(57)【要約】  本発明は、植物由来の抽出物及び／又はその画分、それを含む組成物並びに外因性毒素により引き起こされる損傷からの組織の保護におけるその使用に関する。特に、本発明は、アステリスクスグラベオレンス由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分、それを含む組成物並びに外因性毒素、特に、環境汚染から生じる毒素の有害な影響からの上皮細胞を含む組織の保護におけるその使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護する方法であって、アステリスクスグラベオレンス植物由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分又はそれを含む組成物を、それを必要とする対象に投与し、それによって、前記少なくとも１種類の汚染物質から前記組織を保護することを含む方法。
【請求項２】
前記対象が、前記少なくとも１種類の汚染物質に暴露されたか、かつ／又は暴露されるか、かつ／又は暴露されることが予想される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１種類の汚染物質が、燃焼ガス、産業汚染及び煙の少なくとも１つから生じる、請求項１〜２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１種類の汚染物質が煙から生じる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記煙がタバコの煙である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１種類の汚染物質が、表１に示される群から選択される、請求項４〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記組織の保護が、前記少なくとも１種類の汚染物質に対する前記組織細胞の耐性の増加を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響からの上皮細胞を含む前記組織の保護が、前記組織の生存率の増加、前記組織の健康の改善及び前記組織の早期老化の低減からなる群から選択される少なくとも１つの結果をもたらす、請求項１又は請求項７に記載の方法。
【請求項９】
上皮細胞を含む前記組織が、皮膚、鼻腔、口腔咽頭、喉頭、気管、肺、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記組織が皮膚であり、前記方法が、前記極性溶媒抽出物及び／又はその画分又はそれを含む組成物を前記皮膚に局所投与することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響からの前記皮膚の保護が、皮膚細胞の生存率の増加、皮膚の外観の改善、早期皮膚老化の低減及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される少なくとも１つの結果をもたらす、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
皮膚の外観の改善及び／又は早期皮膚老化の低減が、前記皮膚の皺、褐色斑及び赤色斑のうちの少なくとも１つの外観の低減を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
皮膚の外観の改善及び／又は早期皮膚老化の低減が、所定の閾値と比較した前記皮膚の水和の値の維持及び／又は改善を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記組織が、肺、気管又は鼻腔組織であり、前記方法が、前記極性溶媒抽出物及び／又はその画分又はそれを含む組成物を吸入により投与することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
前記組織が前記鼻腔の組織であり、前記方法が、前記極性溶媒抽出物及び／又はその画分又はそれを含む組成物をスプレーノズルにより前記鼻腔に投与することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
前記組織が前記口腔、咽頭又は喉頭の組織であり、前記方法が、口腔ケア製剤の形態の前記極性溶媒抽出物及び／又はその画分又はそれを含む組成物を投与することを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
前記汚染物質が、単離された形態での上皮細胞を含む前記組織と接触する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記汚染物質が、上皮細胞を含む前記組織と接触する媒体中に存在する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記汚染物質が、周囲の空気、水、及び土壌からなる群から選択される媒体中に存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記周囲空気中に存在する前記少なくとも１種類の汚染物質が、燃焼ガス、産業汚染物質又は火災の煙から生じる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記周囲空気が煙関連汚染物質を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記周囲空気がタバコの煙を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記極性溶媒が水である、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記極性溶媒が、水及び少なくとも１種類の追加の極性溶媒を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記少なくとも１種類の追加の極性溶媒が、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、及びアセトンからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記極性溶媒が水及びグリセリンを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記極性溶媒抽出物及び／又はその画分が、４０〜６０％（ｗ／ｗ）のグリセリンを含む溶液の形態である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記極性溶媒抽出物又はその画分が、基本的に精油を欠く、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するのに有効な量のアステリスクスグラベオレンス植物由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分を含む組成物であって、美容的に及び／若しくは薬学的に許容される及び／若しくは皮膚用の希釈剤、賦形剤又は担体をさらに含む組成物。
【請求項３０】
前記極性溶媒抽出物又はその画分が、前記Ａ．グラベオレンス植物の地上部のいずれかに由来する、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記地上部が、茎、葉及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記極性溶媒が水である、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記極性溶媒が、水及び少なくとも１種類の追加の極性溶媒を含む、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記少なくとも１種類の追加の極性溶媒が、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、及びアセトンからなる群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記極性溶媒抽出物又は前記画分が、最高で１％ｗ／ｗの精油を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３６】
前記極性溶媒抽出物又はその画分が精油を欠く、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
さらに少なくとも１種類の追加の植物抽出物を含む、請求項２９〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
さらに少なくとも１種類の微細藻類抽出物を含む、請求項２９〜３７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３９】
さらに、抗酸化剤、キレート剤、洗浄剤、皮膚保護剤、日焼け止め、皮膚ライトニング剤、抗皺剤、抗炎症剤、抗老化剤、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される追加の活性薬剤を含む、請求項２９〜３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記組成物が、前記皮膚への局所投与のために製剤化された化粧品組成物である、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物が、スプレーノズルを介する投与用に製剤化される、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４２】
前記組成物が、練り歯磨き、歯磨きクリーム、ゲル、粉末、うがい薬、息清涼剤、歯肉マッサージクリーム、うがい用の錠剤、ロゼンジ及びチューインガムからなる群から選択される形態で製剤化された口腔ケア組成物である、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
前記少なくとも１種類の汚染物質の前記有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するのに使用するための組成物であって、アステリスクスグラベオレンス植物由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分を含む、請求項２９〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するのに使用するための組成物であって、アステリスクスグラベオレンス植物由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分を含む組成物。
【請求項４５】
少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するための組成物の調製のための、アステリスクスグラベオレンス植物由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分の使用。
【請求項４６】
前記組成物が、美容的に許容される又は皮膚用の希釈剤、賦形剤又は担体をさらに含む化粧品組成物である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記組成物が、治療上許容される希釈剤、賦形剤又は担体をさらに含む吸入用組成物である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４８】
前記組成物が、口腔ケアに適する希釈剤、賦形剤又は担体をさらに含む口腔ケア組成物である、請求項４５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物由来の抽出物及び／又はその画分、それを含む組成物並びに外因性毒素によって引き起こされる損傷からの組織の保護におけるその使用に関し、特に、外因性毒素、特に、環境汚染から生じる毒素の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するための、アステリスクスグラベオレンス由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分並びにそれを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
上皮は、結合組織、筋肉組織及び神経組織と共に、動物組織の４つの基本的な種類のうちの１つである。上皮組織は、身体全体の表面及び腔を覆っている。上皮は、哺乳動物の体の外側表面（皮膚）と内部の腔及び空洞の両方の部分を形成する。上皮細胞の機能には、保護、感覚の検出、選択吸収、分泌及び経細胞輸送が含まれる。
【０００３】
皮膚は、他の細胞型のうち、重層扁平角化上皮細胞及び生存角化細胞を含む。口の内側、食道及び直腸の一部を覆っている組織は、非角化重層扁平上皮で構成されている。外部環境から体腔を分離する他の表面は、単純な扁平上皮細胞、円柱上皮細胞、又は偽重層上皮細胞によってパディングされる。他の上皮細胞は、肺の内側、消化管、生殖管及び尿路を覆っており、外分泌腺及び内分泌腺を構成する。角膜の外側表面は、急成長しており、容易に再生される上皮細胞で覆われている。
