(57)【要約】  ＶＩＳＴＡの受容体が同定され（ＶＳＩＧ８）、並びに、アゴニストまたはアンタゴニスト化合物、好ましくはＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡ結合相互作用の効果を刺激する、またはそれに拮抗する抗体、ポリペプチド及び融合タンパク質の同定または合成における、この受容体の使用についてもまた記載する。これらのアンタゴニストは、Ｔ細胞免疫におけるＶＩＳＴＡの抑制効果を抑制するために使用してよく、より詳細には、癌または感染症の治療に使用してよい。これらのアゴニスト化合物を使用して、Ｔ細胞免疫におけるＶＩＳＴＡの抑制効果を強化または向上させることによって、自己免疫、アレルギーまたは炎症性状態の治療等におけるＴ細胞免疫を抑制してよい。これらのアゴニスト及びアンタゴニスト化合物を同定するためのスクリーニングアッセイもまた提供する。【選択図】図１
2018505911.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＩＳＴＡとＶ−Ｒ（ＶＳＩＧ８）の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物。
【請求項２】
アゴニスト抗ＶＳＩＧ８抗体または抗体断片である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
アンタゴニスト抗ＶＳＩＧ８抗体または抗体断片である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｔ細胞免疫での抑制効果を誘発するＶＳＩＧ８の細胞外領域、その断片、または、ＶＳＩＧ８の細胞外領域、もしくは配列番号１、２、もしくは３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する前記ＶＳＩＧ８ポリペプチドの誘導体を含むポリペプチドの少なくとも１つのコピーを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ヒト、非ヒト霊長類またはマウスＶＳＩＧ８の細胞外領域全体を含む少なくとも１つのポリペプチドを含む、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
融合タンパク質である、請求項４または５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｉｇ融合タンパク質である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
任意で突然変異誘発し、ＦｃＲまたは補体結合を取り除いたヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４定常領域、またはそれらの断片を含む、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８を含む単離した複合体。
【請求項１０】
前記ＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８はオリゴマーまたは多量体である、請求項９に記載の複合体。
【請求項１１】
請求項１０に記載のＶＩＳＴＡ−ＶＳＩＧ８複合体に特異的に結合する、抗体または抗体断片。
【請求項１２】
上の請求項のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物を含む医薬組成物。
【請求項１３】
上の請求項のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物と抗原を含むワクチン組成物。
【請求項１４】
上に記載の請求項のいずれか一項に従った、診断または治療用途の、ＶＳＩＧ８またはＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡアゴニストまたはアゴニストを含有する治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用であって、前記方法または使用は、治療または診断を必要とする対象に、治療上または診断上効果的な量の、上の請求項のいずれか一項に記載の少なくとも１つのＶＳＩＧ８もしくはＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡアゴニストもしくはアンタゴニストを含む組成物、または上の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物の少なくとも１つの用量を投与することを含む、前記治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用。
【請求項１５】
個体が、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡが仲立ちする免疫への効果の増減に関係する状態を有するかどうかの検出における、抗体もしくは抗原結合断片または組成物の診断方法または使用であって、前記方法または使用は、前記個体からの組織試料を化合物、例えば、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、または組成物と接触させることと、前記組織試料への特異的結合を検出することを含む、前記診断方法または使用。
【請求項１６】
診断もしくは治療用途の、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片を含有する治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用であって、治療及び診断を必要とする対象における、Ｔ細胞免疫もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）免疫の促進、及び／またはＴｒｅｇもしくはＭＤＳＣの抑制を含み、上の請求項のいずれか一項に記載の、治療上または診断上効果的な量の少なくとも１つの抗体、抗原結合断片または組成物を投与することを含み、かかる抗体または抗原結合断片は、免疫または免疫細胞において、配列番号１、２、または３のポリペプチドに少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するＶＳＩＧ８ポリペプチドの、少なくとも１つの効果に拮抗するか遮断する、前記治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用。
【請求項１７】
Ｔ細胞免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの阻害効果を抑制するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１８】
ＣＴＬ活性を促進するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項１９】
診断もしくは治療用途の、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片を含有する治療及び／もしくは診断及び／もしくは診断方法、または、組成物の使用であって、治療及び／または診断を必要とする対象においてＮＫまたはＴ細胞免疫を促進することを含み、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の、治療上または診断上効果的な量の少なくとも１つの抗体、抗原結合断片または組成物を投与することを含み、かかる抗体または抗原結合断片は、配列番号１、２、もしくは３のアミノ酸配列を有するポリペプチド（ＶＳＩＧ８）、またはこのアミノ酸配列、もしくは免疫もしくは免疫細胞上の非ヒトＶＳＩＧ８オルソログ、もしくはヒトＶＩＳＴＡと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドの少なくとも１つの効果を阻害する、前記治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用。
【請求項２０】
前記治療される個体が感染症を患っている、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２１】
前記治療される個体は癌を患っている、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２２】
上に記載の請求項のいずれか一項に記載の任意の化合物、例えば、以下の免疫阻害性効果の少なくとも１ついずれか１つ、または組み合わせを仲立ちする、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の方法または使用であって、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とし、任意で自己免疫、アレルギー、炎症、移植または敗血症を治療（ｔｒｅａｔｒ）するために使用される、前記方法または使用：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の低下、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞の細胞数及び／もしくは活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉ）細胞の直接殺傷の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の低下、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の低下。
【請求項２３】
診断もしくは治療用途の、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片を含有する治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用であって、治療及び／または診断を必要とする対象における、Ｔ細胞免疫もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）免疫の抑制、及び／またはＴｒｅｇもしくはＭＤＳＣの促進を含み、上の請求項のいずれか一項に記載の、少なくとも１つの抗体、抗原結合断片または組成物を投与することを含み、かかる抗体または抗原結合断片が、免疫または免疫細胞上の、配列番号１、２、もしくは３のアミノ酸配列を有するポリペプチド（ＶＳＩＧ８）、またはオルソログの少なくとも１つの効果を強める、模倣する、または促進する、前記治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用。
【請求項２４】
アレルギー、自己免疫、移植、遺伝子治療、炎症またはこれらの組み合わせの治療で用いる、請求項２３に記載の方法または使用。
【請求項２５】
ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ３、ＶＩＳＴＡのうちの１つ以上を標的とするアンタゴニスト抗体、及び／またはＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、もしくはＩＣＯＳの１つ以上を標的とするアゴニスト抗体から選択される別の抗体を更に含む、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【請求項２６】
治療前、治療と同時、及び／または治療後に、個体の細胞によりＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡタンパク質をアッセイすることを含む、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２７】
上に記載の請求項のいずれか一項に記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原断片、または、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の方法もしくは使用において好適な抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原断片を選択するためのアッセイ方法であって、前記方法は、（ｉ）推定上、配列番号１、２、もしくは３のいずれかに記載されるアミノ酸配列から選択される配列を有するＶＳＩＧ８ポリペプチドに結合する、もしくは、この配列もしくは非ヒトＶＳＩＧ８オルソログと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドに結合する、１つ以上の抗体、または、少なくとも１つのＶＳＩＧ８エピトープを含有する、ポリペプチドの断片もしくは変異体であって、前記断片もしくは変異体が、前記ポリペプチド、または非ヒトＶＳＩＧ８オルソログに少なくとも９０％の同一性を有する、前記断片もしくは変異体を得ることと、（ｉｉ）前記抗体または抗原結合断片が前記ＶＳＩＧ８ポリペプチドに特異的に結合するかどうかを決定することと、（ｉｉ）前記抗体または抗原結合断片が、免疫におけるＶＳＩＧ８の少なくとも１つの効果を制御（刺激する、またはそれに拮抗する）かどうかを決定することと、（ｉｖ）（ｉｉ）と（ｉｉ）が満たされる場合、前記抗体を、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の方法または使用で有用な可能性があるものとして選択することと、を含む、前記方法。
【請求項２８】
前記選択される抗体は、以下の効果のうちの少なくとも１つを仲立ちすることを示し、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発することを条件とする、請求項２７に記載の方法：（ｉ）免疫応答の増加、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の増加、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加、（ｉｖ）ＮＫ細胞活性の増加、（ｖ）Ｔ細胞抑制の緩和、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の増加、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の増加、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の増加、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の増加、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの少なくとも１つの細胞数、及び／もしくは活性の減少もしくは除去、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の活性の低下、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの減少もしくは除去、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ腫瘍形成活性の低下、（ｘｖ）Ｎ２好中球の減少もしくは除去、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球の腫瘍形成活性の低下、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の低下、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の低下、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の低下、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の逆転、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の増加、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の増加、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の刺激、（ｘｘｉｖ）癌細胞のアポトーシスもしくは溶解の誘発、（ｘｘｖ）癌細胞に対する細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の刺激、（ｘｘｖｉ）癌細胞の直接殺傷の誘発、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の増加、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の誘発。
【請求項２９】
前記選択した抗体は、以下の効果のうちの少なくとも１つを仲立ちすることを示し、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発することを条件とする、請求項２７に記載の方法：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の低下、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞の細胞数及び／もしくは活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞に対する細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉ）細胞の直接殺傷の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の低下、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の低下。
【請求項３０】
前記選択された抗体は、ヒトまたは齧歯類ＶＳＩＧ８のＶＩＳＴＡへの結合と競合することを示す、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
上に記載の請求項のいずれか一項により得た免疫調節抗体もしくは抗原結合断片、またはこれらを含有する医薬もしくは診断用組成物。
【請求項３２】
癌、感染症、敗血症、自己免疫、炎症、アレルギーもしくは他の免疫状態を治療もしくは診断するため、または、細胞もしくは遺伝子治療薬、もしくは移植した細胞、組織もしくは臓器に対する望ましくない免疫反応を抑制するための、上に記載の請求項のいずれか一項に従って得た免疫調節抗体もしくは抗原結合断片、もしくはＶＳＩＧ８融合もしくは非融合タンパク質、または、これらを含有する医薬もしくは診断用組成物の使用。
【請求項３３】
細胞、組織または臓器のレシピエントへの移植を含む移植療法であって、前記細胞、組織または臓器は、前記細胞、組織または臓器を前記レシピエントに注入または移植する前に、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片または組成物、またはＶＳＩＧ８融合もしくは非融合タンパク質を含有する組成物を使用してｅｘ  ｖｉｖｏで治療される、前記移植療法。
【請求項３４】
診断上または治療的有効量の、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の化合物を含む診断用または治療用組成物。
【請求項３５】
ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１アゴニストもしくはアンタゴニスト、または他の免疫調節剤の投与を更に含むか包含する、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の方法または組成物。
【請求項３６】
免疫細胞を、上に記載の請求項のいずれか一項に記載のアゴニストまたはアンタゴニスト化合物と接触させる方法。
【請求項３７】
ＶＳＩＧ８を単独、またはＶＩＳＴＡと共に使用して、ＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡアゴニストまたはアンタゴニストを識別することを含むスクリーニングアッセイ。
【請求項３８】
ＶＳＩＧ８  ＥＣＤの断片を含む単離したペプチドであって、前記断片は、配列番号１、２もしくは３のいずれか１つに記載されるアミノ酸配列、または、このアミノ酸と少なくとも８０％、８５、９０、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の配列同一性を有する変異体から本質的になるかこれからなる、前記単離したポリペプチド。
【請求項３９】
２〜１０個の、前記ＶＳＩＧ８  ＥＣＤポリペプチド断片を含む、請求項３８に記載の単離したポリペプチド。
【請求項４０】
前記断片は異種リンカーにより介在され、前記リンカーはＶＳＩＧ８ポリペプチドの断片ではない、請求項３７〜３８に記載の単離したポリペプチド。
【請求項４１】
異種ポリペプチド及び／または半減期延長部位に結合した、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の、または、配列番号１、２もしくは３のいずれか一項に記載の前記単離したポリペプチドを含み、前記異種ポリペプチドまたは前記半減期延長部位がＶＳＩＧ８ポリペプチドの断片でないことを条件とする、融合タンパク質。
【請求項４２】
ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるヒト免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項４３】
受容体、ホルモン、サイトカイン、抗原、Ｂ細胞標的、ＮＫ細胞標的、Ｔ細胞標的、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー、ヘッジホッグファミリーメンバー、受容体型チロシンキナーゼ、プロテオグリカン関連分子、ＴＧＦ−βスーパーファミリーメンバー、Ｗｎｔ関連分子、受容体リガンド、樹状細胞標的、骨髄細胞標的、単核細胞／マクロファージ細胞標的、または血管新生標的である少なくとも１種の異種ポリペプチドを含む、上の請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項４４】
前記抗原は腫瘍抗原、自己抗原、アレルゲン、または病原体抗原である、請求項４３に記載の融合タンパク質。
【請求項４５】
免疫調節ポリペプチドである少なくとも１種の異種ポリペプチドを含む、上の請求項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項４６】
以下の効果のうちの少なくとも１つを仲立ちし、前記単離または組み換えＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質が、（ｉ）−（ｘｘｖｉｉｉ）の１つ以上の逆の効果を誘発することを条件とする、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー細胞活性の低下、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｖｉｉｉ）Ｔ細胞によるインターフェロンγ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）制御性Ｔ細胞の細胞数及び／もしくは活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球のうちの１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉ）細胞の直接殺傷の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の低下、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の低下。
【請求項４７】
Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上のＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの効果、または１種以上の炎症性サイトカインの産生を刺激する、またはそれに拮抗する、上の請求項のいずれか一項に記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【請求項４８】
ＣＴＬ活性、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性化、及び／もしくはＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖及び／もしくは細胞枯渇、または炎症性サイトカインの枯渇もしくは分泌のうちの１つ以上を阻害する、または促進する、上の請求項のいずれか一項に記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【請求項４９】
上に記載の請求項のいずれか一項に記載の単離したタンパク質もしくは融合タンパク質、または配列番号１、２、３のいずれかに記載するＶＳＩＧ８  ＥＣＤタンパク質、または発現ベクターもしくはウイルスもしくは組み換え細胞をコードするポリヌクレオチドを含む医薬組成物。
【請求項５０】
任意で、本出願で特定した任意のものから選択される別の薬剤または免疫調節剤と組み合わせて、上に記載の請求項のいずれか一項に記載の少なくとも１種の化合物、融合タンパク質ＶＳＩＧ８アゴニストまたはアンタゴニストを含む、例えば癌、感染症、アレルギー、自己免疫、炎症、移植または敗血症の免疫療法または治療の方法。
【請求項５１】
対象の病気の診断、または診断補助の診断方法であって、前記病気は癌、自己免疫疾患、または感染症からなる群から選択され、前記診断方法はｉｎ  ｖｉｖｏで行われ、上の請求項のいずれか一項に記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、及び／または配列番号１、２、３のいずれに記載されるＶＳＩＧ８  ＥＣＤタンパク質を対象に投与することと、組織への特異的結合を検出することとを含む、前記診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１４年１２月５日出願された、米国仮出願番号第６２／０８８，０５８号に対する優先権を主張し、その内容全体が参照により組み込まれる。
【０００２】
分野
本出願は概して、以前に同定されている、Ｔ細胞の活性化及び増殖を制御するＢ７ファミリーの免疫調節ポリペプチドである、ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶ領域免疫グロブリン含有抑制因子（Ｖ−ｒｅｇｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）１）に対する受容体の同定に関する。本発明はまた、得られる受容体を使用して、治療薬、特に癌、感染症状態、自己免疫、炎症及びアレルギー性疾患の治療において使用され得る、ＶＳＩＧ８の効果を刺激する、またはそれに拮抗する化合物を作製することに関する。本発明は特に、得られる受容体を使用して、ＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒの結合相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物を作製することに関する。また、本発明は、かかるアゴニストまたはアンタゴニストを使用して、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化、及び免疫サイトカインの産生などのＶＩＳＴＡにより影響を受ける免疫機能を増強するかまたは阻害することに関する。
【背景技術】
【０００３】
免疫陰性チェックポイント制御因子（ＮＣＲ）経路は、ヒトの免疫に関係する病気の治療において、顕著な臨床標的であることが証明されている。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用して２つのＮＣＲ（ＣＴＬＡ−４とＰＤ−１）を遮断し腫瘍免疫を高めることは、癌治療に大きな革命をもたらし、ヒトの病気において臨床的に確認された標的として、これらの経路が確立されている。更に最近では、ＮＣＲ経路を誘発する可溶版のＮＣＲリガンドが、自己免疫を治療するための免疫抑制剤（例えば、関節リウマチでのＡＭＰ−１１０／Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ）としてクリニックに導入され、近い将来の臨床結果が非常に待ち望まれている。
【０００４】
ＶＩＳＴＡ（Ｖ領域免疫グロブリン含有Ｔ細胞活性化抑制因子（１））は最近同定されたＮＣＲリガンドであり、最も近い系統的親戚はＰＤ−Ｌ１である。ＰＤ−Ｌ１同様に、ＶＩＳＴＡは、免疫を非常に大きく抑制するリガンドであり（１）、また、ＰＤ−Ｌ１同様に、 ＶＩＳＴＡを遮断することで、症状発現前の腫瘍学モデルにおける、癌に対する治療免疫の発達を可能にする（２）。ＶＩＳＴＡを遮断することで免疫、特に、ＣＤ８＋とＣＤ４＋が仲立ちするＴ細胞免疫が増強されるが、ＶＩＳＴＡ細胞外領域の可溶性Ｉｇ融合タンパク質（ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ）で治療を行うことにより、免疫が抑制され、複数の自己免疫疾患マウスモデルにおける進行を阻止することが示されている。
【０００５】
ＶＩＳＴＡは、非常に大きなＴ細胞抑制を誘発するリガンドであるという、はっきりとした科学的証拠が示されているものの、この抑制効果を伝達する受容体が何であるかは、現在知られていない。ＮＣＲ経路の分野において受容体を同定することは、受容体のｕＭ親和性と密度が極めて低いことを考慮すると、特に困難なままとなっている。
【０００６】
本明細書において、「Ｖ−Ｓｅｔ及び免疫グロブリンドメイン含有８（Ｖ−Ｓｅｔ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ８）」（以下「Ｖ−Ｒ」または「ＶＳＩＧ８」）をＶＩＳＴＡに対する受容体として同定した実験方法を提示する。更に、ＶＳＩＧ８がｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＶＩＳＴＡと特異的に相互作用すること、及び、ＶＩＳＴＡのＶＳＩＧ８との相互作用が、Ｔ細胞の活性化、増殖、及び／または免疫サイトカイン産生の抑制効果を確認するアッセイを開示する。
【０００７】
ＶＳＩＧ８をＶＩＳＴＡに対する受容体として同定することは、臨床的、そして科学的に一層将来性がある。ＶＩＳＴＡアンタゴニスト（例えばαＶＩＳＴＡ  ｍＡｂ）は、腫瘍学及び感染症の治療において治療薬として有用であることが知られている。また、ＶＩＳＴＡの断片をＶＩＳＴＡアンタゴニストとして使用してよく、この断片は、腫瘍学及び感染症の治療において治療薬として潜在的に有用である。更に、ＶＩＳＴＡポリペプチド（例えば、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ融合タンパク質）は、自己免疫、炎症及びアレルギー性疾患の予防及び治療において有用であることが示されている。
【０００８】
したがって、ＶＩＳＴＡ−Ｒアゴニスト及びアンタゴニストの開発のための、第２の独立した標的を提供するので、ＶＳＩＧ８も同様に有用である。実際、Ｂ７ファミリーにおける受容体に関して、今までで現れた最も効果的な治療薬は、（αＣＴＬＡ４｛Ｙｅｒｖｏｙ｝とαＰＤ−１｛Ｎｏｖｏｌｕｍａｂ｝）であり、これらは共に、それぞれのリガンドに対する抗体というよりは、受容体シグナル伝達を遮断する抗体である。
【０００９】
したがって、ＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒ相互作用を遮断、または阻害する、ＶＳＩＧ８に対する抗体は、腫瘍学及び感染症の治療において、効果的な筈である。特に、ＶＩＳＴＡ−Ｒアンタゴニストは潜在的に、黒色腫及び肺癌、またはＨＩＶ感染症等の、癌または感染症の適応症の治療において有用である。対照的に、ＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒの結合相互作用を促進、または向上させるＶＩＳＴＡ−Ｒアゴニストは潜在的に、Ｔ細胞の活性化、Ｔ細胞の増殖、またはサイトカイン産生が所望される、自己免疫性、アレルギー性、及び炎症の適応症、ＧＶＨＤ、移植または他の適応症の治療において有用である。
【００１０】
更に、Ｖ−Ｒを同定することにより、免疫抑制剤としてのＶＩＳＴＡ−Ｉｇの臨床開発が著しく促進され、また、薬力学、標的結合、及び薬物動態学的研究の確認が更に容易になり、それは、最適の臨床結果をもたらすのに必要な受容体占有率の水準を確認するために使用してもよい。
【００１１】
本発明は、ＶＩＳＴＡに対する受容体としてのＶＳＩＧ８を同定することにより、これらの目的を満たす。
【発明の概要】
【００１２】
本発明の目的は、結合アッセイ、及び機能アッセイを用いて、ＶＳＩＧ８がＶＩＳＴＡに対する受容体であることを同定及び確認することである。
【００１３】
同定した受容体を使用して、化合物、例えば、ＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒの結合相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する、アゴニスト及びアンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ−Ｒ抗体、ＶＩＳＴＡ−Ｒポリペプチド、ＶＩＳＴＡ−Ｒ断片及び誘導体、並びにＶＩＳＴＡ−Ｒ融合タンパク質、を作製することもまた、本発明の目的である。
【００１４】
ＶＳＩＧ８アゴニストまたはアンタゴニスト、例えば、ＶＩＳＴＡ−Ｒ及び／またはＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒの結合相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する、Ｖアゴニスト及びアンタゴニスト抗ＶＳＩＧ８抗体、並びに、ＶＳＩＧ８ポリペプチド、ＶＳＩＧ８断片及び誘導体、並びにＶＩＳＴＡ−Ｒ融合タンパク質、を使用して、免疫、特にＴ細胞及び樹状細胞免疫を制御することもまた、本発明の目的である。
【００１５】
ＶＩＳＴＡ−Ｒアゴニストまたはアンタゴニスト、例えば、ＶＩＳＴＡ−Ｒ及び／またはＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒの結合相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する、アゴニスト及びアンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ−Ｒ抗体、並びに、ＶＩＳＴＡ−Ｒポリペプチド、ＶＩＳＴＡ−Ｒ断片及び誘導体、並びにＶＩＳＴＡ−Ｒ融合タンパク質、を使用して、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化、増殖、及びサイトカイン産生を制御することもまた、本発明の特定の目的である。
【００１６】
ＶＩＳＴＡ−Ｒアゴニストまたはアンタゴニスト、例えば、ＶＩＳＴＡ−Ｒ及び／またはＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒの結合相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する、アゴニスト及びアンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ−Ｒ抗体、並びに、ＶＩＳＴＡ−Ｒポリペプチド、ＶＩＳＴＡ−Ｒ断片及び誘導体、並びにＶＩＳＴＡ−Ｒ融合タンパク質、を使用して、癌、ウイルス感染等の感染症を治療することもまた、本発明の特定の目的である。
【００１７】
ＶＩＳＴＡ−Ｒアゴニストまたはアンタゴニスト、例えば、ＶＩＳＴＡ−Ｒ及び／またはＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒの結合相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する、アゴニスト及びアンタゴニスト抗ＶＩＳＴＡ−Ｒ抗体、並びに、ＶＩＳＴＡ−Ｒポリペプチド、ＶＩＳＴＡ−Ｒ断片及び誘導体、並びにＶＩＳＴＡ−Ｒ融合タンパク質、を使用して、自己免疫性、アレルギー性及び炎症性疾患の適応症を治療することもまた、本発明の特定の目的である。
【００１８】
本発明の更なる目的は、同定したＶ−Ｒを用いて、免疫抑制剤としてのＶＩＳＴＡ−Ｉｇの臨床開発を促進することと、薬力学、標的結合、及び薬物動態学的研究の確認を容易にすることと、受容体占有率のレベル、及び、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ治療用化合物に関して最適の臨床結果をもたらすために必要な用量を規定することである。
【００１９】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物、例えば、アゴニスト抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗体断片、または、アンタゴニスト抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗体断片等の、ＶＳＩＧ８を特異的に結合する抗体または抗体断片、を提供することである。
【００２０】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物、例えばヒト化、ヒト、霊長類化、または抗ＶＳＩＧ８抗体または抗体断片、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖまたはＦａｂ２、を提供することである。
【００２１】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物、例えば、ＶＳＩＧ８の細胞外領域、または、ＶＳＩＧ８、好ましくはヒト、霊長類またはマウスＶＳＩＧ８の細胞外領域に対して少なくとも８０、９０、９５％またはそれ以上の配列同一性を有する、前記細胞外領域の誘導体のすべてまたは一部を含む化合物を提供することである。
【００２２】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物、例えば、ＶＳＩＧ８の細胞外領域全域の全体、または少なくとも９０％を含む化合物を提供することである。
【００２３】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８、好ましくはヒト、霊長類またはマウスＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの相互作用に拮抗する化合物を提供することである。
【００２４】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物、例えば、ＶＳＩＧ８−Ｉｇ融合タンパク質等のＶＳＩＧ８融合タンパク質、好ましくは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４の定常領域、またはその断片を含み、任意で突然変異誘発され、ＦｃＲもしくは補体結合、または他のＦｃエフェクター機能を取り除いたものを提供することである。
【００２５】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３の定常領域またはその一部を含み、任意で突然変異誘発され、ＦｃＲもしくは補体結合、または他のＦｃエフェクター機能を増強した化合物を提供することである。
【００２６】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物、例えば、水溶性ポリマーに付着して、血清半減期を増加させる化合物（ＰＥＧ化タンパク質等）を提供することである。
【００２７】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８を含み、例えば、前記ＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８の一方または両方が多量体である、単離した複合体を提供することである。
【００２８】
本発明の特定の目的は、操作されたＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８を発現し、その表面に、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８を含む複合体を含む組み換え細胞または単離細胞を提供することである。
【００２９】
本発明の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８を含む単離した複合体に特異的に結合する抗体または抗体断片であって、例えば、前記ＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８は多量体であり、更に、抗体は好ましくはヒト、ヒト化、霊長類化もしくはキメラ抗体であるか、またはＦａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖもしくはＦａｂ２である、抗体または抗体断片を提供することである。
【００３０】
本発明の別の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８を含む単離した複合体に特異的に結合する抗体または抗体断片であって、例えば、前記ＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８多量体であり、前記抗体は一価の、または複合体化していないＶＩＳＴＡまたはＶＳＩＧ８に認識可能な程度に結合せず、更に、抗体は好ましくはヒト、ヒト化、霊長類化もしくはキメラ抗体であるか、またはＦａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖもしくはＦａｂ２である、抗体または抗体断片を提供することである。
【００３１】
本発明の別の特定の目的は、例えば、癌、またはウイルス性、細菌性、原生動物性、酵母菌性もしくは真菌性、もしくは寄生性疾患等の感染症を治療するために、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を阻害するために、例えば、Ｔ細胞の活性化、増殖またはサイトカイン産生の、ＶＩＳＴＡが関係する抑制を阻害または遮断するために、本発明に従ったアンタゴニスト化合物の使用方法を提供することである。
【００３２】
本発明の別の特定の目的は、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を増強することにより、ＶＩＳＴＡが関係する、Ｔ細胞の活性化、増殖またはサイトカイン産生の抑制を強化するために、例えば、自己免疫性、アレルギー性または炎症性状態を治療するために、本発明に従ったアゴニスト化合物の使用方法を提供することである。
【００３３】
本発明の別の特定の目的は、検出可能な標識、リンカーまたは治療用部位に結合した、本発明に従ったアゴニストまたはアンタゴニスト化合物を提供することである。
【００３４】
本発明の別の特定の目的は、本発明に従った、診断上または治療的有効量のアゴニストまたはアンタゴニスト化合物を含む、例えば、ヒトの治療法での使用に好適な診断用または治療用組成物、例えば、静脈内、皮下または筋肉内投与可能な組成物を提供することである。
【００３５】
本発明の別の特定の目的は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アゴニストまたはアンタゴニスト（例えば、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アゴニストまたはアンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体もしくは抗体断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは抗体断片、一価もしくは多量体であり得るＰＤ−Ｌ１ポリペプチドもしくはその断片、一価もしくは多量体であり得るＰＤ−１ポリペプチドもしくはその断片、または、前述のいずれかを含む複合体もしくは融合タンパク質から選択される）と共に、本発明に従ったアゴニストまたはアンタゴニスト化合物を用いる、診断方法または治療方法を提供することである。
【００３６】
本発明の別の特定の目的は、免疫細胞、例えばヒト免疫細胞を、本発明に従ったアゴニストまたはアンタゴニスト化合物とｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで接触させ、例えば、接触した細胞を、癌もしくは感染症を有する対象、または炎症性、アレルギー性もしくは自己免疫性状態を有する対象等のヒト対象に注入する方法を提供することである。
【００３７】
本発明の別の特定の目的は、ＶＳＩＧ８を単独で、またはＶＩＳＴＡ−Ｒと共に使用して、ＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡアゴニストまたはアンタゴニストを同定することを含むスクリーニングアッセイ、好ましくは、ＶＳＩＧ８と結合し、ＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡ相互作用を増強する化合物、または、Ｔ細胞免疫またはサイトカイン産生における、ＶＩＳＴＡ／ＶＳＩＧ８相互作用の効果を阻害する化合物等の、ＶＳＩＧ８と結合し、ＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡ相互作用を阻害する化合物を同定する結合アッセイを提供することである。
