(57)【要約】  本発明は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび／または毒素Ｂに特異的に結合する、向上した半減期を有する抗体の使用を特徴とする、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染（ＣＤＩ）、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患、およびそれらの症状を治療する方法を特徴とする。一態様において、本発明は、対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患を治療する方法であって、対象に、変化を有さない抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＡおよびＢ抗体と比較して一方または両方の抗体の半減期を増加させる変化を有する抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ抗体および抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ抗体の組合せを投与することを含む方法を提供する。一態様において、本発明は、抗毒素Ａ抗体および抗毒素Ｂ抗体の等モル混合物を含む組成物を特徴とする。本発明は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはその症状を治療するためのキットを提供する。
2018517670.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患を治療する方法であって、前記対象に、変化を有さない抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＡおよびＢ抗体と比較して一方または両方の抗体の半減期を増加させる変化を含む抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ抗体および抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ抗体の組合せを投与することを含む方法。
【請求項２】
対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患を治療する方法であって、前記対象に、抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ抗体および抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ抗体ならびにバンコマイシンの組合せを投与し、それにより参照用量または投与頻度と比較してバンコマイシンの用量または投与頻度を低減させることを含む方法。
【請求項３】
一方または両方の抗体が、変化を有さない抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＡおよびＢ抗体と比較して増加した半減期を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記変化が、２５２Ｙ、２５４Ｔ、または２５６Ｅのいずれか１つ以上である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記変化が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）へのコンジュゲーションまたはアルブミンへのコンジュゲーションである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗毒素Ａ抗体が、配列番号１の配列：
【化１】
2018517670.tif 000053
を含む重鎖を有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗毒素Ａ抗体が、配列番号２の配列：
【化２】
2018517670.tif 000054
を含む軽鎖を有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗毒素Ａ抗体が、ＰＡ５０−ＹＴＥである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記抗毒素Ｂ抗体が、配列番号３の配列：
【化３】
2018517670.tif 000055
を含む重鎖を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗毒素Ｂ抗体が、配列番号４の配列：
【化４】
2018517670.tif 000056
を含む軽鎖を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗毒素Ｂ抗体が、ＰＡ４１−ＹＴＥである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体の組合せが、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せを、単回用量で投与する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
抗生物質、例えば、バンコマイシンを投与することをさらに含む、請求項２〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記バンコマイシンを、経口または静脈内投与する、請求項２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記参照用量および投与頻度が、１５〜２０ｍｇ／ｋｇ、１日２〜３回におけるバンコマイシンの静脈内投与である、請求項２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記参照用量および投与頻度が、１２５ｍｇ、１日３〜４回における経口投与である、請求項２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）再感染の機会を低減させる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび／または毒素Ｂを中和する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記対象における微生物叢の回復を向上させ、微生物叢の失調を低減させ、および／または腸損傷を低減させる、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
抗生物質療法に対して微生物叢の回復を向上させ、および／または微生物叢の失調を低減させる、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染（ＣＤＩ）は、Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌにより緊急の公衆衛生上の脅威として分類され、細菌性毒素媒介疾患および院内感染の主因である。ＣＤＩの大多数は、腸内微生物叢の失調（正常腸管フローラの破壊）が関与し、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の増殖を容易にする広域スペクトル抗生物質による前治療の結果である。逆説的に、この病原菌に疾患を引き起こさせる失調は、ＣＤＩを治療するために使用されるまさにその抗生物質により長期化し、高い疾患再発率をもたらす。
【背景技術】
【０００２】
グラム陽性芽胞形成嫌気性生物クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）による感染は、中程度の下痢および偽膜性大腸炎から中毒性巨大結腸症、敗血症および死亡に及ぶ症状をもたらす。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）胞子は、ほとんどの殺菌剤に耐性であり、症状を呈する患者および無症状の保菌者の両方により院内環境に飛散する。ＣＤＩの年間発生率は、２００１年以来２倍になっており、高病原性株の出現と一致する。５００，０００件を超えるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の新たな症例が、米国で毎年発生し、推定値は、欧州において年間４００，０００超の診断ＣＤＩイベントが発生していることを示唆する。このことは、より有効な治療方針を必要とする疾病率、死亡率、および医療財源消費の大きな負担を表す。
【０００３】
ＣＤＩは、共存症を有する高齢患者（虚弱集団）において最もよく見られ、感染は、典型的には、広域スペクトル抗生物質による治療の後に続く。有益な腸内微生物叢の抗生物質媒介破壊により、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）によるコロニー化および感染が可能となる。ＣＤＩを治療するために一般に使用される抗生物質（メトロニダゾール、バンコマイシンおよびフィダキソマイシン）は、微生物叢の失調を長期化させ、抗生物質療法中止後に１３〜２５％の感染再発率をもたらす。ＣＤＩのための持続的な治癒には、感染再発に耐性である多様で保護的な腸内微生物叢の回復が要求される。実際、全身健康の維持における有益な腸管微生物叢の重要な役割の明確化に役立ったのは、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）病因および耐性の理解の進歩である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
現在のところ、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染および疾病の有効な治療および予防手段は存在しない。新たな治療方法が緊急に要求される。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
下記のとおり、本発明は、一般に、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび／または毒素Ｂに特異的に結合する、向上した半減期を有する抗生物質の使用を特徴とするＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染（ＣＤＩ）、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患、およびそれらの症状を治療する方法を特徴とする。
【０００６】
一態様において、本発明は、対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患を治療する方法であって、対象に、変化を有さない抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＡおよびＢ抗体と比較して一方または両方の抗体の半減期を増加させる変化を有する抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ抗体および抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ抗体の組合せを投与することを含む方法を提供する。
【０００７】
別の態様において、本発明は、対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患を治療する方法であって、対象に、抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ抗体および抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ抗体ならびにバンコマイシンの組合せを投与し、それにより、参照用量または投与頻度と比較してバンコマイシンの用量または投与頻度を低減させることを含む方法を提供する。
【０００８】
本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、一方または両方の抗体は、変化を有さない抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＡおよびＢ抗体と比較して増加した半減期を有する。ある実施形態において、変化は、２５２Ｙ、２５４Ｔ、または２５６Ｅ（例えば、ＹＴＥ改変）のいずれか１つ以上である。一部の実施形態において、変化は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）へのコンジュゲーションまたはアルブミンへのコンジュゲーションである。
