(57)【要約】  痛みの治療において使用するための、（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートおよびその塩。
2018520984.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
疼痛の治療に使用するための、または疼痛の治療のための医薬の製造のための、（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートメシレートおよびその水和物および医薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
疼痛を有する対象に、請求項１に記載の化合物の有効量を投与することを含む、疼痛の治療方法。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物、および１種または複数種の適切な賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項４】
前記疼痛が炎症性疼痛である、請求項１または２に記載の化合物、使用または方法。
【請求項５】
医薬的に許容される塩が、メシレートである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
医薬的に許容される塩が、硫酸塩またはその水和物である、請求項１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、疼痛の治療における、ＳＳＡＯ阻害剤（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートおよびその塩の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
セミカルバジド感受性アミンオキシダーゼ（ＳＳＡＯ）の活性は血管接着タンパク質−１（Vascular Adhesion Protein-1）（ＶＡＰ−１）またはアミンオキシダーゼ銅含有−３（Amine Oxidase, Copper Containing 3）（ＡＯＣ３）によって発現する酵素活性で、銅含有アミンオキシダーゼファミリーの酵素（ＥＣ．１．４．３．６）に属する。したがって、ＳＳＡＯの阻害剤はＶＡＰ−１タンパク質の生物学的機能も調節しうる。
【０００３】
ＳＳＡＯ活性は、血管および非血管平滑筋組織、内皮細胞、ならびに脂肪組織を含む種々の組織で見出されている[Lewinsohn, Braz. J. Med. Biol. Res. 1984, 17, 223-256; Nakos & Gossrau, Folia Histochem. Cytobiol. 1994, 32, 3-10; Yuら, Biochem. Pharmacol. 1994, 47, 1055-1059; Castilloら, Neurochem. Int. 1998, 33, 415-423; Lyles & Pino, J. Neural. Transm. Suppl. 1998, 52, 239-250; Jaakkolaら, Am. J. Pathol. 1999, 155, 1953-1965; Morinら, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001, 297, 563-572; Salmi & Jalkanen, Trends Immunol. 2001, 22, 211-216]。さらに、ＳＳＡＯタンパク質は、血漿中に見出されており、この可溶型は、組織結合型と同じような性質を有するようである[Yuら, Biochem. Pharmacol. 1994, 47, 1055-1059; Kurkijarviら, J. Immunol. 1998, 161, 1549-1557]。
【０００４】
この豊富に存在する酵素の正確な生理学的役割は、まだ十分に決定されていないが、ＳＳＡＯおよびその反応生成物が細胞情報伝達および細胞制御においていくつかの機能を有している可能性がある。例えば、最近の発見では、ＳＳＡＯがＧＬＵＴ４−介在グルコース取り込み[Enrique-Taranconら, J. Biol. Chem. 1998, 273, 8025-8032; Morinら, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2001, 297, 563-572]、および脂肪細胞分化[Fontanaら, Biochem. J. 2001, 356, 769-777; Mercierら, Biochem. J. 2001, 358, 335-342]の両方において役割を果たすことが示唆される。さらに、ＳＳＡＯは、白血球に対する接着タンパク質として作用する炎症過程に含まれること[Salmi & Jalkanen, Trends Immunol. 2001, 22, 211-216; Salmi & Jalkanen, “Adhesion Molecules: Functions and Inhibition” K. Ley (Ed.), 2007, pp. 237-251]、および結合組織マトリックスの成長および維持にも役割を果たし得ること[Langfordら, Cardiovasc. Toxicol. 2002, 2(2), 141-150; Gokturkら, Am. J. Pathol. 2003, 163(5), 1921-1928] が示されている。さらに、ＳＳＡＯと血管新生との間の関連性が最近発見されており[Nodaら, FASEB J. 2008, 22(8), 2928-2935]、この関連性によりＳＳＡＯの阻害剤は抗血管新生効果を有すると予想されている。
