(57)【要約】本発明は、マスクしたＣＤ３（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３）（ＣＤＳ）抗体及びその使用方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＣＤ３（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３）抗体であって、前記抗ＣＤ３抗体が、（ａ）結合ドメインと、（ｂ）ポリペプチドマスクと、を含み、前記ポリペプチドマスクが、配列番号１の少なくともアミノ酸残基１〜３のアミノ酸配列を含むマスキング部分（ＭＭ）を含む、前記抗ＣＤ３（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３）（ＣＤ３）抗体。
【請求項２】
前記結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、前記ポリペプチドマスクが、前記ＶＨドメインまたは前記ＶＬドメインに連結されている、請求項１に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３】
前記ＭＭが、配列番号１の残りの配列のすべてまたはその一部の長さ分Ｃ末端で伸長する、請求項１または２に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４】
前記ＭＭが、配列番号１の少なくともアミノ酸残基１〜５のアミノ酸配列を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５】
前記ＭＭが、配列番号１の少なくともアミノ酸残基１〜６のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６】
前記抗ＣＤ３抗体及びＭＭが、（ＭＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、互いに対して位置付けられる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７】
前記ポリペプチドマスクが、切断可能な部分（ＣＭ）をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項８】
前記ＣＭが、酵素により切断することができる、請求項７に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項９】
前記酵素が、マトリックス金属プロテアーゼ（ＭＭＰ）−２、ＭＭＰ−９、レグマインアスパラギニルエンドペプチダーゼ、トロンビン、線維芽細胞活性化プロテアーゼ（ＦＡＰ）、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、膜型１マトリックス金属プロテアーゼ（ＭＴ１−ＭＭＰ）、プラスミン、膜貫通プロテアーゼ、セリン（ＴＭＰＲＳＳ−３／４）、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＦ、カテプシンＨ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＬ２、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、カスパーゼ１２、カスパーゼ１３、カスパーゼ１４、ヒト好中球エラスターゼ、ウロキナーゼ／ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、ジスインテグリン及び金属プロテアーゼ（ＡＤＡＭ）１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１７、トロンボスポンジンモチーフを有するＡＤＡＭ（ＡＤＡＭＴＳ）、ＡＤＡＭＴＳ５、ベータセクレターゼ（ＢＡＣＥ）、グランザイムＡ、グランザイムＢ、グアニジノベンゾエターゼ、ヘプシン、マトリプターゼ、マトリプターゼ２、メプリン、ネプリライシン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍壊死因子変換酵素（ＴＡＣＥ）、カリクレイン関連ペプチダーゼ（ＫＬＫ）３、ＫＬＫ５、ＫＬＫ７、ＫＬＫ１１、Ｃ型肝炎ウイルスのＮＳ３／４プロテアーゼ（ＨＣＶ−ＮＳ３／４）、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、カルパイン、カルパイン２、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ、血漿カリクレイン、ＡＭＳＨ様プロテアーゼ、ＡＭＳＨ、γ−セクレターゼ成分、抗プラスミン切断酵素（ＡＰＣＥ）、デシン１、アポトーシス関連システインペプチダーゼ、及びＮ−アセチル化アルファ結合酸性ジペプチダーゼ様１からなる群から選択される、請求項８に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１０】
前記酵素が、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、レグマインアスパラギニルエンドペプチダーゼ、トロンビン、またはＦＡＰである、請求項９に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ３抗体、ＭＭ、及びＣＭが、（ＭＭ）−（ＣＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、互いに対して位置付けられる、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１２】
前記ポリペプチドマスクが、リンカー部分（ＬＭ）をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１３】
前記ＬＭが、５〜２４のアミノ酸長さである、請求項１２に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１４】
前記ＬＭが、５〜１５のアミノ酸長さである、請求項１３に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１５】
前記ＬＭが、グリシン（Ｇ）及びセリン（Ｓ）残基を含む、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１６】
前記ＬＭが、ＧＳ反復を含む、請求項１５に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１７】
前記抗ＣＤ３抗体、ＭＭ、及びＬＭが、（ＭＭ）−（ＬＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、互いに対して位置付けられる、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１８】
前記ポリペプチドマスクが、切断可能な部分及びリンカー部分を含み、前記抗ＣＤ３抗体、ＭＭ、ＣＭ、及びＬＭが、（ＭＭ）−（ＬＭ）−（ＣＭ）−（抗ＣＤ３抗体）または（ＭＭ）−（ＣＭ）−（ＬＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、互いに対して位置付けられる、請求項７〜１７のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項１９】
前記結合ドメインが、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：
（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２０】
前記結合ドメインが、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメインを含む、請求項１９に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２１】
前記ＶＨドメインが、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２２】
前記ＶＬドメインが、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２３】
ＶＨドメインが配列番号８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項２１または２２に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２４】
前記結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）Ｘ１Ｘ２ＹＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＦＤＹ（式中、Ｘ１が、Ｄ、Ｔ、及びＳからなる群から選択され、Ｘ２が、Ｇ、Ａ、及びＳからなる群から選択され、Ｘ３がＲまたはＮであり、Ｘ４がＹまたはＡであり、Ｘ５がＹまたはＡである）のアミノ酸配列（配列番号１２）を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｆ）Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＬＲＴ（式中、Ｘ１がＫまたはＴであり、Ｘ２がＱまたはＡであり、Ｘ３がＦまたはＡであり、Ｘ４がＩまたはＡである）のアミノ酸配列（配列番号１５）を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２５】
前記結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む、請求項２４に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２６】
前記結合ドメインが、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む、請求項２５に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２７】
前記ＶＨドメインが、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２８】
前記ＶＬドメインが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項２６に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項２９】
ＶＨドメインが配列番号１８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１９のアミノ酸配列を含む、請求項２７または２８に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３０】
前記結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｆ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む、請求項２４に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３１】
前記結合ドメインが、（ａ）配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１０８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む、請求項３０に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３２】
前記ＶＨドメインが、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３３】
前記ＶＬドメインが、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３４】
ＶＨドメインが配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１０８のアミノ酸配列を含む、請求項３２または３３に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３５】
前記結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｆ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む、請求項２４に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３６】
前記結合ドメインが、（ａ）配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む、請求項３５に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３７】
前記ＶＨドメインが、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３８】
前記ＶＬドメインが、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項３９】
ＶＨドメインが配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメイン配列番号１１０のアミノ酸配列を含む、請求項３７または３８に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４０】
前記結合ドメインが、以下の６つのＨＶＲ：
（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、ならびに
（ｆ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む、請求項２４に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４１】
前記結合ドメインが、（ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む、請求項４０に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４２】
前記ＶＨドメインが、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４３】
前記ＶＬドメインが、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４４】
ＶＨドメインが配列番号１１１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号１１２のアミノ酸配列を含む、請求項４２または４３に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４５】
前記ポリペプチドマスクが、前記抗ＣＤ３抗体のヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する能力を少なくとも１０％阻害する、請求項１〜４４のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４６】
前記ポリペプチドマスクが、前記抗ＣＤ３抗体のヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する能力を少なくとも３０％阻害する、請求項４５に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４７】
前記ポリペプチドマスクが、前記抗ＣＤ３抗体のヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する能力を少なくとも６０％阻害する、請求項４６に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４８】
前記ポリペプチドマスクが、前記抗ＣＤ３抗体のヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する能力を少なくとも８０％阻害する、請求項４７に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項４９】
前記ポリペプチドマスクが、前記抗ＣＤ３抗体のヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する能力を少なくとも９０％阻害する、請求項４８に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５０】
前記ヒトＣＤ３ポリペプチドが、ヒトＣＤ３εポリペプチドである、請求項４５〜４９のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５１】
前記抗ＣＤ３抗体が、非グリコシル化部位突然変異を含む、請求項１〜５０のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５２】
前記非グリコシル化部位突然変異が、置換突然変異である、請求項５１に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５３】
前記置換突然変異が、アミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／またはＤ２６５（ＥＵ番号付け）におけるものである、請求項５２に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５４】
前記置換突然変異が、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａからなる群から選択される、請求項５３に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５５】
前記置換突然変異が、Ｎ２９７Ｇ突然変異である、請求項５４に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５６】
前記非グリコシル化部位突然変異が、前記抗ＣＤ３抗体のエフェクター機能を低下させる、請求項５５に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５７】
前記抗ＣＤ３抗体が、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラである、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５８】
前記抗ＣＤ３抗体が、ＣＤ３に結合する抗体断片である、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項５９】
前記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ＴａＦｖ、ダイアボディ、ｂｓＤｂ、ｓｃＤｂ、ＤＡＲＴ、ＢｉＴＥ、及びＶＨＨ断片からなる群から選択される、請求項５８に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６０】
前記抗ＣＤ３抗体が、完全長抗体である、請求項１〜５７のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６１】
前記抗ＣＤ３抗体が、ＩｇＧ抗体である、請求項１〜６０のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６２】
前記抗ＣＤ３抗体が、単一特異性抗体である、請求項１〜６１のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６３】
前記抗ＣＤ３抗体が、多重特異性抗体である、請求項１〜６１のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６４】
前記多重特異性抗体が、二重特異性抗体である、請求項６３に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６５】
前記二重特異性抗体が、第２の生物学的分子に結合する第２の結合ドメインを含み、前記第２の生物学的分子が、細胞表面抗原である、請求項６４に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６６】
前記細胞表面抗原が、腫瘍抗原である、請求項６５に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６７】
前記腫瘍抗原が、ＣＤ２０；ＦｃＲＨ５（Ｆｃ受容体様５）；ＨＥＲ２；ＬＹＰＤ１；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６１）；Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）；ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；（ＳＩ）；（ＳＩＬ）；ＭＥ２０；ｇｐ１００）；Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ；Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）；ＣＤ１９；ＣＤ３３；ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム）；ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９ａ、免疫グロブリン関連アルファ；ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）；ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、１  Ｇｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）；ＥＤＡＲ（エクトジスプラシンＡ受容体）；ＧＦＲＡ１（ＧＤＮＦ−Ｒａ１）；ＭＲＰ４（多剤耐性タンパク質４）；ＲＥＴ；ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６膜貫通上皮抗原）；ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）；Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）；０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６）；ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）；Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質キャリアファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）；Ｓｅｍａ  ５ｂ；ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）；ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）；ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）；ＳＴＥＡＰ２；ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位陽イオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）；ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形腫由来成長因子）；ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２）；ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）；ＮＣＡ；ＭＤＰ；ＩＬ２０Ｒα；ブレビカン；ＥｐｈＢ２Ｒ；ＡＳＬＧ６５９；ＰＳＣＡ；ＧＥＤＡ；ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）；ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１；ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット）；Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンドゲート化イオンチャンネル５；ＣＤ７２（Ｂ細胞分化因子ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）；ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）；ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）；ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）；ＴＭＥＦＦ１；ＴＭＥＭ４６（シガホモログ２（アフリカツメガエル）；ＳＨＩＳＡ２）；ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質共役受容体５；ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）；ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２６）；ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９；Ｍｍ  ４７８７）；ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体；ＫＩＳＳ１Ｒ；ＧＰＲ５４；ＨＯＴ７Ｔ１７５；ＡＸＯＲ１２）；ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１；ＬＯＣ２５３９８２）；チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ３）；ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）；ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ；ＧＰＣＲ４１；ＦＬＪ１１８５６；Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）；ＧＰＣ３（グリピカン３）；ＣＬＬ１（Ｃ型レクチン様分子１）；Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ｘ；Ｂ７Ｓ１）；ＲＮＦ４３（リングフィンガータンパク質４３）；ＣＤ７０；ＣＸＯＲＦ６１（染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１）；及びＳＬＣ５３Ｄ３、からなる群から選択される、請求項６６に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６８】
前記腫瘍抗原が、ＣＤ２０、ＦｃＲＨ５、ＨＥＲ２、ＬＹＰＤ１、ＬＹ６Ｇ６Ｄ、ＰＭＥＬ１７、ＬＹ６Ｅ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ２２、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＤＡＲ、ＧＦＲＡ１、ＭＲＰ４、ＲＥＴ、Ｓｔｅａｐ１、及びＴｅｎＢ２からなる群から選択される、請求項６７に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項６９】
前記腫瘍抗原がＣＤ２０であり、前記第２の結合ドメインが、６つのＨＶＲ：
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む、請求項６８に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７０】
前記結合ドメインが、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む、請求項６９に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７１】
前記ＶＨドメインが、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７２】
前記ＶＬドメインが、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７３】
ＶＨドメインが配列番号２６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが配列番号２７のアミノ酸配列を含む、請求項７１または７２に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７４】
前記抗ＣＤ３抗体が、１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、前記１つ以上の重鎖定常ドメインが、第１のＣＨ１（ＣＨ１１）ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される、請求項１〜７３のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７５】
前記１つ以上の重鎖定常ドメインのうちの少なくとも１つが、別の重鎖定常ドメインと対になる、請求項７４に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７６】
前記ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインが各々、突起または空隙を含み、前記ＣＨ３１ドメイン内の前記突起または空隙は、それぞれ、前記ＣＨ３２ドメイン内の前記空隙または突起中に位置付けることができる、請求項７５に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７７】
前記ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインが各々、突起または空隙を含み、前記ＣＨ２１ドメイン内の前記突起または空隙は、それぞれ、前記ＣＨ２２ドメイン内の前記空隙または突起中に位置付けることができる、請求項７４〜７６のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７８】
前記ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインが、前記突起と空隙との間の境界面において接触する、請求項７７に記載の抗ＣＤ３抗体。
【請求項７９】
請求項１〜７８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体をコードする、単離核酸。
【請求項８０】
請求項７９に記載の単離核酸を含む、ベクター。
【請求項８１】
請求項８０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項８２】
前記宿主細胞が、哺乳動物細胞である、請求項８１に記載の宿主細胞。
【請求項８３】
前記哺乳動物細胞が、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項８２に記載の宿主細胞。
【請求項８４】
前記宿主細胞が、原核細胞である、請求項８１に記載の宿主細胞。
【請求項８５】
前記原核細胞が、Ｅ．ｃｏｌｉである、請求項８４に記載の宿主細胞。
【請求項８６】
培養培地中で請求項８１に記載の宿主細胞を培養することを含む、請求項１〜７８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体の産生方法。
【請求項８７】
前記方法が、前記宿主細胞または前記培養培地から前記抗ＣＤ３抗体を回収することをさらに含む、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
請求項１〜７８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体及び細胞傷害性薬剤を含む、免疫複合体。
【請求項８９】
請求項１〜７８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体または請求項８８に記載の免疫複合体を含む、組成物。
【請求項９０】
薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含む、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９１】