【０００９】
本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、抗毒素Ａ抗体は、配列番号１の配列：
【化１】
2018517670.tif 000003
を含有する重鎖を有する。
【００１０】
本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、抗毒素Ａ抗体は、配列番号２の配列：
【化２】
2018517670.tif 000004
を含有する軽鎖を有する。
【００１１】
本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、抗毒素Ｂ抗体は、配列番号３の配列：
【化３】
2018517670.tif 000005
を含有する重鎖を有する。
【００１２】
本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、抗毒素Ｂ抗体は、配列番号４の配列：
【化４】
2018517670.tif 000006
を含有する軽鎖を有する。
【００１３】
種々の実施形態において、抗毒素Ａ抗体は、ＰＡ５０−ＹＴＥである。種々の実施形態において、抗毒素Ｂ抗体は、ＰＡ４１−ＹＴＥである。特定の実施形態において、抗体の組合せは、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せである。ある実施形態において、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せを単回用量で投与する。
【００１４】
本明細書に記載の任意の態様のさらなる実施形態において、治療方法は、抗生物質、例えば、バンコマイシン、フィダキソマイシンおよびメトロニダゾールを投与することをさらに含む。種々の実施形態において、抗生物質を経口または静脈内投与する。
【００１５】
本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、治療方法は、バンコマイシンを投与することをさらに含む。種々の実施形態において、バンコマイシンを経口または静脈内投与する。ある実施形態において、参照用量および投与頻度は、１５〜２０ｍｇ／ｋｇ、１日２〜３回におけるバンコマイシンの静脈内投与である。一部の実施形態において、参照用量および投与頻度は、１２５ｍｇ、１日３〜４回における経口投与である。
【００１６】
本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび／または毒素Ｂを中和する。本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、治療方法は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）再感染の機会を低減させる。本明細書に記載の任意の態様の種々の実施形態において、治療方法は、例として、例えば、抗生物質療法に対して対象における微生物叢の回復を向上させ、微生物叢の失調を低減させ、および／または腸損傷を低減させる。
【００１７】
本発明の他の特徴部および利点は、詳細な説明、および特許請求の範囲から明らかである。
【００１８】
定義
特に定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する分野の当業者により一般に理解される意味を有する。以下の参照文献は、当業者に本発明において使用される用語の多くの一般的定義を提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２ｎｄ  ｅｄ．１９９４）；Ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｗａｌｋｅｒ  ｅｄ．，１９８８）；Ｔｈｅ  Ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）；およびＨａｌｅ  ＆  Ｍａｒｈａｍ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｐｅｒ  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）。本明細書において使用される以下の用語は、特に記載のない限り、以下のそれらに帰属する意味を有する。
【００１９】
「クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ（ＴｃｄＡ）」は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＹＰ＿００１０８７１３７において提供されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％以上のアミノ酸同一性を有し、ＴｃｄＡ生物学的活性を有するポリペプチドまたはその断片を意味する。ＴｃｄＡ生物学的活性としては、グルコシル化活性、例えば、ＧＴＰアーゼ（例えば、Ｒｈｏ、Ｒａｃ、およびＣｄｃ４２）のグルコシル化が挙げられる。例示的なＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ配列を以下に提供する（配列番号５）：
【化５】
2018517670.tif 000007
【化６】
2018517670.tif 000008
【化７】
2018517670.tif 000009
【００２０】
「クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ（ＴｃｄＢ）」は、ＮＣＢＩアクセッション番号ＹＰ＿００１０８７１３５において提供されるアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％以上のアミノ酸同一性を有し、ＴｃｄＢ生物学的活性を有するポリペプチドまたはその断片を意味する。ＴｃｄＢ生物学的活性としては、グルコシル化活性、例えば、ＧＴＰアーゼ（例えば、Ｒｈｏ、Ｒａｃ、およびＣｄｃ４２）のグルコシル化が挙げられる。例示的なＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ配列を以下に提供する（配列番号６）：
【化８】
2018517670.tif 000010
【化９】
2018517670.tif 000011
【００２１】
本明細書において使用される用語「半減期」または「インビボ半減期」は、所与の動物の循環中のＦｃＲｎ結合部位を含有する抗体（例えば、ＩｇＧ）、またはその断片の生物学的半減期を指し、動物中に投与された量の半分が動物中の循環および／または他の組織からクリアランスされるために要求される時間により表される。所与のＩｇＧのクリアランス曲線が時間の関数として構築される場合、曲線は、通常、二相であり、血管内空間および血管外空間の間に注射されたＩｇＧ分子の平衡を表し、部分的には、分子のサイズにより決定される急速なα相と、血管内空間中のＩｇＧ分子の異化を表すより長いβ相とを有する。用語「インビボ半減期」は、事実上、β相のＩｇＧ分子の半減期に対応する。
【００２２】
「増加した半減期を有する抗体」は、参照抗体と比較して増加した生物学的半減期を有する抗体を意味する。特定の実施形態において、参照抗体は、変化も改変も有さない抗体（例えば、未改変の親抗体または前駆抗体）である。
【００２３】
「抗ｔｃｄＡ抗体」は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａに特異的に結合する抗体を意味する。抗ｔｃｄＡ抗体としては、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａに特異的であるモノクローナルおよびポリクローナル抗体、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる。ある態様において、本明細書に記載の抗ｔｃｄＡ抗体は、モノクローナル抗体（またはその抗原結合断片）、例えば、ネズミ、ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体（それらの改変誘導体を含む）である。例示的な抗ｔｃｄＡ抗体（例えば、ＰＡ−５０、ＰＡ−３９、およびＰＡ−３８）は、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３０２０２６１８号明細書／米国特許第８９８６６９７号明細書に記載されている。１つの特定の実施形態において、抗ｔｃｄＡ抗体は、以下の重鎖および軽鎖配列を有するＰＡ５０−ＹＴＥである：
【００２４】
ＰＡ５０−ＹＴＥ軽鎖（配列番号２）：
【化１０】
2018517670.tif 000012
【００２５】
ＰＡ５０−ＹＴＥ重鎖（配列番号１）：
【化１１】
2018517670.tif 000013
【００２６】
「抗ｔｃｄＢ抗体」は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂに特異的に結合する抗体を意味する。抗ｔｃｄＢ抗体としては、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂに特異的であるモノクローナルおよびポリクローナル抗体、ならびにそれらの抗原結合断片が挙げられる。ある態様において、本明細書に記載の抗ｔｃｄＢ抗体は、モノクローナル抗体（またはその抗原結合断片）、例えば、ネズミ、ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体（それらの改変誘導体を含む）である。例示的な抗ｔｃｄＢ抗体（例えば、ＰＡ−４１）は、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３０２０２６１８号明細書／米国特許第８９８６６９７号明細書に記載されている。１つの特定の実施形態において、抗ｔｃｄＢ抗体は、以下の重鎖および軽鎖配列を有するＰＡ４１−ＹＴＥである。
【００２７】
ＰＡ４１−ＹＴＥ軽鎖（配列番号４）
【化１２】
2018517670.tif 000014
【００２８】
ＰＡ４１−ＹＴＥ重鎖（配列番号３）
【化１３】
2018517670.tif 000015
【００２９】
「改善する」は、疾患の発症または進行を減少させ、抑制し、減衰させ、縮小させ、停止させ、または安定化させることを意味する。
【００３０】
本開示において使用される用語「抗体」は、免疫グロブリンまたはその断片もしくは誘導体を指し、抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを包含し、それがインビトロで産生されるかインビボで産生されるかを問わない。この用語は、限定されるものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異的、多特異的、非特異的、ヒト化、単鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、突然変異、およびグラフト化抗体を含む。「インタクト抗体」におけるように用語「インタクト」により特に修飾されない限り、本開示の目的のため、用語「抗体」は、抗原結合機能、すなわち、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａまたは毒素Ｂポリペプチドに特異的に結合する能力を保持する抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、および他の抗体断片も含む。典型的には、このような断片は、抗原結合ドメインを含む。
【００３１】
用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合断片」、および「結合断片」は、抗体および抗原間の特異的結合を担うアミノ酸を含む抗体分子の一部を指す。抗原が大型である例において、抗原結合ドメインは、抗原の一部にのみ結合し得る。抗原結合ドメインとの特異的相互作用を担う抗原分子の一部は、「エピトープ」または「抗原決定基」と称される。特定の実施形態において、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むが、必ずしも、その両方を有さなければならないわけでない。例えば、いわゆるＦｄ抗体断片は、ＶＨドメインからのみなるが、依然として、インタクト抗体のいくらかの抗原結合機能を保持する。
【００３２】