【０００５】
ヒトでのいくつかの研究は、血漿中のＳＳＡＯ活性が、うっ血性心不全、糖尿病、アルツハイマー病および炎症のような病状で上昇することが示されている[Lewinsohn, Braz. J. Med. Biol. Res. 1984, 17, 223-256; Boomsmaら, Cardiovasc. Res. 1997, 33, 387-391; Ekblom, Pharmacol. Res. 1998, 37, 87-92; Kurkijarviら, J. Immunol. 1998, 161, 1549-1557; Boomsmaら, Diabetologia 1999, 42, 233-237; Meszarosら, Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 1999, 24, 299-302; Yuら, Biochim. Biophys. Acta 2003, 1647(1-2), 193-199; Matyusら, Curr. Med. Chem. 2004, 11(10), 1285-1298; O'Sullivanら, Neurotoxicology 2004, 25(1-2), 303-315; del Mar Hernandezら, Neurosci. Lett. 2005, 384(1-2), 183-187]。内因性のアミンオキシダーゼによって生成する反応性アルデヒドおよび過酸化水素が心血管疾患、糖尿病合併症およびアルツハイマー病の一因となることが示唆されている[Callingham , Prog. Brain Res. 1995, 106, 305-321; Ekblom, Pharmacol. Res. 1998, 37, 87-92; Yuら, Biochim. Biophys. Acta 2003, 1647(1-2), 193-199; Jiangら, Neuropathol Appl Neurobiol. 2008, 34(2), 194-204]。さらに、ＳＳＡＯ酵素活性は、ＳＳＡＯが血管内皮で強く発現することが示されている炎症の部位での白血球溢出過程に関与する[Salmiら, Immunity 2001, 14(3), 265-276; Salmi & Jalkanen, “Adhesion Molecules: Functions and Inhibition” K. Ley (Ed.), 2007, pp. 237-251]。したがって、ＳＳＡＯの阻害は、糖尿病合併症の予防および炎症性疾患に治療的価値を有することが示唆されている[Ekblom, Pharmacol. Res. 1998, 37, 87-92; Salmiら, Immunity 2001, 14(3), 265-276; Salter-Cidら, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 315(2), 553-562]。
【０００６】
国際公開第２００７／１４６１８８号はＳＳＡＯ活性を阻害することが白血球動員を抑制し、炎症反応を低減し、てんかんのような発作の予防および治療に有効であろうと予想されることを示している。
【０００７】
O'Rourkeら(J Neural Transm. 2007;114(6):845-9)は、神経系疾患におけるＳＳＡＯ阻害剤（それ以前に脳卒中のラットモデルでのＳＳＡＯ阻害の有効性が示されていた）の可能性について調べた。あるＳＳＡＯ阻害剤を再発寛解実験の自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、ヒト多発性硬化症と多くの特徴を共有するマウスモデルで試験している。データは、このモデルでの、したがってヒト多発性硬化症の治療での小分子のＳＳＡＯ治療の臨床的有用性の可能性を示している。
【０００８】
