(57)【要約】ＩＩｂ型高脂血症を有する対象における高レベルの脂質及びアポリポタンパク質Ｂを減少させるための方法及び製剤。ＩＩｂ型高脂血症、ＮＡＦＬＤ、及びＮＡＳＨを含めた脂質障害の合併症を防止する、遅らせる、または後退させるための方法。一次及び二次心血管イベントを防止するまたは遅らせるための方法。このような方法に有用なキット。肝線維症を軽減する方法。血漿フィブリノーゲンレベルを減少させる方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、前記対象に、ゲムカベンを低用量または中用量のスタチンと組み合わせて投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
投与される前記ゲムカベンの１日用量が約５０ｍｇ〜約９００ｍｇであり、投与される前記スタチンの１日用量が約１ｍｇ〜約６０ｍｇである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ゲムカベンの１日用量が１日当たり約５０ｍｇ〜約９００ｍｇであり、かつ
ａ．前記スタチンがアトルバスタチンであり、アトルバスタチンの１日用量が約１０ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｂ．前記スタチンがロスバスタチンであり、ロスバスタチンの１日用量が約５ｍｇ〜約３０ｍｇである；
ｃ．前記スタチンがシンバスタチンであり、シンバスタチンの１日用量が約５ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｄ．前記スタチンがプラバスタチンであり、プラバスタチンの１日用量が約１０ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｅ．前記スタチンがロバスタチンであり、ロバスタチンの１日用量が約２０ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｆ．前記スタチンがフルバスタチンであり、フルバスタチンの１日用量が約２０ｍｇ〜約４０ｍｇである；または
ｇ．前記スタチンがピタバスタチンであり、ピタバスタチンの１日用量が約１ｍｇ〜約４ｍｇである、
請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ゲムカベンの１日用量が約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ゲムカベンの１日用量が１５０ｍｇ、３００ｍｇ、４５０ｍｇ、６００ｍｇ、または９００ｍｇである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
アトルバスタチンの１日用量が約１０ｍｇ〜約４０ｍｇである、請求項３から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ロスバスタチンの１日用量が約１０〜約２０ｍｇである、請求項３から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
シンバスタチンの１日用量が約１０ｍｇ〜約２０ｍｇである、請求項３から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
プラバスタチンの１日用量が約１０ｍｇ〜約４０ｍｇである、請求項３から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ロバスタチンの１日用量が約２０〜約４０ｍｇである、請求項３から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
フルバスタチンの１日用量が約４０ｍｇである、請求項３から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ピタバスタチンの１日用量が約１ｍｇ〜約３ｍｇである、請求項３から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が、家族性複合型高脂血症、代謝症候群、耐糖能障害、炎症性疾患、肥満、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤ、アルコール性肝疾患、または原発性胆汁性肝硬変のうちの１つ以上を有する、請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記スタチン及びゲムカベンが固定用量配合剤として投与される、請求項３から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記対象の血漿トリグリセリドレベルが、ゲムカベン及び前記スタチンの投与から８週間以内に１５０ｍｇ／ｄｌ未満に減少する、請求項１から１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象の血漿ＬＤＬコレステロールレベルが、ゲムカベン及び前記スタチンの投与から８週間以内に１３０ｍｇ／ｄｌ未満に減少する、請求項１から１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記対象のアポＢレベルが、ゲムカベン及び前記スタチンの投与から８週間以内に１２０ｍｇ／ｄｌ未満に減少する、請求項１から１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象のミオパシーのリスクが、前記スタチン単体を投与する場合のリスクより増加しない、請求項１から１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象の筋炎のリスクが、前記スタチン単体を投与する場合のリスクより増加しない、請求項１から１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象の横紋筋融解症のリスクが、前記スタチン単体を投与する場合のリスクより増加しない、請求項１から１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象が、追加的な脂質降下剤、ＰＣＳＫ９阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、ＡＣＣ阻害剤、アポＣ−ＩＩＩ阻害剤、ＡＣＬ阻害剤、医療用魚油、またはＣＥＴＰ阻害剤を投与される、請求項１から２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記追加的な脂質降下剤がエゼチミブである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記対象の一次心血管イベントの発症リスクが減少する、請求項１から２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記対象の二次心血管イベントの発症リスクが減少する、請求項１から２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
約５０ｍｇ〜約９００ｍｇの量のゲムカベン及び約１ｍｇ〜約６０ｍｇのスタチンを含む、固定用量配合剤。
【請求項２６】
前記スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンであり、かつ
ａ．アトルバスタチンの量が約１０ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｂ．ロスバスタチンの量が約５ｍｇ〜約３０ｍｇである；
ｃ．シンバスタチンの量が約１０ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｄ．プラバスタチンの量が約１０ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｅ．ロバスタチンの量が約２０ｍｇ〜約４０ｍｇである；
ｆ．フルバスタチンの量が約２０ｍｇ〜約６０ｍｇである；または
ｇ．ピタバスタチンの量が約１ｍｇ〜約４ｍｇである、
請求項２５に記載の固定用量配合剤。
【請求項２７】
ゲムカベンの量が約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇである、請求項２６に記載の固定用量配合剤。
【請求項２８】
ゲムカベンの量が約１５０〜約３００である、請求項２７に記載の固定用量配合剤。
【請求項２９】
ゲムカベンの量が約３００ｍｇ〜約４５０ｍｇである、請求項２７に記載の固定用量配合剤。
【請求項３０】
ゲムカベンの量が１５０ｍｇ、３００ｍｇ、４５０ｍｇ、６００ｍｇである、請求項２６に記載の固定用量配合剤。
【請求項３１】
ｈ．アトルバスタチンの量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、または４０ｍｇである；
ｉ．ロスバスタチンの量が１０ｍｇまたは２０ｍｇである；
ｊ．シンバスタチンの量が１０ｍｇまたは２０ｍｇである；
ｋ．プラバスタチンの量が１０ｍｇまたは２０ｍｇである；
ｌ．ロスバスタチンの量が２０ｍｇまたは４０ｍｇである；
ｍ．フルバスタチンの量が２０ｍｇまたは４０ｍｇである；または
ｎ．ピタバスタチンの量が１ｍｇ、２ｍｇ、または３ｍｇである、
請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項３２】
１５０ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項３３】
１５０ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項３４】
１５０ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項３５】
３００ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項３６】
３００ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項３７】
３００ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項３８】
６００ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項３９】
６００ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項４０】
６００ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項４１】
９００ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項４２】
９００ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項４３】
９００ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇのアトルバスタチンを含む、請求項３０に記載の固定用量配合剤。
【請求項４４】
肝脂肪症を治療または防止する方法であって、必要とする対象に有効量の式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2018536710.tif 000038
（Ｉ）、
またはその医薬的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはこれらの混合物を投与することを含む、前記方法
（式中、
（ａ）ｍは、それぞれ独立して、０〜５を範囲とする整数であり、
（ｂ）ｎは、それぞれ独立して、３〜７を範囲とする整数であり、
（ｃ）Ｘは、−（ＣＨ２）ｚ−、−Ｏ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−、−ＮＨ−、または−Ｓ−（ｚは、０〜４の整数である）であり、
（ｄ）Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、フェニル、ベンジルであり、あるいは、Ｒ１及びＲ２ならびにこれらの両方が結合する炭素は、一緒になって（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成し、
（ｅ）Ｒ１１及びＲ１２ならびにこれらの両方が結合する炭素は、一緒になって、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成し、
（ｆ）Ｙ１及びＹ２は、それぞれ独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ３Ｈ、
【化２】
2018536710.tif 000039
であり、
【化３】
2018536710.tif 000040
【化４】
2018536710.tif 000041
【化５】
2018536710.tif 000042
式中、
（ｉ）Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、フェニル、またはベンジルであり、かつ非置換であるか、または１つ以上のハロ、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、もしくはフェニル基で置換され、
（ｉｉ）Ｒ４は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルであり、かつ非置換であるか、または１つ以上のハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、もしくはフェニル基で置換され、
（ｉｉｉ）Ｒ５は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルである）。
【請求項４５】
肝脂肪症を治療または予防する方法であって、必要とする対象に有効量の式（ＩＩ）の化合物：
【化６】
2018536710.tif 000043
（ＩＩ）、
またはその医薬的に許容される塩、水和物、溶媒和物もしくはこれらの混合物を投与することを含む、前記方法
（式中、
（ａ）ｍは、それぞれ独立して、０〜５を範囲とする整数であり、
（ｂ）ｎは、それぞれ独立して、３〜７を範囲とする整数であり、
（ｃ）Ｘは、−（ＣＨ２）−、−Ｏ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−、−ＮＨ−、または−Ｓ−（ｚは、０〜４の整数である）であり、
（ｄ）Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、フェニル、ベンジルであり、あるいは、Ｒ１及びＲ２ならびにこれらの両方が結合する炭素は、一緒になって（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成し、
（ｅ）Ｒ１１及びＲ１２ならびにこれらの両方が結合する炭素は、一緒になって、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成し、
（ｆ）Ｙ１及びＹ２は、それぞれ独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ３Ｈ、
【化７】
2018536710.tif 000044
であり、
【化８】
2018536710.tif 000045
【化９】
2018536710.tif 000046
【化１０】
2018536710.tif 000047
式中、
（ｉ）Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、フェニル、またはベンジルであり、かつ非置換であるか、または１つ以上のハロ、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、もしくはフェニル基で置換され、
（ｉｉ）Ｒ４は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルであり、かつ非置換であるか、または１つ以上のハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、もしくはフェニル基で置換され、
（ｉｉｉ）Ｒ５は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルである）。
【請求項４６】
前記化合物が、構造：
【化１１】
2018536710.tif 000048
または前述のうちのいずれかの医薬的に許容される塩を有する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
肝脂肪蓄積のリスクがある対象における肝脂肪の蓄積を減少させる方法であって、前記対象にゲムカベンを投与することを含む、前記方法。
【請求項４８】
前記対象が肝脂肪症を有する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記対象がＩＩｂ型高脂血症または家族性複合型高脂血症を有する、請求項４７または請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
投与される前記ゲムカベンの１日用量が約５０ｍｇ〜約９００ｍｇである、請求項４７から４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
ゲムカベンの１日用量が約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ゲムカベンの１日用量が１５０ｍｇ、３００ｍｇ、４５０、または６００ｍｇである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ゲムカベンがスタチンと組み合わせて投与される、請求項５０から５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記対象の肝疾患の発生リスクが減少する、請求項５０から５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
前記対象が肝疾患を有する、請求項４９から５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記肝疾患が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、または非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、またはアルコール性肝脂肪症である、請求項５５または５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記対象が追加的なコレステロール降下剤を投与される、請求項４７から５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記追加的な脂質降下剤が、コレステロール吸収阻害剤、ＰＣＳＫ９阻害剤、ＡＣＣ阻害剤、アポＣ−ＩＩＩ阻害剤、ＡＣＬ阻害剤、医療用魚油、またはＣＥＴＰ阻害剤である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記コレステロール降下剤がコレステロール吸収阻害剤であり、前記コレステロール阻害剤がエゼチミブである、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記肝脂肪症がＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
対象におけるＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）の安定化または減少の方法であって、前記対象にゲムカベンを投与することを含む、前記方法。
【請求項６３】
投与される前記ゲムカベンの１日用量が約５０ｍｇ〜約９００ｍｇである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
ゲムカベンの１日用量が約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
ゲムカベンの１日用量が１５０ｍｇ、３００ｍｇ、４５０、または６００ｍｇである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
ゲムカベンがスタチンと組み合わせて投与される、請求項６２から６５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＮＡＳにおける肝脂肪化コンポーネントに対し、進行を遅くすること、安定化すること、または軽減することを含む、請求項６２から６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
ＮＡＳにおける小葉内炎症コンポーネントに対し、進行を遅くすること、安定化すること、または軽減することを含む、請求項６２から６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
ＮＡＳにおける肝細胞の風船様変化コンポーネントに対し、進行を遅くすること、安定化すること、または軽減することを含む、請求項６２から６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