抗体の結合断片は、組換えＤＮＡ技術により、またはインタクト抗体の酵素的もしくは化学的開裂により産生される。結合断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、および単鎖抗体が挙げられる。「二重特異的」または「二価」抗体以外の抗体は、同一のその結合部位のそれぞれを有すると理解される。酵素パパインによる抗体の消化は、「Ｆａｂ」断片としても公知である２つの同一の抗原結合断片、および抗原結合活性を有さないが、結晶化能を有する「Ｆｃ」断片をもたらす。酵素ペプシンによる抗体の消化は、抗体分子の２つのアームが依然として結合したままであり、２つの抗原結合部位を含むＦ（ａｂ’）２断片をもたらす。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原の架橋能を有する。本明細書において使用される「Ｆｖ」は、抗原認識部位および抗原結合部位の両方を保持する抗体の最小断片を指す。本明細書において使用される「Ｆａｂ」は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖のＣＨＩドメインを含む抗体の断片を指す。
【００３３】
用語「ｍＡｂ」は、モノクローナル抗体を指す。本発明の抗体としては、限定されるものではないが、全天然抗体、二重特異的抗体；キメラ抗体；Ｆａｂ、Ｆａｂ’、単鎖Ｖ領域断片（ｓｃＦｖ）、融合ポリペプチド、および非慣用抗体が挙げられる。
【００３４】
本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する」および「有する」などは、米国特許法においてそれらに帰属する意味を有し得、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得；「〜から本質的になる」または「本質的になる」は、同様に、米国特許法において帰属する意味を有し、その用語は、無制約であり、記述される基礎的または新規特徴が記述されるそれを超える存在により変化しない限り、記述されるそれを超える存在を許容するが、先行技術の実施形態を除外する。
【００３５】
「Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患」は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染に関連する任意の疾患またはその症状を意味する。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患は、以下の症状の１つ以上：下痢、偽膜性大腸炎、中毒性巨大結腸症、結腸の穿孔、および一部の例において敗血症を特徴とする。
【００３６】
用語「有効量」は、対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を低減もしくは安定化させるため、または患者におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染に関連する症状を低減および／もしくは改善するため、またはそうでなければ所望の生物学的帰結を達成するために十分な薬剤の投与量または量を指す。
【００３７】
本明細書において使用される「中和する」は、抗体が特異的結合する毒素の有害効果の低減、阻害、遮断、改善、または排除を指す。毒素の有害効果の中和としては、１）Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連下痢もしくは疾患の発症または進行の遅延、低減、阻害、または予防、２）抗体により治療されず、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患を有する対象の生存率中央値と比較した対象の生存率の増加、３）Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連下痢もしくは疾患に関連する１つ以上の症状もしくは有害効果の排除または１つ以上の症状もしくは有害効果の重症度の低減、４）Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に感染している、または感染したことがある対象の消化管の正常ミクロフローラの再増殖の許容、５）Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患に罹患したことがある対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患の再発の予防、６）Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患を有する対象における少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または１００％の治癒率の達成、および／または７）ＣＤＡＤまたはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染に関連する他の有害イベントに起因する死亡の予防が挙げられる。
【００３８】
用語「単離」は、その天然環境中に存在する他の要素を実質的に有さない分子を指す。例えば、単離タンパク質は、それが由来する細胞または組織資源からの細胞材料も他のタンパク質も実質的に有さない。用語「単離」は、単離タンパク質が医薬組成物として投与することができるために十分に純粋であり、または少なくとも７０〜８０％（ｗ／ｗ）純粋、より好ましくは、少なくとも８０〜９０％（ｗ／ｗ）純粋、いっそうより好ましくは、９０〜９５％純粋；最も好ましくは、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％（ｗ／ｗ）純粋である調製物も指す。
【００３９】
「断片」は、ポリペプチドまたは核酸分子の一部を意味する。この一部は、好ましくは、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％を含有する。特定の実施形態において、ポリペプチドの断片は、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、または３００アミノ酸を含有し得る。
【００４０】
「参照」は、比較標準を意味する。
【００４１】
「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義される配列である。参照配列は、規定配列のサブセットまたは完全体；例えば、全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列のセグメント、または完全ｃＤＮＡまたは遺伝子配列であり得る。ポリペプチドについては、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に、少なくとも約１６アミノ酸、好ましくは、少なくとも約２０アミノ酸、より好ましくは、少なくとも約２５アミノ酸、いっそうより好ましくは、約３５アミノ酸、約５０アミノ酸、または約１００アミノ酸である。核酸については、参照核酸配列の長さは、一般に、少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは、少なくとも約６０ヌクレオチド、より好ましくは、少なくとも約７５ヌクレオチド、いっそうより好ましくは、約１００ヌクレオチドもしくは約３００ヌクレオチドまたはその辺りもしくはその間の任意の整数である。
【００４２】
「特異的に結合する」は、試料、例えば、生物学的試料中の分子（例えば、ポリペプチド）を認識し、それに結合するが、他の分子を実質的に認識せず、それに結合しない薬剤（例えば、抗体）を意味する。例えば、特異的に結合する２つの分子は、生理学的条件下で比較的安定である複合体を形成する。特異的結合は、高い親和性および低から中程度のキャパシティーを特徴とし、それは通常、中程度から高いキャパシティーで低い親和性を有する非特異的結合と区別される。典型的には、結合は、親和性定数ＫＡが、１０７Ｍ−１よりも高く、またはより好ましくは、１０８Ｍ−１よりも高い場合、特異的であるとみなされる。
【００４３】
「対象」は、哺乳動物、例として、限定されるものではないが、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、ネコ、またはネズミを意味する。
【００４４】
特に記載のない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書において使用される用語「約」は、当技術分野における通常の許容範囲内、例えば、平均値の２標準偏差内として理解される。約は、記述値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％，または０．０１％内として理解することができる。特に文脈から明らかでない限り、本明細書において提供される全ての数値は、約の用語により修飾される。
【００４５】
本明細書における可変部の任意の定義中の化学基の列記の記述は、列記される基の任意の単一基または組合せとしてのその可変部の定義を含む。本明細書における可変部または態様についての実施形態の記述は、任意の単一実施形態としての、または任意の他の実施形態もしくはその一部との組合せのその実施形態を含む。
【００４６】
本明細書において提供される任意の組成物または方法は、本明細書において提供される他の組成物および方法のいずれかの１つ以上と組み合わせることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】向上した半減期を有する、抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂモノクローナル抗体の組合せのＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せが、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）ハムスター感染モデルにおける抗生物質治療に対して優れた感染後保護利益を提供したことを示す。グラフは、試験動物の群の生存率結果を示す。模式図に示されるとおり、動物に、試験０日目にＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）胞子を経口チャレンジし、１日目にクリンダマイシン（１０ｍｇ／ｋｇ）により処理した。試験群は、処理を受けない感染対照動物、バンコマイシンにより処理された動物、ならびに向上した半減期を有するネズミ抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂモノクローナル抗体の組合せにより処理された動物を含んだ。抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂモノクローナル抗体の組合せにより処理された動物は、試験期間にわたり生存し、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒性から保護された。
【発明を実施するための形態】
【００４８】
本発明は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび／または毒素Ｂに特異的に結合する向上した半減期を有する抗体を特徴とするＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染（ＣＤＩ）、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患、およびそれらの症状を治療する方法を特徴とする。
【００４９】
本発明は、少なくとも部分的には、増加した半減期を有する２つのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の混合物が、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＡおよびＢ、この病原体の主要病原性因子を中和するという発見を基礎とする。この組合せは、抗生物質療法に代わる病原体にフォーカスしたプレシジョンメディシンを表す。前臨床生存モデルにおいて、このような組合せによる毒素中和は、ＣＤＩの治療において、抗生物質と少なくとも同程度に有効であり、ことによるとそれ以上に有効であった。これらの病原性因子を直接攻撃することにより、この治療は、症状のより迅速な解決についての潜在性を有する一方、患者が、現在の標準治療の抗生物質療法について考えられるよりも早くそのＣＤＩ耐性微生物叢を回復することを可能とする。このような組合せは、毒素ＡおよびＢの長期中和を提供し、それにより、再発についての潜在性をさらに低減させるという追加の利益を有する。このような組合せによるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療は、抗生物質管理を進歩させ、ＣＤＩについてのリスク因子の基礎となる抗生物質媒介性の微生物叢の失調からの回復を加速させる目的を支持する。継続および提案される前臨床試験は、微生物叢回復および腸損傷の程度に対するそのような組合せの影響を実証することを目的とし、現在の抗生物質治療を超える追加の利益についての証拠を提供する。
