(57)【要約】ペプチド、タンパク質、酵素、およびその機能的断片をコードするポリヌクレオチドを開示する。本開示のポリヌクレオチドは、肺などの臓器に効率的に送達され、臓器の細胞内で発現し得る。本開示のポリリボヌクレオチドを用いて、ＡＢＣＡ３などの、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーの遺伝子に関連する病気または異常を処置することが可能である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーの遺伝子に関連する病気にかかったまたはかかっていることが疑われる対象を処置するための修飾ポリリボヌクレオチドを含む組成物であって、前記修飾ポリリボヌクレオチドは、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド遺伝子に由来する非翻訳領域か、または、アルファ−グロビンポリペプチド遺伝子に由来する非翻訳領域を含み、翻訳時に、前記修飾ポリリボヌクレオチドは、前記病気の症状を改善するポリペプチドを発生させる、組成物。
【請求項２】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、該修飾ポリリボヌクレオチドにさらされる前記対象の細胞内での翻訳向けに最適化されたコドン配列を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＡＴＰ結合カセットファミリーの遺伝子は、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ３、ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＡ１２、ＡＢＣＢ４、ＡＢＣＢ７、ＡＢＣＢ１１、ＡＢＣＣ２、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ８、ＡＢＣＣ９、ＡＢＣＤ１、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８、およびＣＦＴＲからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＡＴＰ結合カセットファミリーの遺伝子はＡＢＣＡ３である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＡＴＰ結合カセットファミリーの遺伝子は、ヒトＡＢＣＡ３に対し少なくとも７０％相同的である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
カチオン性ポリマーのアミン基のモルと前記修飾ポリリボヌクレオチドのリン酸基のモルの比が少なくとも約８である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記最適化コドン配列は、非最適化コドン配列よりも対象の細胞内において少なくとも２０％効率良く翻訳される、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、非修飾ヌクレオチドと修飾ヌクレオチドの組み合わせを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記病気は、加齢黄斑変性、良性反復性肝内胆汁鬱滞、カンチュ症候群、先天性両側輸精管欠損、先天性高インスリン症、嚢胞性線維症、デュビン・ジョンソン症候群、家族性拡張型心筋症、家族性ＨＤＬ欠乏症、乳児全身性大動脈石灰化症、ハーレクイン魚鱗癬、遺伝性膵炎、妊娠性肝内胆汁鬱滞、葉状魚鱗癬、持続性新生児糖尿病、進行性家族性肝内胆汁鬱滞、弾性線維性仮性黄色腫、網膜色素変性、シトステロール血症、シュタルガルト病、サーファクタント機能不全、タンジール病、Ｘ連鎖副腎白質ジストロフィー、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、および運動失調からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、該修飾ポリリボヌクレオチドを有する前記対象の細胞において、ある期間、前記ポリペプチドの発現を提供し、前記期間は最大４週間であり、前記発現は、前記ポリペプチドをコードする非修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた対照細胞における発現と比較し、高い、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記期間は、少なくとも約３０秒である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記期間は、最大で５日である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、前記ポリペプチドをコードするコドン配列に隣接する３’または５’非コーディング領域を含み、前記非コーディング領域は、前記細胞において前記ポリペプチドの発現を高めるのを助ける、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１４】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、ナノ粒子またはナノカプセルにおいて製剤化される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、またはナノエマルジョンにおいて製剤化される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、ウリジン類似体またはシチジン類似体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、５％〜５０％のウリジン類似体または５％〜５０％のシチジン類似体を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、１５％〜３０％のウリジン類似体または１５％〜３０％のシチジン類似体を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
前記ウリジン類似体は、プソイドウリジン、２−チオウリジン、５−ヨードウリジン、および５−メチルウリジンからなる群から選択される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
前記シチジン類似体は、５−メチルシチジン、２’−アミノ−２’−デオキシシチジン、２’−フルオロ−２’−デオキシシチジン、および５−ヨードシチジンからなる群から選択される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２１】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、５−メチルシチジンまたはプソイドウリジンを含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２２】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、（ｉ）ウリジンおよびシチジン；ならびに（ｉｉ）ウリジンおよびシチジンの類似体を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２３】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、アデノシン類似体またはグアノシン類似体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２４】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、（ｉ）アデノシンまたはグアノシン；および（ｉｉ）アデノシンまたはグアノシンの類似体を含む、請求項２３の組成物。
【請求項２５】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、５０％未満のアデノシンまたはグアノシンの類似体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２６】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、該修飾ポリリボヌクレオチドにさらされる細胞のうち、８０％超のトランスフェクション効率を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、該修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた末梢血単核細胞により発現される少なくとも１つの炎症マーカのレベルを実質的に変化させない、請求項１に記載の組成物。
【請求項２８】
（ｉ）前記コドン配列が、欠陥もしくは欠乏が病気の存在に関連する遺伝子または断片であるか、または、（ｉｉ）前記ポリペプチドの欠如もしくは欠乏が前記病気の存在に関連する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
前記修飾ポリリボヌクレオチドは、前記ポリペプチドをコードする非修飾ポリリボヌクレオチドと比較し、前記対象の免疫反応を低下させ、前記免疫反応は、前記修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた末梢血単核細胞により発現される、ＴＮＦ−α、ＩＬ−２、およびＩＬ−８から選択される少なくとも１つの炎症マーカのレベルを、前記非修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた対照の末梢血単核細胞の少なくとも１つの炎症マーカのレベルと比較して判断される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーの遺伝子に関連する病気にかかったまたはかかっていることが疑われる対象を処置するための修飾ポリリボヌクレオチドを含む組成物であって、前記修飾ポリリボヌクレオチドは、該修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた前記対象の細胞内での翻訳向けに最適化されたコドン配列を含み、翻訳時に、前記修飾ポリリボヌクレオチドは、前記病気の症状を改善するポリペプチドを発生させる、組成物。
【発明の詳細な説明】
【相互参照】
【０００１】
本出願は、米国特許法第１１９条の下で、２０１５年６月３０日に出願されたＥＰ１５１７４６７７．３の利益を主張し、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれるものとする。
【背景技術】
【０００２】
メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、それぞれが糖、リン酸、および塩基からなる、いくつかの連結したヌクレオチドを含有するポリマーである。各ｍＲＮＡポリマーは、ヌクレオチド鎖に沿って遺伝子情報を保管する。メッセンジャーＲＮＡポリマーは、細胞の核のＤＮＡから、タンパク質が作られる細胞質へ遺伝情報を運ぶ。ｍＲＮＡのヌクレオチドの核トリプレットはコドンと呼ばれ、各コドンは、翻訳されたタンパク質のアミノ酸の正体を特定する。
【０００３】
細胞は、また、外来性ＲＮＡを取込み、翻訳するが、多くの因子が効率的な取込みと翻訳に影響を与える。例えば、免疫系は、多くの外来性ＲＮＡを異質であると認識し、ＲＮＡを非活性化することを目的とした反応を引き起こす。加えて、多くの外来性ＲＮＡは、宿主細胞内で十分に発現するに足るだけ安定しているわけではない。
【発明の概要】
【０００４】
本開示は、呼吸窮迫症候群に関連する場合があるＡＢＣＡ３など、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）ファミリー遺伝子に関連する病気にかかったまたはかかっていることが疑われる対象を処置するための、修飾ポリリボヌクレオチドを含む組成物を提供する。修飾ポリリボヌクレオチドは、該修飾ポリリボヌクレオチドにさらされる対象の細胞内での翻訳向けに最適化されたコドン配列を含み得、翻訳時に、修飾ポリリボヌクレオチドは、病気の症状を改善するポリペプチドを発生させる。ＡＴＰ結合カセットファミリー遺伝子は、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ３、ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＡ１２、ＡＢＣＢ４、ＡＢＣＢ７、ＡＢＣＢ１１、ＡＢＣＣ２、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ８、ＡＢＣＣ９、ＡＢＣＤ１、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８、およびＣＦＴＲからなる群から選択され得る。一部の場合、ＡＴＰ結合カセットファミリー遺伝子はＡＢＣＡ３であるか、または、ヒトＡＢＣＡ３に対し少なくとも７０％相同的である。一部の場合、組成物は、カチオン性ポリマーのアミン基のモルと修飾ポリリボヌクレオチドのリン酸基のモルの比が少なくとも約８である。一部の場合、組成物は表８から選択される。一部の場合、最適化コドン配列は、非最適化コドン配列よりも、対象の細胞内で少なくとも２０％効率良く翻訳される。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、非修飾ヌクレオチドと修飾ヌクレオチドの組み合わせを含む。本開示の組成物を用いて病気を処置することが可能であり、該病気は、加齢黄斑変性、良性反復性肝内胆汁鬱滞、カンチュ症候群、先天性両側輸精管欠損、先天性高インスリン症、嚢胞性線維症、デュビン・ジョンソン症候群、家族性拡張型心筋症、家族性ＨＤＬ欠乏症、乳児全身性大動脈石灰化症、ハーレクイン魚鱗癬、遺伝性膵炎、妊娠性肝内胆汁鬱滞、葉状魚鱗癬、持続性新生児糖尿病、進行性家族性肝内胆汁鬱滞、弾性線維性仮性黄色腫、網膜色素変性、シトステロール血症、シュタルガルト病、サーファクタント機能不全、タンジール病、Ｘ連鎖副腎白質ジストロフィー、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、および運動失調からなる群から選択され得る。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、該修飾ポリリボヌクレオチドを有する対象の細胞において、ある期間、ポリペプチドの発現を提供し、前記期間は最大４週間であり、発現は、ポリペプチドをコードする非修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた対照細胞における発現と比較し、高い。期間は、少なくとも約３０秒、最大で５日とすることが可能である。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、ポリペプチドをコードするコドン配列に隣接する、３’または５’非コーディング領域を含み、該非コーディング領域は、細胞においてポリペプチドの発現を高めるのを助ける。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドを、ナノ粒子、ナノカプセル、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、ナノエマルジョンにおいて製剤化する。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、ウリジン類似体またはシチジン類似体を含む。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、５％〜５０％のウリジン類似体または５％〜５０％のシチジン類似体を含む。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、１５％〜３０％のウリジン類似体または１５％〜３０％のシチジン類似体を含む。一部の場合、ウリジン類似体は、プソイドウリジン、２−チオウリジン、５−ヨードウリジン、および５−メチルウリジンからなる群から選択される。一部の場合、シチジン類似体は、５−メチルシチジン、２’−アミノ−２’デオキシシチジン、２’−フルオロ−２’−デオキシシチジン、および５−ヨードシチジンからなる群から選択される。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、５−メチルシチジンまたはプソイドウリジンを含む。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、（ｉ）ウリジンおよびシチジン；ならびに（ｉｉ）ウリジンおよびシチジンの類似体を含む。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、アデノシン類似体またはグアノシン類似体を含む。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、（ｉ）アデノシンまたはグアノシン；および（ｉｉ）アデノシンまたはグアノシンの類似体を含む。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、５０％未満のアデノシンまたはグアノシンの類似体を含む。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、（ｉ）アデノシンおよびグアノシンならびに（ｉｉ）アデノシンおよびグアノシンの類似体を含む。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、修飾ポリリボヌクレオチドにさらされる細胞の８０％超のトランスフェクション効率を有する。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた末梢血単核細胞により発現される少なくとも１つの炎症マーカのレベルを実質的に変化させない。一部の場合、（ｉ）コドン配列は、欠陥もしくは欠乏が病気の存在に関連する遺伝子または断片であるか、または、（ｉｉ）ポリペプチドの欠如もしくは欠乏が病気の存在に関連する。例えば、ＡＢＣＡ３遺伝子の欠乏は、呼吸窮迫症候群の原因となり得る。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドは、ポリペプチドをコードする非修飾ポリリボヌクレオチドと比較し、対象の免疫反応を低下させ、該免疫反応は、修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた末梢血単核細胞により発現されるＴＮＦ−α、ＩＬ−２、およびＩＬ−８から選択される少なくとも１つの炎症マーカのレベルを、非修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた対照の末梢血単核細胞における少なくとも１つの炎症マーカのレベルと比較して判断される。
【０００５】
本開示の追加の態様および利点は、以下の詳細な記載により当業者にとって容易に明らかになろう。詳細な記載では、本開示の例示的な実施形態のみを示し、記載する。理解されるように、本開示は、他の異なる実施形態を可能とし、そのいくつかの詳細は、種々の明白な点において、全て本開示から離れることなく、変更が可能である。従って、図および明細書は限定的ではなく本質的に例示的なものとしてみなされるべきである。
【０００６】
〔参照による組み入れ〕
本明細書で言及する全ての刊行物、特許、および特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願が、参照により明確にかつ個々に組み込まれているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれるものとする。
【０００７】
本発明の新規の特徴を、添付の特許請求の範囲において特異性をもって記載する。本発明の特徴および利点のさらなる理解は、本発明の原理を利用する例示的な実施形態について記載する以下の詳細な説明および付随する図面を参照することにより得られるだろう。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本開示の改変ポリリボヌクレオチドのマウスへのエアロゾル投与の例を示す図である。
【図２】トランスフェクションの６時間後のＡ５４９細胞における、異なるＵＴＲを有するＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡの翻訳を示すウェスタンブロットの図である。
【図３】ＨＥＫ−２９３細胞における、種々のヌクレオチド修飾を含むｍＲＮＡからのＡＢＣＡ３タンパク質発現を示すウェスタンブロットの図である。
【図４】Ａ５４９細胞における、種々のヌクレオチド修飾を含むｍＲＮＡからのＡＢＣＡ３タンパク質発現を示すウェスタンブロットの図である。
【図５】ＭＬＥ−１５細胞における、種々のヌクレオチド修飾を含むｍＲＮＡからのＡＢＣＡ３タンパク質発現を示すウェスタンブロットの図である。
【図６】ＨＥＫ−２９３細胞、Ａ５４９細胞、およびＭＬＥ−１５細胞において、ｍＲＮＡトランスフェクションの６時間後にＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔ  ６により測定されたＡＢＣＡ３タンパク質発現レベルの比較を示す図である。
【図７】種々のヌクレオチド修飾を含むＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡからＡＢＣＡ３タンパク質を翻訳するＡ５４９細胞におけるＩＬ−６の誘発を示す図である。
【図８】種々のヌクレオチド修飾を含むＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡからＡＢＣＡ３タンパク質を翻訳するＨｅｐＧ２細胞におけるＩＰ−１０の誘発を示す図である。
【図９】種々の化学修飾を含むｍＲＮＡを用いたトランスフェクション後のＡ５４９細胞の細胞生存率を示す図である。
【図１０】種々の化学修飾を含むｍＲＮＡを用いたトランスフェクション後のＨＥＰ  Ｇ２細胞の細胞生存率を示す図である。
【図１１】種々の化学修飾を含むｍＲＮＡを用いたトランスフェクション後のＡ５４９細胞からＩＬ−６レベルを測定する、ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。
【図１２】種々の化学修飾を含むｍＲＮＡを用いたトランスフェクション後のＡ５４９細胞からＩＰ−１０レベルを測定する、ＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す図である。
【図１３】ｉｎ  ｖｉｔｒｏで肺細胞のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７から発現したＡＢＣＡ３ポリペプチドの翻訳の経時変化を示すウェスタンブロットの図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明の種々の実施形態を本明細書に示し、記載するが、このような実施形態は単なる例示として提供されることが当業者にとって明らかであろう。多数の変形、変化、および置き換えが、本発明から離れることなく当業者に想到され得る。本明細書に記載する本発明の実施形態の種々の代替案が利用できることを理解されたい。
【００１０】
用語「対象」は、本明細書で用いる場合、概してヒトを指す。一部の例では、対象は、また、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウサギ、および種々の他の動物などの動物とすることが可能である。対象は任意の年齢とすることが可能であり、例えば、対象は、幼児、小児、子供、青年期前、青年期、成人、または高齢者とすることが可能である。
【００１１】
用語「病気」は、本明細書で用いる場合、概して、対象の一部またはすべてに影響を与える正常でない生理学的状態を指し、例えば、疾病（例えば、喘息）またはがんである。
【００１２】
用語「がん」は、本明細書で用いる場合、概して、細胞の異常分裂により生じる任意の増殖を指す。がんは、異常細胞の分裂により生じる、悪性もしくは良性の増殖または腫瘍であり得る。がんは、血液がんまたは固形がんであり得る。がんは、対象の身体の任意の部分における、良性または悪性の、異常細胞の非制御の分裂である病気であり得る。包含されるがんの非限定的な例としては、乳がんおよび肺がんが挙げられる。肺がんの例は、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、および肺カルチノイド腫瘍である。乳がんの例としては、転移性乳がん、炎症性乳がん、トリプルネガティブ乳がん（プロゲステロン、エストロゲン、およびＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体が陰性）、浸潤性乳管がん、ならびに乳管内上皮内がんが挙げられる。
【００１３】
用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、本明細書で用いる場合、プリンおよびピリミジン塩基、化学的もしくは生化学的に修飾された、天然もしくは非天然の、または誘導体化されたヌクレオチド塩基を含む、任意の長さのポリマー形態のヌクレオチド、つまり、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドの何れかを指す。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、プリンおよび／またはピリミジンの類似体を含む。ポリヌクレオチドには、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、または、リボ核酸のＤＮＡ複製（ｃＤＮＡ）の配列が含まれ、これらは全て、自然発生源から、組み換え的に生成するか、人工的に合成するか、または単離して精製することが可能である。ポリヌクレオチドおよび核酸は、一本鎖または二本鎖として存在し得る。ポリヌクレオチドの骨格は、ＲＮＡもしくはＤＮＡで典型的に見られるように糖およびリン酸基を含み得るか、または、修飾もしくは置換された、糖もしくはリン酸基を含み得る。ポリヌクレオチドには、メチル化ヌクレオチドおよびヌクレオチド類似体（またはアナログ）などの、天然に存在するまたは天然に存在しないヌクレオチドを含む、修飾ヌクレオチドが含まれ得る。ヌクレオチドの配列に、非ヌクレオチド成分が割り込む場合がある。
【００１４】
用語「ポリリボヌクレオチド」は、本明細書で用いる場合、概して、非修飾および／または修飾リボヌクレオチドを含む、５０％超のリボース塩基を含有するポリヌクレオチドポリマーを指す。本用語は、また、非修飾および／または修飾リボヌクレオチドを含む、５０％超のリボース塩基を含有するようなリボ核酸を含むポリヌクレオチドポリマーを指す。本用語は、また、類似体など、化学的に修飾されたリボヌクレオチドを含むポリヌクレオチドポリマーを指す。ポリリボヌクレオチドは天然に存在するＤ−リボースおよび天然に存在しないＬ−リボースから形成され得る。
【００１５】
用語「ポリペプチド」は、本明細書で用いる場合、概して、アミド結合（ペプチド結合）を介して連結するアミノ酸残基モノマーを含むポリマー鎖を指す。アミノ酸は、Ｌ−光学異性体またはＤ−光学異性体であり得る。ポリペプチドは、少なくとも３つのアミノ酸、ペプチドミメティック、タンパク質、組み換えタンパク質、（単クローン性または多クローン性の）抗体、抗体断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、抗原、エピトープ、酵素、受容体、ビタミン、または構造類似体、またはその組み合わせの鎖であり得る。本明細書で用いる場合、ポリペプチドを形成するＬ−エナンチオマーアミノ酸およびＤ−エナンチオマーアミノ酸の略記は以下の通りである：アラニン（Ａ、Ａｌａ）；アルギニン（Ｒ、Ａｒｇ）；アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）；システイン（Ｃ、Ｃｙｓ）；グルタミン酸（Ｅ、Ｇｌｕ）；グルタミン（Ｑ、Ｇｌｎ）；グリシン（Ｇ、Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈ、Ｈｉｓ）；イソロイシン（Ｉ、Ｉｌｅ）；ロイシン（Ｌ、Ｌｅｕ）；リシン（Ｋ、Ｌｙｓ）；メチオニン（Ｍ、Ｍｅｔ）；フェニルアラニン（Ｆ、Ｐｈｅ）；プロリン（Ｐ、Ｐｒｏ）；セリン（Ｓ、Ｓｅｒ）；スレオニン（Ｔ、Ｔｈｒ）；トリプトファン（Ｗ、Ｔｒｐ）；チロシン（Ｙ、Ｔｙｒ）；バリン（Ｖ、Ｖａｌ）。ＸまたはＸａａは任意のアミノ酸を示すことが可能である。
【００１６】
用語「改変された」は、本明細書で用いる場合、概して、細胞内にポリヌクレオチドを提供するように遺伝子的に設計され、操作された、天然に存在しない遺伝子的に修飾されたポリヌクレオチド、ベクター、および核酸構成体を指す。一部の実施形態では、「改変された」は、細胞内にポリヌクレオチドを提供するように遺伝子的に設計され、操作された、ポリヌクレオチド、ベクター、および核酸構成体を指す。改変ポリヌクレオチドは、部分的にまたは完全に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成することが可能である。改変ポリヌクレオチドは、また、クローン化され得る。メッセンジャーＲＮＡには天然に存在しないリボヌクレオチドなどの改変ポリリボヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾された塩基もしくは塩基（複数）、または糖類似体を含有し得る。改変ポリリボヌクレオチドは、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）に存在する修飾ヌクレオチドもしくはヌクレオチドアナログ、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、核小体低分子ＲＮＡ（ｓｎｏＲＮＡ）、ＳｍＹＲＮＡ、スプライスリーダーＲＮＡ（ＳＬ  ＲＮＡ）、ＣＲＩＳＰＲ  ＲＮＡ、長鎖ノンコーディングＲＮＡ（ｌｎｃＲＮＡ）、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、または別の適切なＲＮＡを含有し得る。
【００１７】
概要
本開示は、タンパク質またはタンパク質断片をコードする安定的な核酸を用いて症状を処置するための組成物および方法を提供する。本開示は、また、サーファクタントの産生に関与する細胞内で翻訳され得るポリリボヌクレオチドを、対象に送達する方法を提供する。例えば、ＡＢＣＡ３遺伝子は、サーファクタントの産生に関与するたんぱく質を作る指示を提供する。サーファクタントは、ある脂肪（リン脂質を呼ばれる）とタンパク質の混合物であり得、これは、肺組織に整列し、対象の肺の膨張と伸縮および呼吸を容易にする。正常なサーファクタントがなければ、肺の気嚢（肺胞）を囲む組織が、息を吐いた後、（表面張力と呼ばれる力のせいで）互いに付着し、肺胞を崩壊させる。結果として、一呼吸ごとに肺を空気で満たすことが難しくなり得、身体への酸素の運搬が害され得る。これは、対象、例えば幼児などにおいて呼吸窮迫症候群を引き起こし得る。
【００１８】
ＡＢＣＡ３タンパク質は、典型的には、層状体を囲む膜に見られ、前記層状体は細胞構造体であり、ここにおいてサーファクタントを構成するリン脂質およびタンパク質がパッケージ化される。ＡＢＣＡ３タンパク質はリン脂質を層状体に輸送し、そこでリン脂質はサーファクタントタンパク質と相互作用してサーファクタントを形成し得る。ＡＢＣＡ３タンパク質は、また、正常な層状体の形成に関与すると見られる。パッケージ化に加え、層状体はサーファクタントタンパク質の正しい処理のために重要であり得、これは、タンパク質が成熟し、機能するようになるために必要である。本開示の改変ポリリボヌクレオチドは対象の細胞内に輸送され、翻訳されて、例えばサーファクタント産生の欠陥に関連する症状を処置するためのＡＢＣＡ３タンパク質、その機能性断片、または機能性相同体を産することが可能である。
【００１９】
一部の例では、改変ポリリボヌクレオチドは、表１に示す、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）および３’ＵＴＲＳいう遺伝子コードを含む。
【００２０】
【表１−１】
2018520155.tif 000002
【表１−２】
2018520155.tif 000003
【００２１】
改変ポリヌクレオチドは、ＡＢＣＡ３遺伝子のｍＲＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）、ＡＢＣＡ３のＤＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９）、５’ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有する天然ＡＢＣＡ３  ＤＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）、５’ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有する天然ＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）、５’ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有するコドン最適化ＡＢＣＡ３  ＤＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、または５’ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有するコドン最適化ＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）を含み得る。
【００２２】
一部の場合、改変ポリリボヌクレオチドは、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーの遺伝子配列の少なくとも一部を含む。ＡＴＰ結合カセットファミリーの遺伝子は、ＡＢＣＡ１、ＡＢＣＡ３、ＡＢＣＡ４、ＡＢＣＡ１２、ＡＢＣＢ４、ＡＢＣＢ７、ＡＢＣＢ１１、ＡＢＣＣ２、ＡＢＣＣ６、ＡＢＣＣ８、ＡＢＣＣ９、ＡＢＣＤ１、ＡＢＣＧ５、ＡＢＣＧ８、またはＣＦＴＲとすることができる。改変ポリリボヌクレオチドは、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーの遺伝子配列に対し、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の相同性を有する配列を含み得る。
【００２３】
改変ポリヌクレオチド
本開示は、１つまたは複数の対象のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドなどの核酸分子を提供する。用語核酸は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物および／または物質を含む。５０％超のリボース塩基または修飾リボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド類似体を含有するヌクレオチドポリマーを、ポリリボヌクレオチドという。改変ポリヌクレオチドの配列は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ転写物、ゲノムＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ、ミトコンドリアＲＮＡ、または、対象の遺伝子の遺伝情報を含む別の適切な核酸に由来し得る。核酸構成体、ベクター、改変ポリヌクレオチド、改変ポリリボヌクレオチド、または組成物は、変異遺伝子および遺伝子多型を有する核酸に由来し得る。
【００２４】
４つの古典的な／標準的なリボヌクレオチド、つまり、アデノシン、グアノシン、シチジン、およびウリジンに加え、いくつかの細胞ＲＮＡは、いくつかの構造的に異なったリボヌクレオチドを含有する。約１００個の構造的に異なるヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、またはヌクレオチド類似体が、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、および核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）において特定されている。ｔＲＮＡでは、いくつかのヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドが、アミノアシル化およびコドン認識の特異性および効率性の重要な決定要素であり得る。このような構造的に異なるリボヌクレオチドは、修飾リボヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体であり得る。一部の場合、修飾リボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド類似体を含むように本開示のポリヌクレオチドを改変する。
【００２５】
本開示のポリヌクレオチドを形成し得る例示的な核酸としては、限定するわけではないが、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、またはその複合型が挙げられる。本開示のポリヌクレオチドの少なくとも断片を形成し得る例示的な修飾ヌクレオチドとしては、限定するわけではないが、プソイドウリジン（Ψ）、５−ヨードウリジン（Ｉ５Ｕ）、５−ヨードシチジン（Ｉ５Ｃ）、２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）、５−メチルシチジン（ｍ５Ｃ）が挙げられる。
【００２６】
化学修飾などの修飾は、１つまたは複数のヌクレオシドまたは核酸分子骨格に位置し得る。修飾は、ヌクレオシドと骨格結合の両方に位置し得る。修飾は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでポリヌクレオチドに導入され得る。修飾リボヌクレオチドおよび核酸類似体は、また、古典的リボヌクレオチドの共有結合性修飾により、転写後に合成され得る。
【００２７】
本開示の改変ポリリボヌクレオチドは、修飾プリンおよび修飾ピリミジン、またはプリン類似体およびピリミジン類似体を含み得る。一部の場合、本開示のポリリボヌクレオチドは、修飾ウリジンおよび／または修飾シチジンなどの、修飾ピリミジンを含む。一部の場合、修飾ウリジンまたはウリジン類似体は、プソイドウリジン（Ψ）、２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）、５−メチルシチジン（ｍ５Ｃ）、５−メチルシチジン（ｍ５Ｃ）、５−ヨードウリジン（Ｉ５Ｕ）、４−チオウリジン（ｓ４Ｕ）、５−ブロモウリジン（Ｂｒ５Ｕ）、２’Ｏ−メチルウリジン（Ｕ２’ｍ）、２’−アミノ−２’−デオキシウリジン（Ｕ２’ＮＨ２）、２’−アジド−２’−デオキシウリジン（Ｕ２’Ｎ３）、および２’−フルオロ−２’−デオキシウリジン（Ｕ２’Ｆ）から選択される。一部の場合、修飾シチジンは、５−メチルシチジン（ｍ５Ｃ）、３−メチルシチジン（ｍ３Ｃ）、２−チオシチジン（ｓ２Ｃ）、２’−Ｏ−メチルシチジン＋（Ｃ２’ｍ）、２’−アミノ−２’−デオキシシチジン（Ｃ２’ＮＨ２）、２’−フルオロ−２’−デオキシシチジン（Ｃ２’Ｆ）、５−ヨードシチジン（Ｉ５Ｃ）、５−ブロモシチジン５’−トリホスフェート（Ｂｒ５Ｃ）、および２’−アジド−２’−デオキシシチジン５’−トリホスフェート（Ｃ２’Ｎ３）から選択される。類似体に言及する場合、前記（または下記の表に列挙した類似体）は、５’トリホスフェート形態の類似体も指すことに注意されたい。
【００２８】
一部の場合、改変ポリリボヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾リボヌクレオチドを含む。一部の場合、修飾リボヌクレオチドは、非修飾（または未修飾）リボヌクレオチドと比較し、対象において少なくとも２５％、より安定している。一部の場合、修飾ヌクレオチドは、非修飾リボヌクレオチドと比較し、対象において、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％、より安定させることが可能である。
【００２９】
ポリリボヌクレオチドは、同じ形態で修飾されたヌクレオチドか、さもなければ、異なる修飾ヌクレオチドの混合物を有し得る。修飾ヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡにおいて天然に存在するまたは天然に存在しない修飾を有し得る。種々の修飾ヌクレオチドの混合物を用いることが可能である。例えば、ポリヌクレオチド内の１つまたは複数の修飾ヌクレオチドが天然修飾を有し得る一方、別の部分は、ｍＲＮＡで天然には見られない修飾を有する。一部の場合、ＲＮＡの安定性は、修飾ポリリボヌクレオチド内の修飾塩基の性質を変えることにより、選択的に最適化することが可能である。
【００３０】
ポリヌクレオチドの安定性または免疫原性に対し影響を及ぼすウリジン修飾の非限定的例を、表２に示す。
【００３１】
【表２】
2018520155.tif 000004
【００３２】
ポリヌクレオチドの安定性または免疫原性に対し影響を及ぼすシチジン修飾の非限定的例を、表３に示す。
【００３３】
【表３】
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【００３４】
ポリヌクレオチドの安定性または免疫原性に対し影響を及ぼすアデノシン修飾の非限定的例を、表４に示す。
【００３５】
【表４】
2018520155.tif 000006
【００３６】
ポリヌクレオチドの安定性または免疫原性に対し影響を及ぼすグアノシン修飾の非限定的例を、表５に示す。
【００３７】
【表５】
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【００３８】