【０００４】
これらの臓器及び組織において、上皮は、有害な物理的力、化学物質、汚染物質、病原体及び他の望ましくない物質に対する保護バリアの一部として機能する。これらの外因性悪化物の全ては、体内に入る前に上皮に挑戦しなければならない。
【０００５】
汚染から生じる毒素は、細胞及び組織の健康並びにそれを含む臓器に有害な影響を及ぼす。汚染は、例えば、タバコの煙、クリーニング製品及び埃から生じる屋内汚染、並びにエンジン煙、産業廃棄物及び一酸化炭素を含む屋外汚染を含む膨大な数の様々な要因によって引き起こされ得る。
【０００６】
毒性の蓄積は、臓器の正常な生理的機能を損なうことが知られている。環境毒素への一定の、時には毎日の暴露は、暴露された全ての臓器の細胞内に蓄積される損傷につながる。ほとんどの汚染物質が悪影響を及ぼす共通の細胞機構は、脂質及びタンパク質の酸化促進剤として直接作用するか、ＤＮＡ付加物、ＤＮＡの破損若しくは変異を形成するか、又は酸化ストレス及び炎症反応の誘導を促進するフリーラジカル生産者として作用する能力を含む。
【０００７】
フリーラジカル（活性酸素種及び窒素種）は、細胞の脂質、タンパク質、及び核のＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡに有害であり、それらの正常な機能を阻害する。加えて、それらは、細胞内シグナル伝達経路を妨害することができる。ヒトを含む真核好気性生物において、フリーラジカルは、正常な代謝中及び外因性環境暴露（例えば、照射、タバコの煙、金属及びオゾン）に応答して連続的に生成される。生体防御機構が圧倒されたときに酸化ストレスの状態が生じ、フリーラジカル濃度の増加につながる。この酸化ストレスは、外観不良及び皮膚の早期老化と関連することが示されている。酸化ストレスはまた、アテローム性動脈硬化症、心臓発作、脳卒中、慢性炎症性疾患（関節リウマチ）、白内障、中枢神経系障害（パーキンソン及びアルツハイマー病）、加齢関連疾患及び癌などの多種多様な変性疾患に関与している。
【０００８】
汚染物質は、主に、汚染された生成物の皮膚接触、吸入及び摂取を介して哺乳動物の組織に到達する。空気及び土壌の汚染（ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ）は、食料及び水の汚染（ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ）に大幅に寄与しており、その結果、摂取も、汚染物質摂取のルートになる。消化管及び気道に堆積した汚染物質は、上皮細胞によって吸収され得、その結果、毒性物質が全身循環に表れて、異なる組織に蓄積する。
【０００９】
特定の物質への暴露と上皮の損傷との間の関係は、普遍的に受け入れられている。例えば、ホルムアルデヒドは現在、発癌物質と皮膚感作物質の両方として世界的に認識されている。別の例は、タバコの煙の中に見られる汚染物質の化学物質である。タバコの煙は、４，７００種を超える化学化合物を含有しており、そのうちの約６０種は発癌性として指定されている。定期的に喫煙する人々は、上皮細胞を含む組織、特に、肺、口腔及び皮膚の損傷を受ける傾向がある。喫煙者の皮膚の老化プロセスも加速している。
【００１０】
高濃度での全ての種類の汚染は、哺乳動物の気道及び消化管に影響を及ぼし得る。それにもかかわらず、同様の効果が、より低い濃度の汚染物質への長期暴露でも観察される。特に、喘息の個体における気管支収縮及び呼吸困難が後に続く鼻並びに喉の刺激などの症状は、通常、二酸化硫黄、窒素酸化物、及びヒ素、ニッケル又はバナジウムなどの特定の重金属の増加したレベルへの暴露後に経験される。窒素酸化物などの大気汚染物質は、呼吸器感染症に対する感受性を増加させる。オゾン及び特定の重金属への慢性暴露は、肺機能を低下させるが、後者は、喘息、肺気腫、さらには肺癌にも関与する。肺気腫様病変は、二酸化窒素へ暴露されたマウスでも観察されている。
【００１１】
上皮は、外因性毒素の物理的除去を含む限られた活性毒素の防御を有する。例示的な経路は、皮膚の有機代謝回転及び間質空間からの毒素の溶解並びに汗を介してこれらを表面上へ戻す転送の一部としての汚染細胞の自然排除を含む。しかし、毒素に対する自然防御機構は、完全な保護を提供しない。
【００１２】
物理的に除去されていない毒素は、上皮内で代謝され得る。近年では、ヒト上皮細胞が、様々な種類の上皮細胞内の外因性毒素の代謝に特異的に関与するものを含めて、様々なチトクロームＰ４５０（ＣＹＰ）酵素を発現することが実証されている。生じた代謝産物は、潜在的に上皮及び身体も損傷し得る。皮膚の毒素に対する防御は、行動ルーチン（すなわち、暴露の回避、食事）、伝統的な医薬製品、治療製品及び／又は化粧品の使用を含むいくつかの要因に依存する。
【００１３】
伝統的な医学は、健康及び福祉に対する毒素堆積物の負の影響を長い間認識しており、多くの疾患及び障害のための標準的な治療法として身体の解毒を実践する。いくつかの変更を伴う同様の実践は、公衆によって非常に一般に自己実現されている。これらの解毒プロセスは、毒素への暴露の低減及び体内からの毒素の除去の増加に焦点を当てている。
【００１４】
皮膚は、上皮組織を含む身体の最大の、最も暴露されている臓器である。皮膚は多くの機能を有し、主な機能は、有害な物理的力、化学物質、汚染物質、病原体及び他の望ましくない物質に対する保護バリアである。皮膚は、３つの主要な層：防水バリアを提供し、皮膚の色調を作る皮膚の最外層の表皮；強い結合組織、毛包、及び汗腺を含有する真皮；脂肪及び結合組織で作られているより深い皮下組織（皮下）からなっている。表皮は、さらにいくつかの層：角質層、顆粒層、有棘層、及び基底層に細分される。
【００１５】
アステリスクス属（オグルマ族、キク科）は、８つの種及び５つの亜種からなり、その形態、系統、及び植物地理学が研究されている。アステリスクスグラベオレンス（Ｆｏｒｓｓｋ．）Ｌｅｓｓ．は、同義語としてＢｕｂｏｎｉｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ、Ｏｄｏｎｔｏｓｐｅｒｍｕｍ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ、又はＮａｕｐｌｉｕｓ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓを有する。この種の、固有の草本薬用芳香植物は、北アフリカからアジアの砂漠地域に広がっている。これは、発熱、消化管の訴え、頭痛及び気管支炎を治療するための健胃薬として、並びに抗炎症剤としてサハラの民間療法で使用されている。アステリスクスグラベオレンスの精油の化学組成が、最近、Ｃｒｉｓｔｏｆａｒｉら（Ｃｒｉｓｔｏｆａｒｉ Ｇら、２０１２．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ９：７２７−７３８）によって記載された。キク科の植物、特に、Ａ．ｐｓｅｕｄｏｓｃｉａｅｎａｅを含む乾燥した植物材料の混合物を含む伝統的な漢方製剤について開示されている（例えば、中国特許出願ＣＮ１０４２０８６１８、同ＣＮ１０４２７４７７０、同ＣＮ１０２８９５５５）。キク科の種のターチオフェン及びポリインは、ヘルペス及び口唇ヘルペスを治療するための植物由来の組成物中の成分として提案されている（国際（ＰＣＴ）出願公開番号ＷＯ２０１５／０３４６６５）。
【００１６】
国際（ＰＣＴ）出願公開番号ＷＯ２０１４／００６６２６は、害虫忌避剤として、他の植物の抽出物のうち、Ａ．グラベオレンス抽出物の使用を開示している。
【００１７】
皮膚疾患及び損傷を治療するための植物ベースの組成物を開発するための試みが継続的に行われている。例えば、米国特許出願公開第２００７／０１２２４９２号は、細胞外プロテアーゼを阻害することができる植物抽出物及び１種又は複数種の植物抽出物を含む皮膚用製剤を開示している。また、皮膚の皺又はたるみ、照射によって誘発される皮膚及び／又は毛髪の損傷、膚線の深化、皮膚の弾性変化を含む様々な皮膚の状態を治療又は予防するのに適する、並びに皮膚、毛髪及び／又は爪の日常ケアに適する皮膚用薬剤としての植物抽出物の使用も開示されている。
【００１８】
米国特許第８，７７１，７５８号は、コラゲナーゼ活性を阻害することができるＴｉｌｉａｃｏｒａ ｔｒｉａｎｄｒａ Ｄｉｅｌｓ植物抽出物を含む組成物を局所適用することによって、老化皮膚の審美的外観を改善する方法を開示している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
特に、環境ハザードによって、特に、汚染物質によって生じる有害な影響から、一般的には上皮細胞を含む組織及び皮膚を保護するのに有効な組成物並びに方法を改善していることは、非常に望ましく、都合がよい。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、汚染から哺乳動物の組織を保護するのに有用なアステリスクスグラベオレンス植物抽出物及びそれを含む組成物を提供する。本発明の抽出物及び組成物は、様々な汚染物質、特に、煙（例えば、エンジンの煙、タバコの煙、及び火災の煙）中に見られる化学物質及び産業廃棄物の中に見られる化学物質を含む化学物質への暴露により、上皮細胞を含む組織への損傷を防止するのに非常に有用である。
【００２１】
本発明は、極性溶媒に可溶性のあるアステリスクスグラベオレンス抽出物の画分が、外因性汚染物質と接触する皮膚及び上皮細胞を含む他の組織、例えば、肺組織にもたらされる毒性負荷に対する保護に有用である予想外の発見に部分的に基づく。該抽出画分は、それによって、皮膚の外観及び活力を改善し、早期皮膚老化を低減した。本発明の抽出物は、細胞生存率に対して顕著な保護効果を発揮し、煙汚染された媒体への暴露後に細胞生存率を増加させる。
【発明の効果】
【００２２】
一態様によれば、本発明は、少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護する方法であって、アステリスクスグラベオレンス植物由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分又はそれを含む組成物を、それを必要とする対象に投与し、それによって、少なくとも１種類の汚染物質から前記組織を保護することを含む方法を提供する。
【００２３】
特定の実施形態によれば、該対象は、少なくとも１種類の汚染物質に暴露されたか、かつ／又は暴露されるか、かつ／又は暴露されることが予想される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００２４】
特定の実施形態によれば、少なくとも１種類の汚染物質は、燃焼ガス、産業汚染及び煙のうちの少なくとも１つから生じる。特定の実施形態によれば、該汚染物質は、煙関連汚染物質である。特定の例示的な実施形態によれば、該汚染物質は、タバコの煙から生じる。
【００２５】
特定の実施形態によれば、該対象は、煙に暴露されたか、かつ／又は暴露されるか、かつ／又は暴露されることが予想される。いくつかの実施形態によれば、該煙はタバコの煙である。他の実施形態によれば、該対象は、タバコ喫煙者であるか、又はタバコの煙に暴露される（二次又は受動喫煙者）。
【００２６】
特定の実施形態によれば、該対象は、少なくとも１種類の汚染物質に散発的に暴露される。他の実施形態によれば、該対象は、毎日、少なくとも１種類の汚染物質に暴露される。
【００２７】
いくつかの実施形態によれば、少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から組織を保護すると、組織細胞の生存率の増加、組織細胞の健康の改善、及び組織細胞の早期老化の低減からなる群から選択される少なくとも１つの結果がもたらされる。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。特定の例示的な実施形態によれば、該組織細胞は上皮細胞である。特定の実施形態によれば、該組織を保護することは、少なくとも１種類の汚染物質に対する前記組織細胞の耐性を増加させることを含む。特定の例示的な実施形態によれば、該組織を保護することは、少なくとも１種類の汚染物質への組織上皮細胞の耐性を増加させることを含む。
【００２８】
任意の特定の理論又は作用機序に拘束されることなく、本発明の抽出物は、前記汚染物質に対する上皮細胞の応答又は感受性を減少させることによって、上皮細胞を含む組織の該汚染物質への耐性を増加させるのに有効である。
【００２９】
特定の実施形態によれば、本発明の方法は、皮膚、鼻腔、口腔、咽頭、喉頭、気管及び／又は肺組織からなる群から選択される組織を保護するためのものである。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００３０】
