(57)【要約】血球貪食性リンパ組織球症(HLH)を治療するための方法および組成物を提供する。本開示はまた、概して、CXCL9のレベル上昇、全IFNγのレベル上昇、および他のバイオマーカーと関連する障害を診断および治療するための方法および組成物に関する。本開示はまた、中和抗-IFNγ抗体を含む、インターフェロンガンマ(IFNγ)シグナル伝達に干渉するかまたはそうでなければ拮抗する作用物質を使用して、CXCL9のレベルが上昇した患者、全IFNγのレベルが上昇した患者、および他のバイオマーカーを有する患者における障害を治療する、その進行を遅らせる、またはそうでなければその症状を改善する方法に関する。2018515493.tif 000052
2018515493.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量を投与する工程を含む、その必要がある対象における血球貪食性リンパ組織球症(HLH)を治療する方法であって、
該抗体またはその抗原結合性断片は、インターフェロンガンマ(IFNγ)に結合し、かつ、
SYAMS(SEQ ID NO: 1)のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1(VH CDR1)；
2018515493.tif 000040
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2(VH CDR2)；および
2018515493.tif 000041
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3(VH CDR3)；
2018515493.tif 000042
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1(VL CDR1)；
EDNQRPS(SEQ ID NO: 5)のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2(VL CDR2)領域；および
2018515493.tif 000043
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3(VL CDR3)領域を含む、前記方法。
【請求項２】
抗体が、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列の重鎖可変アミノ酸配列、およびSEQ ID NO: 48のアミノ酸配列の軽鎖可変アミノ酸配列を含む、請求項1記載の方法。
【請求項３】
抗体が、注入用無菌濃縮製剤として製剤化されている、請求項1記載の方法。
【請求項４】
製剤が、5 mg 抗体、1.55 mg L-ヒスチジン、3.14 mg L-ヒスチジン一塩酸塩一水和物、7.31 mg 塩化ナトリウム(NaCl)、および0.05 mg ポリソルベート80を含み、ここで、pHが5.8〜6.2である、請求項3記載の方法。
【請求項５】
pHが6.0である、請求項4記載の方法。
【請求項６】
1 mg/kgの初回用量での1時間の期間にわたるIV注入によって、その必要がある対象へ抗体を投与する、請求項1記載の方法。
【請求項７】
1 mg/kgの初回用量での1時間の期間にわたる初回IV注入後、少なくとも1回の追加的IV注入によって、その必要がある対象へ抗体を投与する、請求項6記載の方法。
【請求項８】
少なくとも1回の追加的IV注入が、1 mg/kgの初回用量よりも高い用量である、請求項7記載の方法。
【請求項９】
少なくとも1回の追加的IV注入投薬量が3 mg/kgである、請求項6記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後少なくとも3日で実施する、請求項6または請求項9記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日からなる群より選択される時期で実施する、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施する、請求項10記載の方法。
【請求項１３】
1 mg/kgの初回用量での1時間の期間にわたる初回IV注入後、少なくとも1つのシリーズの追加的IV注入によって、その必要がある対象へ抗体を投与し、ここで、追加的IV注入の該シリーズが、週2回IV注入の少なくとも1つのシリーズを含む、請求項6記載の方法。
【請求項１４】
週2回IV注入の少なくとも1つのシリーズを、1 mg/kgの初回用量よりも高い用量で実施する、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
週2回IV注入の少なくとも1つのシリーズを、3 mg/kgの用量で実施する、請求項13記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後少なくとも3週間で実施する、請求項13または請求項15記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間からなる群より選択される時期で実施する、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する、請求項16記載の方法。
【請求項１９】
初回IV注入後、少なくとも2回の追加的IV注入によって、その必要がある対象へ抗体を投与する、請求項6記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも2回の追加的IV注入が、1 mg/kgの初回用量よりも高い用量である、請求項19記載の方法。
【請求項２１】
第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を同じ投薬量で実施する、請求項20記載の方法。
【請求項２２】
第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を、初回用量よりも高い同じ投薬量で実施する、請求項20または21記載の方法。
【請求項２３】
第1および第2の追加的IV注入のうちの少なくとも1つを、3mg/kgの投薬量で実施する、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
第1の追加的IV注入を、初回IV注入後少なくとも3日で実施する、請求項19または請求項23記載の方法。
【請求項２５】
第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日からなる群より選択される時期で実施する、請求項24記載の方法。
【請求項２６】
第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施する、請求項24記載の方法。
【請求項２７】
第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間からなる群より選択される時期で実施する、請求項24記載の方法。
【請求項２８】
第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する、請求項24記載の方法。
【請求項２９】
第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施し、かつ、第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する、請求項24記載の方法。
【請求項３０】
第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を異なる投薬量で実施する、請求項20記載の方法。
【請求項３１】
第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を異なる投薬量で実施し、ここで、各投薬量は初回用量よりも高い、請求項30記載の方法。
【請求項３２】
第1の追加的IV注入を3 mg/kgの投薬量で実施する、請求項30記載の方法。
【請求項３３】
第2の追加的IV注入を6 mg/kgの投薬量で実施する、請求項30記載の方法。
【請求項３４】
第1の追加的IV注入を3 mg/kgの投薬量で実施し、かつ、第2の追加的IV注入を6 mg/kgの投薬量で実施する、請求項30記載の方法。
【請求項３５】
第1の追加的IV注入を、初回IV注入後少なくとも3日で実施する、請求項30または請求項34記載の方法。
【請求項３６】
第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日からなる群より選択される時期で実施する、請求項35記載の方法。
【請求項３７】
第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施する、請求項35記載の方法。
【請求項３８】
第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間からなる群より選択される時期で実施する、請求項35記載の方法。
【請求項３９】
第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する、請求項35記載の方法。
【請求項４０】
第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施し、かつ、第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する、請求項35記載の方法。
【請求項４１】
第1の追加的IV注入が、週2回IV注入の第1シリーズを少なくとも含み、かつ、第2の追加的IV注入が、週2回IV注入の第2シリーズを少なくとも含む、請求項30記載の方法。
【請求項４２】
週2回IV注入の第1シリーズおよび週2回IV注入の第2シリーズを、1 mg/kgの初回用量よりも高い用量で実施する、請求項41記載の方法。
【請求項４３】
週2回IV注入の第1シリーズを3 mg/kgの用量で実施し、かつ、週2回IV注入の第2シリーズを6 mg/kgの用量で実施する、請求項42記載の方法。
【請求項４４】
追加的IV注入の第1シリーズを、初回IV注入後少なくとも3日で実施する、請求項41または43記載の方法。
【請求項４５】
追加的IV注入の第1シリーズを、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日からなる群より選択される時期で実施する、請求項44記載の方法。
【請求項４６】
追加的IV注入の第1シリーズを、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施する、請求項44記載の方法。
【請求項４７】
追加的IV注入の第2シリーズを、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間からなる群より選択される時期で実施する、請求項44記載の方法。
【請求項４８】
追加的IV注入の第2シリーズを、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する、請求項44記載の方法。
【請求項４９】
追加的IV注入の第1シリーズを、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施し、かつ、追加的IV注入の第2シリーズを、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する、請求項44記載の方法。
【請求項５０】
対象にバックグラウンドとしてデキサメタゾンが投与されている、請求項1記載の方法。
【請求項５１】
対象がHLHについて以前に治療されておらず、かつ、デキサメタゾンが少なくとも10 mg/m2の用量で投与される、請求項50記載の方法。
【請求項５２】
対象が第二選択HLH治療として抗体を受け、かつ、デキサメタゾンが少なくとも5 mg/m2の用量で投与される、請求項50記載の方法。
【請求項５３】
少なくとも第2の薬剤を対象へ投与する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項５４】
第2の薬剤が、治療剤、抗炎症剤、および／または免疫抑制剤である、請求項53記載の方法。
【請求項５５】
対象からの生体試料中のCXCL9のレベルを単独で、または1つもしくは複数の他のバイオマーカーと共に、検出する工程、
CXCL9の検出レベルと対照発現レベルとを比較する工程、および、
検出レベルが上昇している場合、障害の症状を緩和するために十分な量の抗-インターフェロンガンマ(IFNγ)アンタゴニストを対象へ投与する工程
を含む、障害の症状を緩和する方法。
【請求項５６】
1つもしくは複数の他のバイオマーカーが、全IFNγレベル、CXCL10、CXCL11、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項55記載の方法。
【請求項５７】
生体試料が、血液であるかまたは血液に由来する、請求項55記載の方法。
【請求項５８】
生体試料が血清である、請求項55記載の方法。
【請求項５９】
抗-IFNγアンタゴニストが、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片である、請求項55記載の方法。
【請求項６０】
抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片が、SYAMS(SEQ ID NO: 1)のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1(VH CDR1)；
2018515493.tif 000044
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2(VH CDR2)；
2018515493.tif 000045
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3(VH CDR3)；
2018515493.tif 000046
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1(VL CDR1)領域；
EDNQRPS(SEQ ID NO: 5)のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2(VL CDR2)；および
2018515493.tif 000047
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3(VL CDR3)
を含む、請求項59記載の方法。
【請求項６１】
抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片が、SEQ ID NO: 47の重鎖可変アミノ酸配列およびSEQ ID NO: 48の軽鎖可変アミノ酸配列を含む、請求項59記載の方法。
【請求項６２】
抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片が、SEQ ID NO: 44の重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO: 46の軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項59記載の方法。
【請求項６３】
対象がヒトである、請求項55記載の方法。
【請求項６４】
障害が、自己免疫障害または炎症性障害である、請求項55記載の方法。
【請求項６５】
障害が、一次性または二次性血球貪食性リンパ組織球症(HLH)である、請求項55記載の方法。
【請求項６６】
障害が、マクロファージ活性化症候群(MAS)である、請求項55記載の方法。
【請求項６７】
障害が、全身型若年性特発性関節炎(sJIA)の状況におけるMASである、請求項55記載の方法。
【請求項６８】
(a)インターフェロンガンマ(IFNγ)に結合する単離抗体またはその抗原結合性断片の治療有効量；
(b)L-ヒスチジン；
(c)L-ヒスチジン一塩酸塩一水和物；
(d)塩化ナトリウム(NaCl)；
(e)ポリソルベート80；
を含み、pHが5.8〜6.2である、製剤。
【請求項６９】
単離抗体が、SYAMS(SEQ ID NO: 1)のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1(VH CDR1)；
2018515493.tif 000048
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2(VH CDR2)；および
2018515493.tif 000049
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3(VH CDR3)；
2018515493.tif 000050
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1(VL CDR1)；
EDNQRPS(SEQ ID NO: 5)のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2(VL CDR2)領域；および
2018515493.tif 000051
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3(VL CDR3)領域を含む、請求項68記載の製剤。
【請求項７０】
抗体が、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列の重鎖可変アミノ酸配列、およびSEQ ID NO: 48のアミノ酸配列の軽鎖可変アミノ酸配列を含む、請求項68記載の製剤。
【請求項７１】
5 mg 抗体、1.55 mg L-ヒスチジン、3.14 mg L-ヒスチジン一塩酸塩一水和物、7.31 mg 塩化ナトリウム(NaCl)、および0.05 mgを含む、請求項68記載の製剤。
【請求項７２】
製剤のpHが6.0である、請求項68または請求項71記載の製剤。
【請求項７３】
注入用無菌濃縮製剤である、請求項68記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、2015年5月7日に出願された米国仮出願第62/158,153号；2015年9月21日に出願された米国仮出願第62/221,393号；および2015年10月27日に出願された米国仮出願第62/246,949号の恩典を主張し、これらの各々の内容はそれらの全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
発明の分野
本開示は概して、血球貪食性リンパ組織球症(HLH)を治療するための方法および組成物に関する。CXCL9のレベル上昇、全IFNγのレベル上昇、および他のバイオマーカーと関連する障害を診断および治療するための方法および組成物をさらに提供する。本開示はまた、中和抗-IFNγ抗体を含む、インターフェロンガンマ(IFNγ)シグナル伝達に干渉するかまたはそうでなければ拮抗する薬剤を使用して、CXCL9のレベル上昇、全IFNγのレベル上昇、および他のバイオマーカーを有する患者における障害を治療する、その進行を遅らせる、またはそうでなければその症状を改善する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ヒトインターフェロンガンマ(IFNγ、IFN-ガンマ)は、活性化されたTリンパ球およびナチュラルキラー細胞によって産生されるリンホカインである。それは、抗増殖および免疫調節活性を示し、免疫系のほとんどのプライマリー細胞上のヘテロ二量体受容体であるIFNγ-Rへ結合し、炎症へ至る事象のカスケードの引き金となる。IFNγの免疫調節活性は、多数の臨床状態において有利な効果を有することが公知である。しかしながら、IFNγ活性が有害な効果を有することが公知である多くの臨床設定がある。例えば、自己免疫疾患は、自己免疫患者からの血液および病変組織中の高レベルのIFNγと関連する。IFNγ活性はまた、悪液質および敗血症性ショックのような疾患状態と関連付けられている。
【０００４】
IFNγは多数の障害に関与しており、抗-IFNγ剤が治療剤として開発中である。従って、IFNγ関連障害におけるIFNγ産生のバイオマーカーの同定における使用のための組成物および方法についての必要性が存在する。
【発明の概要】
【０００５】
本明細書において提供される組成物および方法は、IFNγに結合しIFNγを中和する、本明細書においてNI-0501と呼ばれる完全ヒトIgG1抗-インターフェロンガンマ(IFNγ)モノクローナル抗体(mAb)を使用する。NI-0501は、IFNγの可溶性形態および受容体(IFNγR1)結合形態へ結合する。本明細書において提供される組成物および方法は、血球貪食性リンパ組織球症(HLH)の治療において有用である。
【０００６】
本明細書においてNI-051と呼ばれる抗-IFNγ抗体は、SYAMS(SEQ ID NO: 1)のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1(VH CDR1)；
2018515493.tif 000003
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2(VH CDR2)；および
2018515493.tif 000004
のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3(VH CDR3)；
2018515493.tif 000005
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1(VL CDR1)；
EDNQRPS(SEQ ID NO: 5)のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2(VL CDR2)領域；および
2018515493.tif 000006
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3(VL CDR3)領域を含む。NI-0501は、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列の重鎖可変アミノ酸配列、およびSEQ ID NO: 48のアミノ酸配列の軽鎖可変アミノ酸配列を含む。
【０００７】
本明細書において提供される組成物および方法において、NI-0501は、注入用無菌濃縮物(1 mL当たり)として製剤化されている。いくつかの態様において、NI-0501は、以下のように製剤化されている：5 mgのNI-051、1.55 mg L-ヒスチジン、3.14 mg L-ヒスチジン一塩酸塩一水和物、7.31 mg 塩化ナトリウム(NaCl)、および0.05 mg ポリソルベート80、ここで、pHは5.8〜6.2である。いくつかの態様において、NI-0501は、以下のように製剤化されている：5 mgのNI-051、1.55 mg L-ヒスチジン、3.14 mg L-ヒスチジン一塩酸塩一水和物、7.31 mg 塩化ナトリウム(NaCl)、および0.05 mg ポリソルベート80、ここで、pHは6.0である。
【０００８】
本明細書において提供される組成物および方法において、HLHを治療する、予防する、かつ／またはその発症もしくは進行を遅らせる、またはそれと関連する症状を緩和するために、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、1 mg/kgの初回用量での1時間の期間にわたるIV注入によって、その必要がある対象へNI-0501を投与する。ある患者集団、例えば、低体重を有する患者集団および／または非常に若い患者集団において、IV注入は、1時間を超えて、例えば、少なくとも90分間、少なくとも2時間、または少なくとも3時間またはそれ以上、続き得る。
【０００９】
いくつかの態様において、1 mg/kgの初回用量での1時間の期間にわたる初回IV注入後、少なくとも1回の追加的IV注入によって、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、少なくとも1回の追加的IV注入は、1 mg/kgの初回用量よりも高い用量である。いくつかの態様において、少なくとも1回の追加的IV注入投薬量は3 mg/kgである。いくつかの態様において、少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後少なくとも3日で実施する。いくつかの態様において、少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日からなる群より選択される時期で実施する。いくつかの態様において、少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施する。
【００１０】
いくつかの態様において、1 mg/kgの初回用量での1時間の期間にわたる初回IV注入後、少なくとも1つのシリーズ追加的IV注入によって、その必要がある対象へNI-0501を投与し、ここで、追加的IV注入のシリーズが、週2回IV注入の少なくとも1つのシリーズを含む。いくつかの態様において、週2回IV注入の少なくとも1つのシリーズを、1 mg/kgの初回用量よりも高い用量で実施する。いくつかの態様において、週2回IV注入の少なくとも1つのシリーズを、3 mg/kgの用量で実施する。いくつかの態様において、少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後少なくとも3週間で実施する。いくつかの態様において、少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間からなる群より選択される時期で実施する。いくつかの態様において、少なくとも1回の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する。
【００１１】
いくつかの態様において、初回IV注入後、少なくとも2回の追加的IV注入によって、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、少なくとも2回の追加的IV注入は、1 mg/kgの初回用量よりも高い用量である。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を同じ投薬量で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を、初回用量よりも高い同じ投薬量で実施する。いくつかの態様において、第1および第2の追加的IV注入のうちの少なくとも1つを、3mg/kgの投薬量で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を、初回IV注入後少なくとも3日で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日からなる群より選択される時期で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施する。いくつかの態様において、第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間からなる群より選択される時期で実施する。いくつかの態様において、第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施し、かつ、第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する。
【００１２】
いくつかの態様において、第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を異なる投薬量で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を異なる投薬量で実施し、ここで、第2の追加的IV注入投薬量は、第1の追加的IV注入よりも高い。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入および第2の追加的IV注入を異なる投薬量で実施し、ここで、第2の追加的IV注入投薬量は、第1の追加的IV注入より高く、かつ、ここで、第1および第2の追加的IV注入投薬量の両方が、初回投薬量よりも高い。いくつかの態様において、第1および第2の追加的IV注入のうちの少なくとも1つを、3mg/kgの投薬量で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を3 mg/kgの投薬量で実施し、かつ、第2の追加的IV注入を6 mg/kgの投薬量で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を、初回IV注入後少なくとも3日で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日からなる群より選択される時期で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施する。いくつかの態様において、第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間からなる群より選択される時期で実施する。いくつかの態様において、第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する。いくつかの態様において、第1の追加的IV注入を、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施し、かつ、第2の追加的IV注入を、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する。
【００１３】
