(57)【要約】  本発明は、ヒトＷＴ１／ＨＬＡに結合する、抗体またはそれらの断片に関する。特に、本発明は、改善されたおよび／または有益な特性が合わさった、したがって、臨床開発に適した抗体またはその断片に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞表面で、配列番号１のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体に特異的に結合する、単離された抗体またはその断片。
【請求項２】
前記抗体またはその断片が、配列番号６４のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体に対するＥＣ５０よりも少なくとも１０倍低いＥＣ５０で、配列番号１のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体に結合する、請求項１に記載の抗体またはその断片。
【請求項３】
前記抗体または抗体断片が、配列番号６４のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体に結合しない、請求項１〜２のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項４】
前記抗体またはその断片が、Ｆａｂ形態および免疫グロブリン形態で１０ｎＭ未満のＥＣ５０を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項５】
前記細胞が、配列番号１のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の前記複合体を発現する細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項６】
配列番号１のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の前記複合体を発現する前記細胞が、がん細胞である、請求項５に記載の抗体またはその断片。
【請求項７】
前記抗体またはその断片が、
（ａ）配列番号７のＨＣＤＲ１領域、配列番号８のＨＣＤＲ２領域、配列番号９のＨＣＤＲ３領域、配列番号１０のＬＣＤＲ１領域、配列番号１１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号１２のＬＣＤＲ３領域；
（ｂ）配列番号１７のＨＣＤＲ１領域、配列番号１８のＨＣＤＲ２領域、配列番号１９のＨＣＤＲ３領域、配列番号２０のＬＣＤＲ１領域、配列番号２１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号２２のＬＣＤＲ３領域；
（ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３０のＬＣＤＲ１領域、配列番号３１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号３２のＬＣＤＲ３領域；
（ｄ）配列番号３７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３８のＨＣＤＲ２領域、配列番号３９のＨＣＤＲ３領域、配列番号４０のＬＣＤＲ１領域、配列番号４１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号４２のＬＣＤＲ３領域；
（ｅ）配列番号４７のＨＣＤＲ１領域、配列番号４８のＨＣＤＲ２領域、配列番号４９のＨＣＤＲ３領域、配列番号５０のＬＣＤＲ１領域、配列番号５１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号５２のＬＣＤＲ３領域；
（ｆ）配列番号５７のＨＣＤＲ１領域、配列番号５８のＨＣＤＲ２領域、配列番号５９のＨＣＤＲ３領域、配列番号６０のＬＣＤＲ１領域、配列番号６１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号６２のＬＣＤＲ３領域
を含んでなる、請求項１&#12316;３のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項８】
前記抗体またはその断片が、
（ａ）配列番号５の可変重鎖と配列番号６の可変軽鎖；
（ｂ）配列番号１５の可変重鎖と配列番号１６の可変軽鎖；
（ｃ）配列番号２５の可変重鎖と配列番号２６の可変軽鎖；
（ｄ）配列番号３５の可変重鎖と配列番号３６の可変軽鎖；
（ｅ）配列番号４５の可変重鎖と配列番号４６の可変軽鎖；
（ｆ）配列番号５５の可変重鎖と配列番号５６の可変軽鎖
を含んでなる、請求項１&#12316;４のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項９】
配列番号１のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体に特異的に結合し、請求項７または８に記載の抗体と少なくとも９５％相同的である、抗体またはその断片。
【請求項１０】
請求項７〜９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片と交差競合する、抗体またはその断片。
【請求項１１】
医療で使用するための請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項１２】
前記使用が、がんなどのＷＴ１陽性疾患治療である、請求項１１に記載の抗体またはその断片。
【請求項１３】
請求項７〜９のいずれか一項に記載の抗体またはその断片をコードする、単一の核酸配列または複数核酸配列を含んでなる核酸組成物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の単一の核酸配列または複数の核酸配列を含んでなる、単一のベクターまたは複数のベクターを含んでなるベクター組成物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の核酸組成物または請求項１４に記載のベクター組成物を含んでなる、宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその断片と薬学的に許容できる担体と、および／または賦形剤とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１７】
（ａ）複数の抗体または抗体断片を含んでなる抗体ライブラリーを配列番号６４のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体に混合するステップと、
（ｂ）配列番号６４のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の前記複合体に結合しなかった抗体または抗体断片を抗体ライブラリーから除去するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の枯渇抗体ライブラリーを配列番号１のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体に混合するステップと、
（ｄ）配列番号１のペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の前記複合体に結合する、抗体またはその断片を同定するステップと
を含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を同定する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的に結合する、抗体または抗体断片に関する。本発明はまた、前記抗体またはそれらの断片を発現できる核酸、ベクターおよび宿主細胞；前記抗体またはそれらの断片を含んでなる医薬組成物；および特定の疾患を治療するための前記抗体またはそれらの断片の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
ウィルムス腫瘍１（ＷＴ１）腫瘍性タンパク質は、広範囲の白血病および固形がんにおいて過剰発現される、細胞内発がん性転写因子である。ＷＴ１は核タンパク質であり、したがって従来の抗体療法ではアクセスできない。ＲＭＦ（アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号１））と命名されたＷＴ１由来ペプチドは、ＨＬＡ−Ａ０２０１分子によってプロセスされ提示される。このペプチドは、生体外において、そしてヒトＴ細胞ベースおよびワクチン試験において、ＷＴ１腫瘍細胞を死滅させることができる細胞毒性ＣＤ８Ｔ細胞を誘導する（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１０；５９：１４６７−１４７９）。これは、ＨＬＡ制限ペプチドを抗体で標的化することの論理的根拠を提供する。
【０００３】
ＷＴ１  ＲＭＦペプチド／ＨＬＡ−Ａ０２０１複合体（ＲＭＦ／ＨＬＡ）に対する抗体が、記載されている。Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｃ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｍａｒｃｈ  １３；５（１７６）：１７６ｒａ３３；国際公開第２０１２／１３５８５４号パンフレット）。二重特異的形態（国際公開第２０１５／０７００６１号パンフレット）にあり、強されたＦｃ活性（国際公開第２０１５／０７００７８号パンフレット）を有する、これらの抗体の誘導体もまた作製された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、先行技術において公知の抗体よりも優れた、新規な抗体および抗体断片を提供する。本明細書で開示される抗体および抗体断片は、ＷＴ１  ＲＭＦペプチド／ＨＬＡ−Ａ０２０１複合体（ＲＭＦ／ＨＬＡ）に特異的に結合する。
【０００５】
これらの抗体および抗体フラグメントは、前臨床および臨床開発に特に良く適しており、有望な薬物候補に相当する。抗体はまた、本明細書に記載されているものをはじめとする、さらなる改善を受け入れられる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本出願は、ＲＭＦペプチド／ＨＬＡ−Ａ０２０１複合体（ＲＭＦ／ＨＬＡ）に特異的に結合し、本明細書に開示されるような優れた特性を有する抗体およびそれらの断片を初めて開示する。本開示の抗体およびそれらの断片は、ＨＬＡ−Ａ０２０１と複合体形成する非特異的なペプチドに結合しない。特に、本開示の抗体およびそれらの断片は、ＨＬＡ−Ａ０２０１と複合体形成した場合、ＰＩＧＱペプチド（健常ヒト組織で遍在的に発現されるペプチド）に結合しない。本発明の抗体またはそれらの断片は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体を発現する細胞に結合する。特に、本発明の抗体は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体を発現するがん細胞に結合する。抗体およびそれらの断片はまた、一価Ｆａｂ形態で、そしてこれまでに報告されていない二重特異性免疫グロブリン形態でも、ＥＣ５０値および親和性を示す。したがって、本発明の抗体またはそれらの断片は、このようにして有効性に関して改善され、ひいては、例えば、臨床開発のための適切で有望な化合物を提供する。
【０００７】
特許請求された特性を有する抗体は、洗練されたスクリーニングおよびカウンタースクリーニング法を利用して作製された。したがって、本質的に同一特性、または同一特性を有する、追加的な抗体またはその断片を同定することが可能である。
【０００８】
本発明は、表面細胞上に存在するＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合する、抗体またはそれらの断片を提供する。本開示はまた、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合するが、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体には結合しない、抗体またはそれらの断片も提供する。本開示はまた、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対するＥＣ５０よりも少なくとも１０倍低いＥＣ５０でＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合する、抗体またはそれらの断片も提供する。
