(57)【要約】本明細書では、活性化された同種異系間葉系幹細胞の即時注入集団および１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含有する組成物が提供される。哺乳動物に活性化間葉系幹細胞の有効量を投与することによって、哺乳動物における感染創傷を処置する方法も提供される。間葉系幹細胞は、哺乳動物の間葉系幹細胞（例えば、同種異系間葉系幹細胞および／またはヒト間葉系幹細胞）であり得る。感染創傷は、擦過傷、裂傷、挫傷、振盪、刺創、皮膚切り傷、外科的創傷、銃創、熱傷、サンバーン、凍傷、化学的創傷、咬刺傷、虫刺傷または電気創傷であり得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニスト、核オリゴ二量体化ドメイン（ＮＯＤ）受容体アゴニスト、ＲＩＧ−Ｉ受容体（ＲＬＲ）アゴニスト、サイトゾルＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）アゴニストおよびＳＴＩＮＧ受容体アゴニストからなる群から選択される１つまたは複数の活性化剤への曝露によって活性化された同種異系間葉系幹細胞の即時注入集団、ならびに１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む組成物。
【請求項２】
静脈内投与のために製剤化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
同種異系間葉系幹細胞の前記集団が、骨髄、脂肪組織、臍帯血、組織生検または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）から得られるかまたはそれに由来する、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組織生検が皮膚生検または歯科生検である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
同種異系間葉系幹細胞の前記集団が、前記１つまたは複数の活性化剤との少なくとも２時間のインキュベーションによって活性化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記インキュベーションがｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで行われる、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＴＬＲ３アゴニストが、ポリアデニル酸−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ）、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ｐＩＣ）およびＵＶ不活性化ウイルス粒子からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＵＶ不活性化ウイルス粒子がポックスウイルス粒子である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、阻害性オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、精製ＤＮＡ、および精製または合成プラスミドＤＮＡからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＴＬＲ４アゴニストが、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）およびモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）または加熱殺菌グラム陰性菌からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＮＯＤ受容体アゴニストが、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２およびＮＯＤ１／２混合アゴニストからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＮＯＤ１受容体アゴニストが、ジペプチドＩＥ−ＤＡＰ（ｉＥ−ＤＡＰ（γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ）である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＮＯＤ２受容体アゴニストが、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）およびその合成誘導体からなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記合成誘導体がミラブチドである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＮＯＤ１／２混合アゴニストが、グラム陽性菌および合成分子ＭｕｒＮＡｃ−Ｌ−Ａｌａ−ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ（ＰＧＮ様分子）からなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＲＬＲ受容体アゴニストが、二本鎖ＲＮＡ、合成ｐＡＴ  ＲＮＡおよび合成ｐＩＣ  ＲＮＡからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ＣＤＳアゴニストが細菌から単離された二本鎖ＤＮＡである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ＳＴＩＮＧ受容体アゴニストが、環式ジヌクレオチド；３，３環式ｇＡＭＰ；２，３環式ｇＡＭＰ；２，２環式ｇＡＭＰ；環式二ＧＭＰ；および環式二ＵＭＰからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記活性化剤が１０μｇ／ｍｌのポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐＩＣ）である、請求項２に記載の組成物。
【請求項２０】
１つまたは複数の抗微生物剤の有効量をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項２１】
前記１つまたは複数の抗微生物剤が殺菌性抗生物質である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記殺菌性抗生物質が、ペニシリン誘導体（ペナム）、セファロスポリン（セファム）、モノバクタム、カルバペネム、バンコマイシン、ダプトマイシン、フルオロキノロン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、コトリモキサゾール、テリスロマイシンおよびアミノグリコシド抗生物質からなる群から選択される、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記１つまたは複数の抗微生物剤が静菌性抗生物質である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
前記静菌性抗生物質が、テトラサイクリン抗生物質、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシンおよびリネゾリドからなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記テトラサイクリン抗生物質が、テトラサイクリン、ドキシサイクリンおよびミノサイクリンからなる群から選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記同種異系間葉系幹細胞が哺乳動物の間葉系幹細胞である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２７】
前記同種異系間葉系幹細胞がヒト間葉系幹細胞である、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
哺乳動物におけるＭＤＲ細菌による慢性感染創傷の治癒を強化する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
哺乳動物における慢性感染創傷を処置する方法であって、前記哺乳動物に活性化間葉系幹細胞の有効量を投与することを含む方法。
【請求項３０】
前記活性化間葉系幹細胞が、前記感染創傷において細菌クリアランスを誘導するか、細菌負荷を低減するか、または細菌クリアランスを誘導し、かつ細菌負荷を低減する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記活性化間葉系幹細胞が前記哺乳動物に静脈内投与される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記間葉系幹細胞が、骨髄、脂肪組織、臍帯血、組織生検、血液または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）から得られるかまたはそれに由来する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記ｉＰＳＣ細胞が組織生検または血液細胞に由来する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記生検が皮膚生検または歯科生検である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記間葉系幹細胞が、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニスト、核オリゴ二量体化ドメイン（ＮＯＤ）受容体アゴニスト、ＲＩＧ−Ｉ受容体（ＲＬＲ）アゴニスト、サイトゾルＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）アゴニストおよびＳＴＩＮＧ受容体アゴニストからなる群から選択される１つまたは複数の活性化剤とのインキュベーションによってｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで活性化される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＴＬＲ３アゴニストが、ポリアデニル酸−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ）、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ｐＩＣ）およびＵＶ不活性化ウイルス粒子からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＵＶ不活性化ウイルス粒子がポックスウイルス粒子である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＴＬＲ９アゴニストが、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、阻害性オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、精製ＤＮＡ、および精製または合成プラスミドＤＮＡからなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＴＬＲ４アゴニストが、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）およびモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）または加熱殺菌グラム陰性菌からなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＮＯＤ受容体アゴニストが、ＮＯＤ１、ＮＯＤ２およびＮＯＤ１／２混合アゴニストからなる群から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＮＯＤ１受容体アゴニストが、ジペプチドＩＥ−ＤＡＰ（ｉＥ−ＤＡＰ（γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ）である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＮＯＤ２受容体アゴニストが、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）およびその合成誘導体からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記合成誘導体がミラブチドである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＮＯＤ１／２混合アゴニストが、グラム陽性菌および合成分子ＭｕｒＮＡｃ−Ｌ−Ａｌａ−ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ（ＰＧＮ様分子）からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＲＬＲ受容体アゴニストが、二本鎖ＲＮＡ、合成ｐＡＴ  ＲＮＡおよび合成ｐＩＣ  ＲＮＡからなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＣＤＳアゴニストが細菌から単離された二本鎖ＤＮＡである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＳＴＩＮＧ受容体アゴニストが、環式ジヌクレオチド；３，３環式ｇＡＭＰ；２，３環式ｇＡＭＰ；２，２環式ｇＡＭＰ；環式二ＧＭＰ；および環式二ＵＭＰからなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４８】
前記活性化剤が１０μｇ／ｍｌのポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐＩＣ）である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４９】
前記間葉系幹細胞が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて１０μｇ／ｍｌのポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐＩＣ）との少なくとも２時間のインキュベーションによって活性化されている、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
間葉系幹細胞の前記有効量が前記哺乳動物の体重１ｋｇにつき細胞数２×１０６である、請求項３１に記載の方法。
【請求項５１】
前記細胞が１５分間にわたって静脈内カテーテルで投与される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
１つまたは複数の抗微生物剤の有効量の投与をさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項５３】
前記１つまたは複数の抗微生物剤が殺菌性抗生物質である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記殺菌性抗生物質が、ペニシリン誘導体（ペナム）、セファロスポリン（セファム）、モノバクタム、カルバペネム、バンコマイシン、ダプトマイシン、フルオロキノロン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、コトリモキサゾール、テリスロマイシンおよびアミノグリコシド抗生物質からなる群から選択される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記間葉系幹細胞が哺乳動物の間葉系幹細胞である、請求項２９に記載の方法。