前記組成物が、薬学的組成物である、請求項９０に記載の組成物。
【請求項９２】
前記組成物が、さらなる治療剤をさらに含む、請求項８９〜９１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９３】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害の前記進行の治療または遅延を必要とする対象における、治療方法または遅延方法であって、前記対象に請求項１〜７８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項９４】
細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象における免疫機能の増強方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜７８のいずれか１項に記載の抗ＣＤ３抗体を投与することを含む、前記方法。
【請求項９５】
前記細胞増殖性障害が癌である、請求項９３または９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記癌が、乳癌、膀胱癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、腎臓癌、前立腺癌、肝臓癌、頭頸部癌、黒色腫、卵巣癌、中皮腫、及び膠芽腫からなる群から選択される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記Ｂ細胞白血病が、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記自己免疫性障害が、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ウェグナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、脈管炎、糖尿病、レイノー症候群、シェーグレン症候群、糸球体腎炎、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、及びＩｇＧニューロパチーからなる群から選択される、請求項９３または９４に記載の方法。
【請求項９９】
前記抗ＣＤ３抗体が、（ａ）免疫エフェクター細胞上に位置するＣＤ３分子、及び（ｂ）前記免疫エフェクター細胞以外の標的細胞上に位置する第２の生物学的分子に結合する、請求項９３〜９８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１００】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記ＣＤ３分子より前に前記第２の生物学的分子に結合する、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記標的細胞の表面上に蓄積する、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記標的細胞への細胞傷害性効果及び／またはアポトーシス効果を提供することができる、請求項９３〜１０１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記標的細胞への前記細胞傷害性効果及び／または前記アポトーシス効果が、前記免疫エフェクター細胞の活性化と無関係である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記標的細胞への前記細胞傷害性効果及び／または前記アポトーシス効果が、前記免疫エフェクター細胞の活性化に依存している、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０５】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記対象に、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される、請求項９３〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記対象に、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記抗ＣＤ３抗体が、前記対象に、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記対象に、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤を投与することをさらに含む、請求項９３〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤が、前記抗ＣＤ３抗体の投与の前または後に投与される、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト追加の治療剤が、前記抗ＣＤ３抗体と同時に投与される、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１１】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される、請求項１０８〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）、ＣＴ−０１１（ピジリズマブ）、及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択される、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１５】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５、及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１７】
前記ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが、抗体またはイムノアドヘシンである、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記対象にグルココルチコイドを投与することをさらに含む、請求項９３〜１１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１９】
前記グルココルチコイドが、デキサメタゾンである、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記対象にリツキシマブを投与することをさらに含む、請求項９３〜１１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２１】
前記抗ＣＤ３抗体が、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与される、請求項９３〜１２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記抗ＣＤ３抗体が、皮下投与される、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記抗ＣＤ３抗体が、静脈内投与される、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２４】
前記対象が、ヒトである、請求項９３〜１２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２５】
（ａ）請求項８９〜９２のいずれか１項に記載の組成物と、
（ｂ）細胞増殖性障害または自己免疫障害の治療またはその進行の遅延のために、対象に、組成物を投与するための取扱説明書を含む添付文書と、を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年４月２５日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、５０４７４−０６３ＷＯ２＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿４＿２５＿１６＿ＳＴ２５という名称であり、３９，９１７バイトのサイズである。
【０００２】
本発明は、マスク抗ＣＤ３（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３）抗体及びその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌等の細胞増殖性障害は、細胞亜集団の制御されていない成長を特徴とする。これらは先進国における死因の第１位、及び発展途上国における死因の第２位であり、毎年１２００万人超が新たに癌と診断され、７００万人が癌で死亡している。米国癌協会は、２０１５年には５０万人を超えるアメリカ人が癌によって死亡すると推定しており、これは、ほぼ米国の死亡４例中１例の割合を占める。癌の発症確率は７０歳を過ぎると２倍以上高くなるため、高齢者人口が増加するにつれて、癌の発生数も同時に上昇している。このため、癌治療は、著しくかつ増え続ける社会的負担を意味する。
【０００４】
癌治療への長期間にわたるアプローチには、化学療法、放射線療法、固形腫瘍を除去する手術が含まれる。最近では、Ｔ細胞を標的とする治療抗体が開発されている。これらの治療抗体は、Ｔ細胞及び腫瘍細胞上に細胞表面抗原を同時に結合することができる二重特異性抗体を含み、それによって結合したＴ細胞が腫瘍細胞の破壊に寄与することが可能である。しかしながら、そのようなＴ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体の開発は、免疫介在性副作用という開発につきものの固有のリスクを伴い得る。ある望ましくない効果、たとえばＦｃγ受容体の媒介によるＴ細胞の枯渇は、エフェクターを有しないＴＤＢ抗体を表示することによって最小限に抑えられ得るが、Ｔ細胞の結合及び活性化のキネティクも解決する代替のＴＤＢ抗体の開発分野において、ニーズは満たされていない。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、マスクＣＤ３（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３）抗体及びその使用方法に関する。
【０００６】
一態様では、本発明は、抗ＣＤ３（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３）抗体を特徴とし、抗ＣＤ３抗体は、（ａ）結合ドメイン及び（ｂ）ポリペプチドマスクを含み、ポリペプチドマスクは、配列番号１の少なくともアミノ酸残基１−３のアミノ酸配列を含むマスキング部分（ＭＭ）を含む（例えば、配列番号１のアミノ酸残基１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−８、１−９、１−１０、１−１１、１−１２、１−１３、１−１４、１−１５、１−１６、１−１７、１−１８、１−１９、１−２０、１−２１、１−２２、１−２３、１−２４、１−２５、１−２６、または１−２７を含むＭＭを含むポリペプチドマスク）、またはそのＮ末端の環化グルタミン誘導体（例えば、５−オキソピロリジン−２−カルボン酸（ＰＣＡ）を含むＭＭを含むポリペプチドマスク）。例えば、いくつかの実施形態では、ＭＭは、１位の残基が、グルタミン残基の代わりにＮ末端環化グルタミン（ＰＣＡ）残基であることを除いて、配列番号１の少なくとも初めの３つのアミノ酸残基を含む（例えば、ＭＭは、アミノ酸配列ＰＣＡ−Ｄ−Ｇを含む）。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、ポリペプチドマスクが、ＶＨドメインまたはＶＬドメインに連結されている。いくつかの実施形態では、ＭＭは、Ｃ末端で配列番号１の残りの配列のすべてまたはその一部の長さ分伸長する。例えば、いくつかの実施形態では、ＭＭは、配列番号１の少なくともアミノ酸残基１−５のアミノ酸配列、またはそのＮ末端環化グルタミン誘導体を含む（例えば、１位の残基が、グルタミンの代わりにＰＣＡであることを除いて、配列番号１の少なくとも初めの５つのアミノ酸残基を含むＭＭを含むポリペプチドマスク）。他の実施形態では、ＭＭは、配列番号１の少なくともアミノ酸残基１−６のアミノ酸配列、またはそのＮ末端環化グルタミン誘導体を含む（例えば、１位の残基が、グルタミンの代わりにＰＣＡであることを除いて、配列番号１の少なくとも初めの６つのアミノ酸残基を含むＭＭを含むポリペプチドマスク）。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体及びＭＭは、（ＭＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、互いに対して位置付けられる。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドマスクは、切断可能な部分（ＣＭ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、酵素によって切断することができる。いくつかの実施形態では、酵素は、マトリックス金属プロテアーゼ（ＭＭＰ）−２、ＭＭＰ−９、レグマインアスパラギニルエンドペプチダーゼ、トロンビン、線維芽細胞活性化プロテアーゼ（ＦＡＰ）、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−１４、膜型１マトリックス金属プロテアーゼ（ＭＴ１−ＭＭＰ）、プラスミン、膜貫通プロテアーゼ、セリン（ＴＭＰＲＳＳ−３／４）、カテプシンＡ、カテプシンＢ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＦ、カテプシンＨ、カテプシンＫ、カテプシンＬ、カテプシンＬ２、カテプシンＯ、カテプシンＳ、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９、カスパーゼ１０、カスパーゼ１１、カスパーゼ１２、カスパーゼ１３、カスパーゼ１４、ヒト好中球エラスターゼ、ウロキナーゼ／ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、ジスインテグリン及び金属プロテアーゼ（ＡＤＡＭ）１０、ＡＤＡＭ１２、ＡＤＡＭ１７、トロンボスポンジンモチーフを有するＡＤＡＭ（ＡＤＡＭＴＳ）、ＡＤＡＭＴＳ５、ベータセクレターゼ（ＢＡＣＥ）、グランザイムＡ、グランザイムＢ、グアニジノベンゾエターゼ、ヘプシン、マトリプターゼ、マトリプターゼ２、メプリン、ネプリライシン、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、腫瘍壊死因子変換酵素（ＴＡＣＥ）、カリクレイン関連ペプチダーゼ（ＫＬＫ）３、ＫＬＫ５、ＫＬＫ７、ＫＬＫ１１、Ｃ型肝炎ウイルスのＮＳ３／４プロテアーゼ（ＨＣＶ−ＮＳ３／４）、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、カルパイン、カルパイン２、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ、血漿カリクレイン、ＡＭＳＨ様プロテアーゼ、ＡＭＳＨ、γ−セクレターゼ成分、抗プラスミン切断酵素（ＡＰＣＥ）、デシン１、アポトーシス関連システインペプチダーゼ、及びＮ−アセチル化アルファ結合酸性ジペプチダーゼ様１からなる群から選択される。例えば、いくつかの実施形態では、酵素は、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、レグマインアスパラギニルエンドペプチダーゼ、トロンビン、またはＦＡＰである。いくつかの実施形態では、ＣＭは、酸に不安定なリンカーを含み、酸性ｐＨ環境において切断することが可能である。いくつかの実施形態では、酸に不安定なリンカーは、ヒドラゾン、イミノ、エステル、またはアミド基を含む。いくつかの実施形態では、酸性ｐＨ環境は、細胞のリソソームにおいて見出される。別の実施形態では、酸性ｐＨ環境は、腫瘍微環境において見出される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体、ＭＭ、及びＣＭは、（ＭＭ）−（ＣＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、互いに対して位置付けられる。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドマスクは、リンカー部分（ＬＭ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＬＭは、５〜２４のアミノ酸長さである（例えば、ＬＭは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４のアミノ酸長さである）。いくつかの実施形態では、ＬＭは、５〜１５のアミノ酸長さである（例えば、ＬＭは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５のアミノ酸長さである）。いくつかの実施形態では、ＬＭは、グリシン（Ｇ）及びセリン（Ｓ）残基を含む。いくつかの実施形態では、ＬＭは、ＧＳ反復を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体、ＭＭ、及びＬＭは、（ＭＭ）−（ＬＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、互いに対して位置付けられる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドマスクは、切断可能な部分及びリンカー部分を含み、抗ＣＤ３抗体、ＭＭ、ＣＭ、及びＬＭは、（ＭＭ）−（ＬＭ）−（ＣＭ）−（抗ＣＤ３抗体）または（ＭＭ）−（ＣＭ）−（ＬＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、互いに対して位置付けられる。
【０００９】
いくつかの実施形態では、結合ドメインは、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは配列番号８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは配列番号９のアミノ酸配列を含む。
【００１０】
いくつかの実施形態では、結合ドメインは、以下の６つの超可変領域（ＨＶＲ）：（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）Ｘ１Ｘ２ＹＳＸ３Ｘ４Ｘ５ＦＤＹ（式中、Ｘ１が、Ｄ、Ｔ、及びＳからなる群から選択され、Ｘ２が、Ｇ、Ａ、及びＳからなる群から選択され、Ｘ３が、ＲまたはＮであり、Ｘ４が、ＹまたはＡであり、Ｘ５が、ＹまたはＡである）のアミノ酸配列（配列番号１２）を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＬＲＴ（式中、Ｘ１が、ＫまたはＴであり、Ｘ２が、ＱまたはＡであり、Ｘ３が、ＦまたはＡであり、Ｘ４が、ＩまたはＡである）のアミノ酸配列（配列番号１５）を含むＨＶＲ−Ｌ３、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を含む。例えば、いくつかの実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。
【００１１】
他の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、（ａ）配列番号１０７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１０８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、（ａ）配列番号１０９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１１０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１０９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む。
【００１３】
他の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、のうちの１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ）を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、（ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号１１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１１１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
さらなる抗ＣＤ３抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１４／５７４，１３２（米国公開第２０１５−０１６６６６１号）に開示される抗ＣＤ３結合ドメイン、及び前述のさらなる特性（例えば、ＭＭ、ＣＭ、ＬＭ）のうちのいずれかを有するポリペプチドマスクを含む。例えば、マスク抗ＣＤ３抗体は、参照される抗ＣＤ３抗体のうちのいずれかにあるようなＨＶＲを含み得、例えば、ＭＭ、ＣＭ、及び／またはＬＭを含むポリペプチドマスクに加えて、参照されるアクセプターフレームワーク領域（ＦＲ）のうちのいずれかをさらに含む。いくつかの実施形態では、マスク抗ＣＤ３抗体は、参照される抗ＣＤ３抗体のうちのいずれかにあるようなＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインを含み得、例えば、ＭＭ、ＣＭ、及び／またはＬＭを含むポリペプチドマスクをさらに含む。例えば、マスク抗ＣＤ３抗体は、抗ＣＤ３抗体ＳＰ３４（Ｐｅｓｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ．４：３３７−３４４，１９８５）と、例えば、ＭＭ、ＣＭ、及び／またはＬＭを有するポリペプチドマスクとを含み得る。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ポリペプチドマスクは、抗ＣＤ３抗体のヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する能力を少なくとも１０％（例えば、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、もしくは２９％）、少なくとも３０％（例えば、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、もしくは５９％）、少なくとも６０％（例えば、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、もしくは７９％）、少なくとも８０％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、もしくは８９％）、または少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％）阻害する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドマスクは、抗ＣＤ３抗体のヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する能力を完全に阻害する（すなわち、１００％の阻害）。いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ３ポリペプチドは、ヒトＣＤ３εポリペプチドである。
【００１６】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、非グリコシル化部位突然変異を含む。いくつかの実施形態では、非グリコシル化部位突然変異は、置換突然変異である。いくつかの実施形態では、置換突然変異は、アミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／またはＤ２６５（ＥＵ番号付け）におけるものである。いくつかの実施形態では、置換突然変異は、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、置換突然変異は、Ｎ２９７Ｇ突然変異である。いくつかの実施形態では、非グリコシル化部位突然変異は、抗ＣＤ３抗体のエフェクター機能を低下させる。
【００１７】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３に結合する抗体断片である。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ＴａＦｖ、（Ｆａｂ’）２、ダイアボディ、ｂｓＤｂ、ｓｃＤｂ、ＤＡＲＴ、ＢｉＴＥ、及びＶＨＨ断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、完全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、ＩｇＧ抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、単一特異性抗体である。
【００１８】
他の実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、第２の生物学的分子に結合する第２の結合ドメインを含み、該第２の生物学的分子は、細胞表面抗原である。いくつかの実施形態では、細胞表面抗原は、腫瘍抗原である。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ２０；ＦｃＲＨ５（Ｆｃ受容体様５）；ＨＥＲ２；ＬＹＰＤ１；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｇ６１）；Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）；ＰＭＥＬ１７（シルバーホモログ；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；（ＳＩ）；（ＳＩＬ）；ＭＥ２０；ｇｐ１００）；Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ；Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）；ＣＤ１９；ＣＤ３３；ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォームアイソフォーム）；ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９ａ、免疫グロブリン関連アルファ；ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体ＩＢ型）；ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、１  Ｇｂ（免疫グロブリン関連ベータ）、Ｂ２９）；ＥＤＡＲ（エクトジスプラシンＡ受容体）；ＧＦＲＡ１（ＧＤＮＦ−Ｒａ１）；ＭＲＰ４（多剤耐性タンパク質４）；ＲＥＴ；ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６膜貫通上皮抗原）；ＴＥＮＢ２（推定膜貫通プロテオグリカン）；Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５）；０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６）；ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン）；Ｎａｐｉ３ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質キャリアファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ）；Ｓｅｍａ  ５ｂ；ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ  ２７０００５０Ｃ１２遺伝子）；ＥＴＢＲ（エンドセリンＢ型受容体）；ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮想タンパク質ＦＬＪ２０３１５）；ＳＴＥＡＰ２；ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位陽イオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４）；ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形腫由来成長因子）；ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）またはＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）またはＨｓ．７３７９２）；ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ）；ＮＣＡ；ＭＤＰ；ＩＬ２０Ｒα；ブレビカン；ＥｐｈＢ２Ｒ；ＡＳＬＧ６５９；ＰＳＣＡ；ＧＥＤＡ；ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３）；ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１；ＨＬＡ−ＤＯＢ（ＭＨＣクラスＩＩ分子のベータサブユニット）；Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンドゲート化イオンチャンネル５；ＣＤ７２（Ｂ細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）；ＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、ロイシンリッチ反復（ＬＲＲ）ファミリーのＩ型膜タンパク質）；ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体様タンパク質１）；ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２）；ＴＭＥＦＦ１；ＴＭＥＭ４６（シガホモログ２（アフリカツメガエル）；ＳＨＩＳＡ２）；ＬＧＲ５（ロイシンリッチ反復含有Ｇタンパク質共役受容体５；ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）；ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２６）；ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９；Ｍｍ４７８７）；ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体；ＫＩＳＳ１Ｒ；ＧＰＲ５４；ＨＯＴ７Ｔ１７５；ＡＸＯＲ１２）；ＡＳＰＨＤ１（アスパラギン酸ベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１；ＬＯＣ２５３９８２）；チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ３）；ＴＭＥＭ１１８（リングフィンガータンパク質、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）；ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ；ＧＰＣＲ４１；ＦＬＪ１１８５６；Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）；ＧＰＣ３（グリピカン３）；ＣＬＬ１（Ｃ型レクチン様分子１）；Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７ｘ；Ｂ７Ｓ１）；ＲＮＦ４３（リングフィンガータンパク質４３）；ＣＤ７０；ＣＸＯＲＦ６１（染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１）；及びＳＬＣ５３Ｄ３、からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ２０、ＦｃＲＨ５、ＨＥＲ２、ＬＹＰＤ１、ＬＹ６Ｇ６Ｄ、ＰＭＥＬ１７、ＬＹ６Ｅ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ２２、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＤＡＲ、ＧＦＲＡ１、ＭＲＰ４、ＲＥＴ、Ｓｔｅａｐ１、及びＴｅｎＢ２からなる群から選択される。
【００１９】
