(57)【要約】血液サンプルを培養する容器。この容器は、体積基準で０．５ｍｌ〜約２０ｍｌの可変量の培養培地が入る約４０ｍｌ容量に満たないリザーバを備える。この容器は、患者から採取した血液サンプルを受けるのに適しており、血液量は約１ｍｌ〜約２０ｍｌである。幾つかの実施形態では、血液量と培養培地量との比は約２：１〜約１：２であり、血液量は約１０ｍｌを超えない。幾つかの実施形態では、培地は溶解培地である。血液サンプルの培養にこの容器を使用する方法も企図される。このような方法では、容器に血液サンプルを接種する。或る特定の実施形態では、血液サンプル量は１０ｍｌを超えない。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液サンプルを培養する容器であって、該容器は以下を含む
体積で約４０ｍｌ以下のリザーバ；
体積０．５ｍｌから約２０ｍｌで可変量の培養培地、
ただし前記容器は患者から得られる血液サンプルを受け入れるのに適合し、前記血液体積は約１ｍｌから約２０ｍｌである。
【請求項２】
血液体積と培養培地体積の比が約２：１から約１：２であり、前記血液体積が約１０ｍｌを超えない請求項１の容器。
【請求項３】
前記培地が溶解培地である請求項１の容器。
【請求項４】
血液体積と培養培地体積の比が約２：１から約１：２である請求項３の容器。
【請求項５】
前記血液体積が約４ｍｌから約１０ｍｌであり、前記培養培地体積が約２ｍｌから約２０ｍｌであり、前記血液体積が約１０ｍｌを超えない請求項４の容器。
【請求項６】
前記血液体積が約１ｍｌから約３ｍｌで、前記培養培地体積が約０．５ｍｌから約６ｍｌである請求項４の容器。
【請求項７】
さらにセンサーを有する請求項１の容器、ただし、該センサーは前記容器内の微生物増殖を表す血液サンプルと合わせた前記培養培地の変化を検出する。
【請求項８】
約４０ｍｌを超えない体積のリザーバを有する消耗品を備え、血液サンプルを培養する方法、
該リザーバは、その中に配置されるあらかじめ定められた体積の培養培地を有し、
前記あらかじめ定められた体積は、培地体積に対する血液体積の比が約２：１から約１：２の範囲となるように選択される。
【請求項９】
前記血液体積が約４ｍｌから約１０ｍｌの範囲である請求項８の方法。
【請求項１０】
前記血液体積が約１ｍｌから約３ｍｌである請求項８の方法。
【請求項１１】
前記培養培地が溶解培地である請求項８の方法。
【請求項１２】
前記溶解培地は１００ｍｌの培養培地に対し約０．２５グラムの溶解試薬である請求項８の方法。
【請求項１３】
前記溶解試薬がサポニンである請求項１２の方法。
【請求項１４】
前記消耗品は、その中に該消耗品内の変化、すなわち、その中の微生物の増殖の結果起こる変化を検出することが可能であるセンサーが配置される請求項８の方法。
【請求項１５】
さらに前記消耗品に血液サンプルが摂取された後に前記消耗品を培養することを含む請求項８の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１５年５月１４日付けで出願された米国仮特許出願第６２／１６１，３８０号（その開示が引用することにより本明細書の一部をなす）の出願日の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
敗血症は、高い発症頻度及び高い院内死亡率から重大な医療問題である。敗血症の主な原因の１つが血流感染（ＢＳＩ）である。ＢＳＩは、血液培養にて診断されることが最も一般的であり、その際、細菌増殖を促すために雰囲気制御された閉鎖システムにおいて微生物増殖培地を用いて、血液サンプルをインキュベートする。現行の自動血液培養システムでは、血中の感染性微生物の存在を検出するのに１２時間〜４８時間かかる場合があり、任意の感染性微生物の存在を除外するのに最大５日かかる場合がある。
【０００３】
