(57)【要約】  本発明は、脳由来神経栄養因子レベルの変化およびその調節に関連する障害および病状、特に治療戦略が血中ＢＤＮＦ濃度の増加に基づく障害および病状の治療に使用される哺乳類の初乳に由来するプロリンリッチポリペプチド複合体（ＰＲＰ）に関する。ＰＲＰ複合体は、免疫および神経系の両方の適切な発達および機能を促進および維持するために成人、低年齢小児／乳児および幼児の栄養のために使用することを想定している。ＰＲＰは、粉ミルクを母乳にさらに近づけるために調製乳および乳幼児用粉ミルクの栄養補給のために使用することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳由来神経栄養因子レベルの変化およびその調節に関連する障害および病状の治療に使用される、哺乳類の初乳に由来するプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項２】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、気分障害、強迫性障害、大鬱病などの精神障害、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病、脊髄小脳失調症、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）誘導性障害、糖尿病、神経性無食欲症および神経性過食症などの摂食障害、肥満症および肥満症関連疾患、緑内障、網膜異常、多発性硬化症などの中枢神経系脱髄疾患、末梢神経障害、脳卒中などの脳血管障害、片頭痛および他の頭痛症候群、心血管疾患などを含む群から選択される障害および病状を治療することを目的としている、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項３】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、神経系または一時的な集中精神活動の機能不全に関連する障害、憂鬱な気分、記憶力の低下、集中および記憶障害ならびに疲労を治療することを目的としている、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項４】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、脳における神経活動を維持するのに有効な１日量で個体に投与することを目的としている、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項５】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、医薬品、栄養物質（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃ）、栄養補給剤、特殊な医療目的のための食品、特定の栄養利用のための食品または栄養補助食品の形態で製剤化されている、請求項１〜４のいずれかに記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項６】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、粉ミルクを母乳にさらに近づけるために特に生まれたときから母乳で育てられていない乳幼児用の粉ミルクのための栄養添加物として使用することを目的としている、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項７】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、神経系の活性を誘導および／または向上させ、かつ／または認知向上効果を達成するための、母乳養育および／または粉ミルク養育後の幼児に近い乳児および成人用の栄養添加物として使用することを目的としている、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項８】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、母親および乳児の血中ＢＤＮＦレベルを増加させるために妊婦用の栄養添加物として使用することを目的としている、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項９】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体はウシまたは任意の他の家畜の初乳から単離されたものである、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項１０】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、１６〜２２％のプロリンと、任意に約１８％の酸性アミノ酸およびβ−ラクトグロブリン画分とを含む、請求項９に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項１１】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は前記β−ラクトグロブリン画分を含まない、請求項９に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項１２】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、１ｋＤａ未満の分子量のカットオフ画分および７〜１２．５％のプロリンを含むウシの初乳から単離された乳漿タンパク質複合体である、請求項９に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項１３】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は経口投与に適した形態で製剤化されている、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項１４】
単独あるいは任意の治療薬または栄養補助食品と組み合わせた治療的または予防的に活性な薬剤としての、請求項１に記載の使用のためのプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項１５】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、医薬組成物、栄養物質（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃ）、栄養補給剤、特殊な医療目的のための食品、特定の栄養利用のための食品または栄養補助食品の形態で製剤化されている、請求項１に記載の使用のための哺乳類初乳から単離されたプロリンリッチポリペプチド複合体を含む組成物。
【請求項１６】