ＮＡＳが、ゲムカベンによる治療から６ヵ月後に１．５ポイント以上異なる、請求項６２から７０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
必要とする対象における肝線維症を軽減する方法であって、前記対象にゲムカベンを投与することを含む、前記方法。
【請求項７３】
前記対象がＮＡＳＨを有する、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記対象が原発性胆汁性肝硬変を有する、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
投与される前記ゲムカベンの１日用量が約５０ｍｇ〜約９００ｍｇである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
ゲムカベンの１日用量が約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
ゲムカベンの１日用量が１５０ｍｇ、３００ｍｇ、４５０、または６００ｍｇである、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ゲムカベンがスタチンと組み合わせて投与される、請求項７２から７７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
前記スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
必要とする対象における血漿フィブリノーゲンレベルを減少させる方法であって、前記対象にゲムカベンを投与することを含む、前記方法。
【請求項８１】
前記対象のフィブリノーゲンレベルが、前記対象にゲムカベンを投与することを含む３００ｍｇ／ｄＬより大きい、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記対象のフィブリノーゲンレベルが４００ｍｇ／ｄＬより大きい、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
ゲムカベンの１日用量が５０ｍｇ〜９００ｍｇである、請求項７９から８１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８４】
ゲムカベンがスタチンと組み合わせて投与される、請求項８０から８３のいずれ１項に記載の方法。
【請求項８５】
前記スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
スタチンの１日用量が１ｍｇ〜８０ｍｇである、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
ゲムカベンの１日用量が３００ｍｇ、６００ｍｇ、または９００ｍｇであり、前記スタチンが１０ｍｇ、４０ｍｇ、または８０ｍｇの１日用量で投与されるアトルバスタチンである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
ゲムカベンの１日用量が６００ｍｇであり、アトルバスタチンの１日用量が１０ｍｇである、請求項８７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６２／２５２，１９５号及び２０１５年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６２／２５２，１４７号の優先権による利益を主張する。これらの開示はいずれも、その全体が参照により本書に組み込まれている。
【０００２】
本発明は、混合型脂質異常症の治療のための、ゲムカベンと組み合わせたスタチンの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
高脂血症におけるフレドリクソンの分類体系は、血漿外観、総コレステロール値、及びトリグリセリド値を使用して、対象を高脂血症における５つの型のうちの１つに特徴づける。５つの型とは、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、及びＶである。ＩＩ型は、さらにＩＩａ型及びＩＩｂ型に細分され、いずれの型も総コレステロール及びＬＤＬ−Ｃが高く、ＩＩｂ型はさらに高いトリグリセリドも示す。
【０００４】
報告によると、人口におけるＩＩｂ型高脂血症（ＩＩｂ型）の罹患率は、約１０％と推定されている。ＩＩｂ型は、ＬＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、及びアポリポタンパク質Ｂのレベル上昇、ならびに超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ−Ｃ）、中密度リポタンパク質コレステロール（ＩＤＬ）、及び小型高密度ＬＤＬのレベル増加により特徴づけられる。
【０００５】
ＩＩｂ型高脂血症は、後天性複合型高脂血症及び家族性複合型高脂血症（ＦＣＨＬ）を含む。ＦＣＨＬは１つの遺伝的状態であり、人口のおよそ０．３〜２％で発生するが、人口の５．７％という高い推定値が報告されている。ＩＩｂ型高脂血症を有する個体は心血管疾患の率が高く、ＦＣＨＬを有する個体は、早期冠動脈疾患の出現率が高い。加えて、ＩＩｂ型患者は、ＩＩａ型（肝臓トリグリセリドの過剰産生及び蓄積に起因して発生する、脂肪肝の一形態）を有しない患者に比べて、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の出現率が高い。ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、及び脂肪肝は、肝臓酵素の上昇、線維症、硬変、肝細胞がん、及び肝不全を含めた代謝性合併症につながり得る。肝不全は生命を脅かす危険があるため、脂肪肝に対する発生を遅らせる、形成を防止する、または状態を反転させる療法の開発が、緊急に必要とされている。
【０００６】
現状、ＩＩｂ型高脂血症についての治療選択肢は限られている。スタチンは、ＬＤＬ−Ｃの降下に非常に有効であるが、一般にトリグリセリドレベルの降下にはあまり有効ではない。高用量の一部のスタチン、例えば、８０ｍｇのアトルバスタチンは、顕著にトリグリセリドレベルを降下させる。しかし、高用量スタチン療法は、筋肉痛（筋痛症）を引き起こす場合があり、また患者の忍容性が良好でないことが多い。加えて、高用量スタチン療法は、横紋筋融解症のような深刻な筋毒性のリスク増加を伴う。
【０００７】
さらに、あるいくつかのスタチンは、他の薬物の代謝も媒介するシトクロムＰ４５０酵素により代謝されるため、高用量スタチンの使用は、あるいくつかの薬物との使用が禁忌となり得る。本出願で開示する、ゲムカベン及び低〜中用量のスタチンの組合せがトリグリセリド（ＴＧ）の降下に驚くべき相乗効果をもたらすという発見により、低用量のスタチンの使用が可能になり、そのためより良好な安全プロファイルがもたらされ得る。
【０００８】
ＩＩｂ型高脂血症の治療は、ＬＤＬ−Ｃレベル及びトリグリセリドレベルの降下に焦点が当てられる。治療は通常、スタチンのようなコレステロール降下剤と、フィブラート、ナイアシン、または魚油のようなトリグリセリド降下剤との組合せを投与することを含む。しかし、一般に使用されているトリグリセリド降下剤は、簡便ではない、または忍容性が良好ではない場合がある。例えばフィブラートは、筋痛症及び筋毒性のリスク増加を伴い、魚油は、毎日複数回摂取する必要があり、ナイアシンは、特にスタチンと組み合わせて投与した場合に、フラッシングを引き起こす。あるいくつかのフィブラートは、一部のスタチンが行うように、自らの異化プロセスの一部として、シトクロムＰ４５０の３Ａ４アイソフォームを使用または活性化するため、これらの薬物を組み合わせて投与すると、筋痛症及び筋肉損傷のリスクが増加する恐れがある。医師は、この組合せにより筋肉損傷のリスクが高まることへの懸念から、スタチンをフィブラートと組み合わせることを回避することがある。
【０００９】
非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、全世界で、特に西洋諸国でますます一般的になっている。米国では最も一般的な形態の慢性肝疾患であり、推定で８０００万〜１億人の人々に影響を及ぼしている。非アルコール性脂肪性肝疾患は、アルコールをほとんどまたは全く飲まない人々に影響を及ぼす様々な肝臓状態についての包括的用語である。この名称が示唆するように、非アルコール性脂肪性肝疾患の主な特徴は、肝細胞に貯蔵された過剰な脂肪である。肝臓がいくらかの脂肪を含有することは正常である。しかし、肝臓の重量の５％〜１０％超が脂肪である場合、この状態は脂肪肝（肝脂肪化）と呼ばれる。ＮＡＦＬＤは、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病、及び脂質異常症を含めた代謝症候群の特色と関連性が強く、この症候群の肝臓における徴候とみなされる。
【００１０】
現在、小児ＮＡＦＬＤは、小児における主要な形態の肝疾患である。諸研究により、腹部肥満及びインスリン抵抗性は、ＮＡＦＬＤ発生の主因と考えられることが実証されている。世界中で肥満がますます一般的な問題になっているため、同時発生的にＮＡＦＬＤの罹患率も増加している。小児ＮＡＦＬＤで本当に有効であることが示されている唯一の治療は、減量である。
【００１１】
より深刻な形態のＮＡＦＬＤは、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）と呼ばれる。ＮＡＳＨは、肝臓の膨張及び損傷を引き起こす。ＮＡＳＨは、体重過多もしくは肥満である、または糖尿病、高コレステロール、もしくは高トリグリセリド、もしくは炎症状態を有する人々に発生する傾向がある。潜在的に重篤な形態の疾患であるＮＡＳＨは、肝細胞の風船様変化及び肝臓の炎症によって特徴づけられるが、これらは瘢痕性かつ不可逆性の損傷に進行する恐れがある。この損傷は、大量のアルコール使用により引き起こされる損傷に類似している。マクロ及び顕微鏡的には、ＮＡＳＨは、小葉及び／または門脈の炎症、様々な程度の線維症、肝細胞死、ならびに病理学的血管新生により特徴づけられる。最も重症の場合、ＮＡＳＨは硬変、肝細胞がん、及び肝不全に進行する恐れがある。現状、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨは、例えば、食事、インスリン抵抗性の治療、またはビタミンＥもしくはＤなどのビタミン投与により治療が行われている。残念ながら、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨの治療に認可された薬物は、現状存在しない。
【００１２】
ＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）は、Ｋｌｅｉｎｅｒの基準（Ｋｌｅｉｎｅｒ  ＤＥ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００５；４１：１３１３）に従って算出することができる。ＮＡＳスコア０〜２はＮＡＳＨとは診断されないとみなされ、ＮＡＳスコア３〜４は、ＮＡＳＨとは診断されない、またはＮＡＳＨのボーダーラインもしくは陽性であるとみなされ、一方ＮＡＳスコア５〜８は、概ねＮＡＳＨと診断されるものとみなされる。ＮＡＳＨの治療効果としては、後退、安定化、または疾患進行速度の減少が挙げられる。ＮＡＳＨを有し得る患者からの経時的な肝臓生検は、ＮＡＳスコアの変化の評価や、疾患状態変化の指標に使用することができる。スコアの増加は進行を示唆し、スコアの不変は安定化を示唆し、一方スコアの低下はＮＡＳＨの後退を示唆する。対照群を設定した臨床試験では、プラセボ群と試験物品治療群との間におけるＮＡＳスコアの相違は、通常６ヵ月から２年の持続期間にわたり評価され、例え両群で進行が見られる場合であっても治療効果の指標となり得る。通常、規制機関は、ＮＡＳＨにおける意味のある変化を実証するため、定義されたポイントスプレッドを要求する。
【００１３】
フィブリノーゲン（第Ｉ因子）は、血餅形成の役割を担う哺乳類の糖タンパク質である。フィブリノーゲンは、血餅形成中にトロンビンによりフィブリンに変換される。フィブリノーゲンは肝臓の肝細胞内で合成される。様々な疾患が高レベルのフィブリノーゲンに関連しており、疾患としては、以下に限定するものではないが、ＮＡＳＨ、微小血管疾患、末梢血管疾患、末梢動脈疾患、末梢動脈閉塞性疾患における重症下肢虚血、新規発症の冠状動脈粥状硬化症、がんにおける（例えば、乳がん、腎細胞がん、前立腺がん患者における）生存率低下が挙げられる。また、フィブリノーゲンレベルの増加は、陰性敗血症の転帰、糖尿病、代謝症候群、及び亜急性甲状腺炎、血漿トリグリセリド、肥満、超音波内臓脂肪、拡張期血圧、インスリン抵抗性、ＬＤＬコレステロール、及び喫煙にも関連している。閉塞性睡眠時無呼吸の重症度は、他の点では健康な患者における高い血漿フィブリノーゲンにも関連している。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
そのため、フィブリノーゲンは、多くの疾患の予後指標や血液マーカーとすることができ、また疾患状態の発症及び進行に効果を及ぼす役割も果たし得る。高レベルの対象におけるフィブリノーゲンの減少が医学的に必要とされている。
【００１５】
ＩＩｂ型高脂血症を有する患者の治療選択肢が限定されているため、そして現状の治療は、重篤な副作用のリスクを増加させる恐れがあるか、または忍容性が良好でないため、ＩＩｂ型高脂血症にかかっている患者を治療する上で安全かつ効果的である、追加的な治療が必要とされている。加えて、現状のＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨの治療は限定されており、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨに係っている患者を治療する上で安全かつ効果的である、より多くの治療選択肢が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
概要
本発明は、これらの必要性に対処するものである。発明者らは、ＩＩｂ型高脂血症を有する患者を、ある用量のゲムカベンと低用量または中用量のスタチンとの組合せにより治療することで、各薬剤単体の効果との比較で、ＬＤＬ−Ｃにおける減少と、トリグリセリド（ＴＧ）における加算性を上回る予想外の減少との両方が示されることを明らかにした。ゲムカベンは、医薬品の対処に関与する主なシトクロムＰ４５０酵素の活性または発現に対し、顕著には影響を及ぼさない。そのため、ゲムカベンは、高用量のスタチンを使用する必要性を軽減することにより副作用のリスクを軽減し得る。
【００１７】
本発明の第１の態様は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、ゲムカベンを低用量または中用量のスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。本発明の第１の態様における一部の実施形態では、ゲムカベン及びスタチンは、固定用量配合剤として投与される。
【００１８】
本発明の第２の態様は、対象における肝脂肪蓄積を減少させる方法であって、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。本発明の第２の態様における一部の実施形態では、当該方法は、非アルコール性脂肪性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療または防止する方法である。第２の態様における別の実施形態では、肝脂肪化を治療または予防する方法である。一部の実施形態では、当該方法は、肝疾患を治療または予防する方法であって、当該肝疾患が非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である方法である。
【００１９】
本発明の第３の態様は、ゲムカベン及びスタチンにおける特定の固定用量配合剤を提供する。
【００２０】
第４の態様は、ＩＩｂ型高脂血症及び／またはＮＡＳＨを有する対象を治療するためのキットであって、ゲムカベン、スタチン、及び使用説明書を含むキットを提供する。
【００２１】
本発明の第５の態様は、対象における線維症を軽減する方法であって、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【００２２】
本発明の第６の態様は、高い血漿フィブリノーゲンレベルを有する対象の血漿レベルにおけるフィブリノーゲンレベルを減少する方法であって、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【００２３】
第１の態様における一実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、ゲムカベンを低用量または中用量のスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【００２４】
第１の態様における別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、１日用量約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇのゲムカベン及び１日用量約１ｍｇ〜約６０ｍｇのスタチンを投与することを含む方法である。
【００２５】
第２の態様における一実施形態は、対象における肝脂肪の蓄積を減少させる方法であって、必要とする対象に、１日用量約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇのゲムカベンを投与することと、１日用量約１ｍｇ〜約８０ｍｇのスタチンを投与することとを含む方法である。
【００２６】
本発明の第４の態様における一実施形態は、固定用量配合剤を含むキットであって、約１ｍｇ〜約６０ｍｇのスタチン及び約３００ｍｇ〜約６００ｍｇのゲムカベンならびにその使用説明書を含むキットを提供する。一部の実施形態において、スタチンは、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、及びピタバスタチン、またはこれらの医薬的に許容される塩から選択される。一部の実施形態では、当該スタチンはアトルバスタチンである。
【００２７】
第５の態様における一実施形態は、対象における線維症を軽減する方法であって、必要とする対象に、１日用量約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇのゲムカベンを投与することと、１日用量約１ｍｇ〜約８０ｍｇのスタチンを投与することとを含む方法である。
【００２８】
本発明の第６の態様における一実施形態は、フィブリノーゲンレベルが３００ｍｇ／ｄＬ超の対象におけるフィブリノーゲンの血漿レベルを減少させる方法であって、対象に、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法である。当該対象は、高いＬＤＬ−Ｃレベルを有し得る。当該対象は、冠動脈性心疾患を発生するリスクがある、または既に１つ以上の心臓イベントを経験した可能性がある。
【００２９】
以下の図面は、例として提供するものであり、本発明の請求範囲を限定するようには意図されていない。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１Ａ】ゲムカベンによるアトルバスタチンの濃度への効果を示すグラフであり、ヒト対象のクロスオーバー研究において、アトルバスタチンが８０ｍｇ単体で（黒丸）、３００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（白丸）、または９００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（黒四角）投与された場合におけるものである。
【図１Ｂ】ゲムカベンによるアトルバスタチンラクトンの濃度への効果を示すグラフであり、ヒト対象のクロスオーバー研究において、アトルバスタチンが８０ｍｇ単体で（黒丸）、３００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（白丸）、または９００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（黒四角）投与された場合におけるものである。
【図１Ｃ】ゲムカベンによるオルト−ヒドロキシアトルバスタチンの濃度への効果を示すグラフであり、ヒト対象のクロスオーバー研究において、アトルバスタチンが８０ｍｇ単体で（黒丸）、３００ｍｇのジェムカベンと組み合わせて（白丸）、または９００ｍｇのジェムカベンと組み合わせて（黒四角）投与された場合におけるものである。
【図１Ｄ】ゲムカベンによるオルト−ヒドロキシアトルバスタチンラクトンの濃度への効果を示すグラフであり、ヒト対象のクロスオーバー研究において、アトルバスタチンが８０ｍｇ単体で（黒丸）、３００ｍｇのジェムカベンと組み合わせて（白丸）、または９００ｍｇのジェムカベンと組み合わせて（黒四角）投与された場合におけるものである。
【図１Ｅ】ゲムカベンによるパラ−ヒドロキシアトルバスタチンの濃度への効果を示すグラフであり、ヒト対象のクロスオーバー研究において、アトルバスタチンが８０ｍｇ単体で（黒丸）、３００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（白丸）、または９００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（黒四角）投与された場合におけるものである。
