(57)【要約】  本発明は、リンパ腫の治療を必要とする対象においてリンパ腫を治療するための組成物および方法に関し、前記方法は、治療有効量のベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せを、それを必要とする患者に投与することを含み、ここで、前記治療有効量は、がん細胞増殖に対する相乗的な抗増殖効果をもたらす。【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンパ腫の治療を必要とする患者について前記リンパ腫を治療する方法であって、ベリノスタットとプララトレキサートを投与することを含み、前記ベリノスタットの投与量と前記プララトレキサートの投与量とを併せて前記リンパ腫に対する相乗的な増殖阻害効果を生じる能力のある治療有効量とする、方法。
【請求項２】
前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｂ細胞リンパ腫が、マントル細胞リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記リンパ腫がＴ細胞リンパ腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｔ細胞リンパ腫が末梢性Ｔ細胞リンパ腫である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記末梢性Ｔ細胞リンパ腫が、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、鼻性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、および肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記皮膚Ｔ細胞リンパ腫がセザリー症候群である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ベリノスタットおよびプララトレキサート、ならびに医薬用の担体または賦形剤を含む医薬組成物であって、リンパ腫の治療において使用されて相乗的な増殖阻害効果を示す医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が、ビタミンＢ１２および葉酸からなる群から選択されるビタミンをさらに含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、約２５０から約１０００ｍｇ／ｍ２のベリノスタットおよび約７．５から約３０ｍｇ／ｍ２のプララトレキサートを含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
リンパ腫を治療する医薬の製造のためのベリノスタットおよびプララトレキサートの使用であって、前記治療が、ベリノスタットの投与量とプララトレキサートの投与量とを併せて前記リンパ腫に対する相乗的な増殖阻害効果を生じる能力のある治療有効量とする治療を含む、使用。
【請求項１２】
前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記Ｂ細胞リンパ腫が、マントル細胞リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記リンパ腫がＴ細胞リンパ腫である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１５】
前記Ｔ細胞リンパ腫が末梢性Ｔ細胞リンパ腫である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記末梢性Ｔ細胞リンパ腫が、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、鼻性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、および肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
請求項１に記載の方法で使用するためのキットまたはキットオブパーツであって、（ａ）薬学的に許容される製剤の一成分としてのベリノスタットと、（ｂ）薬学的に許容される製剤の一成分としてのプララトレキサートとを含むキットまたはキットオブパーツ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１５年６月１６日に出願された、米国仮特許出願第６２／１０８，３６８号の出願日の利益を主張し、その開示は、ここに引用することで本明細書の一部をなすものとする。
【０００２】
本発明は、がんを治療するための方法に関する。より詳細には、本発明は、リンパ腫の治療を必要とする患者においてリンパ腫を治療するための方法に関し、前記方法は、治療有効量のベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せを、それを必要とする患者に投与することを含み、ここで、前記治療有効量は、がん細胞増殖に対する相乗的な抗増殖効果をもたらす。
【背景技術】
【０００３】
新しい治療法の開発の何年もの研究にもかかわらず、リンパ系のがん、すなわちリンパ腫は、依然として非常に多く見られる病気である。例えば、米国内の６０，０００名を超える人々が毎年リンパ腫と診断されており、これには５５，０００例を超える非ホジキンリンパ腫が含まれ、これらの数は絶えず増加している。
【０００４】
非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、数種類の異なる型のリンパ腫を含み、典型的には、腫瘍がＢリンパ球から生じる（「Ｂ細胞リンパ腫」）かまたはＴリンパ球から生じる（「Ｔ細胞リンパ腫」）かに基づいて分類される。前者はＮＨＬの大多数を占め、ＮＨＬの約１５％のみがＴ細胞リンパ腫である。Ｔ細胞リンパ腫の大多数は、成熟Ｔ細胞から生じる「末梢性Ｔ細胞リンパ腫」として分類される。末梢性Ｔ細胞リンパ腫には、例えば、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）；未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）；血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）；例えば、セザリー症候群、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、鼻性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、および肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫を含む皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）を含む、数種類の浸潤性（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ）のサブタイプが含まれる。
【０００５】
ＮＨＬの罹患者の予後は悪いことが多く、リンパ腫患者の生存率も低いままである。リンパ腫の従来の治療は、典型的には、リンパ腫の型ならびに患者の病歴に依存する。多くのリンパ腫のための最良の治療には、典型的には、化学療法が含まれる。こうした化学療法は、化合物の「混合物（ｃｏｃｋｔａｉｌ）」、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾンを含む製剤「ＣＨＯＰ」の投与を必要とすることが多くなる。さらに、特定の最良のがん治療には、放射線療法などの、他の形態のがん療法も含まれる。
【０００６】
