(57)【要約】  クルクミンとレスベラトロールとの組み合わせは、ミクログリアが脳の炎症経路に関与することを防ぎ得る。したがって、この組み合わせは、肥満、糖尿病、損傷および感染症などの状態に続発する脳における炎症を低減／予防することができる。この組み合わせは、さらに、慢性疼痛も低減することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖尿病に続発する炎症、
肥満に続発する炎症、
軽度の脳外傷の結果としての炎症、
軽度の発熱または感染症の結果としての炎症、
高血圧に続発する炎症、および
慢性疼痛
からなる群から選択される状態に起因する脳または神経組織における炎症を経験しているかまたは経験するリスクがある人に、相乗的に有効な量のレスベラトロールとクルクミンとの組み合わせを投与すること
を含み、ただし、前記人は、以下の疾患：癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）または鬱病のいずれも有さないこととする、脳炎症を低減する方法。
【請求項２】
前記レスベラトロールおよびクルクミンは、１日当たり１〜１０００ｍｇの用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
以下の状態：糖尿病に続発する炎症、
肥満に続発する炎症、
軽度の脳外傷の結果としての炎症、
軽度の発熱または感染症の結果としての炎症、
高血圧に続発する炎症、および
慢性疼痛
のいずれかを経験しているかまたはそのリスクがある人の脳および神経系における炎症を低減または予防するための、組み合わせたレスベラトロールとクルクミンとの組み合わせの使用。
【請求項４】
１日当たり１〜１０００ｍｇ、好ましくは約２５〜５００ｍｇ／日、より好ましくは１００〜２００ｍｇ／日である、請求項３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の簡単な説明］
本発明は、特に、炎症が主にミクログリア細胞によって仲介される脳における慢性炎症を減少させ、かつ脳および脊髄が知覚する慢性疼痛も低減させるクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用に関する。この組み合わせは、ミクログリアに対するその作用が相乗的であり、したがって糖尿病、軽度の発熱、肥満、高血圧、運動労作および慢性ニューロパチーと関連するものなどの慢性炎症を制御、軽減および予防するのに有用であり得ることが明らかになっている。
【０００２】
［発明の背景］
クルクミンとレスベラトロールとの組み合わせは、肺癌などの特定の癌の処置にある程度の相乗作用を有することが知られている。たとえば、この組み合わせがｐ５３のｓｅｒ  １５におけるリン酸化を調節し、したがって癌性細胞の成長を低減させるアポトーシスを増強することが見出されたＭａｌｈｏｔｒａ  ｅｔ  ａｌ  ２０１４  ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ９（４）ｅ９３８２０を参照されたい。
【０００３】
クルクミンおよびレスベラトロールの両方は、組み合わせでなく単独で使用されると、Ｄｅｒｏｃｈｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｃｈｅｍｉｃｏ−Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ２０６：１８６−１９３で考察されているように抗酸化作用を有することが知られている。ここで、クルクミンは、酸素ラジカル消去剤としても作用するため、レスベラトロールより良好にＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性を調節することが分かった。レスベラトロールは、酸素ラジカル消去活性のみを有することが分かったが、クルクミンほど容易に細胞に進入できない。同様に、Ｃｏｒｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ  ２０１４  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ８８：１７８−１８５には、両方の作用物質を共内包させて、抗癌治療薬として使用すると、それらの抗酸化活性が向上することが示される。
【０００４】
クルクミンおよびレスベラトロールの両方は、アルツハイマー病の処置の単一活性成分として提案されてきた。Ｖｉｌｌａｆｌｏｒｅｓ  ｅｔ  ａｌ  ２０１２  Ｔａｉｗａｎｅｓｅ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  ５１：５１５−５２５を参照されたい。加えて、その抗酸化活性により、クルクミンは、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（クロイツフェルト・ヤコブ病、別名Ｃ−Ｊ病）、神経因性疼痛および鬱病を含む様々な他の神経疾患に対して活性を示すと開示されてきた。レスベラトロールは、ＳＩＲＴ−１経路を介して神経保護薬として作用することもある。