腫瘍抗原がＣＤ２０であるいくつかの実施形態では、第２の結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む。いくつかの実施形態では、結合ドメインは、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２７のアミノ酸配列を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、該１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ１（ＣＨ１１）ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上の重鎖定常ドメインのうちの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対を作る。いくつかの実施形態では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ３１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ３２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの実施形態では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ２１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ２２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの実施形態では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。
【００２１】
別の態様では、本発明は、本明細書に開示される抗ＣＤ３抗体のうちのいずれかをコードする単離核酸を特徴とする。核酸は、抗体を発現させるためのベクター（例えば、発現ベクター）に含まれ得る。
【００２２】
別の態様では、本発明は、前述の核酸及び／またはベクターを含む宿主細胞を特徴とする。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞）である。他の実施形態では、宿主細胞は、原核細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞）である。抗ＣＤ３抗体を産生する宿主細胞を培養することを含む、前述の抗ＣＤ３抗のうちのいずれか１つの産生方法もまた、提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、宿主細胞または培養培地から抗ＣＤ３抗体を回収することをさらに含む。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本発明は、細胞傷害性薬剤に複合体化される前述の抗ＣＤ３抗体のうちのいずれか１つを含む免疫複合体を特徴とする。
【００２４】
前述の抗ＣＤ３抗体のうちのいずれか１つまたは免疫複合体を含む組成物も提供される。一部の実施形態では、本組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤をさらに含む。一部の実施形態では、本組成物は、薬学的組成物である。いくつかの実施形態では、本組成物は、追加の治療剤をさらに含む。
【００２５】
本発明のさらなる態様は、細胞増殖性障害または自己免疫性障害の進行の治療または遅延を必要とする対象における、治療方法または遅延方法であって、本方法は、対象に、有効量の前述の抗ＣＤ３抗体のうちのいずれか１つを投与することを含む。別の態様では、本発明は、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する対象における免疫機能の増強方法を特徴とし、本方法は、対象に、前述の抗ＣＤ３抗体のうちのいずれか１つを投与することを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、（ａ）免疫エフェクター細胞上に位置するＣＤ３分子、及び（ｂ）免疫エフェクター細胞以外の標的細胞上に位置する第２の生物学的分子に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３分子より前に第２の生物学的分子に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、例えば、免疫エフェクター細胞上に位置するＣＤ３分子に対する抗ＣＤ３抗体の結合定数（Ｋａ）の低下のため、標的細胞の表面で蓄積する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、（例えば、活性化された免疫エフェクター細胞を介して）標的細胞への細胞傷害性効果を提供することができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、（例えば、活性化された免疫エフェクター細胞を介して）標的細胞へのアポトーシス効果を提供することができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、標的細胞への細胞傷害性効果及び／またはアポトーシス効果を提供することができる。いくつかの実施形態では、標的細胞への細胞傷害性効果及び／またはアポトーシス効果は、免疫エフェクター細胞の活性化と無関係である。他の実施形態では、標的細胞への細胞傷害性効果及び／またはアポトーシス効果は、免疫エフェクター細胞の活性化に依存している。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、対象に、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、対象に、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、対象に、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内、膀胱内、または鼻腔内で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、皮下投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、静脈内投与される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、本方法は、対象にＰＤ−１軸結合アンタゴニストまたは追加の治療剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗ＣＤ３抗体の投与の前または後に投与される。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、抗ＣＤ３抗体と同時に投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）、ＣＴ−０１１（ピジリズマブ）、及びＡＭＰ−２２４からなる群から選択される。他の実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５、及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。他の実施形態では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、抗体またはイムノアドヘシンである。
【００２７】
いくつかの実施形態では、本方法は、対象にグルココルチコイドを投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、メチルプレドニゾン、トリアムシノロン、パラメタゾン、ベタメタゾン、フルドロコルチゾン、ならびにそれらの薬学的に許容されるエステル、塩、及び複合体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾンである。いくつかの実施形態では、グルココルチコイドは、デキサメタゾンの薬学的に許容されるエステル、塩、または複合体である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本方法は、対象にリツキシマブを投与することをさらに含む。
【００２９】
前述の方法のうちのいずれかでは、細胞増殖性障害は癌であり得る。いくつかの実施形態では、癌は、乳癌、膀胱癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞白血病、多発性骨髄腫、腎臓癌、前立腺癌、肝臓癌、頭頸部癌、黒色腫、卵巣癌、中皮腫、及び膠芽腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞白血病は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）である。
【００３０】
前述の方法のうちのいずれかでは、自己免疫性障害は、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ウェグナー病、炎症性腸疾患、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、自己免疫性血小板減少症、多発性硬化症、乾癬、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発ニューロパチー、重症筋無力症、脈管炎、糖尿病、レイノー症候群、シェーグレン症候群、糸球体腎炎、視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、及びＩｇＧニューロパチーからなる群から選択され得る。
【００３１】
別の態様では、本発明は、（ａ）前述の抗ＣＤ３抗体のうちのいずれか１つを含む組成物、及び（ｂ）細胞増殖性障害の治療またはその進行の遅延のために、対象に、組成物を投与するための取扱説明書を含む添付文書と、を含む、キットを特徴とする。
【００３２】
前述の方法のうちのいずれかでは、対象は、ヒトであり得る。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１Ａ】ファージＥＬＩＳＡによって評価される、トロンビンによる切断の前またはその後に、ＣＤ３ε１−２７−Ｆｃ（ＣＤ３ε−Ｆｃ）に対して指示された切断可能な部分（ＣＭ）を含有するマスク抗ＣＤ３  ＳＰ３４変異体の相対的結合を示すグラフである。マスクＳＰ３４変異体は、トロンビン切断部位を含む介在するＣＭを介して、ＳＰ３４の重鎖可変（ＶＨ）領域のＮ末端に結合される、可変長さ（ヒトＣＤ３εの初めから３個から初めから１５個のアミノ酸残基の範囲に及ぶ）のＮ末端のＣＤ３εペプチドを含むマスキング部分（ＭＭ）を有するポリペプチドマスクを含んだ。測定した結合シグナルは、ＳＰ３４の軽鎖のＣ末端上にディスプレイされたｇＤタグに結合することによって評価される、ディスプレイのために規格化された。
【図１Ｂ】ファージＥＬＩＳＡによって評価される、トロンビンによる切断の前またはその後に、ＣＤ３ε−Ｆｃに対して指示されたＣＭを含有するマスク抗ＣＤ３  ＳＰ３４変異体の相対的結合を示すグラフである。マスクＳＰ３４変異体は、トロンビン切断部位を含む介在するＣＭを介して、ＳＰ３４の軽鎖可変（ＶＬ）領域のＮ末端に結合される、可変長さ（ヒトＣＤ３εの初めから７個から初めから２７個のアミノ酸残基の範囲に及ぶ）のＮ末端のＣＤ３εペプチドを含むマスキング部分（ＭＭ）を有するポリペプチドマスクを含んだ。測定した結合シグナルは、ＳＰ３４の軽鎖のＣ末端上にディスプレイされたｇＤタグに結合することによって評価される、ディスプレイのために規格化された。
【図１Ｃ】図１Ａ及び１Ｂにおいて試験された抗ＣＤ３  ＳＰ３４変異体のＶＨまたはＶＬ領域のＮ末端に結合された、ＣＭを含有するポリペプチドマスクのそれぞれのアミノ酸配列を示す。
【図２Ａ】ファージＥＬＩＳＡによって評価される、トロンビンによる切断の前またはその後に、ＣＤ３ε−Ｆｃに対して指示されたＣＭを含有するマスク抗ＣＤ３抗体変異体の相対的結合を示すグラフである。マスク抗ＣＤ３抗体変異体は、トロンビン切断部位を含む介在するＣＭを介して、抗ＣＤ３抗体のＶＨ領域のＮ末端に結合される、可変長さ（ヒトＣＤ３εの第１のアミノ酸残基から初めから１４個のアミノ酸残基の範囲に及ぶ）のＮ末端のＣＤ３εペプチドを含むＭＭを有するポリペプチドマスクを含んだ。測定した結合シグナルは、抗ＣＤ３抗体の軽鎖のＣ末端上にディスプレイされたｇＤタグに結合することによって評価される、ディスプレイのために規格化された。
【図２Ｂ】ファージＥＬＩＳＡによって評価される、トロンビンによる切断の前またはその後に、ＣＤ３ε−Ｆｃに対して指示されたＣＭを含有するマスク抗ＣＤ３抗体変異体の相対的結合を示すグラフである。マスク抗ＣＤ３抗体変異体は、トロンビン切断部位を含む介在するＣＭを介して、抗ＣＤ３抗体のＶＬ領域のＮ末端に結合される、可変長さ（ヒトＣＤ３εの第１のアミノ酸残基から初めから１３個のアミノ酸残基の範囲に及ぶ）のＮ末端のＣＤ３εペプチドを含むＭＭを有するポリペプチドマスクを含んだ。測定した結合シグナルは、抗ＣＤ３抗体の軽鎖のＣ末端上にディスプレイされたｇＤタグに結合することによって評価される、ディスプレイのために規格化された。
【図２Ｃ】図２Ａ及び２Ｂにおいて試験された抗ＣＤ３抗体変異体のＶＨまたはＶＬ領域のＮ末端に結合された、ＣＭを含有するポリペプチドマスクのそれぞれのアミノ酸配列を示す。
【図３Ａ】ファージＥＬＩＳＡによって評価される、トロンビンによる切断の前またはその後に、ＣＤ３ε−Ｆｃに対して指示されたマスク抗ＣＤ３抗体変異体の相対的結合を示すグラフである。マスク抗ＣＤ３抗体変異体は、トロンビン切断部位を含むＣＭを介して、抗ＣＤ３抗体のＶＨ領域のＮ末端に結合される、可変長さ（ヒトＣＤ３εの第１のアミノ酸残基から初めから１１個のアミノ酸残基の範囲に及ぶＭＭ、１０〜２０個のアミノ酸残基の範囲に及ぶＬＭ）のＭＭ及びリンカー部分（ＬＭ）をそれぞれ有するポリペプチドマスクを含んだ。測定した結合シグナルは、抗ＣＤ３抗体の軽鎖のＣ末端上にディスプレイされたｇＤタグに結合することによって評価される、ディスプレイのために規格化された。
【図３Ｂ】図３Ａにおいて試験された抗ＣＤ３抗体変異体のＶＨのＮ末端に結合された、ＣＭ及びＬＭを含有するポリペプチドマスクのそれぞれのアミノ酸配列を示す。
【図４Ａ】ファージＥＬＩＳＡによって評価される、ＣＤ３ε−Ｆｃに対して指示されたマスク抗ＣＤ３抗体変異体の相対的結合を示すグラフである。マスク抗ＣＤ３抗体変異体は、ＬＭを介して抗ＣＤ３抗体のＶＨ領域のＮ末端に結合される、可変長さ（５〜１０個のアミノ酸残基の範囲に及ぶ）のヒトＣＤ３εの初めから７個のアミノ酸残基を含むＭＭ及びＬＭをそれぞれ有する、「固定した」ポリペプチドマスクを含んだ。測定した結合シグナルは、抗ＣＤ３抗体の軽鎖のＣ末端上にディスプレイされたｇＤタグに結合することによって評価される、ディスプレイのために規格化された。
【図４Ｂ】図４Ａにおいて試験された抗ＣＤ３抗体変異体のＶＨのＮ末端に結合された、固定したポリペプチドマスクのそれぞれのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｃ】図４Ｆ及び４Ｇにおいて試験されたＣＤ２０  ＴＤＢの抗ＣＤ３アームのＶＨ領域のＮ末端に結合された、可変ＭＭ長さを有する固定したポリペプチドマスクのそれぞれのアミノ酸配列を示す。
【図４Ｄ】ＣＭ、ＬＭ、またはＣＭ及びＬＭの両方を介して、抗腫瘍抗原アーム（例えば、抗ＣＤ２０アーム）、抗ＣＤ３アーム、及びＴＤＢの抗ＣＤ３アームに結合されたＭＭを含むポリペプチドマスクを有する、マスクＴ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体の一般的概略図を示す。示されたマスクＴＤＢのポリペプチドマスクを、抗ＣＤ３アームのＶＬドメインに結合するが、ポリペプチドマスクが、代替に、抗ＣＤ３アームのＶＨ領域に結合され得ることが理解されるべきである。
【図４Ｅ】ＦＡＣＳ分析によって測定される、１ウェル当たり２００，０００個のヒトＰＢＭＣ（ドナー番号Ｐ０００００３３６９４から単離された）を用いた異なる濃度で、様々なＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（非マスクＴＤＢ、１２ａａマスクＴＤＢ、及び１４ａａマスクＴＤＢ）のインキュベーションから４８時間後に、非ＴＤＢで処理された対照と比較して、内因性Ｂ細胞を死滅させる割合を示すグラフである。各アッセイの終了時に、生存Ｂ細胞は、ＰＩ−ＣＤ１９＋またはＰＩ−ＣＤ２０＋Ｂ細胞としてゲートアウトされ、内部計数対照として反応混合物に追加されるＦＩＴＣビーズを用いて細胞絶対数を得た。
【図４Ｆ】ＦＡＣＳ分析によって測定される、１ウェル当たり約２００，０００個のヒトＰＢＭＣ（ドナー番号Ｐ０００００３３６９４から単離された）を用いた異なる濃度で、様々なＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（非マスク、マスク６．６、マスク３．９、マスク４．５、マスク５．７、及びマスク４．６のＣＤ２０  ＴＤＢ）のインキュベーションから約２０時間後に、ＣＤ６９及びＣＤ２５表面発現の割合によって測定される、ＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の割合を示すグラフである。Ｔ細胞活性化の程度は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＤ６９＋／ＣＤ２５＋集団の割合を比較することによって決定された。
【図４Ｇ】ＦＡＣＳ分析によって測定される、１ウェル当たり２００，０００個のヒトＰＢＭＣ（ドナー番号Ｐ０００００３３６９４から単離された）を用いた異なる濃度で、様々なＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（非マスク、マスク６．６、マスク３．９、マスク４．５、マスク５．７、及びマスク４．６のＣＤ２０  ＴＤＢ）のインキュベーションから４８時間後に、非ＴＤＢで処理された対照と比較して、内因性Ｂ細胞を死滅させる割合を示すグラフである。各アッセイの終了時に、生存Ｂ細胞は、ＰＩ−ＣＤ１９＋またはＰＩ−ＣＤ２０＋Ｂ細胞としてゲートアウトされ、内部計数対照として反応混合物に添加されるＦＩＴＣビーズを用いて細胞絶対数を得た。ＥＣ５０値（ｎｇ／ｍｌ）も、試験した各ＣＤ２０  ＴＤＢに対するＢ細胞を死滅させる有効性を定量的に評価するために表形式で示される。
【図４Ｈ】第１の列に提供される非マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（非マスクｖ１、非マスクｖ３、非マスクｖ４、及び非マスクｖ５）ならびにマスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（マスク４．５、マスク４．６、及びマスク５．７）の親和性変異体に対する結合親和性アッセイの結果を示す表である。各ＴＤＢについては、計算された会合速度（ｋａ）、解離速度（ｋｄ）、及び一本鎖ＣＤ３εγヘテロ二量体組み換え抗原に対する全結合親和性（ＫＤ）が提供される。
【図４Ｉ】非マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（非マスクｖ１、非マスクｖ３、非マスクｖ４、及び非マスクｖ５）ならびにマスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（マスク４．５、マスク４．６、及びマスク５．７）の親和性変異体に対する結合親和性、Ｔ細胞活性化、及び細胞傷害性活性を要約する表である。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
Ｉ．定義
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者であれば容易に理解するそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（かつ説明する）。
【００３５】
「抗ＣＤ３抗体」及び「ＣＤ３に結合する抗体」という用語は、抗体がＣＤ３の標的化において診断剤及び／または治療剤として有用であるように、十分な親和性でＣＤ３と結合することができる抗体を指す。一実施形態では、無関係の非ＣＤ３タンパク質への抗ＣＤ３抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合に、この抗体のＣＤ３への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＣＤ３に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、異なる種に由来するＣＤ３間で保存されるＣＤ３のエピトープに結合する。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、マスクされる（すなわち、それは、ポリペプチドマスクを含有する）。
【００３６】
「抗体」という用語は、本明細書で最も広義に使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
【００３７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；二重特異性抗体（例えば、ｂｓＤｂ）；一本鎖ダイアボディ（例えば、ｓｃＤｂ）；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；タンデム一本鎖抗体分子（例えば、ＴａＦｖ）；二重親和性再標的分子（例えば、ＤＡＲＴ）；二重特異性Ｔ細胞誘導（例えば、ＢｉＴＥ）；重鎖のみの抗体分子の可変ドメイン（例えば、ＶＨＨ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
「結合ドメイン」とは、標的エピトープ、抗原、リガンド、または受容体に特異的に結合する化合物または分子の一部を意味する。結合ドメインとしては、抗体（例えば、モノクローナル、ポリクローナル、組み換え、ヒト化、及びキメラ抗体）、抗体断片またはその部分（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体、ＴａＦｖ抗体、ＳＭＩＰ、ドメイン抗体、ダイアボディ、ｂｓＤｂ、ｓｃＤｂ、ＤＡＲＴ、ＢｉＴＥ、ミニボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、アフィボディ、ナノボディ、ＶＨＨドメイン抗体、ならびに抗体のＶＨ及び／またはＶＬドメイン）、受容体、リガンド、アプタマー、及び特定された結合パートナーを有する他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３９】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファン、及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロメラミンを含む、エチレンイミン及びメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドレゼシン、カルゼレシン、及びビセレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード等の窒素マスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン等のナイトロゲンマスタード；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩＩ（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；ＣＤＰ３２３、経口アルファ−４インテグリン阻害剤；ダイネシンＡを含むダイネシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連クロモタンパク質エネジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキシルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ  Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソル���シンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミトマイシンＣ等のミトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキセート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；コンブレタスタチン；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミピリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎薬、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えば、メイタンシン及びアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、及びドセタキセルのアルブミン操作されたナノ粒子製剤（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｍｅ−Ｐｏｕｌｅｎｅ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；プラチナ剤、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチン；ツブリン重合が微小管を形成するのを防止するビンカ（ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む）；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボビン；ノバントロン；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロン酸塩；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸（ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む；ビスホスホン酸塩、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常細胞増殖に関わるシグナル伝達経路における遺伝子（例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標）の発現を阻害するもの；細胞増殖を低減させるＶＥＧＦ−Ａ；ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子治療ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン：トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリフォシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ−２阻害剤、例えば、オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピキサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；セリン−トレオニンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ロナファルニブ（ＳＣＨ  ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）；及び上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキシルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソロンの複合療法の省略形）、及びＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵ及びロイコボビンと複合されたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標）による治療計画の省略形）；及び上記のいずれかの��学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせが挙げられる。
【００４０】
本明細書で定義される化学治療剤は、癌の成長を促進し得るホルモンの効果を制御、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」を含む。それらは、それら自体がホルモンであってもよく、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストーン、及びＦＡＲＥＳＴＯＮ．ｃｎｄｏｔ．トレミフェンを含む、副腎におけるエストロゲン産生を調節する、酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタイン、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール等、ならびに抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン、ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、具体的には、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、及びＨ−Ｒａｓ等、リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標）リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；ワクチン、例えば、遺伝子治療ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ビノレルビン及びエスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照されたい）、ならびに上述のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上述のうちの２つ以上の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【００４１】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部分が特定の源または種に由来し、重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００４２】
「切断可能な部分」または「ＣＭ」という用語は、存在する場合、抗体またはその抗原結合断片（例えば、本発明の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片、例えば、本発明のＣＤ２０／ＣＤ３  ＴＤＢまたはその抗原結合断片）にポリペプチドマスクを連結させ、切断される場合、それに連結される抗体またはその抗原結合断片からのポリペプチドマスクの物理的分離をもたらすポリペプチドマスクの任意の成分を指す。いくつかの実施形態では、ＣＭは、酵素（例えば、標的免疫エフェクター細胞以外の標的細胞によって共発現または上方調節されるプロテアーゼ等のプロテアーゼ）のための基質としての役割を果たし得るアミノ酸配列を含んでもよい。他の実施形態では、ＣＭは、還元剤の作用によって切断することができるジスルフィド結合を形成することができるシステイン−システイン対を含む。他の実施形態では、ＣＭは、光分解時に切断することができる基質を含む。いくつかの実施形態では、ＣＭは、酸性ｐＨ環境（例えば、細胞のリソソームまたは腫瘍微環境）において切断することができる酸に不安定なリンカーを含む。
【００４３】
本明細書で使用される「ＣＤ３（ｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ３）」または「ＣＤ３」という用語は、別途指示されない限り、霊長類（例えばヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源からの任意の天然ＣＤ３を指し、例えば、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３α、及びＣＤ３β鎖を含み、完全長「未処理の」ＣＤ３（例えば、未処理または未修飾のＣＤ３εまたはＣＤ３γ）、ならびにすべてのまたは一部のそのシグナルペプチドを有さない「処理された」ＣＤ３εポリペプチド、具体的には、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０００７２４（ヒトＣＤ３εタンパク質）の配列の初めから２１または２２のアミノ酸を有さないＣＤ３εポリペプチドのような細胞における処理によって生じる任意の形態のＣＤ３を包含する。この用語は、例えば、スプライス変異体または対立遺伝子変異体を含む、ＣＤ３の他の自然発生変異体も包含する。ＣＤ３は、例えば、未処理または処理形態で、２０７のアミノ酸長であるヒトＣＤ３εタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０００７２４）、及び１８２のアミノ酸長であるヒトＣＤ３γタンパク質（ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００００６４）の両方を含む。