【００３８】
本発明の別の特定の目的は、ＶＳＩＧ８を単独で、またはＶＩＳＴＡ−Ｒと共に使用して、ＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡアゴニストまたはアンタゴニストを同定することを含むスクリーニングアッセイ、好ましくは、Ｔ細胞免疫またはサイトカイン産生におけるＶＩＳＴＡ／ＶＳＩＧ８相互作用の効果を増強する化合物をスクリーニングする機能アッセイを提供することである。これらのアッセイはｉｎ  ｖｉｔｒｏであってよく、または、ヒトもしくは齧歯類ＶＩＳＴＡ、及び／またはヒトもしくは齧歯類ＶＳＩＧ８を発現するトランスジェニック動物を使用してよく、また、ハイスループットスクリーニングアッセイであってよい。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】ＴＣＲにより誘発された早期Ｔ細胞活性化をＶＩＳＴＡが阻害することを示す実験結果を含む。実験では、Ｔ細胞を単離して、αＣＤ３＋／−対照ＩｇまたはＶＩＳＴＡ−Ｉｇとともに１０分間培養した。全ＥＲＫ、及びホスホＥｒｋ（ｐｈｏｓｐｈｏｒ−Ｅｒｋ）を検出した。
【図２】ＮＣＲの階層を示す概略図を含む。
【図３】ＶＩＳＴＡ  ｍＡｂによる処置で、腫瘍増殖が減少することを示す実験結果を含む。実験では、マウスを皮下で、Ａ．ＭＢ４９、Ｂ．ＭＣＡ１０５、もしくはＣ．ＥＧ７腫瘍細胞のいずれかで播種、または腹腔内でＤ．ＩＤ８ルシフェラーゼ腫瘍細胞で播種し、＋１日目から開始し、隔日でＶＩＳＴＡ  ｍＡｂ  １３Ｆ３（３００μｇ）により処置した。皮下の腫瘍増殖を監視した。ＩＤ８ルシフェラーゼ腫瘍に関して、Ｘｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳを使用して３０日目にマウスを撮像した。
【図４】ｍＶＩＳＴＡ−ＩｇＧ２ａによる治療的処置は腎臓の損傷を逆転させ、ＮＺＢＷＦ１  ＳＬＥモデルにおいて生存を延ばしたことを示す実験結果を含む。この実験では、ＮＺＢＷＦ１メスマウスを、週齢２４から、ＰＢＳ（黒丸）、１５０μｇの対照ＩｇＧ２ａ（青の正方形）、または１５０μｇのｍＶＩＳＴＡ−ＩｇＧ２ａ（赤の三角形）により３日毎に治療的に処置した。（Ａ）病気の重症度を、タンパク尿により毎週監視した。グループあたり６匹の動物の平均±標準誤差としてデータを示し、これは３つの実験を表すものである。対照ＩｇＧ２ａとｍＶＩＳＴＡ−ＩｇＧ２ａとの間で統計的有意性を決定し、対応のないマン・ホイットニー検定によりｐ＝０．０１５６となった。ＶＩＳＴＡで処置したマウスのうち、生存したのは６匹中５匹であったのに対し、ＰＢＳまたはＩｇＧ２ａ対照で処置したマウスの生存はゼロであった。
【図５】ＰＤ−１→ＰＤ−Ｌ１の相互作用を検出するためのパニングの使用を示す。ＣＨＯ−Ｓ細胞に、示したＧＦＰタグタンパク質をトランスフェクションした。４８時間後に、プレートに固定したＦｃタンパク質（１０ｕｇ／ｍＬ）上で１時間、細胞を培養した。非接着細胞を取り除き、結合した細胞をトリプシン−ＥＤＴＡにより分離した。Ａ）ＰＤＬ１−Ｆｃに結合した後の、代表的な陽性及び陰性プロット。Ｂ）パニング後に回収した細胞の数。
【図６】ＶＩＳＴＡ−Ｉｇは、一次ヒトＴ細胞のαＣＤ３による活性化を抑制することができることを示す実験を含む。このデータは、形質転換したヒトＴ細胞株であるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞における、ＣＤ６９の上方制御を、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇを用いて防止することができるということを確立する。
【図７】全脾臓細胞を含有する試料に対して、濃縮したＴ細胞母集団におけるＶＳＩＧ８の発現を比較した、ｑＰＣＲアッセイの結果を含む。
【図８】ＶＩＳＴＡ融合タンパク質が、ＶＳＩＧ８を過剰発現する２９３細胞に特異的に結合することを示す実験を含む。
【図９】図９Ａ〜Ｃは、ＶＳＩＧ８とＶＩＳＴＡに対する抗体が、ＶＩＳＴＡ  ＩｇとＶＳＩＧ８との相互作用を遮断することを示す実験を含む。
【図１０】ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが、マウスＶＳＩＧ８を過剰発現する細胞に結合する能力が低いことを示していることを示す実験を含む。
【図１１】ＶＩＳＴＡを過剰発現する細胞が、ＶＳＩＧ８を過剰発現する細胞に特異的にコンジュゲートすることを明らかにする実験を含む。
【図１２】ＶＳＩＧ８に対する抗体がＣＤ８  Ｔ細胞とＮＫ細胞に結合することを明らかにする実験を含む。
【図１３】ＶＳＩＧ８  ｍＲＮＡはヒトＣＤ４及びＣＤ８  Ｔ細胞により発現されることを明らかにする実験を含む。
【図１４】ＶＩＳＴＡがＶＳＩＧ８を介してＴ細胞にシグナル伝達し、Ｔ細胞の活性化を抑制することを示す実験を含む。ＧＦＰ（対照）またはＶＩＳＴＡ＋ＧＦＰのいずれかを発現するＡ２０細胞を、ＩＳＱペプチドの存在下においてＤＯ１１．１０  Ｔ細胞とともにインキュベーションした。７２時間の時点で、ＣＤ２５の発現によりＴ細胞の活性化を測定した。
【図１５】ＰＤ−１を含むＶＩＳＴＡ−Ｉｇで処理したＶＳＩＧ８発現のＡ２０細胞上における、異なる免疫タンパク質の上方制御を示す実験を含む。
【図１６−１】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−２】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−３】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−４】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−５】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−６】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−７】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−８】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−９】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−１０】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【図１６−１１】ＶＳＩＧ８の種のオルソログの異なる配列を特定する表を含む。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
別段定めがない限り、本明細書において使用される技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者により一般的に理解される用語と同じ意味を有する。本明細書に記載する方法及び材料に類似または等価の方法及び材料を本発明、または本発明の試験に使用してよいが、好適な方法及び材料が本明細書で記載される。材料、方法及び実施例は説明を目的とするだけであり、限定を意図するものではない。本明細書に記載する分析化学、合成有機化学、並びに医薬及び製薬化学に関して利用される用語、並びにこれらの実験室用手順及び技術は十分周知のものであり、当該技術分野において一般的に使用される。化学合成、化学分析、医薬品調製、配合、及び送達、並びに患者の治療については、標準的な技術を使用してよい。
【００４１】
本明細書の説明、及び以下の特許請求の範囲全体で使用するとおり、文脈上別途明記しない限り、「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」の意味には、複数形を含む。
【００４２】
本明細書で使用する場合、「活性化受容体」は、抗原、（例えば、ＭＨＣ分子の文脈における）複合体化抗原、Ｉｇ融合タンパク質、リガンド、または抗体と結合する免疫細胞受容体を広く意味する。活性化受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、サイトカイン受容体、ＬＰＳ受容体、補体受容体、及びＦｃ受容体であるが、それらに限定されない。例えば、Ｔ細胞受容体はＴ細胞上に存在し、ＣＤ３分子と会合している。ＭＨＣ分子の文脈において、Ｔ細胞受容体は、抗原により（及び、ポリクローナルＴ細胞活性化試薬により）刺激される。ＴＣＲによるＴ細胞の活性化は、多くの変化、例えば、タンパク質のリン酸化、膜脂質の変化、イオンの移動、環状ヌクレオチドの改変、ＲＮＡ転写の変化、タンパク合成の変化、及び細胞体積の変化をもたらす。例えば、Ｔ細胞受容体はＴ細胞上に存在し、ＣＤ３分子と会合している。ＭＨＣ分子の文脈において、Ｔ細胞受容体は、抗原により（及び、ポリクローナルＴ細胞活性化試薬により）刺激される。ＴＣＲによるＴ細胞の活性化は、多くの変化、例えば、タンパク質のリン酸化、膜脂質の変化、イオンの移動、環状ヌクレオチドの改変、ＲＮＡ転写の変化、タンパク合成の変化、及び細胞体積の変化をもたらす。
【００４３】
本明細書で使用する場合、「アジュバント」とは、それ自体にいかなる特異的抗原効果も有することなく、免疫系を刺激し、ワクチンに対する応答を増加させる作用物質を意味する。
【００４４】
本明細書において、疾患の「診断の補助」または「検出の補助」とは、対象が、特定の病状の特徴となる細胞、もしくは特定の病状の開始を有するか、または、ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡの発現を特徴とする免疫抑制、もしくは、例えば、慢性的及び非慢性的な疾患を患う個体において、自己免疫、炎症もしくはアレルギー反応の最中等における、ＶＳＩＧ８の量が減少した細胞と特徴とする異常な免疫の上方制御等の免疫不全を含むかどうかを評価するために、特定のマーカーポリペプチドの発現レベル、または発現したＲＮＡを単独、または１つ以上の他のマーカーと共に検出することを意味する。
【００４５】
本明細書で使用する場合、「アレルギー性疾患」とは広く、アレルギー反応を伴う疾患を意味する。より具体的には、「アレルギー性疾患」とは、アレルゲンが特定されている疾患として定義され、ここでは、そのアレルゲンに曝露することと病理学的変化の開始に強力な相関関係があり、病理学的変化は、免疫学的メカニズムを有することが証明されている。本明細書においては、免疫学的メカニズムとは、白血球がアレルゲンの刺激に対して免疫応答を示すことを意味する。
【００４６】
本明細書で使用する場合、「アミノ酸」とは広く、天然及び合成アミノ酸、並びに、天然アミノ酸に類似の様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣物を意味する。天然アミノ酸とは、遺伝暗号によりコードされるアミノ酸、並びに、後で修飾されるこれらのアミノ酸（例えばヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、及びＯ−ホスホセリン）である。アミノ酸類似体とは、天然アミノ酸と同じ基本的な化学構造（即ち、水素、カルボキシル基、アミノ基に結合した炭素）、及びＲ基を有する化合物（例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム）を意味する。類似体は修飾Ｒ基を有する（例えばノルロイシン）か、または修飾ペプチド骨格を有してよいが、天然アミノ酸と同一の基本的な化学構造を保持する。アミノ酸模倣物とは、一般的なアミノ酸の化学構造とは異なるが、天然アミノ酸に類似の様式で機能する構造を有する化合物を意味する。
【００４７】
本明細書で使用する場合、「アネルギー」もしくは「耐性」、または「延びた抗原特異的Ｔ細胞の抑制」もしくは「延びた免疫抑制」とは広く、活性化受容体が仲立ちする刺激に対する不応答性（ｒｅｆｒａｃｔｉｖｉｔｙ）を意味する。不応答性は一般的に抗原特異的であり、寛容抗原への曝露を止めた後に持続する。例えば、（不応性とは対照的に）Ｔ細胞におけるアネルギーは、サイトカイン、例えばＩＬ−２、産生の欠如により特徴づけられる。Ｔ細胞が抗原に曝露され、第２のシグナル（共刺激シグナル）の不存在下にて第１のシグナル（Ｔ細胞受容体またはＣＤ−３が仲立ちするシグナル）を受けるときに、Ｔ細胞のアネルギーは発生する。これらの条件下にて、同じ抗原に細胞を再び曝露する（再曝露が共刺激分子の存在下で発生する場合でも）ことは、サイトカイン産生の失敗、故に増殖の失敗をもたらす。しかし、アネルギーＴ細胞は、サイトカイン（例えばＩＬ−２）を用いて培養した場合、無関係の抗原に対する応答を開始することができ、増殖することが可能である。例えば、Ｔ細胞のアネルギーは、ＥＬＩＳＡで測定する、Ｔリンパ球によるＩＬ−２産生の欠如によって、または、インジケーター細胞株を使用した増殖アッセイによってもまた観察することができる。あるいは、レポーター遺伝子構築物を使用することができる。例えば、アネルギーＴ細胞は、５’  ＩＬ−２遺伝子エンハンサーの制御下において異種プロモーターにより、または、エンハンサー内で見出すことができるＡＰＩ配列の多量体により誘発されるＩＬ−２遺伝子転写を開始することができない（Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５７：１１３４）。共刺激シグナルを制御することで、免疫細胞のエフェクター機能の制御がもたらされる。
【００４８】
本明細書で使用する場合、「抗体」とは広く、抗体の「抗原結合部」（「抗体部」「抗原結合断片」「抗体断片」も同じ意味で用いられる）、及び、全抗体分子を意味する。本明細書で使用する場合、「抗原結合部」という用語は、抗原（例えば、ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡ、またはこれらの特定の部分）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を意味する。本明細書において言及される場合、「抗体」という用語は、全ポリクローナル及びモノクローナル抗体、並びにそれらの任意の抗原結合断片（即ち「抗原結合部」）または一本鎖を含む。「抗体」とは、ジスルフィド結合により相互に連接された、少なくとも２個の重（Ｈ）鎖と２個の軽（Ｌ）鎖またはこれらの抗原結合部を含む糖タンパク質を指す。それぞれの重鎖は、少なくとも１個の重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと省略）、及び重鎖定常領域から成る。重鎖定常領域は、３つのドメインのＣＨ１、Ｃｍ及びＣｍ−から成る。それぞれの軽鎖は、少なくとも１個の軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと省略）、及び軽鎖定常領域から成る。軽鎖定常領域は１つのドメイン（ＣＬ−）から成る。ＶＨ及びＶＬ領域は更に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変領域に細分することができ、相補性決定領域には、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在している。それぞれのＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３個のＣＤＲと４個のＦＲで構成される。 重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えばエフェクター細胞）と、従来の補体系の第１の構成成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への、免疫グロブリンの結合を仲立ちし得る。更に一般的には、「抗体」という用語は、エピトープに適合し、エピトープを認識する特定の形状を有する、任意のポリペプチド鎖を含有する分子構造を含むことが意図され、ここでは、１つ以上の非共有結合相互作用が、分子構造とエピトープとの間の複合体を安定化させる。典型的な抗体分子は免疫グロブリンであり、並びに、全ての源（例えばヒト、齧歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、他の哺乳類、ニワトリ、他のトリ等）からの、全ての種類の免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ等）が「抗体」と見なされる。
【００４９】
抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片により実施されることができる。抗体の「抗原結合部」という用語に包含される抗原結合断片の非限定例としては、（ａ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨＩドメインからなる一価断片のＦａｂ断片；（ｂ）ヒンジ領域にてジスルフィド架橋により結合した２つのＦａｂ断片を含む二価断片のＦ（ａｂ’）２断片；（ｃ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｄ）抗体の１つのアームのＶＬ及びＶＨ領域からなるＦｖ断片；（ｅ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ，ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；並びに（ｆ）単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。  更に、Ｆｖ断片の２つのドメイン（ＶＬ及びＶＨ）は個別の遺伝子によりコードされるが、これらは、これらのドメインを、ＶＬ及びＶＨ領域の対が一価の分子を形成する、単一のタンパク質鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖとして知られている））として作製することができる合成リンカーによる組み換え法を使用して、結合することができる。例えば、Ｂｉｒｄ，ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；及びＯｓｂｏｕｒｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：７７８．を参照のこと。一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部」という用語に包含されることが意図される。完全ＩｇＧ分子または他のアイソタイプを生成するために、特異的ｓｃＦｖの任意のＶＨ及びＶＬ配列が、ヒト免疫グロブリン定常領域のｃＤＮＡ、またはゲノム配列に結合することができる。ＶＨ及びＶＬはまた、タンパク質化学作用または組み換えＤＮＡ技術のいずれかを使用した、Ｆａｂ、Ｆｖ、または免疫グロブリンの他の断片の生成で使用することも可能である。ダイアボディ等の、一本鎖抗体の他の形態もまた包含される。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインがポリペプチド一本鎖で発現するが、同じ鎖の２つのドメイン間で対形成をするにはあまりにも短いリンカーを使用することにより、このドメインを、別の鎖の相補性領域と対形成させることにより、２つの抗原結合部位を作製する、二価の二重特異性抗体である。例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３を参照のこと。更に、抗体、またはその抗原結合部（抗原結合断片、抗体断片、抗体部）は、抗体または抗体部の、１つ以上の他のタンパク質またはペプチドとの共有または非共有結合により形成された、より大きな免疫付着（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｏｎ）分子の一部であってよい。免疫付着分子の例としては、四量体ｓｃＦｖ分子を作製するためのストレプトアビジンコア領域の使用（Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖ，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ６：９３−１０１）、及び、二価のビオチン化ｓｃＦｖ分子を作製するための、システイン分子、マーカーペプチド及びＣ末端ポリヒスチジンタグの使用（Ｋｉｐｒｉｙ��ｎｏｖ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１０４７−１０５８）が挙げられる。Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片等の抗体部は、それぞれ、全抗体のパパインまたはペプシン分解等の従来技術を使用して、全抗体から調製することができる。更に、抗体、抗体部及び免疫付着分子は、本明細書に記載した標準的な組み換えＤＮＡ技術を使用して入手することができる。抗体は、ポリクローナル、モノクローナル、異種、同種異系、同系、またはこれらの改変形態、例えばヒト化またはキメラ抗体であってよい。
【００５０】
「抗原を認識する抗体」及び「抗原に対して特異的な抗体」は本明細書で、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と同じ意味で用いられ、抗原に特異的に結合する免疫グロブリンまたはその断片を意味する。
【００５１】
本明細書で使用する場合、「抗原」とは広く、動物を誘発して、その抗原のエピトープに結合可能な抗体を産生することが更に可能な抗体に結合可能な分子または分子の一部を指す。抗原は１つのエピトープ、または２つ以上のエピトープを有してよい。本明細書で言及する特異的な反応は、抗原が非常に選択的な様式で、対応する抗体と反応し、他の抗原により誘発され得る他の多くの抗体とは反応しないことを指す。対象の特定の抗原に対する、所望の増強された免疫応答の場合において、抗原としては、誘発され得る保護免疫応答が代表的な感染症の抗原が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５２】
本明細書で使用する場合、「抗原提示細胞」とは広く、プロフェッショナル抗原提示細胞（例えばＢリンパ球、単球、樹状細胞、及びランゲルハンス細胞）、並びに、他の抗原提示細胞（例えばケラチノサイト、内皮細胞、星状細胞、線維芽細胞、及び希突起膠細胞）を指す。
【００５３】
本明細書で使用する場合、「アンチセンス核酸分子」とは広く、ｍＲＮＡ配列に相補的な、または遺伝子のコード鎖に相補的なタンパク質をコードする「センス」核酸に相補的な（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的な）ヌクレオチド配列を意味する。したがって、アンチセンス核酸分子は、センス核酸分子に水素結合することができる。
【００５４】
本明細書で使用する場合、「アポトーシス」とは広く、当技術分野において既知の技術を使用して同定可能なプログラム細胞死を意味する。アポトーシス細胞は、細胞収縮、膜の小疱形成、及び、細胞の断片化において最盛となるクロマチン凝縮により特徴づけられ得る。アポトーシスを受ける細胞は、ヌクレオソーム間のＤＮＡ切断における特徴的パターンもまた示す。
【００５５】
本明細書で使用する場合、「自己免疫」または「自己免疫疾患または状態」とは広く、個体自身の組織から生じる、また、これらに向けられる病気もしくは疾患、または、これらの共分離もしくは徴候、またはこれらからもたらされる状態を指し、これらを含む。本明細書において、自己免疫性状態としては、炎症性またはアレルギー性状態、例えば、組織の破壊と潜在的に関係している、自己抗原に対する宿主の免疫反応を特徴とする慢性疾患（関節リウマチ等）が挙げられる。
【００５６】
本明細書で使用する場合、「Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）」とは広く、Ｂ細胞に見られる、膜Ｉｇ（ｍＩｇ）と他の膜貫通ポリペプチド（例えばＩｇＡ及びＩｇ）との複合体を指す。ｍＩｇのシグナル伝達機能は、オリゴマーまたは多量体抗原による受容体分子の架橋により引き起こされる。Ｂ細胞はまた、抗免疫グロブリン抗体により活性化されることも可能である。ＢＣＲの活性化に際し、チロシンのリン酸化を含む多数の変化がＢ細胞で生じる。
【００５７】
本明細書で使用する場合、「癌」とは広く、悪性増殖または腫瘍の原因となる、異常かつ無秩序な細胞分裂（例えば、制御されない細胞増殖）を特徴とする（侵襲性または転移性に関係ない）任意の腫瘍性疾患を指す。本明細書で使用する場合、「癌」または「癌性の」という用語は、非限定例が本明細書で記載される悪性増殖または腫瘍を引き起こす、異常かつ無秩序な細胞分裂を特徴とする、（侵襲性、非侵襲性または転移性に関係ない）任意の腫瘍性疾患を包含するように理解されなければならない。これには、制御されない細胞増殖を通常特徴とする、哺乳類におけるあらゆる生理学的条件が含まれる。癌の例は実施例で例示する。更なる癌としては、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体例としては、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌等）、腹膜癌、肝細胞癌、（胃腸癌を含む）胃癌、膵臓癌、グリア芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮体または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、及び様々な種類の頭頸部癌、並びに（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ性ＮＨＬ；高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳに伴うリンパ腫；及びワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症を含む）Ｂ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性骨髄芽球性白血病；多発性骨髄腫並びに移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）が挙げられる。本発明の治療で対応可能な他の癌としては、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、及び白血病またはリンパ系悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体例としては、結腸癌、膀胱癌、卵巣癌、黒色腫、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌等）、腹膜癌、肝細胞癌、（胃腸癌を含む）胃癌、膵臓癌、グリア芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮体または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌または腎癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、及び様々な種類の頭頸部癌、並びに（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ性ＮＨＬ；高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳに伴うリンパ腫；及びワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症を含む）Ｂ細胞リンパ腫；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；毛様細胞性白血病；慢性リンパ性白血病；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びに、母斑症（ｐｈａｋｏｍａｔｏｓｅｓ）、（脳腫瘍と関係するもの等の）浮腫、及びメイグス症候群と関係する異常血管増殖が挙げられる。癌は、結腸直腸癌、乳癌、結腸直腸癌、直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞癌、前立腺癌、肝癌、膵癌、膵臓癌、軟部組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頸癌、黒色腫、卵巣癌、中皮腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択されるのが好ましい。例示的実施形態において、癌は初期の、または進行した（転移性を含む）膀胱癌、卵巣癌または黒色腫である。別の実施形態において、癌は結腸直腸癌である。本発明の治療で対応可能な癌性状態としては、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡを発現するかまたは発現しない癌が挙げられ、更に、非転移性または非侵襲性、及び侵襲性または転移性癌も含み、ここで、免疫細胞、ストローマ細胞または病気の細胞によるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの発現は、抗腫瘍応答及び抗侵襲性免疫応答を抑制する。本発明の方法は特に、血管新生化腫瘍の治療に好適である。
【００５８】
本発明に従った癌としては、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡを発現するかまたは発現しない癌が挙げられ、更に、非転移性または非侵襲性、及び侵襲性または転移性癌（ここで、免疫細胞、ストローマ細胞または病気の細胞によるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの発現は、抗腫瘍応答及び抗侵襲性免疫応答を抑制する）、また、血管新生化腫瘍を特徴とするものも含む。
【００５９】
本明細書における「癌治療」とは、癌を予防もしくは治療する、または癌の１つ以上の症状を緩和する任意の方法を意味する。通常は、かかる治療法は免疫活性化ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡポリペプチドまたは融合タンパク質、コンジュゲート、多量体（ホモ多量体もしくはヘテロ多量体）、または本発明に従った物質を含有する組成物を、単独で、またはより典型的には、即ち、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの発現が抗腫瘍応答、及び、化学療法もしくは放射線治療の効果、または生物学的効果を抑制する個体において、化学療法もしくは放射線治療、またははこれらの活性を増強するための他の生物学と組み合わせるかのいずれかで、投与することを含む。本発明に従って、抗癌活性を示す任意の化学療法剤を使用することができる。化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体及び関係する阻害剤、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、抗生物質、Ｌ−アスパラギナーゼ、トポイソメラーゼ阻害剤、インターフェロン、白金配位錯体、アントラセンジオン置換尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質抑制剤、副腎皮質ステロイド、プロゲスチン、エストロゲン、抗エストロゲン薬、アンドロゲン、抗アンドロゲン薬、及び性ゴナドトロピン放出ホルモン類似体からなる群から選択されるのが好ましい。化学療法剤は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン（ＬＶ）、イリノテカン、オキサリプラチン、カペシタビン、パクリタキセル及びドセタキセルからなる群から選択されるのがより好ましい。２種以上の化学療法剤を、抗ＶＥＧＦ抗体の投与と組み合わせて投与されるカクテルに使用することができる。１つの好ましい組み合わせの化学療法は、５−ＦＵと１種以上の他の化学療法剤を含む、フルオロウラシルベースのものである。化学療法の組み合わせに好適な投与レジメンは、当技術分野において既知であり、例えば、Ｓａｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ  ＡＳＣＯ  １８：２３３（１９９９）及びＤｏｕｉｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｌａｎｃｅｔ  ３５５：１０４１−７（２０００）に記載されている。生物学的製剤は、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、またはＶＩＳＴＡに対する抗体、及びＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４またはＶＩＳＴＡ融合タンパク質、並びにサイトカイン、増殖因子アンタゴニスト及びアゴニスト、ホルモン、並びに抗サイトカイン抗体等の、別の免疫増強剤であってよい。
【００６０】
本明細書で使用する場合、「キメラ抗体」とは広く、抗原結合部位（可変領域）が、異なる、または変化したクラス、エフェクター機能及び／もしくは種の定常領域、または、キメラ抗体に新しい特性を付与する全く異なる分子に結合するように、定常領域またはその一部が変更、置換または交換された抗体分子を指し、例えば、酵素、毒素、ホルモン、増殖因子、薬剤、可変領域またはその一部が、異なる、または変化した抗原特異性を有する可変領域と変更、置換または交換されている。
【００６１】
本明細書で使用する場合、「コード領域」とは広く、アミノ酸残基に翻訳されたコドンを含むヌクレオチド配列の領域を指し、「非コード領域」という用語は、アミノ酸に翻訳されないヌクレオチド配列の領域（例えば５’及び３’非翻訳領域）を指す。
【００６２】
本明細書で使用する場合、「保存的に改変された変異体」とは、アミノ酸と核酸配列の両方に適用され、特定の核酸配列に関しては、保存的に改変された変異体とは、同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列をコードするこれらの核酸、または核酸が、実質的に同一の配列に対してアミノ酸配列をコードしない場合を指す。遺伝暗号の縮退のため、機能が同一の多数の核酸が、任意の所与のタンパク質をコードする。「サイレント変異」とは、保存的に改変された核酸変異の１つの種である。本明細書における、ポリペプチドをコードする全ての核酸配列はまた、核酸の全ての可能なサイレント変異についても記載している。当業者は、核酸の各コドン（通常メチオニンに対する唯一のコドンであるＡＵＧと、通常トリプトファンに対する唯一のコドンであるＴＧＧを除く）を改変して、機能的に同一の分子を得てよいことを認識するであろう。
【００６３】
本明細書で使用する場合、「相補的決定領域」「超可変領域」または「ＣＤＲ」とは広く、抗体の軽鎖または重鎖の可変領域に見出される、超可変または相補性決定領域（ＣＤＲ）の１つ以上を指す（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．を参照のこと）。これらの表現には、Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓにより規定される超可変領域、または、抗体の三次構造における超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）が含まれる。各鎖のＣＤＲはフレームワーク領域により近接しており、また、他の鎖のＣＤＲと共に、抗原結合部位の形成に寄与している。ＣＤＲの中には、 抗体−抗原相互作用においてＣＤＲにより用いられる重要な接触残基を示す選択性決定領域（ＳＤＲ）と説明されている、選択アミノ酸が存在する（Ｋａｓｈｍｉｒｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５））。
【００６４】
本明細書で使用する場合、「対照量」とは広く、マーカーの試験量と比較される、マーカーが取ることができる任意の量または任意の範囲の量を指す。例えば、マーカーの対照量は、特定の疾患もしくは状態を有する患者、またはかかる疾患もしくは状態を有しないヒトにおけるマーカーの量であってよい。対照量は、絶対量（例えばマイクログラム／ｍＬ）または相対量（例えばシグナルの相対強度）のいずれかであることができる。
【００６５】
本明細書で使用する場合、「共刺激受容体」とは広く、共刺激シグナルを免疫細胞（例えばＣＤ２８またはＩＣＯＳ）に伝達する受容体を指す。本明細書で使用する場合、「阻害性受容体」という用語には、負のシグナルを免疫細胞、例えばＴ細胞またはＮＫ細胞に伝達する受容体を含む。
【００６６】
本明細書で使用する場合、「共刺激する」とは広く、共刺激分子が、増殖またはエフェクター機能を誘発する、非活性化され、受容体が仲立ちする第２のシグナル（「共刺激シグナル」）を生み出す能力を指す。例えば、共刺激シグナルは、（例えば、Ｔ細胞受容体が仲立ちするシグナルを受け取ったＴ細胞における）サイトカイン分泌をもたらすことができ、（例えば、活性化受容体を介して）細胞受容体が仲立ちするシグナルを受け取った免疫細胞は、本明細書においては「活性化免疫細胞」と称してよい。Ｔ細胞に関して、Ｔ細胞に対する共刺激シグナルの伝達には、シクロスポリンＡにより阻害されないシグナル伝達経路が関係する。更に、共刺激シグナルは、Ｔ細胞内でのサイトカイン（例えばＩＬ−２及び／もしくはＩＬ−１０）分泌を誘発することができ、かつ／または、Ｔ細胞内での抗原に対する不応性の誘発、アネルギーの誘発、もしくは、細胞死の誘発を防止することができる。
【００６７】
本明細書において、「共刺激ポリペプチド」または「共刺激分子」とは、Ｔ細胞の細胞表面分子との相互作用の際に、Ｔ細胞応答を制御するポリペプチドを指す。
【００６８】
本明細書で使用する場合、「共刺激シグナル伝達」とは、抗原特異的Ｔ細胞応答の間に、抗原提示細胞上の共刺激ポリペプチドと、Ｔ細胞上の受容体との相互作用から生じるシグナル伝達活性である。１つの仮説に束縛されるものではないが、抗原特異的Ｔ細胞応答は２つのシグナル、すなわち１）Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の、ＭＨＣとの関係において提示される抗原性ペプチドとの関与（シグナル１）、及び２）異なる共刺激受容体／リガンド対の間の接触により送達される、抗原に無関係な第２のシグナル（シグナル２）により仲立ちされると考えられている。１つの仮説に束縛されるものではないが、この「第２のシグナル」は、Ｔ細胞応答の種類（活性化と阻害）、及び、この応答の強さと長さを決定するのに非常に重要であり、また、共刺激分子（Ｂ７ファミリーのタンパク質等）からの、陽性と陰性の両方のシグナルにより制御される。
【００６９】
本明細書において、「Ｂ７」ポリペプチドとは、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−ＤＣ、Ｂ７−Ｈ５、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−Ｈ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ６、Ｂ７−Ｓ３、並びにこれらの生物学的に活性な断片、及び／または変異体を含むがこれらに限定されない、Ｔ細胞を共刺激するＢ７ファミリーのタンパク質のメンバーを意味する。例示的な、生物学的に活性な断片断片としては、Ｔ細胞を共刺激する細胞外領域の、細胞外ドメインまたは断片が挙げられる。
【００７０】
本明細書で使用する場合、「細胞質ドメイン」とは広く、細胞の細胞質に向かって延びるタンパク質の一部分を意味する。
【００７１】
本明細書で使用する場合、「診断の」とは広く、病態の存在または性質を特定することを指す。診断方法は、その感受性と特異性において異なる。診断アッセイの「感受性」とは、陽性と試験される病気に罹った個体の割合（％）（「真陽性」の％）である。アッセイにより検出されない、病気にかかった個体は「偽陰性」である。病気に罹っておらず、アッセイで陰性と試験される対象は「真陰性」と呼ばれる。診断アッセイの「特異性」は、１−偽陽性率であり、ここで、「偽陽性」率とは、陽性と試験される病気を有しない対象の割合として規定される。特定の診断方法は、状態の決定的な診断を行うものでない場合があるが、その方法が、診断に役立つ陽性指標をもたらすのであれば、その方法は十分である。
【００７２】
本明細書で使用する場合、「診断すること」または「診断を補助する」とは広く、疾患もしくは症状を分類すること、及び／または、（例えば、ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡの発現の有無、並びに／または免疫細胞、ストローマ細胞、及び／もしくは病気を有すると推定される細胞による発現の増減に基づいて）個体が病状を有する可能性を測定すること、疾患の重症度を決定すること、疾患の進行を監視すること、疾患の転帰及び／または回復の見込みを予測することを意味する。「検出すること」という用語はまた任意で、前述の内容のいずれをも包含してよい。本発明に従った疾患の診断は、いくつかの実施形態においては、対象から入手した生体試料における、本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの量の測定の影響を受ける場合があり、ここで、決定された量は、疾患の素因、または疾患の有無と相関関係にある可能性がある。「対象から入手した生体試料」は任意で、対象から物理的に取り除かれた試料もまた含み得ることを記しておかなければならない。
【００７３】
本明細書で使用する場合、「有効量」とは広く、疾患を治療するために患者に投与した際に、疾患のかかる治療をもたらすのに十分である、化合物、抗体、抗原、または細胞の量を意味する。有効量は、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）に有効な量、及び／または予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）に有効な量であってよい。有効量は、徴候／症状の発生を防止する、徴候／症状の発生の重症度を低下させる、徴候／症状の発生を取り除く、徴候／症状が発生して進展するのを遅らせる、徴候／症状が発生して進行するのを防止する、かつ／または徴候／症状の発生の防止に影響を与えるのに有効な量であってよい。「有効量」は、疾患とその重症度、並びに、治療される患者の年齢、体重、病歴、罹病性、及び以前から存在する状態に応じて変化し得る。本発明の目的に関して、「有効量」という用語は、「治療的有効量」と同義である。
【００７４】
本明細書で使用する場合、「細胞外ドメイン」または「ＥＣＤ」とは広く、細胞表面から延びるタンパク質の一部分を指す。
【００７５】
本明細書で使用する場合、「発現ベクター」とは広く、原核細胞、酵母菌細胞、真菌細胞、植物細胞、昆虫細胞または哺乳動物細胞を含む任意の細胞において、本発明の核酸配列をｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで、構造的または誘発的に発現させるための、任意の組み換え発現系を指す。この用語は、直鎖状または環状発現系を含む。この用語は、エピソームを保持する、または宿主細胞細胞に組み込む発現系を含む。発現系は、自己増幅を行うか、またはそうではない、即ち、細胞内で一時的発現のみを行う能力を有することができる。この用語は、組み換え核酸の転写に必要な、最小限の要素のみを含有する組み換え発現カセットを含む。
【００７６】
本明細書で使用する場合、「ファミリー」とは広く、ポリペプチドを指し、本発明の核酸分子は、共通の構造ドメインまたはモチーフを有し、かつ、本明細書で定義する十分なアミノ酸またはヌクレオチド配列相同性を有する、２種以上のポリペプチドまたは核酸分子を意味することを目的としている。ファミリーメンバーは天然または非天然であることができ、同じかまたは異なる種のいずれかに由来することができる。例えば、ファミリーは、ヒト由来の第１のポリペプチド、及び、ヒト由来の他の異なるポリペプチドを含有することができるか、あるいは、非ヒト由来のホモログ（例えばサルポリペプチド）を含有することができる。ファミリーメンバーは、共通の機能的特徴もまた有してよい。
【００７７】
本明細書で使用する場合、「Ｆｃ受容体」（ＦｃＲ）とは広く、免疫グロブリン分子（Ｉｇ）のＦｃ部分に対する細胞表面受容体を指す。Ｆｃ受容体は、免疫応答に関与する多くの細胞で見出される。これまでに同定されているヒトＦｃＲは、ＩｇＧ（ＦｃγＲと命名される）、ＩｇＥ（ＦｃεＲＩ）、ＩｇＡ（ＦｃαＲ）、及び重合ＩｇＭ／Ａ（ＦｃεμＲ）を認識するものである。ＦｃＲは以下の細胞型に見出される：ＦｃεＲＩ（肥満細胞）、ＦｃεＲＩＩ（多くの白血球）、ＦｃαＲ（好中球）、及びＦｃμＲ（腺上皮細胞、肝細胞）（Ｈｏｇｇ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ９：１８５−８６（１９８８））。幅広く研究されたＦｃγＲは、細胞免疫防御の中核をなし、炎症のメディエーターの放出、及び自己免疫疾患の病因に関わる加水分解酵素の刺激を担っている（Ｕｎｋｅｌｅｓｓ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２５１−８７（１９８８））。ＦｃγＲは、マクロファージ／単核細胞、多形核白血球、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞のＦｃγＲが、ＩｇＧが仲立ちする特異的認識の構成要素を与えるため、エフェクター細胞と、Ｉｇを分泌するリンパ球との間に重要な繋がりをもたらす。ヒト白血球は、ＩｇＧに対する、少なくとも３つの異なる受容体、すなわちｈＦｃγＲＩ（単球／マクロファージで見出される）、ｈＦｃγＲＩＩ（単球、好中球、好酸球、血小板、場合によりＢ細胞、及びＫ５６２細胞株で見出される）、並びにＦｃγＩＩＩ（ＮＫ細胞、好中球、好酸球、及びマクロファージで見出される）を有する。
