(57)【要約】  本開示は、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。2018505213.tif 000017［式中、ｍ、ｐ、Ａ、Ａｒ1、Ａｒ2、Ａｒ3、Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3は、本明細書に定義される］。式（Ｉ）の化合物は、ＣＧＲＰアンタゴニストとして使用することができ、処置のために使用することができる。【選択図】なし
2018505213.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩：
【化１】
2018505213.tif 000016
［式中、
ｍは、０、１、２、３、４、または５であり；
ｐは、０、１、２、または３であり；
Ａは、炭素−炭素単結合または二重結合であり；
Ａｒ1は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲa、またはＮ（ＲaＲa'）であり、ここで、各Ｒaは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒa'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；
Ａｒ2は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲb、Ｎ（ＲbＲb'）、Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲbＲb'）、またはＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲbＲb'）であり、ここで、各Ｒbは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒb'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；
Ａｒ3は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲc、またはＮ（ＲcＲc'）であり、ここで、各Ｒcは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒc'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；
各Ｒ1は、独立に、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲd、またはＣ（Ｏ）−Ｎ（ＲdＲd'）であり、ここで、各Ｒdは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒd'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；
Ｒ2は、−（ＣＨ2）n−Ｒであり、ここで、ｎは０、１、２、または３であり、Ｒは、置換または非置換グアニジノ、アミノアシル、Ｃ1〜Ｃ4アルキルアミノアシル、ＯＲe、Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ2）−（ＣＨ2）4−Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−Ｎ（ＲeＲe'）、またはＣ1〜Ｃ4アルキルもしくはＮ（ＲeＲe'）で任意選択で置換された５員のヘテロシクロアルキルであり、ここで、各Ｒeは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒe'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；
各Ｒ3は、独立に、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、またはＯＲfであり、ここで、各Ｒfは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；
ただし、ｎが０である場合、Ｒは、アミノまたはグアニジノでなく、Ａｒ1Ｃ（Ｏ）に結合したアミノ酸残基がＬ−Ｖａｌである場合、Ａｒ1は、非置換フェニルでない］。
【請求項２】
Ａｒ1が、フェニル、ピリジニル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピロリル、またはトリアゾリルであり、そのそれぞれが、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基が、独立に、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ2、ＣＨ3、ＣＨ2ＯＨ、またはＮＨ2である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ａｒ2がフェニルまたはピリジニルであり、そのそれぞれが１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基が、独立に、ＣＨ2ＮＨ2、Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、ＯＨ、ＣＮ、ＣＨ2ＯＨ、ＮＨ2、またはＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ2である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ａｒ3がピリジニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｍが１である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ1がＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、またはＣＨ2ＮＨ2である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
ｎが０、１、または２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒが、Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ2）−（ＣＨ2）4−Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ2で任意選択で置換されたトリアゾリル、またはＣＮもしくはＣＨ3で任意選択で置換されたグアニジノであり、各Ｒeが、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ3アルキルであり、各Ｒe'が、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ3アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒが、ＮＨ2、Ｎ（ＣＨ3）2、Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、ＮＨ（ＣＨ（ＣＨ3）2）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ2）−（ＣＨ2）4−Ｎ（ＣＨ3）2、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−ＮＨ（ＣＨ（ＣＨ3）2）、３−アミノ−１，２，４−トリアゾール−５−イル、またはＣＮもしくはＣＨ3で任意選択で置換されたグアニジノである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
ｐが０である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
オキサゾール−２−カルボニル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
ピコリノイル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｄａｂ（Ｅｔ2）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｄａｂ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（５−Ｆ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（Ｅｔ2）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（４−ＣＨ2ＯＨ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（３，５−Ｆ２）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（５−Ｆ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−３Ｐａｌ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（５−Ｆ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−３Ｐａｌ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