いくつかの態様において、第1の追加的IV注入は、週2回IV注入の第1シリーズを少なくとも含み、第2の追加的IV注入は、週2回IV注入の第2シリーズを少なくとも含む。いくつかの態様において、週2回IV注入の第1シリーズおよび週2回IV注入の第2シリーズを、1 mg/kgの初回用量よりも高い用量で実施する。いくつかの態様において、週2回IV注入の第1シリーズを3 mg/kgの用量で実施し、週2回IV注入の第2シリーズを6 mg/kgの用量で実施する。いくつかの態様において、追加的IV注入の第1シリーズを、初回IV注入後少なくとも3日で実施する。いくつかの態様において、追加的IV注入の第1シリーズを、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日からなる群より選択される時期で実施する。いくつかの態様において、追加的IV注入の第1シリーズを、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施する。いくつかの態様において、追加的IV注入の第2シリーズを、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間からなる群より選択される時期で実施する。いくつかの態様において、追加的IV注入の第2シリーズを、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する。いくつかの態様において、追加的IV注入の第1シリーズを、初回IV注入後3日、初回IV注入後6日、初回IV注入後9日、初回注入後12日、および初回注入後15日で実施し、かつ、追加的IV注入の第2シリーズを、初回IV注入後3週間、初回IV注入後4週間、初回IV注入後5週間、初回注入後6週間、初回注入後7週間、および初回注入後8週間で実施する。
【００１４】
いくつかの態様において、注入を初回用量後3日毎に初回用量後最長15日間行う。いくつかの態様において、注入を初回用量後3日毎に初回用量後最長15日間行い、続いて、初回用量後少なくとも15日で開始して週2回注入を行う。いくつかの態様において、注入投薬量を初回用量後の任意の時点で3 mg/kgへ増加させる。いくつかの態様において、3 mg/kgでの最低2回の注入後、最高4回までの注入についてNI-0501の用量を6 mg/kgへ増加させる。
【００１５】
本明細書において提供される組成物および方法において、HLHを治療する、予防する、かつ／またはその発症もしくは進行を遅らせる、またはそれと関連する症状を緩和するために、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、1 mg/kgの初回用量での1時間の期間にわたるIV注入によって、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、注入を初回用量後3日毎に初回用量後最長15日間行う。いくつかの態様において、注入を初回用量後3日毎に初回用量後最長15日間行い、続いて、初回用量後少なくとも15日で開始して週2回注入を行う。いくつかの態様において、注入投薬量を初回用量後の任意の時点で3 mg/kgへ増加させる。いくつかの態様において、3 mg/kgでの最低2回の注入後、最高4回までの注入についてNI-0501の用量を6 mg/kgへ増加させる。
【００１６】
本明細書において提供される組成物および方法において、HLHを治療する、予防する、かつ／またはその発症もしくは進行を遅らせる、またはそれと関連する症状を緩和するために、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、6 mg/kgよりも多い投薬量についてIV注入によって、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、初回投薬量後、6 mg/kgよりも多い第2投薬量について、IV注入によって、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、第2投薬量は少なくとも10 mg/kgである。いくつかの態様において、第2投薬量は10 mg/kgである。いくつかの態様において、第2投薬量は、毎日繰り返される、10 mg/kgである。いくつかの態様において、第2投薬量は、1週間毎日繰り返される、10 mg/kgである。いくつかの態様において、第2投薬量は、2週間毎日繰り返される、10 mg/kgである。いくつかの態様において、第2投薬量は、2週間を超えて毎日繰り返される、10 mg/kgである。
【００１７】
いくつかの態様において、二次性HLHを治療する、予防する、かつ／またはその発症もしくは進行を遅らせる、またはそれと関連する症状を緩和するために、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、sJIAをバックグラウンドとした二次性HLHを治療する、予防する、かつ／またはその発症もしくは進行を遅らせる、またはそれと関連する症状を緩和するために、その必要がある対象へNI-0501を投与する。いくつかの態様において、NI-0501を、6 mg/kgの初回用量として、その必要がある対象へ投与する。いくつかの態様において、NI-0501治療を、継続NI-0501用量で継続する。いくつかの態様において、NI-0501治療を、少なくとも4週間(即ち、最長SD27まで)3日毎に3 mg/kgの継続NI-0501用量で継続する。
【００１８】
いくつかの態様において、NI-0501治療は、所望の臨床転帰の達成時に、縮小、停止、またはそうでなければ短縮される。いくつかの態様において、NI-0501治療は、完全な臨床応答、即ち、MAS寛解の証拠に基づいて、短縮される。
【００１９】
いくつかの態様において、4週間後に、NI-0501治療は、MAS寛解が達成されるまで必要に応じて維持として、最長さらに4週間まで(即ち、最長SD56まで)継続される。いくつかの態様において、4週間後に、NI-0501治療は、MAS寛解が達成されるまで必要に応じて維持として、最長さらに4週間まで(即ち、最長SD56まで)継続され、用量を1 mg/kgへ減少させて注入間の間隔を毎週投与へ延長させうる。
【００２０】
本明細書において提供される組成物および方法において、HLHを治療する、予防する、かつ／またはその発症もしくは進行を遅らせる、またはそれと関連する症状を緩和するために、その必要がある対象であって、バックグラウンドとしてデキサメタゾンが投与された対象へ、NI-0501を投与する。いくつかの態様において、対象は治療ナイーブな患者であり(即ち、HLHについて以前に治療されておらず)、デキサメタゾンは少なくとも10 mg/m2の用量で投与される。いくつかの態様において、対象は第二選択HLH治療としてNI-0501を受け、デキサメタゾンは10 mg/m2〜5 mg/m2の範囲内の用量で投与される。いくつかの態様において、対象は第二選択HLH治療としてNI-0501を受け、デキサメタゾンは少なくとも5 mg/m2の用量で投与される。いくつかの態様において、対象は第二選択HLH治療としてNI-0501を受け、デキサメタゾンは5 mg/m2未満の用量で投与される。
【００２１】
いくつかの態様において、NI-0501を、1つまたは複数の追加の薬剤、例えば、非限定的な例として、治療剤、抗炎症剤、および／または免疫抑制剤と組み合わせての治療の前および／または間および／または後に投与する。いくつかの態様において、第2の薬剤は、HLHの治療において使用されることが公知の薬剤である。いくつかの態様において、追加の薬剤は、少なくともエトポシドを含む。いくつかの態様において、NI-0501および追加の薬剤は、単一の治療用組成物中に製剤化されており、NI-0501および追加の薬剤は同時に投与される。あるいは、NI-0501および追加の薬剤は互いに分離しており、例えば、各々は、分離した治療用組成物中に製剤化されており、NI-0501および追加の薬剤を同時に投与するか、またはNI-0501および追加の薬剤を治療レジメンの間の異なる時に投与する。例えば、NI-0501を追加の薬剤の投与前に投与するか、NI-0501を追加の薬剤の投与後に投与するか、またはNI-0501および追加の薬剤を交互に投与する。本明細書に記載されるように、NI-0501および追加の薬剤は、単一用量でまたは複数用量で投与される。
【００２２】
いくつかの態様において、NI-0501および追加の薬剤を同時に投与する。例えば、NI-0501および追加の薬剤は、単一の組成物中に製剤化され得るか、または2つ以上の分離した組成物として投与され得る。いくつかの態様において、NI-0501および追加の薬剤を逐次的に投与し、またはNI-0501および追加の薬剤を治療レジメンの間の異なる時に投与する。
【００２３】
いくつかの態様において、追加の薬剤は免疫抑制剤である。いくつかの態様において、免疫抑制剤はシクロスポリンA(CsA)である。いくつかの態様において、対象は、NI-0501の投与前にCsAを受けていた対象である。いくつかの態様において、追加の薬剤は少なくともエトポシドを含む。いくつかの態様において、対象は、NI-0501の投与前にエトポシドを受けていた対象である。
【００２４】
いくつかの態様において、追加の薬剤は、髄腔内メトトレキサートおよび／または糖質コルチコイドである。いくつかの態様において、対象は、NI-0501の投与前に髄腔内メトトレキサートおよび／または糖質コルチコイドを受けていた。
【００２５】
いくつかの態様において、追加の薬剤はIV免疫グロブリン(IVIG)である。いくつかの態様において、裏付けられた免疫グロブリン欠損症を有する対象における補充治療としてIVIGを投与する。対象が裏付けられた免疫グロブリン欠損症を有するいくつかの態様において、適切なIgGレベルを維持するために、IVIGは、0.5 g/kgの用量で、4週毎にまたはより頻繁に、投与される。
【００２６】
いくつかの態様において、1つまたは複数の追加の薬剤は、鎮痛治療、血液産物の輸血、電解質およびグルコース注入、抗生物質、抗真菌および抗ウイルス治療、ならびに／または全身支持療法である。
【００２７】
本開示はまた、患者が上昇レベルのCXCL9を単独でまたは1つもしくは複数の追加のインターフェロンγ(IFNγ)関連バイオマーカーと組み合わせて有する、障害に罹患している患者集団を同定またはそうではければ精密化することにおいて有用である組成物および方法を提供する。特に、本開示は、血球貪食性リンパ組織球症(HLH)に罹患しているかまたは罹患していると疑われる患者におけるIFNγ産生についてのバイオマーカーとしてCXCL9レベルを検出するための組成物および方法を提供する。特に、本開示は、二次性血球貪食性リンパ組織球症(HLH)に罹患しているかまたは罹患していると疑われる患者におけるIFNγ産生についてのバイオマーカーとしてCXCL9レベルを検出するための組成物および方法を提供する。いくつかの態様において、本組成物および方法は、マクロファージ活性化症候群(MAS)に罹患しているかまたは罹患していると疑われる患者におけるIFNγ産生についてのバイオマーカーとしてCXCL9レベルを検出するために使用される。いくつかの態様において、本組成物および方法は、自己免疫疾患または炎症性障害の状況におけるMASに罹患しているかまたは罹患していると疑われる患者におけるIFNγ産生についてのバイオマーカーとしてCXCL9レベルを検出するために使用される。いくつかの態様において、本組成物および方法は、全身性自己免疫疾患または炎症性障害の状況におけるMASに罹患しているかまたは罹患していると疑われる患者におけるIFNγ産生についてのバイオマーカーとしてCXCL9レベルを検出するために使用される。いくつかの態様において、本組成物および方法は、全身型若年性特発性関節炎(sJIA)の状況におけるMASに罹患しているかまたは罹患していると疑われる患者におけるIFNγ産生についてのバイオマーカーとしてCXCL9レベルを検出するために使用される。いくつかの態様において、本組成物および方法は、全身性エリテマトーデス(SLE)の状況におけるMASに罹患しているかまたは罹患していると疑われる患者におけるIFNγ産生についてのバイオマーカーとしてCXCL9レベルを検出するために使用される。
【００２８】
上昇レベルのCXCL9を有すると同定された患者は、IFNγの1つまたは複数の生物活性（例えば、IFNγシグナル伝達）に干渉するか、またはそうでなければ拮抗し、IFNγの少なくとも1つの生物活性を中和する薬剤（例えば、抗体または他のポリペプチドベースの治療薬、ペプチドベースの治療薬、小分子阻害剤、核酸ベースの治療薬およびそれらの誘導体）での治療についての好適な候補として同定される。
【００２９】
障害を罹患しているかまたは罹患していると疑われるいくつかの患者において、体液および他の生体試料は、上昇レベルのCXCL9を、単独でまたは他のIFNγ関連バイオマーカー、例えば、CXCL10および／もしくはCXCL11と組み合わせて、含有する。
【００３０】
CXCL9およびこれらの他のバイオマーカーは、インビボIFNγ産生の指標である。従って、IFNγシグナル伝達に干渉する、阻害する、減らす、またはそうでなければ拮抗する抗-IFNγアンタゴニスト、例えば、中和抗-IFNγ抗体または他のポリペプチドベースの治療薬、ペプチドベースの治療薬、小分子阻害剤、核酸ベースの治療薬およびそれらの誘導体の使用は、IFNγ活性を遮断するか、またはそうでなければ阻害する。従って、本組成物および方法は、CXCL9発現レベルの上昇および／または他のバイオマーカーを示す患者へ、抗-IFNγアンタゴニスト、例えば、中和抗-IFNγ抗体または他のポリペプチドベースの治療薬、ペプチドベースの治療薬、小分子阻害剤、核酸ベースの治療薬およびそれらの誘導体を投与することによって、異常な、例えば上昇した、IFNγ発現および／もしくは活性、異常な炎症性サイトカイン産生、ならびに／またはそれらの組み合わせに依存するか、これによって駆動されるか、これと関連するか、またはそうでなければこれによって影響される障害を治療する、その進行を遅らせる、またはそうでなければその症状を改善することにおいて有用である。抗-IFNγアンタゴニスト、例えば、本明細書に記載されるもののような中和抗-IFNγ抗体での治療についての恐らく好適な候補である患者は、CXCL9のレベルを単独でまたは1つもしくは複数のIFNγ関連リガンドもしくは他のバイオマーカーと組み合わせて検出することによって同定される。いくつかの態様において、上昇レベルのCXCL9を単独でまたは他のIFNγ関連バイオマーカーと組み合わせて有さない患者は、本明細書に記載される中和抗-IFNγ抗体または他のポリペプチドベースの治療薬、ペプチドベースの治療薬、小分子阻害剤、核酸ベースの治療薬およびそれらの誘導体のいずれかを含む、抗-IFNγアンタゴニストで依然として処置され得る。
【００３１】
上昇レベルのCXCL9を単独でまたは1つもしくは複数の追加のIFNγ関連バイオマーカーと組み合わせて有する患者は、1つまたは複数の抗-IFNγアンタゴニスト、例えば、本明細書に記載される中和抗-IFNγ抗体での療法についての好適な候補と同定される。本明細書において使用される場合、句「上昇発現レベル」は、一次性もしくは二次性HLHまたはHLH関連障害に罹患していないかまたは罹患していると疑われない患者からの、または別の対照試料からの試料中の、CXCL9（単独でまたは1つもしくは複数の追加のバイオマーカーと組み合わせて）のベースライン発現レベルよりも大きい、発現レベルを指す。いくつかの態様において、CXCL9および／または他のバイオマーカーの上昇発現レベルは、有意な上昇レベルである。
【００３２】
CXCL9（単独でまたは1つもしくは複数の他のIFNγ関連バイオマーカーと組み合わせて）の検出レベルは、患者集団を精密化するかまたはそうでなければ階層化するために有用である。いくつかの態様において、検出レベルは、所定の患者へ投与されるべき抗-IFNγアンタゴニストの投薬量を決定するために使用される。いくつかの態様において、検出レベルは、患者集団をカテゴリー化するかまたはそうでなければ階層化するために使用される。例えば、患者は、CXCL9の検出レベルに基づいて、「重篤な」もしくは高悪性度のMAS、または逆に、重篤でないもしくは低悪性度のMASを有すると分類され得る。
【００３３】
試料は、例えば、血液または血液成分、例えば、血清、血漿である。いくつかの態様において、試料は、別の体液、例えば、非限定的な例として、尿、滑液、気管支肺胞液、脳脊髄液、気管支肺胞洗浄液(BAL)、および／または唾液である。いくつかの態様において、生体試料はCSFである。いくつかの態様において、生体試料はHLH患者からのCSFである。
【００３４】
IFNγおよび／または他のIFNγ関連バイオマーカーのレベルを検出することに加えて、抗-IFNγアンタゴニストでの治療についての好適な患者は、患者集団を同定またはそうではければ精密化するためのバイオマーカーの感度および特異性を改善するであろう多数の追加の生物学的および臨床的パラメータのいずれかを評価することによっても同定することができる。あるいは、これらの追加の生物学的および臨床的パラメータは、抗-IFNγアンタゴニストでの治療または他の好適な療法についての好適な候補である患者を同定するための手段として単独で使用され得る。これらの生物学的および臨床的パラメータは、非限定的な例として、以下のいずれかを含む：フェリチンレベル、好中球カウント、血小板カウント、アラニンアミノトランスフェラーゼレベル、および／または乳酸デヒドロゲナーゼレベル。
【００３５】
本発明の組成物および方法で有用である障害としては、異常な、例えば、上昇した、IFNγ発現および／または活性が存在する任意の障害、特に、HLH（二次性HLHを含む）、MAS、および／またはsJIAが挙げられる。
【００３６】
非限定的な例として、本明細書において提供される方法および組成物は、一次性および／または二次性HLH障害のような障害の診断および／または治療に適している。好適な自己免疫および／または炎症性障害としては、非限定的な例として、異常なIFNγ活性および／または発現と関連する一次性および／または二次性HLH障害が挙げられる。
【００３７】
患者が上昇レベルのCXCL9を単独でまたは1つもしくは複数のIFNγ関連バイオマーカーと組み合わせて有すると同定されると、次いで患者を抗-IFNγアンタゴニストで治療する。例えば、抗-IFNγアンタゴニストは、中和抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性(例えば、抗原結合性)断片である。好適な中和抗-IFNγ抗体は、本明細書に記載される抗-IFNγ抗体のいずれかを含む。
【００３８】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SYAMS(SEQ ID NO: 1)のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域1(VH CDR1)；
2018515493.tif 000007
のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域2(VH CDR2)；および
2018515493.tif 000008
のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む可変重鎖相補性決定領域3(VH CDR3)；
2018515493.tif 000009
のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1(VL CDR1)；
EDNQRPS(SEQ ID NO: 5)のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域2(VL CDR2)；および
2018515493.tif 000010
のアミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域3(VL CDR3)を含む。
【００３９】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SYAMS(SEQ ID NO: 1)のアミノ酸配列を含むVH CDR1；
2018515493.tif 000011
のアミノ酸配列を含むVH CDR2領域；および
2018515493.tif 000012
のアミノ酸配列を含むVH CDR3領域；
2018515493.tif 000013
のアミノ酸配列を含む可変軽鎖相補性決定領域1(VL CDR1)領域；
EDNQRPS(SEQ ID NO: 5)のアミノ酸配列を含むVL CDR2領域；および
2018515493.tif 000014
のアミノ酸配列を含むVL CDR3領域を含む。
【００４０】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖を含み、ここで、組み合わせは、表1A中の単一の行に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである。
【００４１】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖を含み、ここで、組み合わせは、表1B中の単一の行に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせである。
【００４２】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、VH CDR1配列、VH CDR2配列、およびVH CDR3配列の組み合わせを含む重鎖であって、ここで、組み合わせが、表1A中の単一の行に示される3つの重鎖CDR配列(VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3)の組み合わせである重鎖と、VL CDR1配列、VL CDR2配列、およびVL CDR3配列の組み合わせを含む軽鎖であって、ここで、組み合わせが、表1B中の単一の行に示される3つの軽鎖CDR配列(VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3)の組み合わせである軽鎖とを含む。
【００４３】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列の重鎖可変アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００４４】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 48のアミノ酸配列の軽鎖可変アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００４５】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列の重鎖可変アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列、およびSEQ ID NO: 48のアミノ酸配列の軽鎖可変アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００４６】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列の重鎖可変アミノ酸配列を含む。
【００４７】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 48のアミノ酸配列の軽鎖可変アミノ酸配列を含む。
【００４８】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 47のアミノ酸配列の重鎖可変アミノ酸配列、およびSEQ ID NO: 48のアミノ酸配列の軽鎖可変アミノ酸配列を含む。
【００４９】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 44のアミノ酸配列の重鎖アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００５０】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 46のアミノ酸配列の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００５１】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 44のアミノ酸配列の重鎖アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列、およびSEQ ID NO: 46のアミノ酸配列の軽鎖アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００５２】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 44のアミノ酸配列の重鎖アミノ酸配列を含む。
【００５３】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 46のアミノ酸配列の軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５４】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 44のアミノ酸配列の重鎖アミノ酸配列、およびSEQ ID NO: 46のアミノ酸配列の軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００５５】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98、および102からなる群より選択される重鎖可変アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００５６】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92、96、100、および104からなる群より選択される軽鎖可変アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００５７】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98、および102からなる群より選択される重鎖可変アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列、ならびにSEQ ID NO: 52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92、96、100、および104からなる群より選択される軽鎖可変アミノ酸配列に対して少なくとも90%、92%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上同一のアミノ酸配列を含む。
【００５８】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98、および102からなる群より選択される重鎖可変アミノ酸配列を含む。
【００５９】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92、96、100、および104からなる群より選択される軽鎖可変アミノ酸配列を含む。
【００６０】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、SEQ ID NO: 50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、98、および102からなる群より選択される重鎖可変アミノ酸配列、ならびにSEQ ID NO: 52、56、60、64、68、72、76、80、84、88、92、96、100、および104からなる群より選択される軽鎖可変アミノ酸配列を含む。
【００６１】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片を治療有効量で投与する。本発明の抗体の治療有効量は概して、治療目的を達成するために必要な量を指す。この治療目的は、標的の機能に干渉する場合がある、抗体とその標的抗原との結合相互作用であり得る。本発明の抗体または抗体断片の治療有効投薬量についての一般的な範囲は、非限定的な例として、約0.1 mg/kg体重〜約50 mg/kg体重であり得る。一般的な投薬頻度は、例えば、1日2回から週1回までの範囲であり得る。
【００６２】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片を、約0.5 mg/kg〜約2 mg/kgの範囲内の、例えば、約0.5 mg/kg〜約1.5 mg/kg、および／または約0.5 mg/kg〜約1.0 mg/kgの範囲内の初回用量、即ち、負荷用量で投与する。いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片を、約1.0 mg/kgの初回用量で投与する。
【００６３】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片を、初回負荷用量、続いての1つまたは複数の維持用量として投与する。いくつかの態様において、1つまたは複数の維持用量は、初回負荷用量と実質的に同様である投薬量である。いくつかの態様において、1つまたは複数の維持用量は、初回負荷用量未満である投薬量である。いくつかの態様において、1つまたは複数の維持用量は、初回負荷用量を超える投薬量である。
【００６４】
いくつかの態様において、1つまたは複数の維持用量は、少なくとも2つまたはそれ以上の投薬量を含み、ここで、各維持投薬量は同じ投薬量である。いくつかの態様において、2つまたはそれ以上の維持投薬量は、初回負荷用量と実質的に同様である。いくつかの態様において、2つまたはそれ以上の維持投薬量は、初回負荷用量を超える。いくつかの態様において、2つまたはそれ以上の維持投薬量は、初回負荷用量未満である。
【００６５】
いくつかの態様において、1つまたは複数の維持用量は、少なくとも2つまたはそれ以上の投薬量を含み、ここで、各維持投薬量は同じ投薬量でない。いくつかの態様において、2つまたはそれ以上の維持投薬量を、投薬量を増加させつつ投与する。いくつかの態様において、2つまたはそれ以上の維持投薬量を、投薬量を減少させつつ投与する。
【００６６】
いくつかの態様において、1つまたは複数の維持用量は、少なくとも2つまたはそれ以上の投薬量を含み、ここで、各維持投薬量を周期的な時間間隔で投与する。いくつかの態様において、2つまたはそれ以上の投薬量を、時間間隔を増加させつつ投与する。いくつかの態様において、2つまたはそれ以上の投薬量を、時間間隔を減少させつつ投与する。
【００６７】
いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片を、約0.5 mg/kg〜約2 mg/kgの範囲内、例えば、約0.5 mg/kg〜約1.5 mg/kg、および／または約0.5 mg/kg〜約1.0 mg/kgの範囲内の初回負荷用量、続いて、少なくとも1つ、例えば、2つ以上、3つ以上、4つ以上、または5つ以上の維持用量で投与する。いくつかの態様において、抗-IFNγ抗体またはその免疫学的活性断片は、約1.0 mg/kgの初回負荷用量、続いて、少なくとも1つ、例えば、2つ以上、3つ以上、4つ以上、または5つ以上の維持用量で投与する。
【００６８】
本発明に従う薬学的組成物は、本発明の抗-IFNγ抗体および担体を含むことができる。これらの薬学的組成物は、例えば、診断キットのような、キット中に含まれ得る。
