(57)【要約】  本発明は、対象が心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を発症するリスクがあるかどうかを判断する方法に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象が心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を発症するリスクがあるかどうかを判断する方法であって、
ａ）前記対象から得られた少なくとも１つのサンプル中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）に対する単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）の比を求めることと、
ｂ）前記少なくとも１つのサンプル中の前記ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比（ＭＭＲ）を正常なＭＭＲと比較して、前記対象のＭＭＲが前記正常なＭＭＲと比較して変化しているかどうかを判断することと、
を含み、前記対象のＭＭＲの変化は、前記対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す、方法。
【請求項２】
前記正常なＭＭＲは、ＰＴＳＤの発症前の前記対象のＭＭＲを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記正常なＭＭＲは、ＰＴＳＤを患っていない個体の集団から形成されたＭＭＲを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１つのサンプルは、前記対象から採取した全血から得られた血漿サンプルである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記全血は、１つ以上の時点において前記対象から採取される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記全血は、約２ａｍ（０２：００）及び／または約９ａｍ（０９：００）に前記対象から採取される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記対象は、前記対象から得られた前記少なくとも１つのサンプル中の前記ＭＭＲを求める前にうつ病性障害と診断された、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記対象は、前記対象から得られた前記少なくとも１つのサンプル中の前記ＭＭＲを求める前に前記うつ病性障害に対する処置を受けている、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記うつ病性障害に対する前記処置は、少なくとも１つの選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）を前記対象に投与することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＳＳＲＩは、シタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム、フルオキセチン、フルボキサミン、インダルピン、パロキセチン、セルトラリン及びジメリジンから成る群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記対象は、うつ病性障害と診断されていない、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を有する疑いのある対象のＰＴＳＤを診断する方法であって、
ａ）前記対象から得られたサンプル中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）に対する単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）の比を求めることと、
ｂ）前記サンプル中の前記ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比（ＭＭＲ）を正常なＭＭＲと比較して、前記対象のＭＭＲが前記正常なＭＭＲと比較して変化しているかどうかを判断することと、
を含み、正常なＭＭＲを有すると定義されたものと比較した前記対象のＭＭＲの変化は、前記対象がＰＴＳＤを患っていることを示す、方法。
【請求項１３】
前記正常なＭＭＲは、ＰＴＳＤの発症前の前記対象のＭＭＲを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記正常なＭＭＲは、ＰＴＳＤを患っていない個体の集団から形成されたＭＭＲを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つのサンプルは、前記対象から採取した全血から得られた血漿サンプルである、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記全血は、真夜中後及び正午前に前記対象から採取される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記全血は、約２ａｍ（０２：００）及び／または約９ａｍ（０９：００）に前記対象から採取される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記対象は、前記対象から得られた前記少なくとも１つのサンプル中の前記ＭＭＲを求める前にうつ病性障害と診断された、請求項１２〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記対象は、前記対象から得られた前記少なくとも１つのサンプル中の前記ＭＭＲを求める前に前記うつ病性障害に対する処置を受けている、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記うつ病性障害に対する前記処置は、少なくとも１つの選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）を前記対象に投与することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＳＳＲＩは、シタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム、フルオキセチン、フルボキサミン、インダルピン、パロキセチン、セルトラリン及びジメリジンから成る群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
対象における心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）の進行を監視する方法であって、
ａ）各サンプルが異なる日に採取された対象からの少なくとも２つのサンプルを分析して、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）に対する単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）の比を求めることと、
ｂ）経時的に前記ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比（ＭＭＲ）を比較して、前記対象のＭＭＲが経時的に変化しているかどうかを判断することと、
を含み、前記対象のＭＭＲの経時的な増加は、前記対象においてＰＴＳＤが進行していることを示し、前記対象のＭＭＲの経時的な減少または変化なしは前記対象においてＰＴＳＤが進行していないことを示す、方法。
【請求項２３】
前記少なくとも２つのサンプルは、前記対象から採取された全血から得られた血漿サンプルである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記全血は、前記サンプルが得られるそれぞれの日の真夜中後及び正午前に前記対象から採取される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記全血は、前記サンプルが得られるそれぞれの日の約２ａｍ（０２：００）及び／または約９ａｍ（０９：００）に前記対象から採取される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象は、前記対象の前記ＭＭＲを求める前にうつ病性障害と診断された、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記対象は、前記対象の前記ＭＭＲを求める前に前記うつ病性障害に対する処置を受けている、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記うつ病性障害に対する前記処置は、少なくとも１つの選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）を前記対象に投与することを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＳＳＲＩは、シタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム、フルオキセチン、フルボキサミン、インダルピン、パロキセチン、セルトラリン及びジメリジンから成る群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象は、うつ病性障害と診断されていない、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象は、ＰＴＳＤに対する処置を受けている、請求項２２〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を有する対象を治療する方法であって、
ａ）前記対象から得られたサンプル中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）に対する単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）の比を求めることと、
ｂ）前記サンプル中の前記ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比（ＭＭＲ）を正常なＭＭＲと比較して、前記対象のＭＭＲが前記正常なＭＭＲと比較して変化しているかどうかを判断することであって、正常なＭＭＲを有すると定義されたものと比較した前記対象のＭＭＲの変化は、前記対象がＰＴＳＤを患っていることを示す、判断することと、
ｃ）ＰＴＳＤの前記対象にＰＴＳＤを処置するための治療計画を施すことであって、前記治療計画は、認知行動療法（ＣＢＴ）、もう１つの選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）の投与、１つ以上の抗不安薬の投与及び１つ以上の抗不眠薬の投与から成る群から選択される、施すこととを含む、方法。
【請求項３３】
前記正常なＭＭＲは、ＰＴＳＤの発症前の前記対象のＭＭＲを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記正常なＭＭＲは、ＰＴＳＤを患っていない個人の集団から形成されたＭＭＲを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記少なくとも１つのサンプルは、前記対象から採取した全血から得られた血漿サンプルである、請求項３２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記全血は、真夜中後及び正午前に前記対象から採取される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記全血は、約２ａｍ（０２：００）及び／または約９ａｍ（０９：００）に前記対象から採取される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＳＳＲＩは、シタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム、フルオキセチン、フルボキサミン、インダルピン、パロキセチン、セルトラリン及びジメリジンから成る群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
男性対象が心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を発症するリスクがあるかどうかを判断する方法であって、
ａ）男性対象から得られた少なくとも１つのサンプル中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）ならびに胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーのレベルを求めることと、
ｂ）前記少なくとも１つのサンプル中の前記ＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルを正常なＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルと比較して、前記男性対象のＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルが前記正常なＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルと比較して変化しているかどうかを判断することと、
を含み、前記男性対象のＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルの変化は、前記男性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す、方法。
【請求項４０】
前記マーカーはＭＣＰ−１であり、前記男性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す前記ＭＣＰ−４レベルの前記変化は、正常なレベルからの低下である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記マーカーはＴＡＲＣであり、前記男性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す前記ＴＡＲＣレベルの前記変化は、正常なレベルからの低下である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