多くの場合、患者は、最良の治療に最初は反応するが、その後、再発に苦しむ、すなわち、腫瘍が再び現れるまたは増殖を再開する。こうした再発の後に、患者はさらなる化学療法、例えば、「ＣＨＯＰ」もしくは他の製剤で治療されることが多く、または、場合によっては、患者は骨髄移植などの他の手法で治療される。ここでも、多くの場合、患者は、こうしたさらなる治療に最初は反応するが、その後、次の再発に苦しむ。一般に、患者の再発が多くなればなるほど、当技術分野において最適なその後の治療に反応しなくなる。他の場合、患者は、最初でも、治療に全く反応しなくなり、したがって、難治性がんを有すると言われる。こうした場合も同様に、当技術分野において最適なその後の治療に反応しなくなる。
【０００７】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤は、新しい機構クラスの抗がん治療を代表するものである。ヒストンは、クロマチンの主要なタンパク質成分である。クロマチン構造の調節は、遺伝子発現の制御のための中心的な機構であることがわかっている。一般的なパラダイムとして、ヌクレオソームのヒストンのアミノ末端尾部におけるリシン残基のイプシロンアミノ基のアセチル化は転写活性化と関連しているのに対して、脱アセチル化はクロマチンの凝縮および転写抑制と関連している。ヒストンのアセチル化および脱アセチル化は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）およびヒストンデアセチラーゼの酵素活性によって制御されている。ｐ５３およびＧＡＴＡ−１を含む数種類の転写因子がＨＤＡＣの基質であることも示されている。
【０００８】
ＨＤＡＣ阻害剤は、ヒストンアセチル化を促進し、かつ細胞周期停止および腫瘍抑制に関連した遺伝子の発現を誘導することが示されている。ＨＤＡＣ阻害剤によって誘導される表現型の変化には、Ｇ１、およびＧ２／Ｍ細胞周期停止ならびに腫瘍細胞におけるアポトーシスが含まれる。アポトーシスを誘導すること、分化を促進すること、血管形成を阻害すること、および／またはがん細胞の感受性を高めて薬物耐性を克服することによってＨＤＡＣ阻害剤ががん細胞の増殖を停止させることができることがデータによって示されているが、ＨＤＡＣ阻害剤が効果的にがん細胞増殖を阻害する正確な機構は明確にはわかっていない。
【０００９】
ベリノスタット（ＰＸＤ−１０１とも呼ばれる）は、化学名（２Ｅ）−Ｎ−ヒドロキシ−３−［３−（フェニルスルファモイル）フェニル］プロパ−２−エナミドを有するヒストンデアセチラーゼ阻害剤である。ベリノスタットは、再発したまたは難治性の末梢性Ｔ細胞リンパ腫を有する患者の治療のためのＦＤＡ承認を２０１４年に受けた。これは、米国において商品名ＢＥＬＥＯＤＡＱ（登録商標）（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ、Ｎｅｖａｄａ）の下で注射用に市販されている。
【００１０】
ＨＤＡＣ阻害剤に加えて、抗葉酸活性を有する化合物も抗がん剤としての治療有用性を有しうる。これらの作用剤は、典型的には、ジヒドロ葉酸レダクターゼの活性を阻害することによって働き、それが次に、急速に分裂しているがん細胞において細胞分裂、ＤＮＡ／ＲＮＡ合成および修復ならびにタンパク質合成の阻害を引き起こす。化合物プララトレキサートは、化学名（２Ｓ）−２−［［４−［（１ＲＳ）−１−［（２，４−ジアミノプテリジン−６−イル）メチル］ブタ−３イニル］ベンゾイル］アミノ］ペンタン二酸を有する抗腫瘍性の葉酸アナログである。プララトレキサートは、現在、再発したまたは難治性の末梢性Ｔ細胞リンパ腫の治療用にＦＤＡ承認されている。これは、米国において商品名ＦＯＬＯＴＹＮ（登録商標）（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ、Ｎｅｖａｄａ）の下で注射用に市販されている。
【００１１】
ベリノスタットおよびプララトレキサートなどの新しい抗がん剤の近年のＦＤＡ承認において立証されるように、がんの治療における大きな進歩がもたらされてきている。しかし、増強された治療効果を生じるさらなる治療パラダイムが常に望まれている。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、既知のＨＤＡＣ阻害剤、ベリノスタットおよび抗葉酸化学療法剤プララトレキサートを組み合わせて使用するときに、抗がん剤を単独で使用するときよりも予想外に大きい効力が得られ、特に、特定のＢ細胞リンパ腫およびＴ細胞リンパ腫細胞株に対する相乗的な増殖阻害効果を生じるという予想外の驚くべき発見に基づいている。
【００１３】
したがって、一態様では、本発明は、リンパ腫の治療を必要とする患者についてリンパ腫を治療する方法に関し、この方法は、ベリノスタットとプララトレキサートを投与することを含み、ベリノスタットの投与量とプララトレキサートの投与量とを併せてリンパ腫に対する相乗的な増殖阻害効果を生じる能力のある治療有効量とする。一実施形態では、リンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫である。特定の実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は、マントル細胞リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。別の実施形態では、リンパ腫は、Ｔ細胞リンパ腫である。特定の実施形態では、Ｔ細胞リンパ腫は、末梢性Ｔ細胞リンパ腫である。種々の実施形態では、末梢性Ｔ細胞リンパ腫は、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）；未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）；血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）；例えば、セザリー症候群、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、鼻性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、および肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫を含む皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）からなる群から選択される。
【００１４】
別の態様では、本発明は、ベリノスタットおよびプララトレキサート、ならびに医薬用の担体または賦形剤を含む医薬組成物に関し、ここで、前記組成物は、リンパ腫の治療において使用されるときに相乗的な増殖阻害効果を示す。
【００１５】