【０００９】
本発明はまた、（ａ）抗体またはそれらの断片のＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体への特異的結合を可能にする条件下で、複数の抗体またはそれらの断片を含んでなる抗体ライブラリーをＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体と混合するステップと、（ｂ）前記ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に結合する、抗体またはそれらの断片を抗体ライブラリーから除去するステップと、（ｃ）抗体またはその断片のＲＭＦ／ＨＬＡ複合体への特異的結合を可能にする条件下で、ステップ（ｂ）の枯渇抗体ライブラリーをＲＭＦ／ＨＬＡ複合体と混合するステップと、（ｄ）ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合する、抗体またはその断片を同定するステップとを含んでなる、本発明による抗体またはその断片を同定する方法にも関する。
【００１０】
本発明は、表１に列挙されるアミノ酸に準じたＣＤＲ領域を有するＲＭＦペプチド／ＨＬＡ−Ａ０２０１複合体（ＲＭＦ／ＨＬＡ）に結合する、抗体またはそれらの断片を提供する。本発明はまた、表１に準じたアミノ酸配列を含んでなる可変重鎖および可変軽鎖を有する、特異的抗体またはそれらの断片も提供する。本発明はまた、表１に準じたアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲ領域を有する、特異的抗体またはそれらの断片も提供する。本発明はまた、表１に示される抗体と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％相同的な（同一の）重鎖および軽鎖を含んでなる、抗体またはそれらの断片も提供する。本発明はまた、表１に示される抗体のＣＤＲ領域と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％相同的なＣＤＲ領域を含んでなる、抗体またはそれらの断片も提供する。
【００１１】
本発明はまた、その結合が、本明細書で開示されるような特異的抗体またはそれらの断片と競合する、特異的抗体またはそれらの断片も提供する。本発明はまた、本明細書で開示される特異的抗体またはそれらの断片と同じエピトープに結合する、特異的抗体または抗体断片も提供する。本発明はまた、細胞表面に提示された場合、本明細書で開示されてＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合する特異的抗体またはそれらの断片と競合する、特異的抗体またはそれらの断片も提供する。
【００１２】
本発明はまた、医療で使用するための、本発明の単離された抗体またはそれらの断片も提供する。本発明はまた、がんなどのＷＴ１陽性疾患に罹患している患者の治療で使用するための、本発明の抗体またはそれらの断片も提供する。このようなＷＴ１陽性疾患およびがんとしては、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性／骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、中皮腫、卵巣がん、胃腸がん、乳がん、前立腺がん、および神経膠芽腫が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、それに連結する細胞毒性部分を有するコンジュゲートである。その他の実施形態では、抗体またはその断片は、Ｆｃ修飾などの特定の追加的な修飾を保有し得る。
【００１３】
本発明は、本発明の単離された抗体またはそれらの断片と、薬学的に許容できる担体とを含んでなる、医薬組成物もまた提供する。
【００１４】
本発明はまた、本発明の抗体またはそれらの断片をコードする核酸も提供する。
【００１５】
本発明はまた、本発明の抗体またはそれらの断片をコードする核酸を含んでなる、ベクターも提供する。
【００１６】
本発明はまた、本発明の抗体またはそれらの断片をコードするベクターまたは核酸を含んでなる、宿主細胞も提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、ＷＴ１  ＲＭＦペプチド／ＨＬＡ−Ａ０２０１複合体（ＲＭＦ／ＨＬＡ）を認識し、好ましくは特異的に認識し、したがってそれらに結合する、抗体またはそれらの断片に関する。
【００１８】
「ＷＴ１」という用語は、ウィルムス腫瘍タンパク質として知られているタンパク質を指す。ＡＷＴ１、ＧＵＤ、ＮＰＨＳ４、ＷＡＧＲ、ウィルムス腫瘍タンパク質、ＷＩＴ−２、およびＷＴ３３をはじめとする、ＷＴ１の特定の同義語が存在する（ｅｘｉｔｓ）。ヒトＷＴ１は、以下のアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ１９５４４）を有する：
ＭＧＳＤＶＲＤＬＮＡＬＬＰＡＶＰＳＬＧＧＧＧＧＣＡＬＰＶＳＧＡＡＱＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＧＧＰＡＰＰＰＡＰＰＰＰＰＰＰＰＰＨＳＦＩＫＱＥＰＳＷＧＧＡＥＰＨＥＥＱＣＬＳＡＦＴＶＨＦＳＧＱＦＴＧＴＡＧＡＣＲＹＧＰＦＧＰＰＰＰＳＱＡＳＳＧＱＡＲＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳＱＰＡＩＲＮＱＧＹＳＴＶＴＦＤＧＴＰＳＹＧＨＴＰＳＨＨＡＡＱＦＰＮＨＳＦＫＨＥＤＰＭＧＱＱＧＳＬＧＥＱＱＹＳＶＰＰＰＶＹＧＣＨＴＰＴＤＳＣＴＧＳＱＡＬＬＬＲＴＰＹＳＳＤＮＬＹＱＭＴＳＱＬＥＣＭＴＷＮＱＭＮＬＧＡＴＬＫＧＶＡＡＧＳＳＳＳＶＫＷＴＥＧＱＳＮＨＳＴＧＹＥＳＤＮＨＴＴＰＩＬＣＧＡＱＹＲＩＨＴＨＧＶＦＲＧＩＱＤＶＲＲＶＰＧＶＡＰＴＬＶＲＳＡＳＥＴＳＥＫＲＰＦＭＣＡＹＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧＥＫＰＹＱＣＤＦＫＤＣＥＲＲＦＳＲＳＤＱＬＫＲＨＱＲＲＨＴＧＶＫＰＦＱＣＫＴＣＱＲＫＦＳＲＳＤＨＬＫＴＨＴＲＴＨＴＧＫＴＳＥＫＰＦＳＣＲＷＰＳＣＱＫＫＦＡＲＳＤＥＬＶＲＨＨＮＭＨＱＲＮＭＴＫＬＱＬＡＬ（配列番号２）。
【００１９】
マウス（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ２２５６１）、イノシシ（ＮＣＢＩ  ＮＰ＿００１００１２６４．１）、チンパンジー、畜牛、セキショクヤケイ、イヌ、ヒツジ、めだか、ラット（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ４９９５２）、およびゼブラフィッシュをはじめとする、その他の生物種に由来するＷＴ１の相同体もまた知られている。ほとんどの好ましい実施形態では、ＷＴ１はヒトＷＴ１である。その他の好ましい実施形態では、ＷＴ１は配列番号２に記載のタンパク質である。
【００２０】
「ＲＭＦ」および「ＲＭＦペプチド」という用語は、アミノ酸配列ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号１）を有するＷＴ１由来ペプチドを指す。
【００２１】
「ＨＬＡＡ０２０１」、「ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１」、および「ＨＬＡ−Ａ０２０１」という用語は、特異的ＨＬＡ血清型を指す。ＨＬＡ−Ａ０２０１はヘテロ二量体タンパク質であり、α鎖およびβ鎖を含んでなる。
【００２２】
「ＷＴ１／ＨＬＡ複合体」、「ＷＴ１／ＨＬＡ」、「ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体」、および「ＲＭＦ／ＨＬＡ」という用語は同義的に使用され、ＲＭＦペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体を指す。本発明の抗体およびそれらの断片は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に対して特異的である。
【００２３】
「ＲＨＡＭＭ」および「ＲＨＡＭＭペプチド」という用語は、アミノ酸配列ＩＬＳＬＥＬＭＫＬ（配列番号６３）を有するペプチドを指す。「ＲＨＡＭＭ／ＨＬＡ複合体」および「ＲＨＡＭＭ／ＨＬＡ」という用語は、前記ＲＨＡＭＭペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体を指す。
【００２４】
「ＰＩＧＱ」および「ＰＩＧＱペプチド」という用語は、アミノ酸配列ＲＭＦＰＧＥＶＡＬ（配列番号６４）を有するペプチドを指す。このペプチドは、健常ヒト組織に遍在する。
【００２５】
「ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体」および「ＰＩＧＱ／ＨＬＡ」という用語は、ＰＩＧＱペプチドとＨＬＡ−Ａ０２０１の複合体を指す
【００２６】
「抗体」という用語は、本明細書の用法では、ジスルフィド結合によって相互連結する少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含んでなるタンパク質を指し、それは（例えば、結合、立体障害、空間分布の安定化によって）抗原と相互作用する。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書でＶＨと略記される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインから構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書でＶＬと略記される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬから構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性領域にさらに細分化され得て、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域がその中に散在する。各ＶＨおよびＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４の順でアミノ末端からカルボキシ末端に配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンと、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）をはじめとする宿主組織または要素との結合を媒介してもよい。「抗体」という用語は、例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、およびキメラ抗体を含む。抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。軽鎖および重鎖はどちらも、構造的および機能的相同性の領域に分割される。「免疫グロブリン形態」という用語は、本明細書において上で定義されるような完全長抗体を指す。
【００２７】