【００７８】
本明細書で使用する場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」とは広く、抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域内にある１つ以上のフレームワーク領域を指す（Ｋａｂａｔ，ｅｔ  ａｌ．”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ（１９８７）を参照のこと）。これらの表現には、抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域内のＣＤＲの間に挟入された、これらのアミノ酸配列領域が含まれる。
【００７９】
本明細書で使用する場合、「異種」とは広く、核酸が、自然では互いに同じ関係で見出されない２つ以上のサブ配列を含むことを示す核酸の一部を指す。例えば、核酸は通常、組み換えにより作製され、新しい機能性核酸を作製するために、無関係の遺伝子からの２つ以上の配列（例えば、ある源からのプロモーター、及び別の源からのコード領域）を有する。同様に、異種タンパク質は、そのタンパク質が、自然で互いに同一の関係が見出されない２つ以上のサブ配列を含むことを示す（例えば融合タンパク質）。
【００８０】
本明細書で使用する場合、「高親和性」とは広く、標的抗原または受容体に対して、少なくとも１０−６Ｍ、より好ましくは１０−７Ｍ、更により好ましくは少なくとも１０−８Ｍ、及び更により好ましくは少なくとも１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２ＭのＫＤを有する抗体または融合タンパク質を指す。
【００８１】
本明細書において、ＩｇＧ抗体または融合タンパク質の「高親和性」とは、標的抗原または受容体に対して、１０−６Ｍ以下、より好ましくは１０−７Ｍ以下、好ましくは１０−８Ｍ以下、より好ましくは１０−９Ｍ以下、及び更により好ましくは１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、または１０−１２Ｍ以下のＫＤを有する抗体を意味する。抗体に関して特に、「高親和性」結合は、異なる抗体アイソタイプで変えることができる。例えば、ＩｇＭアイソタイプの「高親和性」結合とは、１０−７Ｍ以下、より好ましくは１０−８Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。
【００８２】
本明細書で使用する場合、「相同性」とは広く、核酸配列と参照核酸配列との、または、ポリペプチド配列と参照ポリペプチド配列との類似性の程度を指す。相同性は部分的、または完全であってよい。完全な相同性とは、核酸またはアミノ酸配列が同一であることを示す。部分的相同性核酸またはアミノ酸配列とは、参照核酸またはアミノ酸配列と同一でない配列である。相同性の程度は、例えば、デフォルトのパラメーターを使用した、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＢｌａｓｔＰソフトウェアを使用した配列の比較によって決定することができる。「配列同一性」という用語は、「相同性」と同じ意味で使用してよい。
【００８３】
本明細書で使用する場合、「宿主細胞」とは広く、本発明の組み換え発現ベクター等の本発明の核酸分子が導入される細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞（例えば大腸菌）、または、酵母菌、昆虫（例えばＳＦ９）、両生類、もしくは哺乳類細胞、例えばＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＨＥＫ−２９３等の真核細胞、例えば培養細胞、外植体、及びｉｎ  ｖｉｖｏ細胞であってよい。「宿主細胞」と「組み換え宿主細胞」という用語は、本明細書では同じ意味で用いられる。かかる用語は、特定の対象細胞のみではなく、かかる細胞の後代または潜在的な後代も指すものと理解されるべきである。変異または環境の影響のいずれかにより、ある特定の変化が継代で発生し得るので、後代は実際のところ、親細胞に同一でなくてもよいが、本明細書で使用する用語の範囲内に依然として含まれる。
【００８４】
「ヒトモノクローナル抗体」とは、フレームワーク領域とＣＤＲ領域の両方が、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を意味する。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子と軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物（例えばトランスジェニックマウス）から入手したＢ細胞を含むハイブリドーマにより産生される。これには、例えば、治療薬または診断用薬等のエフェクター作用物質に結合した、完全ヒトモノクローナル抗体及びコンジュゲート、並びにこれらの変異体が含まれる。
【００８５】
本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」とは広く、ヒト細胞により作製された、より類似する抗体に変更された可変領域と定常領域を有する非ヒト細胞により作製された抗体を含むことを指す。例えば、非ヒト抗体アミノ酸配列を改変して、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に見出されるアミノ酸に組み込む。本発明のヒト化抗体は、例えばＣＤＲ内に、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのランダムもしくは部位特異的突然変異誘発、またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異により導入された変異）によりコードされないアミノ酸残基を含んでよい。本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」という用語は、別の哺乳類種（例えばマウス）の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列にグラフトしている抗体もまた含む。
【００８６】
本明細書で使用する場合、「ハイブリダイゼーション」とは広く、鎖が互いに逆平行に配置される際に、複数の相補性ヌクレオチドの間で水素結合を形成することによる、（部分的に相補的なものを含む）相補性ポリヌクレオチド鎖の物理的相互作用を指す。
【００８７】
本明細書で使用する場合、「ＩｇＶドメイン」と「ＩｇＣドメイン」とは広く、Ｉｇスーパーファミリーメンバーのドメインを指す。これらのドメインは、 Ｉｇフォールドと呼ばれる、異なる折り畳みパターンを有する構造単位に対応する。Ｉｇフォールドは、それぞれが、全てではないが大部分のドメインの２つのシート間において、保存されたジスルフィド結合を有する５〜１０個のアミノ酸の逆平行β鎖からなる、２つのβシートのサンドイッチを含む。ＩｇのＩｇＣドメイン、ＴＣＲ、及びＭＨＣ分子は、同じ種類の配列パターンを共有し、Ｉｇスーパーファミリーの中ではＣＩセットと呼ばれている。他のＩｇＣドメインは、他のセットに含まれる。ＩｇＶドメインもまた、配列パターンを共有し、Ｖセットドメインと呼ばれている。ＩｇＶドメインはＣドメインよりも長く、更なるβ鎖の対を形成する。
【００８８】
本明細書で使用する場合、「免疫細胞」とは広く、造血由来であり、免疫応答に役割を果たす細胞を指す。免疫細胞としては、Ｂ細胞及びＴ細胞等のリンパ球；ナチュラルキラー細胞；樹状細胞、及び骨髄性細胞（単球、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球、及び顆粒球等）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８９】
本明細書で使用する場合、「イムノアッセイ」とは広く、抗原に特異的に結合する抗体を用いるアッセイを指す。イムノアッセイは、特定の抗体の特異的結合の性質を使用して、抗原を単離、標的化、及び／または定量化することを特徴とし得る。
【００９０】
本明細書で使用する場合、「免疫関連病（または疾患または状態）」は、自己免疫疾患、炎症性疾患及び臓器移植、同種異系の幹細胞移植、自己幹細胞移植、骨髄移植、及び移植片対宿主病の急性的及び慢性的拒絶等の、グラフト移植拒絶に関係する免疫不全、を含むがこれらに限定されない群から選択される任意の病気、疾患または状態を包含するものと理解されなければならない。
【００９１】
本明細書で使用する場合、「免疫応答」とは広く、Ｔ細胞の共刺激の制御により影響を受ける、Ｔ細胞が仲立ちする、及び／またはＢ細胞が仲立ちする免疫応答免疫応答を指す。例示的な免疫応答としては、Ｂ細胞応答（例えば抗体産生）、Ｔ細胞応答（例えばサイトカイン産生、及び細胞毒性）、並びに、サイトカイン応答性細胞（例えばマクロファージ）の活性化が挙げられる。本明細書で使用する場合、免疫応答に関する「下方制御」という用語には、任意の１つ以上の免疫応答の低下が含まれ、免疫応答に関する「上方制御」という用語には、任意の１つ以上の免疫応答の増加が含まれる。ある種類の免疫応答を上方制御することは、別の種類の免疫応答の対応する下方制御をもたらし得ることが理解されよう。例えば、ある特定のサイトカイン（例えばＩＬ−１０）産生を上方制御することは、細胞免疫応答の下方制御をもたらすことができる。
【００９２】
本明細書における「免疫性（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ）」、「免疫性（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ）」または「免疫」応答とは、レシピエント患者内のペプチドに対して向けられる体液性（抗体が仲立ちする）、及び／または細胞性（抗原特異的Ｔ細胞もしくはその分泌生成物により仲立ちされる）応答の進行を指す。かかる応答は、免疫原の投与により誘発される積極的な応答、または、抗体もしくはプライミングされたＴ細胞を投与することにより誘導される受動的な応答であることができる。１つの仮説に束縛されるものではないが、細胞免疫応答は、クラスＩＩまたはクラスＩ  ＭＨＣ分子と関係するポリペプチドエピトープを提示して、それぞれ、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞及び／またはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化することにより誘発される。応答は、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、星状細胞、ミクログリア細胞、好酸球の活性化、好中球または先天性免疫の他の構成要素の活性化または動員を伴ってもよい。細胞が仲立ちする免疫応答の存在は、増殖アッセイ（ＣＤ４＋Ｔ細胞）またはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイにより測定することができる。体液性応答と細胞応答の、免疫原の防御または治療効果に対する相対的な寄与は、免疫付与した同系動物の抗体とＴ細胞を個別に単離し、第２の対象における防御または治療効果を測定することにより識別することができる。
【００９３】
「免疫原（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ  ａｇｅｎｔ）」または「免疫原（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ）」は、任意でアジュバントと共に哺乳類に投与をする際に、自身に対して免疫応答を誘発することができる部位である。
【００９４】
本明細書において、「病原体」とは、哺乳類細胞、好ましくはヒト細胞に感染し、病状を引き起こす任意の病原体または作用物質を意味する。その例としては、細菌、酵母菌、真菌、原生動物、マイコプラズマ、ウイルス、プリオン、及び寄生生物が挙げられる。かかる病原体の例としては、例えば、（ａ）例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えばＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、もしくはＶＺＶ）、ポックスウイルス（例えば、天然痘もしくは痘疹等のオルソポックスウイルス、もしくは伝染性軟属腫）、ピコルナウイルス（例えばライノウイルスもしくはエンテロウイルス）、オルトミクソウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ））、コロナウイルス（例えばＳＡＲＳ）、パポーバウイルス（例えば、陰部疣贅、尋常性疣贅、もしくは足底疣贅）、ヘパドナウイルス（例えばＢ型肝炎ウイルス）、フラビウイルス（例えばＣ型肝炎ウイルスもしくはデング熱ウイルス）、またはレトロウイルス（例えばＨＩＶ等のレンチウイルス）による感染により生じる病気等のウイルス病；（ｂ）例えば、細菌、例えば、エシェリキア属、エンテロバクター属、サルモネラ属、ブドウ球菌属、赤痢菌属、リステリア属、アエロバクター属、ヘリコバクター属、クレブシェラ属、プロテウス属、シュードモナス属、ストレプ卜コッカス属、クラミジア属、マイコプラズマ属、肺炎球菌属、ナイセリア属、クロストリジウム属、バチルス属、コリネバクテリウム属、抗酸菌属、カンピロバクター属、ビブリオ属、セラチア属、プロビデンシア属、クロモバクテリウム属、ブルセラ属、エルシニア属、ヘモフィルス属、またはボルデテラ属による感染から生じる病気等の細菌病；（ｃ）クラミジア感染症、（カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎を含むがこれらに限定されない）真菌症、（マラリア、ニューモシスチス・カリニ肺炎（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｎｉｉ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、リーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症を含むがこれらに限定されない）寄生虫症、並びに、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、変異型クロイツフェルト・ヤコブ病（ｖＣＪＤ）、ゲルストマン・ストロイスラー・シャインカー症候群、致死性家族性不眠症及びクールー等のヒト疾患を引き起こすトリパノソーマ（ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｅ）感染及びプリオン等の他の感染症に関係するものが挙げられる。
【００９５】
本明細書において、「病原体抗原」とは、化合物が特定の病原体により発現し、抗原が、特定の免疫応答（例えば、ウイルス等の病原体に対する、抗体または細胞が仲立ちする免疫応答）を誘発するのに使用され得る化合物（例えばペプチド、ポリペプチド、糖ペプチド、糖タンパク質等）、またはそのコンジュゲート、断片もしくは変異体を指す。通常、抗原は部位、例えば、ウイルスまたは他の病原体の表面に発現するポリペプチドまたは糖タンパク質（カプシドタンパク質または他の膜タンパク質等）を含む。
【００９６】
本明細書において、「炎症性腸疾患」は、任意の炎症性の腸の状態を含み、特に、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、膠原性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、及び不確定性大腸炎が挙げられる。
【００９７】
本明細書で同じ意味で用いられる「炎症性疾患」「炎症性状態」及び／または「炎症」とは広く、慢性または急性の炎症性疾患を指し、炎症性自己免疫疾患及び炎症性アレルギー状態を明示的に含む。これらの状態としては例えば、有害な刺激に対する制御不全となった免疫応答を特徴とする炎症性異常、例えば病原体、損傷した細胞、または刺激源が挙げられる。炎症性疾患には、非常に多様なヒト疾患が存在する。炎症性プロセスにおける、病因由来の非免疫性疾患としては、癌、アテローム性動脈硬化症、及び虚血性心疾患が挙げられる。炎症と関係する疾患の例としては、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、骨盤内炎症性疾患、再潅流傷害、サルコイドーシス、血管炎、間質性膀胱炎、正補体血症性蕁麻疹様血管炎、心膜炎、筋炎、抗シンセターゼ症候群、強膜炎、マクロファージ活性化症候群、ベーチェット症候群、ＰＡＰＡ症候群、ブラウ症候群、痛風、成人及び青年スティル病、クリノピリノパシー（ｃｒｙｒｏｐｙｒｉｎｏｐａｔｈｙ）、マック・ウェルズ症候群、家族性寒冷自己炎症性症候群、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、家族性地中海熱、慢性乳児神経皮膚関節炎症候群、全身型若年性特発性関節炎、高ＩｇＤ症候群、シュニッツラー症候群、ＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳＰ）、歯肉炎、歯周炎、肝炎、硬変、膵炎、心筋炎、血管炎、胃炎、痛風、痛風性関節炎、並びに、乾癬、アトピー性皮膚炎、湿疹、酒さ、蕁麻疹、及び座瘡からなる群から選択される炎症性皮膚疾患が挙げられる。
【００９８】
本明細書で使用する場合、「阻害シグナル」とは広く、免疫細胞上の阻害性受容体分子を介して伝達されるシグナルを指す。シグナルは、活性化受容体を介して（例えばＴＣＲ、ＣＤ３、ＢＣＲ、またはＦｃ分子を介して）あるシグナルに拮抗し、例えば、セカンドメッセンジャーの産生；増殖；または、免疫細胞におけるエフェクター機能（例えば、ファゴサイトーシス、抗体産生、もしくは細胞細胞毒性の低下、もしくは、免疫細胞がメディエーター（例えばサイトカイン（ＩＬ−２等）、及び／もしくはアレルギー反応のメディエーター）を産生することができないこと）；またはアネルギーの発達の阻害をもたらすことができる。
【００９９】
本明細書で使用する場合、「単離（した）」とは広く、自然の元の環境から取り除かれた物質を指し、それ故、自然環境から人の手により変化が加えられており、「組み換え」ポリペプチドを含む。単離した物質は例えば、ベクター系に含まれる外因性核酸、宿主細胞内に含有される外因性核酸、または、元の環境から取り除かれており、故に人の手により変更されている任意の物質（例えば「単離抗体」）であってよい。例えば、本明細書で使用する場合、「単離（した）」または「精製（した）」とは広く、生物学的基質が由来する細胞もしくは組織源からの細胞物質もしくは他の汚染タンパク質を実質的に含まない、または、化学合成をした場合に化学物質前駆体、もしくは他の化学物質を実質的に含まないタンパク質、ＤＮＡ、抗体、ＲＮＡ、または生物学的に活性なそのタンパク質を意味する。本明細書で使用する場合、「単離（した）」という用語は、化合物が自然に存在するのとは異なる環境にある、例えば、自然では見出されない濃度までペプチドを濃縮すること等により、自然の外部環境から単離した対象の化合物（例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）を指す。「単離（した）」には、対象の化合物に対して実質的に濃縮された、かつ／または対象の化合物が部分的もしくは実質的に精製された試料内に存在する化合物を含む。
【０１００】
本明細書で使用する場合、「単離抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体（例えば、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡを特異的に結合する抗体）を実質的に含まず、かつＶＳＩＧ８以外の抗原を特異的に結合する抗体を実質的に含まない抗体を指すことを目的としている。更に、単離抗体は、他の細胞物質及び／または化学物質を実質的に含まなくてよい。
【０１０１】
本明細書において、「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によりコードされる抗体クラス（例えばＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。
【０１０２】
本明細書で使用する場合、「Ｋ−ａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」とは広く、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度を指し、本明細書で使用する場合、「Ｋｄｉｓｓ」または「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指す。
【０１０３】
本明細書で使用する場合、「ＫＤ」という用語は、Ｋａに対するＫｄの比（即ちＫｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表現される解離定数を指すことを目的としている。抗体に対するＫＤの値は、プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））、ＥＬＩＳＡ及びＫＩＮＥＸＡ等の、当該技術分野において十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定する好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、好ましくは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システムまたはＥＬＩＳＡ等によるバイオセンサーシステムを使用することである。
【０１０４】
本明細書で使用する場合、「標識」または「検出可能部位」とは広く、分光法、光化学法、生化学的方法、免疫化学法、化学的方法、または他の物理的方法により検出可能な組成物を指す。
【０１０５】
本明細書で使用する場合、「低ストリンジェンシー」、「中ストリンジェンシー」「高ストリンジェンシー」または「超高ストリンジェンシー条件」とは広く、核酸ハイブリダイゼーション及び洗浄のための条件を意味する。ハイブリダイゼーション反応を行うための手引きは、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（５ｔｈ  Ｅｄ．）Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（２００２）に見出すことができる。例示的な特定のハイブリダイゼーション条件としては、（１）約４５℃での６Ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）、続いて、０．２Ｘ  ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ（少なくとも５０℃）（洗浄温度は、低ストリンジェンシー条件では５５℃まで増加させることができる）における２回の洗浄の、低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件；（２）約４５℃での６Ｘ  ＳＳＣ、続いて、０．２Ｘ  ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ（６０℃）における１回以上の洗浄の、中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件；（３）約４５℃での６Ｘ  ＳＳＣ、続いて、０．２Ｘ  ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ（６５℃）における１回以上の洗浄の、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件；及び、（４）０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％  ＳＤＳ（６５℃）、続いて、０．２Ｘ  ＳＳＣ、及び１％  ＳＤＳ（６５℃）での１回以上の洗浄の、超高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
本明細書で使用する場合、「哺乳類」とは広く、皮膚を体毛で覆い、メスは幼体に栄養を与えるのに、乳を作り出す乳腺を有することを特徴とする、ヒトを含む、全ての哺乳類温血脊椎動物を指す。哺乳類の例としては、アルパカ、アルマジロ、カピバラ、ネコ、ラクダ、チンパンジー、チンチラ、ウシ、イヌ、ヤギ、ゴリラ、ハムスター、ウマ、ヒト、キツネザル、ラマ、マウス、非ヒト霊長類、ブタ、ネズミ、ヒツジ、トガリネズミ、リス、バク及び野ネズミが挙げられるが、これらに限定されない。哺乳類としては、ウシ科動物、イヌ科動物、ウマ科動物、ネコ科動物、マウス科動物、ヒツジ科動物、ブタ科動物、霊長類、及び齧歯類種が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳類はまた、ワシントンＤ．Ｃの国立自然史博物館（スミソニアン協会）により保管されている、世界の哺乳類種に記載されているもの全ても含む。
【０１０７】
本明細書で使用する場合、「天然核酸分子」とは広く、自然で生じる（例えば、天然タンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有するＲＮＡまたはＤＮＡ分子を指す。
【０１０８】
本明細書で使用する場合、「核酸」または「核酸配列」とは広く、一本鎖または二本鎖形態のいずれかの、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドを指す。この用語は、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含有数核酸、即ちオリゴヌクレオチドを包含する。本用語はまた、合成骨格を有する核酸に似た構造も包含する。特に断りのない限り、特定の核酸配列は、核酸の保存的に改変された変異体（例えば縮重コドン置換）及び相補配列、並びに、明示的に示されている配列もまた暗示的に包含する。「核酸」という用語は、遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、及びポリヌクレオチドと同じ意味で用いられる。
【０１０９】
「オリゴマー化ドメイン」または「多量体化ドメイン」または「二量体化ドメイン」は、本明細書では同じ意味で用いられ、広く、ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡ細胞外ドメインまたはこれらの断片に結合した際に、オリゴマー化を促進するドメインを指す。前記オリゴマー化ドメインは、追加のジスルフィド結合により更に安定化できる、自己会合するαヘリックス、例えばロイシンジッパーを含む。このドメインは、ポリペプチドの、機能性結合タンパク質の中へのｉｎ  ｖｉｖｏフォールディングを容易にすると考えられているプロセスである、膜にわたるベクターによるフォールディングに適合するように設計される。その例は、当技術分野において既知であり、例えば、コイル状ＧＣＮ４、及びＣＯＭＰが挙げられる。αヘリックスのコイルドコイルは恐らく、タンパク質で見られる、最も一般的なサブユニットオリゴマー化モチーフである。したがって、コイルドコイルは種々の異なる機能を果たす。転写活性化因子の複数のファミリーにおいては、例えば、短いロイシンジッパーは、ＤＮＡ上での、ＤＮＡ結合領域の位置特定において重要な役割を果たす（Ｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｃｅｌｌ  ７１：１２２３−１２３７）。コイルドコイルは、中間径フィラメントタンパク質のオリゴマーを形成するためにもまた使用される。コイルドコイルタンパク質は更に、小胞とウイルス性膜の両方の融合において、重要な役割を果たすようである（Ｓｋｅｈｅｌ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｃｅｌｌ  ９５：８７１−８７４（１９９８））。両方の場合において、融合される膜の中に埋め込まれた疎水性配列は、長いαヘリックスのバンドルで構成される、棒状複合体の同じ末端に位置する。複合体が膜融合のためにアセンブルするため、この分子配列は、近接する膜の付着を引き起こすと考えられている。コイルドコイルは多くの場合、オリゴマー化を制御するために使用される。コイルドコイルは、ＧＣＮ４、ウイルス性融合ペプチド、ＳＮＡＲＥ複合体、及びある特定のｔＲＮＡシンセターゼ等を含むがこれらに限定されない転写因子を含む、多くの種類のタンパク質において見出される。非常に長いコイルドコイルは、トロポミオシン、中間径フィラメント、及び紡錘形の極と本体を有する構成成分等のタンパク質で見出される。コイルドコイルは、平行または逆平行方向に会合する、非常に秩序立った様式で互いの周りにスーパーコイル構造を取った多数のαヘリックスを有する。しかし、二量体と三量体が最も一般的である。ヘリックスは同じタンパク質、または異なるタンパク質に由来してよい。コイルドコイルは、疎水性の繋ぎ目を互いに埋めるように交わった、構成成分のヘリックスにより形成される。疎水性の繋ぎ目が各ヘリックスの周りでねじれると、ヘリックスもまたねじれて互いにコイル状となり、疎水性の繋ぎ目を埋めてスーパーコイルを形成する。これは、構造をコイルドコイルとして画定するノブホールパッキングとして知られている、隣接ヘリックス間の側鎖の特徴的な鉗合である。ヘリックスは、この種の相互作用を発生させるには同方向に配向させる必要はないが、平行構造がより一般的である。逆平行構造は三量体では非常に稀であり、五量体では知られてい��いが、２つのヘリックスが多くの場合、短いループで接続している分子内二量体においてはより一般的である。細胞外空間では、ヘテロ三量体コイルドコイルタンパク質のラミニンは、基底膜の形成に重要な役割を果たす。他の例は、３つ（トロンボスポンジン１及び２）または５つ（トロンボスポンジン３、４及びＣＯＭＰ）の鎖が接続する、トロンボスポンジン及び軟骨オリゴマー基質スタンパク質（ＣＯＭＰ）である。分子は花のブーケのような概観を有し、このようなオリゴマー構造を取る理由は恐らく、Ｃ末端ドメインの、細胞受容体との多価相互作用である。酵母菌転写活性化因子ＧＣＮ４は、塩基性領域ロイシンジッパー（ｂＺＩＰ）ＤＮＡ結合モチーフを含有する、３０種類の同定された真核細胞タンパク質の１つである（Ｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ７１：１２２３−１２３７（１９９２））。ｂＺＩＰ二量体は、カルボキシ末端の３４塩基にまたがり平行なコイルドコイルを形成し、ＤＮＡ結合部位の主溝を通ってアミノ末端に向かって徐々に発散する連続したヘリックスの対である。コイルドコイル二量体化界面は、ＤＮＡ軸に対してほとんど垂直に配向され、文字「Ｔ」の概観を複合体にもたらす。ｂＺＩＰは、平行のαヘリックスコイルドコイルの中に共に束ねる、疎水性残基と無極性残基の４−３の７残基の繰り返しを含有する（Ｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ７１：１２２３−１２３７（１９９２））。二量体の安定性は、７残基の繰り返しの位置ａ及びｄにあるロイシンと無極性残基の、横からの束ね合わせ、並びに、ＧＣＮ４ロイシンジッパーペプチドの結晶構造として示される、ヘリックス内、及びヘリックス間の、数が限定された塩橋からもたらされる（Ｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ７１：１２２３−１２３７（１９９２））。別の例は、Ｍｒ５２，０００のサブユニットのホモ三量体としての、ウシの気管軟骨から単離したＣＭＰ（マトリリン−１）（Ｐａｕｌｓｓｏｎ  ＆  Ｈｅｉｎｅｇａｒｄ（１９８１），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９７：３６７−３７５）であり、ここで、各サブユニットは、ｖＷＦＡ１モジュール、単一のＥＧＦドメイン、ｖＷＦＡ２モジュール及び、５個の７塩基にまたがるコイルドコイルドメインから構成される（Ｋｉｓｓ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：８１２６−８１３４（１９８９）；Ｈａｕｓｅｒ  ａｎｄ  Ｐａｕｌｓｓｏｎ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５７４７−２５７５３（１９９４））。精製したＣＭＰの電子顕微鏡法では、各サブユニットが、コイルドコイルに対応する共通の箇所から現れる楕円形を形成する、ブーケのような三量体構造を示した（Ｈａｕｓｅｒ  ａｎｄ  Ｐａｕｌｓｓｏｎ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５７４７−２５７５３（１９９４））。マトリリン−１のコイルドコイルドメインは、広範囲にわたって研究されている。この三量体構造は、非変性条件下における、鎖間のジスルフィド結合の完全な還元の後でも保持される（Ｈａｕｓｅｒ  ａｎｄ  Ｐａｕｌｓｓｏｎ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５７４７−２５７５３（１９９４））。更に別の例は、軟骨オリゴマー基質スタンパク質（ＣＯＭＰ）である。非コラーゲン性の糖タンパク質であるＣＯＭＰは、軟骨で最初に同定された（Ｈｅｄｂｏｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：６１３２−６１３６（１９９２））。このタンパク質は、Ｎ末端の７塩基の繰り返し領域（ｃｃ）、続いて、４つの上皮増殖因子（ＥＧＦ）様ドメイン（ＥＦ）、７つのカルシウム結合ドメイン（Ｔ３）、そしてＣ末端の球状ドメイン（ＴＣ）から構成される５つのサブユニットの、５２４ｋＤａのホモ五量体である。このドメイン構成に従うと、ＣＯＭＰはトロンボスポンジンファミリーに属する。ａとｄの位置に優先的に疎水性残基を有する７塩基の繰り返し（ａｂｃｄｅｆｇ）ｎが、ヘリックスのコイルドコイルドメインを形成する（Ｃｏｈｅｎ  ａｎｄ  Ｐａｒｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６３：４８８−４８９（１９９４））。近年、ＣＯＭＰの、組み換えを行った５本鎖によるコイルドコイルドメイン（ＣＯＭＰｃｃ）が結晶化され、その構造が０．２ｎｍの解像度で解明された（Ｍａｌａｓｈｋｅｖｉｃｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：７６１−７６５（１９９６））。
【０１１０】
本明細書で使用する場合、「作用可能に結合した」とは広く、２つのＤＮＡ断片によりコードされたアミノ酸配列がフレーム内にとどまるように、２つのＤＮＡ断片が結合する場合を指す。
【０１１１】
本明細書で使用する場合、「パラトープ」とは広く、抗原を認識する抗体の一部分（例えば、抗体の抗原結合部位）を意味する。パラトープは、抗体のＦｖ領域の小さな領域（例えば１５〜２２アミノ酸）であってよく、抗体の重鎖及び軽鎖の一部を含有してよい）（Ｇｏｌｄｓｂｙ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｇｅｎｓ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（５ｔｈ  Ｅｄ．）Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ（５７〜７５ページ）を参照のこと）。
【０１１２】
「患者」または「対象」または「レシピエント」、「個体」または「治療される個体」は、本明細書では同じ意味で用いられ、病状を緩和するか、または病状の発生もしくは再発を予防するかのいずれかのために治療を必要とする任意の動物を広く意味する。また、本明細書で使用する場合、「患者」とは広く、危険因子、病歴、罹病性、症状、及び徴候を有するか、以前に診断されたか、疾患の患者母集団の危険性があるか、またはその一員である任意の動物を指す。患者は、ヒト等の臨床患者、またはコンパニオンアニマル、ペット動物、家畜動物、外来動物、もしくは動物園の動物等の獣医学用患者であってよい。
【０１１３】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は同じ意味で用いられ、修飾（例えばリン酸化またはグリコシル化）に関係なく、任意の長さのアミノ酸残基のポリマーを広く指す。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の類似体または模倣物であるアミノ酸ポリマー、及び、天然アミノ酸ポリマーに適用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工キメラ模倣物であるアミノ酸ポリマー、並びに、天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーに適用される。ポリペプチドは例えば、糖質残基を付加することで修飾し、糖タンパク質を形成することが可能である。用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は明示的に、糖タンパク質、及び非糖タンパク質を含む。
【０１１４】
本明細書で使用する場合、「プロモーター」とは広く、核酸の転写を指示する核酸配列アレイを指す。本明細書で使用する場合、プロモーターには、転写開始部位付近に必要な核酸配列、例えば、ポリメラーゼＩＩ型プロモーターの場合、ＴＡＴＡエレメントが含まれる。プロモーターはまた任意で、遠位のエンハンサーまたはリプレッサーエレメントを含み、これらは、転写開始部位から最大数千塩基対離れて位置することができる。「構成的」プロモーターは、大部分の環境及び成長条件化にて活性なプロモーターである。「誘導性プロモーター」とは、環境または成長制御下にて活性なプロモーターである。
【０１１５】
本明細書で使用する場合、「予防的有効量」とは広く、病気の予防、または病気の再発の防止のために患者に投与する場合、病気または再発の予防に影響を及ぼすのに十分な化合物の量を指す。予防的有効量は、徴候及び／または症状の発生を予防するのに有効な量であってよい。「予防的有効量」は、疾患とその重症度、及び、治療される患者の年齢、体重、病歴、状態に対する疾病素質、以前の状態に応じて変化し得る。
【０１１６】
「予防ワクチン」及び／または「予防ワクチン接種」とは、癌または感染状態等の病気と関係する病気または症状を予防するために用いられるワクチンを指す。
【０１１７】
本明細書で使用する場合、「予防」とは広く、徴候及び／もしくは症状が患者に現れていないか、寛解期であるか、または以前に患者に現れていた場合の、一連の治療法を指す。予防には、患者の病気の治療の後に発生する病気の予防が含まれる。更に、予防には、病気が潜在的に進行し得る患者、特に、病気に感染しやすい患者（例えば、危険因子を有するか、または病気の進行の危険性を有する患者母集団の一員）を治療することが含まれる。
【０１１８】
本明細書で使用する場合、「組み換え」とは、生成物、例えば細胞、核酸、タンパク質、またはベクターに関して、細胞、核酸、タンパク質もしくはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入、もしくは天然核酸もしくはタンパク質の変更により改変されているか、またはその細胞が、そのように改変された細胞に由来することを広く指す。したがって、例えば、組み換え細胞は、細胞のネイティブ（非組み換え）な形態内に見出されない遺伝子を発現するか、または別様では異常発現するか、低度に発現するか、もしくは全く発現しないネイティブな遺伝子を発現する。
【０１１９】
本明細書で使用する場合、「組み換えヒト抗体」という用語には、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子を導入もしくは染色体に導入した動物（例えばマウス）から単離した抗体、またはそれから調製したハイブリドーマ（以下に詳述）、（ｂ）例えばトランスフェクトーマから形質転換してヒト抗体を発現する宿主細胞から単離した抗体、（ｃ）組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離した抗体、及び（ｄ）他のＤＮＡ配列に対してヒト免疫グロブリン遺伝子配列をスプライシングすることを伴う任意の他の方法により調製、発現、作製または単離した抗体等の、組み換え法により調製、発現、作製、または単離された全てのヒト抗体が含まれる。かかる組み換えヒト抗体は、フレームワーク領域とＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかし、ある特定の実施形態において、かかる組み換えヒト抗体をｉｎ  ｖｉｔｒｏの突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物を用いる場合、ｉｎ  ｖｉｖｏの体節突然変異誘発）に供することが可能であるため、組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系のＶＨ及びＶＬ配列に由来し、これらに関係するが、ｉｎ  ｖｉｖｏではヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に自然では存在し得ない配列である。
【０１２０】
本明細書で使用する場合、「シグナル配列」または「シグナルペプチド」とは広く、分泌性、及び膜結合ポリペプチドのＮ末端にて生じ、かつ、多数の疎水性アミノ酸残基を含有する約１５個以上のアミノ酸を含有するペプチドを指す。例えば、シグナル配列は、少なくとも約１０〜３０個のアミノ酸残基、好ましくは約１５〜２５個のアミノ酸残基、より好ましくは約１８〜２０個のアミノ酸残基、更により好ましくは約１９個のアミノ酸残基を含有し、かつ、少なくとも約３５〜６５％、好ましくは約３８〜５０％、及びより好ましくは約４０〜４５％の疎水性アミノ酸残基（例えばバリン、ロイシン、イソロイシンまたはフェニルアラニン）を有する。「シグナル配列」はまた、当該技術分野においては、「シグナルペプチド」とも呼ばれ、かかる配列を含有するポリペプチドを脂質二分子膜に向ける役割を果たし、分泌時に切断される。
【０１２１】
本明細書で使用する場合、抗体への「特異的（または選択的）結合」、または「〜との特異的（または選択的）免疫反応性」、または「特異的に相互作用または結合する」とは広く、いくつかの実施形態において、タンパク質及び他の生態（ｂｉｏｌｏｇｉｅｓ）の異質母集団の存在を決定する結合反応を指すタンパク質またはペプチド（または他のエピトープ）を指す。例えば、指定したイムノアッセイ条件下において、特定の抗体は、バックグラウンド（非特異的シグナル）よりも少なくとも２倍を超えて特定のタンパク質に結合し、試料中に存在する他のタンパク質には、実質的に大量に結合しない。通常は、特異的または選択的反応は、バックグラウンドシグナルまたはノイズの少なくとも２倍であり、そしてより典型的には、バックグラウンドの約１０〜１００倍を超える。
【０１２２】
本明細書で使用する場合、「特異的にハイブリダイゼーション可能な」と「相補的」とは広く、核酸が、従来のワトソン−クリック、または非従来的な種類の別の核酸配列とともに水素結合を形成することができることを意味する。核酸分子と相補配列の結合自由エネルギーは、核酸の関係機能（例えばＲＮＡｉ活性）の処理を可能にするのに十分なものである。核酸分子の結合自由エネルギーの測定は、当該技術分野において周知である（例えば、Ｔｕｒｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．ＣＳＨ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．ＬＩＩ：１２３−３３（１９８７）；Ｆｒｉｅｒ，ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ  ８３：９３７３−７７  １９８６）；Ｔｕｒｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：３７８３−８５（１９８７）を参照のこと）。パーセント相補性は、第２の核酸配列と水素結合（例えば、ワトソン−クリック塩基対）を形成可能な核酸分子内の、連続した残基の割合（％）を示す（例えば、１０個のうち少なくとも約５、６、７、８、９、１０個が、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、及び１００％の相補性である（それらの値を含む））。「完全に相補的な」、または１００％相補性とは広く、ある核酸配列の全ての連続した残基が、第２の核酸配列内の同数の連続した残基と水素結合していることを意味する。
【０１２３】
「実質的相補性」とは、非相補性となるように選択された、オーバハング等のポリヌクレオチド鎖の領域を除いて、約９０％の相補性を示すポリヌクレオチド鎖を意味する。特異的結合は、特異的結合が所望される条件下において、即ち、ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイもしくは治療的処理の場合における生理的条件下において、または、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの場合は、アッセイが実施される条件下において、非標的配列への、オリゴマー化合物の非特異的結合を避けるために、十分な程度の相補性を必要とする。非標的配列は通常、少なくとも５個のヌクレオチドが異なっていてよい。