オキサゾール−２−カルボニル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−３Ｐａｌ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
オキサゾール−２−カルボニル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−Ｐｈｅ（３−ＣＨ2ＮＨ2）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−カルボニル（３−Ｍｅ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（２−ＣＨ2ＮＨ2）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
オキサゾール−２−カルボニル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−４Ａｐｈ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
オキサゾール−２−カルボニル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−４Ｕｐｈ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（５−Ｆ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（４−ＣＨ2ＯＨ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（３，５−Ｆ２）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（５−Ｆ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−Ｐｈｅ（４−ＣＨ2ＯＨ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
オキサゾール−２−カルボニル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ（４−ＣＨ2ＯＨ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
オキサゾール−２−カルボニル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−Ｐｈｅ（３−Ｃｂｍ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（５−Ｆ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
オキサゾール−２−カルボニル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−Ｐｈｅ（３−Ｃｂｍ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；
ピコリノイル（５−Ｆ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−Ｐｈｅ（３−Ｃｂｍ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2；または
ピコリノイル−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ）−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｄｈｐ−Ｐｈｅ（４−ＣＨ2ＯＨ）−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
水溶液を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
塩化ナトリウム水溶液を含む、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
水溶液が、約０．９ｗｔ％の塩化ナトリウムを含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１３に記載の医薬組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、片頭痛を処置する方法。
【請求項１８】
片頭痛の処置のためのまたは片頭痛の処置に使用するための、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
片頭痛の処置のための医薬品の製造における、請求項１から１２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＣＧＲＰアンタゴニストペプチド、また関係する組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
片頭痛は、通常、悪心ならびに光および音に対する敏感性と共に、しばしば重度である拍動性頭痛の再発性の発作を特徴とする消耗性の状態である。片頭痛は、しばしば、前兆と呼ばれる限局性の神経症状の後に起きる。片頭痛を処置するためのケアの現在の標準は、トリプタンクラスの薬物の使用である。しかしながら、患者のおよそ３０％は、トリプタンから救済を見出していない。さらに、トリプタンは、心血管疾患（例えば、糖尿病、肥満、および高コレステロール血症）のリスクが高い片頭痛患者には禁忌である。したがって、依然として、片頭痛の処置のための新たな治療パラダイムの必要性がある。
【０００３】
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、カルシトニン遺伝子の選択的スプライシングから生じる、３７アミノ酸ペプチドである。ＣＧＲＰは多くの生理学的状態および病態生理学的状態に関与している。トランケート型ペプチド（例えば、ＣＧＲＰ（８〜３７）またはＣＧＲＰ（２７〜３７））がＣＧＲＰ受容体でアンタゴニストとして作用し得ることが発見された。これらのペプチドは研究ツールとして有用であったが、かかるペプチドは臨床試験においては探求されなかった。非ペプチド性小分子に焦点を当てる創薬の取り組みによって、オルセゲパントおよびテルカゲパントなど、臨床開発に進むいくつかの化合物が生成された。片頭痛を処置することにおける明らかな有効性にも関わらず、これらのプログラムは主に肝毒性の懸念によりすべて中止された。より最近では、片頭痛に向かうＣＧＲＰ経路を標的とする薬物開発の取り組みは、ＣＧＲＰまたはその受容体に対するモノクローナル抗体に再び焦点を当てている。
【０００４】
ＣＧＲＰ受容体は、ＲＡＭＰ１（受容体活性調節ペプチド１）と複合体になった７回膜貫通型ＣＬＲ（カルシトニン様受容体）である。ＣＧＲＰは、ＣＧＲＰ受容体の他に、より高濃度でアドレノメデュリン（ＡＭ）受容体ＡＭ１およびＡＭ２（それぞれＣＬＲ＋ＲＡＭＰ２およびＣＬＲ＋ＲＡＭＰ３）も活性化させる。ＡＭ受容体は、生殖；心血管および腎機能；炎症および他の状態に対して影響を与えると考えられる。ＡＭ受容体での活性が低下した選択的なＣＧＲＰ−Ｒアンタゴニストは、ＡＭシグナル伝達を破壊することによる有害事象のリスクを低下させるであろう。
【発明の概要】
【０００５】
一態様では、この開示は、式（Ｉ）の化合物またはその塩を特徴とする。
【０００６】
【化１】
2018505213.tif 000003