【００５０】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染（ＣＤＩ）およびＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患（ＣＤＡＤ）
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患（ＣＤＡＤ）には、典型的には、抗生物質、例えば、クリンダマイシン、セファロスポリン、およびフルオロキノロンの使用を介する結腸フローラの破壊が関与する。結腸の微小環境のこの摂動は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）胞子への曝露とともに、罹患個体におけるコロニー化をもたらす。コロニー化した全ての患者の約３分の１が、重度の下痢、結腸の穿孔、結腸切除および死亡をもたらし得るＣＤＡＤを発症する。したがって、対象に、本発明の１つ以上の抗体を投与してＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣＤＡＤを治療する方法が提供される。
【００５１】
本明細書において使用される「治療する」ことは、本明細書において提供される抗体および治療法の投与を介して付与されるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患を有する対象への任意の利益を指す。例えば、限定されるものではないが、このような利益は、感染または疾患から生じる１つ以上の症状もしくは有害効果の排除、または１つ以上の症状もしくは有害効果の重症度の低減、もしくは改善；感染または疾患の進行の遅延、停止、または逆戻り；消化管、結腸、腸などの正常および天然ミクロフローラの再コロニー化、再生、もしくは再増殖、または感染もしくは疾患の治癒であり得る（すなわち、臨床医が対象を評価し、対象が感染も疾患ももはや有さないことを判定する）。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染に関連する症状または有害効果としては、脱水、下痢、筋痙攣、腎不全、腸穿孔、結腸の脱腸、および死亡をもたらし得る中毒性巨大結腸症が挙げられる。提供される治療法を使用して本明細書において提供される症状または有害効果のいずれかまたは全てを低減、縮小、改善、または排除することができる。
【００５２】
本明細書において使用される「Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染」は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）がそれまで存在しなかった腸内フローラ中のその存在、または腸内フローラ中のＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の存在の変化（例えば、１つ以上の他の細菌に対するＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の総量の増加など）から生じる感染を指し、それは、腸または消化管を含む他の器官および組織中の有害効果ならびに／または毒素Ａおよび／もしくはＢのレベルの増加を生じさせ、または生じさせ得る。典型的には、ＣＤＡＤは、腸中のＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の獲得および増殖から生じる。インビボで、毒素ＡおよびＢは、疾患の惹起における潜在的な相乗作用についての異なる病理学的プロファイルを実証する。ウサギおよびマウスにおいて、例えば、毒素Ａは、下痢を誘導する腸毒素である一方、毒素Ｂは、この種における流体応答を誘発しない。しかしながら、毒素Ｂは、インビトロでより強力な細胞毒性である。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素Ａ陰性、毒素Ｂ陽性（Ａ−Ｂ＋）株の報告が増加している。Ａ−／Ｂ＋株は、ｔｃｄＡ遺伝子の反復ドメインの欠失に起因して毒素Ａを産生し得ないが、依然として臨床疾患を引き起こし得る。対照的に、これまで、ヒトにおける毒素Ａ陽性、毒素Ｂ陰性（Ａ＋／Ｂ−）株の報告は存在しない。
【００５３】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染は、一般に、軽度から中程度の下痢として、場合により腹部痙攣とともに現れる。腸粘膜上の接着性黄白色プラークである偽膜が場合により観察される。希な症例において、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染を有する患者は、急性腹部および劇症性の致死的な大腸炎を呈し得、それは、結腸の正常細菌フローラの破壊、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）とのコロニー化ならびに粘膜炎症および損傷を引き起こす毒素の放出から生じる。抗生物質療法は、結腸フローラを変化させる主要因子である。正常腸管フローラは、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）によるコロニー化および過剰成長に抵抗する一方、正常フローラを抑制する抗生物質の使用により、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）細菌の増殖が可能となる。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）は、健常成人の２〜３％に、および健常幼児の７０％ほど多くに存在する。本発明のｍＡｂは、その態様の１つにおいて、無症状であるが、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の罹病およびその関連疾患の罹患化に対して感受性であり、またはそのリスクのある対象の治療に利用される。このような対象は、入院中であり得、または病院環境外に存在し得る。
【００５４】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患についての主なリスク因子は、抗生物質への事前曝露である。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）大腸炎に関与する最も一般的な抗生物質としては、セファロスポリン（特に第２および第３世代）、アンピシリン／アモキシシリンおよびクリンダマイシンが挙げられる。一般的ではないが、関与する抗生物質は、マクロライド（すなわち、エリスロマイシン、クラリスロマイシン、アジスロマイシン）および他のペニシリンである。疾患を引き起こすことが場合により報告される化合物または他の薬剤としては、アミノグリコシド、フルオロキノロン、トリメトプリム−スルファメトキサゾール、メトロニダゾール、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、イミペネム、およびメロペネムが挙げられる。任意の単一抗生物質への短時間の曝露でさえ、特に、正常腸内フローラが悪影響を受け、または殺傷される場合、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）腸炎を引き起こし得る。長期の抗生物質過程、または２つ以上の抗生物質の使用により、疾患のリスクが増加する。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）大腸炎を治療するために慣習的に使用される抗生物質は、疾患を引き起こすことが示されている。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）による感染に関連する他のリスク因子としては、高齢（＞６５歳）；弱まった免疫系；直近の入院（特に、感染患者との病室の共有、集中治療室の滞在および長期の入院）；養護施設、ホスピス、または他の長期ケア施設における生活；腹部手術；慢性結腸疾患（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）または結腸癌）；胃酸を低減させ、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）をより容易に腸中に通過させ得る処方または市販制酸剤の摂取；および事前のＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染が挙げられる。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）疾患に関連するさらなる因子としては、抗腫瘍剤、主にメトトレキサート、溶血性尿毒症症候群、悪性腫瘍、腸虚血、腎不全、壊死性腸炎、ヒルシュスプルング病、ＩＢＤおよび非外科的消化管処置、例として、鼻腔栄養チューブが挙げられる。本明細書において提供される治療法を投与することができる対象としては、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染についてのリスクのある記載される対象のいずれかが挙げられる。
【００５５】
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）大腸炎を有する多くの患者は、規定の治療法なしで回復する一方、症状は、持続性および消耗性であり得る。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連下痢は重篤な病態であり得、虚弱な高齢患者における死亡率は最大２５％である。より重篤な疾病患者にフォーカスする報告は、１０〜３０％の死亡率を示す。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染は、高齢集団においてよりよく見られ、老齢は、コロニー化および疾患に対する感受性を促進し得る。幼児および若年小児は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）およびその毒素を保有することが多い一方、臨床的感染はあまり見られない。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）による交差感染は新生児ユニットにおいてよく見られるが、新生児はＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連下痢を発症すると考えられていない。
【００５６】
治療方法
本開示は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患、およびそれらの症状を治療する方法であって、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび／または毒素Ｂ毒性または活性を阻害、遮断、または予防する、向上した半減期を有する１つ以上の単離抗体、またはその抗原結合断片の使用を含む方法を提供する。Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）病変は、この疾患の特徴である大腸炎、下痢および広範囲の炎症応答を媒介する２つの分泌毒素ＡおよびＢにより誘引される。毒素ＡおよびＢは、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の主な病原性決定因子であり、毒素陰性株は、非病原性である。毒素ＡおよびＢは、毒素遺伝子、ｔｃｄＡ（毒素Ａ）およびｔｃｄＢ（毒素Ｂ）、ならびに１つ（ｔｃｄＣ）が毒素転写の推定される負の調節因子をコードする３つの調節遺伝子を含む病原性遺伝子座から転写される。ｔｃｄＣタンパク質は、細菌生活環の早期の指数増殖期の間の毒素転写を阻害すると考えられる。毒素Ｂについては、ロイシン５４３およびグリシン５４４間の自己触媒開裂部位が記載されている。開裂は、宿主細胞質ゾルイノシトールリン酸によるアスパルチルプロテアーゼドメインの活性化から生じ、活性グルコシルトランスフェラーゼドメインを放出する。
【００５７】