「抗体断片」または「その断片」という語句は、本明細書の用法では、（例えば、結合、立体障害、空間分布の安定化によって）抗原に特異的に相互作用する能力を保持する、抗体の１つまたは複数の部分を指す。結合断片の例としては、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価の断片であるＦａｂ断片；ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって連結する２つのＦａｂ断片を含んでなる二価の断片である、Ｆ（ａｂ）２断片；ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられるが、これに限定されるものではない。さらに、Ｆｖ断片のＶＬとＶＨの２つのドメインは別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して、（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９−５８８３）を参照されたい）一価の分子を形成する単一タンパク質鎖になるようにする合成リンカーによって、組換え法を用いて連結され得る。このような一本鎖抗体もまた、「抗体断片」という用語に包含されることが意図される。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来の技術を用いて得られ、断片は非損傷抗体と同一様式で、有用性についてスクリーニングされる。抗体断片また、単一ドメイン抗体、マキシ抗体、ミニ抗体、細胞内抗体、二特異性抗体、三特異性抗体、四特異性抗体、ｖ−ＮＡＲ、およびビス−ｓｃＦｖに組み込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３：１１２６−１１３６を参照されたい）。抗体断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づくスキャフォールドにグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドモノ抗体を記載する、米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。抗体断片は、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒になって１対の抗原結合部位を形成する、１対のタンデムＦｖ断片（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含んでなる、一本鎖分子に組み込まれ得る（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８：１０５７−１０６２；および米国特許第５，６４１，８７０号明細書）。「Ｆａｂ形態」という用語は、抗体のＦａｂ断片を指す。
【００２８】
「抗原結合部位」という用語は、抗原に特異的に結合する領域またはその一部を含んでなる、抗体または抗体断片の部分を指す。抗原結合部位は、１つまたは複数の抗体可変ドメインによって提供されてもよい。好ましくは、抗原結合部位は、抗体またはその断片の関連ＶＨおよびＶＬ内に含まれる。
【００２９】
「ヒト抗体」または「ヒト抗体断片」は、本明細書の用法では、フレームワークおよびＣＤＲ領域の双方がヒト起源の配列に由来する可変領域を有する、抗体およびそれらの断片を含む。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もまた、例えば、ヒト生殖系列配列またはヒト生殖系列配列の変異バージョンなどのヒト配列、または例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９６：５７−８６）に記載されるようなヒトフレームワーク配列分析から誘導される、抗体含有コンセンサスフレームワーク配列に由来する。例えば、ＣＤＲなどの免疫グロブリン可変領域の構造および部位は、例えば、Ｋａｂａｔ番号付与スキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付与スキーム、またはＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの併用などの周知の番号付与スキームを用いて定義されてもよい（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  （１９９１），ｅｄｓ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．；Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２７３：９２７−９４８）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２  Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３；およびＡｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．を参照されたい。
【００３０】
本明細書で定義される「ヒト化抗体」または「ヒト化抗体断片」は、（ｉ）その抗体がヒト生殖系列配列に基づく、非ヒト起源（例えば、異種免疫系を有する遺伝子組換えマウス）に由来するもの、または（ｉｉ）その中で可変領域のＣＤＲが非ヒト起源に由来する一方で、可変領域の１つまたは複数のフレームワークがヒト起源であり、（存在する場合）定常領域がヒト起源である、ＣＤＲがグラフトされたものの１つである。
【００３１】
「キメラ抗体」または「キメラ抗体断片」という用語は、１つの生物種に見いだされる配列に由来または対応する定常抗体領域と、別の生物種に由来する可変抗体領域とを有する抗体分子として、本明細書で定義される。好ましくは、定常抗体領域は、例えば、ヒト生殖細胞系または体細胞などのヒトに見いだされる配列に由来または対応し、可変抗体領域（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲまたはＦＲ領域）は、例えば、マウス、ラット、ウサギまたはハムスターなどの哺乳類のような非ヒト動物に見いだされる配列に由来する。
【００３２】
「単離された」という用語は、例えば、異なる抗原特異性を有するその他の抗体または抗体断片を実質的に含まない、抗体または抗体断片であり得る化合物を指す。さらに、単離された抗体またはその断片は、その他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。したがって、いくつかの態様では、提供される抗体は、異なる特異性を有する抗体から分離された単離された抗体である。単離された抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。単離された抗体は、組換え抗体であってもよい。しかし、標的のエピトープ、イソ型または変異型に特異的に結合する単離された抗体は、例えば、その他の生物種などに由来する、その他の関連抗原（例えば、生物種相同体）との交差反応性を有してもよい。
【００３３】
「組換え抗体」という用語は、本明細書の用法では、ヒト免疫グロブリン遺伝子またはそれから調製されたハイブリドーマで、遺伝子組換えまたは染色体導入された動物（例えば、マウス）から単離された抗体、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離された抗体、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから選択され単離された抗体、およびヒト免疫グロブリン遺伝子の全部または一部の配列の別のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う、その他のあらゆる手段によって調製、発現、作製または単離された抗体などの組換え手段によって調製、発現、作製、または分離された全ての抗体を含む。好ましくは、このような組換え抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する、可変領域を有する。しかし、特定の実施形態では、このような組換えヒト抗体は、生体外変異誘発（または、ヒトＩｇ配列について遺伝子組換えされた動物が使用される場合は、生体内体細胞変異誘発）の対象となり得て、したがって組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し関連する配列である一方で、生体内においてヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しなくてもよい。組換え抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。一実施形態では、本明細書で開示される抗体および抗体断片は、どちらもその内容全体が参照により本明細書に援用される、米国特許第１３／３２１，５６４号明細書または米国特許第１３／２９９，３６７号明細書で開示されるように、Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）抗体ライブラリーから単離される。
【００３４】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書の用法では、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特有の結合特異性と特定のエピトープに対する親和性を有する特有の結合部位を示す。
【００３５】
結合特異性は絶対的でなく相対的性質であるから、本明細書の用法では、抗体またはその断片が抗原と１つまたは複数の参照抗原とを識別できる場合、このような抗体はこのような抗原に「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｔｏ）」、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ）」、「特異的である」または「それを特異的に認識する」。参照抗原は、例えば、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体のスクランブル化バージョンの変異などの、基準点として使用される１つまたは複数の密接に関連する抗原であり得る。特に、ＷＴＡ／ＨＬＡ複合体に「特異的に結合する」抗体または抗体断片は、ＲＨＡＭＭ／ＨＬＡ複合体またはＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に結合しない。
【００３６】
その最も一般的な形態において（そして特に断りのない限り）、「特異的結合」とは、例えば、以下の方法の１つに従って判定されるような、抗体またはその断片が目的の抗原と無関係の抗原とを識別する能力を指す。このような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ試験、ＲＩＡ試験、ＥＣＬ試験、ＩＲＭＡ試験、およびペプチドスキャンを含んでなるが、これに限定されるものではない。例えば、標準ＥＬＩＳＡアッセイが実施され得る。スコア付けは、標準的な発色（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼを有する二次抗体、および過酸化水素を有するテトラメチルベンジジン）によって実施されてもよい。特定のウェル内の反応は、例えば、４５０ｎｍなどにおける光学密度によって評価される。典型的なバックグラウンド（＝陰性反応）は、０．１ＯＤであってもよく；典型的な陽性反応は１ＯＤであってもよい。これは、陽性／陰性の差が１０倍を超え得ることを意味する。典型的に、結合特異性の判定は、単一の参照抗原ではなく、粉乳、ＢＳＡ、トランスフェリンなどの約３&#12316;５種の無関係の抗原のセットを使用して実施される。さらに、「特異的結合」は、例えば、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体の異なるドメインまたは領域などのその標的抗原の異なる部分、またはＷＴ１／ＨＬＡ複合体の１つまたは複数の重要なアミノ酸残基またはアミノ酸残基の一連の配列を識別する能力に関連してもよい。好ましくは、本明細書で開示される抗体またはその断片は、哺乳類のＷＴ１／ＨＬＡ複合体、特にヒトＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的に結合する。
【００３７】
「結合活性」という用語は、タンパク質間の多重結合相互作用の総合強度を描写するために使用される。結合活性は、単結合の強度を描写する親和性とは異なる。したがって、結合活性は結合の合計ではなく、むしろ結合親和性（機能的親和性）の相乗的な強さである。２つの結合部位のそれぞれの単一結合相互作用は、（相対的親和性次第で）容易に破壊され得る一方で、多数の結合相互作用が同時に存在するため、単一部位の一過性の結合解除は分子を拡散させず、その部位の結合は回復する可能性が高い。全体的効果は、抗原と抗体との相乗的かつ強力な結合である。
【００３８】
「親和性」という用語は、本明細書の用法では、単一部位におけるポリペプチドとその標的との間の相互作用の強さを指す。各部位内で、ポリペプチドの結合領域は、多数の部位で弱い非共有結合力を介してその標的と相互作用し；通常、相互作用が多ければ多いほど、親和性が強くなる。
