(57)【要約】  ある実施形態において、本発明は、ＢＴＫ阻害剤またはその薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体、またはこれらの化合物を含む医薬組成物および治療におけるそれらの使用に関する。特に、ある実施形態において、本発明は、イミダゾピラジン化合物、その医薬組成物、ならびに過剰増殖性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患の治療における化合物および医薬組成物の使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造を有する式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2018536705.tif 000087
（式中：
Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化２】
2018536705.tif 000088
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化３】
2018536705.tif 000089
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである）
またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項２】
Ｒ１が水素であり；
Ｘが、
【化４】
2018536705.tif 000090
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化５】
2018536705.tif 000091
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がメトキシであり；
Ｘが、
【化６】
2018536705.tif 000092
であり；
Ｙが、
【化７】
2018536705.tif 000093
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が水素であり；
Ｘが、
【化８】
2018536705.tif 000094
であり；
Ｙが、
【化９】
2018536705.tif 000095
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］−メチル−アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド；
（Ｒ）−４−（８−アミノ−３−（１−（ブタ−２−イノイル）ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（チアゾール−４−イル）ベンズアミド
からなる群から選択される化合物。
【請求項６】
過剰増殖性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患の治療に使用するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
必要とする患者における過剰増殖性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患の治療のための薬剤の製造のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
前記過剰増殖性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患が、膀胱癌、頭頸部癌、膵管腺癌（ＰＤＡ）、膵臓癌、結腸癌、乳癌（mammary carcinoma）、乳癌（breast cancer）、線維肉腫、中皮腫、腎細胞癌、肺癌、胸腺腫、前立腺癌、大腸癌、卵巣癌、急性骨髄性白血病、胸腺癌、脳腫瘍、扁平上皮細胞癌、皮膚癌、眼癌、網膜芽細胞腫、黒色腫、眼内黒色腫、口腔癌および口腔咽頭癌、胃癌（gastric cancer)、胃癌（stomach cancer）、子宮頸癌、頭部癌、頸部癌、腎臓癌（renal cancer）、腎臓癌（kidney cancer）、肝臓癌、卵巣癌、前立腺癌、大腸癌、食道癌、精巣癌、婦人科癌、甲状腺癌、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連リンパ腫、カポジ肉腫、ウイルス誘導性癌、膠芽細胞腫、食道腫瘍、血液学的腫瘍、非小細胞肺癌、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道腫瘍、濾胞中心リンパ腫、頭頸部腫瘍、Ｃ型肝炎ウイルス感染、肝細胞癌、ホジキンリンパ腫、転移性結腸癌、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、腎細胞癌、小細胞肺癌、ＩＶ期黒色腫、腫瘍血管新生、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、乾癬、湿疹、強皮症、糖尿病、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、加齢性黄斑変性症、血管腫、神経膠腫、黒色腫、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、回腸嚢炎、脊椎関節炎、ブドウ膜炎、ベーチェット病、リウマチ性多発筋痛、巨細胞性動脈炎、サルコイドーシス、川崎病、若年性特発性関節炎、汗腺膿瘍、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、強直性脊椎炎、クローン病、紅斑性狼瘡、およびループス腎炎からなる群から選択される、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
必要とする患者における過剰増殖性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患を治療する方法であって、治療的有効量の請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物を、前記患者に投与する工程を含む方法。
【請求項１０】
前記過剰増殖性疾患が、膀胱癌、頭頸部癌、膵管腺癌（ＰＤＡ）、膵臓癌、結腸癌、乳癌（mammary carcinoma）、乳癌（breast cancer）、線維肉腫、中皮腫、腎細胞癌、肺癌、胸腺腫、前立腺癌、大腸癌、卵巣癌、急性骨髄性白血病、胸腺癌、脳腫瘍、扁平上皮細胞癌、皮膚癌、眼癌、網膜芽細胞腫、黒色腫、眼内黒色腫、口腔癌および口腔咽頭癌、胃癌（gastric cancer)、胃癌（stomach cancer）、子宮頸癌、頭部癌、頸部癌、腎臓癌（renal cancer）、腎臓癌（kidney cancer）、肝臓癌、卵巣癌、前立腺癌、大腸癌、食道癌、精巣癌、婦人科癌、甲状腺癌、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連リンパ腫、カポジ肉腫、ウイルス誘導性癌、膠芽細胞腫、食道腫瘍、血液学的腫瘍、非小細胞肺癌、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道腫瘍、濾胞中心リンパ腫、頭頸部腫瘍、Ｃ型肝炎ウイルス感染、肝細胞癌、ホジキン病、転移性結腸癌、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、腎細胞癌、小細胞肺癌、およびＩＶ期黒色腫からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患が、腫瘍血管新生、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、乾癬、湿疹、および強皮症などの皮膚疾患、１型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、加齢性黄斑変性症、血管腫、神経膠腫および黒色腫、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、回腸嚢炎、脊椎関節炎、ブドウ膜炎、ベーチェット病、リウマチ性多発筋痛、巨細胞性動脈炎、サルコイドーシス、川崎病、若年性特発性関節炎、汗腺膿瘍、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、強直性脊椎炎、クローン病、紅斑性狼瘡、ループス腎炎、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）関連疾患、自己抗体、免疫療法、アジソン病、自己免疫性多内分泌腺症候群１型（ＡＰＳ−１）、自己免疫性多内分泌腺症候群２型（ＡＰＳ−２）、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多内分泌自己免疫、医原性自己免疫、特発性上皮小体機能低下症、白斑、およびループス腎炎からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
必要とする患者における固形腫瘍癌を治療する方法であって、治療的有効量の請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物を、前記患者に投与する工程を含み、前記治療的有効量が、前記固形腫瘍癌細胞と、マクロファージ、単球、肥満細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、骨髄由来免疫抑制細胞、制御性Ｂ細胞、好中球、樹枝状細胞、および線維芽細胞からなる群から選択される少なくとも１つの微小環境との間のシグナル伝達を阻害するのに有効である方法。
【請求項１３】
前記固形腫瘍癌が、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、黒色腫、肺癌、頭頸部癌、および大腸癌からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物と、少なくとも１つの薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
必要とする患者における過剰増殖性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患を治療するのに使用するための、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記過剰増殖性疾患が、膀胱癌、頭頸部癌、膵管腺癌（ＰＤＡ）、膵臓癌、結腸癌、乳癌（mammary carcinoma）、乳癌（breast cancer）、線維肉腫、中皮腫、腎細胞癌、肺癌、胸腺腫、前立腺癌、大腸癌、卵巣癌、急性骨髄性白血病、胸腺癌、脳腫瘍、扁平上皮細胞癌、皮膚癌、眼癌、網膜芽細胞腫、黒色腫、眼内黒色腫、口腔癌および口腔咽頭癌、胃癌（gastric cancer)、胃癌（stomach cancer）、子宮頸癌、頭部癌、頸部癌、腎臓癌（renal cancer）、腎臓癌（kidney cancer）、肝臓癌、卵巣癌、前立腺癌、大腸癌、食道癌、精巣癌、婦人科癌、甲状腺癌、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連リンパ腫、カポジ肉腫、ウイルス誘導性癌、膠芽細胞腫、食道腫瘍、血液学的腫瘍、非小細胞肺癌、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道腫瘍、濾胞中心リンパ腫、頭頸部腫瘍、Ｃ型肝炎ウイルス感染、肝細胞癌、ホジキン病、転移性結腸癌、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、腎細胞癌、小細胞肺癌、およびＩＶ期黒色腫からなる群から選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患が、腫瘍血管新生、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、乾癬、湿疹、および強皮症などの皮膚疾患、１型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、加齢性黄斑変性症、血管腫、神経膠腫および黒色腫、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、回腸嚢炎、脊椎関節炎、ブドウ膜炎、ベーチェット病、リウマチ性多発筋痛、巨細胞性動脈炎、サルコイドーシス、川崎病、若年性特発性関節炎、汗腺膿瘍、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、強直性脊椎炎、クローン病、紅斑性狼瘡、ループス腎炎、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）関連疾患、自己抗体、免疫療法、アジソン病、自己免疫性多内分泌腺症候群１型（ＡＰＳ−１）、自己免疫性多内分泌腺症候群２型（ＡＰＳ−２）、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多内分泌自己免疫、医原性自己免疫、特発性上皮小体機能低下症、白斑、およびループス腎炎からなる群から選択される、請求項１５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
ある実施形態において、本発明は、複素環化合物、これらの化合物を含む医薬組成物、および治療におけるそれらの使用に関する。ある実施形態において、本発明は、過剰増殖性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患の治療におけるイミダゾピラジン化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
Ｂリンパ球活性化は、適応免疫応答の発生において重要である。逸脱したＢリンパ球活性化は、多くの自己免疫疾患の特徴であり、したがって、この免疫応答の調節は、治療上興味深い。最近、自己免疫疾患におけるＢ細胞治療の成功が確立された。リツキシマブ（抗ＣＤ２０治療）による関節リウマチ（ＲＡ）患者の治療は、認められた臨床治療である。より最近の臨床試験研究は、リツキシマブによる治療が、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）患者における病徴も改善することを示す。この成功は、Ｂ細胞免疫を標的にする自己免疫疾患における将来の治療の可能性を裏付ける。
【０００３】
ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）は、Ｂ細胞および骨髄細胞において発現されるＴｅｃファミリー非受容体プロテインキナーゼである。Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）および肥満細胞のＦｃεＲ１の関与によって活性化されるシグナル伝達経路におけるＢＴＫの機能は、十分に確立されている。さらに、Ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達における下流標的としてのＢＴＫの機能が示唆される。ＢＴＫは、プレクストリン相同（ＰＨ）、Ｔｅｃ相同（ＴＨ）、Ｓｒｃ相同３（ＳＨ３）、Ｓｒｃ相同２（ＳＨ２）、およびチロシンキナーゼまたはＳｒｃ相同１（ＴＫまたはＳＨ１）ドメインから構成される。成熟Ｂ細胞のＢ細胞受容体（ＢＣＲ）および肥満細胞のＦＣＥＲ１の関与によって活性化されるシグナル伝達経路におけるＢＴＫの機能は、十分に確立されている。ヒトにおけるＢＴＫの機能的突然変異は、プロＢ細胞期とプレＢ細胞期との間の遮断によるＢ細胞発達の欠陥によって特徴付けられる原発性免疫不全症（Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症）をもたらす。結果は、Ｂリンパ球のほぼ完全な非存在であり、これは、全てのクラスの血清免疫グロブリンの顕著な減少を引き起こす。これらの所見は、自己免疫疾患における自己抗体の産生の調節におけるＢＴＫの重要な役割を裏付ける。
【０００４】
ＢＴＫは、多くのＢ細胞リンパ腫および白血病において発現される。Hendriks,et al.,Nat.Rev.Cancer,2014,14,219-231に記載されるように、機能不全Ｂ細胞が重要な役割を有する他の疾病は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。Ｂ細胞の増殖およびアポトーシスの調節におけるＢＴＫの報告されている役割は、Ｂ細胞リンパ腫の治療におけるＢＴＫ阻害剤の可能性を示す。したがって、D’Cruz,et al.,OncoTargets and Therapy 2013,6,161-176に記載されるように、ＢＴＫ阻害剤は、これらの悪性腫瘍の多くのための潜在的な治療薬として開発されてきた。Gilfillan,et al.,Immunologic.Rev.2009,288,149-169に記載されるように、ＦｃεＲ介在性肥満細胞活性化においてＢＴＫについて報告されている調節の役割により、ＢＴＫ阻害剤は、アレルギー反応の治療における可能性も示し得る。さらに、Shinohara,et al.,Cell 2008,132,794-806に記載されるように、ＢＴＫはまた、ＲＡＮＫＬ誘導破骨細胞分化に関与することが報告されており、したがって、骨吸収疾患の治療のためにも興味深いものであり得る。機能不全Ｂ細胞が重要な役割を有する他の疾病は、Ｂ細胞悪性腫瘍である。実際に、Lim,et al.,Haematologica,2010,95,135-143に記載されるように、抗ＣＤ２０治療は、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および慢性リンパ球性白血病の治療のために臨床において有効に使用される。Ｂ細胞の増殖およびアポトーシスの調節におけるＢＴＫの報告されている役割は、Ｂ細胞リンパ腫の治療におけるＢＴＫ阻害剤の可能性もあることを示す。Davis,et al.,Nature,2010,463,88-94に記載されるように、ＢＴＫの阻害は、特に、慢性活動性ＢＣＲシグナル伝達に起因するＢ細胞リンパ腫に適しているようである。
【０００５】
多くの固形腫瘍において、支持微小環境（腫瘍塊の大部分を構成し得る）は、腫瘍生存を可能にする原動力である。Swartz,et al.,Cancer Res.,2012,72,2473に記載されるように、腫瘍微小環境は、一般に、「悪性形質転換を促進し、腫瘍増殖および浸潤を助長し、宿主免疫から腫瘍を保護し、治療抵抗性を促進し、主要な転移を達成させるニッチを提供する細胞、可溶性因子、シグナル伝達分子、細胞外基質、および機械的キュー（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｃｕｅ）」の複合混合物として定義される。腫瘍は、Ｔ細胞によって認識されるべきである抗原を発現するが、微小環境による免疫抑制のため、免疫系による腫瘍クリアランスは稀である。例えば化学療法により腫瘍細胞に対処することは、微小環境の防御作用を克服するのに不十分であることも分かっている。したがって、新たな手法が、微小環境の役割を考慮に入れた、固形腫瘍のより有効な治療のために緊急に必要とされている。
【０００６】
これまでに報告されているＢＴＫ阻害剤の一部は、Ｓｒｃファミリーキナーゼよりも選択的でない。Ｓｒｃファミリーキナーゼのノックアウト、特に、二重および三重ノックアウトについて劇的な有害作用が報告されているが、これが、Ｓｒｃファミリーキナーゼよりも選択的でないＢＴＫ阻害剤の開発を抑制していると見られる。Ｌｙｎ欠損およびＦｙｎ欠損マウスの両方が、ヒトループス腎炎の表現型を模倣する自己免疫を示す。さらに、Ｆｙｎ欠損マウスは、顕著な神経学的異常も示す。Odom,et al.,J.Exp.Med.,2004,199,1491-1502に記載されるように、Ｌｙｎノックアウトマウスは、アレルギー様表現型も示し、これは、肥満細胞応答性およびアレルギー関連形質を制御することによってＩｇＥ介在性アレルギー反応の広範な負の調節因子としてのＬｙｎを示す。さらに、Harder,et al.,Immunity,2001,15,603-615に記載されるように、老齢Ｌｙｎノックアウトマウスは、重症脾腫（骨髄系細胞増殖）および播種性単球／マクロファージ腫瘍を発現する。これらの観察は、過反応性Ｂ細胞、肥満細胞および骨髄細胞、ならびにＬｙｎ欠損マウスにおいて観察されるＩｇレベルの増加と合致する。Roby,et al.,Endocrine,2005,26,169-176に記載されるように、雌Ｓｒｃノックアウトマウスは、卵胞発育および排卵の低下のために不妊性である。二重ノックアウトＳｒｃ−／−Ｆｙｎ−／−およびＳｒｃ−／−Ｙｅｓ−／−は、運動および呼吸に影響を与える重症表現型を示す。Klinghoffer,et al.,EMBO J.,1999,18,2459-2471によって示されるように、三重ノックアウトＳｒｃ−／−Ｆｙｎ−／−Ｙｅｓ−／−は、９．５日で死亡する。Lowell,et al.,Blood,1996,87,1780-1792によって示されるように、二重ノックアウトＳｒｃ−／−Ｈｃｋ−／−については、出生時に３分の２のマウスが死亡し、生存しているマウスは、大理石骨病、骨髄外造血、貧血、白血球減少症を発現する。したがって、Ｓｒｃファミリーキナーゼの複数のまたは全てのキナーゼを同時に阻害する阻害剤は、重篤な副作用を引き起こし得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の概要
一態様において、ＢＴＫ阻害剤は、以下の構造を有する式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2018536705.tif 000002
（式中：
Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化２】
2018536705.tif 000003
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化３】
2018536705.tif 000004
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである）
またはその薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体である。
【０００８】
一実施形態において、本発明は、
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−２）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−３）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−４）；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（式Ｅ−５）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］−メチル−アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−６）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（式Ｅ−７）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（式Ｅ−８）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−９）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（式Ｅ−１０）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１１）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１２）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１３）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１４）；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミド（式Ｅ−１５）；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１６）；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１７）；
（Ｒ）−４−（８−アミノ−３−（１−（ブタ−２−イノイル）ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（チアゾール−４−イル）ベンズアミド（式Ｅ−２４）からなる群から選択される式（Ｉ）の化合物；およびその薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体を含む。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
発明の詳細な説明
本発明の好ましい実施形態が、本明細書に示され、記載されているが、このような実施形態は、例として示されるに過ぎず、本発明の範囲を特に限定することは意図されていない。本発明の記載される実施形態の様々な代替例が、本発明を実施するのに用いられ得る。
【００１０】
特に規定されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書において言及される全ての特許および刊行物は、全体が参照により援用される。
【００１１】
本明細書において使用される際の「共投与（co-administration）」、「共投与する（co-administering）」、「と組み合わせて投与される」、および「と組み合わせて投与する」という用語は、両方の薬剤および／またはそれらの代謝物が、同時に対象中に存在するように、２つ以上の薬剤を対象に投与することを包含する。共投与は、別個の組成物での同時投与、別個の組成物での異なる時点での投与、または２つ以上の薬剤が存在する組成物での投与を含む。s
【００１２】
「有効量」または「治療的有効量」という用語は、限定はされないが、疾病の治療を含む意図する用途を行うのに十分な、本明細書に記載される化合物または化合物の組合せの量を指す。治療的有効量は、意図する用途（インビトロまたはインビボ）、または治療される対象および病態（例えば、対象の体重、年齢および性別）、病態の重症度、投与方法などに応じて変化してもよく、これは、当業者によって容易に決定され得る。この用語は、標的細胞の特定の応答（例えば、血小板粘着および／または細胞移動の減少）を誘導する用量にも適用される。具体的な用量は、選択される具体的な化合物、したがうべき投与計画、化合物が他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、それが投与される組織、および化合物が運ばれる物理的送達系に応じて変化する。
【００１３】
用語が本明細書において使用される際の「治療効果」は、上述される治療効果および／または予防効果を包含する。予防効果は、疾病または病態の出現を遅らせるかまたはなくし、疾病または病態の症状の発現を遅らせるかまたはなくし、疾病または病態の進行を遅らせ、停止させ、または食い止めること、またはそれらの任意の組合せを含む。
【００１４】
「薬学的に許容できる塩」という用語は、当該技術分野において公知の様々な有機および無機対イオンに由来する塩を指す。薬学的に許容できる酸付加塩は、無機酸および有機酸とともに形成され得る。塩が由来し得る無機酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸およびリン酸が挙げられる。塩が由来し得る有機酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびサリチル酸が挙げられる。薬学的に許容できる塩基付加塩は、無機および有機塩基とともに形成され得る。塩が由来し得る無機塩基としては、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガンおよびアルミニウムが挙げられる。塩が由来し得る有機塩基としては、例えば、第一級、第二級および第三級アミン、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂が挙げられる。具体例としては、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、およびエタノールアミンが挙げられる。選択された実施形態において、薬学的に許容できる塩基付加塩は、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩、およびマグネシウム塩から選択される。「共結晶」という用語は、当該技術分野において公知のいくつかの共結晶形成剤に由来する分子複合体を指す。塩と異なり、共結晶は、典型的に、共結晶と薬剤との間の水素転移を必要とせず、代わりに、結晶構造中の共結晶形成剤と薬剤との間の、水素結合、芳香環積層、または分散力などの分子間相互作用を必要とする。
【００１５】
「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できる賦形剤」は、あらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤を含むことが意図される。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野において周知である。従来の媒体または薬剤が、活性成分と不適合でない限り、本発明の治療用組成物におけるその使用が想定される。補助的な活性成分も、記載される組成物に組み込まれ得る。
【００１６】