【０００５】
ミクログリアは、脳および脊髄における細胞の一種である。ミクログリアは、中枢神経系において、末梢免疫系におけるマクロファージとほぼ類似した機能を有する。たとえば、Ｌｏａｎｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０  Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ７（４）：３６６−３７７を参照されたい。ミクログリアは、食作用により細胞残屑および／または有毒物質を除去し、したがってＣＮＳの微小環境を維持することができる。それらの細胞表面は、様々な成長因子、サイトカインおよび損傷細胞が放出する他の因子に対する一連の受容体を有する。この刺激に反応して、ミクログリアは、神経細胞死を引き起し得るケモカインを含むプロ炎症性分子を放出することができる。ミクログリアの短期の活性化は、ＣＮＳの健全性に有益と考えられる。しかしながら、長期の活性化は有害である可能性がある。
【０００６】
慢性炎症（通常肥満または糖尿病を含む別の状態に続発する）が神経組織に好ましくない影響を及ぼし得る多くの状況がある。これらの状況において、その他の点では健康なＣＮＳを有する（すなわちアルツハイマー病、認知症、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症または海綿状脳症などのニューロンの状態を有さない）が、脳組織において慢性炎症を経験しているかまたは経験するリスクがある人は、特に血液脳関門の透過性が高くなっている状況では、それらの組織の保護を望んでいると考えられる。
【０００７】
ミクログリアは、慢性疼痛の発生とも関連している。たとえば、Ｇｉｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ  ２０１５  Ｐａｉｎ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  Ｎｕｒｓｉｎｇ（Ａｒｔｉｃｌｅ  ｉｎ  ｐｒｅｓｓ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｏｎ  ｌｉｎｅ  Ｍａｙ  ８，２０１５）１−１３を参照されたい。活性化されたミクログリアは、様々な炎症性分子を放出し得る。疼痛状態は、疼痛反応を惹起する損傷が治癒した後も長期間続くことがある。現在、慢性疼痛のみに重点を置き、かつ副作用および／または依存症のリスクを有さない好適な処置剤は存在しないため、そうした処置薬があることが望ましいと考えられる。
【０００８】
［発明の詳細な説明］
本発明によれば、クルクミンとレスベラトロールとの組み合わせは、抗炎症薬としてミクログリア細胞に対して相乗的に作用し得ることが見出された。したがって、本発明の一態様は、脳組織、特にミクログリア細胞を活性化から保護し、したがって慢性炎症を軽減または予防するためのクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。本発明の好ましい態様では、経験される慢性炎症は、下記カテゴリー：
ａ）慢性炎症が糖尿病または肥満に続発すること、
ｂ）慢性炎症がコンタクトスポーツ、転倒または他の軽い頭部損傷などにより経験する軽度の脳外傷の結果であること、または
ｃ）慢性炎症が軽度の発熱またはインフルエンザ、副鼻腔炎もしくは髄膜炎などの感染症の結果であること、
ｄ）慢性炎症が血液脳関門漏出と共に起こり高血圧関連炎症を伴うこと
の１つによる。
【０００９】
重要な点として、特に本発明の一部でないものは、以下：癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）、神経因性疼痛および鬱病のいずれかの症状の予防、治癒および／または軽減におけるクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。さらに、前述の疾患のいずれかを有する人における、糖尿病、肥満、軽度の脳外傷、軽度の発熱または高血圧の結果としての慢性炎症を処置するための本組み合わせの使用も明示的に除外される。
【００１０】
本発明のもう１つの態様は、慢性疼痛の感覚を予防、処置または軽減するためのクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。オピオド鎮痛薬は、徐々にその有効性を失うことがあるが知られている。したがって、本発明のもう１つの態様は、オポイドの有効性を維持しやすくするための、および／または慢性疼痛の感覚を予防、処置もしくは軽減するためのクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの併用投与であり、ただし、それを必要とする人は、やはり癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）または鬱病を有さないものとする。