【図１Ｆ】ゲムカベンによるパラ−ヒドロキシアトルバスタチンラクトンの濃度への効果を示すグラフであり、ヒト対象のクロスオーバー研究において、アトルバスタチンが８０ｍｇ単体で（黒丸）、３００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（白丸）、または９００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（黒四角）投与された場合におけるものである。
【図１Ｇ】ゲムカベンによるアトルバスタチンの薬物動態への効果を示すグラフであり、ヒト対象のクロスオーバー研究において、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤濃度の活性により測定され、アトルバスタチンが８０ｍｇ単体で（黒丸）、そして９００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（白丸）投与された場合におけるものである。
【図１Ｈ】ゲムカベンによるシンバスタチンの薬物動態への効果を示すグラフであり、ヒト対象のクロスオーバー研究において、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤濃度の活性により測定され、シンバスタチンが８０ｍｇ単体で（黒丸）、そして９００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて（白丸）投与された場合におけるものである。
【図２Ａ】実施例４に記載の研究に従って、プラセボ；１０ｍｇアトルバスタチン（スタチン）；３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン（ｇｅｍ）；または１０ｍｇアトルバスタチン及び３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン、を投与したＩＩｂ型高脂血症患者における、ＬＤＬベースライン、ベースライントリグリセリド、及びベースラインアポＢレベルからの中央値パーセントの変化を図示する棒グラフである。
【図２Ｂ】実施例４に記載の研究に従って、プラセボ；１０ｍｇアトルバスタチン（スタチン）；３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン（ｇｅｍ）；または１０ｍｇアトルバスタチン及び３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン、を投与したＩＩｂ型高脂血症患者における、ＬＤＬベースライン、ベースライントリグリセリド、及びベースラインアポＢレベルからの平均パーセントの変化を図示する棒グラフである。
【図２Ｃ】実施例４に記載の研究に従って、プラセボ；４０ｍｇアトルバスタチン（スタチン）；３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン（ｇｅｍ）；または４０ｍｇアトルバスタチン及び３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン、を投与したＩＩｂ型高脂血症患者における、ＬＤＬベースライン、ベースライントリグリセリド、及びベースラインアポＢレベルからの中央値パーセントの変化を図示する棒グラフである。
【図２Ｄ】実施例４に記載の研究に従って、プラセボ；４０ｍｇアトルバスタチン（スタチン）；３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン（ｇｅｍ）；または４０ｍｇアトルバスタチン及び３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン、を投与したＩＩｂ型高脂血症患者における、ＬＤＬベースライン、ベースライントリグリセリド、及びベースラインアポＢレベルからの平均パーセントの変化を図示する棒グラフである。
【図２Ｅ】実施例４に記載の研究に従って、プラセボ；８０ｍｇアトルバスタチン（スタチン）；３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン（ｇｅｍ）；または８０ｍｇアトルバスタチン及び３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベンを投与したＩＩｂ型高脂血症患者における、ＬＤＬベースライン、ベースライントリグリセリド、及びベースラインアポＢレベルからの中央値パーセントの変化を図示する棒グラフである。
【図２Ｆ】実施例４に記載の研究に従って、プラセボ；８０ｍｇアトルバスタチン（スタチン）；３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベン（ｇｅｍ）；または８０ｍｇアトルバスタチン及び３００ｍｇ、６００ｍｇ、もしくは９００ｍｇのゲムカベンを投与したＩＩｂ型高脂血症患者における、ＬＤＬベースライン、ベースライントリグリセリド、及びベースラインアポＢレベルからの平均パーセントの変化を図示する棒グラフである。
【図３】ゲムカベン（Ｇｅｍ）１００ｍｇ／ｋｇ及びシンバスタチン（Ｓｉｍｖａ）３ｍｇ／ｋｇによる血漿コレステロール、肝臓コレステロール、及び肝臓トリグリセリドへの効果を図示する棒グラフである。
【図４】糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの平均体重の変化を、治療開始からの日数及び投与用量の関数として示す棒グラフである。
【図５Ａ】治療終了日における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの体重を示すプロットである。
【図５Ｂ】治療終了日における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの肝臓重量を示すプロットである。
【図５Ｃ】治療終了日における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの肝臓：体重比を示すプロットである。
【図６Ａ】終了日の３日前の８時間絶食後における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの空腹時全血グルコースレベルを示すプロットである。
【図６Ｂ】終了日の３日前の８時間絶食後における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの空腹時血漿グルコースレベルを示すプロットである。
【図７Ａ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの全血グルコースレベルを示すプロットである。
【図７Ｂ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの血漿アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベルを示すプロットである。
【図７Ｃ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの血漿アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベルを示すプロットである。
【図７Ｄ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの血漿アルファリポ酸（ＡＬＰ）レベルを示すプロットである。
【図７Ｅ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの血漿ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）レベルを示すプロットである。
【図７Ｆ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの血中尿素窒素（ＢＵＮ）レベルを示すプロットである。
【図７Ｇ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの血漿クレアチニンレベルを示すプロットである。
【図７Ｈ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの血漿総ビリルビンレベルを示すプロットである。
【図７Ｉ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの血漿ケトン体レベルを示すプロットである。
【図７Ｊ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの肝臓トリグリセリドレベルを示すプロットである。
【図８】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）スコアを示すプロットである。
【図９Ａ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの肝脂肪化スコアを示すプロットである。
【図９Ｂ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの小葉内炎症スコアを示すプロットである。
【図９Ｃ】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの風船様変性スコアを示すプロットである。
【図１０】終了時における糖尿病マウスＮＡＳＨモデルの線維症領域（％シリウスレッド陽性領域）を示すプロットである。
【図１１Ａ】雄スプラーグドーリーラットにおける、ゲムフィブロジルまたはゲムカベンによる治療後の肝臓トリグリセリドレベルを示す棒グラフである。
【図１１Ｂ】雄スプラーグドーリーラットにおける、ゲムフィブロジルまたはゲムカベンによる治療後の肝臓非エステル化コレステロールのレベルを示す棒グラフである。
【図１２】雄スプラーグドーリーラットにおける、ゲムフィブロジルまたはゲムカベンによる治療後の血漿フィブリノーゲンレベルのレベルを示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
定義
「ＡＰＩ」は、医薬品有効成分（ａｃｔｉｖｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）の略である。
【００３２】
スタチンは、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ酵素を阻害する薬物のクラスであり、患者のＬＤＬコレステロールを降下させることが一般に知られている。スタチンの例としては、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、及びピタバスタチンが挙げられる。
【００３３】
本明細書において「ＩＩｂ型高脂血症」または「ＩＩｂ型」患者集団とは、空腹時ＬＤＬコレステロール血漿レベルが≧１３０ｍｇ／ｄｌであり、かつ空腹時トリグリセリド血漿レベル≧１５０ｍｇ／ｄＬである患者集団を意味する。ＬＤＬ−Ｃ、トリグリセリド、またはアポＢレベルへの言及は、別段の明確な指示がない限り、空腹時レベルのことである。ＩＩｂ型高脂血症は、ＩＩｂ型高リポタンパク血症の別名でも知られている。一部の参考文献では、ＩＩｂ型高脂血症は、混合型脂質異常症と称されるか、または混合型脂質異常症のサブセットとして記載されている。
【００３４】
本明細書において「ゲムカベン」という用語は、以下の構造を有する化合物６，６’−オキシビス（２，２−ジメチルヘキサン酸）を指す。
【化１】
2018536710.tif 000002
【００３５】
ゲムカベンカルシウムとは、ゲムカベンのモノカルシウム塩を指す。ゲムカベンカルシウムは、ゲムカベンと互換的に使用される。
【００３６】
本明細書において「肝脂肪化（ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）」は、「脂肪肝（ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ）」と互換的に使用され、これは肝臓内の脂肪の蓄積である。
【００３７】
投薬量（ｄｏｓａｇｅ）及び用量（ｄｏｓｅ）に言及する場合、投薬量または用量は、ＡＰＩの重量を元に算出される。一部の実施形態において、ＡＰＩは、医薬的に許容される塩として投与され得る。ＡＰＩが塩として投与される場合も、用量はやはりＡＰＩに基づいて算出される。例えば、８０ｍｇの用量のアトルバスタチンに言及する場合、８０ｍｇのアトルバスタチンに相当するアトルバスタチンカルシウムの用量を意味し、３００ｍｇの用量のゲムカベンカルシウムに言及する場合、３００ｍｇのゲムカベンに相当するゲムカベンカルシウムの用量を意味する。
【００３８】
本明細書において、「単回用量」または「固定用量配合剤」という用語は、２種以上のＡＰＩの混合物及び１種以上の添加剤の混合物で製剤化され、成分ともパッケージともみなされないと考えられる他の任意選択の再利用不可能な材料（例えば、カプセルシェル）と共に使用する、市販形態の医薬組成物を指す。本明細書において「単回用量製剤」及び「固定用量配合剤」という用語は、互換的に使用される。一般的な単回用量製剤としては、ピル、タブレット、またはカプセルが挙げられる。
【００３９】
本明細書において「対象」及び「患者」は、互換的に使用される。対象は哺乳類とすることができ、当該哺乳類は、例えばヒトとすることができ、ヒト対象には、成人、青年、及び小児の対象が含まれる。
【００４０】
「肝脂肪化（ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）」及び「肝脂肪症（ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）」は、本明細書では互換的に使用される。
【００４１】
「血漿（ｂｌｏｏｄ  ｐｌａｓｍａ）」及び「血漿（ｐｌａｓｍａ）」は、本明細書では互換的に使用される。
【００４２】
以下の表は、複数のスタチンについて本明細書で使用する用量カテゴリーを示す。
【表１】
2018536710.tif 000003
【００４３】
本発明は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象の治療のための方法を提供する。実施例３でさらに詳述するように、８週間の二重盲検ランダム化プラセボ対照の用量設定試験を行い、高コレステロール血症患者の治療におけるゲムカベンの有効性及び安全性を、単剤療法としてまたはアトルバスタチンとの組合せで評価した。第１の目的は、ゲムカベン３００、６００、及び９００ｍｇ／日を単剤療法としてまたはアトルバスタチン１０、４０、及び８０ｍｇ／日と組み合わせて高コレステロール血症患者（フレドリクソンのＩＩａ型及びＩＩｂ型）に投与する場合における、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）を下げることの有効性及び用量反応性を評価することであった。第２の目的は、ゲムカベンによる、高感度ｃ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ）、及びトリグリセリド（ＴＧ）、及びアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）の調節を評価することであった。
【００４４】
対象をランダム化して、プラセボ、単剤療法としての薬剤、または種々の用量レベルで配合された薬剤を、８週間投与した。治療期間の前及び最後に、安全性及び脂質変数（血漿トリグリセリド、ＬＤＬ−Ｃ、及びアポＢレベルを含む）を評価した。
【００４５】
ＬＤＬ−Ｃレベル≧１３０ｍｇ／ｄｌ及びトリグリセリドレベル≧１５０ｍｇ／ｄＬを有する対象におけるＬＤＬ−Ｃ及びＴＧの下位群分析。（ＩＩｂ型）最大用量（８０ｍｇ）未満のアトルバスタチン及びゲムカベン（３００、６００、または９００ｍｇ）を投与した患者において、予想外のトリグリセリド減少が明らかになった。試験を行った他の用量のアトルバスタチンでは、組合せ療法によるトリグリセリドの減少は、アトルバスタチンまたはゲムカベンの単剤療法によるいずれの減少よりもはるかに大きかった。加えて、これらの組合せはさらに、アトルバスタチンまたはゲムカベンを単体で投与した場合を上回るＬＤＬ−Ｃ及びアポＢの減少ももたらした。
【００４６】
この群の対象で低〜中用量のスタチンをゲムカベンと組み合わせて使用した結果、驚くべきＴＧ降下がもたらされたという発見は、潜在的に安全性の利点を提供するものである。
【００４７】
シトクロムＰ４５０酵素は、ヒトの薬物代謝を媒介する。例えば、一部のスタチン及びフィブラートは、自らの異化プロセスの一部としてシトクロムＰ４５０の３Ａ４アイソフォームを使用または活性化する。一緒に投与した場合、一部のスタチン及びフィブラートは、シトクロムＰ４５０の３Ａ４アイソフォームに対し競合し、その結果薬物間の相互作用がもたらされ、血漿中の各薬剤レベルに影響が生じる。
【００４８】
一例としては、Ｂａｙｃｏｌとして市販されていたスタチンは、ゲムフィブロジル（フィブラートの１種）との深刻な薬物間相互作用（ＤＤＩ）の結果、横紋筋融解症及び患者死亡が発生し、それから市場から回収された。
【００４９】
後述の実施例１でさらに説明されるように、１５００μＭまでの濃度で試験したシトクロムＰ４５０アイソフォームのいずれについても有意な阻害の根拠は観察されず、このことから、治療濃度のゲムカベンにおけるゲムカベンとスタチンとの間の代謝ベースの臨床的相互作用が起こる可能性は非常に低いことが示唆される。
【００５０】
加えて、ヒトに単回用量で１５００ｍｇまで、多回用量で９００ｍｇまで投与したゲムカベンの単剤療法では、筋骨格の有害事象数はプラセボに類似するかまたはそれ未満であったが、スタチンの単剤療法では、プラセボと比べて筋骨格の有害事象の増加が示された。表２に示すように、ゲムカベン及びスタチンの同時投与では、スタチン単体で見られた筋骨格の有害事象は増加しなかった。
【表２】
2018536710.tif 000004
「ｎ」＝群における患者数。
Ｎｏ＝筋骨格の有害事象の数、％＝特定の群において筋骨格の有害事象を経験した患者のパーセント。
【００５１】
実施形態
本発明の第１の態様は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、ゲムカベンを低用量または中用量のスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。本発明の一部の実施形態では、ゲムカベン及びスタチンは、固定用量配合剤として投与される。本発明の第３の態様は、ゲムカベン及びスタチンにおける特定の固定用量配合剤を提供する。第４の態様は、ＩＩｂ型高脂血症及び／またはＮＡＳＨを有する対象を治療するためのキットを提供する。本発明の第５の態様は、対象における線維症を軽減する方法であって、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【００５２】
概してゲムカベンは、モノカルシウム塩（ゲムカベンカルシウム）として投与される。
【００５３】
第１の態様における一実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、ゲムカベンを低強度用量または中強度用量のスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
【００５４】
別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、１日用量約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇのゲムカベン及び１日用量約１ｍｇ〜約６０ｍｇのスタチンを投与することを含む方法である。
【００５５】
また別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、１日用量約５０ｍｇ〜約９００ｍｇのゲムカベン及び１日用量のスタチンを投与することを含み、スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである、方法である。別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、１日用量約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇのゲムカベン及び１日用量のスタチンを投与することを含み、スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチンである、方法である。さらに別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、１日用量約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇのゲムカベン及び１日用量のスタチンを投与することを含み、スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチンである、方法である。。
【００５６】
さらに別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に１日用量のゲムカベンを投与することを含む方法である。
