(57)【要約】  薬学的応用における、炎症性腸疾患の治療における特に生理学的に許容可能な担体と混合した機能性チラコイド抽出物の使用、及びその治療方法が提供される。炎症性腸疾患は、小腸、大腸（結腸）、直腸又は肛門（肛門括約筋）の炎症に関連する幾つかの疾患を含み得、詳細には潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択され得る。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のチラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物を、任意選択で生理学的に許容可能な賦形剤と混合して含む、対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための組成物。
【請求項２】
１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
経口である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
直腸内である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
浣腸剤溶液である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
坐薬である、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記有効量の抽出物が対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記有効量の抽出物が対象の体重１Ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抽出物が、１日約２５０ｍｇ、約５００及び１０００ｍｇから選択される投薬量である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための医薬の製造における、チラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物の使用。
【請求項１４】
前記抽出物が、１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記医薬が経口投与用である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１７】
前記医薬が直腸内投与用である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１８】
前記医薬が浣腸剤溶液である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記医薬が坐薬である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項２１】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記抽出物が、対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇを達成する量で存在する、請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
前記抽出物の量が対象の体重１Ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇである、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記医薬が、１日約２５０ｍｇ、約５００及び１０００ｍｇから選択される投薬量で製造される、請求項１３〜２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための、チラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物の使用。
【請求項２６】
前記抽出物が、１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
経口投与用である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２９】
直腸内投与用である、請求項２５に記載の使用。
【請求項３０】
前記抽出物が浣腸剤溶液に含まれる、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記抽出物が坐薬に含まれる、請求項２９に記載の使用。
【請求項３２】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択される、請求項２５に記載の使用。
【請求項３３】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記抽出物が、対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇを達成する量で存在する、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
前記抽出物の量が対象の体重１ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇである、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記抽出物が、１日約２５０ｍｇ、約５００及び１０００ｍｇから選択される投薬量である、請求項２５〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
機能性チラコイド抽出物を、生理食塩水溶液中の増粘剤及び任意選択で保存剤と混合して含む、炎症性腸疾患の直腸内治療用の浣腸剤製剤。
【請求項３８】
前記抽出物が、１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項３７に記載の製剤。
【請求項３９】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項３８に記載の製剤。
【請求項４０】
前記増粘剤が、キサンタンガム及びＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）から選択される、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項４１】
前記保存剤が、メチルパラベン、プロピルパラベン、エチルパラベン、及びブチルパラベンから選択される、請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項４２】
前記保存剤がプロピレングリコールに溶解され、及びｐＨが約６．５に調整される、請求項４１に記載の製剤。
【請求項４３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療を、それを必要としている対象において行う方法であって、有効量のチラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物を、特に生理学的に許容可能な担体と混合して前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項４４】
前記抽出物が、１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
経口投与用である、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
直腸内投与用である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記抽出物が浣腸剤溶液に含まれる、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記抽出物が坐薬に含まれる、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択される、請求項４３〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記抽出物が、対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇを達成する量で存在する、請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記抽出物の量が対象の体重１ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇである、請求項５２に記載の使用。