ＢＳＩの有無を出来る限り迅速かつ正確に判定するために、追加の物質を血液培養物に組み込まなければならないことが多い。例えば、サンプリング時の患者の血液には、既に抗生物質が含まれている場合がある。抗生物質の存在により、感染性微生物の存在を検出するのに要する時間が更に増え得る。また、陽性血液培養物を継代培養し、同定試験及び抗菌薬感受性試験を実施することにより感染を引き起こす微生物を特定するのには、更に１２時間〜４８時間かかり得る。これらの結果は、治療過程を変更するには遅すぎ、患者の病気の重症化、更には死に至る場合もある。そのため、抗生物質を吸着し、微生物増殖に対する阻害効果を中和する添加剤を血液培養培地に添加することもある。
【０００４】
現行の血液培養システムは、微生物増殖を促し、検出までの時間を早める、様々な試薬のブロス混合物を有する。微生物増殖を促す重要な因子の１つが、血液サンプルを増殖培地で希釈することである。患者の血液を増殖培地で希釈することで、血液サンプルに存在し得る、抗生物質及び患者の免疫応答構成物の阻害効果が抑えられると考えられる。
【０００５】
様々な種類の吸着樹脂を使用して、患者の血液サンプル内の抗生物質を吸着することで、微生物増殖を阻害する高い抗生物質濃度にて微生物の回収、微生物の回収の改善、及び／又は微生物増殖を検出するのに要する時間の短縮が可能になる。しかしながら、吸着樹脂は、微生物増殖の早期検出に必須である培地の他の構成要素を吸着することもある。培地が溶解培地である場合、吸着樹脂は溶解試薬の構成物（例えば、サポニン）を吸着し得る。このような吸着により、溶解機能の低下及び微生物増殖に必須である栄養素の減少の両方が起こり、検出までの時間がより長くなる。
【０００６】
推奨される血液に対するブロスの比は、抗体及び抗生物質のような物質の阻害効果を低減又は最小化又は制御するために、約１：５〜約１：１０の範囲である。非特許文献１及び非特許文献２を参照されたい。培養にはより大量の血液サンプル（１回の採血当たり１０ｍｌ〜２０ｍｌ）が好ましいことが認められている。非特許文献３を参照されたい。
【０００７】
血液培養ボトルに接種するのに用いられる推奨血液量は、約８ｍｌ〜約１０ｍｌであり、推奨ブロス量は少なくとも５０ｍｌ〜１５０ｍｌとなる。そのため、この種の血液培養に使用される容器は大きく、このことが８ｍｌ〜１０ｍｌの血液から指定の８ｍｌ〜１０ｍｌの血液量が精密に採取されるように血液採取量を精密に制御することを難しくさせている（非特許文献４）。加えて、消費され得る血液培養物を少なくすることも、経済的に、人間工学的に、及び環境的に必要である。
【０００８】
培地構成物に改良を加える、特に増殖培地に樹脂を組み込むことで、微生物増殖に必要なブロス量を減らすことができる。これは、抗生物質が存在する場合に、樹脂が抗生物質を幾らか吸着し、微生物増殖に対する抗生物質の有害作用が緩和されるためである。そうすることで、現行の血液培養システムは、１：３及び１：４の血液対ブロス量の比で奏功している。一例には、８ｍｌ〜１０ｍｌの血液量のサンプルで少なくとも１：３の血液に対するブロスの比を用いる、BectonのＢＡＣＴＥＣ（商標）（Becton Dickinson and Companyの商標）  Ｐｌｕｓ  Ａｅｒｏｂｉｃ製品がある。高濃度の血液に対するブロスの比（例えば１：２以上）は、検出に必要な全陽性培養物を必要量、産生するには有効ではなく、避けるべきであると現在でも考えられている（非特許文献４）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Wilson, Michael L., et al., Principles and Procedures for Blood Cultures; Approved Guidelines, Clinical and Laboratory Standards Institute, M47-A, Vol. 27, No. 17, p. 8 (May 2007)
【非特許文献２】Versalovic, J., et al., Manual of Clinical Microbiology, Vol. 1, Diagnostic Strategies and General Topics, p. 16, 10th ed., ASM Press, (2003)(Murray, P.R. et al., eds.)