【００６９】
本発明はまた、本明細書において提供される方法のいずれかを実施するためのキットを提供する。例えば、いくつかの態様において、キットは、CXCL9（単独でまたは1つもしくは複数のIFNγ関連バイオマーカーと組み合わせて）に特異的な検出試薬、および検出試薬を検出するための手段を含む。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】一次性HLH患者における継続中の第2相パイロット研究における、NI-0501抗体の注入後24時間での全IFNγレベルと投与前の血清CXCL9レベルとの間の相関性を描写するグラフである。
【図２】一次性HLH患者における継続中の第2相パイロット研究における、NI-0501抗体の注入後24時間での全IFNγ投与前レベルと血清CXCL9レベルとの間の相関性を描写するグラフである。
【図３】図3Aおよび3Bは、全身型若年性特発性関節炎(sJIA)に続発するマクロファージ活性化症候群(MAS)を有する患者における、および活動性sJIAを有する患者における、血清CXCL9レベルおよびIFNγレベルの間の相関性を描写する一連のグラフである。
【図４Ａ】活動性sJIAおよびsJIAに続発するMASを有する患者におけるIFNγおよび血清CXCL9レベルと臨床的パラメータとの相関性を描写する一連のグラフである。
【図４Ｂ】活動性sJIAおよびsJIAに続発するMASを有する患者におけるIFNγおよび血清CXCL9レベルと臨床的パラメータとの相関性を描写する一連のグラフである。
【図４Ｃ】活動性sJIAおよびsJIAに続発するMASを有する患者におけるIFNγおよび血清CXCL9レベルと臨床的パラメータとの相関性を描写する一連のグラフである。
【図４Ｄ】活動性sJIAおよびsJIAに続発するMASを有する患者におけるIFNγおよび血清CXCL9レベルと臨床的パラメータとの相関性を描写する一連のグラフである。
【図５】IFNγ誘導性ケモカインの検出不可能なレベルによって示されるように、IFNγが完全に中和されたことを描写するグラフである。
【図６】NI-0501治療中のHLH疾患活動性の改善を描写するグラフである(2週間および治療の終了)：血小板カウント>100 x109/L、好中球カウント>1x109/L、フィブリノーゲン>1.5 g/Lおよび少なくとも25%のフェリチン減少を有する患者のパーセント。
【図７】図7Aおよび7Bは、NI-0501注入後24時間での全IFNγレベルと投与前CXCL9レベルとの相関性を描写する一連のグラフである。図7Bに示される挿入図は、NI-0501治療中の個々のIFNγおよびCXCL9プロフィールの例を描写する。
【図８】図8A、8B、8C、および8Dは、サンプリング時の活動性MAS中およびMASを伴わない活動性sJIA(Act sJIA)中に対の試料が入手可能であった個々の患者におけるIFNγ、ならびにCXCL9、CXCL10およびCXCL11の血清レベルを描写する一連のグラフである。有意水準(p)を、対の試料についてWilcoxon順位検定を使用して得た。
【図９】図9Aおよび9Bは、sJIAの経過中にMASのエピソードを3回示したある患者における、白血球(WBC)および血小板(PLT)カウントならびにフェリチンレベルの変化(図9A)、ならびにIFNγ、CXCL9、CXCL10およびCXCL11の血清レベルの変化(図9B)を描写する一連のグラフである。
【図１０−１】サンプリング時に活動性MASを有する患者(赤色円)およびサンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者(黒色三角)における、IFNγおよびCXCL9のレベルと、フェリチンレベル、好中球および血小板カウント、ならびにLDHおよびALTレベルとの相関性を描写する一連のグラフである。スピアマン相関係数(Rs)および各相関性の有意水準(p)を表3に示す。
【図１０−２】サンプリング時に活動性MASを有する患者(赤色円)およびサンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者(黒色三角)における、IFNγおよびCXCL9のレベルと、フェリチンレベル、好中球および血小板カウント、ならびにLDHおよびALTレベルとの相関性を描写する一連のグラフである。スピアマン相関係数(Rs)および各相関性の有意水準(p)を表3に示す。
【図１１】図11A、11B、11C、11D、11E、および11Fは、MASにおけるIFNγとCXCL9およびCXCL10産生との関係を描写する一連のグラフである。パネルA：サンプリング時にMASを有する患者におけるIFNγのレベルとCXCL9およびCXCL10のレベルとの相関性。スピアマン相関係数(Rs)および各相関性の有意水準(p)を表3に示す。
【図１２】実施例7において提示される研究のスクリーニング、治療および追跡部分の略図である。
【図１３】図13Aおよび13Bは、NI-0501治療の開始時に>37.5℃の体温を有する2人の患者における体温に対するNI-0501投与の効果を描写するグラフである。
【図１４】患者における好中球カウントに対するNI-0501投与の効果を描写する一連のグラフおよび表である。
【図１５】患者における血小板カウントに対するNI-0501投与の効果を描写する一連のグラフおよび表である。
【図１６】患者におけるフェリチンの血清レベルに対するNI-0501投与の効果を描写する一連のグラフおよび表である。
【図１７】患者における糖質コルチコイド漸減（tapering）に対するNI-0501投与の効果を描写する一連のグラフおよび表である。
【図１８】HSCT時までNI-0510の投与がIFNγ中和を維持したことを描写するグラフである。NI-0501治療に対するHLH応答も移植まで持続した。
【図１９】実施例8において提示される研究のスクリーニング、治療および追跡部分の略図である。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
発明の詳細な説明
本明細書において提供される組成物および方法は、本明細書においてNI-0501と呼ばれる完全ヒトIgG1抗-インターフェロンガンマ(IFNγ)モノクローナル抗体(mAb)を使用し、これはIFNγに結合しIFNγを中和する。NI-0501は、IFNγの可溶性形態および受容体(IFNγR1)結合形態へ結合する。NI-0501はヒトIgG1であるため、Fcγ受容体と会合し、補体に結合する能力を含む、この免疫グロブリンアイソタイプの特徴を保持する。IFNγは、免疫系の最も強力かつ多面的なサイトカインの一つである。それは、ウイルスおよび細胞内細菌感染症に対する自然および適応免疫に関して重要である。IFNγは、その受容体への結合後、様々な生理および細胞応答をもたらすように作用する。過去20年にわたる多数の研究が、IFNγを炎症性疾患の病理発生および維持と関連付けてきた(例えば、Billiau A. “Interferon-gamma: biology and role in pathogenesis.” Adv. Immunol. 1996;62:61-130; Schoenborn JR, Wilson CB. “Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses.” Adv. Immunol. 2007;96:41-101; およびZhang SY, Boisson-Dupuis S, Chapgier A et al. “Inborn errors of interferon (IFN)-mediated immunity in humans: insights into the respective roles of IFN-alpha/beta, IFN-gamma, and IFN-lambda in host defense.” Immunol. Rev. 2008; 226:29-40を参照のこと)。IFNγは主に、自然免疫応答の一部として、ナチュラルキラー(NK)およびナチュラルキラーT(NKT)細胞によって産生され、いったん抗原特異的免疫が生じると、CD4 Th1およびCD8細胞傷害性Tリンパ球(CTL)エフェクターT細胞によって産生される。
【００７２】
本明細書において提供される組成物および方法は、血球貪食性リンパ組織球症(HLH)の治療において有用である。HLHは、免疫系の著しい活性化を伴う、NK細胞およびCD8+ T細胞による細胞傷害機能の重篤な障害または欠如によって特徴付けられる症候群である。
【００７３】
HLHは、一次性(遺伝性/家族性)HLHおよび二次性HLHを含み、両方とも、様々な組織および器官に対する有害な結果を伴う深刻な高サイトカイン血症に至る、免疫系の調節異常によって臨床的に説明される(Henter JI, Elinder G, Soder O et al. “Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis.” Blood 1991;78:2918-2922)。HLH分類を下記表9に示す。
【００７４】
（表９）HLH分類
2018515493.tif 000015
【００７５】
一次性HLHは、不均一な常染色体劣性疾患である。一次性HLHは、多くは乳児期および幼児期において見られ、欧州における有病率は1/50,000出生数と推定される(Henter JI, Elinder G, Soder O, Ost A. Incidence in Sweden and clinical features of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Acta Paediatr.Scand. 1991;80:428-435)。この疾患は、無治療ならば、症状の発症後2ヶ月未満の生存期間中央値を伴って常に致命的である(Janka GE. Familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Eur.J.Pediatr. 1983;140:221-230; およびArico M, Janka G, Fischer A, Henter JI, Blanche S, Elinder G, Martinetti M, Rusca MP Hemophagocytic lymphohistiocytosis Report of 122 children from the International Registry. FHL Study Group of the Histiocyte Society. Leukemia. 1996 Feb;10(2):197-203)。
【００７６】
HLHに存在する細胞傷害機能障害は、高サイトカイン血症および血球貪食に至る。これらはそして、HLHの典型的な症状の全てを引き起こす(Dhote R, Simon J, Papo T et al. Reactive hemophagocytic syndrome in adult systemic disease: report of twenty-six cases and literature review. Arthritis Rheum. 2003;49:633-639; Risdall RJ, McKenna RW, Nesbit ME et al. Virus-associated hemophagocytic syndrome: a benign histiocytic proliferation distinct from malignant histiocytosis. Cancer 1979;44:993-1002; およびRisdall RJ, Brunning RD, Hernandez JI, Gordon DH. Bacteria-associated hemophagocytic syndrome. Cancer 1984;54:2968-2972)。HLHの典型的な症状としては、例えば、長期にわたる発熱、脾腫、肝腫、血球減少症、高フェリチン血症、高トリグリセリド血症、低フィブリノーゲン血症、血球貪食、高サイトカイン血症、および／またはリンパ組織球性浸潤、骨髄低形成、髄膜浸潤が挙げられる。
【００７７】
HLH患者において上昇するサイトカインには、IFNγ、インターロイキン6(IL-6)、IL-10、腫瘍壊死因子(TNF)α、IL-8、マクロファージコロニー刺激因子(MCSF)および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)がある。
【００７８】
HLHはまた、感染症、リウマチ性疾患または腫瘍性疾患の経過中に生じ得、この場合、二次性HLHと呼ばれる。二次性HLHは、一次型と同じ徴候および症状を示し、等しく重篤であり得る。二次性HLHの現在の治療は、基礎疾患の原因を明らかにすることを目指している。これは、確かに、リーシュマニア症などの感染症によって引き起こされるHLHについて事実である。注目すべきことに、ある感染症、特に、CMVまたはEBVに起因するものなどのウイルス感染症の存在が、非常に多くの場合、HLHの一次型の症状発現についてのトリガーである。この観察はまた、一次性HLHの動物モデルにおいて、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス(LCMV)での感染が、この疾患の発生のために必要であるという証拠によって支持される(Jordan MB, Hildeman D, Kappler J, Marrack P. An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood 2004;104:735-743; Pachlopnik SJ, Ho CH, Chretien F et al. Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infected perforin- and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol.Med. 2009; 1:112-124; Kogl T, Muller J, Jessen B et al. Hemophagocytic lymphohistiocytosis in syntaxin-11-deficient mice: T-cell exhaustion limits fatal disease. Blood. 2013; 121:604-613; およびSepulveda FE, Debeume F, Menasche G et al. Distinct severity of HLH in both human and murine mutants with complete loss of cytotoxic effector PRF1, RAB27A, and STX11 Blood. 2013; 121:595-603)。
【００７９】
HLHが腫瘍性疾患、特に血液悪性腫瘍中に現れる場合、患者の状態の重症度のため、基礎疾患を具体的に明らかにする前に、HLHの緊急治療を必要とすることが多い。
【００８０】
全身型若年性特発性関節炎(sJIA)および全身性エリテマトーデス(SLE)のようなリウマチ性疾患に罹患している患者におけるHLHの徴候および症状の存在は、リウマチ専門医によってしばしばマクロファージ活性化症候群(MAS)と呼ばれ、リウマチ性疾患自体の出現に先行し得る。MASを有する患者の大多数は、損なわれたNKおよびパーフォリン機能テストを示し、大多数の患者が、PRF1およびUNC13Dの多型性またはヘテロ接合突然変異を示す。これは極めて重篤かつ生命を脅かす状態であるが、通常、ほとんどの場合、コルチコステロイドおよびシクロスポリンからなる適切な治療が開始されると消失する。しかしながら、MASを示す患者のおよそ15%において、この疾患は制御するのが困難であり得、エトポシドの使用が考慮され得る(Minoia F, Davi S, Horne AC et al. Clinical Features, Treatment, and Outcome of Macrophage Activation Syndrome Complicating Systemic Juvenile Idiopathic Arthritis: A Multinational, Multicenter Study of 362 Patients. Arthritis & Rheumatism 2014; 66: 3160-3169)。
【００８１】
一次性HLHは主に小児疾患として認識されているが、HLHは成人においても見られ得る状態であり、意識の高まりにより、これが過去に認識されていたよりも多く起こっている可能性が示されている。成人患者の大多数において、この疾患は、悪性腫瘍(主に非ホジキンリンパ腫)、感染症、自己炎症性または自己免疫疾患、および医原性免疫不全の間に発生する。
【００８２】
現在、HLHの治療についての承認薬はない。しかしながら、当分野の専門家は、HLH患者の管理についてのガイドラインを確立している(Henter JI, Horne AC, Arico M, Egeler RM, Filipovich AH, Imashuku S Ladisch S, McClain K, Webb D, Winiarski J, and Janka Diagnostic and Therapeutic Guidelines for Hemophagocytic Lymphohistiocytosis Blood Cancer 2007; 48:124-13.1; Henter JI, Samuelsson-Horne A, Arico M et al. Treatment of hemophagocytic lymphohistiocytosis with HLH-94 immunochemotherapy and bone marrow transplantation. Blood 2002; 100:2367-2373; およびJordan MB, Allen CE, Weitzman S, Filipovich AH, McClain KL. How I treat hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 2011; 118:4041-4052)。
【００８３】
一次性HLH患者の管理は、現在、以下の段階を含む(Henter et al., Blood Cancer 2007)：(i)コルチコステロイドおよび免疫抑制薬(例えば、エトポシド、CsA、アレムツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン)の組み合わせでの8週間の導入療法；(ii)移植までの維持療法；および(iii)遺伝的欠損が同定された全ての患者についての、そして最終的には、疾患に関連する突然変異を有さない非常に重篤なHLH症例における、移植。
【００８４】
導入療法の主な目標は、HLHを特徴付ける生命を脅かす炎症過程を抑制し、それを必要とする患者において移植を可能にすることである(Horne A, Janka G, Maarten ER et al. Haematopoietic stem cell transplantation in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br.J.Haematol. 2005;129:622-630)。移植は、高浸透度遺伝子突然変異と関連するHLHについての唯一の根治的治療である(Henter et al., Blood 2002)。
【００８５】
このようなガイドラインの採用にもかかわらず、一次性HLHについての全体的な死亡率はおよそ40〜50%のままである(Henter et al., Blood 2002; Trottestam H, Horne A, Arico M et al. Chemoimmunotherapy for hemophagocytic lymphohistiocytosis: long-term results of the HLH-94 treatment protocol. Blood 2011;118:4577-4584)。
【００８６】
導入期間中に、重度の短期および長期の安全性の問題と関連する薬物を使用する必要性は、既に高い死亡率にさらに寄与する。本明細書において提供される組成物および方法は、より少ない毒性を伴って効能を保証する標的化治療として開発された。
【００８７】
ここ数年の間、HLHの発生におけるIFNγの中心的な役割の証拠が相次いでいる(Henter JI, Elinder G, Soder O et al. Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991;78:2918-2922; Jordan MB, Hildeman D, Kappler J, Marrack P. An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood 2004;104:735-743; Pachlopnik SJ, Ho CH, Chretien F et al. Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infected perforin- and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol.Med. 2009;1:112-124; Behrens EM, Canna SW, Slade K et al. Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-like disease in mice. J.Clin.Invest 2011;121:2264-2277; Xu XJ, Tang YM, Song H, MD, Yang SL, Xu WQ, Zhao N, Shi SW, Shen HP, Mao JQ, Zhang LY, and Pan BH, Diagnostic Accuracy of a Specific Cytokine Pattern in Hemophagocytic Lymphohistiocytosis in Children J Pediatr 2011; およびRisma K, Jordan MB. Hemophagocytic lymphohistiocytosis: updates and evolving concepts. Curr.Opin.Pediatr. 2012;24:9-15)。
【００８８】
HLHの一次型を特徴付ける遺伝子の突然変異は、全て、同じプロセスに関与するタンパク質に影響を与え、最終的に細胞傷害活性を害する。パーフォリン突然変異は、HLH患者において最初に同定された。
【００８９】
パーフォリンノックアウト(KO)マウスは、このヒト疾患についての適切なモデルと考えられる。実際に、これらのマウスは、いったんLCMVに感染すると、このヒト疾患の全ての診断的ならびに多くの臨床的および検査的特徴を示し、無治療ならば死亡する。これらの理由から、パーフォリンKOマウスは、HLHの病態生理学を研究するために使用されてきた。それらが示すHLH様病態は、CD8+ T細胞、および抗原刺激に応答して産生されるIFNγに依存する。
【００９０】
高循環レベルのIFNγが抗-IFNγ抗体の投与によって中和されると、臨床的および検査的異常が元に戻るだけでなく、生存率が劇的に改善されることが実証された。これに対して、他のサイトカインのいずれの除去も生存に対して影響を有さなかった(Jordan et al., Blood 2004; Pachlopnik et al., EMBO Mol. Med. 2009)。
【００９１】
二次性HLHの2つのモデルがNI-0501開発プログラムの状況において調べられた。1つのモデルにおいて、感染症に続発するHLHのモデルとして、健康なマウス(即ち、細胞傷害性経路の正常な遺伝的特質を伴う)において慢性的な重度の過剰刺激を模倣するために、CpGの反復投与(TLR9刺激を引き起こす)が使用された。これらのマウスは必ずしも死亡しないが、HLHの典型的な臨床的および検査的特徴を示す。IFNγが抗-IFNγ抗体の投与によって中和されると、この疾患の臨床的および検査的特徴は元に戻る。興味深いことに、このモデルにおいて、抗-IFNγ抗体の投与が、肝臓および脾臓のような関連する標的組織においてもIFNγ効果の完全な中和をもたらすことが実証された(論文準備中)。
【００９２】
リウマチ性疾患の状況において生じる二次性HLHの生理病理学を研究するために、HLHの二次型と最も頻繁に関連するリウマチ性疾患であるsJIAを有する患者において生じるものと同様に高レベルのIL-6を発現するIL-6トランスジェニックマウスを使用して、動物モデルが作製された。これらのマウスは、Toll様受容体(TLR)リガンドでトリガーされると、ヒト疾患の特徴の多くを伴って死亡する(Strippolli R, Carvallo F, Scianaro R et al. Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolonged exposure to interleukin-6 in mice: Implication for the pathogenesis of macrophage activation syndrome. Arthritis & Rheumatism 2012; 64: 1680-1688)。これらのマウスにおいて、IFNγが抗-IFNγ抗体の投与によって中和されると、生存は著しく改善され、検査パラメータは元に戻る(Prencipe G et al, 論文準備中)。
【００９３】
HLHにおけるIFNγの重要性をさらに強固にするのは、一次性HLH患者における高濃度の循環IFNγレベルである(Henter et al., Blood 1991; Xu et al., J Pedatr 2011)。HLH診断から治療および追跡までモニタリングされた一連の71人の患者において、IFNγレベルは全ての患者において正常上限値(17.3 pg/mL)を超え、特に、53.5%が1000 pg/mLを超えるレベルを有した。IFNγレベルが早期かつ急速に上昇し、HLHの有効な治療によって48時間で> 5000 pg/mLから正常へ降下し得ることも報告された。
【００９４】
最近になって、HLHの二次型を有する患者における観察研究において、高レベルのIFNγが、感染症に続発するHLHを有する患者、およびsJIAの状況において生じるHLHを有する患者の両方において実証された。IFNγによって誘導されることが公知である3つのケモカインCXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルもまた、有意に上昇した。注目すべきことに、IFNγおよび3つのIFNγケモカインのレベルは、フェリチン、血小板カウントおよびトランスアミナーゼなどの疾患重症度の検査パラメータと有意に相関することがわかった(Bracaglia et al., 論文提出)。
【００９５】
高サイトカイン血症ならびに活性化されたリンパ球および組織球による器官浸潤は、全てのHLH症状の原因であり、CD8+ T細胞活動亢進および高IFNγレベルに依存するため、IFNγの中和は論理的な治療アプローチである。実際に、CD8+ T細胞を特異的に標的化する薬剤は現在のところ入手可能でなく、IFNγの下流の個々のサイトカインの標的化は必ずしも実行可能ではないだろう。
【００９６】
従って、この疾患の病理発生におけるIFNγによって果たされる重要な役割を確認する、一次性および二次性HLHの動物モデルからの、ならびに一次性および二次性HLHの両方を有する患者においてなされた観察からのデータに基づいて、IFNγの中和は、毒性を伴わずにまたは限定的な毒性を伴って有効であるに違いないHLHについての標的化療法を開発するための確固とした論理的根拠を提供する。
【００９７】
本開示はまた、患者が上昇レベルのCXCL9を単独でまたは1つもしくは複数の追加のインターフェロンγ(IFNγ)関連バイオマーカーと組み合わせて有する障害に罹患している患者集団を同定またはそうではければ精密化することにおいて有用である組成物および方法を提供する。特に、本開示は、血球貪食性リンパ組織球症(HLH)における、二次性HLHにおける、および／またはマクロファージ活性化症候群(MAS)における、IFNγ産生についてのバイオマーカーとしてCXCL9レベルを検出するための組成物および方法を提供する。
【００９８】
動物モデルにおける多数の証拠が、一次性血球貪食性リンパ組織球症(HLH)におけるIFNγの中心的な病原性の役割を指摘している。高レベルのIFNγはまた、HLHを有するヒトにおいても見られる。高レベルのIFNγならびに3つのIFNγ関連ケモカインCXCL9、CXCL10およびCXCL11が、全身型若年性特発性関節炎(sJIA)の状況において生じる二次性HLHの一形態である活動性MASを有する患者において観察されることが以前に報告されている(例えば、Bracaglia C., Caiello I, De Graaf K., et al. Pediatric Rheumatology 2014,12(Suppl 1):O3を参照のこと)。マウスにおける間接的な証拠が、IFNγはほとんどが末梢組織において産生され、血液濃度は比較的低い可能性があることを示唆している。
【００９９】
マクロファージ活性化症候群(MAS)という用語は、慢性炎症性リウマチ性疾患の重篤で潜在的に致命的な合併症を指す。それは典型的に、全身型若年性特発性関節炎(sJIA)の状況において生じ、患者の10〜20%が疾患の経過中にこの症候群を発症する。それはまた、より稀ではあるが、全身性エリテマトーデス、川崎病、ならびに他の自己免疫および自己炎症性障害においても生じ得る。sJIAにおいて、MASは典型的に、疾患発症時を含む活動性疾患期中に生じる。感染性トリガーが患者の高い割合において同定され得る。MASの典型的な特徴としては、発熱、脾腫、出血、ならびに多臓器不全に至り得る肝臓、中枢神経系および腎臓関与の徴候が挙げられる。検査的異常としては、白血球、血小板およびヘモグロビンの減少、高トランスアミナーゼ血症、フェリチンの著しい増加、ならびに凝固系の血管内活性化についての証拠が挙げられる(Ravelli, A., et al., Macrophage activation syndrome as part of systemic juvenile idiopathic arthritis: diagnosis, genetics, pathophysiology and treatment. Genes Immun. 13(4): p. 289-98)。MASは、sJIAに起因する死の関連する割合を占める有意な罹病率および死亡率をもたらす(Minoia, F., et al., Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: a multinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(11): p. 3160-9; Hashkes, P.J., et al., Mortality outcomes in pediatric rheumatology in the US. Arthritis Rheum, 2010. 62(2): p. 599-608)。病理発生のよりよい理解は、結果的な新しい治療標的の同定および標的化療法の可能な開発と共に、MASの管理および転帰の有意な改善をもたらし得る。