別の態様では、本発明は、リンパ腫を治療する医薬の製造のためのベリノスタットおよびプララトレキサートの使用に関し、前記治療は、ベリノスタットの投与量とプララトレキサートの投与量とを併せてリンパ腫に対する相乗的な増殖阻害効果を生じる能力のある治療有効量とする治療を含む。一実施形態では、リンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫である。特定の実施形態では、Ｂ細胞リンパ腫は、マントル細胞リンパ腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。別の実施形態では、リンパ腫は、Ｔ細胞リンパ腫である。特定の実施形態では、Ｔ細胞リンパ腫は、末梢性Ｔ細胞リンパ腫である。種々の実施形態では、末梢性Ｔ細胞リンパ腫は、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）；未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）；血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）；例えば、セザリー症候群、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、鼻性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、および肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫を含む皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）からなる群から選択される。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書は、本発明を詳細に指し示していてかつ明確に特許請求している特許請求の範囲で結論付けられているが、以下の説明から本発明がより良く理解されることになると考えられている。
【００１７】
本明細書中で使用されるすべての百分率および比率は、本明細書において他に示されていない限り、全組成物の重量による。すべての測定は、他に指定されていない限り、２５℃かつ通常の気圧で行われた。すべての温度は、他に明記されていない限り、摂氏度である。本発明は、本発明の成分ならびに本明細書に記載の他の成分または要素を（制限なく）含んでいてもよく、または本質的にそれらからなっていてもよい。本明細書中で使用される場合、「含んでいる」とは、記載されている要素、または構造もしくは機能におけるそれらの均等物、加えて記載されていない他のあらゆる要素を意味する。「有する」および「含む」という用語も、文脈により他に示唆されていない限り、制限のないものとして解釈されるべきである。
【００１８】
本明細書に記載されているすべての範囲は、２つの値の「間の」範囲を記載しているものを含み、端点を含む。「約」、「一般的には」、「実質的に」などの用語は、用語または値を、それが絶対ではないが、従来技術では示されていないように修飾していると解釈されるべきであるが、こうした用語は状況によって定義されることになり、それらの用語としてそれらが修飾する用語は当業者によって理解される。これは、きわめて少なくとも、値を測定するために使用される所与の技術に予想される程度の実験誤差、技術誤差および機器誤差を含む。
【００１９】
他に示されていない限り、本明細書中で使用される場合、「１つの（ａおよびａｎ）」には複数形が含まれ、そのため、例えば、「化学療法剤」は、少なくとも１種の化学療法剤、ならびに複数の化学療法剤、すなわち、異なる型の化学療法剤を含むがそれらに限定されない２種以上の化学療法剤を意味しうる。
【００２０】
本明細書中で使用される場合、「および／または」という用語は、２種以上の品目の一覧において使用されるときに、挙げられている特性のうちのいずれか１つが存在しうること、または挙げられている特性のうちの２つ以上のいずれかの組合せが存在しうることを意味する。例えば、組成物が作用剤Ａ、Ｂ、および／またはＣを含むと記載されている場合、その組成物は、Ａの特徴単独；Ｂ単独；Ｃ単独；ＡおよびＢの組合せ；ＡおよびＣの組合せ；ＢおよびＣの組合せ；またはＡ、Ｂ、およびＣの組合せを含みうる。
【００２１】
本明細書中に引用されているすべての参考文献は、ここに引用することで本明細書の一部をなすものとする。
【００２２】
本発明は、がんを治療する方法および組成物に関する。特に、ベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて異なるリンパ腫細胞に対する異なる増殖阻害効果を有しうることが驚くべきことに発見された。注目すべきことに、特定の濃度で、該組合せは、特定のがん細胞において相加的な増殖阻害性の結果をもたらす。しかし、他のがん細胞では、予想外の相乗的な増殖阻害効果が観察される。
【００２３】
これらのデータに鑑み、特定のＢまたはＴ細胞リンパ腫を患っている患者が、治療有効量のベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せを投与されたときに臨床的利点を得る可能性があることが本明細書において意図されている。場合によっては、患者は、相加的な治療効果から利点を得ることもある。しかし、他のリンパ腫患者では、組合せ治療の結果として達成される治療効果が、増強されたまたは相乗的な、すなわち、相加的よりも良い治療効果である場合もある。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、「ベリノスタット」は、化学名（２Ｅ）−Ｎ−ヒドロキシ−３−［３−（フェニルスルファモイル）フェニル］プロパ−２−エナミドを有する化合物（ＰＸＤ−１０１としても知られる）を指す。この化学療法剤は、現在、米国において商品名ＢＥＬＥＯＤＡＱ（登録商標）（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ、Ｎｅｖａｄａ）の下で注射用に市販されている。本明細書中で使用される場合、「ベリノスタット」という用語は、米国特許第６，８８８，０２７号および第８，８３５，５０１号において開示および特許請求されている化合物を参照することができ、ここに引用することで本明細書の一部をなすものとする。
【００２５】
さらに、本明細書中で使用される場合、「プララトレキサート」は、化学名（２Ｓ）−２−［［４−［（１ＲＳ）−１−［（２，４−ジアミノプテリジン−６−イル）メチル］ブタ−３イニル］ベンゾイル］アミノ］ペンタン二酸を有する化合物を指す。これは、現在、米国において商品名ＦＯＬＯＴＹＮ（登録商標）（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ、Ｎｅｖａｄａ）の下で注射用に市販されている。本明細書中で使用される場合、「プララトレキサート」という用語は、米国特許第６，０２８，０７１号および第７，６２２，４７０号において開示および特許請求されている化合物を参照することができ、ここに引用することで本明細書の一部をなすものとする。
【００２６】
本明細書において意図されているように、本発明の方法および組成物は、指示されている化学療法剤、ならびにそれらの薬学的に許容されるあらゆる塩、立体異性体、溶媒和化合物、プロドラッグ、ホモログ、およびアナログの使用を含む。
【００２７】
本明細書中で使用される場合、「がんの治療」、「がん治療」という用語および同様の用語は、がん転移を含む、がんの進行を部分的にまたは完全に阻害すること、遅延させること、または予防すること；がん転移を含む、がんの再発を阻害すること、遅延させること、または予防すること；または哺乳動物、例えばヒトにおいてがんの発症もしくは発生を予防すること（化学的予防）を指す。こうした治療を達成する手段は、いかなる特定の生物学的経路または作用機構にも限定されるものではない。
【００２８】
本発明の治療の方法は、投与量のベリノスタットおよび投与量のプララトレキサートを、それを必要とする患者に投与することを含む。これらの２つの量は、併せると、治療有効量を構成する。本明細書中で使用される場合、「治療有効量」という用語は、組合せ療法において投与されるベリノスタットおよびプララトレキサートの組み合わされた投与量を指す。組み合わされた投与量は、望ましい生物学的反応を達成することになる。本発明において、望ましい生物学的反応は、がんの治療、すなわち、がん転移を含む、がんの進行の部分的または完全な阻害、遅延、または予防；がん転移を含む、がんの再発の阻害、遅延、または予防；または哺乳動物、例えばヒトにおけるがんの発症もしくは発生の予防（化学的予防）である。
【００２９】