【非特許文献３】Forbes, B., et al. Diagnostics Microbiology, Part 3: Diagnosis by Organ System (10th ed. 1998). P 292
【非特許文献４】Weinstein, Melvin P. Current Blood Culture Methods and Systems: Clinical Concepts, Technology, and Interpretation of Results. The University of Chicago, Clinical Infectious Diseases, 1996
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
しかしながら、樹脂の使用により有効性が改善しているにも関わらず、血液サンプル及び／又はブロスの要求量を減らしながら、検出までの時間が改善する血液培養環境が求められ続けている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の一実施の形態によれば、血液量が約４ｍｌ〜約１０ｍｌの範囲となり、血液量と血液サンプルを移す培養培地の量との比が約２：１〜約１：２となるように、血液サンプルを培養培地に移す。或る特定の実施の形態では、この比は約１：１である。したがって、血液対培地比が約２：１〜約１：２である実施の形態での培養培地量の範囲は、約２ｍｌ〜約２０ｍｌである。血液対培地比が約１：１である実施の形態での培地量は、約４ｍｌ〜約１０ｍｌである。
【００１２】
本発明の別の実施の形態によれば、血液量は、約１ｍｌ〜約３ｍｌであり、この実施の形態の培養培地量は、約０．５ｍｌ〜約６ｍｌの範囲である。
【００１３】
本発明の別の実施の形態での培養培地量は、４０ｍｌ未満であり、血液量と培養培地との比は、約２：１〜約１：２の範囲であり、血液量は、約２０ｍｌを超えない。
【００１４】
本発明の別の実施の形態によれば、血液量は、約３ｍｌ〜約４ｍｌであり、血液量と培養培地の量との比は、約２：１〜約１：２である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の実施形態で使用される血液培養ボトルの２つの異なる構成を示す図である。
【図２】抗生物質阻害剤を存在させずに血液中の微生物増殖を判定するためにブロス中のより高濃度の血液を使用する本発明の一実施形態を示す図である。
【図３】抗生物質阻害剤を含む血液サンプル中での微生物増殖を判定するためにブロス中のより高濃度の血液（１：１のより低い血液に対するブロスの比がもたらされる）を使用する方法を示す図である。
【図４】抗生物質の存在下におけるＰｌｕｓＡｅｒサンプル調製物と、ＰｌｕｓＬｙｔｉｃサンプル調製物と、微量サンプル調製物との回収率の比較を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
ブロス中のより高濃度の血液（血液に対するブロスの比が低くなる）にて血液培養サンプルを調製及び試験する方法が本明細書に記載される。好ましくは、「ブロス中のより高濃度の血液」は、ブロス（又は培地）量が培養サンプルの血液量以下である（例えば１：１、２：１）ことを指す。培地とブロスとは本明細書では区別なく用いられる。本明細書に記載のブロス中の血液濃度がより高い（すなわち、より低い血液に対するブロスの比がもたらされる）サンプルは、より希釈された血液に対するブロスの比（例えば１：３、１：４）を用いる現行の技術水準である血液培養サンプルボトルと比べて同様の又は更には改善された検出までの時間（「ＴＴＤ」）結果を示した。本明細書で使用される場合、検出までの時間、すなわち「ＴＴＤ」は、血液微生物を容器に接種した時点と、システムが容器内の微生物増殖を検出することができる時点との間で経過した時間として定義される。
【００１７】