【００３９】
「ＫＤ」という用語は、本明細書の用法では、ＫｄとＫａとの比率（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られる解離定数を指し、モル濃度（Ｍ）として表される。例えば、モノクローナル抗体のような抗原結合部分のＫＤ値は、当該技術分野で確立された方法を使用して判定され得る。例えば、モノクローナル抗体のような抗原結合部分のＫＤを判定する方法は、ＳＥＴ（可溶性平衡滴定）であり、あるいはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムまたはＯｃｔｅｔシステム（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）などのバイオセンサー装置を用いる表面プラズモン共鳴である。本発明において、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に対して特異的な抗体は、典型的に、５×１０−２Ｍ未満、１０−２Ｍ未満、５×１０−３Ｍ未満、１０−３Ｍ未満、５×１０−４Ｍ未満、１０−４Ｍ未満、５×１０−５Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、５×１０−６Ｍ未満、１０−６Ｍ未満、５×１０−７Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１３Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、５×１０−１４Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５×１０−１５Ｍ未満、または１０−１５Ｍ未満の解離速度定数（ＫＤ）（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を有する。
【００４０】
「交差競合」または「交差競合する」は、抗体、抗体断片またはその他の抗原結合部分が、標準競合結合アッセイにおいて、特異的抗原に対するその他の抗体、抗体断片または抗原結合部分の結合に干渉する能力を意味する。抗体、抗体断片またはその他の抗原結合部分が、特異的抗原に対する別の抗体、抗体断片または抗原結合部分の結合に干渉できる能力または程度、ひいては、それが本発明によれば交差競合すると言えるかどうかは、標準競合結合アッセイを用いて判定され得る。１つの適切なアッセイは、（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ  ３０００装置（Ｂｉａｃｏｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用することによる）Ｂｉａｃｏｒｅ技術の使用を伴い、それは、表面プラズモン共鳴技術を使用して相互作用の程度を測定し得る。交差競合を測定するための別のアッセイは、ＥＬＩＳＡベースのアプローチを使用する。それらの交差競合に基づいて、抗体を「エピトープビニング」するためのハイスループットプロセスが、国際公開第２００３／４８７３１号パンフレットに記載される。調査中の抗体または抗体フラグメントが、表１に記載される抗体の１つのＷＴ１／ＨＬＡ複合体に対する結合を６０％以上、特に７０％、またはより特に８０％以上低下させ、そして表１に記載される抗体の１つが、前記抗体または抗体断片のＷＴ１／ＨＬＡ複合体に対する結合を６０％以上、特に７０％、またはより特に８０％以上低下させる場合、交差競合が存在する。
【００４１】
「エピトープ」という用語は、抗体またはその断片あるいはＴ細胞受容体によって特異的に認識され、または別の様式で分子と相互作用する、あらゆるタンパク質性領域を含む。一般的に、エピトープは、アミノ酸または炭水化物または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面の集団であり、一般に特異的な三次元構造特性ならびに特異的な電荷特性を有してもよい。当業者には理解されるように、抗体が特異的に結合し得るものは、実質的にエピトープであり得る。エピトープは、抗体が結合する残基をを含んでなり得て、「直鎖」または「立体配座」であり得る。「直鎖エピトープ」という用語は、タンパク質と相互作用分子（抗体など）との間の相互作用点の全てが、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って直線的に（連続的に）存在するエピトープを指す。「立体配座エピトープ」という用語は、その中で不連続なアミノ酸が、三次元の立体構造に合わさっているエピトープを指す。立体配座エピトープにおいて、相互作用点は、互いに分離されたタンパク質上のアミノ酸残基に全体にわたり存在する。
【００４２】
「同一エピトープに結合する」とは、抗体、抗体断片またはその他の抗原結合部分が、特異的抗原に結合でき、例示される抗体と同じエピトープを有することを意味する。例示される抗体およびその他の抗体のエピトープは、エピトープマッピング技術を用いて判定され得る。エピトープマッピング技術は、当該技術分野で周知である。例えば、立体配座エピトープは、例えば水素／重水素交換、Ｘ線結晶学、および二次元核磁気共鳴などのアミノ酸の空間的立体配座を判定することで容易に同定される。
【００４３】
本発明の組成物は、治療または予防用途のために使用されれてもよい。したがって、本発明は、発明の抗体（または機能性抗体断片）と、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含有する、医薬組成物を含む。関連態様において、本発明は、炎症性疾患を治療する方法を提供する。このような方法は、本明細書で記載されまたは検討されるような、本発明による抗体を含有する医薬組成物の有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含む。
【００４４】
本発明は、開示されるようなＷＴ１／ＨＬＡ複合体抗体の治療有効量を、そのような治療を必要とする対象に投与することを含んでなる治療法を提供する。「治療有効量」または「有効量」は、本明細書の用法では、所望の生物学的応答を引き起こすために必要なＷＴ１／ＨＬＡ複合体抗体の量を指す。本発明によれば、治療有効量は、特定の疾患を治療および／または予防すために必要なＷＴ１／ＨＬＡ複合体抗体の量である。
【００４５】
「対象」または「生物種」は、この文脈の用法では、マウスまたはラットなどの齧歯類、およびカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）、アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）またはヒト（Ｈｏｍｏｓａｐｉｅｎｓ）などの霊長類をはじめとする、あらゆる哺乳類を指す。好ましくは、対象は霊長類であり、最も好ましくはヒトである。
【００４６】
一実施形態では、本発明は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合する、抗体またはその断片に関する。
【００４７】
別の実施形態では、本発明は、細胞表面に提示される、および／または存在するＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合する、抗体またはその断片に関する。
【００４８】
別の実施形態では、本発明は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体を発現する細胞に特異的に結合する、抗体またはその断片に関する。
【００４９】
別の実施形態では、本発明は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体を発現するがん細胞、好ましくはその表面に前記複合体を提示するがん細胞に特異的に結合する、抗体またはその断片に関する。
【００５０】
別の実施形態では、本発明は、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対する前記抗体またはその断片のＥＣ５０よりも少なくとも１０倍低いＥＣ５０でＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合する、抗体またはその断片に関する
【００５１】
別の実施形態では、本発明は、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に結合しない抗体またはその断片に関する。
【００５２】
別の実施形態では、本発明は、Ｆａｂ形態および免疫グロブリン形態で１０ｎＭ未満のＥＣ５０を有する、抗体またはその断片に関する。
【００５３】
別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号７のＨＣＤＲ１領域、配列番号８のＨＣＤＲ２領域、配列番号９のＨＣＤＲ３領域、配列番号１０のＬＣＤＲ１領域、配列番号１１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号１２のＬＣＤＲ３領域を含んでなる。
【００５４】
別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号１７のＨＣＤＲ１領域、配列番号１８のＨＣＤＲ２領域、配列番号１９のＨＣＤＲ３領域、配列番号２０のＬＣＤＲ１領域、配列番号２１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号２２のＬＣＤＲ３領域を含んでなる。
【００５５】
別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３０のＬＣＤＲ１領域、配列番号３１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号３２のＬＣＤＲ３領域を含んでなる。
【００５６】
別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号３７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３８のＨＣＤＲ２領域、配列番号３９のＨＣＤＲ３領域、配列番号４０のＬＣＤＲ１領域、配列番号４１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号４２のＬＣＤＲ３領域を含んでなる。
【００５７】
別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体または抗体断片は、配列番号４７のＨＣＤＲ１領域、配列番号４８のＨＣＤＲ２領域、配列番号４９のＨＣＤＲ３領域、配列番号５０のＬＣＤＲ１領域、配列番号５１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号５２のＬＣＤＲ３領域を含んでなる。
【００５８】
別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体または抗体断片は、配列番号５７のＨＣＤＲ１領域、配列番号５８のＨＣＤＲ２領域、配列番号５９のＨＣＤＲ３領域、配列番号６０のＬＣＤＲ１領域、配列番号６１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号６２のＬＣＤＲ３領域を含んでなる。
【００５９】
本発明の別の実施形態では、抗体またはその断片は、ヒトＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的に結合する。
【００６０】
別の実施形態では本発明の、抗体またはその断片は、モノクローナル抗体または断片である。
【００６１】
本発明の別の実施形態では、抗体またはその断片は、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体またはその断片である。本発明の別の実施形態では、抗体またはその断片は、ＩｇＧアイソタイプである。
【００６２】
一実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に対して特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号５の重鎖および配列番号６の軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号５の重鎖および配列番号６の軽鎖と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の同一性を有する、重鎖および軽鎖を含んでなる。