５０〜１０００μｇ、好ましくは８０〜１６０μｇの範囲内の成人に有効な前記プロリンリッチポリペプチド複合体の１日量を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記プロリンリッチポリペプチド複合体は、乳幼児の血中ＢＤＮＦレベルを母乳で育てられた乳児の血中で検出されるレベルと同等またはそれによりも高いレベルまで増加させる調製粉ミルクまたは乳幼児用栄養粉ミルクの添加剤である、請求項１に記載の使用のためのウシの初乳から単離されたプロリンリッチポリペプチド複合体。
【請求項１９】
１６〜２２％のプロリンを含むウシの初乳に由来するプロリンリッチポリペプチド複合体で栄養強化された乳幼児用調製粉ミルク。
【請求項２０】
体重１ｋｇ当たり１〜５μｇの範囲内である乳幼児のＰＲＰ１日必要量を満たす量の前記プロリンリッチポリペプチド複合体を含む、請求項１９に記載の乳幼児用調製粉ミルク。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳由来神経栄養因子レベルの変化およびその調節に関連する障害および病状の治療に使用される、哺乳類の初乳に由来するプロリンリッチポリペプチド複合体に関する。特に本発明は、ＢＤＮＦレベルの増加に応答する障害および病状の予防的および補助的治療におけるプロリンリッチポリペプチド複合体の使用に関する。
【０００２】
プロリンリッチポリペプチド複合体は、免疫および神経系の両方の適切な発達および機能を促進するための成人、低年齢小児／乳児および幼児の栄養のために使用することを目的としている。さらに、本複合体を乳幼児用粉ミルクの栄養補給のために使用して粉ミルクを母乳にさらに近づけることができる。
【背景技術】
【０００３】
当該技術分野において、哺乳類の初乳は免疫系の支持因子を含む健康増進成分の豊富な供給源であることは十分に実証されている。初乳すなわち産後の最初の７２時間に哺乳類によって生成される最初に出てくる乳汁（pre-milk fluid）は、高濃度の各種成分、例えば栄養因子、免疫グロブリン、増殖因子、サイトカインならびにリンパ球Ｔ、リンパ球Ｂ、好中球およびマクロファージなどの特定の免疫細胞を含む(Borysewicz-SanczykおよびSzczepanski. Postepy neonatologii. 15(1), 2009,ポーランド語)。
【０００４】
プロリンリッチポリペプチド複合体（ＰＲＰ）は最初にＪａｎｕｓｚら（FEBS Lett. 49 (2), 1974）によってヒツジの初乳から単離された。この初乳由来のプロリンリッチポリペプチド複合体は１８．０００ダルトンの分子量を有するものと特徴づけられ、３つの非共有結合的に結合されたサブユニットを含む。この複合体は約２２％のプロリン含有量を有し、コロストリニン（ｃｏｌｏｓｔｒｉｎｉｎ）と呼ばれている。その後、他の種類の哺乳類の初乳においてＰＲＰの類似体が同定された。
【０００５】
ヒトの末梢血単核細胞の研究では、プロリンリッチポリペプチド複合体は血液細胞を刺激して重要な免疫系サイトカイン、例えばＩΝΡ−γγ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＩＬ−１βを放出し、このようにして免疫系を増強または抑制する（恒常性を回復させる）ことが証明されている。さらに、ＰＲＰ製剤はマウスの胸腺細胞の成熟および分化を促進させて活性化リンパ球にすることができる。
【０００６】
アルツハイマー病の病因および特にアミロイドβペプチド（Ａβ）凝集に対するサイトカインおよびインターロイキンの確認済みの阻害効果に関する長期間の研究(Griffinら, Brain Pathol. 8(1), 1998)に加えて、プロリンリッチポリペプチド複合体の明確に定義された生物学的活性は、ＰＲＰを複数の神経変性疾患に使用することができることを示唆している。しかし、アルツハイマー病におけるＰＲＰの主張されている神経保護作用の根底にある機序はなお知られていない。アルツハイマー病は、記憶喪失症状、合理的行動（ｒａｔｉｏｎａｌｉｔｙ）、日常業務（ｒｏｕｔｉｎｅ）を含む脳機能の進行性機能障害を引き起こす多岐にわたる病態を特徴とする認知症の一形態である。認知症の全症例の約５０〜７０％は、セクレターゼ活性およびタウタンパク質過剰リン酸化、その後の神経原線維変化（ＮＦＴ）の形成を伴うアミロイドβ前駆体（βＡΡΡ）のタンパク質分解的切断によるＡβからなる老人斑の形成を含む脳における神経学的異常が原因である。
【０００７】
生体内研究により、プロリンリッチポリペプチド複合体の向精神作用も証明されている。プロリンリッチポリペプチド複合体の投与は高齢ラットにおいて認知機能を高め、空間学習の習得を容易にすることを示し、かつ若齢動物において観察されるのと同様に高齢の齧歯類において偶発記憶を向上させた(Popikら, Pharmacol. Biochem. Behav. 64 (1), 1999)。
【０００８】
ＰＲＰによって媒介される遺伝子発現の増加による神経細胞の成長、増殖および分化の刺激におけるプロリンリッチポリペプチド複合体の中枢的役割により、ＰＲＰを組織再生および皮膚疾患治療で使用することができる。プロリンリッチポリペプチド複合体が中枢神経系における損傷した神経細胞の成長および再生（これは神経変性疾患の進行に典型的な病変にとって重要なプロセスである）を促進するという何らかの兆しが認められる。
【０００９】
認知機能の向上に対するプロリンリッチポリペプチド複合体の効果も調査された。ＰＲＰの認知促進（ｐｒｏ−ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ）活性に関する情報の大部分は、動物モデル、すなわち若齢および老齢ラット、ヒヨコならびにアルツハイマー病患者に対する３種類の臨床試験から得られたものである。生体外研究では、抗酸化酵素スーパーオキシドディスムターゼ１（ＳＯＤ１）のレベルを減少させることにより、一次神経細胞培養物におけるアミロイドβペプチド毒性を減少させるプロリンリッチポリペプチド複合体の強い活性が証明された(Froudら, J. Alzheimers Dis. 20 (2), 2010)。
【００１０】
さらに、プロリンリッチポリペプチド複合体そのものは非アレルギー性であり、環境アレルゲンによって誘発される炎症を防止することさえできることが分かった。
【００１１】
プロリンリッチポリペプチド複合体の抗酸化活性は十分に実証されている。いくつかの研究の結果は、ＰＲＰが細胞培養において一酸化窒素（ＮＯ）形成を阻害し、かつ細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）の生成および酸化ストレスを減少させ、それにより老化プロセスを遅らせ、かつ神経細胞の欠損から保護することを示している。生体外および生体内研究の両方から、ＰＲＰが培養細胞の老化を顕著に減速させ、かつ老化促進マウスから単離された細胞の寿命を引き延ばすことが分かった。ＰＲＰは、ヒトおよびチャイニーズハムスター細胞培養においてＤＮＡ配列の変化を減少させて細胞老化プロセスを遅らせることができることが実証された。さらなる研究により、酸化ストレスを受けたか癌治療で一般的に使用される２種類の化学的有糸分裂阻害剤(mitotic agent)であるメタンスルホン酸メチルおよびマイトマイシンＣに曝露された細胞においてＰＲＰが抗突然変異作用を示すことが明らかとなった。注目すべきことに、プロリンリッチポリペプチド複合体は、悪性黒色腫および扁平上皮癌のそれぞれの発生に寄与するＵＶＡおよびＵＶＢ誘導突然変異の頻度を減少させる。
