(57)【要約】  本発明は、ペプチド、ならびにアミノ酸複合体及びペプチド複合体、アミノ酸複合体及びペプチド複合体を作製するための方法、該方法によって生産される複合体、該ペプチド及び複合体を含む薬学的組成物、対象において免疫応答を引き出す方法及び対象にワクチン接種する方法、対象において免疫応答を引き出す及び対象にワクチン接種するための該ペプチド及び複合体の使用、ならびに対象において免疫応答を引き出す及び対象にワクチン接種するための医薬品の製造における該ペプチド及び複合体の使用に関する。【選択図】図１
2018505152.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチド複合体を作製するための方法であって、前記方法が、
脂質付加（ｌｉｐｉｄｉｄａｔｅｄ）アミノ酸またはペプチドを得ることと、
前記脂質付加アミノ酸またはペプチドを１つ以上のアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチド複合体を得ることと、を含み、前記ペプチド複合体が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む、方法。
【請求項２】
前記アミノ酸包含複合パートナーが、ペプチド含有複合パートナーである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アミノ酸包含複合パートナーが、エピトープを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記方法が、前記アミノ酸複合体の前記アミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチド複合体を得ることを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記方法が、ペプチドエピトープを含むペプチド複合体を得るように、前記アミノ酸複合体の前記アミノ酸または前記ペプチド複合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結することを更に含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記方法が、エピトープを前記アミノ酸複合体の前記アミノ酸または前記ペプチド複合体のアミノ酸に連結することを更に含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記エピトープがペプチドエピトープである、請求項３、５、及び６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記エピトープがリンカー基を介して連結または結合している、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記脂質含有複合体が複合される前記ペプチド複合体の前記アミノ酸が、Ｎ末端アミノ酸残基である、請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記アミノ酸包含複合パートナーの前記アミノ酸またはあるアミノ酸が、炭素−炭素二重結合またはチオールを含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記炭素−炭素二重結合またはチオールを含む前記アミノ酸が、Ｎ末端アミノ酸残基である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記炭素−炭素二重結合またはチオールを含む前記アミノ酸のアミノ基が、アシル化される、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記方法は、前記脂質含有複合パートナーが複合される、前記アミノ酸複合体の前記アミノ酸の、または前記ペプチド複合体の前記アミノ酸残基の前記アミノ基をアシル化することを更に含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記アミノ酸包含複合パートナーの前記アミノ酸またはあるアミノ酸が、前記チオールを含む、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記チオールが、システイン残基の前記チオールである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記システイン残基の前記アミノ基が、Ｃ２−２０脂肪酸でアシル化される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｃ２−２０脂肪酸がアセチルである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ペプチド複合体またはアミノ酸包含複合パートナーが、１つ以上の可溶化基を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記可溶化基が、前記ペプチド鎖内に２個以上の連続親水性アミノ酸残基の配列を含むアミノ酸配列である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ペプチド複合体またはアミノ酸包含複合パートナーが、前記脂質含有複合パートナーが複合される前記アミノ酸残基に隣接してセリン残基を含む、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ペプチドが、前記セリン残基に隣接して２個以上の親水性アミノ酸残基の連続配列を更に含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記アミノ酸包含複合パートナーの１つ以上のアミノ酸の１つ以上の反応性官能基が、無保護である、請求項１〜３、５、７、８、及び１０〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記アミノ酸包含複合パートナーが、ペプチドからなる、請求項１〜３、５、７、８、及び１０〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記アミノ酸包含複合パートナーが、アミノ酸からなる、請求項１、４〜１０、及び１２〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記アミノ酸のカルボキシル基が、カルボキシル保護基で保護される、かつ／または前記アミノ酸の前記アミノ基が、アミノ保護基で保護される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記脂質含有複合パートナーは、各々が少なくとも４つまたは少なくとも６つの鎖連結原子を含む、１つ以上の任意選択で置換される直鎖状または分岐状脂肪族またはヘテロ脂肪族鎖を含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記１つ以上の鎖が、ヘテロ原子含有官能基によって前記炭素−炭素二重結合または前記チオールを含む部分に共有結合している、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記脂質含有複合パートナーが、式（Ａ１）、
【化１】
2018505152.tif 000063
の化合物であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであるが、
但し、
Ｒ３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるとき、Ｒ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｍが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｌ１、及びＬ２のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記脂質含有複合パートナーが、式（Ｂ１）、
【化２】
2018505152.tif 000064
の化合物であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｐが、０〜４の整数であり、
ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３３及びＲ４４が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであるが、
但し、
Ｒ３３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキル、Ｒ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｐが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、Ｌ１、及びＬ２のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記アミノ酸またはペプチド複合体が、式（Ａ）、
【化３】
2018505152.tif 000065
の構造であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
あるいはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であるが、
但し、
Ｒ３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるとき、Ｒ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｍが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記アミノ酸またはペプチド複合体が、式（Ｂ）、
【化４】
2018505152.tif 000066
の構造であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、前記アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｐが、０〜４の整数であり、
ｑが、０〜２の整数であり、
ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
あるいはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｑの各出現例においてＲａ及びＲｂが各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ３３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキル、Ｒ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｐが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒａ、Ｒｂ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキル、またはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、請求項１〜２７及び２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
Ｒ９が独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであるか、
あるいはＲ９が、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）またはＡ２であり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであるが、
但し、
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであることを条件とする、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記アミノ酸またはペプチド複合体が、式（Ｉ）
【化５】
2018505152.tif 000067
の構造であって、式中、ｍ、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１及びＡ１が、請求項３０に定義される通りである、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
前記方法が、式（ＩＩ）
【化６】
2018505152.tif 000068
の脂質含有複合パートナーと、式（ＩＩＩ）
【化７】
2018505152.tif 000069
の構造を含むペプチド含有複合パートナーとを、式（ＩＩ）の前記化合物を式（ＩＩＩ）の前記化合物と複合するのに有効な条件下で、式（ＩＩ）の前記化合物における前記炭素−炭素二重結合の、式（ＩＩＩ）の前記化合物における前記チオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、請求項１〜２８、３０、及び３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記アミノ酸またはペプチド複合体が、式（ＩＡ）、
【化８】
2018505152.tif 000070
の構造であって、式中、ｐ、ｑ、Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒａ、Ｒｂ、Ｌ１及びＡ１が、請求項３１に定義される通りである、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
前記方法が、式（ＩＩＡ）
【化９】
2018505152.tif 000071
の化合物と、式（ＩＩＩＡ）
【化１０】
2018505152.tif 000072
の化合物とを、式（ＩＩＡ）の前記化合物を式（ＩＩＩＡ）の前記化合物と複合するのに有効な条件下で、式（ＩＩＩＡ）の前記化合物における前記炭素−炭素二重結合の、式（ＩＩＡ）の前記化合物における前記チオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、請求項１〜２７、２９、３１、及び３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
ｐが、０〜２の整数である、請求項２９、３１、３２、及び３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
ｐが、０または１である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２が各々独立して、水素である、請求項２９、３１、３２、及び３４〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
Ｒ３３及びＲ４４が各々、水素である、請求項２９、３１、３２、及び３４〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
ｑが、０または１である、請求項３１、３２、及び３４〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
Ｒ５５、Ｒ６６、及びＲ７７が各々、水素である、請求項３１、３２、及び３４〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
ｑの各出現例においてＲａ及びＲｂが各々、水素である、請求項３１、３２、及び３４〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
ｍが、０〜２の整数である、請求項２８、３０、３２、及び３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
ｍが、０または１である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素である、請求項２８、３０、３２、３３、４２、及び４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
Ｒ４及びＲ５が各々、水素である、請求項２８、３０、３２、３３、及び４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
Ｒ６及びＲ７が各々、水素である、請求項３０、３２、３３、及び４２〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
式（Ｉ）の前記化合物が、式（ＩＶ）、
【化１１】
2018505152.tif 000073
の化合物であって、式中、
Ｒ３が、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、
Ｒ９が、水素、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含む、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である、請求項３０、３２、３３、及び４２〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
Ｒ９が、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであるが、
但し、
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであることを条件とする、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
Ｌ１が、Ｃ５−２１アルキルである、請求項２８〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
Ｌ１が、線状  Ｃ１５アルキルである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
Ｌ２が、Ｃ５−２１アルキルである、請求項２８〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
Ｒ３が、水素である、請求項２８、３０、３２、３３、及び４２〜５１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
Ｒ９が、水素、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である、請求項３０〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
Ｒ９が、水素またはアミノ保護基であり、前記方法が、Ｒ９における前記水素またはアミノ保護基をＬ３−Ｃ（Ｏ）で置換するように、前記アミノ酸複合体またはペプチド複合体をアシル化することを更に含む、請求項３０〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
Ｌ３が、メチルまたは線状  Ｃ１５アルキルである、請求項３０〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
Ｌ３が、メチルである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記アミノ保護基が、ＢｏｃまたはＦｍｏｃである、請求項２５〜５６に記載の方法。
【請求項５８】
Ａ１及び／またはＡ２が、アミノ酸またはペプチドである、請求項３０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
Ａ１が、ＯＰ１またはＯＨであり、Ｒ９が、水素、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である、請求項３０〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記方法が、Ａ１及び／またはＲ９を前記アミノ酸またはペプチドで置換するように、アミノ酸またはペプチドを連結することを更に含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ペプチドが、ＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む、請求項５８または６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ペプチドが、
ａ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｂ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基，
ｃ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｄ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｅ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｆ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列、
ｇ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｈ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｉ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｊ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｋ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｌ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列、
ｍ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｎ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｏ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｐ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｑ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｒ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列、
ｓ．または上記の（ａ）〜（ｒ）のうちの２つ以上の任意の組み合わせ、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、またはそれからなる、請求項３及び５〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記脂質含有複合パートナーを前記アミノ酸包含複合パートナーに複合するのに有効な前記条件が、熱開始剤の熱分解または光化学開始剤の光化学分解によって開始される１つ以上のフリーラジカルの生成を含む、請求項１〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記熱開始剤がＡＩＢＮである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記光開始剤がＤＭＰＡである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記フリーラジカル開始剤の光化学分解が、約３６５ｎｍの波長を有する紫外線による照射を含む、請求項６３または６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記反応が、溶媒を含む液体媒体中で行われ、前記溶媒が、ＮＭＰ、ＤＭＳＯ、またはそれらの混合物を含む、請求項１〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記反応が、二量化、テロメル化、または重合を阻害する１つ以上の添加剤の存在下で行われる、請求項１〜６７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記添加剤がＤＴＴまたはｔｅｒｔ−ブチルメルカプタンである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
請求項１〜６９のいずれか１項に記載の方法によって作製される、アミノ酸またはペプチド複合体。
【請求項７１】
式（Ｖ）、
【化１２】
2018505152.tif 000074
の化合物であって、式中、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１が、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含み、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、化合物、
またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項７２】
Ｒ９が独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ９が、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）もしくはＡ２であり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであるが、
但し、
Ａ１及びＡ２のうちの少なくとも１つが、ＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含み、かつ
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであることを条件とする、請求項７２に記載の化合物。
【請求項７３】
Ｌ１が、請求項４９または５０に定義される通りである、請求項７２または７３に記載の化合物。
【請求項７４】
ｍが、請求項４２または４３に定義される通りである、請求項７２〜７４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７５】
ｍが０である、請求項７２〜７５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７６】
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素である、請求項７２〜７６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７７】
Ｒ３が、水素である、請求項７２〜７７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７８】
Ｒ４及びＲ５が各々、水素である、請求項７２〜７８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７９】
Ｒ６及びＲ７が各々、水素である、請求項７２〜７９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８０】
Ｒ８が水素であり、Ｒ９が、水素、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である、請求項７２〜８０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８１】
Ａ１が、ＯＰ１またはＯＨであり、Ｒ９が、水素、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である、請求項７２〜８１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８２】
Ｌ３が、Ｍｅである、請求項７２〜８２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８３】
Ａ１及び／またはＡ２が、アミノ酸またはペプチドである、請求項７２〜８３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８４】
前記ペプチドが、配列番号７６〜１０１のいずれか１つのアミノ酸配列からなる群から選択されるエピトープを含む、請求項７２〜８４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８５】
Ａ１が、セリンであるか、またはＮ末端の最初のアミノ酸残基としてセリンを含むペプチドである、請求項７２〜８１及び８３〜８５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８６】
Ａ１及び／またはＡ２が、前記ペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含む、ペプチドである、請求項７２〜８１及び８３〜８６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８７】
前記ペプチドが、
ａ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｂ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基，
ｃ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｄ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｅ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｆ．配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列、
ｇ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｈ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｉ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｊ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｋ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｌ．配列番号１〜９３のうちのいずれか１つの配列、
ｍ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの８個以上の連続したアミノ酸残基、
ｎ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｏ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１２個以上の連続したアミノ酸残基、
ｐ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの１５個以上の連続したアミノ酸残基、
ｑ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの２０個以上の連続したアミノ酸残基、
ｒ．配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列、
ｓ．または上記の（ａ）〜（ｒ）のうちの２つ以上の任意の組み合わせ、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、またはそれからなる、請求項８３〜８６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８８】
配列番号１〜７５のうちのいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、それからなる、またはそれから本質的になる、単離された、精製された、または組換えペプチド。
【請求項８９】
前記ペプチドが、配列番号１〜７５のうちのいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項８８に記載のペプチド。
【請求項９０】
有効量の請求項７１〜８７のいずれか１項に記載のペプチド複合体または請求項８８もしくは８９に記載のペプチド、あるいはその薬学的に許容される塩または溶媒和物、あるいはそれらの任意の組み合わせと、薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項９１】
有効量の請求項７１〜８７のいずれか１項に記載の２つ以上のペプチド複合体、または請求項８８もしくは８９に記載の２つ以上のペプチド、あるいは請求項７１〜８７のいずれか１項に記載の１つ以上のペプチド複合体と請求項８８もしくは８９に記載の１つ以上のペプチドとの任意の組み合わせを含む、請求項９０に記載の薬学的組成物。
【請求項９２】
対象にワクチン接種するまたは前記対象において免疫応答を引き出す方法であって、前記対象に、有効量の請求項７１〜８７のいずれか１項に記載のペプチド複合体または請求項８８もしくは８９に記載のペプチド、あるいはその薬学的に許容される塩または溶媒和物を投与することを含む、方法。
【請求項９３】
対象にワクチン接種するまたは前記対象において免疫応答を引き出す方法であって、前記対象に、有効量の請求項９０または９１に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【請求項９４】
ペプチド複合体を作製するための方法であって、前記方法が、
脂質含有複合パートナーと、
アミノ酸包含複合パートナーとを、
前記脂質含有複合パートナーを前記アミノ酸包含複合パートナーに複合するのに有効な条件下で、炭素−炭素二重結合のチオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含み、
前記方法が、前記アミノ酸複合体の前記アミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチド複合体を得ることを更に含み、前記ペプチド複合体が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む、方法。
【請求項９５】
ペプチド複合体を作製するための方法であって、前記方法が、
脂質含有複合パートナーと、
１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む、ペプチド包含複合パートナーとを、
前記脂質含有複合パートナーを前記ペプチド包含複合パートナーに複合するのに有効な条件下で、炭素−炭素二重結合のチオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノ酸複合体及びペプチド複合体、アミノ酸複合体及びペプチド複合体を作製するための方法、該方法によって生産される複合体、該ペプチド及び複合体を含む薬学的組成物、対象において免疫応答を引き出す方法及び対象にワクチン接種する方法、対象において免疫応答を引き出す及び対象にワクチン接種するための該ペプチド及び複合体の使用、ならびに対象において免疫応答を引き出す及び対象にワクチン接種するための医薬品の製造における該ペプチド及び複合体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
合成ペプチドワクチンは一般に、タンパク質抗原の免疫原性部分の合成コピーを含む。このワクチン開発へのアプローチは、合成の容易さ、潜在的に有毒な生物学的副生成物の回避、及び簡明な特徴付けを含む、いくつかの利点を有する。
【０００３】
ペプチドワクチンの開発における主要な問題点は、唯一のワクチン構成成分としてのペプチドによって呈示される免疫原性の不足である。自然免疫系の構成要素を活性化するよう設計されたアジュバントをワクチンに含めることが通常は必要である（例えば、フロイントアジュバント）。
【０００４】
ペプチドワクチン設計における代替的な戦略は、目的となるペプチドエピトープが適切なアジュバントに共有結合されている、自己アジュバント性ワクチンを創出することである。かかる自己アジュバント性ワクチンは、抗原を外部アジュバントと単に共製剤化することと比較して、向上した抗原取り込み、提示、及び樹状細胞成熟を有し得る。
【０００５】
いくつかの自己アジュバント性ワクチンが開発されてきたが、ワクチンの調製は複雑であり得る。
【０００６】
新たな自己アジュバント性ワクチン及び自己アジュバント性ワクチンを作製する新たな方法が継続的に必要とされている。特に、ホジキン病（ＨＤ）または鼻咽頭（Ｎａｓｏｐｈａｒａｎｇｅａｌ）癌（ＮＰＣ）等のエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）関連疾患を治療することを目的とする、例えば、ＥＢＶ潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）からの１つ以上のエピトープを含む自己アジュバント性（ｓｅｌｆ−ａｄｊｕｖａｔｉｎｇ）ワクチンを含む、自己アジュバント性ワクチンが必要とされている。
【０００７】
これらの必要性を満たすことにいくらか役立つこと、及び／または一般大衆に有用な選択制を少なくとも提供することが、本発明の目的である。
【０００８】
本発明の他の目的は、単なる例として与えられる次の説明から明らかとなり得る。
【０００９】
本明細書に含まれた文書、法令、材料、デバイス、物品等のいずれの考察も、本発明に対して前後関係を提供することのみを目的とする。それは、これらの事柄のいずれかまたは全てが、優先権主張日の前に存在したものとして、先行技術基準の一部を形成することまたは本発明の関連技術分野の共通一般知識であることを認めるものとして解釈されるものではない。
【発明の概要】
【００１０】
一態様において、本発明は、ペプチド複合体を作製するための方法であって、該方法が、
脂質付加（ｌｉｐｉｄｉｄａｔｅｄ）アミノ酸またはペプチドを得ることと、
該脂質付加アミノ酸またはペプチドを１つ以上のアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチド複合体を得ることと、を含み、該ペプチド複合体が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む、方法を提供する。
【００１１】
一態様において、本発明は、ペプチド複合体を作製するための方法であって、該方法が、
脂質含有複合パートナーと、
アミノ酸包含複合パートナーとを、
該脂質含有複合パートナーを該アミノ酸包含複合パートナーに複合するのに有効な条件下で、炭素−炭素二重結合のチオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含み、
該方法が、該アミノ酸複合体の該アミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチド複合体を得ることを更に含み、該ペプチド複合体が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む、方法を提供する。
【００１２】
別の態様において、本発明は、ペプチド複合体を作製するための方法であって、該方法が、
脂質含有複合パートナーと、
１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む、ペプチド包含複合パートナーとを、
該脂質含有複合パートナーを該ペプチド包含複合パートナーに複合するのに有効な条件下で、炭素−炭素二重結合のチオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、方法を提供する。
【００１３】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載されるアミノ酸複合体またはペプチド複合体を提供する。種々の実施形態において、該アミノ酸複合体またはペプチド複合体は、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。一例において、該アミノ酸複合体またはペプチド複合体は、本発明の方法によって作製されるアミノ酸複合体またはペプチド複合体である。