【請求項５４】
前記抽出物が、１日約２５０ｍｇ、約５００及び１０００ｍｇから選択される投薬量である、請求項４３〜５３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５５】
炎症性腸疾患の治療用の直腸浣腸剤を作製するためのキットであって、
・チラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物を乾燥形態において含む容器と、
・直腸浣腸剤溶液を含む容器と、
・任意選択で、どのように前記粉末を前記溶液に懸濁させるかに関する説明書と
を含むキット。
【請求項５６】
１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項５５に記載のキット。
【請求項５７】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項５６に記載のキット。
【請求項５８】
直腸バルブシリンジと、前記懸濁液の直腸内投与に関する説明書とを更に含む、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５９】
前記乾燥チラコイド抽出物が粉末の形態である、請求項５５〜５８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６０】
前記チラコイド抽出物粉末が約２５０ｍｇ用量のアリコートの形態である、請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
前記チラコイド抽出物粉末が約５００ｍｇ用量のアリコートの形態である、請求項５９に記載のキット。
【請求項６２】
前記チラコイド抽出物粉末が約１０００ｍｇ用量のアリコートの形態である、請求項５９に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チラコイドの完全性及び安定性を確保する特定の製剤（即ち機能性チラコイド抽出物）における機能性チラコイドを含む組成物、及び炎症性腸疾患を治療するための使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、生物医学分野において急性及び慢性疾患及び障害への関与が周知の過程である。炎症は細胞及び組織の防御及び再生に関連する自然の過程であるが、無秩序な炎症は細胞及び組織にとって有害な多くの過程に寄与し得る（又はそれに関与している）。
【０００３】
炎症は、感染病原体、抗原誘発又は物理的、化学的若しくは外傷性傷害に対する体の反応である。炎症の主な目的は、体液、タンパク質、及び細胞を血液から損傷組織に運び込むことである。炎症反応の主な特徴は、（ｉ）血管拡張（血流を増加させようと血管が広がる）、（ｉｉ）組織への拡散性成分の侵入を可能にする血管透過性の増加、（ｉｉｉ）走化性による細胞浸潤、即ち炎症細胞が血管壁を通り抜けて傷害部位に入る方向付けられた動き、（ｉｖ）罹患組織の生合成、代謝、及び異化プロファイルの変化、及び（ｖ）免疫系並びに血漿酵素系の細胞の活性化である。
【０００４】
一般に、炎症反応は、傷害又は感染病原体によって引き起こされた損傷の管理及び修復に極めて有効である。これらの現象が起こる程度は、通常、傷害の重症度又は誘発の範囲に比例する。しかしながら、炎症は、それが無秩序な、不均衡な又は望ましくない方法で発生するときに組織にとって有害となることもあり、慢性疾患又は障害を引き起こし得る。
【０００５】
慢性炎症反応は長期にわたる炎症と見ることができ、そこでは炎症性物質が絶えず存在する。しかしながら、炎症性物質が存在しない場合に慢性炎症が見られることも多く、炎症性腸疾患がこれに該当する。この場合、１つ以上の炎症性成分が炎症の病因及び永続化に寄与する。
【０００６】
炎症の有効な治療に抗炎症薬が広く用いられているにも関わらず、ステロイド耐性、高用量、骨粗鬆症、タンパク質及び脂質の異化、脂質塊の再分布など、抗炎症薬の使用による副作用が医学研究及び薬剤開発における大きい懸案である。
【０００７】
国際公開第０１／４９３０５号パンフレットは、抗酸化組成物及びその抽出方法を開示している。国際公開第０３／０４０４２号パンフレットは、他の抗炎症化合物とのその併用を開示している。国際公開第２００５／０２７９４４号パンフレットは、抗炎症化合物として投与される経口製剤を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】国際公開第０１／４９３０５号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／０４０４２号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００５／０２７９４４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、慢性炎症、詳細には炎症性腸疾患の治療用の、一般的な抗炎症治療による副作用を回避しながらも症状の効率的な軽減をもたらす新規組成物及び製剤の開発がなおも必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
従って、機能性チラコイド抽出物を含む組成物（本明細書では組成物Ａと命名される）、医薬製剤及び炎症性腸疾患の治療におけるその使用が提供される。
【００１１】
第１の態様において、有効量の機能性チラコイド抽出物を、特に生理学的に許容可能な担体と混合して含む、対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための組成物が提供される。
【００１２】
第２の態様において、対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための医薬の製造におけるチラコイド抽出物の使用が提供される。
【００１３】
更なる態様において、対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するためのチラコイドの使用が提供される。
【００１４】
代替的な態様において、チラコイド抽出物を、経口的に許容可能な賦形剤及び任意選択で保存剤と混合して含む、炎症性腸疾患の経口治療用の製剤が提供される。
【００１５】
代替的な態様において、チラコイド抽出物を、生理食塩水溶液中の増粘剤及び任意選択で保存剤と混合して含む、炎症性腸疾患の直腸内治療用の製剤が提供される。
【００１６】
更なる態様において、また、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療を、それを必要としている対象において行う方法であって、有効量のチラコイド抽出物を、任意選択で生理学的に許容可能な担体と混合して前記対象に投与するステップを含む方法も提供される。
【００１７】
代替的な態様において、炎症性腸疾患の治療用の直腸浣腸剤を作製するためのキットが提供され、前記キットは、チラコイド抽出物を含む容器と、直腸浣腸剤溶液を含む容器と、どのように前記抽出物を前記溶液に溶解させ、懸濁させ、又は希釈するかに関する説明書とを含む。
【００１８】
本発明の他の目的、利点及び特徴は、添付の図面を参照してあくまでも例として提供されるその好ましい実施形態についての以下の非限定的な説明を読めば、更に明らかになるであろう。
【００１９】
本開示に引用される文献の内容は、それらを参照することによって援用される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】組成物Ａの製造プロセスのフロー図である。
【図２】組成物Ａの色素プロファイルを示すＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図３Ａ】投薬後最長３６時間までのバイタルサインの平均経時変化（安全性集団）である。Ａ）収縮期血圧。
【図３Ｂ】投薬後最長３６時間までのバイタルサインの平均経時変化（安全性集団）である。Ｂ）拡張期血圧。
【図３Ｃ】投薬後最長３６時間までのバイタルサインの平均経時変化（安全性集団）である。Ｃ）脈拍数。
【図３Ｄ】投薬後最長３６時間までのバイタルサインの平均経時変化（安全性集団）である。Ｄ）呼吸数。
【図３Ｅ】投薬後最長３６時間までのバイタルサインの平均経時変化（安全性集団）である。Ｅ）体温。
【図４】軽度から中等度の活動性遠位潰瘍性大腸炎患者における修正メイヨーサブスコアのベースラインからの平均変化である。Ａ）直腸出血、Ｂ）排便回数。
【図５】潰瘍性大腸炎症状スコアの治験責任医師判定の全スコア及び症状スコアのベースラインからの平均変化である。
【図６】軽度から中等度の活動性遠位潰瘍性大腸炎患者における炎症バイオマーカーレベルのベースラインからの平均変化である。