一実施形態では、血液培養物には抗生物質阻害剤が含まれない。別の実施形態では、血液培養物には所定量の抗生物質阻害剤が含まれる。
【００１８】
本明細書に記載の方法では、１：１から最大約２：１までのより低い血液に対するブロスの比の血液培養物を使用する。血液培養物を入れる血液培養ボトルの容量及び構成は多様であり得る。例えば、図１に血液培養ボトルの２つの異なる構成を示している。ボトル１１は、ＢＡＣＴＥＣ（商標）  Ｐｌｕｓ  Ａｅｒｏｂｉｃボトルとして現在販売されている８０ｍｌ容のボトルであり、このボトルは、３０ｍｌの液体培養培地及び約２グラム〜約６グラムの範囲の樹脂が入った８０ｍｌ容のボトルである。ＢＡＣＴＥＣ（商標）は、Becton Dickinson and Companyの商標である。ボトル１２は、約８ｍｌの培養培地及び同様に約２グラム〜約６グラムの範囲の樹脂が投入された３０ｍｌ容のボトルである。培地量は約５ｍｌ〜約２０ｍｌの範囲と多様であり得る。ボトルの実容量は主に、ボトル容量、頭隙の形態、ボトルが受ける血液及びブロスの総量、センサーのタイプ、センサーの形態等のような因子に応じた設計上の選択事項である。ボトル又は器の代替形態としては、試験管、シリンダー、フラスコ等が挙げられる。
【００１９】
より低い血液に対するブロスの比を用いることで、増殖培地及び試薬の量を少なくすることができ、使用する血液培養ボトルの容量を小さくすることができる。血液培養ボトルの容量を小さくすることで、内径を小さくするか、高さを短くするか、又はその両方が可能になる。ボトルの内径が小さくなると、より内径が大きい８０ｍｌ容のボトルよりも精密に、より正確な量の血液を指定量だけ採取することも可能になる。容量が小さくなると、消費コストも削減され、現行の技術水準である８０ｍｌ容のボトルと比べて一度に試験することができるバイアルが多くなるため、機器設置面積を減らすことが可能になる。
【実施例】
【００２０】
実施例１：標準比／標準量及び低い比／少量を用いた様々な微生物についての検出までの時間（ＴＴＤ）の比較
約１：５という標準的な血液と培地量との比（すなわち、８ｍｌの血液及び４０ｍｌの培養培地）についての検出までの時間を、１：１の血液対培地量のものと比較した。溶解試薬を含まない培地（非溶解培地）及び溶解試薬を含む培地（溶解培地）の両方を使用した。非溶解培地は、ＢＡＣＴＥＣ（商標）  Ａｅｒｏｂｉｃ  Ｍｅｄｉａとした。１：４比のサンプルでは、４０ｍｌの培地を使用した。標準ＢＡＣＴＥＣ  Ａｅｒｏｂｉｃボトルは、４０ｍｌの培地を含んでいる。そのため、１：１比の例については、ボトルから３２ｍｌの培地を取り除いた後に、サンプルをボトルに入れた。培地を溶解性にするために、約０．２５％のサポニンを培地に添加した。
【００２１】
上述のように、４つのサンプルセットを調製した。２つのセットは１：４の標準血液に対するブロスの比であり、２つのセットは１：１比であった。それぞれの比の２つのセットの一方には非溶解培地を含ませ、他方のセットには溶解培地を含ませた。１：１の血液に対するブロスの比のサンプルを作製するために、標準ＢＡＣＴＥＣ  Ａｅｒｏｂｉｃボトル内の４０ｍｌの培地のうち３２ｍｌを抜き取り、８ｍｌのブロスのみを残した。ブロスを溶解性にするために、溶解試薬であるサポニンを、残るブロス（１：４比では４０ｍｌ及び１：１比では８ｍｌ）に、標準比及び低い比のサンプルそれぞれにおいて０．２５％の濃度となるような量で添加した。約８ｍｌの血液及び下記表１で挙げられる微生物をそれぞれ１０ｃｆｕ〜１００ｃｆｕ、各ボトルに接種した。元の４０ｍｌの培地が入ったＢＡＣＴＥＣ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ａｅｒｏｂｉｃボトルを１：４の血液に対するブロスの比のサンプルに使用した。全ての接種ボトルをＢＤ  ＢＡＣＴＥＣ（商標）  ＦＸ機器に入れ、３５℃で５日間、培養した。結果から、下記表１で指定された８種の微生物についての検出までの時間は、互いに同程度であったことが分かった。したがって、１：１と低い比の血液希釈倍率が従来の１：４よりも顕著に低いにも関わらず、１：１の血液対培地比が、血液培養物中での微生物増殖を支持している。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