修飾ヌクレオチドは、ピリジン−４−１リボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、５−ヒドロキシウリジン、3−メチルウリジン、５−カルボキシメチル−ウリジン、１−カルボキシメチル−プソイドウリジン、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−プソイドウリジン、５−タウリノメチルウリジン、１−タウリノメチル−プソイドウリジン、５−タウリノメチル−2−チオ−ウリジン、1−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−l−メチル−プソイドウリジン, 1−メチル−l−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−シチジン、プソイドイソシチジン、３−メチル−シチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、１−メチル−プソイドイソシチジン、ピロール−シチジン、ピロール−プソイドイソシチジン、２−チオ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−プソイドイソシチジン、４−チオ−l−メチル−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−プソイドイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−プソイドイソシチジン、２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−イソペンチルアデノシン、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンチル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンチル）アデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−メチルアデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、イノシン、１−メチル−イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチルイノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、およびＮ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシンを含む群から選択され得る。
【００３９】
一部の場合、改変ポリリボヌクレオチドの少なくとも約５％が、本明細書に記載の修飾ヌクレオチドのように、天然に存在しない（例えば、修飾されたまたは改変された）ウラシル、アデニン、グアニン、またはシトシンを含む。一部の場合、改変ポリリボヌクレオチドの少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％が、天然に存在しないウラシル、アデニン、グアニン、またはシトシンを含む。一部の場合、改変ポリヌクレオチドの多くて約９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、１％が、天然に存在しないウラシル、アデニン、グアニン、またはシトシンを含む。
【００４０】
本開示の改変ポリリボヌクレオチドは、１つまたは複数のプロモータ配列と、任意の関連する制御配列を含み得る。プロモータ配列および／または関連制御配列は、任意の数の修飾または未修飾のヌクレオチドを含み得る。プロモータ配列および／または任意の関連制御配列は、例えば、少なくとも１５０個の塩基もしくは塩基対、少なくとも２００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも３００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも４００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも５００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも６００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも７００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも８００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも９００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも１０００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも２０００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも３０００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも４０００個の塩基もしくは塩基対、少なくとも５０００個の塩基もしくは塩基対、または少なくとも１００００個の塩基もしくは塩基対を含み得る。プロモータ配列および／または任意の関連制御配列は、任意の数の修飾または未修飾のヌクレオチドを、例えば、多くて１００００個の塩基もしくは塩基対、５０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、または１００個の塩基もしくは塩基対を含み得る。
【００４１】
一部の場合、プロモータ配列または関連制御領域のヌクレオチドを部分的に修飾する。例えば、一部の場合、プロモータまたは関連制御領域において、ヌクレオチドの９９％以下、９５％以下、９０％以下、８５％以下、８０％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下、６０％以下、５５％以下、５０％以下、４５％以下、４０％以下、３５％以下、３０％以下、２５％以下、２０％以下、１５％以下、１０％以下、または５％以下を修飾する。一部の場合、プロモータまたは関連制御領域のヌクレオチドの全てを修飾する。
【００４２】
本開示の改変ポリリボヌクレオチドは、改変５’キャップを含み得るか、または、５’キャップをポリリボヌクレオチドに細胞内付加することが可能である。ｍＲＮＡの５’キャップ構造はｍＲＮＡキャップ結合タンパク質（ＣＢＰ）との結合に関与し得、これは、成熟環状ｍＲＮＡ種を形成するポリ（Ａ）結合タンパク質とＣＢＰの会合を介して、細胞におけるｍＲＮＡ安定性および翻訳能力に関わっている。５’キャップ構造は、また、核外輸送に関わり、ｍＲＮＡの安定性を向上させ、ｍＲＮＡスプライシング時に５’近位イントロンの除去を補助し得る。
【００４３】
改変ポリリボヌクレオチドの５−末端はキャップ化することが可能であり、これにより、末端グアノシンキャップ残基とｍＲＮＡ分子の５−末端が転写されたセンスヌクレオチドの間に５−ｐｐｐ−５’−トリホスフェート結合が生じる。キャップ構造には、５’−５’トリホスフェート架橋を介して第１ヌクレオチドに結合した、修飾または未修飾の７−メチルグアノシンが含まれ得る。この５−グアニル酸キャップは、次に、メチル化されて、Ｎ７−メチル−グアニル酸残基を生成することが可能である。ｍＲＮＡの５’末端の末端および／または末端前の転写ヌクレオチドのリボース糖も、オプションとして、２’−Ｏ−メチル化され得る。グアニル酸キャップ構造の加水分解および切断を介した５’−キャップ除去は、ｍＲＮＡ分子などの核酸分子を分解のために標的にすることができる。
【００４４】
一部の場合、キャップは、ｍＲＮＡの５’末端の最初の２つのリボース糖の２’ヒドロキシ基のメチル化など、さらなる修飾を含み得る。例えば、真核キャップ−１は、メチル化２’−ヒドロキシ基を最初のリボース糖に有する一方、キャップ−２は、メチル化２’−ヒドロキシ基を最初の２つのリボース糖に有する。このような二重修飾は、５’エキソヌクレアーゼに対するかなりの抵抗性を提供し得る。改変ポリリボヌクレオチドと共に用いることが可能な５’キャップ構造の非限定的例としては、限定するわけではないが、ｍ７Ｇ(５’)ｐｐｐ（５’）Ｎ（キャップ−０）、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ１ｍｐＮｐ（キャップ−１）、および７ｍＧ（５’）−ｐｐｐ（５’）Ｎ１ｍｐＮ２ｍｐ（キャップ−２）が挙げられる。
【００４５】
本開示の修飾ｍＲＮＡに対する修飾は、キャップ除去を防ぐ非加水分解性キャップ構造を生じさせ、そのため、ｍＲＮＡの半減期を伸ばすことができる。キャップ構造の加水分解は、５’−ｐｐｐ―５’ホスホロジエステル結合の切断を要することから、修飾ヌクレオチドをキャップ化反応中に用いることができる。例えば、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ（マサチューセッツ州、イプスウィッチ）のワクチニアキャッピング酵素（Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｃａｐｐｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ）を、製造業者の指示に従ってチオ−グアノシンヌクレオチドと共に用いて、５’−ｐｐｐ−５’キャップにホスホロチオエート結合を作成することができる。メチル−ホスホナートヌクレオチドおよびセレノ−ホスホナートヌクレオチドなどの追加の修飾グアノシンヌクレオチドを用いることができる。追加の修飾としては、限定するわけではないが、糖環の２’−ヒドロキシル基におけるｍＲＮＡの５’−末端および／または５’−末端前ヌクレオチドのリボース糖の２’−Ｏ−メチル化が挙げられる。多数の別個の５’−キャップ構造を用いて、ポリリボヌクレオチドの５’−キャップを生成することが可能である。
【００４６】
修飾ｍＲＮＡは、転写後にキャップ化することができる。本開示によると、５’末端キャップは、内因性キャップまたはキャップ類似体を含み得る。本開示によると、５’末端キャップは、グアニン類似体を含み得る。有用なグアニン類似体としては、限定するわけではないが、イノシン、Ｎｌ−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、および２−アジド−グアノシンが挙げられる。
【００４７】
さらに、改変ポリリボヌクレオチドは、１つまたは複数のリボソーム内部侵入部位（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｉｂｏｓｏｍｅ  ｅｎｔｒｙ  ｓｉｔｅ（ｓ）（ＩＲＥＳ））を含有し得る。ＩＲＥＳ配列は、５’キャップ構造なしにタンパク質合成を開始することが可能である。ＩＲＥＳ配列は、また、唯一のリボソーム結合部位であるか、または、ＩＲＥＳ配列は、ｍＲＮＡの多数のリボソーム結合部位の１つとして機能し得る。２つ以上の機能性リボソーム結合部位を含有する改変ポリリボヌクレオチドは、リボソームにより翻訳されるいくつかのペプチドまたはポリペプチドをコードし得る（「多シストロン性またはマルチシストロン性ポリペプチド」）。本明細書に記載の改変ポリヌクレオチドは、少なくとも１個のＩＲＥＳ配列、２個のＩＲＥＳ配列、３個のＩＲＥＳ配列、４個のＩＲＥＳ配列、５個のＩＲＥＳ配列、６個のＩＲＥＳ配列、７個のＩＲＥＳ配列、８個のＩＲＥＳ配列、９個のＩＲＥＳ配列、１０個のＩＲＥＳ配列を含み得るか、または別の適切な数が改変ポリリボヌクレオチドに存在する。本開示に従い用いることが可能なＩＲＥＳ配列の例としては、限定するわけではないが、ピコルナウイルス（例えば、ＦＭＤＶ）、ペストウイルス（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、C型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ブタコレラウイルス（ＣＳＦＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、またはコオロギ麻痺ウイルス（ＣｒＰＶ）由来のものが挙げられる。ＩＲＥＳ配列は、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（商標）、ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ（商標）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（商標）から入手可能なＩＲＥＳ配列など、商業的に入手可能なベクターに由来し得る。ＩＲＥＳ配列は、例えば、少なくとも、１５０個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、５０００個の塩基もしくは塩基対、または１００００個の塩基もしくは塩基対であり得る。ＩＲＥＳ配列は、多くて、１００００個の塩基もしくは塩基対、５０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、１００個の塩基もしくは塩基対、５０個の塩基もしくは塩基対、または１０個の塩基もしくは塩基対であり得る。
【００４８】
本開示の改変ポリリボヌクレオチドは、１つまたは複数の非翻訳領域を含み得る。非翻訳は、任意の数の修飾または未修飾のヌクレオチドを含み得る。遺伝子の非翻訳領域（ＵＴＲ）は転写されるが、ポリペプチドに翻訳されない。一部の場合、非翻訳配列は、核酸分子の安定性および翻訳の効率性を高めることが可能である。ＵＴＲの制御特徴は、本開示の修飾ｍＲＮＡ分子に組み込まれて、例えば、分子の安定性を高めることが可能である。特異的な特徴は、また、組み込まれて、不所望の臓器部位に誤って導かれた場合に転写物のダウンレギュレーションを確実に制御することが可能である。いくつかの５’ＵＴＲは、翻訳開始に関与する。５’ＵＴＲは、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与するＫｏｚａｋ配列を含み得る。Ｋｏｚａｋ配列は、コンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧを有し得、ここで、Ｒは開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流に位置するプリン（アデニンまたはグアニン）である。５’ＵＴＲは、翻訳延長因子の結合に関与する第２構造を形成し得る。一部の場合、特異的な標的臓器で豊富に発現する遺伝子に典型的に見られる特徴を改変することにより、本開示の改変ポリヌクレオチド分子の安定性およびタンパク質生成を高めることが可能である。例えば、肝臓発現ｍＲＮＡ、例えば、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、アルファフェトプロテイン、エリスロポエチン、または第ＶＩＩＩ因子の５‘ＵＴＲの導入を用いて、肝臓において改変ポリヌクレオチドの発現を増大させることが可能である。同様に、内皮細胞（Ｔｉｅ―１、ＣＤ３６）、骨髄性細胞（Ｃ／ＥＢＰ、ＡＭＬ１、Ｇ―ＣＳＦ、ＧＭ―ＣＳＦ、ＣＤ１  ｌｂ、ＭＳＲ、Ｆｒ−１、ｉ―ＮＯＳ）、白血球細胞（ＣＤ４５、ＣＤ１８）、脂肪組織（ＣＤ３６、ＧＬＵＴ４、ＡＣＲＰ３０、アディポネクチン）、および肺上皮細胞（ＳＰ−Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｄ）に対し、筋タンパク質（ＭｙｏＤ、ミオシン、ミオグロビン、Ｍｙｏｇｅｎｉｎ、Ｈｅｒｃｕｌｉｎ）由来の５’ＵＴＲを用いて、所望の細胞または組織において改変ポリヌクレオチドの発現を増大させることが可能である。一部の場合、本開示のＵＴＲは、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）、α−グロビン遺伝子、または、ＡＢＣＡ３遺伝子などのＡＴＰ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリー遺伝子の配列に由来し得る。
【００４９】
したがって、好適な実施形態では、本発明の修飾ポリリボヌクレオチドを含む組成物は、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）の配列に由来する１つまたは複数の非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。より好適な実施形態では、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）の配列に由来する１つまたは複数の非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む修飾ポリリボヌクレオチドを含む組成物は、本明細書の上記および以下に記載するようにＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーの遺伝子をコードする、組成物である。
【００５０】
以下において、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）の配列に由来する非翻訳領域（ＵＴＲ）の好適な実施形態について記載する。上記表１において、ヒトＣＹＢＡ遺伝子５’−および３’ＵＴＲを表すＤＮＡ配列を、それぞれＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１およびＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２と示す。
【００５１】
本発明が、主に、ＲＮＡ分子（つまり、本発明の観点からいえば修飾ポリリボヌクレオチド分子）に関するという事実に照らし、以下で前記ＵＴＲの対応ＲＮＡ配列について言及する。
【００５２】
上記ＤＮＡ配列に由来して、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１は、ＲＮＡレベルでは以下のＵＴＲ配列に対応する：
５’−ＣＧＣＧＣＣＵＡＧＣＡＧＵＧＵＣＣＣＡＧＣＣＧＧＧＵＵＣＧＵＧＵＣＧＣＣ−３’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４）。
【００５３】
この５’ＵＴＲ配列は、ヒトＣＹＢＡ遺伝子の開始コドンのすぐ前にある。
【００５４】
上記ＤＮＡ配列に由来して、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２は、ＲＮＡレベルでは以下のＵＴＲ配列に対応する：
５’−ＣＣＵＣＧＣＣＣＣＧＧＡＣＣＵＧＣＣＣＵＣＣＣＧＣＣＡＧＧＵＧＣＡＣＣＣＡＣＣＵＧＣＡＡＵＡＡＡＵＧＣＡＧＣＧＡＡＧＣＣＧＧＧＡ−３’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５）。
【００５５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．５は、ＲＮＡレベルでは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に記載された配列に対応する。
【００５６】
本発明に従い用いる場合、用語「非翻訳領域」または「ＵＴＲ」は、翻訳されない開始コドンの上流および終止コドン下流のｍＲＮＡ部分に関し、そのため、それぞれ、５プライム非翻訳領域（５’ＵＴＲ）および３プライム非翻訳領域（３’ＵＴＲ）という。これらの領域はコーディング領域と共に転写され、したがって、該領域は成熟ｍＲＮＡに存在する場合、エキソンである。
【００５７】
本発明で用いる場合、３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）は、翻訳終止コドンのすぐ後に続くメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）部分に関する。ｍＲＮＡ分子は、ＤＮＡ配列から転写され、その後、タンパク質に翻訳される。５’キャップ、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、およびｐｏｌｙ−Ａテールを含むｍＲＮＡ分子のいくつかの領域は、タンパク質に翻訳されない。
【００５８】
本発明で用いる場合、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）（リーダー配列またはリーダーＲＮＡとしても知られる）は、開始コドンのすぐ上流にあるｍＲＮＡ領域である。５’ＵＴＲは転写開始部位で始まり、コーディング領域の開始コドン（通常、ＡＵＧ）の１ヌクレオチド（ｎｔ）前で終わる。原核生物では、５’ＵＴＲの長さは、３〜１０ヌクレオチド長である傾向にある一方、真核生物では、５’ＵＴＲはより長く、概して１００〜数千ヌクレオチド長である傾向にあるが、より短いＵＴＲが真核生物に生じる場合もある。
【００５９】
本発明で用いる場合、３’ＵＴＲは、３’−非翻訳領域内に制御領域を含み得、これは、ｍＲＮＡのポリアデニル化および安定性に影響を与えることが知られている。多くの３’−ＵＴＲは、また、ＡＵ−ｒｉｃｈ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ（ＡＲＥ）を含有する。さらに、３’−ＵＴＲは、配列ＡＡＵＡＡＡを含有し、これは、ｐｏｌｙ（Ａ）テールと呼ばれる数百のアデニン残基をｍＲＮＡ転写物の末端に付加することを指示する。
【００６０】
したがって、本発明に従って用いるＲＮＡ分子は、また、ｐｏｌｙ−Ａテールを含有し得る。ｐｏｌｙ−Ａテールは、ポリアデニル化と呼ばれるプロセスにより、ｐｒｅ−ｍＲＮＡの３’末端に付加された（しばしば数百の）アデニンヌクレオチドの長配列である。このテールは、核外輸送および翻訳を促進し、ｍＲＮＡを分解から守る。ポリアデニル化は、ｐｏｌｙ（Ａ）テールをメッセンジャーＲＮＡへ付加することである。ｐｏｌｙ（Ａ）テールは、多数のアデノシン一リン酸からなり；言い換えると、ｐｏｌｙ（Ａ）テールは、アデニン塩基のみを有するＲＮＡの広がりである。真核生物では、ポリアデニル化は、翻訳用の成熟メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を生成するプロセスの一部である。本明細書で用いる場合、ｐｏｌｙ−Ａテールは、ＲＮＡの３’末端に位置するアデニンヌクレオチドの配列に関する。ｐｏｌｙ−Ａテールは、通常、ポリアデニル化と呼ばれるプロセスによりＲＮＡの３’末端に付加される。したがって、本発明は上記ＲＮＡの何れかに関し、該ＲＮＡ分子は、３’末端にｐｏｌｙ−Ａテールを含む。
【００６１】
ｐｏｌｙ−Ａテールの長さは、特に限定しない。しかし、好適な実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、３’末端にｐｏｌｙ−Ａテールを含み、該ｐｏｌｙ−Ａテールの長さは、少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、１００、または１１０ヌクレオチドである。より好適な実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、３’末端にｐｏｌｙ−Ａテールを含み、該ｐｏｌｙ−Ａテールの長さは、少なくとも１２０ヌクレオチドである。他の好適な実施形態では、本発明のＲＮＡ分子は、３’末端にｐｏｌｙ−Ａテールを含み、該ｐｏｌｙ−Ａテールの長さは、少なくとも１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００ヌクレオチドである。
【００６２】
好適な実施形態では、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）の配列に由来する１つまたは複数の非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む本発明の修飾ポリリボヌクレオチド／ＲＮＡ分子を含む組成物は、前記１つまたは複数のＵＴＲがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較し１〜４個の置換を示し、その結果、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかまたはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む、組成物である。
【００６３】
本文脈における「１つまたは複数の」は、ＲＮＡ分子が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較し１〜４個の置換を示し、その結果、本発明のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかまたはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む、１つのＵＴＲを含み得ることを意味する。ＲＮＡ分子は、また、本発明のＵＴＲを２つ、３つ、または４つ含み得る。あるいは、ＲＮＡ分子は、また、本発明のこれらのＵＴＲを、５つまたはそれ以上を含み得る。
【００６４】
別の好適な実施形態では、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）の配列に由来する１つまたは複数の非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む本発明の修飾ポリリボヌクレオチド／ＲＮＡ分子を含む組成物は、前記１つまたは複数のＵＴＲがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１〜７個の置換を示し、その結果、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかまたはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む、組成物である。
【００６５】
本文脈における「１つまたは複数の」は、ＲＮＡ分子が、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１〜７個の置換を示し、その結果、本発明のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかまたはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む、１つのＵＴＲを含み得ることを意味する。ＲＮＡ分子は、また、本発明のＵＴＲを２つ、３つ、または４つ含み得る。あるいは、ＲＮＡ分子は、また、本発明のこれらのＵＴＲを、５つまたはそれ以上を含み得る。
【００６６】
しかしながら、本発明で用いるチトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド遺伝子に由来するＵＴＲは、上記のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４の特異的配列に特に限定されるわけではなく、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較し１〜４個の置換を示す配列を含むＵＴＲ配列とすることができる。あるいは、ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較し１〜３個の置換を示す配列を含む配列とすることができる。ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較し１〜２個の置換を示す配列を含む配列とすることができる。最も好適には、ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較し１個の置換を示す配列を含む配列とすることができる。
【００６７】
好適には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較した上記ヌクレオチド置換の位置は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４配列の位置３２において行われる。好適には、この位置のヌクレオチド「Ｕ」は、「Ｃ」によって置換される。この置換は、脊椎動物のＫｏｚａｋコンセンサス配列により近い、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に（部分的に）存在するＣＹＢＡのＫｏｚａｋエレメントをもたらすことから、好適である。脊椎動物のＫｏｚａｋコンセンサス配列は、ＧＣＣＲＣＣＡＵＧＧ（開始コドンに下線を引く一方、「Ｒ」は任意のプリンを示す）という配列を有する一方、ＣＹＢＡのＫｏｚａｃエレメントは、ＧｕＣＧＣＣＡＵＧＧ（開始コドンには下線を引く一方、脊椎動物コンセンサス配列からの逸脱は、小文字「ｕ」で示す）という配列を有する。
【００６８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較して上記置換を１つまたは複数有するＵＴＲ配列は、結果として、翻訳効率の点で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じまたは同様の機能の、好適には、翻訳効率の点で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子より機能の高いＲＮＡ分子をもたらし得る。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と翻訳効率の点で比較した所与の修飾ＵＴＲ配列の翻訳効率に関する特性／機能は、当技術分野で既知の方法により、添付の例で概説するように当業者によって決定され得る。
【００６９】
翻訳効率とは、細胞内でのポリペプチドまたはタンパク質へのｍＲＮＡ翻訳の速度である。所与のｍＲＮＡの翻訳効率は、時間単位当たりでｍＲＮＡごとに翻訳されるタンパク質またはポリペプチドの数として測定される。翻訳は、細胞リボソームがタンパク質を作成するプロセスであり、これは当業者に周知である。簡潔に言えば、翻訳では、ＤＮＡから転写により生成されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、リボソームによりデコードされて、特異的なアミノ酸鎖またはポリペプチドもしくはタンパク質を生成する。
【００７０】
したがって、修飾ＵＴＲ配列を含む本発明の所与のＲＮＡ分子の翻訳効率は、好適には、同じ所与のＲＮＡだがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のＵＴＲを含むＲＮＡの翻訳効率と比較し、より高い。したがって、単位時間当たりでＲＮＡごとに翻訳される、修飾ＵＴＲ配列を含むＲＮＡ分子のＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーの遺伝子によりコードされたタンパク質またはポリペプチドの数は、単位時間当たりでＲＮＡごとに翻訳される、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のＵＴＲを含むＲＮＡ分子のＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーの遺伝子によりコードされるタンパク質またはポリペプチドの数よりも大きい。
【００７１】
修飾ＵＴＲ配列を含む所与のＲＮＡ分子の翻訳効率が、同じ所与のＲＮＡだがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のＵＴＲを含むＲＮＡの翻訳効率と比較し、同様かまたは同じである場合、単位時間当たりでＲＮＡごとに翻訳される、修飾ＵＴＲ配列を含むＲＮＡ分子のＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーの遺伝子によりコードされたタンパク質またはポリペプチドの数は、単位時間当たりでＲＮＡごとに翻訳される、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のＵＴＲを含むＲＮＡ分子のＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーの遺伝子によりコードされたタンパク質またはポリペプチドの数と同様かまたは同じである。「翻訳効率」は、例えば、添付の例に記載する方法により、以下で概説するように求めることが可能である。
【００７２】
本発明の文脈では、翻訳効率は、ある時点で細胞において個々のタンパク質をコードするｍＲＮＡの量に対して、同時点で前記細胞内でタンパク質に翻訳されたｍＲＮＡの割合である。したがって、翻訳効率は、ある時点で細胞内でタンパク質に翻訳されたｍＲＮＡと、個々のタンパク質をコードするｍＲＮＡの量の商である。両パラメータ、つまり、タンパク質に翻訳されたｍＲＮＡと個々のタンパク質をコードするｍＲＮＡの量は、当技術分野で既知の方法により求めることが可能である。添付の例で行ったように、非限定的例として、細胞内でタンパク質に翻訳されたｍＲＮＡの量は、例えば、フローサイトメトリー（ＦＣ）により求めることが可能である一方、個々のタンパク質をコードするｍＲＮＡの量は、例えば、ｑＰＣＲにより測定することが可能である。
【００７３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１４に示される配列、またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較して１〜４個の置換を示し、その結果、本発明で用いるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含むＵＴＲは、上記特異的配列および上記置換に特に限定されるわけではなく、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較し、ヌクレオチド付加を示す配列を含むＵＴＲ配列にも関連し得る。ヌクレオチドの付加は隣接し得る。したがって、付加ヌクレオチドは、本発明のＵＴＲの３’−末端または５’−末端に付加され得る。付加ヌクレオチドは、最大０個（変化なし）、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個のヌクレオチドの、好適には、最大２０個のヌクレオチド、さらにより好適には最大３０個のヌクレオチドのポリヌクレオチド鎖を含む。ヌクレオチドの付加は本発明のＵＴＲの上記機能的特徴を変える可能性はないという理由から、ヌクレオチドの付加の長さは、最大４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、もしくは１００個のヌクレオチドか、またはさらに多く、最大２００個、３００個、４００個、もしくは５００個のヌクレオチドとすることができる。ただし、これらの配列が、上記で定義したように、（上記の翻訳効率の点で）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と同様の機能を有する、好適にはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４より高い翻訳効率を有する場合に限る。
【００７４】
あるいは、または、これらのヌクレオチド隣接付加に加え、ヌクレオチドの付加を所々に交えることが可能である。したがって、付加ヌクレオチドは、本発明のＵＴＲのヌクレオチド配列内に付加／挿入され得る。これらのヌクレオチド挿入は、１個、２個、または３個のヌクレオチドを含む。ただし、これらの配列が、上記で定義したように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と（上記の翻訳効率の点で）同様の機能を有する、好適には、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４より高い翻訳効率を有する場合に限る。
【００７５】
本発明で用いる場合、ＵＴＲは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４の上記特異的配列およびその修飾物に特に限定されるわけではない。むしろ、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４の特異的配列およびその修飾物は、ＣＹＢＡ５’コア領域を定義するのみである。したがって、好適な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示されるＵＴＲは、少なくとも１ヌクレオチド分、５’末端において（つまり、上流に）伸長する。別の好適な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示されるＵＴＲは、１〜２０ヌクレオチド分、５’末端において（つまり、上流に）伸長する。つまり、好適な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４の配列は、５’末端において（つまり、上流に）２０ヌクレオチド分、伸長する。他の好適な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４の配列は、５’末端において（つまり、上流に）１８、１５、１３、１０、７、または５ヌクレオチド分、伸長する。他の好適な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４は、５’末端において（つまり、上流に）４、５、または２ヌクレオチド分、伸長する。他の好適な実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４の配列は、５’末端において（つまり、上流に）１ヌクレオチド分、伸長する。
【００７６】
５’末端において（つまり上流に）伸長するたこれらのＵＴＲ配列は、また、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４について本明細書で上記で定義したように、修飾することができる。したがって、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４のＵＴＲの文脈において上記したように、上記で定義した５’末端で伸長するＵＴＲについても、必要に応じて変更を加えて、同様のことが言える。
【００７７】
さらに、本発明で用いるＵＴＲは、また、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５の上記特異的配列に特に限定されるわけではなく、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し、１〜７個の置換を示す配列を含むＵＴＲ配列とすることもできる。あるいは、ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１〜６個の置換を示す配列を含む配列とすることもできる。ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１〜５個の置換を示す配列を含む配列とすることもできる。ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１〜４個の置換を示す配列を含む配列とすることもできる。ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１〜３個の置換を示す配列を含む配列であってもよい。ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１〜２個の置換を示す配列を含む配列とすることもできる。ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１〜３個の置換を示す配列を含む配列とすることもできる。最も好適には、ＵＴＲ配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１個の置換を示す配列を含む配列とすることができる。
【００７８】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し１つまたは複数の上記置換を有するＵＴＲ配列は、結果として、翻訳効率の点で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じまたは同様の機能の、好適には、翻訳効率の点で、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子より機能の高いＲＮＡ分子をもたらし得る。ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と、翻訳効率の点で比較した所与の修飾ＵＴＲ配列の翻訳効率に関する特性／機能は、当技術分野で既知の方法により、添付の例で概説するように、当業者によって決定され得る。
【００７９】
翻訳効率とは、細胞内でのポリペプチドまたはタンパク質へのｍＲＮＡ翻訳の速度である。所与のｍＲＮＡの翻訳効率は、時間単位当たりｍＲＮＡごとに翻訳されるタンパク質またはポリペプチドの数として測定される。翻訳は、細胞リボソームがタンパク質を作成するプロセスであり、これは当業者に周知である。簡潔に言えば、翻訳では、ＤＮＡから転写により生成されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、リボソームによりデコードされて、特異的なアミノ酸鎖またはポリペプチドもしくはタンパク質を生成する。
【００８０】
したがって、修飾ＵＴＲ配列を含む所与のＲＮＡ分子の翻訳効率は、好適には、同じ所与のＲＮＡだがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のＵＴＲを含むＲＮＡの翻訳効率と比較し、より高い。したがって、単位時間当たりでＲＮＡごとに翻訳される、修飾ＵＴＲ配列を含むＲＮＡ分子のＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーの遺伝子によりコードされるタンパク質またはポリペプチドの数は、単位時間当たりでＲＮＡごとに翻訳される、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のＵＴＲを含むＲＮＡ分子のコーディング領域によりコードされるタンパク質またはポリペプチドの数よりも大きい。
【００８１】
修飾ＵＴＲ配列を含む所与のＲＮＡ分子の翻訳効率が、同じ所与のＲＮＡだがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のＵＴＲを含むＲＮＡの翻訳効率と比較し、同様かまたは同じである場合、単位時間当たりでＲＮＡごとに翻訳される、修飾ＵＴＲ配列を含むＲＮＡ分子のコーディング領域によりコードされたタンパク質またはポリペプチドの数は、単位時間当たりでＲＮＡごとに翻訳される、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５のＵＴＲを含むＲＮＡ分子のＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーの遺伝子によりコードされたタンパク質またはポリペプチドの数と同様かまたは同じである。
【００８２】
「翻訳効率」は、例えば、添付の例に記載する方法により、上記で概説するように求めることが可能である。
