(57)【要約】  本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物の光力学的不活性化（ＰＤＩ）が可能であり、癌細胞を殺すこと又は不活性化することが可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び関連する組成物を記述する。本発明は、上記のイタドリ抽出物及び光力学的不活性化（ＰＤＩ）を微生物感染の処置のための治療法として使用する方法、並びにイタドリ抽出物及び関連する組成物の癌の処置のための光力学療法の治療剤としての使用を更に記述する。
2018535250.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び賦形剤を含む組成物。
【請求項２】
前記賦形剤は、研磨剤、界面活性剤、結着剤、湿潤剤、香味剤、甘味剤、着色剤、保存剤及び水から成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記賦形剤は、水、シリカ、ソルビトール、グリセリン、キシリトール、ココ硫酸塩、デシルグルコシド、香味剤、キサンタンガム、カラゲナン及びグルタミン酸から成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
当該組成物は、溶液又は懸濁液として製剤化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
当該組成物は、ペーストとして製剤化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
当該組成物は、ゲルとして製剤化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
当該組成物は、泡状物として製剤化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
当該組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、０．０１％と２０％の間である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
当該組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、約０．１％である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
当該組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、約１％である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
当該組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、０．１％と１０％の間であり、２０％と４５％の間の研磨剤、１％と２％の間の界面活性剤、０．５％と４％の間の結着剤、１０％と３０％の間の湿潤剤、１％と５％の間の香味剤、甘味剤及び着色剤、０．０５％と０．５％の間の保存剤、並びに１００％への残部の水、を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
当該組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、０．１％と１０％の間であり、１０％と４０％の間のシリカ、０％と５％の間のソルビトール、０％と５％の間のグリセリン、０％と１．５％の間のキシリトール、０％と２．５％の間のココ硫酸ナトリウム、０％と１．５％の間の香味剤、０％と１．５％の間のキサンタンガム、０％と１．５％の間のカラゲナン、並びに１００％への残部の水、を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
当該組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、０．１％と１０％の間であり、約２５％のシリカ、約１％のソルビトール、約１％のグリセリン、約０．５％のキシリトール、約１％のココ硫酸ナトリウム、約０．２５％の香味剤、約０．５％のキサンタンガム、約０．５％のカラゲナン、及び１００％への残部の水、を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
当該組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、約１％であり、約７６．６５％の水、約１０％のグリセリン、約８％のソルビトール、約１％のキシリトール、約０．３５％の天然香料、及び約３％のラウロイルグルタミン酸ナトリウムを更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
当該組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、約０．１％であり、約７９．５５％の水、約１０％のグリセリン、約８％のソルビトール、約１％のキシリトール、約０．３５％の天然香料、及び約１％のココ硫酸ナトリウムを更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
微生物を殺すか又は不活性化する方法であって、
前記微生物を、イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び賦形剤を含む組成物と接触させるステップ、及び
光源を用いて、前記微生物に照射するステップ、
を含む、方法。
【請求項１７】
当該方法は、酸素の存在下で実行される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記微生物は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫から成る群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記微生物は、対象者の口腔内に存在する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記微生物は、バイオフィルムの一部である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記微生物は、歯科用器具に付着している、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
前記歯科用器具は、歯列矯正用ブラケット、バンド、ボタン、結着アタッチメント、結着ワイヤ、クラウン、インレー、オンレー、レストレーション、歯科用アバットメント、歯科用インプラントから成る群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
癌細胞、癌腫又は腫瘍を殺す方法であって、
前記癌細胞、癌腫又は腫瘍を、イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び賦形剤を含む組成物と接触させるステップ、及び
光源を用いて、前記癌細胞、癌腫又は腫瘍に照射するステップ、
を含む、方法。
【請求項２４】
当該方法は、酸素の存在下で実行される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置する方法であって、
前記口腔又は咽頭の腫瘍を、イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び賦形剤を含む組成物と接触させるステップ、及び
光源を用いて、前記口腔又は咽頭の腫瘍に照射するステップ、
を含む、方法。
【請求項２６】
当該方法は、酸素の存在下で実行される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
光の放射露光は、１Ｊｃｍ−２と３００Ｊｃｍ−２の間である、請求項１６乃至２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
光の表面パワー密度は、０．００１Ｗｃｍ−２と０．２５Ｗｃｍ−２の間である、請求項１６乃至２７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願への相互参照］
本出願は、２０１５年１０月１日に出願された、米国仮特許出願シリアル番号第６２／２３６，１１４号からの優先権を主張し、当該米国仮特許出願の全ての内容は、参照により本明細書に取り込まれる。
【背景技術】
【０００２】
イタドリ（Polygonum  cuspidatum）（P.  cuspidatum）は、根茎を広げること、赤褐色の茎、葉柄をもつ葉、及び垂れ下がった穂の白い花によって特徴付けられる多年生植物種である。伝統的な漢方薬としてよく知られており、中国薬局方に公式に記載されている、イタドリの根及びその抽出物は、東アジアの生薬学において炎症性疾患、肝炎、腫瘍、生理不順、下痢、火傷、胆石症及び骨髄炎のような状態を処置するために使用されてきた（Ban,  S.  H.ら、Fitoterapia  2010,  81,  30-34、Song,  J.  H.ら、J.  Ethnopharmacol  2007,  112,  419-425、Chu,  X.ら、J  Chromatogr  A  2005,  1097,  33-39）。イタドリは、中国原産であり、中国ではHu  Zhang（ＨＺ）又はHu  Changと呼ばれ、その後、日本に移植され、虎杖根として知られている。現今、イタドリは、北米全域で、ジャパニーズノットウィード（ＪＫ）、メキシカンバンブー（ＭＢ）又はジャパニーズバンブー（ＪＢ）と呼ばれる頑強な雑草として、生育していることが見出されることができる。イタドリは、侵略的種と見られ、北米において厄介なものと一般的にみなされるが、ライム病のような状態についてのその治療的性質にいくらかの興味が存在していた（Suvarna  R.  Altern  Complement  Ther  2012,  18,  220-5）。
【０００３】
イタドリの根は、口腔衛生を維持するため、及び口腔疾患、特にバイオフィルム関連疾患を制御するために朝鮮において使用されてきた。これらの伝統的な使用は、浮遊培養物中の、及びハイドロキシアパタイト（ＨＡ）ディスク上で増殖する、ストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus  mutans）及びストレプトコッカス・ソブリナス（Streptococcus  sobrinus）の生存率（viability）及び病原性因子へのイタドリ抽出物の効果を描写すること（delineating）を目指したいくつかの最近の研究を促進してきた（Song,  J.  H.ら、Arch  Oral  Biol  2006,  51,  1131-1140）。これらは虫歯の重要な病因学的決定要因として関係があるとされている２種のミュータンス連鎖球菌である（Loesche,  W.  J.  Microbiol  Rev  1986,  50,  353-380、Hamada,  S.;  Slade,  H.  D.  Microbiol  Rev  1980,  44,  331-384）。これらの研究において、特定のイタドリ抽出物は、懸濁液中の様々なストレプトコッカス・ミュータンス及びストレプトコッカス・ソブリナス株に対して、２倍から４倍高いＭＢＣ（ＭＢＣ＝最小殺菌濃度）と共に、０．５から４ｍｇ  ｍＬ−１ＭＩＣ（ＭＩＣ＝最小阻害濃度）の、幅広い抗菌濃度プロファイルを示した。しかしながら、抗菌活性において３対数減少（3-log  reduction）を達成するために、処置後少なくとも８時間を要し、１０３ＣＦＵｍＬ−１（ＣＦＵ＝コロニー形成単位）を残していた。この時間依存性の静菌活性及び殺菌活性はバイオフィルムにまで及んだが、より弾力のある形態のため予想されたように、実質的に弱められた。最大の対数減少は、暴露とサンプリング時間に依存して２倍に過ぎず、バイオフィルムの厚さによって強く影響を受けた。これらの知見は、イタドリ抽出物は浮遊培養物及びハイドロキシアパタイト（ＨＡ）ディスク上で増殖する薄いバイオフィルム中の細菌負荷を減少させることができるという概念証明を提供するが、一方で抗菌効果の大きさは、至適基準（gold-standard）、広範スペクトル抗生物質クロルヘキシジン（ＣＨＸ）のそれによりはるかに小さい。その上に、イタドリ根の抗菌作用の時間依存性は、持続性（substantivity）が決定的に重要である口腔内においてその力（power）を減らす。クロルヘキシジンは、殆どの製品が満たさない良好な吸着性質及び優れた持続性、経口産抗菌剤の理想的な品質によって、効能のある殺菌活性及び長期間の静菌効果を提供する（Jenkins,  S.ら、J  Clin  Periodontol,  1988,  15,  415-424）。残念ながら、クロルヘキシジン調合剤（preparations）は、歯を汚し、味認識を変え、短期間の使用のために一般的に示される（Guggenheim,  B.;  Meier  A.  Schweiz  Monatsschrift  Fuer  Zahnmed  2011,  121,  432-441)。これらの因子は、抗生物質の広範に広がった使用に対する懸念及び抗生物質耐性の発達（Horner,  C.ら、J  Antimicrob  Chemother  2012,  67,  2547-2559）と並んで、効能のある、速効性の高い又は高度に持続性の新たな戦略、並びに細菌標的及び（複数の）作用機序に関して広範なスペクトルを保証する。
【０００４】
微生物の光力学的不活性化（ＰＤＩ）は、これらの基準を超える、従来の抗生物質に対する強力な代替を代表する。簡単に、ＰＤＩは、光増感剤の励起状態から、細胞毒性の一重項酸素（１Ｏ２）、及び他の活性酸素種（ＲＯＳ）の産生を通して細菌、ウイルス、真菌及び原虫を不活性化及び破壊するために、光増感剤（ＰＳ）、光及び酸素を利用する。光力学的効果の発現は即座に起こり、従ってＰＤＩは即時的であり、その作用の機序は非特異的である。その結果、ＲＯＳの毒性バーストに対する抗生物質耐性の報告はない。即時応答は、口腔内での長期作用のための高い持続性を有する抗菌剤の必要性を無くす。選択性は、活性は、抽出物、光及び酸素が空間及び時間において重複する領域に限定される、ＰＤＩの固有の性質である。したがって、光がどこに照射されるかを制御することによって、健康な組織が危害を与えられずに済む。
【０００５】
ＰＤＩの概念は、癌の処置にも適用され得る、細胞を殺す一般的な方法を代表する。癌細胞及び腫瘍に対して使用される場合、そのプロセスは光力学療法（ＰＤＴ）と呼ばれる。微生物の光力学的不活性化と同様に、ＰＤＴは、光増感剤の励起状態から、細胞毒性の一重項酸素（１Ｏ２）、及び他の活性酸素種（ＲＯＳ）の産生を通して癌細胞及び腫瘍を不活性化及び破壊するために、光増感剤（ＰＳ）、光及び酸素を利用する。
【０００６】
当該分野において、殺菌又は抗癌活性を有する新規な組成物及び製剤、並びにそれを製造及び使用する方法、特には、殺菌又は抗癌活性を有する組成物及び製剤を使用した光力学的不活性化及び光力学療法を含む方法のための必要性が依然として存在する。本発明は、これらの必要性を満たす。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Fitoterapia  2010,  81,  30-34
【非特許文献２】J.  Ethnopharmacol  2007,  112,  419-425
【非特許文献３】J  Chromatogr  A  2005,  1097,  33-39
【非特許文献４】Altern  Complement  Ther  2012,  18,  220-5
【非特許文献５】Arch  Oral  Biol  2006,  51,  1131-1140
【非特許文献６】J.  Microbiol  Rev  1986,  50,  353-380
【非特許文献７】Microbiol  Rev  1980,  44,  331-384
【非特許文献８】J  Clin  Periodontol,  1988,  15,  415-424
【非特許文献９】Schweiz  Monatsschrift  Fuer  Zahnmed  2011,  121,  432-441
【非特許文献１０】J  Antimicrob  Chemother  2012,  67,  2547-2559
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一つの態様において、本発明は、イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び賦形剤（excipient）を含む組成物に関する。一つの実施形態において、賦形剤は、研磨剤（abrasive）、界面活性剤（detergent）、結着剤（binding agent）、湿潤剤（humectant）、香味剤（flavoring  agent）、甘味剤（sweetening  agent）、着色剤（coloring  agent,）、保存剤（preservative）及び水から成る群から選択される。他の実施形態において、賦形剤は、水、シリカ、ソルビトール、グリセリン、キシリトール、ココ硫酸塩（coco  sulfate  salt）、デシルグルコシド、香味剤、キサンタンガム、カラゲナン及びグルタミン酸から成る群から選択される。一つの実施形態において、組成物は、溶液又は懸濁液（suspension）として製剤化されている（formulated）。他の実施形態において、組成物は、ペーストとして製剤化されている。他の実施形態において、組成物は、ゲルとして製剤化されている。他の実施形態において、組成物は、泡状物（foam）として製剤化されている。一つの実施形態において、組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、０．０１％と２０％の間である。他の実施形態において、組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、約０．１％である。他の実施形態において、組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、約１％である。
【０００９】
一つの実施形態において、組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、０．１％と１０％の間であり、２０％と４５％の間の研磨剤、１％と２％の間の界面活性剤、０．５％と４％の間の結着剤、１０％と３０％の間の湿潤剤、１％と５％の間の香味剤、甘味剤及び着色剤、０．０５％と０．５％の間の保存剤、並びに１００％への残部の水（the  balance  to  100%  water）、を更に含む。他の実施形態において、組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、０．１％と１０％の間であり、１０％と４０％の間のシリカ、０％と５％の間のソルビトール、０％と５％の間のグリセリン、０％と１．５％の間のキシリトール、０％と２．５％の間のココ硫酸ナトリウム（sodium  coco  sulfate）、０％と１．５％の間の香味剤、０％と１．５％の間のキサンタンガム、０％と１．５％の間のカラゲナン、並びに１００％への残部の水、を更に含む。他の実施形態において、組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、０．１％と１０％の間であり、約２５％のシリカ、約１％のソルビトール、約１％のグリセリン、約０．５％のキシリトール、約１％のココ硫酸ナトリウム、約０．２５％の香味剤、約０．５％のキサンタンガム、約０．５％のカラゲナン、及び１００％への残部の水、を更に含む。他の実施形態において、組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、約１％であり、約７６．６５％の水、約１０％のグリセリン、約８％のソルビトール、約１％のキシリトール、約０．３５％の天然香料、及び約３％のラウロイルグルタミン酸ナトリウム（sodium  lauroyl  glutamate）を更に含む。他の実施形態において、組成物内のイタドリ（Polygonum  cuspidatum）抽出物の百分率比は、約０．１％であり、約７９．５５％の水、約１０％のグリセリン、約８％のソルビトール、約１％のキシリトール、約０．３５％の天然香料、及び約１％のココ硫酸ナトリウムを更に含む。
【００１０】