本明細書中で使用される場合、「化学療法剤」、「薬学的に許容される作用剤」、「活性剤」という用語および同様の用語は、指示されている作用剤、ならびにそれらの薬学的に許容される塩、立体異性体、溶媒和化合物、プロドラッグ、ホモログ、およびアナログを含むことを意味する。
【００３０】
本明細書において意図されているように、本発明の組合せ療法は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む、リンパ腫の治療における使用に特に好適である。これらのがんは当業者によく知られており、Ｂ細胞リンパ腫およびＴ細胞リンパ腫を含む。前者の例には、例えば、マントル細胞リンパ腫、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫が含まれる。後者の例には、末梢性Ｔ細胞リンパ腫およびそのサブタイプが含まれるが、これらに限定されない。これらのサブタイプには、例えば、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ−ＮＯＳ）；未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）；血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）；例えば、セザリー症候群、腸管症型Ｔ細胞リンパ腫、鼻性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、および肝脾ガンマ・デルタＴ細胞リンパ腫を含む皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）が含まれる。
【００３１】
本明細書中で使用される「患者」、「それを必要とする患者」、「それを必要とする対象」という用語およびいずれの同様の用語も、本開示のがん治療の受容者を指す。哺乳動物および非哺乳動物の患者が含まれる。一実施形態では、患者は、哺乳動物である。一実施形態では、患者は、齧歯動物（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミの仲間（例えば、マウス）、ウサギ目動物（例えば、ウサギ）、鳥類（例えば、鳥）、イヌの仲間（例えば、イヌ）、ネコの仲間（例えば、ネコ）、ウマの仲間（例えば、ウマ）、ブタの仲間（例えば、ブタ）、ヒツジの仲間（例えば、ヒツジ）、ウシの仲間（例えば、ウシ）、ヤギの仲間（例えば、ヤギ）、霊長類、真猿類（例えば、サルまたは類人猿）、サル（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトである。一実施形態では、患者は、ヒト、イヌの仲間、ネコの仲間、ネズミの仲間、ウシの仲間、ヒツジの仲間、ブタの仲間、またはヤギの仲間である。
【００３２】
一実施形態では、患者は、ヒトである。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、「相乗作用」および「相乗効果」は、少なくとも２種の成分の組成物において、組成物の１成分、例えば、１種の活性化合物単独の効果、または少なくとも１種の化合物を引いた化合物の完全な混合物の効果と比較したときの、測定可能な効果の、あらゆる実質的な増強（ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）を指しうる。相乗効果は、複数の成分を含む組成物の特有の特徴であり、単に、例えば、あらゆる無作為な成分の組合せの相加効果によるいかなるバックグラウンドレベルの増強も超える。したがって、本明細書中で使用される場合、「相乗的な増殖阻害効果」という用語は、ベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せの投与による、相加効果を超える実証された、がん細胞増殖の低下を包含する。
【００３４】
本明細書において意図されているように、観察された増殖阻害効果は、いかなる特定の作用機構にも限定されず、かつ、例えば、細胞増殖における低下および／もしくはアポトーシスにおける上昇、または腫瘍細胞増殖を低下させる他の手段を含んでいてもよい。
【００３５】
ベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せは、さらなる臨床的利点を患者にもたらしうる、さらなる化学療法剤を含むがこれらに限定されない、当業者によく知られている１種または複数のさらなる薬学的に許容される作用剤との組合せで、本明細書に開示されているように患者に投与されてもよいことが本明細書において意図されている。
【００３６】
本発明の方法に従って患者に投与されうる他の有用な薬学的に許容される作用剤には、例えば、当業者によく知られている臨床的利点を患者にもたらしうるビタミンまたは他のサプリメントが含まれる。例えば、当業者によって理解されるように、プララトレキサートなどの抗葉酸剤を投与された患者は、ビタミンＢ１２および／もしくは葉酸、またはそれらの誘導体、例えば、テトラヒドロ葉酸の共投与から臨床的利点を得うる。例えば、ＵＳＦＤＡによれば、ＦＯＬＯＴＹＮ（登録商標）を開始する前に、患者に８〜１０週毎に１ｍｇのビタミンＢ１２を筋肉内にかつ毎日１．０〜１．２５ｍｇの葉酸を経口で補給するべきである。
【００３７】
本明細書において理解されるように、本明細書に開示されている化学療法剤およびさらなる薬学的に許容される作用剤の立体異性体、プロドラッグ、ホモログ、およびアナログの使用は、本発明の範囲によって包含される。こうした物質は、当業者によく知られている。
【００３８】
本発明の方法において使用される本明細書に記載の活性な化学療法剤の好適な薬学的に許容される塩には、従来の無毒性の塩が含まれる。当業者によって理解されるように、これらには、塩基を有する塩または酸付加塩、例えば、アルカリ金属塩（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩など）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩など）、アンモニウム塩などの無機塩基を有する塩など；例えば、有機アミン塩（例えば、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩など）などの有機塩基を有する塩；無機酸付加塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩など）；有機カルボン酸またはスルホン酸付加塩（例えば、ギ酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩など）；塩基性または酸性のアミノ酸（例えば、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸など）を有する塩などが含まれうる。
【００３９】
［剤形および投与様式］
ベリノスタットおよび／またはプララトレキサートを含む医薬組成物および製剤は、本発明の方法で使用するために、単独でまたは１種もしくは複数のさらなる薬学的に許容される活性剤と組み合わされ、このような医薬組成物および製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｎ．Ｙ．２０１２に記載のような、従来の方法を使用して、当業者によって作製されうる。当業者によって理解されるように、この化学療法活性な成分や任意のさらなる薬学的に許容される活性剤と共に、本発明に係る組成物は、少なくとも１種の薬学的に許容されるビヒクルまたは賦形剤を含んでいてもよいことが本明細書において意図されている。これらは、例えば、製剤コアジュバント、例えば、可溶化剤、分散化剤、懸濁剤、および乳化剤を含んでいてもよい。活性剤は、目的の投与の形態、すなわち、経口錠、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤などに応じて好適に選択され且つ従来の医薬実務と一致している好適な医薬用の希釈剤、賦形剤または担体（ひとまとめにして本明細書中で「担体」材料と呼ぶ）と混合して、活性成分として投与することができる。