【請求項５６】
前記哺乳動物の間葉系幹細胞が同種異系間葉系幹細胞である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記哺乳動物の間葉系幹細胞がヒト間葉系幹細胞である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記活性化間葉系幹細胞が、前記哺乳動物における感染創傷の治癒を強化する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５９】
前記感染創傷が、擦過傷、裂傷、挫傷、振盪、刺創、皮膚切り傷、外科的創傷、銃創、熱傷、サンバーン、凍傷、化学的創傷、咬刺傷、虫刺傷および電気創傷からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記活性化間葉系幹細胞が、活性化されていない間葉系幹細胞と比較して高い抗微生物活性を有する、請求項３５に記載の方法。
【請求項６１】
前記活性化間葉系幹細胞が、前記創傷の発生時または発生後に投与される、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１５年１２月７日に出願された米国出願番号第６２／２６４，０７７号に基づく優先権の利益を主張しており、この米国出願の内容は参考としてその全体が本明細書中に援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、概して、感染創傷の処置のための活性化間葉系幹細胞の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
創傷治癒は、皮膚組織の破壊が起こるたびに活性化される、複雑、動的で良好に編成されたプロセスである。創傷治癒プロセスを通して、広範囲の事象が起こる。創傷感染は、外傷性および外科的創傷、慢性の創傷および潰瘍、ならびに熱傷などの組織傷害の、最も一般的で重大な合併症である。
【０００４】
しかし、抗生物質耐性の世界的増加のために、創傷感染の処置のためのさらなる非従来型の療法への満たされていない危機的な必要性が当技術分野に残されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の要旨
Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニスト、核オリゴ二量体化ドメイン（ＮＯＤ）受容体アゴニスト、ＲＩＧ−Ｉ受容体（ＲＬＲ）アゴニスト、サイトゾルＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）アゴニストおよびＳＴＩＮＧ受容体アゴニストから選択される１つまたは複数の活性化剤への曝露によって活性化された同種異系間葉系幹細胞の即時注入集団、ならびに／あるいは１つまたは複数の薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む組成物が本明細書において提供される。例えば、組成物は、静脈内投与のために製剤化することができる。
【０００６】
間葉系幹細胞は、当技術分野で公知の任意の供与源から、例えば、骨髄、脂肪組織、臍帯血、組織生検（例えば、皮膚生検または歯科生検）または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）から得られるかまたはそれに由来し得る。一部の実施形態では、同種異系間葉系幹細胞の集団は、１つまたは複数の活性化剤との少なくとも２時間のインキュベーションによってｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｅｘ  ｖｉｖｏで活性化されている。
【０００７】
好適なＴＬＲ３アゴニストの非限定的な例として、ポリアデニル酸−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ）、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ｐＩＣ）および／またはＵＶ不活性化ウイルス粒子（例えば、ポックスウイルス粒子）が挙げられる。
【０００８】
ＴＬＲ９アゴニストの非限定的な例として、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、阻害性オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、精製ＤＮＡ、および／または精製または合成プラスミドＤＮＡが挙げられる。
【０００９】
ＴＬＲ４アゴニストの非限定的な例として、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）および／または加熱殺菌グラム陰性菌が挙げられる。
【００１０】
ＮＯＤ受容体アゴニストの非限定例には、ＮＯＤ１アゴニスト（例えば、ジペプチドＩＥ−ＤＡＰ（ｉＥ−ＤＡＰ（γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ））、ＮＯＤ２アゴニスト（例えば、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）および／またはその合成誘導体、例えばミラブチド）、および／またはＮＯＤ１／２混合アゴニスト（例えば、グラム陽性菌および／または合成分子ＭｕｒＮＡｃ−Ｌ−Ａｌａ−ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ（ＰＧＮ様分子）が含まれる。
【００１１】
一部の実施形態では、ＲＬＲ受容体アゴニストは、二本鎖ＲＮＡ、合成ｐＡＴ  ＲＮＡおよび／または合成ｐＩＣ  ＲＮＡであり、ＣＤＳアゴニストは、細菌から単離された二本鎖ＤＮＡであり、ならびに／または、ＳＴＩＮＧ受容体アゴニストは、３，３環式ｇＡＭＰ、２，３環式ｇＡＭＰ、２，２環式ｇＡＭＰおよび環式二ＧＭＰおよび／もしくは環式二ＵＭＰを限定されずに含む、環式のジヌクレオチドである。
【００１２】
一実施形態では、活性化剤は１０μｇ／ｍｌポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐＩＣ）である。
【００１３】
本明細書に記載される組合せのいずれも、殺菌性抗生物質および／または静菌性抗生物質などの１つまたは複数の抗微生物性薬剤の有効量をさらに含むことができる。適する殺菌性抗生物質の非限定例には、ペニシリン誘導体（ペナム）、セファロスポリン（セファム）、モノバクタム、カルバペネム、バンコマイシン、ダプトマイシン、フルオロキノロン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、コトリモキサゾール、テリスロマイシンおよび／またはアミノグリコシド抗生物質を含むことができる。静菌性抗生物質の非限定例には、テトラサイクリン抗生物質、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシンおよび／またはリネゾリドを含むことができる。
【００１４】
さらに、一部の実施形態では、活性化間葉系幹細胞は、投与の前に１つまたは複数の抗生物質でプレロードすることができる。
【００１５】
適する同種異系間葉系幹細胞は、ヒト間葉系幹細胞を含む哺乳動物の間葉系幹細胞である。
【００１６】
本明細書に記載される組成物は、哺乳動物におけるＭＤＲ細菌による慢性感染創傷の治癒を強化する。
【００１７】
哺乳動物に活性化間葉系幹細胞の有効量（例えば、哺乳動物の体重１ｋｇにつき細胞数２×１０６）を投与することによって、哺乳動物において慢性感染創傷を処置する方法も提供される。例えば、細胞は、１５分間にわたって静脈内カテーテルで投与することができる。
【００１８】
当業者は、哺乳動物において慢性感染創傷を処置する方法で、本明細書に記載される組成物のいずれかの有効量を使用することもできることを認識し得る。そのような方法では、活性化間葉系幹細胞または組成物は、感染創傷において細菌クリアランスを誘導するか、細菌負荷を低減するか、または細菌クリアランスを誘導し、かつ細菌負荷を低減する。
【００１９】
好ましくは、活性化間葉系幹細胞は、哺乳動物に全身（すなわち、静脈内）投与される。
【００２０】
本明細書に記載の任意の方法において、間葉系幹細胞は、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）アゴニスト、核オリゴ二量体化ドメイン（ＮＯＤ）受容体アゴニスト、ＲＩＧ−Ｉ受容体（ＲＬＲ）アゴニスト、サイトゾルＤＮＡセンサー（ＣＤＳ）アゴニストおよびＳＴＩＮＧ受容体アゴニストから選択される１つまたは複数の活性化剤とのインキュベーションによってｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで活性化される。
【００２１】
好適なＴＬＲ３アゴニストの非限定的な例として、ポリアデニル酸−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ）、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ｐＩＣ）および／またはＵＶ不活性化ウイルス粒子（例えば、ポックスウイルス粒子）が挙げられる。
【００２２】
ＴＬＲ９アゴニストの非限定的な例として、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、阻害性オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、精製ＤＮＡ、および／または精製または合成プラスミドＤＮＡが挙げられる。
【００２３】
ＴＬＲ４アゴニストの非限定的な例として、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）および／または加熱殺菌グラム陰性菌が挙げられる。
【００２４】
ＮＯＤ受容体アゴニストの非限定例には、ＮＯＤ１アゴニスト（例えば、ジペプチドＩＥ−ＤＡＰ（ｉＥ−ＤＡＰ（γ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ））、ＮＯＤ２アゴニスト（例えば、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）および／またはその合成誘導体、例えばミラブチド）、および／またはＮＯＤ１／２混合アゴニスト（例えば、グラム陽性菌および／または合成分子ＭｕｒＮＡｃ−Ｌ−Ａｌａ−ガンマ−Ｄ−Ｇｌｕ−ｍＤＡＰ（ＰＧＮ様分子）が含まれる。
【００２５】
一部の実施形態では、ＲＬＲ受容体アゴニストは、二本鎖ＲＮＡ、合成ｐＡＴ  ＲＮＡおよび／または合成ｐＩＣ  ＲＮＡであり、ＣＤＳアゴニストは、細菌から単離された二本鎖ＤＮＡであり、ならびに／または、ＳＴＩＮＧ受容体アゴニストは、３，３環式ｇＡＭＰ、２，３環式ｇＡＭＰ、２，２環式ｇＡＭＰおよび環式二ＧＭＰおよび／もしくは環式二ＵＭＰを限定されずに含む、環式のジヌクレオチドである。
【００２６】
一実施形態では、間葉系幹細胞は、投与に先立ってポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐＩＣ）で活性化されている。例えば、間葉系幹細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて１０μｇ／ｍｌのポリイノシン酸：ポリシチジル酸（ｐＩＣ）との少なくとも２時間のインキュベーションによって活性化されている。
【００２７】
本明細書に記載される方法のいずれも、殺菌性抗生物質（例えば、ペニシリン誘導体（ペナム）、セファロスポリン（セファム）、モノバクタム、カルバペネム、バンコマイシン、ダプトマイシン、フルオロキノロン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、コトリモキサゾール、テリスロマイシンおよび／またはアミノグリコシド抗生物質）および／または静菌性抗生物質（例えば、テトラサイクリン抗生物質、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシンおよび／またはリネゾリド）などの１つまたは複数の抗微生物性薬剤の有効量の投与をさらに含むことができる。
【００２８】
間葉系幹細胞は、哺乳動物の間葉系幹細胞（例えば、同種異系間葉系幹細胞および／またはヒト間葉系幹細胞）である。
【００２９】
本明細書に記載される方法のいずれでも、活性化間葉系幹細胞またはその組成物は、哺乳動物における感染創傷の治癒を強化する。非限定的な例として、感染創傷は、擦過傷、裂傷、挫傷、振盪、刺創、皮膚切り傷、外科的創傷、銃創、熱傷、サンバーン、凍傷、化学的創傷、咬刺傷、虫刺傷および電気創傷から選択される。
【００３０】
様々な実施形態では、創傷は、高度薬剤耐性細菌に感染した慢性創傷、または１つより多い（すなわち、２、３、４、５またはそれより多い）株もしくは種の細菌に感染した慢性創傷であってよい。
【００３１】
さらに、本明細書に記載される方法のいずれも、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病患者における創傷を処置するために使用することもできる。そのような患者は、慢性および／または感染創傷の処置を困難にする免疫欠損を有することが公知である。
【００３２】
本明細書に記載される方法および使用で利用される活性化間葉系幹細胞は、活性化されていない間葉系幹細胞と比較して高い抗微生物活性を有する。
【００３３】
好ましい一実施形態では、活性化ＭＳＣは静脈内投与され、殺菌または静菌性抗生物質を含む抗生物質療法と並行して投与される。
【００３４】
本明細書に記載される方法または使用のいずれでも、活性化間葉系幹細胞は、創傷の発生時または発生後に投与することができる。
【００３５】
別の態様では、本発明は、哺乳動物において慢性感染創傷の処置で使用するための、活性化間葉系幹細胞を提供する。活性化間葉系幹細胞は、治療有効量での投与のためである。
【００３６】
さらなる態様では、本発明は、哺乳動物において慢性感染創傷の処置で使用するための、本発明の組成物を提供する。例えば、組成物は、治療有効量での投与のためである。
【００３７】
処置の方法の特徴（例えば、本明細書に記載される間葉系幹細胞および／または組成物の特徴）のいずれも、本発明の処置方法および医学的使用の両方の態様に等しく適用可能である。
【００３８】
本明細書に記載される態様および実施形態のいずれも、発明の概要、図面および／または下の本発明の具体的で非限定的な実施例／実施形態を含む発明を実施するための形態においてここで開示される任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
【００３９】
特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての専門用語および科学用語は、この出願が属する分野の当業技術者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。明細書では、単数形は、文脈が明らかに別に指図しない限り複数形も含む。
【００４０】
本明細書に記載されるそれらに類似するかまたは均等である方法および材料を、本出願の実施および試験で使用することができるが、適する方法および材料が以下に記載される。本明細書で指摘される全ての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、参照により組み込まれる。
【００４１】
本明細書で引用される参考文献は、特許請求される出願の先行技術と認められていない。相反する場合には、定義を含めた本明細書が優先される。さらに、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定されるものではない。
【００４２】