【図７】組成物Ａ−２５０ｍｇ（１日１回１４日間）による治療の終了後７日の炎症及び潰瘍性大腸炎バイオマーカー（ｈｓＣＲＰ、Ｍ３０アポトソーム等）のレベルのベースラインからの平均変化である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
略語及び定義
定義
用語「約」は、本明細書で使用されるとき、示される数の±１０％の許容差を指す。正確を期せば、約という用語は、例えば９０％と併せて用いられるとき、９０％±９％、即ち８１％〜９９％を意味する。より正確には、約という用語は示される数の±５％を指し、ここで、例えば９０％は、９０％±４．５％、即ち８６．５％〜９４．５％を意味する。
【００２２】
本明細書で使用されるとき、単数形「１つの（ａ）」、「及び（ａｎｄ）」、及び「その（ｔｈｅ）」には、文脈上特に明確に指示されない限り複数の指示対象が含まれる。従って、例えば、「細胞」という表現は複数のかかる細胞を含み、「その培養物」という表現は、１つ以上の培養物及び当業者に公知のその均等物を含むなどである。本明細書で使用される全ての科学技術用語は、特に明確な指示がない限り、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。
【００２３】
本明細書及び特許請求の範囲で使用されるとき、語句「含んでいる」（並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」）など、含んでいるの任意の形態、「有している」（並びに「有する（ｈａｖｅ）」及び「有する（ｈａｓ）」など、有しているの任意の形態）、「包含している」（並びに「包含する（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「包含する（ｉｎｃｌｕｄｅ）」など、包含しているの任意の形態）又は「含有している」（並びに「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」など、含有しているの任意の形態）は、包含的又はオープンエンドであり、追加の記載されていない要素又は方法ステップを除外しない。
【００２４】
用語「チラコイド」、「チラコイド抽出物」、「機能性チラコイド抽出物」又は「機能性チラコイド」は、本明細書で使用されるとき、チラコイド膜環境にある（即ち、それがなおも活性であり得る又は活性化され得るような一体となった天然の状態にある）、詳細にはその元のチラコイド環境にある精製された機能性光合成色素を意味する。より詳細には、これらの用語は、本明細書に記載される方法によるか、及び／又はＢｉｓｓｏｎｎｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）若しくは国際公開第２００１４９３０５号パンフレットに開示される手順によって抽出されるとおりの機能性チラコイド膜を指す。
【００２５】
特に、本チラコイド抽出物の態様に関連して、分子複合体の機能品質は、当該技術分野において周知のとおり、及び／又はＭａｘｗｅｌｌ（２０００）に記載されるとおり、蛍光により、光と反応してそのエネルギーを放散するその能力（Ｆｖ／Ｆｍ比）に基づき計測することができる。
【００２６】
組成物
第１の態様において、本発明は、有効量の活性チラコイド抽出物を、特に生理学的に許容可能な担体と混合して含む、対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための組成物を記載する。詳細には、チラコイド抽出物はホウレンソウチラコイド抽出物であり、より詳細にはホウレンソウ葉から抽出される。
【００２７】
詳細には、本組成物は、精製された機能性光合成色素をチラコイド膜環境に含む。更に詳細には、本抽出物は静止状態であり、光合成で活性化させることができる。より詳細には、本抽出物は、いかなる電子供与体（水など）も欠いていることにより、その基本状態で安定化されている（即ち安定である）。
【００２８】
最も詳細には、本組成物は組成物Ａと呼ばれ、生の有機栽培ホウレンソウの活性チラコイド抽出物として定義され、ここで、全色素に対するクロロフィルａの比は少なくとも０．４、詳細には少なくとも０．５、より詳細には少なくとも０．６である。
【００２９】
詳細には、チラコイド抽出物に含まれる色素は、クロロフィルａ、クロロフィルｂ、及びカロテノイド類からなる群から選択される。より詳細には、チラコイド抽出物に含まれる色素は、クロロフィルａ、クロロフィルｂ、ルテイン、並びに任意選択でβ−カロチン及び／又はフェオフィチンからなる群から選択される。更に最も詳細には、チラコイド抽出物に含まれる色素は、クロロフィルａ（４０％超）、次にクロロフィルｂ（約１０〜１５％）、ルテイン（約１０％以下）、β−カロチン（約３％）及びフェオフィチン（１％未満）から本質的になる。
【００３０】
安定化抽出物
詳細には、本抽出物は、いかなる電子供与体（水など）も欠いていることにより、その基本状態で安定化されている（即ち安定である）。より詳細には、本抽出物は、１０％を超える水（又は他の電子供与体）を含有しないことにより安定化されている。
【００３１】
本組成物は凍結乾燥組成物などの粉末形態であってもよく、又は本組成物が電子供与体（水など）を含まない、又は実質的に含まないままであることにより機能性色素の活性を維持している限り、ＰＥＧ又はＤＭＳＯなどの生理学的に許容可能な固体又は液体賦形剤と混合されて懸濁液の安定化溶液を形成してもよい。
【００３２】
詳細には、安定化抽出物は固体形態であり、より詳細には粉末としての固体形態である。更により詳細には、本抽出物は、粉末１グラム当たり少なくとも２５ｍｇの色素の粉末形態である。より詳細には、生の粉末は、錠剤に圧縮され、カプセル化され、又はアリコートのパケット若しくはパウチに包装され得る。或いは、粉末は坐薬賦形剤と混合され、成形されて坐薬を形成してもよい。
【００３３】
或いは、本安定化抽出物は、例えばＰＥＧ又はＤＭＳＯなど、水又は電子供与体を欠いている液体賦形剤中にある溶液又は懸濁液などの液体形態である。詳細には、安定化溶液又は懸濁液は、投与のわずかに前又は直前に液体中に希釈されてもよい。最も詳細には、経口投与について、液体は水、ジュース、シロップ等であってもよい。或いは、直腸投与について液体は浣腸製剤であってもよい。
【００３４】
使用
詳細な態様において、対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための医薬の作製における、精製された機能性光合成色素をチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物の使用が提供される。
【００３５】
或いは、対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための、精製された機能性光合成色素をチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物の使用が提供される。
【００３６】
詳細には、ＩＢＤが潰瘍性大腸炎（直腸炎を含む）又はクローン病から選択される状況、より詳細には潰瘍性大腸炎（直腸炎を含む）の治療、最も詳細には潰瘍性大腸炎に対する治療にそれを使用する状況で組成物Ａの使用が提供される。
【００３７】
治療方法
詳細な実施形態において、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療を、それを必要としている対象において行う方法であって、精製された機能性光合成色素をチラコイド膜環境に含む有効量のチラコイド抽出物を、特に生理学的に許容可能な担体と混合して対象に投与するステップを含む方法が提供される。
【００３８】
詳細には、本治療方法は、潰瘍性大腸炎（直腸炎を含む）又はクローン病を治療する状況、より詳細には潰瘍性大腸炎を治療する状況で提供される。
【００３９】
治療適応
詳細には、炎症性腸疾患は、小腸、大腸（結腸）、直腸又は肛門（肛門括約筋）の炎症に関連する幾つかの疾患を含み得、詳細には、いずれの場合にも直腸炎を含めた潰瘍性大腸炎及びクローン病を挙げることができる。
【００４０】
詳細な態様において、例えば放射線直腸炎又は感染性直腸炎など、ＩＢＤ以外の原因によって引き起こされる直腸炎に用いられるか、又はその治療用の本発明のチラコイド抽出物が提供される。
【００４１】
対象
特に、本使用及び方法は、哺乳類対象、詳細にはペット又はヒト、より詳細にはネコ、イヌ、ウマ、又はヒト、最も詳細にはヒトの治療に適応され得る。
【００４２】
投薬量
本明細書で使用されるとき、用語「有効量」は、ＩＢＤ症状の低減又は炎症マーカーの低減を生じさせるのに十分な用量を意味し、治療下の対象、病歴及び／又は症状の重症度に依存し得る。
【００４３】