【００１２】
数多くの障害を有する患者の血液試料におけるコロストリニンの十分に実証されている生体外での高い免疫向性（ｉｍｍｕｎｏｔｒｏｐｉｃ）活性に加えて、これらのデータは、ポーランド特許第１８５４４２Ｂ１号に記載されているような細菌性およびウイルス性病因を有する慢性疾患ならびに化学および放射線療法の影響における後天性免疫不全を治療するための活性薬剤としてのプロリンリッチポリペプチド複合体の可能な使用を示唆し得る。
【００１３】
国際公開第９８／１４４７３号として公開されている国際特許出願は、神経障害、精神障害、認知症、神経変性疾患、精神病、神経症および特にアルツハイマー病などの中枢神経系（ＣＮＳ）障害の治療のためのコロストリニンの使用を開示した。幼児における免疫系の発達の改善ならびに乳児における免疫不全の改善のためにコロストリニンを使用できることが示唆された。国際公開第９８／１４４７３号明細書は、化学療法を受けている乳幼児、小児および成人および／または悪液質、すなわち慢性疾患に誘発された著しい体重減少に苦しんでいる成人の治療のための栄養補助食品としてのコロストリニンの経口医薬組成物を開示している。
【００１４】
国際公開第００／７５１７３号として公開されている国際特許出願は、特に免疫系および中枢神経系の障害の治療において有用なコロストリニン由来ペプチド配列を提供している。
【００１５】
欧州特許第１２３８０５８Ｂ１号特許明細書は、生体外での神経細胞分化促進剤としてコロストリニンの成分ペプチドの使用を開示している。
【００１６】
国際公開第０２／１３８５１号の国際特許出願には、コロストリニン、その成分ペプチドおよびコロストリニンのプロリンリッチ活性類似体が生体外および生体内での神経細胞（例えば神経系の多能性細胞）分化促進剤として記載されている。ＰＣ１２細胞を使用して、損傷した神経細胞を機能的神経細胞に転換するためのコロストリニンおよびその類似体の影響が調査され、このプロセスは神経成長因子（ＮＧＦ）などの神経栄養因子の産生に伴う神経細胞の分化に強く関連している。
【００１７】
米国特許出願公開第２０１１／００９８２１６号は、肥満症および肥満症関連の併存症、例えば、ＩＩ型糖尿病、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化症、冠動脈性心疾患、脳卒中、炎症性疾患、例えば限定されるものではないが、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患（クローン病など）の予防および／または治療のためのコロストリニンの使用を開示している。これらの有益な治療効果は、細胞におけるレプチンおよびレジスチンの両方の遺伝子発現のコロストリニン依存性制御に起因していた。
【００１８】
別の組成のプロリンリッチポリペプチド複合体は、ポーランド特許第２１８６９３Ｂ１号に記載されている革新的な技術を使用して、産後の最初の４８時間の間に生成されたウシの初乳から単離されたものである。前記技術は、COLOCO prpと呼ばれる独特な複合体物質を得るために初乳からポリペプチド混合物をアセトン抽出する工程からなっていた。COLOCO prp複合体の構造は、先行技術のプロリンリッチポリペプチド複合体組成物とは僅かに異なり、約２０％のプロリンを含有する１０ｋＤａまでの低分子量のペプチド混合物を指し、かつ高比率の酸性アミノ酸（約１８％）、生物学的に不活性なβラクトグロブリン（１７ｋＤａ）画分およびそれ自身の生物学的活性を発揮しない関連する非ペプチド成分の存在を特徴とする。
【００１９】
末梢血単核細胞を用いる生体外研究により、ＩＬ−１βおよびＩＬ−６などのサイトカイン産生を刺激するCOLOCO prpの能力が明らかとなり、この効果は、以前にＪａｎｕｓｚら（FEBS LETTERS, 49, 276-279, 1974）によって記載された方法に従って初乳から単離された参照コロストリニンの効果と同様であった。
【００２０】
さらなる生体外研究では、COLOCO prpがＮＯ産生を阻害し、かつ末梢血単核細胞のモデルにおいて参照製品（ウシまたは／およびヒツジのコロストリニン）と同等に酸化ストレスを減弱することが分かった。この効果は、トロロックス等価抗酸化能（ＴＥＡＣ：Trolox equivalent antioxidant capacity）法を用いて推定された。
【００２１】
本発明者自身の研究では、非生物的条件下でＡβ凝集を減らすCOLOCO prpの能力が実証された。ＡβモノマーとCOLOCO prpとのインキュベーションによりＡβ線維形成は濃度依存的に有効に阻害され、事前に凝集したＡβ線維構造は破壊され、このようにしてアルツハイマー病に典型的な初期および進行した神経変性変化の両方を防止するのに有効なものとなる。
【００２２】
以前に公開されたデータを考慮すると、初乳由来のプロリンリッチポリペプチド複合体は、免疫系機能を調節する能力を有し、かつそれらの神経保護特性と合わせた抗炎症および抗酸化活性を有する。しかし、これらの有益な治療効果とＰＲＰ製剤の単なる医学的作用機序との相関に関する調査の経験的結果は今日まで何も知られていない。
【発明の概要】
【００２３】
本発明は、プロリンリッチポリペプチド複合体治療の健康な個体における脳由来神経栄養因子の血清中濃度に対する効果を実証する本発明者らによって行われた実験的研究の結果に基づいている。
【００２４】
脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）は、神経細胞およびグリア細胞の成熟および分化において大きな役割を有する神経成長因子ファミリーのメンバーである。ＢＤＮＦ発現は毒物、例えばＡβに応答して顕著に増加し、神経保護を与えることは十分に実証されている。ＢＤＮＦは、適切な神経系活性におけるその役割の点で最も特徴的な神経栄養因子であると思われる。従って、ＢＤＮＦは、自己免疫疾患、例えば多発性硬化症ならびにアルツハイマー病、ハンチントン病およびパーキンソン病などの多くの他の神経障害の脳病理を調べるための適当なバイオマーカーであると考えられている。
【００２５】
ＢＤＮＦレベルは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）などの免疫不全症候群と大きく関連している。アルツハイマー病の治療のために最近認可されたメマンチンは、脳における認知障害の発症を防止し、かつこの効果はメマンチンに媒介されるＢＤＮＦ発現の上方制御と相関していることが分かっている。さらに、脳内のＢＤＮＦ発現の増加により、脳におけるドーパミンおよびセロトニン濃度の増加が生じた。従って、ＢＤＮＦ合成は抗鬱作用と見なされている。いくつかのデータから、過剰な炎症誘発性サイトカイン産生に伴う炎症は鬱病様の行動の病因に関与していることが分かった。これらの状態では、ＢＤＮＦレベルは脳内の選択された領域において大きく減少し、鬱病様の症状を加速させる。従って、ＢＤＮＦによる鬱病患者の治療は、気分関連の神経精神病の有効な治療法となる。
【００２６】
