(57)【要約】    本発明は、自然医学および医薬品化学の分野に属し、新規の、一般式Ｉおよび一般式ＩＩのトリプトリドのエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、および異化生成物および代謝産物、これら化合物の製造方法、当該化合物を含んでなる医薬組成物ならびに腫瘍、免疫疾患、またはＸＰＢもしくはＰｏｌ  ＩＩもしくは腫瘍遺伝子ｃ−ｍｙｃの異常発現に関連する疾患に対する薬の製造におけるそれらの使用に関する。
2018536619.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）および一般式（ＩＩ）のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体：
【化１】
2018536619.tif 000030
［式中、
Ｒ１およびＲ４は、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され；該アミノ酸は、ラセミ化合物、または光学的純粋な左旋性もしくは右旋性でもよく；該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され；該アミノ酸は、ラセミ化合物、または光学的に純粋な左旋性もしくは右旋性でもよく；該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；Ｒ２およびＲ３、Ｒ５およびＲ６は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｎ等の保護基であってもよく；Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく；Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。］。
【請求項２】
請求項１に記載のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の薬学的に許容可能な付加物または複合体。
【請求項３】
請求項１に記載のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
請求項１に記載のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の異化生成物および代謝産物。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ４が、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され、該アミノ酸は、ラセミ化合物または光学的純粋な左旋性もしくは右旋性でもよく；該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；Ｒ２およびＲ３、Ｒ５およびＲ６は、保護基であるかまたは保護基ではなく；Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく；Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよく；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６が、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され、該アミノ酸は、ラセミ化合物または光学的に純粋な左旋性もしくは右旋性でもよく；該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択される、請求項１に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の、薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物。
【請求項６】
Ｒ１およびＲ２が、置換または非置換アリールから選択され；該置換基が、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；該置換基が、同時に１つ以上存在するように選択されてもよい、請求項１〜４に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物。
【請求項７】
前記誘導体が、以下の化合物から選択される、請求項１に記載のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体：
【化２】
2018536619.tif 000031
【請求項８】
以下の工程を含んでなる、一般式（Ｉ）の化合物の製造方法：
【化３】
2018536619.tif 000032
【請求項９】
以下の工程を含んでなる、一般式（ＩＩ）の化合物の全体的な製造方法：
【化４】
2018536619.tif 000033
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物ならびに任意の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１１】
抗腫瘍剤の製造における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物の使用。
【請求項１２】
抗腫瘍治療薬としての、請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物の使用。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物の治療的有効量を、そのような治療が必要な患者に投与することを含んでなる、腫瘍を有する患者の治療方法。
【請求項１４】
前記腫瘍が、白血病、多発性骨髄腫、リンパ腫、肝臓癌、胃癌、乳癌、胆管癌、膵癌、肺癌、結腸直腸癌、骨肉腫、ヒト子宮頸癌、神経膠腫、上咽頭癌、喉頭癌、食道癌、中耳腫瘍、黒色腫および前立腺癌から選択される、請求項１１または１２に記載の使用。
【請求項１５】
前記腫瘍が、白血病、多発性骨髄腫、リンパ腫、肝臓癌、胃癌、乳癌、胆管癌、膵癌、肺癌、結腸直腸癌、骨肉腫、ヒト子宮頸癌、神経膠腫、上咽頭癌、喉頭癌、食道癌、中耳腫瘍、黒色腫および前立腺癌から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
免疫疾患に対する薬剤の製造における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物の使用。
【請求項１７】
前記免疫疾患が、免疫細胞の機能不全に関連する自己免疫疾患から選択される、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記免疫疾患が、Ｔ細胞またはＢ細胞の機能不全に関連する自己免疫疾患から選択される、請求項１６に記載の使用。
【請求項１９】
前記免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリトマトーデス、乾癬および腎症を含んでなる群から選択される、請求項１６に記載の使用。
【請求項２０】
ＸＰＢまたはＰｏｌ  ＩＩの異常な発現に関連する疾患のための薬剤の製造における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物の使用。
【請求項２１】
前記ＸＰＢまたはＰｏｌ  ＩＩの異常な発現に関連する疾患が、ＸＰＢまたはＰｏｌ  ＩＩの過剰発現に関連する腫瘍から選択される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
腫瘍遺伝子ｃ−ｍｙｃの異常な発現に関連する疾患のための薬剤の製造における、請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩および異化生成物および代謝産物の使用。
【請求項２３】
ｃ−ｍｙｃの異常な発現に関連する前記疾患が、ｃ−ｍｙｃの過剰発現に関連する腫瘍から選択される、請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自然医学および医薬品化学、ならびにより詳しくは新規のトリプトリド誘導体、特にトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体ならびにこれら化合物の製造方法および使用の分野に属するものである。
【０００２】
本発明の背景
トリプトリド（ＴＰＬ）は、ニシキギ科（Celastraceae）のクロヅル（Tripterygium）属の植物である、トリプテリジウム・ウィルフォルディ・フックｆ（Tripterygium Wilfordii Hook. f. ）から単離された、３つのエポキシ基とα，β−不飽和５員ラクトン環構造とを含有する、独特な構造を有するアビエタン・ジテルペン・ラクトン化合物である。それは、分子式Ｃ２０Ｈ２４Ｏ６、分子量３６０．４および下記に示す構造式を有する。
【化１】
2018536619.tif 000003
【０００３】
多数のｉｎ  ｖｉｖｏ  およびｉｎ  ｖｉｔｒｏの研究から、トリプトリドが、抗腫瘍活性、抗炎症活性、免疫抑制性活性および抗雄妊性活性等の顕著な生物活性を有することが示されている。トリプトリドは、Ｌ６１５白血病マウスの生存期間を顕著に延長させることができ、かつ、最大４０％（１８／４５）の完全寛解率で、ヒト白血病に顕著な治療効果も示す [Xia Zhi-Lin et al., “Pharmacological and Clinical Studies of Triptolide.”  Acta Pharmacologica Sinica, 1992, (6)427-431]。それは、乾癬、関節リウマチ、白血病、腎症等の治療に臨床的に使用されている。しかしながら、トリプトリドの毒性に関する研究では、トリプトリドが高い毒性および狭い治療濃度域を有し、消化器系、泌尿生殖器系および血液系に深刻な有毒副作用があることが実証されている。したがって、トリプトリドの臨床開発研究はある程度まで制限されている。その独特な化学構造および生物活性により、トリプトリドには様々な国々の化学者および薬理学者から大きな関心が寄せられている。 トリプトリドの活性機序と構造活性との関係性を明らかにするため、およびそれの高活性かつ低毒性を備えた誘導体を見つけるために、いくつかの研究グループは、トリプトリドとその類似体に関する系統的研究を行い、一連のトリプトリド誘導体を合成した［Zhang Fan et al., “Progress in Structure Modification of Triptolide.” Acta Pharmacologica Sinica, 2004, 39(10):857-864; and Tai Ting et al., “Advance in Pharmacokinetics of Triptolide.” Pharmaceutical and Clinical Research, 2012, 20(3):229-235］。それらのうちのいくつかは治験に入った。 例えば、アメリカ合衆国、ミネソタ大学の科学者が合成した、トリプトリドの水溶性プロドラッグであるミネリド（Minnelide）は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏの両方でトリプトリドへ変換することができる。ミネリドは、いくつかの動物モデルにおいて良好な抗癌効果およびより少ない毒性反応を示した。例えば、ミネリドは、膵臓癌のヌードマウス・モデルにおいて、腫瘍容積および腫瘍の拡大を減少させて、マウスの生存期間を延長し、かつ、ミネリドは、腫瘍退縮に有効な容量で顕著な毒性効果を示さなかった。現在ミネリドは、臨床試験のフェーズＩに進んでいる［Chugh R, et al., “A preclinical evaluation of Minnelide as a therapeutic agent against pancreatic cancer.” Sci Transl Med., 2012; 4(156):156ra139.］。残念ながら、現在までのところ、臨床試験のフェーズＩＩに進めるトリプトリドあるいはその誘導体は見つかっていない。したがって、トリプトリドの安全な臨床用途に関係する方法と同様に、高活性かつ低毒性の新規トリプトリド誘導体を探求するために、研究者は、依然としてさらなる研究を行う必要がある。さらに、経口注入および静脈内注射の両方のためのトリプトリドの薬物動態学特性は、トリプトリドは排出半減期が短く、体内での素早い吸収、分配、代謝および排出を経て、時間とともに大きく変動する血漿薬物濃度および組織薬物濃度を有することを示唆する。それ故、トリプトリドは理想的な薬物動態学特性を有さず、臨床用途には好ましくなく、臨床的拒絶反応の発生率を増加させるかもしれない。したがって、よい薬物動態学特性を有する、新規のトリプトリド誘導体および関連の処方物を調査することが非常に重要である［Tai Ting et al., “Advance in Pharmacokinetics of Triptolide.” Pharmaceutical and Clinical Research, 2012, 20(3):229-235］。
【０００４】
したがって、依然として、市場において良好な生物活性および薬物動態学特性およびより少ない毒性を有するトリプトリド薬剤の需要がある。今までのところ、これらの特性を有するトリプトリド誘導体の合成および用途に関する報告はまだない。
【０００５】
発明の概要
本発明の第一の目的は、単一アミノ酸エステル化を特徴とする、新規の、一般式（Ｉ）のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体、またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物および代謝産物を提供すること、およびジペプチドエステル化を特徴とする、新規の、一般式（ＩＩ）のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物および代謝産物を提供することである。
【化２】
2018536619.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され；当該アミノ酸は、ラセミ化合物または光学的に純粋（左旋性または右旋性）でもよく；当該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され、；
Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され；当該アミノ酸は、ラセミ化合物または光学的に純粋（左旋性または右旋性）でもよく；当該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；Ｒ２およびＲ３は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｎ、Ｃｂｚ等の保護基であってもよく；Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく；
Ｒ４は、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、および置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され、当該アミノ酸はラセミ化合物でもよく、または光学的に純粋（左旋性または右旋性）でもよく；当該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；
Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルあるいはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、および置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され；当該アミノ酸はラセミ化合物でもよく、または左旋性もしくは右旋性を含んで光学的に純粋でもよく、；当該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；Ｒ５およびＲ６は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｎ、Ｃｂｚ等の保護基でもよく；Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。］
【０００６】
本発明の第二の目的は、下記のスキームに従い実行される、本発明の、一般式（Ｉ）の単一アミノ酸エステル化および一般式（ＩＩ）のジペプチドエステル化した、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の製造方法を提供することである。
【化３】
2018536619.tif 000005
【０００７】
一般式（Ｉ）の単一アミノ酸エステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体は、適温で、縮合剤または好適な溶媒中の触媒の存在下で、それぞれのアミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈとの、トリプトリドのエステル化縮合を通して形成してもよく；また、塩基性薬剤の存在下で、それぞれのアミノ酸塩化アシルＲ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯＣｌとの、トリプトリドのエステル化縮合を通してか；または、アミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈの活性化により、活性エステル中間体を生成し、次いでそれをトリプトリドと反応させ、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉ）を生成し；また、さらにアミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈの活性化により混合無水中間体を生成し、次いでそれをトリプトリドと反応させ、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉ）を生成してもよい。式（Ｉ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、アミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈ中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、アミノ酸塩化アシルＲ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯＣｌ中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、活性エステル中間体中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３および混合無水中間体中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３は全て、上記式（Ｉ）中における定義と同一である。
【０００８】
また本発明は、本発明の一般式（ＩＩ）のジペプチドのエステル化した、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の製造方法を提供する。当該ジペプチドのエステル化（ＩＩ）を有する、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体は、第一に、使用するアミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈ中、Ｒ２またはＲ３が保護基である、前述の方法により、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉ）を製造することによって製造し得る。アミノ保護基は、当業者に公知であり、全体を参照することにより本明細書中に組込まれる、例えば、Greene and Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis,” 3rd edition, John Wiley & Sons Press, New York, NY, 1999などの文献において容易に見つけることができる。その後、保護基を除去して一般式Ｉａの誘導体を生成し、それを適切な温度下で縮合剤または好適な溶媒中の触媒の存在下で、それぞれのアミノ酸Ｒ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯ２Ｈとさらにアミド化縮合させてジペプチドエステル化（ＩＩ）したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体を生成し；保護基の除去によって得られた一般式Ｉａの誘導体も、塩基性薬剤の存在下でそれぞれのアミノ酸塩化アシルＲ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯＣｌとアミド化縮合させて、ジペプチドエステル化（ＩＩ）したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体を生成してもよく；または、ジペプチドエステル化（ＩＩ）したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体は、アミノ酸Ｒ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯ２Ｈの活性化により、活性エステル中間体を生成し、それをトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉａ）と反応させて、生成してもよく；また、アミノ酸Ｒ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯ２Ｈの活性化により混合無水中間体を生成し、それをトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉａ）と反応させて、生成してもよい。Ｒ５またはＲ６が保護基である場合、化合物ＩＩａは、保護基をさらに除去することにより得られてもよい。式（ＩＩ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６、アミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ４Ｈ中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、アミノ酸塩化アシルＲ２Ｒ５ＮＣＨＲ６ＣＯＣｌ中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、活性エステル中間体中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、および混合無水中間体中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３は全て上記の式（ＩＩ）中のものと同一の定義を有する。アミノ酸Ｒ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯ２Ｈ中のＲ４、Ｒ５、Ｒ６、アミノ酸塩化アシルＲ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯＣｌ中のＲ４、Ｒ５、Ｒ６、活性エステル中間体中のＲ４、Ｒ５、Ｒ６および混合無水中間体中のＲ４、Ｒ５、Ｒ６は全て上記の式（ＩＩ）中の定義と同一である。
【０００９】
本発明の第三の目的は、少なくとも１種の本発明の化合物および任意の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる医薬組成物であって、当該化合物が、一般式（Ｉ）の単一のアミノ酸エステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体および一般式（ＩＩ）のジペプチドエステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体から選択される、医薬組成物を提供することである。
【００１０】
本発明の第四の目的は、薬剤（特に、抗腫瘍剤）の製造における、本発明の化合物を含んでなる、化合物または医薬組成物の使用を提供することである。したがって、本発明は、治療的に有効な量の本発明の少なくとも１種の化合物を、そのような治療が必要な患者に投与することを含んでなる、腫瘍を有する患者の治療方法を提供する。具体的には、腫瘍は、白血病、多発性骨髄腫、リンパ腫、肝臓癌、胃癌、乳癌、胆管癌、膵癌、肺癌、結腸直腸癌、骨肉腫、黒色腫、ヒト子宮頸癌、神経膠腫、上咽頭癌、喉頭癌、食道癌、中耳腫瘍、前立腺癌等から選択される。 化合物は、一般式（Ｉ）の単一のアミノ酸エステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体および一般式（ＩＩ）のジペプチドエステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体から選択される。
【００１１】
本発明の第五の目的は、自己免疫疾患治療薬の製造における、本発明の化合物または化合物を含んでなる医薬組成物の使用を提供することである。具体的には、自己免疫疾患は、Ｔ細胞またはＢ細胞のような免疫細胞の機能不全に関連する自己免疫疾患から選択され、かつ、当該自己免疫疾患は、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、腎症等である。化合物は、一般式（Ｉ）の単一のアミノ酸エステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体および一般式（ＩＩ）のジペプチドエステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体から選択される。
【発明の詳細な説明】
【００１２】
本発明は、一般式（Ｉ）の単一アミノ酸エステル化を有し、かつ一般式（ＩＩ）のジペプチドエステル化した、トリプトリドの新規のＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体、またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物および代謝産物に関する。
【化４】
2018536619.tif 000006
［式中、
Ｒ１は、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され、当該アミノ酸は、ラセミ化合物でもよくまたは光学的に純粋（左旋性または右旋性）でもよく；当該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択される；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され、当該アミノ酸は、ラセミ化合物でもよく、または光学的に純粋（左旋性または右旋性）でもよく；当該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；Ｒ２およびＲ３、Ｒ５およびＲ６は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｎ、Ｃｂｚ等の保護基であってもよく；Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく；Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。］
【００１３】
一つの態様において、本発明は、一般式Ｉまたは一般式ＩＩの化合物に関し、ここでＲ１およびＲ４は、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキルから選択される。Ｒ１とＲ４は、同一でも異なっていてもよい。
【００１４】
一つの態様において、本発明は、一般式Ｉまたは一般式ＩＩの化合物に関し、ここで、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、Ｈおよび置換または非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキルから選択される。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。
【００１５】
一つの態様において、本発明は、一般式Ｉまたは一般式ＩＩの化合物に関し、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、置換または非置換Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたは置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニルから選択される。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。
【００１６】
一つの態様において、本発明は、一般式Ｉまたは一般式ＩＩの化合物に関し、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニルから選択される。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。
【００１７】
一つの態様において、本発明は、一般式Ｉまたは一般式ＩＩの化合物に関し、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、置換または非置換アリールから選択される。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。
【００１８】
一つの態様において、本発明は、一般式Ｉあるいは一般式ＩＩの化合物に関し、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、置換または非置換ヘテロシクリルまたは芳香族ヘテロシクリルから選択される。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。
【００１９】
一つの態様において、本発明は、一般式Ｉまたは一般式ＩＩの化合物に関し、ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択される。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。
【００２０】