驚くべきことに、１：１比（低い比／少量）のサンプルが、１：４比（標準比／標準量）のサンプルと同様に働いていた。また、上記表から、幾つかの微生物について、非溶解培地を含むボトルよりも溶解培地を含むボトルのＴＴＤが低かったことが分かる。しかしながら、試験微生物の幾つかでは、非溶解培地を含むボトルに比べて溶解培地を含むボトルでＴＴＤの増大が観察された。サンプルサイズが小さかったことから、これらの観察結果は、必ずしも溶解培地を含むボトルと対比した非溶解培地を含むボトルの実質的なＴＴＤ差を示すものではない。
【００２４】
図２において、抗生物質阻害剤を存在させずに血液サンプル中での微生物増殖を判定するためにより低い血液に対するブロスの比を用いる方法を説明する。図２Ａでは、４ｍｌの液体培地２０２に入れられる８ｍｌの血液２０１を示している。血液２０１と液体培地２０２とを１６ｍｌ容の滅菌済み封止管２０３にて合わせ、２：１の血液に対するブロスの比２０４にする。図２Ｂでは、８ｍｌの液体培地２０６に入れられる８ｍｌの血液２０１を示している。血液２０１と液体培地２０６とを１９ｍｌ容の滅菌済み封止管２０５にて合わせ、１：１の血液に対するブロスの比２０７にする。図２Ａ及び図２Ｂでは、容器内のセンサーは、固体蛍光Ｏ２センサーとした。蛍光シグナルの変化は、微生物増殖の指標とみなした。図２Ｃでは、３０ｍｌの液体培地２０９に入れられる８ｍｌの血液２０１を示している。血液２０１と液体培地２０９とを市販のＢＡＣＴＥＣ（商標）  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ａｅｒｏｂｉｃ製品（「ＳｔｄＡｅｒ」）にて合わせ、少なくとも１：３の血液対ブロス比２１０にする。
【００２５】
液体培地は、サポニンを追加したＢＡＣＴＥＣ  Ｍｙｃｏ／Ｆ溶解培地をベースとする改変培地である。サンプルに、それぞれ１０ＣＦＵ〜１００ＣＦＵの微生物２１１を負荷（すなわち、スパイク）する。試験微生物は、アルカリゲネス・フェカリス（Alcaligenes faecalis）、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）、カンジダ・グラブラタ（Candida glabrata）、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli：大腸菌）、ネイセリア・メニンギチデス（Neisseria meningitides）、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）（２種の異なる種）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Staphylococcus epidermidis）、ストレプトコッカス・ニューモニア（Streptococcus pneumonia）、及びストレプトコッカス・ピオジェネス（Streptococcus pyogenes）とした。管の底部で使用するセンサー２１２は、ＢＡＣＴＥＣ  Ｍｙｃｏ／Ｆ溶解ボトルのものと同様の構成（formulation）で作製した。
【００２６】
微生物のそれぞれについて、微生物２１１を添加した直後に、血液培養ボトル２０３、２０５、２０８を５回転回させ、その後ＢＡＣＴＥＣ  ＦＸ機器に入れた。管を保持するのにアダプターを使用することで、管をステーション内にしっかりと支え、検出に適した位置に配置した。管及びボトルを５日間、インキュベートして、ＴＴＤ分析のために培養ボトルのセンサー２１２からのシグナルを検出した。各微生物について３回の培養を行った。