【００５７】
さらに別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法であって、対象に、１日用量約５０ｍｇ〜約６００ｍｇ、または１５０ｍｇ〜約６００、または約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇ、または約１５０ｍｇ〜約３００ｍｇのゲムカベン及び１日用量のスタチンを投与することを含み、スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンであり、かつ：
ａ．スタチンがアトルバスタチンであり、アトルバスタチンの１日用量が約１０ｍｇ〜約６０ｍｇまたは約５ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｂ．スタチンがロスバスタチンであり、ロスバスタチンの１日用量が約５ｍｇ〜約２０ｍｇまたは約２．５ｍｇ〜約３０ｍｇである；
ｃ．スタチンがシンバスタチンであり、シンバスタチンの１日用量が約１０ｍｇ〜約４０ｍｇまたは約５ｍｇ〜約６０である；
ｄ．スタチンがプラバスタチンであり、プラバスタチンの１日用量が約１０ｍｇ〜約８０ｍｇまたは約５ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｅ．スタチンがロバスタチンであり、ロバスタチンの１日用量が約２０ｍｇ〜約４０ｍｇまたは約１０ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｆ．スタチンがフルバスタチンであり、フルバスタチンの１日用量が約２０ｍｇ〜約８０ｍｇまたは約１ｍｇ〜約６０ｍｇである；または
ｇ．前記スタチンがピタバスタチンであり、ピタバスタチンの１日用量が約１ｍｇ〜約４ｍｇである、
方法である。
【００５８】
上記実施形態のいずれかでは、ゲムカベンの１日用量は、約５０ｍｇ〜約６００ｍｇである。上記の実施形態の一部では、ゲムカベンの１日用量は、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、または６００ｍｇである。
【００５９】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、アトルバスタチンの１日用量は約１０ｍｇ〜約４０ｍｇである。
【００６０】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、ロスバスタチンの１日用量は約１０〜約２０ｍｇである。
【００６１】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、シンバスタチンの１日用量は約１０ｍｇ〜約２０ｍｇである。
【００６２】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、プラバスタチンの１日用量は約１０ｍｇ〜約４０ｍｇである。
【００６３】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、ロバスタチンの１日用量は約４０ｍｇである。
【００６４】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、フルバスタチンの１日用量は約２０ｍｇ〜約４０ｍｇである。
【００６５】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、ピタバスタチンの１日用量は約１ｍｇ〜約３ｍｇである。
【００６６】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態のいずれかでは、スタチン及びゲムカベンは固定用量配合剤として投与され得る。
【００６７】
本発明の一部の実施形態では、対象は家族性複合型高脂血症（ＦＣＨＬ）を有する。
【００６８】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、対象の血漿トリグリセリドレベルが、ゲムカベン及びスタチンの投与から８週間以内に１５０ｍｇ／ｄｌ未満に減少する。
【００６９】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の別の実施形態では、対象の血漿ＬＤＬコレステロールレベルが、ゲムカベン及びスタチンの投与から８週間以内に１３０ｍｇ／ｄｌ未満に減少する。
【００７０】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法のさらに別の実施形態では、ゲムカベン及びスタチンの投与から８週間以内に、対象の血漿トリグリセリドレベルが１５０ｍｇ／ｄｌ未満に減少し、対象のＬＤＬコレステロールレベルが１３０ｍｇ／ｄｌ未満に減少する。
【００７１】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、治療後に対象のＨＤＬコレステロールレベルが増加する。
【００７２】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、対象のミオパシーのリスクは、高用量のスタチンを単体で投与する場合のリスクより減少する。
【００７３】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、対象の筋炎のリスクは、高用量のスタチンを単体で投与する場合のリスクより減少する。
【００７４】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、対象の横紋筋融解症のリスクは、高用量のスタチンを単体で投与する場合のリスクより減少する。
【００７５】
本発明の方法の実施形態のいずれかでは、対象は、追加的なコレステロール降下剤を投与され得る。一部の実施形態では、この追加的なコレステロール降下剤はコレステロール吸収阻害剤である。一部の実施形態では、このコレステロール吸収阻害剤はエゼチミブである。一部の実施形態では、この追加的なコレステロール降下剤はＰＣＫＳ９阻害剤である。
【００７６】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、対象の一次心血管イベントを有するリスクが減少する。
【００７７】
ＩＩｂ型高脂血症を有する対象を治療する方法の実施形態の一部では、対象の二次心血管イベントを有するリスクが減少する。別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する患者を治療する方法であって、対象に、１日用量約１５０ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または６０ｍｇからなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与することを含む方法である。
【００７８】
また別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する患者を治療する方法であって、対象に、１日用量約３００ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または６０ｍｇからなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与することを含む方法である。
【００７９】
また別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する患者を治療する方法であって、対象に、１日用量約４５０ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または６０ｍｇからなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与することを含む方法である。
【００８０】
別の実施形態は、ＩＩｂ型高脂血症を有する患者を治療する方法であって、対象に、１日用量約６００ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または６０ｍｇからなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与することを含む方法である。
【００８１】
本発明の第２の態様は、対象における肝脂肪の量または肝脂肪蓄積を減少させる方法であって、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。第２の態様における一部の実施形態では、当該方法は、肝脂肪化を減少させるまたは防止するように対象を治療する方法であって、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法である。第２の態様における一実施形態は、対象における脂肪肝疾患を治療する方法であって、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法である。別の実施形態は、肝疾患を治療する方法であって、当該肝疾患が非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）である、方法である。第２の態様における一部の実施形態では、当該方法は、肝疾患を防止するまたは肝疾患の進行速度を減少させるように対象を治療する方法である。一部の実施形態では、当該肝疾患は非アルコール性肝脂肪症（ＮＡＳＨ）である。一部の実施形態では、当該肝疾患はアルコール性肝脂肪症である。本発明の第２の態様における一部の実施形態では、当該対象はＩＩｂ型高脂血症を有する。一部の実施形態では、当該患者はＦＣＨＬを有する。第２の態様における実施形態のいずれかでは、対象は脂肪肝（肝脂肪化）を発生するリスク因子を有する可能性があり、当該リスク因子とは、対象が、代謝症候群、２型糖尿病、耐糖能障害、肥満、脂質異常症、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ感染、または代謝障害（例えば、ウィルソン病、糖原貯蔵症、またはガラクトース血症）を有することである。一部の実施形態では、当該患者は糖尿病を有する。一部の実施形態では、当該患者は炎症状態を有する。一部の実施形態では、当該患者は、性別、年齢、及び身長に対する正常値を上回る高いボディーマス指数を有する。
【００８２】
第２の態様における一部の実施形態では、当該方法は、単剤療法としてのゲムカベンを患者に投与することにより、患者の肝臓脂肪の蓄積を減少させる方法である。一部の実施形態では、ゲムカベンは１種以上の追加的な治療剤と共に投与される。一部の実施形態では、この１種以上の治療剤はスタチンである。一部の実施形態では、当該スタチンは、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである。
【００８３】
第２の態様における実施形態のいずれかでは、対象における肝臓脂肪の蓄積を防止するまたは減少させる方法は、必要とする対象に、１日用量約５０ｍｇ〜約９００ｍｇのゲムカベンを投与することを含む。
【００８４】
第２の態様における別の実施形態は、対象における肝脂肪の蓄積を防止するまたは減少させる方法であって、必要とする対象に、１日用量約５０ｍｇ〜約９００ｍｇのゲムカベンを１日用量約１ｍｇ〜約８０ｍｇのスタチンと組み合わせて投与することを含む方法である。
【００８５】
第２の態様における別の実施形態は、対象における肝脂肪の蓄積を減少させる方法であって、必要とする対象にゲムカベンをスタチンと組み合わせて投与することを含み、対象に投与されるゲムカベンの１日用量が１日当たり約５０ｍｇ〜約９００ｍｇであり、スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである、方法である。
【００８６】
対象における肝脂肪の蓄積を防止するまたは減少させる方法における実施形態のいずれかでは、ゲムカベンの１日用量は約５０ｍｇ〜約９００ｍｇである。
【００８７】
対象における肝脂肪の蓄積を減少させる方法におけるいずれかの実施形態では、ゲムカベンの１日用量は１５０ｍｇ、３００ｍｇ、４５０ｍｇ、または６００ｍｇである。
【００８８】
対象における肝脂肪の蓄積を減少させる方法における実施形態のいずれかでは、アトルバスタチンの１日用量は約１０ｍｇ〜約８０ｍｇである。
【００８９】
対象における肝脂肪の蓄積を減少させる方法におけるいずれかの実施形態では、ロスバスタチンの１日用量は約５〜約４０ｍｇである。
【００９０】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法におけるいずれかの実施形態では、シンバスタチンは約１０ｍｇ〜約２０ｍｇである。
【００９１】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法におけるいずれかの実施形態では、プラバスタチンの１日用量は約１０ｍｇ〜約４０ｍｇである。
【００９２】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法におけるいずれかの実施形態では、ロバスタチンの１日用量は約２０〜約４０ｍｇである。
【００９３】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法におけるいずれかの実施形態では、フルバスタチンの１日用量は約２０ｍｇ〜約４０ｍｇである。
【００９４】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法におけるいずれかの実施形態では、ピタバスタチンの１日用量は約１ｍｇ〜約３ｍｇである。
【００９５】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法におけるいずれかの実施形態では、スタチン及びゲムカベンは固定用量配合剤として投与され得る。
【００９６】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法における一部の実施形態では、対象の肝疾患の発生リスクが減少する。
【００９７】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法における一部の実施形態では、対象は肝疾患を有する。
【００９８】
肝脂肪の蓄積を減少させる方法における一部の実施形態では、当該脂肪はトリグリセリドである。
【００９９】
一部の実施形態では、当該肝疾患は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。
【０１００】
一部の実施形態では、当該肝疾患は非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）である。
【０１０１】
一部の実施形態では、当該肝疾患は肝線維症である。
【０１０２】
一部の実施形態では、当該肝疾患は肝臓の炎症である。
【０１０３】
一部の実施形態では、当該肝疾患は肝硬変である。
【０１０４】
本発明の第２の態様における一実施形態では、対象は、１日用量約７５ｍｇのゲムカベン及び１〜８０ｍｇの１日用量で１日用量のスタチンを投与される。
【０１０５】
第２の態様における特定の実施形態では、対象は、１日用量約１５０ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、または８０からなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与される。
【０１０６】
第２の態様における別の実施形態では、対象は、１日用量約３００ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または６０ｍｇからなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与される。
【０１０７】
第２の態様における特定の実施形態では、対象は、１日用量約４５０ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または６０ｍｇからなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与される。
【０１０８】
第２の態様における別の実施形態では、対象は、１日用量約６００ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または６０ｍｇからなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与される。
【０１０９】
第２の態様における別の実施形態では、対象は、１日用量約９００ｍｇのゲムカベンと、１日用量が１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、または６０ｍｇからなる群から選択されるアトルバスタチンとを投与される。
【０１１０】
本発明の第２の態様における好ましい実施形態では、対象は、１日用量約４５０ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。別の好ましい実施形態では、対象は、１日用量約４５０ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。別の好ましい実施形態では、対象は、１日用量約４５０ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。
【０１１１】
本発明の第２の態様における好ましい実施形態では、対象は、１日用量約３００ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。別の好ましい実施形態では、対象は、１日用量約３００ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。別の好ましい実施形態では、対象は、１日用量約３００ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。
【０１１２】
本発明の第２の態様における好ましい実施形態では、対象は、１日用量約１５０ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。別の好ましい実施形態では、対象は、１日用量約１５０ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。別の好ましい実施形態では、対象は、１日用量約１５０ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇから選択される１日用量のスタチンを投与される。
【０１１３】
第２の態様における一部の実施形態では、当該方法は、追加的な治療剤を投与することをさらに含み、当該追加的な治療剤は、ＮＡＳＨを治療するための薬物である。一部の実施形態では、当該追加的な薬剤は、シムツズマブ、ＧＳ−４９９７、ＧＳ−９７４、ＧＳ−０９７６、ＩＮＴ−４７オベチコール酸、またはセニクリビロックである。
【０１１４】
第２の態様における実施形態Ａでは、本発明は、肝脂肪症、ＮＡＦＬＤ、またはＮＡＳＨを治療または防止する方法を含み、当該方法は、必要とする対象に有効量の式（Ｉ）の化合物：
【化２】
2018536710.tif 000005
（Ｉ）、
または医薬的に許容される塩もしくは水和物を投与することを含む
（式中、
（ａ）ｍは、それぞれ独立して、０〜５を範囲とする整数であり、
（ｂ）ｎは、それぞれ独立して、３〜７を範囲とする整数であり、
（ｃ）Ｘは、−（ＣＨ２）ｚ−、−Ｏ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−、−ＮＨ−、または−Ｓ−（ｚは、０〜４の整数である）であり、
（ｄ）Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、フェニル、ベンジルであり、あるいは、Ｒ１及びＲ２ならびにこれらの両方が結合する炭素は、一緒になって（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成し、
（ｅ）Ｒ１１及びＲ１２ならびにこれらの両方が結合する炭素は、一緒になって、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成し、
（ｆ）Ｙ１及びＹ２は、それぞれ独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ３Ｈ、
【化３】
2018536710.tif 000006
【化４】
2018536710.tif 000007
であり、
式中、
（ｉ）Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、フェニル、またはベンジルであり、かつ非置換であるか、または１つ以上のハロ、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、もしくはフェニル基で置換され、
（ｉｉ）Ｒ４は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルであり、かつ非置換であるか、または１つ以上のハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、もしくはフェニル基で置換され、
（ｉｉｉ）Ｒ５は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルである）。