特定の例示的な実施形態によれば、上皮組織は皮膚の一部を形成する。これらの実施形態によれば、本方法は、Ａ．グラベオレンス由来の極性溶媒抽出物及び／又はその画分又はそれを含む組成物を、それを必要とする対象の皮膚に局所投与することを含む。さらなる実施形態によれば、少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から皮膚を保護すると、皮膚細胞の生存率の増加、皮膚の外観の改善、及び／又は早期皮膚老化の低減からなる群から選択される少なくとも１つの結果がもたらされる。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。特定の実施形態によれば、皮膚の外観の改善及び／又は早期皮膚老化の低減には、皮膚の皺、皮膚の褐色斑及び皮膚の赤色斑のうちの少なくとも１つの出現の低減が含まれる。いくつかの実施形態によれば、皮膚の外観の改善及び／又は早期皮膚老化の低減には、所定の閾値と比較した皮膚の水和の値の維持及び／又は改善が含まれる。
【００３１】
特定の実施形態によれば、皮膚の水和の所定の閾値は、少なくとも１種類の汚染物質に暴露されていない同一の対象の皮膚領域から得られる。他の実施形態によれば、皮膚の水和の所定の閾値は、少なくとも１種類の汚染物質に暴露されていない対象の皮膚領域から得られる。
【００３２】
さらなる例示的な実施形態によれば、上皮組織は、肺、気管及び鼻腔のうちの少なくとも１つの一部を形成する。特定の実施形態によれば、本方法は、該極性溶媒抽出物、及び／又はその画分又はそれを含む組成物を吸入により投与することを含む。さらに又はあるいは、本方法は、該極性溶媒抽出物、及び／又はその画分又はそれを含む組成物をスプレーノズルによって投与することを含む。
【００３３】
さらなる追加の実施形態によれば、該上皮組織は、咽頭及び喉頭のうちの少なくとも１つの一部を形成する。これらの実施形態によれば、該極性溶媒抽出物、及び／又はその画分又はそれを含む組成物は、口腔ケアのために製剤化される。
【００３４】
対象に投与されるＡ．グラベオレンス抽出物及び／又はその画分の濃度並びに投与計画は、とりわけ、治療される組織の種類、暴露の重症度及び少なくとも１種類の汚染物質によって引き起こされる症状の重症度に依存する。特定の実施形態によれば、該極性溶媒抽出物及び／又はその画分を含む組成物は、０．１％〜１０％（ｗ／ｗ）の濃度で投与される。他の実施形態によれば、該組成物は、０．２％〜５．０％の極性溶媒抽出物及び／又はその画分を含む。特定の例示的な実施形態によれば、１％の該極性溶媒抽出物及び／又はその画分を含む組成物が投与される。
【００３５】
特定の実施形態によれば、該抽出物、その画分又はそれを含む組成物は、少なくとも１日１回投与される。特定の例示的な実施形態によれば、該抽出物、その画分又はそれを含む組成物は、１日２回投与される。いくつかの実施形態によれば、該抽出物、その画分又はそれを含む組成物は、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間又は少なくとも４週間投与される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。特定の例示的な実施形態によれば、該抽出物、その画分又はそれを含む組成物は、４週間中に投与される。
【００３６】
いくつかの実施形態によれば、該汚染物質は、その単離された形態の上皮細胞を含む組織と接触する。他の実施形態によれば、該汚染物質は、対象組織と接触する媒体中に存在する。
【００３７】
特定の実施形態によれば、該汚染物質及び／又はそれを含む媒体は、該対象の皮膚と接触する。他の実施形態によれば、該汚染物質及び／又はそれを含む媒体は、該対象の口腔と接触する。さらなる実施形態によれば、該汚染物質及び／又はそれを含む媒体は、該対象の呼吸器系と接触する。
【００３８】
特定の実施形態によれば、該汚染物質は、周囲の空気、水及び土壌からなる群から選択される媒体中に存在する。
【００３９】
いくつかの実施形態によれば、該対象はヒトである。特定の例示的な実施形態によれば、該ヒト対象は喫煙者である。
【００４０】
特定の実施形態によれば、本発明の組成物及び方法は、該極性溶媒抽出物の画分を使用する。他の実施形態によれば、本発明の組成物及び方法は、Ａ．グラベオレンス由来の完全な極性溶媒抽出物を使用する。
【００４１】
いくつかの実施形態によれば、該極性溶媒抽出物及び／又はその画分は、アステリスクスグラベオレンス植物の地上部のいずれかに由来する。さらなる実施形態によれば、該地上部は、茎、葉、種子、花、果実、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態によれば、該地上部は、茎及び／又は葉である。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００４２】
いくつかの実施形態によれば、該極性溶媒は水である。他の実施形態によれば、該極性溶媒は、水及び少なくとも１種類の追加の極性溶媒を含む。特定の実施形態によれば、該追加の極性溶媒は、１，２，３−トリヒドロキシプロパン（グリセリン又はグリセロールとしても知られる）、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、及びアセトンからなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態において、該極性溶媒は、水及びグリセリンを含む。他の実施形態において、該極性溶媒は、水及びブチレングリコールを含む。さらに他の実施形態において、該極性溶媒は、プロピレングリコールを含む。特定の例示的な実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、水及びグリセリンを含む溶液の形態にあり、前記グリセリンの濃度は、溶液の全重量に対して４０％〜６０％（ｗ／ｗ）の範囲にある。
【００４３】
特定の典型的な実施形態によれば、該溶液は、５０％グリセリン（ｗ／ｗ）を含む。
【００４４】
特定の実施形態によれば、本発明による抽出物及び／又はその画分並びにグリセリンを含む溶液は、透明で、均一な溶液の形態にある。いくつかの例示的な実施形態によれば、該溶液は、目に見える凝集体を形成することなく、４０〜５０℃の温度で少なくとも３ヶ月間安定である。
【００４５】
特定の実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、基本的に精油を欠く。いくつかの実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、精油を最高で１．０％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０３％、０．０１％、０．００５％、又は０．００１％ｗ／ｗ含む。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。さらなる実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、精油を欠く。
【００４６】
特定の実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、基本的に油を欠く。
【００４７】
追加の態様によれば、本発明は、少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するのに有効な量でアステリスクスグラベオレンス植物由来の極性溶媒抽出物又はその画分を含む組成物であって、さらに美容的に及び／若しくは薬学的に許容される及び／若しくは皮膚用の希釈剤、賦形剤又は担体を含む組成物を提供する。
【００４８】
いくつかの実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンス植物の地上部のいずれかに由来する。さらなる実施形態によれば、該地上部は、茎、葉、種子、花、果実、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態によれば、該地上部は、茎及び／又は葉である。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００４９】
特定の実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、基本的に精油を欠く。いくつかの実施形態によれば、該抽出画分は、精油を最高で１％、０．５％、０．１％、０．０５％、０．０３％、０．０１％、０．００５％、又は０．００１％ｗ／ｗ含む。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。さらなる実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、精油を欠く。
【００５０】
特定の実施形態によれば、該抽出物又はその画分は、基本的に油を欠く。
【００５１】
特定の実施形態によれば、該組成物は、該組成物の全重量に対して０．１％〜１０％（ｗ／ｗ）の濃度でアステリスクス抽出物及び／又はその画分を含む。他の実施形態によれば、該組成物は、０．２％〜５％の濃度で該抽出物又はその画分を含む。特定の例示的な実施形態によれば、該組成物は、該組成物の全重量に対して１％（ｗ／ｗ）の濃度で該抽出物及び／又はその画分を含む。
【００５２】
いくつかの実施形態によれば、該組成物は、さらに、少なくとも１種類の追加の植物抽出物を含む。他の実施形態によれば、該組成物は、さらに、少なくとも１種類の微細藻類抽出物を含む。
【００５３】
いくつかの実施形態によれば、該組成物は、さらに、抗酸化剤、キレート剤、洗浄剤、皮膚保護剤、日焼け止め、皮膚ライトニング剤、抗皺剤、抗炎症剤、抗老化剤、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される追加の活性剤を含む。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００５４】
いくつかの実施形態によれば、該組成物は、水溶液、クリーム、ローション、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン、マイクロエマルジョン、ナノエマルジョン、ゲル、血清及びミルクからなる群から選択される形態で製剤化される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００５５】
特定の実施形態によれば、該組成物は、局所投与用に製剤化される。当技術分野で知られているような任意の局所製剤は、本発明の教示に従って使用することができる。
【００５６】
特定の実施形態によれば、該組成物は、美容的に許容される若しくは皮膚用の担体、希釈剤及び／又は賦形剤をさらに含む化粧品組成物又は皮膚用組成物である。
【００５７】
いくつかの実施形態によれば、美容的に許容される又は皮膚用の担体は、リポソーム、ミセル構造、マイクロカプセル、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００５８】
いくつかの実施形態によれば、該化粧品組成物は、さらに、美容的に許容される又は皮膚用の添加剤を含む。特定の実施形態によれば、該添加剤は、脂肪、乳化剤、共乳化剤、親水性ゲル化剤、親油性ゲル化剤、防腐剤、溶媒、香料、充填剤、親水性フィルター、親油性フィルター、染料、顔料、中和剤、ｐＨ緩衝剤、浸透促進剤、皮膚軟化剤、ポリマー及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００５９】
他の実施形態によれば、該組成物は、スプレーノズルによる投与用に製剤化される。
【００６０】
いくつかの実施形態によれば、該組成物は、吸入用組成物である。特定の実施形態によれば、該吸入用組成物は、吸入装置を使用することによって気道に送達される。特定の実施形態によれば、該吸入装置は、吸入器及び噴霧器からなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。特定の実施形態によれば、該吸入用組成物は、加湿器により投与される。他の実施形態によれば、該吸入用組成物は、空気濾過システムを介して投与される。
【００６１】
いくつかの実施形態によれば、該組成物は、口腔ケア組成物である。特定の実施形態によれば、該口腔ケア組成物は、練り歯磨き、歯磨きクリーム、ゲル、粉末、うがい薬、息清涼剤、歯肉マッサージクリーム、うがい用の錠剤、ロゼンジ及びチューインガムからなる群から選択される形態である。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。特定の実施形態によれば、該口腔ケア組成物は、白色着色剤、白色化剤、酵素、抗歯垢剤、抗着色剤、抗微生物剤、抗カリエス剤、香味剤、冷却剤及び唾液分泌剤からなる群から選択される追加の薬剤を含む。いくつかの実施形態によれば、該口腔ケア組成物は、さらに、研磨剤、界面活性剤、キレート剤、フッ化物源、増粘剤、緩衝剤、溶媒、湿潤剤、担体、及び増量剤からなる群から選択される試薬を含む。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００６２】