【００２７】
本手法の結果を下記表２に示す。表２に示されるように、１：１の血液に対するブロスの比２０７の血液培養ボトル２０５及び２：１の血液に対するブロスの比２０４の血液培養ボトル２０３（図２）は、少なくとも１：３の血液に対するブロスの比の市販のＢＡＣＴＥＣ（商標）  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ａｅｒｏｂｉｃボトルに比べて同様の又は更にはより短いＴＴＤを示した。
【００２８】
【表２】
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【００２９】
１：１の血液に対するブロスの比２０７の調製物における１１種の試験微生物の平均ＴＴＤは、１１．７時間であった。少なくとも１：３のより希釈された血液に対するブロスの比２１０のＢＡＣＴＥＣ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ａｅｒｏｂｉｃボトル２０８の平均ＴＴＤは、１５．０時間であり、１：１のサンプル比２０７よりも長かった。同様に、２：１の血液に対するブロスの比２０４の１６ｍｌ容のボトル２１０の平均ＴＴＤは、１３．０時間であった。１：１の血液に対するブロスの比２０７及び２：１の血液に対するブロスの比２０４のより短いＴＴＤは予期せぬ結果であり、少なくとも１：３の血液に対するブロスの比２１０のＢＡＣＴＥＣ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ａｅｒｏｂｉｃボトルのような現行のより希釈した血液に対するブロスの比に対する改善である。
【００３０】
実施例２：抗生物質阻害剤を用いた培養培地中での増殖
図３において、少なくとも幾つかの微生物の増殖を阻害する抗生物質を含有する血液サンプル中での微生物増殖を判定するためにブロス中のより高濃度の血液（それにより、１：１のより低い血液に対するブロスの比がもたらされる）を使用する方法を説明する。抗生物質の存在下における微生物増殖のＴＴＤは、微生物の増殖を高めるために増殖培地に加えて樹脂を使用するサンプルにおいて短くなり得る。樹脂の主な機能は、患者血液において抗生物質を中和又は吸着することである。その他には、樹脂は抗生物質の阻害効果を顕著に抑えることができ、培地量を減らすことを可能にする。血液培養培地における溶解試薬が微生物回収及びＴＴＤの短縮に有利に働くことも示唆されている。これは、血液細胞の溶解により、食菌された微生物が放出され、より良好な回収がもたらされるためであると考えられる。微生物の生存率及び増殖に影響を及ぼさずに血液細胞を効率的に溶解させることが分かっている一般的に使用される溶解試薬の一例は、植物抽出物のサポニンである。微生物増殖のＴＴＤを最大にするために、接種の際に、ブロス中の血液濃度がより高い混合物にサポニンを追加することができる。当業者は、他の溶解試薬を認識しており、本発明は何らか１つの溶解試薬の使用に限定されない。
【００３１】
阻害性抗生物質の存在下における１：１の血液に対するブロスの比の成績を、標準的な希釈された少なくとも１：３の血液に対するブロスの比のものと比較試験した。１：１の血液に対するブロスの比について２つの異なるサンプル調製物を下記に記載する。
【００３２】
図３Ａでは、樹脂及び別のチャンバーに入れられた溶解培地の入った３０ｍｌ容のバイアルにて調製される少量／低い比の調製物を示している。調製物には、樹脂と合計８ｍｌの溶解培地とが含まれていた。容器内のセンサーは、固体蛍光Ｏ２センサーとした。微生物増殖の判定には、蛍光シグナルの変化を用いた。少量／低い比の調製物のサイズを調整し、約８ｍｌの血液サンプルと合わせて、血液に対するブロスの比を約１：１にする。少量／低い比の調製物から、１：１の血液に対するブロスの比を得た。合計８ｍｌの溶解培地を２つに分けた。一方の溶解培地を樹脂の入った３０ｍｌ容のボトルに入れ、もう一方の溶解培地を別の装置に入れ、中の培地は、ボトルに血液サンプル及び微生物の両方を接種した時点で３０ｍｌ容のボトルに滅菌条件下において添加した。