ＢＤＮＦ分泌は、いくつかの非神経組織でも観察され、主に脳における病態に応答して発現される。ＢＤＮＦは、リンパ球および単球などの免疫系細胞の活性の特異的誘導物質として働き、病変を有する脳の領域へのマクロファージ遊走を刺激して再生プロセスを活性化させる。
【００２７】
ＢＤＮＦは、食物摂取行動、グルコースおよび脂質の代謝ならびに体重維持を制御することが分かっている。血中ＢＤＮＦ濃度の減少は摂食障害と関連していることが多い。
【００２８】
いくつかのデータは、海馬におけるＢＤＮＦレベルの減少が老化中に生じ、これは認知の低下と関連しており、運動および食事はどちらも海馬のＢＤＮＦ発現を増加させ、かつ加齢性記憶障害を妨害するのではないかということを示している。
【００２９】
ＢＤＮＦは他の神経栄養因子と同様に、神経細胞の分化および成長、シナプス形成および可塑性ならびに髄鞘形成を含む哺乳類の脳における多くの活性依存性プロセスを媒介する(ParkおよびPoo, Nat. Rev. Neurosci. 14(1), 2013)。これらの機能に加えて、ＢＤＮＦは多発性硬化症などの各種疾患の発症と大きく相関している。以前の発見では、ＢＤＮＦは局所的に脱髄した神経に対する保護となり、多発性硬化症における脳ＢＤＮＦ発現の増加は再髄鞘形成プロセスの強化と関連していることが示されている。
【００３０】
Ｎａｓｓａｒらの研究（Matern. Child. Nutr. 7(2), 2011）によれば、血中ＢＤＮＦレベルは、Ｂａｙｌｅｙ乳幼児発達検査（Bayley Scale of Infant Development）第２版（ＢＳＩＤ−ＩＩ）を用いて評価される乳幼児養育パターンに応じて異なり得る。この研究により、母乳養育群はより高いＢＳＩＤ−ＩＩスコアを有し、それに続いて母乳／粉ミルク混合養育群、次いで粉ミルク養育群の順のスコアであったが、これらの結果は総行動評価尺度（ＴＢＲＳ：total behaviour rating scale）およびＭｏｔｏｒ質パーセンタイル（Motor Quality Percentile）順位値のみにおいて統計的有意性に達したことが明らかになった。さらに、母乳で育てられた乳幼児は、粉ミルクを与えた乳幼児と比較した場合、有意により高い血清中ＢＤＮＦ値を有しており、この正相関は、母乳の時間が乳幼児にとって最も喜ばしい幸せな時であるためＢＤＮＦの分泌を引き起こすことができるプロセスとしての母乳養育の利点によるものであると考えられている。
【００３１】
ＢＤＮＦが授乳中の女性の乳汁において天然に生じ、いくつかの種類の細胞、例えば白血球によって産生されるといういくつかの証拠がある。この研究は、授乳期間中のＢＤＮＦレベルの変化を報告しており、授乳期間の３〜９０日間にわたって一定である。さらに、ＢＤＮＦレベルは授乳中の女性の血清中よりも母乳中において高く、これは乳幼児の食事におけるその重要な役割を示している。
【００３２】
この知識を踏まえると、市場で入手可能な一般的な乳幼児用粉ミルクは乳幼児の適切な発達には不十分であると思われる。
【００３３】
その発達をプラスに刺激し、かつ免疫および神経系の機能を維持することができ、それらの天然の供給源により使用にとって安全であると同時に標準化されているために成人および小児の両方において有益な効果を提供することができる、特定の生物学的薬剤の社会的必要性が高まっている。
【００３４】
その必要性は、特定の投与計画において投与された場合に神経保護作用と合わせた極めて重要な免疫系支持に影響を与えることができる本発明に係る生物学的薬剤の使用によって満たすことができる。
【００３５】
本発明は、脳由来神経栄養因子レベルの変化およびその調節に関連する障害および病状の治療に使用される、哺乳類の初乳に由来するプロリンリッチポリペプチド複合体を提供する。
【００３６】
本明細書で使用される「治療」は、脳由来神経栄養因子レベルの調節に応答する病状および障害の治療的、予防的および補助的治療を含む。
【００３７】
本明細書で使用される「脳由来神経栄養因子の調節」という用語は、プロリンリッチポリペプチド複合体によって誘導されるＢＤＮＦ血清中濃度を免疫および神経系の適切な機能の維持に必要なレベルまで増加させること、および環境要因、例えば不十分な栄養、疲労または慢性ストレスによって引き起こされる一時的なＢＤＮＦ変動を防止することの両方を指す。
【００３８】
本発明者らによって行われた健康な成人の個体に対する研究では、プロリンリッチポリペプチド複合体の投与によってヒトの血清中ＢＤＮＦレベルの有意な増加が生じることが実証された。
【００３９】
本明細書の実験の箇所に説明されているように、枯渇した末梢ＢＤＮＦレベルと各種病状および障害の発症との強い相関を確認する一般的な科学的知識に加えて、ＰＲＰに誘導されるＢＤＮＦレベルの増大について言及する本発明自身の研究結果によれば、プロリンリッチポリペプチド複合体の投与により、成人および小児におけるこれらの病態および障害の発生を防ぐことができるものと想定される。
【００４０】
本発明の一態様では、プロリンリッチポリペプチド複合体は、限定されるものではないが、気分障害、強迫性障害、大鬱病などの精神障害、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病、脊髄小脳失調症、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）誘導性障害、糖尿病、神経性無食欲症および神経性過食症などの摂食障害、肥満症および肥満症関連疾患、緑内障、網膜異常、多発性硬化症などの中枢神経系脱髄疾患、末梢神経障害、脳卒中などの脳血管障害、片頭痛および他の頭痛症候群、心血管疾患などを含む群から選択される障害の治療で使用することを目的としている。
【００４１】
本発明の別の態様は、神経系の適切な機能を保証し、かつＢＤＮＦ依存性神経細胞の活性を維持するための、神経系または一時的な集中精神活動の機能不全に関する障害、憂鬱な気分、記憶力の低下、集中および記憶障害ならびに疲労の治療におけるプロリンリッチポリペプチド複合体の使用を提供する。
【００４２】
血中ＢＤＮＦレベルを制御するその能力と共にプロリンリッチポリペプチド複合体の抗ラジカル保護活性は、ＰＲＰが特に軽度の認知障害を有する個体に適用可能な認知および注意促進剤として有用であり得ることを示している。
【００４３】
本発明の別の態様は、認知機能を高め、かつ乳幼児および低年齢小児の神経系の発達を強化するために予防的に使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体を提供する。ＢＤＮＦレベルを増加させるＰＲＰの能力に加えて、特に人生の早い段階での乳幼児の発達におけるＢＤＮＦの明確に定義された役割は、プロリンリッチポリペプチド複合体が乳幼児および低年齢小児における髄鞘形成の特定の活性化剤として機能し、それにより神経系の発達に寄与できることを示唆している。
【００４４】
本発明のその態様の具体的な実施形態では、プロリンリッチポリペプチド複合体は、特に生まれたときから粉ミルクが与えられ、母乳で育てられておらず、かつプロリンリッチポリペプチド複合体が欠乏している乳幼児に対して、乳幼児および低年齢小児用の栄養添加物／補給剤として使用することを目的としている。唯一の乳源として、あるいは母乳養育と組み合わせてＰＲＰで栄養強化された調製粉ミルクを乳幼児に与えることにより、母乳のみで育てられた乳幼児において検出されるＢＤＮＦレベルに匹敵するレベルまで乳幼児の血中ＢＤＮＦレベルを増加させる。