【００４４】
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。５つの主要なクラスの抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免役グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００４５】
本明細書に記載の本発明の態様及び実施形態が、態様及び実施形態「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」を含むことが理解される。
【００４６】
本明細書で使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害するもしくは阻止する、及び／または細胞死もしくは破壊を引き起こす、物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤もしくは化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素等の酵素及びそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素（それらの断片及び／または変異体を含む）等の毒素；ならびに下に開示される種々の抗腫瘍または抗癌剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００４７】
「障害」とは、哺乳動物を問題の障害に罹患しやすくする病理学的状態を含む慢性及び急性障害または疾患を含むが、これらに限定されない、治療から恩恵を受けることになる任意の状態である。
【００４８】
「細胞増殖性障害」及び「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害は、癌である。一実施形態では、細胞増殖性障害は、腫瘍である。
【００４９】
「癌」及び「癌性」という用語は、一般的に無秩序な細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理的状態を指しまたは記述する。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌（例えば、上皮扁平上皮癌）、肺癌、例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌及び肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、例えば、胃腸癌及び胃腸間質癌、膵臓癌、膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、表在拡大型黒色腫、悪性黒子型黒色腫、末端性黒子性黒色腫、結節型黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非開裂細胞性ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症等）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症に関連する異常な血管増殖、浮腫（脳腫瘍に関連するもの等）、メーグス症候群、脳癌、ならびに頭頸部癌、及び関連転移が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、本発明の抗体での治療に適する癌としては、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、膠芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、膵臓癌、軟組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌、頭頸部癌、卵巣癌、中皮腫、及び多発性骨髄腫が挙げられる。いくつかの実施形態では、癌は、小細胞肺癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、黒色腫、乳癌、胃癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、及び肝細胞癌から選択される。さらに、いくつかの実施形態では、癌は、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、膠芽細胞腫、及び乳癌（これらの転移型を含む）癌から選択される。
【００５０】
本明細書で使用される「腫瘍」は、悪性か良性かを問わず、すべての腫瘍性細胞の成長及び増殖、ならびにすべての前癌性及び癌性細胞及び組織を指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、及び「腫瘍」という用語は、本明細書で言及される場合、相互排他的ではない。
【００５１】
本明細書で使用される「腫瘍抗原」という用語は、腫瘍細胞上に提示される抗原として理解され得る。これらの抗原は、分子の膜貫通及び細胞質部分と結合していることが多い細胞外部分とともに細胞表面に提示されることがある。これらの抗原は、腫瘍細胞によりのみ提示され、通常細胞によっては決して提示され得ない。腫瘍抗原は、腫瘍細胞上にのみ発現されるか、または通常細胞と比較して腫瘍特異的な突然変異を表すことがある。この場合、それらは腫瘍特異的抗原と称される。腫瘍細胞及び通常細胞により提示される腫瘍抗原がより一般的であり、それらは腫瘍関連抗原と称される。これらの腫瘍関連抗原は、通常細胞と比較して過剰発現される場合があり、または通常組織と比較して腫瘍組織の構造が小さくないことから腫瘍細胞中で抗体結合を起こしやすい。一態様では、腫瘍抗原は、以下の表１に記載されるものから選択される。
【００５２】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられる。
【００５３】
「有効量」の化合物、例えば、本発明の抗ＣＤ３抗体またはその組成物（例えば、薬学的組成物）は、特定の障害（例えば、細胞増殖性障害、例えば、癌）の測定可能な改善または予防のような所望の治療的または予防的結果の達成に必要な少なくとも最小の量である。本明細書における有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体における所望の応答を誘発する抗体の能力等の要因に応じて異なり得る。有効量はまた、治療上有益な作用が治療の任意の毒性作用または有害作用を上回るものでもある。予防的使用の場合、有益なまたは所望の結果としては、疾患の生化学的、組織学的、及び／または挙動的症状、その合併症、ならびに疾患の発症中に現れる中間病理学的表現型を含む、疾患のリスクの排除または低減、疾患の重症度の軽減、または疾患の発生の遅延等の結果が挙げられる。治療的使用の場合、有益なまたは所望の結果としては、疾患に起因する１つ以上の症状の軽減、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患の治療に必要な他の薬剤の用量の低減、別の薬剤の効果の増強（例えば、標的による）、疾患の進行の遅延、及び／または生存期間の延長等の臨床結果が挙げられる。癌または腫瘍の場合、有効量の薬物は、癌細胞の数を減少させ、腫瘍サイズを低減させ、癌細胞の末梢器官への浸潤を阻害し（すなわち、ある程度遅らせるか、または望ましくは停止し）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅らせるか、または望ましくは停止し）、腫瘍成長をある程度阻害し、及び／または障害に関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減する効果を有し得る。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本発明では、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、予防的治療または治療的治療を直接または間接的に達成するのに十分な量である。臨床分野において理解されるように、薬物、化合物、または薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または薬学的組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の治療薬の投与との関連で考慮され得、単剤は、１つ以上の他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るか、または達成される場合、有効量で与えられると見なされ得る。
【００５４】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在する場合もあれば、しない場合もある。本明細書で別途指示がない限り、Ｆｃ領域または定常領域中のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付け方式に従う。
【００５５】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列、ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で出現する。
【００５６】
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然の抗体構造に実質的に類似な構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する、抗体を指して、本明細書に互換的に使用される。
【００５７】
本明細書で使用されるとき、「成長阻害剤」とは、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長を阻害する化合物または組成物を指す。一実施形態では、成長阻害剤は、抗体が結合する抗原を発現する細胞の増殖を予防または低減する成長阻害抗体である。別の実施形態では、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞の割合を著しく減少させるものであり得る。成長阻害剤の例としては、細胞周期進行（Ｓ期以外の場所で）を遮断する薬剤、例えば、Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤が挙げられる。従来のＭ期遮断薬としては、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、及びトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンが挙げられる。Ｇ１を停止する薬剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、及びａｒａ−Ｃ等のＤＮＡアルキル化剤は、Ｓ期停止にも波及する。さらなる情報は、ＭｕｒａｋａｍｉらのＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ａｎｄ  Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １、表題「Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ」（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）、例えば、１３貢で見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、いずれもイチイ由来の抗癌薬である。ヨーロッパイチイ由来のドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体由来の微小管の構築を促進し、脱重合を阻止することによって微小管を安定させ、細胞内での有糸分裂を阻害する。
【００５８】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」という用語は、同義に使用され、外因性核酸が中に導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞としては、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が挙げられ、これらは、初代形質転換細胞及び継代の数にかかわらずそれに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と核酸含有量の点で完全に同一ではないが、変異を含み得る。元来形質転換された細胞についてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が、本明細書に含まれる。
【００５９】
「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリ等の当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載の方法も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８−７４（２００１）も参照されたい。ヒト抗体は、抗原投与に応答してかかる抗体を産生するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫化異種マウスに抗原を投与することによって調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関しては、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照されたい）。また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体に関して、例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）も参照されたい。
【００６０】
本明細書で使用される「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、配列中で超可変（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）であり、及び／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成し、及び／または抗原接触残基（「抗原接触体」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。概して、抗体は、６つのＨＶＲ：ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。本明細書の例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）で発生する超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）、８９−９７（Ｌ３）、３１−３５ｂ（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）、及び９５−１０２（Ｈ３）で発生するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））、
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３〜１０１（Ｈ３）で発生する抗原接触体（ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（１９９６））、ならびに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／または（ｃ）の組み合わせを含む。
【００６１】
別途指示されない限り、可変ドメイン（例えば、ＦＲ残基）におけるＨＶＲ残基及び他の残基は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って付番される。
【００６２】
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれに限定されない１つ以上の異種性分子（複数可）に複合体化される抗体である。
【００６３】
「対象」または「個体」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、対象または個体は、ヒトである。
【００６４】
「単離」抗体は、その自然環境の構成成分から分離されているものである。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）、またはクロマトグラフ法（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって決定される場合、９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の概説に関して、例えばＦｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００６５】
「単離された」核酸とは、その天然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、通常は核酸分子を含有する細胞内に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子が染色体外に、またはその天然染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
【００６６】
「抗ＣＤ３抗体をコードする単離された核酸」とは、抗体重鎖及び軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内のかかる核酸分子（複数可）を含み、かかる核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ以上の場所に存在する。
【００６７】
本明細書で使用される「リンカー部分」または「ＬＭ」とは、存在する場合に、抗体またはその抗原結合断片（例えば、本発明の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片、例えば、本発明のＣＤ２０／ＣＤ３  ＴＤＢまたはその抗原結合断片）に直接または間接的にポリペプチドマスクのＭＭ要素を結合するポリペプチドマスクの任意の要素を意味する。全般に、ＬＭは、５〜２４のアミノ酸長さ（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４のアミノ酸長さ）である。いくつかの実施形態では、ＬＭは、５〜１５のアミノ酸長さ（例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５のアミノ酸長さ）である。いくつかの実施形態では、ＬＭは、高度に柔軟であり、グリシン（Ｇ）及び／またはセリン（Ｓ）残基を多く含み得、ＧＳ反復の形態で存在し得る。
【００６８】
「マスク部分」または「ＭＭ」という用語は、抗体またはその抗原結合断片（例えば、本発明の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片、例えば、本発明のＣＤ２０／ＣＤ３  ＴＤＢまたはその抗原結合断片）のその標的（例えば、ＣＤ３）に特異的に結合する能力を低下させるポリペプチドマスクの要素を指す。いくつかの実施形態では、ＭＭは、ＣＤ３ポリペプチドの断片（例えば、ヒトＣＤ３εポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ３εポリペプチドのＮ末端の断片、例えば、処理されたヒトＣＤ３εポリペプチドの少なくとも初めの３個のアミノ酸）を含むアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＭは、Ｎ末端の環化グルタミン（ピログルタミン酸、５−オキソピロリジン−２−カルボン酸（ＰＣＡ）、５−オキソプロリン、ピドル酸、またはピログルタミン酸塩）を含むアミノ酸配列を含む。ＭＭは、ＬＭ、ＣＭ、またはＬＭ及びＣＭの両方を介して、抗体またはその抗原結合断片に結合され得る。あるいは、ＭＭは、抗体またはその抗原結合断片に直接結合され得る。
【００６９】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指す。すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、及び／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、想定される変異型抗体を除いて、かかる変異体は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、多様な技法によって作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのこのような方法及び他の例示的な方法が、本明細書に記載されている。
【００７０】
「裸の抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識に複合されていない抗体を指す。裸の抗体は、薬学的製剤中に存在してもよい。
【００７１】
「天然抗体」は、様々な構造を有する、自然発生免役グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｈｅａｖｙ  ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）と、その後に３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）とを有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ  ｌｉｇｈｔ  ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、その後に定常軽（ＣＬ）ドメインとを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つに割り当てられ得る。
【００７２】
「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／またはその使用に関する警告を含有する、治療剤製品のパッケージに通例含まれる指示書を指すように使用される。
【００７３】
「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１シグナル伝達軸上のシグナル伝達に起因するＴ細胞機能障害を除去するようにＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上との相互作用を阻害し、結果として、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）を復元または増強する分子を指す。本明細書で使用されるとき、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストを含む。
【００７４】
「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のその結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１のＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２への結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、ならびにＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／またはＰＤ−Ｌ２との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１を介するシグナル伝達を媒介したＴリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の特定の態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＣＴ−０１１（ピジリズマブ）である。別の具体的な態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載のＡＭＰ−２２４である。
【００７５】
「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ１とその結合パートナー、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１のうちのいずれか１つ以上との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のその結合パートナーへの結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１のＰＤ−１及び／またはＢ７−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ１とその結合パートナーのうちの１つ以上、例えば、ＰＤ−１、Ｂ７−１との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１を介するシグナル伝達を媒介したＴリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。具体的な一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＭＤＸ−１１０５である。さらに別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＭＰＤＬ３２８０Ａである。さらに別の具体的な態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載のＭＥＤＩ４７３６である。
【００７６】
「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または妨害する分子を指す。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のその結合パートナーのうちの１つ以上への結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、及びＰＤ−Ｌ２とその結合パートナーのうちのいずれか１つ以上、例えば、ＰＤ−１との相互作用に起因するシグナル伝達を低減、遮断、阻害、抑止、または妨害する他の分子を含む。一実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２を介するシグナル伝達を媒介したＴリンパ球で発現された細胞表面タンパク質によってまたはそれを介して媒介される負の共刺激シグナルを低減し、機能障害Ｔ細胞の機能障害性をより低くする（例えば、抗原認識へのエフェクター応答を増強する）。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【００７７】
参照ポリペプチド配列に関して「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列同一性最大パーセントを達成するために配列を整列させ、かつ必要に応じてギャップを導入した後の、配列同一性の一部としていずれの保存的置換も考慮しない、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一の候補配列におけるアミノ酸残基の割合と定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するための整列は、当該技術分野の技術範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたる最大整列を達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、配列の整列に適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が作成したものであり、ソースコードは、米国著作権局（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，２０５５９）においてユーザ文書とともに申請されており、これは、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に入手可能であり、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされるべきである。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されており、変動しない。
【００７８】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較に用いられる状況下で、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、またはそれに対するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するか、または含む所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、以下のように計算される。
１００×画分Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列整列プログラムＡＬＩＧＮ−２によってそのプログラムのＡとＢとの整列において完全な一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％とは等しくないことが理解される。別途具体的に示されない限り、本明細書で使用されるすべてのアミノ酸配列同一性値％は、直前の段落に記載されるようにＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られる。
【００７９】
「薬学的製剤」という用語は、調製物の中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、かつ製剤が投与される対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有しない調製物を指す。
【００８０】
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００８１】
「ポリペプチドマスク」という用語は、抗体またはその抗原結合断片（例えば、本発明の抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片、例えば、本発明のＣＤ２０／ＣＤ３  ＴＤＢまたはその抗原結合断片）に結合し、抗体またはその抗原結合断片のその標的（例えば、ＣＤ３）に特異的に結合する能力を低下させるように位置付けられるアミノ酸配列を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドマスクは、ＬＭ、ＣＭ、またはＬＭ及びＣＭの両方を介して、抗体またはその抗原結合断片に結合され得る、ＭＭを含む。
【００８２】
本明細書で使用されるとき、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」等のその文法上の変形）とは、治療されている個体の自然経過を変更することを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に実施され得る。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的病理学的帰結の縮小、転移の予防、疾患進行速度の減少、病状の回復または寛解、及び緩解または予後の改善を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体を使用して、疾患の発達を遅延させるか、または疾患の進行を減速させる。
【００８３】
本明細書で使用されるとき、障害または疾患の「進行を遅延させること」とは、疾患または障害（例えば細胞増殖性障害、例えば癌）の発達を延期する、妨げる、減速させる、遅滞させる、安定化させる、及び／または延滞させることを意味する。この遅延は、病歴及び／または治療される個体に応じて様々な期間のものであり得る。当業者に明らかであるように、十分または著しい遅延は、個体が疾患を発症しないという点で、予防を事実上包含し得る。例えば、転移の発症等の末期癌を遅延させることができる。
【００８４】