追加の実施形態によれば、本発明の組成物は、汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するのに使用するためのものである。特定の実施形態によれば、該組織は、皮膚、鼻腔、口腔、咽頭、喉頭、気管及び／又は肺組織からなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００６３】
追加の態様によれば、本発明は、少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するのに使用するための組成物であって、アステリスクス植物由来の極性溶媒抽出物又はその分画を含む組成物を提供する。
【００６４】
アステリスクス植物に由来する抽出物、その画分及びそれを含む組成物は、上述したとおりである。
【００６５】
本発明の他の目的、特徴及び利点は、以下の説明及び実施例から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】タバコの煙で中毒化された角化細胞の生存率に対するＡ．グラベオレンス抽出物の効果のグラフィック表現を提供する。該抽出物の効果を、０．００１％（図１Ａ）及び０．００２％（図１Ｂ）の濃度で試験した。
【図２】Ａ．グラベオレンス抽出物が老化防止効果を有することを示す。皺の数（図２Ａ）及び皺の体積（図２Ｂ）を、抽出物での処置（明るい色のバー）又はプラセボによる処置（暗い色のバー）について試験した。示されるように、百分率変化を１４及び２８日後に測定した。大きな変化にアスタリスク（＊）で印をつけている。
【図３】Ａ．グラベオレンス抽出物で処置した皺の臨床評価を示す。皺のグレースケール（ＷＧＳ）を、抽出物（明るい色のバー）及びプラセボ（暗い色のバー）について評価した。示されるように、百分率変化を１４及び２８日後に測定した。大きな変化にアスタリスク（＊）で印をつけている。ＮＳ−重要ではない。
【図４】Ａ．グラベオレンス抽出物で処置した皮膚の臨床評価を示す。肌荒れ（図４Ａ）及び皮膚の質感（図４Ｂ）を、抽出物（明るい色のバー）及びプラセボ（暗い色のバー）について評価した。示されるように、百分率変化を１４及び２８日後に測定した。大きな変化にアスタリスク（＊）で印をつけている。ＮＳ−重要ではない。
【図５】皮膚の色に対するＡ．グラベオレンス抽出物の効果を示す。皮膚の色を、Ｌ＊（より明るい色の皮膚の増加）及びｂ＊（黄色の皮膚の減少）から算出される個々の類型角度（Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ Ｔｙｐｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｇｌｅ（ＩＴＡ））単位により評価した。ＩＴＡを、抽出物（明るい色のバー）及びプラセボ（暗い色のバー）について評価した。示されるように、百分率変化を１４及び２８日後に測定した。大きな変化にアスタリスク（＊）で印をつけている。ＮＳ−重要ではない。
【図６】Ａ．グラベオレンス抽出物で処置した皮膚の皮膚水和の変化を示す。皮膚の水和を、抽出物（明るい色のバー）及びプラセボ（暗い色のバー）について評価した。示されるように、百分率変化を１４及び２８日後に測定した。大きな変化にアスタリスク（＊）で印をつけている。
【図７】Ａ．グラベオレンス抽出物で処置した皮膚上に見えるスポット数の変化を示す。目に見えるスポット数を、抽出物（明るい色のバー）及びプラセボ（暗い色のバー）について調べた。示されるように、百分率変化を１４及び２８日後に測定した。大きな変化にアスタリスク（＊）で印をつけている。ＮＳ−重要ではない。
【図８】タバコ煙凝縮物（ＣＳＣ）への暴露後の、肺由来細胞に対するＡ．グラベオレンス抽出物（ＡＳ１−８１−１、図８Ａ及びＡＳ１−９１−１、図８Ｂ）の２つの調製物の保護効果を実証する。
【図９】ＴＵＮＥＬアッセイによって測定される、肺胞基底上皮細胞に対する、タバコ煙凝縮物（ＣＳＣ）が引き起こすＤＮＡ断片化からのＡ．グラベオレンス抽出物の保護効果を実証する。
【図１０】８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）アッセイによって測定される、肺胞基底上皮細胞に対する、タバコ煙凝縮物（ＣＳＣ）が引き起こすＤＮＡ断片化からのＡ．グラベオレンス抽出物の保護効果を実証する。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
本発明は、汚染物質が上皮細胞を含む組織へ引き起こす損傷を予防及び／若しくは治療するためのアステリスクスグラベオレンス由来の抽出物並びに／又はその画分並びに／又はそれを含む組成物を提供する。
【００６８】
本発明は、Ａ．グラベオレンスの極性溶媒抽出物が、タバコの煙に汚染された媒体によって誘導される死及びＤＮＡ損傷から培養ヒト上皮細胞（表皮細胞及び肺細胞）を保護した予想外の発見に部分的に基づく。（ヘビースモーカー対象の皮膚に局所適用することにより）インビボで煙に暴露された皮膚に適用した場合に、該抽出物は、皮膚に対して正の効果を有し、皺の数及び体積を減少させ、皮膚の色調、質感及び水和を改善した。
【００６９】
いかなる特定の理論又は作用機序に拘束されることなく、汚染物質、特に、煙関連汚染物質によって引き起こされる損傷に対する上皮細胞の保護及び／又は耐性の増加における本発明の抽出物及び組成物の高い有効性は、遺伝子発現に影響を及ぼす能力、特に、炎症、酸化及び細胞死のプロセスに関与するタンパク質をコードする遺伝子の発現を減少させ、毒素の代謝に関与するタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子の発現を増加させる能力に帰属し得る。細胞防御機構への抽出物の積極的な貢献は、極性溶媒に可溶性のあるアステリスクスグラベオレンス植物内に存在する特定の成分及び／又は植物成分の保護的な性質を維持する抽出方法に帰属し得る。
【００７０】
本発明の抽出物及び組成物は、様々な汚染物質が上皮組織へ引き起こす損傷を防止するのに非常に有用である。本発明の抽出物及び組成物は、さらに、火災の煙、エンジンの燃焼ガス及び産業汚染によって引き起こされるものなどの大気汚染の損傷を防止するのに有用である。大気汚染源の１つの例としては、タバコの煙である。多くの研究が、タバコの煙の中に見られる毒素と肺及び皮膚の上皮細胞への損傷との間の関係を示している。タバコの煙は、４，７００種を超える化学化合物を含有し、そのうちの約６０種は、発癌性として広く認識されている。タバコの煙は、したがって、空中浮遊汚染の広いモデルとして役立ち得る。
【００７１】
定義
極性溶媒に可溶性のある「極性溶媒抽出物」及び「アステリスクス植物由来の極性溶媒抽出物」並びに「アステリスクス植物由来の抽出物」という用語は、本明細書において互換的に使用され、アステリスクスグラベオレンスの任意の地上部を極性溶媒で抽出することによって得られる抽出物を指す。「その画分」という用語は、該抽出物の少なくとも１つの画分を指す。特定の例示的な実施形態によれば、該画分は、供給源の粗抽出物を濾過することにより得られる。
【００７２】
少なくとも１種類の汚染物質を参照して「有害な影響」又はその複数の「有害な影響」という用語は、上皮細胞を含む組織、特に、哺乳類の体の外側の表面（皮膚）と内側の腔及び空洞の両方を覆っている組織に引き起こされる任意の害を指す。有害な影響は、限定されないが、活力の喪失、代謝性疾患、早期老化及び／又は細胞死を含み得る。本明細書で使用する「皮膚に対する有害な影響」という用語は、限定されないが、早期皮膚老化、活力の喪失、及び皮膚の外観の悪化、特に、皺の形成を含む、本発明に開示されているような汚染物質によって皮膚に引き起こされる任意の害を指す。
【００７３】
本明細書で使用する「皮膚損傷」という用語は、本発明に記載の汚染物質への暴露の結果としての、皮膚層のいずれかへの害を指す。本明細書で使用する「汚染物質」という用語は、効果が望ましくない環境、又はそれが導入された媒体の特性及び機能に悪影響を及ぼす環境へ導入される化合物を指す。本明細書で使用する「汚染物質」という用語は、主に哺乳動物に有毒及び／又は有害な異種化学化合物を指す。特定の実施形態によれば、該汚染物質は、煙関連物質、特に、上皮細胞を損傷する煙関連物質である。特定の例示的な実施形態によれば、該煙は、タバコの煙である。
【００７４】
「喫煙者」という用語は、その最も広い範囲で、本明細書で使用され、タバコ、パイプ及び任意の他の一般的に使用される喫煙物質を喫煙する対象を指す。
【００７５】
本明細書で使用する「二次又は受動喫煙者」という用語は、喫煙者によって生成されるタバコの煙に暴露される対象を指す。
【００７６】
「上皮」、「上皮組織」、及び「上皮細胞」という用語は、本明細書中で互換的に使用され、非常に少ない細胞間物質によって分離された細胞の１つ又は複数の層で構成され、身体の及びその臓器の最も内側及び最も外側の表面の被覆を形成している膜状組織を指すことを意味する。該用語は、生存可能な角化細胞を明示的に含む。「上皮細胞を含む組織」という用語は、その構造の一部として上皮細胞を含む組織を指す。本発明による上皮細胞は、とりわけ、皮膚、口腔及び鼻腔、咽頭、喉頭、食道、気管並びに肺の中に見られる。
【００７７】
本明細書で使用する「精油」という用語は、アステリスクスグラベオレンスの葉、茎、花又は小枝由来の揮発油を指す。精油は、植物材料由来の疎水性油であり、実質的に脂質又は脂質油を欠く。
【００７８】
「基本的に油を欠く」及び「基本的に精油を欠く」という用語は、当技術分野で一般的な方法によって、検出可能なレベル以下の量で油若しくは精油を含む抽出物又はその画分を定義するために、本発明の抽出物に関連して本明細書で使用される。特定の実施形態によれば、本発明の極性溶媒抽出物又はその画分は、１％未満の油又は１％未満の精油を含む。特定の追加の実施形態によれば、本発明の極性溶媒抽出物又はその画分は、０．１％未満の油又は０．１％未満の精油を含む。
【００７９】
本明細書で使用する「及び／又は」という用語は、列挙された関連項目の１つ又は複数の任意の及び全ての組み合わせを含む。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００８０】
一態様によれば、本発明は、少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護する方法であって、アステリスクスグラベオレンス植物由来の極性溶媒抽出物若しくはその分画又はそれを含む組成物を、それを必要とする対象に投与し、それによって少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から前記組織を保護することを含む方法を提供する。
【００８１】
特定の実施形態によれば、該対象は哺乳動物である。特定の例示的な実施形態によれば、該対象はヒトである。
【００８２】
アステリスクスグラベオレンスは、キク科に属し、暑くて乾燥した環境で育つ。植物精油は、発熱、消化管の訴え、頭部の痛み及び気管支炎を治療するための健胃薬として、並びに抗炎症剤として伝統医学で知られている。抗菌特性及び低血糖特性のために該植物が使用されることも記載されている（Ｃｒｉｓｔｏｆａｒｉら、２０１２、前掲）。キク科のこのような使用は知られていたが、アステリスクスグラベオレンス抽出物は、本発明の前に、化粧品成分の国際命名法（ＩＮＣＩ）の名が割り当てられておらず、パーソナルケア製品評議会（米国）及び／又は中国内の既存の化粧品原料の一覧表に登録されていなかった。予想外にも、本発明は、アステリスクスグラベオレンスの極性溶媒抽出物が、実質的に精油を欠き、皮膚の損傷などの汚染関連上皮損傷を保護及び／又は治療及び／又は防止するのに有用であることをこれから開示する。
【００８３】
本発明の抽出物は、その自然の生息地で生育したＡ．グラベオレンス植物から、又は指定された農業条件下で生育した植物から得ることができる。任意の様々な植物を使用することができる。
【００８４】
該抽出物は、該植物の任意の部分から得ることができる。いくつかの実施形態によれば、該抽出物は、アステリスクスグラベオレンス植物の地上部のいずれかに由来する。さらなる実施形態によれば、該地上部は、茎、葉、種子、果実及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。特定の実施形態によれば、該地上部は、茎や葉である。任意の可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【００８５】