【００８３】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示すような配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較して１〜７個の置換を示し、その結果、本発明で用いるＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含むＵＴＲは、上記特異的配列および上記置換に特に限定されるわけではなく、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較し、ヌクレオチド付加を示す配列を含むＵＴＲ配列にも関連し得る。ヌクレオチドの付加は、隣接しているか、または、所々に置かれ得る。したがって、付加ヌクレオチドは、本発明のＵＴＲの３’−末端または５’−末端に付加され得る。代わりに、またはこれらの隣接付加ヌクレオチドに加えて、付加ヌクレオチドは、本発明のＵＴＲのヌクレオチド配列内にあってもよい。付加ヌクレオチドは、最大０個（変化なし）、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個のヌクレオチド、好適には、最大２０個のヌクレオチド、さらにより好適には最大３０個のヌクレオチドのポリヌクレオチド鎖を含む。ヌクレオチドの付加は本発明のＵＴＲの上記機能的特徴を変える可能性はないという理由から、ヌクレオチドの付加の長さは、最大４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、もしくは１００個のヌクレオチドか、またはさらに多く、最大２００個、３００個、４００個、もしくは５００個のヌクレオチドとすることができる。ただし、これらの配列が、上記で定義したように、（上記の翻訳効率の点で）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と同様の機能を有する、好適にはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５より高い翻訳効率を有する場合に限る。
【００８４】
このようなＵＴＲを含有するＲＮＡ分子と同様に、本発明のＵＴＲは、当業者に既知の方法により、組み換え的に（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏもしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏの系において）または合成的に生成／合成することができる。
【００８５】
より具体的には、本発明のＵＴＲおよびそのようなＵＴＲを含有するＲＮＡ分子を、当業者に既知の方法により、ｉｎ  ｖｉｖｏ系において何れかを組換え的に生成することができる。
【００８６】
あるいは、本発明のＵＴＲおよびそのようなＵＴＲを含有するＲＮＡ分子を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ系において、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写系を用いて生成することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写系は、一般的に既知であり、通常、以下でさらに詳細に概説するように、モジュール（ｂ）および／またはモジュール（ｃ）を「コードしている」ＤＮＡ配列を含有する精製された線形ＤＮＡ鋳型を必要とし、前記ＤＮＡ配列は、適切なプロモータの制御下に置かれる。さらに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写系は、また、一般的に、リボヌクレオシド三リン酸、ＤＴＴおよびマグネシウムイオンを含む緩衝系、ならびに、前記ＵＴＲを「コードする」ＤＮＡ配列を本発明のＵＴＲにｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写するための酵素活性を提供する適切なＲＮＡポリメラーゼを必要とする。
【００８７】
さらに、本発明のＵＴＲおよびそのようなＵＴＲを含有するＲＮＡ分子は、例えば、固相支持体および標準的技法を用いる自動化ヌクレオチド配列合成装置での従来型の化学合成により、または、個々のＤＮＡ配列の化学的合成およびそれに続く該ＤＮＡ配列のｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏの転写により、化学的に合成され得る。
【００８８】
分子生物学および遺伝学において、上流および下流は両方とも、ＲＮＡ分子の相対的位置を指す。本発明の文脈において、上流はＲＮＡ分子の５’末端に向かい、下流は分子の３’末端に向かう。
【００８９】
したがって、一実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較して１〜４個の置換を示し、その結果、上記で定義したように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含むＵＴＲ（以下、「モジュール（ｂ）」いう）は、上記または以下に記載するようなＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードする修飾ポリリボヌクレオチド（以下、「モジュール（ａ）」という）の上流に位置する。さらに、一実施形態では、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較して１〜７個の置換を示し、その結果、上記で定義したように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含むＵＴＲ（以下、「モジュール（ｃ）」という）は、上記または以下に記載するようなＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードする修飾ポリリボヌクレオチド（以下、「モジュール（ａ）」という）の下流に位置する。しかし、好適には、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードする遺伝子（「モジュール（ａ）」）は、ＵＴＲモジュール（ｂ）およびＵＴＲモジュール（ｃ）の間に位置し、したがって、ＲＮＡ分子は、好適には、５’−（ｂ）−（ａ）−（ｃ）−３’という配置を有する。
【００９０】
ＲＮＡ分子が、１つのＵＴＲモジュール（つまり、モジュール（ｂ）（つまり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較して１〜４個の置換を示し、その結果、上記で定義したように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む、１つまたは複数のＵＴＲ）か、またはモジュール（ｃ）（つまり、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較して１〜７個の置換を示し、その結果、上記で定義したように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む、１つまたは複数のＵＴＲ）のいずれか）のみを含む場合、ＲＮＡ分子は、好適には、５’−（ｂ）−（ａ）−３’または５’−（ａ）−（ｃ）−３’という配置を有する。
【００９１】
以下では、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードする修飾ポリリボヌクレオチド（「モジュール（ａ）」）に対する本発明のＵＴＲモジュール（ｂ）および／または（ｃ）の好適な配置について記載し、該配置では、ＵＴＲモジュール（ｂ）（上記で定義した、ＣＹＢＡ  ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ断片に対応する）は、コーディング領域の上流（つまり、コーディング領域の５’末端）に位置し、および／または、ＵＴＲモジュール（ｃ）（上記で定義した、ＣＹＢＡ  ｍＲＮＡの３’ＵＴＲ）は、コーディング領域の下流（つまり、コーディング領域の３’末端）に位置する。
【００９２】
したがって、好適な実施形態では、上記に従い、本発明は、（ａ）修飾ポリリボヌクレオチド、つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするコーディング領域と；（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較して１〜４個の置換を示し、その結果、上記で定義したように、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む１つまたは複数のＵＴＲとを含み、（ｂ）で定義した前記ＵＴＲは、（ａ）で定義したコーディング領域の５’末端に位置する、ＲＮＡ分子に関する。
【００９３】
好適な実施形態では、前記に従い、本発明は、（ａ）ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするコーディング領域と；（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較して１〜７個の置換を示し、その結果、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む１つまたは複数のＵＴＲとを含み、（ｃ）で定義した前記ＵＴＲは、（ａ）で定義したコーディング領域の３’末端に位置する、ＲＮＡ分子に関する。
【００９４】
好適な実施形態では、前記に従い、本発明は、（ａ）ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするコーディング領域と；（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較して１〜４個の置換を示し、その結果、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む１つまたは複数のＵＴＲと；（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示す配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較して１〜７個の置換を示し、その結果、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む１つまたは複数のＵＴＲとを含み、（ｂ）で定義した前記ＵＴＲは、（ａ）で定義したコーディング領域の５’末端に位置し、（ｃ）で定義した前記ＵＴＲは、（ａ）で定義したコーディング領域の３’末端に位置する、ＲＮＡ分子に関する。
【００９５】
好適な実施形態では、前記に従い、本発明は、（ａ）ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするコーディング領域と；（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４に示される配列、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４と比較して１〜４個の置換を示し、その結果、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む１つのＵＴＲと；（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示す配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較して１〜７個の置換を示し、その結果、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む２つのＵＴＲとを含み、（ｂ）で定義した前記１つのＵＴＲを（ａ）で定義したコーディング領域の５’末端に含み、（ｃ）で定義した前記２つのＵＴＲを（ａ）で定義したコーディング領域の３’末端に含む、ＲＮＡ分子に関する。
【００９６】
好適な実施形態では、前記に従い、本発明は、（ａ）ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするコーディング領域と；（ｃ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５に示される配列か、または、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５と比較して１〜７個の置換を示し、その結果、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５を含むＵＴＲを含むＲＮＡ分子と同じかもしくはより高い翻訳効率を有するＲＮＡ分子をもたらす配列を含む２つのＵＴＲとを含み、（ｃ）で定義した前記２つのＵＴＲを（ａ）で定義したコーディング領域の３’末端に含む、ＲＮＡ分子に関する。
【００９７】
本発明の構成体は、上記３つのメインモジュール、（ａ）、（ｂ）、および／または（ｃ）を含むだけではない場合がある。むしろ、個々のモジュールの間に、（ａ）リンカー部および／または（ａ）多数のクローニング部位が置かれ、これは、例えば、構成体の構成を容易にし得る。適切なリンカー部および多数のクローニング部位は、当業者にとって既知である。
【００９８】
本発明のＲＮＡ分子内の、モジュール（ａ）（つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバー）に対するＵＴＲモジュール（ｂ）および／または（ｃ）の位置は、特に限定されるものではなく、したがって、本発明のＲＮＡ分子の個々のモジュールの間には、１つまたは複数のヌクレオチドＧ、Ａ、Ｕ、および／またはＣで埋められる間隔またはギャップがあり得、これはメインモジュール（ａ）、（ｂ）、および／または（ｃ）の一部ではない。
【００９９】
この文脈における「１つまたは複数のヌクレオチドＧ、Ａ、Ｕ、および／またはＣ」は、本発明のＲＮＡ分子の個々のモジュールの間の間隔またはギャップが、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個のヌクレオチドＧ、Ａ、Ｕ、および／またはＣで埋められることを意味する。他の好適な実施形態では、本発明のＲＮＡ分子の個々のモジュールの間の間隔またはギャップは、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、１１０個、またはそれ以上のヌクレオチドＧ、Ａ、Ｕ、および／またはＣで埋められる。
【０１００】
しかし、好適な実施形態では、本発明のＲＮＡ分子内で、モジュール（ａ）（つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするコーディング領域）に対し、ＵＴＲモジュール（ｂ）または（ｃ）を、いずれの間隔もギャップも間に挟まず、モジュール（ａ）のコーディング領域の開始コドンに隣接させて直接置く、つまり、モジュール（ａ）のコーディング領域の開始コドンの上流に直接置く。
【０１０１】
別の好適な実施形態では、本発明のＲＮＡ分子内で、モジュール（ａ）（つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバー）に対し、ＵＴＲモジュール（ｂ）または（ｃ）は、いずれの間隔もギャップも間に挟まずに、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするモジュール（ａ）のコーディング領域の末端コドン（つまり、停止コドン）に隣接させて直接置く、つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするモジュール（ａ）のコーディング領域の末端コドン／停止コドンの下流に直接置く。
【０１０２】
好適な実施形態では、本発明のＲＮＡ分子内で、モジュール（ａ）（つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするコーディング領域）に対し、ＵＴＲモジュール（ｂ）は、いずれの間隔もギャップも間に挟まず、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするモジュール（ａ）のコーディング領域の開始コドンに隣接させて直接置く、つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするモジュール（ａ）のコーディング領域の開始コドンの上流に直接置き、本発明のＲＮＡ分子内で、モジュール（ａ）（つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするコーディング領域）に対し、ＵＴＲモジュール（ｃ）は、いずれの間隔もギャップも間に挟まずに、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするモジュール（ａ）のコーディング領域の末端コドン（つまり、停止コドン）に隣接させて直接置く、つまり、ＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーメンバーをコードするモジュール（ａ）のコーディング領域の末端コドン／停止コドンの下流に直接置く。
【０１０３】
さらにより好適な実施形態では、本明細書の上記で定義したように、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）の配列に由来する１つまたは複数の非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む本発明の修飾ポリリボヌクレオチドを含む組成物は、前記修飾ポリヌクレオチドがＡＢＣ−結合カセット（ＡＢＣ）３タンパク質（ＡＢＣＡ３）をコードし、好適には、ヒトＡＢＣＡ３タンパク質をコードし、前記修飾ポリヌクレオチドは、修飾ポリリボヌクレオチドにさらされた対象の細胞内での翻訳向けに最適化されたコドン配列を含む、組成物である。
【０１０４】
最も好適な実施形態では、本明細書の上記で定義したように、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）の配列に由来する１つまたは複数の非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む本発明の修飾ポリリボヌクレオチドを含む組成物は、５’ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有するコドン最適化ＡＢＣＡ３  ＤＮＡ配列のｍＲＮＡ配列であるか（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）、または、５’ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有するコドン最適化ＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ配列である（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）。
【０１０５】
他の非ＵＴＲ配列を、本開示のポリリボヌクレオチドの５’ＵＴＲ（または３’ＵＴＲ）に組み込むことが可能である。５’および／または３’ＵＴＲは、ポリリボヌクレオチドの安定性および／または翻訳効率を提供し得る。例えば、イントロンまたはイントロン配列の一部を、改変ポリリボヌクレオチドの隣接領域に組み込むことが可能である。イントロン配列の組み込みは、また、ポリリボヌクレオチドの翻訳速度を速め得る。
【０１０６】
３’ＵＴＲには、アデノシンおよびウリジンの広がりが埋め込まれ得る。これらのＡＵリッチサインは、ターンオーバーが高速な遺伝子において、特によく見られる。その配列特徴および機能的特性に基づき、ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）はクラスに分かれ得：クラスＩ  ＡＲＥは、Ｕ−リッチ領域内でＡＵＵＵＡモチーフのいくつかの分散コピーを含有する。Ｃ−ＭｙｃおよびＭｙｏＤは、クラスＩ  ＡＲＥを含有する。クラスＩＩ  ＡＲＥは、２つ以上の重複ＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）九量体を有する。このタイプのＡＲＥを含有する分子としては、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−αが挙げられる。クラスＩＩＩ  ＡＲＥはあまり明確に定義されない。これらのＵリッチ領域は、ＡＵＵＵＡモチーフを含有せず、ｃ−ＪｕｎおよびＭｙｏｇｅｎｉｎがこのクラスのよく研究された２つの例である。ＡＲＥに結合したタンパク質がメッセンジャーを不安定化する一方、ＥＬＶＡファミリーのメンバー、例えば、ＨｕＲは、ｍＲＮＡの安定性を高め得る。ＨｕＲは、３つのクラス全てのＡＲＥに結合し得る。ＨｕＲ特異的結合部位を核酸分子の３’ＵＴＲに組み込むとＨｕＲ結合がもたらされ、したがって、ｉｎ  ｖｉｖｏでのメッセージの安定化につながり得る。
【０１０７】
３’ＵＴＲ  ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）の改変を用いて改変ポリリボヌクレオチドの安定性を調節することが可能である。ＡＲＥの１つまたは複数の複製をポリヌクレオチドに導入して、ポリリボヌクレオチドの安定性を調節することが可能である。ＡＲＥを特定し、取り除き、または、変異させて、細胞内安定性を高め、それにより、翻訳および結果として生じるタンパク質の生成を増大させる。トランスフェクション実験を、改変ポリリボヌクレオチドを用いて関連細胞株において行うことが可能であり、タンパク質生成を、トランスフェクション後の種々の時点で調べることが可能である。例えば、細胞を、異なるＡＲＥ改変分子を用いてトランスフェクションし、ＥＬＩＳＡキットを関連タンパク質に用いることにより、トランスフェクションの６時間後、１２時間後、２４時間後、４８時間後、および７日後に、生成されたタンパク質を調べる。
【０１０８】
非翻訳領域は、任意の数のヌクレオチドを含み得る。非翻訳領域の長さは、約１個〜約１０個の塩基もしくは塩基対、約１０個〜約２０個の塩基もしくは塩基対、約２０〜約５０個の塩基もしくは塩基対、約５０〜約１００個の塩基もしくは塩基対、約１００個〜約５００個の塩基もしくは塩基対、約５００〜約１０００個の塩基もしくは塩基対、約１０００〜約２０００個の塩基もしくは塩基対、約２０００〜約３０００個の塩基もしくは塩基対、約３０００〜約４０００個の塩基もしくは塩基対、約４０００〜約５０００個の塩基もしくは塩基対、約５０００〜約６０００個の塩基もしくは塩基対、約６０００〜約７０００個の塩基もしくは塩基対、約７０００〜約８０００個の塩基もしくは塩基対、約８０００〜約９０００個の塩基もしくは塩基対、または約９０００〜約１００００個の塩基もしくは塩基対であり得る。非翻訳領域の長さは、例えば、少なくとも１個の塩基もしくは塩基対、２個の塩基もしくは塩基対、３個の塩基もしくは塩基対、４個の塩基もしくは塩基対、５個の塩基もしくは塩基対、６個の塩基もしくは塩基対、７個の塩基もしくは塩基対、８個の塩基もしくは塩基対、９個の塩基もしくは塩基対、１０個の塩基もしくは塩基対、２０個の塩基もしくは塩基対、３０個の塩基もしくは塩基対、４０個の塩基もしくは塩基対、５０個の塩基もしくは塩基対、６０個の塩基もしくは塩基対、７０個の塩基もしくは塩基対、８０個の塩基もしくは塩基対、９０個の塩基もしくは塩基対、１００個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、５０００個の塩基もしくは塩基対、６０００個の塩基もしくは塩基対、７０００個の塩基もしくは塩基対、８０００個の塩基もしくは塩基対、９０００個の塩基もしくは塩基対、または１００００個の塩基もしくは塩基対であり得る。
【０１０９】
本開示の改変ポリリボヌクレオチドは、１つまたは複数のイントロンを含み得る。イントロンは、任意の数の修飾または非修飾のヌクレオチドを含み得る。イントロンは、例えば、少なくとも１個の塩基もしくは塩基対、５０個の塩基もしくは塩基対、１００個の塩基もしくは塩基対、１５０個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、または５０００個の塩基もしくは塩基対を含み得る。一部の場合、イントロンは、例えば、多くて１００００個の塩基もしくは塩基対、５０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、または１００個の塩基もしくは塩基対を含み得る。
【０１１０】
一部の場合、イントロンのヌクレオチドをあるパーセンテージで修飾する。例えば、一部の場合、イントロンのヌクレオチドの９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または１％未満を修飾する。一部の場合、イントロンのヌクレオチドの全てを修飾する。
【０１１１】
本開示の改変ポリリボヌクレオチドは、ｐｏｌｙＡ配列を含み得る。ｐｏｌｙＡ配列（例えば、ｐｏｌｙＡテール）は、任意の数のヌクレオチドを含み得る。ｐｏｌｙＡ配列の長さは、約１個〜約１０個の塩基もしくは塩基対、約１０個〜約２０個の塩基もしくは塩基対、約２０〜約５０個の塩基もしくは塩基対、約５０〜約１００個の塩基もしくは塩基対、約１００個〜約５００個の塩基もしくは塩基対、約５００〜約１０００個の塩基もしくは塩基対、約１０００〜約２０００個の塩基もしくは塩基対、約２０００〜約３０００個の塩基もしくは塩基対、約３０００〜約４０００個の塩基もしくは塩基対、約４０００〜約５０００個の塩基もしくは塩基対、約５０００〜約６０００個の塩基もしくは塩基対、約６０００〜約７０００個の塩基もしくは塩基対、約７０００〜約８０００個の塩基もしくは塩基対、約８０００〜約９０００個の塩基もしくは塩基対、または約９０００〜約１００００個の塩基もしくは塩基対であり得る。一部の例では、ｐｏｌｙＡ配列の長さは、少なくとも約１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、または２００個のヌクレオチドである。ｐｏｌｙＡ配列の長さは、例えば、少なくとも１個の塩基もしくは塩基対、２個の塩基もしくは塩基対、３個の塩基もしくは塩基対、４個の塩基もしくは塩基対、５個の塩基もしくは塩基対、６個の塩基もしくは塩基対、７個の塩基もしくは塩基対、８個の塩基もしくは塩基対、９個の塩基もしくは塩基対、１０個の塩基もしくは塩基対、２０個の塩基もしくは塩基対、３０個の塩基もしくは塩基対、４０個の塩基もしくは塩基対、５０個の塩基もしくは塩基対、６０個の塩基もしくは塩基対、７０個の塩基もしくは塩基対、８０個の塩基もしくは塩基対、９０個の塩基もしくは塩基対、１００個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、５０００個の塩基もしくは塩基対、６０００個の塩基もしくは塩基対、７０００個の塩基もしくは塩基対、８０００個の塩基もしくは塩基対、９０００個の塩基もしくは塩基対、または１００００個の塩基もしくは塩基対であり得る。ｐｏｌｙＡ配列の長さは、多くて１００個の個の塩基もしくは塩基対、９０個の塩基もしくは塩基対、８０個の塩基もしくは塩基対、７０個の塩基もしくは塩基対、６０個の塩基もしくは塩基対、５０個の塩基もしくは塩基対、４０個の塩基もしくは塩基対、３０個の塩基もしくは塩基対、２０個の塩基もしくは塩基対、１０個の塩基もしくは塩基対、または５個の塩基もしくは塩基対であり得る。
【０１１２】
一部の場合、ｐｏｌｙ−Ａ配列のヌクレオチドをあるパーセンテージで修飾する。例えば、一部の場合、ｐｏｌｙ−Ａ配列のヌクレオチドの９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または１％未満を修飾する。一部の場合、ｐｏｌｙ−Ａのヌクレオチドの全てを修飾する。
【０１１３】
リンカー配列は、任意の数のヌクレオチドを含み得る。リンカーは、Ｎ−３またはＣ−５位置で修飾核酸塩基に付着し得る。核酸塩基に付着したリンカーは、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、テトラエチレングリコール、二価アルキル、アルケニル、アルキニル部、エステル、アミド、またはエーテル部とすることが可能である。リンカー配列の長さは、約１個〜約１０個の塩基もしくは塩基対、約１０個〜約２０個の塩基もしくは塩基対、約２０〜約５０個の塩基もしくは塩基対、約５０〜約１００個の塩基もしくは塩基対、約１００個〜約５００個の塩基もしくは塩基対、約５００〜約１０００個の塩基もしくは塩基対、約１０００〜約２０００個の塩基もしくは塩基対、約２０００〜約３０００個の塩基もしくは塩基対、約３０００〜約４０００個の塩基もしくは塩基対、約４０００〜約５０００個の塩基もしくは塩基対、約５０００〜約６０００個の塩基もしくは塩基対、約６０００〜約７０００個の塩基もしくは塩基対、約７０００〜約８０００個の塩基もしくは塩基対、約８０００〜約９０００個の塩基もしくは塩基対、または約９０００〜約１００００個の塩基もしくは塩基対であり得る。リンカー配列の長さは、例えば、少なくとも１個の塩基もしくは塩基対、２個の塩基もしくは塩基対、３個の塩基もしくは塩基対、４個の塩基もしくは塩基対、５個の塩基もしくは塩基対、６個の塩基もしくは塩基対、７個の塩基もしくは塩基対、８個の塩基もしくは塩基対、９個の塩基もしくは塩基対、１０個の塩基もしくは塩基対、２０個の塩基もしくは塩基対、３０個の塩基もしくは塩基対、４０個の塩基もしくは塩基対、５０個の塩基もしくは塩基対、６０個の塩基もしくは塩基対、７０個の塩基もしくは塩基対、８０個の塩基もしくは塩基対、９０個の塩基もしくは塩基対、１００個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、５０００個の塩基もしくは塩基対、６０００個の塩基もしくは塩基対、７０００個の塩基もしくは塩基対、８０００個の塩基もしくは塩基対、９０００個の塩基もしくは塩基対、または１００００個の塩基もしくは塩基対であり得る。リンカーの長さは、多くて１００００個の塩基もしくは塩基対、５０００個の塩基もしくは塩基対、４０００個の塩基もしくは塩基対、３０００個の塩基もしくは塩基対、２０００個の塩基もしくは塩基対、１０００個の塩基もしくは塩基対、９００個の塩基もしくは塩基対、８００個の塩基もしくは塩基対、７００個の塩基もしくは塩基対、６００個の塩基もしくは塩基対、５００個の塩基もしくは塩基対、４００個の塩基もしくは塩基対、３００個の塩基もしくは塩基対、２００個の塩基もしくは塩基対、または１００個の塩基もしくは塩基対であり得る。
【０１１４】
一部の場合、リンカー配列のヌクレオチドをあるパーセンテージで修飾する。例えば、一部の場合、リンカー配列のヌクレオチドの９９％未満、９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、または１％未満を修飾する。一部の場合、リンカー配列のヌクレオチドの全てを修飾する。
【０１１５】
一部の場合、改変ポリリボヌクレオチドは、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）の前に少なくとも１つの停止コドンを含み得る。一部の場合、改変ポリリボヌクレオチドは、多数の停止コドンを含む。停止コドンは、ＴＧＡ、ＴＡＡ、およびＴＡＧから選択され得る。停止コドンは、修飾または非修飾であり得る。一部の場合、改変ポリリボヌクレオチドは、停止コドンＴＧＡと１つの追加停止コドンを含む。一部の場合、改変ポリリボヌクレオチドは、ＴＡＡ停止コドンの追加を含む。
【０１１６】
コード化ポリペプチド
コード化ポリペプチドとは、アミド結合（ペプチド結合）を介して連結するアミノ酸残基モノマーを含むポリマー鎖である。アミノ酸は、Ｌ−光学異性体またはＤ−光学異性体であり得る。ポリペプチドは、少なくとも３つのアミノ酸、ペプチドミメティック、タンパク質、組み換えタンパク質、（単クローン性または多クローン性の）抗体、抗原、エピトープ、酵素、受容体、ビタミン、または構造類似体、またはその組み合わせの鎖であり得る。対象の身体内で翻訳されるポリリボヌクレオチドは、対象の細胞内、組織内、または多くの細胞および組織にわたり、特異的なペプチドまたはタンパク質を十分に供給し得る。一部の場合、ポリリボヌクレオチドは、特異的な標的細胞種または標的組織のサイトソル内で、ｉｎ  ｖｉｖｏで翻訳され得る。一部の場合、ポリリボヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｖｏで翻訳されて、ＡＢＣＡ３タンパク質、その機能的断片、または、ヒトＡＢＣＡ３タンパク質に対し少なくとも７０％相同的なタンパク質を提供し得る。一部の場合、ポリリボヌクレオチドは、種々の非標的細胞種または標的組織においてｉｎ  ｖｉｖｏで翻訳され得る。標的または非標的細胞である細胞の非限定的例としては：ａ）肌細胞、例えば：ケラチノサイト、メラノサイト、尿路上皮細胞；ｂ）神経細胞、例えば：ニューロン、シュワン細胞、乏突起膠芽細胞、星状膠細胞；ｃ）肝細胞、例えば、肝実質細胞；ｄ）腸細胞、例えばグロバブル細胞、腸細胞；ｅ）血液細胞；例えば、リンパ球または骨髄細胞が挙げられる。組織の非限定的例としては、結合組織、筋肉組織、神経組織、または上皮組織が挙げられる。一部の場合、標的細胞または標的組織は、がん性の細胞、組織、または臓器である。
【０１１７】
ポリヌクレオチド配列は、１つまたは複数の種に由来し得る。例えば、ポリヌクレオチド配列は、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）、マウス（例えば、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）、ラット（例えば、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓまたはＲａｔｔｕｓ  ｒａｔｔｕｓ）、ラクダ（例えば、Ｃａｍｅｌｕｓ  ｄｒｏｍｅｄａｒｉｕｓまたはＣａｍｅｌｕｓ  ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ）、ラマ（Ｌａｍａ  ｖｉｃｕｇｎａ）、または任意の他の適切な生物に由来し得る。ポリヌクレオチド配列は、１つまたは複数の種の配列のキメラ組み合わせとすることが可能である。
【０１１８】
一部の場合、内因性翻訳機構は、翻訳後修飾をコード化ペプチドに付加し得る。翻訳後修飾は、膜位置測定のためのポリペプチドを標的し得る疎水性基の付加、酵素活性を増大させる補助因子の付加、または、より小さい化学基の付加を伴い得る。コード化ポリペプチドを翻訳後修飾して、他のペプチドまたはタンパク質部の付加を受け取るようにすることが可能である。例えば、ユビキチン化は、ユビキチンのコード化ポリペプチドへの共有結合をまねき、ＳＵＭＯ化は、ＳＵＭＯ（低分子ユビキチン様修飾因子）のコード化ポリペプチドへの共有結合をまねき、ＩＳＧ化は、ＩＳＧ１５（インターフェロン活性化遺伝子１５）の共有結合を招き得る。
【０１１９】
一部の場合、コード化ポリペプチドを翻訳後修飾して、他のタイプの構造変化を受けさせることが可能である。例えば、コード化ポリペプチドは、タンパク質切断することが可能であり、１つまたは複数のタンパク質分解断片は、細胞内経路の活性を調節することが可能である。コード化ポリペプチドは、細胞内で折り畳まれ得る。一部の場合、コード化ポリペプチドは、補助因子および分子シャペロンの存在下で折り畳まれる。折り畳まれたポリペプチドは、二次構造および三次構造を有し得る。折り畳まれたポリペプチドは、他の折りたたまれたペプチドを関連して、四次構造を形成し得る。折り畳まれたペプチドは、抗体分子などの機能的なマルチサブユニット複合体にページ付けし、前記ペプチドは、四量体四次構造を有する。抗体のクラスまたはイソタイプを形成する種々のポリペプチドが、ポリリボヌクレオチドから発現し得る。
【０１２０】
コード化ポリペプチドを翻訳後修飾して、コード化アミノ酸の化学的性質を変えることが可能である。例えば、コード化ポリペプチドを、翻訳後シトルリン化または脱イミノ化すること、つまりアルギニンをシトルリンへ転換することが可能である。コード化ポリペプチドを翻訳後アミド分解することが可能であり；グルタミンをグルタミン酸へ転換すること、またはアスパラギンをアスパラギン酸へ転換することが可能である。コード化ポリペプチドを脱離化すること、つまり、ホスホスレオニンおよびホスホセリンのベータ脱離によりアルケンを変換すること、またはスレオニンおよびセリンを脱水すること、ならびにシステインを脱カルボキシル化することが可能である。コード化ペプチドは、また、カルバミル化すること、つまり、リシンをホモシトルリンへ転換することが可能である。コード化ペプチドは、また、ラセミ化すること、例えば、プロピルイソメラーゼによりプロリンをラセミ化すること、またはプロテイン−セリンエピメラーゼによりセリンをラセミ化することが可能である。
【０１２１】
複数の生体分子の活性は、ポリリボヌクレオチドにコードされた分子により調整され得る。活性がコード化ポリヌクレオチドにより調整され得る分子の非限定的例としては：アミノ酸、ペプチド、ペプチドミメティック、タンパク質、（単クローナル性または多クローナル性の）組み換えタンパク質抗体、抗体断片、抗原、エピトープ、炭化水素、脂質、脂肪酸、酵素、天然物、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、ヌクレオシド、ヌクレオチド、構造類似体、またはその組み合わせ）、栄養素、受容体、およびビタミンが挙げられる。
【０１２２】
本開示のポリヌクレオチドの一部となり得るヌクレオチド配列の非限定的例を、表６に開示する。
【０１２３】
【表６】
2018520155.tif 000008
【０１２４】
ポリペプチド配列は、内因性ポリペプチドのアミノ酸配列に対しａ％の相同性を共有し得る。ポリペプチド配列は、内因性ポリペプチドのアミノ酸配列と、多くて１０％の相同性、多くて２０％の相同性、多くて３０％の相同性、多くて４０％の相同性、多くて５０％の相同性、多くて６０％の相同性、多くて７０％の相同性、多くて８０％の相同性、多くて９０％の相同性、多くて９９％の相同性を共有し得る。種々の方法およびソフトウェアプログラム、例えば、ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｏｍｅｇａ、ＡｌｉｇｎＭｅ、Ｐｒａｌｉｎｅ、または他の適切な方法もしくはアルゴリズムを用いて、２つ以上のペプチドの間の相同性を求めることが可能である。
【０１２５】
免疫原性
種々のサイズの分子（ポリヌクレオチド、タンパク質、または酵素）を含む組成物が含まれる多くの医薬品は、対象に投与されると免疫反応を引き起こし得る。多くの場合、免疫系は組成物を異物として認識し、その医薬品の作用を中和する。本開示のポリリボヌクレオチドおよび組成物は、免疫原性が低く、または非免疫原性であり得、それにより、免疫系により引き起こされる反応が小さい、または、免疫反応を全く引き起こさない。
【０１２６】
免疫原性は、また、例えば、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−８のレベル、ならびに、ＴＬＲ−３、ＴＬＲ−７、ＴＬＲ−８、およびヘリカーゼＲＩＧ−１のへの結合能力を測定することにより求めることが可能である。ポリリボヌクレオチドが所望の低免疫原性を有するか否かを確かめるため、ポリリボヌクレオチドを対象に投与した後、１つまたは複数の因子の量を測定することが可能である。ポリペプチドの免疫原性は、ポリペプチドを対象に投与した際の白血球数の増加に関連して求めることが可能である。一部の場合、組成物を対象に投与した際に、対象は、９０％未満、８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、または１０％未満の白血球の数の増加を示す。本開示のポリリボヌクレオチドは、最小のまたはわずかな炎症性反応または免疫反応を引き起こし得る。
【０１２７】
ポリリボヌクレオチドの免疫原性の決定のために、種々の方法を用いることが可能である。非常に適切な方法は、ポリリボヌクレオチドの投与に対する反応である、細胞における炎症マーカかまたは単純な白血球数を求めることである。このような方法について、例において記載する。例えば、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−８、ＩＬ−６、および／またはＩＬ−１２などの炎症に関連するサイトカインを測定することが可能である。樹状細胞活性マーカの発現を、免疫原性の推定に用いることも可能である。免疫原性反応のさらなる指標は、Ｔｏｌｌ様受容体ＴＬＲ−３、ＴＬＲ−７、およびＴＬＲ−８に対する、ならびにヘリカーゼに対する結合の検出であり得る。
【０１２８】
ポリリボヌクレオチドの免疫原性を、炎症マーカまたは白血球数のレベルの、ポリリボヌクレオチド投与前のレベルと比較した全体的な増加として求めることが可能である。例えば、未修飾または修飾した改変ポリリボヌクレオチドを細胞かまたは対象に投与し、定義した時間間隔における、ポリリボヌクレオチドの投与に対する反応である炎症マーカの分泌を測定することが可能である。
【０１２９】
組成物
「ネイキッド」ポリヌクレオチド組成物は、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、および／または賦形剤の補助なしに対象に良好に投与され、対象の細胞に取り込まれ得る。（Wolff et al. 1990, Science, 247, 1465-1468）。しかしながら、多くの場合、エンドサイトーシス取込みを高め得る製剤を用いたポリヌクレオチドのカプセル化は、本開示の組成物の効率性を高め得る。
【０１３０】
ポリリボヌクレオチドを多細胞生物に送達することの背後にある別の技術的課題は、対象の細胞または組織内で翻訳されるポリリボヌクレオチドの高効率な送達を提供する組成物を特定することである。ネイキッド核酸の投与は非常に非効率的であり、ポリヌクレオチドを多細胞生物に投与するための適切なアプローチを提供し得ないと認識されてきた。
【０１３１】
この課題を解決するため、改変ポリリボヌクレオチドを含む組成物を、医薬担体と共にカプセル化するまたは製剤化することが可能である。製剤は、限定するわけではないが、ナノ粒子、ポリ（乳酸−グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ）ミクロスフェア、脂質、リポプレックス、リポソーム、ポリマー、炭水化物（単糖を含む）、カチオン性脂質、フィブリンゲル、フィブリンヒドロゲル、フィブリン糊、フィブリンシーラント、フィブリノーゲン、トロンビン、迅速除去脂質ナノ粒子（ｒｅＬＮＰ）およびその組み合わせであり得る。本明細書に開示の改変ポリリボヌクレオチドを含む組成物は、約１重量／体積％〜約９９重量／体積％の担体系を含み得る。担体系に存在する担体の量は、いくつかの異なる因子または配合者によりなされた選択、例えば、ポリリボヌクレオチドの最終濃度および可溶化剤の量に基づく。種々の担体が、異なるクラスの治療剤の送達に有用であることが示されている。これらの担体のうち、生体適合性ポリマーＰＬＧＡ（ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクタイド−ｃｏ−グリコライド）およびＰＬＡ（ポリラクタイド）から製剤化される生物分解性ナノ粒子は、異なる治療剤の細胞内への持続的な送達に対し有望であることが示されている。
【０１３２】