【０１２４】
本明細書で使用する場合、病気の「徴候」とは広く、検査で発見可能な、患者の病気を示す任意の異常、すなわち病気の主観的な指標である症状とは対照的に、病気の客観的な指標を意味する。
【０１２５】
本明細書で使用する場合、「固体支持体」、「支持体」及び「基質」とは広く、滑らかな支持体（例えば金属、ガラス、プラスチック、ケイ素、及びセラミック表面）並びにテキスチャード及び多孔質物質を含むがこれらに限定されない、別の物質が付着可能な、個体または半固体構造物を提供する任意の物質を指す。
【０１２６】
本明細書で使用する場合、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの「可溶性エクトドメイン（ＥＣＤ）」または「エクトドメイン」または「可溶性ＶＳＩＧ８またはＶＩＳＴＡタンパク質／分子」とは、ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡ融合タンパク質、またはＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡ  ＥＣＤ−Ｉｇ融合タンパク質を含むがこれらに限定されない、細胞表面に結合していないＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡ分子、またはその任意の一部分を意味し、ここで、ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡの細胞外ドメイン、またはこれらの断片は、融合分子を可溶性にする免疫グロブリン（Ｉｇ）部位、またはその断片及び誘導体、パピローマウイルスＥ７遺伝子産物、黒色腫関連抗原ｐ９７もしくはＨＩＶエンベロープタンパク質、またはこれらの断片及び誘導体等の、生物学的に活性な、または化学的に活性なタンパク質の一部と融合または結合した、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの細胞外ドメインを有するタンパク質；ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡ−Ｉｇ等のハイブリッド（キメラ）融合タンパク質、またはこれらの断片及び誘導体に融合している。かかる融合タンパク質を、以下で更に詳細に記載する。
【０１２７】
本明細書において、「可溶性ＶＳＩＧ８またはＶＩＳＴＡタンパク質／分子」は、膜貫通ドメインが取り除かれ、タンパク質が可溶性となったＶＳＩＧ８もしくはＶＩＳＴＡ分子、またはこれらの断片及び誘導体；これらの断片、一部分または誘導体、及び、可溶性ＶＳＩＧ８またはＶＩＳＴＡ変異分子もまた含む。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った方法で使用する可溶性ＶＳＩＧ８またはＶＩＳＴＡ分子は、シグナル（リーダー）ペプチド配列を含んでも、含まなくてもよい。
【０１２８】
本明細書において、治療または診断の文脈における「対象」または「患者」または「個体」は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。「非ヒト動物」という用語としては、全ての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類、即ち、トリ及び哺乳類対象を含むがこれらに限定されない、本発明に従って治療するのに好適な任意の動物等の、哺乳類及び非哺乳類が挙げられ、好ましくは哺乳類である。本発明に従って治療される必要がある、任意の哺乳類対象が好適である。両方の性、そして、成長の任意の段階（即ち新生児、乳児、少年、思春期、及び成人）のヒト対象を、本発明に従って治療することができる。本発明は、動物対象、特に、獣医学的目的、並びに薬剤スクリーニング及び薬剤開発目的用のマウス、ラット、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ヒツジ及びウマ等の哺乳類対象でもまた実施してよい。「対象」は、「個体」及び「患者」と同じ意味で用いられる。
【０１２９】
本明細書で使用する場合、「化学物質前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」とは広く、ＶＳＩＧ８またはＶＩＳＴＡタンパク質であって、これらのタンパク質が、タンパク質合成に関係する化学物質前駆体または他の化学物質から単離されている、ＶＳＩＧ８またはＶＩＳＴＡタンパク質の調製物を指す。一実施形態では、「化学物質前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」という表現には、（乾燥重量で）約３０％未満の化学物質前駆体または非ＶＳＩＧ８化学物質、より好ましくは、約２０％未満の化学物質前駆体または非ＶＳＩＧ８もしくはＶＩＳＴＡ化学物質、更により好ましくは約１０％未満の化学物質前駆体または非ＶＳＩＧ８もしくはＶＩＳＴＡ化学物質そして最も好ましくは、約５％未満の化学物質前駆体または非ＶＳＩＧ８もしくはＶＩＳＴＡ化学物質を有するＶＳＩＧ８またはＶＩＳＴＡタンパク質の調製物が含まれる。
【０１３０】
本明細書で使用する場合、病気の「症状」とは広く、患者が経験し、病気であることを示す、任意の病的現象、または、通常の構造、機能、もしくは感覚から離れることを指す。
【０１３１】
本明細書で使用する場合、「Ｔ細胞」とは広く、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を指す。「Ｔ細胞」という用語は、Ｔヘルパー１型Ｔ細胞と、Ｔヘルパー２型Ｔ細胞の両方もまた含む。
【０１３２】
本明細書で使用する場合、「治療法」、「治療用」、「治療すること」、または「治療」とは広く、病気を治療すること、病気もしくは臨床的症状の進行を阻止もしくは低減すること、及び／または病気を和らげること、病気もしくはその臨床的症状の回復を引き起こすことを意味する。治療は、病気、徴候、及び／もしくは病気の症状の予防、治療、療法、低減、緩和、並びに／または、軽減をもたらすことを包含する。治療法は、進行中の病気の徴候及び／または症状（例えば炎症、痛み）を有する患者における、徴候及び／または症状の緩和を包含する。治療はまた、「予防」も包含する。治療目的のための「低減した」という用語は広く、徴候及び／または症状の、臨床的に著しい低減を指す。治療には、徴候及び／または症状（例えば炎症、痛み）の再発または反復を治療することが含まれる。治療には、任意の時間における徴候及び／または症状の発生を妨げること、並びに、既存の徴候及び／または症状を低減させ、既存の徴候及び／または症状を取り除くことが包含されるが、これらに限定されない。治療には、慢性疾患（「持続性」）及び急性疾患の治療が含まれる。例えば、治療には、徴候及び／または症状（例えば炎症、痛み）の再発または反復を治療または予防することが含まれる。
【０１３３】
「治療用ワクチン」及び／または「治療用ワクチン接種」とは、癌等の病気、または感染状態を治療するために使用されるワクチンを指す。
【０１３４】
本明細書で使用する場合、「Ｔｒｅｇ細胞」（場合によっては、サプレッサーＴ細胞、または誘発性Ｔｒｅｇ細胞（もしくはｉＴｒｅｇ）とも呼ばれる）とは、免疫系を制御し、自己抗原に対する寛容性を維持し、自己免疫疾患を排除することができるＴ細胞の部分集団を指す。Ｆｏｘｐ３＋  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）は、通常下で末梢性寛容を維持するのに非常に重要である。
【０１３５】
本明細書で使用する場合、「膜貫通ドメイン」とは広く、原形質膜にまたがる、長さが約１５アミノ酸残基のアミノ酸配列を指す。より好ましくは、膜貫通ドメインは、少なくとも約２０、２５、３０、３５、４０、または４５アミノ酸残基を含み、原形質膜にまたがる。膜貫通ドメインは疎水性残基内に豊富であり、通常はαヘリックス構造を有する。一実施形態では、膜貫通領域のアミノ酸の少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上が疎水性、例えばロイシン、イソロイシン、チロシン、またはトリプトファンである。膜貫通ドメインは、例えばＺａｇｏｔｔａ，ｅｔ  ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９：２３５−２６３（１９９６）に記載されている。
【０１３６】
本明細書で使用する場合、「トランスジェニック動物」とは広く、動物の１つ以上の細胞が「導入遺伝子」を含む、非ヒト動物、好ましくは哺乳類、より好ましくはマウスを指す。「導入遺伝子」という用語は、トランスジェニック動物が成長する細胞のゲノム内に組み込まれ、かつ、成熟動物のゲノム内に保持された外因性ＤＮＡを指し、例えばトランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織内での、コードされた遺伝子産物の発現を指令する。
【０１３７】
本明細書で使用する場合、「腫瘍」とは広く、組織新生物の形態、特に、内因性組織の、多かれ少なかれ脱阻害された、自然的、自律的及び不可逆的な過剰増幅形態の少なくとも１つの細胞または細胞塊を指し、この増殖は、特定の細胞及び組織機能の、多少の明確な喪失と関係した規則的なものである。この細胞または細胞塊は、その増殖に関しては、自身により、または、宿主生物の制御メカニズムにより効果的に阻害されず、例えば結腸直腸癌、黒色腫または癌種となっている。腫瘍抗原としては、悪性細胞自体に存在する抗原だけでなく、内皮細胞及び他の血管構成成分を含む、腫瘍の間質支持組織に存在する抗原もまた含まれる。
【０１３８】
本明細書で使用する場合、「不応性」とは広く、刺激、例えば、活性化受容体またはサイトカインを介する刺激に対する免疫細胞の不応答性を意味する。不応性は例えば、免疫抑制剤、または高用量の抗原への曝露のために生じる可能性がある。
【０１３９】
本明細書で使用する場合、「ワクチン」とは、特定の病気（例えば癌または感染症）に対する免疫を改善する生物学的調製物を指し、ここでワクチンは、病気の特異的抗原、例えば、免疫応答が誘発される病気に対する癌抗原または病原体抗原を含む。ワクチンには通常、免疫系を刺激する、免疫増強剤としてのアジュバントが含まれる。これには、（病気を予防する）予防用ワクチン、及び（病気またはその症状を治療する）治療用ワクチンが挙げられる。
【０１４０】
本明細書で使用する場合、「可変領域」または「ＶＲ」とは広く、抗体が抗原に直接結合するのに関係する、抗体内の軽鎖及び重鎖のそれぞれの対の中に存在するドメインを指す。それぞれの重鎖は、一端に可変領域（ＶＨ）、続いていくつかの定常領域を有する。それぞれの軽鎖は一端に可変領域（ＶＬ）を、そして他端に定常領域を有し、軽鎖の定常領域は重鎖の第１の定常領域と並んでおり、軽鎖可変領域は重鎖可変領域と並んでいる。
【０１４１】
本明細書で使用する場合、「ベクター」とは広く、核酸分子であって、この核酸分子が結合した別の核酸分子を運搬可能な核酸分子を指す。ベクターの種類の１つは「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントが中にライゲーションされ得る、環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターはウイルスベクターであり、ここでは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノム内にライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、そのベクターが導入される宿主細胞内での自律複製が可能である（例えば、細菌由来の複製物を有する細菌ベクターと、エピソーム哺乳類ベクター）。宿主細胞内に導入する際に、他のベクター（例えば非エピソーム哺乳類ベクター）を宿主細胞のゲノム内に組み込むことにより、宿主ゲノムと共に複製される。更に、ある特定のベクターは、作用可能に結合する遺伝子の発現を指令することができる。本明細書において、ベクターは「組み換え発現ベクター」または単に「発現ベクター」と呼ばれる。一般に、組み換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは多くの場合、プラスミドの形態である。プラスミドがベクターの最も一般的に使用されている形態であるので、本明細書において、「プラスミド」と「ベクター」は同じ意味で使用してよい。しかし、本発明は、等価な機能を有するかかる他の形態の発現ベクター、例えばウイルスベクター（例えば、複製能欠失型レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）を含むことを意図している。本技術及び手順は通常、当該技術分野において周知の従来の方法に従って、そして、本明細書を通して引用及び議論される、種々の一般的、及びより具体的な参考文献に記載されているとおりに実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃ．Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｌａｂ．Ｍａｎｕａｌ［３ｒｄ  Ｅｄ］Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００１）を参照のこと。組み換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、及び組織培養、並びに形質転換（例えば電気穿孔法、リポフェクション）のために標準的な技術を使用してよい。酵素反応及び精製技術は、メーカーの規格書に従って、または当該技術分野において一般に行われる、もしくは本明細書に記載されるとおりに実施してよい。
【０１４２】
本出願で使用する特定の用語及び表現を規定したので、本発明に包含される、特定の種類のＶＳＩＧ８ポリペプチド、融合タンパク質、抗ＶＳＩＧ８抗体及び抗原結合抗体断片、並びに、これらの作製方法及び使用方法を以下で更に記載する。
【０１４３】
表１に示すとおり、Ｉｇスーパーファミリーは、Ｂ７ファミリーリガンド及び受容体を含む、多くの非常に重要な免疫制御因子を含む。これらのうち、最も特質決定された共刺激因子リガンドは、プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で発現し、受容体がＣＤ２８、ＰＤ−Ｌ１及びＣＴＬＡ−４である、ＣＤ８０及びＣＤ８６である（１２）。これらの標的は、自己免疫及び癌の治療において、貴重な臨床標的であることが証明されている。
【０１４４】
【表１】
2018505911.tif 000003
【０１４５】
Ｂ７ファミリーリガンドは拡大して、共刺激性Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳリガンド）及びＢ７−Ｈ３（未知の受容体）、並びに、共阻害性Ｂ７−Ｈ１（ＰＤ−Ｌ１）、Ｂ７−ＤＣ（ＰＤ−Ｌ２）、Ｂ７−Ｈ４（Ｂ７Ｓ１またはＢ７ｘ；未知の受容体）、Ｂ７−Ｈ５（ヒトのみ）（１３）及びＢ７−Ｈ６（１２、１４）も含んでいる。ＰＤ−Ｌ１→ＰＤ−１相互作用、ＣＴＬＡ−４と、そのリガンドであるＢ７−１及びＢ７−２との関与についてのメカニズムの研究は、製薬及びバイオテクノロジー業界に、アウトカムを予想し、ＰＫ及びＰＤ研究を戦略的に設計し、治療的関与と関係する毒性を理解するだけの力を与えた。これらの治療薬の成功は、受容体−リガンド相互作用の理解を含む、ＭＯＡについての包括的理解により非常に向上した。特に、さほど発達していないＮＣＲリガンドの中には、恐らくリガンド結合の低密度及び低親和性故の、受容体の同定における特別の困難さのために、同定された受容体が存在しないものもある。
【０１４６】
Ｔ細胞の活性化のＶ領域免疫グロブリン含有抑制因子（１５）（ＶＩＳＴＡ）は、最も近い系統的親戚がＰＤ−Ｌ１である、負のチェックポイント制御因子（ＮＣＲ）リガンドである。ＶＩＳＴＡは、休止Ｔ細胞の活性化を非常に大きく抑制することが示されている。ヒトとマウスの両方において、ＶＩＳＴＡの発現は、造血においては制限され、骨髄コンパートメントでは大量に発現し、Ｔ細胞ではより強さが低い（１６）。ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−１の遮断のように、ＶＩＳＴＡを遮断することで、癌のマウスモデルにおいて免疫が増強される（１７）。
【０１４７】
ＶＩＳＴＡの効果を遮断または阻害する抗体を使用して、ヒト免疫応答、特に悪性腫瘍及び感染症に対する免疫応答を増強してよい。対照的に、可溶性ＶＩＳＴＡ（例えばＶＩＳＴＡ−Ｉｇ）等のＶＩＳＴＡを刺激する分子を使用して、自己免疫性、アレルギー性または炎症性免疫応答等の、望ましくないヒト免疫応答を抑制してよい。本発明に先立って、ＶＩＳＴＡに対する受容体は報告されていない。本明細書で開示した、この受容体の同定により、腫瘍学、感染症、自己免疫性、アレルギー性及び炎症性発症の治療のための、他の治療薬の設計が容易となることが予想される。同様に、受容体を同定することにより、受容体と会合したＶＩＳＴＡが免疫を制御する方法についてのより一層の理解が促進される。
【０１４８】
これに基づき、本発明の目的は、ＶＩＳＴＡに対する受容体を同定することであった。ＶＩＳＴＡの類似体である、この受容体に拮抗するか、またはこの受容体の、ＶＩＳＴＡへの結合を制御（阻害もしくは遮断）する化合物は、ＴまたはＮＫ細胞免疫の上方制御が所望される、癌または感染症の病状の治療に有用なはずである。ＶＩＳＴＡの更なる類似体である、この受容体を刺激するか、または、ＶＩＳＴＡへの、この受容体の結合を制御する（促進するもしくは増強する）化合物は、ＴまたはＮＫ細胞免疫の下方制御が所望される、自己免疫、アレルギー、炎症、ＧＶＨＤ、移植、または細胞もしくは遺伝子治療の状態に有用な筈である。
【０１４９】
同定されたＢ７受容体ファミリーの全てのメンバーが、Ｉｇスーパーファミリーのメンバーであるので、ＶＩＳＴＡ受容体は、発明者らにより、Ｂ７ファミリーのメンバーと予測された。このＩｇスーパーファミリーには、共に可溶性であるタンパク質、並びに、細胞−細胞シグナル伝達／相互作用、付着及び通信に関係する膜タンパク質が含まれる。これらの分子は全て、ＩｇＶ領域（ＩｇＶ）または定常領域（ＩｇＣ）のこれらのドメインに類似のドメインを含有する。このドメインは通常、長さが７０〜１１０アミノ酸であり、ＢとＦ鎖のシステイン残基間に形成された、２つの平行なαシートにより形成されるサンドイッチのような構造を有する特徴的なＩｇフォールドを有し、Ｉｇフォールドを安定化させる。
【０１５０】
１つのＩｇＶドメイン、及び１つのＩｇＣドメインを有する、これらの受容体（ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＯＳＬ、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２）のリガンドとは対照的に、Ｂ７受容体（ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１）は１つのＩｇＶドメインを有する。興味深いことに、ＶＩＳＴＡは、ファミリー内の受容体のように、１つのＩｇＶドメインを有する。したがって、ＶＩＳＴＡは、（Ｔ細胞の活性化を抑制する）リガンドのような活性に加えて、細胞シグナル伝達機能もまた有し得る。このことに関わらず、このファミリーで現在同定されている受容体とリガンドは全て、Ｉｇスーパーファミリーのメンバーであるため、発明者らは、ＶＩＳＴＡの結合パートナーは、Ｂ７ファミリーのメンバーを含むことを予測した。
【０１５１】
出版物（１５、１６及び１７）で公開されている研究及び参考文献は、ＶＩＳＴＡは新規かつ構造的に異なる、鍵となる特徴が以下の通りである、Ｉｇスーパーファミリーの阻害リガンドであることを示している。
（ｉ）ＶＩＳＴＡの発現が造血コンパートメント内に排他的に存在し、成熟骨髄細胞（ＤＣ及びＭａｃ、ＣＤ１１ｂｂｒｉｇｈｔ）では高く、ＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ及びＣＤ８＋Ｔ細胞では低レベルで発現する。
（ｉｉ）固定化され不溶性のマウスＶＩＳＴＡ−Ｉｇ融合タンパク質、またはＡＰＣにおけるＶＩＳＴＡの発現は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでマウスＰＤ−１＋及びＰＤ−１−ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖（１５）並びにサイトカイン産生を抑制する。このことは、ＶＩＳＴＡが免疫抑制性であり、ＰＤ−１がＶＩＳＴＡの受容体ではないことを確立する。
（ｉｉｉ）ＶＩＳＴＡ−Ｉｇは、初期のＴ細胞活性化抗原（ＣＤ６９、ＣＤ４４）の発現、及びｐ−ＥＲＫの活性化を抑制し、このことは、ＶＩＳＴＡの受容体（Ｖ−Ｒ）が休止Ｔ細胞で発現することを示唆している。
（ｉｖ）αＶＩＳＴＡ  ｍＡｂ（１３Ｆ３）を遮断することにより、自己免疫（ＥＡＥ）が一層悪化した（１５）。
（ｖ）αＶＩＳＴＡ  ｍＡｂは、複数のマウス腫瘍モデルにおける腫瘍の寛解を誘発する（１７）。
（ｖｉ）ＶＩＳＴＡは、ヒト（１６）及びマウス（１７）ＣＤ４＋Ｔ細胞の両方における、Ｆｏｘｐ３の発現を誘発する。
（ｖｉｉ）ＶＩＳＴＡ−Ｉｇを投与することにより、マウスＳＬＥ及びマウスＥＡＥの抑制を誘発する。
（ｖｉｉｉ）マウスＶＩＳＴＡにおける全ての発見は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒトＴ細胞上のヒトＶＩＳＴＡでも繰り返されている（１６）。
【０１５２】
更に、未だに、免疫制御におけるＶＩＳＴＡの影響が全て明らかとなっているわけではないが、このＮＣＲリガンドは、Ｔ細胞増殖のシャットダウン（１６）とＦｏｘｐ３発現の誘発（１７）において、ＰＤ−Ｌ１同様に活性であるように思われる。ＶＩＳＴＡは、骨髄細胞では恒常的に高レベルで発現しており（１５、１６）、休止Ｔ細胞、明らかに活性化したＴ細胞、及びメモリーＴ細胞の活性化を抑制することができる（１５、１６）。
【０１５３】
前述の内容に更に基づき、発明者らは更に、ＶＩＳＴＡ受容体が休止Ｔ細胞でも発現する可能性が高いことを理論付けた。この理論は、部分的には、ＴＣＲが誘発したホスホ−ＥＲＫ活性化（活性化の１０分後）が、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇにより完全に阻止され得る（図１）という事実に基づいたものであった。更に、Ｔ細胞の活性化（ＣＤ６９、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４４）における最も早い変化もまた、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ１により完全に阻止された（１５、１６）。
【０１５４】
また、ＢｉａＣｏｒｅ分析では、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇは、既知のＢ７もしくはＰＤファミリーメンバーのいずれにも結合しない（データは図示せず）、か、または、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＴＬＴ−２、ＴＬＴ４、ＣＤ３００Ａ、及びＣＤ３００Ｄを過剰発現する細胞に結合しない（非公表のデータ）ことが示された。ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが、刺激の１０分後にαＣＤ３ホスホ−ＥＲＫシグナルを抑制する能力（図１）に基づき、ＶＩＳＴＡ−Ｒの発現が休止Ｔ細胞で予測されている。
【０１５５】
加えて、ＶＩＳＴＡがＢ細胞には機能的影響を及ぼしていない事実を考慮して、発明者らは更に、ＶＩＳＴＡ受容体は、Ｂ細胞の活性化または増殖に影響を及ぼさない可能性が高く、また、休止もしくは活性化Ｂ細胞で認識可能な程度に発現しない可能性が高いことを予測した。
【０１５６】
陰性制御因子としてのＶＩＳＴＡ
ＶＩＳＴＡは、（認識活性化の前に）少なくともＴＣＲの持続性シグナル伝達（ｔｏｎｉｃ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を陰性制御するようであり（図２）、無差別のＴ細胞の活性化を防止するためのレオスタットとして恒常的に機能する。このことは、ＶＩＳＴＡ−／−マウスに見られる、活性化Ｔ細胞の頻度の高さと一致する（データは示さず）。しかし、ＶＩＳＴＡは活性化後のＴ細胞機能もまた抑制することができるという観察結果は、Ｔ細胞の認識活性化の後でも、ＶＩＳＴＡは同様に効果的な陰性制御因子であり得ることを示唆している。
【０１５７】
ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１、及びＣＴＬＡ−４／ＣＤ８０／８６は本質的に、受容体がＴ細胞の活性化後に上方制御だけが行われるという、異なる経路である。対照的に、ＶＩＳＴＡは排他的に造血において制限されており、それ故、ＶＩＳＴＡの主な役割は、二次リンパ器官（ＳＬＯ）、または、非造血細胞の組織で発現するＰＤ−Ｌ１とは異なり、重度の白血球浸潤（ＴＭＥ等）が存在する部位で果たされるようである。したがって、ＶＳＩＧ８もしくはＶＩＳＴＡ、及び／またはＶＩＳＴＡ／ＶＩＳＴＡ−Ｒ相互作用を制御する化合物は、初期のＴ細胞活性の制御において、本質的に異なる役割を果たす筈である。
【０１５８】
癌の陰性チェックポイント制御因子としてのＶＩＳＴＡ
癌のマウスモデルでの研究は、ＶＩＳＴＡの抑制機能に対する、更なる大きな洞察をもたらした。ＶＩＳＴＡは、ナイーブマウスの骨髄細胞では高いレベルで発現するが、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内の骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）でのＶＩＳＴＡ発現は、極めて高い。更に、４つの異なる腫瘍モデルのマウスをαＶＩＳＴＡで処置することにより、腫瘍増殖が劇的に減少する（図３）。これらの所見は、ＭＤＳＣで発現したＶＩＳＴＡは、防御のための抗腫瘍免疫の発達に干渉する、主な抑制分子であり、また、αＶＩＳＴＡはこの抑制活性を緩和し、免疫の介入を可能にして腫瘍増殖を遅らせることを示唆している。これらの所見は更に、自己免疫疾患における骨髄細胞のＶＩＳＴＡは、炎症の程度を制御する中心的な機能を果たすという仮説を支持している。ＶＩＳＴＡはこれらの腫瘍では発現しない。
【０１５９】
チェックポイント制御因子Ｉｇリガンド
自己免疫の進行の制御において、ＮＣＲが非常に重要な役割を果たすということについては、ほとんど疑いがない。ＷＴ  Ｃ５７Ｂｌ／６  ｂｋｇにおいて、ＣＴＬＡ−４−／−マウスでは、侵襲性の全身性自己免疫疾患が進行し（４〜６）、Ｂａｌｂ／ｃ ｂｋｇのＰＤ−１−／−マウスでは、心筋症と軽度の狼瘡が進行する（７、１９）。ヒトにおいては、ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４の遮断における、免疫が関係する主な毒性は、自己免疫疾患の出現である。「単純な」負の調節の背後では、自然の（ｎ）Ｔｒｅｇへの影響を通して、または、ナイーブＴ細胞の適応性（ａ）Ｔｒｅｇへの転換を向上させることにより、多くのＮＣＲがＴｒｅｇ機能に影響を及ぼしている。新しいデータは、アゴニストによる、正に関与するＮＣＲ経路は、免疫抑制を誘発することにより治療効果をもたらすことを示している。対応する受容体を介して免疫抑制シグナルを積極的に誘発する、ＮＣＲリガンドのＩｇ融合タンパク質（Ｂ７−Ｉｇ）（Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ、ＰＤ−Ｌ１−Ｉｇ）は、自己免疫の治療において、効果的な治療薬のようである。
【０１６０】
研究では、ＰＤ−Ｌ１−ＩｇとＰＤ−Ｌ２−Ｉｇは免疫抑制剤と組み合わせて、心臓同種異系移植片の生存（２３）、及び角膜同種異系移植片の生存（２４）を著しく延ばすことができた、という説得力のあるデータが示されている。Ｂ７−Ｈ４は、ＣＩＡ、ＥＡＥ、及び糖尿病での抑制活性を示している（２５〜２９）。モデルよっては、このことは、Ｔｈ１またはＴｈ１７集団のＴｒｅｇ機能及び／または阻害の増強によるものであるように思われる（２５〜２９）。我々は、ＰＤ−Ｌ１及びＢ７−Ｈ４同様に、ＶＩＳＴＡはＴｒｅｇへの転換を高めることができ、このことは、自己反応性の制御に重要であり得ることを示している（１６）。ヒト治療薬の開発に関して、２０１３年１月に第一三共は、Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇを用いた、関節リウマチの第１相試験を開始した（２７、２９、３０）。
【０１６１】
他のＢ７−Ｉｇ同様に、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇは完全に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの、αＣＤ３により誘発されたＴ細胞の増殖、及び、実質的に全ての、初期のＴ細胞活性のシャットダウンを阻止することができる（１５〜１７）。ＶＩＳＴＡ−ＩｇがＴ細胞の活性化を低下させることができるということを考慮して、我々は、全身性エリテマトーデスのマウスモデルにおける、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇの治療効果を評価した。ＳＬＥ腎炎の進行の根本にあるメカニズムの１つは、炎症性骨髄細胞が後で腎臓に動員されることでＴ細胞が慢性的に活性化され、病状が進行することを示唆している。十分に特性決定されたマウス株のＢＷＦ１は、循環自己反応性抗体の存在、炎症性サイトカインの増加、免疫複合体沈着糸球体腎炎（ＧＮ）、進行性タンパク尿、及び腎不全による不健全な死を含む、ヒト狼瘡において見られるものと類似の自己免疫腎疾患を発症する。確立した腎疾患をＶＩＳＴＡ−Ｉｇが抑制できるかどうかを決定するために、ＢＷ  Ｆ１マウスを、ＶＩＳＴＡ−ＩｇＧ２ａで２４週間処置した。この介入により、これらのマウスにおいて、タンパク尿の急速かつ劇的な逆転、及び著しく延びた生存が得られた（図４）。ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ処置による、活性化Ｔ細胞の頻度の低下、並びに、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＦｏｘｐ３シグナル及びサイトカイン産生の増加もまた、我々は示した（データは示さず）。我々は、Ｖ−Ｒを介するシグナルの強度に応じて、Ｖ−Ｒを介する活性シグナル伝達が、Ｔ細胞の不応性及び／またはａＴｒｅｇの出現を誘発することを提示している（１５、１６）。ＶＩＳＴＡ−Ｉｇの同様の治療効果もまた、Ｔ細胞が仲立ちする従来の病気である、多発性硬化症のマウスモデルにおいて見られている（図示せず）。
【０１６２】
前述の内容に基づくと、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇを用いる効果的治療法の開発は、Ｖ−Ｒの同定により大いなる利益が得られ、ＶＩＳＴＡに対する標的細胞集団を明確に規定し、かつ、ＰＫ及びＰＤ研究において更に役立つものとなる。
【０１６３】
Ａ．ＶＩＳＴＡ受容体を同定するのに使用した方法
１．多量体ＶＩＳＴＡの結合を検出することによる、Ｖ−Ｒの同定
ＶＩＳＴＡ受容体の同定に非常に重要なことは、質の高い多量体リガンドを作製することである。この理由は、ＶＩＳＴＡの、受容体との予測される相互作用が非常に低い可能性が高い（ｕＭ）ことである。この予測は、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の相互作用が低い（Ｋｄが５２６ｎＭ；ＰＤ−Ｌ２とはＫｄが８９ｎＭ）という事実に基づいている。リガンドまたは受容体のいずれかが過剰発現している場合、ＰＤ−１→ＰＤ−Ｌ１の相互作用を観察することができる（３４）。しかし、別様においてＰＤ−１→ＰＤ−Ｌ１の結合を観察するために、四量体等の多量体リガンドを使用しなければならない。あるいは、リガンドまたは受容体を過剰発現する細胞を、相補性結合タンパク質で覆ったプラスチック皿で速やかにパニングすることができる（３５）。
【０１６４】
この予測に基づいて、我々は、二量体化、オリゴマー化または多量体化、及びパニングに好適なＶＩＳＴＡリガンドを作製した。高分子量の骨格を有する多量体を作製するために、例えば、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇを、Ｎ末端ＢｉｒＡ部位で改変した。ＩｍｍｕＤｅｘ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｍｕｄｅｘ．ｃｏｍ）を用いて作業をし、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇのｄｅｘｔｒａｍｅｒ（Ｃ）（ＶＩＳＴＡ−ｄｅｘｔｒａｍｅｒ）を作製した。これらは、リガンドを、予め規定した化学量論でデキストラン骨格に結合させることにより作製した、非常に高分子量の多量体である。これらの多量体は、従来のアビジンベースの四量体を使用するよりも、受容体の検出では一層感度が高い。予備データは、ＶＩＳＴＡ−ｄｅｘｔｒａｍｅｒは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴ細胞を抑制する活性を有することを示す（データは示さず）。
【０１６５】
特に、ＶＩＳＴＡ二量体を、Ｖ−Ｒの同定のために使用してよい。ＶＩＳＴＡの元の構造的特徴記述を、ＰＤ−Ｌ１分子内の構造モチーフを使用してモデリングした（１５）。しかし、Ｆａｂ断片に基づく代替モデルは、ＶＩＳＴＡは、システイン残基を使用したジスルフィド架橋を伴う二量体を形成し得ることを示唆している。この推定上の二量体構造を支持するものとして、３つのグリコシル化部位がＶＩＳＴＡポリペプチド内に位置し、これらのポリペプチドは、推定の二量体界面部位からは十分に離れた距離で位置しており、二量体形成を可能にしているようである。これらの所見は、天然の機能性ＶＩＳＴＡが二量体として存在可能であるという事実を支えるものである。この理論は更に、機能的研究における、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃタンパク質の使用により否定されるものではない。これは、この融合タンパク質が、二量体化を可能にし得るＦｃ部分において、鎖間のジスルフィド架橋を含有するためではない。更に、比較的長く柔軟なリンカーが、長くて柔軟性のあるリンカー等の融合（ｆｕｓｉｏｎ）欠失タンパク質ではなく、活性が一層強力なＶＩＳＴＡ  Ｉｇ融合タンパク質をもたらすということが見出されている。
【０１６６】
この観察結果は、このリンカーが、２つの鎖の、特定の方法での相互作用（二量体化）を促進し得るので、ＶＩＳＴＡが機能性二量体を形成することもまた支持するものである。したがって、ＶＩＳＴＡ細胞外ＩｇＶドメインとＣＨ３タンパク質（ＶＩＳＴＡ−ＣＨ３）を含む融合タンパク質が作製され、このタンパク質は、ＶＩＳＴＡの二量体形成を可能にする筈である（即ち、２つの鎖のＣ末端を互いに接近させない）。非還元条件下においてのみ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥはこのタンパク質が二量体であることを示し、このことは、ＶＩＳＴＡ鎖間ジスルフィド架橋が存在することを示唆している。架橋が発生することができる唯一の位置はＶＩＳＴＡ  ＩｇＶであるため、このことは更に、適切な条件下でＶＩＳＴＡが共有結合のホモ二量体を形成することを示唆している。
【０１６７】
したがって、Ｖ−Ｒの検出に関しては、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇと比較してＶＩＳＴＡ−ＣＨ３が好ましいリガンドであることが理論化された。したがって、Ｃ末端ＢｉｒＡ部位を有するＶＩＳＴＡ−ＣＨ３は、受容体の発見作業用のための酵素ビオチン化での使用に好適であることが想到された。したがって、これらのＶＩＳＴＡリガンドがＴ細胞に検出可能な程度に結合することは、未だに示されていない。しかし、このファミリーにおけるリガンドと受容体の相互作用の親和性が低いために、このことは驚くべきことではない。他のＰＤリガンドと同様に、これらのＶＩＳＴＡリガンドは、過剰発現した際にＶ−Ｒと検出可能な程度に結合することが予想された。四量体ＰＤ−Ｌ１は単量体ＰＤ−Ｌ１３１よりも、ＰＤ−１に１００倍高く（Ｋｄは６×１０−８Ｍ）結合したことを示したため、このことは、合理的な考えであった。より高い結合力を有するリガンドが受容体の検出に使用され、リガンド結合に基づく発現クローニングが成功した（ＢＴＬＡ−４）（３１、３２）。
【０１６８】
前述の内容に基づいて、発明者らは、可溶性リガンドを使用する場合のＶ−Ｒの同定に努力を集中させ、ここで、アッセイで使用した可溶性リガンドはＶＩＳＴＡ−ｄｅｘｔｒａｍｅｒ（ＶＩＳＴＡ１９−ｄｅｘ：２５０Ｋのデキストラン骨格上の１９分子のＶＩＳＴＡ）を含むか、またはＶＩＳＴＡ二量体を含む。
【０１６９】
２．パニングと可溶性リガンド結合による、候補ライブラリーのスクリーニング  
Ｕｎｉｐｒｏｔ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースから、約２００個の候補の膜貫通Ｉｇ／ＴＮＦ−ファミリーメンバーをコードするプラスミドを選択し購入した。これらの遺伝子の選択は、造血細胞での発現、及び、文献から入手した、いくつかの遺伝子の既知の活性に基づいた。これらのプラスミドは、当該候補遺伝子に対するオープンリーディングフレーム、並びに、プラスミドのトランスフェクション及び発現を確認するためのＧＦＰの両方を含有する。ＰＯＣとして、ＰＤ−１／ＧＦＰをｓ−ＣＨＯ細胞にトランスフェクションした。一晩培養した後、ＧＦＰ＋細胞の特異的付着を容易に観察し、プレートに結合した他のリガンドではなく、ＰＤ−Ｌ１に対して定量化できた（図５）。
【０１７０】
ハイスループット作業のために、２００を超える選択遺伝子の候補リストからの、ＧＦＰタグ化したタンパク質（Ｏｒｉｇｅｎｅ）用のＣＭＶ発現ベクターと共に、ＣＨＯ−Ｓ細胞（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を９６ウェルフォーマット内でトランスフェクションした。２４時間後、細胞を、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃ融合タンパク質、または無関係のＦｃ融合タンパク質のいずれかでコーティングしたプレートの上で分け、１時間培養した。新しい９６ウェルプレートに穏やかにピペッティングすることにより、付着していない細胞を回収する。トリプシン−ＥＤＴＡ処理により付着細胞を分離し、両方の母集団をフローサイトメトリーにより調査する。本方法ではごくわずかのバックグランドを示し、陽性は、光学顕微鏡を用いてもはっきりと確認できる。これに基づくと、Ｖ−Ｒを過剰発現するＣＨＯ−Ｓ細胞は、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇでコーティングしたプレートに検出可能な程度に結合する筈である。
【０１７１】
３．リガンド結合による、アレイ候補のスクリーニング
組み換え蛍光ＶＩＳＴＡ１９−ｄｅｘを使用して、膜タンパク質ライブラリー、例えばＲｅｔｒｏｇｅｎｉｘ（ＵＫ）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ．ｃｏｍにより作製した（〜３８００個の独自の遺伝子）ライブラリーをスクリーニングし、簡単なハイスループット結合アッセイで、推定上の結合パートナーを同定してよい。遺伝子はＨＥＫ２９３細胞のアレイで発現し、蛍光色素が結合したリガンドを、結合パートナーを発現する細胞の検出に使用する。
【０１７２】
４．酵母菌のツーハイブリッドスクリーニング
代替的に、または更に、Ｈｙｂｒｉｇｅｎｉｃｓ（フランス）により開発されたシステム等の、酵母菌ツーハイブリッドシステム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｙｂｒｉｇｅｎｉｃｓ−ｓｅｒｖｉｃｅｓ．ｃｏｍ）を使用して、活性化、及び非活性化された健全なヒトＰＢＭＣから構築したＶＩＳＴＡ−ＥＣＤおとり及び獲物ライブラリーを用いながら、ＶＩＳＴＡの推定受容体を同定してよい。
【０１７３】
これらの方法において、ＶＩＳＴＡの細胞外ドメインのコード配列（ａａ３３〜１９５；Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号  ｇｉ：６２３３９４３１）をＰＣＲ増幅し、ＬｅｘＡに対するＮ末端融合としてｐＢ２９にクローニングする（Ｎ−ＶＩＳＴＡ−ＬｅｘＡ−Ｃ）。構築物を、インサート全体を配列決定することによる正当性について確認し、続いておとりとして使用し、それぞれ元のｐＢＴＭ１１６（３７、３８）及びｐＧＡＤＧＨ（３９）プラスミドに由来するｐＰ６、ｐＢ２９及びｐＰ６内に構築した、ランダムにプライミングした白血球と、活性化単核球のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングする。
【０１７４】
以前に記載されているＹＨＧＸ１３（Ｙ１８７  ａｄｅ２−１０１：：ｌｏｘＰ−ｋａｎＭＸ−ｌｏｘＰ、ｍａｔα）とＬ４０αＧａｌ４（ｍａｔａ）酵母菌株（４０）との組み合わせアプローチを使用して、６３００万個のクローン（ライブラリーの複雑性の６倍）をスクリーニングしてよい。トリプトファン、ロイシン及びヒスチジンを欠く培地上で、１６１  Ｈｉｓ＋コロニーを選択する。陽性クローンの獲物断片をＰＣＲ増幅し、５’及び３’接合部にて配列決定する。得られる配列を使用して、完全な自動化手順を用いて、Ｇｅｎｂａｎｋデータベース（ＮＣＢＩ）の対応する、相互作用するタンパク質を同定する。次に、信頼スコア（ＰＢＳ、予想生物学的スコア）を、前述のとおりに各相互作用に帰する（４１）。
【０１７５】
５．全体のサイレンシング
ＶＩＳＴＡ−Ｉｇは、一次ヒトＴ細胞のαＣＤ３を抑制することができることを、我々は示した。一次細胞において活性のみを有することに対する制限の１つは、一次細胞の遺伝子操作が難しいことである。ここで、予備データが、形質転換したヒトＴ細胞株であるＪｕｒｋａｔ  Ｔ細胞におけるＣＤ６９の上方制御が、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇを使用して防ぐことができることを確立している（図５）。この所見により、Ｊｕｒｋａｔ細胞を使用して、ＶＩＳＴＡにより誘発されるＣＤ６９発現の抑制を遺伝子的にサイレンシングし、Ｖ−Ｒの同定を試みることが可能となる。これらの方法において、Ｓｉｇｍａ製のＭｉｓｓｉｏｎ  ｓｈＲＮＡ全ゲノムライブラリーを使用する。ライブラリーを１０本の管に分け、各管は、〜２，０００個の遺伝子を標的とする〜１２，０００個のｓｈＲＮＡ構築物を含有する。細胞１つあたりにおいて、１つの遺伝子のみがノックダウンされるＭＯＩで、Ｊｕｒｋａｔ細胞をライブラリーにトランスフェクションする。
【０１７６】
形質導入した細胞を、ピューロマイシンの存在下において培養し、かつ／または分類してｓｈＲＮＡ発現細胞を選択する。安定してノックダウンした細胞を抗ＣＤ３＋／−ＶＩＳＴＡ−Ｉｇで２４時間刺激し、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇの存在下のＣＤ６９＋細胞を陽性ヒットとして数える。ＣＤ６９に加えて、ＩＬ−２産生の回復もまた使用して、受容体サイレンシングに対応する。ＣＤ６９＋細胞を分類し、ディープシーケンシング及びデコンボリューション技術を使用して、ｓｈＲＮＡの同定をＳｉｇｍａにより行ってよい。追加のアッセイ（例えば、増殖及び複数のサイトカイン）を使用した、Ｊｕｒｋａｔ細胞と一次Ｔ細胞の両方における、単一の遺伝子ノックダウンと過剰発現アプローチにより、トップ候補の特異性を試験してよい。
【０１７７】
６．発現クローニング
Ｆｒｅｅｍａｎと同僚により繰り返し使用されてきた、Ｂ７受容体を発見するための立証された戦略（３５、３６）。約３×１０６個の一次インサートを含有する、切断していない完全長ＯＲＦ  ｃＤＮＡライブラリーを、ＣｌｏｎｅＭｉｎｅｒ（商標）ＩＩ  ｃＤＮＡライブラリー構築キットと、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）組み換えシステム（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＶＩＳＴＡ応答性ヒトＴ細胞株から単離した全ｍＲＮＡから１方向にクローニングし、続いて、サブトラクティブハイブリダイゼーションを使用した正規化により、より頻度の少ないｍＲＮＡ種の提示を向上させる。得られるｃＤＮＡライブラリーを、ヒト伸長因子１−αプロモーターの下流、かつＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）−ＺｓＧｒｅｅｎ１蛍光タンパク質カセットの上流のＧａｔｅｗａｙ（登録商標）適合性ＤＥＳＴ発現ベクターに直接入れて交換し、同じｍＲＮＡ種からのクローニングｃＤＮＡインサートの同時発現を追跡する。ＶＩＳＴＡ−Ｉｇでコーティングしたプレート上で、ライブラリートランスフェクションしたＣＨＯ−Ｓ細胞の数ラウンドのパニングを行い、ＶＩＳＴＡ受容体の発現を強化する。高い割合（ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）で細胞がプレートに付着する（５０％超）と、プラスミドが単離して、クローン伸長のために細菌の中に形質転換され、配列決定される。
【０１７８】
