ１、ＤＡＭ−１０、ＤＡＭ−６、ＤＥＫ−ＣＡＮ、ＥＦＴＵＤ２／ｍ、ＥＧＦＲ、ＥＬＦ２／ｍ、ＥＭＭＰＲＩＮ、ＥｐＣａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｒｂＢ３、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１、ＥＺＨ２、ＦＧＦ−５、ＦＮ、Ｆｒａｕ−１、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ７ｂ、ＧＡＧＥ−８、ＧＤＥＰ、ＧｎＴ−Ｖ、ｇｐ１００、ＧＰＣ３、ＧＰＮＭＢ／ｍ、ＨＡＧＥ、ＨＡＳＴ−２、ヘプシン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＨＥＲＶ−Ｋ−ＭＥＬ、ＨＬＡ−Ａ＊０２０１−Ｒ１７Ｉ、ＨＬＡ−Ａ１１／ｍ、ＨＬＡ−Ａ２／ｍ、ＨＮＥ、ホメオボックス ＮＫＸ３．１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−１４／ＳＣＰ−１、ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５、ＨＰＶ−Ｅ６、ＨＰＶ−Ｅ７、ＨＳＰ７０−２Ｍ、ＨＳＴ−２、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−１３Ｒａ２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−５、未熟型ラミニン受容体、カリクレイン−２、カリクレイン−４、Ｋｉ６７、ＫＩＡＡ０２０５、ＫＩＡＡ０２０５／ｍ、ＫＫ−ＬＣ−１、Ｋ−Ｒａｓ／ｍ、ＬＡＧＥ−Ａ１、ＬＤＬＲ−ＦＵＴ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｂ１、ＭＡＧＥ−Ｂ２、ＭＡＧＥ−Ｂ３、ＭＡＧＥ−Ｂ４、ＭＡＧＥ−Ｂ５、ＭＡＧＥ−Ｂ６、ＭＡＧＥ−Ｂ１０、ＭＡＧＥ−Ｂ１６、ＭＡＧＥ−Ｂ１７、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｄ１、ＭＡＧＥ−Ｄ２、ＭＡＧＥ−Ｄ４、ＭＡＧＥ−Ｅ１、ＭＡＧＥ−Ｅ２、ＭＡＧＥ−Ｆ１、ＭＡＧＥ−Ｈ１、ＭＡＧＥＬ２、マンマグロビンＡ、ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ、ＭＡＲＴ−２、ＭＡＲＴ−２／ｍ、マトリックスタンパク質２２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＥ１／ｍ、メソテリン、ＭＧ５０／ＰＸＤＮ、ＭＭＰ１１、ＭＮ／ＣＡ ＩＸ抗原、ＭＲＰ−３、ＭＵＣ−１、ＭＵＣ−２、ＭＵＭ−１／ｍ、ＭＵＭ−２／ｍ、ＭＵＭ−３／ｍ、ミオシンクラスＩ／ｍ、ＮＡ８８−Ａ、Ｎ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼ−Ｖ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ、Ｎｅｏ−ＰＡＰ／ｍ、ＮＦＹＣ／ｍ、ＮＧＥＰ、ＮＭＰ２２、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ−Ｒａｓ／ｍ、ＮＳＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−Ｂ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＯＡ１、ＯＦＡ−ｉＬＲＰ、ＯＧＴ、ＯＧＴ／ｍ、ＯＳ−９、ＯＳ−９／ｍ、オステオカルシン、オステオポンチン、ｐ１５、ｐ１９０マイナーｂｃｒ−ａｂｌ、ｐ５３、ｐ５３／ｍ、ＰＡＧＥ−４、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＰＡＰ、ＰＡＲＴ−１、ＰＡＴＥ、ＰＤＥＦ、Ｐｉｍ−１−キナーゼ、Ｐｉｎ−１、Ｐｍｌ／ＰＡＲアルファ、ＰＯＴＥ、ＰＲＡＭＥ、ＰＲＤＸ５／ｍ、プロステイン、プロテイナーゼ−３、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ／ｍ、ＲＡＧＥ−１、ＲＢＡＦ６００／ｍ、ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８、ＲＵ１、ＲＵ２、Ｓ−１００、ＳＡＧＥ、ＳＡＲＴ−１、ＳＡＲＴ−２、ＳＡＲＴ−３、ＳＣＣ、ＳＩＲＴ２／ｍ、Ｓｐ１７、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２／ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０、ＳＳＸ−４、ＳＴＡＭＰ−１、ＳＴＥＡＰ−１、サバイビン、サバイビン−２Ｂ、ＳＹＴ−ＳＳＸ−１、ＳＹＴ−ＳＳＸ−２、ＴＡ−９０、ＴＡＧ−７２、ＴＡＲＰ、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、ＴＧＦベータ、ＴＧＦベータＲＩＩ、ＴＧＭ−４、ＴＰＩ／ｍ、ＴＲＡＧ−３、ＴＲＧ、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２／６ｂ、ＴＲＰ／ＩＮＴ２、ＴＲＰ−ｐ８、チロシナーゼ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ−２／ＦＬＫ−１およびＷＴ１からなるリストより選択される。このような腫瘍抗原は、好ましくは、ｐ５３、ＣＡ１２５、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ＰＡＰ、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ３、メソテリン、ＭＵＣ−１、ＧＰ１００、ＭＡＲＴ−１、チロシナーゼ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ−１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、Ｒａｓ、ＣＥＡまたはＷＴ１からなる群より選択されてもよく、より好ましくは、ＰＡＰ、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＷＴ１およびＭＵＣ−１より選択されてもよい。このような腫瘍抗原は、好ましくは、ＭＡＧＥ−Ａ１（例えば、登録番号Ｍ７７４８１のＭＡＧＥ−Ａ１）、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ６（例えば、登録番号ＮＭ＿００５３６３のＭＡＧＥ−Ａ６）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、メラン−Ａ（例えば、登録番号ＮＭ＿００５５１１のメラン−Ａ）、ＧＰ１００（例えば、登録番号Ｍ７７３４８のＧＰ１００）、チロシナーゼ（例えば、登録番号ＮＭ＿０００３７２のチロシナーゼ）、サバイビング（surviving）（例えば、登録番号ＡＦ０７７３５０のサバイビン）、ＣＥＡ（例えば、登録番号ＮＭ＿００４３６３のＣＥＡ）、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ（例えば、登録番号Ｍ１１７３０のＨｅｒ−２／ｎｅｕ）、ＷＴ１（例えば、登録番号ＮＭ＿０００３７８のＷＴ１）、ＰＲＡＭＥ（例えば、登録番号ＮＭ＿００６１１５のＰＲＡＭＥ）、ＥＧＦＲＩ（上皮増殖因子受容体１）（例えば、登録番号ＡＦ２８８７３８のＥＧＦＲＩ（上皮増殖因子受容体１））、ＭＵＣ１、ムチン−１（例えば、登録番号ＮＭ＿００２４５６のムチン−１）、ＳＥＣ６１Ｇ（例えば、登録番号ＮＭ＿０１４３０２のＳＥＣ６１Ｇ）、ｈＴＥＲＴ（例えば、ｈＴＥＲＴ登録番号ＮＭ＿１９８２５３）、５Ｔ４（例えば、登録番号ＮＭ＿００６６７０の５Ｔ４）、ＴＲＰ−２（例えば、登録番号ＮＭ＿００１９２２のＴＲＰ−２）、ＳＴＥＡＰ１、ＰＣＡ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ等からなる群より選択されてもよい。
【０１７４】
本発明に関して、好ましい実施形態によると、腫瘍抗原は（好ましくは表９に開示されているような）、１Ａ０１＿ＨＬＡ−Ａ／ｍ；１Ａ０２；５Ｔ４；ＡＣＲＢＰ；ＡＦＰ；ＡＫＡＰ４；アルファ−アクチニン−＿４／ｍ；アルファ−メチルアシル−コエンザイム＿Ａ＿ラセマーゼ；ＡＮＤＲ；ＡＲＴ−４；ＡＲＴＣ１／ｍ；ＡＵＲＫＢ；Ｂ２ＭＧ；Ｂ３ＧＮ５；Ｂ４ＧＮ１；Ｂ７Ｈ４；ＢＡＧＥ−１；ＢＡＳＩ；ＢＣＬ−２；ｂｃｒ／ａｂｌ；ベータ−カテニン／ｍ；ＢＩＮＧ−４；ＢＩＲＣ７；ＢＲＣＡ１／ｍ；ＢＹ５５；カルレティキュリン；ＣＡＭＥＬ；ＣＡＳＰＡ；カスパーゼ＿８；カテプシン＿Ｂ；カテプシン＿Ｌ；ＣＤ１Ａ；ＣＤ１Ｂ；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ１Ｄ；ＣＤ１Ｅ；ＣＤ２０；ＣＤ２２；ＣＤ２７６；ＣＤ３３；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４４＿アイソフォーム＿１；ＣＤ４４＿アイソフォーム＿６；ＣＤ５２；ＣＤ５５；ＣＤ５６；ＣＤ８０；ＣＤ８６；ＣＤ８Ａ；ＣＤＣ２７／ｍ；ＣＤＥ３０；ＣＤＫ４／ｍ；ＣＤＫＮ２Ａ／ｍ；ＣＥＡ；ＣＥＡＭ６；ＣＨ３Ｌ２；ＣＬＣＡ２；ＣＭＬ２８；ＣＭＬ６６；ＣＯＡ−１／ｍ；コアクトシン様＿タンパク質；コラーゲン＿ＸＸＩＩＩ；ＣＯＸ−２；ＣＰ１Ｂ１；ＣＳＡＧ２；ＣＴ−＿９／ＢＲＤ６；ＣＴ４５Ａ１；ＣＴ５５；ＣＴＡＧ２＿アイソフォーム＿ＬＡＧＥ−１Ａ；ＣＴＡＧ２＿アイソフォーム＿ＬＡＧＥ−１Ｂ；ＣＴＣＦＬ；Ｃｔｅｎ；サイクリン＿Ｂ１；サイクリン＿Ｄ１；ｃｙｐ−Ｂ；ＤＡＭ−１０；ＤＥＰ１Ａ；Ｅ７；ＥＦ１Ａ２；ＥＦＴＵＤ２／ｍ；ＥＧＦＲ；ＥＧＬＮ３；ＥＬＦ２／ｍ；ＥＭＭＰＲＩＮ；ＥｐＣａｍ；ＥｐｈＡ２；ＥｐｈＡ３；ＥｒｂＢ３；ＥＲＢＢ４；ＥＲＧ；ＥＴＶ６；ＥＷＳ；ＥＺＨ２；ＦＡＢＰ７；ＦＣＧＲ３Ａ＿Ｖｅｒｓｉｏｎ＿１；ＦＣＧＲ３Ａ＿Ｖｅｒｓｉｏｎ＿２；ＦＧＦ５；ＦＧＦＲ２；フィブロネクチン；ＦＯＳ；ＦＯＸＰ３；ＦＵＴ１；Ｇ２５０；ＧＡＧＥ−１；ＧＡＧＥ−２；ＧＡＧＥ−３；ＧＡＧＥ−４；ＧＡＧＥ−５；ＧＡＧＥ−６；ＧＡＧＥ７ｂ；ＧＡＧＥ−８＿（ＧＡＧＥ−２Ｄ）；ＧＡＳＲ；ＧｎＴ−Ｖ；ＧＰＣ３；ＧＰＮＭＢ／ｍ；ＧＲＭ３；ＨＡＧＥ；ヘプシン；Ｈｅｒ２／ｎｅｕ；ＨＬＡ−Ａ２／ｍ；ホメオボックス＿ＮＫＸ３．１；ＨＯＭ−ＴＥＳ−８５；ＨＰＧ１；ＨＳ７１Ａ；ＨＳ７１Ｂ；ＨＳＴ−２；ｈＴＥＲＴ；ｉＣＥ；ＩＦ２Ｂ３；ＩＬ−１０；ＩＬ−１３Ｒａ２；ＩＬ２−ＲＡ；ＩＬ２−ＲＢ；ＩＬ２−ＲＧ；ＩＬ−５；ＩＭＰ３；ＩＴＡ５；ＩＴＢ１；ＩＴＢ６；カリクレイン−２；カリクレイン−４；ＫＩ２０Ａ；ＫＩＡＡ０２０５；ＫＩＦ２Ｃ；ＫＫ−ＬＣ−１；ＬＤＬＲ；ＬＧＭＮ；ＬＩＲＢ２；ＬＹ６Ｋ；ＭＡＧＡ５；ＭＡＧＡ８；ＭＡＧＡＢ；ＭＡＧＥ−＿Ｂ１；ＭＡＧＥ−＿Ｅ１；ＭＡＧＥ−Ａ１；ＭＡＧＥ−Ａ１０；ＭＡＧＥ−Ａ１２；ＭＡＧＥ−Ａ２；ＭＡＧＥ−Ａ３；ＭＡＧＥ−Ａ４；ＭＡＧＥ−Ａ６；ＭＡＧＥ−Ａ９；ＭＡＧＥ−Ｂ１０；ＭＡＧＥ−Ｂ１６；ＭＡＧＥ−Ｂ１７；ＭＡＧＥ−Ｂ２；ＭＡＧＥ−Ｂ３；ＭＡＧＥ−Ｂ４；ＭＡＧＥ−Ｂ５；ＭＡＧＥ−Ｂ６；ＭＡＧＥ−Ｃ１；ＭＡＧＥ−Ｃ２；ＭＡＧＥ−Ｃ３；ＭＡＧＥ−Ｄ１；ＭＡＧＥ−Ｄ２；ＭＡＧＥ−Ｄ４；ＭＡＧＥ−Ｅ１＿（ＭＡＧＥ１）；ＭＡＧＥ−Ｅ２；ＭＡＧＥ−Ｆ１；ＭＡＧＥ−Ｈ１；ＭＡＧＥＬ２；マンマグロビン＿Ａ；ＭＡＲＴ−１／メラン−Ａ；ＭＡＲＴ−２；ＭＣ１＿Ｒ；Ｍ−ＣＳＦ；メソテリン；ＭＩＴＦ；ＭＭＰ１＿１；ＭＭＰ７；ＭＵＣ−１；ＭＵＭ−１／ｍ；ＭＵＭ−２／ｍ；ＭＹＯ１Ａ；ＭＹＯ１Ｂ；ＭＹＯ１Ｃ；ＭＹＯ１Ｄ；ＭＹＯ１Ｅ；ＭＹＯ１Ｆ；ＭＹＯ１Ｇ；ＭＹＯ１Ｈ；ＮＡ１７；ＮＡ８８−Ａ；Ｎｅｏ−ＰＡＰ；ＮＦＹＣ／ｍ；ＮＧＥＰ；Ｎ−ｍｙｃ；ＮＰＭ；ＮＲＣＡＭ；ＮＳＥ；ＮＵＦ２；ＮＹ−ＥＳＯ−１；ＯＡ１；ＯＧＴ；ＯＳ−９；オステオカルシン；オステオポンチン；ｐ５３；ＰＡＧＥ−４；ＰＡＩ−１；ＰＡＩ−２；ＰＡＰ；ＰＡＴＥ；ＰＡＸ３；ＰＡＸ５；ＰＤ１Ｌ１；ＰＤＣＤ１；ＰＤＥＦ；ＰＥＣＡ１；ＰＧＣＢ；ＰＧＦＲＢ；Ｐｉｍ−１＿−キナーゼ；Ｐｉｎ−１；ＰＬＡＣ１；ＰＭＥＬ；ＰＭＬ；ＰＯＴＥ；ＰＯＴＥＦ；ＰＲＡＭＥ；ＰＲＤＸ５／ｍ；ＰＲＭ２；プロステイン；プロテイナーゼ−３；ＰＳＡ；ＰＳＢ９；ＰＳＣＡ；ＰＳＧＲ；ＰＳＭ；ＰＴＰＲＣ；ＲＡＢ８Ａ；ＲＡＧＥ−１；ＲＡＲＡ；ＲＡＳＨ；ＲＡＳＫ；ＲＡＳＮ；ＲＧＳ５；ＲＨＡＭＭ／ＣＤ１６８；ＲＨＯＣ；ＲＳＳＡ；ＲＵ１；ＲＵ２；ＲＵＮＸ１；Ｓ−１００；ＳＡＧＥ；ＳＡＲＴ−＿１；ＳＡＲＴ−２；ＳＡＲＴ−３；ＳＥＰＲ；セルピンＢ５；ＳＩＡ７Ｆ；ＳＩＡ８Ａ；ＳＩＡＴ９；ＳＩＲＴ２／ｍ；ＳＯＸ１０；ＳＰ１７；ＳＰＮＸＡ；ＳＰＸＮ３；ＳＳＸ−１；ＳＳＸ−２；ＳＳＸ３；ＳＳＸ−４；ＳＴ１Ａ１；ＳＴＡＧ２；ＳＴＡＭＰ−１；ＳＴＥＡＰ−１；サバイビン；サバイビン−２Ｂ；ＳＹＣＰ１；ＳＹＴ−ＳＳＸ−１；ＳＹＴ−ＳＳＸ−２；ＴＡＲＰ；ＴＣＲｇ；ＴＦ２ＡＡ；ＴＧＦベータ１；ＴＧＦＲ２；ＴＧＭ−４；ＴＩＥ２；ＴＫＴＬ１；ＴＰＩ／ｍ；ＴＲＧＶ１１；ＴＲＧＶ９；ＴＲＰＣ１；ＴＲＰ−ｐ８；ＴＳＧ１０；ＴＳＰＹ１；ＴＶＣ＿（ＴＲＧＶ３）；ＴＸ１０１；チロシナーゼ；ＴＹＲＰ１；ＴＹＲＰ２；ＵＰＡ；ＶＥＧＦＲ１；ＷＴ１；ＸＡＧＥ１からなる群より選択される任意の腫瘍抗原より選択されてもよい。これに関して、特に好ましくは、表９の腫瘍抗原をコードしているＲＮＡ配列である。
【０１７５】
【表９】
2018517674.tif 000037
【０１７６】
2018517674.tif 000038
【０１７７】
2018517674.tif 000039
【０１７８】
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【０１７９】
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【０１８０】
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【０１８１】
2018517674.tif 000043
【０１８２】
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【０１８３】
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【０１８４】
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【０１８５】
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【０１８６】
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【０１８７】
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【０１８８】
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【０１８９】
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【０１９０】
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【０１９１】
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【０１９２】
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【０１９３】
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【０１９４】
2018517674.tif 000056
【０１９５】
2018517674.tif 000057
【０１９６】
2018517674.tif 000058
【０１９７】
2018517674.tif 000059
【０１９８】
2018517674.tif 000060
【０１９９】
本発明によると、より好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも一つの腫瘍抗原またはその断片もしくはバリアントをコードしている少なくとも一つのコード領域を含んでいる少なくとも一つのＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）を含んでおり、上記少なくとも一つのコード領域は、表９に開示された配列番号のＲＮＡ配列と同一、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＲＮＡ配列を含んでいる。
【０２００】
さらに、腫瘍抗原は、癌または腫瘍疾患（特にリンパ腫またはリンパ腫関連疾患）に関連するイディオタイプ抗原も含んでおり、上記イディオタイプ抗原は、リンパ球血液細胞の免疫グロブリンイディオタイプまたはリンパ球血液細胞のＴ細胞受容体イディオタイプである。
【０２０１】
特に好ましい実施形態において、本発明のＲＮＡ組成物は、少なくとも一つのＲＮＡを含んでおり、当該少なくとも一つのＲＮＡは、以下の抗原をコードしている：
・ＳＴＥＡＰ（６回膜貫通型前立腺上皮抗原）；
・ＰＳＡ（前立腺特異的抗原）、
・ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、
・ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）；
・ＰＡＰ（前立腺産生フォスファターゼ）、および、
・ＭＵＣ１（ムチン１）。
【０２０２】
他の特に好ましい実施形態において、本発明のＲＮＡ組成物は、少なくとも一つのＲＮＡを含んでおり、当該少なくとも一つのＲＮＡは、以下の抗原をコードしている：
・５Ｔ４（栄養芽層糖タンパク質、ＴＰＢＧ）；
・サバイビン（バキュロ・ウイルスＩＡＰリピート含有タンパク質５；ＢＩＲＣ５）、
・ＮＹ−ＥＳＯ−１（ニューヨーク食道扁平上皮細胞がん１；ＣＴＡＧ１Ｂ）、
・ＭＡＧＥ−Ｃ１（メラノーマ抗原ファミリーＣ１）；
・ＭＡＧＥ−Ｃ２（メラノーマ抗原ファミリーＣ２）、および、
・ＭＵＣ１（ムチン１）。
【０２０３】
＜９．β−カテニン阻害因子＞
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、ＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）は、少なくとも一つのβ−カテニン阻害因子またはそれらの断片もしくはバリアントをコードしている。好ましくは、少なくとも一つのβ−カテニン阻害因子をコードしているＲＮＡは、β−カテニン経路の阻害タンパク質またはドミナントネガティブ変異タンパク質をコードしている。特に好ましくは、本発明のβ−カテニン阻害因子は、ＴＡＴ−ＮＬＳ−ＢＬＢＤ−６、アキシン−１、ＴＣＦ−４、ＧＳＫ−３ｂ、ＤＫＫ−１、Ｄｖｌ−１誘導体またはその断片を含んでいる。
【０２０４】
Thakur and Mishra （Thakur R, Mishra DP. Pharmacological modulation of beta-catenin and its applications in cancer therapy. J Cell Mol Med. 2013 Apr;17(4):449-56. doi: 10.1111/jcmm.12033）によって説明されているように、ベータ−カテニン（β−カテニン）は、生理学的恒常性において重要な役割を果たす多機能タンパク質である。これは、転写調節因子および細胞内接着のためのアダプタータンパク質の両方として機能する。β−カテニンは、上皮層の構築および維持に必須であり、細胞内ジャンクションと細胞骨格タンパク質との結合を提供する。β−カテニンはＷｎｔシグナルによって調整される。Ｗｎｔ下流シグナルがないと、β−カテニンはリン酸化され、それによりこれのユビキチン化が引き起こされ、徐々にタンパク質分解が引き起こされる。種々の文献報告が正常細胞の悪性転換とβ−カテニンとを関連付けている。例えば、Ｗｎｔシグナルおよびβ−カテニン核内在化は、肝細胞の腫瘍性表現型への分化に関連していた。同様に、肺上皮細胞および肝臓細胞において、β−カテニンの活性化は、腫瘍形成形質転換の誘導に十分である。悪性形質転換の駆動力であることに加えて、異常なβ−カテニンの発現および局在化は、転移の可能性の増大に関連している。近年、β−カテニンシグナルは、Ｔ細胞浸潤および免疫療法の潜在効果を強く制限する抗腫瘍免疫を防ぐことが実証されている。β−カテニンは、腫瘍形成において重要かつ不利な役割を担っているため、想定される薬剤標的として提案されている。
【０２０５】
＜１０．ＳＴＩＮＧ−経路活性化因子＞
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、ＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）は、ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）経路の活性化因子またはその断片もしくはバリアントの少なくとも一つをコードする。好ましくは、ＳＴＩＮＧ経路の少なくとも一つの活性化因子（刺激因子）をコードしている上記ＲＮＡは、ＳＴＩＮＧ経路の活性化タンパク質または構成的活性タンパク質をコードしており、好ましくは、ＤＤＸ４１、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＩＲＦ３、ＴＢＫ１もしくはＳＴＡＴ６またはその断片もしくはバリアントである。
【０２０６】
Woo et al.（Woo SR, Corrales L, Gajewski TF. The STING pathway and the T cell-inflamed tumor microenvironment. Trends Immunol. 2015 Mar 7. pii: S1471-4906(15)00019-8. doi: 10.1016/j.it.2015.02.003）およびaDubensky et al.（Dubensky TW Jr, Kanne DB, Leong ML. Rationale, progress and development of vaccines utilizing STING-activating cyclic dinucleotide adjuvants. Ther Adv Vaccines. 2013 Nov;1(4):131-43. doi: 10.1177/2051013613501988）によって説明されているように、いわゆるＳＴＩＮＧ経路（ＳＴＩＮＧ−インターフェロン遺伝子の刺激因子）は、細胞質ＤＮＡの感知および炎症性メディエーターの誘導を引き起こす。細胞質のＤＮＡの結合の後、ＳＴＩＮＧは、ＩＦＮ−βの産生を引き起こす、ＴＡＮＫ−結合キナーゼ１（ＴＢＫ−１）／ＩＲＦ−３の軸（axis）を介してシグナルを活性化する。この経路は、いくつかの自己免疫疾患だけでなく、ＤＮＡウイルスの感知において重要な役割を担っていることが示された。最近のデータでは、in vivoにおいて、腫瘍抗原に対する自発的なＴ細胞プライミングを誘導するために、ＳＴＩＮＧ経路が不可欠であることが特定されている。腫瘍ＤＮＡは、腫瘍に浸透しているＤＣにおいて検出され、ＩＦＮ−β産生およびＴ細胞活性化を引き起こした。それゆえに、小分子ＳＴＩＮＧ経路アゴニストの腫瘍内適用は、腫瘍を有している動物における有効性を実証している。ＳＴＩＧＮ経路のアゴニストも、ワクチン接種された宿主において細胞性免疫および体液性免疫を誘導するという効能を示すワクチンアジュバントとして評価されている。
【０２０７】
＜１１．チェックポイントモジュレーター＞
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、ＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）は、少なくとも一つのチェックポイントモジュレーターまたはその断片もしくはバリアントをコードする、少なくとも一つのコード領域を含んでいる。
【０２０８】
負の調節Ｔ細胞表面分子は、活性型Ｔ細胞においてアップレギュレートされて、これらの活性を弱め、その結果、腫瘍細胞を死滅させる効果の低下を引き起こすことが見出された。これらの抑制分子は、Ｔ細胞共刺激分子ＣＤ２８とのホモロジーのため、負の共刺激分子と呼ばれた。これらのタンパク質（免疫チェックポイントタンパク質とも呼ばれる）は、複数の経路（初期活性化シグナルの弱化、正の共刺激に対する競合、および抗原提示細胞の直接阻害等）において機能する（Bour-Jordan et al., 2011. Immunol Rev. 241(1):180-205）。
【０２０９】
本発明の好ましい実施形態において、上記チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７／ＨＨＬＡ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ／ＩＧＰＲ−１、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＤＣＤ６、ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５／ＰＤ−１Ｈ、ＢＴＮ１Ａ１／ブチロフィリン、ＢＴＮ２Ａ１、ＢＴＮ２Ａ２／ブチロフィリン ２Ａ２、ＢＴＮ３Ａ１／２、ＢＴＮ３Ａ２、ＢＴＮ３Ａ３、ＢＴＮＬ２／ブチロフィリン様２、ＢＴＮＬ３、ＢＴＮＬ４、ＢＴＮＬ６、ＢＴＮＬ８、ＢＴＮＬ９、ＢＴＮＬ１０、ＣＤ２７７／ＢＴＮ３Ａ１、ＬＡＩＲ１、ＬＡＩＲ２、ＣＤ９６、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＣＲＴＡＭ、ＤＮＡＭ−１／ＣＤ２２６、ネクチン−２／ＣＤ１１２、ネクチン−３、ＴＩＧＩＴ、ＬＩＬＲＡ３／ＣＤ８５ｅ、ＬＩＬＲＡ４／ＣＤ８５ｇ／ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１／ＣＤ８５ｊ／ＩＬＴ２、ＬＩＬＲＢ２／ＣＤ８５ｄ／ＩＬＴ４、ＬＩＬＲＢ３／ＣＤ８５ａ／ＩＬＴ５、ＬＩＬＲＢ４／ＣＤ８５ｋ／ＩＬＴ３、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９／ＣＤ１３７、４−１ＢＢ リガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７ リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０ リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０ リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲ リガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン−アルファ／ＴＮＦ−ベータ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０ リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ−アルファ、ＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−３、ＴＩＭ−４、ＣＤ７、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、インテグリン アルファ４ ベータ １、インテグリン アルファ４ ベータ ７／ＬＰＡＭ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＳＬＰ  Ｒのモジュレーターまたはこれらの任意の組み合わせである。
【０２１０】
本発明に関して、チェックポイントモジュレーターは、本明細書中、分子、好ましくは、タンパク質（例えば、抗体、ドミナント・ネガティブ受容体、デコイ受容体もしくはリガンドまたはその断片もしくはバリアント）として定義され、これらは、免疫チェックポイントタンパク質の機能を調節するが、例えば、チェックポイント阻害因子（もしくは、抑制性チェックポイント分子）の活性を阻害もしくは低減させたり、チェックポイント刺激因子（もしくは、刺激性チェックポイント分子）の活性を刺激したりする。従って、本明細書中に定義されるチェックポイントモジュレーターは、チェックポイント分子の活性に影響を与える。
【０２１１】
これに関して、抑制性チェックポイント分子は、チェックポイント阻害因子として定義され、同義で使用できる。さらに、刺激性チェックポイント分子は、チェックポイント刺激因子として定義され、同義で使用できる。
【０２１２】
本発明に関して、チェックポイントモジュレーターによって阻害され得る、好ましい抑制性チェックポイント分子は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３／ＨＡＶＣＲ２、２Ｂ４、Ａ２ａＲ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＣＤ１６０、ＧＡＬ９、ＨＶＥＭ、ＩＤＯ１、ＩＤＯ２、ＫＩＲ、ＬＡＩＲ１およびＶＩＳＴＡである。
【０２１３】
本発明に関して、チェックポイントモジュレーターによって刺激され得る、好ましい刺激性チェックポイント分子は、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＣＤ２２６、ＣＤ２７６、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＯＸ−４０およびＣＤ７０である。
【０２１４】
好ましくは、上記チェックポイントモジュレーターは、アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、ドミナント・ネガティブ抗体、およびデコイ抗体、またはこれらの組み合わせより選択される。
【０２１５】
ｍＲＮＡコード抗体を生成するためおよび使用するための方法は、当該分野において知られている（例えば、ＷＯ第２００８／０８３９４９号）。
【０２１６】
好ましくは、上記アゴニスト抗体は、以下のリストより選択される：抗４−１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ−４０抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＴＮＦＲＳＦ２５抗体、および抗ＬＩＧＨＴ抗体。
【０２１７】
ＯＸ４０は、ＴＮＦＲ受容体スーパーファミリーのメンバーであり、抗原活性型哺乳類ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔリンパ球の表面に発現される。ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ；ｇｐ３４、ＡＣＴ−４−Ｌ、およびＣＤ２５２とも知られる）は、ＯＸ４０受容体に特異的に相互作用するタンパク質である。ＯＸ４０Ｌとの用語には、完全なＯＸ４０リガンド、水溶性ＯＸ４０リガンド、および、第二の部分（例えばタンパク質ドメイン）に共有結合しているＯＸ４０リガンドの機能的活性部分を含んでいる融合タンパク質、が含まれる。また、ＯＸ４０Ｌの定義には、天然のＯＸ４０Ｌからアミノ酸配列が改良されているバリアントであって、ＯＸ４０受容体に特異的に結合する能力を保持しているバリアントが含まれる。ＯＸ４０Ｌの定義には、ＯＸ４０の生物学的活性を高めるバリアントもさらに含まれる。ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０の生物学的活性（例えば、ＯＸ４０を介したシグナル伝達）を誘導するかまたは高める分子である。本明細書中、好ましくは、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０に特異的に結合できる結合分子として定義される。従って、上記ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０に結合し、ＯＸシグナルを刺激できる任意のアゴニストであってもよい。これに関して、上記ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０に結合しているアゴニスト抗体であってもよい。
【０２１８】
ＯＸ４０アゴニストおよび抗ＯＸ４０モノクローナル抗体は、ＷＯ１９９５／０２１２５１号、ＷＯ１９９５／０１２６７３号およびＷＯ１９９５／２１９１５号に記載される。特に好ましくは、抗ＯＸ４０抗体  ９Ｂ１２（ヒトＯＸ４０の細胞外ドメインに対するマウス抗ＯＸ４０モノクローナル抗体（Weinberg et al., 2006. J. Immunother. 29(6):575-585））である。
【０２１９】
好ましくは、上記アンタゴニスト抗体は、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｖｉｓｔａ抗体、抗Ｔｉｍ−３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体および抗ＢＴＬＡ抗体のリストから選択される。
【０２２０】
細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）は、Ｔ細胞の細胞内に主に発現される。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介したナイーブＴ細胞への、効果があるかまたは長く続く刺激の後、ＣＴＬＡ−４は、細胞表面に輸送され、免疫シナプスに集中する。その後、ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ８０／ＣＤ８６に対してＣＤ２８と競合し、Ａｋｔシグナルの効果によってＴＣＲシグナルを下方制御する。ゆえに、ＣＴＬＡ−４は、シグナルを弱めるもの（signal dampener）として生理学的に機能する（Weber, J. 2010. Semin. Oncol. 37(5):430-9）。
【０２２１】
特に好ましくは、抗ＣＴＬＡ−４抗体であるイピリムマブ（ipilimumab）(YervoyＲ）、トレメリムマブ（tremelimumab）およびＡＧＥＮ−１８８４である。
【０２２２】
ＰＤ−１経路のメンバーは、すべてが、ＰＤ−１シグナルに関連するタンパク質である。一方で、これらは、ＰＤ−１の上流のＰＤ−１シグナルを誘導するタンパク質、例えば、ＰＤ−１のリガンドであるＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２並びにシグナル伝達受容体ＰＤ−１であってもよい。他方で、これらは、ＰＤ−１受容体の下流の、シグナル伝達タンパク質であってもよい。本発明に関して、ＰＤ−１経路のメンバーとして特に好ましくは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２である。
【０２２３】
本発明に関して、本明細書中、好ましくは、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ＰＤ−１経路シグナル（好ましくは、ＰＤ−１受容体に介されるシグナル）を弱めることができる化合物として定義される。従って、上記ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ＰＤ−１経路シグナルに拮抗できる、ＰＤ−１経路の任意のメンバーに対する任意のアンタゴニストであってもよい。これに関して、当該アンタゴニストは、本明細書中で定義されるように、ＰＤ−１経路の任意のメンバーを標的とする（好ましくは、ＰＤ−１受容体であるＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２に対する）アンタゴニスト抗体であってもよい。また、このアンタゴニスト抗体は、核酸によってコードされていてもよい。また、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ＰＤ１リガンドの活性を阻害するＰＤ−１受容体の断片であってもよい。Ｂ７−１またはその断片は、同様に、ＰＤ１に拮抗するリガンドとして作用してもよい。さらに、ＰＤ−１経路アンタゴニストは、ＰＤ−１に結合できるが（例えば、ＰＤ−１とＢ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＬとの相互作用を阻害することによって（ＷＯ２０１４１２７９１７号））ＰＤ−１シグナルを抑えることができるアミノ酸配列を含むタンパク質（または、当該アミノ酸配列をコードする核酸）であってもよい。
【０２２４】
特に好ましくは、抗ＰＤ１抗体であるニボルマブ（ＭＤＸ−１１０６／ＢＭＳ−９３６５５８／ＯＮＯ−４５３８）、(Brahmer et al., 2010. J Clin Oncol. 28(19):3167-75; PMID: 20516446）；ピディリズマブ（ＣＴ−０１１）、（Berger et al., 2008. Clin Cancer Res. 14(10):3044-51; PMID: 18483370）；ペムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５、ＳＣＨ ９００４７５）；ＡＭＰ−２２４およびＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４）である。
【０２２５】
特に好ましくは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、ＭＤＸ−１１０５／ＢＭＳ−９３６５５９（Brahmer et al. 2012. N Engl J Med. 366(26):2455-65; PMID: 22658128）；アテゾリズマブ（atezolizumab）（ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６）；デュルバルマブ（durvalumab）（ＭＥＤＩ４７３６）；およびアベルマブ（avelumab）（ＭＳＢ００１０７１８）である。
【０２２６】
本発明によると、本発明のＲＮＡ含有組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、表１０の、少なくとも一つの抗体またはその断片もしくはバリアントをコードしている。上記ＲＮＡ含有組成物が、特定の抗体またはその断片もしくはバリアントの重鎖をコードしているＲＮＡを少なくとも一つ含んでおり、上記と同じ特定の抗体またはその断片もしくはバリアントの軽鎖をコードしているＲＮＡを少なくとも一つさらに含んでいることが特に好ましい。
【０２２７】
【表１０】
2018517674.tif 000061
【０２２８】
2018517674.tif 000062
【０２２９】
さらに好ましい実施形態において、上記チェックポイントモジュレーターは、デコイ受容体（例えば、水溶性受容体）である。好ましくは、上記デコイ受容体は、水溶性ＰＤ１受容体である。特に好ましい実施形態において、本発明のＲＮＡ含有組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、水溶性ＰＤ−１受容体をコードしている配列番号３８９のＲＮＡ配列と同一、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＲＮＡ配列を含んでいる。
【０２３０】
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、ＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）は、チェックポイントモジュレーターとして機能するリガンドを少なくとも一つコードしている。好ましくは、当該リガンドは、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である。本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態において、ＲＮＡ（好ましくは、ｍＲＮＡ）は、チェックポイントモジュレーターとして機能するリガンドを少なくとも一つコードしている。好ましくは、当該リガンドは、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である。最も好ましくは、本発明のＲＮＡ含有組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、ＣＤ４０Ｌをコードしている配列番号１００７３のＲＮＡ配列と同一、または少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるＲＮＡ配列を含んでいる。
【０２３１】
＜１２．自然免疫活性化因子＞
これに関して、自然免疫活性化因子は、例えばＴＬＲに外性ＴＬＲリガンドを結合する反応のような、自然免疫反応（哺乳動物において）を引き出すことを可能にする、任意のヒトタンパク質またはペプチドを概して含む、特定のヒトアジュバントタンパク質において、哺乳類から選択され得る。より好ましくは、ヒトアジュバントタンパク質は、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１；ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＯＤ３、ＮＯＤ４、ＮＯＤ５、ＮＡＬＰ１、ＮＡＬＰ２、ＮＡＬＰ３、ＮＡＬＰ４、ＮＡＬＰ５、ＮＡＬＰ６、ＮＡＬＰ６、ＮＡＬＰ７、ＮＡＬＰ７、ＮＡＬＰ８、ＮＡＬＰ９、ＮＡＬＰ１０、ＮＡＬＰ１１、ＮＡＬＰ１２、ＮＡＬＰ１３、ＮＡＬＰ１４、ｌＩＰＡＦ、ＮＡＩＰ、ＣＩＩＴＡ、ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５およびＬＧＰ２を含んでいるＴＬＲ、ＮＬＲおよびＲＬＨ、例えばＴｒｉｆおよびＣａｒｄｉｆを含んでいるアダプタータンパク質を含んでいるＴＬＲシグナリングのトランスデューサー信号；低分子ＧＴＰアーゼシグナリング（ＲｈｏＡ、Ｒａｓ、Ｒａｃ１、Ｃｄｃ４２、Ｒａｂ等）の成分、ＰＩＰシグナリング（ＰＩ３Ｋ、Ｓｒｃ−カイネース等）の成分、ＭｙＤ８８依存シグナリング（ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＩＲＡＰ、ＴＲＡＦ６等）の成分、ＭｙＤ８８独立シグナリング（ＴＩＣＡＭ１、ＴＩＣＡＭ２、ＴＲＡＦ６、ＴＢＫ１、ＩＲＦ３、ＴＡＫ１、ＩＲＡＫ１等）の成分；例えばＡｋｔ、ＭＥＫＫ１、ＭＫＫ１、ＭＫＫ３、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＭＫＫ７、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＧＳＫ３、ＰＫＣカイネース、ＰＫＤカイネース、ＧＳＫ３カイネース、ＪＮＫ、ｐ３８ＭＡＰＫ、ＴＡＫ１、ＩＫＫ、およびＴＡＫ１を含んでいる活性化カイネース；例えばＮＦ−ｋＢ、ｃ−Ｆｏｓ、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ＣＲＥＢ、ＡＰ−１、Ｅｌｋ−１、ＡＴＦ２、ＩＲＦ−３、ＩＲＦ−７を含んでいる活性化転写因子を含んでいるパターン認識受容体のシグナリングネットワークの成分およびリガンドである、タンパク質から成る群から選択される。哺乳類、特にヒトアジュバントタンパク質は、ＨＳＰ１０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ７５およびＨＳＰ９０、ｇｐ９６、フィブリノーゲン、フィブロネクチンのＩＩＩ型反復エキストラドメインＡ；またはＣ１ｑ、ＭＢＬ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２ｂ、Ｂｂ、Ｄ、ＭＡＳＰ−１、ＭＡＳＰ−２、Ｃ４ｂ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、ＣＲ１、ＣＲ２、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｃ１ｑＲ、Ｃ１ＩＮＨ、Ｃ４ｂｐ、ＭＣＰ、ＤＡＦ、Ｈ、Ｉ、ＰおよびＣＤ５９を含んでいる補体系の構成要素、または例えばベータ−デフェンシン、細胞表面タンパク質を含んでいる誘導標的遺伝子；またはｔｒｉｆ、ｆｌｔ−３リガンド、Ｇｐ９６またはフィブロネクチン等を含んでいるヒトアジュバントタンパク質、または任意の上記ヒトアジュバントタンパク質の任意のホモログ種など、ヒートショックタンパク質から成る群からさらに選択され得る。さらに、ＨＧＭＢ１は、アジュバントタンパク質として用いられ得る。
【０２３２】
哺乳類、特にヒトアジュバントタンパク質は、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ１ベータＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦアルファ、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ；ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１アルファ、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン、ＣＣＬ２１を含んでいるケモキナーゼ；ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−アルファ；ならびにＩＬ−１Ｒ１およびＩＬ−１アルファを含んでいる、マクロファージから放出したサイトキナーゼを含んでいる、自然免疫反応を誘発または亢進するサイトキナーゼをさらに含み得る。
【０２３３】
従って、これに関して、少なくとも１つの自然免疫活性化因子をコードする少なくとも１つのＲＮＡ、好ましくは、アジュバントタンパク質、より好ましくは、ヒトアジュバントタンパク質、または、それらのフラグメントもしくはそれらの変異体が特に好ましい。
【０２３４】
これに関して、アジュバントタンパク質の恒常的な活性化変異体は、少なくとも１つのＲＮＡによってコードされ、好ましくはＲＩＧ−１（ΔＲＩＧＩ）の恒常的な活性化変異体であることが特に好ましい。
【０２３５】
別の好ましい実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡは、自然免疫活性化因子、または、それらのフラグメントもしくはそれらの変異体として、ＨＧＭＢ１をコードする。
【０２３６】
本発明に関する好ましい実施形態によると、自然免疫活性化因子は、ＣＤ５５、Ａｋｔ、ＡＴＦ２、Ｃ１ＱＢＰ、Ｃ１ＱＣ、Ｃａｒｄｉｆ、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ３、ＣＣＬ５、ＣＤ５９、Ｂｅｔａ−Ｄｅｆｅｎｓｉｎ、Ｃｄｃ４２、ＣＦＡＤ、ＣＦＡＨ、ＣＦＡＩ、ＣＨ６０、ＣＩＩＴＡ、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−ｍｙｃ、ＣＯ８Ａ、ＣＯ８Ｂ、ＣＯ８Ｇ、complement_system_component_C1INH、complement_system_component_C1qR、complement_system_component_C1s、complement_system_component_C4bp、complement_system_component_C6、complement_system_component_C7、complement_system_component_C8、complement_system_component_C9、complement_system_component_CR2、complement_system_component_CR3、complement_system_component_MASP-1、complement_system_component_MASP-2、complement_system_component_MBL、complement_system_component_MCP、ＣＲＥＢ３、ＣＲＥＢ３Ｌ１、ＣＲＥＢ３Ｌ３、ＣＲＥＢ３Ｌ４、ＣＲＥＢ５、ＣＲＴＣ２、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ８、ＤＪＢ１１、ＤＪＢ１３、ＤＪＢ１４、ＤＪＣ１０、ＤＪＣ１２、ＤＪＣ１４、ＤＪＣ１５、ＤＪＣ１６、ＤＪＣ１７、ＤＪＣ１８、ＤＪＣ２２、ＤＪＣ２４、ＤＪＣ２５、ＤＪＣ２７、ＤＪＣ２８、ＤＪＣ３０、ＤＮＡＪＢ１２、ＤＮＡＪＣ１１、ＤＮＡＪＣ２１、ＤＮＪＡ１、ＤＮＪＡ２、ＤＮＪＡ３、ＤＮＪＡ４、ＤＮＪＢ１、ＤＮＪＢ２、ＤＮＪＢ３、ＤＮＪＢ４、ＤＮＪＢ５、ＤＮＪＢ６、ＤＮＪＢ７、ＤＮＪＢ８、ＤＮＪＢ９、ＤＮＪＣ１、ＤＮＪＣ２、ＤＮＪＣ３、ＤＮＪＣ４、ＤＮＪＣ５、ＤＮＪＣ７、ＤＮＪＣ８、ＤＮＪＣ９、Ｅｌｋ−１、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ、ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ、ＦＬＴ３＿ｌｉｇａｎｄ、ＦＯＳ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＲＰ９４＿（ｇｐ９６）、ＧＳＫ３Ａ、ＧＳＫ３Ｂ、ＨＳ７１Ａ、ＨＳ７１Ｂ、ＨＳＣ７０、ＨＳＰ１０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ７５、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ９０Ｂ１、ＩＦＮａｌｐｈａ、ＩＦＮＢ、ＩＦＮＧ、ＩＫＫ、ＩＬ−１、ＩＬ−１＿ａｌｐｈａ、ＩＬ−１＿ｂｅｔａ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１Ｒ１、ＩＬ−２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＩＲＦ３、ＩＲＦ−７、ＪＮＫ、ＫＰＣＢ、ＫＰＣＤ、ＫＰＣＤ１、ＫＰＣＤ３、ＫＰＣＥ、ＫＰＣＧ、ＫＰＣＩ、ＫＰＣＬ、ＫＰＣＴ、ＫＰＣＺ、ｌ＿ＩＰＡＦ、ＬＧＰ２、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＤＡ５、ＭＫ１１、ＭＫ１２、ＭＫ１３、ＭＫ１４、ＭＫＫ１、ＭＫＫ３、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＭＫＫ７、ＭＳＴＰ１０４、ＭｙＤ８８、ＮＡＬＰ１０、ＮＡＬＰ１１、ＮＡＬＰ１２、ＮＡＬＰ１３、ＮＡＬＰ２、ＮＡＬＰ３、ＮＡＬＰ４、ＮＡＬＰ５、ＮＡＬＰ６、ＮＡＬＰ７、ＮＡＬＰ８、ＮＡＬＰ９、ＮＦ−ｋａｐｐａＢ、ＮＬＲＰ１４、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＯＤ３、ＰＩ３Ｋ、ＰＫＤ２、ＰＫＮ１、ＰＫＮ２、ＰＫＮ３、ＰＲＫＣＡ、ＰＲＫＤ２、Ｒａｂ、Ｒａｃ１、ＲＡＳＨ、ＲＡＳＫ、ＲＡＳＮ、ＲｈｏＡ、ＲＩＧ−Ｉ、Ｓｒｃ−Ｋｉｎａｓｅｓ、Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ＿ｐｒｏｔｅｉｎ＿Ａ、Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ＿ｐｒｏｔｅｉｎ＿Ｄ、ＴＡＫ１、ＴＢＫ１、ＴＩＣＡＭ１、ＴＩＣＡＭ２、ＴＩＲＡＰ、ＴＬＲ１、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、TＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＮＦ、ＴＲＡＦ６からなる群、より好ましくは表１１に示される群より選択される、任意の自然免疫活性化因子から選択され得る。これに関して、表１１に係る自然免疫活性化因子をコードするＲＮＡ配列が特に好ましい。
【０２３７】
【表１１】
2018517674.tif 000063
【０２３８】
2018517674.tif 000064
【０２３９】
2018517674.tif 000065
【０２４０】
2018517674.tif 000066
【０２４１】
2018517674.tif 000067
【０２４２】
2018517674.tif 000068
【０２４３】
2018517674.tif 000069
【０２４４】
2018517674.tif 000070
【０２４５】
2018517674.tif 000071
【０２４６】
2018517674.tif 000072
【０２４７】
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【０２４８】
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【０２４９】
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【０２５０】
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【０２５１】
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【０２５２】
2018517674.tif 000078
【０２５３】
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【０２５４】
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【０２５５】
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【０２５６】
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【０２５７】
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【０２５８】
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【０２５９】
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【０２６０】
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【０２６１】
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【０２６２】
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【０２６３】
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【０２６４】