「プロドラッグ」は、生理学的条件下でまたは加溶媒分解によって本明細書に記載される生物学的に活性な化合物に転化され得る化合物を表すことが意図される。したがって、「プロドラッグ」という用語は、薬学的に許容できる生物学的に活性な化合物の前駆体を指す。プロドラッグは、対象に投与されるとき不活性であり得るが、例えば、加水分解によって、生体内で活性化合物に転化される。プロドラッグ化合物は、溶解性、哺乳動物生物における組織適合性または遅延放出の利点を提供することが多い（例えば、Bundgaard,Design of Prodrugs,Elsevier,Amsterdam,1985を参照）。「プロドラッグ」という用語はまた、対象に投与されると生体内で活性化合物を放出する、任意の共有結合された担体を含むことが意図される。本明細書に記載される活性化合物のプロドラッグは、日常的な操作または生体内のいずれかで修飾が切断され、活性な親化合物を生じるように、活性化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製され得る。プロドラッグとしては、例えば、ヒドロキシ、アミノまたはメルカプト基が任意の基に結合された化合物が挙げられ、これは、活性化合物のプロドラッグが哺乳動物対象に投与されると、切断されて、それぞれ遊離ヒドロキシ、遊離アミノまたは遊離メルカプト基を形成する。プロドラッグの例としては、限定はされないが、アルコールのアセテート、ホルメートおよびベンゾエート誘導体、カルボン酸の様々なエステル誘導体、または活性化合物中のアミン官能基のアセトアミド、ホルムアミドおよびベンズアミド誘導体が挙げられる。
【００１７】
本明細書において、例えば、分子量または化学式などの、物理的または化学的特性を表すために範囲が使用されるとき、範囲およびその特定の実施形態の全ての組合せおよび部分的組合せが含まれることが意図される。数値または数値範囲に言及するときの「約」という用語の使用は、言及される数値または数値範囲が、実験のばらつきの範囲内（または統計的な実験誤差の範囲内）の近似値であり、したがって、数値または数値範囲が、例えば、記載される数値または数値範囲の１％〜１５％で変化し得ることを意味する。「を含む（comprising）」という用語（および「を含む（comprise）」または「を含む（comprises）」または「を有する（having）」または「を含む（including）」などの関連する用語）は、例えば、記載される特徴「からなる」または「から本質的になる」いずれかの組成物、方法またはプロセスの一実施形態などの実施形態を含む。
【００１８】
「異性体」は、同じ分子式を有する異なる化合物である。「立体異性体」は、空間における原子の配置のされ方のみが異なる−すなわち、異なる立体化学配置を有する異性体である。「鏡像異性体」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である立体異性体の対である。鏡像異性体の対の１：１混合物は、「ラセミ」混合物である。「（±）」という用語は、必要に応じて、ラセミ混合物を示すのに使用される。「ジアステレオ異性体」は、少なくとも２個の不斉原子を有するが、互いに鏡像でない立体異性体である。絶対立体化学は、カーン・インゴルド・プレローグＲ−Ｓ表示法にしたがって特定される。化合物が純粋な鏡像異性体である場合、各キラル炭素における立体化学は、（Ｒ）または（Ｓ）のいずれかによって特定され得る。絶対配置が未知である分割された化合物は、ナトリウムＤ線の波長で平面偏光を回転させる方向（右旋性または左旋性）に応じて（＋）または（−）と示され得る。本明細書に記載される化合物のいくつかは、１つ以上の不斉中心を含有し得、したがって、鏡像異性体、ジアステレオマー、および絶対立体化学に関して、（Ｒ）または（Ｓ）として定義され得る他の立体異性体を生じ得る。本発明の化学物質、医薬組成物および方法は、ラセミ混合物、光学的に純粋な形態および中間体混合物を含む全てのこのような可能な異性体を含むことが意図される。光学活性（Ｒ）−および（Ｓ）−異性体は、キラルシントンまたはキラル試薬を用いて調製されるか、または従来の技術を用いて分割され得る。本明細書に記載される化合物が、オレフィン性二重結合または幾何学的非対称の他の中心を含む場合、特に規定されない限り、化合物はＥおよびＺ幾何異性体の両方を含むことが意図される。
【００１９】
「水和物」という用語は、限定はされないが、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物などを含む。ＢＴＫ阻害剤の水和物は、最適な水和物を生成する好適な条件下でＢＴＫ阻害剤を水と接触させることによって調製され得る。
【００２０】
ある実施形態において、鏡像異性的に濃縮された組成物は、その組成物のラセミ混合物より単位質量当たりの治療的有用性に関してより高い効力を有する。鏡像異性体は、キラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびにキラル塩の形成および結晶化を含む、当業者に公知の方法によって混合物から単離され得；または好ましい鏡像異性体は、不斉合成によって調製され得る。例えば、Jacques,et al.,Enantiomers,Racemates and Resolutions,Wiley Interscience,New York,1981；Eliel,Stereochemistry of Carbon Compounds,McGraw-Hill,NY,1962；およびEliel and Wilen,Stereochemistry of Organic Compounds,Wiley,New York,1994を参照されたい。
【００２１】
「互変異性体」は、互変異性化によって相互変換する構造的に異なる異性体である。「互変異性化」は、異性化の一形態であり、酸−塩基化学のサブセットと見なされるプロトトロピーまたはプロトン移動互変異性化を含む。「プロトトロピー互変異性化」または「プロトン移動互変異性化」は、結合の順序の変化、多くの場合、単結合と、隣接する二重結合との交換を伴うプロトンの移動を含む。互変異性化が可能である場合（例えば溶液中）、互変異性体の化学平衡に達し得る。互変異性化の一例は、ケト−エノール互変異性化である。ケト−エノール互変異性化の具体例は、ペンタン−２，４−ジオンおよび４−ヒドロキシペンタ−３−エン−２−オン互変異性体の相互変換である。互変異性化の別の例は、フェノール−ケト互変異性化である。フェノール−ケト互変異性化の具体例は、ピリジン−４−オールおよびピリジン−４（１Ｈ）−オン互変異性体の相互変換である。
【００２２】
「溶媒和物」は、薬学的に許容できる溶媒の１つ以上の分子と物理的に結合された化合物を指す。
【００２３】
「置換」は、言及される基が、例えば、アシル、アルキル、アルキルアリール、シクロアルキル、アラルキル、アリール、炭水化物、カーボネート、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロ、カルボニル、エステル、チオカルボニル、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、オキソ、パーハロアルキル、パーフルオロアルキル、ホスフェート、シリル、スルフィニル、スルホニル、スルホンアミジル、スルホキシル、スルホネート、尿素、およびアミノ（一置換および二置換アミノ基を含む）、およびそれらの保護された誘導体から個別にかつ独立して選択される、結合された１つ以上のさらなる基、ラジカルまたは部分を有し得ることを意味する。置換基自体が、置換されてもよく、例えば、シクロアルキル置換基自体が、その環炭素の１つ以上においてハライド置換基を有し得る。「任意選択により置換される」という用語は、特定の基、ラジカルまたは部分による任意選択の置換を意味する。
【００２４】
本発明の化合物は、例えば、化合物の多形、疑似多形、溶媒和物、水和物、非溶媒和多形（無水物を含む）、立体配座多形、および非晶質形態、ならびにそれらの混合物を含む、化合物の結晶形態および非晶質形態も含む。「結晶形態」および「多形」は、特定の結晶形態または非晶質形態が言及されない限り、例えば、多形、疑似多形、溶媒和物、水和物、非溶媒和多形（無水物を含む）、立体配座多形、および非晶質形態、ならびにそれらの混合物を含む、化合物の全ての結晶形態および非晶質形態を含むことが意図される。
【００２５】
ＢＴＫ阻害剤
本発明のＢＴＫ阻害剤は、（不可逆的に）標的に共有結合するＢＴＫ阻害剤および（可逆的に）標的に非共有結合的に結合するＢＴＫ阻害剤を含む。一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、ＢＴＫの４８１位においてシステイン残基に共有結合する。
【００２６】
一態様において、ＢＴＫ阻害剤は、以下の構造を有する式（Ｉ）の化合物：
【化４】
2018536705.tif 000005
（式中：
Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化５】
2018536705.tif 000006
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化６】
2018536705.tif 000007
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである）
またはその薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体である。
【００２７】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中：
Ｒ１が水素であり；
Ｘが、
【化７】
2018536705.tif 000008
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化８】
2018536705.tif 000009
である。
【００２８】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中：
Ｒ１がメトキシであり；
Ｘが、
【化９】
2018536705.tif 000010
であり；
Ｙが、
【化１０】
2018536705.tif 000011
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである。
【００２９】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中：
Ｒ１が水素であり；
Ｘが、
【化１１】
2018536705.tif 000012
であり；
Ｙが、
【化１２】
2018536705.tif 000013
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである。
【００３０】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化１３】
2018536705.tif 000014
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化１４】
2018536705.tif 000015
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである。
【００３１】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化１５】
2018536705.tif 000016
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化１６】
2018536705.tif 000017
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである。
【００３２】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化１７】
2018536705.tif 000018
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化１８】
2018536705.tif 000019
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである。
【００３３】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化１９】
2018536705.tif 000020
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化２０】
2018536705.tif 000021
であり；
Ｒ３が、Ｈまたはメチルである。
【００３４】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化２１】
2018536705.tif 000022
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化２２】
2018536705.tif 000023
である。
【００３５】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１が、水素またはメトキシであり、ここで、メトキシが、１つまたは２つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｘが、
【化２３】
2018536705.tif 000024
であり；
Ｒ２が、水素、ハロゲン、メチル、メトキシ、またはエトキシであり、ここで、メチル、メトキシ、およびエトキシがそれぞれ、１つ、２つ、または３つのフルオロで任意選択により置換され；
Ｙが、
【化２４】
2018536705.tif 000025
である。
【００３６】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−２）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−３）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−４）；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（式Ｅ−５）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］−メチル−アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−６）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（式Ｅ−７）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（式Ｅ−８）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−９）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（式Ｅ−１０）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１１）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１２）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１３）；
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１４）；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミド（式Ｅ−１５）；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１６）；
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（式Ｅ−１７）；
（Ｒ）−４−（８−アミノ−３−（１−（ブタ−２−イノイル）ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（チアゾール−４−イル）ベンズアミド（式Ｅ−２４）
からなる群から選択される式（Ｉ）の化合物；およびその薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体である。
【００３７】
一実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、
【化２５】
2018536705.tif 000026
【化２６】
2018536705.tif 000027
【化２７】
2018536705.tif 000028
からなる群から選択される化合物、その鏡像異性体、およびその薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体である。
【００３８】
医薬組成物
選択された実施形態において、本発明は、固形腫瘍癌、リンパ腫および白血病を治療するための医薬組成物を提供する。
【００３９】
医薬組成物は、典型的に、治療的有効量の、活性成分としてのＢＴＫ阻害剤、またはその薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体を提供するように製剤化される。必要に応じて、医薬組成物は、薬学的に許容できる塩および／またはその配位錯体、および１つ以上の薬学的に許容できる賦形剤、担体（不活性固体希釈剤および充填剤を含む）、希釈剤（滅菌水溶液および様々な有機溶媒を含む）、透過促進剤、可溶化剤および補助剤を含有する。
【００４０】
医薬組成物は、ＢＴＫ阻害剤として投与される。必要に応じて、他の薬剤が、製剤へと混合されてもよく、または両方の成分が、別々にまたは同時に組み合わせて使用するために別個の製剤へと配合され得る。
【００４１】
選択された実施形態において、本発明の医薬組成物において提供されるＢＴＫ阻害剤のそれぞれの濃度は、独立して、例えば、医薬組成物の総質量または総体積に対して、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％または０．０００１％  ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖ未満である。
【００４２】
選択された実施形態において、本発明の医薬組成物において提供されるＢＴＫ阻害剤のそれぞれの濃度は、独立して、医薬組成物の総質量または総体積に対して、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％  １９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％  １８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％  １７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％  １６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％  １５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％  １４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％  １３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％  １２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％  １１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％  １０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％  ９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％  ８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％  ７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％  ６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％  ５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％または０．０００１％  ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖを超える。
【００４３】
選択された実施形態において、本発明のＢＴＫ阻害剤のそれぞれの濃度は、独立して、医薬組成物の総質量または総体積に対して、約０．０００１％〜約５０％、約０．００１％〜約４０％、約０．０１％〜約３０％、約０．０２％〜約２９％、約０．０３％〜約２８％、約０．０４％〜約２７％、約０．０５％〜約２６％、約０．０６％〜約２５％、約０．０７％〜約２４％、約０．０８％〜約２３％、約０．０９％〜約２２％、約０．１％〜約２１％、約０．２％〜約２０％、約０．３％〜約１９％、約０．４％〜約１８％、約０．５％〜約１７％、約０．６％〜約１６％、約０．７％〜約１５％、約０．８％〜約１４％、約０．９％〜約１２％または約１％〜約１０％  ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖの範囲である。
【００４４】
選択された実施形態において、本発明のＢＴＫ阻害剤のそれぞれの濃度は、独立して、医薬組成物の総質量または総体積に対して、約０．００１％〜約１０％、約０．０１％〜約５％、約０．０２％〜約４．５％、約０．０３％〜約４％、約０．０４％〜約３．５％、約０．０５％〜約３％、約０．０６％〜約２．５％、約０．０７％〜約２％、約０．０８％〜約１．５％、約０．０９％〜約１％、約０．１％〜約０．９％  ｗ／ｗ、ｗ／ｖまたはｖ／ｖの範囲である。
【００４５】
選択された実施形態において、本発明のＢＴＫ阻害剤のそれぞれの量は、独立して、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇまたは０．０００１ｇ以下である。
【００４６】
選択された実施形態において、本発明のＢＴＫ阻害剤のそれぞれの量は、独立して、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、または３ｇを超える。
【００４７】
本発明に係るＢＴＫ阻害剤のそれぞれは、広い投与量範囲にわたって有効である。例えば、成人の治療の際、投与量は、独立して、１日当たり０．０１〜１０００ｍｇ、０．５〜１００ｍｇ、１〜５０ｍｇの範囲であり、１日当たり５〜４０ｍｇが、使用され得る投与量の例である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、治療される対象の性別および年齢、治療される対象の体重、ならびに担当医の選好および経験に応じて決まる。
【００４８】
後述されるのは、非限定的な医薬組成物およびそれを調製するための方法である。
【００４９】
経口投与用の医薬組成物
選択された実施形態において、本発明は、本明細書に開示されるＢＴＫ阻害剤および経口投与に好適な薬剤賦形剤を含有する、経口投与用の医薬組成物を提供する。
【００５０】
選択された実施形態において、本発明は、（ｉ）有効量の本明細書に開示されるＢＴＫ阻害剤および（ｉｉ）経口投与に好適な薬剤賦形剤を含有する、経口投与用の固体医薬組成物を提供する。
【００５１】
選択された実施形態において、医薬組成物は、経口摂取に好適な液体医薬組成物であり得る。経口投与に好適な本発明の医薬組成物は、粉末としてあるいは顆粒、溶液、水性もしくは非水性液体の懸濁液、水中油型エマルション、または油中水型液体エマルション中で、所定の量の活性成分をそれぞれ含有する分離した剤形、例えば、カプセル、カシェ剤、または錠剤、または液体もしくはエアロゾルスプレーとして提供され得る。このような剤形は、薬学の方法のいずれかによって調製され得るが、全ての方法は、活性成分を、１つ以上の必要な成分を構成する担体と一緒にする工程を含む。一般に、組成物は、活性成分を、液体担体または微粉化した固体担体または両方と均一かつ均質に混合し、次に、必要に応じて、生成物を所望の提供形態に成形することによって調製される。例えば、錠剤は、任意選択により、１つ以上の補助成分とともに、圧縮または成形を行うことによって調製され得る。圧縮錠剤は、粉末または顆粒などの自由流動形態の活性成分を、好適な機械内で圧縮することによって調製され得、任意選択により、限定はされないが、結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、および／または表面活性剤または分散剤などの賦形剤と混合され得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らされた粉末化合物の混合物を、好適な機械内で成形することによって作製され得る。
【００５２】
本発明は、水が、一部の化合物の分解を促進し得るため、無水医薬組成物および剤形をさらに包含する。例えば、薬剤分野において、保存可能期間または経時的な製剤の安定性などの特性を決定するために、長期貯蔵をシミュレートする手段として水が加えられ得る（例えば、５％）。本発明の無水医薬組成物および剤形は、無水または低水分含有成分および低水分または低湿度条件を用いて調製され得る。ラクトースを含有する本発明の医薬組成物および剤形は、製造、包装、および／または貯蔵中の水分および／または湿気とのかなりの接触が予測される場合、無水にされ得る。無水医薬組成物は、その無水性が維持されるように調製され、貯蔵され得る。したがって、無水組成物は、それらが好適な処方キットに含まれ得るように、水への曝露を防ぐことが知られている材料を用いて包装され得る。好適な包装の例としては、限定はされないが、密封された箔、プラスチックなど、単位用量容器、ブリスターパック、およびストリップパックが挙げられる。
【００５３】
活性成分としてのＢＴＫ阻害剤のそれぞれは、従来の薬剤配合技術にしたがって、医薬担体と均質混合して組み合わされ得る。担体は、投与に望ましい製剤の形態に応じて多種多様な形態を取り得る。経口剤形用の組成物を調製する際、通常の薬剤媒体のいずれかが、例えば、経口液体製剤（懸濁液、溶液、およびエリキシル剤など）またはエアロゾルの場合、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、防腐剤、着色剤などの担体として用いられ得；またはデンプン、糖、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤などの担体が、経口固体製剤の場合、ある実施形態においては、ラクトースの使用を用いずに使用され得る。例えば、固体経口製剤に関して、好適な担体としては、粉末、カプセル、および錠剤が挙げられる。必要に応じて、錠剤が、標準的な水性または非水性技術によって被覆され得る。
【００５４】
医薬組成物および剤形に使用するのに好適な結合剤としては、限定はされないが、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、または他のデンプン、ゼラチン、天然および合成ゴム、例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギネート、トラガカント末、グアーガム、セルロースおよびその誘導体（例えば、エチルセルロース、酢酸セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００５５】
本明細書に開示される医薬組成物および剤形に使用するのに好適な充填剤の例としては、限定はされないが、タルク、炭酸カルシウム（例えば、顆粒または粉末）、微結晶性セルロース、粉末セルロース、デキストレート（dextrate）、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン、アルファ化デンプン、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００５６】
崩壊剤が、水性環境に曝されたときに崩壊する錠剤を提供するために、本発明の組成物に使用され得る。多過ぎる崩壊剤は、瓶中で崩壊する錠剤を生成し得る。少な過ぎる崩壊剤は、崩壊が起こるのに不十分であることがあり、したがって、剤形からの活性成分の放出の速度および程度を変化させる。したがって、活性成分の放出を有害に変更するほど少な過ぎも多過ぎもしない十分な量の崩壊剤が、本明細書に開示される化合物の剤形を形成するのに使用され得る。使用される崩壊剤の量は、製剤のタイプおよび投与方法に基づいて変化してもよく、当業者には容易に認識され得る。約０．５〜約１５重量パーセントの崩壊剤、または約１〜約５重量パーセントの崩壊剤が、医薬組成物に使用され得る。本発明の医薬組成物および剤形を形成するのに使用され得る崩壊剤としては、限定はされないが、寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、他のデンプン、アルファ化デンプン、他のデンプン、粘土、他のアルギン、他のセルロース、ガムまたはそれらの混合物が挙げられる。
【００５７】
本発明の医薬組成物および剤形を形成するのに使用され得る滑沢剤としては、限定はされないが、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、軽油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、水添植物油（例えば、ピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油）、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天、またはそれらの混合物が挙げられる。さらなる滑沢剤としては、例えば、サイロイド（syloid）シリカゲル、合成シリカの凝固エアロゾル、またはそれらの混合物が挙げられる。滑沢剤は、医薬組成物の約１重量パーセント未満の量で任意選択により加えられ得る。