Ｂ．推定上のＶ−Ｒ（ＶＩＳＴＡ−Ｒ）が本物のＶＩＳＴＡ受容体であることを確認するための機能アッセイ
上述の方法のいずれかにより同定した、推定上のＶＩＳＴＡ−Ｒ候補を機能アッセイで評価して、推定上のＶ−Ｒの結合相互作用が、免疫、とりわけＴ細胞の活性化、増殖及びサイトカイン産生における抑制効果におけるＶＩＳＴＡの影響に対して、制御効果を有することを確認してよい。例示的なアッセイを以下で説明する。
【０１７９】
１．抗Ｖ−Ｒモノクローナル抗体によるＶＩＳＴＡ機能の遮断：抗Ｖ−Ｒモノクローナル抗体の存在下における、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが仲立ちするＴ細胞抑制の逆転
組み換えＶＩＳＴＡ−Ｉｇ融合タンパク質は、用量に依存して、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）が仲立ちするｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を抑制する。したがって、（アゴニストまたはアンタゴニスト活性を有しない、遮断／中和抗体である）抗Ｖ−Ｒ抗体の存在下において、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃの抑制効果が阻害される。
【０１８０】
例えば、例示的な抗Ｖ−Ｒ抗体の遮断アッセイにおいて、９６ウェルプレートを、３７℃で１時間、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）のみ、または抗ＣＤ３とＶＩＳＴＡ−Ｉｇのいずれかでコーティングする。抗ＣＤ３及びＶＩＳＴＡ−Ｉｇをそれぞれ、２．５及び１０ｕｇ／ｍＬの最終濃度で使用してよい。健常ドナーの末梢血からの、２０万個の精製ヒトＴ細胞を各ウェルに加える。抗Ｖ−Ｒ  ｍＡｂの存在下において、二重実験を行う。プレートを３７℃で５日間インキュベーションする。５日目において、サイトカイン（ＩＦＮ−γ及びＩＬ−２）分析のために３０ｕＬの上清を取り除き、トリチウム標識したチミジン（２５μＬ）を細胞培養物に加える。次に、細胞を更に８時間培養した後で、トリチウムの組み込みにより細胞増殖を測定する。
【０１８１】
２．ＶＩＳＴＡ受容体ノックアウト細胞株を作製することによる、ＶＩＳＴＡ機能の遮断
ＶＩＳＴＡ機能におけるＶ−Ｒの効果を、ＴまたはＪｕｒｋａｔ細胞株を使用して更に確認してよく、ここでは、推定上のＶ−Ｒの発現がノックアウトされている。例示的な方法について以下で説明する。
【０１８２】
方法Ａ
組み換えＶＩＳＴＡ−Ｉｇ融合タンパク質は、用量に依存して、リンパ腫細胞株であるＪｕｒｋａｔ細胞における、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）が誘発するＣＤ６９及びＩＬ−２上方制御を抑制する。レンチウイルスｓｈＲＮＡのサイレンシング技術を使用して、Ｊｕｒｋａｔ細胞内のＶＩＳＴＡ受容体候補をノックダウンする。かかるノックアウト細胞は、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが仲立ちする抑制に対して不応性である。
【０１８３】
遺伝子特異的なｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子を構築して、ＶＳＩＧ８をノックダウンする（Ｍｉｓｓｉｏｎ  ｓｈＲＮＡ粒子、Ｓｉｇｍａ製のＴＣＲライブラリー）。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、最適化した感染多重度にてｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子により形質導入し、非特異的な遺伝子欠失を持たない標的遺伝子の、９０％を超えるノックダウンを達成する。形質導入した細胞を、ピューロマイシン剤の存在下にて選択する。標的遺伝子の特異性、及びノックダウンの程度を定量ＰＣＲにより確認する。この細胞を、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇの存在下または不存在下にて、抗ＣＤ３により刺激する。フローサイトメトリー及びＩＬ−２により評価したＣＤ６９の量を、７２時間後に培養物の上清中でＥＬＩＳＡにより測定する。
【０１８４】
方法Ｂ
組み換えＶＩＳＴＡ−Ｉｇ融合タンパク質は、用量に依存して、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）が仲立ちするｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を抑制する。レンチウイルスｓｈＲＮＡのサイレンシング技術を使用して、ＶＩＳＴＡ受容体の候補をＴ細胞においてノックダウンする。かかるノックアウト細胞は、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが仲立ちする抑制に対して不応性の筈である。
【０１８５】
遺伝子特異的なｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子を構築して、ＶＳＩＧ８をノックダウンする（Ｓｉｇｍａ製のＭｉｓｓｉｏｎ  ｓｈＲＮＡ粒子、ＴＣＲライブラリー）。健全なドナーからのＴ細胞を、最適化した感染多重度にて、ｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子で形質導入し、非特異的な遺伝子欠失を持たない標的遺伝子の、９０％を超えるノックダウンを達成する。形質導入した細胞を、ピューロマイシン剤の存在下にて選択する。標的遺伝子の特異性、及びノックダウンの程度を、定量ＰＣＲにより確認する。ＶＩＳＴＡ−Ｉｇの存在下または不存在下にて、抗ＣＤ３が仲立ちするＴ細胞増殖アッセイを上述のとおりに実施する。サイトカインと細胞増殖を評価する。
【０１８６】
３．Ｖ−Ｒ発現アッセイ
一次ヒトＴ細胞とＪｕｒｋａｔ細胞を使用するサイレンシング法により、推定上のＶ−Ｒをサイレンシングすること、または、プレートに結合した抗Ｖ−Ｒ抗体を使用した抗体遮断アッセイにより、Ｔ細胞の活性化の抑制を誘発することに加えて、ＶＩＳＴＡに対する本物の受容体としての、推定上のＶ−Ｒの確認を、Ｔ細胞上でｍＲＮＡとタンパク質の発現を検出することにより、更に確証してよい。
【０１８７】
これらのアッセイは、適切な対象と比較して、Ｔ細胞またはＪｕｒｋａｔ細胞において、Ｖ−Ｒ  ｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルを検出する。これらの発現アッセイは、本物のＶ−Ｒは構造的に、休止Ｔ細胞により、そしてＪｕｒｋａｔ細胞により発現されることを示すことが予測される。
【０１８８】
実施例で詳細を記載するとおり、ＶＩＳＴＡ受容体が明らかとなり、これは、Ｖセット及び免疫グロブリンドメイン含有タンパク質８、即ちＶＳＩＧ８であることが発見された。
【０１８９】
Ｃ．ＶＩＳＴＡ／Ｖ−Ｒアゴニスト及びアンタゴニストを作製するためのＶＳＩＧ８の使用、並びに、治療法及び診断における使用
同定したＶ−Ｒを使用して、ＶＩＳＴＡ／Ｖ−Ｒアゴニストまたはアンタゴニストを同定する。これらのアゴニスト及びアンタゴニスト化合物としては特に、ＴまたはＮＫ免疫におけるＶＳＩＧ８の効果を刺激する、またはそれに拮抗する抗体及び抗体断片、並びに好ましくは、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を阻害または促進する化合物が挙げられる。これらの抗体は、免疫原としての、ＶＳＩＧ８ポリペプチド、またはその断片もしくはコンジュゲートを使用した周知のｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ免疫付与により得られてよい。好ましくは、これらの抗体及び抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ）２、ＩｇＮａｒ、ｍｅｔＭａｂ等の、ヒト、ヒト化、霊長類化及びキメラ抗体、並びに抗体断片、並びに、他の既知の種類の抗体及び抗体断片が挙げられる。
【０１９０】
これらのアゴニスト及びアンタゴニスト化合物としては更に、ポリペプチド、即ち、ＶＳＩＧ８の細胞外領域のすべてもしくは一部を含むポリペプチド、または、ＶＳＩＧ８の細胞外領域に対して少なくとも８０、９０、９５、もしくは９９％の配列同一性を有するポリペプチド、または、その中のＩｇＶもしくはＩｇＣドメイン等の、ポリペプチドの一部分が挙げられる。これらのＶＳＩＧ８ポリペプチドはまた、Ｉｇ定常領域（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４定常領域）等の、別のポリペプチドにも融合してよく、任意で突然変異誘発され、ＦｃＲ及び／もしくは補体結合、または他のエフェクター機能を向上または阻害してもよい。また、アゴニストまたはアゴニストは、ＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは断片の１つ以上のコピーを含んでよく、即ち、化合物は多量体であってよく、ＶＳＩＧ８ポリペプチドのコピーには、リンカー、例えば、少なくとも１５〜２５アミノ酸であり、１つ以上のセリン残基を含有するペプチド等の、長くて柔軟性のあるペプチドが介在してよい。
【０１９１】
更に、本発明に従ったアゴニスト及びアンタゴニスト化合物は、ＶＩＳＴＡ／ＶＳＩＧ８の結合相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する小分子を更に含む。
【０１９２】
本発明に従ったアンタゴニストは、実質的に、ＴまたはＮＫ細胞免疫における、ＶＩＳＴＡの抑制効果を阻害するか防止するのが好ましい。これは、ＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８を発現する細胞を用いる、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのセルベースアッセイを使用して検出されてよい。アンタゴニストは、Ｔ細胞の活性化もしくは増殖、またはＮＫ  Ｔ細胞の活性化もしくは増殖における、ＶＩＳＴＡが仲立ちする抑制効果を阻害するかまたは遮断する。例えば、アンタゴニストは、 好適な対象と比較して、ＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化、またはＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖を増加させ、かつ／または、ＮＫ細胞が仲立ちする活性を促進する。
【０１９３】
逆に、本発明に従ったアゴニストは、ＴまたはＮＫ細胞免疫におけるＶＩＳＴＡの抑制効果を増強または向上させるのが好ましい。このことは、ＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８を発現する細胞を用いるセルベースアッセイをｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用することにより検出され得る。アゴニストは、Ｔ細胞の活性化もしくは増殖、またはＮＫ細胞が仲立ちする活性において、ＶＩＳＴＡが仲立ちする抑制効果を促進する。例えば、アゴニストは、好適な対照と比較して、ＣＤ８＋もしくはＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化もしくは増殖、またはＮＫが仲立ちする細胞機能（例えば細胞溶解）を抑制する。
【０１９４】
かかるアゴニスト及びアンタゴニストを同定するために使用するスクリーニング法は任意で、ハイスループットフォーマットの影響を受けてよい。
【０１９５】
同定したアゴニスト及びアンタゴニストを、ヒトの治療法で使用するために配合してよい。これには、好適な安定剤、賦形剤または担体の添加を含んでよい。更に、アゴニストまたはアゴニストを改変することにより、例えば、１種以上の水溶性ポリマー（ポリエチレングリコールポリマー等）を結合することにより、またはアシル化により、ｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を高めてよい。かかる部位をタンパク質に結合させる方法は、当該技術分野において周知である。
【０１９６】
前述のとおり、本発明に従ったアゴニストを含有する組成物を使用して、Ｔ細胞免疫を阻害し、自己免疫性、アレルギー性または炎症性状態等の、治療が所望される条件を治療してよい。これらの組成物は、Ｔ細胞の活性化または増殖の抑制を必要とする対象において、Ｔ細胞の活性化または増殖を抑制するのに効果的な、一定量の本発明に従ったアゴニストを含んでよい。かかる自己免疫性、炎症性及びアレルギー性状態としては、例えば、関節炎状態（例えばＲＡ、乾癬性関節炎）、強皮症、多発性硬化症、狼瘡、ＩＢＤ、ＩＴＰ、糖尿病、サルコイドーシス、アレルギー性喘息等が挙げられる。
【０１９７】
本発明に従ったアンタゴニストを含有する組成物を使用して、Ｔ細胞免疫を促進し、癌及び感染症の発症等、治療が所望される状態を治療してよい。これらの組成物は、Ｔ細胞の活性化または増殖の促進を必要とする対象、例えば癌状態の対象においてＴ細胞の活性化または増殖を促進するのに効果的な、本発明に従った一定量のアンタゴニストを含む。
【０１９８】
対象のアンタゴニストで治療可能な癌としては、任意の例として黒色腫、リンパ腫、白血病、肺癌、卵巣癌、子宮頚癌、精巣癌、消化器癌、食道癌、肝癌、膵癌、腎臓癌、皮膚癌が挙げられる。
【０１９９】
本発明に従ったアンタゴニストで治療可能な感染症としては、ウイルス病（例えばＨＩＶ、ＨＰＶ、ＥＢＶ、脳炎、ヘルペス、他のポックスウイルス、及び他の既知のヒトウイルス）、寄生虫病、細菌病、真菌または酵母菌関連症、及び、ヒトに影響を及ぼす他の感染症が挙げられる。
【０２００】
上で特定した病状は、例示的なものであり排他的なものではないことが意図されるものと理解されるべきである。加えて、対象のアゴニストまたはアンタゴニストを、同一または異なる時間にて、同一または異なる組成物中で投与されてよい、他の治療薬と組み合わせてよい。例えば、対象のアゴニストまたはアンタゴニストを、ＰＤ−１もしくはＰＤ−Ｌ１アゴニストもしくはアンタゴニスト、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、サイトカイン、サイトカインアゴニストもしくはアンタゴニスト、または他の受容体アゴニストもしくはアンタゴニストを含む治療レジメンで投与してよい。
【０２０１】
特定の生殖細胞系配列を有する抗ＶＳＩＧ８抗体
ある特定の実施形態において、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体は、特定の生殖細胞系重鎖免疫グロブリン遺伝子からの重鎖可変領域、及び／または、特定の生殖細胞系軽鎖免疫グロブリン遺伝子からの軽鎖可変領域を含む。例えば、かかる抗ＶＳＩＧ８抗体は、抗体の可変領域を、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得た場合、特定の生殖細胞系配列「の生成物」、またはこれ「に由来する」重鎖または軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含むか、これからなってよい。かかる系は、対象の抗原により、ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスを免疫付与すること、または、対象の抗原を有するファージに表示されるヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーをスクリーニングすることを含む。ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列「の生成物」、またはこれ「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列を、ヒト生殖細胞系免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、ヒト抗体の配列に最も近似する配列（即ち、％同一性が最大）のヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列を選択することにより同定することができる。
【０２０２】
特定のヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列「の生成物」、またはこれ「に由来する」ヒト抗体は、例えば、自然発生する体細胞突然変異、または部位での変異を意図的に導入することにより、生殖細胞系配列と比較して、アミノ酸の相違を含有してよい。しかし、選択したヒト抗体は通常、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列に対してアミノ酸配列が少なくとも９０％の同一性となり、他の種の生殖細胞系免疫グロブリンアミノ酸配列（例えばマウス生殖細胞系配列）と比較した場合に、ヒト抗体がヒトであることを同定するアミノ酸残基を含有する。ある特定の場合において、ヒト抗体は、生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によりコードされたアミノ酸配列に対して、少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％、あるいは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列であってよい。通常、特定のヒト生殖細胞系配列に由来するヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によりコードされるアミノ酸配列とは、１０個以下のアミノ酸の相違を示す。特定の場合において、ヒト抗体は、生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子によりコードされたアミノ酸配列とは５個以下、あるいは４、３、２、または１個以下のアミノ酸の相違を示してよい。
【０２０３】
相同性抗体
ある特定の実施形態において、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体は、それぞれ、好ましい抗ＶＳＩＧ８抗体の単離した抗ＶＳＩＧ８アミノ酸配列に相同であるアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖可変領域を含み、抗体は、親抗ＶＳＩＧ８抗体の所望の機能的性質を保持する。本明細書で使用する場合、２つのアミノ酸配列間の％相同性は、２つの配列間の％同一性に等しい。２つの配列間の％同一性は、配列が共有する同一位置の数の関数（即ち、％相同性＝同一位置の数／位置の総数×１００）であり、２つの配列の最適アラインメントのために導入する必要がある、ギャップの数と各ギャップの長さを考慮に入れる。２つの配列間の％同一性の配列の比較と測定は、非限定的例として以下に記載するように、数学的アルゴリズムを使用して行うことができる。
【０２０４】
２つのアミノ酸配列間の％同一性は、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用する、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．，４：１１−１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定することができる。加えて、２つのアミノ酸配列間の％同一性は、Ｂｌｏｓｓｕｍ  ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、及びギャップの重み１６、１４、１２、１０、８、６、または４、及び長さの重み１、２、３、４、５、または６を使用する、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（市販されている）のＧＡＰプログラムに組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。
【０２０５】
加えて、または代替的に、本発明のタンパク質配列を更に「クエリー配列」として使用し、例えば関係する配列を同定するための公的データペースの検索を行うことができる。かかる検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質の検索は、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体分子に相同的なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長さ＝３を用いて実施することができる。比較目的のためのギャップアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２に記載されているギャップＢＬＡＳＴを使用することができる。ＢＬＡＳＴ、及びギャップＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えばＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。
【０２０６】
保存的改変を有する抗体
ある特定の実施形態において、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域を含み、ここで、これらのＣＤＲ配列の１つ以上は、本明細書の方法を使用して単離及び作製した好ましい抗ＶＳＩＧ８抗体に基づいた特定のアミノ酸配列、またはその保存的改変を含み、抗体はそれぞれ、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗ＶＳＩＧ８抗体の所望の機能的性質を保持する。
【０２０７】
様々な実施形態において、抗ＶＳＩＧ８抗体は例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体であることができる。本明細書で使用する場合、「保存的配列改変」という用語は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に著しく影響を及ぼさないか、結合特性を著しく変えないアミノ酸改変を意味することを意図している。かかる保存的改変としては、アミノ酸置換、付加及び欠失が挙げられる。部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲによる突然変異誘発等の当該技術分野において既知の技術により、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従って、改変を抗体に導入することができる。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられている置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖を有するアミノ酸（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体のＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーの他のアミノ酸残基で置換することができ、変更した抗体を、本明細書で記載される機能アッセイを使用して保持された機能（即ち、（ｃ）〜（ｊ）で説明した機能）について試験することができる。
【０２０８】
同一のエピトープに結合する抗ＶＳＩＧ８抗体
ある特定の実施形態において、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体は、免疫刺激の制御といった所望の機能的性質、及び関係する機能を有する。同一のエピトープ特異性を有する他の抗体を選択してよく、これらは所望の抗体との、ＶＳＩＧ８抗原への結合に関して交差競合の能力を有する。あるいは、ＶＳＩＧ８ポリペプチド全体を含むオーバーラップペプチドのライブラリーを使用して、所望の抗体のエピトープ特異性を測定してよく、例えば、ライブラリー内の同じペプチド、またはペプチドの１つ以上の残基に結合する、ＶＳＩＧ８及び抗体の所望のエピトープを含有する部分を構成する十五量体またはオーバーラップペプチドライブラリ−が、同じ直鎖または立体構造エピトープを結合することを決定する。
【０２０９】
操作され、修飾された抗体
ある特定の実施形態において、修飾抗体を改変するための抗ＶＳＩＧ８抗体出発物質に由来する１つ以上のＶＨ及び／またはＶＬ配列を有する抗体を使用して、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体を調製することができ、この修飾抗体は、出発抗体とは変化した性質を有し得る。例えば、１つ以上のＣＤＲ領域及び／または１つ以上のフレームワーク領域内の、１つまたは両方の可変領域（即ち、ＶＨ及び／またはＶＬ）内の１つ以上の残基を修飾することにより、抗体を改変することができる。加えて、または代替的に、定常領域内の残基を修飾する、例えば、抗体のエフェクター機能を変更することにより、抗体を操作することができる。
【０２１０】
実施可能な可変領域の操作の種類の１つは、ＣＤＲグラフティングである。抗体は標的抗原と、主に６個の重鎖及び軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）内に位置するアミノ酸残基を通して、相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲ外の配列よりも、個々の抗体間でより多様的である。ＣＤＲ配列は大部分の抗体−抗原相互作用を担うため、異なる性質を有する異なる抗体のフレームワーク配列にグラフティングした、特定の天然抗体からのＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することにより、特定の天然抗体の性質を模倣する組み換え抗体を発現することが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｑｕｅｅｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．を参照、Ｕ．Ｓ．８６：１００２９−１００３３；米国特許出願第５，２２５，５３９号（Ｗｉｎｔｅｒ）並びに同第５，５３０，１０１号；同５，５８５，０８９号；同５，６９３，７６２号及び同６，１８０，３７０号（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）を参照のこと）。
【０２１１】
好適なフレームワーク配列は、生殖細胞系抗体遺伝子配列を含む、公的なＤＮＡデータベースまたは公開された参考文献から入手することができる。例えば、ヒト重鎖及び軽鎖可変領域遺伝子の生殖細胞系ＤＮＡ配列は、「ＶＢａｓｅ」ヒト生殖細胞系配列データベース（インターネットで入手可能）、並びに、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２；Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）”Ｔｈｅ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍｌｉｎｅ  ＶＨ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａｂｏｕｔ  Ｆｉｆｔｙ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｏｆ  ＶＨ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｌｏｏｐｓ”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８；及びＣｏｘ，Ｊ．Ｐ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）”Ａ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒｙ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｒｍ−ｌｉｎｅ  ＶＨ  Ｓｅｇｍｅｎｔｓ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  Ｓｔｒｏｎｇ  Ｂｉａｓ  ｉｎ  ｔｈｅｉｒ  Ｕｓａｇｅ”Ｅｕｒ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：８２７−８３６；に見出すことができ、それぞれの内容は明示的に、参考として本明細書に組み込まれる。
【０２１２】
他の種類の可変領域修飾は、ＶＨ並びに／またはＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／もしくはＣＤＲ３領域内のアミノ酸残基を変異することにより、対象の抗体の１つ以上の結合特性（例えば親和性）を改善することである。部位特異的突然変異誘発またはＰＣＲによる突然変異誘発を行って変異を導入することができ、抗体結合、または対象の他の機能的性質への影響を、適切なｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイで評価することができる。（上述の）保存的改変を導入するのが好ましい。変異はアミノ酸置換、付加または欠失であってよいが、置換が好ましい。更に、通常はＣＤＲ領域内の１、２、３、４、または５個の残基が変更される。
【０２１３】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った改変抗体としては、例えば、抗体の性質を改善するために、ＶＨ及び／またはＶＬ内のフレームワーク残基に改変が行われた抗体が挙げられる。典型的には、かかるフレームワーク改変を行って、抗体の免疫原性を低下させる。例えば、１つのアプローチは、１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖細胞系配列に「復帰突然変異」させることである。より具体的には、体細胞突然変異を受けた抗体は、抗体が由来する生殖細胞系配列とは異なるフレームワーク残基を含有してよい。かかる残基は、抗体のフレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系配列と比較することにより同定することができる。
【０２１４】
フレームワークまたはＣＤＲ領域内で行われた改変に加えて、またはその代わりに、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体を操作して、Ｆｃ領域内に、通常は抗体の１つ以上の機能的性質、例えば血清の半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、及び／または抗原依存性の細胞毒性を変更した改変を含めてよい。更に、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体を化学修飾する（例えば、１つ以上の化学部位を抗体に結合させることができる）か、または修飾してそのグリコシル化を変更し、抗体の１つ以上の機能的性質を再び変更してよい。かかる実施形態を、以下で更に記載する。Ｆｃ領域内の残基の付番は、ＫａｂａｔのＥＵインデックスの付番である。
【０２１５】
一実施形態では、ＣＨ１のヒンジ領域を、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を変更（例えば増減）するように改変する。本アプローチは、米国特許第５，６７７，４２５号（Ｂｏｄｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）に更に記載されている。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数を変更し、例えば、軽鎖及び重鎖のアセンブリを容易にするか、または抗体の安定性を増減する。
【０２１６】
別の実施形態において、抗体のＦｃヒンジ領域を変異させ、抗体の生物学的半減期を減少させる。より具体的には、抗体が、ネイティブのＦｃヒンジドメインのＳｐＡ結合と比較して、低下したブドウ球菌プロテインＡ（ＳｐＡ）結合を有するように、Ｆｃヒンジ断片のＣＨ２−ＣＨ３ドメインの界面領域に１つ以上のアミノ酸変異を導入する。本アプローチは、米国特許第６，１６５，７４５号（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．）に更に詳細に記載されている。
【０２１７】
別の実施形態において、抗体を改変して、生物学的半減期を増加させる。種々のアプローチが可能である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号（Ｗａｒｄ）に記載のとおり、以下の変異：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆの１つ以上を導入することができる。あるいは、生物学的半減期を増加させるために、米国特許番号第５，８６９，０４６号及び同第６，１２１，０２２号（Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載のとおり、抗体をＣＨ１またはＣＬ領域内で変更し、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから入手した、サルベージ受容体結合エピトープを含有させる。
【０２１８】
更に他の実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置換することによりＦｃ領域を変更し、抗体のエフェクター機能を変更する。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を、抗体が、エフェクターに対して変化した親和性を有するが、親抗体の抗原結合能力を保持するように、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。親和性が変化したエフェクターリガンドは例えば、Ｆｃ受容体、または補体のＣＬ成分であることができる。本アプローチは、米国特許番号第５，６２４，８２１号及び同第５，６４８，２６０号（共にＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）に、更に詳細に記載されている。
【０２１９】
別の例において、アミノ酸残基３２９、３３１及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸を、抗体が変化したＣｌｑ結合、及び／または低下した、もしくは消滅した補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。本アプローチは、米国特許番号第６，１９４，５５１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．）に更に詳細に記載されている。
【０２２０】
別の実施例において、アミノ酸の位置２３１及び２３９内の１つ以上のアミノ酸残基を変更することにより、抗体が補体を固定する能力を変化させる。本アプローチは、ＰＣＴ国際公開特許第９４／２９３５１号（Ｂｏｄｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）に更に記載されている。
【０２２１】
更に別の実施例において、以下の位置における１つ以上のアミノ酸を改変することにより、Ｆｃ領域を改変し、抗体が抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を仲立ちする能力を増加させ、かつ／または、Ｆｅｙ受容体に対する抗体の親和性を増加させる：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９。本アプローチは、ＰＣＴ国際公開特許第００／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ）に更に記載されている。更に、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎに対する、ヒトＩｇＧ１の結合部位がマッピングされ、向上した結合を有する変異体が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４を参照）。位置２５６、２９０、２９８、３３３、３３４及び３３９における特定の変異が、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示されている。更に、以下の組み合わせの変異体が、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示されている：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４Ａ及びＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ。更に、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６ＥまたはＭ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ等の変異は、ＦｃＲｎへの結合を改善し、抗体循環半減期を増加させる（Ｃｈａｎ  ＣＡ  ａｎｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＰＪ（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０：３０１−３１６を参照のこと）。
【０２２２】
更に別の実施形態において、抗体を改変して、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＦａｂアーム交換をなくすことができる。特に、本（ｔｈ  ｓ）プロセスは、機能的に一価の二重特異的抗体（ｂ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ）を効果的にもたらす他のＩｇＧ４抗体との間での、ＩｇＧ４半分子（１つの重鎖と１つの軽鎖）の交換を伴う。重鎖のヒンジ領域及び定常領域に対する変異は、この交換をなくすことができる（Ａａｌｂｅｒｓｅ，ＲＣ，Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ  Ｊ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５：９−１９を参照）。
【０２２３】
更に別の実施形態において、抗体のグリコシル化形成を改変する。例えば、非グリコシル化抗体を作製することができる（即ち、抗体がグリコシル化形成を欠いている）。グリコシル化形成を変更して、例えば抗原に対する抗体の親和性を増加させることができる。かかる糖質の改変は、例えば、抗体配列内のグリコシル化形成部位の１つ以上を変更することにより行うことができる。例えば、１つ以上の可変領域フレームワーク糖鎖形成部位を取り除くことで、その部位における糖鎖形成を取り除いた１つ以上のアミノ酸置換基を作製することができる。かかる非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。かかるアプローチは、米国特許第５，７１４，３５０号及び同第６，３５０，８６１号（Ｃｏ  ｅｔ  ａｌ．）に更に詳細に記載されている。
【０２２４】
加えて、または代替的に、別の種類のグリコシル化形成を有する抗体、フコシル残基の量が減少した低フコシル化抗体、またはバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体等を作製することができる。かかる、変化した糖鎖形成パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが示されている。かかる糖質改変は、例えば、抗体を、グリコシル化形成機構が変化した宿主細胞内で発現させることにより行うことができる。グリコシル化形成機構が変化した細胞は、当該技術分野において説明されてきており、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った組み換え抗体を発現することにより、グリコシル化形成が変化した抗体を作製する宿主細胞として使用することができる。例えば、細胞株のＭｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９はフコシルトランスフェラーゼ遺伝子であるＦＵＴ８（ａ（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）を欠いており、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９細胞株内で発現する抗体が、糖質上にフコースを欠くこととなる。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９  ＦＵＴ８細胞株は、２つの置換ベクターを使用して、ＣＨＯ／ＤＧ４４細胞内でＦＵＴ８遺伝子を標的攪乱することにより作製される（例えば、米国特許公報第２００４０１１０７０４号（Ｙａｍａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．）及びＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８７：６１４−２２を参照）。別の例として、ＥＰ１，１７６，１９５（Ｈａｎａｉ  ｅｔ  ａｌ．）では、かかる細胞株内で発現する抗体が、１，６結合に関係する酵素を減少させるか取り除くことにより、低フコシル化を示すようにフコシルトランスフェラーゼをコードする、機能が攪乱されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株について記載されている。Ｈａｎａｉ  ｅｔ  ａｌ．はまた、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを付加するための酵素活性が低い、または酵素活性を有しない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２）についても記載している。ＰＣＴ国際公開特許第ＷＯ０３／０３５８３５号（Ｐｒｅｓｔａ）は、Ａｓｎ（２９７）結合糖質にフコースを結合させる能力が低下し、その宿主細胞内に発現する抗体の低フコシル化もまたもたらす、変異ＣＨＯ細胞株であるＬｅｃｌ３細胞について記載している（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０もまた参照）。Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．によるＰＣＴ国際公開特許第９９／５４３４２号は、改変した細胞株で発現する抗体が、増加したバイセクティングＧｌｃＮａｃ構造を示し、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えばＰ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように改変した細胞株について記載している（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０もまた参照のこと）。あるいは、抗体のフコース残基を、フコシダーゼ酵素を使用して切断してよい。例えば、フコシダーゼのα−Ｌ−フコシダーゼは、抗体のフコシル残基を取り除く（���ａｒｅｎｔｉｎｏ，Ａ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６−２３）。
【０２２５】
本発明により想到される、本明細書の抗体の他の改変は、例えば、半減期を増加させるための、ＰＥＧ化、または他の水溶性部位（通常はポリマー）の付加である。抗体をＰＥＧ化して、例えば抗体の生物学的（例えば血清）半減期を増加させることができる。抗体をＰＥＧ化するために、抗体またはその断片を、１つ以上のＰＥＧ基が、抗体または抗体断片に結合する条件下において、通常は、反応性エステルまたはＰＥＧのアルデヒド誘導体等のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる。ＰＥＧ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を通して行うのが好ましい。本明細書で使用する場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃｉ−Ｃｉｏ）アルコキシもしくはアリールオキシポリエチレングリコール、またはポリエチレングリコール−マレイミド等の、他のタンパク質を誘導体化するために使用したＰＥＧの形態のいずれかを包含するすることを意図している。ある特定の実施形態において、ＰＥＧ化する抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をＰＥＧ化する方法は、当技術分野において既知であり、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従って抗体に適用することができる。例えば、ＥＰ  ０  １５４  ３１６（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．）及びＥＰ  ０  ４０１  ３８４（Ｉｓｈｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．）を参照のこと。
【０２２６】
抗体の操作方法