2018517674.tif 000090
【０２６５】
本発明によると、より好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも１つのＲＮＡ、好ましくは少なくとも１つの自然免疫活性化因子、または、それらのフラグメントもしくはそれらの変異体をコードする、少なくとも１つのコード領域を含むｍＲＮＡを含んでいることが好ましい。ここで、上記少なくとも１つのコード領域は、表１１に示される配列番号に係るＲＮＡ配列と同一の、または、少なくとも当該ＲＮＡ配列に対して５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同じである配列を含んでいる。
【０２６６】
＜１３．抗体、デコイ（decoy）受容体およびドミナント・ネガティブ（dominant negative）受容体＞
好ましい実施形態によると、本発明の組成物における少なくとも１つのＲＮＡは、腫瘍または癌の発生に関係するタンパク質の機能またはシグナル経路を調節する（例えば、抑制する）、少なくとも１つの抗体および／または少なくとも１つのドミナント・ネガティブ受容体および／または少なくとも１つのデコイ受容体、または、それらのフラグメントもしくはそれらの変異体をコードしている。ＲＮＡ含有組成物は、特定の抗体、または、それらのフラグメントもしくはそれらの変異体の重鎖をコードする少なくとも１つのＲＮＡ、および、上記特定の抗体、または、それらのフラグメントもしくはそれらの変異体の軽鎖をコードする少なくとも１つのさらなるＲＮＡ、を含むことが特に好ましい。これに関して、表１２に示す抗体であることが特に好ましい。
【０２６７】
【表１２】
2018517674.tif 000091
【０２６８】
2018517674.tif 000092
【０２６９】
2018517674.tif 000093
【０２７０】
2018517674.tif 000094
【０２７１】
2018517674.tif 000095
【０２７２】
2018517674.tif 000096
【０２７３】
2018517674.tif 000097
【０２７４】
好ましくは、中和（neutralizing）抗体は、抗ＩＬ−１０抗体および抗ＴＧＦ−β抗体のリストから選択される。さらに、上記少なくとも１つの抗体は、好ましくは抗ＣＤ７３抗体、または、それらのフラグメントもしくはそれらの変異体から選択され得る。さらに特に好ましい実施形態において、上記少なくとも１つの抗体は、ＣＣＤ５／ＣＤ１９５に対する抗体、または、そのリガンドＣＣＬ５／ＲＡＮＴＥＳに対する抗体から選択される。
特に好ましい実施形態において、上記デコイ受容体は可溶性ＣＣＲ５（ＣＤ１９５としても知られる、５型ケモカイン受容体）である。
【０２７５】
さらに特に好ましい実施形態において、上記ドミナント・ネガティブ受容体は、ドミナント・ネガティブＣＣＲ５（ＣＤ１９５としても知られる、５型ケモカイン受容体）である。
【０２７６】
さらに、上記少なくとも１つの抗体は、好ましくは抗ＣＤ７３抗体、または、それらのフラグメントもしくはそれらの変異体から選択され得る。
【０２７７】
＜１４．骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子＞
骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣ）は、不均一な未成熟骨髄細胞集団であり、癌および関連疾患で増加する。ＭＤＳＣは、成長因子を分泌する腫瘍によって誘導される。ＭＤＳＣは、いくつかの機構を経て宿主免疫応答の抑制において重要な役割を果たす。さらに、ＭＤＳＣは、血管形成および腫瘍侵襲の一因ともなり得る。従って、ＭＤＳＣの阻害は、癌および関連疾患の治療のための方策となる。本発明に関して、ＭＤＳＣの直接的な不活性化によって（例えば、抗ＩＬ−１７抗体）、ＭＤＳＣの成熟細胞への分化を阻止することによって（例えば、ＩＬ−１２）、ＭＤＳＣの細胞発生を阻止することによって、または、ＭＤＳＣの減少によって（例えば、細胞毒性剤）、ＭＤＳＣの阻害を達成することができる。従って、ＭＤＳＣの阻害剤として、抗ＩＬ−１７抗体およびＩＬ−１２を用いることが特に好ましい。
【０２７８】
＜１５．ＩＤＯ経路阻害因子＞
本発明のＲＮＡ含有組成物のさらに好ましい実施形態では、ＲＮＡ、好ましくは少なくとも１つのＩＤＰ経路阻害剤をコードするｍＲＮＡ、を含む。好ましくは、少なくとも１つのＩＤＯ経路阻害因子をコードするＲＮＡは、阻害タンパク質またはＩＤＯ経路のドミナント・ネガティブ変異タンパク質をコードする。
【０２７９】
Prendergastら（Prendergast GC, Smith C, Thomas S, Mandik-Nayak L, Laury-Kleintop L, Metz R, Muller AJ. Indoleamine 2,3-dioxygenase pathways of pathogenic inflammation and immune escape in cancer. Cancer Immunol. Immunother. 2014 Jul;63(7):721-35）にレビューされているように、インドールアミンピロール２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯまたはＩＮＤＯ  ＥＣ  １．１３．１１．５２）は、ヒトにおいて、ＩＤＯ１遺伝子によってコードされる酵素である。当該酵素は、必須アミノ酸であるＬ−トリプトファンからＮ−ホルミルキヌレニンへの分解を触媒する。ＩＤＯは、トリプトファン異化経路の最初の酵素および律速酵素であるため、トリプトファンの減少が起こり、Ｔ細胞だけでなく細菌の成長停止をもたらすことができる。ＩＤＯは、いくつかの代替活性化マクロファージおよび他の免疫調整細胞（多くの腫瘍による免疫転覆（subversion）方策としても用いられる）によって生成される免疫修飾酵素である。ＩＤＯ阻害因子の臨床開発は、進行したヒトの癌の治療において広く適用される免疫修飾剤の新しいクラスを生じ得る。
【０２８０】
＜１６．アポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質またはペプチド＞
アポトーシスは、しっかりとした細胞の過程（cellular process）を調整し、欠陥のあるアポトーシスの調整は、ヒトの癌の特徴である。腫瘍細胞のアポトーシスを回復させる目的を有する、標的の鍵となるアポトーシスのレギュレーターは、新しい癌の治療の方策として追求されている。アポトーシス阻害（ＩＡＰ）タンパク質のメンバーである、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１およびｃＩＡＰ２は、細胞死および生存の重要なレギュレーターであり、新しい癌の治療のための魅力的な標的である。ＳＭＡＣ／ＤＩＡＢＬＯタンパク質は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１およびｃＩＡＰ２の内在性のアンタゴニストである。この１０年の間に、熱烈な研究の成果の結果、癌の治療のための重要な試みにおいて、今やいくつかの低分子ＳＭＡＣ模倣物（mimetics）の設計および開発が行われている。さらに好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アポトーシス阻害タンパク質（ＩＡＰｓ）に結合する少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードする、少なくとも１つのコード領域を含む、少なくとも１つのＲＮＡを含んでいるため、癌細胞をアポトーシスの死に感作する。
【０２８１】
従って、本発明のＲＮＡ含有組成物における少なくとも１つのＲＮＡは、ＳＭＡＣ模倣物のようなアポトーシスの阻害因子に結合する、少なくとも１つのタンパク質またはペプチドをコードしていることが特に好ましい。
【０２８２】
本発明に係るＩＡＰsに結合する、タンパク質またはペプチドは、Ｏｍｉ／ＨｔｒＡ２、Ｓｍａｃ、ペプチド由来のＳｍａｃ、Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯ、およびＸＡＦ１（ＸＩＡＰ関連因子１（XIAP-associated factor 1））、および、それらのフラグメントまたはそれらの誘導体であることが特に好ましい。
【０２８３】
［ＲＮＡ修飾］
一実施形態によると、本明細書で規定される、少なくとも１つのタンパク質および／またはペプチドをコードする、組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、修飾ＲＮＡの形態のものであり、本明細書で規定される任意の修飾は、組成物の少なくとも１つのＲＮＡに導入されてもよい。本明細書で規定される修飾は、好ましくは、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡを安定化に導く。
【０２８４】
従って、一実施形態によると、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、“安定化ＲＮＡ”として提供されてもよく、当該安定化ＲＮＡとは、インビボでの分解（例えば、エキソヌクレアーゼまたはエンドヌクレアーゼによる）に対して本質的に耐性を有するＲＮＡということである。そのような安定化は、例えば、本発明に係る組成物の少なくとも１つのＲＮＡの修飾されたリン酸主鎖によって影響され得る。本発明に関連する主鎖の修飾は、ＲＮＡに含まれるヌクレオチドの主鎖のリン酸が化学的に修飾される修飾である。これに関連して好ましく使用され得るヌクレオチドは、例えば、ホスホロチオネート修飾リン酸主鎖、好ましくは、硫黄原子によって置換されているリン酸主鎖に含まれるリン酸酸素のうちの少なくとも１つを含む。安定化ＲＮＡは、例えば、アルキルホスホネートおよびアリールホスホネートなどの、例えば、非イオン性ホスホネートアナログをさらに含んでもよく、ここでは、荷電したホスホネート酸素は、アルキル基またはアリール基またはホスホジエステルおよびアルキルホスホトリエステルによって置換されており、ここでは、荷電した酸素残基が、アルキル化された形態で存在している。いかなる限定も意味することなく、そのような主鎖の修飾は、一般的に、メチルホスホネート、ホスホロアミデートおよびホスホロチオネート（例えば、シチジン−５’−Ｏ−（１−チオリン酸））からなる群からの修飾を含む。
【０２８５】
以下に記載される特定の修飾は、本明細書で規定される少なくとも１つのＲＮＡを「安定化する」ことができることが好ましい。
【０２８６】
［化学修飾］
本明細書で用いられる用語「ＲＮＡ修飾」は、糖修飾または塩基修飾だけでなく、骨格修飾を含む化学修飾を示す。
【０２８７】
これに関して、本明細書で規定される修飾ＲＮＡ分子は、例えば、骨格修飾、糖修飾または塩基修飾などの、ヌクレオチドアナログ／修飾を含み得る。本発明に関わる骨格修飾とは、本明細書で規定されるＲＮＡに含まれるヌクレオチドの骨格のリン酸塩が化学的に修飾されるという修飾である。本発明に関わる糖修飾とは、本明細書で定義されるＲＮＡのヌクレオチドの糖の化学修飾のことである。さらに、本発明に関わる塩基修飾とは、ＲＮＡのヌクレオチドの塩基部位の化学修飾のことである。ここにおいてヌクレオチドアナログまたは修飾は、転写および／または翻訳に適用可能なヌクレオチドアナログから選択されることが望ましい。
【０２８８】
［糖修飾］
ここに記述される修飾ＲＮＡに組み込まれ得る修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、糖部位を修飾することもできる。例えば、２’ヒドロキシル群（ＯＨ）は多数の異なる「オキシ」または「デオキシ」置換基で修飾または置換することができる。「オキシ」２’ヒドロキシル群修飾の例は、アルコキシまたはアリルコキシ（−ＯＲ、例えば、Ｒ＝Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたは糖）、ポリエチレングリコール類（ＰＥＧ）、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ、２’ヒドロキシル基が、例えば、同じリボース糖の４’炭素へのメチレン架橋によって連結されている「ロックト」核酸（ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ：ＬＮＡ）、およびアミノ群（例えばＮＲＰなどのアミノ群はアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、またはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノであり得る、−Ｏ−アミノ）あるいはアミノアルコキシを含むが、これらに限定されない。
【０２８９】
「デオキシ」修飾は、水素、アミノ（例えばＮＨ２、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、またはアミノ酸）を含み得る。または、当該アミノ群は当該糖にリンカーを通して結びつき得、当該リンカーは一つまたはそれ以上のＣ、Ｎ、およびＯ原子を含むことを特徴としている。
【０２９０】
当該糖群はまた、リボース中の対応する炭素の配置と反対の立体化学的配置を備える一つまたはそれ以上の炭素を含み得る。従って、修飾ＲＮＡは、例えば、糖としてアラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。
【０２９１】
［骨格修飾］
当該リン酸塩骨格は、修飾したヌクレオシドおよびヌクレオチド（ここに記述する修飾ＲＮＡに組み込まれていてもよい）を更に修飾してもよい。当該骨格のリン酸塩類は、一つまたはそれ以上の酸素原子を異なる置換基に置換することによって修飾することができる。さらに、当該修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、非修飾リン酸部位の、ここに定義する修飾リン酸部位への全置換を含んでもよい。修飾リン酸部位群の例は、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート類、ボランホスフェート類、ボランホスフェートエステル類、水素ホスホネート類、ホスホロアミデート類、アルキルまたはアリールホスホネート類およびホスホトリエステル類を含むが、これらに限定されない。ホスホロジチオエートは、硫黄で置換される両端非リンク酸素を有する。リン酸塩リンカーはまた、リンク酸素の、窒素（架橋ホスホロアミデート類）、硫黄（架橋ホスホロチオエート類）および炭素（架橋メチレンホスホネート）への置換によっても修飾され得る。
【０２９２】
［塩基修飾］
当該修飾ヌクレオシドおよびヌクレオチド（ここに記述する修飾ＲＮＡに組み込まれていてもよい）は更に、核塩基部位を修飾することもできる。ＲＮＡ中に見受けられる核塩基の例は、アデニン、グアニン、シトシンおよびウラシルを含むが、これらに限定されない。例えば、ここに記述するヌクレオシドおよびヌクレオチドは、主溝面上が化学的に修飾されてもよい。いくつかの実施例において、主溝の化学的修飾はアミノ群、チオニル群、アルキル群、ハロゲン群を含み得る。
【０２９３】
本発明の特に望ましい実施例において、当該ヌクレオチドアナログ／修飾は、望ましくは２−アミノ−６−クロロプリンリボサイド−５’−三リン酸、２−アミノプリン−リボサイド−５’−三リン酸、２−アミノアデノシン−５’−三リン酸、２−アミノ−２’−デオキシシチジン−三リン酸、２−チオシチジン−５’−三リン酸、２−チオウリジン−５’−三リン酸、２’−フルオロチミジン−５’−三リン酸、２’−Ｏ−メチルイノシン−５’−三リン酸  ４−チオウリジン−５’−三リン酸、５−アミノアリルシチジン−５’−三リン酸、５−アミノアリルウリジン−５’−三リン酸、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸、５−ブロモウリジン−５’−三リン酸、５−ブロモ−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン−５’−三リン酸、５−ヨードシチジン−５’−三リン酸、５−ヨード−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−ヨードウリジン−５’−三リン酸、５−ヨード−２’デオキシウリジン−５’−三リン酸、５−メチルシチジン−５’−三リン酸、５−メチルウリジン−５’−三リン酸、５−プロピニル−２’−デオキシシチジン−５’−三リン酸、５−プロピニル−２’−デオキシウリジン−三リン酸、６−アザシチジン−５’−三リン酸、６−アザウリジン−５’−三リン酸、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸、８−アザアデノシン−５’−三リン酸、ベンズイミダゾール−リボシド−５’−三リン酸、Ｎ１−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｎ１−メチルグアノシン−５’−三リン酸、Ｎ６−メチルアデノシン−５’−三リン酸、Ｏ６−メチルグアノシン−５’−三リン酸、シュードウリジン−５’−三リン酸、またはプロマイシン−５’−三リン酸、キサントシン−５’−三リン酸から選択される塩基修飾から選択される。特に望ましいのは、５−メチルシチジン−５’−三リン酸、７−デアザグアノシン−５’−三リン酸、５−ブロモシチジン−５’−三リン酸、およびシュードウリジン−５’−三リン酸から成る塩基修飾ヌクレオチドの群から選択された、塩基修飾のためのヌクレオチドである。
【０２９４】
いくつかの実施例において、修飾ヌクレオチドは、ピリジン−４−一リボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−シュードウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチルウリジン、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチルウリジン、１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−１−メチルシュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、および４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジンを含む。
【０２９５】
いくつかの実施例において、修飾ヌクレオチドは５−アザ−シチジン、シュードイソシチジン、３−メチルシチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、１−メチル−シュードシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−シュードシチジン、４−チオ−１−メチル−シュードシチジン、４−チオ−１−メチル−デアザ−シュードシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−シュードイソシチジン、および４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジンを含む。
【０２９６】
他の実施例において、修飾ヌクレオチドは２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６メチルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６（ｃｉｓ−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−メチルアデニン、２−メチルチオ−アデニン、および２−メトキシ−アデニンを含む。
【０２９７】
他の実施例において、修飾ヌクレオチドはイノシン、１−メチル−イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチルイノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、およびＮ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシンを含む。
【０２９８】
いくつかの実施例において、当該ヌクレオチドは主溝面上が修飾されていてもよく、ウラシルのＣ−５置換水素の、メチル群またはハロゲン群との置換を含んでいてもよい。
特定の実施例において、修飾ヌクレオチドは５’−Ｏ−（１−三リン酸）−アデノシン、５’−Ｏ−（１−三リン酸）−シチジン、５’−Ｏ−（１−三リン酸）−グアノシン、５’−Ｏ−（１−三リン酸）−ウリジンまたは５’−Ｏ−（１−三リン酸）−シュードウリジンである。
【０２９９】
さらに特定の実施例において、修飾ＲＮＡは、６−アザ−シチジン、２−チオ−シチジン、α−チオ−シチジン、シュード−イソ−シチジン、５−アミノアリル−ウリジン、５−ヨードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、α−チオ−ウリジン、４−チオ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン、デオキシ−チミジン、５−メチル−ウリジン、ピロロ−シチジン、イノシン、α−チオ−グアノシン、６−メチル−グアノシン、５−メチル−シチジン、５−メチル−シチジン、８−オキソ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、Ｎ１−メチル−アデノシン、２−アミノ−６−クロロ−プリン、Ｎ６−メチル−２−アミノ−プリン、シュード−イソ−シチジン、６−クロロ−プリン、Ｎ６−メチル−アデノシン、α−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデノシンから選択されるヌクレオシド修飾を含み得る。
【０３００】
［脂質修飾］
さらにある実施例によれば、本明細書で規定される修飾ＲＮＡは、脂質修飾を含有し得る。かかる脂質修飾ＲＮＡは典型的にはここに定義されるＲＮＡを含む。本明細書で規定されるかかる脂質修飾ＲＮＡは典型的には更に、少なくとも１つの、そのＲＮＡと共有結合的に連結するリンカーおよび、少なくとも１つの、それぞれのリンカーと共有結合的に連結する脂質を含む。あるいは、当該の脂質修飾ＲＮＡは少なくとも１つの、ここに定義されるＲＮＡおよび、少なくとも１つの、そのＲＮＡと（リンカーなしで）共有結合的に連結する（二官能性）脂質を含む。３番目の代替例によれば、当該脂質修飾ＲＮＡは、本明細書で規定されるＲＮＡ分子、少なくとも１つの、そのＲＮＡと共有結合的に連結するリンカー、および少なくとも１つの、それぞれのリンカーに共有結合的に結合する脂質、および少なくとも１つの、そのＲＮＡと（リンカーなしで）共有結合的に連結する（二官能性）脂質を含む。ここにおいて、当該脂質修飾は直線ＲＮＡ配列の両末端に存在することが特に望ましい。
【０３０１】
［Ｇ／Ｃ含量の最適化］
本発明の特に好ましい実施形態によると、本発明の組成物のＲＮＡは改変される。好ましくは、上記ＲＮＡは、改変されること、および、好ましくはそれらのコード領域のＲＮＡのＧ（グアノシン）／Ｃ（シトシン）含量が増加することによって安定化される。それに関して、コード領域のＲＮＡのＧ／Ｃ含量が、その特定の野生型コード配列、すなわち改変されていないＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含量と比較して増加する。しかしながら、ＲＮＡにコードされるアミノ酸配列は、好ましくは特定の野生型／非改変ＲＮＡにコードされるアミノ酸配列と比較して改変されない。
【０３０２】
本発明の組成物のＲＮＡのＧ／Ｃ含量の改変は、Ｇ（グアニン）／Ｃ（シトシン）含量が増加した配列は、Ａ（アデノシン）／Ｕ（ウラシル）含量が増加した配列よりも安定である事実に基づく。それゆえに、翻訳されるアミノ酸は維持される一方で、コード配列または全ＲＮＡのコドンは、野生型のコード配列またはＲＮＡと比較して異なるように、含有するＧ／Ｃヌクレオチドの量を増加させる。いくつかのコドンは１つまたは同一のアミノ酸をコードするという事実（いわゆる、遺伝子コードの変質）に関して、安定性に最も優れたコドンを決定する（いわゆる、選択的コドン利用）ことができる。少なくとも１つのＲＮＡによってコードされるアミノ酸に依存して、その野生型配列と比較して、ＲＮＡ配列の改変の様々な可能性が存在する。ＧまたはＣヌクレオチドのみを含有するコドンによってコードされるアミノ酸の場合、コドンの改変は必要ない。従って、プロリン（Ｐｒｏ）（ＣＣＣまたはＣＣＧ）、アルギニン（Ａｒｇ）（ＣＧＣまたはＣＧＧ）、アラニン（Ａｌａ）（ＧＣＣまたはＧＣＧ）およびグリシン（Ｇｌｙ）（ＧＧＣまたはＧＧＧ）のコドンは、ＡまたはＵが存在しないため、改変の必要がない。対照的に、Ａおよび／またはＵを含有するコドンは、Ａおよび／Ｕを含有しないコドンであって、同じアミノ酸をコードする他のコドンへの置換によって改変できる。これらの例として、プロリンのコドンは、ＣＣＵまたはＣＣＡからＣＣＣまたはＣＣＧに改変でき、アルギニンのコドンは、ＣＧＵまたはＣＧＡまたはＡＧＡまたはＡＧＧからＣＧＣまたはＣＧＧに改変でき、アラニンのコドンは、ＧＣＵまたはＧＣＡからＧＣＣまたはＧＣＧに改変でき、グリシンのコドンは、ＧＧＵまたはＧＧＡからＧＧＣまたはＧＧＧに改変できる。他の場合、ＡまたはＵヌクレオチドがコドンから排除できずとも、Ａおよび／またはＵヌクレオチドの含量がより低いコドンを使用することによって、ＡおよびＵ含量を低下することができる。これらの例として、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）のコドンは、ＵＵＵからＵＵＣに改変でき、ロイシン（Ｌｅｕ）のコドンは、ＵＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵまたはＣＵＡからＣＵＣまたはＣＵＧに改変でき、セリン（Ｓｅｒ）のコドンは、ＵＣＵまたはＵＣＡまたはＡＧＵからＵＣＣ、ＵＣＧまたはＡＧＣに改変でき、チロシン（Ｔｙｒ）のコドンは、ＵＡＵからＵＡＣに改変でき、システイン（Ｃｙｓ）のコドンは、ＵＧＵからＵＧＣに改変でき、ヒスチジン（Ｈｉｓ）のコドンは、ＣＡＵからＣＡＣに改変でき、グルタミン（Ｇｌｎ）のコドンは、ＣＡＡからＣＡＧに改変でき、イソロイシン（Ｉｌｅ）のコドンは、ＡＵＵまたはＡＵＡからＡＵＣに改変でき、スレオニン（Ｔｈｒ）のコドンは、ＡＣＵまたはＡＣＡからＡＣＣまたはＡＣＧに改変でき、アスパラギン（Ａｓｎ）のコドンは、ＡＡＵからＡＡＣに改変でき、リジン（Ｌｙｓ）のコドンは、ＡＡＡからＡＡＧに改変でき、バリン（Ｖａｌ）のコドンは、ＧＵＵまたはＧＵＡからＧＵＣまたはＧＵＧに改変でき、アスパラギン酸（Ａｓｐ）のコドンは、ＧＡＵからＧＡＣに改変でき、グルタミン酸（Ｇｌｕ）のコドンは、ＧＡＡからＧＡＧに改変でき、終始コドンＵＡＡは、ＵＡＧに改変できることが挙げられる。一方、メチオニン（Ｍｅｔ）（ＡＵＧ）およびトリプトファン（Ｔｒｐ）（ＵＧＧ）の場合、配列の改変はできない。上記に列挙した置換体は、個々にであっても、その特定の野生型ｍＲＮＡ（すなわち、オリジナル配列）と比較して本発明の組成物の少なくとも１つのｍＲＮＡのＧ／Ｃ含量を増加させるための全ての可能な組み合わせであっても両方用いることができる。従って、例えば、野生型配列にあるスレオニンの全てのコドンを、ＡＣＣ（またはＡＣＧ）に改変できる。しかしながら、好ましくは、例えば、上記置換体可能性の組み合わせが用いられる：
オリジナル配列（野生型ｍＲＮＡ）においてスレオニンをコードする全てのコドンをＡＣＣ（またはＡＣＧ）にした置換、および、
セリンをコードする全てのオリジナルコドンをＵＣＣ（またはＵＣＧまたはＡＧＣ）にした置換；オリジナル配列においてイソロイシンをコードする全てのコドンをＡＵＣにした置換、および、
リジンをコードする全てのオリジナルコドンをＡＧＧにした置換、および、
チロシンをコードする全てのオリジナルコドンをＵＡＣにした置換；オリジナル配列においてバリンをコードする全てのコドンをＧＵＣ（またはＧＵＧ）にした置換、および、
グルタミン酸をコードする全てのオリジナルコドンをＧＡＧにした置換、および、
アラニンをコードする全てのオリジナルコドンをＧＣＣ（またはＧＣＧ）にした置換、および、
アルギニンをコードする全てのオリジナルコドンをＣＧＣ（またはＣＧＧ）にした置換；オリジナル配列においてバリンをコードする全てのコドンをＧＵＣ（またはＧＵＧ）にした置換、および、
グルタミン酸をコードする全てのオリジナルコドンをＧＡＧにした置換、および、
アラニンをコードする全てのオリジナルコドンをＧＣＣ（またはＧＣＧ）にした置換、および、
グリシンをコードする全てのオリジナルコドンをＧＧＣ（またはＧＧＧ）にした置換、および、
アスパラギンをコードする全てのオリジナルコドンをＡＡＣにした置換；オリジナル配列においてバリンをコードする全てのコドンをＧＵＣ（またはＧＵＧ）にした置換、および、
フェニルアラニンをコードする全てのオリジナルコドンをＵＵＣにした置換、および、
システインをコードする全てのオリジナルコドンをＵＧＣにした置換、および、
ロイシンをコードする全てのオリジナルコドンをＣＵＧ（またはＣＵＣ）にした置換、および、
グルタミンをコードする全てのオリジナルコドンをＣＡＧにした置換、および、
プロリンをコードする全てのオリジナルコドンをＣＣＣ（またはＣＣＧ）にした置換；等。
【０３０３】
好ましくは、本発明に係る少なくとも１つのＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含量は、野生型ＲＮＡのコード領域のＧ／Ｃ含量と比較して、少なくとも７％、より好ましくは少なくとも１５％、特に好ましくは少なくとも２０％増加している。特定の実施形態によれば、本明細書で規定されるタンパク質もしくはペプチドまたはその断片をコードする領域、またはその変異体をコードする領域、または野生型ＲＮＡ配列もしくはコード配列の全配列における置換可能なコドンの、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、より好ましくは少なくとも７０％、さらに好ましくは少なくとも８０％、および最も好ましくは少なくとも９０％、９５％またはさらに１００％を置換することによって、これらの配列のＧ／Ｃ含量を増加させる。これに関して、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡのＧ／Ｃ含量を、特にコード領域において、野生型配列と比較して最大（すなわち、置換可能なコドンの１００％）に増加させることが特に好ましい。
【０３０４】
本発明によると、さらに好ましい組成物の少なくとも１つのＲＮＡのコドン配列の改変は、翻訳効率が細胞におけるｔＲＮＡの発生頻度の違いによっても決定されるという事実に基づく。それゆえに、いわゆる「レアコドン」が本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡのコード領域に存在する場合、量を増やすために、対応する改変された少なくとも１つのＲＮＡ配列は、比較的「頻出」するｔＲＮＡについてコードするコドンが存在する場合よりも、非常に低い程度に翻訳される。本発明によると、本発明の組成物の改変された少なくとも１つのＲＮＡにおいて、上記に規定されたペプチドまたはタンパク質の一つをコードする領域は、細胞において比較的まれなｔＲＮＡをコードする野生型配列の少なくとも１つのコドンを、細胞において比較的頻出し、比較的まれなｔＲＮＡと同じアミノ酸を運ぶｔＲＮＡをコードするコドンに交換するというように、野生型ＲＮＡの対応する領域と比較して、好ましくは改変されている。この改変により、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡの少なくとも１つのコード領域の配列は、頻出して存在するｔＲＮＡが利用可能なコドンを挿入するように改変されている。言い換えると、本発明によると、この改変により、細胞において比較的まれなｔＲＮＡをコードする野生型配列の全てのコドンは、それぞれの場合において、細胞において比較的頻出し、比較的まれなｔＲＮＡと同じアミノ酸を運ぶｔＲＮＡをコードするコドンに交換可能である。どのｔＲＮＡが細胞において比較的頻出するか、および、反対に、どのｔＲＮＡが細胞において比較的まれかについては、当業者に公知である：例えば、Akashi, Curr. Opin. Genet. Dev. 2001, 11(6): 660-666を参照。例えば、Ｇｌｙコドンのように、特定のアミノ酸のための最も頻出するｔＲＮＡに用いられるコドン、（ヒト）細胞において最も頻出するｔＲＮＡに用いられるコドンが、特に好ましい。本発明によると、本発明の組成物の改変された少なくとも１つのＲＮＡにおいて、そのＲＮＡのコード領域によりコードされるタンパク質のアミノ酸配列を変化させることがない「頻出」コドンと、一連のＧ／Ｃ含量の増加、特に最大化とが結びつくことが好ましい。この好ましい実施形態は、本発明の組成物の（改変された）少なくとも１つのＲＮＡの、特に効率的な翻訳と安定化との実現を可能にする。最も頻繁に発生するｔＲＮＡを特定のアミノ酸のために使用するコドン、例えば、（ヒト）細胞中で最も頻繁に発生するｔＲＮＡを使用するＧｌｙコドンが特に好ましい。本発明によると、ＲＮＡのコード領域によってコードされたタンパク質のアミノ酸配列を改変することなく、本発明に係る組成物の改変された少なくとも１つのＲＮＡにおいて、増加された連続的Ｇ／Ｃ含有量、特に、最大化された連続的Ｇ／Ｃ含有量と、“頻度の高い”コドンとを関連付けることが特に好ましい。この好ましい実施形態は、本発明に係る組成物の、特に効率的に翻訳および安定化された（改変された）少なくとも１つのＲＮＡの提供を可能にする。上記で説明された本発明（増加されたＧ／Ｃ含有量、ｔＲＮＡの交換）に係る組成物の改変された少なくとも１つのＲＮＡの測定は、ＷＯ０２／０９８４４３で説明されているコンピュータプログラムを使��して実施され得る。当該開示内容は、その全範囲が本発明に含まれる。このコンピュータプログラムを使用することで、細胞中で可能な限り頻繁に発生するｔＲＮＡをコードしているコドン、改変されていない配列と比較して好ましくは改変されていない、少なくとも１つの改変ＲＮＡによってコードされているアミノ酸配列、の使用を組み合わせて、最大限のＧ／Ｃ含有量が生じるように、任意で所望のコードＲＮＡのヌクレオチド配列が、遺伝コードの援助、またはその変性の性質の援助により改変され得る。あるいは、元の配列と比較して、Ｇ／Ｃ含有量だけ、またはコドン使用頻度だけ、改変することも可能である。また、Visual Basic 6.0（development environment used: Microsoft Visual Studio Enterprise 6.0 with Servicepack 3）のソースコードは、ＷＯ０２／０９８４４３で説明されている。本発明のさらに好ましい実施形態において、本発明に係る組成物の少なくとも１つのＲＮＡのリボソーム結合サイトの環境におけるＡ／Ｕ含有量は、その特定の野生型ＲＮＡのリボソーム結合サイトの環境におけるＡ／Ｕと比較して増加される。この改変（リボソーム結合サイト周辺で増加したＡ／Ｕ含有量）は、少なくとも１つのＲＮＡへのリボソーム結合の効率を上昇させる。リボソーム結合サイト（コザック配列：ＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＵＧＧ（配列番号：１０．０７１）、ＡＵＧは、開始コドンを形成する）へのリボソームの効果的な結合もまた、少なくとも１つのＲＮＡの効率的な翻訳の効果を有する。本発明のさらなる実施形態によると、本発明に係る組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、潜在的に不安定化させる配列エレメントに関して改変されてもよい。特に、このＲＮＡのコード領域ならびに／または５’および／もしくは３’非翻訳領域は、それが、不安定化配列エレメント、その特定の野生型ＲＮＡと比較して好ましくは改変されていない、少なくとも１つの改変ＲＮＡによってコードされたアミノ酸配列、を含まないように、特定の野生型ＲＮＡと比較して改変されていてもよい。例えば、真核生物のＲＮＡの配列において、不安定化配列エレメント（ＤＳＥ）が発生し、これに対して、シグナルタンパク質は、インビボで結合し、ＲＮＡの酵素分解を調節することが知られている。改変された少なくとも１つのＲＮＡのさらなる安定化のために、本明細書で規定されるタンパク質またはペプチドをコードしている領域において、不安定化配列エレメントがここに含まれないか、または実質的に含まれないように、野生型ＲＮＡの対応する領域と比較した１つ以上の上記の改変が、必要に応じて実施され得る。また、本発明によると、非翻訳領域（３’−ＵＴＲおよび／または５’−ＵＴＲ）に存在するＤＳＥも、本発明に係る組成物の少なくとも１つのＲＮＡから、上記の改変によって除去され得る。上記の不安定化配列は、例えば、ＡＵリッチ配列（ＡＵＲＥＳ）であり、当該ＡＵリッチ配列は、多くの不安定なＲＮＡの３’−ＵＴＲセクションで生じる（Caput et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1986, 83: 1670 to 1674）。従って、本発明に係る組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは、少なくとも１つのＲＮＡが上記の不安定化配列を含まないように、野生型ＲＮＡと比較して改変されている。また、これは、可能性のあるエンド���クレアーゼによって認識されるそれらの配列モチーフ、例えば、配列ＧＡＡＣＡＡＧに適用される。当該配列モチーフは、トランスフェリン受容体をコードしている遺伝子の３’−ＵＴＲセグメントに含まれる（Binder et al., EMBO J. 1994, 13: 1969 to 1980）。
【０３０５】
［コドン使用頻度の適応］
本発明によると、さらに好ましい本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡの改変は、異なる頻度で生じる同じアミノ酸をコードするコドンを見出すことに基づく。本発明によると、本発明の組成物の改変された少なくとも１つのＲＮＡにおいて、上記の規定されたペプチドまたはタンパク質（コード配列）の１つをコードする領域は、好ましくは、例えば表１３に示すようなヒトコドン使用頻度にあるコドンの自然に生じる頻度に相当する、同じアミノ酸をコードするコドンの頻度のような野生型ＲＮＡの相当する領域と比較して改変される。
【０３０６】
これは、例えば、本発明に係るコードされたタンパク質のアミノ酸配列にあるアラニンの場合、配列をコードする野生型は、コドン「ＧＣＣ」は０．４０の頻度で使用され、コドン「ＧＣＴ」は０．２８の頻度で使用され、コドン「ＧＣＡ」は０．２２の頻度で使用され、コドン「ＧＣＧ」は０．１０の頻度で使用される等のように適用されるということを意味する（表１３参照）。
【０３０７】
【表１３】
2018517674.tif 000098
【０３０８】
2018517674.tif 000099
【０３０９】
［コドンの最適化］
本発明の特に好ましい実施形態によると、細胞において比較的稀であるｔＲＮＡをコードする、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡのコード領域の野生型配列の全てのコドンは、いずれの場合にも細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡをコードするコドンに交換され、いずれの場合にも比較的稀なｔＲＮＡと同一のアミノ酸を運搬することが好ましい。それゆえに、それぞれのアミノ酸をコードする、最も頻度の高いコドンが用いられる。（表１３を参照、最も頻度の高いコドンにはアスタリスクを付す）。
【０３１０】
これは、例えば、アミノ酸アラニン（Ａｌａ）の場合、本発明に係るコードされるペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列に存在し、野生型コード配列は、最も頻度の高いヒトコドン「ＧＣＣ」が当該アミノ酸に常に用いられ、また、アミノ酸システイン（Ｃｙｓ）の場合、野生型配列は、最も頻度の高いヒトコドン「ＴＧＣ」が当該アミノ酸に常に用いられる。
【０３１１】
［Ｃ−エンリッチ］
他の実施形態によると、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、ＲＮＡの、好ましくは少なくとも１つのＲＮＡのコード領域の、Ｃ含量を増加させることによって改変され得る。
【０３１２】
本発明の特に好ましい実施形態において、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡのコード領域のＣ含量は改変され、好ましくは、その特定の野生型ＲＮＡ（すなわち改変されていないｍＲＮＡ）のコード領域のＣ含量とくらべて増加させる。少なくとも１つのＲＮＡによってコードされるアミノ酸配列は、好ましくは特定の野生型ＲＮＡによってコードされるアミノ酸配列と比較して改変されない。
【０３１３】
本発明の好ましい実施形態において、改変ＲＮＡは、理論上最大のシトシン含量の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％、または少なくとも９０％が改変され、または、最大のシトシン含量を達成する。
【０３１４】
さらに好ましい実施形態において、「シトシン含量の最適化が可能である」、野生型の標的ＲＮＡのコドンの少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％は、野生型配列に存在するシトシン含量よりも高いシトシン含量を有するコドンによって置換される。
【０３１５】
さらに好ましい実施形態において、野生型コード配列のいくつかのコドンは、細胞において比較的稀なｔＲＮＡのコドンは、細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡのコドンによって交換され、比較的高頻度であるｔＲＮＡに置換されたコドンは、オリジナルの野生型コドンの比較的稀なｔＲＮＡとして同一のアミノ酸を運搬するといったように、任意に改変され得る。好ましくは、比較的稀なｔＲＮＡの全てのコドンは、シトシンを含有しないコドンのみによってコードされるアミノ酸をコードするコドンを除いて、または、どちらも含有するシトシンの数が同一である２つのコドンによってコードされるグルタミン（Ｇｌｎ）を除いて、細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡのコドンによって置換される。
【０３１６】
本発明のさらに好ましい実施形態において、改変された標的ＲＮＡは、アミノ酸配列は変わらないままであるが、細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡをコードするコドンによって、理論上最大のシトシン含量の少なくとも８０％、または少なくとも９０％が改変され、または、最大のシトシン含量を達成する。
【０３１７】
遺伝子コードの自然に発生する変質のために、一つよりも多いコドンが、特定のアミノ酸をコードし得る。それゆえに、２０種類の自然に生じるアミノ酸のうち１８種類は、１つよりも多いコドン（トリプトファン（Ｔｒｙｐ）およびメチオニンを除く）によって、例えば２つのコドン（例えば、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸）によって、３つのコドン（例えば、イソロイシン）によって、４つのコドン（例えば、アラニン（Ａｌ）、グリシン、プロリン）によって、または、６つのコドン（例えばロイシン、アルギニン、セリン）によってコードされる。しかしながら、同一のアミノ酸をコードするコドンは、生体条件下での頻度と等しい頻度で使用されるとは限らない。それぞれの単独の組織によって、典型的なコドン使用プロフィール（profile）が確立される。
【０３１８】
本発明の明細書において用いられる用語「シトシン含量最適化コドン」は、同一のアミノ酸をコードする他のコドンよりも低いシトシンの量のコドンを指す。それゆえに、同一のアミノ酸をコードするコドンであって、より高いシトシン数の他のコドン、によって置換され得る任意の野生型コドンは、シトシン最適化可能性（Ｃ最適化可能性）を考慮される。野生型コード領域内において、特定のコドンによってＣ最適化可能な野生型コドンに対する任意のそのような置換は、その全Ｃ含量を増加させ、Ｃエンリッチな改変されたＲＮＡ配列を反映する。Ｃ最大化されたＲＮＡ配列は、潜在的にＣ最適化可能な全てのコドンに対して、Ｃ最適化されたコドンを含有している。それゆえに、理論上置換可能なＣ最適化可能なコドンは、そのような条件下で、コード領域の全長にわたりＣ最適化されたコドンによって実際に置換される。
【０３１９】
これに関して、シトシン含量最適化可能なコドンは、同一のアミノ酸をコードする他のコドンより含有するシトシンの数が少ない。
コドンＧＣＧ、ＧＣＡ、ＧＣＵは、何れもアミノ酸アラニンをコードし、同一のアミノ酸をコードするコドンＧＣＣに交換され得、および／または、
システインをコードするコドンＵＧＵは、同一のアミノ酸をコードするコドンＵＧＣに交換され得、および／または、
アスパラギン酸をコードするコドンＧＡＵは、同一のアミノ酸をコードするコドンＧＡＣに交換され得、および／または、
フェニルアラニンをコードするコドンＵＵＵは、同一のアミノ酸をコードするＵＵＣに交換され得、および／または、
グリシンをコードするコドンＧＧＧ、ＧＧＡ、ＧＧＵは、いずれも同一のアミノ酸をコードするコドンＧＧＣに交換され得、および／または、
ヒスチジンをコードするコドンＣＡＵは、同一のアミノ酸をコードするコドンＣＡＣに交換され得、および／または、
イソロイシンをコードするコドンＡＵＡ、ＡＵＵは、何れもコドンＡＵＣに交換され得、および／または、
ロイシンをコードするＵＵＧ、ＵＵＡ、ＣＵＧ、ＣＵＡ、ＣＵＵは、何れも同一のアミノ酸をコードするコドンＣＵＣに交換され得、および／または、
アスパラギンをコードするコドンＡＡＵは、同一のアミノ酸をコードするコドンＡＡＣに交換され得、および／または、
プロリンをコードするコドンＣＣＧ、ＣＣＡ、ＣＣＵは、何れも同一のアミノ酸をコードするコドンＣＣＣに交換され得、および／、または、
アルギニンをコードするコドンＡＧＧ、ＡＧＡ、ＣＧＧ、ＣＧＡ、ＣＧＵは、何れも同一のアミノ酸をコードするコドンＣＧＣに交換され得、および／または、
セリンをコードするコドンＡＧＵ、ＡＧＣ、ＵＣＧ、ＵＣＡ、ＵＣＵは、何れも同一のアミノ酸をコードするコドンＵＣＣに交換され得、および／または、
スレオニンをコードするコドンＡＣＧ、ＡＣＡ、ＡＣＵは、何れも同一のアミノ酸をコードするコドンＡＣＣに交換され得、および／または、
バリンをコードするコドンＧＵＧ、ＧＵＡ、ＧＵＵは、何れも同一のアミノ酸をコードするコドンＧＵＣに交換され得、および／または、
チロシンをコードするコドンＵＡＵは、同一のアミノ酸をコードするコドンＵＡＣに交換され得る。
【０３２０】
上記例の何れかにおいて、シトシンの数が交換されたコドン当たり１個増加される。コード領域の（Ｃ最適化可能性のあるコドンと比較して）Ｃ最適化されていない全てのコドンの交換によって、Ｃ最大化されたコード配列になる。本発明に関して、野生型配列のＣ最適化されていないコドンの少なくとも７０％は、Ｃ最適化されたコドンに置換され、好ましくはコード領域内で少なくとも８０％、より好ましくはコード領域内で少なくとも９０％である。Ｃ最適化されたコドンに置換されたＣ最適化可能なコドンにおけるアミノ酸の割合は、７０％よりも低いことが好ましく、一方、少なくとも７０％のＣ最適化可能なコード領域の全野生型コドンの、Ｃ最適化の全体の割合に合うように、置換されたコドンの他のアミノ酸は７０％より高いことが好ましい。好ましくは、本発明のＣ最適化されたＲＮＡにおいて、与えられたアミノ酸のＣ最適化可能な野生型コドンの少なくとも５０％は、Ｃ最適化されたコドンに置換される。例えば、改変されたＣエンリッチなＲＮＡは、好ましくは、上述したアミノ酸アラニン、システイン、アスパラギン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、アスパラギン、プロリン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリンおよびチロシンの何れか１つをコードする、Ｃ最適化可能な野生型コドン位置において、Ｃ最適化されたコドンを、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも６０％含有している。
【０３２１】
これに関して、シトシン含量最適化可能ではないが、少なくとも２つのコドンによってコードされるアミノ酸をコードするコドンは、さらなる選択過程なしで用いられ得る。しかしながら、細胞（例えばヒト細胞）において比較的稀なｔＲＮＡをコードする野生型配列のコドンは、同一のアミノ酸をコードする、細胞において比較的高頻度であるｔＲＮＡをコードするコドンに交換され得る。それゆえに、グルタミン酸をコードする比較的稀なコドンＧＡＡは、同一のアミノ酸をコードする、比較的高頻度であるコドンＧＡＧに交換され得、および／または、リジンをコードする比較的稀なコドンＡＡＡは、同一のアミノ酸をコードする比較的高頻度であるコドンＡＡＧに交換され得、および／または、グルタミンをコードする比較的稀なコドンＣＡＡは、同一のアミノ酸をコードする比較的高頻度であるコドンＣＡＧに交換される。
【０３２２】
これに関して、一つのコドンによってのみコードされるアミノ酸メチオニン（ＡＵＧ）およびトリプトファン（ＵＧＧ）は、交換されないままである。ストップコドンは、シトシン含量が最適化されないが、比較的稀なストップコドンアンバー、オーカー（ＵＡＡ、ＵＡＧ）は、比較的高頻度であるストップコドンオパール（ＵＧＡ）に交換され得る。
【０３２３】
上記に列挙した置換は、明らかに個々に用いられるが、野生型ＲＮＡ配列を比較して改変ＲＮＡのシトシン含量を最適化するための全ての可能な組み合わせの中でも用いられる。
【０３２４】
それゆえに、ペプチドまたはタンパク質をコードする改変ＲＮＡの領域は、少なくとも２つ以上のコドンによってコードされるアミノ酸のように、野生型ＲＮＡのコード領域と比較して改変され得、１つの追加のシトシンを含む。そのようなコドンは、１つの追加のシトシンを含むＣ最適化されたコドンに交換され得るが、それによってアミノ酸は野生型配列と比較して変わらない。
【０３２５】
塩基の置換、付加または除去は、よく知られている部位特異的変異生成の手法による核酸分子の調製のためのＤＮＡマトリクスを用いてか、またはオリゴヌクレオチド連結を用いて、好ましく実施される。そのような処理において、本発明に規定されているような少なくとも１つのＲＮＡの調製のために、対応するＤＮＡ分子がインビトロ転写され得る。このＤＮＡマトリクスは、調製される少なくとも１つのＲＮＡのための所望されるヌクレオチド配列が後ろに続く、インビトロ転写にとって好適なプロモータ（例えば、Ｔ７またはＳ６プロモータ）、およびインビトロ転写のための終結シグナルを好ましくは含んでいる。少なくとも１つの所望のＲＮＡのマトリクスを形成するＤＮＡ分子は、発酵性増殖および細菌において複製され得るプラスミドの一部としての続く単離によって調製され得る。本発明にとって好適であると述べられ得るプラスミドは、例えば、プラスミドｐＴ７Ｔ（GenBank accession number U26404; Lai et al., Development 1995, 121: 2349 to 2360）、ｐＧＥＭ（登録商標）（例えば、ｐＧＥＭ（登録商標）−１）（GenBank accession number X65300; from Promega）、およびｐＳＰ６４（GenBank accession number X65327）（Mezei and Storts, Purification of PCR Products, in: Griffin and Griffin (ed.), PCR Technology: Current Innovation, CRC Press, Boca Raton, FL, 2001も参照）。
【０３２６】
［断片および変異体］
本発明との関連において、ここに開示されたペプチドおよびタンパク質に加えて、ある程度の配列の同一性を示す、ペプチドおよびタンパク質を用いてもよい。それ故に、本明細書中に規定されているようなタンパク質およびペプチドの断片ならびに変異体が、本発明との関連において本明細書に開示される。
【０３２７】
さらに、本明細書中に規定されているような核酸の断片および変異体は、それ故に、本発明との関連において本明細書に開示される。
【０３２８】
［モノ−バイ−マルチシストロン性の、自己切断型のペプチドなど］
本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡのコーディング領域は、モノシストロン性、ジシストロン性、またはさらにマルチシストロン性のＲＮＡとして存在してもよく、すなわち、一つ、二つ、またはそれ以上のタンパク質もしくはペプチドのコーディング配列を持っているＲＮＡとして存在してもよい。ジシストロン性、またはさらにマルチシストロン性のＲＮＡのそのようなコーディング配列は、少なくとも一つの配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離されていてもよい。従って、本発明に係る少なくとも一つのＲＮＡは、特に、ＲＮＡが二つまたはそれ以上のペプチドもしくはタンパク質をコードする（バイシストロン性またはマルチシストロン性のＲＮＡ）場合、さらに、一つ以上の配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列またはＩＲＥＳモチーフ、を含んでいてもよく、当該配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列または当該ＩＲＥＳモチーフは、いくつかのオープン・リーディング・フレームを分離していてもよい。例えば、配列内リボソーム進入部位配列は、ＥＭＣＶ（脳心筋炎ウイルス）またはＦＭＶＤ（口蹄疫ウイルス）に由来していてもよい。さらに、自己切断型のシグナルペプチドが使用されていてもよく、当該自己切断型のシグナルペプチドは、いくつかのタンパク質またはペプチドを含んでいるポリペプチド産物の開裂を誘導し、例えば、自己切断型のシグナルペプチド配列は、ＦＭＤＶからのＦ２Ａペプチドに由来する。
【０３２９】
［異なるコーディング配列の組み合わせ］