【００１１】
本発明のもう１つの態様は、正常な血液脳関門（ＢＢＢ）機能を維持しやすくするためのクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。この組み合わせは、ＢＢＢの完全性の維持を促進するミクログリア細胞に対して相乗的な抗炎症作用を有するためである。
【００１２】
これは、高血圧治療の補助剤として特に重要である。したがって、本発明のもう１つの態様は、高血圧の人の炎症を制御するためのクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】クルクミンＣ３抽出物（０〜３０ｎＭ）が、ＬＰＳ刺激した初代ミクログリアによる炎症性サイトカインの放出を阻害した。クルクミンの濃度は、製造者の記録したＣ３抽出物中の本化合物のパーセンテージに基づき計算した。図１Ａは、＞１０ｎＭ（１８μｇ／ｍＬ）のクルクミンＣ３処理がＰＧＥ２放出およびＩＬ−１β放出（図１Ｂ）を有意に阻害したことを示す。図１Ｃは、ＩＬ−６放出を有意に阻害するのに、少なくとも２０ｎＭ（５０μｇ／ｍＬ）のクルクミンＣ３濃度を必要としたことを示す。図１Ｄは、＞５ｎＭ（１２．５μｇ／ｍＬ）のクルクミンＣ３濃度がＴＮＦ−α放出を有意に阻害したことを示す。処理間の有意差（ｐ＜０．０５）は、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙの事後検定により判定した。ＡＮＯＶＡパラメータは、各グラフ内に挿入されている。エラーバーはＳＥＭを表す。
【図２】レスベラトロール（０〜２５０μΜ）は、ＬＰＳ刺激した初代ミクログリアによるＰＧＥ２の発現のみを阻害した。図２Ａは、レスベラトロールが７５μΜおよび２５０μΜでＰＧＥ２放出を有意に阻害したが、ＴＮＦ−α（図２Ｂ）およびＩＬ−１β（図２Ｃ）放出に対して有意な作用が検出されなかったことを示す。処理間の有意差（ｐ＜０．０５）は、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙの事後検定により判定した。ＡＮＯＶＡパラメータは、各グラフ内に挿入されている。エラーバーはＳＥＭを表す。
【図３】レスベラトロールとクルクミンＣ３抽出物との組み合わせは、そのそれぞれのＩＣ５０値で初代ミクログリアからのＰＧＥ２放出を有望な相乗効果で阻害した。レスベラトロール（２．２５μΜ）、クルクミンＣ３（７ｎＭ；１４．４μｇ／ｍＬ）およびレスベラトロール（２．２５μΜ）＋クルクミンＣ３（７ｎＭ）の組み合わせは、ＰＧＥ２放出を阻害し、この組み合わせは、化合物単独より有意に強い作用を有した。処理間の有意差（ｐ＜０．０５）は、一元配置ＡＮＯＶＡ、続いてＴｕｋｅｙの事後検定により判定した。異なる英文字を付したバー間には有意差がある。個々の化合物の反応をこの組み合わせと比較して強調するため、５０％阻害の点線を示す。ＡＮＯＶＡパラメータは、各グラフ内に挿入されている。エラーバーはＳＥＭを表す。
【図４】レスベラトロール（２．２５μΜ）＋クルクミンＣ３（７ｎＭ）組み合わせの相乗作用解析から十分な相乗作用が検出された。作用分画（ａｆｆｅｃｔｅｄ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）（Ｆａ、すなわち９０％阻害＝０．９）を、計算したコンビネーションインデックス値に対してプロットしてある。すべての計算値が＜０．１であることから、２つの化合物の非常に強い相乗効果が示唆され、平均濃度指標値は０．０４であった。レスベラトロールおよびクルクミンＣ３の減量計数（ＤＲＩ）値は、それぞれ４２．７６および２１．８６と判定された。したがって、組み合わせた場合、レスベラトロール濃度が４３％減少し（すなわち１．３μΜ）、クルクミンＣ３濃度が２２％減少しても（すなわち６．５ｎＭ）、なお相乗効果を有すると考えられる。
【００１４】
本明細書および特許請求の範囲を通じて以下の定義を適用する。
【００１５】
「慢性疼痛」は、１２週間を超えて持続する疼痛である。
【００１６】
「急性炎症」は、通常、細菌性病原体または損傷組織により引き起こされる。急性炎症は、一般に、持続するのが数日間であるが、慢性炎症に至ることもある。
【００１７】
「慢性炎症」は、主にその持続性および明らかな改善が見られないことを特徴とする。慢性炎症は、非分解性病原体、ウイルス感染症、滞留異物または自己免疫応答により引き起こされ得る。慢性炎症は、組織が損傷物質の作用を克服できないと起こる。
【００１８】
「健常人」は、特に本出願で使用される場合、以下の疾患／状態：癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）および鬱病のいずれも有さない人を指す。
【００１９】
「その他の点では健常人」は、その人が、本発明の組み合わせの投与により処置または改善できる疾患／状態を有するが、同時に以下の疾患／状態：癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）および鬱病のいずれも有さないことを意味する。