他の態様において、本発明は、微生物を殺すか又は不活性化する方法であって：微生物を、イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び賦形剤を含む組成物と接触させるステップ、及び光源を用いて、微生物に照射するステップ（irradiating）、を含む方法に関する。一つの実施形態において、方法は、酸素の存在下で実行される。一つの実施形態において、微生物は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫から成る群から選択される。一つの実施形態において、微生物は、対象者の口腔内に存在する。他の実施形態において、微生物は、バイオフィルムの一部である。他の実施形態において、微生物は、歯科用器具（dental  appliance）に付着している。一つの実施形態において、歯科用器具は、歯列矯正用ブラケット、バンド、ボタン、結着アタッチメント（bonded  attachments）、結着ワイヤ、クラウン、インレー、オンレー、レストレーション（restorations）、歯科用アバットメント及び歯科用インプラントから成る群から選択される。
【００１１】
他の態様において、本発明は、癌細胞、癌腫（carcinomas）又は腫瘍（tumors）を殺す方法であって：癌細胞、癌腫又は腫瘍を、イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び賦形剤を含む組成物と接触させるステップ、及び光源を用いて、癌細胞、癌腫又は腫瘍に照射するステップ、を含む方法に関する。一つの実施形態において、方法は、酸素の存在下で実行される。他の態様において、本発明は、良性の（benign）口腔又は咽頭の腫瘍を処置する（treating）方法であって：口腔又は咽頭の腫瘍を、イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物及び賦形剤を含む組成物と接触させるステップ、及び光源を用いて、口腔又は咽頭の腫瘍に照射するステップ、を含む方法に関する。一つの実施形態において、方法は、酸素の存在下で実行される。
【００１２】
一つの態様において、本発明は、微生物を殺すか又は不活性化する方法、癌細胞、癌腫又は腫瘍を殺す方法、及び良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置する方法に関し、それらの方法は、光の放射露光（radiant  exposure）が１Ｊｃｍ−２と３００Ｊｃｍ−２の間である、光照射（light  irradiation）を含む。いくつかの実施形態において、光の表面パワー密度（surface  power  density）は、０．００１Ｗｃｍ−２と０．２５Ｗｃｍ−２の間である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】暗条件下（左）及び光活性化あり（右）での、イタドリ抽出物（１００μｇ）を用いた一般的な土壌細菌の処置。光処理は、３５Ｊｃｍ−２の光反応器からの光であった。光源は、０．００９６Ｗｃｍ−２を試料表面に放出する（delivers）。
【図２】暗条件下（実線の曲線）及び光活性化あり（破線の曲線）での、イタドリ抽出物を用いたヒト白血病癌細胞のＰＤＴ処理。光処理は、２８Ｊｃｍ−２の光反応器からの光であった。
【図３】浮遊培養物として増殖する（ａ）黄色ブドウ球菌（S.  aureus）及び（ｂ）ストレプトコッカス・ミュータンスに対する、イタドリ抽出物の抗菌作用（Antibiotic  activity）。黒色のバーは暗条件下で保管された試料を表し；赤色のバーは、光処理した試料（３５Ｊｃｍ−２）である。バーがないことは、＞９９．９％の殺菌活性を示す。
【図４】ヒト歯冠の走査型電子顕微鏡写真（ＳＥＭ）：（ａ）未処理の歯表面上の微生物学的バイオフィルム（３５００Ｘ）、（ｂ）抽出物を用いて処理された場合のバイオフィルムへの形態変化（３５００Ｘ）、及び（ｃ）抽出物を用いて処理され、光を用いて照射された場合のバイオフィルム形成の阻害（３５００Ｘ）。
【図５】マウスの（ａ）上顎切歯を囲む上歯肉領域（ｂ）及び舌の前部背側領域（anterior  dorsal  region）の頂点におけるストレプトコッカス・ミュータンスの生存率に対するイタドリ抽出物媒介性光増感の効果。光線量（light  dose）は、３０Ｊｃｍ−２であり、５分間にわたってＬＥＤを用いて放出された。対照動物は、抽出物を製剤化するために使用された賦形薬（水中の５％プロピレングリコール）を用いて処理され、暗所に保たれるか又は光線処理が施された。１１ｍｇ  ｍＬ−１の抽出物及び光を用いて処理された動物において、細菌は検出されなかった。
【図６】イタドリ抽出物のＨＰＬＣトレース
【図７】ＴＳＡ寒天プレートに２０ｍＬで加えられた、イタドリ抽出物の増加する濃度（０．１ｍｇ  ｍＬ−１、１．０ｍｇ  ｍＬ−１、１０ｍｇ  ｍＬ−１及び１００ｍｇ  ｍＬ−１）に対する黄色ブドウ球菌（ａ）及びストレプトコッカス・ミュータンス（ｂ）の抗菌感受性。左：暗条件のプレート；右：光を用いて照射されたプレート（３５Ｊｃｍ−２）。クロルヘキシジン及びＤＭＳＯは、抗菌作用の陽性対照及び陰性対照として含まれた。
【図８】ＴＳＡ寒天（内）拡散（diffusion）によって調査された（probed）、イタドリ抽出物の二つの濃度（１０ｍｇ  ｍＬ−１及び１００ｍｇ  ｍＬ−１）、市販のクロルヘキシジン(Oro-Clense)、市販のListerine Zero、及びトルイジンブルー（ＴＢ）の１％溶液に対する黄色ブドウ球菌（ａ）及びストレプトコッカス・ミュータンス（ｂ）の抗菌感受性。左：暗条件のプレート；右：光を用いて照射されたプレート（３６Ｊｃｍ−２）。
【図９】イタドリ抽出物（４０ｍｇ、賦形薬としてのＤＭＳＯ中）及び対照としてのＤＭＳＯに対するストレプトコッカス・ミュータンスの抗菌感受性。左：暗条件のプレート；右：光を用いて照射されたプレート（３６Ｊｃｍ−２）。穿孔された穴へのラベルＤＫ、１ｈ及び２ｈは、光への事前の曝露無し、１時間の曝露、及び２時間の曝露を与えられたイタドリ抽出物にそれぞれ対応する。イタドリ抽出物は、光への長時間の曝露の後にそれらのＰＤＩ活性を維持し、光安定性を示している。
【図１０】最小の介入（ａ：賦形薬  水中の５％のプロピレングリコール、暗条件）及び最大の処置（ｂ：１１ｍｇ  ｍＬ−１抽出物、光）を受けたマウスの上顎切歯を囲む上歯肉領域（左）及び舌の前部背側領域の頂点（右）の肉眼での視野（Macroscopic  views）。写真は、Ｖｉｖｉｔａｒ  Ｓｅｒｉｅｓ  １  １０５ｍｍマクロレンズ及びＡＦ５４０ＦＧＺワイヤレスフラッシュを装備したＰｅｎｔａｘ（登録商標）  Ｋ２０カメラを用いて撮影された。
【図１１】イタドリ抽出物及び光を用いて処置されたマウスの舌の前部背側領域の６μｍスライスの組織学的画像（４０倍（４０ｘ）の倍率）。組織は、ＰＤＩ処置のために炎症性浸潤の形跡を示さない。
【図１２】皮膚線維芽細胞（ＣＣＤ−１０６４Ｓｋ細胞株）に対しての、イタドリ抽出物（点線）及びエモジン（実線）の細胞傷害性。
【図１３】製剤化されていないイタドリ抽出物及び製剤化されたイタドリ抽出物に対するストレプトコッカス・ミュータンスの抗菌感受性。左：暗条件のプレート；右：光を用いて照射されたプレート（３６Ｊｃｍ−２）。製剤化されていない抽出物は、ＤＭＳＯ中のイタドリ抽出物の１％溶液である。製剤化された抽出物は、表１３に示される処方中のイタドリ抽出物の１％溶液である。
【図１４】純粋なエモジン又はレスベラトロール、及びエモジンとレスベラトロールの混合物に対する、ストレプトコッカス・ミュータンスの抗菌感受性。左：暗条件のプレート；右：光を用いて照射されたプレート（３６Ｊｃｍ−２）。
【図１５】イタドリ抽出物のＨＰＬＣクロマトグラム。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に指し向けられている。本発明の新規なイタドリ抽出物は、光の存在下において細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物の光力学的不活性化が可能である。さらに、本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ抽出物は、光の存在下において微生物を殺すために有用である。加えて、微生物の光力学的不活性化が可能な当該イタドリ抽出物は、対象者への微生物の光力学的不活性化が可能な当該イタドリ抽出部の投与による、光及び酸素の存在下における、必要としている対象者における微生物感染の処置のために有用である。
【００１５】
定義
本明細書において使用される場合、以下の用語のそれぞれは、この節においてそれに関連する意味を有する。他に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、概して、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。概して、本明細書において使用される専門語（nomenclature）及び実験室手順は、技術分野においてよく知られ且つ一般的に利用されるものであり、標準的な技術又はそれらの改変が使用される。
【００１６】
冠詞“ａ”及び“ａｎ”は、本明細書において、一つ又は一つより多くの、すなわち、冠詞の文法的目的語の少なくとも一つを参照するために使用される。例として、“一つの要素”は、一つの要素又は一つより多くの要素を意味する。
【００１７】
量、時間的持続時間等のような測定可能な値を参照するときに本明細書において使用される“約”という用語は、そのような変化が開示された方法を実施するために適切であるときに、特定された値から±２０％、±１０％、±５％、±１％、又は±０．１％の変動を包含するように意図されている。
【００１８】
本明細書において使用される場合、用語“又は”は、二者択一のみを参照するように明示的に示されない限り、或いは代替物が相互に排他的でない限り、“及び／又は”を意味する。ただし本開示は、二者択一のみ及び“及び／又は”を参照する定義をサポートする。
【００１９】
本明細書において使用される場合、用語“阻害すること（inhibiting）”、“減少させること”、又は“防止すること”、“減らすこと”及びこれらの用語の変形は、完全な、又は実質的に完全な阻害を含めて、任意の測定可能な減少を含む。
【００２０】
本明細書において使用される場合、複数の語“comprising”（並びに“comprise”及び“comprises”等を含むその任意の形態）、“having”（並びに“have”及び“has”等のその任意の形態）、“including”（及び“includes”及び“include”等のその任意の形態）、又は“containing”（及び“contains”及び“contain”等のその任意の形態）は、包括的であるか又はオーブンエンドであり、追加的な、言及されていない要素又は方法ステップを排除しない。
【００２１】
説明全体にわたって、組成物が特定の成分（components）を有する、包含する、又は含むと記述される場合、又はプロセスが特定のプロセスステップを有する、包含する、又は含むと記述される場合、本教示の組成物はまた、本質的に列挙された成分から成るか又は列挙された成分から成ること、及び本教示のプロセスはまた、本質的に列挙されたプロセスステップから成るか又は列挙されたプロセスステップから成ることが、企図されている。
【００２２】
本出願において、要素又は成分が、列挙された要素又は成分のリストに含まれる且つ／或列挙された要素又は成分のリストから選択されると言われる場合、その要素又は成分は、列挙された要素又は成分のうちのいずれか一つであってもよく、列挙された要素又は成分のうちの二つ又はそれ以上から成る群から選択されてもよいことが、理解されるべきである。
【００２３】
本明細書中の単数形の使用は、特に異なるように明言されない限り、複数を含む（及びその逆も同様である）。加えて、用語“約”の使用が定量値の前である場合、特に異なるように明言されない限り、本教示はその特定の定量値自体も含む。
【００２４】
ステップの順序又は特定の動作を実行するための順序は、本教示が動作可能なままである限り重要ではないことが、理解されるべきである。そのうえに、二つ又はそれ以上のステップ又は動作は、同時に実行されてもよい。
【００２５】
本明細書において使用される場合、用語“処置する（treat）”及び“処置すること”及び“処置”は、患者が罹患していると疑われる状態を部分的又は完全に緩和すること、阻害すること、改善すること及び／又は軽減することを参照する。
【００２６】
本明細書において使用される場合、“治療的に有効な”及び“有効な用量（effective  dose）”は、所望の生物学的活性又は効果を誘発する物質又は量を参照する。
【００２７】
言及される場合を除き、用語“対象”又は“患者”は互換的に用いられ、ヒト患者及び非ヒト霊長類のような哺乳動物、並びにウサギ、ラット、マウス、イヌ、ネコ及び他の動物等の動物を参照する。それ故に、本明細書において使用される用語“対象”又は“患者”は、本発明の化合物が投与され得る任意の哺乳動物の患者又は対象を意味する。本発明の一つの例示的な実施形態において、本発明の方法による処置のための対象患者を特定するために、又は、標的とされるか又は疑われる疾患若しくは状態と関連する危険因子を決定するため、又は対象において現存する疾患若しくは状態の現状（status）を決定するために、容認された（accepted）スクリーニング方法が利用される。これらのスクリーニング方法は、例えば、標的とされるか又は疑われる疾患若しくは状態と関連付けられ得る危険因子を決定するための従来のワークアップを含む。これら及び他のルーチンの方法は、臨床医が本発明の方法及び化合物を使用する治療を必要とする患者を選択することを可能にする。
【００２８】
本開示全体にわたって、本発明の様々な態様は、範囲の形式で提示されてもよい。範囲の形式の記載は、単に便宜及び簡潔さのためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない制限として解釈されるべきではないことが理解されるべきである。それ故に、範囲の記載は、全ての可能な部分範囲、並びにその範囲内の個々の数値を具体的に開示していると考えられるべきである。例えば、１から６までのような範囲の記載は、１から３まで、１から４まで、１から５まで、２から４まで、２から６まで、３から６まで等の部分範囲、並びにその範囲内の個々の及び部分的な数字、例えば１、２、３、４、５、５．５及び６を、具体的に開示していると考えられるべきである。これは、範囲の幅に関わらず当てはまる。
【００２９】
本明細書において使用される場合、細菌の非限定的な例は、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophilia）、結核菌（Mycobacterium  tuberculosis）、マイコバクテリウム・アビウム（Mycobacterium  avium）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Mycobacterium intracellulare）、マイコバクテリウム・カンサシ（Mycobacterium  kansaii）、マイコバクテリウム・ゴルドナエ（Mycobacterium  gordonae）、マイコバクテリアスポロゾイト（Mycobacteria  sporozoites）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus  aureus）、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus  epidermidis）、淋菌（Neisseria  gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria  meningitidis）、リステリア菌（Listeria  monocytogenes）、化膿連鎖球菌（Streptococcus  pyogenes）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクチア・ピオゲネス（Streptococcus  agalactiae  pyogenes）（Ｂ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・ディスガラクティア（Streptococcus  dysgalactia）、大便連鎖球菌（Streptococcus  faecalis）、ウシ連鎖球菌（Streptococcus  bovis）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus  pneumoniae）、病原性カンピロバクタースポロゾイト（Campylobacter  sporozoites）、エンテロコッカススポロゾイト（Enterococcus  sporozoites）、インフルエンザ菌（Haemophilus  influenzae）、緑膿菌（Pseudomonas  aeruginosa）、炭疽菌（Bacillus  anthracis）、枯草菌（Bacillus  subtilis）、大腸菌（Escherichia  coli）、ジフテリア菌（Corynebacterium  diphtheriae）、Corynebacterium  jeikeium、コリネバクテリウムスポロゾイト（Corynebacterium  sporozoites）、ブタ丹毒菌（Erysipelothrix  rhusiopathiae）、ウェルシュ菌（Clostridium  perfringens）、破傷風菌（Clostridium  tetani）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）、エンテロバクター・アエロゲネス（Enterobacter  aerogenes）、肺炎桿菌（Klebsiella  pneumoniae）、パストレラ・ムルトシダ（Pasturella  multocida）、バクテロイデス・テタイオタミクロン（Bacteroides  thetaiotamicron）、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides  uniformis）、バクテロイデス・ブルガタス（Bacteroides  vulgatus）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium  nucleatum）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Streptobacillus  moniliformis）、レプトスピラ（Leptospira）、Actinomyces  israelli、ストレプトコッカス・ガラクチア（Steptococcus  galactiae）、ストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus  mutans）、ストレプトコッカス・ソブリナス（Streptococcus  sobrinus）、アシドフィルス菌（Lactobacillus  acidophilus）等の乳酸桿菌（lactobacilli）、アクチノミセス属菌（Actinomyces  spp.）、ノカルジア属菌（Nocardia  spp.）、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（A.  actinomycetemcomitans）、ジンジバリス菌（P.  gingivalis）、プレボテラ・インターメディア（P.  intermedia）、バクテロイデス・フォルシサス（B.  forsythus）、カンピロバクター・レクタス（C.  rectus）、ユーバクテリウム・ノダタム（E.  nodatum）、P.  micros、ストレプトコッカス・インターメディウス（S.  intermedius,）、トレポネーマ属菌（Treponema  sp.）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Staphylococcus  aureus）（ＭＲＳＡ）及びバンコマイシン耐性腸球菌（Entercocci）（ＶＲＥ）を含む。
【００３０】