「低減する」または「阻害する」とは、例えば、２０％以上の、５０％以上の、または７５％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれ以上の全体的な減少を生じる能力を意味する。ある特定の実施形態では、低減するまたは阻害するとは、マスクされたとき（すなわち、抗ＣＤ３抗体がポリペプチドマスクを含むとき）、抗ＣＤ３抗体のヒトＣＤ３ポリペプチドに結合する能力の完全な低下を指すことができる。他の実施形態では、低減するまたは阻害するとは、抗体Ｆｃ領域によって媒介される抗体のエフェクター機能を指すことができ、かかるエフェクター機能は、具体的に補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を含む。
【００８５】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般に、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む同様の構造を有する（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい）。単一のＶＨドメインまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインを使用して単離されて、それぞれ、相補的ＶＬドメインまたはＶＨドメインのライブラリをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００８６】
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが結合している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、及び中に導入される宿主細胞のゲノム内に組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に結合している核酸の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
【００８７】
本明細書で使用されるとき、「投与する」とは、ある投薬量の化合物（例えば、本発明の抗ＣＤ３抗体もしくは本発明の抗ＣＤ３抗体をコードする核酸）または組成物（例えば、薬学的組成物、例えば、本発明の抗ＣＤ３抗体を含む薬学的組成物）を対象に与える方法を意味する。本明細書に記載される方法に用いられる組成物は、例えば、筋肉内、静脈内、皮内、経皮的、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、局所的（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小胞内、経粘膜、心膜内、臍帯内、眼球内、経口、局所的、局所的（ｌｏｃａｌｌｙ）、吸入、注射、注入、持続注入、標的細胞に直接的に流す局所灌流、カテーテル、洗浄、クリーム、または脂質組成物で投与することができる。投与方法は、様々な要素（例えば、投与される化合物または組成物、ならびに治療される状態、疾患、または障害の重症度）に応じて多様であり得る。
【００８８】
ＩＩ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、ポリペプチドマスクを含むマスク抗ＣＤ３抗体に部分的に基づく。ある特定の実施形態では、マスク抗ＣＤ３抗体は、多重特異性（例えば、二重特異性）であり、ＣＤ３またはその断片に加えて、第２の生物学的分子（例えば、細胞表面抗原、例えば、腫瘍抗原）と結合することができる。本発明のマスク抗体は、Ｔ細胞の関与及び活性化の反応速度を具体的に明らかにし、その反応速度を制御する方法で、例えば、細胞増殖性障害（例えば、癌）または自己免疫性障害の進行の治療もしくは遅延のために、またはそのような障害に罹患している対象における免疫機能の増強のために有用であり得る。
【００８９】
Ａ．マスク抗ＣＤ３抗体
一態様では、本発明は、（ａ）ＣＤ３（例えば、ＣＤ３ε及び／または及び／またはＣＤ３γ、例えば、ヒトＣＤ３ε及び／またはＣＤ３γ）に結合することができる結合ドメイン、（ｂ）抗体またはその抗原結合断片のＣＤ３に特異的に結合する能力を低減または阻害するように位置付けられるポリペプチドマスクを含むマスク抗ＣＤ３抗体を提供する。抗ＣＤ３アーム及び抗腫瘍標的アームを含むＴ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体の特定の文脈において、ＴＤＢに連結されるポリペプチドマスクは、関与腫瘍標的細胞及びＴ細胞の細胞生体内分布を独自にシフトし、それによって、ＴＤＢの有効性を変化させ得る。
【００９０】
ポリペプチドマスクは、その重鎖可変（ＶＨ）ドメインまたは軽鎖可変（ＶＬ）ドメインにより抗ＣＤ３抗体の結合ドメインに連結され得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドマスクは、抗ＣＤ３抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインのＮ末端に連結されている。ポリペプチドマスクに連結されるか、または修飾される抗ＣＤ３抗体は、以下の式によって表され得る（アミノ末端領域からカルボキシ末端領域への順に）：（ポリペプチドマスク）−（抗ＣＤ３抗体）。
【００９１】
ポリペプチドマスクは、抗ＣＤ３抗体のＣＤ３ポリペプチド（例えば、ヒトＣＤ３ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ３εポリペプチド）に結合する能力を少なくとも１０％（例えば、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、または２９％もしくはそれ以上）、少なくとも３０％（例えば、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、または５９％もしくはそれ以上）、少なくとも６０％（例えば、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、もしくは７９％）、少なくとも８０％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、もしくは８９％）、少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％）、または約１００％阻害し得る。
【００９２】
同様に、ポリペプチドマスクの存在は、ＣＤ３に対するマスク抗ＣＤ３抗体の解離定数（Ｋｄ）は、ＣＤ３に対する非マスク形態で同じ抗ＣＤ３抗体のＫｄよりも少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、５０，０００、１００，０００、５００，０００、１，０００，０００、５，０００，０００、１０，０００，０００、５０，０００，０００もしくはそれ以上、または５〜１０、１０〜１００、１０〜１，０００、１０〜１０，０００、１０〜１００，０００、１０〜１，０００，０００、１０〜１０，０００，０００、１００〜１，０００、１００〜１０，０００、１００〜１００，０００、１００〜１，０００，０００、１００〜１０，０００，０００、１，０００〜１０，０００、１，０００〜１００，０００、１，０００〜１，０００，０００、１０００〜１０，０００，０００、１０，０００〜１００，０００、１０，０００〜１，０００，０００、１０，０００〜１０，０００，０００、１００，０００〜１，０００，０００、または１００，０００〜１０，０００，０００倍もしくはそれ以上もたらし得る。
【００９３】
マスク抗ＣＤ３抗体は、マスク抗ＣＤ３抗体がそのＣＤ３標的に対して有するよりもそのポリペプチドマスクに対して低い親和性を有し得る。例えば、抗ＣＤ３抗体のマスクに対する抗ＣＤ３抗体のＫｄは、ＣＤ３に対する抗ＣＤ３抗体のＫｄよりも少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、または１００，０００倍高くなり得る。そのようなマスクは、例えば、マスクが切断可能な部分を有さない場合に、マスクが連結される抗ＣＤ３抗体からの除去を促進するために有用であり得る。あるいは、マスク抗ＣＤ３抗体は、マスク抗ＣＤ３抗体がそのＣＤ３標的に対して有するよりもそのポリペプチドマスクに対して高い親和性を有し得る。例えば、抗ＣＤ３抗体のポリペプチドマスクに対する抗ＣＤ３抗体のＫｄは、ＣＤ３に対する抗ＣＤ３抗体のＫｄよりも少なくとも５、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、１，０００、２，５００、５，０００、１０，０００、または１００，０００倍低くなり得る。そのようなマスクは、例えば、マスクが切断可能な部分を有する場合に、マスクが連結される抗ＣＤ３抗体からの除去を促進するために有用であり得る。
【００９４】
場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体の結合ドメインは、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号２８〜３１の配列をそれぞれ含む重鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、及びＦＲ−Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）、及び／または配列番号３２〜３５の配列をそれぞれ含む軽鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、及びＦＲ−Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）を含む。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号８の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、及び／または配列番号９の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、またはその誘導体もしくはクローン関連を有し得る。
【００９５】
場合によっては、本発明のマスク抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ならびに（ｉｉｉ）配列番号４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つすべてのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを有し得る。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体の結合ドメインは、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む。
【００９６】
ある特定の実施形態では、上で提供される抗ＣＤ３抗体の任意の１つ以上のアミノ酸は、以下のＨＶＲ位置：
−ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１２）：位置１、２、５、６、及び７、ならびに
−ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１５）：位置１、２、４、及び５で置換される。
【００９７】
ある特定の実施形態では、置換は、本明細書で提供される、保存的置換である。ある特定の実施形態では、以下の置換のうちの任意の１つ以上は、任意の組み合わせ：
−ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１２）：Ｄ１ＴまたはＳ；Ｓ１ＤまたはＴ；Ｔ１ＤまたはＳ；Ｇ２ＡまたはＳ；Ａ２ＧまたはＳ；Ｓ２ＡまたはＧ；Ｒ５Ｎ；Ｎ５Ｒ；Ｙ６Ａ；Ａ６Ｙ；Ａ７Ｙ；及びＹ７Ａ；ならびに
−ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１５）：Ｋ１Ｔ；Ｔ１Ｋ；Ｑ２Ａ；Ａ２Ｑ；Ｆ４Ａ；Ａ４Ｆ；Ｉ５Ａ及びＡ５Ｉ、により作製され得る。
【００９８】
例えば、場合によっては、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む結合ドメインを有するマスク抗ＣＤ３抗体を提供する。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号３６〜３９の配列をそれぞれ含む重鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、及びＦＲ−Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）、及び／または配列番号４０〜４３の配列をそれぞれ含む軽鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、及びＦＲ−Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）を含む。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号１８の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１９の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、またはその誘導体もしくはクローン関連を有し得る。
【００９９】
場合によっては、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む結合ドメインを有するマスク抗ＣＤ３抗体を提供する。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号３６〜３９の配列をそれぞれ含む重鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、及びＦＲ−Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）、及び／または配列番号４０〜４３の配列をそれぞれ含む軽鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、及びＦＲ−Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）を含む。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号１０７の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１０８の配列の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、またはその誘導体もしくはクローン関連を有し得る。
【０１００】
場合によっては、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む結合ドメインを有するマスク抗ＣＤ３抗体を提供する。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号３６〜３９の配列をそれぞれ含む重鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、及びＦＲ−Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）、及び／または配列番号４０〜４３の配列をそれぞれ含む軽鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、及びＦＲ−Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）を含む。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号１０９の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１１０の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、またはその誘導体もしくはクローン関連を有し得る。
【０１０１】
場合によっては、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む結合ドメインを有するマスク抗ＣＤ３抗体を提供する。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号３６〜３９の配列をそれぞれ含む重鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、及びＦＲ−Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）、及び／または配列番号４０〜４３の配列をそれぞれ含む軽鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、及びＦＲ−Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）を含む。場合によっては、マスク抗ＣＤ３抗体は、配列番号１１１の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１１２の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、またはその誘導体もしくはクローン関連を有し得る。
【０１０２】
本発明の開示に従ってマスク形態で有利な使用に企図される他の抗ＣＤ３抗体は、抗ＣＤ３抗体ＳＰ３４（Ｐｅｓｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ．４：３３７−３４４，１９８５）及びＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１４／５７４，１３２（米国公開第２０１５−０１６６６６１号）（参照によりその全体が組み込まれる）に開示される他の抗ＣＤ３抗体を含む。
【０１０３】
上の実施形態のいずれにおいても、マスク抗ＣＤ３抗体は、ヒト化され得る。例えば、マスク抗ＣＤ３抗体は、上述の実施形態のうちのいずれかにあるようにＨＶＲを含んでもよく、アクセプターヒトフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
【０１０４】
マスク抗ＣＤ３抗体は、抗体の１つ以上の特異的残基での置換突然変異であり得る、非グリコシル化部位突然変異を含んでもよい。例えば、非グリコシル化部位突然変異は、アミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、及び／またはＤ２６５（ＥＵ番号付け）（例えば、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／またはＤ２６５Ａ）における置換突然変異であってもよい。非グリコシル化部位突然変異は、マスク抗ＣＤ３抗体のエフェクター機能を低下させ得る。
【０１０５】
上記の実施形態のうちのいずれか１つによるマスク抗ＣＤ３抗体は、モノクローナル抗体、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体であり得る。マスク抗ＣＤ３抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、（Ｆａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ＴａＦｖ、ダイアボディ、ｂｓＤｂ、ｓｃＤｂ、ＤＡＲＴ、ＢｉＴＥ、またはＶＨＨ断片であり得る。あるいは、マスク抗ＣＤ３抗体は、完全長抗体、例えば、本明細書に定義されるインタクトなＩｇＧ抗体（例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体）、または他の抗体クラスもしくはアイソタイプであり得る。
【０１０６】
１．マスキング部分（ＭＭ）
いくつかの実施形態では、マスク抗ＣＤ３抗体は、処理されたヒトＣＤ３ε（すなわち、その２１のアミノ酸シグナル配列を有さないヒトＣＤ３ε）の初めから２７のアミノ酸残基に対応する、配列番号１の少なくともアミノ酸残基１〜３のアミノ酸配列を含むマスキング部分（ＭＭ）を含むポリペプチドマスクを有する。したがって、ＭＭは、配列番号１のアミノ酸残基１〜３、１〜４、１〜５、１〜６、１〜７、１〜８、１〜９、１〜１０、１〜１１、１〜１２、１〜１３、１〜１４、１〜１５、１〜１６、１〜１７、１〜１８、１〜１９、１〜２０、１〜２１、１〜２２、１〜２３、１〜２４、１〜２５、１〜２６、もしくは１〜２７、またはそのＮ末端環化グルタミン誘導体（例えば、配列番号１の位置１に５−オキソピロリジン−２−カルボン酸（ＰＣＡ）（ピログルタミン酸塩、ピログルタミン酸、５−オキソプロリン、またはピドル酸とも称される）残基を有するＭＭを含むポリペプチドマスク）を含み得る。前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＭＭは、配列番号１及び５２〜１０３のいずれか1つの１位にＰＣＡ残基を含み得る。例えば、ＭＭは、１位のグルタミン残基がＮ末端環化グルタミンで置換され、アミノ酸配列がＰＣＡ−Ｄ−Ｇである、配列番号１のアミノ酸残基１〜３を含むことができる。ＭＭは、（ＭＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、抗ＣＤ３抗体に対して位置付けられ得る。場合によっては、ＭＭは、切断可能な部分（ＣＭ）及び／またはリンカー部分（ＬＭ）等の非天然ＣＤ３ポリペプチド配列によって、一方の端（すなわち、Ｃ末端の端）で、直接または間接的に伸長される。
【０１０７】
２．切断可能な部分（ＣＭ）
上述のように、マスク抗ＣＤ３抗体は、ＭＭ及び切断可能な部分（ＣＭ）の両方を有するポリペプチドマスクを有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＭは、プロテアーゼ等の酵素によって切断することができるアミノ酸配列を含有する。他の実施形態では、ＣＭは、還元によって切断することができるシステイン−システインジスルフィド結合を提供する。さらなる実施形態では、ＣＭは、酸性ｐＨ環境の存在下で切断される酸に不安定なリンカーを提供する。さらに他の実施形態では、ＣＭは、光分解によって活性化可能である光分解基質を提供する。
【０１０８】
したがって、ＣＭを有するポリペプチドマスクを含むマスク抗ＣＤ３抗体は、切断状態または切断されていない状態のいずれかで存在し得る。本明細書で使用されるとき、切断状態という用語は、例えば、プロテアーゼによるＣＭの修飾、ＣＭのシステイン−システインジスルフィド結合の還元、及び／または光活性化の後の抗ＣＤ３抗体の状態を指す。本明細書で使用されるとき、切断されていない状態という用語は、たとえばプロテアーゼによるＣＭの切断の不在下、ＣＭのシステイン−システインジスルフィド結合の還元の不在下、酸性ｐＨ環境の不在下（例えば、中性または塩基性ｐＨ環境）、及び／または光の不在下での抗ＣＤ３抗体の状態を指す。いくつかの実施形態では、切断された抗ＣＤ３抗体が、例えば、プロテアーゼによるＣＭの切断、少なくともＭＭの放出をもたらすため、ＭＭを欠失し得ることは、当業者であれば明らかであろう。それ故に、マスク抗ＣＤ３抗体が切断されていない状態であるとき、抗体の結合ドメインがＣＤ３標的分子から有効にマスクされるため、マスク抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３への結合の低下を示し得る。切断状態では、抗ＣＤ３抗体は、抗体の結合ドメインがポリペプチドマスクのＭＭによってもはや阻害し得ないため、その切断されていない状態であり得る抗体よりもＣＤ３に対してより高い親和性を示し得る。
【０１０９】
ＣＭが酵素（例えば、プロテアーゼ）によって切断することができ、マスク抗ＣＤ３抗体がＴＤＢであるとき、酵素は、組織中でＴＤＢの所望の標的と共局在化されるプロテアーゼに基づいて選択され得る。様々な異なる状態は、対象となる標的がプロテアーゼと共局在化されることが知られており、プロテアーゼの基質が当該技術分野で知られている。癌の例では、標的組織は、癌組織、具体的には、固形腫瘍の癌組織であり得る。固形腫瘍等の多くの癌において既知の基質を有するプロテアーゼの増加したレベルが、当該技術分野で知られている（例えば、Ｌａ  Ｒｏｃｃａ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ．９０（７）：１４１４−１４２１，２００４及びＬｏｐｅｚ−Ｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．７：８００−８０８，２００７を参照されたい）。例示的なＣＭには、ＷＯ２０１０／０８１１７３、ＷＯ２００９／０２５８４６、ＷＯ２０１０／０９６８３８において特定される酵素（例えば、プロテアーゼ）のうちの１つ以上、及び／または表１中の下に列挙される以下の酵素のうちの１つ以上によって切断可能である基質が含まれるが、これらに限定されない。
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【０１１０】
あるいはまたは加えて、マスク抗ＣＤ３抗体は、システイン対のジスルフィド結合を含み、それ故に、還元剤によって切断可能である、ＣＭを含み得る。これらには、固形腫瘍の組織またはその周辺に大量に存在し得る、グルタチオン（ＧＳＨ）、チオレドキシン、ＮＡＤＰＨ、フラビン、アスコルビン酸塩等の細胞性還元剤が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１１】
他の実施形態では、マスク抗ＣＤ３抗体は、ＰＣＴ公開ＷＯ２００６／１０８０５２（これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される、酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン、イミノ、エステル、またはアミド基）を含み、それ故に、酸性ｐＨ環境の存在下で切断可能であるＣＭを含み得る。これには、細胞のリソソーム中または腫瘍微環境中に存在し得る酸性ｐＨ環境を含むが、これに限定されない。
【０１１２】
ＣＭは、（ＭＭ）−（ＣＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、抗ＣＤ３抗体及びＭＭに対して位置付けられ得る。
【０１１３】
他の実施形態では、マスク抗ＣＤ３抗体は、そのポリペプチドマスク内に１つ以上（例えば、２つまたは３つもしくはそれ以上）の異なるＣＭを含み得る。
【０１１４】
３．リンカー部分（ＬＭ）
上述のように、マスク抗ＣＤ３抗体は、ＭＭ及びリンカー部分（ＬＭ）の両方、またはあるいは、３つすべての部分（すなわち、ＭＭ、ＬＭ、及びＣＭ）を有するポリペプチドマスクを含み得る。本明細書に記載されるポリペプチドマスクで用いるのに好適なＬＭは、マスクに、抗ＣＤ３抗体のＣＤ３への結合の阻害の度合いを促進または調節する柔軟性及び／または長さを提供するものである。かかるＬＭはまた、柔軟性リンカーとも称され得る。好適なＬＭは、容易に選択され得、１つのアミノ酸（例えば、１つのグリシン（Ｇ）または１つのセリン（Ｓ）残基）から３０のアミノ酸（例えば、ＧＳ反復配列を含むＬＭ）等の異なる好適な長さのものであり得る。ＬＭは、好ましくは、１つを超えるアミノ酸長さ（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０もしくはそれ以上のアミノ酸長さ）である。場合によっては、ＬＭは、５〜２４のアミノ酸長さ、例えば、５〜１５のアミノ酸長さであり得る。ＬＭは、Ｇ及び／またはＳ含量（すなわち、Ｇ／ＳリッチなＬＭ）が高く、ＧＳ反復を含み得る。例えば、ＬＭは、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ、グリシン−セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ及び（ＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは少なくとも１つの整数である）を含む）、グリシン−アラニンポリマー、アラニン−セリンポリマー、及び当該技術分野で周知の他の柔軟性リンカーの組み合わせを含み得る。グリシン及びグリシン−セリンポリマーは、比較的構造化されておらず、したがって、抗ＣＤ３抗体に、ポリペプチドマスクのＭＭ成分を間接または直接連結させる中性ＬＭとしての役割を果たし得る。グリシンは、アラニンよりもさらにフィー−プシースペースに有意にアクセスし、より長い側鎖を有する残基ほど制限がない（例えば、Ｓｃｈｅｒａｇａ．Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１１１７３−１４２，１９９２を参照されたい）。例示的な柔軟性リンカーとしては、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ等が挙げられるが、これらに限定されない。当業者は、ポリペプチドマスクの設計が完全にまたは部分的に柔軟であるＬＭを含み得ることを認識されよう。例えば、ＬＭは、あまり柔軟性のない構造を付与して、ＣＤ３結合の阻害の所望の度合いを示すマスク抗ＣＤ３抗体を得る柔軟な部分及び１つ以上の部分を含み得、ＬＭは、例えば、以下に詳述されるファージ結合ＥＬＩＳＡを用いて評価され得る。
【０１１５】
ポリペプチドマスクがＣＭを含まないとき、ＬＭは、（ＭＭ）−（ＬＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、抗ＣＤ３抗体及びＭＭに対して位置付けられ得る。ポリペプチドマスクがＣＭを含まないとき、ＬＭは、（ＭＭ）−（ＬＭ）−（ＣＭ）−（抗ＣＤ３抗体）または（ＭＭ）−（ＣＭ）−（ＬＭ）−（抗ＣＤ３抗体）として、Ｎ末端からＣ末端の方向に、抗ＣＤ３抗体、ＭＭ、及びＣＭに対して位置付けられ得る。
【０１１６】
他の実施形態では、マスク抗ＣＤ３抗体は、そのポリペプチドマスク内に１つ以上（例えば、２つまたは３つもしくはそれ以上）の異なるＣＭを含み得る。
【０１１７】
上記の実施形態のうちのいずれか１つによるマスク抗ＣＤ３抗体は、以下の項４〜１０に記載される特長のうちのいずれかを、単独でまたは組み合わせて組み込むことができる。
【０１１８】
４．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるマスク抗−ＣＤ３抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、］１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。場合によっては、低いＫｄ値は、抗ＣＤ３抗体からのポリペプチドマスクの除去の際にのみ観察される。
【０１１９】
一実施形態では、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的とする抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原とＦａｂを平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートと結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、室温（およそ２３℃）で２〜５時間にわたりＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンでブロックした。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的とするＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における、抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）と混合する。その後、目的とするＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）続けて、平衡に達することを確実にすることができる。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。次いで溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥してから、１５０μｌ／ウェルのシンチラート（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートを、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイでの使用に選択する。
【０１２０】