毒素中和抗体は、ＣＤＩの再発の低減における臨床利益を既に実証している。ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せは、毒素ＡおよびＢに結合し、それらの細胞毒性を中和する、向上した半減期を有する２つの完全ヒトモノクローナル抗体の等モル混合物である。ハムスター感染モデルにおいて、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せは、致死性Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療においてバンコマイシンよりも有効であった。現在の臨床試験における抗毒素抗体と比較して、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せは、インビトロでより大きな毒素中和効力を実証し、より広範囲の臨床単離株からの毒素を中和した。重要なことに、ハムスター感染モデルにおいて、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せは、既存の抗毒素モノクローナル抗体と比較して優れた保護を提供した。さらに、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せを含むモノクローナル抗体は、半減期拡張技術により遺伝子操作され、標準的なＩｇＧと比較して３倍拡張した毒素中和のウインドウを提供し、感染再発に対する数ヵ月の予防を提供する。
【００５８】
単剤療法としての、または短期過程の抗生物質との組合せでのＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せによるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療は、臨床徴候および症状の迅速な軽減を提供すべきである。ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せ治療により可能となった抗生物質曝露の排除または最小化により、患者が、全過程の標準的抗生物質療法について考えられるよりも早くその保護微生物叢を再構築することが可能となるべきである。向上した半減期を有する抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂ抗体による治療により、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に感染した対象における正常腸管フローラの回復が可能となり得る。このような抗体は、治療を受ける患者における疾患を消散させ得る。向上した半減期を有する抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂ抗体による治療は、有益なインビボ薬物動態も実証し得る。向上した半減期を有する抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂ抗体による治療は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に感染した対象に長期または長続きするまたは治療法も提供し得る。本明細書において使用される「長続きする」は、治療停止から１ヵ月以上、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患の不存在をもたらす治療法を指す。好ましくは、治療法は、２ヵ月以上、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患の不存在をもたらす。一部の実施形態において、本発明のｍＡｂによる治療法は、活性Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療または抑制をもたらし、感染のロバスト性の低減または縮小をもたらす。他の実施形態において、本発明により提供される治療法は、１、２、３、４、５、または６ヵ月間、対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患の不存在をもたらす。他の実施形態において、本発明により提供される治療法は、６ヵ月よりも長く、対象におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患の不存在をもたらす。向上した半減期を有する抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂ抗体による治療は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染および／またはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患の再発を予防し得る。
【００５９】
別の例として、向上した半減期を有する抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂ抗体による治療は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはさらには１００％の治癒率または生存率を達成し得る。別の例として、抗体は、１００％の治癒率または生存率を達成し得る。一実施形態において、１つ以上の抗毒素Ａ抗体は、１つ以上の抗毒素Ｂ抗体と一緒に対象に投与される場合、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％の治癒率または生存率を達成する。本明細書において使用される「治癒率」は、本発明の１つ以上の抗体、またはその１つ以上の治療方法が投与される感染または疾患を有する対象の集団のうち感染も疾患ももはや有さないと臨床医が判定する対象の割合を指す。本明細書において使用される「生存率」は、本発明の１つ以上の抗体、またはその１つ以上の治療方法が投与される対象の集団のうち所望の期間生存する対象の割合を指す。
【００６０】
ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せの長期の血清半減期は、ＣＤＩの再発をさらに最小化する連続的な毒素中和のウインドウも提供する。まとめると、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せは、慣習的な抗生物質療法に関連する有益な微生物叢への付随損傷なしで困難な細菌感染を有効に治療するプレシジョンメディシンの一例である。
【００６１】
ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せおよびバンコマイシン治療レジメン
以下に詳細に報告されるとおり、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せは、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染の治療においてバンコマイシンと少なくとも同程度に有効である。ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せは、腸壁への毒素結合を競合阻害し、それにより腸壁がＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染に対して感受性でなくなることにより作用する。対照的に、バンコマイシンは、殺菌剤である。特定の実施形態において、バンコマイシンおよびＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せを同時投与することができる。このような組合せ治療方針は、慣用のバンコマイシン療法よりもバンコマイシンのより低い用量または低減した投与頻度を要求する可能性が高く、それにより有害副作用を低減させ、微生物叢の回復を向上させ、微生物叢の失調を低減させ、および／または再感染のリスクを低減させる。
【００６２】
慣用のバンコマイシン投与量および投与は記載されており、当技術分野において公知である（例えば、Ｒｙｂａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｙｓｔ  Ｐｈａｒｍ．２００９；６６（１）：８２−９８；Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ−Ｓｙｓｔｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ，ｔｈｅ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ参照）。バンコマイシン投与量は、現体重（ＡＢＷ）に基づき計算される。しかしながら、肥満患者については、初期投薬はＡＢＷをベースとし、次いで血清バンコマイシン濃度に基づき調整して治療レベルを達成する。８〜１２時間ごとに与えられる１５〜２０ｍｇ／ｋｇ（ＡＢＷに基づく）のバンコマイシン投与量が、正常腎機能を有する多くの患者におけるＭＩＣ≦１ｍｇ／Ｌの目標血清濃度を達成する（例えば、１２時間ごとに１ｇ）。一実施形態において、維持投与（約１５〜２０ｍｇ／現体重１ｋｇ、２５０ｍｇの単位に丸められる）が、患者のクレアチニンクリアランスレベル（ＣｒＣＬ）に推奨される投薬間隔において投与される（表２参照）。最大初期用量は、血清濃度モニタリングがより多い投薬についての必要性を示すまで約１２時間ごとに約１７５０ｍｇである。例示的なバンコマイシン維持用量および注入速度を表１に提供する。
【００６３】
【表１】
2018517670.tif 000016
【００６４】
重度の疾病患者のためのこの目標濃度の迅速な到達を達成するため、２５〜３０ｍｇ／ｋｇ（ＡＢＷに基づく）の負荷用量を使用することができる。一実施形態において、約５００ｍｇ／時間の速度（しかし、約１ｇ／時間以下）における約２５〜３０ｍｇ／現体重１ｋｇ（２５０ｍｇの単位に丸められる）の１回の負荷用量を、治療濃度に迅速に到達させるため、ＣｒＣＬ＞３０ｍＬ／分の重度の疾病患者（例えば、敗血症、発熱および好中球減少症、ＭＲＳＡ菌血症の疑い／確定診断）のために考慮することができる。例示的なバンコマイシン負荷用量および注入速度を表２に提供する。
【００６５】
【表２】
2018517670.tif 000017
【００６６】
個々の薬物動態調整および血清目標達成の確認が推奨される。
【００６７】
バンコマイシンは、注入関連有害効果を最小化するため、少なくとも１時間の注入期間にわたり静脈内投与すべきである。バンコマイシンは、間欠投薬または連続注入により投与することができる。個々の用量が１ｇを超過する場合（すなわち、１．５および２ｇ）、注入期間は、１．５〜２時間に延長すべきである。バンコマイシン投薬間隔は、部分的には、患者のクレアチニンクリアランスレベル（ＣｒＣＬ）に基づく。例えば、推定ＣｒＣＬに基づくバンコマイシン投薬間隔を表３に提供する。
【００６８】
【表３】
2018517670.tif 000018
【００６９】
偽膜性大腸炎の治療については、バンコマイシンを経口投与して結腸中の感染部位に到達させることができる。成人におけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染については、慣用のレジメンは、１０日間の約６時間ごとの約１２５ｍｇにおけるバンコマイシンの経口投与である。小児において、慣用のレジメンは、７〜１０日間の約６〜８時間ごとの約４０ｍｇ／ｋｇ／日（２ｇ／日を超過しない）におけるバンコマイシンの経口投与である。経口投与後、バンコマイシンの糞便濃度は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の感受性株についてのＭＩＣ≦２μｇ／ｍｌ（Ｐｅｌａｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００２；４６（６）：１６４７−１６５０）と比較して約５００μｇ／ｍｌ（Ｅｄｌｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，１９９７；２５（３）：７２９−３２）であり得る。
【００７０】
トラフ血清バンコマイシン濃度は、バンコマイシン有効性をモニタリングする最も高精度の実用的な方法である。トラフ濃度は、定常状態条件において次回の投与直前に得るべきである。定常条件達成は可変的であり、複数の因子に依存する。トラフ試料は、正常腎機能を有する患者における４回目の投与直前に得て目標濃度への到達を確保するべきである。浸透を改善し、最適目標血清バンコマイシン濃度の確率を増加させ、感染についての臨床的帰結を改善するための潜在性に基づくと、１５〜２０ｍｇ／Ｌの総トラフ血清バンコマイシン濃度が推奨される。その範囲のトラフ血清バンコマイシン濃度は、多くの患者において≧４００のＡＵＣ（濃度対時間曲線下面積）／ＭＩＣ（最小阻害濃度）を、ＭＩＣが≦１ｍｇ／Ｌである場合に達成すべきである。重度の疾病患者についてのこの目標濃度の迅速な到達を達成するため、２５〜３０ｍｇ／ｋｇ（ＡＢＷに基づく）の負荷用量を考慮することができる。
【００７１】