【００５８】
水性懸濁液および／またはエリキシル剤が、経口投与に所望される場合、その中の必須の活性成分が、様々な甘味料または着香剤、着色物質または染料および、必要に応じて、乳化剤および／または懸濁化剤と、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンおよびそれらの様々な組合せなどの希釈剤と一緒に組み合わされ得る。
【００５９】
錠剤は、被覆されていないか、または胃腸管中の崩壊および吸収を遅延させるために公知の技術によって被覆され得、それによって、より長い期間にわたって持続する作用を提供する。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料が用いられ得る。経口使用用の製剤はまた、活性成分が、不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合される硬ゼラチンカプセルとして、または活性成分が、水もしくは油媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合される軟ゼラチンカプセルとして提供され得る。
【００６０】
本発明の医薬組成物および剤形を形成するのに使用され得る界面活性剤としては、限定はされないが、親水性界面活性剤、親油性界面活性剤、およびそれらの混合物が挙げられる。すなわち、親水性界面活性剤の混合物が用いられてもよく、親油性界面活性剤の混合物が用いられてもよく、または少なくとも１つの親水性界面活性剤と少なくとも１つの親油性界面活性剤との混合物が用いられてもよい。
【００６１】
好適な親水性界面活性剤は、一般に、少なくとも１０のＨＬＢ値を有し得る一方、好適な親油性界面活性剤は、一般に、約１０以下のＨＬＢ値を有し得る。非イオン性両親媒性化合物の相対的な親水性および疎水性を特徴付けるのに使用される実験的パラメータは、親水性−親油性バランス（「ＨＬＢ」値）である。より低いＨＬＢ値を有する界面活性剤は、より親油性または疎水性であり、油へのより高い溶解性を有する一方、より高いＨＬＢ値を有する界面活性剤は、より親水性であり、水溶液へのより高い溶解性を有する。親水性界面活性剤は、一般に、約１０を超えるＨＬＢ値を有する化合物、ならびにＨＬＢスケールが一般に適用されないアニオン性、カチオン性、または両性化合物であると見なされる。同様に、親油性（すなわち、疎水性）界面活性剤は、約１０以下のＨＬＢ値を有する化合物である。しかしながら、界面活性剤のＨＬＢ値は、工業用、薬剤および化粧用エマルションの配合を可能にするために一般に使用されるおおよその指針に過ぎない。
【００６２】
親水性界面活性剤は、イオン性または非イオン性のいずれかであり得る。好適なイオン性界面活性剤としては、限定はされないが、アルキルアンモニウム塩；フシジン酸塩；アミノ酸、オリゴペプチド、およびポリペプチドの脂肪酸誘導体；アミノ酸、オリゴペプチド、およびポリペプチドのグリセリド誘導体；レシチンおよび水添レシチン；リゾレシチンおよび水添リゾレシチン；リン脂質およびその誘導体；リゾリン脂質およびその誘導体；カルニチン脂肪酸エステル塩；アルキル硫酸塩；脂肪酸塩；ドキュセートナトリウム；アシルアクチレート（acylactylate）；モノ−およびジ−グリセリドのモノ−およびジ−アセチル化酒石酸エステル；コハク酸化モノ−およびジ−グリセリド；モノ−およびジ−グリセリドのクエン酸エステル；およびそれらの混合物が挙げられる。
【００６３】
上記の群のうち、イオン性界面活性剤としては、例として、レシチン、リゾレシチン、リン脂質、リゾリン脂質およびその誘導体；カルニチン脂肪酸エステル塩；アルキル硫酸塩；脂肪酸塩；ドキュセートナトリウム；アシルアクチレート；モノ−およびジ−グリセリドのモノ−およびジ−アセチル化酒石酸エステル；コハク酸化モノ−およびジ−グリセリド；モノ−およびジ−グリセリドのクエン酸エステル；およびそれらの混合物が挙げられる。
【００６４】
イオン性界面活性剤は、レシチン、リゾレシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルグリセロール、リゾホスファチジン酸、リゾホスファチジルセリン、ＰＥＧ−ホスファチジルエタノールアミン、ＰＶＰ−ホスファチジルエタノールアミン、脂肪酸の乳酸エステル、ステアロイル−２−ラクチレート、ステアロイルラクチレート、コハク酸化モノグリセリド、モノ／ジグリセリドのモノ／ジアセチル化酒石酸エステル、モノ／ジグリセリドのクエン酸エステル、コリルサルコシン、カプロエート、カプリレート、カプレート、ラウレート、ミリステート、パルミテート、オレエート、リシノレエート、リノレエート、リノレネート、ステアレート、ラウリル硫酸塩、テラセシル硫酸塩（teracecyl sulfate）、ドキュセート、ラウロイルカルニチン、パルミトイルカルニチン、ミリストイルカルニチン、ならびにそれらの塩および混合物のイオン化形態であり得る。
【００６５】
親水性非イオン性界面活性剤としては、限定はされないが、アルキルグルコシド；アルキルマルトシド；アルキルチオグルコシド；ラウリルマクロゴールグリセリド；ポリエチレングリコールアルキルエーテルなどのポリオキシアルキレンアルキルエーテル；ポリエチレングリコールアルキルフェノールなどのポリオキシアルキレンアルキルフェノール；ポリエチレングリコール脂肪酸モノエステルおよびポリエチレングリコール脂肪酸ジエステルなどのポリオキシアルキレンアルキルフェノール脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールグリセロール脂肪酸エステル；ポリグリセロール脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステルなどのポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステル；ポリオールと、グリセリド、植物油、水添植物油、脂肪酸、およびステロールからなる群の少なくとも１つの構成要素との親水性エステル交換生成物；ポリオキシエチレンステロール、およびその誘導体、および類似体；ポリオキシエチル化ビタミンおよびその誘導体；ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー；およびそれらの混合物；ポリオールと、トリグリセリド、植物油、および水添植物油からなる群の少なくとも１つの構成要素とのポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステルおよび親水性エステル交換生成物が挙げられる。ポリオールは、グリセロール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、プロピレングリコール、ペンタエリトリトール、またはサッカリドであり得る。
【００６６】
他の親水性非イオン性界面活性剤としては、限定はされないが、ラウリン酸ＰＥＧ−１０、ラウリン酸ＰＥＧ−１２、ラウリン酸ＰＥＧ−２０、ラウリン酸ＰＥＧ−３２、ジラウリン酸ＰＥＧ−３２、オレイン酸ＰＥＧ−１２、オレイン酸ＰＥＧ−１５、オレイン酸ＰＥＧ−２０、ジオレイン酸ＰＥＧ−２０、オレイン酸ＰＥＧ−３２、オレイン酸ＰＥＧ−２００、オレイン酸ＰＥＧ−４００、ステアリン酸ＰＥＧ−１５、ジステアリン酸ＰＥＧ−３２、ステアリン酸ＰＥＧ−４０、ステアリン酸ＰＥＧ−１００、ジラウリン酸ＰＥＧ−２０、トリオレイン酸ＰＥＧ−２５グリセリル、ジオレイン酸ＰＥＧ−３２、ラウリン酸ＰＥＧ−２０グリセリル、ラウリン酸ＰＥＧ−３０グリセリル、ステアリン酸ＰＥＧ−２０グリセリル、オレイン酸ＰＥＧ−２０グリセリル、オレイン酸ＰＥＧ−３０グリセリル、ラウリン酸ＰＥＧ−３０グリセリル、ラウリン酸ＰＥＧ−４０グリセリル、ＰＥＧ−４０パーム核油、ＰＥＧ−５０水添ヒマシ油、ＰＥＧ−４０ヒマシ油、ＰＥＧ−３５ヒマシ油、ＰＥＧ−６０ヒマシ油、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、ＰＥＧ−６０水添ヒマシ油、ＰＥＧ−６０トウモロコシ油、ＰＥＧ−６カプリン酸／カプリル酸グリセリド、ＰＥＧ−８カプリン酸／カプリル酸グリセリド、ラウリン酸ポリグリセリル−１０、ＰＥＧ−３０コレステロール、ＰＥＧ−２５フィトステロール、ＰＥＧ−３０ダイズステロール、トリオレイン酸ＰＥＧ−２０、オレイン酸ＰＥＧ−４０ソルビタン、ラウリン酸ＰＥＧ−８０ソルビタン、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＰＯＥ−９ラウリルエーテル、ＰＯＥ−２３ラウリルエーテル、ＰＯＥ−１０オレイルエーテル、ＰＯＥ−２０オレイルエーテル、ＰＯＥ−２０ステアリルエーテル、コハク酸トコフェリルＰＥＧ−１００、ＰＥＧ−２４コレステロール、オレイン酸ポリグリセリル−１０、Tween 40、Tween 60、モノステアリン酸スクロース、モノラウリン酸スクロース、モノパルミチン酸スクロース、ＰＥＧ１０−１００ノニルフェノール系列、ＰＥＧ１５−１００オクチルフェノール系列、およびポロキサマーが挙げられる。
【００６７】
好適な親油性界面活性剤としては、あくまでも例として、脂肪族アルコール；グリセロール脂肪酸エステル；アセチル化グリセロール脂肪酸エステル；低級アルコール脂肪酸エステル；プロピレングリコール脂肪酸エステル；ソルビタン脂肪酸エステル；ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル；ステロールおよびステロール誘導体；ポリオキシエチル化ステロールおよびステロール誘導体；ポリエチレングリコールアルキルエーテル；糖エステル；糖エーテル；モノ−およびジ−グリセリドの乳酸誘導体；ポリオールと、グリセリド、植物油、水添植物油、脂肪酸およびステロールからなる群の少なくとも１つの構成要素との疎水性エステル交換生成物；油溶性ビタミン／ビタミン誘導体；およびそれらの混合物が挙げられる。この群のうち、好ましい親油性界面活性剤としては、グリセロール脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、およびそれらの混合物が挙げられ、またはポリオールと、植物油、水添植物油、およびトリグリセリドからなる群の少なくとも１つの構成要素との疎水性エステル交換生成物である。
【００６８】
一実施形態において、組成物は、本発明の化合物の良好な可溶化および／または溶解を確実にし、本発明の化合物の沈殿を最小限に抑えるための可溶化剤を含み得る。これは、非経口使用用の組成物−例えば、注射用の組成物に特に重要であり得る。可溶化剤はまた、親水性薬剤および／または界面活性剤などの他の成分の溶解性を高めるために、または安定したまたは均一な溶液または分散体として組成物を維持するために加えられ得る。
【００６９】
好適な可溶化剤の例としては、限定はされないが、以下のものが挙げられる：アルコールおよびポリオール、例えば、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、ベンジルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタンジオールおよびその異性体、グリセロール、ペンタエリトリトール、ソルビトール、マンニトール、トランスキトール（transcutol）、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、シクロデキストリンおよびシクロデキストリン誘導体；約２００〜約６０００の平均分子量を有するポリエチレングリコールのエーテル、例えば、テトラヒドロフルフリルアルコールＰＥＧエーテル（グリコフロール）またはメトキシＰＥＧ；アミドおよび他の窒素含有化合物、例えば、２−ピロリドン、２−ピペリドン、ε−カプロラクタム、Ｎ−アルキルピロリドン、Ｎ−ヒドロキシアルキルピロリドン、Ｎ−アルキルピペリドン、Ｎ−アルキルカプロラクタム、ジメチルアセトアミドおよびポリビニルピロリドン；エステル、例えば、プロピオン酸エチル、クエン酸トリブチル、クエン酸アセチルトリエチル、クエン酸アセチルトリブチル、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、酪酸エチル、トリアセチン、プロピレングリコールモノアセテート、プロピレングリコールジアセテート、ε−カプロラクトンおよびその異性体、δ−バレロラクトンおよびその異性体、β−ブチロラクトンおよびその異性体；および当該技術分野において公知の他の可溶化剤、例えば、ジメチルアセトアミド、ジメチルイソソルビド、Ｎ−メチルピロリドン、モノオクタノイン、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、および水。
【００７０】
可溶化剤の混合物も使用され得る。例としては、限定はされないが、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチル、ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキストリン、エタノール、ポリエチレングリコール２００−１００、グリコフロール、トランスキトール（transcutol）、プロピレングリコール、およびジメチルイソソルビドが挙げられる。特に好ましい可溶化剤としては、ソルビトール、グリセロール、トリアセチン、エチルアルコール、ＰＥＧ−４００、グリコフロールおよびプロピレングリコールが挙げられる。
【００７１】
含まれ得る可溶化剤の量は、特に限定されない。所与の可溶化剤の量は、生体許容（bioacceptable）量に限定され得、これは、当業者によって容易に決定され得る。状況によっては、例えば薬剤の濃度を最大にするために、生体許容量を超える量の可溶化剤を含むことが有利であり得、過剰な可溶化剤は、蒸留または蒸発などの従来の技術を用いて、患者に組成物を提供する前に除去される。したがって、存在する場合、可溶化剤は、薬剤、および他の賦形剤の総合重量を基準にして、１０重量％、２５重量％、５０重量％、１００重量％、または約２００重量％までの重量比であり得る。また、必要に応じて、５％、２％、１％あるいはそれ以下などのごく少量の可溶化剤が使用され得る。典型的に、可溶化剤は、約１重量％〜約１００重量％、より典型的に、約５重量％〜約２５重量％の量で存在し得る。
【００７２】
組成物は、１つ以上の薬学的に許容できる添加剤および賦形剤をさらに含み得る。このような添加剤および賦形剤としては、限定はされないが、粘着防止剤、消泡剤、緩衝剤、ポリマー、酸化防止剤、防腐剤、キレート剤、粘度調節剤（viscomodulator）、等張化剤（tonicifier）、香味剤、着色剤、着臭剤、乳白剤、懸濁化剤、結合剤、充填剤、可塑剤、滑沢剤、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００７３】
さらに、酸または塩基が、処理を容易にするため、安定性を高めるため、または他の理由で、組成物に組み込まれ得る。薬学的に許容できる塩基の例としては、アミノ酸、アミノ酸エステル、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、水酸化マグネシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、合成ケイ酸アルミニウム、合成ヒドロカルサイト、水酸化マグネシウムアルミニウム、ジイソプロピルエチルアミン、エタノールアミン、エチレンジアミン、トリエタノールアミン、トリエチルアミン、トリイソプロパノールアミン、トリメチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）などが挙げられる。薬学的に許容できる酸、例えば、酢酸、アクリル酸、アジピン酸、アルギン酸、アルカンスルホン酸、アミノ酸、アスコルビン酸、安息香酸、ホウ酸、酪酸、炭酸、クエン酸、脂肪酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、ヒドロキノスルホン酸（hydroquinosulfonic acid）、イソアスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、シュウ酸、パラ−ブロモフェニルスルホン酸、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、タンニン酸、酒石酸、チオグリコール酸、トルエンスルホン酸、尿酸などの塩である塩基も好適である。ポリプロトン酸の塩、例えば、リン酸ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、およびリン酸二水素ナトリウムも使用され得る。塩基が塩である場合、カチオンは、任意の好都合な薬学的に許容できるカチオン、例えば、アンモニウム、アルカリ金属およびアルカリ土類金属であり得る。例としては、限定はされないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、マグネシウム、カルシウムおよびアンモニウムが挙げられる。
【００７４】
好適な酸は、薬学的に許容できる有機または無機酸である。好適な無機酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、ホウ酸、リン酸などが挙げられる。好適な有機酸の例としては、酢酸、アクリル酸、アジピン酸、アルギン酸、アルカンスルホン酸、アミノ酸、アスコルビン酸、安息香酸、ホウ酸、酪酸、炭酸、クエン酸、脂肪酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、ヒドロキノスルホン酸、イソアスコルビン酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、パラ−ブロモフェニルスルホン酸、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、タンニン酸、酒石酸、チオグリコール酸、トルエンスルホン酸および尿酸が挙げられる。
【００７５】
注射用の医薬組成物
選択された実施形態において、本発明は、ＢＴＫ阻害剤および注射に好適な薬剤賦形剤を含有する注射用の医薬組成物を提供する。組成物中の薬剤の成分および量は、本明細書に記載されるとおりである。
【００７６】
注射による投与のために本発明の組成物が組み込まれ得る形態としては、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油、またはピーナッツ油、ならびにエリキシル剤、マンニトール、デキストロース、または滅菌水溶液、および同様の薬剤ビヒクルとともに、水性もしくは油性懸濁液、またはエマルションが挙げられる。
【００７７】
生理食塩水中の水溶液も、注射用に従来から使用される。エタノール、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール（および好適なそれらの混合物）、シクロデキストリン誘導体、および植物油も用いられ得る。適切な流動性が、例えば、分散体の場合、必要な粒径の維持のために、レシチンなどのコーティングの使用によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の防止が、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、およびチメロサールによってもたらされ得る。
【００７８】
滅菌した注射可能な溶液は、必要に応じて、上に列挙される様々な他の成分とともに、適切な溶媒中に必要量のＢＴＫ阻害剤を組み込んだ後、ろ過滅菌することによって調製される。一般に、分散体は、様々な滅菌した活性成分を、基礎的な分散媒および上に列挙されるものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌した注射可能な溶液の調製のための滅菌粉末の場合、いくつかの望ましい調製方法は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる、噴霧乾燥法、真空乾燥法およびフリーズドライ（凍結乾燥）法である。当業者に公知の他の凍結乾燥または噴霧乾燥された製剤も、本発明で用いられ得る。このような製剤としては、米国特許第５，９０８，８２６号、同第６，２６７，９５８号、同第７，６８２，６０９号、同第７，５９２，００４号、および同第８，２９８，５３０号、および米国特許出願公開第２０１０／０１５８９２５号（これらの教示内容は、参照により本明細書に具体的に援用される）に開示されるものが挙げられる。
【００７９】
投与量および投与計画
投与されるＢＴＫ阻害剤の量は、治療される哺乳動物、疾患または病態の重症度、投与速度、化合物の性質（disposition）および処方医師の裁量に依存する。しかしながら、有効な投与量は、単回または分割投与で、１日当たりｋｇ体重当たり約０．００１〜約１００ｍｇ、例えば、約１〜約３５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。７０ｋｇのヒトの場合、これは、約０．０５〜７ｇ／日、例えば、約０．０５〜約２．５ｇ／日になるであろう。ある場合には、上記の範囲の下限未満の投与量レベルが、十分以上であり得る一方、他の場合には、さらに多い用量が、例えば、このようなより多い用量を、１日を通した投与のためにいくつかの少ない用量に分割することによって、有害な副作用を引き起こさずに用いられ得る。
【００８０】
選択された実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、単回投与で投与される。典型的に、このような投与は、薬剤を迅速に導入するために、注射によって、例えば静脈注射によって行われる。しかしながら、必要に応じて、他の経路が使用され得る。単回投与のＢＴＫ阻害剤はまた、急性疾患の治療に使用され得る。
【００８１】
選択された実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、複数回投与で投与される。投与は、１日に約１回、２回、３回、４回、５回、６回、または７回以上であり得る。投与は、月に約１回、２週間に１回、週に１回、または１日置きに１回であり得る。他の実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、１日に約１回〜１日に約６回投与される。別の実施形態において、ＢＴＫ阻害剤の投与は、約７日未満にわたって続く。さらに別の実施形態において、投与は、約６、１０、１４、２８日間、２ヶ月間、６ヶ月間、または１年間を超えて続く。場合によっては、連続投与が、必要な限り達成され、維持される。
【００８２】
本発明の薬剤の投与は、必要な限り続き得る。選択された実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、１、２、３、４、５、６、７、１４、または２８日間を超えて投与される。ある実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、２８、１４、７、６、５、４、３、２、または１日間未満投与される。選択された実施形態において、ＢＴＫ阻害剤は、例えば、慢性作用の治療のために、継続的に慢性的に投与される。
【００８３】
有効量のＢＴＫ阻害剤の組合せが、直腸、口腔、鼻腔内および経皮経路、動脈内注射によるもの、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下、経口、局所、または吸入剤としてのものを含む、同様の有用性を有する、許容される薬剤投与方法のいずれかによって、単回または複数回投与のいずれかで投与され得る。
【００８４】
治療の方法
ある実施形態において、本発明は、哺乳動物における過剰増殖性疾患、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患を治療する方法であって、治療的有効量のＢＴＫ阻害剤、またはＢＴＫ阻害剤の薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体を前記哺乳動物に投与することを含む方法に関する。
【００８５】
ある実施形態において、本発明は、膀胱癌、頭頸部癌、膵管腺癌（ＰＤＡ）、膵臓癌、結腸癌、乳癌（mammary carcinoma）、乳癌（breast cancer）、線維肉腫、中皮腫、腎細胞癌、肺癌、胸腺腫、前立腺癌、大腸癌、卵巣癌、急性骨髄性白血病、胸腺癌、脳腫瘍、扁平上皮細胞癌、皮膚癌、眼癌、網膜芽細胞腫、黒色腫、眼内黒色腫、口腔癌および口腔咽頭癌、胃癌（gastric cancer）、胃癌（stomach cancer）、子宮頸癌、頭部癌、頸部癌、腎臓癌（renal cancer）、腎臓癌（kidney cancer）、肝臓癌、卵巣癌、前立腺癌、大腸癌、食道癌、精巣癌、婦人科癌、甲状腺癌、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連癌（例えば、リンパ腫およびカポジ肉腫）、ウイルス誘導性癌、膠芽細胞腫、食道腫瘍、血液学的腫瘍、原発性中枢神経系リンパ腫、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、慢性骨髄性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、食道腫瘍、濾胞中心リンパ腫、頭頸部腫瘍、Ｃ型肝炎ウイルス感染、肝細胞癌、ホジキン病、転移性結腸癌、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、腎細胞癌、小細胞肺癌、またはＩＶ期黒色腫からなる群から選択される、哺乳動物における過剰増殖性疾患をＢＴＫ阻害剤で治療する方法に関する。選択された実施形態において、本発明は、限定はされないが、急性骨髄性白血病、胸腺、脳、肺、扁平上皮細胞、皮膚、眼、網膜芽細胞腫、眼内黒色腫、口腔および口腔咽頭、膀胱、胃（gastric）、胃（stomach）、膵臓、膀胱、乳房、子宮頸部、頭部癌、頸部癌、腎臓（renal）、腎臓（kidney）、肝臓、卵巣、前立腺、大腸、食道、精巣、婦人科、甲状腺、ＣＮＳ、ＰＮＳ、ＡＩＤＳ関連癌（例えば、リンパ腫およびカポジ肉腫）またはウイルス誘導性癌などの癌を含む過剰増殖性疾患などの疾患をＢＴＫ阻害剤で治療する方法に関する。ある実施形態において、前記医薬組成物は、皮膚（例えば、乾癬）、再狭窄、または前立腺（例えば、前立腺肥大症（ＢＰＨ））の良性過形成などの非癌性過剰増殖性疾患の治療用である。
【００８６】
ある実施形態において、本発明は、哺乳動物における炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患をＢＴＫ阻害剤で治療する方法に関する。選択された実施形態において、本発明は、ＢＴＫ阻害剤で疾病を治療する方法であって、疾病が、腫瘍血管新生、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、乾癬、湿疹、および強皮症などの皮膚疾患、１型糖尿病、２型糖尿病、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、加齢性黄斑変性症、血管腫、神経膠腫および黒色腫、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、回腸嚢炎、脊椎関節炎、ブドウ膜炎、ベーチェット病、リウマチ性多発筋痛、巨細胞性動脈炎、サルコイドーシス、川崎病、若年性特発性関節炎、汗腺膿瘍、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、強直性脊椎炎、クローン病、紅斑性狼瘡、ループス腎炎、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）関連疾患、自己抗体、免疫療法、アジソン病、自己免疫性多内分泌腺症候群１型（ＡＰＳ−１）、自己免疫性多内分泌腺症候群２型（ＡＰＳ−２）、グレーブス病、橋本甲状腺炎、多内分泌自己免疫、医原性自己免疫、特発性上皮小体機能低下症、白斑、およびループス腎炎からなる群から選択される方法にも関する。
【００８７】
ある実施形態において、本発明は、ＢＣＲシグナル伝達が、自己免疫抗体の不適切な産生または炎症性サイトカインの放出および炎症性Ｔ細胞を含む免疫細胞の活性化をもたらす慢性Ｂ細胞疾患である、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患を治療する方法を提供する。このタイプの疾病において、ＢＴＫの阻害によってＢＣＲシグナル伝達を低減することは、治療効果をもたらし得る。ある実施形態において、本発明は、関節リウマチ（ＲＡ）、若年性ＲＡ、若年性特発性関節炎、変形性関節症、乾癬性関節炎、尋常性乾癬、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、変形性関節症、感染性関節炎、進行性慢性関節炎、リウマチ性多発筋痛、変形性関節炎、外傷性関節炎、痛風性関節炎、ライター症候群、多発性軟骨炎、急性滑膜炎、強直性脊椎炎、脊椎炎、シェーグレン症候群（ＳＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状エリテマトーデス（円板状ＬＥ）、腫瘍性紅斑性ＬＥ（LE tumidus）、ループス腎炎（ＬＮ）、抗リン脂質症（antiphospholipidosis）、皮膚筋炎、多発性筋炎、自己免疫血液疾患、血小板減少症、特発性血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、自己免疫（寒冷）凝集素症、自己免疫溶血性貧血、クリオグロブリン血症、再生不良性貧血、好中球減少症、自己免疫脈管炎、ベーチェット病、抗好中球細胞質抗体（ＡＮＣＡ）関連脈管炎、強皮症、全身性硬化症、重症筋無力症、多発性硬化症（ＭＳ）、慢性限局性脳炎、ギラン・バレー症候群、慢性疲労症候群、全身性労作不耐症、視神経脊髄炎、自己免疫ブドウ膜炎、結膜炎、角結膜炎、グレーブス病、甲状腺眼症、慢性甲状腺炎、顕微鏡的多発血管炎を伴う肉芽腫症、ヴェグナー肉芽腫、自己免疫胃炎、自己免疫性炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、移植片対宿主病、特発性スプルー、自己免疫性肝炎、（急性および慢性）活動性肝炎、特発性肺線維症、気管支炎、間質性肺線維症、慢性炎症性肺疾患、サルコイドーシス、特発性膜性腎症、ＩｇＡ腎症、糸球体硬化、糸球体腎炎（ネフローゼ症候群を伴うおよび伴わない）、膵炎および１型または２型糖尿病からなる群から選択される、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