好ましい実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、六つ、七つ、八つ、九つ、または十以上のＲＮＡを含んでおり、当該ＲＮＡのそれぞれは、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、六つ、七つ、八つ、九つ、または十以上のコーディング領域を含んでおり、当該コーディング領域は、以上に規定されているようなサイトカインを少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているようなケモカインを少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているような自殺遺伝子産物を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているような免疫原性のペプチドもしくはタンパク質を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているようなアポトーシス誘導因子を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているような血管新生阻害因子を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているようなヒートショックタンパク質を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているような腫瘍抗原を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているようなβ−カテニン阻害因子を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているようなＳＴＩＮＧ経路の活性化因子を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているようなチェックポイント調節因子を少なくとも一つ以上、および／または、自然免疫活性化因子を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているような抗体を少なくとも一つ以上、および／または、ドミナント・ネガティブ受容体を少なくとも一つ、および／または、デコイ受容体を少なくとも一つ以上、および／または、骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子を少なくとも一つ以上、および／または、ＩＤＯ経路阻害因子を少なくとも一つ以上、および／または、以上に規定されているようなアポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質またはペプチド、または、それらの変異体もしくは断片を少なくとも一つ以上、コードしている。
【０３３０】
［非翻訳領域（ＵＴＲｓ）］
さらなる実施形態に基づくと、本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、好ましくは、以下の構造要素の少なくとも一つを含んでいる：５’非翻訳領域エレメント（ＵＴＲエレメント）および／または３’非翻訳領域エレメント、特に、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ、または、その断片、ホモログもしくは変異体に由来する核酸配列を含んでいるかまたは当該核酸配列からなる５’ＵＴＲエレメント、または、安定なｍＲＮＡを提供する遺伝子またはそのホモログ、断片もしくは変異体に由来してもよい５’ＵＴＲエレメントおよび／または３’ＵＴＲエレメント；ヒストンステム−ループ構造、好ましくはその３’非翻訳領域におけるヒストンステム−ループ；５’ＣＡＰ構造；ポリ−Ａ尾部（ポリ（Ａ）配列）；またはポリ（Ｃ）配列。
【０３３１】
好ましい実施形態において、少なくとも一つのＲＮＡは、少なくとも一つの、５’ＵＴＲエレメントまたは３’ＵＴＲエレメントを含んでいる。これに関連して、ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、任意の天然起源の遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲに由来する核酸配列であるか、または遺伝子の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲの断片、ホモログもしくは変異体に由来する核酸配列である。好ましくは、本発明に使用される５’ＵＴＲエレメントまたは３’ＵＴＲエレメントは、本発明の組成物のＲＮＡのコーディング領域に対して非相同なものである。たとえ天然起源の遺伝子に由来する５’ＵＴＲエレメントまたは３’ＵＴＲエレメントが好ましいとしても、合成的に設計されたＵＴＲエレメントもまた、本発明に関連して、使用されてもよい。
【０３３２】
特に好ましい実施形態において、少なくとも一つのＲＮＡは、少なくとも一つの５’非翻訳領域エレメント（５’ＵＴＲエレメント）を含んでおり、当該５’非翻訳領域エレメントは核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列であるか、または、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの断片、ホモログもしくは変異体に由来する核酸配列である。
【０３３３】
５’ＵＴＲエレメントは、以上に規定されているように、ＴＯＰモチーフまたは５’ＴＯＰを含んでいないことが、特に好ましい。
【０３３４】
いくつかの実施形態において、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する５’ＵＴＲエレメントの核酸配列は、当該核酸配列が由来する遺伝子もしくはｍＲＮＡの、開始コドン（例えばＡ（Ｕ／Ｔ）Ｇ）の上流の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０番目に位置するヌクレオチドを有しており、当該核酸配列の３’末端において終了する。従って、５’ＵＴＲエレメントは、タンパク質コーディング領域のいずれの部分も含んでいない。従って、好ましくは、本発明の組成物のｍＲＮＡのタンパク質コーディング部分のみが、コーディング領域によって提供される。
【０３３５】
ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列は、真核生物のＴＯＰ遺伝子、好ましくは植物または動物のＴＯＰ遺伝子、より好ましくは脊索動物のＴＯＰ遺伝子、さらにより好ましくは脊椎動物のＴＯＰ遺伝子、最も好ましくは哺乳類のＴＯＰ遺伝子、例えばヒトＴＯＰ遺伝子、に由来する。
【０３３６】
例えば、５’ＵＴＲエレメントは、好ましくは、核酸配列を含んでいるかまたは当該核酸配列から構成される５’ＵＴＲエレメントから選択され、当該核酸配列は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号（その開示が参照として本明細書中に組み込まれる）の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２からなる群から選択される核酸配列、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２のホモログから選択される核酸配列、それらの変異体から選択される核酸配列、または、好ましくは対応するＲＮＡ配列から選択される核酸配列、に由来する核酸配列である。用語「特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２のホモログ」は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２に基づく配列と相同である、ホモ・サピエンス以外の種の配列、を指す。
【０３３７】
好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２から選択される核酸配列、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２のホモログから選択される核酸配列、それらの変異体から選択される核酸配列、または対応するＲＮＡ配列の５番目のヌクレオチド（すなわち、配列において５番目に位置するヌクレオチド）から、開始コドン（当該開始コドンは、配列の３’側に位置する）の５’側に隣接するヌクレオチド（例えばＡＴＧ配列の５’側に隣接するヌクレオチド）にかけて伸びている核酸配列に由来する核酸配列である。５’ＵＴＲエレメントが、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２から選択される核酸配列、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１〜１３６３、配列番号１３９５、配列番号１４２１および配列番号１４２２のホモログから選択される核酸配列、それらの変異体から選択される核酸配列、または、対応するＲＮＡ配列の５’ＴＯＰの直ぐ３’側の位置のヌクレオチドから、開始コドン（当該開始コドンは、配列の３’に位置する）の５’側に隣接するヌクレオチド（例えばＡＴＧ配列の直ぐの５’の位置のヌクレオチド）にかけて伸びている核酸配列、に由来することが特に好ましい。
【０３３８】
特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、リボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列であるか、または、リボソームタンパク質をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列である。例えば、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の、配列番号６７、１７０、１９３、２４４、２５９、５５４、６５０、６７５、７００、７２１、９１３、１０１６、１０６３、１１２０、１１３８、および１２８４〜１３６０、のいずれかに基づく核酸配列、対応するＲＮＡ配列、本明細書中に記載されているような、それらのホモログ、またはそれらの変異体、の５’ＵＴＲに由来する核酸配列であり、好ましくは５’ＴＯＰモチーフを欠いている。上述されているように、５番目から、ＡＴＧ（当該ＡＴＧは、配列の３’末端に位置している）の直ぐ５’側のヌクレオチドにかけて伸びている配列は、上記配列の５’ＵＴＲに相当する。
【０３３９】
好ましくは、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、リボソームラージタンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列であるか、または、リボソームラージタンパク質（ＲＰＬ）をコードしているＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲのホモログもしくは変異体に由来する核酸配列である。例えば、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の、配列番号６７、２５９、１２８４〜１３１８、１３４４、１３４６、１３４８〜１３５４、１３５７、１３５８、１４２１および１４２２のいずれかに基づく核酸配列、対応するＲＮＡ配列、本明細書中に記載されているような、それらのホモログ、またはそれらの変異体、の５’ＵＴＲに由来する核酸配列であり、好ましくは５’ＴＯＰモチーフを欠いている。
【０３４０】
特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子の５’ＵＴＲに由来する核酸配列、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、より好ましくは哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、最も好ましくはヒトリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子に由来する核酸配列であるか、または、リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子の５’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列、好ましくは脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、より好ましくは哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子、最も好ましくはヒトリボソームタンパク質ラージ３２（Ｌ３２）遺伝子に由来する核酸配列であり、ここで、好ましくは、当該５’ＵＴＲエレメントは、上記遺伝子の５’ＴＯＰを含んでいない。
【０３４１】
５’ＵＴＲエレメントのための好ましい配列は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３６８に相当する。
【０３４２】
従って、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、上述されているような核酸配列（当該核酸配列は、配列番号１０．０５１（当該配列番号１０．０５１は、５’末端のオリゴピリミヂントラクト：GGCGCTGCCTACGGAGGTGGCAGCCATCTCCTTCTCGGCATCを欠いているヒトリボソームタンパク質ラージ３２の５’ＵＴＲであり、；当該配列番号１０．０５１は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３６８に相当する）に基づく）に対して、または、好ましくは対応するＲＮＡ配列に対して、少なくとも約２０％の、好ましくは少なくとも約４０％の、好ましくは少なくとも約５０％の、好ましくは少なくとも約６０％の、好ましくは少なくとも約７０％の、より好ましくは少なくとも約８０％の、より好ましくは少なくとも約９０％の、さらにより好ましくは少なくとも約９５％の、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の、相同性を有している。または、ここで、少なくとも一つの５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列の断片を含んでいるか、または、当該核酸配列の断片からなり、当該核酸配列は、配列番号１０．０５１に基づく核酸配列に対して、またはより好ましくは対応するＲＮＡ配列に対して、少なくとも約４０％の、好ましくは少なくとも約５０％の、好ましくは少なくとも約６０％の、好ましくは少なくとも約７０％の、より好ましくは少なくとも約８０％の、より好ましくは少なくとも約９０％の、さらにより好ましくは少なくとも約９５％の、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の、相同性を有している。ここで、好ましくは、当該断片は、上述されているような断片であり、すなわち、５’ＵＴＲの完全長の少なくとも２０％などに相当する、ヌクレオチドの連続した一続き（stretch）である。
【０３４３】
好ましくは、上記断片は、少なくとも約２０個のヌクレオチド以上、好ましくは少なくとも約３０個のヌクレオチド以上、より好ましくは少なくとも約４０個のヌクレオチド以上、の長さを有している。好ましくは、上記断片は、本明細書中に記載されているような、機能的断片である。
【０３４４】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物のｍＲＮＡは、５’ＵＴＲエレメントを含んでおり、当該５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、ＲＰＳＡ、ＲＰＳ２、ＲＰＳ３、ＲＰＳ３Ａ、ＲＰＳ４、ＲＰＳ５、ＲＰＳ６、ＲＰＳ７、ＲＰＳ８、ＲＰＳ９、ＲＰＳ１０、ＲＰＳ１１、ＲＰＳ１２、ＲＰＳ１３、ＲＰＳ１４、ＲＰＳ１５、ＲＰＳ１５Ａ、ＲＰＳ１６、ＲＰＳ１７、ＲＰＳ１８、ＲＰＳ１９、ＲＰＳ２０、ＲＰＳ２１、ＲＰＳ２３、ＲＰＳ２４、ＲＰＳ２５、ＲＰＳ２６、ＲＰＳ２７、ＲＰＳ２７Ａ、ＲＰＳ２８、ＲＰＳ２９、ＲＰＳ３０、ＲＰＬ３、ＲＰＬ４、ＲＰＬ５、ＲＰＬ６、ＲＰＬ７、ＲＰＬ７Ａ、ＲＰＬ８、ＲＰＬ９、ＲＰＬ１０、ＲＰＬ１０Ａ、ＲＰＬ１１、ＲＰＬ１２、ＲＰＬ１３、ＲＰＬ１３Ａ、ＲＰＬ１４、ＲＰＬ１５、ＲＰＬ１７、ＲＰＬ１８、ＲＰＬ１８Ａ、ＲＰＬ１９、ＲＰＬ２１、ＲＰＬ２２、ＲＰＬ２３、ＲＰＬ２３Ａ、ＲＰＬ２４、ＲＰＬ２６、ＲＰＬ２７、ＲＰＬ２７Ａ、ＲＰＬ２８、ＲＰＬ２９、ＲＰＬ３０、ＲＰＬ３１、ＲＰＬ３２、ＲＰＬ３４、ＲＰＬ３５、ＲＰＬ３５Ａ、ＲＰＬ３６、ＲＰＬ３６Ａ、ＲＰＬ３７、ＲＰＬ３７Ａ、ＲＰＬ３８、ＲＰＬ３９、ＲＰＬ４０、ＲＰＬ４１、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＲＰＬＰ３、ＲＰＬＰ０、ＲＰＬＰ１、ＲＰＬＰ２、ＥＥＦ１Ａ１、ＥＥＦ１Ｂ２、ＥＥＦ１Ｄ、ＥＥＦ１Ｇ、ＥＥＦ２、ＥＩＦ３Ｅ、ＥＩＦ３Ｆ、ＥＩＦ３Ｈ、ＥＩＦ２Ｓ３、ＥＩＦ３Ｃ、ＥＩＦ３Ｋ、ＥＩＦ３ＥＩＰ、ＥＩＦ４Ａ２、ＰＡＢＰＣ１、ＨＮＲＮＰＡ１、ＴＰＴ１、ＴＵＢＢ１、ＵＢＡ５２、ＮＰＭ１、ＡＴＰ５Ｇ２、ＧＮＢ２Ｌ１、ＮＭＥ２、ＵＱＣＲＢから選択されるか、または、それらのホモログもしくは変異体から選択される、哺乳類のような脊椎動物のＴＯＰ遺伝子（例えばヒトＴＯＰ遺伝子）の５’ＵＴＲに由来する核酸配列である。ここで、好ましくは、５’ＵＴＲエレメントは、ＴＯＰモチーフ、または、上記遺伝子の５’ＴＯＰを含んでいない。また、ここで、任意で、５’ＵＴＲエレメントは、５’末端オリゴピリミジントラクト（ＴＯＰ）の下流の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０番目に位置するヌクレオチドを有しており、当該５’ＵＴＲエレメントの５’末端から、始まる。また、ここで、さらに任意で、ＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲに由来する５’ＵＴＲエレメントは、当該５’ＵＴＲエレメントが由来する遺伝子の開始コドン（Ａ（Ｕ／Ｔ）Ｇ）の上流の１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０番目に位置するヌクレオチドを有しており、当該５’ＵＴＲエレメントの３’末端において終了する。
【０３４５】
特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、（ｉ）リボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、ＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、アンドロゲン誘導１遺伝子（ＡＩＧ１）、シトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、もしくはＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドラーゼ（アシッドセラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）に、または、それらの変異体に、（ｉｉ）好ましくは、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、脊椎動物のリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、脊椎動物の、ＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、脊椎動物のヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、脊椎動物のアンドロゲン誘導１遺伝子（ＡＩＧ１）、脊椎動物のシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、もしくは脊椎動物のＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドラーゼ（アシッドセラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）に、または、それらの変異体に、（ｉｉｉ）より好ましくは、哺乳類のリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、リボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、リボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、哺乳類の、ＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、哺乳類のヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、哺乳類のアンドロゲン誘導１遺伝子（ＡＩＧ１）、哺乳類のシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、もしくは哺乳類のＮ−アシルスフィンゴシンアミ−ドヒドラーゼ（アシッドセラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）に、または、それらの変異体に、（ｉｖ）最も好ましくは、ヒトのリボソームタンパク質ラージ３２遺伝子（ＲＰＬ３２）、ヒトのリボソームタンパク質ラージ３５遺伝子（ＲＰＬ３５）、ヒトのリボソームタンパク質ラージ２１遺伝子（ＲＰＬ２１）、ヒトの、ＡＴＰシンターゼ、Ｈ＋輸送、ミトコンドリアＦ１複合体、アルファサブユニット１、心筋（ＡＴＰ５Ａ１）遺伝子、ヒトのヒドロキシステロイド（１７−ベータ）デヒドロゲナーゼ４遺伝子（ＨＳＤ１７Ｂ４）、ヒトのアンドロゲン誘導１遺伝子（ＡＩＧ１）、ヒトのシトクロムｃオキシダーゼサブユニットＶＩｃ遺伝子（ＣＯＸ６Ｃ）、もしくはヒトのＮ−アシルスフィンゴシンアミ−ドヒドラーゼ（アシッドセラミダーゼ）１遺伝子（ＡＳＡＨ１）に、または、それらの変異体に、由来する核酸配列である。ここで、好ましくは、５’ＵＴＲエレメントは、上記遺伝子の５’ＴＯＰを含んでいない。
【０３４６】
これに関連して、５’ＵＴＲエレメントは、配列番号１０．０５１〜１０．０５４に基づく核酸配列を含んでいることが、特に好ましい。
【０３４７】
従って、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３６８、もしくは配列番号１４１２〜１４２０に基づく核酸配列に対して、または、対応するＲＮＡ配列に対して、少なくとも約４０％の、好ましくは少なくとも約５０％の、好ましくは少なくとも約６０％の、好ましくは少なくとも約７０％の、より好ましくは少なくとも約８０％の、より好ましくは少なくとも約９０％の、さらにより好ましくは少なくとも約９５％の、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の、相同性を有している。または、ここで、少なくとも一つの５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列の断片を含んでいるか、または、当該核酸配列の断片からなり、当該核酸配列は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３６８、または、配列番号１４１２〜１４２０に基づく核酸配列に対して、少なくとも約２０％の、好ましくは少なくとも約４０％の、好ましくは少なくとも約５０％の、好ましくは少なくとも約６０％の、好ましくは少なくとも約７０％の、より好ましくは少なくとも約８０％の、より好ましくは少なくとも約９０％の、さらにより好ましくは少なくとも約９５％の、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の、相同性を有している。ここで、好ましくは、当該断片は、上述されているような断片であり、すなわち、５’ＵＴＲの完全長の少なくとも２０％など、に相当するヌクレオチドの連続した一続きである。好ましくは、上記断片は、少なくとも約２０個以上のヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０個以上のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約４０個以上のヌクレオチド、の長さを有している。好ましくは、上記断片は、本明細書中に記載されているような、機能的断片である。
【０３４８】
従って、特に好ましい実施形態において、５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、配列番号１０．０５３（当該配列番号１０．０５３は、５’末端のオリゴピリミヂントラクト：GCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTGCG-GAGTAACTGCAAAGを欠いているＡＴＰ５Ａ１の５’ＵＴＲであり；当該配列番号１０．０５３は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１４１４（５’末端のオリゴピリミヂントラクトを欠いているＡＴＰ５Ａ１の５’ＵＴＲ）に相当する）に基づく核酸配列に対して、または、好ましくは対応するＲＮＡ配列に対して、少なくとも約２０％の、好ましくは少なくとも約４０％の、好ましくは少なくとも約５０％の、好ましくは少なくとも約６０％の、好ましくは少なくとも約７０％の、より好ましくは少なくとも約８０％の、より好ましくは少なくとも約９０％の、さらにより好ましくは少なくとも約９５％の、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の、相同性を有している。または、ここで、少なくとも一つの５’ＵＴＲエレメントは、核酸配列の断片を含んでいるか、または当該核酸配列の断片からなり、当該核酸配列は、（特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の）配列番号２６に基づく核酸配列に対して、または、より好ましくは対応するＲＮＡ配列に対して、少なくとも約４０％の、好ましくは少なくとも約５０％の、好ましくは少なくとも約６０％の、好ましくは少なくとも約７０％の、より好ましくは少なくとも約８０％の、より好ましくは少なくとも約９０％の、さらにより好ましくは少なくとも約９５％の、さらにより好ましくは少なくとも約９９％の、相同性を有している。ここで、好ましくは、当該断片は、上述されているような断片であり、すなわち、５’ＵＴＲの完全長の少なくとも２０％など、に相当するヌクレオチドの連続した一続きである。好ましくは、上記断片は、少なくとも約２０個以上のヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０個以上のヌクレオチド、より好ましくは少なくとも約４０個以上のヌクレオチド、の長さを有している。好ましくは、上記断片は、本明細書中に記載されているような、機能的断片である。
【０３４９】
さらに好ましい実施形態において、本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、さらに、少なくとも一つの３’ＵＴＲを含んでおり、当該３’ＵＴＲは、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、脊索動物の遺伝子、好ましくは脊椎動物の遺伝子、より好ましくは哺乳類の遺伝子、最も好ましくはヒトの遺伝子、の３’ＵＴＲに由来する核酸配列であるか、または、脊索動物の遺伝子、好ましくは脊椎動物の遺伝子、より好ましくは哺乳類の遺伝子、最も好ましくはヒトの遺伝子、の３’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列である。
【０３５０】
用語「３’ＵＴＲエレメント」は、３’ＵＴＲもしくは３’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなる核酸配列、を指す。本発明の意味において、３’ＵＴＲエレメントは、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲを意味してもよい。従って、本発明の意味において、好ましくは、３’ＵＴＲエレメントは、ｍＲＮＡの、好ましくは人工ｍＲＮＡの、３’ＵＴＲであってもよく、または、３’ＵＴＲエレメントは、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲのための転写テンプレートであってもよい。従って、３’ＵＴＲエレメントは、好ましくは、ｍＲＮＡの３’ＵＴＲ、好ましくは人工ｍＲＮＡ、例えば、遺伝子工学的に生成されるベクターコンストラクトの転写によって得られたｍＲＮＡ、の３’ＵＴＲ、に相当する核酸配列である。好ましくは、３’ＵＴＲエレメントは、３’ＵＴＲの機能を実現するか、または、３’ＵＴＲの機能を実現する配列をコードする。
【０３５１】
好ましくは、本発明のｍＲＮＡは、増大された半減期を有するｍＲＮＡ（当該ｍＲＮＡは安定なｍＲＮＡを提供する）に関わる遺伝子を誘導できる場合がある３’ＵＴＲエレメント（例えば、以下に規定されており、かつ以下に記載されているような３’ＵＴＲエレメント）を含んでいる。好ましくは、３’ＵＴＲエレメントは、遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列であるか、または上記遺伝子のホモログ、断片もしくは変異体に由来する核酸配列であり、当該遺伝子は、好ましくは、安定なｍＲＮＡをコードする。
【０３５２】
特に好ましい実施形態において、３’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、アルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、および、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子のようなコラーゲンアルファ遺伝子、からなる群から選択される遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列であるか、または、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号（その開示が参照によって本明細書中に組み込まれる）の配列番号１３６９〜１３９０に基づく、アルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、および、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子のようなコラーゲンアルファ遺伝子、からなる群から選択される遺伝子の３’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列である。特に好ましい実施形態において、３’ＵＴＲは、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、アルブミン遺伝子、好ましくは脊椎動物のアルブミン遺伝子、より好ましくは哺乳類のアルブミン遺伝子、最も好ましくはヒトのアルブミン遺伝子、最も好ましくは、配列番号１００６３（当該配列番号１００６３は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３６９に相当する）に基づくヒトのアルブミン遺伝子、の３’ＵＴＲに由来する核酸配列である。ｍＲＮＡ配列は、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、ジェンバンク（GenBank）のアクセッション番号ＮＭ＿０００４７７．５に基づくヒトのアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列であるか、または、それらの断片もしくは変異体に由来する核酸配列である。
【０３５３】
これに関連して、本発明の組成物のｍＲＮＡは、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３６９〜１３９０、または、それらの断片、ホモログもしくは変異体に基づく核酸配列に由来する、対応するＲＮＡ配列を含んでいる３’ＵＴＲエレメントを含んでいることが特に好ましい。
【０３５４】
最も好ましい３’ＵＴＲエレメントは、配列番号１００６５（当該配列番号１００６５は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３７６に相当する）に基づくヒトアルブミン遺伝子（アルブミン７  ３’ＵＴＲ）の断片に由来する核酸配列を含んでいる。
【０３５５】
これに関連して、本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡの３’ＵＴＲエレメントは、配列番号１００６６に基づく核酸配列に対応するＲＮＡ配列を含んでいるか、または当該対応するＲＮＡ配列からなることが、特に好ましい。
【０３５６】
別の特に好ましい実施形態において、３’ＵＴＲエレメントは、核酸配列を含んでいるか、または、当該核酸配列からなり、当該核酸配列は、α−グロビン遺伝子、好ましくは脊椎動物のα−グロビン遺伝子またはβ−グロビン遺伝子、より好ましくは哺乳類のα−またはβ−グロビン遺伝子、最も好ましくはヒトのα−またはβ−グロビン遺伝子、の３’ＵＴＲに由来する核酸配列であり、当該ヒトのα−β−グロビン遺伝子もしくはβ−グロビン遺伝子は、配列番号１００５５（当該配列番号１００５５は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３７０（ホモ・サピエンスのヘモグロビン、アルファ１（ＨＢＡ１）の３’ＵＴＲ）に相当する）に基づくか、または、配列番号１００５７（当該配列番号１００５７は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３７１（ホモ・サピエンスのヘモグロビン、アルファ２（ＨＢＡ２）の３’ＵＴＲ）に相当する）に相当するか、および／または、配列番号１００５９（当該配列番号１００５９は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３７２（ホモ・サピエンスのヘモグロビン、ベータ（ＨＢＢ）の３’ＵＴＲ）に相当する）に基づいている。
【０３５７】
例えば、３’ＵＴＲエレメントは、配列番号１００６１（当該配列番号１００６１は、特許出願国際公開公報第ＷＯ２０１３／１４３７００号の配列番号１３９３に相当する）に基づく、α−グロビン遺伝子の３’ＵＴＲの中心であるα複合体結合部分、を含んでいるか、または、当該中心である当該α複合体結合部分、から構成されてもよい。
【０３５８】
これに関連して、本発明の組成物のＲＮＡの３’ＵＴＲエレメントは、核酸配列に対応するＲＮＡ配列を含んでいるか、または、当該対応するＲＮＡ配列からなり、かつ、当該核酸配列は、配列番号１００６２、または、そのホモログ、断片もしくは変異体に相当する、ことが特に好ましい。
【０３５９】
用語「［・・・］遺伝子の３’ＵＴＲに由来する核酸配列」は、好ましくは、［・・・］遺伝子の３’ＵＴＲ配列またはその一部分に基づいている核酸配列を指し、例えば、アルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、もしくは、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子のようなコラーゲンα遺伝子、の３’ＵＴＲに基づいている核酸配列を指し、好ましくはアルブミン遺伝子の３’ＵＴＲ配列またはその一部分に基づいている核酸配列を指す。この用語は、３’ＵＴＲ配列の全体（すなわち遺伝子の３’ＵＴＲ配列の完全長）に相当する配列を含み、かつ、遺伝子、例えばアルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、もしくは、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子のようなコラーゲンα遺伝子、好ましくはアルブミン遺伝子、の３’ＵＴＲ配列の断片に相当する配列を含む。
【０３６０】
用語「［・・・］遺伝子の３’ＵＴＲの変異体に由来する核酸配列」は、好ましくは、遺伝子の３’ＵＴＲ配列の変異体に基づいている核酸配列を指し、例えば、上述されているような、アルブミン遺伝子、α−グロビン遺伝子、β−グロビン遺伝子、チロシンヒドロキシラーゼ遺伝子、リポキシゲナーゼ遺伝子、もしくは、コラーゲンアルファ１（Ｉ）遺伝子のようなコラーゲンα遺伝子、の３’ＵＴＲの変異体、または、その一部分に基づいている核酸配列を指す。この用語は、遺伝子の３’ＵＴＲの変異体の全体の配列（すなわち遺伝子の変異体３’ＵＴＲ配列の完全長）に相当する配列を含み、かつ、遺伝子の変異体３’ＵＴＲ配列の断片に相当する配列を含む。これに関連して、断片は、好ましくは、変異体３’ＵＴＲの完全長におけるヌクレオチドの連続した一続きに相当する、ヌクレオチドの連続した一続きからなり、これは、変異体３’ＵＴＲの完全長の、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、さらにより好ましくは少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％、に相当する。本発明の意味において、変異体のそのような断片は、好ましくは、本明細書中に記載されているような変異体の機能的な断片である。
【０３６１】
好ましくは、少なくとも一つの５’ＵＴＲエレメントおよび少なくとも一つの３’ＵＴＲエレメントは、相乗的に作用し、上述されているような本発明の組成物のＲＮＡからのタンパク質産生を増加させる。
【０３６２】
［ヒストンステムループ］
特に好ましい実施形態において、本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、ヒストンステム−ループ配列／構造を含んでいる。そのようなヒストンステム−ループ配列は、好ましくは、国際公開公報第ＷＯ２０１２／０９１７８０号（その開示が参照によって本明細書中に組み込まれる）に開示されているようなヒストンステム−ループ配列から選択される。
【０３６３】
本発明の範囲内において使用されることに適したヒストンステム−ループ配列は、好ましくは、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）の少なくとも一つから選択され：
式（Ｉ）（ステム境界エレメントを有さないステム−ループ配列）：
【０３６４】
【化１】
2018517674.tif 000100
【０３６５】
式（ＩＩ）（ステム境界エレメントを有するステム−ループ配列）：
【０３６６】
【化２】
2018517674.tif 000101
【０３６７】
ここで：
ステム１またはステム２の境界エレメントＮ１−６は、１〜６個の、好ましくは２〜６個の、より好ましくは２〜５個の、さらにより好ましくは３〜５個の、最も好ましくは４〜５個または５個のＮが連続した配列であり、ここで、それぞれのＮは、別のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、または、それらのヌクレオチド類似物、から選択され；
ステム１［Ｎ０−２ＧＮ３−５］は、ステム２のエレメントと逆相補的、または、部分的に逆相補的であり、かつ、５〜７個のヌクレオチドが連続した配列であり；
ここでＮ０−２は、０〜２個の、好ましくは０〜１個の、より好ましくは１個のＮが連続した配列であり、ここで、それぞれのＮは、別のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、または、それらのヌクレオチド類似物、から選択され；
ここでＮ３−５は、３〜５個の、好ましくは４〜５個の、より好ましくは４個のＮが連続した配列であり、ここで、それぞれのＮは、別のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、または、それらのヌクレオチド類似物、から選択され、ならびに、
ここでＧは、グアノシンまたはその類似物であり、ステム２におけるその相補的なヌクレオチドであるシチジンがグアノシンによって置き換えられている条件の下で、任意でシチジンまたはその類似物によって置き換えられてもよく；
ループ配列［Ｎ０−４（Ｕ／Ｔ）Ｎ０−４］は、ステム１およびステム２のエレメントの間に位置しており、かつ、３〜５個のヌクレオチド、より好ましくは４個のヌクレオチドが連続した配列であり；
ここで、それぞれのＮ０−４は、別のＮ０−４から独立して、０〜４個の、好ましくは１〜３個の、より好ましくは１〜２個のＮが連続した配列であり、ここで、それぞれのＮは、別のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、または、それらのヌクレオチド類似物、から選択され；ならびに、
ここで、Ｕ／Ｔは、ウリジン、または任意でチミジンであり；
ステム２［Ｎ３−５ＣＮ０−２］は、ステム１のエレメントと逆相補的または部分的に逆相補的であり、かつ、５〜７個のヌクレオチドが連続した配列であり；
ここでＮ３−５は、３〜５個の、好ましくは４〜５個の、より好ましくは４個のＮが連続した配列であり、ここで、それぞれのＮは、別のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、または、それらのヌクレオチド類似物、から選択され；
ここでＮ０−２は、０〜２個の、好ましくは０〜１個の、より好ましくは１個のＮが連続した配列であり、ここで、それぞれのＮは、別のＮから独立して、Ａ、Ｕ、Ｔ、ＧおよびＣから選択されるヌクレオチド、または、それらのヌクレオチド類似物、から選択され；ならびに、
ここでＣは、シチジンまたはその類似物であり、ステム１におけるその相補的なヌクレオチドであるグアノシンがシチジンによって置き換えられている条件の下で、任意でグアノシンまたはその類似物によって置き換えられてもよく；
ここで、ステム１およびステム２は、お互いに、逆相補的配列である塩基対の形成が可能であり、ここで、当該塩基対の形成は、例えば、ヌクレオチドＡおよびＵ／ＴもしくはＧおよびＣのワトソン−クリック塩基対形成によって、または、非ワトソン−クリック塩基対形成（例えば、揺らぎ塩基対形成、逆ワトソン−クリック塩基対形成、フーグスティーン型塩基対形成、逆フーグスティーン型塩基対形成）によって、ステム１およびステム２の間で生じ得る。または、ステム１およびステム２は、お互いに、部分的に逆相補的配列である塩基対の形成が可能であり、ここで、不完全な塩基対形成は、一方のステムにおける一つ以上の塩基が、他方のステムの逆相補的な配列において、相補的な塩基を有していないことに基づいて、ステム１およびステム２の間で生じる場合がある。
【０３６８】
本発明の第一の態様のさらに好ましい実施形態によると、本発明のｍＲＮＡ配列は、以下の特定の式（Ｉａ）または（ＩＩａ）の少なくとも一つに基づくヒストンステム−ループ配列を少なくとも一つ含んでいてもよく：
式（Ｉａ）（ステム境界エレメントを有さないステム−ループ配列）：
【０３６９】
【化３】
2018517674.tif 000102
【０３７０】
式（ＩＩａ）（ステム境界エレメントを有するステム−ループ配列）：
【０３７１】
【化４】
2018517674.tif 000103
【０３７２】
ここで、Ｎ、Ｃ、Ｇ、ＴおよびＵは以上に規定されている通りである。
【０３７３】
第一の態様のさらにより特に好ましい実施形態によると、少なくとも一つのＲＮＡは、以下の特定の式（Ｉｂ）または（ＩＩｂ）の少なくとも一つに基づくヒストンステム−ループ配列を少なくとも一つ含んでいてもよく：
式（Ｉｂ）（ステム境界エレメントを有さないステム−ループ配列）：
【０３７４】
【化５】
2018517674.tif 000104
【０３７５】
式（ＩＩｂ）（ステム境界エレメントを有するステム−ループ配列）：
【０３７６】
【化６】
2018517674.tif 000105
【０３７７】
ここで、Ｎ、Ｃ、Ｇ、ＴおよびＵは以上に規定されている通りである。
【０３７８】
特に好ましいヒストンステム−ループは、配列番号８に基づく配列である。
【０３７９】
より好ましいヒストンステム−ループは、配列番号９に基づく核酸配列に対応するＲＮＡ配列である。
【０３８０】
［ポリ（Ａ）］
特に好ましい実施形態において、本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、上述されているようなペプチドまたはタンパク質、またはその断片もしくは変異体、を少なくとも一つコードしているコーディング領域に加えて、ポリ−Ａ  テールとも呼ばれているポリ（Ａ）配列を、好ましくは当該ＲＮＡの３’末端に、含んでいる。ポリ（Ａ）配列が存在する場合、そのようなポリ（Ａ）配列は、約２５〜約４００個のアデノシンヌクレオチドの配列、好ましくは約５０〜約４００個のアデノシンヌクレオチドの配列、より好ましくは約５０〜約３００個のアデノシンヌクレオチドの配列、さらにより好ましくは約５０〜約２５０個のアデノシンヌクレオチドの配列、最も好ましくは約６０〜約２５０個のアデノシンヌクレオチドの配列、を含んでいる。これに関連して、用語「約」は、当該用語「約」が付されている（複数の）値の±１０％の偏差、を指す。このポリ（Ａ）配列は、好ましくは、本発明に係るＲＮＡに含まれるコーディング領域の３’に位置する。
【０３８１】
好ましくは、組成物の少なくとも一つのＲＮＡにおけるポリ（Ａ）配列は、ＲＮＡインビトロ転写によるＤＮＡテンプレートに由来する。代替的に、ポリ（Ａ）配列は、インビトロにおいて、ＤＮＡ前駆体から転写されることを必ずしも必要とせず、化学合成の一般的な方法によって得られてもよい。さらに、ポリ（Ａ）配列、またはポリ（Ａ）  テールは、当該技術分野で知られている、市販のポリアデニル化キットおよび対応するプロトコルを使用する、少なくとも一つのＲＮＡの酵素的なポリアデニル化によって、生成されてもよい。
【０３８２】
代替的に、本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、任意で、ポリアデニル化シグナルを含んでいる。当該ポリアデニル化シグナルは、特異的なタンパク質因子（例えば、切断ポリアデニル化特異因子（ＣＰＳＦ）、切断促進因子（ＣｓｔＦ）、切断因子ＩおよびＩＩ（ＣＦ  ＩおよびＣＦ  ＩＩ）、ポリ（Ａ）ポリメラーゼ（ＰＡＰ））によって、（転写された）ＲＮＡに対してポリアデニル化を伝達するシグナルとして、本明細書中に定義される。これに関連して、コンセンサスポリアデニル化シグナルは、好ましくは、ＮＮ（Ｕ／Ｔ）ＡＮＡコンセンサス配列を含んでいる。特に好ましい態様において、ポリアデニル化シグナルは、以下の配列の一つを含んでいる：ＡＡ（Ｕ／Ｔ）ＡＡＡまたはＡ（Ｕ／Ｔ）（Ｕ／Ｔ）ＡＡＡ（ここで、ウリジンは通常ＲＮＡにおいて存在し、チミジンは通常ＤＮＡにおいて存在する）。
【０３８３】
［ポリ（Ｃ）］
さらに好ましい実施形態によると、本発明の組成物のＲＮＡは、少なくとも１０個のシトシン、好ましくは少なくとも２０個のシトシン、より好ましくは少なくとも３０個のシトシンの配列（いわゆる「ポリ（Ｃ）配列」）によって修飾され得る。特に、ＲＮＡは、一般的に約１０〜２００個のシトシンヌクレオチド、好ましくは約１０〜１００個のシトシンヌクレオチド、より好ましくは約１０〜７０個のシトシンヌクレオチド、またはさらにより好ましくは約２０〜５０個もしくはさらに２０〜３０個のシトシンヌクレオチド、のポリ（Ｃ）配列を含んでいてもよい。このポリ（Ｃ）配列は、本発明に係るＲＮＡに含まれる、好ましくはコーディング領域の３’側、より好ましくは任意のポリ（Ａ）配列の３’側、に位置する。
【０３８４】
［５’キャップ］
本発明の別の好ましい実施形態によると、本明細書中に規定されているような修飾ＲＮＡ分子は、いわゆる「５’キャップ」構造の付加によって修飾され得、当該「５’キャップ」構造は、好ましくは、本明細書中に記載されているようなＲＮＡを安定させる。５’キャップは、構成要素であり、一般的には修飾ヌクレオチドの構成要素であり、概して、成熟ｍＲＮＡの５’末端に「キャップ」をする。５’キャップは、一般的には、修飾ヌクレオチドによって形成されてもよく、特に、グアニンヌクレオチドの誘導体によって形成されてもよい。好ましくは、５’キャップは、５’末端に対して５’−５’−三リン酸結合を介して連結される。５’キャップは、メチル化されてもよく、例えばｍ７ＧｐｐｐＮであってもよい。ｍ７ＧｐｐｐＮにおいて、Ｎは、５’キャップを保有する核酸の、５’末端のヌクレオチドであり、一般的には、ｍＲＮＡの５’末端である。ｍ７ＧｐｐｐＮは、ポリメラーゼＩＩによって転写されたｍＲＮＡ中に天然に存在する５’キャップ構造であり、それ故に、ｍ７ＧｐｐｐＮは、好ましくは、これに関連して、修飾ＲＮＡにおいて含まれる修飾としては見なされない。従って、本発明の修飾ＲＮＡは、５’キャップとしてｍ７ＧｐｐｐＮを含んでいてもよいが、付加的な修飾ＲＮＡは、一般的に、本明細書中に規定されているような修飾を少なくともさらに一つ、含んでいる。
【０３８５】
５’キャップ構造のさらなる例は、グリセリル、逆デオキシ脱塩基性残基（部分）、４’，５’メチレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、アルファ−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’−セコヌクレオチド、非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式３，５ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆ヌクレオチド部分、３’−３’−逆脱塩基部分、３’−２’−逆ヌクレオチド部分、３’−２’−逆脱塩基性部分、１，４−ブタンジオールホスファート、３’−ホスホロアミダート、ヘキシルホスファート、アミノヘキシルホスファート、３’−ホスファート、３’ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、または、架橋もしくは非架橋メチルホスホナート部分を含む。これらの修飾５’キャップ構造は、これに関連して、少なくともひとつの修飾として見なされる。
【０３８６】
特に好ましい修飾５’キャップ構造は、ＣＡＰ１（ｍ７Ｇに隣接するヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＣＡＰ２（ｍ７Ｇの下流の２番目のヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化）、ＣＡＰ３（ｍ７Ｇの下流の３番目のヌクレオチドのリボースのさらなるメチル化）、ＣＡＰ４（ｍ７Ｇの下流の４番目のヌクレオチドのリボースのメチル化）、ＡＲＣＡ（アンチ−リバースキャップアナログ（anti-reverse cap analogue））、修飾ＡＲＣＡ（例えば、ホスホチオアート修飾ＡＲＣＡ）、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、および２−アジド−グアノシンである。
【０３８７】
［分泌シグナル配列］
別の特に好ましい実施形態によると、組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、代替的に、またはさらに、分泌シグナルペプチドをコードしてもよい。そのような分泌シグナル配列は、ペプチドの一続きであり、これは、一般的に約１５〜３０個のアミノ酸の長さを示し、かつ、好ましくは、コードされたペプチドのＮ末端に位置されるが、これらに限定されない。本明細書中に規定されているような分泌シグナル配列は、好ましくは、組成物の少なくとも一つのＲＮＡの少なくとも一つのコーディング配列によってコードされているペプチドまたはタンパク質の、規定された細胞内区画、好ましくは、細胞表面、小胞体（ＥＲ）またはエンドソーム−リソソーム区画、への輸送を可能にする。本明細書中に規定されているような分泌シグナル配列の例は、古典的ＭＨＣ分子または非古典的ＭＨＣ分子の分泌シグナル配列（例えば、ＭＨＣＩ分子およびＭＨＣＩＩ分子のシグナル配列、例えば、ＭＨＣクラスＩ分子ＨＬＡ−Ａ＊０２０１のシグナル配列）、本明細書中に規定されているようなサイトカインまたは免疫グロブリンの分泌シグナル配列、本明細書中に規定されているような免疫グロブリンまたは抗体の不変鎖の分泌シグナル配列、Ｌａｍｐ１、タパシン、Ｅｒｐ５７、カルレティキュリン、カルネキシンおよびさらなる膜関連タンパク質のシグナル配列、または、小胞体（ＥＲ）もしくはエンドソーム−リソソーム区画に関連したタンパク質のシグナル配列を含むが、これらに限定されない。
【０３８８】
以上に規定されているようなコーディング配列に関して、および／または、以上に規定されているようなＲＮＡに関して、任意の上記修飾が、本発明の組成物のコーディング配列および／または本発明の組成物のＲＮＡに適用されてもよく、また、さらに、本発明の関連において使用されているような任意のＲＮＡに適用されてもよく、また、適しているかまたは必要な場合には、これらの修飾の組み合わせが、それぞれの少なくとも一つのＲＮＡにおいて、互いに干渉しないという条件で、用いられてもよい。当業者は、適宜、当業者の選択をとることができるだろう。
【０３８９】
［ｍＲＮＡおよびＲＮＡの製造］
ＲＮＡは、技術的に知られる任意の方法を使用して調製され得る。当該任意の方法としては、例えば固相合成のような合成方法（ＲＮＡの化学合成）、および、ＲＮＡインビトロ転写反応のような、インビトロ方法、が挙げられる。
【０３９０】
［組み合わせ］
本発明によると、ペプチドまたはタンパク質をコードするＲＮＡを組み合わせることが特に好ましい。これに関連して、以下の組み合わせが特に好ましい：