【００４０】
選択される投与経路により、本発明の組成物は、例えば、経口、非経口または局所の投与に好適な固体または液体の形態を含む、その作用剤に適切ないかなる好適な剤形であってもよい。例えば、経口剤形は、錠剤、カプセル剤（これは持続放出または時限放出製剤を含んでいてもよい）、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁液、シロップ剤、およびエマルションなどの剤形を含みうる。錠剤またはカプセル剤の形態での経口投与の場合、活性剤のうちの１種または複数を、経口の、非毒性の、薬学的に許容される、不活性な担体、例えば、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどまたはそれらの組合せなどと組み合わせることができる。遅延放出性の組合せ剤形、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏであるが投与後の異なる望ましい時間にベリノスタットおよびプララトレキサートの両方を送達することができるものは、本明細書において意図されており、当業者によく知られている医薬用の賦形剤を使用して従来の方法によって製造されうる。
【００４１】
液体の形態での経口投与の場合、経口の薬物成分を、あらゆる経口の、非毒性の、薬学的に許容される不活性な担体、例えば、エタノール、グリセロール、水などと組み合わせることができる。さらに、所望によりまたは必要に応じて、好適な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤を混合物中に組み込むこともできる。好適な結合剤には、デンプン、ゼラチン、例えば、グルコースまたはベータ−ラクトースなどの天然の糖、トウモロコシの甘味料、例えば、アカシア、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウムなどの天然および合成のガム、カルボキシメチルセルロース、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、ポリエチレングリコール、ワックスなどが含まれる。これらの剤形中に使用されうる滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤としては、限定されるものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれる。
【００４２】
同様に、活性剤は、医薬の技術分野において当業者によく知られている様式で、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、皮下、または筋肉内の形態で投与されうる。例えば、静脈内投与に好適なバッファーには、グルクロン酸、Ｌ−乳酸、酢酸、クエン酸、またはベリノスタットおよび／もしくはプララトレキサートの静脈内投与のために許容されるｐＨ範囲において妥当な緩衝能力を有する任意の薬学的に許容される酸／共役塩基が含まれる。ｐＨが酸または塩基のいずれか、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムで望ましい範囲に調整された塩化ナトリウム溶液を用いることもできる。典型的には、静脈注射用製剤のｐＨ範囲は、約５から約１２までの範囲内でありうる。一般に、ベリノスタット、すなわち、ヒドロキサム酸部分を有するＨＤＡＣ阻害剤の静脈注射用製剤のｐＨ範囲は、約ｐＨ９から約ｐＨ１２である。一般に、プララトレキサートの静脈注射用製剤のｐＨ範囲は、約ｐＨ７．５から約ｐＨ８．５である。ベリノスタットおよびプララトレキサートの両方を含む静脈注射用製剤のｐＨは、したがって、当業者によって従来の方法を使用して調整されうる。
【００４３】
本発明の方法によって使用される活性剤は、活性成分のうちの１種または複数の持続放出を可能にするような様式で製剤化されうるデポー注射またはインプラント調製物の形態での投与に好適でありうることが本明細書においてさらに意図されている。活性剤は、ペレットまたは小さなシリンダーに圧縮して、デポー注射またはインプラントとして皮下または筋肉内に埋め込むことができる。インプラントは、生分解性ポリマーまたは合成シリコンなどの不活性材料を用いることができ、例えば、ＳＩＬＡＳＴＩＣ（登録商標）シリコンゴム、または他のポリマー、例えば、Ｄｏｗ−Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造されたものを用いることができる。
【００４４】
当業者によって理解されるように、リポソーム送達システム、例えば、小型単層小胞、大型単層小胞および多層小胞などを使用して、抗がん剤および／または他の薬学的に活性のある作用剤を患者に投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの、多様なリン脂質から形成することができる。
【００４５】
さらに、モノクローナル抗体を、従来の方法によって化合物分子が結合されている個々の担体として使用して、治療に有用な活性剤を送達することもできる。
【００４６】
活性薬剤は、標的可能な薬物担体として可溶性ポリマーを用いて従来の方法によって調製することもできる。こうしたポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシ−プロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルタミド−フェノール、またはパルミトイル残基で置換されているポリエチレンオキシド−ポリリジンが含まれうる。さらに、活性剤は、薬物の制御放出を達成するのに有用な生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、および架橋されたまたは両親媒性のヒドロゲルのブロックコポリマーを用いて調製することができる。
【００４７】
例えば、当技術分野においてよく知られている手法によって約５から約１２の間の範囲内のｐＨで調製される、皮下製剤も、好適なバッファーおよび等張剤を含む。それらは、１日１回または複数回、例えば、毎日１、２、または３回の皮下投与において１日用量の活性剤を送達するように製剤化することができる。製剤の適切なバッファーおよびｐＨの選択は、投与される活性剤の溶解度に依存して、当業者によって容易になされる。ｐＨが酸または塩基のいずれか、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムで望ましい範囲に調整された塩化ナトリウム溶液を皮下製剤に用いることもできる。典型的には、皮下製剤のｐＨ範囲は、約５から約１２までの範囲内でありうる。ＨＤＡＣ阻害剤がベリノスタットである（すなわち、ヒドロキサム酸部分を有する）場合の皮下製剤のｐＨ範囲は、約ｐＨ９から約ｐＨ１２でありうる。一般に、プララトレキサートの皮下製剤のｐＨ範囲は、約ｐＨ７．５から約ｐＨ８．５である。
【００４８】
活性剤は、好適な鼻腔内ビヒクルの局所使用を介して経鼻投与の形態で患者に投与することもできる。例えば、その技術分野の当業者によく知られている皮膚パッチ剤を使用する、経皮的な送達を使用して、投与レジメンの全体を通しての活性剤の継続的な送達を可能にすることができる。
【００４９】
［投与レジメンおよび投与量］