【００２０】
［投与量］
成人のククルミンとレスベラトロールとの組み合わせの用量範囲は、１日当たり１ｍｇ〜１０００ｍｇである。好ましくは、本組み合わせの範囲は、２５〜５００ｍｇ／日、より好ましくは、範囲は１００〜２００ｍｇ／日である。本発明のいくつかの態様では、この組み合わせは１５０ｍｇ／日で投与される。
【００２１】
クルクミン：レスベラトロールの比率は、相乗効果を有する比率であるべきである。これは、かなり幅の広い定量であり、１：１３８という低比率でも、１：６２５０という高比率でもよい。製造の都合上、範囲は、１：１００〜１００：１、好ましくは５０：１〜１：５０、より好ましくは−１：１０〜１０：１であるべきである。比率１：１も想定することができる（各々１５０〜５００ｍｇなど）。
【００２２】
この用量は、好ましくは１日当たり１回投与されるが、必要に応じて投与量を都合のよい、２または３のより低い用量に分割して１日を通して投与してもよい。
【００２３】
最良の結果を得るために、クルクルミンとレスベラトロールとの組み合わせは、少なくとも１週間、好ましくは少なくとも４週間持続的に摂取すべきであり、より長い期間摂取してもよい。
【００２４】
［形態］
本発明による栄養補助食品組成物、飲食用組成物および／または医薬組成物は、人体に投与するのに好適などのようなガレヌス形態、特に経口投与にとって通常のどのような形態、たとえば固体形態、たとえば食品もしくは飼料（用添加剤／サプリメント）、食品もしくは飼料プレミックス、栄養強化食品もしくは飼料、錠剤、丸剤、顆粒剤、糖衣錠、カプセル剤ならびに散剤および錠剤などの発泡性製剤、または液体形態、たとえば飲料、ペースト剤および油性懸濁剤としての溶液剤、乳剤もしくは懸濁剤であってもよい。ペースト剤は、硬または軟カプセルに封入してもよく、カプセルは、たとえば（魚、ブタ、家禽、雌ウシ）ゼラチン、植物タンパク質またはリグニンスルホネートのマトリックスを特徴とする。他の適用形態の例として、経皮投与、非経口投与または注射投与用の形態がある。飲食用組成物および医薬組成物は、制御（遅延）放出製剤の形態であってもよい。本発明による飲食用組成物は、保護親水コロイド（ガム、タンパク質、加工デンプン）、バインダー、被膜剤、被包剤／材料、壁／シェル材料、マトリックス化合物、コーティング剤、乳化剤、表面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、ワックス、レシチン等）、吸着剤、キャリア、充填剤、共化合物、分散剤、湿潤剤、加工助剤（溶媒）、流動化剤、矯味剤、比重調整剤、ゼリー化剤、ゲル形成剤、酸化防止剤および抗菌物質などをさらに含んでもよい。
【００２５】
レスベラトロールとクルクミンとの組み合わせを含有させるのに好適な食品の例として、シリアルバー、ヨーグルトなどの乳製品、ならびにケーキおよびクッキーなどのベーカリー製品がある。栄養強化食品の例として、シリアルバー、ならびにパン、ロールパン、ベーグル、ケーキおよびクッキーなどのベーカリー製品がある。ダイエタリーサプリメントの例として、錠剤、丸剤、顆粒剤、糖衣錠、カプセル剤および発泡性製剤、ソフトドリンク、果汁、レモネード、ニアウオーター飲料、茶および乳飲料などの非アルコール飲料の形態、スープおよび乳製品（ミューズリー飲料）などの流動食の形態がある。飲料も適している。飲料は、非アルコールおよびアルコール飲料、ならびに飲料水および流動食に加えられる液体調製物を包含する。非アルコール飲料として、たとえばソフトドリンク、スポーツドリンク、果汁、野菜ジュース（たとえばトマトジュース）、レモネード、茶および乳飲料がある。流動食として、たとえばスープおよび乳製品（たとえばミューズリー飲料）がある。
【００２６】
レスベラトロールとクルクミンとの組み合わせに加えて、本発明による医薬組成物は、従来の医薬品添加剤および補助剤、賦形剤または希釈剤、以下に限定されるものではないが、水、任意の起源のゼラチン、植物ガム、リグニンスルホネート、タルク、糖、デンプン、アラビアゴム、植物油、ポリアルキレングリコール、着香剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、緩衝液、滑沢剤、着色剤、湿潤剤、充填剤および同種のものをさらに含んでもよい。キャリア材料は、経口／非経口／注射投与に好適な不活性な有機または無機キャリア材料であってもよい。
【００２７】
［糖尿病関連炎症］
糖尿病（または高血糖症などの前糖尿病状態）の見過ごされることが多い側面の１つは、脳にも存在し得る慢性炎症である。ククルミンとレスベラトロールとの組み合わせを用いることにより、脳における炎症の量を低減および／または消失させることができる。したがって、本発明の一態様は、脳および／または他の神経組織において糖尿病に続発する炎症の量を低減させるためのレスベラトロールとクルクミンとの組み合わせの使用である。もう１つの態様は、脳および／または他の神経組織の糖尿病に続発する急性または慢性炎症の症状を制御、低減または改善させる方法であって、レスベラトロールとクルクミンとの組み合わせを、糖尿病を有する人に投与することを含む方法であり、ただし、その人は、その他の点では健常者である。