【００４５】
本発明は、ウシの初乳に由来するプロリンリッチポリペプチド複合体、好ましくは１６〜２２％のプロリンを含むプロリンリッチポリペプチド複合体で栄養強化された乳幼児用調製粉ミルクをさらに提供する。
【００４６】
母乳にさらに近づけるためにウシ由来のプロリンリッチポリペプチド複合体で栄養強化された乳幼児用調製粉ミルクの独特な組成物を以後「Ｃｏｌｏｃｏ母乳化（Ｍａｔｈｅｒｎｉｚｅｄ）粉ミルク（ＣＭＦ）」と呼ぶ。ＣＭＦの新規な組成物は、乳幼児の血中ＢＤＮＦレベルを増加させる独特な特性を示す。
【００４７】
本発明の好ましい実施形態では、乳幼児用調製粉ミルクは、体重１ｋｇ当たり１〜５μｇの範囲内である乳幼児のＰＲＰ１日必要量を満たす量で投与することを目的としている。
【００４８】
本発明に開示されているＣＭＦ組成物は、母乳で育てられた乳児の血中で検出されるレベルと同等またはさらにより高いに循環中ＢＤＮＦレベルを提供し、それにより神経系の発達を支持する。乳幼児用粉ミルクをプロリンリッチポリペプチド複合体、特にＩｇＧを含まないプロリンリッチポリペプチド複合体で栄養強化することで、免疫調節、全身免疫の向上、抗アレルギー効果および自己免疫攻撃（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｏａｇｇｒｅｓｓｉｏｎ）からの保護を含む、乳児の免疫系に対するそのさらなる有益な効果が決まる。
【００４９】
本発明に係るＣＭＦの栄養組成物は、ＰＲＰによる乳幼児用粉ミルクの栄養強化によって母乳のみで育てられた乳児の血中で検出されるＢＤＮＦレベルと同様に循環中ＢＤＮＦ濃度が上昇するため、市場で入手可能な一般的な粉ミルクよりも乳児の健康にとってはるかに有益なものとなる。
【００５０】
本発明の別の態様は、母親および乳児の血中ＢＤＮＦレベルを増加させるために、妊婦のための栄養添加物として使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体を提供する。ＰＲＰで栄養強化された妊婦の食事は、免疫調節および抗アレルギープロセスの活性化に寄与し、かつ全身免疫の向上に繋がる。
【００５１】
本発明のさらなる態様は、神経系の活性を誘導および／または向上させ、かつ／または認知促進効果、すなわち記憶および集中力の向上を達成するために、母乳養育および／または粉ミルク養育後の幼児に近い乳児および成人用の栄養添加物として使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００５２】
本発明に従って使用される哺乳類の初乳に由来するプロリンリッチポリペプチド複合体は一般に、１６〜２４％のアミノ酸残基プロリン、好ましくは２０％のプロリンを含む複合体を指す。
【００５３】
プロリンリッチポリペプチド複合体は、大きな動物の初乳、好ましくはウシの初乳から単離されたものである。この複合体は、ヒツジ、ヤギおよび他の家畜などの他の哺乳類から得たものであってもよい。
【００５４】
本発明の好ましい実施形態では、プロリンリッチポリペプチド複合体は、ポーランド特許第２１８６９３Ｂ１号に記載されている方法に従ってウシの初乳から得たものであり、これを以後COLOCO prpと呼ぶ。本明細書で使用される「COLOCO prp」という用語は、１８〜２０％のプロリン、好ましくは２０％のプロリンを含有し、かつ高比率の酸性アミノ酸（約１８％）、生物学的に不活性なβ−ラクトグロブリン（１７ｋＤａ）画分および付随する非タンパク質成分の存在を特徴とする、１０ｋＤａまでの低分子量のポリペプチド混合物を指す。
【００５５】
本発明の別の好ましい実施形態では、プロリンリッチポリペプチド複合体は、分子量に基づく分離によってCOLOCO prpから単離されたβ−ラクトグロブリン画分を含まないポリペプチド混合物である。
【００５６】
本発明のさらに別の好ましい実施形態では、プロリンリッチポリペプチド複合体は、ポーランド特許第２１８７０８Ｂ１号に記載されている方法に従ってウシの初乳から分離された乳漿タンパク質複合体である。その乳漿タンパク質複合体は、１ｋＤａ未満の分子量のカットオフ画分（cut off fraction）および７〜１２．５％のプロリンを含有する。COLOCO prpの代わりに乳漿タンパク質複合体を使用する場合には、本発明において提供されているプロリンの標準的な含有量（１６〜２４％）を参照してプロリン残基の含有量を再計算しなければならず、付随する担体と共に正しいタンパク質レベルに標準化しなければならない。
【００５７】
本発明に係る使用において、プロリンリッチポリペプチド複合体は、ＢＤＮＦレベルの増加またはその調節に応答する個体に、所定の投与スキームに従って治療的または予防的に有効な用量レベルで投与することを目的としている。
【００５８】
プロリンリッチポリペプチド複合体の治療的または予防的に有効な１日量は、治療される具体的な病状または障害、個体の年齢、体重、一般的な健康状態および期待される治療効果に応じて異なってもよく、臨床試験の結果に基づいて当業者（医療の専門家または栄養士）が決定してもよい。
【００５９】
成人におけるプロリンリッチポリペプチド複合体の治療的または予防的に有効な１日量は、好ましくは５０〜１０００μｇの範囲、より好ましくは８０〜１６０μｇの範囲であり、１日１回投与してもよく、あるいは１日に数回の分割用量として投与してもよい。
【００６０】
提案される好ましい投与スキームにおいて、プロリンリッチポリペプチド複合体を成人に約２〜４週間の期間内、最も好ましくは４週間投与してもよく、その後にプロリンリッチポリペプチド複合体の投与が推奨されない期間があってもよい。ＰＲＰを投与しない期間は１〜４週間、最も好ましくは２週間であってもよい。投与サイクルを好ましくは少なくとも１回、より好ましくは２回以上繰り返す。
【００６１】
乳幼児用粉ミルクおよびベビーフードの栄養補給のために使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体の１日量は、好ましくは体重１ｋｇ当たり１〜５μｇの範囲である。
【００６２】
妊婦の食事の栄養補給のために使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体の１日量は、好ましくは５０〜１４０μｇの範囲である。
【００６３】
プロリンリッチポリペプチド複合体は、液体または凍結乾燥された初乳から直接単離されたそのままの形態でそれ自体を投与してもよく、あるいは生理学的に許容される担体および／または他の賦形剤と組み合わせた治療的または予防的に有効な用量のＰＲＰを含む製剤の成分として投与してもよい。
【００６４】
本発明に従って使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体を、一般的な健康状態、障害／疾患の重症度または標的レシピエント群に応じて様々な形態で提供してもよい。プロリンリッチポリペプチド複合体を医薬品、栄養物質（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃ）、栄養補給剤、特殊な医療目的のための食品、特定の栄養利用のための食品または栄養補助食品の形態で使用してもよい。
