(57)【要約】  本明細書で提供されるのは、カリケアマイシンを含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）と、それを使用して増殖性障害を処置する方法とである。
2018515457.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ａｂ−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］ｚ３  （Ｉ）
を有する化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ａｂは、標的化剤であり、
Ｗは、連結基であり、
Ｍは、開裂可能部分であり、
Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーであり、
Ｐは、ジスルフィド保護基であり、
Ｄは、カリケアマイシンまたはその類似体であり、
ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数であり、および
ｚ３は、１〜１０の整数である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｄは、式（Ｉａ）：
【化１】
2018515457.tif 000097
を含み、
式中、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１ＤおよびＲ１Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、
ｎ１は、０〜４の整数であり、および
ｖ１は、１または２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１は、水素、置換もしくは非置換のアルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記標的化剤は、抗体である、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
前記抗体は、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体またはそれらの免疫反応性断片である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記抗体は、抗ＳＥＺ６抗体である、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
Ｗは、前記抗体内のシステイン残基に共有結合的に付着している、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
前記システイン残基は、Ｋａｂａｔ位置Ｃ２１４に存在する、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｗは、前記抗体内のリシン残基に共有結合的に付着している、請求項４に記載の化合物。
【請求項１０】
式（ＩＩ）：
【化２】
2018515457.tif 000098
を有し、
式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、
Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、
Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＷ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃであり、
Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合しており、かつＭ１Ｃは、Ｌ４に結合しており、
Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｗ１Ａは、Ａｂに結合しており、かつＷ１Ｃは、Ｌ３に結合しており、
Ｗ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＡＢ−、−ＮＲ６ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＡＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｗ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｗ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＣＢ−、−ＮＲ６ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＣＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６ＡＢ、Ｒ６ＢＢおよびＲ６ＣＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、
ｎ１は、０〜４の整数であり、
ｖ１は、１または２であり、
ｎ２、ｎ３、ｎ４およびｎ５は、独立して１〜１０の整数であり、
ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数であり、および
ｚ３は、１〜１０の整数である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
Ｍは、Ｍ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合しており、かつＭ１Ｃは、Ｌ４に結合している、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｗは、Ｗ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃであり、Ｗ１Ａは、Ａｂに結合しており、かつＷ１Ｃは、Ｌ３に結合している、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｐは、置換または非置換のアルキルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１４】
ｚ３は、１または２である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｌ３は、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｌ４は、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１は、水素または−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｗは、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｗは、５員または６員の置換または非置換のヘテロシクロアルキレンである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｗは、式：
【化３】
2018515457.tif 000099
を有する、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｍは、ペプチドを含む、請求項１０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｍ１Ａは、結合、置換もしくは非置換のヘテロアルキレンまたは−［ＮＲ５ＡＢＣ（Ｒ５ＡＥ）（Ｒ５ＡＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ３であり、
Ｍ１Ｂは、結合、置換もしくは非置換のヘテロアルキレンまたは−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−であり、および
Ｍ１Ｃは、結合、または置換もしくは非置換のアリーレン、または置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｍ１ＡおよびＭ１Ｂは、独立してアミノ酸である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つは、バリン（ｖａｌ）である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つは、アラニン（ａｌａ）である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つは、シトルリン（ｃｉｔ）である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｍ１Ａ、Ｍ１ＢまたはＭ１Ｃのうちの少なくとも１つは、置換アリーレンである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｍ１Ａ、Ｍ１ＢまたはＭ１Ｃのうちの少なくとも１つは、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2018515457.tif 000100
を有し、
式中、
Ｙは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、および
ｎ６は、０〜３の整数である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項２９】
−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］は、
【化５】
2018515457.tif 000101
【化６】
2018515457.tif 000102
【化７】
2018515457.tif 000103
【化８】
2018515457.tif 000104
である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項３０】
−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］は、式：
【化９】
2018515457.tif 000105
のものである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項３１】
請求項１〜３０のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項３２】
癌の処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記対象に請求項３１に記載の医薬組成物または請求項１〜３０のいずれか一項に記載の化合物の治療上有効な量を投与することを含む方法。
【請求項３３】
前記癌は、膵癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌および胃癌から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
追加の化学療法剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
細胞にカリケアマイシン細胞毒素を送達する方法であって、前記細胞と請求項１〜３０のいずれか一項に記載の化合物とを接触させることを含む方法。
【請求項３６】
抗体薬物コンジュゲートを調製する方法であって、カリケアマイシン構築物と抗体のシステインまたはリシンとを接触させることを含み、前記カリケアマイシン構築物は、式Ｗ１−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄを有し、式中、Ｗ１は、リシン側鎖またはシステイン側鎖と反応する官能基であり、Ｍは、開裂可能部分であり、Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーであり、Ｐは、ジスルフィド保護基であり、およびＤは、カリケアマイシンまたはその類似体である、方法。
【請求項３７】
前記カリケアマイシン構築物は、前記抗体の特定のシステインと接触させられる、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記特定のシステインは、天然ジスルフィド架橋に由来する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗体は、操作された抗体であり、および前記特定のシステインは、天然ジスルフィド架橋に由来しない、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記特定のシステインは、前記接触前に選択的に還元される、請求項３６〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗体を選択的に還元する工程は、前記抗体と安定化剤とを接触させる工程を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
式（ＩＶ）：
【化１０】
2018515457.tif 000106
を有する化合物であって、
Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、
Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−，−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、
Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、
Ｗ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７Ｅ、−ＯＲ７Ａ、−ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＯ２、−ＳＲ７Ｄ、−ＳＯｎ７Ｒ７Ｂ、−ＳＯｖ７ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＯＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃであり、
Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合しており、かつＭ１Ｃは、Ｌ４に結合しており、
Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ７Ａ、Ｒ７Ｂ、Ｒ７Ｃ、Ｒ７Ｄ、Ｒ７Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、
ｎ１およびｎ７は、独立して０〜４の整数であり、
ｖ１およびｖ７は、独立して１または２であり、および
ｎ２、ｎ３、ｎ４およびｎ５は、独立して１〜１０の整数である、化合物。
【請求項４３】
【化１１】
2018515457.tif 000107
【化１２】
2018515457.tif 000108
【化１３】
2018515457.tif 000109
【化１４】
2018515457.tif 000110
【化１５】
2018515457.tif 000111
である、請求項４２に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年４月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／１５０，６９３号明細書の利益を主張し、この特許出願は、その全体が全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願は、概して、標的化剤に結合しているカリケアマイシンを含む新規の化合物（本明細書ではカリケアマイシン−リンカー構築物とも称される）に関する。この標的化剤は抗体であることができ、それにより抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が得られる。このＡＤＣは、例えば、癌およびそのあらゆる再発または転移の処置、診断または予防に使用され得る。
【背景技術】
【０００３】
幹細胞および前駆細胞の分化および増殖は、器官形成中での組織の成長、細胞修復および細胞の置換えを支援するために協調して作用する正常な進行プロセスである。この系は、生物の必要性に基づいて適切なシグナルのみが確実に生じるように厳密に調節される。細胞の増殖および分化は、通常、損傷したもしくは死滅する細胞の置換えまたは増殖に必要な場合にのみ起こる。しかしながら、様々なシグナル伝達化学物質の過小もしくは過剰、微小環境の変更の存在、遺伝子変異またはそれらの組み合わせ等の多くの因子により、このプロセスの混乱が誘発される可能性がある。正常な細胞の増殖および／または分化が混乱すると、増殖性疾患（例えば、癌）等の様々な障害が起こる可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
癌の従来の治療的処置として、化学療法、放射線療法および免疫療法が挙げられる。これらの処置は有効でないことが多く、外科的切除は実行可能な臨床的代替手段を提供しない場合がある。現在の標準的治療での限界は、患者が第一選択処置を受け、その後に再発する場合で特に顕著である。そのような場合、難治性腫瘍（侵襲性および不治であることが多い）が頻繁に生じる。多くの固形腫瘍に関する全生存率は、再発、腫瘍の再発および転移を予防するための既存の治療の失敗に少なくとも一部が起因して、長年にわたりほとんど変化しないままである。従って、増殖性障害を目的とする、より標的を絞ったおよびより強力な治療を開発する必要性が依然として大きい。本発明はこの必要性に対処する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
第１の態様では、式（Ｉ）：
Ａｂ−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］ｚ３  （Ｉ）
を有する化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【０００６】
式Ｉの抗体薬物コンジュゲートでは、Ａｂは、標的化剤である。Ｗは、連結基である。Ｍは、開裂可能部分である。Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカー（例えば、スペーサー）である。Ｐは、ジスルフィド保護基である。Ｄは、カリケアマイシンまたはその類似体である。記号ｚ１、ｚ２およびｚ３は、独立して０〜１０の整数である。実施形態では、ｚ３は、１〜１０の整数である。
【０００７】
式Ｉのある実施形態では、式（Ｉａ）：
【０００８】
【化１】
2018515457.tif 000003
【０００９】
の化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００１０】
式（Ｉａ）の化合物では、Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃである。Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１ＤおよびＲ１Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができる。記号ｎ１は、独立して０〜４の整数である。記号ｖ１は、独立して１または２である。記号
【００１１】
【化２】
2018515457.tif 000004
【００１２】
は、式Ｉ中でのＰへの付着点を表す。
【００１３】
式Ｉのある実施形態では、式（ＩＩ）：
【００１４】
【化３】
2018515457.tif 000005
【００１５】
の化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００１６】
式（ＩＩ）の化合物では、Ａｂは、抗体等の標的化部分である。Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃである。Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃである。Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＷ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃである。Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合している。Ｍ１Ｃは、Ｌ４に結合している。Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｗ１Ａは、Ａｂに結合している。Ｗ１Ｃは、Ｌ３に結合している。Ｗ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＡ−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＡ−、−ＮＲ６ＢＡＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＡＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＡ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｗ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｗ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＣ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＣ−、−ＮＲ６ＢＣＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＣＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＣ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６ＢＡ、Ｒ６ＢＢおよびＲ６ＢＣは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができる。記号ｎ１は、０〜４の整数である。記号ｖ１は、１または２である。記号ｎ２、ｎ３、ｎ４およびｎ５は、独立して１〜１０の整数である。記号ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数である。記号ｚ３は、独立して１〜１０の整数である。
【００１７】
別の態様では、式（ＩＶ）：
【００１８】
【化４】
2018515457.tif 000006
【００１９】
の化合物が提供される。
【００２０】
式（ＩＶ）の化合物では、Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃである。Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃである。Ｗ１は、反応性部分、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７Ｅ、−ＯＲ７Ａ、−ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＯ２、−ＳＲ７Ｄ、−ＳＯｎ７Ｒ７Ｂ、−ＳＯｖ７ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＯＮＲ７ＢＲ７Ｃまたは−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃである。Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合している。Ｍ１Ｃは、Ｌ４に結合している。Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ７Ａ、Ｒ７Ｂ、Ｒ７Ｃ、Ｒ７Ｄ、Ｒ７Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができる。記号ｎ１およびｎ７は、独立して０〜４の整数である。記号ｎ７およびｖ７は、独立して１または２である。記号ｎ２、ｎ３、ｎ４およびｎ５は、独立して１〜１０の整数である。
【００２１】
別の態様では、抗体薬物コンジュゲートを調製する方法が提供される。この方法は、カリケアマイシン構築物と抗体のアミノ酸（例えば、システインまたはリシン）とを接触させることを含み、このカリケアマイシン構築物は、本明細書で定義したように式Ｗ１−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄを有する。Ｗ１は、アミノ酸（例えば、リシン側鎖またはシステイン側鎖）と反応する官能基である。Ｍは、開裂可能部分である。Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーである。Ｐは、ジスルフィド保護基である。Ｄは、カリケアマイシンまたはその類似体である。記号ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数である。記号ｚ３は、独立して１〜１０の整数である。
【００２２】
また、本明細書で提供されるのは医薬組成物でもある。一態様では、本明細書で説明されている化合物と、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物である。別の態様では、本明細書で説明されている抗体薬物コンジュゲートと、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物である。
【００２３】
また、本明細書で提供されるのは、癌の処置を、それを必要とする対象において行う方法でもある。この方法は、この対象に、本明細書で説明されている医薬組成物または化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）の治療上有効な量を投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】本発明に従って製造された例示的なカリケアマイシン−リンカー構築物の化学構造（この構築物の特定の構成要素を示すために注釈が付けられている）を示す。
【図２Ａ−Ｃ】開示されている本発明のカリケアマイシン−リンカー構築物が効率的に開裂されて活性なカリケアマイシンが生成されることを実証するデータを提供する。
【図３Ａ−Ｄ】カリケアマイシン（図３Ａ）および例示的なカリケアマイシン−リンカー構築物（図３Ｂ〜図３Ｄ）がｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞を効率的に死滅させることを示し、ＩＣ５０値が導き出される。
【図４Ａ−Ｂ】開示されている手順を使用すると、本発明のカリケアマイシン−リンカー構築物が例示的な抗体に効率的にコンジュゲートされることを裏付ける質量分析データを提供する。
【図５】ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して決定した場合の、２種の異なるカリケアマイシン−リンカー構築物にコンジュゲートされた２種の例示的な部位特異的抗体の軽鎖および重鎖のコンジュゲーション割合を示す。ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃは、式４’において示した付着点でｈＳＣ１７抗体に付着した式４’であり、この抗体は、システイン側鎖を介してコンジュゲート／分子の残部に連結されたｈＳＣ１７ｓｓ１（ＩｇＧ抗体）である。ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａは、式５’において示した付着点でｈＳＣ１７抗体に付着した式５’であり、この抗体は、システイン側鎖を介してコンジュゲート／分子の残部に連結されたｈＳＣ１７ｓｓ１（ＩｇＧ抗体）である。ｈＳＣ１ｓｓ１−ｖｃは、式４’において示した付着点でｈＳＣ１抗体に付着した式４’であり、この抗体は、システイン側鎖を介してコンジュゲート／分子の残部に連結されたｈＳＣ１ｓｓ１（ＩｇＧ抗体）である。
【図６】ＨＩＣを使用して決定した場合の、本明細書で開示されている手順を使用してコンジュゲートされた例示的な部位特異的抗体構築物のＤＡＲ分布のグラフ表示を提供する。
【図７Ａ−Ｃ】カリケアマイシン−ｖｃリンカー（図７Ａ）、カリケアマイシン−ｖａリンカー（図７Ｂ）またはカリケアマイシン−オキシムリンカー（図７Ｃ）を含む例示的な抗体薬物コンジュゲートのｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞を死滅させる能力を実証する。
【図８Ａ−Ｃ】本発明の例示的な抗体薬物コンジュゲートがｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍細胞を効率的に死滅させ得ることを示すデータを提供する。ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｏｘは、式１４’において示した付着点でｈＳＣ１７抗体に付着した式１４’であり、この抗体は、システイン側鎖を介してコンジュゲート／分子の残部に連結されたｈＳＣ１７ｓｓ１（ＩｇＧ抗体）である。
【図９】本発明の例示的な抗体薬物コンジュゲートがｉｎ  ｖｉｖｏで腫瘍細胞を効率的に死滅させ得ることを示すデータを提供する。
【図１０】カニクイザルでの例示的な抗体薬物コンジュゲートの薬物動態データを提供する。ｈＳＣ２７ｓｓ１−ｖｃは、式４’において示した付着点でｈＳＣ２７抗体に付着した式４’であり、この抗体は、システイン側鎖を介してコンジュゲート／分子の残部に連結されたｈＳＣ２７ｓｓ１（ＩｇＧ抗体）である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明を多くの異なる形態で具体化することができる。本明細書で開示されているのは、本発明の原理を例示する本発明の非限定的な例示的実施形態である。本明細書で使用されているあらゆる節の表題は構成を目的とするのみであり、説明されている主題を限定すると解釈すべきではない。一般に、本明細書で使用する命名法ならびに下記で説明する細胞培養、分子遺伝学、有機化学および核酸化学およびハイブリダイゼーションでの実験室手順は、当技術分野で公知でありかつ一般に利用されているものである。核酸合成およびペプチド合成に標準的技術を使用する。一般に、製造業者の仕様書に従って酵素反応および精製工程を実施する。本開示の目的のために、全ての識別配列受託番号（ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ）を、別途言及しない限りＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＲｅｆＳｅｑ）データベース中でおよび／またはＮＣＢＩ  ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）アーカイブ配列データベース中で見出すことができる。本明細書で使用する命名法ならびに下記で説明する分析化学および有機合成での実験室手順は、当技術分野で公知でありかつ一般に利用されているものである。化学合成および化学分析に標準的技術およびその改変を使用する。
Ｉ．定義
用語「開裂可能部分」は、選択された標的部位で開裂される部分を意味するように意図されている。好ましくは、「開裂可能部分」は、標的化剤からカリケアマイシンを開裂または分離することによりカリケアマイシンの分離および／または活性化を可能にする。作用的に定義すると、リンカー（下記で定義する）は、好ましくは、生理的エフェクターによる標的部位での開裂可能部分の分枝により開裂される。この開裂は、限定されないが、例えば酵素、還元、ｐＨ等の任意のプロセスから起こり得る。好ましくは、開裂可能部分は、活性化が所望の作用部位で起こるように選択されておりかつリンカーに組み込まれており、この作用部位は、好ましくは、標的細胞（例えば、癌腫細胞）または標的組織中またはその付近の部位である。選択された実施形態では、開裂可能部分は、ペプチド結合、ヒドラゾン部分、オキシム部分、エステル結合およびジスルフィド結合を含むことができる。特に好ましい実施形態では、そのような開裂は、例示的な酵素的に開裂可能な基が、天然アミノ酸または天然アミノ酸で終わるペプチド配列を含みかつリンカーに組み込まれているという点で酵素的である。好ましくは、組み込まれている開裂可能部分は、カリケアマイシンの少なくとも約１０％が投与から２４時間以内に活性化および放出され、より好ましくは２５％が放出されるものである。
【００２６】
本明細書では、アミノ酸残基のポリマーに言及するために、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」を互換的に使用する。これらの用語は、１個または複数個のアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工化学模倣物である、アミノ酸ポリマー、ならびに天然に存在するアミノ酸ポリマーおよび天然には存在しないアミノ酸ポリマーに適用される。これらの用語はまた、用語「抗体」も包含する。
【００２７】
用語「アミノ酸」は、天然に存在するアミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸と同様の方法で機能するアミノ酸類似体およびアミノ酸模倣物を意味する。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるもの、ならびに後に改変されるアミノ酸（例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸およびＯ−ホスホセリン）である。アミノ酸類似体は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造（即ち、水素に結合しているα炭素、カルボキシル基、アミノ基およびＲ基（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム））を有する化合物を意味する。そのような類似体は、改変されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または改変されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸と同様の方法で機能する化合物を意味する。用語「非天然アミノ酸」は、上記で説明した２０種の天然に存在するアミノ酸の「Ｄ」立体化学的形態を表すように意図されている。用語非天然アミノ酸には、天然アミノ酸の同族体および天然アミノ酸の合成により改変された形態が含まれることが更に理解される。合成により改変された形態として、最大２個の炭素原子で短縮または延長されたアルキレン鎖を有するアミノ酸、任意選択で置換されたアリール基を含むアミノ酸、ならびにハロゲン化基（好ましくはハロゲン化アルキル基およびハロゲン化アリール基）を含んだアミノ酸が挙げられるがこれらに限定されない。本発明のリンカーまたはコンジュゲートに付着した場合、アミノ酸は、このアミノ酸のカルボン酸基がケト（Ｃ（Ｏ））基で置き換えられている「アミノ酸側鎖」の形態である。そのため、例えばアラニン側鎖は−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＨ３および同類のものである。
【００２８】
「核酸」は、一本鎖または二本鎖のいずれかの形態でのデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドおよびそれらのポリマーを意味する。この用語は、既知のヌクレオチド類似体または改変された骨格の残基もしくは結合を含む核酸（合成である、天然に存在する、および天然には存在しない）を包含し、この核酸は、参照核酸と類似の結合特性を有し、かつ参照ヌクレオチドと同様の方法で代謝される。そのような類似体の例として、ホスホロチオエート、ホスホラミデート、メチルホスホネート、キラル−メチルホスホネート、２−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、ペプチド−核酸（ＰＮＡ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００２９】
別途示さない限り、特定の核酸配列はまた、明確に示されている配列だけなく、その保存的に改変された多様体（例えば、縮重コドン置換）および相補的配列も暗黙で包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１個または複数個の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することにより達成され得る。
【００３０】
「脂肪族」は、指定された数の炭素原子を有する（例えば、「Ｃ３脂肪族」、「Ｃ１〜Ｃ５脂肪族」もしくは「Ｃ１からＣ５の脂肪族」の場合、後者の２つの語句は１〜５個の炭素原子を有する脂肪族部分と同義である）または炭素原子の数が明確に指定されていない場合には１〜４個の炭素原子（不飽和脂肪族部分の場合には２〜４個の炭素）を有する、直鎖または分枝鎖の飽和または不飽和の非芳香族炭化水素部分を意味する。
【００３１】
用語「アルキル」は、単独でまたは別の置換基の一部として、別途明記しない限り、炭素原子の数が指定されている（即ち、Ｃ１〜Ｃ１０は１〜１０個の炭素を意味する）直鎖もしくは分枝鎖のまたは環状の炭化水素ラジカルまたはそれらの組み合わせ（これらは完全に飽和されていてもよく、一不飽和であってもよく、または多不飽和であってもよく、かつ二価および多価のラジカルを含むことができる）を意味する。用語「アルキル」は、別途言及しない限り、下記でより詳細に定義するアルキルの誘導体（例えば、「ヘテロアルキル」）を含むことも意図されている。炭化水素基に限定されるアルキル基は「ホモアルキル」と呼ばれる。実施形態では、アルキルは環状炭化水素ラジカルを含まない。実施形態では、用語「アルキル」は、本明細書で使用する場合、１〜２０個の炭素原子の飽和の直鎖または分枝鎖の一価炭化水素ラジカルを意味する。飽和炭化水素ラジカルの例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル等の基、例えばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルの同族体および異性体、ならびに同類のもの。不飽和アルキル基は、１個または複数個の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−プロピニルおよび３−プロピニル、３−ブチニル、ならびにより高級な同族体および異性体。「一価」は、アルキルが分子の残部への１箇所の付着点を有することを意味する。アルキル基の例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−メチル−１−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、２−ブチル、２−メチル−２−プロピル、１−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、２−メチル−２−ブチル、３−メチル−２−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−１−ブチル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、３−メチル−３−ペンチル、２−メチル−３−ペンチル、２，３−ジメチル−２−ブチル、３，３−ジメチル−２−ブチル、１−ヘプチル、１−オクチルおよび同類のもの。具体的には、アルキル基は１〜１０個の炭素原子を有する。より具体的には、アルキル基は１〜４個の炭素原子を有する。
【００３２】
用語「アルキレン」は、単独でまたは別の置換基の一部として、限定されないが−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−で例示されるようにアルカンに由来する二価ラジカルを意味しており、「ヘテロアルキレン」として下記で説明する基を更に含む。典型的には、アルキル（またはアルキレン）基は１〜２４個の炭素原子を有し、この基が１０個以下の炭素原子を有することが本発明では好ましい。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、概して８個以下の炭素原子を有するより短い鎖のアルキル基またはアルキレン基である。
【００３３】
用語「ヘテロアルキル」は、単独でまたは別の用語との組み合わせで、別途明記しない限り、明記された数の炭素原子とＯ、Ｎ、ＳｉおよびＳからなる群から選択される少なくとも１個のヘテロ原子とからなる安定した直鎖もしくは分枝鎖のまたは環状の炭化水素ラジカルまたはそれらの組み合わせを意味しており、窒素原子、炭素原子および硫黄原子は任意選択で酸化され得、窒素ヘテロ原子は任意選択で四級化され得る。ヘテロ原子Ｏ、ＮおよびＳおよびＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置またはアルキル基が分子の残部に付着している位置に配置され得る。例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３。例えば−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３および−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３のように最大２個のヘテロ原子が連続していてもよい。同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、単独でまたは別の置換基の一部として、限定されないが−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−および−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−で例示されるようにヘテロアルキルに由来する二価ラジカルを意味する。ヘテロアルキレン基の場合、ヘテロ原子はいずれかのまたは両方の鎖末端を占めることもできる（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノおよび同類のもの）。用語「ヘテロアルキル」および「ヘテロアルキレン」は、ポリ（エチレングリコール）およびその誘導体を包含する。更に、アルキレン結合基およびヘテロアルキレン結合基の場合、この結合基の配向が、この結合基の式が記載されている方向によって暗示されることはない。例えば、式−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−は−Ｃ（Ｏ）２Ｒ’−および−Ｒ’Ｃ（Ｏ）２−の両方を表す。
【００３４】
用語「低級」は、用語「アルキル」または「ヘテロアルキル」との組み合わせで、１〜６個の炭素原子を有する部分を意味する。
【００３５】
用語「アルコキシ」、「アルキルアミノ」および「アルキルチオ」（またはチオアルコキシ」）はこれらの従来の意味で使用され、それぞれ酸素原子、アミノ基または硫黄原子を介して分子の残部に付着しているアルキル基を意味する。
【００３６】
一般に、「アシル置換基」も上記に記載の群から選択される。本明細書で使用する場合、用語「アシル置換基」は、本発明の化合物の多環核に直接または間接のいずれかで付着しているカルボニル炭素に付着してこのカルボニル炭素の原子価を満たす基を意味する。
【００３７】
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、単独でまたは他の用語との組み合わせで、別途明記しない限り、それぞれ置換または非置換の「アルキル」および置換または非置換の「ヘテロアルキル」の環状バージョンを表す。更に、ヘテロシクロアルキルの場合、ヘテロ原子は、複素環が分子の残部に付着している位置を占めることができる。シクロアルキルの例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチルおよび同類のもの。ヘテロシクロアルキルの例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニルおよび同類のもの。環状構造のヘテロ原子および炭素原子は任意選択で酸化されている。
【００３８】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、単独でまたは別の置換基の一部として、別途明記しない限り、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を意味する。更に、「ハロアルキル」等の用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むように意図されている。例えば、用語「ハロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル」は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピルおよび同類のものを含むがこれらに限定されないように意図されている。
【００３９】
用語「アリール」（略語Ａｒ）は、別途明記しない限り、単環または互いに縮合もしくは共有結合している多環（好ましくは１〜３環）であり得る、置換または非置換の多価不飽和の芳香族炭化水素置換基を意味する。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を含むアリール基（またはアリール環）を意味しており、窒素原子、炭素原子および硫黄原子は任意選択で酸化されており、窒素原子は任意選択で四級化されている。ヘテロアリール基を、ヘテロ原子を介して分子の残部に付着させることができる。アリール基およびヘテロアリール基の非限定的な例として下記が挙げられる：フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンゾイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリルおよび６−キノリル。上記で言及したアリール環系およびヘテロアリール環系のそれぞれの置換基は、下記で説明する許容される置換基の群から選択される。「アリール」および「ヘテロアリール」はまた、１個または複数個の非芳香族環系がアリール系またはヘテロアリール系に縮合したまたは他の方法で結合した環系も包含する。
【００４０】
簡潔にするために、用語「アリール」は、他の用語と組み合わせて使用する場合（例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）、上記で定義したアリール環およびヘテロアリール環の両方を含む。そのため、用語「アリールアルキル」は、炭素原子（例えば、メチレン基）が例えば酸素原子で置き換えられているアルキル基（例えば、フェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル、３−（１−ナフチルオキシ）プロピルおよび同類のもの）等、アリール基がアルキル基に付着しているラジカル（例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチルおよび同類のもの）を含むように意図されている。
【００４１】
上記用語（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」および「ヘテロアリール」）は、それぞれ示されているラジカルの置換型および非置換型の両方を含む。各タイプのラジカルの好ましい置換基を下記に記載する。
【００４２】
（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニルおよびヘテロシクロアルケニルと称されることが多い基等の）アルキルラジカルおよびヘテロアルキルラジカルの置換基は、概して、それぞれ「アルキル置換基」および「ヘテロアルキル置換基」と称され、０〜（２ｍ’＋１）（ここで、ｍ’は各ラジカル中の炭素原子の総数である）の範囲の数で−Ｏ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−Ｓ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）’、−Ｃ（Ｏ）’、−ＣＯ２’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）’、−Ｓ（Ｏ）２’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ２’、−ＣＮおよびＮＯ２から選択されるがこれらに限定さない様々な基のうちの１つまたは複数であることができる。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’およびＲ’’’’は、それぞれ好ましくは、独立して、水素、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のアリール、例えば１〜３個のハロゲンで置換されたアリール、置換もしくは非置換のアルキル基、アルコキシ基もしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基を意味する。例えば、本発明の化合物が複数個のＲ基を含む場合、各Ｒ基は、これらの基のうちの複数が存在する場合には各Ｒ’基、Ｒ’’基、Ｒ’’’基およびＲ’’’’基であるとして独立して選択される。Ｒ’およびＲ’’が同一の窒素原子に付着している場合、これらを窒素原子と組み合わせて５員環、６員環または７員環を形成することができる。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’は、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むがこれらに限定されないように意図されている。置換基に関する上記考察から、当業者は、用語「アルキル」が、水素基以外の基（例えば、ハロアルキル（例えば、（−ＣＦ３および−ＣＨ２ＣＦ３）ならびにアシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３および同類のもの））に結合している炭素原子を含む基を含むように意図されていることを理解するであろう。
【００４３】
アルキルラジカルに関して説明した置換基と同様に、アリール置換基およびヘテロアリール置換基は、概して、それぞれ「アリール置換基」および「ヘテロアリール置換基」と称され、多様であり、例えば下記から選択される：０〜芳香環系上の空の原子価（ｏｐｅｎ  ｖａｌｅｎｃｅ）の総数の範囲の数でハロゲン、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ２Ｒ’、−ＣＮおよび−ＮＯ２、−Ｒ’、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシならびにフルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル（ここで、Ｒ’、Ｒ’、Ｒ’’’およびＲ’’’’は、好ましくは、独立して、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルおよび（Ｃ１〜Ｃ８）ヘテロアルキル、非置換のアリールおよびヘテロアリール、（非置換アリール）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルならびに（非置換アリール）オキシ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択される）。例えば、本発明の化合物が複数個のＲ基を含む場合、各Ｒ基は、これらの基のうちの複数が存在する場合には各Ｒ’基、Ｒ’基、Ｒ’’’基およびＲ’’’’基であるとして独立して選択される。
【００４４】
アリール環またはヘテロアリール環の隣接した原子上のアリール置換基のうちの２つは、式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）ｑ−Ｕ−（式中、ＴおよびＵは、独立して、−ＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−または単結合であり、ｑは０〜３の整数である）の置換基で任意選択的に置き換えられ得る。あるいは、アリール環またはヘテロアリール環の隣接した原子上の置換基のうちの２つは、式−Ａ−（ＣＨ２）ｒ−Ｂ−（式中、ＡおよびＢは、独立して、−ＣＲＲ’−、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−または単結合であり、ｒは１〜４の整数である）の置換基で任意選択的に置き換えられ得る。そのようにして形成された新規の環の単結合のうちの１つは二重結合で任意選択的に置き換えられ得る。あるいは、アリール環またはヘテロアリール環の隣接した原子上の置換基のうちの２つは、式−（ＣＲＲ’）ｎ−Ｘ−（ＣＲ’’Ｒ’’’）ｄ−（式中、ｓおよびｄは、独立して０〜３の整数であり、Ｘは−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−である）の置換基で任意選択的に置き換えられ得る。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、好ましくは、独立して、水素または置換もしくは非置換の（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択される。
【００４５】
本明細書で使用する場合、用語「ヘテロ原子」は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）およびケイ素（Ｓｉ）を含む。
【００４６】
記号「Ｒ」は、置換または非置換のアルキル基、置換または非置換のヘテロアルキル基、置換または非置換のアリール基、置換または非置換のヘテロアリール基および置換または非置換のヘテロシクリル基から選択される置換基を表す一般的な略語である。
【００４７】
「アルキレン」は、本明細書で使用する場合、１〜２０個の炭素原子の飽和の直鎖または分枝鎖の二価炭化水素ラジカルを意味しており、このアルキレンの例として、上記で例示したアルキル基と同じコア構造を有するものが挙げられるがこれに限定されない。「二価」は、アルキレンが分子の残部への２箇所の付着点を有することを意味する。具体的には、アルキレン基は１〜１０個の炭素原子を有する。より具体的には、アルキレン基は１〜４個の炭素原子を有する。
【００４８】
用語「炭素環」、「カルボシクリル」、カルボサイクリックおよび「カルボサイクリック環」は、単環式環として３〜１２個の炭素原子を有するか、または二環式環として７〜１２個の炭素原子を有する一価の非芳香族の飽和のまたは部分的に不飽和の環を意味する。７〜１２個の原子を有する二環式炭素環を例えばビシクロ［４，５］系、ビシクロ［５，５］系、ビシクロ［５，６］系またはビシクロ［６，６］系として配置することができ、９個または１０個の環原子を有する二環式炭素環をビシクロ［５，６］系もしくはビシクロ［６，６］系としてまたは架橋系（例えば、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタンおよびビシクロ［３．２．２］ノナン）として配置することができる。単環式炭素環の例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−Ｉ−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−Ｉ−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシルおよび同類のもの。
【００４９】
用語「シクロアルキルアルキル」は、アルキレン基により別の基に連結されているシクロアルキル基を意味する。シクロアルキルアルキルの例として、シクロヘキシルメチル、シクロヘキシルエチル、シクロペンチルメチル、シクロペンチルエチルおよび同類のものが挙げられるがこれらに限定されない。
【００５０】
ある基が「任意選択的に置換されている」と説明されている場合、この基は（１）置換されいなくてもよく、または（２）置換されていてもよい。ある基のある炭素が置換基のリストのうちの１つまたは複数で任意選択的に置換されていると説明されている場合、この炭素上の（いずれかが存在する限りにおいて）水素原子のうちの１つまたは複数が別々におよび／または一緒に、独立して選択された任意選択の置換基で置き換えられていてもよい。
【００５１】
用語「標的化剤」および「細胞結合剤」を互換的に使用することができ、ある部分であって、（１）この部分が付着している実体（例えば、カリケアマイシン）を標的細胞（例えば、特定のタイプの腫瘍細胞）へと導くことができるか、または（２）標的組織（例えば、腫瘍）で優先的に活性化される部分を意味するように意図されている。標的化剤は小分子であることができ、この小分子は非ペプチドおよびペプチドの両方を含むように意図されている。標的化剤は巨大分子であることもでき、この巨大分子として、糖類、レクチン、受容体、受容体のリガンド、ＢＳＡ等のタンパク質、抗体および同類のものが挙げられる。最も好ましいのは、標的化剤は抗体またはその免疫反応性断片を含むものとする。実施形態では、標的化剤は抗体またはその免疫反応性断片である。
【００５２】
用語「塩」は、本明細書で使用する場合、本発明の化合物の有機塩または無機塩を意味する。具体的には、塩は薬学的に許容される塩である。他の薬学的に許容されない塩も本発明発明に含まれる（例えば、分子または巨大分子）。塩として、本発明の化合物（塩基性基を含む）と無機酸または有機酸（例えば、カルボン酸）との反応により形成される塩、および本発明の化合物（酸性基を含む）と無機塩基または有機塩基（例えば、アミン）との反応により形成される塩が挙げられる。例示的な塩として、直下で説明する薬学的に許容される塩が挙げられる。
【００５３】
本発明の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、そのような化合物の中性形態と十分な量の所望の塩基とをそのままでまたは適切な不活性溶媒中で接触させることにより、塩基付加塩を得ることができる。薬学的に許容される塩基付加塩の例として、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミノ塩もしくはマグネシウム塩または類似の塩が挙げられる。本発明の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、そのような化合物の中性形態と十分な量の所望の酸とをそのままでまたは適切は不活性溶媒中で接触させることにより、酸付加塩を得ることができる。
【００５４】
薬学的に許容される酸付加塩の例として、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｃａｒｂｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、リン酸、一水素リン酸（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）、二水素リン酸（ｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）、硫酸、一水素硫酸（ｍｏｎｏｈｙｄｒｏｇｅｎｓｕｌｆｕｒｉｃ  ａｃｉｄ）、ヨウ化水素酸または亜リン酸および同類のもののような無機酸から得られるもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸および同類のもののような比較的非毒性の有機酸から得られる塩が挙げられる。また、アミノ酸の塩（例えば、アルギン酸塩および同類のもの）、ならびにグルクロン酸またはガラクツロン酸（ｇａｌａｃｔｕｎｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）および同類のもののような有機酸の塩も挙げられる（例えば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９７７，６６，１−１９を参照されたい）。本発明の特定の具体的な化合物は、この化合物が塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする塩基性官能基および酸性官能基の両方を含む。
【００５５】
表現「薬学的に許容される塩」は、分子または巨大分子の有機塩または無機塩を意味する。薬学的に許容される塩として、本明細書で説明されている化合物上で見られる特定の置換基に応じて比較的非毒性の酸または塩基により調製される活性化合物の塩が挙げられる。酸付加塩をアミノ基により形成することができる。例示的な塩として下記が挙げられるがこれらに限定されない：硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（即ち、１，１’メチレンビス−（２−ヒドロキシ３−ナフトエート））。薬学的に許容される塩は、別の分子（例えば、酢酸イオン、コハク酸イオン）または他の対イオンの包含を伴っていてもよい。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化させるあらゆる有機部分または無機部分であることができる。更に、薬学的に許容される塩は、その構造中に複数個の荷電原子を有していてもよい。複数個の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合、この塩は複数個の対イオンを有することができる。そのため、薬学的に許容される塩は、１個もしくは複数個の荷電原子および／または１個もしくは複数個の対イオンを有することができる。
【００５６】
中性形態の化合物は、好ましくは、従来の方法でこの塩と塩基または酸とを接触させ、および親化合物を単離することにより再生される。親形態の化合物は、特定の物理的特性（例えば、極性溶媒での溶解性）が様々な塩形態と異なるが、そうでなければ、これらの塩は本発明の目的のために親形態の化合物と均等である。
【００５７】
「薬学的に許容される溶媒和物」または「溶媒和物」は、１個または複数個の溶媒分子と分子または巨大分子との会合を意味する。薬学的に許容される溶媒和物を形成する溶媒の例として、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸およびエタノールアミンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００５８】
用語「リンカー」、「バイオコンジュゲートリンカー」および「スペーサー」は互換的に使用され、本明細書で使用する場合、ある化学的部分を別の化学的部分へと共有結合的に接合する二価化学基を説明する。リンカーの具体例を本明細書で説明する。リンカーは、ポリエチレン（ＰＥＧ）リンカーもしくはバイオコンジュゲートリンカーまたはそれらの組み合わせであることができる。
【００５９】
用語「連結基」または「バイオコンジュゲーション部分」は、リンカーへの標的化剤の付着を可能にする部分を意味する。下記でより詳細に論じるように、例示的な連結基として、例示を目的として限定を目的とすることなくアルキル、アミノアルキル、アミノカルボニルアルキル、カルボキシアルキル、ヒドロキシアルキル、アルキル−マレイミド、アルキル−Ｎ−ヒドロキシルスクシンイミド、ポリ（エチレングリコール）−マレイミドおよびポリ（エチレングリコール）−Ｎ−ヒドロキシルスクシンイミドが挙げられ、これらは全て更に置換されていてもよい。リンカーはまた、標的化基に実際に付加された付着部分を有することもできる。
【００６０】
「反応性官能基」、「反応性部分」、「反応性基」は、本明細書で使用する場合、反応して化学的部分間にリンカーを形成する基を意味する。説明される反応性基として、本明細書で説明されているようにバイオコンジュゲート技術で一般に用いられる反応性官能基が挙げられる。実施形態では、反応性部分は、リシン側鎖またはシステイン側鎖等のアミノ酸（例えば、アミノ酸側鎖）と反応する官能基であることができる。反応性基として下記が挙げられるがこれらに限定されない：オレフィン、アセチレン、アルコール、フェノール、エーテル、酸化物、ハロゲン化物、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、シアネート、イソシアネート、チオシアネート、イソチオシアネート、アミン、ヒドラジン、ヒドラゾン、ヒドラジド、ジアゾ、ジアゾニウム、ニトロ、ニトリル、メルカプタン、スルフィド、ジスルフィド、スルホキシド、スルホン、スルホン酸、スルフィン酸、アセタール、ケタール、無水物、スルフェート、スルフェン酸イソニトリル、アミジン、イミド、イミデート、ニトロン、ヒドロキシルアミン、オキシム、ヒドロキサム酸チオヒドロキサム酸、アレン、オルトエステル、亜硫酸塩、エナミン、イナミン、尿素、イソ尿素、セミカルバジド、カルボジイミド、カルバメート、イミン、アジド、アゾ化合物、アゾキシ化合物およびニトロソ化合物。反応性官能基として、バイオコンジュゲートの調製に使用されるものも挙げられ、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、マレイミドおよび同類のものも挙げられる。これらの官能基のそれぞれを調製する方法は当技術分野で公知であり、この方法の特定の目的への適用または特定の目的のための改変は当業者の能力の範囲内である。
【００６１】
本明細書で使用する場合、用語「コンジュゲート」は、原子間のまたは分子間の会合を意味する。この会合は直接的または間接的であることができる。例えば、核酸（例えば、リボ核酸）と本明細書に記載されている化合物部分との間のコンジュゲートは（例えば、共有結合により）直接的であることができるか、または（例えば、非共有結合により）間接的であることができる。任意選択で、コンジュゲート化学を使用してコンジュゲートを形成し、このコンジュゲート化学として下記が挙げられるがこれらに限定されない：求核置換（例えば、アミンおよびアルコールと、ハロゲン化アシル、活性エステルとの反応）、求電子置換（例えば、エナミン反応）、ならびに炭素−炭素多重結合および炭素−ヘテロ原子多重結合への付加（例えば、マイケル反応、ディールス・アルダー付加）。これらのおよび他の有用な反応は、例えばＭａｒｃｈ，ＡＤＶＡＮＣＥＤ  ＯＲＧＡＮＩＣ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８５、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，ＢＩＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９９６およびＦｅｅｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮＳ；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｖｏｌ．１９８，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９８２で論じられている。そのため、核酸酸を、その骨格を介して化合物部分に付着させることができる。任意選択で、リボ核酸は、このリボ核酸と化合物部分との相互作用を促進する１個または複数個の反応性部分（例えば、アミノ酸反応性部分）を含む。
【００６２】
本明細書のコンジュゲート化学に使用される有用な反応性部分または反応性官能基として、例えば下記が挙げられる：
（ａ）カルボキシル基およびその様々な誘導体であって、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル、酸ハロゲン化物、アシルイミダゾール、チオエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび芳香族エステルが挙げられるがこれらに限定されないカルボキシル基およびその様々な誘導体；
（ｂ）ヒドロキシル基であって、エステル、エーテル、アルデヒド等に変換され得るヒドロキシル基；
（ｃ）ハロアルキル基であって、ハロゲン化物が後に例えばアミン、カルボキシレートアニオン、チオールアニオン、カルバニオンまたはアルコキシドイオン等の求核基で置き換えられ得、それによりハロゲン原子の部位で新たな基の共有結合性の付着が起こる、ハロアルキル基；
（ｄ）ジエノフィル基であって、ディールス・アルダー反応に関与することができるジエノフィル基、例えばマレイミド基；
（ｅ）アルデヒド基またはケトン基であって、例えばイミン、ヒドラゾン、セミカルバゾンもしくはオキシム等のカルボニル誘導体の形成によるか、またはグリニャール付加もしくはアルキルリチウム付加等のメカニズムによるその後の誘導体化が可能であるようなアルデヒド基またはケトン基；
（ｆ）ハロゲン化スルホニル基であって、後にアミンとの反応により例えばスルホンアミドを形成するハロゲン化スルホニル基；
（ｇ）チオール基であって、ジスルフィドに変換され得る、ハロゲン化アシルと反応し得るか、または金等の金属に結合し得るチオール基；
（ｈ）アミンまたはスルフヒドリル基であって、例えばアシル化、アルキル化または酸化され得るアミンまたはスルフヒドリル基；
（ｉ）アルケンであって、例えば環化付加、アシル化、マイケル付加等を受け得るアルケン；
（ｊ）エポキシドであって、例えばアミン化合物およびヒドロキシル化合物と反応し得るエポキシド；
（ｋ）核酸合成で有用なホスホラミダイトおよび他の標準的な官能基；
（ｌ）金属酸化ケイ素結合；
（ｍ）例えばリン酸ジエステル結合を形成するための、反応性リン基（例えば、ホスフィン）への金属結合、ならびに
（ｎ）スルホン、例えばビニルスルホン。
【００６３】