本明細書において使用される場合、ウイルスの非限定的な例は、レトロウイルス科（Retroviridae）（例えば、ＨＩＶ‐１（ＨＴＬＶ‐ＩＩＩ、ＬＡ  Ｖ又はＨＴＬＶ‐ＩＩＩ／ＬＡＶとも呼ばれる）又はＨＩＶ−ＩＩＩ等のヒト免疫不全ウイルス）；及びＨＩＶ−ＬＰ等の他の分離株）；ピコルナウイルス科（Picornaviridae）（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（Calciviridae）（例えば、胃腸炎を引き起こす系統）；トガウイルス科（Togaviridae）（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（Flaviridae）（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（Coronaviridae）（例えば、コロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス）；ラブドウイルス科（Rhabdoviridae）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（Filoviridae）（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（Paramyxoviridae）（例えば、パラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス（mumps  virus）、麻疹ウイルス（measles  virus）、呼吸器合胞体ウイルス（respiratory  syncytial  virus））；オルソミクソウイルス科（Orthomyxoviridae）（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（Bungaviridae）（ハンタンウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス及びナイロウイルス）；アレナウイルス科（Arenaviridae）（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（Reoviridae）（例えばレオウイルス、オルビウイルス及びロタウイルス）；ビルナウイルス科（Birnaviridae）；ヘパドナウイルス科（Hepadnaviridae）（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（Parvoviridae）（パルボウイルス）；パポバウイルス科（Papovaviridae）（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（Adenoviridae）（大半のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（Herpesviridae）（例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１及び２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（Poxviridae）（例えば、痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；及びイリドウイルス科（Iridoviridae）（例えば、アフリカ豚熱ウイルス）；並びに未分類ウイルス（例えば、海綿状脳症の病原体、デルタ肝炎の病原体（Ｂ型肝炎ウイルスの欠陥サテライト（defective  satellite）であると考えられる）、非Ａ型非Ｂ型肝炎の病原体（クラス１＝内部的に伝染された；クラス２＝親から伝染された、すなわちＣ型肝炎）；ノーウォーク及び関連ウイルス、並びにアストロウイルス）を含む。
【００３１】
本明細書において使用される場合、真菌の非限定的な例は、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus  neoformans）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Histoplasma  capsulatum）、コクシジオイデス・イミチス（Coccidioides  immitis）、ブラストミセス・デルマチチジス（Blastomyces  dermatitidis）、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia  trachomatis）、カンジダ・アルビカンス（Candida  albicans）、カンジダ・トロピカリス（Candida  tropicaiis）、カンジダ・グラブラタ（Candida  glabrata）、カンジダ・クルセイ（Candida  krusei）、カンジダ・パラプローシス（Candida  parapsilosis）、Candida  dubliniensis、Candida  lusitaniae、有毛表皮糸状菌（Epidermophyton  floccosum）、オードアン小胞子菌（Microsporum  audouinii）、イヌ小胞子菌（Microsporum  canis）、イヌ小胞子菌変種ジストルタム（Microsporum  canisvar.  distortum）、ミクロスポルム・コーケイ（Microsporum  cookei）、Microsporum  equinum、鉄錆色小胞子菌（Microsporum  ferrugineum）、ミクロスポルム・フルブム（Microsporum  fulvum）、ミクロスポルム・ガリネ（Microsporum  gallinae）、石膏状小胞子菌（Microsporum  gypseum）、ミクロスポルム・ナヌム（Microsporum  nanum）、ミクロスポルム・ペルジコロル（Microsporum  persicolor）、Trichophyton  ajelioi、渦状白癬菌（Trichophyton  concentricum）、トリコフィトン・エクイヌム（Trichophyton  Equinum）、Trichophyton  flavescens、Trichophyton  gioriae、トリコフィトン・メグニーニ（Trichophyton  megnini）、毛瘡白癬菌変種エリナセイ（Trichophyton  mentagrophytes  var.  erinacei）、毛瘡白癬菌変種インテルジキターレ（Trichophyton
mentagrophytes var. interdigitale）、Trichophyton  phaseoliforme、紅色白癬菌（Trichophyton  rub  rum）、紅色白癬菌綿毛系統（downy  strain）、紅色白癬菌粒状系統（granular  strain）、シェーンライン白癬菌（Trichophyton  schoenleinii）、トリコフィトン・シミイ（Trichophyton  simii）、トリコフィトン・ソウダネンセ（Trichophyton  soudanense）、トリコフィトン・テルエストレ（Trichophyton  terrestre）、断髪性白癬菌（Trichophyton  tonsurans）、トリコフィトン・バンブロセゲミイ（Trichophyton  vanbreuseghemii）、トリコフィトン・ベルコーズム（Trichophyton  verrucosum）、紫色白癬菌（Trichophyton  violaceum）、トリコフィトン・ヤオウンデイ（Trichophyton  yaoundei）、アスペルギルス・フミガーツス（Aspergillus  fumigatus）、黄色コウジ菌（Aspergillus  flavus）及びアスペルギルス・クラバタス（Aspergillus  clavatus）を含む。
【００３２】
本明細書において使用される場合、原虫の非限定的な例は、膣トリコモナス（Trichomonas  vaginalis）、ランブル鞭毛虫（Giardia  lamblia）、赤痢アメーバ（Entamoeba  histolytica）、大腸バランチジウム（Balantidium  coli）、クリプトスポリジウム・パルバム（Cryptosporidium  parvum）及び戦争イソスポーラ（Isospora  belli）、クルーズトリパノソーマ・（Trypanosoma  cruzi）、ガンビアトリパノソーマ（Trypanosoma  gambiense）、ドノバンリーシュマニア（Leishmania  donovani）及びフォーラーネグレリア（Naegleria  fowleri）を含む。
【００３３】
本明細書において使用される場合、癌細胞、癌腫及び腫瘍の非限定的な例は、白血病細胞及び腫瘍、黒色腫細胞及び腫瘍、基底細胞癌、扁平上皮癌、疣状癌、小唾液腺癌、リンパ腫、腺様嚢胞癌細胞及び腫瘍、膀胱細胞及び腫瘍、乳房細胞及び腫瘍、並びに大腸癌細胞及び腫瘍を含む。
【００３４】
本明細書において使用される場合、良性の口腔又は咽頭の腫瘍の非限定的な例は、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローム、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫及び歯原性腫瘍を含む。
【００３５】
以下に提供される材料、方法及び実施例は、本発明の例示的なイタドリ抽出物を調製するための代表的な方法を提供する。以下に提供される材料、方法及び実施例は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物の光力学的不活性化（ＰＤＩ）を提供するイタドリ抽出物の能力を実証する、代表的な方法を更に提供する。当業者は、本発明のイタドリ抽出物を調製するため、及び細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物の光力学的不活性化（ＰＤＩ）を提供するイタドリ抽出物の能力を実証するために、当業者に知られている適切な試薬、出発物質及び精製方法をどのように置換するかを知るであろう。
【００３６】
説明
本発明は、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter  pylori）、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophilia）、結核菌（Mycobacterium  tuberculosis）、マイコバクテリウム・アビウム（Mycobacterium  avium）、マイコバクテリウム・イントラセルラーレ（Mycobacterium intracellulare）、マイコバクテリウム・カンサシ（Mycobacterium  kansaii）、マイコバクテリウム・ゴルドナエ（Mycobacterium  gordonae）、マイコバクテリアスポロゾイト（Mycobacteria  sporozoites）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus  aureus）、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus  epidermidis）、淋菌（Neisseria  gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria  meningitidis）、リステリア菌（Listeria  monocytogenes）、化膿連鎖球菌（Streptococcus  pyogenes）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクチア・ピオゲネス（Streptococcus  agalactiae  pyogenes）（Ｂ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・ディスガラクティア（Streptococcus  dysgalactia）、大便連鎖球菌（Streptococcus  faecalis）、ウシ連鎖球菌（Streptococcus  bovis）、肺炎連鎖球菌（Streptococcus  pneumoniae）、病原性カンピロバクタースポロゾイト（Campylobacter  sporozoites）、エンテロコッカススポロゾイト（Enterococcus  sporozoites）、インフルエンザ菌（Haemophilus  influenzae）、緑膿菌（Pseudomonas  aeruginosa）、炭疽菌（Bacillus  anthracis）、枯草菌（Bacillus  subtilis）、大腸菌（Escherichia  coli）、ジフテリア菌（Corynebacterium  diphtheriae）、Corynebacterium  jeikeium、コリネバクテリウムスポロゾイト（Corynebacterium  sporozoites）、ブタ丹毒菌（Erysipelothrix  rhusiopathiae）、ウェルシュ菌（Clostridium  perfringens）、破傷風菌（Clostridium  tetani）、クロストリジウム・ディフィシル（Clostridium  difficile）、エンテロバクター・アエロゲネス（Enterobacter  aerogenes）、肺炎桿菌（Klebsiella  pneumoniae）、パストレラ・ムルトシダ（Pasturella  multocida）、バクテロイデス・テタイオタミクロン（Bacteroides  thetaiotamicron）、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacteroides  uniformis）、バクテロイデス・ブルガタス（Bacteroides  vulgatus）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium  nucleatum）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Streptobacillus  moniliformis）、レプトスピラ（Leptospira）、Actinomyces  israelli、ストレプトコッカス・ガラクチア（Steptococcus  galactiae）、ストレプトコッカス・ミュータンス（Streptococcus  mutans）、ストレプトコッカス・ソブリナス（Streptococcus  sobrinus）、アシドフィルス菌（Lactobacillus  acidophilus）等の乳酸桿菌（lactobacilli）、アクチノミセス属菌（Actinomyces  spp.）、ノカルジア属菌（Nocardia  spp.）、アグリゲイティバクター・アクチノミセテムコミタンス（A.  actinomycetemcomitans）、ジンジバリス菌（P.  gingivalis）、プレボテラ・インターメディア（P.  intermedia）、バクテロイデス・フォルシサス（B.  forsythus）、カンピロバクター・レクタス（C.  rectus）、ユーバクテリウム・ノダタム（E.  nodatum）、P.  micros、ストレプトコッカス・インターメディウス（S.  intermedius,）、トレポネーマ属菌（Treponema  sp.）、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Staphylococcus  aureus）（ＭＲＳＡ）及びバンコマイシン耐性腸球菌（Entercocci）（ＶＲＥ）から成る群から選択される細菌の光力学的不活性化が可能な、イタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に指し向けられている。
【００３７】
本発明は、レトロウイルス科（Retroviridae）（例えば、ＨＩＶ‐１（ＨＴＬＶ‐ＩＩＩ、ＬＡ  Ｖ又はＨＴＬＶ‐ＩＩＩ／ＬＡＶとも呼ばれる）又はＨＩＶ−ＩＩＩ等のヒト免疫不全ウイルス）；及びＨＩＶ−ＬＰ等の他の分離株）；ピコルナウイルス科（Picornaviridae）（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（Calciviridae）（例えば、胃腸炎を引き起こす系統）；トガウイルス科（Togaviridae）（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（Flaviridae）（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（Coronaviridae）（例えば、コロナウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス）；ラブドウイルス科（Rhabdoviridae）（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（Filoviridae）（例えば、エボラウイルス）；パラミクソウイルス科（Paramyxoviridae）（例えば、パラインフルエンザウイルス、おたふく風邪ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（respiratory  syncytial  virus））；オルソミクソウイルス科（Orthomyxoviridae）（例えば、インフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（Bungaviridae）（ハンタンウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス及びナイロウイルス）；アレナウイルス科（Arenaviridae）（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（Reoviridae）（例えばレオウイルス、オルビウイルス及びロタウイルス）；ビルナウイルス科（Birnaviridae）；ヘパドナウイルス科（Hepadnaviridae）（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（Parvoviridae）（パルボウイルス）；パポバウイルス科（Papovaviridae）（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（Adenoviridae）（大半のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（Herpesviridae）（例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１及び２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；ポックスウイルス科（Poxviridae）（例えば、痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；及びイリドウイルス科（Iridoviridae）（例えば、アフリカ豚熱ウイルス）；並びに未分類ウイルス（例えば、海綿状脳症の病原体、デルタ肝炎の病原体（Ｂ型肝炎ウイルスの欠陥サテライト（defective  satellite）であると考えられる）、非Ａ型非Ｂ型肝炎の病原体（クラス１＝内部的に伝染された；クラス２＝親から伝染された、すなわちＣ型肝炎）；ノーウォーク及び関連ウイルス、並びにアストロウイルス）から成る群から選択されるウイルスの光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に指し向けられている。
【００３８】
本発明は、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus  neoformans）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Histoplasma  capsulatum）、コクシジオイデス・イミチス（Coccidioides  immitis）、ブラストミセス・デルマチチジス（Blastomyces  dermatitidis）、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia  trachomatis）、カンジダ・アルビカンス（Candida  albicans）、カンジダ・トロピカリス（Candida  tropicaiis）、カンジダ・グラブラタ（Candida  glabrata）、カンジダ・クルセイ（Candida  krusei）、カンジダ・パラプローシス（Candida  parapsilosis）、Candida  dubliniensis、Candida  lusitaniae、有毛表皮糸状菌（Epidermophyton  floccosum）、オードアン小胞子菌（Microsporum  audouinii）、イヌ小胞子菌（Microsporum  canis）、イヌ小胞子菌変種ジストルタム（Microsporum  canisvar.  distortum）、ミクロスポルム・コーケイ（Microsporum  cookei）、Microsporum  equinum、鉄錆色小胞子菌（Microsporum  ferrugineum）、ミクロスポルム・フルブム（Microsporum  fulvum）、ミクロスポルム・ガリネ（Microsporum  gallinae）、石膏状小胞子菌（Microsporum  gypseum）、ミクロスポルム・ナヌム（Microsporum  nanum）、ミクロスポルム・ペルジコロル（Microsporum  persicolor）、Trichophyton  ajelioi、渦状白癬菌（Trichophyton  concentricum）、トリコフィトン・エクイヌム（Trichophyton  Equinum）、Trichophyton  flavescens、Trichophyton  gioriae、トリコフィトン・メグニーニ（Trichophyton  megnini）、毛瘡白癬菌変種エリナセイ（Trichophyton  mentagrophytes  var.  erinacei）、毛瘡白癬菌変種インテルジキターレ（Trichophyton