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つのケモカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つの自殺遺伝子産物をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つの免疫原性のタンパク質またはペプチドをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つのアポトーシス誘導因子をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つの血管新生阻害因子をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つのヒートショックタンパク質をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つの腫瘍抗原をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つのβ−カテニン阻害因子をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つのＳＴＩＮＧ経路の活性化因子をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つのチェックポイント調節因子をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つの自然免疫活性化因子をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つの抗体をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つのデコイ受容体をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つの骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、少なくとも一つのＩＤＯ経路阻害因子をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・少なくとも一つのサイトカインをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、アポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質もしくはペプチドの少なくとも一つをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ。
【０３９１】
さらに、以下の実施形態が特に好ましい：
・ＩＬ−２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）および／またはＩＬ−１２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、チミジンキナーゼをコードしているｍＲＮＡとの組み合わせ（アプローチ：サイトカイン＋自殺遺伝子産物）、
・ＩＬ−２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）および／またはＩＬ−１２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）、
・ＩＬ−１２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）および／またはＣＤ４０ＬをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）、
・ＩＬ−１５をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）および／またはＩＬ−１２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）、
・ＩＬ−２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、インフルエンザＮＰタンパク質をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ、
・ＩＬ−２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）および／またはＩＬ−１２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、シトクロムｃ／カスパーゼ３をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ（サイトカイン＋アポトーシス誘導）、
・ＣＤ４０ＬをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、ＩＬ−１２をコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と、ΔＲＩＧＩをコードしているＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）との組み合わせ。
【０３９２】
本発明の組成物のＲＮＡ分子は、以上で説明されているような、一つ以上の異なるペプチドまたはタンパク質（例えば、サイトカイン、ケモカイン、自殺遺伝子産物、免疫原性のタンパク質もしくはペプチド、アポトーシス誘導因子、血管新生阻害因子、ヒートショックタンパク質、腫瘍抗原、β−カテニン阻害因子、ＳＴＩＮＧ経路の活性化因子、チェックポイント調節因子、自然免疫活性化因子、抗体、ドミナント・ネガティブ受容体およびデコイ受容体、骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子、ＩＤＯ経路阻害因子、ならびに、アポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質もしくはペプチド）をコードしてもよい、ということが理解されるべきである。いくつかのＲＮＡ配列が、本発明の組成物のＲＮＡにおいて組み合わされてもよい。さらに、ＲＮＡ配列、または本発明の組成物の配列は、野生型のタンパク質配列の変異体もしくは断片をコードしているか、または、野生型のタンパク質配列もしくはその変異体の一部分または断片の一つ以上をコードしている、ことが可能である。
【０３９３】
［ノンコーディングＲＮＡ］
本発明によると、本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、少なくとも一つのノンコーディングＲＮＡを含んでいてもよい。当該ノンコーディングＲＮＡは、好ましくは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ（ａｓＲＮＡ）、環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）、リボザイム、アプタマー、リボスイッチ、免疫刺激性（immunostimulating）／免疫刺激性（immunostimulatory）ＲＮＡ  ＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、およびＰｉｗｉ−結合ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）からなる群から選択される。
【０３９４】
［免疫刺激性（immunostimulating）／免疫刺激性（immunostimulatory）ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）］
同様に、さらなる代替方法によると、本発明の組成物の少なくとも一つのＲＮＡは、免疫刺激性（immunostimulating）／免疫刺激性（immunostimulatory）ＲＮＡであり、当該免疫刺激性（immunostimulating）／免疫刺激性（immunostimulatory）ＲＮＡは、好ましくは、自然免疫応答を顕在化させる。そのような免疫賦活性ＲＮＡ（免疫刺激性ＲＮＡ）は、本明細書中に規定されているような、任意の（二本鎖の、または一本鎖の）ＲＮＡ（例えば、コーディングＲＮＡ）であってもよい。好ましい実施形態において、免疫賦活性ＲＮＡは、ノンコーディングＲＮＡである。好ましくは、免疫賦活性ＲＮＡは、一本鎖、二本鎖、または部分的に二本鎖であるＲＮＡであってもよく、より好ましくは一本鎖ＲＮＡであってもよく、および／または、免疫賦活性ＲＮＡは、環状または直鎖状であるＲＮＡであってもよく、より好ましくは直鎖状のＲＮＡであってもよい。より好ましくは、免疫賦活性ＲＮＡは、（直鎖状の）一本鎖ＲＮＡであってもよい。さらにより好ましくは、免疫賦活性ＲＮＡは、（長い）（直鎖状の）（一本鎖の）ノンコーディングＲＮＡであってもよい。これに関連して、インビトロにおいて転写されたＲＮＡである場合には、ｉｓＲＮＡは、その５’末端に三リン酸を保有していることが特に好ましい。免疫賦活性ＲＮＡは、また、本明細書中に規定されているような、短いＲＮＡオリゴヌクレオチドとして存在してもよい。
【０３９５】
本明細書中で用いられるとき、免疫賦活性ＲＮＡは、さらに、自然状態のＲＮＡ分子、または、合成的に調製されるＲＮＡ分子の任意のクラスから選択されてもよい。当該ＲＮＡ分子は、自然免疫応答を誘導することができ、かつ、抗原によって誘導された適応免疫応答を支援する場合がある。これに関して、免疫応答は、様々な方法によって発生してもよい。適切な（適応）免疫応答のための実質的な要因は、種々のＴ細胞亜集団の刺激である。Ｔリンパ球は、一般的に、二つの亜集団、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）細胞およびＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞、に分けられ、当該二つの亜集団によって、免疫系は、細胞内の（Ｔｈ１）および細胞外の（Ｔｈ２）病原体（例えば抗原）を、破壊することができる。上記二つのＴｈ細胞集団は、これらによって産生されるエフェクタータンパク質（サイトカイン）の型の点で異なる。従って、Ｔｈ１細胞は、マクロファージおよび細胞傷害性Ｔ細胞の活性化によって、細胞性免疫応答を援助する。一方、Ｔｈ２細胞は、プラズマ細胞への変換のためのＢ細胞の刺激、および、抗体（例えば抗原に対する）の形成、によって、体液性免疫応答を促進する。それ故に、Ｔｈ１／Ｔｈ２比は、適応免疫応答の誘導および維持において、非常に重要である。本発明に関連して、（適応）免疫応答のＴｈ１／Ｔｈ２比は、好ましくは、細胞性応答（Ｔｈ１応答）へと向かう方向に転換され、それによって、細胞性免疫応答が誘導される。一実施例によると、自然免疫系は、適応免疫応答を支援する場合があり、かつ、自然免疫系は、トール様受容体（ＴＬＲ）のリガンドによって活性化されてもよい。ＴＬＲは、高度に保存されたパターン認識受容体（ＰＲＲ）ポリペプチドのファミリーであり、当該パターン認識受容体（ＰＲＲ）ポリペプチドは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、かつ、哺乳類における自然免疫において重要な役割を果たす。現在までに、ＴＬＲ１−ＴＬＲ１３（トール様受容体：ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２またはＴＬＲ１３）と表される、少なくとも１３のファミリーメンバーが同定されている。さらに、いくらかの特定のＴＬＲリガンドが同定されている。さらに、特定のＴＬＲのリガンドが、特定の核酸分子を含むこと、および、ＲＮＡの特定の型が配列非依存性様式または配列依存性様式にて免疫を刺激すること、が報告されており、ここで、これらの様々な免疫賦活性ＲＮＡは、例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、もしくはＴＬＲ８、または、ＲＩＧ−１、ＭＤＡ−５などのような細胞内受容体、を刺激してもよい。
【０３９６】
好ましくは、本明細書中において使用されているような、免疫賦活性核酸、好ましくは免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）、は免疫刺激性であると知られている任意のＲＮＡ配列を含んでいてもよい。当該ＲＮＡ配列は、ＴＬＲのリガンドに相当するＲＮＡ配列および／または当該ＴＬＲのリガンドをコードしているＲＮＡ配列、ＲＮＡに対する細胞内受容体のためのリガンド（例えばＲＩＧ−１またはＭＤＡ−５など）に相当するＲＮＡ配列、および／または、当該細胞内受容体のためのリガンドをコードしているＲＮＡ配列、または、任意の他の免疫刺激性ＲＮＡ配列、を含むが、これらに限定されることはない。また、当該ＴＬＲは、好ましくはヒトのファミリーメンバーＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０から選択されるかまたはマウスのファミリーメンバーＴＬＲ１〜ＴＬＲ１３から選択され、より好ましくは（ヒトの）ファミリーメンバーＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０から選択され、さらにより好ましくはＴＬＲ７およびＴＬＲ８から選択されるが、これらに限定されることはない（例えば、Meylan, E., Tschopp, J. (2006). Toll-like receptors and RNA helicases: two parallel ways to trigger antiviral responses. Mol. Cell 22, 561−569を参照のこと）。さらに、本発明のワクチンのさらなる化合物として用いられている、免疫賦活性ＲＮＡ分子（のクラス）は、免疫応答を顕在化することが可能である任意の他のＲＮＡを含んでいてもよい。そのような免疫賦活性ＲＮＡは、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、およびウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）を含んでいてもよいが、これらに限定されることはない。そのような免疫賦活性ＲＮＡは、１０００〜５０００個、５００〜５０００個、５〜５０００個、また５〜１０００個、５〜５００個、５〜２５０個、５〜１００個、５〜５０個または５〜の３０個のヌクレオチドを含む長さであり得る。
【０３９７】
本明細書中で用いられるとき、免疫賦活性ＲＮＡは、さらに、自然状態のＲＮＡ分子または合成的に調製されるＲＮＡ分子の任意のクラスから選択されてもよい。当該ＲＮＡ分子は、自然免疫応答を誘導することができ、かつ、抗原によって誘導された適応免疫応答を支援する場合がある。これに関して、免疫応答は、様々な方法において発生してもよい。適切な（適応）免疫応答のための実質的な要因は、種々のＴ細胞亜集団の刺激である。Ｔリンパ球は、一般的に、二つの亜集団、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）細胞およびＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞、に分けられ、当該二つの亜集団によって、免疫系は、細胞内の（Ｔｈ１）および細胞外の（Ｔｈ２）病原体（例えば抗原）を、破壊することができる。上記二つのＴｈ細胞集団は、これらによって産生されるエフェクタータンパク質（サイトカイン）の型の点で異なる。従って、Ｔｈ１細胞は、マクロファージおよび細胞傷害性Ｔ細胞の活性化によって、細胞性免疫応答を援助する。一方、Ｔｈ２細胞は、プラズマ細胞への変換のためのＢ細胞の刺激、および、抗体（例えば抗原に対する）の形成、によって、体液性免疫応答を促進する。それ故に、Ｔｈ１／Ｔｈ２比は、適応免疫応答の誘導および維持において、非常に重要である。本発明に関連して、（適応）免疫応答のＴｈ１／Ｔｈ２比は、好ましくは、細胞性応答（Ｔｈ１応答）へと向かう方向に転換され、それによって、細胞性免疫応答が誘導される。一実施例によると、自然免疫系は、適応免疫応答を支援する場合があり、かつ、自然免疫系は、トール様受容体（ＴＬＲ）のリガンドによって活性化されてもよい。ＴＬＲは、高度に保存されたパターン認識受容体（ＰＲＲ）ポリペプチドのファミリーであり、当該パターン認識受容体（ＰＲＲ）ポリペプチドは、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）を認識し、かつ、哺乳類における自然免疫において重要な役割を果たす。現在までに、ＴＬＲ１−ＴＬＲ１３（トール様受容体：ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２またはＴＬＲ１３）と表される、少なくとも１３のファミリーメンバーが同定されている。さらに、いくらかの特定のＴＬＲリガンドが同定されている。例えば、非メチル化細菌性ＤＮＡおよびその合成類似物（ＣｐＧ  ＤＮＡ）が、ＴＬＲ９のためのリガンドであることが見出された（Hemmi H et al. (2000) Nature 408:740-5; Bauer S et al. (2001) Proc NatlAcadSci USA 98, 9237−42）。さらに、特定のＴＬＲのリガンドが、特定の核酸分子を含むこと、および、ＲＮＡの特定の型が配列非依存性様式または配列依存性様式にて免疫を刺激すること、が報告されている。ここで、これらの様々な免疫賦活性ＲＮＡは、例えば、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、もしくはＴＬＲ８、または、ＲＩＧ−１、ＭＤＡ−５などのような細胞内受容体、を刺激してもよい。例えば、Ｌｉｐｆｏｒｄらは、ＴＬＲ７およびＴＬ８を介する作用によって、免疫賦活性剤として、特定のＧ，Ｕ含有オリゴリボヌクオチドを特定した（国際公開公報第ＷＯ０３／０８６２８０号を参照のこと）。Ｌｉｐｆｏｒｄらによって記載されている免疫賦活性Ｇ，Ｕ含有オリゴリボヌクオチドは、ＲＮＡ源（例えば、リボ���ームＲＮＡ、トランスファーＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、およびウイルスＲＮＡ）を誘導できると考えられている。
【０３９８】
特に好ましい実施形態によれば、このような免疫賦活性の核酸配列は、好ましくは、下記式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）の核酸からなるか、または当該核酸を含んでいる、ＲＮＡであることが好ましい：
ＧｌＸｍＧｎ    （式（ＩＩＩ））
式中、
Ｇは、グアノシン、ウラシル、または、グアノシンもしくはウラシルの類似物（analogue）であり；
Ｘは、グアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、シトシン、または、上述のヌクレオチドの類似物であり；
ｌは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｌ＝１であるとき、Ｇは、グアノシンまたはその類似物であり、
ｌ＞１であるとき、ヌクレオチドの少なくとも５０％は、グアノシンまたはその類似物であり；
ｍは、整数、かつ、少なくとも３であり、
ここで、ｍ＝３であるとき、Ｘは、ウラシルまたはその類似物であり、
ｍ＞３であるとき、少なくとも３つ連続するウラシルまたはウラシルの類似物が存在し；
ｎは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｎ＝１であるとき、Ｇはグアノシンまたはその類似物であり、
ｎ＞１であるとき、ヌクレオチドの少なくとも５０％は、グアノシンまたはその類似物である。
【０３９９】
ＣｌＸｍＣｎ    （式（ＩＶ））
式中、
Ｃは、シトシン、ウラシル、または、シトシンもしくはウラシルの類似物であり；
Ｘは、グアノシン、ウラシル、アデノシン、チミジン、シトシン、または、上述のヌクレオチドの類似物であり；
ｌは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｌ＝１であるとき、Ｃは、シトシンまたはその類似物であり、
ｌ＞１であるとき、ヌクレオチドの少なくとも５０％は、シトシンまたはその類似物であり；
ｍは、整数、かつ、少なくとも３であり、
ここで、ｍ＝３であるとき、Ｘは、ウラシルまたはその類似物であり、
ｍ＞３であるとき、少なくとも３つ連続するウラシルまたはウラシルの類似物が存在し；
ｎは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｎ＝１であるとき、Ｃは、シトシンまたはその類似物であり、
ｎ＞１であるとき、ヌクレオチドの少なくとも５０％は、シトシンまたはその類似物である。
【０４００】
免疫賦活性ＲＮＡとして用いられうる、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の核酸は、比較的短い核酸分子であってよく、通常は約５〜１００個（しかし特定の実施形態については、１００個のヌクレオチドより長くてもよい（例えば、最大２００個のヌクレオチド））、５〜９０個または５〜８０個のヌクレオチド長、好ましくは約５〜７０個のヌクレオチド長、より好ましくは約８〜６０個のヌクレオチド長、より好ましくは約１５〜６０個のヌクレオチド長、より好ましくは２０〜６０個のヌクレオチド長、最も好ましくは３０〜６０個のヌクレオチド長である。本発明の核酸カーゴ複合体の核酸が最大長（例えば１００個のヌクレオチド）を有する場合、ｍは、通常９８以下となる。式（ＩＩＩ）の核酸中のヌクレオチドＧの数は、ｌまたはｎによって決まる。ｌおよびｎは、互いに独立に、それぞれ１〜４０の整数である。ここで、ｌ＝１またはｎ＝１であるとき、Ｇはグアノシンまたはその類似物である。ｌ＞１またはｎ＞１であるとき、ヌクレオチドの少なくとも５０％は、グアノシンまたはその類似物である。例えば、何ら限定されないが、ｌ＝４またはｎ＝４であるとき、ＧｌまたはＧｎは、例えば、ＧＵＧＵ、ＧＧＵＵ、ＵＧＵＧ、ＵＵＧＧ、ＧＵＵＧ、ＧＧＧＵ、ＧＧＵＧ、ＧＵＧＧ、ＵＧＧＧまたはＧＧＧＧなどでありうる。ｌ＝５またはｎ＝５であるとき、ＧｌまたはＧｎは、例えば、ＧＧＧＵＵ、ＧＧＵＧＵ、ＧＵＧＧＵ、ＵＧＧＧＵ、ＵＧＧＵＧ、ＵＧＵＧＧ、ＵＵＧＧＧ、ＧＵＧＵＧ、ＧＧＧＧＵ、ＧＧＧＵＧ、ＧＧＵＧＧ、ＧＵＧＧＧ、ＵＧＧＧＧまたはＧＧＧＧＧなどでありうる。以下、同様である。本発明に係る式（ＩＩＩ）の核酸において、Ｘｍに隣接するヌクレオチドは、ウラシルでないことが好ましい。同様に、本発明に係る式（ＩＶ）の核酸中のヌクレオチドＣの数は、ｌまたはｎによって決まる。ｌおよびｎは、互いに独立に、それぞれ１〜４０の整数である。ｌ＝１またはｎ＝１であるとき、Ｃはシトシンまたはその類似物である。ｌ＞１またはｎ＞１であるとき、ヌクレオチドの少なくとも５０％は、シトシンまたはその類似物である。例えば、何らの限定されないが、ｌ＝４またはｎ＝４であるとき、ＣｌまたはＣｎは、例えば、ＣＵＣＵ、ＣＣＵＵ、ＵＣＵＣ、ＵＵＣＣ、ＣＵＵＣ、ＣＣＣＵ、ＣＣＵＣ、ＣＵＣＣ、ＵＣＣＣまたはＣＣＣＣなどでありうる。ｌ＝５またはｎ＝５であるとき、ＣｌまたはＣｎは、例えば、ＣＣＣＵＵ、ＣＣＵＣＵ、ＣＵＣＣＵ、ＵＣＣＣＵ、ＵＣＣＵＣ、ＵＣＵＣＣ、ＵＵＣＣＣ、ＣＵＣＵＣ、ＣＣＣＣＵ、ＣＣＣＵＣ、ＣＣＵＣＣ、ＣＵＣＣＣ、ＵＣＣＣＣまたはＣＣＣＣＣなどでありうる。以下、同様である。本発明に係る式（ＩＩＩ）の核酸において、Ｘｍに隣接するヌクレオチドは、ウラシルでないことが好ましい。式（ＩＩ）について、ｌ＞１またはｎ＞１であるとき、上記に規定されるように、ヌクレオチドの少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または１００％が、グアノシンまたはその類似物であることが好ましい。フランキング配列Ｇ１および／またはＧｎ中の、１００％に満たない残余のヌクレオチドは（グアノシンがヌクレオチドの１００％未満を構成する場合）、上記で規定されるように、ウラシルまたはその類似物である。また、ｌおよびｎは、互いに独立に、それぞれ、２〜３０の整数、より好ましくは２〜２０の整数、さらにより好ましくは２〜１５の整数である。ｌまたはｎの下限は、必要であれば変更することができ、少なくとも１、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも３、４、５、６、７、８、９または１０である。この規定は、式（ＩＩＩ）にも対応して適用される。
【０４０１】
特に好ましい実施形態によれば、免疫賦活性ＲＮＡとして用いられ得る、上記の式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）のいずれかに係る核酸は、下記配列番号２９８〜３８１のいずれかからなる配列、または当該配列を含む配列から選択されうる。あるいは、上記の配列のいずれかに対して、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の配列同一性を有している配列から選択されうる。
【０４０２】
さらなる特に好ましい実施形態によれば、このような免疫賦活性核酸配列（特にＲＮＡ）は、式（Ｖ）または（ＶＩ）の核酸からなるか、または当該核酸を含んでいてもよい：
（ＮｕＧｌＸｍＧｎＮｖ）ａ    （式（Ｖ））
式中、
Ｇは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、または、グアノシン（グアニン）もしくはウリジン（ウラシル）の類似物であり、好ましくはグアノシン（グアニン）またはその類似物であり；
Ｘは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、または、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似物であり、好ましくはウリジン（ウラシル）またはその類似物であり；
Ｎは、約４〜５０個、好ましくは約４〜４０個、より好ましくは約４〜３０個または４〜２０個の核酸の長さの核酸配列であり、各Ｎは、独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、または、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似物から選択され；
ａは、１〜２０、好ましくは１〜１５、最も好ましくは１〜１０の整数であり；
ｌは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｌ＝１であるとき、Ｇは、グアノシン（グアニン）またはその類似物であり、
ｌ＞１であるとき、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％は、グアノシン（グアニン）またはその類似物であり；
ｍは、整数、かつ、少なくとも３であり、
ここで、ｍ＝３であるとき、Ｘは、ウリジン（ウラシル）またはその類似物であり、
ｍ＞３であるとき、少なくとも３つ連続するウリジン（ウラシル）またはウリジン（ウラシル）の類似物が存在し；
ｎは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｎ＝１であるとき、Ｇは、グアノシン（グアニン）またはその類似物であり、
ｎ＞１であるとき、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％は、グアノシン（グアニン）またはその類似物であり；
ｕ、および、ｖは、互いに独立して、０〜５０の整数であり、好ましくは、（ａ）ｕ＝０であるときに、ｖ≧１であり、または、（ｂ）ｖ＝０であるときに、ｕ≧１であり；
式（ＩＶ）の核酸分子は、少なくとも５０個のヌクレオチドの長さ、好ましくは少なくとも１００個のヌクレオチドの長さ、より好ましくは少なくとも１５０個のヌクレオチドの長さ、さらにより好ましくは少なくとも２００個のヌクレオチドの長さ、最も好ましくは少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さである。
【０４０３】
（ＮｕＣｌＸｍＣｎＮｖ）ａ    （式（ＶＩ））
式中、
Ｃは、シチジン（シトシン）、ウリジン（ウラシル）、または、シチジン（シトシン）もしくはウリジン（ウラシル）の類似物であり、好ましくはシチジン（シトシン）またはその類似物であり；
Ｘは、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、または、上述したヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似物であり、好ましくはウリジン（ウラシル）またはその類似物であり；
Ｎは、互いに独立して、約４〜５０個、好ましくは約４〜４０個、より好ましくは約４〜３０個または４〜２０個の核酸の長さの核酸配列であり、各Ｎは、独立して、グアノシン（グアニン）、ウリジン（ウラシル）、アデノシン（アデニン）、チミジン（チミン）、シチジン（シトシン）、または、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の類似物から選択され；
ａは、１〜２０、好ましくは１〜１５、最も好ましくは１〜１０の整数であり；
ｌは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｌ＝１であるとき、Ｃは、シチジン（シトシン）またはその類似物であり、
ｌ＞１であるとき、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％は、シチジン（シトシン）またはその類似物であり；
ｍは、整数、かつ、少なくとも３であり、
ここで、ｍ＝３であるとき、Ｘは、ウリジン（ウラシル）またはその類似物であり、
ｍ＞３であるとき、少なくとも３つ連続するウリジン（ウラシル）またはウリジン（ウラシル）の類似物が存在し；
ｎは、１〜４０の整数であり、
ここで、ｎ＝１であるとき、Ｃは、シチジン（シトシン）またはその類似物であり、
ｎ＞１であるとき、これらのヌクレオチド（ヌクレオシド）の少なくとも５０％は、シチジン（シトシン）またはその類似物であり；
ｕ、および、ｖは、互いに独立して、０〜５０の整数とすることができ、好ましくは、
（ａ）ｕ＝０であるときに、ｖ≧１であり、または、（ｂ）ｖ＝０であるときに、ｕ≧１であり；
本発明に係る式（Ｖ）の核酸分子は、少なくとも５０個のヌクレオチドの長さ、好ましくは少なくとも１００個のヌクレオチドの長さ、より好ましくは少なくとも１５０個のヌクレオチドの長さ、さらにより好ましくは少なくとも２００個のヌクレオチドの長さ、最も好ましくは少なくとも２５０個のヌクレオチドの長さである。
【０４０４】
式（ＶＩ）において、要素Ｎ（すなわち、ＮｕおよびＮｖ）およびＸ（Ｘｍ）、特に上記に規定されたコア構造に関して、ならびに整数ａ、ｌ、ｍ、ｎ、ｕおよびｖに関して、上記に与えた定義のいずれもが、対応する式（ＶＩ）の要素に同様に適用される。ここで、式（ＶＩ）におけるコア構造は、ＣｌＸｍＣｎによって定められる。末端要素ＮｕおよびＮｖの定義は、上述のＮｕおよびＮｖについて与えた定義と同一である。
【０４０５】
特に極めて好ましい実施形態によれば、核酸分子（好ましくは、式（Ｖ）に係る免疫賦活性ＲＮＡ）は、例えば、配列番号３８２〜３９５の配列のいずれかから選択されうる。あるいは、上記の配列のいずれかに対して、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の配列同一性を有している配列から選択されうる。
【０４０６】
これに関して、配列番号５、３９４、１００７２に対応する免疫賦活性ＲＮＡが、特に好ましい。
Ｒ２０２５：
GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGCGGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUCUUCGACCACAAGUGCAUAUAGUAGUCAUCGAGGGUCGCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGCCCAGUUCUGAGACUUCGCUAGAGACUACAGUUACAGCUGCAGUAGUAACCACUGCGGCUAUUGCAGGAAAUCCCGUUCAGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCGCUCACUAUGAUUAAGAACCAGGUGGAGUGUCACUGCUCUCGAGGUCUCACGAGAGCGCUCGAUACAGUCCUUGGAAGAAUCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGUGCGACGAUCACAGAGAACUUCUAUUCAUGCAGGUCUGCUCUAG（配列番号５、３９４）
Ｒ３６３０：
GGGAGAAAGCUCAAGCUUAUCCAAGUAGGCUGGUCACCUGUACAACGUAGCCGGUAUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGACCGUCUCAAGGUCCAAGUUAGUCUGCCUAUAAAGGUGCGGAUCCACAGCUGAUGAAAGACUUGUGCGGUACGGUUAAUCUCCCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUAGUAAAUGCGUCUACUGAAUCCAGCGAUGAUGCUGGCCCAGAUCUUCGACCACAAGUGCAUAUAGUAGUCAUCGAGGGUCGCCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGGCCCAGUUCUGAGACUUCGCUAGAGACUACAGUUACAGCUGCAGUAGUAACCACUGCGGCUAUUGCAGGAAAUCCCGUUCAGGUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUCCGCUCACUAUGAUUAAGAACCAGGUGGAGUGUCACUGCUCUCGAGGUCUCACGAGAGCGCUCGAUACAGUGCUUGGAAGAAUCUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUUGUGCGACGAUCACAGAGAACUUCUAUUCAUGCAGGUCUGCUCUAG（配列番号１００７２）。
【０４０７】
他の特に極めて好ましい実施形態によれば、式（ＶＩ）の核酸分子は、例えば、配列番号３９６または３９７の配列のいずれかから選択されうる。または、上記の配列のいずれかに対して、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％または９５％の配列同一性を有している配列から選択されうる。
【０４０８】
コーディングＲＮＡに関して開示されている全ての修飾を、ノンコーディングＲＮＡに関しても適用することができる（適用が可能ならば）。
【０４０９】
［コーディングＲＮＡおよびノンコーディングＲＮＡの組み合わせ］
特に好ましい実施形態では、本発明のＲＮＡ含有組成物は、少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードする少なくとも１つのＲＮＡと、上述したような少なくとも１つのノンコーディングＲＮＡとを含み、好ましくは少なくとも１つの免疫賦活性ＲＮＡを含む。
【０４１０】
特に好ましくは、以下の実施形態である：
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのサイトカイン（好ましくはＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５またはＣＤ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのケモカインをコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの自殺遺伝子産物（好ましくは単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの免疫原性のタンパク質またはペプチド（好ましくはインフルエンザＮＰタンパク質）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのアポトーシス誘導因子（好ましくはチトクロームｃまたはカスパーゼ３）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの血管新生誘導因子をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのヒートショックタンパク質をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの腫瘍抗原をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのβ−カテニン抑制因子をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのＳＴＩＮＧ経路の活性化因子をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのチェックポイント調節因子（好ましくは、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＣＴＬＡ４に対して方向付けられた抗原）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの自然免疫活性化因子（好ましくは、ＲＩＧ−１の構成活性変異体）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの抗体をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのデコイ受容体（好ましくは可溶性のＰＤ−１受容体）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの脊髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのＩＤＯ経路阻害因子をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号  ＸＹまたはＹＹに従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、アポトーシスの阻害因子に結合する少なくとも１つのタンパク質またはペプチドをコードするｍＲＮＡ。
【０４１１】
より特に好ましいのは以下の実施形態である：
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのサイトカイン（好ましくはＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５またはＣＤ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの免疫原性のタンパク質またはペプチド（好ましくはインフルエンザＮＰタンパク質）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのサイトカイン（好ましくはＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５またはＣＤ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つの自然免疫活性化因子（好ましくは、ＲＩＧ−１の構成活性変異体）をコードするｍＲＮＡ、
・好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う免疫賦活性ＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのサイトカイン（好ましくはＩＬ−２、ＩＬ−１２またはＩＬ−１５）をコードするｍＲＮＡ、＋ＲＮＡ、好ましくは、少なくとも１つのさらなるサイトカイン（好ましくはＣＤ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ。
【０４１２】
［処方および錯体形成（Complexation）］
本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、さらなるいずれの賦形剤、担体、トランスフェクション剤、錯体形成剤とも関連することなく、むき出しのままで投与されてもよい。
【０４１３】
好ましい実施形態では、本発明の組成物のＲＮＡは、トランスフェクション効率および／またはＲＮＡの免疫賦活特性を増加させるためのさらなる化合物と共に処方される。このような化合物は、ここでは賦形剤、担体、トランスフェクション剤、錯体形成剤と称される。好ましくは、ＲＮＡは、１つまたはそれよりも多いカチオン性またはポリカチオン性の化合物と共に処方され、好ましくは、カチオン性またはポリカチオン性のポリマー、カチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質、カチオン性またはポリカチオン性の多糖、カチオン性またはポリカチオン性の脂質、および／または重合体担体と共に処方される。このようなカチオン性またはポリカチオン性のポリマー、カチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質、カチオン性またはポリカチオン性の多糖、カチオン性またはポリカチオン性の脂質、および／または重合体担体は、本発明に関連する核酸の賦形剤、担体、トランスフェクション剤、錯体形成剤として有益である。したがって、本発明のさらなる実施形態では、本発明の組成物に含まれる少なくとも１つのＲＮＡまたは他の任意の核酸が、カチオン性またはポリカチオン性の化合物または重合体担体と関連し、または、それらと共に錯体化される。随意的に、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対するＲＮＡまたは核酸について、重量比率は、約６：１（ｗ／ｗ）ないし約０．２５：１（ｗ／ｗ）の範囲から、より好ましくは約５：１（ｗ／ｗ）ないし約０．５：１（ｗ／ｗ）の範囲から、さらに好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）ないし約１：１（ｗ／ｗ）の範囲から、または、約３：１（ｗ／ｗ）ないし約１：１（ｗ／ｗ）の範囲から、最も好ましくは約３：１（ｗ／ｗ）ないし約２：１（ｗ／ｗ）の範囲から、選択される。または、随意的に、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対するＲＮＡまたは核酸の窒素／リン酸塩比率において、約０．１〜１０の範囲で、好ましくは約０．３〜４または０．３〜１の範囲で、より好ましくは約０．５〜１または０．７〜１の範囲で、さらにより好ましくは約０．３〜０．９または０．５〜０．９の範囲で、選択される。
【０４１４】
上述のような少なくとも１つのＲＮＡと、カチオン性またはポリカチオン性の化合物との比率は、全てのこれらの成分における窒素／リン酸塩の比率（Ｎ／Ｐ比率）に基づいて計算されうる。本発明に関連して、Ｎ／Ｐ比率は、好ましくは、本発明のワクチンに含まれる核酸：カチオン性またはポリカチオン性のペプチドの比率に関して、約０．０１〜４、０．０１〜２、０．１〜２または０．１〜１．５の範囲であり、最も好ましくは、約０．１〜１の範囲である。このようなＮ／Ｐ比率は、好ましくは、in vivoでの良好なトランスフェクション特性を提供し、細胞膜への運搬および細胞膜を介した運搬を提供するように設計される。好ましくは、この目的のために、ここで用いられるようなカチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体は、ペプチドシーケンスに基づいている。
【０４１５】
カチオン性またはポリカチオン性の化合物は、これに関連する特に好ましい薬剤であり、プロタミン、ヌクレオリン(nucleoline)、スペルミン、スペルミジン、または他のカチオン性のペプチドまたはタンパク質を含み、例えば、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ポリ−アルギニン、塩基性ポリペプチド、細胞貫通ペプチド（ＣＰＰｓ）であり、以下のものを含む：ＨＩＶ結合ペプチド、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ（ＨＩＶ）、Ｔａｔ由来ペプチド、Penetratin、ＶＰ２２由来または類縁のペプチド、ＨＳＶ  ＶＰ２２（単純疱疹）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡまたはタンパク質または形質導入ドメイン（ＰＴＤｓ）、ＰｐＴ６２０、プロリンに富むペプチド、アルギニンに富むペプチド、リジンに富むペプチド、ＭＰＧ−ペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトニンペプチド、Antennapedia由来ペプチド（特にDrosophila antennapedia由来）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌ、ＦＧＦ、ラクトフェリン、Transportan、Buforin-2、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ由来ペプチド、ＳＡＰまたはヒストン。
【０４１６】
これに関連して、プロタミンが特に好ましい。
【０４１７】
さらに、好ましいカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質は、以下の全体式（ＶＩＩ）を有する以下のタンパク質またはペプチドから選択されうる：
（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ          （式（ＶＩＩ））
ここで、ｌ＋ｍ＋ｎ＋ｏ＋ｘ＝８−１５であり、ｌ、ｍ、ｎまたはｏは、互いと独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５から選択される任意の数であってよく、ただし、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓおよびＯｒｎの全含有量が、オリゴペプチドの全てのアミノ酸の少なくとも５０％に相当することが条件であり、また、Ｘａａは、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、ＨｉｓおよびＯｒｎ以外の、天然（＝自然界に存在する）アミノ酸または非天然アミノ酸から選択される任意のアミノ酸であってよく、また、ｘは、０、１、２、３、４から選択される任意の数であってよく、ただし、Ｘａａの全含有量が、オリゴペプチドの全てのアミノ酸の５０％を超えないとすることが条件である。これに関連して、特に好ましいカチオン性のペプチドは、例えば、Ａｒｇ７、Ａｒｇ８、Ａｒｇ９、Ｈ３Ｒ９、Ｒ９Ｈ３、Ｈ３Ｒ９Ｈ３、ＹＳＳＲ９ＳＳＹ、（ＲＫＨ）４、Ｙ（ＲＫＨ）２Ｒなどである。これに関連して、ＷＯ  ２００９／０３０４８１の開示が参考として本明細書に引用される。
【０４１８】
本発明に用いられる重合体担体は、ジスルフィド架橋されたカチオン性成分によって形成される、重合体担体であってよい。
【０４１９】
さらに特に好ましい実施形態によれば、重合体担体のカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質は、上述のような実験に基づいた式（ＶＩＩ）を有し、また、少なくとも１つの−ＳＨ部分を含むか、含むようにさらに修飾され、限定はされないが、一般式Ａｒｇ７（Ｒ７とも称する）、Ａｒｇ９（Ｒ９とも称する）、Ａｒｇ１２（Ｒ１２とも称する）からなるサブグループから選択されてもよい。
【０４２０】
さらに特に好ましい実施形態によれば、重合体担体のカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質は、上述のような式｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝（式（ＶＩＩ））に従って少なくとも１つの−ＳＨ部分を含むか、含むようにさらに修飾され、限定はされないが、副式（ＶＩＩａ）から選択されてもよい：
｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ’）ｘ（Ｃｙｓ）ｙ｝          式（ＶＩＩａ）
ここで、（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏおよびｘは、ここに規定された通りのものであり、また、Ｘａａ’は、Ａｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、ＯｒｎおよびＣｙｓ以外の、天然（＝自然界に存在する）アミノ酸または非天然アミノ酸から選択される任意のアミノ酸であってよく、また、ｙは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１−３０、３１−４０、４１−５０、５１−６０、６１−７０、７１−８０および８１−９０から選択される任意の数であってよく、ただし、Ａｒｇ（アルギニン）、Ｌｙｓ（リジン）、Ｈｉｓ（ヒスチジン）、Ｏｒｎ（オルニチン）の全含有量が、オリゴペプチドの全てのアミノ酸の少なくとも１０％に相当することが条件である。
【０４２１】
この実施形態は、重合体担体のカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質が、例えば上述のような式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式（ＶＩＩ））に従って規定されるときに、上述の意味で−ＳＨ部分のような少なくとも１つのシステインを含むか、少なくとも１つのシステインによって修飾され、それによって、カチオン性成分としてのカチオン性またはポリカチオン性のペプチドが、少なくとも１つのシステインを有し、当該システインは、重合体担体の他の成分とジスルフィド結合を形成することができる。
【０４２２】
実験に基づいた例には、以下のシーケンスのうちの任意のものが含まれ得る：
Ｃｙｓ（Ａｒｇ７）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ８）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ９）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１０）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１１）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１２）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１３）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１４）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１５）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１６）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１７）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１８）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１９）、Ｃｙｓ（Ａｒｇ２０）。
【０４２３】
別の特に好ましい実施形態によれば、重合体担体のカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質は、上述のような式｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝（式（ＶＩＩ））に従って規定されるとき、限定はされないが、副次的な式（ＶＩＩｂ）から選択されてもよい：
Ｃｙｓ１｛（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ｝Ｃｙｓ２          式（ＶＩＩｂ）
ここで、式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式（ＶＩＩ））は、ここに規定された通りのものであり、また、（準実験的な）式（Ｉ）に従ってアミノ酸シーケンスのコアを形成し、ここで、Ｃｙｓ１およびＣｙｓ２は、（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘの基部または末端のシステインである。実験的な例には、２つのＣｙｓによって挟まれた上述のシーケンス、および、以下のシーケンスのうちの任意のものが含まれ得る：
Ｃｙｓ（Ａｒｇ７）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ８）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ９）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１０）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１１）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１２）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１３）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１４）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１５）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１６）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１７）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１８）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ１９）Ｃｙｓ、Ｃｙｓ（Ａｒｇ２０）Ｃｙｓ（配列番号：  １０−２３）。
【０４２４】
この実施形態は、重合体担体のカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質が、例えば上述のような式（Ａｒｇ）ｌ；（Ｌｙｓ）ｍ；（Ｈｉｓ）ｎ；（Ｏｒｎ）ｏ；（Ｘａａ）ｘ（式（ＶＩＩ））に従って規定されたときに、上述の意味で−ＳＨ部分のような少なくとも１つのシステインで修飾され、それによって、カチオン性成分としての本発明の重合体担体カーゴ錯体のカチオン性またはポリカチオン性のペプチドが、少なくとも２つの（末端）システインを有し、当該システインは、重合体担体の他の成分とジスルフィド結合を形成することができる。
【０４２５】
好ましい実施形態では、重合体担体は、ペプチドＣｙｓＡｒｇ１２Ｃｙｓ（配列番号：  １５）またはＣｙｓＡｒｇ１２（ＣＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲＲ）によって形成され、または、これを含み、または、これから成る。
【０４２６】