いくつかの実施形態によれば、アステリスクスグラベオレンス由来の抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンスの地上部における精油の割合と比較して５０体積％未満の精油を含む。特定の実施形態によれば、アステリスクスグラベオレンス由来の抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンスの地上部における精油の割合と比較して６０体積％未満の精油を含む。特定の実施形態によれば、アステリスクスグラベオレンス由来の抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンスの地上部における精油の割合と比較して７０体積％未満の精油を含む。特定の実施形態によれば、アステリスクスグラベオレンス由来の抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンスの地上部における精油の割合と比較して８０体積％未満の精油を含む。特定の実施形態によれば、アステリスクスグラベオレンス由来の抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンスの地上部における精油の割合と比較して９０体積％未満の精油を含む。特定の実施形態によれば、アステリスクスグラベオレンス由来の抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンスの地上部における精油の割合と比較して９５体積％未満の精油を含む。特定の実施形態によれば、アステリスクスグラベオレンス由来の抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンスの地上部における精油の割合と比較して９９体積％未満の精油を含む。特定の実施形態によれば、アステリスクスグラベオレンス由来の抽出物又はその画分は、アステリスクスグラベオレンスの地上部における精油の割合と比較して、９９．９体積％未満の精油を含む。
【００８６】
いくつかの実施形態によれば、アステリスクス由来の抽出物又はその画分は、６−オキソシクロネロリドールを欠く。特定の実施形態によれば、本発明の抽出物は、０．７％、０．５％、０．２％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％未満の６−オキソシクロネロリドールを含む。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態によれば、アステリスクス由来の抽出物又はその画分は、６−ヒドロキシシクロネロリドールを欠く。他の実施形態によれば、アステリスクス由来の抽出物又はその画分は、シス−８−アセトキシクリサンテニルアセテートを欠く。
【００８７】
当技術分野で知られているような様々な極性溶媒を用いて、本発明の抽出物を得ることができる。特定の例示的な実施形態によれば、該極性溶媒は、水並びに１，２，３−トリヒドロキシプロパン（グリセリン又はグリセロールとしても知られている）、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、メタノール、及びアセトンからなる群から選択される少なくとも１種類の追加の極性溶媒を含む。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【００８８】
特定の例示的な実施形態によれば、汚染物質保護成分は、所望の抽出画分を得た後に、水性媒体に添加されるグリセリン（１，２，３−トリヒドロキシプロパン）と共に、極性溶媒として水を使用してＡ．グラベオレンス植物部分から抽出される。これらの実施形態によれば、本発明は、Ａ．グラベオレンスの水抽出物の少なくとも１つの画分及びグリセリンを含む抽出液を提供する。いくつかの実施形態によれば、Ａ．グラベオレンスの水抽出物の少なくとも１つの画分とグリセリンの比は、１：３〜３：１である。特定の現在の例示的な実施形態によれば、該比は１：１である。目に見える凝集体を形成することなく、４０〜５０℃の高温下で保持した場合でも、この抽出液は、少なくとも３ヶ月間、透明、半透明、均質かつ非常に安定である。
【００８９】
いくつかの実施形態によれば、該汚染物質は、その単離された形態で上皮細胞を含む組織と接触する。他の実施形態によれば、該汚染物質は、対象組織と接触する媒体中に存在する。
【００９０】
本明細書で使用する「汚染」という用語は、少なくとも１種類の汚染物質を含む媒体を指す。
【００９１】
産業、乗り物の煙霧、タバコの煙及び他の源によって生じる都市の大気汚染は、ヒトの皮膚に有害な影響を有することが知られており、早期老化及び皺を生じさせる（Ｄｒａｋａｋｉ Ｅら、２０１４、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２：１−６）。汚染及びスモッグは、吸い込まれ、かつとりわけ、皮膚を介して吸収される分子及び粒子の非常に複雑な混合物で構成される。汚染の組成は、著しく変化し得るが、典型的にはいくつかの主要なカテゴリーの化合物を含有する（Ｇｈｅｌｆｉ Ｅ．２０１１．環境健康と大気汚染の事例のアドバンストピック（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ａｉｒ Ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ Ｃａｓｅ Ｓｔｕｄｉｅｓ）、Ａｎｃａ Ｍａｒｉａ Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕ（編）、ＩｎＴｅｃｈ．ｐｐ．１２１−１５６）。
【００９２】
タバコの煙（最も一般的な種類であるタバコの煙）は、大気汚染源とも考えられており、ヒトの健康に有害であることが知られている最大で４６００種の化合物及び毒素を含む。喫煙は、早期老化を引き起こし、皮膚上に目に見える顕著な影響を有する（Ｏｒｔｉｚ Ａ ａｎｄ Ｇｒａｎｄｏ Ｓ Ａ．２０１２．Ｉｎｔ Ｊ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ５１：２５０−２６２）。
【００９３】
汚染物質は、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、多環芳香族炭化水素（ＰＨＡ）、酸化物及び重金属から選択される１つ又は複数のグループに分類することができる。
【００９４】
ＶＯＣは、車の排ガス並びに塗料中の有機溶媒の使用及び様々な産業施設から空気中に排出される。このような化合物の例としては、脂肪族炭化水素、酢酸エチル、グリコールエーテル及びアセトンが挙げられる。タバコの煙の排出は、ベンゼン及び関連するモノ芳香族、アルデヒド及びケトン、フラン、アクリロニトリル、１，３−ブタジエン、塩化ビニル、並びにニトロメタンを含むＶＯＣを含み、全ては大気汚染物質として知られている（Ｓａｍｐｓｏｎ Ｍ Ｍら、２０１４．Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ．８６（１４）：７０８８−７０９５）。ＶＯＣへの皮膚の暴露は、サイトカインの増加につながる可能性があり、ひいては、炎症、アレルギー反応、アトピー性皮膚炎又は湿疹につながり得る。
【００９５】
ＰＡＨは、石炭、石油、ガソリン、ゴミ、タバコ、木材、又は炭火焼き肉などの他の有機物質の燃焼から放出される１００種以上の異なる化学物質のグループを構成している。それらはまた、多核芳香族炭化水素と呼ばれている。これらの環状分子は、皮膚癌の発症に関与している。活性化されたとき、それらは、皮膚に浸透し、細胞ＤＮＡに結合することができるジオール及びエポキシドを形成し、発癌につながる。いくつかの化学薬品（例えば、ベンゾ［ａ］ピレン）について、該影響はＵＶＡへの暴露で増強されたことも留意されたい。タバコの煙は、（とりわけ）１−メチルアントラセン（１−ＭＡ）、フェナントレン（ＰＡ）、及びベンゾ［ａ］ピレンを含むＰＡＨを含有することも知られている（Ｌｅｅ  ＬＬら、２００２．Ｂｏｎｅ ３０（６）：９１７−９２３；Ｓｉｄｄｅｎｓ  Ｌ Ｋら、２０１２．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２６４（３）：３７７−３８６；Ｔｉｔｈｏｆ  Ｐ Ｋら、２００２．ＦＡＳＥＢ Ｊ．１６（１１）：１４６３−４）。
【００９６】
二酸化硫黄、二酸化窒素及び一酸化炭素などの酸化物は、大気汚染及びタバコの煙の両方に存在することが知られている分子の別のグループを形成する。ＮＯｘ及びＣＯは、アトピー性湿疹及び屈面性湿疹並びにアトピー性皮膚炎に関連している（Ｄｒａｋａｋｉ、２０１４年、前掲）。
【００９７】
活性酸素種（ＲＯＳ）及びＲＯＳに関連したフリーラジカルは、酸化ストレス及び脂質過酸化と関連している。これらは、経表皮水分喪失、皮膚における結合組織の変性及び結合皮膚組織を分解するＭＭＰ（メタロプロテイナーゼ）酵素の増加につながることが示されている（Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ  Ｌ Ｎ Ｋら、１９９８．Ｓｕｒｇｅｒｙ １２３：４５０−４５５）。タバコの煙によって放出されたフリーラジカルはまた、ＤＮＡ損傷につながることが示されている（Ａｌｂｉｎｏ Ａ Ｐら、２００６．Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ ２８：１４９１−１５０５）。活性酸素種は、タバコの煙と大気汚染の両方に見られる。その有害な影響の例として、ニューヨーク市の混雑した道路近くでの運動の３０分後に、対象の血液カルボキシヘモグロビンにおいて１．７％から５．１％への急性上昇が測定された（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ Ｊ Ｐ．１９８３．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ Ｓｐｏｒｔｓｍｅｄ １１：１３５−１３８）。
【００９８】
カドミウム、鉛、ニッケル、及びクロムを含む微量の重金属も、大気汚染とタバコの煙の両方に見られる。微量レベルの重金属への暴露は、皮膚の質に影響を及ぼすことが示されていないが、経時的な重金属の蓄積が、癌のより高いリスクと関連することが示された。
【００９９】
追加の重要なクラスの汚染物質は、粒子状物質（ＰＭ）である。このクラスの汚染物質は、その組成ではなく、むしろその大きさによって定義される。粒子状物質は、多くの場合、３つの主要なグループに分けられる：２．５〜１０μｍのサイズ範囲（ＰＭ１０〜ＰＭ２．５）のより大きな粒子を含有する粗粒分；最大２．５μｍのより小さいサイズ範囲（ＰＭ２．５）の粒子を含有する細粒分；並びに０．１μｍより小さく、超微粒子と呼ばれる微細画分中の粒子。
【０１００】
空気中の粒子状物質の総質量の大部分は、通常、０．１〜２．５μｍの範囲の微粒子で構成されている。超微粒子は、多くの場合、空気中の汚染物質の総質量にわずか数パーセント寄与するが、９０％超の粒子数を包含する。
【０１０１】
タバコの煙は、車の排ガスに類似したＰＭ２．５を排出し（Ｉｎｖｅｒｎｉｚｚｉ Ｇら、２００４．Ｔｏｂ Ｃｏｎｔｒｏｌ １３：２１９−２２１)、これらの粒子がヒトの健康に、特に皮膚の健康に対して有害な影響を有することを多くの研究が示している。ＰＭ汚染への暴露と色素斑、鼻唇溝、及び皺を含む皮膚老化の徴候との間の相関が見出されている（Ｖｉｅｒｋｏｔｔｅｒ Ａら、２０１０．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １３０：２７１９−２７２６）。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、汚染は大気汚染である。いくつかの実施形態において、大気汚染は煙である。他の実施形態において、大気汚染は、タバコの煙である。
【０１０３】
タバコの煙の中に見られる化合物の多くは、空気が汚染された都市及び産業エリアでも見られる。したがって、タバコの煙の組成物は、大気汚染の組成物の代表例である。
【０１０４】
特定の例示的な実施形態によれば、該汚染物質は、表１に示す汚染物質からなる群から選択される。
【０１０５】
【表１】
2018503671.tif 000002
2018503671.tif 000003
【０１０６】
本発明は、これから、Ａ．グラベオレンスの極性溶媒抽出が汚染物質、特に煙関連汚染物質によって引き起こされる有害な影響及び／又は損傷から上皮細胞を保護するのに非常に有効であることを示す。該抽出物及び該抽出物を含む組成物は、したがって、汚染、特に煙関連汚染に暴露される傾向にある対象、特にヒト対象を保護するのに有用である。
【０１０７】
特定の実施形態によれば、該ヒト対象は、タバコの煙に暴露される。特定の例示的な実施形態によれば、該ヒト対象は、ヘビースモーカーである。
【０１０８】
該抽出物又はその画分の投与量及び投与経路は、当業者に知られているとおり、保護されるべき標的組織、汚染物質への暴露の程度に依存し、かつ性別、年齢及び一般的な健康状態を含む対象の特性に依存する。特定の例示的な実施形態によれば、Ａ．グラベオレンス抽出物又はその画分の有効用量は、０．１％〜１０％、０．２％〜５％又は約１％である（Ａ．グラベオレンス抽出物又はその画分を含む組成物の全重量に対するｗ／ｗ）。
【０１０９】
特定の例示的な実施形態によれば、該抽出物、その画分又はそれを含む組成物は、皮膚組織、気管組織、肺組織並びに口腔、咽頭及び喉頭内の組織からなる群から選択される組織に局所的に投与される。
【０１１０】