ある特定の実施形態において、ＶＨ及びＶＬ配列を有する、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体を使用して、ＶＨ及び／もしくはＶＬ配列、またはこれらに結合した定常領域をそれぞれ改変することにより、新規の抗ＶＳＩＧ８抗体を作製してよい。したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った別の態様において、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗ＶＳＩＧ８抗体の構造的特徴を使用して、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体の少なくとも１つの機能的性質、例えばヒトＶＳＩＧ８への結合を維持する、構造的に関係のある抗ＶＳＩＧ８抗体を作製する。例えば、１つのＶＳＩＧ８抗体またはその変異体の、１つ以上のＣＤＲ領域を、既知のフレームワーク領域及び／または他のＣＤＲと組み換えにより組み合わせ、上述のとおりの、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った、追加の遺伝子組み換え抗ＶＳＩＧ８抗体を作製することができる。他の種類の改変には、以前のセクションに記載したものが含まれる。操作方法のための出発物質は、本明細書において提供するＶＨ及び／もしくはＶＬ配列の１つ以上、またはその１つ以上のＣＤＲ領域である。操作抗体を作製するために、本明細書において提供するＶＨ及び／もしくはＶＬ配列の１つ以上、またはその１つ以上のＣＤＲ領域を有する抗体を実際に調製する（即ち、タンパク質として発現させる）必要はない。むしろ、配列に含まれる情報を出発物質として使用して、元の配列に由来する「第二世代」配列を作製し、続いて、「第二世代」の配列を調製して、タンパク質として発現させる。
【０２２７】
標準的な分子生物学的技術を使用して、変化した抗体配列を調製して発現させることができる。好ましくは、変化した抗体配列によりコードされる抗ＶＳＩＧ８抗体は、本明細書において提供する方法及び配列を用いて作製した、それぞれ抗ＶＳＩＧ８抗体の機能的性質を１つ、いくつか、または全て保持する抗体であり、これらの機能的性質としては、特定のＫＤレベル以下でのＶＳＩＧ８抗原への結合、及び／または免疫応答の制御、及び／または所望の標的細胞（例えば、ＶＳＩＧ８抗原を発現するもの等）への選択的結合が挙げられる。
【０２２８】
変化した抗体の機能的性質は、当該技術分野において使用可能な、及び／または本明細書で記載される標準的なアッセイを使用して評価することができる。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った、抗体の操作方法のある特定の実施形態において、抗ＶＳＩＧ８抗体コード配列の全て、または一部に沿ってランダムに、または選択的に変異を導入することができ、得られる改変抗ＶＳＩＧ８抗体を、結合活性、及び／または他の所望の機能的性質についてスクリーニングすることができる。
【０２２９】
変異方法は、当該技術分野において説明されている。例えば、ＰＣＴ国際公開特許第ＷＯ０２／０９２７８０号（Ｓｈｏｒｔ）は、飽和突然変異誘発、合成ライゲーションアセンブリ、またはこれらの組み合わせを使用した、抗体変異体の作製及びスクリーニング法について記載している。あるいは、ＰＣＴ国際公開特許第０３／０７４６７９号（Ｌａｚａｒ  ｅｔ  ａｌ．）は、コンピューターによるスクリーニング方法を使用して、抗体の生理化学的性質を最適化する方法について記載している。
【０２３０】
ＶＳＩＧ８断片ポリペプチド
ＶＳＩＧ８の「可溶性エクトドメイン（ＥＣＤ）」または「エクトドメイン」または「可溶」形態という用語は、対応するタンパク質をコードする核酸配列もまた指す。任意で、ＶＳＩＧ８  ＥＣＤタンパク質及びその断片は、配列番号１〜３のいずれかに記載したポリペプチド配列、並びに／または、そのポリペプチド配列と少なくとも８０％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、更により好ましくは、そのポリペプチド配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の配列同一性を有する変異体、並びに／またはその融合体及び／もしくはコンジュゲート、並びに／またはこれをコードするポリヌクレオチドのいずれか１つを指す。
【０２３１】
特に、ＶＳＩＧ８の細胞外ドメインの断片は、ＶＳＩＧ８の細胞外ドメインのＩｇＶドメインの任意の一部分に対応する、またはＶＳＩＧ８の細胞外ドメインのＩｇＶドメインを含む任意の配列を含むことができる。
【０２３２】
ＶＳＩＧ８タンパク質は、細胞外ドメイン内の免疫グロブリンドメインであり、抗体の可変領域に関係するＩｇＶドメイン（またはＶドメイン）を含有する。ＩｇＶドメインは、他のＢ７ファミリーメンバー同様に、受容体の結合を担い得る。細胞外ドメインのＩｇドメインは、このフォールドでは一般的で、構造機能にとって重要であり得る、ドメイン内のシステイン残基間で形成される１つのジスルフィド結合を含む。
【０２３３】
一実施形態では、ＶＳＩＧ８の可溶性断片が提供される。融合タンパク質のセクションにおいて以下にて更に詳細に記載するように、かかる可溶性断片は任意で、第１の融合パートナーとして記載されてよい。有用な断片は、単独で、または、融合タンパク質に含まれるかもしくは多量体化した場合に、（例えば、Ｔ及びＮＫ細胞上で発現する、並びに／またはＴ細胞及び／もしくはＮＫ細胞の活性化を制御（阻害もしくは促進）する）天然の１つ以上の受容体への結合能力を保持する断片である。完全長ＶＳＩＧ８の断片であるＶＳＩＧ８ポリペプチドは通常、完全長ＶＳＩＧ８と比較して、免疫及び特定の免疫細胞において、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％、１００％、あるいは１００％を超える、天然受容体への結合能力、及び／または、ＶＳＩＧ８の１つ以上の機能的効果の制御（作動性もしくは拮抗性）を有する。可溶性ＶＳＩＧ８ポリペプチド断片は、生み出す細胞から除去、分泌、または別様においては抽出され得るＶＳＩＧ８ポリペプチドの断片である。別の実施形態において、ＶＳＩＧ８ポリペプチドの可溶性断片は、ＶＳＩＧ８生物活性を保持するＶＳＩＧ８細胞外ドメインの断片、例えば、１つまたは複数の天然受容体に結合する能力を保持し、かつ／またはＴもしくはＮＫ細胞活性化を制御する（阻害もしくは促進する）断片を含む。細胞外ドメインは、膜貫通ドメインからの１、２、３、４、もしくは５個の連続アミノ酸、及び／またはシグナル配列からの１、２、３、４、もしくは５個の連続アミノ酸を含むことができる。
【０２３４】
あるいは、細胞外ドメインは、Ｃ末端、Ｎ末端、またはその両方から取り除いた、１、２、３、４、５個またはそれ以上のアミノ酸を有することができる。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、 ＶＳＩＧ８細胞外ドメインポリペプチドは、配列番号１、２、または３のいずれか１つに記載されるＩｇＶドメインのアミノ酸配列、またはその断片もしくは変異体を含む。他の実施形態では、ＶＳＩＧ８細胞外ドメインポリペプチドは、配列番号１〜３のいずれか１つに記載されているＩｇＶドメインのアミノ酸配列から本質的になる。
【０２３６】
通常、ＶＳＩＧ８ポリペプチド断片は、シグナル配列をコードする配列を含む核酸から発現する。シグナル配列を未成熟ポリペプチドから切断し、シグナル配列を欠く成熟ポリペプチドを作製する。標準的な分子生物学的技術を使用して、ＶＳＩＧ８のシグナル配列を別のポリペプチドのシグナル配列で置き換え、発現レベル、分泌、溶解性、またはポリペプチドの他の性質に影響を与えることができる。ＶＳＩＧ８シグナルペプチド配列を置き換えるために使用するシグナルペプチド配列は、当該技術分野において公知であり得る。
【０２３７】
ＶＳＩＧ８の、かかる「可溶性エクトドメイン（ＥＣＤ）」または「エクトドメイン」または「可溶性」形態は、免疫、並びに、細胞毒性またはエフェクターＴ細胞、Ｔｒｅｇ及びＮＫ細胞等の、特定の種類の免疫細胞への、ＶＳＩＧ８の影響の１つ以上を制御する（刺激する、またはそれに拮抗する）のが好ましい。
【０２３８】
ＶＳＩＧ８ポリペプチドの変異体
少なくともいくつかの実施形態では、本発明は、本明細書で記載されるアッセイのいずれかにより示される生物活性を増大させる、または、タンパク質の半減期もしくは安定性を増大させるものを含む、ＶＳＩＧ８ポリペプチドの有用な変異体を包含する。可溶性ＶＳＩＧ８タンパク質、またはＶＳＩＧ８タンパク質活性を有するその断片もしくは融合物をそれぞれ操作して、生物活性を増大させることができる。更なる実施形態において、ＶＳＩＧ８タンパク質または融合タンパク質を、免疫細胞（例えばＴ細胞）への分子の結合を増大させ、阻害シグナルをＴ細胞に伝達する、少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失、または挿入により改変する。前述の特許請求の範囲のいずれかに従った、単離または組み換えＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、少なくとも１つの半減期延長部位を含む。
【０２３９】
かかる半減期延長部位としては例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、モノメトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、ＸＴＥＮ分子、ｒＰＥＧ分子、アドネクチン、血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、免疫グロブリン定常領域もしくはその断片、またはアシル基が含まれる。いくつかの実施形態では、異種ポリペプチド、または半減期延長部位、または他の異種分子を含む、半減期を変更した、本発明に従った単離または組み換えＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、前記異種ポリペプチド、半減期延長部位、または他の異種分子を欠く他の部分は同一の分子と比較して、ＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、またはそれ以上増加させてよい。
【０２４０】
他の任意の変異体は、操作をして、ある種類のＴ細胞と他の免疫細胞、またはＮＫ細胞に選択的に結合するこれらのＶＳＩＧ８タンパク質である。例えば、ＶＳＩＧ８ポリペプチドを任意で、制御性Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、Ｔｈ０、Ｔｈ１、Ｔｈ１７、Ｔｈ２もしくはＴｈ２２細胞、またはＮＫ細胞に結合するように操作することができる。好ましい結合とは、ある種類の細胞に対して、別の種類の細胞よりも少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれを超えて結合することを指す。ＶＳＩＧ８タンパク質の更に他の変異体を操作して、それぞれ野生型ＶＳＩＧ８タンパク質と比較して、免疫細胞への結合を低下させることができる。これらの変異体を、より強力な結合特性を有する変異体と組み合わせて使用し、適度な影響力を有する免疫応答を制御することができる。
【０２４１】
また任意で、変異ＶＳＩＧ８タンパク質を操作して、野生型と比較して半減期を増加させることができる。これらの変異体は通常、酵素による分解に耐性を有するように改変される。例示的な改変としては、酵素による分解に耐性を有する改変アミノ酸残基及び改変ペプチド結合が挙げられる。これを達成するための種々の改変が、当技術分野において既知である。
【０２４２】
ＶＳＩＧ８のかかる変異形態は、免疫、及び、細胞毒性もしくはエフェクターＴ細胞、Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ、他のサプレッサー細胞型またはＮＫ細胞等の特定の種類の免疫細胞への、ＶＳＩＧ８の１つ以上の影響を制御する（刺激する、またはそれに拮抗する）のが好ましい。
【０２４３】
ＶＳＩＧ８融合タンパク質
少なくともいくつかの実施形態に従うと、ＶＳＩＧ８融合ポリペプチドは、第２のポリペプチドに直接、または、２つのタンパク質を結合するのに有用なリンカーペプチド配列、もしくは化学リンカーを介して融合した、ＶＳＩＧ８タンパク質の全てまたは一部を含む第１の融合パートナーを有する。ＶＳＩＧ８ポリペプチドは第２のポリペプチドに任意で融合し、本明細書に記載した融合タンパク質を形成してよい。第２のポリペプチドが存在することにより、ＶＳＩＧ８融合ポリペプチドの可溶性、安定性、親和性及び／または結合価を変更することができる。本明細書で使用する場合、「結合価」とは、１分子当たりで利用可能な結合部位の数を意味する。一実施形態において、第２のポリペプチドは、異なる源または異なるタンパク質からのポリペプチドである。
【０２４４】
少なくともいくつかの実施形態に従うと、ＶＳＩＧ８タンパク質または断片は、免疫関連疾患、感染症、敗血症、癌の治療に対する活性、及び／または本明細書に記載した遺伝子導入に続く、望ましくない免疫活性化の遮断に対して選択される。
【０２４５】
一実施形態では、第２のポリペプチドは、好ましくは、ヒト免疫グロブリンＣｙ１、Ｃｙ２、Ｃｙ３、もしくはＣｙ４鎖のヒンジ、Ｃｍ及びＣｍ領域、または、マウス免疫グロブリンＣｙ２ａ鎖のヒンジ、Ｃｍ及びＣｍ領域に対応するアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン重鎖定常領域の１つ以上のドメインを含有する。少なくともいくつかの実施形態に従うと、融合タンパク質は、２つ以上の標的を任意で架橋可能な、二量体融合タンパク質である。所望の二量体融合タンパク質において、二量体は、二量体化した通常のＩｇ重鎖でジスルフィド結合している同じＣｙｓ残基である、２つのＩｇ重鎖のヒンジ領域内における、Ｃｙｓ残基の共有結合からもたらされる。かかるタンパク質は、ＶＳＩＧ８ポリペプチド、その断片または融合タンパク質と呼ばれる。
【０２４６】
一実施形態では、免疫グロブリン定常ドメインは、特定の細胞型への結合を向上もしくは低下させる、生物学的利用能を増大させる、または、ＶＳＩＧ８ポリペプチド、融合タンパク質もしくはその断片の安定性を増加させる１つ以上のアミノ酸挿入、欠失または置換を含有してよい。好適なアミノ酸置換としては、上述した保存的、及び非保存的置換が挙げられる。
【０２４７】
融合タンパク質は任意で、２つ以上の融合タンパク質を二量体化または多量体化するように機能するドメインを含有する。ペプチド／ポリペプチドリンカードメインは、個別のドメインであることができるか、あるいは、融合タンパク質の他のドメイン（ＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは第２のポリペプチド）の１つの中に含有されることができるかの、いずれかである。同様に、融合タンパク質を二量体化または多量体化するように機能するドメインは、個別のドメインであることができるか、あるいは、融合タンパク質の他のドメイン（ＶＳＩＧ８ポリペプチド、第２のポリペプチドまたはペプチド／ポリペプチドリンカードメイン）の１つの中に含有されることができるかの、いずれかである。一実施形態では、二量体化／多量体化ドメインとペプチド／ポリペプチドリンカードメインは同一である。二量体化／多量体化ドメインとリンカーの、更に具体的で例示的、かつ非限定的例を以下で示す。
【０２４８】
少なくとも本発明のいくつかの実施形態に従った、本明細書にて開示した融合タンパク質は式Ｉ：Ｎ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｃであり、式中、「Ｎ」は融合タンパク質のＮ末端を表し、「Ｃ」は融合タンパク質のＣ末端を表す。更なる実施形態において、「Ｒ１」はＶＳＩＧ８ポリペプチドであり、「Ｒ２」は任意のペプチド／ポリペプチドまたは化学リンカードメインであり、「Ｒ３」は第２のポリペプチドである。あるいは、Ｒ３はＶＳＩＧ８ポリペプチドであってよく、Ｒ１は第２のポリペプチドであってよい。リンカーの種々の非限定的例を、以下で更に詳細に記載する。
【０２４９】
任意で融合タンパク質は、任意で、１つ以上のアミノ酸（例えばＧＳ）のリンカーペプチドにより、１つ以上の「半減期延長部位」に融合した、本明細書に記載したＶＳＩＧ８ポリペプチド断片を含む。「半減期延長部位」とは、タンパク質に付加した場合に、対象の体内（例えば、対象の血漿）における、そのタンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を延長する任意の部位、例えば、ポリペプチド、小分子またはポリマーである。例えば、本発明の一実施形態において、半減期延長部位は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、モノメトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、ＸＴＥＮ分子、ｒＰＥＧ分子、アドネクチン、血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、免疫グロブリン定常領域もしくはその断片、またはアシル基である。本発明の一実施形態において、ＰＥＧは、５、１０、１２、２０、３０、４０または５０ｋＤａまたはそれより大きい部位か、または約１２０００個のエチレングリコール単位を含む（ＰＥＧ１２０００）である。本発明に従った単離または組み換えＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、少なくとも１つの半減期延長部位を任意で含んでよい。半減期延長部位としては、ＰＥＧ、ＸＴＥＮ分子、ｒＰＥＧ分子、アドネクチン、血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、免疫グロブリン定常領域もしくはその断片、またはアシル基が挙げられる。いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質に含有される異種ポリペプチド、半減期延長部位、または他の異種分子は、前記異種ポリペプチド、半減期延長部位、または他の異種分子を欠く別様の同一分子と比較して、前記単離または組み換えＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、またはそれ以上増加させてよい。
【０２５０】
融合タンパク質はまた、任意で、化学合成法により調製してもよく、合成中または合成後のいずれかに、「結合部」が化学的にもたらされる。
【０２５１】
例えば、米国特許第５，５４７，８５３号（Ｗａｌｌｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されているように（非限定的例としてのみ、本明細書に全体が記載されているかのように、参照として本明細書に組み込まれている）、架橋、及び他のかかる方法を、（上述した遺伝子レベルでの融合方法と共に）任意で使用してよい。
【０２５２】
本発明に従って、免疫グロブリンの定常領域を含む免疫グロブリンの一部との融合により、本発明のタンパク質から融合タンパク質を調製してもよい。より好ましくは、免疫グロブリンの一部は、任意で、及びより好ましくはヒト重鎖定常領域である重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、最も好ましくはＩｇＧ重鎖定常領域であり、任意で、かつ最も好ましくはＦｃ鎖であり、最も好ましくは、ヒンジ、Ｃｍ及びＣｍドメインを含むＩｇＧ  Ｆｃ断片である。Ｆｃ鎖は任意で、既知または「野生型」のＦｃ鎖であってよく、あるいは、変異して、または切断されていてよい。融合タンパク質のＦｃタンパク質は、任意でアイソタイプもしくはサブクラスにより変異されてよく、キメラもしくはハイブリッドであってもよく、かつ／または、例えば、エフェクター機能を改善するために、半減期、組織への接近性を調節するために、安定性等の生物物理学的特徴を増強するために、そして産生効率を改善する（そして、コストを下げる）ために、改変してよい。開示した融合タンパク質の構築に有用な多くの改変、及びこれらの作製方法は当技術分野において既知であり、例えば、Ｍｕｅｌｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．，３４（６）：４４１−４５２（１９９７），Ｓｗａｎｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．，２０：４９３−４９９（２００８），ａｎｄ  Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．２０：４６０−４７０（２００８）を参照のこと。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は天然のＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域はハイブリッド、例えば、ＩｇＧ２／ＩｇＧ４  Ｆｃ定常領域からなるキメラである。
【０２５３】
Ｆｃ領域の改変としては、Ｆｅｙ受容体と補体への結合を防止するために改変したＩｇＧ４、１つ以上のＦｃγ受容体への結合を改善するために改変したＩｇＧ１、エフェクター機能を最小限に抑えるために改変した（アミノ酸の変化）ＩｇＧ１、変更したグリカンを含む／グリカンを含まないＩｇＧ１（通常は、発現宿主を変更すること、または位置２９７のＡｓｎを置換することによる）、ＦｃＲｎへのｐＨ依存性結合を変更したＩｇＧ１が挙げられるが、これらに限定されない。Ｆｃ領域は、ヒンジ領域全体、またはヒンジ領域全体未満を含んでよい。別の実施形態において、Ｆｃドメインは、低親和性阻害Ｆｃ受容体ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）への結合を低下させ、かつ、低親和性活性化Ｆｃ受容体ＣＤ１６Ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ）への、野生型レベルの結合を維持するか、結合を向上させる１つ以上のアミノ酸挿入、欠失または置換を含有してよい。
【０２５４】
別の実施形態は、半減期を増加させるＦｃＲ（Ｆｃ受容体）への結合が低下した、ＩｇＧ２−４ハイブリッド、及びＩｇＧ４変異体を含む。例示的なＩｇＧ２−４ハイブリッド、及びＩｇＧ４変異体は、Ａｎｇａｌ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３０（１）：１０５−１０８（１９９３）；Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３４（６）：４４１−４５２（１９９７）；及び、米国特許第６，９８２，３２３号（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１及び／またはＩｇＧ２ドメインを欠失する；例えば、Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，３０（１）：１０５−１０８（１９９３）では、セリン２４１がプロリンで置き換えられたＩｇＧ１及びＩｇＧ２について記載されている。
【０２５５】
更なる実施形態において、Ｆｃドメインは、ＣＤ１６Ａへの結合を向上させるアミノ酸挿入、欠失、または置換を含有する。ＣＤ１６Ａへの結合を向上させ、ＣＤ３２Ｂへの結合を低下させる、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン内での多数の置換は、当技術分野において既知であり、Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５７（１８）：８８８２−９０（２００７）に記載されている。ＣＤ３２Ｂへの結合が低下し、かつ／またはＣＤ１６Ａへの結合が増加したヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインの例示的変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５ＩまたはＰ２９６Ｌ置換を含有する。これらのアミノ酸置換は、任意の組み合わせでヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン内に存在してよい。
【０２５６】
一実施形態では、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ及びＹ３００Ｌ置換を含有する。別の実施形態において、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン変異体は、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ９２９Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ及びＰ２９６Ｌ置換を含有する。別の実施形態において、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメイン変異体は、Ｎ２９７Ａ／Ｑ置換を含有する。これは、これらの変異体がＦｃγＲ結合を消滅させるためである。変異の非限定的な実例的、例示的種類は、２００６年２月１６日公開の米国特許出願第２００６００３４８５２号に記載されており、その明細書に全体が記載されているかのように、参考として本明細書に組み込まれる。「Ｆｃ鎖」という用語はまた、任意でいかなる種類のＦｃ断片をも含む。
【０２５７】
ＩｇＧサブクラス内での、抗体の定常領域が仲立ちする活性に大切な、特定のいくつかのアミノ酸残基が同定されている。これらの特定のアミノ酸の包含、置換または除外はそれ故、特定の免疫グロブリン定常領域が仲立ちする活性の包含または除外を可能にする。更に、特定の変化は、例えば非グリコシル化、及び／またはＦｃ鎖への他の所望の変化をもたらし得る。少なくとも、いくつかの変化を任意で加えて、望ましくないと考えられているＦｃの機能、例えば、以下にて更に詳細に記載する望ましくない免疫系効果を遮断してよい。
【０２５８】
融合タンパク質の活性を制御するために加えられ得る、Ｆｃへの変異の非限定的実例としては、以下の変化（Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ：Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，（１９９１）により、Ｆｃ配列に関して与えられる）またはこれらの組み合わせが挙げられる：２２０Ｃ→Ｓ；２３３〜２３８  ＥＬＬＧＧＰ→ＥＡＥＧＡＰ；２６５Ｄ→Ａ（好ましくは、４３４Ｎ→Ａと組み合わせる）；２９７Ｎ→Ａ（例えば、Ｎグリコシル化を遮断するため）；３１８〜３２２ＥＹＫＣＫ→ＡＹＡＣＡ；３３０−３３１ＡＰ→ＳＳ；（例えば、これらの変異、及びそれらの効果の説明については、Ｍ．Ｃｌａｒｋ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐｐ  １−３１を参照のこと）。上記の変化を特徴とするＦｃ鎖の構造は、任意で、そして好ましくは、ヒンジ領域と、Ｃｍ及びＣｍドメインとの組み合わせを含む。
【０２５９】
上記の変異は任意で、所望の特性を向上させるか、あるいは望ましくない特性を遮断するために実行されてよい。例えば、抗体の非グリコシル化は、一方、任意で、望ましくない機能であり得る、Ｔ細胞の枯渇の遮断、またはサイトカイン放出の誘発を行う一方、所望の結合機能性を維持することが示された（Ｍ．Ｃｌａｒｋ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐｐ  １−３１を参照）。３３１プロリンをセリンで置換することにより、補体を活性化する能力を遮断してよく、この能力は任意で、望ましくない機能と考えられ得る（Ｍ．Ｃｌａｒｋ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐｐ  １−３１を参照）。この変更と組み合わせて、位置３３０でアラニンをセリンに変更することによってもまた、補体を活性化する能力を遮断する所望の効果が向上し得る。
【０２６０】
残基２３５及び２３７は、上述の２３３〜２３８の残基の遮断を変更することにより、ＡＤＣＣが望ましくない機能であると考えられる場合に、かかる活性もまた遮断し得るように、細胞が仲立ちする抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）に関与することが示された。残基２２０は通常、ＩｇＧ１からのＦｃではシステインであり、これは、重鎖が軽鎖と共有結合を形成する部位である。任意で、この残基を別のアミノ酸残基（例えばセリン）に変更し、または欠失もしくは切断により、任意の種類の共有結合を避けてよい（Ｍ．Ｃｌａｒｋ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐｐ  １−３１を参照）。
【０２６１】
残基２６５及び４３４に対する上記の変化を任意で行い、Ｆｃ受容体への結合を低下または遮断してよく、これは任意で、免疫系機能に関係する、Ｆｃの望ましくない機能性を遮断し得る（Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  Ｈｕｍａｎ  ＩｇＧｌ  ｆｏｒ  Ｆｃ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｖｏｌ  ２７６，ｐｐ  ６５９１−６６０４，２００１を参照）。
【０２６２】
上記の変化は、所望の変化の単なる解説を意図するものであり、如何様にも限定を行うことを意図するものではない。更に、上記説明は説明目的のために提供され、単一の仮説により束縛されることを望まない。更なる実施形態において、融合タンパク質は、Ｉｇ  Ｆｃ領域に融合したＶＳＩＧ８の細胞外ドメイン、またはその断片を含む。以前に記載されたように（Ｃｈａｐｏｖａｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ，４５：２４７−２５５（２０００））、組み換えＩｇ  ＶＳＩＧ８ポリペプチド、その断片または融合タンパク質を、ＶＳＩＧ８の細胞外ドメインのコード領域、またはその断片を、ヒトＩｇＧ１またはマウスＩｇＧ２ａのＦｃ領域に融合することにより調製することができる。
【０２６３】
任意で、ＶＳＩＧ８  ＥＣＤとは、ヒト免疫グロブリンＦｃに融合したヒトＶＳＩＧ８  ＥＣＤのアミノ酸配列を含む融合タンパク質もまた指す。任意で、前記融合タンパク質は、配列番号１、２、３で説明されているヒトまたは非ヒトＶＳＩＧ８  ＥＣＤのアミノ酸配列、またはその断片を含む。
【０２６４】
別の実施形態において、第２のポリペプチドは、追加の分子がＶＳＩＧ８融合タンパク質に結合可能な、コンジュゲーションドメインを有し得る。かかる一実施形態において、コンジュゲート分子は、融合タンパク質を特定の臓器または組織に標的化することができ、かかる標的化ドメイン及び／または分子の、更なる特定の実例的、非限定的例を以下で示す。
【０２６５】
かかる別の実施形態において、コンジュゲート分子は、ＶＳＩＧ８融合タンパク質の効果を向上または増強することができる、別の免疫賦活剤である。別の実施形態において、コンジュゲート分子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は結合領域を含み、ここで、結合タンパク質は２つ以上の標的を架橋することができる。いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は別の結合部位を含み、ここで、結合部位は腫瘍細胞、病原体（例えばウイルス、バクテリア、マイコプラズマ（ｍｙｃｏｐｌａｓｍ）、真菌、酵母菌もしくは寄生生物）、またはそれらに感染した細胞、免疫細胞、または疾患部位を標的とする。
【０２６６】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、少なくとも１つの異種ポリペプチドを含み、それは受容体、ホルモン、サイトカイン、抗原、Ｂ細胞標的、ＮＫ細胞標的、Ｔ細胞標的、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー、ヘッジホッグファミリーメンバー、受容体型チロシンキナーゼ、プロテオグリカン関連分子、ＴＧＦ−βスーパーファミリーメンバー、Ｗｎｔ関連分子、受容体リガンド、樹状細胞標的、骨髄細胞標的、単核細胞／マクロファージ細胞標的、または血管新生標的であってよい。
【０２６７】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、少なくとも１つの抗原（例えば腫瘍抗原、自己抗原、アレルゲン、または病原体抗原）を含む。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ−２  Ｒａ、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ−２Ｒ  、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７−１／ＣＤ８０、ＩＬ−４Ｒ、Ｂ７−Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ、ＩＬ−６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ−７  Ｒａ、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ−８  ＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ−１０  Ｒａ、ＣＣＲ７、ＩＬ−１０  Ｒ、ＣＣＲ８、ＩＬ−１２  Ｒｉ、ＣＣＲ９、ＩＬ−１２  Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ−１３Ｒａｌ、ＩＬ−１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａ４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５、インテグリンａＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンａＭ／ＣＤｌ  ｌｂ、ＣＤ８、インテグリンａＸ／ＣＤ  １１ｃ、インテグリン２／ＣＤ１８、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２８、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ−３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤ８３、ロイコトリエンＢ４  Ｒｌ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ−Ｌｌ、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬ  ＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ−４、ＣＤ６９、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ−２  Ｒｙ、Ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ−１、ＣＲＴ  ＡＭ、ＰＳＧＬ−１、ＣＴＬＡ−４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１  Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ−セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰ  βi、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲＡＶＳＸ−１、ＤＮＡＭ−１、チモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、ＴＩＭ−１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ−２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ−３、Ｆａｓ  リガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ−４、Ｆｅｙ  ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ−６、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦ  Ｒｌ／ＴＮＦＲＳＦＩＡ、グラニュライシン、ＴＮＦ  Ｒ１１／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、Ｈ  ＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ  １４、ＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬ  Ｒ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ−γＲ１、ＴＲＡＩＬ  Ｒ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ−１  Ｒ１及びＴＳＬＰ  Ｒからなる群から選択されるＴ細胞標的を含む。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、Ｂ７−１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７−Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンａ４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンａＸ／ＣＤ１  ｌｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ラテクシン（Ｌａｔｅｘｉｎ）、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ロイコトリエンＢ４  Ｒｌ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩ／ＳＲ−Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ−１、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ−１、ＥＣＦ−Ｌ、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン（Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ）／ＧＰＮＭＢ、ＦｃγＲｌ／ＣＤ６４、オステオポンチン、ＦｃγＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ−Ｌ２、ＦｃγＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、ＦｃγＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＦｅｙＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ−ＣＳＦ  Ｒａ、ＴＣＣＲ  ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ−ｙ  Ｒｌ、ＴＬＲ４、ＩＦＮ−ｙ  Ｒ２、ＴＲＥＭ−１、ＩＬ−１  ＲＩＩ、ＴＲＥＭ−２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ−３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ−１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ−１０  Ｒａ、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ−１０  Ｒβ、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、インテグリン４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンａＭ／ＣＤ  ｌ  ｉｂ（ＣＣＲ８）、インテグリンＸ／ＣＤ  １１ｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４  Ｒｌ、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩ／ＳＲ−Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固因子Ｉｌｌ／Ｔｉｓｓｕｅ  Ｆａｃｔｏｒ、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ−１、ＣＸＣＲ６、Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＭＤ−１、ＤＮＡＭ−１、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＦｃγＲ１／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ−１、Ｆｃ Ｙ  ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ−ＣＳＦ  Ｒ、Ｌ−セレクチン、ＧＭ−ＣＳＦ  Ｒ、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、Ｈ  ＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ  １４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲＡＶＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ−１、ＩＬ−６  Ｒ、��ＲＥＭ−２、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ−８  ＲＡ、ＴＲＥＭ−３及びＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ−１からなる群から選択される少なくとも１つの単核細胞／マクロファージ細胞標的を含む。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＯＸ−１／ＳＲ−Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ−ＡＩ／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ−Ｉ、ＣＬ−Ｐ  １／ＣＯＬＥＣ  １２、ＳＲＥＣ−ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩ／ＳＲ−Ｂ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４−ＩＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９（ＩＬ−１２／ＩＬ−２３  ｐ４０、４−アミノ−１，８−ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８−オキソ−ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、インテグリンａ４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、ランゲリン（Ｌａｎｇｅｒｉｎ）、Ｂ７−２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４  Ｒ１、Ｂ７−Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ−４ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ−１、ＣＤ６８、ＭＤ−２、ＣＤ８３、ＭＤＬ−１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、オステオアクチビン（Ｏｓｔｅｏａｃｔｉｖｉｎ）／ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｍ  ２３、ＰＤ−Ｌ２、ＣＬＥＣ−１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ−２、Ｓｉｇｌｅｃ−２／ＣＤ２２、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、ＤＣ−ＳＩＧＮ、Ｓｉｇｌｅｃ−５、ＤＣ−ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、Ｓｉｇｌｅｃ−６、ＤＣＡＲ、Ｓｉｇｌｅｃ−７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、Ｓｉｇｌｅｃ−９、ＤＥＣ−２０５、Ｓｉｇｌｅｃ−１０、デクチン−１／ＣＬＥＣ７Ａ、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆ、デクチン−２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＦｃγＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、ＦｃγＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ−１、ＦｃγＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、ＴＲＥＭ−２、Ｆｃｙ  ＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ−３、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２及びバニロイドＲ１からなる群から選択される少なくとも１つの樹状細胞標的を含む。