【０１１５】
例示的な式（Ｉ）の化合物において、Ｙは、それぞれ独立して、ＯＨ、ＣＯＯＲ３、またはＣＯＯＨである。
【０１１６】
他の式（Ｉ）の化合物は、ｍが０である化合物である。
【０１１７】
他の式（Ｉ）の化合物は、ｍが１である化合物である。
【０１１８】
他の式（Ｉ）の化合物は、ｎが４である化合物である。
【０１１９】
他の式（Ｉ）Ｉの化合物は、ｎが５である化合物である。
【０１２０】
他の式（Ｉ）の化合物は、ｚが０である化合物である。
【０１２１】
他の式（Ｉ）の化合物は、ｚが１である化合物である。
【０１２２】
他の式（Ｉ）の化合物は、Ｙ１及びＹ２がそれぞれ独立して（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルである化合物である。
【０１２３】
他の式（Ｉ）の化合物は、Ｙ１及びＹ２がそれぞれメチルである化合物である。
【０１２４】
他の式（Ｉ）の化合物は、Ｒ１及びＲ２ならびにこれらの両方が結合する炭素がそれぞれ、一緒になって（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成する化合物である。
【０１２５】
第２の態様における実施形態Ｂでは、本発明は、肝脂肪症、ＮＡＦＬＤ、またはＮＡＳＨ治療または防止する方法であって、必要とする対象に有効量の式（ＩＩ）の化合物：
【化５】
2018536710.tif 000008
（ＩＩ）、
または医薬的に許容される塩もしくは水和物を投与することを含む方法である
（式中、
（ａ）ｍは、それぞれ独立して、０〜５を範囲とする整数であり、
（ｂ）ｎは、それぞれ独立して、３〜７を範囲とする整数であり、
（ｃ）Ｘは、−（ＣＨ２）ｚ−、−Ｏ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）−、−ＮＨ−、または−Ｓ−（ｚは、０〜４の整数である）であり、
（ｄ）Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、フェニル、ベンジルであり、あるいは、Ｒ１及びＲ２ならびにこれらの両方が結合する炭素は、一緒になって（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成し、
（ｅ）Ｒ１１及びＲ１２ならびにこれらの両方が結合する炭素は、一緒になって、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成し、
（ｆ）Ｙ１及びＹ２は、それぞれ独立して、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ３Ｈ、
【化６】
2018536710.tif 000009
【化７】
2018536710.tif 000010
【化８】
2018536710.tif 000011
【化９】
2018536710.tif 000012
であり、
式中、
（ｉ）Ｒ３は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニル、フェニル、またはベンジルであり、かつ非置換であるか、または１つ以上のハロ、ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、もしくはフェニル基で置換され、
（ｉｉ）Ｒ４は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルであり、かつ非置換であるか、または１つ以上のハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、もしくはフェニル基で置換され、
（ｉｉｉ）Ｒ５は、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルである）。
【０１２６】
例示的な式（ＩＩ）の化合物において、Ｙは、それぞれ独立して、ＯＨ、ＣＯＯＲ３、またはＣＯＯＨである。
【０１２７】
他の式（ＩＩ）の化合物は、ｎが４である化合物である。
【０１２８】
他の式（ＩＩ）の化合物は、ｎが５である化合物である。
【０１２９】
他の式（ＩＩ）の化合物は、ｚが０である化合物である。
【０１３０】
他の式（ＩＩ）の化合物は、ｚが１である化合物である。
【０１３１】
他の式（ＩＩ）の化合物は、Ｙ１及びＹ２がそれぞれ独立して（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルである化合物である。
【０１３２】
他の式（ＩＩ）の化合物は、Ｙ１及びＹ２がそれぞれメチルである化合物である。
【０１３３】
他の式（ＩＩ）の化合物は、Ｒ１及びＲ２ならびにこれらの両方が結合する炭素がそれぞれ、一緒になって（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアキル基を形成する化合物である。
【０１３４】
実施形態Ｂによる一実施形態では、当該化合物はベンペド酸である。
【０１３５】
実施形態Ｂによる一実施形態では、当該化合物は以下の構造：
【化１０】
2018536710.tif 000013
またはその医薬的に許容される塩もしくは水和物を有する。
【０１３６】
実施形態Ｂによる別の実施形態では、当該化合物はゲムカベンまたはその医薬的に許容される塩である。
【０１３７】
実施形態Ｂによる一実施形態では、当該化合物はゲムカベンのモノカルシウム塩である。
【０１３８】
実施形態Ｂによるまた別の実施形態では、当該化合物はゲムカベンのモノカルシウム塩の水和物である。
【０１３９】
実施形態Ｂによる別の実施形態では、当該化合物またはその医薬的に許容される塩は、医薬的に許容されるビヒクルまたは担体をさらに含む組成物中に存在する。
【０１４０】
実施形態Ｂによるさらなる実施形態では、当該組成物は経口投与用に製剤化される。
【０１４１】
実施形態Ｂによるなおさらなる実施形態では、当該組成物はタブレットまたはカプセルの形態をとる。
【０１４２】
実施形態Ｂによる一実施形態では、当該化合物またはその医薬的に許容される塩は、約５０ｍｇ〜約９００ｍｇの量で組成物中に存在する。
【０１４３】
実施形態Ｂによる一実施形態では、当該化合物またはその医薬的に許容される塩は、約１ｍｇ〜約１，０００ｍｇの量で組成物中に存在する。
【０１４４】
本発明の第３の態様は、ゲムカベン及びスタチンの固定用量配合剤である。
【０１４５】
スタチン及びゲムカベンの固定用量配合剤は、ＩＩｂ型高脂血症、高度な肝脂肪、ＮＡＦＬＤ、またはＮＡＳＨ、さらにこれらの状態に関連する合併症、加えてＬＤＬ−Ｃ及び／またはトリグリセリドレベルの降下を要する他の状態、のうちの１つ以上を有する対象の防止及び治療に有用である。固定用量配合剤を使用することにより、用量における各構成成分の放出速度をコントロールすることができる。スタチン、特に高用量のスタチンは、安全性に関わる合併症につながり得るため、スタチンの制御された緩速な放出は有益であり、かつ高用量のスタチンに関連した骨格筋の安全性におけるリスクを緩和することができる。また固定用量配合剤は服用に好都合であり、かつ複数の薬剤を服用する場合における誤投与のリスクを減少させ、さらに遵守状況も向上させ得る。
【０１４６】
本開示の固定用量配合剤は、特定の量でゲムカベン及びスタチンを含む医薬組成物を含む。本開示の固定用量配合剤は、本明細書に記載される別々に投与される場合と同じ投薬量のＡＰＩを提供する。
【０１４７】
本発明の第３の態様における一実施形態は、約５０ｍｇ〜約７５０ｍｇの量のゲムカベン及び約１ｍｇ〜約６０ｍｇのスタチンを含む固定用量配合剤である。
【０１４８】
一実施形態では、固定用量配合剤は、ゲムカベンの量が約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇであり、スタチンが、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンであり、かつ
ａ．アトルバスタチンの量が約１０ｍｇ〜約６０ｍｇである；
ｂ．ロスバスタチンの量が約５ｍｇ〜約２０ｍｇである；
ｃ．シンバスタチンの量が約１０ｍｇ〜約４０ｍｇである；
ｄ．プラバスタチンの量が約１０ｍｇ〜約８０ｍｇである；
ｅ．ロバスタチンの量が約２０ｍｇ〜約４０ｍｇである；
ｆ．フルバスタチンの量が約２０ｍｇ〜約８０ｍｇである；または
ｇ．ピタバスタチンの量が約１ｍｇ〜約４ｍｇである。
【０１４９】
本発明の第３の態様における一部の実施形態では、ゲムカベンの量は約３００ｍｇ〜約６００ｍｇである。
【０１５０】
一部の実施形態では、ゲムカベンの量は３００ｍｇまたは６００ｍｇである。
【０１５１】
一部の実施形態では、アトルバスタチンの量は約１０ｍｇ〜約４０ｍｇである。
【０１５２】
他の実施形態では、ロスバスタチンの量は約１０〜約２０ｍｇである。
【０１５３】
さらに他の実施形態では、シンバスタチンの量は約１０ｍｇ〜約２０ｍｇである。
【０１５４】
一部の実施形態では、プラバスタチンの量は約１０ｍｇ〜約２０ｍｇである。
【０１５５】
他の実施形態では、ロバスタチンの量は約４０ｍｇである。
【０１５６】
他の実施形態では、フルバスタチンの量は約２０ｍｇ〜約４０ｍｇである。
【０１５７】
他の実施形態では、ピタバスタチンの量は約１ｍｇ〜約３ｍｇである。
【０１５８】
一部の実施形態では、固定用量配合剤は３００ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇのアトルバスタチンを含む。一部の実施形態では、固定用量配合剤は３００ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇのアトルバスタチンを含む。一部の実施形態では、固定用量配合剤は３００ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇのアトルバスタチンを含む。
【０１５９】
一部の実施形態では、固定用量配合剤は６００ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇのアトルバスタチンを含む。一部の実施形態では、固定用量配合剤は６００ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇのアトルバスタチンを含む。一部の実施形態では、固定用量配合剤は６００ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇのアトルバスタチンを含む。
【０１６０】
一部の実施形態では、固定用量配合剤は９００ｍｇのゲムカベン及び１０ｍｇのアトルバスタチンを含む。一部の実施形態では、固定用量配合剤は９００ｍｇのゲムカベン及び２０ｍｇのアトルバスタチンを含む。一部の実施形態では、固定用量配合剤は９００ｍｇのゲムカベン及び４０ｍｇのアトルバスタチンを含む。一部の実施形態では、固定用量配合剤はタブレットの形態をとる。
【０１６１】
製剤化
本発明において有用な化合物は、医薬組成物として製剤化し、ヒト対象などの対象に、選択された投与経路（すなわち、経口、経皮、及び非経口）に適合した様々な形態で投与することができる。このような組成物及びこのような組成物を調製する方法は周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）に見いだすことができる。例えば、ゲムカベンの典型的な製剤法は米国特許第５，６４８，３８７号に記載されている。一実施形態では、ゲムカベンは、単体で、またはスタチンと組み合わせて、一般的な添加剤及び担体（例えば、デンプン、結合剤、希釈剤など）と共に製剤化され、好都合な経口投与用にタブレットに成形されるかまたはゼラチンカプセルに封入される。
【０１６２】
本発明の第４の態様は、固定用量配合剤を含むキットであって、約１ｍｇ〜約６０ｍｇのスタチン及び約１５０ｍｇ〜約９００ｍｇのゲムカベンならびにその使用説明書を含むキットを提供する。一部の実施形態において、スタチンは、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、及びピタバスタチン、またはこれらの医薬的に許容される塩から選択される。一部の実施形態では、当該スタチンはアトルバスタチンである。
【０１６３】
本発明の第５の態様は、対象における線維症を軽減する方法であって、ゲムカベンを単体で、またはスタチンと組み合わせて投与することを含む方法を提供する。第５の態様における一実施形態は、必要とする対象における肝線維症を軽減する方法であって、対象にゲムカベンを投与することを含む方法である。第５の態様における別の実施形態は、必要とする対象の肝線維症を軽減する方法であって、ＮＡＳＨを有する対象にゲムカベンを投与することを含む方法である。第５の態様における一部の形態では、投与されるゲムカベンの１日用量は約５０ｍｇ〜約９００ｍｇである。他の実施形態では、ゲムカベンの１日用量は約１５０ｍｇ〜約６００ｍｇである。さらに別の実施形態では、ゲムカベンの１日用量は１５０ｍｇ、３００ｍｇ、４５０、または６００ｍｇである。第５の態様における別の実施形態は、必要とする対象の肝線維症を軽減する方法であって、ゲムカベンをスタチンと組み合わせて投与することを含む方法である。様々な実施形態では、当該スタチンは、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである。
【０１６４】
本発明の第６の態様は、対象における血漿フィブリノーゲンレベルを減少させる方法であって、対象にゲムカベンを投与することを含む方法を提供する。本発明の第６の態様における一実施形態は、フィブリノーゲンレベルが３００ｍｇ／ｄＬ超である、必要としている対象における血漿フィブリノーゲンレベルを減少させる方法であって、対象にゲムカベンを投与することを含む方法である。本発明の第６の態様における別の実施形態は、フィブリノーゲンレベルが４００ｍｇ／ｄＬ超である、必要としている対象における血漿フィブリノーゲンレベルを減少させる方法であって、対象にゲムカベンを投与することを含む方法である。第６の態様における一部の実施形態では、当該方法は、対象に５０ｍｇ〜９００ｍｇの用量のゲムカベンを投与することを含む。一部の実施形態では、ゲムカベンは１５０〜６００ｍｇの用量で投与される。一部の実施形態では、ゲムカベンの用量は５０、７５、１５０、３００、４５０、６００、または９００ｍｇである。第６の態様における一実施形態は、必要とする対象における血漿フィブリノーゲンレベルを減少させる方法であって、対象にゲムカベンをスタチンと組み合わせて投与することを含む方法である。別の実施形態は、対照の血漿フィブリノーゲンレベルを減少させる方法であって、対象にゲムカベンをスタチンと組み合わせて投与することを含み、スタチンがアトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンである、方法である。第６の態様における別の実施形態は、必要とする対象における血漿フィブリノーゲンを減少させる方法であって、対象に５０ｍｇ〜９００ｍｇの１日用量のゲムカベン及び１ｍｇ〜８０ｍｇの１日用量のスタチンを投与することを含む方法である。また別の実施形態は、必要とする対象における血漿フィブリノーゲンを減少させる方法であって、対象に３００ｍｇ、６００ｍｇ、または９００ｍｇの１日用量のゲムカベン及び１０ｍｇ、４０ｍｇ、または８０ｍｇの１日用量のアトルバスタチンを投与することを含む方法である。さらに別の実施形態では、必要とする対象における血漿フィブリノーゲンを減少させる方法であって、対象に６００ｍｇの１日用量のゲムカベン及び１０ｍｇの１日用量のアトルバスタチンを投与することを含む方法である。
【０１６５】
第６の態様における実施形態の一部では、対象における一次心血管イベントのリスクが減少する。第６の態様における他の実施形態では、対象の二次心血管イベントのリスクが減少する。第６の態様における実施形態のいずれかでは、対象は、追加的な治療剤を投与され得る。一部の実施形態では、この追加的な治療剤は、抗凝固剤または脂質制御剤である。一部の実施形態では、当該抗凝固剤は、アスピリン、ダビガトラン、リバーロキサバン、アピキサバン  クロピドグレル、チエノピリジン、ワルファリン（クマジン）アセノクマロール、フェンプロクーモン、アトロメンチン、フェニンジオン、エドキサバン、ベトリキサバン、レタキサバン  エリバキサバン  ヒルジン、レピルジン、ビバリルジン、アルガトロバン、ダビガトラン、キシメラガトラン、バトロキソビン、ヘメンチン、ヘパリン（複数可）、及びビタミンＥである。第６の態様における別の実施形態では、必要とする対象における血漿フィブリノーゲンレベルを減少させる方法であって、対象に、５０ｍｇ〜９００ｍｇの１日用量のゲムカベン及び１ｍｇ〜８０ｍｇの１日用量のスタチンを投与して、糖尿病、耐糖能障害、代謝症候群、肥満、がん、敗血症、睡眠時無呼吸、心房細動、深部静脈血栓症、脳卒中、凝固亢進状態、心筋梗塞、肺塞栓症、再狭窄、高トリグリセリド血症、高血圧、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、または心血管疾患を有する対象における凝固合併症を予防的に減少させるまたは予防することを含む方法である。
【０１６６】
第６の態様における別の実施形態は、必要とする対象における凝血減少のために血漿フィブリノーゲンを減少させる方法であって、対象に５０ｍｇ〜９００ｍｇの１日用量のゲムカベンを投与することを含む方法である。第６の態様における別の実施形態は、必要とする対象における予防的凝血減少のために血漿フィブリノーゲンを減少させる方法であって、対象に５０ｍｇ〜９００ｍｇの１日用量のゲムカベンを投与することを含む方法である。一部の実施形態では、ゲムカベンはスタチンと組み合わせて投与される。一部の実施形態では、当該スタチンは、アトルバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、フルバスタチン、またはピタバスタチンであり、スタチンの１日用量は１ｍｇ〜８０ｍｇである。第６の態様における一実施形態は、必要とする対象における血漿フィブリノーゲンを減少させる方法であって、対象に５０ｍｇ〜９００ｍｇの１日用量のゲムカベンを投与して末梢血管疾患、末梢動脈疾患、微小血管疾患、末梢動脈閉塞性疾患、または重症下肢虚血を治療することを含む方法である。
【実施例】
【０１６７】
実施例１
シトクロムＰ４５０酵素は、ヒトの薬物代謝及び異物代謝を媒介する。
例えば、一部のスタチン及びフィブラートは、自らの異化プロセスの一部としてシトクロムＰ４５０の３Ａ４アイソフォームを使用または活性化する。一緒に投与した場合、スタチン及びフィブラートは、シトクロムＰ４５０の３Ａ４アイソフォームに対し競合し、その結果薬物間の相互作用がもたらされ、血漿中の各薬剤レベルに影響が生じる。
【０１６８】
ゲムカベンが同様の薬物間相互作用を有し得るかどうかを検討するため、１００、３００、及び１５００ｍＭのゲムカベンが、ヒトの薬物代謝及び異物代謝を媒介する７種の主要なシトクロムＰ４５０酵素：ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、及びＣＹＰ３Ａ４を阻害する能力を、アイソフォーム選択性マーカー基質及びヒト肝臓ミクロソーム調製物を用いて検討した。
【０１６９】
一連のプローブ基質を使用して、ゲムカベンの阻害活性を、このプローブ基質のシトクロムＰ４５０依存アイソフォーム選択性代謝経路について評価した。本研究のために、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｂａｎｋからヒト肝臓のＨＬＭ１４１、ＨＬＭ１４３、及びＨＬＭ１４４を選択したミクロソームを用意し、ゲムカベン（１００、３００、及び１５００ｍＭ、すなわち３０．２、９０．７、及び４５３．６ｍｇ／ｍＬ）が、各プローブ基質の自らのＫｍにおける定義代謝経路を阻害する能力を定量した。唯一の例外はＣＹＰ１Ａ２であり、Ｋｍの約１．５ｍＭを下回る０．５ｍＭを濃度に使用した。他の各プローブに使用した実際の濃度は以下に明記する。実験的対照は、ゲムカベン不在下におけるプローブ基質による完全なミクロソームインキュベーションからなるものであった。定量は、対照及び種々のゲムカベン濃度のそれぞれについて、３重反復で行った。初回検討用に選択するゲムカベンの諸濃度は、ミクロソーム濃度が等しく、かつｉｎ  ｖｉｖｏで遭遇することが予想されるゲムカベンの濃度を顕著に超えると考えられる範囲を含むことを保証するように設計した。７種のアイソフォーム及び特定のアイソフォーム活性のモニターに使用した各プローブの代謝経路を、以下に収載する。
【０１７０】
ＣＹＰ１Ａ２：高濃度（０．５ｍＭ）の（Ｒ）−ワルファリンの６−ヒドロキシ化。反応のモニターは、定量ガスクロマトグラフィー／質量分析（ＧＣ／ＭＳ）により、内部標準として６−ヒドロキシワルファリン−（ｄ５−フェニル）を用いて行う。
【０１７１】
ＣＹＰ２Ａ６：クマリン（４μＭ）の７−ヒドロキシ化。反応のモニターは、ＨＰＬＣにより、蛍光検出を用いて行う。
【０１７２】
ＣＹＰ２Ｃ９：（Ｓ）−ワルファリン（４μＭ）の７−ヒドロキシ化。反応のモニターは、定量ＧＣ／ＭＳにより、内部標準として７−ヒドロキシワルファリン−（ｄ５−フェニル）を用いてモニターする。
【０１７３】
ＣＹＰ２Ｃ１９：（Ｓ）−メフェニトイン（５０μＭ）の４’−ヒドロキシ化。反応のモニターは、定量ＧＣ／ＭＳにより、内部標準としてメフェニトイン−（ｄ３−メチル）を用いて行う。
【０１７４】