前記少なくとも１つのサンプルは、前記対象から採取した全血から得られた血漿サンプルである、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
女性対象が心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を発症するリスクがあるかどうかを判断する方法であって、
ａ）女性対象から得られた少なくとも１つのサンプル中の単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）及び単球相互作用タンパク質１β（ＭＩＰ−１β）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーのレベルを求めることと、
ｂ）前記少なくとも１つのサンプル中の前記ＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルを正常なＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルと比較して、前記女性対象のＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルが前記正常なＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルと比較して変化しているかどうかを判断することと、
を含み、前記女性対象のＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルの変化は、前記女性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す、方法。
【請求項４４】
前記マーカーはＭＣＰ−４であり、前記女性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す前記ＭＣＰ−４レベルの前記変化は、正常なレベルを超えた増加である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記マーカーはＭＩＰ−１βであり、前記女性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す前記ＭＩＰ−１βレベルの前記変化は、正常なレベルを超えた増加である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記少なくとも１つのサンプルは、前記対象から採取した全血から得られた血漿サンプルである、請求項４３〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）、単球相互作用タンパク質１β（ＭＩＰ−１β）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）または胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ）のうちの少なくとも１つと特異的に結合する少なくとも１セットの抗体を含む、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を検出または診断するためのキットであって、前記抗体は固体表面上に固定される、キット。
【請求項４８】
前記キットは、それぞれのセットがそれぞれＭＣＰ−１、ＭＣＰ−４、ＴＡＲＣ及びＭＩＰ−１βと特異的に結合することができる４セットの抗体を含む、請求項４７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
連邦政府資金による研究または開発に関する記載
本発明の開発中に実施された研究の一部は、助成金第ＣＤＭＲＰ−ＰＴＳＤ（ＰＴＯ７４４１５）号により米国政府資金を利用した。米国政府は、本発明のある一定の権利を有する。
【０００２】
配列表に対する言及
２０１５年１０月８日またはその頃作成した「０４４５０８−５０５２−Ｐ１−ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」という名称で約８．７ｋｂのファイルサイズのコンピュータ可読テキストファイルは、本出願に関する配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
発明の分野
本発明は、対象が心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を発症するリスクがあるかどうかを判断する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）は、心的外傷事象を体験した後に起こる精神疾患である。ＰＴＳＤは急性または慢性である場合があり、何ヶ月、何年または何十年も持続する可能性のある症状の漸増及び漸減過程がある場合がある［２、３］。慢性ＰＴＳＤの患者は、視床下部下垂体副腎（ＨＰＡ）軸の持続的な活性化によるものと解釈されている免疫系の変化と、結果として生じた交感神経副腎髄質系（ＳＡＭ）ストレスがある［４〜６］、［７］。慢性ＰＴＳＤ患者と回復力のある健康な対照との間の差は、通常解消されるストレス体験に対して、ＳＡＭを介した副腎髄質からの最初は高レベルのノルエピネフリンがＨＰＡからのコルチゾールの一時的な上昇によって最終的に低減されることである。しかしながら、いくつかの研究は、慢性ＰＴＳＤ患者の循環コルチゾールのレベルが本質的に低いことを発見した。フィードバック抑制の不全が過剰なレベルの細胞性及び炎症性サイトカイン発現に関するドライバーであると推測されてきた［８〜１０］。例えば、ＴＮＦ−アルファ及びＩＬ−６などのサイトカインは、血液脳関門を通過し、ＨＰＡ軸の刺激により免疫応答を調節することが知られている［１０、１１］。一貫して、ＰＴＳＤ患者の血清中のＩＬ−１−ベータ［１２］、ＴＮＦ−アルファ［１３］、及びＩＬ−６［１４、１５］が上昇していることが報告されている。さらに、ＰＴＳＤ患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中においてＩＬ−６［１６］及びノルエピネフリン［１７］の両方がＰＴＳＤ患者で正常な対照よりも高いことが報告されている。従来の高コルチゾール状態から低コルチゾール／高ノルエピネフリン状態への変化も小児ＰＴＳＤ患者のコホートにおいて記録されている［１６］。
【０００５】
ＰＴＳＤの診断を受けた患者は、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、ならびにアルコール及び他の薬物に対する依存症などの併発状態にある場合が多い［６、１９］。興味深いことに、ＭＤＤを併発しているＰＴＳＤ患者の血清ＩＬ−６レベルが高い［２０］一方で、ＭＤＤを併発していないＰＴＳＤ患者は正常な対照と同一の血清ＩＬ−６レベルを有する［２０］。さらに、すべてが背側海馬が小さく、相対的にＭＤＤがない民間人の慢性ＰＴＳＤ患者のＮＩＭＨコホートからのＣＳＦの慎重に管理された研究では、副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）、ＩＬ−６、ＢＤＮＦ、ＩＧＦ−１及びサブスタンスＰの濃度が正常な対照のＣＳＦにおけるレベルと同一であった［１］。これらの結果は、サイトカインまたはケモカインがＰＴＳＤに関与していない可能性もあることを示唆しているように見える。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、対象が心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を発症するリスクがあるかどうかを判断する方法であって、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）に対する単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）の比を求めることと、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比（ＭＭＲ）を正常なＭＭＲと比較することとを含む方法に関する。正常な比を超えたＭＭＲの上昇は、対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す。
【０００７】
本発明は、対象における心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）の進行を監視する方法であって、少なくとも異なる２日に対象のＭＭＲを求めることと、経時的にＭＭＲを比較して、対象のＭＭＲが経時的に変化しているかどうかを判断することとを含む方法に関する。対象のＭＭＲの経時的な増加は、対象においてＰＴＳＤが進行していることを示す。
【０００８】
本発明は、対象の心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を診断する方法であって、対象のＭＭＲを求めることと、ＭＭＲを正常なＭＭＲと比較することとを含む方法に関する。正常な比を超えたＭＭＲの上昇は、対象がＰＴＳＤを有するか、または患っていることを示す。
【０００９】
本発明はまた、男性対象のＰＴＳＤを診断する方法であって、男性対象から得られた少なくとも１つのサンプル中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）ならびに胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーのレベルを求めることと、少なくとも１つのサンプル中のＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルを正常なＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルと比較して、男性対象のＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルが正常なＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルと比較して変化しているかどうかを判断することとを含む方法に関する。男性対象のＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルの変化は、男性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す。
【００１０】
本発明はまた、女性対象のＰＴＳＤを診断する方法であって、女性対象から得られた少なくとも１つのサンプル中の単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）及び単球相互作用タンパク質１β（ＭＩＰ−１β）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーのレベルを求めることと、少なくとも１つのサンプル中のＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルを正常なＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルと比較して、女性対象のＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルが正常なＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルと比較して変化しているかどうかを判断することとを含む方法に関する。女性対象のＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルの変化は、女性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１（Ａ〜Ｉ）は、２ＡＭ（ａ）及び９ＡＭ（ｂ）におけるＰＴＳＤ及び健康な対照の血漿中、ならびに９ＡＭにおけるＣＳＦ（ｃ）中のＭＣＰ−４、ＭＣＰ−１及びＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比のドット・プロット分布を示す。（ａ、ｂ、ｃ）．ＰＴＳＤ血漿中のＭＣＰ−１（単球走化性タンパク質−１、ＣＣＬ２）は低い。（ｄ、ｅ、ｆ）．ＰＴＳＤ血漿中のＭＣＰ−４（単球走化性タンパク質−４、ＣＣＬ１３）は高い。ＣＳＦ中のＭＣＰ−４のレベルは、ほとんどないくらい低く、正確に測定できない。（ｇ、ｈ、ｉ）．２ＡＭのＰＴＳＤ血漿（約２０％、ｐ＝０．０２）及び９ＡＭのＰＴＳＤ血漿（約６６％、ｐ＝０．００４）中のＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比は上昇している。すべてのｐ値は両側である。水平な点線は、検出の下限（ＬＬＯＤ）である。
【図２】図２（Ａ〜Ｄ）は、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比に関する、ならびに個々にＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１に関する概日リズムに対するＰＴＳＤの影響を示す。（ａ）．ＰＴＳＤ患者及び健康な対照におけるＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比に関する概日リズム。点線の曲線は、各時点におけるデータの＋／−２標準偏差である。（ｂ）．ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比に関する概日リズムデータであり、そのデータは患者毎に正規化され、高頻度の変動に対してフィルタリングされたものである。（ｃ）．ＭＣＰ−４単独に関する概日リズムデータであり、そのデータは患者毎に正規化され、高頻度の変動に対してフィルタリングされたものである。（ｄ）．ＭＣＰ−１単独に関する概日リズムデータであり、そのデータは患者毎に正規化され、高頻度の変動に対してフィルタリングされたものである。ＰＴＳＤは、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比の両方の相及び振幅、ならびにその構成成分分析物に影響を及ぼすようである。
【図３】健康な対照及びＰＴＳＤ患者におけるＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１の追跡を示す。（ａ）健康な対照；（ｂ）ＰＴＳＤ患者。
【図４】図４（Ａ〜Ｂ）は、ＰＴＳＤ患者及び健康な対照におけるＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１の血漿中濃度を示す。（ａ）絶対濃度；（ｂ）平均濃度。