別の実施形態によると、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用したアッセイは、２５℃で、約１０の応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて行われる。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給者の指示書に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）になるまで希釈した後に、５μＬ／分の流量で注入して、およそ１０応答単位（ＲＵ）のカップリングしたタンパク質を得る。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基をブロックする。動態測定のために、Ｆａｂ（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）の２倍段階希釈物が、２５℃及びおよそ２５μｌ／分の流速で、０．０５％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入される。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な１対１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラムと解離センサグラムとを同時に当てはめることによって計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）を比率ｋｏｎ／ｋｏｆｆとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記表面プラズモン共鳴アッセイによるオンレートが１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オンレートは、ストップトフローを備えた分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、または撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定される場合に、増加する抗原濃度の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ中２０ｎＭの抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する蛍光消光技法を使用して決定することができる。
【０１２１】
５．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるマスク抗ＣＤ３抗体は、抗体断片であり得る。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ＴａＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、ｂｓＤｂ、ｓｃＤｂ、ＤＡＲＴ、ＢｉＴＥ、及びＶＨＨ断片、ならびに下述の他の断片が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１２２】
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもまた、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０１２３】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部、または軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部を含む、抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ例えば、米国特許第６，２４８，５１６  Ｂ１号を参照されたい）。
【０１２４】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質消化、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない、様々な技法によって作製することができる。
【０１２５】
６．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるマスク抗ＣＤ３抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サル由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１２６】
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減する一方で、親非ヒト抗体の特異性及び親和性は保持するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、そのＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）は、非ヒト抗体に由来し、そのＦＲ（またはそれらの部分）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または改善するように、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。
【０１２７】
ヒト化抗体及びそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングを記載する）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載する）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載する）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記載する）にさらに記載されている。
【０１２８】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域としては、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異された）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２９】
７．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるマスク抗ＣＤ３抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生され得る。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０１３０】
ヒト抗体は、抗原投与に応答してヒト可変領域を有するインタクトなヒト抗体またはインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在するか、もしくは動物の染色体にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する）、米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する）、米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する）、米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する）も参照されたい。かかる動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに修飾され得る。
【０１３１】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株について説明されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体も、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）についても、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１３２】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。その後、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が以下に記載されている。
【０１３３】
８．ライブラリ由来抗体
本発明のマスク抗ＣＤ３抗体は、上述のように、コンビナトリアルライブラリを、所望の活性（単数または複数）を有する抗ＣＤ３抗体についてスクリーニングし、その後、ＶＨまたはＶＬドメインの特定された抗ＣＤ３抗体をポリペプチドマスクで連結することによって、生成されてもよい。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための多様な方法が、当該技術分野で既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）で概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０１３４】
ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別個にクローン化され、ファージライブラリ中で無作為に組み換えられ、それは次いでＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、抗体断片を一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとしてディスプレイする。免疫化源由来のライブラリは、ハイブリドーマの構築を必要とすることなく、免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブレパートリーは、クローン化され（例えば、ヒトから）、いかなる免疫化も伴わずに、幅広い非自己抗原また自己抗原に対する抗体の単一の源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、ナイーブライブラリは、幹細胞から再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロで再配列を達成することによって合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリについて記載している特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号及び米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０１３５】
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされ、これらの抗体を、上述のポリペプチドマスクと連結させて、本発明のマスク抗ＣＤ３抗体を生成し得る。
【０１３６】
９．多重特異性抗体
上記の態様のうちのいずれか１つにおいて、本明細書に提供されるマスク抗ＣＤ３抗体は、多重特異性抗体、例えば、Ｔ細胞依存性二重特異性（ＴＤＢ）抗体等の二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、マスク抗ＣＤ３二重特異性抗体は、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３εまたはＣＤ３γ）の２つの異なるエピトープに結合することができ、ポリペプチドマスクに連結される一方または両方の抗ＣＤ３アームを有し得る。他の実施形態では、結合特異性のうちの一方は、ＣＤ３（例えば、ＣＤ３εまたはＣＤ３γ）に対するものであり、他方は、任意の他の抗原（例えば、第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原、例えば、腫瘍抗原）に対するものである。したがって、マスク抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、表２中に列挙され、米国公開第２０１０／０１１１８５６号に記載される、第２の生物学的分子（例えば、腫瘍抗原）に対する結合特異性を有し得、抗体の抗ＣＤ３アームは、ポリペプチドマスクに連結させることができる。
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【０１３７】
より具体的には、ＣＤ３  ＴＤＢ抗体は、ＣＤ３、ならびにＣＤ２０、ＦｃＲＨ５、ＨＥＲ２、ＬＹＰＤ１、ＬＹ６Ｇ６Ｄ、ＰＭＥＬ１７、ＬＹ６Ｅ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ２２、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＥＤＡＲ、ＧＦＲＡ１、ＭＲＰ４、ＲＥＴ、Ｓｔｅａｐ１、及びＴｅｎＢ２からなる群から選択される第２の生物学的分子に対する結合特異性を有し得る。
【０１３８】
例えば、場合によっては、抗体は、（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む第１の結合ドメインと、ＣＤ２０に結合する第２の結合ドメインと、を含むマスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（マスクＣＤ２０  ＴＤＢ）であり、第１の結合ドメイン（すなわち、抗ＣＤ３結合ドメイン）のＶＨまたはＶＬドメインのいずれかを、上述のポリペプチドマスク等のポリペプチドマスクに連結させる。ＣＤ２０に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含み得る。場合によっては、ＣＤ２０に結合する第２の結合ドメインは、配列番号４４〜４７の配列をそれぞれ含む重鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｈ１、ＦＲ−Ｈ２、ＦＲ−Ｈ３、及びＦＲ−Ｈ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）、及び／または配列番号４８〜５１の配列をそれぞれ含む軽鎖フレームワーク領域ＦＲ−Ｌ１、ＦＲ−Ｌ２、ＦＲ−Ｌ３、及びＦＲ−Ｌ４のうちの少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、もしくは４つ）を含む。場合によっては、ＣＤ２０に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）配列番号２６の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号２７の配列もしくはその配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）と同様のＶＨドメイン及び（ｂ）と同様のＶＬドメイン、を含み得る。
【０１３９】
１０．抗体変異体
ある特定の実施形態では、本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原（例えば腫瘍抗原）に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、例えば、本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましくあり得る。抗体のアミノ酸配列変異は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／またはそこへの挿入、及び／またはその置換が挙げられる。最終構築物に到達するように、欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせることができるが、但し、その最終構築物が、所望の特徴、例えば、抗原結合性を有することを条件とする。
【０１４０】
ａ．置換、挿入、及び欠失変異体
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有するマスク抗ＣＤ３抗体変異体が提供される。置換型変異誘発の目的とする部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。保存的置換は、表３において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表３において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、その産物が、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについて、スクリーニングされてもよい。
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アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って群分けされ得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
【０１４１】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのあるメンバーと別のクラスとの交換を伴う。
【０１４２】
ある種類の置換型変異体は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらなる試験のために選択される結果として生じる変異体（複数可）は、親抗体と比較したある特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修飾（例えば、改善）を有し、及び／または実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有する。例示的な置換型変異体は、例えば、本明細書に記載の技法等のファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して好都合に生成され得る親和性成熟抗体である。簡潔には、１つ以上のＨＶＲ残基が変異され、変異体抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１４３】
改変（例えば、置換）がＨＶＲに行われて、例えば、抗体親和性を改善することができる。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を経るコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／または抗原と接触する残基において行われてもよく、結果として生じる変異体ＶＨまたはＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリの構築及びそれからの再選択による親和性成熟については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のうちのいずれかによって、成熟させるために選択された可変遺伝子に導入される。その後、二次ライブラリが作製される。その後、このライブラリがスクリーニングされて、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を特定する。多様性を導入する別の方法は、数個のＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６個の残基）が無作為化されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的とされることが多い。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的改変（例えば、本明細書に提供される保存的置換）がＨＶＲで行われ得る。かかる改変は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であってもよい。上述の変異体ＶＨ配列及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、改変されないか、または１つ、２つ、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有する。
【０１４５】
変異誘発のために標的とされ得る抗体の残基または領域の特定に有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって説明される「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基または標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）が特定され、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗体と抗原との相互作用に影響が及ぼされたかを決定する。さらなる置換が最初の置換に対する機能感受性を示すアミノ酸位置に導入され得る。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接する残基が置換の候補として標的とされ得るか、または排除され得る。変異体はスクリーニングされて、それらが所望の特性を有するかどうかを決定することができる。類似の戦略もまた、１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、または１０もしくはそれ以上の）指向性置換突然変異等の変異誘発を耐容し得るまたは有効であり得るマスク抗ＣＤ３抗体のポリペプチドマスクの残基（複数可）を特定するために使用され得る。
【０１４６】
アミノ酸配列挿入としては、長さが１残基から１００以上の残基の範囲を含有するポリペプチドの範囲であるアミノ末端及び／またはカルボキシル末端の融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体には、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端もしくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増加させる。
【０１４７】
ｂ．グリコシル化変異体
ある特定の実施形態では、本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原（例えば腫瘍抗原）に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、例えば、本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化させられ得る。本発明のマスク抗ＣＤ３抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位を作り出すかまたは除去するように、アミノ酸配列を変化させることによって、簡便に達成することができる。
【０１４８】
この抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が改変され得る。哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、一般にＮ結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖としては、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが挙げられ得る。いくつかの実施形態では、ある特定の特性が改善された抗体変異体を作製するために、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が行われ得る。
【０１４９】
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合されたフコースを欠く炭水化物構造を有するマスク抗ＣＤ３抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合したすべての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間にも位置してもよい。かかるフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異体に関する公報の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８  Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ２００４／０５６３１２  Ａ１、Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、特に実施例１１）、及びアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照されたい）が挙げられる。
【０１５０】
二分されたオリゴ糖類を有する、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、マスク抗ＣＤ３抗体変異体がさらに提供される。かかる抗体変異体は、低減されたフコシル化及び／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。かかる抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１５１】
ｃ．Ｆｃ領域変異体
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾は、本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原、例えば腫瘍抗原に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、たとえば本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）のＦｃ領域に導入され、それによって、Ｆｃ領域変異体を生成し得る。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含み得る。
【０１５２】
ある特定の実施形態では、本発明は、すべてではなく、いくつかのエフェクター機能を保有し、それにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、さらにある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣ等）が不必要であるか、または有害である用途に対して望ましい候補となる、マスク抗ＣＤ３抗体変異体を企図する。インビトロ及び／またはインビボ細胞毒性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（故にＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４貢の表３に要約されている。目的とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定例が、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法が用いられ得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的にまたは追加的に、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示の動物モデルで評価され得る。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができず、それ故にＣＤＣ活性を欠くことを確認することができる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ  Ｂｌｏｏｄ．１０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の判定も、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０１５３】
低減したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号、同第８，２１９，１４９号）。かかるＦｃ突然変異体は、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸２６５位、２６９位、２７０位、２９７位、及び３２７位のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号及び同第８，２１９，１４９号）。
【０１５４】
ＦｃＲへの結合が改善または低減されたある特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、改変された（すなわち、改善したかまたは減弱したかのいずれかである）Ｃ１ｑ結合性及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす改変が、Ｆｃ領域においてなされる。
【０１５７】
増加した半減期、及び母体のＩｇＧ類を胎児に移行させる役割を負う新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））に対する改善した結合性を伴う抗体が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合性を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域をそこに含む。かかるＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０１５８】
Ｆｃ領域変異体の他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
【０１５９】
いくつかの態様では、マスク抗ＣＤ３抗体（例えば、マスクＴＤＢ）は、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含むＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含むマスク抗ＣＤ３抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む第１の結合ドメインを含む抗ＣＤ３アームと、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、を含む第２の結合ドメインを含む抗ＣＤ２０アームと、抗ＣＤ３アームの結合ドメインのＶＨまたはＶＬドメインに連結されるポリペプチドマスクと、を含む。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含むマスク抗ＣＤ３抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む第１の結合ドメインを含む抗ＣＤ３アームと、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む第２の結合ドメインを含む抗ＣＤ２０アームと、抗ＣＤ３アームの結合ドメインのＶＨまたはＶＬドメインに連結されるポリペプチドマスクと、を含む。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含むマスク抗ＣＤ３抗体は、１つ以上の重鎖定常ドメインを含み、該１つ以上の重鎖定常ドメインは、第１のＣＨ１（ＣＨ１１）ドメイン、第１のＣＨ２（ＣＨ２１）ドメイン、第１のＣＨ３（ＣＨ３１）ドメイン、第２のＣＨ１（ＣＨ１２）ドメイン、第２のＣＨ２（ＣＨ２２）ドメイン、及び第２のＣＨ３（ＣＨ３２）ドメインから選択される。いくつかの事例では、１つ以上の重鎖定常ドメインのうちの少なくとも１つは、別の重鎖定常ドメインと対になる。いくつかの事例では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ３１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ３２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。いくつかの事例では、ＣＨ３１及びＣＨ３２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの事例では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは各々、突起または空隙を含み、ＣＨ２１ドメイン内の該突起または空隙は、それぞれ、ＣＨ２２ドメイン内の空隙または突起中に位置付けることができる。他の事例では、ＣＨ２１及びＣＨ２２ドメインは、該突起と空隙との間の境界面において接触する。いくつかの事例では、抗ＣＤ３抗体は、ＩｇＧ１抗体である。
【０１６２】
他の実施形態では、Ｎ２９７Ｇ突然変異を含むマスク抗ＣＤ３抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む第１の結合ドメインを含む抗ＣＤ３アームと、（ａ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む第２の結合ドメインを含む抗ＣＤ２０アームと、抗ＣＤ３アームの結合ドメインのＶＨまたはＶＬドメインに連結されるポリペプチドマスクと、を含み、（ａ）抗ＣＤ３アームは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含み、（ｂ）抗ＣＤ２０アームは、Ｔ３６６Ｗ及びＮ２９７Ｇ置換突然変異を含む。