【００６３】
一実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号１５の重鎖および配列番号１６の軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号１５の重鎖および配列番号１６の軽鎖と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の同一性を有する、重鎖および軽鎖を含んでなる。
【００６４】
一実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体または抗体断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号２５の重鎖および配列番号２６の軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号２５の重鎖および配列番号２６の軽鎖と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の同一性を有する、重鎖および軽鎖を含んでなる。
【００６５】
一実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号３５の重鎖および配列番号３６の軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号３５の重鎖および配列番号３６の軽鎖と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の同一性を有する、重鎖および軽鎖を含んでなる。
【００６６】
一実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号４５の重鎖および配列番号４６の軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号４５の重鎖および配列番号４６の軽鎖と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の同一性を有する、重鎖および軽鎖を含んでなる。
【００６７】
一実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号５５の重鎖および配列番号５６の軽鎖を含んでなる。別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号５５の重鎖および配列番号５６の軽鎖と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の同一性を有する、重鎖および軽鎖を含んでなる。
【００６８】
本発明の別の実施形態では、抗体またはその断片は、単離された抗体またはその断片である。
【００６９】
本発明の別の実施形態では、抗体またはその断片は、組換え抗体またはその断片である。
【００７０】
一実施形態では、本発明は、ＷＴ１陽性疾患の治療で使用するための、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関する。別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１の望まれない存在および／または発現によって特徴付けられる疾患の治療で使用するための、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関する。
【００７１】
一実施形態では、本発明は、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片をコードする、単一の核酸配列または複数の核酸配列を含んでなる核酸組成物に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号７のＨＣＤＲ１領域、配列番号８のＨＣＤＲ２領域、配列番号９のＨＣＤＲ３領域、配列番号１０のＬＣＤＲ１領域、配列番号１１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号１２のＬＣＤＲ３領域；配列番号１７のＨＣＤＲ１領域、配列番号１８のＨＣＤＲ２領域、配列番号１９のＨＣＤＲ３領域、配列番号２０のＬＣＤＲ１領域、配列番号２１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号２２のＬＣＤＲ３領域；配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３０のＬＣＤＲ１領域、配列番号３１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号３２のＬＣＤＲ３領域；配列番号３７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３８のＨＣＤＲ２領域、配列番号３９のＨＣＤＲ３領域、配列番号４０のＬＣＤＲ１領域、配列番号４１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号４２のＬＣＤＲ３領域；配列番号４７のＨＣＤＲ１領域、配列番号４８のＨＣＤＲ２領域、配列番号４９のＨＣＤＲ３領域、配列番号５０のＬＣＤＲ１領域、配列番号５１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号５２のＬＣＤＲ３領域；配列番号５７のＨＣＤＲ１領域、配列番号５８のＨＣＤＲ２領域、配列番号５９のＨＣＤＲ３領域、配列番号５０のＬＣＤＲ１領域、配列番号５１のＬＣＤＲ２領域、および配列番号５２のＬＣＤＲ３領域を含んでなる。
【００７２】
一実施形態では、本発明は、
（ａ）配列番号３の可変重鎖ＤＮＡ配列および配列番号４の可変軽鎖ＤＮＡ配列；
（ｂ）配列番号１３の可変重鎖ＤＮＡ配列および配列番号１４の可変軽鎖ＤＮＡ配列；
（ｃ）配列番号２３の可変重鎖ＤＮＡ配列および配列番号２４の可変軽鎖ＤＮＡ配列；
（ｄ）配列番号３３の可変重鎖ＤＮＡ配列および配列番号３４の可変軽鎖ＤＮＡ配列；
（ｅ）配列番号４３の可変重鎖ＤＮＡ配列および配列番号４４の可変軽鎖ＤＮＡ配列；
（ｆ）配列番号５３の可変重鎖ＤＮＡ配列および配列番号５４の可変軽鎖ＤＮＡ配列の少なくとも１つを含んでなる、核酸分子に関する。
【００７３】
一実施形態では、本発明は、２つの核酸分子に関し、その中では、
１つの核酸分子は配列番号３のＤＮＡ配列を含んでなり、第２の核酸分子は配列番号４のＤＮＡ配列を含んでなり；
１つの核酸分子は配列番号１３のＤＮＡ配列を含んでなり、第２の核酸分子は配列番号１４のＤＮＡ配列を含んでなり；
１つの核酸分子は配列番号２３のＤＮＡ配列を含んでなり、第２の核酸分子は配列番号２４のＤＮＡ配列を含んでなり；
１つの核酸分子は配列番号３３のＤＮＡ配列を含んでなり、第２の核酸分子は配列番号３４のＤＮＡ配列を含んでなり；
１つの核酸分子は配列番号４３のＤＮＡ配列を含んでなり、第２の核酸分子は配列番号４４のＤＮＡ配列を含んでなり；
１つの核酸分子は配列番号５３のＤＮＡ配列を含んでなり、第２の核酸分子は配列番号５４のＤＮＡ配列を含んでなる。
【００７４】
別の実施形態では、本発明は、表１で開示されるような抗体またはその断片をコードする核酸配列または複数の核酸配列を含んでなる、単一のベクターまたは複数のベクターを含んでなるベクター組成物に関する。
【００７５】
一実施形態では、本発明は、表１で開示されるような抗体またはその断片をコードする核酸配列または複数の核酸配列を含んでなる、単一のベクターまたは複数のベクターを含んでなるベクター組成物を含んでなる細胞に関する。
【００７６】
別の実施形態では、本発明は、表１で開示されるような抗体または抗体断片と、薬学的に許容できる担体または賦形剤とを含んでなる、医薬組成物に関する。
【００７７】
一実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合し、Ｆａｂ形態で、１００ｎＭ、７５ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２．５ｎＭまたは１ｎＭ未満のＥＣ５０を有する。好ましい実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合し、Ｆａｂ形態で、１０ｎｍ未満のＥＣ５０を有する。
【００７８】
一実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合し、免疫グロブリン形態で、１００ｎＭ、７５ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２．５ｎＭまたは１ｎＭ未満のＥＣ５０を有する。好ましい実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合し、免疫グロブリン形態で、１０ｎｍ未満のＥＣ５０を有する。
【００７９】
一実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合し、Ｆａｂ形態および免疫グロブリン形態で、１００ｎＭ、７５ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２．５ｎＭまたは１ｎＭ未満のＥＣ５０を有する。好ましい実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合し、Ｆａｂ形態および免疫グロブリン形態で、１０ｎｍ未満のＥＣ５０を有する。
【００８０】
一実施形態では、前記抗体またはその断片は、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対するＥＣ５０よりも少なくとも２５倍、少なくとも１５倍、少なくとも１０倍または少なくとも５倍低いＥＣ５０で、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合する。
【００８１】
一実施形態では、前記抗体またはその断片は、Ｆａｂ形態で、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対するＥＣ５０よりも少なくとも２５倍、少なくとも１５倍、少なくとも１０倍または少なくとも５倍低いＥＣ５０で、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合する。
【００８２】
一実施形態では、前記抗体またはその断片は、免疫グロブリン形態で、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対するＥＣ５０よりも少なくとも２５倍、少なくとも１５倍、少なくとも１０倍または少なくとも５倍低いＥＣ５０で、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合する。
【００８３】
一実施形態では、前記抗体またはその断片は、免疫グロブリン形態およびＦａｂ形態で、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対するＥＣ５０よりも少なくとも２５倍、少なくとも１５倍、少なくとも１０倍または少なくとも５倍低いＥＣ５０で、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合する。
【００８４】
特定の実施形態では、本出願のＥＣ５０値は、ＥＬＩＳＡアッセイにおける測定値としてのＥＣ５０値である。特定の実施形態では、本出願のＥＣ５０値は、本明細書に例示されるようなＥＬＩＳＡアッセイにおける測定値としてのＥＣ５０値である。
【００８５】
一実施形態では、前記抗体またはその断片はＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合するが、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体には結合しない。
【００８６】
一実施形態では、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的な本抗体またはそのフラグメントは、モノクローナル抗体または抗体断片である。
【００８７】