【００１４】
一実施形態において、本発明は、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むペプチド複合体を提供する。種々の実施形態において、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープは、ＭＨＣＩエピトープである。種々の実施形態において、該ペプチド複合体は、配列番号７６〜１０１のいずれか１つからなる群から選択される１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。種々の実施形態において、該ペプチド複合体は、配列番号１〜７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１２個以上の連続したアミノ酸を含む、またはそれからなるペプチドを含む。種々の実施形態において、該該ペプチド複合体は、配列番号１〜７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１５個以上の連続したアミノ酸を含む、またはそれからなるか、あるいは配列番号１〜７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの２０個以上の連続したアミノ酸を含む、またはそれからなる、ペプチドを含む。
【００１５】
別の態様において、本発明は、配列番号１〜７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１２個以上の連続したアミノ酸を含む、またはそれからなる、単離された、精製された、または組換えペプチドを提供する。種々の実施形態において、該単離された、精製された、または組換えペプチドは、配列番号１〜７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの１５個以上の連続したアミノ酸を含むか、またはそれからなるか、あるいは配列番号１〜７５のいずれか１つのアミノ酸配列からの２０個以上の連続したアミノ酸を含むか、それからなる。
【００１６】
一実施形態において、該ペプチドは、配列番号１〜７５のうちのいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる。
【００１７】
本明細書に記載される実施形態のうちのいずれも、本明細書の態様のうちのいずれかに関する。
【００１８】
種々の実施形態において、該脂質付加アミノ酸またはペプチドは、次のうちの１つ以上を含む：Ｐａｍ１Ｃｙｓ、Ｐａｍ２Ｃｙｓ、及びＰａｍ３Ｃｙｓ。例えば、該脂質付加アミノ酸またはペプチドは、次のうちの１つ以上を含む：Ｐａｍ１ＣＳＫ４、Ｐａｍ２ＣＳＫ４、及びＰａｍ３ＣＳＫ４。種々の実施形態において、該脂質付加アミノ酸またはペプチドは、アセチル化またはアミド化されており、例えば、該脂質付加アミノ酸またはペプチドは、アセチル化Ｐａｍ１Ｃｙｓ、アセチル化Ｐａｍ２Ｃｙｓ、もしくはアセチル化Ｐａｍ３Ｃｙｓ、またはアミド化Ｐａｍ１Ｃｙｓ、アミド化Ｐａｍ２Ｃｙｓ、もしくはアミド化Ｐａｍ３Ｃｙｓを含む。
【００１９】
一実施形態において、該アミノ酸包含複合（ｃｏｎｊｕａｔｉｏｎ）パートナーは、ペプチド含有複合パートナーであり、該脂質含有複合パートナーは、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに連結される。
【００２０】
いくつかの実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、該アミノ酸含有複合パートナーの該アミノ酸もしくはあるアミノ酸または該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに複合される。
【００２１】
ある特定の実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、該アミノ酸含有複合パートナーの該アミノ酸またはあるアミノ酸に複合される。
【００２２】
したがって、別の態様において、本発明は、ペプチド複合体を作製するための方法であって、該方法が、
脂質含有複合パートナーと、
ペプチド含有複合パートナー（該ペプチド包含パートナーは、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む）とを、
該脂質含有複合パートナーを該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに複合するのに有効な条件下で、炭素−炭素二重結合のチオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、方法を提供する。
【００２３】
一実施形態において、該複合体は、リポペプチドであり、このため、該方法は、リポペプチドを作製するためのものである。
【００２４】
一実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、炭素−炭素二重結合を含み、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、チオールを含む。
【００２５】
一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、２つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、２つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。一実施形態において、該ペプチド複合体は、２つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。一実施形態において、該エピトープは、ペプチドエピトープである。一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、ペプチドからなる。一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、ペプチドエピトープを含むペプチドからなる。一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、ペプチドからなる。一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、ペプチドエピトープを含むペプチドからなる。
【００２６】
いくつかの実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、該複合パートナーの該アミノ酸またはあるアミノ酸に結合したエピトープを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに結合したエピトープを含む。いくつかの実施形態において、該エピトープは、リンカー基を介してペプチドに結合している。
【００２７】
いくつかの実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、リンカー基を介して該複合パートナーの該アミノ酸またはあるアミノ酸に結合したペプチドエピトープを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、リンカー基を介してペプチドに結合したペプチドエピトープを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナー及び／または該ペプチド含有複合パートナーは、抗原ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、抗原ペプチドを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、該方法は、該アミノ酸複合体の該アミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチド複合体を得ることを更に含み、該ペプチド複合体は、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。
【００３０】
いくつかの実施形態において、ペプチドを連結することは、１つ以上のアミノ酸及び／または１つ以上のペプチドを個々に連結することを含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、該方法は、リンカー基またはその１つ以上のアミノ酸を含むペプチド複合体を得るように、該アミノ酸複合体の該アミノ酸または該ペプチド複合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結することを更に含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、該方法は、脂質含有複合パートナーがリンカー基を介して複合されるアミノ酸に結合した１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む、ペプチド複合体を得るように、リンカー基またはその１つ以上のアミノ酸を含む該ペプチド複合体のアミノ酸を、アミノ酸またはペプチドに連結することを更に含む。
【００３３】
いくつかの実施形態において、該脂質含有複合体が複合される該ペプチド複合体の該アミノ酸は、Ｎ末端アミノ酸残基である。
【００３４】
いくつかの実施形態において、該方法は、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むペプチド複合体を得るように、該アミノ酸複合体の該アミノ酸または該ペプチド複合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結することを更に含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、該方法は、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを該アミノ酸複合体の該アミノ酸または該ペプチド複合体のアミノ酸に連結することを更に含む。いくつかの実施形態において、該方法は、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを該アミノ酸複合体の該アミノ酸または該ペプチド複合体のアミノ酸に連結することを更に含む。いくつかの実施形態において、該エピトープは、リンカー基を介して連結または結合している。
【００３６】
いくつかの実施形態において、該方法は、エピトープを該ペプチド複合体の該ペプチドに連結することを更に含む。いくつかの実施形態において、該方法は、ペプチドエピトープを該ペプチド複合体の該ペプチドに連結することを更に含む。いくつかの実施形態において、該エピトープは、リンカー基を介してペプチドに結合している。種々の例において、該エピトープは、ＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープである。
【００３７】
一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、アミノ酸からなる。一実施形態において、該アミノ酸のＣ末端カルボキシル基は、カルボキシル保護基で保護され、かつ／または該アミノ酸のＮα−アミノ基は、アミノ保護基で保護される。
【００３８】
いくつかの実施形態において、該ペプチドのＣ末端カルボキシル基は、カルボキシル保護基で保護され、かつ／または該ペプチドのＮα−アミノ基は、アミノ保護基で保護される。
【００３９】
一実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、各々が少なくとも４つの鎖連結原子を含む、１つ以上の任意選択で置換される直鎖状または分岐状脂肪族またはヘテロ脂肪族鎖を含む。一実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、各々が少なくとも６つの鎖連結原子を含む、１つ以上の任意選択で置換される直鎖状または分岐状脂肪族またはヘテロ脂肪族鎖を含む。具体的に企図される一実施形態において、該１つ以上の鎖は、脂肪族である。具体的に企図される一実施形態において、該１つ以上の鎖は、飽和である。
【００４０】
いくつかの実施形態において、該１つ以上の鎖は、任意選択で置換されている。いくつかの実施形態において、該１つ以上の鎖は、任意選択で、１つ以上のアリール基で置換されている。
【００４１】
いくつかの実施形態において、該１つ以上の鎖は、少なくとも４、６、８、１０、１２、または１４個の鎖連結原子を含む。いくつかの実施形態において、該１つ以上の鎖は、４〜２２、６〜２２、８〜２２、１０〜２２、１２〜２２、または１４〜２２個の鎖連結原子を含む。
【００４２】
一実施形態において、該１つ以上の鎖は、ヘテロ原子含有官能基によって該炭素−炭素二重結合または該チオールを含む部分に共有結合している。ヘテロ原子含有官能基の例としては、エーテル、アミン、スルフィド、スルホキシド、スルホン、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、及び尿素基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
例示的な実施形態において、該１つ以上の鎖は、エステル官能基によってこの部分に共有結合している。
【００４４】
一実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、１つ以上の飽和または不飽和脂肪酸エステルを含む。いくつかの実施形態において、該脂肪酸は、飽和である。一実施形態において、１つ以上の脂肪酸エステルは、炭素−炭素二重結合またはチオールを含む部分に結合している。一実施形態において、該エステルは、脂肪酸のカルボキシル基とこの部分のアルコールとのエステルである。
【００４５】
一実施形態において、該脂肪酸は、Ｃ４−２２脂肪酸である。一実施形態において、該脂肪酸は、Ｃ６−２２脂肪酸である。別の実施形態において、該脂肪酸は、Ｃ１０−２２脂肪酸である。なおも別の実施形態において、該脂肪酸は、Ｃ１２−２２脂肪酸である。例示的な一実施形態において、該脂肪酸は、Ｃ１２、Ｃ１４、Ｃ１６、Ｃ１８、またはＣ２０脂肪酸である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、該脂肪酸は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、α−リノレン酸、及びアラキドン酸である。一実施形態において、該脂肪酸は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、またはステアリン酸である。具体的に企図される実施形態において、該脂肪酸は、パルミチン酸である。
【００４７】
例示的な一実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、１つまたは２つの脂肪酸エステルを含む。具体的に企図される実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、１つの脂肪酸エステルを含む。
【００４８】
ある特定の実施形態において、該脂肪酸エステルは、炭素−炭素二重結合またはチオールを含むアルコールのエステルである。一実施形態において、該アルコールは、一価、二価、または三価Ｃ２−６脂肪族アルコールである。別の実施形態において、該アルコールは、一価または二価Ｃ２−４脂肪族アルコールである。例示的な一実施形態において、該アルコールは、一価Ｃ２脂肪族または一価もしくは二価Ｃ３脂肪族アルコールである。具体的に企図される実施形態において、該アルコールは、一価Ｃ２アルコールである。
【００４９】
ある特定の実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、炭素−炭素二重結合を含む。
【００５０】
例示的な一実施形態において、該アルコールは、炭素−炭素二重結合を含む。
【００５１】
具体的に企図される実施形態において、該アルコールは、ビニルアルコールである。
【００５２】
具体的に企図される実施形態において、該ペプチドは、合成ペプチドである。
【００５３】
一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナー及び／またはペプチド複合体は、合成ペプチドを含む。いくつかの実施形態において、該合成ペプチドは、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を含む方法によって調製されるペプチドである。
【００５４】
いくつかの実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーの該アミノ酸またはあるアミノ酸は、炭素−炭素二重結合またはチオールを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドのアミノ酸残基は、炭素−炭素二重結合またはチオールを含む。
【００５５】
いくつかの実施形態において、炭素−炭素二重結合またはチオールを含む該アミノ酸残基は、末端アミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、該末端アミノ酸残基は、Ｎ末端残基である。
【００５６】
いくつかの実施形態において、炭素−炭素二重結合またはチオールを含む該アミノ酸の該Ｎα−アミノ基は、アシル化される。
【００５７】
ある特定の実施形態において、該方法は、該脂質含有複合パートナーが複合される、該アミノ酸複合体の該アミノ酸の、または該ペプチド複合体の該アミノ酸残基の該Ｎα−アミノ基をアシル化することを更に含む。ある特定の実施形態において、該方法は、Ｎα−アミノ基をＣ２−２０脂肪酸でアシル化することを更に含む。
【００５８】
ある特定の実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーの該アミノ酸またはあるアミノ酸は、チオールを含む。ある特定の実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドのアミノ酸残基は、チオールを含む。ある特定の実施形態において、該チオールは、システイン残基のチオールである。
【００５９】
ある特定の実施形態において、該システイン残基は、末端残基である。ある特定の実施形態において、該システイン残基は、Ｎ末端残基である。
【００６０】
いくつかの実施形態において、該システイン残基の該アミノ基は、アシル化される。
【００６１】
一実施形態において、該アミノ基は、Ｃ２−２０脂肪酸でアシル化される。
【００６２】
例示的な一実施形態において、該Ｃ２−２０脂肪酸は、アセチルまたはパルミトイルである。別の例示的な実施形態において、該Ｃ２−２０脂肪酸は、アセチルである。
【００６３】
いくつかの実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナー及び／またはペプチド複合体は、８〜２２０、８〜２００、８〜１７５、８〜１５０、８〜１２５、８〜１００、８〜９０、８〜８０、８〜７０、８〜６０、８〜５０、８〜４０、８〜３０、８〜２５、８〜２０、または８〜１５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、８〜２２０、８〜２００、８〜１７５、８〜１５０、８〜１２５、８〜１００、８〜９０、８〜８０、８〜７０、８〜６０、８〜５０、８〜４０、８〜３０、８〜２５、８〜２０、または８〜１５個のアミノ酸を含む。
【００６４】
例示的な一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナー及び／またはペプチド複合体は、８〜６０個のアミノ酸を含むペプチドを含む。例示的な一実施形態において、該ペプチドは、８〜６０個のアミノ酸を含む。
【００６５】
他の実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナー及び／またはペプチド複合体は、５〜２２０、８〜２２０、５〜１７５、８〜１７５、８〜１５０、１０〜１５０、１５〜１２５、２０〜１００、２０〜８０、２０〜６０、２５〜１００、２５〜８０、２５〜６０、３０〜８０、４０〜６０、または５０〜６０個のアミノ酸を含む。他の実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、５〜２２０、８〜２２０、５〜１７５、８〜１７５、８〜１５０、１０〜１５０、１５〜１２５、２０〜１００、２０〜８０、２０〜６０、２５〜１００、２５〜８０、２５〜６０、３０〜８０、４０〜６０、または５０〜６０個のアミノ酸を含む。
【００６６】
他の実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナー及び／またはペプチド複合体は、５〜１５０、５〜１２５、５〜１００、５〜７５、５〜６０、５〜５０、５〜４０、５〜３０、５〜２５、５〜２０、８〜１５０、８〜１２５、８〜１００、８〜７５、８〜６０、８〜５０、８〜４０、８〜３０、８〜２５、または８〜２０個のアミノ酸を含む。他の実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、５〜１５０、５〜１２５、５〜１００、５〜７５、５〜６０、５〜５０、５〜４０、５〜３０、５〜２５、５〜２０、８〜１５０、８〜１２５、８〜１００、８〜７５、８〜６０、８〜５０、８〜４０、８〜３０、８〜２５、または８〜２０個のアミノ酸を含む。
【００６７】
一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナー及び／またはペプチド複合体は、１つ以上の可溶化基を含む。一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、１つ以上の可溶化基を含む。
【００６８】
ある特定の実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列である。ある特定の実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖内に２個以上の連続親水性アミノ酸残基の配列を含むアミノ酸配列である。一実施形態において、該親水性アミノ酸残基は、カチオン性アミノ酸残基である。一実施形態において、該カチオン性アミノ酸残基は、アルギニンまたはリジン残基である。具体的に企図される一実施形態において、該カチオン性アミノ酸残基は、リジン残基である。一実施形態において、該配列は、２〜２０、２〜１５、２〜１０、３〜７、または３〜５個のアミノ酸を含む。一実施形態において、該可溶化基は、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−、またはヘプタ−リジン配列である。具体的に企図される一実施形態において、該可溶化基は、テトラリジン配列である。
【００６９】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはアミノ酸包含複合パートナーは、該脂質含有複合パートナーが複合される該アミノ酸残基に隣接してセリン残基を含む。具体的に企図される実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、該脂質含有複合パートナーが複合される該アミノ酸残基に隣接してセリン残基を含む。例示的な実施形態において、該脂質含有複合パートナーが複合される該アミノ酸残基は、Ｎ末端である具体的に企図される実施形態において、該ペプチドは、該セリン残基に隣接して２個以上の親水性アミノ酸残基の連続配列を更に含む。
【００７０】
ある特定の実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはアミノ酸包含複合パートナーは、セリン残基に隣接して２個以上の親水性アミノ酸残基の連続配列を含む。
【００７１】
ある特定の実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはアミノ酸包含複合パートナーは、天然型（ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｉｎｇ）アミノ酸のみを含む。ある特定の実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、天然型（ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｉｎｇ）アミノ酸のみを含む。他の実施形態において、該ペプチドにおける該アミノ酸残基の７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または９９％以上は、天然型（ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｉｎｇ）アミノ酸である。
【００７２】
他の実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはアミノ酸包含複合パートナーにおける該アミノ酸残基の７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または９９％以上は、天然型（ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｉｎｇ）アミノ酸である。
【００７３】
例示的な実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはアミノ酸包含複合パートナーは、ＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むペプチドを含む。例示的な実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。
【００７４】
種々の実施形態において、該ペプチドは、
【数１−１】
2018505152.tif 000003
【数１−２】
2018505152.tif 000004
【数１−３】
2018505152.tif 000005
【数１−４】
2018505152.tif 000006
【数１−５】
2018505152.tif 000007
【数１−６】
2018505152.tif 000008
【数１−７】
2018505152.tif 000009
【数１−８】
2018505152.tif 000010
【数１−９】
2018505152.tif 000011
【数１−１０】
2018505152.tif 000012
【００７５】
例示的な一実施形態において、該ペプチドは、潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）、例えば、完全長ＥＢＶ  ＬＭＰ２（アミノ酸１〜４９７）に由来する、１つ以上のエピトープを含む。具体的に企図される一実施形態において、該ペプチドは、配列番号４、５、９、１０、１４、１５、１９、２０、２４、２５、２９、３０、３４、３５、３９、４０、４４、４５、４９、５０、５４、５５、５９、６０、６４、６５、６９、７０、７４、または７５のいずれか１つからの８個以上の連続したアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【００７６】
具体的に企図される別の実施形態において、該ペプチドは、配列番号４、５、９、１０、１４、１５、１９、２０、２４、２５、２９、３０、３４、３５、３９、４０、４４、４５、４９、５０、５４、５５、５９、６０、６４、６５、６９、７０、７４、または７５のいずれか１つからの１２個以上の連続したアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【００７７】
具体的に企図される別の実施形態において、該ペプチドは、配列番号４、５、９、１０、１４、１５、１９、２０、２４、２５、２９、３０、３４、３５、３９、４０、４４、４５、４９、５０、５４、５５、５９、６０、６４、６５、６９、７０、７４、または７５のいずれか１つからの１５個以上、１８個以上、２０個以上、または２５個以上の連続したアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【００７８】
一実施形態において、該ペプチドは、配列番号４、５、９、１０、１４、１５、１９、２０、２４、２５、２９、３０、３４、３５、３９、４０、４４、４５、４９、５０、５４、５５、５９、６０、６４、６５、６９、７０、７４、または７５のうちのいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【００７９】
具体的に企図される別の実施形態において、該ペプチドは、配列番号１〜７５のいずれか１つからの１５個以上、１８個以上、２０個以上、または２５個以上の連続したアミノ酸残基からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【００８０】
一実施形態において、該ペプチドは、配列番号１〜７５のうちのいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【００８１】
一実施形態において、該ペプチドは、配列番号７６〜１０１のうちのいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一例において、該ペプチドは、配列番号７６〜９３のうちのいずれか１つからなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００８２】
一実施形態において、該ペプチドは、配列番号７６〜１０１のうちのいずれか２つ以上からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一例において、該ペプチドは、配列番号７６〜９３のうちのいずれか２つ以上からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００８３】
具体的に企図される一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該アミノ酸の反応性官能基は、無保護である。
【００８４】
ある特定の実施形態において、該ペプチド複合体の１つ以上のアミノ酸の１つ以上の反応性官能基が、無保護である。
【００８５】
ある特定の実施形態において、該アミノ酸複合体の該アミノ酸の１つ以上の反応性官能基が、無保護である。
【００８６】
ある特定の実施形態において、アミノ酸包含複合パートナーの１つ以上のアミノ酸の１つ以上の反応性官能基が、無保護である。
【００８７】
ある特定の実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、ペプチドを含み、該ペプチドの該アミノ酸の側鎖の反応性官能基は、反応させられるチオール以外のいずれのチオールも除いて、無保護である。
【００８８】
具体的に企図される一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドの該アミノ酸の反応性官能基は、無保護である。具体的に企図される一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドの該アミノ酸の反応性官能基は、反応させられるチオール以外のいずれのチオールも除いて、無保護である。
【００８９】
一態様において、本発明は、式（Ａ）、
【化１】
2018505152.tif 000013
の構造であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
あるいはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるとき、Ｒ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｍが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、ペプチド複合体を作製する方法に関する。
【００９０】
一実施形態において、該方法は、式（Ａ）、
【化２】
2018505152.tif 000014
の構造であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
またはＲ９が、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）もしくはＡ２であり、
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであり、
Ｒ３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるとき、Ｒ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｍが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、ペプチド複合体を作製することを含む。
【００９１】
一実施形態において、該方法は、式（Ｂ）、
【化３】
2018505152.tif 000015
の構造であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｐが、０〜４の整数であり、
ｑが、０〜２の整数であり、
ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
あるいはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｑの各出現例においてＲａ及びＲｂが各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ３３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキル、Ｒ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｐが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒａ、Ｒｂ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキル、またはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、アミノ酸またはペプチド複合体を作製することを含む。
【００９２】
一実施形態において、該方法は、式（Ｂ）、
【化４】
2018505152.tif 000016
の構造であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｐが、０〜４の整数であり、
ｑが、０〜２の整数であり、
ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
またはＲ９が、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）もしくはＡ２であり、
ｑの各出現例においてＲａ及びＲｂが各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであり、
Ｒ３３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキル、Ｒ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｐが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒａ、Ｒｂ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキル、またはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含む、ペプチド複合体を作製することを含む。
【００９３】
一実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、式（Ａ１）、
【化５】
2018505152.tif 000017
の化合物であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであるが、
但し、
Ｒ３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるとき、Ｒ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｍが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｌ１、及びＬ２のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００９４】
別の実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、式（Ｂ１）、
【化６】
2018505152.tif 000018
の化合物であって、式中、
Ｚが、−Ｏ−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−、及び−ＮＲＣ（Ｏ）ＮＲ−からなる群から選択され、
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、該アルキルまたはシクロアルキルが、任意選択で置換されており、
ｐが、０〜４の整数であり、
ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３３及びＲ４４が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであるが、
但し、
Ｒ３３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキル、Ｒ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｐが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、Ｌ１、及びＬ２のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００９５】
一実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに定義される式（ＩＩ）の化合物である。
【００９６】
一実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに定義される式（ＩＩＡ）の化合物である。
【００９７】
一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに定義される式（ＩＩＩ）の化合物である。
【００９８】
一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに定義される式（ＩＩＩ）の化合物である。
【００９９】
一実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに定義される式（ＩＩＩＡ）の化合物である。
【０１００】
一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに定義される式（ＩＩＩＡ）の化合物である。
【０１０１】
一実施形態において、該方法は、式（Ｉ）
【化７】
2018505152.tif 000019
の構造であって、式中、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
あるいはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるとき、Ｒ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｍが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
該方法が、式（ＩＩ）
【化８】
2018505152.tif 000020
（式中、ｍ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＬ１は、式（Ｉ）の化合物において定義される通りである）の脂質含有複合パートナーと、
の脂質含有複合パートナーと、式（ＩＩＩ）
【化９】
2018505152.tif 000021