ＳＳＡＯノックアウト動物は、表現型の上では明らかに正常であるが、種々の炎症刺激への応答で引き起こされる炎症応答に顕著な減少を示す[Stolenら, Immunity 2005, 22(1), 105-115]。さらに、ヒト疾患（例えば、カラゲニン誘発足炎症、オキサゾロン誘発大腸炎、リポポリサッカライド誘発肺炎症、コラーゲン誘発関節炎、エンドトキシン誘発ブドウ膜炎）の多様な動物モデルでの野生型動物における、抗体および／または小分子の使用によるその機能の拮抗作用は、白血球浸潤の減少、疾病表現型の重篤度の減少ならびに炎症性サイトカインおよびケモカインのレベルの減少において保護的であることを示している[Kirtonら, Eur. J. Immunol. 2005, 35(11), 3119-3130; Salter-Cidら, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2005, 315(2), 553-562; McDonaldら, Annual Reports in Medicinal Chemistry 2007, 42, 229-243; Salmi & Jalkanen, “Adhesion Molecules: Functions and Inhibition” K. Ley (Ed.), 2007, pp. 237-251; Nodaら, FASEB J. 2008 22(4), 1094-1103; Nodaら, FASEB J. 2008, 22(8), 2928-2935]。この抗炎症保護は、特定の疾患または疾患モデルに限定されるよりはむしろ、独立の原因メカニズムとして広範な炎症モデルの全てに亘って与えられるようである。このことは、ＳＳＡＯが、炎症応答の制御の重要な節点であり得ることを示唆するであろうし、それ故に、ＳＳＡＯ阻害剤が広範なヒトおよび動物の疾患での効果的な抗炎症薬となり得るように思われる。ＶＡＰ−１もまた肝臓および肺の線維症を含む線維症の進行および維持に関わっている。WestonとAdams(J Neural Transm. 2011, 118(7), 1055-64)は肝線維症におけるＶＡＰ−１に関わる実験データを要約しており、また、Westonら(EASL Poster 2010)はＶＡＰ−１の遮断が四塩化炭素で誘導された線維化の回復を促進することを報告している。さらに、ＶＡＰ−１は肺の炎症に関わっており(例えばSingh ら, 2003, Virchows Arch 442:491-495)、ＶＡＰ−１遮断剤は肺の炎症を低減し、したがって、嚢胞性線維症の疾患の前線維および前炎症状態の両方を治療することによって嚢胞性線維症の治療に対して有効であることが示唆されている。
【０００９】
ＳＳＡＯ（ＶＡＰ−１）は胃がんにおいて上方制御され、ヒトメラノーマ、肝臓がん、ならびに 頭部および 頚部腫瘍の腫瘍血管系で同定されている(Yoong KF, McNab G, Hubscher SG, Adams DH. (1998), J Immunol 160, 3978-88.; Irjala H, Salmi M, Alanen K, Gre´nman R, Jalkanen S (2001), Immunol. 166, 6937-6943; Forster-Horvath C, Dome B, Paku Sら, (2004), Melanoma Res. 14, 135-40.)。ある報告(Marttila-Ichihara F, Castermans K, Auvinen K, Oude Egbrink MG, Jalkanen S, Griffioen AW, Salmi M. (2010), J Immunol. 184, 3164-3173.)では、酵素不活性ＶＡＰ−１のマウスはメラノーマの成長が遅く、腫瘍血管の数および直径が減少していることが示された。また、これらの腫瘍の成長の低減はミエロイド抑制細胞の浸潤の低減（６０〜７０％）に反映されていた。ＶＡＰ−１の欠乏は正常組織の血管またはリンパの形成には影響がなかったことは期待が持てる。
【００１０】
上述の理由から、ＳＳＡＯの阻害は前炎症性酵素生成物（アルデヒド、過酸化水素およびアンモニア）の濃度を低減する一方で、免疫細胞の接着能を低下させ、それに応じてそれらの活性化および最終的な滲出を低下させることが予想される。このような活性が治療的に有効であると予想される疾患は、免疫細胞が症状の開始、維持、または回復において主要な役割を演じるようなすべての疾患（例えば、炎症性疾患および免疫/自己免疫疾患）を含む。このような疾患の例としては多発性硬化症、関節炎および血管炎を含む。
【００１１】
国際公開第２０１０／０３１７８９号（参照により本明細書の内容に包含される）はＳＳＡＯ阻害剤化合物の有望なクラスを開示しており、特に有望なものが、実施例１６が有望であり、それは（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートの遊離塩基であり、以下の構造を有する：
【化１】
2018520984.tif 000003
【００１２】
痛みは、人の生活の質を妨げ得る不快な状態である。新たな疼痛治療のための満たされていない医学的ニーズが存在する。
【発明の概要】
【００１３】
鋭意研究を行った結果、（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートが、驚くべきことに疼痛の治療に有効であることを見出した。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、ＣＦＡを誘発した熱痛覚過敏（疼痛）モデルにおける（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートの効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
定義
本明細書で使用される用語「疼痛（ｐａｉｎ）」は、炎症性疼痛を含む。一実施形態では、疼痛は炎症性疼痛である。