コンジュゲート（「クリック」）化学を使用して小モジュラー単位を接合することによる組成物の化学合成は当技術分野で公知であり、例えば下記：Ｈ．Ｃ．Ｋｏｌｂ，Ｍ．Ｇ．Ｆｉｎｎ  ａｎｄ  Ｋ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ（（２００１）．“Ｃｌｉｃｋ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｄｉｖｅｒｓｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｆｅｗ  Ｇｏｏｄ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ”．Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ４０（１１）：２００４−２０２１）、Ｒ．Ａ．Ｅｖａｎｓ（（２００７）．“Ｔｈｅ  Ｒｉｓｅ  ｏｆ  Ａｚｉｄｅ−Ａｌｋｙｎｅ  １，３−Ｄｉｐｏｌａｒ‘Ｃｌｉｃｋ’Ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ”．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６０（６）：３８４−３９５、Ｗ．Ｃ．Ｇｕｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．ｐ３  １９９６、Ｓｐｉｔｅｒｉ，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ  ａｎｄ  Ｍｏｓｅｓ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．（（２０１０）．“Ｃｏｐｐｅｒ−Ｃａｔａｌｙｚｅｄ  Ａｚｉｄｅ−Ａｌｋｙｎｅ  Ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎ：Ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  １，４，５−Ｔｒｉｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  １，２，３−Ｔｒｉａｚｏｌｅｓ”．Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ４９（１）：３１−３３）、Ｈｏｙｌｅ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｅ．ａｎｄ  Ｂｏｗｍａｎ，Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｎ．（（２０１０）．“Ｔｈｉｏｌ−Ｅｎｅ  Ｃｌｉｃｋ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”．Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ４９（９）：１５４０−１５７３）、Ｂｌａｃｋｍａｎ，Ｍｅｌｉｓｓａ  Ｌ．ａｎｄ  Ｒｏｙｚｅｎ，Ｍａｋｓｉｍ  ａｎｄ  Ｆｏｘ，Ｊｏｓｅｐｈ  Ｍ．（（２００８）．“Ｔｅｔｒａｚｉｎｅ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ：Ｆａｓｔ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｉｎｖｅｒｓｅ−Ｅｌｅｃｔｒｏｎ−Ｄｅｍａｎｄ  Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ  Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ”．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １３０（４１）：１３５１８−１３５１９）、Ｄｅｖａｒａｊ，Ｎｅａｌ  Ｋ．ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓｌｅｄｅｒ，Ｒａｌｐｈ  ａｎｄ  Ｈｉｌｄｅｒｂｒａｎｄ，Ｓｃｏｔｔ  Ａ．（（２００８）．“Ｔｅｔｒａｚｉｎｅ  Ｂａｓｅｄ  Ｃｙｃｌｏａｄｄｉｔｉｏｎｓ：Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｅｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｌｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ”．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９（１２）：２２９７−２２９９）、Ｓｔｏｅｃｋｍａｎｎ，Ｈｅｎｎｉｎｇ；Ｎｅｖｅｓ，Ａｎｄｒｅ；Ｓｔａｉｒｓ，Ｓｈａｕｎ；Ｂｒｉｎｄｌｅ，Ｋｅｖｉｎ；Ｌｅｅｐｅｒ，Ｆｉｎｉａｎ（（２０１１）．“Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ  ｉｓｏｎｉｔｒｉｌｅ−ｂａｓｅｄ  ｃｌｉｃｋ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｆｏｒ  ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ”．Ｏｒｇａｎｉｃ＆Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）で説明されており、これらは全てその全体が参照によりおよび全ての目的のために本明細書に組み込まれる。
【００６４】
本明細書で説明されているタンパク質の化学的安定性に関与または干渉しないような反応性官能基を選択することができる。一例として、核酸はビニルスルホンまたは他の反応性部分を含むことができる。任意選択で、核酸は、式ＳーＳ−Ｒを有する反応性部分を含むことができる。Ｒは例えば保護基であることができる。任意選択で、Ｒはヘキサノールである。本明細書で使用する場合、用語ヘキサノールは、式Ｃ６Ｈ１３ＯＨを有する化合物を含み、このヘキサノールとして下記が挙げられる：１−ヘキサノール、２−ヘキサノール、３−ヘキサノール、２−メチル−１−ペンタノール、３−メチル−１−ペンタノール、４−メチル−１−ペンタノール、２−メチル−２−ペンタノール、３−メチル−２−ペンタノール、４−メチル−２−ペンタノール、２−メチル−３−ペンタノール、３−メチル−３−ペンタノール、２，２−ジメチル−１−ブタノール、２，３−ジメチル−１−ブタノール、３，３−ジメチル−１−ブタノール、２，３−ジメチル−２−ブタノール、３，３−ジメチル−２−ブタノールおよび２−エチル−１−ブタノール。任意選択で、Ｒは１−ヘキサノールである。
【００６５】
「抗体」は、抗原に特異的に結合して認識する免疫グロブリン遺伝子由来のフレームワーク領域を含むポリペプチドまたはその断片を意味する。認識されている免疫グロブリン遺伝子として、カッパ定常領域遺伝子、ラムダ定常領域遺伝子、アルファ定常領域遺伝子、ガンマ定常領域遺伝子、デルタ定常領域遺伝子、イプシロン定常領域遺伝子およびミュー定常領域遺伝子と、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子とが挙げられる。軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロンに分類され、順にそれぞれ免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを規定する。典型的には、抗体の抗原結合領域は、結合の特異性および親和性において最も重要であろう。いくつかの実施形態では、抗体または抗体の断片は、様々な生物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ハムスター、ラクダ等）に由来し得る。本発明の抗体として、抗体の所望の機能（例えば、グリコシル化、発現、抗原認識、エフェクター機能、抗原結合、特異性等）を改善するためにまたは調節するために１箇所または複数箇所のアミノ酸位置で改変されているかまたは変異している抗体を挙げることができる。
【００６６】
抗体は、複雑な内部構造を有する大きく複雑な分子（約１５０，０００の分子量または約１３２０個のアミノ酸）である。天然抗体分子は２つの同一の対のポリペプチド鎖を含み、各対は１本の軽鎖および１本の重鎖を有する。各軽鎖および各重鎖は順番に下記の２つの領域からなる：標的抗原への結合に関与する可変（「Ｖ」）領域、および免疫系の他の構成要素と相互作用する定常（「Ｃ」）領域。軽鎖および重鎖の可変領域は３次元空間で一体となって、抗原（例えば、細胞表面上の受容体）に結合する可変領域を形成する。各軽鎖可変領域内または各重鎖可変領域内には、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）と呼ばれる３個の短いセグメント（長さが平均して１０個のアミノ酸）が存在する。抗体可変ドメイン中の６個のＣＤＲ（軽鎖由来の３個および重鎖由来の３個）は３次元空間で一緒に折り畳まれ、標的抗原上にドッキングする実際の抗体結合部位を形成する。ＣＤＲの位置および長さは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３，１９８７により正確に定義されている。可変領域においてＣＤＲに含まれてない部分はフレームワーク（「ＦＲ」）と呼ばれ、このフレームワークはＣＤＲの環境を形成する。
【００６７】
例示的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は四量体を含む。各四量体は２つの同一の対のポリペプチド鎖からなり、各対は、１本の「軽」（約２５ｋＤ）と１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）とを有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０個またはより多くのアミノ酸からなる可変領域を定義する。用語可変軽鎖（ＬＶ）および可変重鎖（ＶＨ）は、それぞれこれらの軽鎖および重鎖を意味する。Ｆｃ（即ち、断片結晶化可能な領域）は免疫グロブリンの「ベース」または「テイル」であり、典型的には、抗体のクラスに応じて２個または３個の定常ドメインに寄与する２本の重鎖から構成されている。特定のタンパク質への結合により、Ｆｃ領域は、各抗体が所与の抗原に対して適切な免疫応答を生じることを確実にする。Ｆｃ領域はまた、様々な細胞受容体（例えば、Ｆｃ受容体）および他の免疫分子（例えば、補体タンパク質）にも結合する。
【００６８】
抗体は、例えば、インタクトな免疫グロブリンとして、または様々なペプチダーゼによる消化によって生成された、特徴が十分に明らかにされている多くの断片として存在する。そのため、例えばペプシンはヒンジ領域中のジスルフィド結合下で抗体を消化し、Ｆ（ａｂ）’２（即ち、それ自体がジスルフィド結合によりＶＨ−ＣＨ１に接合された軽鎖であるＦａｂの二量体）が生成される。Ｆ（ａｂ）’２が穏和な条件下で還元されてヒンジ領域中のジスルフィド結合が破壊され得、それによりＦ（ａｂ）’２二量体はＦａｂ’単量体へと変換される。Ｆａｂ’単量体は、本質的に、ヒンジ領域の一部を有する抗原結合部分である（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ  ｅｄ．，３ｄ  ｅｄ．１９９３）を参照されたい。様々な抗体断片がインタクトな抗体の消化の観点から定義されているが、当業者は、そのような断片を化学的にまたは組換えＤＮＡ方法論の使用により新たに合成し得ることを認識するであろう。そのため、用語抗体は、本明細書で使用する場合、全抗体の改変により作製された抗体断片、または組換えＤＮＡ方法論を使用して新たに合成された抗体断片（例えば、一本鎖Ｆｖ）、またはファージディスプレイライブラリを使用して同定された抗体断片（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）を参照されたい）も含む。
【００６９】
用語「治療上有効な量」は、対象中において所望の生物学的応答を誘発する活性のカリケアマイシンまたは抗体薬物コンジュゲートの量を意味する。そのような応答として下記が挙げられる：処置される疾患もしくは障害の症状の緩和、疾患の症状もしくは疾患自体の再発の予防、阻害もしくは遅延、処置されない場合と比較した対象の延命、または疾患の症状もしくは疾患自体の進行の予防、阻害もしくは遅延。この有効な量の決定は、特に本明細書に記載されている詳細な開示を考慮して十分に当業者の能力の範囲内である。開示されている化合物の毒性および治療上の有効性を、細胞培養および実験動物での標準的な薬学的手順により決定することができる。対象に投与される本発明の化合物もしくはコンジュゲートまたは他の治療剤の有効な量は、多発性骨髄腫のステージ、カテゴリーおよび状態ならびに対象の特徴（例えば、全体的な健康状態、年齢、性別、体重および薬物耐性）によって決まる。投与される本発明の化合物もしくはコンジュゲートまたは他の治療剤の有効な量はまた、投与経路および剤形によっても決まる。所望の治療効果を維持するのに十分である活性化合物の血漿中濃度を実現するために投与量および投与間隔を個々に調整することができる。
【００７０】
本明細書で提供されるのは、特に、好ましい薬物動態学的および薬力学的な特徴を示すカリケアマイシンリンカー構築物を提供する新規の方法、化合物、組成物および製品である。本明細書に記載されている利点は抗体薬物コンジュゲートの分野において広く適用可能であり得、かつ様々な標的と反応する抗体と併用され得る。実施形態では、開示されている化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）は、非特異性毒性の低下と共に標的部位での細胞毒性カリケアマイシン種の効率的な提示を可能にする開裂可能部分を有する新規のカリケアマイシンリンカー構築物を含む。更に、実施形態では、開示されているカリケアマイシンリンカー構築物を使用して、従来のコンジュゲート調製物と比較した場合に比較的安定であり、かつ平均ＤＡＲ分布およびペイロード位置に関して実質的に均一である部位特異的コンジュゲート調製物を生成する。添付した実施例で示すように、（平均ＤＡＲ分布およびカリケアマイシンポジショニングの両方に関する）そのような部位特異的カリケアマイシンコンジュゲートの安定性および均一性により、治療指標の改善に寄与する好ましい毒性プロファイルが可能になる。
【００７１】
一実施形態では、本発明は、１個または複数個の開裂可能部分を含むカリケアマイシンリンカー構築物を対象とする。当業者は、開裂可能なカリケアマイシンペイロードにより、活性化された弾頭の標的部位（例えば、腫瘍細胞）への選択的なおよび制御された送達が可能になることを認識するであろう。
【００７２】
実施形態では、開示されている化合物は、腫瘍原性細胞上に存在する抗原決定基と免疫特異的に反応する。従って、特に好ましい実施形態では、本発明は、開裂可能なカリケアマイシンペイロードを含む抗体薬物コンジュゲートであって、抗体が、様々な腫瘍と関連していることが分かっているＳＥＺ６決定基と免疫特異的に反応する、抗体薬物コンジュゲートを対象とする。
ＩＩ．組成物
本明細書で提供されるのは、式２：
Ａｂ−［Ｗ−（Ｘ１）ａ−ＣＭ−（Ｘ２）ｂ−Ｐ−Ｄ］ｎ  （式２）
の化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）またはその薬学的に許容される塩である。
【００７３】
Ａｂは標的化剤である。Ｗは連結基またはリンカーである。ＣＭは開裂可能部分である。Ｐはジスルフィド保護基である。Ｘ１およびＸ２は任意選択のスペーサー部分またはリンカー部分を含む。Ｄはカリケアマイシンである。記号ａおよびｂは、独立して０または１である。記号ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。
【００７４】
一態様では、式（Ｉ）：
Ａｂ−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］ｚ３  （Ｉ）
の化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）またはその薬学的に許容される塩が提供される。
【００７５】
Ａｂは標的化剤である。Ｗは連結基またはリンカー基である。Ｍは開裂可能部分である。Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーまたはスペーサーである。Ｐはジスルフィド保護基である。Ｄはカリケアマイシンまたはその類似体である。記号ｚ１、ｚ２およびｚ３は、独立して０〜１０の整数である。実施形態では、記号ｚ３は１〜１０の整数である。
【００７６】
本明細書に記載されている式のいずれかでＤがカリケアマイシンまたはその類似体である場合、Ｄ（カリケアマイシンまたは類似体）は、当技術分野で既知であるカリケアマイシンのクラスの任意のメンバーであって、末端−Ｓ−Ｓ−Ｓ−ＣＨ３部分が
【００７７】
【化５】
2018515457.tif 000007
【００７８】
（記号
【００７９】
【化６】
2018515457.tif 000008
【００８０】
はＰへの付着点を表す）で置き換えられているメンバーを含むことが理解される。カリケアマイシンは、細菌ミクロモノスポラ・エキノスポラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ  ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）に由来するエンジイン（ｅｎｅｄｉｙｎｅ）抗腫瘍抗体のクラスであり、カリケアマイシンγＩ、カリケアマイシンβ１Ｂｒ、カリケアマイシンγ１Ｂｒ、カリケアマイシンα２Ｉ、カリケアマイシンα３Ｉ、カリケアマイシンβ１ｉおよびカリケアマイシンδ１ｉが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８１】
実施形態では、標的化剤は抗体である。
【００８２】
実施形態では、Ｄは、式（Ｉａ）：
【００８３】
【化７】
2018515457.tif 000009
【００８４】
のものである。
【００８５】
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃである。
【００８６】
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１ＤおよびＲ１Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールである。
【００８７】
実施形態では、同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができる。記号ｎ１は、独立して０〜４の整数である。記号ｖ１は、独立して１または２である。
【００８８】
別の態様では、式（ＩＩ）：
【００８９】
【化８】
2018515457.tif 000010
【００９０】
の化合物（例えば、抗体薬物コンジュゲート）が提供される。
【００９１】
Ａｂは抗体等の標的化剤である。実施形態では、この抗体は、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体またはそれらの免疫反応断片である。実施形態では、この抗体は抗ＳＥＺ６抗体である。
【００９２】
Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。
【００９３】
Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。
【００９４】
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃである。
【００９５】
Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。
【００９６】
Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃである。
【００９７】
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＷ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃである。
【００９８】
Ｍ１ＡはＬ３に結合している。Ｍ１ＣはＬ４に結合している。
【００９９】
Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。
【０１００】
Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。
【０１０１】
Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。
【０１０２】
Ｗ１ＡはＡｂに結合している。Ｗ１ＣはＬ３に結合している。
【０１０３】
Ｗ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＡ−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＡ−、−ＮＲ６ＢＡＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＡＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＡ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。
【０１０４】
Ｗ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。
【０１０５】
Ｗ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＣ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＣ−、−ＮＲ６ＢＣＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＣＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＣ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。
【０１０６】
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６ＢＡ、Ｒ６ＢＢおよびＲ６ＢＣは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールである。
【０１０７】
実施形態では、同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができる。
【０１０８】
記号ｎ１は０〜４の整数である。実施形態では、ｎ１は０である。実施形態では、ｎ１は１である。実施形態では、ｎ１は２である。実施形態では、ｎ１は３である。実施形態では、ｎ１は４である。記号ｎ７は０〜４の整数である。実施形態では、ｎ７は０である。実施形態では、ｎ７は１である。実施形態では、ｎ７は２である。実施形態では、ｎ７は３である。実施形態では、ｎ１は４である。記号ｖ１は１または２である。記号ｎ２、ｎ３、ｎ４、ｎ５およびｚ３は、独立して１〜１０の整数である。記号ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数である。実施形態では、ｎ２は１である。実施形態では、ｎ２は２である。実施形態では、ｎ２は３である。実施形態では、ｎ２は４である。実施形態では、ｎ２は５である。実施形態では、ｎ２は６である。実施形態では、ｎ２は７である。実施形態では、ｎ２は８である。実施形態では、ｎ２は９である。実施形態では、ｎ２は１０である。実施形態では、ｎ３は１である。実施形態では、ｎ３は２である。実施形態では、ｎ３は３である。実施形態では、ｎ３は４である。実施形態では、ｎ３は５である。実施形態では、ｎ３は６である。実施形態では、ｎ３は７である。実施形態では、ｎ３は８である。実施形態では、ｎ３は９である。実施形態では、ｎ３は１０である。実施形態では、ｎ４は１である。実施形態では、ｎ４は２である。実施形態では、ｎ４は３である。実施形態では、ｎ４は４である。実施形態では、ｎ４は５である。実施形態では、ｎ４は６である。実施形態では、ｎ４は７である。実施形態では、ｎ４は８である。実施形態では、ｎ４は９である。実施形態では、ｎ４は１０である。実施形態では、ｎ５は１である。実施形態では、ｎ５は２である。実施形態では、ｎ５は３である。実施形態では、ｎ５は４である。実施形態では、ｎ５は５である。実施形態では、ｎ５は６である。実施形態では、ｎ５は７である。実施形態では、ｎ５は８である。実施形態では、ｎ５は９である。実施形態では、ｎ５は１０である。実施形態では、ｚ２は１である。実施形態では、ｚ２は２である。実施形態では、ｚ２は３である。実施形態では、ｚ２は４である。実施形態では、ｚ２は５である。実施形態では、ｚ２は６である。実施形態では、ｚ２は７である。実施形態では、ｚ２は８である。実施形態では、ｚ２は９である。実施形態では、ｚ２は１０である。実施形態では、ｚ１は１である。実施形態では、ｚ１は２である。実施形態では、ｚ１は３である。実施形態では、ｚ１は４である。実施形態では、ｚ１は５である。実施形態では、ｚ１は６である。実施形態では、ｚ１は７である。実施形態では、ｚ１は８である。実施形態では、ｚ１は９である。実施形態では、ｚ１は１０である。実施形態では、ｚ３は１である。実施形態では、ｚ３は２である。実施形態では、ｚ３は３である。実施形態では、ｚ３は４である。実施形態では、ｚ３は５である。実施形態では、ｚ３は６である。実施形態では、ｚ３は７である。実施形態では、ｚ３は８である。実施形態では、ｚ３は９である。実施形態では、ｚ３は１０である。
【０１０９】
実施形態では、Ｗは、抗体内のシステイン残基に共有結合的に付着している。実施形態では、このシステイン残基はＫａｂａｔ位置Ｃ２１４に存在する。実施形態では、Ｗは、抗体内のリシン残基に共有結合的に付着している。
【０１１０】
実施形態では、ＭはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、Ｍ１ＡはＬ３に結合しており、かつＭ１ＣはＬ４に結合している。
【０１１１】
実施形態では、Ｍ１Ａは、結合、置換もしくは非置換のヘテロアルキレンまたは−［ＮＲ５ＡＢＣ（Ｒ５ＡＥ）（Ｒ５ＡＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ３である。実施形態では、Ｍ１Ｂは、結合、置換もしくは非置換のヘテロアルキレンまたは−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−である。実施形態では、Ｍ１Ｃは、結合または置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。実施形態では、Ｍ１Ａはアミノ酸である。実施形態では、Ｍ１Ｂはアミノ酸である。実施形態では、Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つはバリン（ｖａｌ）である。実施形態では、Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つはアラニン（ａｌａ）である。実施形態では、Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つはシトルリン（ｃｉｔ）である。実施形態では、Ｍ１Ａ、Ｍ１ＢまたはＭ１Ｃのうちの１つは置換アリーレンである。
【０１１２】
実施形態では、Ｍ１Ａ、Ｍ１ＢまたはＭ１Ｃのうちの少なくとも１つは、式（ＩＩＩ）：
【０１１３】
【化９】
2018515457.tif 000011
【０１１４】
を有し、式中、Ｙは−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、ｎ６は０〜３の整数である。
【０１１５】
実施形態では、ＷはＷ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃであり、Ｗ１ＡはＡｂに結合しており、かつＷ１ＣはＬ３に結合している。
【０１１６】
実施形態では、Ｐは置換または非置換のアルキルである。
【０１１７】
実施形態では、ｚ３は１または２である。
【０１１８】
実施形態では、Ｌ３は、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。
【０１１９】
実施形態では、Ｌ４は、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。
【０１２０】
実施形態では、Ｗは、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである。
【０１２１】
実施形態では、Ｗは５員または６員の置換または非置換のヘテロシクロアルキレンである。
【０１２２】
実施形態では、Ｗは、式：
【０１２３】
【化１０】
2018515457.tif 000012
【０１２４】
を有する。
【０１２５】
実施形態では、Ｍはペプチドを含む。
【０１２６】
実施形態では、−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］は、
【０１２７】
【化１１】
2018515457.tif 000013
【０１２８】
【化１２】
2018515457.tif 000014
【０１２９】
【化１３】
2018515457.tif 000015
【０１３０】
【化１４】
2018515457.tif 000016
【０１３１】
である。
【０１３２】
実施形態では、−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］は、式：
【０１３３】
【化１５】
2018515457.tif 000017
【０１３４】
のものである。
【０１３５】
更なる態様では、式（ＩＶ）：
【０１３６】
【化１６】
2018515457.tif 000018
【０１３７】
の化合物が提供される。
【０１３８】
ｎ１、ｚ１、ｚ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｒ１、ＰおよびＭは本明細書で説明した通りである。
【０１３９】
Ｗ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７Ｅ、−ＯＲ７Ａ、−ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＯ２、−ＳＲ７Ｄ、−ＳＯｎ７Ｒ７Ｂ、−ＳＯｖ７ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＯＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃである。
【０１４０】
記号ｎ７は０〜４の整数である。記号ｖ７は１または２である。
【０１４１】
実施形態では、式（ＩＶ）の化合物は、式：
【０１４２】
【化１７】
2018515457.tif 000019
【０１４３】
【化１８】
2018515457.tif 000020
【０１４４】
【化１９】
2018515457.tif 000021
【０１４５】
【化２０】
2018515457.tif 000022
【０１４６】
を有する。
【０１４７】
実施形態では、Ｒ１は、水素、置換もしくは非置換のアルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅである。実施形態では、Ｒ１は水素または−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅである。実施形態では、Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅである。実施形態では、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３または−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。実施形態では、Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１４８】
実施形態では、Ｌ３は、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ３Ｇ−置換もしくは非置換のアルキレンまたはＲ３Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。実施形態では、Ｌ３は、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ３Ｇ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキレンまたはＲ３Ｇ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキレンである。
【０１４９】
Ｒ３Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ３Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ３Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ３Ｈ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ３Ｈ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１５０】
実施形態では、Ｌ４は、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ４Ｇ−置換もしくは非置換のアルキレンまたはＲ４Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである。実施形態では、Ｌ４は、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ４Ｇ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキレンまたはＲ４Ｇ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキレンである。
【０１５１】
Ｒ４Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ４Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ４Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ４Ｈ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ４Ｈ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１５２】
実施形態では、Ｒ１は、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ１Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１は、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１Ｇ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ１Ｇ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１５３】
Ｒ１Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ１Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１Ｈ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ１Ｈ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１５４】
実施形態では、Ｐは、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ２Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｐは、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ２Ｇ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ２Ｇ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１５５】
Ｒ２Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ２Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ２Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ２Ｈ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ２Ｈ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１５６】
実施形態では、Ｍは、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］２−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］３−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］４−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］５−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］６−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］７−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］８−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］９−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］１０−、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のアリール、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアリールまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃである。実施形態では、Ｍは、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］２−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］３−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］４−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］５−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］６−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］７−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］８−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］９−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］１０−、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換のフェニル、Ｒ５Ｇ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃである。
【０１５７】
Ｒ５Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５Ｈ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５Ｈ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１５８】
実施形態では、Ｗは、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のアリール、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアリールまたはＷ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃである。実施形態では、Ｗは、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６Ｇ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６Ｇ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールまたはＷ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃである。実施形態では、Ｗは−［（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］または−［（Ｌ３’）ｚ１’−Ｍ’−（Ｌ４’）ｚ２’−Ｐ’−Ｄ’］であり、−［（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］は−［（Ｌ３’）ｚ１’−Ｍ’−（Ｌ４’）ｚ２’−Ｐ’−Ｄ’］と同一であるか、または任意選択で異なる。ｚ１、ｚ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｐ、ＭおよびＤは、独立して、ｚ１’、ｚ２’、Ｌ３’、Ｌ４’、Ｐ’、Ｍ’およびＤ’と同一であるか、または独立して任意選択で異なる。ｚ１、ｚ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｐ、ＭおよびＤは本明細書で説明した通りである。ｚ１’、ｚ２’、Ｌ３’、Ｌ４’、Ｐ’、Ｍ’およびＤ’は、独立してｚ１、ｚ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｐ、ＭおよびＤに対応し、かつそれ自体は本明細書で定義した通りである。
【０１５９】
Ｒ６Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６Ｈ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６Ｈ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６０】
実施形態では、Ｗ１は、水素、ハロゲン、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ７Ｇ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｗは、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ７Ｇ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ７Ｇ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６１】
Ｒ７Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ７Ｈ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ７Ｇは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ７Ｈ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ７Ｈ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６２】
実施形態では、Ｍ１Ａは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］２−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］３−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］４−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］５−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］６−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］７−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］８−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］９−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］１０−、Ｒ５ＡＧ−置換または非置換のアルキル、Ｒ５ＡＧ−置換または非置換のヘテロアルキル、Ｒ５ＡＧ−置換または非置換のシクロアルキル、Ｒ５ＡＧ−置換または非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＡＧ−置換または非置換のアリール、Ｒ５ＡＧ−置換または非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｍ１Ａは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］２−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］３−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］４−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］５−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］６−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］７−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］８−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］９−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］１０−、Ｒ５ＡＧ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５ＡＧ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５ＡＧ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５ＡＧ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＡＧ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５ＡＧ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６３】
Ｒ５ＡＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５ＡＨ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＡＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＡＨ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５ＡＨ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６４】
実施形態では、Ｍ１Ｂは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］２−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］３−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］４−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］５−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］６−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］７−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］８−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］９−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］１０−、Ｒ５ＢＧ−置換または非置換のアルキル、Ｒ５ＢＧ−置換または非置換のヘテロアルキル、Ｒ５ＢＧ−置換または非置換のシクロアルキル、Ｒ５ＢＧ−置換または非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＢＧ−置換または非置換のアリール、Ｒ５ＢＧ−置換または非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｍ１Ｂは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］２−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］３−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］４−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］５−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］６−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］７−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］８−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］９−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］１０−、Ｒ５ＢＧ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５ＢＧ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５ＢＧ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５ＢＧ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＢＧ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５ＢＧ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６５】
Ｒ５ＢＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５ＢＨ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＢＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＢＨ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５ＢＨ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６６】
実施形態では、Ｍ１Ｃは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］２−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］３−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］４−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］５−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］６−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］７−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］８−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］９−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］１０−、Ｒ５ＣＧ−置換または非置換のアルキレン、Ｒ５ＣＧ−置換または非置換のヘテロアルキレン、Ｒ５ＣＧ−置換または非置換のシクロアルキレン、Ｒ５ＣＧ−置換または非置換のヘテロシクロアルキレン、Ｒ５ＣＧ−置換または非置換のアリール、Ｒ５ＣＧ−置換または非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｍ１Ｃは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］２−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］３−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］４−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］５−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］６−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］７−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］８−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］９−、−［ＮＨＣＨ２Ｃ（Ｏ）］１０−、Ｒ５ＣＧ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキレン、Ｒ５ＣＧ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキレン、Ｒ５ＣＧ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキレン、Ｒ５ＣＧ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキレン、Ｒ５ＣＧ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５ＣＧ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６７】
Ｒ５ＣＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５ＣＨ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＣＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５ＣＨ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５ＣＨ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６８】
実施形態では、Ｗ１Ａは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ６ＡＧ−置換または非置換のアルキレン、Ｒ６ＡＧ−置換または非置換のヘテロアルキレン、Ｒ６ＡＧ−置換または非置換のシクロアルキレン、Ｒ６ＡＧ−置換または非置換のヘテロシクロアルキレン、Ｒ６ＡＧ−置換または非置換のアリール、Ｒ６ＡＧ−置換または非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｗ１Ａは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ６ＡＧ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキレン、Ｒ６ＡＧ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキレン、Ｒ６ＡＧ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキレン、Ｒ６ＡＧ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキレン、Ｒ６ＡＧ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６ＡＧ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１６９】
Ｒ６ＡＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６ＡＨ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６ＡＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６ＡＨ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６ＡＨ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１７０】
実施形態では、Ｗ１Ｂは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ６ＢＧ−置換または非置換のアルキレン、Ｒ６ＢＧ−置換または非置換のヘテロアルキレン、Ｒ６ＢＧ−置換または非置換のシクロアルキレン、Ｒ６ＢＧ−置換または非置換のヘテロシクロアルキレン、Ｒ６ＢＧ−置換または非置換のアリール、Ｒ６ＢＧ−置換または非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｗ１Ｂは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ６ＢＧ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキレン、Ｒ６ＢＧ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキレン、Ｒ６ＢＧ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキレン、Ｒ６ＢＧ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキレン、Ｒ６ＢＧ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６ＢＧ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１７１】
Ｒ６ＢＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６ＢＨ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６ＢＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６ＢＨ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６ＢＨ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１７２】
実施形態では、Ｗ１Ｃは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ６ＣＧ−置換または非置換のアルキレン、Ｒ６ＣＧ−置換または非置換のヘテロアルキレン、Ｒ６ＣＧ−置換または非置換のシクロアルキレン、Ｒ６ＣＧ−置換または非置換のヘテロシクロアルキレン、Ｒ６ＣＧ−置換または非置換のアリール、Ｒ６ＣＧ−置換または非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｗ１Ｃは、独立して、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、Ｒ６ＣＧ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキレン、Ｒ６ＣＧ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキレン、Ｒ６ＣＧ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキレン、Ｒ６ＣＧ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキレン、Ｒ６ＣＧ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６ＣＧ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１７３】
Ｒ６ＣＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６ＣＨ−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６ＣＧは、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６ＣＨ−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６ＣＨ−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１７４】
実施形態では、Ｒ１Ａは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．１−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ１．１−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ１．１−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ１．１−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．１−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ１．１−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１Ａは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．１−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ１．１−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ１．１−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ１．１−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．１−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ１．１−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１７５】
実施形態では、Ｒ１Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．２−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ１．２−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ１．２−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ１．２−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．２−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ１．２−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．２−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ１．２−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ１．２−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ１．２−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．２−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ１．２−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１７６】
実施形態では、Ｒ１Ｃは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．３−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ１．３−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ１．３−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ１．３−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．３−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ１．３−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１Ｃは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．３−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ１．３−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ１．３−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ１．３−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．３−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ１．３−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。同一の窒素原子に結合しているＲ１ＢおよびＲ１Ｃは、任意選択的に接合されてＲ１．３−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキルまたはＲ１．３−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールを形成することができる。
【０１７７】
実施形態では、Ｒ１Ｄは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．４−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ１．４−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ１．４−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ１．４−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．４−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ１．４−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１Ｄは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．４−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ１．４−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ１．４−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ１．４−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．４−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ１．４−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１７８】