【０１００】
MASは、血球貪食性リンパ組織球症(HLH)の臨床的特徴および検査的異常の大多数を共有し、実際に現在、二次性または反応性HLH(sec-HLH)に分類される(Jordan, M.B., et al., How I treat hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood, 2011. 118(15): p. 4041-52)。HLHの一次型(p-HLH)は、CD8+リンパ球およびNK細胞の不完全な細胞傷害活性に典型的に至る、PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、RAB27AおよびXIAPを含む、顆粒エキソサイトーシスに関与するタンパク質をコードする遺伝子の突然変異によって引き起こされる。現在の分類によれば、同定可能な遺伝的原因および／または家族性遺伝が存在しない場合、HLHは二次性または反応性と定義される。sec-HLHは、実証可能なトリガーが存在しない場合に、または感染症、悪性腫瘍もしくはリウマチ性疾患の状況において生じ得、後者は一般的にMASと呼ばれる。MASの発症についての遺伝的基礎は次第に解明されてきており、多数の研究が、MAS、および一般にsec-HLHと、p-HLHの同じ原因遺伝子の低浸透度変異または突然変異についてのヘテロ接合との関連性を指摘している(Kaufman, K.M., et al., Whole-exome sequencing reveals overlap between macrophage activation syndrome in systemic juvenile idiopathic arthritis and familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(12): p. 3486-95; Vastert, S.J., et al., Mutations in the perforin gene can be linked to macrophage activation syndrome in patients with systemic onset juvenile idiopathic arthritis. Rheumatology (Oxford), 2010. 49(3): p. 441-9.; Zhang, K., et al., Macrophage activation syndrome in patients with systemic juvenile idiopathic arthritis is associated with MUNC13-4 polymorphisms. Arthritis Rheum, 2008. 58(9): p. 2892-6; およびZhang, M., et al., Genetic defects in cytolysis in macrophage activation syndrome. Curr Rheumatol Rep, 2014. 16(9): p. 439; およびBracaglia C, Sieni E, Da Ros M, et al. Mutations of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis (FHL) related genes and abnormalities of cytotoxicity function tests in patients with macrophage activation syndrome (MAS) occurring in systemic juvenile idiopathic arthritis (sJIA). Pediatric Rheumatology 2014, 12(Suppl 1):P53)。p-HLHとMASとの間の遺伝的背景におけるこれらの類似性は共通の病理発生機構をさらに支持する。
【０１０１】
p-HLHを有する患者における、ならびにp-HLHのマウスモデルにおける研究は、不完全な細胞傷害活性および抗原提示細胞(APC)-CD8+ T細胞クロストークにおける異常が免疫反応の不完全なサイレンシングおよび異常なT細胞活性化をもたらすという仮説を支持している。これは、制御されない免疫活性化ならびにTリンパ球およびマクロファージによる炎症性サイトカイン産生をもたらし、臓器損傷に至る。パーフォリンおよびRab27欠損マウスにおいて行われたp-HLHの動物モデルにおける研究は、活性化CD8+ T細胞によって産生されるインターフェロン-ガンマ(IFNγ)の重要な役割を指摘している。パーフォリン欠損マウスにおいて、IFNγの中和は、生化学的および血液学的異常の逆転を伴って、そうでなければ致死的な症候群の生存をもたらす(Jordan, M.B., et al., An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood, 2004. 104(3): p. 735-43; Pachlopnik Schmid, J., et al., Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infected perforin- and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol Med, 2009. 1(2): p. 112-24)。Rab27欠損マウス（疾患は死に至らない）において、IFNγの中和は、中枢神経系を含めて、末梢器官の関与の著しい改善を引き起こす(Pachlopnik 2009)。高循環IFNγレベルはまた、HLH 2004診断ガイドラインに従って診断されたHLHを有する患者において見られ(My, L.T., et al., Comprehensive analyses and characterization of haemophagocytic lymphohistiocytosis in Vietnamese children. Br J Haematol, 2010. 148(2): p. 301-10; Takada, H., et al., Increased serum levels of interferon-gamma-inducible protein 10 and monokine induced by gamma interferon in patients with haemophagocytic lymphohistiocytosis. Clin Exp Immunol, 2003. 133(3): p. 448-53; Tang, Y., et al., Early diagnostic and prognostic significance of a specific Th1/Th2 cytokine pattern in children with haemophagocytic syndrome. Br J Haematol, 2008. 143(1): p. 84-91; Xu, X.J., et al., Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J Pediatr, 2012. 160(6): p. 984-90 e1.)、従って、必ずしも遺伝子突然変異の存在に基づかない。これらの研究は、実証可能な遺伝的原因を伴わない、可変であるが有意な割合の患者を含んでいたことに、注目すべきである(同書)。
【０１０２】
本明細書において提供される研究は、IFNγインビボ産生のバイオマーカーを探し出すために、活動性MASを有する患者における、IFNγおよび3つのIFNγ関連ケモカインの血清レベルと、それらとの、および疾患活動性の検査パラメータとの相関性を評価するように設計された。特に、IFNγ、CXCL9、CXCL10、CXCL11およびIL-6の循環レベルを、sJIAを有する患者において測定し、患者の約37%(54人中20人)がサンプリング時にMASを有した。IFNγのレベルとCXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルとの相関性を評価したように、循環レベルと疾患活動性パラメータとの関係も評価した。いくつかの態様において、バイオマーカーは、薬力学的バイオマーカーとして有用である、全IFNγレベルである。
【０１０３】
本明細書において実証されるように、IFNγならびに3つのIFNγ関連ケモカインCXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルは、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAと比較して活動性MASにおいて有意に上昇した。活動性MASにおいて、フェリチン、好中球、血小板、アラニンアミノトランスフェラーゼおよび乳酸デヒドロゲナーゼのような、疾患重症度の検査パラメータは、IFNγおよびCXCL9と有意に相関し、より少ない程度にCXCL10およびCXCL11と相関し；IL-6レベルとの相関性は見られなかった。MASを伴わない活動性sJIAを有する患者において、検査パラメータとサイトカインレベルとの間で有意な相関性はなかった。活動性MASにおいて、IFNγレベルは、CXCL9のレベルと有意に相関し、より少ない程度にCXCL10のレベルと相関し、CXCL11のレベルと相関しなかった。
【０１０４】
活動性MASを有する患者中に存在する高レベルのIFNγおよびCXCL9は、疾患重症度の検査パラメータと有意に相関する。活動性MASを有する患者において、IFNγおよびCXCL9は密接に相関している。CXCL9はIFNγによってのみ誘導され他のインターフェロンによっては誘導されないことが示されているため(例えば、Groom J.R. and Luster A.D. Immunol Cell Biol 2011, Feb;89(2):207-15を参照のこと)、本明細書に開示される知見は、CXCL9がMASにおけるIFNγ産生のバイオマーカーであることを実証する。
【０１０５】
本明細書において提供される研究はまた、IFNγならびにケモカイン(C-X-Cモチーフ)リガンド9(CXCL9)、CXL10およびCXCL11（IFNγによって誘導されることが公知である3つのケモカイン）のレベルが、MAS併発sJIAを有する患者において上昇するが、MASを伴わない活動性sJIAを有する患者においては上昇しないことを実証する。さらに、これらの患者において、IFNγ、CXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルは疾患重症度の検査パラメータと相関した。
【０１０６】
本発明の中和抗-IFNγ抗体は、例えば、下記表1Aに示される重鎖相補性決定領域(CDR)、表1Bに示される軽鎖CDR、およびそれらの組み合わせを含む。Chothiaら, 1989、E.A. Kabatら, 1991によって定義される相補性決定領域(CDR)を包含するアミノ酸を、下記において下線付きのイタリック体のテキストで強調する。(Chothia, C, et al., Nature 342:877-883 (1989); Kabat, EA, et al., Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991)を参照のこと)。
【０１０７】
（表１Ａ）IFNγに結合しこれを中和する抗体クローンからのVH CDR配列
2018515493.tif 000016
【０１０８】
（表１Ｂ）IFNγに結合しこれを中和する抗体クローンからのVL CDR配列
2018515493.tif 000017
【０１０９】
本発明の例示的な抗体としては、例えば、PCT公開公報第WO 2006/109191号に記載される抗-IFNγ抗体が挙げられ、この内容は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
【０１１０】
本発明の例示的な抗体としては、例えば、ヒトIFNγに結合する、本明細書においてNI-0501と呼ばれる抗体が挙げられる。NI-0501抗体の重鎖、軽鎖、可変重(VH)鎖、および可変軽(VL)鎖配列を下に示し、VHおよびVLアミノ酸配列においてCDR配列に下線を付す。
2018515493.tif 000018
2018515493.tif 000019
【０１１１】
好適な抗-IFNγ抗体としては、米国特許第7,700,098号に記載される抗体が挙げられ、これは参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。いくつかの例示的な抗体としては、ARC1.2R3P2_A6 (「A6」)、ARC1.2R3P2_B4 (「B4」)、ARC1.2R3P2_B9 (「B9」)、ARC1.2R3P2_C9 (「C9」)、ARC1.2R3P2_C10 (「C10」)、ARC1.2R3P2_D3 (「D3」)、ARC1.2R3P2_D6 (「D6」)、ARC1.2R3P2_D8 (「D8」)、ARC1.2R3P2_E1 (「E1」)、ARC1.2R3P2_F8 (「F8」)、ARC1.2R3P2_F9 (「F9」)、ARC1.2R3P2_G7 (「G7」)、ARC1.2R3P2_G9 (「G9」)、およびARC1.2R3P2_G10 (「G10」)とその中において呼ばれる抗体が挙げられる。
【０１１２】
これら抗体の配列を下に示す。
2018515493.tif 000020
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【０１１３】
いくつかの態様において、IFNγ抗体はIgGアイソタイプにフォーマットされる。いくつかの態様において、IFNγ抗体はIgG1アイソタイプにフォーマットされる。
【０１１４】
いくつかの態様において、本発明のIFNγ抗体は、ヒトおよび／またはカニクイザルIFNγに特異的に結合し、ここで、抗体は、NI-0501抗体、A6抗体、B4抗体、B9抗体、C9抗体、C10抗体、D3抗体、D6抗体、D8抗体、E1抗体、F8抗体、F9抗体、G7抗体、G9抗体、および／またはG10抗体と同じエピトープへ結合する。
【０１１５】
定義：
本発明に関して用いられる、科学用語および専門用語は、別途定義されない限り、当業者により通常理解される意味を有する。さらに、文脈によってそうでないことが要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。一般的に、本明細書中に記載される、細胞培養および組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質化学およびオリゴヌクレオチド化学またはポリヌクレオチド化学ならびにハイブリダイゼーションに関して利用される命名法、およびこれらの技術は、当技術分野において周知の、通常用いられるものである。標準的な技術が、組換えDNA、オリゴヌクレオチドの合成、および組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）のために用いられる。酵素反応および精製技術は、製造元の仕様書に従って、または当技術分野において通常達成されるようにまたは本明細書中に記載されるように行われる。上記の技術および手順は、一般的に、当技術分野において周知の通常の方法に従って、ならびに、本明細書を通じて引用および議論される様々な一般的およびより詳細な参考文献に記載される通り行われる。例えば、Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)を参照のこと)。本明細書中で記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学および薬化学に関して利用される命名法、ならびにこれらの検査手順および技術は、当技術分野において周知の通常用いられるものである。標準的な技術が、化学合成、化学分析、薬の調製、処方および送達、ならびに患者の治療のために用いられる。
【０１１６】
抗-IFNγ抗体の投与
本発明に従う治療的実体の投与は、好適な担体、賦形剤および他の薬剤と共に投与されることが、認識される。上記他の薬剤は、改良された転移、送達、耐性などを提供するための製剤中へ組み込まれる。多数の適切な製剤が、全ての製薬化学者に公知の処方書中に見出され得る：Remington’s Pharmaceutical Sciences (15th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1975))、特にその中のBlaug, Seymourによる第87章。これらの製剤としては、例えば、散剤、パスタ、軟膏剤、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）含有小胞(例えばLipofectin（商標）)、DNA結合体、無水吸収性ペースト、水中油型エマルジョンおよび油中水型エマルジョン、エマルジョンカルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、およびカルボワックスを含む半固体混合物が挙げられる。製剤における活性成分が製剤により不活性化されず、製剤が投与経路に対して生理的に適合であり、耐性であるという条件で、任意の上記混合物が、本発明に従う治療および療法において適切であり得る。Baldrick P. ‘‘Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance.” Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. “Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals.” Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60 (2000), Charman WN “Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery- some emerging concepts.” J Pharm Sci. 89(8):967-78 (2000), Powell et al. “Compendium of excipients for parenteral formulations” PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)、ならびにその中における引用文献も、製薬化学者に周知の製剤、賦形剤および担体に関係するさらなる情報について参照のこと。
【０１１７】
治療の有効性は、特定の免疫関連障害を診断または治療するための任意の公知の方法を伴って決定される。免疫関連障害の1つまたは複数の症状の緩和は、抗体が臨床的利点を与えることを示す。
【０１１８】
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体を含む本発明の抗体は、治療剤として使用され得る。そのような薬剤は一般に、対象中の所定の標的の異常な発現または活性化と関連する疾患または病態を治療または予防するために用いられるだろう。抗体調製物、好ましくはその標的抗原に高特異性および高親和性を有するものが対象へ投与され、一般に標的とのその結合に起因して効果を有する。抗体の投与は、標的のシグナル伝達機能を阻止もしくは阻害し得るかまたはこれに干渉し得る。抗体の投与は、標的が天然に結合する内因性リガンドとの標的の結合を阻止もしくは阻害し得るかまたはこれに干渉し得る。
【０１１９】
本発明の抗体の治療有効量は一般に、治療目的を達成するために必要な量に関する。上述したように、これは、標的の機能に干渉する場合のある、抗体とその標的抗原との結合相互作用であり得る。投与に要求される量はさらに、その特異的抗原についての抗体の結合親和性に依存し、また、抗体が投与された対象の自由体積から抗体が消散する速度にも依存する。本発明の抗体または抗体断片の治療有効投薬量についての一般的な範囲は、非限定的な例として、約0.1 mg/kg体重〜約50 mg/kg体重であり得る。一般的な投薬頻度は、例えば1日2回から週1回までの範囲であり得る。
【０１２０】
本発明の抗体またはその断片は、薬学的組成物の形態で様々な疾患および障害を治療するために投与することができる。そのような組成物の調製に関わる原理および考慮事項、ならびに構成要素の選択における指針は、例えば、Remington: The Science And Practice Of Pharmacy 19th ed. (Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995; Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994; およびPeptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New Yorkに提供されている。
【０１２１】
製剤はまた、治療される特定の適応症のために必要に応じて1つを超える活性化合物、例えば、抗-IFNγアンタゴニスト、好ましくは、互いに悪影響を与えない相補的な活性を有するものを含有することができる。あるいは、またはさらに、組成物は、その機能を増強する薬剤、例えば、細胞傷害性剤、サイトカイン、化学療法剤、または増殖阻害剤などを含むことができる。そのような分子は、意図される目的に有効である量で、組み合わせて適切に存在する。
【０１２２】
一態様において、活性化合物、例えば、抗-IFNγアンタゴニストは、併用療法で、即ち、病理学的な状態または障害を治療するために有用である1つまたは複数の追加の薬剤と組み合わせて投与される。この文脈における用語「組み合わせて」は、薬剤が実質的に同時期に、同時にまたは逐次的に与えられることを意味する。逐次的に与えられる場合、第2の化合物の投与の開始時に、2つの化合物の第1のものは、好ましくは、治療の部位で有効濃度にて依然として検出可能である。
【０１２３】
例えば、併用療法は、以下により詳細に記載されるように、1つまたは複数の追加の治療剤、例えば、1つまたは複数のサイトカインおよび増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、ならびに／または細胞傷害性もしくは細胞増殖抑制剤と同時製剤化および／または同時投与される本発明の1つまたは複数の中和抗-IFNγ抗体を含むことができる。そのような併用療法は、有利なことには、より低い投薬量の治療剤を投与し、従って、様々な単剤療法に関連する可能性がある毒性または合併症を回避しうる。
【０１２４】
抗体断片を使用する場合、標的タンパク質の結合性ドメインへ特異的に結合する最小の阻害断片、および／またはIFNγシグナル伝達に干渉するかまたはそうでなければ拮抗する最小の阻害断片が好ましい。例えば、抗体の可変領域の配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子を設計することができる。そのようなペプチドは、化学的に合成し、かつ／または組換えDNA技術によって産生することができる(例えば、Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993)を参照のこと)。製剤はまた、治療される特定の適応症のために必要に応じて1つを超える活性化合物、好ましくは、互いに悪影響を与えない相補的な活性を有するものを含有することができる。あるいは、またはさらに、組成物は、その機能を増強する薬剤、例えば、細胞傷害性剤、サイトカイン、化学療法剤、または増殖阻害剤などを含むことができる。そのような分子は、意図する目的に有効な量で組み合わせて適切に存在する。
【０１２５】
CXCL9および他のバイオマーカーのレベルは、様々な標準的な検出技法のいずれかを使用して検出される。試料中の所与の標的（またはそのタンパク質断片）の存在を検出するために検出剤を使用することができる。いくつかの態様において、検出剤は、検出可能な標識を含有する。いくつかの態様において、検出剤は、抗体（もしくはその断片）またはプローブである。いくつかの態様において、薬剤またはプローブは標識されている。用語「標識」は、プローブまたは抗体に関して、プローブまたは抗体への検出可能な物質のカップリング（即ち、物理的連結）によるプローブまたは抗体の直接標識、および直接標識されている別の試薬との反応性によるプローブまたは抗体の間接標識を包含するように意図される。間接標識の例としては、蛍光標識二次抗体を使用した一次抗体の検出、およびDNAプローブが蛍光標識ストレプトアビジンで検出され得るようなビオチンを用いたDNAプローブの末端標識が挙げられる。
【０１２６】
用語「生体試料」は、対象から単離された組織、細胞、および生体液、ならびに対象内に存在する組織、細胞、および流体を含むように意図される。従って、血液、および血清、血漿、またはリンパ液を含む血液の画分または構成要素が、用語「生体試料」の使用の範囲内に含まれる。体液は、これらに限定されないが、例えば、血液、血漿、血清、滑液、尿、痰、脊髄液、脳脊髄液、胸膜液、気道、腸管、および尿生殖路の流体、唾液、臓器系内流体、腹水、腫瘍嚢胞液、羊水、ならびにこれらの組み合わせを含む、対象の体内のどこか、好ましくは末梢位置から単離された流体であり得る。生体試料には、前述の流体の全ての実験的に分離された画分も含まれる。生体試料には、均質化された固体材料、例えば、糞便、組織、および生検試料を含有する溶液または混合物も含まれる。本発明の検出法は、インビトロおよびインビボで生体試料中の分析物mRNA、タンパク質、またはゲノムDNAを検出するために使用することができる。例えば、分析物mRNAを検出するためのインビトロ技法としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。分析物タンパク質を検出するためのインビトロ技法としては、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)、ウエスタンブロット、免疫沈降、および免疫蛍光が挙げられる。分析物ゲノムDNAを検出するためのインビトロ技法としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられる。イムノアッセイを行うための手順は、例えば、“ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology”, Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995; “Immunoassay”, E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996; および“Practice and Theory of Enzyme Immunoassays”, P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985に記載されている。さらに、分析物タンパク質を検出するためのインビボ技法としては、標識された抗-分析物タンパク質抗体を対象中へ導入することが挙げられる。例えば、抗体を放射性マーカーで標識することができ、対象中のその存在および位置を標準的なイメージング技法によって検出することができる。
【０１２７】
組成物および方法は、異常なIFNγ発現および／または活性を含む、インターフェロン-ガンマ(IFNγ)発現および／または活性と関連する様々な障害のいずれかの治療において有用である。本開示の組成物および方法は、血球貪食性リンパ組織球症(HLH)の治療において有用である。HLHは、極端な炎症(発熱、脾腫、血球減少症、凝固障害)の臨床的徴候および症状によって特徴付けられる、稀で、深刻でありかつ生命を脅かす、病的な免疫活性化の疾患であり、異常な免疫媒介病態の発症に至り、これは、組織損傷を通して、最終的に多臓器不全および死を引き起こし得る(Henter JI, Elinder G, Soder O, Hansson M, et al: Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991, 78:2918-2922)。HLHは一次性(遺伝性/家族性)HLHおよび二次性HLHを含む。
【０１２８】
一次性HLHは、多くは乳児期および幼児期において見られる、不均一な常染色体劣性疾患であり、欧州における有病率は1/50,000出生数と推定される(Janka GE: Familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Eur. J. Pediatr. 1983, 140:221-230)。この疾患は、無治療ならば、症状の発症後2ヶ月未満の生存期間中央値を伴って常に致命的である(Filipovich AH: Hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH) and related disorders. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2009:127-131)。
【０１２９】
一次性HHLにおける遺伝的欠陥は全て、パーフォリン合成、細胞溶解性顆粒成熟、顆粒エキソサイトーシスおよび放出顆粒エキソサイトーシスまたは機能のためのタンパク質をコードする、活性化マクロファージを排除するために必要とされるNK細胞および／または細胞傷害性リンパ球の細胞傷害性経路に関与する遺伝子に影響を与える(Filipovich, A., K. McClain, and A. Grom. 2010. Histiocytic disorders: recent insights into pathophysiology and practical guidelines. Biol. Blood Marrow Transplant. 16(1 Suppl):S82-S89)。一次性HLH患者の約20〜40%において、HLH症候群を特徴付ける細胞傷害機能障害は、T細胞およびナチュラルキラー細胞媒介細胞溶解10についての重要な調節因子である細胞傷害性顆粒の細胞傷害性タンパク質であるパーフォリンをコードする遺伝子(PRF1)における突然変異に起因する。患者の約10%において、この疾患は、標的細胞中へのパーフォリンの放出に関与するタンパク質をコードするUNC13D遺伝子における突然変異によって引き起こされる。さらに、いくつかの免疫不全症候群、例えば、Griscelli症候群2型(GS-2)およびChediak-Higashi症候群(CHS)は、頻繁にHLHを示す(Janka GE, Lehmberg K: Hemophagocytic lymphohistiocytosis: pathogenesis and treatment. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2013, 2013:605-611)。