本発明の幾つかのトリプトリドのアミノ酸誘導体は下記に示される。これらの例は、単に本発明のさらなる説明であり、いかなる方法によっても本発明の範囲を制限することを意図していない。
【化５】
2018536619.tif 000007
【００２１】
上に列挙された化合物の幾つかのデータは、下記の表中に示される。
【表１】
2018536619.tif 000008
【００２２】
別の態様によれば、本発明において下記の一般式（Ｉ）の化合物が特に好ましい：
１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−トリプトリド）
【化６】
2018536619.tif 000009
１４−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−トリプトリド）
【化７】
2018536619.tif 000010
【００２３】
別の態様によれば、本発明において下記の一般式（ＩＩ）の化合物が特に好ましい：
１４−Ｄ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−右旋性−バリン−トリプトリド）
【化８】
2018536619.tif 000011
１４−Ｌ−バリン−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−左旋性−バリン−トリプトリド）
【化９】
2018536619.tif 000012
１４−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシン−ＴＰＬ（１４−左旋性−フェニルアラニル−左旋性−チロシン−トリプトリド）
【化１０】
2018536619.tif 000013
１４−Ｌ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−右旋性−バリン−トリプトリド）
【化１１】
2018536619.tif 000014
【００２４】
本発明は、塩、溶媒和物、水和物、付加物、複合体、多形体の形態の、本発明の一般式（Ｉ）および一般式（ＩＩ）の化合物またはそれらのプロドラッグに関する。
【００２５】
本明細書において、用語「Ｃ１〜Ｃ２０アルキル」とは、１〜２０個の炭素原子を含有する、直鎖状または分岐状の、置換または非置換アルキルを指す。アルキルＣ１〜Ｃ２０の例として、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよびｎ−エイコシルが挙げられる。
【００２６】
用語「Ｃ２〜Ｃ２０アルキル」とは、２〜２０個の炭素原子を含有する、直鎖状または分岐状の、置換または非置換アルキルを指す。アルキルＣ２〜Ｃ２０の例として、限定されないが、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよびｎ−エイコシルが挙げられる。
【００２７】
用語「Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル」とは、２〜２０個の炭素原子を含有する、直鎖状または分岐状、置換または非置換アルケニルを指す。Ｃ２〜Ｃ２０アルケニルの例として、限定されないが、ビニル、アリルおよびエイコスエニルが挙げられる。
【００２８】
用語「Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル」とは、４〜２０個の炭素原子を含有する、直鎖状または分岐状、置換または非置換共役アルケニルを指す。Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニルの例として、限定されないが、共役ブタジエン基、レチノイルおよび（９Ｚ）−オクタデカノイル−９−アルケニルが挙げられる。
【００２９】
用語「Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルあるいはシクロアルケニル」とは、飽和または不飽和環式の３〜７員単環システムの炭化水素基を指し、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロプロペニルおよびシクロヘキセニルであってもよい。
【００３０】
用語「アリール」とは、アリール、アリールアルキルおよびアルキルアリールを含む、ヘテロ原子を含有していないアリールを指す。
【００３１】
用語「ヘテロ環式アリール」とは、ヘテロ環式アリール、ヘテロ環式アリールアルキルおよびアルキルヘテロ環式アリールを含む、ヘテロ原子を含有するアリールを指す。ヘテロ原子は、窒素、酸素および硫黄を指す。ヘテロ環式アリールは、１つのヘテロ原子を含有しても、同時にいくつかのヘテロ原子を含有していてもよい。
【００３２】
用語「アミノ酸」とは、天然アミノ酸または非天然アミノ酸を指す。
【００３３】
用語「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。
【００３４】
用語「Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ」とは、−Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｎ−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルを指す。
【００３５】
用語「Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ」とは、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｏ−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルを指す。
【００３６】
用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキルチオ」とは、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｓ−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルを指す。
【００３７】
用語「式（Ｉ）および式（ＩＩ）の化合物の薬学的に許容可能な付加物および複合体」とは、本発明の化合物が、非化学的結合または非共有結合性分子間力でその他の小分子またはバイオ高分子へ結合する際に生成される生成物を指す。
【００３８】
本明細書において、用語「一般式（Ｉ）および一般式（ＩＩ）の化合物の薬学的に許容可能な塩」とは、本発明の化合物によって形成された有機酸塩および薬学的に許容可能なアニオンを有する有機酸を指す。  有機酸塩には、限定されないが、トシレート、メシレート、マレート、アセテート、シトレート、マロネート、タルトレート、スクシネート、ベンゾエート、アスコルベート、ラクテート、α-ケトグルタレートおよびα-グリセロホスフェートが含まれ;限定されないが、塩酸塩、スルフェート、ニトレート、ビカーボネートおよびカーボネート、ホスフェート、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩等を含む、好適な無機塩類も形成され得る。
【００３９】
薬学的に許容可能な塩は、例えば、十分な量の塩基性化合物と薬学的に許容可能なアニオンを提供する好適な酸との反応により、当技術分野で公知の標準的方法を用いて得てもよい。
【００４０】
本明細書において、用語「多形体」とは、本発明の化合物またはその複合体の固体結晶形を指す。同一の化合物の異なる多形体は、異なる物理的特性、化学的特性および／またはスペクトルの特性を示し得る。異なる物理的特性には、限定されないが、安定性（例えば、熱に対するか光に対する安定性）、圧縮性および密度（製剤調製および製品製造にとって重要）および溶解速度（それはバイオ吸収性およびバイオアベイラビリティに影響し得る）が含まれる。安定性の差異は、化学反応性（例えば、投薬形態が、別の多形体からなる際より、１つの多形体からなる際に急速に変色するような差動酸化）、または機械的性能（例えば、保管中動学的に好ましい多形体の錠剤粉砕物が、高湿度でより熱力学的に安定な多形体へと変換する）、または両方（例えば、１つの多形体の錠剤は、高湿度の影響をより受けやすい）の変化に結びつくだろう。多形体の異なる物理的性質は、それらの加工に影響し得る。例えば、１つの多形体は、溶媒和物を形成する可能性が高く、または、別のものより不純物を濾過し出すか、洗浄して取り除くことが難しいことがあるが、これは、例えば、それらの粒子の形状か粒度の分布を理由とするものである。
【００４１】
本明細書において、用語「水和物」とは、非共有結合性分子間力によって結合した化学量論量または非化学量論量の水をさらに含んでなる、本発明の化合物またはそれらの塩を指す。
【００４２】
本明細書において、用語「プロドラッグ」とは、別の記載がない限り、生物学的条件（ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ）下で加水分解、酸化または他の反応を受けて、本発明の化合物をもたらし得る誘導体を指す。プロドラッグは、生物学的条件下で当該反応を受けた後に初めて活性化合物になるか、またはそれらの未反応形態で活性となり得る。プロドラッグは、例えば、1 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E.  Wolff, Ed., 5th edition) および J.  Rautio’s Prodrugs and Targeted Delivery (2011) 31-60 (Wiley-VCH, Methods and Principles in Medicinal Chemistry Volume 47)および G.  Thomas’s Fundamentals of Medicinal Chemistry (2003) 195-200 (Wiley)に記載されているような公知の方法を使用して、典型的に製造し得る。
【００４３】
本発明の化合物において、トリプトリド誘導体は、一般式Ｉの構造式（１０個のキラル中心があり、そのうちの９個は、トリプトリドに由来し、かつ１個は、アミノ酸に由来する）；かつ一般式ＩＩ（１１個のキラル中心があり、そのうち９個は、トリプトリドに由来し、かつ２個はアミノ酸に由来する）によって示された立体化学を有する。本明細書で使用する立体化学の定義および表現は、概してMcGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (S.  P.  Parker, Ed., McGraw-Hill Book Company, New York, 1984); Eliel, E. and Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds (John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994)に従う。  多くの有機化合物は、光学的に活性な形態で存在する、即ち、それらは平面偏光の平面を回転させる能力を持っているということである。
【００４４】
本明細書において、用語「治療」とは、概して、所望の薬理効果および／または生理学的効果を得ることを指す。結果は、疾患あるいはその症状を完全にまたは部分的に予防する点では予防的かもしれず；および／または疾患および／またはその疾患によって引き起こされた悪影響に対する部分的か完全な安定性または治癒の点から治療的であり得る。本明細書において「治療」とは、患者の疾患の任意の治療を含み、次のものを含む：（ａ）疾患または症状の予防、ここで疾患または症状は、疾患の診断がまだされていない患者において発生している疾患または症状である；（ｂ）疾患の症状の阻害、即ち、症状の発展の阻止；または（ｃ）疾患の症状の緩和、即ち、疾患または症状の退縮を発生させること。
【００４５】
本発明の化合物は、従来の有機化学的合成方法によって調製し得る。例えば、本発明の一般式（Ｉ）の化合物を調製する一般的法は、以下のとおりである。
【化１２】
2018536619.tif 000015
【００４６】
一般式（Ｉ）の単一アミノ酸エステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体は、適切な温度で、縮合剤または好適な溶媒中の触媒の存在下で、それぞれのアミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈとの、天然に抽出されかつ単離されたトリプトリド（ＴＰＬ）のエステル化縮合により得ることができ；また、塩基性薬剤の存在下で、それぞれのアミノ酸塩化アシルＲ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯＣｌとのトリプトリドのエステル化縮合により得ることができ；または、アミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈの活性化により活性エステル中間体を生成することで、その後、それをトリプトリドと反応させて、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉ）を生成させるか；また、アミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈの活性化により、混合無水中間体を生成することで、その後、それをトリプトリドと反応させてトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉ）を生成させる。式（Ｉ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、アミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈ中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、アミノ酸塩化アシルＲ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯＣｌ中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、活性エステル中間体中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３および混合無水中間体中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３は全て、上記の式（Ｉ）中の定義と同一である。
【００４７】
本発明の一般式（ＩＩ）の化合物を調製する一般的方法は、以下のとおりである:
【化１３】
2018536619.tif 000016
【００４８】
ジペプチドエステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（ＩＩ）は、第一に、使用するアミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ２Ｈ中、Ｒ２またはＲ３が保護基である前述の方法により、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉ）を調製することによって調製し得る。アミノ保護基は、当業者に公知であり、例えば、全体を参照することにより本明細書中に組込まれた、Greene and Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis,” 3rd edition, John Wiley & Sons Press, New York, NY, 1999などの文献において容易に見つけることができる。次いで、一般式Ｉａの誘導体を得るために保護基を除去し、それを適切な温度で、縮合剤または好適な溶媒中の触媒の存在下でそれぞれのアミノ酸Ｒ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯ２Ｈとアミド化縮合させて、ジペプチドエステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（ＩＩ）を生成し；かつ、保護基の除去で得られた一般式Ｉａの誘導体は、塩基性薬剤の存在下で、それぞれのアミノ酸塩化アシルＲ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯＣｌとアミド化縮合させて、ジペプチドエステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（ＩＩ）を生成してもよく；または、ジペプチドエステル化したトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（ＩＩ）は、アミノ酸Ｒ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯ２Ｈの活性化により、活性エステル中間体を生成してもよく、次いでそれをトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉａ）と反応させてもよく；また、アミノ酸Ｒ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯ２Ｈの活性化により、混合無水中間体を生成してもよく、次いでそれをトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体（Ｉａ）と反応させて生成してもよい。Ｒ５およびＲ６が保護基である場合、化合物ＩＩａは、さらに保護基を除去することにより得られてもよい。式（ＩＩ）中の、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６、アミノ酸Ｒ２Ｒ３ＮＣＨＲ１ＣＯ４Ｈ中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、アミノ酸塩化アシルＲ２Ｒ５ＮＣＨＲ６ＣＯＣｌ中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、活性エステル中間体中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３および混合無水中間体中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３は全て、上記の式（ＩＩ）における定義と同一である。アミノ酸Ｒ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯ２Ｈ  中のＲ４、Ｒ５、Ｒ６、アミノ酸塩化アシルＲ５Ｒ６ＮＣＨＲ４ＣＯＣｌ中のＲ４、Ｒ５、Ｒ６、および混合無水中間体中のＲ４、Ｒ５、Ｒ６は全て、上記の式（ＩＩ）における定義と同一である。
【００４９】
上記の反応は、一般的に塩基または塩基性薬剤の存在下で実行する。本明細書における塩基は、限定されないが、有機塩基であってもよい。  例えば、それはジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミンあるいはジメチルアミノピリジンであってもよい。
【００５０】
上記の反応は、一般的に溶媒中で実行する。使用する溶剤には、限定されないが、非プロトン性極性溶媒、例えば、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチルピロル（ＮＭＰ）またはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等が含まれる。
【００５１】
上記の反応の反応温度は、一般的に０℃〜５０℃である。反応温度は、一般的に、反応で使用する異なる原料および塩基に応じて変動する。
【００５２】
調製反応の原料は、トリプトリド（ＴＰＬ）である。原料は、天然物から抽出されて単離され、市場から入手可能である。
【００５３】
調製反応の中で使用される有機酸、有機無水物または有機塩化アシルは、全て市場から入手可能である。
【００５４】
本発明を実施するにあたり、従来の化学的変換を使用してもよい。当業者であれば、これら化学的変換のために、適切な化学試薬、溶媒、保護基および反応条件を決定し得る。関連情報は、R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH publisher (1989); T. W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd edition, John Wiley and Sons (1999); L. Fieser and M.  Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); およびEncyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, L. Paquette Ed., John Wiley and Sons (1995)ならびに最新版にて記載されている。
【００５５】
保護基とは、一度活性部分（例えば、ヒドロキシルまたはアミノ）に結合すると、保護基が、これら部分を後続の反応に介入されないように保護し、反応後に従来的方法によって除去することができるような基を指す。ヒドロキシル保護基の例として、限定されないが、アルキル、ベンジル、アリル、トリチル（即ち、トリフェニルメチル）、アシル（例えば、ベンゾイル、アセチルまたはＨＯＯＣ−Ｘ”−ＣＯ、ここでＸ”は、アルキレン、アルケニレン、シクロアルキレンまたはアリーレンである）、シリル（例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリルおよびｔ−ブチルジメチルシリル）、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル（例えば、ジメチルアミノカルボニル、メチルエチルアミノカルボニルおよびフェニルアミノカルボニル）、アルコキシメチル、ベンジルオキシメチル、およびアルキルメルカプトメチルが挙げられる。アミノ保護基の例として、限定されないが、アルコキシカルボニル、アルカノイル、アリールオキシカルボニル、アリール置換アルキル等が挙げられる。ヒドロキシルおよびアミノ保護基は、T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd edition, John Wiley and Sons (1991)にて説明されている。ヒドロキシル保護基およびアミノ保護基は両方とも反応後に従来的方法によって除去することができる。
【００５６】
本発明はまた、本発明の一般式Ｉ／一般式ＩＩの化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００５７】
本発明はまた、上記の本発明の式Ｉ／式ＩＩの少なくとも１つの化合物および任意の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００５８】
特定の量の有効成分を含有する多様な医薬組成物の製造方法は、Remington’s Pharmaceutical Sciences, Martin, E.W., ed., Mack Publishing Company, 19th ed.  (1995)に記載されたとおりに、当業者に公知であるか、または本開示を照らして明らかである。前記医薬組成物の製造方法は、適切な医薬賦形剤、担体、希釈剤などを組込むことを含んでなる。
【００５９】
本発明の医薬製剤は、従来的な混合、溶解または凍結乾燥法を含む、既知の方法で作成される。
【００６０】
本発明の化合物は、医薬組成物として調製して、選択された投与様式（例えば、経口的または非経口的（静脈内、筋肉内、局所的、または皮下の経路を介するもの））に好適な多様な経路で患者へ投与してもよい。
【００６１】
したがって、本発明の化合物は、薬学的に許容可能な担体（例えば、不活性希釈剤または吸収可能な食用担体）と併せて、全身的（例えば、経口的）に投与してもよい。それらは、硬カプセル剤または軟カプセル剤内にカプセル化してもよく、かつ、錠剤に押し出してもよい。経口投与用には、活性化合物を、１つ以上の賦形剤と組み合わせてもよく、飲み込み可能な錠剤、口腔錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液、シロップ剤、ディスク等の形態で使用してもよい。そのような組成および処方は、少なくとも０．０１％の活性化合物を含んでなるべきである。当然、そのような組成および処方の比は変動し得、所与の単位剤形の約０．１％〜約９９％の重量からなっていてもよい。この治療的に有用な組成物中の活性化合物の量は、有効量レベルが得られるような量である。
【００６２】
また、錠剤、トローチ剤、ピル剤、カプセル剤等は、さらに次のものを含んでなる：トラガカント、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチン等のような結合剤；二塩基リン酸カルシウム等の賦形剤；コーンスターチ、バレイショデンプン、アルギン酸等のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤；およびスクロース、フルクトース、ラクトースまたはアスパルテーム等の甘味料；あるいはミント、ウインターグリーン油またはチェリーフレーバー等の香料。単位剤形が上記の材料の種類に加えて、カプセル剤である場合、さらに、それは植物油またはポリエチレングリコール等の液体担体を含んでなり得る。多様なその他の材料は、コーティング剤としてか、または固体単位剤形の物理的形態を別の方法で変更するために存在していてもよい。例えば、錠剤、ピル剤またはカプセル剤は、ゼラチン、ワックス、セラックまたは砂糖等でコーティングされてもよい。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性化合物、甘味料としてのスクロースまたはフルクトース、保存料としてのパラヒドロキシ安息香酸メチルまたはパラヒドロキシ安息香酸プロピル、染料および香料(チェリーフレーバーまたはオレンジフレーバー)を含んでなり得る。当然、任意の単位剤形を調製するのに使用する任意の材料は、適用する量において薬学的に許容可能で、本質的に無毒であるべきである。さらに、活性化合物は徐放性の製剤およびデバイスに組み入れてもよい。
【００６３】
また活性化合物は、注入または注射によって静脈内または腹腔内に投与してもよい。活性化合物またはその塩の水溶液は、場合により無毒な界面活性剤と混合して調製してもよい。あるいは、グリセリン、液体ポリエチレングリコール、トリアセチンおよびその混合物中の分散液、および油中の分散液を調製してもよい。保管および使用の通常条件の下で、これらの製剤は、微生物の増殖を防ぐために保存剤を含んでなる。
【００６４】
注射または注入に好適な薬の剤形には、無菌の注射可能なまたは注入可能な溶液あるいは分散液の即時調製に適した、有効成分（場合によりリポソームないにカプセル化されたもの）を含んでなる、無菌の水溶液または分散液、あるいは無菌の散剤が含まれてもよい。全ての場合において、最終剤形は製造および保管の条件下で、無菌、液体、安定でなければならない。液体担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、植物油、無毒グリセリドおよびそれらの好適な混合物を含む、溶媒または液体分散媒であってもよい。適切な流動度は、例えば、リポソームの形成によって、分散液の場合、所望の粒径を維持することによって、または界面活性剤を使用することによって維持し得る。微生物の予防は、多様な抗菌薬および抗真菌薬（パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チオマーサル等）によってもたらされ得る。多くの場合では、砂糖、緩衝剤または塩化ナトリウム等の等張剤を含むことが好ましい。注射可能な組成物の延長された吸収は、吸収（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を遅らせるための薬剤の組成を使用することによってもたらされ得る。
【００６５】
無菌注射剤は、必要量の活性化合物を、必要に応じて、上記に列挙された多様な他の成分とともに、好適な溶媒中に組み入れ、その後濾過により無菌化することによって調製し得る。無菌注射液を調製するために、無菌の散剤を使用した場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、それによって、以前の無菌濾過された溶液中にあった任意の追加的な所望成分に加えて活性成分の散剤が生成される。
【００６６】
有用な固体状担体は、精細に分割された固体（タルク、粘土、微結晶性セルロース、シリカ、アルミナ等）を含む。有用な液体担体には、水、エタノールまたはグリコール、または水−エタノール/グリコール混合物が含まれ、本化合物はその中で、場合により無毒な界面活性剤を用いて、有効な含有量に溶解または分散させることができる。香料等のアジュバントおよび追加的抗菌薬は、所与の用途に特性を最適化するために添加してもよい。
【００６７】
また、使用者の肌へ直接適用するために、増粘剤（合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸塩およびエステル、脂肪族アルコール、変性セルロースまたは改質無機材料等）を、液体担体と共に使用してコーティング可能なペースト、ゲル、軟膏、石鹸等を形成してもよい。
【００６８】
化合物あるいはそれらの活性塩または誘導体の治療で使用するために必要な量は、選択された特定の有効成分だけでなく、投与経路、治療する疾患の性質ならびに患者の年齢および病態にも依存して変わり、かつ最終的には主治医か臨床主治医の裁量に依存して変わるだろう。
【００６９】
上記製剤は、単位剤形で存在し得、それは、ヒトまたはその他の哺乳類への投与に好適な、単位用量を含有する物理的不連続単位である。単位剤形は、１つのカプセル剤または１つの錠剤でもよく、あるいは多数のカプセル剤あるいは多数の錠剤でもよい。単位用量中の有効成分の量は、関連する特定の治療に従い、約０．０１〜約１０００ミリグラム以上に変更または調整し得る。
【００７０】
次の例において、本発明をより詳細に説明する。しかしながら、次の例が、いかなる方法でも発明の範囲を制限せずに、本発明を例証するように意図されたものであることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】図１は、腫瘍細胞および正常細胞中のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩタンパク質レベルのイムノブロット解析の結果を示す図である。
【図２】図２は、ヒトＴＨＰ−１白血病細胞中のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの活性に対する１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの阻害効果のイムノブロット解析の結果を示す図である。