［式中、ｍは、０、１、２、３、４、または５であり；ｐは、０、１、２、または３であり；Ａは、炭素−炭素単結合または二重結合であり；Ａｒ1は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲa、またはＮ（ＲaＲa'）であり、ここで、各Ｒaは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒa'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；Ａｒ2は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲb、Ｎ（ＲbＲb'）、Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲbＲb'）、またはＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲbＲb'）であり、ここで、各Ｒbは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒb'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；Ａｒ3は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲc、またはＮ（ＲcＲc'）であり、ここで、各Ｒcは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒc'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；各Ｒ1は、独立に、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲd、またはＣ（Ｏ）−Ｎ（ＲdＲd'）であり、ここで、各Ｒdは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒd'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；Ｒ2は、−（ＣＨ2）n−Ｒであり、ここで、ｎは、０、１、２、または３であり、Ｒは、置換または非置換グアニジノ、アミノアシル、Ｃ1〜Ｃ4アルキルアミノアシル、ＯＲe、Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ2）−（ＣＨ2）4−Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−Ｎ（ＲeＲe'）、またはＣ1〜Ｃ4アルキルもしくはＮ（ＲeＲe'）で任意選択で置換された５員のヘテロシクロアルキルであり、ここで、各Ｒeは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒe'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；各Ｒ3は、独立に、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、またはＯＲfであり、ここで、各Ｒfは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；ただし、ｎが０である場合、Ｒは、アミノまたはグアニジノでなく、Ａｒ1Ｃ（Ｏ）に結合したアミノ酸残基がＬ−Ｖａｌである場合、Ａｒ1は、非置換フェニルでない］。
【０００７】
他の態様では、本開示は、本明細書に記載した式（Ｉ）の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を特徴とする。
【０００８】
さらなる他の態様では、本開示は、本明細書に記載した医薬組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、片頭痛を処置する方法を特徴とする。
【０００９】
他の特徴、目的、および利点は、本説明および特許請求の範囲から明らかである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本開示は、全体的に、ＣＧＲＰアンタゴニストペプチドおよび片頭痛を処置するためのそれらの使用に関する。特に、本開示は、いくつかのペプチドが、ＣＧＲＰ受容体に対して改良された効力を示し、片頭痛を処置するために有効に用いることができるＣＧＲＰアンタゴニストであるという予期しない発見に基づいている。いくつかの実施形態では、ＣＧＲＰアンタゴニストペプチドは、ＡＭ２受容体と比して、ＣＧＲＰ受容体に対してより選択的である。いくつかの実施形態では、ＣＧＲＰアンタゴニストペプチドは、溶解性が改良されている。いくつかの実施形態では、ＣＧＲＰアンタゴニストペプチドは、バイオアベイラビリティが改良されている。
【００１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載したＣＧＲＰアンタゴニストペプチドは、式（Ｉ）のものまたは薬学的に許容されるその塩である。
【００１２】
【化２】
2018505213.tif 000004
【００１３】
式（Ｉ）中、ｍは、０、１、２、３、４、または５であり；ｐは、０、１、２、または３であり；Ａは、炭素−炭素単結合または二重結合であり；Ａｒ1は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、もしくはＩ）、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル（例えば、ＣＨ2ＯＨ）、ＯＲa、またはＮ（ＲaＲa'）であり、ここで、各Ｒaは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒa'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；Ａｒ2は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4アミノアルキル（例えば、ＣＨ2ＮＨ2）、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲb、Ｎ（ＲbＲb'）、Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲbＲb'）、またはＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲbＲb'）であり、ここで、各Ｒbは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒb'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；Ａｒ3は、アリールまたは５員もしくは６員のヘテロアリールであり、そのそれぞれは、１つまたは複数の置換基で任意選択で置換されており、各置換基は、独立に、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲc、またはＮ（ＲcＲc'）であり、ここで、各Ｒcは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒc'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；各Ｒ1は、独立に、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4アミノアルキル、Ｃ1〜Ｃ4ヒドロキシアルキル、ＯＲd、またはＣ（Ｏ）−Ｎ（ＲdＲd'）であり、ここで、各Ｒdは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒd'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；Ｒ2は、−（ＣＨ2）n−Ｒであり、ここで、ｎは、０、１、２、または３であり、Ｒは、置換または非置換グアニジノ、アミノアシル（すなわち、Ｃ（Ｏ）ＮＨ2）、Ｃ1〜Ｃ4アルキルアミノアシル（例えば、Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ3）、ＯＲe、Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ2）−（ＣＨ2）4−Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−Ｎ（ＲeＲe'）、またはＣ1〜Ｃ4アルキルもしくはＮ（ＲeＲe'）で任意選択で置換された５員のヘテロシクロアルキルであり、ここで、各Ｒeは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、各Ｒe'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；各Ｒ3は、独立に、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、またはＯＲfであり、ここで、各Ｒfは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ4アルキルであり；ただし、ｎが０である場合、Ｒは、アミノまたはグアニジノでなく、Ａｒ1Ｃ（Ｏ）に結合したアミノ酸残基がＬ−Ｖａｌである場合、Ａｒ1は、非置換フェニルでない。
【００１４】