【０１３０】
HLHの二次型は、感染症、自己免疫／リウマチ性疾患の経過中にまたは悪性腫瘍に関連して生じ得る。二次型は一次性HLHと同じ徴候および症状を示し、等しく重篤であり得る。
【０１３１】
本開示の組成物および方法は、二次性HLHの治療において有用である。本開示の組成物および方法は、マクロファージ活性化症候群(MAS)の治療において有用である。
【０１３２】
MASは、Tリンパ球およびマクロファージの過剰な活性化および拡大によって引き起こされるリウマチ性疾患の重篤な、潜在的に生命を脅かす合併症である。これらの免疫細胞の制御されない拡大は、著しい高サイトカイン血症、ならびに発熱、血球減少症、肝脾腫、肝機能障害、凝固異常および高フェリチン血症を伴う高炎症状態をもたらし、多臓器不全および死へ進行し得る(Schulert GS, Grom AA: Pathogenesis of macrophage activation syndrome and potential for cytokine- directed therapies. Annu. Rev. Med. 2015, 66:145-159)。
【０１３３】
MASは、HLHとのその強い臨床的および病理学的な類似性のため、HLHの二次性または後天性形態に分類される。実際に、MASを有する患者の大多数が、損なわれたNKおよびパーフォリン機能テストを有すること、ならびにかなりの数のMAS患者が、PRF1およびUNC13Dの多型性またはヘテロ接合突然変異を示すことが最近実証された(Zhang M, Behrens EM, Atkinson TP, Shakoory B, et al: Genetic defects in cytolysis in macrophage activation syndrome. Curr Rheumatol Rep 2014, 16:439)。
【０１３４】
MASは、最も頻繁にはsJIAを有する患者において、より稀には全身性エリテマトーデス(SLE)を有する患者において生じ、より稀ではあるが、脈管炎、特に川崎病を有する患者においても記載されている。SJIAを有する患者のおよそ7〜17%が顕性MASを発症し(Sawhney S, Woo P, Murray KJ: Macrophage activation syndrome: a potentially fatal complication of rheumatic disorders. Arch. Dis. Child. 2001, 85:421-426; Moradinejad MH, Ziaee V: The incidence of macrophage activation syndrome in children with rheumatic disorders. Minerva Pediatr. 2011, 63:459-466)、いくつかの証拠は、無症状性のMASが、活動性全身性疾患を有する患者の3分の1もの患者において見られ得ることを示唆している(Behrens EM, Beukelman T, Paessler M, Cron RQ: Occult macrophage activation syndrome in patients with systemic juvenile idiopathic arthritis. J. Rheumatol. 2007, 34:1133-1138)。
【０１３５】
MASは致命的となる可能性があるため、適時の診断および即時の治療介入が、この疾患の適切な管理のために必須である。報告されたMASの死亡率は20〜30%に達し、小児リウマチ学における主な死亡原因のままである(Grom AA, Horne A, De Benedetti F: Macrophage activation syndrome in the era of biologic therapy. Nat Rev Rheumatol. 2016 Mar 24. doi: 10.1038/nrrheum.2015.179)。
【０１３６】
異なる基準セットが、sJIAを有する患者におけるMASの診断のために提案されている。HLHの一次性(遺伝性)形態について初めに開発されたHLH-2004診断ガイドライン(Henter J, Horne A, Arico M, Egeler RM, et al: HLH-2004: Diagnostic and therapeutic guidelines for hemophagocytic lymphohistiocytosis. Pediatr Blood Cancer 2007, 48:124-131)が推奨された時期もあった。しかし、それらはいくつかの制限を提示し、sJIAを有する患者には当てはまらない場合がある。例えば、HLH-2004によって要求される閾値未満の血球減少症および低フィブリノーゲン血症のような基準は、これら患者が、sJIA炎症反応の一部として、増加した白血球および血小板カウントならびに上昇した血清レベルのフィブリノーゲンを有することが多いことから、MASの後期においてのみ明白となる(Schulert GS, Grom AA: Pathogenesis of macrophage activation syndrome and potential for cytokine- directed therapies. Annu. Rev. Med. 2015, 66:145-159)。血球貪食は、MASを示す患者のかなりの割合において存在しない場合がある(Minoia F, Davi S, Horne A, Demirkaya E, et al: Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: a multinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:3160-3169)。さらに、血球貪食、NK細胞活性およびsCD25は、MASの状況においてルーチン的に評価されない。
【０１３７】
代替アプローチは、sJIA1の炎症期（flare）を有する患者の群と比較しての、MASを有する患者のコホートの分析を通して作成された、MAS併発sJIAについての予備診断ガイドライン(PDG)の適用に基づく。
【０１３８】
最近になって、HLH-2004診断ガイドラインおよびsJIA関連MASについての予備診断ガイドラインが、大きな患者集団においてsJIA/MASとsJIA(MASなし)および全身性感染症とを識別するそれらの能力について比較された(Davi S, Minoia F, Pistorio A, Horne A, et al: Performance of current guidelines for diagnosis of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:2871-2880)。その後向き（retrospective）の性質に起因していくつかの制限を伴うが、この研究は、予備MASガイドラインが、感度および特異性の間の最良のバランス、ならびに主治医によって行われる診断との最良の一致を達成することを示すようである。HLH-2004基準セットの感度は<30%であった。いずれにせよ、PDGの各基準を満たす患者の割合には大きな開きがあり、いくつかの臨床的特徴(例えば、CNS機能不全および出血)はMASの後期に現れ、初期MASにおけるそれらの感度は低い可能性が報告された(Lehmberg K, Pink I, Eulenburg C, Beutel K, et al: Differentiating macrophage activation syndrome in systemic juvenile idiopathic arthritis from other forms of hemophagocytic lymphohistiocytosis. The Journal of pediatrics 2013, 162:1245-1251)。
【０１３９】
さらに最近になって、診断スコア(HScore)が開発され、312人の患者の後向きコホートにおいて検証され、これらの患者のうち162人が反応性血球貪食症候群を有すると判断された(Fardet L, Galicier L, Lambotte O, Marzac C, Aumont C, Chahwan D, Coppo P, Hejblum G: Development and validation of the HScore, a score for the diagnosis of reactive hemophagocytic syndrome. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:2613-2620)。9つの変数（3つの臨床的［即ち、公知の基礎をなす免疫抑制、高体温、臓器肥大］、5つの生物学的［即ち、トリグリセリド、フェリチン、血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ、フィブリノーゲンレベル、および血球減少症］、ならびに1つの細胞学的［即ち、骨髄穿刺液の血球貪食特徴］）が、HScoreにおいて保持され、血球貪食症候群を有する確率は、≦90のHScoreで<1%から、≧250のHScoreで>99%までの範囲であった。
【０１４０】
MASについての有効な診断基準に対する最終的合意が達成されるまで、熟練医による臨床診断が、MASと、SJIAの炎症期または敗血症様症候群のような重複する特徴を示す状態とを識別するための課題において依然として重要である。
【０１４１】
現在、MASの治療についての承認薬はない。通常、高用量糖質コルチコイドが、MASについての第一選択治療である。糖質コルチコイドに応答しない患者において、シクロスポリンA(CsA)が追加の治療として提案された(Stephan JL, Kone-Paut I, Galambrun C, Mouy R, Bader-Meunier B, Prieur AM: Reactive haemophagocytic syndrome in children with inflammatory disorders. A retrospective study of 24 patients. Rheumatology (Oxford, England) 2001, 40:1285-1292)。
【０１４２】
pHLHを治療するために開発されたHLH-94治療プロトコルの一部である、エトポシドの投与も、高用量糖質コルチコイドで失敗する患者において考慮される。しかしながら、薬物の潜在的な毒性が大きな懸念のままである。他の現在の第一選択HLH治療はデキサメタゾンを含む。しかしながら、エトポシドおよび／またはデキサメタゾンのような治療は、骨髄抑制性および／または広範に免疫抑制性である。現在、第二選択HLH治療についての標準治療はなく、アレムツズマブ／ATGのような治療は極めて免疫抑制性であり、生存はこれらの治療では非常に不十分であると考えられる。
【０１４３】
MASの治療におけるIL-1、IL-6RまたはTNFα経路を阻害する生物製剤の有用性は、依然として不明瞭なままである。これらの経路を阻害する生物製剤は孤立した症例において有効であると報告されたが、これら治療の状況においてMASを発症する患者(Stern A, Riley R, Buckley L: Worsening of macrophage activation syndrome in a patient with adult onset Still's disease after initiation of etanercept therapy. J Clin Rheumatol 2001, 7:252-256; Ramanan AV, Schneider R: Macrophage activation syndrome following initiation of etanercept in a child with systemic onset juvenile rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 2003, 30:401-403; De Benedetti F, Brunner HI, Ruperto N, Kenwright A, et al: Randomized trial of tocilizumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N. Engl. J. Med. 2012, 367:2385-2395; Ruperto N, Brunner HI, Quartier P, Constantin T, et al: Two randomized trials of canakinumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N. Engl. J. Med. 2012, 367:2396-2406)、ならびにこれらの治療に応答しない患者の報告もあり、これは、IL-1、IL-6RまたはTNFαの阻害は、MAS発症からの完全な保護も、末期（full blown）症候群の効果的な治療も、提供しないことを示している。
【０１４４】
大規模な後向き多施設研究により、合計362人の患者におけるMAS/sJIAの臨床的、検査的および組織病理学的特徴ならびに現在の治療および転帰が調べられた(Minoia F, Davi S, Horne A, Demirkaya E, et al: Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: a multinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:3160-3169)。患者のおよそ半分において、活動性sJIAの状況において、またはsJIA炎症期中にMASが生じ、これら患者の30%は疾患発症時であった。感染性トリガーが患者の3分の1において同定された。感染症のタイプが報告された24人の患者のうち、EBVが最も一般的な原因因子であった(25%)。11人の患者(3.8%)において、MASは治療副作用に関係すると考えられた：これらのうちの8人が、IL-6(N=4)、IL-1(N=3)またはTNFα(N=1)経路を標的化する生物剤を伴った。ほぼ全ての患者が糖質コルチコイドを与えられた。シクロスポリン、生物剤およびエトポシドが、それぞれ患者の61%、15%および12%へ与えられた。
【０１４５】
従って、MASについての有効な治療レジメンの同定は、満たされていない高い医学的必要性の領域である。sJIAおよびMASを有する患者の50%超が、全身性糖質コルチコイド単独には応答しないか、または有意な罹病率を伴う高用量での長期間の治療を必要とし得る。患者が糖質コルチコイドに応答しない場合、CsAまたはエトポシドのような追加の治療の有効性についての十分な証拠に基づくデータは入手可能ではない。MASの経過は、急速に不可逆となり、致命的な転帰に至り得る。現在のデータは、sJIA関連MASの死亡率は8%であり、患者の約3分の1はICU入院を必要とすることを示唆している。この疾患の病理発生におけるIFNγの中心的な役割についての最近の知見は、IFNγ遮断が新規の治療標的となる可能性があることを示唆している。
【０１４６】
本開示の組成物（NI-0501組成物を含む）および方法は、一次性および二次性HLHについての現在の療法よりも有利である。
【０１４７】
MASおよびHLHは、持続的な免疫細胞活性化、ならびにIFNγ、TNFα、IL-1およびIL-6の過剰産生を伴う、炎症性サイトカインの付随するサイトカインストームによって特徴付けられる(Henter JI, Elinder G, Soder O, Hansson M, et al: Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991, 78:2918-2922; Imashuku S, Hibi S, Fujiwara F, Todo S: Hyper-interleukin (IL)-6-naemia in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996, 93:803-807; Xu X, Tang Y, Song H, Yang S, et al: Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J. Pediatr. 2012, 160:984-90.e1; Put K, Avau A, Brisse E, Mitera T, et al: Cytokines in systemic juvenile idiopathic arthritis and haemophagocytic lymphohistiocytosis: tipping the balance between interleukin-18 and interferon-γ. Rheumatology (Oxford) 2015)。ここ数年の間、HLH(Jordan MB, Hildeman D, Kappler J, Marrack P: An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood 2004, 104:735-743; Pachlopnik Schmid J, Ho C, Chretien F, Lefebvre JM, et al: Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infected perforin- and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol Med 2009, 1:112-124; Zoller EE, Lykens JE, Terrell CE, Aliberti J, et al: Hemophagocytosis causes a consumptive anemia of inflammation. J. Exp. Med. 2011, 208:1203-1214)およびMAS(Behrens EM, Canna SW, Slade K, Rao S, et al: Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-like disease in mice. J. Clin. Invest. 2011, 121:2264-2277)の両方の発症におけるIFNγの中心的な役割を支持する証拠が蓄積している。
【０１４８】
一次性HLHについて、パーフォリンノックアウトマウスは、いったんLCMVに感染すると、このヒト疾患の全ての診断的ならびに多くの臨床的および検査的特徴を示すため、適切なモデルであると考えられる。それらが示すHLH様疾患は、CD8+ T細胞、および抗原刺激に応答して産生されるIFNγに依存する(Imashuku S, Hibi S, Fujiwara F, Todo S: Hyper-interleukin (IL)-6-naemia in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996, 93:803-807)。高循環レベルのIFNγが抗-IFNγ抗体の投与によって中和されると、臨床的および検査的異常が元に戻るだけでなく、生存率が劇的に改善されることが実証された。これに対して、多くの他のサイトカインの除去は生存に対して影響がなかった(Imashuku S, Hibi S, Fujiwara F, Todo S: Hyper-interleukin (IL)-6-naemia in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996, 93:803-807; Xu X, Tang Y, Song H, Yang S, et al: Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J. Pediatr. 2012, 160:984-90.e1)。HLHにおけるIFNγの重要性をさらに強固にするのは、これらの患者において見られる高濃度の循環IFNγレベルである(Henter JI, Elinder G, Soder O, Hansson M, et al: Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991, 78:2918-2922; Xu X, Tang Y, Song H, Yang S, et al: Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J. Pediatr. 2012, 160:984-90.e1)。HLH診断から治療および追跡までモニタリングされた一連の71人の患者において、IFNγレベルは全ての患者において正常上限値(17.3 pg/mL)を超え、特に、53.5%が1000 pg/mLを超えるレベルを有した。IFNγレベルが早期かつ急速に上昇し、HLHの有効な治療によって48時間で> 5000 pg/mLから正常へ降下し得ることも報告された。
【０１４９】
二次性HLHの2つの動物モデルが、IFNγの潜在的な病原性の役割を解明するために、NI-0501開発プログラムの状況において調べられた。第一に、感染によって駆動されるHLHを模倣するマウスモデルにおいて、CpGの反復投与は、TLR9の活性化を介して、高サイトカイン血症を引き起こし、これは、HLH33の臨床的(例えば、体重減少、脾腫)および検査的(例えば、血球減少症、高フェリチン血症)特徴をもたらした。IFNγが抗-IFNγ抗体の投与によって中和されると、この疾患の臨床的および検査的特徴は元に戻った。IFNγの中和は、肝臓および脾臓のような関連する標的組織においても完全であることが示された。興味深いことに、抗-IFNγ抗体の投与は、血液中において測定されたものよりも500〜2,000倍高いIFNγの量を明らかにし、組織中におけるIFNγ産生をよりよく反映する可能性が高かった。2つのIFNγ誘導性ケモカイン(CXCL9およびCXCL10)は、血液中および肝臓中の両方においてTLR9刺激後にアップレギュレートされ、IFNγの血清レベルとCXCL9およびCXCL10血清濃度との間で、有意な相関性が観察された。IFNγの中和は、血清CXCL9およびCXCL10の、ならびに肝臓中のそれらのmRNAレベルの、有意な減少を誘導した(Buatois V, Chatel L, Cons L, Lory S, et al: IFNγ drives disease in the TLR9-mediated secondary HLH in mice: rationale for a new therapeutic target in secondary HLH, 準備中)。
【０１５０】
第二に、高レベルのIL-6を発現するIL-6トランスジェニックマウスの動物モデルが、HLHの二次型と最も頻繁に関連するリウマチ性疾患であるsJIAを有する患者の状態を模倣するため、研究された。Toll様受容体(TLR)リガンドでトリガーすると、致死率の増加、炎症性サイトカイン産生の増加、および炎症性シグナル伝達経路の過剰活性化が観察された。さらに、これらのマウスは、血小板および好中球カウントの低下、sCD25、フェリチンおよびLDHレベルの増加を示し、MASを有する患者において典型的に存在する特徴の多くと類似していた(Strippoli R, Carvello F, Scianaro R, De Pasquale L, et al: Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolonged exposure to interleukin-6 in mice: implication for the pathogenesis of macrophage activation syndrome. Arthritis Rheum. 2012, 64:1680-1688)。これらのマウスにおいて、IFNγが抗-IFNγ抗体の投与によって中和されると、生存は著しく改善され、検査パラメータは元に戻る(Prencipe G et al, 論文準備中)。
【０１５１】
同様の証拠が、感染症に続発するかもしくは未知の起源のHLHの二次型を有するか(正常な細胞傷害活性、pHLHを引き起こす公知の遺伝子における突然変異の欠如、および家族歴の欠如によってpHLHは除外されている)、またはsJIAの状況において生じるMASを有する患者において行われた観察研究において、最近になって集められている。
【０１５２】
二次性HLHを有する患者14人(患者のうちの7人において、基礎をなす感染症が同定可能であった)において、血清試料を活動性末期疾患中および疾患寛解中に分析した。IFNγ、CXCL9およびCXCL10のレベルは、疾患寛解と比較して、活動期において著しく高かった(IFNγ: 34.7 vs. <3.5 pg/ml; CXCL9: 33598 vs. 745 pg/ml; CXCL10: 4420 vs. 132 pg/ml; 中央値)。IFNγレベルは、CXCL9のレベルと有意に相関し(p=0.0018)、より少ない程度でCXCL10のレベルと相関した(p=0.014)。IFNγおよびケモカイン(特にCXCL9)のレベルは、好中球および血小板カウント、フェリチンおよびALTなどの疾患重症度のパラメータと有意に相関し、これは、二次性HLHにおけるIFNγの病原性の役割、およびこの疾患の適切なバイオマーカーとしてのケモカインの使用可能性を支持している(Buatois V, Chatel L, Cons L, Lory S, et al: IFNγ drives disease in the TLR9-mediated secondary HLH in mice: rationale for a new therapeutic target in secondary HLH)。
【０１５３】
同様の知見が、sJIAを有する患者において生じるMASを有する患者において示された。IFNγ、IFNγ誘導性ケモカイン(CXCL9、CXCL10、CXCL11)およびIL-6の血清濃度を、sJIAを有する患者54人において測定し、そのうちの20人がMASを有した。IL-6のレベルは、サンプリング時に末期MASを有する患者、および活動性sJIAを有したがMASを有さなかった患者において匹敵した。これに対して、循環IFNγおよびケモカインレベルは、特にCXCL9について、MASにおいて有意に高く、その中央値レベルは、活動性sJIAを有するがMASを有しない患者と比較しておよそ15倍高かった(13392 vs. 837 pg/mL; p=0.005)。注目すべきことに、CXCL9レベルと、フェリチン(p=0.041)、好中球(p=0.010)および血小板(p=0.022)カウント、ALT(p=0.044)およびLDH(p=0.013)などの典型的に異常なパラメータとの間の有意な相関性が、MASを有する患者においてのみ実証された。統計的有意性が達成されなかったLDHを除いて、IFNγのレベルも疾患重症度の検査パラメータと相関した(Bracaglia et al., 論文準備中)。
【０１５４】
まとめると、これらのデータは、二次性HLHおよびMASについての標的化療法としてのIFNγの中和についての、ならびに臨床設定におけるその研究についての、確固たる論理的根拠を提供する。
【０１５５】
本開示の組成物（NI-0501組成物を含む）および方法は、sJIAについての現在の療法よりも有利である。例えば、本開示の組成物（NI-0501組成物を含む）および方法は、MAS寛解の達成を主な目的として、sJIA患者におけるMAS/sHLHの治療において有用である。
【０１５６】
NI-0501での治療から利益を受けるとこの患者集団を同定することについておよびMAS/sHLHにおけるNI-0501の効能を評価することについての論理的根拠は、多数の因子に基づく。第一に、sJIAにおけるMASについて適切な動物モデルにおいて得られた前臨床データは、IFNγ中和が生存を著しく改善し、検査パラメータの変化を元に戻したことを示した。次に、MAS/sHLHを有する患者における観察データは、高レベルのIFNγ、ならびにさらに重要なことに、極めて上昇したレベルのIFNγ誘導ケモカインCXCL9、CXCL10およびCXCL11の存在を実証する。第三に、MAS/sHLHを有する患者において、IFNγおよびCXCL9の濃度は、フェリチン、血小板カウントおよびトランスアミナーゼなどの疾患パラメータと有意に相関する。次に、健常ボランティアにおいてなされた観察を確認する、投与された全ての注入物が十分に許容された以前の研究におけるpHLH患者において好都合な忍容性プロフィールおよび関連する安全性の懸念の欠如が観察され、IFNγの中和によって好都合となることが知られている病原体によって引き起こされる感染症は報告されず、pHLH患者の一部において生じた感染症のいずれもNI-0501治療とは関係しないと考えられ、むしろ、免疫状態、罹患期間および以前または同時の治療に関係すると考えられた。第五に、以前の臨床研究の予備データは、治療の最初の数日以内の効果のかなりの発現を伴って、疾患パラメータに対する好都合な影響を示す：HLHの典型的な臨床的徴候および症状は、NI-0501の最初の投与後に急速に改善し始め(数時間以内に熱、数日以内に脾腫/肝腫)；そしてカットオフ時での18人の評価可能な患者のうち、NI-0501での治療は、10人の患者がHSCTへ移ることを可能にした。次に、PKモデリングおよびシミュレーションアプローチからの証拠は、NI-0501の予測可能な薬物動態プロフィール、およびIFNγの中和が達成されかつ維持されることを示す。最後に、従来の療法(例えば、CsA)は、NI-0501がその疾患を適切に制御しない場合、休薬期間の必要性なしに直ちに始めることができる。
【０１５７】
結論として、前臨床的および臨床的証拠に基づいて、リウマチ性疾患に続発するMAS/sHLHにおいてIFNγを中和することについての強力な論理的根拠があり、pHLH患者における予備データは、HLH特徴の正常化への有意な改善を伴って、NI-0501の好都合なベネフィットリスクプロフィールを示す。