mentagrophytes var. interdigitale）、Trichophyton  phaseoliforme、紅色白癬菌（Trichophyton  rubrum）、紅色白癬菌綿毛系統（downy  strain）、紅色白癬菌粒状系統（granular  strain）、シェーンライン白癬菌（Trichophyton  schoenleinii）、トリコフィトン・シミイ（Trichophyton  simii）、トリコフィトン・ソウダネンセ（Trichophyton  soudanense）、トリコフィトン・テルエストレ（Trichophyton  terrestre）、断髪性白癬菌（Trichophyton  tonsurans）、トリコフィトン・バンブロセゲミイ（Trichophyton  vanbreuseghemii）、トリコフィトン・ベルコーズム（Trichophyton  verrucosum）、紫色白癬菌（Trichophyton  violaceum）、トリコフィトン・ヤオウンデイ（Trichophyton  yaoundei）、アスペルギルス・フミガーツス（Aspergillus  fumigatus）、黄色コウジ菌（Aspergillus  flavus）及びアスペルギルス・クラバタス（Aspergillus  clavatus）から成る群から選択される真菌の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に指し向けられている。
【００３９】
本発明は、膣トリコモナス（Trichomonas  vaginalis）、ランブル鞭毛虫（Giardia  lamblia）、赤痢アメーバ（Entamoeba  histolytica）、大腸バランチジウム（Balantidium  coli）、クリプトスポリジウム・パルバム（Cryptosporidium  parvum）及び戦争イソスポーラ（Isospora  belli）、クルーズトリパノソーマ・（Trypanosoma  cruzi）、ガンビアトリパノソーマ（Trypanosoma  gambiense）、ドノバンリーシュマニア（Leishmania  donovani）及びフォーラーネグレリア（Naegleria  fowleri）から成る群から選択される原虫の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に指し向けられている。
【００４０】
本発明は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を殺すことが可能な光力学療法の治療剤として有用なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に更に指し向けられている。
【００４１】
本発明は、白血病細胞及び腫瘍、黒色腫細胞及び腫瘍、基底細胞癌、扁平上皮癌、疣状癌、小唾液腺癌、リンパ腫、腺様嚢胞癌細胞及び腫瘍、膀胱細胞及び腫瘍、乳房細胞及び腫瘍、並びに大腸癌細胞及び腫瘍から成る群から選択される癌細胞、癌腫及び腫瘍を殺すことが可能な光力学療法の治療剤として有用なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に更に指し向けられている。
【００４２】
本発明は、良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置することが可能な光力学療法の治療剤として有用なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に更に指し向けられている。
【００４３】
本発明は、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローム、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫及び歯原性腫瘍から成る群から選択される良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置することが可能な光力学療法の治療剤として有用なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の新規な抽出物に更に指し向けられている。
【００４４】
本発明は、本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量（effective  amount）及び賦形剤（excipient）を含む、組成物に更に関する。
【００４５】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物を殺す方法に更に関し、当該方法は、微生物を、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物と接触させるステップを含む。
【００４６】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物を殺す方法に更に関し、当該方法は、微生物を、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物及び賦形剤と接触させるステップを含む。
【００４７】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、対象者における微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者に投与するステップ（administering）を含む。
【００４８】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、対象者における微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者に投与するステップを含む。
【００４９】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、対象者の口腔内の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者の口腔に投与するステップを含む。
【００５０】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、対象者の口腔内の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者の口腔に投与するステップを含む。
【００５１】
本発明は、対象者の口腔内のバイオフィルムを除去する（eliminating）方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者の口腔に投与するステップを含む。
【００５２】
本発明は、対象者の口腔内のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者の口腔に投与するステップを含む。
【００５３】
本発明は、対象者の口腔内のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者の口腔に投与するステップを含む。
【００５４】
本発明は、対象者の口腔内のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者の口腔に投与するステップを含む。
【００５５】
本発明は、対象者の口腔内の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者の口腔に投与するステップを含む。
【００５６】
本発明は、対象者の口腔内の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者の口腔に投与するステップを含む。
【００５７】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯の表面上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面（tooth  surface）に投与するステップを含む。
【００５８】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯の表面上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯（posterior  teeth）の舌側（lingual）、咬合側（occlusal）、近位側（proximal）及び頬側（buccal）の表面、並びに、前歯（anterior  teeth）の舌側、切歯側（incisal）、近位側及び口唇側（labial）の表面から成る群から選択される。
【００５９】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯の表面上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含む。
【００６０】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯の表面上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００６１】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯の表面上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含む。
【００６２】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯の表面上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００６３】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯の表面上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含む。
【００６４】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯の表面上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００６５】
本発明は、歯の表面上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含む。
【００６６】
本発明は、歯の表面上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００６７】
本発明は、歯の表面上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含む。
【００６８】
本発明は、歯の表面上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００６９】
本発明は、歯の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含む。
【００７０】
本発明は、歯の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００７１】
本発明は、歯の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含む。
【００７２】
本発明は、歯の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００７３】
本発明は、歯の表面上のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含む。
【００７４】
本発明は、歯の表面上のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００７５】
本発明は、歯の表面上のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含む。
【００７６】
本発明は、歯の表面上のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯面に投与するステップを含み、歯の表面は、後方歯の舌側、咬合側、近位側及び頬側の表面、並びに、前歯の舌側、切歯側、近位側及び口唇側の表面から成る群から選択される。
【００７７】
本発明は、歯の空洞（cavity  in  a  tooth）を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯に投与するステップを含む。
【００７８】
本発明は、歯の空洞を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯に投与するステップを含む。
【００７９】
本発明は、歯の空洞を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯に投与するステップを含む。
【００８０】
本発明は、歯の空洞を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯に投与するステップを含む。
【００８１】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯肉（gums）の表面上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含む。
【００８２】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯肉の表面上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁（gingival  margin）、歯肉溝（sulcus）、及び歯周ポケット（periodontal  pocket）の開口面（opening  surface）から成る群から選択される。
【００８３】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯肉の表面上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦活剤を歯面に投与するステップを含む。
【００８４】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯肉の表面上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦活剤を歯面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【００８５】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯肉の表面上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含む。
【００８６】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯肉の表面上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【００８７】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯肉の表面上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦活剤を歯肉表面に投与するステップを含む。
【００８８】
本発明は、細菌、ウイルス、真菌及び原虫による感染のような、歯肉の表面上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦活剤を歯肉表面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【００８９】
本発明は、歯肉の表面上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯肉表面に投与するステップを含む。
【００９０】
本発明は、歯肉の表面上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯肉表面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【００９１】
本発明は、歯肉の表面上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯肉表面に投与するステップを含む。
【００９２】
本発明は、歯肉の表面上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯肉表面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【００９３】
本発明は、歯肉の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者の歯肉表面に投与するステップを含む。
【００９４】
本発明は、歯肉の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者の歯肉表面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【００９５】
本発明は、歯肉の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者の歯肉表面に投与するステップを含む。
【００９６】
本発明は、歯肉の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者の歯肉表面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【００９７】
本発明は、歯肉の表面上のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者の歯肉表面に投与するステップを含む。
【００９８】
本発明は、歯肉の表面上のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を対象者の歯肉表面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【００９９】
本発明は、歯肉の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者の歯肉表面に投与するステップを含む。
【０１００】
本発明は、歯肉の表面上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、バイオフィルムは細菌、ウイルス、真菌及び原虫を包含し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を対象者の歯肉表面に投与するステップを含み、歯肉表面は、歯肉縁、歯肉溝、及び歯周ポケットの開口面から成る群から選択される。
【０１０１】