組成物における改変ポリヌクレオチドの搭載重量パーセントは、少なくとも、０．０５％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、１％、２％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、または１０％とすることができる。ＰＬＧＡミクロスフェアにおける修飾ｍＲＮＡのカプセル化効率は、少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％とすることができる。
【０１３３】
本開示は、ポリヌクレオチド、一部の場合は改変ポリリボヌクレオチドを細胞または組織に送達するのに有用な、交互非同一性アルキレンアミンユニットを含有するオリゴ（アルキレンアミン）を含む、ナノ粒子、オリゴマー、ポリマー、または、リピドイドについて記載する。本明細書に開示の組成物は、少なくとも約１分、５分、１０分、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、２週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、８か月、９か月、１０か月、１１か月、または１年の間、安定的であり得る。本明細書に開示の製剤は、例えば、少なくとも約０℃、５℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃、３５℃、４０℃、４５℃、５０℃、６０℃、７０℃、または８０℃で安定的であり得る。本開示の組成物は所望の濃度とすることが可能である。組成物の濃度は、組成物の特性、例えば、組成物のレオロジーを改善し得る。
【０１３４】
ナノ粒子
本開示は、また、対象への投与後に場所を移すことができる改変ポリリボヌクレオチドの、ナノ粒子ベースの製剤を提供する。一部の場合、投与は肺性であり、改変ポリリボヌクレオチドは、投与部位から全身血流へ能動的にまたは受動的に完全な状態のまま移動し、続いて、異なる細胞または組織、例えば、胸部に置かれ得る。治療タンパク質、例えば、ＡＢＣＡ３またはその機能的断片をコードする改変ポリリボヌクレオチドを含むナノ粒子のこの移動は、肺を超えた医薬品有効成分の非侵襲性の全身送達を構成して、全身的にアクセス可能な非肺細胞または組織に、機能的タンパク質の生成をもたらす。
【０１３５】
ナノ粒子は、約１０ナノメータ（ｎｍ）〜５０００ｎｍ、１０ｎｍ〜１０００ｎｍ、または６０ｎｍ〜５００ｎｍ、または７０ｎｍ〜３００ｎｍの粒子サイズの粒子とすることが可能である。一部の例では、ナノ粒子の粒子サイズは、約６０ｎｍ〜２２５ｎｍである。ナノ粒子は、改変ポリリボヌクレオチドであり得る１つまたは複数のポリリボヌクレオチドをカプセル化するカプセル化剤（例えば、コーティング）を含み得る。ナノ粒子は、改変されたおよび／または天然に存在するポリリボヌクレオチドを含み得る。カプセル化剤は、ポリマー物質、例えば、ＰＥＩまたはＰＥＧとすることができる。
【０１３６】
送達剤として用いることができるリピドイドまたは脂質ナノ粒子としては、Ｃ１２−２００、ＭＤ１、９８Ｎ１２−５、ＤＬｉｎ―ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、ペグ化脂質、およびその類似体からなる群から選択され得る脂質を挙げることができる。適切なナノ粒子は、１つまたは複数の脂質を種々の割合で含み得る。例えば、本開示の組成物は、Ｃ１２−２００：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ−ＰＥＧ２０００を４０：３０：２５：５の割合で含むか、または、ＨＧＴ５００１：ＤＯＰＥ：コレステロール：ＤＭＧ−ＰＥＧ２０００を４０：２０：３５：５の割合で含み得る。ナノ粒子は、少なくとも、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個の脂質または別の適切な数の脂質を含み得る。ナノ粒子は、Ｃ１２−２００、ＭＤ１、９８Ｎ１２−５、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧからなる群から選択される、任意の適切な割合の脂質で形成され得る。
【０１３７】
平均サイズのナノ粒子製剤には、６０ナノメータ（ｎｍ）〜２２５ｎｍの修飾ｍＲＮＡを含み得る。修飾ｍＲＮＡを含むナノ粒子製剤の多分散指数ＰＤＩは、０．０３〜０．１５であり得る。ナノ粒子製剤のゼータ電位は、ｐＨ７．４で−１０〜＋１０であり得る。修飾ｍＲＮＡの製剤は、融合性脂質、コレステロール、およびＰＥＧ脂質を含み得る。製剤の分子比は、５０：１０：３８．５：１．５〜３．０（カチオン性脂質：融合性脂質：コレステロール：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）脂質）であり得る。ＰＥＧ脂質は、限定するわけではないが、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧから選択することができる。融合性脂質は、ＤＳＰＣとすることができる。本開示の脂質ナノ粒子は、限定するわけではないが、フィブリンシーラントなどのシーラントにおいて製剤化することが可能である。
【０１３８】
オリゴ（アルキレンアミン基）
いくつかの製剤を用いたポリヌクレオチドのカプセル化は、組成物のエンドサイトーシス取込みを高め得るが、細胞により取り込まれるポリヌクレオチドは、細胞内で効率的に翻訳されない場合があることも認識されている。いくつかの製剤は、プラスミドＤＮＡおよび／またはｓｉＲＮＡの送達に効果的に用いることができるが、ポリリボヌクレオチドの送達の使用では実用的ではない。本開示は、ポリリボヌクレオチド組成物の対象への効率的な送達および翻訳に利用することが可能な製剤を提供する。
【０１３９】
本開示の組成物は、細胞内で効率的に翻訳されるポリリボヌクレオチドを提供するように設計することが可能である。本開示の組成物は、細胞を任意のポリヌクレオチド、例えば改変ポリリボヌクレオチドを用いてトランスフェクションするために、エチレンアミンユニットも組成物中に含有する、３つ以上のユニットの長さが交互になったアルキレンアミンユニットの配置を含む。本開示の組成物は、長さが交互になっていないアルキレンアミンユニットの類似配置よりも、より効果的にポリリボヌクレオチドを細胞に送達し得る。
【０１４０】
式（Ｉ）に示す共通の構造実態を共有するオリゴマー、ポリマー、またはリピドイドを提供し得る。
【０１４１】
【化１】
2018520155.tif 000009
【０１４２】
本開示の組成物は、以下のａ）〜ｃ）から選択されるオリゴ（アルキレンアミン）を含み得る。
【０１４３】
ａ）側鎖および／または末端基として式（ＩＩ）の基を複数含むオリゴマーまたはポリマー：
【０１４４】
【化２】
2018520155.tif 000010
【０１４５】
前記複数の基において、式（ＩＩ）の各基では、変数ａ、ｂ、ｐ、ｍ、ｎ、およびＲ２〜Ｒ６は、以下のように独立して定義され：
ａは１かつｂは２〜４の整数であるか；または、ａは２〜４の整数かつｂは１であり、
ｐは１または２であり、
ｍは１または２であり；ｎは０または１であり、ｍ＋ｎは≧２であり；
Ｒ２〜Ｒ５は、互いに独立して、水素；基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７または−ＣＨ２−Ｒ７から選択され、式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニル；アミノ基に対する保護基；およびポリ（エチレングリコール）鎖から選択され；
Ｒ６は、水素；基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７、または−ＣＨ２−Ｒ７（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）；アミノ基に対する保護基；−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ；ポリ（エチレングリコール）鎖；および受容体リガンドから選択され、
式（ＩＩ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて式（ＩＩ）のカチオン基を提供する。
【０１４６】
ｂ）繰り返しユニットとして複数の式（ＩＩＩ）の基を含むオリゴマーまたはポリマー：
【０１４７】
【化３】
2018520155.tif 000011
【０１４８】
前記複数の基において、式（ＩＩＩ）の各基では、変数ａ、ｂ、ｐ、ｍ、ｎ、およびＲ２〜Ｒ５は、以下のように独立して定義され：
ａは１かつｂは２〜４の整数であるか；または、ａは２〜４の整数かつｂは１であり、
ｐは１または２であり、
ｍは１または２であり；ｎは０または１であり、ｍ＋ｎは≧２であり；
Ｒ２〜Ｒ５は、互いに独立して、水素；基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７、−ＣＨ２−Ｒ７、または−ＣＨ２−（式中、Ｒ７は１つのＣ−Ｃ結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）；アミノ基に対する保護基；およびポリ（エチレングリコール）鎖から選択され；
式中、式（ＩＩＩ）に示される１つまたは複数の窒素原子はプロトン化されて、式（ＩＩＩ）のカチオン基を提供し得る。
【０１４９】
ｃ）式（ＩＶ）の構造を有するリピドイド：
【０１５０】
【化４】
2018520155.tif 000012
【０１５１】
式中、変数ａ、ｂ、ｐ、ｍ、ｎ、およびＲ２〜Ｒ６は、以下のように定義され：
ａは１かつｂは２〜４の整数であるか；または、ａは２〜４の整数かつｂは１であり、
ｐは１または２であり、
ｍは１または２であり；ｎは０または１であり、ｍ＋ｎは≧２であり；
Ｒ２〜Ｒ６は、互いに独立して、水素；基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７または−ＣＨ２−Ｒ７（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）；アミノ基に対する保護基；およびポリ（エチレングリコール）鎖；および受容体リガンドから選択され；ただし、Ｒ１〜Ｒ６の間の少なくとも２つの残基が基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７または−ＣＨ２−Ｒ７である（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）ことを条件とし；
式中、式（ＩＶ）に示される１つまたは複数の窒素原子はプロトン化されて、式（ＩＶ）のカチオン基を提供し得る。
【０１５２】
アルケニル基およびアルケニレン基の非限定的例としては、直鎖、分岐、および環状のアルケニル基が挙げられる。アルケニル基のオレフィンまたは複数のオレフィンは、例えば、Ｅ、Ｚ、ｃｉｓ、ｔｒａｎｓ、末端、またはｅｘｏ−メチレンとすることができる。アルケニレン基は、例えば、置換または非置換の、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１０、Ｃ１１、Ｃ１２、Ｃ１３、Ｃ１４、Ｃ１５、Ｃ１６、Ｃ１７、Ｃ１８、Ｃ１９、Ｃ２０、Ｃ２１、Ｃ２２、Ｃ２３、Ｃ２４、Ｃ２５、Ｃ２６、Ｃ２７、Ｃ２８、Ｃ２９、Ｃ３０、Ｃ３１、Ｃ３２、Ｃ３３、Ｃ３４、Ｃ３５、Ｃ３６、Ｃ３７、Ｃ３８、Ｃ３９、Ｃ４０、Ｃ４１、Ｃ４２、Ｃ４３、Ｃ４４、Ｃ４５、Ｃ４６、Ｃ４７、Ｃ４８、Ｃ４９、またはＣ５０とすることが可能である。
【０１５３】
式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、および（ＩＶ）のオリゴ（アルキレンアミン）構造は、それらが、より短い（例示では「Ｓ」ともいう）エチレンアミンユニット（つまり、ａまたはｂが１である）を、より長い（例示では「Ｌ」ともいう）アルキレンアミンユニット（つまり、ａまたはｂのもう一方が整数２〜４である）と、交互に組み合わせることが可能であるということを特徴とする。プロトン化可能なユニットのこのような配置は、結果として生じる基の適合性という点で利点を提供して、細胞にポリリボヌクレオチドを送達するためのビヒクルを提供する。
【０１５４】
本開示の組成物は、側鎖または末端基として式（ＩＩ）のオリゴ（アルキレンアミン）基を複数含み得る。
【０１５５】
−ＮＲ２｛ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ４］ｐ｝ｍ−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ５］ｎ−Ｒ６（ＩＩ）
【０１５６】
前記複数の基において、式（ＩＩ）の各基では、変数ａ、ｂ、ｐ、ｍ、ｎ、およびＲ２〜Ｒ６は、以下のように独立して定義され、
ａは１かつｂは２〜４の整数であるか；または、ａは２〜４の整数かつｂは１であり、
ｐは１または２であり、
ｍは１または２であり；ｎは０または１であり、ｍ＋ｎは≧２であり；
Ｒ２〜Ｒ５は、互いに独立して、水素；基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７または−ＣＨ２−Ｒ７（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）；アミノ基に対する保護基；−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ２−；およびポリ（エチレングリコール）鎖から選択され；
Ｒ６は、水素；基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７、または−ＣＨ２−Ｒ７（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１６アルキルまたはＣ３−Ｃ１６アルケニルから選択される）；アミノ基に対する保護基；−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ；ポリ（エチレングリコール）鎖；および受容体リガンドから選択される。
【０１５７】
一部の場合、Ｒ２〜Ｒ５ は水素であり、Ｒ６は、水素、アミノ基に対する保護基；−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ２、およびポリ（エチレングリコール）鎖から選択される。一部の場合、Ｒ２〜Ｒ６は水素である。一部の場合、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ８−Ｃ１８アルキルもしくはＣ８−Ｃ１８アルケニルから、または１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ８−Ｃ１２アルキルもしくはＣ８−Ｃ１２アルケニルから、または、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ１０−Ｃ１２アルキルもしくはＣ１０−Ｃ１２アルケニルから選択される。本開示の組成物は、式（ＩＩ）−（ＩＶ）のアルキレン基を１つまたは多数含み得る。
【０１５８】
一部の場合、本開示の組成物で用いることが可能なオリゴマーまたはポリマーは、繰り返しユニットとして式（ＩＩＩ）のオリゴ（アルキレンアミン）基を複数含む。
【０１５９】
ＮＲ２｛ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ４］ｐ｝ｍ−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ５］ｎ−（ＩＩＩ）
【０１６０】
前記複数の基において、式（ＩＩＩ）の各基では、変数ａ、ｂ、ｐ、ｍ、ｎ、およびＲ２〜Ｒ５は、以下のように独立して定義され、
ａは１かつｂは２〜４の整数であるか；または、ａは２〜４の整数かつｂは１であり、
ｐは１または２であり、
ｍは１または２であり；ｎは０または１であり、ｍ＋ｎは≧２であり；
Ｒ２〜Ｒ５は、互いに独立して、水素；基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７、−ＣＨ２−Ｒ７、または−ＣＨ２−（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）；アミノ基に対する保護基；−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ２；ポリ（エチレングリコール）鎖；ならびにエンドソーム脱出エフェクタおよびレセプターリガンドから選択される。一部の場合、Ｒ２〜Ｒ５水素である。一部の場合、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃを有するＣ８−Ｃ１８アルキルまたはＣ８−Ｃ１８アルケニルから選択される。Ｒ７は、１つのＣ−Ｃを有するＣ８−Ｃ１２アルキルまたはＣ８−Ｃ１２アルケニルから選択することができる。代わりとして、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃを有するＣ１０−Ｃ１２アルキルまたはＣ１０−Ｃ１２アルケニルから選択することができる。
【０１６１】
式（ＩＩＩ）に示される１つまたは複数の窒素原子はプロトン化されて、式（ＩＩＩ）のカチオン基を提供する。
【０１６２】
オプションとして、繰り返しユニットとして式（ＩＩＩ）の基を複数含むオリゴマーまたはポリマーは、さらに、側鎖および／または末端基として式（ＩＩ）のオリゴ（アルキレンアミン）基を１つまたは複数含み得る。
【０１６３】
繰り返しユニットである複数の式（ＩＩＩ）の基において、２つ、３つ、またはそれ以上の式（ＩＩＩ）の基が、オリゴマーまたはポリマーに含有され得る。概して、２〜９個の繰り返しユニットを含む物質を、本明細書ではオリゴマーといい、これは、ポリマーとして１０個以上の繰り返しユニットを含む。したがって、繰り返しユニットとして式（ＩＩＩ）の基を複数含有するポリマーでは、式（ＩＩＩ）の基が１０個以上存在し得る。式（ＩＩＩ）の基は、ポリマーもしくはオリゴマー内で同一の構造を有するか、または、式（ＩＩＩ）の範囲内で２つ以上の異なる構造を有する。一部の場合では、繰り返しユニットとして式（ＩＩＩ）の基を複数含有するオリゴマーまたはポリマーを、式（ＩＩＩ）の異なる基から制御された段階的な重合化において調製された配列定義ポリマーのライブラリの形で、提供することが可能である。
【０１６４】
上記式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）と一致して、アルキレンアミンユニットを、交互鎖において１度繰り返すことができ、その結果、タイプ−Ｓ−Ｌ−Ｌ−Ｓ−または−Ｌ−Ｓ−Ｓ−Ｌのオリゴ（アルキレンアミン）部が生じ得る（式中、Ｓはより短いエチレンアミンユニットを表し、Ｌはより長いアルキレンアミンユニットを表す）。一部の場合、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の基は、繰り返しが起きない、つまり、ｐが１であり、その結果、より短いまたはより長いユニットが対に現れない基である。式（ＩＩ）の基は、式（ＩＩａ）のオリゴ（アルキレンアミン）基であり得、式（ＩＩＩ）の基は、（ＩＩＩａ）のオリゴ（アルキレンアミン）基であり得る：
【０１６５】
−ＮＲ２｛ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ４｝ｍ−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ５］ｎ−Ｒ６（ＩＩａ）
【０１６６】
式中、ａ、ｂ、ｍ、ｎ、およびＲ２〜Ｒ６は式（ＩＩ）のように定義され、式（ＩＩａ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性オリゴマーまたはポリマーの構造を提供し得る。
【０１６７】
−ＮＲ２｛ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ４｝ｍ−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ａＮＲ５］ｎ−（ＩＩＩａ）
【０１６８】
式中、ａ、ｂ、ｍ、ｎ、およびＲ２〜Ｒ５は式（ＩＩＩ）のように定義され、式（ＩＩＩａ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性オリゴマーまたはポリマーの構造を提供し得る。
【０１６９】
さらに、一部の場合では、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のオリゴ（アルキレンアミン）基ではｎは１であり得る。一部の場合では、ｍが１かつｎが１である。一部の場合では、式（ＩＩ）の基は、式（ＩＩｂ）のオリゴ（アルキレンアミン）基であり、式（ＩＩＩ）の基は、式（ＩＩＩｂ）のオリゴ（アルキレンアミン）基である。
【０１７０】
−ＮＲ２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ４−ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−（ＮＲ５）−Ｒ６（ＩＩｂ）
【０１７１】
式中、ａ、ｂ、およびＲ２〜Ｒ６は式（ＩＩ）のように定義され、式（ＩＩｂ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性オリゴマーまたはポリマーの構造を提供し得る。
【０１７２】
−ＮＲ２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ４−ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ５−（ＩＩＩｂ）
【０１７３】
式中、ａ、ｂ、およびＲ２〜Ｒ５は式（ＩＩＩ）のように定義され、式（ＩＩＩｂ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性オリゴマーまたはポリマーの構造を提供し得る。
【０１７４】
式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、および（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）の式のオリゴ（アルキレンアミン）基のアルキレンアミンユニットの長さに関し、交互ユニットの１つは、エチレンアミンユニット（つまり、ａまたはｂの何れかが１である）とすることが可能である。他の交互ユニットは、プロピレンアミンユニット、ブチレンアミンユニット、またはペンチレンアミンユニット（つまり、ａまたはｂのもう一方が整数２〜４である）とすることが可能である。一部の場合、ａまたはｂのもう一方が２または３であり、一部の場合では、ａが１でｂが２であるか、または、ａが２でｂが１である。一部の場合では、式（ＩＩｃ）のオリゴ（アルキレンアミン）基は、基（ＩＩ）の代わりに、もしくは、基（ＩＩ）に加えて用いられ、および／または、式（ＩＩＩｃ）のオリゴ（アルキレンアミン）基は、基（ＩＩＩ）の代わりに、もしくは、基（ＩＩＩ）に加えて用いられる。基（ＩＩｃ）および基（ＩＩＩｃ）の式は以下の通りである。
【０１７５】
−ＮＲ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ５−Ｒ６（ＩＩｃ）
【０１７６】
式中、Ｒ２〜Ｒ６は式（ＩＩ）のように定義され、Ｒ２〜Ｒ６は水素であり、式（ＩＩｃ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性オリゴマーまたはポリマーの構造を提供し得る。
【０１７７】
−ＮＲ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ５−（ＩＩＩｃ）
【０１７８】
式中、Ｒ２〜Ｒ５は式（ＩＩＩ）のように定義され、式（ＩＩＩｃ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性オリゴマーまたはポリマーの構造を提供し得る。
【０１７９】
一部の場合、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、および（ＩＩｃ）の基Ｒ２〜Ｒ６、または、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、および（ＩＩＩｃ）の基Ｒ２〜Ｒ５は、アミノ基に対する保護基とすることができる。保護基の非限定的な例としては、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはカルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）が挙げられる。
【０１８０】
一部の場合、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、および（ＩＩＩｃ）の基Ｒ１〜Ｒ６または式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、および（ＩＩＩｃ）の基Ｒ２〜Ｒ５は受容体リガンド、例えば、Philipp and Wagner in “Gene and Cell Therapy-Therapeutic Mechanisms and Strategy”, 3rd Edition, Chapter 15, CRC Press, Taylor & Francis Group LLC, Boca Raton 2009に記載されている受容体リガンドである。肺組織を標的とする受容体リガンドの例は、Pfeifer et al. 2010, Ther. Deliv. 1 (1): 133-48に記載されている。受容体リガンドとしては、特定の細胞表面構造または特定の細胞タイプに結合するためのペプチドライブラリをスクリーニングすることから得られるような合成環状もしくは線状ペプチド、環状もしくは線状のＲＧＤペプチド、シアル酸、ガラクトース、もしくはマンノースなどの合成もしくは天然の炭水化物、または、炭水化物を、例えば、ペプチド、細胞表面構造を特異的に認識する抗体、葉酸、上皮成長因子およびそれに由来するペプチド、トランスフェリン、抗トランスフェリン受容体の抗体、ナノボディ、および抗体断片、細胞表面分子（例えば、細胞表面レセプター）などに結合し得る承認薬と反応させることから得られる合成リガンドが挙げられる。
【０１８１】
式（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、および（ＩＩｃ）の基Ｒ１〜Ｒ６または式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、および（ＩＩＩｃ）の基Ｒ２〜Ｒ５の何れかがポリ（エチレングリコール）鎖である限り、ポリ（エチレングリコール）鎖の分子量は、約１００ｇ／ｍｏｌ〜２０，０００ｇ／ｍｏｌ、約１，０００ｇ／ｍｏｌ〜１０，０００ｇ／ｍｏｌ、または約１，０００ｇ／ｍｏｌ〜５，０００ｇ／ｍｏｌとすることができる。
【０１８２】
一部の場合、基（ＩＩ）は、式（ＩＩｄ）のオリゴ（アルキレンアミン）基とすることが可能である。
【０１８３】
−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｈ（ＩＩｄ）
【０１８４】
式中、式（ＩＩｄ）に示される１つまたは複数の窒素原子はプロトン化されて、カチオンポリマーまたはデンドリマー構造を提供する。一部の場合、基（ＩＩＩ）は、式（ＩＩＩｄ）のオリゴ（アルキレンアミン）基である。
【０１８５】
−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−（ＩＩＩｄ）
【０１８６】
式中、式（ＩＩＩｄ）に示される１つまたは複数の窒素原子はプロトン化されて、カチオンポリマーまたはデンドリマー構造を提供する。
【０１８７】
リピドイド
改変ポリリボヌクレオチドは、リピドイド製剤にカプセル化することが可能である。リピドイド製剤は、脂質、例えば、脂肪、ワックス、ステロール、脂溶性ビタミン（例えば、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、およびＫ）、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、ならびにリン脂質他などの特徴を有する任意の物質とすることが可能である。例えば、脂質製剤またはリピドイド製剤には、化学文献においてヘルパー脂質と呼ばれるコレステロール、ＤＯＰＥ、ＤＯＰＣ、もしくはＤＳＰＣなどの脂質、および／または、リポプレックスを調製するのに有用なＰＥＧ化脂質もしくは任意の他の脂質が含まれ得る。改変ポリリボヌクレオチドを含む製剤は、少なくとも１つの脂質を含み得るナノ粒子とすることができる。リピドイド製剤は、脂質ナノ粒子とすることが可能である。脂質は、限定するわけではないが、ＤＯＰＥ、ＤＯＰＣ、ＤＳＰＣ、コレステロール、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、およびＰＥＧ化脂質から選択され得る。別の態様では、脂質は、限定するわけではないが、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ―ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、およびＤＯＤＭＡなどのカチオン性脂質とすることができる。
【０１８８】
リピドイドを含有する組成物は、約４０〜６０％リピドイド、約４０〜６０％コレステロール、および約５〜２０％ＰＥＧ−脂質（組成物の全重量に対する重量％）とすることができる。リピドイドを含有する組成物は、約５０〜６０％リピドイド、約４０〜５０％コレステロール、および約５〜１０％ＰＥＧ−脂質とすることができる。リピドイドを含有する組成物は、約５０〜７５％リピドイド、約２０〜４０％コレステロール、および約１〜１０％ＰＥＧ−脂質とすることができる。リピドイドを含有する組成物は、約６０〜７０％リピドイド、約２５〜３５％コレステロール、および約５〜１０％ＰＥＧ−脂質とすることができる。組成物は、例えば、Akinc et al, 2007, Nat Biotech, 26, 561-569；Akinc et al, 2009, Mol Ther, 17, 872-9；Love et al, 2010, PNAS, 107, 1864-9；米国特許第８４５０２９８号明細書、国際公開第２００６／１３８３８０号に記載されている技法を用いて提供することができる。ＲＮＡ／リピドイド複合体は、一本鎖ＲＮＡまたはｍＲＮＡなどのＲＮＡを細胞に送達するのに有用な粒子を形成し得る。
【０１８９】
本開示の組成物は、式（ＩＶ）のリピドイドによりカプセル化した改変ポリリボヌクレオチドとすることが可能である。
【０１９０】
Ｒ１−ＮＲ２｛ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ４］ｐ｝ｍ−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ５］ｎ−Ｒ６（ＩＶ）
【０１９１】
式中、変数ａ、ｂ、ｐ、ｍ、ｎ、およびＲ１〜Ｒ６は、以下のように定義され：
ａは１かつｂは２〜４の整数であるか；または、ａは２〜４の整数かつｂは１であり、
ｐは１または２であり、
ｍは１または２であり；ｎは０または１であり、ｍ＋ｎは≧２であり；
Ｒ１〜Ｒ６は、互いに独立して、水素；基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−Ｒ７、または−ＣＨ２−Ｒ７（式中、Ｒ７は１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）；アミノ基に対する保護基；−Ｃ（ＮＨ）−ＮＨ２；ポリ（エチレングリコール）鎖；および受容体リガンドから選択され；ただし、Ｒ１〜Ｒ６の間の少なくとも２つの残基が、基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７、−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ７、−ＣＨ２−ＣＨ２−（Ｃ＝Ｏ）、−ＮＨ−Ｒ７、または−ＣＨ２−Ｒ７（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）であることを条件とする。
【０１９２】
一部の場合、Ｒ１〜Ｒ６は、独立して、水素；基−ＣＨ２−Ｃ（ＯＨ）Ｈ−Ｒ７または−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）；アミノ基に対する保護基；およびポリ（エチレングリコール）鎖から選択され；ただし、Ｒ１〜Ｒ６の間の少なくとも２つの残基が、基−ＣＨ２−Ｃ（ＯＨ）Ｈ−Ｒ７または−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）であることを条件とする。一部の場合、Ｒ１〜Ｒ６は、独立して、水素；および基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７または−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１６アルキルまたはＣ３−Ｃ１６アルケニルから選択され；ただし、Ｒ１〜Ｒ６の間の少なくとも２つの残基が、基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７または−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）であることを条件とする。一部の場合、Ｒ１およびＲ６は、独立して、水素；および基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７または−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）から選択され；Ｒ２〜Ｒ５は、全て、基−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−Ｒ７または−ＣＨ（Ｒ７）−ＣＨ２−ＯＨ（式中、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ３−Ｃ１８アルキルまたはＣ３−Ｃ１８アルケニルから選択される）である。一部の場合、Ｒ７は、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ８−Ｃ１６アルキルもしくはＣ８−Ｃ１８アルケニルから、または、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ８−Ｃ１２アルキルもしくはＣ８−Ｃ１２アルケニルから、または、１つのＣ−Ｃ二重結合を有するＣ１０−Ｃ１２アルキルもしくはＣ１０−Ｃ１２アルケニルから選択される。
【０１９３】
式（ＩＶ）に示される１つまたは複数の窒素原子をプロトン化して、式（ＩＶ）のカチオン性リピドイドを提供することができる。
【０１９４】
上記式（ＩＶ）と一致して、アルキレンアミンユニットを、交互鎖において１度繰り返すことができ、その結果、タイプ−Ｓ−Ｌ−Ｌ−Ｓ−または−Ｌ−Ｓ−Ｓ−Ｌ−のオリゴ（アルキレンアミン）部が生じ得る（式中、Ｓはより短いエチレンアミンユニットを表し、Ｌはより長いアルキレンアミンユニットを表す）。一部の場合、式（ＩＶ）のリピドイドは、繰り返しが起きない、つまり、ｐが１であり、その結果、より短いまたはより長いユニットが対に現れないリピドイドである。式（ＩＶ）のリピドイドは、（ＩＶａ）のリピドイドとすることができる。
【０１９５】
Ｒ１−ＮＲ２｛ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ｝ｍ−［ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ５］ｎ−Ｒ６（ＩＶａ）
【０１９６】
式中、ａ、ｂ、ｍ、ｎ、およびＲ１〜Ｒ６は式（ＩＶ）のように定義され、式（ＩＶａ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性リピドイドを提供し得る。
【０１９７】
一部の場合、リピドイドは、式（ＩＶ）のリピドイドである。一部の場合、「ｎ」は、式（ＩＶ）のリピドイドにおいて１である。一部の場合、式（ＩＶ）のリピドイドにおいて、「ｍ」は１かつ「ｎ」は１である。一部の場合、式（ＩＶ）のリピドイドは、式（ＩＶｂ）のリピドイドである。
【０１９８】
Ｒ−ＮＲ２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ３−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｂ−ＮＲ４−ＣＨ２−（ＣＨ２）ａ−ＮＲ５−Ｒ６（ＩＶｂ）
【０１９９】
式中、ａ、ｂ、およびＲ１〜Ｒ６は式（ＩＶ）のように定義され、式（ＩＶｂ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性リピドイドを提供し得る。
【０２００】
式（ＩＶ）、（ＩＶａ）、および（ＩＶｂ）のリピドイドのアルキレンアミンユニットの長さに関し、交互ユニットの１つがエチレンアミンユニット（つまり、ａまたはｂの何れかが１である）である必要があることを理解されたい。他の交互ユニットは、プロピレンアミンユニット、ブチレンアミンユニット、ペンチレンアミンユニット、または別の適切なユニット（つまり、ａまたはｂのもう一方が整数２〜４である）とすることが可能である。一部の場合、式（Ｎ）のリピドイドは、式（ＩＶｃ）のリピドイドである。
【０２０１】
Ｒ１−ＮＲ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ４−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＲ５−ＲＳ（ＩＶｃ）
【０２０２】
式中、Ｒ１〜Ｒ６は式（ＩＶ）のように定義され、式（ＩＶｃ）に示される１つまたは複数の窒素原子は、プロトン化されて、カチオン性リピドイドを提供し得る。
【０２０３】
一部の場合、式（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、および（ＩＶｃ）の基Ｒ１〜Ｒ６は、アミノ基に対する保護基である。保護基の非限定的な例としては、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、またはカルボベンゾキシ（Ｃｂｚ）が挙げられる。
【０２０４】
式（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、および（ＩＶｃ）の基Ｒ１〜Ｒ６は、Philipp and Wagner in “Gene and Cell Therapy-Therapeutic Mechanisms and Strategy”, 3rd Edition, Chapter 15, CRC Press, Taylor & Francis Group LLC, Boca Raton 2009に記載されている受容体リガンドなどの受容体リガンドである。肺組織を標的にする受容体リガンドの例は、Pfeifer et al. 2010, Ther. Deliv. 1 (1): 133-48に記載されている。受容体リガンドとしては、特定の細胞表面構造または特定の細胞タイプに結合するためのペプチドライブラリをスクリーニングすることから得られるような合成環状もしくは線状ペプチド、環状もしくは線状のＲＧＤペプチド、シアル酸、ガラクトース、もしくはマンノースなどの合成もしくは天然の炭水化物、または、炭水化物を、例えば、ペプチド、細胞表面構造を特異的に認識する抗体、葉酸、上皮成長因子およびそれに由来するペプチド、トランスフェリン、抗トランスフェリン受容体の抗体、ナノボディ、および抗体断片、細胞表面分子（例えば、細胞表面レセプター）などに結合し得る承認薬と反応させることから得られる合成リガンドが挙げられる。
【０２０５】
式（ＩＶ）、（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、および（ＩＶｃ）の基Ｒ１〜Ｒ６が、ポリ（エチレングリコール）鎖である限り、ポリ（エチレングリコール）鎖の分子量は、約１００ｇ／ｍｏｌ〜２０，０００ｇ／ｍｏｌ、約１，０００ｇ／ｍｏｌ〜１０，０００ｇ／ｍｏｌ、または約１，０００ｇ／ｍｏｌ〜５，０００ｇ／ｍｏｌとすることができる。一部の場合、ＰＥＧ鎖の分子量は、所望の濃度の組成物を提供し得る。
【０２０６】
多数のリピドイド分子は、改変ポリリボヌクレオチドに関連し得る。例えば、組成物は、１個の改変ポリリボヌクレオチド〜１００個のリピドイド分子、１個の改変ポリリボヌクレオチド〜１，０００個のリピドイド分子、１０個の改変ポリリボヌクレオチド〜１，０００個のリピドイド分子、または１００個の改変ポリリボヌクレオチド〜１０，０００個のリピドイド分子を含み得る。改変ポリリボヌクレオチドとリピドイドの複合体は、粒子を形成し得る。粒子の直径は、例えば、１０ナノメートル〜１，２００ナノメートルに及び得る。一部の場合では、粒子の直径は、１０ナノメートル〜５００ナノメートルに及ぶ。一部の場合では、粒子の直径は、２０ナノメートル〜１５０ナノメートルである。
【０２０７】
対象への投与
本明細書にさらに記載するのは、ポリヌクレオチド（例えば、ポリリボヌクレオチド）を対象に投与する方法である。ポリリボヌクレオチドは、ポリリボヌクレオチドをカプセル化するカプセル化剤を用いた粒子またはカプセルなどの、送達剤により対象に提供することが可能である。送達剤は、治療薬とすることが可能である。対象は、ヒト、例えば、がんにかかった人などとすることが可能である。送達剤を対象に所与の容量で投与することができ（例えば、自己投与または医療供給者などの第三者による投与）、投薬量は、時間とともに増加させる、時間と共に減少させる、または、一定に保つことが可能である。投薬量は、対象の病気、例えば、奇病またはがんなどの進行または退行に基づき変更することが可能である。
【０２０８】
本開示のポリリボヌクレオチドを１つまたは複数の医薬的に許容される担体と共に製剤化して対象に投与することが可能である。一部の場合では、ポリリボヌクレオチドを、標的の細胞または細胞集団への標的化送達向けに製剤化することが可能である。一部の場合では、ポリリボヌクレオチドを、細胞または細胞集団への非標的化送達向けに製剤化することが可能である。次に、ポリリボヌクレオチドのコード化ポリペプチド生成物を転写し、それをレシピエント細胞に蓄積させる。
【０２０９】
組成物は、本明細書に記載の任意の改変ポリリボヌクレオチドと、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、および／または賦形剤などの他の化学成分との組み合わせとすることが可能である。組成物は、化合物を生物に投与することを容易にする。医薬組成物は、医薬組成物として治療的に有効な量で、例えば、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、経口投与、経腸投与、エアロゾル投与、非経口的投与、経眼投与、肺内投与、経皮投与、経膣投与、経耳投与、経鼻投与、および局所投与を含む種々の形態および経路により投与することが可能である。