一実施形態では、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的な本抗体またはその断片は、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体である。特定の実施形態では、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的な前記抗体またはその断片は、単離された抗体またはその断片である。別の実施形態では、前記抗体またはその断片は、組換え抗体またはその断片である。さらなる実施形態では、前記抗体またはその断片は、組換えヒト抗体またはその断片である。さらなる実施形態では、前記組換えヒト抗体またはその断片は、単離された組換えヒト抗体またはその断片である。さらなる実施形態では、前記組換えヒト抗体またはその断片または単離された組換えヒト抗体またはその断片は、モノクローナルである。
【００８８】
別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、配列番号１３によってコードされる重鎖と配列番号１４によってコードされる軽鎖、または配列番号２３によってコードされる重鎖と配列番号２４によってコードされる軽鎖、または配列番号３３によってコードされる重鎖と配列番号３４によってコードされる軽鎖、または配列番号４３によってコードされる重鎖と配列番号４４によってコードされる軽鎖、または配列番号５３によってコードされる重鎖と配列番号５４によってコードされる軽鎖、または配列番号６３によってコードされる重鎖と配列番号６４によってコードされる軽鎖、または前述の配列と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の相同性を有する重鎖および軽鎖を含んでなる。
【００８９】
一実施形態では、本抗体またはその断片は、ヒト重鎖定常領域とヒト軽鎖定常領域とを含んでなる。さらなる実施形態では、前記ヒト重鎖定常領域は配列番号５のアミノ酸配列を含んでなり、ヒト軽鎖定常領域は配列番号６のアミノ酸配列を含んでなり、または前記ヒト重鎖定常領域は配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなり、ヒト軽鎖定常領域は配列番号１６のアミノ酸配列を含んでなり、または前記ヒト重鎖定常領域は配列番号２５のアミノ酸配列を含んでなり、ヒト軽鎖定常領域は配列番号２６のアミノ酸配列を含んでなり、または前記ヒト重鎖定常領域は配列番号３５のアミノ酸配列を含んでなり、ヒト軽鎖定常領域は配列番号３６のアミノ酸配列を含んでなり、または前記ヒト重鎖定常領域は配列番号４５のアミノ酸配列を含んでなり、ヒト軽鎖定常領域は配列番号４６のアミノ酸配列を含んでなり、または前記ヒト重鎖定常領域は配列番号５５のアミノ酸配列を含んでなり、ヒト軽鎖定常領域は配列番号５６のアミノ酸配列を含んでなり、
【００９０】
一実施形態では、開示された抗体またはその断片は、ＩｇＧアイソタイプである。別の実施形態では、前記抗体はＩｇＧ１である。
【００９１】
一実施形態では、抗体断片は二価の抗体断片である。
【００９２】
別の実施形態では、本発明は、表１に記載される抗体と交差競合する抗体またはその断片に関する。一実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、表１の抗体の１つのＫａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含んでなる、抗体またはその断片と交差競合する。
【００９３】
別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、６つのＣＤＲを含んでなる抗体またはその断片と交差競合し、ＨＣＤＲ１は配列番号７のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２は配列番号８のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３は配列番号９のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１は配列番号１０のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２は配列番号１１のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３は配列番号１２のアミノ酸配列である。別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号５に記載のＶＨと配列番号６に記載のＶＬとを含んでなる抗体またはその断片と交差競合する。
【００９４】
別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、６つのＣＤＲを含んでなる抗体またはその断片と交差競合し、ＨＣＤＲ１は配列番号１７のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２は配列番号１８のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３は配列番号１９のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１は配列番号２０のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２は配列番号２１のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３は配列番号２２のアミノ酸配列である。別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号１５に記載のＶＨと配列番号１６に記載のＶＬとを含んでなる抗体またはその断片と交差競合する。
【００９５】
別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、６つのＣＤＲを含んでなる抗体またはその断片と交差競合し、ＨＣＤＲ１は配列番号２７のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２は配列番号２８のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３は配列番号２９のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１は配列番号３０のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２は配列番号３１のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３は配列番号３２のアミノ酸配列である。別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号２５に記載のＶＨと配列番号２６に記載のＶＬとを含んでなる抗体またはその断片と交差競合する。
【００９６】
別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、６つのＣＤＲを含んでなる抗体またはその断片と交差競合し、ＨＣＤＲ１は配列番号３７のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２は配列番号３８のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３は配列番号３９のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１は配列番号４０のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２は配列番号４１のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３は配列番号４２のアミノ酸配列である。別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号３５に記載のＶＨと配列番号３６に記載のＶＬとを含んでなる抗体またはその断片と交差競合する。
【００９７】
別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、６つのＣＤＲを含んでなる抗体またはその断片と交差競合し、ＨＣＤＲ１は配列番号４７のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２は配列番号４８のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３は配列番号４９のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１は配列番号５０のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２は配列番号５１のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３は配列番号５２のアミノ酸配列である。別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号４５に記載のＶＨと配列番号４６に記載のＶＬとを含んでなる抗体またはその断片と交差競合する。
【００９８】
別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、６つのＣＤＲを含んでなる抗体またはその断片と交差競合し、ＨＣＤＲ１は配列番号５７のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ２は配列番号５８のアミノ酸配列であり、ＨＣＤＲ３は配列番号５９のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ１は配列番号６０のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ２は配列番号６１のアミノ酸配列であり、ＬＣＤＲ３は配列番号６２のアミノ酸配列である。別の実施形態では、本発明は、抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、配列番号５５に記載のＶＨと配列番号５６に記載のＶＬとを含んでなる抗体またはその断片と交差競合する。
【００９９】
特定の実施形態では、本発明は、表１に記載される抗体と交差競合し、ＥＬＩＳＡベースの交差競合アッセイで、表１に記載される抗体の１つの特異的結合を少なくとも７０％、８０％または９０％低下させる抗体またはその断片に関する。特定の実施形態では、本発明は、表１に記載されるモノクローナル抗体と交差競合し、ＥＬＩＳＡベースの交差競合アッセイで、表１に記載される抗体の１つのＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に対する特異的結合を少なくとも７０％、８０％または９０％低下させる抗体またはその断片に関する。代表的なアッセイ設定は、本発明の実施例６に例示される。
【０１００】
別の実施形態では、本発明は、（例えば、結合、安定化、空間分布によって）表１の抗体の１つと同じエピトープに結合する、抗体またはその断片に関する。さらなる実施形態では、前記抗体またはその断片は、表１の抗体の１つのＫａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含んでなる、抗体またはその断片と同じエピトープに（例えば、結合、安定化、空間的分布によって）結合する。
【０１０１】