本発明は、下顎弓及び上顎弓（mandibular  and  maxillary  arches）上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１０２】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上の微生物感染を処置する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１０３】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１０４】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上の微生物感染を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１０５】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１０６】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上の微生物負荷を低下させる方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１０７】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１０８】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上のバイオフィルムを除去する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１０９】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１１０】
本発明は、下顎弓及び上顎弓上のバイオフィルムの形成を防止する方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を下顎弓及び上顎弓に投与するステップを含む。
【０１１１】
本発明は、歯科用器具の表面上の、細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物を殺す方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯科用器具の表面に投与するステップを含む。
【０１１２】
本発明は、歯科用器具の表面上の、細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物を殺す方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を歯科用器具の表面に投与するステップを含み、歯科用器具は、歯列矯正用ブラケット、バンド、ボタン、結着アタッチメント、結着ワイヤ、クラウン、インレー、オンレー、レストレーション、歯科用アバットメント及び歯科インプラントから成る群から選択される。
【０１１３】
本発明は、歯科用器具の表面上の細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物を殺す方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯科用器具の表面に投与するステップを含む。
【０１１４】
本発明は、歯科用器具の表面上の、細菌、ウイルス、真菌及び原虫のような微生物を殺す方法に更に関し、当該方法は、光及び酸素の存在下で本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を歯科用器具の表面に投与するステップを含み、歯科用器具は、歯列矯正用ブラケット、バンド、ボタン、結着アタッチメント、結着ワイヤ、クラウン、インレー、オンレー、レストレーション、歯科用アバットメント及び歯科インプラントから成る群から選択される。
【０１１５】
本発明は、本発明による癌細胞、癌腫及び腫瘍を殺すことが可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量及び賦形剤を含む組成物に更に関する。
【０１１６】
本発明は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を殺す方法に更にし、当該方法は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を、光及び酸素の存在下で本発明による光力学療法の治療剤として作用すること（acting）が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物と接触させるステップを含む。
【０１１７】
本発明は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を殺す方法に更にし、当該方法は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を、光及び酸素の存在下で本発明による光力学療法の治療剤として作用することが可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物と接触させるステップを含み、癌細胞、癌腫及び腫瘍は、白血病細胞及び腫瘍、黒色腫細胞及び腫瘍、基底細胞癌、扁平上皮癌、疣状癌、小唾液腺癌、リンパ腫、腺様嚢胞癌細胞及び腫瘍、膀胱細胞及び腫瘍、乳房細胞及び腫瘍、並びに大腸癌細胞及び腫瘍から成る群から選択される。
【０１１８】
本発明は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を殺す方法に更にし、当該方法は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を、光及び酸素の存在下で本発明による光力学療法の治療剤として作用すること（acting）が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物及び賦形剤と接触させるステップを含む。
【０１１９】
本発明は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を殺す方法に更にし、当該方法は、癌細胞、癌腫及び腫瘍を、光及び酸素の存在下で本発明による光力学療法の治療剤として作用すること（acting）が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物及び賦形剤と接触させるステップを含み、癌細胞、癌腫及び腫瘍は、白血病細胞及び腫瘍、黒色腫細胞及び腫瘍、基底細胞癌、扁平上皮癌、疣状癌、小唾液腺癌、リンパ腫、腺様嚢胞癌細胞及び腫瘍、膀胱細胞及び腫瘍、乳房細胞及び腫瘍、並びに大腸癌細胞及び腫瘍から成る群から選択される。
【０１２０】
本発明は、良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置することが可能な光力学療法の治療剤として有用なイタドリPolygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物の有効量を含む、組成物に更に関する。
【０１２１】
本発明は、良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置する方法に更に関し、当該方法は、口腔又は咽頭の腫瘍を、光及び酸素の存在下で本発明による光力学療法の治療剤として作用することが可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物と接触させるステップを含む。
【０１２２】
本発明は、良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置する方法に更に関し、当該方法は、口腔又は咽頭の腫瘍を、光及び酸素の存在下で本発明による光力学療法の治療剤として作用することが可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物と接触させるステップを含み、良性の口腔又は咽頭の腫瘍は、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローム、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫及び歯原性腫瘍から成る群から選択される。
【０１２３】
本発明は、良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置する方法に更に関し、当該方法は、口腔又は咽頭の腫瘍を、光及び酸素の存在下で本発明による光力学療法の治療剤として作用することが可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物及び賦形剤と接触させるステップを含む。
【０１２４】
本発明は、良性の口腔又は咽頭の腫瘍を処置する方法に更に関し、当該方法は、口腔又は咽頭の腫瘍を、光及び酸素の存在下で本発明による光力学療法の治療剤として作用することが可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の一つ又はそれ以上の抽出物及び賦形剤と接触させるステップを含み、良性の口腔又は咽頭の腫瘍は、好酸球性肉芽腫、線維腫、顆粒細胞腫、角化棘細胞腫、平滑筋腫、骨軟骨腫、脂肪腫、シュワン細胞腫、神経線維腫、乳頭腫、尖圭コンジローム、疣贅型黄色腫、化膿性肉芽腫、横紋筋腫及び歯原性腫瘍から成る群から選択される。
【０１２５】
本発明は、本発明による微生物の光力学的不活性化が可能なイタドリ（Polygonum  cuspidatum）の抽出物を調製するためのプロセスに更に関する。
【０１２６】
これら及び他の目的、特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び添付の特許請求の範囲を読むことから、当業者にとって明らかになるであろう。本明細書における全ての百分率、比率及び割合は、特に指定されない限り、重量による。全ての温度は、特に指定されない限り、摂氏度（℃）である。引用された全ての文献は、関連する部分において、参照により本明細書に取り込まれる；如何なる文書の引用も、それが本発明に関する先行技術であると認めるものとして解釈されるべきではない。
【０１２７】
本発明の組成物
イタドリ（P.  cuspidatum）の根から３０種以上の化学化合物が単離されている。これらの成分の中には：スチルベン、アントラキノン、フラボノイド、フェノール、ステロール、精油（essential  oils）及びアミノ酸がある。伝統的な民間薬（folk  medicine）におけるその使用の要因であり得る、報告された生物学的活性を有するイタドリ根の成分は：レスベラトロール、ポリダチン（polydatin）、エモジン（emodin）、フィスシオン（physcion）、レイン（rhein）並びにアントラグリコシド（anthraglycosides）Ａ及びＢを含む。これらの生理活性物質のいくつかは、光増感反応に関与する、照射時に励起三重項状態を引き起こす構造的特徴を所持する。いくつかの実施形態において、照射により生じる励起三重項状態は、酸素及び他の種との光増感反応に関与する。エモジン、フィスシオン及びそれらのそれぞれのグリコシル化された誘導体（derivatives）、アントラグリコシドＡ及びＢは、微生物の光力学的不活性化及び光力学療法の効果を生じさせる。いくつかの実施形態において、単離方法は、結果として生じる抽出物を、光力学療法及び微生物の光力学的不活性化の要因となる光増感分子に関して富化するために開発されている。一つの実施形態において、イタドリ抽出物中の様々な化学物質の相対量は、表１に記載される通りである。
表１．１ｍｇの抽出物内に見られる既知のイタドリ成分の相対量
【０１２８】
【表１】
2018535250.tif 000003
【０１２９】
例示的なイタドリ抽出物の代表的なＨＰＬＣクロマトグラムは、図６及び図１５に示され、保持時間のリストは表２に示される。５つの化合物が抽出物の一部として特定されている。
表２．ＨＰＬＣ保持時間、２５４ｎｍにおける強度及び既知の成分の対応する同一性（identities）を含む。
【０１３０】
【表２】
2018535250.tif 000004
【０１３１】
イタドリ植物抽出物の抗菌特性は、光による照明によって優位に増幅されることが発見されている。一つの実施形態において、照明は可視光による。他の実施形態において、照明は青色光による。他の実施形態において、照明は緑色光による。他の実施形態において、照明は紫外（ＵＶ）光による。他の実施形態において、一つの実施形態において、使用される光は、２００ｎｍと４００ｎｍの間の波長を有する。他の実施形態において、使用される光は、３８０ｎｍと４５０ｎｍの間の波長を有する。他の実施形態において、使用される光は、４００ｎｍと７００ｎｍの間の波長を有する。他の実施形態において、使用される光は、４５０ｎｍと４９５ｎｍの間の波長を有する。他の実施形態において、使用される光は、４９５ｎｍと５７０ｎｍの間の波長を有する。他の実施形態において、使用される光は、５７０ｎｍと５９０ｎｍの間の波長を有する。他の実施形態において、使用される光は、５９０ｎｍと６２０ｎｍの間の波長を有する。他の実施形態において、使用される光は、６２０ｎｍと７５０ｎｍの間の波長を有する。
【０１３２】
いくつかの実施形態において、光照射は、１Ｊｃｍ−２と３００Ｊｃｍ−２の間の放射露光で実行される。一つの実施形態において、光の放射露光は、約２８Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約３０Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約３５Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約３６Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約５０Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約１００Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約１５０Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約２００Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約２５０Ｊｃｍ−２である。他の実施形態において、光の放射露光は、約３００Ｊｃｍ−２である。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、０．００１Ｗｃｍ−２と０．２５Ｗｃｍ−２の間である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００１Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００２Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００３Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００４Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００５Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００６Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００７Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００８Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００９Ｗｃｍ−２である。一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．００９６Ｗｃｍ−２である。
【０１３４】
一つの実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０１Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０２Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０２７８Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０３Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０４Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０５Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０６Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０７Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０８Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．０９Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．１０Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．１５Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．２０Ｗｃｍ−２である。他の実施形態において、照射光の表面パワー密度は、約０．２５Ｗｃｍ−２である。
【０１３５】
この光力学的効果は、土壌からの細菌を使用して最初に実証され（図１）、続いてＡＴＣＣ（American  Type  Culture  Collection）から購入された標準的な細菌種を用いて定量された。いくつかの実施形態において、口腔細菌に対して、光毒性の（phototoxic）イタドリ抽出物の有効性（potency）は、クロルヘキシジンからの伝統的な抗菌作用を超える。これらの光活性抽出物は、ノバスコシア州及びニューブランズウィック州の至る所の様々な収穫地、季節並びに栽培方法（屋内対屋外）にわたって、顕著な光力学療法（ＰＤＴ）及び光力学的不活性化効果を与える。
【０１３６】
驚くべきことに、これらの化合物を比較的少ない重量百分率で含有する抽出物は、類似の濃度での、単離した及び混合物としての純粋なアントラキノン（anthraquinones）よりも、はるかに活性である。いくつかの実施形態において、増大させられた活性は、１０％よりも低い重量百分率において観察されている。賦形薬としての抽出物は、以前に観察されていないような方法でイタドリの成分の光活性（photoactivity）を増大させる。今日まで、イタドリ抽出物の光力学的活性の報告はなく、抽出物を構成する単離された成分と比較したその光活性の増大の報告もない。
【０１３７】
本発明の製剤（Formulations）
本発明はまた、本発明によるイタドリ抽出物を含む組成物（compositions）又は製剤に関する。概して、本発明の組成物は、細菌、ウイルス、真菌のような微生物の光力学的不活性化（ＰＤＩ）提供するために有効な本発明によるイタドリ抽出物の有効量；及び一つ又はそれ以上の賦形剤を含む。
【０１３８】
本発明の目的のために、用語“賦形剤（excipients）”及び“担体（carrier）”は、本発明の説明全体にわたって相互交換可能に使用され、それらの用語は、本明細書において“安全かつ有効な医薬組成物の製剤化の実施に使用される原料”と定義される。
【０１３９】
賦形剤は、安全、安定かつ機能的な医薬品の送達において働くために主に使用されてもよく、送達のための賦形薬全体の一部としてだけでなく、活性成分のレシピエントによる有効な吸収を達成するための手段としても働くことが、明確に理解されるべきである。賦形剤は、不活性充填剤（inert  filler）であるのと同じように単純かつ直接的な役割を果たしてもよく、又は本明細書において使用される賦形剤は、処置のための適切な生理学的な位置への原料の送達を安全に確かにするためのｐＨ安定化システム又は被覆の部分であってもよい。
本発明のイタドリ抽出物は、改善された経口生物学的利用能（バイオアベイラビリティ）ばかりでなく、改善された細胞有効性、薬物動態特性をも有するという事実が利用され得ることもまた、明確に理解されるべきである。
【０１４０】
本教示はまた、本明細書に記載のイタドリ抽出物及び一つ又はそれ以上の薬学的に許容可能な担体、賦形剤又は希釈剤を含む医薬組成物を提供する。そのような担体の例は、当業者に周知であり、例えば、Remington’s  Pharmaceutical  Sciences,  第１７版  Alfonoso  R.  Gennaro,  Mack  Publishing  Company,  Easton,  PA（1985）に記載されているもののような、許容可能な薬学的手順に従って調製されてもよく、その全開示は全ての目的に関して参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において使用される場合、“薬学的に許容可能”は、毒物学的観点から医薬用途での使用のために許容可能であり、活性成分と有害に相互作用しない物質を参照する。したがって、薬学的に許容可能な担体は、製剤中の他の原料と適合性であり、生物学的に許容可能な担体である。補足の活性成分もまた、医薬組成物に組み込まれてもよい。
【０１４１】