本出願の他の特徴および利点は、実施例と共に以下の詳細な記載から明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は、バイオフィルムを形成したマウス慢性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ創傷感染モデルにおける抗微生物性幹細胞処置の効果を示す一連の写真である。（本明細書に参照により組み込まれる、Ｗａｌｔｏｎら、Ｃｏｍｐ  Ｍｅｄ．６４巻（１号）：２５〜３３頁（２０１４年）を参照）。
【００４４】
【図２】図２は、マウスＳ．ａｕｒｅｕｓ創傷感染モデルにおける活性化ＭＳＣおよび抗生物質による処置の後の、創傷組織における細菌負荷の経時的低減を実証するグラフである。
【００４５】
【図３】図３は、活性化ＭＳＣプラス抗生物質による処置が創傷組織における細菌数を低減することを実証するグラフである。
【００４６】
【図４】図４は、慢性創傷感染の処置のための活性化ＭＳＣの静脈内  対  直接創傷注射の比較を示すグラフである。
【００４７】
【図５】図５は、マウス慢性感染モデルにおける顕微鏡創傷治癒組織学に及ぼす活性化ＭＳＣ投与プラス抗生物質の効果を示す一連の顕微写真である。
【００４８】
【図６】図６は、静脈内投与の後に活性化ＭＳＣが創傷感染部位に効率的に移動することを示す一連の写真である。
【００４９】
【図７】図７は、創傷治癒が活性化ＭＳＣによる全身処置によって促進されることを示す一連の写真である。
【００５０】
【図８】図８は、静脈内投与の後の感染創傷部位へのＤｉＲ標識、活性化ＭＳＣの移動を示す一連の写真である。
【００５１】
【図９】図９は、ＭＳＣによるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細菌殺滅を実証するグラフであり、ここで、＊＊＊はノンパラメトリックｔ検定によって評価したときｐ＜０．００１であることを表す。
【００５２】
【図１０】図１０は、抗生物質療法と組み合わせたとき、ＭＳＣが相乗的な細菌殺滅および高レベル抗生物質耐性の反転を示すことを実証するグラフである。
【００５３】
【図１１】図１１は、活性化ＭＳＣによって生成されるケモカインがｉｎ  ｖｉｔｒｏで単球移動を刺激することを実証するグラフである。
【００５４】
【図１２】図１２は、活性化ＭＳＣの全身投与が創傷感染部位への単球動員を誘発することを示す一連の写真である。
【００５５】
【図１３】図１３は、活性化ＭＳＣによる療法が、創傷部位での創傷治癒マクロファージの分化を刺激すること、および活性化ＭＳＣによる処置がＭ１からＭ２表現型にマクロファージ分極をシフトすることを示す一連の写真である。
【００５６】
【図１４】図１４は、ＭＳＣが抗微生物性カテリシジンペプチドＬＬ−３７を生成することを実証する一連の写真である。
【００５７】
【図１５】図１５は、カテリシジンＬＬ−３７の生成に一部依存するＭＳＣによる細菌殺滅を実証するグラフである。
【００５８】
【図１６】図１６は、活性化ＭＳＣによって生成される因子が好中球による細菌食作用の増加を誘発することを実証する。
【００５９】
【図１７】図１７は、活性化ＭＳＣの静脈内投与が、感染した外傷性足傷害を有するイヌにおいて感染した足創傷の中の複数株の薬剤耐性細菌の排除を誘発することを実証するグラフである。
【００６０】
【図１８】図１８は、活性化ＭＳＣの全身投与が、感染した外傷性足傷害を有するイヌにおいて創傷治癒を刺激することを示す一連の写真である。
【００６１】
【図１９】図１９は、イヌの治癒しない感染足創傷に及ぼす活性化イヌ同種異系脂肪由来ＭＳＣの効果を示す。
【００６２】
【図２０】図２０は、ＭＲＳＡ感染イヌにおける、慢性術後関節感染の活性化ＭＳＣによる処置による解消を示す一連の写真である。
【００６３】
【図２１】図２１は、ＭＤＲ  Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓによる皮膚感染を有するイヌにおける創傷治癒を実証する一連の写真である。
【００６４】
【図２２】図２２は、活性化ＭＳＣおよび抗生物質療法によるイヌにおける骨髄炎および骨板感染の処置を示す。
【００６５】
【図２３】図２３は、抗生物質と共に静脈内投与された活性化ネコＭＳＣによる一連の処置の後の、ネコにおける大きな慢性感染創傷の治癒を実証する一連の写真である。
【００６６】
【図２４】図２４は、抗生物質と併用された活性化イヌＭＳＣの単一の静脈内投与により処置された、真性糖尿病および慢性感染術後創傷感染を有するイヌからの一連の処置前後の写真および培養結果である。
【００６７】
【図２５】図２５は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来するＭＳＣも抗微生物活性を発揮することを示すグラフである。
【００６８】
【図２６】図２６は、ＭＳＣの活性化がそれらの移動を増加させることを示すグラフである。
【００６９】
【図２７】図２７は、活性化ＭＳＣがＳ．ａｕｒｅｕｓのバイオフィルムを破壊することを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００７０】
発明の詳細な説明
慢性創傷感染は、薬剤耐性細菌の蔓延の増加ならびに、慢性創傷および創傷感染の素因である真性糖尿病などの疾患のより高い発生率によって一部促進されて、罹病率および死亡率の主要な原因であり続ける。（Ｏｗｅｎｓら、Ｊ．  Ｈｏｓｐ．  Ｉｎｆｅｃｔ７０巻（増補２）：３〜１０頁（２００８年）；Ｖｉｎｈら、Ｊ．  Ｌｏｎｇ  Ｔｅｒｍ  Ｅｆｆ．  Ｍｅｄ．  Ｉｍｐｌａｎｔｓ１５巻（５号）：４６７〜８８頁（２００５年）；Ｔｕｔｔｌｅら、Ａｄｖ．  Ｗｏｕｎｄ  Ｃａｒｅ（Ｎｅｗ  Ｒｏｃｈｅｌｌｅ）４巻（１号）：１〜１１頁（２０１５年）；およびＥｄｍｉｓｔｏｎら、Ａｄｖ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  Ｂｉｏｌ．８３０巻：４７〜６７頁（２０１５年）を参照）。カテーテルまたは整形外科用デバイスなどのインプラントの表面に最もしばしば発生する細菌バイオフィルムの発生によって特徴付けられる感染症は、抗生物質療法単独で管理するのが特に困難であり、数週間から数カ月の連続療法をしばしば必要とする。攻撃的な抗生物質療法にもかかわらず、多くの場合、これらの慢性感染を完全に解消するためにバイオフィルム感染デバイスまたはインプラントを取り出す必要がある。
【００７１】
本明細書において、それらの抗微生物活性およびそれらの創傷治癒活性を増加させるために、特異的免疫活性化化合物を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで活性化した間葉系幹細胞（ＭＳＣ）が提供される。そのような活性化ＭＳＣは、従来の直接注入にアクセス不可能であり得る部位における慢性創傷感染（例えば、整形外科用インプラントの感染症）に到達して処置するために、特異的静脈内（ｉ．ｖ．）注入技術を単独で使用するか、または、１つまたは複数のさらなる抗生物質療法（すなわち、１つまたは複数の殺菌および／または静菌性抗生物質）と併用して全身投与することができる。
【００７２】
これらの活性化ＭＳＣ（および、その任意の組成物）は、バイオフィルムを形成する多剤耐性細菌がしばしば関与し、処置を特に困難にする、慢性、外傷性および／または術後の創傷感染の処置のために使用することができる。実施形態では、活性化ＭＳＣおよびその組成物は、高度抗生物質薬耐性感染症および／または同じか異なる抗生物質の複数の株によって引き起こされる感染症の処置のために有益である。
【００７３】
さらに、活性化ＭＳＣは、宿主免疫状態がしばしば抗生物質療法が単独で完全に有効になることができないことにおける寄与因子である場合、ならびに先天性および適応性の免疫の欠陥がよく認識される場合に、患者（例えば、真性糖尿病患者）で創傷を処置するために使用することができる。
【００７４】
本明細書に記載される方法または使用のいずれでも、一部、抗生物質の効果を増強するＭＳＣの能力のために、有効な細菌クリアランスを達成するために、創傷感染細菌が耐性である抗生物質を活性化ＭＳＣと同時投与することがなおできる。実際、本明細書に記載される方法または使用のいずれでも、抗生物質（感染細菌が耐性であるものでさえ）が活性化ＭＳＣと同時投与されることが必須である。
【００７５】
全身投与される活性化ＭＳＣは抗生物質および宿主先天性免疫系と相互作用して、細菌負荷を低減し、創傷治癒を刺激する。したがって、全身性活性化ＭＳＣ投与は、慢性深在性創傷感染のための従来の抗微生物療法の効能を強化する、新しい非抗生物質性アプローチである。
【００７６】
ＭＳＣと抗生物質療法の間の相互作用の最終結果は、Ｓ．ａｕｒｅｕｓまたはＥ．ｃｏｌｉまたはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓまたはｉｎ  ｖｉｖｏでバイオフィルムを形成するいかなる数の細菌で覆われたメッシュなどの重度感染合成インプラント材料からであっても、細菌のかなりのクリアランスである。さらに、ＭＳＣ投与は、創傷治癒の刺激ならびに創傷関連の炎症および線維症の低減を含む他の利点ももたらした。
【００７７】
複数の相補的作用機構が、創傷感染の制御を助ける活性化ＭＳＣの能力をおそらく説明する。したがって、細菌負荷に及ぼすＭＳＣ投与の正味の効果は、直接的および間接的な作用機構の合計をおそらく反映する。実証された１つの直接的抗菌作用機構は、ＭＳＣによるカテリシジンなどの抗微生物性ペプチドの分泌であった。ＭＳＣによる細菌排除の間接機構には、活性化ＭＳＣと宿主の先天性免疫応答との相互作用が含まれた。
【００７８】
定義
この開示では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する」、「有する」などは、米国特許法でそれらに帰される意味を有することができ、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができる。用語「から本質的になる」または「本質的になる」は、米国特許法で帰される意味を同様に有し、これらの用語はオープンエンドであって、列挙されるものの基本的または新規の特徴が列挙されるものより多くの存在によって変更されないが、先行技術の実施形態を排除する限り、列挙されるものより多くの存在を許す。
【００７９】
本明細書で使用するように、特記しない限り、または文脈から明らかでない限り、用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、単数または複数であると理解される。
【００８０】
本明細書で使用するように、特記しない限り、または文脈から明らかでない限り、用語「または」は包括的であると理解される。
【００８１】
本明細書で使用するように、用語「約」は、特記しない限り、列挙される値、例えば、量、用量、温度、時間、百分率等の±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％または±１％を指す。
【００８２】
用語「創傷」は、切り傷、殴打、または、膜（例えば、皮膚）の裂傷を含むことができ、下の組織に損傷をもたらすことができる他の衝撃を原因とする、生組織への傷害を指す。創傷は、開放的および閉鎖的な創傷を含む。「創傷」の例には、限定されずに、非貫通性創傷（例えば、擦過傷、裂傷、挫傷、振盪）；貫通性創傷（例えば、刺創、皮膚切り傷、銃創、外傷性創傷および自動車事故または他の外傷からの骨折）；熱的創傷（例えば、熱傷、サンバーン、凍傷）；化学的創傷（例えば、酸またはアルカリ）；咬刺傷および虫刺傷（例えば、ヒト、イヌ、バット、齧歯動物、ヘビ、サソリ、クモおよび／またはダニ類による）；ならびに電気創傷を含むことができる。他の重要な創傷カテゴリーには、軟組織手術部位（例えば、腫瘍切除、心臓手術、臓器移植）の感染、整形インプラントの感染（例えば、感染した膝または腰人工器官）、移植されたデバイスの感染（例えば、感染したペースメーカー）および慢性カテーテルの感染（例えば、ＰＩＣラインまたは留置尿カテーテルの感染）を含むことができる、術後創傷感染が含まれる。
【００８３】
「感染創傷」は、細菌などの微生物に加えて明らかな宿主応答（好中球およびマクロファージ浸潤、肉芽組織、線維形成）によって浸潤された任意の創傷を指す。
【００８４】
創傷は、慢性または急性であってよい。「慢性創傷」は、断定できる時間（すなわち、初期創傷発生から数週間または数カ月以内）に、および順序正しい段階のセットで治癒しない創傷である。これらの創傷は、人工的な移植された材料の表面に形成することができるが、宿主組織（例えば、糖尿病性足潰瘍）の上に発達することもできる、細菌バイオフィルムを形成した細菌の集団も一般的に抱える。細菌バイオフィルム状態の発達は、特に創傷が局所処置にとってアクセス不可能な部位にあるとき、細菌を抗生物質または他の薬剤による処置に対して大いにより難治性にする。さらに、慢性創傷は、抗生物質による処置の以前の長い歴史のために、多剤耐性細菌を宿す可能性も大いにより高い。したがって、細菌耐性機構および薬剤耐性への抗生物質選択圧の共進化のために、慢性創傷は、処置するのがほとんど常に大いにより困難である。これらの感染は、細菌の１つまたは複数の多剤耐性（ＭＤＲ）株も一般的に伴う。そのような細菌には、グラム陰性の病原体（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）およびグラム陽性の病原体（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）が含まれる。グラム陰性およびグラム陽性両方の細菌の事実上全ての株が、ｉｎ  ｖｉｖｏでバイオフィルムを形成することが可能なことにも注意すべきである。慢性創傷は、高度薬剤耐性細菌感染の結果および／または同じか異なる細菌の複数の株もしくは種による感染の結果であってもよい。
【００８５】
非限定的な例として、慢性感染創傷は、圧潰瘍、褥瘡性潰瘍、動脈潰瘍、静脈潰瘍、静脈うっ血潰瘍、糖尿病性足潰瘍、外傷性潰瘍および／または熱傷潰瘍、ならびにインプラント感染（膝、足首、腰人工器官）、医療デバイス感染（留置静脈アクセスまたは尿路カテーテル、ペースメーカー、細動除去器、静脈外科または動脈狭窄症のためのステント）、メッシュインプラント（例えば、膣および腹膜スリング、血管フィルター）および整形修復感染（例えば、骨板、ネジ、ピンおよび他の固定デバイスの感染）を含むことができる。慢性創傷は、創傷処置を困難にする免疫欠陥を有することが公知である、糖尿病患者で起こることもできる。
【００８６】
対照的に、「急性創傷」は、急速に起こり（すなわち、１週未満）、予測可能な抗生物質処置レジメンで予測可能な時間でいかなる合併症なしで治癒する傷害である。
【００８７】
本明細書で使用するように、「障害」は、創傷治癒（急性創傷、裂開性創傷ならびに緩慢治癒性遅延治癒性および慢性の創傷を含む）を開始、加速、促進または強化する薬剤から恩恵を受ける任意の障害、疾患または状態を指す。そのような創傷には、糖尿病患者（例えば、足潰瘍または他の皮膚感染）または末梢血管疾患により血液供給の低減した患者（例えば、褥瘡性潰瘍、皮膚感染、四肢感染）における創傷が含まれ得る。したがって、薬剤は炎症を低減し、瘢痕化を低減もしくは減少させ、瘢痕の質を改善し、線維形成を低減し、および／または接着を低減することが予想され得る。例えば、疾患、障害および状態は、急性創傷、裂開性創傷ならびに緩慢治癒性遅延治癒性および慢性の創傷を含む。
【００８８】
重要なことに、処置は、感染の解消を誘導するのに必要な処置時間を有意に短縮すること、ならびに必要な抗生物質の処置回数および用量を低減することも予想され得る。
【００８９】