実施形態では、Ｒ１Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．５−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ１．５−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ１．５−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ１．５−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．５−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ１．５−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ１．５−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ１．５−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ１．５−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ１．５−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１．５−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ１．５−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１Ｅは置換アルキルである。実施形態では、Ｒ１Ｅは非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルである。実施形態では、Ｒ１Ｅは、メチル、エチル、プロピルまたはブチルである。実施形態では、Ｒ１Ｅはメチルである。
【０１７９】
実施形態では、Ｒ２Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ２．２−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ２．２−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ２．２−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ２．２−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ２．２−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ２．２−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ２Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ２．２−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ２．２−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ２．２−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ２．２−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ２．２−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ２．２−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８０】
実施形態では、Ｒ３Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ３．２−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ３．２−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ３．２−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ３．２−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ３．２−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ３．２−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ３Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ３．２−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ３．２−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ３．２−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ３．２−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ３．２−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ３．２−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８１】
実施形態では、Ｒ４Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ４．２−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ４．２−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ４．２−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ４．２−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ４．２−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ４．２−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ４Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ４．２−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ４．２−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ４．２−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ４．２−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ４．２−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ４．２−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８２】
実施形態では、Ｒ５Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．２−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．２−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．２−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．２−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．２−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．２−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．２−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．２−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．２−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．２−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．２−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．２−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８３】
実施形態では、Ｒ５Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．５−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．５−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．５−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．５−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．５−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．５−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．５−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．５−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．５−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．５−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．５−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．５−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８４】
実施形態では、Ｒ５Ｆは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．６−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．６−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．６−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．６−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．６−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．６−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５Ｆは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．６−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．６−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．６−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．６−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．６−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．６−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８５】
実施形態では、Ｒ５ＡＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．７−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．７−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．７−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．７−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．７−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．７−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＡＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．７−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．７−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．７−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．７−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．７−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．７−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８６】
実施形態では、Ｒ５ＡＥは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．８−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．８−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．８−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．８−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．８−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．８−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＡＥは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．８−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．８−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．８−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．８−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．８−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．８−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８７】
実施形態では、Ｒ５ＡＦは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．９−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．９−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．９−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．９−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．９−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．９−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＡＦは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．９−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．９−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．９−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．９−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．９−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．９−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８８】
実施形態では、Ｒ５ＢＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．１０−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＢＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１０−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．１０−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１８９】
実施形態では、Ｒ５ＢＥは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．１１−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＢＥは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１１−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．１１−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９０】
実施形態では、Ｒ５ＢＦは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．１２−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＢＦは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１２−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．１２−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９１】
実施形態では、Ｒ５ＣＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．１３−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＣＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１３−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．１３−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９２】
実施形態では、Ｒ５ＣＥは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．１４−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＣＥは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１４−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．１４−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９３】
実施形態では、Ｒ５ＣＦは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ５．１５−置換もしくは非置換のテロアリールである。実施形態では、Ｒ５ＣＦは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ５．１５−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ５．１５−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９４】
実施形態では、Ｒ６Ａは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．１−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６．１−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６．１−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６．１−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．１−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６．１−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６Ａは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．１−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６．１−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６．１−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６．１−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．１−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６．１−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９５】
実施形態では、Ｒ６Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．２−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６．２−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６．２−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６．２−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．２−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６．２−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６Ｂは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．２−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６．２−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６．２−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６．２−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．２−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６．２−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９６】
実施形態では、Ｒ６ＡＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．７−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６．７−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６．７−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６．７−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．７−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６．７−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６ＡＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．７−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６．７−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６．７−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６．７−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．７−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６．７−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９７】
実施形態では、Ｒ６ＢＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６．１０−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６ＢＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．１０−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６．１０−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９８】
実施形態では、Ｒ６ＢＣは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換のアリールまたはＲ６．１３−置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ６ＢＣは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換のＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換の２〜６員のヘテロアルキル、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換のＣ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、Ｒ６．１３−置換もしくは非置換のフェニルまたはＲ６．１３−置換もしくは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
【０１９９】
Ｒ１Ｈ、Ｒ２Ｈ、Ｒ３Ｈ、Ｒ４Ｈ、Ｒ５Ｈ、Ｒ６Ｈ、Ｒ７Ｈ、Ｒ５ＡＨ、Ｒ５ＢＨ、Ｒ５ＣＨ、Ｒ６ＡＨ、Ｒ６ＢＨ、Ｒ６ＣＨ、Ｒ１．１、Ｒ１．２、Ｒ１．３、Ｒ１．４、Ｒ１．５、Ｒ２．２、Ｒ３．２、Ｒ４．２、Ｒ５．２、Ｒ５．５、Ｒ５．６、Ｒ５．７、Ｒ５．８、Ｒ５．９、Ｒ５．１０、Ｒ５．１１、Ｒ５．１２、Ｒ５．１３、Ｒ５．１４、Ｒ５．１５、Ｒ６．１、Ｒ６．２、Ｒ６．７、Ｒ６．１０およびＲ６．１３は、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）＝ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリールまたは非置換ヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ１Ｈ、Ｒ２Ｈ、Ｒ３Ｈ、Ｒ４Ｈ、Ｒ５Ｈ、Ｒ６Ｈ、Ｒ７Ｈ、Ｒ５ＡＨ、Ｒ５ＢＨ、Ｒ５ＣＨ、Ｒ６ＡＨ、Ｒ６ＢＨ、Ｒ６ＣＨ、Ｒ１．１、Ｒ１．２、Ｒ１．３、Ｒ１．４、Ｒ１．５、Ｒ２．２、Ｒ３．２、Ｒ４．２、Ｒ５．２、Ｒ５．５、Ｒ５．６、Ｒ５．７、Ｒ５．８、Ｒ５．９、Ｒ５．１０、Ｒ５．１１、Ｒ５．１２、Ｒ５．１３、Ｒ５．１４、Ｒ５．１５、Ｒ６．１、Ｒ６．２、Ｒ６．７、Ｒ６．１０およびＲ６．１３は、独立して、オキソ、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＮＯ２、−ＳＨ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ４Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）＝ＮＨ２、−ＮＨＳＯ２Ｈ、−ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、非置換の２〜６員のヘテロアルキル、非置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、非置換の３〜６員のヘテロシクロアルキル、非置換フェニルまたは非置換の５〜６員のヘテロアリールである。
ＩＩＩ．医薬組成物
また、本明細書で提供されるのは医薬製剤である。一態様では、本明細書で説明されている化合物または抗体薬物コンジュゲートと、薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物である。
ＩＶ．方法
本明細書で提供されるのは方法である。一態様では、抗体薬物コンジュゲートを調製する方法が提供される。この方法は、カリケアマイシン構築物と抗体のシステインまたはリシンとを接触させることを含み、このカリケアマイシン構築物は、式Ｗ１−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄを有し、式中、Ｗ１はリシン側鎖またはシステイン側鎖と反応する官能基であり、Ｍは開裂可能部分であり、Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーであり、Ｐはジスルフィド保護基であり、Ｄはカリケアマイシンまたはその類似体である。
【０２００】
実施形態では、カリケアマイシン構築物は、抗体の特定のシステインと接触させされる。実施形態では、特定のシステインは天然ジスルフィド架橋に由来する。実施形態では、抗体は操作された抗体であり、および特定のシステインは天然ジスルフィド架橋に由来しない。実施形態では、特定のシステインは接触前に選択的に還元される。実施形態では、抗体を選択的に還元する工程は、この抗体と安定化剤とを接触させる工程を含む。
【０２０１】
更に他の好ましい実施形態では、開示されているカリケアマイシン−リンカー構築物を使用して、式：
Ａｂ−［Ｗ−（Ｘ１）ａ−ＣＭ−（Ｘ２）ｂ−Ｐ−Ｄ］ｎ
の抗体薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を製造し、
式中、
ａ）Ａｂは標的化剤を含み、
ｂ）Ｗは連結基または結合基を含み、
ｃ）ＣＭは開裂可能部分を含み、
ｄ）Ｐはジスルフィド保護基を含み、
ｅ）Ｘ１およびＸ２は任意選択のスペーサー部分を含み、
ｆ）Ｄはカリケアマイシンを含み、
ａおよびｂは、独立して０または１であり、
ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。
【０２０２】
選択された実施形態では、標的化剤は、１個または複数個の遊離システインを有する部位特異的抗体を含む。選択された実施形態では、開裂可能部分は、ペプチド結合、ヒドラゾン部分、オキシム部分、エステル結合およびジスルフィド結合を含むことができる。更に他の好ましい実施形態では、連結基は、標的化剤上のシステイン部分と反応して、この標的化剤にカリケアマイシン−リンカー構築物を共有結合させる。
【０２０３】
上記の抗体薬物コンジュゲートに加えて、本発明は、開示されているＡＤＣを概して含む医薬組成物と、そのようなＡＤＣを使用して患者の障害（例えば、癌）を診断または処置する方法とを更に提供する。特に好ましい実施形態では、開示されているコンジュゲートはＳＥＺ６決定基と会合する。
【０２０４】
別の実施形態では、標的化剤は、少なくとも１個の不対システイン残基を含む、部位特異的な操作されたＩｇＧ１アイソタイプ抗体を含む。いくつかの実施形態では、この不対システイン残基は、重鎖／重鎖の鎖間残基とは対照的に重鎖／軽鎖の鎖間残基を含む。他の実施形態では、この不対システイン残基は鎖内ジスルフィド架橋から生成される。
【０２０５】
別の実施形態では、標的化剤は、操作された抗体であって、前記部位特異的な操作された抗体を構成する軽鎖のＣ２１４残基（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングされている）が別の残基で置換されているかまたは欠失している、抗体を含む。更なる実施形態では、標的化剤は、操作された抗体であって、この操作された抗体を構成する重鎖のＣ２２０残基（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従ってナンバリングされている）が別の残基で置換されているかまたは欠失している、抗体を含む。
【０２０６】
関連した実施形態では、本発明は、腫瘍細胞もしくは腫瘍原性細胞を死滅させるか、これらの細胞の出現頻度を低下させるか、またはこれらの細胞の増殖を阻害する方法であって、本発明のカリケアマイシンＡＤＣで前記腫瘍細胞または腫瘍原性細胞を処置することを含む方法を対象とする。関連した実施形態では、本発明は、癌を処置する方法であって、本発明のカリケアマイシンコンジュゲートを含む医薬組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。
【０２０７】
別の実施形態では、本発明は、本発明の抗体薬物コンジュゲートを調製する方法であって、
ａ）開裂可能リンカーを含むカリケアマイシン構築物を準備する工程、
ｂ）標的化剤を還元して活性化された残基を生成する工程、および
ｃ）選択的に還元した標的化剤をカリケアマイシン構築物にコンジュゲートさせる工程
を含む方法を含む。
【０２０８】
選択された実施形態では、標的化剤は、１個または複数個の遊離システインを有する部位特異的抗体を含む。他の実施形態では、この部位特異的抗体は選択的に還元される。関連した好ましい実施形態では、抗体を選択的に還元する工程は、この抗体と安定化剤とを接触させる工程を含む。更に別の実施形態では、このプロセスは、この抗体と穏和な還元剤とを接触させる工程を更に含むことができる。
【０２０９】
別の態様では、癌の処置を、それを必要とする対象において行う方法が提供される。この方法は、対象に、特許請求の範囲の医薬組成物または本明細書で開示されている抗体薬物コンジュゲートの治療上有効な量を投与することを含む。実施形態では、癌は、膵癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌および胃癌から選択される。実施形態では、この方法は、追加の化学療法剤を対象に投与することを更に含む。
【０２１０】
一態様では、細胞にカリケアマイシン細胞毒素を送達する方法が提供される。この方法は、細胞と本明細書で開示されている抗体薬物コンジュゲートとを接触させることを含む。
【０２１１】
示されているように、開示されているコンジュゲートを、増殖性障害またはその再発もしくは進行の処置、管理、改善または予防に使用することができる。本発明の選択された実施形態は、そのようなカリケアマイシンコンジュゲートの、腫瘍始原細胞の出現頻度の低下を好ましくは含む、悪性腫瘍の免疫療法的処置のための使用を提供する。開示されているＡＤＣを、単独でまたは多種多様な抗癌化合物（例えば、化学療法剤または免疫療法剤（例えば、治療用抗体）または生物学的応答変更因子）と共に使用することができる。他の選択された実施形態では、２種以上の別々のカリケアマイシンコンジュゲートを併用して抗新生物効果を増強することができる。
【０２１２】
本発明はまた、癌等の増殖性障害の処置に有用である、本明細書で開示されているカリケアマイシンコンジュゲートおよび本明細書で開示されているカリケアマイシンコンジュゲートの医薬組成物を用いるキットまたはデバイスおよび関連する方法も提供する。この目的のために、本発明は、好ましくは、本発明の抗体薬物コンジュゲートを含む容器と、このコンジュゲートを増殖性障害またはその進行もしくは再発の処置、改善または予防に使用するための指示書（ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｌ  ｍａｔｅｒｉａｌ）とを含む、そのような障害の処置に有用な製品を提供する。選択された実施形態では、このデバイスおよび関連する方法は、少なくとも１種の癌幹細胞を接触させる工程を含む。
【０２１３】
上記は概要であり、そのため、必然的に詳細の単純化、一般化および省略を含んでおり、その結果として、この概要は一例にすぎず、決して限定することを意図されていないことを当業者は認識するであろう。本明細書で説明されている方法、組成物および／またはデバイスならびに／または他の主題の他の態様、特徴および利点は、本明細書に記載の教示で明らかになるであろう。この概要は、詳細な説明において下記で更に説明されている単純化された形式で概念の選択を導入するために提示されている。この概要は、特許請求される主題の重要な特徴または本質的な特徴を明らかにすることを意図されておらず、特許請求される主題の範囲の画定での支援として使用されることも意図されていない。
Ｉ  カリケアマイシン
カリケアマイシンは、細菌ミクロモノスポラ・エキノスポラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ  ｅｃｈｉｎｏｓｐｏｒａ）に由来するエンジイン抗腫瘍抗生物質のクラスであり、単離されてキャラクタライズされたカリケアマイシンγ１Ｉ、カリケアマイシンβ１Ｂｒ、カリケアマイシンγ１Ｂｒ、カリケアマイシンα２Ｉ、カリケアマイシンα３Ｉ、カリケアマイシンβ１ｉおよびカリケアマイシンδ１ｉが挙げられる。上記のカリケアマイシン類似体のそれぞれの構造は当技術分野で公知であり（例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれるＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，Ｊｕｌｙ  １９８９を参照されたい）、本明細書で開示されているカリケアマイシン構築物および抗体薬物コンジュゲートに適合する。一般に、カリケアマイシンγ１は２つの異なる構造領域を含み、それぞれがこの化合物の生物学的活性で特定の役割を果たす。これら２つのうちの大きい方は、４個の単糖単位と１個の六置換ベンゼン環とを含む、伸長された糖残基からなり、これらは、非常に珍しい一連のグリコシド結合、チオエステル結合およびヒドロキシルアミン結合を介して互いに接合されている。第２の構造領域アグリコン（カリチアマイシノンとして知られている）は、コンパクトで高度に官能化されている二環式コアを含み、架橋している１０員環内に歪んだエンジイン単位を収納する。このアグリコンサブユニットは、下記で説明するように、細胞毒性型の分子を生成するための活性化剤として機能するアリル基のトリスルフィドを更に含む。
【０２１４】
一例として、トリスルフィドカリケアマイシンγ１Ｉの構造を直下に示す。
【０２１５】
【化２１】
2018515457.tif 000023
【０２１６】
本明細書で使用する場合、用語「カリケアマイシン」は、カリケアマイシンγ１Ｉ、カリケアマイシンβ１Ｂｒ、カリケアマイシンγ１Ｂｒ、カリケアマイシンα２Ｉ、カリケアマイシンα３Ｉ、カリケアマイシンβ１ｉおよびカリケアマイシンδ１のうちのいずれか１つをそれらのＮ−アセチル誘導体、スルフィド類似体および誘導体と一緒に意味するものとする。本明細書で使用する場合、「カリケアマイシンは、天然に見出されるカリケアマイシンおよび別の分子（例えば、抗体薬物コンジュゲート）への付着点を有するジスルフィド中に末端を有するカリケアマイシン部分ならびにそれらの類似体を包含すると理解されるであろう。一例として、本明細書で使用する場合、カリケアマイシンγＩを下記のように解釈すると理解すべきである。
【０２１７】
【化２２】
2018515457.tif 000024
【０２１８】
上述の化合物のうちのいずれかは本明細書の教示に適合し、かつ開示されているカリケアマイシン構築物および抗体薬物コンジュゲートを製造するために使用され得ることが認識されるであろう。特定の実施形態では、開示されている抗体薬物コンジュゲートのカリケアマイシン成分はＮ−アセチルカリケアマイシンγ１Ｉを含む。
【０２１９】
カリケアマイシンは核酸を標的とし、鎖開裂を引き起こしてそれにより標的細胞を死滅させる。より具体的には、カリケアマイシンはＤＮＡの副溝に結合することが分かっており、このカリケアマイシンは、次いでＢｅｒｇｍａｎ環化に類似する反応を受けてジラジカル種を生成する。これに関して、アリール四糖サブユニットは、Ｃｒｏｔｈｅｒｓら（１９９９）により実証されているように、薬物をその標的へと送達するのに役立ち、二重らせんＤＮＡの副溝に強く結合する。求核試薬（例えば、グルタチオン）がトリスルフィド基の中心硫黄原子を攻撃する場合、構造ジオメトリーに大きい変化が起きて１０員のエンジイン環に大きい歪みが加わる。この歪みは、環化芳香族化反応を受けるエンジインにより完全に解放され、高反応性の１，４−ベンゼノイドジラジカルが生成され、最終的にデオキシリボースＤＮＡ骨格から水素原子を引き付けることによりＤＮＡを開裂して鎖開裂が起こる。本発明のカリケアマイシンジスルフィド類似体構築物では、求核試薬は、保護されているジスルフィド結合を開裂して所望のジラジカルを生成することに留意されたい（図１を参照されたい）。
【０２２０】
２０００年に、Ｎ−アセチルジメチルヒドラジドカリケアマイシンを含むＣＤ３３抗原標的型免疫コンジュゲート（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））が開発されており、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に対する標的療法として市販されている。この薬物は、その後、有効性および毒性の問題のために回収された。対照的に、本発明の抗体カリケアマイシンコンジュゲートは、このコンジュゲートが多数の増殖性障害を処置するために効果的に使用され得ることを示唆する有利な治療プロファイルを示す。
ＩＩ  抗体コンジュゲート
好ましい実施形態では、本発明に適合する標的化剤を新規のカリケアマイシン構築物とコンジュゲートさせて「抗体薬物コンジュゲート」（ＡＤＣ）または「抗体コンジュゲート」を形成する。用語「コンジュゲート」は広く使用され、会合の詳細な方法に関係なく、任意の開裂可能なカリケアマイシン部分と本発明に適合する標的化剤（例えば、抗体）との共有結合的なまたは非共有結合的な会合を意味する。特定の好ましい実施形態では、この会合は標的化剤のシステイン残基を介して引き起こされる。特に好ましい実施形態では、カリケアマイシンは、１個または複数個の部位特異的な遊離システインにより開裂可能リンカーを介して抗体にコンジュゲートされ得る。開示されているＡＤＣは、癌の処置等の治療目的に使用され得る。
【０２２１】
本発明のＡＤＣを使用して、標的位置（例えば、ＳＥＺ６を発現する腫瘍原性細胞）に細胞毒素または他のペイロードを送達することができる。本明細書で使用する場合、用語「薬物」または「弾頭」は互換的に使用され得、上記で説明したあらゆるカリケアマイシンまたはカリケアマイシン類似体を意味する。好ましい実施形態では、開示されているＡＤＣは、弾頭の放出および活性化前に、カリケアマイシン弾頭を含む結合ペイロードを比較的非反応性で非毒性な状態で標的部位へと誘導する。この弾頭の標的を定めた放出は、好ましくは、（例えば、抗体上の１個または複数個のシステインによる）ペイロードの安定したコンジュゲーションおよび過剰にコンジュゲートした毒性種を最小限にするＡＤＣ調製物の比較的均一な組成物を介して補助される。ペイロードを含むカリケアマイシンをほとんど放出するように設計されている開裂可能な薬物リンカーに加えて、腫瘍部位に送達されると、本発明の抗体薬物コンジュゲートは、望ましくない非特異的毒性を実質的に低下させることができる。有利には、これは、標的ではない細胞および組織の曝露を最小限に抑えつつ腫瘍部位での比較的高レベルの活性カリケアマイシンを可能にし、それにより治療指数が増強される。
【０２２２】
いずれにしても、カリケアマイシンを含む選択されたペイロードは抗体に共有結合してもよく、または非共有結合してもよく、コンジュゲーションを引き起こすために使用される方法に少なくとも部分的に応じて様々な化学量論的モル比を示す。好ましい実施形態では、本発明のコンジュゲーションは、式：
Ａｂ−［Ｗ−（Ｘ１）ａ−ＣＭ−（Ｘ２）ｂ−Ｐ−Ｄ］ｎ  （式２）
またはその薬学的に許容される塩で表され得、式中、
ａ）Ａｂは標的化剤を含み、
ｂ）Ｗは連結基を含み、
ｃ）ＣＭは開裂可能部分を含み、
ｄ）Ｐはジスルフィド保護基を含み、
ｅ）Ｘ１およびＸ２は任意選択のスペーサー部分を含み、
ｆ）Ｄはカリケアマイシンを含み、
ａおよびｂは、独立して０または１であり、かつｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。
【０２２３】
本開示の目的のために、成分Ｗ−（Ｘ１）ａ−ＣＭ−（Ｘ２）ｂ−Ｐは、概して「リンカー」または「リンカーユニット」と称され得、（例えば、一連の共有結合を介して）カリケアマイシン弾頭を標的化剤へと結合または連結させることが理解されるであろう。まとめると、カリケアマイシンおよびリンカーは、本明細書で説明されているように標的化剤にコンジュゲートされるペイロードを含む。
【０２２４】
特定の実施形態では、リンカーは分枝したリンカーを含むことができる。他の好ましい実施形態では、標的化剤は抗体を含む。特に好ましい実施形態では、直下の式３：
【０２２５】
【化２３】
2018515457.tif 000025
【０２２６】
に記載されているようにＤはＮ−アセチルカリケアマイシンを含み、式中、＊記号は、リンカーの残部に共有結合しており、最終的に標的化剤（Ａｂ）に共有結合するジスルフィド保護基を表す。他の好ましい実施形態およびリンカー成分およびリンカーの立体配置を下記でより詳細に論じる。
【０２２７】
式３に関して、図示した化合物は、リンカーの残部に共有結合しているジスルフィド保護基（＊で表す）に結合しているジスルフィドＮ−アセチルカリケアマイシン類似体を含むことが認識されるであろう。下記の実施例で示すように、ジスルフィド保護基は血流中でのジスルフィド結合の安定性を改善し、開示されているカリケアマイシン−リンカー構築物の効率的な合成を可能にする。標的（例えば、癌細胞）に到達すると、開裂可能部分（ＣＭ）が開裂されて、ジスルフィド保護基を介してリンカーの一部（例えば、Ｘ２−図２を参照されたい）に付着しているカリケアマイシンが放出される。リンカーがＣＭで最初に開裂されると、カリケアマイシンに付着しているリンカーの残部が、ジスルフィド結合が（好ましくは細胞内で）開裂され、その後に活性ビラジカルカリケアマイシン種が再構成および形成される程度まで生理化学的条件下で分解される。細胞ＤＮＡの副溝に結合し、かつ所望の細胞毒性効果を誘導するのは、この形態のカリケアマイシン弾頭である（参照により全体が本明細書に組み込まれるＷａｌｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８９：４６０８−４６１２，５／９２を参照されたい）。図１は、説明のために個々の成分が描写されている本発明のジペプチドカリケアマイシン−リンカー構築物を示す注釈付き化学構造を示す。
【０２２８】
いずれにしても、上述の式２に従うコンジュゲートを、多くの異なる開裂可能リンカーを使用して製造することができ、このコンジュゲーション方法論は成分の選択に応じて変化する。従って、カリケアマイシンおよび開示されている標的化剤の反応性残基（例えば、システイン）と会合する式２のあらゆる開裂可能リンカー化合物は本明細書の教示に適合する。同様に、選択されたカリケアマイシン−リンカーの抗体へのコンジュゲーション（例えば、部位特異的コンジュゲーション）を可能にするあらゆる反応条件は本発明の範囲内である。上述に関わらず、本発明の特に好ましい実施形態は、本明細書で説明されている穏和な還元剤と組み合わせて安定化剤を使用するカリケアマイシン−リンカーの遊離システインへの選択的なコンジュゲーションを含む。そのような反応条件により、非特異的コンジュゲーションおよび夾雑物がより少ないならびにそれに応じて毒性がより低い、より均一な調製物が生成される傾向がある。
ＩＩＩ  決定基
最初に、本発明のカリケアマイシン構築物および対応する抗体薬物コンジュゲートは、任意の特定の標的または抗原に限定されないことに留意することが重要である。むしろ、任意の標的化剤（例えば、任意の既存の抗体、または本明細書で説明されているように生成され得る任意の抗体）が新規のカリケアマイシン−リンカー構築物にコンジュゲートされ得ることから、本発明により付与される利点は広く適用可能であり、任意の標的抗原（または決定基）と共に使用され得る。より具体的には、新規のカリケアマイシン−リンカー構築物の使用により付与される有益な特性（例えば、潜在的な部位特異的コンジュゲーション、コンジュゲート安定性の増強および非特異的毒性の低下）は、特定の標的に関わりなく治療用抗体に広く適用可能である。そのため、本発明の利点の説明および実証を目的として、選択された決定基を対象とする特定の非限定的な標的化剤を使用しているが、それらは本発明の範囲に関して決して限定的ではない。
【０２２９】
従って、本発明の抗体薬物コンジュゲートは、任意の選択された決定基を特異的に認識するか、またはこの決定基と特異的に会合する任意の標的化剤（例えば、抗体）を組み込み得ることを当業者は認識するであろう。本明細書で使用する場合、「決定基」は、特定の細胞、細胞集団または組織と識別可能に会合するか、またはその中もしくは表面上で特異的に見出される、あらゆる検出可能な形質、特性、マーカーまたは因子を意味する。決定基はその性質が形態的であってもよく、機能的であってもよく、または生化学的であってもよく、概して表現型である。特定の好ましい実施形態では、決定基は、その物理的構造および／もしくは化学的組成に関して差次的に改変されているタンパク質、または特定の細胞型によりまたは特定の条件（例えば、細胞周期の特定の点間もしくは特定のニッチにおける細胞）下で細胞により差次的に発現される（上方制御または下方制御される）タンパク質である。本発明の目的のために、決定基は、化学的改変、提示の形態（例えば、スプライス多様体）、タイミングまたは量により証明されるように異常細胞により差次的に発現される細胞表面の抗原またはタンパク質を好ましくは含む。特定の実施形態では、決定基は、ＳＥＺ６タンパク質またはその多様体、アイソフォームまたはファミリメンバーのいずれかおよびそれらの特定のドメイン、領域またはエピトープを含むことができる。「免疫原性決定基」または「抗原決定基」または「免疫原」または「抗原」は、免疫応答性動物に導入された場合に免疫応答を刺激することができ、かつこの免疫応答から産生された抗体により認識されるポリペプチドの任意の断片、領域またはドメインを意味する。本明細書で企図されている決定基は、この決定基の存在（肯定的な決定基）または非存在（否定的な決定基）により、細胞、細胞亜集団または組織（例えば、腫瘍）を同定することができる。
【０２３０】
特に好ましい実施形態では、開示されている抗体薬物コンジュゲートは、ＳＥＺ６を対象とする抗体を含む。ＳＥＺ６（発作関連６ホモログとしても知られている）は、痙攣薬ペンチレンテトラゾール（ｐｅｎｔｙｌｅｎｔｅｔｒａｚｏｌｅ）で処置したマウス大脳皮質由来細胞から初めてクローニングされたＩ型膜貫通タンパク質である（Ｓｈｉｍｉｚｕ−Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，１９９５，ＰＭＩＤ：７７２３６１９）。ＳＥＺ６は２種のアイソフォームを有し、１種は９９４個のアミノ酸のタンパク質（ＮＰ＿８４９１９１）をコードする約４２１０個の塩基（ＮＭ＿１７８８６０）であり、１種は９９３個のアミノ酸のタンパク質（ＮＰ＿００１０９２１０５）をコードする約４１９４個の塩基（ＮＭ＿００１０９８６３５）である。これらのアイソフォームは、それらのＥＣＤで最後の１０個のアミノ酸残基のみが異なる。ＳＥＺ６は２種の他のファミリメンバー：ＳＥＺ６ＬおよびＳＥＺ６Ｌ２を有する。用語「ＳＥＺ６ファミリ」は、ＳＥＺ６、ＳＥＺ６Ｌ、ＳＥＺ６Ｌ２およびこれらの様々なアイソフォームを意味する。成熟ＳＥＺ６タンパク質は、一連の構造ドメイン（細胞質ドメイン、膜貫通ドメイン、および固有のＮ末端ドメインを含む細胞外ドメイン）と、続いて２個の交互のＳｕｓｈｉドメインおよびＣＵＢ様ドメインならびに３個の追加の直列Ｓｕｓｈｉドメイン反復とで構成されている。ヒトＳＥＺ６遺伝子での変異は、熱性発作、体温上昇に関連する痙攣、および小児期での最も一般的なタイプの発作に関連付けられている（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，ＰＭＩＤ：１７０８６５４３）。相同性および配列解析により同定されるＳＥＺ６タンパク質の構造モジュールの再検討により、シグナル伝達、細胞間連絡および神経発生での可能な役割が示唆される。本発明に適合する抗ＳＥＺ６ヒト化抗体を、ＳＥＺ６抗原で免疫化したマウスから単離した抗体から、全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０３１５４１号パンフレットで説明されているように生成した。
ＩＶ  標的化剤
Ａ．薬剤構造
上記で示唆したように、本発明の特に好ましい実施形態は、好ましくは選択された決定基上の１個または複数個のエピトープに優先的に会合する抗体またはその免疫反応性断片の形態の標的化剤を有する開示されているコンジュゲートを含む。抗体ならびにその多様体および誘導体（一般に認められている命名法およびナンバリングシステムを含む）は、例えばＡｂｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０），Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（６ｔｈ  Ｅｄ．），Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ＣｏｍｐａｎｙまたはＭｕｒｐｈｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１），Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（８ｔｈ  Ｅｄ．），Ｇａｒｌａｎｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅで広く説明されている。
【０２３１】
本明細書で使用する場合、「抗体」または「インタクトな抗体」は、概して、共有結合性のジスルフィド結合および非共有結合性の相互作用により一体に保持されている２本の重（Ｈ）ポリペプチド鎖および２本の軽（Ｌ）ポリペプチド鎖を含む、Ｙ字形の四量体タンパク質を意味する。各軽鎖は１個の可変ドメイン（ＶＬ）および１個の定常ドメイン（ＣＬ）で構成されている。各重鎖は１個の可変ドメイン（ＶＨ）を含み、定常領域は、ＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体およびＩｇＤ抗体の場合、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３と命名されている３種のドメインを含む（ＩｇＭおよびＩｇＥは４番目のドメインＣＨ４を有する）。ＩｇＧクラス、ＩｇＡクラスおよびＩｇＤクラスでは、ＣＨ１ドメインおよびＣＨ２ドメインは可撓性のヒンジ領域で隔てられており、このヒンジ領域は、プロリンおよびシステインに富む可変長（様々なＩｇＧサブクラスでは約１０〜約６０個のアミノ酸）のセグメントである。軽鎖および重鎖の両方における可変ドメインは、約１２個以上のアミノ酸からなる「Ｊ」領域により定常ドメインに接合されており、重鎖はまた、約１０個の更なるアミノ酸からなる「Ｄ」領域も有する。各クラスの抗体は、対をなすシステイン残基により形成される鎖間のおよび鎖内のジスルフィド結合を更に含む。
【０２３２】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、マルチクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体および霊長類化抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト抗体、組換えにより製造された抗体、細胞内抗体、多重特異的抗体、二重特異的抗体、一価抗体、多価抗体、抗イディオタイプ抗体、合成抗体、例えばムテインおよびその多様体、免疫特異的抗体断片、例えばＦｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖断片（例えば、ＳｃＦｖおよびＳｃＦｖＦｃ）、ならびにそれらの誘導体、例えばＦｃ融合および他の改変、ならびに任意の他の免疫反応性分子を含み、但し、この免疫反応性分子は決定基との優先的な会合または結合を示す。更に、文脈上の制約により別途指示されない限り、この用語は、抗体の全てのクラス（即ち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ）ならびに全てのサブクラス（即ち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩＧｇＡ２）を更に含む。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、概して、それぞれ対応する小文字のギリシャ文字α、δ、ε、γおよびμで示される。同様に、任意の脊椎動物種由来の抗体の軽鎖を、この軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２種の明らかに異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。両方の軽鎖が本明細書の教示に適合し、開示されている抗体薬物コンジュゲートの製造に使用され得る。
【０２３３】
抗体の可変ドメインは抗体毎にアミノ酸組成の大幅な変化を示し、抗原の認識および結合に主に関与する。各軽／重鎖対の可変領域は、インタクトなＩｇＧ抗体が２つの結合部位を有する（即ち、このＩｇＧ抗体は二価である）ように抗体結合部位を形成する。ＶＨドメインおよびＶＬドメインは極端な可変性の３つの領域を含み、これらの領域は超可変領域と命名され、またはより一般的には相補性決定領域（ＣＤＲ）と命名され、フレームワーク領域（ＦＲ）として既知である４つのより低い可変性の領域で囲まれていており、かつ隔てられている。ＶＨ領域とＶＬ領域との間の非共有結合的な会合により、抗体の２つの抗原結合部位のうちの１つを含むＦｖ断片（「断片可変」を表す）が形成される。遺伝子操作により得られ得るＳｃＦｖ断片（一本鎖断片可変を表す）は、単一のポリペプチド鎖中で、ペプチドリンカーで隔てられている抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域を会合させる。
【０２３４】
本明細書で使用する場合、各ドメイン、フレームワーク領域およびＣＤＲへのアミノ酸の割り当ては、別途言及しない限り、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（５ｔｈＥｄ．），ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，ＰＭＩＤ：３６８１９８１、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，ＰＭＩＤ：２６８７６９８、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，ＰＭＩＤ：８８７６６５０またはＤｕｂｅｌ，Ｅｄ．（２００７）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，３ｒｄＥｄ．，Ｗｉｌｙ−ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇ  ＧｍｂＨ  ａｎｄ  Ｃｏ  ｏｒ  ＡｂＭ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ／ＭＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｉａ）により提供されるナンバリングスキームのうちの１つに従うことができる。Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｃｏｎｔａｃｔとしても知られている）により定義されるＣＤＲならびにＡｂｙｓｉｓウェブサイトのデータベース（後掲）から得られるＡｂＭを含むアミノ酸残基を下記に示す。
【０２３５】
【表１】
2018515457.tif 000026
【０２３６】
抗体配列中の可変領域およびＣＤＲを、（上記に記載したように、例えばＫａｂａｔナンバリングシステム等の）当技術分野で開発されている一般的な規則に従って、またはこの配列を既知の可変領域のデータベースに対してアラインすることにより、同定することができる。これらの領域を同定する方法は、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，２００１およびＤｉｎａｒｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ，２０００で説明されている。抗体配列の例示的なデータベースは、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓでの「Ａｂｙｓｉｓ」ウェブサイト（Ａ．Ｃ．Ｍａｒｔｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｌｏｎｄｏｎ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄにより維持されている）およびｗｗｗ．ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇでのＶＢＡＳＥ２ウェブサイト（Ｒｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，３３（Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ）：Ｄ６７１−Ｄ６７４（２００５）で説明されている）で説明されており、かつこれらのウェブサイトを介してアクセスすることができる。好ましくは、Ａｂｙｓｉｓデータベースを使用して配列を分析し、このＡｂｙｓｉｓデータベースは、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴおよびＰｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）からの配列データとＰＤＢからの構造データとを統合している。Ｄｒ．Ａｎｄｒｅｗ  Ｃ．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎの書籍の章Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅｄ．：Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．ａｎｄ  Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，ＩＳＢＮ−１３：９７８−３５４０４１３５４７、ウェブサイトｂｉｏｉｎｆｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓでも入手可能）を参照されたい。Ａｂｙｓｉｓデータベースウェブサイトは、本明細書の教示に従って使用され得るＣＤＲを同定するために開発されている一般的な規則を更に含む。別途示さない限り、本明細書に記載の全てのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ等によるＡｂｙｓｉｓデータベースウェブサイトに従って得られる。
【０２３７】
本発明で論じる重鎖定常領域のアミノ酸位置に関して、ナンバリングは、配列決定された最初のヒトＩｇＧ１であることが報告された骨髄腫タンパク質Ｅｕのアミノ酸配列を説明するＥｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ６３（１）：７８−８５で初めて説明されているＥｕインデックスに従う。ＥｄｅｌｍａｎのＥＵインデックスはまた、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１（上掲）にも記載されている。そのため、重鎖に関連して、用語「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス」または「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」または「ＥＵインデックス」は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１（上掲）に記載されているようにＥｄｅｌｍａｎらのヒトＩｇＧ１  Ｅｕ抗体に基づく残基のナンバリングシステムを意味する。軽鎖定常領域のアミノ酸配列に使用するナンバリングシステムも同様にＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（上掲）に記載されている。本発明に適合する例示的なカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を直下に記載する（下記で論じるように遊離システインを含んでもよいＣ２１４位に下線を引いている）。
【０２３８】
【化２４】
2018515457.tif 000027
【０２３９】
同様に、本発明に適合する例示的なＩｇＧ１重鎖定常領域のアミノ酸配列を直下に記載する（下記で論じるように遊離システインを含んでもよいＣ２２０位に下線を引いている）。
【０２４０】
【化２５】
2018515457.tif 000028
【０２４１】
標準的な分子生物学的技術を使用して、開示されている定常領域配列またはその多様体もしくは誘導体を、開示されている重鎖および軽鎖の可変領域と作動可能に会合させて、本発明のＡＤＣに組み込まれ得る完全長抗体を生成することができる。
【０２４２】
免疫グロブリン分子中には２個のジスルフィド架橋またはジスルフィド結合（即ち、鎖間ジスルフィド結合および鎖内ジスルフィド結合）が存在することを当業者は認識するであろう。公知であるように、鎖間ジスルフィド結合の位置および数は、免疫グロブリンのクラスおよび種類に従って変動する。本発明は任意の特定のクラスまたはサブクラスの抗体に限定されないが、例示を目的として本開示全体を通してＩｇＧ１免疫グロブリンを概して使用する。野生型ＩｇＧ１分子中には、１２個の鎖内ジスルフィド結合（各重鎖上に４個および各軽鎖上に２個）と、４個の鎖間ジスルフィド結合とが存在する。鎖内ジスルフィド結合は概して多少保護されており、鎖間結合と比べて比較的還元され難い。逆に、鎖間ジスルフィド結合は免疫グロブリンの表面上に位置しており、溶媒に接触可能であり、かつ通常は比較的還元され易い。２個の鎖間ジスルフィド結合は重鎖間に存在し、更に各重鎖からこれらの重鎖のそれぞれの軽鎖へのジスルフィド結合が存在する。鎖間ジスルフィド結合は重鎖および軽鎖の会合に必須ではないことが実証されている。ＩｇＧ１ヒンジ領域は、重鎖中に、鎖間ジスルフィド結合を形成するシステインを含み、このシステインは、Ｆａｂの動きを容易にする柔軟性と共に構造的な支持を提供する。重／重ＩｇＧ１鎖間ジスルフィド結合は残基Ｃ２２６およびＣ２２９（Ｅｕナンバリング）に位置しており、ＩｇＧ１の軽鎖および重鎖（重／軽）間のＩｇＧ１鎖間ジスルフィド結合は、カッパまたはラムダの軽鎖のＣ２１４と重鎖の上流ヒンジ領域中のＣ２２０との間に形成される。