【００１６】
本明細書で用いられる「治療」は、名前が付けられている疾患若しくは病状の予防、またはいったん確立された前記疾患の改善若しくは除去を含む。
【００１７】
「有効量」は、治療される対象者に治療効果をもたらす化合物の量を意味する。前記治療効果は、客観的（すなわち、ある試験またはマーカーによって測定できる）であってよく、或いは主観的（すなわち、対象者が効果の兆候を得るかまたは効果を感じる）であってもよい。
【００１８】
「医薬的に許容される」は、一般的に安全、無毒性でかつ生物学的でもその他の点でも好ましくなくはない医薬組成物を製造するのに有用であることを意味し、獣医学的用途ならびにヒトの医薬用途で有用であることを含む。
【００１９】
特に断りがない限り、用語「（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート」は、本明細書に記述された結晶性塩の形態と関連して用いられるとき、（３Ｓ、４Ｓ）および（３Ｒ、４Ｒ）エナンチオマーの混合物を含む。一態様では、（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートおよびその塩は、９５％を超える、好ましくは９９％を超える、さらに好ましくは９９．５％を超える絶対純度を有する。一態様では、（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートは、９５％を超える、好ましくは９９％を超える、さらに好ましくは９９．５％を超えるエナンチオマー純度を有する（３Ｓ，４Ｓ）エナンチオマーを意味する。一態様では（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートは９５％を超える、好ましくは９９％を超える、さらに好ましくは９９．５％を超えるジアステレオマー純度を有する。
【００２０】
発明の詳細な説明
（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートは、そのまま、または医薬的に許容される塩の形態で使用され得る。塩は、医薬的に許容される塩を含み、例えば無機酸又は有機酸由来の酸付加塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、リン酸塩、硫酸塩、過塩素酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩および安息香酸塩である。塩に関するレビューについては、Ｓｔａｈｌ及びＷｅｒｍｕｔｈによる、Ｈａｎｄａｈｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｕｓｅ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ、２００２）を参照のこと。
【００２１】
塩はまた、塩基とともに形成されてもよい。そのような塩には、無機塩基または有機塩基由来の塩を含み、例えばマグネシウム塩またはカルシウム塩などのアルカリ金属塩、およびモルホリン、ピペリジン、ジメチルアミンまたはジエチルアミン塩などの有機アミン塩である。特定の塩はメシレート塩である。別の塩は、硫酸塩（サルフェート）であり、それは水和物として存在する。一実施形態では、水和物は、（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートサルフェート１．５Ｈ２Ｏである。
【００２２】
典型的な投薬量は、１日に１回または複数回、または連続注入によって投与される、２〜２０ｍｇ／ｋｇである。ヒトに対する典型的な１日当りの全投与量は、１〜２０００ｍｇ／日、好ましくは２００〜２０００ｍｇ／日、より好ましくは５００〜２０００ｍｇ／日である。
【００２３】
（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートは、種々の投薬形態で投与されてもよい。従って、それは経口的に、例えば錠剤、カプセル、トローチ、舐剤（ｌｏｚｅｎｇｅ）、水性若しくは油性懸濁液、分散性粉末または顆粒として投与することができる。薬物は、好ましくは、経口経路を介して投与される。しかし、特定の患者の特定の用量レベルは、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、薬物の組み合わせ、および治療を受けている特定の状態の重篤度を含む、様々な要因に依存することが理解されよう。
【００２４】
有効成分を含有する医薬組成物は、任意の適切な形態、例えば、水性または非水性の溶液または懸濁液、分散性粉末または顆粒、経皮または経粘膜パッチ、クリーム、軟膏またはエマルションなどのであってもよい。
【００２５】