液体担体は、溶液、懸濁液、乳状液、シロップ剤、エリキシル剤の調製において使用されてもよく、また吸入送達のために使用されてもよい。本教示のイタドリ抽出物は、水、有機溶媒若しくはその両方の混合物、又は薬学的に許容可能な油脂のような、薬学的に許容可能な液体担体中に溶解又は懸濁されてもよい。液体担体は、可溶化剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤、甘味料、香味剤、懸濁化剤、増粘剤、着色料、粘度調整剤、安定剤及び浸透圧調整剤のような、他の適切な医薬添加物を含有してもよい。経口投与及び非経口投与のための液体担体の例は、水（特には本明細書に記載の添加物、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム溶液のようなセルロース誘導体を含有する）、アルコール（一価アルコール及び多価アルコール、例えばグリコールを含む）及びそれらの誘導体、並びに油（例えば、分留ヤシ油及びラッカセイ油）を含むが、これらに限定されない。非経口投与のために、担体はオレイン酸エチル及びミリスチン酸イソプロピルのような油状エステルであってもよい。滅菌液体担体は、非経口投与のための滅菌液体状組成物中で使用される。加圧組成物のための液体担体は、ハロゲン化炭化水素又は他の薬学的に許容可能な推進剤（propellants）であってもよい。
【０１４２】
好ましくは、医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤又は坐剤などの単位剤形（unit  dosage  form）である。そのような形態では、医薬組成物は、適切な量の化合物を包含する（複数の）単位用量に小分けされてもよい。単位剤形は、例えば、小包粉末、バイアル、アンプル、プレフィルドシリンジ、又は液体を包含する小袋（サシェ）のような、包装された組成物であってもよい。代替的に、単位剤形は、カプセル又は錠剤それ自体であってもよく、或いはそれは、適切な数の包装形態の任意のそのような組成物であってもよい。そのような単位剤形は、約１ｍｇ／ｋｇのイタドリ抽出物から約５００ｍｇ／ｋｇの化合物を含んでもよく、単回投与又は２回又はそれ以上の投与で与えられてもよい。そのような用量は、経口的に、インプラントを介して、非経口的に（静脈内、腹腔内及び皮下注射を含む）、直腸性、経膣及び経皮的な方法を含めて、対象者の又は表面上の、微生物又は癌細胞の位置にイタドリ抽出物を指し向けることにおいて有用な如何なる方法で投与されてもよい。
【０１４３】
特定の疾患状態又は障害の処置又は阻害のために投与される場合、有効な投与量（effective  dosage）は、利用される特定の化合物、投与の様式（mode）及び処置されている状態の重篤度、並びに治療される個体に関連する様々な身体的因子に依存して、変動し得ることが理解される。治療用途において、本教示のイタドリ抽出物は、疾患及びその合併症の症状を治癒するか又は少なくとも部分的に改善するために十分な量で、疾患に既に罹患している患者に提供されてもよい。特定の個人の処置において使用されるべき投与量は、典型的に、主治医によって自覚的に（subjectively）決定されなければならない。関与する変数は、特定の状況及びその様子並びに患者のサイズ、年齢及び応答パターンを含む。
【０１４４】
本教示のイタドリ抽出物の有効性を高めるために、イタドリ抽出物を標的疾患の処置に有効な他の薬剤と組み合わせることが望ましいかも知れない。例えば、標的疾患の処置において有効な他の活性化合物（すなわち、他の活性成分又は薬剤）は、本教示のイタドリ抽出物と共に投与されてもよい。他の薬剤は、本明細書に開示されているイタドリ抽出物と同時に又は異なる時間に投与されてもよい。
【０１４５】
本教示のイタドリ抽出物は、哺乳類、例えばヒトの対象者における病理学的状態又は傷害の処置又は阻害のために有用で有り得る。したがって、本教示は、哺乳類に本教示のイタドリ抽出物、又は薬学的に許容可能な担体と組み合わせて又は伴って、本教示のイタドリ抽出物を含む医薬組成物を提供することによって、病理学的状態又は傷害を処置又は阻害する方法を提供する。本教示のイタドリ抽出物は、単独で投与されてもよく、或いは他の治療上有効な化合物、又はその病理学的状態又は傷害の処置若しくは阻害のための治療法と組み合わせて投与されてもよい。
【０１４６】
本発明の組成物及び製剤の非限定的な例は、０％から１００％の任意の相対量のイタドリ抽出物を含む。いくつかの実施形態において、相対量は、体積当たりの重量、すなわちｗ／ｖとして表現される。例えば、１％濃度の抽出物は、１ｍＬの組成物又は製剤当たり１０ｍｇの抽出物であると理解される、すなわち１％＝１０ｍｇ／ｍＬである。
【０１４７】
様々な実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比（relative  percentage）は、０．０１％と２０％の間である。一つの実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、０．００５％と０．１％の間である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、０．０１％と１％の間である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、０．１％と１％の間である。一つの実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．１％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．２％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．３％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．４％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．６％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．７％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．８％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約０．９％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約１％である。一つの実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約１０％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約１５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約２０％である。
【０１４８】
様々な実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、２０％と１００％の間である。一つの実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約２５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約３０％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約３５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約４０％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約４５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約５０％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約５５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約６０％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約６５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約７０％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約７５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約８０％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約８５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約９０％である。
他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約９５％である。他の実施形態において、イタドリ抽出物の相対百分率比は、約１００％である。
【０１４９】
本発明による組成物の非限定的な例は、約０．００１ｍｇから約１０００ｍｇの本発明による一つ又はそれ以上のイタドリ抽出物、及び一つ又はそれ以上の賦形剤；約０．０１ｍｇから約１００ｍｇの本発明による一つ又はそれ以上のイタドリ抽出物、及び一つ又はそれ以上の賦形剤；並びに、約０．１ｍｇから約１０ｍｇの本発明による一つ又はそれ以上のイタドリ抽出物、及び一つ又はそれ以上の賦形剤、を含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、０．００５重量％から１０重量％でペーストの中に取り込まれた本発明のイタドリ抽出物及び少なくとも一つの賦形剤で構成される、ペーストとして製剤化されてもよい。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、表３に列挙された材料（material）で構成される、ペーストとして製剤化されてもよい。これらの製剤において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％でペーストの中に取り込まれる。
表３．本発明のイタドリ抽出物のペースト製剤のための例示的な処方（Exemplary  formulations）
【０１５２】
【表３】
2018535250.tif 000005
【０１５３】
一つの好ましい実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、表４に列挙された材料で構成される、ペーストとして製剤化されてもよい。これらの製剤において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％でペーストの中に取り込まれる。
表４．本発明のイタドリ抽出物のペースト製剤のための好ましい例示的な処方
【０１５４】
【表４】
2018535250.tif 000006
【０１５５】
いくつかの実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、表５に列挙された材料で構成される、ペーストとして製剤化されてもよい。これらの製剤において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％でペーストの中に取り込まれる。
表５．本発明のイタドリ抽出物のペースト製剤のための例示的な処方
【０１５６】
【表５】
2018535250.tif 000007
【０１５７】
研磨剤は、リン酸二カルシウム、メタリン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、シリカ、水和アルミナ、ケイ酸ジルコニウム、カルシウムピロリン酸カルシウム及び雲母を含むが、これらに限定されない。
【０１５８】
界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム、ココ硫酸ナトリウム及びデシルグルコシドを含むが、これらに限定されない。
【０１５９】
結着剤は、セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カラゲナン、キサンタンガム、アルギン酸塩、ポリビニルメチルエーテル／マレイン酸（ＰＶＭ／ＭＡ）共重合体、アラビアゴム及びケイ酸アルミニウムマグネシウムを含むが、これらに限定されない。
【０１６０】
湿潤剤は、グリセロール、ソルビトール及びプロピレングリコールを含むが、これらに限定されない。
【０１６１】
香味剤、甘味剤及び着色剤は、ペパーミント、スペアミント、シナモン、ウィンターグリーン、メントールキシリトール及びサッカリンナトリウムを含むが、これらに限定されない。
【０１６２】
保存剤は、アルコール、ベンゾエート、ホルムアルデヒド、ジクロロフェノール、安息香酸ナトリウム、メチルパラベン及びエチルパラベンを含むが、これらに限定されない。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％でゲルの中に取り込まれた本発明のイタドリ抽出物及び少なくとも一つの賦形剤で構成される、ゲルとして製剤化されてもよい。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、表６に列挙された材料で構成される、ゲルとして製剤化されてもよい。これらの製剤において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％でペーストの中に取り込まれる。
表６．本発明のイタドリ抽出物のゲル製剤のための例示的な処方
【０１６５】
【表６】
2018535250.tif 000008
【０１６６】
一つの好ましい実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、表７に列挙された材料で構成される、ゲルとして製剤化されてもよい。これらの製剤において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％でゲルの中に取り込まれる。
表７．本発明のイタドリ抽出物のゲル製剤のための好ましい例示的な処方
【０１６７】
【表７】
2018535250.tif 000009
【０１６８】
いくつかの実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％で泡の中に取り込まれた本発明のイタドリ抽出物及び少なくとも一つの賦形剤で構成される、泡（foam）として製剤化されてもよい。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、表８に列挙された材料で構成される、泡として製剤化されてもよい。これらの製剤において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％で泡状物の中に取り込まれる。
表８．本発明のイタドリ抽出物の泡状製剤のための例示的な処方
【０１７０】
【表８】
2018535250.tif 000010
【０１７１】
一つの好ましい実施形態において、本発明のイタドリ抽出物は、表９に列挙された材料で構成される、泡状物として製剤化されてもよい。これらの製剤において、本発明のイタドリ抽出物は、０．０１重量％から１０重量％で泡状物の中に取り込まれる。
表９．本発明のイタドリ抽出物の泡状製剤のための好ましい例示的な処方
【０１７２】
【表９】
2018535250.tif 000011
【実施例】
【０１７３】
本発明は、以下の実験的な実施例を参照して更に詳細に記述される。これらの実施例は、例示のみを目的として提供されており、特記しない限り、限定することを意図されていない。したがって、本発明は、以下の実施例に限定されるものと決して解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書において提供される教示の結果として明らかになる任意の及び全ての変形を包含すると解釈されるべきである。
【０１７４】
材料及び方法
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、９９．７％）はFisher  Scientificから購入された。５％水性プロピレングリコール（ＰＧ）は、市販のプロピレングリコール（９９．５％、Sigma-Aldrich（登録商標））を滅菌脱イオン水で希釈することによって、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験のための賦形薬として調製された。トルイジンブルーＯ（ＴＢ）は、Sigma-Aldrichから購入され、滅菌脱イオン水で希釈された。Listerine（登録商標）  Zero（Johnson  &  Johnson（登録商標））は、地元の食料品店で購入され、Oro-Clense（Germiphene  Corporation,  DIN 02209055）は、歯科医院から得られた。クロルヘキシジンジグルコネート（ＣＨＸ）は、購入され（Sigma-Aldrich）、滅菌水で希釈された。
【０１７５】
イタドリ抽出物の調製
イタドリの植物根から過剰な土壌及び根毛が取り除かれ、イタドリの植物根は、続いて往復動鋸及び剪定鋏を使用して小片に切断された。根片は、余分な土壌を除去するために洗浄され、Earthwise  Chipper  Shredder（モデル番号GS70014）を用いて削られたか、又は市販のVita-Mixer  Maxi-4000（Vitamix  Corporation、モデル番号479044）を使用して粉砕し、粉末にした。処理された根は、抽出前に少なくとも１日間乾燥させられた。
【０１７６】
ＨＰＬＣ分析は、Ａ‐Ｂ勾配（９０％→０％Ａ；Ａ＝Ｈ２Ｏ中の０．２％ギ酸、Ｂ＝ＭｅＯＨ）を有するHypersil  GOLD  C18逆相カラムを使用して、Agilent/Hewlett-Packard（登録商標）1100シリーズ計装設備（ChemStation  Rev.  A.  10.02ソフトウェア）上で実行された。報告された保持時間は、±０．１分以内に補正される。カラム温度は３５℃であったと記録され、流速は５ｍｇ／ｍＬで調製された試料の２０μＬ注入を使用して１ｍＬ／分であった。ＵＶ／Ｖｉｓ  ＤＡＤを使用した吸光度値は、２５４ｎｍ、３０６ｎｍ、３２０ｎｍ、４３５ｎｍ及び４５０ｎｍで記録された。図１５に示されるトレースは、２５４ｎｍで記録された。
【０１７７】
イタドリ抽出物調整１：
イタドリ植物は、２０１２年４月にHalifax,  NSから収穫され、promix  soil（ASB  Greenwood）に移植され、２０１３年２月の処理まで周囲条件下で人工気象室（phytotron）内に保持された。根粉（０．５ｇ）は、２００ｍｌエタノールを用いて、溶媒が無色になるまでソックスレー抽出された。エタノール抽出物は減圧下で濃縮され、１３２ｍｇの粗抽出物を得た。
【０１７８】
当業者は、イタドリ抽出物調製１において使用されるエタノールは、メタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、テトラヒドロフラン、１，４‐ジオキサン、塩化メチレン、ジクロロエタン、酢酸エチル及び同様のもののような、適切な有機溶媒によって置換され得ることを知り、理解するであろう。
【０１７９】
イタドリ抽出物調整２：
イタドリ根は、２０１３年５月に、Wolfville,  NSにおいて生長する４３の植物から収穫された。根は人工気象室に移植され、そこでは２２の標本（specimens）がネイティブな土壌内で増殖させられ（propagated）、２１の標本がpromix  soil内で増殖させられた。植物標本は、全４３の根が収穫された２０１４年１月から２０１４年５月までに、人工気象室から集められた。この材料は削られ、組み合わされ、１．５ｋｇは７．５Ｌのエタノールを用いて室温で抽出された。１１週目に、４０ｍＬのアリコート（aliquot）が取り出され、真空で濃縮されて４９７ｍｇの粗抽出物を与えた。
【０１８０】
当業者は、イタドリ抽出物調製１において使用されるエタノールは、メタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、テトラヒドロフラン、１，４‐ジオキサン、塩化メチレン、ジクロロエタン、酢酸エチル及び同様のもののような、適切な有機溶媒によって置換され得ることを知り、理解するであろう。
【０１８１】