Ｂ．抗体の生成および製造
本発明の抗体を、当技術分野で抗体の様々な方法を使用して製造することができる。
１．宿主動物中でのポリクローナル抗体の生成
様々な宿主細胞中でのポリクローナル抗体の製造は当技術分野で公知である（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（Ｅｄｓ．）（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ  ＰｒｅｓｓおよびＨａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＮＹ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。ポリクローナル抗体を生成するために、免疫応答性動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、非ヒト霊長類等）を、抗原性タンパク質または抗原性タンパク質を含む細胞もしくは調製物で免疫化する。一定期間後、この動物を出血させるかまたは屠殺することにより、ポリクローナル抗体を含む血清を得る。この血清をこの動物から得た形態で使用してもよく、または抗体を部分的にまたは完全に精製して免疫グロブリン画分または単離された抗体調製物を得てもよい。
【０２４３】
任意の形態の抗原またはこの抗原を含む細胞もしくは調製物を使用して、決定基に特異的である抗体を生成することができる。用語「抗原」は広義で使用され、任意の免疫原性断片または選択された標的の決定基、例えば単一のエピトープ、複数のエピトープ、単一もしくは複数のドメイン、または全細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むことができる。抗原は、単離された完全長タンパク質であってもよく、または細胞表面タンパク質（例えば、表面上で抗原の少なくとも一部を発現している細胞で免疫化する）であってもよく、または可溶性タンパク質（例えば、タンパク質のＥＣＤ部分のみで免疫化する）であってもよい。抗原を、遺伝的に改変された細胞中で産生することができる。上述の抗原のうちのいずれかを単独で使用してもよく、または当技術分野で既知である１種または複数種の免疫原性増強アジュバントと併用してもよい。抗原をコードするＤＮＡはゲノムであってもよく、または非ゲノム（例えば、ｃＤＮＡ）であってもよく、かつ免疫原性応答を誘発するのに十分なＥＣＤの少なくとも一部をコードしてもよい。任意のベクターを用いて、抗原が発現される細胞を形質転換させることができ、このベクターとして、アデノウイルスベクター、レンチウイルルベクター、プラスミド、および非ウイルスベクター、例えばカチオン性脂質が挙げられるがこれらに限定されない。
２．モノクローナル抗体
選択された実施形態では、本発明はモノクローナル抗体の使用を企図する。用語「モノクローナル抗体」または「ｍＡｂ」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体（即ち、小量で存在し得る、起こり得る変異（例えば、天然に起こる変異）を除いて同一である集団を構成する個々の抗体）を意味する。
【０２４４】
モノクローナル抗体を、多種多様な技術（例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術、ファージディスプレイ技術、トランスジェニック動物（例えば、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標））またはそれらのうちのいくつかの組み合わせ）を使用して調製することができる。例えば、好ましい実施形態では、モノクローナル抗体を、ハイブリドーマ技術および生化学技術および遺伝子操作技術を使用して製造することができ、これらの技術は例えば下記でより詳細に説明されている：Ａｎ，Ｚｈｉｇｉａｎｇ（ｅｄ．）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１ｓｔｅｄ．２００９、Ｓｈｉｒｅ  ｅｔ．  ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ  ＬＬＣ，１ｓｔｅｄ．２０１０、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）。決定基に特異的に結合する多くのモノクローナル抗体の生成後、例えば決定基に対する親和性または内在化速度に基づく様々なスクリーニングプロセスにより、特に適切な抗体を選択することができる。特定の好ましい実施形態では、本明細書で説明されているように製造されたモノクローナル抗体を「起源（ｓｏｕｒｃｅ）」抗体として使用することができ、かつ例えば標的に対する親和性を改善する、細胞培養でのこのモノクローナル抗体の産生を改善する、ｉｎ  ｖｉｖｏでの免疫原性を低下させる、多重特異的構築物を生成する等のために更に改変することができる。
３．ヒト抗体
抗体は完全ヒト抗体を含むことができる。用語「ヒト抗体」は、ヒトにより産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、および／または下記で説明するヒト抗体を製作するための技術のうちのいずれかを使用して製作されている抗体（好ましくはモノクローナル抗体）を意味する。
【０２４５】
一実施形態では、ファージディスプレイを使用して調製された組換えコンビナトリアル抗体ライブラリをスクリーニングすることにより、組換えヒト抗体を単離することができる。一実施形態では、このライブラリはｓｃＦｖファージディスプレイライブラリまたは酵母ディスプレイライブラリであり、Ｂ細胞から単離されたｍＲＮＡから調製されたヒトＶＬおよびＶＨのｃＤＮＡを使用して生成されている。
【０２４６】
ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物（例えば、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的にまたは完全に不活性化されており、かつヒト免疫グロブリンが導入されているマウス）に導入することにより、ヒト抗体を製作することもできる。抗原曝露時に抗体生成が観察され、これは、遺伝子再構成、アセンブリおよび完全ヒト抗体レパートリー等のあらゆる点において、ヒトで見られるものと密接に類似している。このアプローチは、例えば米国特許第５，５４５，８０７号明細書、米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，５６９，８２５号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，６３３，４２５号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、ならびにＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号明細書および米国特許第６，１５０，５８４号明細書、ならびにＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，１９９５，ＰＭＩＤ：７４９４１０９）で説明されている。あるいは、ヒト抗体を、標的抗原を対象とする抗体を産生するヒトＢリンパ球の不死化により調製してもよい（そのようなＢリンパ球を、新生物性障害を罹患している個体から回収してもよく、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化していてもよい）。例えば、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＰＭＩＤ：２０５１０３０および米国特許第５，７５０，３７３号明細書を参照されたい。他のモノクローナル抗体と同様に、そのようなヒト抗体を起源抗体として使用することができる。
４．派生抗体（ｄｅｒｉｖｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）：
上記で説明したように起源抗体を生成し、選択し、および単離すると、この起源抗体を更に変更して、薬学的特徴が改善されている、本発明に適合する抗体を生成することができる。好ましくは、この起源抗体を、既知の分子操作技術を使用して改変または変更して、所望の治療上の特性を有する派生抗体を生成する。
４．１  キメラ抗体およびヒト化抗体
本発明の選択された実施形態は、選択された決定基（例えば、ＳＥＺ６）に免疫特異的に結合し、かつ本開示の目的のために「起源」抗体と見なされ得るマウスモノクローナル抗体を含む。選択された実施形態では、この起源抗体の定常領域および／または抗原が結合するアミノ酸配列の任意選択的な改変により、そのような起源抗体から本発明に適合する抗体を派生させることができる。特定の実施形態では、起源抗体中の選択されたアミノ酸が、欠失、変異、置換、組み込みまたは組み合わせにより変更されている場合、この起源抗体から抗体が派生される。別の実施形態では、「派生」抗体は、派生的抗体（例えば、キメラ抗体またはヒト化抗体）を生成するために起源抗体の断片（例えば、１個もしくは複数個のＣＤＲまたは全重鎖可変領域および全軽鎖可変領域）がアクセプター抗体配列と組み合わされているか、またはこのアクセプター抗体配列に組み込まれている抗体である。この派生抗体を、下記で説明する標準的な分子生物学的技術を使用して生成して、例えば、決定基に対する親和性を改善することができるか、抗体安定性を改善することができるか、細胞培養での産生および収率を改善することができるか、ｉｎ  ｖｉｖｏでの免疫原性を低下させることができるか、毒性を低下させることができるか、活性部分のコンジュゲーションを促進することができるか、または多重特異的抗体を作成することができる。そのような抗体を、化学的手段または翻訳後改変による成熟分子の改変（例えば、グリコシル化パターンまたはペグ化）によって起源抗体から派生させることができる。
【０２４７】
一実施形態では、本発明のキメラ抗体は、共有結合的に接合されている少なくとも２つの異なる種類またはクラスの抗体に由来するタンパク質セグメントから派生されるキメラ抗体を含む。用語「キメラ」抗体は、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来するか、または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるが、この鎖の残部が別の種に由来するか、または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同である構築物、ならびにそのような抗体の断片を対象とする（米国特許第４，８１６，５６７号明細書、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，ＰＭＩＤ：６４３６８２２）。いくつかの好ましい実施形態では、本発明のキメラ抗体は、ヒトの軽鎖定常領域および重鎖定常領域に作動可能に結合している選択されたマウスの重鎖可変領域および軽鎖可変領域の全てまたはほとんどを含むことができる。他の特定の好ましい実施形態では、本発明に適合する抗体は、本明細書で開示されているマウス抗体から「派生」することができる。
【０２４８】
他の実施形態では、本発明のキメラ抗体は「ＣＤＲ移植」抗体であり、ＣＤＲ（Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＭｃＣａｌｌｕｍ等を使用して定義される）は特定の種に由来するか、または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属するが、この抗体の残部は別の種の抗体に由来するか、または別の特定のクラスもしくはサブクラスに属する。ヒトで使用するために、１個または複数個の選択された齧歯類のＣＤＲ（例えば、マウスのＣＤＲ）をヒトアクセプター抗体に移植することができ、ヒト抗体の天然に存在するＣＤＲのうちの１つまたは複数が置き換えられる。この構築物は、概して、対象による抗体に対する望ましくない免疫応答を低減しつつ、全力のヒト抗体機能（例えば、補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）および抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ））を付与するという利点を有する。特定の好ましい実施形態では、ＣＤＲ移植抗体は、ヒトフレームワーク配列中で組み込まれた、マウスから得られた１個または複数個のＣＤＲを含む。
【０２４９】
このＣＤＲ移植抗体に類似しているのは「ヒト化」抗体である。本明細書で使用する場合、「ヒト化」抗体とは、１種または複数種の非ヒト抗体（ドナー抗体または起源抗体）に由来する１種または複数種のアミノ酸配列（例えば、ＣＤＲ配列）を含むヒト抗体（アクセプター抗体）である。特定の実施形態では、ヒト化抗体に「復帰変異」を導入することができ、この復帰変異では、レシピエントヒト抗体の可変領域の１個または複数個のＦＲにおける残基が、非ヒト種のドナー抗体由来の対応する残基により置き換えられている。そのような復帰変異は、移植されたＣＤＲの適切な三次元立体配置の維持を促進し、それにより親和性および抗体安定性を改善することができる。様々なドナー種由来の抗体を使用することができ、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類が挙げられるがこれらに限定されない。更に、ヒト化抗体は、例えば抗体の性能を更に洗練させるために、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない新たな残基を含むことができる。従って、本発明に適合し、かつ下記の実施例に記載の起源マウス抗体を含むＣＤＲ移植抗体およびヒト化抗体を、本明細書に記載の先行技術の技術を使用して、過度に実験することなく容易に生成することができる。
【０２５０】
当技術分野で認識されている様々な技術を更に使用して、いずれのヒト配列をアクセプター抗体として使用するかを決定し、本発明に従ってヒト化構築物を生成することができる。適合するヒト生殖細胞系配列の編集およびこの配列のアクセプター配列としての適合性を決定する方法は、例えばＴｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８、Ｃｏｏｋ，Ｇ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １６：２３７−２４２、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７およびＴｏｍｌｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＥＭＢＯ  Ｊ  １４：４６２８−４６３８で開示されており、これらはそれぞれ全体が本明細書に組み込まれる。ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的なディレクトリ（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫによりコンパイルされている）を提供するＶ−ＢＡＳＥディレクトリ（ＶＢＡＳＥ２−Ｒｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．３３；６７１−６７４，２００５）を使用して、適合するアクセプター配列を同定することができる。更に、例えば米国特許第６，３００，０６４号明細書で説明されているコンセンサスヒトフレームワーク配列が適合するアクセプター配列であることも判明し得、かつ本教示に従って使用され得る。一般に、ヒトフレームワークアクセプター配列は、起源抗体およびアクセプター抗体のＣＤＲの古典的構造の分析と共に、マウス起源のフレームワーク配列との相同性に基づいて選択される。次いで、派生抗体の重鎖および軽鎖の可変領域の派生配列を、当技術分野で認識されている技術を使用して合成することができる。
【０２５１】
一例として、ＣＤＲ移植抗体およびヒト化抗体ならびに関連する方法が米国特許第６，１８０，３７０号明細書および米国特許第５，６９３，７６２号明細書で説明されている。更なる詳細に関しては、例えばＪｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＰＭＩＤ：３７１３８３１）ならびに米国特許第６，９８２，３２１号明細書および米国特許第７，０８７，４０９号明細書を参照されたい。
【０２５２】
ヒトアクセプター可変領域に対するＣＤＲ移植抗体またはヒト化抗体の可変領域の配列の同一性および相同性は本明細書で論じたように決定され得、そのように測定した場合、好ましくは少なくとも６０％または６５％の配列同一性を共有し、より好ましくは少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％または９０％の配列同一性を共有し、更により好ましくは少なくとも９３％、９５％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。好ましくは、同一ではない残基位置は保存的アミノ酸置換により異なる。「保存的アミノ酸置換」とは、あるアミノ酸残基が、化学的特性（例えば、電荷または疎水性）が類似する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換される置換である。一般に、保存的アミノ酸置換はタンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２種以上のアミノ酸配列が保存的置換により互いに異なる場合、配列同一性パーセントまたは類似度を上方に調整して、この置換の保存的性質を補正することができる。
４．２  部位特異的抗体
本発明の抗体を操作して、カリケアマイシン−リンカー構築物へのコンジュゲーションを促進することができる。抗体薬物コンジュゲート調製物にとっては、抗体上の細胞毒素の位置および薬物対抗体比（ＤＡＲ）の観点からＡＤＣ分子の均一な集団を含むことが有利である。本開示に基づけば、当業者は、部位特異的に操作された構築物を容易に製造することができ、かつこの構築物を本明細書に記載されているカリケアマイシン−リンカー構築物に選択的にコンジュゲートさせることができるであろう。本出願で使用する場合、「部位特異的抗体」または「部位特異的構築物」は、重鎖または軽鎖のいずれかの少なくとも１個のアミノ酸が欠失していて、変更されていてまたは（好ましくは別のアミノ酸で）置換されていて少なくとも１個の遊離システインが生成されている抗体またはその免疫反応性断片を意味する。同様に、「部位特異的コンジュゲート」は、部位特異的抗体と、不対システインにコンジュゲートされている少なくとも１個のカリケアマイシンとを含むＡＤＣを意味するものとする。特定の実施形態では、不対システイン残基は不対の鎖内残基を含む。他の好ましい実施形態では、遊離システイン残基は不対の鎖間システイン残基を含む。他の更に好ましい実施形態では、下記でより詳細に論じるように、不対のまたは遊離のシステインは、選択された抗体中にまたはその免疫反応性断片中に存在する任意の残基部位へと操作され得る（即ち、そのような部位は、天然に存在する天然ジスルフィド結合の破壊を必要としない）。操作された抗体は様々なアイソタイプであることができ、例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡまたはＩｇＤであることができ、これらのクラス内では抗体は様々なサブクラスであることができ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４であることができる。ＩｇＧ構築物の場合、抗体の軽鎖は、それぞれＣ２１４を組み込むカッパアイソタイプまたはラムダアイソタイプを含むことができ、好ましい実施形態では、このＣ２１４は、ＩｇＧ１重鎖中のＣ２２０残基の欠失により不対であることができる。
【０２５３】
予め選択された部位で遊離システインを導入するか天然ジスルフィド結合を破壊するかに関わらず、本明細書に記載されている抗体の操作により、薬物対抗体比（「ＤＡＲ」）が実質的に均一な調製物が生成される正確さでＤＡＲがほとんど固定されることを可能にするカリケアマイシンの制御された化学量論的コンジュゲーションが可能になる。更に、開示されている部位特異的構築物により、抗体上のペイロードの位置に関して実質的に均一である調製物が更に可能になる。本明細書で説明されている安定化剤を使用する、操作された構築物の選択的なコンジュゲーションは、所望のＤＡＲ種の割合を増加させ、作られた不対のまたは遊離のシステイン部位と共に、カリケアマイシンの偶発性の浸出に起因する非特異的毒性を低下させるコンジュゲートの安定性および均一性を付与する。遊離システインの選択的なコンジュゲーションと調製物の（コンジュゲーション位置およびＤＡＲの両方における）相対的な均一性とによりもたらされる毒性の低下により、腫瘍部位でのカリケアマイシンペイロードレベルの増加を可能にする治療指数の増強ももたらされる。更に、結果として得られる部位特異的コンジュゲートを、様々なクロマトグラフィー方法論を使用して任意選択的に精製し、７５％、８０％、８５％、９０％または更に９５％を超えて所望のＤＡＲ種（例えば、ＤＡＲ＝２）を含む高度に均一な部位特異的コンジュゲート調製物を生成することができる。そのようなコンジュゲート均一性は、毒性を増加させるおそれがある、望まれていないより高いＤＡＲコンジュゲート不純物（比較的不安定な場合がある）を制限することにより、開示されている調製物の治療指数を更に増加させることができる。
【０２５４】
開示されている操作されたコンジュゲート調製物により示される好ましい特性は、コンジュゲーションを特異的に方向付ける能力ならびに作られたコンジュゲートをカリケアマイシンの位置および絶対ＤＡＲに関して大きく制限する能力に少なくとも部分的に基づいていることが認識されるであろう。従来のほとんどのＡＤＣ調製物と異なり、本発明の好ましい実施形態は、ランダムなコンジュゲーション部位が生成され、および生成されるＤＡＲ種が比較的制御されていない抗体の部分的なまたは完全な還元には全く依存しない。むしろ、本発明の選択された実施形態では、天然に存在する（即ち、「天然の」）鎖間のもしくは鎖内のジスルフィド架橋のうちの１つまたは複数を破壊するようにまたは任意の位置でシステイン残基を導入するように標的化抗体を操作することにより、１個または複数個の所定の不対（または遊離）システイン部位が生成される。後者の場合、選択された実施形態において、システイン残基を、標準的な分子操作技術を使用して抗体（またはその免疫反応性断片）の重鎖または軽鎖に沿っていずれの箇所にでも組み込むことができるか、またはそれらに付加し得ることが認識されるであろう。他の更に好ましい実施形態では、天然ジスルフィド結合の破壊を非天然システインの導入と組み合わせて実施して、後にコンジュゲーション部位として使用され得る複数の遊離システインを生成することができる。
【０２５５】
（天然ジスルフィド結合の破壊とは対照的に）遊離システインを生成するためのシステイン残基の導入または付加に関して、当業者は、抗体上のまたは抗体断片上の適合する位置を容易に識別することができる。従って、選択された実施形態では、所望のＤＡＲ、抗体構築物、選択されたカリケアマイシン−リンカーおよび抗体標的に応じて、システインをＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインもしくはＣＨ３ドメインまたはそれらの任意の組み合わせに導入することができる。他の好ましい実施形態では、システインをカッパまたはラムダのＣＬドメインに導入することができ、特に好ましい実施形態ではＣＬドメインのｃ末端領域に導入することができる。各場合において、分子安定性、コンジュゲーション効率を促進するために、またはカリケアマイシンペイロードが付着すると、このカリケアマイシンペイロードの保護環境を形成するために、システイン挿入部位に近位の他のアミノ酸残基を変更してもよく、除去してもよく、または置換してもよい。特定の実施形態では、置換残基は抗体の任意の利用可能な部位で生じる。そのような表面残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は抗体上の容易に利用可能な部位に位置しており、本明細書で更に説明するように選択的に還元され得る。
【０２５６】
本明細書で使用する場合、用語「遊離システイン」または「不対システイン」は、文脈により別途規定しない限り互換的に使用され得、同一の抗体上の別のシステインとは天然ジスルフィド架橋を形成しない抗体の任意のシステイン成分（天然に存在するかまたは分子操作技術を使用して選択された残基位置で特異的に組み込まれている）を意味するものとする。そのため、特定の好ましい実施形態では、遊離システインは天然に存在するシステインを含むことができ、この天然に存在するシステインの天然の鎖間のまたは鎖内のジスルフィド架橋パートナーは置換されており、消失しており、または他の方法で変更されており、天然に存在するジスルフィド架橋が生理学的条件下で破壊され、それにより不対システインが部位特異的コンジュゲーションに適したものになる。他の好ましい実施形態では、遊離システインまたは不対システインは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ酸配列内の所定の部位に選択的に位置するシステイン残基を含む。コンジュゲーション前に、遊離システインまたは不対システインは、系の酸化状態に応じて、同一の抗体上で、チオール（還元システイン）として、キャッピングされたシステイン（酸化）として、または別の遊離システインとの非天然の分子内ジスルフィド結合（酸化）として存在し得ることが認識されるであろう。下記でより詳細に論じるように、この抗体構築物の穏和な還元により、部位特異的コンジュゲーションに利用可能なチオールが生成される。特に好ましい実施形態では、遊離システインまたは不対システイン（天然に存在するか組み込まれている）は、選択的還元およびその後のカリケアマイシンコンジュゲーションを受けて、開示されている均一なＤＡＲ組成物が生成される。
【０２５７】
いくつかの実施形態では、鎖間システイン残基は欠失している。他の実施形態では、鎖間システインは別のアミノ酸（例えば、天然に存在するアミノ酸）で置換されている。例えば、アミノ酸置換により、中性残基（例えば、セリン、スレオニンもしくはグリシン）または親水性残基（例えば、メチオニン、アラニン、バリン、ロイシンもしくはイソロイシン）による鎖間システインの置き換えが生じ得る。特に好ましい一実施形態では、鎖間システインはセリンで置き換えられている。
【０２５８】
本発明により意図されるいくつかの実施形態では、欠失するかまたは置換されるシステイン残基は軽鎖（カッパまたはラムダのいずれか）上に存在し、そのため重鎖上に遊離システインが残る。他の実施形態では、欠失するかまたは置換されるシステイン残基は重鎖上に存在し、軽鎖定常領域上に遊離システインが残る。アセンブリでは、インタクトな抗体の軽鎖または重鎖のいずれかでの単一のシステインの欠失または置換により、２個の不対システイン残基を有する部位特異的抗体が得られることが認識されるであろう。
【０２５９】
特に好ましい一実施形態では、ＩｇＧ軽鎖（カッパまたはラムダ）の２１４位のシステイン（Ｃ２１４）が欠失しているか、または置換されている。別の好ましい実施形態では、ＩｇＧ重鎖上の２２０位のシステイン（Ｃ２２０）が欠失しているか、または置換されている。更なる実施形態では、重鎖上の２２６位または２２９位のシステインが欠失しているか、または置換されている。一実施形態では、重鎖上のＣ２２０がセリンで置換されて（Ｃ２２０Ｓ）、軽鎖中に所望の遊離システインが生成されている。そのように操作された構築物を下記の実施例で使用し、本明細書の教示に適合する新規の薬物抗体コンジュゲートを生成する。別の実施形態では、軽鎖中のＣ２１４がセリンで置換されて（Ｃ２１４Ｓ）、重鎖中に所望の遊離システインが生成されている。これらの好ましい構築物の概要を直下の表２に示し、表中、全てのナンバリングはＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従い、ＷＴは「野生型」のまたは変更されていない天然の定常領域配列を表し、デルタ（Δ）はアミノ鎖残基の欠失を示す（例えば、Ｃ２１４Δは２１４位のシステインが欠失していることを示す）。
【０２６０】
【表２】
2018515457.tif 000029
【０２６１】
（天然ジスルフィド結合の破壊とは対照的に）遊離システインを生成するためのシステイン残基の導入または付加に関して、当業者は、抗体上のまたは抗体断片上の適合する位置を容易に識別することができる。従って、選択された実施形態では、所望のＤＡＲ、抗体構築物、選択されたペイロードおよび抗体標的に応じて、システインをＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインもしくはＣＨ３ドメインまたはそれらの任意の組み合わせに導入することができる。他の好ましい実施形態では、システインをカッパまたはラムダのＣＬドメインに導入することができ、特に好ましい実施形態ではＣＬドメインのｃ末端領域に導入することができる。各場合において、分子安定性、コンジュゲーション効率を促進するために、またはペイロードが付着すると、このペイロードの保護環境を形成するために、システイン挿入部位に近位の他のアミノ酸残基を変更してもよく、除去してもよく、または置換してもよい。特定の実施形態では、置換残基は抗体の任意の利用可能な部位で生じる。そのような表面残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は抗体上の容易に利用可能な部位に位置しており、本明細書で更に説明するように選択的に還元され得る。特定の実施形態では、置換残基は抗体の利用可能な部位で生じる。この残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は抗体上の利用可能な部位に位置しており、抗体を選択的にコンジュゲートするために使用され得る。特定の実施形態では、下記の残基のうちのいずれか１つまたは複数をシステインで置換することができる：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（Ｅｕナンバリング）および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（Ｅｕナンバリング）。適合する部位特異的抗体を製造するための更なる置換の位置および方法は米国特許第７，５２１，５４１号明細書に記載されており、この特許はその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２６２】
部位特異的構築物が生成されると、インタクトな天然ジスルフィド架橋を実質的に破壊することなく、本明細書で開示されている新規の技術を使用して、生じた遊離システインを選択的に還元し、主に選択されたシステイン部位で反応性チオールを生成することができる。次いで、この製造されたチオールは、実質的な非特異的コンジュゲーションなしに、開示されているカリケアマイシン−リンカー構築物との定方向コンジュゲーションを受ける。即ち、本明細書中で開示されている操作された構築物および任意選択で選択的還元技術を使用して、カリケアマイシンペイロードの非特異的なランダムコンジュゲーションをほとんど除外することができる。意義深いことに、これにより、ＤＡＲ種の分布および標的化抗体上のカリケアマイシン位置の両方において実質的に均一である調製物が可能になる。下記で論じるように、比較的高いＤＡＲ夾雑物の除外はそれ自体、非特異的毒性を低下させることができ、かつ調製物の治療指標を増大させることができる。更に、そのような選択性により、カリケアマイシンペイロードが、カリケアマイシン−リンカー構築物が腫瘍に達するまでこのカリケアマイシン−リンカー構築物が多少保護されるが送達時に適切に提示されて処理される特に有利な所定の位置（例えば、軽鎖定常領域の末端領域）にほとんど位置することが可能になる。そのため、特定のカリケアマイシンペイロードのポジショニングを容易にするための操作された抗体の設計を使用して、開示されている調製物の非特異的毒性を低下させることもできる。最後に、抗体のコンジュゲーションを選択的におよび再現可能に方向付ける能力により、結果として生じる組成物のキャラクタリゼーションが大幅に単純化され、それにより薬物開発が促進される。
【０２６３】
抗体上の予め選択された部位でシステインを導入するためにまたはジスルフィド結合の構成システイン残基のうちの１つを除去するか、変更するか、もしくは置き換えるために当技術分野で認識されている分子操作技術を使用して、この所定の遊離システイン部位の生成を達成し得ることが認識されるであろう。この技術を使用すると、任意の抗体のクラスまたはアイソタイプが、本発明に従って選択的にコンジュゲートされ得る１個または複数個の遊離システインを示すように操作され得ることを当業者は認識するであろう。更に、選択された抗体は、所望のＤＡＲに応じて、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個または更に８個の遊離システインを具体的に示すように操作され得る。より好ましくは、選択された抗体は２個または４個の遊離システインを含むように操作され、更により好ましくは２個の遊離システインを含むように操作される。非特異的毒性を低下させつつコンジュゲートされたカリケアマイシンの標的への送達を容易にするために遊離システインが操作されている抗体中に位置し得ることも認識されるであろう。この点において、ＩｇＧ１抗体を含む本発明の選択された実施形態では、カリケアマイシンペイロードはＣＨ１ドメイン上に位置し、より好ましくはこのドメインのＣ末端上に位置する。他の好ましい実施形態では、抗体構築物を操作してカリケアマイシンを軽鎖定常領域上に位置させ、より好ましくはこの定常領域のＣ末端上に位置させる。
【０２６４】
意義深いことに、下記に記載の新規の安定化剤およびカリケアマイシン−リンカー構築物を使用する構築物の選択的還元により、操作された遊離システインへのペイロードコンジュゲーションの制限も促進され得る。「選択的還元」は、本明細書で使用する場合、インタクトな天然ジスルフィド結合を実質的に破壊することなく遊離システインが還元される（それにより反応性チオールが生成される）還元条件に操作された構築物を曝露することを意味する。一般に、選択的還元を、インタクトなジスルフィド結合を破壊することなく所望のチオールを生成する任意の還元剤またはその組み合わせを使用することにより達成することができる。特定の好ましい実施形態では、および下記の実施例に記載するように、安定化剤および穏和な還元条件を使用して選択的還元を達成し、コンジュゲーション用の操作された構築物を調製することができる。本明細書でより詳細に論じるように、適合する安定化剤は、概して、遊離システインの還元を促進し、かつより低ストリンジェントな還元条件下で所望のコンジュゲーションが進行することを可能にする。これにより、天然ジスルフィド結合の実質的大部分がインタクトなままであること、および非特異的コンジュゲーションの量が著しく低減され、それにより望ましくない夾雑物および潜在的な毒性を制限することが可能になる。比較的穏和な還元条件は多くの系の使用により達成され得るが、好ましくはチオール含有化合物の使用を含む。当業者は本開示を考慮して適合する還元系を容易に得ることができることが認識されるであろう。
４．３  定常領域の改変および糖鎖付加の変更
本発明の選択された実施形態はまた、定常領域（即ち、Ｆｃ領域）の置換または改変（アミノ酸残基の置換、変異および／または改変が挙げられるがこれらに限定されない）も含むことができ、これにより、好ましい特性（薬物動態の変更、血清半減期の延長、結合親和性の増加、免疫原性の低下、産生の増加、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）へのＦｃリガンドの結合の変化、ＡＤＣＣもしくはＣＤＣの増強もしくは減少、糖鎖付加の変更、または定常領域の結合特異性の改変が挙げられるがこれらに限定されない）を有する化合物が得られる。
【０２６５】
例えば、ＦｃドメインとＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡおよびＢ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎ）との間の相互作用に関与するアミノ酸残基の変化により、Ｆｃエフェクター機能が改善されている化合物を生成することができ、これにより、細胞毒性の増加および／または薬物動態の変更（例えば、血清半減期の延長）を導くことができる（例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２（１９９１）、Ｃａｐｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）およびｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）を参照されたい）。
【０２６６】
選択された実施形態では、ＦｃドメインとＦｃＲＮ受容体との間の相互作用に関与すると確認されているアミノ酸残基を改変する（例えば、置換するか、欠失させるか、または付加する）ことにより、ｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期が延長されている抗体を生成することができる（例えば、国際公開第９７／３４６３１号パンフレット、国際公開第０４／０２９２０７号パンフレット、米国特許第６，７３７，０５６号明細書および米国特許出願公開第２００３／０１９０３１１号明細書を参照されたい）。そのような実施形態に関して、Ｆｃ多様体は、哺乳動物（好ましくはヒト）において５日超の、１０日超の、１５日超の、好ましくは２０日超の、２５日超の、３０日超の、３５日超の、４０日超の、４５日超の、２ヶ月超の、３ヶ月超の、４ヶ月超のまたは５ヶ月超の半減期をもたらし得る。半減期の延長により、血清力価がより高くなり、そのため抗体薬物コンジュゲートの投与頻度が減少するか、または投与する抗体の濃度が低下する。例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウスもしくは遺伝子導入されたヒト細胞系統で、または多様体Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類で、ｉｎ  ｖｉｖｏでのヒトＦｃＲＮへの結合とポリペプチドに高い親和性で結合するヒトＦｃＲＮの血清半減期とをアッセイすることができる。国際公開第２０００／４２０７２号パンフレットでは、ＦｃＲｎへの結合が改善または減少している抗体多様体が説明されている。例えばＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）も参照されたい。
【０２６７】
他の実施形態では、Ｆｃの変更により、ＡＤＣＣ活性またはＣＤＣ活性が増強または低下され得る。当技術分野で既知であるように、ＣＤＣは補体の存在下での標的細胞の溶解を意味しており、ＡＤＣＣは細胞毒性の一形態を意味しており、この形態では、特定の細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃＲ上に結合した分泌Ｉｇにより、この細胞毒性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合することができ、その後に細胞毒性により標的細胞が死滅する。本発明に関連して、抗体多様体は「変更された」ＦｃＲ結合親和性を有し、親抗体もしくは非改変抗体または天然配列ＦｃＲを含む抗体と比較して、結合が増強または低下している。結合の低下を示すそのような多様体は、認識できる結合をほとんどまたは全く有していない場合があり、例えば当技術分野で公知の技術により決定した場合、例えば天然配列と比較してＦｃＲに０〜２０％が結合する。他の実施形態では、この多様体は、天然の免疫グロブリンＦｃドメインと比較して結合の増強を示す。これらの種類のＦｃ多様体は、開示されている抗体の有効な抗新生物効特性を増強するために有利に使用され得ることが認識されるであろう。更に他の実施形態では、そのような変更により、結合親和性の増加、免疫原性の低下、産生の増加、（例えば、コンジュゲーション部位に対する）糖鎖付加および／もしくはジスルフィド結合の変更、結合特異性の改変、食作用の増加、ならびに／または細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御等が導かれる。
【０２６８】
更に他の実施形態は１種または複数種の操作されたグリコフォームを含み、例えば、（例えば、Ｆｃドメイン中の）タンパク質に共有結合的に付着している変更されたグリコシル化パターンまたは変更された炭水化物組成を含む部位特異的抗体を含む。例えばＳｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０を参照されたい。操作されたグリコフォームは様々な目的に有用であり得、この目的として、エフェクター機能の増強または低下、標的に対する抗体の親和性の増加、または抗体の産生の促進が挙げられるがこれらに限定されない。エフェクター機能の低下が望まれている特定の実施形態では、分子を操作してアグリコシル化形態を発現させることができる。１個または複数個の可変領域フレームワークグリコシル化部位を消去し、それによりこの部位でのグリコシル化を消去し得る置換は公知である（例えば、米国特許第５，７１４，３５０号明細書および米国特許第６，３５０，８６１号明細書を参照されたい）。逆に、１個または複数個の更なるグリコシル化部位での操作により、増強されたエフェクター機能または改善された結合をＦｃ含有分子に付与することができる。
【０２６９】
他の実施形態としてグリコシル化組成が変更されているＦｃ多様体が挙げられ、例えば、フコシル残基の量が減少している低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体または二分するＧｌｃＮＡｃ構造が増加している抗体が挙げられる。そのような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証されている。当業者に既知の任意の方法により、例えば、操作された発現株もしくは多様体発現株を使用することにより、１種もしくは複数種の酵素（例えば、Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））との共発現により、様々な生物中でもしくは様々な生物由来の細胞系統中で、Ｆｃ領域を含む分子を発現させることにより、またはＦｃ領域を含む分子を発現させた後に炭水化物を改変することにより、操作されたグリコフォームを生成することができる（例えば、国際公開第２０１２／１１７００２号パンフレットを参照されたい）。
４．４  断片
本発明を実施するためにいずれの形態の抗体（例えば、キメラ、ヒト化等）を選択するかに関わらず、抗体の免疫反応性断片が抗体薬物コンジュゲートの標的化剤として本明細書の教示に従って使用され得ることが認識されるであろう。「抗体断片」はインタクトな抗体の少なくとも一部を含む。本明細書で使用する場合、抗体分子の用語「断片」は抗体の抗原結合断片を含み、用語「抗原結合断片」または「免疫反応性断片」は免疫グロブリンまたは抗体のポリペプチド断片を意味し、このポリペプチド断片は、選択された抗原もしくはその免疫原性決定基に免疫特異的に結合するか、もしくはこれらと免疫特異的に反応するか、またはこの断片が由来したインタクトな抗体と特異的抗原結合に関して競合する。
【０２７０】
例示的な部位特異的断片として下記が挙げられる：可変軽鎖断片（ＶＬ）、可変重鎖断片（ＶＨ）、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、単一ドメイン抗体断片、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子、および抗体断片から形成された多重特異的抗体。加えて、活性部位特異的断片は、抗体において抗原／基質または受容体と相互作用する能力を保持し、かつ（おそらく効率は多少劣るが）インタクトな抗体と類似の様式で抗原／基質または受容体を改変する部分を含む。そのような抗体断片を、１個または複数個の遊離システインを含むように更に操作することができる。
【０２７１】
他の実施形態では、抗体断片とは、Ｆｃ領域を含み、かつインタクトな抗体中に存在する場合にはＦｃ領域と通常関連する生物学的機能（例えば、ＦｃＲｎ結合、抗体半減期調節、ＡＤＣＣ機能および補体結合）のうちの少なくとも１つを保持する抗体断片である。一実施形態では、抗体断片とは、インタクトな抗体と実質的に類似のｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期を有する一価抗体である。例えば、そのような抗体断片は、この断片にｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性を付与することができる少なくとも１個の遊離システインを含むＦｃ配列に結合した抗原結合アームを含むことができる。
【０２７２】
当業者に十分に認識されるように、分子操作により、またはインタクトまたは完全な抗体または抗体鎖の化学的または酵素的な処理（例えば、パパインもしくはペプシン）により、または組換え手段により、断片を得ることができる。抗体断片のより詳細な説明に関して、例えばＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９９）を参照されたい。
４．５  多価構築物
他の実施形態では、本発明の抗体薬物コンジュゲートは一価であってもよく、または多価（例えば、二価、三価等）であってもよい。本明細書で使用する場合、用語「原子価」は、抗体に会合する潜在的な標的結合部位の数を意味する。各標的結合部位は、１個の標的分子または標的分子上の特定の位置もしくは座位に特異的に結合する。抗体が一価である場合、分子の各結合部位は、単一の抗原位置またはエピトープに特異的に結合する。抗体が複数個の標的結合部位（多価）を含む場合、各標的結合部位は、同一のまたは異なる分子に特異的に結合することができる（例えば、異なるリガンドもしくは異なる抗原または同一の抗原上の異なるエピトープもしくは位置に結合することができる）。例えば米国特許出願公開第２００９／０１３０１０５号明細書を参照されたい。
【０２７３】
一実施形態では、抗体は二重特異的抗体であり、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９で説明されているように、この二重特異的抗体では２本の鎖が異なる特異性を有する。他の実施形態として、三重特異的抗体等の更なる特異性を有する抗体が挙げられる。他のより精巧な適合する多重特異的抗体およびその製造方法は、米国特許出願公開第２００９／０１５５２５５号明細書ならびに国際公開第９４／０４６９０号パンフレット、Ｓｕｒｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０および国際公開第９６／２７０１１号パンフレットに記載されている。
【０２７４】
多価抗体は、所望の標的分子の異なるエピトープに免疫特異的に結合することができるか、または標的分子と異種エピトープ（例えば、異種ポリペプチドまたは固体支持材料）との両方に免疫特異的に結合することができる。好ましい実施形態は２種の抗原にのみ結合する（即ち、二重特異的抗体）が、三重特異的抗体等の更なる特異性を有する抗体も本発明に包含される。二重特異的抗体には架橋抗体または「ヘテロコンジュゲート」抗体も含まれる。例えば、ヘテロコンジュゲート中の抗体のうちの一方はアビジンに結合され得、他方はビオチンに結合され得る。そのような抗体は例えば、免疫系細胞が望ましくない細胞を標的とするように（米国特許第４，６７６，９８０号明細書）およびＨＩＶ感染の処置のために（国際公開第９１／００３６０号パンフレット、国際公開第９２／２００３７３号パンフレットおよび欧州特許第０３０８９号明細書）提案されている。ヘテロコンジュゲート抗体を、任意の好都合な架橋方法を使用して製造することができる。適切な架橋剤は当技術分野で公知であり、多くの架橋技術と一緒に米国特許第４，６７６，９８０号明細書で開示されている。
５．抗体の組換え産生
抗体産生細胞から得られる遺伝子材料および組換え技術を使用して、抗体およびその断片を産生または改変することができる（例えば、Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ，Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１５２  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ（Ｅｄｓ．）（２０００）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄ．），ＮＹ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ，Ｊｏｈｎ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．および米国特許第７，７０９，６１１号明細書を参照されたい）。核酸は、全細胞中に存在してもよく、細胞溶解物中に存在してもよく、または部分的に精製されているかもしくは実質的に純粋な形態で存在してもよい。核酸は、標準技術（例えば、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンド形成、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当技術分野で公知の他のもの）により他の細胞成分または他の夾雑物（例えば、他の細胞核酸またはタンパク質）から分離された場合、「単離されている」または実質的に純粋になっている。本発明の核酸は、例えばＤＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ）、ＲＮＡおよびそれらの人工多様体（例えば、ペプチド核酸）、一本鎖のＲＮＡか二本鎖のＲＮＡかに関わらずＲＮＡであることができ、イントロンを含んでもよく、または含まなくてもよい。好ましい実施形態では、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【０２７５】
標準的な分子生物学的技術を使用して核酸を得ることができる。ハイブリドーマにより発現された抗体の場合、標準的なＰＣＲ増幅技術またはｃＤＮＡクローニング技術により、抗体の軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡを得ることができる。（例えば、ファージディスプレイ技術を使用する際に）免疫グロブリン遺伝子ライブラリから得られた抗体の場合、当技術分野で認識されている標準的な技術を使用して、このライブラリから、抗体の免疫反応性断片をコードする核酸を回収することができる。
【０２７６】
ＶＨセグメントおよびＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片を標準的な組換えＤＮＡ技術により更に操作して、例えば、可変領域遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子またはｓｃＦｖ遺伝子へと変換することができる。この操作では、ＶＬコーディングＤＮＡ断片またはＶＨコーディングＤＮＡ断片は、別のタンパク質（例えば、抗体定常領域またはフレキシブルリンカー）をコードする別のＤＮＡ断片に作動可能に結合している。用語「作動可能に結合している」は、これに関連して使用する場合、２種のＤＮＡ断片によりコードされるアミノ酸配列がインフレームのままであるように２種のＤＮＡ断片が接合されることを意味する。
【０２７７】
ＶＨ領域をコードする単離ＤＮＡは、このＶＨコーディングＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に結合することにより、完全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野で既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）（上掲）を参照されたい）、この領域を包含するＤＮＡ断片を標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域はＩｇＧ１定常領域、ＩｇＧ２定常領域、ＩｇＧ３定常領域、ＩｇＧ４定常領域、ＩｇＡ定常領域、ＩｇＥ定常領域、ＩｇＭ定常領域またはＩｇＤ定常領域であり得るが、最も好ましくはＩｇＧ１定常領域またはＩｇＧ４定常領域である。例示的なＩｇＧ１定常領域が配列番号２に記載されている。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子の場合、ＶＨコーディングＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に結合され得る。
【０２７８】
ＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡは、このＶＬコーディングＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に結合することにより、完全長軽鎖遺伝子（およびＦａｂ軽鎖遺伝子）に変換され得る。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は当技術分野で既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）（上掲）を参照されたい）、この領域を包含するＤＮＡ断片を標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域はカッパ定常領域またはラムダ定常領域であり得るが、最も好ましくはカッパ定常領域である。この点において、例示的な適合するカッパ軽鎖定領域が配列番号１に記載されている。
【０２７９】
本発明に適合する抗体を、上記で説明されているそのような核酸（プロモーター（例えば、国際公開第８６／０５８０７号パンフレット、国際公開第８９／０１０３６号パンフレットおよび米国特許第５，１２２，４６４号明細書）に作動可能に結合され得る）と、真核分泌経路の他の転写調節エレメントおよびプロセシング制御エレメントとを含むベクターを使用して産生することができる。次いで、そのようなベクターおよび宿主発現系を保有する宿主細胞を当技術分野で認識されている技術を使用して培養し、所望の抗体を産生させる。
【０２８０】
本明細書で使用する場合、用語「宿主発現系」は、本発明に適合する核酸またはポリペプチドのいずれかおよび抗体を生成するように操作され得るあらゆる種類の細胞系を含む。そのような宿主細胞系として下記が挙げられるがこれらに限定されない：組換えバクテリオファージＤＮＡまたはプラスミドＤＮＡで形質転換されたまたは遺伝子導入された微生物（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）もしくはＢ．スブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））、組換え酵母発現ベクターで遺伝子導入された酵母（例えば、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ））、または哺乳動物細胞もしくはウイルスのゲノムに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター）を含む組換え発現構築物を保有する哺乳動物細胞（例えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ−Ｓ細胞、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞、３Ｔ３細胞）。宿主細胞を、２種の発現ベクター（例えば、重鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクターおよび軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクター）で共遺伝子導入してもよい。
【０２８１】
哺乳動物細胞を形質転換する方法は当技術分野で公知である。例えば米国特許第４，３９９，２１６号明細書、米国特許第４，９１２，０４０号明細書、米国特許第４，７４０，４６１号明細書および米国特許第４，９５９，４５５号明細書を参照されたい。宿主細胞を、様々な特徴（例えば、改変されたグリコフォーム、またはＧｎＴＩＩＩ活性を有するタンパク質）を有する抗原結合分子の産生を可能にするように操作することもできる。
【０２８２】
組換えタンパク質の長期にわたる高収率の産生のためには、安定した発現が好ましい。従って、選択された抗体を安定して発現する細胞系統を当技術分野で認識されている標準的な技術を使用して操作することができ、この細胞系は本発明の一部を形成する。ウイルス複製起源を含む発現ベクターを使用するよりはむしろ、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター配列またはエンハンサー配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）および選択可能マーカーで制御されたＤＮＡで宿主を形質転換することができる。当技術分野で公知の選択系のいずれかを使用することができ、この選択系として、特定の条件下で発現を増強する効率的なアプローチを提供するグルタミン合成酵素遺伝子発現系（ＧＳ系）が挙げられる。ＧＳ系は、欧州特許第０２１６８４６号明細書、欧州特許第０２５６０５５号明細書、欧州特許第０３２３９９７号明細書および欧州特許第０３３８８４１号明細書ならびに米国特許第５，５９１，６３９号明細書および米国特許第５，８７９，９３６号明細書に関連して全体的にまたは部分的に論じられている。安定した細胞系統の開発のための別の好ましい発現系はＦｒｅｅｄｏｍ（商標）ＣＨＯ−Ｓ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）である。
【０２８３】
本発明に適合する抗体が組換え発現または開示されている技術のうちのいずれか他のものにより産生されると、この抗体を、当技術分野で既知の方法により精製することができ、または単離することができ、これは、この抗体の天然環境からおよびＡＤＣを含む抗体の治療的使用を妨げるであろう夾雑物から、この抗体が同定、キャラクタライズ、分離および／または回収されることを意味する。単離抗体として、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕでの抗体が挙げられる。
【０２８４】
この単離調製物を、当技術分野で認識されている様々な技術（例えば、イオン交換およびサイズ排除クロマトグラフィー、透析、ダイアフィルトレーションおよびアフィニティクロマトグラフィー、特にプロテインＡアフィニティクロマトグラフィーまたはプロテインＧアフィニティクロマトグラフィー）を使用して精製することができる。
６．産生後選択
どのような方法で得たとしても、抗体産生細胞（例えば、ハイブリドーマ、酵母コロニー等）を選択し、クローニングし、かつ所望の特徴（例えば、頑強な増殖、高い抗体産生、および目的の抗原に対する高い親和性等の所望の抗体特徴）に関して更にスクリーニングすることができる。ハイブリドーマは、細胞培養においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで、または同系遺伝子免疫不全動物においてｉｎ  ｖｉｖｏで増殖され得る。ハイブリドーマおよび／またはコロニーを選択する方法、クローニングする方法および増殖させる方法は当業者に公知である。所望の抗体が同定されると、当技術分野で認識されている一般的な分子生物学的技術および生化学的技術を使用して、関連する遺伝子材料を単離し、操作し、かつ発現させることができる。
【０２８５】
ナイーブライブラリ（天然または合成のいずれか）により産生された抗体は中程度の親和性（約１０６〜１０７Ｍ−１のＫＡ）であることができる。親和性を増強するために、（例えば、エラー−プローンポリメラーゼを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏでランダム変異を導入することにより）抗体ライブラリを構築し、かつ（例えば、ファージディスプレイまたは酵母ディスプレイを使用することにより）第２のライブラリから抗原に対して高い親和性を有する抗体を再選択することにより、親和性成熟をｉｎ  ｖｉｔｒｏで模倣することができる。国際公開第９６０７７５４号パンフレットでは、免疫グロブリン軽鎖のＣＤＲで変異誘発を誘導して軽鎖遺伝子のライブラリを作成する方法が説明されている。
【０２８６】
様々な技術を使用して抗体を選択することができ、これらの技術として、ヒトコンビナトリアル抗体またはｓｃＦｖ断片のライブラリがファージまたは酵母で合成されるファージディスプレイまたは酵母ディスプレイが挙げられるがこれらに限定されず、このライブラリを、目的の抗原またはその抗体結合部分でスクリーニングし、抗原に結合するファージまたは酵母を単離し、このファージまたは酵母から抗体または免疫反応性断片を得ることができる（Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，ＰＭＩＤ：９６３０８９１、Ｓｈｅｅｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＰＭＩＤ：９６００９３４、Ｂｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，ＰＭＩＤ：９１８１５７８、Ｐｅｐｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，ＰＭＩＤ：１８３３６２０６）。ファージディスプレイライブラリまたは酵母ディスプレイライブラリを生成するためのキットが市販されている。抗体ディスプレイライブラリの生成およびスクリーニングで使用され得る他の方法および試薬も存在する（米国特許第５，２２３，４０９号明細書、国際公開第９２／１８６１９号パンフレット、国際公開第９１／１７２７１号パンフレット、国際公開第９２／２０７９１号パンフレット、国際公開第９２／１５６７９号パンフレット、国際公開第９３／０１２８８号パンフレット、国際公開第９２／０１０４７号パンフレット、国際公開第９２／０９６９０号パンフレットおよびＢａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＰＭＩＤ：１８９６４４５を参照されたい）。そのような技術は多数の候補抗体のスクリーニングを有利に可能にし、かつ（例えば、組換えシャフリングにより）配列の比較的容易な操作を可能にする。
Ｖ  抗体の特徴
選択された実施形態では、抗体産生細胞（例えば、ハイブリドーマまたは酵母コロニー）を選択し、クローニングし、かつ有利な特性（例えば、頑強な増殖、高い抗体産生、および下記でより詳細に論じるように所望の抗体薬物コンジュゲートの特徴等）に関して更にスクリーニングすることができる。他の場合、動物の接種のために特定の抗原（例えば、特異的タンパク質ドメイン）または標的抗原の免疫反応性断片を選択することにより、抗体の特徴を付与することができる。更に他の実施形態では、選択された抗体を上記で説明したように操作して、免疫化学的特徴（例えば、親和性または薬物動態）を増強してもよく、または洗練させてもよい。
Ａ．中和抗体
選択された実施形態では、本発明に適合する抗体は「アンタゴニスト」抗体または「中和」抗体であることができ、これは、抗体が決定基と会合し、直接的にまたは決定基と結合パートナー（例えば、リガンドまたは受容体）との会合を防止することにより、前記決定基の活性をブロックし、または阻害し、それにより、そうでなければ分子の相互作用に起因するであろう生物学的応答が中断されることを意味する。例えば標的分子活性によりまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ競合結合アッセイで測定した場合、過剰な抗体が、決定基に結合した結合パートナーの量を少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％またはより多く低下させる場合、中和抗体またはアンタゴニスト抗体は、決定基のそのリガンドまたは基質への結合を実質的に阻害することができる。改変された活性を当技術分野で認識されている技術を使用して直接測定することができるか、または変更された活性が下流で有する影響（例えば、腫瘍形成または細胞生存）により測定し得ることが認識されるであろう。
Ｂ．内在化抗体
多くの場合、選択された決定基は腫瘍原性細胞表面と会合したままであり、そのため、開示されているＡＤＣの局在化および内在化が可能になる。好ましい実施形態では、そのような抗体は、内在化時に細胞を死滅させる１種または複数種のカリケアマイシンペイロードと会合されるか、またはこのカリケアマイシンペイロードにコンジュゲートされる。特に好ましい実施形態では、本発明のＡＤＣは、カリケアマイシンペイロードを有する内在化部位特異的ＡＤＣを含む。
【０２８７】
本明細書で使用する場合、「内在化する」抗体とは、会合する抗原または受容体に結合する際に、細胞により（任意の細胞毒素と一緒に）取り込まれる抗体である。治療への応用の場合、内在化は、好ましくは、それを必要とする対象においてｉｎ  ｖｉｖｏで起こる。内在化したＡＤＣの数は、抗原発現細胞（特に抗原発現癌幹細胞）を死滅させるのに十分であり得る。（例えば、ＤＡＲに基づいて）全体としてのカリケアマイシンまたはＡＤＣの効力に応じて、単一抗体分子の細胞への取込みは、この抗体が結合する標的細胞を死滅させるのに十分であり得る。例えば、より高いＤＡＲおよび付着したカリケアマイシンの効率的な送達により、いくつかのＡＤＣは非常に強力であることから、腫瘍細胞を死滅させるには少数の分子の内在化で十分である。哺乳動物細胞への結合時に抗体が内在化するかどうかを、当技術分野で認識されている様々なアッセイ（例えば、Ｍａｂ−ＺａｐおよびＦａｂ−Ｚａｐ等のサポリンアッセイ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により決定することができる。抗体が細胞中に内在化するかどうかを検出する方法が米国特許第７，６１９，０６８号明細書でも説明されている。
Ｃ．枯渇抗体
他の実施形態では、本発明の抗体は枯渇抗体である。用語「枯渇」抗体は、細胞表面上のまたは細胞表面近傍の抗原に好ましくは結合し、（例えば、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、または細胞毒性剤の導入により）細胞の死滅を誘導するか、促進するか、または生じさせる抗体を意味する。好ましい実施形態では、選択された枯渇抗体は細胞毒素にコンジュゲートされる。好ましくは、枯渇抗体は、定義された細胞集団においてＳＥＺ６発現細胞の少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％を死滅させる。いくつかの実施形態では、この細胞集団は、富化、区分、精製または単離された腫瘍原性細胞（例えば、癌幹細胞）を含むことができる。他の実施形態では、この細胞集団は、全腫瘍試料、または癌幹細胞を含む異種腫瘍抽出物を含むことができる。標準的な生化学的技術を使用して、本明細書の教示に従って腫瘍原性細胞の枯渇をモニタリングおよび定量化することができる。
Ｄ．結合親和性
本発明に適合する抗体は、選択された決定基（例えば、ＳＥＺ６）に対する高い結合親和性を好ましくは有する。用語「ＫＤ」は、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数または見かけの親和性を意味する。本発明に適合する抗体は、解離定数ＫＤ（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）が≦１０−６Ｍである場合、この抗体の標的抗原に免疫特異的に結合することができる。この抗体は、ＫＤが≦５×１０−９Ｍである場合に高い親和性で抗原に特異的に結合し、ＫＤが≦５×１０−１０Ｍである場合に非常に高い親和性で抗原に特異的に結合する。本発明の一実施形態では、この抗体は、≦１０−９ＭのＫＤと約１×１０−４／秒のオフ速度（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）とを有する。本発明の一実施形態では、オフ速度は＜１×１０−５／秒である。本発明の他の実施形態では、この抗体は約１０−７Ｍ〜１０−１０ＭのＫＤで決定基に結合し、更に別の実施形態ではＫＤ≦２×１０−１０Ｍで結合する。本発明の更に他の選択された実施形態は、１０−６Ｍ未満、５×１０−６Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５×１０−７Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、５×１０−１３Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５×１０−１４Ｍ未満、１０−１５Ｍ未満または５×１０−１５Ｍ未満のＫＤ（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を有する抗体を含む。
【０２８８】