【図５Ａ】本発明の実施形態に関する受信者操作者曲線（ＲＯＣ）に対する曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。
【図５Ｂ】本発明の実施形態に関する受信者操作者曲線（ＲＯＣ）に対する曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。
【図５Ｃ】本発明の実施形態に関する受信者操作者曲線（ＲＯＣ）に対する曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。
【図５Ｄ】本発明の実施形態に関する受信者操作者曲線（ＲＯＣ）に対する曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。
【図６】さまざまなケモカインに関するＲＯＣに対するＡＵＣを示す。
【図７Ａ】ＰＴＳＤ及び対照における血漿ケモカインの概日依存性を示す。
【図７Ｂ】ＰＴＳＤ及び対照における血漿ケモカインの概日依存性を示す。
【図７Ｃ】ＰＴＳＤ及び対照における血漿ケモカインの概日依存性を示す。
【図７Ｄ】ＰＴＳＤ及び対照における血漿ケモカインの概日依存性を示す。
【図７Ｅ】ＰＴＳＤ及び対照における血漿ケモカインの概日依存性を示す。
【図７Ｆ】ＰＴＳＤ及び対照における血漿ケモカインの概日依存性を示す。
【図７Ｇ】ＰＴＳＤ及び対照における血漿ケモカインの概日依存性を示す。
【図７Ｈ】ＰＴＳＤ及び対照における血漿ケモカインの概日依存性を示す。
【図８】図８（Ａ〜Ｄ）は、ＰＴＳＤの患者及び健康な対照に関するある概日期間にわたる血漿中のＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比の分布を示す。
【図９】図９（Ａ〜Ｄ）は、ＰＴＳＤの患者及び健康な対照に関するある概日期間にわたる血漿中のＭＩＰ−１βの分布を示す。
【図１０】図１０（Ａ〜Ｄ）は、ＰＴＳＤの患者及び健康な対照に関する概日期間にわたる血漿中のＴＡＲＣの分布を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、対象が心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を発症するリスクがあるかどうかを判断する方法であって、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）に対する単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）の比を求めることと、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比（ＭＭＲ）を正常なＭＭＲと比較することとを含む方法に関する。正常な比を超えたＭＭＲの上昇は、対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す。
【００１３】
ＭＣＰ−４（ＣＣＬ１３）及びＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）はともに６７％の配列相同性を共有し、単球に対する、ならびにそれより低い程度にリンパ球及び好塩基球に対する分子誘引物質（「ケモカイン」）として機能する。両ケモカインはまた、共通受容体としてＣＣＲ２を共有する［２９、３０］。Ｓｅｇｍａｎら（２００５年）［３１］は、イスラエルにおけるテロ攻撃の生存者の末梢血単核細胞（ＰＢＭＮ）を調査した。Ｙｅｈｕｄａら（２００９）［３２］は、ニューヨークの世界貿易センター攻撃の生存者の全血発現パターンを調査した。Ｎｅｙｌａｎら（２０１１）［３３］は、ＰＴＳＤ、ならびに他の併存症を有する男性及び女性の精製ＣＤ１４＋単球を調査した。３つすべてのケースに共通の観察結果は、遺伝子発現の抑制であった。血液採取のタイミングについては、これらの刊行物では言及されていなか、または提言されていなかった。
【００１４】
２つの単球ケモカイン、ＭＣＰ−４（ＣＣＬ１３）とＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）の比は、ＰＴＳＤに対する時間非依存的な二変数の血漿バイオマーカーを構成する。さらに、ＰＴＳＤ患者の血漿には定量的に高いＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比、及びその構成する個々の分析物に重なる、乱れた概日パターンが存在する。これらの結果は、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比を含むバイオマーカーが、それもまたＰＴＳＤ患者を特徴づける可能性のある概日生物学における付加的な欠陥とは無関係であることを示唆する。
【００１５】
しかしながら、最近の研究は、循環単球が自律的概日時計によって駆動される内生的ＭＣＰ−１発現と一致する概日振動を示し、その時間依存的変動は感染または代謝ストレスとは無関係であることを示す［３４、３５］。ヒトでは、循環単球、Ｔリンパ球及びＢリンパ球に関して１ＡＭから３ＡＭの間の時間を含む夜間のピーク血中レベルを確認することができる［３６］。夜間の単球は、ＭＣＰ−１の発現を活性化する［３４］。循環単球、Ｂ細胞及びＴ細胞のレベルは、約４ＡＭに始まり低下し始める［３６］。同時に、ＭＣＰ−１の単球発現は、転写因子ＣＬＯＣＫ、ＢＭＡＬ１及びＥＺＨ２によってブロックされる［３４］。健康な対照（ＨＣ）のＭＣＰ−１血漿レベルもまた２ＡＭから９ＡＭに約７０％有意に低下する（ｐ＝０．００１）（下記表１及び図１）。ＰＴＳＤ患者の場合も、ＭＣＰ−１レベルは低下するが、より大きな割合、約９０％、より高い有意性（ｐ＝２×１０−６）で低下する。このプロセスも概日パターンにおいてさらに詳細に見られる。したがって、この疾患固有の差は、ＰＴＳＤ固有のＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１バイオマーカーのより小さい分母部分をもたらすＭＣＰ−１に関する動力学的根拠である可能性がある。
【表１】
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【００１６】
遺伝的性質または血漿ＭＣＰ−４の起こりうる概日変動についてはあまり知られていない。しかしながら、ＭＣＰ−４血漿レベルも、ＰＴＳＤ患者におけるわずか約４０％の有意な低下（ｐ＝０．０１）と比較して、健康な対照で２ＡＭから９ＡＭまでに約６０％有意に低下する（Ｐ＝０．００４））。このプロセスも概日パターンにおいてさらに詳細に見られる（図２ｃを参照）。このように、ＰＴＳＤ患者は、覚醒時間が始まると、ＭＣＰ−４に関してよりもＭＣＰ−１がより低下した状態で比較的低下した量のＭＣＰ−１及びＭＣＰ−４の両方を発現するようである。このように、ＰＴＳＤ患者におけるＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比の上昇は、これら両方の分析物の合成速度のＰＴＳＤ依存的な変化による可能性もある。
【００１７】
睡眠障害は、ＰＴＳＤの顕著な特徴である［２１、２２］。したがって、睡眠欠乏がＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１に関する乱れた概日プロフィールの根本的原因であろう可能性もある。しかしながら、完全に機器を装着された正常な男性の総合的な研究において、Ｂｏｒｎら（１９９７）［３６］は、２４時間の睡眠欠乏体験後、次の２４時間は、単球を含む免疫細胞数、ならびにＴＮＦα、ＩＬ−１β、及びＩＬ−６レベルの概日変化の鈍化のみによって特徴づけられたことを報告した。Ｂｏｒｎらはまた、相または多峰性の外見に変化はなかったことを報告した。したがって、血漿ＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１に関しＰＴＳＤ患者に観察されるサーカディアノパシーは、疾患固有なようである。さらに、利用可能な一時点においてＣＳＦ中のサイトカイン及びケモカインのいずれにもＰＴＳＤ固有の変動が観察されなかったため、本明細書中で開示されているデータは、単球または免疫細胞生物学における固有の欠陥に対するＰＴＳＤの寄与を主張することができる。この結論は、それぞれ、ＰＢＭＣ［３１］及び全血［３２］ならびにＣＤ１４＋単核細胞［３３］に関する上記の結果と一致する。
【００１８】
脳の中枢時計機構は、光への曝露及び視交差上核におけるＣＬＯＣＫ／ＢＭＡＬ１シグナル伝達の活性化によって動く［３７］。末梢の補助時計は、視床下部下垂体副腎（ＨＰＡ）軸を介してこの中枢機構からの刺激を受け取り、正確な補助的タイミングをそれ自体の要求に適合させる。健康な対照では、概日時計プログラムは、本質的に順応性があり、例えば、代謝または日の出時間の変化に反応して可逆的に変化することができる［２８］。それに反して、慢性精神神経障害は、中枢時計が常時「時間が把握できない」ような症状と関連づけられてきた［３８］。しかしながら、ＰＴＳＤの場合、こうした患者は、ＭＣＰ−１及びＭＣＰ−４に関して位相変位した末梢時計を示し、少なくともＭＣＰ−４の場合、完全に異なるパターンを示す。
【００１９】
例えば、図２ｃは、健康な対照のＭＣＰ−４レベルが２４時間にわたり単峰性分布を有することを示す。対照的に、ＰＴＳＤ患者のＭＣＰ−４分布における２４時間にわたる４つの個別のピークの変化。ＭＣＰ−１の場合、図２ｄは、健康な対照のＭＣＰ−１も、深夜の時間にピークに到達し、ＭＣＰ−４に約２時間遅れる単峰性分布で分布することを示す（図３を参照）。しかしながら、ＰＴＳＤ患者のＭＣＰ−１は、主な深夜のピークに約６時間遅れ、午後遅く及び夕刻にやや低いレベルに「追いつく」ようである。
【００２０】
ここで提示するデータは、ＣＳＦ中のＰＴＳＤ固有の変化が９ＡＭにおけるサイトカイン及びケモカインの単純なスクリーニングからはほとんど検出できないことを示す。実際、検出可能な変化は、ＩＬ−８の小さな減少だけであった。これらのデータは、同じＣＳＦサンプルのサイトカインの部分集合に関するＢｏｎｎｅら（２０１１）によって報告されたデータと一致している。
【００２１】
その一方で、９ＡＭのＣＳＦと血漿との間に他の濃度勾配が存在する。濃度勾配の最も高い上昇は、ＩＬ−８（約１４倍上昇）、ＭＣＰ−１（約７倍上昇）、ＩＰ−１０（約７倍上昇）、ＭＩＰ−１β及びエオタキシン３（ともに約４倍上昇）に関してであった。最も減少した分析物は、ＭＣＰ−４（約８０〜１００分の１に減少）；エオタキシン１（約１８分の１に減少）；ＭＤＣ（約２５分の１に減少）；ＴＡＲＣ（約９分の１に減少）；及びＴＮＦα（約６分の１に減少）であった。
【００２２】
本明細書中のデータに基づいて、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比は、ＰＴＳＤに対する定量的な候補バイオマーカーを構成し、これは血液が採取できればいつでも測定可能であるという利益を有する。さらに、比ならびにその個々の構成成分、ＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１の両方に関する概日パターンの発現は、健康な対照と比較して位相変位し、多峰性である。このように、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比から入手できる血漿中の相対的なＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１レベルは、ＰＴＳＤに対する機能的バイオマーカーとして使用することができる。さらに、これらのデータは、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比が、これもまたＰＴＳＤ患者に影響を及ぼす可能性もあろう概日生物学におけるいかなる欠陥とも無関係であることを示唆する。
【００２３】
さらに、血漿ＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１に関する概日リズムがＰＴＳＤ患者において乱れている。したがって、場合によっては、単球、または免疫細胞全般が関わる概日リズムの異常がこのクラスの精神病患者を苦しめる行動障害に重要な役割を果たしている可能性もあることも除外できない。
【００２４】
本発明はまた、男性対象のＰＴＳＤを診断する方法であって、男性対象から得られた少なくとも１つのサンプル中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）ならびに胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーのレベルを求めることと、少なくとも１つのサンプル中のＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルを正常なＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルと比較して、男性対象のＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルが正常なＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルと比較して変化しているかどうかを判断することとを含む方法に関する。男性対象のＭＣＰ−１またはＴＡＲＣレベルの変化は、男性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す。
【００２５】
ＭＣＰ−１、すなわち、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ１３５００のＣＣＬ２は、周知のＣ−Ｃモチーフケモカインであり、プロテオグリカンを介して内皮細胞につながれている。ＭＣＰ−１は、９９アミノ酸のタンパク質であり、残基１〜２３はシグナル配列である。ＭＣＰ−１は、一般にＣＣＲ２及びＣＣＲ４受容体に結合する。本明細書中で使用される場合、ＭＣＰ−１という用語は、特定のアミノ酸配列に限定されず、むしろ対象の血液中に見出されるケモカインを意味するよう使用され、このケモカインは任意の標準的または商業的に利用可能な分析、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＭＣＰ−１として容易に特徴づけられるであろう。したがって、ＭＣＰ−１として、例えば、既知のＭＣＰ−１タンパク質に対して産生される抗体との結合能力が検出されるあらゆるタンパク質が、本発明の目的でＭＣＰ−１と見なされることになろう。いくつかの実施形態において、ＭＣＰ−１という用語は、ＭＣＰ−１タンパク質の成熟（シグナル配列を含まない完全長ポリペプチド）型を意味する。
【００２６】