【図３】図３は、ヒトＫ５６２白血病細胞中のｃ−ｍｙｃの活性に対する１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの阻害効果のイムノブロット解析の結果を示す図である。
【実施例】
【００７２】
発明の詳細な説明
次の例において使用される化学原料は全て市場から入手可能か、または当技術分野において公知の合成方法によって得られる。
実施例１：化合物１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−トリプトリド）の合成および同定
【化１４】
2018536619.tif 000017
【００７３】
スキーム中、ＴＰＬ：トリプトリド；Ｄ−Ｂｏｃ−バリン：右旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ）−バリン；ＤＩＣ：Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド；  ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸。
【００７４】
工程１：トリプトリドＴＰＬ（５００ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ、１．０当量）と右旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ）−バリン（１５００ｍｇ、６．９１ｍｍｏｌ、５当量）とをジクロロメタン（２０ｍＬ）中に溶解し、０℃に冷却した。    Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（４ｍＬ、１３ｍｍｏｌ、９．３５当量）および４−ジメチルアミノピリジン（１３０ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ、０．８当量）を、０℃で混合溶液中に添加し、２５℃で２４時間反応させた。反応溶液を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、次に、飽和塩化アンモニウムで洗浄し、乾燥させ濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、分取シリカゲルカラムで精製して、Ｄ−Ｂｏｃ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−Ｂｏｃ−バリン−トリプトリド）を収率３２．２％で白色固形物（２５０ｍｇ）として得た。
【００７５】
工程２：前の工程の生成物Ｄ−Ｂｏｃ−バリン−ＴＰＬ（１４−Ｄ−Ｂｏｃ−バリン−トリプトリド）（２００ｍｇ）を、ジクロロメタン（１５ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸３ｍＬを滴状添加した。添加後、反応溶液を３．５時間２５℃で反応させた。反応溶液をジクロロメタンで希釈し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、次に、乾燥させ濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物を分取高性能液体クロマトグラフィーによって精製してＤ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−トリプトリド）を収率７３％で白色固形物（１２０ｍｇ）として得た。
【００７６】
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：０．８３分（ＵＶ２２０：９７．８％）、ｍ／ｚ：４６０．２８（Ｍ＋Ｈ）
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.11 (s, 1H), 4.78 - 4.62 (m, 2H), 4.01 (s, 1H), 3.86 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.58 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.52 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 2.72 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 2.47 (s, 1H), 2.33 (d, J = 16.3 Hz, 1H), 2.26 - 2.08 (m, 2H), 1.94 (dd, J = 36.2, 22.1 Hz, 2H), 1.58 (dd, J = 12.0, 4.5 Hz, 1H), 1.23 (d, J = 5.6 Hz, 4H), 1.16 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.93 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.81 (d, J = 6.5 Hz, 3H)
【００７７】
実施例２：化合物１４−Ｌ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−右旋性−バリン−トリプトリド）の合成および同定
【化１５】
2018536619.tif 000018
スキーム中、Ｄ−バリン−ＴＰＬ：１４−右旋性−バリン−トリプトリド；Ｌ−Ｂｏｃ−バリン：左旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ）−バリン；ＨＡＴＵ：２−（７−アザ−ベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート；ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸。
【００７８】
工程１：Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−トリプトリド）（１１０ｍｇ、実施例１）と左旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ）−バリン（１．２当量）とをジクロロメタン（１０ｍＬ）中に溶解し、ＨＡＴＵ（２−（７−アザ−ベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、１．５当量）とＤＩＰＥＡ（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、２当量）とを、混合溶液中に添加し、３０分間２５℃で反応させた。反応溶液を１Ｍ炭酸カリウム溶液で洗浄し、乾燥させ濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を、分取シリカゲルカラムで精製して１４−Ｌ−Ｂｏｃ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ）−バリン−右旋性−バリン−トリプトリド）を白色固形物（８５ｍｇ）として得た。
【００７９】
工程２：前の工程の生成物、１４−Ｌ−Ｂｏｃ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ）−バリン−右旋性−バリン−トリプトリド）（８５ｍｇ）を、ジクロロメタン（５ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸１ｍＬを滴状添加した。添加後、反応溶液を３．５時間２５℃で反応させた。反応溶液をジクロロメタンで希釈し、重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、次に乾燥させ濃縮して粗生成物を得た。粗生成物を分取高性能液体クロマトグラフィーによって精製して１４−Ｌ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−右旋性−バリン−トリプトリド）を白色固形物（５１．５ｍｇ）として得た。
【００８０】
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：０．９６分（ＵＶ２２０：９７．７％）、ｍ／ｚ：５５９．４４（Ｍ＋Ｈ）
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.52 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.60 (b, 3H), 5.06 (s, 1H), 4.80 - 4.65 (m, 2H), 4.58 (dd, J = 7.8, 4.0 Hz, 1H), 4.20 (s, 1H), 3.88 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.57 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 3.50 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 2.72 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 2.47 - 2.09 (m, 5H), 1.92 (dd, J = 17.9, 10.2 Hz, 2H), 1.57 (dd, J = 11.5, 5.1 Hz, 1H), 1.25 (dd, J = 12.2, 5.5 Hz, 2H), 1.13 - 1.04 (m, 11H), 1.02 (s, 3H), 0.92 (t, J = 8.4 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 6.7 Hz, 3H)
【００８１】
実施例３：化合物１４−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−トリプトリド）の合成および同定
化合物１４−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−トリプトリド）は、Ｄ−Ｂｏｃ−バリン−ＴＰＬ（右旋性−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン）をＬ−Ｂｏｃ−バリン（左旋性−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン）と置き換えて、実施例１の方法に従い合成した。
【００８２】
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：０．９６分（ＵＶ２２０、１００％）、ｍ／ｚ：４６０．２８（Ｍ＋Ｈ）
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 5.10 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 4.73 - 4.60 (m, 2H), 3.99 (s, 1H), 3.91 - 3.79 (m, 1H), 3.63 - 3.44 (m, 2H), 2.67 (s, 1H), 2.55 - 1.79 (m, 7H), 1.65 - 1.47 (m, 1H), 1.31 - 1.09 (m, 7H), 1.01 (s, 3H), 0.97 - 0.86 (m, 3H), 0.85 - 0.72 (m, 3H)
【００８３】
実施例４：化合物１４−Ｌ−バリン−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−左旋性−バリン−トリプトリド）の合成および同定
化合物１４−Ｌ−バリン−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−左旋性−バリン−トリプトリド）は、１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−トリプトリド、実施例１）を１４−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−左旋性−バリン−トリプトリド、実施例３）と置き換え、かつ、Ｄ−Ｂｏｃ−バリン−ＴＰＬ（右旋性−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン）をＬ−Ｂｏｃ−バリン（左旋性−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン）と置き換えて、実施例２の方法に従い合成した。
【００８４】
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：１．７８分（ＥＬＳＤ：  ９９．６％）、ｍ／ｚ：５５９．５０（Ｍ＋Ｈ）
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.83 (s, 1H), 5.08 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.75 - 4.65 (m, 2H), 4.57 (dd, J = 8.7, 4.7 Hz, 1H), 3.84 (dd, J = 5.8, 3.2 Hz, 1H), 3.53 (ddd, J = 17.4, 11.7, 4.1 Hz, 2H), 2.70 (s, 1H), 2.43 - 2.27 (m, 3H), 2.23 - 2.12 (m, 2H), 2.04 - 1.88 (m, 2H), 1.67 - 1.54 (m, 1H), 1.30 - 1.20 (m, 1H), 1.12 - 0.99 (m, 10H), 0.95 (t, J = 7.5 Hz, 5H), 0.90 - 0.77 (m, 3H)
【００８５】
実施例５：化合物１４−Ｄ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−右旋性−バリン−トリプトリド）の合成および同定
化合物１４−Ｄ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−右旋性−バリン−トリプトリド）は、Ｌ−Ｂｏｃ−バリン−ＴＰＬ（左旋性−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン）を、Ｄ−Ｂｏｃ−バリン（右旋性−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン）と置き換えて、実施例２の方法に従い合成した。
【００８６】
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：１．９５分（ＥＬＳＤ：９８．０％）、ｍ／ｚ：５５９．５０（Ｍ＋Ｈ）