特定の実施形態によれば、該抽出物、その画分又はそれを含む組成物は、皮膚に局所的に投与される。本明細書で使用する「皮膚への局所投与」という用語は、皮膚の表面上への投与並びに皮膚層への投与を含む。特定の実施形態によれば、投与は、皮膚及び／又は経皮及び／又は皮下に行われる。
【０１１１】
Ａ．グラベオレンスの極性溶媒抽出物又はその画分は、それ自体で又はそれを含む組成物で、それを必要とする対象に投与することができる。
【０１１２】
さらなる態様によれば、本発明は、少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するのに有効な量の、アステリスクス植物に由来する極性溶媒抽出物又はその画分を含む組成物であって、さらに、美容的に許容される、薬学的若しくは皮膚科学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体を含む組成物を提供する。
【０１１３】
上述したように、本発明の抽出物又はその画分は、皮膚、気管、肺、口腔、咽頭及び喉頭の少なくとも１つの中の上皮細胞の保護における使用が意図される。皮膚、気管、肺、口腔、咽頭及び喉頭に活性成分を適用するのに適する、当技術分野で公知の任意の組成物は、汚染の有害な影響に対する本発明の抽出物の保護活性が保たれている限り、本発明の教示に従って使用することができる。
【０１１４】
いくつかの実施形態によれば、該組成物は、化粧品組成物、口腔ケア組成物、及び吸入剤組成物からなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【０１１５】
「化粧品組成物」という用語は、哺乳動物における局所適用、特に、皮膚上への局所適用に適する組成物を指す。特定の実施形態によれば、本明細書に記載のとおり、該組成物は、皮膚に美容的に有益な効果を有する。
【０１１６】
本明細書で使用する「口腔ケア用組成物」という用語は、個体の口腔及び／又は咽頭及び／又は喉頭への投与に適する組成物を指す。当技術分野で知られているように、該組成物は、うがい薬、練り歯磨き、息清涼剤などとして使用することができる。
【０１１７】
本明細書で使用する「吸入用組成物」という用語は、呼吸器系を対象とする組成物を指す。該吸入用組成物は、呼吸器系の上皮細胞に到達するように設計されている。
【０１１８】
さらに別の態様によれば、本発明は、少なくとも１種類の汚染物質の有害な影響から上皮細胞を含む組織を保護するのに使用するための組成物であって、アステリスクス植物に由来する極性溶媒抽出物又はその分画を含む組成物を提供する。
【０１１９】
特定の実施形態によれば、該組成物は、化粧品組成物である。
【０１２０】
他の実施形態によれば、該組成物は、さらに、治療上許容される希釈剤、賦形剤又は担体を含む吸入用組成物である。
【０１２１】
さらなる実施形態によれば、該組成物は、さらに、口腔ケアに適する希釈剤、賦形剤又は担体を含む口腔ケア組成物である。
【０１２２】
特定の実施形態によれば、該組成物は、上皮細胞を含む組織に局所的に投与される。いくつかの実施形態によれば、上皮細胞を含む組織は、皮膚、鼻腔、口腔、咽頭、喉頭、気管及び／又は肺組織からなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【０１２３】
化粧品組成物
本発明の化粧品組成物は、当技術分野で知られているような追加の許容される化粧剤を含んでよい。いくつかの実施形態によれば、該化粧剤は、植物抽出物、ペプチド、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖又は多糖、グリコシド、アルカロイド、フラボノイド、ポリフェノール、テルペノイド、ポリケチド、カロテノイド、脂肪酸又はその誘導体、ステロイド、キサンチン、レチノイド、α−ヒドロキシ酸、β−ヒドロキシ酸、α−２アドレナリン阻害薬、β−アドレナリンアゴニスト、アロマターゼ阻害剤、抗エストロゲン、ハイドロキノン、アスコルビン酸、コウジ酸、コルチコステロイド、ムコ多糖、コラーゲン、エストロゲン、イソフラボノイド、桂皮酸、過酸化ベンゾイル、トロポロン、カテコール、メルカプトアミン、ナイアシンアミド、トコフェロール、フェルラ酸、アゼライン酸、ボツリヌス菌、尿素、その誘導体、その塩、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【０１２４】
いくつかの実施形態によれば、該化粧品組成物は、さらに、美容的に許容される希釈剤、担体又は賦形剤を含む。さらなる実施形態によると、美容的に許容される担体は、リポソーム、ミセル構造、マイクロカプセル、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【０１２５】
いくつかの実施形態によれば、該化粧品組成物は、さらに、許容される添加剤を含む。特定の実施形態によれば、該添加剤は、脂肪、乳化剤、共乳化剤、親水性ゲル化剤、親油性ゲル化剤、防腐剤、溶媒、香料、充填剤、親水性フィルター、親油性フィルター、染料、中和剤、浸透促進剤、ポリマー及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。各可能性は本発明の別々の実施形態を表す。
【０１２６】
様々な添加剤の量は、当業者に知られているように、化粧用及び皮膚用調製物で従来から使用されているものである。
【０１２７】
適切な脂肪の非限定的な例としては、鉱物油、動物由来の油（ラノリン）、合成油（イソプロピルミリステート、オクチルドデシル、イソステアリルイソステアレート、デシルオレエート、イソプロピルパルミテート）、シリコーン油（シクロメチコン又はジメチコン）及びフッ素化油が挙げられる。脂肪アルコール、脂肪酸、ワックス及びゴム、特にシリコーンゴム並びにエラストマーは、脂肪としても使用することができる。
【０１２８】
適切な乳化剤及び共乳化剤の非限定的な例としては、ポリグリセロール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、オキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ＰＥＧ脂肪アルコールエーテル、グリセロール脂肪酸エステル、アルキルサルフェート、アルキルエーテルサルフェート、アルキルホスフェート、アルキルポリグルコシド及びジメチコンコポリオールが挙げられる。
【０１２９】
適切な親水性ゲル化剤の非限定的な例としては、カルボキシビニルポリマー（カルボマー）、アクリレート／アルキルアクリレートコポリマーなどのアクリルコポリマー、ポリアクリルアミド、キサンタンガム、グアーガムなどの多糖、セルロースガム及び誘導体などの天然ゴム、粘土並びに２−アクリルアミド−２−メチルプロパン酸コポリマーが挙げられる。
【０１３０】
適切な親油性ゲル化剤の非限定的な例としては、ベントン、脂肪酸の金属塩、疎水性シリカ及びエチルセルロースなどの変性粘土が挙げられる。
【０１３１】
適切な充填剤の非限定的な例としては、タルク、カオリン、雲母、絹雲母、炭酸マグネシウム、ケイ酸アルミニウム及びナイロンなどの有機粉末が挙げられる。
【０１３２】
適切な中和剤の非限定的な例としては、ソーダ、トリエタノールアミン、アミノメチルプロパノール及び水酸化カリウムが挙げられる。
【０１３３】
適切な浸透促進剤の非限定的な例としては、アルコール及びグリコール（エタノール及びプロピレングリコール）、エトキシジグリコール、アルコール及び脂肪酸（オレイン酸）、脂肪酸エステル並びにジメチルイソソルビドが挙げられる。
【０１３４】
防腐剤の非限定的な例としては、安息香酸、その塩及びエステル、ソルビン酸及びその塩、パラベン及びそれらの塩、トリクロサン、イミダゾリジニル尿素、フェノキシエタノール、ＤＭＤＭヒダントイン、ジアゾリジニル尿素及びクロルフェネシンが挙げられる。
【０１３５】
適切な溶媒の非限定的な例としては、水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコール、リン酸緩衝液、生理食塩水及びソルビトールが挙げられる。
【０１３６】
いくつかの実施形態によれば、該組成物は、添加剤として発泡剤を含む。発泡剤は、例えば、カプセルを破裂させるか、又はカプセルの外側周囲の材料とカプセルの内容物の密接な接触を促進する目的で液体と接触させたときに、二酸化炭素ガスを排出する薬剤である。
【０１３７】
いくつかの実施形態によれば、該組成物は、食品医薬品局合格証（ＧＲＡＳ）などの他の添加剤を含む。ＧＲＡＳは、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）が指定するものであり、食品に添加される化学物質又は物質を安全であるとみなし、そのため通常の連邦食品医薬品化粧品法（ＦＦＤＣＡ）食品添加物の許容範囲の要件を免除していることを示す。いくつかの実施形態によれば、食品サプリメントとして許容される賦形剤は、粉末中の賦形剤及び他の経口粉末、局所用粉末中の賦形剤、液体中の賦形剤、軟膏中の賦形剤又はそれらの組み合わせを含む。
【０１３８】
局所用粉末中の賦形剤の非限定的な例としては、酸化亜鉛、タルク、デンプン、カオリン、ホウ酸塩粉末、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、沈降炭酸カルシウム、次没食子酸ビスマス及び硫酸カリウムアルミニウム粉末が挙げられる。
【０１３９】
液体中の賦形剤の非限定的な例としては、水、グリセリン、プロピレングリコール、甘味シロップ、エタノール、脂肪油、エチレングリコール、ポリエチレングリコール及びソルビトールが挙げられる。
【０１４０】
軟膏剤中の賦形剤の非限定的な例としては、脂肪、脂肪油、ラノリン、ワセリン、グリセリンワックス、ジャパンワックス、パラフィン、パラフィン硫酸、樹脂、高級アルコール、プラスチック、グリコール、水及び界面活性剤を混合することによって調製された（油溶性基剤、水溶性基剤及び懸濁基剤を含む）疎水性基剤又は親水性基剤を含む。
【０１４１】
当業者に知られているように、様々な添加剤の量は、食品サプリメントで従来使用されるものである。
【０１４２】
吸入用組成物
該吸入用組成物は、当技術分野で知られている任意の賦形剤を含んでよい。例えば、米国特許出願第２０１４／０３７７３５５号は、任意の賦形剤として２種以上のポロキサマーの組合せの使用を開示している。適切なポロキサマーは、ポロキサマー１８８及びポロキサマー４０７を含んでよい。いくつかの実施形態によれば、微粉化ポロキサマー組成物は、約３０μｍ〜約７０μｍの範囲の粒径を含んでよい。
【０１４３】
該吸入用組成物は、粉末形態で取得し、吸入のために後に使用され得るカプセルを充填するために使用されてよい。いくつかの実施形態によれば、粉末状の吸入用組成物は、溶液の形態で吸入用組成物を取得するために、塩化ナトリウム及び水の滅菌溶液などの適切な溶媒を用いて溶解してよい。溶液形態の本発明の吸入用組成物は、定量吸入器（ＭＤＩ）、乾燥粉末吸入器、エアゾール、注射器、ピペット、点眼器、噴霧器、又は任意の適切な吸入送達装置などの適切な吸入装置を用いて気道に送達され得る。
【０１４４】
口腔ケア組成物
本発明の別の実施形態は、本発明の抽出物又はその画分を含む経口組成物を指す。経口組成物は、例えば、練り歯磨き、歯磨きゲル、歯磨きクリーム、うがい薬、吸入用の無糖キャンディー、口腔スプレー、歯磨きフロス又は歯磨きケアチューインガムの形態で、口腔と接触することが意図される。理由は、経口組成物が歯科用組成物であるとも考えられているからである。該用語は、栄養のための専用食品を包含しない。
【０１４５】
該経口組成物は、典型的には、例えば、シリカ、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、酸化アルミニウム及び／又はヒドロキシアパタイトなどの研磨系（研磨剤又は光沢剤）、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルサルコシン酸ナトリウム及び／又はコカミドプロピルベタインなどの界面活性物質、例えば、グリセロール及び／又はソルビトールなどの保湿剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、カラギーナン及び／又はＬａｐｏｎｉｔｅ（登録商標）などの増粘剤、例えば、サッカリンなどの甘味料、不快な味の印象のための風味補正剤、さらに、概して不快ではない味の印象のための風味補正剤、風味調節物質（例えば、イノシトールリン酸、グアノシン一リン酸、アデノシン一リン酸などのヌクレオチド、又はグルタミン酸ナトリウム若しくは２−フェノキシプロピオン酸などの他の物質）、例えば、メントール誘導体（例えば、Ｌ−メンチルラクテート、Ｌ−メンチルアルキルカーボネート、メントンケタール、メンタンカルボン酸アミド）などの冷却活性化合物、２，２，２−トリアルキル酢酸アミド類（例えば、２，２−ジイソプロピルプロピオン酸メチルアミド）、イシリン及びイシリン誘導体、例えば、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン酸ナトリウム、二フッ化スズ、第四級アンモニウムフッ化物、クエン酸亜鉛、硫酸亜鉛、ピロリン酸スズ、二塩化スズ、様々なピロリン酸塩の混合物、トリクロサン、クロルヘキシジン、塩化セチルピリジニウム、乳酸アルミニウム、クエン酸カリウム、硝酸カリウム、塩化カリウム、塩化ストロンチウム、過酸化水素、芳香、重炭酸ナトリウムなどの安定剤及び活性化合物並びに／又は臭気補正剤を含む。