（式中、ｎ、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＡ１は、式（Ｉ）の化合物において定義される通りである）の構造を含むペプチド含有複合パートナーとを、
式（ＩＩ）の該化合物を式（ＩＩＩ）の該化合物と複合するのに有効な条件下で、式（ＩＩ）の該化合物における該炭素−炭素二重結合の、式（ＩＩＩ）の該化合物における該チオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、アミノ酸またはペプチド複合体を作製することを含む。
【０１０２】
一実施形態において、該方法は、式（Ｉ）
【化１０】
2018505152.tif 000022
の構造であって、式中、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
またはＲ９が、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）もしくはＡ２であり、
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであり、
Ｒ３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるとき、Ｒ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｍが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
該方法が、式（ＩＩ）
【化１１】
2018505152.tif 000023
（式中、ｍ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＬ１は、式（Ｉ）の化合物において定義される通りである）の脂質含有複合パートナーと、
の脂質含有複合パートナーと、式（ＩＩＩ）
【化１２】
2018505152.tif 000024
（式中、ｎ、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＡ１は、式（Ｉ）の化合物において定義される通りである）の構造を含むペプチド含有複合パートナーとを、
式（ＩＩ）の該化合物を式（ＩＩＩ）の該化合物と複合するのに有効な条件下で、式（ＩＩ）の該化合物における該炭素−炭素二重結合の、式（ＩＩＩ）の該化合物における該チオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、ペプチド複合体を作製することを含む。
【０１０３】
一実施形態において、該方法は、式（ＩＡ）、
【化１３】
2018505152.tif 000025
の構造であって、式中、
ｐが、０〜４の整数であり、
ｑが、０〜２の整数であり、
ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
あるいはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｑの各出現例においてＲａ及びＲｂが各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ３３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキル、Ｒ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｐが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒａ、Ｒｂ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキル、またはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
該方法が、式（ＩＩＡ）
【化１４】
2018505152.tif 000026
（式中、ｐ、Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、及びＬ１は、式（ＩＡ）の化合物において定義される通りである）の化合物と、
式（ＩＩＩＡ）
【化１５】
2018505152.tif 000027
（式中、ｑ、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒａ、Ｒｂ、及びＡ１は、式（ＩＡ）の化合物において定義される通りである）の化合物とを、
式（ＩＩＡ）の該化合物を式（ＩＩＩＡ）の該化合物と複合するのに有効な条件下で、式（ＩＩＡ）の該化合物における該炭素−炭素二重結合の、式（ＩＩＩＡ）の該化合物における該チオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、アミノ酸またはペプチド複合体を作製することを含む。
【０１０４】
一実施形態において、該方法は、式（ＩＡ）、
【化１６】
2018505152.tif 000028
の構造であって、式中、
ｐが、０〜４の整数であり、
ｑが、０〜２の整数であり、
ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ１１が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであり、
Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ３３が、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであるか、
またはＲ９が、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）もしくはＡ２であり、
ｑの各出現例においてＲａ及びＲｂが各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであり、
Ｒ３３がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキル、Ｒ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはなく、かつ
ｐが２〜４の整数であるとき、１つよりも多くのＲ１１がＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣ１−６アルキルであることはないことを条件とし、
Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒａ、Ｒｂ、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキル、またはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を含み、
該方法が、式（ＩＩＡ）
【化１７】
2018505152.tif 000029
（式中、ｐ、Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、及びＬ１は、式（ＩＡ）の化合物において定義される通りである）の化合物と、
式（ＩＩＩＡ）
【化１８】
2018505152.tif 000030
（式中、ｑ、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒａ、Ｒｂ、及びＡ１は、式（ＩＡ）の化合物において定義される通りである）の化合物とを、
式（ＩＩＡ）の該化合物を式（ＩＩＩＡ）の該化合物と複合するのに有効な条件下で、式（ＩＩＡ）の該化合物における該炭素−炭素二重結合の、式（ＩＩＩＡ）の該化合物における該チオールでのヒドロチオール化によって、反応させることを含む、ペプチド複合体を作製することを含む。
【０１０５】
一実施形態において、Ｌ１及びＬ２のうちの少なくとも１つは、Ｃ５−２２アルキルである。
【０１０６】
一実施形態において、ｐは、０〜２の整数である。別の実施形態において、ｐは、０または１である。
【０１０７】
いくつかの実施形態において、ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２は各々独立して、水素であるか、またはＲ１１は、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２である。一実施形態において、Ｌ１−Ｃ（Ｏ）−Ｏに隣接した炭素上のＲ１１は、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２である。
【０１０８】
具体的に企図される一実施形態において、ｐの各出現例においてＲ１１及びＲ２２は各々独立して、水素である。
【０１０９】
一実施形態において、Ｒ３３は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２である。
【０１１０】
一実施形態において、Ｒ３３及びＲ４４は各々、水素である。
【０１１１】
具体的に企図される一実施形態において、ｑは、０または１である。具体的に企図される一実施形態において、ｑは、０である。
【０１１２】
具体的に企図される一実施形態において、Ｒ５５、Ｒ６６、及びＲ７７は各々、水素である。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、ｑの各出現例においてＲａ及びＲｂは各々、水素である。
【０１１４】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｐは、１であり、Ｒ１１は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、Ｒ２２は、水素であり、Ｒ３３は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、Ｒ４４は、水素であり、Ｌ２は、Ｃ１１−２１アルキルである。
【０１１５】
一実施形態において、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒａ、Ｒｂ及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒａ、Ｒｂ及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０１１６】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｐは、１であり、Ｒ１１は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、Ｒ２２は、水素であり、Ｒ３３は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、Ｒ４４は、水素であり、Ｌ２は、Ｃ１１−２１アルキルであり、Ｒ５５、Ｒ６６、Ｒ７７、Ｒａ、Ｒｂ及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。
【０１１７】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ５−２１アルキルである。別の実施形態において、Ｌ１は、Ｃ９−２１アルキルである。なおも別の実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルである。例示的な一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１５、Ｃ１７、またはＣ１９アルキルである。具体的に企図される一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１５アルキルである。
【０１１８】
一実施形態において、Ｌ１は、９〜２１個の炭素原子の直鎖を含む。具体的に企図される一実施形態において、Ｌ１は、線状Ｃ１５アルキルである。
【０１１９】
一実施形態において、ｍは、０〜２の整数である。別の実施形態において、ｍは、０または１である。具体的に企図される一実施形態において、ｍは、０である。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２は各々独立して、水素であるか、またはＲ１は、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２である。一実施形態において、Ｌ１−Ｃ（Ｏ）−Ｏに隣接した炭素上のＲ１は、Ｌ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２である。
【０１２１】
具体的に企図される一実施形態において、ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２は各々独立して、水素である。
【０１２２】
一実施形態において、Ｒ３は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２である。具体的に企図される一実施形態において、Ｒ３は、水素である。
【０１２３】
一実施形態において、Ｌ２は、Ｃ５−２１アルキルである。別の実施形態において、Ｌ２は、Ｃ９−２１アルキルである。なおも別の実施形態において、Ｌ２は、Ｃ１１−２１アルキルである。例示的な一実施形態において、Ｌ２は、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１５、Ｃ１７、またはＣ１９アルキルである。別の例示的な実施形態において、Ｌ２は、Ｃ１５アルキルである。
【０１２４】
具体的に企図される一実施形態において、Ｒ４及びＲ５は各々、水素である。
【０１２５】
具体的に企図される一実施形態において、ｎは、１である。
【０１２６】
具体的に企図される一実施形態において、Ｒ６及びＲ７は各々、水素である。
【０１２７】
例示的な実施形態において、Ｒ８は、水素である。
【０１２８】
一実施形態において、Ｒ８及びＲ９は各々、水素であるか、またはＲ９は、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）またはＡ２である。例示的な一実施形態において、Ｒ８は、水素であり、Ｒ９は、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０１２９】
いくつかの実施形態において、Ｌ３は、Ｃ１−２１アルキルである。具体的に企図される一実施形態において、Ｌ３は、メチルまたは線状Ｃ１５アルキルである。例示的な実施形態において、Ｌ３は、メチルである。
【０１３０】
当業者であれば、式（ＩＩＩ）及び（ＩＩＩＡ）の構造が該ペプチド含有複合パートナーのペプチドを含んでもよいことを理解するであろう。本明細書に記載されるように、ペプチドは任意選択で、置換、修飾、または本明細書に記載される種々の他の部分に結合して、該ペプチド含有複合パートナーを得てもよい。
【０１３１】
一実施形態において、Ａ１は、ＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むペプチドである。一実施形態においてＡ２は、ＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むペプチドである。
【０１３２】
一実施形態において、Ａ１は、エピトープで置換されたペプチドである。一実施形態において、Ａ２は、エピトープで置換されたペプチドである。
【０１３３】
一実施形態において、該エピトープは、リンカー基を介してペプチドに結合している。
【０１３４】
一実施形態において、該エピトープは、ペプチドエピトープである。
【０１３５】
いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は各々独立して、約８〜２２０、８〜２０、８〜１７５、８〜１５０、８〜１２５、８〜１００、８〜９０、８〜８０、８〜７０、８〜６０、８〜５０、８〜４０、８〜３０、８〜２５、８〜２０、または８〜１５個のアミノ酸を含むペプチドである。例示的な一実施形態において、Ａ１及びＡ２は各々独立して、約８〜６０個のアミノ酸を含むペプチドである。
【０１３６】
他の実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は各々独立して、約５〜１５０、５〜１２５、５〜１００、５〜７５、５〜６０、５〜５０、５〜４０、５〜３０、５〜２５、５〜２０、８〜１５０、８〜１２５、８〜１００、８〜７５、８〜６０、８〜５０、８〜４０、８〜３０、８〜２５、または８〜２０個のアミノ酸を含むペプチドである。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は各々独立して、ペプチドであり、該ペプチドは、８〜６０個のアミノ酸を含む。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は各々独立して、ペプチドエピトープを含むまたはペプチドエピトープで置換されたペプチドであり、該ペプチドエピトープは、８〜６０個のアミノ酸を含む。
【０１３９】
いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は各々独立して、ペプチドエピトープを含むまたはペプチドエピトープで置換されたペプチドであり、該ペプチドは、配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つの配列、例えば配列番号１〜７５のうちのいずれか１つの配列からの８個以上、１０個以上、１２個以上、１５個以上、２０個以上、または２５個以上の連続したアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる。
【０１４０】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、Ｌ２は、Ｃ１１−２１アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素である。
【０１４１】
一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。一実施形態において、Ｌ３は、メチルまたは線状Ｃ１５アルキルである。
【０１４２】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、Ｌ２は、Ｃ１１−２１アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、Ｌ２は、Ｃ１１−２１アルキルであり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９が、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０１４３】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素である。
【０１４４】
一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｌ３は、メチルである。
【０１４５】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０１４６】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｌ３は、メチルである。
【０１４７】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素である。
【０１４８】
一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｌ３は、メチルである。
【０１４９】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０１５０】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｌ３は、メチルである。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、Ａ１は、Ｎ末端の最初のアミノ酸残基としてセリンを含むペプチドである。いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、可溶化基を含むペプチドである。いくつかの実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態において、Ａ１は、ペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含む、ペプチドである。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、Ａ１は、Ｎ末端の最初のアミノ酸残基としてセリンを、かつ該セリンに隣接してペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含む、ペプチドである。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖内に２個以上の連続親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む。
【０１５４】
一実施形態において、該親水性アミノ酸残基は、カチオン性アミノ酸残基である。一実施形態において、該カチオン性アミノ酸残基は、アルギニンまたはリジン残基である。具体的に企図される一実施形態において、該カチオン性アミノ酸残基は、リジン残基である。一実施形態において、該配列は、２〜２０、２〜１５、２〜１０、３〜７、または３〜５個のアミノ酸を含む。一実施形態において、該可溶化基は、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−、またはヘプタ−リジン配列である。具体的に企図される一実施形態において、該可溶化基は、テトラリジン配列である。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、Ｒ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。いくつかの実施形態において、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、Ｒ９は、水素またはアミノ保護基であり、該方法は、Ｒ９における該水素またはアミノ保護基をＬ３−Ｃ（Ｏ）で置換するように、該アミノ酸複合体またはペプチド複合体をアシル化することを更に含む。いくつかの実施形態において、Ｒ９におけるアミノ保護基をＬ３−Ｃ（Ｏ）で置換するように、該アミノ酸複合体またはペプチド複合体をアシル化することは、Ｒ９におけるアミノ保護基を除去して、Ｒ９において水素を得ることを含む。
【０１５７】
いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、アミノ酸またはペプチドである。いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、ペプチドである。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、Ａ１は、ＯＨまたはＯＰ１であり、かつ／あるいはＲ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。いくつかの実施形態において、Ａ１は、ＯＰ１またはＯＨであり、かつ／あるいはＲ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。いくつかの実施形態において、Ａ１は、ＯＰ１またはＯＨであり、Ｒ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、Ａ１は、ＯＰ１またはＯＨであり、かつ／あるいはＲ９は、水素、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）であり、該方法は、Ａ１及び／またはＲ９を該アミノ酸またはペプチドで置換するように、アミノ酸またはペプチドを連結することを含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、Ａ１は、ＯＰ１またはＯＨであり、Ｒ９は、水素であり、アミノ保護基またはＬ３−Ｃ（Ｏ）であり、該方法は、Ａ１及び／またはＲ９を該アミノ酸またはペプチドで置換するように、アミノ酸またはペプチドを連結することを更に含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、ペプチドを連結することは、１つ以上のアミノ酸及び／または１つ以上のペプチドを個々に連結することを含む。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、アミノ酸またはペプチドの連結は、ペプチドエピトープを含むペプチド複合体をもたらす。いくつかの実施形態において、アミノ酸またはペプチドの該連結は、リンカー基またはその１つ以上のアミノ酸を含むペプチド複合体をもたらす。いくつかの実施形態において、アミノ酸またはペプチドの連結は、該脂質含有複合パートナーがリンカー基を介して複合されるアミノ酸に結合したペプチドエピトープを含む、ペプチド複合体をもたらす。
【０１６３】
いくつかの実施形態において、該アミノ保護基は、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ（カルボキシベンジル）、Ｎｏｓｙｌ（ｏ−またはｐ−ニトロフェニルスルホニル）、Ｂｐｏｃ（２−（４−ビフェニル）イソプロポキシカルボニル）及びＤｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソヘキシリデン）エチル）である。いくつかの実施形態において、該アミノ保護基は、ＢｏｃまたはＦｍｏｃである。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、該カルボキシル保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルまたベンジルである。一実施形態において、式（Ｉ）の該化合物は、式（ＩＶ）、
【化１９】
2018505152.tif 000031
の化合物であって、式中、
Ｒ３が、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、
Ｒ９が、水素、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、式中、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含む、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【０１６５】
一実施形態において、式（Ｉ）の該化合物は、式（ＩＶ）、
【化２０】
2018505152.tif 000032
の化合物であって、式中、
Ｒ３が、水素またはＬ２−Ｃ（Ｏ）−ＯＣＨ２であり、
Ｒ９が、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
Ｌ１及びＬ２が各々独立して、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであることを条件とする、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【０１６６】
一実施形態において、式（ＩＶ）の化合物におけるＬ１、Ａ１、Ａ２、Ｌ２、及びＬ３は各々独立して、式（Ｉ）の化合物に関する実施形態のうちのいずれかに定義される通りである。
【０１６７】
具体的に企図される一実施形態において、Ｒ３は、水素である。
【０１６８】
具体的に企図される別の実施形態において、Ｒ９は、アセチルである。
【０１６９】
具体的に企図される別の実施形態において、Ｒ３は、水素であり、Ｒ９は、アセチルである。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、該方法は、式（ＩＶ）の化合物を作製するためのものであり、Ｌ１は、Ｃ１５線状アルキルであり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ９は、Ｆｍｏｃであり、Ａ１、はＯＨであり、該方法は、パルミチン酸ビニルとＦｍｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＨとを反応させることを含む。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、該アミノ保護基は、Ｆｍｏｃではない。いくつかの実施形態において、該アミノ保護基は、Ｂｏｃである。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナーは、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＨではない。
【０１７３】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、３個以上、４個以上、または５個以上の連続したアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、式（Ｉ）の該化合物は、３個以上、４個以上、または５個以上の連続したアミノ酸を含む。
【０１７４】
一実施形態において、該脂質含有複合パートナーを該アミノ酸包含複合パートナーに複合するのに有効な条件は、１つ以上のフリーラジカルの生成を含む。一実施形態において、該脂質含有複合パートナーを該ペプチド含有複合パートナーに複合するのに有効な条件は、１つ以上のフリーラジカルの生成を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、１つ以上のフリーラジカルの生成は、熱的に及び／または光化学的に開始される。ある特定の実施形態において、１つ以上のフリーラジカルの生成は、フリーラジカル開始剤の熱分解及び／または光化学分解によって開始される。例示的な実施形態において、１つ以上のフリーラジカルの生成は、熱開始剤の熱分解または光化学開始剤の光化学分解によって開始される。
【０１７６】
いくつかの実施形態において、フリーラジカル開始剤の熱分解は、反応混合物を好適な温度で加熱することを含む。いくつかの実施形態において、該反応混合物は、約４０℃〜約２００℃、約５０℃〜約１８０℃、約６０℃〜約１５０℃、約６５℃〜約１２０℃、約７０℃〜約１１５℃、約７５℃〜約１１０℃、または約８０℃〜約１００℃の温度で加熱される。他の実施形態において、該反応混合物は、少なくとも約４０℃、少なくとも約５０℃、少なくとも約６０℃、または少なくとも約６５℃の温度で加熱される。具体的に企図される一実施形態において、該反応混合物は、約９０℃の温度で加熱される。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、フリーラジカル開始剤の光化学分解は、紫外線による照射を含む。具体的に企図される実施形態において、該紫外線は、約３６５ｎｍの波長を有する。例示的な実施形態において、フリーラジカル開始剤の光化学分解は、およそ周囲温度で行われる。
【０１７８】
具体的に企図される一実施形態において、該熱開始剤は、２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）である。具体的に企図される一実施形態において、該光開始剤は、２，２−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）である。
【０１７９】
ある特定の実施形態において、該反応は、液体媒体中で行われる。一実施形態において、該液体媒体は、溶媒を含む。一実施形態において、該溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、１，２−ジクロロエタン、及びそれらの混合物からなる群から選択される。具体的に企図される一実施形態において、該溶媒は、ＮＭＰ、ＤＭＳＯ、またはそれらの混合物を含む。
【０１８０】
具体的に企図される一実施形態において、該溶媒は、ＤＭＳＯを含む。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、該反応は、二量化、テロメル化、または重合を阻害する１つ以上の添加剤の存在下で行われる。いくつかの例示的な実施形態において、該添加剤は、還元型グルタチオン（ＧＳＨ）、２，２’−（エチレンジオキシ）ジエタンチオール（ＤＯＤＴ）、１，４−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、及びタンパク質からなる群から選択される。具体的に企図される実施形態において、添加剤は、ＤＴＴである。いくつかの実施形態において、該添加剤は、ＤＴＴまたはｔｅｒｔ−ブチルメルカプタンである。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、該１つ以上の添加剤は、ＴＦＡ、ｔｅｒｔ−ブチルメルカプタン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。ある特定の実施形態において、該１つ以上の添加剤は、ＴＦＡ及びｔｅｒｔ−ブチルメルカプタンの組み合わせである。いくつかの実施形態において、該反応は、約５分〜約４８時間、５分から約２４時間、約５分〜約１２時間、約５分〜約６時間、約５分〜約３時間、５分〜２時間、または約５分〜約１時間の時間にわたって行われる。例示的な実施形態において、該反応は、約５分〜約１時間の時間にわたって行われる。いくつかの実施形態において、該反応は、該複合パートナーのうちの一方が、少なくとも約７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％消費されるまで行われる。
【０１８３】
ある特定の実施形態において、該反応は、実質的に無酸素条件下で行われる。
【０１８４】
いくつかの実施形態において、該方法は、
該脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナーを反応させて、アミノ酸またはペプチド複合体を得ることと、
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によってペプチドのアミノ酸配列を合成することと、
ペプチドエピトープを含むペプチド複合体、リンカー基もしくはその１つ以上のアミノ酸を含むペプチド複合体、または該脂質含有複合パートナーがリンカー基を介して複合されるアミノ酸に結合したペプチドエピトープを含むペプチド複合体を得るように、該アミノ酸複合体の該アミノ酸または該ペプチド複合体のアミノ酸をＳＰＰＳによって固相結合ペプチドに連結することと、を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、該方法は、該アミノ酸複合体の該アミノ酸の、または該ペプチド複合体のうちのいずれか１つの該脂質含有複合パートナーが複合されるアミノ酸のＮα−アミノ基をアシル化することを更に含む。
【０１８６】
いくつかの実施形態において、該方法は、該ペプチド複合体を固相担体から切断することを含む。
【０１８７】
いくつかの実施形態において、該方法は、
該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドのアミノ酸配列を固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によって合成することと、
本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに従って、該脂質含有複合パートナー及びペプチド含有複合パートナーを反応させることと、を含む。
【０１８８】
例示的な実施形態において、該方法は、
該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドのアミノ酸配列をＳＰＰＳによって合成することと、
ペプチドを固相担体から切断することと、
本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに従って、該脂質含有複合パートナー及びペプチド含有複合パートナーを反応させることと、を含む。
【０１８９】
一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、該脂質含有複合パートナーとの反応の前に精製されていない。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、１つ以上の保護基は、ペプチドを固相担体から切断する際に除去される。ある特定の実施形態において、ペプチド内に存在する全ての保護基が除去される。
【０１９１】
一実施形態において、該ＳＰＰＳは、Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳである。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、反応される炭素−炭素二重結合またはチオールを保持する、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチド中の該アミノ酸残基は、Ｎ末端アミノ酸残基であり、該方法は、ペプチドを固相から切断する前に該Ｎ末端アミノ基をアシル化することを含む。例示的な実施形態において、該アミノ酸残基は、Ｎ末端残基である。具体的に企図される実施形態において、該Ｎ末端残基は、システイン残基である。
【０１９３】
一実施形態において、該方法は、該ペプチド複合体を反応媒体から分離することと、任意選択で、該ペプチド複合体を精製することとを更に含む。
【０１９４】
別の態様において、本発明は、式（Ｖ）、
【化２１】
2018505152.tif 000033
の化合物であって、式中、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ９が、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２であり、
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１が、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、アミノ酸もしくはペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨもしくはＯＰ１であり、Ｐ１が、カルボキシル保護基であり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２、もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含み、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【０１９５】
別の態様において、本発明は、式（Ｖ）、
【化２２】
2018505152.tif 000034
の化合物であって、式中、
ｍが、０〜４の整数であり、
ｎが、１または２であり、
ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８、及びＲ９が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、もしくはＣ３−６シクロアルキルであるか、またはＲ９が、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）もしくはＡ２であり；
ｎの各出現例においてＲ６及びＲ７が各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ｌ１が、Ｃ５−２１アルキルまたはＣ４−２０ヘテロアルキルであり、
Ｌ３が、Ｃ１−６アルキルまたはＣ３−６シクロアルキルであり、
Ａ１及びＡ２が各々独立して、ペプチドであるか、またはＡ１が、ＯＨであり、Ａ１もしくはＡ２が、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むか、またはＡ１、Ａ２もしくはＡ１及びＡ２の両方が、配列番号１〜１０１からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含むが、
但し、
Ｒ９がＡ２でないとき、Ａ１がペプチドであることを条件とし、かつ、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｌ１、及びＬ３のいずれかに存在する任意のアルキル、シクロアルキルまたはヘテロアルキルが、任意選択で置換されている、