医薬組成物は、滅菌注射用の水性または非水性（例えば、油性）溶液または懸濁液の形態であってもよい。滅菌した注射用製剤は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のような非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射溶液または懸濁液中であってもよい。使用することができる許容されるビヒクルおよび溶媒には、水、リン酸緩衝溶液、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌不揮発性油は、溶媒または懸濁媒体として従来から使用されている。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、無刺激性の不揮発性油を使用することができる。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は注射剤の調製に使用される。懸濁液は、それらの適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いる既知の技術に従って製剤化され得る。
【００２６】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤との混合物中に活性成分を含有する。このような賦形剤は、懸濁剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴム；天然起源のリン脂質などの分散剤または湿潤剤、例えばレシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えばポリオキシエチレンステアレート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸由来の部分エステルおよびポリオキシエチレンのようなヘキシトールと脂肪酸由来の部分エステルおよびヘキシトール無水物の縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートである。水性懸濁液はまた、１種以上の防腐剤、例えばエチルもしくはｎ−プロピル  ｐ−ヒドロキシベンゾエート、１種以上の着色剤、１種以上の香味剤、および１種以上の甘味剤、例えばスクロースまたはサッカリンなどを含んでもよい。
【００２７】
非水性（すなわち、油性）懸濁液は、植物油中、例えばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もしくはココナッツ油、または液体パラフィンなどの鉱油中に、活性成分を懸濁させることによって製剤化してもよい。油性懸濁液は、増粘剤、例えば蜜蝋、硬質パラフィンまたはセチルアルコールを含有してもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸のような酸化防止剤の添加によって保存されてもよい。
【００２８】
水を添加することによって水性懸濁液を調製するのに適した分散性粉末および顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１種以上の防腐剤との混合物中に活性成分を提供する。好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は公知である。
【００２９】
活性薬剤は、薬物の直腸投与のための坐剤の形態で投与されてもよい。これらの組成物は、常温で固体であるが直腸温度で液体である適切な非刺激性賦形剤と薬物を混合することによって調製することができ、したがって直腸内で溶解して薬物を放出する。そのような物質は、カカオバターおよびポリエチレングリコールである。
【００３０】
局所送達のために、経皮および経粘膜パッチ、クリーム、軟膏、ゼリー、溶液または懸濁液を使用してもよい。舌下送達のために、速溶性錠剤製剤、ならびに上述の提示した多くのものを使用してもよい。経口投与の場合、薬物は、錠剤、カプセルまたは液体として投与されてもよい。
【００３１】
以下の研究は、本発明の基礎となる証拠を提供する。
【実施例】
【００３２】
（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートを、炎症性疼痛の確立されたモデルであるＣＦＡ熱痛覚過敏モデルにおいて調べた（図１）。（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートは、用量依存的に有効であり、ゴールドスタンダードベンチマークのインドメタシンと有効性において同等であることが判明した。さらに詳細には以下の通り：
【００３３】
ラットにおけるＣＦＡ（完全フロイントアジュバント）誘導過敏症に対する（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートメシレート塩の評価
【００３４】
（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートメシレート塩の抗痛覚過敏特性の評価は、ＣＦＡ誘発過敏症後の体重負荷（Ｗｅｉｇｈｔ  ｂｅａｒｉｎｇ）の測定により測定した。ナイーブラットは、２つの後肢の間に等しく体重を分配する。しかし、注射された（左）後肢が痛みを伴う場合、影響を受けた足に体重を軽く載せられるように体重が再分配される（負傷した足にかかる体重の減少）。ラットインキャパシタンス（ｉｎｃａｐａｃｉｔａｎｃｅ）試験機（Ｌｉｎｔｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、ＵＫ）を用いて各後肢の体重を測定した。ラットを、インキャパシタンス試験機に後肢を別々のセンサー上に置き、両方の後肢によって加えられる平均的な力を４秒間にわたって記録した。ＣＦＡの注射はまた、足容積によって評価され得る浮腫を誘発する；これはプレチスモメーターを用いて測定される。ラットの後肢を、溶液を入れたシリンダーに入れ、排出された液体の体積が足の体積を決定する。