特定の実施形態では、本発明に適合する抗体は、少なくとも１０５Ｍ−ｌ秒−ｌ、少なくとも２×１０５Ｍ−ｌ秒−ｌ、少なくとも５×１０５Ｍ−ｌ秒−ｌ、少なくとも１０６Ｍ−ｌ秒−ｌ、少なくとも５×１０６Ｍ−ｌ秒−ｌ、少なくとも１０７Ｍ−ｌ秒−ｌ、少なくとも５×１０７Ｍ−ｌ秒−ｌまたは少なくとも１０８Ｍ−ｌ秒−ｌの会合速度定数またはｋｏｎ（もしくはｋａ）速度（抗体＋抗原（Ａｇ）ｋｏｎ←抗体−Ａｇ）で決定基に免疫特異的に結合する。
【０２８９】
別の実施形態では、本発明に適合する抗体は、ｌ０−ｌ秒−ｌ未満、５×ｌ０−ｌ秒−ｌ未満、ｌ０−２秒−ｌ未満、５×ｌ０−２秒−ｌ未満、ｌ０−３秒−ｌ未満、５×ｌ０−３秒−ｌ未満、ｌ０−４秒−ｌ未満、５×ｌ０４秒−ｌ未満、ｌ０−５秒−ｌ未満、５×ｌ０−５秒−ｌ未満、ｌ０−６秒−ｌ未満、５×ｌ０−６秒−ｌ未満、ｌ０−７秒−ｌ未満、５×ｌ０−７秒−ｌ未満、ｌ０−８秒−ｌ未満、５×ｌ０−８秒−ｌ未満、ｌ０−９秒−ｌ未満、５×ｌ０−９秒−ｌ未満またはｌ０−１０秒−ｌ未満の解離速度定数またはｋｏｆｆ（もしくはｋｄ）速度（抗体＋抗原（Ａｇ）ｋｏｆｆ←抗体−Ａｇ）で決定基に免疫特異的に結合する。
【０２９０】
当技術分野で既知の様々な技術（例えば、表面プラズモン共鳴、バイオ−レイヤー干渉法、二重偏波干渉法、静的光散乱、動的光散乱、等温滴定熱量測定、ＥＬＩＳＡ、分析用超遠心分離およびフローサイトメトリー）を使用して、結合親和性を決定することができる。
Ｅ．ビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）およびエピトープマッピング
本明細書で使用する場合、用語「ビニング」は、複数の抗体を、これらの抗体の抗原結合の特徴およびこれらの抗体が互いに競合するかどうかに基づいて、「ビン（ｂｉｎ）」にグループ化するために使用する方法を意味する。ビンの初期決定を、エピトープマッピングおよび本明細書で説明した他の技術により更に洗練させてもよく、かつ確認してもよい。しかしながら、個々のビンへの抗体の実験的割り当てにより、開示されている抗体薬物コンジュゲートの治療可能性を示すことができる情報が提供されることが認識されるであろう。
【０２９１】
より具体的には、当技術分野で既知の方法を使用することにより、選択された参照抗体（またはその断片）が結合に関して別の試験抗体（即ち、同一のビン中である抗体）と競合するかどうかを決定することができる。一実施形態では、飽和条件下で参照抗体を選択された抗原と会合させ、次いで、標準的な免疫化学的技術を使用して、別の抗体または試験抗体の同一の抗原に結合する能力を決定する。試験抗体が参照抗体と同時に抗原に実質的に結合することができる場合、別の抗体または試験抗体は最初の抗体または参照抗体と異なるエピトープに結合する。しかしながら、試験抗体が同時に抗原に実質的に結合することができない場合、この試験抗体は、同一のエピトープ、重複するエピトープ、または参照抗体が結合するエピトープに（少なくとも立体的に）密接しているエピトープに結合する。換言すると、この試験抗体は抗原結合に関して競合し、参照抗体と同じビンにある。
【０２９２】
用語「競合する」または「競合抗体」は、開示されている抗体に関連して使用する場合、試験する試験抗体またはその免疫学的に機能する断片が共通の抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにより決定される抗体間の競合を意味する。典型的には、そのようなアッセイには、固体表面または発現細胞、非標識試験抗体および標識参照抗体に結合する精製抗原（またはそのドメインもしくは断片）の使用が含まれる。試験抗体の存在下で固体表面または細胞に結合する標識の量を決定することにより、競合的阻害を測定する。通常、試験抗体は過剰に存在し、および／または最初に結合する。競合的結合を決定する方法に関する更なる詳細を本明細書の実施例に記載する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、この競合抗体は、共通抗原への参照抗体の特異的結合を少なくとも３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％阻害する。いくつかの場合、結合は少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９７％またはより多く阻害される。
【０２９３】
逆に、参照抗体が結合する場合、この参照抗体は、好ましくは、後に添加する試験抗体の結合を少なくとも３０％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％阻害する。いくつかの場合、試験抗体の結合は少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９７％またはより多く阻害される。
【０２９４】
一般に、当技術分野で認識されている様々な技術（例えば、イムノアッセイ、例えばウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射線アッセイ、蛍光イムノアッセイおよびプロテインＡイムノアッセイ等）を使用して、ビニングまたは競合的結合を決定することができる。そのようなイムノアッセイは日常的であり、当技術分野で公知である（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，ｅｄｓ，（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。更に、交差ブロッキングアッセイを使用してもよい（例えば、国際公開第２００３／４８７３１号パンフレットおよびＨａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅを参照されたい）。
【０２９５】
競合的阻害（従って「ビン」）を決定するために使用する他の技術として、例えばＢＩＡｃｏｒｅ（商標）２０００システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する表面プラズモン共鳴、例えばＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用するバイオ−レイヤー干渉法、または例えばＦＡＣＳＣａｎｔｏ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）もしくは多重ＬＵＭＩＮＥＸ（商標）検出アッセイ（Ｌｕｍｉｎｅｘ）を使用するフローサイトメトリービーズアレイが挙げられる。
【０２９６】
Ｌｕｍｉｎｅｘは、大規模な多重化抗体対合を可能にするビーズベースのイムノアッセイプラットフォームである。このアッセイは、標的抗原への抗体対の同時結合パターンを比較する。この対のうちの一方の抗体（捕捉ｍＡｂ）がＬｕｍｉｎｅｘビーズに結合し、各捕捉ｍＡｂは異なる色のビーズに結合する。他方の抗体（検出器ｍＡｂ）は、蛍光シグナル（例えば、フィコエリトリン（ＰＥ））に結合する。このアッセイは抗原への抗体の同時結合（対合）を分析し、類似の対合プロファイルを有する抗体と共にグループ化する。検出器ｍＡｂおよび捕捉ｍＡｂの類似のプロファイルは、２種の抗体が同一のまたは密接に関連するエピトープに結合することを示す。一実施形態では、Ｐｅａｒｓｏｎ相関係数を使用して対合プロファイルを決定し、試験する抗体のパネル上の任意の特定の抗体に最も密接に相関する抗体を同定することができる。好ましい実施形態では、抗体対のＰｅａｒｓｏｎ相関係数が少なくとも０．９である場合、試験／検出基ｍＡｂは参照／捕捉ｍＡｂと同一のビン中であると決定することができる。他の実施形態では、Ｐｅａｒｓｏｎ相関係数は少なくとも０．８、０．８５、０．８７または０．８９である。更なる実施形態では、Ｐｅａｒｓｏｎ相関係数は少なくとも０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９または１である。Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイから得られたデータを分析する他の方法が米国特許第８，５６８，９９２号明細書で説明されている。同時に１００種（またはより多く）のビーズを分析するＬｕｍｉｎｅｘの能力により、ほぼ無限の抗原および／または抗体表面が提供され、バイオセンサーアッセイを超えて抗体エピトーププロファイリングでのスループットおよび分解能が改善される（Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，２０１１，ＰＭＩＤ：２１２２３９７０）。
【０２９７】
「表面プラズモン共鳴」は、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出により、リアルタイムでの特異的相互作用の分析を可能にする光学的現象を意味する。
【０２９８】
他の実施形態では、試験抗体が結合に関して参照抗体と「競合する」かどうかを決定するために使用することができる技術は、２種の表面（即ち、バイオセンサーチップ上の固定されたタンパク質の層および内部参照層）から反射される白色光の干渉パターンを分析する光学的分析技術である「バイオ−レイヤー干渉法」である。バイオセンサーチップに結合する分子の数の任意の変化により、リアルタイムで測定され得る干渉パターンのシフトが起こる。そのようなバイオレイヤー干渉法アッセイを、下記のようにＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ装置を使用して行なうことができる。参照抗体（Ａｂ１）を抗マウス捕捉チップ上に捕捉し、次いで、高濃度の非結合抗体を使用してこのチップをブロックし、ベースラインを集める。次いで、単量体の組換え標的タンパク質を特異的抗体（Ａｂ１）で捕捉し、このチップを、コントロールと同一の抗体（Ａｂ１）が入ったウェル中にまたは異なる試験抗体（Ａｂ２）が入ったウェル中に浸漬させる。コントロールＡｂ１と結合レベルを比較して決定した場合で更なる結合が生じない場合、Ａｂ１およびＡｂ２を「競合する」抗体であると決定する。Ａｂ２により更なる結合を観測する場合、Ａｂ１およびＡｂ２は互いに競合しないと決定する。固有のビンを表す９６ウェルプレート中の抗体の全ての列を使用して、このプロセスを拡張して固有の抗体からなる大きいライブラリをスクリーニングすることができる。好ましい実施形態では、参照抗体が共通の抗原に対する試験抗体の特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％または７５％阻害する場合、試験抗体は参照抗体と競合する。他の実施形態では、結合は少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％もしくは９７％またはより多く阻害される。
【０２９９】
競合抗体の群を包含するビンを定義すると、更なるキャラクタリゼーションを行なって、ビン中の抗体が結合する抗原上の特定のドメインまたはエピトープを決定することができる。Ｃｏｃｈｒａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，ＰＭＩＤ：１５０９９７６３により説明されているプロトコルの改変を使用して、ドメインレベルのエピトープマッピングを実施することができる。ファインエピトープマッピング（ｆｉｎｅ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｍａｐｐｉｎｇ）は、抗体が結合する決定基のエピトープを含む抗原上の特定のアミノ酸を決定するプロセスである。用語「エピトープ」はその一般的な生化学的意味で使用され、標的抗原において特定の抗体により認識されて特異的に結合され得る部分を意味する。特定の実施形態では、エピトープまたは免疫原性決定基として、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基等の分子の化学的に活性な表面グルーピング（ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｒｏｕｐｉｎｇ）が挙げられ、特定の実施形態では、エピトープまたは免疫原性決定基は特定の３次元構造の特徴および／または特定の電荷特徴を有することができる。特定の実施形態では、抗体が、タンパク質および／または巨大分子の複雑な混合物中でのこの抗体の標的抗原を優先的に認識する場合、この抗体はこの抗原に特異的に結合するといわれる。
【０３００】
抗原がＳＥＺ６等のポリペプチドである場合、エピトープは、概して、連続アミノ酸とタンパク質の三次折り畳みにより並置される非連続アミノ酸との両方から形成され得る（「立体構造エピトープ」）。そのような立体構造エピトープでは、相互作用点は、互いに線状に分離されているタンパク質上のアミノ酸残基にわたり生じる。連続アミノ酸から形成されたエピトープ（「線状」エピトープまたは「連続」エピトープと称されることがある）は、概して、タンパク質変性時に保持されるが、三次折り畳みにより形成されたエピトープは、概して、タンパク質変性時に消失する。抗体エピトープは、概して、固有の空間的構造中に少なくとも３個、より一般に少なくとも５個または８〜１０個のアミノ酸を含む。エピトープの決定または「エピトープマッピング」の方法は当技術分野で公知であり、本開示と併用して、開示されている抗体薬物コンジュゲートにより結合されたＳＥＺ６上のエピトープを同定することができる。
【０３０１】
適合するエピトープマッピング技術として、アラニンスキャニング変異体、ペプチドブロット（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８：４４３−６３）またはペプチド開裂分析が挙げられる。加えて、エピトープ切除、エピトープ抽出および抗原の化学的改変等の方法も用いることができる（Ｔｏｍｅｒ（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９：４８７−４９６）。他の実施形態では、抗原構造をベースとする抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＡＳＡＰ）としても既知でもある改変支援プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＭＡＰ）により、化学的にまたは酵素的に改変された抗原表面に対する各抗体の結合プロファイルの類似性に従って、同一の抗原を対象とする多数のモノクローナル抗体を分類する方法が提供される（米国特許出願公開第２００４／０１０１９２０号明細書）。この技術により、キャラクタリゼーションの焦点を遺伝的に異なる抗体に合わせることができるように遺伝的に同一の抗体の迅速なフィルタリングが可能になる。ＭＡＰを使用して、本発明に適合する抗体を異なるエピトープに結合する抗体の群に分類し得ることが認識されるであろう。
【０３０２】
抗原上の所望のエピトープを決定すると、例えば、本発明で説明されている技術を使用して、エピトープを含むペプチドで免疫化することにより、このエピトープに対する抗体を生成することができる。あるいは、発見プロセス中、抗体の生成およびキャラクタリゼーションにより、特定のドメインまたはモチーフに位置する所望のエピトープについての情報を解明することができる。次いで、この情報から、同一のエピトープへの結合に関して抗体を競合的にスクリーニングすることができる。これを達成するためのアプローチは、抗原への結合に関して競合する抗体を発見するための競合研究を行なうことである。交差競合に基づく抗体のビニングのためのハイスループットプロセスは、国際公開第０３／４８７３１号パンフレットで説明されている。酵母上の抗体競合または抗原断片発現を含むビニングもしくはドメインのレベルのマッピングまたはエピトープのマッピングの他の方法は、当技術分野で公知である。
ＶＩ  リンカー成分
一般式［−Ｗ−（Ｘ１）ａ−ＣＭ−（Ｘ２）ｂ−Ｐ−］の多数のリンカー化合物を使用して、選択されたカリケアマイシン弾頭に本発明の標的化剤をコンジュゲートさせることができる。このリンカーは、標的化剤上の反応性残基（好ましくはシステインまたはリシン）と選択されたカリケアマイシンまたはカリケアマイシン類似体とに共有結合する必要があるのみである。従って、標的化剤の選択された残基と反応する任意の開示されているカリケアマイシン−リンカー構築物は、本発明の比較的安定なコンジュゲート（部位特異的またはその他）を生成するために使用され得、本明細書の教示に適合する。
【０３０３】
好ましい実施形態では、適合するリンカーは細胞外環境中においてＡＤＣに安定性を付与することができ、ＡＤＣ分子の凝集を予防することができ、かつＡＤＣの水性媒体中でのおよび単量体状態での溶けやすさを維持することができる。細胞中への輸送または送達の前では、ＡＤＣは、好ましくは安定しており、インタクトなままであり、即ち、標的化剤はカリケアマイシンに結合したままである。リンカーは標的細胞外では安定しているが、標的ではまたは（より好ましくは）細胞内ではいくらか効果的な速度で開裂および／または分解されるように具体的に設計されている。従って、効果的なリンカーは、（ｉ）標的化剤の特異的結合特性を維持し、（ｉｉ）ペイロードまたはカリケアマイシン弾頭の細胞内送達を促進し、（ｉｉｉ）この弾頭がその標的部位に送達または輸送されるまで、安定したままおよびインタクトなままであり、即ち、開裂または分解されておらず、および（ｉｖ）選択されたカリケアマイシン（いくつかの場合、任意のバイスタンダー効果を含む）の細胞毒性、細胞死滅効果または細胞分裂停止効果を維持する。添付した実施例で示すように、標準的な分析技術（例えば、ＨＰＬＣ／ＵＰＬＣ、質量分析、ＨＰＬＣならびに分離／分析技術ＬＣ／ＭＳおよびＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）により、ＡＤＣの製造および安定性を測定することができる。
Ａ．開裂可能部分  −  （ＣＭ）
本発明に適合するリンカーは広義では開裂可能と分類され得、本明細書で定義したように少なくとも１個の開裂可能部分を含む。開裂可能リンカー（この開裂可能リンカーとして、酸に不安定なリンカー、プロテアーゼにより開裂可能なリンカーおよびジスルフィドリンカーを挙げることができる）は、好ましくは、標的細胞中に内在化され、この細胞内のエンドソーム−リソソーム経路で開裂される。そのような場合、カリケアマイシン弾頭の放出および活性化は、酸に不安定な化学結合（例えば、ヒドラゾンまたはオキシム）の開裂を促進するエンドソーム／リソソーム酸性区画に依存する場合がある。好ましくは、開示されているカリケアマイシン弾頭をその細胞内標的に近傍で放出するために、リソソーム特異的プロテアーゼ開裂部位もこのリンカー中に操作することができる。あるいは、（カリケアマイシン弾頭に近位なものに加えて）開裂可能なジスルフィド部分を含むリンカーはカリケアマイシンが細胞内に放出されるアプローチを提供し、なぜならば、このジスルフィド結合は、細胞の還元環境下では選択的に開裂されるが血流中の酸素リッチな環境下では開裂されないからである。
【０３０４】
従って、本発明の特定の好ましい実施形態は、細胞内環境中（例えば、リソソーム内またはエンドソーム内またはカベオラ内）に存在する開裂剤により開裂可能であるリンカーを含む。このリンカーは、例えば、細胞内のペプチダーゼ酵素またはプロテアーゼ酵素により開裂されるペプチジルリンカーであることができ、このプロテアーゼ酵素としてリソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、このペプチジルリンカーは少なくとも２個のアミノ酸長または少なくとも３個のアミノ酸長である。開裂剤としてカテプシンＢおよびカテプシンＤならびにプラスミンを挙げることができ、これらは、それぞれジペプチド薬物誘導体を加水分解して標的細胞内で活性カリケアマイシンを放出させることが知られている。チオール依存性プロテアーゼであるカテプシン−Ｂにより開裂される例示的なペプチジルリンカーはＰｈｅ−Ｌｅｕを含むペプチドであり、なぜならば、カテプシン−Ｂは、癌性組織中で高度に発現されることが分かっているからである。そのようなリンカーの他の例は、例えば米国特許第６，２１４，３４５号明細書で説明されている。具体的な好ましい実施形態では、細胞内プロテアーゼにより開裂可能なペプチジルリンカーは、米国特許第６，２１４，３４５号明細書で説明されているようなＶａｌ−Ｃｉｔリンカー、Ｖａｌ−ＡｌａリンカーまたはＰｈｅ−Ｌｙｓリンカーである。治療剤の細胞内タンパク質分解放出を使用することの１つの利点は、この薬剤が、コンジュゲートされる場合には概して減弱化され、コンジュゲートの血清安定性が概して高いことである。
【０３０５】
そのため、特に好ましい実施形態では、開裂可能部分は、血清中のプロテアーゼによるのとは対照的に、意図された作用部位でプロテアーゼにより優先的に開裂されるペプチド結合を含む。典型的には、開裂可能部分のペプチド成分は１〜２０個のアミノ酸を含み、好ましくは１〜６個のアミノ酸を含み、より好ましくは１〜３個のアミノ酸を含む。このアミノ酸は天然および／または非天然のα−アミノ酸であることができる。天然アミノ酸は、遺伝子コードによりコードされるものならびにそれに由来するアミノ酸（例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、シトルリンおよびＯ−ホスホセリン）である。用語アミノ酸はまた、アミノ酸の類似体および模倣物も含む。類似体は、天然アミノ酸の同じ一般的なＨ２Ｎ（Ｒ）ＣＨＣＯ２Ｈ構造を有する化合物であるが、但し、Ｒ基は天然アミノ酸中では見出されないものである。類似体の例として、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニン−スルホキシドおよびメチオニンメチルスルホニウムが挙げられる。アミノ酸模倣物は、α−アミノ酸の一般的な化学構造と異なる構造を有するが類似の様式で機能する化合物である。用語「非天然アミノ酸」は「Ｄ」立体化学形態を表すように意図されており、天然アミノ酸は「Ｌ」形態である。
【０３０６】
特に好ましい実施形態では、適合するペプチジルリンカーは、
【０３０７】
【化２６】
2018515457.tif 000030
【０３０８】
を含み、ここで、アスタリスクは、任意選択のスペーサー（もしくはリンカー）Ｘ２またはジスルフィド保護基への付着点を示し、ＴＡは、本明細書で開示されているような標的化剤であり、Ｌ１はペプチジル開裂可能部分を含み、Ｗは、Ｌ１を標的化剤上の反応性残基に連結させる連結基（任意選択でスペーサー（もしくはリンカー）Ｘ１を含む）であり、Ｌ２は共有結合であり、または−ＯＣ（＝Ｏ）−と一緒に自壊性（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）リンカーを形成する。Ｌ１−Ｌ２−ＯＣ（Ｏ）−は、式２中の−（Ｘ１）ａ−ＣＭ−および式（Ｉ／Ｉａ）中の−（Ｌ３）Ｚ１−Ｍ−に対応する。
【０３０９】
ペプチジル開裂可能リンカーの場合、Ｌ１は、好ましくは、標的部位でジスルフィド結合が開裂され、および活性ビラジカルカリケアマイシン種が生成されるリンカー分解を開始させるトリガーである。
【０３１０】
Ｌ１およびＬ２の性質は多種多様であり得ることが認識されるであろう。これらの基はそれらの開裂特性に基づいて選択され、これらの開裂特性は、コンジュゲートが送達される部位での条件により決定され得る。酵素の作用により開裂される部分が好ましいが、いくつかの場合、ｐＨの変化（例えば、酸もしくは塩基に不安定）、温度または照射（例えば、光に不安定）により開裂可能である部分が本発明に適合し、かつＣＭとして用いられ得ることを強調しなければならない。還元条件下または酸化条件下で開裂可能である部分も適合し、開裂可能部分として使用され得る。
【０３１１】
特に好ましい実施形態では、Ｌ１はアミノ酸の連続配列を含むことができる。このアミノ酸配列（即ち、開裂可能ペプチド）は酵素開裂のための標的基質であり得、それにより薬物の放出を可能にする。用語「開裂可能ペプチド」は、プロテアーゼの開裂認識配列を含むペプチドを意味する。プロテアーゼ用の開裂認識配列は、タンパク質分解開裂中にプロテアーゼにより認識されるアミノ酸配列である。多くのプロテアーゼ開裂部位が当技術分野で知られており、これらのおよび他の開裂部位を、リンカー、スペーサーまたはリンカー部分に含めることができる。例えば、Ｍａｔａｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：９５４（１９９０）、Ｄｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４１：２５４（１９９４）、Ｓｅｉｄａｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４４：１７５（１９９４）、Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４４：６１５（１９９４）、Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４４：５９５（１９９４）、Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４４：４１２（１９９４）、Ｂｏｕｖｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４８：６１４（１９９５）、Ｈａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ，ＡＭＹＬＯＩＤ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＰＲＥＣＵＲＳＯＲ  ＩＮ  ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ，ＡＧＩＮＧ，ＡＮＤ  ＡＬＺＨＥＩＭＥＲ’Ｓ  ＤＩＳＥＡＳＥ，Ｅｄ．Ｍａｓｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｐｐ．１９０−１９８（１９９４）を参照されたい。
【０３１２】
そのため、選択された実施形態では、Ｌ１は酵素の作用により開裂可能である。他の選択された実施形態では、酵素はエステラーゼまたはペプチダーゼを含むことができる。更に他の実施形態では、ペプチド配列は、このペプチド配列の、腫瘍関連プロテアーゼ（例えば、癌性細胞の表面上でまたは腫瘍細胞近くの細胞外で見出されるプロテアーゼ）により開裂される能力に基づいて選択される。そのようなプロテアーゼの例として、チメットオリゴペプチダーゼ（ｔｈｉｍｅｔ  ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）（ＴＯＰ）、ＣＤＩＯ（ネプリライシン）、マトリックスメタロプロテアーゼ（例えば、ＭＭＰ２またはＭＭＰ９）、ＩＩ型膜貫通セリンプロテアーゼ（例えば、ヘプシン、テスティシン（ｔｅｓｔｉｓｉｎ）、ＴＭＰＲＳＳ４またはマトリプターゼ／ＭＴ−ＳＰ１）およびレグマインが挙げられる。ペプチドの腫瘍関連プロテアーゼにより開裂される能力を、当技術分野で既知のｉｎ  ｖｉｔｒｏプロテアーゼ開裂アッセイを使用して試験することができる。
【０３１３】
細胞により内在化されるように設計されているコンジュゲートの場合、開裂可能部分は、エンドソームプロテアーゼまたはリソソームプロテアーゼによる開裂用に選択されたアミノ酸配列を好ましくは含む。そのようなプロテアーゼの非限定的な例としてカテプシンＢ、Ｃ、Ｄ、Ｈ、ＬおよびＳが挙げられ、特にカテプシンＢが挙げられる。カテプシンＢは配列−ＡＡ２−ＡＡ１−（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ（Ｃｉｔはシトルリンを表す）またはＶａｌ−Ｌｙｓ）でペプチドを優先的に開裂し、この配列中、ＡＡ１は塩基性のまたは強い水素結合アミノ酸（例えば、リシン、アルギニンまたはシトルリン）であり、ＡＡ２は疎水性アミノ酸（例えば、フェニルアラニン、バリン、アラニン、ロイシンまたはイソロイシン）である。（ここで、別途文脈が明確に示さない限り、Ｈ２Ｎ−ＡＡ２−ＡＡ１−ＣＯ２ＨのようにＮからＣへの方向でアミノ酸配列を記載する）。カテプシン開裂可能基に関する更なる情報に関して、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８，３３４１−３３４６（１９９８）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，８  ３３４７−３３５２（１９９８）およびＤｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３，８５５−８６９（２００２）を参照されたい。これらの開示は参照により組み込まれる。ペプチジルリンカーの開裂に用いることができる別の酵素は、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎで優先的に開裂するリソソームシステインプロテアーゼであるレグマインである。
【０３１４】
従って、好ましい実施形態では、Ｌ１はペプチドを含む。特定の選択された実施形態では−ＮＨ−ＡＡ２−ＡＡ１−ＣＯ−と表されるジペプチドであることができ、−ＮＨ−および−ＣＯ−は、それぞれアミノ酸基のＮ末端およびＣ末端を表す。他の実施形態では、開裂可能ペプチドはトリペプチド、クアトラペプチド（ｑｕａｔｒａｐｅｐｔｉｄｅ）またはペンタペプチドであることができ、各アミノ酸は、独立してＬ異性体またはＤ異性体である。
【０３１５】
特定の実施形態では、このペプチドは下記からなる群から選択される：Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号３）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号４）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号５）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−ＡｌａおよびＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−ＣｉｔおよびＡｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ。他の代替では、このペプチドは下記からなる群から選択される：Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−ＡｌａおよびＡｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ。あるいは、このペプチドはＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｇｌｕ−ＡｌａまたはＧｌｕ（ＯＭｅ）−Ａｌａである。関連する実施形態では、本明細書での上記のペプチド配列はいずれも、上記で定義したようにいずれの方向であってもよい。
【０３１６】
更に、カルボキシル側鎖官能基およびアミノ側鎖官能基（例えば、それぞれＧｌｕおよびＬｙｓ）を有するアミノ酸基の場合、ＣＯおよびＮＨは、このアミノ酸基の側鎖官能基を表すことができる。
【０３１７】
一実施形態では、ジペプチド（−ＮＨ−ＡＡ２−ＡＡ１−ＣＯ−）中の−ＡＡ２−ＡＡ１−基は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｌａ−、−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、−Ａｌａ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｃｉｔ−、−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ−、−Ｉｌｅ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−および−Ｔｒｐ−Ｃｉｔ−から選択され、Ｃｉｔはシトルリンである。
【０３１８】
好ましくは、ジペプチド（−ＮＨ−ＡＡ２−ＡＡ１−ＣＯ−）中の−ＡＡ２−ＡＡ１−基は、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−、−Ｖａｌ−Ａｌａ−、−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−、−Ａｌａ−Ｌｙｓ−および−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−から選択される。
【０３１９】
最も好ましくは、ジペプチド（−ＮＨ−ＡＡ２−ＡＡ１−ＣＯ−）中の−ＡＡ２−ＡＡ１−基は、−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−、−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−または−Ｖａｌ−Ａｌａ−である。
【０３２０】
特定の好ましい実施形態では、Ｌ２が存在し、かつ−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−と一緒に自壊性リンカーを形成する。他の実施形態では、Ｌ２は酵素活性用の基質であり、それにより薬物の放出が更に調節される。
【０３２１】
Ｌ１が酵素の作用により開裂可能であり、かつＬ２が存在する一実施形態では、この酵素はＬ１とＬ２との間の結合を開裂する。
【０３２２】
特定の実施形態では、Ｌ１およびＬ２（存在する場合）は、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）−、−ＮＨ（Ａｒ）、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ−および−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ−から選択される結合により連結され得る。
【０３２３】
Ｌ２に連結するＬ１のアミノ基は、アミノ酸のＮ末端であってもよく、またはアミノ酸側鎖（例えば、リシンアミノ酸側鎖）のアミノ基に由来してもよい。
【０３２４】
ペプチジル開裂可能部分を含む適合するカリケアマイシン−リンカー構築物の特に好ましい実施形態を式４〜１２として直下に記載する。式６〜１２の構築物は、所望のジペプチド部分での置換のみで実施例３（式４、Ｖａｌ−Ｃｉｔ）および実施例４（式５、Ｖａｌ−Ａｌａ）に記載するように実質的に製造され得ることが認識されるであろう。更に、本開示を考慮して、当業者は、類似の合成スキームを使用して更なるペプチジルリンカーカリケアマイシン構築物を容易に製造することができる。
【０３２５】
【化２７】
2018515457.tif 000031
【０３２６】
【化２８】
2018515457.tif 000032
【０３２７】
【化２９】
2018515457.tif 000033
【０３２８】
【化３０】
2018515457.tif 000034
【０３２９】
Ｌ２に連結するＬ１のカルボキシル基は、アミノ酸のＣ末端であってもよく、またはアミノ酸側鎖（例えば、グルタミン酸アミノ酸側鎖）のカルボキシル基に由来してもよい。
【０３３０】
Ｌ２に連結するＬ１のヒドロキシル基は、アミノ酸側鎖（例えば、セリンアミノ酸側鎖）のヒドロキシル基に由来してもよい。
【０３３１】
用語「アミノ酸側鎖」には下記で見出される基が含まれる：（ｉ）天然に存在するアミノ酸、例えばアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリン；（ｉｉ）マイナーなアミノ酸、例えばオルニチンおよびシトルリン；（ｉｉｉ）非天然アミノ酸、ベータ−アミノ酸、天然に存在するアミノ酸の合成類似体および合成誘導体；ならびに（ｉｖ）全ての鏡像異性体、ジアステレオマー、異性体富化形態、同位体標識（例えば、２Ｈ、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ）形態、保護形態およびそれらのラセミ混合物。
【０３３２】
一実施形態では、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−およびＬ２は、一緒に基：
【０３３３】
【化３１】
2018515457.tif 000035
【０３３４】
を形成し、この基中、アスタリスクは任意選択のスペーサーＸ２またはジスルフィド保護基への付着点を示し、波線は開裂可能部分への付着点を示し、Ｙは−Ｎ（Ｈ）−、−Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）−または−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−であり、ｎは０〜３である。フェニレン環は、本明細書で説明されている１種、２種または３種の置換基で任意選択的に置換されている。一実施形態では、フェニレン基は、ハロ、ＮＯ２、ＲまたはＯＲ（Ｒは上記で定義されている）で任意選択的に置換されている。
【０３３５】
一実施形態ではＹはＮＨである。
【０３３６】
一実施形態ではｎは０または１である。好ましくは、ｎは０である。
【０３３７】
ＹがＮＨであり、かつｎが０である場合、自壊性リンカーをｐ−アミノベンジルカルボニルリンカー（ＰＡＢＣ）と称することができる。
【０３３８】
特に好ましい実施形態では、リンカーは自壊性リンカーを含むことができ、ジペプチドは、一緒に下記：
【０３３９】
【化３２】
2018515457.tif 000036
【０３４０】
に示す−ＮＨ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−基（式５を参照されたい）を形成し、この基中、アスタリスクは、任意選択のスペーサーまたはカリケアマイシン弾頭に近位のジスルフィド保護基への付着点を示し、波線は、抗体にコンジュゲートされ得るリンカーの残余部分（例えば、任意選択のスペーサー−連結基セグメント）への付着点を示す。酵素によるジペプチドの開裂時、自壊性リンカーは、下記：
【０３４１】
【化３３】
2018515457.tif 000037
【０３４２】
に示すラインに沿って進行しながら、遠隔部位が活性化された場合、保護された化合物（即ち、カリケアマイシンジスルフィド類似体）の完全な放出を可能とし、このライン中、Ｌ＊は、開裂されたばかりのペプチジルユニットと標的化抗原とを含むリンカーの残余部分の形態である。ジスルフィド保護基と共にカリケアマイシン類似体を完全に放出することにより、残余のリンカー断片の分解および所望のジラジカル種の生成が促進される。他の特に好ましい実施形態では、選択されたリンカーは−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯ−ＮＨ−ＰＡＢＣ−（式４を参照されたい）を含む。
【０３４３】
自壊化（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｎｇ）部分に関する更なる開示に関して、Ｃａｒｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２４（３），４７９−４８０（１９８１）、Ｃａｒｌ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第８１／０１１４５号パンフレット（１９８１）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８３，６７−１２３（１９９９）、Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第６，２１４，３４５Ｂ１号明細書（２００１）、Ｔｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７，１８６６−１８７２（２００２）、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２１（７），７７８−７８４（２００３）（正誤表、ｐ．９４１）、Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第７，６９１，９６２Ｂ２号明細書、Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許出願公開第２００８／０２７９８６８Ａ１号明細書、Ｓｕｆｉ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００８／０８３３１２Ａ２号パンフレット、Ｆｅｎｇ，米国特許第７，３７５，０７８Ｂ２号明細書、およびＳｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許出願公開第２００３／００９６７４３Ａ１号明細書を参照されたい（これらの開示は参照により組み込まれる）。
【０３４４】
他の実施形態では、開裂可能リンカーはｐＨ感受性である（例えば、式１３および式１４を参照されたい）。典型的には、このｐＨ感受性リンカーは酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソーム中で加水分解可能である酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン、オキシム、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、ｃｉｓ−アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールまたは同類のもの）を使用することができる（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号明細書、米国特許第５，８２４，８０５号明細書、米国特許第５，６２２，９２９号明細書を参照されたい）。そのようなリンカーは、中性ｐＨ条件（例えば、血液中のｐＨ条件）下では比較的安定であるが、リソソームの近似ｐＨであるｐＨ５．５または５．０未満では不安定である。そのため、開裂が酸触媒される開裂可能部分は、血漿速度と比べてリソソーム内で数桁早い速度で開裂する。適切な酸感受性基の例として、Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，６３１，１９０号明細書（１９８６）、Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，１４４，０１１号明細書（１９９２）、Ｓｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１０２，１０４８−１０５４（１９８１）およびＹａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ（ＵＳＡ），８５，１１８９−１１９３（１９８８）で説明されているようにｃｉｓ−アコニチルアミドおよびヒドラゾンが挙げられ、これらの文献の開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０３４５】
更に他の実施形態では、リンカーは還元条件下で開裂可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。ジスルフィドは、周囲のチオール濃度に依存する速度でチオール−ジスルフィド交換機構により開裂され得る。グルタチオンおよび他のチオールの細胞内濃度はそれらの血清濃度と比べて高いことから、ジスルフィドの開裂速度は細胞内ではより高いであろう。更に、チオール−ジスルフィド交換速度を、ジスルフィドの立体的特性および電子的特性の調整（例えば、アルキル−アリールジスルフィド対アルキル−アルキルジスルフィド、アリール環上の置換等）によって調節することができ、血清安定性の増強または特定の開裂速度を有するジスルフィド結合の設計が可能になる。様々なジスルフィドリンカーが当技術分野で既知であり、例えば、ＳＴＡＴ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート）およびＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）を使用して形成され得るものが挙げられる。コンジュゲート中でのジスルフィド開裂可能基に関する更なる開示に関して、例えばＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８，６３９６−６４０３（１９８８）、Ｓａｎｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第７，５４１，５３０Ｂ２号明細書（２００９）、Ｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第６，９８９，４５２Ｂ２号明細書（２００６）、Ｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００２／０９６９１０Ａ１号パンフレット、Ｂｏｙｄ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第７，６９１，９６２Ｂ２号明細書およびＳｕｆｉ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許出願公開第２０１０／０１４５０３６Ａ１号明細書を参照されたい（これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）。
Ｂ．任意選択のスペーサー（Ｘ１およびＸ２）
既に示唆したように、開示されている開裂可能部分は、１個または複数個の任意選択のスペーサー（Ｘ１およびＸ２）に隣接し得、または標的化剤もしくはジスルフィド保護基のいずれかと直接会合してもよく、即ち、スペーサーＸ１およびＸ２は存在しなくてもよく、または独立して存在してもよい。例えば、開裂可能部分がジスルフィドを含む場合、２個の硫黄のうちの１個は、システイン残基またはその代用物である標的化剤であることができる。他の実施形態では、開裂可能部分は、抗体の炭水化物側鎖上のアルデヒドに結合したヒドラゾンであることができる。他の好ましい実施形態では、開裂可能部分は（潜在的に任意選択の自壊性基と一緒に）、選択された立体配置の２個のスペーサーに結合されていてもよい。
【０３４６】
用語「スペーサー」は、本明細書で使用する場合、任意の２個の化学基間に介在する化学的部分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、スペーサーの一端（例えば、Ｘ１）は標的化剤に直接結合しているが、他の実施形態では、細胞結合剤と共有結合を形成することができる反応性官能基（即ち、連結基）に直接結合している。更に他の実施形態では、スペーサーの一端（例えば、Ｘ２）は、ジスルフィド保護基またはジスルフィド保護基と共有結合を形成することができる反応性官能基に結合している。いくつかの実施形態では、スペーサーの一端は、分枝した足場に結合している。いくつかの実施形態では、スペーサーは、（１）標的化剤または標的化剤と共有結合を形成することができる反応性官能基と、（２）分枝した足場との間に挿入されている。いくつかの実施形態では、スペーサーは、（１）ジスルフィド保護基またはジスルフィド保護基と共有結合を形成することができる反応性官能基と、（２）分枝した足場との間に挿入されている。特定の好ましい実施形態では、スペーサーは一端で反応性官能基に付着されて、標的化剤または保護ジスルフィド基と更に反応することができるリンカー部分を形成してもよい。
【０３４７】
用語「分枝した足場」は、本明細書で使用する場合、２個以上のスペーサーに結合した化学的部分（即ち、「分枝ユニット」）を含む。分枝した足場により、２個以上のカリケアマイシン部分が標的化剤に付着することが可能になる（式１５）。例示的な分枝した足場は、アミノ基（例えば、Ｌｙｓ）またはカルボキシル基（例えば、ＧｌｕもしくはＡｓｐ）を含む側鎖を有するアミノ酸または２個以上のそのようなアミノ酸を含むペプチド（例えば、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ二量体等）に由来してもよい。他の実施形態では、この分枝ユニットは、第三級アミン等の反応性部分に由来してもよく、またはこの反応性部分を含んでもよい。
【０３４８】
特定の実施形態では、スペーサーは２個の化学基間に所望の距離を作り、例えば、立体障害を回避するか、または分子の柔軟性を促進する。特定の実施形態では、スペーサーの存在により、隣接する化学基の機能（例えば、細胞結合剤の細胞上の標的分子に結合する能力、または細胞毒性剤の細胞毒性）は妨げられないか、阻害されないか、または他に悪影響が及ばない。特定の実施形態では、スペーサーは、このスペーサーを含む免疫コンジュゲートまたはリンカー化合物に更なる有利な特徴（例えば、力価、溶解性、血清安定性および／または有効性の増強）を付与する。特定の実施形態では、スペーサーは１個または複数個のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個またはより多くの残基）を含むことができ、このアミノ酸残基は、プロテアーゼまたはペプチダーゼ（例えば、細胞内／リソソームペプチダーゼ）による開裂に対して耐性を示してもよく、または示さなくてもよい。特定の実施形態では、スペーサーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）単位である−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）−の１個または複数個の反復（例えば、１〜１０００個のＰＥＧ単位、１〜５００個のＰＥＧ単位、１〜２４個のＰＥＧ単位または２〜８個のＰＥＧ単位（２個、４個、６個もしくは８個のＰＥＧ単位））を含むことができる。他の実施形態では、好ましいスペーサーは、直鎖のまたは分枝した置換または非置換のアルキル部分またはアリール部分を含む。更に他の実施形態では、任意選択のスペーサーＸ１またはＸ２のいずれかが自壊化部分を含むことができる。
Ｃ．ジスルフィド保護基  −  （Ｐ）
既に示したように、カリケアマイシンのジスルフィド基は、好ましくは、ＡＤＣが標的細胞に達するまで安定性（例えば、血漿安定性）を付与する短鎖の置換または非置換の二官能性の脂肪族基またはアリール基（ジスルフィド保護基）により保護されている。これについて、ジスルフィド保護基は、任意選択のスペーサーＸ２によりカリケアマイシンのジスルフィド基と共有結合するか、またはスペーサーが存在しない場合には開裂可能部分もしくは任意選択の自壊性基によりカリケアマイシンのジスルフィド基と直接共有結合する。その際、ジスルフィド保護基はジスルフィド結合にある程度の立体障害を付与し、それにより、チオール−ジスルフィド交換反応による開裂に対するジスルフィド結合の感受性が低下する。本開示を考慮して、当業者は、所望の安定性を付与し、かつカリケアマイシンＡＤＣの治療指数を最適化する、適合するジスルフィド保護基を容易に選択することができる（Ｋｅｌｌｏｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ，２０１１，２２，７１７−７２７を参照されたい）。ジスルフィド結合を安定化させる更なる方法を米国特許出願公開第２００１００３６９２６号明細書中に見出すことができ、この特許出願は参照により本明細書に組み込まれる。
【０３４９】
特に好ましい実施形態では、ジスルフィド保護基は、環式または非環式の直鎖または分枝鎖のＣ１〜Ｃ１２の飽和または不飽和の脂肪族部分を含む。特定の好ましい実施形態では、この脂肪族部分は置換されていてもよい。他の好ましい実施形態では、この脂肪族部分は置換されていなくてもよい。更に他のジスルフィド保護基の実施形態は、ジスルフィド部分に近位の炭素に結合した１個または２個のメチル基を有する脂肪族部分を含む。更に他の実施形態では、この脂肪族部分は、ジスルフィド部分に近位の炭素に結合した単一のメチル基を含む。他の好ましい実施形態は、この近位炭素から１個、２個または３個の炭素で離れて１個または複数個のメチル基を有する脂肪族部分を含む。そのような各構築物により付与された安定性を、当技術分野で認識されている技術を使用して容易に測定することができる。いずれの場合でも、選択されたジスルフィド保護基は、ジスルフィド結合の安定性を増加させるように、かつｉｎ  ｖｉｖｏでのカリケアマイシンＡＤＣの半減期を延長するように作用する。
Ｄ．連結基  −  （Ｗ）
連結基を使用して、開示されているカリケアマイシン構築物を標的化剤と会合させて本発明の抗体薬物コンジュゲートを生成する。好ましい実施形態では、そのような連結剤は、タンパク質標的化剤の表面上の選択された天然アミノ酸（システイン、リシン、チロシン、トリプトファン）の化学選択的改変に関与することが知られている部分、グルココンジュゲーション（ｇｌｕｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）に関与することが知られている反応性官能基、非天然アミノ酸との化学選択的反応に適した反応性部分、特定のペプチドタグとの酵素反応によるバイオコンジュゲーションに適した反応性基を含むことができる（これらの方法の一般的な説明に関して、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１５，２６，１７６−１９２を参照されたい）。本明細書で詳細に論じるように、部位特異的抗体薬物コンジュゲートの生成に適したチオールベースの連結基が特に好ましい。
【０３５０】
多くの適合するリンカーは、還元システインおよび還元リシンに有利に結合することができ、これら還元システインおよび還元リシンは求核性である。還元システインおよび還元リシンを含むコンジュゲーション反応として下記が挙げられるがこれらに限定されない：チオール−マレイミド反応、チオール−ジブロモマレイミド反応、チオール−ハロゲノ（ハロゲン化アシル）反応、チオール−エン反応、チオール−イン反応、チオール−ビニルスルホン反応、チオール−ビスルホン反応、チオール−チオスルホネート反応、チオール−ピリジルジスルフィド反応およびチオール−パラフルオロ反応。本明細書で更に論じるように、チオール−マレイミドバイオコンジュゲーションは、このバイオコンジュゲーションの早い反応速度および穏和なコンジュゲーション条件に起因して、最も広く使用されるアプローチのうちの１つである。このアプローチに関する１つの問題は、レトロマイケル反応とマレイミドが結合したペイロードの喪失または抗体から血漿中の他のタンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン等）への移動との可能性である。しかしながら、好ましい実施形態では、本明細書の実施例８および実施例９に記載の選択的還元および部位特異的抗体を使用して、コンジュゲートを安定化させ、かつこの望ましくない移動を低減することができる。チオール−ハロゲン化アシル反応は、レトロマイケル反応を受ける可能性がなく、従ってより安定であるバイオコンジュゲートを可能にする。残念ながら、チオール−ハロゲン化物反応は、概して、マレイミドベースのコンジュゲーションと比較して反応速度が遅く、そのため望ましくない薬物対抗体比が生じるほど効率的ではない。チオール−ピリジルジスルフィド反応は、別の一般的なバイオコンジュゲーション経路である。ピリジルジスルフィドは遊離チオールと迅速に交換されて、混合型ジスルフィドが生じ、かつピリジン−２−チオンが放出される。混合型ジスルフィドを、ペイロードが放出される還元的な細胞環境下で開裂することができる。バイオコンジュゲーションにおいてより注目を集める他のアプローチはチオール−ビニルスルホン反応およびチオール−ビスルホン反応であり、これらはそれぞれ本明細書の教示に適合し、本発明の範囲に明確に含まれる。上述のコンジュゲーションの技術および試薬がそれぞれ本発明に適合し、開示されている抗体薬物コンジュゲートを生成するために用いられ得ることを当業者は認識するであろう。
【０３５１】
上述の手順にも関わらず、本発明のカリケアマイシン−リンカーは、好ましくは、システイン上の反応性チオール求核試薬（例えば、遊離システインにより提供されるもの）に結合される。この目的のために、標的化剤のシステインを、ＤＴＴもしくはＴＣＥＰ等の様々な還元剤または本明細書に記載の穏和な還元剤で処理することにより、リンカー試薬とのコンジュゲーションのために反応性とすることができる。
【０３５２】
これに関して、好ましい連結基は、タンパク質標的剤上の求核性官能基との反応のための求電子性官能基を含む。タンパク質上の求核基として下記が挙げられるがこれらに限定されない：（ｉ）Ｎ−末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えばリシン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えばシステイン、および（ｉｖ）抗体がグリコシル化されている場合には糖ヒドロキシル基またはアミノ基。アミン基、チオール基およびヒドロキシル基は求核であり、リンカー部分上のおよびリンカー試薬上の求電子基と反応して共有結合を形成することができ、この求電子基として下記が挙げられる：（ｉ）マレイミド基、（ｉｉ）活性化ジスルフィド、（ｉｉｉ）活性エステル、例えばＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）エステル、ＨＯＢｔ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）エステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物、（ｉｖ）ハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジル、例えばハロアセトアミド、ならびに（ｖ）アルデヒド基、ケトン基およびカルボキシル基。
【０３５３】
好ましい連結基は、下記：
【０３５４】
【化３４】
2018515457.tif 000038
【０３５５】
を含む。
【０３５６】
選択された実施形態では、標的化剤とカリケアマイシン−リンカー部分との間の連結は、標的化剤上のシステイン（例えば、遊離システイン）のチオール残基とリンカー上に存在する末端マレイミド基（即ち、連結基）とを通る。そのような実施形態では、タンパク質標的化剤とカリケアマイシン−リンカーとの間の連結は、下記：
【０３５７】
【化３５】
2018515457.tif 000039
【０３５８】
であり、ここで、アスタリスクはカリケアマイシン−リンカーの残存部分への付着点を示し、波線は標的化剤の残存部分への付着点を示す。選択された実施形態では、硫黄原子は、好ましくは、部位特異的遊離システインに由来し得る。他の適合するリンカーに関しては、連結基は、活性化された残基と反応して所望のコンジュゲートを生成することができる末端ヨードアセトアミドを含む。いずれにせよ、当業者は、本開示を考慮して、開示されているカリケアマイシン−リンカー構築物のそれぞれと、適合する標的化剤（例えば、部位特異的抗体）とを容易にコンジュゲートさせることができる。
【０３５９】
活性化チオール基に加えて、リシンコンジュゲーションは様々な活性化エステルにより生じてもよく、この活性化エステルとして、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ｓｕｃｃｉｎａｉｍｉｄｅ）（ＮＨＳ）エステル、ペンタフルオロフェノールエステル、テトラフルオロフェノエステル、パラ−ニトロフェノールエステル、ヒドロキシル−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）エステルおよび他のものが挙げられるがこれらに限定されない。ｐＫａが摂動したリシンの特定の場合、部位特異的リシンコンジュゲートは、アザテジノン（ａｚａｔｅｄｉｎｏｎｅ）部分とベータ−ジケトンとの反応により生成されてもよい。
【０３６０】
他の実施形態では、チロシン抗体成分およびトリプトファン抗体成分を、ジアゾニウム塩、オキサジアゾール３，５−ジオン誘導体、環式イミンおよび他の官能基を使用してコンジュゲートさせることができる。
【０３６１】
他の実施形態は、開示されているカリケアマイシン構築物を、特定の標的化剤（例えば、抗体）上に存在するＮ−グリカンにコンジュゲートさせることを含む。一般に用いられる一方法は、過ヨウ素酸塩による処理によって隣接ジオールでグリカンを酸化してアルデヒドを生成することを含む。次いで、リンカー上の連結基を、アルデヒド反応性官能基（例えば、還元アミノ化に適したヒドラジン、アミノオキシ化合物またはアミン）から選択する。他の好ましい実施形態では、リンカー上の連結基を、様々な歪んだシクロオクチンから選択する。他の適合するアプローチは、標的化剤の表面上のチオール官能化グリカンの代謝発現を含む。次いで、上記に記載のシステイン活性連結基を介して、チオールのコンジュゲーションが可能となる。
【０３６２】
更に他の適合する実施形態では、標的化剤中の非天然アミノ酸の組込みにより、双直交の（ｂｉｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）化学官能基の予め選択した部位への効率的なコンジュゲーションが可能になる。次いで、連結基を、相補的な双直交の反応性官能基から選択する。例えば、組み込まれたｐ−アセチルフェニルアラニン残基を、ケトン反応性連結基（例えば、還元アミノ化に適したヒドラジン、アミノオキシ化合物およびアミン）を使用してコンジュゲートさせることができる。あるいは、アジド官能化された非天然アミノ酸を、銅を含まないクリック化学試薬（例えば、歪んだシクロオクチン）を使用して組み込むことができ、かつコンジュゲートさせることができる。
【０３６３】
更に他の適合する実施形態は、カリケアマイシン構築物と開示されている標的化剤との酵素により媒介されるコンジュゲーションを含む。この目的のために、ビオチンリガーゼ、トランスグルタミナーゼ（ｔｒａｎｓｌｕｔａｍｉｎａｓｅ）およびリポ酸リガーゼを使用して、小分子をタンパク質部位に特異的にライゲートさせることができる。例えば、トランスグルタミナーゼは、グルタミン側鎖と第一級アミン連結基を含む小分子との間でのアミド結合の形成を触媒する。特に好ましい一実施形態は、トランスグルタミナーゼ  ストレプトベルティシリウム・モバラネーゼ（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｔｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍｏｂａｒａｎｅｓｅ）による特異的ペプチドタグ（ＬＬＱＧＡ）の改変およびその後のコンジュゲーションを含む。このペプチドタグは、単一のタグが抗体の重鎖および軽鎖に組み込まれている場合に最も効率的にコンジュゲートされることが分かっている。そのような立体配置は、ＭＭＡＤ−アミンとの反応において約１．８〜１．９で薬物抗体比レベルを再現性よく可能にする。代替の戦略として、ホルミルグリシン生成酵素が用いられている。この酵素は、ペプチドタグＣＸＰＸＲ内のシステイン残基をホルミルグリシンに変換する。ホルミルグリシンは、適切な連結基とのオキシムおよびヒドラジンの形成に適合するが、好ましくは、アミノオキシ官能化またはヒドラジン官能化のトリプタミン連結基とのＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒライゲーションによりコンジュゲートされる。そのような反応の生成物は生理学的条件下で非常に安定であることが分かっており、本発明に従ってカリケアマイシンＡＤＣを容易に生成することができる。
【０３６４】
一般的な抗体に連結されたカリケアマイシン−リンカー構築物の例を、式４’〜１２’および１４’〜１７’として直下に記載する。記号
【０３６５】
【化３６】
2018515457.tif 000040
【０３６６】
は、式ＩにおけるＡｂへの付着点を表す。
【０３６７】
本開示を考慮して、当業者は、類似の合成スキームを使用して更なるペプチジルリンカーカリケアマイシン構築物を容易に製造することができる。
【０３６８】
【化３７】
2018515457.tif 000041
【０３６９】
【化３８】
2018515457.tif 000042
【０３７０】
【化３９】
2018515457.tif 000043
【０３７１】
【化４０】
2018515457.tif 000044
【０３７２】
【化４１】
2018515457.tif 000045
【０３７３】
ＶＩＩ  コンジュゲーション調製物
Ａ．コンジュゲーションの手順
上記で示唆したように、多くの公知の異なる反応を使用して、開示されているカリケアマイシン−リンカー構築物を選択された標的化剤に付着させることができる。例えば、システインのスルフヒドリル基を利用する様々な反応を用いて、所望のペイロードをコンジュゲートさせることができる。特に好ましい実施形態は、下記で詳細に論じるように、１個または複数個の遊離システインを含む抗体のコンジュゲーションを含む。他の実施形態では、選択された抗体中に存在するリシン残基の溶媒に曝露されたアミノ基へのカリケアマイシンのコンジュゲーションにより、本発明のＡＤＣを生成することができる。更に他の実施形態はＮ末端のスレオニン残基およびセリン残基の活性化を含み、次いで、これらの残基を使用して、開示されているペイロードを抗体に付着させることができる。選択されたコンジュゲーション方法論は、好ましくは、抗体に付着する薬物の数を最適化するようにおよび比較的高い治療指数を可能にするように調整される。
【０３７４】
治療用化合物をシステイン残基にコンジュゲートさせるための様々な方法が当技術分野で既知であり、当業者に明らかであろう。塩基性条件下でシステイン残基を脱プロトン化して、ソフトな求核試薬（例えば、マレイミドおよびヨードアセトアミド）と反応させることができる求核試薬であるチオレートを生成することができる。そのようなコンジュゲーション用の一般的な試薬は、システインのシステインチオールと直接反応して、コンジュゲートされたタンパク質を形成する場合があり、リンカー−薬物と反応してリンカー−薬物中間体を形成する場合もある。リンカーの場合、有機化学の反応、条件および試薬を用いるいくつかの経路が当業者に既知であり、この経路として下記が挙げられる：（１）本発明のタンパク質のシステイン基とリンカー試薬との反応であって、共有結合によりタンパク質−リンカー中間体を形成するための反応、およびその後の活性化された化合物との反応、ならびに（２）ある化合物の求核基とリンカー試薬との反応であって、共有結合により薬物−リンカー中間体を形成するための反応、およびその後の本発明のタンパク質のシステイン基との反応。好ましい実施形態では、開示されている二官能性リンカーは、システイン残基への共有結合のためのチオール改変基と、カリケアマイシンへの共有結合または非共有結合のための少なくとも１個の付着部分（例えば、第２のチオール改変部分）とを含むことができる。
【０３７５】
コンジュゲーション前に還元剤（例えば、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）または（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ））で処理することにより、リンカー試薬とのコンジュゲーションに関して抗体を反応性にすることができる。他の実施形態では、リシンと試薬（２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）、ＳＡＴＡ、ＳＡＴＰまたはＳＡＴ（ＰＥＧ）４が挙げられるがこれらに限定されない）との反応により、更なる求核基を抗体に導入することができ、この反応によりアミンがチオールへと変換される。
【０３７６】
そのようなコンジュゲーションに関して、システインチオール基またはリシンアミノ基は求核であり、リンカー試薬上のまたは化合物−リンカー中間体上のまたは薬物上の求電子基と反応して共有結合を形成することができ、この求電子基として下記が挙げられる：（１）活性エステル、例えばＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメートおよび酸ハロゲン化物、（ｉｉ）ハロゲン化アルキルおよびハロゲン化ベンジル、例えばハロアセトアミド、（ｉｉｉ）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基およびマレイミド基、ならびに（ｉｖ）ジスルフィド、例えば、スルフィド交換によるピリジルジスルフィド。化合物上のまたはリンカー上の求核基として下記が挙げられるがこれらに限定されない：リンカー部分上のおよびリンカー試薬上の求電子基と反応して共有結合を形成することができる、アミン基、チオール基、ヒドロキシル基、ヒドラジド基、オキシム基、ヒドラジン基、チオセミカルバゾン基、ヒドラジンカルボキシレート基およびアリールヒドラジド基。
【０３７７】
好ましい標識試薬として、マレイミド、ハロアセチル、ヨードアセトアミドスクシンイミジルエステル、イソチオシアネート、スルホニルクロリド、２，６−ジクロロトリアジニル、ペンタフルオロフェニルエステルおよびホスホラミダイトが挙げられるが、他の官能基も使用することができる。特定の実施形態では、方法として例えば下記が挙げられる：システインのチオールと反応して化合物との反応性であるチオエーテルを生成する、マレイミド、ヨードアセトイミドまたはハロゲン化ハロアセチル／アルキル、アジリジン（ａｚｉｒｉｄｎｅ）、アクリロイル誘導体の使用。活性化されたピリジルジスルフィドとの遊離チオールのジスルフィド交換もコンジュゲートの生成に有用である（例えば、５−チオ−２−ニトロ安息香酸（ＴＮＢ）の使用）。好ましくはマレイミドを使用する。
【０３７８】
上記で示したように、反応性残基としてリシンを使用して、本明細書に記載のコンジュゲーションを生じさせることもできる。求核性リシン残基は、概して、アミン反応性のスクシンイミジルエステルを介して標的を定める。最適な数の脱プロトン化リシン残基を得るためには、水溶液のｐＨはリシンアンモニウム基のｐＫａ（約１０．５である）未満でなければならず、そのため、反応の典型的なｐＨは約８および９である。カップリング反応用の一般的な試薬は、リシンアシル化機構により求核リシンと反応するＮＨＳ−エステルである。類似の反応を受ける他の適合する試薬は、本明細書の教示と共に使用されてＡＤＣを生成することもできるイソシアネートおよびイソチオシアネートを含む。リシンが活性化されると、上述の結合基のうちの多くを使用して、抗体に弾頭を共有結合させることができる。
【０３７９】