細胞外マトリックスの中の線維性物質の過剰な生成を含む線維性物質の過剰な生成によって特徴付けられる疾患、障害および状態；マトリックス関連の構成成分の異常な、非機能的および／または過剰な蓄積による正常な組織構成要素の交換によって特徴付けられる疾患、障害および状態；接着形成によって特徴付けられる疾患、障害および状態；ならびに／または、創傷治癒を促進し、および／または、膨潤、炎症および／もしくは瘢痕形成（ケロイド瘢痕、過形成性瘢痕、広範囲にわたる（拡大した）瘢痕および萎縮性（くぼんだ）瘢痕を含む、異常で過剰な瘢痕化を含む）を低減する薬剤から恩恵を受ける任意の障害、疾患または状態も含まれる。例えば、手術または外傷からもたらされる創傷、予想速度で治癒しない創傷（例えば、遅延治癒創傷、不完全治療創傷、慢性創傷および裂開性創傷）、ならびに、神経障害性、虚血性、微小血管病状、骨領域（尾骨（仙椎）、腰（転子）、臀部（坐骨）または足の踵もしくはつま先）への圧、再かん流傷害および弁逆流病因および状態に関連した創傷関連の異常が含まれる。本明細書に記載される強化された細胞移動、低減された細胞接着、瘢痕化および炎症から恩恵を受ける疾患、障害および状態も含まれる。
【００９０】
本明細書で使用するように、用語「患者」または「対象」は本明細書において互換的に使用され、ヒト、家畜および畜産動物、ならびに動物園、スポーツおよび愛玩動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ならびにウシ、ヒツジ、ブタおよびヤギを含む農業用動物を含む、任意の哺乳動物を指す。１つの好ましい哺乳動物は、成人、小児および高齢者を含むヒトである。さらにより好ましいヒトは、慢性の治癒しない感染創傷を有するＩ型またはＩＩ型糖尿病の者であろう。対象は、イヌ、ネコおよびウマを含む愛玩動物であってもよい。好ましい農業用動物は、ウシおよびヤギであり得。
【００９１】
本明細書で使用するように、用語「処置する」、「処置すること」、「処置」などは、別途指示がない限り、そのような用語が適用される疾患、障害もしくは状態、またはそのような疾患、障害もしくは状態の１つまたは複数の症状のプロセスを反転、緩和、抑制すること、またはそれらを予防することを指し、症状もしくは合併症の開始を予防するため、または症状もしくは合併症を緩和するため、または疾患、状態もしくは障害を排除するための、本明細書に記載される組成物、医薬組成物または剤形のいずれかの投与を含む。好ましくは、処置は治療的であるかまたは改善する。
【００９２】
本明細書で使用するように、「予防する」は、予防すべき物または事象、例えば、疾患、障害または状態の生成または発生を全部または一部を予防すること、または改善もしくは制御すること、または低減もしくは停止させることを意味する。
【００９３】
本明細書で使用するように、フレーズ「治療有効量」および「有効量」などは、改善あるいは治癒効果などの治療効果を達成するために、患者に、または患者の細胞、組織もしくは器官に投与するのに必要な量を示す。有効量は、研究者、獣医、医師または臨床医が望む、細胞、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を導き出すのに十分である。適当な有効量または治療有効量の判定は、当分野のルーチンの技術レベルの範囲内である。
【００９４】
本明細書で使用するように、用語「投与すること」、「投与する」、「投与」などは、治療剤をそのような薬剤による処置を必要とする対象に移転、送達、導入または輸送する任意の様式を指す。そのような様式には、経口、局所、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、鼻腔内、および皮下投与が限定されずに含まれる。
【００９５】
本明細書で使用するように、用語「殺菌性」、「殺菌性抗生物質」などは、細菌の増殖または繁殖を遅らせる抗生物質である「静菌性抗生物質」と対照的に、細菌を死滅させる抗生物質を指す。殺菌性抗生物質は、細胞壁合成を阻害することによっておよび／または細菌酵素もしくはタンパク質翻訳を阻害することによって細菌を死滅させる。殺菌性抗生物質の例には、ベータ−ラクタム抗生物質（例えば、ペニシリン誘導体（クラブラン酸などのベータラクタマーゼ阻害剤の有る無しのペニシリンおよび半合成ペニシリン）、セファロスポリン（セファム）、モノバクタムおよびカルバペネム）、ならびにバンコマイシン、ダプトマイシン、フルオロキノロン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、コトリモキサゾール、テリスロマイシンおよびアミノグリコシド抗生物質が限定されずに含まれる。しかし、活性化ＭＳＣによる処置が、クロラムフェニコールおよびテトラサイクリンを含む静菌性抗生物質による細菌クリアランスを改善することもできることに注意すべきである。複数のクラスの抗生物質（すなわち、単独のまたは１つまたは複数の静菌性抗生物質と組み合わせた１つまたは複数の殺菌性抗生物質）を、使用することができる。
【００９６】
「Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）」は、先天性免疫系において鍵となる役割を演ずるタンパク質のクラスを指す。これらのタンパク質は、代表的には、マクロファージおよび樹状細胞などの免疫系の前哨細胞（ｓｅｎｔｉｎｅｌ  ｃｅｌｌ）おいて発現される。それらは、微生物に由来する構造的に保存された分子を認識する。ＴＬＲの例には、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１、ＴＬＲ１２およびＴＬＲ１３が含まれる。ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７／８および／またはＴＬＲ９を含む、ＭＳＣによって発現されることが公知であるＴＬＲが最も好ましくあり得る。
【００９７】
「ヌクレオチド結合性オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）受容体」も、先天性免疫応答の調節で鍵となる役割をする。それらは、リンパ球、マクロファージ、樹状細胞および非免疫細胞（すなわち、上皮およびＭＳＣ）において見出され、ＴＬＲと協働するか、または単独で炎症性応答を調節することができる。
【００９８】
ＲＩＧ−１またはＳＴＩＮＧまたはＣＤＡ受容体を含む先天性免疫受容体の他のクラスも、刺激性リガンド、特にウイルスおよび細菌核酸の細胞内導入の後の先天性免疫応答の活性化において鍵となる役割をする。それらは、リンパ球、マクロファージ、樹状細胞および非免疫細胞（すなわち、上皮およびＭＳＣ）において見出され、ＴＬＲと協働するか、または単独で炎症性応答を調節することができる。
【００９９】
本明細書で使用するように、用語「アゴニスト」は、受容体と組み合わせたときに生理反応を開始する物質を指す。対照的に、「アンタゴニスト」は、別の物質の生理的作用を妨害または阻害する物質である。
【０１００】
創傷治癒
体組織（すなわち、皮膚）が外傷または傷害の後にそれ自体を修復するプロセスである創傷治癒は、いくつかの相に一般的に分けられる：止血（血液凝固）、炎症、増殖（組織増殖）および成熟（組織再構築）。
【０１０１】
皮膚組織傷害および血管の破壊の後に、フィブリン凝塊の形成が続き、それはさらなる出血を遅らせるかまたは予防する機能をし、創傷への細胞遊走のための基質を提供する。これは、創傷治癒の止血段階である。
【０１０２】
次に、炎症段階の間、各種の分子によって誘引される好中球は、外来物体および細菌を食菌し、単球によって急速に接合され、マクロファージに分化する。マクロファージは、次に、微生物、細胞外マトリックスの断片、フィブリン、好中球、赤血球および他のデブリを食菌し、有効な創傷修復のために重要であると考えられる様々な分子も分泌する。慢性創傷では、この相の構成成分の１つまたは複数は調節不全になり、それによって創傷治癒の遅延につながる可能性がある。Ｍ２表現型のマクロファージは、創傷治癒の刺激において最も有効であると考えられる。
【０１０３】
増殖段階の間には、血管新生、コラーゲン沈着、繊維増殖および肉芽組織形成、上皮形成および創傷収縮が起こる。最後に、成熟および再構築相の間には、コラーゲンが再編成され、創傷の引張強度が増加し、いかなる不必要な細胞もアポトーシスによって除去される。
【０１０４】
創傷治癒のこれらの相は、通常は予測可能な形で進行するが、そうではないとき、慢性創傷または病的瘢痕化がもたらされることがある。創傷治癒が進行する進度、速度および／または効能には、局所および／または全身性の因子が影響することができる。例えば、局所因子には、水分、機械的因子、水腫、虚血および壊死、外来体の存在、低酸素圧および／またはかん流を含むことができる。全身性因子には、炎症、糖尿病、栄養状態、代謝疾患、免疫抑制、結合組織障害、喫煙、年齢および／またはアルコール摂取を含むことができる。
【０１０５】
創傷治癒の合併症には、慢性感染の発達、不完全または過剰な瘢痕形成、過大な肉芽および／または不完全な創傷収縮を含むことができる。これらの合併症のうち、最も重篤なものは、慢性感染の発達、特に、皮膚および骨組織の感染、整形外科用もしくは外科的インプラントの感染、または、金属整形材料（プレート、ネジ、ピン）、メッシュ（血管フィルター、再建メッシュ）、ならびに医療インプラント（ペースメーカー、シャント）および血管アクセスポートおよびカテーテルを含む、外科的修復のために使用される材料の感染を含む、バイオフィルム形成を伴う感染の発達である。これらの感染は、細菌の多剤耐性（ＭＤＲ）株をも、一般的に伴う。そのような細菌には、グラム陰性の病原体（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）およびグラム陽性の病原体（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）が含まれる。グラム陰性およびグラム陽性両方の細菌の事実上全ての株が、ｉｎ  ｖｉｖｏでバイオフィルムを形成することが可能なことにも注意すべきである。
【０１０６】
間葉系幹細胞
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、骨芽細胞、軟骨細胞、筋細胞および脂肪細胞に分化することが可能である多能性幹細胞である。組織培養条件下では、ＭＳＣは塑性粘着特性を示し、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１４−、ＣＤ１９−、ＣＤ３４−、ＣＤ４５−、ＣＤ７９ａ−およびＨＬＡ−ＤＲ−細胞に最もしばしば分類されるが、異なる組織源から単離されたＭＳＣは異なる表面表現型を提示することに注意すべきである。ＭＳＣの抗微生物特性は、組織源によって異なることがあり、したがって、細菌感染と闘うそれらの効果に関していくぶん予測できないと考えられる。
【０１０７】
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、体内のほとんどの組織に少数で存在する神経堤起源の細胞の亜集団である。様々な供与源からの間葉系幹細胞が、動物モデルの敗血症、創傷治癒および感染症において抗微生物活性を有することが示された。（Ｋｒａｓｎｏｄｅｍｂｓｋａｙａら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ２８巻（１２号）：２２２９〜３８頁（２０１０年）；Ｋｒａｓｎｏｄｅｍｂｓｋａｙａら、Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ３０２巻（１０号）：Ｌ１００３〜１３頁（２０１２年）；Ａｌ−Ａｎａｚｉら、「Ｃｈａｐｔｅｒ  ９：  Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  −  Ｔｈｅｉｒ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｒｏｌｅ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｈｉｇｈ  Ｒｉｓｋ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ」、ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．５７７２／６０６４０（２０１５年）；Ｍａｘｓｏｎら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｔｒａｎｓ  Ｍｅｄ１巻（２号）：１４２〜４９頁（２０１２年）；およびＭｅｉら、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ１８２巻（８号）：１０４７〜５７頁（２０１０年）を参照）。ＭＳＣの上のＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の存在およびＴＬＲリガンドのＭＳＣ活性への影響も調査されている。（Ｌｉｅｎｅｋｅ  Ｉ．  Ｂｏｕｗｍａｎ、「Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｌｔｅｒ  ｔｈｅ  ｆａｔｅ  ｏｆ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  −  ＴＬＲ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ  ｓｕｒｖｉｖａｌ，  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ」という題名の論文、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｅｉｔ  Ｕｔｒｅｃｈｔ、Ｆａｃｕｌｔｙ  ｏｆ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００９年７月１３日、を参照）。これらの研究の結果は、最終的に結果である特性に及ぼすＭＳＣの効果に関する、しばしば矛盾する多量の情報である。例えば、ＴＬＲ３のリガンドによるＭＳＣの活性化が、創傷の処置のために通常は避けるべきであり得る効果であるＭＳＣの免疫抑制機能を実際に増加させることを、研究者は示した。（Ｚｈｏｕら、Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ５巻：３６１９頁（２０１４年）；Ｃａｓｓａｔｅｌｌａら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ２９巻（６号）：１００１〜１１頁（２０１１年）；およびＺｈａｏら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ３２巻（２号）：５２１〜３３頁（２０１４年）を参照）。したがって、それらのＴＬＲを通してのＭＳＣの前活性化からもたらされる正味の効果（正または負）は、特に、細菌と細菌バイオフィルムの間の複雑な相互作用を示す慢性感染創傷の処置およびやがて起こる免疫応答に関しては、予測するのが非常に困難である。
【０１０８】
しかし、慢性バイオフィルム感染を処置するためのＭＳＣ（または、その組成物）の使用は、以前には評価されていない。
【０１０９】
例えば、骨髄、脂肪組織、胎盤、羊水、臍帯組織、臍帯血、成体の筋肉、角膜支質、皮膚組織および／または歯髄を含む、様々な組織からＭＳＣを得ることができるかまたは導くことができる。
【０１１０】
ＭＳＣによるほとんどの実験および臨床研究は、骨髄（ＢＭ−ＭＳＣ）または脂肪組織（Ａｄ−ＭＳＣ）に由来する細胞を使用する。しかし、より高齢の患者または動物からの細胞は一般的により機能的でないので、自家ＭＳＣを使用するとき、ドナーの年齢がＭＳＣの免疫学的および抗微生物特性に大いに影響するので、ＢＭ−ＭＳＣおよびＡｄ−ＭＳＣの使用は、潜在的に欠点を伴う。さらに、無関係のドナーからのＭＳＣ（すなわち、同種異系ＭＳＣ）を使用するときは、ドナー間の変動性および病原体のないＭＳＣの保証の問題がある。さらに、ＭＳＣは、それらが老化を経てそれらの効果を失う前に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで限られた拡張だけを経る可能性があり、それによって、単一のドナーから生成することができるＭＳＣの数を大いに制限する。
【０１１１】