詳細な実施形態において、本抽出物は、対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇ、より詳細には対象の体重１Ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇの有効量を含む。
【００４４】
詳細な実施形態において、本抽出物は、約１５０〜約２０００ｍｇ／日、より詳細には約２５０、約３７５、約５００、約７５０、約１０００又は約１５００ｍｇ／日、最も詳細には２５０、５００又は１０００ｍｇ／日の投薬量で提供される。
【００４５】
製剤
詳細な態様において、本明細書に定義するとおりの使用又は治療方法が提供され、ここで、本組成物は、経口又は直腸内投与用、より詳細には浣腸剤又は坐薬などの直腸内投与用に製剤化される。
【００４６】
詳細な態様において、チラコイド膜環境にある精製された機能性光合成色素を、増粘剤及び任意選択で保存剤と混合して含む組成物を含む、炎症性腸疾患の治療又は使用向けの浣腸製剤が提供される。
【００４７】
詳細には、増粘剤は、キサンタンガム及びＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）から選択される。更に詳細には、保存剤は、メチルパラベン、プロピルパラベン、エチルパラベン、及びブチルパラベンから選択される。最も詳細には、保存剤はプロピレングリコールに溶解され、詳細にはｐＨが約６．５に調整される。
【００４８】
詳細な態様において、精製された機能性光合成色素をチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物を、直腸的に許容可能な賦形剤及び任意選択で保存剤と混合して含む、炎症性腸疾患の治療又は使用向けの坐薬の成形に好適な製剤が提供される。
【００４９】
詳細な実施形態によれば、直腸的に許容可能な賦形剤は、限定はされないが、ココアバター、グリセリン、半合成グリセリド類、ゼラチン、ステアリン酸ポリオキシル４０（種々の基剤）、及びＰＥＧから選択され得る。
【００５０】
キット
代替的な態様において、炎症性腸疾患の治療用の直腸浣腸剤を作製するためのキットが提供され、前記キットは、乾燥形態又は安定化溶液若しくは懸濁液の、精製された機能性光合成色素をチラコイド膜環境に含むチラコイド抽出物を含む容器と）、直腸浣腸剤溶液を含む容器と、どのように前記抽出物を前記溶液に溶解させ、懸濁させ、又は希釈するかに関する説明書とを含む。詳細には、本キットは、任意選択で、直腸バルブシリンジと、チラコイド浣腸製剤の直腸内投与に関する説明書とを含む。
【００５１】
代替的な態様において、炎症性腸疾患の治療用の直腸浣腸剤を作製するためのキットが提供され、前記キットは、精製された機能性光合成色素をチラコイド膜環境に含む乾燥又は液体形態の安定化チラコイド抽出物を含む容器と、直腸浣腸剤溶液を含む容器と、どのように前記抽出物を前記浣腸剤溶液に溶解させ、懸濁させ、又は希釈するかに関する説明書とを含む。詳細には、本キットは、任意選択で、直腸バルブシリンジと、チラコイド懸濁液の直腸内投与に関する説明書とを含む。
【００５２】
詳細には、安定化チラコイド抽出物は粉末の形態である。より詳細には、チラコイド抽出物の粉末は、約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ又は約１０００ｍｇ用量の錠剤、カプセル、又は単回用量パケット（又はパウチ）の形態である。
【００５３】
より詳細には、チラコイド抽出物の安定化溶液又は懸濁液はアリコート（パケット、パウチ、アンプル等）の形態であるか、又は約２５０ｍｇ、約５００ｍｇ若しくは約１０００ｍｇ用量のスポイト、詳細には定量スポイトを備えたボトルである。
【００５４】
以下の例は、本発明をどのように作製し及び使用するかについての完全な開示及び説明を当業者に提供するために提示され、本発明者らがその発明であると見なすものの範囲を限定する意図はなく、また、それらの例によって以下の実験が実施された全ての又は唯一の実験であることが表明されるように意図するものでもない。用いられる数値（例えば、量、温度等）に関して正確さを確保するように努めているが、幾らかの実験誤差及び偏差が考慮されなければならない。特に指示がない限り、部数は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は百分度であり、及び圧力は大気圧又はほぼ大気圧である。
【実施例】
【００５５】
実施例１  −  チラコイド抽出物（組成物Ａ）の調製
組成物Ａは、葉緑体が豊富なベビーホウレンソウ（スピナシア・オレラセア・Ｌ．（Ｓｐｉｎａｃｉａ  ｏｌｅｒａｃｅａ  Ｌ．））葉の葉肉組織に由来する。チラコイドとして知られる構造に組織化された葉緑体の内膜をベビーホウレンソウから抽出し、濃縮し、及び安定化させて固体粉末形態にする。チラコイド膜の主成分は色素、タンパク質及び脂質である。
【００５６】
【表１】
2018536701.tif 000003
【００５７】
製造プロセス
組成物Ａの製造プロセスを図１のフロー図に概略的に提供する。
【００５８】
光合成色素の活性を最大限保つため、処理ステップは最小限の露光且つ冷温条件下で実施する。ステップは以下の順序で行う：ホウレンソウ葉の検査及び次亜塩素酸ナトリウム溶液による洗浄、機械的破壊及びホモジナイゼーション、遠心によるろ過、凍結乾燥、及びガンマ線照射。
【００５９】
ホウレンソウ葉の検査及び次亜塩素酸ナトリウム溶液による洗浄。目視検査を実施して寸法及び識別属性（例えば、葉が緑色であり、変色した領域又は黄化したペック（ｐｅｃｋｓ）（クロロシス）がないこと）を確かめた後、ホウレンソウ葉は、初めに、ｐＨ７．０〜８．０（目標ｐＨ：７．４）に調整した次亜塩素酸ナトリウム溶液によって一定の比の溶液対葉（４４ｋｇ：５．４ｋｇ）でまとめて洗浄し、生鮮食品の葉に天然に見られる微生物叢を低減する。
【００６０】
機械的破壊及びホモジナイゼーション。過剰な次亜塩素酸ナトリウム溶液を除去した後、葉を機械的カッター／ミキサーに７．０〜８．０（目標ｐＨ：７．４）の一定容積のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝溶液と共に一定の比の溶液対葉（５．４ｋｇ：３．７ｋｇ）でまとめて移し入れる。このステップを用いると、葉がカット及びホモジナイズされて粗懸濁液になる一方、葉緑体に由来するチラコイド膜の断片が遊離する。
【００６１】
遠心によるろ過。次に、この懸濁液をバスケット遠心機でろ過する。遠心は３１００ｒｐｍの目標速度（範囲：２８００〜３２００ｒｐｍ）で実施する。このステップにより、スクリーン上に残留する繊維、屑片及び粗粒材料を除去することが可能になり、廃棄されることになる副産物ケーキが生じる。活性成分である組成物Ａは遠心分離物中に存在し、回収されて、更なる処理のために１０℃未満の温度で保管される。
【００６２】
凍結乾燥。次に、この材料を浅いステンレス鋼プレートの一面に広げ、暗所において≦−３０℃の温度で少なくとも２時間凍結させる。次に、１０℃の目標温度に保たれたプレートを凍結乾燥器に移し、生成物を凍結乾燥する。
【００６３】
ガンマ線照射。最終ガンマ線照射ステップを行う。照射後、密封性のねじ蓋が装着されたジャーに組成物Ａを移し入れる。
【００６４】
色素組成及び他の特性
ホウレンソウは、天然抗酸化剤（例えば、フラボノイド類）及び光合成色素（クロロフィル類及びカロテノイド類）を含有する。葉緑体の内膜は、チラコイドとして知られる構造に組織化されている。チラコイド膜の主成分は色素、タンパク質及び脂質である。
【００６５】
組成物Ａは、葉緑体に富むホウレンソウ葉の葉肉組織に由来する。これまでに、組成物ＡではＨＰＬＣ分析を用いて以下の色素が同定されている：ルテイン、クロロフィルｂ、クロロフィルａ、フェオフィチン及びβ−カロチン。組成物Ａの色素プロファイル（面積％）を示す典型的なクロマトグラムを図２に提供する。この分析は、組成物Ａの主成分がクロロフィルａ（６２．５％）であり、それにクロロフィルｂ（１３．１％）、ルテイン（９．４％）、β−カロチン（２．９８％）及びフェオフィチン（０．４５％）が続くことを示している。
【００６６】
好ましくは、アメリカ合衆国農務省（ＵＳＤＡ）の全米オーガニック基準（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）に従う認証を受けた栽培者からの生のベビーホウレンソウを使用して、肥料又は農薬からの可能性のある化学残留物が組成物Ａに存在するリスクを最小限に抑えた。
【００６７】
規格の正当化
組成物Ａは、粉末抽出物１グラム当たりの色素のミリグラム数で表されるその色素含有量によって特徴付けられる。工程能力に基づき、及び植物出発物質における季節変動を考慮して、２５ｍｇ色素／ｇ抽出物以上の規格を設定した。安定性データに基づき、初期色素含有量の８０％の限度を有効期間に設定した。