【００２８】
本発明のもう１つの態様は、糖尿病を発症するリスクがある健常者にレスベラトロールとクルクミンとの組み合わせを投与することにより、脳および／または他の神経組織において続発する炎症を予防し、最小限に抑え、炎症の発現を遅延させ、かつ／または炎症の量を改善させるためのその組み合わせの使用である。
【００２９】
［肥満と関連する炎症］
肥満の人は、同時に糖尿病を有するか有さないかに関係なく、脳および神経組織における炎症を含む慢性炎症を経験することがある。したがって、本発明のもう１つの態様は、脳および／または神経組織において肥満、または糖尿病と同時に起こる肥満に続発する炎症を予防または軽減または消失させるためのクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。本発明のもう１つの態様は、肥満に続発する脳または神経組織における炎症を低減させる方法であって、レスベラトロールとクルクミンとの組み合わせを肥満の人に投与することを含む方法であり、ただし、その人は、その他の点では健常者である。
【００３０】
脳および神経組織の炎症を発症するリスクがあるが、そうした炎症を依然として有していない人、特に太りすぎの人にとって、本発明のもう１つの態様は、肥満に続発する脳および神経組織の炎症を発症するリスクを低減する方法であって、その他の点では健常者にクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせを投与することを含む方法である。
【００３１】
［軽度脳外傷に続発する炎症］
脳震盪または意識消失を起こすほどでない１つまたは複数の軽度頭部損傷、すなわち１つまたは複数の軽度の頭部の傷害を負った人も、損傷の明らかな徴候はないこともあるものの、脳および神経組織の炎症を経験する可能性がある。炎症は、保護ヘルメットを着用していても起こる可能性がある。これらのタイプの損傷のリスクがある人の例として、
・運動選手、特に身体的接触があるかまたは転倒もしくは頭部を打つリスクがあるスポーツに関係する運動選手。こうしたスポーツの例として、ボクシング、レスリング、フットボール、ラグビー、武道、スケート、スキー、サイクリング、体操、乗馬および同種のものが挙げられる。
・建設業界の人、スタントパフォーマー、軍人、救助者、消防士、警察官および同種のもの人など、軽度頭部損傷を受ける可能性がある仕事を有する人、または
・虚弱高齢者または癲癇を有する人を含め、別の医学的状態によりバランスが障害され、転倒のリスクがある人
が挙げられる。
【００３２】
したがって、本発明のもう１つの態様は、軽度頭部損傷を来すリスクがある人の軽度頭部外傷に続発する脳および他の神経組織の炎症のリスクを予防、改善または軽減するためのレスベラトロールとクルクミンとの組み合わせの使用である。本発明のもう１つの態様は、軽度頭部損傷に続発する脳および他の神経組織の炎症のリスクを低減させる方法であって、前記損傷を負うリスクがある、その他の点では健常者にクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせを投与することを含む方法である。
【００３３】
［発熱に続発する炎症］
軽度の発熱を来している人は、多くの場合、脳において炎症を経験する。この種の短期疾病は特に重篤でないことがある一方、遷延性軽度発熱は慢性炎症を引き起こす可能性がある。たとえば、遷延性の副鼻腔炎または他のアレルギー反応を来している人は、脳または他の神経組織において炎症を経験することがある。やはり脳に影響を与え得る他の疾患／状態として、髄膜炎などの脳および神経組織自体を直接冒すものがある。髄膜炎を来している人への投与は、関連した炎症を低減させることができる。
【００３４】
したがって、本発明のもう１つの態様は、軽度の発熱または髄膜炎に続発する脳における炎症を低減させる方法であって、それを必要とする人にクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせ投与することを含む方法であり、ただし、その人は、同時に癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）および／または鬱病を来していないものとする。本発明のさらにもう１つの態様は、軽度の発熱または髄膜炎に続発する脳における炎症を低減させるためのクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。
【００３５】
［慢性疼痛を経験している人］