【００３３】
図３Ｂでは、「ＰｌｕｓＬｙｔｉｃ」と表示された第２のサンプル調製物を示している。ＰｌｕｓＬｙｔｉｃ調製物には、市販のＢＡＣＴＥＣ  Ｐｌｕｓ  Ａｅｒｏｂｉｃ製品を使用し、これは８０ｍｌ容のボトル内の３０ｍｌの培地である。試験に際して、８ｍｌの血液と、所定量の抗生物質と、１０ＣＦＵ〜１００ＣＦＵの微生物と、追加の２０ｍｇのサポニンとをボトル内の３０ｍｌの培地と合わせた。血液対培地の比は８：３０であり、これは３．７部の培地に対して約１部の血液である。正確には培地量はサンプル量の４倍ではないが、この比を概して１：４と称する。
【００３４】
対照試験サンプル調製物を図３Ｃに示し、「ＰｌｕｓＡｅｒ」と表示している。ＰｌｕｓＡｅｒ調製物には、何ら培地構成物を追加せずに、市販のＢＡＣＴＥＣ  Ｐｌｕｓ  Ａｅｒｏｂｉｃ製品を使用する。試験に際して、８ｍｌの血液と、所定量の抗生物質と、１０ＣＦＵ〜１００ＣＦＵの微生物とをＢＡＣＴＥＣ  Ｐｌｕｓ  Ａｅｒｏｂｉｃ製品の内容物と合わせる。したがって、血液に対するブロスの比は１：４より僅かに低い（すなわち、８ｍｌの血液：３０ｍｌの培地）。
【００３５】
各サンプル調製物を、６４の抗生物質／微生物の組合せを用いて試験した。試験した抗生物質は、ゲンタマイシン、アモキシシリン−クラブラン酸、アズトレオナム、セフトリアキソン、セフェピム、イミペネム、メロペネム、ピペラシリン−タゾバクタム、バンコマイシン、チゲサイクリン、シプロフロキサシン、テトラサイクリン、フルコナゾールであった。各試験ボトルに接種した薬剤の分量は、７ｍｌの血液中でのピーク血清レベルの薬剤の量と同等にした。これらの抗生物質は、一般的に取扱いのある特定の微生物と合わせた。例えば、アモキシシリン−クラブラン酸は、Ｓ．アウレウス（S. aureus）、Ｅ．コリ（E. coli）、及びＥ．フェカリス（E. faecalis）と合わせた。各サンプルを薬剤の存在下におけるＴＴＤ及び微生物の回収の両方について試験した。
【００３６】
培地に、血液サンプル、抗生物質及びサポニンを互いに数分間隔で接種した。
【００３７】
ＴＴＤ試験では、少量／低い比のサンプル調製物は、シプロフロキサシン、ピペラシリン／タゾバクタム、及びチゲサイクリンに対して対照サンプル調製物（１：４  ＰｌｕｓＡｅｒ）と同様の成績であった。バンコマイシン、セフェピム、アモキシシリン−クラブラン酸、セフトリアキソン、及びメロペネムを用いて試験した場合に、少量／低い比の調製物は、ＰｌｕｓＡｅｒ調製物と比べてＴＴＤがより迅速であった。下記表３を参照されたい。少量／低い比の調製物は、唯一抗生物質のゲンタマイシンにてＰｌｕｓＡｅｒ調製物に比べてＴＴＤがより遅かった。少量（すなわち合計２０ｍｌ以下）でブロスよりも大量の血液（すなわち、より低い比）（例えば、１：１及び２：１といった血液量対培地量）では許容可能なＴＴＤに達することはできないという当該技術分野における従来の見解からすると、この成績は驚くべきものである。
【００３８】
【表３】
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【００３９】
薬剤吸収効率については、少量で低い比の調製物の方が、吸収速度が迅速であることが明らかとなった。より少量の調製物における全体的な抗生物質吸収効率は、ＰｌｕｓＡｅｒ調製物のものと同様である。
【００４０】
図４では、抗生物質の存在下においてＰｌｕｓＡｅｒサンプル調製物、ＰｌｕｓＬｙｔｉｃサンプル調製物及び少量／低い比のサンプル調製物の間で微生物の回収率を比較している。各比較では、６４の抗生物質／微生物の組合せについて、それぞれの調製物における微生物増殖が陽性又は陰性のいずれかであるかを試験した。