別の実施形態によれば、重合体担体の少なくとも１つのカチオン性（またはポリカチオン性）の成分は、例えば、これに関連する適した任意の（非ペプチド性の）カチオン性またはポリカチオン性の重合体から選択されてもよく、ただし、この（非ペプチド性の）カチオン性またはポリカチオン性重合体は、少なくとも１つの−ＳＨ部分を提示するか、提示するように修飾されることが条件であり、当該−ＳＨ部分は、カチオン性またはポリカチオン性重合体に対して、ここに規定されたような重合体担体の他の成分とのジスルフィド結合を提供する。したがって、ここに規定されたように、重合体担体は、同一または異なるカチオン性またはポリカチオン性の重合体を含んでいてもよい。
【０４２７】
重合体担体のカチオン性成分が（非ペプチド性の）カチオン性またはポリカチオン性の重合体を含むような場合には、（非ペプチド性の）カチオン性またはポリカチオン性の重合体のカチオン特性は、カチオン性の重合体の成分の全電荷に対する、カチオン性の電荷の含有量に基づいて決定されてもよい。好ましくは、ここで規定されたような（生理学的）ｐＨでの、カチオン性の重合体におけるカチオン性の電荷の含有量は、少なくとも１０％、２０％または３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％または７０％、しかしまた、好ましくは少なくとも８０％、９０％、またはさらに９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％、最も好ましくは少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％であり、または、約１０％ないし９０％の範囲であっても、より好ましくは約３０％ないし１００％の範囲であっても、さらに好ましくは約５０％ないし１００％の範囲であっても、例えば５０、６０、７０、８０％、９０％または１００％であっても、または、上述の数値のうちの任意の２つによって形成される範囲であってもよい。ただし、カチオン性の全重合体の全電荷が（例えばここで規定されたような（生理学的）ｐＨでの正電荷および負電荷が）、１００％であることが条件である。
【０４２８】
好ましくは、重合体担体の（非ペプチド性の）カチオン性の成分は、カチオン性またはポリカチオン性の重合体に相当し、典型的には、約０．１または０．５ｋＤａないし約１００ｋＤａ、好ましくは約１ｋＤａないし約７５ｋＤａ、より好ましくは約５ｋＤａないし約５０ｋＤａ、さらにより好ましくは約５ｋＤａないし約３０ｋＤａの分子量、または、約１０ｋＤａないし約５０ｋＤａ、さらにより好ましくは約１０ｋＤａないし約３０ｋＤａの分子量を有している。さらに、（非ペプチド性の）カチオン性またはポリカチオン性の重合体は、典型的には、少なくとも１つの−ＳＨ部分を示し、当該−ＳＨ部分が、ここに規定されたような重合体担体の他のカチオン性成分または他の成分のいずれかとの縮合によって、ジスルフィド結合を形成することができる。
【０４２９】
上記に関連して、重合体担体の（非ペプチド性の）カチオン性の成分は、アクリレート、修飾されたアクリレート、例えば、ｐＤＭＡＥＭＡ（ポリ（ジメチルアミノエチル  メチルアクリレート）、キトサン、アジリジンまたは（オリゴエチレンイミンまたは修飾されたオリゴエチレンイミンを形成する）２−エチル−２−オキサゾリン、ビスアクリレートとオリゴベータアミノエステルまたはポリアミドアミンを形成するアミンとの反応によって得られる重合体、または、ポリエステル、ポリカーボネートなどの他の重合体などから選択されてもよい。これらの（非ペプチド性の）のカチオン性またはポリカチオン性の重合体の各分子は、典型的には、少なくとも１つの−ＳＨ部分を有し、当該少なくとも１つの−ＳＨ部分は、化学的な修飾によって（例えば、イモノチオラン(imonothiolan)、３−チオプロピオン酸、システイン、または、任意のさらなる（修飾された）アミノ酸などの−ＳＨ部分含有アミノ酸の導入によって）、（非ペプチド性の）のカチオン性またはポリカチオン性の重合体に導入されてもよい。このような−ＳＨ部分は、好ましくは、すでに規定した通りである。
【０４３０】
ジスルフィド架橋されたカチオン性の成分は、互いに同一であっても、異なっていてもよい。重合体担体はまた、さらなる成分を含有することもできる。本発明に用いられる重合体担体は、カチオン性のペプチド、タンパク質または重合体および随意的にここで規定されたようなさらなる成分であって、ここで述べたようなジスルフィド結合によって架橋された成分、の混合物を含むことが特に好ましい。これに関連して、ＷＯ  ２０１２／０１３３２６の開示が参考として本明細書に援用される。
【０４３１】
これに関連して、ジスルフィド架橋によって重合体担体の基礎を形成するカチオン性の成分は、典型的には、この目的に適した、任意のカチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体から選択され、特に、本発明のＲＮＡまたは核酸を錯体化することができて、それによって好ましくはＲＮＡまたは核酸を縮合する、任意のカチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体から選択される。カチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体は、好ましくは、直線状の分子であるが、しかしながら、枝分かれしたカチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体を使用してもよい。
【０４３２】
ジスルフィド架橋された重合体担体の各カチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体は、本発明の組成物のＲＮＡまたは本発明の組成物に含まれるさらなる核酸を錯体化するために用いられてもよく、これらは、ここで述べたような重合体担体のカチオン性の成分としての少なくとも１つのさらなるカチオン性またはポリカチオン性のペプチド、タンパク質または重合体との縮合によってジスルフィド結合を形成することができる、少なくとも１つの−ＳＨ部分（最も好ましくは、少なくとも１つのシステイン残基）、または、−ＳＨ部分を提示する任意のさらなる化学結合、を含むものである。
【０４３３】
上で規定したように、重合体担体は、本発明の組成物のＲＮＡまたは本発明の組成物に含まれる任意のさらなる核酸を錯体化するために用いられてもよく、当該重合体担体は、ジスルフィド架橋されたカチオン性（またはポリカチオン性）成分によって形成されてもよい。
【０４３４】
このような重合体担体と錯体化された核酸は、ここでは、「重合体担体カーゴ錯体」とも称する。
【０４３５】
これに関連して、本発明に免疫賦活性ＲＮＡが用いられる場合には、免疫賦活性ＲＮＡは、上述のような重合体担体と錯体化されることが特に好ましい。好ましくは、（例えば、式ＩＩＩ−ＶＩのうちの任意のものに従うＲＮＡシーケンスを含む）免疫賦活性ＲＮＡ、最も好ましくは、配列番号５、３９４または１００７２に従うＲＮＡシーケンスを含む免疫賦活性ＲＮＡが、式ＶＩＩ、ＶＩＩまたはＶＩＩｂに従う、ジスルフィド架橋されたペプチドを含む、または、それによって形成された重合体担体（好ましくはＣｙｓ（Ａｒｇ１２）ＣｙｓまたはＣｙｓ（Ａｒｇ１２）によって形成された重合体担体）と錯体化される。このような、特に好ましい実施形態はここでは、「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」とも称する。
【０４３６】
さらに好ましい実施形態では、本発明の組成物に含まれるＲＮＡまたは任意のさらなる核酸を錯体化するために用いられる重合体担体は、一般式（ＶＩＩＩ）に従う重合体担体から選択されうる：
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌ            式（ＶＩＩＩ）
ここで、
Ｐ１およびＰ３は、
互いに異なるまたは同一であり、直線状または枝分かれした親水性の重合体鎖を表し、Ｐ１およびＰ３の各々は、少なくとも１つの−ＳＨ部分を提示し、成分Ｐ２との、または、（ＡＡ）、（ＡＡ）ｘまたは［（ＡＡ）ｘ］ｚ（このような成分がＰ１とＰ２の間またはＰ３とＰ２の間で結合剤として用いられる場合。）との、および／または、さらなる成分（例えば（ＡＡ）、（ＡＡ）ｘ、［（ＡＡ）ｘ］ｚまたはＬ）との、縮合に基づいて、ジスルフィド結合を形成することができ、上記の直線状または枝分かれした親水性の重合体鎖は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロイロキシ）エチルホスホリルコリン、ポリ（ヒドロキシアルキル  Ｌ−アスパラギン）、ポリ（２−（メタクリロイロキシ）エチルホスホリルコリン）、ヒドロキシエチルスターチ、またはポリ（ヒドロキシアルキル  Ｌ−グルタミン）から、互いから独立して選択され、親水性の重合体鎖は、約１ｋＤａないし約１００ｋＤａ、好ましくは約２ｋＤａないし約２５ｋＤａ、またはより好ましくは約２ｋＤａないし約１０ｋＤａ、例えば、約５ｋＤａないし約２５ｋＤａ、または５ｋＤａないし約１０ｋＤａの分子量を有し、
Ｐ２は、
例えば、ジスルフィド架橋されたカチオン性の成分によって形成された重合体担体に対して上で規定されたような、カチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質であり、好ましくは、約３個ないし約１００個のアミノ酸の長さを有しており、より好ましくは、約３個ないし約５０個のアミノ酸の長さを有しており、さらにより好ましくは、約３個ないし約２５個のアミノ酸の長さを有しており、例えば、約３個ないし１０個、５個ないし１５個、１０個ないし２０個、または１５個ないし２５個のアミノ酸の長さを有しており、より好ましくは、約５個ないし約２０個のアミノ酸の長さを有しており、さらにより好ましくは、約１０個ないし約２０個のアミノ酸の長さを有しており、
または、Ｐ２は、
例えば、ジスルフィド架橋されたカチオン性の成分によって形成された重合体担体に対して上で規定されたような、カチオン性またはポリカチオン性の重合体であり、典型的には、約０．５ｋＤａないし約３０ｋＤａの分子量を有し、約１ｋＤａないし約２０ｋＤａの分子量を含み、さらにより好ましくは、約１．５ｋＤａないし約１０ｋＤａの分子量であり、または、約０．５ｋＤａないし約１００ｋＤａの分子量を有し、約１０ｋＤａないし約５０ｋＤａの分子量を含み、さらにより好ましくは、約１０ｋＤａないし約３０ｋＤａの分子量であり、
各Ｐ２は、少なくとも２つの−ＳＨ部分を提示し、さらなる成分Ｐ２または成分Ｐ１および／またはＰ３と、あるいは、さらなる成分（例えば（ＡＡ）、（ＡＡ）ｘ、［（ＡＡ）ｘ］ｚまたはＬ）と、縮合して、ジスルフィド結合を形成することができ、
−Ｓ−Ｓ−は、
（可逆的な）ジスルフィド結合（より読みやすくするためには、括弧を省略する）であり、ここで、Ｓは、好ましくは、（可逆的な）ジスルフィド結合を形成する硫黄または−ＳＨを有する部分であり、（可逆的な）ジスルフィド結合は、好ましくは、成分Ｐ１とＰ２との、Ｐ２とＰ２との、または、Ｐ２とＰ３との、または、随意的に、ここで規定されたようなさらなる成分（例えば、Ｌ、（ＡＡ）、（ＡＡ）ｘ、［（ＡＡ）ｘ］ｚなど）の、−ＳＨ部分の縮合によって形成され、−ＳＨ部分は、これらの成分の構造の一部であってもよく、または、以下に規定されるような修飾によって加えられてもよく、
Ｌは、
随意的なリガンドであり、あってもなくてもよく、ＲＧＤ、トランスフェリン、葉酸塩、シグナルペプチドまたはシグナル配列、局在化シグナルまたは局在化配列、核局在化シグナルまたは核局在化配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞貫通ペプチド、（例えばＴＡＴまたはＫＡＬＡ）、受容体のリガンド（例えばサイトカイン、ホルモン、成長因子など）、小分子（例えば、マンノースまたはガラクトースのような炭水化物または合成リガンド）、小分子アゴニスト、受容体のインヒビターまたはアンタゴニスト（例えばＲＧＤペプチド模倣性の類縁物質）、または、ここで規定されたような任意のさらなるタンパク質などから独立して選択されてもよく、
ｎは、
整数であり、典型的には、約１ないし５０の範囲から選択され、好ましくは、約１、２または３ないし３０の範囲から選択され、より好ましくは、約１、２、３、４または５ないし２５の範囲から選択され、または、約１、２、３、４または５ないし２０の範囲から選択され、または、約１、２、３、４または５ないし１５の範囲から選択され、または、約１、２、３、４または５ないし１０の範囲から選択され、または、例えば、約４ないし９、４ないし１０、３ないし２０、４ないし２０、５ないし２０または１０ないし２０の範囲、または、約３ないし１５、４ないし１５、５ないし１５または１０ないし１５の範囲、または、約６ないし１１または７ないし１０の範囲を含み、最も好ましくは、ｎは、約１、２、３、４または５ないし１０の範囲であり、より好ましくは、約１、２、３または４ないし９の範囲、約１、２、３または４ないし８の範囲、または約１、２または３ないし７の範囲である。
【０４３７】
これに関連して、ＷＯ  ２０１１／０２６６４１およびＷＯ  ２０１２／１１６８１１の開示が参考として本明細書に援用される。親水性の重合体Ｐ１およびＰ３は、典型的には、少なくとも１つの−ＳＨ部分を提示し、ここで、この少なくとも１つの−ＳＨ部分は、成分Ｐ２との、または、成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘ（以下に規定するようにこれがＰ１とＰ２の間またはＰ３とＰ２の間で結合剤として用いられる場合。）との、および、随意的に、さらなる成分（例えば（例えばもし２つ以上の−ＳＨ部分が含まれる場合）Ｌおよび／または（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘ）との、反応に基づいて、ジスルフィド結合を形成することができる。上記の一般式の中の以下の副式「Ｐ１−Ｓ−Ｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ３」は、Ｓ、Ｐ１およびＰ３のうちの任意のものがここに規定された通りである場合、典型的には、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のうちの１つの−ＳＨ部分が上記の一般式の成分Ｐ２の１つの−ＳＨ部分と縮合されて、これらの−ＳＨ部分の両方の硫黄がジスルフィド結合−Ｓ−Ｓ−を形成する。これらの−ＳＨ部分は、典型的には、例えば、内部のシステイン、または、−ＳＨ部分を有する任意のさらなる（修飾された）アミノ酸または成分を介して、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれによって提供される。したがって、−ＳＨ部分がシステインによって提供されるならば、副式「Ｐ１−Ｓ−Ｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ３」は、「Ｐ１−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ３」と書いてもよく、ここで、用語Ｃｙｓ−Ｃｙｓは、ペプチド結合を介するのではなく、ジスルフィド結合を介して、結合された２つのシステインを表す。この場合、これらの副式での用語「−Ｓ−Ｓ−」は、「−Ｓ−Ｃｙｓ」、「−Ｃｙｓ−Ｓ」または「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」と書いてもよい。これに関連して、用語「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」は、ペプチド結合を表すのではなく、ジスルフィド結合を形成する、−ＳＨ部分を介した２つのシステインの結合を表す。したがって、用語「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」は、一般には、「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−（Ｓ−Ｃｙｓ）−」と理解されてもよく、ここで、この特定の場合には、Ｓは、システインの−ＳＨ部分の硫黄を示す。同様に、用語「−Ｓ−Ｃｙｓ」および「−Ｃｙｓ−Ｓ」は、−ＳＨ含有部分とシステインとの間のジスルフィド結合を示し、これらは、「−Ｓ−（Ｓ−Ｃｙｓ）」および「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−Ｓ」と書いてもよい。あるいは、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれが、少なくとも１つのこのような−ＳＨ部分を有するように、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３が、好ましくは−ＳＨ部分を有する化合物との化学反応を介して、−ＳＨ部分によって修飾されていてもよい。このような、−ＳＨ部分を有する化合物は、例えば、（追加的な）システイン、または、−ＳＨ部分を有する任意のさらなる（修飾された）アミノ酸であってもよい。このような化合物は、−ＳＨ部分を含むか、ここで規定されたような親水性の重合体Ｐ１およびＰ３に−ＳＨ部分を導入することが可能な、任意の非アミノ化合物または部分であってもよい。このような非アミノ化合物は、化合物の化学反応または結合を介して、例えば、３−チオプ��ピオン酸またはチオイモラン(thioimolane)の結合によって、アミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、Ｍｉｃｈａｅｌ付加（例えばマレイニミド(maleinimide)部分、不飽和カルボニルなど）によって、クリック(click)化学（例えばアジドまたはアルキン）によって、アルケン／アルキンメタテシス(methatesis)（例えばアルケンまたはアルキン）によって、イミンまたはヒドロゾン(hydrozone)形成（アルデヒドまたはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、錯体形成反応（アビジン、ビオチン、Ｇプロテイン）またはＳｎタイプの置換反応を可能にする成分（例えばハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）、または、さらなる成分の結合に利用可能な他の化学部分によって、重合体担体の親水性の重合体Ｐ１およびＰ３に結合されてもよい。これに関連する特に好ましいＰＥＧ誘導体は、α−メトキシ−ω−メルカプトポリ（エチレングリコール）である。各場合において、例えばシステインの−ＳＨ部分、または、任意のさらなる（修飾された）アミノ酸または成分の−ＳＨ部分は、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３の末端または内部の任意の位置に存在していてもよい。ここに規定された通り、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれは、典型的には、好ましくは１つの末端に、少なくとも１つの−ＳＨ部分を提示するが、２つまたはそれよりも多い−ＳＨ部分を含んでいてもよく、当該−ＳＨ部分は、ここに記載したようなさらなる成分を追加的に結合させるのに用いられてもよい。なお、さらなる成分は、好ましくは、さらなる機能的なペプチドまたはタンパク質、例えば、リガンド、アミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘ、抗体、細胞貫通ペプチドまたはエンハンサーペプチド（例えばＴＡＴまたはＫＡＬＡ）などである。
【０４３８】
ここに規定された通り、リガンド（Ｌ）は、例えば、本発明の担体重合体およびその全部の「カーゴ」（本発明の組成物またはワクチン組成物のアジュバント成分および／または抗原）を特定の細胞へ方向づけるために、一般式（ＶＩＩＩ）に従う重合体担体分子に随意的に用いられてもよい。これらは、ＲＧＤ、トランスフェリン、葉酸塩、シグナルペプチドまたはシグナル配列、局在化シグナルまたは局在化配列、核局在化シグナルまたは核局在化配列（ＮＬＳ）、抗体、細胞貫通ペプチド（ＣＰＰ）、（例えばＴＡＴまたはＫＡＬＡ）、受容体のリガンド（例えばサイトカイン、ホルモン、成長因子など）、小分子（例えば、マンノースまたはガラクトースのような炭水化物または合成リガンド）、小分子アゴニスト、受容体のインヒビターまたはアンタゴニスト（例えばＲＧＤペプチド模倣性の類縁物質）、または、以下でさらに規定されたような任意の分子などから独立して選択されてもよい。特に好ましいのは細胞貫通ペプチド（ＣＰＰｓ）であり、これは、エンドソームにおけるｐＨが媒介する立体構造の変化を誘導し、リポソームの脂質層への挿入によって、エンドソームからの（核酸との錯体における）本発明の重合体担体の改良された放出をもたらす。このようないわゆるＣＰＰｓまたは運搬のためのカチオン性のペプチドは、限定されないが、プロタミン、ヌクレオリン(nucleoline)、スペルミンまたはスペルミジン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ），塩基性ポリペプチド、ポリ−アルギニン、キメラＣＰＰｓ、例えばTransportanまたはＭＰＧペプチド、ＨＩＶ−結合ペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ  （ＨＩＶ）、Ｔａｔ由来ペプチド、オリゴアルギニン、penetratin系統のメンバー、例えばPenetratin、Antennapedia由来ペプチド（特にDrosophila antennapedia由来）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌなど、抗菌薬由来ＣＰＰｓ、例えばＢｕｆｏｒｉｎ−２、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ由来ペプチド、ＳＡＰ、ＭＡＰ、ＰｐＴＧ２０、プロリンに富むペプチド、Ｌ−オリゴマー、アルギニンに富むペプチド、カルシトニンペプチド、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリ−アルギニン、ヒストン、ＶＰ２２由来または類縁のペプチド、Pestivirus Erns、ＨＳＶ、ＶＰ２２（ヘルペスシンプレックス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡまたはタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤｓ、ＰｐＴ６２０、プロリンに富むペプチド、アルギニンに富むペプチド、リジンに富むペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトニンペプチドなどを含んでもよい。これに関連して特に好ましいのは、その細胞膜上にマンノース受容体が存在する抗原提示細胞に対するリガンドとしてのマンノースである。本発明の第１の実施形態のさらに好ましい態様では、随意的なリガンドとしてのガラクトースが、ターゲットの肝細胞に対して用いられうる。このようなリガンドは、以下に規定したような可逆的なジスルフィド結合によって、または、任意の他の可能な化学結合によって、例えば、アミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、Ｍｉｃｈａｅｌ付加（例えばマレイニミド(maleinimide)部分、α、β不飽和カルボニルなど）によって、クリック(click)化学（例えばアジドまたはアルキン）に��って、アルケン／アルキンメタテシス(methatesis)（例えばアルケンまたはアルキン）によって、イミンまたはヒドロゾン(hydrozone)形成（アルデヒドまたはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、錯体形成反応（アビジン、ビオチン、Ｇプロテイン）またはＳｎタイプの置換反応を可能にする成分（例えばハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）、または、さらなる成分の結合に利用可能な他の化学部分によって、成分Ｐ１および／またはＰ３に結合されてもよい。
【０４３９】
本発明の式（ＶＩＩＩ）に関連して成分Ｐ１およびＰ３は、直線状または枝分かれした親水性の重合体鎖を表し、少なくとも１つの−ＳＨ部分を含有し、各成分Ｐ１およびＰ３は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ−２−（メタクリロイロキシ）エチルホスホリルコリン、ポリ（ヒドロキシアルキル  Ｌ−アスパラギン）、またはポリ（ヒドロキシアルキル  Ｌ−グルタミン）から、互いから独立して選択される。Ｐ１およびＰ３は、互いに異なるまたは同一である。好ましくは、Ｐ１およびＰ３のそれぞれは、約１ｋＤａないし約１００ｋＤａ、好ましくは約１ｋＤａないし約７５ｋＤａ、より好ましくは約５ｋＤａないし約５０ｋＤａ、さらにより好ましくは約５ｋＤａないし約２５ｋＤａの分子量を有する。加えて、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれは、典型的には、少なくとも１つの−ＳＨ部分を提示し、この少なくとも１つの−ＳＨ部分は、成分Ｐ２との、または、（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘ（以下に規定するようなＰ１とＰ２の間またはＰ３とＰ２の間で結合剤として用いられる場合。）との、および、随意的に、さらなる成分（例えばＬ、（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘ）（例えば２つまたはそれより多い−ＳＨ部分が含まれる場合。）との、反応に基づいて、ジスルフィド結合を形成することができる。上記の一般式（ＶＩＩ）の中の以下の副式「Ｐ１−Ｓ−Ｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ３」（より読みやすくするためには、括弧を省略する）は、Ｓ、Ｐ１およびＰ３のうちの任意のものがここに規定された通りである場合、典型的には、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のうちの１つの−ＳＨ部分が上記の一般式（ＶＩＩ）の成分Ｐ２の１つの−ＳＨ部分と縮合されて、これらの−ＳＨ部分の両方の硫黄が、式（ＶＩＩ）においてここで規定されたようなジスルフィド結合−Ｓ−Ｓ−を形成する。これらの−ＳＨ部分は、典型的には、例えば、内部のシステイン、または、−ＳＨ部分を有する任意のさらなる（修飾された）アミノ酸または成分を介して、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれによって提供される。したがって、−ＳＨ部分がシステインによって提供されるならば、副式「Ｐ１−Ｓ−Ｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｓ−Ｓ−Ｐ３」は、「Ｐ１−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ２」および「Ｐ２−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐ３」と書いてもよく、ここで、用語Ｃｙｓ−Ｃｙｓは、ペプチド結合を介するのではなく、ジスルフィド結合を介して、結合された２つのシステインを表す。この場合、これらの副式での用語「−Ｓ−Ｓ−」は、「−Ｓ−Ｃｙｓ」、「−Ｃｙｓ−Ｓ」または「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」と書いてもよい。これに関連して、用語「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」は、ペプチド結合を表すのではなく、ジスルフィド結合を形成する、−ＳＨ部分を介した２つのシステインの結合を表す。したがって、用語「−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−」は、一般には、「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−（Ｓ−Ｃｙｓ）−」と理解されてもよく、ここで、この特定の場合には、Ｓは、システインの−ＳＨ部分の硫黄を示す。同様に、用語「−Ｓ−Ｃｙｓ」および「−Ｃｙｓ−Ｓ」は、−ＳＨ含有部分とシステインとの間のジスルフィド結合を示し、これらは、「−��−（Ｓ−Ｃｙｓ）」および「−（Ｃｙｓ−Ｓ）−Ｓ」と書いてもよい。あるいは、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれが、少なくとも１つのこのような−ＳＨ部分を有するように、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３が、好ましくは−ＳＨ部分を有する化合物との化学反応を介して、−ＳＨ部分によって修飾されていてもよい。このような、−ＳＨ部分を有する化合物は、例えば、（追加的な）システイン、または、−ＳＨ部分を有する任意のさらなる（修飾された）アミノ酸であってもよい。このような化合物は、−ＳＨ部分を含むか、ここに規定されたような親水性の重合体Ｐ１およびＰ３に−ＳＨ部分を導入することが可能な、任意の非アミノ化合物または部分であってもよい。このような非アミノ化合物は、化合物の化学反応または結合を介して、例えば、３−チオプロピオン酸またはチオイモラン(thioimolane)の結合によって、アミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、Ｍｉｃｈａｅｌ付加（例えばマレイニミド(maleinimide)部分、α、β 不飽和カルボニルなど）によって、クリック(click)化学（例えばアジドまたはアルキン）によって、アルケン／アルキンメタテシス(methatesis)（例えばアルケンまたはアルキン）によって、イミンまたはヒドロゾン(hydrozone)形成（アルデヒドまたはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、錯体形成反応（アビジン、ビオチン、Ｇプロテイン）またはＳｎタイプの置換反応を可能にする成分（例えばハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）、または、さらなる成分の結合に利用可能な他の化学部分によって、本発明に係る重合体担体の式（ＶＩＩ）の親水性の重合体Ｐ１およびＰ３に結合されてもよい。これに関連する特に好ましいＰＥＧ誘導体は、α−メトキシ−ω−メルカプトポリ（エチレングリコール）である。各場合において、例えばシステインの−ＳＨ部分、または、任意のさらなる（修飾された）アミノ酸または成分の−ＳＨ部分は、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３の末端または内部の任意の位置に存在していてもよい。ここに規定された通り、親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれは、典型的には、好ましくは１つの末端に、少なくとも１つの−ＳＨ部分を提示するが、２つまたはそれよりも多い−ＳＨ部分を含んでいてもよく、当該−ＳＨ部分は、ここに記載したようなさらなる成分を追加的に結合させるために用いられてもよい。上記成分は、好ましくは、さらなる機能的なペプチドまたはタンパク質、例えば、リガンド、アミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘ、抗体、細胞貫通ペプチドまたはエンハンサーペプチド（例えばＴＡＴまたはＫＡＬＡ）などである。
【０４４０】
１つの好ましい実施形態によれば、このようなさらなる機能的なペプチドまたはタンパク質は、いわゆる細胞貫通ペプチド（ＣＰＰｓ）、または、運搬のためのカチオン性のペプチドを含んでいてもよい。特に好ましいのはＣＰＰｓであり、これは、エンドソームにおけるｐＨが媒介する立体構造の変化を誘導し、リポソームの脂質層への挿入によって、エンドソームからの（核酸との錯体における）本発明の重合体担体の改良された放出をもたらす。このようないわゆる細胞貫通ペプチド（ＣＰＰｓ）または運搬のためのカチオン性のペプチドは、限定されないが、プロタミン、ヌクレオリン(nucleoline)、スペルミンまたはスペルミジン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ），塩基性ポリペプチド、ポリ−アルギニン、キメラＣＰＰｓ、例えばTransportanまたはＭＰＧペプチド、ＨＩＶ−結合ペプチド、Ｔａｔ、ＨＩＶ−１  Ｔａｔ  （ＨＩＶ）、Ｔａｔ由来ペプチド、オリゴアルギニン、penetratin系統のメンバー、例えばPenetratin、Antennapedia由来ペプチド（特にDrosophila antennapedia由来）、ｐＡｎｔｐ、ｐＩｓｌなど、抗菌薬由来ＣＰＰｓ、例えばＢｕｆｏｒｉｎ−２、Ｂａｃ７１５−２４、ＳｙｎＢ、ＳｙｎＢ（１）、ｐＶＥＣ、ｈＣＴ由来ペプチド、ＳＡＰ、ＭＡＰ、ＰｐＴＧ２０、プロリンに富むペプチド、Ｌ−オリゴマー、アルギニンに富むペプチド、カルシトニンペプチド、ＦＧＦ、ラクトフェリン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリ−アルギニン、ヒストン、ＶＰ２２由来または類縁のペプチド、Pestivirus Erns、ＨＳＶ、ＶＰ２２（ヘルペスシンプレックス）、ＭＡＰ、ＫＡＬＡまたはタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤｓ、ＰｐＴ６２０、プロリンに富むペプチド、アルギニンに富むペプチド、リジンに富むペプチド、Ｐｅｐ−１、Ｌ−オリゴマー、カルシトニンペプチドなどを含んでもよい。
【０４４１】
本発明のさらに好ましい実施形態によれば、本発明に用いられる重合体担体の式（ＶＩＩＩ）の親水性の重合体Ｐ１およびＰ３のそれぞれは、ここに規定されたようなさらなる成分を結合させることができる少なくとも１つのさらなる機能的な部分（例えば、上で規定したようなリガンド）を含んでもよく、または、例えば、アミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、Ｍｉｃｈａｅｌ付加（例えばマレイニミド(maleinimide)部分、不飽和カルボニルなど）によって、クリック(click)化学（例えばアジドまたはアルキン）によって、アルケン／アルキンメタテシス(methatesis)（例えばアルケンまたはアルキン）によって、イミンまたはヒドロゾン(hydrozone)形成（アルデヒドまたはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、錯体形成反応（アビジン、ビオチン、Ｇプロテイン）またはＳｎタイプの置換反応を可能にする成分（例えばハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）、または、さらなる成分の結合に利用可能な他の化学部分によって、さらなる成分を結合させることができる機能性を含んでもよい。さらなる機能的な部分は、ここに規定されたようなアミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘを含んでいてもよく、ここで、（ＡＡ）は、好ましくは、上で規定したようなアミノ成分である。これに関連して、ｘは、好ましくは整数であり、約１ないし１００の範囲から、好ましくは約１ないし５０の範囲から、より好ましくは１ないし３０の範囲から、選択されてもよく、さらにより好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５ないし３０を含む数から、例えば、約１ないし３０の範囲から、約１ないし１５の範囲から、または、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５を含む数から、選択されてもよく、または、上記の数値のうちの任意の２つによって形成される範囲から選択されてもよい。最も好ましくは、ｘは１である。このようなアミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘは、上の式（ＶＩＩＩ）に従う本発明の重合体担体のすべての部分に含まれてもよく、それゆえ、式（ＶＩＩ）に従う本発明の重合体担体のすべての成分に結合されてもよい。リガンドまたは本発明の重合体担体の式（ＶＩＩＩ）内の各成分［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの部分に、アミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘが存在していることが特に好ましい。
【０４４２】
重合体担体の全体の式（ＶＩＩＩ）に関連して、好ましくは以下のように規定される：
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−［Ｃｙｓ−Ｐ２−Ｃｙｓ］ｎ−Ｓ−Ｐ３−Ｌここで、Ｌ、Ｐ１、Ｐ２およびＰ３は、ここに規定された通りであり、Ｓは硫黄であり、各Ｃｙｓはジスルフィド結合のための１つの−ＳＨ部分を提供する。
【０４４３】
特定の実施形態によれば、上で規定したような式（ＶＩＩ）に従う重合体担体は、上で規定したような少なくとも１つのアミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘを含んでいてもよい。このようなアミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘは、上の式（ＶＩＩＩ）に従う本発明の重合体担体のすべての部分に含まれていてもよく、それ故に、式（ＶＩＩＩ）に従う重合体担体の全ての成分に結合されていてもよい。リガンドまたは本発明の重合体担体の式（ＶＩＩＩ）内の各成分［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの部分に、アミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘが存在していることが特に好ましい。アミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘは、好ましくは、ジスルフィド結合を介してこの成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘを、ここに規定されたような式（ＶＩＩＩ）に従う重合体担体に導入することを可能にする、少なくとも１つの−ＳＨ含有部分を有するか、または、−ＳＨ含有部分によって（例えば末端で）挟まれている。このような−ＳＨ含有部分は、任意の−ＳＨ含有部分（または、もちろん、ジスルフィド結合のうちの１つの硫黄）であってもよく、例えばシステイン残基であってもよい。−ＳＨ含有部分がシステインのような特定の構成の場合には、アミノ酸成分（ＡＡ）ｘは、−Ｃｙｓ−（ＡＡ）ｘ−または−Ｃｙｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｃｙｓ−と読まれてもよく、ここで、Ｃｙｓは、システインを表し、ジスルフィド結合のために必要な−ＳＨ部分を提供する。−ＳＨ含有部分は、成分Ｐ１、Ｐ２またはＰ３に対して上で示したような修飾または反応のうちの任意のものを用いて、アミノ酸成分（ＡＡ）ｘに導入されてもよい。式（ＶＩＩＩ）に従う重合体担体の２つの成分にアミノ酸成分（ＡＡ）ｘが結合されているような特定の構成の場合には、（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘは、少なくとも２つの−ＳＨ部分（例えば少なくとも２つのシステイン）を、好ましくはその末端に含有することが好ましい。これは、（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘが各成分［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎの一部である場合に特に好ましい。あるいは、任意の可能な化学的付加反応によって、アミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘは、ここに規定したような式（ＶＩＩＩ）に従って重合体担体に導入される。それ故、アミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘは、少なくとも１つのさらなる機能的な部分であって、ここに規定されたようなさらなる成分（例えば、成分Ｐ１またはＰ３、Ｐ２、Ｌ、またはさらなるアミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘなど）を結合させることができる部分、を含む。このような機能的な部分は、さらなる成分の結合を可能にする機能性、例えばここで規定したような機能性、例えば、アミド形成（例えばカルボン酸、スルホン酸、アミンなど）によって、Ｍｉｃｈａｅｌ付加（例えばマレイニミド(maleinimide)部分、α、β 不飽和カルボニルなど）によって、クリック(click)化学（例えばアジドまたはアルキン）によって、アルケン／アルキンメタテシス(methatesis)（例えばアルケンまたはアルキン）によって、イミンまたはヒドロゾン(hydrozone)形成（アルデヒドまたはケトン、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、アミン）、錯体形成反応（アビジン、ビオチン、Ｇプロテイン）またはＳｎタイプの置換反応を可能にする成分（例えばハロゲンアルカン、チオール、アルコール、アミン、ヒドラジン、ヒドラジド、スルホン酸エステル、オキシホスホニウム塩）、または、さらなる成分の結合に利用可能な他の化学部分から選択されてもよい。
【０４４４】
式（ＶＩＩＩ）の重合体担体中のアミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘは、混合された各アミノ酸成分［（ＡＡ）ｘ］ｚとして存在してもよく、アミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘの数は、整数ｚによってさらに規定される。これに関連して、ｚは、約１ないし３０の範囲から選択されてもよく、好ましくは約１ないし１５の範囲から、より好ましくは１ないし１０または１から５、および、さらにより好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５から選択される数から選択され、または、上記の数値のうちの任意の２つによって形成される範囲から選択されてもよい。
【０４４５】
特定かつ特に好ましい実施形態によれば、好ましくはＳ−（ＡＡ）ｘ−Ｓまたは［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］と書かれるアミノ酸成分（ＡＡ）または（ＡＡ）ｘは、成分Ｐ２を（特に、上の式（ＶＩＩＩ）の重合体担体の各成分［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ｎにおける成分Ｓ−Ｐ２−Ｓの含有量を）修飾するために用いられてもよい。これは、式（ＶＩＩＩ）に従う全部の重合体担体の含有量において、例えば以下の式（ＶＩＩＩａ）によって表されてもよい：
Ｌ−Ｐ１−Ｓ−｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝−Ｓ−Ｐ３−Ｌ
ここで、ｘ、Ｓ、Ｌ、ＡＡ、Ｐ１、Ｐ２およびＰ３は、好ましくは、ここに規定された通りである。上の式（ＶＩＩＩａ）では、単一の成分［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］および［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］のうちの任意のものが、副式｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝内にて任意の順序で生じてもよい。副式｛［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］ａ［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］ｂ｝中の単一の成分［Ｓ−Ｐ２−Ｓ］および［Ｓ−（ＡＡ）ｘ−Ｓ］の数は、整数ａおよびｂによって決定され、ａ＋ｂ＝ｎである。ｎは整数であり、式（ＶＩＩＩ）に対して上のように規定される。
【０４４６】
ａは整数であり、典型的には、ｂから独立して、約１ないし５０の範囲から選択されてもよく、好ましくは約１、２または３ないし３０の範囲から選択されてもよく、より好ましくは、約１、２、３、４または５ないし２５の範囲、または、約１、２、３、４または５ないし２０の範囲、または、約１、２、３、４または５ないし１５の範囲、または、約１、２、３、４または５ないし１０の範囲から選択されてもよく、これは、例えば、約３ないし２０、４ないし２０、５ないし２０または１０ないし２０の範囲、または、約３ないし１５、４ないし１５、５ないし１５または１０ないし１５の範囲、または、約６ないし１１または７ないし１０の範囲を含む。ａは、最も好ましくは、約１、２、３、４または５ないし１０の範囲であり、より好ましくは、約１、２、３または４ないし９の範囲、より好ましくは、約１、２、３または４ないし８の範囲、または、より好ましくは、約１、２または３ないし７の範囲である。
【０４４７】
ｂは整数であり、典型的には、ａから独立して、約０ないし５０または１ないし５０の範囲から選択されてもよく、好ましくは約０、１、２または３ないし３０の範囲から選択されてもよく、より好ましくは、約０、１、２、３、４または５ないし２５の範囲、または、約０、１、２、３、４または５ないし２０の範囲、または、約０、１、２、３、４または５ないし１５の範囲、または、約０、１、２、３、４または５ないし１０の範囲から選択されてもよく、これは、例えば、約３ないし２０、４ないし２０、５ないし２０または１０ないし２０の範囲、または、約３ないし１５、４ないし１５、５ないし１５または１０ないし１５の範囲、または、約６ないし１１または７ないし１０の範囲を含む。ｂは、最も好ましくは、約１、２、３、４または５ないし１０の範囲であり、より好ましくは、約１、２、３または４ないし９の範囲、より好ましくは、約１、２、３または４ないし８の範囲、または、より好ましくは、約１、２または３ないし７の範囲である。
【０４４８】
これに関連して、本発明の組成物のＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体によって（好ましくはカチオン性のペプチドまたはタンパク質でによって）、少なくとも部分的に錯体化される。これに関連して、ＷＯ  ２０１０／０３７５３９およびＷＯ  ２０１２／１１３５１３の開示が参考として本明細書に援用される。「部分的に」とは、ＲＮＡのわずか一部が、カチオン性の化合物によって錯体化され、ＲＮＡの残りが、非錯体化形式（「フリー」）である（本発明の組成物中に含まれる）ことを意味する。好ましくは、（本発明の組成物中での）「錯体化されたＲＮＡ」対「フリーのＲＮＡ」の比率は、約５：１（ｗ／ｗ）ないし約１：１０（ｗ／ｗ）の範囲、より好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）ないし約１：８（ｗ／ｗ）の範囲、さらにより好ましくは約３：１（ｗ／ｗ）ないし約１：５（ｗ／ｗ）または１：３（ｗ／ｗ）の範囲から選択され、最も好ましくは、本発明の組成物中での「錯体化されたＲＮＡ」対「フリーのＲＮＡ」の比率は、約１：１（ｗ／ｗ）の比率から選択される。
【０４４９】
いわゆる「（アジュバント）成分」は、本発明の組成物のＲＮＡ（好ましくはｍＲＮＡ）と共に用いられてもよく、好ましくは、（アジュバント）成分の少なくとも１つの（ｍ）ＲＮＡを、安定な錯体を形成するための特定の比率で、好ましくはここで規定したような、カチオン性またはポリカチオン性の化合物と、および／または、重合体担体と、錯体化することによる第１ステップに従って調製される。これに関連して、（ｍ）ＲＮＡを錯体化した後に、（アジュバント）成分中に、フリーのカチオン性またはポリカチオン性の化合物も重合体担体も無いこと、または、無視できるほどに少量のそれらが残っているだけであること、が非常に好ましい。したがって、（アジュバント）成分中の（ｍ）ＲＮＡと、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体との比率は、典型的には、（ｍ）ＲＮＡが、全体的に錯体化されて、組成物中にはフリーのカチオン性またはポリカチオン性の化合物も重合体担体も無い、または、無視できるほどに少量のそれらが残っているだけである、ような範囲で選択される。好ましくは、（アジュバント）成分の比率、すなわち、好ましくはここで規定したような、（ｍ）ＲＮＡの、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対する比率は、約６：１（ｗ／ｗ）ないし約０，２５：１（ｗ／ｗ）の範囲、より好ましくは約５：１（ｗ／ｗ）ないし約０，５：１（ｗ／ｗ）から、さらにより好ましくは約４：１（ｗ／ｗ）ないし約１：１（ｗ／ｗ）または約３：１（ｗ／ｗ）ないし約１：１（ｗ／ｗ）、および、最も好ましくは約３：１（ｗ／ｗ）ないし約２：１（ｗ／ｗ）の範囲から選択される。あるいは、（アジュバント）成分中の、好ましくはここで規定したような、（ｍ）ＲＮＡの、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対する比率は、全部の錯体の窒素／リン酸塩（Ｎ／Ｐ比率）に基づいて計算されてもよい。好ましくは、錯体中のカチオン性またはポリカチオン性の化合物が、ここに規定したようなカチオン性またはポリカチオン性のペプチドまたはタンパク質および／または重合体担体である場合は、本発明に関連して、Ｎ／Ｐ比率は、好ましくは約０．１ないし１０の範囲であり、好ましくは約０．３ないし４の範囲であり、最も好ましくは約０．５ないし２または０．７ないし２の範囲であり、錯体中の、好ましくはここに規定したような、ＲＮＡの、カチオン性またはポリカチオン性の化合物および／または重合体担体に対する比率は、最も好ましくは約０．７ないし１．５の範囲である。このような比率（特に、重量比率および／またはＮ／Ｐ比率）は、ここに規定したような少なくとも１つのＲＮＡと、少なくとも１つのＲＮＡを錯体化するのに用いられるここに規定したようなカチオン性またはポリカチオン性の重合体または重合体担体と、の比率にも適用されてもよい。
【０４５０】
これに関連して、Ｎ／Ｐ比率は、カチオン性またはポリカチオン性の化合物のカチオン性（側鎖）成分のイオン電荷の尺度である。特に、カチオン性の化合物のカチオン特性が（例えばアミノ酸側鎖の）窒素によって生成される場合に、カチオン性の化合物中の（側鎖の）窒素原子が正電荷に寄与し、核酸のリン酸塩主鎖のリン酸塩が負電荷に寄与することを考慮すると、Ｎ／Ｐ比率は、ヌクレオチド主鎖のリン酸塩残基に対する塩基性窒素原子の比率を示している。Ｎ／Ｐ比率は、核酸、および、カチオン性またはポリカチオン性の化合物の錯体全体の窒素／リン酸塩比率（Ｎ／Ｐ比率）として規定される。これは、典型的には、カチオン性の化合物の含有量／量に対して例証となり、結合されたまたは錯体化された核酸の含有量／量に対して特有である。これは、ＲＮＡが統計的な塩基分布を示している場合には、例えば、１μｇのＲＮＡが典型的には約３ｎｍｏｌのリン酸塩残基を含んでいるという根拠に基づいて計算されてもよい。加えて、１ｎｍｏｌのペプチドは、典型的には、その（カチオン性）アミノ酸の分子量と数とに依存して、約ｘ  ｎｍｏｌの窒素残基を含んでいる。
【０４５１】
特に好ましい実施形態によれば、本発明の組成物は、重合体担体カーゴ錯体を含んでおり、これは、
好ましくは薬品としての使用のために、より好ましくは免疫賦活剤またはアジュバントとしての使用のために、好ましくは癌または腫瘍疾患の治療のために、
（ａ）担体として、好ましくは上で規定されたような、より好ましくは式ＶＩＩ、ＶＩＩａ、ＶＩＩｂまたはＶＩＩに従う、ジスルフィド架橋されたカチオン性化合物によって形成された重合体担体、および、
（ｂ）カーゴとして、少なくとも１つの核酸分子、好ましくは免疫賦活性ＲＮＡ、最も好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従うＲＮＡ配列を含むＲＮＡ、
を含むまたはそれから成っており、
ここで、重合体担体カーゴ錯体は、好ましくは腫瘍内に投与される。
【０４５２】
好ましい実施形態によれば、本発明のＲＮＡ含有組成物は、重合体担体カーゴ錯体を含んでおり、これは、
免疫賦活剤またはアジュバントとしての使用のために、
（ａ）担体として、好ましくは上で規定されたような、より好ましくは式ＶＩＩ、ＶＩＩａ、ＶＩＩｂまたはＶＩＩに従う、ジスルフィド架橋されたカチオン性化合物によって形成された重合体担体、および、
（ａ）（ｂ）カーゴとして、少なくとも１つの第１の核酸分子、好ましくは免疫賦活性ＲＮＡ、最も好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従うＲＮＡシーケンスを含むＲＮＡ、
および、少なくとも１つの第２の核酸分子、好ましくはＲＮＡ、より好ましくは、少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードするｍＲＮＡ、最も好ましくは、ＲＮＡをコーディングするための上述したようなもの、を含んでおり、
ここで、本発明の組成物は、好ましくは腫瘍内に投与される。
【０４５３】
好ましい実施形態によれば、本発明は、重合体担体カーゴ錯体に関し、これは、
免疫賦活剤またはアジュバントとしての使用のために、
（ａ）担体として、好ましくは上で規定されたような、より好ましくは式ＶＩＩ、ＶＩＩａ、ＶＩＩｂまたはＶＩＩに従う、ジスルフィド架橋されたカチオン性化合物によって形成された重合体担体、および、
（ａ）（ｂ）カーゴとして、少なくとも１つの第１の核酸分子、好ましくは免疫賦活性ＲＮＡ、最も好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従うＲＮＡシーケンスを含むＲＮＡ、
を含んでおり、
ここで、この重合体担体カーゴ錯体は、少なくとも１つの第２の核酸分子、好ましくはＲＮＡ、より好ましくは、少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードするｍＲＮＡ、最も好ましくは、ＲＮＡをコーディングするための上述したようなもの、と組み合わせて投与され、
ここで、カーゴ錯体および第２の核酸分子は、好ましくは腫瘍内に投与される。
【０４５４】