【０１５８】
従って、NI-0501は、長期間の高用量糖質コルチコイド治療からの副作用を制限する可能性のある、この重篤で生命を脅かすリウマチ性疾患の合併症の管理における革新的かつ有効な治療アプローチとなる。
【０１５９】
薬学的組成物
本発明の抗体または可溶性キメラポリペプチド（本明細書において「活性化合物」とも呼ばれる）、ならびにそれらの誘導体、断片、類似体、および同族体を、投与に適した薬学的組成物中に組み込むことができる。そのような組成物は、典型的に、抗体または可溶性キメラポリペプチド、および薬学的に許容される担体を含む。本明細書において使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、薬剤投与に適合するあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含むように意図される。好適な担体は、参照により本明細書に組み入れられる、当技術分野で標準的な参考書であるRemington’s Pharmaceutical Sciencesの最新版に記載されている。そのような担体または希釈剤の好ましい例としては、これらに限定されないが、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および5%ヒト血清アルブミンが挙げられる。リポソーム、および固定油などの非水性ビヒクルも使用され得る。薬学的活性物質のためにそのような媒体および薬剤を使用することは、当技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、組成物中でのそれらの使用が企図されている。補充的な活性化合物も組成物中に組み込むことができる。
【０１６０】
本発明の薬学的組成物は、その意図された投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（即ち、局所）、経粘膜、および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下用途に使用される液剤または懸濁剤は、以下の成分を含むことができる：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩、および張性を調整するための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。pHは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムなどで調整することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数用量バイアル中に封入することができる。
【０１６１】
注射使用に適した薬学的組成物は、滅菌水溶液（水溶性である場合）または分散液、および滅菌注射用溶液または分散液を即時調製するための滅菌粉末を含む。静脈内投与について、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Cremophor EL（商標）(BASF, Parsippany, N.J.)、またはリン酸緩衝生理食塩水(PBS)が挙げられる。全ての場合において、組成物は、滅菌状態でなければならず、容易なシリンジ通過性（syringeability）が存在する程度に流動的であるべきである。それは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保全されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびに好適なそれらの混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散液の場合において要求される粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって実現することができる。多くの場合において、等張剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。
【０１６２】
滅菌注射用溶液は、必要に応じて、上記に列挙した成分のうちの1つまたは組み合わせと共に適切な溶媒中に必要量で活性化合物を組み込み、その後濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、基本分散媒と上記に列挙したもののうち必要な他の成分とを含有する滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合、調製方法は真空乾燥および凍結乾燥であり、それによって活性成分と任意の追加の所望の成分との粉末が、前もって滅菌濾過したそれらの溶液から作られる。
【０１６３】
経口組成物は一般に、不活性な希釈剤または食用担体を含む。これらは、ゼラチンカプセル中に封入、または圧縮して錠剤にすることができる。経口治療投与の目的のために、活性化合物を賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用することができる。経口組成物は、洗口液として使用するための流体担体を使用して調製することもでき、この場合、流体担体中の化合物は、経口的に適用され、口中で回されたのち、吐き出されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤および／またはアジュバント材料を、組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分、または同様の性質の化合物のいずれかを含有することができる：結合剤、例えば、微結晶性セルロース、トラガカントガム、もしくはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプンもしくはラクトース、崩壊剤、例えば、アルギン酸、プリモゲル（Primogel）、もしくはコーンスターチ；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはステロテス（Sterotes）；流動促進剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えば、スクロースもしくはサッカリン；または香味剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジ香味料。
【０１６４】
吸入による投与のために、化合物は、好適な噴霧剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサー、または噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０１６５】
全身投与も、経粘膜または経皮手段によるものであり得る。経粘膜または経皮投与について、透過させられる障壁に適切な浸透剤が製剤中に使用される。このような浸透剤は、当技術分野で一般に公知であり、例えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻腔用スプレー剤または坐剤を使用することによって達成することができる。経皮投与については、活性化合物は、当技術分野で一般に公知である軟膏剤、膏薬、ゲル剤、またはクリーム剤に製剤化される。
【０１６６】
化合物は、坐剤（例えば、従来の坐剤基剤、例えば、カカオバターおよび他のグリセリドを用いて）、または直腸送達用停留浣腸の形態でも調製することができる。
【０１６７】
一態様において、活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤など、体からの急速な排除から化合物を保護する担体と共に調製される。生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレンビニルアセテート、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸を使用することができる。そのような製剤を調製するための方法は、当業者に明らかである。材料は、Alza CorporationおよびNova Pharmaceuticals, Incから商業的に得ることもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を含む感染細胞を標的にしたリポソームを含む）も、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、当業者に公知の方法に従って、例えば、米国特許第4,522,811号に記載されているように調製することができる。
【０１６８】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で経口または非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書において使用される投薬単位形態は、治療される対象にとって単位投薬量として適した物理的に別々の単位を指し；各単位は、必要とされる薬学的担体を伴って所望の治療効果を生じさせるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態の仕様は、活性化合物の特有の特徴、および達成される特定の治療効果、および個体を治療するためにそのような活性化合物を調合する当技術分野において固有の制限事項によって指定され、これらに直接依存する。
【０１６９】
薬学的組成物は、投与のための説明書と共に、容器、パック、またはディスペンサー内に含めることができる。
【０１７０】
本発明を以下の実施例においてさらに記載するが、これらは特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定しない。
【実施例】
【０１７１】
実施例1．マクロファージ活性化症候群(MAS)におけるIFNγ産生についてのバイオマーカーとしてのCXCL9レベル
本実施例において提示される研究は、IFNγインビボ産生の潜在的なバイオマーカーを探し出すために、活動性MASを有する患者における、IFNγおよび3つのIFNγ関連ケモカインの血清レベルと、それらおよび疾患活動性の検査パラメータとの相関性を評価するように設計された。
【０１７２】
IFNγ、CXCL9、CXCL10、CXCL11およびIL-6の循環レベルを、sJIA(n=54)を有する患者（そのうちの20人がサンプリング時にMASを有した）においてLuminexマルチプレキシングアッセイを使用して測定した。IFNγのレベルとCXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルとの相関性と共に、これらの循環レベルと疾患活動性パラメータとの関係を評価した。
【０１７３】
IFNγおよび3つのIFNγ関連ケモカイン(CXCL9、CXCL10およびCXCL11)のレベルは、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAと比較して活動性MASにおいて有意に上昇した(全てのp値<0.005)。活動性MASにおいて、疾患重症度の検査パラメータ(フェリチン、好中球、血小板、アラニンアミノトランスフェラーゼおよび乳酸デヒドロゲナーゼ)は、IFNγおよびCXCL9と有意に相関し、より少ない程度にCXCL10およびCXCL11と相関し；IL-6レベルとの相関性は見られなかった。MASを伴わない活動性sJIAを有する患者において、下記表7に示されるように、検査パラメータとサイトカインレベルとの間で有意な相関性はなかった。活動性MASにおいて、IFNγレベルは、CXCL9のレベルと有意に相関し(r=0.69; r2=0.47; p=0.001)、より少ない程度にCXCL10のレベルと相関し(r=0.53; r2=0.28; p=0.015)、CXCL11のレベルと相関しなかった(r=-0.04; p=0.886)。
【０１７４】
（表７）MASを有する患者および活動性sJIAを有する患者における疾患活動性の検査パラメータとIFNγ、CXCL9、CXCL10、CXCL11、およびIL-6との相関性
2018515493.tif 000030
N =好中球カウント；PLT = 血小板カウント；ALT = アラニンアミノトランスフェラーゼ、1 = 中央値(IQR); r* = スピアマンr
【０１７５】
活動性MASを有する患者中に存在する高レベルのIFNγおよびCXCL9は、疾患重症度の検査パラメータと有意に相関する。活動性MASを有する患者において、IFNγおよびCXCL9は密接に相関している。CXCL9はIFNγによってのみ誘導され他のインターフェロンによっては誘導されないことが示されており(例えば、Groom J.R. and Luster A.D. Immunol Cell Biol 2011,Feb;89(2):207-15を参照のこと)、これらの知見は、CXCL9はMASにおけるIFNγ産生のバイオマーカーであることを実証している。
【０１７６】
実施例2．一次性血球貪食性リンパ組織球症(HLH)患者におけるCXCL9およびIFNγレベル相関性
本実施例において提示される研究は、NI-0501抗体が投与された一次性HLH患者における継続中の第2相パイロット研究、および人道的使用においてNI-0501抗体を受けた患者に由来する。
【０１７７】
図1に示されるように、CXCL9およびIFNγの血清レベルを、6人の一次性HLH患者および3人の人道的使用患者から得られた試料中において、それぞれ、LuminexおよびMeso Scale Discovery(MSD)技術によって測定した。相関性をCXCL9濃度と全IFNγ濃度との間で調べた。スピアマン検定を使用して統計的検定を行い、p値を得た。
【０１７８】
図2に示されるように、CXCL9およびIFNγの投与前の血清レベルを、6人の一次性HLH患者および3人の人道的使用患者から得られた試料中において、それぞれ、LuminexおよびMSD技術によって測定した。相関性をCXCL9濃度と全IFNγ濃度との間で調べた。スピアマン検定を使用して統計的検定を行い、p値を得た。
【０１７９】
実施例3．二次性血球貪食性リンパ組織球症(HLH)患者におけるCXCL9およびIFNγレベル相関性
本実施例において提示される研究は、NI-0501抗体が投与された二次性HLH患者における観察研究、および人道的使用においてNI-0501抗体を受けた患者に由来する。
【０１８０】
特に、これら患者は、マクロファージ活性化症候群(MAS、二次性HLHの一形態)を発症した全身型若年性特発性関節炎(sJIA)を有する患者である。これらの患者について、CXCL9またはIFNγと、フェリチン、血小板カウント(PLT)、好中球カウント(Neu)、およびアラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)のような疾患パラメータとの相関性も存在する。
【０１８１】
図3Aおよび3Bに示されるように、CXCL9およびIFNγの血清レベルを、サンプリング時にsJIAに続発するMASを有する患者19人および活動性sJIAを有する患者24人から得られた試料から、Luminex技術を使用するマルチプレックスアッセイによって測定した。相関性をCXCL9濃度とIFNγ濃度との間で調べた。スピアマン検定を使用して統計的検定を行い、p値を得た。
【０１８２】
図4A-1、4A-2、4B-1、4B-2、4C-1、4C-2、4D-1、および4D-2に示されるように、CXCL9およびIFNγの血清レベルを、サンプリング時にsJIAに続発するMASを有する患者および活動性sJIAを有する患者から、Luminex技術を使用するマルチプレックスアッセイによって測定した。相関性を、IFNγまたはCXCL9レベルとフェリチン、血小板カウント、好中球カウントまたはALT(アラニンアミノトランスフェラーゼ)との間で調べた。スピアマン検定を使用して統計的検定を行い、p値を得た。
【０１８３】
実施例4．重篤な血球貪食性リンパ組織球症(HLH)患者におけるCXCL9およびIFNγレベル相関性
本実施例において提示される研究は、人道的使用においてNI-0501抗体を受けた患者からのものである。この患者は、NLRC4関連疾患および重篤な血球貪食性リンパ組織球症(HLH)の症状を示した。最近になって、NLRC4遺伝子の突然変異が再発性マクロファージ活性化症候群およびIL-18（これはIFNγを誘導することが公知である）の産生の増加を引き起こすことが報告された。
【０１８４】
この研究における患者は以下の特徴を有した：発熱、発疹、著しい肝脾腫、汎血球減少症、低フィブリノーゲン血症、高トリグリセリド血症、著しいフェリチンおよびsCD25増加を伴って、生後20日で発症。続いて多臓器不全が生じ、ICU入院が必要となった。HLH診断は8 HLH-2004基準のうちの6つに基づいた。一次性HLHを引き起こす遺伝子(PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、RAB27A、XIAP)および機能テスト(パーフォリン発現、脱顆粒および細胞傷害性)は陰性であった。高用量i.v.糖質コルチコイドおよびi.v.シクロスポリン-Aは、全身状態および検査的異常の漸進的な改善を伴った。HLH再活性化が感染症(カンジダ・アルビカンス（Candida Albicans）およびクレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella Pneumoniae）敗血症)によって引き起こされ、全身状態が急速に悪化し、新たにICUに入院した。既に免疫不全の対象における活動性感染症の存在のため、エトポシドおよび／またはATGでの治療は考慮されなかった。
【０１８５】
IFNγの測定可能な血清レベルならびにIFNγ誘導ケモカインCXCL9およびCXCL10の高血清レベル、ならびにIL-18の著しく上昇した血清レベルが裏付けられた(表8)。
【０１８６】
（表８）NI-0501治療の開始時およびNI-0501での治療中のIFNγ、IFNγ関連ケモカインおよびIL-18のレベル
2018515493.tif 000031
＊中央値(四分位範囲)
【０１８７】
NI-0501での人道的使用治療を、デキサメタゾン(13.6 mg/m2)およびi.v.シクロスポリン-Aのバックグラウンドにおいて開始した。NI-0501を、薬物動態に従って3日毎、その後7日毎に投与した。注入反応は観察されなかった。NI0501は十分に許容された。HLH臨床的特徴および検査的異常は次第に改善した。進行中の活動性感染症は急速になくなった。5ヶ月間の治療の後、患者は良好な状態のままであった。患者は、経口シクロスポリン-A(6 mg/kg)およびプレドニゾン(0.9 mg/m2のデキサメタゾンと等価である0.3 mg/kg)を受け続けた。全てのHLHパラメータが正常化した。
【０１８８】
対象は、炎症の原因不明のエピソードを依然として示した。NLRC4の解析はデノボミスセンス突然変異(T337N)を示した。上昇した血清IL-18が裏付けられ、NLRC4突然変異の関連が確認された。IFNγの高い産生が、NI-0501と複合体化された高レベルIFNγによって実証された。IFNγ誘導性ケモカインの検出不可能なレベルによって示されるように、IFNγは完全に中和された(図5および表8)。IL-18の循環レベルは持続的に上昇した。
【０１８９】
従って、この研究は、重篤な治療抵抗性HLH(NLRC4突然変異に起因する)を有する患者において、NI-0501でIFNγを遮断することは、安全性の懸念なしに十分に許容され、全てのHLH特徴の制御を可能にし、急速な糖質コルチコイド漸減を可能にし、かつ、進行中の活動性感染症の消失と関連したことを実証している。
【０１９０】
実施例5．NI-0501での血球貪食性リンパ組織球症(HLH)の治療への標的化アプローチ
本実施例において提示される研究は、一次性HLHを有する小児におけるパイロット第2相研究に由来する。一次性HLH(pHLH)は、無治療ならば常に致死的である稀な免疫調節障害である。それは病的な免疫活性化によって駆動され、発熱、脾腫、血球減少症および凝固障害の発症へ至り、多臓器不全および死を引き起こし得る。抗-IFNγ抗体で処置された一次性および二次性HLH(sHLH)のマウスモデルからのデータ、およびHLHを有する患者における観察研究に基づいて、IFNγの高い産生が、この疾患の発症を駆動する重要な因子であると考えられる。免疫化学療法、主にエトポシドベースのレジメンは、現在、HLHを制御して患者を根治的な同種異系造血幹細胞移植(allo-HSCT)へ導く唯一の薬理学的アプローチである。治療レジメンをさらに強化しようとする最近の試みにもかかわらず、死亡率および罹病率は、一部は薬物関連毒性に起因して、高いままである。
【０１９１】
上述したように、NI-0501は、ヒトIFNγへ結合しこれを中和する完全ヒト高親和性抗-IFNγ mAbであり、HLHの制御についての新規かつ標的化されたアプローチを提供する。
【０１９２】
方法：非盲検第2相研究を米国および欧州において行い、pHLHが確認されたかまたは疑われる小児におけるNI-0501の安全性および効能を評価した。初回バックグラウンドデキサメタゾン5〜10 mg/m2において、NI-0501を1 mg/kgの初回用量で3日毎に投与し、場合によって各患者におけるPKデータおよび／または臨床応答を指針として用量増加を伴った。治療継続期間は4〜8週間であった。allo-HSCTへ移る能力、関連するHLH疾患パラメータ、および8週間生存を評価した。
【０１９３】
研究集団：合計13人の患者を登録した：女性8名／男性5名（8F/5M）、年齢中央値1.0y(範囲2.5mo〜13y)。12人の患者（pt）は、従来の療法を受け、そして再活性化したか、不十分な応答を得たか、または療法に対して不耐性であった後、第二選択治療としてNI-0501を受けた。1人の患者は第一選択においてNI-0501で治療した。9人の患者は公知のHLH遺伝的欠陥を保有した(3 FHL2、2 FHL3、2 GS-2、1 XLP1、1 XLP2)。患者の大多数は、HLHスペクトラムで重度の側にあり、全身状態が害され、以前のHLH治療からの著しい毒性を有していた。患者13人のうち、フェリチンが12人において上昇し、sCD25が8人において上昇し、血球減少症が10人の患者において存在し、脾腫が8人において存在し、低フィブリノーゲン血症および高トリグリセリド血症が9人において存在した。肝臓障害およびCNS関与（CNS involvement）が、それぞれ、7人および3人の患者に存在した。
【０１９４】
結果：全体として、NI-0501治療は、HLH疾患活動性のパラメータを有意に改善し(図6)、患者13人のうち9人が満足な応答を達成した。6人の患者がHSCTへ進んだ。良好なHLH制御を有する2人の患者は、適切なドナーが同定され次第、HSCTへ進む計画である。1人の患者(第一選択NI-0501での疾患制御を達成した)において、原因となるHLH遺伝子突然変異の欠如を考慮して、HSCTはまだ計画されていない。患者13人のうち11人が8週間時点で生存していた。CNS徴候および症状が2人の評価可能な患者において消失した。デキサメタゾン用量の50%を超える減少が、NI-0501治療の最初の4週間の間に患者の50%において可能であった。
【０１９５】
バイオマーカー評価  特に、IFNγによって精巧に誘導されることが公知のケモカインであるCXCL9は、完全なIFNγ中和の実証を可能にしただけでなく、IFNγ産生と相関する、HLHの診断についての新しいパラメータとして現れる(図7Aおよび7B)。
【０１９６】
NI-0501は十分に許容され、安全性に関する懸念は同定されなかった。IFNγ中和によって好都合となることが知られている感染症はいずれも報告されず、化学療法を以前に受けていない患者において感染症は生じなかった。7人の患者が、少なくとも1つのSAEを報告し、全てがNI-0501投与には関係しないとDMCによって評価された。NI-0501の「オフターゲット」効果に起因する予想外の事象(例えば、骨髄毒性、血行力学的効果)は観察されなかった。
【０１９７】
結論：NI-0501によるIFNγの標的化中和は、HLH管理への革新的で毒性の低い可能性のあるアプローチを提供する。この研究の結果は、NI-0501が、従来の療法に不十分に応答したかまたはそれに対して不耐性を示した一次性HLHを有する患者において安全かつ有効な治療選択肢であることを示している。さらに、NI-0501での療法は、エトポシドベースのレジメンと関連する典型的な短期または長期毒性のいずれとも関連しなかった。pHLHを有する患者における第一選択治療としてのNI-0501の評価は継続中であり、同様の有意な臨床的利点が達成され得ると予期される。
【０１９８】
実施例6．上昇循環レベルのインターフェロンγおよびインターフェロン誘導ケモカインはマクロファージ活性化症候群併発全身型JIAを有する患者を特徴付ける
インターフェロンガンマ(IFNγ)は、一次性血球貪食性リンパ組織球症(HLH)のマウスモデルにおける中心的なメディエーターである。一次性HLHと二次性HLH(sec-HLH)（マクロファージ活性化症候群(MAS)を含む）との類似性を考慮して、全身型若年性特発性関節炎(sJIA)およびMASを有する患者におけるIFNγレベルおよびその生物活性を分析した。
【０１９９】
本実施例において提供される研究において、Luminexマルチプレキシングアッセイを使用して、sec-HLHを有する患者(n=11)における、およびsJIAを有する患者(n=54)（そのうちの20人がサンプリング時にMASを有した）における、IL-1β、IL-6、IFNγ、ならびにIFN誘導および／またはIFN関連ケモカインCXCL9、CXCL10、およびCXCL11の血清レベルを評価した。IFNγ誘導ケモカインの発現(肝臓および脾臓中のCXCL9およびCXCL10 mRNAレベル)、ならびに血清フェリチンレベルとのそれらの相関性を、MAS特徴がLPSでのTLR4刺激によって誘導されるIL-6トランスジェニックマウスモデルにおいて評価した。
【０２００】
下記により詳細に示されるように、IFNγおよびIFN誘導ケモカインの循環レベルが、MAS（本明細書において活動性MASとも呼ばれる）およびsec-HLH中に著しく上昇した。IFNγおよびIFN誘導ケモカインのレベルは、MASを有する患者において、活動性sJIAを有するがMASを有しない患者と比較して著しく高かった。この後者の群において、IFNγおよびIFNγ誘導ケモカインは、臨床的に非活動性のsJIAを有する患者のものと匹敵した。MASの間に、フェリチンおよびアラニントランスフェラーゼレベルならびに好中球および血小板カウントを含む、この症候群を特徴付ける検査的異常は、IFNγおよびCXCL9のレベルと有意に相関した。MASのマウスモデルにおいて、フェリチンの血清レベルは、肝臓および脾臓中のCXCL9のmRNAレベルと有意に相関した。
【０２０１】
こうして、下に示す研究で、高レベルのIFNγおよびIFN誘導ケモカイン、ならびにMASの検査的異常の重症度との特にCXCL9についてのそれらの相関性が、IFNγがMASにおいて中心的な役割を果たすことを示唆することを示す。上昇循環レベルのインターフェロンγおよびインターフェロン誘導ケモカインは、マクロファージ活性化症候群併発全身型JIAを有する患者を特徴付ける。
【０２０２】
材料および方法：患者および試料：末梢血試料を、3つの小児科リウマチ学センターにおいて、sJIAを有する患者であって、MASを有するまたは有しない患者から回収した：Ospedale Pediatrico Bambino Gesu in Rome、Istituto Giannina Gaslini in GenoaおよびCincinnati Children’s Hospital Medical Centre。全身性関節炎についてのILAR分類基準を満たしたsJIAを有する54人の患者(発症時の年齢7.9歳、四分位範囲4.6〜13.6歳；女性48%)を研究した(Petty, R.E., et al., International League of Associations for Rheumatology classification of juvenile idiopathic arthritis: second revision, Edmonton, 2001. J Rheumatol, 2004. 31(2): p. 390-2)。20人のSJIA患者について、試料を、3つの施設の各々で主治医によって診断された活動性末期MASのエピソードの間に回収した。事後解析は、これらの20エピソードのうちの17(85%)が、新しく提案されたMAS分類基準を満たすことを示した(Minoia F, Davi S, Bovis F, et al. Development of new classification criteria for macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis. Pediatric Rheumatology 2014, 12(Suppl 1):O1.)。MASの証拠を有さない活動性SJIAを有する28人の患者から試料が入手可能であった。35個の試料が、Wallaceの基準に従って定義される臨床的に非活動性の疾患の間に、35人のsJIA患者(病歴にMAS有りまたは無しの両方)から入手可能であった(Wallace, C.A., et al., Preliminary criteria for clinical remission for select categories of juvenile idiopathic arthritis. J Rheumatol, 2004. 31(11): p. 2290-4)。
【０２０３】
sec-HLH(リウマチ性疾患は除外した)を有する患者においてIFNγが増加することが示されているため、Ospedale Pediatrico Bambino Gesuで見られた、sec-HLHを有する11人の患者(発症時の年齢8.6歳、四分位範囲4.1〜12.9歳；女性36%)からも試料を回収し、陽性対照として使用した。全てのsec-HLH患者が2004-HLH診断ガイドラインを満たした(Henter, J.I., et al., HLH-2004: Diagnostic and therapeutic guidelines for hemophagocytic lymphohistiocytosis. Pediatr Blood Cancer, 2007. 48(2): p. 124-31)：6人の患者は5つの基準を満たし、5人の患者は4つの基準を満たした。なお、これらの患者が募集された機関では試験がルーチン的に行われないため、U/mlでのsCD25のレベルは利用可能ではない。一次性HLHの診断は、家族歴の欠如、HLHを引き起こすことが公知の遺伝子の病原性突然変異の欠如、および正常な機能的研究(NK活性、パーフォリン発現およびCD107脱顆粒を含む)の存在に基づいて除外された。sec-HLHを有する11人の患者は全て、活動性疾患の間にそれぞれ得られた1つの試料を与えた。