用語「アルキル」とは、飽和の、直鎖状もしくは分枝状の炭化水素部分、例えば、−ＣＨ3または−ＣＨ（ＣＨ3）2などを意味する。用語「シクロアルキル」とは、飽和の、環式炭化水素部分、例えば、シクロヘキシルを意味する。用語「ヘテロシクロアルキル」とは、少なくとも１個の環ヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ）を有する飽和の、環式部分、例えば、４−テトラヒドロピラニルを意味する。用語「アリール」とは、１つまたは複数の芳香族環を有する炭化水素部分を意味する。アリール部分の例には、フェニル（Ｐｈ）、フェニレン、ナフチル、ナフチレン、ピレニル、アントリル、およびフェナントリルが含まれる。用語「ヘテロアリール」とは、少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｏ、もしくはＳ）を含む１つまたは複数の芳香族環を有する部分を意味する。ヘテロアリール部分の例には、フリル、フリレン、フルオレニル、ピロリル、チエニル、オキサゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、キナゾリニル、キノリル、イソキノリルおよびインドリルが含まれる。
【００１５】
いくつかの実施形態では、Ａｒ1Ｃ（Ｏ）に結合したアミノ酸残基は、Ｄ−Ｖａｌとなり得る。
【００１６】
いくつかの実施形態では、Ａｒ1は、フェニル、ピリジニル、オキサゾリル、チアゾリル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピロリル、またはトリアゾリルとなり得、そのそれぞれは、Ｆ、Ｃｌ、ＮＯ2、ＣＨ3、ＣＨ2ＯＨ、またはＮＨ2などの１つまたは複数の置換基で任意選択で置換される。
【００１７】
いくつかの実施形態では、Ａｒ2は、フェニルでもピリジニルでもよく、そのそれぞれは、ＣＨ2ＮＨ2、Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、ＯＨ、ＣＮ、ＣＨ2ＯＨ、ＮＨ2、またはＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ2などの１つまたは複数の置換基で任意選択で置換される。
【００１８】
いくつかの実施形態では、Ａｒ3は、ピリジニルとなり得る。
【００１９】
いくつかの実施形態では、Ｒ1は、ＯＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、またはＣＨ2ＮＨ2となり得る。かかる実施形態では、式（Ｉ）中のｍは、１となり得る。
【００２０】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）中のＲ2におけるｎは、０、１、または２となり得る。
【００２１】
いくつかの実施形態では、Ｒは、Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ2）−（ＣＨ2）4−Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−Ｎ（ＲeＲe'）、ＮＨ2で任意選択で置換されたトリアゾリル、またはＣＮもしくはＣＨ3で任意選択で置換されたグアニジノとなり得、各Ｒeは、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ3アルキルであり、各Ｒe'は、独立に、ＨまたはＣ1〜Ｃ3アルキルである。例えば、Ｒは、ＮＨ2、Ｎ（ＣＨ3）2、Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2、ＮＨ（ＣＨ（ＣＨ3）2）、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ2）−（ＣＨ2）4−Ｎ（ＣＨ3）2、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−ＮＨ2、ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2−（ＯＣＨ2ＣＨ2）2−ＮＨ（ＣＨ（ＣＨ3）2）、３−アミノ−１，２，４−トリアゾール−５−イル、またはＣＮもしくはＣＨ3で任意選択で置換されたグアニジノとなり得る。
【００２２】
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）中のｐは、０である。
【００２３】
式（Ｉ）の例示的化合物（すなわち、化合物１〜７０）には、以下の表１に列挙したものが含まれる。
【００２４】
【表１−１】
2018505213.tif 000005
【表１−２】
2018505213.tif 000006
【表１−３】
2018505213.tif 000007
【００２５】
別段の指定がない限り、表１中のアミノ酸コードは、そのＬ−異性体を意味する。例えば、ＯｒｎはＬ−オルニチンを意味し、３Ｐａｌは３−（３−ピリジル）−Ｌ−アラニンを意味し、Ｄｈｐは３，４−デヒドロ−Ｌ−プロリンを意味し、Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）は３−（２−カルバモイル）フェニル−Ｌ−アラニンを意味する。
【００２６】
例示的化合物１〜７０は、ｍは１であり、ｐは０であり、Ａｒ3は３−ピリジニルであり、Ａ、Ａｒ1、Ａｒ2、Ｒ1、ｎ、およびＲは以下の表２に示すものである、式（Ｉ）のものである。
【００２７】
【表２−１】
2018505213.tif 000008
【表２−２】
2018505213.tif 000009
【表２−３】
2018505213.tif 000010
【００２８】
式（Ｉ）の化合物は、当技術分野で公知の方法または本明細書に記載した方法により作製することができる。以下の実施例１〜５では、化合物１〜７０が実際どのようにして調製されたかの詳細な説明を示す。
【００２９】
本開示はまた、有効成分として、治療有効量の本明細書に記載したＣＧＲＰアンタゴニストペプチド（すなわち、式（Ｉ）の化合物）または薬学的に許容されるその塩の少なくとも１種（例えば、２種以上）を、少なくとも１種の薬学的に許容される担体（例えば、アジュバントまたは賦形剤）とともに含有する医薬組成物を特徴とする。薬学的に許容される塩の例には、酸付加塩、例えば、ハロゲン化水素酸（塩酸または臭化水素酸など）、鉱酸（硫酸、リン酸および硝酸など）、および脂肪族、脂環式、芳香族もしくは複素環式のスルホン酸またはカルボン酸（ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、エンボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロベンゼンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、およびナフタレンスルホン酸など）との反応により形成された塩が含まれる。
【００３０】
医薬組成物中の担体は、組成物の有効成分と相溶性があり（好ましくは、有効成分を安定化することが可能であり）、処置しようとする対象に有害でないという意味において「許容され」なければならない。１種または複数の安定化剤を、活性ＣＧＲＰアンタゴニストペプチドの送達のための医薬用担体として活用することができる。他の担体の例には、コロイド状酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウム、およびＤ＆Ｃ黄色＃１０が含まれる。
【００３１】
本明細書に記載した医薬組成物は、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、矯味剤、保存剤、着色料および任意のその混合物から選択される少なくとも１種のさらなる添加物を任意選択で含むことができる。かかる添加物および他の添加物の例は、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」；Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ編、第３版、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ＵＳＡ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ＵＫ、２０００年において見出すことができる。
【００３２】
本明細書に記載した医薬組成物は、非経口、経口、局所、経鼻、直腸、口腔、もしくは舌下の投与に適合することができ、または気道経由の、例えば、エアロゾルもしくは流動微粉〔air-suspended fine powder〕の形態の投与に適合させることができる。本明細書で使用される場合、用語「非経口」とは、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑膜内、胸骨内〔intrasternal〕、くも膜下腔内、病巣内、腹腔内、眼内、耳内、または頭蓋内の注射を、任意の適当な注入技法とともに、意味する。いくつかの実施形態では、本組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、微小粒子、顆粒剤、シロップ剤、懸濁液剤、溶液剤、点鼻剤、経皮パッチ剤または坐剤の形態となり得る。
【００３３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載した医薬組成物は、水溶液に溶解させた本明細書に記載したＣＧＲＰアンタゴニストペプチドを含有することができる。例えば、本組成物は、賦形剤として働くための（例えば、０．９ｗｔ％の塩化ナトリウムを含有する）塩化ナトリウム水溶液を含むことができる。