少なくとも１つの第１の核酸分子（好ましくは免疫賦活性ＲＮＡ）と、少なくとも１つの第２の核酸分子（好ましくはＲＮＡ、より好ましくは、少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードするｍＲＮＡ）との、このような好ましい組み合わせは、「コーディングＲＮＡおよびノンコーディングＲＮＡ」に関連して上述されている。
【０４５５】
ここで用いられるような「第１の核酸分子」は、核酸分子であって、重合体担体カーゴ錯体内のカーゴとして用いられ、また、それゆえ重合体担体と関連している核酸分子を、参照する。ここで用いられるような「第２の核酸分子」は、典型的には、核酸であって、重合体担体カーゴ錯体の一部ではなく、また、少なくとも１つのペプチドまたはタンパク質をコードする核酸を、参照する。
【０４５６】
本発明に関連して免疫賦活剤またはアジュバントは、好ましくは自然免疫反応を誘導するために（特に、抗ウイルスサイトカインであるＩＦＮ−α誘導するために）、有効である化合物として理解される。
【０４５７】
アジュバントまたは免疫賦活剤は、通常、自然免疫反応を誘導する能力によって作用する。自然免疫システムは、ほとんどの生物体で宿主防御(host defense)の主要なシステムを形成しており、また、例えば炎症を含む体液バリアおよび化学バリアなどのバリア、補体システム、および細胞バリアを含んでいる。自然免疫システムは、典型的には、パターン認識受容体と呼ばれる少数の受容体に基づいている。それらは、宿主の細胞から、ウイルス、細菌、真菌および寄生虫のような、他の生物体を識別する、保存された分子パターンを認識する。このような、病原体と関連したパターン（ＰＡＭＰ）は、ウイルスの核酸、細菌のおよび真菌の壁の成分、鞭毛タンパク質、などを含んでいる。詳細に研究されているパターン認識受容体（ＰＡＭＰ受容体）の第１の系統は、ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）系統である。ＴＬＲは、細胞外液環境のリガンドまたはエンドソームのリガンドを認識する膜貫通型のタンパク質である。ＴＬＲは、リガンドへの結合に続き、細胞質アダプタータンパク質を介して、宿主防御反応のトリガーと、抗菌ペプチド、炎症誘発性ケモカインおよびサイトカイン、抗ウイルスサイトカインなどの必要な生成と、をもたらす信号を生成する（例えば、Meylan, E., J. Tschopp, et al. (2006), Nature 442(7098): 39-44参照）。免疫システムのさらなる関連成分は、例えば、エンドソームＴＬＲ、細胞質受容体、タイプＩのインターフェロン、および細胞質受容体を含む。それゆえ、免疫賦活剤またはアジュバントは、ここでは、好ましくは、パターン認識受容体（ＰＡＭＰ受容体）を活性化する、自然免疫反応の誘導剤と規定される。それによって、信号のカスケードが誘発され、これは、例えば、自然免疫反応を支援するサイトカイン（例えばＩＦＮ−α）の放出を起こし得る。したがって、好ましくは、このような受容体と結合してこのようなＰＡＭＰ受容体を活性化することは、免疫賦活剤またはアジュバントの特徴である。理想的には、このような薬剤またはアジュバントは、例えば、好ましいＴｈ細胞クラスが活性化されるような免疫反応をシフトすることによって、適応できる免疫反応をさらに支援する。治療される疾患または障害に依存して、Ｔｈ１ベースの免疫反応へのシフトが好ましくてもよく、または、他の場合には、Ｔｈ２ベースの免疫反応へのシフトが好ましくてもよい。さらに、アジュバントは、通常、抗原の固有の免疫原性を増加および／または調節することができる化合物として規定される。
【０４５８】
用語「免疫賦活剤」は、典型的には、適応できる／細胞傷害性の免疫反応を誘発する、例えば「体液」または「細胞」免疫反応を誘発する、言い換えれば、免疫所管細胞によって他のものと認識された抗原の構造的特性への特異的反応によって特徴づけられる免疫反応を誘発する（そしてそれ自身で免疫を与える）、例えば抗原（どんな化学構造であっても）としての、薬剤を含まないと理解される。むしろ、「免疫賦活剤」は、典型的には、適応できる免疫反応をそれ自身でトリガーするのではなく、非特異的方法で（例えば「ＰＡＭＰ」受容体を活性化してそれによって実際の適応できる免疫反応を支援するサイトカインの放出をトリガーすることによって）、このような適応できる免疫反応をもっぱら促進しうる、薬剤／化合物／錯体を意味すると理解される。したがって、適応できる免疫反応をそれ自身で呼び起こす（直接または間接にそれ自身で免疫を与える）薬剤（例えば抗原）による免疫刺激は、典型的には、「免疫賦活剤」との表現によって放棄される。
【０４５９】
用語「アジュバント」も、それ自身で免疫を与える薬剤を含まないと理解される。したがって、アジュバントは、それ自身で免疫を与えるのではなく、例えば免疫システムへの抗原の提示を促進することによって、抗原特異的免疫反応を促進するための種々の方法で免疫システムを支援する。それによって、アジュバントは、好ましくは、例えば主要なＴｈ２ベースの抗原特異的反応を、より多くのＴｈ１ベースの抗原特異的反応へシフトすることによって、または、その逆へシフトすることによって、抗原特異的反応を調節してもよい。したがって、本発明に関連する用語「免疫賦活剤」および「アジュバント」は、典型的には、それ自身で免疫を与えるのではなく、非特異的な手段（例えば、サイトカイン発現／分泌、改良された抗原提示、免疫反応のアーム(arms)の性質のシフトなど）によって、抗原特異的（適応できる細胞のおよび／または体液の）免疫反応を調節する効果によって、（抗原提示免疫反応と対比して）非特異的方法で免疫反応をもっぱら支援する薬剤／化合物／錯体を意味すると理解される。したがって、それ自身で免疫を呼び起こす任意の薬剤は、典型的には、「アジュバント」または「免疫賦活剤」との用語によって放棄される。
【０４６０】
随意的に第２の核酸分子（好ましくはＲＮＡ）と組み合わせた重合体担体カーゴ錯体の使用によって、より有効および／またはより安全な薬品を提供することができる。有利には、重合体担体カーゴ錯体は、核酸のin vivoでの運搬に適しており、特に、核酸のトランスフェクションの目的のための核酸を圧縮および安定化することに適しており、これは、例えば、上述のような高分子量の重合体の、１つまたはそれよりも多い、減少された否定的な副作用であり、例えば、低い生分解性または高い毒性、凝集、in vivoでの低いトランスフェクション活性、などである。重合体担体カーゴ錯体はまた、血清の安定性、塩の安定性、摂取効率、減少した補体活性化、核酸放出などを含めて、特に腫瘍内の経路を介して、in vivoでの改良された核酸運搬を提供する。このような重合体担体カーゴ錯体は、さらに、平行して自然免疫反応を開始または促進することによって、適応できる免疫反応の誘導および維持を支持してもよい。特に、重合体担体カーゴ錯体が、ペプチドまたはタンパク質をコードする第２の核酸分子（好ましくはＲＮＡ）と組み合わせて投与された場合に、または、重合体担体カーゴ錯体が、ペプチドまたはタンパク質（好ましくは抗原性のペプチドまたはたんぱく質をコードする第２の核酸分子（好ましくはＲＮＡ）を有する薬学的組成物中で混合処方された場合に、改良された適応できる免疫反応をさらに得ることができることが分かった。これに関して、腫瘍内の経路を介して、ここで規定したような第２の核酸分子と随意的に組み合わせて、重合体担体カーゴ錯体を含む本発明の組成物を投与することが特に有益であることが分かった。さらに、重合体担体カーゴ錯体は、特に、凍結乾燥の間の改良された貯蔵安定性を示しうる。
【０４６１】
特定の実施形態において、上で規定されたような重合体担体カーゴ錯体は、ペプチドまたはタンパク質に対する免疫反応を促進し、ペプチドまたはタンパク質は、第２の核酸分子（好ましくはＲＮＡ、より好ましくはｍＲＮＡ）によってコードされ、これは、好ましくは腫瘍内の投与経路を介して、重合体担体カーゴ錯体を組み合わせて投与される。
【０４６２】
重合体担体カーゴ錯体、および／または、ペプチドまたはタンパク質をコードする第２の核酸分子は、好ましくは、薬学的に許容可能な担体および／または賦形剤と一緒に提供される。本発明に関連して、薬学的に許容可能な担体は、典型的には、液体または非液体の物質を含んでおり、これは、重合体担体カーゴ錯体および／または第２の核酸分子と混合される。もし重合体担体カーゴ錯体および／または第２の核酸分子が液体形式で提供されれば、担体は、典型的には、発熱物質のない水、生理食塩液または緩衝化された水溶液であり、例えば、リン酸塩、クエン酸塩など、の緩衝化された溶液である。液体基剤としては、リンガー液またはリンガー乳酸塩溶液が特に好ましい。
【０４６３】
ここで用いられるような「組み合わせて投与する」との表現は、重合体担体カーゴ錯体が被験者に投与されるのが、ペプチドまたはタンパク質をコードする第２の核酸分子を同じ被験者に投与する前、同時または後であるような状況を指す。好ましくは、重合体担体カーゴ錯体と、ペプチドまたはタンパク質をコードする少なくとも１つの第２の核酸分子（好ましくはＲＮＡ）との投与の時間間隔は、約４８時間未満、より好ましくは約２４時間未満、１２時間、６時間、４時間、２時間、１時間、最も好ましくは約３０分未満、１５分または５分である。特に好ましい実施形態では、「組み合わせて投与する」との表現は、重合体担体カーゴ錯体と、少なくとも１つの第２の核酸分子と、の同時投与を指し、すなわち、両方の成分の同時投与、または、典型的には５分未満の時間フレーム内の両方の成分の投与を指す。「組み合わせて投与する」との表現は、重合体担体カーゴ錯体が少なくとも１つの第２の核酸分子と物理的に接触している、または、第２の核酸分子と一緒に処方されるような状況だけを指すわけではない。ここで用いられるような「組み合わせて投与する」との表現は、また、２つの投与の時間間隔が上述の間隔を超えない限り、重合体担体カーゴ錯体と第２の核酸分子との別々の投与（例えば２つの別々の注射）を含む。あるいは、重合体担体カーゴ錯体と第２の核酸分子とは、投与の前に重合体担体カーゴ錯体と第２の核酸分子とを混合してから被験者に混合物を投与することによって、組み合わせて投与されてもよい。重合体担体カーゴ錯体は、第２の核酸分子と一緒に処方される場合、または、ここで規定したような組成物が用いられる場合、重合体担体カーゴ錯体と第２の核酸分子とは、さらに、互いから独立して、個々で述べたような投与経路のうちの任意のものを介して、組み合わせて投与されてもよい。
【０４６４】
重合体担体カーゴ錯体は、カーゴとして、少なくとも１つの核酸分子を含む。本発明に関連して、このような核酸分子は、任意の適した核酸であってよく、例えば任意の（一本鎖または二本鎖）ＤＮＡ、好ましくは、それに限定されないが、例えばゲノム、一本鎖ＤＮＡ分子、二本鎖ＤＮＡ分子、コーディングＤＮＡ、ＤＮＡプライマー、ＤＮＡプローブ、免疫刺激性ＤＮＡ／免疫賦活性ＤＮＡ、（短い）ＤＮＡオリゴヌクレオチド（（短い）オリゴデオキシリボヌクレオチド）、ウイルスＤＮＡから選択され、または、例えば任意のＰＮＡ（ペプチド核酸）から選択され、または、例えば、任意の（一本鎖または二本鎖）ＤＮＡ、好ましくは、それに限定されないが（短い）ＲＮＡオリゴヌクレオチド（（短い）オリゴリボヌクレオチド）、コーディングＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ウイルスＲＮＡ、レプリコン、免疫刺激ＲＮＡ／免疫賦活性ＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、ヘアピン低分子（ｓｈ）ＲＮＡまたはリボスイッチ(riboswitches)、リボゾームまたはアプタマーなどから選択される。重合体担体カーゴ錯体の核酸分子は、また、リボゾームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）であってもよい。好ましくは、重合体担体カーゴ錯体の核酸分子は、ＲＮＡである。より好ましくは、重合体担体カーゴ錯体の核酸分子は、（直線状の）一本鎖ＲＮＡであり、さらにより好ましくは、ｍＲＮＡまたは免疫刺激ＲＮＡ／免疫賦活性ＲＮＡである。
【０４６５】
さらに、重合体担体カーゴ錯体の核酸は、一本鎖または二本鎖の核酸分子、または、部分的に二本鎖または部分的に一本鎖の核酸分子であり、これらは、少なくとも部分的に自己相補的であり、これらの部分的に二本鎖または部分的に一本鎖の核酸分子は、典型的には、より長いおよびより短い一本鎖の核酸分子によってまたは２つの二本鎖核酸分子によって形成され、これらは、長さがほぼ等しく、ここで、１つの一本鎖の核酸分子は、部分的に、他の一本鎖の核酸分子と相補的であり、それゆえ、両方が、この領域で、二本鎖の核酸分子、すなわち、部分的に二本鎖または部分的に一本鎖の核酸分子、を形成する。好ましくは、核酸分子は、一本鎖の核酸分子であってよい。さらに、核酸分子は、環状または直線状の核酸分子であってよく、好ましくは直線状の核酸分子であってよい。
【０４６６】
１つの実施形態によれば、本発明の重合体担体カーゴ錯体の核酸分子は、コーディング核酸（例えばＤＮＡまたはＲＮＡ）であってもよい。さらに、重合体担体カーゴ錯体は、ペプチドまたはタンパク質をコードする少なくとも１つの第２の核酸分子と組み合わせて投与されてもよい。
【０４６７】
１つの実施形態によれば、少なくとも１つの第１の核酸分子と、少なくとも１つの第２の核酸分子とは、いずれも、コーディング核酸分子である。好ましくは、少なくとも１つの第１の核酸分子と、少なくとも１つの第２の核酸分子とは、それぞれ、異なるペプチドまたはタンパク質をコードする。１つの実施形態において、第１の核酸分子は、第２の核酸分子の配列とは異なる配列を持ち、第１の核酸分子は、重合体担体カーゴ錯体と組み合わせて投与される。あるいは、第１の核酸分子と第２の核酸分子とは、同じ配列を含んでいても、同一であってもよい。
【０４６８】
少なくとも１つの第１の核酸分子および／または第２の核酸分子の場合には、このようなコーディングＤＮＡまたはＲＮＡは、ここに規定したような任意のＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい。好ましくは、このようなコーディングＤＮＡまたはＲＮＡは、一本鎖または二本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、より好ましくは、一本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、および／または、環状または直線状のＤＮＡまたはＲＮＡであってもよく、より好ましくは、直線状のＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい。さらに、このようなコーディングＤＮＡまたはＲＮＡは、ゲノムＤＮＡ、ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡ、レプリコン、プラスミドＤＮＡまたはｍＲＮＡであってもよい。さらにより好ましくは、コーディングＤＮＡまたはＲＮＡは、（直線状の）一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい。最も好ましくは、本発明による核酸分子は、直線状の一本鎖メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であってもよい。このようなｍＲＮＡは、モノ−、ジ−またはさらには多重のシストロンＲＮＡ、すなわち、１つ、２つまたはそれより多いペプチドまたはタンパク質のコーディング配列を有するＲＮＡであってもよい。このようなジ−または多重のシストロンｍＲＮＡのコーディング配列は、例えば、ここに規定したような少なくとも１つのＩＲＥＳ配列によって分離されていてもよい。
【０４６９】
好ましい実施形態では、少なくとも１つの第２の核酸分子は、ここに規定したような、好ましくは「コーディングＲＮＡ」に関連して記載されたような、治療的に活性なタンパク質または抗原をコードする。特に好ましい実施形態では、少なくとも１つの第２の核酸分子は、重合体担体カーゴ錯体と組み合わせて投与されて、ペプチドまたはタンパク質をコードし、これは、投与後に（特に腫瘍内投与後に）宿主に対し、免疫反応（好ましくは適応できる免疫反応）を誘発することができる。あるいは、少なくとも１つの第２の核酸分子は、少なくとも１つの治療的に活性なペプチドまたはタンパク質をコードし、これは、好ましくは、サイトカイン、ケモカイン、自殺遺伝子産物、免疫原性のペプチドまたはタンパク質、アポトーシス誘導因子、血管新生阻害因子、ヒートショックタンパク質、腫瘍抗原、β−カテニン阻害因子、ＳＴＩＮＧ経路の活性化因子、チェックポイント調節因子、自然免疫活性化因子、抗体、ドミナント・ネガティブ受容体およびデコイ受容体、脊髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子、ＩＤＯ経路阻害因子、および、アポトーシスの阻害因子に結合する少なくとも１つのタンパク質またはペプチドからなるグループから選択される。
【０４７０】
特定の実施形態では、ここに規定したような重合体担体カーゴ錯体の第１の核酸分子、および／または、重合体担体カーゴ錯体と組み合わせて投与される第２の核酸分子は、主鎖修飾、糖修飾または塩基修飾を含んでいてもよい。本発明に関連する主鎖修飾は、本発明の重合体担体カーゴ錯体の核酸分子に含まれるヌクレオチドの主鎖のリン酸塩が化学的に修飾されるような修飾である。本発明に関連する糖修飾は、本発明の重合体担体カーゴ錯体の第１の核酸分子の、および／または、重合体担体カーゴ錯体と組み合わせて投与される第２の核酸分子の、ヌクレオチドの糖の化学的修飾である。さらに、本発明に関連する塩基修飾は、本発明の重合体担体カーゴ錯体の第１の核酸分子の、および／または、重合体担体カーゴ錯体と組み合わせて投与される第２の核酸分子の、ヌクレオチドの塩基部分の化学的修飾である。このような修飾は、「ＲＮＡ修飾」に関連して上で述べられている。
【０４７１】
さらなる実施形態によれば、ここに規定したような重合体担体カーゴ錯体の第１の核酸分子、および／または、重合体担体カーゴ錯体と組み合わせて投与される第２の核酸分子は、脂質修飾を含むことができる。このような脂質修飾された核酸は、典型的には、ここに規定したような核酸を含んでいる。重合体担体カーゴ錯体のこのような脂質修飾された第１の核酸分子、または、重合体担体カーゴ錯体と組み合わせて投与される脂質修飾された第２の核酸分子は、典型的には、さらに、その核酸分子と共有結合した少なくとも１つの結合剤と、その各結合剤と共有結合した少なくとも１つの脂質と、を含む。あるいは、脂質修飾された核酸分子は、ここに規定したような少なくとも１つの核酸分子と、その核酸分子と（結合剤なしで）共有結合した少なくとも１つの（二官能性の）脂質と、を含む。３番目の実施形態によれば、脂質修飾された核酸分子は、ここで規定したような核酸分子と、（ｉ）その核酸分子と共有結合した少なくとも１つの結合剤、および、その各結合剤と共有結合した少なくとも１つの脂質、または、（ｉｉ）その核酸分子と（結合剤なしで）共有結合した少なくとも１つの（二官能性の）脂質と、を含む。
【０４７２】
さらに好ましい実施形態によれば、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、１つまたはそれよりも多い、リポソーム、リポプレックス(lipoplexes)または脂質ナノ粒子を形成する脂質と錯体化される。それゆえ、１つの実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１つのＲＮＡを含む、リポソーム、リポプレックス、および／またはナノ粒子を含む。
【０４７３】
脂質ベースの処方は、その生体適合性と、大規模製造の容易さとから、ＲＮＡのための最も有望な運搬システムの一つとして認識されている。カチオン性の脂質は、ＲＮＡの運搬のための合成物質として広く研究されている。一緒に混合した後、核酸は、カチオン性の脂質によって縮合されて、リポプレックスとして知られている脂質／核酸錯体を形成する。これらの錯体は、ヌクレアーゼの作用から遺伝物質を保護することができ、また、遺伝物質を、負に帯電した細胞膜との相互作用によって細胞に運搬することができる。リポプレックスは、正に帯電した脂質を、生理学的なｐＨで、負に帯電した脂質と直接混合することによって、調製できる。
【０４７４】
従来のリポソームは、水性のコアを囲むカチオン性、アニオン性、または中性の（リン）脂質とコレステロールとで構成される、脂質二重層からなっている。脂質二重層と水性の空間とは、いずれも、それぞれ、疎水性または親水性の化合物を組み込むことができる。in vivoでのリポソームの特性および挙動は、立体的な安定性を与えるために、親水性の重合体コーティング（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をリポソームの表面に加えること）によって、修飾されることができる。さらに、リポソームは、リガンド（例えば、抗体、ペプチドおよび炭水化物）を、その表面へ、または、結合されたＰＥＧ鎖の末端へ、結合させることによって、特定のターゲッティングのために使用され得る（Front Pharmacol. 2015 Dec 1;6:286）。
【０４７５】
リポソームは、水性の区画を取り囲むリン脂質の二重層からなる、コロイド状の脂質ベースの、および、界面活性剤ベースの、運搬システムである。これらは、球状の小胞（vesicles）として存在してもよく、２０ｎｍから数ミクロンまでのサイズで分布することができる。カチオン性の脂質をベースとしたリポソームは、静電相互作用によって、負に帯電した核酸と錯体化することができ、この結果、生体適合性、低毒性、および、in vivoでの臨床応用のために必要な大規模製造の可能性を提供する錯体が得られる。リポソームは、摂取のために血漿膜と融合することができ、リポソームは、一旦細胞の内部でエンドサイトーシス経路を介して処理され、その後、遺伝物質が、エンドソーム／担体から細胞質へと放出される。リポソームが基本的に生物学的膜の類縁物質であることを考えると、リポソームは、長い間、その優れた生体適合性ゆえ、薬剤運搬賦形剤媒体として認識されてきており、天然および合成のリン脂質のいずれからも調製が可能である（Int J Nanomedicine. 2014; 9: 1833-1843）。
【０４７６】
カチオン性のリポソームは、伝統的に、プラスミドＤＮＡ、アンチセンスオリゴ、および、ｓｉＲＮＡ／ヘアピン小分子ＲＮＡ−ｓｈＲＮＡを含めて、オリゴヌクレオチドのための最も一般的に用いられる非ウイルス性運搬システムである。カチオン性の脂質（例えばＤＯＴＡＰ、（１，２−ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン）およびＤＯＴＭＡ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチル−アンモニウム  メチル硫酸塩））は、負に帯電した核酸と錯体またはリポプレックスを形成することができ、静電相互作用によってナノ粒子を形成し、in vitroでの高いトランスフェクション効率を提供する。さらに、例えば天然の１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）ベースのナノリポソームが、ＲＮＡ運搬のための天然脂質ベースのナノリポソームとして、開発された（Adv Drug Deliv Rev. 2014 Feb; 66: 110-116.）。
【０４７７】
それゆえ、１つの実施形態において、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、カチオン性の脂質および／または天然脂質と錯体化され、それによって、リポソーム、脂質ナノ粒子、リポプレックスまたは天然の脂質ベースのナノリポソームを形成する。
【０４７８】
好ましいカチオン性またはポリカチオン性の化合物は、トランスフェクションまたは錯体化の薬剤として用いられることができ、これは、以下のものを含んでもよい：カチオン性多糖、例えばキトサン、ポリブレン、カチオン性重合体、例えばポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、カチオン性脂質、例えば、ＤＯＴＭＡ：［１−（２，３−シオレイルオキシ）プロピル）］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド、ＤＭＲＩＥ、ジ−Ｃ１４−アミジン、ＤＯＴＩＭ、ＳＡＩＮＴ、ＤＣ−Ｃｈｏｌ、ＢＧＴＣ、ＣＴＡＰ、ＤＯＰＣ、ＤＯＤＡＰ、ＤＯＰＥ：ジオレイルホスファチジルエタノール−アミン、ＤＯＳＰＡ、ＤＯＤＡＢ、ＤＯＩＣ、ＤＭＥＰＣ、ＤＯＧＳ：ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン、ジＭＲＩ：ジミリスト−オキシプロピルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド、ＤＯＴＡＰ：ジオレオイルオキシ−３−（トリメチルアミノ）プロパン、ＤＣ−６−１４：Ｏ，Ｏ−ジテトラデカノイル−Ｎ−（α−トリメチルアミノアセチル）ジエタノールアミンクロライド、ＣＬＩＰ１：ｒａｃ−［（２，３−ジオクタデシルオキシプロピル）（２−ヒドロキシエチル）］−ジメチルアンモニウムクロライド、ＣＬＩＰ６：ｒａｃ−［２（２，３−ジヘキサデシルオキシプロピル−オキシメチルオキシ）エチル］トリメチルアンモニウム、ＣＬＩＰ９：ｒａｃ−［２（２，３−ジヘキサデシルオキシプロピル−オキシスクシニルオキシ）エチル］−トリメチルアンモニウム、オリゴフェクタミン、または、カチオン性またはポリカチオン性重合体、例えば修飾されたポリアミノ酸、例としてβ−アミノ酸重合体または逆ポリアミドなど、修飾されたポリエチレン、例としてＰＶＰ（ポリ（Ｎ−エチル−４−ビニルピリジニウムブロミド））など、修飾されたアクリル酸塩、例としてｐＤＭＡＥＭＡ（ポリ（ジメチルアミノエチルメチルアクリレート））など、修飾されたアミドアミン、例としてｐＡＭＡＭ（ポリ（アミドアミン））など、修飾されたポリベータアミノエステル（ＰＢＡＥ）、例としてジアミン末端修飾された１，４ブタンジオール  ジアクリレート−ｃｏ−５−アミノ−１−ペンタノール重合体など、デンドリマー、例としてポリプロピルアミンデンドリマーまたはｐＡＭＡＭベースのデンドリマーなど、ポリイミン、例としてＰＥＩ：ポリ（エチレンイミン）、ポリ（プロピレンイミン）など、ポリアリルアミン、糖主鎖ベースの重合体、例としてシクロデキストリンベースの重合体、デキストランベースの重合体、キトサンなど、シラン主鎖ベースの重合体、例としてＰＭＯＸＡ−ＰＤＭＳ共重合体など、１つまたはそれより多いカチオン性ブロック（例えば上述のカチオン性重合体から選択される）および１つまたはそれより多い親水性または疎水性のブロック（例えばポリエチレングリコール）の組み合わせから成るブロック重合体など。
【０４７９】
［追加の薬学的に活性な化合物］
さらに、本発明の組成物は、少なくとも１つの追加の薬学的に活性な成分／化合物を含んでもよい。代替として、またはそれに加えて、本発明の組成物と同時に、一緒に、少なくとも１つの追加の薬学的に活性な成分／化合物が投与されてもよい。それゆえ、上記の少なくとも１つの追加の薬学的に活性な成分／化合物は、本発明の組成物の少なくとも１つのＲＮＡと、または、本発明のＲＮＡを含む組成物と、または、組み合わせて投与されてもよい。
【０４８０】
ここで用いられるような「組み合わせて投与される」、「一緒に投与」または「同時投与」との表現は、本発明の組成物またはその成分が被験者に投与されるのが、さらなる薬学的に活性な成分を同じ被験者に投与する前、同時または後であるような状況を指す。本発明の組成物またはその成分と、少なくとも１つの第２の薬学的に活性な成分との投与の時間間隔は、その特定の薬学的に活性な成分の性質と生物学的効果とに依存しており、医者によって決定されることができる。好ましくは、時間間隔は、約４８時間未満、より好ましくは約２４時間未満、１２時間、６時間、４時間、２時間、１時間、最も好ましくは約３０分未満、１５分または５分である。特に好ましい実施形態では、「組み合わせて投与される」との表現は、本発明の組成物またその成分と、少なくとも１つの第２の薬学的に活性な成分の、同時投与を指し、すなわち、両方の成分の同時投与、または、典型的には５分未満の時間フレーム以内の両方の成分の投与を指す。「組み合わせて投与する」との表現は、本発明の組成物またその成分が、少なくとも１つの第２の薬学的に活性な成分と物理的に接触している、または、この第２の薬学的に活性な成分と一緒に処方されるような状況だけを指すわけではない。ここで用いられるような「組み合わせて投与する」との表現は、また、本発明の組成物またその成分と第２の薬学的に活性な成分との別々の投与（例えば２つの別々の注射）を含む。あるいは、本発明の組成物またその成分と第２の薬学的に活性な成分は、投与の前に本発明の組成物またその成分と第２の薬学的に活性な成分とを混合してから被験者に混合物を投与することによって、組み合わせて投与されてもよい。本発明の組成物またその成分は、第２の薬学的に活性な成分と一緒に処方される場合、または、ここに規定したような組成物が用いられる場合、本発明の組成物またその成分と第２の薬学的に活性な成分は、さらに、互いから独立して、個々で述べたような投与経路のうちの任意のものを介して、組み合わせて投与されてもよい。
【０４８１】
これに関する薬学的に活性な成分／化合物は、特定の兆候または疾患、すなわち腫瘍または癌疾患を、治療、改善または予防する治療的効果を有する化合物である。このような化合物は、なんら限定されないが、ペプチドまたはタンパク質（好ましくはここに規定したようなもの）、核酸（好ましくはここに規定したようなもの）、（治療的に活性の）低分子の有機または無機の化合物（５０００未満の分子量、好ましくは１０００未満）、糖、抗原または抗体（好ましくはここに規定したようなもの）、従来公知の治療的薬剤、抗原性細胞、抗原性細胞断片、細胞分画、細胞壁成分（例えば多糖）、（例えば化学的にまたは照射によって）修飾された、弱毒化された、または非活性化された病原体（ウイルス、細菌など）、アジュバント、などを含む。
【０４８２】
好ましい実施形態では、本発明の組成物は、追加的に、少なくとも１つのさらなる薬学的に活性な成分／化合物を含み、この少なくとも１つのさらなる薬学的に活性な成分は、サイトカイン、ケモカイン、自殺遺伝子産物、免疫原性のペプチドまたはタンパク質、アポトーシス誘導因子、血管新生阻害因子、ヒートショックタンパク質、腫瘍抗原、β−カテニン抑制剤、ＳＴＩＮＧ経路の活性化因子、チェックポイント調節因子、自然免疫活性化因子、抗体、ドミナント・ネガティブ受容体およびデコイ受容体、脊髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子、ＩＤＯ経路阻害因子、アポトーシスの阻害因子に結合する少なくとも１つのタンパク質またはペプチド、抗細菌剤、抗ウイルス剤、アジュバント、化学療法剤およびキナーゼ阻害剤からなるグループから選択される。
【０４８３】
代替として、またはそれに加えて、少なくとも１つの追加の薬学的に活性な成分は、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡと、または、本発明による組成物と、同時に、一緒に、投与されてもよく、または、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡと、または、本発明による組成物と、組み合わせて用いられてもよい。
【０４８４】
これに関して、タンパク質ベースのサイトカイン、ケモカイン、自殺遺伝子産物、免疫原性のペプチドまたはタンパク質、アポトーシス誘導因子、血管新生阻害因子、ヒートショックタンパク質、腫瘍抗原、β−カテニン阻害因子、ＳＴＩＮＧ経路の活性化因子、チェックポイント調節因子、自然免疫活性化因子、抗体、ドミナント・ネガティブ受容体およびデコイ受容体、脊髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣｓ）の阻害因子、ＩＤＯ経路阻害因子、および、アポトーシスの阻害因子に結合する少なくとも１つのタンパク質またはペプチド、または、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたような断片およびその変種が、追加の薬学的に活性の成分として用いられうる。あるいは、これらのタンパク質または断片またはその変種をコードする核酸が、追加の薬学的に活性の成分として用いられうる。
【０４８５】
＜１．サイトカイン＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたようなタンパク質ベースのサイトカイン、または、断片およびその変種が、追加の薬学的に活性の成分として用いられ得る。あるいは、これらのタンパク質または断片およびその変種をコードする核酸が、追加の薬学的に活性の成分として用いられ得る。
【０４８６】
好ましくは、サイトカインは、インターロイキン（ＩＬ）である。１つまたはそれよりも多いインターロイキンは、例えば、以下のリストから選択されてもよい：ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１ｒａ（アンタゴニスト）、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０；ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＥＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８Ａ／Ｂ、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＬ−３５。さらに、サイトカインは、ＴＮＦ系統から選択される１つまたはそれより多いサイトカインであってもよく、例えば、以下のリストから選択されてもよい：特に、ＴＮＦα、ＬＴα、ＬＴβ、ＬＩＧＨＴ、ＴＷＥＡＫ、ＡＰＲＩＬ、ＢＡＦＦ、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＦＡＳＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫリガンド。好ましいサイトカインのさらなる例は、以下のリストから選択されてもよい：ＦＬＴ３リガンド、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα／β／ω、ＩＦＮγ、ＬＩＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＩＦ、ＯＳＭ、幹細胞刺激因子、ＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、ＴＧＦβ３、ＴＳＬＰリガンド。
【０４８７】
特に好ましいのは、以下のリストから選択されるサイトカインである：ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１８、ＩＦＮα、ＩＬ−１β、ＩＬ−３２、ＩＬ−７、ＩＬ−２１、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ。
【０４８８】
これに関連して、特に好ましいのは、上の表１に記載したようなサイトカインである。
【０４８９】
特に好ましい実施形態では、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う、免疫賦活性ＲＮＡであり、また、上で記載したような少なくとも１つのサイトカイン（好ましくはＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＣＤ４０ＬまたはＩＬ−１５、または、断片またはその変種）と組み合わされる。
【０４９０】
＜１．ケモカイン＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたようなタンパク質ベースのケモカイン、または、断片およびその変種が、追加の薬学的に活性の成分として用いられ得る。あるいは、これらのタンパク質または断片およびその変種をコードする核酸が、追加の薬学的に活性の成分として用いられ得る。
【０４９１】
好ましいケモカインは、以下のリストから選択されてもよい：ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ７、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１５、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ６、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ９／１０、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１２、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＣＸ３ＣＬ１。
【０４９２】
これに関連して、特に好ましいのは、上の表２に記載したようなケモカインである。
【０４９３】
特に好ましい実施形態では、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う、免疫賦活性ＲＮＡであり、また、上で記載したような少なくとも１つのケモカイン、または、断片またはその変種、と組み合わされる。
【０４９４】
＜２．自殺酵素＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたようなタンパク質ベースの自殺酵素、または、断片またはその変種が、追加の薬学的に活性の成分として用いられてもよい。あるいは、これらのタンパク質をコードする核酸または断片またはその変種が、追加の薬学的に活性の成分として用いられてもよい。
【０４９５】
自殺酵素は、好ましくは、ヌクレオチド代謝酵素である。好ましくは、自殺酵素は、自殺酵素の基質であるプロドラッグと組み合わせて用いられ、プロドラッグは、自殺酵素によって細胞傷害性の化合物に変換される。１つまたはそれよりも多い好ましい自殺酵素は、以下のリストから選択されてもよい：チミジンキナーゼ、好ましくはウイルスのチミジンキナーゼ、より好ましくは単純疱疹ウイルスのチミジンキナーゼ、水痘帯状疱疹ウイルス（Varicella zoster）のチミジンキナーゼ、植物のチミジンキナーゼ、好ましくはトマトのチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、好ましくは細菌のシトシンデアミナーゼまたはイースト菌のシトシンデアミナーゼ、デオキシヌクレオシドキナーゼ、好ましくはキイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）のデオキシヌクレオシドキナーゼ、デオキシシチジンキナーゼ、好ましくは哺乳類のデオキシシチジンキナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、好ましくは細菌のプリンヌクレオシドホスホリラーゼ。
【０４９６】
これに関連して、特に好ましいのは、上の表３および表４に記載したような自殺酵素（自殺遺伝子産物）である。
【０４９７】
特に好ましい実施形態では、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う、免疫賦活性ＲＮＡであり、また、上で記載したような少なくとも１つの自殺酵素または、断片またはその変種、と組み合わされる。
【０４９８】
＜３．免疫原性のタンパク質またはペプチド＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたようなタンパク質ベースの免疫原性のタンパク質またはペプチド、または、断片またはその変種が、追加の薬学的に活性な成分として用いられてもよい。あるいは、これらのタンパク質またはペプチドをコードする核酸または断片またはその変種が、追加の薬学的に活性な成分として用いられてもよい。
【０４９９】
免疫原性のタンパク質またはペプチドは、好ましくは、腫瘍および／または癌疾患の治療のためのこのような抗原に対する、前から存在する免疫を利用する、病原体の抗原である。記憶された免疫反応がトリガーされ、腫瘍細胞を攻撃するための免疫システムが強化される。
【０５００】
本発明のこの実施形態のための免疫原性のタンパク質またはペプチドの好ましい例は、広く知られている病原体、すなわち、すべての生物体、特に哺乳類、好ましくはヒト、が彼／彼女の人生で少なくとも１回感染する高い可能性を有しているような病原体の、タンパク質またはペプチドである。これらは例えば、以下のようなものの、任意の構造的または非構造的なタンパク質またはペプチドを含んでいる：
インフルエンザウイルスタイプＡまたはＢまたは任意の他のオルトミクソウイルス（インフルエンザウイルスタイプＣ）、
ピコルナウイルス、例としてライノウイルスまたは肝炎Ａウイルス、
トガウイルス、例としてアルファウイルスまたはルビウイルス、例えばシンドビス、セムリキ森林ウイルス（Semliki-Forest）または麻疹ウイルス（rubeolavirus）（はしかウイルス）、
風疹ウイルス（ドイツはしかウイルス）、
コロナウイルス、特にサブタイプＨＣＶ−２２９ＥまたはＨＣＶ−ＯＣ４３、
ラブドウイルス、例として狂犬病ウイルス、
パラミクソウイルス、例としておたふく風邪ウイルス、
レオウイルス、例としてグループＡ、ＢまたはＣのロタウイルス、
ヘパドナウイルス、例として肝炎Ｂウイルス、
パポウイルス、例として任意の血清型の、特に１ないし７５の、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、
アデノウイルス、特にタイプ１ないし４７、
ヘルペスウイルス、例として単純疱疹ウイルス１、２または３、
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、好ましくはＣＭＶｐｐ６５、
エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、
ワクシニアウイルス、および、
バクテリウム属のクラミドフィラ・ニューモニエ（Chlamydophila pneumoniae）（クラミジア・ニューモニエ（Chlamydia pneumoniae））。
【０５０１】
好ましい免疫原性のタンパク質またはペプチドのさらなる例は、めったに生物体に感染しない病原体のタンパク質またはペプチドである。これらのタンパク質またはペプチドは、例えば、以下のようなものの、任意の構造的または非構造的なタンパク質またはペプチドを含んでいる：
フラビウイルス、例としてデング熱ウイルスタイプ１ないし４、黄熱病ウイルス、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、
肝炎Ｃウイルス、
カリシウイルス、
フィロウイルス、例としてエボラウイルス、
ボルナウイルス、
ブンヤウイルス、例としてリフトバレー熱ウイルス、
アレナウイルス、例としてＬＣＭＶ（リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス）または出血熱ウイルス、
レトロウイルス、例としてＨＩＶ、および、
パルボウイルス。
【０５０２】
特に好ましい実施形態では、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う、免疫賦活性ＲＮＡであり、また、上で記載したような少なくとも１つの免疫原性のタンパク質またはペプチド（好ましくはインフルエンザ核タンパク質（ＮＰ）、または、断片またはその変種）と組み合わされる。
【０５０３】
＜４．アポトーシス誘導因子＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたようなアポトーシス誘導剤、断片またはその変種が、追加の薬学的に活性な成分として用いられてもよい。あるいは、これらのタンパク質またはペプチドをコードする核酸または断片またはその変種が、追加の薬学的に活性の成分として用いられてもよい。
【０５０４】
好ましくは、アポトーシス誘導剤は、Ｂｃｌ−２ファミリー、および、膜貫通型のデス（death）受容体のリガンド、腫瘍抑制タンパク質ｐ５３、特に、ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）受容体遺伝子のスーパーファミリー、プロアポトーシス受容体アゴニスト、およびＢｅｃｌｉｎ−１からなるグループから選択される。
【０５０５】
本発明に関連する特に好ましいアポトーシス誘導剤は、（ＢＥＣＮ１遺伝子由来の）Ｂｅｃｌｉｎ−１である。
【０５０６】
アポトーシス誘導剤のさらに好ましい例は、以下のリストから選択されてもよい：Ｂｃｌ−１０、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｄ、Ｂａｄ、Ｂｉｍ、Ｂｉｋ、Ｂｌｋ、チトクロームｃ、カスパーゼ、特にカスパーゼ３、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、死ドメイン、特にＦａｓのもの、好ましくはＦａｓＬ、ＴＮＦα、Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ、ＤＲ４および／またはＤＲ５のアゴニスト、Ａｐｏ３Ｌ、ＤＲ４アゴニストの抗体、ＤＲ５アゴニストの抗体、プロテインキナーゼＲ（ＰＫＲ）（好ましくは恒常的に活性なＰＫＲ）、ＧｒａｎｚｙｍｅＢ。
【０５０７】
これに関連して、特に好ましいのは、上の表５および表６に記載したようなアポトーシス誘導剤である。
【０５０８】
特に好ましい実施形態では、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う、免疫賦活性ＲＮＡであり、また、上で記載したような少なくとも１つのアポトーシス誘導剤または、断片またはその変種、と組み合わされる。
【０５０９】
＜５．血管新生阻害因子＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたようなタンパク質ベースの血管新生阻害因子、または、断片またはその変種が、追加の薬学的に活性な成分として用いられてもよい。あるいは、これらのタンパク質またはペプチドをコードする核酸または断片またはその変種が、追加の薬学的に活性な成分として用いられてもよい。
【０５１０】
本発明による血管新生阻害因子の好ましい例は、以下のリストから選択されてもよい：インターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）、（インターフェロンベータ）ＩＦＮ−β、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、血小板因子４（ＰＦ−４）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｓＦＬＴ−１）、胎児肝臓キナーゼ１（ＦＬＫ−１）、アンギオスタチン、エンドスタチン、バソスタチン、カンスタチン、ツムスタチン、１６ｋＤのプロラシン（prolacin）断片、金属プロテイナーゼの組織抑制剤１（ＴＩＭＰ−１）、メタロプロテアーゼの組織抑制剤２（ＴＩＭＰ−２）、メタロプロテアーゼの組織抑制剤３（ＴＩＭＰ−３）、トロンボスポンジン１（ＴＳＰ−１）、トロンボスポンジン２（ＴＳＰ−２）、Ｍａｓｐｉｎ、ＰＥＸ、可溶性チロシン−プロテインキナーゼ受容体１（ｓＴｉｅ１）、可溶性アンジオポエチン−１受容体２（ｓＴｉｅ２）、アンジオポエチン−１、アンジオポエチン−２、抗血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）抗体（例えばAlacizumab、Ramucirumab）、抗血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）抗体（例えばBrolucizumab、Ranibizumab、Bevacizumab）、および抗血管内皮成長因子受容体１（ＶＥＧＦＲ１）抗体（例えばIcrucumab）。
【０５１１】
これに関連して、特に好ましいのは、上の表７に記載したような血管新生阻害因子である。
【０５１２】
特に好ましい実施形態では、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う、免疫賦活性ＲＮＡであり、また、上で記載したような少なくとも１つの血管新生阻害因子、または、断片またはその変種、と組み合わされる。
【０５１３】
＜６．ヒートショックタンパク質＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたようなタンパク質ベースのヒートショックタンパク質、または、断片およびその変種が、追加の薬学的に活性な成分として用いられ得る。あるいは、これらのタンパク質質またはペプチドまたは断片およびその変種をコードする核酸が、追加の薬学的に活性な成分として用いられ得る。
【０５１４】
好ましくは、ヒートショックタンパク質は、以下のリストから選択されてもよい：ＨＳＰ２７、ＨＳＰ４７（serpin  Ｈ１）、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ７０、ＨＳＣ７０、ＧＲＰ７８（ＢｉＰ）、ＨＳＰ９０、ＨＳＰ１１０、ＧＲＰ９４（ｇｐ９６）、ＧＲＰ１７０（ＯＲＰ１５０）、ＰＤＩ／ＰＤＩＡ、ＣＲＴ／ＣＡＬＲ。
【０５１５】
これに関連して、特に好ましいのは、上の表８に記載したようなヒートショックタンパク質である。
【０５１６】
特に好ましい実施形態では、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う、免疫賦活性ＲＮＡであり、また、上で記載したような少なくとも１つのヒートショックタンパク質、または、断片またはその変種、と組み合わされる。
【０５１７】
＜７．腫瘍抗原＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関連して上で記載されたようなタンパク質ベースの腫瘍抗原、または、断片およびその変種が、追加の薬学的に活性な成分として用いられ得る。あるいは、これらのタンパク質またはペプチドまたは断片およびその変種をコードする核酸が、追加の薬学的に活性の成分として用いられ得る。
【０５１８】
これに関連して、特に好ましいのは、上の表９に記載したような腫瘍抗原である。
【０５１９】
特に好ましい実施形態では、ＲＮＡ含有組成物のうちの少なくとも１つのＲＮＡは、好ましくは配列番号５、３９４または１００７２に従う、免疫賦活性ＲＮＡであり、また、上で記載したような少なくとも１つの腫瘍抗原、または、断片またはその変種、と組み合わされる。
【０５２０】
＜８．β−カテニン阻害因子＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関して以上に開示されているような、タンパク質に基づくβ−カテニン阻害因子、またはその断片およびバリアントは、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。代替的に、これらのタンパク質もしくはペプチドまたはその断片もしくはバリアントをコードしている核酸は、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。
【０５２１】
本発明に係る特に好ましいβ−カテニン阻害因子は、ＴＡＴ−ＮＬＳ−ＢＬＢＤ−６、アクシン−１、ＴＶＦ−４、ＧＳＫ−３ｂ、ＤＫＫ−１、Ｄｖｌ−１誘導体またはその断片を含んでいる。
【０５２２】
［化学的なβ−カテニン阻害因子］
本発明によれば、本発明の組成物に含有され得る、および／または、本発明の組成物と共に投与もしくは併用され得る、少なくとも１つのさらなる活性な薬学的な成分は、化学的なβ−カテニン阻害因子であり得る。本発明にしたがって投与され得る化学的なβ−カテニン阻害因子は、当該分野において知られている。好ましくは、上記化学的なβ−カテニン阻害因子は、以下の一覧：ＰＫＦ１１８−３１０、ＣＧＰ０４９０９０、ＰＫＦ１１５−５８４、ＰＫＦ２２２−８１５、ＰＫＦ１１８−７４４、ＩＣＧ００１、ＣＣＴ０３６４７７、ＸＡＶ９３９、アシルヒドラゾン（ＨＱＢＡ）、２，３，６−三置換ピリド［２，３，−ｂ］ピラジン  コア骨格を有している分子、カルノシン酸、ＣＣＴ０３１３７４、ｉＣＲＴ−３、５、１４、ＮＣ０４３、イブプロフィン、アスピリンから選択される。
【０５２３】
以下の表１３は、このような関係において特に好ましいβ−カテニンシグナル伝達の小分子阻害因子の例をまとめている。
【０５２４】
【表１４】
2018517674.tif 000106
【０５２５】
特に好ましい実施形態において、ＲＮＡ含有組成物のうち、少なくとも１つのＲＮＡは、免疫賦活性のＲＮＡ（好ましくは配列番号５、３９４または１００７２）であり、以上に規定されているような少なくとも１つのβ−カテニン阻害因子、またはその断片もしくはバリアントと組み合わせられる。
【０５２６】
＜９．ＳＴＩＮＧ経路の活性化因子＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関して以上に開示されているような、ＳＴＩＮＧ経路の、タンパク質に基づく活性化因子、またはその断片およびバリアントは、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。代替的に、これらのタンパク質もしくはペプチドまたはその断片もしくはバリアントをコードしている核酸は、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。好ましくは、ＳＴＩＮＧ経路の少なくとも１つの活性化因子（刺激因子）は、ＳＴＩＮＧ経路の、活性化しているタンパク質または恒常的に活性なタンパク質、好ましくはＤＤＸ４１、ＳＴＩＮＧ、ｃＧＡＳ、ＩＲＦ３、ＴＢＫ１もしくはＳＴＡＴ６またはその断片もしくはバリアントから選択される。
【０５２７】
［化学的なＳＴＩＮＧ経路の活性化因子］
さらなる好ましい実施形態において、さらなる任意の薬学的に活性な成分が、環状ジヌクレオチドおよびキサンテノン類似物から好ましく選択され、これらは、ＳＴＩＮＧ経路の化学的な活性化物質として使用される。
【０５２８】
表１４は、化学的なＳＴＩＮＧアゴニストの例を示している。ＳＴＩＮＧアゴニストのさらなる例は、国際公開第２０１４１８９８０５号に開示されている。
【０５２９】
【表１５】
2018517674.tif 000107
【０５３０】
特に好ましい実施形態において、ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、免疫賦活性のＲＮＡ（好ましくは配列番号５、３９４または１００７２にしたがう）であり、以上に規定されているような、少なくとも１つのＳＴＩＮＧ経路の活性化因子、またはその断片もしくはバリアントと組み合わせられる。
【０５３１】