【００３５】
ナイーブ雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを、自由に摂取できる食物および水を用いて順応させた。インキャパシタンス試験機への慣れを行った。ベースライン体重および足容積の記録は、傷害の誘発に先立って行った。左後肢にＣＦＡ（１００μｌの１ｍｇ／ｍｌ溶液）を足底内注射することにより炎症性過敏症を誘発した。ＣＦＡの２３時間後の過敏症を評価するために、処置前体重および足容積測定を行った。次いで、ラテン方格法（Ｌａｔｉｎ  ｓｑｕａｒｅ  ｄｅｓｉｇｎ）においてＣＦＡウインドウに従って動物をランク付けし、ランダム化した。（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートメシレート塩を、１５０、２５０および５００ｍｇ／ｋｇ経口投与（２ｍＬ／Ｋｇにて水中に投与、ｐＨ〜５−６）にて、ベヒクルと共に、及び参照群（インドメタシン）で、１グループ当たりｎ＝９〜１０で投与した。体重負荷は、化合物投与の１、２および４時間後、すべての群で評価した。足の体積は、化合物投与の４時間後に評価した。データは、各時点で処置群を対照群と比較することによって分析した。
【００３６】
左右の後肢の両方について体重負荷（ｇ）示度（ｒｅａｄｉｎｇ）を測定し、その差を計算した。データは、疼痛に対する過敏症の回復率（％）、（投与後示度  −  投与前示度）／（ナイーブ示度  −  投与前示度）×１００で表し、ここで、ナイーブの体重負荷の差  −  投与前示度の差は、回復されるＣＦＡウインドウとして定義される。統計分析は、反復測定ＡＮＯＶＡ、続いてＩｎＶｉｖｏＳｔａｔ（ｉｎｖｉｖｏｓｔａｔ．ｃｏ．ｕｋ）を用いた計画比較試験（ｐ＜０．０５が有意であるとみなされる）によって実施した。
【００３７】
１５０ｍｇ／ｋｇの（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートメシレート塩では、任意の時点で、有意な回復は示さず、２５０ｍｇ／ｋｇは４時間で有意な回復を示したが、５００ｍｇ／ｋｇはすべての時点で有効であり、投与後４時間に最大効果が見られた。（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートメシレート塩では足容積には効果は見られなかった。
【００３８】
合成
以下の略号が用いられた：
Ａｑ          水性
ＤＣＭ        ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ    ジイソピロピルエチルアミン
ｅｅ          鏡像体過剰率
ＥＳ＋        エレクトロスプレー
ＥｔＯＡｃ    酢酸エチル
ｈ            時間（単数又は複数）
ＨＰＬＣ      高速液体クロマトグラフィー
ＨＲＭＳ      高分解能質量分析
ＬＣＭＳ      液体クロマトグラフィー−質量分析
Ｍ            モル
ＭｅＯＨ      メタノール
［ＭＨ＋］    プロトン付加分子イオン
ｍｉｎ        分
ＲＰ          逆相
ＭＳ          質量分析
ＲＴ          保持時間
ｓａｔ        飽和した
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
ＴＦＡ        トリフルオロ酢酸
実験方法
【００３９】
全ての試薬は、特に明記しない限り、市販級であり、入手したものを精製せずに用いた。すべてのケースで試薬級溶媒を用いた。
分析ＬＣＭＳはAgilent 1100 HPLCシステムに接続したWaters ZQ質量分析計で行った。分析ＨＰＬＣはAgilent 1100システムで行った。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）はAgilent 1100 HPLCシステムに接続したAgilent MSD-TOFで得た。分析の間、較正は２つの質量でチェックし、必要に応じて自動的に補正した。スペクトルは正イオンエレクトロスプレーモードで収集した。収集質量範囲はｍ／ｚ１００〜１１００であった。質量ピークのプロファイル検出を用いた。フラッシュクロマトグラフィーはRediSepシリカカラムを備えたCombiFlash Companionシステム、またはStrata SI-1シリカギガチューブを備えたFlash Master Personalのいずれかで行った。逆相ＨＰＬＣはPhenomenex Synergi Hydro RP150x10mm、YMC ODS-A100/150x20mmまたはChirobiotic T250x10mmカラムを備えたGilson システム（Gilson 321平衡ポンプ付きGilson 322ポンプ、およびGilson 215オートサンプラー）で行った。逆相カラムクロマトグラフィーはMerck LiChroprep（登録商標）RP-18（４０−６３μｍ）シリカカラムを備えたGilsonシステム（Gilson 321ポンプおよびGilson FC204フラクションコレクター）で行った。化合物はＡＣＤ６．０を用いて自動的に命名した。すべての化合物は真空ポンプ中で一晩乾燥した。