ＣＹＰ２Ｄ６：デキストロメトルファン（５μＭ）のＯ−脱メチル化。反応のモニターは、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、蛍光検出を用いて行う。
【０１７５】
ＣＹＰ２Ｅ１：ｐ−ニトロフェノール（４０μＭ）からのｐ−ニトロカテコール形成。形成された生成物の量は、ＨＰＬＣによりモニターされる。
【０１７６】
ＣＹＰ３Ａ４：（Ｒ）−ワルファリン（０．５ｍＭ）の１０−ヒドロキシ化。反応のモニターは、定量ＧＣ／ＭＳにより、内部標準として１０−ヒドロキシワルファリン−（ｄ５−フェニル）を用いてモニターする。
【０１７７】
７種のヒトシトクロムＰ４５０アイソフォームに対し３種の濃度（１００、３００、及び１５００μＭ、すなわちそれぞれ３０．２、９０．７、及び４５３．６μｇ／ｍＬ）で試験したが、ゲムカベンはいずれのアイソフォームに対しても顕著には阻害していないように思われた。血漿−タンパク質結合は、ヒトの場合非線形であるが、本研究で使用した濃度のゲムカベンは、結合の研究で使用されるものより４倍上回る。最も高い使用濃度（１５００μＭ）では、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｄ６、及びＣＹＰ２Ｃ９に対する境界的（１０％〜２０％）阻害活性が存在するように思われた。これに対し、ＣＹＰ２Ｅ１は、わずかに（約２０％）強化されているように思われた。これらの結果が示唆することは、ゲムカベンと、試験したシトクロムＰ４５０アイソフォームの１つにクリアランスを依存する他の薬物との間で代謝ベースの臨床的相互作用が起こる可能性は、治療濃度のゲムカベンの場合、非常に低いということである。
【０１７８】
表３に示すように、主要なヒト肝臓シトクロムＰ４５０アイソフォームのＩＣ５０値は、１５００μＭ（４５３．６μｇ／ｍｌ）よりも大きい。
【表３】
2018536710.tif 000014
【０１７９】
実施例２
放射標識ゲムカベンの雄ラット組織内分布
放射標識ゲムカベンを投与したラットにおける吸収、分布、及び除去の研究により、ほとんど全ての薬物が、ゲムカベンの代謝及び除去に関与する臓器である肝臓及び腎臓内に分布し、筋肉には、ほとんどまたは全く分布がないことが実証された。
【０１８０】
本研究は、比放射能が４７．３μＣｉ／ｍｇの［１４Ｃ］ゲムカベンを用いて実施した。標識の位置（＊）を示した［１４Ｃ］ゲムカベンの構造を以下に示す。
【化１１】
2018536710.tif 000015
【０１８１】
０．４５ｍＬのエタノール及び４．０５ｍＬの水中０．５％メチルセルロースに標識薬物を溶解することにより、用量溶液を調整した。非標識ゲムカベンを添加して１０ｍｇ／ｋｇ溶液を得た。用量溶液の最終比放射能は、１０．３７μＣｉ／ｍｇであった。
【０１８２】
平均体重２０２ｇの雄ウィスターラットを終夜絶食させてから投与を行った。動物に単回経口（ＰＯ）用量の１０．０ｍｇ／ｋｇの［１４Ｃ］ゲムカベンを投与し（およそ２１μＣｉ／ラット）、投与後１、４、８、２４、４８、９６、または１９２時間時に２匹／時点をハロタン麻酔の過剰投与により屠殺した。死体をドライアイス／ヘキサン混合物で急速凍結させ、全身の薄切り及びオートラジオグラフィーのために用意した。５０μｍ厚さの薄切りを−２０℃で風乾し、ＢｉｏＭａｘサイエンティフィックイメージングフィルム（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｋｏｄａｋ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）またはオートラジオグラフィー露出用蛍光イメージングプレート（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に適用した。アナライザーの校正用に、炭素−１４標準物質（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）を代表的なフィルム及びプレート上に含ませた。処理済みフィルムをアナライザースキャナー（Ｌｏａｔｓ  ＩＮＱＵＩＲＹ画像分析システム、Ｌｏａｔｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｗｅｓｔｍｉｎｓｔｅｒ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）でデジタル化し、デジタルイメージの定量ビデオデンシトメトリー分析により、組織中に残存する放射能を定量した。イメージングプレートは、１週間露出した後にスキャンした。得られた電子的イメージを、分布の予備評価に使用した。
【０１８３】
表４は、１０ｍｇ／ｋｇの経口投与後、組織中に残存する［１４Ｃ］ゲムカベン放射性当量（ｒａｄｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）を示す。
【表４】
2018536710.tif 000016
定量化の下限＝０．１０μｇ／ｇ
ＢＬＱ：定量化レベル未満
【０１８４】
実施例３
アトルバスタチンの薬物動態に及ぼすスタチンとゲムカベンとの間の潜在的相互作用
スタチンとゲムカベンとの間の潜在的相互作用をさらに検討するため、複数用量のゲムカベン（３００及び９００ｍｇを１日１回［ＱＤ］）がアトルバスタチン（８０ｍｇ  ＱＤ）の定常状態における薬物動態に及ぼす効果について研究した。
【０１８５】
本試験は、健康な対象における、非盲検・複数投与・１シーケンス、３回治療のクロスオーバー研究であった。
【０１８６】
２０人の対象が以下の治療を受けた：（治療１）８０ｍｇアトルバスタチンＱＤを５日間；（治療２）８０ｍｇアトルバスタチンＱＤ及び３００ｍｇゲムカベンＱＤを１１日間（６〜１６日目）；（治療３）８０ｍｇアトルバスタチンＱＤ及び９００ｍｇゲムカベンＱＤを１１日間（１７〜２７日目）。薬剤は、各治療ごとに１日のうちのほぼ同じ時間に経口投与した。各用量は、８ｏｚの水と共に投与した。
【０１８７】
５、１６、及び２７日目の用量（複数可）の後に、アトルバスタチン及びアトルバスタチン代謝アッセイ用の連続血液サンプルを２４時間収集した。３ミリリットルの静脈血をヘパリンナトリウムを含有する採血管に採取した。血液サンプルの採取を、５、１６、及び２７日目の投薬前ならびに投薬後０．３３、０．６６、１、２、３、４、６、８、１２、及び２４時間時に行った。各収集後、できるだけ速やかに血液サンプルを遠心処理し、血漿を分離し、アトルバスタチン濃度のアッセイを行うまで７０℃で凍結保管した。
【０１８８】
８０ｍｇのアトルバスタチンを単体で、または３００及び９００ｍｇのゲムカベンと組み合わせて投与した場合は、健康なボランティアに対する忍容性が良好だった。アトルバスタチン及びアトルバスタチン代謝産物についてのＣｍａｘ、ｔｍａｘ、ＡＵＣ（０〜２４）、及びｔ１／２の値に基づけば、ゲムカベンはアトルバスタチンの薬物動態に重要な効果を及ぼさない。アトルバスタチンの薬物動態を表５に示し、アトルバスタチンの総分析対象物（アトルバスタチン及びその代謝産物）の薬物動態を表６に示す。
【表５】
2018536710.tif 000017
比=パーセンテージとして表される治療平均値の比(100%ｘ試験/参照)。
90%信頼区間=参照平均のパーセンテージとして表される治療平均値の比(試験/参照)の90%信頼区間推定値。
*=t1/2の値は、0〜24時間のデータのみに基づいており、真の終末相半減期よりも低く推定されている。そのため、これらの値は過去の研究の報告値よりも実質的に低い。
【０１８９】
ゲムカベンがアトルバスタチンの薬物動態に及ぼす効果の定量に加えて、ゲムカベンが代謝産物に及ぼす効果も定量した。ＡＵＣ（０〜２４）値に基づけば、８０ｍｇのアトルバスタチンを３００または９００ｍｇのゲムカベンと共に投与した後のアトルバスタチン総代謝産物への曝露は、８０ｍｇのアトルバスタチン単体への曝露に類似していた。平均ＡＵＣ（０〜２４）値の差は７％未満であった。試験／参照治療ＡＵＣ（０〜２４）値の比における９０％信頼区間は、ログ変換に基づいて８０％〜１２５％の範囲内であり、これはゲムカベンと総代謝産物との相互作用が存在しなかったことを示すものである。総分析対象物濃度がＭで表される場合、または活性分析対象物のアトルバスタチン、ｏ−ヒドロキシアトルバスタチン、及びｐ−ヒドロキシアトルバスタチンのみが分析の前に配合された場合に、同様の結果が観察された。
【表６】
2018536710.tif 000018
比＝パーセンテージとして表される治療平均値の比（１００％試験／参照）。
９０％信頼区間＝参照平均のパーセンテージとして表される治療平均値の比（試験／参照）の９０％信頼区間推定値。
＊＝ｔ１／２の値は、０〜２４時間のデータのみに基づいており、真の終末相半減期よりも低く推定されている。そのため、これらの値は過去の研究の報告値よりも実質的に低い。
【０１９０】
アトルバスタチン血漿濃度、アトルバスタチンラクトン濃度、オルト−ヒドロキシアトルバスタチン、オルト−ヒドロキシアトルバスタチンラクトン、パラ−ヒドロキシアトルバスタチン、及びパラ−ヒドロキシアトルバスタチンラクトンについての平均定常状態アトルバスタチン血漿の濃度−時間プロファイルを、図１Ａ〜１Ｅにグラフ形式で示す。平均定常状態におけるアトルバスタチン及び代謝産物の血漿の濃度−時間プロファイルを、グラフ形式で図１Ｇに示す。（８０ｍｇアトルバスタチン単体（黒丸）、８０ｍｇアトルバスタチン及び３００ｍｇゲムカベン（白丸）、及び８０ｍｇアトルバスタチン及び９００ｍｇゲムカベン（黒四角））
【０１９１】
ゲムカベンがシンバスタチンの薬物動態に及ぼす効果
【０１９２】
健康な成人男女対象に対し、１日１回の経口によるシンバスタチン用量を１５日間、１日１回の経口によるシンバスタチン及びゲムカベンの用量を１５日間、間に４週間の休薬期間を入れて投与した。
【０１９３】
採血（シンバスタチン）：１０ミリリットルの静脈血を、１５日目及び５７日目のシンバスタチン用量の前及びその後の０．５、１、２、３、４、６、８、１２、及び２４時間時に、ＥＤＴＡを含有する真空採血管に収集した。各時点において、血漿を回収し、２アリコートに分離し、一方をＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイに、もう一方をＥＩＡアッセイに用いた。採血後、サンプルを遠心処理し、血漿を分離し、薬物濃度の分析を行うまで−８０℃で凍結保管した。
【０１９４】
採血（ゲムカベン）：５ミリリットルの静脈血を、１５日目または５７日目のゲムカベン用量の前及びその後の０．５、１、２、３、４、８、１２、及び２４時間時に、７２ＵＳＰ単位のヘパリンナトリウムを含有するガラス製の真空採血管に採取した。採血後、サンプルを遠心処理し、血漿を分離し、分析を行うまで−２０℃で凍結保管した。
【０１９５】
表７は、８０ｍｇシンバスタチン単体（参照）、及び９００ｍｇゲムカベン（ＣＩ−１０２７）（試験）の投与後におけるＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤の薬物動態パラメーター値の概要を示す。
【表７】
2018536710.tif 000019
パラメーターは表４に記載。
比＝パーセンテージとして表される治療平均値の比（１００％×試験／参照）。
９０％信頼区間＝参照平均のパーセンテージとして表される治療平均値の比（試験／参照）の９０％信頼区間推定値。
【０１９６】
図１Ｈは、シンバスタチン（８０ｍｇ）を単体で（黒い印）、またはゲムカベン（６００ｍｇ）と組み合わせて（白い印）投与した後の平均の活性ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤濃度を示す。この結果は、ゲムカベンがＣｍａｘを降下させ、ただしＡＵＣには効果を及ぼさないことを示すものである。高強度用量のシンバスタチンの場合に、シンバスタチンまたはシンバスタチン代謝産物の異化作用に対するわずかな効果が観察された。（活性ＨＭＧ−Ｃｏ−Ａレダクターゼ阻害剤の濃度及びパラメーター値は、本アッセイで使用した標準物質のシンバスタチン酸に対するｎｇ当量／ｍＬとして報告している）
【０１９７】
実施例４
ゲムカベン及びスタチンの組合せが血漿のＬＤＬ−Ｃ、ＴＧ、及びＡｐｏＢのレベル降下に及ぼす効果。
８週間の二重盲検ランダム化プラセボ対照用量設定試験を行い、高コレステロール血症患者の治療におけるゲムカベンの有効性及び安全性を、単剤療法としてまたはアトルバスタチンとの組合せで評価した。第１の目的は、ゲムカベン３００、６００、及び９００ｍｇ／日を単剤療法としてまたはアトルバスタチン１０、４０、及び８０ｍｇ／日と組み合わせて高コレステロール血症患者（フレドリクソンのＩＩａ型及びＩＩｂ型）に投与する場合における、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）を下げることの有効性及び用量反応性を評価することであった。第２の目的は、ゲムカベンによる、高感度ｃ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ）、及びトリグリセリド（ＴＧ）、及びアポリポタンパク質Ｂ（アポＢ）の調節を評価することであった。
【０１９８】
対象をランダム化して、プラセボ、単剤療法としての薬剤、または種々の用量レベルとして配合された薬剤を、８週間投与した。治療期間の前及び最後に、安全性及び脂質変数（血漿トリグリセリド、ＬＤＬ−Ｃ、及びアポＢレベルを含む）を評価した。
【０１９９】
ＬＤＬ−Ｃレベル≧１３０ｍｇ／ｄｌ及びトリグリセリドレベル≧１５０ｍｇ／ｄＬを有する対象におけるＬＤＬ−Ｃ及びＴＧの下位群分析。（ＩＩｂ型）８０ｍｇ未満のアトルバスタチン及びゲムカベン（３００、６００、または９００ｍｇ）を投与した患者において、加算性を上回るトリグリセリドの減少が明らかになった。組合せ療法によるトリグリセリドの減少は、アトルバスタチンまたはゲムカベンの単剤療法によるいずれの減少よりもはるかに大きかった。加えて、これらの組合せはさらに、ＬＤＬ−Ｃ及びアポＢの減少ももたらした。
【０２００】
本研究は、高コレステロール血症患者における、並行群間比較、４×４要因計画、ランダム化、二重盲検、プラセボ対照の多施設試験であった。以下の表は、ＩＩｂ型高脂血症を有するとして分類された対象のサブセットを反映している。
【０２０１】
表８は、８週間、二重盲検治療期間に使用された４×４要因計画を示す。
【表８】
2018536710.tif 000020
【０２０２】
本研究には、３つの期間：（１）必要な場合は脂質薬剤休薬の受診、（２）認定期間、（３）８週間二重盲検治療期間が存在した。患者を等しい確率でランダム化して、上述（表６）のような様々な用量のゲムカベン及び／またはアトルバスタチン及び／またはプラセボを含む１６種の薬物治療のうちの１種を受けさせた。試験薬剤を、１日１回（ＱＤ）午前中に経口摂取させた。患者、現場の職員、及びスポンサーには、８週間の治療期間中、治療及び血漿脂質レベルを知らせないようにした。上表の「ｎ」は、本研究における、ベースラインがＬＤＬ−Ｃ≧１３０ｍｇ／ｄＬ及びＴＧ＞１５０ｍｇ／ｄＬの患者（ＩＩｂ型患者）の数を表す。
【０２０３】
研究用薬剤を、４週間間隔で、１日分量が別々になった７日用トレーに分配した。患者は、適切な１日分量に対応する全てのタブレットを午前中に摂取するように指示を受けた。ゲムカベン及び対応プラセボは、３００ｍｇタブレットとして提供した。アトルバスタチン及び対応プラセボは、１０ｍｇまたは４０ｍｇタブレットとして提供した。研究用薬剤を、１日当たり６個のタブレットを含む１日分量が別々になった、７日分のブリスター包装でパッケージ化した。
【０２０４】
各受診時に収集した血液サンプルに基本的な脂質評価を実施した。総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、及びトリグリセリドについて、ベースライン及びベースラインからのパーセント変化をクロスオーバーＡＮＯＶＡモデルを用いて分析した。期間的効果の可能性を考慮して、第１及び第２の期間データについては、治療の効果のみが一貫したＡＮＯＶＡモデルを用いて別々に分析も行った。
【０２０５】
結果を図２Ａ〜２Ｆに示す。
【０２０６】
１０ｍｇのアトルバスタチンと３００、６００ｍｇのゲムカベンとの組合せは、アトルバスタチン単体の場合よりもそれぞれ１０．５％、１７．３％さらにＴＧレベルを降下させた。（中央値％変化）３００、６００、及び９００の用量のゲムカベンは、１０ｍｇのアトルバスタチン単体に比べてＬＤＬ−Ｃ及びアポＢをさらに降下させた。
【０２０７】
４０ｍｇのアトルバスタチンと３００、６００、及び９００ｍｇのゲムカベンとの組合せは、アトルバスタチン単体の場合よりも、それぞれ４２．６％、３１．７％、２１．８％さらにＴＧレベルを降下させた。（中央値％変化）
【０２０８】
実施例５
初代ラット肝細胞培養物におけるゲムカベン、アトルバスタチン、及びアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤がコレステロール及びトリグリセリド合成に及ぼす効果
全ての実験で、Ｒａｍｈａｒａｃｋ  Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ  １９９５；３６：１２９４−３０４に基づいて単離及び培養した初代ラット肝細胞培養物（スプラーグ−ドーリー）を使用した。プレーティングから１日後、細胞のインキュベートを３重反復で、ウシ胎児血清を引いた実質細胞培地において指示濃度の化合物と共に、６ウェルプレートのウェル当たり１．０ｍＬで、ＤＭＳＯを１％の最終濃度にして行った。細胞を３７℃で２時間、９５％  Ｏ２／５％  ＣＯ２組織培養インキュベーター内でインキュベートした。インキュベート期間の最後に、培地を、ウシ胎児血清を引いた実質細胞培地において指示濃度の化合物及び３０μＣｉの１−［１４Ｃ］アセテート（Ａｍｅｒｓｈａｍ）からなる標識培地、ウェル当たり１．０ｍＬに変え、３７℃で４時間組織培養インキュベーター内でインキュベートした。標識期間の最後に、細胞を室温のＤ−ＰＢＳ、ウェル当たり２．０ｍＬで洗浄し、１．０ｍＬの０．７５Ｎ  ＨＣｌで反応を停止させた。細胞を掻爬し、１５ｘ４５ｍｍのガラス製バイアル（１ドラムサイズ）に移した。ウェルを１．０ｍＬのメタノールで洗浄し、掻爬した細胞を添加し、次に２．０ｍＬのクロロホルムを添加した。バイアルにキャップをして５秒間ボルテックスし、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＧＳ  ６ＫＲ遠心機内で３，６００ｒｐｍ、１５分間、室温で遠心処理して相を分離した。底のクロロホルム相を新たな１５ｘ４５ｍｍのガラス製バイアルに移し、３７℃のＲｅａｃｔｉＶａｐエバポレーター内で窒素ガス下で乾燥させた。バイアルを室温に冷却し、５秒間のボルテックスにより、サンプルを１３０μＬのｎ−ヘプタン：クロロホルム、４：１に再懸濁させた。サンプルを２０ｘ２０ｃｍのＷｈａｔｍａｎ  ＬＫ６Ｄシリカゲル６０  Ａ  ＴＬＣプレートにスポットし、８０℃の重力対流オーブン内で１５〜２０分乾燥させた。プレートを室温に冷却し、クロマトグラフィーを室温で６０分間、イソオクタン：ジエチルエーテル：氷酢酸、７５：２５：２で行った。プレートを８０℃の重力対流オーブン内で３０分間乾燥させ、室温に冷却し、サラン（商標）ラップに包んだ。プレートを終夜ホスホイメージャープレートに露出し、Ｔｙｐｈｏｏｎホスホイメージャー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）でスキャンし、Ｉｍａｇｅｑｕａｎｔソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ）を用いて分析した。
【０２０９】
結果
初代ラット肝細胞のゲムカベンによる治療は、有意にかつ濃度依存的に、１０μＭ、３０μＭの濃度においてそれぞれ、コレステロール合成を６１．５±１．８（ＳＥＭ）％（ｐ＜１．８×１０−８）、９０．０±０．８％（ｐ＜１．０×１０−１０）低下させた（表７）。トリグリセリド合成についても、用量依存的に、１０μＭ、３０μＭの濃度においてそれぞれ、８．９±４．５％（ｐ＜０．１２）、７２．１±２．９％（ｐ＜４．１×１０−８）減少したが、統計的有意に達したのは３０μＭの用量のみであった。これらの細胞において、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤であるアトルバスタチンは、１μＭの用量で、トリグリセリド合成をもたらすことなく、有意にコレステロール合成を９３．７±０．４％（ｐ＜３．０×１０−１０）減少させた。アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）阻害剤であるＣＥ１５６８６０は、３μＭにおいて、有意にコレステロール合成を阻害しなかったが、有意にトリグリセリド合成を８７．６±０．６％（ｐ＜０．００３１）低下させた。（表７）
【０２１０】
このデータは、ゲムカベンが、初代ラット肝細胞培養物におけるコレステロール及びトリグリセリド両方の合成阻害に有効であることを示すものである。ゲムカベンのこの効果は、スタチン、すなわちコレステロール合成を阻害するアトルバスタチン、及びトリグリセリド合成を阻害するＡＣＣ阻害剤のＣＥ１５６８６０とは異なる。ゲムカベンの阻害プロファイルからは、ゲムカベンがコレステロール合成経路及びトリグリセリド合成経路に対し個々に効果を及ぼしているか、または両方の合成経路に効果を及ぼす共通の経路に効果を及ぼしている可能性が示唆される。
【表９】
2018536710.tif 000021