当業者によって理解されるように、投与レジメンは、望ましい治療目的に到達するために選択される薬物投与のモダリティである。本明細書において意図されているように、本明細書に記載の活性剤の組合せを利用する好適な投与レジメンは、例えば、患者の型、種、年齢、体重、および性別；治療しているがんの型；治療するがんの重症度（すなわち、ステージ）；投与の経路；患者の腎臓および肝臓の機能；ならびに用いる特定の化合物またはその塩を含む、多様な因子によって選択されうる。普通の手腕をもつ医師または獣医師ならば、治療するために、例えば、疾患の進行を予防、阻害（完全にまたは部分的に）または停止するために、必要とされる薬物の有効量を容易に決定および処方することができる。
【００５０】
開示の抗がん剤ならびに本発明の方法に従って投与されるあらゆる任意選択のさらなる薬剤の投与量は、医師または他の熟練した専門家によって従来の方法によって決定することができ、治療される状態、選択される投与の経路、投与される実際の化合物、薬物の組合せ、個々の患者の年齢、体重、および反応性、患者の症状の重症度などを含む、関連する状況に基づきうる。いずれの化合物についても、治療有効用量は、細胞培養アッセイにおいて、または動物モデル、通常、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、もしくはブタにおいてのいずれかで最初に見積もられうる。動物モデルは、適切な濃度範囲および投与の経路を決定するためにも使用されうる。こうした情報は、次いで、ヒトにおける有用な用量および投与の経路を決定するために使用されうる。ヒト等価用量（ＨＥＤ）の算出では、Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｒｅｖｉｅｗｅｒｓの文献（２００２，Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．，ＵＳＡ）において提供されている変換表を使用することが推奨される。
【００５１】
一般に、化学療法剤の有効用量は、０．０１ｍｇ／ｋｇから２０００ｍｇ／ｋｇの薬剤、好ましくは、０．０５ｍｇ／ｋｇから５００ｍｇ／ｋｇの薬剤になる。ヒト対象のための正確な有効用量は、病状の重症度、対象の健康状態、対象の年齢、体重、および性別、食事、投与の時間および頻度、薬物の組合せ、反応感受性、ならびに療法に対する耐性／反応性によって異なることになる。この量は、慣例の実験法によって決定することができ、臨床医の判断の範囲内にある。当業者によって理解されるように、本発明の方法に従って投与されるいずれの薬剤の投与量もその薬剤の最大耐量を超えてはならない。
【００５２】
例えば、当業者によって理解されるように、本発明の方法と共に使用される抗がん剤の経口投与量は、１日あたり約２ｍｇから約２０００ｍｇの間、例えば、１日あたり約２０ｍｇから約２０００ｍｇまで、例えば、１日あたり約２００ｍｇから約２０００ｍｇまでの範囲に及んでもよい。例えば、経口投与量は、１日あたり約２、約２０、約２００、約４００、約８００、約１２００、約１６００または約２０００ｍｇであってもよい。１日あたりの合計量は、一回の投与（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅ）で投与されてもよいこと、または１日あたり２、３もしくは４回などの多数回の投与で投与されてもよいことが理解される。
【００５３】
例えば、患者は、約２ｍｇ／日から約２０００ｍｇ／日の間、例えば、約２０から２０００ｍｇ／日まで、例えば、約２００から約２０００ｍｇ／日まで、例えば、約４００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日までの活性剤を投与されうる。１日１回の投与用に好適に調製された医薬は、したがって、約２ｍｇおよび約２０００ｍｇの間、例えば、約２０ｍｇから約２０００ｍｇまで、例えば、約２００ｍｇから約１２００ｍｇまで、例えば、約４００ｍｇ／日から約１２００ｍｇ／日までを含みうる。活性剤は、一回の投与でまたは１日２、３、もしくは４回の分割投与をすることができる。１日２回の投与では、好適に調製された医薬は、したがって、必要とされる１日用量の半分を含むはずである。
【００５４】
再発したまたは難治性の末梢性Ｔ細胞リンパ腫を有する治療患者に関して、ＦＤＡに推奨されているベリノスタットについての用量およびスケジュールは、３週毎に１〜５日目に１日１回、静脈内注入によって３０分かけて投与されるＢＥＬＥＯＤＡＱ（登録商標）の１，０００ｍｇ／ｍ２の投与である。プララトレキサートに関して、ＦＤＡに推奨されているＦＯＬＯＴＹＮの用量は、７週周期で６週間、週１回３から５分かけての静脈内プッシュとして投与される３０ｍｇ／ｍ２の投与である。
【００５５】
本明細書において理解されるように、本発明の方法による組合せで投与される投与量のベリノスタットおよびプララトレキサートは、それらの組合せが、リンパ腫に対する相乗的な増殖阻害効果を生じる能力のある治療有効量をもたらすものである。上記のように、こうした量は、治療するリンパ腫、および患者の状態を含む、多様な因子に依存して対象によって変化しうる。
【００５６】
例えば、本明細書において意図されているように、静脈内または皮下に、ベリノスタットを１日あたり約３から１５００ｍｇ／ｍ２の間、例えば、１日あたり約３、３０、６０、９０、１８０、２５０、３００、６００、９００、１２００または１５００ｍｇ／ｍ２送達するのに十分な量で患者に投与することができる。特定の実施形態では、ベリノスタットを１日あたり約２５０から約１０００ｍｇ／ｍ２の間送達するのに十分な量で患者に投与することができる。こうした量は、いくつかの好適な方法、例えば、大量の低濃度のベリノスタットを１回の長時間または１日数回で投与することができる。これらの量は、１日または複数の連続した日もしくは断続した日に、または１週間毎（７日の期間）にそれらの組合せで投与することができる。代替的に、少量の高濃度のベリノスタットを短時間で、例えば、１日または複数日で連続的もしくは断続的に、または１週間毎（７日の期間）にそれらの組合せでのいずれかで１日１回、投与することもできる。例えば、１日あたり３００ｍｇ／ｍ２の用量を、連続した５日間で１治療あたり合計１５００ｍｇ／ｍ２になるように投与することができる。別の例では、１日あたり２５０ｍｇ／ｍ２の用量を、連続した４日間で１治療あたり合計１０００ｍｇ／ｍ２になるように投与することができる。別の投与レジメンでは、連続した日数は５日であってもよく、連続した２または３週間で合計３０００ｍｇ／ｍ２および４５００ｍｇ／ｍ２の合計治療になるように治療を続ける。
【００５７】
典型的には、約１．０ｍｇ／ｍＬから約１０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、２．０ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬおよび１０ｍｇ／ｍＬの濃度のベリノスタットを含む静脈注射用製剤を調製することができ、上記の用量を達成する量で投与されうる。一例では、十分な量の静脈注射用製剤を、１日にその日の合計用量が約２５０ｍｇ／ｍ２から約１５００ｍｇ／ｍ２の間であるように患者に投与することができる。特定の実施形態では、ベリノスタットは、２４時間毎に９００ｍｇ／ｍ２の割合で患者に静脈内投与される。
【００５８】
同様に、プララトレキサートは、いくつかの好適な方法で患者に投与することができる。
【００５９】
例えば、１つの可能な好適な投与スケジュールには、週１回×６週間の３０ｍｇ／ｍ２の投与およびその後１週間の休止が含まれうる。
【００６０】
別の特定の実施形態では、プララトレキサートを１日あたり約７．５ｍｇ／ｍ２から３０ｍｇ／ｍ２の間送達するのに十分な量で患者に投与することができる。
【００６１】