分析ＨＰＬＣおよびＬＣＭＳデータは以下の条件で得た：
【００４０】
システムＡ：Phenomenex Synergi Hydro RP（Ｃ１８、３０ｘ４．６ｍｍ、４μｍ）、勾配５〜１００％ＣＨ３ＣＮ（＋０．０８５％ＴＦＡ）水溶液（＋０．１％ＴＦＡ）、１．５ｍＬ／分、勾配時間１．７５分、２００ｎｍ、３０℃；または
【００４１】
システムＢ：Phenomenex Synergi Hydro RP（Ｃ１８、１５０ｘ４．６ｍｍ、４μｍ）、勾配５〜１００％ＣＨ３ＣＮ（＋０．０８５％ＴＦＡ）水溶液（＋０．１％ＴＦＡ）、１．５ｍＬ／分、勾配時間７分、２００ｎｍ、３０℃。
キラルＨＰＬＣで他は以下の条件で得た：
【００４２】
システムＣ：Chirobiotic V polar ionic mode （１５０ｘ４．６ｍｍ）、７０％ＭｅＯＨ１０ｍＭ水系ギ酸アンモニウム緩衝液、１．０ｍＬ／分、１０分間、２００ｎｍ、３０℃。
中間体１
４−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジンハイドロクロライド
【化２】
2018520984.tif 000004
【００４３】
ヒスタミン二塩酸塩（６１．９ｇ、３３６ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（３３．６ｇ、８４１ｍｍｏｌ)の水（１２５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５００ｍＬ）溶液に溶解し、イソブチルアルデヒド（６１．４ｍＬ、６７２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を還流下８０℃で24時間加熱し、室温まで冷却し、1Ｍ塩酸水溶液（２５０ｍＬ）でｐＨを７に調整し、真空中で溶媒を除去した。残留物を温めたＭｅＯＨ（３００ｍＬ）に溶解し、１時間放置し、ろ過し、溶媒を真空中で除去した。残留物をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）およびアセトン（４００ｍＬ）中で２時間撹拌し、４℃まで２時間冷却した。得られた沈殿物をろ過し、アセトン（１００ｍＬ）で洗浄し、４−イソプロピル−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジンハイドロクロライド（３３．０ｇ、４８．７％）の白色固体を得た。
分析ＬＣＭＳ：純度＞９０％（システムＡ、ＲＴ＝０．５１分）、ＥＳ＋：１６６．４［ＭＨ］＋。
中間体２
４−ニトロフェニル ４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート
【化３】
2018520984.tif 000005
【００４４】
中間体１（２．７８ｇ、８．２８ｍｍｏｌ、６０％純度）およびＤＩＰＥＡ（５．２７ｍＬ、３０．３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解した。反応混合物を０℃まで冷却し、４−ニトロフェニルクロロホルメート（４．０７ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を真空中で除去して、４−ニトロフェニル ４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート（５．２８ｇ、粗製物）の黄色ゴム状物を得た。
【００４５】
分析ＨＰＬＣ：純度４１％（システムＢ、ＲＴ＝４．７０分）；分析ＬＣＭＳ：純度８６％（システムＡ、ＲＴ＝１．７０分）、ＥＳ＋：３３１．０［ＭＨ］＋。
【００４６】
（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート
【化４】
2018520984.tif 000006
【００４７】
ＮａＨ（０．４０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ、ミネラルオイル中６０％分散）を無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）に懸濁させ、０℃まで冷却し、（Ｓ）−３−ヒドロキシテトラヒドロフラン（０．８８ｇ、０．６８ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を０℃で３０分間撹拌し、次に中間体２（３．３０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ、７０％純度）のＴＨＦ（６０ｍＬ）溶液に加え、反応混合物を室温で撹拌した。同量のＮａＨおよび（Ｓ）−３−ヒドロキシテトラヒドロフランＴＨＦ溶液を５時間後および２９時間後に２回それぞれ加えた。