バンコマイシンによる臨床有効性を達成するための目標として、≧４００のＡＵＣ／ＭＩＣ比が提唱されている。動物試験および制限されたヒトデータは、バンコマイシンが濃度依存的でないこと、およびＡＵＣ／ＭＩＣがバンコマイシンについての予測薬物動態パラメータであることを実証すると考えられる。＜１０ｍｇ／Ｌのトラフ血清バンコマイシン濃度への曝露が耐性株を産生し得ることを示唆する証拠に基づくと、トラフ血清バンコマイシン濃度を常に１０ｍｇ／Ｌ超に維持して耐性の発症を回避することが推奨される。目標とされる≧４００のＡＵＣ／ＭＩＣは、正常腎機能（すなわち、７０〜１００ｍＬ／分のＣｒＣＬ）を有する患者においてバンコマイシンＭＩＣが≧２ｍｇ／Ｌである場合、慣用の投薬方法では達成可能でない。したがって、代替治療法を考慮すべきである。
【００７２】
バンコマイシンは、長きにわたり、腎毒性および耳毒性薬剤であるとみなされてきた。代替的説明の不存在下でバンコマイシン療法の数日後に複数（少なくとも２または３つの連続的な）の高い血清クレアチニン濃度（０．５ｍｇ／ｄＬの増加またはベースラインからの≧５０％の増加、どちらか大きい方）が報告される場合、患者をバンコマイシン誘導腎毒性が認められたとして同定すべきである。
【００７３】
腎毒性を低減させるためのトラフ血清バンコマイシン濃度のモニタリングは、１５〜２０ｍｇ／Ｌの持続的トラフ薬物濃度を産生することを目標とされる侵襲的投薬を受け、または高い毒性リスクのある患者、例えば、同時の腎毒素を受ける患者に最良に適合される。この目標範囲が望まれる場合、血行動態的に安定である患者における１週間に１回のトラフ濃度を得ることが推奨される。長期過程のバンコマイシンを受ける患者は、少なくとも１つの定常状態トラフ濃度を有するべきである（４回目の投与直前）。モニタリングは、不安定な腎機能を有する患者（悪化または顕著な改善のいずれか）および長期過程の治療法（３から５日間にわたる）を受ける患者についても推奨される。高頻度（一部の例において、毎日）のトラフ濃度モニタリングは、血行動態的に不安定な患者における毒性を予防するために妥当である。モニタリングの正確な頻度は、臨床的判断の一事項であることが多い。
【００７４】
抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび毒素Ｂ抗体
本明細書に記載の治療方法は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび／または毒素Ｂ毒性または活性を阻害、遮断、または予防する、向上した半減期を有する１つ以上の単離抗体（その抗原結合断片および改変誘導体を含む）の使用を含む。例示的な抗ｔｃｄＡ（例えば、ＰＡ−５０、ＰＡ−３９、およびＰＡ−３８）および抗ｔｃｄＢ抗体（例えば、ＰＡ−４１）は、それぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１３０２０２６１８号明細書／米国特許第８９８６６９７号明細書に記載されている。例示的な抗体は、配列番号７〜２２におけるＶＨ、ＶＬ、重鎖、および軽鎖配列の１つ以上も含み得る。
【００７５】
一態様において、本発明は、毒素Ａ内在化および細胞毒性を阻害、遮断、または予防する単離抗体、またはその抗原結合断片の使用を含む治療方法を提供する。ある実施形態において、抗体はモノクローナル抗体である。特定の実施形態において、抗体は、ヒト化またはキメラ抗体である。具体的な実施形態において、抗体は、ＰＡ−５０（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６４）またはヒト化ＰＡ−５０である。他の実施形態において、抗体は、ＰＡ−３９（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６９２）またはヒト化ＰＡ−３９である。種々の実施形態において、抗体は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素Ａの受容体結合ドメインの外側で毒素Ａに結合する。
【００７６】
別の態様において、本方法は、毒素ＢのＮ末端酵素領域中のエピトープ部位に結合することによりＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ毒性を阻害、遮断、または予防する単離抗体、またはその抗原結合断片の使用を含む。ある実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体である。特定の実施形態において、抗体は、ヒト化またはキメラ抗体である。具体的な実施形態において、抗体は、ＰＡ−４１（ＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−９６９３）またはＰＡ−４１のヒト化形態である。種々の実施形態において、抗体は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＢのＮ末端酵素領域に結合する。
【００７７】
本発明の抗体は、多数の有益な特徴を示す。例えば、抗毒素Ａ抗体は、インビトロおよびインビボの両方で毒素Ａの毒性を中和または阻害する。インビトロ中和試験において、ヒト化ＰＡ−３９およびヒト化ＰＡ−４１は、報告されている他のヒト抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂモノクローナル抗体（国際公開第２００６／１２１４２２号パンフレット；米国特許出願公開第２００５／０２８７１５０号明細書；Ｂａｂｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，２００６）による中和値と比較して高い中和効力（すなわち、ＥＣ５０値；米国特許出願公開第２０１３０２０２６１８号明細書／米国特許第８９８６６９７号明細書）を実証した。
【００７８】
種々の実施形態において、本発明は、向上した半減期を有する抗体による治療を提供する。抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素抗体（例えば、ＰＡ−３９、ＰＡ−４１、ＰＡ−５０）は、別の機能分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質（例えば、アルブミン）に結合させることができる。例えば、抗体は、化学的架橋により、または組換え法により結合させることができる。抗体は、米国特許第４，６４０，８３５号明細書；同第４，４９６，６８９号明細書；同第４，３０１，１４４号明細書；同第４，６７０，４１７号明細書；同第４，７９１，１９２号明細書；または同第４，１７９，３３７号明細書に記載の様式で、種々の非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、またはポリオキシアルキレンの１つに結合させることもできる。抗体は、例えば、ポリマーへの共有結合コンジュゲーションにより化学的に修飾させてその循環半減期を増加させることができる。例示的なポリマーおよびそれらを付着させる方法は、米国特許第４，７６６，１０６号明細書；同第４，１７９，３３７号明細書；同第４，４９５，２８５号明細書、および同第４，６０９，５４６号明細書にも示されている。
【００７９】
ある実施形態において、抗体のＦｃ領域は、２５２、２５４、および２５６から選択される１つ以上の位置における少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む。種々の実施形態において、非天然アミノ酸は、それぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれるＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１，２３５１４−２３５２４（２００６）、および米国特許第７０８３７８４号明細書／米国特許出願公開第２００３０１９０３１１号明細書に記載の２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（「ＹＴＥ改変」と称される）から選択される群から選択される。ＹＴＥ改変を有する抗体は、非改変抗体（例えば、親抗体）と比較して向上した半減期を有する。一実施形態において、ＰＡ−５０−ＹＴＥは、毒素Ａに結合し、その細胞毒性を中和する、向上した半減期を有する完全ヒトモノクローナル抗体である。一実施形態において、ＰＡ−４１−ＹＴＥは、毒素Ｂに結合し、その細胞毒性を中和する、向上した半減期を有する完全ヒトモノクローナル抗体である。一態様において、本発明は、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せ（２０１５年４月１５日に出願された優先権出願の米国仮特許出願第６２／１４７，９０８号明細書においてもＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４０ＹＴＥ組合せと称される）と称される抗毒素Ａ抗体ＰＡ−５０−ＹＴＥおよび抗毒素Ｂ抗体ＰＡ−４１−ＹＴＥの等モル混合物を含む組成物を特徴とする。
【００８０】
一実施形態において、抗毒素Ａ抗体は、有効用量においてＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａのインビボ毒性を中和または阻害する。別の実施形態において、抗毒素Ｂ抗体は、毒素Ｂのインビボ毒性を中和または阻害する。一実施形態において、有効用量の１つ以上の抗毒素Ａ抗体を、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染対象に提供する。一実施形態において、本発明の有効用量の１つ以上の抗毒素Ａ抗体を、本発明の有効用量の１つ以上の抗毒素Ｂ抗体との組合せでＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染対象に提供する。一実施形態において、本発明の抗毒素Ｂ抗体との１：１組合せにおける本発明の抗毒素Ａ抗体を、有効用量としてＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染対象に提供する。一実施形態において、本発明の有効用量の抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂ抗体を、例えば、１／２：１、１：１、２：１、３：１、４：１などの抗体組合せでＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染対象に提供することができる。一実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。一実施形態において、抗体は、組成物中に含まれる。
【００８１】
説明として、有効用量の抗毒素Ａおよび／または抗毒素Ｂ抗体は、０．１μｇから１０００ミリグラム（ｍｇ）に及び得る。抗毒素Ａ抗体および抗毒素Ｂ抗体またはそれらの抗原結合断片は、例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１５０ｍｇ／ｋｇの量で；０．５ｍｇ／ｋｇ〜７５ｍｇ／ｋｇの量で；１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの量で；１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの量で；２ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの量で；２ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの量で；５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの量で；５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの量で；１０ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇの量で；１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの量で；１０ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの量で；または１５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの量で対象に投与することができる。一実施形態において、上記量は、組合せ中で提供される変動比の抗毒素Ａ抗体および抗毒素Ｂ抗体を含み得る。
【００８２】