この問題への１つの解決方法は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）に由来するＭＳＣの使用である。ｉＰＳＣはいくつかの異なる成体組織から生成することができ、本明細書において「ｉＭＳＣ」と呼ばれるＭＳＣに分化させることができる。ｉＭＳＣの使用に関連した利点のいくつかには、それらを無期限に増殖させることができるという事実、より高齢の個体に由来する場合でもそれらが若齢ＭＳＣの機能を回復するという事実、および、それらが複数の患者の処置のために細胞の単一の供与源の役割をすることができるという事実が含まれる。
【０１１２】
したがって、ｉＭＳＣ系をマウスおよびイヌのｉＰＳＣから開発し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細菌殺滅活性を示すそれらの能力を評価した。しかし、前に述べたＭＳＣ抗菌活性の予測不能性は、ｉＭＳＣの抗菌活性の予測を不可能にした。さらに、ｉＭＳＣは従来のＢＭ−ＭＳＣまたはＡｄ−ＭＳＣと非常に異なる表面表現型を発現することが見出された。
【０１１３】
しかし、マウスからの活性化ｉＭＳＣは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓの殺滅を示すそれらの能力に関してマウスＡｄ−ＭＳＣと同等であることが判明した。（図２５を参照のこと）。抗微生物活性に関する類似の結果も、イヌＡｄ−ＭＳＣと比較したイヌｉＭＳＣで得られた。
【０１１４】
したがって、ｉＭＳＣは、薬剤耐性、慢性細菌感染の処置のために使用することができる、ＭＳＣの別の供与源である。さらに、臨床患者で使用する前にさらにより大きな抗微生物活性についてｉＭＳＣの亜集団をｉｎ  ｖｉｔｒｏでｉＭＳＣ細胞系からさらに選択することが潜在的にでき、したがって、ｉＭＳＣを従来のＢＭ−ＭＳＣまたはＡｄ−ＭＳＣよりさらに有効にする。
【０１１５】
ＭＳＣの活性化
ＭＳＣは、抗微生物性ペプチドの分泌を通して細菌に対して抗微生物性効果を発揮することが示された。（参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｒａｓｎｏｄｅｍｂｓｋａｙａら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ２８巻（１２号）：２２２９〜２２３８頁（２０１０年）を参照のこと）。ＭＳＣは全て、培養中に抗微生物性因子を自然発生的に分泌することも示された。（図９を参照のこと）。例えば、ネズミ、イヌおよびヒトのＭＳＣは、細胞内のＣｒａｍｐ、グラム陰性菌およびグラム陽性菌を死滅させる重要な抗微生物性ペプチドを生成する。（図１４および１５を参照のこと）。
【０１１６】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）リガンドを使用したＭＳＣの活性化は、この抗微生物性効果を強化することが示された。（参照により本明細書に組み込まれる、Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１９０巻（１号）：補遺１８０．１１（２０１３年）を参照；Ｚｈａｏら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ３２巻（２号）：５２１〜３３頁（２０１４年）も参照）。しかし、Ｊｏｈｎｓｏｎの参考文献では、抗微生物活性はｉｎ  ｖｉｔｒｏだけで、およびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓの完全に抗生物質感受性の株に対してだけ実証された。さらに、Ｊｏｈｎｓｏｎらでは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細菌殺滅アッセイによって評価されたように、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＭＳＣの活性化はそれらの抗菌活性を実際増加させないことが判明した。したがって、活性化ＭＳＣが慢性創傷感染に対してｉｎ  ｖｉｖｏで活性だろうと予測することは不可能だろうし、実際、Ｊｏｈｎｓｏｎらの刊行物は活性化ＭＳＣのｉｎ  ｖｉｖｏ使用とは反対の教示を含み得る。さらに、非薬剤耐性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ以外の細菌株に対するＭＳＣ活性を予測することも不可能だろう。ｉｎ  ｖｉｖｏでの高度薬剤耐性細菌株に対する活性を予測することも、不可能だろう。最後に、高度薬剤耐性細菌の複数の異なる株を含有する混合感染（例えば、ＭＤＲ  Ｅ．ｃｏｌｉおよびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含有する感染）においてＭＳＣ活性を予測することも不可能だろう。
【０１１７】
対照的に、本明細書に実証されるように、活性化ＭＳＣのｉｎ  ｖｉｖｏ静脈内投与は、創傷組織における細菌負荷を経時的に低減し（下の実施例２を参照のこと）、創傷部位の生存能力のある細菌を低減し（下の実施例３を参照のこと）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細菌を死滅させることがわかった（下の実施例９を参照のこと）。さらに、活性化ＭＳＣの静脈内投与は、慢性創傷感染の処置のためにｉｎ  ｖｉｖｏで有効であることもわかった。（下の実施例４〜５、７、１０および１７〜２０を参照；図１８〜２４も参照のこと）。同様に、下の表１に示すように、活性化ＭＳＣは高度薬剤耐性細菌株に対してｉｎ  ｖｉｖｏで有効であって、高度薬剤耐性細菌の複数の異なる株に対して同時に有効でもあった。
【０１１８】
さらに、例えば、慢性細菌感染を制御するそれらの能力を制限するかなりの免疫欠損を有することが公知である真性糖尿病患者において、高度薬剤耐性感染に対するＭＳＣの活性を予測することはさらにより困難だろう。特定の理論に束縛されることを望まないが、活性化ＭＳＣは、糖尿病の創傷等におけるように血管化の減少した組織において制限されることが予想されるだろう免疫媒介機構を通して作用することを、証拠は示唆する。（図１１〜１３、１６を参照のこと）。しかし、真性糖尿病および反復した複数回の抗生物質療法に応答しなかった後膝関節の慢性（６カ月）術後感染を有するイヌにおいて、活性化イヌＭＳＣの強力で予想外の活性が実証された。ＭＳＣの単一の静脈内投与の後（図２２を参照のこと）、創傷は部分的に治癒し、最も重要なことに、創傷培養は数カ月で初めて陰性になった。
【０１１９】
さらに、本明細書に記載されるように、１つまたは複数のＴＬＲ３、ＴＬＲ９、ＴＬＲ４および／またはＮＯＤ受容体アゴニストを使用したＭＳＣの活性化は、これらの細胞の抗微生物性効果を強化する。適するＴＬＲ活性化剤の例には、限定されずに、ポリアデニル酸−ポリウリジル酸（ポリ（Ａ：Ｕ））、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ）またはｐＩＣ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ  ＯＤＮ）、阻害性オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、細菌ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、合成二本鎖ＤＮＡまたは単鎖ＲＮＡ、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬＡ）および／またはＴＬＲ７／８リガンド（例えば、イミキモド）が含まれる。さらに、ＭＳＣ活性化は、ペプチドグリカン、尿酸、高濃度カリウム、単鎖ＲＮＡおよび他のＮＯＤリガンドを含む、ＮＯＤリガンドを使用して達成することもできた。
【０１２０】
ＭＳＣ活性化は、活性化剤の有効量との、ＭＳＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏインキュベーションによって起こすことができる。例えば、ＭＳＣは、活性化剤（すなわち、ｐＩＣ）と１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０時間またはそれより長くインキュベートすることができる。活性化剤の適当な濃度の判定は当分野の技術のルーチンのレベルの範囲内であるが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０μｇ／ｍｌまたはそれより高い濃度が企図される。一実施形態では、ＭＳＣは、１０μｇ／ｍｌのｐＩＣとの２時間のｉｎ  ｖｉｔｒｏインキュベーションによって活性化されている。
【０１２１】
ＭＳＣの活性化は、それらの移動も増加させる。例えば、ケモカイン勾配に応答して移動するＭＳＣの能力を、最下部チャンバーにＳＤＦ−１（幹細胞由来の因子１、ＭＳＣのケモカイン）および最上部チャンバーにＭＳＣを含有したＢｏｙｄｅｎチャンバーを使用して評価した。ｐＩＣで活性化されたＭＳＣの移動は、非活性化ＭＳＣより有意に大きいことが判明した。（図２６を参照のこと）。感染創傷は高レベルのＳＤＦ−１を生成するので、炎症部位への活性化ＭＳＣのこの増加した移動は、静脈内注射の後に感染創傷への道を見い出すそれらの能力にとって重要である。
【０１２２】
さらに、活性化ＭＳＣは、創傷部位への移動および宿主免疫エフェクター細胞（すなわち、好中球および単球）の動員に関して優れた免疫学的特性を有し（図１６を参照のこと）、活性化間葉系幹細胞は活性化されなかった間葉系幹細胞と比較して増加した抗微生物活性を示す。
【０１２３】
慢性感染創傷における細菌の根絶の観点から、活性化ＭＳＣと抗生物質の間に強力な相乗的相互作用が存在する。
【０１２４】
投与
本明細書に記載される活性化ＭＳＣまたは組成物のいずれかの有効量は、経口、局所、静脈内（ｉ．ｖ．）、動脈内、眼内、腹腔内、クモ膜下、心室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内または皮下投与経路を通して対象に投与することができる。
【０１２５】
一実施形態では、活性化ＭＳＣは、静脈内投与される。図４に示すように、ＭＳＣの静脈内投与は、創傷細菌負荷の低減においてＳＣ投与より有意に効果的である。さらに、当初、静脈内投与活性化ＭＳＣは肺に捕獲されるが、それらは肺を出て、体全体の炎症部位に移動することができる。（図６および８を参照のこと）。
【０１２６】
本明細書に記載される活性化ＭＳＣまたは組成物を投与するために、当技術分野で公知の任意の適する投与プロトコールを使用することができる。間葉系幹細胞および／または組成物は、単一の用量として、または複数の（すなわち、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれより多い）用量で投与することができる。
【０１２７】
代表的には、患者は、本明細書に記載される組成物のいずれかおよび／または活性化ＭＳＣの１を超える（すなわち、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれより多い）用量を受ける。１を超える用量が投与されるとき、用量は、定期または不定期の間隔で投与することができる。非限定的な例として、用量は、毎日、毎週、隔週、毎月または隔月で投与することができる。例えば、用量は、１、２、３、４、５、６または７日ごとに；１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２週ごとに；および／またはその任意の組合せにより投与することができる。
【０１２８】
１つの非限定的な例では、３つの別個の用量（すなわち、３回の処置）が、６週間にわたって（すなわち、２週ごとに）投与される。
【０１２９】
一部の実施形態では、体重１ｋｇにつき１×１０４から１×１０８の細胞数を、各用量で投与することができる。例えば、体重１ｋｇにつき約２×１０６の細胞を、静脈内カテーテルにより１５分間にわたって徐々に投与することができる。
【０１３０】
具体的な創傷タイプの処置で使用するための（体重１ｋｇあたりの活性化間葉系幹細胞の）適当な用量、投与速度、投与用量数および／または投与頻度の判定は、当分野のルーチンの技術レベルの範囲内である。
【０１３１】
本明細書に記載される活性化ＭＳＣおよび組成物は、１つまたは複数の抗微生物剤、例えば、殺菌性抗生物質（例えば、ペニシリン誘導体（ペナム）、セファロスポリン（セファム）、モノバクタム、カルバペネム、バンコマイシン、ダプトマイシン、フルオロキノロン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、コトリモキサゾール、テリスロマイシンおよび／またはアミノグリコシド抗生物質）の有効量をさらに含有することができる。適当な殺菌性抗生物質およびその有効用量の選択は、当分野のルーチンの技術レベルの範囲内である。さらに、一部の実施形態では、１つまたは複数の静菌性抗生物質を投与することができる（単独で、または１つまたは複数の殺菌性抗生物質と併用して）。
【０１３２】
活性化ＭＳＣの全身投与は、抗生物質療法と組み合わせたとき、慢性感染創傷に伴う細菌の排除において有効だった。さらに、ＭＳＣの全身投与は、慢性感染モデルにおける創傷治癒のより大きな詳細にも関連している。
【０１３３】
組成物
１つまたは複数の薬学的または獣医学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤またはビヒクルと一緒にそれらの抗微生物性効果を強化するように活性化された、ＭＳＣの即時注入集団（ｉｎｆｕｓｉｏｎ−ｒｅａｄｙ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ）が本明細書で提供される。これらの組成物は、哺乳動物における感染したまたは深在性の創傷の治癒を強化する。
【０１３４】
用語「薬学的に許容される」および「獣医学的に許容される」は、薬学的にまたは獣医学的に許容される材料、組成物またはビヒクル、例えば液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒またはカプセル化材を指す。各構成成分は、医薬製剤の他の成分に適合するという意味において、「薬学的に許容され」または「獣医学的に許容され」なければならない。それは、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、免疫原性、または他の問題もしくは合併症なしでヒトおよび動物の組織または器官と接触させて使用するのに適し、理にかなった利益／リスク比と釣り合っている必要もある。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、２００５年；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第５版；Ｒｏｗｅら編、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：２００５年；ならびにＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ、第３版；ＡｓｈおよびＡｓｈ編、Ｇｏｗｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ：２００７年；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ、Ｇｉｂｓｏｎ編、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  ＬＬＣ：Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、ＦＬ、２００４年を参照）。
【０１３５】
様々な実施形態では、活性化ＭＳＣの集団は、同種異系または自家であってもよい。
【０１３６】
本明細書に記載される組成物のいずれも、殺菌性抗生物質（単独で、または１つまたは複数の静菌性抗生物質と併用される）などの１つまたは複数の抗微生物剤の有効量をさらに含有することができる。例示的な殺菌性抗生物質には、限定されずに、ペニシリン誘導体（ペナム）、セファロスポリン（セファム）、モノバクタム、カルバペネム、バンコマイシン、ダプトマイシン、フルオロキノロン、メトロニダゾール、ニトロフラントイン、コトリモキサゾール、テリスロマイシン、アミノグリコシド抗生物質、およびその任意の組合せが含まれる。抗生物質と活性化ＭＳＣを組み合わせたとき、強力な相乗効果が観察された。（図１０を参照のこと）。あるいは、活性化ＭＳＣプラスクロラムフェニコール、エリスロマイシン、クリンダマイシンまたはテトラサイクリンなどの静菌性抗生物質の組合せを考えることができる。