化合物をスレオニン残基またはセリン残基（好ましくはＮ末端残基）へとコンジュゲートするための方法も当技術分野で既知である。例えば、カルボニル前駆体がセリンまたはスレオニンの１，２−アミノアルコールに由来する方法も説明されており、このカルボニル前駆体は、過ヨウ素酸塩酸化によりアルデヒド形態へと選択的にまたは迅速に変換され得る。アルデヒドと本発明のタンパク質に付着する化合物中のシステインの１，２−アミノチオールとの反応により、安定したチアゾリジン生成物が形成される。この方法は、Ｎ末端のセリン残基またはスレオニン残基でのタンパク質の標識に特に有用である。
【０３８０】
特に好ましい実施形態では、１個、２個、３個、４個またはより多くの遊離システイン残基を導入することにより（例えば、１個または複数個の遊離の非天然システインアミノ酸残基を含む抗体を調製することにより）、反応性チオール基を選択された抗体（またはその断片）に導入することができる。上記に記載したように、そのような部位特異的なまたは操作された抗体は、本明細書に記載の操作された遊離システイン部位および／または新規のコンジュゲーション手順の実現に少なくとも部分的に起因して、安定性の増強および実施的な均一性を示すコンジュゲート調製物を可能にする。鎖内のまたは鎖間の各抗体ジスルフィド結合を完全にまたは部分的に還元してコンジュゲーション部位を生成する（および本発明に完全に適合する）従来のコンジュゲーション方法論と異なり、本発明により、特定の調製された遊離システイン部位の選択的還元と、この遊離システイン部位へのカリケアマイシン−リンカーの方向付けとが更に可能になる。操作された部位および選択的還元より促進されるコンジュゲーションの特異性により、所望の位置での高い割合の部位特異的コンジュゲーションが可能になる。意義深いことに、これらのコンジュゲーション部位のいくつか（例えば、軽鎖定常領域の末端領域中に存在するもの）は、概して、他の遊離システインと交差反応する傾向があることから効率的にコンジュゲートすることが困難である。しかしながら、分子操作および結果として得られる遊離システインの選択的還元により、効率的なコンジュゲーション率を得ることができ、これにより、望ましくない高ＤＡＲ夾雑物および非特異的毒性が相当に低減される。より一般的には、操作された構築物と、開示されている新規のコンジュゲーション方法であって、選択的還元を含む方法とにより、薬物動態および／または薬力学作用が改善されており、ならびに潜在的には治療指数が改善されているＡＤＣ調製物が生成される。
【０３８１】
上記で論じたように、部位特異的構築物は遊離システインを示し、この遊離システインは、還元された場合、求核性でありリンカー部分上の求電子基（例えば、上記で開示したもの）と反応して共有結合を形成することができるチオール基を含む。本発明の好ましい抗体は、還元可能な不対の鎖間システインまたは鎖内システイン（即ち、そのような求核基を提供するシステイン）を有する。そのため、特定の実施形態では、還元された不対のシステインの遊離スルフヒドリル基と開示されている薬物−リンカーの末端のマレイミド基またはハロアセトアミド基との反応により、所望のコンジュゲーションが可能になる。そのような場合、還元剤（例えば、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）または（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ））で処理することにより、リンカー試薬とのコンジュゲーションに関して抗体の遊離システインを反応性にすることができる。そのため、各遊離システインは理論的には反応性チオール求核試薬を示す。そのような試薬は適合するが、当業者に既知の様々な反応、条件および試薬を使用して、部位特異的抗体のコンジュゲーションを引き起こし得ることが認識されるであろう。
【０３８２】
加えて、操作された抗体の遊離システインを選択的に還元することにより、部位特異的コンジュゲーションの増強および望ましくない潜在的に毒性の夾雑物の低減を可能にすることを発見した。より具体的には、アルギニン等の「安定化剤」は、タンパク質中の分子内相互作用および分子間相互作用を調節すること、ならびに選択された還元剤（好ましくは比較的穏和）と共に使用して、本明細書に記載されているように、遊離システインを選択的に還元し、かつ部位特異的コンジュゲーションを促進し得ることを発見した。
【０３８３】
本明細書で使用する場合、用語「選択的還元」または「選択的に還元する」は互換的に使用され得、操作された抗体中に存在する天然ジスルフィド結合を実質的に破壊することのない遊離システインの還元を意味するものとする。選択された実施形態では、これは、特定の還元剤の影響を受ける場合がある。他の好ましい実施形態では、操作された構築物の選択的還元は、還元剤（例えば、穏和な還元剤）と組み合わせた安定化剤の使用を含む。用語「選択的コンジュゲーション」は、本明細書で説明したようにカリケアマイシンで選択的に還元されている操作された抗体のコンジュゲーションを意味するものとすることが認識されるであろう。これについて、選択された還元剤と組み合わせたそのような安定化剤の使用により、抗体重鎖上のおよび抗体軽鎖上のコンジュゲーションの程度ならびに調製物のＤＡＲ分布で決定した場合、部位特異的コンジュゲーションの効率を顕著に改善することができる。
【０３８４】
いかなる特定の理論にも拘束されることを望まないが、そのような安定化剤は、所望のコンジュゲーション部位で静電的微小環境を調節するようにおよび／または立体構造の変化を調節するように作用することができ、それにより、比較的穏和な還元剤（インタクトな天然ジスルフィド結合を実質的に還元しない）が所望の遊離システイン部位でのコンジュゲーションを促進することが可能になる。そのような薬剤（例えば、特定のアミノ酸）は（水素結合および静電気的相互作用により）塩架橋を形成することが知られており、かつ有利な立体構造変化を引き起こすことができ、および／または不利なタンパク質間相互作用を低減することができる安定化効果を付与するようにタンパク質間相互作用を調節することができる。更に、そのような薬剤は、還元後に所望されない分子内の（および分子間の）システイン−システイン結合の形成を阻害するように作用することができ、そのため、操作された部位特異的システインが（好ましくはリンカーを介して）薬物に結合される所望のコンジュゲーション反応が促進される。選択的還元条件はインタクトな天然ジスルフィド結合を顕著には還元しないことから、後のコンジュゲーション反応は遊離システイン上の比較的少数の反応性チオール（例えば、好ましくは１個の抗体当たり２個の遊離チオール）へと自然に駆動される。既に示唆したように、これにより、非特異的コンジュゲーションおよび本命明細書に記載したように製造されたコンジュゲート調製物中の対応する不純物のレベルが相当に低減される。
【０３８５】
選択された実施形態では、本発明に適合する安定化剤は、概して、ｐＫａが塩基性である少なくとも１個の部分を有する化合物を含む。特定の実施形態では、この部分は第一級アミンを含むが、他の好ましい実施形態では、アミン部分は第二級アミンを含む。更に他の好ましい実施形態では、このアミン部分は第三級アミンまたはグアニジウム基を含む。他の選択された実施形態では、このアミン部分はアミノ酸を含むが、他の適合する実施形態では、このアミン部分はアミノ酸側鎖を含む。更に他の実施形態では、このアミン部分は、タンパク質を構成するアミノ酸を含む。更に他の実施形態では、このアミン部分は、タンパク質を構成しないアミノ酸を含む。特に好ましい実施形態では、適合する安定化剤は、アルギニン、リシン、プロリンおよびシステインを含むことができる。加えて、適合する安定化剤は、グアニジンとｐＫａが塩基性である窒素含有複素環とを含むことができる。
【０３８６】
特定の実施形態では、適合する安定化剤は、ｐＫａが約７．５を超える少なくとも１個のアミン部分を有する化合物を含み、他の実施形態では、対象のアミン部分はｐＫａが約８．０を超え、更に他の実施形態では、このアミン部分はｐＫａが約８．５を超え、更に他の実施形態では、この安定化剤は、ｐＫａが約９．０を超えるアミン部分を含む。他の好ましい実施形態は、アミン部分はｐＫａが約９．５を超えることができる安定化剤を含むが、特定の他の実施形態は、ｐＫａが約１０．０を超える少なくとも１個のアミン部分を示す安定化剤を含む。更に他の好ましい実施形態では、安定化剤は、ｐＫａが約１０．５を超えるアミン部分を有する化合物を含み、他の実施形態では、安定化剤は、ｐＫａが約１１．０を超えるアミン部分を有する化合物を含むが、更に他の実施形態では、安定化剤は、ｐＫａが約１１．５を超えるアミン部分を含む。更に他の実施形態では、安定化剤は、ｐＫａが約１２．０を超えるアミン部分を有する化合物を含むが、更に他の実施形態では、安定化剤は、ｐＫａが約１２．５を超えるアミン部分を含む。標準的な技術を使用して適切なｐＫａを容易に算出することまたは決定することができ、この適切なｐＫａを使用して、選択された化合物を安定化剤として使用することの適否を決定し得ることが当業者に理解されるであろう。
【０３８７】
開示されている安定化剤は、特定の還元剤と組み合わせた場合、部位特異的な遊離システインへのコンジュゲーションのターゲティングに特に有効であることが分かっている。本発明の目的のために、適合する還元剤は、操作された抗体の天然ジスルフィド結合を顕著に破壊することなくコンジュゲーション用の還元された部位特異的な遊離システインを生成する任意の化合物を含むことができる。選択された安定化剤と還元剤との組み合わせにより実現されるそのような条件下で、活性化されたカリケアマイシン−リンカーは、所望の部位特異的な遊離システイン部位への結合に主に限定される。穏和な条件を実現するためには、比較的穏和な還元剤または比較的低濃度で使用される還元剤が特に好ましい。本明細書で使用する場合、用語「穏和な還元剤」または「穏和な還元条件」は、操作された抗体中に存在する天然ジスルフィド結合を実質的に破壊することなく遊離システイン部位でチオールを生成する還元剤（任意選択で安定化剤の存在下）によりもたらされる任意の薬剤または状態を意味するものとする。即ち、穏和な還元剤または還元条件により、タンパク質の天然ジスルフィド結合を顕著に破壊することなく遊離システイン（チオールを生成する）を効率的に還元することができる。所望の還元条件は、選択的コンジュゲーションに適切な環境を確立する多くのスルフヒドリルベースの化合物により実現され得る。好ましい実施形態では、穏和な還元剤は、１個または複数個の遊離チオールを有する化合物を含むことができるが、特に好ましい実施形態では、穏和な還元剤は、単一の遊離チオールを有する化合物を含む。本発明に適合する還元剤の非限定的な例は、グルタチオン、ｎ−アセチルシステイン、システイン、２−アミノエタン−１−チオールおよび２−ヒドロキシエタン−１−チオールを含む。
【０３８８】
上記に記載の選択的還元プロセスは、遊離システインを標的としたコンジュゲーションで特に有効であることが認識されるであろう。これについて、部位特異的抗体中の所望の標的部位へのコンジュゲーションの程度（本明細書において「コンジュゲーション効率」と定義する）を、当技術分野で容認されている様々な技術により決定することができる。標的コンジュゲーション部位（本発明では軽鎖のＣ末端上の遊離システイン）上の、全ての他のコンジュゲート部位と比較したコンジュゲーションの割合を評価することにより、抗体への薬物の部位特異的コンジュゲーションの効率を決定することができる。特定の実施形態では、本明細書の方法により、遊離システインを含む抗体への薬物の効率的なコンジュゲーションが可能になる。いくつかの実施形態では、このコンジュゲーション効率は、全ての他のコンジュゲーション部位と比較した標的コンジュゲーションの割合により測定した場合、少なくとも５％であり、少なくとも１０％であり、少なくとも１５％であり、少なくとも２０％であり、少なくとも２５％であり、少なくとも３０％であり、少なくとも３５％であり、少なくとも４０％であり、少なくとも４５％であり、少なくとも５０％であり、少なくとも５５％であり、少なくとも６０％であり、少なくとも７０％であり、少なくとも７５％であり、少なくとも８０％であり、少なくとも８５％であり、少なくとも９０％であり、少なくとも９５％であり、少なくとも９８％であり、またはより高い。
【０３８９】
コンジュゲーション可能な操作された抗体は、この抗体が製造または貯蔵される場合にブロックまたはキャップされるスルフヒドリル基を含む遊離システイン残基を含み得ることが更に認識されるであろう。そのようなキャップとして、このスルフヒドリル基と相互作用し、かつコンジュゲート形成を防止または阻害する、小分子、タンパク質、ペプチド、イオンおよびその他の物質が挙げられる。いくつかの場合、未コンジュゲートの操作された抗体は、同一のまたは異なる抗体上の他の遊離システインに結合する遊離システインを含むことができる。本明細書で論じるように、そのような交差反応性は、製造手順中の様々な夾雑物の原因となる場合ある。いくつかの場合、この操作された抗体は、コンジュゲーション反応の前に脱キャッピングを必要とする場合がある。具体的な実施形態では、本明細書の抗体は脱キャップされており、コンジュゲーション可能な遊離スルフヒドリル基を示す。具体的な実施形態では、本明細書の抗体を、天然に存在するジスルフィド結合を邪魔しないまたは再編成しない脱キャッピング反応にかける。ほとんどの場合、この脱キャッピング反応は通常の還元反応（還元または選択的還元）中に起こることが認識されるであろう。
Ｂ．ＤＡＲ分布および精製
本発明の部位特異的抗体とのコンジュゲーションの利点のうちの１つは、ＤＡＲ分布が狭い比較的均一なＡＤＣ調製物を生成する能力である。これに関して、開示されている構築物および／または選択的コンジュゲーションは、薬物と操作された抗体との間の化学量論比に関して試料内のＡＤＣ種の均一性を可能にする。上記で簡潔に論じたように、用語「薬物対抗体比」または「ＤＡＲ」は、抗体に対する薬物のモル比を意味する。いくつかの実施形態では、コンジュゲート調製物は、このコンジュゲート調製物のＤＡＲ分布に関して実質的に均一であることができ、これは、この調製物内に、特定のＤＡＲ（例えば、２または４のＤＡＲ）を有する部位特異的ＡＤＣからなる主な種であって、（即ち、遊離システイン上の）積載部位に関しても均一である種が存在することを意味する。本発明の特定の実施形態では、部位特異的抗体ならびに／または選択的な還元およびコンジュゲーションの使用により、所望の均一性を達成することができる。他の好ましい実施形態では、選択的還元と組み合わせた部位特異的構築物の使用により、所望の均一性を達成することができる。更に他の特に好ましい実施形態では、分析用または調製用のクロマトグラフィー技術を使用して、この調製物を更に精製することができる。これらの実施形態では、それぞれ当技術分野で既知の様々な技術を使用してＡＤＣ試料の均一性を分析することができ、この技術として、質量分析、ＨＰＬＣ（例えば、サイズ排除ＨＰＬＣ、ＲＰ−ＨＰＬＣ、ＨＩＣ−ＨＰＬＣ等）またはキャピラリー電気泳動が挙げられるがこれらに限定されない。
【０３９０】
ＡＤＣ調製物の精製に関して、標準的な医薬調製法を用いて所望の純度を得ることができることが認識されるであろう。本明細書で論じるように、逆相（ＲＰ）クロマトグラフィーおよび疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）等の液体クロマトグラフィー法は、薬物積載値により混合物中の化合物を分離することができる。いくつかの場合、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）または混合モードクロマトグラフィー（ＭＭＣ）を使用して、特定の薬物積載を有する種を単離することもできる。
【０３９１】
開示されているＡＤＣおよびその調製物は、抗体の立体配置に応じて、およびコンジュゲーションを引き起こすために使用する方法に少なくとも部分的に応じて、様々な化学量論モル比でカリケアマイシンおよび抗体部分を含むことができる。特定の実施形態では、１個のＡＤＣ当たりのカリケアマイシンの積載は１〜２０個の弾頭を含むことができる（即ち、ｎは１〜２０である）。他の選択された実施形態は、薬物積載が１〜１５個の弾頭であるＡＤＣを含むことができる。更に他の実施形態では、ＡＤＣは１〜１２個の弾頭を含むことができ、より好ましくは１〜１０個の弾頭を含むことができる。特定の好ましい実施形態では、ＡＤＣは１〜８個の弾頭を含む。
【０３９２】
理論的な薬物積載は比較的高い場合があるが、遊離システインの交差反応性および弾頭の疎水性等の実際の制限から、凝集および他の夾雑物に起因して、そのようなＤＡＲを含む均一な調製物の生成は制限される傾向がある。換言すると、薬物積載がより高い（例えば、＞１０）と、特定の抗体−薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性または細胞透過性の喪失が生じる場合がある。そのような懸念事項を考慮すると、本発明により可能になる実際の薬物積載は１個のコンジュゲート当たり１〜１０個の薬物の範囲が好ましく、即ち、（例えば、ＩｇＧ１の場合には）１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個の薬物が各抗体に共有結合的に付着している（他の抗体はジスルフィド結合の数に応じて積載量が異なる場合がある）。好ましくは、本発明の組成物のＤＡＲは約２、４または６であり、特に好ましい実施形態では、このＤＡＲは約２または４を含む。
【０３９３】
本発明により実現される比較的高レベルの均一性にも関わらず、開示されている組成物は、実際には、カリケアマイシン化合物の範囲が（ＩｇＧ１の場合で）１〜１０個であるコンジュゲートの混合物を含む。従って、開示されているＡＤＣ組成物は、構成抗体のほとんどが１個または複数個のカリケアマイシン部分に共有結合しており、かつ（選択的還元のコンジュゲート特異性にも関わらず）カリケアマイシンが様々なチオール基により抗体に付着され得るコンジュゲートの混合物を含む。換言すると、コンジュゲーション後の本発明のＡＤＣ組成物は、（主に遊離システインの交差反応により生じる特定の反応夾雑物と一緒に）様々な濃度で異なるカリケアマイシン積載（例えば、１個のＩｇＧ１抗体当たり１から１０個の薬物）を有するコンジュゲートの混合物を含む。選択的還元および製造後の精製を使用して、このコンジュゲート組成物を、単一の優勢な所望のＡＤＣ種（例えば、２個または４個の薬物積載を有する）を主に含み、他のＡＤＣ種（例えば、１個、３個、５個等の薬物積載を有する）を比較的低レベルで含む点へと駆動させることができる。平均ＤＡＲ値は、全体として（即ち、全てのＡＤＣ種をまとめる）組成物に対するカリケアマイシン積載の加重平均を表す。用いる定量化方法論に固有の不確実性および商業的環境下での非優勢ＡＤＣ種の完全な除去の困難さに起因して、許容可能なＤＡＲ値またはＤＡＲ規格を平均、範囲または分布（即ち、２＋／−０．５の平均ＤＡＲ）として表すことが多い。好ましくは、この範囲（即ち、１．５〜２．５）内で測定平均ＤＡＲを含む組成物が医薬環境下で使用されることになる。
【０３９４】
そのため、特定の好ましい実施形態では、本発明は、平均ＤＡＲが１＋／−０．５、２＋／−０．５、３＋／−０．５、４＋／−０．５、５＋／−０．５、６＋／−０．５、７＋／−０．５または８＋／−０．５である組成物を含む。他の好ましい実施形態では、本発明は、２、４、６または８＋／−０．５の平均ＤＡＲを含む。最後に、選択された好ましい実施形態では、本発明は２＋／−０．５の平均ＤＡＲを含む。特定の好ましい実施形態では範囲または偏差が０．４未満の場合があることが認識されるであろう。そのため、他の実施形態では、この組成物は、１＋／−０．３、２＋／−０．３、３＋／−０．３、４＋／−０．３、５＋／−０．３、６＋／−０．３、７＋／−０．３または８＋／−０．３の平均ＤＡＲを含み、２、４、６または８＋／−０．３の平均ＤＡＲを含み、更により好ましくは２または４＋／−０．３の平均ＤＡＲを含み、または更に２＋／−０．３の平均ＤＡＲを含む。他の実施形態では、ＩｇＧ１コンジュゲート組成物は、平均ＤＡＲが１＋／−０．４、２＋／−０．４、３＋／−０．４、４＋／−０．４、５＋／−０．４、６＋／−０．４、７＋／−０．４または８＋／−０．４である組成物と、比較的低レベル（即ち、３０％未満）の非優勢ＡＤＣ種とを好ましくは含む。他の好ましい実施形態では、ＡＤＣ組成物は、２＋／−０．４、４＋／−０．４、６＋／−０．４または８＋／−０．４の平均ＤＡＲと、比較的低レベル（＜３０％）の非優勢ＡＤＣ種とを含む。特に好ましい実施形態では、ＡＤＣ組成物は、２＋／−０．４の平均ＤＡＲと、比較的低レベル（＜３０％）の非優勢ＡＤＣ種とを含む。更に他の実施形態では、優勢ＡＤＣ種（例えば、２または４のＤＡＲ）は、他のＤＡＲ種に対して測定した場合に６５％超の濃度で存在し、７０％超の濃度で存在し、７５％超の濃度で存在し、８０％超の濃度で存在し、８５％超の濃度で存在し、９０％超の濃度で存在し、９３％超の濃度で存在し、９５％超の濃度で存在し、または更に９７％超の濃度で存在する。
【０３９５】
下記の実施例で詳述するように、コンジュゲーション反応由来のＡＤＣの調製物における１個の抗体当たりのカリケアマイシンの分布を、従来の手段（例えば、ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法、逆相ＨＰＬＣ、ＨＩＣ、質量分析、ＥＬＩＳＡおよび電気泳動）によりキャラクタライズすることができる。１個の抗体当たりの薬物に関するＡＤＣの定量的分布も決定することができる。ＥＬＩＳＡにより、ＡＤＣの特定の調製物における１個の抗体当たりの薬物の平均値を決定することができる。しかしながら、１個の抗体当たりの薬物の分布の値は、抗体−抗原結合によりおよびＥＬＩＳＡの検出限界により識別不能である。また、抗体−薬物コンジュゲートの検出用のＥＬＩＳＡアッセイにより、薬物部分が抗体に付着している場所（例えば、重鎖もしくは軽鎖の断片または特定のアミノ酸残基）も決定されない。
ＶＩＩＩ  医薬組成物および治療的使用
Ａ．製剤および投与経路
本発明のカリケアマイシンＡＤＣを、当技術分野で認識されている技術を使用して様々な方法で製剤化することができる。いくつかの実施形態では、本発明の治療用ＡＤＣ組成物を、そのままでまたは最小の追加成分と共に投与することができるが、適切な薬学的に許容される担体を含むように任意選択で製剤化することができる。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」は、当技術分野で公知であり、かつ医薬調製物で使用するために商業的供給源から入手可能である、添加剤、ビヒクル、アジュバントおよび希釈剤を含む（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（２００３）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｗｉｔｈ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ  Ｐｌｕｓ，２０ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈｅｄ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。
【０３９６】
適切な薬学的に許容される担体は、物質であって、比較的不活性であり、かつＡＤＣの投与を容易にすることができるか、または活性化合物の、作用部位への送達に薬学的に最適化されている調製物への加工を補助することができる物質を含む。
【０３９７】
そのような薬学的に許容される担体として、製剤の形態、一貫性、粘度、ｐＨ、浸透圧、安定性、モル浸透圧濃度、薬物動態、タンパク質凝集または溶解性を変更することができる薬剤が挙げられ、緩衝剤、湿潤剤、乳化剤、希釈剤、カプセル化剤および皮膚浸透増進剤が挙げられる。担体の特定の非限定的な例として、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、アルギニン、スクロース、水、グリセロール、エタノール、ソルビトール、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびそれらの組み合わせが挙げられる。全身投与用のＡＤＣを、経腸投与用に、非経口投与用にまたは局所投与用に製剤化することができる。実際には、３種全ての製剤を同時に使用して活性成分の全身投与を達成することができる。非経口的なおよび経口的な薬物送達用の添加剤および剤形は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０００）２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇに記載されている。
【０３９８】
経腸投与に適した剤形として、硬質または軟質のゼラチンカプセル、丸剤、錠剤（例えば、被覆錠剤）、エリキシル剤、懸濁液、シロップまたは吸入剤およびそれらの徐放形態が挙げられる。
【０３９９】
（例えば、注射による）非経口投与に適した剤形として、活性成分が溶解している、懸濁されているかまたは他の方法で（例えば、リポソーム中でもしくは他の微小粒子中で）提供される、水性または非水性の、等張性の、発熱物質フリーの、無菌の液体（例えば、溶液、懸濁液）が挙げられる。そのような液体は、他の薬学的に許容される担体（例えば、抗酸化剤、緩衝剤、防腐剤、安定化剤、静菌剤、懸濁剤、増粘剤）および製剤を対象とするレシピエントの血液（または他の関連する体液）と等張にする溶質を更に含む場合がある。添加剤の例として、例えば水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油および同類のものが挙げられる。そのような製剤で使用するための薬学的に許容される適切な等張担体の例として、塩化ナトリウム注射液、リンゲル溶液または乳酸リンゲル注射液が挙げられる。
【０４００】
特に好ましい実施形態では、本発明の製剤化組成物を凍結乾燥させて、次いで投与前に再構成され得る抗体またはＡＤＣの粉末化形態を形成することができる。開示されている抗体またはＡＤＣを含む溶液を凍結乾燥させて、生体適合するあらゆる任意選択の共可溶化成分と一緒に活性成分を含む粉末を得ることにより、注射可能な溶液の調製用の無菌粉末を生成することができる。一般には、活性化合物を、塩基性分散媒または溶媒（例えば、希釈剤）と任意選択の生体適合する他の成分とを含む無菌ビヒクルに組み込むことにより、分散液または溶液を調製する。適合する希釈剤は、薬学的に許容され（ヒトへの投与のために安全であり非毒性でもあり）、かつ液体製剤（例えば、凍結乾燥後に再構成された製剤）の調製に有用であるものである。例示的な希釈剤として、無菌水、注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、無菌生理食塩水、リンゲル溶液またはデキストロース溶液が挙げられる。代替実施形態では、希釈剤として、塩の水溶液および／または緩衝剤を挙げることができる。
【０４０１】
特定の好ましい実施形態では、抗体またはＡＤＣを、薬学的に許容される糖と組み合わせて凍結乾燥させる。「薬学的に許容される糖」は、目的のタンパク質と組み合わされた場合に貯蔵時のタンパク質の化学的および／または物理的な不安定性を顕著に防止または低減する分子である。この製剤は、凍結乾燥されることが意図されている場合に再構成される。本明細書で使用する場合、薬学的に許容される糖は「凍結乾燥保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）」とも称される。例示的な糖およびその対応する糖アルコールとして下記が挙げられる：アミノ酸、例えばグルタミン酸１ナトリウムまたはヒスチジン；メチルアミン、例えばベタイン；リオトロピックな塩、例えば硫酸マグネシウム；ポリオール、例えば三価またはより高い分子量の糖アルコール、例えばグリセリン、デキストラン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）；およびそれらの組み合わせ。更なる例示的な凍結乾燥保護剤として、グリセリンおよびゼラチン、ならびに糖メリビオース、メレチトース、ラフィノース、マンノトリオースおよびスタキオースが挙げられる。還元糖の例として、グルコース、マルトース、ラクトース、マルツロース（ｍａｌｔｕｌｏｓｅ）、イソ−マルツロースおよびラクツロースが挙げられる。非還元糖の例として、糖アルコールおよび他の直鎖多価アルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが挙げられる。好ましい糖アルコールはモノグリコシドであり、特に、二糖（例えば、ラクトース、マルトース、ラクツロースおよびマルツロース）の還元により得られる化合物である。グリコシド側基は、グリコシドまたはガラクトシドのいずれかであり得る。糖アルコールの更なる例は、グルシトール、マルチトール、ラクチトールおよびイソ−マルツロースである。好ましい薬学的に許容される糖は、非還元糖であるトレハロースまたはスクロースである。薬学的に許容される糖を、タンパク質がその物理的および化学的な安定性および完全性を貯蔵中に（例えば、再構成および貯蔵後に）本質的に保持することを意味する「保護する量」で（例えば、凍結乾燥前に）製剤に添加する。
【０４０２】
適合する凍結乾燥保護剤を下記の範囲の濃度で液体製剤または凍結乾燥製剤に添加し得ることを当業者は認識するであろう：約１ｍＭ〜約１０００ｍＭ、約２５ｍＭ〜約７５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約５００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約３００ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約１５０ｍＭ〜約２００ｍＭまたは約１６５ｍＭ〜約１８５ｍＭ。特定の実施形態では、凍結乾燥保護剤を下記の濃度となるように添加することができる：約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、約５０ｍＭ、約７５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１６０ｍＭ、約１６５ｍＭ、約１７０ｍＭ、約１７５ｍＭ、約１８０ｍＭ、約１８５ｍＭ、約１９０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２２５ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約４００ｍＭ、約５００ｍＭ、約６００ｍＭ、約７００ｍＭ、約８００ｍＭ、約９００ｍＭまたは約１０００ｍＭ。特定の好ましい実施形態では、凍結乾燥保護剤は薬学的に許容される糖を含むことができる。特に好ましい態様では、この薬学的に許容される糖はトレハロースまたはスクロースを含む。
【０４０３】
他の選択された実施形態では、本発明の液体製剤または凍結乾燥製剤は、安定化剤または緩衝剤として作用する特定の化合物（例えば、アミノ酸またはその薬学的に許容される塩）を含むことができる。そのような化合物を下記の範囲の濃度で添加することができる：約１ｍＭ〜約１００ｍＭ、約５ｍＭ〜約７５ｍＭ、約５ｍＭ〜約５０ｍＭ、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭまたは約１５ｍＭ〜約２５ｍＭ。特定の実施形態では、緩衝剤を下記の濃度となるように添加することができる：約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭまたは約１００ｍＭ。他の選択された実施形態では、緩衝剤を下記の濃度となるように添加することができる：約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭまたは約１００ｍＭ。特定の好ましい実施形態では、緩衝剤はヒスチジン塩酸塩を含む。
【０４０４】
更に他の選択された実施形態では、本発明の液体製剤または凍結乾燥製剤は、安定化剤として非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０またはポリソルベート８０）を含むことができる。そのような化合物を下記の範囲の濃度で添加することができる：約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約２．０ｍｇ／ｍｌ、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌ、約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約０．８ｍｇ／ｍｌ、約０．２ｍｇ／ｍｌ〜約０．６ｍｇ／ｍｌまたは約０．３ｍｇ／ｍｌ〜約０．５ｍｇ／ｍｌ。特定の実施形態では、この界面活性剤を下記の濃度となるように添加することができる：約０．１ｍｇ／ｍｌ、約０．２ｍｇ／ｍｌ、約０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、約０．８ｍｇ／ｍｌ、約０．９ｍｇ／ｍｌまたは約１．０ｍｇ／ｍｌ。他の選択された実施形態では、この界面活性剤を下記の濃度となるように添加することができる：約１．１ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．５ｍｇ／ｍｌ、約１．６ｍｇ／ｍｌ、約１．７ｍｇ／ｍｌ、約１．８ｍｇ／ｍｌ、約１．９ｍｇ／ｍｌまたは約２．０ｍｇ／ｍｌ。特定の好ましい実施形態では、この界面活性剤はポリソルベート２０またはポリソルベート４０を含む。
【０４０５】
凍結乾燥粉末からの再構成かそのままの溶液かに関わらず、開示されている抗体またはＡＤＣの適合する非経口投与（例えば、静脈注射）用製剤は、約１０μｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬのＡＤＣ濃度または抗体濃度を含むことができる。特定の選択された実施形態では、抗体濃度またはＡＤＣ濃度は、２０μｇ／ｍＬ、４０μｇ／ｍＬ、６０μｇ／ｍＬ、８０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、４００μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ、６００μｇ／ｍＬ、７００μｇ／ｍＬ、８００μｇ／ｍＬ、９００μｇ／ｍＬまたは１ｍｇ／ｍＬを含む。他の実施形態では、ＡＤＣ濃度は２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１２ｍｇ／ｍＬ、１４ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、１８ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬまたは１００ｍｇ／ｍＬを含む。
【０４０６】
いずれにしても、本発明の化合物および組成物を、経口、静脈内、動脈内、皮下、非経口、経鼻、筋肉内、心臓内、脳室内、気管内、口腔、直腸、腹腔内、皮内、局所、経皮および髄腔内が挙げられるがこれらに限定されない経路で、または移植もしくは吸入による他の方法で、それを必要とする対象にｉｎ  ｖｉｖｏで投与し得ることが認識されるであろう。対象の組成物を、固体、半固体、液体または気体の形態の調製物へと製剤化することができ、この形態として、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、座薬、浣腸剤、注射液、吸入剤およびエアロゾルが挙げられるがこれらに限定されない。意図する適用および治療レジメンに従って、適切な剤形および投与経路を選択することができる。
Ｂ．投与量
特定の投与レジメン（即ち、用量、タイミングおよび反復）は特定の個々の依存し、薬物動態（例えば、半減期、クリアランス速度等）等の経験的な検討事項にも依存する。処置される状態およびこの状態の重症度、処置される対象の年齢および全身の健康状態ならびに同類のものからなる検討事項に基づいて、主治医等の当業者によって投与頻度の決定を行なうことができる。選択された組成物および投与レジメンの有効性の評価に基づいて、治療コース全体にわたり投与頻度を調整することができる。そのような評価を、具体的な疾患、障害または状態のマーカーに基づいて行なうことができる。個体が癌を有する実施形態では、この評価として下記が挙げられる：触診もしくは目視観察による腫瘍サイズの直接測定；Ｘ線もしくは他の撮像技術による腫瘍サイズの間接測定；直接腫瘍生検および腫瘍サンプルの顕微鏡検査により評価した場合の改善；本明細書で説明されている方法に従って同定される間接的な腫瘍マーカー（例えば、前立腺癌の場合のＰＳＡ）もしくは抗原の測定；増殖性細胞もしくは腫瘍原性細胞の数の減少、そのような新生細胞の減少の維持；新生細胞の増殖の低減；または転移の発症の遅延。
【０４０７】
本発明のカリケアマイシンＡＤＣを様々な範囲で投与することができる。この範囲として、１回の用量当たり約５μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重、１回の用量当たり約５０μｇ／ｋｇ体重〜約５ｍｇ／ｋｇ体重、１回の用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重が挙げられる。他の範囲として、１回の用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重および１回の用量当たり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重が挙げられる。特定の実施形態では、投与量は、少なくとも約１００μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。
【０４０８】
選択された実施形態では、ＡＤＣを、１回の用量当たり約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００μｇ／ｋｇ体重で（好ましくは静脈内）投与する。他の実施形態は、１回の用量当たり約２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００または２０００μｇ／ｋｇ体重でのＡＤＣの投与を含むことができる。他の好ましい実施形態では、開示さているコンジュゲートを２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、９または１０ｍｇ／ｋｇで投与する。更に他の実施形態では、このコンジュゲートを１回の用量当たり１２、１４、１６、１８または２０ｍｇ／ｋｇ体重で投与することができる。更に他の実施形態では、このコンジュゲートを１回の用量当たり２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０または１００ｍｇ／ｋｇ体重で投与することができる。本明細書の教示により、当業者は、特定の標的、前臨床動物実験、臨床観察ならびに標準的な医療でのおよび生化学的な技術および測定に基づいて、ＡＤＣに関する適切な投与量を容易に決定することができる。
【０４０９】
他の投与レジメンは、米国特許第７，７４４，８７７号明細書で開示されているように体表面積（ＢＳＡ）算出に基づくことができる。公知であるように、ＢＳＡは患者の身長および体重を使用して算出され、患者の身体の表面積により表される対象のサイズの尺度を提供する。特定の実施形態では、このコンジュゲートを、１ｍｇ／ｍ２〜８００ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２〜５００ｍｇ／ｍ２の投与量および１００ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、２５０ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、３５０ｍｇ／ｍ２、４００ｍｇ／ｍ２または４５０ｍｇ／ｍ２の投与量で投与することができる。当技術分野で認識されたおよび経験上の技術を使用して適切な投与量を決定し得ることも認識されるであろう。
【０４１０】
開示されているＡＤＣを具体的なスケジュールで投与することができる。一般には、カリケアマイシンコンジュゲートの有効な用量を対象に１回または複数回投与する。より具体的には、開示されているＡＤＣの有効な用量を、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、１ヶ月に１回または１ヶ月に１回未満投与する。特定の実施形態では、選択されたＡＤＣの有効な用量を複数回投与することができ、この複数回として、少なくとも１ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１年、少なくとも２年または数年の期間が挙げられる。更に他の実施形態では、開示されている抗体またはＡＤＣの投与間に数日間（２、３、４、５、６もしくは７）、数週間（１、２、３、４、５、６、７もしくは８）または数ヶ月（１、２、３、４、５、６、７もしくは８）または更に１年もしくは数年が経過する場合がある。
【０４１１】
特定の好ましい実施形態では、コンジュゲート抗体を含む処置の経過は、数週間または数ヶ月の期間にわたる、選択された薬品の複数回の投与を含む。より具体的には、本発明の抗体またはＡＤＣを、１日に１回、２日に１回、４日に１回、１週間に１回、１０日に１回、２週間に１回、３週間に１回、１ヶ月に１回、６週間に１回、２ヶ月に１回、１０週間に１回または３ヶ月に１回投与することができる。これに関して、患者の応答および診療に基づいて投与量を変更し得、または間隔を調整し得ることが認識されるであろう。
【０４１２】
１回または複数回投与されている個体において、開示されている治療用組成物に関して投与量およびレジメンを経験的に決定することもできる。例えば、本明細書で説明されているように製造した治療用組成物の漸増する投与量を個体に投与することができる。選択された実施形態では、経験的に決定または観測される副作用または毒性にそれぞれ基づいて、投与量を徐々に増加させてもよく、減少させてもよく、または減弱させてもよい。選択された組成物の有効性を評価するために、既に説明したように、具体的な疾患、障害または状態のマーカーを追跡することができる。癌の場合、このマーカーの追跡として下記が挙げられる：触診もしくは目視観察による腫瘍サイズの直接測定、Ｘ線もしくは他の撮像技術による腫瘍サイズの間接測定；直接腫瘍生検および腫瘍サンプルの顕微鏡検査により評価した場合の改善；本明細書で説明されている方法に従って同定される間接的な腫瘍マーカー（例えば、前立腺癌の場合のＰＳＡ）もしくは腫瘍原性抗原の測定、疼痛または麻痺の軽減；発声、視覚、呼吸または腫瘍と関連する他の能力障害の改善；食欲の増進；または容認された検査により測定した場合の生活の質の上昇もしくは生存の延長。個体、新生物状態の種類、新生物状態のステージ、個体において新生物状態が他の場所に転移し始めているかどうか、ならびに過去に使用されており、および現在使用されている処置に応じて投与量が変化することは当業者には明らかであろう。
Ｃ．併用療法
併用療法は、望ましくない新生細胞の増殖の減少もしくは阻害、癌の発生の減少、癌の再発の減少もしくは予防、または癌の拡散もしくは転移の減少もしくは予防で特に有用であり得る。そのような場合、本発明の抗体またはＡＤＣは、普通なら腫瘍塊を支えかつ永続させるはずのＣＳＣを除去することにより、感作剤または化学療法増感剤として機能することができ、それにより、ケア減量（ｃａｒｅ  ｄｅｂｕｌｋｉｎｇ）剤または抗癌剤の現在の標準のより有効な使用を可能にする。換言すると、開示されている抗体またはＡＤＣは、特定の実施形態では、別の投与された治療薬の作用様式を増強する効果（例えば、事実上相加または相乗）の強化を可能にする。本発明に関連して、「併用療法」は広義に解釈されるものとし、カリケアマイシン抗体またはＡＤＣと、１種または複数種の抗癌剤（細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、抗血管新生剤、減量剤、化学療法剤、放射線療法剤および放射線治療剤、標的型抗癌剤（モノクローナル抗体および小分子実体の両方が挙げられる）、ＢＲＭ、治療用抗体、癌ワクチン、サイトカイン、ホルモン療法、放射線療法および抗転移剤が挙げられるがこれらに限定されない）ならびに免疫療法剤（特異的アプローチおよび非特異的アプローチの両方を含む）との投与を単に意味する。
【０４１３】
この併用の結果が、各処置（例えば、カリケアマイシンＡＤＣおよび抗癌剤）を別々に行なう場合に観測される効果の相加である必要はない。少なくとも相加効果が概して望ましいが、単一療法のうちの１つを超えて増加するあらゆる抗腫瘍効果が有益である。更に、本発明は併用処置が相乗効果を示すことを必要としない。しかしながら、好ましい実施形態を含む特定の選択された組み合わせにより相乗作用を観測し得ることを当業者は認識するであろう。
【０４１４】
従って、特定の態様では、この併用療法は、（ｉ）単独で使用されるＡＤＣ、または（ｉｉ）単独で使用される治療成分、または（ｉｉｉ）ＡＤＣを追加することなく別の治療成分と組み合わせた治療成分の使用を超えて、癌の処置での治療的相乗作用を有するか、または測定可能な治療効果を改善する。用語「治療的相乗作用」は、本明細書で使用する場合、ＡＤＣと、ＡＤＣおよび１種または複数種の治療成分の組み合わせの相加効果を超える治療効果を有する１種または複数種の治療成分との組み合わせを意味する。
【０４１５】
開示されている組み合わせの所望される転帰を、コントロールまたはベースラインの測定値との比較により定量化する。本明細書で使用する場合、「改善する」、「増加させる」または「低減させる」等の相対的な用語は、コントロール（例えば、本明細書で説明されている処置の開始前の同一の個体での測定値、またはケア処置の標準等の他の治療成分の存在下ではあるが、本明細書で説明されている開示されたＡＤＣの非存在下でのコントロール個体（もしくは複数のコントロール個体）での測定値）と比較した値を示す。代表的なコントロール個体は、処置される個体と同一の形態の癌に罹患している個体であって、（処置される個体およびコントロール個体での疾患のステージが同等であることを確実にするために）処置される個体とほぼ同一の年齢である個体である。
【０４１６】
治療への応答の変化または改善は、概して、統計的に有意である。本明細書で使用する場合、用語「有意性」または「有意」は、２つ以上の実体間にランダムでない関連が存在する確率の統計的分析に関する。関係が「有意である」かどうかまたは「有意性」を有するかどうかを決定するために、「ｐ値」を算出することができる。使用者により定義されるカットオフ値を下回るｐ値は有意と見なされる。０．１以下、０．０５未満、０．０１未満、０．００５未満または０．００１未満のｐ値は有意と見なされ得る。
【０４１７】
相乗的治療効果は、単一の治療成分もしくはカリケアマイシンＡＤＣにより引き出される治療効果または所与の組み合わせのＡＤＣもしくは単一の治療成分により引き出される治療効果の合計と比べて少なくとも約２倍大きい効果であることができ、または少なくとも約５倍大きいもしくは少なくとも約１０倍大きいもしくは少なくとも約２０倍大きいもしくは少なくとも約５０倍大きいもしくは少なくとも約１００倍大きい効果であることができる。また、相乗的治療効果を、単一の治療成分もしくはＡＤＣにより引き出される治療効果または所与の組み合わせのＡＤＣもしくは単一の治療成分により引きされる治療効果の合計と比較して少なくとも１０％の治療効果の増加として観測することもでき、または少なくとも２０％もしくは少なくとも３０％もしくは少なくとも４０％もしくは少なくとも５０％もしくは少なくとも６０％もしくは少なくとも７０％もしくは少なくとも８０％もしくは少なくとも９０％もしくは少なくとも１００％もしくはより大きい治療効果の増加として観測することもできる。また、相乗効果は、治療薬を併用する場合にこれらの治療薬の投与量の低減を可能にする効果でもある。
【０４１８】
併用療法の実施では、カリケアマイシンＡＤＣおよび治療成分を、単一の組成物で同時に対象に投与しもよく、または同一のまたは異なる投与経路を使用して２つ以上の別々の組成物として同時に対象に投与してもよい。あるいは、ＡＤＣによる処置は、例えば数分〜数週間の範囲の間隔で治療成分による処置に先行してもよく、または後続してもよい。一実施形態では、治療成分およびＡＤＣの両方を互いに約５分〜約２週間以内に投与する。更に他の実施形態では、ＡＤＣの投与と治療成分の投与との間に、数日間（２、３、４、５、６もしくは７）、数週間（１、２、３、４、５、６、７もしくは８）または数ヶ月（１、２、３、４、５、６、７もしくは８）が経過する場合がある。
【０４１９】
この併用療法を、様々なスケジュール（例えば、１日に１回、２回もしくは３回、２日に１回、３日に１回、１週間に１回、２週間に１回、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、６ヶ月に１回）で、状態が処置されるまで、緩和されるまでまたは治癒されるまで施すことができ、または連続的に施す場合がある。選択されたＡＤＣおよび治療成分を隔日もしくは隔週で投与してもよく、または一連のＡＤＣ処置を施し、続いて追加の治療成分による１つまたは複数の処置を施してもよい。一実施形態では、ＡＤＣを、短い処置サイクルにわたり１種または複数種の治療成分と組み合わせて投与する。他の実施形態では、この併用処置を長い処置サイクルにわたり施す。この併用療法を任意の経路で施すことができる。
【０４２０】
いくつかの実施形態では、カリケアマイシンＡＤＣを、様々な第一選択の癌処置と併用することができる。一実施形態では、この併用療法は、ＡＤＣと、細胞毒性剤（例えば、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ビンデシン、ビンブラスチン、エトポシド、イロニテカン（ｉｒｏｎｉｔｅｃａｎ）、ゲムシタビン、タキサン、ビノレルビン、メトトレキサートおよびペメトレキセド）と、任意選択の１種または複数種の他の治療成分との使用を含む。
【０４２１】
別の実施形態では、この併用療法は、ＡＤＣと、白金ベースの薬物（例えば、カルボプラチンまたはシスプラチン）と、任意選択の１種または複数種の他の治療成分（例えば、ビノレルビン；ゲムシタビン；タキサン、例えばドセタキセルまたはパクリタキセル等；イリノチカン（ｉｒｉｎｏｔｉｃａｎ）；またはペメトレキセド）との使用を含む。
【０４２２】
選択された実施形態では、本発明の化合物および組成物を、ＰＤ−１阻害剤またはＰＤ−Ｌ１阻害剤等のチェックポイント阻害剤と併用することができる。ＰＤ−１は、そのリガンドＰＤ−Ｌ１と一緒に、抗腫瘍Ｔリンパ球応答の負の制御因子である。一実施形態では、この併用療法は、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ）および任意選択の１種または複数種の他の治療成分と一緒のカリケアマイシンＡＤＣの投与を含むことができる。別の実施形態では、この併用療法は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体（例えば、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ）および任意選択の１種または複数種の他の治療成分と一緒のカリケアマイシンＡＤＣの投与を含むことができる。更に別の実施形態では、この併用療法は、チェックポイント阻害剤および／または標的型ＢＲＡＦ併用療法（ｔａｒｇｅｔｅｄ  ＢＲＡＦ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）（例えば、ベムラフェニブまたはダブラフィニブ（ｄａｂｒａｆｉｎｉｂ））による処置後に進行が続く患者に投与される抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１と一緒のカリケアマイシンＡＤＣの投与を含むことができる。
【０４２３】
一実施形態では、例えばＢＲ−ＥＲＰＲ、ＢＲ−ＥＲまたはＢＲ−ＰＲの癌の処置において、併用療法は、ＡＤＣと「ホルモン療法」と説明されている１種または複数種の治療成分との使用を含む。「ホルモン療法」は、本明細書で使用する場合、例えばタモキシフェン；性腺刺激ホルモン放出ホルモンもしくは黄体形成放出ホルモン（ＧｎＲＨもしくはＬＨＲＨ）；エベロリムスおよびエキセメスタン；トレミフェン；またはアロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタンもしくはフルベストラント）を意味する。
【０４２４】
別の実施形態では、例えばＢＲ−ＨＥＲ２の処置において、併用療法は、ＡＤＣと、トラスツズマブまたはアド−トラスツズマブエムタンシン（ａｄｏ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ  ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）と、任意選択の１種または複数種の他の治療成分（例えば、ペルツズマブおよび／もしくはドセタキセル）との使用を含む。
【０４２５】
いくつかの実施形態では、例えば転移性乳癌の処置において、併用療法は、開示されているＡＤＣと、タキサン（例えば、ドセタキセルまたはパクリタキセル）と、任意選択の追加の治療成分、例えばアントラサイクリン（例えば、ドキソルビシンもしくはエピルビシン）および／またはエリブリンとの使用を含む。
【０４２６】
別の実施形態では、例えば転移性もしくは再発性の乳癌またはＢＲＣＡ変異乳癌の処置において、併用療法は、開示されているＡＤＣと、メゲストロールと、任意選択の追加の治療成分との使用を含む。
【０４２７】
更なる実施形態では、例えばＢＲ−ＴＮＢＣの処置において、併用療法は、カリケアマイシンＡＤＣと、ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤（例えば、ＢＭＮ−６７３、オラパリブ、ルカパリブおよびベリパライブ）と、任意選択の追加の治療成分との使用を含む。
【０４２８】
別の実施形態では、例えば乳癌の処置において、併用療法は、開示されているＡＤＣと、シクロホスファミドと、任意選択の追加の治療成分（例えば、ドキソルビシン、タキサン、エピルビシン、５−ＦＵおよび／またはメトトレキサート）との使用を含む。
【０４２９】
別の実施形態では、ＥＧＦＲ陽性ＮＳＣＬＣの処置のための併用療法は、開示されているＡＤＣと、アファチニブと、任意選択の１種または複数種の他の治療成分（例えば、エルロチニブおよび／またはベバシズマブ）との使用を含む。
【０４３０】
別の実施形態では、ＥＧＦＲ陽性ＮＳＣＬＣの処置のための併用療法は、ＡＤＣと、エルロチニブと、任意選択の１種または複数種の他の治療成分（例えば、ベバシズマブ）との使用を含む。
【０４３１】
別の実施形態では、ＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣの処置のための併用療法は、ＡＤＣと、セリチニブと、任意選択の１種または複数種の他の治療成分との使用を含む。
【０４３２】
別の実施形態では、ＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣの処置のための併用療法は、ＡＤＣと、クリゾチニブと、任意選択の１種または複数種の他の治療成分との使用を含む。
【０４３３】
別の実施形態では、併用療法は、ＡＤＣと、ベバシズマブと、任意選択の１種または複数種の他の治療成分（例えば、タキサン、例えばドセタキセルまたパクリタキセル等；および／または白金類似体）との使用を含む。
【０４３４】
別の実施形態では、併用療法は、ＡＤＣと、ベバシズマブと、任意選択の１種または複数種の他の治療成分（例えば、ゲムシタビンおよび／または白金類似体）との使用を含む。
【０４３５】
特定の実施形態では、白金抵抗性腫瘍の処置のための併用療法は、ＡＤＣと、ドキソルビシンおよび／またはエトポシドおよび／またはゲムシタビンおよび／またはビノレルビンおよび／またはイホスファミドおよび／またはロイコボリン調整性５−フルオロウラシル（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ−ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｃｉｌ）および／またはベバシズマブおよび／またはタモキシフェンと、任意選択の１種または複数種の他の治療成分との使用を含む。
【０４３６】
別の実施形態では、併用療法は、ＡＤＣと、ＰＡＲＰ阻害剤と、任意選択の１種または複数種の他の治療成分との使用を含む。
【０４３７】
別の実施形態では、併用療法は、ＡＤＣと、ベバシズマブと、任意選択のシクロホスファミドとの使用を含む。
【０４３８】
併用療法は、ＡＤＣと、変異したまたは異常に発現された遺伝子またはタンパク質（例えば、ＢＲＣＡ１）を含む腫瘍に対して有効である化学療法成分とを含むことができる。
【０４３９】
Ｔリンパ球（例えば、細胞毒性リンパ球（ＣＴＬ））は、悪性腫瘍に対する宿主防御において重要な役割を果たす。ＣＴＬは、抗原提示細胞上の腫瘍関連抗原の提示により活性化される。活性特異的免疫療法とは、既知の癌関連抗原に由来するペプチドを患者にワクチン接種することにより、癌に対するＴリンパ球応答を増強するために使用され得る方法である。一実施形態では、併用療法は、ＡＤＣと、癌関連抗原に対するワクチン（例えば、メラノサイト系列特異的抗原チロシナーゼ、ｇｐ１００、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１またはｇｐ７５）とを含むことができる。他の実施形態では、併用療法は、自家ＣＴＬまたはナチュラルキラー細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの増殖、活性化および養子性再導入（ａｄｏｐｔｉｖｅ  ｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）と一緒のＡＤＣの投与を含むことができる。ＣＴＬの活性化は、抗原提示細胞による腫瘍抗原提示を増強する戦略によっても促進され得る。顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、樹状細胞の動員および樹状細胞交差提示の活性化を促進する。一実施形態では、併用療法は、抗原提示細胞の単離、そのような細胞の刺激性サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）による活性化、腫瘍関連抗原によるプライミング、次いでこの抗原提示細胞の、開示されているＡＤＣおよび任意選択の１種または複数種の異なる治療成分の使用と組み合わせた患者への養子性再導入を含むことができる。
【０４４０】
他の実施形態では、本発明のＡＤＣを、下記で説明する抗癌剤のうちの１つまたは複数と併用することができる。
【０４４１】
用語「抗癌剤」または「化学療法剤」は、本明細書で使用する場合、「治療成分」の１つのサブセットであり、「治療成分」とは「薬学的に活性な成分」として説明されている薬剤のサブセットである。より具体的には、「抗癌剤」は、癌等の細胞増殖性障害を処置するために使用され得るあらゆる薬剤を意味しており、下記が挙げられるがこれらに限定されない：細胞毒性剤、細胞増殖抑制剤、抗血管新生剤、減量剤、化学療法剤、放射線療法剤および放射線治療剤、標的型抗癌剤、生物学的応答調節剤、治療用抗体、癌ワクチン、サイトカイン、ホルモン療法、抗転移剤および免疫療法剤。上記で論じたように、選択された実施形態では、そのような抗癌剤は抗体薬物コンジュゲートを含むことができ、投与の前に抗体と会合され得ることが認識されるであろう。特定の実施形態では、結果として生じる抗癌剤ＡＤＣを、本明細書で開示されているように本発明のＡＤＣと併用することができる。
【０４４２】
用語「細胞毒性剤」（抗癌剤の場合もある）は、細胞に対して毒性であり、かつ細胞の機能を低下させるかもしくは阻害し、および／または細胞の破壊を引き起こす物質を意味する。典型的には、この物質は、生存する生物に由来する天然に存在する分子（または合成により調製された天然物）である。細胞毒性剤の例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：細菌の小分子毒素または酵素的に活性な毒素（例えば、ジフテリア（Ｄｉｐｔｈｅｒｉａ）毒素、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）の内毒素および外毒素、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）エンテロトキシンＡ）、真菌の小分子毒素または酵素的に活性な毒素（例えば、α−サルシン、レストリクトシン）、植物の小分子毒素または酵素的に活性な毒素（例えば、アブリン、リシン、モデシン、ビスクミン、ヨウシュヤマゴボウの抗ウイルスタンパク質、サポリン、ゲロニン、モモリジン（ｍｏｍｏｒｉｄｉｎ）、トリコサンチン、オオムギ毒素、アレウリテス・ホルジイ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラッカ・メリカナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ  ｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・カランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉ）阻害剤、クルシン、クロチン、サポナリア・オフィシナリス（ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ミテゲリン（ｍｉｔｅｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン、ネオマイシンおよびトリコテシン）、または動物の小分子毒素または酵素的に活性な毒素（例えば、細胞毒性ＲＮアーゼ、例えば細胞外膵臓ＲＮアーゼ；ＤＮアーゼＩ（それらの断片および／もしくは多様体を含む））。
【０４４３】
抗癌剤として、癌細胞または癌となる可能性があるか、もしくは腫瘍原性の後代を生成する可能性がある細胞（例えば、腫瘍原性細胞）を阻害するかまたは阻害するように設計されているあらゆる化学的薬剤を挙げることができる。そのような化学的薬剤は、細胞の成長または分裂に必要な細胞内プロセスを対象とすることが多く、そのため、概して成長および分裂が迅速な癌細胞に対して特に有効である。例えば、ビンクリスチンは微小管を脱重合し、そのため細胞が有糸分裂に入るのを阻害する。そのような薬剤は、例えば製剤ＣＨＯＰにおいて、組み合わされて投与されることが多く、かつ最も有効であることが多い。この場合もやはり、選択された実施形態では、そのような抗癌剤を、開示されている抗体にコンジュゲートさせることができる。
【０４４４】
本発明のカリケアマイシンＡＤＣと併用することができる抗癌剤の例として下記が挙げられるがこれらに限定されない：アルキル化剤、スルホン酸アルキル、アナストロゾール、アマニチン、アジリジン、エチレンイミンおよびメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、アセトゲニン、カンプトテシン、ＢＥＺ−２３５、ボルテゾミブ、ブリオスタチン、カリスタチン、ＣＣ−１０６５、セリチニブ、クリゾチニブ、クリプトフィシン、ドラスタチン、デュオカルマイシン、エリュテロビン、エルロチニブ、パンクラチスタチン、サルコジクチイン、スポンジスタチン、ナイトロジェンマスタード、抗生物質、エンジインジネミシン（ｅｎｅｄｉｙｎｅ  ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、ビスフォスフォネート、エスペラミシン、色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団（ｃｈｒｏｍｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｅｄｉｙｎｅ  ａｎｔｉｏｂｉｏｔｉｃ  ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｅ）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウトラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カンホスファミド、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、シクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、エキセメスタン、フルオロウラシル、フルベストラント、ゲフィチニブ、イダルビシン、ラパチニブ、レトロゾール、ロナファルニブ、マルセロマイシン、酢酸メゲストロール、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、パゾパニブ、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン、ラパマイシン、ロドルビシン、ソラフェニブ、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、クエン酸タモキシフェン、テモゾロミド、テポディナ（ｔｅｐｏｄｉｎａ）、チピファルニブ、ツベルシジン、ウベニメクス、バンデタニブ、ボロゾール、ＸＬ−１４７、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、葉酸類似体、プリン類似体、アンドロゲン、抗副腎剤、葉酸補充薬、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン、ベストラブシル、ビスアントレン、エダトレキサート、デフォファミン、デメコルチン、ジアジクオン、エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウム、エポチロン、エトグルシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、レンチナン、ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）、マイタンシノイド、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）、ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）、ペントスタチン、フェナメト（ｐｈｅｎａｍｅｔ）、ピラルビシン、ロソキサントロン、ポドフィリン酸、２−エチルヒドラジド、プロカルバジン、多糖複合体、ラゾキサン；リゾキシン；ＳＦ−１１２６、シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルア��ン；トリコテシン（Ｔ−２トキシン、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、クロランブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、ビンブラスチン；白金；エトポシド；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン；レチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン；オキサリプラチン；ＸＬ５１８、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦ−Ａの阻害剤であって、細胞増殖を低減する阻害剤、ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩または溶媒和物、酸または誘導体。また、この定義には下記も含まれる：腫瘍へのホルモン作用を制御するようにまたは阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体抗体、副腎中でのエストロゲン産生を制御する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、および抗アンドロゲン；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤およびＨＥＲ２発現阻害剤；ワクチン、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ビノレルビンおよびエスペラミシン、ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩または溶媒和物、酸または誘導体。
【０４４５】