＜１０．チェックポイント調節因子＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関して以上に開示されているような、タンパク質に基づくチェックポイント調節因子は、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。代替的に、これらのタンパク質もしくはペプチドまたはその断片もしくはバリアントをコードしている核酸は、薬学的に活性なさらなる成分として使用され得る。
【０５３２】
本発明の好ましい実施形態において、チェックポイント調節因子は、Ｂ７−１／ＣＤ８０、Ｂ７−２／ＣＤ８６、Ｂ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｈ７／ＨＨＬＡ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ２８、ＣＤ２８Ｈ／ＩＧＰＲ−１、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ２／Ｂ７−ＤＣ、ＰＤＣＤ６、ＶＩＳＴＡ／Ｂ７−Ｈ５／ＰＤ−１Ｈ、ＢＴＮ１Ａ１／ブチロフィリン、ＢＴＮ２Ａ１、ＢＴＮ２Ａ２／ブチロフィリン２Ａ２、ＢＴＮ３Ａ１／２、ＢＴＮ３Ａ２、ＢＴＮ３Ａ３、ＢＴＮＬ２／ブチロフィリン様２、ＢＴＮＬ３、ＢＴＮＬ４、ＢＴＮＬ６、ＢＴＮＬ８、ＢＴＮＬ９、ＢＴＮＬ１０、ＣＤ２７７／ＢＴＮ３Ａ１、ＬＡＩＲ１、ＬＡＩＲ２、ＣＤ９６、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、ＣＲＴＡＭ、ＤＮＡＭ−１／ＣＤ２２６、ネクチン−２／ＣＤ１１２、ネクチン−３、ＴＩＧＩＴ、ＬＩＬＲＡ３／ＣＤ８５ｅ、ＬＩＬＲＡ４／ＣＤ８５ｇ／ＩＬＴ７、ＬＩＬＲＢ１／ＣＤ８５ｊ／ＩＬＴ２、ＬＩＬＲＢ２／ＣＤ８５ｄ／ＩＬＴ４、ＬＩＬＲＢ３／ＣＤ８５ａ／ＩＬＴ５、ＬＩＬＲＢ４／ＣＤ８５ｋ／ＩＬＴ３、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９／ＣＤ１３７、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、リンホトキシン−α／ＴＮＦ−ベータ、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ−アルファ、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＣＤ２、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ５８／ＬＦＡ−３、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−３、ＴＩＭ−４、ＣＤ７、ＣＤ９６、ＣＤ１６０、ＣＤ２００、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＲＴＡＭ、ＤＡＰ１２、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＥｐｈＢ６、インテグリンアルファ４ベータ１、インテグリンアルファ４ベータ７／ＬＰＡＭ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ−４、ＴＳＬＰ  Ｒまたはそれらの任意の組み合わせの調節因子である。
【０５３３】
好ましくは、チェックポイント調節因子は、アゴニスト性の抗体、アンタゴニスト性の抗体、リガンド、ドミナント・ネガティブ受容体およびデコイ受容体、またはそれらの組み合わせから選択される。
【０５３４】
好ましくは、アゴニスト性の抗体は、以下の一覧：抗４−１ＢＢ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ−４０抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＴＮＦＲＳＦ２５抗体および抗ＬＩＧＨＴ抗体から選択される。
【０５３５】
好ましくは、アンタゴニスト性の抗体は、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗Ｖｉｓｔａ抗体、抗Ｔｉｍ−３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体および抗ＢＴＬＡ抗体の一覧から選択される。
【０５３６】
抗ＣＴＬＡ−抗体（イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標））、トレメリムマブおよびＡＧＥＮ−１８８４）が、特に好ましい。
【０５３７】
抗ＰＤ１抗体（ニボルマブ（ＭＤＸ−１１０６／ＢＭＳ−９３６５５８／ＯＮＯ−４５３８）、（Brahmer et al., 2010. J Clin Oncol. 28(19):3167-75; PMID: 20516446）；ピジリズマブ（ＣＴ−０１１）、（Berger et al., 2008. Clin Cancer Res. 14(10):3044-51; PMID: 18483370）；ペムブロリズマブ（ＭＫ−３４７５、SCH 900475）；ＡＭＰ−２２４およびＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ−５１４））が、特に好ましい。
【０５３８】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体（ＭＤＸ−１１０５／ＢＭＳ−９３６５５９（Brahmer et al. 2012. N Engl J Med. 366(26):2455-65; PMID: 22658128）；アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ／ＲＧ７４４６）；ドゥルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）；およびアベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８））が、特に好ましい。
【０５３９】
本発明によれば、表１５に係るチェックポイント調節因子が、特に好ましい。
【０５４０】
【表１６】
2018517674.tif 000108
【０５４１】
2018517674.tif 000109
【０５４２】
さらなる好ましい実施形態において、チェックポイント調節因子は、デコイ受容体（例えば、可溶性の受容体）である。好ましくは、デコイ受容体は、可溶性のＰＤ１受容体である。特に好ましい実施形態において、可溶性のＰＤ１受容体をコードしているＲＮＡ配列は、配列番号３８９のＲＮＡ配列を含んでいる。
【０５４３】
さらなる好ましい実施形態において、チェックポイント調節因子は、免疫チェックポイントタンパク質のリガンドである。好ましくは、当該リガンドはＣＤ４リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である。
【０５４４】
特に好ましい実施形態において、ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、免疫賦活性のＲＮＡ（好ましくは配列番号５、３９４または１００７２）であり、以上に規定されているようなチェックポイント調節因子（好ましくは抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ＣＤ４０リガンドもしくは可溶性のＰＤ１受容体、またはその断片もしくはバリアントから選択される）の少なくとも１つと組み合わせられる。
【０５４５】
＜１１．自然免疫活性化因子＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関して以上に開示されているような、タンパク質に基づく自然免疫活性化因子は、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。代替的に、これらのタンパク質もしくはペプチドまたはその断片もしくはバリアントをコードしている核酸は、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。
【０５４６】
これに関連して、自然免疫活性化因子は、典型的にヒトタンパク質またはヒトペプチドを含んでいる、（哺乳類における）自然免疫応答（例えば、外因性のＴＬＲリガンドのＴＬＲに対する結合の反応として）を惹起可能な、哺乳類（特にヒト）のアジュバントタンパク質から選択される。より好ましくは、ヒトアジュバントタンパク質は、パターン認識受容体（ＴＬＲ、ＮＬＲおよびＲＬＨ（ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１；  ＮＯＤ１、ＮＯＤ２、ＮＯＤ３、ＮＯＤ４、ＮＯＤ５、ＮＡＬＰ１、ＮＡＬＰ２、ＮＡＬＰ３、ＮＡＬＰ４、ＮＡＬＰ５、ＮＡＬＰ６、ＮＡＬＰ６、ＮＡＬＰ７、ＮＡＬＰ７、ＮＡＬＰ８、ＮＡＬＰ９、ＮＡＬＰ１０、ＮＡＬＰ１１、ＮＡＬＰ１２、ＮＡＬＰ１３、ＮＡＬＰ１４、ｌ  ＩＰＡＦ、ＮＡＩＰ、ＣＩＩＴＡ、ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５およびＬＧＰ２が挙げられる）が挙げられる）のシグナル伝達ネットワークの構成要素およびリガンド、ＴＬＲシグナル伝達のシグナル伝達因子（アダプタータンパク質（例えばＴｒｉｆおよびＣａｒｄｉｆが挙げられる）が挙げられる）；Ｓｍａｌｌ−ＧＴＰａｓｅｓシグナル伝達の構成要素（ＲｈｏＡ、Ｒａｓ、Ｒａｃ１、Ｃｄｃ４２、Ｒａｂなど）、ＰＩＰシグナル伝達の構成要素（ＰＩ３Ｋ、Ｓｒｃ−キナーゼなど）、ＭｙＤ８８依存性のシグナル伝達の構成要素（ＭｙＤ８８、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＩＲＡＫ４、ＴＩＲＡＰ、ＴＲＡＦ６など）、ＭｙＤ８８非依存性のシグナル伝達の構成要素（ＴＩＣＡＭ１、ＴＩＣＡＭ２、ＴＲＡＦ６、ＴＢＫ１、ＩＲＦ３、ＴＡＫ１、ＩＲＡＫ１など）；活性化されたキナーゼ（例えば、Ａｋｔ、ＭＥＫＫ１、ＭＫＫ１、ＭＫＫ３、ＭＫＫ４、ＭＫＫ６、ＭＫＫ７、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＧＳＫ３、ＰＫＣキナーゼ、ＰＫＤキナーゼ、ＧＳＫ３キナーゼ、ＪＮＫ、ｐ３８ＭＡＰＫ、ＴＡＫ１、ＩＫＫおよびＴＡＫ１が挙げられる）；活性化された転写因子（例えば、ＮＦ−κＢ、ｃ−Ｆｏｓ、ｃ−Ｊｕｎ、ｃ−Ｍｙｃ、ＣＲＥＢ、ＡＰ−１、Ｅｌｋ−１、ＡＴＦ２、ＩＲＦ−３、ＩＲＦ−７が挙げられる）であるタンパク質からなる群から選択される。
【０５４７】
哺乳類（特にヒト）のアジュバントタンパク質は、ヒートショックタンパク質（例えばＨＳＰ１０、ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５、ＨＳＰ７０、ＨＳＰ７５およびＨＳＰ９０）、ｇｐ９６、フィブリノーゲン、フィブロネクチンのＴＹＰＩＩＩリピート外部ドメインＡ；または補体系の構成要素（Ｃ１ｑ、ＭＢＬ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ２ｂ、Ｂｂ、Ｄ、ＭＡＳＰ−１、ＭＡＳＰ−２、Ｃ４ｂ、Ｃ３ｂ、Ｃ５ａ、Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、ＣＲ１、ＣＲ２、ＣＲ３、ＣＲ４、Ｃ１ｑＲ、Ｃ１ＩＮＨ、Ｃ４ｂｐ、ＭＣＰ、ＤＡＦ、Ｈ、Ｉ、ＰおよびＣＤ５９が挙げられる）、もしくは誘導された標的遺伝子（例えばベータ−ディフェンシンが挙げられる）、細胞表面タンパク質；またはヒトアジュバントタンパク質（ｔｒｉｆ、ｆｌｔ−３  ｌｉｇａｎｄ、Ｇｐ９６またはフィブロネクチンなどが挙げられる）もしくはこれらのヒトアジュバントタンパク質のいずれかの、任意の種の相同物からなる群から、さらに選択され得る。さらに、ＨＧＭＢ１はアジュバントタンパク質として使用され得る。
【０５４８】
哺乳類（特にヒト）のアジュバントタンパク質は、自然免疫応答を誘導または促進するサイトカイン（ＩＬ−１アルファ、ＩＬ１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＴＮＦアルファ、ＩＦＮアルファ、ＩＦＮベータ、ＩＦＮガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦが挙げられる）；ケモカイン（ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１アルファ、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン、ＣＣＬ２１が挙げられる）；マクロファージから放出されるサイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦ−アルファ；ならびにＩＬ−１Ｒ１およびＩＬ−１アルファが挙げられる）をさらに含み得る。
【０５４９】
したがって、これに関連して、少なくとも自然免疫活性化因子は、好ましくはアジュバントタンパク質（より好ましくはヒトアジュバントタンパク質）、またはその断片もしくはバリアントであることが、特に好ましい。
【０５５０】
これに関連して、アジュバントタンパク質の恒常的な活性バリアント（好ましくはＲＩＧ−１の恒常的な活性バリアント（ΔＲＩＧＩ））は、自然免疫の活性化因子として使用される。
【０５５１】
好ましい他の実施形態において、少なくとも自然免疫活性化因子は、ＨＧＭＢ１またはその断片もしくはバリアントである。
【０５５２】
これに関連して、上述の表１１に開示されているような自然免疫活性化因子が、特に好ましい。
【０５５３】
特に好ましい実施形態において、ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、免疫賦性ＲＮＡ（好ましくは配列番号５、３９４または１００７２）であり、以上に規定されているような少なくとも１つの自然免疫活性化因子、またはその断片もしくはバリアントと組み合わせられる。
【０５５４】
＜１２．抗体、デコイ受容体およびドミナント・ネガティブ受容体＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関して以上に開示されているような、タンパク質に基づく抗体、デコイ受容体もしくはドミナント・ネガティブ受容体、またはその断片およびバリアントは、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。代替的に、これらのタンパク質またはその断片もしくはバリアントをコードしている核酸は、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。
【０５５５】
本発明によれば、表１６に係る抗体が特に好ましい。
【０５５６】
【表１７】
2018517674.tif 000110
【０５５７】
2018517674.tif 000111
【０５５８】
2018517674.tif 000112
【０５５９】
2018517674.tif 000113
【０５６０】
2018517674.tif 000114
【０５６１】
2018517674.tif 000115
【０５６２】
2018517674.tif 000116
【０５６３】
好ましくは、中和抗体は、抗ＩＬ−１０および抗ＴＧＦベータの一覧から選択される。
【０５６４】
特に好ましい実施形態において、ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、免疫賦活性ＲＮＡ（好ましくは配列番号５、３９４または１００７２）であり、以上に規定されているような少なくとも１つの抗体（好ましくは抗ＣＤ７３抗体）もしくはデコイ受容体、またはその断片もしくはバリアントと組み合わせられる。
【０５６５】
さらに、少なくとも１つの抗体は、抗ＣＤ７３抗体またはその断片もしくはバリアントから好ましく選択され得る。
【０５６６】
特に好ましいさらなる実施形態において、少なくとも１つの抗体は、ＣＣＲ５／ＣＤ１９５に対する抗体、またはそのリガンドであるＣＣＬ５／ＲＡＮＴＥＳに対する抗体、またはその断片もしくはバリアントから選択される。
【０５６７】
特に好ましい実施形態において、デコイ受容体は、可溶性のＣＣＲ５（ＣＤ１９５としても知られているケモカイン受容体タイプ５）である。
【０５６８】
特に好ましい実施形態において、ドミナント・ネガティブ受容体は、ドミナント・ネガティブであるＣＣＲ５（ＣＤ１９５としても知られているケモカイン受容体タイプ５）である。
【０５６９】
＜１３．骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣ）の阻害剤＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関して以上に開示されているような、骨髄由来のサプレッサ細胞（ＭＤＳＣ）の、タンパク質に基づく阻害剤またはその断片もしくはバリアントは、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。代替的に、これらのタンパク質もしくはペプチドまたはその断片もしくはバリアントをコードしている核酸は、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。
【０５７０】
ＭＤＳＣの阻害剤として、抗ＩＬ−１７抗体およびＩＬ１２を使用することが特に好ましい。
【０５７１】
本発明に関連して、ＭＤＳＣ阻害は、ＭＤＳＣの直接的な不活性化（例えば、化学的なＮＯ阻害剤（ＰＤＥ−５阻害剤、ＮＯ−アスピリン、Ｌ−ＮＡＭＥ）、アルギナーゼ阻害剤（ＰＤＥ−５阻害剤、ＣＯＸ２阻害剤、ＮＯＨＡ、Ｌ−ＮＡＭＥ）、ＲＯＳ阻害剤（合成トリテルペノイド））によって、ＭＤＳＣが成熟細胞へ分化することを遮断すること（例えば、ＡＴＲＡ、ビタミンＡ、ビタミンＤ３、ＣｐＧ）によって、ＭＤＳＣの細胞成長を遮断すること（例えば、、細胞シグナル伝達の修飾因子（ビスホスホラート（bisphosphorates）（ゾロドロン酸）、細胞シグナル伝達の修飾因子（ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ３阻害剤、マルチキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤）））によって、または、ＭＤＳＣの枯渇（細胞毒物（ゲムシタビン、シスプラチン、パクリタキセル、５−フルオロウラシル）またはＨＳＰ９０（１７−ＤＭＡＧ））によって、達成され得る。したがって、これらの化合物も、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。
【０５７２】
特に好ましい実施形態において、ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、免疫賦活性ＲＮＡ（好ましくは配列番号５、３９４または１００７２）であり、以上に規定されているような少なくとも１つのＭＤＳＣの阻害剤、またはその断片もしくはバリアントと組み合わせられる。
【０５７３】
＜１４．ＩＤＯ経路阻害因子＞
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関して以上に開示されているような、ＩＤＯ経路阻害因子の、タンパク質に基づく阻害剤またはその断片もしくはバリアントは、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。代替的に、これらのタンパク質もしくはペプチドまたはその断片もしくはバリアントをコードしている核酸は、薬学的に活性なさらなる成分として使用され得る。
【０５７４】
［化学的なＩＤＯ経路阻害剤］
さらに好ましい実施形態において、薬学的に活性な、さらなる成分は、ＩＤＯ経路阻害因子（小分子阻害剤から好ましく選択される）から選択され得る。好ましくは、ＩＤＯ経路阻害因子は、以下の一覧：インドキシモド（１−メチル−トリプトファンのＤ異性体）およびＮＬＧ９１９から選択される。
【０５７５】
特に好ましい実施形態において、ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、免疫賦活性ＲＮＡ（好ましくは配列番号５、３９４または１００７２）であり、以上に規定されているような少なくとも１つのＩＤＯ経路阻害因子、またはその断片もしくはバリアントと組み合わせられる。
【０５７６】
＜１５．アポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質またはペプチド＞
アポトーシスは、厳重に制御されている細胞過程であり、アポトーシスの不完全な制御は、ヒトの癌の顕著な特徴である。腫瘍細胞におけるアポトーシスを回復するために、重要なアポトーシス制御因子を標的にすることは、癌の新たな治療戦略として進められている。アポトーシスタンパク質の阻害因子（ＩＡＰ）の一員である、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１およびｃＩＡＰ２は、細胞死および細胞生存の決定的な制御因子であり、新たな癌治療にとって興味深い標的である。ＳＭＡＣ／ＤＩＡＢＬＯタンパク質は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１およびｃＩＡＰ２の内在性アンタゴニストである。この１０年に、集中的な研究の試みは、癌処置にとっての臨床試験中である種々の小分子ＳＭＡＣ模倣物の設計および開発をもたらしている。
【０５７７】
さらなる好ましい実施形態において、本発明の組成物は、アポトーシスタンパク質の阻害剤に結合し、したがってアポトーシス性の死に対して癌細胞を感受性にする、少なくとも１つの分子を含んでいる。
【０５７８】
したがって、本発明のＲＮＡ含有組成物は、アポトーシスの阻害因子に結合する少なくとも１つの分子（例えばＳＭＡＣ模倣物）を含んでいることが、特に好ましい。
【０５７９】
本発明に係るＩＡＰに結合する特に好ましいタンパク質またはペプチドには、Ｏｍｉ／ＨｔｒＡ２、Ｓｍａｃ、Ｓｍａｃ由来ペプチド、Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯおよびＸＡＦ１（ＸＩＡＰ関連因子１）ならびにその断片またはバリアントが包含される。
【０５８０】
これに関連して、「コーディングＲＮＡ」に関して以上に開示されているような、アポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質もしくはペプチド、またはその断片およびバリアントは、薬学的に活性な、さらなる成分として使用され得る。代替的に、これらのタンパク質もしくはペプチド、またはその断片もしくはバリアントをコードしている核酸は、薬学的に活性なさらなる成分として使用され得る。
【０５８１】
したがって、薬学的に活性な、さらなる成分は、アポトーシスの阻害因子に結合するタンパク質またはペプチド（例えばＳＭＡＣ模倣物）から選択されることが、特に好ましい。さらに、薬学的に活性な、さらなる成分として使用されるそのようなＳＭＡＣ模倣物は、アポトーシスの阻害因子を阻害する小分子であることが、特に好ましい。
【０５８２】
特に好ましい実施形態において、ＲＮＡ含有組成物の少なくとも１つのＲＮＡは、免疫賦活性ＲＮＡ（好ましくは配列番号５、３９４または１００７２）であり、以上に規定されているような、アポトーシスの阻害因子に結合する少なくとも１つのタンパク質もしくはペプチド、またはその断片もしくはバリアントと組み合わせられる。
【０５８３】
＜１６．抗菌剤＞
本発明によれば、本発明の組成物に含有され得る、および／または、共投与され得る、薬学的に活性な、さらなる成分の少なくとも１つは、抗菌剤であり得る。これに関連して、当業者に知られている任意の抗菌剤は、本明細書に規定されているような、本発明の組成物の成分と組み合わせて使用され得る。抗菌剤の非限定的な例としては、アミカシン、アモキシシリン、アモキシシリン−クラブラン酸、アンフォテリシンＢ、アンピシリン、アンピクリン（Ampicllin）−スルバクタム、アプラマイシン、アジスロマイシン、アストレオナム、バシトラシン、ベンジルペニシリン、カスポフンギン、ケファクロール、ケファドロキシル、ケファレキシン、ケファロチン、ケファゾリン、ケフジニル、ケフェピム、ケフィキシム、ケフメノキシム、ケフォペラゾン、ケフォペラゾン−スルバクタム、ケフォタキシム、ケフォキシチン、ケフビロム、ケフポドキシム、ケフポドキシム−クラブラン酸、ケフドキシム−スバルクタム、ケフブロジル、ケフキノム、ケフタジジム、ケフチブチン、ケフチオフル、ケフトビプロル、ケフトリアクソン、ケフロキシム、クロラムフェニコール、フロルフェニコール、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリナフロキサシン、クリンダマイシン、クロキサシリン、コリシチン、コトリモキサゾール（トリムトプリム／スルファメトキサゾール）、デルババンシン、ダルフォプリスチン／キノプリスチン、ダプトマイシン、ジベカチン、ジクロキサシリン、ドリペネム、ドキシサイクリン、エンロフロキサシン、エルタペネム、エリスロマイシン、フルクロキサシリン、フルコナゾール、フルシトシン、フォスフォマイシン、フシジン酸、ガレノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、ゲンタマイシン、イミペネム、イトラコナゾール、カナマイシン、ケトコナゾール、レボフロキサシン、リンコマイシン、リネゾリド、ロラカルベフ、メシルナム（アムジノシリン）、メロペネム、メトロニダゾール、メジオシリン、メジオシリン−スルバクタム、ミノサイクリン、モキシフロキサシン、ムピロシン、ナリジクス酸、ネオマイシン、メチルミシン、ニトロフラントイン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキサシリン、ペフロキサシン、ペニシリンＶ、ピペラシリン、ピペラシリン−スルバクタム、ピペラシリン−タゾバクタム、リファンピシン、ロキシスロマイシン、スパルフロキサシン、スペクチノマイシン、スピラマイシン、ストレプトマイシン、スルバクタム、スルファムトキサゾール、テイコプラミン、テラバンシン、テリスロマイシン、テモシリン、テトラシクリン（Tetracyklin）、チカルシリン、チカルシリン−クラブラン酸、チゲサイクリン、トブラマイシン、トリメトプリム、トロバフロキサシン、チロシン（Tylosin）、バンコマイシン、ビルギニアミシンおよびボリコナゾールが挙げられる。
【０５８４】
＜１７．抗ウイルス剤＞
本発明によれば、本発明の組成物に含有され得る、および／または、共投与され得る、薬学的に活性なさらなる成分／化合物の少なくとも１つは、抗ウイルス剤（これらに限定されないが、好ましくはヌクレオシド類似物（例えば、ジドブジン、アシクロビル、ガンシクロビル、ビダラビン、イドキシウリジン、トルフルリジンおよびラバビリン）、フォスカーネット、アマンタジン、ペラミビル、リマンタジン、サキナビル、インジナビル、リトナビル、アルファインターフェロンおよび他のインターフェロン、ＡＺｔ、ｔ−７０５、ザナミビル（Relenza（登録商標）およびオセルタミビル（Tamiflu（登録商標））））であり得る。他の抗ウイルス剤としては、インフルエンザウイルスワクチン（例えば、（Fluarix（登録商標））（Glaxo SmithKline）、FluMist（登録商標）（Medlmmune Vaccines）、Fluvirin（登録商標）（Chiron Corporation）、Flulaval（登録商標）（GlaxoSmithKline）、Afluria（登録商標）（CSL Biotherapies Inc.）、Agriflu（登録商標）（Novartis）またはFluzone（登録商標）（Aventis Pasteur））が挙げられる。
【０５８５】
＜１８．薬剤＞
いくつかの実施形態において、薬学的に活性な、さらなる成分／化合物は、少なくとも１つの薬剤を含み得る。用語「薬剤」は、生体の身体に導入または吸収されたときに通常の身体機能または細胞機能を変更する任意の物質を包含していることを意図されている。好適な薬剤（薬剤の、組み合わせおよび代替形態（例えば、代替的な塩の形態、遊離酸の形態、遊離塩基の形態、プロドラッグ、および水和物）が挙げられる）の非限定的な一部の例としては、鎮痛剤／解熱剤（例えば、アスピリン、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナトリウムナプロキセン、ブプレノルフィン、プロポキシフェンヒドロクロリド、プロポキシフェンナプシレート、メペリジンヒドロクロリド、ヒドロモルホンヒドロクロリド、モルヒネ、オキシコドン、コデイン、ジヒドロコデイン重酒石酸塩、ペンタゾシン、ヒドロコドン重酒石酸塩、レボルファノール、ジフルニサル、サリチル酸トロラミン、ナルブヒンヒドロクロリド、メフェナム酸、ブトルファノール、サリチル酸コリン、ブタルビタル、クエン酸フェニルトロキサミン、クエン酸ジフェンヒドラミン、メトトリメプラジン、シナメドリンヒドロクロリドおよびメプロバメート）；抗喘息薬（例えば、ケトチフェンおよびトラキサノクス）；抗生物質（例えば、ネオマイシン、ストレプトマイシン、クロラムフェニコール、セファロスポリン、アンピシリン、ペニシリン、テトラサイクリン、およびシプロフロキサシン）；抗うつ剤（例えば、ネフォパム、オキシペルチン、ドキセピン、アモキサピン、トラゾドン、アミトリプチリン、マプロチリン、フェネルジン、デシプラミン、ノルトリプチリン、トラニルシプロミン、フルオキセチン、イミプラミン、パモ酸イミプラミン、イソカルボキサジド、トリミプラミンおよびプロトリプチリン）；抗糖尿病薬（例えば、ビグアニドおよびスルホニル尿素誘導体）；抗真菌剤（例えば、グリセオフルビン、ケトコナゾール、イトラコナゾール、アンフォテリシンＢ、ニスタチンおよびカンジシン）；血圧降下剤（例えば、プロパノロール、プロパフェノン、オキシプレノロール、ニフェジピン、レセルピン、トリメタファン、フェノキシベンザミン、パルギリンヒドロクロリド、デセルピジン、ジアゾキシド、グアネチジン一硫酸塩、ミノキシジル、レシンナミン、ニトロプルシドナトリウム、ラウウォルフィアセルペンチン、アルセロキシロンおよびフェントラミン）；抗炎症薬（例えば、（非ステロイド性）インドメタシン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、ナプロキセン、イブプロフェン、ラミフェナゾン、ピロキシカム、（ステロイド性）コルチゾン、デキサメタゾン、フルアザコルト、デフラザコルト、セレコキシブ、レフェコキシブ、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロンおよびプレドニゾン）；抗新生物薬（例えば、シクロフォスファミド、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドクソルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、メトトレキサート、フルオロウラシル、ゲミシタビン、カルボプラチン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、メチル−ＣＣＮＵ、シスプラチン、エトポシド、カンプトセシンおよびその誘導体、フェネステリン、パクリタキセルおよびその誘導体、ドセタキセルおよびその誘導体、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ゴセレリン、レウプロリド、タモキシフェン、インターフェロンアルファ、レチノイン酸（ＡＴＲＡ）、ナイトロジェンマスタードアルキル化剤およびピポサルファン）；抗不安剤（例えば、ロラゼパム、ブスピロン、パラゼパム、クロルジアゼポキシド、オキサゼパム、クロラゼブ酸二カリウム、ジザゼパム、パモ酸ヒドロキシジン、ヒドロキシジンヒドロクロリド、アルプラゾラム、ドロペリドール、ハラゼパム、クロルメザノンおよびダントロレン）；免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、ミゾリビンおよびＦＫ５０６（タクロリムス））；抗偏頭痛剤（例えば、エルゴタミン、プロパノロール、ムチン酸イソメテプテンおよびジクロルアルフェナゾン）；鎮静剤／睡眠剤（例えば、バルビツール酸塩（例えば、ペントバルビタール、ペントバルビタールおよびセコバルビタール））；およびベンゾジアザピン（例えば、フルラゼパムヒドロクロリド、トリアゾラムおよびミダゾラム）；抗狭心症剤（例えば、ベータ−アドレナリン遮断薬；カルシウムチャネル遮断薬（例えば、ニフェジピンおよびジルチアゼム））；硝酸塩（例えば、ニトログリセリン、イソソルビドジニトラート、ペンテアリスリトールトテラニトラートおよびエルスリチルテトラニトラート）；抗精神病剤（例えば、ハロペリドール、コハク酸ロキサピン、ロキサピンヒドロクロリド、チオリダジン、チオリダジンヒドロクロリド、チオチキセン、フルフェナジン、デカン酸フルフェナジン、エナント酸フルフェナジン、トリフルオペラジン、クロルプロマジン、ペルフェナジン、クエン酸リチウムおよびプロクロルペラジン）；抗躁病剤（例えば、炭酸リチウム）；抗不整脈薬（例えば、ブレチリウムトシラート、エスモロール、ベラパミル、アミオダロン、エンカミド、ジゴキシン、ジギトキシン、メキシレチン、リン酸ジソピラミド、プロカインアミド、硫酸キニジン、グルコン酸キニジン、ポリガラクツロン酸キニジン、酢酸フレカミド、トカミドおよびリドカイン）；抗関節炎剤（例えば、フェニルブタゾン、スリンダク、ペニシラニン、サルサラート、ピロキシカム、アザチオプリン、インドメタシン、メクロフェナメート、金チオリンゴ酸ナトリウム、ケトプロフェン、オーラノフィン、オーロチオグルコースおよびトルメチンナトリウム）；抗痛風剤（例えば、コルキシンおよびアロプリノール）；抗凝固剤（例えば、ヘパリン、得ｈパリンナトリウムおよびワルファリンナトリウム）；血栓溶解剤（例えば、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼおよびアルテプラーゼ）；抗線維素溶解剤（例えば、アミノカプロン酸）；血液流動剤（例えば、ペントキシフィリン）；抗血小板剤（例えば、アスピリン）；抗痙攣薬（例えば、バルプロ酸、ジバルプロックスナトリウム、フェニロイン、フェニロインナトリウム、クロナゼパム、ピリミドン、フェノバルビタール、カルバマゼピン、アモバルビタールナトリウム、メトスクシミド、メタルビタール、メフォバルビタール、メフェニロイン、フェンスクシミド、パラメタジオン、エトトニン、フェナセミド、セコバルビタールナトリウム、クロラゼブ酸二カリウムおよびトリメタジオン）；抗パーキンソン剤（例えば、エトスクシミド）；抗ヒスタミン剤／止痒剤（例えば、ヒドロキシジン、ジフェンヒドラミン、クロルフェニラミン、マレイン酸ブロムフェニラミン、シクロヘプタジンヒドロクロリド、テルフェナジン、フマル酸クレマスチン、トリプロリジン、カルビノキサミン、ジフェニルピラジン、フェニンダミン、アザタジン、トリペレナミン、マレイン酸デクスクロルフェニラミン、メトジラジンおよび）；カルシウム調節に有用な剤（例えば、カルシトニンおよび副甲状腺ホルモン）；抗菌剤（例えば、硫酸アミカシン、アズトレオナム、クロラムフェニコール、パルミチン酸クロラムフェニコール、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、パルミチン酸クリンダマイシン、リン酸クリンダマイシン、メトロニダゾール、メトロニダゾールヒドロクロリド、硫酸ゲンタマイシン、リノマイシンヒドロクロリド、硫酸トブラマイシン、バンコマイシンヒドロクロリド、硫酸ポリミキシンＢ、コリスチンメタンスルホン酸ナトリウムおよびコリスチン硫酸）；抗ウイルス剤（例えば、インターフェロン  アルファ、ベータまたはガンマ、ジドブジン、アマンタジンヒドロクロリド、リバビリンおよびアシクロビル）；抗微生物剤（例えば、セファロスポリン（例えば、セファゾリンナトリウム、セフラジン、セファクロル、セファリンナトリウム、セフチゾキシムナトリウム、セフォペラゾンナトリウム、セフォテタン二ナトリウム、セフロキシム  アクセチル、セフォタキシムナトリウム、セファドロキシル一水和物、セファレキシン、セファロチンナトリウム、セファレキシンヒドロクロリド一水和物、セファマンドールナファート、セフォキシチンナトリウム、セフォニシドナトリウム、セフォラニド、セフトリアクソンナトリウム、セファチジム、セファドロキシル、セフラジンおよびセフロキシムナトリウム）；ペニシリン（例えば、アンピシリン、アモキシリン、ペニシリンＧベンザチン、シクラシリン、アンピシリンナトリウム、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＶカリウム、ピペラシンナトリウム、オキサシリンナトリウム、バカンピシリンヒドロクロリド、クロキサシリンナトリウム、チカルシリン二ナトリウム、アズロシリンナトリウム、カルベニシリンインダニルナトリウム、ペニシリンＧプロカイン、メチシリンナトリウムおよびナフシリンナトリウム）；マクロライド（例えば、アジスロイマイシン、クラリスロマイシンおよびエリスロマイシン（例えば、エチルコハク酸エリスロマイシン、エリスロマイシン、エリスロマイシンエストラート、エリスロマイシンラクトビオナート、ステアリン酸エリスロマイシンおよびエチルコハク酸エリスロマイシン））；テトラサイクリン（例えば、テトラサイクリンヒドロクロリド、ドキシサイクリンヒクラートおよびミノサイクリンヒドロクロリド））；抗感染薬（例えばＧＭ−ＣＳＦ）；気管支拡張薬（例えば、交感神経模倣薬（例えば、エピネフリンヒドロクロリド、硫酸メタプロテレノール、硫酸テルブタリン、イソエタリン、イソエタリンメシラート、イソエタリンヒドロクロリド、硫酸アルブテロール、アルブテロール、ビトルテロールメシラート、イソプロテロールヒドロクロリド、硫酸テルブタリン、重酒石酸エピネフリン、メタプロテレ��ール、エピネフリンおよび重酒石酸エピネフリン）；抗コリン作用薬（例えば、イプラトロピウムブロミド）；キサンチン（例えば、アミノフィリン、ジフィリン、硫酸メタプロテレノールおよびテオフィリン）；マスト細胞安定化剤（例えば、クロモリンナトリウム）；吸入コルチコステロイド（例えば、二プロピオン酸ベクロメタゾン（ＢＤＰ）および二プロピオン酸ベクロメタゾン一水和物；サルブタモール；イプラトロピウムブロミド；ブデソニド；サルメテロール；キシナフォアート；トリアムシノロン；ネドクロミルナトリウム；フルニソリド；プロピオン酸フルチカゾン）；ステロイド化合物およびステロイドホルモン（例えば、アンドロゲン（例えば、ダナゾール、テストステロンシピオナート、フルオキシメステロン、エチルテストステロン、テストステロンエナテート、メチルテストステロン）；エストロゲン（例えば、エストラジオール、エストロピペートおよび複合エストロゲン）；プロゲスチン（例えば、酢酸メトキシプロゲステロンおよび酢酸ノルチンドロン）；コルチコステロイド（例えば、トリアムシノロン、ベータメタゾン、リン酸ベータメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、酢酸デキサメタゾン、プレドニゾン、酢酸メチルプレドニゾロン懸濁物、トリアムシノロンアセトニド、メチルプレドニゾン、リン酸プレドニゾンナトリウム、コハク酸プレドニゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、トリアムシノロンヘキサカトニド、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンシピオナート、プレドニゾン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸パラメタゾン、プレドニゾロンテブタート、酢酸プレドニゾン、リン酸プレドニゾンナトリウム、およびチオイドホルモン（例えば、レボチロキシンナトリウム））；血糖降下剤（例えば、ヒトインスリン、精製ビーフインスリン、精製ブタインスリン、グルブリド、メトフォルミン、クロルプロパミド、グリピジド、トルブタミドおよびトラザミド）；脂質低下剤（例えば、クロフィブラート、デキストロチロキシンナトリウム、プロブコール、プラバスチチン、アトロバスタチン、ロボスタチンおよびナイアシン）；タンパク質（例えば、ＤＮａｓｅＡ、アルギナーゼ、スーパーオキシドジムスターゼおよびリパーゼ）；核酸（例えば、アンチセンス核酸）；赤血球産生刺激に有用な剤（例えば、エリスロポエチン）；
【０５８６】
抗潰瘍／抗逆流の剤（ファモチジン、シメチジンおよびラニチジンヒドロクロリド）；制おう吐剤／制吐剤（例えば、メクリジンヒドロクロリド、ナビロン、プロクロルペラジン、ジメンヒドリナート、プロメタジンヒドロクロリド、チエチルペラジンおよびスコポラミン；ならびに本明細書に記載の組成物および方法において有用な他の薬剤（ミトタン、ハロニトロソ尿素、アントロサイクリン、エプリプチシン、セフトリアクソン、ケトコナゾール、セフタジジム、オキサプロジン、バラシクロビル、ウロフォリトロピン、ファムシクロビル、フルタミド、エナラプリル、イトラコナゾール、ブスピロン、ガバペンチン、フォシノプリル、トラマドール、アカルボース、ロラゼパム、フォリトロピ、オメプラゾール、フルオキセチン、リシノプリル、トラマドール、レボフロキサシン、ザフィルルカスト、インターフェロン、成長ホルモン、インターロイキン、エリスロポエチン、顆粒球刺激因子、ニザチジン、ブプロピオン、ペリンドプリル、エルブミン、アデノシン、アレンドロナート、アルプロシタジル、ベナゼプリル、ベータクソロール、硫酸ブレオマイシン、デクスフェンフルラミン、ジルチアゼム、フェンタニル、フレカミド、ゲムシタビン、酢酸グラチラマー、グラニセトロン、ラミブジン、マンガフォジピル三ナトリウム、メサラミン、フマル酸メトプロロール、メトロニダゾール、ミグリトール、モエキシプリル、モンテロイカスト、酢酸オクトレオチド、オロパタジン、パリカルシトール、ソマトロピン、コハク酸スマトリプタン、タクリン、ベラパミル、ナブメトン、トロバフロキサシン、ドラセトロン、ジドブジン、フィナステリド、トブラマイシン、イスラジピン、トロカポン、エノキサパリン、フルコナゾール、ランソプラゾール、テルビナフィン、パミドロナート、ジダノシン、ジクロフェナク、シサプリド、ベンラファキシン、トログリタゾン、フルバスタチン、ロザルタン、イミグルセラーゼ、ドネペジル、オランザピン、バルサルタン、フェクソフェナジン、カルシトニンおよびイプラトロピウムブロミドが挙げられる）が挙げられる。いくつかの実施形態において、薬剤は水溶性であり得る。いくつかの実施形態において、薬剤は水溶性でなくともよい。
【０５８７】
＜１９．標準的な治療法との組み合わせ＞
本発明によれば、本発明の組成物に含有され得る、および／または、共投与され得る、少なくとも１つのさらなる活性な薬学的な成分／化合物は、特定の腫瘍疾患または癌疾患の処置のために使用される任意の標準的な療法（例えば、任意の化学療法、チェックポイント修飾因子、キナーゼ阻害剤など）から選択され得る。
【０５８８】
［アジュバントおよびさらなる成分］
本発明によれば、本発明の組成物に含有され得る、および／または、共投与され得る、少なくとも１つのさらなる活性な薬学的な成分／化合物は、アジュバントであり得る。特定の実施形態によれば、本発明の組成物は、アジュバントを含み得る。これに関連して、アジュバントは、自然免疫系の免疫応答（例えば非特異定な免疫応答）を惹起または増強させるために適した任意の化合物と理解され得る。言い換えると、本発明の組成物は、投与されたときに、必要に応じてそれに含まれているアジュバントによって、自然免疫応答を好ましく引き出す。
【０５８９】
ビヒクル、トランスフェクション剤または複合化剤として、本発明の組成物のＲＮＡに関して上述されているような、カチオン性化合物またはポリカチオン性化合物は、デポーおよび送達に好適なアジュバントとして特に好ましい。
【０５９０】
さらに、本発明の組成物は、特に病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に結合することによって、自然免疫系の免疫応答（すなわち非特異定な免疫応答）を惹起または増強させるために適した１つ以上のさらなるアジュバントを含み得る。言い換えると、薬学的組成物は、投与されたときに、必要に応じてそれに含まれているアジュバントによって、自然免疫応答を好ましく引き出す。好ましくは、そのようなアジュバントは、当業者に知られている、この場合に好適な（すなわち哺乳類における自然免疫の誘導を補助する）アジュバントから選択され得る。
【０５９１】
また、そのようなアジュバントは、当業者に知られている、この場合に好適な（すなわち哺乳類における自然免疫の誘導を補助する）、および／または、本発明の組成物の成分のデポーおよび送達に好適な、任意のアジュバントから選択され得る。上述のようなカチオン性化合物またはポリカチオン性化合物が、デポーおよび送達に好適なアジュバントとして好ましい。同様に、アジュバントは、例えば上述のようなカチオン性化合物またはポリカチオン性化合物からなる群から選択され得、キトサン、ＴＤＭ、ＭＤＰ、ムラミルジペプチド、プルロニクス、ミョウバン溶液、水酸化アルミニウム、ＡＤＪＵＭＥＲ（登録商標）（ポリホスファゼン）；リン酸アルミニウムゲル；藻類から得たグルカン；アルガムリン；水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）；高いタンパク質吸収性の水酸化アルミニウムゲル；低粘度の水酸化アルミニウムゲル；ＡＦまたはＳＰＴ（スクアラン（５％）、Ｔｗｅｅｎ  ８０（０．２％）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ１２１（１．２５％）、リン酸緩衝化生理食塩水、ｐＨ７．４のエマルション）；ＡＶＲＩＤＩＮＥ（登録商標）（プロパンジアミン）；ＢＡＹ  Ｒ１００５（登録商標）（（Ｎ−（２−デオキシ−２−Ｌ−ロイシルアミノブ−Ｄ−グルコピラノシル）−Ｎ−オクタデシル−ドデカノイル−アミドヒドロ酢酸）；ＣＡＬＣＩＴＲＩＯＬ（登録商標）（１−アルファ，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３）；リン酸カルシウムゲル；ＣＡＰ（登録商標）（リン酸カルシウムナノ粒子）；コレラホロ毒素、コレラ毒素Ａ１タンパク質Ａ〜Ｄ断片の融合タンパク質、コレラ毒素のサブユニットＢ；ＣＲＬ  １００５（ブロック共重合体Ｐ１２０５）；サイトカイン含有リポソーム；ＤＤＡ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド）；ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン；ＤＭＰＣ（ジミリストイルホスファチジルコリン）；ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリセロール）；ＤＯＣ／ミョウバン複合体（デオキシコリン酸ナトリウム塩）；フロイント完全アジュバント；フロイント不完全アジュバント；ガンマイヌリン；Ｇｅｒｂｕアジュバント（ｉ）Ｎ−アセチルグルコサミニル−（Ｐ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル-L-アラニル−Ｄ３５グルタミン（ＧＭＤＰ）、ｉｉ）ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド（ＤＤＡ）、ｉｉｉ）亜鉛−Ｌ−プロリン塩複合体（ＺｎＰｒｏ−８）；ＧＭ−ＣＳＦ）の混合物）；ＧＭＤＰ（Ｎ−アセチルグルコサミニル−（ｂ１−４）−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ４７アラニル−Ｄ−イソグルタミン）；イミキモド（１−（２−メチプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）)；ＩｍｍＴｈｅｒ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａ−グリセロールジパルミチン酸）；ＤＲＶ（脱水−再水和小胞から調製された免疫リポソーム）；インターフェロンガンマ；インターロイキン−１ベータ；インターロイキン−２；インターロイキン−７；インターロイキン−１２；ＩＳＣＯＭＳ（登録商標）；ＩＳＣＯＰＲＥＰ  ７.０．３.（登録商標）；リポソーム；ＬＯＸＯＲＩＢＩＮＥ（登録商標）（７−アリル−８−オキソグアノシン）��ＬＴ５経口アジュバント（Ｅ.ｃｏｌｉの不安定エンテロトキシン−プロトキシン）；任意の組成物の小球および微粒子；ＭＦ５９（登録商標）；（スクアレン水エマルション）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ５１（登録商標）（精製フロイント不完全アジュバント）；ＭＯＮＴＡＮＩＤＥ  ＩＳＡ  ７２０（登録商標）（代謝可能なオイルアジュバント）；ＭＰＬ（登録商標）（３−Ｑ−デサシル−４‘−モノホスホリル脂質Ａ）；ＭＴＰ−ＰＥおよびＭＴＰ−ＰＥリポソーム（（Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニルｌ−Ｌ−アラニン−２−（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グルセロ−３−（ヒドロキシホスホリロキシ））−エチルアミド、一ナトリウム塩）；ＭＵＲＡＭＥＴＩＤＥ（登録商標）（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−Ｇｌｎ−ＯＣＨ３）；ＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（登録商標）およびＤＭＵＲＡＰＡＬＭＩＴＩＮＥ（登録商標）（Ｎａｃ−Ｍｕｒ−Ｌ−Ｔｈｒ−Ｄ−ｉｓｏＧＩｎ−ｓｎ−グリセロジパルミトイル）；ＮＡＧＯ（ノイラミニダーゼ−ガラクトースオキシダーゼ）；任意の組成物のナノスフェアまたはナノ粒子；ＮＩＳＶ（非イオン性界面活性剤小胞）；ＰＬＥＵＲＡＮ（登録商標）（β-グルカン）；ＰＬＧＡ、ＰＧＡおよびＰＬＡ（乳酸およびグリコール酸のホモポリマーおよびコポリマー；小球／微粒子）ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｌ１２１（登録商標）；ＰＭＭＡ（ポリメチルメタクリレート）；ＰＯＤＤＳ（登録商標）（プロテノイド小球）；カルバミン酸ポリエチレン誘導体；ポリｒＡ：ポリｒＵ（ポリアデニル酸−ポリウリジル酸複合体）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）；タンパク質のコクリエート（cochleates）（Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, AL）；ＳＴＩＭＵＬＯＮ（登録商標）（QS-21）；Ｑｕｉｌ−Ａ（Ｑｕｉｌ−Ａサポニン）；Ｓ−２８４６３（４−アミノ−ｏｔｅｃ−ジメチルｌ−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール；ＳＡＦ−１（登録商標）（「Ｓｙｎｔｅｘアジュバント製剤」；センダイプロテオリポソームおよびセンダイ含有脂質マトリクス；Ｓｐａｎ−８５（トリオレイン酸ソルビタン）；Ｓｐｅｃｏｌ（Ｍａｒｃｏｌ  ５２、Ｓｐａｎ  ８５およびＴｗｅｅｎ  ８５のエマルション）；Ｒｏｂａｎｅ（登録商標）（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサンおよび２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２,６,１０,１４,１８,２２−テトラコサヘキサン）；ステアリルチロシン（オクタデシルチロシンヒドロクロリド）；Ｔｈｅｒａｍｉｄ（登録商標）（Ｎ−アセチルグルコサミニル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−Ａｌａ−Ｄ−ｉｓｏＧｌｕ−Ｌ−Ａｌａジパルミトキシプロピルアミド）；Ｔｈｅｒｏｎｙｌ−ＭＤＰ（Ｔｅｒｍｕｒｔｉｄｅ（登録商標）または［ｔｈｒ  １］−ＭＤＰ；Ｎ−アセチルムラミル−Ｌトレオニル−Ｄ−イソグルタミン）；Ｔｙ粒子（Ｔｙ−ＶＬＰ（すなわちウイルス様粒子））；Ｗａｌｔｅｒ−Ｒｅｅｄリポソーム（水酸化アルミニウムに吸収されている、脂質Ａを含んでいるリポソーム）およびリポペプチド（特にアルミニウム塩における、Ｐａｍ３Ｃｙｓ（例えば、Ａｄｊｕ−ｐｈｏｓ、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ、Ｒｅｈｙｄｒａｇｅｌ��が挙げられる）；エマルション（ＣＦＡ、ＳＡＦ、ＩＦＡ、ＭＦ５９、Ｐｒｏｖａｘ、ＴｉｔｅｒＭａｘ、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ、Ｖａｘｆｅｃｔｉｎが挙げられる）；コポリマー（Ｏｐｔｉｖａｘ（ＣＲＬ１００５）、Ｌ１２１、Ｐｏｌｏａｘｍｅｒ４０１０）などが挙げられる）；リポソーム（Ｓｔｅａｌｔｈが挙げられる）、コクリエート（ＢＩＯＲＡＬが挙げられる）；植物由来のアジュバント（ＱＳ２１、Ｑｕｉｌ  Ａ、Ｉｓｃｏｍａｔｒｉｘ、ＩＳＣＯＭが挙げられる）；同時刺激に好適なアジュバント（Ｔｏｍａｔｉｎｅ、生体高分子（ＰＬＧ、ＰＭＭ、イヌリンが挙げられる）、微生物由来のアジュバント（Ｒｏｍｕｒｔｉｄｅ、ＤＥＴＯＸ、ＭＰＬ、ＣＷＳ、マンノース、ＣｐＧ核酸配列、ＣｐＧ７９０９、ヒトＴＬＲ  １−１０のリガンド、マウスＴＬＲ  １−１３のリガンド、ＩＳＳ−１０１８、３５  ＩＣ３１、イミダゾキノリン、Ａｍｐｌｉｇｅｎ、Ｒｉｂｉ５２９、ＩＭＯｘｉｎｅ、ＩＲＩＶ、ＶＬＰ、コレラ毒素、熱不安定性毒素、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、フラゲリン、ＧＰＩアンカー、ＬＮＦＰＩＩＩ／Ｌｅｗｉｓ  Ｘ、抗菌ペプチド、ＵＣ−１Ｖ１５０、ＲＳＶ融合タンパク質、ｃｄｉＧＭＰが挙げられる）が挙げられる）；ならびにアンタゴニストとして好適なアジュバント（ＣＧＲＰ神経ペプチドが挙げられる）から選択され得る。
【０５９２】
特に好ましくは、アジュバントは、ナイーブＴ細胞のＴｈ１免疫応答の誘導を補助するアジュバント（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＦＮｇ、本明細書に規定のような任意のＲＮＡ（好ましくは免疫賦活性のＲＮＡ）、ＣｐＧ  ＤＮＡなど）から選択され得る。
【０５９３】
本発明の組成物は、上述のような少なくとも１つのＲＮＡに加えて、さらなる抗原もしくはさらなる抗原提示核酸；さらなる免疫療法剤；１つ以上の補助的な物質；またはヒトのトルライク受容体に対するその結合アフィニティによって免疫刺激すると知られている任意のさらなる化合物；および／またはアジュバント核酸（好ましくは免疫賦活性のＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ））からなる群から選択される成分をさらに含有することができる。