【００３４】
さらに、本開示は、片頭痛を処置するためにまたはそのような処置用の医薬品を製造するために、上記で概説した通りのＣＧＲＰアンタゴニストペプチドを使用する方法を特徴とする。本方法は、本明細書に記載した医薬組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与するステップを含むことができる。「有効量」とは、処置される対象に治療効果を与えるために必要とされる医薬組成物の量を意味する。有効用量は、当業者によって認識される通り、処置される疾患、投与経路、添加剤の使用、および他の治療上の処置との同時使用の可能性に応じて変わる。
【００３５】
本明細書で使用される場合、用語「処置」〔treatment〕、「処置する」〔treat〕および「処置する」〔treating〕とは、本明細書に記載されているように、片頭痛または１種もしくは複数のその症状を回復させる、緩和する、それらの発生を遅らせる、またはそれら進行を妨げることを意味する。いくつかの実施形態では、処置は、１種または複数の症状が発症した後に施してもよい。他の実施形態では、処置は、症状の非存在下で投与することができる。例えば、処置は、症状の発生前に（例えば、症状の病歴に照らしておよび／または遺伝的因子もしくは他の感受性因子に照らして）感受性がある個体に投与することができる。処置はまた、例えば、これらの再発を防止するまたは遅延させるために、症状が解消した後に継続することもできる。
【００３６】
本明細書に記載したＣＧＲＰアンタゴニストペプチドの典型的な投与量は、広い範囲内で変わることもあり、各患者の個別のニーズおよび投与経路などの様々な因子に依存する。（例えば、皮下投与用の）例示的な１日投与量は、少なくとも約０．５ｍｇ（例えば、少なくとも約１ｍｇ、少なくとも約５ｍｇ、少なくとも約１０ｍｇ、または少なくとも約１５ｍｇ）および／または最大でも約１００ｍｇ（例えば、最大でも約７５ｍｇ、最大でも約５０ｍｇ、最大でも約２０ｍｇ、または最大でも約１５ｍｇ）のＣＧＲＰアンタゴニストペプチドとなり得る。当業者または医師は、目前にある状態に対応するために、この投与量の範囲および実用的な実施に関連する変形形態を考慮することができる。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載した医薬組成物は、１日１回投与することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１日１回より多く（例えば、１日２回、１日３回、または１日４回）投与することができる。
【００３８】
本明細書で引用されたすべての刊行物（例えば、特許、出願公開、および論文）の内容は、その全体を参照により本明細書に組み込まれる。
【００３９】
以下の実施例は、例示的なものであり、限定することを目的としない。
【実施例】
【００４０】
一般的な合成方法
１．アミノ酸誘導体
アミノ酸誘導体を、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ，Ｂｏｃ）−ＯＨを除いて、民間の提供業者（Ａａｐｐｔｅｃ社、Ｃｈｅｍ  Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、ＰＰＬ社、ＰｅｐＴｅｃｈ社およびＰｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社など）から購入した。Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ，Ｂｏｃ）−ＯＨは次の通り調製した。
【００４１】
Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ｂｏｃ）−ＯＨ５０．０ｇ（１０５．８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（ＤＣＭ）１００ｍＬに溶解した。続いて、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）１００ｍＬを加えた。反応混合物を１時間磁力的に撹拌し、溶媒を蒸発させた。過剰なＴＦＡを除去するために、残留物をＤＣＭで再構成し、数回蒸発させた。油性の残留物をＭｅＯＨ４００ｍＬおよびアセトン１００ｍＬに溶解し、その後、酢酸３０ｍＬに溶解した。反応混合物を激しく撹拌し、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ−ＯＨが消費されるまで（約２時間、分析用ＨＰＬＣによりモニターした）、固体のＮａＢＨ（ＯＡｃ）3１２０．０ｇ（０．５７ｍｏｌ、５．４ｅｑ）を１０ｇずつ加えた。次いで、溶媒を蒸発させ、得られた固形残留物を精製せずに次のステップに用いた。
【００４２】
前のステップで得られた残留物を水１００ｍＬに溶解し、固体Ｎａ2ＣＯ3で溶液のｐＨを約９．５に調整した。続いて、ｔ−ＢｕＯＨ１００ｍＬを、磁力的に撹拌した反応混合物に加えた。ｔ−ＢｕＯＨ１００ｍＬ中のＢｏｃ2Ｏ（６０．０ｇ、２７５ｍｍｏｌ、２．６ｅｑ）を１０時間にわたって少量ずつ加えた。飽和Ｎａ2ＣＯ3（ａｑ）を加えて、反応混合物のｐＨを約９．５で維持した。Ｂｏｃ2Ｏの最後の部分を加えた後、反応混合物をさらに９時間撹拌した。反応混合物を水１Ｌで希釈し、ヘキサン２×２００ｍＬで抽出した。２Ｍ  ＨＣｌで水相を酸性とし、生成物をジエチルエーテル（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を２Ｍ  ＨＣｌ（３×２００ｍＬ）および水で十分に洗浄し、続いて、無水ＭｇＳＯ4で乾燥した。乾燥剤をろ過し、溶媒を蒸発させた。得られた固形残留物を、石油エーテルで処理し、デカントし、真空中で乾燥した。結晶性生成物をｔ−ＢｕＯＨ２００ｍＬに溶解し、凍結乾燥した。凍結乾燥した誘導体４１．８ｇ（８４ｍｍｏｌ、収率７９．５％）を得た。
【００４３】
２．ペプチド合成
樹脂は、民間の供給業者（例えば、ＰＣＡＳ  ＢｉｏＭａｔｒｉｘ  Ｉｎｃ．およびＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社）から購入した。Ｎ−末端アシル基を導入するためのカルボン酸は、ＡｓｔａＴｅｃｈ社、ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ  Ｃｏｒｐ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、Ｊ＆Ｗ  Ｐｈａｒｍａｌａｂ社、Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社およびＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ社から取得した。すべての追加の試薬、化学薬品および溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社およびＶＷＲ社から購入した。
【００４４】
本明細書に記載した化合物を、Ｆｍｏｃ法を利用する固相ペプチド化学において標準的な方法により合成した。ペプチドを、Ｔｒｉｂｕｔｅペプチドシンセサイザー（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｔｕｃｓｏｎ、Ａｒｉｚｏｎａ）またはＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３Ａペプチドシンセサイザーを用いて手動でもしくは自動的に、または手動のおよび自動の合成の組み合わせにより構築した。
【００４５】