化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【０１９６】
一実施形態において、ｍ、ｎ、Ｒ６、Ｒ７、Ａ１及びＡ２は各々独立して、式（Ｉ）に関する実施形態のうちのいずれかに定義される通りである。
【０１９７】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ５−２１アルキルである。一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ５−２１アルキルである。別の実施形態において、Ｌ１は、Ｃ９−２１アルキルである。なおも別の実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルである。例示的な一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１、Ｃ１３、Ｃ１５、Ｃ１７、またはＣ１９アルキルである。具体的に企図される一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１５アルキルである。
【０１９８】
一実施形態において、Ｌ１は、９〜２１個の炭素原子の直鎖を含む。具体的に企図される一実施形態において、Ｌ１は、線状Ｃ１５アルキルである。
【０１９９】
一実施形態において、ｍは、０〜２の整数である。別の実施形態において、ｍは、０または１である。具体的に企図される一実施形態において、ｍは、０である。
【０２００】
具体的に企図される一実施形態において、ｍの各出現例においてＲ１及びＲ２は各々独立して、水素である。
【０２０１】
具体的に企図される一実施形態において、Ｒ３は、水素である。
【０２０２】
具体的に企図される一実施形態において、Ｒ４及びＲ５は各々、水素である。
【０２０３】
具体的に企図される一実施形態において、ｎは、１である。
【０２０４】
具体的に企図される一実施形態において、Ｒ６及びＲ７は各々、水素である。
【０２０５】
例示的な実施形態において、Ｒ８は、水素である。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、Ｒ８は、水素であり、Ｒ９は、水素、アミノ保護基、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、Ｒ８及びＲ９は各々、水素であるか、またはＲ９は、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）もしくはＡ２である。例示的な一実施形態において、Ｒ８は、水素であり、Ｒ９は、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）である。具体的に企図される一実施形態において、Ｌ３は、メチルである。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、Ａ１は、ＯＰ１またはＯＨであり、Ｒ９は、水素、アミノ保護基、またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、アミノ酸またはペプチドである。いくつかの実施形態において、該ペプチドは、エピトープを含む。
【０２０９】
いくつかの実施形態において、Ａ１は、セリン、またはＮ末端の最初のアミノ酸残基としてセリンを含むペプチドである。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、Ａ１及び／またはＡ２は、ペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含むペプチドである。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、Ａ１は、Ｎ末端の最初のアミノ酸残基としてセリンを、かつ該セリンに隣接してペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含むアミノ酸配列を含む可溶化基を含む、ペプチドである。
【０２１２】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素である。
【０２１３】
一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。一実施形態において、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｌ３は、メチルである。
【０２１４】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素、Ｌ３−Ｃ（Ｏ）、またはＡ２である。一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）である。
【０２１５】
一実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１１−２１アルキルであり、ｍは、０であり、Ｒ３は、水素であり、Ｒ４及びＲ５は各々、水素であり、ｎは、１であり、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、水素またはＬ３−Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｌ３は、メチルである。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、Ｌ１は、Ｃ１５線状アルキルであり、ｍは、０であり、ｎは、１であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８は各々、水素であり、Ｒ９は、Ｆｍｏｃであり、Ａ１は、式（Ｖ）の化合物中のＯＨである。
【０２１７】
いくつかの実施形態において、Ｒ９の該アミノ保護基は、Ｆｍｏｃでない。いくつかの実施形態において、Ｒ９の該アミノ保護基は、Ｂｏｃである。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、式（Ｖ）の該化合物は、３個以上、４個以上、または５個以上の連続したアミノ酸を含む。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、該アミノ及び／またはカルボキシル保護基は、式（Ｉ）の化合物に関する実施形態のうちのいずれかに定義されるようなものである。
【０２２０】
当業者であれば、式（Ｖ）の化合物は、ペプチド複合体であり、本明細書に記載される該複合方法の該ペプチド複合体に関するある特定の実施形態は、式（Ｖ）の化合物にも適用されることを理解するであろう。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、式（Ｖ）の該化合物は、自己アジュバント性ペプチドである。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、該化合物は、リンカーまたはその１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチドは、リンカーまたはその１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチドは、Ｌ１が結合するアミノ酸にリンカーを介して結合したペプチドエピトープを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド、２つ以上のエピトープを含む。いくつかの実施形態において、該リンカーは、約２〜２０、２〜１８、２〜１６、２〜１４、２〜１２、２〜１０、または２〜８個のアミノ酸の長さのアミノ酸配列である。
【０２２３】
別の態様において、本発明は、有効量の本発明のペプチド複合体、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。
【０２２４】
一実施形態において、該薬学的組成物は、免疫原性組成物である。
【０２２５】
一実施形態において、該組成物は、外因性アジュバントを含まない。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、該組成物は、ワクチンである。
【０２２７】
一実施形態において、該薬学的組成物は、有効量の２つ以上の本発明のペプチド複合体を含み、例えば、薬学的組成物は、有効量の３つ以上の本発明のペプチド複合体を含む。一例において、該薬学的組成物は、有効量の２つ以上の本発明のペプチド複合体を含み、該２つ以上のペプチド複合体は、ＬＭＰ２の免疫原性領域の実質的に全てを含む。
【０２２８】
別の態様において、本発明は、有効量の本発明のペプチド、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を提供する。
【０２２９】
一実施形態において、該薬学的組成物は、有効量の２つ以上の本発明のペプチドを含み、例えば、該薬学的組成物は、有効量の３つ以上の本発明のペプチドを含む。
【０２３０】
一実施形態において、該薬学的組成物は、有効量の１つ以上の本発明のペプチド複合体ならびに１つ以上の本発明のペプチド、またはそれらの任意の組み合わせを含む。例えば、該薬学的組成物は、有効量の２つ以上の本発明のペプチド複合体及び１つ以上の本発明のペプチド、または有効量の１つ以上の本発明のペプチド複合体及び２つ以上の本発明のペプチドを含む。
【０２３１】
別の態様において、本発明は、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出す方法を提供し、該方法は、対象に、有効量の本発明のペプチド複合体またはペプチドを投与することを含む。
【０２３２】
別の態様において、本発明は、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための本発明のペプチド複合体またはペプチドの使用を提供する。
【０２３３】
別の態様において、本発明は、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための医薬品の製造における本発明のペプチド複合体またはペプチドの使用を提供する。
【０２３４】
別の態様において、本発明は、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出す方法を提供し、該方法は、対象に、有効量の本発明の薬学的組成物を投与することを含む。
【０２３５】
別の態様において、本発明は、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための本発明の薬学的組成物の使用を提供する。
【０２３６】
別の態様において、本発明は、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための医薬品の製造における１つ以上の本発明のペプチドまたは１つ以上の本発明のペプチド複合体の使用を提供する。
【０２３７】
別の態様において、本発明は、対象において免疫応答を引き出す方法を提供し、該方法は、対象に、有効量の本発明のペプチド複合体もしくはペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む。
【０２３８】
別の態様において、本発明は、対象において免疫応答を引き出すための本発明のペプチド複合体、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用を提供する。
【０２３９】
別の態様において、本発明は、対象において免疫応答を引き出すための医薬品の製造における本発明のペプチド複合体、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用を提供する。
【０２４０】
別の態様において、本発明は、対象にワクチン接種する方法を提供し、該方法は、対象に、有効量の本発明のペプチド複合体もしくはペプチド、またはそれらの薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む。
【０２４１】
別の態様において、本発明は、対象にワクチン接種するための本発明のペプチド複合体、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用を提供する。
【０２４２】
別の態様において、本発明は、対象にワクチン接種するための医薬品の製造における本発明のペプチド複合体、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用を提供する。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、該方法は、対象への、１つ以上の本発明のペプチド及び／または１つ以上の本発明のペプチド複合体、例えば１つ以上のペプチド複合体と組み合わせた１つ以上のペプチドの投与を含む。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、１つ以上の本発明のペプチド及び／または１つ以上の本発明のペプチド複合体、例えば１つ以上のペプチド複合体と組み合わせた１つ以上のペプチドは、ワクチン接種するか、もしくは対象において免疫応答を引き出すために使用されるか、またはワクチン接種するか、もしくは対象において免疫応答を引き出すための医薬品の製造において使用される。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、２つ以上のペプチド、２つ以上のペプチド複合体、または１つ以上のペプチド及び１つ以上のペプチド複合体が使用または投与される。いくつかの実施形態、２つ以上のペプチド、２つ以上のペプチド複合体、または１つ以上のペプチド及び１つ以上のペプチド複合体が、同時に、順次、または別個に、使用または投与される。
【０２４６】
本明細書に記載される化合物中に、不斉中心が存在し得る。該不斉中心は、キラル炭素原子における三次元空間内の置換基の構成により、（Ｒ）または（Ｓ）として指定され得る。該化合物の全ての立体化学的異性体型は本発明の範囲内であり、これには、ジアステレオマー型、エナンチオマー型、及びエピマー型、ならびにｄ−異性体及びｌ−異性体、ならびにそれらの混合物（エナンチオマー的に豊富化され、ジアステレオマー的に豊富化された立体化学的異性体の混合物を含む）が含まれる。
【０２４７】
個々のエナンチオマーは、市販のエナンチオピュアな開始材料から合成的に、またはエナンチオマー混合物を調製して該混合物を個々のエナンチオマーに溶解することによって調製することができる。溶解方法は、エナンチオマー混合物のジアステレオマーの混合物への変換、ならびに例えば、再結晶化またはクロマトグラフィー、及び当該技術分野で既知の任意の他の適切な方法を用いたジアステレオマーの分離を含む。既定の立体化学を有する開始材料は、市販されているか、または作成され得、必要に応じて、当該技術分野で周知の技術を用いて溶解される。
【０２４８】
本明細書に記載される化合物はまた、配座異性体または幾何異性体として存在してもよく、これには、シス、トランス、シン、アンチ、エントゲーゲン（Ｅ）、及びツザメン（Ｚ）異性体が含まれる。全てのかかる異性体及びそれらの任意の混合物は、本発明の範囲内である。
【０２４９】
記載される化合物の任意の互変異性異性体またはその混合物もまた本発明の範囲内である。当業者には理解されるように、多様な官能基及び他の構造が、互変異性を呈し得る。例としては、ケト／エノール、イミン／エナミン、及びチオケトン／エンチオールの互変異性が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５０】
本明細書に記載される化合物はまた、同位体置換体及び同位体異性体としても存在し得、化合物中の１つ以上の原子が、異なる同位体によって置き換えられている。好適な同位体としては、例えば、１Ｈ、２Ｈ（Ｄ）、３Ｈ（Ｔ）、１２Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１６Ｏ、及び１８Ｏが挙げられる。かかる同位体を本明細書に記載される化合物に組み込むための手順は、当業者には明らかであろう。本明細書に記載される化合物の同位体置換体及び同位体異性体も、本発明の範囲内である。
【０２５１】
本明細書に記載される化合物の水和物を含む、薬学的に許容される塩及び溶媒和物もまた、本発明の範囲内である。かかる塩としては、酸付加塩、塩基付加塩、及び塩基性窒素含有基の四級塩が挙げられる。
【０２５２】
酸付加塩は、遊離塩基型の化合物を無機酸または有機酸と反応させることによって調製することができる。無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、及びリン酸が挙げられるが、これらに限定されない。有機酸の例としては、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イセチオン酸、スルファニル酸、アジピン酸、酪酸、及びピバル酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５３】
塩基付加塩は、遊離酸型の化合物を無機塩基または有機塩基と反応させることによって調製することができる。無機塩基付加塩の例としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、及び他の生理的に許容される金属塩、例えば、アルミニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、または亜鉛塩が挙げられる。有機塩基付加塩の例としては、アミン塩、例えば、トリメチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、及びエチレンジアミンの塩が挙げられる。
【０２５４】
該化合物中の塩基性窒素含有基の四級塩は、例えば、化合物を、メチル、エチル、プロピル、及びブチルの塩化物、臭化物、及びヨウ化物等のハロゲン化アルキル、ジメチル、ジエチル、ジブチル、及びジアミルの硫酸塩等の硫酸ジアルキル等と反応させることによって調製され得る。
【０２５５】
式中に使用される一般的な化学用語は、それらの通常の意味を有する。
【０２５６】
「脂肪族」という用語は、飽和及び不飽和である、非芳香族、直鎖状、分岐状、非環式、及び環式の炭化水素を含むことが意図される。当業者であれば、脂肪族基には、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、及びシクロアルケニル基が含まれることを理解するであろう。いくつかの実施形態において、該脂肪族基は、飽和である。
【０２５７】
「ヘテロ脂肪族」という用語は、脂肪族基を含むことが意図され、１つ以上の鎖炭素原子は、ヘテロ原子によって置き換えられている。いくつかの実施形態において、該ヘテロ脂肪族は、飽和である。
【０２５８】
「アルキル」という用語は、飽和または不飽和である、直鎖及び分岐鎖の炭化水素基を含むことが意図される。飽和である炭化水素基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル等が挙げられる。不飽和であるアルキル基は、１つ以上の炭素−炭素二重結合または三重結合を有する。
【０２５９】
不飽和であるアルキル基の例としては、ビニル、プロプ−２−エニル、クロチル、イソペント−２−エニル、２−ブタジエニル、ペンタ−２，４−ジエニル、ペンタ−１，４−ジエニル、エチニル、プロプ−３−イニル、ブト−３−イニル等が挙げられる。いくつかの実施形態において、該アルキルは、飽和である。
【０２６０】
「ヘテロアルキル」という用語は、１つ以上の鎖炭素原子がヘテロ原子によって置き換えられているアルキル基を含むことが意図される。いくつかの実施形態において、該ヘテロアルキルは、飽和である。
【０２６１】
「シクロアルキル」という用語は、非芳香族アルキル基を含むことが意図される。シクロアルキル基の例としては、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキシ−１−エニル、シクロヘキシ−３−エニル、シクロヘプチルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、該シクロアルキルは、飽和である。
【０２６２】
「ヘテロ原子」という用語は、酸素、窒素、硫黄、またはリンを含むことが意図される。いくつかの実施形態において、該ヘテロ原子は、酸素、窒素、及び硫黄からなる群から選択される。
【０２６３】
「アリール」という用語は、芳香族ラジカルを含むことが意図される。例としては、フェニル、トリル、ナフチル、インダニル等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、アリール基は、芳香環系内に４〜８または６〜８個の炭素原子を含む。
【０２６４】
本明細書で使用される場合、「置換された」という用語は、示された基内の１つ以上の水素原子が、１つ以上の独立して選択された好適な置換基によって置き換えられることを意味することが意図されるが、但し、該置換基が結合する各原子の通常の原子価が超過されないこと、及び該置換が安定化合物をもたらすことを条件とする。
【０２６５】
本明細書に記載される化合物中の脂肪族基、ヘテロ脂肪族基、アルキル基、ヘテロアルキル基、及びシクロアルキル基のための任意選択の置換基の例としては、ハロ、ＣＮ、ＮＯ２、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＲ１、ＮＲ１Ｒ２、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ１、Ｃ（Ｏ）ＮＲ１Ｒ１、ＳＯ２Ｒ１、ＯＲ１、ＳＲ１、Ｓ（Ｏ）Ｒ１、Ｃ（Ｏ）Ｒ１、及びＣ１−６脂肪族が挙げられるが、これらに限定されず、Ｒ１及びＲ２は各々独立して、Ｃ１−６アルキルである。
【０２６６】
本明細書で使用される「カルボキシル保護基」という用語は、容易に除去して、カルボキシル基のＯＨ基を提供し、合成手順の間の所望されない反応に対してカルボキシル基を保護することが可能な基を意味する。かかる保護基は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅら編のＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９）及びＦｅｒｎａｎｄｏ  Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ（Ａｌｂｅｒｔ  Ｉｓｉｄｒｏ−Ｌｌｏｂｅｔ及びＭｅｒｃｅｄｅｓ  Ａｌｖａｒｅｚと共に）による「Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ−Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ」Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００９（１０９）２４５５−２５０４に記載されている。例としては、アルキル及びシリル基、例えば、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル、メトキシメチル、２，２，２−トリクロロエチル、ベンジル、ジフェニルメチル、トリメチルシリル、及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２６７】
本明細書で使用される「アミン保護基」という用語は、容易に除去して、アミン基のＮＨ２基を提供し、合成手順の間の所望されない反応に対してアミン基を保護することが可能な基を意味する。かかる保護基は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅら編のＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９）及びＦｅｒｎａｎｄｏ  Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ（Ａｌｂｅｒｔ  Ｉｓｉｄｒｏ−Ｌｌｏｂｅｔ及びＭｅｒｃｅｄｅｓ  Ａｌｖａｒｅｚと共に）による「Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ−Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ」Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００９（１０９）２４５５−２５０４に記載されている。例としては、アシル及びアシルオキシ基、例えばアセチル、クロロアセチル、トリクロロアセチル、ｏ−ニトロフェニルアセチル、ｏ−ニトロフェノキシ−アセチル、トリフルオロアセチル、アセトアセチル、４−クロロブチリル（ｃｈｌｏｒｏｂｕｔｙｒｙｌ）、イソブチリル、ピコリノイル、アミノカプロイル、ベンゾイル、メトキシ−カルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、２，２，２−トリフルオロエトキシカルボニル、２−トリメチルシリルエトキシ−カルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２，４−ジクロロ−ベンジルオキシカルボニル等が挙げられるが、これらに限定されない。更なる例としては、Ｃｂｚ（カルボキシベンジル）、Ｎｏｓｙｌ（ｏ−またはｐ−ニトロフェニルスルホニル）、Ｂｐｏｃ（２−（４−ビフェニル）イソプロポキシカルボニル）、及びＤｄｅ（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソヘキシリデン）エチル）が挙げられる。
【０２６８】
本明細書で使用される場合、「及び／または」という用語は、「及び」もしくは「または」、またはその両方を意味する。
【０２６９】
名詞に続く「（複数可）」という用語は、単数形及び複数形、またはその両方を企図する。
【０２７０】
本明細書中に使用される「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「から少なくとも部分的になる」ことを意味する。「含む」という用語を含む本明細書中の各記述を解釈するとき、該用語に先行するもの以外の特徴も存在し得る。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」等の関連用語は、同様に解釈されるものとする。「含有する」もまた、同様に解釈されるものとする。
【０２７１】
本発明はまた、本出願の明細書中で言及されるかまたは示唆される部分、要素及び特徴について、個別または集合的に、該部分、要素、または特徴のうちの２つ以上の任意または全ての組み合わせで存すると広く言うことができ、本発明が関する当該技術分野において既知の同等物を有する特定の整数が本明細書に示される場合、かかる既知の同等物は、個別に記載されているかのように本明細書に組み込まれているものと見なされる。
【０２７２】
本明細書に開示される数の範囲（例えば、１〜１０）への言及には、その範囲内の全ての有理数（例えば、１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９、及び１０）、及びまた、その範囲内の有理数の任意の範囲（例えば、２〜８、１．５〜５．５、及び３．１〜４．７）への言及も組み込まれ、したがって、本明細書に明確に開示される全ての範囲の全ての部分範囲が、それにより明確に開示されることが意図される。これらは、具体的に意図されることの単なる例であり、列挙された最低値と最高値との間の数値の全ての考えられる組み合わせが、同様に、本出願において明確に述べられていると見なされるものとする。
【０２７３】
本発明は、上記に広く定義されるものの、当業者であれば、本発明がこれらに限定されるものではなく、本発明が、以下の記述が例証する実施形態も含むことを理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【０２７４】
本発明は、添付の図面を参照して説明される。
【図１】本明細書において実施例４に記載されるＬＭＰ２  Ｓ１のＲＰ−ＨＰＬＣのトレースを示す。
【図２】本明細書において実施例４に記載されるＬＭＰ２  Ｓ２のＲＰ−ＨＰＬＣのトレースを示す。
【図３】本明細書において実施例５に記載されるＰａｍ１−Ｃ（Ａｃ）ＳＫ４−ＬＭＰ２  Ｓ４のＲＰ−ＨＰＬＣのトレースを示す。
【発明を実施するための形態】
【０２７５】
本発明は、アミノ酸複合体及びペプチド複合体、ならびにペプチド複合体を作製する方法、及び免疫療法治療、特にＥＢＶに関連する状態の免疫療法治療においてペプチド及びペプチド複合体を使用する方法に関する。複合体を作製する特定の方法は、脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナーを、該脂質含有複合パートナーをアミノ酸包含複合パートナーに複合するのに有効な条件下で、チオール−エン反応によって反応させることを含む。いくつかの実施形態において、該方法は、脂質含有複合パートナー及びペプチド含有複合パートナーを、該脂質含有複合パートナーを該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに複合するのに有効な条件下で、チオール−エン反応によって反応させることを含む。
【０２７６】
チオール−エン反応は、非芳香族炭素−炭素二重結合（すなわち、炭素−炭素二重結合のヒドロチオール化）にわたるチオールの付加を伴う。反応は、フリーラジカル機序を介して進行する。反応において、開始、重合または連結、及び終結の３つの別個の段階がある。ラジカル発生により、求電子性チイルラジカルが生じ、これはエン基全体に増殖し、炭素中心ラジカルを形成する。付加チオール分子からの連鎖移動は、次いで、炭素上のラジカルの反応を停止させ、最終生成物を生み出す。
【０２７７】
本発明の方法において、一方の複合パートナーはチオールを含み、他方は炭素炭素二重結合を含む。
【０２７８】
１つ以上のフリーラジカルは、当該技術分野で既知の任意の方法によって本発明の方法を用いて生成され得る。フリーラジカルは、熱的に及び／または光化学的に生成され得る。１つ以上のフリーラジカル開始剤を使用して、フリーラジカルの生成を開始してもよい。好適なフリーラジカル開始剤には、熱開始剤及び光開始剤が含まれる。
【０２７９】
フリーラジカルは、加熱によって熱開始剤から生成される。熱開始剤の分解、及びもたらされるフリーラジカル形成の速度は、開始剤、及び開始剤が加熱される温度に左右される。より高い温度は、一般に、より速い分解をもたらす。当業者であれば、過度の実験を伴うことなく、開始剤を加熱するための適切な温度を選択することができるであろう。
【０２８０】
数々の熱開始剤が市販されている。熱開始剤の例としては、ｔｅｒｔ−アミルパーオキシベンゾエート、１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）、２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、過酸化ベンゾイル、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド、過酢酸ｔｅｒｔ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシド、ｔｅｒｔ−ブチルパーオキシベンゾエート、ｔｅｒｔ−ブチルパーオキシイソプロピルカーボネート、ラウロイルペルオキシド、過酢酸、及び過硫酸カリウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８１】
フリーラジカルは、光での照射によって光開始剤から生成され得る。光開始剤の分解及びフリーラジカル形成を誘発するのに必要な光の周波数は、開始剤に左右される。多くの光開始剤は、紫外線によって開始することができる。
【０２８２】
脂質含有複合パートナーまたはアミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナーが、感光性基を含む場合、特定の波長または波長範囲の光を使用して、開始剤を選択的に照射してもよい。本発明の方法のある特定の実施形態において、約３６５ｎｍの周波数が使用される。この周波数の光は、一般に、天然型アミノ酸の側鎖に適合する。
【０２８３】
幅広い光開始剤が市販されている。光開始剤の例としては、アセトフェノン、アニソイン、アントラキノン、アントラキノン−２−スルホン酸、ベンジル、ベンゾイン、ベンゾインエチルエーテル、ベンゾインイソブチルエーテル、ベンゾインメチルエーテル、ベンゾフェノン、３，３’，４，４’−ベンゾフェノンテトラカルボン酸二無水物、４−ベンゾイルビフェニル、２−ベンジル−２−（ジメチルアミノ）−４’−モルホリノブチロフェノン、４’−ビス（ジエチルアミノ）ベンゾフェノン、４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ベンゾフェノン、カンファキノン、２−クロロチオキサンテン−９−オン、ジベンゾスベレノン、２，２−ジエトキシアセトフェノン、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２−ジメトキシ−２−フェニルアセトフェノン（ＤＭＰＡ）、４−（ジメチルアミノ）ベンゾフェノン、４，４’−ジメチルベンジル、２，５−ジメチルベンゾフェノン、３，４−ジメチルベンゾフェノン、４’−エトキシアセトフェノン、２−エチルアントラキノン、３’−ヒドロキシアセトフェノン、４’−ヒドロキシアセトフェノン、３−ヒドロキシベンゾフェノン、４−ヒドロキシベンゾフェノン、１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２−ヒドロキシ−２−メチルプロピオフェノン、２−メチルベンゾフェノン、３−メチルベンゾフェノン、メチベンゾイルホルメ−ト（ｍｅｔｈｙｂｅｎｚｏｙｌｆｏｒｍａｔｅ）、２−メチル−４’−（メチルチオ）−２−モルホリノプロピオフェノン、フェナントレンキノン、４’−フェノキシアセトフェノン、及びチオキサンテン−９−オンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２８４】
当業者であれば、例えば、脂質含有複合パートナー、アミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナー、及び該反応混合物中に存在する任意の他の構成成分の性質を考慮して、該方法での使用のための好適なフリーラジカル開始剤を選択することができるであろう。いくつかの実施形態において、該開始剤は、該チオールを含む開始材料に対して約２０：１〜約０．０５：１、約１０：１〜約０．０５：１、約５：１〜約０．０５：１、約３：１〜約０．５：１の化学量論比で反応中に存在する。
【０２８５】
反応における脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナーは、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに定義されるものである。
【０２８６】
脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナーは、既知の合成化学技術（例えば、Ｌｏｕｉｓ  Ｆ  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｙ  Ｆ，  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｖ．１−１９，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９６７−１９９９  ｅｄ．）、またはＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ  Ｈａｎｄｂｕｃｈ  ｄｅｒ  ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ，４，Ａｕｆｌ．Ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｂｅｒｌｉｎ、その増補含む（これもまた、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンラインデータベースから入手可能））を使用して調製されてもよく、あるいはいくつかの実施形態において、市販されている場合もある。
【０２８７】
式（ＩＩ）の化合物
【化２３】
2018505152.tif 000035
（式中、ｍ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＬ１は各々独立して、式（Ｉ）の化合物について記載される実施形態のうちのいずれかにおいて定義される通りである）の脂質含有複合パートナー化合物は、式（ＶＩ）
【化２４】
2018505152.tif 000036
（式中、Ｘは、ＯＨまたは好適な脱離基である）の化合物と、式（ＶＩＩ）
【化２５】
2018505152.tif 000037
の化合物とを、エステル化に有効な条件下で反応させることによって調製されてもよい。エステル化の方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｘがクロロである場合、反応は、ピリジンまたはトリエチルアミン等の塩基の存在下で、好適な溶媒中で行われてもよい。酸塩化物は、より反応性である種に（ヨウ化ナトリウムを使用して、対応するヨウ化物に）インサイチュで変換されてもよい。反応が行われる温度は、酸の種の反応性及び使用される溶媒に左右される。
【０２８８】
数々の式（ＶＩ）の化合物が市販されている。他のものは、標準合成化学技術を使用して市販の前駆体から調製されてもよい。例えば、Ｘがクロロである場合、式（ＶＩ）の化合物は、好適な溶媒または溶媒の混合物中で、対応するカルボン酸を塩化チオニルで処理することで調製され得る。
【０２８９】
式（ＩＩＡ）
【化２６】
2018505152.tif 000038
（式中、ｐ、Ｒ１１、Ｒ２２、Ｒ３３、Ｒ４４、及びＬ１は、式（ＩＡ）の化合物に定義される通りである）の脂質含有複合パートナー化合物は、上記に定義される式（ＶＩ）の化合物と、式（ＶＩＩＩ）
【化２７】
2018505152.tif 000039
（式中、Ｐは、好適な保護基である）の化合物とを、エステル化に有効な条件下で反応させ、次いで保護基を除去することによって調製され得る。
【０２９０】
あるいは、式（ＩＩＡ）の化合物は、上記に定義される式（ＶＩ）の化合物と、式（ＩＸ）
【化２８】
2018505152.tif 000040
（式中、Ｐは、好適な保護基である）の化合物とを、エステル化に有効な条件下で反応させ、保護基を除去し、次いで、対応するアルコールをチオールに変換することによって調製され得る。アルコールをチオールに変換するための好適な方法は、当業者には明らかであろう。
【０２９１】
該化合物の調製は、様々な化学基の保護及び脱保護を伴う場合がある。保護及び脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者であれば容易に判定することができる。保護基、ならびに保護及び脱保護の方法は、当該技術分野で周知である（例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄＥｄ．，Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９）を参照されたい）。
【０２９２】
同様に、式（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、及び（ＩＸ）の化合物もまた、市販されているか、または標準合成化学技術を使用して市販の前駆体から調製されてもよい。
【０２９３】
該脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナー、ならびに反応混合物中に存在する任意の他の構成成分が反応容器内に導入される順序は、多様であり得る。反応は、ワンポット手順として行われ得る。
【０２９４】
該反応における該脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナーの化学量論は、多様であり得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸包含複合パートナーの脂質含有複合パートナーに対する化学量論比は、約１：０．５〜約１：２０、約１：１〜約１：１０、約１：１〜約１：５、約１：１〜約１：３である。いくつかの実施形態において、ペプチド含有複合パートナーの脂質含有複合パートナーに対する化学量論比は、約１：０．５〜約１：２０、約１：１〜約１：１０、約１：１〜約１：５、約１：１〜約１：３である。