特に好ましい抗癌剤は商業的または臨床的に利用可能な化合物を含み、例えば下記を含む：エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、５−ＦＵ（フルオロウラシル、５−フルオロウラシル、ＣＡＳ  Ｎｏ．５１−２１−８）、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ）、ＰＤ−０３２５９０１（ＣＡＳ  Ｎｏ．３９１２１０−１０−９、Ｐｆｉｚｅｒ）、シスプラチン（ｃｉｓ−ジアミン、ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ  Ｎｏ．１５６６３−２７−１）、カルボプラチン（ＣＡＳ  Ｎｏ．４１５７５−９４−４）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、テモゾロミド（４−メチル−５−オキソ−２，３，４，６，８−ペンタアザビシクロ［４．３．０］ノナ−２，７，９−トリエン−９−カルボキサミド、ＣＡＳ  Ｎｏ．８５６２２−９３−１、ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）、ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、タモキシフェン（（Ｚ）−２−［４−（１，２−ジフェニルブタ−１−エニル）フェノキシ］−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、ＩＳＴＵＢＡＬ（登録商標）、ＶＡＬＯＤＥＸ（登録商標））、およびドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））。商業的または臨床的に使用可能な更なる抗癌剤は下記を含む：オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、スーテント（ＳＵＮＩＴＩＮＩＢ（登録商標）、ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−５１８（Ｍｅｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、国際公開第２００７／０４４５１５号パンフレット）、ＡＲＲＹ−８８６（Ｍｅｋ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、Ａｒｒａｙ  ＢｉｏＰｈａｒｍａ，Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）、ＳＦ−１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｓｅｍａｆｏｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ−２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ−１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）、ＳＣＨ  ６６３３６、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、ＢＡＹ４３−９００６、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、Ｃ���Ｔ−１１、Ｐｆｉｚｅｒ）、チピファルニブ（ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標）、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒフリー）、パクリタキセルの、アルブミンで操作されたナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｎｍｂｕｃｉｌ）、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カンホスファミド（ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標）、Ｔｅｌｉｋ）、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）、タモキシフェン、例えばＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）；クエン酸タモキシフェン、ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（クエン酸トレミフェン）ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、ホルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）ならびにＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）。
【０４４６】
他の実施形態では、本発明のＡＤＣを、現在臨床試験中のまたは商業的に利用可能である多くの抗体（または免疫療法剤）のうちのいずれか１つと併用することができる。開示されている抗体を、下記からなる群から選択される抗体と併用することができる：アバゴボマブ（ａｂａｇｏｖｏｍａｂ）、アデカツムマブ（ａｄｅｃａｔｕｍｕｍａｂ）、アフツズマブ、アレムツズマブ、アルツモマブ（ａｌｔｕｍｏｍａｂ）、アマツキシマブ、アナツモマブ（ａｎａｔｕｍｏｍａｂ）、アルシツモマブ、バビツキシマブ、ベクツモマブ（ｂｅｃｔｕｍｏｍａｂ）、ベバシズマブ、ビバツズマブ（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）、ブリナツモマブ、ブレンツキシマブ（ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、カンツズマブ、カツマキソマブ、セツキシマブ、シタツズマブ（ｃｉｔａｔｕｚｕｍａｂ）、シキスツムマブ（ｃｉｘｕｔｕｍｕｍａｂ）、クリバツズマブ（ｃｌｉｖａｔｕｚｕｍａｂ）、コナツムマブ（ｃｏｎａｔｕｍｕｍａｂ）、ダラツムマブ、ドロジツマブ（ｄｒｏｚｉｔｕｍａｂ）、ズリゴツマブ（ｄｕｌｉｇｏｔｕｍａｂ）、デュシギツマブ（ｄｕｓｉｇｉｔｕｍａｂ）、デツモマブ（ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）、ダセツズマブ、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、エクロメキシマブ（ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ）、エロツズマブ、エンシツキシマブ（ｅｎｓｉｔｕｘｉｍａｂ）、エルツマキソマブ（ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）、エタラシズマブ、ファーレツズマブ、フィクラツズマブ（ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、フィギツムマブ、フランボツマブ（ｆｌａｎｖｏｔｕｍａｂ）、フツキシマブ（ｆｕｔｕｘｉｍａｂ）、ガニツマブ（ｇａｎｉｔｕｍａｂ）、ゲムツズマブ、ギレンツキシマブ（ｇｉｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ）、グレムバツムマブ（ｇｌｅｍｂａｔｕｍｕｍａｂ）、イブリツモマブ、イゴボマブ（ｉｇｏｖｏｍａｂ）、イムガツズマブ（ｉｍｇａｔｕｚｕｍａｂ）、インダツキシマブ（ｉｎｄａｔｕｘｉｍａｂ）、イノツズマブ（ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ）、インテツムマブ（ｉｎｔｅｔｕｍｕｍａｂ）、イピリムマブ、イラツムマブ（ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ラベツズマブ、ランブロリズマブ、レクサツムマブ、リンツズマブ、ロルボツズマブ（ｌｏｒｖｏｔｕｚｕｍａｂ）、ルカツムマブ（ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、マパツムマブ、マツズマブ、ミラツズマブ、ミンレツモマブ（ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ）、ミツモマブ（ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）、モキセツモマブ（ｍｏｘｅｔｕｍｏｍａｂ）、ナルナツマブ（ｎａｒｎａｔｕｍａｂ）、ナプツモマブ（ｎａｐｔｕｍｏｍａｂ）、ネシツムマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブ（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂｎ）、オビヌツズマブ、オカラツズマブ（ｏｃａｒａｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ、オララツマブ（ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、オラパリブ、オナルツズマブ（ｏｎａｒｔｕｚｕｍａｂ）、オポルツズマブ（ｏｐｏｒｔｕｚｕｍａｂ）、オレゴボマブ、パニツムマブ、パルサツズマブ（ｐａｒｓａｔｕｚｕｍａｂ）、パトリツマブ（ｐａｔｒｉｔｕｍａｂ）、ペムツモマブ（ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）、ペルツズマブ、ピディリズマブ、ピンツモマブ（ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ）、プリツムマブ（ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラコツモマブ（ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、ラドレツマブ（ｒａｄｒｅｔｕｍａｂ）、ラムシルマブ、リロツムマブ、リツキシマブ、ロバツムマブ（ｒｏｂａｔｕｍｕｍａｂ）、サツモマブ（ｓａｔｕｍｏｍａｂ）、セルメチニブ、シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、シルツキシマブ、シムツズマブ（ｓｉｍｔｕｚｕｍａｂ）、ソリトマブ（ｓｏｌｉｔｏｍａｂ）、タカツズマブ（ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ）、タプリツモマブ（ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ）、テナツモマブ（ｔｅｎａｔｕｍｏｍａｂ）、テプロツムマブ（ｔｅｐｒｏｔｕｍｕｍａｂ）、ティガツズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブ（ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ）、ウブリツキシマブ（ｕｂｌｉｔｕｘｉｍａｂ）、ベルツズマブ、ボルセツズマブ（ｖｏｒｓｅｔｕｚｕｍａｂ）、ボツムマブ（ｖｏｔｕｍｕｍａｂ）、ザルツムマブ、ＣＣ４９、３Ｆ８、ＭＤＸ−１１０５およびＭＥＤＩ４７３６ならびにそれらの組み合わせ。
【０４４７】
他の特に好ましい実施形態は、癌治療用に認可された抗体の使用であって、リツキシマブ、ゲムツズマブ、オゾガマイシン（ｏｚｏｇａｍｃｉｎ）、アレムツズマブ、イブリツモマブチウキセタン、トシツモマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、パチツムマブ（ｐａｔｉｔｕｍｕｍａｂ）、オファツムマブ、イピリムマブおよびブレンツキシマブベドチンが挙げられるがこれらに限定されない抗体の使用を含む。当業者は、本明細書の教示に適合する更なる抗癌剤を容易に同定することができるであろう。
Ｄ．放射線療法
本発明はまた、ＡＤＣと放射線療法（即ち、ガンマ線照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波、電子照射および同類のもの等、腫瘍細胞内にＤＮＡ損傷を局所的に誘発するためのあらゆるメカニズム）との組み合わせも提供する。腫瘍細胞への放射性同位体の指向性送達を使用する併用療法も企図され、開示されているＡＤＣを、標的型抗癌剤または他の標的化手段と関連して使用することができる。典型的には、放射線療法を約１〜約２週間の期間にわたりパルスで施す。放射線療法を、頭頸部癌を有する対象に約６〜７週にわたり施すことができる。任意選択で、放射線療法を単回線量としてまたは複数回の逐次線量として施すことができる。
ＩＸ  適応症
本発明は、様々な障害（例えば、新生物性障害、炎症性障害、血管新生性障害および免疫性障害ならびに病原体により引き起こされる障害）の診断、治療診断、処置および／または予防のための本発明のＡＤＣの使用を提供する。特に、処置の鍵となる標的は、固形腫瘍を含む新生物性状態であるが、血液悪性腫瘍も本発明の範囲内である。特定の実施形態では、本発明のＡＤＣを使用して、特定の決定基（例えば、ＳＥＺ６）を発現する腫瘍または腫瘍原性細胞を処置する。好ましくは、処置する「対象」または「患者」はヒトであるが、本明細書で使用する場合、この用語は明示的に、あらゆる哺乳動物種を含むものとする。
【０４４８】
本発明の化合物および組成物を使用して、疾患の様々なステージでおよびその処置サイクルでの様々な時点で対象を処置し得ることが認識されるであろう。従って、特定の実施形態では、本発明の抗体およびＡＤＣを第一選択治療として使用し、癌状態がこれまで処置されていない患者に投与する。他の実施形態では、本発明の抗体およびＡＤＣを使用して、第二選択および第三選択の患者（即ち、それぞれ同じ状態が１回または２回で既に処置されている対象）を処置する。更に他の実施形態は、同じまたは関連する状態が開示されているＡＤＣまたは異なる治療剤で３回以上処置されている第四選択またはより高次の患者（例えば、ＳＣＬＣ患者）の処置を含む。他の実施形態では、本発明の化合物および組成物を使用して、（本発明の抗体もしくはＡＤＣまたは他の抗癌剤で）既に処置されておりかつ再発しているか、または過去の処置に対して難治性であることが確認されている対象を処置する。選択された実施形態では、本発明の化合物および組成物を使用して、再発性腫瘍を有する対象を処置することができる。
【０４４９】
特定の態様では、増殖性障害は固形腫瘍を含み、この固形腫瘍として下記が挙げられるがこれらに限定されない：副腎、肝臓、腎臓、膀胱、乳房、胃、卵巣、子宮頸部、子宮、食道、結腸直腸、前立腺、膵臓、肺（小細胞および非小細胞の両方）、甲状腺、癌腫、肉腫、神経膠芽細胞腫および様々な頭頸部腫瘍。他の好ましい実施形態では、および下記の実施例で示すように、開示されているＡＤＣは、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（例えば、扁平上皮細胞非小細胞肺癌または扁平上皮細胞小細胞肺癌）の処置で特に有効である。特定の実施形態では、肺癌は、白金ベースの薬剤（例えば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、トポテカン）および／またはタキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセルもしくはカバジタキセル）に対して難治性であるか、再発性であるか、または抵抗性である。別の実施形態では、処置する対象は大細胞神経内分泌癌（ＬＣＮＥＣ）に罹患している。本発明の更に他の態様では、開示されている抗体およびＡＤＣを、甲状腺髄様癌、神経膠芽腫、神経内分泌性前立腺癌（ＮＥＰＣ）、高悪性度の胃腸膵癌（ＧＥＰ）および悪性黒色腫の処置に使用することができる。
【０４５０】
より一般的には、本発明に従う処置の対象となる例示的な新生物状態は良性であってもよく、悪性であってもよく、固形腫瘍であってもよく、または他の血液新生物であってもよく、下記からなる群から選択され得るがこれらに限定さない：副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞巣状軟部肉腫、星状細胞腫瘍、自律神経節腫瘍、膀胱癌（扁平上皮癌および移行細胞癌）、胞胚腔障害、骨癌（アダマンチノーマ、動脈瘤性骨嚢胞、骨軟骨腫、骨肉腫）、脳および脊髄の癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈球腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性の腎細胞癌、明細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚の良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、上皮障害、ユーイング腫瘍、骨外性の粘液型軟骨肉腫、骨繊維形成不全症（ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｍｐｅｒｆｅｃｔａ  ｏｓｓｉｕｍ）、骨の線維性骨異形成症、胆嚢胆管癌、胃癌、消化管、妊娠性絨毛疾患、生殖細胞腫瘍、腺障害、頭頸部癌、視床下部、腸癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌（腎芽腫、乳頭状腎細胞癌）、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫腫瘍、肝臓癌（肝芽腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌（小細胞癌、腺癌、扁平上皮細胞癌、大細胞癌等）、マクロファージ障害、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫瘍、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ぶどう膜黒色腫、まれな血液障害、腎転移癌、横紋筋肉腫様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌、間質細胞障害、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺転移癌、ならびに子宮癌（子宮頸部の癌、子宮内膜癌および平滑筋腫）。
【０４５１】
特に好ましい実施形態では、対象は、膵癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌および胃癌に罹患している。好ましい実施形態では、対象は、膵癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌および胃癌に対して難治性である。
【０４５２】
他の好ましい実施形態では、ＡＤＣは、下記のサブタイプを含む肺癌の処置で特に有効である：小細胞肺癌および非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮細胞非小細胞肺癌または扁平上皮細胞小細胞肺癌）。選択された実施形態では、抗体およびＡＤＣを、限定されたステージの疾患または広範なステージの疾患を示す患者に投与することができる。他の好ましい実施形態では、開示されているコンジュゲート抗体を下記の患者に投与する：難治性の患者（即ち、初期治療の経過中にもしくは経過完了直後に疾患が再発する患者）、感受性の患者（即ち、再発が初期治療後から２〜３ヶ月よりも長い患者）、または白金ベースの薬剤（例えば、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン）および／またはタキサン（例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセルもしくはカバジタキセル）に対して耐性を示す患者。
【０４５３】
別の特に好ましい実施形態では、開示されているＡＤＣは、卵巣癌（卵巣漿液癌（ｏｖａｒｉａｎ−ｓｅｒｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）および卵巣乳頭状漿液癌（ｏｖａｒｉａｎ−ｐａｐｉｌｌａｒｙ  ｓｅｒｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む）の処置で有効である。
【０４５４】
本発明はまた、良性または悪性の腫瘍を示す対象の予防的な（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）または予防的な（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）処置も提供する。特定のタイプの腫瘍または増殖性障害が本発明の抗体を使用する処置から除外されることはない。
Ｘ  製品
本発明は、１個または複数個の容器を含む医薬パックおよび医薬キットであって、容器は本発明のＡＤＣの１回または複数回の用量を含むことができる、医薬パックおよび医薬キットを含む。特定の実施形態では、このパックまたはキットは単位投与量（例えば、１種または複数種の追加の薬剤および任意選択の１種または複数種の抗癌剤を伴ってまたは伴わずに本発明のＡＤＣを含む組成物の所定量を意味する）を含む。
【０４５５】
本発明のキットは、概して、本発明のＡＤＣの薬学的に許容される製剤を適切な容器内に含み、任意選択で１種または複数種の抗癌剤を同一のまたは異なる容器内に含む。このキットはまた、診断または併用療法のいずれかのための他の薬学的に許容される製剤またはデバイスも含むことができる。デバイスまたは機器の例として、増殖性障害と関連する細胞またはマーカーの検出、モニタリング、定量またはプロファイリングに使用され得るものが挙げられる。本発明により意図されるキットはまた、本発明のＡＤＣと抗癌剤または診断剤（例えば、米国特許第７，４２２，７３９号明細書を参照されたい）とを組み合わせるための適切な試薬も含むことができる。
【０４５６】
キットの構成要素が１種または複数種の溶液で提供される場合、この溶液は非水性であることができるが水溶液が好ましく、無菌水溶液が特に好ましい。このキット中の製剤を、適切な液体が添加されると再構成され得る乾燥粉末としてまたは凍結乾燥形態で提供することもできる。再構成に使用する液体を別個の容器に含めることができる。そのような液体は、無菌の薬学的に許容される緩衝剤または他の希釈剤（例えば、注射用の静菌水、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液またはデキストロース溶液）を含むことができる。このキットが、追加の治療剤または薬剤と組み合わせて本発明のＡＤＣを含む場合、溶液を、モル当量の組み合わせでまたは１つの成分を他よりも過剰で予め混合してもよい。あるいは、本発明のＡＤＣと任意選択のあらゆる抗癌剤または他の薬剤とを、患者への投与前に別々の容器内で別々に維持することができる。
【０４５７】
このキットは、１個または複数個の容器と、この容器内の、この容器上のまたはこの容器に付随するラベルまた添付文書とを含むことができ、このラベルまたは添付文書は、封入された組成物が、選択された病状の診断または処置に使用されることを示す。適切な容器として、例えばボトル、バイアル、シリンジ等が挙げられる。この容器を、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料で形成することができる。この容器は無菌のアクセスポートを含むことができ、例えば、この容器は、静脈注射用溶液バッグであってもよく、または皮下注射針により穿孔され得るストッパーを有するバイアルであってもい。
【０４５８】
いくつかの実施形態では、このキットは、ＡＤＣおよびあらゆる任意選択の成分を患者に投与するための手段を含むことができ、例えば、１つまたは複数の針またはシリンジ（予め充填されているか、もしくは空である）、点眼器、ピペット、または他のそのような器具であって、製剤を対象に注入もしくは導入することができるか、または身体の疾患領域に塗布することができる器具を含むことができる。本発明のキットは、概して、市販のために密閉でバイアル等およびその他の構成要素を収容するための手段（例えば、所望のバイアルおよび他の器具が配置または保持されるブロー成形のプラスチック容器）も含む。
ＸＩ  その他
本明細書で別途定義しない限り、本発明に関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者により一般に理解される意味を有するものとする。更に、文脈により別途要求されない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。加えて、本明細書および添付した特許請求の範囲に記載されている範囲は、両方の端点と、これらの端点間の全ての点とを含む。従って、２．０〜３．０の範囲は、２．０、３．０、および２．０と３．０との間の全ての点を含む。
【０４５９】
一般に、本明細書で説明されている細胞および組織の培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学および化学の技術は公知であり、かつ当技術分野で一般に使用される。そのような技術と関連して本明細書で使用する命名法も当技術分野で一般に使用される。本発明の方法および技術は、概して、別途示さない限り、当技術分野で公知の従来の方法に従っておよび本明細書全体にわたり引用されている様々な参考文献で説明されているように実施される。
ＸＩＩ  参考文献
本明細書で引用されている全ての特許、特許出願および刊行物および電子的に入手可能な資料（例えば、例えばＧｅｎＢａｎｋおよびＲｅｆＳｅｑでのヌクレオチド配列の提出、ならびに例えばＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、ＰＩＲ、ＰＲＦ、ＰＤＢでのアミノ酸配列の提出、ならびにＧｅｎＢａｎｋおよびＲｅｆＳｅｑでの注釈付きのコーディング領域からの翻訳）の完全な開示は、特定の参考文献との関連で語句「参照により組み込まれる」が使用されているか否かに関わらず、参照により組み込まれる。上記の詳細な説明および後続する実施例は、理解を明確にすることのみのために示されている。これらから不要に限定されないことを理解されたい。本発明は、示されておりかつ説明されている厳格な詳細に限定されない。当業者に自明な変形形態は、特許請求の範囲により画定される本発明に含まれる。本明細書で使用されているあらゆる節の表題は構成を目的とするのみであり、説明されている主題を限定すると解釈すべきではない。
ＸＩＩＩ  配列表の概要
本出願に添付されているのは、多くの核酸配列およびアミノ酸配列を含む図面である。下記の表３は、含まれる配列の概要を示す。
【０４６０】
【表３】
2018515457.tif 000046
【０４６１】
実施形態
本明細書で開示されている実施形態として、下記の実施形態Ｐ１〜Ｐ２７が挙げられる。
【０４６２】
実施形態Ｐ１．式Ａｂ−［Ｗ−（Ｘ１）ａ−ＣＭ−（Ｘ２）ｂ−Ｐ−Ｄ］ｎの抗体薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩であって、式中、ａ）Ａｂは、標的化剤を含み、ｂ）Ｗは、連結基を含み、ＣＭは、開裂可能部分を含み、ｄ）Ｐは、ジスルフィド保護基を含み、ｅ）Ｘ１およびＸ２は、任意選択のスペーサー部分を含み、かつｆ）Ｄは、カリケアマイシンを含み、ａおよびｂは、独立して０または１であり、およびｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である、抗体薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩。
【０４６３】
実施形態Ｐ２．標的化剤は、抗体を含む、実施形態Ｐ１に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４６４】
実施形態Ｐ３．抗体は、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体またはそれらの免疫反応性断片を含む、実施形態Ｐ２に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４６５】
実施形態Ｐ４．抗体は、抗ＳＥＺ６抗体を含む、実施形態Ｐ２またはＰ３に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４６６】
実施形態Ｐ５．抗体は、部位特異的抗体を含む、実施形態Ｐ２〜Ｐ４のいずれか１つに記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４６７】
実施形態Ｐ６．抗体は、２個の不対システインを含む、実施形態Ｐ２〜Ｐ５のいずれかに記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４６８】
実施形態Ｐ７．各抗体軽鎖は、不対システイン残基を含む、実施形態Ｐ６に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４６９】
実施形態Ｐ８．各不対システイン残基は、Ｃ２１４位に存在する、実施形態Ｐ７に記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４７０】
実施形態Ｐ９．ｎは、２〜８の整数を含む、実施形態Ｐ１〜Ｐ８のいずれか１つに記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４７１】
実施形態Ｐ１０．ｎは、２の整数を含む、実施形態Ｐ１〜Ｐ９のいずれか１つに記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４７２】
実施形態Ｐ１１．Ｄは、カリケアマイシンγ１Ｉの類似体を含む、実施形態Ｐ１〜Ｐ１０のいずれか１つに記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４７３】
実施形態Ｐ１２．カリケアマイシンは、カリケアマイシンのＮ−アセチル誘導体またはジスルフィド類似体である、実施形態Ｐ１〜Ｐ１１のいずれかに記載の抗体／薬物コンジュゲート。
【０４７４】
実施形態Ｐ１３．カリケアマイシンは、Ｎ−アセチル−γ−カリケアマイシンである、実施形態Ｐ１〜Ｐ１２のいずれかに記載の抗体／薬物コンジュゲート。
【０４７５】
実施形態Ｐ１４．開裂可能部分は、ペプチド結合、ヒドラゾン部分、オキシム部分、エステル結合またはジスルフィド結合を含む、実施形態Ｐ１〜Ｐ１３のいずれかに記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４７６】
実施形態Ｐ１５．開裂可能部分は、ペプチド結合を含む、実施形態Ｐ１〜Ｐ１４のいずれかに記載の抗体薬物コンジュゲート。
【０４７７】
実施形態Ｐ１６．実施形態Ｐ１〜Ｐ１５のいずれか１つに記載の抗体薬物コンジュゲートを含む医薬組成物。
【０４７８】
実施形態Ｐ１７．癌を処置する方法であって、それを必要とする対象に実施形態１６に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【０４７９】
実施形態Ｐ１８．癌は、膵癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌および胃癌から選択される、実施形態Ｐ１７に記載の方法。
【０４８０】
実施形態Ｐ１９．少なくとも１種の追加の治療成分を対象に投与することを更に含む、実施形態Ｐ１７またはＰ１８に記載の方法。
【０４８１】
実施形態Ｐ２０．細胞にカリケアマイシン細胞毒素を送達する方法であって、細胞と実施形態Ｐ１〜Ｐ１５のいずれか１つに記載の抗体薬物コンジュゲートとを接触させることを含む方法。
【０４８２】
実施形態Ｐ２１．抗体薬物コンジュゲートを調製する方法であって、ａ）開裂可能リンカーを含むカリケアマイシン構築物を準備する工程、ｂ）標的化剤を還元して活性化された残基を生成する工程、およびｃ）還元した標的化剤をカリケアマイシン構築物にコンジュゲートさせる工程を含む方法。
【０４８３】
実施形態Ｐ２２．標的化剤は、部位特異的抗体を含む、実施形態Ｐ２１に記載の方法
実施形態Ｐ２３．部位特異的抗体は、天然ジスルフィド架橋に由来する遊離システインを含む、実施形態Ｐ２２に記載の方法。
【０４８４】
実施形態Ｐ２４．操作された抗体は、天然ジスルフィド架橋に由来しない遊離システインを含む、実施形態Ｐ２２に記載の方法。
【０４８５】
実施形態Ｐ２５．遊離システインは、導入システイン残基または置換システイン残基を含む、実施形態Ｐ２２に記載の方法。
【０４８６】
実施形態Ｐ２６．標的化剤を還元する工程は、標的剤を選択的に還元することを含む、実施形態Ｐ２１〜Ｐ２５のいずれかに記載の方法。
【０４８７】
実施形態Ｐ２７．抗体を選択的に還元する工程は、抗体と安定化剤とを接触させる工程を含む、実施形態Ｐ２６に記載の方法。
【０４８８】
更なる実施形態として、下記の実施形態１〜４４が挙げられる。
【０４８９】
実施形態１．式（Ｉ）：Ａｂ−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］ｚ３  （Ｉ）を有する化合物またはその薬学的に許容される塩であって、式中、Ａｂは、標的化剤であり、Ｗは、連結基であり、Ｍは、開裂可能部分であり、Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーであり、Ｐは、ジスルフィド保護基であり、Ｄは、カリケアマイシンまたはその類似体であり、ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数であり、およびｚ３は、１〜１０の整数である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【０４９０】
実施形態２．Ｄは、式（Ｉａ）：
【０４９１】
【化４２】
2018515457.tif 000047
【０４９２】
を含み、式中、Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１ＤおよびＲ１Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、ｎ１は、０〜４の整数であり、およびｖ１は、１または２である、実施形態１に記載の化合物。
【０４９３】
実施形態３．Ｒ１は、水素、置換もしくは非置換のアルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅである、実施形態２に記載の化合物。
【０４９４】
実施形態４．標的化剤は、抗体である、実施形態２に記載の化合物。
【０４９５】
実施形態５．抗体は、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体またはそれらの免疫反応性断片である、実施形態４に記載の化合物。
【０４９６】
実施形態６．抗体は、抗ＳＥＺ６抗体である、実施形態４に記載の化合物。
【０４９７】
実施形態７．Ｗは、抗体内のシステイン残基に共有結合的に付着している、実施形態４に記載の化合物。
【０４９８】
実施形態８．システイン残基は、Ｋａｂａｔ位置Ｃ２１４に存在する、実施形態７に記載の化合物。
【０４９９】
実施形態９．Ｗは抗体内のリシン残基に共有結合的に付着している、実施形態４に記載の化合物。
【０５００】
実施形態１０．式（ＩＩ）：
【０５０１】
【化４３】
2018515457.tif 000048
【０５０２】
を有し、式中、Ａｂは、抗体であり、Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＷ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃであり、Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合しており、かつＭ１Ｃは、Ｌ４に結合しており、Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｗ１Ａは、Ａｂに結合しており、かつＷ１Ｃは、Ｌ３に結合しており、Ｗ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＡＢ−、−ＮＲ６ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＡＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｗ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｗ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＣＢ−、−ＮＲ６ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＣＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６ＡＢ、Ｒ６ＢＢおよびＲ６ＣＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、ｎ１は、０〜４の整数であり、ｖ１は、１または２であり、ｎ２、ｎ３、ｎ４およびｎ５は、独立して１〜１０の整数であり、ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数であり、およびｚ３は、１〜１０の整数である、実施形態１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【０５０３】
実施形態１１．Ｍは、Ｍ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合しており、かつＭ１Ｃは、Ｌ４に結合している、実施形態１０に記載の化合物。
【０５０４】
実施形態１２．Ｗは、Ｗ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃであり、Ｗ１Ａは、Ａｂに結合しており、かつＷ１Ｃは、Ｌ３に結合している、実施形態１０に記載の化合物
実施形態１３．Ｐは、置換または非置換のアルキルである、実施形態１０に記載の化合物。
【０５０５】
実施形態１４．ｚ３は、１または２である、実施形態１０に記載の化合物。
【０５０６】
実施形態１５．Ｌ３は、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである、実施形態１０に記載の化合物。
【０５０７】
実施形態１６．Ｌ４は、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンである、実施形態１０に記載の化合物。
【０５０８】
実施形態１７．Ｒ１は、水素または−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅである、実施形態１０に記載の化合物。
【０５０９】
実施形態１８．Ｗは、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである、実施形態１０に記載の化合物。
【０５１０】
実施形態１９．Ｗは、５員または６員の置換または非置換のヘテロシクロアルキレンである、実施形態１８に記載の化合物。
【０５１１】
実施形態２０．Ｗは、式：
【０５１２】
【化４４】
2018515457.tif 000049
【０５１３】
を有する、実施形態１９に記載の化合物。
【０５１４】
実施形態２１．Ｍは、ペプチドを含む、実施形態１０に記載の化合物。
【０５１５】
実施形態２２．Ｍ１Ａは、結合、置換もしくは非置換のヘテロアルキレンまたは−［ＮＲ５ＡＢＣ（Ｒ５ＡＥ）（Ｒ５ＡＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ３であり、Ｍ１Ｂは、結合、置換もしくは非置換のヘテロアルキレンまたは−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−であり、およびＭ１Ｃは、結合、または置換もしくは非置換のアリーレン、または置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである、実施形態１０に記載の化合物。
【０５１６】
実施形態２３．Ｍ１ＡおよびＭ１Ｂは、独立してアミノ酸である、実施形態１０に記載の化合物。
【０５１７】
実施形態２４．Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つは、バリン（ｖａｌ）である、実施形態１０に記載の化合物。
【０５１８】
実施形態２５．Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つは、アラニン（ａｌａ）である、実施形態１０に記載の化合物。
【０５１９】
実施形態２６．Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つは、シトルリン（ｃｉｔ）である、実施形態１０に記載の化合物。
【０５２０】
実施形態２７．Ｍ１Ａ、Ｍ１ＢまたはＭ１Ｃのうちの少なくとも１つは、置換アリーレンである、実施形態１０に記載の化合物。
【０５２１】
実施形態２８．Ｍ１Ａ、Ｍ１ＢまたはＭ１Ｃのうちの少なくとも１つは、式（ＩＩＩ）：
【０５２２】
【化４５】
2018515457.tif 000050
【０５２３】
を有し、式中、Ｙは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、およびｎ６は、０〜３の整数である、実施形態１０に記載の化合物。
【０５２４】
実施形態２９．−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］は、
【０５２５】
【化４６】
2018515457.tif 000051
【０５２６】
【化４７】
2018515457.tif 000052
【０５２７】
【化４８】
2018515457.tif 000053
【０５２８】
【化４９】
2018515457.tif 000054
【０５２９】
である、実施形態１０に記載の化合物。
【０５３０】
実施形態３０．−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］は、式：
【０５３１】
【化５０】
2018515457.tif 000055
【０５３２】
のものである、実施形態１０に記載の化合物。
【０５３３】
実施形態３１．実施形態１〜３０のいずれか１つに記載の化合物を含む医薬組成物。
【０５３４】
実施形態３２．癌の処置を、それを必要とする対象において行う方法であって、対象に実施形態３１に記載の医薬組成物または実施形態１〜３０の１つに記載の化合物の治療上有効な量を投与することを含む方法。
【０５３５】
実施形態３３．癌は、膵癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌および胃癌から選択される、実施形態３２に記載の方法。
【０５３６】
実施形態３４．追加の化学療法剤を対象に投与することを更に含む、実施形態３２に記載の方法。
【０５３７】
実施形態３５．細胞にカリケアマイシン細胞毒素を送達する方法であって、細胞と実施形態１〜３０のいずれか１つに記載の化合物とを接触させることを含む方法。
【０５３８】
実施形態３６．抗体薬物コンジュゲートを調製する方法であって、カリケアマイシン構築物と抗体のシステインまたはリシンとを接触させることを含み、カリケアマイシン構築物は、式Ｗ１−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄを有し、式中、Ｗ１は、リシン側鎖またはシステイン側鎖と反応する官能基であり、Ｍは、開裂可能部分であり、Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーであり、Ｐは、ジスルフィド保護基であり、およびＤは、カリケアマイシンまたはその類似体である、方法。
【０５３９】
実施形態３７．カリケアマイシン構築物は、抗体の特定のシステインと接触させられる、実施形態３６に記載の方法。
【０５４０】
実施形態３８．特定のシステインは、天然ジスルフィド架橋に由来する、実施形態３７に記載の方法。
【０５４１】
実施形態３９．抗体は、操作された抗体であり、および特定のシステインは、天然ジスルフィド架橋に由来しない、実施形態３７に記載の方法。
【０５４２】
実施形態４０．特定のシステインは、接触前に選択的に還元される、実施形態３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【０５４３】
実施形態４１．抗体を選択的に還元する工程は、抗体と安定化剤とを接触させる工程を含む、実施形態４０に記載の方法。
【０５４４】
実施形態４２．式（ＩＶ）：
【０５４５】
【化５１】
2018515457.tif 000056
【０５４６】
を有する化合物であって、式中、Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−，−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、Ｗ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７Ｅ、−ＯＲ７Ａ、−ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＯ２、−ＳＲ７Ｄ、−ＳＯｎ７Ｒ７Ｂ、−ＳＯｖ７ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＯＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃであり、Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合しており、かつＭ１Ｃは、Ｌ４に結合しており、Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ７Ａ、Ｒ７Ｂ、Ｒ７Ｃ、Ｒ７Ｄ、Ｒ７Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、ｎ１およびｎ７は、独立して０〜４の整数であり、ｖ１およびｖ７は、独立して１または２であり、およびｎ２、ｎ３、ｎ４およびｎ５は、独立して１〜１０の整数である、化合物。
【０５４７】
実施形態４３．化合物は、
【０５４８】
【化５２】
2018515457.tif 000057
【０５４９】
【化５３】
2018515457.tif 000058
【０５５０】
【化５４】
2018515457.tif 000059
【０５５１】
【化５５】
2018515457.tif 000060
【０５５２】
である、実施形態４２に記載の化合物。
【実施例】
【０５５３】
ＸＩＶ  実施例
このように上記で概略的に説明した本発明は、例示を目的として提供されており本発明を限定することを意図するものではない下記の実施例を参照することにより、より容易に理解されるであろう。この実施例は、下記の実験が、実施される全てのまたは唯一の実験であることを表すことを意図するものではない。別途指示しない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧または大気圧付近である。
【０５５４】
ＰＤＸ腫瘍細胞の型を略号およびこの略号に続く数字で示し、この略号および数字は特定の腫瘍細胞系統を示す。被験試料の継代数をこの試料の名称に添付したｐ０〜ｐ＃で示し、ｐ０は患者の腫瘍から直接得られた非継代試料を示し、ｐ＃はこの腫瘍を試験前にマウスで継代している回数を示す。本明細書で使用する場合の腫瘍の型および亜型の略号を下記の表４に示す。
【０５５５】
【表４】
2018515457.tif 000061
【０５５６】
【表５】
2018515457.tif 000062
【０５５７】
【表６】
2018515457.tif 000063
【０５５８】
【表７】
2018515457.tif 000064
【０５５９】
【表８】
2018515457.tif 000065
【０５６０】
分析ＨＰＬＣ法および分取ＨＰＬＣ法に関する一般情報
分析法Ａ：
ＭＳ：Ａｃｕｉｔｙ  Ｕｌｔｒａ  ＳＱ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ＥＳＩ、走査範囲１２０〜２０４０Ｄａ。
【０５６１】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
カラム温度：５０℃
流速：０．６ｍｌ／分
移動相Ａ：水中の０．１％のギ酸。
【０５６２】
移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％のギ酸。
勾配：
【０５６３】
【表９】
2018515457.tif 000066
【０５６４】
分析法Ｂ：
ＭＳ：Ａｃｕｉｔｙ  Ｕｌｔｒａ  ＳＱ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ＥＳＩ、走査範囲１２０〜２０４０Ｄａ、
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
カラム温度：６０℃
流速：０．４ｍｌ／分
移動相Ａ：水中の０．１％のギ酸。
【０５６５】
移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％のギ酸。
勾配：
【０５６６】
【表１０】
2018515457.tif 000067
【０５６７】
分析法Ｃ：
ＨＲＭＳ：ＡＢＳｃｉｅｘ  ５６００  Ｐｌｕｓ  Ｔｒｉｐｌｅ  Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ（ＴＯＦ）、走査範囲２５０〜２５００Ｄａ
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８、１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ
カラム温度：６０℃
流速：０．４ｍｌ／分
移動相Ａ：水中の０．１％のギ酸。
【０５６８】
移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％のギ酸。
勾配：
【０５６９】
【表１１】
2018515457.tif 000068
【０５７０】
分取ＨＰＬＣ法Ａ：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ５μｍ  ＯＢＤ、１９×１００ｍｍ
カラム温度：周囲
流速：１５ｍｌ／分
移動相Ａ：水中の０．１％のギ酸。
【０５７１】
移動相Ｂ：アセトニトリル中の０．１％のギ酸。
勾配：
【０５７２】
【表１２】
2018515457.tif 000069
【０５７３】
分取ＨＰＬＣ法Ｂ：
カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＢｒｉｄｇｅ  ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ５μｍ  ＯＢＤ、１９×１００ｍｍ
カラム温度：周囲
流速：１５ｍｌ／分
移動相Ａ：水。
【０５７４】
移動相Ｂ：アセトニトリル。
勾配：
【０５７５】
【表１３】
2018515457.tif 000070
【０５７６】
実施例１
ヒドラゾンリンカーを含むカリケアマイシン構築物の合成
式１３：
【０５７７】
【化５６】
2018515457.tif 000071
【０５７８】
に係る薬物−リンカー化合物を、直下に記載する３種の異なる方法を使用して合成した。
合成経路１：
【０５７９】
【化５７】
2018515457.tif 000072
【０５８０】
（ｉ）Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｅ）−１３−（２−（（４−ヒドラジニル−２−メチル−４−オキソブタン−２−イル）ジスルファニル）エチリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート（３）。
【０５８１】
Ｎ−アセチルカリケアマイシン（２，２０ｍｇ、１４μｍｏｌ）をアセトニトリル２ｍｌに溶解させ、−１５Ｃに冷却した。３−メルカプト−３−メチルブタンヒドラジド（２１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、１０当量）をアセトニトリル０．５ｍｌに溶解させ、このカリケアマイシンの冷却溶液に緩やかに添加し、続いてトリエチルアミン（１８．８μＬ、０１４ｍｍｏｌ、１０当量）を添加した。反応を、完了するまで温まるままにした。３時間後、この反応を濃縮してシリカゲルカラムによるカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １〜２０％）により精製し、３を白色固体として得た（１８．７ｍｇ、８９％）。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．８０分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４７８．５７。
（ｉｉ）４−（４−（（Ｅ）−１−（２−（３−（（（Ｅ）−２−（（１Ｒ，８Ｓ，Ｚ）−８−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−５−（（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−５−（（４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾイル）チオ）−４−ヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）アミノ）−３−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−１−ヒドロキシ−１０−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−４，９−ジエン−２，６−ジイン−１３−イリデン）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタノイル）ヒドラゾノ）エチル）フェノキシ）ブタン酸（４）。
【０５８２】
分子ふるいの存在下で、４−（４−アセチルフェノキシ）ブタン酸（３．８ｍｇ、１７μｍｏｌ、５当量）をアルコール（１００μＬ）中の化合物３（５ｍｇ、３．４μｍｏｌ）に添加した。酢酸（１５μＬ、８０当量）を添加し、反応を３日にわたり３７℃で撹拌した。その後、８０％変換を観測し、反応を濃縮してシリカゲルカラムによるカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １〜２０％）により精製し、４を得た（１．１ｍｇ、２０％）。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．９６分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６８２．５３
（ｉｉｉ）Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｅ）−１３−（２−（（４−（２−（（Ｅ）−１−（４−（４−（（２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）エチル）アミノ）−４−オキソブトキシ）フェニル）エチリデン）ヒドラジニル）−２−メチル−４−オキソブタン−２−イル）ジスルファニル）エチリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート（１）。
【０５８３】
ＤＩＰＥＡ  ５μＬ（１０当量）を、ＤＭＦ中のＮ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（７ｍｇ／ｍＬ、１４μｍｏｌ、５当量）の溶液５００μＬに添加した。この溶液を、ＤＩＰＥＡ  ５μＬ（１０当量）を含む４の溶液（ＤＣＭ  １ｍＬ当たり１０ｍｇで４８０μＬ）に添加した。最後にＥＤＣＩ（１１ｍｇ、２８μｍｏｌ、１０当量）１１ｍｇを添加し、混合物を１５時間にわたり室温で撹拌した。出発物質が消費されており、ＬＣＭＳにより所望の生成物を観測した。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．９８分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１９１８．２９
合成経路２：
【０５８４】
【化５８】
2018515457.tif 000073
【０５８５】
（ｉ）Ｎ−（２−（４−（４−アセチルフェノキシ）ブタンアミド）エチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（６）
Ｎ−（２−アミノエチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１３７ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．２当量）をＴＨＦ（２ｍＬ）中の５（１００ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、続いてＨＡＴＵ（２０５．３ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．２当量）およびＨＯＢｔ水和物（８２．６ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。次いで、ＤＩＰＥＡ（１．５７ｍＬ、９．００ｍｍｏｌ、２０当量）を添加し、反応を１５時間にわたり室温で撹拌した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物６を白色固体として得た（２００ｍｇ、９７％）。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．６０分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝４５８．３７。
（ｉｉ）Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｅ）−１３−（２−（（４−（２−（（Ｅ）−１−（４−（４−（（２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）エチル）アミノ）−４−オキソブトキシ）フェニル）エチリデン）ヒドラジニル）−２−メチル−４−オキソブタン−２−イル）ジスルファニル）エチリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート（１）。
【０５８６】
アルコール２０μＬ中のＮ−（２−（４−（４−アセチルフェノキシ）ブタンアミド）エチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド６（０．３ｍｇ、０．６μｍｏｌ、５当量）の溶液を、ＤＭＦ（２０μＬ）中の化合物３（０．２ｍｇ、０．１４μｍｏｌ）に添加した。酢酸（１μＬ、１００当量）を添加し、反応を２４時間にわたり３７℃で撹拌した。その後、所望の生成物を観測した。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．９８分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１９１８．６９。
合成経路３：
【０５８７】
【化５９】
2018515457.tif 000074
【０５８８】
（ｉ）（Ｅ）−４−（４−（１−（２−（３−メルカプト−３−メチルブタノイル）ヒドラゾノ）エチル）フェノキシ）ブタン酸（８）。
【０５８９】
４−（４−アセチルフェノキシ）ブタン酸（５，７５０ｍｇ、３．３７ｍｍｏｌ、５当量）を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の３−メルカプト−３−メチルブタンヒドラジド（７，１００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）に添加した。酢酸（３．０ｍＬ、８０当量）を添加し、反応を３日にわたり３７℃で撹拌した。その後、８０％変換を観測し、反応を濃縮してシリカゲルカラムによるカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １〜２０％）により精製し、８を得た（７．０ｍｇ、３％）。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．７４分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５３．２８。
（ｉｉ）４−（４−（（Ｅ）−１−（２−（３−（（（Ｅ）−２−（（１Ｒ，８Ｓ，Ｚ）−８−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−５−（（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−５−（（４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾイル）チオ）−４−ヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）アミノ）−３−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−１−ヒドロキシ−１０−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−４，９−ジエン−２，６−ジイン−１３−イリデン）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタノイル）ヒドラゾノ）エチル）フェノキシ）ブタン酸（４）。
【０５９０】
Ｎ−アセチルカリケアマイシン（２，５ｍｇ、３．５μｍｏｌ）をアセトニトリル５０μＬに溶解させ、−１５Ｃに冷却した。化合物８（６．２ｍｇ、１７．７μｍｏｌ、５当量）をアセトニトリル５０μＬに溶解させ、このカリケアマイシンの冷却溶液に緩やかに添加し、続いてトリエチルアミン（２．３μＬ、１７．７μｍｏｌ、５当量）を添加した。反応を、完了するまで温まるままにした。３時間後、この反応を濃縮してシリカゲルカラムによるカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １〜２０％）により精製し、４を得た。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）Ｒｔ＝１．９６分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６８２．８０。
（ｉｉｉ）Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｅ）−１３−（２−（（４−（２−（（Ｅ）−１−（４−（４−（（２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）エチル）アミノ）−４−オキソブトキシ）フェニル）エチリデン）ヒドラジニル）−２−メチル−４−オキソブタン−２−イル）ジスルファニル）エチリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート（１）
合成経路１を参照されたい。
実施例２
オキシムリンカーを含むカリケアマイシン構築物の合成
式１４：
【０５９１】
【化６０】
2018515457.tif 000075
【０５９２】
に係る薬物−リンカー化合物を直下に記載するように合成した。
合成パート１：リンカーの形成
【０５９３】
【化６１】
2018515457.tif 000076
【０５９４】
（ｉ）Ｎ−（２−（４−（４−アセチルフェノキシ）ブタンアミド）エチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（６）。
【０５９５】
実施例１／合成経路２と同じ手順である。
（ｉｉ）ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−（２−（（（１−（４−（４−（（２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）エチル）アミノ）−４−オキソブトキシ）フェニル）エチリデン）アミノ）オキシ）エチル）カルバメート（１０）。
【０５９６】
ｔｅｒｔ−ブチル（２−（アミノオキシ）エチル）カルバメート（４６．２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、１．２当量）を、ジメチルホルムアミド（２００μＬ）中のＮ−（２−（４−（４−アセチルフェノキシ）ブタンアミド）エチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド６（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応を１５時間にわたり４０℃で撹拌した。反応を濃縮してカラムクロマトグラフィーにより精製し、所望の生成物１０を白色固体として得た（６５．５ｍｇ、５０％）。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．９２分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝６１６．４４。
（ｉｉｉ）（Ｚ）−Ｎ−（２−（４−（４−（１−（（２−アミノエトキシ）イミノ）エチル）フェノキシ）ブタンアミド）エチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド（１１）。
【０５９７】
ｔｅｒｔ−ブチル（Ｚ）−（２−（（（１−（４−（４−（（２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）エチル）アミノ）−４−オキソブトキシ）フェニル）エチリデン）アミノ）オキシ）エチル）カルバメート１０をジクロロメタン中の１０％ＴＦＡの溶液に溶解させた。この反応混合物を１時間にわたり室温で撹拌した後、溶媒を蒸発させた。結果として生じた粗混合物を次の工程で使用した。
合成パート２：リンカー−薬剤の製造
【０５９８】
【化６２】
2018515457.tif 000077
【０５９９】
（ｉ）４−（（（Ｅ）−２−（（１Ｒ，８Ｓ，Ｚ）−８−（（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−５−（（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｒ）−５−（（４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾイル）チオ）−４−ヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）アミノ）−３−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−１−ヒドロキシ−１０−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−４，９−ジエン−２，６−ジイン−１３−イリデン）エチル）ジスルファニル）−４−メチルペンタン酸（１２）。
【０６００】
Ｎ−アセチルカリケアマイシンγ１（０．２ｇ、０．１４２ｍｍｏｌ、１当量）をアセトニトリル３０ｍｌに溶解させ、溶液を−１５℃に冷却した。４−メルカプト−４−メチルペンタン酸（０．４２０ｍｌ、２．８３７ｍｍｏｌ、２０当量）をアセトニトリル１０ｍｌに溶解させ、このＮ−アセチルカリケアマイシンの冷却溶液に緩やかに添加した。この反応混合物にトリエチルアミン（０．３７７ｍｌ、２．８３７ｍｍｏｌ、２０当量）を添加し、反応を３〜１８時間にわたり室温まで温まるままにした。反応の完了時に混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー精製用のシリカゲル上に乾燥ロードした。ＤＣＭ中の２〜２０％ＭｅＯＨによるフラッシュクロマトグラフィー精製により所望の生成物をガラス状固体として単離し（０．１９ｇ、９０．５％収率）、このガラス状固体を冷ジエチルエーテルから白色粉末として沈殿させることできる。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．９２分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４７８．６４。
（ｉｉ）Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｅ）−１３−（（Ｚ）−２−（４−（４−（（２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）エチル）アミノ）−４−オキソブトキシ）フェニル）−１１，１１−ジメチル−８−オキソ−４−オキサ−１２，１３−ジチア−３，７−ジアザペンタデカ−２−エン−１５−イリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート（９）。
【０６０１】
（Ｚ）−Ｎ−（２−（４−（４−（１−（（２−アミノエトキシ）イミノ）エチル）フェノキシ）ブタンアミド）エチル）−６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド１１（２．１ｍｇ、４μｍｏｌ、１．５当量）をジメチルホルムアミド１００μＬに溶解させ、ＤＩＰＥＡ  ５μＬ（１０当量）を添加した。次いで、この溶液を、ＤＩＰＥＡ  ５μＬ（１０当量）を含むジメチルホルムアミド１００μＬ中の１２（４．０ｍｇ、２．７μｍｏｌ）の溶液に添加した。ＥＤＣＩ（２．６ｍｇ、１３．５μｍｏｌ、５当量）およびＨＯＢｔ水和物（４．１ｍｇ、２７μＬ、１０当量）を添加し、反応を２０時間にわたり室温で撹拌した。完全な変換を観測し、この反応を濃縮した後に分取ＨＰＬＣ（分取ＨＰＬＣ法Ｂ）で精製して所望の生成物９を得た（０．４ｍｇ、７．５％）。ＬＣ／ＨＲＭＳ（分析法Ｃ）：Ｒｔ＝９．０６分、［Ｍ＋２Ｈ］＋に関して観測したＭ／Ｚ＝９８８．３１９５。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ７．５６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６８（ｓ，２Ｈ），６．４６（ｓ，２Ｈ），６．２３（ｄ，Ｊ＝６５．９Ｈｚ，３Ｈ），５．７３（ｓ，１Ｈ），４．６８（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｓ，１Ｈ），４．３２（ｓ，１Ｈ），４．２４（ｓ，３Ｈ），４．０４（ｑ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，４Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，４Ｈ），３．８２−３．５４（ｍ，１３Ｈ），３．４９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），３．４２−３．２５（ｍ，１０Ｈ），２．６１（ｄ，Ｊ＝１７．７Ｈｚ，１Ｈ），２．３９（ｄ，Ｊ＝２１．７Ｈｚ，８Ｈ），２．２９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．２１（ｓ，５Ｈ），２．１１（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，７Ｈ），２．０２（ｓ，２Ｈ），１．９３（ｓ，２Ｈ），１．６７−１．４９（ｍ，４２Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，４Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，５Ｈ），１．２８−１．１５（ｍ，１２Ｈ）．