分取ＨＰＬＣは、ＰｒｅｐＰａｃｋカートリッジＤｅｌｔａ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８、３００Å、１５μｍ、４７×３００ｍｍを用いたＷａｔｅｒｓ  Ｐｒｅｐ  ＬＣ系で流速１００ｍＬ／分で、および／またはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム、１００Å、５μｍ、３０×１００ｍｍで流速４０ｍＬ／分で行った。分析用逆相ＨＰＬＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２００ｒｒシリーズ液体クロマトグラフで、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｃ１８カラム、１．８μｍ、４．６×１１０ｍｍを用いて、流速１．５ｍＬ／分で行った。最終化合物分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２００シリーズクロマトグラフで、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  １１０Å  Ｃ１８カラム、３μｍ、２×１５０ｍｍ、流速０．３ｍＬ／分での逆相ＨＰＬＣにより行った。質量スペクトルは、ＭＡＴ  Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱエレクトロスプレー質量分析計で記録した。別段の記載がない限り、すべての反応は室温で行った。次の参考文献は、一般的な実験装置について、必要とされる出発原料および試薬の利用可能性についてとともに、さらなる指針を与える。Ｋａｔｅｓ、Ｓ．Ａ．、Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ，Ｆ．編、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ、２０００年；Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．、Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．、第２版、１９９１年；Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．、Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９８４年；Ｂｉｓｅｌｌｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９８年、２７３巻、２２４９８〜２２５０５頁；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６３年、８５巻、２１４９〜２１５４頁；およびＣｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ  Ｐ．Ｄ．、「Ｆｍｏｃ  Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、２０００年。
【００４６】
次の保護基を利用して、所与のアミノ酸側鎖官能基を保護した。Ａｒｇの場合、Ｐｂｆ（２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル）；ＴｙｒおよびＡｓｐの場合、ｔＢｕ（ｔ−ブチル）；Ｄａｂ、Ｏｒｎ、Ｏｒｎ（ｉＰｒ）およびＬｙｓの場合、Ｂｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）；およびＣｙｓの場合、Ｔｒｔ（トリチル）。
【００４７】
ＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＢｔを用いてカップリングされたシステイン誘導体を除いて、ＴｒｉｂｕｔｅシンセサイザーにおけるＦｍｏｃ保護アミノ酸のカップリングはＤＭＦ中のＨＢＴＵ／ＮＭＭを介して行った。合成中、５倍の過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸による３０〜６０分の単回サイクルを用いた。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、ＵＶによりモニターした。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンによるペプチド樹脂の複数回の（必要に応じて１０回まで）２分間の洗浄を行った。
【００４８】
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社によって指定された周期プロトコールを、４３３Ａシンセサイザーにおいて用いた。カップリングを、ＤＭＦ／ＮＭＰ中のＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡまたはＤＩＣ／ＨＯＢｔを介して行った。４倍の過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸による３５〜５０分の単回のカップリングを使用した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、ＵＶによりモニターし、２０％ピペリジン／ＮＭＰによる単回の２０分間の洗浄により達成した。
【００４９】
手動モードではすべてのアミノ酸に対してＤＭＦ中でのＤＩＣ／ＨＯＢｔを介したカップリングを使った。合成中、３倍までの過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を用いる少なくとも２時間の単回サイクルを用いた。カップリングの完全性を、ニンヒドリン（カイザー）試験で評価した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンによるペプチド樹脂の単回の３０分間の洗浄で達成した。
【００５０】
ペプチド合成の完了後、ペプチド樹脂をＤＣＭで洗浄し、真空中で乾燥した。樹脂を、Ｈ2Ｏ（１０％まで）およびジイソプロピルシラン（ＴＩＳ；４％まで）の可変量を含有するＴＦＡで２時間処理して、樹脂からペプチドを切断すると同時に側鎖保護基を除去した。ペプチドをろ過し、ジエチルエーテルで沈殿させ、デカントした。ジスルフィド架橋したペプチドを得るために、沈殿物をニートＴＦＡまたはＡｃＯＨに溶解し、続いて、その溶液を水中の１０％アセトニトリル中に注いだ。場合によっては、アセトニトリルの追加の量を加えて、基質を可溶化した。直鎖ペプチドを、ＭｅＯＨまたはＡｃＯＨ中の０．１Ｍ  Ｉ2で酸化した。酸化剤溶液は黄色が持続するまで滴下した。過量のヨウ素はアスコルビン酸で還元した。次いで、濃アンモニアでｐＨを約４に調整した。得られた溶液をＨＰＬＣプレップカラムに直接添加し、以下の表３に示す構成成分Ｂの勾配で溶出させた。
【００５１】
各粗ペプチドを表３に示す緩衝液Ｔで精製した。逆相分析用ＨＰＬＣにより決定された純度が９０％を超える画分を、プールし、カラムに再び添加し、緩衝液Ｔで溶出させて、トリフルオロ酢酸塩を生成した。場合によっては、表３に示す緩衝液Ｃによる追加の精製を行った。塩酸塩を得るために、緩衝液ＴまたはＣを流して得られた画分をカラムに再び添加し、カラムを１ｍＭ  ＨＣｌ中の０．１Ｍ塩化ナトリウム３〜５体積で洗浄した。最終生成物を表３に示す緩衝液Ｈで溶出させた。画分をプールし、凍結乾燥した。このようにして調製した化合物は概して、純度が少なくとも約９０％になることが判明した。
【００５２】
【表３】
2018505213.tif 000011
【００５３】
本明細書に記載した式（Ｉ）のいくつかの例示的化合物の合成を以下に示す。
【００５４】
［実施例１］化合物３０の合成
Ｆｍｏｃ−ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、カタログ番号８５５００３、０．６５ｍｍｏｌ／ｇ）３．０ｇ（１．９５ｍｍｏｌ）から開始し、ペプチドを手動で構築した。ＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＢｔを介したカップリングを使った。合成中、３倍まで過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸による少なくとも２時間の単回サイクルを用いた。カップリングの完全性を、ニンヒドリン試験で評価した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンによるペプチド樹脂の単回の３０分間の洗浄で達成した。次のアミノ酸誘導体を、樹脂に結合されたペプチドを構築するために用いた。Ｆｍｏｃ−３Ｐａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ，Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｄ−Ｖａｌ−ＯＨ。１〜１１のペプチド断片を構築した後、樹脂を、オキサゾール−２−カルボン酸／ＤＩＣ／ＨＯＢｔ（４当量）でキャップし、ＤＣＭで十分に洗浄し、真空中で乾燥した。粗直鎖ペプチドを、ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ／ＴＩＳ  ９６：２：２（ｖ／ｖ／ｖ）の５０ｍＬで２時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発させた後、粗ペプチドを、ジエチルエーテルで沈殿させ、デカントした。沈殿物を、１％ＴＦＡ水溶液１Ｌに溶解し、０．１Ｍ  Ｉ2／ＭｅＯＨで酸化させた。酸化剤溶液は黄色が持続するまで滴下した。過剰なヨウ素は固体アスコルビン酸で還元した。次いで、濃アンモニアでｐＨを約４に調整した。得られた溶液を、ＨＰＬＣプレップカラムに直接添加し、緩衝液Ｔで精製した。逆相分析用ＨＰＬＣによって決定された、純度＞９０％の画分を、プールし、カラムに再び添加した。カラムを、１ｍＭ  ＨＣｌで平衡化し、１ｍＭ  ＨＣｌ中の０．１ｍＭ  ＮａＣｌ  ３体積で洗浄し、化合物を、緩衝液Ｈで溶出させて、塩酸塩を生成した。画分を、プールし、凍結乾燥した。白色のペプチド粉末（化合物３０）１００９．８ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ、ペプチド含有量８９．６％に対して全体で３２．３％）を得た。