【０１６３】
ｄ．システイン操作された抗体変異体
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作された抗体、例えば、「チオマブ（ｔｈｉｏＭＡｂ）」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体の利用しやすい部位において生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性のチオール基がそれにより抗体の接触可能部位に位置付けられ、それを使用して、薬物部分またはリンカー−薬物部分等の他の部分に抗体を複合体化して、本明細書にさらに記載される免疫複合体を作製することができる。ある特定の実施形態では、以下の残基、軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）のうちの任意の１つ以上が、システインで置換されてもよい。システイン操作された抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように作製することができる。
【０１６４】
ｅ．抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原（例えば腫瘍抗原）に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、例えば、本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）は、当該技術分野で既知であり、容易に利用可能である追加の非タンパク質性部分を含有するためにさらに修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーを含むが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐状または非分岐状であり得る。本抗体に結合したポリマーの数は異なり得、１つより多くのポリマーが結合している場合、それらは、同じ分子または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、改善される本抗体の具体的な特性または機能、本抗体の誘導体が規定の条件下である療法で使用されるか等を含むが、これらに限定されない検討事項に基づいて決定され得る。
【０１６５】
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、マスク抗ＣＤ３抗体及び非タンパク質性部分の複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞を傷つけないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分に近位の細胞を死滅させる温度まで加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
【０１６６】
Ｂ．組み換え法及び組成物
本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原（例えば腫瘍抗原）に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、例えば、本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え法及び組成物を用いて生成され得る。一実施形態では、本明細書に記載されるマスク抗ＣＤ３抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得、ポリペプチドマスクは、ＶＬまたはＶＨドメインのいずれかと同じオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）内でコードされる。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクターであり、ポリペプチドマスクが、ＶＬドメインもしくはＶＨドメインのいずれかと同じＯＲＦ内でコードされる、ベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターであって、ポリペプチドマスクが、ＶＬドメインもしくはＶＨドメインのいずれかと同じＯＲＦ内でコードされる、第１のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核生物のもの、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、マスク抗ＣＤ３抗体の作製方法が提供され、該方法は、上に提供されるように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、及び任意に、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することと、を含む。
【０１６７】
マスク抗ＣＤ３抗体の組み換え産生のために、例えば、上述のもの等の、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。かかる核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定され得る。
【０１６８】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現のための好適な宿主細胞は、本明細書に記載される原核生物細胞または真核生物細胞を含む。例えば、マスク抗ＣＤ３抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされないときに、細菌内で産生され得る。細菌内での抗体断片の発現及びポリペプチドについては、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉ内での抗体断片の発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、２４５〜２５４頁も参照されたい。）発現後、マスク抗ＣＤ３抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製されてもよい。
【０１６９】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主であり、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有するマスク抗ＣＤ３抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株を含む。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０１７０】
グリコシル化マスク抗ＣＤ３抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にＳｐｏｎｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０１７１】
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するための、ＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載する）を参照されたい。
【０１７２】
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が、有用である場合がある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚部癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ  ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照されたい。
【０１７３】
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原（例えば腫瘍抗原）に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、例えば、本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）は、当該技術分野で既知の様々なアッセイによってそれらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性を特徴づけられ得る。
【０１７４】
１．結合アッセイ及び競合アッセイ
一態様では、本発明のマスク抗ＣＤ３抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット等の既知の方法によって、その結合活性に関して試験される。
【０１７５】
別の態様では、競合アッセイを用いて、ＣＤ３への結合について本発明の抗ＣＤ３抗体と競合する抗体が特定され得る。ある特定の実施形態では、かかる競合抗体は、本発明の抗ＣＤ３抗体が結合するものと同じエピトープ（例えば、直鎖または立体構造のエピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，」ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
【０１７６】
例示的な競合アッセイでは、固定化されたＣＤ３が、ＣＤ３に結合する第１の標識抗体と、ＣＤ３への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体とを含む溶液中で、インキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＣＤ３を、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体のＣＤ３への結合を許容する条件下でのインキュベーションの後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化されたＣＤ３に関連する標識の量を測定する。固定化されたＣＤ３に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第２の抗体がＣＤ３への結合について第１の抗体と競合していることを示す。例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．Ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０１７７】
２．活性アッセイ
一態様では、所望の生物学的活性を有するマスク抗ＣＤ３抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性には、例えば、所望の度合い（すなわち、ＣＤ３結合なしから低Ｋｄを有するＣＤ３結合の範囲に及ぶか、またはＣＤ３についてはマスク抗ＣＤ３抗体の好ましい中間体親和性）で、ＣＤ３（例えば、Ｔ細胞の表面上のＣＤ３）またはそのペプチド断片に、インビボ、インビトロ、またはエキソビボのいずれかで結合することが含まれ得る。
【０１７８】
本発明のマスクＴＤＢの場合は、望ましい生物学的活性はまた、例えば、ポリペプチドマスクが切断可能である場合、切断されていない状態ではなく切断状態でエフェクター細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）の活性化）及び／または及び／またはエフェクター細胞集団の拡張（すなわち、Ｔ細胞計数の増加）を含み得る。ポリペプチドマスクが切断できない場合、望ましい生物学的活性は、例えば、ポリペプチドマスクの不在下での抗ＣＤ３抗体のかかる活性と比較して、エフェクター細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）の活性化）の低減もしくは阻害及び／またはエフェクター細胞集団の拡張（すなわち、Ｔ細胞計数の増加）を含み得る。他の望ましい活性は、例えば、ポリペプチドマスクが切断可能である場合、切断状態で抗ＣＤ３抗体のかかる活性と比較して、切断されない状態で、標的細胞集団の減少またはその低下の阻害（すなわち、それらの細胞表面上に第２の生物学的分子を発現する細胞の集団の減少）及び／または標的細胞を死滅させることを含み得る。ポリペプチドマスクが切断できない場合、望ましい活性は、例えば、ポリペプチドマスクの不在下での抗ＣＤ３抗体のかかる活性と比較して、標的細胞集団の減少またはその低下の阻害（すなわち、それらの細胞表面上に第２の生物学的分子を発現する細胞の集団の減少）及び／または標的細胞を死滅させることを含み得る。他の例では、標的細胞集団の減少及び／またはマスク抗ＣＤ３抗体による標的細胞の死滅は、エフェクター細胞の活性化（例えば、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）の活性化）及び／またはエフェクター細胞集団の拡張（すなわち、Ｔ細胞計数の増加）がない場合に生じる。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、本発明のマスク抗ＣＤ３抗体は、本明細書において以下の実施例において詳述される、かかる生物学的活性について試験される。
【０１８０】
Ｄ．免疫複合体及び標識された抗体
本発明は、本明細書において、化学治療剤もしくは薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体等の１つ以上の細胞傷害性薬剤に複合体化されるマスク抗ＣＤ３抗体を含む、免疫複合体も提供する。
【０１８１】
一実施形態では、免疫複合体は、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ  ０  ４２５  ２３５  Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）等のオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号、同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照されたい）、ダウノマイシンまたはドキソルビシン等のアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセル等のタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５を含むがこれらに限定されない、１つ以上の薬物にマスク抗ＣＤ３抗体が複合された抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）である。
【０１８２】
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａからの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンを含むが、これらに限定されない、酵素的活性毒素またはその断片に複合体化される、本明細書に記載されるマスク抗ＣＤ３抗体を含む。
【０１８３】
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に複合体化されて放射性複合体を形成する、本明細書に記載されるマスク抗ＣＤ３抗体を含む。多様な放射性同位体が、放射性複合体の産生のために利用可能である。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が含まれる。放射性複合体が検出のために使用されるとき、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または再びヨード−１２３、ヨード−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、もしくは鉄等の核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても既知である）のためのスピン標識を含み得る。
【０１８４】
本発明のマスク抗ＣＤ３抗体及び細胞傷害性薬剤の複合体は、Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジサクシニミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネート等）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）等の多様な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体に複合体化するための例示的キレート剤である。例えば、ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。カップリング剤は、細胞内において細胞傷害性薬物の放出を容易にするために可逆的であり得る。例えば、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１，１９９２及び米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい。
【０１８５】
本明細書のイムヌオ複合体またはＡＤＣは、市販される（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むがこれらに限定されない、架橋剤試薬で調製されたかかる複合体を明白に企図するが、これらに限定されない。
【０１８６】
ある特定の実施形態では、標識されたマスク抗ＣＤ３抗体が提供される。標識としては、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、電子密度の高い標識、化学発光標識、及び放射性標識等）、ならびに間接的に、例えば、酵素反応または分子相互作用により検出される酵素またはリガンド等の部分が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な標識としては、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルのルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン類、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、複素環式オキシダーゼ、例えば、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、ＨＲＰ等の、染料前駆体を酸化するために過酸化水素を利用する酵素と結合したもの、ラクトペルオキシダーゼまたはミクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識物質、バクテリオファージ標識物質、安定フリーラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８７】
Ｅ．薬学的製剤
本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原（例えば腫瘍抗原）に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、例えば、本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）の薬学的製剤は、所望の純度を有するかかる抗体を１つ以上の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と凍結乾燥製剤または水溶液の形態で混合することによって調製することができる。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに非毒性であり、それらとしては、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸及びメチオニン；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；単糖、二糖、及び他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、またはデキストリン；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／または非イオン界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の介在性薬物分散剤をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０１８８】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものを含み、後者の製剤は、ヒスチジン−アセテート緩衝剤を含む。
【０１８９】
本明細書の製剤はまた、治療されている特定の適応症の必要に応じて、１つを上回る活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。例えば、追加の治療剤（例えば、化学療法剤、細胞傷害性剤、成長阻害剤、及び／または抗ホルモン剤、例えば、本明細書において上に言及されたもの）をさらに提供することが望ましくあり得る。かかる活性成分は、好適には、意図される目的に有効な量で、組み合わせで存在する。
【０１９０】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に封入され得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０１９１】
徐放性調製物を調製してもよい。持続放出調製物の好適な例としては、本抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【０１９２】
インビボ投与に使用される製剤は、一般に、滅菌のものである。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜を介する濾過によって容易に達成され得る。
【０１９３】
Ｆ．治療法及び組成物
本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原（例えば腫瘍抗原）に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、例えば、本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）のうちのいずれかは、治療方法で使用され得る。
【０１９４】
一態様では、医薬品として使用するためのマスク抗ＣＤ３抗体が提供される。さらなる態様では、細胞増殖性障害（例えば、癌）または自己免疫性障害（例えば、関節炎）の治療またはその進行の遅延において使用するためのマスク抗ＣＤ３抗体が提供される。ある特定の実施形態では、治療方法において使用するためのマスク抗ＣＤ３抗体が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体を治療する方法において使用するためのマスク抗ＣＤ３抗体を提供し、本方法は、個体に、有効量のマスク抗ＣＤ３抗体を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、本発明は、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体の免疫機能の増強において使用するためのマスク抗ＣＤ３抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体の免疫機能の増強において使用するためのマスク抗ＣＤ３抗体を提供し、本方法は、個体に、有効量のマスク抗ＣＤ３抗体を投与し、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、標的細胞（例えば、本発明のマスクＴＤＢによって認識される第２の生物学的分子を発現する細胞）集団を減少させる、及び／または標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させることを含む。上記実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０１９５】
さらなる態様では、本発明は、医薬品の製造または調製におけるマスク抗ＣＤ３抗体の使用を提供する。一実施形態では、医薬品は、細胞増殖性障害（例えば、癌）または自己免疫性障害（例えば、関節炎）の治療のためのものである。さらなる実施形態では、医薬品は、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体に有効量の医薬品を投与することを含む、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を治療する方法において使用するためのものである。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、医薬品は、エフェクター細胞（例えばＴ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、標的細胞（例えば、本発明のマスクＴＤＢによって認識される第２の生物学的分子を発現する細胞）集団を減少させる、及び／または個体における標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させるためのものである。さらなる実施形態では、医薬品は、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体における免疫機能を増強する方法において使用するためのものであり、本方法は、個体に、有効量の医薬品を投与し、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、標的細胞（例えば、本発明のマスクＴＤＢによって認識される第２の生物学的分子を発現する細胞）集団を減少させる、及び／または標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させることを含む。上記実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０１９６】
さらなる態様では、本発明は、細胞増殖性障害（例えば、癌）または自己免疫性障害（例えば、関節炎）を治療するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、このような細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体に、有効量のマスク抗ＣＤ３抗体を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば、以下に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することをさらに含む。上記実施形態のうちのいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０１９７】
さらなる態様では、本発明は、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体において、細胞増殖性障害または自己免疫性障害を有する個体における免疫機能を増強するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、個体に、有効量のマスク抗ＣＤ３抗体を投与し、エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ８＋及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞）を活性化する、エフェクター細胞集団を拡張する（増加させる）、標的細胞（例えば、本発明のマスクＴＤＢによって認識される第２の生物学的分子を発現する細胞）集団を減少させる、及び／または標的細胞（例えば、標的腫瘍細胞）を死滅させることを含む。一実施形態では、「個体」は、ヒトである。
【０１９８】
さらなる態様では、本発明は、例えば、上述の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供されるマスク抗ＣＤ３抗体のうちのいずれかを含む、薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供されるマスク抗ＣＤ３抗体のうちのいずれか及び薬学的に許容される担体を含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供されるマスク抗ＣＤ３抗体のうちのいずれかと、例えば以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
【０１９９】
本発明のマスク抗ＣＤ３抗体は、療法において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与されてもよい。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学治療剤、成長阻害剤、細胞傷害性薬剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、または上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、血小板由来成長因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン、次の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ  ＶＥＧＦ、もしくはＶＥＧＦ受容体（複数可）のうちの１つ以上に結合する抗体等の本発明の抗ＣＤ３抗体以外の抗体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、または別の生物活性もしくは有機化学剤等の他の薬剤である。
【０２００】
本発明のマスク抗ＣＤ３抗体はまた、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせて、単独で、または追加の治療剤とともに使用することもできる。場合によっては、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト、またはＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストであり得る。ＰＤ−１結合アンタゴニストは、例えば、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ−３４７５（ランブロリズマブ）、ＣＴ−０１１（ピジリズマブ）、またはＡＭＰ−２２４であり得る。ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、例えば、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５、またはＭＥＤＩ４７３６であり得る。ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、抗体またはイムノアドヘシンであり得る。
【０２０１】
他の例では、本発明のマスク抗ＣＤ３抗体は、デキサメタゾン等のグルココルチコイドと組み合わせて使用してもよい。上の併用療法のうちのいずれかにおいても、マスク抗ＣＤ３抗体はまた、リツキシマブと組み合わせて使用してもよい。
【０２０２】
かかる併用療法には、組み合わせ投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）及び別個の投与が含まれ、別個の投与の場合、本発明の抗体の投与は、追加の治療剤（複数可）の投与の前、それと同時、及び／またはその後に行うことができる。一実施形態では、マスク抗ＣＤ３抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約１ヶ月以内、または約１週間、２週間、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に生じる。本発明のマスク抗ＣＤ３抗体（例えば、ＣＤ３及び第２の生物学的分子、例えば、細胞表面抗原（例えば腫瘍抗原）に結合する本発明のマスク抗ＣＤ３抗体、例えば、本発明のマスクＴＤＢ抗体またはその変異体）はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０２０３】
本発明の抗体（及び／または任意の追加の治療剤）は、非経口投与、肺内投与、及び鼻腔内投与、ならびに局所治療で所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短時間であるか慢性的であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内または皮下注射等の注射によるものであってもよい。単回投与または種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