実施例３
Ｖａｌ−Ｃｉｔジペプチドリンカーを含むカリケアマイシン構築物の合成
式４（図１）：
【０６０２】
【化６３】
2018515457.tif 000078
【０６０３】
に係る薬物−リンカー化合物を直下に記載するように合成した。
合成パート１：リンカーの形成
【０６０４】
【化６４】
2018515457.tif 000079
【０６０５】
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート１４。
【０６０６】
１４の合成は既に説明されている（米国特許第６，２１４，３４５Ｂ１号明細書）。
【０６０７】
ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）エタン−１，２−ジイルジカルバメート１５。
【０６０８】
４−ニトロフェニルカーボネート１４（１００ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ、１当量）を無水ＤＭＦ  ５ｍｌに溶解させ、０℃まで冷却し、ｔｅｒｔ−ブチル（２−アミノエチル）カルバメート（２１．４ｕＬ、０．１３６ｍｍｏｌ、１当量）で処理した。反応混合物を２時間にわたり撹拌し、濃縮してカラムクロマトグラフィー（勾配２〜５０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭ）により精製し、オフホワイトの固体を得た（５５ｍｇ、５３％）。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．７３分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝７５９．３８。
【０６０９】
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−アミノエチル）カルバメート１６。
【０６１０】
Ｂｏｃ−アミンリンカー１５（５０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ、１当量）を１０％ＴＦＡ／ＤＣＭ溶液（５ｍｌ）に溶解させ、３０分にわたり室温で撹拌した。反応の完了をＬＣＭＳにより確認し、溶媒をｉｎ  ｖａｃｕｏで除去した。結果として生じた遊離アミンのＴＦＡ塩を直ちに次の工程に使用した。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．３６分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝６５９．５２。
合成パート２：薬物−リンカーの製造
【０６１１】
【化６５】
2018515457.tif 000080
【０６１２】
Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｅ）−１３−（１−（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−１１，１１−ジメチル−３，８−ジオキソ−２−オキサ−１２，１３−ジチア−４，７−ジアザペンタデカン−１５−イリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート１３。
【０６１３】
カリケアマイシン−酸誘導体１０（１０８ｍｇ、０．０７３ｍｍｏｌ、１当量）を乾燥ＤＭＦ  ２０ｍｌに溶解させ、続いてＥＤＣＩ（１４０．１ｍｇ、０．７３１ｍｍｏｌ、１０当量）、ＨＯＢｔ（１１１．８ｍｇ、０．７３１ｍｍｏｌ、１０当量）および乾燥ＤＩＰＥＡ（０．２５３ｍｌ、１．４６ｍｍｏｌ、２０当量）を添加した。反応を１０分にわたり室温で撹拌した。リンカーアミン１６（１４４．２ｍｇ、０．２１９ｍｍｏｌ、３当量）を乾燥ＤＭＦ  ３ｍｌに溶解させ、このリンカー溶液に乾燥ＤＩＰＥＡ（０．２５３ｍｌ、１．４６ｍｍｏｌ、２０当量）を添加した。次いで、リンカー−アミン溶液を、活性化された酸溶液に添加した。反応を一晩３７℃で撹拌し、ＬＣＭＳによりモニタリングした。反応完了時にＤＭＦをｉｎ  ｖａｃｕｏで除去し、得られた残留物を、分取ＨＰＬＣ精製（方法Ａ）用の１：１アセトニトリル：水に溶解させた。分取ＨＰＬＣ法Ａにより、所望の生成物を白色粉体として単離した（２０ｍｇ、１２．９％）。ＬＣＭＳ：Ｒｔ（分析法ＡまたはＣ）＝８．５２分、［Ｍ＋Ｈ］＋に関して観測したＭ／Ｚ＝２１１８．７１３４。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ７．５２（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），６．９５−６．８６（ｍ，２Ｈ），６．６８（ｓ，２Ｈ），６．４４−６．３６（ｍ，１Ｈ），６．２３（ｓ，１Ｈ），５．９１（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），５．８２−５．７３（ｍ，２Ｈ），５．６７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，２Ｈ），５．０３（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，７．７Ｈｚ，４Ｈ），４．７３−４．４９（ｍ，５Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｓ，２Ｈ），４．２４−４．１４（ｍ，３Ｈ），３．８８（ｓ，４Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，４Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７７−３．５９（ｍ，９Ｈ），３．５７（ｓ，４Ｈ），３．４９（ｑ，Ｊ＝８．２，７．４Ｈｚ，３Ｈ），３．４２−３．２０（ｍ，１３Ｈ），３．１８−３．０４（ｍ，３Ｈ），２．４４−２．３３（ｍ，６Ｈ），２．２９（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），２．２０−１．９６（ｍ，３１Ｈ），１．８７（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），１．８０−１．４７（ｍ，１１Ｈ），１．４６−１．３５（ｍ，５Ｈ），１．３５−１．１４（ｍ，１８Ｈ），０．９２（ｄｄ，Ｊ＝６．７，３．２Ｈｚ，６Ｈ）．
実施例４
Ｖａｌ−Ａｌａジペプチドリンカーを含むカリケアマイシン構築物の合成
式５：
【０６１４】
【化６６】
2018515457.tif 000081
【０６１５】
に係る薬物−リンカー化合物を直下に記載するように合成した。
合成パート１：リンカーの形成
【０６１６】
【化６７】
2018515457.tif 000082
【０６１７】
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カーボネート１８。
【０６１８】
４−ニトロフェニルカーボネート１８の合成は既に説明されている（米国特許第６，２１４，３４５Ｂ１号明細書）。
【０６１９】
ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル）エタン−１，２−ジイルジカルバメート１９。
【０６２０】
リンカー１５の調製の場合と同じ合成手順を使用して合成を実施した。単離収量６８ｍｇ（６３％）、ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．８５分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝６７３．３９。
【０６２１】
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル（２−アミノエチル）カルバメート２０。
【０６２２】
リンカー１６の調製の場合と同じ合成手順である。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．３８分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝５７３．４４。
合成パート２。薬物−リンカーの製造
【０６２３】
【化６８】
2018515457.tif 000083
【０６２４】
Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｅ）−１３−（１−（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）−１１，１１−ジメチル−３，８−ジオキソ−２−オキサ−１２，１３−ジチア−４，７−ジアザペンタデカン−１５−イリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート１７。
【０６２５】
１３の調製の場合と同じ合成手順である。白色固体として単離した。ＬＣＭＳ（分析法ＢまたはＣ）Ｒｔ＝８．９３分、［Ｍ＋２Ｈ］＋に関して観測したＬＣ／ＨＲＭＳ  Ｍ／Ｚ＝１０１６．８８１０。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ  ７．５０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，３Ｈ），７．２６（ｓ，４Ｈ），６．６８（ｓ，２Ｈ），６．２５（ｓ，３Ｈ），５．８３−５．７５（ｍ，２Ｈ），５．７３（ｓ，２Ｈ），５．６４（ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，２Ｈ），５．０６（ｔ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，４Ｈ），４．７５−４．５２（ｍ，６Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），４．３２（ｓ，３Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝９．４，６．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０５（ｓ，４Ｈ），３．８９（ｓ，４Ｈ），３．８４（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，５Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝１５．６，９．１Ｈｚ，４Ｈ），３．７３−３．６０（ｍ，７Ｈ），３．５８（ｓ，４Ｈ），３．４９（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），３．４３−３．２２（ｍ，１３Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．９８（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｓ，７Ｈ），２．３３−２．１３（ｍ，８Ｈ），２．１０（ｓ，７Ｈ），１．９０（ｓ，３Ｈ），１．５９（ｓ，１９Ｈ），１．５０−１．３７（ｍ，１０Ｈ），１．３５−１．１３（ｍ，２２Ｈ），０．９３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，７Ｈ）．
実施例５
Ｂｉｓ−Ｖａｌ−Ｃｉｔジペプチドリンカーを含むカリケアマイシン構築物の合成
式１５：
【０６２６】
【化６９】
2018515457.tif 000084
【０６２７】
に係る薬物−リンカー化合物を直下に記載するように合成した。
合成パート１：リンカーの形成。
【０６２８】
【化７０】
2018515457.tif 000085
【０６２９】
（（（（２Ｓ，５Ｓ，１５Ｓ，１８Ｓ）−１０−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル）−５，１５−ジイソプロピル−４，７，１３，１６−テトラオキソ−２，１８−ビス（３−ウレイドプロピル）−３，６，１０，１４，１７−ペンタアザノナデカンジオイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１−フェニレン））ビス（メチレン）ビス（４−ニトロフェニル）ビス（カーボネート）２２。
【０６３０】
４−ニトロフェニルカーボネート２２の合成をカーボネート１８と同様に達成した。
【０６３１】
（（（（２Ｓ，５Ｓ，１５Ｓ，１８Ｓ）−１０−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル）−５，１５−ジイソプロピル−４，７，１３，１６−テトラオキソ−２，１８−ビス（３−ウレイドプロピル）−３，６，１０，１４，１７−ペンタアザノナデカンジオイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１−フェニレン））ビス（メチレン）ビス（（２−アミノエチル）カルバメート）２３のビスｔｅｒｔ−ブチルカルボキシレート。
【０６３２】
リンカー１５および１９の調製の場合と同じ合成手順を使用して合成を実施した。単離収量１３ｍｇ（５１％）、ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．６８分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３７９．８５。
【０６３３】
（（（（２Ｓ，５Ｓ，１５Ｓ，１８Ｓ）−１０−（２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）エチル）−５，１５−ジイソプロピル−４，７，１３，１６−テトラオキソ−２，１８−ビス（３−ウレイドプロピル）−３，６，１０，１４，１７−ペンタアザノナデカンジオイル）ビス（アザンジイル））ビス（４，１−フェニレン））ビス（メチレン）ビス（（２−アミノエチル）カルバメート）２４。
【０６３４】
リンカー１６および２０の調製の場合と同じ合成手順である。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．５２分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１７９．６７。
合成パート２：リンカー−薬物の製造
【０６３５】
【化７１】
2018515457.tif 000086
【０６３６】
マレイミドビス−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ−カリケアマイシンガンマ１誘導体２１。
【０６３７】
１３および１７の調製の場合と同じ合成手順である。白色固体として単離した。ＬＣＭＳ（分析法ＢまたはＣ）Ｒｔ＝７．８０分、［Ｍ＋３Ｈ］＋に関して観測したＬＣ／ＨＲＭＳ  Ｍ／Ｚ＝１３６６．７８９７。
実施例６
可変ＰＥＧスペーサーを有するＶａｌ−Ｃｉｔジペプチドリンカーを含むカリケアマイシンリンカー−薬物の合成
式１６：
【０６３８】
【化７２】
2018515457.tif 000087
【０６３９】
を直下に記載するように合成した。
合成パート１：リンカーの形成。
【０６４０】
【化７３】
2018515457.tif 000088
【０６４１】
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２，２−ジメチル−４−オキソ−３，９，１２，１５−テトラオキサ−５−アザオクタデカン−１８−イル）カルバメート（２６）。
【０６４２】
リンカー１５の調製の場合と同じ合成手順を使用して合成を実施した。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：ＲＴ＝１．８１分、［Ｍ＋Ｈ］＋＝９１９．３６。
【０６４３】
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（３−（２−（２−（３−アミノプロポキシ）エトキシ）エトキシ）プロピル）カルバメート（２７）。
【０６４４】
リンカー１６の調製の場合と同じ合成手順である。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．４６分、［Ｍ＋Ｈ］＋に関して観測したＭ／Ｚ＝８１９．３６。
合成パート２：薬物−リンカーの製造
【０６４５】
【化７４】
2018515457.tif 000089
【０６４６】
Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｚ）−１３−（１−（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−２２，２２−ジメチル−３，１９−ジオキソ−２，８，１１，１４−テトラオキサ−２３，２４−ジチア−４，１８−ジアザヘキサコサン−２６−イリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート（２５）。
【０６４７】
１３および１７の調製の場合と同じ合成手順である。白色固体として単離した。ＬＣＭＳ（分析法ＢまたはＣ）Ｒｔ＝８．６２分、［Ｍ＋２Ｈ］＋に関して観測したＬＣ／ＨＲＭＳ  Ｍ／Ｚ＝１１３９．９０８８。
【０６４８】
【化７５】
2018515457.tif 000090
【０６４９】
を直下に記載するように合成した。
合成パート１：リンカーの形成。
【０６５０】
【化７６】
2018515457.tif 000091
【０６５１】
ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）（３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサペンタトリアコンタン−１，３５−ジイル）ジカルバメート（２９）。
【０６５２】
リンカー１５の調製の場合と同じ合成手順を使用して合成を実施した。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．８０分、［Ｍ＋Ｈ］＋に関して観測したＭ／Ｚ＝１２４３．６９。
【０６５３】
４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（３５−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３−ウンデカオキサペンタトリアコンチル）カルバメート（３０）。
【０６５４】
リンカー１６の調製の場合と同じ合成手順である。ＬＣＭＳ（分析法Ａ）：Ｒｔ＝１．５０分、［Ｍ＋Ｈ］＋に関して観測したＭ／Ｚ＝１１４３．５０。
【０６５５】
【化７７】
2018515457.tif 000092
【０６５６】
合成パート２。薬物−リンカーの製造
Ｓ−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，６Ｓ）−６−（（（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−６−（（（２Ｓ，５Ｚ，９Ｒ，１３Ｚ）−１３−（１−（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−４４，４４−ジメチル−３，４１−ジオキソ−２，７，１０，１３，１６，１９，２２，２５，２８，３１，３４，３７−ドデカオキサ−４５，４６−ジチア−４，４０−ジアザオクタテトラコンタン−４８−イリデン）−９−ヒドロキシ−１２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−１１−オキソビシクロ［７．３．１］トリデカ−１（１２），５−ジエン−３，７−ジイン−２−イル）オキシ）−５−（（（２Ｓ，４Ｓ，５Ｓ）−５−（Ｎ−エチルアセトアミド）−４−メトキシテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）アミノ）オキシ）−４−ヒドロキシ−２−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−３−イル）４−（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３，５−ジヒドロキシ−４−メトキシ−６−メチルテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）−３−ヨード−５，６−ジメトキシ−２−メチルベンゾチオエート（２８）。
【０６５７】
１３および１７の調製の場合と同じ合成手順である。白色固体として単離した。ＬＣＭＳ（分析法ＢまたはＣ）Ｒｔ＝８．６１分、［Ｍ＋２Ｈ］＋に関して観測したＬＣ／ＨＲＭＳ  Ｍ／Ｚ＝１３０２．０００７。
実施例７
ジペプチドリンカー−カリケアマイシン構築物はｉｎ  ｖｉｔｏｒｏで効率的に開裂される
先の実施例で製作したジペプチドリンカー−薬物構築物が酵素開裂の影響を受けやすいことを実証するために、カテプシンＢアッセイを実施した。最初に、実施例３および４のリンカー薬物構築物を１ＭのＮ−アセチルシステイン溶液で処理してマレイミド官能基をクエンチし、続いてカテプシンＢ処理した。過剰なＮ−アセチルシステインを使用してカテプシンＢを活性化させる。
【０６５８】
より具体的には、１：１のアセトニトリル：水中のクエンチしたリンカー−薬物の溶液（２０ｕｌ）を、２０ｍＭのＨｉｓＣｌ  ｐＨ６．０で１０体積／体積％（８０ｕｌ）の最終アセトニトリル含有量まで希釈した。リンカー−薬物に対して２．５ｍｏｌ％、５ｍｏｌ％または１０ｍｏｌ％の酵素となるまで、カテプシンＢ酵素を添加した。反応を緩やかにボルテックスし、室温に保った。１５分、３０分、６０分および９０分の時点で、この反応混合物３ｕｌを、Ｔｒｉｓ  ｐＨ９、５ｕＬ、１００ｍＭのジヒドロキシアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）２ｕＬ、水１５ｕｌが入っている全回収バイアルに入れた。上記に記載の分析法Ｂを使用して試料を分析した。変換を、出発物質のピーク面積の減少に基づいて算出した。結果を図２Ａ〜図２Ｃに示す。
【０６５９】
Ｖａｌ−Ｃｉｔカリケアマイシン構築物は、概して、Ｖａｌ−Ａｌａジペプチジル構築物と比べて迅速に開裂されたが、両方の構築物ともカテプシンＢにより効率的に開裂された。予想されるペイロードであるアミンの放出を、１５２０．３３の［ＭＨ］＋イオンを示す質量分析キャラクタリゼーションにより確認した。細胞中で見られるものに近いイオン化条件下では、ジスルフィド結合の開裂および再構成の生成物も１３３４．３９の［ＭＨ］＋イオンとして観測した（図１）。
【０６６０】
上述の結果から、リンカー開裂プロセスによりカリケアマイシンペイロードの完全な放出が可能になることが明瞭に実証されている。このデータは、この例示的なジペプチジル薬物リンカーが望ましい治療上の特性を有し、かつ開示されている抗体薬物コンジュゲートに効率的に組み込まれ得ることを示す。
実施例８
カリケアマイシン−リンカー構築物はｉｎ  ｖｉｔｒｏで治療上有効な細胞毒性を示す
上記で説明したもの等のカリケアマイシン−リンカー構築物が細胞死滅能力を保持しており、かつ抗体薬物コンジュゲートの一部として機能し得ることを実証するために、更なるアッセイを実行した。２９３Ｔ細胞を、ＡＴＣＣから購入した子宮肉腫系統を含むＭＥＳ  ＳＡ細胞およびＭＥＳ  ＳＡ／Ｄｘ細胞と一緒に使用した。ドキソルビシンの量を増加させて培養して、ドキソルビシンに対する耐性を１００倍にし、かつＭＤＲ１を上方制御したＭＥＳ  ＳＡ細胞から、ＭＥＳ  ＳＡ／Ｄｘ細胞系統を生成した。ドキソルビシンに加えて、ＭＥＳ−ＳＡ／Ｄｘ細胞は、多くの他の化学療法剤（例えば、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ビンクリスチン、タキソール、コルヒチン）に対する顕著な交差耐性と、マイトマイシンＣおよびメルファランに対する中程度の交差耐性とを示す。
【０６６１】
これらの細胞を約５０〜８０％の培養密度までＴ７５フラスコ中で培養し、トリプシンで単一細胞懸濁液へと回収した。１ウェル当たり５００個の細胞を５０μＬ／ウェルの培養培地での組織培養プレートに播種し、１８〜２４時間にわたり３７℃でインキュベートした。化合物をＤＭＳＯで４００×最終の所望濃度として希釈した。次いで、ＤＭＳＯでの連続希釈液を培養培地で希釈して０．２５％の最終ＤＭＳＯ濃度とし、５０μＬ／ウェルの最終希釈液を細胞に添加した（Ｖｆ＝１００μＬ）。蒔く際および処理の際、細胞を更に７２時間にわたりインキュベーターに戻した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を製造業者の指示で調製し、培養物に１００μＬ／ウェルで添加した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏは、細胞内ＡＴＰ濃度を定量化することにより、代謝的に活性な細胞の相対的な列挙を可能にする。周囲室温でＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏと共に５分にわたりインキュベートした後、１２５μＬ／ウェルのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ／細胞溶解液を黒色アッセイプレートに移し、次いで３０分以内にルミノメーターで読み取った。０．２５％のＤＭＳＯ以外で何ら処理されていない培養物から得られた発光読み取り値を１００％コントロールと設定し、他の全ての発光値をこのコントロールに対して正規化した（例えば、正規化ＲＬＵ、相対発光単位）。
【０６６２】
このアッセイの結果を図３Ａ〜図３Ｄに示し、同じデータから得られた、選択されたＩＣ５０値を下記の表５に示す。より具体的には、図３Ａ〜図３Ｄは、カリケアマイシンの場合（図３Ａ）、上記実施例３からのＶａｌ−Ｃｉｔカリケアマイシン（式３）の場合（図３Ｂ）、上記実施例４からのＶａｌ−Ａｌａカリケアマイシン（式４）の場合（図３Ｃ）および上記実施例１からのオキシムリンカーを含むカリケアマイシン（式１）の場合の濃度依存的なｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞死滅曲線を示す。各化合物に関してＭＥＳ細胞、ＭＥＳ  ＳＡ／ＤＸ細胞および２９３Ｔコントロール細胞について細胞死滅能力を決定した。
【０６６３】
図３Ａ〜図３Ｄに記載の曲線により示されるように、カリケアマイシンおよび各リンカー薬物化合物は薬学的に許容される活性を示し、比較的低濃度でＭＥＳ  ＳＡ細胞および２９３Ｔコントロール細胞を死滅させた。これに関して、裸のカリケアマイシンは、リンカー−薬物構築物により付与される濃度よりも約一桁低い濃度で活性を示した。更に、予想されるように、ＭＥＳ  ＳＡ／ＤＸ細胞は耐性がより高く、細胞死を誘発するためには、裸の毒素および薬物−リンカー構築物の両方ともより高い毒素濃度が必要であった。
【０６６４】
表５に関して、得られたＩＣ５０値は、裸のカリケアマイシンおよび細胞毒素コントロールがピコモル濃度範囲で活性を有し、カリケアマイシン−リンカー構築物がナノモル濃度範囲で活性を有することを示す。リンカー部分の付加によりもたらされる細胞毒性の低下は、薬物リンカーが何らかの方法で標的化部分から解離する場合に非局在化毒性が低下することから望ましいことが認識されるであろう。従って、図３Ａ〜図３Ｄに記載のデータは、開示されているカリケアマイシン−リンカーが抗体薬物コンジュゲートへの含有に有利な候補であることを示す。
【０６６５】
【表１４】
2018515457.tif 000093
【０６６６】
実施例９
細胞結合剤へのカリケアマイシン−リンカー構築物のコンジュゲーション
本発明のカリケアマイシン−リンカー構築物を更にキャラクタライズするために、安定化剤（例えば、Ｌ−アルギニン）および穏和な還元剤（例えば、グルタチオン）を含む選択的還元プロセススを使用して、上記の実施例３および実施例４に記載したように製造したジペプチジル薬物−リンカー化合物を部位特異的抗ＳＥＺ６抗体にコンジュゲートさせた。上記で論じたように、選択的コンジュゲーションにより、カリケアマイシン−リンカー構築物は、わずかな非特異的コンジュゲーションで、抗体上の操作された遊離システインに優先的にコンジュゲートされる。
【０６６７】
これについて、ｈＳＣ１７ｓｓ１構築物の標的コンジュゲーション部位は、２１４位での各軽鎖上の不対システイン（Ｃ２１４）である。これらの操作された部位のコンジュゲーションを引き起こすために、ｈＳＣ１７ｓｓ１の調製物を、室温で最低２時間にわたり、１ＭのＬ−アルギニン／８ｍＭのグルタチオン、還元（ＧＳＨ）／５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ８．０を含む緩衝剤中で部分的に還元した。次いで、この調製物を、３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ）を使用して２０ｍＭのＴｒｉｓ／３．２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．０緩衝剤に緩衝剤交換した。結果として得られた部分的に還元された調製物は遊離チオール濃度が１．９〜２．３であり、次いで、全ての調製物を、４℃で一晩、マレイミド部分を介してＶａｌ−Ａｌａカリケアマイシン（ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａ）およびＶａｌ−Ｃｉｔカリケアマイシン（ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃ）にコンジュゲートさせた。次いで、水で調製した１０ｍＭのストック溶液を使用して、１．２モル過剰のＮＡＣの添加により、この反応をクエンチした。最低２０分間のクエンチ時間後、３０ｋＤａ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ）を使用するダイアフィルトレーションにより、抗体−カリケアマイシンの調製物を２０ｍＭの塩化ヒスチジン、ｐＨ６．０にダイアフィルトレートした。
実施例１０
カリケアマイシンＡＤＣのキャラクタリゼーション
カリケアマイシン抗体−薬物コンジュゲートの非還元質量を、ＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ５６００  Ｔｒｉｐｌｅ  Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（ＨＲ  Ｔｒｉｐｌｅ  ＴＯＦ  ＭＳ）およびＢｒｕｋｅｒ  ｍａＸｉｓ  ＩＩ  Ｕｌｔｒａ  Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（ＵＨＲ−ＴＯＦ  ＭＳ）により決定した。両方とも、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）システムに直接連結されているエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源を備えていた。試料を最初に１ｍｇ／ｍＬに希釈し、次いでこの試料の非還元型で分析した。タンパク質を、変性移動相系を有する逆相カラム（Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  ３００  ＳＢ−Ｃ３、５ｕｍ、１．０×７５ｍｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐ／Ｎ  ６６１７５０−９０９；Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ３００  Ｃ４、１．７ｕｍ、２．１×５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ  Ｐ／Ｎ  １８６００４４９５）で分離した。移動相Ａは、水中の０．１％（体積／体積）ギ酸である。移動相Ｂは、８０％（体積／体積）２−プロパノール、１０％（体積／体積）アセトニトリル、１０％（体積／体積）水（移動相Ｂ）中の０．１％（体積／体積）ギ酸である。各タンパク質のＭＳスペクトル（例えば、図４Ａおよび図４Ｂ）を平均化し、次いで畳み込みを解いて平均質量およびモノアイソトピック質量を得る。下記の表５でまとめられているのは、対応するコンジュゲートされたカリケアマイシンリンカー−薬物を有するＳＣ１７ｓｓ１  ＬＣの理論上のおよび観測した平均質量およびモノアイソトピック質量である。
【０６６８】
【表１５】
2018515457.tif 000094
【０６６９】
このデータは、操作された抗ＳＥＺ−６抗体の遊離システインへのカリケアマイシン−リンカー構築物のコンジュゲートが成功したことを示す。
【０６７０】
（ＣＤ４６に免疫特異的に結合しており、かつ他の調製物と実質的に同じ方法でコンジュゲートされた別の調製物ｈＳＣ１ｓｓ１−ｖｃと一緒に）先の実施例の抗体−薬物調製物を逆相（ＲＰ−ＨＰＬＣ）分析により更にキャラクタライズして、重鎖コンジュゲーション部位対軽鎖コンジュゲーション部位を定量化した。より具体的には、図５に示すように、ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃ（式４’）、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａ（式５）’およびｈＳＣ１ｓｓ１−ｖｃ（式４’）への正確な軽鎖コンジュゲーションの割合を決定した（図５）。移動相Ａとしての水中の０．１％（体積／体積）のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と移動相Ｂとしての９０％（体積／体積）のアセトニトリル中の０．１％（体積／体積）のＴＦＡとでＡｅｒｉｓ  ＷＩＤＥＰＯＲＥ  ３．６μｍ  Ｃ４カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を使用して、分析を行なった。分析前に試料をＤＴＴで完全に還元した後にカラム上に注入し、このカラムでは、３０〜７０％の移動相Ｂの勾配を１５分超でアプライした。２１４ｎｍでのＵＶシグナルを収集し、次いでこのシグナルを使用して重鎖および軽鎖のコンジュゲーションの程度を算出した。
【０６７１】
事前に確立したピーク（軽鎖、軽鎖＋１薬物、重鎖、重鎖＋１薬物、重鎖＋２薬物等）のＲＰ−ＨＰＬＣ曲線下の面積を積分し、各鎖に関してコンジュゲートした％を算出することにより、重鎖および軽鎖へのコンジュゲーションのパーセントを決定した。図５に示すように、ｈＳＣ１７部位特異的の軽鎖へのコンジュゲーションのパーセントは、Ｖａｌ−Ｃｉｔカリケアマイシン構築物およびＶａｌ−Ａｌａカリケアマイシン構築物の両方とのコンジュゲーションの場合に＞８０％である。Ｖａｌ−Ｃｉｔカリケアマイシンに部位特異的にコンジュゲートしたｈＳＣ１ｓｓ１部位も、＞８０％の軽鎖コンジュゲーションを得た。上記で説明した試料の重鎖へのコンジュゲーションの割合は、ｈＳＣ１７部位特異的コンジュゲートの場合には＜１５％であり、ｈＳＣ１ｓｓ１部位特異的コンジュゲーションの場合には＜３０％であり、これは、ｈＳＣ１７部位特異的なＶａｌ−ＣｉｔコンジュゲートおよびＶａｌ−Ａｌａコンジュゲートのそれぞれに関して得られた１．９および１．８のＤＡＲと比較して、この試料に関して得られた２．３の高いＤＡＲに起因すると予想される。全ての場合において、コンジュゲーションのパラメータを更に最適化して、重鎖へのコンジュゲーションのパーセントを低下させつつ軽鎖へのコンジュゲーションのパーセントを増加させることができる。
【０６７２】
同じｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃ調製物、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａ調製物およびｈＳＣ１ｓｓ１−ｖｃ調製物も、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）ＨＰＬＣをベースとする方法を使用して分析し、ＡＤＣにとって望ましくないＤＡＲ＞２種に対するＤＡＲ＝２種の量を決定した。これに関して、移動相Ａとしての水中の１．５Ｍの硫酸アンモニウムおよび２５ｍＭのリン酸カリウムと移動相Ｂとしての水中の０．２５重量／体積％のＣＨＡＰＳおよび２５ｍＭのリン酸カリウムとでＰｏｌｙＰｒｏｐｙｌ  Ａカラム（ＰｏｌｙＬＣ）を使用して、ＨＩＣを行なった。試料をカラム上に直接注入し、このカラムでは、０〜１００％の移動相Ｂの勾配を１５分超でアプライした。２８０ｎｍでのＵＶシグナルを収集し、未コンジュゲートの抗体およびより高いＤＡＲ種に関してクロマトグラムを分析した。事前に確立したピーク（ＤＡＲ＝０、ＤＡＲ＝１、ＤＡＲ＝２、ＤＡＲ＝４等）のＨＩＣ曲線下の面積を積分し、各ピークの％を算出することにより、ＤＡＲ算出を実施した。ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃおよびｈＳＣ１ｓｓ１−ｖｃに関して得られたＤＡＲ分布を図６に示す。ｈＳＣ１７部位特異的コンジュゲート調製物のＨＩＣにより決定された場合のＤＡＲ分布（ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａに関してはデータを示さない）は、３種のコンジュゲート全てが＞６５％のＤＡＲ＝２を得たことを示す。これらのコンジュゲート調製物は、２５％未満のＤＡＲ＜２および１５％未満のＤＡＲ＞２も得た。
【０６７３】
同じ手順を使用して、Ｎ１４９、ＳＣ２７およびＳＣ５７（様々な決定基に対するＩｇＧ１部位特異的抗体）の二次コンジュゲーションを分析し、結果を表７にまとめた。上記で説明したＨＩＣ法または下記で説明するサイズ排除クロマトグラフィー法のいずれかを使用して、ＤＡＲ算出を実施した。
【０６７４】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、カリケアマイシン抗体−薬物コンジュゲートのサイズ不均一性をキャラクタライズした。この分析は、移動相としての水中の２５ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ６．５、５００ｍＭのＬ−アルギニンおよび１０％のイソプロパノール（ＩＰＡ）でＡｃｑｕｉｔｙ  １．７−μｍ、４．６×３００ｍｍ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ２００  ＳＥＣカラムを用いた。試料をそのまま注入し、移動相を２２分にわたり０．２ｍＬ／分において均一濃度でアプライした。２８０ｎＭでのＵＶシグナルを収集し、ピーク面積を使用して、ＡＤＣの凝集および断片化の程度を算出した。
【０６７５】
【表１６】
2018515457.tif 000095
【０６７６】
比較的タイトな平均ＤＡＲおよび低率の凝集または断片化は、結果として得られる調製物が好ましい治療指数および比較的低い非特異的毒性を示すであろうことを強く示唆する。
実施例１１
カリケアマイシンＡＤＣはｉｎ  ｖｉｔｒｏで抗原発現細胞を死滅させる
本発明の抗ＳＥＺ６  ＡＤＣが生存する腫瘍細胞への細胞毒性剤の送達を内在化可能かどうかおよび媒介可能かどうかを決定するために、実施例９で生成したもの等の選択された抗ＳＥＺ６  ＡＤＣを使用して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞死滅アッセイを実施した。
【０６７７】
細胞を、ほとんどが上記の実施例８で説明されているように培養して蒔いた。１日後、この腫瘍細胞を０ｐＭ〜１０００ｐＭの範囲の様々な濃度でヒト化抗ＳＥＺ６  ＡＤＣ（ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａ、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃ、および式１のオキシム薬物−リンカーを含むｈＳＣ１７ｓｓ１−ｏｘ）に曝露した。９６時間にわたるインキュベーション後、上記の実施例７で説明したようにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して生存細胞を計数した。未処理細胞を含む培養物を使用した生の発光カウントを１００％参照値と設定し、他の全てのカウントをこの参照値の割合として算出した。
【０６７８】
このｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの結果を、本明細書に添付した図７Ａ〜図７Ｃに示す。より具体的には、図７Ａは、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃの抗原発現細胞を排除する能力を示し、図７Ｂは、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａに関して同じことを示し、図７Ｃは、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｏｘの場合を示す。いずれの場合でも、ＳＥＺ６を過剰発現するように形質導入された２９３Ｔ−ＳＥＺ６細胞は、ＳＥＺ６に関してＡＤＣに対して特異性を示す親系統（２９３Ｔ）と比べて実質的に低いＡＤＣ濃度でより多く死滅した。図７Ａ〜図７Ｃで表すデータは、抗ＳＥＺ６  ＡＤＣの細胞毒性カリケアマイシンペイロードを内在化および送達する能力を示し、それにより、開示されているカリケアマイシン−リンカー構築物のＡＤＣ成分としての使用を支持する。
【０６７９】
適切な標的発現細胞系統を使用する同一の手順を使用して、次のＮ１４９、ＳＣ２７およびＳＣ５７の二次カリケアマイシンコンジュゲートの細胞死滅能力を決定し、結果を下記の表８でまとめた。
【０６８０】
【表１７】
2018515457.tif 000096
【０６８１】
全体として、標的特異的ＡＤＣは、比較的低いＩＣ５０値を示す高効率で標的発現細胞を死滅させる。そのような値は、非標的発現細胞の死滅の欠如と組み合わせると、治療上有用な化合物の値である。
実施例１２
カリケアマイシンＡＤＣはｉｎ  ｖｉｖｏで抗原発現細胞を死滅させる
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験を行ない、直上の実施例１１で示したカリケアマイシンＡＤＣ  ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃおよびカリケアマイシンｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａの細胞死滅特性を確認した。この目的のために、先の実施例で記載したように調製した部位特異的ＳＣ１７標的型ＡＤＣを、内因性ＳＥＺ６細胞表面タンパク質発現を有する、皮下患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）腫瘍を担持する免疫無防備状態のＮＯＤＳＣＩＤマウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ治療効果に関して試験した。より具体的には、抗ＳＥＺ６  ＡＤＣをそれぞれ３種の異なるＳＣＬＣモデルで試験した。
【０６８２】
ＳＣＬＣ−ＰＤＸ系統、ＬＵ６４、ＬＵ９５およびＬＵ１４９をそれぞれ乳房脂肪体領域付近の皮膚下で解離した細胞接種物として注入し、キャリパで毎週測定した（楕円形体積＝ａ×ｂ２／２、ａは楕円の長径であり、ｂは楕円の短径である）。腫瘍が２００ｍｍ３（範囲、１００〜３００ｍｍ３）の平均サイズまで成長した後、マウスを、腫瘍体積平均が等しい処置群（１つの群当たりｎ＝５のマウス）に無作為化した。マウス（１つの群当たり５匹）を、合計用量で４日に１回（Ｑ４Ｄ×４）の腹腔内注射（３００μＬ体積）により、ビヒクル（無菌水中の５％のグルコース）またはｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃカリケアマイシン調製物およびｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａカリケアマイシン調製物（０．１〜１ｍｇ／ｋｇ）のいずれかで処置し、毎週の腫瘍容積（上記のキャリパによる）および体重測定により治療効果を評価した。個々のマウスまたは処置群のエンドポイント基準は、健康評価（病気のあらゆる徴候）、体重減少（試験開始から２０％超の体重減少）および腫瘍負荷（腫瘍容積＞１０００ｍｍ３）を含んだ。群が平均して約８００〜１０００ｍｍ３に達するまで、毎週の腫瘍容積測定（ｍｍ３）により有効性をモニタリングした。腫瘍容積を、処置群における全てのマウスに関する標準誤差平均を有する平均として算出し、最初の処置からの時間（日数）に対してプロットした。処置の結果を図８Ａ〜図８Ｃに示し、これらの図では、１つの処置群当たり５匹のマウスにおける標準誤差平均（ＳＥＭ）を有する平均腫瘍容積を示す。
【０６８３】
具体的には、ＳＣＬＣ  ＰＤＸ−ＬＵ１４９（図８Ａ）、ＰＤＸ−ＬＵ９５（図８Ｂ）またはＰＤＸ−ＬＵ６４（図８Ｃ）を担持するマウスにおいて、選択された投与量でｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃ  ＡＤＣ、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａ  ＡＤＣおよびｈＳＣ１７ｓｓ１−オキシム（式１４’）ＡＤＣを評価し、これらの腫瘍の成長を遅延させる能力を決定した。従属する図面で示されたデータから、中程度の用量レベル（０．３〜０．６ｍｇ／ｋｇ、単回用量またはＱ４Ｄ×４投与レジメン）では、ｈＳＣ−１７ｓｓ１−ｖｃ  ＡＤＣおよびｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａ  ＡＤＣが、類似した（ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａと比較したｈｓＣ１７ｓｓ１−ｖｃ）治療効果を有するか、または異なる（ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃと比較したｈＳＣ１７ｓｓ１−オキシム）治療効果を有することが実証された。更に、本実施例で使用される用量レベル等の適切な用量レベル（例えば、１ｍｇ／ｋｇ、Ｑ４Ｄ×４）はＳＣＬＣ−ＰＤＸ担持マウスにおいて５０日以上にわたり持続的応答を達成し得ることも示された。
【０６８４】
これらのモデルおよび投与された用量では、ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃ  ＡＤＣ調製物およびｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖａ  ＡＤＣ調製物は、ＳＣＬＣ  ＰＤＸの３匹のマウスモデルで試験された場合に同等のｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性を有した。ｈＳＣ１７ｓｓ１−オキシムＡＤＣ調製物はある程度の治療効果を有したが、２つのＳＣＬＣ  ＰＤＸモデルにおいて同一の用量で評価した場合にｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃと比べて低かった。ＳＣＬＣ−ＰＤＸ腫瘍を担持するマウスにおけるＳＣ１７結合ＡＤＣのｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性は用量レベルに依存し、より高い用量レベルで強力であった。まとめると、このデータは、ＳＣ１７カリケアマイシンＡＤＣが同等かつ強力なｉｎ  ｖｉｖｏでの治療有効性を提供することを示す。
実施例１３
マウス許容性試験
先の実施例に記載したように調製したｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃカリケアマイシンＡＤＣのｉｎ  ｖｉｖｏでの許容性を、免疫無防備状態のＮＯＤＳＩＤマウスで試験した。未処置の５〜７週齢のマウスを秤量し（２１〜２８ｇ）、平均動物体重が等しい処置群（１つの群当たりｎ＝３〜４のマウス）に無作為化した。マウスを、静脈内注射（１００μＬ体積）によりｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃカリケアマイシン調製物（２〜１６ｍｇ／ｋｇ）の単回用量で処置し、マウス体重の測定値を２〜３週間にわたり１週間に２〜３回モニタリングした。個々のマウスのエンドポイント基準は、体重減少（試験開始から１０％超）および身体健康の評価（姿勢、活発さ、体温、呼吸数、または病気のあらゆる他の徴候）を含んだ。結果を図９に示し、この図９では、試験開始からの体重変化のパーセント（％）が経時的にモニタリングされている。図９に示すデータから、免疫無防備状態のＮＯＤＳＩＤマウスにおいて８ｍｇ／ｋｇ以下の単回用量ではｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃが良好に許容されることが実証された。処置後５日目に最初の体重減少からの回復が８ｍｇ／ｋｇの用量レベルで生じたが、１６ｍｇ／ｋｇの用量レベルで処置した動物は回復せず、不健康（エンドポイント基準）に起因してこの動物を取り除いた。
実施例１４
ｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃカリケアマイシンおよびｈＳＣ２７ｓｓ１−ｖｃカリケアマイシンのカニクイザル薬物動態（ＰＫ）における薬物動態
先の実施例に記載したように調製したＡＤＣをカニクイザルで評価した。合計で２回の用量で３週間に１回（Ｑ３Ｗ×２）２０分の静脈内注入により、１．５ｍｇ／ｋｇのｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃ、２．５ｍｇ／ｋｇのｈＳＣ１７ｓｓ１−ｖｃまたは１．５ｍｇ／ｋｇのｈＳＣ２７ｓｓ１−ｖｃでカニクイザル（１つの群当たりｎ＝３の雌）を処置した。毒性に関連する曝露を確認するために薬物動態を評価した（実施例１５を参照されたい）。各用量後の様々な時点で血漿試料を採取し、全抗体（Ｔａｂ）およびＡＤＣ分析物の濃度をサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイ型方法（ｓａｎｄｗｉｃｈ  ＥＬＩＳＡ  ａｓｓａｙ−ｔｙｐｅ  ｍｅｔｈｏｄ）により評価した。時間に対するＴａｂおよびＡＤＣの濃度のデータを図１０に示す。
【０６８５】
図１０に示すデータ（式４’）から、カリケアマイシンＡＤＣのＰＫは用量線形であることが実証される。ＭＡｂ曝露は、予想したようにＡＤＣ曝露と比べて大きい。ＡＤＣの蓄積はほとんどまたは全くないことを観測した。まとめると、カニクイザル中のカリケアマイシンＡＤＣのＰＫは、抗体および／またはＡＤＣに関して予想したＰＫと一致する。
実施例１５
サル毒性試験
試験デザイン：
カニクイザル（３匹／用量レベル）に、合計で２回の用量で３週間の間隔において１．５および２．５ｍｇ／ｋｇ用量レベルでＳＣ１７ｓｓ１ＬＤ１９．４を投与した。最後の用量から３週間後に動物を解剖した。エンドポイントは、臨床観察、体重、血液、臨床化学、凝固、尿検査、臓器重量、肉眼所見および組織病理を含んだ。
結果：
１．５ｍｇ／ｋｇ／用量でのＳＣ１７ｓｓ１ＬＤ１９．４
静脈内持続注入により３週間に２回の用量として投与した１．５ｍｇ／ｋｇ／用量でのＳＣ１７ｓｓ１ＬＤ１９．４の投与が許容された。臨床化学および組織病理では、被験物質依存的変化が存在した。肉眼所見、臓器重量、血液、凝固および尿検査では、被験物質依存的変化は存在しなかった。
【０６８６】
臨床化学での変化は概して用量依存的であり、ＡＳＴの上昇を特徴とした。病理組織学的変化は、腎臓、皮膚、食道、舌、膀胱および胸腺での変化により、わずかにかつ一貫することなく用量依存的であった。
２．５ｍｇ／ｋｇ／用量でのＳＣ１７ｓｓ１ＬＤ１９．４
静脈内持続注入により３週間に２回の用量として投与した２．５ｍｇ／ｋｇ／用量でのＳＣ１７ｓｓ１ＬＤ１９．４の投与が許容された。臓器重量、血液、臨床化学および組織病理では、被験物質依存的変化が存在した。肉眼所見、凝固および尿検査では、被験物質依存的変化は存在しなかった。
【０６８７】
臓器重量の変化は、胸腺の減少および精巣重量の増加を特徴とした。血液の変化は、血小板および網状赤血球数の減少を特徴とした。臨床化学での変化はわずかに用量依存的であり、ＡＳＴ、ＡＬＴ、総タンパク質、グロブリンの上昇およびアルブミンの減少を特徴とした。病理組織学的変化は、腎臓、上皮（皮膚、食道、舌、膀胱）、胸腺および精巣での変化により、わずかにかつ一貫することなく用量依存的であった。
【０６８８】
全体として、被験化合物の毒性プロファイルは、この被験化合物が哺乳動物で十分に許容され、かつ治療上有用であり得ることを示す。
【０６８９】
当業者は、本発明が、本発明の趣旨および中心的な特性から逸脱することなく、他の具体的な形態で具体化され得ることを更に認識するであろう。本発明の上述の説明は本発明の例示的な実施形態を開示するのみであることから、他の変形形態も本発明の範囲内であるとして企図されることを理解されたい。従って、本発明は、本明細書で詳細に説明されている特定の実施形態には限定されない。むしろ、本発明の範囲および内容を示す添付の特許請求の範囲を参照すべきである。
【図１】
2018515457.tif 000112
【図２Ａ】
2018515457.tif 000113
【図２Ｂ】
2018515457.tif 000114
【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
2018515457.tif 000116
【図３Ｂ】
2018515457.tif 000117
【図３Ｃ】
2018515457.tif 000118
【図３Ｄ】
2018515457.tif 000119
【図４Ａ】
2018515457.tif 000120
【図４Ｂ】
2018515457.tif 000121
【図５】
2018515457.tif 000122
【図６】
2018515457.tif 000123
【図７Ａ】
2018515457.tif 000124
【図７Ｂ】
2018515457.tif 000125
【図７Ｃ】
2018515457.tif 000126
【図８Ａ】
2018515457.tif 000127
【図８Ｂ】
2018515457.tif 000128
【図８Ｃ】
2018515457.tif 000129
【図９】
2018515457.tif 000130
【図１０】
2018515457.tif 000131
【配列表】
2018515457000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成30年1月23日(2018.1.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ａｂ−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］ｚ３  （Ｉ）
を有する化合物またはその薬学的に許容される塩であって、
式中、
Ａｂは、標的化剤であり、
Ｗは、連結基であり、
Ｍは、開裂可能部分であり、
Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーであり、
Ｐは、ジスルフィド保護基であり、
Ｄは、カリケアマイシンまたはその類似体であり、
ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数であり、および
ｚ３は、１〜１０の整数である、化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｄは、式（Ｉａ）：
【化１】
2018515457.tif 000132
を含み、
式中、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１ＤおよびＲ１Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、
ｎ１は、０〜４の整数であり、および
ｖ１は、１または２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記標的化剤は、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗ＳＥＺ６抗体およびそれらの免疫反応性断片からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｗは、前記標的化剤内のシステイン残基に共有結合的に付着している、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記システイン残基は、Ｋａｂａｔ位置Ｃ２１４に存在する、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
式（ＩＩ）：
【化２】
2018515457.tif 000133
を有し、
式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、
Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、
Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、
Ｗは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＷ１Ａ−Ｗ１Ｂ−Ｗ１Ｃであり、
Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合しており、かつＭ１Ｃは、Ｌ４に結合しており、
Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｗ１Ａは、Ａｂに結合しており、かつＷ１Ｃは、Ｌ３に結合しており、
Ｗ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＡＢ−、−ＮＲ６ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＡＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｗ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＢＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｗ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ６ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６ＣＢ−、−ＮＲ６ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ６ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６ＣＢ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ６ＡＢ、Ｒ６ＢＢおよびＲ６ＣＢは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、
ｎ１は、０〜４の整数であり、
ｖ１は、１または２であり、
ｎ２、ｎ３、ｎ４およびｎ５は、独立して１〜１０の整数であり、
ｚ１およびｚ２は、独立して０〜１０の整数であり、および
ｚ３は、１〜１０の整数である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７】
Ｗは、５員または６員の置換または非置換のヘテロシクロアルキレンである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｗは、式：
【化３】
2018515457.tif 000134
を有する、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｍは、ペプチドを含む、請求項６に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｍ１ＡおよびＭ１Ｂは、独立してアミノ酸である、請求項６に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｍ１ＡまたはＭ１Ｂのうちの少なくとも１つは、バリン（ｖａｌ）、アラニン（ａｌａ）およびシトルリン（ｃｉｔ）からなる群から選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｍ１Ａ、Ｍ１ＢまたはＭ１Ｃのうちの少なくとも１つは、置換アリーレンである、請求項６に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｍ１Ａ、Ｍ１ＢまたはＭ１Ｃのうちの少なくとも１つは、式（ＩＩＩ）：
【化４】
2018515457.tif 000135
を有し、
式中、
Ｙは、−ＮＨ−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、および
ｎ６は、０〜３の整数である、請求項６に記載の化合物。
【請求項１４】
−［Ｗ−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄ］は、
【化５】
2018515457.tif 000136
【化６】
2018515457.tif 000137
【化７】
2018515457.tif 000138
【化８】
2018515457.tif 000139
【化９】
2018515457.tif 000140
である、請求項６に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１６】
癌を有する患者を処置する方法であって、前記患者を選択し、前記患者に請求項１に記載の化合物の治療上有効な量を投与する工程を含む方法。
【請求項１７】
細胞にカリケアマイシン細胞毒素を送達する方法であって、前記細胞と請求項１に記載の化合物とを接触させることを含む方法。
【請求項１８】
抗体薬物コンジュゲートを調製する方法であって、カリケアマイシン構築物と抗体のシステインまたはリシンとを接触させることを含み、前記カリケアマイシン構築物は、式Ｗ１−（Ｌ３）ｚ１−Ｍ−（Ｌ４）ｚ２−Ｐ−Ｄを有し、式中、Ｗ１は、リシン側鎖またはシステイン側鎖と反応する官能基であり、Ｍは、開裂可能部分であり、Ｌ３およびＬ４は、独立してリンカーであり、Ｐは、ジスルフィド保護基であり、およびＤは、カリケアマイシンまたはその類似体である、方法。
【請求項１９】
式（ＩＶ）：
【化１０】
2018515457.tif 000141
を有する化合物であって、
Ｌ３は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ３Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ３ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、
Ｌ４は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−，−ＮＲ４Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ４ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアルキレンであり、
Ｒ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１Ｅ、−ＯＲ１Ａ、−ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ＢＲ１Ｃ、−ＳＲ１Ｄ、−ＳＯｎ１Ｒ１Ｂまたは−ＳＯｖ１ＮＲ１ＢＲ１Ｃであり、
Ｐは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２Ｂ−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５Ｂ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５Ｂ−、−［ＮＲ５ＢＣ（Ｒ５Ｅ）（Ｒ５Ｆ）Ｃ（Ｏ）］ｎ２−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンまたはＭ１Ａ−Ｍ１Ｂ−Ｍ１Ｃであり、
Ｗ１は、水素、ハロゲン、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリール、−Ｎ３、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７Ｅ、−ＯＲ７Ａ、−ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７Ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＯ２、−ＳＲ７Ｄ、−ＳＯｎ７Ｒ７Ｂ、−ＳＯｖ７ＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＯＮＲ７ＢＲ７Ｃ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＲ７ＢＲ７Ｃであり、
Ｍ１Ａは、Ｌ３に結合しており、かつＭ１Ｃは、Ｌ４に結合しており、
Ｍ１Ａは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＡＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＡＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＡＢ−、−［ＮＲ５ＡＢＣＲ５ＡＥＲ５ＡＦＣ（Ｏ）］ｎ３−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍ１Ｂは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＢＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＢＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＢＢ−、−［ＮＲ５ＢＢＣ（Ｒ５ＢＥ）（Ｒ５ＢＦ）Ｃ（Ｏ）］ｎ４−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｍ１Ｃは、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５ＣＢ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）−、−ＮＲ５ＣＢＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ５ＣＢ−、−［ＮＲ５ＣＢＣＲ５ＣＥＲ５ＣＦＣ（Ｏ）］ｎ５−、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレンまたは置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであり、
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ、Ｒ１Ｃ、Ｒ１Ｄ、Ｒ１Ｅ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｅ、Ｒ５Ｆ、Ｒ５ＡＢ、Ｒ５ＡＥ、Ｒ５ＡＦ、Ｒ５ＢＢ、Ｒ５ＢＥ、Ｒ５ＢＦ、Ｒ５ＣＢ、Ｒ５ＣＥ、Ｒ５ＣＦ、Ｒ６Ｂ、Ｒ７Ａ、Ｒ７Ｂ、Ｒ７Ｃ、Ｒ７Ｄ、Ｒ７Ｅは、独立して、水素、ハロゲン、−ＣＦ３、−ＣＣｌ３、−ＣＢｒ３、−ＣＩ３、−ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−Ｎ（Ｏ）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）３Ｈ、−Ｓ（Ｏ）４Ｈ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＯＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−ＮＨＳ（Ｏ）２Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、−ＮＨＣ（Ｏ）−ＯＨ、−ＮＨＯＨ、−ＯＣＦ３、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＢｒ３、−ＯＣＩ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨＣｌ２、−ＯＣＨＢｒ２、−ＯＣＨＩ２、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリールまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、かつ同一の窒素原子に結合しているＲ１Ｂ置換基およびＲ１Ｃ置換基は、任意選択的に接合されて置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換のヘテロアリールを形成することができ、
ｎ１およびｎ７は、独立して０〜４の整数であり、
ｖ１およびｖ７は、独立して１または２であり、および
ｎ２、ｎ３、ｎ４およびｎ５は、独立して１〜１０の整数である、化合物。
【請求項２０】
【化１１】
2018515457.tif 000142
【化１２】
2018515457.tif 000143
【化１３】
2018515457.tif 000144
【化１４】
2018515457.tif 000145
【化１５】
2018515457.tif 000146
である、請求項１９に記載の化合物。
【国際調査報告】
2018515457.tif 000147
2018515457.tif 000148
2018515457.tif 000149