他の実施形態において、イタドリの構成要素となる光活性成分を包含する他の植物からの抽出物は、ＰＤＩ及びＰＤＴ効果を誘発することが可能であろう。例えば、イタドリ抽出物に包含される光活性化合物、エモジンは、以下の植物科及び属内にも見出される。いくつかの実施形態において、マタタビ科（マタタビ属）、ヒユ科（イノコズチ属）、キク科（ヨモギ属、アキノノゲシ属、フキ属）、ノウゼンカズラ科（キササゲ属）、オトギリソウ科（オトギリソウ属）、オトギリソウ科（Ploiarium）、オトギリソウ科（Psorospermum）、ヒノキ科（ビャクシン属）、マメ科（ナンバンサイカチ属）、マメ科（インゲンマメ属）、マメ科（エンドウ属）、ユリ科（アロエ属）、ヤブコウジ科（ツルマンリョウ属）、オオバコ科（オオバコ属）、イネ科（カモジグサ属）、タデ科（ダイオウ属）、タデ科（ギシギシ属）、クロウメモドキ科（クロウメモドキ属）、クロウメモドキ科（Ventilago）、バラ科（オランダイチゴ属）、バラ科（サクラ属）、ユキノシタ科（ヒマラヤユキノシタ属）、ニガキ科（ニガキモドキ属）、ニガキ科（Picramnia）及びブドウ科（ブドウ属）からの抽出物は、本開示のイタドリ抽出物と同じ目的を果たし、同じ方法で単離されるであろう。
【０１８２】
細菌培養の準備
トリプシン大豆寒天（ＴＳＡ）は、生体外（in  vitro）寒天ウェル拡散試験のために使用された。培地（media）は、２５０ｍＬの脱イオン（ＤＩ）水の中に７．５ｇのトリプシンソイブロス（ＴＳＢ）を３．７５ｇの寒天と合わせることにより、５００ｍＬのエルレンマイヤーフラスコ（三角フラスコ）内で調製された。フラスコ上端を綿栓と箔で覆い、懸濁液は１２１℃で１時間オートクレーブ処理された。液体寒天のよく混合されたアリコート（２０ｍＬ）は、ブンゼンバーナの近くで滅菌血清ピペット（２５ｍＬ）を用いて１００×１５ｍｍペトリ皿に移され、固化させられた。平均寒天深さは４ｍｍであった。プレートは標識され、Parafilm（登録商標）を用いて密封され、使用する前に１日から２日間４℃で保存された。
【０１８３】
ストレプトコッカス・ミュータンス回収のための選択培地であるトリプシン大豆酵母抽出物バシトラシン寒天（ＴＳＹ２０Ｂ）は、臨床試料を評価するために使用された（生体外マウス口腔ＰＤＩ）（Schaeken,  M.  J.  J  Dent  Res  1986,  65,  906-908）。培地（media）は、２５０ｍＬの脱イオン（ＤＩ）水の中に６．７５ｇＴＳＢ、４．５ｇ寒天、２．５ｇ酵母抽出物及び５０ｇ蔗糖を合わせ、マイクロ波（電子レンジ）で沸騰するまで加熱し、フラスコ上端を綿栓と箔で覆い、次いで１２１℃で１時間オートクレーブ処理することにより、５００ｍＬのエルレンマイヤーフラスコ（三角フラスコ）内で調製された。溶融した寒天の僅かな冷却の後に、１１．２μＬのバシトラシン（５０ｍｇ  ｍＬ−１）が加入され、熱い寒天が１００×１５ｍｍペトリ皿に注がれた。寒天プレートは標識され、Parafilmを用いて密封され、使用する前に１日から２日間４℃で保存された。
【０１８４】
細菌の準備
無菌技術を使用して、１バイアルのストレプトコッカス・ミュータンス（S.  mutans  Clarke,  ATCC  25175,  指定（designation）NCTC  10449）は、凍結乾燥ペレットの半分を、滅菌ループを使用して２ｍＬのブレインハートインフュージョン（Brain  Heart  Infusion）培地（ＢＨＩ、Ｏｘｏｉｄ）を含む培養管に移し、旋回により穏やかに混合することによって、増殖させられた。チューブは、ゆるく蓋をかぶせられ、３７℃のインキュベーター内に２４時間にわたって置かれた。翌日、１０回の連続希釈が行われ（１０−１から１０−８）、次いで各希釈物からの０．１ｍＬアリコートが、滅菌ループを使用して未使用の（fresh）ＢＨＩ寒天プレート（３．８％ＢＨＩ）の上に広げられ、斜めに蓋をして乾燥させられ、次いで３７℃のインキュベーター内に上下逆さにして一晩置かれた。コロニー増殖の純度が確認され、細菌培養管は、遠心分離（５０００ｒｐｍ、５分間）し、上清を慎重に注ぎこぼして廃棄し、５ｍＬの未使用の培地と交換することによって、継代培養された（subcultured）。ストレプトコッカス・ミュータンスの凍結ストックは、ストレプトコッカス・ミュータンス培養物の５００μＬアリコートを、水中の滅菌７０％グリセロール５００μＬを含む滅菌１．５ｍＬマイクロ遠心チューブに移すことによって、調製された。チューブは、短時間ボルテックスすることによって混合され、続いて−８０℃で保存された。
【０１８５】
一次増殖コロニープレートは、５０μＬ凍結ストレプトコッカス・ミュータンスを５００μＬトリプシン大豆ブロス（ＴＳＢ、Fluka  22092）を含む滅菌マイクロ遠心チューブに移すことによって調製され、溶液は、ボルテックス処理によって十分に混合された。四分円ストリーク法（quadrant  streak）を使用して、５０μＬのアリコートは、ＴＳＡプレート（寒天中の３％ＴＳＢ）に塗布され、斜めに蓋をかぶせて乾燥させられ、一晩インキュベートされた。翌朝、一次増殖培養物の純度が確認され、次いで１‐２個のコロニーが５００μＬＴＳＢを含む滅菌マイクロ遠心チューブに移され、上下にピペッティングすること及びボルテックス処理によって混合された。二次増殖コロニープレートは、この混合物の５０μＬを温められたＴＳＡプレートに移されることによって調製され、四分円ストリーク法で塗布され（quadrant  streaked）、前と同じように乾燥させられ、３７℃で保存された。翌朝、二次増殖培養物の純度が再度確認され、続いて寒天ウェル拡散アッセイのために使用された。これらの実験は、典型的に１週齢未満であった二次増殖プレートからのストレプトコッカス・ミュータンスコロニーを使用した。二次増殖プレートは、７‐１２日ごとに交換された。
【０１８６】
全ての実験について開始細菌濃度を標準化する（standardize）ために、おおよその細菌濃度を代表する、マクファーランド（McFarland）硫酸バリウム濁度基準の標準曲線が作成された。マクファーランド硫酸バリウム基準０．５、１、２、３、４及び５は、公表されたプロトコール（Isenberg  H.  Clinical  Microbiology  Procedures  Handbook  2007年更新、第２版、American  Society  Microbiology,  2004）に従うことによって調製された。これらの基準は、それぞれ約１．５、３、６、９、１２、１５×１０８の細菌ｍＬ−１を代表する。１ｃｍ経路長の石英キュベット内で、６２５ｎｍでの６つの硫酸バリウム標準の吸光度値が記録され（Biochrom  Libra  S12  UV/Vis分光光度計、Biochrom  Ltd.）、標準曲線が作られ、点は直線に適合させられた（fit）。近似線（trend  line）の式は、全ての実験的細菌接種物（experimental  bacterial  inoculums）を決定するために使用された。
【０１８７】
寒天拡散試験方法
ストレプトコッカス・ミュータンスの接種物は、室温の二次増殖プレートからのコロニーを、５ｍＬ滅菌蒸留水を含む滅菌１５ｍＬコニカルチューブに移すことによって調製され、内容物は、ボルテックス処理によって十分に混合された。６２５ｎｍでの吸光度が読み取られ、おおよその濃度がマクファーランド硫酸バリウム標準曲線に従って算出された。次いで、濃度は、マクファーランド基準０．５（およそ１．５×１０８ＣＦＵ  ｍＬ−１）に一致するように調整された。接種物の３００μＬアリコートは、菌叢（bacterial  lawn）の均一な増殖を可能にするために、滅菌綿チップアプリケータ（MedPro,コード018-426）を用いて各ＴＳＡプレート上に均一に広げられた。プレートは、斜めに蓋をして約３０分間乾燥させられ、試料は、穿孔の中又は紙ディスクの上に加えられた（delivered）。
【０１８８】
穿孔寒天拡散（ＢＨＡＤ）
穿孔ウェル（直径５．５ｍｍ、深さ４ｍｍ）は、
【数１】
2018535250.tif 000012
の滅菌パスツールピペットの端部を用いて、ＴＳＡ接種プレートに作られた。典型的には、５つのウェルが穿孔され、１つは対照のため中央に、４つは中央の対照ウェルの周りに対称的な正方形に穿孔された。ウェルは２０μＬの試料を受容した。
【０１８９】
紙ディスク寒天拡散（ＰＤＡＤ）
紙ディスクは、直径６ｍｍのディスクを与える穴開けパンチを用いて、Whatman  filter  paper  1（GE（登録商標）Healthcare  Life  Sciences,コード1001  090）から作られた。紙ディスクは、エタノールで殺菌され、次いで使用の前に乾燥させられた。滅菌鉗子を使用して、紙ディスクはＢＨＡＤのそれに類似したパターンで、接種されたＴＳＡ上に静かに置かれた。ひとたび紙ディスクが適切に配置されると、１０μＬの試料が各ディスクに塗布された。
【０１９０】
生体内（In  Vivo）研究のために使用される抽出物に対する寒天拡散試験
試料は、以前に記述されたＢＨＡＤ又はＰＤＡＤの方法に従って、０．５マクファーランドバリウム標準接種物（barium  standard  inoculum）（１．５×１０８ＣＦＵ  ｍＬ−１）をそれぞれ有する、一双に（in  duplicate）（暗プレート及び明プレート（dark  and  light  plates)））調製されたＴＳＡプレートに送達された。試料は：３ｍｇ  ｍＬ−１クロルヘキシジン、脱イオン水、５％ＰＧ、５％プロピレングリコール中の３ｍｇ  ｍＬ−１の本開示のイタドリ抽出物、及び５％プロピレングリコール中の本開示の１１ｍｇ  ｍＬ−１イタドリ抽出物、を含んでいた。試料を有するプレートは室温で３０分間インキュベートされ、透過プロジェクタ（transparency  projector）（Bell  &  Howell,モデル番号310  LA）を用い、プロジェクタのベースから１６．２ｃｍの距離での、１５分間にわたる明プレートの照射が続き、１００Ｊｃｍ−２の光線量を得た。この照射期間中、暗プレートは、同等の時間にわたって、光から保護された状態に保たれた。明又は暗の処置に続いて、プレートは３７℃で一晩インキュベートされ、翌朝分析された。
【０１９１】
寒天拡散濃度ベース試験
本開示のイタドリ抽出物の濃度ベースのアッセイは、ＤＭＳＯ中０．１、１、１０、１００ｍｇ／ｍＬの抽出物を使用して実行された。５ｍｇ／ｍＬのクロルヘキシジン及びＤＭＳＯのみの対照が含まれていた。ＴＳＡプレートは、１．０マクファーランド標準（３．０×１０８ＣＦＵ  ｍＬ−１）を用いて、ＢＨＡＤ又はＰＤＡＤの方法に従って、一双に（暗プレート及び明プレート）調製された。明プレートは、光反応器（Luzchem  Research  Ltd.モデル番号LZC-4V）内で、１６個のクールホワイト電球（Osram  Sylvania  Inc.コードF8T5-CW）を用いて１時間にわたって照射され、３５Ｊｃｍ−２の光線量を得た。この照射期間中、暗プレートは、同等の時間にわたって、光から保護された状態に保たれた。明又は暗の処置に続いて、プレートは３７℃で一晩インキュベートされ、翌朝分析された。
【０１９２】
寒天拡散比較試験
市販のリステリン、Oro-Clense、及び１％ＴＢは、ＤＭＳＯ中の１０ｍｇ  ｍＬ−１及び１００ｍｇ  ｍＬ−１イタドリ抽出物と一緒に、濃度ベースのアッセイ研究において記述された寒天拡散分析に付された。明プレートに対して放出された総光線量は３６Ｊｃｍ−２であった。
【０１９３】
浮遊培養物に対するマイクロブロス希釈法
最小阻害濃度（ＭＩＣ）及び最小殺菌濃度（ＭＢＣ）は、９６ウェルマイクロタイタープレート内で増殖する懸濁培養物に対して、マイクロウェル希釈法（Sahin,  Fら、J  Ethnopharmacol  2003,  87,  61-65、Methods  for  Antimicrobial  Susceptibility  Testing  of  Anaerobic  Bacteria;   承認された標準、,第６版。Wayne,  Pennsylvania:  National  Committee  for  Clinical  Laboratory  Standards;  2004）に従って決定された。接種懸濁液は、１００μＬの希釈された懸濁液（アッセイにおける最終的な濃度５×１０５ＣＦＵ  ｍＬ−１）及び水中の最大で５％のプロピレングリコール１００μＬの希釈された抽出物を組み合せることによって、二次増殖プレートから調製され、アッセイにおいて０．０１ｍｇ  ｍＬ−１と５０ｍｇ  ｍＬ−１の間の最終的な抽出物濃度を得た。２つのマイクロタイタープレートが並行して同じように調製され、一つは、３７℃で３０分間のプレインキュベーションの後に、光反応器内で電球を用いて、１時間にわたって３５Ｊｃｍ−２の光処置を受けた。その後、光処置プレート及び暗プレートの両方は、３７℃で１６時間にわたってインキュベートされ、次いで、ＣＦＵ  ｍＬ−１は、ＴＳＡ寒天プレートを使用したMiles及びMisraの液滴計数技術（Miles,  A.  A,ら、J  Hyg（Lond）1938,  38,  732‐749）に従って、各ウェルについて定量された。
【０１９４】
体外の（Ex  Vivo）ヒト歯の研究
イタドリ抽出物及び光によるヒトの歯上のバイオフィルム形成阻害は、文献（Cho,  Y.  S.ら、Biotechnol  Bioprocess  Eng  2010,  15,  359-364）から適応されたプロトコールに従って評価された。簡潔に述べると、ヒトの歯は、ストレプトコッカス・ミュータンスを接種された（２４ウェルマイクロタイタープレート内の）ＢＨＩブロス中に３７℃で４日間にわたって、キャンドルジャー（５％ＣＯ２）内で保持された。２−４日目に１日３回３分間にわたって、歯は取り出され、生理食塩水（対照）又はイタドリ抽出物（５ｍｇ  ｍＬ−１）のいずれかの中に置かれた。この短いインキュベーション期間に続いて、試料の半分は１００Ｊｃｍ−２の光を用いて照射され、残りの半分は暗条件下に保たれ、次に明試料と暗試料の両方が接種されたＢＨＩブロス溶液に戻された。５日目に、試料は画像化のために調製され、６日目に、歯の表面上のバイオフィルム形成が走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）によって調べられた（Somayaji,  K.ら、Iran  Endod  J  2010,  5,  53-58）。
【０１９５】
ＳＥＭ分析のための試料調製は、０．５Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．２、５℃）中で穏やかに洗浄することから開始した。次いで歯は、２％グルタルアルデヒド中、５℃で２０時間にわたって固定され、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１５分間にわたって洗浄され、１％（ｗ／ｖ）四酸化オスミウム中、５℃で１２時間にわたって後固定された。次いで試料は、ＰＢＳで洗浄され、上昇するグレードのアセトン（１グレード当たり１０分間浸漬）：３０、６０、８０及び１００％で脱水された。１００％エタノールに保存した後、試料は、液体ＣＯ２に移され、臨界点乾燥機（critical  point  dryer）内で更に乾燥させられた後に、マウンティング及びPolaron  SC7670スパッタコーター（１００秒、１８‐２０μＡ）を使用して金パラジウムの層でコーティングされた。歯表面は、JOEL  JSM-5900LV  SEMを用いてバイオフィルム形成の形跡（evidence）について３５００Ｘまでの倍率で調べられた。
【実施例１】
【０１９６】
実施例１：イタドリ抽出物の抗菌作用
暗条件下及び光が媒介するイタドリ抽出物の抗菌作用は、トリプシン大豆寒天（ＴＳＡ）拡散試験（表１０；図７）を使用して調査された。０．０１％から１０％までの、ＤＭＳＯ中の抽出物の増加する濃度は、３００μＬの黄色ブドウ球菌又はストレプトコッカス・ミュータンス接種物（３×１０８ＣＦＵ  ｍＬ−１）に対して試験された。３０分間のインキュベーション期間の後に、１枚のプレートは光を用いて１時間にわたって照射され、３５Ｊｃｍ−２の総光線量を得たが、同時に、暗プレートは光から保護された。阻害ゾーンは更なる１６時間のインキュベーション期間の後に測定され、これらの抽出物の強度及び条件に対する細菌の感受性（bacterial  sensitivity）の程度を示した。最も低い濃度、０．０１％及び０．１％において、イタドリ抽出物は、暗条件下において黄色ブドウ球菌又はストレプトコッカス・ミュータンスに対して識別可能な抗菌作用を全く示さなかった。しかしながら、イタドリ抽出物の光活性化は、試験した両方の細菌種に対して、それぞれ２つの濃度について８ｍｍ及び１２ｍｍの阻害ゾーンを生じさせた。１％のイタドリ抽出物強度は、両細菌に対して９ｍｍの暗条件下での阻害ゾーン（dark  inhibition  zones）を与え、１０％は黄色ブドウ球菌及びストレプトコッカス・ミュータンスに対してそれぞれ１６ｍｍ及び１５ｍｍの暗条件下での阻害ゾーンを与えた。１％及び１０％イタドリ抽出物溶液の光活性化は、両方の種の細菌に対してそれぞれ１５ｍｍ及び１８ｍｍの阻害ゾーンを生じさせた。注目すべきことに、最高濃度のイタドリ抽出物によって生成された阻害ゾーンは、市販の強度の４０倍の広範スペクトル抗生物質クロルヘキシジンによって生成されたものと同じであった。市販のクロルヘキシジン製品Oro-Clenseに対して試験された場合、光活性化された１％イタドリ抽出物は同等に有効であり、１０％イタドリ抽出物はクロルヘキシジンよりも顕著に活性が高かった（表１１；図８）。比較すると、Listerine  Zeroはこのアッセイにおいて抗菌効果を有していなかった。これらの結果は、広範スペクトル抗生物質として作用する光反応性イタドリ抽出物の多能性（versatility）を強調している。重要なことに、微生物の光力学的不活性化は、即時的かつ無差別に作用し、従来の抗生物質に疑念を抱かせる抵抗の脅威を除く。
表１０：イタドリ抽出物の増加する濃度を用いて寒天拡散試験において測定された薬剤感受性（Antibiotic  susceptibility）阻害ゾーン；参考のために、クロルヘキシジンについてのこれらの値（暗及び明）は、両方の細菌に対して１８ｍｍであった
【０１９７】
【表１０】
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表１１．１％（１０ｍｇ  ｍＬ−１）イタドリ抽出物、１％トルイジンブルー（ＴＢ）及び２つの市販品について、寒天拡散試験において測定された薬剤感受性阻害ゾーン
【０１９８】
【表１１】
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【０１９９】
イタドリの抽出物は、黄色ブドウ球菌及びストレプトコッカス・ミュータンスの懸濁培養物に対する微生物の光力学的不活性化を提供することにおいても有効であった（それぞれ、図３ａ及び図３ｂ）。１０μｇ  ｍＬ−１において、特定のイタドリ抽出物は、黄色ブドウ球菌に対するベースライン抗菌作用（baseline  antimicrobial  activity）を全く与えなかったが、一方で光活性化は、同じ濃度において自然対数で５を超える殺菌（over  5  log10  of  kill）を生じさせた。１００μｇ  ｍＬ−１において、抽出物は、伝統的な抗生物質のように振る舞い、光はその効果を更に増幅し、全細菌の９９．９％以上を破壊した。この傾向は、ストレプトコッカス・ミュータンスに対しても保持された。
【０２００】
イタドリ抽出物は、光を用いて活性化された場合、ヒトの歯の表面上のストレプトコッカス・ミュータンスのバイオフィルムの形成を阻害する（図４）。バイオフィルムは、４日間にわたってストレプトコッカス・ミュータンスを接種されたブレインハートインフュージョン（ＢＨＩ）ブロス中に歯を維持することによって、個々の歯試料上に形成させられた。結果として得られた未処置の歯表面上のバイオフィルムは、図４ａに示される。３日間にわたるイタドリ抽出物処置（１日３回３分間）によって、バイオフィルムへの形態学的変化は、明白であった（図４ｂ）。しかしながら、各々の３分間の処置に続いてイタドリ抽出物を活性化するために光（１００Ｊｃｍ−２）が使用された場合には、バイオフィルムは全く形成されなかった。図４ｃにおいて実証されるように、イタドリ抽出物は、ヒトの歯上の微生物の体外での光力学的不活性化のための効能のある（potent）光増感剤として作用する。
【実施例２】
【０２０１】
実施例２：イタドリ抽出物対個々の成分の抗菌作用
注目すべきことに、イタドリ抽出物の光増感力（photosensitizing  power）は、抽出物のうちの何れか一つの特定可能な成分のそれよりもはるかに大きな、微生物の光力学的不活性化効果を引き起こした。アントラキノン又はそのグリコシル化誘導体は、抽出物の光増感効果の要因であり得る。分画によって単離された場合には、エモジンが最も大きな光力学的効果を生じさせ、フィスシオンが続いた。それらのグリコシドである、アントラキノンＢ及びＡは、それぞれ不活性であった。アントラキノン類の市販の試料は、エモジン＞フィスシオン＞レインの順で微生物の光力学的不活性化を生じさせた。いくつかのイタドリ抽出物において、エモジン及びフィスシオンの割合は、それぞれ０．５１‐０．６５重量％及び０．２４‐０．２７重量％の間であった。ストレプトコッカス・ミュータンス（又は黄色ブドウ球菌）が塗られたＴＳＡプレートに送達されたイタドリ抽出物（４０μｇ）の寒天拡散試験において、微生物の光力学的不活性化阻害ゾーンは、それらの最も幅広い直径において実に３５‐３７ｍｍ、平均で２４‐２８ｍｍの大きさであり、抽出物が光処置に予め曝露された場合に弱められなかった（図９；表１２）。