特定の実施形態において、ＭＣＰ−１という用語は、配列番号：１のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。他の実施形態において、ＭＣＰ−１という用語は、配列番号：２のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。
ＭＫＶＳＡＡＬＬＣＬ  ＬＬＩＡＡＴＦＩＰＱ  ＧＬＡＱＰＤＡＩＮＡ  ＰＶＴＣＣＹＮＦＴＮ  ＲＫＩＳＶＱＲＬＡＳ  ＹＲＲＩＴＳＳＫＣＰ  ＫＥＡＶＩＦＫＴＩＶ  ＡＫＥＩＣＡＤＰＫＱ  ＫＷＶＱＤＳＭＤＨＬ  ＤＫＱＴＱＴＰＫＴ（配列番号：１）
ＱＰＤＡＩＮＡＰＶＴ  ＣＣＹＮＦＴＮＲＫＩ  ＳＶＱＲＬＡＳＹＲＲ  ＩＴＳＳＫＣＰＫＥＡ  ＶＩＦＫＴＩＶＡＫＥ  ＩＣＡＤＰＫＱＫＷＶ  ＱＤＳＭＤＨＬＤＫＱ  ＴＱＴＰＫＴ（配列番号：２）
【００２７】
ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ９２５８３の胸腺及び活性化制御ケモカイン（ＴＡＲＣ、すなわちＣＣＬ１７）は、周知のＣ−Ｃモチーフケモカインであり、一般に胸腺ならびに、それより低い程度で、肺、結腸及び小腸で発現する。ＴＡＲＣは、９４アミノ酸のタンパク質であり、残基１〜２３がシグナル配列を構成する。これは、一般にＴ細胞に対する走化性因子として働き、Ｔ細胞の発生ならびに成熟Ｔ細胞の輸送にも関与する可能性がある。ＴＡＲＣは、一般にＣＣＲ４受容体と結合する。本明細書中で使用される場合、ＴＡＲＣという用語は特定のアミノ酸配列に限定されず、むしろ対象の血液中に見出されるケモカインを意味するよう使用され、このケモカインは任意の標準的または商業的に利用可能な分析、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＴＡＲＣとして容易に特徴づけられるであろう。例えば、ＴＡＲＣは、完全長ペプチド鎖のアミノ酸位置５及び６７に少なくとも２つの天然に存在するバリアントを有する。ただし、両バリアントは、ＥＬＩＳＡアッセイでＴＡＲＣとして検出されるため、両バリアントは本発明の目的でＴＡＲＣと見なされることになろう。ＴＡＲＣとして、例えば、既知のＴＡＲＣタンパク質に対して産生される抗体との結合能力が検出されるあらゆるタンパク質が、本発明の目的でＴＡＲＣと見なされることになろう。いくつかの実施形態において、ＴＡＲＣという用語は、ＴＡＲＣタンパク質の成熟（シグナル配列を含まない完全長ポリペプチド）型を意味する。
【００２８】
特定の実施形態において、ＴＡＲＣという用語は、配列番号：３のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。他の実施形態において、ＴＡＲＣという用語は、配列番号：４のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。
ＭＡＰＬＫＭＬＡＬＶ  ＴＬＬＬＧＡＳＬＱＨ  ＩＨＡＡＲＧＴＮＶＧ  ＲＥＣＣＬＥＹＦＫＧ  ＡＩＰＬＲＫＬＫＴＷ  ＹＱＴＳＥＤＣＳＲＤ  ＡＩＶＦＶＴＶＱＧＲ  ＡＩＣＳＤＰＮＮＫＲ  ＶＫＮＡＶＫＹＬＱＳ  ＬＥＲＳ（配列番号：３）
ＡＲＧＴＮＶＧＲＥＣ  ＣＬＥＹＦＫＧＡＩＰ  ＬＲＫＬＫＴＷＹＱＴ  ＳＥＤＣＳＲＤＡＩＶ  ＦＶＴＶＱＧＲＡＩＣ  ＳＤＰＮＮＫＲＶＫＮ  ＡＶＫＹＬＱＳＬＥＲ  Ｓ（配列番号：４）
【００２９】
本発明はまた、女性対象のＰＴＳＤを診断する方法であって、女性対象から得られた少なくとも１つのサンプル中の単球走化性タンパク質４（ＭＣＰ−４）及び単球相互作用タンパク質１β（ＭＩＰ−１β）から成る群から選択される少なくとも１つのマーカーのレベルを求めることと、少なくとも１つのサンプル中のＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルを正常なＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルと比較して、女性対象のＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルが正常なＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルと比較して変化しているかどうかを判断することとを含む方法に関する。女性対象のＭＣＰ−４またはＭＩＰ−１βレベルの変化は、女性対象がＰＴＳＤを患うリスクが増加していることを示す。
【００３０】
単球相互作用タンパク質１β（ＭＩＰ−１β）はＣＣＬ４  Ｃ−Ｃモチーフケモカインから形成されるケモカインである。具体的には、ＣＣＬ４ケモカインは、９２アミノ酸のタンパク質であり、残基１〜２３はシグナル配列である。したがって、「成熟」ＣＣＬ４タンパク質は、完全長ＣＣＬ４の残基２４〜９２のアミノ酸配列を有する６９残基のタンパク質である。ＭＩＰ−１βは、成熟ＣＣＬ４タンパク質（完全長ＣＣＬ４の残基２６〜９２）の残基３〜６９を構成するやや短い鎖にさらにプロセシングされる。本明細書中で使用される場合、ＭＰ−１βは、ＣＣＬ４の完全長型及び成熟型、ならびに短い形態のＣＣＬ４を含んでもよい。特定の実施形態において、ＭＩＰ−１βという用語は、成熟ＣＣＬ４鎖及びタンパク質のより短いＣＣＬ４鎖（成熟ＣＣＬ４の残基３〜６９）型のみを意味する。他の特定の実施形態において、ＭＩＰ−１βという用語は、タンパク質の短い鎖（成熟ＣＣＬ４の残基３〜６９）型のみを意味する。
【００３１】
特定の実施形態において、ＭＩＰ−１βという用語は、配列番号：５（完全長型）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。他の実施形態において、ＭＩＰ−１βという用語は、配列番号：６（成熟ＣＣＬ４）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。他の実施形態において、ＭＩＰ−１βという用語は、配列番号：７（ＭＩＰ−１β）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。
ＭＫＬＣＶＴＶＬＳＬ  ＬＭＬＶＡＡＦＣＳＰ  ＡＬＳＡＰＭＧＳＤＰ  ＰＴＡＣＣＦＳＹＴＡ  ＲＫＬＰＲＮＦＶＶＤ  ＹＹＥＴＳＳＬＣＳＱ  ＰＡＶＶＦＱＴＫＲＳ  ＫＱＶＣＡＤＰＳＥＳ  ＷＶＱＥＹＶＹＤＬＥ  ＬＮ（配列番号：５）
ＡＰＭＧＳＤＰＰＴＡ  ＣＣＦＳＹＴＡＲＫＬ  ＰＲＮＦＶＶＤＹＹＥ  ＴＳＳＬＣＳＱＰＡＶ  ＶＦＱＴＫＲＳＫＱＶ  ＣＡＤＰＳＥＳＷＶＱ  ＥＹＶＹＤＬＥＬＮ（配列番号：６）
ＭＧＳＤＰＰＴＡＣＣ  ＦＳＹＴＡＲＫＬＰＲ  ＮＦＶＶＤＹＹＥＴＳ  ＳＬＣＳＱＰＡＶＶＦ  ＱＴＫＲＳＫＱＶＣＡ  ＤＰＳＥＳＷＶＱＥＹ  ＶＹＤＬＥＬＮ（配列番号：７）
【００３２】
ＭＣＰ−４、すなわちＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｑ９９６１６のＣＣＬ１３は、周知のＣ−Ｃモチーフケモカインであり、小腸、胸腺、結腸、肺、気管、胃、リンパ節及び肺動脈平滑筋細胞において広く発現する。ＭＣＰ−４は、９８アミノ酸のタンパク質であり、残基１〜１６はシグナル配列である。成熟または「長い鎖の」ＭＣＰ−４タンパク質（シグナル配列を含まない完全長タンパク質）は、下に示される中程度の鎖及び短い鎖として知られる２つのさらなる鎖にさらにプロセシングまたは切断され得る。ＭＣＰ−４は、一般にＣＣＲ２Ｂ及びＣＣＲ３受容体と結合し、単球、リンパ球、好塩基球及び好酸球を誘引する走化性因子である。本明細書中で使用される場合、ＭＣＰ−４という用語は、特定のアミノ酸配列に限定されず、むしろ対象の血液中に見られるケモカインを意味するよう使用され、このケモカインは任意の標準的または商業的に利用可能な分析、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイにおいてＭＣＰ−４として容易に特徴づけられるであろう。したがって、ＭＣＰ−４として、例えば、既知のＭＣＰ−４タンパク質に対して産生される抗体との結合能力が検出されるあらゆるタンパク質が本発明の目的でＭＣＰ−４と見なされることになろう。特定の実施形態において、ＭＣＰ−４という用語は、成熟ＭＣＰ−４鎖、タンパク質の中程度のＭＣＰ−４鎖型及びより短いＭＣＰ−４鎖型のみを意味する。他の特定の実施形態において、ＭＣＰ−４という用語は、タンパク質の中程度のＭＣＰ−４鎖型及びより短いＭＣＰ−４鎖型のみを意味する。別の実施形態において、ＭＣＰ−４という用語は、タンパク質のより短いＭＣＰ−４鎖型のみを意味する。
【００３３】
特定の実施形態において、ＭＣＰ−４という用語は、配列番号：８（完全長型）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。他の実施形態において、ＭＣＰ−４という用語は、配列番号：９（長い鎖のＭＣＰ−４）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。他の実施形態において、ＭＣＰ−４という用語は、配列番号：１０（中程度の鎖のＭＣＰ−４）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。他の実施形態において、ＭＣＰ−４という用語は、配列番号：１１（短い鎖のＭＣＰ−４）のアミノ酸配列と少なくとも約７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。
ＭＫＶＳＡＶＬＬＣＬ  ＬＬＭＴＡＡＦＮＰＱ  ＧＬＡＱＰＤＡＬＮＶ  ＰＳＴＣＣＦＴＦＳＳ  ＫＫＩＳＬＱＲＬＫＳ  ＹＶＩＴＴＳＲＣＰＱ  ＫＡＶＩＦＲＴＫＬＧ  ＫＥＩＣＡＤＰＫＥＫ  ＷＶＱＮＹＭＫＨＬＧ  ＲＫＡＨＴＬＫＴ（配列番号：８）
ＦＮＰＱＧＬＡＱＰＤ  ＡＬＮＶＰＳＴＣＣＦ  ＴＦＳＳＫＫＩＳＬＱ  ＲＬＫＳＹＶＩＴＴＳ  ＲＣＰＱＫＡＶＩＦＲ  ＴＫＬＧＫＥＩＣＡＤ  ＰＫＥＫＷＶＱＮＹＭ  ＫＨＬＧＲＫＡＨＴＬ  ＫＴ（配列番号：９）
ＬＡＱＰＤＡＬＮＶＰ  ＳＴＣＣＦＴＦＳＳＫ  ＫＩＳＬＱＲＬＫＳＹ  ＶＩＴＴＳＲＣＰＱＫ  ＡＶＩＦＲＴＫＬＧＫ  ＥＩＣＡＤＰＫＥＫＷ  ＶＱＮＹＭＫＨＬＧＲ  ＫＡＨＴＬＫＴ（配列番号：１０）
ＱＰＤＡＬＮＶＰＳＴ  ＣＣＦＴＦＳＳＫＫＩ  ＳＬＱＲＬＫＳＹＶＩ  ＴＴＳＲＣＰＱＫＡＶ  ＩＦＲＴＫＬＧＫＥＩ  ＣＡＤＰＫＥＫＷＶＱ  ＮＹＭＫＨＬＧＲＫＡ  ＨＴＬＫＴ（配列番号：１１）
【００３４】
参照アミノ酸配列、例えば、配列番号：２と少なくとも、例えば、約９５％「同一の」アミノ酸配列を有するポリペプチドは、アミノ酸配列が参照アミノ酸配列の各１００アミノ酸当たり最大約５つの改変を含んでもよいことを除いて、ポリペプチドのアミノ酸配列が参照配列と同一であることを意味すると理解される。言い換えると、参照アミノ酸配列と少なくとも約９５％同一のアミノ酸配列を有するペプチドを得るために、参照配列の最大約５％のアミノ酸残基は、除去されるか、または別のアミノ酸で置換されてもよく、あるいは参照配列の全アミノ酸のうちの最大約５％のいくつかのアミノ酸が参照配列に挿入されてもよい。参照配列のこうした改変は、参照アミノ酸配列のＮ末端もしくはＣ末端位置またはこれらの末端位置の間のどこかに、参照配列のアミノ酸の間に個々に、または参照配列内の１つ以上の隣接する群にかのいずれかに生じることもある。
【００３５】
本明細書中で使用される場合、「同一性」とは、参照ヌクレオチドまたはアミノ酸配列と比較したヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、配列は、最高次の一致が得られるようアライメントされる。「同一性」それ自体は当該技術分野において認識されている意味を有し、公開されている技術を使用して算出することができる。（例えば、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｌｅｓｋ，  Ａ．  Ｍ．，  ｅｄ．，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９８８）；  Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，  Ｓｍｉｔｈ，  Ｄ．  Ｗ．，  ｅｄ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９３）；  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，  Ｐａｒｔ  Ｉ，  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ａ．  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ｈ．  Ｇ．，  ｅｄｓ．，  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ  （１９９４）；  ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，  Ｇ．，  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  （１９８７）；  ａｎｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，  Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．，  ｅｄｓ．，  Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９１）参照）。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の同一性を評価するためのいくつかの方法が存在するが、「同一性」という用語は、当業者によく知られている（Ｃａｒｉｌｌｏ，  Ｈ．  ＆  Ｌｉｐｔｏｎ，  Ｄ．，  Ｓｉａｍ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ  ４８：１０７３  （１９８８））。２つの配列間の同一性または類似性を求めるために一般的に利用される方法としては、Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｈｕｇｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ，  Ｍａｒｔｉｎ  Ｊ．  Ｂｉｓｈｏｐ，  ｅｄ．，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  （１９９４）  ａｎｄ  Ｃａｒｉｌｌｏ，  Ｈ．  ＆  Ｌｉｐｔｏｎ，  Ｄ．，  Ｓｉａｍ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ  ４８：１０７３  （１９８８）に開示されているものが挙げられるが、これらに限定されるものではない。コンピュータプログラムはまた、同一性及び類似性を算出する方法及びアルゴリズムを含む場合もある。２つの配列間の同一性及び類似性を求めるためのコンピュータプログラム方法の例としては、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２（ｉ）：３８７  （１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＥｘＰＡＳｙ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．  Ｆ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ  Ｍｏｌｅｃ  Ｂｉｏｌ  ２１５：４０３  （１９９０））及びＦＡＳＴＤＢが挙げられるが、これらに限定されるものではない。同一性及び類似性を求めるための方法の例は、参照により組み込まれるＭｉｃｈａｅｌｓ，  Ｇ．  ａｎｄ  Ｇａｒｉａｎ，  Ｒ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｖｏｌ  １，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓ���ｎｓ，  Ｉｎｃ．（２０００）に述べられている。