【０２１０】
組成物は、局所的にまたは全身に、例えば、オプションとしてデポ製剤または徐放性製剤において化合物を臓器に直接注入することにより、投与することが可能である。医薬組成物は、速放性製剤の形で、徐放性製剤の形で、または、速効型製剤の形で提供することが可能である。速報性形態は、即時放出を提供することが可能である。徐放性製剤は、制御放出または持続遅延放出を提供することが可能である。
【０２１１】
吸入による投与では、活性化合物は、エアロゾル、ミスト、蒸気、噴霧、またはパウダーの形態とすることが可能である。医薬組成物は、適切な噴射剤、例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適切なガスを用いて、加圧パックまたは噴霧器から、エアロゾル噴霧提示の形態で、都合良く送達される。加圧エアロゾルの場合、弁を提供することにより投薬量単位を決定して、計測量を送達することが可能である。吸入器または吹き入れ器で用いるための、例えばゼラチンでできたカプセルおよびカートリッジを、化合物および適切なパウダー基剤、例えば、ラクトースまたはデンプンのパウダー混合物を含有させて製剤化することが可能である。
【０２１２】
眼は、視覚の維持に絶対不可欠な眼の成分を供給する、構造的および機能的に別個のいくつかの血管床を含む。これらの床には網膜および脈絡膜の脈管構造が含まれ、これは、網膜の内部および外部それぞれと、角膜の周囲に位置する角膜縁脈管構造に供給する。
【０２１３】
改変ポリリボヌクレオチドを含む医薬組成物は、例えば、局所投与、経口、全身投与、硝子体内投与、前房内投与、結膜下投与、テノン嚢下投与、眼球後投与、眼内投与、後傍胸腔内投与、眼窩周囲投与、網膜下投与、および脈絡膜上投与を含む任意の適切な形態または経路により眼に投与することが可能である。組成物は、前房、後房、硝子体腔（硝子体内）、網膜本体、および／または網膜下腔を含む眼の任意の部分に製剤を注入することにより投与することが可能である。組成物は、また、無侵襲的方法により送達することが可能である。製剤を投与する無侵襲法には、無針注入デバイスの使用が含まれる。多数の投与経路を、医薬組成物の効率的な送達のために用いることが可能である。
【０２１４】
本開示の改変ポリヌクレオチドを、例えば、血管内皮細胞などの内皮細胞、網膜色素上皮（ＲＰＥ）などの網膜細胞、角膜細胞、線維芽細胞、星状細胞、グリア細胞、周皮細胞、虹彩上皮細胞、神経起源の細胞、毛様体上皮細胞、ミューラー細胞、外直筋細胞などの眼を囲み、眼に付着した筋細胞、眼窩脂肪細胞、強膜および上強膜の細胞、小柱網細胞、ならびに結合組織細胞を含む任意の適切な眼細胞に送達することが可能である。
【０２１５】
本明細書に開示する組成物の、対象への投与時の、対象の細胞によるトランスフェクション効率は、少なくとも約８０％、９０％、または９５％である。一部の場合、カプセル化組成物の対象への投与時のトランスフェクション効率は、非カプセル化ポリリボヌクレオチドに対し、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％、３００％、３２５％、３５０％、３７５％、４００％、４５０％、または５００％である。一部の場合、修飾ポリリボヌクレオチドを含む組成物（一部の場合は、非修飾ポリリボヌクレオチドも含む）の対象への投与時のトランスフェクション効率は、非修飾ポリリボヌクレオチドを単に含有する組成物に対し、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％、３００％、３２５％、３５０％、３７５％、４００％、４５０％、または５００％である。組成物のトランスフェクション効率は、細胞透過性ペプチドまたはカチオン性コーティングなどの担体を組成物の外層に加えることにより、高めることが可能である。組成物のトランスフェクション効率は、組成物の濃度により調整することが可能である。
【０２１６】
本明細書に記載する改変ポリリボヌクレオチドを含む組成物の調製方法は、化合物を、固形、半固形、または液体の組成物を形成するための、不活性で医薬的に許容される１つまたは複数の賦形剤または担体とともに製剤化するステップを含む。固体組成物としては、例えば、パウダー、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤、および坐剤が挙げられる。液体組成物としては、例えば、化合物が溶解した溶液、化合物を含むエマルジョン、本明細書に開示する化合物を含む、リポソーム、ミセル、またはナノ粒子を含有する溶液が挙げられる。半固体組成物としては、例えば、ゲル、懸濁液、およびクリームが挙げられる。組成物は、液体溶液、液体懸濁液、使用前に液体に溶解もしくは懸濁するのに適切な個体形態中に存在するか、またはエマルジョンとして存在し得る。これらの組成物は、また、少量の無毒性補助剤物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、および他の医薬的に許容される添加剤などを含有し得る。
【０２１７】
医薬的に許容される賦形剤の非限定的例は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)；Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980；およびPharmaceutical Dosage Forms andDrug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)に見られ、これらはそれぞれ参照によりその全体が組み込まれる。
【０２１８】
ポリヌクレオチド（例えば、ポリリボヌクレオチド）を含む組成物は、種々の投薬量で提供することが可能である。ポリヌクレオチドまたはポリリボヌクレオチドの投与量は、約１μｇ〜約１０００μｇ、約１μｇ〜約５００μｇ、約１μｇ〜約１０００μｇ、約１０μｇ〜約５００μｇ、約２０μｇ〜約５００μｇ、約２５μｇ〜約５００μｇ、約３０μｇ〜約５００μｇ、約４０μｇ〜約５００μｇ、約５０μｇ〜約５００μｇ、約１０μｇ〜約２５０μｇ、約２０μｇ〜約２５０μｇ、約３０μｇ〜約２５０μｇ、約４０μｇ〜約２５０μｇ、約５０μｇ〜約２５０μｇ、約１μｇ〜約２００μｇ、約１０μｇ〜約２００μｇ、約２０μｇ〜約２００μｇ、約３０μｇ〜約２００μｇ、約４０μｇ〜約２００μｇ、約５０μｇ〜約２００μｇ、約２５μｇ〜約５０μｇ、約２５μｇ〜約１００μｇ、約２５μｇ〜約１５０μｇ、約２５μｇ〜約２００μｇ、約２５μｇ〜約２５０μｇ、約２５μｇ〜約３００μｇ、約２５μｇ〜約３５０μｇ、約２５μｇ〜約４００μｇ、約２５μｇ〜約４５０μｇ、約２５μｇ〜約５００μｇ、約５０μｇ〜約７５０μｇ、または約２５μｇ〜約１０００μｇの改変ポリリボヌクレオチドとすることが可能である。一部の場合では、ポリヌクレオチドの投与量は、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約５０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約５０ｍｇ、約２５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約３０ｍｇ〜約５０ｍｇ、約４０ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１ｍｇ〜約２５ｍｇ、約２ｍｇ〜約２５ｍｇ、約３ｍｇ〜約２５ｍｇ、約４ｍｇ〜約２５ｍｇ、約５ｍｇ〜約２５ｍｇ、約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約２ｍｇ〜約２０ｍｇ、約３ｍｇ〜約２０ｍｇ、約４ｍｇ〜約２０ｍｇ、または約５ｍｇ〜約２０ｍｇの改変ポリリボヌクレオチドである。
【０２１９】
製剤中の（例えば、カプセル化剤内の）ポリリボヌクレオチドのパーセンテージを、０．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、０．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、0．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１重量％ポリリボヌクレオチド以上、１．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、２重量％ポリリボヌクレオチド以上、２．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、２．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、２．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、３重量％ポリリボヌクレオチド以上、３．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、３．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、３．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、４重量％ポリリボヌクレオチド以上、４．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、４．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、４．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、５重量％ポリリボヌクレオチド以上、５．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、５．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、５．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、６重量％ポリリボヌクレオチド以上、６．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、６．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、６．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、７重量％ポリリボヌクレオチド以上、７．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、７．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、７．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、８重量％ポリリボヌクレオチド以上、８．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、８．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、８．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、９重量％ポリリボヌクレオチド以上、９．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、９．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、９．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１０重量％ポリリボヌクレオチド以上、１０．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１０．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１０．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１１重量％ポリリボヌクレオチド以上、１１．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１１．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１１．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１２重量％ポリリボヌクレオチド以上、１２．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１２．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１２．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１３重量％ポリリボヌクレオチド以上、１３．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１３．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１３．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１４重量％ポリリボヌクレオチド以上、１４．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１４．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１４．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１５．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１５．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１５．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１６重量％ポリリボヌクレオチド以上、１６．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１６．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１６．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１７重量％ポリリボヌクレオチド以上、１７．２５重��％ポリリボヌクレオチド以上、１７．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１７．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１８重量％ポリリボヌクレオチド以上、１８．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１８．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１８．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１９重量％ポリリボヌクレオチド以上、１９．２５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１９．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、１９．７５重量％ポリリボヌクレオチド以上、２０重量％ポリリボヌクレオチド以上、２０．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、２１重量％ポリリボヌクレオチド以上、２１．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、２２重量％ポリリボヌクレオチド以上、２２．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、２３重量％ポリリボヌクレオチド以上、２３．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、２４重量％ポリリボヌクレオチド以上、２４．５重量％ポリリボヌクレオチド以上、または２５重量％ポリリボヌクレオチド以上とすることが可能である。あるいは、製剤中の（例えば、カプセル化剤内の）ポリリボヌクレオチドのパーセンテージを、約２５％ポリリボヌクレオチド未満、２４．５％ポリリボヌクレオチド未満、２４％ポリリボヌクレオチド未満、２３．５％ポリリボヌクレオチド未満、２３％ポリリボヌクレオチド未満、２２．５％ポリリボヌクレオチド未満、２２％ポリリボヌクレオチド未満、２１．５％ポリリボヌクレオチド未満、２１％ポリリボヌクレオチド、２０．５％ポリリボヌクレオチド未満、２０％ポリリボヌクレオチド未満、１９．５％ポリリボヌクレオチド未満、１９％ポリリボヌクレオチド、１８．５％ポリリボヌクレオチド未満、１８％ポリリボヌクレオチド未満、１７．５％ポリリボヌクレオチド未満、１７％ポリリボヌクレオチド未満、１６．５％ポリリボヌクレオチド未満、１６％ポリリボヌクレオチド未満、１５．５％ポリリボヌクレオチド未満、１５％ポリリボヌクレオチド、１４．５％ポリリボヌクレオチド未満、１４％ポリリボヌクレオチド未満、１３．５％ポリリボヌクレオチド未満、１３％ポリリボヌクレオチド未満、１２．５％ポリリボヌクレオチド未満、１２％ポリリボヌクレオチド未満、１１．５％ポリリボヌクレオチド未満、１１％ポリリボヌクレオチド未満、１０．５％ポリリボヌクレオチド未満、１０％ポリリボヌクレオチド未満、９．５％ポリリボヌクレオチド未満、９％ポリリボヌクレオチド未満、８．５％ポリリボヌクレオチド未満、８％ポリリボヌクレオチド未満、７．５％ポリリボヌクレオチド未満、７％ポリリボヌクレオチド未満、６．５％ポリリボヌクレオチド未満、６％ポリリボヌクレオチド未満、５．５％ポリリボヌクレオチド未満、５％ポリリボヌクレオチド未満、４．５％ポリリボヌクレオチド未満、４％ポリリボヌクレオチド、３．５％ポリリボヌクレオチド未満、３％ポリリボヌクレオチド、２．５％ポリリボヌクレオチド未満、２％ポリリボヌクレオチド未満、１．５％ポリリボヌクレオチド未満、１％ポリリボヌクレオチド未満、０．５％ポリリボヌクレオチド未満、または０．１％ポリリボヌクレオチド未満とすることが可能である。
【０２２０】
一部の場合、本開示のカプセル化組成物は、対象において、ポリリボヌクレオチド、医薬担体、カプセル化剤、またはポリマー物質（例えば、ポリエチレングリコールもしくはポリエチレンイミン）の血漿濃度、血清濃度、もしくは血中濃度を、デバイスの使用から約１秒〜約３０分、約１秒〜２０分、約１秒〜１０分、約１秒〜５分、約１秒〜２分、約１秒〜１分、約１秒〜約３０秒、約３０秒〜３０分、約３０秒〜２０分、約３０秒〜１０分、約３０秒〜５分、約３０秒〜２分、約３０秒〜約１分、約１分〜約３０分、約１分〜約２５分、約１分〜約２０分、約１分〜約１５分、約１分〜約１０分、約５分〜約３０分、約５分〜約２５分、約５分〜約２０分、約５分〜約１５分、約５分〜約１０分、約１０分〜約３０分、約１０分〜約２５分、約１０分〜約２０分、または約１０分〜約１５分以内に生じさせることが可能である。ポリリボヌクレオチド、医薬担体、カプセル化剤、またはポリマー物質（例えば、ポリエチレングリコールもしくはポリエチレンイミン）濃度の血漿濃度、血清濃度、もしくは血中濃度は、ピーク濃度または平均濃度であり得る。
【０２２１】
処置および病状
本開示の方法、ポリリボヌクレオチド、および医薬組成物は、病状を処置する方法を提供する。処置には、対象（例えば、病気の患者および／または異常のある実験動物）を処置することが含まれる。一部の場合では、異常とはがんである。一部の場合では、異常とは肺がんである。一部の場合では、異常とは乳がんである。一部の場合では、対象はヒトである。処置は、病気の臨床的発症の前に対象に提供され得る。処置は、病気の臨床的発症の後に対象に提供され得る。処置は、病気の臨床的発症の１分以後、５分以後、１０分以後、３０分以後、１時間以後、２時間以後、３時間以後、４時間以後、５時間以後、６時間以後、１２時間以後、１日以後、１週間以後、６か月以後、１２か月以後、または２年以後に、対象に提供することができる。処置は、病気の臨床的発症後、１分以上、１０分以上、３０分以上、１時間以上、２時間以上、３時間以上、４時間以上、５時間以上、６時間以上、１２時間以上、１日以上、１週間以上、１か月以上、６か月以上、１２か月以上、または２年以上の期間の間、対象に提供することができる。処置は、病気の臨床的発症後、２年以下、１２か月以下、６か月以下、１か月以下、１週間以下、１日以下、１２時間以下、６時間以下、５時間以下、４時間以下、３時間以下、２時間以下、１時間以下、３０分以下、１０分以下、または１分以下の期間の間、対象に提供することができる。処置は、また、治験においてヒトを処置することを含み得る。
【０２２２】
本明細書に記載の改変ポリリボヌクレオチドを含有する組成物は、予防処置および／または治療処置のために投与することが可能である。治療用途では、改変ポリリボヌクレオチドを、肺がんや乳がんなどの病気をすでに患っている対象に対し、病気の症状を治すまたは少なくとも改善するコード化ポリリボヌクレオチドの量を提供するのに十分な量で投与することが可能である。改変ポリリボヌクレオチドは、また、病気が発現する、病気に罹患する、または、病気を悪化させる可能性を低減させるために投与することが可能である。この使用に有効な量は、病気または異常の重症度および経過、改変ポリヌクレオチドのトランスフェクション効率、コード化ポリペプチドの標的分子に対する親和性、以前の治療、対象の健康状態、体重、薬物に対する反応、ならびに処置する医師の判断に基づき変わり得る。
【０２２３】
本開示のポリリボヌクレオチドを用いて、例えば、ＡＴＰ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーの遺伝子の欠陥または機能不全に関連する異常を処置することが可能である。ＡＴＰ−結合カセット（ＡＢＣ）ファミリーの遺伝子に関連する異常の非限定的例としては：加齢黄斑変性、良性反復性肝内胆汁鬱滞、カンチュ症候群、先天性両側輸精管欠損、先天性高インスリン症、嚢胞性線維症、デュビン・ジョンソン症候群、家族性拡張型心筋症、家族性ＨＤＬ欠乏症、乳児全身性大動脈石灰化症、ハーレクイン魚鱗癬、遺伝性膵炎、妊娠性肝内胆汁鬱滞、葉状魚鱗癬、持続性新生児糖尿病、進行性家族性肝内胆汁鬱滞、弾性線維性仮性黄色腫、網膜色素変性、シトステロール血症、シュタルガルト病、サーファクタント機能不全、タンジール病、Ｘ連鎖副腎白質ジストロフィー、Ｘ連鎖鉄芽球性貧血、および運動失調が挙げられる。
【０２２４】
本開示のポリリボヌクレオチド、方法、および医薬組成物を用いて、例えば、がんを処置することが可能である。がんの非限定的例としては：急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、ＡＩＤＳ関連がん、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍、例えば小脳星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、視覚経路および視床下部の神経膠腫、乳がん、気管支腺腫、バーキットリンパ腫、原発不明の細胞種、中枢神経系リンパ腫、小脳星状細胞腫、子宮頸がん、小児がん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸がん、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、線維形成性小細胞腫瘍、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、ユーイング肉腫、胚細胞腫瘍、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頸部がん、心臓がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼内黒色腫、膵島細胞がん、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭がん、口腔および口腔がん、脂肪肉腫、肝臓がん、肺がん、例えば非小細胞肺がんおよび小細胞肺がん、リンパ腫、白血病、マクログロブリン血症、骨の悪性線維性組織球腫／骨肉腫、髄芽腫、メラノーマ、中皮腫、原発不明の転移性頸部扁平上皮がん、口腔がん、多発性内分泌腺腫症候群、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、鼻腔および副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん、口腔咽頭がん、骨肉腫/骨の悪性線維性組織球腫、卵巣がん、上皮性卵巣がん、卵巣胚細胞腫瘍、膵臓がん、膵臓がん島細胞、副鼻腔および鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、松果体星状細胞腫、松果体胚細胞腫、下垂体腺腫、胸膜肺芽腫、形質細胞腫瘍、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎盂および尿管移行細胞がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、皮膚がん、皮膚メルケル細胞がん腫、小腸がん、軟部組織肉腫、扁平上皮がん、胃がん、Ｔ細胞リンパ腫、咽喉がん、胸腺腫、胸腺がん、甲状腺がん、トロホブラスト腫瘍（妊娠性）、原発部位不明のがん、尿道がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。一部の場合では、改変ポリリボヌクレオチドを対象に投与して、肺がんを処置する。一部の場合では、改変ポリリボヌクレオチドを対象に投与して、乳がんを処置する。
【０２２５】
一部の場合では、本開示のポリヌクレオチドは、ＡＴＰ−結合カセット、サブファミリーＡ、例えばＡＢＣＡ３などのタンパク質に対し少なくとも８０％相同的であるポリペプチドをコード化し得る。
【０２２６】
多数の改変ポリリボヌクレオチドを、任意の順でまたは同時に投与することが可能である。改変ポリリボヌクレオチドは、同一の標的分子を標的にするポリリボヌクレオチドを含む単一パッケージか、または、複数のパッケージに、一緒にまたは別々に包装することが可能である。改変ポリリボヌクレオチドの１つまたは全ては、多数回投与で与えることが可能である。同時ではない場合、多数回投与の間のタイミングを変更することができる。
【０２２７】
改変ポリリボヌクレオチドは、症状の発症後できるだけ早く対象に投与することが可能である。改変ポリリボヌクレオチドは、病気または異常の発症が検出されたかまたは疑われた後、可能な限り早く、病気の処置に必要な期間の間、例えば、約１か月、約６か月、約１２か月、約１８か月、約２４か月、または任意の適切な期間の間、投与することが可能である。処置の長さは、各対象によって異なり得る。
【実施例】
【０２２８】
実施例１：肺疾患に悩むヒト対象の処置のための、改変ポリリボヌクレオチドを含む組成物の製剤化
組成物を以下のように製剤化する。
【０２２９】
ＡＢＣＡ３遺伝子配列、ＮＣＢＡ参照配列：ＮＭ＿００１０８９．２をコードする改変ポリヌクレオチドを、国際公開第２０１１０１２３１６号、同第２０１４２０７２３１号、同第２０１４１５３０５２号、同第２０１３１８５０６９号に記載されているように調整する。分岐ポリエチレンイミン（ＰＥＩ、平均ＭＷ＝２５ｋＤａ）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（商標）（ドイツ国、シュネルドルフ）から購入し、さらなる精製なしに用いる。ＰＥＩを、エンドトキシンフリー水で希釈し、ＨＣｌを用いてｐＨ７．４に調整する。エンドトキシンフリー水は、Ｂ．Ｂｒａｕｎ（ドイツ国、メルズンゲン）から購入する。
【０２３０】
改変ポリリボヌクレオチドとＰＥＩを、４．０ｍＬの再蒸留水に希釈し、それぞれ、２５０μｇ／ｍｌ  ｍＲＮＡと３２６．３μｇ／ｍｌ  ＰＥＩという濃度をもたらす（おおよそ、ポリヌクレオチド対ＰＲＩ比が１０である）。改変ポリリボヌクレオチド溶液をＰＥＩ溶液にピペッティングし、上下にピペッティングしながら混合して、１２５μｇ／ｍＬという最終ポリリボヌクレオチド濃度を生じさせる。複合体を室温で２０分間インキュベーションしてから、対象に投与することが可能である。
【０２３１】
実施例２：ヒトＡＢＣＡ３の合成のための、改変ポリリボヌクレオチドの設計、合成、製剤化、および細胞に基づいた特徴付け
以下の配列を含む、ヒトＡＢＣＡ３のバリエーションをコードする改変ポリリボヌクレオチドの８つの異なるタイプを調製する。
【０２３２】
【表７】
2018520155.tif 000013
【０２３３】
構成体をベクターにサブクローニングし、標準的な手順（例えば、ｍａｘｉ  ｐｒｅｐ）を用いて増幅させる。各構成体の核酸配列を、配列決定技法を用いて確かめる。
【０２３４】
実施例３：ヒト肺胞上皮性細胞株における改変ポリリボヌクレオチドの発現
表６に記載した配列を発現する異なる構成体を、ヒト肺胞上皮性細胞株Ａ５４９、ＨｅｐＧ２、およびＨＥＫ２９３細胞に投与する。各構成体を、Ｎ／Ｐ比が約８である製剤に組み込む（Ｎ／Ｐ＝ＤＮＡのリン酸基に対するカチオン性ポリマーのアミン基のモル比）。製剤の例および構成要素のモル比を表８に示す。
【０２３５】
【表８】
2018520155.tif 000014
【０２３６】
本明細書で用いる場合、ｄＬ＿０１は、以下の通りである。
【０２３７】
【化５】
2018520155.tif 000015
【０２３８】
本明細書に用いる場合、ｄＬ＿０５は以下の通りである。
【０２３９】
【化６】
2018520155.tif 000016
【０２４０】
各製剤のポリプレックスサイズおよびゼータ電位を測定する。各製剤の安定度を、種々のｐＨおよび温度で、勢いよく振とうさせた後、測定する。
【０２４１】
各ポリリボヌクレオチド製剤の半減期、ＲＮＡ取り込み、および免疫原性を、３つの肺上皮性細胞株全て（Ａ５４９、ＨｅｐＧ２、およびＨＥＫ２９３）において測定する。
【０２４２】
実施例４：レポーター遺伝子をコードする改変ポリリボヌクレオチドの取り込み、発現、および分布
改変ポリリボヌクレオチドは、ホタルルシフェラーゼ（ＦＦＬ、１．６４ｋｂ）、トマトレッド（ＴＲ、１．８６ｋｂ）、高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ、０．９４ｋｂ）、およびＬａｃＺ（３．３ｋｂ）レポーターをコードする。この研究は、また、ポリエチレンイミン（「ＰＥＩ」）とＥＰＥ（アミノエチルおよびアミノプロピルユニットの合成ポリマー；ＥＰ−Ａ１３０３４５３９を参照されたい（これは、参照により本明細書に組み込まれるものとする）の製剤間での、細胞分布（例えば、肺胞タイプＩＩ上皮細胞、肺胞タイプＩ上皮細胞、肺内毛細血管内皮細胞）、ならびに、レポーター遺伝子をコードする異なる改変ポリリボヌクレオチドの最適な取り込み、発現、および分布のための投与量範囲の変動の比較について記載する。表９は、マウスモデルでテストする異なる投与レジメンを示す。
【０２４３】
【表９−１】
2018520155.tif 000017
【表９−２】
2018520155.tif 000018
【０２４４】
投与経路：吸入（エアロゾル）。図１は、改変ポリリボヌクレオチドのマウスへのエアロゾル投与の例を示す。実験は、野生型Ｃ５７Ｂ１６マウスなどの任意のマウスにおいて行うことが可能である。ホタルルシフェラーゼ（ＦＦＬ、１．６４ｋｂ）、トマトレッド（ＴＲ、１．８６ｋｂ）、高感度緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ、０．９４ｋｂ）、およびＬａｃＺ（３．３ｋｂ）レポーターの発現を、総数５４匹のマウスにおいて測定する。
【０２４５】
実施例５：ＡＢＣＡ３タンパク質をコードする改変ポリリボヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏでの取り込み、発現、および分布
総数３６匹の野生型Ｃ５７Ｂ１６マウスに、表８に列記した１つまたは複数の製剤を用いて調製した、表７のポリリボヌクレオチドを含む１つまたは複数の構成体を投与する。気管内チューブを、投与経路として用いる。
【０２４６】
各マウスの肺組織を、各ペプチド気管内投与の２４時間後に採取する。マウス１匹あたり一方の肺の組織を急速冷凍し、ｑＰＣＲ、ウェスタンブロット、およびＥＬＩＳＡにより、ＡＢＣＡ３タンパク質の発現について解析する。マウス１匹あたり一方の肺の組織をホルマリンに固定し、改変ポリリボヌクレオチドがｉｎ  ｓｉｔｕで存在するか否か、および組織学的解析のために解析する。気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を収集し、マーカＩＬ−１０、ＭＩＰ−ｌα、ＩＮＦ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、およびＩＬ−６の発現レベルを解析して、各改変ポリリボヌクレオチドの免疫原性を求める。
【０２４７】
実施例６：ＡＢＣＡ３タンパク質をコードする改変ポリリボヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏでの投与量研究
野生型Ｃ５７Ｂ１６マウスに、表８に列記した１つまたは複数の製剤において調製した、表７のポリリボヌクレオチドを含む１つまたは複数の構成体を投与する。気管内チューブを用いて、改変ポリリボヌクレオチドを各マウスに投与する。０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇにわたる投薬量を含む、各改変ポリリボヌクレオチドの異なる投薬量をテストする。
【０２４８】
各マウスの肺組織を、各ペプチド気管内投与の約２４時間後に採取する。マウス１匹あたり一方の肺の組織を急速冷凍し、ｑＰＣＲ、ウェスタンブロット、およびＥＬＩＳＡにより、ＡＢＣＡ３タンパク質の発現について解析する。マウス１匹あたり一方の肺の組織をホルマリンに固定し、改変ポリリボヌクレオチドがｉｎ  ｓｉｔｕで存在するか否か、および組織学的解析のために解析する。気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を収集し、マーカＩＬ−１０、ＭＩＰ−ｌα、ＩＮＦ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、およびＩＬ−６の発現レベルを解析して、各改変ポリリボヌクレオチドの免疫原性を求める。
【０２４９】
肺および生物学的サンプルから求められた計量を用いて、各投薬量の安全性および有効性を評価する。
【０２５０】
実施例７：ＡＢＣＡ３タンパク質をコードする改変ポリリボヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏでの投与研究
野生型Ｃ５７Ｂ１６マウスが、表７に列記したポリリボヌクレオチドを有する１つまたは複数の構成体を含むエアロゾルを繰り返し吸入する。０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇにわたる投薬量を含む、各改変ポリリボヌクレオチドの異なる投薬量をテストする。
【０２５１】
別々のマウスが、最初の投薬の８時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、および１２０時間後に反復投薬を受ける。異なるマウスの肺組織および生物学的サンプルを、各ペプチド投与の８時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、および１２０時間後に採取する。特定の時刻それぞれで、マウス１匹あたり一方の肺の組織を急速冷凍し、ｑＰＣＲ、ウェスタンブロット、およびＥＬＩＳＡにより、ＡＢＣＡ３タンパク質の発現について解析する。マウス１匹あたり一方の肺の組織をホルマリンに固定し、改変ポリリボヌクレオチドがｉｎ  ｓｉｔｕで存在するか否か、および組織学的解析のために解析する。気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を収集し、マーカＩＬ−１０、ＭＩＰ−ｌα、ＩＮＦ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、およびＩＬ−６の発現レベルを解析して、各改変ポリリボヌクレオチドの免疫原性を求める。血液、肝臓、および脾臓も採取し、急速冷凍し、組織学的解析向けに処理する。
【０２５２】
肺および生物学的サンプルから求められた計量を用いて、エアロゾル化改変ポリリボヌクレオチドの反復投与の安全性および有効性を評価する。
【０２５３】
実施例８：哺乳動物細胞におけるＡＢＣＡ３リボ核酸の発現
この実験は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの、２つのＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡの発現（翻訳）を実証する。この実験では、５’ＵＴＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）を欠くＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ  ＤＮＡ（図２：２０分のポリアデニル化後のＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ−ＰｏｌｙＡ〜３０；テールを伸長させるために２０分間ポリアデニル化した後の３０Ａ  ｐｏｌｙＡテールを用いて鋳型から作成）および５’ヒトα−グロビンＵＴＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）を含むＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ  ＤＮＡ（図２：ＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ―ＰｏｌｙＡ〜１２０、ＤＮＡレベルでＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５の５’ＵＴＲを、ＲＮＡレベルでＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６を含む）を用いて、対応するｍＲＮＡをｉｎ  ｖｉｔｒｏで４つの正規のヌクレオチドを用いて転写し、キャップ１構造を用いてキャップ化し、ポリアデニル化する。これらの２つのＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡ、ポリアデニル化後のＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ−ＰｏｌｙＡ〜３０およびＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ−ＰｏｌｙＡ〜１００を、Ａ５４９細胞にトランスフェクションした。図２は、トランスフェクションして６時間後のＡ５４９細胞におけるＡＢＣＡ３  ｎＲＮＡの翻訳を示す、ウェスタンブロットである。生物学的３連（biological triplicates）を図に示す。
【０２５４】
この実験では、２ｘ１０６個のＡ５４９細胞（ｐ７）を、７．５μｇのＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ−ＰｏｌｙＡ〜３０またはＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ−ＰｏｌｙＡ〜１００を用いてトランスフェクションし、トランスフェクションの６時間後に収集した。細胞をウェルから掻爬し、ペレット化し、該ペレットをＲＩＰＡ緩衝液に溶解させた。７５μｇの全タンパク質をゲルに乗せた。Ｏ／Ｎで、１：１００００で共役させたＭ２  ａｎｔｉ  ｆｌａｇ−ＨＲＰを用いて、ブロットを調べ、Ｆｅｍｔｏ  Ｓｕｐｅｒ  ｓｉｇｎａｌ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅを用いて展開させた。同様なウェスタンブロットの結果が、ＭＬＥ−１５細胞について得られた。
【０２５５】
Ａ５４９細胞において、トランスフェクションしたｍＲＮＡからのＡＢＣＡ３タンパク質の良好な発現を実証する追加実験を行った（データは示さない）。簡潔に言えば、Ａ５４９細胞を、ヒトＡＢＣＡ３をコードするｍＲＮＡを用いてトランスフェクションした。トランスフェクションの６時間後、細胞を収集し、溶解し、ＡＢＣ３Ａタンパク質発現をウェスタンブロットにより検出した。この実験では、ＣＹＢＡ５’ＵＴＲおよびＣＹＢＡ３’ＵＴＲを有するコドン最適化ＡＢＣＡ３−ＤＮＡを用いて、対応するｍＲＮＡをｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写した。
【０２５６】
実施例９：ＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの発現
化学的に修飾した特異的なヌクレオチドを種々の比率および組み合わせで組み込むことが異なる細胞種の翻訳効率に与える影響を比較するために、以下の実験を行った。本明細書に記載の実験は、１）５０％Ψ；２）１００％Ψ；３）２５％ｓ２Ｕ＋２５％ｍ５Ｃ（Ｍｏｄ１）；４）５０％Ｉ５Ｕ（Ｍｏｄ２）；または、５）３５％Ｉ５Ｕ＋７．５％Ｉ５Ｃ（Ｍｏｄ３）を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写反応により調製したＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）からのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの翻訳について評価した。この実験で用いたＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ鋳型には、ヒトＡＢＣＡ３向けのコドン最適化オープンリーディングフフレーム、長さ約３０ＡのｐｏｌｙＡ、キャップ１構造が含まれ、ＵＴＲ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７）は含まれなかった。
【０２５７】