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.69 (s, 2H), 4.61 (dd, J = 8.8, 4.5 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.57 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 2.74 - 2.68 (m, 1H), 2.39 - 2.27 (m, 3H), 2.22 - 2.10 (m, 2H), 1.94 (ddd, J = 25.7, 16.2, 10.6 Hz, 2H), 1.59 (dd, J = 12.4, 4.6 Hz, 1H), 1.28 - 1.20 (m, 1H), 1.06 (dt, J = 12.6, 6.1 Hz, 12H), 0.95 (dd, J = 12.7, 6.9 Hz, 6H), 0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3H)
【００８７】
実施例６：化合物１４−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシン−ＴＰＬ（１４−左旋性−フェニルアラニル−左旋性−チロシン−トリプトリド）の合成および同定
【化１６】
2018536619.tif 000019
スキーム中、ＴＰＬ：トリプトリド；Ｌ−Ｂｏｃ−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−チロシン：左旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル）−チロシン；ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド；ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＢＡＦ：テトラブチルアンモニウムフルオリド；
Ｄ−バリン−ＴＰＬ：１４−右旋性−バリン−トリプトリド；Ｌ−Ｂｏｃ−フェニルアラニン：左旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ）−フェニルアラニン；ＨＡＴＵ：２−（７−アザ−ベンゾトリアゾール）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート；ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；
化合物Ｌ−チロシン−ＴＰＬ（１４−左旋性のチロシン−トリプトリド）は、Ｄ−Ｂｏｃ−バリン−ＴＰＬ（右旋性−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン）を、Ｌ−Ｂｏｃ−Ｏ−ＴＢＤＭＳチロシン：左旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル）−チロシンと置き換えて、実施例１の方法に従い合成した。
【００８８】
化合物１４−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシン−ＴＰＬ（１４−左旋性−フェニルアラニル−左旋性−チロシン−トリプトリド）は、１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−右旋性−バリン−トリプトリド、実施例１）を化合物Ｌ−チロシン−ＴＰＬ（１４−左旋性−チロシン−トリプトリド）と置き換え、かつ、Ｄ−Ｂｏｃ−バリン−ＴＰＬ（右旋性−Ｎ−Ｂｏｃ−バリン）を、Ｌ−Ｂｏｃ−フェニルアラニン（左旋性−（Ｎ−Ｂｏｃ）−フェニルアラニン）と置き換えて、実施例２の方法に従い合成した。
【００８９】
ＬＣ−ＭＳ：保持時間：１．０６分（ＵＶ２２０：９７．８．０％）、ｍ／ｚ：６７１．５６（Ｍ＋Ｈ）
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.34 (s, 0H), 9.17 (s, 0H), 8.07 (d, J = 15.1 Hz, 1H), 7.42 - 7.14 (m, 2H), 7.13 - 7.03 (m, 1H), 6.89 (d, J = 7.6 Hz, 0H), 6.74 - 6.62 (m, 1H), 5.01 (d, J = 6.3 Hz, 0H), 4.82 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 4.64 - 4.58 (m, 0H), 4.03 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 3.2 Hz, 0H), 3.25 (d, J = 14.2 Hz, 0H), 3.15 (s, 0H), 3.05 (dd, J = 13.9, 6.2 Hz, 0H), 2.94 - 2.77 (m, 1H), 2.64 (s, 1H), 2.31 - 2.07 (m, 1H), 1.92 (d, J = 24.5 Hz, 1H), 1.87 - 1.72 (m, 1H), 1.66 - 1.53 (m, 1H), 1.38 - 1.17 (m, 1H), 1.04 (d, J = 6.8 Hz, 0H), 0.97 - 0.88 (m, 2H), 0.80 (dd, J = 6.7, 3.8 Hz, 1H), 0.65 (d, J = 6.8 Hz, 3H)
【００９０】
実施例７：本発明の化合物１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬおよびトリプトリド（ＴＰＬ）間の治療濃度域の比較
（１）実験材料
白血病細胞株：Ｓｕｐ−Ｂ１５（Ｐｈ＋急性リンパ芽球性白血病）、ＣＥＭ（急性リンパ芽球性白血病、ＡＬＬ）およびＭｏｌｔ−４（急性リンパ芽球性白血病、ＡＬＬ） 
正常血球試料：健康な志願者からの末梢血
一次試薬：本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ 
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【００９１】
（２）実験方法
十分に培養させた白血病細胞または正常ヒト血球を５０００個採取し、９６−ウェル細胞培養プレートのウェル中に播種した。培地は、１０％ウシ胎児血清を含有する１６４０細胞培地であった。異なる濃度で１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬを添加し、均一に混合した後に、プレートを二酸化炭素（５％ＣＯ２）細胞インキュベーターに入れ、７２時間３７℃でインキュベートした。その後、ＭＴＴアッセイを用いて、生存細胞の濃度を測定した。この実験では、対照グループ（化合物処理のないグループ）内の細胞生存率を１００％に設定し、化合物の活性後の細胞生存率（％）、７２時間での白血病細胞の半数増殖阻害濃度（７２時間のＩＣ５０値）および治療濃度域指数を計算した。治療濃度域指数＝正常血球ＩＣ５０値／白血病細胞ＩＣ５０値。治療濃度域指数が＜１または、＝１であることは、治療濃度域がなく、化合物が正常細胞と腫瘍細胞に対して同一毒性で、非選択的でないことを示す。治療濃度域指数が＞１であることは、治療濃度域があり、化合物が、正常細胞より腫瘍細胞に対してより有毒であることを示す。治療濃度域が広ければ広いほど、化合物は腫瘍細胞に対してより選択性を示す。
【００９２】
（３）実験結果
実験結果は表１に示され、そこでは、本発明の化合物１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬがより良好な治療濃度域を有する一方、トリプトリドは治療濃度域が本質的にないことが示されている。表１は、トリプトリド（ＴＰＬ）がＭｏｌｔ−４細胞のみに狭い治療濃度域（２．０）を有する一方で、その他の３つの白血病細胞、Ｊｕｒｋａｔ、ＣＥＭおよびＳｕｐ−Ｂ１５に対するその治療濃度域は、全て＜１であり、それぞれ０．６４、０．９３および０．９４であったことを示す。これらは、トリプトリドが正常細胞と腫瘍細胞には本質的に選択性を有さないことを示し、このことは、文献にてＴＰＬが本質的に治療濃度域を有さないと報告された結果と一致する。対照的に、本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬには、分析した４つの異なるタイプのヒト白血病細胞に対して、５．５４〜１８．５８の治療濃度域指数を有し、１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬは、Ｍｏｌｔ−４細胞に対する治療濃度域指数が最大１８．５８であって、４つのタイプの白血病全てに対してより広い治療濃度域を有することを示している。
【表２】
2018536619.tif 000020
【００９３】
実施例８：本発明の化合物１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの、白血病に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性の測定
（１）実験材料
白血病細胞株：ヒトＫＧ−１ａ（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ−Ｍ０）、ＴＨＰ−１（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ−Ｍ５）、ＮＢ４（急性前骨髄球性白血病、ＡＭＬ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（急性骨髄性白血病Ｍ２型、ＡＭＬ−Ｍ２）、ＫＧ−１（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ）、Ｊｕｒｋａｔ（急性リンパ芽球性白血病、ＡＬＬ）およびＨ９（急性リンパ芽球性白血病、ＡＬＬ）
一次試薬：本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ 
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【００９４】
（２）実験方法
十分に培養させた白血病細胞５０００個採取し、９６−ウェル細胞培養プレートのウェル内へ播種した。培地は、１０％ウシ胎児血清を含有している１６４０細胞培地であった。異なる濃度で１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬを添加し、均一に混合した後に、プレートを二酸化炭素（５％ＣＯ２）細胞インキュベーターに入れ、７２時間３７℃でインキュベートした。その後、ＭＴＴアッセイを用いて生存細胞濃度を測定した。この実験では、対照グループ（化合物の処理のないグループ）内の細胞生存率が１００％になるように設定し、化合物の活性後の細胞生存率（％）および７２時間での白血病細胞の半数増殖阻害濃度（７２時間のＩＣ５０値）を計算した。
【００９５】
（３）実験結果
実験結果を表２に示す。表２は、本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬが、ヒト急性骨髄性白血病細胞およびヒト急性リンパ芽球性白血病細胞の死亡を誘発することができ、かつ、これらの白血病細胞の増殖を阻害することができることを示す。
【表３】
2018536619.tif 000021
【００９６】
実施例９：本発明の化合物１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの、マウス中のヒト白血病に対するｉｎ  ｖｉｖｏ活性の測定
（１）実験材料
実験動物：中国科学院（ＣＡＳ）の上海実験動物センターから得たＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス
白血病細胞株：ＡＴＣＣライブラリーから得た、ヒトＫＧ−１ａ（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ−Ｍ０）およびＴＨＰ−１（急性単球性白血病、ＡＭＬ−Ｍ５）
試薬：無菌ＰＢＳで１０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解させ、次に無菌脱イオン水で必要作用濃度に希釈させた、本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬトリフルオロアセテート
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【００９７】
（２）実験方法
７週齢の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを用い、マウスあたり１×１０７細胞（０．２ｍｌ）で左側の腋窩にヒト急性骨髄性白血病ＫＧ−１ａ細胞を、右側にヒト急性単球性白血病ＴＨＰ−１細胞を皮下接種した。腫瘍が、約０．５ｃｍの腫瘍サイズに成長した際に、マウスを、マウス３匹ずつのグループに無作為に分けた。対照グループには同量のＰＢＳを使用し、１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬグループは、体重０．２ｍｇ／ｋｇおよび体重０．４ｍｇ／ｋｇの２つのグループに分割した：連続１４日間の処理の間、１日２回の胃内投与（午前８時に１回、および午後４時に１回）。合計３０日間観察を行い、その間に、腫瘍サイズ、体重、行動、食事等のマウスの状態を測定した。実験の終わりに、マウスを屠殺し、腫瘍組織を取り、腫瘍を計量し、肝臓、脾臓、心臓、肺、大腸、小腸等のマウスの主要な器官および組織を検査した。
【００９８】
（３）実験結果
実験結果を表３および表４に示す。
【表４】
2018536619.tif 000022
【表５】
2018536619.tif 000023
【００９９】
表３および表４は、本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬが、ｉｎ  ｖｉｖｏで、マウス中の２つの異なるタイプのヒト急性骨髄性白血病細胞系ＫＧ−１ａおよびＴＨＰ−１の増殖を顕著に阻害することができ、顕著な用量依存効果を示すことを示す。体重１キログラム当たり用量０．４ｍｇの１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬによって、マウスが著しく減量することなく、ＫＧ−１ａおよびＴＨＰ−１異種移植片腫瘍の完全な退行が可能となる。さらに、マウスの解剖検査では、心臓、肺、肝臓、脾臓、大腸、小腸等の主要な器官で顕著な異常が見られなかった。これらの結果は、本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬが、異なるタイプのヒト急性骨髄性白血病に対して顕著な活性を有し、かつ顕著な毒性反応を示さないことを示す。
【０１００】
実施例１０：１４−Ｌ−バリン−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−ＬＬＶ−ＴＰＬ）の、マウス中のヒト白血病に対するｉｎ  ｖｉｖｏ活性の測定
（１）実験材料
実験動物：中国科学院（ＣＡＳ）の上海実験動物センターから得たＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス
白血病細胞株：ＡＴＣＣライブラリーから得た、ヒトＫＧ−１ａ（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ−Ｍ０）
試薬：無菌ＰＢＳで１０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解させ、次に無菌脱イオン水で必要作用濃度に希釈させた、本発明の１４−ＬＬＶ−ＴＰＬトリフルオロアセテート
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【０１０１】
（２）実験方法