慢性疼痛は、それ自体厳密には疾患ではないが、身体を衰弱させることがある。さらに、オポイドは、多くの場合、徐々にそれらの有効性を喪失することがある。本発明のもう１つの態様は、それを必要とし、かつ癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）および／または鬱病を来していない人の慢性疼痛を改善または緩和するためのレスベラトロールとクルクミンとの組み合わせの使用である。したがって、本発明は、慢性疼痛を低減させる方法であって、それを必要とする人にレスベラトロールとクルクミンとの組み合わせを投与することを含む方法も包含し、ただし、その人は、同時に癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）および／または鬱病を有していないものとする。
【００３６】
［高血圧に続発する炎症］
高血圧は、ＢＢＢの完全性に干渉し、したがって炎症経路に関与し得る。したがって、本発明のもう１つの態様は、高血圧だが、その他の点では健常である人におけるクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。さらに、本発明の一部として、高血圧の人の脳および神経組織における炎症を低減させる方法であって、レスベラトロールとクルクミンとの組み合わせを投与することを含む方法があり、ただし、その人は、同時に癌、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、癲癇、脳損傷、加齢性神経変性、統合失調症、海綿状脳症（Ｃ−Ｊ病）および／または鬱病を有していないものとする。
【００３７】
［血液脳関門の保護］
本発明のさらなる態様は、糖尿病、肥満、脳への軽度の外傷、軽度の発熱または血液脳関門漏出と共に起こる高血圧に関連する炎症を来しているまたはそれらを来すリスクがある人などＢＢＢ漏出リスクがある人のＢＢＢを保護するためのクルクミンとレスベラトロールとの組み合わせの使用である。したがって、本発明のもう１つの態様は、ＢＢＢを漏出から保護する方法であって、ＢＢＢ漏出を経験しているかまたは経験するリスクがある人に、クルクミンとレスベラトロールとの組み合わせを投与することを含む方法であり、ただし、その人は、その他の点では健常であるものとする。
【００３８】
本発明を説明しやすくするため、以下の非限定的な例を提示する。
【００３９】
［実施例］
［実施例１］
［材料および方法］
ミクログリアの回収および培養。動物に関係する実験は、すべてＢｏｌｄｅｒ  Ｂｉｏｐａｔｈ，Ｉｎｃ．（ボルダー（Ｂｏｕｌｄｅｒ）、コロラド州）で設立された動物実験委員会（Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。初代ミクログリア培養物は、時限妊娠（ｔｉｍｅｄ−ｐｒｅｇｎａｎｔ）親動物（チャールス・リバー（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ））から帝王切開により採取したＥ２２  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ仔ラットの新皮質組織に由来した。簡単に説明すると、仔の脳皮質をＨｉｂｅｒｎａｔｅ  ＥＢ（Ｂｒａｉｎ  Ｂｉｔｓ；スプリングフィールド（Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ）、イリノイ州）で単離した。次いで、サンプルをＨｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ（Ｃａを含まない；Ｂｒａｉｎ  Ｂｉｔｓ；スプリングフィールド、イリノイ州）に移し、新鮮なＨｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ（−Ｃａ）で２回洗浄した。次に、この組織を、０．５％トリプシン（シグマ（Ｓｉｇｍａ））を含むＨｉｂｅｒｎａｔｅ  Ｅ（−Ｃａ）によって３７℃で１５分間消化した）。上方の溶液を除去し、沈降した組織を、２０％熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；ハイクローン（ＨｙＣｌｏｎｅ））を含むＨｉｂｅｒｎａｔｅｄ  Ｅ（−Ｃａ）で洗浄することにより、トリプシン反応をクエンチした。
【００４０】
この組織を単一細胞にトリチュレートし、その懸濁液を７０μｍのセルストレーナーで濾過した。トリパンブルー（０．４％；フィッシャー・サイエンティフィック（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））およびＣｏｕｎｔｅｓｓ自動セルカウンター（ライフテクノロジー（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、グランドアイランド（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ）、ニューヨーク州）を用いて判定した細胞の数および生存率は、一貫して９５％を超えていた。細胞を、１００μｇ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、０．