エピトープを含む所与のポリペプチドの領域は、当該技術分野で周知の多数のエピトープマッピング技術を用いて同定され得る。例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．，１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙを参照されたい。例えば、直鎖エピトープは、固体支持体上で多数のペプチドを同時に合成する、ペプチドがタンパク質分子の部分に対応する、そしてペプチドが支持体になおも付着している間にペプチドを抗体と反応させることで、判定されてもよい。このような技術は当該技術分野で公知であり、例えば、米国特許第４，７０８，８７１号明細書；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：７８−１８２；Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載される。同様に、立体配座エピトープは、例えば水素／重水素交換、Ｘ線結晶学、および二次元核磁気共鳴などのアミノ酸の空間的立体配座を判定することで容易に同定される。例えば、上記のエピトープマッピングプロトコールを参照されたい。タンパク質の抗原性領域はまた、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐから入手できるＯｍｉｇａバージョン１．０ソフトウェアプログラムを用いて計算されたものなど、標準的な抗原性および疎水性親水性指標プロットを用いて同定され得る。このコンピュータプログラムは、抗原性プロファイルを判定するために、Ｈｏｐｐ／Ｗｏｏｄｓ法、Ｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８を採用し；疎水性親水性指標プロットのために、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅの技術、Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２を採用する。
【０１０２】
一実施形態では、本発明は、表１のいずれかの抗体のＫａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含んでなる、抗体またはその断片に関する。別の態様では、本発明は、表１の各抗体のＫａｂａｔによって定義される６つのＣＤＲを含んでなる、単離されたモノクローナル抗体またはその断片に関する。
【０１０３】
別の実施形態では、本発明は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはその断片に関し、前記抗体またはその断片は、５×１０−２Ｍ未満、１０−２Ｍ未満、５×１０−３Ｍ未満、１０−３Ｍ未満、５×１０−４Ｍ未満、１０−４Ｍ未満、５×１０−５Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、５×１０−６Ｍ未満、１０−６Ｍ未満、５×１０−７Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１３Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、５×１０−１４Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５×１０−１５Ｍ未満、または１０−１５Ｍ未満の解離速度定数（ＫＤ）で、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に対する一価の親和性を有し、前記抗体またはその断片は、二価の形態において、一価の形態における解離速度定数（ＫＤ）よりも少なくとも２倍、５倍、１０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍、１０００００倍低い解離速度定数（ＫＤ）で、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に対する親和性（見かけの親和性）を有する。さらなる実施形態では、前記抗体またはそれらの断片の二価の親和性は、ＩｇＧ形態で判定され、前記抗体またはそれらの断片の一価の親和性は、Ｆａｂ形態で判定される。
【０１０４】
別の実施形態では、本発明は、ＷＴ１の望まれない存在および／または発現に関連する障害または病状を治療するための、前記医薬組成物の使用に関する。別の実施形態では、ＷＴ１の望まれない存在および／またはの発現に関連する前記病状は、がんである。
【０１０５】
このような担体、希釈剤、および賦形剤は当該技術分野で周知であり、当業者は、本開示のＲＭＦ／ＨＬＡ抗体または抗体断片によって対象を治療するのに最適な処方および投与経路を見いだすであろう。
【０１０６】
別の実施形態では、本発明は、対象において炎症性疾患を予防する方法に関し、前記方法は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体拮抗薬を前記対象に投与するステップを含んでなる。「予防」は、この文脈の用法では、疾患の発症を予防すること、または疾患の発症を遅延させることを目的とする方法を指す。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、対象はヒトである。代案の態様では、対象は、ラットまたはマウスなどの齧歯類である。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、本発明のＲＭＦ／ＨＬＡに特異的な抗体またはそれらの断片は、皮下投与される。その他の態様では、本発明のＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的な抗体またはそれらの断片は、静脈内、関節内または脊髄内投与される。
【０１０９】
一実施形態では、本発明は、表１の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬを含んでなる、単離されたモノクローナル抗体またはその断片に関する。
【０１１０】
別の実施形態では、本発明は、単離されたモノクローナル抗体またはその断片をコードする核酸に関し、核酸は、表１の抗体のいずれかのＶＨおよびＶＬを含んでなる。
【０１１１】
【表１−１】
2018536393.tif 000002
【表１−２】
2018536393.tif 000003
【表１−３】
2018536393.tif 000004
【表１−４】
2018536393.tif 000005
【表１−５】
2018536393.tif 000006
【表１−６】
2018536393.tif 000007
【０１１２】
ここで本発明を以下の実施例において図面を参照して説明するが、それに限定されるものではない。本発明の目的で、本明細書で引用される全ての参考文献は、その内容全体が参照により援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１１３】
【図１】６つの参照抗体のＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に対する結合を示す。
【図２】６つの参照抗体のＲＨＡＭＭ／ＨＬＡ複合体に対する結合を示す。
【図３】６つの参照抗体のＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対する結合を示す。
【図４】本発明の抗体のＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に対する結合を示す。
【図５】本発明の抗体のＲＨＡＭＭ／ＨＬＡ複合体に対する結合を示す。
【図６】本開示の抗体のＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対する結合を示す。
【実施例】
【０１１４】
実施例１：抗原の作製
抗体選択のための標的として、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体を使用した。標的は、Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２０１３  Ｍａｒｃｈ  １３；５（１７６）：１７６ｒａ３３）に記載されるようにして作製した。ビオチン化ＷＴ１／ＨＬＡ−Ａ０２０１およびＲＨＡＭＭ−Ｒ３／ＨＬＡ＿Ａ０２０１複合体は、免疫学部において、（小さな修正を加えてＡｌｔｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．１９９６．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：９４、およびＪｕｎｇ，Ｇ．，Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ，Ｊ．Ａ．，ａｎｄ  Ｍｕｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ，Ｈ．Ｊ．（１９８７）．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｒｅｓｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｂｏｕｎｄ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｂｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｈｅｔｅｒｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，８４（１３），４６１１−４６１５に記載されるようにして）組換えＨＬＡ−Ａ２およびｓ２−ミクログロブリンと共にペプチドを再折りたたみすることによって合成した。
【０１１５】
陰性対照として、ＲＨＡＭＭ／ＨＬＡ複合体を作製した（Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＲＨＡＭＭペプチドは、ＩＬＳＬＥＬＭＫＬ（配列番号（ＳＥＤ  ＩＤ  ＮＯ）６３）のアミノ配列を有する。ＲＨＡＭＭペプチドは、ＨＬＡ−Ａ０２０１と複合体形成させた。
【０１１６】
別の陰性対照として、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体を作製した。ＰＩＧＱペプチドは、ＸＰＲＥＳＩＤＥＮＴ（登録商標）（ｉｍｍａｔｉｃｓ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＧｍｂＨ，Ｇｅｒｍａｎｙ）標的化同定プラットフォームを通じて同定した（ＲＭＦＰＧＥＶＡＬ（配列番号ＳＥＤ  ＩＤ  ＮＯ）６４）のアミノ酸配列）。これもまた、ＨＬＡ−Ａ０２０１と複合体形成させた。ＰＩＧＱペプチドは、健常ヒト組織に遍在する。したがって、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体への結合は、極めて好ましくない。ＰＩＧＱペプチドの９つのアミノ酸のうちの５つは、ＷＴ１ペプチドと同じである。
【０１１７】
全ての抗原は、ビオチン化形態および非ビオチン化形態で生成された。全てのペプチドおよびＨＬＡ抗原の純度（＞９５％）およびモノマー部分（＞９７〜９９％）は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、分析サイズ排除クロマトグラフィーおよび動的光散乱を通じて確認した。
【０１１８】
実施例２：参照抗体の作製
６つのＲＭＦ／ＨＬＡ複合体結合抗体は、国際公開第２０１２／１３５８５４号パンフレット（Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ）に記載されている。これらの６つの抗体のうちの５つもまた、Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．（上記参照）に記載される。Ｒｅｆｍａｂ＃１８（下記参照）のみが、Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）に記載されていない。
【０１１９】
これらの６つの抗体の配列（Ｒｅｆｍａｂ＃３、Ｒｅｆｍａｂ＃５、Ｒｅｆｍａｂ＃１３、Ｒｅｆｍａｂ＃１５、Ｒｅｆｍａｂ＃１８、およびＲｅｆｍａｂ＃２３）をクローン化し、ヒトＩｇＧ１ｆ抗体をＨＫＢ１１細胞内で生成した。抗体を精製し、品質管理（収量、濃度、純度、およびモノマー含量）に供した。
【０１２０】
実施例３：参照抗体に対する単離された抗原の結合
この実験では、参照抗体の特異性を調べた。ビオチン化ペプチド／ＨＬＡ複合体をニュートラアビジンプレート上に、５０ｎＭでコーティングした。実施例２の単離された参照抗体を抗原上で滴定した：結合は、ＡＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用するＥＬＩＳＡで試験した。
【０１２１】