％変化はビヒクル細胞との比較で算出され、各ｎは、個々の動物から単離した肝細胞を用いて３重反復で行われた別々の実験を表す。ｐ値は両側ｔ検定から算出されている。
＊（ｐ＜１．８ｘ１０−８）、ｎ＝３；＊＊（ｐ＜１．０ｘ１０−１０）、ｎ＝３；＊＊＊（ｐ＜３．０ｘ１０−１０）、ｎ＝３；†（Ｐ＜４．１ｘ１０−８）、ｎ＝３；††（ｐ＜０．００３１）、ｎ＝１；ｎｓ＝有意性なし
【０２１１】
実施例６
Ｃ５７／ＢＬ６、アポＢ１００／Ｌｐ（ａ）マウスにおける、血漿及び肝臓のコレステロール及びトリグリセリドの合成阻害。
８〜１２週齢の雄マウスを全ての研究に使用した。Ｃｈａｒｌｅｓ  ＲｉｖｅｒからアポＢ１００／Ｌｐ（ａ）（ヒトアポＢ１００のトランスジェニックマウスとヒトアポ（ａ）マウスとの交雑種）を取得した。治療群当たり８匹の動物が存在した。
【０２１２】
本研究では、ゲムカベンを３０及び／または１００ｍｇ／ｋｇ投薬した。シンバスタチンを３ｍｇ／ｋｇ投薬した。薬物を、ポリトロンにより（ボルテックスは用いず（ｖｏｒｔｅｘ  ｍｉｓｓｉｎｇ））、ビヒクル（１．５％カルボキシメチルセルロース、０．１５％Ｔｗｅｅｎ２０（商標）、水中で平衡）内で調製し、０．１ｍＬ／１０ｇ体重の用量ボリュームを用いて経口投与した。
【０２１３】
マウスを最低７日間、逆転した１２時間明期／１２時間暗期の周期に順応させてから、試験薬物またはビヒクルの初回用量の投与を行った。試験薬物及びビヒクルを、暗期の中間時点の約２時間前に強制経口投与した。試験薬物及びビヒクルは１日１回投与した。８回目の用量の３０分後に、１２．５μＣｉの［１４Ｃ］酢酸ナトリウムを投与した。［１４Ｃ］酢酸ナトリウム投与後４時間時に、マウスを血漿収集のため、心臓穿刺により安楽死させ失血させた。全血サンプルをＥＤＴＡが装填された遠心管に入れ遠心処理することにより、個々の血漿サンプルを得た。血漿を新たな管に移し、［１４Ｃ］標識コレステロールのアッセイを行うまで−２０℃で保管した。
【０２１４】
肝臓サンプルを液体窒素中で瞬間冷凍し、［１４Ｃ］標識コレステロール及びトリグリセリドのアッセイを行うまで−８０℃で保管した。
【０２１５】
血漿［１４Ｃ］標識コレステロールのアッセイ凍結した血漿サンプル（体積０．２〜０．４ｍＬ）を解凍し、生理的食塩水で全体積１ｍＬになるように調整した。加えて、０．０２５μＣｉの［１４Ｈ］コレステロール（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を各サンプルに添加し、抽出内部標準としての７ｍＬシンチレーションバイアル中の２種または３種のスパイク対照にも添加した。次に、調製したばかりの１０％  ＫＯＨ溶液をサンプル当たり２．５ｍＬ添加した。サンプルをボルテックスし、７５℃で１時間鹸化した。サンプルを冷却した後、サンプル当たり２．５ｍＬの石油エーテルでμＣｉ［１４Ｃ］標識コレステロールを抽出し、１０分間振とうしてから０℃で１０分間遠心処理した。次に有機相をシンチレーションバイアルに移し、窒素ガス下３７℃のヒートブロックで蒸発させた。次に、各サンプルを超音波処理により０．２５ｍＬのメタノール当たり１部：クロロホルム２部に溶解した。５ｍＬのシンチレーション液を各サンプル及びスパイク対照に添加し、Ｐａｃｋａｒｄ  ２５００ＴＲ  Ｔｒｉ−Ｃａｒｂ液体シンチレーションアナライザーを用いて直接［３Ｈ］及び［１４Ｃ］の壊変率（ＤＰＭ）を記録した。各サンプルにおける［３Ｈ］コレステロールの回収率をスパイク対照における平均合計と比較して、［１４Ｃ］カウント抽出分散（ｃｏｕｎｔｓ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｖａｒｉａｎｃｅ）のパーセント補正を決定した。
【０２１６】
肝臓［１４Ｃ］標識コレステロール及びトリグリセリドのアッセイ    凍結した肝臓サンプルは、サンプル秤量手順及びアッセイ準備の間、ドライアイス上にとどめた。各サンプルを、氷冷メタノール；０．５Ｎ酢酸の溶液中で均質化した。均質化したサンプルをガラス製バイアルに移し、合計１ｘ１０５ＤＰＭのエタノール中［３Ｈ］５０μＬ及びクロロホルム１５ｍＬを各サンプルに添加した。次にサンプルをボルテックスし、室温、３０００ｒｐｍで２０分間遠心処理して相を分離した。下方のクロロホルム層を新たなバイアルに移した。残存する上方の水相を１５ｍＬのクロロホルムを用いてさらに２回、同様の方法で抽出した。クロロホルム相を各サンプルごとにプールし、次に１５ｍＬの０．８８％  ＫＣＬで２回洗浄し、２０秒ボルテックスし、２０分間遠心処理した。水相を廃棄し、クロロホルム相を同様の方法で１５ｍＬのメタノール１部：水１部で２回洗浄し、水相を廃棄した。クロロホルムサンプルを窒素ガス下で蒸発させ、６００μＬのクロロホルムに再懸濁させ、３０μＬをシンチレーションカウント用に取り出した。サンプルボリュームを、総肝臓重量に基づいた補正パーセント回収率及び装填する算出ボリュームに応じて調整した。算出ボリュームをＴＬＣプレートにスポットし、８０℃のオーブン内で乾燥させた。プレートが室温まで冷めてから、１０２ｍＬのイソオクタン：ジエチルエーテル：氷酢酸、それぞれ７５：２５：２にプレートを展開した。プレートを８０℃のオーブン内で乾燥させ、室温まで冷却し、プラスチックラップに包み、ホスホイメージャースクリーンに露出した。Ｉｍａｇｅｑｕａｎｔソフトウェアを使用してコレステロール及びトリグリセリドのバンドを定量化した。
【０２１７】
血漿中の測定で、１００ｍｇ／ｋｇのゲムカベンは有意にコレステロール合成を６０％阻害し、３ｍｇ／ｋｇのシンバスタチンはコレステロール合成を５９％阻害した（図３）。この結果は、肝臓組織内で、１００ｍｇ／ｋｇのゲムカベンが、新たに合成されるコレステロールを６５％、トリグリセリドを６６％阻害し、一方３ｍｇ／ｋｇに過ぎないシンバスタチンがコレステロール合成を８２％降下させたことを示すものである（図３及び表１０）。
【０２１８】
図３に示される値は平均±ＳＥＭであり、群当たりｎ＝８である。Ｖｅｈ＝ビヒクル対照、Ｇｅｍ＝１００ｍｇ／ｋｇのゲムカベン、ｓｉｍｖａ＝３ｍｇ／ｋｇのシンバスタチン。＋ｐ値＜０．０５は、％変化の１要因ＡＮＯＶＡの中での両側スチューデントｔ検定に基づき、＊ｐ値＜０．０５は、［１４Ｃ］コレステロールについてのビヒクルに対する両側スチューデントｔ検定に基づく。ゲムカベン及びシンバスタチンが、アポＢ１００／Ｌｐ（ａ）マウスにおける肝臓トリグリセリド及びコレステロール合成（［１４Ｃ］酢酸ナトリウム）に及ぼす効果を示すデータを、表１０に示す。
【表１０】
2018536710.tif 000022
＊ｐ値＜０．０５は、［１４Ｃ］コレステロールについてのビヒクルに対する両側スチューデントｔ検定に基づく。
群当たりｎ＝８マウス、ｎｓ＝有意性なし。
【０２１９】
肝臓脂質の減少、特に肝臓ＴＧの減少は、ＮＡＳＨの治療または防止に有用である。加えて、ゲムカベンは脂肪酸の酸化を増大させるので、脂肪肝発生の傾向がさらに減少する。
【０２２０】
実施例７
非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のＳＴＡＭモデルにおける、ゲムカベンのｉｎ  ｖｉｖｏ有効性の研究
材料及び方法
試験物質：ゲムカベンはＧｅｍｐｈｉｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．が提供した。投薬溶液を調製するため、製剤指示に従って、ゲムカベンを秤量しビヒクル［純水］で溶解した。テルミサルタン（Ｍｉｃａｒｄｉｓ（登録商標））をＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＧｍｂＨ（Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入し、純水に溶解した。
【０２２１】
ＮＡＳＨの誘発
４０匹の雄マウスにおいて、生後２日に２００μｇのストレプトゾトシン（ＳＴＺ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）溶液の単回皮下注射を行い、４週齢から後に高脂肪食（ＨＦＤ、５７ｋｃａｌ％脂肪、Ｃａｔ＃ＨＦＤ３２，ＣＬＥＡ  Ｊａｐａｎ，Ｊａｐａｎ）を与えることにより、ＮＡＳＨを誘発した。
【０２２２】
薬物投与の経路
ビヒクル（対照）を１０ｍＬ／ｋｇのボリュームで経口投与した。
【０２２３】
ゲムカベンを１０ｍＬ／ｋｇのボリュームで経口投与した。
【０２２４】
テルミサルタンを１０ｍＬ／ｋｇのボリュームで経口投与した。
【０２２５】
治療用量
ゲムカベンを３０、１００、及び３００ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回投与した。
【０２２６】
テルミサルタンを１０ｍｇ／ｋｇの用量で１日１回投与した。
【０２２７】
動物：Ｃ５７ＢＬ／６マウス（妊娠１４日のメス）をＪａｐａｎ  ＳＬＣ，Ｉｎｃ．（Ｊａｐａｎ）から取得した。本研究で使用する全ての動物を、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｕｓｅに従って収容及び飼育した。
【０２２８】
環境：動物を、温度（２３±２℃）、湿度（４５±１０％）、採光（１２時間の人工照明及び暗周期；照明は８：００〜２０：００）の制御条件及び室内空気の交換により、ＳＰＦ施設内で維持した。実験室を加圧して施設の汚染を防止した。
【０２２９】
動物飼育：動物をＴＰＸケージ（ＣＬＥＡ  Ｊａｐａｎ）内に収容し、ケージ当たり最大４匹とした。滅菌済みＰａｐｅｒ−Ｃｌｅａｎ（Ｊａｐａｎ  ＳＬＣ）を床敷に使用し、週に１回取り替えた。
【０２３０】
食料及び飲料：滅菌済みの固形高脂肪食（ＨＦＤ）を、ケージの上面にある金属蓋の中に入れ、自由に与えた。ゴムのストッパー及びシッパーチューブを装備した給水瓶から純水を自由に与えた。給水瓶は週に１回取り替え、清掃してオートクレーブ内で滅菌し、再使用した。
【０２３１】
動物及びケージの識別：マウスは耳パンチで識別した。各ケージは特定の識別コードで標識した。
【０２３２】
全血及び血漿の生化学検査の測定：終了の３日前に、顔面静脈から８時間絶食血液サンプルを収集した。
【０２３３】
８時間絶食血中グルコースを、Ｌｉｆｅ  Ｃｈｅｃｋ（ＥＩＤＩＡ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）を用いて全血で測定した。血漿生化学検査用に、抗凝固剤（Ｎｏｖｏ−Ｈｅｐａｒｉｎ，Ｍｏｃｈｉｄａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｊａｐａｎ）を含むポリプロピレンチューブに８時間絶食血液を収集し、４℃、１，０００ｘｇで１５分間遠心処理した。上清を収集し、使用するまで−８０℃で保管した。超高感度マウスインスリンＥＬＩＳＡキット（Ｍｏｒｉｎａｇａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，Ｊａｐａｎ）より、血漿インスリンレベルを定量化した。
【０２３４】
終了日に、非空腹時血中グルコースをＬｉｆｅ  Ｃｈｅｃｋを用いて全血で測定した。血漿生化学検査用に、抗凝固剤（Ｎｏｖｏ−Ｈｅｐａｒｉｎ）を含むポリプロピレンチューブに非空腹時血液を収集し、４℃、１，０００ｘｇで１５分間遠心処理した。上清を収集し、使用するまで−８０℃で保管した。血漿ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＰ、ＧＧＴ、ＢＵＮ、クレアチニン、及び総ビリルビンレベルをＦＵＪＩ  ＤＲＩ−ＣＨＥＭ  ７０００（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｊａｐａｎ）により測定した。血漿ケトン体レベルをＥｎｚｙＣｈｒｏｍ（商標）ケトン体アッセイキット（ＢｉｏＡｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）により定量化した。
【０２３５】
肝臓生化学検査の測定
肝臓トリグリセリド含量の測定：肝臓の全脂質抽出物をフォルチ法（Ｆｏｌｃｈ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９５７；２２６：４９７）により取得した。肝臓サンプルをクロロホルム−メタノール（２：１、ｖ／ｖ）中で均質化し、終夜室温でインキュベートした。クロロホルム−メタノール−水（８：４：３、ｖ／ｖ／ｖ）で洗浄後、抽出物を蒸発乾固させ、イソプロパノールに溶解した。肝臓トリグリセリド含量をＴｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  Ｅ−ｔｅｓｔ（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）により測定した。
【０２３６】
肝臓ヒドロキシプロリン含量の測定：肝臓ヒドロキシプロリン含量を定量化するため、凍結した肝臓サンプルを、アルカリ−酸加水分解法により以下のようにして処理した。肝臓サンプルを１００％のアセトンで脱脂し、風乾し、６５℃の２Ｎ  ＮａＯＨに溶解し、１２１℃で２０分間オートクレーブした。溶解サンプル（４００μＬ）を４００μＬの６Ｎ  ＨＣｌを用いて１２１℃で２０分間酸加水分解し、１０ｍｇ／ｍＬの活性炭素を含有する４００μＬの４Ｎ  ＮａＯＨで中和した。ＡＣバッファー（２．２Ｍ酢酸／０．４８Ｍクエン酸、４００μＬ）をサンプルに添加し、次に遠心処理にかけて上清を収集した。トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を１６μｇ／ｍＬから段階希釈することにより、ヒドロキシプロリンの標準曲線を構築した。調製したサンプル及び標準物質（各４００μＬ）を４００μＬのクロラミンＴ溶液（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）と混合し、室温で２５分間インキュベートした。次にサンプルをエールリッヒ液（４００μＬ）と混合し、６５℃で２０分間加熱して呈色させた。サンプルを氷上で冷却し、遠心処理して沈殿物を除去した後、各上清の光学密度を５６０ｎｍで測定した。ヒドロキシプロリン標準曲線からヒドロキシプロリンの濃度を算出した。肝臓サンプルのタンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ）を用いて定量し、算出ヒドロキシプロリン値の正規化に使用した。肝臓ヒドロキシプロリンレベルを、ｍｇ当たりのμｇとして表した。
【０２３７】
組織学的分析：ＨＥ染色のため、ブアン液で予め固定した肝臓組織のパラフィンブロックから切片を切断し、Ｌｉｌｌｉｅ−Ｍａｙｅｒ’ｓ  Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ（Ｍｕｔｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ）及びエオジン液（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）で染色した。Ｋｌｅｉｎｅｒの基準（Ｋｌｅｉｎｅｒ  ＤＥ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００５；４１：１３１３）に従ってＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）を算出した。コラーゲン沈着を可視化するため、ブアン液で固定した肝臓切片をピクロシリウスレッド液（Ｗａｌｄｅｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて染色した。
【０２３８】
線維症領域の定量分析のため、シリウスレッドで染色された切片の明視野像を、倍率２００のデジタルカメラ（ＤＦＣ２９５；Ｌｅｉｃａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて中心静脈周辺でキャプチャーし、５視野／切片における陽性領域をＩｍａｇｅＪソフトウェア（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，ＵＳＡ）を用いて測定した。
【０２３９】
ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．，ＵＳＡ）上でボンフェローニ多重比較検定を用いて統計分析を実施した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意とみなした。結果を平均±ＳＤとして表した。
【０２４０】
実験計画及び治療
研究群
群１：ビヒクル（正常）
８匹の正常なマウス（ストレプトゾトシンを投与していない）に対し、６週齢から９週齢にかけて、ビヒクル［純水］を１０ｍＬ／ｋｇのボリュームで１日１回経口投与した。
【０２４１】
群２：ビヒクル（ＮＡＳＨのストレプトゾトシン誘発モデル）
８匹のＮＡＳＨマウスに対し、６週齢から９週齢にかけて、ビヒクルを１０ｍＬ／ｋｇのボリュームで１日１回経口投与した。
【０２４２】
群３：ゲムカベン３０ｍｇ／ｋｇ（ＮＡＳＨのストレプトゾトシン誘発モデル）
８匹のＮＡＳＨマウスに対し、６週齢から９週齢にかけて、３０ｍｇ／ｋｇの用量のゲムカベンを追加したビヒクルを１日１回経口投与した。
【０２４３】
群４：ゲムカベン１００ｍｇ／ｋｇ（ＮＡＳＨのストレプトゾトシン誘発モデル）
８匹のＮＡＳＨマウスに対し、６週齢から９週齢にかけて、１００ｍｇ／ｋｇの用量のゲムカベンを追加したビヒクルを１日１回経口投与した。
【０２４４】
群５：ゲムカベン３００ｍｇ／ｋｇ（ＮＡＳＨのストレプトゾトシン誘発モデル）
８匹のＮＡＳＨマウスに対し、６週齢から９週齢にかけて、３００ｍｇ／ｋｇの用量のゲムカベンを追加したビヒクルを１日１回経口投与した。
【０２４５】
群６：テルミサルタン１０ｍｇ／ｋｇ（ＮＡＳＨのストレプトゾトシン誘発モデル）
８匹のＮＡＳＨマウスに対し、６週齢から９週齢にかけて、１０ｍｇ／ｋｇの用量のテルミサルタンを追加した純水を１日１回経口投与した。
【０２４６】
以下の表１１に治療スケジュールを概括する。
【表１１】
2018536710.tif 000023
【０２４７】
動物のモニター及び屠殺
生存状況、臨床徴候、及び行動を毎日モニターした。治療の前に体重を記録した。各投与からおよそ６０分、マウスにおける毒性、瀕死、及び死亡という顕著な臨床徴候を観察した。動物は９週齢時に、イソフルラン麻酔（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）下、直接的心臓穿刺を通じた失血により屠殺した。
【０２４８】
結果
体重変化及び全身状態
治療期間中、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の平均体重はビヒクル（正常）群の平均体重よりも有意に低かった。１０日目から２１日目にかけて、テルミサルタン群の平均体重は、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の平均体重よりも有意に低かった。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群とゲムカベン治療群との間では、治療期間中、平均体重の有意な変化が見られなかった（図４）。治療期間中、テルミサルタン群で、２１日目に達する前に１匹のマウスが死亡した状態で見つかった。
【０２４９】
終了日における体重
終了日におけるビヒクル（ＮＡＳＨ）群の平均体重は、ビヒクル（正常）群に対し有意な低下を示した。終了日におけるテルミサルタン群の平均体重は、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な低下を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群とゲムカベン治療群との間では、終了日における平均体重に有意な差が見られなかった（図５Ａ及び表１３）。
【０２５０】
肝臓重量及び肝臓：体重比
ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の平均肝臓重量は、ビヒクル（正常）群に対し有意な増加を示した。ゲムカベン１００及び３００ｍｇ／ｋｇ群の平均肝臓重量は、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な増加を示した。テルミサルタン群の平均肝臓重量は、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な低下を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群とゲムカベン３０ｍｇ／ｋｇ群との間では、平均肝臓重量に有意な差が見られなかった（図５Ｂ及び表１３）。
【０２５１】
ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の平均の肝臓：体重比は、ビヒクル（正常）群に対し有意な増加を示した。ゲムカベン１００及び３００ｍｇ／ｋｇ群の平均の肝臓：体重比は、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な増加を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と他の任意の治療群との間では、平均の肝臓：体重比に有意な差が見られなかった（図５Ｃ及び表１２）。
体重及び肝臓重量
【表１２】
2018536710.tif 000024
【０２５２】