【０２０４】
診断に関しかつサンプリング時での全ての患者の臨床的および検査的特徴が、各施設の調査担当医によって集中ウェブデータベースに集められた。活動性疾患の間にサンプリングされた20人のMAS患者のうち、6人はサンプリング時にいかなる治療も受けておらず、一方、残りの14人の患者は、糖質コルチコイドパルス、シクロスポリンA、アナキンラまたはシクロホスファミドを含む、MASに特異的な治療のうちの1つを既に受けていた。活動性疾患中のsec-HLHを有する患者11人のうち6人が、サンプリング時に特別な治療をまだ受けておらず、一方、残りの5人の患者は、上述の治療のうちの少なくとも1つを既に受けていた。Ospedale Pediatrico Bambino Gesuの倫理委員会は研究を承認した。承諾書が全ての参加者について集められた。
【０２０５】
サイトカインの定量化：IL-6、IL-1β、IFNγ、CXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルを、Luminex（登録商標）マルチプレキシングビーズ技術によって解析した。試薬をMilliporeから購入し、全ての試薬はMilliplex（登録商標）MAPキットと共に提供された。試薬を製造業者のプロトコルに従って調製した。25μl/ウェルのスタンダード、ブランクおよびクオリティーチェック試料を、Milliplex MAP 96-ウェルプレート中にデュプリケートで添加し、続けて25μlの血清マトリックスを添加した。25μlのアッセイバッファーを各試料ウェルへ添加し、続いて25μl試料を添加した。試料の利用可能な体積に応じて、試料をデュプリケートまたはトリプリケートで添加した。プレートをLuminex 200（登録商標）システム(Luminex Corp.)で測定した。x PONENTソフトウェアバージョン3.1(Luminex Corp.)を使用して生データを得、Milliplex Analystソフトウェアバージョン3.5.5.0(Millipore)を使用してデータを解析した。Milliplex Analystソフトウェアで得られた生データを、次いで、Luminex解析についての専用マクロでさらに解析した(NI-Sc-ESM-MAC-012-v01およびSc-ESM-MAC-013-v01)。
【０２０６】
動物実験：IL-6トランスジェニックマウスの作製および表現型、ならびにTLRリガンドの投与によって誘発されるMAS様症候群の特徴が、以前に記述されている(Strippoli, R., et al., Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolonged exposure to interleukin-6 in mice: implication for the pathogenesis of macrophage activation syndrome. Arthritis Rheum, 2012. 64(5): p. 1680-8)。マウスを特定病原体除去条件下で維持し、国策（national police）に従って取り扱った。研究プロトコルは当所の倫理委員会によって承認された。全ての実験を10〜14週齢のマウスに対して行った。マウスに単回用量の5μg/g体重のリポ多糖類(LPS、大腸菌（E. coli）血清型055:B5; Sigma-Aldrich)を腹腔内投与した。マウスを30時間後に屠殺した。トリゾール(Life technologies)を使用して、全RNAを脾臓および肝臓組織から抽出した。Superscript Viloキット(Invitrogen)を使用してcDNAを得た。マウスCxcl9およびCxcl10遺伝子発現アッセイ(Applied Biosystems)と共にTaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems)を使用して、リアルタイムPCRアッセイを行った。マウスHprt (Applied Biosystems)を使用して、遺伝子発現データを正規化した。2-Δct法を使用して決定される任意単位(AU)としてデータを表す。製造業者の説明書に従って市販のELISAキット(ALPCO Diagnostics)を使用して、血清フェリチン濃度を決定した。
【０２０７】
統計解析：GraphPad Prism 5ソフトウェアを使用して統計解析を行った。連続変数(定量的な人口統計学的、臨床的および検査的データ)を中央値および四分位範囲(IQR)として表し、Mann-Whitney U検定を使用して比較した。Wilcoxon符号順位検定を使用して、前後差の分布がガウス分布に従うと仮定せずに、2つの対の群を比較した。スピアマン順位相関を使用して、検査パラメータとの関係を評価した。p値<0.05を統計的に有意と見なした。
【０２０８】
結果：MASを有する患者におけるIFNγおよびIFNγ誘導ケモカインのレベルの増加。サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者を、臨床的に非活動性の疾患の間にサンプリングされた患者と比較した場合、予想通りに(de Benedetti, F., et al., Correlation of serum interleukin-6 levels with joint involvement and thrombocytosis in systemic juvenile rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum, 1991. 34(9): p. 1158-63)、IL-6レベルが、臨床的に非活動性の疾患を有する患者のものと比較して、活動性sJIAを有する患者において有意に高かった(p<0.01)ことが分かった。活動性SJIAのいくつかの以前の研究において報告されたように、血清IL-1βレベルは、疾患活動性状態とは無関係に、患者の大多数において検出限界未満であった。臨床的に活動性のsJIAを有する患者と臨床的に非活動性の疾患を有する患者との間で、IFNγおよび3つのIFNγ誘導ケモカインのレベルの差はなかったことが、注目に値する。
【０２０９】
サンプリング時にMASを有する患者を、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者と比較した場合、IL-1βおよびIL-6のレベルは匹敵し、これは、活動性sJIAにおいて中心的な役割を果たすことが公知であるこれらの2つのサイトカインのレベルが、末期MAS中に増加しないことを示唆している。sJIAを有する患者であってMASを有するかまたは有さない患者の大多数において循環IL-1βレベルが定量限界(即ち、3.5 pg/ml)未満であったことに注目すべきである。対照的に、循環IFNγレベルは、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者と比較して、活動性MASを有する患者において有意に高かった。3つのIFNγ関連ケモカインCXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルも、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者と比較して、活動性MASを有する患者において著しく高かった。この差異はCXCL9について特に明白であり、その中央値レベルは、活動性sJIAを有するがMASを有しない患者と比較して、MASを有する患者においておよそ15倍高かった。
【０２１０】
sec-HLHを有する患者において、IFNγのレベルならびに3つのIFNγ関連ケモカインのレベルが著しく増加した。IFNγおよびIFNγ関連ケモカインのレベルは、MASを有する患者のものとほぼ識別不可能であり、差は統計的に有意でなかった。偶然に、活動性MASを有する患者において、および活動性sec-HLHを有する患者において、IFNγおよび3つのIFNγ誘導ケモカインのレベルは、治療を受けていない患者において、および既に治療を受けている患者において、匹敵するものであった。
【０２１１】
IFNγ、ならびにCXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルは、個々の患者におけるMASの存在に関係している。図8A〜8Dは、活動性MAS中およびMASを伴わない活動性sJIA中の対の試料が入手可能であった個々の患者におけるIFNγ、ならびにCXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルを示す。断面的解析において得られた結果と一致して、IFNγおよび3つのIFNγ誘導ケモカインのレベルは、対の試料の解析によって、MAS中に得られた試料において有意により高かった。加えて、数人の患者において、MASエピソードの前および後の両方で試料が入手可能であり、MAS臨床症状の消失によりIFNγおよびIFNγ誘導ケモカインのレベルが正常に戻ることを実証した。例えば、この研究における1人の患者はMASのエピソードを3回経験し、これらのエピソード中ならびにサンプリング時にMASを伴わない疾患期中に血清試料が得られた。IFNγおよび3つのIFNγ誘導ケモカインの産生の増加と活動性MASとの関係をさらに確認して、この患者において、上昇レベルのIFNγおよび3つのIFNγ関連ケモカインが、MASエピソード時にのみ見られた(図9A〜9B)。
【０２１２】
IFNγおよびIFNγ関連ケモカインのレベルはMASの検査的異常と相関する。サンプリング時のIFNγおよび3つのIFNγ誘導ケモカインのレベルとMASの検査パラメータとの相関性を、次いで調べた。MASを伴わない活動性sJIAを有する患者において、IFNγおよび3つのIFNγ誘導ケモカインのレベルは、1つの例外を伴って、MASの検査パラメータと関連しなかった：CXCL9、CXCL10およびCXCL11のレベルはALTレベルと弱く相関し、r2は0.17〜0.25の範囲であった(表2)。この関連性の有意性は不明瞭であるが、ALTレベルは、活動性sJIAを有するがMASを有しない全ての患者において正常範囲内にあったことに注目すべきである。サンプリング時にMASを有する患者において、MASの検査的特徴とIL-1およびIL-6との間で有意な相関性は見られなかった。対照的に、サンプリング時にMASを有する患者において、IFNγおよびIFNγ誘導ケモカインのレベルは、MASを有する患者において全て典型的に異常な、フェリチンのレベル、好中球および血小板カウント、ならびに増加したLDHおよびALTと関連した(表2)。統計的有意性に達しなかったIFNγとLDHとの相関性を唯一の例外として、検査的異常との相関性が、IFNγおよびCXCL9について特に明白であった(表2および図10A〜10J)。再び、上述したように、これらの相関性は、サンプリング時にMASを伴わない活動性s-JIAを有する患者においては存在しなかった。この群中の1人の患者は、著しく高レベルのIFNγ(336.2 pg/ml)、CXCL9(549400 pg/ml)およびCXCL10(35066 pg/ml)を有した。この患者は、特に重篤なMASを有し、重度の中枢神経系関与を伴って集中治療室へ入院した。この観察は、IFNγおよびCXCL9のレベルと疾患重症度との間で強い関連性があるという仮説についてのさらなる支持を提供している。まとめると、これらの結果は、IFNγおよびIFNγ関連ケモカインの産生の増加が、MASの検査的異常の重症度と強く相関する活動性MASの特徴であることを示している。
【０２１３】
（表２）活動性二次性HLHを有する患者、サンプリング時に活動性MASを有する患者、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者、および臨床的に非活動性のsJIAを有する患者におけるIL-1β、IL-6、IFNγならびに3つのIFNγ関連ケモカインCXCL9、CXCL10およびCXCL11の血清レベル
2018515493.tif 000032
値は中央値(四分位範囲)で示される
＊活動性sJIA対臨床的に非活動性のsJIA：p<0.01
【０２１４】
（表３）サンプリング時にMASを有する患者およびMASを伴わない活動性sJIAを有する患者における疾患活動性の検査パラメータとIFNγ、CXCL9、CXCL10、CXCL11、およびIL-6のレベルとの相関性
2018515493.tif 000033
NEU=好中球カウント；PLT=血小板カウント；ALT=アラニンアミノトランスフェラーゼ；LDH=乳酸デヒドロゲナーゼ；
1=中央値(IQR)；
r*=スピアマンr。
MASを有する患者および活動性sJIAを有する患者における疾患活動性の検査パラメータとIFN-γ、CXCL9、CXCL10、CXCL11およびIL-6との相関性。
【０２１５】
MASを有する患者におけるIFNγとIFNγ誘導ケモカインのレベルとの相関性：MASを有する患者におけるIFNγと3つのIFNγ誘導ケモカインとの関係をさらに特徴付けるために、IFNγレベルとそれぞれのケモカインのレベルとの相関性を評価した。特に、CXCL9は、主にかつ特異的にIFNγによって誘導されるようであり、一方、CXCL10およびCXCL11はI型インターフェロンによっても誘導される。これと一致して、活動性MASを有する患者において、IFNγの循環レベルは、CXCL9と有意に相関していた(r=0.693; r2=0.48; p=0.001)が、CXCL10レベルとは、より弱い相関性を有した(r= 0.535; r2=0.29; p=0.015) (図11A〜11F)。CXCL11レベルとの相関性はさらに弱く、統計的有意性に達しなかった(r=0.447; r2=0.20; p=0.08)(示さず)。
【０２１６】
IFNγ誘導ケモカインは、MASのマウスモデルにおいて疾患活動性と相関する。MASとのIFNγ誘導ケモカイン産生の関連性をさらに調べるために、標的組織(肝臓および脾臓)におけるこれらのケモカインの発現をMASのマウスモデルにおいて調べた。このモデルにおいて、MAS臨床的および検査的特徴は、IL-6トランスジェニックマウス中の高レベルのIL-6のバックグラウンドにおいて、TLR4アゴニストであるリポ多糖類(LPS)で急性感染症を模倣することによって誘導される(Strippoli et al., Arthritis Rheum 2012)。このアプローチは、sJIAを有する患者において生じるものを再現する：感染症は、高レベルのIL-6によって実際に特徴付けられる、活動性疾患の存在下でのMAS/HLHを引き起こし得る。LPSでの誘導に続いて、CXCL9およびCXCL10の高mRNAレベルが、IL-6トランスジェニックマウスにおける肝臓および脾臓中に存在した。特に、フェリチンの血清レベルは、脾臓および肝臓中のCXCL9の、ならびに肝臓中のCXCL10の発現レベルと有意に相関し、これは、標的組織中のIFNγ関連上流事象(即ち、肝臓および脾臓中におけるCXCL9およびCXCL10産生)と、高フェリチンレベルのような、典型的な下流検査的異常との関係を示している。まとめると、MASを有する患者におけるおよびMASマウスモデルにおけるデータは、IFNγの増加した産生と、CXCL9の、およびより少ない程度にCXCL10の増加した発現、ならびにMASの検査的異常との明らかな関係を指摘している。
【０２１７】
p-HLHの患者および動物モデルの両方における研究は、病理発生におけるIFNγの中心的役割を実証した。しかしながら、sJIAの状況におけるMASを含むsec-HLHにおけるIFNγの役割は、不明瞭なままであった。この研究は、高レベルのIFNγおよびIFNγ誘導ケモカインが、sJIAにおいて生じるMASを有する患者において存在したことを決定的に実証している。加えて、IFNγ、CXCL9およびCXCL10のレベルは、MAS重症度の検査パラメータと強く相関した。この研究は、IFNγおよび3つのIFNγ関連ケモカインの血清レベルが、活動性sJIAを有する患者と、臨床的に非活動性の疾患を有する患者との間で匹敵したことを見出した。この結果は、sJIAにおけるIFNγの病原性の役割に反論し、実際に、他の著者による多数の観察と一致している。3つの遺伝子発現研究が、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者の末梢血単核球(PBMC)中において顕著なIFNγ誘導シグネチャーを見出せなかった(Fall, N., et al., Gene expression profiling of peripheral blood from patients with untreated new-onset systemic juvenile idiopathic arthritis reveals molecular heterogeneity that may predict macrophage activation syndrome. Arthritis Rheum, 2007. 56(11): p. 3793-804; Ogilvie, E.M., et al., Specific gene expression profiles in systemic juvenile idiopathic arthritis. Arthritis Rheum, 2007. 56(6): p. 1954-65; Pascual, V., et al., Role of interleukin-1 (IL-1) in the pathogenesis of systemic onset juvenile idiopathic arthritis and clinical response to IL-1 blockade. J Exp Med, 2005. 201(9): p. 1479-86)。PBMCのエクスビボ刺激後、活動性sJIAを有する患者におけるIFNγを産生する細胞の数は、対照のそれと同様であった(Lasiglie, D., et al., Role of IL-1 beta in the development of human T(H)17 cells: lesson from NLPR3 mutated patients. PLoS One, 2011. 6(5): p. e20014)。一致して、活動性および非活動性SJIAを有する患者は両方とも、IFNγの増加した血清または滑液レベルを示さない(de Jager, W., et al., Blood and synovial fluid cytokine signatures in patients with juvenile idiopathic arthritis: a cross-sectional study. Ann Rheum Dis, 2007. 66(5): p. 589-98)。sJIAの関節炎におけるIFNγの役割の欠如を支持して、CXCL9およびCXCL10は、sJIA患者の滑膜組織中においてほぼ検出不可能であり、一方、高レベルのこれらのケモカインが、少関節型または多関節型JIAを有する患者由来の滑膜組織中において見られ得る(Sikora, K.A., et al., The limited role of interferon-gamma in systemic juvenile idiopathic arthritis cannot be explained by cellular hyporesponsiveness. Arthritis Rheum, 2012. 64(11): p. 3799-808)。マウスにおける最近のデータは、フロイント完全アジュバントでのIFNγノックアウトマウスの免疫刺激は、sJIAの特徴を含む全身性炎症性症候群をもたらすことを示しており、これは、sJIAにおけるIFNγの限定的役割をさらに支持している(Avau, A., et al., Systemic juvenile idiopathic arthritis-like syndrome in mice following stimulation of the immune system with Freund's complete adjuvant: regulation by interferon-gamma. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(5): p. 1340-51)。
【０２１８】
際立って対照的に、本研究は、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有する患者のそれと比較しての、サンプリング時に活動性MASを有する患者におけるIFNγおよびIFNγ関連ケモカインの著しく高いレベルを示した。これはまた、活動性MAS中およびMASを伴わない活動性sJIA中の両方において得られた連続試料を用いて、個々の患者においても確認された。偶然に、本研究は、MAS中にサンプリングされた患者においては、IL-6またはIL-1βのレベルの有意な増加も、MASの検査パラメータとの関連性も見出されず、これは、これらのサイトカインが、sJIAの病理発生機構に決定的に関与しているとはいえ(De Benedetti, F., et al., Randomized trial of tocilizumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N Engl J Med, 2012. 367(25): p. 2385-95; Ruperto, N., et al., Two randomized trials of canakinumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N Engl J Med, 2012. 367(25): p. 2396-406)、MASの維持において重要ではない可能性があることを示唆している。上昇レベルのIFNγおよびIFNγ関連ケモカインのこの知見は、いくつかの以前の観察と一致している。Shimizuらは、IFNγの刺激でヒトマクロファージによって合成されるグアノシン三リン酸の異化代謝産物であるネオプテリンのレベルが、活動性sJIAを有するがMASを有しない患者と比較して、sJIA中のMASを有する患者において高かったことを報告した(Shimizu, M., et al., Distinct cytokine profiles of systemic-onset juvenile idiopathic arthritis-associated macrophage activation syndrome with particular emphasis on the role of interleukin-18 in its pathogenesis. Rheumatology (Oxford), 2010. 49(9): p. 1645-53)。最近になって、Putらは、一次性および二次性HLHの両方を有する5人の患者（そのうちの3人はsJIAの経過中のMASを有した）における上昇レベルのIFNγおよびCXCL10を報告した(Put, K., et al., Cytokines in systemic juvenile idiopathic arthritis and haemophagocytic lymphohistiocytosis: tipping the balance between interleukin-18 and interferon-gamma. Rheumatology (Oxford), 2015)。これらの結果と一致して、サンプリング時にMASを伴わない活動性sJIAを有した5人の患者は、著しく低いレベルのIFNγおよびCXCL10を有した(Put et al., Rheumatology 2015)。
【０２１９】
興味深いことに、本研究は、IFNγおよびIFNγ関連ケモカインのレベルが著しく上昇しただけでなく、それらのレベル、特にCXCL9のレベルが、MASの検査的特徴と厳密に相関したことを見出し、これは、疾患重症度との関連性を示している。疾患重症度との関連性をさらに支持して、本研究は、長期の集中治療室入院を必要とする全身発作と共に多臓器不全および中枢神経系関与を伴う重篤な疾患を有するある患者において、著しく高いレベルのIFNγならびにCXCL9およびCXCL10を見出した。
【０２２０】
MASを有する患者において、3つのIFNγ誘導ケモカインのうち、CXCL9は、IFNγレベルとの最も強い相関性を有することが見出された。この観察は、I型インターフェロンによっても誘導され得るCXCL10およびCXCL11の産生とは対照的に、CXCL9産生が特異的にかつIFNγによってのみ誘導されるようであるという確立した考えと一致している(Groom, J.R. and A.D. Luster, CXCR3 ligands: redundant, collaborative and antagonistic functions. Immunol Cell Biol, 2011. 89(2): p. 207-15)。これは、CXCL9レベルがMAS活動性についての敏感かつ特異的なバイオマーカーとして役立ち得ることを示唆している。実際に、高いIL-6レベルのバックグラウンドにおいて感染性刺激によってMASのトリガーリングを模倣するMASのマウスモデルを使用して(Strippoli et al., Arthritis Rheum 2012)、本研究はまた、肝臓および脾臓中のCXCL9の発現レベルがフェリチンの循環レベルと有意に相関することを見出した。CXCL10発現レベルについて、この相関性は、脾臓レベルについては存在せず、肝臓レベルについてのみ存在した。これはまた、MASを有する患者における知見によって支持され、ここで、CXCL9レベルはMASの全ての検査パラメータと厳密に相関した。まとめると、ヒトおよびマウスにおけるこれらの観察は、CXCL9はMAS特徴およびIFNγ産生と強く相関することを示しており、これは、IFNγの過剰な産生がMASにおいて主要な病原性の役割を果たすという仮説をさらに支持している。これらの観察はまた、MASを伴わない活動性sJIA中、ならびにMAS中に得られた同じSJIA患者からの連続するリンパ節生検を使用してPutらによって作製された免疫組織化学データと一致している。彼らは、ともにIFNγ誘導性タンパク質であるCXCL10およびインドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼが、MAS中に得られた組織中において免疫組織化学によって高レベルで検出されたが、MASを伴わない活動性sJIA中に得られた組織においては検出されなかったことを報告している(Put et al., Rheumatology 2015)。
【０２２１】
MASおよびsec-HLHにおけるこれらの結果は、p-HLHを有する患者における文献において入手可能な観察と共に、IFNγ、およびIFNγ関連ケモカイン、特にCXCL9の増加が、基礎をなす原因から独立して、HLHの特有の特徴であるという仮説を支持している。この点で、高レベルのCXCL9が、NLRC4機能獲得型突然変異によって誘発された再発性MASを有する患者において検出されたことに注目することは興味深く(Canna, S.W., et al., An activating NLRC4 inflammasome mutation causes autoinflammation with recurrent macrophage activation syndrome. Nat Genet, 2014. 46(10): p. 1140-6)、これは、インフラマソーム調節異常によってのみ誘発されるHLHの状況においてさえ、IFNγ過剰産生が存在し得ることを示唆している。
【０２２２】
パーフォリンおよびRab27aノックアウトマウスの両方におけるp-HLHの動物モデルにおけるデータは、IFNγの病原性の役割を明白に実証している。同様に、HLHのTLR9誘発モデル（感染症に続発するHLHのモデル）における最近のデータもまた、増加したIFNγ産生についての主要な役割を示した(Behrens, E.M., et al., Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-like disease in mice. J Clin Invest, 2011. 121(6): p. 2264-77および(Bautois et al., 進行中)。さらなる研究により、MASの上述のマウスモデルにおいて、抗-IFNγ抗体での治療が、生存を増加させ、MASの臨床的および検査的特徴を元に戻すことが、最近になって実証された(Prencipe et al., 進行中)。まとめると、動物におけるこれらの観察およびこの研究の結果は、MASにおける治療アプローチとしてのIFNγ中和についての論理的根拠を提供する。
【０２２３】
実施例7．一次性血球貪食性リンパ組織球症(HLH)を有する小児患者における抗-インターフェロンガンマ抗-IFNγモノクローナル抗体の静脈内複数回投与の安全性、忍容性、薬物動態および効能評価
本実施例において提示される研究は、本明細書においてNI-0501と呼ばれる抗-IFNγ抗体の複数回静脈内(IV)投与の安全性および忍容性プロフィールを決定するために；HLH患者におけるNI-0501効能およびベネフィット／リスクプロフィールを決定するために；HLH患者におけるNI-0501の薬物動態(PK)プロフィールを描くために；HLHについての適切なNI-0501治療用量レジメンを規定するために；ならびにNI-0501の免疫原性を評価するために、設計した。
【０２２４】
前臨床研究：以前の研究により、NI-0501が、イヌ、ネコ、ブタ、ウサギ、ラットまたはマウスからではなく、アカゲザルおよびカニクイザルを含む非ヒト霊長動物種からのIFNγについて同様の結合親和性および遮断活性を示すことが実証されている。カニクイザルにおける毒物学および安全性の研究は、NI-0501の投与に起因するオフターゲット毒性がなく、NI-0501の毎週投与が十分に許容され、かつ抗生物質予防処置を必要としないことを実証し、これらの事前の研究において、異常な組織病理学的または行動的所見は観察されなかった。
【０２２５】
遊離したおよびIFNγR1に結合したIFNγに結合するNI-0501の能力に起因して、標的の存在下でのADCCおよびCDC活性を媒介するNI-0501の可能性を調べるために、研究を行った。ADCC活性の欠如が実証され、CDC活性の誘導は観察されなかった。
【０２２６】