【０１３７】
本開示の医薬組成物は、その予定の投与経路（すなわち、非経口、静脈内、動脈内、皮内、皮下、経口、吸入、経皮、局所、経粘膜、腹腔内もしくは胸膜腔内、および／または直腸投与）に適合するように製剤化される。非経口、皮内または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の構成成分を含むことができる：注射用水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒などの無菌の希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸の酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート化剤；酢酸、クエン酸またはリン酸などの緩衝液、および塩化ナトリウムまたはブドウ糖などの張性調整剤。ｐＨは、酸または塩基、例えば塩酸または水酸化ナトリウムで調整することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは多回投与バイアルに封入することができる。
【０１３８】
注射用に適する医薬組成物には、無菌の水溶液（水溶性）または分散液、および細胞の無菌の注射用溶液または分散液の即時（ｅｘｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓ）使用調製物のための無菌の粉末が含まれる。静脈内投与の場合、適する担体には、生理的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。全ての場合において、組成物は無菌でなければならず、容易な注射針通過が存続する程度まで流動性であるべきである。それは、製造および保存条件下で安定しなければならず、細菌および真菌類などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、およびその適する混合物を含有する溶媒または分散媒体であってもよい。例えばレシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合は所望の粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。微生物活動の防止は、様々な抗細菌および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。一部の実施形態では、等張剤、例えば糖、多価アルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムを組成物中に含むことが望ましい。吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含むことによって、注射可能な組成物の長期吸収をもたらすことができる。
【０１３９】
無菌の注射可能な溶液は、必要に応じて上に列挙された成分の１つまたは組合せと一緒に、適当な溶媒に必要な量で活性化合物（単数または複数）を組み込み、続いて濾過滅菌を行うことによって調製することができる。一般に、分散液は、塩基性の分散媒体および上に列挙されるものから必要とされる他の成分を含有する無菌のビヒクルに活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合は、調製法は、前もって濾過滅菌したその溶液から有効成分プラス任意の追加の所望の成分の粉末を与える、減圧乾燥およびフリーズドライ法である。
【０１４０】
一部の実施形態では、ＭＳＣが送達機構の役割をして感染創傷部位への抗生物質の直接送達を増加させるために、投与の前にＭＳＣに抗生物質をプレロードすることもできる。この送達方法のための特に望ましい抗生物質には、フルオロキノロン（ｆｌｏｒｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅ）、クロラムフェニコール、テトラサイクリンおよびメトロニダゾールを限定されずに含む、細胞で高い溶解性を有する抗生物質が含まれる。抗生物質を詰めたＭＳＣの宿主への投与の前に、細胞膜を越えて自由に可溶性の１つまたは複数の抗生物質と一緒にＭＳＣを培養することによって、抗生物質によるＭＳＣのプレロードを達成することができる。
【０１４１】
経口組成物は、不活性の希釈剤または食用の担体を一般的に含む。それらはゼラチンカプセルに封入することができ、または圧縮して錠剤にすることができる。経口治療投与については、活性化合物を賦形剤と一緒に組み込んで、錠剤、トローチまたはカプセル剤の形で使用することができる。経口組成物は洗口剤として使用するために液状担体を使用して調製することもでき、ここで、液状担体中の化合物は経口的に適用され、うがいをして吐き出されるかまたは嚥下される。薬学的に適合する結合剤および／またはアジュバント材が組成物の一部として含まれてもよい。錠剤、ピル、カプセル剤、トローチなどは、以下の成分のいずれか、または似通った性質の化合物を含有することができる：微結晶性セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチンなどの結合剤；デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはコーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの滑走剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤；またはハッカ、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料などの香料。
【０１４２】
吸入による投与のために、化合物は、適する噴射剤、例えば、二酸化炭素などの気体を含有する加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからのエアゾール噴霧剤の形で送達される。
【０１４３】
全身投与は、経粘膜または経皮手段によってもよい。経粘膜または経皮投与のためには、透過するべきバリアに対して適当な浸透剤が製剤で使用される。そのような浸透剤は一般的に当技術分野で公知であり、例としては、経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、鼻内噴霧または坐薬の使用により達成することができる。経皮投与のためには、当該技術分野において一般に公知であるように、活性化合物は軟膏、膏薬、ゲルまたはクリームに製剤化される。
【０１４４】
化合物は、直腸送達のために、坐薬（例えば、カカオバターおよび他のグリセリドなどの従来の坐薬基剤で）または停留浣腸の形で調製することもできる。
【０１４５】
一実施形態では、活性化合物は、インプラントおよびマイクロカプセル送達系を含む、制御放出製剤などの体からの急速な排除から化合物を保護する担体で調製される。生分解性、生体適合性のポリマー、例えばエチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸を使用することができる。そのような製剤の調製のための方法は、当業者に明らかになる。材料は、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販品を得ることもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する感染細胞を標的にするリポソームを含む）を、薬学的に許容される担体として使用することもできる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように、当業者に公知である方法に従って調製することができる。
【０１４６】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位剤形で経口または非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される投薬単位剤形は、処置対象のための単一投薬量として適している物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な薬用担体と共同して所望の治療効果を生むように計算された活性化合物の所定量を含有する。本開示の投薬単位剤形の明細は、活性化合物の特異な特徴および達成すべき特定の治療効果、およびそのような活性化合物を個体の処置のために配合する技術に固有の限界によって決定づけられ、それに直接的に依存する。
【０１４７】
キット、医薬および製造品
医薬、例えば、感染したまたは深在性の創傷の処置のための医薬の製造において、活性化ＭＳＣを単独で、または１つまたは複数の他の治療剤（例えば、１つまたは複数の殺菌性抗生物質）と組み合わせて使用することができる。
【０１４８】
慢性感染創傷を処置するための、本明細書に記載される組成物のいずれかを、任意選択で使用説明書と一緒に含むキットも提供される。
【０１４９】
対象における感染したまたは深在性の創傷の処置のための、本明細書に記載される組成物のいずれかを含有する容器および使用説明書を含む、製造品も提供される。
本明細書に記載される組成物のいずれも、投与のための説明書と一緒に、容器、パックまたはディスペンサーに含まれてもよい。
【０１５０】
処置の方法
本明細書に記載される組成物のいずれも、哺乳動物における多剤耐性細菌による慢性感染創傷を処置するために使用することができる。同様に、活性化ＭＳＣの有効量を、慢性感染創傷の処置で使用することもできる。例えば、高度薬剤耐性感染を処置するために、ＭＳＣの組成物を使用することができる。
【０１５１】
慢性創傷感染処置のための活性化ＭＳＣの使用のための特定の適応には、感染に対する免疫が不全である糖尿病患者の処置が含まれる（図２４を参照のこと）。例えば、これらの患者における特定の慢性創傷には、感染潰瘍（脚、足、腕）、感染インプラント、感染カテーテルおよび骨髄炎、および深部組織の他の慢性感染が含まれる。創傷感染処置のための活性化ＭＳＣの他の適応には、グラム陰性菌およびグラム陽性菌の感染による混合感染、ならびに異なるグラム陽性菌またはグラム陰性菌による混合感染を含む、ＭＤＲ細菌の複数の種または株を含有する感染の処置が含まれる（図１７〜１９を参照のこと）。
【０１５２】
組成物または活性化間葉系幹細胞は、殺菌性抗生物質および／または静菌性抗生物質などの１つまたは複数の抗微生物剤と一緒に（例えば、組成物または活性化間葉系幹細胞の投与の前、並行して、またはその後に）投与される方法も提供される。深部組織における細菌感染の効率的な排除のために、本明細書に記載される活性化ＭＳＣまたは組成物および殺菌性抗生物質療法の特定の組合せが必要とされ、深部細菌感染の処置のためにｉｎ  ｖｉｖｏで抗生物質と活性化ＭＳＣを組み合わせたとき、強力な相乗効果が観察される。（図１０を参照のこと）。
【０１５３】
例えば、活性化ＭＳＣと経口抗生物質の組合せは、細菌負荷の有意な低減をもたらす。（図２を参照のこと）。同様に、この組合せは、深部創傷感染部位の生細菌の数も有意に低減した。（図３を参照のこと）。
【０１５４】
さらに、活性化ＭＳＣは、Ｓ．ａｕｒｅｕｓバイオフィルムを破壊することもできる。Ｓ．ａｕｒｅｕｓバイオフィルムを破壊するＭＳＣの能力は、バイオフィルムペグアッセイを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで評価した。バイオフィルム状態の細菌と活性化ＭＳＣとのインキュベーションは、バイオフィルム単独または非活性化ＭＳＣとインキュベートしたバイオフィルムと比較してバイオフィルムの破壊を明らかにした。（図２７を参照のこと）。さらに、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ細菌のバイオフィルムで、バイオフィルムのさらにより大きな破壊が注目された。バイオフィルム生成と関連したインプラントの感染は従来の抗生物質療法で根絶するのが極めて困難であるので、本明細書に記載される併用処置（すなわち、活性化ＭＳＣおよび抗生物質による）が有益になる。
【０１５５】
本明細書に記載される組成物のいずれかまたは活性化間葉系幹細胞の投与は、感染創傷において細菌クリアランスを誘導し、および／または細菌負荷を低減するが、そのことは、次に、感染創傷の治癒を強化することができる。
【０１５６】
適する組成物および／または活性化間葉系幹細胞（単独の、または１つまたは複数の殺菌および／もしくは静菌性抗生物質と併用した）は、創傷の発生時または発生後に投与することができる。さらに、ＭＳＣは、１つまたは複数の抗生物質でプレロードされてもよい。
【０１５７】
本開示による治療実体の投与は、適する担体、賦形剤、および改善された移転、送達、忍容性などを提供するために製剤に組み込まれる他の薬剤と一緒に投与されることが理解される。全ての薬学者に公知である処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１５版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９７５年））、特にその中のＢｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒによる第８７章に、多数の適当な製剤を見出すことができる。これらの製剤には、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有ベシクル（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油および油中水型乳剤、乳剤カルボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体のゲルならびにカルボワックスを含有する半固体の混合物が含まれる。製剤中の有効成分が製剤によって不活性化されず、製剤が投与経路に生理的に適合し、忍容されるならば、上述の混合物のいずれも本開示による処置および療法に適することができる。薬学者に周知の製剤、賦形剤および担体に関連した追加情報については、Ｂａｌｄｒｉｃｋ  Ｐ．「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：  ｔｈｅ  ｎｅｅｄ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄａｎｃｅ」、Ｒｅｇｕｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２巻（２号）：２１０〜８頁（２０００年）、Ｗａｎｇ  Ｗ．「Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．２０３巻（１〜２号）：１〜６０頁（２０００年）、Ｃｈａｒｍａｎ  ＷＮ「Ｌｉｐｉｄｓ，  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｄｒｕｇｓ，  ａｎｄ  ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ  ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｃｏｎｃｅｐｔｓ」、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．８９巻（８号）：９６７〜７８頁（２０００年）、Ｐｏｗｅｌｌら「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２巻、２３８〜３１１頁（１９９８年）およびその中の引用も参照のこと。
【０１５８】