生化学検査
終了の３日前、絶食から８時間後
【０２５３】
空腹時全血グルコース：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の空腹時全血グルコースレベルは、ビヒクル（正常）群に対し有意な増加を示した。テルミサルタン群の空腹時全血グルコースレベルは、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な増加を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群とゲムカベン治療群との間では、空腹時全血グルコースレベルに有意な差が見られなかった（図６Ａ及び表１３）。
【０２５４】
空腹時血漿インスリン：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の空腹時血漿インスリンレベルは、ビヒクル（正常）群に対し有意な低下を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と他の任意の治療群との間では、空腹時血漿インスリンレベルに有意な差が見られなかった（図６Ｂ及び表１３）。
【０２５５】
終了時
全血グルコース：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の全血グルコースレベルは、ビヒクル（正常）群に対し有意な増加を示した。テルミサルタン群の全血グルコースレベルは、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な増加を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群とゲムカベン治療群との間では、全血グルコースレベルに有意な差が見られなかった（図７Ａ及び表１３）。
【０２５６】
血漿ＡＬＴ：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の血漿ＡＬＴレベルは、ビヒクル（正常）群に対し有意な増加を示した。ゲムカベン１００ｍｇ／ｋｇ群の血漿ＡＬＴレベルは、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な低下を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と他の任意の治療群との間では、血漿ＡＬＴレベルに有意な差が見られなかった（図７Ｂ及び表１３）。
【０２５７】
血漿ＡＳＴ：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と任意の治療群との間では、血漿ＡＳＴレベルに有意な差が見られなかった（図７Ｃ及び表１３）。
【０２５８】
血漿ＡＬＰ：ゲムカベン１００及び３００ｍｇ／ｋｇ群ならびにテルミサルタン群の血漿ＡＬＰレベルは、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な増加を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と他の任意の治療群との間では、血漿ＡＬＰレベルに有意な差が見られなかった（図７Ｄ及び表１３）。
【０２５９】
血漿ＧＧＴ：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と任意の治療群との間では、血漿ＧＧＴレベルに有意な差が見られなかった（図７Ｅ及び表１３）。
【０２６０】
血漿ＢＵＮ：テルミサルタン群の血漿ＢＵＮレベルは、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な増加を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と他の任意の治療群との間では、血漿ＢＵＮレベルに有意な差が見られなかった（図７Ｆ及び表１３）。
【０２６１】
血漿クレアチニン：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の血漿クレアチニンレベルは、ビヒクル（正常）群に対し有意な低下を示した。ゲムカベン３００ｍｇ／ｋｇ群の血漿クレアチニンレベルは、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な増加を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と他の任意の治療群との間では、血漿クレアチニンレベルに有意な差が見られなかった（図７Ｇ及び表１３）。
【０２６２】
血漿総ビリルビン：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と任意の治療群との間では、血漿総ビリルビンレベルに有意な差が見られなかった（図７Ｈ及び表１３）。
【０２６３】
血漿ケトン体：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の血漿ケトン体レベルは、ビヒクル（正常）群に対し有意な増加を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と他の任意の治療群との間では、血漿ケトン体レベルに有意な差が見られなかった（図７Ｉ及び表１３）。
【０２６４】
肝臓トリグリセリド：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群の肝臓トリグリセリド含量は、ビヒクル（正常）群に対し有意な増加を示した。テルミサルタン群の肝臓トリグリセリド含量は、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な低下を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群とゲムカベン治療群との間では、肝臓トリグリセリド含量に有意な差が見られなかった（図７Ｊ及び表１３）。
【０２６５】
肝臓ヒドロキシプロリン：ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と任意の治療群との間では、肝臓ヒドロキシプロリン含量に有意な差が見られなかった（図７Ｋ及び表１３）。
生化学検査
【表１３】
2018536710.tif 000025
2018536710.tif 000026
【０２６６】
組織学的解析
ＨＥ染色及びＮＡＦＬＤ活性スコア
ＮＡＳＨは、肝臓生検における特定の組織学的異常の存在及びパターンにより定義される。ＮＡＦＬＤ活性スコア（ＮＡＳ）は、治療試験中のＮＡＦＬＤにおける変化を測定するツールとして開発された複合スコアである。ＮＡＳは、肝脂肪化、小葉内炎症、及び肝細胞の風船様変化を含む、３つの構成要素からなる複合スコアである（表１４）。ＮＡＳスコアは、肝脂肪化、小葉内炎症、及び肝細胞の風船様変化のスコアの重み付けなしの合計として定義された。肝脂肪化グレードは、脂肪滴を含有する肝細胞のパーセンテージとして定量化される。肝臓の線維症ステージの評価は、ＮＡＳとは別個に、肝臓小葉の中心周囲領域におけるコラーゲンのシリウスレッド染色強度を組織学的に評価することにより行われる。
【０２６７】
ビヒクル（ＮＡＳＨ）群からの肝臓切片は、ビヒクル（正常）群と比べて、微小血管及び大血管の脂肪沈着、肝細胞の風船様変化、ならびに炎症性細胞浸潤を示した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群のＮＡＳは、ビヒクル（正常）群に対し有意な増加を示した。ゲムカベン３０及び３００ｍｇ／ｋｇ群及びテルミサルタン群のＮＡＳは、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群に対し有意な減少を示した（図８及び９Ａ〜９Ｃならびに表１４）。
ＮＡＦＬＤ活性スコア
【表１４】
2018536710.tif 000027
2018536710.tif 000028
【０２６８】
肝線維症
シリウスレッド染色
シリウスレッド染色した肝臓切片を評価して肝線維症を判定した。ビヒクル（ＮＡＳＨ）群からの肝臓切片は、ビヒクル（正常）群と比べて、肝臓小葉の中心周囲領域におけるコラーゲンの沈着増加を示した。全ての群の線維症領域は、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と比べて、有意な低下を示した（図１０及び表１５）。
組織学的分析
【表１５】
2018536710.tif 000029
【０２６９】
概要及び考察
テルミサルタンは、ＳＴＡＭマウスにおいて抗脂肪化性、抗炎症性、及び抗線維化性効果を有することが示されたため、本研究における陽性対照として使用した。テルミサルタンによる治療は、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と比べて、肝臓トリグリセリド含量、ＮＡＳ、及び線維症領域を有意に低下させた。これは、ＳＭＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓの過去のデータと一致している。
【０２７０】
ゲムカベンは、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と比べて、線維症領域を有意に減少させており、本研究における抗線維症効果を実証している。中用量及び高用量のゲムカベンにより、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と比べて、血漿ＡＬＰレベルが増加した。また高用量のゲムカベンにより、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と比べて、血漿クレアチニンレベルも増加した。ゲムカベン治療群において血漿ＡＬＴレベルは低下しており、中用量のゲムカベン群では統計的有意性を伴って低下した。低用量及び高用量のゲムカベンにより、ビヒクル（ＮＡＳＨ）群と比べて、ＮＡＳが減少した。高用量のゲムカベンにより、ＮＡＳの中でも肝脂肪化及び風船様変化のスコアがテルミサルタンに匹敵する程度に減少した。肝細胞の風船様変化は、酸化ストレスにより誘発される肝細胞の損傷に由来すると考えられており、かつＮＡＳＨの疾患進行に関連している（Ｆｕｊｉｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．２００９；１６：８９３、Ｒａｎｇｗａｌａ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．２０１１；２２４：４０１）ことから、ゲムカベンが、肝細胞損傷及び風船様変化細胞の形成を阻害することにより、ＮＡＳＨの病態を改善していることが示唆される。同時に、本研究においてゲムカベンは、全ての試験用量で抗線維化性効果を示し、さらにＳＴＡＭマウスの肝臓病態に対する抗ＮＡＳＨ効果及び肝臓保護的効果を示した。これらのデータは、ゲムカベンが肝臓の改善をもたらし、かつ、肝臓の遺伝子発現分析または特定のターゲットに対する免疫組織化学検査により評価され得る炎症性及び／または代謝に関する分子に対し、正の影響を及ぼす可能性があることを示唆するものである。
【０２７１】
実施例８
ゲムフィブロジルまたはゲムカベンで治療した雄スプラーグドーリーラットにおける肝臓脂質
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから５６匹の雄スプラーグドーリーラットを取得した。温度制御された室内で、全ての動物に通常のラット用飼料（Ｒａｌｓｔｏｎ−Ｐｕｒｉｎａ）及び水を自由に与え、１２時間明期、１２時間暗期の周期とし、照明を午前６時につけた。ラットを、群辺り８匹の７群に分けた。毎日午前６時から１０時の間に、１．５％のカルボキシメチルセルロース及び０．２％のＴｗｅｅｎ−２０の懸濁ビヒクル（ビヒクル）を用いてラットに強制経口で投薬した。対照動物にはビヒクルを単体で投与した。投薬ビヒクルのボリュームは、体重の０．２５％に相当した。ＰＤ７２９５３はゲムカベンである。ＣＩ−７１９はゲムフィブロジルである。化合物は、毎日７種の治療群に対し１４日連続で投与した（表１６に示す）。
【表１６】
2018536710.tif 000030
【０２７２】
最後の日に動物を屠殺し、肝臓脂質を抽出し、Ｈｏｍａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｂ，７０８（１９９８），２１−２６の方法により、トリグリセリド及びコレステロールの含量を定量した。およそ５００ｍｇの肝臓片を脂質及び肝臓タンパク質の定量用に抽出した。
【０２７３】
データは、ビヒクル（対照）、または指示用量のゲムフィブロジルもしくはゲムカベンで治療したラットにおける、μｇ肝臓トリグリセリド／ｍｇ肝臓タンパク質の平均±ＳＥＭ（図１１Ａ）またはμｇ肝臓非エステル化コレステロール／ｍｇ肝臓タンパク質（図１１Ｂ）の平均±ＳＥＭとして示されている。統計的分析は、ＡＮＯＶＡ及びフィッシャーのＰＬＳＤ事後検定であった（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
【０２７４】
実施例９
ラットにおけるフィブリノーゲンレベル
実施例８におけるラットの屠殺時に、血漿を収集した。電気免疫アッセイにより血漿フィブリノーゲンレベルを定量した。１００ｍｇ／ｋｇ／日のゲムフィブロジルならびに３０ｍｇ／ｋｇ／日及び１００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＤ７２９５３は、対照と比べて、血漿フィブリノーゲンレベルをそれぞれ３１、５２、及び５７パーセント有意に減少することを示した。データを、対照フィブリノーゲンレベルに対するパーセントの平均±ＳＥＭとして図１２に示す。＊ｐ＜０．００１、両側独立ｔ検定、対照との比較。
【０２７５】
実施例１０
ヒトにおけるフィブリノーゲンレベル
高コレステロール血症患者の治療における、単剤療法またはアトルバスタチンと組み合わせたゲムカベン（ＣＩ−１０２７）の有効性及び安全性についての、８週間の二重盲検ランダム化プラセボ対照の用量設定試験（研究Ａ４１４１００１）からのフィブリノーゲンの事後分析において。フィブリノーゲンを測定するための血液サンプルを開始時（受診Ｔ５、０週目）及び終了時（受診Ｔ８、８週目）に収集した。
【０２７６】
元の研究Ａ４１４１００１で使用した共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）の方法を、これらの分析で再び利用した。フィブリノーゲンについては、ベースラインを最終治療前受診時のものとして定義し、エンドポイントを最終薬剤投薬日までにおける最終受診時のものとして定義した。フィブリノーゲンにおけるベースラインからの変化についての最小２乗平均及びｐ値を、ＡＮＣＯＶＡモデルを用いて、ベースライン脂質値及び治療の効果について算出した。また、ベースラインからのパーセント変化についての中央値及びｐ値も算出した。
【０２７７】
フィブリノーゲン分析に含めた全ての患者をランダム化し、少なくとも１回用量の試験薬剤を投与した。さらに、これらの患者は、ベースライン及び少なくとも１つの評価可能なベースライン後測定値を有しなければならなかった。結果的に、これは修正された治療企図（ＭＩＴＴ）集団に関する定義となった。
【０２７８】
ゲムカベン３００、６００、及び９００ｍｇの単剤療法により、ベースラインからエンドポイントにかけて、プラセボの３７．２と比べてそれぞれ２４．２、２３．６、及び１２．９の平均変化でフィブリノーゲンが上昇した。ランク変換データは、表１７に示すように、ゲムカベンとプラセボとの間で有意差を示さなかった。
ゲムカベン単剤療法ｖｓプラセボ：ベースラインからエンドポイントにかけてのフィブリノーゲンの変化（修正治療企図（Ｉｎｔｅｎｔ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ））
【表１７】
2018536710.tif 000031
Ｐｂｏ＝プラセボ；差＝Ｇゲムカベンｘｘｍｇ−プラセボ；ＳＥ＝標準誤差；ＣＩ＝信頼区間
【０２７９】
用量範囲にわたり統合された６００ｍｇのゲムカベンとアトルバスタチンとの同時投与は、表１８に示すように、アトルバスタチン単剤療法に−３１．６上回るフィブリノーゲンの低下を示した（ｐ＝０．０１７７）。３００及び９００ｍｇゲムカベンとアトルバスタチンとの同時投与では、これより小幅な低下が観察された。
ゲムカベン＋アトルバスタチンｖｓアトルバスタチン：ベースラインからエンドポイントにかけてのフィブリノーゲンの変化（修正治療企図）
【表１８】
2018536710.tif 000032
Ｇｅｍ＋Ａｔｏｒ＝ゲムカベン及びアトルバスタチンの組合せ；Ａｔｏｒ＝アトルバスタチン単剤療法；ＳＥ＝標準誤差；ＣＩ＝信頼区間；差＝（Ｇｅｍ＋Ａｔｏｒ）−Ａｔｏｒ。
【０２８０】
フィブリノーゲンの正常範囲は、約１５０〜３００ｍｇ／ｄＬである。フィブリノーゲンの正常範囲を上回るフィブラートレベルを有する対象におけるゲムカベン単剤療法またはアトルバスタチンと組み合わせたゲムカベンの効果を確認するため、フィブリノーゲンベースラインレベル＞４００ｍｇ／ｄＬを有する対象の下位群のデータを検討した。表１９は、様々な用量のゲムカベン単体、アトルバスタチン単体、または様々な用量の組合せのゲムカベン及びアトルバスタチンがベースラインフィブリノーゲンレベルの変化に及ぼす効果を示す。６００ｍｇのゲムカベンを１０、４０、または８０ｍｇのアトルバスタチンと組み合わせた組合せによる治療は、それぞれ２２．５、１０．８、及び１６．８％の低下をもたらした。
【表１９】
2018536710.tif 000033
【０２８１】
表２０は、各用量のゲムカベン及びアトルバスタチンのいずれかの用量におけるデータを示す。６００ｍｇのゲムカベンをアトルバスタチンと組み合わせた場合に、１７．１％の低下が示されている。
【表２０】
2018536710.tif 000034
【０２８２】
表２１は、ゲムカベン（Ｇｅｍ）の３００、６００、及び９００ｍｇにおける単剤療法のデータを示す。
【表２１】
2018536710.tif 000035
Ｇｅｍはゲムカベン、ＳＥは標準誤差、ＣＩは信頼区間、差はＧｅｍ−プラセボである。
【０２８３】
表２２は、プラセボ用にアマルガムにしたアトルバスタチン（Ａｔｏｒ）用量及び各用量のゲムカベン（ｇｅｍ）についてのデータを示す。アトルバスタチンと組み合わせたゲムカベンによる降下は、アトルバスタチン単体と比べると、９１．７ｍｇ／ｄＬの有意な低下を示した（ｐ＝０．０００２）。
【表２２】
2018536710.tif 000036
Ｇｅｍ＋Ａｔｏｒはゲムカベン及びアトルバスタチンの組合せ、Ａｔｏｒ＝アトルバスタチン単剤療法、ＳＥは標準誤差、ＣＩは信頼区間、差は（Ｇｅｍ＋Ａｔｏｒ）−ａｔｏｒである。
【０２８４】
実施例１１
固定用量配合剤の代表例を表１６に示す。
表１６
【表２３】
2018536710.tif 000037
【０２８５】
本開示で参照された全ての刊行物及び特許は、各刊行物または特許出願が参照により組み込まれている旨明確かつ個々に示されている場合と同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれる。万が一、参照により組み込まれている特許または刊行物のいずれかにある用語の意味が、本開示で使用されている用語の意味と矛盾する場合、本開示における用語の意味が支配的となるように意図される。さらに、先述の考察は、単に本発明における例示的な実施形態を開示及び説明するものである。当業者であれば、以下の請求項で定義される本発明の範囲及び趣旨から逸脱することなく様々な変更、改変、及び変形形態がなされ得ることを、このような考察ならびに付属の図面及び請求項から容易に認識することになる。
【図１Ａ−１Ｂ】
2018536710.tif 000049
【図１Ｃ−１Ｄ】
2018536710.tif 000050
【図１Ｅ−１Ｆ】
2018536710.tif 000051
【図１Ｇ−１Ｈ】
2018536710.tif 000052
【図２Ａ−２Ｂ】
2018536710.tif 000053
【図２Ｃ−２Ｄ】
2018536710.tif 000054
【図２Ｅ−２Ｆ】
2018536710.tif 000055
【図３】
2018536710.tif 000056
【図４】
2018536710.tif 000057
【図５Ａ−５Ｂ】
2018536710.tif 000058
【図５Ｃ】
2018536710.tif 000059
【図６Ａ−６Ｂ】
2018536710.tif 000060
【図７Ａ−７Ｂ】
2018536710.tif 000061
【図７Ｃ−７Ｄ】
2018536710.tif 000062
【図７Ｅ−７Ｆ】
2018536710.tif 000063
【図７Ｇ−７Ｈ】
2018536710.tif 000064
【図７Ｉ−７Ｊ】
2018536710.tif 000065
【図８】
2018536710.tif 000066
【図９Ａ−９Ｂ】
2018536710.tif 000067
【図９Ｃ】
2018536710.tif 000068
【図１０】
2018536710.tif 000069
【図１１Ａ−１１Ｂ】
2018536710.tif 000070
【図１２】
2018536710.tif 000071
【国際調査報告】
2018536710.tif 000072
2018536710.tif 000073
2018536710.tif 000074
2018536710.tif 000075