全ての参照抗体は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合した。Ｒｅｆｍａｂ＃２３はまた、文献に記載されているようにＲＨＡＭＭ−ＨＬＡ複合体とも非特異性に結合した。
【０１２２】
興味深いことに、Ｒｅｆｍａｂ＃１８を除く全ての参照抗体は、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体、すなわち健常ヒト組織上に提示されるペプチドにも結合した。Ｒｅｆｍａｂ＃１８のみが、ＥＬＩＳＡでＷＴ１−ＨＬＡ複合体に特異的であった。結果は、図１&#12316;３に示される。
【０１２３】
実施例４：細胞上の抗原に対する参照抗体の結合
無傷細胞上に提示された場合、単離された抗原への結合は必ずしも抗原への結合と一致しないので、対照抗体もまたこの抗原を発現する細胞上のＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に結合するかどうかを調べた。
【０１２４】
抗原陽性がん細胞として、ＳＥＴ２細胞（ＤＳＭＺ  Ｎｏ．ＡＣＣ６０８）およびＢＶ１７３細胞（ＤＳＭＺ  Ｎｏ．ＡＣＣ２０）を使用した（Ｄａｏ  ｅｔ  ａｌ．；２０１３を参照されたい）。結合は、ＰＥコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を使用するフローサイトメトリーによって測定し、ＥＣ５０値を判定した。結果は、表２に示される。「＋＋」は１０ｎＭ未満のＥＣ５０での結合を示し、「＋」は１０ｎＭを超えるＥＣ５０での結合を示し、「−−−」は細胞上の標的に結合しないことを示す。
【０１２５】
【表２】
2018536393.tif 000008
【０１２６】
表２に見られるように、６つの参照抗体のうちの２つは、標的を発現する細胞に結合しない。したがって、これらの抗体（Ｒｅｆｍａｂ＃１８を含む）は、治療上の開発に適していない。
【０１２７】
実施例５：優れたＲＭＦ／ＨＬＡ複合体結合体の同定
抗体作製のために、Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）ライブラリー（ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ  ＡＧ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、ＷＴ１／ＨＬＡ複合体に対するＦａｂフラグメントを選択した。Ｙｌａｎｔｈｉａ（登録商標）ライブラリー（Ｔｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ｍＡｂｓ  ５：３，１−２６；Ｍａｙ／Ｊｕｎｅ（２０１３）および米国特許第８，７２８，９８１号明細書）は、市販のファージミドライブラリーであり、ファージ表面におけるＦａｂ提示のためにＣｙｓＤｉｓｐｌａｙ（登録商標）技術を採用する（（Ｌｏｈｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開第２００１／０５９５０号パンフレット）。
【０１２８】
ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体特異的抗体を単離するために、異なるパンニングストラテジーを用いた（溶液パンニング、播種ベースパンニング）。各パンニングストラテジーは、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に対する少なくとも３回の個々のラウンドのパンニングを含んでなった。非特異的結合体の選択は、対抗標的としてのＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体によるプレブロッキングによって妨げた。
【０１２９】
単離された結合体は、蛍光ビーズ使用するＩｎｔｅｌｌｉｃｙｔ  ＨＴＦＣスクリーニングシステム上の一次スクリーニングに供した。３つの異なる抗原（ＷＴ１／ＨＬＡ複合体、ＲＨＡＭＭ／ＨＬＡ複合体、およびＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体）を並行して試験した。ＷＴ１−ＨＬＡ複合体抗原上で陽性であったが別の２つの抗原の上で陰性であったヒットを単離し、より厳格なＥＬＩＳＡアッセイを用いる二次スクリーニングに供した。選択された陽性クローンは、ＩｇＧ形態に変換した。最も有望な候補のうち６つを精製し、さらに特性決定した。６つの結合体の配列は、表１に示される。
【０１３０】
結合体は、さらに詳細な特性決定に供した。これらはまた、先行技術の抗体とも直接比較した。結合体のＥＣ５０を、一価Ｆａｂ形態として、および完全長免疫グロブリン（ＩｇＧ１）として測定した。
【０１３１】
実施例６：Ｆａｂ形態における結合体の特性決定
結合体は、詳細な特性決定に供した。それらは、実施例３に記載されるようなニュートラアビジンプレートを使用するＥＬＩＳＡアッセイにおいて、先行技術の抗体と直接比較した。選択された参照抗体および本発明の結合体について、ＥＣ５０を判定した。結果は表３に要約される。「＋＋」は１０ｎＭ未満のＥＣ５０での結合を示し、「＋」は１０ｎＭを超えるＥＣ５０での結合を示し、「−−−」は結合しないことを示す。
【０１３２】
ＲＭＦ／ＨＬＡ上のＥＣ５０値は、先行技術の参照抗体のＥＣ５０値よりも有意により低い（より良い）。試験された全ての結合体は、先行技術の最良の結合体よりも少なくとも３．３倍優れたＥＣ５０を示した。試験された４つの結合体のうち３つは、先行技術の最良の結合体よりも少なくとも５．５倍優れたＥＣ５０を示した。試験された４つの結合体のうち２つは、先行技術の最良の結合体よりも少なくとも７．５倍優れたＥＣ５０を示した。さらに、本発明の結合体のいずれも、対抗標的に対するいかなる結合も示さず、特にＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体への結合を示さない。一部の参照抗体については、ある程度の結合が観察された。
【０１３３】
抗原ＲＭＦ／ＨＬＡに対する、結合体ＡａｌｉおよびＲｅｆｍａｂ＃１３のＦａｂ断片の親和性はまた、ストレプトアビジンに固定化された抗原を用いたＯｃｔｅｔシステムによっても測定した。ＫＤ値は、Ａａｌｉでは６６ｎＭ、Ｒｅｆｍａｂ＃１３では５９０ｎＭとして測定され、本発明の抗体が、より高い親和性を有することも確認された。
【０１３４】
【表３】
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【０１３５】
実施例７：免疫グロブリン形態における結合体の特異性
この実験では、本開示の抗体の特異性を実施例３に記載されるようにして調べた。結果は、図４&#12316;６に示される。
【０１３６】
全ての結合体は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に高度に特異的であることが見いだされた。いずれの結合体も、ＲＨＡＭＭ−ＨＬＡ複合体またはＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体のどちらとも交差反応性を示さなかった。これは、（Ｒｅｆｍａｂ＃１８を除く）全てが、健常ヒト組織上で発現されるペプチド／ＨＬＡ複合体（ＰＩＧＱ／ＨＬＡ）との交差反応性を示した先行技術の抗体（実施例３参照）とは、著しく対照的である。
【０１３７】
実施例８：免疫グロブリン形態における結合体の親和性およびＥＣ５０
本開示の結合体および先行技術の結合体について、ＥＬ５０値を判定した（ＥＬＩＳＡはニュートラアビジンプレート上で実施した）。結果は、表４に要約される。「＋＋」は１０ｎＭ未満のＥＣ５０での結合を示し、「＋」は１０ｎＭを超えるＥＣ５０での結合を示し、「−−−」は結合しないことを示す。
【０１３８】
【表４】
2018536393.tif 000010
【０１３９】
全ての結合体（本発明の結合体ならびに先行技術の結合体）は、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に対する非常に低いＥＣ５０値を示した（Ｒｅｆｍａｂ＃３およびＲｅｆｍａｂ＃５を除いて、全てのＥＣ５０は事実上＜１ｎＭであった）。しかし、先行技術（Ｒｅｆｍａｂ＃１８を除く）の全ての結合体は、ＰＩＧＱ／ＨＬＡ対抗抗原への結合もまた示した。先行技術の２つの結合体は、ＲＨＡＭＭ／ＨＬＡ対抗抗原への結合を示した。
【０１４０】
結合体ＡａｌｉおよびＲｅｆｍａｂ＃１３の見かけの親和性は、ＯｃｔｅｔシステムによってＲＭＦ／ＨＬＡ抗原に対して測定した。Ｒｅｆｍａｂ＃１３の見かけの親和性値は８．２ｎＭと判定された。Ａａｌｉの結合は、非常に遅い解離速度によって特徴付けられ、これはシステムに設定された仕様限界を超えていた。Ｒｅｆｍａｂ＃１３（８．２ｎＭ）と比較して、Ａａｌｉの見かけの親和性は＜０．５ｎＭである。
【０１４１】
実施例９：細胞に対する本発明の抗体の結合
本開示の抗体を用いて、実施例４を繰り返し、すなわち、ＲＮＦ／ＨＬＡ陽性ＳＥＴ２細胞（ＤＳＭＺ番号ＡＣＣ６０８）およびＢＶ１７３細胞（ＤＳＭＺ番号ＡＣＣ２０）への結合をフローサイトメトリーによって試験した。ＥＣ５０値が判定された。結果は、表５に示される。「＋＋」は１０ｎＭ未満のＥＣ５０での結合を示し、「＋」は１０ｎＭを超えるＥＣ５０での結合を示し、「−−−」は細胞上の標的に結合しないことを示す。
【０１４２】
【表５】
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【０１４３】
本発明の全ての抗体は、ＷＴ１／ＨＬＡ発現細胞への結合を示す。これは、先行技術抗体の大部分（６つのうち４つ）にも当てはまったが、注目すべきことに、ＰＩＧＱ／ＨＬＡに結合しない唯一の参照抗体であるＲｅｆｍａｂ＃１８ではそうではなかった。
【０１４４】
したがって、本発明の抗体および結合体は、それらがＰＩＧＱ／ＨＬＡ複合体に対するいかなる交差反応性も示さずに、ＲＭＦ／ＨＬＡ複合体に特異的に結合することを特徴とする。さらに、本開示の抗体はまた、ＷＴ１／ＨＬＡ発現細胞株にも結合する。
【０１４５】
実施例７：白血病患者サンプルへの結合
本発明の結合体は、原発性ＡＭＬ細胞上のＲＭＦエピトープを検出するそれらの能力について調べられる。結合体は、患者のＡＭＬ芽球に結合することが予期される。結果は、フローサイトメトリー分析によって確認される。結果は、白血病細胞の表面上のＲＭＦ／ＨＬＡ−Ａ０２０１のレベルが、本発明の結合体との反応性を可能にするのに十分であることを確認する。この結果はまた、陰性の健常細胞上の標的分子のレベルが、重要でないことも確認する。
【０１４６】
実施例８：ＡＤＣＣ活性の媒介
本発明の結合体はまた、ヒトにおける治療用抗体の主要なエフェクター機序の１つであるＡＤＣＣを媒介する、それらの可能性についても調査される。ヒトＰＢＭＣの存在下では、結合体は、ＲＭＦペプチドを負荷されたＴ２細胞（抗原プロセシング欠損細胞株、例えば、国際公開第２０１２／１３５８５４号パンフレットを参照されたい）に対して、用量依存性ＰＢＭＣ  ＡＤＣＣを媒介するが、Ｔ２細胞単独または対照ペプチドでパルス処理されたＴ２細胞に対しては媒介しない。結合体はまた、中皮腫細胞株、ＪＭＮ、および白血病細胞株ＢＶ１７３などの腫瘍細胞上でＨＬＡ−Ａ０２０１分子によって自然に提示されたＲＭＦエピトープに対しても、ＡＤＣＣを媒介できるが、ＭＳＴＯまたはＨＬ−６０などのＨＬＡ−Ａ２陰性細胞に対しては媒介できない。これらの結果は、結合体が、ＲＭＦおよびＨＬＡ−Ａ０２０１複合体を生理学的レベルで天然に発現する細胞に対して、ならびに細胞株上で、特異的ＡＤＣＣを媒介することを実証する。
【０１４７】
実施例９：ＮＳＧマウスにおけるヒト白血病細胞の除去
本発明の結合体は、生体内ＮＯＤ  ＳＣＩＤγ（ＮＳＧ）マウス異種移植モデルにおいてさらに調べられる。マウスは、ＢＶ１７３  ｂｃｒ／ａｂｌ陽性急性リンパ芽球性白血病で、６日前に静脈内に異種移植される。治療の時点で、マウスは、肝臓、脾臓、およびＢＭにおいて、ルシフェラーゼイメージングによって可視化される白血病を発症した。本発明の結合体は、少なくとも３０日間にわたり、腫瘍負荷を劇的に減少させる。結果は、抗体の用量を滴定することによって確認される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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