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＮＧＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１６、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、オステオプロテゲリン／ＴＮＦＲＳＦｌ  ｌＢ、Ｂ  ＣＭＡ／ＴＮＦＲＳＦ  １７、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１  Ａ、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、Ｔ  ＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ  １３Ｂ、ＤｃＲ３／ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦ  ＲＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＤｃＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ２３、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＤｃＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ２２、ＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＤＲ６／ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＲＡＩＬ  Ｒ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＥＤＡＲ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ４／ＴＮＦＲＳＦ  １０Ｄ、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＲＯ  Ｙ／ＴＮＦＲＳＦ  １９、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＷＥＡＫ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１２、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＸＥＤＡＲ、リンフォトキシンβＲ／ＴＮＦＲＳＦ３、４−１ＢＢ  リガンド／ＴＮＦＳＦ９、リンフォトキシン、ＡＰＲＩＬ／ＴＮＦＳＦ  １３、リンフォトキシン／ＴＮＦＳＦ３、ＢＡＦＦ／ＴＮＦＳＦ１３Ｃ、ＯＸ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦ−ａ／ＴＮＦＳＦＩＡ、ＣＤ４０  リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦ−／ＴＮＦＳＦｌＢ、ＥＤＡ−Ａ２、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦＳＦＩＯ、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＲ  ＡＮＣＥ／ＴＮＦＳＦ  １１、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦＳＦＬ  ２及びＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４からなる群から選択される少なくとも１つのＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーを含む。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、パッチド及びスムーズンドからなる群から選択される少なくとも１つのヘッジホッグファミリーメンバーを含む。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、Ａｘｌ、ＦＧＦ  Ｒ４、Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、ＦＧＦ  Ｒ５、ＤＤＲ１、Ｆｌｔ−３、ＤＤＲ２、ＨＧＦ  Ｒ、Ｄｔｋ、ＩＧＦ−Ｉ  Ｒ、ＥＧＦ  Ｒ、ＩＧＦ−ＩＩ  Ｒ、Ｅｐｈ、ＩＮＳＲＲ、ＥｐｈＡｌ、インスリンＲ／ＣＤ２２０、ＥｐｈＡ２、Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ、ＥｐｈＡ３、Ｍｅｒ、ＥｐｈＡ４、ＭＳＰ  Ｒ／Ｒｏｎ、ＥｐｈＡ５、ＭｕＳＫ、ＥｐｈＡ６、ＰＤＧＦ  Ｒａ、ＥｐｈＡ７、ＰＤＧＦ  Ｒβ、ＥｐｈＡ８、Ｒｅｔ、ＥｐｈＢｌ、ＲＯＲｌ、ＥｐｈＢ２、ＲＯＲ２、ＥｐｈＢ３、ＳＣＦ  Ｒ／ｃ−ｋｉｔ、ＥｐｈＢ４、Ｔｉｅ−１、ＥｐｈＢ６、Ｔｉｅ−２、ＥｒｂＢ２、ＴｒｋＡ、ＥｒｂＢ３、ＴｒｋＢ、ＥｒｂＢ４、ＴｒｋＣ、ＦＧＦ  Ｒｌ、ＶＥＧＦ  Ｒｌ／Ｆｌｔ−１、ＦＧＦ  Ｒ２、ＶＥＧＦ  Ｒ２／Ｆｌｋ−１、ＦＧＦ  Ｒ３、及びＶＥＧＦ  Ｒ３／Ｆｌｔ−４からなる群から選択される少なくとも１つの受容体型チロシンキナーゼを含む。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、アクチビンＲＩＡ／ＡＬＫ−２、ＧＦＲ  ａ−１、アクチビンＲＩＢ／ＡＬＫ−４、ＧＦＲ  ａ２、アクチビンＲＨＡ、ＧＦＲ  ａ−３、アクチビンＲＵＢ、ＧＦＲ  ａ−４、ＡＬＫ−１、ＭＩＳ  ＲＩＩ、ＡＬＫ−７、Ｒｅｔ、ＢＭＰＲ−ＩＡ／ＡＬＫ−３、ＴＧＦ−ｂｅｔ  ａ  Ｒｌ／ＡＬＫ−５、ＢＭＰＲ−ＩＢ／ＡＬＫ−６、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＢＭＰＲ−ＩＩ、ＴＧＦ−βＲｌｌｂ、エンドグリン／ＣＤ  １０５及びＴＧＦ−βＲＩＩＩからなる群から選択される少なくとも１つのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）スーパーファミリーメンバーを含む。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−８、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−２、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−９、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−３、ｓＦＲＰ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４、ｓＦＲＰ−２、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−５、ｓＦＲＰ−３、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−６、ｓＦＲＰ−４、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−７、ＭＦＲＰ、ＬＲＰ  ５、ＬＲＰ  ６、Ｗｎｔ−１、Ｗｎｔ−８ａ、Ｗｎｔ−３ａ、Ｗｎｔ−ｌＯｂ、Ｗｎｔ−４、Ｗｎｔ−１１、Ｗｎｔ−５ａ、Ｗｎｔ−９ａ及びＷｎｔ−７ａからなる群から選択される少なくとも１つのＷｎｔ関連分子を含む。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、リンフォトキシン、ＡＰＲＩＬ／ＴＮＦＳＦ  １３、リンフォトキシン／ＴＮＦＳＦ３、ＢＡＦＦ／ＴＮＦＳＦ１３Ｃ、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦ−ａ／ＴＮＦＳＦＩＡ、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦ−β／ＴＮＦＳＦ  １  Ｂ、ＥＤＡ−Ａ２、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦＳＦ１０、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＲＡＮＣＥ／ＴＮＦＳＦ１１  １、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＴＷＥＡＫ  ＴＮＦＳＦ１２、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、アンフィレグリン、ＮＲＧ１アイソフォームＧＧＦ２、ベータセルリン、ＮＲＧ１アイソフォームＳＭＤＦ、ＥＧＦ、ＮＲＧｌ−ａ  ＨＲＧｌ−ａ、エピジェン、ＮＲＧｌ−β１／ＨＲＧｌ−β１、エピジェン、ＴＧＦ−ａ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＭＥＦＦｌ／トモレグリン（Ｔｏｍｏｒｅｇｕｌｉｎ）−１、ニューレグリン−３、ＴＭＥＦＦ２、ＩＧＦ‐Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、インスリン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−３、ＢＭＰ−８、ＢＭＰ−３ｂ／ＧＤＦ−１０、ＢＭＰ−９、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−１５、ＢＭＰ−５、デカペンタプレジック、ＢＭＰ−６、ＧＤＦ−１、ＧＤＦ−８、ＧＤＦ−３、ＧＤＦ−９、ＧＤＦ−５、ＧＤＦ−１１、ＧＤＦ−６、ＧＤＦ−１５、ＧＤＦ−７、アルテミン（Ａｒｔｅｍｉｎ）、ニュールツリン、ＧＤＮＦ、パーセフィン、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β３、ＬＡＰ（ＴＧＦ−β１）、ＴＧＦ−β５、Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β１、Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−βｂｐｌ、ＴＧＦ−β１．２、Ｌｅｆｔｙ、Ｎｏｄａｌ、ＭＩＳ／ＡＭＨ、酸性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１２、塩基性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−１７、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−２０、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−２１、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−２３、ＦＧＦ−１０、ＫＧＦ／ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−１１、ニューロピリン−１、Ｐ１ＧＦ、ニューロピリン−２、Ｐ１ＧＦ−２、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｄ及びＰＤＧＦ−ＡＢからなる群から選択される少なくとも１つの受容体リガンドを含む。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、扁平上皮細胞癌抗原１（ＳＣＣＡ−１）、（ＰＲＯＴＥＩＮ  Ｔ４−Ａ）、扁平上皮細胞癌抗原２（ＳＣＣＡ−２）、卵巣癌腫抗原ＣＡ１２５（１Ａ１−３Ｂ；ＫＩＡＡ００４９）、ムチン１（腫瘍関連ムチン；癌腫関連ムチン；多型上皮ムチン；ＰＥＭ；ＰＥＭＴ；ＥＰＩＳＩＡＬＩＮ；腫瘍関連上皮膜抗原；ＥＭＡ；Ｈ２３ＡＧ；落花生反応性泌尿器ムチン（Ｐｅａｎｕｔ−Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｕｒｉｎａｒｙ  Ｍｕｃｉｎ）；ＰＵＭ；及び乳癌関連抗原ＤＦ３）、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅｌ−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅｌ４−３、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ２０−４、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ２０−９、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ３３−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ３７−２、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ５７−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ８９−１前立腺特異的膜抗原、５Ｔ４癌胎児性栄養膜糖タンパク質、Ｏｒｆ７３カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＭＡＧＥ−Ｃ１（癌／精巣抗原ＣＴ７）、ＭＡＧＥ−Ｂ１抗原（ＭＡＧＥ−ＸＰ抗原；ＤＡＭ１０）、ＭＡＧＥ−Ｂ２抗原（ＤＡＭ６）、ＭＡＧＥ−２抗原、ＭＡＧＥ−４ａ抗原、ＭＡＧＥ−４ｂ抗原、大腸癌抗原ＮＹ−ＣＯ−４５、肺癌抗原ＮＹ−ＬＵ−１２変異体Ａ、癌関連表面抗原、腺癌抗原ＡＲＴ１、腫瘍随伴性脳・精巣癌抗原（腫瘍神経細胞（ｏｎｃｏｎｅｕｒｏｎａｌ）抗原ＭＡ２；腫瘍随伴性神経細胞抗原）、神経腫瘍学的腹部抗原２（ＮＯＶＡ２）、肝細胞癌抗原遺伝子５２０、腫瘍関連抗原ＣＯ−０２９、腫瘍関連抗原ＭＡＧＥ−Ｘ２、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２、Ｔ細胞により認識される扁平上皮細胞癌抗原、血清学的規定大腸癌抗原１、血清学的規定乳癌抗原ＮＹ−ＢＲ−１５、血清学的規定乳癌抗原ＮＹ−ＢＲ−１６、クロモグラニンＡ、副甲状腺分泌タンパク質１、ＤＵＰＡＮ−２、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡ  １９５並びにＬ６からなる群から選択される少なくとも１つの腫瘍抗原を含む。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗｌ３０、ＣＤ１３８及びＣＤｗｌ５０からなる群から選択される少なくとも１つのＢ細胞標的を含む。
【０２７９】
いくつかの実施形態においては、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、アンジオポエチン−１、アンジオポエチン様２、アンジオポエチン−２、アンジオポエチン様３、アンジオポエチン−３、アンジオポエチン様７／ＣＤＴ６、アンジオポエチン−４、Ｔｉｅ−１、アンジオポエチン様１、Ｔｉｅ−２、アンジオジェニン、ｉＮＯＳ、 凝固因子Ｉｌｌ／組織因子、ｎＮＯＳ、ＣＴＧＦ／ＣＣＮ２、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＤＡＮＣＥ、ＯＳＭ、ＥＤＧ−１、Ｐｌｆｒ、ＥＧ−ＶＥＧＦ／ＰＫ１、プロリフェリン、エンドスタチン、ＲＯＢ  ０４、エリスロポエチン、トロンボスポンジン−１、キニノスタチン（Ｋｉｎｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、 トロンボスポンジン−２、ＭＦＧ−Ｅ８、トロンボスポンジン−４、一酸化窒素、ＶＧ５Ｑ、ｅＮＯＳ、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ６、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ８、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ４、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ６、ＥｐｈＢ３、エンフリン−Ａ１、 エフリン−Ａ４、エフリン−Ａ２、エフリン−Ａ５、エフリン−Ａ３、エフリン−Ｂ１、エフリン−Ｂ３、エフリン−Ｂ２、酸性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１２、塩基性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−１７、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−２０、ＦＧＦ−８、 ＦＧＦ−２１、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−２３、ＦＧＦ−１０、ＫＧＦ／ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−１１、ＦＧＦ  Ｒ１、ＦＧＦ  Ｒ４、ＦＧＦ  Ｒ２、ＦＧＦ  Ｒ５、ＦＧＦ  Ｒ３、ニューロピリン−１、ニューロピリン−２、セマフォリン３Ａ、セマフォリン６Ｂ、セマフォリン３Ｃ、セマフォリン６Ｃ、セマフォリン３Ｅ、セマフォリン６Ｄ、セマフォリン６Ａ、セマフォリン７Ａ、ＭＭＰ、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１、 ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１６／ＭＴ３−ＭＭＰ、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−２４／ＭＴ５−ＭＭＰ、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−２５／ＭＴ６−ＭＭＰ、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−３、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−４、ＡＣＥ、 ＩＬ−１３  Ｒａ  １（ＩＬ−１３）Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、インテグリン４／ＣＤ４９ｄ、ＶＥ−カドヘリン、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＫＬＦ４、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＹＶＥ−１、ＣＤ１５１、ＭＣＡＭ、ＣＬ−Ｐ１／ＣＯＬＥＣ１２、ネクチン−２／ＣＤ１１２、 凝固因子Ｉｌｌ／組織因子、Ｅ−セレクチン、Ｄ６、Ｐ−セレクチン、ＤＣ−ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、Ｔｉｅ−２、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＴＮＦ  ＲＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＥＰＣＲ、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、 エリスロポイエチンＲ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＥＳＡＭ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＦＡＢＰ５、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＶＥＧＦ  Ｒ２／Ｆｌｋ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＶＥＧＦ  Ｒ３／Ｆｌｔ−４、ＩＬ−１  ＲＩ及びＶＧ５Ｑからなる群から選択される少なくとも１つの血管新生標的を含む。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドを含み、少なくとも１つの異種ポリペプチド、及び／もしくは結合部位またはＶＳＩＧ８ポリペプチドは、アミノ酸スペーサーにより互いに結合している。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、ＶＳＩＧ８ポリペプチドを含み、少なくとも１つの異種ポリペプチド、及び／もしくは結合部位またはＶＳＩＧ８ポリペプチドは、十分な長さのアミノ酸残基のアミノ酸スペーサーにより互いに結合されるため、異なる部位が個々の標的に上手く結合することができる。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、本明細書にて開示する、２〜１０個のＶＳＩＧ８  ＥＣＤポリペプチドのいずれか、またはその断片を含む。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、１つ以上のＶＳＩＧ８ポリペプチド、及び、ＶＳＩＧ８ポリペプチドの断片ではないポリペプチドを任意で含む異種リンカーにより任意で中断される、少なくとも１つの異種ポリペプチドを含む。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、５〜５０個のアミノ酸残基、より好ましくは５〜２５個のアミノ酸残基を含むペプチドであるリンカーを含む。
【０２８５】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、グリシン、セリン、及び／またはアラニン残基を含むか、これらから本質的になるリンカーを含む。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質は、５〜５０個、５〜２５個、５〜１５個、４〜１４個、４〜１２個、またはそれ以上のアミノ酸残基を含む、例えばグリシン、セリン及び／またはアラニン残基を含むか、またはこれらからなり得るリンカーを含む。
【０２８７】
ペプチドまたはポリペプチドリンカードメイン
ＶＳＩＧ８融合タンパク質は任意で、第２のポリペプチドからＶＳＩＧ８ポリペプチドを分離する、ペプチドまたはポリペプチドリンカードメインを含有してよい。かかるリンカードメインの種々の非限定的例は、本明細書に記載されている。一実施形態では、リンカードメインは、免疫グロブリンのヒンジ領域を含有する。更なる実施形態において、ヒンジ領域はヒト免疫グロブリンに由来する。ヒンジが由来することができる好適なヒト免疫グロブリンとしては、ＩｇＧ、ＩｇＤ及びＩｇＡが挙げられる。更なる実施形態において、ヒンジ領域はヒトＩｇＧに由来する。免疫グロブリンヒンジ領域と他のドメインのアミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。別の実施形態において、リンカードメインは任意で上述した免疫グロブリンのヒンジ領域を含有し、１つ以上の追加の免疫グロブリンドメインを更に含む。
【０２８８】
他の好適なペプチド／ポリペプチドリンカードメインは任意で、天然、または非天然のペプチドまたはポリペプチドを含む。ペプチドリンカー配列は、少なくとも長さが２個のアミノ酸である。任意で、ペプチドまたはポリペプチドドメインは、柔軟なペプチドまたはポリペプチドである。本明細書において、「柔軟なリンカー」とは、柔軟なリンカーの不存在下で結合した２つのポリペプチドよりも、結合した２つのポリペプチドの回転自由度を増加させるペプチド結合により結合する２つ以上のアミノ酸残基を含有するペプチドまたはポリペプチドを指す。かかる回転自由度により、柔軟なリンカーにより結合した２つ以上の抗原結合部位がそれぞれ、より効率的に標的抗原に接近することを可能にする。
【０２８９】
例示的な柔軟なペプチド／ポリペプチドとしては、アミノ酸配列Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ａｌａ−  Ｓｅｒ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−  Ｇｌｙ−Ｓｅｒ、Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）２、（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３、（Ｇｌｙ４−  Ｓｅｒ）４、［Ｇｌｙ４−Ｓｅｔ］２  Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ  Ｇｌｙ−（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）２、Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−  Ｇｌｙ２  ａｎｄ  Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ２−Ｓｅｒが挙げられるが、これらに限定されない。更なる柔軟なペプチド／ポリペプチド配列が、当該技術分野において周知である。他の好適なペプチドリンカードメインとしては、任意で、タバコＥｔｃｈウイルスプロテアーゼにより認識される直線状エピトープである、ＴＥＶリンカーＥＮＬＹＦＱＧが挙げられる。例示的なペプチド／ポリペプチドとしては、ＧＳＥＮＬＹＦＱＧＳＧ、及び、Ａｌａ−（Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ）ｎ−Ａｌａ（ｎ＝１〜５）等のヘリックス形成リンカーが挙げられるが、これらに限定されない。更なるヘリックス形成ペプチド／ポリペプチド配列が、当該技術分野において周知である。いくつかの任意の実施形態において、ＶＳＩＧ８断片（例えばＥＣＤ断片）が互いに結合し（多量体）、かつ／または、１つ以上のＶＳＩＧ８断片（例えばＥＣＤ断片）が、ペプチドリンカー、好ましくは「柔軟なリンカー」配列により、免疫グロブリンまたはその断片、特に、免疫グロブリン重鎖またはその断片等の異種ポリペプチドに結合する。リンカー配列は、ＶＳＩＧ８断片及び異種ポリペプチド（免疫グロブリンポリペプチドまたはそのドメイン等）の効果的な配置を可能にすることで、両方の部位、及びそのドメインの機能活性を可能にする筈である。ポリペプチド融合体を上手く提示することにより、細胞の活性を制御して、Ｔ細胞増殖を誘発もしくは阻害するか、または、特定の部位に対する免疫応答の開始もしくは阻害のいずれかを行うことができる。このことは、Ｔ細胞を培養してそれを増殖し、Ｔ細胞を本発明に従った融合ポリペプチド、またはそれを発現する細胞と接触させ、その後、融合ポリペプチドがＴ細胞増殖を促進するのか阻害するかを評価する連続ステップを含むｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを含む、本明細書の以下で記載する適切なアッセイで決定することができる。
【０２９０】
本明細書で使用する場合、「異種ポリペプチド及びＶＳＩＧ８ポリペプチドの効果的な配置」という表現、または他の類似の表現は、ＶＳＩＧ８ドメイン及び異種ポリペプチドドメインが、免疫または他の標的細胞（例えば、癌細胞または他のＶＳＩＧ８発現細胞）と相互作用し、免疫反応を開始もしくは阻害するか、または細胞の成長を阻害もしくは刺激することができるように、これらの部位のドメインが配置されることを意味することを意図している。
【０２９１】
ＶＳＩＧ８−Ｉｇ融合タンパク質に関して、リンカー配列は、ＦｃドメインとＶＳＩＧ８ドメインを効果的に配置して、各ドメインを機能的に活性化させるのもまた可能にするのが好ましい。ある特定の実施形態において、Ｆｃドメインは効果的に配置され、適切な融合タンパク質複合体の形成、及び／または補体系の免疫細胞またはタンパク質上のＦｃ受容体との相互作用による、オプソニン作用、細胞溶解、肥満細胞・好塩基球及び好酸球の脱顆粒、及びＦｃ受容体依存性の他のプロセスを含む、Ｆｃが仲立ちする効果の刺激；補体経路の活性化；並びに、融合タンパク質複合体のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の向上を可能にする。
【０２９２】
リンカー配列は、本発明に従った融合タンパク質と共に上で論じている。リンカー配列を任意で使用して、生物学的に活性なポリペプチドの２つ以上のＶＳＩＧ８ポリペプチドを結合し、所望の機能活性を有する一本鎖分子を生成することができる。いくつかの好ましい実施形態においては、リンカー配列は、約５〜２０個のアミノ酸、より好ましくは約７または８〜約１６個のアミノ酸を含む。リンカー配列は、ＶＳＩＧ８ポリペプチド、及びこれに結合した部位（例えば、１つの望ましくない構造の中のエフェクター分子）を保持しないように柔軟であるのが好ましい。リンカー配列を使用して、例えば、融合分子から認識部位を離間することができる。具体的には、ペプチドリンカー配列を、生物学的に活性なＶＳＩＧ８ポリペプチドとエフェクター分子の間に配置して、例えばこれらを化学的に架橋し、分子の柔軟性をもたらすことができる。いくつかの実施形態において、リンカーは主として、小さい側鎖を有するアミノ酸（グリシン、アラニン及びセリン等）を含み、柔軟性を提供する。リンカー配列の約８０または９０％、またはそれ以上が、グリシン、アラニンまたはセリン残基、特にグリシン及びセリン残基を含むのが好ましい。他の好適なリンカー配列としては、抗体可変領域を互いに上手く結合するために使用されている柔軟なリンカー設計が挙げられる（Ｗｈｉｔｌｏｗ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）  Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２：９７−１０５を参照のこと）。いくつかの実施例では、エフェクター分子をＶＳＩＧ８分子に共有結合するために、リンカーのアミノ配列は、ＶＳＩＧ８ポリペプチドのＣ末端残基からエフェクター分子のＮ末端残基まで、好適な距離を置くことができなければならない。好適なリンカー配列は、実験により速やかに同定することができる。加えて、リンカー配列の好適なサイズと配列は、融合ポリペプチドの予測サイズ及び形状に基づく、既知のコンピュータモデリング技術によってもまた決定することができる。他のリンカー配列は、本発明に従った融合タンパク質と共に上で論じている。
【０２９３】
本明細書に記載したポリペプチドは、任意で互いに結合した２〜２０個のＶＳＩＧ８  ＥＣＤポリペプチド断片を含む。任意で、断片には、ＶＳＩＧ８ポリペプチドの断片ではないポリペプチドを任意で含む、異種リンカーが介在する。
【０２９４】
任意で、リンカーは、５〜５０個のアミノ酸残基、より好ましくは５〜２５個のアミノ酸残基を含むペプチドである。任意で、リンカーは、４〜１２個のグリシン、セリン及び／またはアラニン残基を含むか、これから本質的になるか、またはこれからなる。
【０２９５】
二量体化、多量体化及び標的化ドメイン
本明細書にて開示したＶＳＩＧ８融合タンパク質は、任意で、２つ以上の融合タンパク質を二量体化、オリゴマー化または多量体化するために機能する、二量体化または多量体化またはオリゴマー化ドメインを含有し、これらの融合タンパク質は、同じであっても異なっていてもよい（ヘテロ多量体またはホモ多量体）。例えば、ＶＳＩＧ８融合タンパク質を、別のＶＳＩＧ８融合タンパク質または別の部位、例えば、別の共刺激融合タンパク質に結合してよい。融合タンパク質を二量体化または多量体化するために機能するドメインは個別のドメインとすることもでき、あるいは、融合タンパク質の他のドメイン（ＶＳＩＧ８ポリペプチド、第２のポリペプチド、またはペプチド／ポリペプチドリンカードメイン）の１つの中に含有することもできる。
【０２９６】
二量体化または多量体化は、二量体化または多量体化ドメインを介して、２つの融合タンパク質の間、または３つ以上の融合タンパク質の中に生じることができる。あるいは、融合タンパク質の二量体化または多量体化は、化学架橋により生じることができる。形成した二量体または多量体は、ホモ二量体／ホモ多量体、またはヘテロ二量体／ヘテロ多量体であることができる。ＶＳＩＧ８融合ポリペプチド内の第２のポリペプチド「パートナー」は、任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）タンパク質またはその一部、好ましくは、Ｆｃ領域、または、パピローマウイルスＥ７遺伝子産物、黒色腫関連抗原（ｐ９７）及びＨＩＶエンベロープタンパク質（ｇｐｌ２０）等の、生物学的もしくは化学的に活性なタンパク質の一部を含むがこれらに限定されない、本明細書に記載した１つ以上の他のタンパク質、タンパク質断片またはペプチドからなってもよい。「パートナー」は任意で、本明細書に記載した可溶性二量体／多量体、及び／または１つ以上の他の生物活性を提供するために選択される。
【０２９７】
「二量体化ドメイン」は、少なくとも２つのアミノ酸残基、または少なくとも２つの（同一もしくは異なるアミノ酸配列を有し得る）ペプチドもしくはポリペプチドの会合により形成される。ペプチドまたはポリペプチドは、共有及び／または非共有会合により相互作用してよい。任意の二量体化ドメインは、パートナー融合タンパク質のシステインと分子間ジスルフィド結合を形成できる、少なくとも１つのシステインを含有する。二量体化ドメインは、ジスルフィド結合をパートナー融合タンパク質間で形成することができるように、１つ以上のシステイン残基を含有することができる。一実施形態では、二量体化ドメインは、１、２、また３〜約１０個のシステイン残基を含有する。更なる実施形態において、二量体化ドメインは、免疫グロブリンのヒンジ領域である。
【０２９８】
更なる例示的な二量体化ドメインは、任意の当該技術分野において既知であることができ、コイルドコイル、酸パッチ、ジンクフィンガー、カルシウムハンド、ＣＨ１−ＣＬ対、米国特許第５，８２１，３３３号に記載されている、改変「ノブ」及び／もしくは「突出部」を有する「界面」、（例えば、ｊｕｎ及び／またはｆｏｓからの）ロイシンジッパー（米国特許第５，９３２，４４８号）、並びに／または酵母菌転写活性化因子ＧＣＮ４、ＳＨ２（ｓｒｃ相同性２）、ＳＨ３（ｓｒｃ相同性３）（Ｖｉｄａｌ，ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４３，７３３６−４４（（２００４））、ホスホチロシン結合（ＰＴＢ）（Ｚｈｏｕ，ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３７８：５８４−５９２（１９９５））、ＷＷ（Ｓｕｄｏｌ，Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｃｈｙｓ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．，６５：１１３−１３２（１９９６））ＰＤＺ（Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ，３７８：８５−８８（１９９５）；Ｋｏｍａｕ，ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６９．１７３７−１７４０（１９９５））１４−３−３、ＷＤ４０（Ｈｕ５  ｅｔ  ａｌ．，／  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２７３：３３４８９−３３４９４（１９９８））ＥＨ、Ｌｉｍ、イソロイシンジッパー、受容体二量体対（例えばインターロイキン−８受容体（ＩＬ−８Ｒ）；並びにＬＦＡ−Ｉ及びＧＰＩＩＩｂ／ＩＩＩａ等のインテグリンヘテロ二量体）、またはこれらの二量体化領域、二量体リガンドポリペプチド（例えば、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＤＧＦメンバー）、並びに、脳由来の神経栄養因子（ＢＤＮＦ）（Ａｒａｋａｗａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９（４５）：２７８３３−２７８３９（１９９４）及びＲａｄｚｉｅｊｅｗｓｋｉ，ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３２（４８）：１３５０（１９９３））が挙げられるが、これらに限定されず、また、親和性が変化したこれらのドメインの変異体とすることもできる。ポリペプチド対は、酵母菌ツーハイブリッドスクリーンを含む、当該技術分野において公知の方法により同定することができる。酵母菌 ツーハイブリッドスクリーンは、米国特許第５，２８３，１７３号及び６，５６２，５７６号に記載されている。相互作用するドメイン対間の親和性は、Ｋａｔａｈｉｒａ，ｅｔ  ａｌ．，／．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２７７，９２４２−９２４６（２００２）） に記載されているものを含む、当該技術分野において既知の方法を使用して測定することができる。あるいは、例えばＷＯ０１／００８１４に記載されている方法を使用して、ヘテロ二量体化に関してペプチド配列のライブラリーをスクリーニングすることができる。タンパク質−タンパク質の相互作用の有用な方法は、米国特許第６，７９０，６２４号にも記載されている。
【０２９９】
本明細書において言及される「多量体化ドメイン」または「オリゴマー化ドメイン」とは、３つ以上のペプチドまたはポリペプチドを、共有及び／または非共有結合を介して互いに相互作用させるドメインである。好適な多量体化またはオリゴマー化ドメインとしては、コイルドコイルドメインが挙げられるが、これに限定されない。コイルドコイルとは、通常は、７つのアミノ酸（７塩基の繰り返し）または１１個のアミノ酸（１１塩基の繰り返し）の配列内に存在する、３〜４残基離間した、主に疎水性残基の連続パターンを有するペプチド配列であり、これらがアセンブルし（折りたたまれて）、ヘリックスの多量体バンドルを形成する。３〜４残基離間した、いくつかの不規則な分布を含む配列を有するコイルドコイルもまた、企図される。疎水性残基は特に、疎水性アミノ酸のＶａｌ、Ｈｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ及びＴｒｐである。「主に疎水性の」とは、少なくとも５０％の残基が、前述の疎水性アミノ酸から選択されなければならないことを意味する。
【０３００】
コイルドコイルドメインは、ラミニンに由来してもよい。細胞外間隙において、ヘテロ三量体のコイルドコイルタンパク質であるラミニンは、基底膜の形成に重要な役割を果たす。多機能性オリゴマー構造が、ラミニン形成のために必要であるのは明白である。コイルドコイルドメインは、３つ（ＴＳＰ−１及びＴＳＰ−２）もしくは５つ（ＴＳＰ−３、ＴＳＰ−４及びＴＳＰ−５）の鎖が接続しているトロンボスポンジンから、または、平行の５本鎖コイルドコイル（Ｍａｌａｓｈｋｅｖｉｃｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７４：７６１−７６５（１９９６））の中で折りたたまれるＣＯＭＰ（ＣＯＭＰｃｃ）（Ｇｕｏ，ｅｔ  ａｔ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１９９８，１７：５２６５−５２７２）に由来してもよい。他のタンパク質に由来するコイルドコイルドメイン、及びポリペプチドの多量体化を仲立ちするドメインの更なる非限定的例が、当技術分野において既知であり、例えば血管拡張薬刺激リンタンパク質（ＶＡＳＰ）ドメイン、マトリリン−１（ＣＭＰ）、ウイルス性融合ペプチド、可溶性ＮＳＦ（Ｎ−エチルマレイミド感受性因子）付着タンパク質受容体（ＳＮＡＲＥ）複合体、ロイシンリッチリピート、ある特定のｔＲＮＡシンセターゼが、開示した融合タンパク質での使用に好適である。
【０３０１】
別の実施形態において、ＶＳＩＧ８ポリペプチド、融合タンパク質またはこれらの断片を誘発して、抗体等の第２の多価ポリペプチドに結合することにより、多量体を形成することができる。ＶＳＩＧ８ポリペプチド、融合タンパク質、またはこれらの断片を多量体化するために使用するのに好適な抗体としては、ＩｇＭ抗体、及び架橋した多価ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ複合体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３０２】
二量体化または多量体化は、上述のものを含む二量体化または多量体化を介して、２つの融合タンパク質間で、または３つ以上の融合タンパク質の中で生じることができる。あるいは、融合タンパク質の二量体化または多量体化は、化学架橋により生じることができる。融合タンパク質二量体は、ホモ二量体またはヘテロ二量体であることができる。融合タンパク質多量体は、ホモ多量体またはヘテロ多量体であることができる。
【０３０３】
本明細書にて開示する融合タンパク質二量体は、式ＩＩ：
Ｎ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｃ
Ｎ−Ｒ４−Ｒ５−Ｒ６−Ｃ、を有するか、あるいは、式ＩＩＩ：
Ｎ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｃ
Ｃ−Ｒ４−Ｒ５−Ｒ６−Ｎを有し、式中、式ＩＩで提供される二量体の融合タンパク質は、平行に配向しているものと規定され、式ＩＩＩで提供される二量体の融合タンパク質は、逆平行に配向しているものと規定される。平行及び逆平行二量体はそれぞれ、シス及びトランス二量体ともまた呼ばれる。「Ｎ」と「Ｃ」はそれぞれ、融合タンパク質のＮ及びＣ末端を表す。融合タンパク質の成分「Ｒ１」、「Ｒ２」及び「Ｒ３」は、式Ｉに関して上述のとおりである。式ＩＩと式ＩＩＩの両方に関して、「Ｒ４」はＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは第２のポリペプチドであり、「Ｒ５」は任意のペプチド／ポリペプチドリンカードメインであり、「Ｒ６」はＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは第２のポリペプチドであり、ここで、「Ｒ４」が第２のポリペプチドである場合、「Ｒ６」はＶＳＩＧ８ポリペプチドであり、「Ｒ４」がＶＳＩＧ８ポリペプチドである場合、「Ｒ６」は第２のポリペプチドである。一実施形態では、「Ｒ１」はＶＳＩＧ８ポリペプチドであり、「Ｒ４」もまたＶＳＩＧ８ポリペプチドであり、かつ、「Ｒ３」及び「Ｒ６」は共に第２のポリペプチドである。
【０３０４】
式ＩＩの融合タンパク質二量体は、「Ｒ１」＝「Ｒ４」、「Ｒ２」＝「Ｒ５」、かつ「Ｒ３」＝「Ｒ６」である場合にホモ二量体と定義される。同様に、式ＩＩＩの融合タンパク質二量体は、「Ｒ１」＝「Ｒ６」、「Ｒ２」＝「Ｒ５」、及び「Ｒ３」＝「Ｒ４」である場合にホモ二量体と定義される。これらの条件がいかなる理由によっても満たされない場合に、融合タンパク質二量体はヘテロ二量体と定義される。例えば、ヘテロ二量体は、これらの条件を満たす（即ち、式ＩＩの二量体に関して、「Ｒ１」及び「Ｒ４」は共にＶＳＩＧ８ポリペプチドであり、「Ｒ２」及び「Ｒ５」は共にペプチド／ポリペプチドリンカードメインであり、かつ、「Ｒ３」及び「Ｒ６」は共に第２のポリペプチドである）ドメイン配向を含有してよいが、これらのドメインの１つ以上の種は同一ではない。例えば、「Ｒ３」及び「Ｒ６」が共にＶＳＩＧ８ポリペプチドであってよいが、あるポリペプチドは野生型ＶＳＩＧ８アミノ酸配列を含有してよく、一方で、他のポリペプチドは変異型ＶＳＩＧ８ポリペプチドであってよい。例示的な変異ＶＳＩＧ８ポリペプチドは、標的細胞への結合が増減し、免疫細胞での活性が増大し、半減期または安定性が増減するように改変されたＶＳＩＧ８ポリペプチドである。ポリペプチドリンカードメインの一部として、免疫グロブリンのＣＨ１またはＣＬ領域のいずれかを含有する融合タンパク質の二量体は、ヘテロ二量体を形成することが好ましく、ここで、二量体の１つの融合タンパク質はＣＨ１領域を含有し、二量体の他の融合タンパク質はＣＬ領域を含有する。
【０３０５】
融合タンパク質を使用して、多量体を形成することもまた可能である。二量体と同様に、多量体は平行多量体であってよく、ここにおいては、多量体の全ての融合タンパク質がＮ及びＣ末端に対して同一方向に配置されている。多量体は逆平行多量体であってよく、ここにおいては、多量体の融合タンパク質は代わりに、Ｎ及びＣ末端に対して反対方向に配置されている。多量体（平行または逆平行）は、ホモ多量体またはヘテロ多量体のいずれかであることができる。融合タンパク質は任意で二量体形態で作製され、より好ましくは、融合は、２つ（またはそれ以上の）タンパク質、タンパク質の一部、及び／またはペプチドに対応するポリヌクレオチド配列を結合することにより、結合した、または融合したタンパク質が、結合したポリヌクレオチド配列に関する細胞により作製されるように、後述するように遺伝子レベルで行われる。かかる融合タンパク質の調製についての記述は、米国特許第５，８５１，７９５号（Ｌｉｎｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ，．）に記載されており、これは非限定的例のみとして、本明細書に全体が記載されているかのように参照として本明細書に組み込まれている。