第1相臨床研究：NI-0501の単回静脈内(IV)投与の安全性、忍容性および薬物動態プロフィールを調べる20人の健常成人ボランティアにおける第1相無作為化二重盲検プラセボ対照単回漸増用量研究。この研究の間、6人の対象がプラセボを受け、一方、3人、3人、4人、および4人の対象(合計で14人の対象)が、それぞれ、0.01、0.1、1、および3 mg/kgのNI-0501用量を受けた。
【０２２７】
NI-0501のPK解析によって、長い半減期(およそ22日間)、遅いクリアランス(≦0.007 L/h)および低い分布容積(平均で< 6 L)を伴うIgG1についての予想されたプロフィールが明らかとなった。
【０２２８】
合計41件の有害事象(AE)が、薬物注入の開始後に対象20人のうちの14人(70%)において観察され、そのうちの10件はプラセボを受けた4人の対象によって報告されたものであった。36件(87.8%)のAEが、程度の軽いものであり、5件(12.2%)が中程度のものであった。重度のまたは生命を脅かすAEは報告されなかった。AEを経験した対象14人のうちの10人における23件のAE(56.1%)は、薬物関連と報告された(少なくとも合理的な可能性を伴う)。ほとんどのAEは単発性であり、NI-0501投薬量の増加に関連する傾向は観察されなかった。全てのNI-0501注入が、大きな事象のないものであった。
【０２２９】
要約すると、NI-0501の注入は十分に許容され、薬物注入後8週間のモニタリングの間に観察された効果は、いかなる深刻なまたは予想外のオフターゲット安全性または免疫原性の懸念をも示さなかった。
【０２３０】
第2／3相臨床研究材料および方法：これらの研究を一次性HLH患者に対して行う。研究を3つのパートへ分割する：スクリーニング、治療、および追跡。概要を図12に示す。
【０２３１】
これらの研究において、好適な患者は、HLH治療に対してナイーブな患者(本明細書において「第一選択患者」とも呼ばれる)、または、従来のHLH療法を既に受けている場合がある患者(本明細書において「第二選択患者」とも呼ばれる)であって、例えば主治医に従って、満足な応答が得られなかったか、もしくはそれに対して不耐性の徴候を示した患者を含む。従来のHLH療法に失敗したかまたはそれに対して不耐性を示した後にNI-0501を受ける患者は、一次性HLHの第二選択治療としてのNI-0501の効能を実証するための、研究の中心的なコホートである。治療ナイーブな患者は、第一選択設定における効能および安全性データの収集のために登録される。
【０２３２】
以下の患者をこの研究から除外する：立証されたリウマチ性または腫瘍性疾患による二次性HLHの診断を有した患者；スクリーニング前の2週間の間にT細胞枯渇剤(例えば、抗胸腺細胞グロブリン(ATG)、抗-CD52療法)で以前に治療されているか、または、任意の他の生物学的薬物でそれらの規定半減期の5倍の期間内に治療されている(裏付けられたB細胞EBV感染症の場合のリツキシマブを除く)、患者；活動性のミコバクテリア、ヒストプラスマ・カプスラーツム（Histoplasma Capsulatum）、赤痢菌属（Shigella）、サルモネラ属（Salmonella）、カンピロバクター（Campylobacter）およびリーシュマニア属（Leishmania）感染症を有する患者；結核または潜伏結核の既往歴の証拠を有する患者；HIV抗体、B型肝炎表面抗原またはC型肝炎抗体について血清学的検査が陽性の患者；悪性腫瘍が存在する患者；心血管、肺、肝臓または腎機能に大きな影響を与える別の合併症または奇形を有する患者；研究レジメンの任意の構成要素に対する過敏性またはアレルギーの病歴を有する患者；スクリーニング前の12週間以内に生または弱毒化生(BCGを含む)ワクチンを受けた患者；および／または妊娠中もしくは授乳中の女性患者。
【０２３３】
本実施例において提示される研究は、ヒトIFNγに対する完全ヒトIgG1モノクローナル抗体(mAb)である抗-インターフェロンガンマ抗体NI-0501を使用する。NI-0501は、下記表4に示されるような注入用無菌濃縮物(1 mL当たり)として提供される。
【０２３４】
（表４）NI-0501製剤
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【０２３５】
これらの研究において、1 mg/kgの初回用量での1時間の期間にわたるIV注入によってNI-0501を投与する。この用量は、3400 pg/mL以下のベースラインIFNγ濃度を有する患者においてIFNγ効果の少なくとも99%を3日間阻害すると予想される。研究15日目(SD15)(注入番号6)までは3日毎に、その後は1週間に2回、注入を行う。3 mg/kgへのNI-0501用量増加は、研究中のいかなる時でも、各患者における臨床的および検査的応答を指針として予め定義された基準(下記表5に記載される通り)に従って可能である。3 mg/kgでの最低2回の注入後、再評価して、患者に3 mg/kgのNI-0501を受ける資格を与える同じ臨床的および検査的基準が依然として当てはまることが分かった場合、臨床的および検査的HLHパラメータを規則的にモニタリングしつつ、NI-0501の用量を最高4回までの注入について6 mg/kgへ増加させうる。これらのパラメータの進展に基づいて、NI-0501の用量は、i)3 mg/kgへ再び減少させ得、またはii)PKおよびPD証拠が過度に高いIFNγ産生、そして結果として速いNI-0501排除を示す場合、追加的IV注入について6 mg/kgのままであり得る(または6 mg/kgを超えて増加され得る)。本実施例に記載の臨床的および検査的基準が満たされる場合、用量増加は研究中のいかなる時でも行い得る。
【０２３６】
（表５）用量増加の指針となる臨床的および検査的基準
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a これらの基準がSD6後に当てはまる場合、NI-0501用量は1から3 mg/kgへ増加させなければならない。
b NI-0501用量がSD3に既に増加されている場合、3 mg/kgの用量での少なくとも2回の注入が、基準再評価前に行われなければならない。
c 3 mg/kgへの用量増加をSD3またはSD6に行ったかどうかに依存する。
d 最高4回の注入について。
略語：bsl. =ベースライン；ANC =絶対好中球カウント；US =超音波
【０２３７】
これらの研究において、NI-0501を8週間投与し、治療期間を2つの分離した期間に分ける：図12に示す治療期間1および2。
【０２３８】
NI-0501を8週間投与した後、造血幹細胞移植(HSCT)のための準備におけるコンディショニングレジメンを開始し得る。患者の状態およびドナー入手可能性が移植の実行を可能にする場合、予想される治療継続期間は、4週間未満にならない範囲で短縮し得る。適切なドナーが第8週までに同定されなかった場合、またはNI-0501の投与に無関係の理由のために移植スケジュールを遅らせる必要性がある場合、好都合なベネフィット／リスクが患者について確立されたならば、NI-0501治療は長期追跡研究の状況において継続され得る。
【０２３９】
これらの研究において、NI-0501をデキサメタゾンのバックグラウンドにおいて投与し、デキサメタゾンは患者の状態に依存して漸減させ得る。治療ナイーブな患者において、NI-0501を10 mg/m2のデキサメタゾンのバックグラウンドにおいて投与する。第二選択HLH治療としてNI-0501を受ける患者において、デキサメタゾンは、少なくとも5mg/m2の用量で、またはスクリーニング前にそれよりも高い用量で投与されていた場合はその用量で、投与される必要がある。患者は、SD-1からデキサメタゾンを受けていることが求められる。
【０２４０】
デキサメタゾンは、主治医の判断に従い、患者の状態に依存して漸減させ得る。デキサメタゾン用量が各段階で半減を超えず、かつ、変更の頻度が毎週を超えないならば、漸減スキームは主治医によって選択され得る。
【０２４１】
デキサメタゾンの漸減後に疾患が悪化した場合には、デキサメタゾンの用量は、主治医に従って、満足な応答が達成されるまで増加および維持され得る。
【０２４２】
HLH治療ガイドラインにおいて推奨されるように、患者は、NI-0501治療開始の前日から研究終了まで、ニューモシスティス・ジロベチー（Pneumocystis jiroveci）、真菌および帯状疱疹（Herpes Zoster）ウイルス感染症についての予防的処置を受ける。患者は、NI-0501治療開始の前日(即ち、SD-1)から研究終了まで予防的処置を受ける。例えば、ニューモシスティス・ジロベチー予防については、患者は、例えば、等しく分割された用量で1日2回、1週間当たり連続3日で経口的に提供される750 mg/m2/日スルファメトキサゾールおよび150 mg/m2/日トリメトプリムを受け得る。真菌感染症予防については、患者は、例えば、最高400 mg一日用量で、フルコナゾール12 mg/kgを毎日受け得る。HZウイルス予防については、患者は、例えば、2歳を超える小児についてはアシクロビル200 mgを1日4回、2歳未満の小児については100 mgを1日4回受け得る。これらの治療は、可能な限り常に経口的に、そうでなければ静脈内に提供される。
【０２４３】
患者はまた、例えば、シクロスポリンA、髄腔内メトトレキサートおよび糖質コルチコステロイドなどのような、任意の様々な併用療法を受けることができる。シクロスポリンA(CsA)は、スクリーニング前に患者へ既に投与されている場合、継続され得る。CsAはいかなる時でも中止することができる。いったんNI-0501投与が始まると、CsAは、研究の経過中に新たに導入されない。
【０２４４】
患者がNI-0501治療開始時に髄腔内メトトレキサートおよび糖質コルチコイドを受けている場合、この治療は必要に応じて継続される。NI-0501治療の開始前にCNS症状が出現した場合、髄腔内メトトレキサートおよび糖質コルチコイドでの療法が、NI-0501の最初の投与の前に開始されなければならない。
【０２４５】
IV免疫グロブリン(IVIG)は、裏付けられた免疫グロブリン欠損症の場合の補充治療としてのみ許容される。例えば、補充を正当とする裏付けられた免疫グロブリン欠損症の場合、適切なIgGレベルを維持するために、IVIGは、0.5 g/kgの用量で、4週毎にまたはより頻繁に、提供され得る。スクリーニング前の4週間以内の注入、ならびにNI-0501治療中の注入は、いずれも許容可能である。
【０２４６】
鎮痛治療、血液産物の輸血、電解質およびグルコース注入、抗生物質、抗真菌および抗ウイルス治療、ならびに全身支持療法が許容される。いったん最大NI-0501用量レベルが達成された後、持続されないまたは限定的なHLH改善の場合、追加のHLH治療が許容され得る。本明細書において使用される場合、持続されないHLH改善は、3つのHLHパラメータについてのベースラインからの少なくとも50%改善を維持することができない患者を指す(下記表6を参照のこと)。少なくとも2つの連続する測定で、HLH改善の低下が裏付けられなければならない。本明細書において使用される場合、限定的なHLH改善は、最低3つのHLH臨床的および検査的基準のベースラインからの50%未満の変化を指す。エトポシドが、この薬物に対する応答の欠如または不耐性の明確な証拠が以前の病歴から導き出されない限り、追加のHLH治療として投与されるべきである。
【０２４７】
以下の療法はNI-0501投与と同時に使用してはならない：エトポシド、T細胞枯渇剤、または任意の他の生物学的薬物は、以下を除いて一般に許容されない：長期の好中球減少の場合のG-CSF；裏付けられたB細胞EBV感染症の場合のリツキシマブ；および最大NI-0501投与レベルでの持続されないまたは限定的なHLH改善(本明細書において定義される通り)の場合の、追加のHLH治療。エトポシドが、この薬物に対する応答の欠如または不耐性の明確な証拠が以前の病歴から導き出されない限り、投与されるべきである。生または弱毒化(BCGを含む)ワクチンでの予防接種は、4週間の追跡期間を含む研究全体の間、回避されなければならない。NI-0501濃度が研究終了後に治療レベルのままである場合には、予防接種のない期間は、NI-0501の測定可能な濃度がもはや検出可能でなくなるまで、延長されるべきである。
【０２４８】
この疾患を特徴付ける臨床徴候(発熱、脾腫、CNS症状)および検査パラメータ(CBC、フィブリノーゲン、フェリチン、sCD25レベル)の進展を使用して、応答の達成および応答までの時間を評価する。主要効能エンドポイントは、全奏効率、即ち、下記表6に定義される治療終了(EoT)時での、完全もしくは部分奏効またはHLH改善のいずれかの達成を含む。副次的効能エンドポイントは、研究中のいずれかの時点での応答までの時間；応答の持続性、即ち、EoTおよびそれを越えての研究中のいずれかの時点で達成された応答の維持(いずれかの長期追跡研究において収集されたデータを含む)；糖質コルチコイドをベースライン用量の50%以上減らすことができる患者の数；適応であると見なされる場合、HSCTへ進むことができる患者の数；第8週(またはEoT)時および研究終了時での生存；NI-0501薬物動態(PK)プロフィールを決定するためのNI-0501の血清濃度；循環全IFNγおよびその中和マーカー、即ちCXCL9およびCXCL10のレベルを含む、薬力学的(PD)効果の決定；ならびに他のバイオマーカー、例えば、sCD25、IL-10の決定を含む。
【０２４９】
（表６）応答の定義
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* 以下の検査パラメータは再活性化の決定について具体的に考慮される：
- 血小板
- 好中球
- フィブリノーゲン
- フェリチン
- 可溶性CD25(sCD25；即ち、可溶性IL-2受容体)。
NK機能、赤血球/ヘモグロビンおよびトリグリセリドレベルの評価は、再活性化の決定について考慮できない。
【０２５０】
収集および評価されるべき安全性パラメータは、感染症に特に注目した、有害事象(AE)(重度および重度でない)の発生率、重症度、因果関係および転帰；赤血球(ヘモグロビン)、好中球および血小板に焦点を合わせた完全血球算定(CBC)、肝臓テスト、腎機能テスト、ならびに凝固などの、検査パラメータの進展；安全性の理由のために中止となった患者の数；および免疫原性(ADA)を決定するための、NI-0501に対する循環抗体のレベル(もしあれば)などの他のパラメータを含む。
【０２５１】
主要エンドポイント(全奏効率)を、片側0.025レベルで厳密な二項検定を使用して評価する。応答までの時間、応答の持続性および生存時間を、入手可能である場合は中央値を計算してKaplan-Meier曲線を使用して提示する。95%信頼区間をこれらのエンドポイントの各々についての中央値について計算する。糖質コルチコイドを50%以上減らす患者の数、およびHSCTへ進むことができる患者の数を含む、二元転帰に基づく追加のエンドポイントを、割合へ変換し、関連する95%信頼区間を計算する。p値による統計的有意性を主要エンドポイントについてのみ得る。全ての他のエンドポイントは、主要エンドポイントについて支持的と見なされ、結果として、エンドポイントの形式的階層は言明されない。
【０２５２】
患者におけるNI-0501の投与は、NI-0501の最初の注入後数時間内に熱の急速な正常化をもたらす。図13Aおよび13Bは、NI-0501治療の開始時に>37.5℃の体温を有する2人の患者における体温に対するNI-0501注入の効果を描写する。図14は、患者における好中球カウントに対するNI-0501投与の効果を描写する一連のグラフおよび表である。図15は、患者における血小板カウントに対するNI-0501投与の効果を描写する一連のグラフおよび表である。図16は、患者におけるフェリチンの血清レベルに対するNI-0501投与の効果を描写する一連のグラフおよび表である。図17は、患者における糖質コルチコイド漸減に対するNI-0501投与の効果を描写する一連のグラフおよび表である。図18は、HSCT時までNI-0510の投与がIFNγ中和を維持したことを描写するグラフである。NI-0501治療に対するHLH応答も移植まで持続した。NI-0501投与後にCNS関与についても患者を評価した。治療終了(EOT)までのベースラインCNS関与および状態の概要を下記表11に示す。
【０２５３】
（表１１）NI-0501治療に対する応答 - CNS関与
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注：定期的な薬剤適用LPが行われなかった患者番号（Pt.#）4を除いて、患者はIT療法を受けた
＊治療継続中
＄治療は2週間前から始まった
＾EOTでのコントロールは行われなかった
【０２５４】
造血幹細胞移植(HSCT)を受けた患者10人のうち、全ての患者が生着した；1人の患者において、CD34幹細胞ブーストがHSCT後D+145における混合キメリズムに起因して必要とされた。1人の患者において、続発性生着不全、続いてHLH再活性化が生じた。この患者は、急性呼吸不全および細菌感染症に起因してHSCT後D+68に死亡した。別の患者はHSCT後D+47に死亡した(重篤なGvHDの状況における敗血症性ショック)。軽度のGvHDが、他の3人の患者において報告され、消失した／消失しつつある。
【０２５５】
定量限界未満のCXCL9(IFNγによって精巧に誘導されるケモカイン)のレベルによって反映される、HSCT時のNI-0501の中和血清濃度が、移植を受ける患者10人のうちの8人において測定された。従って、これらのデータは、NI-0501が、エトポシドベースのレジメンについて報告された短期または長期毒性から離れることができることを示している。これはallo-HSCT関連合併症のリスクの低下と解釈される。
【０２５６】
これらのデータは、NI-0501治療が、CNS徴候および症状を含むHLHの関連する臨床的および検査的異常を改善かつ／または消失させることができることを実証している。NI-0501に対する応答は、原因となる突然変異の存在およびタイプならびに／または感染性トリガーの存在およびタイプとは無関係である。NI-0501は十分に許容された。安全性の懸念は現在まで現れなかった(例えば、骨髄毒性無し、広範囲の免疫抑制無し)。IFNγ中和によって促進されることが知られている病原体によって引き起こされる感染症は観察されなかった。NI-0501によるIFNγの中和は、HLHの管理への革新的かつ標的化されたアプローチを提供することができる。
【０２５７】
実施例8．マクロファージ活性化症候群/二次性HLH(MAS/sHLH)を示す全身型若年性特発性関節炎(sJIA)を有する患者における、抗-インターフェロンガンマ(抗-IFNγ)モノクローナル抗体NI-0501の短期静脈内投与の安全性、忍容性、薬物動態および効能
本実施例において提供される研究は、sJIAを有する患者におけるMAS/sHLHの治療についてのNI-0501の効能および安全性を実証するために設計され、2つのパートに分けられる：(i)NI-0501のPKプロフィールおよび投薬戦略を評価するため、ならびにこの患者集団におけるNI-0501ベネフィット／リスクを予備的に評価するためのパイロット研究；ならびに(ii)NI-0501の効能および安全性を実証するための中心的研究(NI-0501のポジティブなベネフィット／リスクプロフィールおよび投薬レジメンの確認で継続される研究)。この研究設計の概要を図19に示す。
【０２５８】
パイロット研究の主要な目的は以下のとおりである：(i)MAS/sHLHを有するsJIA患者についての適切なNI-0501治療用量レジメンを定義すること；(ii)MAS/sHLHを有するsJIA患者におけるNI-0501のベネフィット／リスクプロフィールを評価すること；および(iii)MAS/sHLHを有するsJIA患者におけるNI-0501の薬物動態(PK)プロフィールを描くこと。中心的研究の主要な目的は以下のとおり：(i)MAS/sHLHを有するsJIA患者におけるNI-0501の効能を決定すること；(ii)MAS/sHLHを有するsJIA患者におけるNI-0501の短期静脈内(i.v.)投与の安全性および忍容性プロフィールを評価すること；(iii)MAS/sHLHを有するsJIA患者におけるNI-0501のポジティブなベネフィット／リスクプロフィールを確認すること；(iv)MAS/sHLH診断バイオマーカーとしてのおよびNI-0501治療に対する応答の予測因子としてのケモカインCXCL9およびCXCL10の探索的な評価を行うこと；ならびに(v)MAS/sHLHを有するsJIA患者におけるNI-0501の免疫原性を評価すること。
【０２５９】
研究集団は、高用量糖質コルチコイド治療に対して不十分な応答を示したMAS/sHLHを有するsJIA患者を含む。研究に含めるための基準は以下を含む：(i)性別：男性および女性；(ii)年齢：sJIA診断時に<16歳；(iii)以下の検査的および臨床的基準のうちの少なくとも2つの存在における、治療するリウマチ専門医によって確認された活動性MAS/sHLHの診断：(a)検査的基準：血小板カウント≦262 x109/L、WBCカウント≦4.0 x109/L、ASTレベル> 59 U/L、および／またはフィブリノーゲンレベル≦2.5 g/L；(b)臨床的基準：肝腫、出血症状、および／またはCNS機能不全；(iv)局所的な標準治療による、少なくとも3日間の高用量i.v.糖質コルチコイド治療(連続3日の30 mg/kg mPDNのパルスが挙げられるがこれに限定されない)に対して不十分な応答を示す患者；(v)高用量i.v.糖質コルチコイドは、2つの別々の一日用量において2 mg/Kg/日のmPDN当量未満ではなく、60 mg/日までであるべきである。患者の状態および／または検査パラメータの急速な悪化の場合、高用量i.v.糖質コルチコイドを始めてから3日未満でも研究に含め得る；(vi)患者の承諾(または法律上の正式な代理人の承諾)；ならびに(vii)患者が思春期を過ぎている場合は、避妊手段を容認したこと。
【０２６０】
除外基準は以下を含む：(i)疑わしいまたは確認された一次性HLHまたは腫瘍性疾患によるHLHの診断；(ii)アナキンラ、トシリズマブ、カナキヌマブ、TNF阻害剤、リツキシマブまたは任意の他の生物学的薬物で、それらの規定半減期の5倍の期間内に治療された患者；(iii)活動性のミコバクテリア(定型および非定型)、ヒストプラスマ・カプスラーツム、赤痢菌属、サルモネラ属、カンピロバクターおよびリーシュマニア属感染症；(iv)潜伏結核の証拠；(v)HIV抗体について陽性の血清学的検査；(vi)悪性腫瘍の存在；(vii)調査担当医の意見による、治療および／またはNI-0501安全性の評価に応答する可能性に有意に影響を与え得る、心血管、肺、CNS、肝臓または腎機能に大きな影響を与える別の合併症または奇形を有する患者；(viii)研究レジメンの任意の構成要素に対する過敏性またはアレルギーの病歴；(ix)スクリーニング前の12週間以内のBCGワクチン接種；(x)スクリーニング前の6週間以内の他の生または弱毒化生ワクチン接種；ならびに／または(xi)妊娠中もしくは授乳中の女性患者。
【０２６１】
投薬レジメン、投与頻度および治療継続期間：これらの研究において、NI-0501を、実施例7に示す製剤において使用する。パート1において、NI-0501を、SD0において1時間の期間にわたる注入によって6 mg/kgの初回用量で投与する。NI-0501治療を、4週間(即ち、最長SD27まで)3日毎に3 mg/kgの用量で継続する。NI-0501治療は、完全な臨床応答(即ち、MAS寛解)の達成時に短縮され得る。4週間後、NI-0501治療は、MAS寛解が達成されるまで、必要に応じて、維持として最長さらに4週間まで(即ち、最長SD56まで)継続され得、用量を1 mg/kgへ減少させて注入間の間隔を毎週投与へ延長する可能性を伴う。PKプロフィールが予期せぬTMDD(従って異常に高いIFNγ産生のシグナル伝達)を示す場合、NI-0501の用量を、臨床的およびPK証拠を指針として10 mg/kgへ増加しうる。この用量増加は、その個々の患者におけるベネフィット／リスクプロフィールの注意深い評価時にのみ承認される。
【０２６２】
パート2において、提案された投薬レジメンが適切であると確認され、かつ、NI-0501のポジティブなベネフィット／リスクが実証されると、研究は継続される。パート1において得られた証拠に基づいて必要な場合は、投薬レジメンを若干変更しうる。
【０２６３】
バックグラウンド療法および併用薬：NI-0501を、60 mg/日まで(30 kg以上の患者において)の少なくとも2 mg/kgのメチルプレドニゾロン(mPDN)当量のバックグラウンドにおいて投与し、これは、患者の状態に依存して治療中に漸減させ得る。患者は、帯状疱疹感染症についての予防的処置を、好ましくは前日(どのような場合でも、NI-0501治療開始の前)に始め、血清NI-0501レベルがもはや検出可能でなくなるまで受ける。シクロスポリンA(CsA)は、NI-0501治療の開始の少なくとも3日前に開始された場合、継続され得る。CsA用量調節が、治療レベルを維持するために許容される。CsAは、調査担当医の判断で、研究中のいかなる時でも中止することができる。いったんNI-0501投与が始まると、CsAは新たに導入することができない。患者がNI-0501治療開始時に髄腔内メトトレキサートおよび糖質コルチコイドを受けている場合、この治療は必要に応じて継続され得る。生または弱毒化(BCGを含む)ワクチンでの予防接種は、研究全体の間、およびどのような場合でも、血清NI-0501レベルがもはや検出可能でなくなるまで、回避されなければならない。鎮痛治療、血液産物の輸血、電解質およびグルコース注入、抗生物質、抗真菌および抗ウイルス治療、ならびに全身支持療法が許容される。
【０２６４】
試料サイズ：パート1において、少なくとも5人の評価可能な患者を登録する。パート2において、研究の継続時に、少なくとも10人の評価可能な患者を登録し、合計15人の評価可能な患者を達成する。疾患の希少な性質および承認治療の欠如を考慮して、15人の試料サイズは正式には正当とされなかった。いずれにせよ、患者の少なくとも50%が全身性糖質コルチコイド単独に対して不十分に応答する、即ち、糖質コルチコイドを受けた患者の50%が、治療開始後第8週までにMAS寛解を達成するという仮定に基づいて、この研究は、5%の片側有意水準を使用して50%から77%への改善を検出するための70%検出力を有する。
【０２６５】
研究継続期間および研究終了の定義：研究の継続期間は各患者について8週間とする(＋最長1週間のスクリーニング期間)。研究終了は、最後の患者の最後の受診と定義される。NI-0501の少なくとも1つの用量を受けた全ての患者は、長期追跡のためにNI-0501-05研究に入るよう依頼される。
【０２６６】
研究エンドポイント：研究のパート1(パイロット)において、この患者集団における投薬レジメンを確認するために以下を評価する：(i)NI-0501のベネフィット／リスクプロフィール；(ii)NI-0501のPKプロフィール；(iii)IFNγによって誘導されることが公知のケモカイン(例えば、CXCL9、CXCL10、CXCL11)のレベル；(iv)NI-0501開始後2、4、6および8週間での血球減少症、肝機能障害および凝固障害のMASの明瞭な特徴の進展；ならびに(v)NI-0501治療の用量および期間。研究のパート2(中心的)において、効能研究エンドポイントは以下の通りである：(a)：主要効能エンドポイント：NI-0501治療の開始後第8週までにMAS寛解を達成する患者の数；および(b)副次的効能エンドポイント：MAS寛解までの時間；調査担当医の評価に従う、最初の応答までの時間；糖質コルチコイドを、MASの発生前に投与されていた用量と同じ(またはより低い)用量へ、研究中のいずれかの時点で漸減させ得る患者の数；糖質コルチコイド漸減の達成までの時間；研究終了時の生存；ならびに効能の欠如に起因して研究から中止となった患者の数。研究のパート2(中心的)において、安全性研究エンドポイントは以下の通りである：(a)感染症に特に注目した、AE(重度および重度でない)の発生率、重症度、因果関係および転帰；検査パラメータ、特にCBC(ヘモグロビン、好中球および血小板に焦点を合わせて)、LFT、および凝固パラメータの進展；安全性の理由のために研究から中止となった患者の数；ならびに免疫原性(ADA)を決定するためのNI-0501に対する循環抗体のレベル(もしあれば)。
【０２６７】
薬物動態および薬力学を、NI-0501のPKプロフィール；投与前の循環遊離IFNγのレベル、およびNI-0501開始後の全IFNγ(遊離IFNγ＋NI-0501へ結合されたもの)；IFNγによって誘導されることが公知のケモカイン(例えば、CXCL9、CXCL10、CXCL11)のレベル；ケモカインレベル(CXCL9、CXCL10)と遊離NI-0501、遊離IFNγ(投与前)および全IFNγのレベルとの間の相関性；ケモカインおよび全IFNγレベルと、MAS重症度の検査パラメータ、例えば、フェリチン、血小板カウント、LFTとの相関性(探索的分析)；ならびに他の可能性のある疾患バイオマーカー(例えば、sCD25、IL-10、IL-6、IL-18、TNFα、ネオプテリン)によって評価する。
【０２６８】
他の態様
本発明をその詳細な説明と組み合わせて説明したが、前述の説明は、例示として意図されたものであり、本発明の範囲を限定せず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲の範囲によって定義される。他の局面、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内にある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2018515493.tif 000062
【図８】
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【図９】
2018515493.tif 000064
【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
2018515493.tif 000068
【図１３】
2018515493.tif 000069
【図１４】
2018515493.tif 000070
【図１５】
2018515493.tif 000071
【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年1月15日(2018.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2018515493000001.app
【国際調査報告】
2018515493.tif 000076
2018515493.tif 000077
2018515493.tif 000078
2018515493.tif 000079
2018515493.tif 000080
2018515493.tif 000081
2018515493.tif 000082