【００５５】
生成物の純度を、分析用ＨＰＬＣにより９０．７％と決定した。観測されたおよび算出されたＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）を、以下の表４に示す。
【００５６】
［実施例２］化合物４０の合成
本ペプチドの固相合成を、Ｆｍｏｃ−戦略を用いてＴｒｉｂｕｔｅペプチドシンセサイザーで行った。出発樹脂は、Ｒｉｎｋ  Ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社、カタログ番号８５５００３、１００〜２００メッシュ、０．６５ｍｍｏｌ／ｇ）０．２３ｇ（０．１５ｍｍｏｌ）であった。ＨＢＴＵ／ＮＭＭカップリング方法を必要とするＮ−末端オキサゾール−２−カルボン酸を除き、すべてのアミノ酸に対して、ＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＢｔを介したカップリングを使った。合成中、３倍の過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸による２時間の単回サイクルを用いた。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンによる１×５分および１×２５分の処理により、Ｆｍｏｃ保護基を除去した。次のアミノ酸誘導体を連続的に用いて、樹脂に結合されたペプチドを構築した。Ｆｍｏｃ−３Ｐａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−３Ｐａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ，Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｄ−Ｖａｌ−ＯＨ。ＤＭＦ中のオキサゾール−２−カルボン酸（０．５ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（０．５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（１．０ｍｍｏｌ）の予め活性化された混合物で、樹脂に結合された（１〜１１）ペプチド断片を４時間処理することにより、Ｎ−末端アシル基を導入した。最終の構築されたペプチド樹脂を、ＤＣＭで洗浄し、真空中で乾燥した。粗直鎖ペプチドを、ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ／ＴＩＳ（９４：３：３、ｖ／ｖ／ｖ）２５ｍＬで２．５時間、樹脂から切断した。溶媒を減圧下で蒸発させ、粗ペプチドをジエチルエーテルで沈殿させた。沈殿物を、ろ過により収集し、次いで、５％ＡＣＮ中の０．１％ＴＦＡ４００ｍＬに溶解し、０．１Ｍ  Ｉ2／ＡｃＯＨで酸化させた。ヨウ素溶液を、黄色が持続するまで滴下した。過量のヨウ素を、アスコルビン酸の飽和水溶液で還元した。得られた溶液を、分取ＨＰＬＣカラムに直接添加し、緩衝液Ｔで精製した。逆相分析用ＨＰＬＣにより決定された、純度が＞９０％の画分をプールし、凍結乾燥機で凍結乾燥した。白色のペプチド粉末（化合物４０）８０．２ｍｇ（４５．０μｍｏｌ、推定ペプチド含有量８０％に対して全収率で３０％）を得た。
【００５７】
生成物の純度を、分析用ＨＰＬＣにより９６．８％と決定した。観測されたおよび算出されたＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）を、以下の表４に示す。
【００５８】
［実施例３］化合物６２の合成
高温ＳＰＰＳ（７５℃、Ｌａｕｄａ  Ｅ１００  水浴、ジャケット付き５０ｍＬ  ＳＰＰＳ反応槽）を用いて、Ｒｉｎｋ  ａｍｉｄｅ  ＭＢＨＡ樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、カタログ番号８．５５００３、０．５９ｍｍｏｌ／ｇ）３．０ｇ（１．７７ｍｍｏｌ）から開始し、ペプチドを手動で構築した。合成中、４倍までの過量の予め活性化されたＦｍｏｃ保護アミノ酸（ＨＯＢｔ、ＤＩＣ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ，Ｂｏｃ）−ＯＨについては予め活性化させない）による少なくとも１５分の単回サイクルを用いた。ＤＭＦ中の２５％ピペリジンによりペプチド樹脂を２×５分洗浄することによりＦｍｏｃ保護基を除去した。次のアミノ酸誘導体を、樹脂に結合されたペプチドを構築するために用いた。Ｆｍｏｃ−３Ｐａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ，Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、およびＦｍｏｃ−Ｄ−Ｖａｌ−ＯＨ。１〜１１のペプチド断片を構築した後、樹脂を、３，５−ジフルオロピコリン酸／ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡ（４ｅｑ）でキャップし、ＭｅＯＨで十分に洗浄し、真空中で乾燥した。粗直鎖ペプチドを、ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ／ＴＩＳ  ９６：２：２（ｖ／ｖ／ｖ）の７５ｍＬで２時間、樹脂から切断した。溶媒が蒸発した後、粗ペプチドを、ジエチルエーテルで沈殿させ、デカントした。沈殿物を、０．５％ＴＦＡ水溶液中の１０％ＭｅＣＮ  １Ｌに溶解し、０．０５Ｍ  Ｉ2／ＡｃＯＨで酸化させた。酸化剤溶液は黄色が持続するまで滴下した。過量のヨウ素は１Ｍアスコルビン酸で還元した。得られた溶液を、ＨＰＬＣプレップカラムに直接添加し、改質された緩衝液Ｔ（構成成分Ａ：０．０１％ＴＦＡ、構成成分Ｂ：０．０１％ＴＦＡ中の９５％アセトニトリル）で精製した。逆相分析用ＨＰＬＣによって決定された、純度＞９５％の画分を、プールし、カラムに再び添加した。カラムを、１ｍＭ  ＨＣｌで平衡化し、１ｍＭ  ＨＣｌ中の０．１ｍＭ  ＮａＣｌ  ３体積で洗浄し、続いて、化合物を、緩衝液Ｈで溶出させて、塩酸塩を生成した。画分をプールし、凍結乾燥した。白色のペプチド粉末（化合物６２）５８３ｍｇ（０．６３ｍｍｏｌ、ペプチド含有量８７．３％に対して全体で２０％、および純度９８．８％）を得た。
【００５９】
生成物の純度を、分析用ＨＰＬＣにより９８．８％と決定した。観測されたおよび算出されたＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）を以下の表４に示す。
【００６０】
［実施例４］化合物６５の合成
化合物を、手動および自動の合成の組み合わせにより固相で構築した。まず、Ｃ−末端トリペプチドを、Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ  ａｍｉｄｅ  Ｃｈｅｍ  Ｍａｔｒｉｘ樹脂（Ｂｉｏｔａｇｅ社、カタログ番号７−６００−１３１０−２５、０．４８ｍｍｏｌ／ｇ）７．３ｇ（３．５ｍｍｏｌ）から開始し、手動で合成した。ＤＭＦ中のＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡを介したカップリングを３ＰａｌおよびＰｈｅ（３−Ｃｂｍ）の場合に使い、ＤＭＦ中のＤＩＣ／ＨＯＢｔを介したカップリングをＣｙｓの場合に使った。合成中、３倍まで過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸による少なくとも２時間の単回サイクルを用いた。カップリングの完全性をニンヒドリン試験で評価した。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、それぞれ５分および２５分の２回の洗浄を用いてＤＭＦ中の３０％ピペリジンで達成した。次のアミノ酸誘導体を、樹脂に結合されたペプチドを構築するために用いた。Ｆｍｏｃ−３Ｐａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｐｈｅ（３−Ｃｂｍ）−ＯＨ。合成を、樹脂の８分の１（０．４４ｍｍｏｌ）で、４３３Ａシンセサイザーで続けた。ＮＭＰ／ＤＭＦ中のＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡまたは（Ｃｙｓの場合）ＤＩＣ／ＨＯＢｔを介したカップリングを使った。合成中、５倍まで過量の活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸による少なくとも３０分の単回サイクルを用いた。Ｆｍｏｃ保護基の除去を、ＮＭＰ中の２０％ピペリジンでペプチド樹脂の単回の３０分間の洗浄で達成した。次のアミノ酸誘導体を、樹脂に結合されたペプチドの構築を終了するために用いた。