【００３６】
本発明の一実施形態において、２つ以上のポリペプチド間の同一性を求めるために使用されるアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴＰである。本発明の別の実施形態において、２つ以上のポリペプチド間の同一性を求めるために使用されるアルゴリズムは、ＦＡＳＴＤＢであり、これは、Ｂｒｕｔｌａｇらのアルゴリズムに基づくものである（参照により組み込まれるＣｏｍｐ．  Ａｐｐ．  Ｂｉｏｓｃｉ．  ６：２３７−２４５  （１９９０））。ＦＡＳＴＤＢ配列アライメントでは、クエリー配列及び参照配列はアミノ配列である。配列アライメントの結果は、一致率である。一実施形態において、一致率を算出するためのアミノ酸配列のＦＡＳＴＤＢアライメントに使用することができるパラメータとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されるものではない：Ｍａｔｒｉｘ＝ＰＡＭ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、Ｍｉｓｍａｔｃｈ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ  Ｓｃｏｒｅ＝１、Ｇａｐ  Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ  Ｓｉｚｅ  Ｐｅｎａｌｔｙ  ０．０５、Ｗｉｎｄｏｗ  Ｓｉｚｅ＝５００または対象アミノ配列の長さのどちらか短い方。
【００３７】
内部の付加または欠失のためではなくＮ末端またはＣ末端の付加または欠失のためにクエリー配列よりも参照配列が短いまたは長い場合、ＦＡＳＴＤＢプログラムは一致率を算出するときに参照配列のＮ末端及びＣ末端の切断または付加を考慮しないため、手動の補正を行ってもよい。Ｎ末端またはＣ末端で切断されたクエリー配列に関して、参照配列に対して、一致しない／アライメントされない参照配列に対するＮ末端及びＣ末端であるクエリー配列の残基の数を、クエリー配列の合計の基準となる数に対するパーセントとして算出することによって一致率は補正される。ＦＡＳＴＤＢ配列アライメントの結果は、一致／アライメントを決定する。そのアライメントのパーセンテージは、その後、特定のパラメータを使用した上記のＦＡＳＴＤＢプログラムによって算出された一致率から差し引かれて、最終的な一致率スコアに到達する。この補正されたスコアは、アライメントがどのように互いに「対応する」か、ならびにパーセンテージ同一性を判断するために使用することができる。クエリー配列のＮ末端またはＣ末端を超えて伸びる参照配列の残基は、一致率スコアを手動で調節するために考慮されてもよい。すなわち、比較配列のＮ末端またはＣ末端と一致しない／アライメントされない残基は、一致率スコアまたはアライメントナンバリングを手動で調節するときにカウントされてもよい。
【００３８】
例えば、９０アミノ酸残基のクエリー配列が、一致率を求めるために１００残基の参照配列とアライメントされる。クエリー配列のＮ末端側において欠失が起こるため、ＦＡＳＴＤＢアライメントは、Ｎ末端側の最初の１０残基の一致／アライメントを示さない。１０の対になっていない残基は、参照配列の１０％に相当するため（一致しないＮ末端及びＣ末端の残基の数／参照配列の残基の総数）、１０％がＦＡＳＴＤＢプログラムによって算出された一致率スコアから差し引かれる。残りの９０残基が完全に一致した場合（１００％のアライメント）、最終的な一致率は、９０％（１００％の整列−１０％の一致しないオーバーハング）になることになろう。別の例において、欠失が内部の欠失であることを除いて、９０残基のクエリー配列が１００の参照配列と比較される。この場合、対象配列のＮ末端またはＣ末端にクエリーと一致しない／アライメントされない残基がないため、ＦＡＳＴＤＢによって算出された一致率は手動で補正されない。さらに別の例では、１１０アミノ酸のクエリー配列が、一致率を求めるために１００残基の参照配列とアライメントされる。クエリーにおける付加は、クエリー配列のＮ末端側に生じるため、ＦＡＳＴＤＢアライメントはＮ末端側の最初の１０残基の一致／アライメントを示さない可能性もある。クエリー配列の残りの１００アミノ酸残基が完全長の参照配列と９５％の同一性を有する場合、クエリーのＮ末端付加は無視され、クエリーの参照配列に対する一致率が９５％になることになろう。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、配列アライメントに関する場合の「と対応する」及び「と対応すること」という用語は、参照タンパク質、例えば、野生型ＭＣＰ−１内の挙げられた位置、及び参照タンパク質の位置とアライメントされた突然変異体または関連ＭＣＰ−１のそれらの位置を意味することが意図される。したがって、対象ペプチドのアミノ酸配列が参照ＭＣＰ−１、例えば、配列番号：２のアミノ酸配列とアライメントされるとき、参照配列の特定の挙げられた位置「と対応する」対象配列のアミノ酸は、必ずしも参照配列のこれらの厳密な数値的な位置ではないが参照配列、例えば、配列番号：２のこれらの位置とアライメントされるものである。配列間の対応するアミノ酸を決定するために配列をアライメントするための方法は、本明細書に記載される。したがって、本発明の実施形態は、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−４、ＴＡＲＣ及び／またはＭＩＰ−１βと対応するバイオマーカーを用いてバイオマーカーのレベル（またはそれらの比）を検出すること、または求めることを含む。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、対象または「試験対象」は、哺乳動物、特に、ヒトまたは非ヒト霊長類を示す。試験対象は、ＰＴＳＤに対する素因の評価を必要としても、またはしなくてもよい。例えば、試験対象は、本発明の方法を適用する前にＰＴＳＤに関連づけられるであろう体験の記憶を有しても、または有していなくてもよい。別の実施形態において、試験対象は、本発明の方法を適用する前にＰＴＳＤにつながるであろう体験を有した可能性がある対象と特定されていない。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、ＰＴＳＤは、当該技術分野において一般的に理解されるとおりに使用される。選ばれた実施形態において、対象のＰＴＳＤは、当該技術分野において理解されるとおりＳｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ  ｆｏｒ  ＤＳＭ−ＩＶ（ＳＣＩＤ）を使用して評価される。これもまた当該技術分野において理解されるとおり、ＰＴＳＤの重症度は、軽度から重度に及ぶ可能性がある。本発明の選ばれた実施形態において、ＰＴＳＤの重症度は、いつでも、すなわち、対象のＭＭＲを求める前または後に評価することができる。ＰＴＳＤの重症度は、以下に限定されるものではないが、Ｃｌｉｎｉｃｉａｎ−Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ＰＴＳＤ  ｓｃａｌｅ（ＣＡＰＳ）などの任意の手法で評価することができる。
【００４２】
本明細書中で使用される場合、「リスクの増加」という用語の意味は、試験対象が正常な個体と比較してＰＴＳＤを発症する、または得る確率が増加することを意味するよう使用される。リスクの増加は相対的または絶対的でもよく、質的または量的に表されてもよい。例えば、リスクの増加は、対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを単純に求めることと、先行する集団調査に基づいて患者を「リスクの増加」カテゴリーに入れることと表されてもよい。あるいは、対象のリスクの増加の数値的表現は、それぞれＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルに基づいて判断されてもよい。本明細書中で使用される場合、リスクの増加の表現の例としては、オッズ、確率、オッズ比、ｐ値、寄与リスク、相対頻度、陽性的中率、陰性適中率、及び相対的リスクが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４３】
例えば、対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルとＰＴＳＤを患っている可能性との間の相関性は、オッズ比（ＯＲ）によって及び相対的リスク（ＲＲ）によって判断されてもよい。Ｐ（Ｒ＋）がリスクプロフィール（Ｒ）を有する個体のＰＴＳＤを発症する確率であり、Ｐ（Ｒ−）がリスクプロフィールを有さない個体のＰＴＳＤを発症する確率である場合、その結果、相対的リスクは２つの確率の比：ＲＲ＝Ｐ（Ｒ＋）／Ｐ（Ｒ−）である。
【００４４】
しかしながら、症例対照研究では、相対的リスクの直接的な尺度は、サンプリング設計のために得られない場合が多い。オッズ比は低い発生率の疾患に対する相対的リスクの近似値を考慮し、ＯＲ＝（Ｆ＋／（１−Ｆ＋））／（Ｆ−／（１−Ｆ−））により算出することができ、Ｆ＋は、症例研究のリスクプロフィールの頻度であり、Ｆ−は、対照のリスクプロフィールの頻度である。Ｆ＋及びＦ−は、研究のＭＭＲ頻度を使用して算出することができる。
【００４５】
寄与リスク（ＡＲ）は、リスクの増加を表すために使用することができる。ＡＲは、集団においてＭＭＲあるいはＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルの特定のメンバーが原因でＰＴＳＤを呈する個体の割合を示す。ＡＲはまた、個々のマーカーの状態の病因において及び公衆衛生に及ぼす影響に関して個々の構成成分（特定のメンバー、例えば、ＭＣＰ−４またはＭＣＰ−１）の役割を定量する際に重要な場合もある。ＡＲの測定の公衆衛生への関連性は、ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルあるいは個々の構成成分が正常と見なされる場合に防げるであろう集団におけるＰＴＳＤの症例の割合を推定することにある。ＡＲは、以下のとおり求めることができ：ＡＲ＝ＰＥ（ＲＲ−１）／（ＰＥ（ＲＲ−１）＋１）、この場合、ＡＲは、ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルに起因するリスクであり、ＰＥは、全体としての集団内のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルに対する曝露の頻度である。ＲＲは、相対的リスクであり、これは、研究下のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルが母集団において比較的低い発生率を有する場合、オッズ比に近づけることができる。
【００４６】
一実施形態において、患者のリスクの増加は、関連研究から導き出されるｐ値から求めることができる。具体的には、特定のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルとの関連づけは、ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルのＰＴＳＤとの回帰推定をすることによる回帰分析を使用して行うことができる。さらに、回帰は、１つ以上の要因に関して補正または調節されても、またはされなくてもよい。分析が調節され得る要因としては、いくつか挙げるならば年齢、性別、体重、民族、地理的位置、絶食状態、妊娠または妊娠後の状態、月経周期、対象の全身の健康状態、アルコールまたは薬物摂取、カフェインまたはニコチン摂取及び概日リズムならびに対象の遺伝子型が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４７】
リスクの増加はまた、ロジスティック回帰を使用して導き出されるｐ値から求めることができる。二項（または二変数）のロジスティック回帰は、従属が二分であり、独立があらゆるタイプである場合に使用される回帰の形態である。ロジスティック回帰は、連続及び／またはカテゴリー独立に基づいて従属変数を予測するため、及び独立によって説明される従属変数の分散のパーセントを求めるため；独立の相対的重要性を順位付けするため；相互作用効果を評価するため；及び共変量の統制変数の影響を理解するために使用することができる。ロジスティック回帰は、従属の「ロジット」変数（生じるかまたは生じない従属のオッズの自然対数）への変換後に最大尤推定法を利用する。このように、ロジスティック回帰は、特定の事象が生じる確率を推定する。こうした分析は、プログラムＳＡＳにより行われる。
【００４８】
試験サンプルのＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルの個々の構成成分のレベルをアッセイするための手法は当業者によく知られており、本発明は構成成分が評価される手段に限定されない。一実施形態において、ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルの個々の構成成分のレベルは、いくつか例を挙げると、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＰＬＣ）と連結した質量分析、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、及びＵＰＬＣを使用して評価される。個々の構成成分のレベルを評価するその他の方法としては、以下に限定されないが、ＥＬＩＳＡアッセイなどの生物学的方法が挙げられる。