【０１４６】
チューインガム又は特に、歯磨きケアチューインガムの形態の本発明による製剤又は生成物は、例えば、ＥＰ ０ ２４２ ３２５、米国特許第４，５１８，６１５号、同第５，０９３，１３６号、同第５，２６６，３３６号、同第５，６０１，８５８号、又は同第６，９８６，７０９号に記載されているような、例えば、ビニルアセテート／ビニルラウレート、ビニルアセテート／ビニルステアレート、又はエチレン／ビニルアセテートに基づく、例えば、ポリビニルアセテート（ＰＶＡ）、ポリエチレン、（低い又は中程度の分子量の）ポリイソブテン（ＰＩＢ）、ポリブタジエン、イソブテンイソプレンコポリマー（ブチルゴム）、ポリビニルエチルエーテル（ＰＶＥ）、ポリビニルブチルエーテル、ビニルエステルとビニルエーテルのコポリマー、スチレン／ブタジエンコポリマー（スチレン／ブタジエンゴム、ＳＢＲ）又はビニルエラストマー、及び上述のエラストマーの混合物などのエラストマーを含むチューインガムベースを含む。加えて、チューインガムベースは、さらに、例えば、特にＷＯ  ２００９／２１５５８に記載の糖、糖代替物又は甘味物質、（鉱物）充填剤、可塑剤、乳化剤、酸化防止剤、ワックス、例えば、硬化（水素化）植物脂肪若しくは動物脂肪、及びモノグリセリド、ジグリセリド又はトリグリセリドなどの脂肪又は脂肪油などの成分を含む。適切な（鉱物）充填剤は、例えば、炭酸カルシウム、二酸化チタン、二酸化ケイ素、タルク、酸化アルミニウム、リン酸二カルシウム、リン酸三カルシウム、水酸化マグネシウム及びそれらの混合物である。粘着防止に適する可塑剤又は薬剤（粘着防止剤）は、例えば、ラノリン、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、酢酸エチル、ジアセチン（グリセロールジアセテート）、トリアセチン（グリセロールトリアセテート）及びクエン酸トリエチルである。適切なワックスは、例えば、パラフィンワックス、キャンデリラワックス、カルナバワックス、微結晶ワックス及びポリエチレンワックスである。適切な乳化剤は、例えば、レシチンなどのリン脂質、並びに脂肪酸のモノグリセリド及びジグリセリド、例えば、モノステアリン酸グリセロールである。
【０１４７】
本発明による製剤又は生成物（特に、口腔ケア用製剤若しくは生成物の形態又は製剤の形態のもの）は、好ましくは、さらに、精油及び抽出物、チンキ及びバルサムなどの１種以上の芳香及び／若しくは香味物質、例えば、アニソール、バジル油、ベルガモット油、ビターアーモンド油、樟脳油、シトロネラ油、レモン油；ユーカリシトリオドラ油、ユーカリ油、ウイキョウ油、グレープフルーツ油、カモミール油、スペアミント油、キャラウェー油、ライム油、マンダリン油、ナツメグ油（特に、ナツメグ花油＝メイス油（ｍａｃｅｓ ｏｉｌ）、メース油）、ミルラ油、チョウジ油、チョウジ花油、オレンジ油、オレガノ油、パセリ（種子）油、ペパーミント油、ローズマリー油、セージ油（クラリーセージ、ダルメシアン又はスペインセージ油）、スターアニス油、タイム油、バニラ抽出物、ジュニパー油（特に、ジュニパーベリー油）、冬緑油、シナモンリーフ油；シナモン樹皮油、並びにその画分、又はそこから単離された成分を含む。
【０１４８】
選択された組成物中のＡ．グラベオレンスの濃度は、該組成物の種類及び意図される用途に依存する。特定の例示的な実施形態によれば、該組成物は、０．１％〜１０％（ｗ／ｗ）の濃度でアステリスクス植物由来の抽出物又はその画分を含む。他の実施形態によれば、該組成物は、０．２％〜５％（ｗ／ｗ）の濃度で該抽出物又はその画分を含む。特定の例示的な実施形態によれば、該組成物は、該組成物の全重量に対して１％（ｗ／ｗ）の濃度で該抽出物又はその画分を含む。
【０１４９】
以下の実施例は、本発明のいくつかの実施形態をより完全に例示するために提示される。しかしながら、それらは、決して、本発明の広い範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。当業者なら、本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書に開示された原理の多くの変形及び修正を容易に考案することができる。
【０１５０】
実施例
実施例１：アステリスクスグラベオレンス抽出物の調製
乾燥アステリスクスグラベオレンス植物部分（１０％（ｗ／ｗ）以下の水分含量を有する）を、室温で１０：１ｗ／ｗ〜１：１０ｗ／ｗの比（植物部分：水）で水に添加した。植物部分を、典型的には、１２〜７２時間、２０〜６０℃の温度に設定した空気循環式オーブン内で乾燥させた。混合物を２０〜１００℃で０．５〜６時間加熱し、一晩放冷した。固体を３０分間、４５００ｒｐｍで遠心分離により除去した。次に、上清を収集し、１．２ミクロンフィルターを通し、次いで、０．４５ミクロンフィルターを通し、最後に０．２２ミクロンフィルターを通して濾過した。濾液を収集した。この濾液に、５０〜６０％グリセリンを添加し、最終溶液を形成した。形成した溶液は、透明かつ均質であり、４．０〜６．５の範囲のｐＨを有する。乾燥重量は、２０〜６０ｍｇ／ｇの範囲、典型的には、３０〜４５ｍｇ／ｇの範囲である。得られた溶液を、１００％アステリスクスグラベオレンス抽出画分として取得した。
【０１５１】
実施例２：煙関連汚染に対する保護剤としてのアステリスクスグラベオレンス抽出物の特定
タバコの煙を、健康全般及び皮膚の健康及び外観に対して証明された影響と関連する環境汚染物質であり、揮発性有機化合物（ＶＯＣ）、多環芳香族炭化水素（ＰＨＡ）、酸化物及び重金属を含む多くの関連する毒性化合物を含有する汚染のモデルとして選択した。タバコの煙中に存在し、上皮細胞に有害な影響を有することが知られている汚染物質の具体例としては、ホルムアルデヒド及び多環芳香族炭化水素が挙げられる。
【０１５２】
研究設計：
いくつかの植物候補の抽出画分は、基本的に、Ａ．グラベオレンスについて上述したように調製した。この抽出物をＭＴＴ還元アッセイによって細胞毒性について事前にスクリーニングした。簡単に説明すると、ＭＴＴ（（３−（４，５−ジメチルチアゾリル−２）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）は、淡黄色の基質であり、生細胞中に存在するコハク酸デヒドロゲナーゼによって切断されて、ダークブルーの水不溶性ホルマザン塩をもたらす。変換は、酵素活性に比例する。ＤＭＳＯを用いた細胞の解離及びホルマザン結晶の可溶化後に、生細胞数及びそれらの代謝活性に比例する５４０ｎｍでの抽出物の局所密度（ＯＤ）を、マイクロプレートリーダー（ＶＥＲＳＡｍａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて記録した。
【０１５３】
ＭＴＴ試験の結果を用いて、煙細胞毒性から上皮細胞を保護することができる抽出物のスクリーニングアッセイで使用するのに適する様々な植物抽出物の濃度（複数可）は設定した。
【０１５４】
煙細胞毒性アッセイ：
正常ヒト表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）を、２４時間培養媒体で培養した。次いで、この媒体を除去し、植物抽出物画分（試験化合物）を含有するアッセイ媒体、又は対照用のアッセイ媒体に添加された溶媒（２％のＨ２Ｏ又は０．００８％のＤＭＳＯ）のみと交換した。２４時間、プレインキュベーションした後に、この媒体を、試験化合物（アッセイ媒体）を含有するタバコ煙中毒化媒体；対照としてのＨ２Ｏ、Ｈ２Ｏ−ＤＭＳＯ又は無添加の媒体と置換した。いくつかの濃度のタバコ煙中毒化アッセイ媒体（５％〜９０％の範囲の８つの濃度の中毒化媒体）を用いて実験を行った。細胞を２４時間、煙中毒化媒体と共にインキュベートした。
【０１５５】
煙汚染媒体への暴露後の細胞生存率を測光（上記のようなＭＴＴ還元）により測定した。煙汚染媒体の増加濃度の細胞毒性（毒性傷害の増大）をプロットし、煙汚染媒体のＩＣ５０（細胞生存率の５０％阻害をもたらす煙汚染媒体の割合）を決定した。これは、このアッセイにおいて、重要な尺度：ＩＣ５０の増加（顕著な毒性効果を有するのに必要な汚染媒体の投与量の増加を示す、すなわち、前記媒体の毒性の減少）として役立ち、該植物抽出物画分の保護効果を表す。
【０１５６】
実験を、（ｎ＝６である非中毒化対照を除いて）３連で行った。
【０１５７】
様々な植物抽出物をスクリーニングし、アステリスクスグラベオレンス抽出物がトップリードとして強調された。これらの実験は、アステリスクスグラベオレンス抽出画分がタバコの煙中毒に対する顕著な保護効果を呈することを示した。５０％の細胞死が３３．１％の煙中毒化媒体で観察された（ＩＣ５０＝３３．１）が、この媒体中の０．０１％のＡ．グラベオレンス抽出物が最高で４７．５％の中毒化媒体中の細胞を保護した（ＩＣ５０の約４３％の増加）。
【０１５８】
このアッセイは、タバコの煙などの一般的なマルチ成分毒素の混合物から上皮細胞を含む組織を保護するためのリードとしてのアステリスクスグラベオレンスの極性溶媒抽出物を確認した。これらの結果は、未処理細胞と比較して、この抽出物で処理した細胞の活力の増加を示す。
【０１５９】
実施例３：煙負荷した皮膚上皮細胞に対する様々な濃度のＡ．グラベオレンス抽出物の効果
本明細書の上記の実施例１に記載のとおり生成したいくつかの濃度のＡ．グラベオレンス抽出物の効果を調べた。細胞生存率アッセイを、対照媒体がＨ２Ｏである本明細書の上記の実施例２に記載のとおりに行った。
【０１６０】
ｎ＝１０で行った非中毒化対照を除いて、全ての実験条件をｎ＝５で行った。図１に示すとおり、０．００１％（図１Ａ）及び０．００２％（図１Ｂ）ほどの低い濃度で試験した抽出物は、タバコの煙によって誘発される中毒に対して明確な保護効果を有し、０．００１％の抽出物及び０．００２％の抽出物でそれぞれ、対照条件下の３９．３％から４８．５及び５６．３％までＩＣ５０値が顕著にシフトした。
【０１６１】
実施例４：角化細胞における遺伝子発現に対するアステリスクスグラベオレンス抽出物の効果
アステリスクスグラベオレンス抽出物を、実施例１に記載のとおりに生成し、遺伝子発現プロファイルに対するその影響を評価するために使用した。ヒト正常表皮角化細胞（ＮＨＥＫ）細胞を、共にアッセイ媒体で希釈した０．０１％のアステリスクスグラベオレンス抽出物又は対照としてのＨ２Ｏのいずれかで２４時間処理した。次いで、トランスクリプトームプロファイルのために、ｍＲＮＡを処理細胞から抽出し、二本鎖ｃＤＮＡに変換し、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｕ２１９アレイキットにロードした。試験した３０，０００遺伝子のうち、２１１個が有意に調節されたことが見いだされ、２倍変化のカットオフより上又は下の発現レベルを示した。
【０１６２】
表２は、アステリスクス抽出画分による処理の結果として発現が変更された遺伝子を示す。遺伝子発現の観察された減少又は上昇から影響を受ける生物学的現象も示す。
【０１６３】
【表２】
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【０１６４】
結果は、アステリスクスグラベオレンス抽出物が、炎症、酸化ストレス、小胞体（ＥＲ）ストレス及び細胞死などの、汚染並びに毒性に関連する経路を制御する遺伝子の発現を調節することによって、皮膚の固有の防御を増加させることを証明する。
【０１６５】
実施例５：煙を負荷された肺上皮細胞に対する様々な濃度のＡ．グラベオレンス抽出物の効果
アステリスクスグラベオレンスを、異なる時点でその知られている生息地のうちの２つから採取した。ＡＳ１−８１−１と命名した１つの植物を２０１４年４月に死海から採取し、ＡＳ１−９１−１と命名した第２の植物を、２０１５年６月にアラバから採取した。両方の植物を、実施例１のとおりに抽出し、タバコ煙凝縮物への暴露後の肺由来の上皮細胞生存率について評価した。
【０１６６】
肺由来の上皮細胞を、様々な濃度のアステリスクスグラベオレンスで処理し、細胞生存率を、０．４ｍｇ／ｍｌ又は０．２４ｍｇ／ｍｌのいずれかのタバコ煙凝縮物（ＣＳＣ）への暴露後に決定した。ＣＳＣは、ＤＭＳＯ溶液中にタバコ煙成分を含む市販の製品（Ｍｕｒｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ社）である。
【０１６７】
細胞を、２４時間、アステリスクスグラベオレンス抽出物で処理し、その後、さらに２４時間、アステリスクスグラベオレンスの存在下で、ＣＳＣ（０．４ｍｇ／ｍｌ、０．２４ｍｇ／ｍｌ）で処理した。次いで、細胞生存率を、（ＭＴＴと同様に）ＷＳＴ１法を用いて評価した。簡単に説明すると、ＷＳＴ−１を、成長している細胞の媒体に直接添加する。次いで、安定したテトラゾリウム塩ＷＳＴ−１は、赤色溶液を形成する解糖系産物のＮＡＤ（Ｐ）Ｈによって媒介される還元工程において可溶性ホルマザンに切断される。生じた赤色溶液の光学密度は、細胞の生存率に比例し、４５０ｎｍの波長で測定する。
【０１６８】