【００６８】
色素プロファイルはまた、組成物Ａに存在する様々な色素及び面積パーセント単位でのそれらの比の同定も可能にする。バッチで決定されたプロファイルを所与として、クロロフィルａ、クロロフィルｂ、ルテイン及びβ−カロチンが存在しなければならないこと、及び総ピーク面積応答に対するクロロフィルａの比の平均が０．４０以上でなければならないことを確立した。
【００６９】
この製造プロセスでは水を抽出溶媒として使用するため、組成物Ａの含水量を決定する試験を含めている。水分調節のため、１０％ｗ／ｗ以下の水という規格を設定した。
【００７０】
ミニブタにおける複合直腸内単回投与及び１４日間反復投与毒性試験において、第１相臨床バッチに存在する不純物レベルの安全性が適格となった。表２に示されるとおり、第２相臨床バッチにも同様の不純物レベルが存在した。反復投与毒性試験で投与した最大用量（２００ｍｇ／ｋｇ）は、１日１回１４日間投与した第２相臨床試験の最大用量（１０００ｍｇ又は１４．３ｍｇ／ｋｇ）よりも１４倍高かった。この試験では、毒性学的に重要な毒性所見は観察されなかった。ゲッチンゲンミニブタにおける既報告の自然発生の顕微鏡的病変と一致した、腎臓における顕微鏡的な最小限の尿細管変性に基づき、有意事象のＮＯＡＥＬは２００ｍｇ／ｋｇとして正当に定義された。
【００７１】
【表２】
2018536701.tif 000004
【００７２】
安定性
現在まで、密封性のねじ蓋付きのジャーに包装された組成物Ａ原薬の２つのバッチは、以下の条件下：５℃±３℃（現行推奨される保管条件）に安定に置かれている。これまでに利用可能なデータは、組成物Ａが冷蔵条件下で少なくとも１８ヵ月間保管した後にも安定であることを示している。
【００７３】
実施例２  −  試験医薬品
医薬品の詳細及び組成
試験医薬品は、患者が投与前に再構成した直腸浣腸剤である。直腸浣腸剤は、組成物Ａ原薬又は対応プラセボ粉末を再構成溶液で再構成することにより調製した。
【００７４】
そのために、各患者が各投与用量につき以下の材料を受け取った：
−  ６０ｇの再構成溶液を含むボトル１本、及び
−  組成物Ａ物質又は対応プラセボ粉末のいずれかを含むボトル１本。
【００７５】
この試験では３用量の組成物Ａを投与した：
−  ６０ｇの再構成溶液中２５０ｍｇの組成物Ａ、
−  ６０ｇの再構成溶液中５００ｍｇの組成物Ａ、又は
−  ６０ｇの再構成溶液中１０００ｍｇの組成物Ａ。
【００７６】
プラセボ直腸浣腸剤は、６０ｇの再構成溶液に再構成した５００ｍｇの対応プラセボ粉末で構成された。再構成溶液の組成を表３に提供する。
【００７７】
【表３】
2018536701.tif 000005
【００７８】
対応プラセボ粉末の組成を表４に提供する。
【００７９】
【表４】
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【００８０】
再構成溶液の配合は停留直腸浣腸剤に典型的であり、送達部位で適切な接触特性が確保されるように好適な粘度の成分が含まれた。４つのパラベンで構成される保存剤系により、バイオバーデンが許容限度の範囲内に留まることを確実にした。オスモル濃度を調節するため塩化ナトリウムが存在した。この配合は、第１相試験で使用した再構成溶液と比べて、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９８０が加わった点、並びに物理的及び化学的特性を長期間維持するため推奨される保管が室温から冷蔵に変更された点がわずかに修正された。再構成溶液のバッチ配合を表５に提供する。
【００８１】
【表５】
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【００８２】
また、スクロース及びアルファ化コーンスターチを増量剤として使用して、組成物Ａの対応プラセボ粉末も製剤化した。組成物Ａの濃緑色に合わせて着色料を添加した。この混合物を凍結乾燥して組成物Ａの顆粒状の外観を模倣した。スクロースは凍結保護物質としても作用し、保管時のアルファ化コーンスターチによる過度の水分吸収を防止した。対応プラセボ粉末のバッチ配合を表６に提供する。
【００８３】
【表６】
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【００８４】
第２ａ相試験で投与した直腸浣腸剤のバッチ配合を表７に提供する。
【００８５】
【表７】
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【００８６】
再構成溶液
４×２０ｋｇバルク溶液をプールすることにより、８０ｋｇの再構成溶液を調製した。この調製物（２０ｋｇバルク溶液及びプール）の製造プロセスを以下に提供する。
【００８７】
ステップ＃１  ｐＨ２．５  ＵＳＰ精製水の調製：機械的スターラが取り付けられた２０Ｌステンレス鋼容器に２０ｋｇのＵＳＰ精製水を充填した。ＵＳＰ精製水にＨＣｌ  １Ｎの溶液を撹拌下でゆっくりと加えてｐＨを２．５±０．０５に調整した。
【００８８】
ステップ＃２  キサンタンガム／Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）溶液の調製：機械的スターラが取り付けられた２０Ｌステンレス鋼ダブルジャケット付き容器にステップ＃１のｐＨ２．５  ＵＳＰ精製水１１．１ｋｇを充填し、温度を４０℃に調整した。温度が４０℃に達したところで、キサンタンガム（１２２．０ｇ）、塩化ナトリウム（１５０．０ｇ）及びＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９８０（２４．０ｇ）を添加し、この溶液を８００ｒｐｍの速度で６０分間混合した。
【００８９】
ステップ＃３  保存剤溶液の調製：１０００．０ｇのプロピレングリコールを含む１Ｌガラスボトルを５０℃の温度に達するように温水浴に入れた。温度が５０℃に達したところで、４つの保存剤：
−  メチルパラベン：３．２８ｇ
−  プロピルパラベン：０．６１ｇ
−  エチルパラベン：０．６１ｇ
−  ブチルパラベン：０．６１ｇ
を添加し、この溶液を上記の保存剤が溶解するまで５０℃の温度で撹拌下に置いた。
【００９０】
ステップ＃４  バルク溶液の調製：ステップ＃２で調製し、且つ４０℃の温度に維持したキサンタンガム／Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）溶液を含む２０Ｌステンレス鋼容器に、ステップ＃３の保存剤溶液を混合しながら加えた。この容器にステップ＃１のＵＳＰ精製水  ｐＨ２．５を２０．０ｋｇのバルク溶液に達するのに十分な量で加えた。加熱を中止し、バルク溶液を撹拌下で６０分間放冷した。２５℃の温度に達したところでｐＨを測定し、必要に応じてＨＣｌ  １Ｎ又はＮａＯＨ  １Ｎのいずれかの溶液を使用して６．５±０．０５に調整した。
【００９１】
ステップ＃１〜＃４を３回繰り返して３×２０ｋｇの更なるバルク溶液を作成した。
【００９２】
プールに進む前に２０ｋｇバルク溶液の各々に関して粘度試験を実施した。粘度が１０００〜１２００ｃｐである場合、プールを進めた（ステップ＃５）。
【００９３】
ステップ＃６  再構成溶液の包装：カニューレが取り付けられた蓋を有するボトルに定量式ポンプを使用して６０ｇ以上の再構成溶液を充填した。
【００９４】
対応プラセボ粉末
ステップ＃１  着色溶液の調製：この溶液は、６６５７．８ｇのＵＳＰ精製水を含むマグネチックスターラ付き風袋秤量済み１Ｌビーカーに２ｇのＵＳグリーン３  Ｓｈａｄｅ及び６．２ｇのＦＤ＆Ｃ黄色６号を加えることにより調製した。この溶液を２００ｒｐｍで５分間撹拌下に置いた。
【００９５】
ステップ＃２  バルク粉末分散体の調製：１６５９．８ｇのスクロース及び３３２．０ｇのアルファ化デンプンを５０００ｍＬビーカーに共に混合した。次に、この混合物を、８００ｒｐｍでの撹拌下において、ステップ＃１で調製した着色溶液にゆっくりと移し、完全に分散するまで撹拌を維持した。
【００９６】
ステップ＃３  凍結乾燥：ステップ＃２から得られたバルク粉末分散体を凍結乾燥トレイに移し、初めに−５０℃で２４時間乾燥させた。次に、この生成物をフリーズドライした。
【００９７】
組成物Ａ直腸浣腸剤
各投与用量について、患者は２本のボトル：再構成溶液を含むボトル１本と組成物Ａ活性物質又は対応プラセボ粉末を含むボトル１本とを受け取った。これらのボトルは冷蔵下に置かれた。
【００９８】
再構成のため、患者は冷蔵庫から上記に記載される２本のボトルを取り出し、室温で２時間放置した。次に、患者は、再構成溶液を含むボトルの内容物を、組成物Ａ活性物質又は対応プラセボ粉末を含むボトルに移すことにより直腸浣腸剤を再構成した。患者は直腸浣腸剤を再構成から１時間以内に自己投与した。再構成した浣腸剤は、投与直前に少なくとも３０秒間手で振盪した。