一部の実施形態において、１つ以上の抗毒素Ａまたは抗毒素Ｂ抗体の用量または量は、例えば、インビボマウス試験に基づき、例えば、０．２μｇ〜２５０μｇ、または２μｇ〜５０μｇ、または５μｇ〜５０μｇに及び得る。一部の実施形態において、１つ以上の抗毒素Ａまたは抗毒素Ｂ抗体、ならびに特に抗毒素Ａ抗体および抗毒素Ｂ抗体の組合せの用量または量は、例えば、インビボハムスター試験に基づき、例えば、２ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇに及び得る。
【００８３】
本明細書において提供される抗体としては、寄託され、以下の特許寄託記号：ＰＴＡ−９６９２（ＰＡ−３９について）、ＰＴＡ−９６９３（ＰＡ−４１について）、ＰＴＡ−９６９４（ＰＡ−５０について）、およびＰＴＡ−９８８８（ＰＡ−３８について）が与えられたハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体が挙げられる。これらのハイブリドーマは、特許微生物国際寄託機関（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｅｐｏｓｉｔｏｒｙ  Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ）としてのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（「ＡＴＣＣ」）、Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  １５４９，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．２０１０８  ＵＳＡに、２００９年１月６日（ＰＴＡ−９６９２、ＰＴＡ−９６９３、ＰＴＡ−９６９４について）および２００９年３月２４日（ＰＴＡ−９８８８について）に、特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約に準じ、その要件を満たして寄託され、上記の特許寄託記号が与えられた。本明細書において使用される、寄託ハイブリドーマおよびそのハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体の両方を、同一のＡＴＣＣ寄託記号により、またはＡＴＣＣ寄託記号内に見出される番号で称することができる。例えば、ＰＴＡ−９８８８または９８８８は、寄託ハイブリドーマまたはそのハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体を指すために使用することができる。したがって、本明細書に記載のモノクローナル抗体の名称は、それらを産生するハイブリドーマの名称と互換的に使用することができる。その名称が抗体またはその抗体を産生するハイブリドーマを指すものである場合、当業者には明らかである。本明細書において提供される抗原結合断片は、上記寄託抗体の抗原結合断片を含む。
【００８４】
抗体産生の方法
例えば、抗体は、慣習的なハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９９）、組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号明細書）、または抗体ライブラリーを用いて実施されるファージディスプレイ（Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７）を使用して作製することができる。他の抗体産生技術については、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｅｄｓ．Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８も参照。本発明は、いかなる特定の資源、起源種、産生方法によっても限定されない。
【００８５】
免疫グロブリンとしても公知であるインタクト抗体は、典型的には、それぞれ約２５ｋＤａの２つの軽（Ｌ）鎖およびそれぞれ約５０ｋＤａの重（Ｈ）鎖から構成される四量体グリコシル化タンパク質である。λ鎖およびκ鎖と命名される２つのタイプの軽鎖が、抗体中に見出される。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、５つの主要なクラス；Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、およびＭに割り当てることができ、それらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分類することができる。
【００８６】
異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は、当技術分野において周知である。抗体構造の概説については、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，前掲参照。簡潔に述べると、それぞれの軽鎖は、Ｎ末端可変ドメイン（ＶＬ）および定常ドメイン（ＣＬ）から構成される。それぞれの重鎖は、Ｎ末端可変ドメイン（ＶＨ）、３または４つの定常ドメイン（ＣＨ）、およびヒンジ領域から構成される。ＶＨに最も近いＣＨドメインは、ＣＨ１と命名される。ＶＨおよびＶＬドメインは、フレームワーク領域と呼ばれる比較的保存される配列の４つの領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）からなり、それらは、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変配列の３つの領域のための足場を形成する。ＣＤＲは、抗原との特異的相互作用を担う残基のほとんどを含有する。３つのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と称される。したがって、重鎖上のＣＤＲ構成要素は、Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３と称される一方、軽鎖上のＣＤＲ構成要素は、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３と称される。ＣＤＲ３、特にＨ３は、抗原結合ドメイン内の分子多様性の最大の源である。例えば、Ｈ３は、２アミノ酸残基ほどの短鎖であり得、または２６超であり得る。特定の実施形態において、重鎖ＣＤＲ３（Ｈ３）は、約４アミノ酸（例えば、Ａｂ番号２参照）および２２アミノ酸（例えば、Ａｂ番号２０および３４参照）を含む。
【００８７】
Ｆａｂ断片（抗原結合断片）は、定常領域間のジスルフィド結合により共有結合しているＶＨ−ＣＨ１およびＶＬ−ＣＬドメインからなる。宿主細胞中で同時発現させる場合、Ｆｖ中の非共有結合しているＶＨおよびＶＬドメインの傾向を克服して解離させるため、いわゆる単鎖（ｓｃ）Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を構築することができる。ｓｃＦｖにおいて、フレキシブルで適切に長いポリペプチドがＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端に、またはＶＬのＣ末端をＶＨのＮ末端に結合させる。最も一般には、１５残基（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ポリペプチドがリンカーとして使用されるが、他のリンカーも当技術分野において公知である。
【００８８】
抗体多様性は、可変領域をコードする複数の生殖系列遺伝子のコンビナトリアルアセンブリおよび種々の体細胞イベントの結果である。体細胞イベントとしては、完全ＶＨ領域を作製するための多様性（Ｄ）および結合（Ｊ）遺伝子セグメントによる可変遺伝子セグメントの組換えならびに完全ＶＬ領域を作製するための可変および結合遺伝子セグメントの組換えが挙げられる。組換えプロセス自体は、不正確であり、Ｖ（Ｄ）Ｊ結合部におけるアミノ酸の損失または付加をもたらす。これらの多様性の機序は、抗原曝露前にＢ細胞の発生において生じる。抗原刺激後、Ｂ細胞中で発現される抗体遺伝子は、体細胞突然変異を受ける。
【００８９】
生殖系列遺伝子セグメントの推定数、それらのセグメントのランダムな組合せおよびランダムなＶＨ−ＶＬペアリングに基づくと、最大１．６×１０７個の異なる抗体が産生され得る（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９３）。抗体多様性に寄与する他のプロセス（例えば、体細胞突然変異）を考慮する場合、１×１０１０個超の異なる抗体が潜在的に生成され得ることが考えられる（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇｅｎｅｓ，２ｎｄｅｄ．，ｅｄｓ．Ｊｏｎｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，１９９５）。抗体多様性に関与する多くのプロセスのため、独立して生成される抗体がＣＤＲ中の同一またはさらには実質的に類似のアミノ酸配列を有する可能性はかなり低い。
【００９０】
ＣＤＲを担持するための構造は、一般に、ＣＤＲが天然ＶＨおよびＶＬのＣＤＲに対応する位置において局在する抗体重鎖または軽鎖またはそれらの一部であり得る。免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎｏ．９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１に記載のとおり決定することができる。
【００９１】
抗Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａおよび毒素Ｂ抗体は、場合により、抗体定常領域またはその一部を含み得る。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端において、ヒトＣκまたはＣλ鎖を含む付着した抗体軽鎖定常ドメインを有し得る。同様に、ＶＨドメインをベースとする特異的抗原結合ドメインは、任意の抗体アイソトープ、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＭならびにアイソトープサブクラス、例として、限定されるものではないが、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４のいずれかに由来する付着した免疫グロブリン重鎖の全部または一部を有し得る。Ｃ末端断片についてのＤＮＡおよびアミノ酸配列は、当技術分野において周知のものである（例えば、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎｏ．９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１参照）。
【００９２】
ある実施形態は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａまたは毒素Ｂ抗体からのＦｖ断片のＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む。さらなる実施形態は、それらのＶＨおよびＶＬドメインのいずれかの少なくとも１つのＣＤＲを含む。ある実施形態において、ＶＨおよび／またはＶＬドメインを生殖系列化することができ、すなわち、慣用の分子生物学技術を使用してそれらのドメインのフレームワーク領域（ＦＲ）を突然変異させて生殖系列細胞により産生されるものに適合させる。他の実施形態において、フレームワーク配列は、コンセンサス生殖系列配列と相違するままである。
【００９３】
当業者は、本発明の抗体を使用して毒素Ａまたは毒素Ｂといくらか異なるタンパク質を阻害することができることを認識する。抗体は、標的タンパク質が、毒素Ａまたは毒素Ｂの連続アミノ酸の少なくとも１００、８０、６０、４０、または２０個の任意の配列と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％以上同一である配列を含む限り、結合の特異性を保持することが予測される。同一性パーセントは、標準的アラインメントアルゴリズム、例えば、Ａｌｔｓｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０に記載のＢａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４４−４５３のアルゴリズム、またはＭｅｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７のアルゴリズムなどにより決定される。