【００４９】
ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルの個々の構成成分のレベルの評価は、絶対値または相対値として表すことができ、別の構成成分、標準的な内部標準またはサンプル中にあることがわかっている別の化合物の分子に関して表されても、または表されなくてもよい。標準物質または内部標準と比較してレベルが評価される場合、標準物質は、サンプル処理前、間、または後に試験サンプルに添加されてもよい。
【００５０】
対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルは、正常なＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルと考えられるＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルと比較される。正常な個体のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを確立するために、個体または個体の群は、まずＰＴＳＤに関して評価され、個体または個体の群がＰＴＳＤを患っていないことを立証してもよい。立証されたら、その後、その個体または個体の群のＭＭＲが求められ、「正常な」ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを確立してもよい。一実施形態において、正常なＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルは、対象がＰＴＳＤを患っていないか、またはその徴候（臨床的もしくはその他の点）を示していないと考えられるときに同じ対象から確認することができる。一実施形態において、「正常な」ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルは、測定可能な、認知可能なまたは診断されるＰＴＳＤの発症前にサンプルが採取される同じ対象において評価される。すなわち、ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルに対して「正常な」という用語は、ＰＴＳＤの発症前の対象の基準ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを意味するよう使用することができる。ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルは、その後、定期的に再評価され、対象の基準ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルと比較されてもよい。したがって、本発明はまた、（ＰＴＳＤの処置の有効性を監視することを含む）対象におけるＰＴＳＤの進行を監視する方法であって、対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを少なくとも２日以上の２つ以上の期間にわたって求めることを含む方法を含む。本明細書中で使用される場合、「日」は２４時間の期間であり、必ずしもカレンダーの異なる日ではない。例えば、本発明の方法のいくつかの実施形態は、１年、２年、３、年、４年、５年、６年、７年、８年、９年もしくはさらに１０年以上などの２、３、４、５、６、７、８、９、１０時間またはさらにそれ以上の期間にわたって対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを求めることを含むことになる。対象のＰＴＳＤを患うリスクを監視する方法は、対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルがＰＴＳＤの処置の間及び後に評価される実施形態も含むことになろう。言い換えると、本発明はまた、処置の過程にわたって及び処置後に対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを評価することによってＰＴＳＤの処置の効果を監視する方法を含む。処置は、ＭＭＲの症状または根本的原因を処置するために設計された任意の処置であってもよい。
【００５１】
別の実施形態において、正常なＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルは、異なる対象または患者（分析されている対象から）からのサンプルにおいて評価され、この異なる対象はＰＴＳＤを有していないか、または有している疑いがない。さらに別の実施形態において、正常なＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルは、健康な個体の集団において評価され、その構成成分はＰＴＳＤの徴候を示さない。したがって、対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルは、１つの正常なサンプルから形成された正常なＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルまたは２つ以上の正常なサンプルから形成されたＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルと比較することができる。
【００５２】
本発明はまた、対象における心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）の進行を監視する方法であって、少なくとも異なる２日の対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを求めることと、ＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを経時的に比較して、対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルが経時的に変化しているかどうかを判断することとを含む方法に関する。対象のＭＭＲ及び／またはＭＩＰ−１βレベルの経時的な増加は、対象においてＰＴＳＤが進行していることを示す。対象のＴＡＲＣレベルの経時的な低下は、対象においてＰＴＳＤが進行していることを示す。
【００５３】
本発明はまた、対象の心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）を診断する方法であって、対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを求めることと、そのＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを正常なＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルと比較することとを含む方法に関する。正常なＭＭＲ及び／またはＭＩＰ−１βレベルを超えたＭＭＲ及び／またはＭＩＰ−１βレベルの上昇は、対象がＰＴＳＤを有するか、または患っていることを示す。正常なＴＡＲＣレベルを超えたＴＡＲＣレベルの低下は、対象がＰＴＳＤを有するか、または患っていることを示す。
【００５４】
本発明はまた、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）の対象を治療する方法であって、本明細書に記載の本発明の方法を使用することによって対象がＰＴＳＤを有することを判断することと、ＰＴＳＤを有する対象にＰＴＳＤを処置するための治療計画を施すこととを含む方法に関する。ＰＴＳＤを処置するために使用される治療計画は、以下に限定されるものではないが、認知行動療法（ＣＢＴ）、もう１つの選択的セロトニン再取り込み阻害薬（ＳＳＲＩ）の投与、１つ以上の抗不安薬の投与及び１つ以上の抗不眠薬の投与を含む。具体的には、治療の方法は、対象から得られたサンプル中のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを求めることと、サンプル中のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルを正常なＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルと比較して、対象のＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルが正常なＭＭＲ、ＴＡＲＣレベル及び／またはＭＩＰ−１βレベルと比較して変化しているかどうかを判断することとを含み、正常なＭＭＲを有すると定義されたものと比較した対象のＭＭＲの変化は、対象がＰＴＳＤを患っていることを示す。正常なＭＭＲ及び／またはＭＩＰ−１βレベルを超えたＭＭＲ及び／またはＭＩＰ−１βレベルの上昇は、対象がＰＴＳＤを有するか、または患っていることを示す。正常なＴＡＲＣレベルを超えたＴＡＲＣレベルの低下は、対象がＰＴＳＤを有するか、または患っていることを示す。この判断に続いて、対象は、ＰＴＳＤを処置するための治療計画を施される。
【００５５】
選ばれた実施形態において、ＰＴＳＤを患っている対象に投与されるＳＳＲＩは、シタロプラム、ダポキセチン、エスシタロプラム、フルオキセチン、フルボキサミン、インダルピン、パロキセチン、セルトラリン及びジメリジンから成る群から選択される。
【００５６】
本発明はまた、本発明の方法に使用できるキットに関する。具体的には、本発明は、ＰＴＳＤを診断、監視及び／または処置するためのキットであって、固体基板に固定され、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−４、ＴＡＲＣ及びＭＩＰ−１βのうちの少なくとも１つと特異的に結合する１セット以上の抗体を含むキットを提供する。特定の実施形態において、本キットは、固体基板に固定された少なくとも２セットの抗体を含み、１セットの抗体は、ＭＣＰ−１に向けられ、第２のセットの抗体はＭＣＰ−４に向けられる。特定の実施形態において、本キットは、固体基板に固定された少なくとも４セットの抗体を含み、１セットの抗体はＭＣＰ−１に向けられ、第２のセットの抗体はＭＣＰ−４に向けられ、第３のセットの抗体はＴＡＲＣに向けられ、第４のセットの抗体はＭＩＰ−１βに向けられる。
【００５７】
基板に固定される抗体は、標識化されていても、またはされていなくてもよい。例えば、抗体は、特異的なタンパク質の結合により標識をはずすことが可能で、サンプル中のマーカーの存在がシグナルの不在によって示されるような様式で、標識化されてもよく、例えば、標識タンパク質と結合させられてもよい。さらに、基板に固定される抗体は、表面に直接または間接的に固定されてもよい。抗体などのタンパク質を固定するための方法は当該技術分野において周知であり、そのような方法は、標的タンパク質、例えば、ＴＡＲＣまたは別の抗体を基板の表面に固定するために使用することができ、その表面上に特異的なバイオマーカーに向けられた抗体を、その後、特異的に結合させることができる。この手法では、特定のバイオマーカーに向けられた抗体が、本発明の目的で基板の表面に固定される。
【００５８】
本発明のキットは、対象からのサンプルを収集するための容器及び１つ以上の試薬、例えば、検量線を準備するためのＭＣＰ−１、ＭＣＰ−４、ＴＡＲＣまたはＭＩＰ−１βなどの精製標的バイオマーカーを含んでも、または含まなくてもよい。本キットは、洗浄バッファー、標識試薬及び標識の存在（または不在）を検出するために使用される試薬などの付加的な試薬を含んでも、または含まなくてもよい。
【実施例】
【００５９】
実施例１  −  方法及び材料
薬物療法を受けていない一般の慢性ＰＴＳＤの１２人の外来患者（年齢中央値  歳、女性８人／男性４人）及び心的外傷を受けていない健康な１１人の対象（年齢中央値２９．５歳、女性５人、男性５人）を元のコホート研究から選択した。
【００６０】
健康な対照の対象は、年齢、性別及びＢＭＩに関して可能なかぎり厳密にＰＴＳＤ患者と一致させるよう選択した。ここで研究したＰＴＳＤ患者の部分集合において、ＰＴＳＤ前の心的外傷は、５人の対象で思春期前、７人の対象で成人としてであった。心的外傷にさらされてからの経過時間は、思春期前の心的外傷で２６±４年、成人の曝露で１０．１±８．８年であった。患者は、その他の点では身体的に健康で、研究前の少なくとも６ヶ月間アルコールもしくは物質乱用、または依存症に対する基準を満たさず、腰椎穿刺及び付随する静脈穿刺前の少なくとも３週間は向精神薬を与えられていなかった。ただし、ＰＴＳＤ患者に必要とされる薬物療法を受けていない期間は、前にフルオキセチンまたは他のＳＳＲＩを服用した患者に対しては６週間に延長した。さらに、心的外傷の経歴があるが、後に続くＰＴＳＤの病歴はない４人の患者（女性３人及び男性１人）が含まれた。これら後者の患者はこの研究には含まれなかったが、これらの「心的外傷対照」に関するデータは健康な対照と統計学的に異ならなかった。
【００６１】
Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ  ｆｏｒ  ＤＳＭ−ＩＶ（ＳＣＩＤ）を使用して精神医学的診断を確立した。ＰＴＳＤの重症度は、Ｃｌｉｎｉｃｉａｎ−Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ＰＴＳＤ  Ｓｃａｌｅ  （ＣＡＰＳ）を使用して決定した。抑うつ症状、不安症状及び全般的な症状の重症度を、それぞれ抑うつ症状尺度（ＩＤＳ）、ハミルトン不安評価尺度（ＨＡＭＡ）及び臨床全般重症度（ＣＧＩ−Ｓ）を使用して評価した。ＰＴＳＤの個人及び対照は、年齢、性別分布、人種、またはボディマスインデックス（ＢＭＩ）に関して異ならないものとした。ＰＴＳＤの重症度は、７３．１±１０．３のＣＡＰＳスコアで中等度であった。うつ病症状（ＩＤＳ  １６．４±８．２）、不安症状（ＨＡＭＡ  １３．１±６．８）及び全般的な症状（ＣＧＩ−Ｓ    ４±１．２）の重症度も中等度であった。
【００６２】
血液サンプルをＰＴＳＤ患者及び健康な対照患者から採取した。この研究のために、患者に留置静脈カテーテルを埋め込み、２７時間にわたって１時間毎に血液を採取した。全血漿採取過程に９ＡＭの時点が少なくとも２回あるものとし、２回目の９ＡＭの時点からのサンプルを分析のために選択した。確実に留置カテーテルから手動で採取した血液サンプルをすぐにクエン酸ナトリウムで抗凝固処理し、遠心分離によって血漿を回収するよう注意を払った。また、確実に夜間のサンプル採取は患者の睡眠を邪魔することなく行うよう注意を払った。遠心分離の直後に、上清溶液を分けて、−８０℃で保存した。