【００８８】
ある実施形態において、本発明は、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患を治療する方法であって、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患は、骨髄細胞および肥満細胞におけるＢＴＫシグナル伝達が、炎症性サイトカインの不適切な放出、および炎症性Ｔ細胞、自己反応性Ｂ細胞、活性化組織マクロファージ、活性化肥満細胞、浸潤性単球および顆粒球炎症浸潤物を含む免疫細胞の活性化、および組織常在樹枝状細胞集団の活性化をもたらす、慢性自己免疫および炎症性疾患である方法を提供する。この性質の疾病において、骨髄細胞における表面またはエンドサイトーシス受容体を介してＢＴＫシグナル伝達を低減することは、治療効果をもたらし得る。ある実施形態において、本発明は、糖尿病性網膜症、巨細胞性動脈炎、川崎病、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、特発性スプルー、腸疾患、帯状疱疹後神経痛、リウマチ性多発筋痛、原発性胆汁性肝硬変、重症筋無力症、炎症性痛覚、悪液質、歯周病、中耳炎、塵肺、単核球症、肺気腫、肺線維症、珪肺症、慢性炎症性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患、肺機能不全、間質性肺線維症、ウィップル病、皮膚の良性過形成（例えば、乾癬）、感染症に起因する筋肉痛、感染症に続発する悪液質、全身性労作不耐症、アテローム性動脈硬化症、肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎を伴う肉芽腫症、汗腺膿瘍、加齢性黄斑変性症、およびアミロイド症からなる群から選択される、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患を治療する方法を提供する。
【００８９】
ある実施形態において、本発明は、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患を治療する方法であって、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患は、ＢＴＫ介在性シグナルが、炎症細胞の動員、活性化および／または増殖、ならびに皮膚における炎症メディエータおよび抗菌ペプチドの産生に関与する皮膚疾患である方法を提供する。ある実施形態において、本発明は、全身性疾患の皮膚の症状に起因する皮膚疾患を治療する方法であって、感作、リンパ球動員、局所またはリンパ節抗原提示細胞によるリンパ球スキューイング（skewing）、皮膚常在または皮膚ホーミングリンパ球の活性化、自然免疫による認識、ケラチノサイト抗菌応答、常在または浸潤性骨髄樹枝状細胞、形質細胞様樹状細胞、マクロファージ、肥満細胞、好中球、および／またはランゲルハンス細胞の活性化が、皮膚病変の発生をもたらす方法を提供する。ある実施形態において、本発明は、尋常性乾癬、滴状乾癬、乾癬性紅皮症、爪の乾癬、環状膿疱性乾癬、膿疱性乾癬、間擦部位の乾癬、乾癬性関節炎、膿漏性角皮症、類乾癬、結節性紅斑、掌蹠汗腺炎、アトピー性皮膚炎、アトピー性湿疹、脂漏性湿疹、脂漏性皮膚炎、発汗異常症、酒さ、皮膚エリテマトーデス、急性皮膚エリテマトーデス、亜急性皮膚エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、腫瘍性紅斑性エリテマトーデス、ループス腎炎（ＬＮ）、エリテマトーデス脂肪織炎、多形紅斑、疣贅、疣贅状エリテマトーデス、白斑、円形脱毛症、結節性痒疹、扁平苔癬、色素性痒疹、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、紅斑性天疱瘡、結節性天疱瘡、紅皮症性サルコイドーシス、肉芽腫性皮膚炎、強皮症、全身性硬化症、全身性硬化症の皮膚症状、汎発性皮膚肥満細胞症、紅皮症性肥満細胞症、環状肉芽腫、耳輪結節性軟骨皮膚炎、接触皮膚炎、薬疹、線状ＩｇＡ水疱性皮膚症、好酸球性皮膚炎、毛孔性角化症、リンパ腫様丘疹症、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹（ＰＬＥＶＡ）、慢性苔癬状粃糠疹（ＰＬＣ）、熱潰瘍性ムーシャ・ハーベルマン病（ＦＵＭＨＤ）、慢性じんましん、リウマチ性好中球性皮膚炎、クリオグロブリン血清紫斑病、および高グロブリン性紫斑病からなる群から選択される皮膚疾患を治療する方法を提供する。
【００９０】
ある実施形態において、本発明は、過剰増殖性疾患を治療する方法であって、過剰増殖性疾患は、破骨細胞、肥満細胞、および骨髄細胞におけるＢＴＫシグナル伝達が、骨溶解、破骨細胞過程、骨再形成過程の不均衡、または骨密度の低下に関与する骨の慢性自己免疫および炎症性疾患である方法を提供する。自己免疫成分も有することが多い、この性質の疾病としては、変形性関節症、転移による骨量減少、溶骨性病変、骨粗鬆症、強直性脊椎炎、脊椎関節炎、広汎性特発性骨増殖症、痛風性関節炎、および多発性骨髄腫に関連する骨疾患が挙げられる。ある実施形態において、本発明は、過剰増殖性疾患を治療する方法であって、過剰増殖性疾患が、変形性関節症、転移による骨量減少、溶骨性病変、骨粗鬆症、強直性脊椎炎、脊椎関節炎、広汎性特発性骨増殖症、痛風性関節炎、および多発性骨髄腫に関連する骨疾患からなる群から選択される方法を提供する。
【００９１】
ある実施形態において、本発明は、活性化Ｂ細胞が、ＩｇＥ抗体を産生し、ＦｃεＲの関与の後、肥満細胞が脱顆粒して、炎症性因子の放出および局所組織応答の急な活性化、ならびに内皮細胞、神経受容体および臓器の機能を決定する他の近位構造に対する慢性変化をもたらすアレルギー性およびアトピー性疾患を治療する方法を提供する。このような病態としては、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、湿疹、アトピー性湿疹、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、結節性痒疹、スティーブンス・ジョンソン症候群、喘息、気道過敏症、気管支けいれん、気管支炎、反応性喘息、慢性閉塞性肺疾患、１型過敏症、２型過敏症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、および気道における他の炎症性または閉塞性疾患が挙げられる。治療または予防され得るアレルギーとしては、中でも特に、食品、食品添加物、昆虫毒、イエダニ、花粉、動物性物質、金属、および特定の薬剤に対するアレルギーが挙げられる。
【００９２】
一実施形態において、本発明は、ヒト対象における臓器または細胞移植の前または後の免疫応答を抑制する方法であって、治療的有効量のＢＴＫ阻害剤、またはＢＴＫ阻害剤の薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体を前記ヒト対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、ヒト対象における臓器または細胞移植の前またはその間の免疫応答を抑制する方法であって、ヒト対象が移植のドナーであり、治療的有効量のＢＴＫ阻害剤、またはＢＴＫ阻害剤の薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体を前記ヒト対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、ヒト対象における臓器または細胞移植の前または後の免疫応答を抑制する方法であって、ヒト対象が移植のレシピエントであり、治療的有効量のＢＴＫ阻害剤、またはＢＴＫ阻害剤の薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体を前記ヒト対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、移植調整処置の一環として抗アロ−ＨＬＡ負荷を低減するために、移植の前に、高いレベルの抗アロ−ＨＬＡ抗体を有する患者を、ＢＴＫ阻害剤で処置する方法を提供する。ある実施形態において、本発明は、抗アロ抗体のデノボ産生を低減するために、移植の間、またはその後に、患者をＢＴＫで処置する方法を提供する。一実施形態において、本発明は、ヒト対象における臓器または細胞移植の前、その間、または後の同種移植の拒絶反応を抑制する方法であって、治療的有効量のＢＴＫ阻害剤、またはＢＴＫ阻害剤の薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体を前記ヒト対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、ＢＴＫ阻害剤を用いて、固形臓器移植を受ける患者のレジメンを移植前調整する方法を提供する。一実施形態において、本発明は、臓器移植の前、その間、またはその後、ヒト対象における生着の術後早期段階に、ＢＴＫ阻害剤で体液性急性拒絶を抑制する方法であって、治療的有効量のＢＴＫ阻害剤、またはＢＴＫ阻害剤の薬学的に許容できる塩、共結晶、エステル、プロドラッグ、溶媒和物、水和物もしくは誘導体を前記ヒト対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態において、本発明は、臓器移植の前、その間、またはその後、ＢＴＫの阻害によって、組織同種移植片への骨髄細胞の浸潤を抑制する方法を提供する。一実施形態において、本発明は、移植後の臓器における虚血／再かん流に関連する生理学的変化を低減し、それによって、白血球遊走をもたらす炎症性シグナルを低減する方法を提供する。一実施形態において、本発明は、臓器移植の生着後段階にＴリンパ球に対する有効なＢ細胞抗原提示を阻害する方法を提供し、それによって、ＣＤ８  Ｔ細胞、Ｔｈ１  Ｔ細胞、Ｔｈ２  Ｔ細胞およびＴｈ１７  Ｔ細胞、および他の炎症性Ｔ細胞集団を含む、同種移植に特有の細胞傷害性およびヘルパーＴ細胞集団の発現を低減する。一実施形態において、本発明は、移植された臓器によって示される区画においてＢＣＲを���したシグナル伝達を防ぐ用量のＢＴＫ阻害剤による処置によって、移植後のＢ細胞のデノボ活性化を防ぐ方法を提供する。一実施形態において、本発明は、移植された臓器から流出するリンパ節によって示される区画においてＢＣＲを介したシグナル伝達を防ぐ用量のＢＴＫ阻害剤による処置によって、移植後のＢ細胞のデノボ活性化を防ぐ方法を提供する。一実施形態において、本発明は、移植された臓器内の炎症組織によって示される区画においてＢＣＲを介したシグナル伝達を防ぐ用量のＢＴＫ阻害剤で、臓器移植後の急性または慢性移植片拒絶を処置する方法を提供する。上記の実施形態のいずれかにおいて、臓器または細胞移植は、心臓移植、腎移植、腎臓移植、肺移植、肝臓移植、ＡＢＯ血液型不適合移植、および幹細胞移植からなる群から選択される。ある実施形態において、本発明は、移植のレシピエントであるヒト対象を処置する方法であって、ＢＴＫ阻害剤を投与する工程を含む方法を提供する。
【００９３】
一実施形態において、本発明は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療する方法であって、ＢＴＫ阻害剤を投与する工程を含み、ＧＶＨＤが、幹細胞移植に関連するＧＶＨＤ、骨髄移植に関連するＧＶＨＤ、胸腺ＧＶＨＤ、皮膚ＧＶＨＤ、胃腸ＧＶＨＤ、肝臓ＧＶＨＤ、急性ＧＶＨＤ、および慢性ＧＶＨＤからなる群から選択される方法を提供する。
【００９４】
一実施形態において、薬剤は、活性化シグナルを伝達し、活性化された内皮細胞におけるインテグリンを認識し、浸出し、またはインサイチュでサイトカインおよび／またはケモカイン産生細胞になるためにＢＴＫシグナル伝達を必要とする、ミクログリアの活性化、マクロファージの動員および活性化、骨髄細胞を含む炎症細胞の浸潤に関与する神経変性疾患を抑制する。式（Ｉ）によるＢＴＫの阻害は、タンパク質の毒性凝集体、例えば、βアミロイド沈着（アミロイド斑）、神経原線維変化、タウ凝集および過剰リン酸化、細胞質内封入体、細胞質内対らせん状細線維、ポリグルコサン封入体、Papp-Lantos体、ユビキチン含有封入体の蓄積に関連する神経変性疾患、ならびにタンパク質分解の不十分な制御および／またはミスフォールドしたタンパク質を除去できないことが、神経変性をもたらす疾患を抑制することによって、疾患活動性または疾患進行を抑制するであろう。このような疾病としては、孤発性および家族性アルツハイマー病、軽度認知障害、脳アミロイド血管症、レビー小体型認知症、アルツハイマー病のレビー小体を伴う亜型、ダウン症、ハンチントン病、線条体黒質変性症、多系統萎縮症（ＭＳＡ−Ｐ、ＭＳＡ−Ｃ、シャイ・ドレーガー症候群）、孤発性または遺伝性筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳまたはルー・ゲーリッグ病）、原発性側索硬化症、若年性原発性側索硬化症、神経変性タウオパチー、孤発性または遺伝性シヌクレイノパチー、神経核内封入体病、パーキンソン病、１７番染色体に連鎖したパーキンソニズムを伴う前頭側頭認知症（ＦＴＤＰ−１７）が挙げられる。
【００９５】
一実施形態において、本発明は、哺乳動物における神経変性疾患をＢＴＫ阻害剤で治療する方法であって、グリア細胞、骨髄細胞、シュワン細胞、乏突起膠細胞およびＣＮＳ内にある他の骨髄由来の細胞型における炎症過程の阻害が、ＢＴＫとのその共有結合性相互作用およびＢＴＫ経路を介したシグナル伝達の阻害によって行われる方法に関する。式（Ｉ）の投与は、トリヌクレオチドリピート病（ポリグルタミン病）、ハンチントン病、脊髄小脳失調症１、２、３型（マチャド・ジョセフ病）、６、７、および１７型；球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核・淡蒼球ルイ体萎縮症、神経セロイドリポフスチン症、前頭側頭認知症（ピック病、原発性進行性失語症、および意味認知症）、大脳皮質基底核変性症および進行性核上麻痺に起因する、ミスフォールドしたおよび／または蓄積された細胞内タンパク質に対する免疫認識および炎症反応を阻害することによって、神経変性を予防または低減するであろう。
【００９６】
別の実施形態において、式（Ｉ）の投与を用いて、哺乳動物におけるＢＴＫを阻害し、それによって、孤発性または遺伝性プリオン病、プリオン障害、例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病、クールー、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、およびオリーブ橋小脳萎縮症、孤発性致死性不眠症、致死性家族性不眠症をもたらす疾患に起因する、炎症介在性神経細胞死および他の神経炎症作用を改善することができる。家族性プリオン障害の場合、哺乳動物における式（Ｉ）の投与を用いて、臨床兆候の発現後に病徴を軽減し、疾患進行を遅らせることに加えて、疾病の臨床症状の発生を防ぎ、および／または遅らせることもできる。
【００９７】
一実施形態において、本発明は、ＣＮＳ虚血に起因する、哺乳動物における神経炎症性疾患をＢＴＫ阻害剤で治療する方法に関する。式（Ｉ）による治療は、酸素が欠乏した組織の常在細胞におけるＢＴＫ介在性シグナルを低減することによって、ミクログリア活性化、炎症細胞浸潤、血管透過およびその後の再かん流傷害を防ぐために、症状の発現および／またはＣＮＳ虚血の最近のイベントを特定するイメージングの直後に使用され得る。虚血性イベントの数時間後または数日後に共有結合性ＢＴＫ阻害剤を投与することによって、治療は、血管性認知症、軽度認知障害、脳血管発作、脳卒中、一過性脳虚血発作（軽度の脳卒中）、局所脳虚血、多発性脳虚血、血栓性脳卒中、塞栓性脳卒中、および限られたまたは制限された血流の領域の周りの梗塞またはペナンブラの発生を含む、虚血性脳損傷に関連する神経炎症性および神経変性疾患を軽減および／または予防するであろう。
【００９８】
一実施形態において、本発明は、中枢および／または末梢神経系における自己免疫介在性神経変性疾患をＢＴＫ阻害剤で治療する方法に関する。ＢＴＫ介在性自己抗体産生の阻害によって、式（Ｉ）は、組織内にある骨髄由来細胞の活性化を低減し、循環骨髄細胞のトランスサイトーシス、溢出および浸潤を阻害し、それによって、炎症を低減し得る。さらに、式（Ｉ）による治療は、１）ミクログリアと内皮細胞との間のクロストークを変化させ、２）Ｂリンパ球の活性化、および循環または浸潤Ｔ細胞に対するそれらの同種抗原提示を阻害し、３）サイトカインおよび／またはケモカイン産生を低減することによって、内皮−ミクログリア境界および間質腔（自己免疫神経障害では、ここで、リンパ球凝集体が観察されている）における炎症過程の活性化を低減し得る。式（Ｉ）との共有結合性相互作用によるＢＴＫ阻害のこれらの効果は、Ｂ細胞活性化、サイトカイン活性化、およびＡＰＣ機能の阻害によって、ならびに浸潤性単球、活性化ミクログリア、および乏突起膠細胞を含むプロフェッショナルなＡＰＣの発達および成熟状態を変化させることによって、灰白質および白質への自己免疫Ｔ細胞の浸潤を低減するものと考えられる。したがって、式（Ｉ）などの共有結合性ＢＴＫ阻害剤による自己免疫介在性神経変性疾患の治療方法は、自然免疫過程を阻害すること、ならびに抗体産生および自己免疫Ｔ細胞の活性化を低減することによって、疾患進行を妨げ得る。本発明は、動物モデルにおける実験的自己免疫脳症、および視神経脊髄炎（デビック症候群）、ギラン・バレー症候群、多発性硬化症、臨床的に初発の症状（clinically isolated syndrome）、再発寛解型多発性硬化症、悪性多発性硬化症、原発性進行性多発性硬化症、視神経脊髄炎スペクトラム疾患、バロー同心円性硬化症、マールブルグ多発性硬化症、びまん性ミエリン破壊性硬化症（diffuse myelinoclastic sclerosis）、慢性限局性脳炎、ラスムッセン脳炎、スティッフパーソン症候群、重症筋無力症、抗ＭＡＧ  ＩｇＭ単クローン性免疫グロブリン血症に関連する多発神経障害を含むヒト神経障害の進行を遅らせ、またはその寛解を誘導し得る。
【００９９】
別の実施形態において、本発明は、Bannworth症候群（ライム病）、慢性脳脊髄炎（ライム病）；帯状疱疹後神経痛；ＨＴＬＶ−１関連脊髄症；進行性多巣性白質脳症；慢性疲労症候群（ＣＦＳ）、全身性労作不耐症（ＳＥＩＤ）、筋痛性脳脊髄炎（ＭＥ）、ウイルス感染後疲労症候群（ＰＶＦＳ）、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）；メニエール病（めまい内耳内リンパ体液調節（vertigo-inner ear endolymph fluid regulation））、ギラン・バレー症候群、筋萎縮性側索硬化症、進行性球麻痺、小児性進行性球麻痺（または若年性進行性球麻痺）、ベル麻痺、前庭神経炎、急性散在性脳脊髄炎、再発性または多相性散在性脳脊髄炎、および慢性脳脊髄炎を含む、哺乳動物における感染症または感染後神経炎症に起因する多発性神経障害をＢＴＫ阻害剤で治療する方法に関する。
【０１００】
ある実施形態において、本発明は、遺伝性神経変性疾患をＢＴＫ阻害剤で治療する方法であって、遺伝子の突然変異が、末梢または中枢神経、脊髄神経、後根神経節または特にこれらの構造を保護するミエリン鞘の変性をもたらし；および／またはニューロン、シュワン細胞、グリア細胞または星状膠細胞の欠陥に続発する炎症反応を引き起こす方法に関する。シャルコー・マリー・トゥース病、デジュリーヌ・ソッタス病、肥厚性間質性神経障害、レット症候群、リソソーム蓄積症および／または脂質蓄積症（ゴーシェ病、テイ・サックス病、ニーマン・ピック病Ａ、ＢおよびＣ型；ファーバー病、ＧＭ１ガングリオシドーシス、ＧＭ２ガングリオシドーシス、ムコ多糖症Ｉ型（ハーラー症候群、ハーラー・シャイエ症候群、およびシャイエ症候群を含む）、神経セロイドリポフスチン症（サンタヴォリ・ハルティア病、ヤンスキー・ビールショースキー病、バッテン病、クフス病、および他の小児性／若年性神経セロイドリポフスチン症）、白質ジストロフィー（副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、カナバン病、アレキサンダー病、ペリツェウス・メルツバッヘル病を含む）；およびミトコンドリアの機能不全、例えば、フリードライヒ運動失調症慢性進行性外眼筋麻痺、アルパース病、脊髄性筋萎縮症（遺伝性ＳＭＮ１またはＳＭＮ２突然変異）、小児性脊髄性筋萎縮症（ウェルドニッヒ・ホフマン病）、若年性脊髄性筋萎縮症（ウォルファルト・クーゲルベルク・ヴェランダー病）、先天性多発性関節拘縮症、および炎症が運動神経（特に、長い神経）の低下をもたらし得る疾病、例えば、遺伝性痙性対麻痺からなる群から選択される疾病。
【０１０１】
ある実施形態において、本発明は、ＢＴＫ阻害剤を含む組成物で、ヒトにおける固形腫瘍癌を治療する方法であって、用量が、固形腫瘍細胞と、マクロファージ、単球、肥満細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、骨髄由来免疫抑制細胞、制御性Ｂ細胞、好中球、樹枝状細胞、および線維芽細胞からなる群から選択される少なくとも１つの微小環境との間のシグナル伝達を阻害するのに有効である方法に関する。選択された実施形態において、本発明は、ＢＴＫ阻害剤を用いて、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、黒色腫、肺癌、頭頸部癌、および大腸癌を治療する方法であって、用量が、固形腫瘍細胞と、マクロファージ、単球、肥満細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、骨髄由来免疫抑制細胞、制御性Ｂ細胞、好中球、樹枝状細胞、および線維芽細胞からなる群から選択される少なくとも１つの微小環境との間のシグナル伝達を阻害するのに有効である方法に関する。
【０１０２】
ある実施形態において、過剰増殖性疾患は、膀胱癌、扁平上皮細胞癌、頭頸部癌、膵管腺癌（ＰＤＡ）、膵臓癌、結腸癌、乳癌、乳癌、線維肉腫、中皮腫、腎細胞癌、肺癌、胸腺腫、前立腺癌、大腸癌、卵巣癌、急性骨髄性白血病、胸腺癌、脳腫瘍、扁平上皮細胞癌、皮膚癌、眼癌、網膜芽細胞腫、黒色腫、眼内黒色腫、口腔癌、口腔咽頭癌、胃癌、胃癌、子宮頸癌、腎臓癌、腎臓癌、肝臓癌、卵巣癌、前立腺癌、大腸癌、食道癌、精巣癌、婦人科癌、甲状腺癌、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連癌（例えば、リンパ腫およびカポジ肉腫）、ウイルス誘導性癌、例えば、子宮頸癌（ヒトパピローマウイルス）、Ｂ細胞リンパ増殖性疾患、鼻咽頭癌（エプスタイン・バーウイルス）、カポジ肉腫および原発性滲出液リンパ腫（カポジ肉腫ヘルペスウイルス）、肝細胞癌（Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎ウイルス）、およびＴ細胞白血病（ヒトＴ細胞白血病ウイルス−１型）、膠芽細胞腫、食道腫瘍、頭頸部腫瘍、転移性結腸癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、腎細胞癌、血液学的腫瘍、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、ＩＶ期黒色腫、および神経膠腫からなる群から選択される固形腫瘍癌である。
【０１０３】
ある実施形態において、過剰増殖性疾患は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、バーキットリンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症（ＷＭ）、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、または骨髄線維症からなる群から選択されるＢ細胞悪性血液疾患である。一実施形態において、本発明は、哺乳動物における癌を治療する方法であって、癌が、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、ＤＬＢＣＬ（活性化されたＢ細胞（ＡＢＣ）および胚中心Ｂ細胞（ＧＣＢ）亜型を含む）、濾胞中心リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、無痛性非ホジキンリンパ腫、および成熟Ｂ細胞ＡＬＬである方法に関する。
【０１０４】
ある実施形態において、過剰増殖性疾患は、ＣＬＬの亜型である。ＣＬＬのいくつかの亜型が特徴付けられている。ＣＬＬは、白血病細胞における免疫グロブリン重鎖可変領域（ＩｇＶＨ）突然変異状態に分類されることが多い。R.N.Damle,et al.,Blood 1999,94,1840-47；T.J.Hamblin,et al.,Blood 1999,94,1848-54。ＩｇＶＨ突然変異を有する患者は、一般に、ＩｇＶＨ突然変異を有さない患者より長生きする。ＺＡＰ７０発現（陽性または陰性）はまた、ＣＬＬを特徴付けるのに使用される。L.Z.Rassenti,et al.,N.Engl.J.Med.2004,351,893-901。ＣｐＧ３におけるＺＡＰ−７０のメチル化も、例えばピロシーケンスによってＣＬＬを特徴付けるのに使用される。R.Claus,et al.,J.Clin.Oncol.2012,30,2483-91；J.A.Woyach,et al.,Blood 2014,123,1810-17。ＣＬＬはまた、BinetまたはRai基準で、疾病の段階によって分類される。J.L.Binet,et al.,Cancer 1977,40,855-64；K.R.Rai,T.Han,Hematol.Oncol.Clin.North Am.1990,4,447-56。１１ｑ欠失、１３ｑ欠失、および１７ｐ欠失などの他の一般的な突然変異は、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を用いた周知の技術を用いて評価され得る。一実施形態において、本発明は、ヒトにおけるＣＬＬを治療する方法であって、ＣＬＬが、ＩｇＶＨ突然変異陰性ＣＬＬ、ＺＡＰ−７０陽性ＣＬＬ、ＣｐＧ３  ＣＬＬにおいてメチル化されたＺＡＰ−７０、ＣＤ３８陽性ＣＬＬ、１７ｐ１３．１（１７ｐ）欠失によって特徴付けられる慢性リンパ球性白血病、および１１ｑ２２．３（１１ｑ）欠失によって特徴付けられるＣＬＬからなる群から選択される方法に関する。
【０１０５】
ある実施形態において、過剰増殖性疾患は、リヒタートランスフォーメーションを起こしたＣＬＬである。リヒター症候群としても知られているリヒタートランスフォーメーションを評価する方法が、P.Jain and S.O’Brien,Oncology,2012,26,1146-52に記載されている。リヒタートランスフォーメーションは、５〜１０％の患者において観察されるＣＬＬの亜型である。リヒタートランスフォーメーションは、ＣＬＬからのアグレッシブリンパ腫の発生を含み、一般に不良な予後を有する。
【０１０６】
ある実施形態において、過剰増殖性疾患は、リンパ球増加症に罹患しやすい患者におけるＣＬＬまたはＳＬＬである。一実施形態において、本発明は、患者におけるＣＬＬまたはＳＬＬを治療する方法であって、患者が、ウイルス感染、細菌感染、原虫感染、または脾臓摘出後状態からなる群から選択される疾患によって引き起こされるリンパ球増加症を示す方法に関する。一実施形態において、上記の実施形態のいずれかにおけるウイルス感染は、伝染性単核球症、肝炎、およびサイトメガロウイルスからなる群から選択される。一実施形態において、上記の実施形態のいずれかにおける細菌感染は、百日咳、結核、およびブルセラ症からなる群から選択される。
【０１０７】
ある実施形態において、過剰増殖性疾患は、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、骨髄増殖性腫瘍、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病（ＢＣＲ−ＡＢＬ１陽性）、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、または肥満細胞症からなる群から選択される。
【０１０８】
ある実施形態において、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患は、腫瘍血管新生、慢性炎症性疾患、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、乾癬、湿疹、および強皮症などの皮膚疾患、糖尿病、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、加齢性黄斑変性症、血管腫、神経膠腫および黒色腫、潰瘍性大腸炎、アトピー性皮膚炎、回腸嚢炎、脊椎関節炎、ブドウ膜炎、ベーチェット病、リウマチ性多発筋痛、巨細胞性動脈炎、サルコイドーシス、川崎病、若年性特発性関節炎、汗腺膿瘍、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチ、強直性脊椎炎、クローン病、紅斑性狼瘡、およびループス腎炎からなる群から選択される。
【０１０９】