【００９４】
配列相同性分析に加え、エピトープマッピング（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｅｄ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６参照）ならびに二次および三次構造分析を実施して開示抗体および抗原とのその複合体により想定される特異的３Ｄ構造を同定することができる。このような方法としては、限定されるものではないが、目下開示される抗体のＸ線結晶分析（Ｅｎｇｓｔｏｍ（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．，１１：７−１３）およびバーチャル表示のコンピュータモデリング（Ｆｌｅｔｔｅｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ，ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）が挙げられる。
【００９５】
キット
本発明は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはその症状を治療するためのキットを提供する。一実施形態において、キットは、単位剤形で、向上した半減期を有する有効量の抗毒素Ａ抗体および／または抗毒素Ｂ抗体の１つ以上を含有する治療組成物を含む。
【００９６】
一部の実施形態において、キットは、治療または予防生物学的組成物を含有する無菌容器を含み；そのような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、または当技術分野において公知の他の好適な容器形態であり得る。このような容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、または医薬品の保持に好適な他の材料製であり得る。
【００９７】
所望により、本発明の抗体は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連疾患、またはそれらの症状を有し、または発症するリスクのある対象に抗体または薬剤を投与するための説明書と一緒に提供される。説明書は、一般に、そのような適応症の治療または予防のための抗体の使用についての情報を含む。他の実施形態において、説明書は、以下の少なくとも１つ：治療剤の記載；Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染またはその症状の治療または予防のための投薬スケジュールおよび投与；安全上の注意；警告；適応症；禁忌症；過剰摂取情報；有害反応；動物薬理学；臨床試験；および／または参照文献を含む。説明書は、容器（存在する場合）上に直接、または容器に適用されるラベルとして、または容器中もしくは容器に供給される別紙、パンフレット、カード、もしくはフォルダとして印刷することができる。
【００９８】
本発明の実施は、特に記載のない限り、十分に当業者の技能の範囲内の分子生物学（例として、組換え技術）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の慣用の技術を用いる。このような技術は、文献、例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｇａｉｔ，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）；“Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ”（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）に十分に説明されている。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの産生に適用可能であり、したがって、本発明の作製および実施において考慮することができる。特定の実施形態に特に有用な技術は、以下のセクションにおいて考察される。
【００９９】
以下の実施例は、当業者に、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療方法における抗Ｐ２Ｘ４抗体の作製および使用法の完全な開示および記載を提供するために説明され、本発明者らがその発明とみなすものの範囲を限定するものではない。
【０１００】
以下の実施例は、当業者に、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療方法の作製および使用法の完全な開示および記載を提供するために説明され、本発明者らがその発明とみなすものの範囲を限定するものではない。
【実施例】
【０１０１】
実施例１
抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂモノクローナル抗体の組合せによる治療は、Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染のモデルにおいて生存率を増加させ、毒性から保護する。
Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）感染のハムスターモデルは、ヒトにおけるＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）関連下痢（ＣＤＡＤ）疾患の主要な態様を再現する。抗生物質による治療時、正常結腸フローラは全滅し、ハムスターはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）による感染に対して容易に感受性になる。感染は、重度の下痢、偽膜性大腸炎および死亡をもたらす。ハムスターＣＤＡＤモデルを利用して生存Ｃ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）細菌からの動物のチャレンジに関連する疾患および死亡を予防するモノクローナル抗毒素Ａおよび抗毒素Ｂ抗体の潜在的な効力を評価した。
【０１０２】
ハムスターに、０日目にＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）胞子を経口投与によりチャレンジし、１日目に単回用量のクリンダマイシン（１０ｍｇ／ｋｇ）により前処理して正常結腸フローラを破壊した。動物を、処理を受けない対照群およびバンコマイシン（２、３、４、５、および６日目）または毒素Ａおよび毒素Ｂ抗体のＰＡ−５０−ＹＴＥ（４０ｍｇ／ｋｇ）およびＰＡ−４１−ＹＴＥ（４０ｍｇ／ｋｇ）の組合せ（ＭＥＤＩ０９５とも称される）のいずれかを２日目に受ける群に配置した。動物を健康状態および生存率について毎日モニタリングした。
【０１０３】
処理を受けなかった感染対照群における全てのハムスターは、試験３日目までに死亡した。バンコマイシン処理群において、処理により、大多数の動物において生存期間が３日間を超えて延びた。しかしながら、治療法の中断後、動物のほとんど（約８０％）は、試験の完了における２１日目までに死亡した。対照的に、抗体ＰＡ−５０−ＹＴＥおよびＰＡ−４１−ＹＴＥ（すなわち、ＭＥＤＩ０９５）の組合せを受けた全ての動物は、チャレンジ２１日後まで１００％の生存率を示した。したがって、ＰＡ５０ＹＴＥ／ＰＡ４１ＹＴＥ組合せによる治療は、抗生物質治療に対して優れた持続的な感染後保護利益を提供した。
【０１０４】
他の実施形態
上記の記載から、本明細書に記載の発明に対して変形および改変を行ってそれを種々の使用法および条件に適合させることができることが明らかである。このような実施形態も、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【０１０５】
本明細書における可変部の任意の定義中の要素の列記の記述は、列記要素の任意の単一要素または組合せ（または下位組合せ）としてのその可変部の定義を含む。本明細書における実施形態の記述は、任意の単一の実施形態としての、または任意の他の実施形態もしくはその一部との組合せのその実施形態を含む。
【０１０６】
本明細書において挙げられる全ての特許および刊行物は、それぞれの独立特許および刊行物が参照により組み込まれることが具体的および個別的に示されるのと同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
【０１０７】
配列表
配列番号１  ＰＡ５０−ＹＴＥ重鎖
【化１４】
2018517670.tif 000019
【０１０８】
配列番号２  ＰＡ５０−ＹＴＥ軽鎖
【化１５】
2018517670.tif 000020
【０１０９】
配列番号３  ＰＡ４１−ＹＴＥ重鎖
【化１６】
2018517670.tif 000021
【０１１０】
配列番号４  ＰＡ４１−ＹＴＥ軽鎖
【化１７】
2018517670.tif 000022
【０１１１】
配列番号５  クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ａ（ＴｃｄＡ）
【化１８】
2018517670.tif 000023
【化１９】
2018517670.tif 000024
【０１１２】
配列番号６  クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素Ｂ（ＴｃｄＢ）
【化２０】
2018517670.tif 000025
【化２１】
2018517670.tif 000026
【０１１３】
配列番号７  抗毒素Ａ抗体、ヒト化ＰＡ−３９（ｈＰＡ−３９）のＶＨ領域
【化２２】
2018517670.tif 000027
【０１１４】
配列番号８  抗毒素Ａ抗体、ヒト化ＰＡ−３９（ｈＰＡ−３９）のＶＨ領域
【化２３】
2018517670.tif 000028
【０１１５】
配列番号９  抗毒素Ａ抗体、ヒト化ＰＡ−３９（ｈＰＡ−３９）のＶＬ領域
【化２４】
2018517670.tif 000029
【０１１６】
配列番号１０  抗毒素Ａ抗体、ヒト化ＰＡ−３９（ｈＰＡ−３９）のＶＬ領域
【化２５】
2018517670.tif 000030
【０１１７】
配列番号１１  抗毒素Ａ抗体、ヒト化ＰＡ−５０（ｈＰＡ−５０）のＶＨ領域
【化２６】
2018517670.tif 000031
【０１１８】
配列番号１２  抗毒素Ａ抗体、ヒト化ＰＡ−５０（ｈＰＡ−５０）のＶＨ領域
【化２７】
2018517670.tif 000032
【０１１９】
配列番号１３  抗毒素Ａ抗体、ヒト化ＰＡ−５０（ｈＰＡ−５０）のＶＬ領域
【化２８】
2018517670.tif 000033
【０１２０】
配列番号１４  抗毒素Ｂ抗体、ヒト化ＰＡ−４１（ｈＰＡ−４１）のＶＨ領域
【化２９】
2018517670.tif 000034
【０１２１】
配列番号１５  抗毒素Ｂ抗体、ヒト化ＰＡ−４１（ｈＰＡ−４１）のＶＨ領域
【化３０】
2018517670.tif 000035
【０１２２】
配列番号１６  抗毒素Ｂ抗体、ヒト化ＰＡ−４１（ｈＰＡ−４１）のＶＬ領域
【化３１】
2018517670.tif 000036
【０１２３】
配列番号１７  抗毒素Ａ抗体、重鎖
【化３２】
2018517670.tif 000037
【化３３】
2018517670.tif 000038
【化３４】
2018517670.tif 000039
【０１２４】
配列番号１８  抗毒素Ａ抗体、軽鎖
【化３５】
2018517670.tif 000040
【化３６】
2018517670.tif 000041
【０１２５】
配列番号１９  抗毒素Ａ抗体、重鎖
【化３７】
2018517670.tif 000042
【化３８】
2018517670.tif 000043
【化３９】
2018517670.tif 000044
【０１２６】
配列番号２０  抗毒素Ａ抗体、軽鎖
【化４０】
2018517670.tif 000045
【化４１】
2018517670.tif 000046
【０１２７】
配列番号２１  抗毒素Ｂ抗体、重鎖
【化４２】
2018517670.tif 000047
【化４３】
2018517670.tif 000048
【化４４】
2018517670.tif 000049
【化４５】
2018517670.tif 000050
【０１２８】
配列番号２２  抗毒素Ｂ抗体、軽鎖
【化４６】
2018517670.tif 000051
【化４７】
2018517670.tif 000052
【図１】
2018517670.tif 000057
【配列表】
2018517670000001.app
【国際調査報告】
2018517670.tif 000058
2018517670.tif 000059