ＨＥＫ−２９３細胞からのＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡの発現（生物学的３連）：簡潔に言えば、１ｘ１０６個のＡ５４９細胞（生物学的３連）に、７．５μｇのＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ／１１．２５μＬのＭｅｓｓｅｎｇｅｒ  Ｍａｘをトランスフェクションし、６時間後に収集した。５０μｇの全タンパク質をゲルに乗せた。ＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧの検出について：一晩で１：１００００で共役させたＭ２  ａｎｔｉ  ｆｌａｇ−ＨＲＰを用いてＷＢを調べ、Ｆｅｍｔｏ  Ｓｕｐｅｒ  ｓｉｇｎａｌ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅを用いて展開させた。図３は、ＨＥＫ−２９３細胞における、１）５０％Ψ；２）１００％Ψ；３）２５％ｓ２Ｕ＋２５％ｍ５Ｃ（Ｍｏｄ１）；４）５０％Ｉ５Ｕ（Ｍｏｄ２）；５）３５％Ｉ５Ｕ＋７．５％Ｉ５Ｃ（Ｍｏｄ３）；または、ＨＥＫ−２９３細胞での対照を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写反応により転写された異なるＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡからのタンパク質発現を示すウェスタンブロットである。図３に示すように、ＮＴＣ＝ｍｏｃｋトランスファクター細胞である（ｍＲＮＡもプラスミドもなし）。
【０２５８】
図４は、Ａ５４９細胞での同様の実験の結果を示す、ウェスタンブロットである。図４は、Ａ５４９細胞における、１）５０％Ψ；２）１００％Ψ；３）２５％ｓ２Ｕ＋２５％ｍ５Ｃ（Ｍｏｄ１）；４）５０％Ｉ５Ｕ（Ｍｏｄ２）；または、５）３５％Ｉ５Ｕ＋７．５％Ｉ５Ｃ（Ｍｏｄ３）を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写反応により転写された異なるＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡからのタンパク質発現を示す。
【０２５９】
同様に、図５は、ＭＬＥ−１５細胞における、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡの発現の結果を示すウェスタンブロットである。図５は、ＭＬＥ−１５細胞における、１）５０％Ψ；２）１００％Ψ；３）２５％ｓ２Ｕ＋２５％ｍ５Ｃ（Ｍｏｄ１）；４）５０％Ｉ５Ｕ（Ｍｏｄ２）；または、５）３５％Ｉ５Ｕ＋７．５％Ｉ５Ｃ（Ｍｏｄ３）を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写反応により転写された異なるＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡからのタンパク質発現を示す。
【０２６０】
図６は、ＨＥＫ−２９３細胞、Ａ５４９細胞、およびＭＬＥ−１５細胞において、ｍＲＮＡトランスフェクションの６時間後にＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔ６により測定されたＡＢＣＡ３タンパク質発現レベルの比較を示す。結果を、全タンパク質染色（ＳＹＰＲＯ  Ｒｕｂｙ）について正規化する。各データ要素は、３つの生物学的（トランスフェクション）反復の平均、エラーバー＋／−標準偏差である。この図に示す全てのＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡは同じ配列を有し、同じプラスミドから作成した。この実験で用いるＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ鋳型はＵＴＲを含まず、ＡＢＣＡ３向けのコドン最適化オープンリーディングフレーム、長さ約３０ＡのｐｏｌｙＡ、およびキャップ１構造を有する。
【０２６１】
実施例１０：ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡの免疫原性
前記ＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡの免疫原性を、２つの細胞株、つまり、Ａ５４９ヒト肺胞基底上皮腺がん細胞およびＨｅｐＧ２ヒト肝がん細胞において、サイトカイン生成を測定することによりテストした。転写に反応したＩＬ−６の生成がＡ５４９細胞において測定された一方、ＨｅｐＧ２細胞ではＩＰ−１０の生成が測定された。各細胞株を各ＲＮＡの滴定を用いて、３連でトランスフェクションした。簡潔に言えば、９６ウェルプレートにおいて、ウェル毎に２０，０００個（Ａ５４９）または４０，０００個の（ＨｅｐＧ２）細胞を、トランスフェクションの２４時間前にまいた。次に、細胞を、ＲＮＡ：ＭｅｓｓｅｎｇｅｒＭａｘの比を１：１．５としてＭｅｓｓｅｎｇｅｒＭａｘ試薬を用い、ウェル毎に２５０ｎｇ〜７ｎｇの各転写物の滴定を用いてトランスフェクションした。
【０２６２】
培養上清をトランスフェクションの１８時間後に収集した。細胞生存率を、上清を取り除いてすぐに、代謝的に活性な細胞のしるしであるＡＴＰレベルを測定するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、測定した。ＩＬ−６検出では、Ａ５４９細胞培養上清をアッセイ緩衝液において１：２０で希釈し、ＩＬ−６レベルを、ＩＬ−６高感度ヒトＥＬＩＳＡキット（Ａｂｃａｍ  ａｂ４６０４２）を用いて測定した。ＩＰ−１０を、非希釈ＨｅｐＧ２細胞培養上清において、ヒトＩＰ−１０ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ  ＳｉｍｐｌｅＳｔｅｐ（Ａｂｃａｍ  ａｂ１７３１９４）を用いて検出した。
【０２６３】
図７は、種々のヌクレオチド修飾を含むＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡからＡＢＣＡ３タンパク質を翻訳するＡ５４９細胞においての、ＩＬ−６の誘発を示す。ＩＬ−６発現は、ＥＬＩＳＡにより測定される種々の量の各ＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡにより誘発される。図７は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイを用いて測定される、種々の量の各ＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡを用いたトランスフェクション後の細胞生存率を示す。図８は、種々のヌクレオチド修飾を含むＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡからＡＢＣＡ３タンパク質を翻訳するＨｅｐＧ２細胞においての、ＩＰ−１０の誘発を示す。ＩＰ−１０の発現は、ＥＬＩＳＡにより測定される種々の量の各ＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡにより誘発される。図８は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏアッセイを用いて測定される、種々の量の各ＡＢＣＡ−ＦＬＡＧ  ｍＲＮＡを用いたトランスフェクション後の細胞生存率を示す。
【０２６４】
実施例１１：細胞生存率およびサイトカイン誘発
図９〜１２は、細胞生存率およびｉｎ  ｖｉｔｒｏでのサイトカイン誘発の結果を示す。
【０２６５】
方法：Ａ５４９細胞（２ｘ１０４個／ウェル）またはＨＥＰＧ２細胞（４Ｘ１０４個／ウェル）の何れかを、９６ウェルプレートに、トランスフェクションの２４時間前にまいた。ＲＮＡとトランスフェクション試薬の比率を１：１．５として、ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  ＭＡＸを用いてトランスフェクションを実行した。陽性対照：１．ＰｏｌｙＩ：Ｃを、ｓｎｉｍとして用いて、同じ濃度でトランスフェクションし；２．ｍＲＮＡ  ｅＧＦＰ（ｔｒｉｌｉｎｋ）。陰性対照：１．Ｏｐｔｉ  Ｍｅｍ＋Ｍａｘ試薬混合物で処置したＡ５４９／ＨＥＰ  Ｇ２；および２．未処置のＡ５４９／ＨＥＰ  Ｇ２細胞。生物学的２連を、３つの異なる９６ウェルプレートにまいた。
【０２６６】
上清を、トランスフェクションの１８時間後に採取し、細胞生存率を上清除去後すぐ評価した。図９および図１０は、Ａ５４９細胞およびＨＥＰ  Ｇ２それぞれの細胞生存率を示す。図１１および図１２は、ＩＬ−６およびＩＰ−１０のレベルを測定するＥＬＩＳＡアッセイの結果示す。ＩＬ−６ＥＬＩＳＡでは、サンプルを、アッセイを通して、アッセイ緩衝液に１：２０で希釈した。ＩＰ−１０では、非希釈サンプルをテストした。
【０２６７】
実施例１２：肺細胞におけるＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡの翻訳の経時変化
１ｘ１０６個のＡ５４９細胞（ヒト肺細胞）、ｐａｓｓａｇｅ  １０を、７．５μｇのＲＮＡ／１１．５Ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ  Ｍａｘを用いて、２連でトランスフェクションした。トランスフェクション培地をトランスフェクションの４時間後に変え、細胞を、トランスフェクション後異なる時点で：６時間後、１８時間後、２４時間後、３２時間後、および４８時間後に収集した。続いて細胞をＰＢＳで洗浄し、室温で５分間トリプシン処理した。トリプシン反応を、ＦＢＳ含有培地を加えることにより停止させ、細胞を収集し、遠心分離し、ペレットを冷ＰＢＳで二度洗浄した。次に、ペレットを冷凍した。全てのサンプルを収集したら、冷凍ペレットを氷上で解凍し、ＴＴＸプロトコルに従いＲＩＰＡ緩衝液に溶解させた。５０μｇのタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥに加えた。図１３は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで肺細胞のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７から発現したＡＢＣＡ３ポリペプチド翻訳の経時変化を示すウェスタンブロットである。ＡＢＣＡ３−ＦＬＡＧ検出では：Ｏ／Ｎで、１：１００００で共役させたＭ２  ａｎｔｉ  ｆｌａｇ−ＨＲＰを用いてＷＢを調べ、Ｆｅｍｔｏ  Ｓｕｐｅｒ  ｓｉｇｎａｌ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅを用いて展開させた。
【０２６８】
本発明の好適な実施形態を本明細書に示し、記載するが、このような実施形態は単なる例示として提供されることが当業者にとって明らかであろう。本発明が本明細書で提供する特定の例によって限定されることは、意図するものではない。前記明細書を参照して本明細書について記載したが、本明細書の記載および例示を、限定的な意味で解釈することは意味しない。多数の変形、変化、および置き換えが、本発明から離れることなく、今、当業者に想到されるだろう。さらに、本発明の全ての態様は、本明細書に記載した特定の描写、構成、または関連の相対的比率に限定されず、種々の条件および変数に依存することを理解されたい。本明細書に記載する本発明の実施形態の種々の代替案を、本発明を実施する際に利用できることを理解されたい。そのため、本発明は、また、任意のこのような代替形態、修正形態、変形形態、または同等物を範囲に含むことを意図する。以下の請求項は、本発明の範囲を定義し、これらの請求項の範囲内の方法および構造およびその同等物が本発明の範囲に含まれることを意図する。
【０２６９】
出願において記載する例示的配列を以下に提供する。本開示は、ある実施形態において、例えば、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７、１８、もしくは１９に記載の配列、または、このような配列に対し少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一の配列を含むポリヌクレオチド、または、上記の何れかに対応するかもしくは上記の何れかによりコードされるｍＲＮＡなどのポリリボヌクレオチド配列を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７または１８に記載される配列を含むが、ただし、ＦＬＡＧおよび／またはｍｙｃタグを欠いたポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、ＡＢＣファミリーメンバーをコードするポリヌクレオチドの一部として使用する５’−ＵＴＲは、チトクロムｂ−２４５アルファポリペプチド遺伝子に由来する非翻訳領域か、または、ヒト遺伝子などのアルファ−グロビンポリペプチド遺伝子に由来する非翻訳領域を含む。一部の実施形態では、ＡＢＣファミリーメンバーをコードするポリヌクレオチドの一部として使用する５’−ＵＴＲは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５またはＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６に記載の配列を含む。前記の何れかのある実施形態では、ポリヌクレオチドまたはポリリボヌクレオチドは修正される（例えば、本明細書に記載するように、ヌクレオチド類似体を含む）。
【０２７０】
〔配列表〕
１）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１
概要：ＣＹＢＡ５‘
CGCGCCTAGCAGTGTCCCAGCCGGGTTCGTGTCGCC 
２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２
概要：ＣＹＢＡ３‘
CCTCGCCCCGGACCTGCCCTCCCGCCAGGTGCACCCACCTGCAATAAATGCAGCGAAGCCGGGA 
３）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３
概要：α−グロビン５’ＵＴＲ（ＨＢＡ１）
CATAAACCCTGGCGCGCTCGCGGCCCGGCACTCTTCTGGTCCCCACAGACTCAGAGAGAACCCACC 
４）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４
概要：α−グロビン５’ＵＴＲ（ＨＢＡ２）
CATAAACCCTGGCGCGCTCGCGGGCCGGCACTCTTCTGGTCCCCACAGACTCAGAGAGAACCCACC (SEQ ID NO: 4)
５）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５
概要：α−グロビン  ５’ＵＴＲ  ＥＴＨ
TCTTCTGGTCCCCACAGACTCAGAGAGAAC
６）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６
概要：ＡＢＣＡ３  ５‘
GCGGCCGCTGCGTCCGCCAGTAGCGGGTTGCAGGCGCACCCTCCCCTCCAGGGCGGCCACGCAGCTGTCAGTGCCGCCGCCACTGCGAGGCTGGAGCGGAGCCCGGGTGGCCGAGGGAGGGGACCCCGCGAGAGGGCCGCGCGCCGGCCGCCGCCGCCCCGGCGCCCAGGCTCGGTGCTGGAGAGTCATGCCTGTGAGCCCTGGGCACCTCCTGATGTCCTGCGAGGTCACGGTGTTCCCAAACCTCAGGGTTGCCCTGCCCCACTCCAGAGGCTCTCAGGCCCCACCCCGGAGCCCTCTGTGCGGAGCCGCCTCCTCCTGGCCAGTTCCCCAGTAGTCCTGAAGGGAGACCTGCTGTGTGGAGCCTCTTCTGGGACCCAGCCATGAGTGTGGAGCTGAGCAACTGAACCTGAAACTCTTCCACTGTGAGTCAAGGAGGCTTTTCCGCACATGAAGGACGCTGAGCGGGAAGGACTCCTCTCTGCCTGCAGTTGTAGCGAGTGGACCAGCACCAGGGGCTCTCTAGACTGCCCCTCCTCCATCGCCTTCCCTGCCTCTCCAGGACAGAGCAGCCACGTCTGCACACCTCGCCCTCTTTACACTCAGTTTTCAGAGCACGTTTCTCCTATTTCCTGCGGGTTGCAGCGCCTACTTGAACTTACTCAGACCACCTACTTCTCTAGCAGCACTGGGCGTCCCTTTCAGCAAGACG
７）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７
概要：ＡＢＣＡ３  ５‘
GGGGTGGCGGCTGTCTCGCCATCAGGCAGGGACAGGACGGGCAAGCAGGGCCCATCTTACATCCTCTCTCTCCAAGTTTATCTCATCCTTTATTTTTAATCACTTTTTTCTATGATGGATATGAAAAATTCAAGGCAGTATGCACAGAATGGACGAGTGCAGCCCAGCCCTCATGCCCAGGATCAGCATGCGCATCTCCATGTCTGCATACTCTGGAGTTCACTTTCCCAGAGCTGGGGCAGGCCGGGCAGTCTGCGGGCAAGCTCCGGGGTCTCTGGGTGGAGAGCTGACCCAGGAAGGGCTGCAGCTGAGCTGGGGGTTGAATTTCTCCAGGCACTCCCTGGAGAGAGGACCCAGTGACTTGTCCAAGTTTACACACGACACTAATCTCCCCTGGGGAGGAAGCGGGAAGCCAGCCAGGTTGAACTGTAGCGAGGCCCCCAGGCCGCCAGGAATGGACCATGCAGATCACTGTCAGTGGAGGGAAGCTGCTGACTGTGATTAGGTGCTGGGGTCTTAGCGTCCAGCGCAGCCCGGGGGCATCCTGGAGGCTCTGCTCCTTAGGGCATGGTAGTCACCGCGAAGCCGGGCACCGTCCCACAGCATCTCCTAGAAGCAGCCGGCACAGGAGGGAAGGTGGCCAGGCTCGAAGCAGTCTCTGTTTCCAGCACTGCACCCTCAGGAAGTCGCCCGCCCCAGGACACGCAGGGACCACCCTAAGGGCTGGGTGGCTGTCTCAAGGACACATTGAATACGTTGTGACCATCCAGAAAATAAATGCTGAGGGGACACAGTC
８）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８
概要：ＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ
AUGGCUGUGCUCAGGCAGCUGGCGCUCCUCCUCUGGAAGAACUACACCCUGCAGAAGCGGAAGGUCCUGGUGACGGUCCUGGAACUCUUCCUGCCAUUGCUGUUUUCUGGGAUCCUCAUCUGGCUCCGCUUGAAGAUUCAGUCGGAAAAUGUGCCCAACGCCACCAUCUACCCGGGCCAGUCCAUCCAGGAGCUGCCUCUGUUCUUCACCUUCCCUCCGCCAGGAGACACCUGGGAGCUUGCCUACAUCCCUUCUCACAGUGACGCUGCCAAGACCGUCACUGAGACAGUGCGCAGGGCACUUGUGAUCAACAUGCGAGUGCGCGGCUUUCCCUCCGAGAAGGACUUUGAGGACUACAUUAGGUACGACAACUGCUCGUCCAGCGUGCUGGCCGCCGUGGUCUUCGAGCACCCCUUCAACCACAGCAAGGAGCCCCUGCCGCUGGCGGUGAAAUAUCACCUACGGUUCAGUUACACACGGAGAAAUUACAUGUGGACCCAAACAGGCUCCUUUUUCCUGAAAGAGACAGAAGGCUGGCACACUACUUCCCUUUUCCCGCUUUUCCCAAACCCAGGACCAAGGGAACCUACAUCCCCUGAUGGCGGAGAACCUGGGUACAUCCGGGAAGGCUUCCUGGCCGUGCAGCAUGCUGUGGACCGGGCCAUCAUGGAGUACCAUGCCGAUGCCGCCACACGCCAGCUGUUCCAGAGACUGACGGUGACCAUCAAGAGGUUCCCGUACCCGCCGUUCAUCGCAGACCCCUUCCUCGUGGCCAUCCAGUACCAGCUGCCCCUGCUGCUGCUGCUCAGCUUCACCUACACCGCGCUCACCAUUGCCCGUGCUGUCGUGCAGGAGAAGGAAAGGAGGCUGAAGGAGUACAUGCGCAUGAUGGGGCUCAGCAGCUGGCUGCACUGGAGUGCCUGGUUCCUCUUGUUCUUCCUCUUCCUCCUCAUCGCCGCCUCCUUCAUGACCCUGCUCUUCUGUGUCAAGGUGAAGCCAAAUGUAGCCGUGCUGUCCCGCAGCGACCCCUCCCUGGUGCUCGCCUUCCUGCUGUGCUUCGCCAUCUCUACCAUCUCCUUCAGCUUCAUGGUCAGCACCUUCUUCAGCAAAGCCAACAUGGCAGCAGCCUUCGGAGGCUUCCUCUACUUCUUCACCUACAUCCCCUACUUCUUCGUGGCCCCUCGGUACAACUGGAUGACUCUGAGCCAGAAGCUCUGCUCCUGCCUCCUGUCUAAUGUCGCCAUGGCAAUGGGAGCCCAGCUCAUUGGGAAAUUUGAGGCGAAAGGCAUGGGCAUCCAGUGGCGAGACCUCCUGAGUCCCGUCAACGUGGACGACGACUUCUGCUUCGGGCAGGUGCUGGGGAUGCUGCUGCUGGACUCUGUGCUCUAUGGCCUGGUGACCUGGUACAUGGAGGCCGUCUUCCCAGGGCAGUUCGGCGUGCCUCAGCCCUGGUACUUCUUCAUCAUGCCCUCCUAUUGGUGUGGGAAGCCAAGGGCGGUUGCAGGGAAGGAGGAAGAAGACAGUGACCCCGAGAAAGCACUCAGAAACGAGUACUUUGAAGCCGAGCCAGAGGACCUGGUGGCGGGGAUCAAGAUCAAGCACCUGUCCAAGGUGUUCAGGGUGGGAAAUAAGGACAGGGCGGCCGUCAGAGACCUGAACCUCAACCUGUACGAGGGACAGAUCACCGUCCUGCUGGGCCACAACGGUGCCGGGAAGACCACCACCCUCUCCAUGCUCACAGGUCUCUUUCCCCCCACCAGUGGACGGGCAUACAUCAGCGGGUAUGAAAUUUCCCAGGACAUGGUUCAGAUCCGGAAGAGCCUGGGCCUGUGCCCGCAGCACGACAUCCUGUUUGACAACUUGACAGUCGCAGAGCACCUUUAUUUCUACGCCCAGCUGAAGGGCCUGUCACGUCAGAAGUGCCCUGAAGAAGUCAAGCAGAUGCUGCACAUCAUCGGCCUGGAGGACAAGUGGAACUCACGGAGCCGCUUCCUGAGCGGGGGCAUGAGGCGCAAGCUCUCCAUCGGCAUCGCCCUCAUCGCAGGCUCCAAGGUGCUGAUACUGGACGAGCCCACCUCGGGCAUGGACGCCAUCUCCAGGAGGGCCAUCUGGGAUCUUCUUCAGCGGCAGAAAAGUGACCGCACCAUCGUGCUGACCACCCACUUCAUGGACGAGGCUGACCUGCUGGGAGACCGCAUCGCCAUCAUGGCCAAGGGGGAGCUGCAGUGCUGCGGGUCCUCGCUGUUCCUCAAGCAGAAAUACGGUGCCGGCUAUCACAUGACGCUGGUGAAGGAGCCGCACUGCAACCCGGAAGACAUCUCCCAGCUGGUCCACCACCACGUGCCCAACGCCACGCUGGAGAGCAGCGCUGGGGCCGAGCUGUCUUUCAUCCUUCCCAGAGAGAGCACGCACAGGUUUGAAGGUCUCUUUGCUAAACUGGAGAAGAAGCAGAAAGAGCUGGGCAUUGCCAGCUUUGGGGCAUCCAUCACCACCAUGGAGGAAGUCUUCCUUCGGGUCGGGAAGCUGGUGGACAGCAGUAUGGACAUCCAGGCCAUCCAGCUCCCUGCCCUGCAGUACCAGCACGAGAGGCGCGCCAGCGACUGGGCUGUGGACAGCAACCUCUGUGGGGCCAUGGACCCCUCCGACGGCAUUGGAGCCCUCAUCGAGGAGGAGCGCACCGCUGUCAAGCUCAACACUGGGCUCGCCCUGCACUGCCAGCAAUUCUGGGCCAUGUUCCUGAAGAAGGCCGCAUACAGCUGGCGCGAGUGGAAAAUGGUGGCGGCACAGGUCCUGGUGCCUCUGACCUGCGUCACCCUGGCCCUCCUGGCCAUCAACUACUCCUCGGAGCUCUUCGACGACCCCAUGCUGAGGCUGACCUUGGGCGAGUACGGCAGAACCGUCGUGCCCUUCUCAGUUCCCGGGACCUCCCAGCUGGGUCAGCAGCUGUCAGAGCAUCUGAAAGACGCACUGCAGGCUGAGGGACAGGAGCCCCGCGAGGUGCUCGGUGACCUGGAGGAGUUCUUGAUCUUCAGGGCUUCUGUGGAGGGGGGCGGCUUUAAUGAGCGGUGCCUUGUGGCAGCGUCCUUCAGAGAUGUGGGAGAGCGCACGGUCGUCAACGCCUUGUUCAACAACCAGGCGUACCACUCUCCAGCCACUGCCCUGGCCGUCGUGGACAACCUUCUGUUCAAGCUGCUGUGCGGGCCUCACGCCUCCAUUGUGGUCUCCAACUUCCCCCAGCCCCGGAGCGCCCUGCAGGCUGCCAAGGACCAGUUUAACGAGGGCCGGAAGGGAUUCGACAUUGCCCUCAACCUGCUCUUCGCCAUGGCAUUCUUGGCCAGCACGUUCUCCAUCCUGGCGGUCAGCGAGAGGGCCGUGCAGGCCAAGCAUGUGCAGUUUGUGAGUGGAGUCCACGUGGCCAGUUUCUGGCUCUCUGCUCUGCUGUGGGACCUCAUCUCCUUCCUCAUCCCCAGUCUGCUGCUGCUGGUGGUGUUUAAGGCCUUCGACGUGCGUGCCUUCACGCGGGACGGCCACAUGGCUGACACCCUGCUGCUGCUCCUGCUCUACGGCUGGGCCAUCAUCCCCCUCAUGUACCUGAUGAACUUCUUCUUCUUGGGGGCGGCCACUGCCUACACGAGGCUGACCAUCUUCAACAUCCUGUCAGGCAUCGCCACCUUCCUGAUGGUCACCAUCAUGCGCAUCCCAGCUGUAAAACUGGAAGAACUUUCCAAAACCCUGGAUCACGUGUUCCUGGUGCUGCCCAACCACUGUCUGGGGAUGGCAGUCAGCAGUUUCUACGAGAACUACGAGACGCGGAGGUACUGCACCUCCUCCGAGGUCGCCGCCCACUACUGCAAGAAAUAUAACAUCCAGUACCAGGAGAACUUCUAUGCCUGGAGCGCCCCGGGGGUCGGCCGGUUUGUGGCCUCCAUGGCCGCCUCAGGGUGCGCCUACCUCAUCCUGCUCUUCCUCAUCGAGACCAACCUGCUUCAGAGACUCAGGGGCAUCCUCUGCGCCCUCCGGAGGAGGCGGACACUGACAGAAUUAUACACCCGGAUGCCUGUGCUUCCUGAGGACCAAGAUGUAGCGGACGAGAGGACCCGCAUCCUGGCCCCCAGCCCGGACUCCCUGCUCCACACACCUCUGAUUAUCAAGGAGCUCUCCAAGGUGUACGAGCAGCGGGUGCCCCUCCUGGCCGUGGACAGGCUCUCCCUCGCGGUGCAGAAAGGGGAGUGCUUCGGCCUGCUGGGCUUCAAUGGAGCCGGGAAGACCACGACUUUCAAAAUGCUGACCGGGGAGGAGAGCCUCACUUCUGGGGAUGCCUUUGUCGGGGGUCACAGAAUCAGCUCUGAUGUCGGAAAGGUGCGGCAGCGGAUCGGCUACUGCCCGCAGUUUGAUGCCUUGCUGGACCACAUGACAGGCCGGGAGAUGCUGGUCAUGUACGCUCGGCUCCGGGGCAUCCCUGAGCGCCACAUCGGGGCCUGCGUGGAGAACACUCUGCGGGGCCUGCUGCUGGAGCCACAUGCCAACAAGCUGGUCAGGACGUACAGUGGUGGUAACAAGCGGAAGCUGAGCACCGGCAUCGCCCUGAUCGGAGAGCCUGCUGUCAUCUUCCUGGACGAGCCGUCCACUGGCAUGGACCCCGUGGCCCGGCGCCUGCUUUGGGACACCGUGGCACGAGCCCGAGAGUCUGGCAAGGCCAUCAUCAUCACCUCCCACAGCAUGGAGGAGUGUGAGGCCCUGUGCACCCGGCUGGCCAUCAUGGUGCAGGGGCAGUUCAAGUGCCUGGGCAGCCCCCAGCACCUCAAGAGCAAGUUCGGCAGCGGCUACUCCCUGCGGGCCAAGGUGCAGAGUGAAGGGCAACAGGAGGCGCUGGAGGAGUUCAAGGCCUUCGUGGACCUGACCUUUCCAGGCAGCGUCCUGGAAGAUGAGCACCAAGGCAUGGUCCAUUACCACCUGCCGGGCCGUGACCUCAGCUGGGCGAAGGUUUUCGGUAUUCUGGAGAAAGCCAAGGAAAAGUACGGCGUGGACGACUACUCCGUGAGCCAGAUCUCGCUGGAACAGGUCUUCCUGAGCUUCGCCCACCUGCAGCCGCCCACCGCAGAGGAGGGGCGA
９）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９
概要：ＡＢＣＡ３  ＤＮＡ  ＯＲＦ（野生型）
ATGGCTGTGCTCAGGCAGCTGGCGCTCCTCCTCTGGAAGAACTACACCCTGCAGAAGCGGAAGGTCCTGGTGACGGTCCTGGAACTCTTCCTGCCATTGCTGTTTTCTGGGATCCTCATCTGGCTCCGCTTGAAGATTCAGTCGGAAAATGTGCCCAACGCCACCATCTACCCGGGCCAGTCCATCCAGGAGCTGCCTCTGTTCTTCACCTTCCCTCCGCCAGGAGACACCTGGGAGCTTGCCTACATCCCTTCTCACAGTGACGCTGCCAAGACCGTCACTGAGACAGTGCGCAGGGCACTTGTGATCAACATGCGAGTGCGCGGCTTTCCCTCCGAGAAGGACTTTGAGGACTACATTAGGTACGACAACTGCTCGTCCAGCGTGCTGGCCGCCGTGGTCTTCGAGCACCCCTTCAACCACAGCAAGGAGCCCCTGCCGCTGGCGGTGAAATATCACCTACGGTTCAGTTACACACGGAGAAATTACATGTGGACCCAAACAGGCTCCTTTTTCCTGAAAGAGACAGAAGGCTGGCACACTACTTCCCTTTTCCCGCTTTTCCCAAACCCAGGACCAAGGGAACCTACATCCCCTGATGGCGGAGAACCTGGGTACATCCGGGAAGGCTTCCTGGCCGTGCAGCATGCTGTGGACCGGGCCATCATGGAGTACCATGCCGATGCCGCCACACGCCAGCTGTTCCAGAGACTGACGGTGACCATCAAGAGGTTCCCGTACCCGCCGTTCATCGCAGACCCCTTCCTCGTGGCCATCCAGTACCAGCTGCCCCTGCTGCTGCTGCTCAGCTTCACCTACACCGCGCTCACCATTGCCCGTGCTGTCGTGCAGGAGAAGGAAAGGAGGCTGAAGGAGTACATGCGCATGATGGGGCTCAGCAGCTGGCTGCACTGGAGTGCCTGGTTCCTCTTGTTCTTCCTCTTCCTCCTCATCGCCGCCTCCTTCATGACCCTGCTCTTCTGTGTCAAGGTGAAGCCAAATGTAGCCGTGCTGTCCCGCAGCGACCCCTCCCTGGTGCTCGCCTTCCTGCTGTGCTTCGCCATCTCTACCATCTCCTTCAGCTTCATGGTCAGCACCTTCTTCAGCAAAGCCAACATGGCAGCAGCCTTCGGAGGCTTCCTCTACTTCTTCACCTACATCCCCTACTTCTTCGTGGCCCCTCGGTACAACTGGATGACTCTGAGCCAGAAGCTCTGCTCCTGCCTCCTGTCTAATGTCGCCATGGCAATGGGAGCCCAGCTCATTGGGAAATTTGAGGCGAAAGGCATGGGCATCCAGTGGCGAGACCTCCTGAGTCCCGTCAACGTGGACGACGACTTCTGCTTCGGGCAGGTGCTGGGGATGCTGCTGCTGGACTCTGTGCTCTATGGCCTGGTGACCTGGTACATGGAGGCCGTCTTCCCAGGGCAGTTCGGCGTGCCTCAGCCCTGGTACTTCTTCATCATGCCCTCCTATTGGTGTGGGAAGCCAAGGGCGGTTGCAGGGAAGGAGGAAGAAGACAGTGACCCCGAGAAAGCACTCAGAAACGAGTACTTTGAAGCCGAGCCAGAGGACCTGGTGGCGGGGATCAAGATCAAGCACCTGTCCAAGGTGTTCAGGGTGGGAAATAAGGACAGGGCGGCCGTCAGAGACCTGAACCTCAACCTGTACGAGGGACAGATCACCGTCCTGCTGGGCCACAACGGTGCCGGGAAGACCACCACCCTCTCCATGCTCACAGGTCTCTTTCCCCCCACCAGTGGACGGGCATACATCAGCGGGTATGAAATTTCCCAGGACATGGTTCAGATCCGGAAGAGCCTGGGCCTGTGCCCGCAGCACGACATCCTGTTTGACAACTTGACAGTCGCAGAGCACCTTTATTTCTACGCCCAGCTGAAGGGCCTGTCACGTCAGAAGTGCCCTGAAGAAGTCAAGCAGATGCTGCACATCATCGGCCTGGAGGACAAGTGGAACTCACGGAGCCGCTTCCTGAGCGGGGGCATGAGGCGCAAGCTCTCCATCGGCATCGCCCTCATCGCAGGCTCCAAGGTGCTGATACTGGACGAGCCCACCTCGGGCATGGACGCCATCTCCAGGAGGGCCATCTGGGATCTTCTTCAGCGGCAGAAAAGTGACCGCACCATCGTGCTGACCACCCACTTCATGGACGAGGCTGACCTGCTGGGAGACCGCATCGCCATCATGGCCAAGGGGGAGCTGCAGTGCTGCGGGTCCTCGCTGTTCCTCAAGCAGAAATACGGTGCCGGCTATCACATGACGCTGGTGAAGGAGCCGCACTGCAACCCGGAAGACATCTCCCAGCTGGTCCACCACCACGTGCCCAACGCCACGCTGGAGAGCAGCGCTGGGGCCGAGCTGTCTTTCATCCTTCCCAGAGAGAGCACGCACAGGTTTGAAGGTCTCTTTGCTAAACTGGAGAAGAAGCAGAAAGAGCTGGGCATTGCCAGCTTTGGGGCATCCATCACCACCATGGAGGAAGTCTTCCTTCGGGTCGGGAAGCTGGTGGACAGCAGTATGGACATCCAGGCCATCCAGCTCCCTGCCCTGCAGTACCAGCACGAGAGGCGCGCCAGCGACTGGGCTGTGGACAGCAACCTCTGTGGGGCCATGGACCCCTCCGACGGCATTGGAGCCCTCATCGAGGAGGAGCGCACCGCTGTCAAGCTCAACACTGGGCTCGCCCTGCACTGCCAGCAATTCTGGGCCATGTTCCTGAAGAAGGCCGCATACAGCTGGCGCGAGTGGAAAATGGTGGCGGCACAGGTCCTGGTGCCTCTGACCTGCGTCACCCTGGCCCTCCTGGCCATCAACTACTCCTCGGAGCTCTTCGACGACCCCATGCTGAGGCTGACCTTGGGCGAGTACGGCAGAACCGTCGTGCCCTTCTCAGTTCCCGGGACCTCCCAGCTGGGTCAGCAGCTGTCAGAGCATCTGAAAGACGCACTGCAGGCTGAGGGACAGGAGCCCCGCGAGGTGCTCGGTGACCTGGAGGAGTTCTTGATCTTCAGGGCTTCTGTGGAGGGGGGCGGCTTTAATGAGCGGTGCCTTGTGGCAGCGTCCTTCAGAGATGTGGGAGAGCGCACGGTCGTCAACGCCTTGTTCAACAACCAGGCGTACCACTCTCCAGCCACTGCCCTGGCCGTCGTGGACAACCTTCTGTTCAAGCTGCTGTGCGGGCCTCACGCCTCCATTGTGGTCTCCAACTTCCCCCAGCCCCGGAGCGCCCTGCAGGCTGCCAAGGACCAGTTTAACGAGGGCCGGAAGGGATTCGACATTGCCCTCAACCTGCTCTTCGCCATGGCATTCTTGGCCAGCACGTTCTCCATCCTGGCGGTCAGCGAGAGGGCCGTGCAGGCCAAGCATGTGCAGTTTGTGAGTGGAGTCCACGTGGCCAGTTTCTGGCTCTCTGCTCTGCTGTGGGACCTCATCTCCTTCCTCATCCCCAGTCTGCTGCTGCTGGTGGTGTTTAAGGCCTTCGACGTGCGTGCCTTCACGCGGGACGGCCACATGGCTGACACCCTGCTGCTGCTCCTGCTCTACGGCTGGGCCATCATCCCCCTCATGTACCTGATGAACTTCTTCTTCTTGGGGGCGGCCACTGCCTACACGAGGCTGACCATCTTCAACATCCTGTCAGGCATCGCCACCTTCCTGATGGTCACCATCATGCGCATCCCAGCTGTAAAACTGGAAGAACTTTCCAAAACCCTGGATCACGTGTTCCTGGTGCTGCCCAACCACTGTCTGGGGATGGCAGTCAGCAGTTTCTACGAGAACTACGAGACGCGGAGGTACTGCACCTCCTCCGAGGTCGCCGCCCACTACTGCAAGAAATATAACATCCAGTACCAGGAGAACTTCTATGCCTGGAGCGCCCCGGGGGTCGGCCGGTTTGTGGCCTCCATGGCCGCCTCAGGGTGCGCCTACCTCATCCTGCTCTTCCTCATCGAGACCAACCTGCTTCAGAGACTCAGGGGCATCCTCTGCGCCCTCCGGAGGAGGCGGACACTGACAGAATTATACACCCGGATGCCTGTGCTTCCTGAGGACCAAGATGTAGCGGACGAGAGGACCCGCATCCTGGCCCCCAGCCCGGACTCCCTGCTCCACACACCTCTGATTATCAAGGAGCTCTCCAAGGTGTACGAGCAGCGGGTGCCCCTCCTGGCCGTGGACAGGCTCTCCCTCGCGGTGCAGAAAGGGGAGTGCTTCGGCCTGCTGGGCTTCAATGGAGCCGGGAAGACCACGACTTTCAAAATGCTGACCGGGGAGGAGAGCCTCACTTCTGGGGATGCCTTTGTCGGGGGTCACAGAATCAGCTCTGATGTCGGAAAGGTGCGGCAGCGGATCGGCTACTGCCCGCAGTTTGATGCCTTGCTGGACCACATGACAGGCCGGGAGATGCTGGTCATGTACGCTCGGCTCCGGGGCATCCCTGAGCGCCACATCGGGGCCTGCGTGGAGAACACTCTGCGGGGCCTGCTGCTGGAGCCACATGCCAACAAGCTGGTCAGGACGTACAGTGGTGGTAACAAGCGGAAGCTGAGCACCGGCATCGCCCTGATCGGAGAGCCTGCTGTCATCTTCCTGGACGAGCCGTCCACTGGCATGGACCCCGTGGCCCGGCGCCTGCTTTGGGACACCGTGGCACGAGCCCGAGAGTCTGGCAAGGCCATCATCATCACCTCCCACAGCATGGAGGAGTGTGAGGCCCTGTGCACCCGGCTGGCCATCATGGTGCAGGGGCAGTTCAAGTGCCTGGGCAGCCCCCAGCACCTCAAGAGCAAGTTCGGCAGCGGCTACTCCCTGCGGGCCAAGGTGCAGAGTGAAGGGCAACAGGAGGCGCTGGAGGAGTTCAAGGCCTTCGTGGACCTGACCTTTCCAGGCAGCGTCCTGGAAGATGAGCACCAAGGCATGGTCCATTACCACCTGCCGGGCCGTGACCTCAGCTGGGCGAAGGTTTTCGGTATTCTGGAGAAAGCCAAGGAAAAGTACGGCGTGGACGACTACTCCGTGAGCCAGATCTCGCTGGAACAGGTCTTCCTGAGCTTCGCCCACCTGCAGCCGCCCACCGCAGAGGAGGGGCGA
１０）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０
概要：５’  ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’  ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有する天然ＡＢＣＡ３  ＤＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）