Ｆｍｏｃ−Ｄｈｐ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｏｒｎ（ｉＰｒ，Ｂｏｃ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ（２−Ｃｂｍ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｄ−Ｖａｌ−ＯＨ。１〜１１のペプチド断片が構築された後、樹脂を、オキサゾール−２−カルボン酸／ＨＡＴＵ／ＤＩＰＥＡ（４ｅｑ）で手動でキャップし、ＤＣＭで十分に洗浄し、真空中で乾燥した。粗直鎖ペプチドを、ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ／ＴＩＳ  ９０：８：２（ｖ／ｖ／ｖ）の５０ｍＬで２時間、樹脂から切断した。溶媒を蒸発させ、粗ペプチドをＭＴＢＡで沈殿させ、遠心し、デカントした。沈殿物を、ＡｃＯＨ１５ｍＬに溶解し、１０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル水溶液２５０ｍＬ中に注ぎ、０．１Ｍ  Ｉ2／ＭｅＯＨで酸化させた。酸化剤溶液は黄色が持続するまで滴下した。過量のヨウ素は固体アスコルビン酸で還元した。次いで、濃アンモニアでｐＨを約４に調整した。得られた溶液を、ＨＰＬＣプレップカラムに直接添加し、緩衝液Ｔで精製した（上記の表を参照のこと）。逆相分析用ＨＰＬＣによって決定された、純度＞９０％の画分をプールし、凍結乾燥した。白色のペプチド粉末（化合物６５）１１６．２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ、ペプチド含有量７８．５％に対して全体で１４．１％）を得た。
【００６１】
生成物の純度を、分析用ＨＰＬＣにより９８．３％と決定した。観測されたおよび算出されたＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）を以下の表４に示す。
【００６２】
［実施例５］化合物１〜２９、３１〜３９、４１〜６１、６３、６４、および６６〜７０の合成
化合物１〜２９、３１〜３９、４１〜６１、６３、６４、および６６〜７０を、実施例１〜４に記載の方法を用いることにより合成した。
【００６３】
化合物１〜７０の観測されたおよび算出されたＭＳデータ（すなわち、Ｍ＋Ｈ）を、以下の表４にまとめる。
【００６４】
【表４−１】
2018505213.tif 000012
【表４−２】
2018505213.tif 000013
【００６５】
［実施例６］ｃＡＭＰアッセイによって測定されたＣＧＲＰ受容体アンタゴニスト活性
ＣＧＲＰ受容体アゴニストは、細胞内環式アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）を増加させる。ＣＧＲＰ受容体アンタゴニストは、アゴニスト効果を減少させることができる。アンタゴニスト活性を、ｈＣＧＲＰ受容体を安定的に発現する細胞系（ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ（登録商標）ＣＡＬＣＲＬ：ＲＡＭＰ１−ＣＲＥ−ｂｌａ  Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）２９３Ｆ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いて、環式アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）を測定することにより評価した。ｈＣＧＲＰ受容体発現細胞を、加湿された雰囲気下、ＣＯ2５％、３７℃で、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、０．１ｍＭ  ＮＥＡＡ、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ブラストサイジン５ｕｇ／ｍｌ、ハイグロマイシン１００ｕｇ／ｍｌ、およびジェネテシン４００ｕｇ／ｍｌを含有するＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）で、ＤＭＥＭ高グルコース中で維持した。ｃＡＭＰ測定のために、細胞を、１Ｘ  ＰＢＳ５ｍｌで一度洗浄し、細胞維持培地を化合物緩衝液（（ＣＢ）：０．１％  ＢＳＡおよび０．５ｍＭ  ＩＢＭＸを含有するＤＭＥＭ）で置き換え、加湿された雰囲気下、ＣＯ2５％、３７℃で１時間、フラスコをインキュベートした。細胞を、非酵素細胞解離緩衝液を用いて培養フラスコから除去し、ＣＢで回収した。ウェル当たり１０，０００個の細胞の密度で３８４ウェルの白色少容量プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ社）中で反応を行った。細胞を、固定濃度のアゴニスト（ヒトα−ＣＧＲＰ）の存在下で３０分間、様々な濃度のアンタゴニスト化合物に曝露した。ｃＡＭＰレベルを、製造業者の指示に従ってＨＴＲＦ（均一性時間分解蛍光〔homogeneous time resolved fluorescence〕）に基づく競合的ｃＡＭＰイムノアッセイ（ｃＡＭＰ  Ｄｙｎａｍｉｃ  ２  Ｋｉｔ、Ｃｉｓｂｉｏ社）を用いて測定した。６６５ｎｍおよび６１５ｎｍの比の時間分解蛍光読み取り（ＲＦＵ）を算出し、単結合部位、４つのパラメーターの濃度反応モデル：（ＭＩＮ＋（（ＭＡＸ−ＭＩＮ）／（１＋（（ＥＣ５０／ｘ）＾Ｈｉｌｌ））））を用いて、非線形回帰分析を行い、濃度反応曲線を生成した。報告されたパラメーターには、アンタゴニスト力価ＩＣ５０（アンタゴニスト化合物に対するアゴニストの応答を最大半量阻害する濃度）および効果（％ＭＰＥ：最大可能効果のパーセント）が含まれる。
【００６６】
化合物１〜７０および３つの参照ペプチド化合物を、上記アッセイにおいて試験した。３つの参照ペプチド化合物は、（１）Ｂｚ（４−Ｆ）−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ａｇｐ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2（「参照化合物１」、すなわち、Ｙａｎら、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．２０１１年、１７巻、３８３〜３８６頁中の化合物３６）、（２）Ｂｚ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ｃ（Ｃｙｓ−Ｄｐｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ）−３Ｐａｌ−ＮＨ2（「参照化合物２」、Ｙａｎら、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．２０１１年、１７巻、３８３〜３８６頁中の化合物３３）、および（３）Ｈ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（「参照化合物３」、ヒトα−ＣＧＲＰ（８−３７）−ＮＨ2アンタゴニスト）である。これらの結果を、以下の表５にまとめる。
【００６７】
表５に示す通り、化合物１〜７０は概ね、参照化合物１〜３に比べて改良された効力を示した。
【００６８】
［実施例７］ｃＡＭＰアッセイによって測定されたＡＭ２受容体アンタゴニスト活性
アドレノメデュリン受容体ＡＭ２についてのアンタゴニスト活性を、以下のように修正した上で、上記実施例６に記載されている方法を用いて決定した。ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ（登録商標）ＣＡＬＣＲＬ：ＲＡＭＰ１−ＣＲＥ−ｂｌａ  Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）２９３Ｆ細胞に替えて、ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ（登録商標）ＣＡＬＣＲＬ：ＲＡＭＰ３−ＣＲＥ−ｂｌａ  Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）２９３Ｆ細胞を用いて、ｈＡＭ２受容体における活性を試験した。アゴニストは、α−ＣＧＲＰに替えて、ヒトアドレノメデュリンであった。
【００６９】
化合物１〜７０および実施例６に記載されている３つの参照ペプチド化合物を、本アッセイにおいて試験した。これらの結果を、以下の表５にまとめる。表５中、ｈＡＭ２に対するｈＣＧＲＰの選択比を、ｈＣＧＲＰ−Ｒ  ＩＣ50／ｈＡＭ２−Ｒ  ＩＣ50として算出した。
【００７０】
表５に示す通り、化合物１〜７０の大部分は、参照化合物１〜３に比べて改良された、ｈＡＭ２受容体に対するｈＣＧＲＰ受容体への選択性を示した。
【００７１】
【表５−１】
2018505213.tif 000014
【表５−２】
2018505213.tif 000015
【００７２】
他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【国際調査報告】
2018505213.tif 000018