２日後に反応混合物を水（１０ｍＬ）で急冷し、溶媒を真空中で除去した。残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解し、１Ｍ Ｎａ２ＣＯ３水溶液（４ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を真空中で除去した。残留物をカラムクロマトグラフィー（順相、２０ｇ、Strata SI-1、シリカギガチューブ、ＤＣＭ（２００ｍＬ）続いて、２％、４％、および５％ＭｅＯＨのＤＣＭ溶液（それぞれ２００ｍＬ）)および逆相ＨＰＬＣ（YMC ODS-A １００ｘ２０ｍｍ、５μｍ、２５ｍＬ／分、１０％ＭｅＯＨ／水中の勾配３０％〜６０％（／７分間）、続く１００％（３分）ＭｅＯＨ）で精製し、（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート（３４．８ｍｇ、１．１％）の白色固体を得た。
【００４８】
分析ＨＰＬＣ：純度１００％（システムＢ、ＲＴ＝３．６３分）；分析ＬＣＭＳ：純度１００％（システムＢ、ＲＴ＝４．０１分）、ＥＳ＋：２８０．１［ＭＨ］＋。
【００４９】
（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル−（４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート（３９．９１ｍｇ）を１０ｍＭギ酸アンモニウム緩衝液およびＭｅＯＨ（２ｍＬ、１：１）に溶解し、逆相キラルＨＰＬＣ(Chirobiotic T ２５０ｘ１０ｍｍ、３ｍＬ／分、定組成ラン７０％ＭｅＯＨ／１０ｍＭギ酸アンモニウム緩衝液（４０分）、ｐＨ７．４)で２回精製し、（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート（６．９０ｍｇ、９９％ｅｅ）の単一のジアステレオ異性体を得た。
【００５０】
分析ＨＰＬＣ：純度１００％（システムＢ、ＲＴ＝３．６３分）；キラルＨＰＬＣ：純度９９．５％（システムＣ、ＲＴ＝２．２２分）；分析ＬＣＭＳ：純度１００％（システムＢ、ＲＴ＝３．９０分）、ＥＳ＋：２８０．１［ＭＨ］＋；ＨＲＭＳ  Ｃ１４Ｈ２１Ｎ３Ｏ３計算値：２７９．１５８３、実測値２７９．１５７１。
【００５１】
（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート，メタンスルホン酸塩（実施例１）
【００５２】
（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレート遊離塩基（４６０ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を室温でＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）に溶解し、無色透明溶液を得た。メタンスルホン酸（１０７μＬ）を穏やかに加熱しながら少量ずつ加えた。溶液を一晩室温まで冷却させた。得られた結晶をろ過により集め、ＥｔＯＡｃ（２ｘ１０ｍＬ）で洗浄し、真空中で４０℃にて一晩乾燥させた。（３Ｓ）−テトラヒドロフラン−３−イル （４Ｓ）−４−イソプロピル−１，４，６，７−テトラヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−５−カルボキシレートメシレート塩の白色結晶性固体を９９％の収率（６１５ｍｇ）で得た。ＨＰＬＣ：保持時間２．２７分、純度９９．５％。融点：１８９℃。ＬＣＭＳ： 保持時間４．１９分、ＥＳ＋２８０．０［ＭＨ］＋、１００％純度。キラルＨＰＬＣ ：保持時間３．７０分、＞９９．５％ｄｅ。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δＨ８．７２（１Ｈ，ｍ，ＮＨＣＨＮＨ＋），５．２９（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨ），５．０５（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ８．４Ｈｚ，ＣＣＨＮ），４．８９（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ７．６Ｈｚ，ＣＣＨＮ），４．５９（０．５Ｈ，ｍ，ＮＣＨＡＣＨＢ），４．３９（０．５Ｈ，ｍ，ＮＣＨＡＣＨＢ），３．９７−３．８５（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２ＯＣＨ２），３．２０（１Ｈ，ｍ，ＮＣＨＡＣＨＢ），２．８９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３ＳＯ３−），２．８９−２．７２（２Ｈ，ｍ，ＣＣＨ２ＣＨ２Ｎ），２．２３−２．０７（３Ｈ，ｍ，ＣＨ（ＣＨ３）２，ＯＣＨ２ＣＨ２），１．１６（３Ｈ，ｄ，Ｊ６．４Ｈｚ，ＣＨ３）および１．０６−０．９６（３Ｈ，ｍ，ＣＨ３）。
【図１】
2018520984.tif 000007
【国際調査報告】
2018520984.tif 000008
2018520984.tif 000009