【０２９５】
該反応は、任意の好適な温度で行われ得る。いくつかの実施形態において、該反応は、約−２５℃〜約２００℃、約−１０℃〜約１５０℃、約０℃〜約１２５℃、およそ周囲温度〜約１００℃の温度で行われる。いくつかの実施形態において、該反応は、約２００℃未満、約１７５℃未満、約１５０℃未満、約１２５℃未満、または約１００℃未満の温度で行われる。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、該反応は、周囲温度よりも高い温度で行われる。一実施形態において、該反応は、４０〜２００℃、５０〜１５０℃、６０〜１００℃、６５〜９０℃、または７０〜８０℃の温度で行われる。いくつかの実施形態において、該反応は、４０℃超、５０℃超、７５℃超、１００℃超、または１５０℃超の温度で行われる。
【０２９７】
該反応が行われる温度は、反応においてフリーラジカルがどのように生成されるかに左右される。使用される温度は、反応速度を制御するために選択され得る。温度を反応の経過中に調節して、反応速度を制御し得る。反応速度を制御することにより、望ましくない副生成物（例えば、テロメル化または重合生成物）の形成を最小化するか防止することが可能な場合がある。
【０２９８】
フリーラジカルが熱的に生成される（例えば、熱開始剤を使用して）場合、該反応は、一般に、周囲温度よりも高い温度で行われることになる。温度は、フリーラジカルが生成される種の反応性に左右されることになる。
【０２９９】
フリーラジカルが光化学的に生成される場合、該反応は、有利に、周囲温度で行われてもよい。ある特定の実施形態において、反応速度を遅くするために反応混合物を冷却するか、または逆に、反応速度を高めるために反応混合物を加熱することが望ましい場合がある。
【０３００】
当業者であれば、該脂質含有複合パートナー、アミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナー、及び使用される場合にはフリーラジカル開始剤の反応性を考慮して、該方法を行うための適切な温度を選択することができるであろう。
【０３０１】
該反応が行われる温度は、反応混合物を加熱または冷却することによって制御され得る。反応混合物の温度は、当該技術分野で既知の好適な方法によって制御され得る。例えば、反応容器内の熱交換器を使用するか、反応容器を囲む加熱ジャケットを使用するか、または加熱液体（例えば、油または砂風呂）中に反応容器を浸すことにより、反応混合物を加熱してもよい。ある特定の例示的な実施形態において、該反応混合物は、マイクロ波照射によって加熱される。
【０３０２】
該反応の進行は、任意の好適な手段、例えば、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって監視され得る。該反応を、開始材料のうちの少なくとも１つの消費によって監視される実質的完了へと進行させてもよい。いくつかの実施形態において、該反応は、１分〜７日間、５分〜７２時間、１０分〜４８時間、１０分〜２４時間の時間にわたって進行させてもよい。他の実施形態において、該反応は、７２時間未満、４８時間未満、２４時間未満、１２時間未満、６時間未満、４時間未満、２時間未満、または１時間未満の時間にわたって進行させてもよい。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、該反応は、該脂質含有複合パートナーまたはアミノ酸包含複合パートナーのうちの化学量論的に少ない一方の、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％が消費されるまで行われる。いくつかの実施形態において、該反応は、該脂質含有複合パートナーまたはペプチド含有複合パートナーのうちの化学量論的に少ない一方の、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％が消費されるまで行われる。開始材料の消費は、任意の好適な方法、例えば、ＨＰＬＣによって監視され得る。
【０３０４】
反応混合物は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法によって、例えば電磁または機械的撹拌器を使用して混合され得る。使用される方法は、反応が行われる規模に左右され得る。
【０３０５】
該反応は、一般に、液体反応媒体中で行われる。該液体反応媒体は、溶媒を含んでもよい。好適な溶媒の例としては、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素、水、メタノール、エタノール、ジメチルスルホキシド、トリフルオロ酢酸、酢酸、アセトニトリル、及びそれらの混合物が挙げられる。
【０３０６】
溶媒は、溶媒中での該脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナーの可溶性に基づいて選択され得る。フリーラジカル開始剤の可溶性もまた関連し得る。いくつかの実施形態において、該脂質含有複合パートナーは、疎水性である。アミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナーの疎水性または親水性は、例えば、ペプチド含有複合パートナーのペプチドのアミノ酸配列によって異なり得る。該ペプチド含有複合パートナーにおける可溶化基の存在は、水等の極性溶媒における可溶性を高め得る。当業者であれば、過度の実験を伴うことなく、適切な溶媒を選択することができるであろう。
【０３０７】
反応は、実質的に無酸素条件下で行われてもよい。酸素は、反応中に形成されたフリーラジカルの反応を停止させ得る。反応混合物を、実質的に無酸素である不活性ガス（例えば、窒素またはアルゴン）で脱気して、フリーラジカルが生成される前に全ての溶存酸素を除去してもよい。あるいは、反応混合物の個々の構成成分を、反応容器内で化合される前に、実質的に無酸素である不活性ガスで脱気してもよい。反応は、実質的に無酸素である不活性ガスの雰囲気下で行われてもよい。
【０３０８】
本発明の方法は、周囲圧力で行われてもよい。
【０３０９】
チオール−エン反応における増殖に対する連鎖移動の速度が遅い場合、望ましくない二量化、テロメル化、または重合が生じ得る。
【０３１０】
二量化、テロメル化、または重合を阻害する添加剤が、本発明の方法における反応混合物中に含まれてもよい。発明者らは、いくつかの実施形態において、連鎖移動を容易にする外因性チオールの添加剤としての反応混合物中における包含により、望ましくない副生成物の形成が低減されることを発見した。外因性チオールは、いくつかの実施形態において、所望のチオールエン反応の効率を高め得る。好適な外因性チオールの例としては、還元型グルタチオン、ＤＯＤＴ、ＤＴＴ、タンパク質等が挙げられるが、これらに限定されない。発明者らは、いくつかの実施形態において、ＤＴＴの包含により、結果として望ましくない副生成物が一切含まれないことを発見した。
【０３１１】
ある特定の実施形態において、該外因性チオールは、立体障害型チオールである。好適な立体障害型外因性チオールの非限定的な例としては、ｔｅｒｔ−ブチルメルカプタン及び１−メチルプロピルメルカプタンが挙げられる。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、酸の包含も、二量化、テロメル化、または重合を阻害し得る。該酸は、無機強酸、例えばＨＣＩ、または有機強酸、例えばＴＦＡであり得る。ある特定の実施形態において、該添加剤は、ＴＦＡである。
【０３１３】
発明者らは、いくつかの実施形態において、ｔｅｒｔ−ブチルメルカプタン及びＴＦＡの両方を添加剤として反応混合物中に含むことにより、オリゴマーの形成が低減され、所望の生成物への開始材料の変換が増加することを発見した。したがって、ある特定の例示的な実施形態において、該反応混合物は、ＴＦＡ及びｔｅｒｔ−ブチルメルカプタンの組み合わせを含む。
【０３１４】
該添加剤は、一般に、該反応、または該方法におけるいかなる任意選択の後続のステップにも悪影響を及ぼすことなく、望ましくない副生成物の形成を最小化するのに十分な量で使用される。いくつかの実施形態において、該添加剤は、該チオールを含む開始材料に対して約２０：１〜約０．０５：１、約１０：１〜約０．５：１、約５：１〜約１：１、約３：１〜約１：１の化学量論比で反応中に存在する。
【０３１５】
いくつかの実施形態において、該反応に使用される該脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナー開始材料の約５０重量％未満、約４０重量％未満、約３０重量％未満、約２５重量％未満、約２０重量％未満、約１５重量％未満、約１０重量％未満、約５重量％未満、約３重量％未満、または約１重量％未満は、二量化、テロメル化、または重合によってもたらされる望ましくない副生成物である。いくつかの実施形態において、該反応に使用される該脂質含有複合パートナー及びペプチド含有複合パートナー開始材料の約５０重量％未満、約４０重量％未満、約３０重量％未満、約２５重量％未満、約２０重量％未満、約１５重量％未満、約１０重量％未満、約５重量％未満、約３重量％未満、または約１重量％未満は、二量化、テロメル化、または重合によってもたらされる望ましくない副生成物である。該反応の生成物の純度は、例えば、ＨＰＬＣによって判定され得る。
【０３１６】
反応混合物における該脂質含有複合パートナー及びアミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナーの濃度も、それぞれ、該反応に影響を及ぼし得る。当業者であれば、例えば、収率及び純度を最適化するために、過度の実験を伴うことなく、反応混合物における該脂質含有複合パートナー及びペプチド含有複合パートナーの濃度を変えることができるであろう。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、該チオールを含む開始材料は、約０．０５ｍＭ〜約１Ｍ、約０．５ｍＭ〜約１Ｍ、約１ｍＭ〜約１Ｍの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、該濃度は、少なくとも約０．０５ｍＭ、０．５ｍＭ、または１ｍＭである。
【０３１８】
いくつかの実施形態において、アルケンを含む開始材料の濃度は、少なくとも約０．０５ｍＭ、０．５ｍＭ、または１ｍＭである。
【０３１９】
いくつかの実施形態において、該アミノ酸複合体またはペプチド複合体は、反応後に反応媒体から分離され、任意選択で精製されてもよい。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、反応後に反応媒体から分離され、任意選択で精製されてもよい。該複合体は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法、例えば沈澱法を使用して反応媒体から分離されてもよい。
【０３２０】
いくつかの実施形態において、該アミノ酸またはペプチド複合体は、それを反応媒体から分離した後に精製される。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、それを反応媒体から分離した後に精製される。具体的に企図される実施形態において、該複合体は、１つ以上の好適な溶媒を使用してＨＰＬＣによって精製される。
【０３２１】
本発明の方法によって生成されたペプチド複合体及び／または本発明の方法におけるペプチド含有複合パートナーは、合成ペプチドを含み得る。合成ペプチドは、固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）を使用して調製され得る。
【０３２２】
固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）の基本原理は、リンカー分子を介して固相担体、典型的には樹脂粒子に固着した成長ポリペプチド鎖へのアミノ酸の段階的付加であり、これにより、ポリペプチド鎖が完成すると、切断及び精製が可能となる。簡潔には、固相樹脂担体及び開始アミノ酸は、リンカー分子を介して互いに結合している。かかる樹脂−リンカー−酸マトリックスは、市販されている。
【０３２３】
樹脂に連結されるアミノ酸は、そのＮα−末端において化学保護基によって保護されている。
【０３２４】
該アミノ酸はまた、側鎖保護基を有する場合がある。かかる保護基は、新規のペプチド結合を形成するプロセス中に、連結されるアミノ酸のカルボキシル基と、樹脂に連結されたペプチド鎖の無保護なＮα−アミノ基との間で望ましくないまたは有害な反応が起こることを防止する。
【０３２５】
連結されるアミノ酸を、ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸の無保護であるＮα−アミノ基と反応させ、ペプチド鎖の鎖長をアミノ酸１個分、増加させる。連結されるアミノ酸のカルボキシル基を、好適な化学的活性化剤を用いて活性化させ、ペプチド鎖のＮα−アミノ基との反応を促進させてもよい。ペプチド鎖のＮ末端アミノ酸のＮα−保護基は、次いで、次のアミノ酸残基との連結の準備のために除去される。この技術は、可能な場合には自動化が魅力的である、多くの繰り返しのステップからなる。当業者であれば、例えば収束的ペプチド合成が所望される場合、ペプチドが、独立したアミノ酸ではなく固相結合アミノ酸またはペプチドのＮα−アミノ基に連結され得ることを理解するであろう。
【０３２６】
アミノ酸の所望の配列が達成されると、ペプチドはリンカー分子において固相担体から切断される。
【０３２７】
ＳＰＰＳは、連続フロー法またはバッチフロー法を使用して行われてもよい。連続フローは、分光光度計を介して反応進行をリアルタイムで監視することを可能にするが、樹脂上でペプチドと接触する試薬が希釈されていること、及び固相樹脂の物理的な大きさの制限に起因して規模が限定されることの２つの明白な不利益を有する。バッチフローは濾過反応容器内で発生し、反応物質が到達可能であり、手動または自動で添加することができるため、有用である。
【０３２８】
保護基の種類が、Ｎ−アルファ−アミノ末端を保護するために一般的に使用される：「Ｂｏｃ」（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）及び「Ｆｍｏｃ」（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）。Ｂｏｃ方法のための試薬は、比較的安価であるが、これらは腐食性が高く、高価な機器及びより厳しく注意を払うことが求められる。より高価であるが腐食性がより低い試薬を使用するＦｍｏｃ方法が、典型的に好ましい。
【０３２９】
ＳＰＰＳにおいて、幅広い固相担体が利用可能である。合成に使用される固相担体は、合成目的において好適である合成樹脂、合成重合膜、またはシリコンもしくはシリケート表面（例えば、細孔性ガラス）であってもよい。一般に、樹脂が使用され、通常、ポリスチレン懸濁液、またはポリスチレン−ポリエチレングリコール、または重合体担体、例えばポリアミドである。Ｂｏｃ反応において好適なリンカーによって官能化された樹脂の例としては、ＰＡＭ樹脂、オキシム樹脂ＳＳ、フェノール樹脂、臭素化ワング樹脂、及び臭素化ＰＰＯＡ樹脂が挙げられる。Ｆｍｏｃ反応において好適な樹脂の例としては、ＡＭＰＢ−ＢＨＡ樹脂、シーバーアミド樹脂、リンク酸樹脂、Ｔｅｎｔａｇｅｌ  Ｓ  ＡＣ樹脂、塩化２−クロロトリチル樹脂、２−クロロトリチルアルコール樹脂、ＴｅｎｔａＧｅｌ  Ｓ  Ｔｒｔ−ＯＨ樹脂、Ｋｎｏｒｒ−２−クロロトリチル樹脂、ヒドラジン−２−クロロトリチル樹脂、ＡＮＰ樹脂、Ｆｍｏｃ感光性樹脂、ＨＭＢＡ−ＭＢＨＡ樹脂、ＴｅｎｔａＧｅｌ  Ｓ  ＨＭＢ樹脂、Ａｒｏｍａｔｉｃ  Ｓａｆｅｔｙ  Ｃａｔｃｈ樹脂、ＢＡｌ樹脂、及びＦｍｏｃ−ヒドリキシルアミン２クロロトリチル樹脂が挙げられる。他の樹脂としては、ＰＬ  Ｃｌ−Ｔｒｔ樹脂、ＰＬ−オキシム樹脂、及びＰＬ−ＨＭＢＡ樹脂が挙げられる。
【０３３０】
各樹脂について、開始モノマーまたはサブユニットの結合のための適切な連結条件が、文献において既知である。
【０３３１】
固相担体の調製は、適切な溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）中に担体を溶媒和させることを含む。固相は、典型的には、溶媒和中にその体積が増加し、それによりペプチド合成を行うのに利用可能な表面積が増加する。
【０３３２】
リンカー分子は、次いで、ペプチド鎖を固相担体に連結するための担体に結合される。リンカー分子は、一般に、やがて起こる切断が、Ｃ末端において遊離酸またはアミドのいずれかを提供するように設計されている。リンカーは、一般に、樹脂特異的ではない。リンカーの例としては、ペプチド酸、例えば４−ヒドロキシメチルフェノキシアセチル−４’−メチルベンジヒドリルアミン（ＨＭＰ）、またはペプチドアミド、例えばベンズヒドリルアミンアミン誘導体が挙げられる。
【０３３３】
ペプチド配列の最初のアミノ酸は、リンカーが固相担体に結合した後にリンカーに結合してもよく、またはペプチド配列の最初のアミノ酸を含むリンカーを使用して固相担体に結合してもよい。アミノ酸を含むリンカーは、市販されている。
【０３３４】
次のステップは、最初のアミノ酸のＮα−アミノ基を脱保護することである。Ｆｍｏｃ  ＳＰＰＳについて、Ｎα−アミノ基の脱保護は、穏やかな塩基処理（例えば、ピペラジンまたはピペリジン）を用いて行われ得る。側鎖保護基は、適度なアシドリシス（例えば、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ））によって除去され得る。Ｂｏｃ  ＳＰＰＳについて、Ｎα−アミノ基の脱保護は、例えばＴＦＡを使用して行われ得る。
【０３３５】
脱保護に続いて、ペプチド結合の形成によってアミノ酸鎖伸長または連結が進行する。このプロセスは、連結されるアミノ酸のＣ−α−カルボキシル基の活性化を要する。これは、例えば、インサイチュ試薬、予め形成された対称性無水物、活性エステル、酸ハロゲン化物、またはウレタン保護Ｎ−カルボキシ無水物を使用して達成され得る。インサイチュ方法は、同時の活性化及び連結を可能にする。カップリング試薬としては、カルボジイミド誘導体、例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはＮ，Ｎ−ジイソプロピルカルボジイミドが挙げられる。カップリング試薬としては、ウロニウム、またはベンゾトリアゾールのホスホニウム塩誘導体も挙げられる。かかるウロニウム及びホスホニウム塩の例としては、ＨＢＴＵ（Ｏ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＰｙＡＯＰ、ＨＣＴＵ（Ｏ−（１Ｈ−６−クロロ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＴＣＴＵ（Ｏ−１Ｈ−６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、ＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＴＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、ＴＯＴＵ（Ｏ−［シアノ（エトキシカルボニル）メチレンアミノ］−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、及びＨＡＰｙＵ（Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）オキシビス−（ピロリジノ）−ウロニウムヘキサフルオロホスフェートが挙げられる。いくつかの実施形態において、該カップリング試薬は、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＢＯＰ、またはＰｙＢＯＰである。
【０３３６】
所望のアミノ酸配列が合成された後に、該ペプチドは樹脂から切断される。このプロセスにおいて使用される条件は、ペプチド及び側鎖保護基のアミノ酸組成の感受性に左右される。一般に、切断は、保護基及びリンカーに由来する反応性カルボニウムイオンの反応を停止させる複数の除去薬を含有する環境で行われる。一般的な切断剤としては、例えば、ＴＦＡ及びフッ化水素（ＨＦ）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ペプチドがリンカーを介して固相担体に結合している場合、ペプチド鎖は、リンカーからペプチドを切断することによって固相担体から切断される。
【０３３７】
該ペプチドを樹脂から切断するのに使用される条件は、同時に１つ以上の側鎖保護基を除去し得る。
【０３３８】
ＳＳＰＳにおける保護基の使用は、十分に確立されている。一般的な保護基の例としては、アセトアミドメチル（Ａｃｍ）、アセチル（Ａｃ）、アダマンチルオキシ（ＡｄａＯ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、２−ブロモベンジル、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ｔｅｒｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、ｔｅｒｔ−ブチルチオ（ｔＢｕｔｈｉｏ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、４，４’−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソ−シクロヘキシリデン）３−メチル−ブチル（ｉｖＤｄｅ）、４−｛Ｎ−［１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソ−シクロヘキシリデン）３−メチルブチル］−アミノ）ベンジルオキシ（ＯＤｍａｂ）、２，４−ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ホルミル（Ｆｏｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、２，２，５，７，８−ペンタメチル−クロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、トシル（Ｔｏｓ）、トリフルオロアセチル（Ｔｆａ）、トリメチルアセタミドメチル（Ｔａｃｍ）、トリチル（Ｔｒｔ）、及びキサンチル（Ｘａｎ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３９】
該ペプチドの該アミノ酸の側鎖のうちの１つ以上が官能基、例えば、付加的なカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシ基、またはチオール基等を含有するとき、追加の保護基が必要である場合がある。例えば、Ｆｍｏｃ戦略を使用する場合、Ｍｔｒ、Ｐｍｃ、ＰｂｆがＡｒｇの保護に使用され、Ｔｒｔ、ＴｍｏｂがＡｓｎ及びＧｌｎの保護に使用され、ＢｏｃがＴｒｐ及びＬｙｓの保護に使用され、ｔＢｕがＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、及びＴｙｒの保護に使用され、Ａｃｍ、ｔＢｕ、ｔＢｕｔｈｉｏ、Ｔｒｔ及びＭｍｔがＣｙｓの保護に使用されてもよい。当業者であれば、数々の他の好適な組み合わせがあることを理解するであろう。
【０３４０】
上記に概説されるＳＳＰＳのための方法は、当該技術分野で周知である。例えば、Ａｔｈｅｒｔｏｎ  ａｎｄ  Ｓｈｅｐｐａｒｄ，「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９、Ｓｔｅｗａｒｔ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇ：  「Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ２ｎｄ  Ｅｄ．」Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ：Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，１９８４、Ｊｏｎｅｓ，「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」Ｏｘｆｏｒｄ：Ｃｌａｒｅｎｄｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９９４、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４６−２１４９（１９６３）、Ｍａｒｇｌｉｎ，Ａ．ａｎｄ  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９：８４１−６６（１９７０）、及びＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ  Ｒ．Ｂ．ＪＡＭＡ．２１０（７）：１２４７−５４（１９６９）、及び「Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  −  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」（Ｗ．Ｃ．Ｃｈａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ｄ．Ｗｈｉｔｅ，ｅｄｓ．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）を参照されたい。ペプチドまたはポリペプチドの自動合成のための機器は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ／Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）等の供給業者から容易に入手可能であり、製造業者の指示に従って操作され得る。
【０３４１】
樹脂からの切断に続いて、ペプチドは、例えば遠心分離または濾過によって反応媒体から分離され得る。ペプチドは次いで、例えば、１つ以上の好適な溶媒を使用するＨＰＬＣによって続いて精製される。
【０３４２】
有利には、発明者らは、いくつかの実施形態において、ペプチド含有複合パートナーを、樹脂からのペプチドの切断に続く精製を伴わずに、本発明の方法において使用し得ることを発見した。
【０３４３】
発明者らはまた、本発明の方法は、該ペプチドが、Ｎα−アミノ基保護基またはいかなる側鎖保護基も含有しない、ペプチド含有複合パートナーを使用して行うことができることを有利に発見した。該反応は、一般に、チオールと非芳香族炭素−炭素二重結合との反応について選択的である。
【０３４４】
本発明の方法において望ましくない競合反応を防止するために、該ペプチド含有複合パートナー中（例えば、ペプチドのシステイン残基中）に存在するチオール基を保護基で保護する必要がある場合がある。該チオール基は、ペプチド中に存在する１つ以上の他の保護基を除去するため、またはペプチドを樹脂から切断するために使用される条件下で除去できない保護基によって保護され得る。典型的には、ペプチドは、適切な保護基を保持するアミノ酸を使用して合成されることになる。当業者であれば、過度の実験を伴うことなく、適切な保護基を選択することができるであろう。
【０３４５】
ある特定の実施形態において、該アミノ酸包含複合パートナー及び脂質含有複合パートナーは、反応される炭素−炭素二重結合に加えて、１つ以上の不飽和炭素−炭素結合を含む。ある特定の実施形態において、該ペプチド含有複合パートナー及び脂質含有複合パートナーは、反応される炭素−炭素二重結合に加えて、１つ以上の不飽和炭素−炭素結合を含む。当業者であれば、かかる実施形態における反応される炭素−炭素二重結合のためのチオールの選択性は、例えば、１つ以上の不飽和炭素−炭素結合に関連する、炭素−炭素二重結合の立体及び／または電子環境に左右され得ることを理解するであろう。ある特定の実施形態において、反応される炭素−炭素二重結合は、アミノ酸包含複合パートナー及び脂質含有複合パートナー中の任意の他の不飽和炭素−炭素結合に関連して活性化される。ある特定の実施形態において、反応される炭素−炭素二重結合は、ペプチド含有複合パートナー及び脂質含有複合パートナー中の任意の他の不飽和炭素−炭素結合に関連して活性化される。
【０３４６】
いくつかの実施形態において、炭素−炭素二重結合またはチオールを含むアミノ酸包含複合パートナーのアミノ酸のＮα−アミノ基は、アシル化、例えばアセチル化される。いくつかの実施形態において、本発明の方法は、反応される炭素−炭素二重結合またはチオールを含むアミノ酸包含複合パートナーのアミノ酸のＮα−アミノ基をアシル化、例えばアセチル化することを含み得る。
【０３４７】
ペプチド含有複合パートナーがＳＰＰＳによって合成される場合、アシル化は、樹脂からの切断の前または後に行われ得る。いくつかの実施形態において、反応される炭素−炭素二重結合またはチオールを保持するペプチド含有複合パートナーのアミノ酸残基は、Ｎ末端アミノ酸残基であり、該方法は、ペプチドを切断する前にＮ末端アミノ基をアシル化することを含む。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、該方法は、該脂質含有複合パートナーが複合される、アミノ酸複合体のアミノ酸、またはペプチド複合体のアミノ酸残基のＮα−アミノ基をアシル化することを更に含む。
【０３４９】
アミノ酸のＮα−アミノ基のアシル化は、好適な溶媒、例えばＤＭＦ中の塩基の存在下でアミノ酸またはペプチドをアシル化剤と反応させることによって行われ得る。アシル化剤の非限定的な例としては、酸ハロゲン化物、例えば、塩化アセチル等の酸塩化物、及び酸無水物、例えば、無水酢酸が挙げられる。かかる薬剤は、市販されているか、または当該技術分野で周知の方法で調製され得る。好適な塩基の非限定的な例としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、４−メチルモルホリン等が挙げられる。
【０３５０】
他の実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドの合成は、Ｎα−アミノ基でアシル化され、１つ以上のアミノ酸及び／または１つ以上のペプチドと反応される炭素−炭素二重結合またはチオールを含むアミノ酸を含むアミノ酸またはペプチドに連結することを含む。
【０３５１】
いくつかの実施形態において、該方法は、該アミノ酸複合体の該アミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチド複合体を得ることを含む。いくつかの実施形態において、該方法は、該アミノ酸複合体の該アミノ酸を、ＳＰＰＳにより固相樹脂に結合したアミノ酸またはペプチドに連結することを含む。いくつかの実施形態において、該方法は、該アミノ酸複合体の該アミノ酸を、ＳＰＰＳにより固相樹脂に結合したペプチドに連結することを含む。該方法は、ＳＰＰＳにより固相樹脂に結合したペプチドを合成することを含み得る。
【０３５２】
いくつかの実施形態において、該方法は、アミノ酸複合体のアミノ酸またはペプチド複合体のアミノ酸を、１つ以上のアミノ酸またはペプチドに連結して、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むペプチド複合体を得ることを更に含む。いくつかの実施形態において、連結されるペプチドは、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。他の実施形態において、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープは、連結時に形成される。連結は、本明細書に記載されるＳＰＰＳによって行われてもよい。
【０３５３】
いくつかの実施形態において、該方法は、アミノ酸複合体のアミノ酸を、ＳＰＰＳにより固相樹脂担体に結合したペプチドに連結して、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むペプチド複合体を得ることを含む。
【０３５４】
一実施形態において、連結されるペプチド複合体のペプチドは、固相樹脂担体に結合し、該方法は、連結されるペプチド複合体のアミノ酸をアミノ酸またはペプチドに連結して、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むペプチド複合体を得ることを含む。
【０３５５】
代替的な実施形態において、該方法は、ペプチド複合体のアミノ酸を、ＳＰＰＳにより固相樹脂担体に結合したアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチドエピトープを含むペプチド複合体を得ることを含む。
【０３５６】
いくつかの実施形態において、該方法は、エピトープ、例えばペプチドエピトープを、アミノ酸複合体またはペプチド複合体に連結することを更に含む。該方法がペプチドエピトープを連結するを含む場合、該連結は、本明細書に記載されるＳＰＰＳによって行われてもよい。
【０３５７】
ある特定の実施形態において、該エピトープ、例えば１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープは、リンカー基を介して連結または結合している。ある特定の実施形態において、該リンカー基は、アミノ配列、例えば、２個以上、３個以上、または４個以上の連続したアミノ酸の配列である。ある特定の実施形態において、該リンカーは、約２〜２０、２〜１８、２〜１６、２〜１４、２〜１２、２〜１０、４〜２０、４〜１８、４〜１６、４〜１４、４〜１２、または４〜１０個のアミノ酸を含む。
【０３５８】
当業者であれば、本明細書に記載されるようにアミノ酸またはペプチドを別のアミノ酸またはペプチドに連結することは、アミノ酸のＮα末端または一方の連結パートナーのペプチドのアミノ酸と、アミノ酸のＣ末端または他方の連結パートナーのペプチドのアミノ酸との間にペプチド結合を形成することを含み得ることは、理解されるであろう。
【０３５９】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドのアミノ酸配列をＳＰＰＳにより合成することと、該脂質含有複合パートナーを該ペプチド含有複合パートナーと反応させることとを含む。
【０３６０】
いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドのアミノ酸配列をＳＰＰＳにより合成することは、アミノ酸またはペプチドを、固相樹脂担体に結合したアミノ酸またはペプチドに連結して、ペプチドのアミノ酸配列またはその一部を得ることを含む。ある特定の実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの全ペプチドの該アミノ酸配列は、ＳＰＰＳによって合成される。
【０３６１】
該ペプチド含有複合パートナーは、固相樹脂担体に結合している間に、該脂質含有複合パートナーと反応され得る。あるいは、ペプチドは、固相樹脂担体から切断されてもよく、かつ任意選択で、該脂質含有複合パートナーとの反応の前に精製されてもよい。
【０３６２】
該ペプチド複合体及び／またはアミノ酸包含複合パートナー、例えばペプチド含有複合パートナーは、１つ以上の可溶化基を含み得る。該１つ以上の可溶化基は、水等の極性溶媒における、例えば、該ペプチド含有複合パートナーの可溶性を増加させる。例示的な実施形態において、該可溶化基は、該ペプチド複合体の生物活性に悪影響を及ぼさない。
【０３６３】
可溶化基の存在は、薬学的組成物としてのペプチド複合体の製剤化及び／または投与において有利であり得る。
【０３６４】
いくつかの実施形態において、該可溶化基は、該ペプチド複合体及び／または該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに結合している。いくつかの実施形態において、該可溶化基は、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに結合している。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体の該ペプチド及び／または該ペプチド含有パートナーの該ペプチドは、可溶化基を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有パートナーの該ペプチドは、可溶化基を含む。
【０３６５】
いくつかの実施形態において、該可溶化基は、アミノ酸ペプチド鎖内の側鎖に結合している。いくつかの実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖のＣ末端またはＮ末端に結合している。いくつかの実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖内の２個のアミノ酸残基の間で結合している。いくつかの実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖内の１つのアミノ酸残基のＮα−アミノ基及びペプチド鎖内の別のアミノ酸残基のカルボキシル基に結合している。
【０３６６】
好適な可溶化基の例としては、親水性アミノ酸配列またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３６７】
一実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖内に２個以上の親水性アミノ酸残基を含む親水性アミノ酸配列である。いくつかの実施形態において、該可溶化基は、ペプチド鎖内に２個以上の連続親水性アミノ酸残基の配列を含むアミノ酸配列である。かかる可溶化基は、ＳＰＰＳにより該可溶化基の各アミノ酸をペプチド鎖に付加することによって形成され得る。
【０３６８】
別の実施形態において、該可溶化基は、ポリエチレングリコールである。いくつかの実施形態において、該ポリエチレングリコールは、ペプチド鎖内の１つのアミノ酸残基のＮα−アミノ基及びペプチド鎖内の別のアミノ酸残基のカルボキシル基に結合している。
【０３６９】
いくつかの実施形態において、該ポリエチレングリコールは、約１〜約１００、約１〜約５０、約１〜約２５、約１〜約２０、約１〜約１５、約１〜約１０、約２〜約１０、または約２〜約４のエチレングリコールモノマー単位を含む。ポリエチレングリコールをペプチドに連結する方法は既知である。
【０３７０】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーは、抗原、例えば抗原ペプチドを含む。一実施形態において、該ペプチド複合体またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、抗原であるか、またはそれを含み、あるいは、抗原が、任意選択でリンカーを介してペプチドに結合している。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、抗原、例えば抗原ペプチドを含む。一実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、抗原であるか、またはそれを含み、あるいは、抗原が、任意選択でリンカーを介してペプチドに結合している。
【０３７１】
一実施形態において、該抗原は、エピトープを含むペプチドを含む。一実施形態において、エピトープを含む該ペプチドは、エピトープを含むグリコペプチドである。一実施形態において、該抗原は、エピトープを含むグリコペプチドを含む。
【０３７２】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーは、エピトープを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、エピトープを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、エピトープを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、エピトープを含む。