本明細書において意図されているように、プララトレキサートの静脈注射用製剤は、当業者によって調製されうる。こうした製剤は、例えば、約１．０ｍｇ／ｍＬから約３０ｍｇ／ｍＬの間、例えば、２．０ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、６．０ｍｇ／ｍＬ、７．０ｍｇ／ｍＬ、８．０ｍｇ／ｍＬ、９．０ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、および３０ｍｇ／ｍＬの濃度のプララトレキサートを含んでいてもよく、上記の用量を達成する量で投与される。一例では、十分な量の静脈注射用製剤を、その日の合計用量が約７．５ｍｇ／ｍ２から約３０ｍｇ／ｍ２の間であるように患者に１日で投与することもできる。特定の実施形態では、３０ｍｇ／ｍ２のプララトレキサートを、７週周期で６週間、週１回３から５分かけての静脈内プッシュとして投与してもよい。
【００６２】
本明細書において意図されているように、本明細書に記載のデータに基づき、本発明の方法における使用に適切なベリノスタットおよびプララトレキサートの投与量は、当業者によって決定されうる。本明細書において意図されているように、特定の実施形態では、プララトレキサートの投与量は、７．５ｍｇ／ｍ２から３０ｍｇ／ｍ２までの範囲に及んでもよく、かつ／またはベリノスタットの投与量は、２５０ｍｇ／ｍ２から１０００ｍｇ／ｍ２までの範囲に及んでもよく、本明細書において意図されているいずれかの様式で患者に投与される。
【００６３】
本明細書において意図されているように、ベリノスタットおよびプララトレキサートは、本発明の方法に従って任意の順序で連続に、同時に、またはそれらの組合せで患者に投与されてもよい。例えば、ベリノスタットは、プララトレキサートの投与の前に投与されてもよく（例えば、最長７、１４、２１日前）、プララトレキサートの投与の後に投与されてもよく（例えば、最長７、１４、２１日後）、プララトレキサートと同時に投与されてもよく、またはこうした投与レジメンの組合せである様式で投与されてもよい。
【００６４】
例えば、組合せ療法は、ベリノスタットを２４時間毎に５日間投与し、次いで、プララトレキサートおよびベリノスタットを２〜５および１０〜１３日目に投与する２１日周期であってもよい。特定の実施形態では、ベリノスタットは、３週毎に５日間、２４時間毎に投与されてもよい。各周期において、プララトレキサートレジメンは、ベリノスタットの投与後の周期３日目に（ｏｎ  ｃｙｃｌｅ  ｄａｙ  ３）投与されることになる。
【００６５】
［キット］
別の態様では、本発明は、キットまたはキットオブパーツに関し、このキットまたはキットオブパーツは、例えば、好適な容器内でおよび／または好適なパッケージングで提供される薬学的に許容される製剤の一成分としてのベリノスタットと、例えば、好適な容器内でおよび／または好適なパッケージングで提供される薬学的に許容される製剤の一成分としてのプララトレキサートとを含み、前記キットまたはキットオブパーツは、所定の作用剤を、本発明の方法に従ってＢ細胞またはＴ細胞リンパ腫を治療する方法における使用に好適な投与量で含む。本明細書において意図されているように、ヒトまたは他の哺乳動物への一回の投与量として適するようにされた物理的に別々の複数のユニットが含まれており、この各ユニットには、同時または連続に投与されると、望ましい治療効果を生じると算定された予め決定された量の活性成分が、任意で好適な医薬用の賦形剤と共に含有されていてもよい。典型的なユニットの剤形は、例えば、液体組成物の予め測定されたアンプルもしくはシリンジ；または固体組成物の場合には丸剤、錠剤、カプセル剤などを含みうる。
【００６６】
本明細書において意図されているように、キットまたはキットオブパーツは、説明書、例えば、使用のための書面による説明書、例えば、ベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せを、それを必要とする対象に投与するための説明書をさらに含んでいてもよい。一実施形態では、説明書は、指示されている活性剤の組合せがそれに好適な治療である適応症（例えば、リンパ腫の型）の一覧を含む。種々の実施形態では、キットまたはキットオブパーツは、活性剤の投与を容易にするための適切な試薬（例えば、緩衝液、溶媒）および／または装置（例えば、チューブ、シリンジ）をさらに含む。
【００６７】
本明細書において特定の実施形態に言及して本発明を説明しているが、これらの実施形態は本発明の原理および用途を単に例示しているものであることを理解されたい。したがって、添付の特許請求の範囲によって定義されているような本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、例示の実施形態に多くの改変がなされうることおよび他の構成が考案されうることを理解されたい。本開示は、以下の実施例においてさらに説明されることになり、これは、本発明の特定の実施形態をさらに例示するものであって、いかなる形であっても本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００６８】
［実施例１］
ベリノスタット単独、およびプララトレキサートとの組合せでの増殖阻害効果を数種類の異なるヒトリンパ腫細胞株においてｉｎ  ｖｉｔｒｏでアッセイした。細胞に基づく試験の終了点は、処理の７２時間後であった。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を使用して細胞生存率を測定し、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ分析を使用して、本明細書に示しているようなＩＣ５０および組合せ指数の値と共に組合せ効果を決定した。数種類のヒトリンパ腫細胞株における、プララトレキサートと一緒に用いたベリノスタットの配列依存的な相乗効果または相加効果の可能性について調査した。
【００６９】
（材料および方法）
細胞株：一区画のリンパ腫細胞株（ＫＡＲＰＡＳ−２９９［ヒト非ホジキンＫｉ陽性大細胞リンパ腫（Ｔ細胞由来）］、Ｊｅｋｏ−１［マントル細胞リンパ腫（Ｂ細胞由来）］およびＨＵＴ−７８［皮膚Ｔリンパ球（Ｔ細胞由来）］をＲＰＭＩ（１０％ＦＢＳ）、ＲＰＭＩ（２０％ＦＢＳ）およびイスコフ培地（２０％ＦＢＳ）中でそれぞれペニシリンおよびストレプトマイシン（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ，Ｉｎｃ）と共に培養する。この試験において使用するＲＰＭＩおよびイスコフ培地には、それぞれ葉酸（２．３μｍおよび２ｍｇ／５００ｍｌ）が含まれる。
【００７０】
この試験において使用する血清は、未透析のウシ胎児血清（Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）であり、１ｎｍ未満の５−メチルテトラヒドロ葉酸を含む。
【００７１】
培養物を、Ｔ７５−ｃｍ２培養フラスコ中で３７℃、９５％の空気湿度、かつ５％のＣＯ２で維持する。細胞を８０〜９０％のコンフルエンス（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅ）で継代培養し、それぞれの実験用に９６ウェルプレート内に１ウェルあたり１．５×１０４細胞で播種する。
【００７２】
細胞処理：プレーティングの２４時間後に処理を開始する。単剤試験では、細胞を、それぞれ０．００５〜１μＭおよび０．００１μＭ〜０．２Ｍｍの間の漸増濃度のベリノスタットおよびプララトレキサートで処理する。組合せ試験では、ベリノスタットに加えてプララトレキサートで同時に細胞を以下の一定のＩＣ５０比：０．２５×、０．５×、１×、２×および４×で３７℃で７２時間処理する。７２時間の処理後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して細胞生存率を決定する。
【００７３】