図８は、２つの抽出調製物が煙汚染物質から上皮肺組織に対する保護効果を有することを示す。
【０１６９】
このアッセイでは、保護効果は、ＡＳ１−８１−１については０．０３８％〜０．３％及びＡＳ１−９１−１については０．０３８％〜０．１５％の抽出物濃度で顕著であった。
【０１７０】
実施例６：皮膚パラメータに対するアステリスクスグラベオレンス抽出物の効果の臨床評価
臨床試験を行い、慢性毒性傷害に対する皮膚の耐性の増強に起因するグローバル抗老化の利点として現れることが期待される「解毒」剤としての、インビボのアステリスクス抽出物の活性を実証した。
【０１７１】
研究設計：
・１％のＡ．グラベオレンス抽出物（本明細書の上記の実施例１に記載のとおりに生成した）を含有するクリーム−ゲルシャーシの試験化合物対プラセボ（クリーム−ゲルシャーシのみ）の二重盲検
・年齢分布：４６〜６０；グループサイズ＝２５；全て女性
・「ヘビースモーキング習慣」（１日１０本を超えるタバコ）を有し、かつ眼周囲及び口角に「老化の兆候」を有する」対象
・Ｄ０、Ｄ１４、及びＤ２８での測定と共に、４週間、１日２回のスプリットフェース（左／右）への適用
【０１７２】
測定：
・ビシア（Ｖｉｓｉａ）ＣＡ：通常照明、交差偏光照明、及びＵＶ照明で標準化したイメージング
・プリモス３Ｄによる皺及び荒れの評価
・コルネオメーターによる皮膚の水和
・キュートメーターによる皮膚の弾性
・比色計（Ｍｉｎｏｌｔａ）による皮膚の色（Ｌ、ａ、ｂとして）
・標準化された「昼光」照明の下での訓練を受けた臨床医による臨床評価
・皺（画像ベースのスケール）、荒れ、しなやかさ、顔貌の均一性、質感
・アンケートによる主観的自己評価
この研究を、ＰｈＤ研究室（ポルトガル）で行った−ＰｈＤ研究室の研究番号２２６０１１５。
【０１７３】
結果：
抗老化（抗皺）：
本発明の化合物は、皺数の強力かつ顕著な減少、並びに皺体積の顕著な減少として現れる良好な抗老化効果を示す。図２Ａに示すように、皺数は、対照（プラセボ）における１４日目の２８％及び２８日目の３３％の減少と比較して、１４日目に３６．９％まで、及び２８日目に４２．１％まで低下した。皺体積は、プラセボ（図２Ｂ）で処理した皮膚領域における１４日目の１．２％及び２８日目の０．２％の増加と比較して、１４日目に９．７％まで及び２８日目に１２％まで低下した。
【０１７４】
皺の臨床評価：
上記の装置の測定値を確認すると、臨床評価は、ベースライン及びプラセボ（プラセボは２８日目に３．８％の減少を示した、図３）に対する皺スコアの顕著な低下（１４日目に４．７％及び２８日目に２０．３％）として現れる顕著な抗老化効果を明らかにした。
【０１７５】
臨床評価、追加パラメータ：
Ａ．グラベオレンスを含む試験化合物の使用は以下の結果となった：
・肌荒れグレードにおける中程度であるが顕著な改善（ベースライン及びプラセボに対して、図４Ａ）
・皮膚の質感グレードにおける中程度であるが顕著な改善（ベースライン及びプラセボに対して、図４Ｂ）
・皮膚の均一性グレードにおける小さいが顕著な改善（ベースライン及びプラセボに対して）
全ての３つの場合において、データは、明確な時間依存性を示した（２８日目で著しいが１４日目ではそうではない）。
【０１７６】
皮膚の色（クロモメーター）：
本発明のＡ．グラベオレンス抽出物を含む試験化合物の使用は、Ｌ＊の増加（すなわち、より明るい皮膚）、及びｂ＊の減少（すなわち、黄色が少ない皮膚）に示される（ベースライン及びプラセボに対して）小さいが顕著な明色化効果をもたらした。Ｌ＊及びｂ＊から計算される個々の類型角度（ＩＴＡ）は、対応する増加（より明るい皮膚）を示す。観察された変化（２単位Ｌ＊、半分の単位のｂ＊）は、皮膚の色調の顕著な変化を表す（図５）。
【０１７７】
いかなる特定の理論又は作用機序に拘束されることなく、この効果は、解毒機構に起因し得、慢性的に負荷された皮膚（ヘビースモーカーの顔の皮膚若しくは慢性の低悪性度の炎症条件下での皮膚のような）は、メラニンレベルを上昇させ、皮膚の色素沈着の上昇又は不均一な皮膚の色素沈着、斑などをもたらす。本発明の組成物は、この効果を緩和すると考えられる。この活性は、２８日目に唯一検出可能であり、既存のメラニン負荷角化細胞／角質細胞を、Ａ．グラベオレンス抽出物の影響下、したがって、より低い慢性毒性ストレス下で成熟してきた新しい細胞と置き換えて配置する落屑プロセスのための時間を必要とする効果と一致する。
【０１７８】
皮膚の水和（コルネオメーター）：
本発明のＡ．グラベオレンス抽出物は、ベースライン及びプラセボ（プラセボは顕著な活性を有さない）に対して、統計的に有意な皮膚の水和の時間依存的増加を示した。皮膚の水和を口角で測定した（図６）。
【０１７９】
ビシア：Ａ．グラベオレンス抽出物で処理した皮膚は、ＵＶ及び可視スポットの数の減少によって示される皮膚の色の統計的に有意な改善を示した（図７）。
【０１８０】
キュートメーター：
本発明の植物抽出物はまた、皮膚のハリに正の効果を有していた。
【０１８１】
自己評価アンケート：
本発明のＡ．グラベオレンス植物抽出物は、本発明の抽出物で処置した対象の自己評価によって反映されるとおり、皮膚の色調、皮膚の輝き、スポットの発生、皮膚の感度、及び皺などの皮膚のパラメータをさらに改善した。様々な皮膚のパラメータに関する１６個の質問のセットを用いて、治療効果を評価した。プラセボと比較して、治療の２８日後の改善の自己評価は、本発明の化合物で処置した対象においてより高かった。
【０１８２】
時間依存性に関する一般的なコメント：
多くの例において、観察された効果は、Ｄ１４で示唆され、すでに目に見えるが、Ｄ２８ではより強くなるか、又は統計的有意性を獲得する。いかなる特定の理論又は作用機序に拘束されることなく、これらの結果は、Ａ．グラベオレンスによって誘発される修復機構を支持し、細胞固有の、活性のあるプロセスを誘導し、皮膚に対する慢性毒性ストレス効果のいくつかの軽減をもたらし、それがより良好な恒常性の状態に徐々に戻る−目に見える美しさの恩恵に変換するのを可能にする。
【０１８３】
実施例７：アステリスクスグラベオレンス抽出物を含む化粧品製剤
以下の表３は、化粧品用途のためのアステリスクスグラベオレンス抽出物を含む代表的な組成を示す。
【表３】
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【０１８４】
プロセス（実験室規模）：
１．保存剤／ポリオールプレミックス：完全に溶解するまで４５℃で攪拌しながら、以下のものを組み合わせる：ブチレングリコール；ヘキシレングリコール；ジプロピレングリコール；フェノキシエタノール；メチルパラベン。
２．有機相：完全に混合するまで４５℃で攪拌しながら、以下のものを組み合わせる：シクロメチコン；水素化ポリデセン。
３．主たる混合：
ａ．カルボマーを、４５℃の水にゆっくりと分散させ（８４．３５％の式量）、激しく攪拌する。カルボマーが完全に分散するまで攪拌を継続する。
ｂ．得られた混合物を均質化する。
ｃ．以下のものを順に添加する：ＥＤＴＡ；Ｔｗｅｅｎ  ２０；保存剤／ポリオールプレミックス；有機相。
ｄ．トリエタノールアミンを、ｐＨ＝５．５〜６．５まで添加する。
ｅ．攪拌を１０分間継続する。
４．活性：
ｉ．アステリスクスグラベオレンス抽出物（本明細書の上記の実施例１に記載したとおりに調製した１００％抽出物）を、ベース混合物に攪拌しながら添加する。
ｉｉ．得られた混合物を均質化する。
【０１８５】
実施例８：ＤＮＡ損傷に対するアステリスクスグラベオレンス抽出物の効果
ヒト肺胞基底上皮細胞をモデル系として使用した。Ａ５４９細胞を、培養媒体中で培養し、次いで、媒体を除去し、本明細書の上記の実施例１に記載したように生成した０．０５％、０．１６％、及び０．５％のＡ．グラベオレンス植物抽出物を含有する媒体と交換した。これらの細胞を抽出物含有媒体中で一晩インキュベートし、次いで、この媒体を除去し、都市の大気汚染のためのモデルであるタバコ煙凝縮物（ＣＳＣ）で中毒化した培養媒体と交換した。培養物を、さらに２４時間又は４８時間、中毒化媒体でインキュベートした。以前のキャリブレーションアッセイに基づいて、１００μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌの２つの濃度のＣＳＣを調べた。
【０１８６】
ＣＳＣとのインキュベーション後に、媒体を除去し、これらの細胞を、製造業者のプロトコルに従ってＴＵＮＥＬ（末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼｄＵＴＰニック末端標識）アッセイを用いてＤＮＡ断片化について分析した。ＴＵＮＥＬアッセイは、エンドヌクレアーゼの活性化後にアポトーシスの間に生じるＤＮＡ断片化に基づく。ＤＮＡ断片の３’末端の標識はアポトーシスを受けた細胞の容易な測定を提供する。修飾ヌクレオチドは、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）の活性によって３’末端で組み込まれる。これらのヌクレオチドは、西洋ワサビペルオキシダーゼ検出系及び非毒性の発色基質を用いて検出される。図９に示されるように、本発明のＡ．グラベオレンス植物抽出物画分は、ＣＳＣによって生じるＤＮＡ断片化から肺胞基底上皮細胞を用量依存的に保護した。
【０１８７】
ＤＮＡに対する本発明の抽出物の保護効果を、さらに、８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）アッセイを用いて試験し、ＤＮＡの酸化的損傷を測定した。
【０１８８】
８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ又は８−オキソ−ｄＧ）は、デオキシグアノシンの酸化誘導体であり、細胞ＤＮＡ中でヒドロキシルラジカル、一重項酸素、及び一電子酸化剤により生成される。
【０１８９】
本発明のＡ．グラベオレンス植物抽出画分の量を変えて２００μｇ／ｍｌのＣＳＣに暴露した後に（上記のように実験を行った）、これらの細胞を溶解し、全ＤＮＡを収集した。一本鎖ＤＮＡを調製し、このアッセイで使用した。このアッセイは、タバコ煙凝縮物への暴露の結果として生成される８−オキソ−ｄＧ塩基の量を測定し、記録される値の減少は、ＤＮＡ損傷の減少を意味する。図１０に示すように、本発明のＡ．グラベオレンス植物抽出画分は、ＣＳＣによって引き起こされるＤＮＡの断片化から肺胞基底上皮細胞の適度な保護をもたらした。
【０１９０】
実施例９：ＨＥＴ−ＣＡＭアッセイを使用してＡ．グラベオレンス抽出物の眼刺激能の評価
鶏卵試験−絨毛尿膜（ＨＥＴ−ＣＡＭ）アッセイを、ＩＮＶＩＴＴＯＸプロトコル番号４７（１９９０）、ＩＳＳＮ番号０９６０−２１９４に基づいて行った。
【０１９１】
試験システムの正当化：
ＨＥＴ−ＣＡＭは、化学物質の潜在的な刺激性を評価する定性的な方法であることが示されている。ＣＡＭは、動脈、静脈及び毛細血管を含有する完全な組織であり、研究するのに技術的に簡単である。ＣＡＭは、ウサギの眼の結膜組織で観察されるものに類似する炎症過程を伴う損傷に応答する。そのよく発達した血管新生は、眼刺激性試験の理想的なモデルを提供する。
【０１９２】
繁殖性の１０日齢の白色レグホン卵を、ドレーズウサギ眼試験の代替として、ＨＥＴ−ＣＡＭで使用し、６つの試験群−３つの試験品濃度、２つの陽性対照及び１つのビヒクル対照群を収容するように構成する。
【０１９３】
発生：卵を、市販のインキュベーターに入れた。発生の１０日目に、卵をインキュベーターから取り出して、胚の生存率を測定するために明りに透かして調べた。矩形窓を、気室のすぐ上の殻から取り除き、卵膜を注意深く２〜３ｍｌの０．９％生理食塩水で湿らせ、インキュベーターに戻した。
【０１９４】
次いで、試験項目を卵に適用し、定義した（２０秒）暴露時間放置し、生理食塩水ですすいだ。これらの卵を、溶解、出血及び／又は凝固の出現について、５分間連続して観察した。
【０１９５】
１分及び５分の時点の卵の重症度をスコア化した。１分及び５分後の各反応の重症度を記録した。
【０１９６】
このモデルでは、本明細書の上記の実施例１に記載したとおりに調製し（５０％のグリセリンを含有する）、５％希釈で試験したアステリスクスグラベオレンス抽出画分は、わずかに刺激性があると考えられた（総刺激スコア２．０）。
【０１９７】
特定の実施形態の上記の説明は、本発明の一般的な性質を完全に明らかにするので、現在の知識を適用することにより、過度の実験を行うことなく、一般的な概念から逸脱することなく、そのような特定の実施形態を容易に変更し、かつ／又は様々な用途に適合させることができ、したがって、そのような適合及び修正は、開示される実施形態の均等物の意味及び範囲内で理解されるべきであり、理解されることが意図される。本明細書で用いた表現又は用語は、説明の目的のためであり、限定するものではないことが理解されるべきである。様々な開示された機能を実行するための手段、材料、及びステップは、本発明から逸脱することなく、別の様々な形態をとることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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