ある実施形態において、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患は、関節リウマチ、炎症性腸疾患、アテローム性動脈硬化症、乾癬、湿疹、および強皮症などの皮膚疾患、糖尿病、糖尿病性網膜症、未熟網膜症、加齢性黄斑変性症、血管腫、神経膠腫、黒色腫、カポジ肉腫および卵巣、乳房、肺、膵臓、前立腺、結腸および扁平上皮癌などの、腫瘍血管新生、慢性炎症性疾患として発現し得る、哺乳動物における脈管形成または血管新生に関連する疾病である。
【０１１０】
ある実施形態において、炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患は、喘息の治療、予防、および／または管理である。本明細書において使用される際、「喘息」は、気道過敏症を含め、原因にかかわらず気道狭窄を包含する。喘息の一般的な原因としては、限定はされないが、環境刺激物質（例えば、アレルゲン）、冷気、暖気、香料、湿った空気、運動または労作、および情緒的ストレスへの曝露が挙げられる。喘息に関連する１つ以上の症状を治療、予防および／または管理する方法も、本明細書において提供される。症状の例としては、限定はされないが、激しい咳、気道狭窄、および粘液産生が挙げられる。
【０１１１】
本明細書に記載される他の示される疾病または疾患の治療、予防および／または管理における本明細書に記載される化合物および化合物の組合せの有効性はまた、当該技術分野において公知の様々なモデルを用いて試験され得る。喘息の治療、予防および／または管理における有効性が、例えば、Lee,et al.,J.Allergy Clin.Immunol.2006,118,403-9に記載されるオボアルブミン誘導喘息モデルを用いて評価され得る。関節炎（例えば、リウマチまたは乾癬性関節炎）の治療、予防および／または管理における有効性が、例えば、Williams,et al.,Chem.Biol.2010,17,123-34、国際公開第２００９／０８８９８６号パンフレット、国際公開第２００９／０８８８８０号パンフレット、および国際公開第２０１１／００８３０２号パンフレットに記載される自己免疫動物モデルを用いて評価され得る。乾癬の治療、予防および／または管理における有効性が、表皮、血管系または免疫細胞に標的突然変異を有するトランスジェニックまたはノックアウトマウスモデル、自然突然変異から得られるマウスモデル、およびヒト皮膚または免疫細胞の異種移植を有する免疫欠損マウスモデルを用いて評価され得、これらの全ては、例えば、Boehncke,et al.,Clinics in Dermatology,2007,25,596-605に記載されている。線維症または線維性疾患の治療、予防および／または管理における有効性が、例えば、Chevalier,et al.,Kidney International2009,75,1145-1152に記載される腎線維症の片側尿管閉塞モデル；例えば、Moore,et al.,Am.J.Physiol.Lung.Cell.Mol.Physiol.2008,294,L152-L160に記載される肺線維症のブレオマイシン誘導モデル；例えば、Chuang,et al.,Clin.Liver Dis.2008,12,333-347およびOmenetti,et al.,Laboratory Investigation,2007,87,499-514に記載される様々な肝臓／胆管線維化モデル（胆管結紮モデル）；またはVaricchio,et al.,Expert Rev.Hematol.2009,2,315-334に記載されるものなどのいくつかの骨髄線維症マウスモデルのいずれかを用いて評価され得る。強皮症の治療、予防および／または管理における有効性が、例えば、Yamamoto,et al.,J.Invest.Dermatol.1999,112,456-462に記載される、ブレオマイシンの反復局所注入によって誘導されるマウスモデルを用いて評価され得る。皮膚筋炎の治療、予防および／または管理における有効性が、例えば、Phyanagi,et al.,Arthritis & Rheumatism,2009,60(10),3118-3127に記載される、ウサギミオシンによる免疫付与によって誘導される筋炎マウスモデルを用いて評価され得る。紅斑性狼瘡の治療、予防および／または管理における有効性が、例えば、Ghoreishi,et al.,Lupus,2009,19,1029-1035；Ohl,et al.,J.Biomed.& Biotechnol.,Article ID 432595(2011)；Xia,et al.,Rheumatology,2011,50,2187-2196；Pau,et al.,PLoS ONE,2012,7(5),e36761；Mustafa、et al.,Toxicology,2011,90,156-168；Ichikawa et al.,Arthritis & Rheumatism,2012,62(2),493-503；Rankin,et al.,J.Immunology,2012,188,1656-1667に記載される様々な動物モデルを用いて評価され得る。シェーグレン症候群の治療、予防および／または管理における有効性が、例えば、Chiorini,et al.,J.Autoimmunity,2009,33,190-196に記載される様々なマウスモデルを用いて評価され得る。
【０１１２】
示される疾病または疾患の治療、予防および／または管理における本明細書に記載される化合物および化合物の組合せの有効性は、当該技術分野において公知の様々なモデルを用いて試験され得る。例えば、膵臓癌のための治療の有効性を決定するためのモデルが、Herreros-Villanueva,et al.,World J.Gastroenterol.2012,18,1286-1294に記載されている。乳癌のための治療の有効性を決定するためのモデルが、例えば、Fantozzi,Breast Cancer Res.2006,8,212に記載されている。卵巣癌のための治療の有効性を決定するためのモデルが、例えば、Mullany,et al.,Endocrinology2012,153,1585-92；およびFong,et al.,J.Ovarian Res.2009,2,12に記載されている。黒色腫のための治療の有効性を決定するためのモデルが、例えば、Damsky,et al.,Pigment Cell & Melanoma Res.2010,23,853-859に記載されている。肺癌のための治療の有効性を決定するためのモデルが、例えば、Meuwissen,et al.,Genes & Development,2005,19,643-664に記載されている。肺癌のための治療の有効性を決定するためのモデルが、例えば、Kim,Clin.Exp.Otorhinolaryngol.2009,2,55-60；およびSano,Head Neck Oncol.2009,1,32に記載されている。ＣＴ２６モデルを含む、大腸癌のための治療の有効性を決定するためのモデルが、Castle,et al.,BMC Genomics,2013,15,190；Endo,et al.,Cancer Gene Therapy,2002,9,142-148；Roth et al.,Adv.Immunol.1994,57,281-351；Fearon,et al.,Cancer Res.1988,48,2975-2980に記載されている。
【０１１３】
Ｂ細胞癌を含む血液悪性疾患における治療の有効性を決定するためのモデルも使用され得る。例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）における有効性が、ＰｉＢＣＬ１マウスモデルおよびＢＡＬＢ／ｃ（ハプロタイプＨ−２ｄ）マウスを用いて評価され得る。Illidge,et al.,Cancer Biother.& Radiopharm.2000,15,571-80。非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）における有効性が、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ハプロタイプ２−Ｈｋ）マウスを用いた３８Ｃ１３マウスモデルあるいは３８Ｃ１３  Ｈｅｒ２／ｎｅｕモデルを用いて評価され得る。Timmerman,et al.,Blood2001,97,1370-77；Penichet,et al.,Cancer Immunolog.Immunother.2000,49,649-662。ＣＬＬにおける有効性が、ＢＡＬＢ／ｃ（ハプロタイプＨ−２ｄ）マウスを用いたＢＣＬ１モデルを用いて評価され得る。Dutt,et al.,Blood,2011,117,3230-29。
【実施例】
【０１１４】
ここで、本明細書に包含される実施形態が、以下の実施例を参照して説明される。これらの実施例は、例示のために示されるに過ぎず、本明細書に包含される開示は、これらの実施例に限定されるものと決して解釈されるべきではなく、本明細書に示される教示の結果として明らかになるあらゆる変形例を包含するものと解釈されるべきである。実施例に記載される試薬は、市販されているか、または文献に記載される手順にしたがって調製され得る。
【０１１５】
以下の略語が使用される：
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＰＯＣｌ３：オキシ塩化リン（Ｖ）
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＫＯＡｃ：酢酸カリウム
ＩＰＡ：２−プロパノール
ＡＣＮ：アセトニトリル
ＭＷ：マイクロ波
ＡｃＯＨ：酢酸
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＥｔＯＨ：エタノール
ＥＤＣＩ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド
ＤＭＡＰ：ジメチルアミノピリジン
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＬｉＨＭＤＳ：リチウムヘキサメチルジシラジド
ＭｅＯＨ：メタノール
ｎ−ＢｕＬｉ：ｎ−ブチルリチウム
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分析法
ＳＣＸ−２：強酸性カチオン交換−２
ＫＯｔＢｕ：カリウムｔｅｒｔ．ブトキシド
Ｔ３Ｐ：プロピルホスホン酸無水物
ＲＴ：室温
Ｒｔ：保持時間
ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリジノン
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＩＡＤ：アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＴＨＰ：テトラヒドロピラン
ＴＢＤＭＳ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ＴＥＡ：トリエチルアミン
Ｐｄ２（ｄｂａ）３：トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）
ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＤＣＭ：ジクロロメタンとの錯体である、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＰＥ：相交換
ＣＤＣｌ３：クロロホルム−ｄ
ＨＢｒ：臭化水素
Ｋ２ＣＯ３：炭酸カリウム
ｍ／ｚ：質量電荷比
【０１１６】
実施例１−ＢＴＫ阻害剤の合成
本発明に含まれるＢＴＫ阻害剤は、有機化学の技術分野において周知の方法によって調製され得る。例えば、March,Advanced Organic Chemistry,4th Edition,John Wiley & Sons,2001を参照されたい。合成プロセス中、該当する分子のいずれかにおける感受性または反応性基を保護することが必要であるか、および／または望ましいことがある。これは、Greene and Wutts,Protective Groups in Organic Synthesis,3rd Edition,John Wiley & Sons,1999に記載されるものなどの従来の保護基によって達成される。保護基は、当該技術分野において周知の方法を用いて、好都合なその後の段階で任意選択により除去される。
【０１１７】
反応の生成物は、必要に応じて、限定はされないが、ろ過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどの従来の技術を用いて、任意選択により単離され、精製される。このような材料は、物理定数およびスペクトルデータの測定を含む従来の手段を用いて、任意選択により特性評価される。
【０１１８】
本発明に含まれるＢＴＫ阻害剤は、以下の経路によって合成され得る。ボロン酸ピナコールエステルは、以下のように調製され得る。
【化２８】
2018536705.tif 000029
【０１１９】
以下の化合物は、スキーム１およびスキーム２に示される調製と類似の方法で調製され得る。
【化２９】
2018536705.tif 000030
【０１２０】
さらなるボロン酸ピナコールエステルが、以下のように調製され得る。
【化３０】
2018536705.tif 000031
【０１２１】
ボロン酸が、以下のように調製され得る。
【化３１】
2018536705.tif 000032
【０１２２】
ピロリジン誘導体が、以下のように調製され得る（式中、ＣＢｚが、カルボキシベンジルを指す）。
【化３２】
2018536705.tif 000033
【０１２３】
ＣＢｚ保護アラニンおよびＮ−メチルアラニン誘導体が、類似の方法で調製される。
【０１２４】
ピロリジン誘導体はまた、以下のように調製され得る。
【化３３】
2018536705.tif 000034
【０１２５】
上記の合成において、ボロン酸およびボロン酸ピナコールエステルは、鈴木カップリング工程において同様に良好に機能する。
【０１２６】
本発明は、例えば、配置または幾何異性のために得られる、本発明に係るＢＴＫ阻害剤の全ての立体異性体もその範囲内に含む。このような立体異性体は、鏡像異性体、ジアステレオ異性体、シスおよびトランス異性体などを含む。本明細書に記載される化合物の個々の立体異性体の場合、本発明は、他の立体異性体を実質的に含まない、すなわち、５％未満、好ましくは、２％未満、特に、１％未満の他の立体異性体を伴う上記の立体異性体も含む。任意の割合の立体異性体の混合物、例えば、実質的に等しい量の２つの鏡像異性体を含むラセミ混合物も、本発明の範囲内に含まれる。
【０１２７】
キラル化合物の場合、純粋な立体異性体を得るための不斉合成方法、例えば、キラル誘導による合成、キラル中間体から出発する合成、エナンチオ選択的酵素的変換、キラル媒質におけるクロマトグラフィーを用いた立体異性体の分離が、当該技術分野において周知である。このような方法は、Collins,et al.,eds.,Chirality in Industry,John Wiley& Sons,1992に記載されている。同様に、幾何異性体の合成のための方法も、当該技術分野において周知である。
【０１２８】
遊離塩基の形態であり得る本発明の化合物は、薬学的に許容できる塩の形態で反応混合物から単離され得る。薬学的に許容できる塩はまた、本明細書に開示されるＢＴＫ阻害剤の遊離塩基を、塩化水素、臭化水素、ヨウ化水素、硫酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、マレイン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、およびアスコルビン酸などの、有機または無機酸で処理することによって得られる。
【０１２９】
本明細書に開示される本発明の化合物はまた、非晶質形態として、または多形としても知られている複数の結晶形態として存在し得る。全ての物理的形態が、本発明の範囲内に含まれる。溶媒和物の調製は、一般に知られている。ここで、例えば、Caira,et al.,J.Pharm.Sci.,2004,93,601-611には、酢酸エチル中ならびに水からの抗真菌フルコナゾールの溶媒和物の調製が記載されている。溶媒和物、水和物などの同様の調製が、van Tonder,et al.,AAPS PharmSciTech.,2004,5(1),article 12；およびBingham,et al.,Chem.Commun.2001,603-604によって記載されている。典型的な非限定的なプロセスは、周囲温度より高い温度で、所望の量の所望の溶媒（有機溶媒または水またはそれらの混合物）に本発明の化合物を溶解させ、標準的な方法によって後に単離される結晶を形成するのに十分な速度で溶液を冷却することを含む。例えばＩＲ分光法などの分析技術は、溶媒和物（または水和物）のような結晶中の溶媒（または水）の存在を示す。
【０１３０】
本発明は、１個以上の原子が、自然界に通常見られる原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子で置換されることを除いて、本明細書に記載されるものと同一である、本発明の同位体で標識した化合物も包含する。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、１８Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、および３６Ｃｌなどの、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体が挙げられる。
【０１３１】
本明細書に開示される化合物の放射性同位体で標識した形態（例えば、３Ｈおよび１４Ｃで標識したもの）は、化合物および／または基質組織分布アッセイに有用である。三重水素（３Ｈ）および炭素−１４（１４Ｃ）同位体が、調製の容易さおよび可検出性のために特に好ましい。さらに、重水素（２Ｈ）などのより重い同位体による置換は、より高い代謝的安定性（例えば、増加した生体内半減期または減少した必要投与量）から得られるいくつかの治療上の利点を与えることができ、したがって、状況によっては好ましいことがある。本明細書に開示される化合物の同位体で標識した形態は、一般に、同位体で標識されていない試薬の代わりに適切な同位体で標識した試薬を用いることによって、スキームおよび／または後述される実施例に開示されるものと類似の以下の手順によって調製され得る。
【０１３２】
実施例２−分析方法
以下の液体クロマトグラフィー（ＬＣ）および質量分析法（ＭＳ）方法が、本発明に含まれる化合物を特性評価するのに使用され得る。
【０１３３】
方法Ａ
ＬＣ−ＭＳ分光計（Agilent）
検出器：ＤＡＤ（２１０、２５４および２８０ｎｍ）
質量検出器：ＡＰＩ−ＥＳ（１０〜２０００ａｍｕ、正／負イオンモード）
溶離剤（移動相）：Ａ：ＭｉｌｌｉＱ水中０．１％のギ酸、Ｂ：アセトニトリル
カラム：Waters XTerra C18 MS、５０×４．６ｍｍの内径、２．５μｍ
流量：０．５ｍＬ／分
【０１３４】
【表１】
2018536705.tif 000035
【０１３５】
方法Ｂ
ＬＣ−ＭＳ分光計（Waters）；検出器：ＤＡＤ（２１４ｎｍ）
質量検出器：ＡＰＩ−ＥＳ（１００〜１０００ａｍｕ、正／負イオンモード）
溶離剤（移動相）：Ａ：水中０．１％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）；Ｂ：アセトニトリル
ＬＣ−ＭＳフロー方法：勾配
カラム：Acquity HSS-T3（２．１×１００ｍｍ×１．８μｍ）
流量：０．３ｍＬ／分
【０１３６】
【表２】
2018536705.tif 000036
【０１３７】
方法Ｃ
ＨＰＬＣ：Gilson分析ＨＰＬＣシステム
カラム：Phenomenex Luna C18(2)（１００×２．００ｍｍ、５μｍ）
検出器：ＵＶ／Ｖｉｓ（２１０／２４０ｎｍ）
流量：１ｍＬ／分
溶離剤（移動相）：Ａ：アセトニトリル、Ｂ：アセトニトリル／ＭｉｌｌｉＱ水＝１／９（ｖ／ｖ）、Ｃ：ＭｉｌｌｉＱ水中０．１％のＴＦＡ
【０１３８】
【表３】
2018536705.tif 000037
【０１３９】
方法Ｄ
ＨＰＬＣ：Waters分析ＨＰＬＣシステム；カラム：SunFire-C18（４．６×５０ｍｍ、５μｍ）
検出器：ＵＶ／Ｖｉｓ（２１０／２４０ｎｍ）
流量：１ｍＬ／分
溶離剤（移動相）：Ａ：水中５ｍＭの酢酸アンモニウム、Ｂ：アセトニトリル
【０１４０】
【表４】
2018536705.tif 000038
【０１４１】
方法Ｅ
ＨＰＬＣ：Waters分析ＨＰＬＣシステム；カラム：X-Bridge Shield-RP-18（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ）
検出器：プログラム可能なダイオードアレイ
流量：１ｍＬ／分
溶離剤：Ａ：水中２ｍＭの酢酸アンモニウム、Ｂ：アセトニトリル
【０１４２】
【表５】
2018536705.tif 000039
【０１４３】
実施例３：２−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｉ−１）の調製
【化３４】
2018536705.tif 000040
４−ブロモ−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中の４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−アミン（１３．０ｇ、８０．１ｍｍｏｌ）および４−ブロモ−２−メトキシ−安息香酸（１８．５ｇ、８０．１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４４．２ｍＬ、２４０．３ｍｍｏｌ）を加え、次に、プロピルホスホン酸無水物溶液（ジクロロメタン中５０％、７６．４ｇ、１２０．１ｍｍｏｌ）を滴下して加え、反応混合物を８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を冷却し、水（３００ｍＬ）で希釈した。得られた固体をろ過して取り出し、水（３００ｍＬ）で洗浄した。この固体を、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中１０％のメタノールに溶解させ、水で洗浄した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、濃縮して、４−ブロモ−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（１７．０ｇ、５６．８％）を淡褐色の固体として得た。
【０１４４】
２−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。４−ブロモ−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（１７．０ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（１３．７ｇ、５４．３ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（８．８ｇ、９０．６ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（１７０ｍＬ）に取り込み、反応混合物を、１０分間にわたって窒素下で脱気した。次に、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）２．ＤＣＭ（１．７ｇ、２．２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１００℃で１６時間加熱した。反応混合物を冷却し、水（３００ｍＬ）をこの混合物に加え、酢酸エチル（２００ｍＬ）で抽出した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、濃縮して、残渣を得て、それを、シリカゲル（１００〜２００メッシュ）およびヘキサン中０〜１０％の酢酸エチルを用いたカラムクロマトグラフィーによってさらに精製して、２−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（１４．４ｇ、７７．０％）をオフホワイトの固体として得た。ＨＰＬＣ（方法Ｅ）Ｒｔ：５．９９分；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：１０．９（１Ｈ，ｓ）、８．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ）、８．５６（１Ｈ，ｓ）、７．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．５４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ）、７．４１−７．３７（ｍ，２Ｈ）、３．９８（ｓ，３Ｈ）および１．３２（ｓ，１２Ｈ）。
【０１４５】
実施例４：ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（８−アミノ−１−ブロモ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（Ｉ−２）の調製
【化３５】
2018536705.tif 000041
ベンジルＮ−［（１Ｓ）−２−［（３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメートの調製。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１９．３５ｍＬ、１１１．０９ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２５０ｍＬ）中の、（２Ｓ）−２−［ベンジルオキシカルボニル（メチル）アミノ］プロパン酸（６．５９ｇ、２７．７７ｍｍｏｌ）と、（３−クロロピラジン−２−イル）メタンアミン塩酸塩（５．００ｇ、２７．７７ｍｍｏｌ）と、ＨＡＴＵ（１５．８４ｇ、４１．６６ｍｍｏｌ）との混合物に、１０分間で滴下して加え、得られた混合物を２０℃で３時間撹拌した。混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍＬ）で１回、および飽和塩化アンモニウム水溶液（２００ｍＬ）で１回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、蒸発乾固させた。残渣を、シリカゲルにおけるフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘプタン中０〜１００％の酢酸エチル）によって精製して、ベンジルＮ−［（１Ｓ）−２−［（３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（９．２ｇ、９１．３％）を無色油として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：５．３２分；ｍ／ｚ  ３６３．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４６】
ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］−Ｎ−メチル−カルバメートの調製。ＰＯＣｌ３（１４．２２ｍＬ、１５２．１５ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（２００ｍＬ）中のベンジルＮ−［（１Ｓ）−２−［（３−クロロピラジン−２−イル）メチルアミノ］−１−メチル−２−オキソ−エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（９．２ｇ、２５．３６ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（０．２ｍＬ、２．５４ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で５分間にわたって滴下して加え、混合物を７０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷まし、氷（２５０ｍＬ）に注いだ。混合物を炭酸ナトリウムでｐＨ約８にして、酢酸エチル（２５０ｍＬ）で２回抽出した。組み合わされた有機抽出物を、塩水（２００ｍＬ）で１回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（１００％の酢酸エチル）によって精製して、ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（８．０ｇ、９１．５％）をオレンジ色の油として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：６．１８分；ｍ／ｚ  ３４５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４７】
ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（１−ブロモ−８−クロロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］−Ｎ−メチル−カルバメートの調製。ＮＢＳ（４．５４ｇ、２５．５２ｍｍｏｌ）を、ＮＭＰ（５０ｍＬ）中のベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（８−クロロイミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（８．０ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を室温で２時間撹拌した。酢酸エチル（２５０ｍＬ）および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）を反応混合物に加え、層を分離した。有機抽出物を、水（２００ｍＬ）で１回、および飽和塩水（２００ｍＬ）で１回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘプタン中０〜１００％の酢酸エチル）によって精製して、ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（１−ブロモ−８−クロロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（６．５ｇ、６６．１％）を白色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：７．０５分；ｍ／ｚ  ４２３．０＋４２５．０（１：１）（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４８】
ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（８−アミノ−１−ブロモ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］−Ｎ−メチル−カルバメートの調製。２つのマイクロ波バイアル（１×０．９ｇ；１×１．３ｇ）中で、ベンジル−Ｎ−［（１Ｓ）−１−（１−ブロモ−８−クロロ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（２．２ｇ、５．１９ｍｍｏｌ）を、ＩＰＡ（２×１２ｍＬ）中で懸濁させ、水酸化アンモニウム（水中２８％）（２×８ｍＬ、４１０．８４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、１２０℃で２時間にわたってマイクロ波中で加熱した。反応混合物をプールし、少量になるまで濃縮した。固体をろ過して取り出し、水（５０ｍＬ）で洗浄し、アセトニトリル（２５ｍＬ）と１回同時蒸発させて、表題化合物（１．８ｇ、８５．８％の収率）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：４．２７分；ｍ／ｚ  ４０４．１＋４０６．１（１：１）（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４９】
実施例５：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−３）の調製
【化３６】
2018536705.tif 000042
ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−［８−アミノ−１−［４−（２−ピリジルカルバモイル）フェニル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメートの調製。中間体Ｉ−２（３００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）中のＮ−（２−ピリジル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド（３１３ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）に加え、２Ｍの炭酸カリウム水溶液（３ｍＬ）を加え、混合物を、５分間にわたってＮ２ガスでパージした。ビス（ｄｐｐｆ）Ｐｄ（ＩＩ）Ｃｌ２（３０．３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を再度パージし、反応混合物を、マイクロ波中で、１４０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、酢酸エチル（１００ｍＬ）で２回抽出した。組み合わされた有機抽出物を飽和塩水（１００ｍＬ）で１回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０〜８％のメタノール）によって精製して、ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−［８−アミノ−１−［４−（２−ピリジルカルバモイル）フェニル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（２０５ｍｇ、５３．０％）を黄色の油として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：４．６９分；ｍ／ｚ  ５２２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５０】
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミドの調製。酢酸中の臭化水素酸（３３重量％；４ｍＬ、７０．２ｍｍｏｌ）と、ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−［８−アミノ−１−［４−（２−ピリジルカルバモイル）フェニル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル］エチル］−Ｎ−メチル−カルバメート（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で４時間撹拌した。反応混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で２回抽出した。水相を、固体炭酸ナトリウムで塩基性（ｐＨ約１０）にして、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で１回、および酢酸エチル（５０ｍＬ）で２回抽出した。組み合わされた有機抽出物を飽和塩水（１００ｍＬ）で１回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮して、４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（１１５ｍｇ、７７．４％）をオフホワイトの固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：１．０９分；ｍ／ｚ  ３８８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５１】
実施例６：２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド（Ｉ−４）の調製
【化３７】
2018536705.tif 000043
４−ブロモ−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミドの調製。ジクロロメタン（２５０ｍＬ）中の４−ブロモ−２−メトキシ−安息香酸（１５．３ｇ、６６．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン−２−アミン（６．９ｇ、７２．８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３４．６ｍＬ、１９８．７ｍｍｏｌ）を加えた。ＨＡＴＵ（３２．７ｇ、８６．１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。水（２００ｍＬ）を加え、反応混合物を１時間撹拌した。有機層を減圧下で濃縮した。ＤＣＭ（５０ｍＬ）を加え、溶液を週末にかけて結晶化させた。固体をろ過して取り出し、ジエチルエーテル（１０ｍＬ）で２回洗浄し、減圧下で乾燥させて、４−ブロモ−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（１４．４ｇ、６６．８％）を淡褐色の結晶として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：６．０５分；ｍ／ｚ  ３０７．０＋３０９．０（１：１）（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５２】
２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミドの調製。１，４−ジオキサン（１７５ｍＬ）中の４−ブロモ−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（１４．４ｇ、４６．９ｍｍｏｌ）の溶液に、ビス（ピナコラト）ジボロン（１４．３ｇ、５６．３ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（９．２ｇ、９３．８ｍｍｏｌ）を加えた。ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）．ＤＣＭ（１．９ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１００℃で５時間撹拌した。反応混合物を水（１５０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１５０ｍＬ）で２回抽出した。組み合わされた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘプタン中０〜５０％の酢酸エチル）によって精製した。生成物を含有する画分を減圧下で濃縮した。残渣をヘプタン（１５０ｍＬ）中で懸濁させ、３０分間撹拌した。固体をろ過して取り出し、ヘプタン（１５ｍＬ）で２回洗浄して、２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド（１０．４ｇ、６２．６％）を白色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：６．８６分；ｍ／ｚ  ３５５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．５１（１Ｈ，ｓ）、８．３６（１Ｈ，ｍ）、８．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．８５（１Ｈ，ｍ）、７．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝７．６Ｈｚ、Ｊ２＝０．９Ｈｚ）、７．３８（１Ｈ，ｓ）、７．１７（１Ｈ，ｍ）、４．０１（３Ｈ，ｓ）、１．３３（１２Ｈ，ｓ）。
【０１５３】
実施例７：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−５）の調製
【化３８】
2018536705.tif 000044
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−２およびＩ−４を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、３２０ｍｇ、１００％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：２．３８分；ｍ／ｚ  ４１８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５４】
実施例８：Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド（Ｉ−６）の調製
【化３９】
2018536705.tif 000045
Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミドの調製。４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）安息香酸（３．０ｇ、１２．０９ｍｍｏｌ）、５−メチルピリジン−２−アミン（１．４３ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（２．５５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１７７．３ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を２１℃で一晩撹拌した。５０ｍＬの３％のクエン酸水溶液を反応混合物に加え、反応混合物を１５分間撹拌した。有機層を、５０ｍＬの１％のクエン酸水溶液および塩水（５０ｍＬ）で連続して洗浄し、ＰＥフィルタ上に注ぎ、減圧下で濃縮して、表題化合物をオフホワイトの固体（３．５２ｇ、８６．０％）として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ：６．３９７分；ｍ／ｚ  ３３９．３（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、３００Ｋ）：δ＝８．８６（１Ｈ，ｓ）、８．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、８．１２（１Ｈ，ｍ）、７．９３（４Ｈ，ｓ）、７．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝２．３Ｈｚ、Ｊ２＝８．５Ｈｚ）、２．３３（３Ｈ，ｓ）、１．３７（１２Ｈ，ｓ）。
【０１５５】
実施例９：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−７）の調製
【化４０】
2018536705.tif 000046
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−２およびＩ−６を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、２７５ｍｇ、９２％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：１．６０分；ｍ／ｚ  ４０２．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５６】
実施例１０：２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミド（Ｉ−８）の調製
【化４１】
2018536705.tif 000047
２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）ベンズアミドの調製。２−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）安息香酸を用いて、中間体Ｉ−６について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（４．２１ｇ、７５．２％）をオフホワイトの固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ：７．１７８分；ｍ／ｚ  ３６９．３（Ｍ＋Ｈ）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、３００Ｋ）：δ＝１０．３４（１Ｈ，ｓ）、８．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）、８．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ）、８．１４（１Ｈ，ｍ）、７．５５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）、７．４４（１Ｈ，ｓ）、４．１２（３Ｈ，ｓ）、２．３１（３Ｈ，ｓ）、１．３７（１２Ｈ，ｓ）。
【０１５７】
実施例１１：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−９）の調製
【化４２】
2018536705.tif 000048
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（メチルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−２およびＩ−８を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、２０９ｍｇ、６６％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：２．８６分；ｍ／ｚ  ４３２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５８】
実施例１２：ベンジル−（２Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート硫酸塩（Ｉ−１０）の調製
【化４３】
2018536705.tif 000049
ベンジル（２Ｓ）−２−（８−アミノ−１−ブロモ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート硫酸塩の調製。国際特許出願公開番号国際公開第２０１３／０１０８６８Ａ１号パンフレット（その開示内容が、参照により本明細書に援用される）に記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物をベージュ色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．７３６分；ｍ／ｚ  ４１４．１＋４１６．１（１：１）（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５９】
実施例１３：４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｉ−１１）の調製
【化４４】
2018536705.tif 000050
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１およびＩ−１０を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、１６５ｍｇ、４７％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．８６分；ｍ／ｚ  ４９８．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６０】
実施例１４：ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（８−アミノ−１−ブロモ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］カルバメート（Ｉ−１２）の調製
【化４５】
2018536705.tif 000051
ベンジルＮ−［（１Ｓ）−１−（８−アミノ−１−ブロモ−イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−３−イル）エチル］カルバメートの調製。（２Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロパン酸を用いて、中間体Ｉ−２について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（４工程で、１．８ｇ、４２％）を白色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．５９分；ｍ／ｚ  ３９０．０＋３９２．０（１：１）（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６１】
実施例１５：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｉ−１３）の調製
【化４６】
2018536705.tif 000052
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１およびＩ−１２を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、７９ｍｇ、６５％）を得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．７７１分；ｍ／ｚ  ４７２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６２】
実施例１６：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−１４）の調製
【化４７】
2018536705.tif 000053
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−４およびＩ−１２を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、１６４ｍｇ、６６％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：２．０４分；ｍ／ｚ  ４０４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６３】
実施例１７：４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｉ−１５）の調製
【化４８】
2018536705.tif 000054
４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−アミンを用いて、中間体Ｉ−６について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（６９４ｍｇ、４３．９％）を白色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：７．７４分；ｍ／ｚ  ３９３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６４】
実施例１８：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｉ−１６）の調製
【化４９】
2018536705.tif 000055
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１２およびＩ−１５を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、１３５ｍｇ、５９．６％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．４０分；ｍ／ｚ  ４４２．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６５】
実施例１９：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−１７）の調製
【化５０】
2018536705.tif 000056
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１２およびＩ−６を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、２１７ｍｇ、７０％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：１．２８分；ｍ／ｚ  ３８８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６６】
実施例２０：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−１８）の調製
【化５１】
2018536705.tif 000057
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−アミノエチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１２およびＩ−８を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、２１９ｍｇ、７７％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：２．６８分；ｍ／ｚ  ４１８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６７】
実施例２１：２−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミド（Ｉ−１９）の調製
【化５２】
2018536705.tif 000058
４−ブロモ−２−メトキシ−ベンゾイルクロリドの調製。４−ブロモ−２−メトキシ−安息香酸（８．３８ｇ、３６．２７ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（７５ｍＬ）に溶解させた。塩化チオニル（５．２９ｍＬ、７２．５４ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＦを加えた。反応混合物を還流状態で３時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、油ポンプ上で乾燥させて、定量的収率（９．５ｇ）で黄色の固体を得た。
【０１６８】
４−ブロモ−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミドの調製。４−ブロモ−２−メトキシ−ベンゾイルクロリド（４．００ｇ、１６．０３ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１００ｍＬ）中のチアゾール−２−アミン（３．２１ｇ、３２．０７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．３４ｍＬ、２４．１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を２１℃で一晩撹拌した。反応混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で２回洗浄した。有機層を塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物を、ヘプタン中０〜１００％のＥｔＯＡｃで溶離しながら、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、表題化合物を白色の固体（１．０１ｇ、２０．１％）として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ：６．０６５分；ｍ／ｚ  ３１３．０＋３１５．０（Ｍ、Ｍ＋２）＋。
【０１６９】
２−メトキシ−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミドの調製。４−ブロモ−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミド（１．０１ｇ、３．２３ｍｍｏｌ）を、乾燥１，４−ジオキサン（３２ｍＬ）に溶解させた。ビス（ピナコラト）ジボロン（９８３ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）および酢酸カリウム（６３３ｍｇ、６．４５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を、１０分間にわたって窒素ガスでパージした。ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）２（１３２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を、５分間にわたって窒素ガスで再度パージした。反応混合物を、窒素ガス雰囲気下で、１００℃で一晩撹拌した。反応混合物を水（４０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮して、褐色／黒色の油（１．７６ｇの粗製物＞１００％）を得て、それを次の工程で粗製物のまま使用した。ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ：６．９２８分；ｍ／ｚ  ３６１．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７０】
実施例２２：４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミド（Ｉ−２０）の調製
【化５３】
2018536705.tif 000059
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１０およびＩ−１９を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、８９ｍｇ、４２％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：２．８５１分；ｍ／ｚ  ４３６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７１】
実施例２３：４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−２１）の調製
【化５４】
2018536705.tif 000060
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１０およびＩ−６を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、１７６ｍｇ、８７％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：１．７２８分；ｍ／ｚ  ４１４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７２】
実施例２４：４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｉ−２２）の調製
【化５５】
2018536705.tif 000061