【００６５】
本発明に従って使用される医薬品組成物は、所与の製剤中に使用することが推奨され、かつそれ自体の治療効果を発揮することも活性薬剤をひどく妨害することもない不活性かつ生理学的に許容される担体および／または賦形剤と組み合わせた活性薬剤（すなわちプロリンリッチポリペプチド複合体）を含む。
【００６６】
本発明に従って使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体の医薬品組成物は、全身投与に適したあらゆる形態で製剤化することができる。例えば、経口投与のために、それを錠剤、カプセル、澱粉カプセル、フィルムコート錠または腸溶錠の形態、粉末または顆粒として、溶液、経口懸濁液または乳濁液として製剤化してもよい。経口投与のための錠剤またはカプセルは、結合剤、充填剤、湿潤剤および崩壊剤などの従来から使用されている賦形剤を含む。錠剤を一般的に使用される方法に従ってコーティングしてもよい。経口液剤は、水性もしくは油性懸濁液、溶液および乳濁液、シロップ、エリキシル剤、即席で水または別の液体担体で再構成するための粉末または凍結乾燥物として調製することができる。経口液剤は、懸濁化剤、乳化剤、非水性担体（食用油など）または防腐剤などのさらなる成分を含むことができる。担体／賦形剤の種類および量は医薬品形態およびその投与経路によって決まる。好適な製剤は、当該技術分野でよく知られている技術を用い、任意の生理学的に許容される担体、希釈液、充填剤および他の賦形剤を用いて調製される。
【００６７】
本発明に従って使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体の医薬製剤を栄養物質として製剤化することもできる。栄養物質を栄養補助食品または健康上の利点を与える任意の他の機能性食品として使用してもよい。栄養物質は、さらなる健康上の利点を与えることを目的として人の摂取食物に天然の食物源に由来する栄養を補うために一般的に使用される。栄養物質は食物中に天然には非常に少量でしか生じないにも関わらず、これらの物質の生物学的重要性は体の機能を支えるために極めて重要である。
【００６８】
本発明に従って使用される医薬製剤は、特殊な医療目的のための食品すなわち、その栄養所要量を通常の食品によって満たすことができない特定の疾患、障害または病状を有する個体を対象とした食品として使用することもできる。
【００６９】
さらに、本発明に従って使用される製剤は、特定の栄養利用のために食品中に含めることができる。「特定の栄養利用のための食品」という用語は、それらの特殊な組成または製造プロセスにより通常の消費のための食品とは明らかに区別可能であり、かつ特定の疾患、障害または病状に罹患している個体を対象とした食品を指す。特に、栄養利用は、その消化プロセスまたは代謝に障害がある個体、または特殊な生理学的条件下にあり、かつ特定の物質の制御された消費が有効である個体、あるいは良好な健康状態の乳幼児または低年齢小児の特定の栄養所要量を満たすものでなければならない。
【００７０】
本発明に従って使用される製剤は、添加しなければ十分な量で食事と共に消費させることができない栄養を与えることを目的とした栄養補給剤として使用することができる。
【００７１】
COLOCO prpを含むプロリンリッチポリペプチド複合体成分の小型および単純な構造により、このポリペプチドを通常の拡散により粘膜、特に口腔および咽喉を容易に通過させたり、免疫調節物質のための細胞受容体を介して上皮に吸収させたりすることができる。従って、プロリンリッチポリペプチド複合体を好ましくは経口投与のために製剤化することができ、口腔／鼻咽腔および／または消化管の粘膜を通して吸収させるための液体または固体の形態で提供することができる。
【００７２】
本発明に係る使用のために選択された好適な製剤の種類は、標的群および具体的な治療的使用によって決まる。本発明に係る最も好ましい剤形を錠剤、トローチ剤、舌下錠、丸剤、カプセル、粉末、顆粒、ネクター／飲料またはシロップの形態で調製することができる。年長児用の適切な剤形は、例えば、チューインガム、棒状物（ｂａｒ）、キャンディまたはロリポップであってもよい。妊婦用の適切な剤形は、例えば、錠剤、カプセル、滴剤、乳飲料、飲料、チューインガム、棒状物、キャンディなどであってもよい。
【００７３】
本発明の好ましい実施形態では、本発明に従って使用されるプロリンリッチポリペプチド複合体は、生後一年間、最も好ましくは６〜１２ヶ月の乳幼児用粉ミルクの添加剤である。
【００７４】
健康な成人の対象における本発明者自身の臨床研究結果によれば、プロリンリッチポリペプチド複合体は、乳幼児集団において血中ＢＤＮＦレベルの調節を含む同様の活性を発揮することが期待される。プロリンリッチポリペプチド複合体を乳幼児用粉ミルクに添加することによりＢＤＮＦ依存的に乳幼児および低年齢小児の神経系の適切な発達および機能を与えると想定される。動物毒性研究では、ＰＲＰの低い毒性（ＬＤ５０＞１．２５ｋｇ／ｋｇ体重）が明らかになり、これにより、乳幼児用粉ミルクへのＰＲＰの添加は完全に安全であることが確認された。
【００７５】
特定の栄養利用のための食品に関するポーランド共和国の保健大臣（Minister of Health）の法令に準拠したウシ由来の初乳に由来するプロリンリッチポリペプチド複合体は、乳幼児および低年齢小児の栄養のために推奨されている乳漿タンパク質群に含められており、これはＰＲＰ強化製剤の高い安全性をさらに示している。
【００７６】
本発明に開示されているＣｏｌｏｃｏ母乳化粉ミルク（ＣＭＦ）の組成物は、体重１ｋｇ当たり１〜５μｇの範囲内である乳幼児のＰＲＰ１日必要量を満たす量のプロリンリッチポリペプチド複合体で栄養強化されている。この投与量レベルは、乳幼児における血中ＢＤＮＦレベルを母乳で育てられた乳児の血中で検出されるレベルと同等またはそれよりもさらに高いレベルまで増加させるのに有効であることが期待される。
【００７７】
プロリンリッチポリペプチド複合体は、単独の治療的または予防的活性薬剤として使用することができ、任意の治療薬または栄養補助食品と併用投与することもできる。
【００７８】
本発明の一態様では、好適な医薬組成物に含まれたプロリンリッチポリペプチド複合体を１日当たり０．９ｍｇ〜１．５ｍｇ、好ましくは１．１ｍｇの用量でビタミンＢ類、特にビタミンＢ１と同時投与してもよい。
【００７９】
本発明の別の態様では、プロリンリッチポリペプチド複合体を２５０ｍｇ〜２０００ｍｇ、好ましくは１０００ｍｇの用量でＮ−アセチル−Ｌ−カルニチンなどのミトコンドリア抗酸化剤などの抗酸化剤と併用投与してもよい。
【００８０】
本発明の別の態様では、プロリンリッチポリペプチド複合体をαリポ酸と併用してもよい。
【００８１】