本発明を説明したが、以下の実施例は、例示として提供され、限定するものではない。
【実施例】
【０１５９】
（実施例１）
活性化ＭＳＣは、深部組織のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ感染のマウスモデルにおいて、細菌創傷感染を抑制する。
Ｓ．ａｕｒｅｕｓのルシフェラーゼ発現株（Ｘｅｎ３６）でバイオフィルムが確立された外科用メッシュをＣＤ−１マウス（１群につきｎ＝５）に植え込み、それは、生物発光の画像化を使用した感染の追跡を可能にした。（本明細書に参照により組み込まれる、Ｗａｌｔｏｎら、Ｃｏｍｐ  Ｍｅｄ．６４巻（１号）：２５〜３３頁（２０１４年）を参照）。引き続き、深在性外科用インプラント感染を模倣するために、メッシュを皮下に植え込んだ。インプラント設置の２日後に、以下の処置群にマウスを無作為に割付けた：非処置対照；抗生物質（アモキシシリン−クラブラン酸、飲料水に入れて連続処置）だけによる処置；非処置ＭＳＣの静脈内投与による処置；活性化ＭＳＣの静脈内投与による処置；非処置ＭＳＣプラス抗生物質の投与による処置；および、活性化ＭＳＣプラス抗生物質による処置。
【０１６０】
３日間隔で４回の処置のために、マウスごとに細胞数５×１０５の用量で活性化ＭＳＣを静脈内投与した。ＭＳＣは、合成ＴＬＲ３リガンドを使用して活性化した。
【０１６１】
細菌負荷に及ぼす処置の効果を調査するために、メッシュ植え込みから２〜３日ごとにＩＶＩＳ画像化によってマウスを画像化した。各処置群の１匹のマウスにおける創傷の代表的ＩＶＩＳ画像を図１に表す。
【０１６２】
画像は、抗生物質および活性化ＭＳＣで処置したマウスにおける感染の消失を実証するが、マウスの他の群においては感染が持続した。処置効果は、３つの鍵因子に依存することが見出された：（１）ＭＳＣの活性化；（２）ＭＳＣ投与を同時並行の抗生物質療法と組み合わせること；および（３）ＭＳＣの静脈内投与。
【０１６３】
これらの所見は、創傷へのＭＳＣの局所直接注入が細菌感染を効果的に制御しなかったこと、および、抗生物質と一緒の非活性化ＭＳＣの投与も感染を制御しなかったことを実証する。（図３を参照のこと）。さらに、感染創傷に皮下注射したときにも、活性化ＭＳＣの単独投与は細菌クリアランスを改善しなかった。このように、深部組織における細菌感染の効率的な排除のために、活性化ＭＳＣと殺菌性抗生物質療法の特定の組合せが必要である。
【０１６４】
（実施例２）
マウスＳ．ａｕｒｅｕｓ創傷感染モデルにおける活性化ＭＳＣおよび抗生物質による処置の後の、創傷組織における細菌負荷の経時的低減。
上の実施例１に記載されている通り、Ｓ．ａｕｒｅｕｓを含浸させたメッシュで感染させたＣＤ−１マウス（１群につきｎ＝５）を、活性化ＭＳＣまたは抗生物質で、または両方の組合せにより処置した。創傷部位におけるＳ．ａｕｒｅｕｓの数をＩＶＩＳ画像化（画像強度は生存能力のある細菌数に比例する）を使用して定量化し、平均（＋／−ＳＥＭ）ルシフェラーゼフラックス強度を処置時間の上にプロットした。
【０１６５】
非処置の対照マウスまたは抗生物質（Ａｂｘ）もしくは活性化ＭＳＣ（Ａｃｔ  ＭＳＣ）単独で処置したマウスと比較して、活性化ＭＳＣ＋経口抗生物質で処置したマウスは、処置の１３日目に細菌負荷が有意に低減した。（図２を参照のこと）。
【０１６６】
（実施例３）
抗生物質療法と組み合わせた活性化ＭＳＣの静脈内送達の後の創傷感染部位における生存能力のある細菌の低減。
ＣＤ−１マウス（１群につきｎ＝５）は、上の実施例１に記載される通り、移植された感染メッシュを使用して確立された慢性の深部Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染を有していた。マウスは、同種異系脂肪由来のマウスＭＳＣの３日間隔で３回の反復静脈内注射によって次に処置した。処置群には、非処置の対照動物（Ｃｔｒｌ）、経口アモキシシリン（ａｍｏｘｉｃｌｌｉｎ）−クラブラン酸単独（Ａｂｘ）、ＭＳＣ単独（ＭＳＣ）、活性化ＭＳＣ単独（Ａｃｔ  ＭＳＣ）、非活性化ＭＳＣプラス抗生物質（ＭＳＣ＋Ａｂｘ）、または活性化ＭＳＣプラス抗生物質（Ａｃｔ  ＭＳＣ＋Ａｂｘ）で２週間処置した動物が含まれた。２週間の処置の完了時に、動物を安楽死させ、感染部位の創傷組織を収集して、ＬＢ寒天四重プレート上の定量的平板培養を使用して、創傷組織における生存能力のある細菌の細菌数（コロニー形成単位またはＣＦＵ）の定量化のために処理した。
【０１６７】
活性化ＭＳＣプラス抗生物質で処置したマウスは、他の処置群の動物と比較して創傷部位の生存能力のある細菌負荷が有意に低減した。（図３を参照のこと）。図３は、抗生物質と一緒に投与したときにも、非活性化ＭＳＣが感染制御において有効でなかったことも実証する。同様に、抗生物質のある特定のクラスだけが、ＭＳＣと抗菌効果を誘発するのに活性であることが示された。
【０１６８】
合わせると、これらの所見は、殺菌性抗生物質と組み合わせたとき、活性化ＭＳＣが深部創傷感染部位で生細菌の数を有意に低減することを示す。
【０１６９】
（実施例４）
慢性創傷感染の処置のための静脈内  対  直接創傷注射の比較。
上の実施例１に記載の確立されたＳ．ａｕｒｅｕｓ創傷感染を有するマウスを、病変部近傍組織（ＳＣ）への直接注入または静脈内経路のいずれかによって投与された経口抗生物質プラス活性化ＭＳＣで処置した。処置は、３日間隔でさらに２回繰り返した。１４日目に、創傷組織を収集し、平板培養およびコロニー計数によって組織の細菌負荷を判定した。
【０１７０】
図４に示す結果は、ＭＳＣの静脈内投与が、創傷細菌負荷の低減においてＳＣ投与より有意に効果的であることが見出されたことを実証する。
【０１７１】
（実施例５）
マウス慢性感染モデルにおける顕微鏡創傷治癒特徴に及ぼす活性化ＭＳＣ投与プラス抗生物質の効果。
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染メッシュインプラントを有するマウスを、上の実施例１に記載されている通りに処置した。研究の完了時（２１日目）に、マウスを安楽死させ、感染創傷組織を切開してインプラント部位を露出させた。図５は、非処置の創傷（上パネル）および活性化ＭＳＣプラス抗生物質で処置した創傷（下パネル）の代表的な顕微写真（Ｈ＆Ｅ染色組織切片、２０×）を表す。処置された創傷では、炎症性細胞浸潤は有意に低減し、炎症は線維芽細胞治癒組織で置き換えられる。（図５を参照のこと）。
【０１７２】
（実施例６）
活性化ＭＳＣは、静脈内投与の後に創傷感染部位に効率的に移動する。
感染対照動物および活性化ＧＦＰトランスジェニックＭＳＣ（各注射につきマウス１匹につき１×１０６個のＭＳＣ）を静脈内注射された感染動物からの創傷組織を免疫蛍光画像化によって評価して、創傷組織中のＭＳＣを検出した。図６に示すように、創傷部位における多数のＧＦＰ＋ＭＳＣの蓄積が右の画像で明白であり、それは、ＭＳＣが静脈内投与後に創傷に効率的に移動することを示す。
【０１７３】
これらの結果は、ほとんどの静脈内注射された活性化ＭＳＣは当初肺に捕獲されるが、細胞はその後肺から効率的に出て、その後何日も体全体の炎症部位に移動することができることを示す。この観察は、静脈内投与方法の主要な利点の１つ、すなわち、ＭＳＣが、局所的に、または針注射により適用することができる皮膚部位だけでなく、体内のあらゆる場所の感染部位にアクセスすることを可能にすることを強調する。
【０１７４】
（実施例７）
活性化ＭＳＣによる全身処置によって促進される創傷治癒。
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染メッシュインプラントを有するマウスを、上の実施例１に記載されている通りに処置した。研究の完了時（２１日目）に、マウスを安楽死させ、皮膚を切開してインプラント部位を露出させた。図７は、非処置の創傷（対照）および活性化ＭＳＣプラス抗生物質で処置した創傷の代表的な写真を表すが、非処置の対照創傷（左パネル）と比較してＭＳＣ処置創傷（右パネル）において相当な治癒が明白である。非処置の創傷（左）は膿を含有する反応性組織の厚いカプセルで囲まれており、ＭＳＣ＋抗生物質処置創傷（右）は非常に小さい炎症を、および膿蓄積のないことを示す。当初に移植された外科用メッシュ材料は処置創傷のインプラントにおいて可視化することもできるが、非処置の創傷において、それは膿によって完全に囲まれている。
【０１７５】
創傷治癒効果は、活性化ＭＳＣおよび抗生物質で処置されたマウスの群だけで観察された。さらに、図７に示す結果は、慢性深在性細菌感染を根絶するそれらの能力に加えて、活性化ＭＳＣの投与が、創傷治癒ならびに炎症および反応性瘢痕組織形成の低減にも有意に寄与することを示す。
【０１７６】
（実施例８）
静脈内投与の後の感染創傷部位へのＤｉＲ標識ＭＳＣの移動。
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染創傷（詳細は上の実施例１を参照のこと）を有するマウスで、活性化または非活性化ＭＳＣを赤外線色素ＤｉＲ（ＤｉＩＣ１８（７）（１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドトリカルボシアニンヨウ化物））で標識し、生存マウスに静脈内注射し、マウスを次に生物発光撮影装置（ＩＶＩＳ）で画像化して、注射されたＭＳＣの移動を検出した。注射の４８時間後までに、感染創傷の領域においてＤｉＲ＋細胞が明らかだった（中央および右パネル、ボックス領域）。
【０１７７】
図８に示す結果は、非活性化ＭＳＣ（中央パネル）を注射されたマウスより、活性化ＭＳＣ（右パネル）を注射されたマウスにおいて、創傷領域に実質的により多くのＤｉＲ＋細胞があることを示した。ＭＳＣを注射されてない対照マウス（左パネル）では、赤外線シグナルは検出されなかった。Ｓ．ａｕｒｅｕｓによる創傷感染領域は、各動物において青緑色の領域として画像化される（各画像の左パネル）。各マウスの大きな陰影領域は肺であり、創傷浸潤細胞はボックス領域に概要を示す。
【０１７８】
静脈内注射ＭＳＣは、おそらく炎症組織によって生成されたケモカインに応答して動員された結果、感染創傷に効率的に運ばれ、活性化ＭＳＣは非活性化細胞よりも効率的に移動した。静脈内注射ＭＳＣが感染創傷の縁に次第に蓄積したという事実は、全体的細菌クリアランス効果の誘導のための反復ＭＳＣ投与の重要性も示した。
【０１７９】
（実施例９）
ＭＳＣによるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細菌殺滅。
Ｓ．ａｕｒｅｕｓを死滅させるＭＳＣの能力を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細菌のＭＳＣとの直接的共培養によって調査した。９６ウェルプレートの３反復のウェルの中でＭＳＣ（細胞数１×１０５／ウェル）を細菌（細胞あたり１０個の細菌）と４時間共培養し、次に上清から細菌を収集し、ＣＦＵを手動計数によって判定した。結果を、図９に示す。馴化培地をＭＳＣ培養から収集して細菌とインキュベートしたときにも、類似の結果が観察された。
【０１８０】
これらの所見は、ＭＳＣが培養に抗微生物性因子を自然発生的に分泌することを示す。
【０１８１】
（実施例１０）
抗生物質療法と組み合わせたとき、ＭＳＣは相乗的な細菌殺滅および高レベル抗生物質耐性の反転を示す。
上の実施例９に記載の類似の実験計画を使用して、高度抗生物質耐性細菌株を、活性化ＭＳＣ単独、抗生物質単独（セファゾリン（ｃｅｆａ））または抗生物質＋活性化ＭＳＣと３反復の培養でインキュベートし、細菌殺滅を４時間後に調査した。細菌を非常に高い用量の抗生物質とインキュベートしたとき、細菌殺滅はほとんど観察されなかった。同様に、活性化ＭＳＣ単独では細菌殺滅はあまり観察されなかった。
【０１８２】
しかし、活性化ＭＳＣと組み合わせた抗生物質の投与は、単独の活性化ＭＳＣまたは抗生物質と比較して相乗的細菌殺滅を実証した。（図１０を参照のこと）。さらに、他の抗生物質、および他の細菌株でも類似の結果が観察された。さらに、イヌおよびヒトからのＭＳＣも、この相乗効果を両方とも実証した。
【０１８３】
これらの所見は、ＭＳＣによって分泌される因子とセファロスポリンおよびペニシリンおよびアミノグリコシド系などの従来の殺菌性抗生物質の間に、特異な、以前に認められていない抗細菌性相互作用があることを実証するので、慢性感染の処置のために、細菌が耐性であると考えられる抗生物質であっても、ＭＳＣ療法を連続抗生物質療法と組み合わせることの理論的根拠を支持する。さらに、この相互作用は、深部細菌感染の処置のためにｉｎ  ｖｉｖｏで抗生物質と活性化ＭＳＣを組み合わせたときに観察される強力な相乗性を一部説明する。
【０１８４】
（実施例１１）
活性化ＭＳＣによって生成されるケモカインはｉｎ  ｖｉｔｒｏで単球移動を刺激する。
移動アッセイ（Ｂｏｙｄｅｎ  ｃｈａｍｂｅｒｓ）およびイヌからの血液を使用して、単球移動を刺激する能力についてＭＳＣ培養からの馴化培地（ＣＭ）を評価した。図１１に示すように、ＭＳＣからのＣＭとのインキュベーションは単球移動の強化を刺激したが、活性化ＭＳＣ（ｐＩＣによりｉｎ  ｖｉｔｒｏで２時間活性化した）からのＣＭとのインキュベーションは有意により大きな単球移動を刺激した。
【０１８５】
ｐＩＣによるＭＳＣの活性化は、創傷部位への単球のより大きな移動を刺激することができることを、これらの結果は示す（下の実施例１２を参照のこと）。
【０１８６】
（実施例１２）
活性化ＭＳＣの全身投与は創傷感染部位への単球動員を誘発する。
単球、マクロファージおよび好中球応答を含む宿主免疫応答に及ぼす活性化ＭＳＣの影響を調査するために、研究を行った。創傷組織に移動する単球の数は、その炎症性単球が全てＧＦＰを発現したリポーターマウスの使用によって判定した。Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染マウスからの創傷を、炎症性単球の検出のために免疫染色した。
【０１８７】
慢性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ感染創傷を有するマウス（上の実施例１を参照のこと）を図１２に示すように活性化ＭＳＣの静脈内投与によって処置したとき、非処置の対照動物（左パネル）と比較して、創傷に浸潤する単球数の有意な増加があった（右パネル）。非処置の動物（左）または抗生物質単独で処置した動物（示さず）からの創傷は、単球の比較的まばらな集団を含有したが、活性化ＭＳＣで処置した動物（右）からの創傷は血流から動員された単球の非常に高密度な集団を含有した。さらに、創傷組織に移動した単球の数は、非活性化ＭＳＣよりも活性化ＭＳＣで処置した動物において有意に多かった。
【０１８８】
これらの所見は、静脈内投与の後にＭＳＣが宿主免疫細胞（単球）を組織に動員することを実証し、および、ＭＳＣの活性化がこの単球動員効果を有意に強化することをも実証する。単球は組織の中でマクロファージに分化し、マクロファージは創傷治癒を刺激するための鍵となる白血球であるので、活性化ＭＳＣ処置の単球動員効果は重要である。
【０１８９】
（実施例１３）
活性化ＭＳＣによる療法は、創傷部位で創傷治癒マクロファージの分化を刺激する。
図１３に示すように、非処置のマウス（左）、非活性化ＭＳＣで処置したマウス（中央パネル）および活性化ＭＳＣで処置したマウス（右パネル）から、慢性Ｓ．ａｕｒｅｕｓ創傷感染を有するマウスからの創傷組織を収集し、感染創傷からの組織を２週時に収集し、誘導可能な一酸化窒素を発現するＭ１マクロファージ（ｉＮＯＳ発現）の検出のために、およびＭ２マクロファージ（アルギナーゼ発現）の検出のために処理した。（非活性化ＭＳＣで処置したマウスではなく）活性化ＭＳＣで処置したマウスは、Ｍ１マクロファージより有意に多くのＭ２マクロファージを含有した創傷を有したが、非処置の動物または非活性化ＭＳＣで処置した動物では正反対のことが観察された。
【０１９０】
Ｍ２マクロファージは創傷治癒のために必須であるので、Ｍ２マクロファージの数の増加は、活性化ＭＳＣで処置した動物で創傷治癒が加速される理由を説明する助けとなることができる。（上の実施例１２を参照のこと）。
【０１９１】
（実施例１４）