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−ピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１０およびＩ−８を用いて、中間体Ｉ−３について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２工程で、１８７ｍｇ、８７％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：２．９７５分；ｍ／ｚ  ４４４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７３】
実施例２５：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−１）の調製
【化５６】
2018536705.tif 000062
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミドの調製。プロピルホスホン酸無水物溶液（ＤＭＦ中５０％）（０．０８ｍＬ、０．１５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のトリエチルアミン（０．０５ｍＬ、０．３９ｍｍｏｌ）、ブタ−２−イン酸（１３．６７ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）および中間体Ｉ−３（６０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＳｉＯ２カラム上に直接充填し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０〜８％のメタノール）によって精製し、最も純粋な画分を組み合わせて、濃縮した。残渣を、アセトニトリル／水（１：１）からの懸濁液として凍結乾燥して、表題化合物（５６．９ｍｇ、８１．０％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ：３．７７分；ｍ／ｚ  ４５４．２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：４．９５分、１００％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．８８（１Ｈ，ｓ）、８．４３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ１＝４．８Ｈｚ、Ｊ２＝１．９Ｈｚ、Ｊ３＝０．９Ｈｚ）、８．２５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ１＝８．３Ｈｚ、Ｊ２＝０．９Ｈｚ）、８．１９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．５Ｈｚ、Ｊ２＝１．５Ｈｚ）、７．８８（１Ｈ，ｍ）、７．７９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．５Ｈｚ、Ｊ２＝２．２Ｈｚ）、７．４０（０．３Ｈ，ｄ  Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．３２（０．７Ｈ，ｄ  Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．２５（０．３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９）、７．２０（１．７Ｈ，ｍ）、６．２８（２Ｈ，ｂｒ．ｓ）、６．１６（１Ｈ，ｍ）、２．８８（２．１Ｈ，ｓ）、２．６０（０．９Ｈ，ｓ）、２．１６（０．９Ｈ，ｓ）、２．０５（２．１Ｈ，ｓ）、１．７４（０．９Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、１．６５（２．１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。
【０１７４】
実施例２６：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−２）の調製
【化５７】
2018536705.tif 000063
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−５およびブタ−２−イン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（６７ｍｇ、５７％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：４．１９分；ｍ／ｚ  ４８４．１（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：５．９３分、９９．０％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．５０（１Ｈ，ｓ）、８．３８（１Ｈ，ｍ）、８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．８７（１Ｈ，ｍ）、７．４３（２Ｈ，ｍ）、７．３９（０．３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、７．３０（０．７Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），７．２４（０．３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、７．１８（１．７Ｈ，ｍ）、６．３５（２Ｈ，ｍ）、６．１４（１Ｈ，ｍ）、４，０８（３Ｈ，ｓ）、２．８７（２Ｈ，ｓ）、２，６０（１Ｈ，ｓ）、２．１４（１Ｈ，ｓ）、２．０３（２Ｈ，ｓ）、１．７３（１Ｈ，ｄ，６．８Ｈｚ）、１．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
【０１７５】
実施例２７：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−３）の調製
【化５８】
2018536705.tif 000064
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−７およびブタ−２−イン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（６７ｍｇ、５７％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．８９分；ｍ／ｚ  ４６８．３（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：５．２５分、９９．９％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．７９（１Ｈ，ｓ）、８．２６（１Ｈ，ｍ）、８．１９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ、Ｊ２＝１．６Ｈｚ）、８．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．７８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ、Ｊ２＝２．３Ｈｚ）、７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ、Ｊ２＝２．０Ｈｚ）、７．４０（０．３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、７．３１（０．７Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、７．２５（０．３Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、７．１９（０．７Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、６．２８（２Ｈ，ｍ）、６．１６（１Ｈ，ｍ）、２．８８（２Ｈ，ｓ）、２．６１（１Ｈ，ｓ）、２．３１（３Ｈ，ｓ）、２．１６（１Ｈ，ｓ）、２．０５（２Ｈ，ｓ）、１．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
【０１７６】
実施例２８：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−４）の調製
【化５９】
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４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−９およびブタ−２−イン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（６８ｍｇ、５９％）を白色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：４．３９分；ｍ／ｚ  ４９８．２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：５．９０分、１００％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．４２（１Ｈ，ｓ）、８．２０（２Ｈ，ｍ）、８．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．６Ｈｚ、Ｊ２＝２．３Ｈｚ）、７．１７−７．４５（４Ｈ，ｍ）、６．３５（２Ｈ，ｍ）。６．１４（１Ｈ，ｍ）、４．０７（３Ｈ，ｓ）、２．８６（２Ｈ，ｓ）、２．６０（１Ｈ，ｓ）、２．２９（３Ｈ，ｓ）、２．０４（２Ｈ，ｓ）、１．９７（１Ｈ，ｓ）、１．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
【０１７７】
実施例２９：４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｅ−５）の調製
【化６０】
2018536705.tif 000066
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１１およびブタ−２−イン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（５４ｍｇ、８９％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：５．０５分；ｍ／ｚ  ５６４．４（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：６．８２分、９９．１％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．８６（１Ｈ，ｓ）、８．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、８．６２（１Ｈ，ｓ）、８．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．１Ｈｚ、Ｊ２＝１．９Ｈｚ）、７．８２（０．４Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．８０（０．６Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．４０（２Ｈ，ｍ）、７．１８（０．４Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、７．１４（０．６Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、６．２６（２Ｈ，ｍ）、５．７４（０．４Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝７．６Ｈｚ、Ｊ２＝４．１Ｈｚ）、５．４８（０．６Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝７．６Ｈｚ、Ｊ２＝４．１Ｈｚ）、４．０６（３Ｈ，ｓ）、３．８３（１．３Ｈ，ｍ）、３．６１（０．７Ｈ，ｍ）、２．４８−１．６５（７Ｈ，ｍ）。
【０１７８】
実施例３０：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］−メチル−アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−６）の調製
【化６１】
2018536705.tif 000067
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］−メチル−アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−７および（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製した。収量２６．８ｍｇ（４２％）。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．８５分；ｍ／ｚ  ５００．２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：５．３５分、９７．３％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．７９（１Ｈ，ｓ）、８．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、８．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、８．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ）、７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）、７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．７Ｈｚ、Ｊ２＝２．３Ｈｚ）、７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、６．８５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ１＝１５．０Ｈｚ、Ｊ２＝４．２Ｈｚ）、６．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ）、６．３３（１Ｈ，ｑ，Ｊ１、Ｊ２＝７．１Ｈｚ）、６．２４（２Ｈ，ｓ）、４．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝２．１Ｈｚ、Ｊ２＝２．７Ｈｚ）、３．３１（３Ｈ，ｓ）、２．７９（３Ｈ，ｓ）、２．３１（３Ｈ，ｓ）１．６４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
【０１７９】
実施例３１：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｅ−７）の調製
【化６２】
2018536705.tif 000068
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［ブタ−２−イノイル（メチル）アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１およびブタ−２−イン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製した。収量３５．５ｍｇ（６２％）。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：５．２０分；ｍ／ｚ  ５５２．１（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：７．１１分、９９．４％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．８７（１Ｈ，ｓ）、８．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ）、８．６１（１Ｈ，ｓ）、８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．４２（２Ｈ，ｍ）、７．４０（０．３Ｈ，ｓ）、７．２８（０．７Ｈ，ｓ）、７．２４（０．３Ｈ，ｓ）、７．１９（０．７Ｈ，ｓ）、６．３５（２Ｈ，ｂｒ．ｓ）、６．１５（１Ｈ，ｍ）、４．０６（３Ｈ，ｓ）、２．８７（２Ｈ，ｓ）、２．６１（１Ｈ，ｓ）、２．１５（１Ｈ，ｓ）、２．０４（２Ｈ，ｓ）、１．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）、１．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
【０１８０】
実施例３２：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｅ−８）の調製
【化６３】
2018536705.tif 000069
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１３およびブタ−２−イン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法で、３１．１ｍｇ（５４％）の収量でこの化合物を調製した。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：４．７８分；ｍ／ｚ  ５３８．２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：６．４０分、９９．８％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．８７（１Ｈ，ｓ）、９．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、８．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ）、８．６１（１Ｈ，ｓ）、８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．５６（２Ｈ，ｍ）、７．４２（２Ｈ，ｍ）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、６．２８（２Ｈ，ｂｒ．ｓ）、５．４８（１Ｈ，ｍ）、４．０６（３Ｈ，ｓ）、１．９８（３Ｈ，ｓ）、１．５９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。
【０１８１】
実施例３３：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−９）の調製
【化６４】
2018536705.tif 000070
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１４を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（５５．５ｍｇ、４７．４％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．６８分；ｍ／ｚ  ４７０．１（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：４．７６分、９７．３％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．５１（１Ｈ，ｓ）、９．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、８．３９（１Ｈ，ｍ）、８．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）、８．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．８９（１Ｈ，ｍ）、７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．４３（１Ｈ，ｍ）、７．４０（１Ｈ，ｍ）、７．２０（１Ｈ，ｍ）、７．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、６．２９（２Ｈ，ｓ）、５．５０（１Ｈ，ｍ）、４．０８（３Ｈ，ｓ）、１．９６（３Ｈ，ｓ）、１．６０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。
【０１８２】
実施例３４：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミド（Ｅ−１０）の調製
【化６５】
2018536705.tif 000071
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１６を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（４５．３ｍｇ、８３．９％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：４．５２分；ｍ／ｚ  ５０８．１（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：５．８０分、１００％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１１．３６（１Ｈ，ｓ）、９．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、８．５８（１Ｈ，ｍ）、８．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．５６（１Ｈ，ｍ）、７．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０）、６．２１（２Ｈ，ｓ）、５，４８（１Ｈ，ｍ）、１．９５（３Ｈ，ｓ）、１．５９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。
【０１８３】
実施例３５：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−１１）の調製
【化６６】
2018536705.tif 000072
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１７を用いて、実施例Ｅ−１１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２５．７ｍｇ、２１．８％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．４１分；ｍ／ｚ  ４５４．１（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：４．４３分、９９．５％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．７８（１Ｈ，ｓ）、９．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．２６（１Ｈ，ｍ）、８．１８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）、８．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．７６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．３Ｈｚ、Ｊ２＝２．４Ｈｚ））、７．５４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、６．２１（２Ｈ，ｓ）、５．５０（１Ｈ，ｍ）、２．３１（３Ｈ，ｓ）、１．９５（３Ｈ，ｓ）、１．６０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）。
【０１８４】
実施例３６：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−１２）の調製
【化６７】
2018536705.tif 000073
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−（ブタ−２−イノイルアミノ）エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１８を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（５５．４ｍｇ、４４．９％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．８９分；ｍ／ｚ  ４８４．１（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：５．１２分、９６．２％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．４３（１Ｈ，ｓ）、９．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、８．２２（２Ｈ，ｍ）、８．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．７１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．５Ｈｚ、Ｊ２＝２．２Ｈｚ）、７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、７．４１（２Ｈ，ｍ）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、６．２９（２Ｈ，ｓ）、５．４９（１Ｈ，ｍ）、４．０８（３Ｈ，ｓ）、２．３０（３Ｈ，ｓ）、１．９６（３Ｈ，ｓ）、１．６０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）。
【０１８５】
実施例３７：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−１３）の調製
【化６８】
2018536705.tif 000074
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１７および（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（２４．０ｍｇ、５７．６％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．４１分；ｍ／ｚ  ４８６．２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：４．４７分、９８．２％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．７６（１Ｈ，ｓ）、８．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、８．２４（１Ｈ，ｍ）、８．１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）、８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ）、７．７５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）、７．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝８．５Ｈｚ、Ｊ２＝１．８Ｈｚ）、７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９）、６．６９（１Ｈ，ｍ）、６．１８（２Ｈ，ｓ）、６．１０（１Ｈ，ｍ）、５．５６（１Ｈ，ｍ）、４．０２（２Ｈ，ｍ）、３．２７（３Ｈ，ｓ）、２．３０（３Ｈ，ｓ）、１．６２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
【０１８６】
実施例３８：４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−１４）の調製
【化６９】
2018536705.tif 000075
４−［８−アミノ−３−［（１Ｓ）−１−［［（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エノイル］アミノ］エチル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。中間体Ｉ−１８および（Ｅ）−４−メトキシブタ−２−エン酸を用いて、実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（３０．５ｍｇ、３６．４％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ａ）Ｒｔ：３．８９分；ｍ／ｚ  ５１６．２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：４．５５分、９８．８％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．４１（１Ｈ，ｓ）、８．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ）、８．２０（２Ｈ，ｍ）、８．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ，ｍ）、７．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、７．３９（２Ｈ，ｍ）、７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）、６．６９（１Ｈ，ｍ）、６．２６（２Ｈ，ｓ）、６．１０（１Ｈ，ｍ）、５．５６（１Ｈ，ｍ）、４．０６（３Ｈ，ｓ）、４．０２（２Ｈ，ｍ）、３．２７（３Ｈ，ｓ）、２．２９（３Ｈ，ｓ）、１．６２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）。