７週齢の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを用い、マウスあたり１×１０７細胞（０．２ｍｌ）で左側の腋窩にヒト急性骨髄性白血病ＫＧ−１ａ細胞を皮下接種した。腫瘍が、約５０〜１００ｍｍ３の腫瘍サイズに成長した際に、マウスを、マウス３匹ずつのグループに無作為に分けた。対照グループには同量のＰＢＳを使用し、ＴＰＬ−ＬＬＶグループは、体重０．２３ｍｇ／ｋｇおよび体重０．４６ｍｇ／ｋｇの２つのグループに分割した：連続１４日間の処理の間、１日２回の胃内投与（午前８時に１回、および午後４時に１回）。合計３０日間観察を行い、その間に、腫瘍サイズ、体重、行動、食事等のマウスの状態を測定した。実験の終わりに、マウスを屠殺し、腫瘍組織を取り、腫瘍を計量し、肝臓、脾臓、心臓、肺、大腸、小腸等のマウスの主要な器官および組織を検査した。
【０１０２】
（３）実験結果
実験結果を表５に示す。表５は、本発明の１４−ＬＬＶ−ＴＰＬが、ｉｎ  ｖｉｖｏでマウス中のヒト急性骨髄性白血病細胞系ＫＧ−１ａの増殖を顕著に阻害することができ、かつ顕著な用量依存効果を示すことを示す。
【表６】
2018536619.tif 000024
【０１０３】
実施例１１：１４−Ｌ−バリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−ＤＬＶ−ＴＰＬ）の、マウス中のヒト白血病に対するｉｎ  ｖｉｖｏ活性の測定
（１）実験材料
実験動物：中国科学院（ＣＡＳ）の上海実験動物センターから得たＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス
白血病細胞株：ＡＴＣＣライブラリーから得た、ヒトＫＧ−１ａ（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ−Ｍ０）
試薬：無菌ＰＢＳで１０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解させ、次に無菌脱イオン水で必要作用濃度に希釈させた、本発明の１４−ＤＬＶ−ＴＰＬトリフルオロアセテート
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【０１０４】
（２）実験方法
７週齢の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを用い、１匹あたり１×１０７細胞（０．２ｍｌ）で、左側の腋窩にヒト急性骨髄性白血病ＫＧ−１ａ細胞を皮下接種した。腫瘍が、約５０〜１００ｍｍ３の腫瘍サイズに成長した際に、マウスを、マウス３匹ずつのグループに無作為に分けた。対照グループには同量のＰＢＳを使用し、ＴＰＬ−ＤＬＶグループは、体重０．２３ｍｇ／ｋｇおよび体重０．４６ｍｇ／ｋｇの２つのグループに分割した：連続１４日間の処理の間、１日２回の胃内投与（午前８時に１回、および午後４時に１回）。合計３０日間観察を行い、その間に、腫瘍サイズ、体重、行動、食事等のマウスの状態を測定した。実験の終わりに、マウスを屠殺し、腫瘍組織を取り、腫瘍を計量し、肝臓、脾臓、心臓、肺、大腸、小腸等のマウスの主要な器官および組織を検査した。
【０１０５】
（３）実験結果
実験結果を表６に示す。表６は、本発明の１４−ＤＬＶ−ＴＰＬが、ｉｎ  ｖｉｖｏでマウス中のヒト急性骨髄性白血病細胞系KG-1aの増殖を顕著に阻害することができ、かつ顕著な用量依存効果を示すことを示す。
【表７】
2018536619.tif 000025
【０１０６】
実施例１２：１４−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシン−ＴＰＬ（１４−ＬＰＴ−ＴＰＬ）の、マウス中のヒト白血病に対するｉｎ  ｖｉｖｏ活性の測定
（１）実験材料
実験動物：中国科学院（ＣＡＳ）の上海実験動物センターから得たＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス
白血病細胞株：ＡＴＣＣライブラリーから得た、ヒトＫＧ−１ａ（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ−Ｍ０）
試薬：無菌ＰＢＳで１０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解させ、次に無菌脱イオン水で必要作用濃度に希釈させた、本発明の１４−ＬＰＴ−ＴＰＬトリフルオロアセテート
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【０１０７】
（２）実験方法
７週齢の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを用い、マウスあたり１×１０７細胞（０．２ｍｌ）で左側の腋窩にヒト急性骨髄性白血病ＫＧ−１ａ細胞を皮下接種した。腫瘍が、約５０〜１００ｍｍ３の腫瘍サイズに成長した際に、マウスを、マウス３匹ずつのグループに無作為に分けた。対照グループには同量のＰＢＳを使用し、ＴＰＬ−ＤＬＶグループは、体重０．３２ｍｇ／ｋｇおよび体重０．６４ｍｇ／ｋｇの２つのグループに分割した：連続１４日間の処理の間、１日２回の胃内投与（午前８時に１回、および午後４時に１回）。合計３０日間観察を行い、その間に、腫瘍サイズ、体重、行動、食事等のマウスの状態を測定した。実験の終わりに、マウスを屠殺し、腫瘍組織を取り、腫瘍を計量し、肝臓、脾臓、心臓、肺、大腸、小腸等のマウスの主要な器官および組織を検査した。
【０１０８】
（３）実験結果
実験結果を表７に示す。表７は、本発明の１４−ＬＰＴ−ＴＰＬが、ｉｎ  ｖｉｖｏでマウス中のヒト急性骨髄性白血病細胞系ＫＧ−１ａの増殖を顕著に阻害することができ、かつ顕著な用量依存効果を示すことを示す。
【表８】
2018536619.tif 000026
【０１０９】
実施例１３：１４−Ｄバリン−Ｄ−バリン−ＴＰＬ（１４−ＤＤＶ−ＴＰＬ）の、マウス中のヒト白血病に対するｉｎ  ｖｉｖｏ活性の測定
（１）実験材料
実験動物：中国科学院（ＣＡＳ）の上海実験動物センターから得たＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス
白血病細胞株：ＡＴＣＣライブラリーから得た、ヒトＫ５６２／ＡＤＲ（慢性骨髄性白血病、ＣＭＬ）
試薬：無菌ＰＢＳで１０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解させ、次に無菌脱イオン水で必要作用濃度に希釈させた、本発明の１４−ＤＤＶ−ＴＰＬトリフルオロアセテート
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【０１１０】
（２）実験方法
７週齢の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを用い、マウスあたり１×１０７細胞（０．２ｍｌ）で左側の腋窩にヒトＫ５６２／ＡＤＲ細胞を皮下接種した。腫瘍が、約５０〜１００ｍｍ３の腫瘍サイズに成長した際に、マウスを、マウス３匹ずつのグループに無作為に分けた。対照グループには同量のＰＢＳを使用し、ＴＰＬ−ＤＤＶグループは、体重０．２３ｍｇ／ｋｇおよび体重０．４６ｍｇ／ｋｇの２つのグループに分割した：連続１４日間の処理の間、１日２回の胃内投与（午前８時に１回、および午後４時に１回）。合計３０日間観察を行い、その間に、腫瘍サイズ、体重、行動、食事等のマウスの状態を測定した。実験の終わりに、マウスを屠殺し、腫瘍組織を取り、腫瘍を計量し、肝臓、脾臓、心臓、肺、大腸、小腸等のマウスの主要な器官および組織を検査した。
【０１１１】
（３）実験結果
実験結果を表８に示す。表８は、本発明の１４−ＤＤＶ−ＴＰＬが、ｉｎ  ｖｉｖｏでマウス中のヒト慢性骨髄性白血病細胞系Ｋ５６２／ＡＤＲ細胞の増殖を顕著に阻害することができ、かつ顕著な用量依存効果を示すことを示す。
【表９】
2018536619.tif 000027
【０１１２】
実施例１４：１４−Ｌ−バリン−ＴＰＬ（１４−ＬＶ−ＴＰＬ）の、マウス中のヒト白血病に対するｉｎ  ｖｉｖｏ活性の測定
（１）実験材料
実験動物：中国科学院（ＣＡＳ）の上海実験動物センターから得たＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス
白血病細胞株：ＡＴＣＣライブラリーから得た、ヒトＫ５６２／ＡＤＲ（慢性骨髄性白血病、ＣＭＬ）
試薬：無菌ＰＢＳで１０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解させ、次に無菌脱イオン水で必要作用濃度に希釈させた、本発明の１４−ＬＶ−ＴＰＬトリフルオロアセテート
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【０１１３】
（２）実験方法
７週齢の雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスを用い、マウスあたり１×１０７細胞（０．２ｍｌ）で左側の腋窩にヒトＫ５６２／ＡＤＲ細胞を皮下接種した。腫瘍が、約５０〜１００ｍｍ３の腫瘍サイズに成長した際に、マウスを、マウス３匹ずつのグループに無作為に分けた。対照グループには同量のＰＢＳをに使用し、ＴＰＬ−ＬＶグループは、体重０．２ｍｇ／ｋｇおよび体重０．４ｍｇ／ｋｇの２つのグループに分割した：連続１４日間の処理の間、１日２回の胃内投与（午前８時に１回、および午後４時に１回）。合計３０日間観察を行い、その間に、腫瘍サイズ、体重、行動、食事等のマウスの状態を測定した。実験の終わりに、マウスを屠殺し、腫瘍組織を取り、腫瘍を計量し、肝臓、脾臓、心臓、肺、大腸、小腸等のマウスの主要な器官および組織を検査した。
【０１１４】
（３）実験結果
実験結果を表９に示す。表９は、本発明の１４−ＬＶ−ＴＰＬが、ｉｎ  ｖｉｖｏでマウス中のヒト慢性骨髄性白血病細胞系Ｋ５６２／ＡＤＲ細胞の増殖を顕著に阻害することができ、かつ顕著な用量依存効果を示すことを示す。
【表１０】
2018536619.tif 000028
【０１１５】
実施例１５：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴリンパ球およびＢリンパ球を阻害するための１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの活性の測定
（１）実験材料
白血病細胞株：Ｊｕｒｋａｔ（Ｔリンパ球）、Ｈ９（Ｔリンパ球）、ＣＥＭ（Ｂリンパ球）およびＳｕｐ−Ｂ１５（Ｂリンパ球）
一次試薬：本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【０１１６】
（２）実験方法
十分に培養させたリンパ球５０００個採取し、９６−ウェル細胞培養プレートのウェル内へ播種した。培地は、１０％ウシ胎児血清を含有している１６４０細胞培地であった。異なる濃度で１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬを添加し、均一に混合した後に、プレートを二酸化炭素（５％ＣＯ２）細胞インキュベーターに入れ、７２時間３７℃でインキュベートした。その後、ＭＴＴアッセイを用いて生存細胞濃度を測定した。この実験では、対照グループ（化合物の処理のないグループ）内の細胞生存率が１００％になるように設定し、化合物の活性後の細胞生存率（％）および７２時間での白血病細胞の半数増殖阻害濃度（７２時間のＩＣ５０値）を計算した。
【０１１７】
（３）実験結果
実験結果を表１０に示す。表１０は、本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬが、これらＴリンパ球とＢリンパ球の増殖を顕著に阻害することができることを示す。
【表１１】
2018536619.tif 000029
【０１１８】
実施例１６：異なるタイプの腫瘍細胞および正常細胞中の転写因子ＴＦＩＩＨサブユニットＸＰＢおよびＲＮＡポリメラーゼＩＩ（Ｐｏｌ  ＩＩ）の発現
転写因子ＴＦＩＩＨサブユニットＸＰＢ（色素性乾皮症Ｂ群）およびＲＮＡポリメラーゼＩＩ（Ｐｏｌ  ＩＩ）が、トリプトリドがその薬理学的効果を発揮するための鍵となる標的分子であることはいくつかの文献において報告されてきた［Titov DV,et al., “XPB, a subunit of TFIIH, is a target of the natural product triptolide.”  Nature chemical biology.  2011, 7:182-188］。腫瘍細胞および正常細胞中のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの発現レベルが異なるかどうか知るために、本発明は、イムノブロット法を適用して異なるタイプの腫瘍細胞および正常細胞のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩのタンパク質レベルを検出する。
【０１１９】
（１）実験材料
白血病細胞株：Ｎａｌｍ６（リンパ腫）、Ｊｕｒｋａｔ（急性リンパ芽球性白血病）、ＴＨＰ−１（急性単球性白血病）、ＫＧ−１ａ（急性骨髄性白血病）、ＨＬ−６０（急性骨髄性白血病）、ＮＢ４（急性前骨髄球性白血病）およびＵ９３７（急性単球性白血病）。正常血球試料は志願者から得た。
【０１２０】
（２）実験方法：従来のイムノブロット法
白血病細胞および正常細胞の試料の細胞タンパク質を従来的方法によって抽出し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥタンパク電気泳動によって分離し、次に、ＮＣ細胞膜に移した。一次抗体および二次抗体でのインキュベーション、現像、露光のような実験手順は、従来の方法で行なった。ＧＡＰＤＨは、内部基準タンパク質としての役割を果たした。結果：図１に示されるように、ＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩのタンパク質は、ほとんどの腫瘍細胞中に高度に発現し、かつ、正常血球中に低レベルで発現したかまたは発現しなかった。この結果は、ＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの異常に高い発現に関連する疾患が、トリプトリドおよびその誘導体の適応としての役割を果たし得ることを示す。
【０１２１】
図１は、イムノブロット法の適用により検出された、異なるタイプの腫瘍細胞および正常細胞中のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの発現レベルの結果を示す図である。１：正常血球；２：Ｎａｌｍ６；３：Ｊｕｒｋａｔ；４：ＴＨＰ−１；５：ＫＧ−１ａ；６：ＨＬ−６０；７：ＮＢ４；８：Ｕ９３７。
【０１２２】
実施例１７：ヒトＴＨＰ−１白血病細胞中のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの活性に対する、１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの阻害効果
ＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩは、トリプトリドがその薬理学的効果を発揮するための鍵となる標的分子であると知られている[Titov DV, et al., “XPB, a subunit of TFIIH, is a target of the natural product triptolide.”  Nature chemical biology.  2011, 7:182-188]。発明の化合物が、これら２つの標的分子を阻害するための活性を有するか否か知るために、本発明は、細胞培養技術およびイムノブロット法を適用して白血病細胞中のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの活性に対する１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの効果を検出した。