【００９９】
実施例３  −  前臨床結果概要
前臨床試験
多くの前臨床試験が実施されており、組成物Ａの抗炎症、抗酸化、及び免疫調節特性が実証された。前臨床試験には（ｉ）インビトロ及びインビボ薬理試験、及び（ｉｉ）安全性薬理試験及び毒性試験が含まれ、以下の表８及び表９にまとめる。
【０１００】
【表８】
2018536701.tif 000010
【０１０１】
【表９】
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【０１０２】
【表１０】
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【０１０３】
実施例４  −  第１相臨床試験
前臨床試験において組成物Ａで得られた好ましい結果を受けて、軽度から中等度の活動性遠位潰瘍性大腸炎の治療としてのその開発に着手することにした。これが、正常ヒトボランティアにおける第Ｉ相安全性臨床試験である独国でのファーストインヒューマン臨床試験の実施につながった。従って、本発明者らは、独国連邦規制機関  −  連邦医薬品医療機器研究所（ＢｆＡｒＭ）に治験申請（ＣＴＡ）を提出し、必要な承認を得た。
【０１０４】
第１相試験は、４つの異なるコホートに割り付けた２４人の健常ヒトボランティアで実施した無作為化、二重盲検、並行群間、単回漸増投与、プラセボ対照安全性及び忍容性試験であった。用量は、１８７．５ｍｇ／６０ｇ〜１５００ｍｇ／６０ｇの範囲の直腸浣腸剤又はプラセボであった。
【０１０５】
この試験では、バイタルサイン（血圧、脈拍数、体温及び呼吸数）又は心電図（ＥＣＧ）の臨床的に関連性のある変化は示されず、臨床的に重要な異常は示されず、試験医薬品に関係すると見なされる有害事象は示されず、及び投薬８〜１０時間後にＳ状結腸鏡検査を実施したとき直腸粘膜における潰瘍、びらん、又は浮腫の徴候は示されなかった。
【０１０６】
この試験からの本発明者らの結論は以下のとおりであった：最大１５００ｍｇ／６０ｇの組成物Ａ直腸浣腸剤の投与が安全であり、極めて良好に忍容された。いずれの測定値にも臨床的に重要な所見はなく、及び投与前の検査から投与後の検査にかけて臨床的に関連性のある変化は観察されなかった。加えて、試験した投薬量範囲に最大耐容量は同定されなかった。
【０１０７】
安全性評価
曝露の程度
この試験に組み入れられた２４人全ての被験者が組成物Ａ直腸浣腸剤又はプラセボの単回投与を受けた：８人の被験者はプラセボで治療された。４人の被験者は、それぞれ１８７．５ｍｇ、３７５ｍｇ、７５０ｍｇ又は１５００ｍｇの組成物Ａ直腸浣腸剤の単回投与を受けた。
【０１０８】
有害事象の概要
いずれの被験者についてもベースラインＡＥの報告はなく、この試験に組み入れられた被験者２４人のうちの１人の被験者のみ（４．２％）が治療後に１つのＡＥを報告した。
【０１０９】
有害事象の分析
被験者００４（プラセボ）について軽度の血栓性静脈炎が報告され、これは３日目から始まり、８日以内に完全に回復した。試験医薬との関連性は治験責任医師によって無関係と評価された。
【０１１０】
死亡、その他の重篤な有害事象及び他の重要な有害事象
死亡、又はＳＡＥ又は他の重要なＡＥはなかった。ＡＥに起因してこの試験からドロップアウトした被験者はいなかった。
【０１１１】
臨床検査値の評価
被験者毎の個別検査室測定値及び各異常検査値の一覧。
【０１１２】
各臨床検査パラメータの評価
経時的臨床検査値
ほとんどの臨床検査値が正常範囲内であった。幾つものパラメータについて正常範囲からの個別的な偏差が見られた。これらの偏差のほとんどが、健常な被験者で通常観察される正常な変動であった（正常範囲からのごくわずかな偏差、ほとんどは本方法の精度の範囲内であり、被験薬投与前に既に存在することも多い）。
【０１１３】
幾人かの被験者でヘモグロビン及びヘマトクリットの低下が観察された。これは、この試験で実施された多数の採血が原因であり得る。
【０１１４】
血球分画を調べると、正常範囲を上回る異常値及び下回る異常値が見られ、治療に関係する一貫した変化はなかった。しかしながら、血球分画はアーチファクトの影響を非常に受け易いことが知られている点を考慮すべきである。
【０１１５】
被験者０２４（１５００ｍｇ）は、スクリーニング時の２８．６Ｕ／Ｌ及び１日目チェックイン時の３４．２Ｕ／Ｌから最高３日目の７２．８Ｕ／Ｌへの（正常範囲≦４８Ｕ／Ｌ）のＡＳＴの独立した増加を示した。その後、ＡＳＴは低下し、８日目に再び正常範囲内になった（４７．０Ｕ／Ｌ）。他の肝機能パラメータはいかなる増加も示さなかった。この増加は正常範囲の上限の２倍未満であり、治験責任医師により臨床的に重要でないと見なされた。他の被験者で肝機能パラメータに顕著な変化を示した者はいなかった。
【０１１６】
寄生虫、卵子、細菌培養物及び毒素に関する便検査はいずれも陰性であった。全ての潜血試験が陰性であった。
【０１１７】
個々の臨床的に重要な異常
臨床的に重要な臨床検査結果はなかった。
【０１１８】
バイタルサイン、身体的所見及び安全性に関連する他の観察項目
血圧及び脈拍数
平均バイタルサイン測定値を図３Ａ〜図３Ｅに示す。
【０１１９】
バイタルサイン平均値に臨床的に重要な時間関連又は用量関連変化はなかった。総じて、全ての治療群で投薬後にバイタルサイン平均値が低下したが、これは日内変化が原因であり得る（投与は夜就寝前に実施された）。
【０１２０】
正常範囲外の異常な個別値が幾つかあったが、用量に伴い異常値の頻度が増加することはなかった。ほとんどのパラメータについて、正常範囲を下回る値と上回る値とが見られた。最も高用量の組成物Ａの投与後に最も低頻度の異常値が観察され、但し脈拍数は例外であり、他の治療群において投与前値からの変化が０〜１拍／分であるのに対し、１５００ｍｇ群の被験者に４つの低い値が検出された（全て被験者０１９に観察された：投薬０．２５〜１時間後に４０〜４３拍／分、この被験者はチェックイン時に既に４２拍／分を有した）。ほとんどの異常値が呼吸数について観察されたが、若年の健常被験者について、安静時に１５回／分未満の呼吸数は珍しいものではない。
【０１２１】
実施例５  −  第２ａ相臨床試験
次に、独国規制当局からファーストインペイシェント（第２ａ相）試験の承認を得た後、本発明者らは、軽度から中等度の活動性遠位潰瘍性大腸炎患者において組成物Ａ直腸浣腸剤の２週間、探索的無作為化、二重盲検、並行群間、用量範囲探索、プラセボ対照安全性、忍容性、バイオマーカー及び有効性臨床試験を実施した。
【０１２２】
この短期の２週間試験の所見は、以下のとおり要約することができる。この試験の主要目的は達成された。軽度から中等度の活動性遠位潰瘍性大腸炎を有する被験者において２５０ｍｇ、５００ｍｇ及び１０００ｍｇ用量の組成物Ａ直腸浣腸剤の１日１回投与は安全であり、良好に忍容された。これらの結果は、１８７．５から１５００ｍｇまでの組成物Ａ直腸浣腸剤の単回漸増投与が健常ボランティアに安全且つ忍容されて投与され、及び最大耐容量が観察されなかった先行する第１相試験の結果と一致している。
【０１２３】
以下の節は、第２ａ相試験で観察されたとおりの、軽度から中等度の活動性遠位潰瘍性大腸炎患者における組成物Ａ治療の一部の重要な結果を提供する。
【０１２４】
有効性結果
プラセボと比較した組成物Ａ−２５０ｍｇ用量について、エンドポイント（１４日目）において潰瘍性大腸炎の主症状／主徴である修正メイヨースコア（図４）の直腸出血サブスコアのベースラインからの変化に統計学的に有意な（ｐ＜０．０５）低下があった。この試験には治療群間の臨床的に有意味な差を検出する能力はなく、２週間の治療継続期間は極めて短かったため、この結果は特に重要である。潰瘍性大腸炎の主症状／主徴である、修正メイヨースコアの直腸出血サブスコアの統計学的に有意なプラセボ補正された約１ポイントの改善は、組成物Ａ−２５０ｍｇ用量についてのベースライン時の中等度からエンドポイント時の軽度への重症度のシフトに相当する。この結果は、軽度から中等度の活動性遠位潰瘍性大腸炎における組成物Ａの生物学的活性を確認するものである。
【０１２５】
加えて、潰瘍性大腸炎の２つの主症状、それぞれ修正メイヨースコアの直腸出血及び排便回数サブスコアの低下平均において、エンドポイント時にプラセボと比べて組成物Ａ直腸浣腸剤５００ｍｇ及び１０００ｍｇの優位傾向が観察された。しかしながら、標本サイズが小さかったため、これらの結果は統計的有意性を達成しなかったが、結果は組成物Ａの生物学的活性を示唆している。
【０１２６】
同様に、潰瘍性大腸炎症状スコアの治験責任医師の判定による潰瘍性大腸炎症状スコア（直腸出血、下痢、腹痛、及び総合）の低下平均において、プラセボと比べた組成物Ａ直腸浣腸剤（５００ｍｇ）の優位性を示唆する一貫した傾向が観察された（図５）。この場合も、観察された約１ポイントのプラセボ補正した改善が、ベースライン時の中等度からエンドポイント時の軽度への、症状の重症度のシフトに相当する（これらの症状（直腸出血、下痢及び腹痛）に対して５００ｍｇ用量）。これらの結果はまた、この薬物の生物学的活性も更に示唆している。