【０１８７】
実施例３９：４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミド（Ｅ−１５）の調製
【化７０】
2018536705.tif 000076
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−チアゾール−２−イル−ベンズアミドの調製。実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（１２．６ｍｇ、２１．８％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ：４．０９５分；ｍ／ｚ  ５０２．３（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：５．４２分、９９．５％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１１．８２（１Ｈ，ｓ）、７．８８（２Ｈ，ｍ）、７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ）、７．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ）、７．４０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ１＝１．３Ｈｚ、Ｊ２＝３．７Ｈｚ）、７．３６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝１．３Ｈｚ、Ｊ２＝７．９Ｈｚ）、７．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ）、７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝５．０Ｈｚ、Ｊ２＝１６．１Ｈｚ）、６．２６（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，Ｊ＝２７．０Ｈｚ）、５．４７−５．７７（１Ｈ，ｍ）、４．０３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）、３．８４（１Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．７Ｈｚ）、３．６２（１Ｈ，ｍ）、２．６９（１Ｈ，ｍ）、２．３４（２Ｈ，ｍ）、２．１５（１Ｈ，ｍ）、２．０３（２Ｈ，ｓ）、１．６６（１Ｈ，ｓ）。
【０１８８】
実施例４０：４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−１６）の調製
【化７１】
2018536705.tif 000077
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（３０．３ｍｇ、３３．９％）を黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ：３．８４分；ｍ／ｚ  ４８０．２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：４．９２分、９９．９％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．７９（１Ｈ，ｓ）、８．２６（８．２６、１Ｈ）、８．１７（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝１．６Ｈｚ、Ｊ２＝６．８Ｈｚ）、８．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．８２−７．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝５．１Ｈｚ、Ｊ２＝２２．８Ｈｚ）、７．６８−７．７８（３Ｈ，ｍ）、７．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝５．０Ｈｚ、Ｊ２＝１４．９Ｈｚ）、６．３５（２Ｈ，ｂｒ  ｓ）、５．４７−５．７７（１Ｈ，ｍ）、３．８４（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．８Ｈｚ）、３．６１（１Ｈ，ｍ）、２．４１（１Ｈ，ｍ）、２．３１（３Ｈ，ｓ）、２．１６（１Ｈ，ｍ）、２．０３（２Ｈ，ｓ）、２．００（１Ｈ，ｍ）、１．６５（１Ｈ，ｓ）。
【０１８９】
実施例４１：４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミド（Ｅ−１７）の調製
【化７２】
2018536705.tif 000078
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−２−メトキシ−Ｎ−（５−メチル−２−ピリジル）ベンズアミドの調製。実施例Ｅ−１について記載されるのと類似の方法でこの化合物を調製して、表題化合物（４８．３ｍｇ、５６．０％）を淡黄色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ  Ｒｔ：４．２６分；ｍ／ｚ  ５１０．２（Ｍ＋Ｈ）＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）Ｒｔ：５．５７分、１００％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１０．４２（１Ｈ，ｓ）、８．２２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）、８．０５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝２．０Ｈｚ、Ｊ２＝８．１Ｈｚ）、７．８４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝５．２Ｈｚ、Ｊ２＝２５．２Ｈｚ）、７．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝２．３Ｈｚ、Ｊ２＝８．３Ｈｚ）、７．４０（２Ｈ，ｍ）、７．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１＝４．９Ｈｚ、Ｊ２＝１６．１Ｈｚ）。６．２６（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，Ｊ＝２７．７Ｈｚ）、５．４６−５．７８（１Ｈ，ｍ）、４．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）、３．８４（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、３．６２（１Ｈ，ｍ）、２．３８（２Ｈ，ｍ）、２．３０（３Ｈ，ｓ）、２．１５（１Ｈ，ｍ）、２．０３（２Ｈ，ｓ）、１．６６（１Ｈ，ｓ）。
【０１９０】
実施例４２：（Ｒ）−４−（８−アミノ−３−（１−（ブタ−２−イノイル）ピロリジン−２−イル）イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル）−Ｎ−（チアゾール−４−イル）ベンズアミド（Ｅ−２４）の調製
【化７３】
2018536705.tif 000079
４−［８−アミノ−３−［（２Ｓ）−１−ブタ−２−イノイルピロリジン−２−イル］イミダゾ［１，５−ａ］ピラジン−１−イル］−Ｎ−チアゾール−４−イル−ベンズアミドの調製。１，４−ジオキサン（５ｍＬ）中の中間体Ｉ−２３（２００ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ、１．０当量）、中間体Ｉ−２５（２７７ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、１．２当量）、２Ｍの炭酸カリウム水溶液（０．１６ｍＬ、１．１０ｍｍｏｌ、２．０当量）の溶液を、５分間にわたって脱気した。ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）２（１８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加え、次に、反応混合物を、５分間にわたって再度脱気し、１００℃で１６時間撹拌した。完了後、反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。残渣を、ＨＰＬＣ分取精製によって精製して、表題化合物（１５ｍｇ、６％）を白色の固体として得た。データ：ＬＣ−ＭＳ（方法Ｇ）Ｒｔ：３．９６分；ｍ／ｚ  ４７５．５（Ｍ＋Ｈ）＋。ＨＰＬＣ（方法Ｈ）Ｒｔ：８．４３分、９５％の純度；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６、３００Ｋ）：δ＝１１．４９（１Ｈ，ｓ）、９．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２４Ｈｚ）、８．１６（２Ｈ，ｄｄ  Ｊ＝２．６０Ｈｚ  Ｊ＝８．３８Ｈｚ）、７．８９−７．８４（１Ｈ，ｍ）、７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２８Ｈｚ）、７．７４−７．７１（２Ｈ，ｍ）、７．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９２Ｈｚ  Ｊ＝１５．７６Ｈｚ）、６．１４（２Ｈ，ｂｓ）、５．７２−５．４６（１Ｈ，ｍ）、３．８３−３．８０（１Ｈ，ｔ）、３．６０−３．５８（１Ｈ，ｍ）、２．４９−２．３６（１Ｈ，ｍ）、２．２８−２．１０（２Ｈ，ｍ）、２．０５−１．９２（３Ｈ，ｍ）、１．６２（１Ｈ，ｓ）。
【０１９１】
実施例４３：ＢＴＫ、ＥＧＦＲ、および他の酵素活性の測定
ＢＴＫ酵素活性は、以下に概説されるように、ＩＭＡＰ（固定化金属イオンアフィニティーに基づく蛍光偏光）アッセイを用いて測定される。
【０１９２】
ＢＴＫ酵素（His-BTK（Milliporecatalog#14-552））を、ＫＲ緩衝液（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のTween-20、０．０５％のＮａＮ３、１ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＭｎＣｌ２、ｐＨ７．２）中で０．４Ｕ／ｍＬに希釈する。
【０１９３】
２ｍＭ〜６３．２ｎＭの試験化合物の連続希釈ｌｏｇ１０を、１００％のＤＭＳＯ中で行う。次に、ＤＭＳＯ中の希釈物を、ＫＲ緩衝液中で５０倍に希釈する。アッセイにおける最終的な化合物濃度範囲は、１０μＭ〜０．３１６ｎＭの範囲であった。
【０１９４】
アッセイを以下のように行う：ＫＲ緩衝液（アッセイにおける最終的なＤＭＳＯ濃度は１％である）中の５μＬ／ウェルの試験化合物を、５μｌ／ウェルの０．４Ｕ／ｍＬのＢＴＫ酵素（アッセイにおける最終濃度は０．１Ｕ／ｍＬである）と混合する。試験化合物およびＢＴＫ酵素を、室温で６０分間プレインキュベートしてから、ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２００ｎＭのフルオレセイン標識基質ペプチド（Blk/Lyntide基質、例えば#R7188/#R7233,Molecular Devices）を加える。アッセイにおける最終的なペプチド基質濃度は５０ｎＭである。ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２０μＭのＡＴＰ（最終的なＡＴＰ濃度は、５μＭのＡＴＰである、ＢＴＫ  ＩＭＡＰアッセイにおけるＫｍ  ＡＴＰ）を加えることによって、キナーゼアッセイを開始する。室温で２時間のインキュベーションの後、（１：６００のProgressive Binding Solutionとともに７５％の１×緩衝液Ａおよび２５％の１×緩衝液Ｂを用いて、供給業者（Molecular Devices）のプロトコルにしたがって）４０μＬ／ウェルのIMAP Progressive Binding Solutionを加えることによって酵素反応を停止させる。暗所における室温で６０分間のインキュベーションの後、ＦＰシグナルを読み取る。５３５ｎｍにおける蛍光を、平行および垂直フィルタを用いて測定して、ビーズへのリン酸化基質ペプチドの結合に起因する回転の差を決定する。ＡＴＰを伴うおよび伴わない対照の読み出しの差（ΔｍＰｉ）のパーセンテージとして値を計算する。Activity Baseを用いて、実験結果の曲線あてはめによって、ＩＣ５０値を決定する。結果が表１に報告される。
【０１９５】
ＥＧＦＲ酵素活性は、以下に概説されるように、ＩＭＡＰ（固定化金属イオンアフィニティーに基づく蛍光偏光）アッセイを用いて測定される。
【０１９６】
ＥＧＦＲ酵素（Invitrogencatalog# PR7295B）を、ＫＲ緩衝液（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のTween-20、０．１％のＮａＮ３、１ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＭｎＣｌ２、ｐＨ７．５）中で２．５μｇ／ｍＬに希釈する。
【０１９７】
１ｍＭ〜３１．６ｎＭの試験化合物の連続希釈ｌｏｇ１０を、１００％のＤＭＳＯ中で行う。次に、ＤＭＳＯ中の希釈物を、ＫＲ緩衝液中で２５倍に希釈し、そのうちの５μＬをアッセイに使用し、１０μＭ〜０．３１６ｎＭのアッセイにおける最終的な化合物濃度範囲を得る。
【０１９８】
アッセイを以下のように行う：ＫＲ緩衝液（アッセイにおける最終的なＤＭＳＯ濃度は１％である）中の５μＬ／ウェルの試験化合物を、５μｌ／ウェルの２．５μｇ／ｍＬのＥＧＦＲ酵素（アッセイにおける最終濃度は６２５ｎｇ／ｍＬである）と混合する。試験化合物およびＥＧＦＲ酵素を、室温で６０分間プレインキュベートしてから、ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２００ｎＭのフルオレセイン標識基質ペプチド（PDGFR-tide基質ペプチドRP7084、Molecular Devices）を加える。アッセイにおける最終的なペプチド基質濃度は５０ｎＭである。ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの８μＭのＡＴＰ（最終的なＡＴＰ濃度は、２μＭである、ＥＧＦＲ  ＩＭＡＰアッセイにおけるＫｍ  ＡＴＰ）を加えることによって、キナーゼアッセイを開始する。暗所における室温で６０分間のインキュベーションの後、（６００×希釈ビーズとともに２０％の１×緩衝液Ａおよび８０％の１×緩衝液Ｂを用いて、供給業者（Molecular Devices）のプロトコルにしたがって）４０μＬ／ウェルのIMAP Progressive Binding Solutionを加えることによって酵素反応を停止させる。暗所における室温で６０分間のインキュベーションの後、ＦＰシグナルを読み取る。５３５ｎｍにおける蛍光を、平行および垂直フィルタを用いて測定して、ビーズへのリン酸化基質ペプチドの結合に起因する回転の差を決定する。ＡＴＰを伴うおよび伴わない対照の読み出しの差（ΔｍＰｉ）のパーセンテージとして値を計算する。GraphPad Prism6を用いて、実験結果の曲線あてはめによって、ＩＣ５０値を決定する。結果が表１に報告される。
【０１９９】
ＩＴＫ酵素活性は、以下に概説されるように、ＩＭＡＰ（固定化金属イオンアフィニティーに基づく蛍光偏光）アッセイを用いて測定される。
【０２００】
ＩＴＫ酵素（Millipore#14-660M）を、ＫＲ緩衝液（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のTween-20、０．１％のＮａＮ３、１ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＭｎＣｌ２、ｐＨ７．５）中で０．２Ｕ／ｍＬに希釈する。
【０２０１】
２ｍＭ〜６３．２ｎＭの試験化合物の連続希釈ｌｏｇ１０を、１００％のＤＭＳＯ中で行う。次に、ＤＭＳＯ中の希釈物を、ＫＲ緩衝液中で５０倍に希釈する。アッセイにおける最終的な化合物濃度範囲は、１０μＭ〜０．３１６ｎＭの範囲であった。
【０２０２】
アッセイを以下のように行う：ＫＲ緩衝液（アッセイにおける最終的なＤＭＳＯ濃度は１％である）中の５μＬ／ウェルの試験化合物を、５μＬ／ウェルの０．２Ｕ／ｍＬのＩＴＫ酵素（アッセイにおける最終濃度は、０．０５Ｕ／ｍＬ（８．４ｎＭ）である）と混合する。試験化合物およびＩＴＫ酵素を、室温で６０分間プレインキュベートしてから、ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２００ｎＭのフルオレセイン標識基質ペプチド（Blk/Lyntide基質#R8124、Molecular Devices）を加える。アッセイにおける最終的なペプチド基質濃度は５０ｎＭである。ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２０μＭのＡＴＰ（最終的なＡＴＰ濃度は、５μＭのＡＴＰである、ＩＴＫ  ＩＭＡＰアッセイにおけるＫｍ  ＡＴＰ）を加えることによって、キナーゼアッセイを開始する。室温で２時間のインキュベーションの後、（８００×希釈ビーズ（Progressive Binding System,Molecular Devices #R8124）とともに６０％の１×緩衝液Ａおよび４０％の１×緩衝液Ｂを用いて、供給業者（Molecular Devices）のプロトコルにしたがって、４０μＬ／ウェルのIMAP Progressive Binding Solutionを加えることによって酵素反応を停止させる。暗所における室温で６０分間のインキュベーションの後、ＦＰシグナルを読み取る。５３５ｎｍにおける蛍光を、平行および垂直フィルタを用いて測定して、ビーズへのリン酸化基質ペプチドの結合に起因する回転の差を決定する。ＡＴＰを伴うおよび伴わない対照の読み出しの差（ΔｍＰｉ）のパーセンテージとして値を計算する。Activity Baseを用いて、実験結果の曲線あてはめによって、ＩＣ５０値を決定する。
【０２０３】
ＴＥＣ酵素活性は、以下に概説されるように、ＩＭＡＰ（固定化金属イオンアフィニティーに基づく蛍光偏光）アッセイを用いて測定される。
【０２０４】
ＴＥＣ酵素（Millipore#14-801M）を、ＫＲ緩衝液（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のTween-20、０．１％のＮａＮ３、１ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＭｎＣｌ２、ｐＨ７．５）中で２Ｕ／ｍＬに希釈する。
【０２０５】
２ｍＭ〜６３．２ｎＭの試験化合物の連続希釈ｌｏｇ１０を、１００％のＤＭＳＯ中で行う。次に、ＤＭＳＯ中の希釈物を、ＫＲ緩衝液中で５０倍に希釈する。アッセイにおける最終的な化合物濃度範囲は、１０μＭ〜０．３１６ｎＭの範囲であった。
【０２０６】
アッセイを以下のように行う：ＫＲ緩衝液（アッセイにおける最終的なＤＭＳＯ濃度は１％である）中の５μＬ／ウェルの試験化合物を、５μＬ／ウェルの２Ｕ／ｍＬのＴＥＣ酵素（アッセイにおける最終濃度は、０．５Ｕ／ｍＬ（６．３ｎＭ）である）と混合する。試験化合物およびＴＥＣ酵素を、室温で６０分間プレインキュベートしてから、ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２００ｎＭのフルオレセイン標識基質ペプチド（Blk/Lyntide基質#R7188、Molecular Devices）を加える。アッセイにおける最終的なペプチド基質濃度は５０ｎＭである。ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２０μＭのＡＴＰ（最終的なＡＴＰ濃度は、５μＭのＡＴＰである、ＴＥＣ  ＩＭＡＰアッセイにおけるＫｍ  ＡＴＰ）を加えることによって、キナーゼアッセイを開始する。室温で２時間のインキュベーションの後、（８００×希釈ビーズ（Progressive Binding System,Molecular Devices #R8124）とともに６０％の１×緩衝液Ａおよび４０％の１×緩衝液Ｂを用いて、供給業者（Molecular Devices）のプロトコルにしたがって、４０μＬ／ウェルのIMAP Progressive Binding Solutionを加えることによって酵素反応を停止させる。暗所における室温で６０分間のインキュベーションの後、ＦＰシグナルを読み取る。５３５ｎｍにおける蛍光を、平行および垂直フィルタを用いて測定して、ビーズへのリン酸化基質ペプチドの結合に起因する回転の差を決定する。ＡＴＰを伴うおよび伴わない対照の読み出しの差（ΔｍＰｉ）のパーセンテージとして値を計算する。Activity Baseを用いて、実験結果の曲線あてはめによって、ＩＣ５０値を決定する。
【０２０７】
ＴＸＫ酵素活性は、以下に概説されるように、ＩＭＡＰ（固定化金属イオンアフィニティーに基づく蛍光偏光）アッセイを用いて測定される。
【０２０８】
ＴＸＫ酵素（Millipore#14-761）を、ＫＲ緩衝液（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のTween-20、０．１％のＮａＮ３、１ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＭｎＣｌ２、ｐＨ７．５）中で２．５Ｕ／ｍＬに希釈する。
【０２０９】
２ｍＭ〜６３．２ｎＭの試験化合物の連続希釈ｌｏｇ１０を、１００％のＤＭＳＯ中で行う。次に、ＤＭＳＯ中の希釈物を、ＫＲ緩衝液中で５０倍に希釈する。アッセイにおける最終的な化合物濃度範囲は、１０μＭ〜０．３１６ｎＭの範囲であった。
【０２１０】
アッセイを以下のように行う：ＫＲ緩衝液（アッセイにおける最終的なＤＭＳＯ濃度は１％である）中の５μＬ／ウェルの試験化合物を、５μＬ／ウェルの２．５Ｕ／ｍＬのＴＸＫ酵素（アッセイにおける最終濃度は、０．６２５Ｕ／ｍＬ（４．４ｎＭ）である）と混合する。試験化合物およびＴＸＫ酵素を、室温で６０分間プレインキュベートしてから、ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２００ｎＭのフルオレセイン標識基質ペプチド（Blk/Lyntide基質#R7188、Molecular Devices）を加える。アッセイにおける最終的なペプチド基質濃度は５０ｎＭである。ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの４μＭのＡＴＰ（最終的なＡＴＰ濃度は、１μＭのＡＴＰである、ＴＸＫ  ＩＭＡＰアッセイにおけるＫｍ  ＡＴＰ）を加えることによって、キナーゼアッセイを開始する。室温で２時間のインキュベーションの後、（８００×希釈ビーズ（Progressive Binding System,Molecular Devices）とともに６０％の１×緩衝液Ａおよび４０％の１×緩衝液Ｂを用いて、供給業者（Molecular Devices）のプロトコルにしたがって、４０μＬ／ウェルのIMAP Progressive Binding Solutionを加えることによって酵素反応を停止させる。暗所における室温で６０分間のインキュベーションの後、ＦＰシグナルを読み取る。５３５ｎｍにおける蛍光を、平行および垂直フィルタを用いて測定して、ビーズへのリン酸化基質ペプチドの結合に起因する回転の差を決定する。ＡＴＰを伴うおよび伴わない対照の読み出しの差（ΔｍＰｉ）のパーセンテージとして値を計算する。Activity Baseを用いて、実験結果の曲線あてはめによって、ＩＣ５０値を決定する。
【０２１１】
ＢＭＸ酵素活性は、以下に概説されるように、ＩＭＡＰ（固定化金属イオンアフィニティーに基づく蛍光偏光）アッセイを用いて測定される。
【０２１２】
ＢＭＸ酵素（Millipore#14-499M）を、ＫＲ緩衝液（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０１％のTween-20、０．１％のＮａＮ３、１ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＭｎＣｌ２、ｐＨ７．５）中で０．５Ｕ／ｍＬに希釈する。
【０２１３】
２ｍＭ〜６３．２ｎＭの試験化合物の連続希釈ｌｏｇ１０を、１００％のＤＭＳＯ中で行う。次に、ＤＭＳＯ中の希釈物を、ＫＲ緩衝液中で５０倍に希釈する。アッセイにおける最終的な化合物濃度範囲は、１０μＭ〜０．３１６ｎＭの範囲であった。
【０２１４】
アッセイを以下のように行う：ＫＲ緩衝液（アッセイにおける最終的なＤＭＳＯ濃度は１％である）中の５μＬ／ウェルの試験化合物を、５μＬ／ウェルの０．５Ｕ／ｍＬのＢＭＸ酵素（アッセイにおける最終濃度は、０．１２５Ｕ／ｍＬ（４．５ｎＭ）である）と混合する。試験化合物およびＢＭＸ酵素を、室温で６０分間プレインキュベートしてから、ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２００ｎＭのフルオレセイン標識基質ペプチド（Blk/Lyntide基質#R7188、Molecular Devices）を加える。アッセイにおける最終的なペプチド基質濃度は５０ｎＭである。ＫＲ緩衝液中の５μＬ／ウェルの２０μＭのＡＴＰ（最終的なＡＴＰ濃度は、５μＭのＡＴＰである、ＢＭＸ  ＩＭＡＰアッセイにおけるＫｍ  ＡＴＰ）を加えることによって、キナーゼアッセイを開始する。室温で２時間のインキュベーションの後、（８００×希釈ビーズ（Progressive Binding System,Molecular Devices #R8124）とともに６０％の１×緩衝液Ａおよび４０％の１×緩衝液Ｂを用いて、供給業者（Molecular Devices）のプロトコルにしたがって、４０μＬ／ウェルのIMAP Progressive Binding Solutionを加えることによって酵素反応を停止させる。暗所における室温で６０分間のインキュベーションの後、ＦＰシグナルを読み取る。５３５ｎｍにおける蛍光を、平行および垂直フィルタを用いて測定して、ビーズへのリン酸化基質ペプチドの結合に起因する回転の差を決定する。ＡＴＰを伴うおよび伴わない対照の読み出しの差（ΔｍＰｉ）のパーセンテージとして値を計算する。Activity Baseを用いて、実験結果の曲線あてはめによって、ＩＣ５０値を決定する。
【０２１５】
実施例４４：ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）ＣＤ６９アッセイ
全血を、ヘパリン被覆されたVacutainer管（BD Biosciences,San Jose,CA）中に収集し、Ficoll-Hypaque(Pharmacia,Uppsala,Sweden）を用いたＰＢＭＣの単離に使用した。単離されたＰＢＭＣを、後の使用のために、９０％のＦＣＳ／１０％のＤＭＳＯ中で凍結保存した。
【０２１６】
極低温貯蔵からの細胞を、３７℃の水浴中で解凍し、ＲＰＭＩ／１％のＦＣＳで希釈し、２回洗浄し、次に、ＲＰＭＩ／１０％のＦＣＳ中でウェル当たり１×１０５個の細胞で平板培養した。
【０２１７】
１０ｍＭ〜３１６ｎＭの試験化合物の連続希釈ｌｏｇ１０を、１００％のＤＭＳＯ中で行い、続いて、ＲＰＭＩ／１％のＦＣＳ中で１００倍に希釈する。次に、各ウェルについて、１０μＬを、９０μＬのＰＢＭＣ細胞を含むディープウェルプレートに移した。アッセイにおける最終的な化合物濃度範囲は、０．１％の最終的なＤＭＳＯ濃度で、１０μＭ〜０．３１６ｎＭの範囲であった。次に、ＰＢＭＣを、１８時間にわたるヤギＦ（ａｂ’）２抗ＩｇＭ（Southern Biotech,#2022-14、アッセイにおける最終濃度５μｇ／ｍＬ）による刺激の前に、試験化合物の存在下または非存在下で、３７℃で２時間インキュベートする。
【０２１８】
抗ＩｇＭによる刺激の後、ＰＢＭＣを、抗ＣＤ６９−ＦＩＴＣ、抗ＣＤ１９−ＢＶ４２１（それぞれ、BD Biosciences #555530および#562440）および７ＡＡＤ（Life Technologies #A1310）を用いて、３０分間にわたって氷上でインキュベートした。フローサイトメトリーを行い、蛍光値を、ＣＤ１９＋ゲートされた生存Ｂ細胞におけるＣＤ６９−ＦＩＴＣチャネルから得た。ＥＣ５０値を、GraphPad Prismを用いて、実験結果の曲線あてはめによって決定する。
【０２１９】
【表６】
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【０２２０】
【表７】
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【０２２１】
【表８】
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【０２２２】
【表９】
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【０２２３】
【表１０】
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【０２２４】
【表１１】
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【０２２５】
【表１２】
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【国際調査報告】
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