【０１２３】
（１）実験材料
白血病細胞株：ヒトＴＨＰ−１白血病細胞株（急性骨髄性白血病−Ｍ５、ＡＭＬ−Ｍ５）
試薬：１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ
【０１２４】
（２）実験方法
十分に培養させた白血病細胞採取し、１×１０６／ｍｌの密度で６−ウェル細胞培養プレートのウェル中へ播種した。培地は、１０％ウシ胎児血清を含有する１６４０細胞培地だった。異なる濃度で１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬを添加し、均一に混合した後に、プレートを二酸化炭素（５％ＣＯ２）細胞インキュベーターに入れ、４８時間３７℃でインキュベートした。その後、細胞タンパク質を抽出し、イムノブロット法を用いてＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの発現レベルを検出した。
【０１２５】
（３）実験結果
実験結果は図２中に示す。１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬは、用量依存的にＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩのレベルを下方制御した。１６０  ｎＭの濃度で１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬが、ＴＨＰ−１細胞中のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩのレベルを顕著に阻害したことが分かる。これらの結果は、本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ化合物が、ＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの活性を阻害することができ、ＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの異常に高い発現に関連する疾患に有用であることを示す。
【０１２６】
図２は、細胞培養技術およびイムノブロット法の適用により検出された、ヒトＴＨＰ−１白血病細胞中のＸＰＢおよびＰｏｌ  ＩＩの活性に対する、１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの阻害効果の結果を示す図である。
【０１２７】
実施例１８：ヒトＫ５６２白血病細胞中のｃ−ｍｙｃ腫瘍遺伝子の活性に対する、１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの阻害効果
腫瘍遺伝子ｃ−ｍｙｃも、トリプトリドが薬理学的効果を発揮するための鍵となる標的分子の１つであると知られている[Stephane Vispe,,et al.,  “Triptolide is an inhibitor of RNA polymerase I and II- dependent transcription leading predominantly to down-regulation of short-lived mRNA.”  Mol Cancer Ther 2009; 8:2780-2790]。本発明の化合物が、ｃ−ｍｙｃを阻害するための活性を有するか否か知るために、本発明は、細胞培養技術およびイムノブロット法を適用して白血病細胞中のｃ−ｍｙｃの活性に対する１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの効果を検出した。
【０１２８】
（１）実験材料
白血病細胞株：ヒトＫ５６２白血病細胞株（慢性骨髄性白血病の急性形質転換）
試薬：１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ
【０１２９】
（２）実験方法
十分に培養させた白血病細胞採取し、１×１０６／ｍｌの密度で、６−ウェル細胞培養プレートのウェルへ播種した。培地は、１０％ウシ胎児血清を含有している１６４０細胞培地であった。異なる濃度で１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬを添加し、均一に混合した後に、プレートを二酸化炭素（５％ＣＯ２）細胞インキュベーターに入れ、４８時間３７℃でインキュベートした。その後、細胞タンパク質を抽出し、イムノブロット法を用いてｃ−ｍｙｃの発現レベルを検出した。
【０１３０】
（３）実験結果
実験結果は、図３中に示す。１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬは、用量依存的にｃ−ｍｙｃタンパク質のレベルを下方制御した。８０  ｎＭの濃縮で１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬが、Ｋ５６２細胞中のｃ−ｍｙｃのレベルを顕著に阻害したことが分かる。この結果は、本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ化合物が、腫瘍細胞中の腫瘍遺伝子ｃ−ｍｙｃの活性を阻害することができ、ｃ−ｍｙｃの異常に高い表現に関連する疾患に有用であることを示す。
【図１】
2018536619.tif 000034
【図２】
2018536619.tif 000035
【図３】
2018536619.tif 000036
【手続補正書】
【提出日】平成30年10月29日(2018.10.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
実施例８：本発明の化合物１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの、白血病に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性の測定
（１）実験材料
白血病細胞株：ヒトＫＧ−１ａ（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ−Ｍ０）、ＴＨＰ−１（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ−Ｍ５）、ＮＢ４（急性前骨髄球性白血病、ＡＭＬ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（急性骨髄性白血病Ｍ２型、ＡＭＬ−Ｍ２）、ＫＧ−１（急性骨髄性白血病、ＡＭＬ）、Ｊｕｒｋａｔ（急性リンパ芽球性白血病、ＡＬＬ）およびＭｏｌｔ−４（急性リンパ芽球性白血病、ＡＬＬ）
一次試薬：本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ 
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
実施例１５：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴリンパ球およびＢリンパ球を阻害するための１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬの活性の測定
（１）実験材料
白血病細胞株：Ｊｕｒｋａｔ（Ｔリンパ球）、Ｍｏｌｔ−４（Ｔリンパ球）、ＣＥＭ（Ｂリンパ球）およびＳｕｐ−Ｂ１５（Ｂリンパ球）
一次試薬：本発明の１４−Ｄ−バリン−ＴＰＬ
一次機器：細胞インキュベーターおよびマイクロプレート・リーダー
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）および一般式（ＩＩ）のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体：
【化１】
2018536619.tif 000037
［式中、
Ｒ１およびＲ４は、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され；該アミノ酸は、ラセミ化合物、または光学的に純粋な左旋性もしくは右旋性でもよく；該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され、該アミノ酸は、ラセミ化合物、または光学的に純粋な左旋性もしくは右旋性でもよく；該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；Ｒ２およびＲ３、Ｒ５およびＲ６は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｂｎ等の保護基であってもよく；Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく；Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよい。］。
【請求項２】
請求項１に記載のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の薬学的に許容可能な付加物または複合体。
【請求項３】
請求項１に記載のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
請求項１に記載のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の異化生成物または代謝産物。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ４が、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され、該アミノ酸は、ラセミ化合物または光学的に純粋な左旋性もしくは右旋性でもよく；該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；Ｒ２およびＲ３、Ｒ５およびＲ６は、保護基であるかまたは保護基ではなく；Ｒ２およびＲ３は、同一でも異なっていてもよく；Ｒ５およびＲ６は、同一でも異なっていてもよく；Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６が、Ｈ、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換または非置換Ｃ４〜Ｃ２０共役アルケニル、置換または非置換Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキルまたはシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロシクリルおよび芳香族ヘテロシクリル、ならびに置換または非置換アミノ酸側鎖アルキルから選択され、該アミノ酸は、ラセミ化合物または光学的に純粋な左旋性もしくは右旋性でもよく；該置換基は、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択される、請求項１に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体の、薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物または代謝産物。
【請求項６】
Ｒ１およびＲ２が、置換または非置換アリールから選択され；該置換基が、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜Ｃ６置換アミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、メルカプトおよびＣ１〜Ｃ６アルキルチオから選択され；該置換基が、同時に１つ以上存在するように選択されてもよい、請求項１〜４のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物または代謝産物。
【請求項７】
前記誘導体が、以下の化合物から選択される、請求項１に記載のトリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体：
【化２】
2018536619.tif 000038
【請求項８】
以下の工程を含んでなる、一般式（Ｉ）の化合物の製造方法：
【化３】
2018536619.tif 000039
【請求項９】
以下の工程を含んでなる、一般式（ＩＩ）の化合物の全体的な製造方法：
【化４】
2018536619.tif 000040
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物もしくは代謝産物および任意の薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物もしくは代謝産物を含んでなる抗腫瘍剤。
【請求項１２】
前記腫瘍が、白血病、多発性骨髄腫、リンパ腫、肝臓癌、胃癌、乳癌、胆管癌、膵癌、肺癌、結腸直腸癌、骨肉腫、ヒト子宮頸癌、神経膠腫、上咽頭癌、喉頭癌、食道癌、中耳腫瘍、黒色腫および前立腺癌から選択される、請求項１１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物もしくは代謝産物を含んでなる、免疫疾患に対する薬剤。
【請求項１４】
前記免疫疾患が、免疫細胞の機能不全に関連する自己免疫疾患から選択される、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１５】
前記免疫疾患が、Ｔ細胞またはＢ細胞の機能不全に関連する自己免疫疾患から選択される、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１６】
前記免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリトマトーデス、乾癬および腎症を含んでなる群から選択される、請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１７】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物もしくは代謝産物を含んでなる、ＸＰＢまたはＰｏｌ  ＩＩの異常な発現に関連する疾患に対する薬剤。
【請求項１８】
前記ＸＰＢまたはＰｏｌ  ＩＩの異常な発現に関連する疾患が、ＸＰＢまたはＰｏｌ  ＩＩの過剰発現に関連する腫瘍から選択される、請求項１７に記載の薬剤。
【請求項１９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の、トリプトリドのＣ１４ヒドロキシルエステル化アミノ酸誘導体またはその薬学的に許容可能な付加物、複合体、塩、異化生成物もしくは代謝産物を含んでなる、腫瘍遺伝子ｃ−ｍｙｃの異常な発現に関連する疾患に対する薬剤。
【請求項２０】
ｃ−ｍｙｃの異常な発現に関連する前記疾患が、ｃ−ｍｙｃの過剰発現に関連する腫瘍から選択される、請求項１９に記載の薬剤。
【国際調査報告】
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