５ｎｇ／ｍＬアムホテリシン（ＣｅｌｌｎＴｅｃ）および１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含むＨｉＧｌｕｔａＸＬダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、４．５ｇ／Ｌグルコースとグルタミン；ハイクローン）を用いて、８×１０６細胞／フラスコでＴ−７５フラスコ（ＶＷＲ）に播種した。培地をインビトロで３日目に交換し、細胞をフラスコに入れたまま４〜５日毎に栄養を与えた。１４日目にインビトロで、マウス顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ｍＧＭ−ＣＳＦ；Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）；ミネアポリス（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ）、ミネソタ州）を５ｎｇ／ｍＬの最終濃度で加えてミクログリアの分化を刺激した。
【００４１】
細胞刺激およびサイトカインアッセイ。ミクログリアをフィーダー培養の培地から２週間毎に単離し、ＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳおよび１００μｇ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、０．５ｎｇ／ｍＬアムホテリシンを用いて９６ウェルプレート（７５，０００細胞／ウェル；ＶＷＲ）に播種した。プレーティングの２４時間後、細胞をクルクミンＣ３抽出物（０〜５０μｇ／ｍＬ；０〜２５ｎＭ；サビンサ（Ｓａｂｉｎｓａ）；ランゲンヘッセン（Ｌａｎｇｅｎ  Ｈｅｓｓｅｎ）、ドイツ）、レスベラトロール（０〜２５０μΜ；ＲｅｓＶｉｄａ；ＤＳＭニュートリショナル・プロダクツ（ＤＳＭ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ））またはそれらの組み合わせで処理した。次いで、さらに２４時間を与えてから、細胞をリポ多糖（ＬＰＳ；１００ｎｇ／ｍＬ；シグマ）で刺激した。刺激の２４時間後、サイトカインアッセイのため上清を集めた。上清を、アッセイを行うまで−２０℃で保存した。上清中のプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の濃度をＥＬＩＳＡ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）により測定した。上清中の腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）の濃度をマルチプレックスＥＬＩＳＡ（Ｑｕａｎｓｙｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；ローガン（Ｌｏｇａｎ）、ユタ州）により測定した。次いで、データをＬＰＳ単独に対する対照反応の割合に対して標準化した。
【００４２】
相乗作用の計算。レスベラトロールとクルクミンＣ３との組み合わせから生じる相乗作用は、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｙのｍｅｄｉａｎ−ｅｆｆｅｃｔ法）および古典的なアイソボログラム式と、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ（２０１３）の方法１とに従って判定した。この方法は、質量作用の法則に基づくものであり、生化学および生物物理学の主な理論、ミカエリス−メンテン式、ヒルの式、ヘアンダーソン・ハッセルバルヒ（Ｈｅａｎｄｅｒｓｏｎ−Ｈａｓｓｅｌｂａｃｈ）の式、およびスキャッチャードの式を、薬剤の組み合わせを試験する際の相加作用、相乗作用および拮抗作用の定量的定義に統合するため、ＴａｌａｙおよびＣｈｏｕ２により開発された。計算は、ＣｏｍｂｏＳｙｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ３（ＣｏｍｂｏＳｙｎ，Ｉｎｃ．、パラマス（Ｐａｒａｍｕｓ）、ニュージャージー州）を用いて行った。簡単に説明すると、薬剤毎にそれらそれぞれのＩＣ５０値を計算するため用量反応曲線をプロットした。次いで、ＩＣ５０値を相乗作用計算に関する相対的Ｄｍ（５０％効果を有する用量）値として使用した。相乗作用は、コンビネーションインデックス（ＣＩ）値の計算により確認した。１に近似するＣＩ値は相加作用を示す一方、ＣＩ＜１は相乗効果を示す。ＣＩ＞１である場合、拮抗的作用が示される。各薬剤単独の用量と比較して組み合わせて投与した場合の化合物毎の用量の潜在的な減少倍数の指標、ＤＲＩ値も報告する。
【図１】
2018536663.tif 000002
【図２】
2018536663.tif 000003
【図３】
2018536663.tif 000004
【図４】
2018536663.tif 000005
【国際調査報告】
2018536663.tif 000006
2018536663.tif 000007
2018536663.tif 000008