【００６３】
腰椎穿刺（ＬＰ）は、経験を積んだ医師が８：００から９：００ＡＭの間に行った。２０ゲージの導入針を挿入し、およそ１５ｃｃのＣＳＦを抜き取り、４，０００ＲＰＭで遠心分離し、−８０℃でアリコートとして凍結した。ＬＰＳは、血漿採取とは異なる日に抜き取った。
【００６４】
サイトカイン及びケモカインに対する２つの多重アッセイを、ＳＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｉｍａｇｅｒ  ６０００機器（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、Ｇａｉｔｈｅｒｂｕｒｇ、ＭＤ）における患者及び対照血漿サンプルの分析に使用した。これらのアッセイの第１は、ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０及びＴＮＦ−αを測定するためのＨｕｍａｎ  ＰｒｏＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ９  Ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙであった（ＭｅｓｏＳｃａｌｅカタログ番号Ｋ１５００７Ｃ−４）。これらのアッセイの第２は、エオタキシン１、ＭＩＰ−１β、エオタキシン−３、ＴＡＲＣ、ＩＰ−１０、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１（ＣＣＬ２）、ＭＤＣ、及びＭＣＰ−４（ＣＣＬ１３）の測定のためのＨｕｍａｎ  Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ９  Ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙであった（カタログ番号Ｋ１５００１Ｃ−１）。このサンプルを特定のサイトカインに対する捕捉抗体によりプレコートされたプレートに加えた。そのプレートに封をし、室温で２時間振盪した。そのプレートをＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０中で洗浄し、その後、検出抗体溶液（１×または１μｇ／ｍＬ）を添加した。そのプレートに封をし、室温で２時間振盪した。その後、そのプレートをＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０中で洗浄した。読み取りバッファーを２倍の濃度で添加し、プレートをＳＥＣＴＯＲ＠６０００  Ｉｍａｇｅｒにおいて読み取った。
【００６５】
データポイントは、再現性のある技術的反復、標準曲線の直線部分内に存在する低い％係変動数（ＣＶ＜５％）及び検出の下限（ＬＬＯＤ）より上の値に基づいて特徴づけられた。ＰＴＳＤのサンプルと正常な対照との間の差を両側ｔ検定を使用して算出し、必要に応じてｐ≦０．０５レベルまたは平均からの２以上の標準偏差（ＳＤ≧２．０）を有意とした。健康な対照のＣＳＦからのすべての分析物に対する値は、分析のための業界標準のＭｅｓｏＳｃａｌｅ電気化学発光Ｓｅｃｔｏｒ  ６０００プラットフォームを使用した他の人によって公開されたデータと統計学的に区別できなかった［２３〜２６］。相対的な概日変動の分析のために、個々の患者に関する値をその個々の２４時間の平均に正規化し、それぞれの患者に関する変化をパーセンテージとして算出した。そのパーセンテージを各時間に対して加えて、ＰＴＳＤ患者及び健康な対照患者に関する合成プロフィールを作成した。時間を血液サンプルの採取を開始した日の日の出時間に標準化した（Ｚ＝０、ツァイトゲーバー）。概日リズムは、データを余弦関数に当てはめることによってモデル化した。
【００６６】
実施例２  −  結果
下記表２は、９ＡＭの時点においてＰＴＳＤ及び健康な対照の両方の患者から採取した血漿中のサイトカイン及びケモカインの測定値を示す。ＭＣＰ−４は、約４３％有意に上昇した。ｐ値は０．０１であり、曲線下面積（「ＡＵＣ」）は０．８２である。対照的に、ＭＣＰ−１は約２０％減少した。ＡＵＣ値はこれも０．８２である。したがって、ＭＣＰ−１及びＭＣＰ−４データは反対の方向に層別化する。
【００６７】
表２の最後の行に示されるとおり、これらの２つの反対方向の分類指標を割ることによる、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比はＰＴＳＤ血漿で８４％上昇し、９ＡＭに採取したＰＴＳＤ血漿に対する極めて有意な候補測定規準を提供する。０．００４の低いｐ値及び０．８４の高いＡＵＣ値の両方に基づいてこの差は有意である。このＰＴＳＤ固有の測定規準は、２ＡＭよりも９ＡＭにおいてより高い値を有し（以下参照）、これは、シグナルが日中のものである可能性もあることを示す。
【表２】
2018536152.tif 000004
【００６８】
ＰＴＳＤの９ＡＭの血漿中のいくつかの他の個々のサイトカイン及びケモカインも、健康な対照の血漿と比較して有意に異なった。有意に異なるサイトカイン及びケモカインには、ＩＬ−１β（２分の１に減少；ｐ＝０．０４；ＡＵＣ＝０．７１）；ＴＮＦ−α（約６４％上昇；ｐ＝０．０３；ＡＵＣ＝０．７６）；及びＩＰ−１０（約５０％上昇；ｐ＝０．０４；ＡＵＣ＝０．７３）が含まれた。それでもなお、これらの差は有意ではあったが、これらは相対的に中程度であり、受信者操作特性（ＲＯＣ）から算出したＡＵＣ値も中程度であった。
【００６９】
２ＡＭにおけるＰＴＳＤ血漿中のサイトカイン及びケモカインの測定
下記表３は、２ＡＭにＰＴＳＤ及び健康な対照の両方の患者から採取した血漿中のサイトカイン及びケモカインの測定値を示す。この表は、２つの分析物、ＭＣＰ−１及びＭＣＰ−４は依然として反対方向に変動し、それぞれが一覧の最も高いＡＵＣ値中にあったことを示す。ＰＴＳＤの症例に関して、表３の最後の行は、健康な対照と比較してＰＴＳＤ患者の血漿中のＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比が３４％上昇したことを示す。Ｐ値は、両側ｔ検定に基づいて、０．０２であり、ＲＯＣ曲線は、０．７５のＡＵＣを有している。したがって、多パラメータ分析はまた、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比を、９ＡＭ及び２ＡＭの両血漿サンプル中のＰＴＳＤ及び健康な対照に対する２値の候補分類指標として特定した。
【表３】
2018536152.tif 000005
【００７０】
表４は、９ＡＭの時点においてＰＴＳＤ及び健康な対照の両方の患者から採取したＣＳＦ中のサイトカイン及びケモカインの測定値を示す。分析物の完全なセットのうち、ＰＴＳＤのＣＳＦではＩＬ−８の減少のみ有意性にアプローチすることができた。ＰＴＳＤのＣＳＦ中のＩＬ−８は約２５％減少したが、ｐ値（両側）は０．０６であった。驚くべきことに、９ＡＭのＣＳＦサンプル中のＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１レベルは血漿中で見られたものと反対であり、ＰＴＳＤと無関係であった。具体的には、健康な対照のＣＳＦ中のＭＣＰ−１レベルは血漿よりも約７倍高い一方で、ＭＣＰ−４レベルは約１００倍低かった。さらに、ＣＳＦ中のＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比は、２ＡＭまたは９ＡＭの血漿サンプル中でのようには、ＰＴＳＤ患者と健康な対照患者との間を有意に区別しなかった。
【表４】
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【００７１】
図１は、それぞれ、２ＡＭ及び９ＡＭにおけるＰＴＳＤ及び健康な対照の血漿、９ＡＭにおけるＣＳＦ中のＭＣＰ−１（図１：ａ、ｂ及びｃ）、ＭＣＰ−４（図１：ｃ、ｄ及びｅ）及びＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比（図１：ｆ、ｇ及びｈ）のドット・プロット分布を示す。２ＡＭ（図１ａ）及び９ＡＭ（図１ｂ）の血漿サンプル中のＭＣＰ−１レベルは、健康な対照に関するレベルより低い傾向がある。
【００７２】
対照的に、９ＡＭのＣＳＦ中（図１ｃ）のＭＣＰ−１レベルは、ＰＴＳＤ及び健康な対照ともに類似しており、並行した９ＡＭの血漿サンプル中のＭＣＰ−１レベルよりも約７倍高かった。一方、図１ｄ（血漿２ＡＭ）及び図１ｅ（血漿９ＡＭ）は、ＰＴＳＤの血漿中のＭＣＰ−４が上昇したことを示す。しかしながら、９ＡＭのＣＳＦ中のＭＣＰ−４のレベルは、ＰＴＳＤ及び健康な対照ともに類似しており（図１ｆ）、いずれかのコホートからの並行した９ＡＭの血漿よりも約１００倍少ないＭＣＰ−４を含んでいた。ＰＴＳＤの血漿中の２ＡＭ（図１ｇ）及び９ＡＭ（図１ｈ）におけるＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比は上昇したが、９ＡＭ  ＣＳＦ中では低かった（図１ｉ）。
【００７３】
図４はまた、９ＡＭの血漿サンプルの（［ＭＣＰ−４］−［ＭＣＰ−１］）に関する差のプロットを示す。この差の統計的有意性は、比に関してと同じである（ｐ＝０．００４）。
【００７４】
図２ａは、５人のＰＴＳＤ及び５人の健康な対照からの血漿のＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比に関する２４時間のプロフィールを示す。このデータは、全２４時間にわたって、ＰＴＳＤ患者に関するスケールフリーなＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比が、健康な対照の比のおよそ２倍のままであったことを示す。したがって、比自体が実用的な測定規準を構成し、これは、血液採取が行われるいかなる時間でも算出することができる。正規化し、フィルタリングした図２ｂのデータは、健康な対照のＭＣＰ４／ＭＣＰ−１比が、深夜の時間に一度ピークに達することを示す。一方、ＰＴＳＤ患者は、健康な対照の深夜のピークと同時に起きるピーク、及び後の午前中に生じる別のピークの２つのピークを有する。
【００７５】
図２ｃはまた、健康な対照のわずか１回と比較して、ＰＴＳＤ患者のＭＣＰ−４は１日をとおして４回ピークに達することを示す。さらに、ＰＴＳＤ患者の深夜のＭＣＰ−４ピークはピーク時間が健康な対照にほぼ３時間遅れる。同様だが固有の時間的障害もＭＣＰ−１プロフィールを特徴づけるようである。例えば、図２ｄは、ＰＴＳＤ患者及び健康な対照のＭＣＰ−１濃度には深夜のピークがあるが、ＰＴＳＤ患者の深夜のピークは６時間近く遅れることを示す。
【００７６】
ＰＴＳＤに対するＭＣＰ−４及びＭＣＰ−１シグナルの特異性及び有意性をさらに検証するために、７種の他のケモカインの発現の概日パターンをＰＴＳＤ患者と健康な対照の間の有意性に関して全２４時間にわたって試験した。これらの分析物のいくつかに関してＰＴＳＤと健康な対照との間に平均差があったが、患者間の分散は、ＭＣＰ−４を除いて、試験したすべてのケモカインのレベルに実質的な部分的一致を示す。図３は、時間単位で試験したすべてのケモカインのＰＴＳＤと健康な対照との間の差に関するｐ値をＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比に対して２４時間の概日時間にわたってプロットする。ＭＣＰ−４及びＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比に関するｐ値は、ｐ＝０．０１から０．０００１の間の範囲である。ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比に関する最も良い統計値は、Ｚ＝０を３〜４時間過ぎた時点（８〜１０ＡＭ）である。ＭＣＰ−４とは対照的に、他の分析物は、０．１から１．０の間のｐ値が占める統計的空間に個々にまとまっていた。
【００７７】
しかしながら、個々の概日リズム構成成分の雑音特性は、時間生物学文献においてよく知られている。代替的な解決手段は、（ｉ）３時間毎の移動平均を作成することによって時間毎の変動をフィルタリングし（「取り除き」）、（ｉｉ）５人の個人に対する結果を平均し、（ｉｉｉ）全データを全２４時間に関する平均に対する比率で表すことによって特定の分析物に関する概日リズムの差を比較することであった［２８］。これらの方法を使用して、図７（Ａ〜Ｈ）は、ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比に関して有意な定量的時間非依存的な差を検出できたに過ぎないが、試験したさまざまなケモカインに対して、ＰＴＳＤ患者に関する概日リズムが乱れていることを示す。実際に、２つの関連しないマーカーの比は、特定の疾患または状態を有する対象を特定するために有用であろうことは一般的ではない。
【００７８】
図８Ａは、女性ＰＴＳＤ患者対女性の健康な対照の間の平均ｌｏｇ血漿ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比の差を示す。ＰＴＳＤ女性は、どの時間においても健康な対照女性よりも大きく、その差は、概日時間にわたって各時間において有意であるか、または有意な傾向がある（ｐ＜０．０５）。図８Ｂは、男性ＰＴＳＤ患者対男性の健康な対照の間の平均ｌｏｇ血漿ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比の差を示す。ＰＴＳＤ男性は、どの時間においても健康な対照男性よりも有意に大きい（ｐ＜０．０５）。図８Ｃは、すべてのＰＴＳＤ患者対すべての健康な対照の間の平均ｌｏｇ血漿ＭＣＰ−４／ＭＣＰ−１比の差を示す。すべてのＰＴＳＤ患者は、どの時間においてもすべての健康な対照よりも大きく、その差は有意である（ｐ＜０．０５）。各時間における差（図８Ａ〜８Ｃ）のそれぞれに対するｐ値を図８Ｄに示す。エラーバーは、＋／−ＳＥＭ（平均値の標準誤差）である。
【００７９】
図９Ａは、女性ＰＴＳＤ患者対女性の健康な対照の間の平均ｌｏｇ血漿ＭＩＰ−１βレベルの差を示す。ＰＴＳＤ女性は、どの時間においても健康な対照女性よりも大きく、概日時間にわたって、各時間においてその差は有意であるか、または有意な傾向がある。（ｐ＜０．０５）。図９Ｂは、男性ＰＴＳＤ患者対男性の健康な対照の間の平均ｌｏｇ血漿ＭＩＰ−１βレベルの差を示す。ＰＴＳＤ男性は、どの時間においても健康な対照男性よりもやや大きい傾向にあるが、どの時間もこれらの差は、概日時間にわたって有意でない（ｐ＜０．０５）。図９Ｃは、すべてのＰＴＳＤ患者対すべての健康な対照の間の平均ｌｏｇ血漿ＭＩＰ−１βレベルの差を示す。すべてのＰＴＳＤ患者は、どの時間においてもすべての健康な対照よりも大きい傾向がある。ただし、この傾向は、女性ＰＴＳＤ患者のみからの寄与に基づく。図９Ｄは、概日時間にわたるＭＩＰ−１βに関するｌｏｇ血漿中濃度差の有意性を示す。赤い横線は、算術スケール上のＰ＝０．０５と同じである。男性ＰＴＳＤ（黒い点線）；女性ＰＴＳＤ（黒い破線）；すべてのＰＴＳＤ（黒い実線）。縦軸はｌｏｇ  ｐ値である。エラーバーは、＋／−ＳＥＭ（平均値の標準誤差）である。各時間における差のＰ値を図９Ｄに示す。