ＭＳＣは、カテリシジン抗微生物性ペプチドＬＬ−３７を生成する。
図１４に示すように、抗微生物性ペプチドＬＬ−３７の細胞内生成の検出のために（左パネル）、または無関係なアイソタイプ対照抗体（右パネル）で、マウスＭＳＣを免疫染色した。ＬＬ−３７の豊富な発現がＭＳＣ（左パネル）で観察されたが、対照抗体による染色はほとんど観察されなかった。
【０１９２】
これらの結果は、ネズミ、イヌおよびヒトのＭＳＣは全て、グラム陰性菌およびグラム陽性菌の両方を死滅させる重要な抗微生物性ペプチドである細胞内ＬＬ−３７を生成することを示す。
【０１９３】
ＭＳＣをセファゾリンと組み合わせたときに観察された、実証された相乗的殺滅は、おそらくＭＳＣによるＬＬ−３７の放出のためであり、それは、その後抗生物質と相乗的に作用して細菌殺滅の増加をもたらす。
【０１９４】
（実施例１５）
カテリシジンＬＬ−３７の生成に一部依存するＭＳＣによる細菌殺滅。
図１５に示すように、ＭＳＣを細菌と共培養し、ＬＬ−３７中和の効果を調査した。対照ＭＳＣにおいて、ＬＬ−３７を中和する抗体でも処置したＭＳＣにおいて、および無関係な抗体で処置したＭＳＣにおいて、ＭＳＣによる細菌殺滅活性を調査した。抗Ｃｒａｍｐ抗体の添加はＭＳＣの細菌殺滅活性を有意に低減し、ＭＳＣ殺滅が抗微生物性ペプチドＬＬ−３７の分泌によって一部媒介されることを示した。
【０１９５】
（実施例１６）
活性化ＭＳＣによって生成される因子は好中球による細菌食作用の増加を誘発する。
単球、マクロファージおよび好中球応答を含む宿主免疫応答に及ぼす活性化ＭＳＣの影響を調査するために、研究を実施した。好中球をＭＳＣからの馴化培地（ＣＭ）と２時間インキュベートし、次に洗浄し、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ細菌と２時間インキュベートした。抗生物質処置によって細胞外細菌を排除し、次に抗Ｓ．ａｕｒｅｕｓ抗体で免疫染色することによって細菌の位置を特定した。ＣＤ１１ｂ発現のための免疫染色によって、好中球の位置を特定した。図１６の下パネルに記したように、ＭＳＣ  ＣＭとのインキュベーションは、細菌取り込みを有意に増加させた。活性化ＭＳＣからの上清とインキュベートした好中球は、対照好中球（右上パネル）または非活性化ＭＳＣからの因子とインキュベートした好中球（右中央パネル）より有意に食細胞性になった（右下パネルおよび左パネル）。
【０１９６】
これらの結果は、ＭＳＣが宿主免疫系と相互作用して細菌クリアランスを強化することができる１つの機構を示す。さらに、活性化ＭＳＣは、宿主自然免疫系に対して、深在性細菌感染の制御に寄与することができる強力な効果を発揮する。
【０１９７】
（実施例１７）
活性化ＭＳＣの静脈内投与は、感染した外傷性足傷害を有するイヌにおいて感染した足創傷の中の複数株の薬剤耐性細菌の排除を誘発する。
活性化ＭＳＣおよび抗生物質療法の効果を評価するために、天然に存在する創傷および創傷感染を有する愛玩動物イヌにおいて臨床試験を実行した。創傷感染制御のために活性化ＭＳＣ療法の効果を評価する試験に、重度の外傷を受けた感染した足創傷を有するイヌ（図１８および１９を参照のこと）を登録した。この特定の動物の足創傷は、２つの高度抗生物質耐性細菌分離株（Ｅ．ｃｏｌｉおよびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に感染しており、試験に組み入れる前に２週間処置したが奏効なしであった。
【０１９８】
足創傷を、活性化した同種異系イヌＭＳＣの３回の静脈内注入（２週間隔で１５分間注入された、体重１ｋｇにつき２×１０６個の活性化同種異系ＭＳＣ）で処置し、処置の間に経時的にとられた連続定量培養によって感染創傷の中の細菌数を判定した（図１７を参照のこと）。試験の解釈の交絡を回避するために、イヌは細菌が耐性だった元の毎日の抗生物質にも維持された。
【０１９９】
ＭＳＣ処置の前には（しかし、抗生物質処置をまだ継続中）、細菌数はまだ高かった。２週時（最初のＭＳＣ処置の後）に、ＭＤＲ  Ｅ．ｃｏｌｉおよびＭＤＲ  Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの両方の数は激減しており、数は３回目のＭＳＣ注入（８週時）の完了までに検出不能レベルまで減少し続けた。
【０２００】
記載した感染足創傷も創傷治癒について写真によってモニタリングし、その結果は図１８および１９に示す。最初の活性化ＭＳＣ注射（図１８、Ｉｎｊ＃１、上パネル）の時点で、足創傷は非常に炎症を起こし、痛みを伴っており、治癒していなかった。３回目のＭＳＣ注射（図１８、下パネル）の時点までには、足創傷は有意な治癒を経ており、イヌはもはや痛みを伴っていなかった。同様に、図１９は、処置前の治癒パラメータと比較して、２回のＭＳＣ処置の後の４週時に創傷が実質的に治癒したことを示す（右パネル）。
【０２０１】
抗生物質と組み合わせた活性化ＭＳＣの静脈内投与による薬剤耐性細菌感染の制御に関する類似の結果が、活性化ＭＳＣおよび抗生物質で処置された慢性創傷感染を有する４匹のさらなるイヌで得られた。これらには、それらの膝関節に数カ月に及ぶ術後感染を有する２匹のイヌ（図２０を参照）、慢性感染ペースメーカーリードを有するイヌ、および慢性感染骨板を有するイヌ（図２１を参照）が含まれた。全ての４つの場合に、活性化された同種異系イヌＭＳＣの静脈内投与が開始された後、細菌数は有意に低減または排除され、創傷は実質的に治癒した。
【０２０２】
活性化ＭＳＣで処置されたＭＤＲ感染を有するイヌで得られたデータの概要を、下の表１に提供する。従来の抗生物質処置に難治性であり、抗微生物処置のための活性化イヌＭＳＣによる療法の効果を評価する臨床治験に登録されて処置された、様々な異なる部位にＭＤＲ創傷感染を有する７匹のイヌからの臨床データ。６週時に治癒の細菌学的および微生物学的な証拠のために、全てのイヌを評価した。
【表１】
2018536010.tif 000002
【０２０３】
合わせると、これらの所見の全ては、活性化ＭＳＣ生成物を無関係のドナー動物（すなわち、同種異系細胞）から得ることができ、なお活性であることを示す。さらに、ヒト臨床使用のために現実的である活性化ＭＳＣの用量は、現実的な創傷感染モデルにおける高度薬剤耐性生物体の複合混合物の根絶において有効であり得る。
【０２０４】
これらの結果は、それらが高度薬剤耐性細菌感染を有する動物に全身投与されるときの、活性化ＭＳＣの強力な治癒活性も実証する。さらに、これらの結果はヒト細菌感染の自然発生的で現実的な動物モデルで得られたので、これらの所見はヒトまたは動物感染の処置に容易に適用することができる。
【０２０５】
（実施例１８）
術後感染を有するイヌにおける活性化ＭＳＣプラス抗生物質による慢性関節感染の処置。
２回のさらなる手術および複数回の抗生物質療法の間も持続した１年間の非解消、術後後膝関節感染を有するイヌを、活性化イヌＭＳＣの抗微生物特性を評価する試験に入れた。試験の間、イヌは元の（無効な）抗生物質レジメンに維持される間、２週間隔で活性化同種異系イヌ脂肪由来ＭＳＣの３回の注入を受けた。処置への応答は、関節穿刺によって得られた関節滑液細胞診断の連続評価によってモニタリングした。（図２０を参照のこと）。
【０２０６】
初期の関節滑液は多数の炎症性細胞を含有し、それらは、試験の８週時までに関節滑液が正常になるまで、処置の間に急速に消失し始めた。さらに、イヌは臨床的に劇的に改善し、８週時までに再び四肢を正常に使用し始めることができた。イヌは、１年後にも臨床的に正常なままである。
【０２０７】
したがって、これらの所見は、抗生物質と組み合わせた活性化ＭＳＣ療法が、膝関節などの部位における、およびヒト術後感染に極めて類似する自然発生的疾患モデルにおける深部感染に対してさえも有効である可能性があることを示す。
【０２０８】
（実施例１９）
ＭＤＲ  Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓによる皮膚感染を有するイヌにおける創傷治癒。
イヌは外傷性皮膚創傷の外科的修復の後にＭＤＲ  Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐによる感染を起こし、この感染は抗生物質療法に応答性でなかった。したがって、創傷感染を解消し、創傷治癒を刺激する活性化イヌＭＳＣの能力を評価する臨床治験に、このイヌを登録した。試験の間、イヌは、活性化イヌ同種異系脂肪由来ＭＳＣの一連の３回の静脈内注入を８週間わたって受けた。試験の完了時に、処置前と比較して創傷はかなり治癒し（図２１、左パネルを参照）、創傷からＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓを培養することはもはやできなかった（図２１、右パネルを参照）。
【０２０９】
（実施例２０）
活性化ＭＳＣおよび抗生物質療法によるイヌにおける骨髄炎および骨板感染の処置。
イヌは、骨板による骨折修復の後に慢性のおよび抗生物質耐性の感染を起こした。（図２２、左パネルを参照）。元の抗生物質を継続したままで、活性化同種異系イヌＭＳＣの２週間隔で３回の注入で、イヌを次に処置した。処置の前および活性化ＭＳＣの最初の静脈内注入から２週後に、ＭＤＲ細菌の複数の異なる種に感染した骨板を有するイヌから、定量的培養を実行した。１回のＭＳＣ注射の後、感染創傷から単離された細菌の数は、処置から４週目に有意に減少した。（図２２、右パネルを参照のこと）。
【０２１０】
これらの所見は、活性化ＭＳＣの全身投与が、抗生物質単独による処置が悪名高く困難である、骨板などのインプラント感染に対しても有効である可能性があることを示す。この公知の困難にもかかわらず、活性化ＭＳＣおよび抗生物質療法の組合せは、ＭＳＣ投与からわずか２週間以内に細菌数の目覚ましい低下をもたらした。
【０２１１】
（実施例２１）
活性化ネコ間葉系幹細胞による全身療法の後のネコにおける慢性ＭＤＲ創傷感染の治癒およびクリアランス。
ネコは、血管炎、および以降の頸部および背中にわたる皮膚の大きな部分の喪失を自然発生的に起こした。創傷は頻繁な包帯交換で管理されたが、その後いくつかの異なる細菌分離株に感染した。ネコを抗生物質（エンロフロキサシン）下に置いたが、創傷は連続的に感染し、著しく壊死し、ネコは全身が病的になった。
【０２１２】
抗微生物性幹細胞試験への登録時に、創傷培養は高度薬剤耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓに増殖した。ネコは、３回の処置のために２週おきに投与された、体重１ｋｇにつき細胞数２×１０６の用量で投与された、活性化ネコ同種異系ＭＳＣの一連の静脈内注入を次に受けた。処置治験の間、ネコは、Ｓｔａｐｈ分離株が耐性だったエンロフロキサシンだけで続けて処置された。
【０２１３】
結果を、図２３に示す。最初の幹細胞処置を受けてから２４時間以内に、ネコは顕著に臨床的に改善した。３週時の再検査で、創傷は顕著により小さく、より少ない分泌物を認めたが、創傷液からはＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓが単離された。５週時に、創傷はなおより小さく、創傷組織は大いにより健康に見え、創傷培養は陰性だった。７週時に、創傷はほとんど完全に治癒し、創傷培養は陰性だった。ネコはさらなる処置を受けず、創傷は解消されたと考えられた。
【０２１４】
（実施例２２）
真性糖尿病のイヌにおけるＭＤＲ細菌の複数の株による慢性創傷感染の処置。
図２４は、真性糖尿病および慢性感染術後創傷を有するイヌにおける創傷治癒および感染の解消を示す。真性糖尿病を長年有するイヌが膝関節の術後創傷感染を起こし、それは、いくつかの異なる抗生物質による処置の後に３カ月間にわたって従来の抗生物質療法に難治性のままだった。
【０２１５】
幹細胞治験への登録時に、創傷は赤く、炎症を起こしており、化膿物質がにじみ出ていた。イヌは、２週間隔で投与された、１ｋｇにつき細胞数２×１０６の活性化同種異系イヌＭＳＣの一連の静脈内注入で処置された。処置前定量的創傷培養は、高度ＭＲＤのＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓの２つの異なる分離株を明らかにした。
【０２１６】
最初のＭＳＣ注入から２週後に、創傷外観は改善し、所有者はイヌの跛行が軽減したことを報告した。さらに、創傷培養では、増殖なしであった。２回目のＭＳＣ注入の後、創傷外観は著しく改善し、創傷培養は再び陰性であった。４週時（図２４を参照のこと）に創傷で認めた漿液性滲出液は無菌であり、活性化ＭＳＣによる処置の間に他の創傷において以前に観察されており、一般的に自然発生的に解消する。
【０２１７】
（実施例２３）
抗生物質負荷ＭＳＣおよび抗生物質療法による慢性創傷感染の処置。
ＭＳＣをｉｎ  ｖｉｔｒｏの培養で増殖し、次に細胞浸透性抗生物質（例えば、キノロン、テトラサイクリン、メトロニダゾール）と１〜２時間インキュベートし、ｐＩＣで並行して、前にまたはその後に活性化する。活性化され負荷されたＭＳＣを洗浄し、収集した後に、上記のように静脈内注入した。抗生物質負荷細胞による処置は、創傷解消が起こるまで１〜２週間隔で繰り返され得る。
【０２１８】
このアプローチ（抗生物質を負荷していないＭＳＣに対して）のための好ましい患者には、特に薬剤耐性の感染（例えば、高度薬剤耐性感染）を有する対象、経口または静脈内送達の後に抗生物質が組織をあまり透過しない感染を有する患者；および、正常な細菌フローラの破壊を回避するために薬物を経口的または非経口的に投与しないことが望ましい、感染を有する患者（例えば、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感受性の患者）が含まれ得る。
【０２１９】
均等物
本発明の１つまたは複数の実施形態の詳細は、上の付随する記載に示される。本明細書に記載されるそれらに類似するまたは均等であるいかなる方法および材料も本発明の実施または試験で用いることができるが、好ましい方法および材料をここでは記載されている。
【０２２０】
前述の記載は例示のためにだけ提供され、本文書に添付の請求項による以外、開示される正確な形に本発明を限定するものではない。
【図１】
2018536010.tif 000003
【図２】
2018536010.tif 000004
【図３】
2018536010.tif 000005
【図４】
2018536010.tif 000006
【図５】
2018536010.tif 000007
【図６】
2018536010.tif 000008
【図７】
2018536010.tif 000009
【図８】
2018536010.tif 000010
【図９】
2018536010.tif 000011
【図１０】
2018536010.tif 000012
【図１１】
2018536010.tif 000013
【図１２】
2018536010.tif 000014
【図１３】
2018536010.tif 000015
【図１４】
2018536010.tif 000016
【図１５】
2018536010.tif 000017
【図１６】
2018536010.tif 000018
【図１７】
2018536010.tif 000019
【図１８】
2018536010.tif 000020
【図１９】
2018536010.tif 000021
【図２０】
2018536010.tif 000022
【図２１】
2018536010.tif 000023
【図２２】
2018536010.tif 000024
【図２３】
2018536010.tif 000025
【図２４】
2018536010.tif 000026
【図２５】
2018536010.tif 000027
【図２６】
2018536010.tif 000028
【図２７】
2018536010.tif 000029
【国際調査報告】
2018536010.tif 000030
2018536010.tif 000031
2018536010.tif 000032
2018536010.tif 000033
2018536010.tif 000034
2018536010.tif 000035