【００４１】
図４Ａでは、１：１の血液対ブロスの調製物を含む少量／低い比の調製物の回収率をＰｌｕｓＡｅｒ調製物（１：４の血液対ブロスの比である）である対照のものと比較している。少量／低い比の調製物を試験したところ、４７の事例で陽性となり、ＰｌｕｓＡｅｒ対照調製物を試験したところ、４３の事例で陽性となった。ＰｌｕｓＡｅｒ対照調製物を試験したところ、２１の事例で陰性となり、少量／低い比の調製物を試験したところ、１７の事例で陰性となった。同じ抗生物質／微生物の組合せで、少量／低い比の調製物を試験した場合に陰性となったが、ＰｌｕｓＡｅｒを試験した場合に陽性となった矛盾する結果を２つの事例で見ることができる。同じ抗生物質／微生物の組合せで、ＰｌｕｓＡｅｒ対照調製物を試験した場合に陰性となったが、少量／低い比の調製物を試験した場合に陽性となった矛盾する結果が６つの事例で得られた。少量／低い比の全体的な回収成績は、ＰｌｕｓＡｅｒ対照と統計的に同等であった。
【００４２】
図４Ｂでは、血液に対するブロスの比が１：４のＰｌｕｓＬｙｔｉｃ調製物の回収率を、対照のＰｌｕｓＡｅｒ調製物（こちらも１：４）のものと比較している。ＰｌｕｓＬｙｔｉｃ調製物を試験したところ、４７の事例で陽性となり、ＰｌｕｓＡｅｒ対照調製物を試験したところ、４３の事例で陽性となった。ＰｌｕｓＡｅｒ対照調製物を試験したところ、２１の事例で陰性となり、ＰｌｕｓＬｙｔｉｃ調製物を試験したところ、１７の事例で陰性となった。同じ抗生物質／微生物の組合せで、ＰｌｕｓＬｙｔｉｃ調製物を試験した場合に陰性となったが、ＰｌｕｓＡｅｒを試験した場合に陽性となった矛盾する結果を１つの事例で見ることができる。また、同じ抗生物質／微生物の組合せで、ＰｌｕｓＡｅｒ対照調製物を試験した場合に陰性となったが、ＰｌｕｓＬｙｔｉｃ調製物を試験した場合に陽性となった矛盾する結果が５つの事例で見られる。したがって、対照比較した場合に、ＰｌｕｓＡｅｒ（１：４）及びＰｌｕｓｌｙｔｉｃ（１：４）は、実質的に等しく働いていた。
【００４３】
図４Ｃでは、１：１の血液対ブロスの比の調製物を含有する少量／低い比の調製物の回収率をＰｌｕｓＬｙｔｉｃ調製物のものと比較している。少量／低い比（１：１）の調製物及びＰｌｕｓ  Ｌｙｔｉｃ調製物を試験したところ、どちらも４７の事例で陽性となった。少量／低い比（１：１）の調製物及びＰｌｕｓ  Ｌｙｔｉｃ調製物を試験したところ、どちらも１７の事例で陰性となった。同じ抗生物質／微生物の組合せで、少量／低い比（１：１）の調製物を試験した場合に陰性となったが、ＰｌｕｓＡｅｒを試験した場合に陽性となった矛盾する結果を２つの事例で見ることができる。同じ抗生物質／微生物の組合せで、ＰｌｕｓＡｅｒ対照調製物を試験した場合に陰性となったが、少量／低い比（１：１）の調製物を試験した場合に陽性となった矛盾する結果も２つの事例で見られる。
【００４４】
図４Ａと図４Ｃとの回収率の比較、すなわち図４Ａの少量／低い比の調製物と図４Ｃの少量／低い比（１：１）の調製物との比較から、血液に対するブロスの比が１：１の調製物の回収率が、血液に対するブロスの比が１：４の調製物よりも対照とほぼ同じであることが示される。
【００４５】
本明細書において発明は特定の実施形態を参照に記載しているが、これらの実施形態は本発明の原理及び用途を説明しているものにすぎないと理解される。そのため、例示的な実施形態に多くの変更を加えることができ、添付の特許請求の範囲に規定される本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく、他の構成を想到することができると理解される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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