【０１２７】
バイオマーカー結果
図６に示すとおり、２週間の組成物Ａ  ２５０ｍｇ治療に応答して（エンドポイント時）、血清Ｃタンパク質（「ＣＲＰ」）、血清高感度ＣＲＰ（「ｈｓ−ＣＲＰ」）、赤血球沈降速度（「ＥＳＲ」）、糞便カルプロテクチン（「ＦＣ」）、及び糞便ラクトフェリン（「ＦＬ」）の２９〜６３．６％の顕著で一貫したバイオマーカーの低下が観察され、加えて、２１日にわたるプラセボ群における全体的な１８．８〜１２０％の増加と比較して、２１日目までにＣＲＰ、ｈｓ−ＣＲＰ及びＦＬレベルがそれぞれ７７．６、８０．９及び８２．９％まで更に低下した（２５０ｍｇ：ｐ＜０．０３、１０００ｍｇ：ｐ＜０．０４）。これらの顕著な一貫したバイオマーカーの低下は、潰瘍性大腸炎における腸炎症に対するこの薬物の生物学的活性の客観的エビデンスである。
【０１２８】
潰瘍性大腸炎における腸炎症に対する組成物Ａ直腸浣腸剤の生物学的活性の更なる客観的エビデンスには、組成物Ａ  ２５０ｍｇ治療群における血清ロイコトリエンＢ４（「ＬＴＢ４」）レベルの顕著な低下が含まれた。１４日目のビジットでこのレベルは３１．４％低下し、一方でプラセボ群では２９％上昇していた（２１日目までに、組成物Ａ−２５０ｍｇ治療群のレベルは８５．０％低下していた）。５００ｍｇ及び１０００ｍｇ組成物Ａ治療群ではまた、血清ＬＴＢ４レベルの低下がより小さいことも観察された（それぞれ２８．０％及び２２．２％）。これらの所見は、組成物Ａがプロスタグランジン類及びロイコトリエン類を含めた脂質炎症メディエーターの産生及び放出を低下させることを実証した前出の動物薬理試験の結果と一致している。
【０１２９】
組成物Ａの生物学的活性の更にもう１つの客観的エビデンスが、プラセボ群における２８．６％の増加と比較した、組成物Ａの２５０ｍｇ及び５００ｍｇ治療の投与を受けている患者からの結腸粘膜生検組織におけるＭ３０アポトソーム（アポトーシスのバイオマーカー）の濃度の４２．５％の低下によって実証された（図７）。
【０１３０】
有効性及びバイオマーカーパラメータ測定値から得られた結果における用量反応の欠如は、同様に一貫した用量反応関係を実証しなかった、軽度から中等度の遠位ＵＣに対する承認済みの第一選択治療薬  −  直腸及び経口５−アミノサリチル酸塩並びに生物学的製剤（中等度から重度のＵＣに対するもの）−  で実施した試験で先に得られた結果と一致している。
【０１３１】
本明細書に提供されるデータは、本発明のチラコイド抽出物（組成物Ａ原薬）が潰瘍性大腸炎に対して活性であることを示している。加えて、興味深いことに、腸炎症を検出する高い感度及び特異性を有する２個のバイオマーカー：糞便ラクトフェリン及び糞便カルプロテクチン、及び一般的炎症の２つのバイオマーカーであるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及び高感度Ｃ反応性タンパク質（ｈｓＣＲＰ）も治療後顕著に低下した（図７を参照のこと）。
【０１３２】
安全性結果
軽度から中等度の活動性遠位潰瘍性大腸炎を有する被験者において組成物Ａ直腸浣腸剤の全３用量（２５０ｍｇ、５００ｍｇ及び１０００ｍｇ）の１日１回投与が安全であり、良好に忍容された。総じて、この試験中に治療関連の若しくは重篤な有害事象又は死亡はなく、有害事象に起因する中止はなかったと共に、実験パラメータ、ＥＣＧ及びバイタルサインについて臨床的に関連性のある時間に伴う又は治療に伴う変化はなかった。
【０１３３】
結論
実施した第１相及び第２ａ相の両方の試験におけるこれまでの組成物Ａ直腸浣腸剤の優れた安全性プロファイル、直腸出血（潰瘍性大腸炎の主症状）及び糞便ラクトフェリンレベルの有意な低下、他の確立された炎症バイオマーカー、炎症及びアポトーシスの探索的バイオマーカー（ロイコトリエンＢ４及びＭ３０アポトソーム）のレベルの統計的に有意でないが顕著な低下、及び潰瘍性大腸炎の他の主要な症状の軽減で観察されるプラセボと比べた優位傾向は、全て組成物Ａが潰瘍性大腸炎、より一般的には炎症性腸疾患の治療において活性であることを示唆している。
【０１３４】
実施例５  −  コンプライアンス問題に向けた代替的投与様式
当然ながら、任意の薬物化合物の直腸内投与は、患者がその医薬を長期的に服用しなければならない場合にコンプライアンスの目的上問題となり得る。この投与様式の影響を低減する１つの方法を挙げるとすれば、疾患の急激な再燃時に痛み及び出血などの症状に素早く対処するため原薬を局所的に（即ち直腸内：浣腸剤又は坐薬）投与することであり得る。患者には、コンプライアンス問題が起こりにくい経口投与を用いて再発予防のための維持量が処方され得る。
【０１３５】
本発明はその特定の実施形態に関連して記載されているが、更なる改良形態が可能であり、本願は、概して本発明の原理に従い、且つ本発明が関係する技術分野の公知の又は慣習的な実施の範囲内に入るような、且つ以上に示される、及び以下の添付の特許請求の範囲にあるとおりの本質的な特徴に適用され得るような本開示からの逸脱を含む、本発明の任意の変形形態、使用、又は適合形態を包含するように意図されることは理解されるであろう。
【０１３６】
本明細書で言及される全ての特許、特許出願及び刊行物は、各独立した特許、特許出願、又は刊行物が具体的且つ個別的に参照により本明細書に援用されることが示されたものとするのと同程度に本明細書において参照により援用される。
【０１３７】
参照文献
Ｂｉｓｓｏｎｎｅｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；ＰＣＴ−２３３，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｐｒｏ−  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３５：４４０−４４７．
Ｍａｘｗｅｌｌ  Ｋ．（２０００）；Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  −  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ｇｕｉｄｅ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｂｏｔ．５１：６５８−６６８．
【図１】
2018536701.tif 000013
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４】
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【図５】
2018536701.tif 000021
【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成30年7月3日(2018.7.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の活性チラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含む活性チラコイド抽出物を、任意選択で生理学的に許容可能な賦形剤と混合して含む、ヒト対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための組成物。
【請求項２】
１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
経口である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
直腸内である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
浣腸剤溶液である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
坐薬である、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記有効量の抽出物が対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記有効量の抽出物が対象の体重１Ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抽出物が、１日約２５０ｍｇ、約５００及び１０００ｍｇから選択される投薬量である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
ヒト対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための医薬の製造における、活性チラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含む活性チラコイド抽出物の使用。