【０３７３】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーは、２つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含み、例えば、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、２つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーは、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むグリコペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、グリコペプチドである。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーは、複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに結合した１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープペプチドを含むグリコペプチドを含む。例えば、該ペプチド含有複合パートナーは、１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むグリコペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、グリコペプチドである。別の例において、該ペプチド含有複合パートナーは、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに結合した１つ以上のＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含むグリコペプチドを含む。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーは、タンパク質分解性切断部位を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、タンパク質分解性切断部位を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、タンパク質分解性切断部位を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、タンパク質分解性切断部位を含む。
【０３７６】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、１つ以上のリンカー基を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、１つ以上のリンカー基を含む。
【０３７７】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーは、リンカー基を含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、リンカー基を含む。
【０３７８】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合（ｃｏｎｊｕｇａｔａｉｏｎ）パートナーは、リンカー基を介して該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに結合したエピトープを含む。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーは、リンカー基を介して該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドに結合したエピトープを含む。
【０３７９】
リンカー基の例としては、アミノ酸配列（例えば、ペプチド）、ポリエチレングリコール、アルキルアミノ酸等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、該リンカーは、タンパク質分解性切断部位であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態において、該リンカーは、可溶化基であるか、またはそれを含む。
【０３８０】
いくつかの実施形態において、該リンカーは、ペプチド鎖内の２個のアミノ酸残基の間で結合している。
【０３８１】
いくつかの実施形態において、該リンカー基は、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナー内の１つのアミノ酸残基のＮα−アミノ基、ならびに該ペプチド含有複合パートナー内の別のアミノ酸残基のカルボキシル基に結合している。いくつかの実施形態において、該リンカー基は、該ペプチド含有複合パートナー内の１つのアミノ酸残基のＮα−アミノ基、及び該ペプチド含有複合パートナー内の別のアミノ酸残基のカルボキシル基に結合している。
【０３８２】
ある特定の実施形態において、該リンカー基は、それが結合するアミノ酸からインビボで切断可能である。ある特定の実施形態において、該リンカー基は、インビボでの加水分解により切断可能である。ある特定の実施形態において、該リンカー基は、インビボでの酵素加水分解により切断可能である。リンカー基は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法で導入されてもよい。
【０３８３】
該方法は、エピトープを該アミノ酸複合体の該アミノ酸または該ペプチド複合体の該ペプチドに連結することを更に含んでもよい。該エピトープは、上記のようにリンカー基を介して結合されてもよい。いくつかの実施形態において、該エピトープは、ペプチドエピトープである。いくつかの実施形態において、該方法は、エピトープを含むグリコペプチドを連結することを含む。
【０３８４】
ある特定の望ましい実施形態において、本発明のペプチド複合体が、抗原提示細胞の適切な取込み、プロセシング、及び提示を維持することは理解されるであろう。望ましくは、該脂質含有複合体は、該複合体中に存在するいかなる抗原ペプチドの抗原提示細胞による提示にも干渉しない。本明細書に提示される例は、本発明の複合体が、非複合である関連するペプチドと同等に、抗原提示細胞によって提示されることを確立する。
【０３８５】
合成されたペプチドの素性の確認は、例えば、アミノ酸分析、質量分析法、エドマン分解等により好都合に達成され得る。
【０３８６】
本発明の方法は、該アミノ酸複合体を液体反応媒体から分離することを更に含み得る。あるいは、本発明の方法は、該ペプチド複合体を液体反応媒体から分離することを更に含み得る。当該技術分野で既知の任意の好適な分離方法、例えば、沈澱または濾過を使用してもよい。該複合体は、続いて、例えば１つ以上の好適な溶媒を使用したＨＰＬＣによって精製されてもよい。
【０３８７】
本発明はまた、本発明の方法によって作製されたアミノ酸複合体及びペプチド複合体に関する。該複合体は、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかに定義される。
【０３８８】
本発明はまた、アミノ酸複合体である、式（Ｖ）の化合物に関する。
【０３８９】
本発明はまた、ペプチド酸複合体である、式（Ｖ）の化合物に関する。
【０３９０】
該ペプチド複合体は、純粋であるか、もしくは精製されているか、または実質的に純粋である。
【０３９１】
本明細書で使用される場合、「精製された」は、完全に純粋であることを必要とせず、むしろ、当の物質が、それが以前にあった環境中と比べてより純粋であるという、相対的な用語として意図される。実践において、材料は、典型的には、例えば、様々な他の構成成分を除去するために分画に供され、結果として生じる材料は、その所望の生物活性または活性を実質的に保持している。「実質的に精製された」という用語は、少なくとも約６０％、好ましくは少なくとも約７５％、及び最も好ましくは少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、またはそれ以上、製造中に付随し得る他の構成成分不含有である材料を指す。
【０３９２】
「α−アミノ酸」または「アミノ酸」という用語は、α−炭素に指定された炭素に結合したアミノ基及びカルボキシル基の両方を含有する分子を指す。好適なアミノ酸には、天然型アミノ酸のＤ−及びＬ−異性体、ならびに有機合成または他の代謝経路によって調製される非天然型アミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。別途文脈が具体的に示さない限り、本明細書で使用される場合、アミノ酸という用語は、アミノ酸類似体を含むことが意図される。
【０３９３】
ある特定の実施形態該ペプチド含有複合パートナーは、天然のアミノ酸のみを含む。「天然型アミノ酸」という用語は、天然に合成されるペプチド中に一般に見出され、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｃ、Ｄ、Ｑ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ及びＶの１文字の略号で知られる２０個のアミノ酸のうちのいずれか１つを指す。
【０３９４】
「アミノ酸類似体」または「非天然型アミノ酸」は、アミノ酸と構造的に類似し、かつアミノ酸を置換することができる分子を指す。アミノ酸類似体には、アミノ基とカルボキシル基との間の１つ以上の付加的メチレン基の包含（例えば、ａ−アミノβ−カルボキシ酸）、同様の反応基によるアミノ基またはカルボキシル基の置換（例えば、二級または三級アミンでの一級アミンの置換、もしくはエステルでのカルボキシ基の置換）を除いて、本明細書に定義されるアミノ酸と構造的に同一である化合物が含まれるが、これらに限定されない。
【０３９５】
別途示されない限り、当該技術分野の範囲内である分子生物学、微生物学、細胞生物学、生物化学、及び免疫学の従来の技術が、本明細書に記載される方法の実践において用いられてもよい。かかる技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ＆Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ＆Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ（Ｄａｖｉｄ  Ｗｉｌｄ，ｅｄ．，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  ＮＹ，１９９４）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）、及びＭｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｒ．Ｍａｓｓｅｙｅｆｆ，Ｗ．Ｈ．Ａｌｂｅｒｔ，ａｎｄ  Ｎ．Ａ．Ｓｔａｉｎｅｓ，ｅｄｓ．，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇｓ  ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ，１９９３）等の文献に十分に説明されている。
【０３９６】
「ペプチド」等の用語は、任意の長さのアミノ酸残基の任意の重合体を指すために本明細書で使用される。重合体は、線状または非線状（例えば、分岐状）であってもよく、修飾されたアミノ酸またはアミノ酸類似体を含んでもよい。この用語は、天然に修飾されたか、または例えば、ジスルフィド結合形成、糖質付加、脂質付加、アセチル化、リン酸化、または任意の他の修飾もしくは操作、例えば標識構成成分もしくは生物活性構成成分との複合による介入によって修飾されたアミノ酸重合体も包含する。
【０３９７】
発明者らは、本発明の特定のペプチド複合体が、免疫活性を有することを発見した。
【０３９８】
細胞媒介性免疫は、主にＴリンパ球によって媒介される。病原抗原は、主要組織適合性ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ分子のいずれかに結合した抗原提示細胞（マクロファージ、Ｂリンパ球、及び樹状細胞等）の表面上に発現される。ＭＨＣクラスＩＩに連結した病原抗原の提示は、ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞応答を活性化する。抗原−ＭＨＣ  ＩＩ複合体へのＴ細胞の結合に際し、ＣＤ４＋  Ｔ細胞はサイトカインを放出し、増殖する。
【０３９９】
ＭＨＣクラスＩ分子に結合した病原抗原の提示は、細胞傷害性（ＣＤ８＋）Ｔ細胞応答を活性化する。抗原−ＭＨＣ  Ｉ複合体へのＴ細胞の結合に際し、ＣＤ８＋細胞はパーフォリン及び他の媒介物質を分泌し、標的細胞死をもたらす。いかなる理論に拘束されることを望まず、出願人らは、ある特定の実施形態において、ＣＤ８＋細胞による増強した応答は、ＣＤ４＋細胞によって認識された１つ以上のエピトープの存在下で達成されたと考える。
【０４００】
対象における細胞媒介性応答の発病または進行を評価及び監視する方法は、当該技術分野で周知である。好都合な例示的な方法には、本明細書において同定されるもののような細胞媒介性応答に関連する１つ以上のサイトカインの存在、またはそのレベルが評価されるものが含まれる。同様に、細胞媒介性応答の発病及び進行を評価または監視するための細胞ベースの方法は、本発明における使用に適しており、細胞増殖または活性化アッセイを含み得、これには、Ｔリンパ球等の免疫細胞の１つ以上の集団の活性化または増殖を特定することを標的とするアッセイが含まれる。
【０４０１】
ある特定の実施形態において、本発明の方法は、細胞媒介性免疫応答及び体液性応答の両方を引き出す。
【０４０２】
体液性免疫応答は、Ｂ細胞によって産生された分泌型抗体によって媒介される。分泌型抗体は、侵入する病原の表面上に提示される抗原に結合し、それらを破壊のために印をつける。
【０４０３】
また、体液性応答の発病または侵攻を評価及び監視する方法は、当該技術分野で周知である。これらには、抗体結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、皮膚プリックテスト等が含まれる。
【０４０４】
いかなる理論に拘束されることも望まず、出願人らは、いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、トール様受容体（ＴＬＲ）を刺激すると考える。
【０４０５】
トール様受容体（ＴＬＲ）は、病原関連分子パターンを認識し、該細胞に危険信号を送達する、高度に保存されたパターン認識受容体（ＰＲＲ）である（Ｋａｗａｉ，Ｔ．，Ａｋｉｒａ，Ｓ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１１，３４，６３７−６５０）。ＴＬＲ２は、樹状細胞、マクロファージ、及びリンパ球を含む、一定範囲の異なる細胞型上の細胞表面受容体である（Ｃｏｆｆｍａｎ，Ｒ．Ｌ．，Ｓｈｅｒ，Ａ．，Ｓｅｄｅｒ，Ｒ．Ａ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２０１０，３３，４９２−５０３）。
【０４０６】
ＴＬＲ２は、リポ多糖、ペプチドグリカン、及びリポテイコ酸を含む幅広い微生物構成成分を認識する。これは、ＴＬＲ１またはＴＬＲ６のいずれかとヘテロ二量体を形成する点で、ＴＬＲの間でも独特であり、他のＰＲＲと複合体を形成する能力は、ＴＬＲ２のための幅広いアゴニストを説明し得る（Ｆｅｌｄｍａｎｎ，Ｍ．，Ｓｔｅｉｎｍａｎ，Ｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２００５，４３５，６１２−６１９）。リガンド結合及びヘテロ二量化に際し、ＭｙＤ８８経路を介してシグナル伝達が行われ、ＮＦκＢ活性化、及びその結果として生じる炎症性及びエフェクターサイトカインの産生がもたらされる。
【０４０７】
菌細胞壁構成成分に由来するジアシル化及びトリアシル化されたリポペプチドは、ＴＬＲ２アゴニストとして広範囲にわたって研究されてきた（Ｅｒｉｋｓｓｏｎ，Ｅ．Ｍ．Ｙ．，Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｄ．Ｃ．，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔ．ａｎｄ  Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．２００７，８，４１２−４１７）。リポペプチドは、樹状細胞成熟を促進させ、細胞表面上の共刺激分子の上方制御、及び増強した抗原提示をもたらすことが報告されてきた。リポペプチドはまた、サイトカインを放出するようにマクロファージを刺激し、Ｂ細胞及びＣＤ８＋  Ｔ細胞を含むリンパ球の活性化を促進することも報告されてきた。
【０４０８】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、ＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４と同等のＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４のＴＬＲ２アゴニスト活性の少なくとも約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％のＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。いくつかの実施形態において、例えば、調節された免疫応答が望ましい実施形態において、該ペプチド複合体は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４のＴＬＲ２アゴニスト活性よりも低いＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。例えば、該ペプチド複合体は、Ｐａｍ３ＣＳＫ４のＴＬＲ２アゴニスト活性の約５０％、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、または約１０％未満のＴＬＲ２アゴニスト活性を有する。
【０４０９】
いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体及び／またはペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、アミノ酸に隣接したセリンアミノ酸残基を含み、該脂質含有複合パートナーはそれを通して該ペプチドに複合される。いくつかの実施形態において、該ペプチド含有複合パートナーの該ペプチドは、アミノ酸に隣接したセリンアミノ酸残基を含み、該脂質含有複合パートナーはそれを通して該ペプチドに複合される。この位置におけるセリンアミノ酸残基の存在は、ＴＬＲ２結合を増強させ得る。いくつかの実施形態において、該セリンアミノ酸残基は、該アミノ酸のアミノ酸のＣ末端に結合し、該脂質含有複合パートナーはそれを通して該ペプチドに複合される。
【０４１０】
当業者には本開示を読んで理解されるように、該ペプチド複合体は、エピトープを含んでもよく、これには、例えば、２つ以上のエピトープが含まれる。いくつかの実施形態において、該エピトープは、ペプチドエピトープである。当業者であれば、幅広いペプチドエピトープを本発明に用いることができることを理解するであろう。
【０４１１】
抗原
多数の抗原、例えば腫瘍抗原または様々な病原器官由来の抗原が特徴付けられ、例えば、本明細書に具体的に引用されたＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープ及びペプチドを含む組成物、ワクチン、及び複合体と組み合わせた本発明における使用に好適であることは理解されるであろう。本明細書において特徴付けられているかどうかにかかわらず、免疫応答を引き出すことが可能な全ての抗原が企図される。
【０４１２】
本発明のペプチド及び複合体は、幅広い免疫療法における用途を見出し、これには、癌、ならびにホジキン病、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、及びＮＰＣを含むリンパ上皮腫を含む腫瘍状態の治療及び予防を含むがこれらに限定されないＥＢＶに関連する状態または疾患の治療及び予防、ならびに例えば骨髄移植または造血幹細胞移植を受けた患者における免疫抑制中のウイルス再活性化の治療が含まれるが、これらに限定されない。
【０４１３】
１つ以上の保存的アミノ酸置換等の１つ以上のアミノ酸置換を含む抗原、具体的にはＥＢＶ  ＬＭＰ２ペプチド抗原もまた企図される。
【０４１４】
「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、化学的に類似しているか、または誘導体かされた側鎖を有する別の残基によって置き換えられるものである。例えば、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されてきた。これらのファミリーには、例えば、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐状側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。アミノ酸類似体（例えば、リン酸化または糖鎖付加されたアミノ酸）、ならびにＮ−アルキル化アミノ酸（例えば、Ｎ−メチルアミノ酸）、Ｄ−アミノ酸、β−アミノ酸、及びγ−アミノ酸を含むがこれらに限定されない、非天然型アミノ酸で置換されたペプチドもまた本発明において企図される。
【０４１５】
抗原の断片及び変異型もまた具体的に企図される。
【０４１６】
ペプチドの「断片」とは、酵素的または結合活性に必要とされる機能を実行する、かつ／またポリペプチドの三次元構造等のペプチドの三次元構造を提供するペプチドの部分配列である。
【０４１７】
本明細書で使用される「変異型」という用語は、例えば、１つ以上のアミノ酸残基が欠失、置換、または付加されている、具体的に同定された配列とは異なるペプチド配列を含むペプチド配列を指す。変異型は、天然型変異型または非天然型変異型である。変異型は、同じ種由来か、または他の種由来であり、ホモログ、パラログ、及びオルソログを包含し得る。ある特定の実施形態において、ペプチドを含むペプチドの変異型は、野生型ペプチドの生物活性と同じまたは類似の生物活性を保有する。ペプチドに関連する「変異型」という用語は、本明細書に定義されるペプチドの全ての形態を包含する。
【０４１８】
当業者であれば、本発明の複合体は、ある特定の実施形態において、例えば癌を含む腫瘍性疾患の治療におけるＴ細胞応答を刺激するのに特に好適であることを理解するであろう。１つ以上の腫瘍抗原を含む本発明の複合体、組成物、及びワクチンが企図される。本発明の組成物、ワクチン、及び／またはペプチド複合体の調製における使用のために企図される腫瘍抗原が、一般に、１つ以上のペプチドを含むことは理解されるであろう。例えば本発明の薬学的組成物を含む本発明のある特定の実施形態において、該１つ以上の腫瘍抗原がペプチドを含まない腫瘍抗原を含む、１つ以上の追加の腫瘍抗原が存在してもよい。腫瘍抗原は、典型的には、特有の抗原または共有抗原のいずれかとして分類され、後者の群には、分化抗原、癌特異的抗原、及び過剰発現抗原が含まれる。抗原の各クラスの例は、本発明での使用に適している。癌を含む腫瘍性疾患に対する、例えば免疫療法治療またはワクチン接種等の該治療における使用のための代表的な腫瘍抗原は、以下に考察される。これらの免疫化の方法を使用して調製された１つ以上の抗原を含む化合物、ワクチン及び組成物が具体的に企図される。
【０４１９】
ある特定の実施形態において、該腫瘍抗原は、ポリペプチド腫瘍抗原または糖タンパク質腫瘍抗原等のペプチド含有腫瘍抗原である。ある特定の実施形態において、該腫瘍抗原は、糖脂質腫瘍抗原またはガングリオシド腫瘍抗原等の糖類含有腫瘍抗原である。ある特定の実施形態において、該腫瘍抗原は、ポリペプチド含有腫瘍抗原を発現するポリヌクレオチド含有腫瘍抗原、例えば、ＲＮＡベクター構築物またはプラスミドＤＮＡ等のＤＮＡベクター構築物である。
【０４２０】
本発明での使用のために適切な腫瘍抗原は、（ａ）ペプチドエピトープ（例えば、８〜２０個のアミノ酸の長さの範囲にあり得るが、この範囲外の長さも一般的である）、リポポリペプチド、及び糖タンパク質を含むペプチド含有腫瘍抗原、（ｂ）多糖類、ムチン、ガングリオシド、糖脂質、及び糖タンパク質を含む糖類含有腫瘍抗原、ならびに（ｃ）抗原ポリペプチドを発現するポリヌクレオチド等の幅広い分子を包含する。また、当業者であれば、本発明の複合体または組成物中に存在する腫瘍抗原が、典型的にペプチドを含むことを理解するであろう。しかしながら、１つ以上の複合体が、それ自体がペプチドをを含まないが、例えばアミノ酸包含複合パートナーまたはペプチド含有複合パートナーに結合している腫瘍抗原を含む本発明の実施形態が企図される。同様に、それ自体はペプチドを含まない１つ以上の腫瘍抗原が存在する、本発明の組成物が企図される。
【０４２１】
ある特定の実施形態において、該腫瘍抗原は、例えば、（ａ）癌細胞に関連する全長分子、（ｂ）欠失、付加、及び／または置換された部分を有する分子を含む、ホモログ及びその修飾形態、ならびに（ｃ）その断片（該断片が抗原性または免疫原性を維持することを条件とする）である。ある特定の実施形態において、該腫瘍抗原は、組み換え形態で提供される。ある特定の実施形態において、該腫瘍抗原は、例えば、ＣＤ８＋リンパ球によって認識されるクラスＩ限定抗原またはＣＤ４＋リンパ球によって認識されるクラスＩＩ限定抗原を含む。
【０４２２】
共有腫瘍抗原は、一般に、発生的に抑制された遺伝子の脱抑制を可能にする後成的変化に起因して腫瘍によって発現される天然の未変異配列であると考えられている。したがって、共有抗原は、典型的には、正常組織において発現がないため、過剰発現抗原または分化関連抗原より望ましいと考えられている。また、同じ抗原を、複数の癌患者において標的とすることができる。例えば、癌精巣抗原ＮＹ−ＥＳＯ−１は、多くの腫瘍を有する患者のほとんど、及び他の腫瘍を有する患者のかなりの少数において存在する。別の例において、乳房分化腫瘍抗原ＮＹＢＲ−１及びＮＹＢＲ−１．１は、一定割合の乳癌患者において発見される。共有腫瘍抗原は、したがって、開発のための魅力的な標的である。
【０４２３】
本発明のペプチドまたは複合体と組み合わせた、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＣＴＳＰ−１、ＣＴＳＰ−２、ＣＴＳＰ−３、ＣＴＳＰ−４、ＳＳＸ２、及びＳＣＰ１を含む癌精巣抗原、ならびに乳癌抗原ＮＹＢＲ−１及びＮＹＢＲ−１．１等の共有腫瘍抗原の使用が、本明細書で具体的に企図される。
【０４２４】
例示的な一実施形態において、本発明のペプチド、例えば、ペプチド含有複合パートナーまたは該ペプチド複合体の該ペプチドは、ＥＢＶ  ＬＭＰ２に由来する１つ以上のエピトープを含む。ＬＭＰ２に由来する代表的なエピトープは、以下の表１に示される。
【表１】
2018505152.tif 000041
【０４２５】
具体的に企図される一実施形態において、本発明のペプチド、例えば、単離された、精製された、もしくは組換えペプチド、または該ペプチド含有複合パートナーもしくは該ペプチド複合体の該ペプチドは、配列番号１〜１０１のいずれか１つ、例えば、配列番号１〜９３のいずれか１つ（例えば配列番号１〜７５のいずれか１つを含む）からの、８個以上の連続した、１０個以上の連続した、１２個以上の連続した、１５個以上の連続した、２０個以上の連続した、または２５個以上の連続したアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【０４２６】
種々の実施形態において、該ペプチドは、配列番号１〜１０１のうちのいずれか１つからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、該ペプチドは、配列番号７６〜１０１からなる群、または配列番号７６〜９３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸配列を含む。
【０４２７】
具体的に企図される一実施形態において、本発明のペプチド、例えば、単離された、精製された、もしくは組換えペプチド、または該ペプチド含有複合パートナーもしくは該ペプチド複合体の該ペプチドは、以下の表２に示される配列のうちのいずれか１つからの、８個以上の連続した、１０個以上の連続した、１２個以上の連続した、１５個以上の連続した、２０個以上の連続した、または２５個以上の連続したアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。
【表２】
2018505152.tif 000042
【０４２８】
同様に、抗原前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）を含む前立腺ワクチンであるシプロイセルＴ（ＡＰＣ８０１５、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（商標））は、９５％の前立腺癌細胞中に存在する。著しい割合の前立腺患者における有効性への潜在力に少なくとも部分的に起因して、シプロイセルＴは、無症候のホルモン抵抗性前立腺癌の治療における使用について、２０１０年にＦＤＡによって認可された。本発明の複合体におけるＰＡＰ抗原の使用は、本発明において具体的に企図される。
【０４２９】
特有の抗原は、個体に特有であるか、または癌患者のごく一部によって共有される抗原であると考えられており、典型的には、特有のタンパク質配列をもたらす変異の結果として生じる。特有の腫瘍抗原の代表的な例としては、変異Ｒａｓ抗原及び変異ｐ５３抗原が挙げられる。本明細書を読んだ当業者には理解されるように、本発明の方法は、例えば、患者に特異的な療法剤の調製において、例えば、１つ以上の特有の腫瘍抗原への特異的Ｔ細胞応答を引き出すための１つ以上の特有の腫瘍抗原を含む複合体の容易な調製を可能にする。本発明が、例えば、患者に特異的な療法剤の調製において、例えば、１つ以上の特有の腫瘍抗原への特異的Ｔ細胞応答を引き出すための１つ以上の特有の腫瘍抗原を含む複合体の容易な調製を可能にする。
【０４３０】
したがって、代表的な腫瘍抗原には、（ａ）抗原、例えばＲＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ及びＭＡＧＥファミリーポリペプチド、例えばＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、及びＭＡＧＥ−１２（これらを使用して、例えば、黒色腫、肺腫瘍、頭頸部腫瘍、ＮＳＣＬＣ、乳腺腫瘍、胃腸腫瘍、及び膀胱腫瘍に対処することができる）、（ｂ）変異抗原、例えばｐ５３（様々な固形腫瘍、例えば結腸直腸癌、肺癌、頭頚部癌に関連する）、ｐ２１／Ｒａｓ（例えば、黒色腫、膵臓癌、及び結腸直腸癌に関連する）、ＣＤＫ４（例えば、黒色腫に関連する）、ＭＵＭ１（例えば、黒色腫に関連する）、カスパーゼ８（例えば、頭頚部癌に関連する）、ＣＩＡ  ０２０５（例えば、膀胱癌に関連する）、ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１、ベータカテニン（例えば、黒色腫に関連する）、ＴＣＲ（例えば、Ｔ細胞非ホジキンリンパ腫に関連する）、ＢＣＲ−ａｂｌ（例えば、慢性骨髄性白血病に関連する）、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＭＡ  ０２０５、ＣＤＣ−２７、及びＬＤＬＲ−ＦＵＴ、（ｃ）過剰発現抗原、例えばガレクチン４（例えば、結腸直腸癌に関連する）、ガレクチン９（例えば、ホジキン病に関連する）、プロテイナーゼ３（例えば、慢性骨髄性白血病に関連する）、ウィルムス腫瘍抗原−１（ＷＴ  １、例えば、様々な白血病に関連する）、炭酸脱水酵素（例えば、腎臓癌に関連する）、アルドラーゼＡ（例えば、肺癌に関連する）、ＰＲＡＭＥ（例えば、黒色腫に関連する）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（例えば、乳癌、結腸癌、肺癌、及び卵巣癌に関連する）、アルファフェトプロテイン（例えば、肝癌に関連する）、ＫＳＡ（例えば、結腸直腸癌に関連する）、ガストリン（例えば、膵臓癌及び胃癌に関連する）、テロメラーゼ触媒性タンパク質、ＭＵＣ−１（例えば、乳癌及び卵巣癌に関連する）、Ｇ−２５０（例えば、腎細胞癌腫に関連する）、ｐ５３（例えば、乳癌、結腸癌に関連する）、及び癌胎児性抗原（例えば、乳癌、肺癌、及び直腸結腸癌等の消化管の癌）、（ｄ）共有抗原、例えばＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ  Ａ、ｇｐ１００、ＭＣ１Ｒ、メラノサイト刺激ホルモン受容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質−１／ＴＲＰ１、及びチロシナーゼ関連タンパク質−２／ＴＲＰ２等の黒色腫−メラノサイト分化抗原（例えば、黒色腫に関連する）、（ｅ）前立腺関連抗原、例えば前立腺癌に関連する、例えばＰＡＰ、前立腺血清抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＭＡ、ＰＳＨ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ２、（ｆ）免疫グロブリンイディオタイプ（例えば、骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫に関連する）、ならびに（ｇ）他の腫瘍抗原、例えばポリペプチド含有抗原、ならびに（ｉ）担体タンパク質に連結されている（例えば、ＭＵＣ−１は、ＫＬＨに連結される）糖タンパク質、例えばシアリルＴｎ及びシアリルＬｅ．ｓｕｐ．ｘ（例えば、乳癌及び結腸直腸癌に関連する）、及び様々なムチン、（ｉｉ）リポポリペプチド（例えば、脂質部分に結合されたＭＵＣ−１）、（ｉｉｉ）担体タンパク質に（例えばＫＬＨに）連結された多糖類（例えば、Ｇｌｏｂｏ  Ｈ合成六糖）、（ｉｖ）担体タンパク質に（例えばＫＬＨ��）連結されたガングリオシド、例えばＧＭ２、ＧＭ１２、ＧＤ２、ＧＤ３（例えば、脳癌、肺癌、黒色腫に関連する）を含む糖類含有抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【０４３１】
本発明での使用に適している他の代表的な腫瘍抗原には、ＴＡＧ−７２（例えば、米国特許第５，８９２，０２０号を参照されたい；ヒト癌腫抗原（例えば、米国特許第５，８０８，００５号を参照されたい）；骨癌細胞由来のＴＰ１及びＴＰ３抗原（例えば、米国特許第５，８５５，８６６号を参照されたい）；腺癌細胞由来のトムゼン‐フリーデンライヒ（ＴＦ）抗原（例えば、米国特許第５，１１０，９１１号を参照されたい）；ヒト前立腺腺癌由来のＫＣ−４抗原（例えば、米国特許第４，７４３，５４３号を参照されたい）；ヒト直腸結腸癌抗原（例えば、米国特許第４，９２１，７８９号を参照されたい）；嚢胞腺癌由来のＣＡ１２５抗原（例えば、米国特許第４，９２１，７９０号を参照されたい）；ヒト乳癌由来のＤＦ３抗原（例えば、米国特許第４，９６３，４８４号及び同第５，０５３，４８９号を参照されたい）；ヒト乳腺腫瘍抗原（例えば、米国特許第４，９３９，２４０号を参照されたい）；ヒト黒色腫のｐ９７抗原（例えば、米国特許第４，９１８，１６４号を参照されたい）；癌腫またはオロソムコイド関連抗原（ＣＯＲＡ）（例えば、米国特許第４，９１４，０２１号を参照されたい）；ヒト乳癌の糖タンパク質中のＴ及びＴｎハプテン；ＭＳＡ乳癌糖タンパク質；ＭＦＧＭ乳癌抗原；ＤＵ−ＰＡＮ−２膵臓癌抗原；ＣＡ１２５卵巣癌抗原；ＹＨ２０６肺癌抗原；アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）；肝細胞癌抗原；癌胎児性抗原（ＣＥＡ）；腸癌抗原；上皮性腫瘍抗原（ＥＴＡ）；乳癌抗原；チロシナーゼ；ｒａｆ発癌遺伝子産物；ｇｐ７５；ｇｐ１００；ＥＢＶ−ＬＭＰ  １＆２；ＥＢＶ−ＥＢＮＡ  １、２＆３Ｃ；ＨＰＶ−Ｅ４、６、７、ＣＯ１７−１Ａ；ＧＡ７３３；ｇｐ７２；ｐ５３；プロテイナーゼ３；テロメラーゼ；及び黒色腫ガングリオシドが含まれる。本明細書において特徴付けられているかどうかにかかわらず、これら及び他の腫瘍抗原は、本発明での使用について企図される。
【０４３２】
ある特定の実施形態において、該腫瘍抗原は、変異または改変型細胞組成に由来する。改変された細胞組成の代表的な例としては、ｒａｓ、ｐ５３、Ｒｂ、ウィルムス腫瘍遺伝子によってコードされた改変型タンパク質、ユビキチン、ムチン、ＤＣＣ、ＡＰＣ、及びＭＣＣ遺伝子によってコードされたタンパク質、ならびにｎｅｕ、甲状腺ホルモン受容体、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体、インスリン受容体、上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体、及びコロニー刺激因子（ＣＳＦ）受容体等の受容体または受容体様構造が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４３３】
本発明に使用されるポリヌクレオチド含有抗原には、上記に列挙されるもの等のポリペプチド腫瘍抗原をコードするポリヌクレオチドが含まれる。ある特定の実施形態において、該ポリヌクレオチド含有抗原には、インビボでポリペプチド腫瘍抗原を発現することが可能なプラスミドベクター（例えば、ｐＣＭＶ）等のＤＮＡまたはＲＮＡベクター構築物が含まれるが、これらに限定されない。
【０４３４】
本発明はまた、免疫抑制されているか、もしくはされてきた患者、例えば、骨髄移植、造血幹細胞移植を受けたか、または他の様式で免疫抑制を受けている患者において有効な抗ウイルス免疫を引き出すようにＴ細胞を刺激することが可能なウイルス抗原を含む複合体の調製も企図する。
【０４３５】
同様に、癌の発生率の増加に関連するか、または発癌性であることが報告されているウイルス、例えばヒトパピローマウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、及びＢ型肝炎ウイルスに由来する抗原が、本発明での使用について企図される。
【０４３６】
例えば、ある特定の実施形態において、該腫瘍抗原には、ｐ１５、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、Ｈ−Ｒａｓ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタインバーウイルス抗原、Ｅ６及びＥ７を含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｂ型及びＣ型肝炎ウイルス抗原、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス抗原、ＴＳＰ−１８０、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｍｎ−２３Ｈ１、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１  Ｔｇｐ７２、ベータ−ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３（ＣＡ  ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ等が含まれるが、これらに限定されない。
【０４３７】
上記に列挙または参照される抗原は、例示的であり、本発明を限定するものではない。
【０４３８】
本発明はまた、本発明の有効量のペプチド複合体、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒、及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物に関する。
【０４３９】
本発明は、有効量の本発明のペプチド、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物、及び薬学的に許容される担体薬学的組成物に関する。
【０４４０】
薬学的組成物は、有効量の２つ以上の本発明のペプチド、２つ以上の本発明のペプチド複合体、または１つ以上の本発明のペプチド及び１つ以上の本発明ペプチド複合体のペプチド複合体を組み合わせで含んでもよい。
【０４４１】
「薬学的に許容される担体」という用語は、本発明のペプチドもしくはペプチド複合体、またはそれらの薬学的に許容される塩または溶媒、及び薬学的に許容される担体と共に対象に投与され得る担体（アジュバントまたはビヒクル）を指す。
【０４４２】