さらに、プロリンリッチポリペプチド複合体をドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）と併用投与してもよい。乳幼児食に最も一般的に使用される成分であるＤＨＡは、神経系の発達の支持および髄鞘形成プロセスへの寄与などの多くの健康上の利点を有するオメガ３脂肪酸の群に含められる。ＤＨＡ欠乏は、ＡＤＨＤなどの小児における神経障害の発症および進行に関連していることがある。ＰＲＰとＤＨＡとの組み合わせを乳幼児用粉ミルクに使用し、それにより髄鞘形成および細胞膜修復に対する構築材料（ＤＨＡ）を神経細胞に供給し、かつ髄鞘形成プロセスの特異的促進剤を提供できると有利である。
【００８２】
本発明の別の態様では、プロリンリッチポリペプチド複合体を、前から存在するタウ凝集体（神経原線維変化、ＮＦＴ）を溶解する能力を示す薬剤またはメチレンブルーなどのタウタンパク質凝集阻害剤と併用投与してもよい。
【００８３】
健康な志願者において行われた研究の結果から、哺乳類の初乳から単離されたプロリンリッチポリペプチド複合体は安全であり、かつ健康な成人の集団における血中ＢＤＮＦレベルを引き上げることが証明された。従って、本発明に係るプロリンリッチポリペプチド複合体は、ＢＤＮＦレベルの変動およびその調節に関連する障害および病状の予防的および補助的治療で使用できると有利である。特に、成人および小児における食事成分ならびに食品および乳幼児用調製粉ミルクの栄養補給剤としてのプロリンリッチポリペプチド複合体の使用により、有益な治療効果が得られる。乳幼児用粉ミルクにプロリンリッチポリペプチド複合体を補給することで、乳幼児の血中ＢＤＮＦレベルの増加に対するその効果により、その粉ミルクを母乳に近づけ、それにより市場で入手可能なＰＲＰを含まない一般的な製剤よりも小児の健康にとって有益な栄養効果を達成することができる。Coloco母乳化粉ミルク（ＣＭＦ）の栄養組成物は母乳で育てることができない乳児の健康および発達にとって最も価値あるものとなる。
【００８４】
以下の実施例により本発明を説明する。
【実施例】
【００８５】
生物学的研究
生物学的研究において試験したプロリンリッチポリペプチド複合体は、ポーランド特許第２１８６９３Ｂ１号に記載されている方法によってウシの初乳から単離したCOLOCO prpであった。
【００８６】
プロリンリッチポリペプチド複合体の組成物、すなわちポーランド特許第２１８６９３Ｂ１号に記載されている方法によってウシの初乳から単離したCOLOCO prpとＭ．Ｊａｎｕｓｚら（FEBS LETTERS 1974, 49, 276-279）によるヒツジのコロストリニンとの比較を表１に示す。COLOCO prpのアミノ酸プロファイルは逆相ＨＰＬＣによって決定した。
【表１】
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【００８７】
ヒトによる証明
COLOCO prpの認知機能に対する効果を評価するための二重盲検無作為化研究を年齢（１８〜７５歳の範囲内）に基づいて３つの群に割り当てられた３６１人の個体に対して行った。治療群では、以下のスケジュール：COLOCO prp治療（４週間）＋２週間の中断＋COLOCO prp治療（４週間）＋２週間の中断＋COLOCO prp治療（４週間）の計１６週間の研究期間により、COLOCO prpを１２０μｇ／日の単回用量で投与した。対照（プラセボ）群でも同じ投与様式を使用した。
【００８８】
神経心理学的評価
選択した神経心理学的試験を用いて、COLOCO prpが健康な対象の認知技能に影響を与える能力を評価した。COLOCO prp治療後に最も高い健康上の利点を得ることが期待された対象の３つのサブ集団において、COLOCO prp治療の有効性を評価した。
【００８９】
「マルチタスカー（ＭＴ：Multitasker）群」を１８〜２５歳の若い成人の男性および女性の集団として定めた。この群では、本研究を完了した１２２人の対象を以下のパラメータに従って評価した（治療群または対照（プラセボ）群、本研究のセンター：ポズナンまたはワルシャワ）。来院１の間に、本研究に登録された全ての対象がメディアマルチタスキング質問表（ＭＭＱ：Media Multitasking Questionnaire）に全て答えた。ＭＭＱに基づき、経験指数ＭＭＩを作成した。
【００９０】
「注意力欠如障害（ＡＤＴ）群」を２５〜５５歳の成人の男性および女性の集団として定めた。この群では、本研究を完了した１１６人の対象を以下のパラメータに従って評価した（治療群または対照（プラセボ）群、本研究のセンター：ポズナンまたはワルシャワ）。本研究に登録されるために、来院１の間に、依頼された全ての対象が成人期ＡＤＨＤ自己報告尺度（Adult ADHD Self-Report Scale）（ＡＳＲＳ−ｖｌ．１）症状チェックリストに全て答えた。
【００９１】
「加齢性記憶機能障害（ＡＡＭＩ）群」を５６歳以上の成人の男性および女性の集団として定めた。この群では、本研究を完了した１２３人の対象を以下のパラメータに従って評価した（治療群または対照（プラセボ）群、本研究のセンター：ポズナンまたはワルシャワ）。来院１および来院３の間に、全ての対象がＭｏＣＡ（モントリオール認知評価検査）を受けた。来院１の間に、全ての対象を軽度認知機能障害（ＭＣＩ）に罹患していると評価した。ＭｏＣＡ検査に基づき、２６点未満のスコアを有する対象を本研究に含めなかった。ＡＡＭＩ群においてCOLOCO prpレジメンの有効性を評価するために、来院１および来院３の際に記録したＭｏＣＡ検査値の差も検討した。
【００９２】
認知能力、特に記憶および注意技能を評価するために、全３回の来院の間に、ＣＡＮＴＡＢ神経心理学的バッテリーから選んだ４種類の認知試験を本研究に登録された全ての対象に適用した。
【００９３】
本研究対象の平均スコアを比較するために、混合効果モデルにおける反復測定による多因子分散分析を使用した。対照群の数が少ないためにその結果が変数の正規分布の仮定を満たさなかった場合は、ＭＡＮＯＶＡの結果をノンパラメトリック検定で確認した。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】図１のグラフは、ＤＭＳ（遅延見本合わせ）の変化における差を示す。ＡＡＭＩ群に関する来院間の群内測定システムにおける正答率。プラセボ群では、来院１の平均は８２．５および標準偏差１．４８３であり、治療群では７８．３３３および標準偏差１．５０８である。来院３の場合、これらの値はプラセボ群では８４．１９４および標準偏差１．３５９であり、治療群では８４．０８３および標準偏差１．３８１である（来院１対来院３、Ｆ＝３．００５、ｐ＝０．０８６、η２＝０．２４）。
【図２】図２のグラフはＰＡＬ（対連合学習）における差を示す。ＭＴ群に関する来院間の群内測定システムにおける総合誤差（補正済）（反復測定の効果、Ｆ＝５．０７２、ｐ＝０．００７、η２＝０．４３）。
【図３】図３のグラフは、ＡＤＴ群に関する来院間の群内測定システムにおけるＲＶＰ．Ａ（迅速な視覚情報処理）値における差を示す。プラセボ群では、来院１の平均は０．８８８および標準偏差０．００６であり、治療群では０．８９２および標準偏差０．００６である。来院３の場合、これらの値は、プラセボ群では０．９１８および標準偏差０．００７であり、治療群では０．９３６および標準偏差０．００７である（来院１対来院３、Ｆ＝３．０３９、ｐ＝０．０８４、η２＝０．２６）。