【０５９４】
本発明の組成物は、必要に応じてその免疫原性または免疫活性化能を増強するために、１つ以上の補助的な物質をさらに含有し得る。本明細書に規定されているような少なくとも１つのＲＮＡ、および本発明の組成物に必要に応じて含有され得る補助的な物質の共同作用は、それによって好ましく実現される。補助的な物質の種々の種類によって、種々の機序は、この点において考慮され得る。例えば、樹状細胞（ＤＣ）の成熟を可能にする化合物（例えば、リポ多糖、ＴＮＦ−アルファまたはＣＤ４０リガンド）は、好適な補助的な物質の第１の分類を形成している。一般的に、「危険シグナル」（ＬＰＳ、ＧＰ９６など）のように免疫系に影響する任意の作用物質、または免疫系が、標的化された様式において増強されるおよび／または影響されることを可能にするサイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）を、補助的な物質として使用可能である。特に好ましい補助的な物質は、自然免疫をさらに促進するサイトカイン、成長因子（例えば、ｈＧＨ）である。サイトカインは、例えば、モノカイン、リンフォカイン、インターロイキンまたはケモカインである。自然免疫をさらに促進するサイトカインは、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−２４、ＩＬ−２５、ＩＬ−２６、ＩＬ−２７、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３２、ＩＬ−３３、ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−ベータ、ＩＦＮ−ガンマ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＬＴ−ベータまたはＴＮＦ−アルファである。
【０５９５】
本発明の組成物は、ヒトのトル様受容体（Toll-like receptor）（ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０）またはマウスのトルライク受容体（ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２またはＴＬＲ１３）に対する結合アフィニティ（リガンドとしての）によって免疫刺激することが知られている、さらなる任意の化合物を含有し得る。
【０５９６】
本発明の組成物に含まれ得るさらなる添加物は、乳化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ）；湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）；着色剤；味質付加剤、薬学的担体；タブレット形成剤；安定化剤；抗酸化剤；保存剤である。
【０５９７】
［薬学的組成物］
さらなる態様において、本発明はまた、本明細書に規定されるようなＲＮＡ含有組成物ならびに薬学的に許容可能な担体および／またはビヒクルを含んでいる薬学的組成物を提供する。好ましくは、薬学的組成物は、腫瘍内使用（好ましくは腫瘍組織への注入による）のために調製されている。本発明の薬学的組成物の注入可能な滅菌の形態は、水性懸濁物または油性懸濁物であり得る。これらの懸濁物は、好適な分散剤または湿潤剤ならびに懸濁剤を用いて、当該分野に知られている手法にしたがって調合され得る。
【０５９８】
薬学的に許容可能な担体としては、本発明の成分を含んでいる組成物のうち、液体基剤または非液体基剤が典型的に挙げられる。組成物が液体形態にて準備される場合、担体は、典型的に、発熱物質を含まない水、等張性の生理食塩水、緩衝化（水性）溶液（例えば、リン酸、クエン酸などの緩衝化溶液）である。注入緩衝液は、特定の基準媒質を基準にして、高張、等張または低張であり得る（すなわち緩衝液は、特定の基準媒質を基準にして、より高い塩分、等しい塩分またはより低い塩分を有し得る）。ここで、浸透圧または他の濃度作用による細胞の損傷を導かないそのような濃度の、上述した塩が、使用され得ることが好ましい。基準媒質は、例えば、「インビボ」法に見られる液体（例えば、血液、リンパ液、細胞質液または他の体液）、または、例えば「インビトロ」法における基準媒質として使用され得る液体（例えば、一般的な緩衝液または液体）である。そのような一般的な緩衝液または液体は、当業者に知られている。リンゲル−乳酸液は、液体基剤として特に好ましい。
【０５９９】
しかし、処置される患者への投与に好適な、適合性の固体または液体の充填剤または希釈剤の１つ以上が、本発明に係る薬学的組成物に同様に使用され得る。本明細書に使用されるとき、用語「適合性」は、本発明の薬学的組成物の成分が、薬学的組成物の薬学的有効性を典型的な使用条件のもとで実質的に低下させるような相互作用を生じない様式において、本発明の薬学的組成物の成分と混合可能であることを意味する。
【０６００】
［投与］
本発明の組成物または本発明の薬学的組成物は、従来の針注入または針なしの注入によって腫瘍組織内に投与され得る。好ましい実施形態において、本発明の組成物または本発明の薬学的組成物は、ジェット式注射によって投与される。ジェット式注射は、本発明の組成物および必要に応じてさらなる好適な賦形剤を含んでいる液体が、オリフィスを通して押し出され、哺乳類の皮膚を貫通可能な高圧の超微細な液体流を生じる、針なしの注入法を指す。原理的には、液体流は、穴（これを通って液体流が標的組織（すなわち腫瘍組織）に押し込まれる）を、皮膚に形成する。本発明によれば、ジェット式注射は、本発明の組成物の腫瘍内使用のために使用され得る。
【０６０１】
本発明の組成物は、従来の針注入または針なしの注入によって、腫瘍組織に隣接、または非常に接近して投与され得る。好ましい実施形態において、本発明の薬学的組成物は、ジェット式注射によって、腫瘍組織に隣接、または非常に接近して投与される。ジェット式注射は、本発明の組成物および必要に応じてさらなる好適な賦形剤を含んでいる液体が、オリフィスを通して押し出され、哺乳類の皮膚を貫通可能な高圧の超微細な液体流を生じる、針なしの注入法を指す。原理的には、液体流は、穴（これを通って液体流が標的組織（すなわち腫瘍組織）に押し込まれる）を、皮膚に形成する。本発明によれば、ジェット式注射は、腫瘍内使用（腫瘍組織に隣接、または非常に接近する）のために（特に本発明の組成物の注入のために）使用され得る。
【０６０２】
他の実施形態において、本発明の組成物または本発明の薬学的組成物は、経口的に、非経口的に、噴霧スプレーによって、局所的に、直腸に、経鼻に、頬側に、経腟に、または埋め込みリザーバを介して、投与され得る。本明細書に使用されるときの用語、非経口としては、皮下、血管内、筋肉内、関節内、リンパ節内、滑膜内、胸骨内、包膜内、肝臓内、病変内、頭蓋内、経皮、皮内、肺内、腹膜内、心臓内、および舌下の注入手法または導入手法が挙げられる。
【０６０３】
さらなる特に好ましい投与経路は、皮内注入および筋肉内注入である。
【０６０４】
本発明の薬学的組成物は、当該薬学的組成物の成分の投与および取り込みを容易にするためのさらなる成分を、さらに含み得る。そのようなさらなる成分は、適切な担体もしくはビヒクル、任意の免疫応答を補助するためのさらなるアジュバント、抗菌剤および／または抗ウイルス剤であり得る。
【０６０５】
本発明の薬学的組成物のさらなる成分は、免疫グロブリン（好ましくはＩｇＧ）、モノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体、多クローン性の（複数の）血清などから選択され得る免疫療法剤であり得る。好ましくは、そのようなさらなる免疫療法剤は、ペプチド／タンパク質として準備され得る、または核酸（好ましくは、ＤＮＡまたはＲＮＡ、より好ましくはｍＲＮＡ）によってコードされ得る。
【０６０６】
本発明の薬学的組成物は、「安全かつ有効な量」の、本発明の薬学的組成物の成分（特に本明細書に規定されるような（複数の）ＲＮＡ分子）を典型的に含んでいる。本明細書に使用されるとき、「安全かつ有効な量」は、腫瘍疾患または癌疾患の積極的な改善を有意に誘導するために十分な、本明細書に規定されるような（複数の）ＲＮＡ分子の、量を意味する。しかし、同時に、「安全かつ有効な量」は、重篤な副作用を回避し、かつ利点およびリスクの間における目的にかなった関係を許容するために十分に小さい。これらの限界の決定は、実際的な医療判断の範囲に、典型的にある。
【０６０７】
本発明の薬学的組成物は、ヒト医薬および動物薬の用途（特にヒト医薬の用途）に、一般に薬学的組成物として使用され得る。
【０６０８】
［ワクチン］
特に好ましい他の態様によれば、本発明の組成物または本発明の薬学的組成物は、ワクチンとして提供または使用され得る。典型的に、そのようなワクチンは、薬学的組成物について、以上に規定されている通りである。さらに、そのようなワクチンは、本明細書に規定されるような少なくとも１つのＲＮＡ、複数のＲＮＡを含んでいる本発明の組成物を、典型的に含有している。好ましくは、少なくとも１つのＲＮＡは、以上に規定されるような少なくとも１つの腫瘍抗原、または少なくとも１つの免疫賦活化因子をコードしている。本発明のワクチンはまた、本発明の薬学的組成物について本明細書に規定されるような、薬学的に許容可能な、担体、アジュバントおよび／またはビヒクルを含んでいる。本発明のワクチンに特に関連して、薬学的に許容可能な担体の選択範囲は、本発明のワクチンが投与される方法によって、原則として決定される。本発明のワクチンは、腫瘍組織内に局所的に投与され得る。
【０６０９】
本発明のワクチンは、必要に応じてその免疫原性または免疫活性化能を増強するために、１つ以上の補助的な物質をさらに含有し得る。本発明の薬学的組成物について規定されるような補助的な物質または添加物として、アジュバントが特に好ましい。
【０６１０】
［キットまたはキットの一部］
さらなる態様において、本発明は、以上に記載のようなＲＮＡ含有組成物もしくは以上に記載のような薬学的組成物、またはその成分、ならびに必要に応じて、当該成分の投与および用量に関する情報を有している技術的な指示書を含んでいる、キットまたはキットの一部に関する。
【０６１１】
本発明のＲＮＡ含有組成物の成分の他に、キットは、薬学的に許容可能なビヒクル、アジュバントおよび少なくとも１つのさらなる成分（例えば、本明細書に規定されるような薬学的に活性なさらなる成分／化合物）、ならびに投与のための手段および技術的な指示書を、さらに含んでいる。組成物の成分および考えられるさらなる成分は、凍結乾燥された形態にて準備され得る。好ましい実施形態において、キットの使用前に、準備されたビヒクルが、例えば技術的な指示書に、記載されているような所定の量において、凍結乾燥された成分に加えられる。
【０６１２】
［医療適用］
本発明は、本明細書に規定されるような、本発明のＲＮＡ含有組成物、または薬学的組成物、またはワクチン、またはキットもしくはキットの一部の、いくつかの用途および利用をさらに提供する。本発明の主な態様として、組成物または薬学的組成物またはキットもしくはキットの一部は、医薬として（すなわち腫瘍疾患またはがん疾患の処置のために）、使用され得る。これに関連して、処置は、腫瘍内使用（特に腫瘍組織内への注入）によって、好ましくなされる。他の態様によれば、本発明は、以上に記載のようなＲＮＡ含有組成物もしくは薬学的組成物、またはワクチン、またはキットもしくはキットの一部（これらは、腫瘍疾患またはがん疾患の処置のための腫瘍内使用（投与）を特に目的とする医薬の調製に使用される）の、第２の医療用途に関する。
【０６１３】
好ましくは、本明細書に述べられているような疾患は、腫瘍疾患または癌疾患（好ましくは、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連白血病、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨のがん（骨肉腫／悪性線維性組織球腫）、脳幹神経膠腫、脳腫瘍（小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、未分化神経外胚葉性テント上腫瘍、視覚路・視床下部神経膠腫（visual pathway and hypothalamic glioma））、乳がん、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、小児カルチノイド腫瘍、胃腸管系のカルチノイド腫瘍、未知の原発性のがん、原発性の中枢神経系リンパ腫、小児小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頸がん、小児がん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄白血病、大腸がん、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、結合組織形成性小細胞腫瘍、子宮内膜がん、上衣細胞腫、食道がん、腫瘍のユーイング群におけるユーイング肉腫、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、生殖腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管がん、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、胆のうがん、胃がん、胃腸管系のカルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭蓋外、生殖腺外または卵巣の胚細胞腫瘍、妊娠性の栄養膜腫瘍、脳幹の神経膠腫、小児大脳星状細胞腫、小児視覚路・視床下部神経膠腫、胃カルチノイド、毛様細胞白血病、頭頸部がん、心臓がん、肝細胞（肝）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、小児視床下部・視覚路神経膠腫、眼内黒色腫、島細胞がん（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓がん（腎細胞がん）、喉頭がん、白血病（急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、毛様細胞白血病、口唇がん、口腔がん、脂肪肉腫、肝がん、非小細胞性肺がん、小細胞性肺がん、リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、小児髄芽細胞腫、黒色腫、眼内黒色腫、メルケル細胞がん、成人悪性中皮腫、小児中皮腫、不顕性および原発性を有している転移性の扁平上皮頸がん、口腔がん、小児多発性内分泌腺腫症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫、菌状息肉症、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、慢性骨髄性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫（骨髄のがん）、慢性骨髄増殖性異常、鼻腔および副鼻腔のがん、鼻咽腔がん、神経芽細胞腫、口腔がん、口腔咽頭がん、骨の骨肉腫／悪性線維性組織球腫、卵巣がん、卵巣上皮がん（表面上皮間質腫瘍）、卵巣生殖細胞腫瘍、悪性の低い潜在性の卵巣腫瘍、膵臓がん、島細胞膵臓がん、副鼻腔および鼻腔のがん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、クロム親和細胞腫、松果体星状細胞種、小児松果体芽細胞腫および未分化神経外胚葉性テント上腫瘍、下垂体腺腫、形質細胞腫／多発性骨髄腫、肺強膜芽細胞腫、原発性中枢神経系白血病、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん（腎臓がん）、腎盂および尿管のがん、網膜芽細胞腫、小児横紋筋肉腫、唾液腺がん、ユーイング群の腫瘍の肉腫、カポジ肉腫、軟組織肉腫、���宮肉腫、セザリー症候群、皮膚がん（非黒色腫）、皮膚がん（黒色腫）、メルケル細胞皮膚肉腫、小腸がん、扁平上皮細胞肉腫、不顕性および原発性を有している転移性扁平上皮頸がん、小児未分化神経外胚葉性テント上腫瘍、精巣がん、咽頭がん、小児胸腺腫、胸腺種および胸腺がん、甲状腺がん、小児甲状腺がん、腎盂および尿管の移行細胞がん、妊娠性の栄養膜腫瘍、尿道口がん、子宮内膜性子宮がん、子宮肉腫、膣がん、小児視覚路・視床下部神経膠腫、外陰がん、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、ならびに小児ウィルムス腫瘍（腎臓がん）などが挙げられる）から選択される。
【０６１４】
腫瘍内投与に適した腫瘍または癌の特に好ましい例は、前立腺がん、肺がん、乳がん、脳腫瘍、頭頸部がん、甲状腺がん、大腸がん、胃がん、肝がん、膵臓がん、卵巣がん、皮膚がん、膀胱、子宮および子宮頸管である。
【０６１５】
特定の実施形態によれば、医薬は、単回用量または複数回用量として患者に投与され得る。一部の実施形態において、医薬は、単回用量（より後の第２の用量、および必要に応じてそれに続く第３、第４（それ以上）の用量などがともなう）として投与され得る。
【０６１６】
好ましくは、本発明の組成物は、単回用量につき、少なくとも４０μｇの量のＲＮＡが提供される。より詳細には、単回用量に含まれているｍＲＮＡの量は、典型的に、少なくとも２００μｇ、好ましくは２００μｇ〜１０００μｇ、より好ましくは３００μｇ〜８５０μｇ、より一層好ましくは３００μｇ〜７００μｇである。
【０６１７】
［さらなる（薬学的）化合物を用いた処置］
特に好ましい実施形態において、本発明の組成物または薬学的組成物もしくはワクチンを受ける対象は、癌の標準的な処置を受けている、または当該処置を受けた、癌または腫瘍を有している患者であり得る。好ましくは、患者は、標準的な処置を受けた後に、部分奏功に達している、または不変の疾患を有している。
【０６１８】
癌の標準的な処置としては、処置される特定の癌または腫瘍の種類に依存して、化学療法、放射線、化学放射線および外科手術（これらの処置は、個々にまたは組み合わせて、使用される）が挙げられる。
【０６１９】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物または薬学的組成物もしくはワクチンを受ける対象は、化学療法（例えば、第１選択または第２選択の化学療法）、放射線療法、化学放射線（化学療法および放射線両方の組み合わせ）、キナーゼ阻害剤、抗体療法および／またはチェックポイント調節因子（例えば、ＣＴＬ４阻害剤、ＰＤ１経路阻害剤）を受けた、または受けている、癌または腫瘍を有している患者（すなわち、以上に特定される処置の１つ以上を受けた後に部分奏功に達している、または不変の疾患を有している患者）であり得る。
【０６２０】
他の実施形態において、本発明の組成物または薬学的組成物もしくはワクチンを受ける対象は、以上に規定されるような薬学的に活性なさらなる成分／化合物を受けた、または受けている、癌または腫瘍を有している患者であり得る。好ましくは、当該対象は、以上に特定される処置の１つ以上を受けた後に部分奏功に達している、または不変の疾患を有している患者である。
【０６２１】
さらなる態様によれば、本発明は、腫瘍疾患またはがん疾患の処置の方法を指し、ここで、以上に記載のようなＲＮＡ含有組成物、または以上に記載のような薬学的組成物、または以上に記載のようなワクチン、または以上に記載のようなキットもしくはキットの一部は、特に腫瘍組織への注入によって、腫瘍内に好ましく使用される。処置のための方法のさらなる特徴については、以上に言及されている。
【０６２２】
［好ましい腫瘍内使用］
これに関連して、以上に規定されるような、ＲＮＡ含有組成物または薬学的組成物またはワクチンの腫瘍内使用は、異なる剤／薬学的に活性な成分／化合物の使用と組み合わせられることが特に好ましい。抗体（例えば、チェックポイント調節因子（例えば、抗ＣＴＬ４、抗ＯＸ４０、抗ＰＤ１または抗ＰＤ−Ｌ１））またはリガンド（例えば、ＣＤ４０Ｌ）が、特に好ましい。
【０６２３】
好ましい実施形態において、以下の組み合わせ：
−RNAdjuvant（i.t.）＋抗ＣＴＬＡ４（タンパク質として）（i.p.／i.v.）
−RNAdjuvant（i.t.）＋抗ＣＴＬＡ４（タンパク質として）（i.t.）
−RNAdjuvant（i.t.）＋抗ＰＤ１（タンパク質として）（i.p.／i.v.）
−RNAdjuvant（i.t.）＋抗ＰＤ１（タンパク質として）（i.t.）
−RNAdjuvant（i.t.）＋抗ＰＤ−Ｌ１（タンパク質として）（i.p.／i.v.）
−RNAdjuvant（i.t.）＋抗ＰＤ−Ｌ１（タンパク質として）（i.t.）
−RNAdjuvant（i.t.）＋ＣＤ４０Ｌ（i.t.）（タンパク質として、または核酸、好ましくはＲＮＡ、より好ましくはｍＲＮＡによってコードされている）
−RNAdjuvant（i.t.）＋ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ＋可溶性ＰＤ−１受容体をコードしているｍＲＮＡ＋抗ＣＤ７３（i.p.／i.v.）
−RNAdjuvant（i.t.）＋ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ＋可溶性ＰＤ−１受容体をコードしているｍＲＮＡ＋抗ＣＤ１３７（i.p.／i.v.）
−RNadjuvant（i.t.）
（i.t.＝腫瘍内、i.p.＝腹腔内、i.v.＝血管内＝intravenous）
が、特に好ましい。
【０６２４】
本発明において、指定のない限り、代替物および実施形態の異なる特徴は、適している場合には互いに組み合わせられ得る。さらに、用語「含んでいる」は、特に述べられていない限り、のみ「からなる」に限定的に狭く解釈されるべきではない。むしろ、本発明に関して、「からなる」は、「含んでいる」が本明細書のどこに用いられていようと、「含んでいる」の範囲に入ると発明者らによって特に意図されている一実施形態である。
【０６２５】
個々の公開物、特許または特許出願のそれぞれが、参照によって組み込まれると具体的かつ個々に示されているかのように、本明細書に引用されている公開物、特許および特許出願のすべては、参照によって本明細書に組み込まれる。先の発明が、明確な理解のための例証および実例として、いくらか詳細に説明されているが、一部の変更および改良が、添付の特許請求の範囲の精神または範囲から逸脱することなくそれらになされ得ることは、本発明の教示に鑑みて当業者に容易に理解される。
【０６２６】
以下に示されている実施例および図面は、単に例証であり、さらなるやり方において本発明を説明している。これらの図面および実施例は、それらに本発明を限定すると解釈されるべきではない。
【０６２７】
（図面の簡単な説明）
図１：ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ（ＩＬ−１２  ｍＲＮＡ）または組換えＩＬ−１２タンパク質（ｒＩＬ−１２タンパク質）を用いた腫瘍内処理後の、Ｅ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍を有しているマウスの、生存率を示す。実験を実施例１に記載の通りに実施した。カプランマイヤー生存曲線が示されている。
【０６２８】
図２：ＩＬ−１２  ｍＲＮＡ（Ｒ２７６３、配列番号１）および重合体の担体カーゴ複合体（Ｒ２３９１、RNAdjuvant（登録商標）、methodsに記載の通りに調製された）の組み合わせを用いた、マウスの腫瘍内処理が、コントロール群と比べて、有意に減少した腫瘍体積に導いたことを示す。実験を実施例２に記載の通りに実施した。図２は、腫瘍チャレンジ後の２１日目（すべての動物が生存していた最後の日）における平均の腫瘍体積を示す。統計分析を、マンホイットニー検定を用いて、GraphPad Prism version 5.04において実施した。
【０６２９】
図３：ＩＬ−１２  ｍＲＮＡおよび重合体の担体カーゴ複合体の組み合わせ（実施例２および図２のレジェンドに記載の通り）を用いた、マウスの腫瘍内処理後の、ＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。カプランマイヤー生存曲線が示されている。統計分析を、ログランク検定を用いて、GraphPad Prism version 5.04において実施した。
【０６３０】
図４：インフルエンザコアタンパク質をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後の、ＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。実験を実施例３に記載の通りに実施した。カプランマイヤー生存曲線が示されている。
【０６３１】
図５：パネル（Ａ）は、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後のＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの、腫瘍成長の中央値の分析を示す。これらの化合物のそれぞれの組み合わせ（コントロール群を含んでいる）を、図面に示されている通り、試験した。実験を、実施例４に記載の通りに実施した。
【０６３２】
パネル（Ｂ）は、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後のＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。これらの化合物のそれぞれの組み合わせ（コントロール群を含んでいる）を、図面に示されている通り、試験した。実験を実施例４に記載の通りに実施した。カプランマイヤー生存曲線が示されている。
【０６３３】
図６：ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後、および抗ＣＤ７３抗体の腹腔内処理後のＣＴ６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。これらの化合物のそれぞれの組み合わせ（コントロール群を含んでいる）を、図面に示されている通り、試験した。実験を実施例５に記載の通りに実施した。カプランマイヤー生存曲線が示されている。
【０６３４】
図７：ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後、および抗ＣＤ１７３抗体の腹腔内処理後のＣＴ６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。これらの化合物のそれぞれの組み合わせ（コントロール群を含んでいる）を、図面に示されている通り、試験した。実験を実施例６に記載の通りに実施した。カプランマイヤー生存曲線が示されている。
【０６３５】
図８：RNAdjuvantを用いた腫瘍内処理後、および抗ＰＤ−１抗体の腹腔内処理後の、ＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。これらの化合物のそれぞれの組み合わせ（コントロール群を含んでいる）を、図面に示されている通り、試験した。実験を実施例７に記載の通りに実施した。カプランマイヤー生存曲線が示されている。
【０６３６】
図９：ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよびＣＤ４０ＬをコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後の、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ単独を用いた腫瘍内処理と比べた、ＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。実験を実施例８に記載の通りに実施した。カプランマイヤー生存曲線が示されている。
【０６３７】
図１０：配列番号１００７３にしたがうマウスＣＤ４０Ｌ（ＭｍＣＤ４０Ｌ）をコードしているｍＲＮＡ配列Ｒ３５７１を示す。
【０６３８】
［実施例］
方法：ＲＮＡの調製
１．  ＤＮＡコンストラクトおよびＲＮＡコンストラクトの調製
本実施例のために、表１７に示したＲＮＡをコードしているＤＮＡ配列を調製し、当該ＤＮＡ配列を、続くＲＮＡインビトロ転写反応に使用した。
【０６３９】
【表１８】
2018517674.tif 000117
【０６４０】
リボソームタンパク質３２Ｌに由来する５’−ＴＯＰ−ＵＴＲを導入すること、ならびに、安定化のためのＧＣ最適化配列、続いて、アルブミン−３’ＵＴＲに由来する安定化配列、一続きの６４のアデノシン（ポリ（Ａ）配列）、一続きの３０のシトシン（ポリ（Ｃ）配列）、およびヒストンステムループを導入すること、によって野生型のコーディング配列を修飾することにより、ＭｍＩＬ−１２（ＧＣ）、インフルエンザＮＰ（ＧＣ）、ｓｏｌＰＤ−１、および、ＰｐＬｕｃ（ＧＣ））のコンストラクトを調製した。野生型のコーディング配列と比較してそれぞれのコーディング配列のＧＣ含有量を増加するインシリコのアルゴリズムを使用して、安定化のためのＧＣ最適化配列を導入することにより野生型をコードしているＤＮＡ配列を修飾し、大部分のＤＮＡ配列を調製した（表１２において「ＧＣ」として表される）。
【０６４１】
本実施例のために、ノンコーディング免疫賦活性ＲＮＡ（ｉｓＲＮＡ）Ｒ２０２５をコードしているＤＮＡ配列を調製し、当該ＤＮＡ配列を、続くＲＮＡインビトロ転写反応に使用した。
【０６４２】
２．  ＲＮＡインビトロ転写
上記の第１節に従って調製したそれぞれのＤＮＡプラスミドを、Ｔ７ポリメラーゼを使用して、インビトロにて転写した。ＩＬ−１２、ＮＰ，ＰｐＬｕｃ、ＣＤ４０Ｌおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているコンストラクトのＲＮＡインビトロ転写反応を、ＣＡＰ類似物（ｍ７ＧｐｐｐＧ）の存在下において、実行した。ｉｓＲＮＡ  Ｒ２０２５を、ＣＡＰ類似物を用いないで調整した。続いて、ＲＮＡを、Ｐｕｒｅ  Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ（登録商標）（ＣｕｒｅＶａｃ、テュービンゲン、ドイツ；国際公開公報第２００８／０７７５９２Ａ１号）を使用して精製した。
【０６４３】
３．  ポリマーカーゴ複合体（「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」）の調製
ポリマー担体のカチオン性成分として、以下のカチオン性ペプチドを使用した：配列番号７に基づく（Ｃｙｓ−Ａｒｇ１２−ＣｙｓまたはＣＲ１２Ｃ）。
【０６４４】
ポリマー担体カーゴ複合体の合成のために、上記の第１節において規定されているようなＲＮＡ配列Ｒ２０２５を有するＲＮＡ分子を、以上で規定されているようなカチオン性ＣＲ１２Ｃペプチド成分、と混合した。特定量のＲＮＡを、以下に指示したような質量比にて、それぞれのカチオン性成分と混合し、それによって複合体を形成させた。ポリマー化しているカチオン性成分を、本発明に従って使用した場合には、カチオン性成分のポリメリゼーションは、自発的に核酸カーゴの複合体化を開始する。その後、結果として生じる溶液を、水を用いて最終体積５０μｌに調節し、３０分間室温においてインキュベートした。さらなる詳細は、国際公開公報第２０１２０１３３２６号に記載されている。
【０６４５】
「ペプチド：ＲＮＡ」の質量比は、「１：３．７」である。担体としてのジスルフィド架橋されたカチオン性ペプチドＣＲ１２Ｃと核酸カーゴとしての免疫刺激性Ｒ２０２５とを用いて、ポリマー担体カーゴ複合体を形成した。このポリマー担体カーゴ複合体Ｒ２０２５／ＣＲ１２Ｃ（Ｒ２３９１と表す）を、以下の実施例においてアジュバントとして使用した（「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」と呼ぶ）。
【０６４６】
４．  インフルエンザ核タンパク質（Ｈ１Ｎ１（ＰＲ８）−ＮＰ（ＧＣ））（Ｒ２６５１）をコードしているワクチン調製物の調製
プロタミンをｍＲＮＡに対して比率（１：２）（Ｗ／Ｗ）にて添加することによって、ｍＲＮＡ（Ｒ２６５０）をプロタミンと複合体化させた（アジュバント成分（免疫賦活成分））。１０分間のインキュベート後に、抗原提供ｍＲＮＡとして使用される遊離ｍＲＮＡを、同量添加した。このワクチン調製物は、本明細書中において、（国際公開公報第２０１００３７５３９に基づいて）Ｒ２６５１と名付けられる。ワクチンは、乳酸リンゲル液で投与した。
【０６４７】
５．  投与のためのＲＮＡの調製
むき出しの（つまり、非調製の）ＰｐＬｕｃｍＲＮＡ（Ｒ２２４４，Ｒ４９１））、ＩＬ−１２ｍＲＮＡ（Ｒ２７６３、Ｒ１３２８）、可溶性ＰＤ−１ｍＲＮＡ（Ｒ３９７１）、ＣＤ４０ＬｍＲＮＡ（Ｒ３５７１）を、乳酸リンゲル（ＲｉＬａ）中で投与した。むき出しのｍＲＮＡおよびポリマー担体カーゴ複合体「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」（Ｒ２３９１）の共調製物もまた、注入前に両方の成分を直接的に混合した後、乳酸リンゲル（ＲｉＬａ）で投与した。
【０６４８】
実施例１：ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡの腫瘍内適用
処置群あたり、５匹のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに、１０６細胞のＥ．Ｇ７−ＯＶＡ細胞を、最初の処置の５日前に接種した。５匹の処置群の各々に関して、確立した（約１００ｍｍ３）、皮内に移植されたＥ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍を処置した。腫瘍に、ＭｍＩＬ−１２（ＭｍＩＬ−１２（ＧＣ））−ｓｃ−Ｆｌａｇ）（Ｒ１３２８）をコードしているｍＲＮＡを１６μｇ、または、０．５μｇのＭｍＩＬ−１２タンパク質を、０、２、４、２１、２３、および２５日目に、５０μｇ（１μｇ／μｌ）で、処置した。コントロールとして、マウスに、無関係のｍＲＮＡ（ｐＰＬｕｃ）（Ｒ４９１）を処置した。
【０６４９】
処置の最初の日を、試験０日目として規定した。腫瘍の成長を頻繁に（２〜３日毎に）監視した。＞３ｃｍ３の体積を有するマウスを殺した。
【０６５０】
実施例１の結果
図１は、ＩＬ−１２をコードしたｍＲＮＡ（ＩＬ−１２ｍＲＮＡ）を用いた腫瘍内処置が、コントロール群と比較して、生存マウスを有意に増加させたことを示す。さらに、生存マウスは、組換え体のＩＬ−１２タンパク質（ｒＩＬ−１２タンパク質）の腫瘍内適用よりも、多かった。
【０６５１】
実施例２：免疫賦活性ＲＮＡ（ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標））と組み合わせて、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡを用いる腫瘍内処置
以下の表１８に、実施例２のために使用したＲＮＡコンストラクトを要約する。
【０６５２】
【表１９】
2018517674.tif 000118
【０６５３】
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝６または７、表１４を参照のこと）に、マウス１匹あたり１ｘ１０６のＣＴ２６細胞（大腸の悪性腫瘍の細胞系列）を（１００μｌの体積のＰＢＳで）、右側の腹に、実験の０日目に、皮内に（Ｓ．Ｃ．）注射した。腫瘍接種してから９日後に、マウスを腫瘍の大きさに従って並び替え、約６０ｍｍ３の平均腫瘍体積を有する群を得た。腫瘍内（ｉ．ｔ．）治療を９日目に開始し、当該腫瘍内治療を、３〜４日毎にさらに４回の注射を、続けた。マウスに、ＩＬ−１２をコードしたｍＲＮＡ（２５μｇのＲ２７６３）＋ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標）（２５μｇのＲ２３９１）の組み合わせを注射した（Ａ群）。ＲＮＡの適用または注射行為に起因する部分的な炎症に対するコントロールのために、マウスに、ルシフェラーゼをコードしているコントロールｍＲＮＡ（ＰｐＬｕｃ、Ｒ２２４４、Ｂ群）、またはバッファー（ＲｉＬａ、Ｃ群）、をそれぞれ注射した。未処置のマウスは、さらなるコントロール（Ｄ群）として扱った。
【０６５４】
腫瘍の大きさを、カリパスを使用して３次元にて測定することによって、腫瘍の成長を監視した。腫瘍体積は、以下の式に従って計算した：
【０６５５】
【数１】
2018517674.tif 000119
【０６５６】
実験の９、１１、１４、１７および２１日目に、マウスに、以下の表１９に基づくＲＮＡを、腫瘍内に（ｉ．ｔ．）注射した。腫瘍内注射の体積は５０μｌであった。
【０６５７】
【表２０】
2018517674.tif 000120
【０６５８】
実施例２の結果
図２に、ＩＬ−１２をコードしたｍＲＮＡ（Ｒ２７６３）およびＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標）（Ｒ２３９１）の組み合わせを用いた腫瘍内処置が、全てのコントロール群と比較して、腫瘍接種の２１日後に、腫瘍体積の統計的に有意な減少という結果になったことを示す。
【０６５９】
図３に、ＩＬ−１２をコードしたｍＲＮＡ（Ｒ２７６３）およびＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標）（Ｒ２３９１）の組み合わせを用いた腫瘍内処置が、全ての３つのコントロール群と比較して、生存マウスの統計的に有意な増加という結果になったことを示す（Ａ群対Ｂ群  ＊  ｐ＝０．０１０４、Ａ群対Ｃ群  ＊＊  ｐ＝０．００３５、Ａ群対Ｄ群、  ＊  ｐ＝＝０．０２６３）。
【０６６０】
実施例３：インフルエンザ核タンパク質（ＮＰ）をコードしているｍＲＮＡを用いるマウスのワクチン接種、および、それに続く、ＮＰをコードしているｍＲＮＡを用いる腫瘍内処置
この実験の目的は、予め存在する免疫応答が、確立された腫瘍を抑え込むことができるか否か、を検証することである。この目的のために、マウスに、インフルエンザ核タンパク質（ＮＰ）をコードしているＲＮＡｃｔｉｖｅ（プロタミンと複合体化したワクチン調製物）（Ｒ２６５１）を用いて最初のワクチン接種を行った。これによって、高レベルの抗ＮＰ  ＣＤ８＋  Ｔ細胞応答を誘導した。その後、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種し、続いて、ＮＰをコードしているむき出しのＲＮＡ（Ｒ２６５０）を腫瘍内処置した。
【０６６１】
２７匹のＢａｌｂ／ｃマウスに、４０μｇの、Ｈ１Ｎ１（ＰＲ８）−ＮＰ（ＧＣ）ＲＮＡｃｔｉｖｅ（Ｒ２６５１）（２×５０μｌ）またはコントロールとして乳酸−リンゲル液を、実験の０日、７日及び１６日目に、皮内に（ｉ．ｄ．）ワクチン接種した。１４日目に、全てのマウスに、マウス１匹あたり１×１０６のＣＴ２６細胞を（１００μｌの体積のＰＢＳで）、右側の腹に、皮内に（ｓ．ｃ．）接種した。２２日目に、マウスを、表２０に示したように、異なる群に割り当てた。
【０６６２】
２回目の追加免疫の７日後である２３日目に、５０μｇのむき出しのＨ１Ｎ１（ＰＲ８）−ＮＰ（ＧＣ）ｍＲＮＡ（Ｒ２６５０）の腫瘍内（ｉ．ｔ．）適用を開始し（Ｃ群のみ）、さらに４回の注射（２５日、２８日、３１日および３５日目）を、続けた。腫瘍内注射の体積は５０μｌであった。詳細な処置計画を、表２１に示す。
【０６６３】
腫瘍の大きさを、カリパスを使用して３次元にて測定することによって、腫瘍の成長
を監視した。腫瘍体積は、以下の式に従って計算した：
【０６６４】
【数２】
2018517674.tif 000121
【０６６５】
【表２１】
2018517674.tif 000122
【０６６６】
【表２２】
2018517674.tif 000123
【０６６７】
実施例３の結果
図４に、予め存在する免疫性（当該免疫性を、このモデルにおいて、ＮＰワクチン接種によって誘導した）が、ＮＰをコードしているｍＲＮＡの腫瘍内適用を受けたマウスの平均生存期間（ＭＳＴ）を、バッファーのみを処置したマウスと比較して、増加させたことを示す（それぞれ、ＭＳＴ＝２８対ＭＳＴ＝２１）。
【０６６８】
実施例４：免疫賦活性ＲＮＡ（「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」）ならびに、可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡおよびおよびＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡを用いる腫瘍内処置
表２２に、本実施例において用いられるときの処置を要約する。ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔならびにＩＬ−１２および可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡコンストラクトを、腫瘍内に（ｉ．ｔ．）投与した。ＣＴ２６腫瘍接種したマウスにおいて、生存率および腫瘍の成長の平均を解析した。
【０６６９】
【表２３】
2018517674.tif 000124
【０６７０】
腫瘍接種および本発明の組成物の投与
６０匹のＢａｌｂ／ｃマウスに、マウス１匹あたり１×１０６のＣＴ２６細胞（ＰＢＳ１００μｌの容量）を、右側の腹に、実験の０日目に、皮内に接種した。８日目に、マウスを腫瘍の大きさに従って並び替えた。腫瘍の大きさに従って（腫瘍は、約４０〜５０ｍｍ３の大きさを有するだろう）、最初のワクチン接種を、８日目または９日目に行った。マウスに、上記の表に従って、ｍＲＮＡおよびＲＮＡｄｊｕｖａｎｔの種々の組み合わせをワクチン接種した。６回のワクチン接種を行った。腫瘍内注射のための体積は５０μｌであった。
【０６７１】
表２２に示した指示計画に従って、マウスに注射した。腫瘍の成長の平均を、実施例３に従って決定した。実験の結果を図５に示した。腫瘍の成長に対する本発明の組成物の効果を図５Ａに示し、生存マウスに対する本発明の組成物の効果を図５Ｂに示す。
【０６７２】
結果
図５Ａに、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物がＲＮＡｄｊｕｖａｎｔとの組み合わせにおいて（表２２によると「Ａ」群）、他の処置（表２２によるとＢ〜Ｄ群）と比較して、平均腫瘍体積を大きく減少させたことを示す。さらに、図５Ｂに、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物がＲＮＡｄｊｕｖａｎｔとの組み合わせにおいて（表２２によると「Ａ」群）、他の処置（表２２によるとＢ〜Ｄ群）と比較して、腫瘍接種したマウスの生存を大きく増加させたことを示す。
【０６７３】
実施例５：免疫刺激性ＲＮＡ（「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」）およびｓｏｌＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡおよび抗ＣＤ７３抗体と組み合わせて、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡを用いる腫瘍内処置
表２３に、本実施例において用いられるときの処置を要約する。ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔならびにＩＬ−１２および可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡコンストラクト（これらを、腫瘍内に（ｉ．ｔ．）投与した）に加えて、抗ＣＤ７３抗体（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を、イントラペリトレラリー（intraperitoreally）（ｉ．ｐ．）共投与した。ＣＴ２６腫瘍を接種したマウスにおいて、生存率を解析した。
【０６７４】
【表２４】
2018517674.tif 000125
【０６７５】
腫瘍接種および本発明の組成物の投与
先の実施例に従って、腫瘍接種を実行した（実施例４を参照のこと）。表２３に示した指示計画に従って、マウスに注射した。実験の結果を図６に示した。
【０６７６】
結果
図６に、抗ＣＤ７３抗体のｉ．ｐ．投与と組み合わせて、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ（Ｒ２７６３）、ｓｏｌ−ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡ（Ｒ３９７１）およびＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標）（Ｒ２３９１）を用いた腫瘍内処置（表２３によると「Ａ」群）が、抗ＣＤ７３抗体のみを受けたコントロール群（表２３によると「Ｃ」群）と比較して、生存マウスの統計的に有意な増加という結果になったこと、ならびに、ＩＬ−１２＋ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ＋可溶性ＰＤ−１およびコントロール抗体（ラットＩｇＧ２ａ、ＢｉＯＸＣｅｌｌ）を用いた処置（表２３によると「Ｂ」群）と比較して、生存率の増加という結果になったこと、を示す。
【０６７７】
実施例６：免疫刺激性ＲＮＡ（「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」）および抗ＣＤ１３７抗体と組み合わせて、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡを用いる腫瘍内処置
表２４に、本実施例において用いられるときの処置を要約する。ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔならびにＩＬ−１２および可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡコンストラクト（これらを、腫瘍内に（ｉ．ｔ．）投与した）に加えて、抗ＣＤ１３７抗体（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を、イントラペリトレラリー（intraperitoreally）（ｉ．ｐ．）共投与した。ＣＴ２６腫瘍を接種したマウスにおいて、生存率を解析した。
【０６７８】
【表２５】
2018517674.tif 000126
【０６７９】
腫瘍接種および本発明の組成物の投与
先の実施例に従って、腫瘍接種を実行した（実施例４を参照のこと）。表２４に示した指示計画に従って、マウスに注射した。実験の結果を図７に示した。
【０６８０】
結果
図７に、抗ＣＤ−１３７抗体のｉ．ｐ．投与と組み合わせて、ＩＬ−１２（Ｒ２７６３）ｓｏｌ−ＰＤ−１（Ｒ３９７１）をコードしているｍＲＮＡおよびＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標）（Ｒ２３９１）を用いた腫瘍内処置（表２４によると「Ａ」群）が、抗体抗ＣＤ−１３７のみを受けたコントロール群（表２４によると「Ｃ」群）と比較して、生存マウスの有意な増加という結果になったこと、ならびに、ＩＬ−１２＋ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ＋可溶性ＰＤ−１およびコントロール抗体（ラットＩｇＧ２ａ、ＢｉＯＸＣｅｌｌ）を用いた処置（表２４によると「Ｂ」群）と比較して、生存率の増加という結果になったこと、を示す。
【０６８１】
実施例７：チェックポイント阻害剤抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて、免疫賦活性ＲＮＡ（「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」）を用いる処置
表２５に、本実施例において用いられるときの処置を要約する。ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（当該ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔを（ｉ．ｔ．）投与した）に加えて、チェックポイント阻害剤抗ＰＤ−１（ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を、ｉ．ｐ．投与した。ＣＴ２６腫瘍を接種したマウスにおいて、生存率を解析した。
【０６８２】
【表２６】
2018517674.tif 000127
【０６８３】
腫瘍接種および本発明の組成物の投与
先の実施例に従って、腫瘍接種を実行した（実施例４を参照のこと）。表２５に示した指示計画に従って、マウスに注射した。実験の結果を図８に示した。
【０６８４】
結果：
図８に、抗ＰＤ−１抗体のｉ．ｐ．投与と組み合わせて、ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ（登録商標）（Ｒ２３９１）を用いた腫瘍内（ｉ．ｔ．）処置（表２５によると「Ｃ」群）が、チェックポイント阻害剤抗ＰＤ−１抗体のみを受けた関連したコントロール群（表２５によると「Ｄ」群）と比較して、生存マウスの増加という結果になったこと、ならびに、ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔおよびコントロール抗体（抗ハムスターＩｇＧ、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）を用いた処置（表２５によると「Ｂ」群）と比較して、生存率の増加という結果になったこと、を示す。
【０６８５】
実施例８：免疫刺激性ＲＮＡ（「ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔ」）およびＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）をコードしているｍＲＮＡおよびＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡを用いる腫瘍内処置
表２６に、本実施例において用いられるときの処置を要約する。ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔならびにＩＬ−１２およびマウスＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）をコードしているｍＲＮＡコンストラクトを腫瘍内（ｉ．ｔ．）投与した。ＣＴ２６腫瘍を接種したマウスにおいて、生存率を解析した。
【０６８６】
【表２７】
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【０６８７】
腫瘍接種および本発明の組成物の投与
先の実施例に従って、腫瘍接種を実行した（実施例４を参照のこと）。表２６に示した指示計画に従って、マウスに注射した。実験の結果を図９に示した。
【０６８８】
結果
図９は、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡおよびＣＤ４０ＬをコードしているｍＲＮＡを含んでいる本発明の組成物が、ＲＮＡｄｊｕｖａｎｔとの組み合わせにおいて（表２６によると「Ａ」群）、他の処置（表２６によるとＢ〜Ｃ群）と比較して、腫瘍接種の平均生存マウスを大きく増加させたことを示す。
【図面の簡単な説明】
【０６８９】
【図１】ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ（ＩＬ−１２  ｍＲＮＡ）または組換えＩＬ−１２タンパク質（ｒＩＬ−１２タンパク質）を用いた腫瘍内処理後の、Ｅ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍を有しているマウスの、生存率を示す。
【図２】ＩＬ−１２  ｍＲＮＡ（Ｒ２７６３、配列番号１）および重合体の担体カーゴ複合体（Ｒ２３９１、RNAdjuvant（登録商標）、methodsに記載の通りに調製された）の組み合わせを用いた、マウスの腫瘍内処理が、コントロール群と比べて、有意に減少した腫瘍体積に導いたことを示す。
【図３】ＩＬ−１２  ｍＲＮＡおよび重合体の担体カーゴ複合体の組み合わせ（実施例２および図２のレジェンドに記載の通り）を用いた、マウスの腫瘍内処理後の、ＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。
【図４】インフルエンザコアタンパク質をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後の、ＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。
【図５】パネル（Ａ）は、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後のＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの、腫瘍成長の中央値の分析を示す。パネル（Ｂ）は、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後のＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。
【図６】ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後、および抗ＣＤ７３抗体の腹腔内処理後のＣＴ６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。
【図７】ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよび可溶性ＰＤ−１をコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後、および抗ＣＤ１７３抗体の腹腔内処理後のＣＴ６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。
【図８】RNAdjuvantを用いた腫瘍内処理後、および抗ＰＤ−１抗体の腹腔内処理後の、ＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。
【図９】ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ、RNAdjuvantおよびＣＤ４０ＬをコードしているｍＲＮＡを用いた腫瘍内処理後の、ＩＬ−１２をコードしているｍＲＮＡ単独を用いた腫瘍内処理と比べた、ＣＴ２６腫瘍を有しているマウスの生存率を示す。
【図１０】配列番号１００７３にしたがうマウスＣＤ４０Ｌ（ＭｍＣＤ４０Ｌ）をコードしているｍＲＮＡ配列Ｒ３５７１を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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