【請求項１４】
前記抽出物が、１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記医薬が経口投与用である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１７】
前記医薬が直腸内投与用である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１８】
前記医薬が浣腸剤溶液である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記医薬が坐薬である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項２１】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記抽出物が、対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇを達成する量で存在する、請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２３】
前記抽出物の量が対象の体重１Ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇである、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記医薬が、１日約２５０ｍｇ、約５００及び１０００ｍｇから選択される投薬量で製造される、請求項１３〜２３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２５】
ヒト対象の炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療するための、活性チラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含む活性チラコイド抽出物の使用。
【請求項２６】
前記抽出物が、１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
経口投与用である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２９】
直腸内投与用である、請求項２５に記載の使用。
【請求項３０】
前記抽出物が浣腸剤溶液に含まれる、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記抽出物が坐薬に含まれる、請求項２９に記載の使用。
【請求項３２】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択される、請求項２５に記載の使用。
【請求項３３】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記抽出物が、対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇを達成する量で存在する、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
前記抽出物の量が対象の体重１ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇである、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記抽出物が、１日約２５０ｍｇ、約５００及び１０００ｍｇから選択される投薬量である、請求項２５〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
請求項１に記載の活性チラコイド抽出物を、生理食塩水溶液中の増粘剤及び任意選択で保存剤と混合して含む、炎症性腸疾患の直腸内治療用の浣腸剤製剤。
【請求項３８】
前記抽出物が、１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項３７に記載の製剤。
【請求項３９】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項３８に記載の製剤。
【請求項４０】
前記増粘剤が、キサンタンガム及びＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）から選択される、請求項３７〜３９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項４１】
前記保存剤が、メチルパラベン、プロピルパラベン、エチルパラベン、及びブチルパラベンから選択される、請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項４２】
前記保存剤がプロピレングリコールに溶解され、及びｐＨが約６．５に調整される、請求項４１に記載の製剤。
【請求項４３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の治療を、それを必要としているヒト対象において行う方法であって、有効量の活性チラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含む活性チラコイド抽出物を、特に生理学的に許容可能な担体と混合して前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項４４】
前記抽出物が、１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
経口投与用である、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
直腸内投与用である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記抽出物が浣腸剤溶液に含まれる、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記抽出物が坐薬に含まれる、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎及びクローン病から選択される、請求項４３〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記抽出物が、対象の体重１Ｋｇ当たり約０．００００５〜５００ｍｇを達成する量で存在する、請求項４３〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記抽出物の量が対象の体重１ｋｇ当たり約０．０５〜１０ｍｇである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記抽出物が、１日約２５０ｍｇ、約５００及び１０００ｍｇから選択される投薬量である、請求項４３〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
炎症性腸疾患の治療用の直腸浣腸剤を作製するためのキットであって、
・活性チラコイド抽出物であって、精製された機能性光合成色素をそのチラコイド膜環境に含む活性チラコイド抽出物を乾燥粉末形態において含む容器と、
・直腸浣腸剤溶液を含む容器と、
・任意選択で、どのように前記粉末を前記溶液に懸濁させるかに関する説明書と、
・どのように前記浣腸剤をヒト対象に投与するかに関する説明書と
を含むキット。
【請求項５６】
１０％未満の電子供与体を含む媒体中に安定化されている、請求項５５に記載のキット。
【請求項５７】
前記媒体が１０％未満の水を含む、請求項５６に記載のキット。
【請求項５８】
直腸バルブシリンジと、前記懸濁液の直腸内投与に関する説明書とを更に含む、請求項５５〜５７のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５９】
前記乾燥チラコイド抽出物が粉末の形態である、請求項５５〜５８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６０】
前記チラコイド抽出物粉末が約２５０ｍｇ用量のアリコートの形態である、請求項５９に記載のキット。
【請求項６１】
前記チラコイド抽出物粉末が約５００ｍｇ用量のアリコートの形態である、請求項５９に記載のキット。
【請求項６２】
前記チラコイド抽出物粉末が約１０００ｍｇ用量のアリコートの形態である、請求項５９に記載のキット。
【国際調査報告】
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