【０２０４】
本発明のマスク抗体は、良好な医療行為と一致する様式で、製剤化され、投薬され、及び投与されるだろう。これに関連して考慮する要因には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、及び医師に既知である他の要因を含む。抗体は必然的にではなく任意に、問題の障害を予防または治療するために現在使用される１つ以上の薬剤とともに製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上で考察される他の要因に左右される。これらは一般に、本明細書に記載されるものと同じ投薬量及び投与経路で、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％で、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【０２０５】
疾患の予防または治療に関して、本発明のマスク抗体の適切な投薬量は（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、及び抗体への応答、ならびに主治医の裁量に左右される。抗体は好適に、１回で、または一連の治療にわたって患者に投与される。
【０２０６】
一般的な提案として、ヒトに投与される治療有効量のマスク抗ＣＤ３抗体は、１回以上の投与によるかにかかわらず、約０．０１〜約１００ｍｇ／患者の体重ｋｇの範囲であろう。いくつかの実施形態では、使用されるマスク抗体は、例えば、約０．０１〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２９ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２８ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２７ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２６ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２４ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２２ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１９ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１８ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１７ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１６ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１４ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１２ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１１ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約９ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約８ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約７ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約６ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約４ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．０１〜約２ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１〜約１ｍｇ／ｋｇが毎日投与される。一実施形態では、本明細書に記載されるマスク抗ＣＤ３抗体は、２１日周期の１日目に、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、または約１４００ｍｇの用量でヒトに投与される。用量は、注入物等の、単回用量で、または複数回用量（例えば、２回用量または３回用量）で投与されてもよい。病態に応じて数日間以上にわたって反復投与では、治療は一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるだろう。マスク抗ＣＤ３抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲だろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの１つ以上の用量（またはそれらの任意の組み合わせ）が、患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週、または３週間毎に投与されてもよい（例えば、患者が、約２回〜約２０回、または例えば、約６回用量のマスク抗ＣＤ３抗体を受容するようにする）。より高い初回負荷量、続いて１回以上のより低い用量が、投与されてもよい。この療法の進行は、従来の技法及びアッセイによって容易に監視される。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、これらの方法は、さらなる療法をさらに含み得る。追加の療法は、放射線療法、手術、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、または前述のものの組み合わせであってもよい。さらなる療法は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法の形態であり得る。いくつかの実施形態では、さらなる療法は、小分子酵素阻害剤または抗転移薬の投与である。いくつかの実施形態では、さらなる療法は、副作用制限剤（例えば、治療の副作用の発生及び／または重症度を軽減するよう意図された薬剤、例えば、制嘔吐剤等）の投与である。いくつかの実施形態では、さらなる療法は、放射線療法である。いくつかの実施形態では、さらなる療法は、手術である。いくつかの実施形態では、さらなる療法は、放射線療法と手術との併用である。いくつかの実施形態では、さらなる療法は、ガンマ照射である。いくつかの実施形態では、追加の療法は、上述の治療剤のうちの１つ以上の別個の投与であってもよい。
【０２０８】
Ｇ．製造品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な材料を含有する製造品が提供される。製品は、容器と、容器上のまたは容器に関連するラベルまたは添付文書と、を含む。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル瓶、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、それ自体によって、または別の組成物と組み合わせて、病態の治療、予防、及び／または診断に有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈注射溶液バッグまたは皮下注射針によって貫通可能な栓を有するバイアル瓶であり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明のマスク抗ＣＤ３抗体である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選定した病態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）本発明のマスク抗ＣＤ３抗体を含む組成物をその中に収容した第１の容器、及び（ｂ）さらなる細胞傷害性薬剤、さもなければ治療剤を含む組成物をその中に収容した第２の容器を含み得る。本発明のこの実施形態の製品は、組成物を使用して特定の病態を治療することができることを示す添付文書をさらに含み得る。代替または追加として、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸干渉食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を備える第２（または第３）の容器をさらに備えてもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的観点及びユーザの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。
【０２０９】
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供される概要を仮定して、種々の他の実施形態が実践され得ることが理解される。
【０２１０】
実施例１．材料及び方法
ファージ結合ＥＬＩＳＡ
Ｎ末端グルタミン残基を環化して、ピログルタミン酸塩（ＰＣＡ）残基を生成するために、アッセイの前に、すべてのＰＥＧ沈殿ファージ調製物をＱ−シクラーゼで処理した。ファージ調製物を、これまでに試験した濃度に希釈して、非マスク抗ＣＤ３抗体ファージに対して４５０ｎｍで、約１．０  ＯＤのＥＬＩＳＡ結合シグナルを得た。
【０２１１】
トロンビンで処理した試料については、トロンビンＣｌｅｎＣｌｅａｖｅキット（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、番号ＲＥＣＯＭＴ）を、キットの取扱説明書に従って使用した。トロンビンＣｌｅａｎＣｌｅａｖｅは、５０％（ｖ／ｖ）懸濁液のトロンビン−アガロースである。樹脂スラリーを、切断緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ８．０、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２）で３回洗浄し、各洗浄後に、５００ｘｇ遠心分離で懸濁液を除去した。ペレット樹脂を、１倍の切断緩衝液中で再懸濁し、樹脂１：５を希釈した。
【０２１２】
マスク抗ＣＤ３ファージ変異体を、１０．０ｍｌの一晩培養から精製した。２ラウンドのＰＥＧ沈殿後、ペレットファージを、１倍の切断緩衝液中で再懸濁し、２６８ｎｍで４．０のＯＤリーディングを得た。切断反応のために、２００μｌのトロンビンアガローススラリーを、微小遠心管中で、２００μｌの精製ファージに添加した。混合物を、穏やかに振盪しながら、３７℃で一晩インキュベートした。ビーズを遠心分離によって除去し、ファージを含有する残りの上清を、アッセイプレートに添加した。
【０２１３】
ＣＤ３ε１−２７Ｆｃ（ＣＤ３ε−Ｆｃ；例えば、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６１／９４９，９５０を参照されたい）を、Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレート上に４℃でＰＢＳ中で一晩コーティングした。ＰＢＳ  Ｔｗｅｅｎ（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を含有するＰＢＳ）中の２％  ミルクで１時間遮断した後、ファージ上にディスプレイされたＰＥＧ精製したマスク抗ＣＤ３抗体変異体を、トロンビンによる前処理の前またはその後で結合した。１時間後、マイクロタイタープレートを３回洗浄し、ＨＲＰ複合化抗Ｍ１３抗体でインキュベートした。結合シグナルは、軽鎖のＣ末端上にディスプレイされたｇＤタグに結合することによって評価される、ディスプレイのために規格化された。
【０２１４】
ヒトＴ細胞活性化アッセイ
ヘパリン処理されたシリンジ中でヒト血液を採取し、製造業によって推薦される、Ｌｅｕｃｏｓｅｐ（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ，Ｃａｔ．Ｎｏ．２２７２９０Ｐ）及びＦｉｃｏｌｌ  Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号９５０３８−１６８）を用いて、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。細胞を、ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号３５０５０−０６１）を補充した１０％ＦＢＳ、ペニシリン、及びストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１５１４０−１２２）を含有するＲＰＭＩ培地中で洗浄し、約２００，０００個の浮遊細胞を９６ウェルＵ底プレートに追加した。１つの抗ＣＤ２０アーム及び１つの抗ＣＤ３アームを有するＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（ＣＤ２０  ＴＤＢ）を、以前に記載されているように、ヒトＩｇＧ１としてノブ−イントゥ−ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）形式で完全長抗体として産生した（例えば、Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６−３５，１９９７及びＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６１／９４９，９５０を参照されたい）。ＣＤ２０  ＴＤＢを、１０〜０．０１μｇ／ｍｌでウェルに添加した。約２０時間培養した後、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液（０．５％  ＢＳＡ、ＰＢＳ中０．０５％のアジ化ナトリウム）で細胞を洗浄した。次いで、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液中で抗ＣＤ６９−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５５５３０）、抗ＣＤ２５−ＰＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５５４３２）、及び抗ＣＤ８−ＡＰＣ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５５５３６９）で染色し、１μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を含有する１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中で懸濁した。データをＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で収集した。Ｔ細胞活性化の程度は、ＣＤ８＋Ｔ細胞中のＣＤ６９＋及びＣＤ２５＋集団の割合を比較することによって決定された。
【０２１５】
内因性Ｂ細胞死滅
Ｆｉｃｏｌｌ分離によって健常ドナーの全血からヒトＰＢＭＣを単離した。製造業者の指示書に従ってＭｉｌｔｅｎｙｉキットを用いて、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を分離した。細胞を、加湿標準細胞培養インキュベータにおいて３７℃で、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中で培養した。２００，０００個のＰＢＭＣを、様々な濃度のＣＤ２０  ＴＤＢ抗体（上述の）で４８時間インキュベートした。各アッセイの終了時に、生存Ｂ細胞は、ＦＡＣＳによってＰＩ−ＣＤ１９＋またはＰＩ−ＣＤ２０＋Ｂ細胞としてゲートアウトされ、内部計数対照として反応混合物に追加されるＦＩＴＣビーズを用いて細胞絶対数を得た。細胞死滅の割合（％）を、非ＴＤＢ治療対照に基づいて計算した。活性化Ｔ細胞は、ＣＤ６９及びＣＤ２５表面発現によって検出された。
【０２１６】
実施例２．阻害におけるポリペプチドマスク長さの効果
本明細書に提供され、米国公開第２０１５−０１６６６６１号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）における抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３εのＮ末端に結合する。本明細書に記載される、抗ＣＤ３抗体に対する天然ＣＤ３εのＮ末端配列の係留部分は、Ｔ細胞上のＣＤ３εへの結合から抗ＣＤ３抗体を阻害することができる「ポリペプチドマスク」を形成する。
【０２１７】
図１及び２に示されるように、異なるレベルの阻害は、天然ＣＤ３εのＮ末端配列を含むポリペプチドマスクの成分であるマスキング部分（ＭＭ）の長さを短くしたり、長くしたりすることによってポリペプチドマスクの全体の長さを変えることによって達成され得る。２つの異なる抗ＣＤ３抗体との関連においてＭＭの長さを変える効果を試験した。このために、１〜２７の範囲のアミノ酸残基（図１Ｃ及び２Ｃ；配列番号５２〜７８）のＭＭを有するポリペプチドマスクを、抗ＣＤ３抗体ＳＰ３４（図１Ａ）の重鎖可変（ＶＨ）領域のＮ末端または第２の異なる抗ＣＤ３抗体変異体（図２Ａ）のＶＨ領域のＮ末端のいずれかに連結させた。加えて、１〜２７の範囲のアミノ酸残基のＭＭを有するポリペプチドマスクを、同様に、ＳＰ３４（図１Ｂ）の軽鎖可変（ＶＬ）領域のＮ末端または第２の異なる抗ＣＤ３抗体変異体（図２Ｂ）のＶＬ領域のＮ末端のいずれかに連結させた。ファージミドベクターにおいて生成され、ファージ上に一価提示させた構築物のそれぞれは、ＭＭ成分といずれかの抗体可変ドメインのＮ末端との間にトロンビン切断部位（すなわち、切断可能な部分（ＣＭ））を含んだ。ＣＤ３εへの結合は、上述のように、ファージＥＬＩＳＡを用いて評価した。
【０２１８】
マスクＳＰ３４抗体については、ＶＨ領域がトロンビン切断部位を介して処理されたヒトＣＤ３εの初めから５つの残基のみを含むマスキング部分を有するポリペプチドマスクに連結させた場合に、ＣＤ３ε結合の阻害が、観察された（図１Ａ）。全般に、このマスクをＳＰ３４抗体変異体のＶＬ領域に連結させた場合に、より長いポリペプチドマスクがＣＤ３ε結合を遮断するために必要であった（図１Ｂ）。第２の異なる抗ＣＤ３抗体のマスク変異体については、抗ＣＤ３抗体変異体のＶＬまたはＶＨ領域のいずれかに連結させて処理されたヒトＣＤ３εの初めから５つの残基のみを含むマスキング部分を有するポリペプチドマスクは、ＣＤ３εへの結合を有意に遮断した（図２Ａ及び２Ｂ）。
【０２１９】
すべてのマスク変異体については、ＣＤ３ε結合は、トロンビンによる処理後に再構築した。全般に、より長いポリペプチドマスクは、より有効に除去され、より長いポリペプチドマスクがさらに有効なトロンビン切断を支持することを示唆している。
【０２２０】
実施例３．阻害におけるポリペプチドマスク含量の効果
ＣＤ３εへのファージ提示した抗ＣＤ３抗体結合を阻害するのに必要とされる、Ｎ末端のＣＤ３ε配列のＭＭの最低含量を決定するために、抗ＣＤ３抗体のＶＨ領域に連結させたポリペプチドマスク長さ全体が、ＧＳリンカー部分（ＬＭ）の含有によって２７のアミノ酸で一定に保たれ、ＣＤ３ε残基の数が系統的に減少した（図３Ｂ、配列番号７９〜８８）。図３Ａに示されるように、処理されたヒトＣＤ３εの初めから６つの残基は、ＣＤ３ε結合を完全に遮断するには十分である。処理されたヒトＣＤ３εの初めから３つ〜５つの残基のみを含むマスクを用いた中等度の阻害が、観察された（図３Ａ）。すべての変異体によってＣＤ３εへの結合は、トロンビンによる処理後に修復した（図３Ａ）。
【０２２１】
実施例４．ＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（ＣＤ２０  ＴＤＢ）の生体内分布及び有効性におけるマスクの効果
インビボで２つの異なる標的細胞集団を対照とする二重特異性抗体の生体内分布は、各標的に対する二重特異性抗体の親和性及び接触可能性によって異なるであろう。固形腫瘍を標的とするＴＤＢについては、Ｔ細胞上のＣＤ３εの接触可能性は、ＩｇＧの制限された腫瘍を透過する能力のため、固形腫瘍に提示される抗原のものよりもはるかに高い。二重特異性の両方のアームが等しい濃度で存在することから考えると、腫瘍に対するＴＤＢの生体内分布をシフトし得るあるアプローチは、腫瘍抗原に対する親和性がＣＤ３εに対する親和性よりもはるかに高いため、二重特異性の各アームの親和性を調節し得る。しかしながら、腫瘍抗原親和性とＣＤ３ε結合親和性との間に得られ得る潜在的な親和性比率は、実用限界を有する。標的物への非常に高い親和性は、得ることが困難である場合があり、ＣＤ３εに対して非常に低い親和性は、ＴＤＢの潜在性を低下させ得る。
【０２２２】
ＣＤ３ε結合を減弱させるポリペプチドマスクは、際立った利点を有し、生体内分布を変化させる新規のアプローチを提供する。ＣＤ３結合の阻害及び生体内分布を変化させるためにタンパク質分解または他の手段によってポリペプチドマスクを除去するのではなく、抗ＣＤ３抗体によるＣＤ３結合の阻害の制御された変化は、「固定されたポリペプチドマスク」の使用によっても構築され得る。図４Ｂ（配列番号８９〜９４）及び図４Ｃ（配列番号９５〜９９）に示されるもののような固定されたポリペプチドマスクは、ＣＭを含まず、それらが連結している抗ＣＤ３抗体から容易に除去することができない。図４Ａに示されるように、抗ＣＤ３抗体によるＣＤ３ε結合は、異なる全長を有する固定されたポリペプチドマスクを使用することによって任意の所望の度合いに特異的に減弱され得る。適切な長さ及び含量を選択することによって、ＣＤ３ε結合は、０〜１００％のいずれかに阻害され得、これは、１から無限大に親和性比率を変化させることに等しい。さらに、このアプローチの効果は、会合速度（Ｋａ）への特異的かつ直接的な影響を有し、これは、抗ＣＤ３抗体の活性濃度が、マスクの長さ及び含量によって制御される、結合状態と非結合状態との間で平衡にあるマスクによって有効に軽減されるためである。ポリペプチドマスクは、ＣＤ３εへの抗ＣＤ３抗体結合の速度を低下させ、ｋａの低下をもたらす。
【０２２３】
ＴＤＢとの関連においてポリペプチドマスクの効果を評価するために、１つの抗ＣＤ２０アームと、固定された１２−〜１６−ａａのポリペプチドマスクを有するそのＶＨ領域で連結した１つの抗ＣＤ３アームとを有するＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（ＣＤ２０  ＴＤＢ）が生成された（図４Ｂ）。生成されたマスクＣＤ２０  ＴＤＢの重鎖は、以下の通りに設計された。
１２ａａ＝抗ＣＤ３抗体７−５：ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＳＧＧ（配列番号１００）−抗ＣＤ３抗体重鎖
１４ａａ＝抗ＣＤ３抗体７−７：ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号１０１）−抗ＣＤ３抗体重鎖
１５ａａ＝抗ＣＤ３抗体７−８：ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号１０２）−抗ＣＤ３抗体重鎖
１６ａａ＝抗ＣＤ３抗体７−９：ＱＤＧＮＥＥＭＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１０３）−抗ＣＤ３抗体重鎖
マスクＣＤ２０  ＴＤＢは、以前に記載されているように、ノブ−イントゥ−ホール形式で完全長抗体として産生され（例えば、Ａｔｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６−３５，１９９７及びＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１４／５７４，１３２（米国公開第２０１５−０１６６６６１号）を参照されたい）、（ＣＤ２０  ＴＤＢのポリペプチドマスクがＶＬ領域ではなくＶＨ領域で連結されていることを除いて）図４Ｄに示される一般構造を有する。
【０２２４】
これらの固定されたマスクＣＤ２０  ＴＤＢは、続いて、上述のように、非マスクＣＤ２０  ＴＤＢと比較して、インビトロでのＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化アッセイにおける有効性について試験した。固定されたマスクの存在により、軽減されたＣＤ３ε結合は、インビトロでのＴ細胞依存性の内因性Ｂ細胞死滅の減弱をもたらし、マスク全長が長いほど、インビトロでのＢ細胞死滅のより大きい度合いの減弱をもたらした（図４Ｅ）。
【０２２５】
様々なＭＭ及びＬＭの長さの固定された９−から１２−ａａのポリペプチドマスクを有するそれらのＶＨ領域で連結したさらなるＣＤ２０  ＴＤＢも生成された（図４Ｃ）。これらの生成されたマスクＣＤ２０  ＴＤＢの重鎖は、以下の通りに設計された。
マスク３．９＝ＱＤＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号９５）−抗ＣＤ３抗体重鎖
マスク４．５＝ＱＤＧＮＳＧＧＧＳ（配列番号９６）−抗ＣＤ３抗体重鎖
マスク４．６＝ＱＤＧＮＳＧＧＧＳＧ（配列番号９７）−抗ＣＤ３抗体重鎖
マスク５．７＝ＱＤＧＮＥＳＧＧＧＳＧＧ（配列番号９８）−抗ＣＤ３抗体重鎖
マスク６．６＝ＱＤＧＮＥＥＳＧＧＧＳＧ（配列番号９９）−抗ＣＤ３抗体重鎖
これらのマスクＣＤ２０  ＴＤＢは、上述のように、ノブ−イントゥ−ホール形式で完全長抗体として産生した。
【０２２６】
これらの固定されたマスクＣＤ２０  ＴＤＢはまた、上述のように、非マスクＣＤ２０  ＴＤＢ対照と比較して、インビトロでのＢ細胞死滅及びＴ細胞活性化アッセイにおける有効性についても試験した。全般に、より長いＭＭ長さは、インビトロでのＣＤ８＋Ｔ細胞活性化（図４Ｆ）及びインビトロでのＢ細胞死滅（図４Ｇ）のより大きな減弱をもたらした。図４Ｄ及び４Ｅにおいて試験された他のＣＤ２０  ＴＤＢから得られた結果と一致して、（例えば、より長いＬＭによって）より長いマスク全長を有するＣＤ２０  ＴＤＢも、インビトロでのＣＤ８＋Ｔ細胞活性化及びＢ細胞死滅のより大きな減弱をもたらした（例えば、マスク４．５及び４．６  ＣＤ２０  ＴＤＢを比較）。
【０２２７】
マスクＴＤＢは、組み換え抗原一本鎖ＣＤ３εγヘテロ二量体におけるそれらの結合親和性についてさらにアッセイした（Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０２：８９９−９１６，２０００）。マスク４．５、マスク４．６、及びマスク５．７  ＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢの結合親和性は、４つの親和性変異体の非マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ、非マスクｖ１（配列番号１８（ＶＨ）及び配列番号１９（ＶＬ））、非マスクｖ３（配列番号１０７（ＶＨ）及び配列番号１０８（ＶＬ））、非マスクｖ４（配列番号１０９（ＶＨ）及び配列番号１１０（ＶＬ））、及び非マスクｖ５（配列番号１１１（ＶＨ）及び配列番号１１２（ＶＬ））の結合親和性と比較した。このアッセイでは、マスクまたは親和性変異体ＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢを、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）抗体捕捉キット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたアミンカップリングを通してＢｉａｃｏｒｅ  ＣＭ５シリーズＳチップ上に固定化した。組み換えＣＤ３εγ抗原を、０．３９ｎＭ〜５００ｎＭの２倍希釈の濃度シリーズで捕捉したＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ上を通過させ、ＨＢＳＰ泳動緩衝液（ｐＨ７．４）中に調製された。各結合サイクルは、１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．７）を用いて再生ステップが続いた。結合応答は、空のフローセルから結合シグナルを控除することによって訂正した。親和性値は、ｋｏｎ及びｋｏｆｆの同時フィッティングの１：１Ｌａｎｇｕｉｒモデルを、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００  ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアによって計算した。
【０２２８】
マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ変異体を、同じ全親和性（ＫＤ）の非マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ親和性変異体と比較する場合、マスクバージョンのＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢは、より遅いオフ速度を有する。全般に、各マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ変異体の親和性が減少する場合に、オフ速度が一定になる。しかしながら、非マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ親和性変異体については、親和性の減少は、オフ速度に反映する。図４Ｈの表に要約される結果は、該マスクが濃度依存性変数である会合速度（ｋａ）の減少によって表される抗ＣＤ３結合部分の活性濃度を低下させるという仮説を支持する。ｋａの減少は、Ｔ細胞上のＣＤ３分子の前に、標的抗原に優先的に結合するＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ（この場合、ＣＤ２０）をもたらす。マスクバージョンの動的特性は、局所的な細胞死滅活性に対して好ましい。より遅いオン速度は、非特異的結合及びＴ細胞の活性化の可能性を減少するが、より遅いオフ速度は、細胞−細胞の架橋接触及び標的特異性の細胞傷害性におけるさらなる時間を可能にする。
【０２２９】
非マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ親和性変異体（非マスクｖ１、非マスクｖ３、非マスクｖ４、非マスクｖ５）及びマスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ変異体（マスク４．５、マスク４．６、マスク５．７）に対するＴ細胞活性化及びＴ細胞媒介性細胞傷害性の比較は、マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢに対する所望の反応速度に反映する。マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢは、同程度のＫＤの非マスクＣＤ３／ＣＤ２０親和性変異体と比較する場合に、より低いレベルのＴ細胞活性化を有した。さらに、非マスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢ親和性変異体は、親和性の低下と関連して細胞死滅活性のより大きな欠失を示したが、より低い親和性のマスクＣＤ３／ＣＤ２０  ＴＤＢは、低レベルのＴ細胞活性化を有するより良好な細胞死滅活性を維持した（図４Ｉ）。
【０２３０】
集合的に、データは、マスクＴＤＢ等のマスク抗ＣＤ３抗体が、関与標的細胞及びＴ細胞の細胞生体内分布を独自に変化させて、ＴＤＢの有効性を制御することができることを示す。ポリペプチドマスクの長さ及び含量を変化させることに加えて、マスク抗ＣＤ３抗体の活性化はまた、環境依存性の様式でその除去を可能にするマスクにおいてＣＭの組み込みによって調節され得る（例えば、ＷＯ２０１２／０２５５２５を参照されたい）。例えば、腫瘍微環境において上方調節したプロテアーゼ活性をうまく利用するように設計された好適なタンパク質分解部位が、記載されている（Ｌｏｐｅｚ−Ｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ．７：８００−８０８，２００７）。
【０２３１】
他の実施形態
前述の発明が明確な理解のために例証及び例によって多少詳しく説明されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書で引用されるすべての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。
【図１Ａ】
2018520642.tif 000005
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図４Ｆ】
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【図４Ｇ】
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【図４Ｈ】
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【図４Ｉ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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