該組成物に使用され得る薬学的に許容される担体には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ｄ−α−コハク酸トコフェロールポリエチレングリコール１０００等の自己乳化薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）、Ｔｗｅｅｎｓまたは他の同様の重合送達マトリックス等の薬学的投与剤形に使用される界面活性剤、ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質、ホスフェート等の緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックスポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロック重合体、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂が含まれるが、これらに限定されない。α−、β−、及びγ−シクロデキストリン等のシクロデキストリン、または２−及び３−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含むヒドロキシアルキルシクロデキストリン等の化学的に修飾された誘導体、または他の可溶化誘導体が、送達の増強のために有利に使用されてもよい。油剤または懸濁液はまた、乳剤及び／または懸濁液等の薬学的に許容される投与剤形の製剤化において一般的に使用される長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤、またはカルボキシメチルセルロースもしくは同様の分散剤を含有してもよい。
【０４４３】
該組成物は、経口または非経口（局所、皮下、筋肉内、及び静脈内を含む）投与を含むがこれらに限定されない、任意の選択された経路による対象への投与を可能にするように製剤化される。
【０４４４】
例えば、該組成物は、意図される投与経路及び標準薬務を考慮して選択された適切な薬学的に許容される担体（賦形剤、補助剤、及びそれらの組み合わせ）で製剤化されてもよい。例えば、該組成物は、粉薬、液体、錠剤、もしくはカプセル剤として経口で、または軟膏、クリーム、もしくはローションとして局所的に投与され得る。好適な製剤は、乳化剤、抗酸化剤、または着色剤を含む、必要に応じた追加の薬剤を含有し得、即時放出、遅延放出、調節性放出、持効性放出、脈動性放出、または徐放性に適合され得る。
【０４４５】
該組成物は、生物学的利用能、免疫原性を最適化するため、または血漿、血液、または長期間を含め、組織濃度を免疫原性または治療範囲内に維持するために製剤化され得る。制御送達調製を使用して、例えば、活性の部位における抗原濃度を最適化することもできる。
【０４４６】
該組成物は、定期的な投与、例えば継続的な曝露を提供するように製剤化されてもよい。有効な免疫学的応答を引き出すための戦略、例えば、１つ以上の「ブースター」ワクチン接種を用いるものは、当該技術分野で周知であり、かかる戦略を採用してもよい。
【０４４７】
該組成物は、非経口経路を介して投与されてもよい。非経口投与剤形の例としては、水溶液、等張生理食塩水もしくは活性薬剤の５％のグルコース、または他の周知の薬学的に許容される賦形剤が挙げられる。例えば、シクロデキストリン、または当業者には周知である他の可溶化剤を、治療剤の送達のための薬学的賦形剤として利用することができる。
【０４４８】
経口投与に好適な投与剤形の例としては、該組成物の治療有効量を提供することが可能な錠剤、カプセル、甘味入り錠剤、もしくは類似形態、または任意の液体形態、例えばシロップ剤、水溶液、乳剤等が挙げられるが、これらに限定されない。カプセルは、任意の標準的な薬学的に許容される材料、例えばゼラチンまたはセルロースを含有してもよい。錠剤は、従来の手順に従って活性成分の混合物を固形担体及び滑沢剤と圧縮することで製剤化することができる。固形担体の例としては、デンプン及び糖ベントナイト（ｓｕｇａｒ  ｂｅｎｔｏｎｉｔｅ）が挙げられる。活性成分を、結合剤、例えばラクトースまたはマンニトール、従来の充填剤、及び打錠剤を含有するハードシェル錠剤またはカプセルの形態で投与することもできる。
【０４４９】
経皮投与に好適な投与剤形の例としては、経皮パッチ、経皮包帯等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４５０】
該組成物の局所投与に好適な投与剤形の例としては、皮膚に直接適用されるか、またはパッド、パッチ等の媒介を介して適用されるかどうかにかかわらず、任意のローション、スティック、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ゲル等が挙げられる。
【０４５１】
該組成物の坐薬投与に好適な投与剤形の例としては、開口部に挿入される任意の固形投与剤形、特に直腸、腟、尿道に挿入されるものが挙げられる。
【０４５２】
該組成物の注射に好適な形態の投与の例としては、静脈内注射、皮下、真皮下、及び筋肉内投与、または経口投与による単一または多回投与等のボーラスを介した送達が挙げられる。
【０４５３】
該組成物のデポー剤投与に好適な投与剤形の例としては、ペプチドもしくはペプチド複合体のペレット剤、またはペプチドまたはペプチド複合体が生分解性重合体、マイクロエマルション、リポソーム中に封入されているか、またはマイクロカプセル化されている固形形態が挙げられる。
【０４５４】
該組成物のための注入器の例としては、所望の数の用量または定常状態での投与を提供するための注入ポンプが挙げられ、植込み型薬物ポンプが含まれる。
【０４５５】
該組成物の植込み型注入器の例としては、ペプチドまたはペプチド複合体が、生分解性重合体、もしくはシリコン、シリコンゴム、シラスチック製等の合成重合体、または同様の重合体内にカプセル化されているか、またはその全体に分散されている任意の固形形態が挙げられる。
【０４５６】
該組成物の経粘膜送達に好適な投与剤形の例としては、活性成分に加え、適切であることが当該技術分野で既知である担体を含有する浣腸剤、膣坐薬、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡、霧状化溶液、紛薬、及び同様の製剤のための貯蔵溶液が挙げられる。かかる投与剤形には、薬学的に許容される水溶液もしくは有機溶液、またはその混合物の溶液及び／または懸濁液、及び／または紛薬のを含む組成物を含む該組成物の吸入、ガス注入に好適な形態が含まれる。該組成物の経粘膜投与は、任意の粘膜を利用してもよいが、一般的には、鼻組織、口腔組織、膣組織、及び直腸組織を利用する。該組成物の経鼻投与に好適な製剤は、液体形態、例えば点鼻噴霧、点鼻薬で、または重合体粒子の水溶液または油性溶液を含む噴霧器によるエアロゾル投与によって投与されてもよい。製剤は、例えば、生理食塩水、ベンジルアルコールもしくは他の好適な保存剤、生物学的利用能を増強させるための吸収促進剤、フッ化炭素、及び／または当該技術分野で既知の他の可溶化剤もしくは分散剤を用いた溶液中で、水溶液として調製されてもよい。
【０４５７】
該組成物の口腔または舌下投与に好適な投与剤形の例としては、甘味入り錠剤、錠剤等が挙げられる。該組成物の眼投与に好適な投与剤形の例としては、挿入物、及び／または薬学的に許容される水溶性または有機溶媒中の溶液及び／もしくは懸濁液を含む組成物が挙げられる。
【０４５８】
ワクチンを含む該組成物の製剤の例は、例えば、Ｓｗｅｅｔｍａｎ，Ｓ．Ｃ．（Ｅｄ．）．，ＭａｒｔｉｎｄａｌｅＴｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，３３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，２００２，２４８３ｐｐ．、Ａｕｌｔｏｎ，Ｍ．Ｅ．（Ｅｄ．）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ．Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍ  Ｄｅｓｉｇｎ．Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ，２０００，７３４  ｐｐ．、及びＡｎｓｅｌ，Ｈ．Ｃ．，Ａｌｌｅｎ，Ｌ．Ｖ．ａｎｄ  Ｐｏｐｏｖｉｃｈ，Ｎ．Ｇ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  １９９９，６７６ｐｐ．に見出すことができる。薬物送達システムの製造に用いられる賦形剤は、例えば、Ｋｉｂｂｅ，Ｅ．Ｈ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，２０００，６６５ｐｐ．を含む、当該技術分野で既知の様々な出版物に記載されている。米国薬局方はまた、錠剤またはカプセルとして製剤化されたものを含む、放出調節性経口投与剤形の例を提供する。例えば、持続放出及び遅延放出性錠剤及びカプセルの薬物放出能力を判定するための具体的な試験を記載する、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ２３／Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  １８，Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  ＭＤ，１９９５（以下、「ＵＳＰ」）を参照されたい。持続放出及び遅延放出性物品のための薬物放出についてのＵＳＰ試験は、経過時間に対する単位用量からの薬物溶出に基づく。様々な試験装置及び手順についての記載は、ＵＳＰ内に見出すことができる。持続放出性投与剤形の分析に関する更なる手引きは、Ｆ．Ｄ．Ａ．によって提供されてきた（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｒａｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ／ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ．Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ：Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，１９９７を参照されたい）。
【０４５９】
該組成物が１つ以上の外因性アジュバントを含む一方、いくつかの実施形態において、有利には、これは必要ではない。いくつかの実施形態において、該ペプチド複合体は、エピトープを含み、自己アジュバント性である。
【０４６０】
本発明は、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出す方法を提供し、該方法は、対象に、有効量の本発明のペプチド複合体またはペプチドを投与することを含む。本発明はまた、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための本発明のペプチド複合体またはペプチドの使用、及びワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための医薬品の製造における本発明のペプチド複合体またはペプチドの使用に関する。
【０４６１】
本発明はまた、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出す方法を提供し、該方法は、対象に、有効量の本発明の薬学的組成物を投与することを含む。本発明はまた、ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための本発明の薬学的組成物の使用、及びワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための医薬品の製造における１つ以上の本発明のペプチド複合体もしくは１つ以上の本発明のペプチド複合体の使用に関する。
【０４６２】
本発明は、対象において免疫応答を引き出す方法を提供し、該方法は、対象に、有効量の本発明のペプチドを投与することを含む。本発明はまた、免疫応答を引き出すための本発明の複合体の使用、及び対象において免疫応答を引き出すための医薬品の製造における本発明のペプチド複合体の使用に関する。
【０４６３】
本発明は、対象にワクチン接種する方法を提供し、該方法は、対象に、有効量の本発明のペプチドを投与することを含む。本発明はまた、免疫応答を引き出すための本発明の複合体の使用、及び対象において免疫応答を引き出すための医薬品の製造における本発明のペプチド複合体の使用に関する。
【０４６４】
ワクチン接種する、または対象において免疫応答を引き出すための、１つ以上の本発明のペプチド及び／または１つ以上の本発明のペプチド複合体、例えば、１つ以上のペプチド複合体と併せた１つ以上のペプチドの投与または使用が、本明細書で企図される。
【０４６５】
２つ以上のペプチド、２つ以上のペプチド複合体、または１つ以上のペプチド及び１つ以上のペプチド複合体が投与または使用される場合、該２つ以上のペプチド、２つ以上のペプチド複合体、または１つ以上のペプチド及び１つ以上のペプチド複合体は、同時に、順次、または別個に投与または使用される。
【０４６６】
「対象」は、哺乳動物、例えば、ヒトである脊椎動物を指す。哺乳動物には、ヒト、家畜、競技用動物、愛玩動物、霊長類、マウス、及びラットが含まれるが、これらに限定されない。
【０４６７】
「有効量」は、臨床結果を含む、有効な、または所望の結果をもたらすのに十分な量である。有効量は、様々な投与経路による１つ以上の投与によって投与されてもよい。
【０４６８】
有効量は、他の要因の中でも、示唆される疾患、疾患の重症度、対象の年齢及び関連する健康状態、投与される化合物の有効性、投与モード、及び所望される治療によって異なることになる。当業者であれば、これらの任意の他の関連要因を考慮して、適切な投与量を判定することができるであろう。
【０４６９】
組成物の有効性は、インビトロ及びインビボの両方において評価することができる。例えば、該組成物は、細胞媒介性免疫応答を誘発する能力について、インビトロまたはインビボで試験することができる。インビボ研究において、該組成物は、動物（例えば、マウス）中に与えられるか注射されてもよく、その後、免疫応答を引き出すことへのその効果が評価される。この結果に基づき、適切な投与量範囲及び投与経路を判定することができる。
【０４７０】
該組成物は、１回用量または多回用量スケジュールで投与されてもよい。多回投与は、一次免疫スケジュールにおいて、かつ／またはブースター免疫スケジュールにおいて使用され得る。
【０４７１】
ある特定の実施形態において、免疫応答を引き出すことは、免疫応答を上昇または増強させることを含む。例示的な実施形態において、免疫応答を引き出すことは、体液性及び細胞媒介性応答を引き出すことを含む。
【０４７２】
ある特定の実施形態において、免疫応答を引き出すことは、免疫を提供する。
【０４７３】
免疫応答は、疾患または状態を治療するために引き出される。当業者であれば、本明細書に記載されるペプチド及びペプチド複合体が、Ｂ細胞及びＴ細胞非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、ならびに上咽頭癌（ＮＰＣ）を含むがこれに限定されないリンパ上皮腫様癌腫を含む、ＥＢＶ関連腫瘍状態から選択される１つ以上の疾患または状態を含む、ＥＢＶに関連する様々な疾患及び状態の治療に有用であることを理解するであろう。
【０４７４】
いくつかの実施形態において、該疾患または状態は、癌、または骨髄移植後もしくは何らかの他の理由による重度の免疫抑制の誘発に続くウイルス再活性化である。
【０４７５】
本明細書で使用される「治療」、ならびに「治療すること」及び「治療する」等の関連する用語は、概して、いくつかの所望の治療効果が達成される、ヒトまたは非ヒト対象の治療に関する。治療効果は、例えば、疾患または状態の阻害、減少、寛解、休止、または予防であり得る。
【０４７６】
該組成物を使用して、全身免疫及び／または粘膜免疫を引き出し得る。増強された全身及び／または粘膜免疫は、増強されたＴＨ１及び／またはＴＨ２免疫応答に反映され得る。増強された免疫応答には、ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２ａ及び／またはＩｇＡの産生の増加が含まれ得る。
【０４７７】
本発明は前述の内容に存し、以下の内容が例を示すのみであって決してその範囲を限定するものではない構築物も想定する。
【実施例】
【０４７８】
実施例１．複合体２００、２０、２２、及び２６の調製
１．１概略的な詳細
市販の開始材料は、Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｊａｘ  Ｆｉｎｅｃｈｅｍ、Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ、ＣＥＭ、ＧＬ−Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｍｅｒｃｋ、ＮＯＶＡ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、及びＴＣＩから購入し、供給されたままに使用した。乾燥溶媒を、Ｎ２またはアルゴン雰囲気下での蒸留を通して調製した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を、ナトリウム／ベンゾフェノンケチル上で新たに蒸留する。メタノール（ＭｅＯＨ）及びトルエンを、水素化カルシウム上で新たに蒸留する。別途示されない限り、収率は、クロマトグラフ的及び分光学的に（１ＨｎｍＲ）均質な材料を指す。
【０４７９】
Ｍｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  Ｆ２５４２００μｍシリカ板上で薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を実行した。紫外線を可視化剤として、ならびに水溶性塩基溶液中の過マンガン酸カリウム及びエタノール溶液中のバニリンの一般的な現像剤を使用する。使用した具体的な現像剤は、一級アミンの同定のための酸を伴ったニンヒドリンのエタノール溶液である。任意の現像剤を使用するときに、熱を加える。フラッシュカラムクロマトグラフィーにシリカゲル（０．０６３〜０．１００ｍｍ）を使用する。
【０４８０】
ＣＤＣｌ３またはＤ２Ｏ中、１Ｈ核について４００ＭＨｚ及び１３Ｃ核について１００ＭＨｚで操作されるＢｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ４００分光器上で、室温で核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを得る。１Ｈ及び１３Ｃスペクトルについての参照ピークをそれぞれ、Ｄ２Ｏ中、ＣＤＣｌ３についてδ０．００及びδ７７．０、ならびに１Ｈスペクトルについてδ４．７９に設定した。ＮＭＲデータは、δスケール上の百万分率（ｐｐｍ）として化学シフトの値で報告され、結合定数はヘルツ（Ｈｚ）で報告される。多重度は、ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｄｄ＝二重線の二重線、ｄｔ＝三重線の二重線、ｔｔ＝三重線の三重線、ｄｑ＝四重線の二重線、ｄｑｎ＝五重線の二重線、ｓｘ＝六重線、ｂｒ  ｓ＝ブロードな一重線、及びｍ＝多重線として報告される。Ｃｑの割り当てを使用して、四級炭素を示す。
【０４８１】
Ｂｒｕｋｅｒ  ｍｉｃｒｏＯＴＯＦ−Ｑ  ＩＩ質量分析器上で、５０００の整数分解能で高分解能質量分析スペクトルを取得する。Ｆｉｎｎｉｇａｎ  Ｓｕｒｖｅｙｏｒ  ＭＳＱ  Ｐｌｕｓ質量分析器を伴うＤｉｏｎｅｘ  ＵｌｔｉＭａｔｅ  ３０００  ＨＰＬＣシステムまたはＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｓｅｒｉｅｓ  １１００  ＭＳＤを伴うＡｇｉｌｅｎｔ  １１２０  Ｃｏｍｐａｃｔ  ＬＣシステムのいずれかで、分析高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）及び液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）クロマトグラムを得る。ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ溶媒システムを使用して分析逆相（ＲＰ）ＨＰＬＣを実行する。
【０４８２】
ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ溶媒システムを使用してＤｉｏｎｅｘ  ＵｌｔｉＭａｔｅ  ３０００  ＨＰＬＣシステム上で分取ＲＰ  ＨＰＬＣを実行する。ＣＥＭ  Ｌｉｂｅｒｔｙ  Ａｕｔｏｍａｔｅｄ  Ｍｉｃｒｏｗａｖｅシステムを使用してマイクロ波反応を実行する。
【０４８３】
１．２ペプチド鎖伸長のための概略的方法
手動合成法
膨潤したペプチド−樹脂を、ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中、２０％ｖ／ｖのピペリジンで処理し、室温で２０分間、振盪する。溶液を排水し、樹脂をＤＭＦ（×２）及びＤＣＭ（×２）で洗浄する。ＤＭＦ（１ｍＬ）中、Ｆｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨ（２．０当量）、ＨＢＴＵ（２．０当量）、及びｉＰｒ２ＮＥｔ（４．０当量）の連結混合物を添加して、樹脂を１時間、振盪する。樹脂を再び排水して、洗浄する。配列内の残りの残基について、この手順を繰り返す。
【０４８４】
自動合成法（標準、０．２ｍｍｏｌスケール）
Ｔｒｉｂｕｔｅ自動ペプチド合成機の反応容器にペプチド−樹脂を移す。Ｆｍｏｃ脱保護及びＦｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨ連結ステップのサイクルで自動合成を行う。ＤＭＦ（６．０ｍＬ）中、２０％ｖ／ｖのピペリジンの添加及び撹拌（２×７分）によって脱保護を行う。樹脂排水及びＤＭＦ洗浄（４ｍＬ×３）に続いて、ＨＢＴＵ（０．２４ｍＭ、ＤＭＦ中、４ｍＬ）中に溶解した５当量のＦｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨで連結ステップを実行する。ＤＭＦ（４ｍＬ）中、２ＭのＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）を塩基添加ステップに利用する。連結を１時間、続行する。ＤＭＦ洗浄ステップの後、脱保護及び連結の次のサイクルを開始し、全てのアミノ酸が連結されるまで繰り返す。
【０４８５】
システイン誘導体の連結のための手順（０．１ｍｍｏｌスケール）
ペプチド−樹脂を、１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ中で３０分間、膨潤させ、次いで排水する。Ｃｙｓアミノ酸（０．２ｍｍｏｌ、２当量）、ＢＯＰ（０．４ｍｍｏｌ、４当量）、及びＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ（０．４ｍｍｏｌ、４当量）の連結混合物を、１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ（２ｍＬ）中で溶解する。次いで、２，４，６−コリジン（０．４ｍｍｏｌ、４当量）を添加し、結果として生じる溶液をペプチド−樹脂に添加する。樹脂を１時間、またはニンヒドリン試験が遊離アミン不含有であることを示すまで撹拌する。その後、樹脂を排水し、ＤＭＦ（２×）及びＣＨ２Ｃｌ２（２×）で洗浄し、乾燥させる。
【０４８６】
ニンヒドリン試験手順
少量の樹脂を採取し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄して、乾燥させる。ＥｔＯＨ中、５％ｖ／ｖのニンヒドリン、ＥｔＯＨ中、８０％ｗ／ｖのフェノール、及びピリジン中、２％ｖ／ｖのＫＣＮの溶液を各１滴、樹脂に添加し、混合物を９０℃で２分間、加熱する。青色ビーズ及び溶液は、遊離一級アミンの存在を示す一方、黄色は、遊離アミノ基が存在しないことを示した。
１．３アミノ酸複合体２００の調製
Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル−［Ｒ］−システイン
【化２９】
2018505152.tif 000043
【０４８７】
Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（１．０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中で溶解する。ＴＦＡ（１．５ｍＬ、１９．６ｍｍｏｌ）及びｉＰｒ３ＳｉＨ（０．７５ｍＬ）を添加し、それにより溶液が黄色に変化する。溶液を室温で２時間、撹拌し、その時点で溶液は無色に変化する。Ｎａ２ＣＯ３．Ｈ２Ｏの添加によって混合物をｐＨ９まで塩基性に変化させ、ＥｔＯＡｃで洗浄する。溶液を１０ＭのＨＣｌで酸性に変化させ、ＥｔＯＡｃで抽出し、減圧下で濃縮して、白色の粉末及びピンク色の残基を得る。粉末及び残基を、４：１のＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ中で溶解して凍結乾燥させ、粗ピンク−白色粉末を得る（４２４ｍｇ、粗収率７３．１％）。この粗生成物を、以下に記載されるチオール−エン反応まで存続させる。
（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−（（２−（パルミトイルオキシ）エチル）チオ）プロパン酸（２００）
【化３０】
2018505152.tif 000044
【０４８８】
熱開始（Ｌｉ，Ｊ．Ｄｏｎｇ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｓ  ａｎ  Ｅｘｐａｎｄｉｎｇ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ：Ｆｕｌｌｙ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｆｕｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  Ｈｏｒｍｏｎｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（１−１４１）．Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ２０１２，５１（４９），１２２６３−１２２６７）。
【０４８９】
Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＨ（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、パルミチン酸ビニル（４７６μＬ、１．５ｍｍｏｌ）、及びＡＩＢＮ（９．６ｍｇ、５９μｍｏｌ）を、脱気された１，２−ジクロロエタン（３ｍＬ）中で溶解する。次いで、反応混合物を還流下（９０℃）で２４時間、加熱し、その後、ＴＬＣがＦｍｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＨの完全消費を示した。次いで、溶液を室温まで冷却する。溶媒を、減圧下で除去する。粗生成物中の所望の生成物２００の存在を、質量分析法によって確認する。
【０４９０】
光開始
Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＨ（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、脱気された無水ＤＭＦ（５００μＬ）中で溶解する。パルミチン酸ビニル（９０μＬ、０．３ｍｍｏｌ）及びＤＭＰＡ（５．０ｍｇ、２０μｍｏｌ）を、脱気されたＣＨ２Ｃｌ２（２００μＬ）中で溶解する。２つの溶液を複合し、結果として生じる混合物を、標準光化学装置中で６時間（３６５ｎｍのＵＶ）、照射する。ＴＬＣによって反応混合物中に更なる変化が認められなくなったら、溶媒を減圧下で除去する。粗生成物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（３：１のＥｔＯＡｃ：ｎ−ヘキサン＋２％ＡｃＯＨ）によって精製し、続いて、１：１のＨ２Ｏ：ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡから凍結乾燥させて、粉末状の白色固体（２４ｍｇ、１３％）としての標記化合物を得る。所望の生成物２００の構造を、質量分析法によって確認する。
１．４ペプチド複合体２０、２２、及び２６の調製
ペプチド
【化３１】
2018505152.tif 000045
【０４９１】
１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ中で予め膨潤させたアミノメチルポリスチレン（ＰＳ）樹脂（０．２０ｇ、１．０ｍｍｏｌ／ｇ充填、０．２ｍｍｏｌスケール）に、ＤＭＦ（３ｍＬ）中で、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ−Ｏ−ＣＨ２−ファイ−ＯＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨ（１５５．２ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１１３．８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、及びｉＰｒ２ＮＥｔ（１０４μＬ、０．６ｍｍｏｌ）の連結混合物を添加する。樹脂を室温で２時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して完全な連結を監視する。次いで、ＤＭＦ（５ｍＬ）中、２０％ｖ／ｖのピペリジンで、室温で２０分間、樹脂を処理することによりＦｍｏｃ−Ｖａｌアミノ基を脱保護する。Ｔｒｉｂｕｔｅ自動ペプチド合成機に樹脂を移す。一般的な自動連結法を使用して、Ｓｅｒ残基まで、かつそれを含む鎖伸長を実行する。１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ（２ｍＬ）中で、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（２３５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（３６０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ（１２０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、及び２，４，６−コリジン（１２０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の混合物の添加により、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ残基の連結を手動で実行する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して完全な連結を監視する。ＤＭＦ（５ｍＬ）中２０％ｖ／ｖのピペリジンで、室温で２０分間、樹脂を処理することにより最終的なＦｍｏｃ脱保護を達成する。
【０４９２】
Ｆｍｏｃ脱保護の後、ＤＭＦ（３ｍＬ）中で、無水酢酸（５０μＬ）及びｉＰｒ２ＮＥｔ（５０μＬ）を樹脂に添加することでＮ−アセチル化を実行する。次いで、樹脂を室温で３０分間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して遊離アミンが残っていないことを確認する。樹脂を排水し、ＤＭＦ及びＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、風乾する。ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＤＯＤＴ：ｉＰｒ３ＳｉＨ（９４：２．５：２．５：１％ｖ／ｖ、１０．０ｍＬ）の切断カクテルを乾燥樹脂に添加し、混合物を室温で４時間、振盪する。次いで、切断カクテルを冷たいジエチルエーテルで処理して、粗ペプチドを沈澱させ、これを４０００ｒｐｍで５分間、遠心分離させる。スピンステップを繰り返す前に、上澄みを廃棄し、ペレットをジエチルエーテルで洗浄する。次いで、エーテル相を廃棄し、Ｎ２フローでペプチドを乾燥させる。次いで、粗ペプチドを、Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡから凍結乾燥させる。粗生成物を、以下に概説されるチオール−エン反応まで存続させる。
Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２
【化３２】
2018505152.tif 000046
【０４９３】
１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ中で予め膨潤させたアミノメチルポリスチレン（ＰＳ）樹脂（０．２０ｇ、１．０ｍｍｏｌ／ｇ充填、０．２ｍｍｏｌスケール）に、ＤＭＦ（２ｍＬ）中、Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−アミド−ＯＨ（２１６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１５１．８ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、及びｉＰｒ２ＮＥｔ（１４０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の連結混合物を添加する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して完全な連結を確立する。次いで、ＤＭＦ（５ｍＬ）中、２０％ｖ／ｖのピペリジンで、室温で２０分間、樹脂を処理することによりリンカーアミノ基を脱保護する。Ｔｒｉｂｕｔｅ自動ペプチド合成機に樹脂を移す。一般的な自動連結法を使用して、Ｓｅｒ残基まで、かつそれを含む鎖伸長を実行する。１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ（２ｍＬ）中で、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（２３５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（３６０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ（１２０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、及び２，４，６−コリジン（１２０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の混合物の添加により、Ｃｙｓ残基の連結を手動で実行する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して完全な連結を確立する。ＤＭＦ（５ｍＬ）中２０％ｖ／ｖのピペリジンで、室温で２０分間、樹脂を処理することにより最終的なＦｍｏｃ脱保護を達成する。樹脂を排水し、ＤＭＦ及びＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、風乾する。ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＤＯＤＴ：ｉＰｒ３ＳｉＨ（９４：２．５：２．５：１％ｖ／ｖ、１０．０ｍＬ）の切断カクテルを乾燥樹脂に添加し、混合物を室温で４時間、振盪する。次いで、切断カクテルを冷たいジエチルエーテルで処理して、粗ペプチドを沈澱させ、これを４０００ｒｐｍで５分間、遠心分離させる。スピンステップを繰り返す前に、上澄みを廃棄し、ペレットをジエチルエーテルで洗浄する。次いで、エーテル相を廃棄し、Ｎ２フローでペプチドを乾燥させる。次いで、粗ペプチドを、Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡから凍結乾燥させる。粗生成物を、以下に概説されるチオール−エン反応まで存続させる。
Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２２４
【化３３】
2018505152.tif 000047
【０４９４】
１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ中で予め膨潤させたアミノメチルポリスチレン（ＰＳ）樹脂（０．２０ｇ、１．０ｍｍｏｌ／ｇ充填、０．２ｍｍｏｌスケール）に、ＤＭＦ（２ｍＬ）中、Ｆｍｏｃ−Ｒｉｎｋ−アミド−ＯＨ（２１６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１５１．８ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、及びｉＰｒ２ＮＥｔ（１４０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の連結混合物を添加する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験が完全な連結を示した。次いで、ＤＭＦ（５ｍＬ）中、２０％ｖ／ｖのピペリジンで、室温で２０分間、樹脂を処理することによりリンカーアミノ基を脱保護する。Ｔｒｉｂｕｔｅ自動ペプチド合成機に樹脂を移す。一般的な自動連結法を使用して、Ｓｅｒ（Ｔｒｔ）残基まで、かつそれを含む鎖伸長を実行する。１：１のＣＨ２Ｃｌ２：ＤＭＦ（２ｍＬ）中で、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（２３５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ（３６０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ（１２０ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、及び２，４，６−コリジン（１２０μＬ、０．８ｍｍｏｌ）の混合物の添加により、Ｃｙｓ残基の連結を手動で実行する。樹脂を室温で１時間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して完全な連結を確立する。Ｆｍｏｃ脱保護の後、ＤＭＦ（３ｍＬ）中で、無水酢酸（５０μＬ）及びｉＰｒ２ＮＥｔ（５０μＬ）を樹脂に添加することでＮ−アセチル化を実行する。次いで、樹脂を室温で３０分間、振盪し、その後、ニンヒドリン試験を実行して遊離アミンが残っていないことを確立する。樹脂を排水し、ＤＭＦ及びＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、風乾する。ＴＦＡ：Ｈ２Ｏ：ＤＯＤＴ：ｉＰｒ３ＳｉＨ（９４：２．５：２．５：１％ｖ／ｖ、１０．０ｍＬ）の切断カクテルを乾燥樹脂に添加し、混合物を室温で２時間、振盪する。次いで、切断カクテルを冷たいジエチルエーテルで処理して、粗ペプチドを沈澱させ、これを４０００ｒｐｍで５分間、遠心分離させる。スピンステップを繰り返す前に、上澄みを廃棄し、ペレットをジエチルエーテルで洗浄する。次いで、エーテル相を廃棄し、Ｎ２フローでペプチドを乾燥させる。次いで、粗ペプチドを、Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡから凍結乾燥させる。粗生成物を、以下に概説されるチオール−エン反応まで存続させる。
ペプチド複合体
Ａｃ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２２４及びパルミチン酸ビニル２２のチオール-エン反応生成物
【化３４】
2018505152.tif 000048
【０４９５】
ｎｍＰ（４ｍＬ）の溶液中の粗ペプチド２４（２５ｍｇ、３２．６μｍｏｌ）及びＤＭＰＡ（３．３ｍｇ、１３．１μｍｏｌ）に、パルミチン酸ビニル（５２．９μＬ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加する。結果として生じる混合物を、３６５ｎｍで１時間、標準ＵＶ光化学装置中で撹拌しながら照射する。所望の生成物２２を、質量分析によって検出する。分取ＲＰ  ＨＰＬＣを介して、５〜６５％の勾配でＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ（毎分３％ＭｅＣＮ、５０℃）で運転されるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８カラムで粗生成物２２を精製する。質量分析法を使用して、所望の生成物２２の構造を確認する。
Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２及びパルミチン酸ビニル２０のチオール-エン反応生成物
【化３５】
2018505152.tif 000049
【０４９６】
ｎｍＰ中、５当量のパルミチン酸ビニル、０．４当量のＤＭＰＡと、粗Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−ＮＨ２との、３６５ｎｍでの１時間の照射によるチオール−エン反応によって所望の生成物２０（Ｐａｍ−ＣＳＫ４）を得て、その素性をＭＳ分析によって判定する。
ＡｃＮ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＯＨ２５及びパルミチン酸ビニル２６のチオール−エン反応生成物
【化３６】
2018505152.tif 000050
【０４９７】
ｎｍＰ（３ｍＬ）の溶液中の粗ペプチド２５（２０ｍｇ）及びＤＭＰＡ（１．２ｍｇ、４．７４μｍｏｌ）に、パルミチン酸ビニル（１９．２μＬ、５９．３μｍｏｌ）を添加する。結果として生じる混合物を、３６５ｎｍで１時間、標準光化学装置中で撹拌しながら照射する。所望の生成物２６を、質量分析によって検出する。分取ＲＰ  ＨＰＬＣを介して、５〜６５％の勾配でＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ（毎分３％ＭｅＣＮ、５０℃）で運転されるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８カラムで粗生成物２６を精製する。質量分析法を使用して、所望の生成物２６及び酸化Ｍｅｔ（Ｏ）副生成物の構造を確認する。
【０４９８】
１．５ペプチド上のチオール−エン反応の概略的方法
ＤＭＳＯ溶液中の粗ペプチドまたは精製されたペプチド（１０ｍＭ）、ＤＴＴ（３０ｍＭ）、及びＤＭＰＡ（４ｍＭ）に、パルミチン酸ビニル（５０ｍＭ）を添加する。結果として生じる混合物を、３６５ｎｍで１５分間、標準ＵＶ光化学装置中で撹拌しながら照射する。所望の生成物を、ＥＳＩ質量分析によって検出する。完全な変換を達成するため、ＤＭＰＡ光開始剤の更なる添加が時には必要とされる。分取ＲＰ  ＨＰＬＣを介して、１〜６５％の勾配でＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ（毎分３％ＭｅＣＮ）で運転されるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８カラムで粗生成物を精製する。貯えた画分を凍結乾燥させて、白色粉末としての純生成物を得る。
【０４９９】
１．６考察
５当量のアルケン及び０．２当量のＡＩＢＮをラジカル開始剤として使用して、パルミチン酸ビニルとのＦｍｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＨの熱反応を１，２−ジクロロエタン中で行う。
【０５００】
還流下（９０度）で２４時間、反応を実行する。ある特定の実施形態において、マイクロ波加熱（１００Ｗ、１時間）も使用する。所望の生成物を、ＴＬＣによって検出する。いくつかの実施形態において、いくつかの副生成物も形成される。
【０５０１】
１当量のパルミチン酸ビニル及び０．２当量のＤＭＰＡを光開始剤として該反応の光開始を行う。脱気されたＤＭＦ：ＤＣＭ溶媒混合物中で反応を行い、３６５ｎｍのＵＶ光で１時間、標準光化学装置中で照射する。Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ−ＯＨのほぼ完全な変換を、ＴＬＣによって監視する。望ましくは、最小の副生成物が形成される。精製は、およそ正当〜高い収率で生成物２００を提供する。２当量のパルミチン酸ビニルの使用は、精製後に、高い収率で生成物２００を提供する。
【０５０２】
ＮＡｃ−ＣＳＫ４を使用してチオール−エン反応を実施する。必要とされるペプチドモチーフ２４を、上記のように合成する。Ｒｉｎｋ−アミドリンカーのアミノメチル樹脂への結合に続いて、自動Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳ（標準連結条件）を使用してＳＫ４配列を構築する。次いで、エピマー化を低減させる条件を使用してＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨを手動で連結する。次いで、Ｎ−アセチル化を実施する。
【０５０３】
副生成物の形成が、システインのｔｅｒｔ−ブチル化（＋５６）に起因して樹脂からのペプチドの切断の際に生じるのかを確立するために、質量分析が使用される。Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）−ＯＨの代わりにＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｔｒｔ）−ＯＨを利用したＮＡｃ−ＣＳＫ４の合成を繰り返すことを、いくつかの実施形態において使用して、システイン−アルキル化生成物不含有の生成物を産生する。ペプチドを切断し、次いで、凍結乾燥させる。
【０５０４】
次いで、パルミチン酸ビニルとの粗ペプチド２４のチオール−エン反応を実施する。Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）は、親水性ＣＳＫ４ペプチド及び疎水性パルミチン酸ビニル分子の両方を有効に溶媒和させる。
【０５０５】
粗ペプチド及び精製されたペプチド上で、パルミチン酸ビニルの過剰（２０当量まで）を使用してＡＩＢＮ及びマイクロ波加熱を使用した熱開始を実施する。反応の光開始は、ある特定の実施形態において、より良い結果を提供する。光開始剤としてのＤＭＰＡを伴って粗ペプチドを使用して、反応は、ある特定の実施形態において、１時間の照射（２ｍＬのＮＭＰ中、５当量のパルミチン酸ビニル、０．４当量のＤＭＰＡ）の後に完了する。所望の生成物を、ＭＳによって確認する（理想的には、ＨＰＬＣによる＞９０％変換、６０％純度）。
【０５０６】
有利には、チオール−エンの連結前に、切断後の精製を必要としない。ＲＰ−ＨＰＬＣによる精製は、典型的には非効率であり、＞５０％の材料の損失が一般的である。一般に、可能である場合には、必要とされるＨＰＬＣ精製ステップの数を低減することが有利である。
【０５０７】
５〜９５％の勾配でＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．１％ＴＦＡ、毎分３％ＭｅＣＮで運転されるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８カラムを使用した分取ＲＰ−ＨＰＬＣによってＮ−アセチル化モノアシルリポペプチド２２の精製が達成される。次いで、精製されたペプチドを凍結乾燥させて、白色粉末としての所望の生成物を得る。
【０５０８】
ペプチド濃度を２５ｍＭに増加させることで、ある特定の実施形態において、副生成物の形成において微減がもたらされる（例えば、ＨＰＬＣによる＞９０％変換、８０％純度）。濃度を５ｍＭに減少されることは、ある特定の場合において、逆の効果を有する。
【０５０９】
グルタチオン（ＧＳＨ）（３当量）の存在下で、５ｍＭの濃度のペプチドとのＮＭＰ：Ｈ２Ｏ：ＤＭＳＯ（４：２：１）の混合物の反応を実施することで、ある特定の場合において、混合ジスルフィド形成（例えば、ＨＰＬＣによる５０％変換、７５％純度）がもたらされる。ＮＭＰ中の２，２’−（エチレンジオキシ）ジエタンチオール（ＤＯＤＴ）（３当量）を５ｍＭの濃度のペプチドと共に使用することで、ある特定の場合において、生成物の複合混合物（例えば、ＨＰＬＣによる８０％変換）がもたらされる。
【０５１０】
ある特定の実施形態において、反応混合物（ＮＭＰ中、１０ｍＭのペプチド）への３当量のＤＴＴの添加は、認められたパルミチン酸ビニルのテロメル化、または混合ジスルフィドの結果として生じる副生成物の不在をもたらし、反応は、高変換で進行する（例えば、ＨＰＬＣによる＞９０％変換、８５％純度）。ＤＴＴを使用することで、良性、かつより多目的な溶媒であるＤＭＳＯ中で反応（２５ｍＭのペプチド）を行うことも可能である（例えば、ＨＰＬＣによる９０％変換、＞９５％純度を達成するため）。
【０５１１】
チオール−エン反応はまた、非アセチル化類似体ＣＳＫ４を使用して実施される。上記の手順を利用してＣＳＫ４モチーフの合成を実施する。次いで、ペプチドを樹脂から切断して、凍結乾燥させる。ある特定の実施形態において、パルミチン酸ビニルとの粗生成物のチオール−エン反応は、ＮＭＰ中、５当量のパルミチン酸ビニル、０．４当量のＤＭＰＡ、３６５ｎｍでの１時間の照射を使用して円滑に進行し、所望の生成物２０（Ｐａｍ−ＣＳＫ４）を得て、その素性をＭＳ分析によって確認する。
【０５１２】
ＥＢＶ  ＬＭＰ２エピトープを含む長ペプチドであるＬＭＰ２  Ｓ−１［配列番号５］とのパルミチン酸ビニルのチオール−エン反応も実施する。
【０５１３】
標準条件を使用して、自動Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳによってＬＭＰ２  Ｓ−１配列を構築する。次いで、Ｋ４タグ及びセリン残基を、本明細書において配列番号４として示される配列のＮ末端に連結する。次いで、ペプチド樹脂を合成機から取り出して、標準条件を使用してシステイン残基を手動で連結する。次いで、Ｎ−アセチル化を実施する。次いで、ペプチドを樹脂から切断し、凍結乾燥させ、良好な収率で白色粉末を得る。
【０５１４】
ペプチド２０及び２２について記載されるように、光開始を使用して、無保護であるペプチド２５及びパルミチン酸ビニルのチオール−エン反応を実施する。質量分析を実行して、パルミトイル化された生成物２６への変換を確立する。０．１％ＴＦＡと共に５〜９５％の勾配でＭｅＣＨ：Ｈ２Ｏで運転されるＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８カラムを使用した分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製を達成する。精製されたペプチドを凍結乾燥させて、対応するＭｅｔ（Ｏ）生成物と併せた、白色粉末としての所望の生成物を得る。
【０５１５】
パルミチン酸ビニルとの粗２５のチオール−エン反応を、上記の概略的手順に続いて実施する。ＥＳＩ−ＭＳ及びＨＰＬＣ分析を実行して、パルミトイル化された生成物２６への良好な変換を確立する。分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製を達成して、例えば＞９５％純度で所望の生成物を得る。
【０５１６】
実施例２．ペプチド複合体２０、２２、及び２６の生物活性
２．１手順
全血中のヒト単球の活性化
１００μｌのヘパリン添加された全血（ＷＢ）を、１００ｎＭ、１μＭ及び１０μＭの各化合物と共に二連でインキュベートし、７℃で一晩、５％のＣＯ２３加湿インキュベータ中でインキュベートする。正の対照としてＰａｍ３ＣＳＫ４（１０μＭ、ＥＭＣ  Ｍｉｃｒｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ）を使用する。単球の活性化を検出するため、光から保護された状態で、室温で２０分間、ＷＢ試料を抗ＣＤ１４−ＦＩＴＣ、抗ＨＬＡ−ＤＲ−Ａｌｅｘａ７００、抗ＣＤ８０−ＰＥ−Ｃｙ７、抗ＣＤ４０−ＰＥ、抗ＣＤ８６−ＡＰＣ、抗ＣＤ１６−ＡＰＣ−Ｃｙ７（全て、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから）で染色する。インキュベーションに続いて、２ｍｌのＢＤ  ＦＡＣＳ溶解（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加し、室温で１５分間、インキュベートし、次いで、冷たい洗浄バッファー（ＰＢＳ、１％のヒト血清）で２度、洗浄する。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ  ＩＩ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）上でデータ取得を実行し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアバージョン７．６．５（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）を使用して分析する。単球上のＣＤ８０受容体発現を、ＣＤ１４＋  ＨＬＡＤＲ＋細胞上のゲーティングによって検出する。
【０５１７】
ＨｅｋＢｌｕｅ細胞を使用したトール様受容体２（ＴＬＲ２）アゴニズム
ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）−ｈＴＬＲ２及びＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）−ｍＴＬＲ２を、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎから購入する。これらのＨＥＫ−Ｂｌｕｅ細胞はそれぞれ、レポーター遺伝子ＳＥＡＰ（分泌型アルカリホスファターゼ）、及びヒトまたはマウスＴＬＲ２のいずれかの両方の同時形質移入によって産生される。ＳＥＡＰレポーター遺伝子は、５つのＡＰ−１及び５つのＮＦｋＢ結合部位に融合したＩＦＮ−Ｂミニマルプロモーターの制御下にある。製造業者の指示に従って細胞を培養する。アッセイの日に、９６ウェルプレート内の２０μｌの容量のエンドトキシン不含有の水中、選択された濃度で構築物を添加する。ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）−ｈＴＬＲ２またはＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）−ｈＴＬＲ２細胞を、約２．８３×１０４細胞／ｍｌでＨＥＫ−Ｂｌｕｅ（商標）Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ培地中で再懸濁させ、すぐに１８０ｍｌの細胞懸濁液（ウェル毎に約５×１０４細胞）を添加する。細胞を、５％ＣＯ２中、３７℃で一晩、インキュベートする。ＳＥＡＰ発現を、ＥｎＳｐｉｒｅプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して６３５ｎＭで定量化した。
【０５１８】
ＴＬＲ２で一過的にトランスフェクトされたＨｅｋ２９３細胞からのＩＬ−８分泌の検出方法
１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ（培地に抗生物質を補充していない）を用いて、９６ウェルプレート内に、ウェル毎に５０μｌ中、３×１０４細胞でＨｅｋ−２９３細胞をプレーティングする。細胞を、ｐＦＬＡＧ−ＴＬＲ２プラスミドとｐｃＤＮＡ３．１との組み合わせ（Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｔ．，Ｙ．Ｋｉｄａ  ａｎｄ  Ｋ．Ｋｕｗａｎｏ（２００５）．「Ａ  ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌａｔｅｄ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｒｏｍ  Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ＮＦ−ｋａｐｐａ  Ｂ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＴＬＲ１，ＴＬＲ２，ａｎｄ  ＴＬＲ６．」Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７５（７）：４６４１−４６４６に報告されるように、Ｓｈｉｍｉｚｕの親切な恩恵）、または制御プラスミドのみ（ｐｃＤＮＡ３．１）のいずれかでトランスフェクトする。試料毎に５０μｌの容量で、０．３μｌのリポフェクタミン中、０．３μｌのＤＮＡでリポフェクタミン／ＤＮＡ複合体のマスターミックスをＯｐｔｉ−ＭＥＭ中に構成する。２０分間のインキュベーションに続いて、プラスミドミックスを細胞に添加した。構築物の添加の前に、タンパク質発現を２４時間、誘発した。
【０５１９】
選択された濃度で構築物をウェルに添加して、ウェル毎に２００μｌの最終容量を得る。１８時間の刺激に続き、各試料から上澄みを収集して、必要とされるまで−２０℃で保管した。製造業者のプロトコルに従い、任意選択で、５０μｌの代わりに２５μｌの培養上清を使用することも可能という１つの変更を伴って、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によってＩＬ−８分泌を判定する。分泌されたＩＬ−８の濃度を正確に判定するため、１１ポイント標準曲線（１〜５０００ｎｇ／ｍｌ）を実行する。ＢＤ−ＦＡＣＳ  Ａｒｉａ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して試料を分析し、次いで、ＦＣＡＰ  ＡＲＲＡＹ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ（バージョン１．０．１）を使用してデータを分析する。
【０５２０】
２．２考察
フローサイトメトリーによってリポペプチド２０、２２、及び２６の生物活性を評価して、新鮮血試料中のヒト単球上での共刺激分子ＣＤ８０の上方制御を測定する。
【０５２１】
特徴的な細胞表面マーカーによってドナー試料中の単球を同定し、市販のＰａｍ３ＣＳＫ４（１０μＭ）を正の対照として、３回の用量での各化合物への曝露の前後にＣＤ８０の発現を判定する。
【０５２２】
全ての投薬において、試験用リポペプチド２０、２２、及び２６が、ＣＤ８０の発現を強度に、例えば正の対照であるＰａｍ３ＣＳＫ４に対して同等かまたはより高い有効性に上方制御することを示す結果は、有効なＴＬＲアゴニズムを示唆する。
【０５２３】
試験用リポペプチド２０、２２、及び２６が、ＨｅｋＢｌｕｅ（商標）及びＩＬ−８リポーターシステム中においてＴＬＲアゴニズム、例えば滴定可能なＴＬＲアゴニズムを呈することを示す結果は、有効なＴＬＲアゴニズムを示唆する。
【０５２４】
２０、２２、及び２６の多回有効性を示す結果は、抗原ペプチドの複合体がＴＬＲ２アゴニズムに影響を及ぼさないという発見を支持する。
【０５２５】
実施例３．複合体２００、１２０、１２１、１１０−１１２、１１２Ａ、及び１１３−１１６の調製
３．１概略的な詳細
保護アミノ酸及び連結試薬を、ＧＬ−Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）から購入する。固相担体合成に使用する樹脂は、予め充填されたＲａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅ  ＧｍｂＨ  （Ｔｕｅｂｉｎｇｅｎ）からのｔｅｎｔａｇｅｌ樹脂であり、他の溶媒及び試薬は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ）及びＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから取得する。
【０５２６】
Ｔｒｉｂｕｔｅペプチド合成機（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）上で標準反復Ｆｍｏｃペプチド合成技術を使用して、以下に記載されるペプチド合成を実施する。０．１ｍｍｏｌスケール上で実施される典型的な脱保護及び連結サイクルは、ＤＭＦ（４ｍＬ×５分）中、２０％のピぺリジンでの２回の処理を使用した樹脂結合アミノ酸からのＦｍｏｃ保護基の除去と、それに続くＤＭＦでの樹脂の洗浄を必要とする。別個の容器中で、Ｆｍｏｃアミノ酸（０．５ｍｍｏｌ）及び連結剤（１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、０．４５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中で溶解し、塩基（４−メチルモルホリン、１ｍｍｏｌ）を添加する。１分間の混合の後、この溶液を樹脂に移し、室温で１時間、撹拌し、排水及び洗浄する。
【０５２７】
５％（ｖ／ｖ）のエタンジチオール（ＥＤＴ）を含有する５ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中で樹脂を懸濁させ、室温で３時間、撹拌することでペプチド（０．１ｍｍｏｌスケール）の切断を達成する。次いで、１％（ｖ／ｖ）でトリイソプロピルシラン（ＴＩＰＳ）を添加し、ＴＦＡを冷却したジエチルエーテル（４０ｍＬ）へ排水する前に、更に５分間、撹拌を継続する。沈澱した材料を遠心分離によってペレット化し、エーテルを廃棄し、エーテル（２５ｍＬ）でペレットを１回洗浄して、風乾または凍結乾燥させる。
【０５２８】
Ｄｉｏｎｅｘ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ３０００  ＨＰＬＣシステムを使用して逆相（ＲＰ）−ＨＰＬＣを実施する。分取精製のために、逆相Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８カラム（５μ、１１０Å；１０×２５０ｍｍ）にペプチド試料を導入し、溶出剤Ａ（水／０．１％ＴＦＡ）及び溶出剤Ｂ（ＭｅＣＮ／０．１％ＴＦＡ）の好適な混合物に平衡させ、次いで、増加した勾配の溶出剤Ｂを生成して、構成成分を溶出する。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８カラム（３μ、１１０Å；４．６×１５０ｍｍ）を使用して同様に分析ＨＰＬＣを実施する。
【０５２９】
Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ６１２０  Ｑｕａｄｒａｐｏｌｅ質量分析器を使用して低分解能質量分析スペクトルを取得する。
【０５３０】
１ＨｎｍＲについて４００ＭＨｚ及び１３ＣｎｍＲについて１００ＭＨｚで操作されるＢｒｕｋｅｒ  ＢＲＸ４００分光器を使用してＮＭＲスペクトルを取得する。
【０５３１】
以下に記載されるアミノ酸複合体及びペプチド複合体において、略号ＡｃＮ−Ｃ（Ｐａｍ−１）−及びＨ２Ｎ−Ｃ（Ｐａｍ−１）−は、
【化３７】
2018505152.tif 000051
を意味し、Ｒは、適宜、ＡｃまたはＨである。
【０５３２】
３．２直接複合によるペプチド複合体の調製
ペプチド
以下の表３に示されるペプチド１００及び１０２（ＬＭＰ２  Ｓ−２、配列番号１０を含む）、１０３及び１０４（ＬＭＰ２  Ｓ−３、配列番号１５を含む）、及び１０５及び１０６（ＬＭＰ２  ５−２、配列番号３０を含む）は、以下に記載され、描写されるように合成される（スキーム１）。
【化３８】
2018505152.tif 000052
（ｉ）反復Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳ；（ｉｉ）Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｉｉｉ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ；（ｉｖ）Ａｃ２Ｏ／ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｖ）ＴＦＡ／ＥＤＴ；（ｖｉ）パルミチン酸ビニル、ＤＴＴ、ＤＭＰＡ、ＮＭＰ、３６５ｎｍ。
【０５３３】
反復Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳを使用した最後から２番目のアミノ酸までのペプチド配列の合成に続き、ＤＭＦ中でのＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、ＨＡＴＵ、及び４−メチルモルホリンとの反応によりＦｍｏｃ−システインを樹脂上ペプチドのＮ末端残基として導入する。ＤＭＦ中、２０％のピペリジンを使用してＦｍｏｃ基を除去する。必要に応じて、結果として生じるアミン基を、ＤＭＦ（２ｍＬ）中、２０％の無水酢酸及び４−メチルモルホリン（１ｍｍｏｌ）の混合物での処理によってアセトアミドに変換する。
【０５３４】
ＴＦＡ／ＥＤＴでのペプチドの樹脂からの切断、及びエーテル中でのその沈澱に続き、固体を１：１の水／ＭｅＣＮ中で溶解し、凍結乾燥させる。ペプチドがメチオニン残基を含有する場合、凍結乾燥の前に、溶液を６０℃で１時間、加熱して、切断中に生じ得る任意のＳ−アルキル化を逆転させる。次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣによってペプチドを精製して、＞９５％の材料を得る。
【表３】
2018505152.tif 000053
【０５３５】
ペプチド複合体
次いで、ペプチド１００及び１０２〜１０６上でチオール−エン反応を実行して、対応するペプチド複合体１１０、１１２、及び１１３−１１６（表４）を生成する。
【０５３６】
ＤＭＰＡ（２．６ｍｇ）、ジチオスレイトール（９．２ｍｇ）、及びパルミチン酸ビニル（４０ｍｇ、ｍｍｏｌ）を、脱気されたＮＭＰ（２ｍＬ）中で溶解する。１００μＬのこの溶液を、小型のポリプロピレン容器に量り取った１μｍｏｌのペプチドに添加して、１０ｍＭのペプチド、５ｍＭのＤＭＰＡ、３０ｍＭのＤＴＴ、及び５０ｍＭのパルミチン酸ビニルを含有する溶液を得る。ＮＭＰは、反応条件に適合し、反応混合物の全ての構成成分を有効に溶媒和させる。
【０５３７】
反応容器を窒素で洗い流し、活発に撹拌された混合物を、３６５ｎｍで操作される６ワットの手持ちＵＶランプ（Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、ＮＹ）で照射する。３０分後に、ＨＰＬＣによって反応を分析し、所望の生成物への変換を判定する。次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣによって生成物を単離し、未反応の開始材料を回収する。
【０５３８】
非アセチル化Ｎ末端システインを有するペプチドは、ある特定の実施形態において、還元剤であるＤＴＴの存在にも関わらず、著しい量のジスルフィド二量体を形成する。これは、対応するＮ−アセチル化ペプチドにおいて、典型的には認められない。
【０５３９】
ペプチド複合体１１０及び１１３〜１１６はまた、以下の代替的な手順（表４Ｂ）によってペプチド１００及び１０３〜１０６から調製される。
【０５４０】
この手順では、ＤＴＴの代わりにｔｅｒｔ−ブチルメルカプタン（ｔＢｕＳＨ）チオールを使用する。ある特定の実施形態において、これは、増加した、かつより純粋な基質ペプチドの所望のペプチド複合体への変換をもたらす。
【０５４１】
トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）も、反応混合物に導入する。ある特定の実施形態において、これは、反応特性を更に向上させる。ビス−パルミトイル化された種を得るためにパルミチン酸ビニルの第２の分子との生成物ペプチド複合体の反応によって形成される少量の副生成物であるオリゴマーの形成は、ＴＦＡの添加によってほとんど抑制される。
【０５４２】
これらの条件下においてメチオニンが対応するスルホキシドに酸化するいずれの明白な傾向も、メチオニン基を保有するこれらのペプチドの粗生成物混合物を凍結乾燥させ、それに続く、ＴＦＡ中での溶解、及びヨウ化テトラブチルアンモニウムでの処理によって酸化メチオニンをメチオニンに還元することで解決することができる。
【０５４３】
典型的な手順は、以下の通りである。ＤＭＰＡ（６．５ｍｇ）を脱気されたＮＭＰ（０．５ｍＬ）中で溶解してｔｅｒｔ−ブチルメルカプタン（１７μＬ）を添加し、別個の容器で、パルミチン酸ビニル（１１．３ｍｇ）を脱気されたＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）（０．５ｍＬ）中で溶解する。小型の撹拌器を備える小型のプロピレン容器にペプチド（１μｍｏｌ）を量り取り、１０μＬのＤＭＰＡ／ｔＢｕＳＨ溶液に続いて１００μＬのパルミチン酸ビニル溶液を添加して、およそ１０ｍＭのペプチド、５ｍＭのＤＭＰＡ、３０ｍＭのＤＴＴ、及び８０ｍＭのパルミチン酸ビニルの溶液を得る。次いで、ＴＦＡ（５．５μＬ）を添加して、５％溶液を得る。反応容器を窒素で洗い流し、活発に撹拌された混合物を、３６５ｎｍで操作される６ワットの手持ちＵＶランプ（Ｓｐｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、ＮＹ）で照射する。２０分後に、更なるＤＭＰＡ（１０μＬ）及びパルミチン酸ビニル（５０μＬ）を添加して、照射を２０分間、継続する。
【０５４４】
メチオニンを含有するペプチドについて、水（０．５ｍＬ）及びＭｅＣＮ（０．５ｍＬ）を添加し、混合物を凍結乾燥させる。結果として生じる固体を、未希釈のＴＦＡ（１５０μＬ）中で溶解し、０℃まで冷却し、２５μＬのＴＦＡ中のヨウ化ｔｅｔｒａ−ｎ−ブチルアンモニウム（３．７ｍｇ、１０μｍｏｌ）を添加する。１分後に、冷却したジエチルエーテル（０．５ｍＬ）を添加して、還元されたリポペプチドを沈殿させ、これを遠心分離によってペレット化して凍結乾燥させる。
【０５４５】
ＨＰＬＣによって反応を分析し、所望の生成物（表４Ｂ）への変換を示し、該生成物を次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣによって単離する。
【表４】
2018505152.tif 000054
【表５】
2018505152.tif 000055
【０５４６】
３．３アミノ酸複合体の調製
以下に記載され描写されるように（スキーム２）、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−、Ｎ−α−アセチル−、及びＮ−α−Ｂｏｃ−保護システインから、それぞれ、アミノ酸複合体２００、１２０、及び１２１を調製する。
【化３９】
2018505152.tif 000056
（ｉ）ラジカル開始剤、ｈυ（３６５ｎｍ）または熱
【０５４７】
固形Ｎ−α−保護システインを、示される溶媒（表５）中で１００ｍｇ／ｍＬの濃度まで溶解するか懸濁させ、パルミチン酸ビニル（１．５モル当量）に続いて示される量の開始剤を添加する。光分解条件下で実施される反応について、溶液をポリプロピレン容器内で調製し、示されるモル割合（表５）でＤＭＰＡを添加し、次いで、撹拌された混合物を３６５ｎｍで照射する。熱条件下で行われる反応について、溶液をガラス管内で調製し、示される量のＡＩＢＮ（アゾビスイソブチロニトリル）を添加し、撹拌された混合物を、油風呂中または電子レンジ中のいずれかで加熱する。
【０５４８】
薄層クロマトグラフィーを使用して反応進行を監視し、システイン開始材料の消費に基づく完了まで進行させる。次いで、溶媒を除去し、シリカゲル上でフラッシュカラムクロマトグラフィーによって残基を精製し、ヘキサン／酢酸エチル混合物を溶出する。１Ｈ及び１３ＣｎｍＲによって、ならびに質量分析法によって、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（２００）、Ａｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（１２０）、及びＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（１２１）の素性を確認する。
Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（２００）
【化４０】
2018505152.tif 000057
Ｎ−Ａｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（１２０）
【化４１】
2018505152.tif 000058
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（１２１）
【化４２】
2018505152.tif 000059
【０５４９】
表５に要約される多様な条件下で複合反応を行う。
【表６】
2018505152.tif 000060
【０５５０】
光分解条件または熱条件の使用は、ある特定の実施形態において、所望の高収率で所望の生成物を精製することになる。
【０５５１】
３．４アミノ酸複合体の連結を介したペプチド複合体の調製
以下に記載され描写されるように（スキーム３）、ペプチド複合体１１０〜１１６を調製する。
【化４３】
2018505152.tif 000061
（ｉ）反復Ｆｍｏｃ−ＳＰＰＳ；（ｉｉ）Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（２００）、ＰｙＢＯＰ、コリジン、ＤＭＦ；（ｉｉｉ）Ａｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（１２０）またはＢｏｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ（１２１）、ＰｙＢＯＰ、ピペリジン、ＤＭＦ；（ｉｖ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ；（ｖ）Ａｃ２Ｏ／ＮＭＭ、ＤＭＦ；（ｖｉ）ＴＦＡ／ＥＤＴ。
【０５５２】
前述のようにＴｒｉｂｕｔｅペプチド合成機を使用した標準反復Ｆｍｏｃ  ＳＰＰＳ技術を使用して所望のペプチド配列を合成する。最後から２番目のアミノ酸残基を連結した後に、次いで、ＤＭＦ中のＰｙＢＯＰ及びコリジンを使用して、アミノ酸複合体Ｎ−Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ  ２００で樹脂結合ペプチド鎖を誘導体化する。次いで、ＤＭＦ中、２０％のピペリジンを使用してＦｍｏｃ基を除去する。
【０５５３】
次いで、結果として生じるペプチドを、ＴＦＡ／ＥＤＴを使用して樹脂から切断し、同時に保護基を除去して、ペプチド複合体１１１、１１３、及び１１５を得る。
【０５５４】
あるいは、結果として生じるペプチドを、ＤＭＦ（２ｍＬ）中、２０％の無水酢酸と４−メチルモルホリン（１ｍｍｏｌ）との混合物での処理によって対応するアセトアミドに変換し、次いで、樹脂から切断して、ペプチド複合体１１０、１１２、１１４、及び１１６を得る。
【０５５５】
あるいは、樹脂結合ペプチドを、アミノ酸複合体Ｎ−Ｂｏｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ  １２１またはＮ−Ａｃ−Ｃｙｓ（Ｐａｍ−１）−ＯＨ  １２０のいずれかで誘導体化する。これにより、Ｆｍｏｃ基に起因して必要とされる追加の操作を伴うことなく、樹脂からの切断の際にペプチド複合体１１０〜１１６を直接得る。
【０５５６】
アミノ酸を連結するための条件は、活性化に際してラセミ化するアミノ酸のα−炭素の性質を有利に低減させる。アミノ酸複合体（０．０７５ｍｍｏｌ）及びＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）（０．１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．３ｍＬ）中で化合及び溶解する。未希釈の２，４，６−トリメチルピリジン（０．１ｍｍｏｌ）を添加し、３０秒間の混合の後に、溶液を０．０２５ｍｍｏｌの樹脂に移し、次いで、これを９０分間、撹拌し、排水及び洗浄する（ＤＭＦ）。
【０５５７】
次いで、５％（ｖ／ｖ）のエタンジチオールを含有する１ｍＬのトリフルオロ酢酸中、０．０１５ｍｍｏｌの樹脂を室温で３時間、撹拌することでペプチドを切断する。次いで、上澄みを、焼結物を通して冷却したジエチルエーテル（１０ｍＬ）へと排水し、エーテルに添加される更なる１ｍＬのＴＦＡで樹脂を洗浄する。
【０５５８】
沈澱した材料を遠心分離によってペレット化し、１：１のＭｅＣＮ／水（＋０．１％ｔｆａ）中で溶解する前に、エーテル（５ｍＬ）でペレットを１回洗浄し、凍結乾燥させる。ペプチドがメチオニン残基を含有する場合、凍結乾燥の前に、溶液を６０℃で１時間、加熱する。次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣによってペプチドを精製し（＞９５％）、分析ＲＰ−ＨＰＬＣ及び質量分析法によってそれらの素性を確認する。
【０５５９】
実施例４．ペプチドＬＭＰ２  Ｓ１＆ＬＭＰ２  Ｓ２の分析
１．１概略的な詳細
ペプチドＬＭＰ２  Ｓ１（ＤＲＨＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬ、配列番号５）及びＬＭＰ２  Ｓ２（ＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ、配列番号１０）を、本質的に上記のように合成した。次いで、ＲＰ−ＨＰＬＣによってペプチドを精製し、（＞９５％）、分析ＲＰ−ＨＰＬＣ及び質量分析法によってそれらの素性を確認した。
【０５６０】
結果
図１は、以下の条件下でのＬＭＰ２  Ｓ１のＲＰ−ＨＰＬＣのトレースを示す：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８（５μ  １１０Å、４．６×１５０ｍｍ）；勾配：０〜１分、５％Ｂ、次いで、３０分間にわたって５％Ｂ〜６５％Ｂ、１ｍＬ／分で溶出、Ｒｔ１４．４分。
ＥＳＩ−ＭＳトレースｍ／ｚ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１５７２．７
図２は、以下の条件下でのＬＭＰ２  Ｓ２のＲＰ−ＨＰＬＣのトレースを示す：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８（５μ  １１０Å、４．６×１５０ｍｍ）；勾配：０〜１分、１％Ｂ、３０分間にわたって１％Ｂ〜６１％Ｂ、１ｍＬ／分で溶出、Ｒｔ１６．０分。
ＥＳＩ−ＭＳトレースｍ／ｚ［Ｍ＋２Ｈ］２＋＝１４４８．２
【０５６１】
実施例５．複合されたＬＭＰ２  Ｓ４（ＳＫ４）の分析
１．１概略的な詳細
ペプチドＬＭＰ２  Ｓ４（ＳＫ４）（ＳＫＫＫＫＳＤＹＱＰＬＧＴＱＤＱＳＬＹＬＧＬＱＨＤＧＮＤＧＬＰＰＰＰＹＳＰＲＤＤＳＳＱＨＩＹＥＥＡ、配列番号１９）を、本質的に上記のように合成、アセチル化、及びＰａｍ１Ｃｙｓに複合して、Ｐａｍ１−Ｃ（Ａｃ）ＳＫ４−ＬＭＰ２  Ｓ４を得た。
【化４４】
2018505152.tif 000062
【０５６２】
次いで、分析ＲＰ−ＨＰＬＣ及び質量分析法によって粗ペプチドの素性を確認した。
【０５６３】
結果
図３は、以下の条件下でのＰａｍ１−Ｃ（Ａｃ）ＳＫ４−ＬＭＰ２  Ｓ４のＲＰ−ＨＰＬＣのトレースを示す：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ１８（５μ  １１０Å、４．６×１５０ｍｍ）；勾配：０〜１分、５％Ｂ、次いで、３０分間にわたって５％Ｂ〜６５％Ｂ、１ｍＬ／分で溶出、Ｒｔ２１．６分。
ＥＳＩ−ＭＳトレースｍ／ｚ［Ｍ＋３Ｈ］３＋＝１９７７．０
【０５６４】
上記の例のみで本発明の範囲を限定することは意図しない。当業者には理解されるように、本発明の範囲を逸脱することなく、多くの変更が可能である。
【０５６５】
産業上の利用性
本発明のペプチド、ならびにアミノ酸複合体及びペプチド複合体及び組成物及び構築物は、薬学的及び医療分野で用途を見出し、これには、対象における免疫応答を引き出す方法及び対象にワクチン接種する方法の用途が含まれる。例えば、ホジキン病（ＨＤ）または鼻咽頭癌（ＮＰＣ）等のエプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）関連疾患を治療することを目的とする、例えば、ＥＢＶ潜伏膜タンパク質２（ＬＭＰ２）からの１つ以上のエピトープを含む自己アジュバント性ワクチンを含む、ペプチドまたはアミノ酸複合体及びペプチド複合体を含む医薬品が、特に企図される。
【図１】
2018505152.tif 000075
【図２】
2018505152.tif 000076
【図３】
2018505152.tif 000077
【配列表】
2018505152000001.app
【国際調査報告】
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2018505152.tif 000079
2018505152.tif 000080
2018505152.tif 000081
2018505152.tif 000082
2018505152.tif 000083
2018505152.tif 000084
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