表１２．イタドリ抽出物の光活性化された抗菌作用の、その２つの組成成分（エモジン及びフィスシオン）に対する、抽出物中に見出されるそれらの各々の割合における比較
【０２０２】
【表１２】
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ａ）阻害ゾーンは、最大の距離で測定された；ｂ）抽出物内に見出される百分率組成；ｃ）使用された基準（エモジン、フィスシオン、レイン、ポリダチン、レスベラトロール、アントラグリコシドＢ）は、抽出物内に見出されるそれぞれの百分率組成で一緒に混合された。
【０２０３】
比較すると、いくつかの抽出物からのそれらの対応する重量百分率比、エモジンについて０．２０‐０．２６μｇ及びフィスシオンについて０．１０‐０．１１μｇ、で試験されたエモジン及びフィスシオン基準は、黄色ブドウ球菌に対して８‐９ｍｍの、微生物の光力学的不活性化阻害ゾーンを生じさせた。エモジンは、ストレプトコッカス・ミュータンスに対して７ｍｍの微生物の光力学的不活性化阻害ゾーンを与えたが、一方でフィスシオンは不活性であった。エモジン、フィスシオン及びレイン基準が抽出物におけるそれらの相対的な割合で混合されて、同じ様に試験された場合、複合された微生物の光力学的不活性化効果は、ただ約８‐９ｍｍだけの阻害ゾーンにつながった。この実施例において、イタドリ抽出物は、市販の基準としての組成成分（constituent  components）の混合物よりも、４倍以上効能があった。そのうえに、混合された基準の微生物の光力学的不活性化効果は、最も活性な成分のそれを共に反映し、イタドリ抽出物中の全体的な微生物の光力学的不活性化は個々の光増感剤能力の単純な一次結合ではないことを示唆した。
【０２０４】
スチルベノイド、レスベラトロール及びポリダチンは、商業的に試験されたアントラキノンの光増感力を増幅しない。エモジンと組み合わされたレスベラトロールは、エモジンの光活性を変化させなかった。エモジンについて（レスベラトロールの存在下又は非存在下で）測定された阻害ゾーンは、いくつかのイタドリ抽出物において自然に起こる濃度（エモジン２５０μｇ  ｍＬ−１の２０μＬ＝５μｇ；レスベラトロール３００μｇ  ｍＬ−１の２０μＬ＝６μｇ）、並びにより高い濃度（２ｍｇ  ｍＬ−１の２０μＬ＝４０μｇ）において、１０ｍｍであった。加えて、レスベラトロールは、実験条件下では暗条件下（in  the  dark）及び光活性化ありの条件で不活性であった（図１４）。
【実施例３】
【０２０５】
実施例３：生体内マウス口腔ＰＤＩ
イタドリ抽出物及び光による微生物の光力学的不活化が口腔内の細菌負荷を効果的に減少させることができるかどうかを決定するために、オスのＣＤ−１マウスモデルが利用された。ストレプトコッカス・ミュータンスの生存率に対する、５分間の３０Ｊｃｍ−２の光による光増感の効果が、処置の直後に測定された（図５）。マウスは以下の処置の１つを受けた：（ｉ）賦形薬（ビヒクル）、暗；（ｉｉ）賦形薬、光；（ｉｉｉ）３ｍｇ  ｍＬ−１抽出物、暗；（ｉｖ）３ｍｇ  ｍＬ−１抽出物、光；（ｖ）１１ｍｇ  ｍＬ−１抽出物、暗；又は（ｖｉ）１１ｍｇ  ｍＬ−１抽出、光。群（ｉ）及び群（ｉｉ）は対照群であり、これらの２つの群の間に有意差はなかった（歯肉についてｐ＝０．１６、舌については０．２５）。光の非存在下でのイタドリ抽出物処置による細菌生存率の低下があったが、これらの減少は、最高濃度の抽出物において自然対数で約２（2log10）のみであった。イタドリ抽出物が光と併せて使用された場合、３ｍｇ  ｍＬ−１で更に自然対数で１‐２（1-2log10）の殺滅が達成され、一方で全てのストレプトコッカス・ミュータンスの全破壊は１１ｍｇ  ｍＬ−１で起こった（ｐ＜０．００１）。１１ｍｇ  ｍＬ−１抽出物を用いた暗処置と光処置との間の差異は、自然対数でおよそ５（5log10）（ｐ＜０．００１）であった。これらの傾向は、両方の処置領域に当てはまる。重要なことに、潰瘍形成又は炎症の肉眼で見える形跡はなかった（図１０）。組織学的評価に関しては、最高濃度のイタドリ抽出物及び光を用いた場合でさえ、炎症性浸潤の形跡はなかった（図１１）。
【０２０６】
生体内マウス口腔研究
およそ１０週齢で体重２５‐３０ｇの、３０匹のオスＣＤ−１マウス（Charles  River  Laboratories  International  Ltd.,サンコンスタン、カナダ）が、この研究において使用された。マウスは、カナダ動物飼養協議会（Canadian  Council  of  Animal  Care）によって定められた規則に従って飼育された。マウスは、ＰＤＩ処置に先立って、以下のレジメンに従って１週間にわたって接種された。１日目に、マウスは、通常の水の代わりに１％蔗糖（Sigma-Aldrich）水を受け入れた。２‐７日目に、マウスは、１×１０６ＣＦＵ  ｍＬ−１のストレプトコッカス・ミュータンス接種物とともに１％蔗糖水溶液を受け入れた。８日目の処置に続いて、全てのマウスは、新鮮な削りくずと清浄な水とともに滅菌ケージの中に置かれた。ＰＤＩ処置日に、マウスは、舌の前部背側領域及び上顎切歯の上の歯肉領域に塗布された２×１０９ＣＦＵ  ｍＬ−１のストレプトコッカス・ミュータンスを含有する１０μＬの水を用いて、更に接種された。前述の場所は、本研究についての処置領域であった。
【０２０７】
２つの異なる濃度のイタドリ抽出物が、この研究における光増感剤として使用された：賦形薬としての水中の５％プロピレングリコール中の３ｍｇ  ｍＬ−１及び１１ｍｇ  ｍＬ−１溶液。照射源は、０．１Ｗｃｍ−２の合成出力を有する３つの広範スペクトル白色発光ダイオード（ＬＥＤｓ）から成る、内部で製造された装置であった。光は、照射中にマウスの口の開口部から２ｃｍのところに置かれ、この距離で３０Ｊｃｍ−２の光線量を得た。
【０２０８】
３０匹のマウスは、群当たり５匹のマウスで無作為に６つのカテゴリーの１つに入れられた：ビヒクル暗、ビヒクル光、３ｍｇ  ｍＬ−１抽出物暗、３ｍｇ  ｍＬ−１光、１１ｍｇ  ｍＬ−１抽出物暗、１１ｍｇ  ｍＬ−１光。マウスは、一度に無作為に処置された。マウスは、
ケタミン及びキシラジン（各５０ｍｇ／ｋｇを包含する混合物）の０．１ｍＬのＩＭ（筋肉内）注射を使用して麻酔された。ひとたび標本が完全に麻酔されると、それは仰臥位の特別な台に位置させられた。口腔へのアクセスは、口を開くための弾性バンドを使用して達成され（バンドは、切歯の両方の組の周りに配置された）、舌及び上顎切歯を囲む上部歯肉領域を露出させた。最初に、２×１０９ＣＦＵ  ｍＬ−１のストレプトコッカス・ミュータンスを含有する１０μＬの水、続いて１０μＬの試料（ビヒクル、ビヒクル中の３ｍｇ  ｍＬ−１又は１１ｍｇ  ｍＬ−１の抽出物、）が、上部歯肉領域に加えられた（delivered）。このプロセスは、舌の前部背側領域に対して繰り返された。これらの処置領域は、５分間にわたる３０Ｊｃｍ−２のＬＥＤ光を用いて同時に照射されるか、又は５分間にわたって暗条件下に保持された。細菌スワブは、無菌歯内ペーパーポイント（Dia  Dent、サイズ４０）を使用して各処置領域から採取された。２つのペーパーポイントは、６０秒間にわたって各々の特定の領域に塗り付けられ、その後に、更なる分析のために０．５ｍＬの滅菌リンゲル‐ペプトンを含むスクリューキャップバイアルの中に置かれた。次いで標本は、弾性バンドから解放され、麻酔から回復するために清潔なケージの中に置かれた。細菌試料は、３時間以内に処理された。
【０２０９】
処置の３日後、標本は処置日と同様の方法で麻酔され、細菌について綿棒で拭き取られ、次いで頚部脱臼により死亡させた。舌及び歯肉（上顎領域の切歯を含む）は、直ちに標本から採取され、組織学的分析のために０．５ｍＬのブアン溶液（Sigma-Aldrich）内で固定された。
【０２１０】
細菌コロニー形成単位（ＣＦＵ）の数は、Miles及びMisraの液滴計数技術（Miles,  A.  A,ら、J  Hyg（Lond）1938,  38,  732‐749）を使用して定量された。ＴＳＹ２０Ｂ（ストレプトコッカス・ミュータンス特異的寒天）プレートは、分析されるべき試料の１００から１０−７の希釈に対応する８つの区分に印を付けられた。希釈されていない１ｘ試料は、滅菌水で連続希釈（７ｘ１０ｘ連続希釈）された。各試料の組の希釈物について、希釈されていない試料又は１０ｘ希釈試料（合計８つ）のいずれかの２０μＬ滴が、濃度が増大する順番（１０−７から１００）で、ＴＳＹ２０Ｂプレートの８つの標識された区分のそれぞれに、塗布された。プレートは、逆転及び３７℃で１８‐２４時間のインキュベーションの前に、乾燥のために直立状態に保たれた。続いて各区分は、増殖（コロニー増殖）について観察された。２から５０個のコロニーを示す区分は計数され、元の試料のｍＬごとの平均ＣＦＵを算出するために、等式１（数２）が使用された。
【０２１１】
【数２】
2018535250.tif 000016
【０２１２】
細菌計数の統計分析は、スチューデントのｔ検定を使用して実行された。  個々の処置群の間の差は、ｐ値＜０．０５で有意であるとみなされた。
【０２１３】
組織学的評価
舌及び歯肉組織標本（上顎領域の切歯を含む）は、固定剤（ブアン溶液）中で、４℃で２日間にわたって冷蔵保存された。歯を含む歯肉試料は、慎重に溶液を取り除き、新鮮な０．５ｍＬブアン溶液で置換し、バイアルを室温で２４時間放置することによって脱石灰化のために準備された。溶液は取り除かれ、試料は低速の流水中で洗浄された（３ｘ１０分）。次いで試料は、水（ｐＨ７．３６）中の１ｍＬの１０％ＥＤＴＡを含む滅菌２４ウェルマイクロプレートに慎重に移された。１０％ＥＤＴＡ溶液は２日ごとに１５日の期間にわたって交換され、試料は、少なくとも２４時間にわたって７０％エタノール中に置かれた。舌組織は、２日間のブアン溶液中での保存の後に７０％エタノールで１回洗浄され、少なくとも２４時間にわたって７０％エタノール中で保持された。試料は、１００％エタノールで脱水され、トルエン中で清澄化され、ヘマトキシリン‐エオシン（Ｈ＆Ｅ）染色による組織学的評価のためにパラフィンに包埋された。
【０２１４】
組織試料の脱水及び染色
試料は、以下のように脱水された：
組織試料は８５％エタノール中で２時間浮かされ（suspended）、次いで溶媒が取り除かれた。次いで組織試料は９５％エタノール中に１時間浮かされ、次いで溶媒が取り除かれた。次いで組織試料は１００％エタノール中に０．５時間浮かされ、次いで溶媒取り除かれた。次いで組織試料はトルエン中に１時間浮かされ、溶媒が取り除かれ、組織試料はトルエンに再び浮かされた。１時間後、溶媒が取り除かれ、組織試料は６０℃の熱い流動パラフィンに２０分間真空下で浮かされ、次いでパラフィンが取り除かれた。パラフィン浮遊及び除去は、更に２回繰り返された。最後に、試料はパラフィンに包埋され、室温で放置されて硬化した。パラフィン包埋組織は、木製ブロックに載せられ、ミクロトーム（American  Optical  Company  820）を使用して６μｍの厚さで切片化され、標識ポリ‐Ｌ‐リシン被覆スライドに移された。Ｈ＆Ｅ染色のために、キシレンの２回の交換によってパラフィンが最初に溶解除去された。アルコールの２回の交換はキシレンを取り除き、スライドは、細胞及び組織要素を再水和する（rehydrate）ために水で徹底的にすすがれた。スライドは、ヘマトキシリン染料に浸漬され、水道水ですすがれ、７０％エタノール中で脱染された。エオシンのアルコール溶液が塗布され、スライドは、水の全ての痕跡を除去するために数回のアルコール交換ですすがれた。組織を清澄化するためにキシレンの２回の交換が使用され、次いでポリスチレンマウント剤（Permoun（登録商標））が塗布され、ガラスカバースリップで覆われた。スライドは、顕微鏡分析に先立って少なくとも２４時間にわたって乾燥させられた。
【実施例４】
【０２１５】
実施例４：抗癌光力学療法
ＨＬ‐６０細胞培養
ＨＬ−６０ヒト前骨髄球性白血病細胞（ATCC  CCL-240）は、２０％ＦＢＳ（PAA Laboratories,  A15-701）を補充したRPMI  1640（Mediatech  Media  MT-10−040-CV）中で、３７℃、５％ＣＯ２条件下で培養され、標準的な無菌手順に従って週に３‐４回継代された。培養は、２５ｃｍ２組織培養フラスコ内の２００，０００細胞ｍＬ−１で開始され、増殖が８００，０００細胞ｍＬ−１に達したときに、長期間の高細胞密度に関連する老化を回避するために継代培養された。完全培地は、ＲＰＭＩ１６４０（１６０ｍＬ）及びＦＢＳ（４０ｍＬ、予備秤量（プレアリコート）され、熱不活性化されている）を、２５０ｍＬ  Millipore  vacuum  stericup（０．２２μｍ）内で合わせること及びろ過することにより、必要に応じて２００ｍＬ分ずつ調製された。
【０２１６】
ＨＬ‐６０細胞生存率アッセイ
実験は、９６ウェルマイクロタイタープレート（Corning  Costar,  Acton,  MA）内で三重に（in  triplicate）実行され、周辺に沿った外側ウェルは、試料ウェルからの蒸発を最小化するために、２．６８ｍＭの塩化カリウム、１．４７ｍＭの第一リン酸カリウム、０．１３７ｍＭの塩化ナトリウム、８．１０ｍＭの第二リン酸ナトリウムを有する２００μＬのｐＨ７．４リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含んでいた。対数期で増殖しているＨＬ−６０細胞（およそ８×１０５細胞）は、５０μＬのアリコートで温かい培地（２５μＬ）を含む内側ウェルに移され、平衡させるために３７℃、５％ＣＯ２水ジャケットインキュベーター（Thermo  Electron  Corp.,  Forma  Series  II,  Model  3110,  HEPA  Class  100）内に１時間置かれた。ルテニウム化合物はＰＢＳで連続希釈され、予め温められ、その後に適切な希釈液の２５μＬのアリコートが細胞に加えられ、１時間又は１６時間の薬物対光の間隔にわたって３７℃、５％ＣＯ２の下でインキュベートされた。処置されていないマイクロプレートは暗いインキュベーター内に維持され、一方でＰＤＴ処置されたマイクロプレートは、１９０Ｗ  BenQ  MS510オーバーヘッドフロジェクタを使用して、光（４００‐７００ｎｍ、２７．８ｍＷｃｍ−２）を用いて照射された。照射時間は１時間であり、およそ〜１００Ｊｃｍ−２の光線量を得た。暗条件マイクロプレート及びＰＤＴ処理されたマイクロプレートの両方は更に４８時間インキュベートされ、その時点において、予め温められた、アラマーブルー試薬（Life  Technologies  DAL  1025）の１０μＬのアリコートが、全ての試料ウェルに加えられ、３７℃、５％ＣＯ２下で１５‐１６時間にわたってインキュベートされた。細胞生存率は、アラマーブルー酸化還元指示薬の、生細胞によって代謝的に蛍光色素に変換される能力に基づいて決定された。蛍光は、励起フィルターを５３０±２５ｎｍに設定し、発光フィルターを６２０±４０ｎｍに設定して、Cytofluor  4000蛍光マイクロプレートリーダーで定量化された。細胞傷害性及び光細胞傷害性（photocytotoxicity）のＥＣ５０値は、等式２（数３）に従い、Graph  Pad  Prism  6.0を使用して用量応答曲線のシグモイドフィットから計算された。ここで、ｙｉ及びｙｆは、初期蛍光シグナル強度及び最終蛍光シグナル強度である。対数増殖期及び同じ継代数で増殖する細胞に関して、ＥＣ５０値は、マイクロモル以下のレジメン（submicromolar  regime）で、±２５％以内に再現可能であった；１０μＭ未満、±１０％；１０μＭ以上、±５％。
【０２１７】
【数３】
2018535250.tif 000017
【０２１８】
本発明の組成物は、光生成ＲＯＳ及び他の反応性種（）によって媒介される、非特異的、即時的な作用機構によって癌細胞を殺す。当業者は、ＨＬ‐６０細胞について記載された条件付けされたものは他の種類の癌細胞株に適合され得ることを認めるであろう。当業者はまた、他の癌細胞株についてのアッセイデータを得るために要求される適切な培地及び一般的技術をどのように選択するかを知っているであろう。
【実施例５】
【０２１９】
実施例５：イタドリ抽出物対その製剤の抗菌作用
製剤化された抽出物は有効であり、（示されるように）いくつかの製剤は、製剤化されていない抽出物よりもより有効ある。
【０２２０】
図９：３、製剤化されたイタドリ抽出物（表１３）は、寒天拡散試験において、製剤化されていないイタドリ抽出物抽出物（１１ｍｍ）と比較して、より大きな阻害ゾーン（１３．５ｍｍ）を生じさせる。したがって、イタドリ抽出物の光が誘発する抗菌作用は、特別な処方によって更に増幅されてもよい。
表１３．イタドリ抽出物製剤化の例
【０２２１】
【表１３】
2018535250.tif 000018
【０２２２】
イタドリ抽出物製剤化の他の例示的な実施形態は、表１４に記載されている。
表１４．イタドリ抽出物製剤化の例
【０２２３】
【表１４】
2018535250.tif 000019
【０２２４】
他の例示的な製剤化において、原料の範囲は、表１５に記載され得る。
表１５．例示的な泡状製剤化のための原料の範囲
【０２２５】
【表１５】
2018535250.tif 000020
【実施例６】
【０２２６】
実施例６：イタドリ抽出物対純粋なエモジンの細胞毒性
接着性CCD-1064SK正常皮膚線維芽細胞（ATCC  CRL-2076）は、１０％ＦＢＳ（PAA Laboratories,  A15-701）を補充したイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）中で培養され、３７℃、５％ＣＯ２条件下でインキュベートされ、標準的な無菌手順に従って週に２〜３回継代された。CCD-1064SK細胞は、７５ｃｍ２組織培養フラスコ内の２００，０００細胞ｍＬ−１で開始され、増殖が５５０，０００細胞ｍＬ−１に達したときに、古い培地を取り除き、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ１Ｘ、Mediatech,  21-031-CV）で一度細胞単層をすすぎ、続いて細胞単層をトリプシン−ＥＤＴＡ溶液（０．２５％ｗ／ｖトリプシン／０．５３ｍＭ  ＥＤＴＡ，  ATCC 30-2101）で解離させること（dissociation）によって継代培養された。細胞の適切なアリコートが新しい細胞容器に移されることを可能にするために、完全増殖培地（Complete  growth  medium）が細胞懸濁液に加えられた。完全増殖培地は、ＩＭＤＭ（２２５ｍＬ）及びＦＢＳ（２５ｍＬ、予備秤量（プレアリコート）され、熱不活性化されている）を、２５０ｍＬ  Millipore  vacuum  stericup（０．２２μｍ）内で合わせること及びろ過することにより、必要に応じて２５０ｍＬ分ずつ調製された。
【０２２７】
イタドリ抽出物は、暗条件下でのエモジンと比べて、正常皮膚線維芽細胞に対して毒性が３倍低い（図１２）。この減少した暗条件毒性は、光活性抗菌剤としての純粋なエモジンに対して抽出物が保持する、有意な利点である。
【０２２８】
本明細書において引用された各々及び全ての特許、特許出願及び文献の開示は、それらの全体について、参照により本明細書に取り込まれる。本発明は特定の実施形態を参照して開示されているが、本発明の真の精神及び範囲から逸脱することなく、当業者によって本発明の他の実施形態及び変形が案出され得ることは明らかである。添付の特許請求の範囲は、全てのそのような実施形態及び同等の変形を含むと解釈されるように意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
2018535250.tif 000023
【図４Ａ−４Ｃ】
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【図５】
2018535250.tif 000025
【図６】
2018535250.tif 000026
【図７Ａ−７Ｂ】
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【図８Ａ−８Ｂ】
2018535250.tif 000028
【図９】
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【図１０】
2018535250.tif 000030
【図１１】
2018535250.tif 000031
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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