CGCGCCTAGCAGTGTCCCAGCCGGGTTCGTGTCGCCGCCACCATGGCTGTGCTCAGGCAGCTGGCGCTCCTCCTCTGGAAGAACTACACCCTGCAGAAGCGGAAGGTCCTGGTGACGGTCCTGGAACTCTTCCTGCCATTGCTGTTTTCTGGGATCCTCATCTGGCTCCGCTTGAAGATTCAGTCGGAAAATGTGCCCAACGCCACCATCTACCCGGGCCAGTCCATCCAGGAGCTGCCTCTGTTCTTCACCTTCCCTCCGCCAGGAGACACCTGGGAGCTTGCCTACATCCCTTCTCACAGTGACGCTGCCAAGACCGTCACTGAGACAGTGCGCAGGGCACTTGTGATCAACATGCGAGTGCGCGGCTTTCCCTCCGAGAAGGACTTTGAGGACTACATTAGGTACGACAACTGCTCGTCCAGCGTGCTGGCCGCCGTGGTCTTCGAGCACCCCTTCAACCACAGCAAGGAGCCCCTGCCGCTGGCGGTGAAATATCACCTACGGTTCAGTTACACACGGAGAAATTACATGTGGACCCAAACAGGCTCCTTTTTCCTGAAAGAGACAGAAGGCTGGCACACTACTTCCCTTTTCCCGCTTTTCCCAAACCCAGGACCAAGGGAACCTACATCCCCTGATGGCGGAGAACCTGGGTACATCCGGGAAGGCTTCCTGGCCGTGCAGCATGCTGTGGACCGGGCCATCATGGAGTACCATGCCGATGCCGCCACACGCCAGCTGTTCCAGAGACTGACGGTGACCATCAAGAGGTTCCCGTACCCGCCGTTCATCGCAGACCCCTTCCTCGTGGCCATCCAGTACCAGCTGCCCCTGCTGCTGCTGCTCAGCTTCACCTACACCGCGCTCACCATTGCCCGTGCTGTCGTGCAGGAGAAGGAAAGGAGGCTGAAGGAGTACATGCGCATGATGGGGCTCAGCAGCTGGCTGCACTGGAGTGCCTGGTTCCTCTTGTTCTTCCTCTTCCTCCTCATCGCCGCCTCCTTCATGACCCTGCTCTTCTGTGTCAAGGTGAAGCCAAATGTAGCCGTGCTGTCCCGCAGCGACCCCTCCCTGGTGCTCGCCTTCCTGCTGTGCTTCGCCATCTCTACCATCTCCTTCAGCTTCATGGTCAGCACCTTCTTCAGCAAAGCCAACATGGCAGCAGCCTTCGGAGGCTTCCTCTACTTCTTCACCTACATCCCCTACTTCTTCGTGGCCCCTCGGTACAACTGGATGACTCTGAGCCAGAAGCTCTGCTCCTGCCTCCTGTCTAATGTCGCCATGGCAATGGGAGCCCAGCTCATTGGGAAATTTGAGGCGAAAGGCATGGGCATCCAGTGGCGAGACCTCCTGAGTCCCGTCAACGTGGACGACGACTTCTGCTTCGGGCAGGTGCTGGGGATGCTGCTGCTGGACTCTGTGCTCTATGGCCTGGTGACCTGGTACATGGAGGCCGTCTTCCCAGGGCAGTTCGGCGTGCCTCAGCCCTGGTACTTCTTCATCATGCCCTCCTATTGGTGTGGGAAGCCAAGGGCGGTTGCAGGGAAGGAGGAAGAAGACAGTGACCCCGAGAAAGCACTCAGAAACGAGTACTTTGAAGCCGAGCCAGAGGACCTGGTGGCGGGGATCAAGATCAAGCACCTGTCCAAGGTGTTCAGGGTGGGAAATAAGGACAGGGCGGCCGTCAGAGACCTGAACCTCAACCTGTACGAGGGACAGATCACCGTCCTGCTGGGCCACAACGGTGCCGGGAAGACCACCACCCTCTCCATGCTCACAGGTCTCTTTCCCCCCACCAGTGGACGGGCATACATCAGCGGGTATGAAATTTCCCAGGACATGGTTCAGATCCGGAAGAGCCTGGGCCTGTGCCCGCAGCACGACATCCTGTTTGACAACTTGACAGTCGCAGAGCACCTTTATTTCTACGCCCAGCTGAAGGGCCTGTCACGTCAGAAGTGCCCTGAAGAAGTCAAGCAGATGCTGCACATCATCGGCCTGGAGGACAAGTGGAACTCACGGAGCCGCTTCCTGAGCGGGGGCATGAGGCGCAAGCTCTCCATCGGCATCGCCCTCATCGCAGGCTCCAAGGTGCTGATACTGGACGAGCCCACCTCGGGCATGGACGCCATCTCCAGGAGGGCCATCTGGGATCTTCTTCAGCGGCAGAAAAGTGACCGCACCATCGTGCTGACCACCCACTTCATGGACGAGGCTGACCTGCTGGGAGACCGCATCGCCATCATGGCCAAGGGGGAGCTGCAGTGCTGCGGGTCCTCGCTGTTCCTCAAGCAGAAATACGGTGCCGGCTATCACATGACGCTGGTGAAGGAGCCGCACTGCAACCCGGAAGACATCTCCCAGCTGGTCCACCACCACGTGCCCAACGCCACGCTGGAGAGCAGCGCTGGGGCCGAGCTGTCTTTCATCCTTCCCAGAGAGAGCACGCACAGGTTTGAAGGTCTCTTTGCTAAACTGGAGAAGAAGCAGAAAGAGCTGGGCATTGCCAGCTTTGGGGCATCCATCACCACCATGGAGGAAGTCTTCCTTCGGGTCGGGAAGCTGGTGGACAGCAGTATGGACATCCAGGCCATCCAGCTCCCTGCCCTGCAGTACCAGCACGAGAGGCGCGCCAGCGACTGGGCTGTGGACAGCAACCTCTGTGGGGCCATGGACCCCTCCGACGGCATTGGAGCCCTCATCGAGGAGGAGCGCACCGCTGTCAAGCTCAACACTGGGCTCGCCCTGCACTGCCAGCAATTCTGGGCCATGTTCCTGAAGAAGGCCGCATACAGCTGGCGCGAGTGGAAAATGGTGGCGGCACAGGTCCTGGTGCCTCTGACCTGCGTCACCCTGGCCCTCCTGGCCATCAACTACTCCTCGGAGCTCTTCGACGACCCCATGCTGAGGCTGACCTTGGGCGAGTACGGCAGAACCGTCGTGCCCTTCTCAGTTCCCGGGACCTCCCAGCTGGGTCAGCAGCTGTCAGAGCATCTGAAAGACGCACTGCAGGCTGAGGGACAGGAGCCCCGCGAGGTGCTCGGTGACCTGGAGGAGTTCTTGATCTTCAGGGCTTCTGTGGAGGGGGGCGGCTTTAATGAGCGGTGCCTTGTGGCAGCGTCCTTCAGAGATGTGGGAGAGCGCACGGTCGTCAACGCCTTGTTCAACAACCAGGCGTACCACTCTCCAGCCACTGCCCTGGCCGTCGTGGACAACCTTCTGTTCAAGCTGCTGTGCGGGCCTCACGCCTCCATTGTGGTCTCCAACTTCCCCCAGCCCCGGAGCGCCCTGCAGGCTGCCAAGGACCAGTTTAACGAGGGCCGGAAGGGATTCGACATTGCCCTCAACCTGCTCTTCGCCATGGCATTCTTGGCCAGCACGTTCTCCATCCTGGCGGTCAGCGAGAGGGCCGTGCAGGCCAAGCATGTGCAGTTTGTGAGTGGAGTCCACGTGGCCAGTTTCTGGCTCTCTGCTCTGCTGTGGGACCTCATCTCCTTCCTCATCCCCAGTCTGCTGCTGCTGGTGGTGTTTAAGGCCTTCGACGTGCGTGCCTTCACGCGGGACGGCCACATGGCTGACACCCTGCTGCTGCTCCTGCTCTACGGCTGGGCCATCATCCCCCTCATGTACCTGATGAACTTCTTCTTCTTGGGGGCGGCCACTGCCTACACGAGGCTGACCATCTTCAACATCCTGTCAGGCATCGCCACCTTCCTGATGGTCACCATCATGCGCATCCCAGCTGTAAAACTGGAAGAACTTTCCAAAACCCTGGATCACGTGTTCCTGGTGCTGCCCAACCACTGTCTGGGGATGGCAGTCAGCAGTTTCTACGAGAACTACGAGACGCGGAGGTACTGCACCTCCTCCGAGGTCGCCGCCCACTACTGCAAGAAATATAACATCCAGTACCAGGAGAACTTCTATGCCTGGAGCGCCCCGGGGGTCGGCCGGTTTGTGGCCTCCATGGCCGCCTCAGGGTGCGCCTACCTCATCCTGCTCTTCCTCATCGAGACCAACCTGCTTCAGAGACTCAGGGGCATCCTCTGCGCCCTCCGGAGGAGGCGGACACTGACAGAATTATACACCCGGATGCCTGTGCTTCCTGAGGACCAAGATGTAGCGGACGAGAGGACCCGCATCCTGGCCCCCAGCCCGGACTCCCTGCTCCACACACCTCTGATTATCAAGGAGCTCTCCAAGGTGTACGAGCAGCGGGTGCCCCTCCTGGCCGTGGACAGGCTCTCCCTCGCGGTGCAGAAAGGGGAGTGCTTCGGCCTGCTGGGCTTCAATGGAGCCGGGAAGACCACGACTTTCAAAATGCTGACCGGGGAGGAGAGCCTCACTTCTGGGGATGCCTTTGTCGGGGGTCACAGAATCAGCTCTGATGTCGGAAAGGTGCGGCAGCGGATCGGCTACTGCCCGCAGTTTGATGCCTTGCTGGACCACATGACAGGCCGGGAGATGCTGGTCATGTACGCTCGGCTCCGGGGCATCCCTGAGCGCCACATCGGGGCCTGCGTGGAGAACACTCTGCGGGGCCTGCTGCTGGAGCCACATGCCAACAAGCTGGTCAGGACGTACAGTGGTGGTAACAAGCGGAAGCTGAGCACCGGCATCGCCCTGATCGGAGAGCCTGCTGTCATCTTCCTGGACGAGCCGTCCACTGGCATGGACCCCGTGGCCCGGCGCCTGCTTTGGGACACCGTGGCACGAGCCCGAGAGTCTGGCAAGGCCATCATCATCACCTCCCACAGCATGGAGGAGTGTGAGGCCCTGTGCACCCGGCTGGCCATCATGGTGCAGGGGCAGTTCAAGTGCCTGGGCAGCCCCCAGCACCTCAAGAGCAAGTTCGGCAGCGGCTACTCCCTGCGGGCCAAGGTGCAGAGTGAAGGGCAACAGGAGGCGCTGGAGGAGTTCAAGGCCTTCGTGGACCTGACCTTTCCAGGCAGCGTCCTGGAAGATGAGCACCAAGGCATGGTCCATTACCACCTGCCGGGCCGTGACCTCAGCTGGGCGAAGGTTTTCGGTATTCTGGAGAAAGCCAAGGAAAAGTACGGCGTGGACGACTACTCCGTGAGCCAGATCTCGCTGGAACAGGTCTTCCTGAGCTTCGCCCACCTGCAGCCGCCCACCGCAGAGGAGGGGCGAACGCGTACGCGACCGCTCGAGCAGAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTGGCAGCAAATGATATCCTGGATTACAAGGATGACGACGATAAGGTTTGACCTCGCCCCGGACCTGCCCTCCCGCCAGGTGCACCCACCTGCAATAAATGCAGCGAAGCCGGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATT
１１）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１
概要：５’  ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’  ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有する天然ＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１）
CGCGCCUAGCAGUGUCCCAGCCGGGUUCGUGUCGCCGCCACCAUGGCUGUGCUCAGGCAGCUGGCGCUCCUCCUCUGGAAGAACUACACCCUGCAGAAGCGGAAGGUCCUGGUGACGGUCCUGGAACUCUUCCUGCCAUUGCUGUUUUCUGGGAUCCUCAUCUGGCUCCGCUUGAAGAUUCAGUCGGAAAAUGUGCCCAACGCCACCAUCUACCCGGGCCAGUCCAUCCAGGAGCUGCCUCUGUUCUUCACCUUCCCUCCGCCAGGAGACACCUGGGAGCUUGCCUACAUCCCUUCUCACAGUGACGCUGCCAAGACCGUCACUGAGACAGUGCGCAGGGCACUUGUGAUCAACAUGCGAGUGCGCGGCUUUCCCUCCGAGAAGGACUUUGAGGACUACAUUAGGUACGACAACUGCUCGUCCAGCGUGCUGGCCGCCGUGGUCUUCGAGCACCCCUUCAACCACAGCAAGGAGCCCCUGCCGCUGGCGGUGAAAUAUCACCUACGGUUCAGUUACACACGGAGAAAUUACAUGUGGACCCAAACAGGCUCCUUUUUCCUGAAAGAGACAGAAGGCUGGCACACUACUUCCCUUUUCCCGCUUUUCCCAAACCCAGGACCAAGGGAACCUACAUCCCCUGAUGGCGGAGAACCUGGGUACAUCCGGGAAGGCUUCCUGGCCGUGCAGCAUGCUGUGGACCGGGCCAUCAUGGAGUACCAUGCCGAUGCCGCCACACGCCAGCUGUUCCAGAGACUGACGGUGACCAUCAAGAGGUUCCCGUACCCGCCGUUCAUCGCAGACCCCUUCCUCGUGGCCAUCCAGUACCAGCUGCCCCUGCUGCUGCUGCUCAGCUUCACCUACACCGCGCUCACCAUUGCCCGUGCUGUCGUGCAGGAGAAGGAAAGGAGGCUGAAGGAGUACAUGCGCAUGAUGGGGCUCAGCAGCUGGCUGCACUGGAGUGCCUGGUUCCUCUUGUUCUUCCUCUUCCUCCUCAUCGCCGCCUCCUUCAUGACCCUGCUCUUCUGUGUCAAGGUGAAGCCAAAUGUAGCCGUGCUGUCCCGCAGCGACCCCUCCCUGGUGCUCGCCUUCCUGCUGUGCUUCGCCAUCUCUACCAUCUCCUUCAGCUUCAUGGUCAGCACCUUCUUCAGCAAAGCCAACAUGGCAGCAGCCUUCGGAGGCUUCCUCUACUUCUUCACCUACAUCCCCUACUUCUUCGUGGCCCCUCGGUACAACUGGAUGACUCUGAGCCAGAAGCUCUGCUCCUGCCUCCUGUCUAAUGUCGCCAUGGCAAUGGGAGCCCAGCUCAUUGGGAAAUUUGAGGCGAAAGGCAUGGGCAUCCAGUGGCGAGACCUCCUGAGUCCCGUCAACGUGGACGACGACUUCUGCUUCGGGCAGGUGCUGGGGAUGCUGCUGCUGGACUCUGUGCUCUAUGGCCUGGUGACCUGGUACAUGGAGGCCGUCUUCCCAGGGCAGUUCGGCGUGCCUCAGCCCUGGUACUUCUUCAUCAUGCCCUCCUAUUGGUGUGGGAAGCCAAGGGCGGUUGCAGGGAAGGAGGAAGAAGACAGUGACCCCGAGAAAGCACUCAGAAACGAGUACUUUGAAGCCGAGCCAGAGGACCUGGUGGCGGGGAUCAAGAUCAAGCACCUGUCCAAGGUGUUCAGGGUGGGAAAUAAGGACAGGGCGGCCGUCAGAGACCUGAACCUCAACCUGUACGAGGGACAGAUCACCGUCCUGCUGGGCCACAACGGUGCCGGGAAGACCACCACCCUCUCCAUGCUCACAGGUCUCUUUCCCCCCACCAGUGGACGGGCAUACAUCAGCGGGUAUGAAAUUUCCCAGGACAUGGUUCAGAUCCGGAAGAGCCUGGGCCUGUGCCCGCAGCACGACAUCCUGUUUGACAACUUGACAGUCGCAGAGCACCUUUAUUUCUACGCCCAGCUGAAGGGCCUGUCACGUCAGAAGUGCCCUGAAGAAGUCAAGCAGAUGCUGCACAUCAUCGGCCUGGAGGACAAGUGGAACUCACGGAGCCGCUUCCUGAGCGGGGGCAUGAGGCGCAAGCUCUCCAUCGGCAUCGCCCUCAUCGCAGGCUCCAAGGUGCUGAUACUGGACGAGCCCACCUCGGGCAUGGACGCCAUCUCCAGGAGGGCCAUCUGGGAUCUUCUUCAGCGGCAGAAAAGUGACCGCACCAUCGUGCUGACCACCCACUUCAUGGACGAGGCUGACCUGCUGGGAGACCGCAUCGCCAUCAUGGCCAAGGGGGAGCUGCAGUGCUGCGGGUCCUCGCUGUUCCUCAAGCAGAAAUACGGUGCCGGCUAUCACAUGACGCUGGUGAAGGAGCCGCACUGCAACCCGGAAGACAUCUCCCAGCUGGUCCACCACCACGUGCCCAACGCCACGCUGGAGAGCAGCGCUGGGGCCGAGCUGUCUUUCAUCCUUCCCAGAGAGAGCACGCACAGGUUUGAAGGUCUCUUUGCUAAACUGGAGAAGAAGCAGAAAGAGCUGGGCAUUGCCAGCUUUGGGGCAUCCAUCACCACCAUGGAGGAAGUCUUCCUUCGGGUCGGGAAGCUGGUGGACAGCAGUAUGGACAUCCAGGCCAUCCAGCUCCCUGCCCUGCAGUACCAGCACGAGAGGCGCGCCAGCGACUGGGCUGUGGACAGCAACCUCUGUGGGGCCAUGGACCCCUCCGACGGCAUUGGAGCCCUCAUCGAGGAGGAGCGCACCGCUGUCAAGCUCAACACUGGGCUCGCCCUGCACUGCCAGCAAUUCUGGGCCAUGUUCCUGAAGAAGGCCGCAUACAGCUGGCGCGAGUGGAAAAUGGUGGCGGCACAGGUCCUGGUGCCUCUGACCUGCGUCACCCUGGCCCUCCUGGCCAUCAACUACUCCUCGGAGCUCUUCGACGACCCCAUGCUGAGGCUGACCUUGGGCGAGUACGGCAGAACCGUCGUGCCCUUCUCAGUUCCCGGGACCUCCCAGCUGGGUCAGCAGCUGUCAGAGCAUCUGAAAGACGCACUGCAGGCUGAGGGACAGGAGCCCCGCGAGGUGCUCGGUGACCUGGAGGAGUUCUUGAUCUUCAGGGCUUCUGUGGAGGGGGGCGGCUUUAAUGAGCGGUGCCUUGUGGCAGCGUCCUUCAGAGAUGUGGGAGAGCGCACGGUCGUCAACGCCUUGUUCAACAACCAGGCGUACCACUCUCCAGCCACUGCCCUGGCCGUCGUGGACAACCUUCUGUUCAAGCUGCUGUGCGGGCCUCACGCCUCCAUUGUGGUCUCCAACUUCCCCCAGCCCCGGAGCGCCCUGCAGGCUGCCAAGGACCAGUUUAACGAGGGCCGGAAGGGAUUCGACAUUGCCCUCAACCUGCUCUUCGCCAUGGCAUUCUUGGCCAGCACGUUCUCCAUCCUGGCGGUCAGCGAGAGGGCCGUGCAGGCCAAGCAUGUGCAGUUUGUGAGUGGAGUCCACGUGGCCAGUUUCUGGCUCUCUGCUCUGCUGUGGGACCUCAUCUCCUUCCUCAUCCCCAGUCUGCUGCUGCUGGUGGUGUUUAAGGCCUUCGACGUGCGUGCCUUCACGCGGGACGGCCACAUGGCUGACACCCUGCUGCUGCUCCUGCUCUACGGCUGGGCCAUCAUCCCCCUCAUGUACCUGAUGAACUUCUUCUUCUUGGGGGCGGCCACUGCCUACACGAGGCUGACCAUCUUCAACAUCCUGUCAGGCAUCGCCACCUUCCUGAUGGUCACCAUCAUGCGCAUCCCAGCUGUAAAACUGGAAGAACUUUCCAAAACCCUGGAUCACGUGUUCCUGGUGCUGCCCAACCACUGUCUGGGGAUGGCAGUCAGCAGUUUCUACGAGAACUACGAGACGCGGAGGUACUGCACCUCCUCCGAGGUCGCCGCCCACUACUGCAAGAAAUAUAACAUCCAGUACCAGGAGAACUUCUAUGCCUGGAGCGCCCCGGGGGUCGGCCGGUUUGUGGCCUCCAUGGCCGCCUCAGGGUGCGCCUACCUCAUCCUGCUCUUCCUCAUCGAGACCAACCUGCUUCAGAGACUCAGGGGCAUCCUCUGCGCCCUCCGGAGGAGGCGGACACUGACAGAAUUAUACACCCGGAUGCCUGUGCUUCCUGAGGACCAAGAUGUAGCGGACGAGAGGACCCGCAUCCUGGCCCCCAGCCCGGACUCCCUGCUCCACACACCUCUGAUUAUCAAGGAGCUCUCCAAGGUGUACGAGCAGCGGGUGCCCCUCCUGGCCGUGGACAGGCUCUCCCUCGCGGUGCAGAAAGGGGAGUGCUUCGGCCUGCUGGGCUUCAAUGGAGCCGGGAAGACCACGACUUUCAAAAUGCUGACCGGGGAGGAGAGCCUCACUUCUGGGGAUGCCUUUGUCGGGGGUCACAGAAUCAGCUCUGAUGUCGGAAAGGUGCGGCAGCGGAUCGGCUACUGCCCGCAGUUUGAUGCCUUGCUGGACCACAUGACAGGCCGGGAGAUGCUGGUCAUGUACGCUCGGCUCCGGGGCAUCCCUGAGCGCCACAUCGGGGCCUGCGUGGAGAACACUCUGCGGGGCCUGCUGCUGGAGCCACAUGCCAACAAGCUGGUCAGGACGUACAGUGGUGGUAACAAGCGGAAGCUGAGCACCGGCAUCGCCCUGAUCGGAGAGCCUGCUGUCAUCUUCCUGGACGAGCCGUCCACUGGCAUGGACCCCGUGGCCCGGCGCCUGCUUUGGGACACCGUGGCACGAGCCCGAGAGUCUGGCAAGGCCAUCAUCAUCACCUCCCACAGCAUGGAGGAGUGUGAGGCCCUGUGCACCCGGCUGGCCAUCAUGGUGCAGGGGCAGUUCAAGUGCCUGGGCAGCCCCCAGCACCUCAAGAGCAAGUUCGGCAGCGGCUACUCCCUGCGGGCCAAGGUGCAGAGUGAAGGGCAACAGGAGGCGCUGGAGGAGUUCAAGGCCUUCGUGGACCUGACCUUUCCAGGCAGCGUCCUGGAAGAUGAGCACCAAGGCAUGGUCCAUUACCACCUGCC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１２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２
概要：５’  ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’  ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有するコドン最適化ＡＢＣＡ３  ＤＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２）
AGACCGCGCCTAGCAGTGTCCCAGCCGGGTTCGTGTCGCCGCCACCATGGCCGTGCTGAGACAGCTGGCTCTGCTGCTGTGGAAGAACTACACCCTGCAGAAACGGAAGGTGCTCGTGACCGTGCTGGAACTGTTCCTGCCCCTGCTGTTCAGCGGCATCCTGATCTGGCTGCGGCTGAAGATCCAGAGCGAGAACGTGCCCAACGCCACCATCTACCCCGGCCAGAGCATCCAGGAACTGCCCCTGTTCTTCACCTTCCCCCCACCCGGCGATACCTGGGAGCTGGCCTATATCCCTAGCCACAGCGACGCCGCCAAGACCGTGACAGAGACAGTGCGGAGAGCCCTCGTGATCAACATGAGAGTGCGGGGCTTCCCCAGCGAGAAGGACTTCGAGGACTACATCAGATACGACAACTGCAGCAGCAGCGTGCTGGCCGCCGTGGTGTTTGAGCACCCCTTCAACCACAGCAAAGAGCCCCTGCCTCTGGCCGTGAAGTACCACCTGAGATTCAGCTACACCCGGCGGAACTACATGTGGACCCAGACCGGCTCATTCTTCCTGAAAGAGACAGAGGGCTGGCACACCACCAGCCTGTTCCCTCTGTTCCCCAACCCTGGCCCCAGAGAGCCTACATCTCCTGACGGCGGCGAGCCCGGCTATATCAGAGAAGGATTCCTGGCCGTGCAGCACGCCGTGGACAGAGCCATCATGGAATACCACGCCGATGCCGCCACCCGGCAGCTGTTTCAGAGACTGACCGTGACCATCAAGCGGTTCCCTTACCCCCCCTTTATCGCCGACCCTTTCCTGGTGGCCATCCAGTACCAGCTGCCACTCCTCCTGCTGCTGAGCTTTACCTACACCGCCCTGACAATCGCCAGAGCCGTGGTGCAGGAAAAAGAGCGGCGGCTGAAAGAGTACATGCGGATGATGGGCCTGTCCAGCTGGCTGCATTGGAGCGCCTGGTTTCTGCTGTTCTTCCTGTTCCTGCTGATCGCCGCCAGCTTCATGACACTGCTGTTTTGCGTGAAAGTGAAGCCCAACGTGGCAGTGCTGAGCCGCAGCGATCCTAGCCTGGTGCTGGCCTTCCTGCTGTGCTTCGCCATCAGCACCATCAGCTTCAGCTTTATGGTGTCCACCTTCTTCAGCAAGGCCAACATGGCCGCTGCCTTCGGCGGCTTCCTGTACTTCTTTACCTATATTCCCTACTTCTTCGTGGCCCCTCGGTACAACTGGATGACCCTGAGCCAGAAGCTGTGCAGCTGCCTGCTGAGCAACGTGGCCATGGCTATGGGAGCCCAGCTGATCGGCAAGTTCGAGGCCAAGGGCATGGGCATCCAGTGGCGGGATCTGCTGAGCCCCGTGAACGTGGACGACGACTTCTGCTTCGGCCAGGTGCTGGGCATGCTGCTGCTGGACTCCGTGCTGTATGGCCTCGTGACCTGGTATATGGAAGCCGTGTTCCCTGGCCAGTTCGGCGTGCCCCAGCCCTGGTACTTCTTCATCATGCCTAGCTATTGGTGCGGCAAGCCCAGGGCCGTGGCCGGCAAAGAGGAAGAGGATAGCGACCCCGAGAAGGCCCTGCGGAACGAGTACTTTGAGGCCGAGCCCGAGGATCTGGTGGCCGGAATCAAGATCAAGCACCTGAGCAAGGTGTTCCGCGTGGGCAACAAGGATAGAGCCGCTGTGCGGGACCTGAACCTGAATCTGTACGAGGGCCAGATCACCGTGCTGCTGGGCCATAATGGCGCCGGAAAGACCACCACCCTGAGCATGCTGACCGGCCTGTTTCCCCCAACAAGCGGCAGGGCCTACATCAGCGGCTACGAGATCAGCCAGGACATGGTGCAGATCCGGAAGTCCCTGGGCCTGTGCCCCCAGCACGACATCCTGTTCGACAACCTGACCGTGGCCGAGCACCTGTACTTTTACGCTCAGCTGAAGGGCCTGAGCCGGCAGAAATGCCCCGAGGAAGTGAAGCAGATGCTGCACATCATCGGCCTGGAAGATAAGTGGAACAGCCGGTCCCGGTTCCTGTCCGGCGGAATGAGAAGAAAGCTGAGCATCGGAATCGCCCTGATTGCCGGCAGCAAGGTGCTGATCCTGGACGAGCCTACCAGCGGCATGGACGCCATCTCCAGAAGGGCCATCTGGGACCTGCTGCAGCGGCAGAAGTCCGACAGAACCATCGTGCTGACCACCCACTTCATGGACGAGGCCGACCTGCTGGGCGACCGGATCGCTATTATGGCCAAGGGGGAGCTGCAGTGCTGCGGCAGCAGCCTGTTTCTGAAGCAGAAATACGGCGCTGGCTACCACATGACCCTCGTGAAAGAGCCTCACTGCAACCCCGAGGACATCTCCCAGCTGGTGCACCACCACGTGCCAAATGCCACCCTGGAAAGCTCTGCCGGCGCTGAGCTGAGCTTCATCCTGCCCAGAGAGAGCACCCACAGATTCGAGGGCCTGTTCGCCAAGCTGGAAAAGAAACAGAAAGAGCTGGGCATTGCCAGCTTCGGCGCCAGCATCACAACAATGGAAGAGGTGTTCCTGAGAGTGGGCAAGCTGGTGGACAGCTCCATGGACATCCAGGCTATCCAGCTGCCCGCCCTGCAGTATCAGCACGAGAGAAGGGCTAGCGACTGGGCCGTGGACTCCAATCTGTGCGGCGCCATGGATCCCTCCGATGGAATCGGCGCCCTGATCGAAGAGGAACGGACCGCCGTGAAGCTGAACACAGGACTGGCCCTGCACTGCCAGCAGTTCTGGGCCATGTTCCTGAAGAAAGCCGCCTACAGCTGGCGCGAGTGGAAAATGGTGGCCGCACAGGTGCTGGTGCCCCTGACCTGTGTGACACTGGCACTGCTGGCCATCAACTACAGCAGCGAGCTGTTCGACGACCCCATGCTGAGACTGACACTGGGCGAGTACGGCAGGACCGTGGTGCCTTTTTCTGTGCCCGGCACCTCACAGCTGGGCCAGCAGCTGTCTGAACACCTGAAGGATGCCCTGCAGGCCGAAGGCCAGGAACCCAGAGAAGTGCTGGGCGATCTGGAAGAGTTCCTGATCTTCCGGGCCAGCGTGGAAGGCGGCGGATTCAACGAGAGATGCCTGGTGGCTGCCTCCTTCCGGGATGTGGGCGAGAGAACAGTCGTGAACGCCCTGTTCAACAATCAGGCCTACCACAGCCCCGCCACCGCTCTGGCTGTGGTGGACAACCTGCTGTTTAAGCTGCTGTGTGGCCCCCACGCCTCCATCGTGGTGTCCAATTTCCCCCAGCCCAGAAGCGCTCTGCAGGCTGCCAAGGACCAGTTCAACGAGGGCCGGAAGGGCTTCGACATTGCTCTGAATCTGCTGTTTGCCATGGCCTTTCTGGCCTCCACCTTCAGCATCCTGGCTGTGTCCGAGAGAGCCGTGCAGGCCAAGCACGTGCAGTTTGTGTCTGGCGTGCACGTGGCCAGCTTTTGGCTGTCTGCCCTGCTGTGGGACCTGATCAGCTTCCTGATCCCCAGCCTCCTGCTGCTGGTGGTGTTCAAGGCCTTCGACGTGCGGGCCTTCACCAGGGATGGACACATGGCCGACACCTTGTTGTTGCTGCTGCTGTACGGCTGGGCCATCATCCCCCTGATGTACCTGATGAACTTCTTCTTCCTGGGCGCTGCCACCGCCTACACCAGACTGACCATCTTCAACATCCTGAGCGGGATCGCCACCTTCCTGATGGTCACAATCATGCGGATCCCTGCCGTGAAACTGGAAGAACTGAGCAAGACCCTGGACCATGTGTTTCTGGTGCTGCCCAACCACTGCCTGGGCATGGCCGTGTCTAGCTTCTACGAGAACTACGAGACACGGCGGTACTGCACCTCCAGCGAAGTGGCCGCCCACTACTGCAAGAAGTATAACATCCAGTATCAGGAAAACTTCTACGCTTGGAGCGCACCCGGCGTGGGCAGATTTGTGGCCTCTATGGCCGCCAGCGGCTGCGCCTATCTGATCCTGCTGTTCCTGATCGAGACTAACCTGCTGCAGAGACTGAGAGGCATCCTGTGCGCCCTGCGGCGGAGAAGAACACTGACCGAGCTGTACACCCGGATGCCCGTGCTGCCTGAGGACCAGGATGTGGCCGACGAGCGGACAAGAATCCTGGCCCCTAGCCCCGATAGCCTGCTGCACACCCCCCTGATCATCAAAGAACTGTCCAAGGTGTACGAGCAGCGGGTGCCACTGCTGGCTGTGGACAGACTGAGTCTGGCTGTGCAGAAAGGCGAGTGCTTCGGACTGCTGGGCTTCAACGGCGCAGGCAAGACCACAACCTTCAAGATGCTGACAGGCGAGGAAAGCCTGACCTCCGGCGACGCCTTTGTGGGCGGACACAGGATCTCTTCCGATGTGGGCAAAGTGCGGCAGCGGATCGGCTACTGCCCTCAGTTCGACGCCCTGCTGGATCACATGACCGGCAGGGAAATGCTCGTGATGTACGCCCGGCTGAGGGGCATCCCCGAGAGACACATTGGCGCCTGCGTGGAAAACACCCTGCGGGGCCTGCTGCTGGAACCCCACGCTAACAAACTCGTGCGGACCTACAGCGGCGGCAACAAGAGAAAGCTGTCTACCGGCATTGCACTGATCGGCGAGCCAGCCGTGATCTTTCTGGATGAGCCCAGCACAGGCATGGACCCCGTGGCTCGGAGACTGCTGTGGGATACAGTGGCCAGAGCCAGAGAGTCCGGCAAGGCCATCATTATCACCAGCCACAGCATGGAAGAGTGCGAGGCCCTGTGTACAAGACTGGCAATTATGGTGCAGGGACAGTTCAAGTGTCTGGGCAGCCCTCAGCACCTGAAGTCCAAGTTCGGCTCCGGCTACAGCCTGCGGGCCAAGGTGCAGTCTGAAGGGCAGCAGGAAGCCCTGGAAGAATTCAAAGCCTTCGTGGACCTGACCTTCCCCGGCTCTGTGCTGGAAGATGAGCACCAGGGAATGGTGCACTACCATCTGCCTGGCAGGGACCTGTCCTGGGCCAAAGTGTTTGGCATCCTGGAAAAGGCCAAAGAGAAGTACGGCGTGGACGATTACAGCGTGTCCCAGATCAGCCTGGAACAGGTGTTCCTGTCCTTTGCCCATCTGCAGCCCCCTACCGCCGAAGAGGGAAGAACGCGTACGCGACCGCTCGAGCAGAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTGGCAGCAAATGATATCCTGGATTACAAGGATGACGACGATAAGGTTTGACCTCGCCCCGGACCTGCCCTCCCGCCAGGTGCACCCACCTGCAATAAATGCAGCGAAGCCGGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAATT
１３）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３
概要：５’  ＣＹＢＡ  ＵＴＲおよび３’  ＣＹＢＡ  ＵＴＲを有するコドン最適化ＡＢＣＡ３  ｍＲＮＡ配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３）
AGACCGCGCCUAGCAGUGUCCCAGCCGGGUUCGUGUCGCCGCCACCAUGGCCGUGCUGAGACAGCUGGCUCUGCUGCUGUGGAAGAACUACACCCUGCAGAAACGGAAGGUGCUCGUGACCGUGCUGGAACUGUUCCUGCCCCUGCUGUUCAGCGGCAUCCUGAUCUGGCUGCGGCUGAAGAUCCAGAGCGAGAACGUGCCCAACGCCACCAUCUACCCCGGCCAGAGCAUCCAGGAACUGCCCCUGUUCUUCACCUUCCCCCCACCCGGCGAUACCUGGGAGCUGGCCUAUAUCCCUAGCCACAGCGACGCCGCCAAGACCGUGACAGAGACAGUGCGGAGAGCCCUCGUGAUCAACAUGAGAGUGCGGGGCUUCCCCAGCGAGAAGGACUUCGAGGACUACAUCAGAUACGACAACUGCAGCAGCAGCGUGCUGGCCGCCGUGGUGUUUGAGCACCCCUUCAACCACAGCAAAGAGCCCCUGCCUCUGGCCGUGAAGUACCACCUGAGAUUCAGCUACACCCGGCGGAACUACAUGUGGACCCAGACCGGCUCAUUCUUCCUGAAAGAGACAGAGGGCUGGCACACCACCAGCCUGUUCCCUCUGUUCCCCAACCCUGGCCCCAGAGAGCCUACAUCUCCUGACGGCGGCGAGCCCGGCUAUAUCAGAGAAGGAUUCCUGGCCGUGCAGCACGCCGUGGACAGAGCCAUCAUGGAAUACCACGCCGAUGCCGCCACCCGGCAGCUGUUUCAGAGACUGACCGUGACCAUCAAGCGGUUCCCUUACCCCCCCUUUAUCGCCGACCCUUUCCUGGUGGCCAUCCAGUACCAGCUGCCACUCCUCCUGCUGCUGAGCUUUACCUACACCGCCCUGACAAUCGCCAGAGCCGUGGUGCAGGAAAAAGAGCGGCGGCUGAAAGAGUACAUGCGGAUGAUGGGCCUGUCCAGCUGGCUGCAUUGGAGCGCCUGGUUUCUGCUGUUCUUCCUGUUCCUGCUGAUCGCCGCCAGCUUCAUGACACUGCUGUUUUGCGUGAAAGUGAAGCCCAACGUGGCAGUGCUGAGCCGCAGCGAUCCUAGCCUGGUGCUGGCCUUCCUGCUGUGCUUCGCCAUCAGCACCAUCAGCUUCAGCUUUAUGGUGUCCACCUUCUUCAGCAAGGCCAACAUGGCCGCUGCCUUCGGCGGCUUCCUGUACUUCUUUACCUAUAUUCCCUACUUCUUCGUGGCCCCUCGGUACAACUGGAUGACCCUGAGCCAGAAGCUGUGCAGCUGCCUGCUGAGCAACGUGGCCAUGGCUAUGGGAGCCCAGCUGAUCGGCAAGUUCGAGGCCAAGGGCAUGGGCAUCCAGUGGCGGGAUCUGCUGAGCCCCGUGAACGUGGACGACGACUUCUGCUUCGGCCAGGUGCUGGGCAUGCUGCUGCUGGACUCCGUGCUGUAUGGCCUCGUGACCUGGUAUAUGGAAGCCGUGUUCCCUGGCCAGUUCGGCGUGCCCCAGCCCUGGUACUUCUUCAUCAUGCCUAGCUAUUGGUGCGGCAAGCCCAGGGCCGUGGCCGGCAAAGAGGAAGAGGAUAGCGACCCCGAGAAGGCCCUGCGGAACGAGUACUUUGAGGCCGAGCCCGAGGAUCUGGUGGCCGGAAUCAAGAUCAAGCACCUGAGCAAGGUGUUCCGCGUGGGCAACAAGGAUAGAGCCGCUGUGCGGGACCUGAACCUGAAUCUGUACGAGGGCCAGAUCACCGUGCUGCUGGGCCAUAAUGGCGCCGGAAAGACCACCACCCUGAGCAUGCUGACCGGCCUGUUUCCCCCAACAAGCGGCAGGGCCUACAUCAGCGGCUACGAGAUCAGCCAGGACAUGGUGCAGAUCCGGAAGUCCCUGGGCCUGUGCCCCCAGCACGACAUCCUGUUCGACAACCUGACCGUGGCCGAGCACCUGUACUUUUACGCUCAGCUGAAGGGCCUGAGCCGGCAGAAAUGCCCCGAGGAAGUGAAGCAGAUGCUGCACAUCAUCGGCCUGGAAGAUAAGUGGAACAGCCGGUCCCGGUUCCUGUCCGGCGGAAUGAGAAGAAAGCUGAGCAUCGGAAUCGCCCUGAUUGCCGGCAGCAAGGUGCUGAUCCUGGACGAGCCUACCAGCGGCAUGGACGCCAUCUCCAGAAGGGCCAUCUGGGACCUGCUGCAGCGGCAGAAGUCCGACAGAACCAUCGUGCUGACCACCCACUUCAUGGACGAGGCCGACCUGCUGGGCGACCGGAUCGCUAUUAUGGCCAAGGGGGAGCUGCAGUGCUGCGGCAGCAGCCUGUUUCUGAAGCAGAAAUACGGCGCUGGCUACCACAUGACCCUCGUGAAAGAGCCUCACUGCAACCCCGAGGACAUCUCCCAGCUGGUGCACCACCACGUGCCAAAUGCCACCCUGGAAAGCUCUGCCGGCGCUGAGCUGAGCUUCAUCCUGCCCAGAGAGAGCACCCACAGAUUCGAGGGCCUGUUCGCCAAGCUGGAAAAGAAACAGAAAGAGCUGGGCAUUGCCAGCUUCGGCGCCAGCAUCACAACAAUGGAAGAGGUGUUCCUGAGAGUGGGCAAGCUGGUGGACAGCUCCAUGGACAUCCAGGCUAUCCAGCUGCCCGCCCUGCAGUAUCAGCACGAGAGAAGGGCUAGCGACUGGGCCGUGGACUCCAAUCUGUGCGGCGCCAUGGAUCCCUCCGAUGGAAUCGGCGCCCUGAUCGAAGAGGAACGGACCGCCGUGAAGCUGAACACAGGACUGGCCCUGCACUGCCAGCAGUUCUGGGCCAUGUUCCUGAAGAAAGCCGCCUACAGCUGGCGCGAGUGGAAAAUGGUGGCCGCACAGGUGCUGGUGCCCCUGACCUGUGUGACACUGGCACUGCUGGCCAUCAACUACAGCAGCGAGCUGUUCGACGACCCCAUGCUGAGACUGACACUGGGCGAGUACGGCAGGACCGUGGUGCCUUUUUCUGUGCCCGGCACCUCACAGCUGGGCCAGCAGCUGUCUGAACACCUGAAGGAUGCCCUGCAGGCCGAAGGCCAGGAACCCAGAGAAGUGCUGGGCGAUCUGGAAGAGUUCCUGAUCUUCCGGGCCAGCGUGGAAGGCGGCGGAUUCAACGAGAGAUGCCUGGUGGCUGCCUCCUUCCGGGAUGUGGGCGAGAGAACAGUCGUGAACGCCCUGUUCAACAAUCAGGCCUACCACAGCCCCGCCACCGCUCUGGCUGUGGUGGACAACCUGCUGUUUAAGCUGCUGUGUGGCCCCCACGCCUCCAUCGUGGUGUCCAAUUUCCCCCAGCCCAGAAGCGCUCUGCAGGCUGCCAAGGACCAGUUCAACGAGGGCCGGAAGGGCUUCGACAUUGCUCUGAAUCUGCUGUUUGCCAUGGCCUUUCUGGCCUCCACCUUCAGCAUCCUGGCUGUGUCCGAGAGAGCCGUGCAGGCCAAGCACGUGCAGUUUGUGUCUGGCGUGCACGUGGCCAGCUUUUGGCUGUCUGCCCUGCUGUGGGACCUGAUCAGCUUCCUGAUCCCCAGCCUCCUGCUGCUGGUGGUGUUCAAGGCCUUCGACGUGCGGGCCUUCACCAGGGAUGGACACAUGGCCGACACCUUGUUGUUGCUGCUGCUGUACGGCUGGGCCAUCAUCCCCCUGAUGUACCUGAUGAACUUCUUCUUCCUGGGCGCUGCCACCGCCUACACCAGACUGACCAUCUUCAACAUCCUGAGCGGGAUCGCCACCUUCCUGAUGGUCACAAUCAUGCGGAUCCCUGCCGUGAAACUGGAAGAACUGAGCAAGACCCUGGACCAUGUGUUUCUGGUGCUGCCCAACCACUGCCUGGGCAUGGCCGUGUCUAGCUUCUACGAGAACUACGAGACACGGCGGUACUGCACCUCCAGCGAAGUGGCCGCCCACUACUGCAAGAAGUAUAACAUCCAGUAUCAGGAAAACUUCUACGCUUGGAGCGCACCCGGCGUGGGCAGAUUUGUGGCCUCUAUGGCCGCCAGCGGCUGCGCCUAUCUGAUCCUGCUGUUCCUGAUCGAGACUAACCUGCUGCAGAGACUGAGAGGCAUCCUGUGCGCCCUGCGGCGGAGAAGAACACUGACCGAGCUGUACACCCGGAUGCCCGUGCUGCCUGAGGACCAGGAUGUGGCCGACGAGCGGACAAGAAUCCUGGCCCCUAGCCCCGAUAGCCUGCUGCACACCCCCCUGAUCAUCAAAGAACUGUCCAAGGUGUACGAGCAGCGGGUGCCACUGCUGGCUGUGGACAGACUGAGUCUGGCUGUGCAGAAAGGCGAGUGCUUCGGACUGCUGGGCUUCAACGGCGCAGGCAAGACCACAACCUUCAAGAUGCUGACAGGCGAGGAAAGCCUGACCUCCGGCGACGCCUUUGUGGGCGGACACAGGAUCUCUUCCGAUGUGGGCAAAGUGCGGCAGCGGAUCGGCUACUGCCCUCAGUUCGACGCCCUGCUGGAUCACAUGACCGGCAGGGAAAUGCUCGUGAUGUACGCCCGGCUGAGGGGCAUCCCCGAGAGACACAUUGGCGCCUGCGUGGAAAACACCCUGCGGGGCCUGCUGCUGGAACCCCACGCUAACAAACUCGUGCGGACCUACAGCGGCGGCAACAAGAGAAAGCUGUCUACCGGCAUUGCACUGAUCGGCGAGCCAGCCGUGAUCUUUCUGGAUGAGCCCAGCACAGGCAUGGACCCCGUGGCUCGGAGACUGCUGUGGGAUACAGUGGCCAGAGCCAGAGAGUCCGGCAAGGCCAUCAUUAUCACCAGCCACAGCAUGGAAGAGUGCGAGGCCCUGUGUACAAGACUGGCAAUUAUGGUGCAGGGACAGUUCAAGUGUCUGGGCAGCCCUCAGCACCUGAAGUCCAAGUUCGGCUCCGGCUACAGCCUGCGGGCCAAGGUGCAGUCUGAAGGGCAGCAGGAAGCCCUGGAAGAAUUCAAAGCCUUCGUGGACCUGACCUUCCCCGGCUCUGUGCUGGAAGAUGAGCACCAGGGAAUGGUGCACUACCAUCUGCCUGGCAGGGACCUGUCCUGGGCCAAAGUGUUUGGCAUCCUGGAAAAGGCCAAAGAGAAGUACGGCGUGGACGAUUACAGCGUGUCCCAGAUCAGCCUGGAACAGGUGUUCCUGUCCUUUGCCCAUCUGCAGCCCCCUACCGCCGAAGAGGGAAGAACGCGUACGCGACCGCUCGAGCAGAAACUCAUCUCAGAAGAGGAUCUGGCAGCAAAUGAUAUCCUGGAUUACAAGGAUGACGACGAUAAGGUUUGACCUCGCCCCGGACCUGCCCUCCCGCCAGGUGCACCCACCUGCAAUAAAUGCAGCGAAGCCGGGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAUU
１４）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１４
概要：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のｍＲＮＡ同等物
CGCGCCUAGCAGUGUCCCAGCCGGGUUCGUGUCGCC
１５）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１５
概要：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のｍＲＮＡ同等物
CCUCGCCCCGGACCUGCCCUCCCGCCAGGUGCACCCACCUGCAAUAAAUGCAGCGAAGCCGGGA
１６）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１６
概要：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５のｍＲＮＡ同等物
UCUUCUGGUCCCCACAGACUCAGAGAGAAC
１７）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７
概要：転写ＴＴＸ−ＡＢＣＡ３−ＲＮＡ−０１８
黒−隣接配列
イタリック体、下線−Ｋｏｚａｋ配列
青−コドン最適化ＡＢＣＡ３
赤−ｃ−ｍｙｃ−タグ
緑−ＦＬＡＧ−タグ
赤でハイライト−停止コドン
橙−ｐｏｌｙ（Ａ）テール
gggagacccaagctggctagcgtttaaacttaagcttggcaatccggtactgttggtaaagccaccatggccgtgctgagacagctggctctgctgctgtggaagaactacaccctgcagaaacggaaggtgctcgtgaccgtgctggaactgttcctgcccctgctgttcagcggcatcctgatctggctgcggctgaagatccagagcgagaacgtgcccaacgccaccatctaccccggccagagcatccaggaactgcccctgttcttcaccttccccccacccggcgatacctgggagctggcctatatccctagccacagcgacgccgccaagaccgtgacagagacagtgcggagagccctcgtgatcaacatgagagtgcggggcttccccagcgagaaggacttcgaggactacatcagatacgacaactgcagcagcagcgtgctggccgccgtggtgtttgagcaccccttcaaccacagcaaagagcccctgcctctggccgtgaagtaccacctgagattcagctacacccggcggaactacatgtggacccagaccggctcattcttcctgaaagagacagagggctggcacaccaccagcctgttccctctgttccccaaccctggccccagagagcctacatctcctgacggcggcgagcccggctatatcagagaaggattcctggccgtgcagcacgccgtggacagagccatcatggaataccacgccgatgccgccacccggcagctgtttcagagactgaccgtgaccatcaagcggttcccttaccccccctttatcgccgaccctttcctggtggccatccagtaccagctgccactcctcctgctgctgagctttacctacaccgccctgacaatcgccagagccgtggtgcaggaaaaagagcggcggctgaaagagtacatgcggatgatgggcctgtccagctggctgcattggagcgcctggtttctgctgttcttcctgttcctgctgatcgccgccagcttcatgacactgctgttttgcgtgaaagtgaagcccaacgtggcagtgctgagccgcagcgatcctagcctggtgctggccttcctgctgtgcttcgccatcagcaccatcagcttcagctttatggtgtccaccttcttcagcaaggccaacatggccgctgccttcggcggcttcctgtacttctttacctatattccctacttcttcgtggcccctcggtacaactggatgaccctgagccagaagctgtgcagctgcctgctgagcaacgtggccatggctatgggagcccagctgatcggcaagttcgaggccaagggcatgggcatccagtggcgggatctgctgagccccgtgaacgtggacgacgacttctgcttcggccaggtgctgggcatgctgctgctggactccgtgctgtatggcctcgtgacctggtatatggaagccgtgttccctggccagttcggcgtgccccagccctggtacttcttcatcatgcctagctattggtgcggcaagcccagggccgtggccggcaaagaggaagaggatagcgaccccgagaaggccctgcggaacgagtactttgaggccgagcccgaggatctggtggccggaatcaagatcaagcacctgagcaaggtgttccgcgtgggcaacaaggatagagccgctgtgcgggacctgaacctgaatctgtacgagggccagatcaccgtgctgctgggccataatggcgccggaaagaccaccaccctgagcatgctgaccggcctgtttcccccaacaagcggcagggcctacatcagcggctacgagatcagccaggacatggtgcagatccggaagtccctgggcctgtgcccccagcacgacatcctgttcgacaacctgaccgtggccgagcacctgtacttttacgctcagctgaagggcctgagccggcagaaatgccccgaggaagtgaagcagatgctgcacatcatcggcctggaagataagtggaacagccggtcccggttcctgtccggcggaatgagaagaaagctgagcatcggaatcgccctgattgccggcagcaaggtgctgatcctggacgagcctaccagcggcatggacgccatctccagaagggccatctgggacctgctgcagcggcagaagtccgacagaaccatcgtgctgaccacccacttcatggacgaggccgacctgctgggcgaccggatcgctattatggccaagggggagctgcagtgctgcggcagcagcctgtttctgaagcagaaatacggcgctggctaccacatgaccctcgtgaaagagcctcactgcaaccccgaggacatctcccagctggtgcaccaccacgtgccaaatgccaccctggaaagctctgccggcgctgagctgagcttcatcctgcccagagagagcacccacagattcgagggcctgttcgccaagctggaaaagaaacagaaagagctgggcattgccagcttcggcgccagcatcacaacaatggaagaggtgttcctgagagtgggcaagctggtggacagctccatggacatccaggctatccagctgcccgccctgcagtatcagcacgagagaagggctagcgactgggccgtggactccaatctgtgcggcgccatggatccctccgatggaatcggcgccctgatcgaagaggaacggaccgccgtgaagctgaacacaggactggccctgcactgccagcagttctgggccatgttcctgaagaaagccgcctacagctggcgcgagtggaaaatggtggccgcacaggtgctggtgcccctgacctgtgtgacactggcactgctggccatcaactacagcagcgagctgttcgacgaccccatgctgagactgacactgggcgagtacggcaggaccgtggtgcctttttctgtgcccggcacctcacagctgggccagcagctgtctgaacacctgaaggatgccctgcaggccgaaggccaggaacccagagaagtgctgggcgatctggaagagttcctgatcttccgggccagcgtggaaggcggcggattcaacgagagatgcctggtggctgcctccttccgggatgtgggcgagagaacagtcgtgaacgccctgttcaacaatcaggcctaccacagccccgccaccgctctggctgtggtggacaacctgctgtttaagctgctgtgtggcccccacgcctccatcgtggtgtccaatttcccccagcccagaagcgctctgcaggctgccaaggaccagttcaacgagggccggaagggcttcgacattgctctgaatctgctgtttgccatggcctttctggcctccaccttcagcatcctggctgtgtccgagagagccgtgcaggccaagcacgtgcagtttgtgtctggcgtgcacgtggccagcttttggctgtctgccctgctgtgggacctgatcagcttcctgatccccagcctcctgctgctggtggtgttcaaggccttcgacgtgcgggccttcaccagggatggacacatggccgacaccttgttgttgctgctgctgtacggctgggccatcatccccctgatgtacctgatgaacttcttcttcctgggcgctgccaccgcctacaccagactgaccatcttcaacatcctgagcgggatcgccaccttcctgatggtcacaatcatgcggatccctgccgtgaaactggaagaactgagcaagaccctggaccatgtgtttctggtgctgcccaaccactgcctgggcatggccgtgtctagcttctacgagaactacgagacacggcggtactgcacctccagcgaagtggccgcccactactgcaagaagtataacatccagtatcaggaaaacttctacgcttggagcgcacccggcgtgggcagatttgtggcctctatggccgccagcggctgcgcctatctgatcctgctgttcctgatcgagactaacctgctgcagagactgagaggcatcctgtgcgccctgcggcggagaagaacactgaccgagctgtacacccggatgcccgtgctgcctgaggaccaggatgtggccgacgagcggacaagaatcctggcccctagccccgatagcctgctgcacacccccctgatcatcaaagaactgtccaaggtgtacgagcagcgggtgccactgctggctgtggacagactgagtctggctgtgcagaaaggcgagtgcttcggactgctgggcttcaacggcgcaggcaagaccacaaccttcaagatgctgacaggcgaggaaagcctgacctccggcgacgcctttgtgggcggacacaggatctcttccgatgtgggcaaagtgcggcagcggatcggctactgccctcagttcgacgccctgctggatcacatgaccggcagggaaatgctcgtgatgtacgcccggctgaggggcatccccgagagacacattggcgcctgcgtggaaaacaccctgcggggcctgctgctggaaccccacgctaacaaactcgtgcggacctacagcggcggcaacaagagaaagctgtctaccggcattgcactgatcggcgagccagccgtgatctttctggatgagcccagcacaggcatggaccccgtggctcggagactgctgtgggatacagtggccagagccagagagtccggcaaggccatcattatcaccagccacagcatggaagagtgcgaggccctgtgtacaagactggcaattatggtgcagggacagttcaagtgtctgggcagccctcagcacctgaagtccaagttcggctccggctacagcctgcgggccaaggtgcagtctgaagggcagcaggaagccctggaagagttcaaagccttcgtggacctgaccttccccggctctgtgctggaagatgagcaccagggaatggtgcactaccatctgcctggcagggacctgtcctgggccaaagtgtttggcatcctggaaaaggccaaagagaagtacggcgtggacgattacagcgtgtcccagatcagcctggaacaggtgttcctgtcctttgcccatctgcagccccctaccgccgaagagggaagaacgcgtacgcggccgctcgagcagaaactcatctcagaagaggatctggcagcaaatgatatcctggattacaaggatgacgacgataaggtttaagaattctgcagAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGC
１８）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８
概要：転写ＴＴＸ−ＡＢＣＡ３−ＲＮＡ−０１９
黒−隣接配列
グレー−５’ＵＴＲヒトアルファグロビン 
イタリック体、下線−Ｋｏｚａｋ配列
青−コドン最適化ＡＢＣＡ３
赤−ｃ−ｍｙｃ−タグ
緑−ＦＬＡＧ−タグ
赤でハイライト−停止コドン
橙−ｐｏｌｙ（Ａ）テール
GGGAGACTCTTCTGGTCCCCACAGACTCAGAGAGAACGCCACCATGGCCGTGCTGAGACAGCTGGCTCTGCTGCTGTGGAAGAACTACACCCTGCAGAAACGGAAGGTGCTCGTGACCGTGCTGGAACTGTTCCTGCCCCTGCTGTTCAGCGGCATCCTGATCTGGCTGCGGCTGAAGATCCAGAGCGAGAACGTGCCCAACGCCACCATCTACCCCGGCCAGAGCATCCAGGAACTGCCCCTGTTCTTCACCTTCCCCCCACCCGGCGATACCTGGGAGCTGGCCTATATCCCTAGCCACAGCGACGCCGCCAAGACCGTGACAGAGACAGTGCGGAGAGCCCTCGTGATCAACATGAGAGTGCGGGGCTTCCCCAGCGAGAAGGACTTCGAGGACTACATCAGATACGACAACTGCAGCAGCAGCGTGCTGGCCGCCGTGGTGTTTGAGCACCCCTTCAACCACAGCAAAGAGCCCCTGCCTCTGGCCGTGAAGTACCACCTGAGATTCAGCTACACCCGGCGGAACTACATGTGGACCCAGACCGGCTCATTCTTCCTGAAAGAGACAGAGGGCTGGCACACCACCAGCCTGTTCCCTCTGTTCCCCAACCCTGGCCCCAGAGAGCCTACATCTCCTGACGGCGGCGAGCCCGGCTATATCAGAGAAGGATTCCTGGCCGTGCAGCACGCCGTGGACAGAGCCATCATGGAATACCACGCCGATGCCGCCACCCGGCAGCTGTTTCAGAGACTGACCGTGACCATCAAGCGGTTCCCTTACCCCCCCTTTATCGCCGACCCTTTCCTGGTGGCCATCCAGTACCAGCTGCCACTCCTCCTGCTGCTGAGCTTTACCTACACCGCCCTGACAATCGCCAGAGCCGTGGTGCAGGAAAAAGAGCGGCGGCTGAAAGAGTACATGCGGATGATGGGCCTGTCCAGCTGGCTGCATTGGAGCGCCTGGTTTCTGCTGTTCTTCCTGTTCCTGCTGATCGCCGCCAGCTTCATGACACTGCTGTTTTGCGTGAAAGTGAAGCCCAACGTGGCAGTGCTGAGCCGCAGCGATCCTAGCCTGGTGCTGGCCTTCCTGCTGTGCTTCGCCATCAGCACCATCAGCTTCAGCTTTATGGTGTCCACCTTCTTCAGCAAGGCCAACATGGCCGCTGCCTTCGGCGGCTTCCTGTACTTCTTTACCTATATTCCCTACTTCTTCGTGGCCCCTCGGTACAACTGGATGACCCTGAGCCAGAAGCTGTGCAGCTGCCTGCTGAGCAACGTGGCCATGGCTATGGGAGCCCAGCTGATCGGCAAGTTCGAGGCCAAGGGCATGGGCATCCAGTGGCGGGATCTGCTGAGCCCCGTGAACGTGGACGACGACTTCTGCTTCGGCCAGGTGCTGGGCATGCTGCTGCTGGACTCCGTGCTGTATGGCCTCGTGACCTGGTATATGGAAGCCGTGTTCCCTGGCCAGTTCGGCGTGCCCCAGCCCTGGTACTTCTTCATCATGCCTAGCTATTGGTGCGGCAAGCCCAGGGCCGTGGCCGGCAAAGAGGAAGAGGATAGCGACCCCGAGAAGGCCCTGCGGAACGAGTACTTTGAGGCCGAGCCCGAGGATCTGGTGGCCGGAATCAAGATCAAGCACCTGAGCAAGGTGTTCCGCGTGGGCAACAAGGATAGAGCCGCTGTGCGGGACCTGAACCTGAATCTGTACGAGGGCCAGATCACCGTGCTGCTGGGCCATAATGGCGCCGGAAAGACCACCACCCTGAGCATGCTGACCGGCCTGTTTCCCCCAACAAGCGGCAGGGCCTACATCAGCGGCTACGAGATCAGCCAGGACATGGTGCAGATCCGGAAGTCCCTGGGCCTGTGCCCCCAGCACGACATCCTGTTCGACAACCTGACCGTGGCCGAGCACCTGTACTTTTACGCTCAGCTGAAGGGCCTGAGCCGGCAGAAATGCCCCGAGGAAGTGAAGCAGATGCTGCACATCATCGGCCTGGAAGATAAGTGGAACAGCCGGTCCCGGTTCCTGTCCGGCGGAATGAGAAGAAAGCTGAGCATCGGAATCGCCCTGATTGCCGGCAGCAAGGTGCTGATCCTGGACGAGCCTACCAGCGGCATGGACGCCATCTCCAGAAGGGCCATCTGGGACCTGCTGCAGCGGCAGAAGTCCGACAGAACCATCGTGCTGACCACCCACTTCATGGACGAGGCCGACCTGCTGGGCGACCGGATCGCTATTATGGCCAAGGGGGAGCTGCAGTGCTGCGGCAGCAGCCTGTTTCTGAAGCAGAAATACGGCGCTGGCTACCACATGACCCTCGTGAAAGAGCCTCACTGCAACCCCGAGGACATCTCCCAGCTGGTGCACCACCACGTGCCAAATGCCACCCTGGAAAGCTCTGCCGGCGCTGAGCTGAGCTTCATCCTGCCCAGAGAGAGCACCCACAGATTCGAGGGCCTGTTCGCCAAGCTGGAAAAGAAACAGAAAGAGCTGGGCATTGCCAGCTTCGGCGCCAGCATCACAACAATGGAAGAGGTGTTCCTGAGAGTGGGCAAGCTGGTGGACAGCTCCATGGACATCCAGGCTATCCAGCTGCCCGCCCTGCAGTATCAGCACGAGAGAAGGGCTAGCGACTGGGCCGTGGACTCCAATCTGTGCGGCGCCATGGATCCCTCCGATGGAATCGGCGCCCTGATCGAAGAGGAACGGACCGCCGTGAAGCTGAACACAGGACTGGCCCTGCACTGCCAGCAGTTCTGGGCCATGTTCCTGAAGAAAGCCGCCTACAGCTGGCGCGAGTGGAAAATGGTGGCCGCACAGGTGCTGGTGCCCCTGACCTGTGTGACACTGGCACTGCTGGCCATCAACTACAGCAGCGAGCTGTTCGACGACCCCATGCTGAGACTGACACTGGGCGAGTACGGCAGGACCGTGGTGCCTTTTTCTGTGCCCGGCACCTCACAGCTGGGCCAGCAGCTGTCTGAACACCTGAAGGATGCCCTGCAGGCCGAAGGCCAGGAACCCAGAGAAGTGCTGGGCGATCTGGAAGAGTTCCTGATCTTCCGGGCCAGCGTGGAAGGCGGCGGATTCAACGAGAGATGCCTGGTGGCTGCCTCCTTCCGGGATGTGGGCGAGAGAACAGTCGTGAACGCCCTGTTCAACAATCAGGCCTACCACAGCCCCGCCACCGCTCTGGCTGTGGTGGACAACCTGCTGTTTAAGCTGCTGTGTGGCCCCCACGCCTCCATCGTGGTGTCCAATTTCCCCCAGCCCAGAAGCGCTCTGCAGGCTGCCAAGGACCAGTTCAACGAGGGCCGGAAGGGCTTCGACATTGCTCTGAATCTGCTGTTTGCCATGGCCTTTCTGGCCTCCACCTTCAGCATCCTGGCTGTGTCCGAGAGAGCCGTGCAGGCCAAGCACGTGCAGTTTGTGTCTGGCGTGCACGTGGCCAGCTTTTGGCTGTCTGCCCTGCTGTGGGACCTGATCAGCTTCCTGATCCCCAGCCTCCTGCTGCTGGTGGTGTTCAAGGCCTTCGACGTGCGGGCCTTCACCAGGGATGGACACATGGCCGACACCTTGTTGTTGCTGCTGCTGTACGGCTGGGCCATCATCCCCCTGATGTACCTGATGAACTTCTTCTTCCTGGGCGCTGCCACCGCCTACACCAGACTGACCATCTTCAACATCCTGAGCGGGATCGCCACCTTCCTGATGGTCACAATCATGCGGATCCCTGCCGTGAAACTGGAAGAACTGAGCAAGACCCTGGACCATGTGTTTCTGGTGCTGCCCAACCACTGCCTGGGCATGGCCGTGTCTAGCTTCTACGAGAACTACGAGACACGGCGGTACTGCACCTCCAGCGAAGTGGCCGCCCACTACTGCAAGAAGTATAACATCCAGTATCAGGAAAACTTCTACGCTTGGAGCGCACCCGGCGTGGGCAGATTTGTGGCCTCTATGGCCGCCAGCGGCTGCGCCTATCTGATCCTGCTGTTCCTGATCGAGACTAACCTGCTGCAGAGACTGAGAGGCATCCTGTGCGCCCTGCGGCGGAGAAGAACACTGACCGAGCTGTACACCCGGATGCCCGTGCTGCCTGAGGACCAGGATGTGGCCGACGAGCGGACAAGAATCCTGGCCCCTAGCCCCGATAGCCTGCTGCACACCCCCCTGATCATCAAAGAACTGTCCAAGGTGTACGAGCAGCGGGTGCCACTGCTGGCTGTGGACAGACTGAGTCTGGCTGTGCAGAAAGGCGAGTGCTTCGGACTGCTGGGCTTCAACGGCGCAGGCAAGACCACAACCTTCAAGATGCTGACAGGCGAGGAAAGCCTGACCTCCGGCGACGCCTTTGTGGGCGGACACAGGATCTCTTCCGATGTGGGCAAAGTGCGGCAGCGGATCGGCTACTGCCCTCAGTTCGACGCCCTGCTGGATCACATGACCGGCAGGGAAATGCTCGTGATGTACGCCCGGCTGAGGGGCATCCCCGAGAGACACATTGGCGCCTGCGTGGAAAACACCCTGCGGGGCCTGCTGCTGGAACCCCACGCTAACAAACTCGTGCGGACCTACAGCGGCGGCAACAAGAGAAAGCTGTCTACCGGCATTGCACTGATCGGCGAGCCAGCCGTGATCTTTCTGGATGAGCCCAGCACAGGCATGGACCCCGTGGCTCGGAGACTGCTGTGGGATACAGTGGCCAGAGCCAGAGAGTCCGGCAAGGCCATCATTATCACCAGCCACAGCATGGAAGAGTGCGAGGCCCTGTGTACAAGACTGGCAATTATGGTGCAGGGACAGTTCAAGTGTCTGGGCAGCCCTCAGCACCTGAAGTCCAAGTTCGGCTCCGGCTACAGCCTGCGGGCCAAGGTGCAGTCTGAAGGGCAGCAGGAAGCCCTGGAAGAATTCAAAGCCTTCGTGGACCTGACCTTCCCCGGCTCTGTGCTGGAAGATGAGCACCAGGGAATGGTGCACTACCATCTGCCTGGCAGGGACCTGTCCTGGGCCAAAGTGTTTGGCATCCTGGAAAAGGCCAAAGAGAAGTACGGCGTGGACGATTACAGCGTGTCCCAGATCAGCCTGGAACAGGTGTTCCTGTCCTTTGCCCATCTGCAGCCCCCTACCGCCGAAGAGGGAAGAacgcgtacgcggccgctcgagcagaaactcatctcagaagaggatctggcagcaaatgatatcctggattacaaggatgacgacgataaggtttaagaattctgcagAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGC
１９）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９
概要：何れのタグ（−ＦＬＡＧタグおよびＭｙｃタグ）もないコドン最適化ＡＢＣＡ３配列
gggagacccaagctggctagcgtttaaacttaagcttggcaatccggtactgttggtaaagccaccatggccgtgctgagacagctggctctgctgctgtggaagaactacaccctgcagaaacggaaggtgctcgtgaccgtgctggaactgttcctgcccctgctgttcagcggcatcctgatctggctgcggctgaagatccagagcgagaacgtgcccaacgccaccatctaccccggccagagcatccaggaactgcccctgttcttcaccttccccccacccggcgatacctgggagctggcctatatccctagccacagcgacgccgccaagaccgtgacagagacagtgcggagagccctcgtgatcaacatgagagtgcggggcttccccagcgagaaggacttcgaggactacatcagatacgacaactgcagcagcagcgtgctggccgccgtggtgtttgagcaccccttcaaccacagcaaagagcccctgcctctggccgtgaagtaccacctgagattcagctacacccggcggaactacatgtggacccagaccggctcattcttcctgaaagagacagagggctggcacaccaccagcctgttccctctgttccccaaccctggccccagagagcctacatctcctgacggcggcgagcccggctatatcagagaaggattcctggccgtgcagcacgccgtggacagagccatcatggaataccacgccgatgccgccacccggcagctgtttcagagactgaccgtgaccatcaagcggttcccttaccccccctttatcgccgaccctttcctggtggccatccagtaccagctgccactcctcctgctgctgagctttacctacaccgccctgacaatcgccagagccgtggtgcaggaaaaagagcggcggctgaaagagtacatgcggatgatgggcctgtccagctggctgcattggagcgcctggtttctgctgttcttcctgttcctgctgatcgccgccagcttcatgacactgctgttttgcgtgaaagtgaagcccaacgtggcagtgctgagccgcagcgatcctagcctggtgctggccttcctgctgtgcttcgccatcagcaccatcagcttcagctttatggtgtccaccttcttcagcaaggccaacatggccgctgccttcggcggcttcctgtacttctttacctatattccctacttcttcgtggcccctcggtacaactggatgaccctgagccagaagctgtgcagctgcctgctgagcaacgtggccatggctatgggagcccagctgatcggcaagttcgaggccaagggcatgggcatccagtggcgggatctgctgagccccgtgaacgtggacgacgacttctgcttcggccaggtgctgggcatgctgctgctggactccgtgctgtatggcctcgtgacctggtatatggaagccgtgttccctggccagttcggcgtgccccagccctggtacttcttcatcatgcctagctattggtgcggcaagcccagggccgtggccggcaaagaggaagaggatagcgaccccgagaaggccctgcggaacgagtactttgaggccgagcccgaggatctggtggccggaatcaagatcaagcacctgagcaaggtgttccgcgtgggcaacaaggatagagccgctgtgcgggacctgaacctgaatctgtacgagggccagatcaccgtgctgctgggccataatggcgccggaaagaccaccaccctgagcatgctgaccggcctgtttcccccaacaagcggcagggcctacatcagcggctacgagatcagccaggacatggtgcagatccggaagtccctgggcctgtgcccccagcacgacatcctgttcgacaacctgaccgtggccgagcacctgtacttttacgctcagctgaagggcctgagccggcagaaatgccccgaggaagtgaagcagatgctgcacatcatcggcctggaagataagtggaacagccggtcccggttcctgtccggcggaatgagaagaaagctgagcatcggaatcgccctgattgccggcagcaaggtgctgatcctggacgagcctaccagcggcatggacgccatctccagaagggccatctgggacctgctgcagcggcagaagtccgacagaaccatcgtgctgaccacccacttcatggacgaggccgacctgctgggcgaccggatcgctattatggccaagggggagctgcagtgctgcggcagcagcctgtttctgaagcagaaatacggcgctggctaccacatgaccctcgtgaaagagcctcactgcaaccccgaggacatctcccagctggtgcaccaccacgtgccaaatgccaccctggaaagctctgccggcgctgagctgagcttcatcctgcccagagagagcacccacagattcgagggcctgttcgccaagctggaaaagaaacagaaagagctgggcattgccagcttcggcgccagcatcacaacaatggaagaggtgttcctgagagtgggcaagctggtggacagctccatggacatccaggctatccagctgcccgccctgcagtatcagcacgagagaagggctagcgactgggccgtggactccaatctgtgcggcgccatggatccctccgatggaatcggcgccctgatcgaagaggaacggaccgccgtgaagctgaacacaggactggccctgcactgccagcagttctgggccatgttcctgaagaaagccgcctacagctggcgcgagtggaaaatggtggccgcacaggtgctggtgcccctgacctgtgtgacactggcactgctggccatcaactacagcagcgagctgttcgacgaccccatgctgagactgacactgggcgagtacggcaggaccgtggtgcctttttctgtgcccggcacctcacagctgggccagcagctgtctgaacacctgaaggatgccctgcaggccgaaggccaggaacccagagaagtgctgggcgatctggaagagttcctgatcttccgggccagcgtggaaggcggcggattcaacgagagatgcctggtggctgcctccttccgggatgtgggcgagagaacagtcgtgaacgccctgttcaacaatcaggcctaccacagccccgccaccgctctggctgtggtggacaacctgctgtttaagctgctgtgtggcccccacgcctccatcgtggtgtccaatttcccccagcccagaagcgctctgcaggctgccaaggaccagttcaacgagggccggaagggcttcgacattgctctgaatctgctgtttgccatggcctttctggcctccaccttcagcatcctggctgtgtccgagagagccgtgcaggccaagcacgtgcagtttgtgtctggcgtgcacgtggccagcttttggctgtctgccctgctgtgggacctgatcagcttcctgatccccagcctcctgctgctggtggtgttcaaggccttcgacgtgcgggccttcaccagggatggacacatggccgacaccttgttgttgctgctgctgtacggctgggccatcatccccctgatgtacctgatgaacttcttcttcctgggcgctgccaccgcctacaccagactgaccatcttcaacatcctgagcgggatcgccaccttcctgatggtcacaatcatgcggatccctgccgtgaaactggaagaactgagcaagaccctggaccatgtgtttctggtgctgcccaaccactgcctgggcatggccgtgtctagcttctacgagaactacgagacacggcggtactgcacctccagcgaagtggccgcccactactgcaagaagtataacatccagtatcaggaaaacttctacgcttggagcgcacccggcgtgggcagatttgtggcctctatggccgccagcggctgcgcctatctgatcctgctgttcctgatcgagactaacctgctgcagagactgagaggcatcctgtgcgccctgcggcggagaagaacactgaccgagctgtacacccggatgcccgtgctgcctgaggaccaggatgtggccgacgagcggacaagaatcctggcccctagccccgatagcctgctgcacacccccctgatcatcaaagaactgtccaaggtgtacgagcagcgggtgccactgctggctgtggacagactgagtctggctgtgcagaaaggcgagtgcttcggactgctgggcttcaacggcgcaggcaagaccacaaccttcaagatgctgacaggcgaggaaagcctgacctccggcgacgcctttgtgggcggacacaggatctcttccgatgtgggcaaagtgcggcagcggatcggctactgccctcagttcgacgccctgctggatcacatgaccggcagggaaatgctcgtgatgtacgcccggctgaggggcatccccgagagacacattggcgcctgcgtggaaaacaccctgcggggcctgctgctggaaccccacgctaacaaactcgtgcggacctacagcggcggcaacaagagaaagctgtctaccggcattgcactgatcggcgagccagccgtgatctttctggatgagcccagcacaggcatggaccccgtggctcggagactgctgtgggatacagtggccagagccagagagtccggcaaggccatcattatcaccagccacagcatggaagagtgcgaggccctgtgtacaagactggcaattatggtgcagggacagttcaagtgtctgggcagccctcagcacctgaagtccaagttcggctccggctacagcctgcgggccaaggtgcagtctgaagggcagcaggaagccctggaagagttcaaagccttcgtggacctgaccttccccggctctgtgctggaagatgagcacca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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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