【００８０】
図１０Ａは、女性ＰＴＳＤ患者対女性の健康な対照の間の平均ｌｏｇ血漿ＴＡＲＣレベルの差を示す。どの時間のＰＴＳＤ女性と健康な対照女性との間の差も有意でない（ｐ＜０．０５）。図１０Ｂは、男性ＰＴＳＤ患者の平均ｌｏｇ血漿ＴＡＲＣレベルの間の差が男性の健康な対照よりも低いことを示す。概日時間にわたる各時間においてＰＴＳＤ男性は、健康な対照とはおよそＺ−１２及びＺにおいてのみ有意に異なる、（ｐ＜０．０５）。図１０Ｃは、すべてのＰＴＳＤ患者対すべての健康な対照の間の平均ｌｏｇ血漿ＴＡＲＣレベルの差を示す。概日時間にわたる各時間において有意差はない（ｐ＜０．０５）。図１０Ｄは、概日時間にわたるＴＡＲＣに関するｌｏｇ血漿中濃度差の有意性を示す。赤い横線は、算術スケール上のＰ＝０．０５と同じである。男性ＰＴＳＤ（黒い点線）；女性ＰＴＳＤ（黒い破線）；すべてのＰＴＳＤ（黒い実線）。概日時間にわたるすべての時間において男性ＰＴＳＤ患者は、男性の健康な対照とはおよそＺ−１２及びＺにおいてのみ有意に異なる、（ｐ＜０．０５）。エラーバーは、＋／−ＳＥＭ（平均値の標準誤差）である。各時間における差のＰ値を図１０Ｄに示す。
【００８１】
本明細書中のすべての参考文献は参照により組み込まれる。
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２４．  Ｗｅｓｔｉｎ  Ｋ，  Ｂｕｃｈｈａｖｅ  Ｐ，  Ｎｉｅｌｓｅｎ  Ｈ，  Ｍｉｎｔｈｏｎ  Ｌ，  Ｊａｎｃｉａｕｓｋｉｅｎｅ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  ＣＣＬ２  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａ  ｆａｓｔｅｒ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｄｅｃｌｉｎｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅｓ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７：  ｅ３０５２５．
２５．  Ｗｉｌｄ  Ｅ，  Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ  Ａ，  Ｌａｈｉｒｉ  Ｎ，  Ｋｒｕｓ  Ｕ，  Ｏｒｔｈ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）  Ａｂｎｏｒｍａｌ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｉｎ  Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  ＰＬｏＳ  Ｃｕｒｒ  ３：  Ｒｒｎ１２３１．
２６．  Ｊａｎｅｌｉｄｚｅ  Ｓ，  Ｖｅｎｔｏｒｐ  Ｆ，  Ｅｒｈａｒｄｔ  Ｓ，  Ｈａｎｓｓｏｎ  Ｏ，  Ｍｉｎｔｈｏｎ  Ｌ，  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）  Ａｌｔｅｒｅｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ  ａｎｄ  ｐｌａｓｍａ  ｏｆ  ｓｕｉｃｉｄｅ  ａｔｔｅｍｐｔｅｒｓ．  Ｐｓｙｃｈｏｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ３８：  ８５３−８６２．
２７．  Ｉｒｗｉｎ  ＤＪ，  ＭｃＭｉｌｌａｎ  ＣＴ，  Ｔｏｌｅｄｏ  ＪＢ，  Ａｒｎｏｌｄ  ＳＥ，  Ｓｈａｗ  ＬＭ，  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｔａｕ  ａｎｄ  Ａｂｅｔａ  １−４２  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ２  ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｐｌａｔｆｏｒｍｓ．  Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ  ６９：  １０１８−１０２５．
２８．  Ｅｃｋｅｌ−Ｍａｈａｎ  ＫＬ，  Ｐａｔｅｌ  ＶＲ，  ｄｅ  Ｍａｔｅｏ  Ｓ，  Ｏｒｏｚｃｏ−Ｓｏｌｉｓ  Ｒ，  Ｃｅｇｌｉａ  ＮＪ，  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）  Ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｃｌｏｃｋ  ｂｙ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ．  Ｃｅｌｌ  １５５：  １４６４−１４７８．
２９．  Ｇａｒｃｉａ−Ｚｅｐｅｄａ  ＥＡ，  Ｃｏｍｂａｄｉｅｒｅ  Ｃ，  Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇ  ＭＥ，  Ｓａｒａｆｉ  ＭＮ，  Ｌａｖｉｇｎｅ  Ｆ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｈｕｍａｎ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＭＣＰ）−４  ｉｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＣＣ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｎ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ，  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ，  ａｎｄ  ｂａｓｏｐｈｉｌｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ａｎｄ  ｎｏｎａｌｌｅｒｇｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｔｈａｔ  ｓｉｇｎａｌｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ＣＣ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  （ＣＣＲ）−２  ａｎｄ  −３．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７：  ５６１３−５６２６．
３０．  Ｂｌａｎｐａｉｎ  Ｃ，  Ｍｉｇｅｏｔｔｅ  Ｉ，  Ｌｅｅ  Ｂ，  Ｖａｋｉｌｉ  Ｊ，  Ｄｏｒａｎｚ  ＢＪ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  ＣＣＲ５  ｂｉｎｄｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ＣＣ−ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ：  ＭＣＰ−３  ａｃｔｓ  ａｓ  ａ  ｎａｔｕｒａｌ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．  Ｂｌｏｏｄ  ９４：  １８９９−１９０５．
３１．  Ｓｅｇｍａｎ  ＲＨ，  Ｓｈｅｆｉ  Ｎ，  Ｇｏｌｔｓｅｒ−Ｄｕｂｎｅｒ  Ｔ，  Ｆｒｉｅｄｍａｎ  Ｎ，  Ｋａｍｉｎｓｋｉ  Ｎ，  ｅｔ  ａｌ．（２００５）  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｃｅｌｌ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｉｄｅｎｔｉｆｙ  ｅｍｅｒｇｅｎｔ  ｐｏｓｔ−ｔｒａｕｍａｔｉｃ  ｓｔｒｅｓｓ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ａｍｏｎｇ  ｔｒａｕｍａ  ｓｕｒｖｉｖｏｒｓ．  Ｍｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １０：  ５００−５１３，  ４２５．
３２．  Ｙｅｈｕｄａ  Ｒ，  Ｃａｉ  Ｇ，  Ｇｏｌｉｅｒ  ＪＡ，  Ｓａｒａｐａｓ  Ｃ，  Ｇａｌｅａ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ．（２００９）  Ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｏｓｔｔｒａｕｍａｔｉｃ  ｓｔｒｅｓｓ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  Ｔｒａｄｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ａｔｔａｃｋｓ．  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ６６：  ７０８−７１１．
３３．  Ｎｅｙｌａｎ  ＴＣ，  Ｓｕｎ  Ｂ，  Ｒｅｍｐｅｌ  Ｈ，  Ｒｏｓｓ  Ｊ，  Ｌｅｎｏｃｉ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｉｎ  ｍｅｎ  ｖｅｒｓｕｓ  ｗｏｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ＰＴＳＤ．  Ｂｒａｉｎ  Ｂｅｈａｖ  Ｉｍｍｕｎ  ２５：  ５２４−５３１．
３４．  Ｎｇｕｙｅｎ  ＫＤ，  Ｆｅｎｔｒｅｓｓ  ＳＪ，  Ｑｉｕ  Ｙ，  Ｙｕｎ  Ｋ，  Ｃｏｘ  ＪＳ，  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）  Ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｇｅｎｅ  Ｂｍａｌ１  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｄｉｕｒｎａｌ  ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｌｙ６Ｃ（ｈｉ）  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：  １４８３−１４８８．
３５．  Ｄｒｕｚｄ  Ｄ，  Ｓｃｈｅｉｅｒｍａｎｎ  Ｃ  （２０１３）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．  Ｓｏｍｅ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ  ｇｏｔ  ｒｈｙｔｈｍ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４１：  １４６２−１４６４．
３６．  Ｂｏｒｎ  Ｊ，  Ｌａｎｇｅ  Ｔ，  Ｈａｎｓｅｎ  Ｋ，  Ｍｏｌｌｅ  Ｍ，  Ｆｅｈｍ  ＨＬ  （１９９７）  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｌｅｅｐ  ａｎｄ  ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｒｈｙｔｈｍ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｅｌｌｓ．  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５８：  ４４５４−４４６４．
３７．  Ｇｒｉｍａｌｄｉ  Ｂ，  Ｎａｋａｈａｔａ  Ｙ，  Ｓａｈａｒ  Ｓ，  Ｋａｌｕｚｏｖａ  Ｍ，  Ｇａｕｔｈｉｅｒ  Ｄ，  ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ｃｈｒｏｍａｔｉｎ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｃｏｎｔｒｏｌ：  ｍａｓｔｅｒ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ＣＬＯＣＫ  ｉｓ  ａｎ  ｅｎｚｙｍｅ．  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ  Ｓｙｍｐ  Ｑｕａｎｔ  Ｂｉｏｌ  ７２：  １０５−１１２．
３８．  Ｍｅｎｅｔ  ＪＳ，  Ｒｏｓｂａｓｈ  Ｍ  （２０１１）  Ｗｈｅｎ  ｂｒａｉｎ  ｃｌｏｃｋｓ  ｌｏｓｅ  ｔｒａｃｋ  ｏｆ  ｔｉｍｅ：  ｃａｕｓｅ  ｏｒ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  ２１：  ８４９−８５７．
【図１】
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【図２】
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【図３】
2018536152.tif 000009
【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2018536152.tif 000012
【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
2018536152.tif 000014
【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
2018536152.tif 000019
【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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