【００９５】
ワルシャワのセンターの５６歳以上の対象（ＡＡＭＩ／ＯＬＤ群）のうち９人において、被験者募集来院中に、初期の認知症いわゆるＭＣＩ＝軽度認知機能障害を意味し得る有意な認知障害を示す低い正答率のＭｏＣＡ（２０点未満）が確認された。COLOCO prpを摂取してから４ヶ月後に、これらの対象を再検査した。ＡＡＭＩ／ＯＬＤ群に割り当てられ、かつCOLOCO prp製品を摂取している他の研究参加者と比較して、上記９人の参加者は、最も高い程度の認知向上を示した。この群内では、他の試験における３．５点と比較して、平均向上値は５点であった（何人かは９点という高さであった）。この群における少数の参加者は、包括的解釈は不可能であるが、高度の障害の場合にCOLOCO prp自体の有益な特性が最も有効に現れることを示唆し得る。
【００９６】
この推論の確認は、ＭＴ群（最年少群）に関する観察により行う。メディアマルチタスキング質問表（ＭＭＱ：Media Multitasking Questionnaire）を用い、かつメディアマルチタスキング指数（ＭＭＩ：Media Multitasking Index）を計算して、この群をいわゆるヘビーマルチタスカー（Heavy Multitasker）およびライトマルチタスカー（Light Multitasker）に分けることができる（これらは１標準偏差だけ異なる）。この場合も、ワルシャワにおける治療群中のヘビーマルチタスカーの来院１と来院３との間の平均向上値はライトマルチタスカーの場合よりも高い。これは認知能力指数（ＣＰＩ）にも当て嵌まり、これはＣＡＮＴＡＢに含まれる４種類の試験（ＰＡＬ、ＲＴＩ、ＤＭＳ、ＲＶＰ）に基づいて計算する。これらの観察は４人の対象に焦点を合わせた。
【００９７】
【図４】図４は、ＭＴ群において認知機能を評価するために使用されるＣＰＩ値における変化を示す。
【００９８】
神経心理学的試験の結論
本研究の神経心理学的（認知）部分は、比較的短い観察期間（１６週間）で、COLOCO prpが、
・ＤＭＳ試験結果（変数：正答率、来院１対来院３、Ｆ＝３．００５、ｐ＝０．０８６、η２＝０．２４）によって示されているように、最年長群すなわちＡＡＭＩ（「ＯＬＤ」）において短期間の視覚的記憶の効率を高め、
・ＰＡＬ試験結果（変数：補正済総合誤差、群内効果の分析、Ｆ＝５．０７２、ｐ＝０．００７、η２＝０．４３）によって証明されているように、最年少群すなわちＭＴにおいて学習能力および空間記憶を高め、
・群内分析システム（変数：単純な反応時間、プラセボ対治療群の再現可能な群内分析、Ｆ＝２．７９３、ｐ＝０．０９７、η２＝０．２４）におけるＲＴＩ試験結果によって示されているように、平均的な群すなわちＡＤＴにおける刺激に応答する反応速度を高め、
・ＲＶＰ試験結果（変数：ＲＶＰ．Ａ、来院１対来院３、Ｆ＝３．０３９、ｐ＝０．０８４、η２＝０．２６）によって示されているように、集中する能力に良い影響を与える
ことができることを示唆している。
【００９９】
生化学分析
COLOCO prpの認知向上特性を明らかにするために、脳活性の特異的なバイオマーカーＢＤＮＦの濃度を測定した。ＢＤＮＦは、シナプス可塑性、長期増強（ＬＴＰ）の誘導ならびに神経細胞の分化および生存（神経保護）において大きな役割を有する。ベースライン（来院１）および本研究の終了時（来院３）に採取した血液試料中のＢＤＮＦレベルを推定した。
【０１００】
【図５】図５は、有意性のレベルに加えて、それぞれの年齢群における９５％信頼区間を用いた平均値および標準偏差として示されている本研究結果を示すグラフである。COLOCO prpで治療したＭＴ、ＡＤＴおよびＯＬＤ群における年齢群を検討すると、対象のそれぞれ７８％、４４％および６２．５％において血清中ＢＤＮＦレベルの増加が認められた。対照（プラセボ）群では、ＢＤＮＦのレベルはＭＴ対象の１８％、ＡＤＴ対象の２３．５％およびＯＬＤ個体の３０％においてより高いことが分かった。さらに、生化学分析により何人かの参加者においてＢＤＮＦ濃度における有意な低下が明らかとなった。血清中ＢＤＮＦレベルはCOLOCO prpで治療した対象の３６．９％および対照群における対象の７５．８％において減少した。
【０１０１】
表２には、実験群の値が治療群およびプラセボ群の割合の平均値として示されている。本研究の結果から、プラセボ群と比較してCOLOCO prpで治療した全ての参加者の血清中の統計的に有意なより高いレベルのＢＤＮＦ（Ｆ（１．１２５）＝２７．２、ｐ＜０．００１、η２＝０．５５）が明らかとなった。
【表２】
2018500284.tif 000003
【０１０２】
表３には形態学的試験結果が示されている。２つの実験群の間で僅かに異なる全ての白血球のレベルに対するリンパ球の割合。
【表３】
2018500284.tif 000004
【０１０３】
生化学分析の結論
生化学分析により、COLOCO prpで治療した対象の６３．１％においてＢＤＮＦレベルの増加が明らかになった（χ２（１）＝１９．４６、ｐ＜０．００１、ＯＲ＝０．１８６８、９５％ＣＩ：０．０８６６〜０．４０３１）。COLOCO prp治療群では、リンパ球のレベルは、対象の１３％において生理学的レベルとしてみなされる濃度範囲まで戻り（χ２（２）＝９．９７７、ｐ＝０．００６８１４）、これは免疫系の恒常性を調節および回復させるCOLOCO prpの能力を示している。
【０１０４】
本研究を終了する最後の来院時に、全ての参加者に治療中に現われた可能性のある予期しない不快な症状を挙げるように求めた。COLOCO prpを投与された患者の中に有害事象を報告するものはおらず、これはヒトがCOLOCO prpを安全に使用できることを示している。
【０１０５】
実施例1
【表４】
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【０１０６】
COLOCO prpで栄養強化された乳幼児用粉ミルクステージ１（ＧＭ−１Ｃ）
粉ミルクステージ１は、０〜５ヶ月の乳児のための乳幼児用粉ミルク、すなわち１００ｍｇの粉ミルク粉末当たり２０μｇの量のCOLOCO prpが補給された市販されているMAMI LAC1であり、１００ｍＬのそのまま飲める製品当たり２．７μｇのCOLOCO prp用量を与える。
【表５】
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2018500284.tif 000008
【０１０７】
COLOCO prpで栄養強化された後続の粉ミルクステージ２（ＧＭ−２Ｃ）
粉ミルクステージ２は、６〜１２ヶ月の乳児のための後続の粉ミルク、すなわち１００ｍｇの粉ミルク粉末当たり４０μｇの量のCOLOCO prpが補給された市販されているMAMI LAC2であり、１００ｍＬのそのまま飲める製品当たり５．６μｇのCOLOCO prp用量を与える。
【表６】
2018500284.tif 000009
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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