増殖阻害アッセイ：ＰｒｏｍｅｇａからのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙアッセイを使用して細胞生存率を決定する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、ＡＴＰ利用を使用して細胞生存率を決定および比較するための均一な方法である。処理後、１００μｌの増殖培地を除去して、細胞を１００μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬と共にニューテーションさせながら２分間インキュベートし、発光シグナルを安定させるために室温でさらに１０分間インキュベートする；次いで、Ｂｉｏｔｅｋルミノメーターを使用して発光を測定し、中で値が記録される（Ｌｕｍ）。
【００７４】
データ分析：各アッセイにおける細胞生存率は、未処理の対照細胞に対する百分率として表される。生存率ＩＣ５０値を、細胞生存率における５０％の低下を引き起こしている化学剤の濃度として決定する。データをＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアにあてはめ、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ分析を使用して単独および組合せの効果を決定して、Ｂｉｏｓｏｆｔ  ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアを使用してＩＣ５０および組合せ指数（ＣＩ）を決定し、ここで、Ｃ＜１＝相乗作用、Ｃ＝１＝相加的；Ｃ＞１＝拮抗作用である（Ｔｉｎｇ−Ｃｈａｏ  Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｐ  Ｔａｌａｌａｙ，”Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ”Ａｄｖａｎ．Ｅｎｚｙｍ．Ｒｅｇｕｌ．Ｖｏｌ．２２，ｐｐ  ２７−５５，１９８５）。
【００７５】
（結果）
実験からのデータを以下の表１〜２に示しており、以下で考察する。
【００７６】
ベリノスタット：７２時間の曝露後の一区画のリンパ腫細胞株全体のベリノスタット（ＰＸＤ１０１）についての単剤ＩＣ５０値は、０．０９〜０．２１μＭである。０．２０３μＭ（ＫＡＲＰＡＳ−２９９）、０．１０３μＭ（Ｊｅｋｏ−１）、０．０９７μＭ（ＨＵＴ−７８）の相対ＩＣ５０値を組合せ実験に利用する（表１）。
【００７７】
プララトレキサート：７２時間の曝露後の一区画のリンパ腫細胞株全体のプララトレキサートについての単剤ＩＣ５０値は、０．００２〜０．０２５μＭである。０．０２４μＭ（ＫＡＲＰＡＳ−１９９）、０．０１８７μＭ（Ｊｅｋｏ−１）、０．００２８μＭ（ＨＵＴ−７８）の相対ＩＣ５０値を組合せ実験に利用する（表１）。
【００７８】
ベリノスタット＋プララトレキサート：組合せ試験では、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）についてのＩＣ５０値は、０．１２７μＭ（ＫＡＲＰＡＳ−２９９）、０．０８７μＭ（Ｊｅｋｏ−１）および０．１７μＭ（ＨＵＴ−７８）である。プララトレキサートについてのＩＣ５０値は、０．００３６μＭ（ＫＡＲＰＡＳ−２９９）、０．００２１μＭ（Ｊｅｋｏ−１）、０．００４１μＭ（ＨＵＴ−７８）と算出され、これらを組合せ実験に利用する。
【００７９】
ＫＡＲＰＡＳ−２９９では、プララトレキサートとのベリノスタットの組合せは、低いＩＣ５０濃度で相乗効果、１×ＩＣ５０濃度で相加効果（ＣＩ＝１）、より高いＩＣ５０濃度で拮抗効果を示す。一方、Ｊｅｋｏ−１では、１×ＩＣ５０およびより低いＩＣ５０は拮抗作用を示し、より高いＩＣ５０は相乗効果を示した。ＨＵＴ−７８の場合には、０．５×および１×ＩＣ５０は相乗効果（Ｃｌ＜１）を示す（表２）。
【００８０】
結論：単剤ベリノスタット処理により、アッセイしたリンパ腫細胞株において０．０９μＭ〜０．２１μＭの範囲に及ぶ同等のＩＣ５０値を示した。同様に、プララトレキサート処理は、０．００２μＭ〜０．０２５μＭの範囲に及ぶＩＣ５０値を示した（表１）。予想外なことに、異なるＢ細胞株およびＴ細胞株を含む、試験した異なるリンパ腫細胞株において、ベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せは、異なるＩＣ５０濃度で相乗的な増殖阻害効果を生じた。特に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのデータは、相乗的な増殖阻害効果が、ＫＡＲＰＡＳ−２９９細胞においてベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せでより低いＩＣ５０の組合せで生じることを実証している。Ｊｅｋｏ−１では、より高い組合せで相乗作用が示され、ＨＵＴ−７８細胞では、相乗作用は１×ＩＣ５０処理で達成された（表２）。
【００８１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験結果：
【表１】
2018517788.tif 000002
【００８２】
【表２】
2018517788.tif 000003
【００８３】
この試験において使用する細胞株は、ヒト患者由来であり、したがって、得られる結果は、ヒトにおけるｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に関連する。ここに記載している試験は、ベリノスタットおよびプララトレキサートの組合せが、特定の比率で使用されるときに相乗的であることを示している。したがって、ここに記載している試験に基づき、２種の作用剤の適切な用量をヒトにおいて試験して、ｉｎ  ｖｉｖｏでの患者への投与のための相乗的な用量を決定することができる。
【００８４】
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態の多くの等価形態を理解するはずであり、または慣例の実験法だけを使用して確認できるはずである。こうした等価形態は、添付の特許請求の範囲によって包含されるものである。
【００８５】
したがって、本発明の好ましい実施形態が例示および記載されているが、本発明は、変形および改変が可能であり、記載されている詳細な用語に限定されるものではないことを理解されたい。本発明者らは、本発明を多様な使用および条件に適応させるためになされうるこうした変化および変更を利用することを望んでいる。こうした変更および変化には、例えば、本発明による作用剤を哺乳動物に投与するための異なる医薬組成物；投与する組成物中の異なる量の作用剤；本発明による作用剤を投与する異なる時間および手段；ならびに、例えば、異なる作用剤の組合せ、または本明細書に詳細に開示されている作用剤の望ましい有用性と同じ、同様の、もしくは異なっている目的のための他の生物学的に活性な化合物と併せた本発明による作用剤の組合せを含む、投与用量中に含まれる異なる材料が含まれうる。こうした変化および変更は、そうした変化が、作用剤の望ましい潜在可能性を変化させずに、投与する医薬組成物中または体内での作用剤の溶解度、身体による作用剤の吸収、貯蔵寿命の間、または体内で作用剤の生物学的作用が望ましい効果をもたらすことができるようなときまでの間のいずれかにおける作用剤の保護を変化させるような様式で作用剤を変更する、本明細書に記載の特定の望ましい作用剤の改変、およびこうした同様の改変を含むものである。したがって、こうした変化および変更は、等価形態の全範囲に適切に入るものであり、それゆえに、添付の特許請求の趣旨の範囲内である。
【００８６】
したがって、本発明ならびにそれを作製および使用する様式およびプロセスは、このように完全、明白、簡潔かつ正確な用語で記載されているので、それが関連する、またはそれが最も密接につながっている、技術分野のすべての当業者が同じものを作製および使用するのを可能にする。
【国際調査報告】
2018517788.tif 000004