標的化ドメイン
【０３０６】
ＶＳＩＧ８ポリペプチド及び融合タンパク質は、標的化ドメインを含有し、体内の特定の部位に分子を標的化することができる。任意の標的化ドメインが、炎症領域に分子を標的化する。例示的な標的化ドメインは、ＩＬ１７、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＭＩＦ、ＴＮＦ−ａ、及びＴＮＦ−β、並びにこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない、炎症組織、または炎症性サイトカインに対して特異的な抗体またはその抗原結合断片である。多発性硬化症等の神経疾患の場合、標的化ドメインは分子を、ＣＮＳに対して標的化し得るか、または血管上皮にてＶＣＡＭ−Ｉに結合し得る。追加の標的化ドメインは、炎症性分子に対して特異的なペプチドアプタマーであることができる。別の実施形態において、ＶＳＩＧ８融合タンパク質は、免疫細胞（例えばＴ細胞）の表面上に提示されるポリペプチドに対して特異的な結合パートナーを含むことができる。更に別の実施形態では、標的化ドメインは、活性化免疫細胞を特異的に標的とする。標的化される任意の免疫細胞としては、Ｔｈ０、Ｔｈ１、Ｔｈ１７、Ｔｈ２及びＴｈ２２  Ｔ細胞、ＩＬ−Ｉβ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１７、ＩＬ−６、ＩＬ−２３、ＩＬ−２２、ＩＬ−２１、及びＭＭＰを含むがこれらに限定されない炎症性分子を分泌する他の細胞、または、他の細胞にこれらの炎症性分子を分泌させる他の細胞並びにＴｒｅｇが挙げられる。例えば、Ｔｒｅｇに対する標的化ドメインは、ＣＤ２５に特異的に結合してよい。
【０３０７】
本発明に従ったＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質内で任意で結合、またはこの中に含有され得る、他の標的化部位または異種ポリペプチドは、本発明に従った例示的な融合タンパク質の合成と共に上で論じられている。
【０３０８】
上記の変化は、任意の変化の単なる解説を意図するものであり、いかなる方法においても限定を行うことを意図するものではない。更に、上記説明は説明目的のために提供され、単一の仮説により束縛されることを望まない。
【０３０９】
基の付加
本発明に従ったタンパク質が直鎖分子である場合、化学修飾を受けやすい、または化学修飾に好適な直鎖分子の種々の箇所において、種々の官能基を配置することが可能である。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったタンパク質の直鎖形態の末端に、官能基を付加することができる。いくつかの実施形態において、官能基は、安定性の改善、（細胞膜及び／または組織バリアを経由する）貫通、組織の局在性、効力、クリアランスの低下、毒性の低下、選択性の改善、細胞ポンプによる排除に対する耐性の改善を含むがこれらに限定されない１つ以上の特徴に関するタンパク質の活性を改善する。便宜上、または、理論に束縛されるものではなく、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った組成物中に含有される配列の１つの遊離Ｎ末端は、組成物のＮ末端と称され、配列の遊離Ｃ末端は、組成物のＣ末端とみなされる。配列のＣ末端もしくはＮ末端のいずれか、または両方はそれぞれ、カルボン酸官能基またはアミン官能基に結合することができる。
【０３１０】
好適な官能基の非限定的例は、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５  ａｎｄ  ７，（１９９１）に記載されており、その教示は参照により本明細書に組み込まれる。好ましい保護基は、例えば、活性成分の親水性を低下させ、親油性を増加させることにより、結合した活性成分の細胞内への運搬を促進するものであり、例えば、「細胞膜をまたぐ運搬のための部位」である。
【０３１１】
これらの部位は任意で、そして好ましくは、細胞内で加水分解または酵素のいずれかによりｉｎ  ｖｉｖｏで切断することができる（Ｄｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，／．Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ．５７：７８３（１９６８）；Ｄｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．５７：８２８（１９６８）；Ｄｉｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，／．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．５８：５５７（１９６９）；Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２６：２２９４（１９８７）；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  １７：３１１（１９８９）；及びＴｕｎｅｋ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．３７：３８６７（１９８８），Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２３９：５３８（１９８５）  ａｎｄ  Ｓｉｎｇｈａｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１：２２０（１９８７））。
【０３１２】
ヒドロキシル保護基としては、エステル、カーボネート及びカルバメート保護基が挙げられる。アミン保護基としては、上でＮ末端保護基について記載したように、アルコキシ及びアリールオキシカルボニル基が挙げられる。カルボン酸保護基としては、上でＣ末端保護基について記載したように、脂肪族、ベンジル及びアリールエステルが挙げられる。一実施形態では、本発明の組成物中の、１つ以上のグルタミン酸またはアスパラギン酸残基の側鎖内のカルボン酸基は、好ましくはメチル、エチル、ベンジルまたは置換ベンジルエステル、より好ましくはベンジルエステルにより保護される。
【０３１３】
Ｎ末端保護基の非限定的実例としては、アシル基（−ＣＯ−Ｒ１）及びアルコキシカルボニルまたはアリールオキシカルボニル基（−ＣＯ−Ｏ−Ｒ１）が挙げられ、式中、Ｒ１は脂肪族、置換脂肪族、ベンジル、置換ベンジル、芳香族または置換芳香族基である。アシル基の具体例としては、アセチル、（エチル）−ＣＯ−、ｎ−プロピル−ＣＯ−、イソプロピル−ＣＯ−、ｎ−ブチル−ＣＯ−、ｓｅｃ−ブチル−ＣＯ−、ｔ−ブチル−ＣＯ−、ヘキシル、ラウロイル、パルミトイル、ミリストイル、ステアリル、オレオイル、フェニル−ＣＯ−、置換フェニル−ＣＯ−、ベンジル−ＣＯ−、及び（置換ベンジル）−ＣＯ−が挙げられるが、これらに限定されない。アルコキシカルボニル及びアリールオキシカルボニル基の例としては、ＣＨ３−Ｏ−ＣＯ−、（エチル）−Ｏ−ＣＯ−、ｎ−プロピル−Ｏ−ＣＯ、イソプロピル−Ｏ−ＣＯ、ｎ−ブチル−Ｏ−ＣＯ、ｓｅｃ−ブチル−Ｏ−ＣＯ、ｔ−ブチル−Ｏ−ＣＯ、フェニル−Ｏ−ＣＯ−、置換フェニル−Ｏ−ＣＯ−、及びベンジル−Ｏ−ＣＯ−、（置換ベンジル）−Ｏ−ＣＯ−、アダマンタン、ナフタレン（ｎａｐｈｔａｌｅｎ）、ミリストレイル、トルエン（ｔｏｌｕｅｎ）、ビフェニル、シンナモイル、ニトロベンゾイル（ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｏｙ）、トルオイル、フロイル、ベンゾイル、シクロヘキサン、ノルボルナン、またはＺ−カプロン（ｃａｐｒｏｉｃ）が挙げられる。Ｎアシル化を促進するために、分子のＮ末端に、１〜４個のグリシン残基が存在することができる。
【０３１４】
例えば、アミド（即ち、Ｃ末端のヒドロキシル基が−ＮＨ２、−ＮＨＲ２及び−ＮＲ２Ｒ３で置換されている）、またはエステル（即ち、Ｃ末端のヒドロキシル基が−ＯＲ２で置換されている）を含むがこれらに限定されない基により、化合物のＣ末端のカルボキシル基を保護することができる。Ｒ２及びＲ３は任意で、独立して脂肪族、置換脂肪族、ベンジル、置換ベンジル、アリールまたは置換アリール基である。加えて、窒素原子と共に、Ｒ２及びＲ３は任意で、窒素、酸素、または硫黄等の、約０〜２個の更なるヘテロ原子を有するＣ４〜Ｃ８複素環を形成することができる。好適な複素環の好適な非限定例としては、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリノ、チオモルホリノまたはピペラジニルが挙げられる。Ｃ末端保護基の例としては、−ＮＨ２、−ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨ（エチル）、−Ｎ（エチル）２、−Ｎ（メチル）（エチル）、−ＮＨ（ベンジル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（ベンジル）、−ＮＨ（フェニル）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）（フェニル）、−ＯＣＨ３−Ｏ−（エチル）、−Ｏ−（ｎ−プロピル）、−Ｏ−（ｎ−ブチル）、−Ｏ−（イソプロピル）、−Ｏ−（ｓｅｃ−ブチル）、−Ｏ−（ｔ−ブチル）、−Ｏ−ベンジル及び−Ｏ−フェニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１５】
ペプチド模倣部位による置換
「ペプチド模倣有機部位」を任意で、保存的及び非保存的置換の両方として、本発明の組成物中のアミノ酸残基と置換することができる。これらの部位は「非天然アミノ酸」とも呼ばれ、アミノ酸残基、アミノ酸を任意で置き換えてよいし、または、欠失したアミノ酸の代わりに、ペプチド内でスペーサー基として作用してよい。ペプチド模倣有機部位は任意で、そして好ましくは、置換されたアミノ酸に類似の立体的、電気的または構造的性質を有し、かかるペプチド模倣物を使用して必要な位置におけるアミノ酸を置換し、これらは保存的置換と考えられる。しかし、かかる類似性は必ずしも必要ではない。本発明の好ましい施形態に従うと、組成物が、本発明に従った天然タンパク質と比較して少なくとも生理学的活性を実質的に保持するように、１つ以上のペプチド模倣物が選択される。
【０３１６】
ペプチド模倣物を任意で使用して、酵素または他の分解プロセスによる、ペプチドの分解を阻害してよい。ペプチド模倣物は任意で、そして好ましくは、有機合成技術により作製することができる。好適なペプチド模倣物の非限定例としては、対応するＬアミノ酸のＤアミノ酸、テトラゾール（Ｚａｂｒｏｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，／．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１０：５８７５−５８８０（１９８８））；アミド結合のアイソスター（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９：３８５３−３８５６（１９８８））；ＬＬ−３−アミノ−２−プロペニドン−６−カルボン酸（ＬＬ−Ａｃｐ）（Ｋｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５０：５８３４−５８３８（１９８５））が挙げられる。同様の類似体は、Ｋｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９：５０８１−５０８２（１９８８）、並びにＫｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９：５０５７−５０６０（１９８８），Ｋｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２９：４９３５−４９３８（１９８８）及びＫｅｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，／．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：１０９−１１５（１９８７）に示されている。好適で例示的な他のペプチド模倣物は、Ｎａｇａｉ  ａｎｄ  Ｓａｔｏ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２６：６４７−６５０（１９８５）；Ｄｉ  Ｍａｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，／．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．，１６８７（１９８５）；Ｋａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３０：２３１７（１９８９）；Ｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，／．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１２：３２３−３３３（１９９０）；及びＧａｒｖｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５６：４３６（１９９０）に示されている。更に好適な例示的ペプチド模倣物としては、ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン３−カルボキシレート（Ｍｉｙａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，／．Ｔａｋｅｄａ  Ｒｅｓ．Ｌａｂｓ  ４３：５３−７６（１９８９））；１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−３−カルボキシレート（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，／．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３３：２２７５−２２８３（１９９１））；ヒスチジンイソキノロンカルボン酸（ＨＩＣ）（Ｚｅｃｈｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．４３（１９９１））；（２Ｓ、Ｓ）−メチル−フェニルアラニン、（２Ｓ、３Ｒ）−メチル−フェニルアラニン、（２Ｒ、３Ｓ）−メチル−フェニルアラニン及び（２Ｒ、３Ｒ）−メチル−フェニルアラニン（Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ  ａｎｄ  Ｈｒｕｂｙ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．（１９９１））が挙げられる。
【０３１７】
例示的、実例的で非限定的な非天然アミノ酸としては、βアミノ酸（β３及びβ２）、ホモアミノ酸、環状アミノ酸、芳香族アミノ酸、Ｐｒｏ及びＰｙｒ誘導体、３置換アラニン誘導体、グリシン誘導体、環置換Ｐｈｅ及びＴｙｒ誘導体、直鎖コアアミノ酸またはジアミノ酸が挙げられる。これらは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（ＵＳＡ）等の種々の供給者から入手可能である。
【０３１８】
タンパク質の化学修飾
本発明では、少なくともいくつかの実施形態に従い、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったタンパク質の任意の部分を任意で化学修飾、即ち、官能基の付加により変更してよい。例えば、天然の配列に現れる側鎖のアミノ酸残基を、任意で修飾してよいが、以下に記載するように、代わりに、タンパク質の他の部分を、側鎖アミノ酸残基に加えて、またはその代わりに、任意で修飾してよい。化学合成プロセスが続く場合、修飾は任意で、例えば、化学修飾したアミノ酸を付加することにより、分子の合成中に行われてもよい。しかし、既に分子内に存在する場合、アミノ酸の化学修飾（「ｉｎ  ｓｉｔｕ」修飾）もまた可能である。
【０３１９】
分子の配列領域のいずれかのアミノ酸は任意で、（「化学修飾した」と概念的に考えられるペプチドにおける）以下の例示的な種類の修飾のいずれか１つに従って修飾することができる。修飾の非限定的で例示的な種類としては、カルボキシメチル化、アシル化、リン酸化、グリコシル化または脂肪族アシル化が挙げられる。エーテル結合を任意で使用して、セリンまたはスレオニンヒドロキシル基を、糖のヒドロキシル基に結合することができる。アミド結合を任意で使用して、グルタメートまたはアスパルテートのカルボキシル基を、糖のアミノ基に結合することができる（Ｇａｒｇ  ａｎｄ  Ｊｅａｎｌｏｚ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）；Ｋｕｎｚ，Ａｎｇ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌｉｓｈ  ２６：２９４−３０８（１９８７））。アセタール及びケタール結合もまた任意で、アミノ酸と糖質の間に形成することができる。例えば遊離アミノ基（例えばリジン）のアシル化により、脂肪酸アシル誘導体を作製することができる（Ｔｏｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｉｖｉｅｒ  ａｎｄ  Ｍａｒｓｈａｌ，ｅｄｓ．，ＥＳＣＯＭ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｅｉｄｅｎ，１０７８−１０７９（１９９０））。
【０３２０】
本明細書で使用する場合、「化学修飾」という用語は、本発明に従ったタンパク質またはペプチドに言及する場合、アミノ酸残基のうち少なくとも１つが、プロセシングもしくは他の翻訳後修飾といった自然プロセス、または当該技術分野において既知の化学修飾技術のいずれかにより修飾されるタンパク質またはペプチドを指す。多数の既知の修飾の例としては、アセチル化、アシル化、アミド化、ＡＤＰリボシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、脂質もしくは脂質誘導体の共有結合、メチル化、ミリストイル化、ＰＥＧ化、プレニル化、リン酸化、ユビキチン化、または任意の同様のプロセスが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２１】
他の種類の修飾としては、任意で、本明細書に全体が記載されているかのように参考として本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ国際公開特許第２００６／０５０２６２号に記載されているように、タンパク質等の生物学的分子への、シクロアルカン部位の付加が挙げられる。生体分子と共に用いるためにこれらの部位を設計し、また、任意でこれらを使用して、タンパク質に種々の性質を付与してよい。
【０３２２】
更に、任意で、タンパク質の任意の箇所を修飾してよい。例えば、本明細書に全体が記載されているかのように参考として本明細書に組み込まれる、国際公開特許第２００６／０５０２４７号に記載されているように、タンパク質のグリコシル化部位のＰＥＧ化を行ってよい。１つ以上のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基を任意で、Ｏ結合及び／またはＮ結合グリコシル化に加えてよい。ＰＥＧ基は任意で、分岐状または直鎖状であってよい。任意で、任意の種類の水溶性ポリマーを、グリコシルリンカーを介して、タンパク質のグリコシル化部位に結合させてよい。
【０３２３】
改変グリコシル化
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったタンパク質を修飾して、改変グリコシル化パターンを有するようにしてよい（即ち、元または天然のグリコシル化パターンから変化してよい）。本明細書で使用する場合、「改変」とは、１つ以上の炭水化物部位を欠失すること、及び／または元のタンパク質に少なくとも１つのグリコシル化部位が付加していることを意味する。タンパク質のグリコシル化は通常、Ｎ結合またはＯ結合のいずれかである。Ｎ結合とは、炭水化物部位をアスパラギン残基の側鎖に結合することを指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン、及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、炭水化物部位がアスパラギン側鎖に、酵素により結合させるための認識配列である。したがって、ポリペプチド内にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が作製される。Ｏ結合グリコシル化とは、糖類であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースの、ヒドロキシアミノ酸（最も一般的にはセリンまたはスレオニン）への結合を意味するが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンを使用してもよい。
【０３２４】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったタンパク質への、グリコシル化部位の付加は、（Ｎ結合グリコシル化部位に関して）タンパク質のアミノ酸配列を、上述のトリペプチド配列の１つ以上を含有するように変化させることにより便利に行われる。改変はまた、（Ｏ結合グリコシル化部位に関して）元のタンパク質の配列内に１つ以上のセリンまたはスレオニン残基を付加することにより、またはこれにより置換することにより行ってもよい。タンパク質のアミノ酸配列 はまた、ＤＮＡレベルで変化を導入することにより、改変することができる。
【０３２５】
タンパク質の炭水化物部位の数を増加させる別の手段は、グリコシドをタンパク質のアミノ酸残基に、化学的または酵素的に結合させることによるものである。使用する結合形態に応じて、糖を、（ａ）アルギニン及びヒスチジン、（ｂ）遊離カルボキシル基、（ｃ）システインにあるもの等の、遊離スルフヒドリル基、（ｄ）セリン、スレオニンもしくはヒドロキシプロリンにあるもの等の、遊離ヒドロキシル基（ｅ）フェニルアラニン、チロシンもしくはトリプトファンにあるもの等の芳香族残基、または（ｆ）グルタミンのアミド基に結合してよい。これらの方法は、ＷＯ８７／０５３３０、及びＡｐｌｉｎ  ａｎｄ  Ｗｒｉｓｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２２：２５９−３０６（１９８１）に記載されている。
【０３２６】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったタンパク質に存在する、任意の炭水化物部位の除去は、化学的または酵素的に行ってよい。化学的脱グリコシル化には、タンパク質をトリフルオロメタンスルホン酸、または同等の化合物に曝露することを必要とする。この処理により、結合した糖類（Ｎ−アセチルグルコサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミン）を除いて、アミノ酸配列をインタクトなままにしながら、大部分または全ての糖類の切断がもたらされる。
【０３２７】
化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２５９：５２（１９８７）；及びＥｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１（１９８１）により説明されている。タンパク質の炭水化物部位の酵素切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．ＥｎｚｙｍｏＬ，１３８：３５０（１９８７）に記載されているように、種々のエンドおよびエクソグリコシダーゼを使用することにより行うことができる。
【０３２８】
抗体をコードする核酸分子
本発明は更に、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体、またはその断片もしくはコンジュゲートをコードする核酸を提供する。核酸は、全細胞中、細胞可溶化物中、または部分的に精製された、もしくは実質的に純粋な形態で存在してよい。核酸は、アルカリ性／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動及び他の当該技術分野において周知の方法等の標準的な技術により、他の細胞成分または他の汚染物質（例えば他の細胞核酸またはタンパク質）から精製した場合に、「単離されている」か、または「実質的に純粋となっている」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った核酸は例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡであることができ、かつ、イントロン配列を含有しても含有しなくてもよい。好ましい実施形態では、核酸はｃＤＮＡ分子である。
【０３２９】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った核酸は、標準的な分子生物学的技術を使用して得ることができる。ハイブリドーマ（例えば、以下に更に詳細を記載するヒト免疫グロブリン遺伝子を有するトランスジェニックマウスから調製したハイブリドーマ）により発現した抗体に関して、ハイブリドーマにより作製した、抗体の軽鎖及び重鎖をコードするｃＤＮＡは、標準的なＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローン作成技術により得ることができる。（例えば、ファージディスプレイ技術を使用して）入手した抗体に関して、抗体をコードする核酸をライブラリーから回収してよい。
【０３３０】
ＶＨ及びＶＬセグメントをコードするＤＮＡ断片が得られると、これらのＤＮＡ断片を更に、例えば、可変領域遺伝子を完全長抗体鎖遺伝子、Ｆａｂ断片遺伝子またはｓｃＦｖ遺伝子に転換する標準的な組み換えＤＮＡ技術により操作することができる。これらの操作において、ＶＬまたはＶＨコーディングＤＮＡ断片は、抗体定常領域または柔軟なリンカー等の、別のタンパク質をコードする別のＤＮＡ断片に作用可能に結合する。先に規定したように、「作用可能に結合した」とは、２つのＤＮＡ断片によりコードされたアミノ酸配列がインフレームのままとなるように、２つのＤＮＡ断片が結合することを意味する。
【０３３１】
ＶＨコーディングＤＮＡを、重鎖定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）をコードする別のＤＮＡ分子に作用可能に結合することにより、ＶＨ領域をコードする単離ＤＮＡを完全長重鎖遺伝子に転換することができる。ヒト重鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野において既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｌ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭまたはＩｇＤ定常領域であることができるが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４定常領域が最も好ましい。Ｆａｂ断片重鎖遺伝子に関して、ＶＨコーディングＤＮＡは、重鎖ＣＨ１定常領域のみをコードする別のＤＮＡ分子に作用可能に結合することができる。
【０３３２】
ＶＬコーディングＤＮＡを、軽鎖定常領域（ＣＬ）をコードする別のＤＮＡ分子に作用可能に結合することにより、ＶＬ領域をコードする単離ＤＮＡを完全長軽鎖遺伝子（及びＦａｂ軽鎖遺伝子）に転換することができる。ヒト軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当技術分野において既知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）、これらの領域を包含するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅により得ることができる。軽鎖定常領域はκまたはλ定常領域であることができるが、κは定常領域であるのが最も好ましい。
【０３３３】
ｓｃＦｖ遺伝子を作製するために、ＶＲ及びＶＬコーディングＤＮＡ断片は、柔軟なリンカーによりＶＬ及びＶＨ領域が結合すると、ＶＨ及びＶＬ配列が連続的に一本鎖タンパク質として発現することができるように、柔軟なリンカーをコードする、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３をコードする別の断片に作用可能に結合する（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４を参照のこと）。
【０３３４】
抗ＶＳＩＧ８モノクローナル抗体の作製
本発明に従った抗ＶＳＩＧ８モノクローナル抗体（ｍＡｂ）及び抗原結合断片は、従来のモノクローナル抗体技術、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５の、標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む様々な技術により作製することができる。体細胞のハイブリダイゼーション方法が好ましいが、原則として、モノクローナル抗体を作製するための他の方法（例えば、Ｂリンパ球のウイルスまたは発癌性形質転換）を使用することができる。
【０３３５】
ハイブリドーマを産生するための好ましい動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマの産生は、非常によく確立された方法である。融合のために免疫付与した脾細胞の単離のための、免疫付与プロトコール及び技術は、当技術分野において既知である。融合パートナー（例えばマウス骨髄腫細胞）及び融合手順もまた、知られている。本発明のキメラまたはヒト化抗体は、上述のように調製したマウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製することができる。重鎖及び軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡを、標準的な分子生物学的技術を使用して、対象のマウスハイブリドーマから得て、改変をして非マウス（例えばヒト）免疫グロブリン配列を得ることができる。例えば、キメラ抗体を作製するために、当該技術分野において公知の方法を使用して、マウス可変領域をヒト定常領域に結合することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７（Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．）を参照）。ヒト化抗体を作製するために、当該技術分野において既知の方法を使用してマウスＣＤＲ領域をヒトフレームワークに挿入することができる（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号（Ｗｉｎｔｅｒ）及び米国特許番号第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号、及び同第６，１８０，３７０号（Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．）を参照）。
【０３３６】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、抗体はヒトモノクローナル抗体である。ＶＳＩＧ８に対して向けられるかかるヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなく、ヒト免疫系の一部を有するトランスジェニックまたはトランスクロモソミックマウスを使用して生成することができる。これらのトランスジェニック及びトランスクロモソミックマウスとしては、それぞれＨｕＭＡｂマウス（商標）及びＫＭマウス（商標）として本明細書で呼ばれるマウスが挙げられ、また、合わせて「ヒトＩｇマウス」と本明細書では呼ばれる。ＨｕＭＡｂマウス（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ．）は、内因性μ及びκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化変異と共に、非再配列ヒトμ及びγ重鎖、並びにκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードする、ヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座を含有する（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９を参照）。したがって、マウスは、低下したマウスＩｇＭまたはκの発現を示し、免疫付与に対応して、導入したヒト重鎖及び軽鎖導入遺伝子は、クラススイッチ変更と体細胞突然変異を受けて、高親和性のヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を生成する（上述のＬｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．及びＨｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３，ａｎｄ  Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６−５４６に概説される）。ＨｕＭａｂマウスＲＴＭの調製及び使用、並びに、かかるマウスが有するゲノム改変は更に、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−６２９５；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５：６４７−６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：３７２０−３７２４；Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−１２３；Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８２１−８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０；Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：５７９−５９１；ａｎｄ  Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１に記載されており、これらの内容全ては、それら全体が本明細書に明確に組み込まれる。米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８７７，３９７号；同第５，６６１，０１６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８７４，２９９号；及び同第５，７７０，４２９号；（全てＬｏｎｂｅｒｇ及びＫａｙ）；���国特許第５，５４５，８０７号（Ｓｕｒａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．）；国際公開第９２／０３９１８号、同第９３／１２２２７号、同第９４／２５５８５号、同第９７／１３８５２号、同第９８／２４８８４号及び同第９９／４５９６２号（及びＬｏｎｂｅｒｇ及びＫａｙ）；並びに国際公開第０１／１４４２４号（Ｋｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．）を更に参照のこと。
【０３３７】
別の実施形態において、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったヒト抗体は、導入遺伝子及び導入染色体にヒト免疫グロブリン配列を有するマウス、例えば、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入染色体を有するマウスを使用して産生することができる。「ＫＭマウス（商標）」と呼ばれるかかるマウスは、国際公開第０２／４３４７８号（Ｉｓｈｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．）に詳細に記載されている。
【０３３８】
また更に、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する他のトランスジェニック動物が当該技術分野において入手可能であり、これを使用して、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗ＶＳＩＧ８抗体を産生することができる。例えば、代替のＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と呼ばれるトランスジェニック系を使用することができる。かかるマウスは例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．の米国特許第５，９３９，５９８号；同第６，０７５，１８１号；同第６，１１４，５９８号；同第６，１５０，５８４号、及び同第６，１６２，９６３号に記載されている。
【０３３９】
更に、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスクロモソミック動物系が当該技術分野において入手可能であり、これを使用して、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗ＶＳＩＧ８抗体を産生することができる。例えば、「ＴＣマウス」と呼ばれる、ヒト重鎖導入染色体及びヒト軽鎖導入染色体の両方を有するマウスを使用することができる。かかるマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：７２２−７２７に記載されている。更に、ヒト重鎖及び軽鎖導入染色体を有するウシが当該技術分野において説明されており（Ｋｕｒｏｉｗａ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０：８８９−８９４）、これを使用して、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗ＶＳＩＧ８抗体を産生することができる。
【０３４０】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用してもまた調製することができる。ヒト抗体を単離するためのかかるファージディスプレイ法が、当該技術分野において確立されている。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；及び同第５，５７１，６９８号（Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）；米国特許第５，４２７，９０８号及び同第５，５８０，７１７号（Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）；米国特許第５，９６９，１０８号及び同第６，１７２，１９７号（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．）；並びに米国特許第５，８８５，７９３号；同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号及び同第６，５９３，０８１号（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．）を参照のこと。
【０３４１】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったヒトモノクローナル抗体は、免疫付与によりヒト抗体応答が生み出されるようにヒト免疫細胞が再構成されたＳＣＩＤマウスを使用してもまた調製することができる。かかるマウスは、例えば米国特許第５，４７６，９９６号及び同第５，６９８，７６７号（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。
【０３４２】
ヒトＩｇマウスの免疫付与
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇマウスを使用して、例えばＬｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１；並びに国際特許第９８／２４８８４号、及び同第０１／１４４２４号に記載されているように、かかるマウスに、ＶＳＩＧ８抗原及び／もしくは組み換えＶＳＩＧ８、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の精製調製物または濃縮調製物を免疫付与することにより、本発明に従ったヒト抗ＶＳＩＧ８抗体を産生する。マウスは、第１の注射の際に週齢６〜１６であることが好ましい。例えば、ＶＳＩＧ８抗原の精製または組み換え調製物（５〜５０μｇ）を使用して、ヒトＩｇマウスを腹腔内で免疫付与することができる。
【０３４３】
一般に、トランスジェニックマウスは、完全フロイントアジュバント内の抗原を最初に腹腔内（ＩＰ）で免疫付与し、続いて、不完全フロイントアジュバント内の抗原を隔週でＩＰ免疫付与（最大、合計で６週）する際に応答する。しかし、フロイントアジュバント以外のアジュバントも効果的であることもまた、見出されている。更に、アジュバントがない状態の全細胞は、非常に免疫原性であることが見出されている。後眼窩静脈叢からの採血により得た血漿試料を用いて、免疫付与プロトコールの過程にわたって免疫応答を監視することができる。血漿を（後述のように）ＥＬＩＳＡによりスクリーニングすることができ、抗ＶＳＩＧ８ヒト免疫グロブリンの十分な力価を有するマウスを融合に使用することができる。マウスに抗原を、犠牲にして脾臓を取り除く３日前に、静脈内で追加免疫することができる。各免疫付与に関して、２〜３回の融合を実施することが必要な場合があることが予想された。６〜２４匹のマウスが通常、各抗原に対して免疫付与される。ＨＣｏ７とＨＣｏ１２株の両方を通常使用する。更に、ＨＣｏ７とＨＣｏ１２導入遺伝子の両方を合わせて、２つの異なるヒト重鎖導入遺伝子（ＨＣｏ７／ＨＣｏ１２）を有する１匹のマウスに入れることができる。あるいは、または更に、ＫＭマウス（商標）株を使用することができる。
【０３４４】
ヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成
ある特定の実施形態において、本発明に従ったヒトモノクローナル抗ＶＳＩＧ８抗体を産生するハイブリドーマを、脾細胞を使用して生成してよく、かつ／または、免疫付与したマウスのリンパ節細胞を単離して、マウス骨髄腫細胞株等の適切な不死化細胞株に融合することができる。得られるハイブリドーマを、抗原特異的抗体の産生のためにスクリーニングすることができる。例えば、免疫付与したマウスの脾臓リンパ球の単一の細胞懸濁液を、５０％ＰＥＧを含む、Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ  １５８０）の６分の１の数に融合することができる。細胞を約２×１０５で平底マイクロタイタープレートに配置し、続いて、２０％胎児クローン血清、１８％「６５３」調整培地、５％オリゲン（ｏｒｉｇｅｎ）（ＩＧＥＮ）、４ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．０５５ｍＭの２−メルカプトエタノール、５０ユニット／ｍＬのペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシン、５０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシン、及びＩＸ  ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；ＨＡＴは融合の２４時間後に加える）を含有する選択培地で２週間インキュベーションする。約２週間後に、ＨＡＴをＨＴで置き換えた培地内で細胞を培養することができる。次に、ヒトモノクローナルＩｇＭ及びＩｇＧ抗体用のＥＬＩＳＡにより個々のウェルをスクリーニングすることができる。広範にわたりハイブリドーマの増殖が発生すると、培地は通常、１０〜１４日後に観察することができる。抗体を分泌するハイブリドーマを再びプレートに配置して、もう一度スクリーニングすることができ、依然としてヒトＩｇＧに対して陽性である場合、モノクローナル抗体を限界希釈により、少なくとも２回サブクローニングすることができる。次に、安定したサブクローンをｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養して、性質決定のために組織培地内で少量の抗体を生成することができる。
【０３４５】
ヒトモノクローナル抗体を精製するために、選択したハイブリドーマを、モノクローナル抗体精製用の２リットルのスピナーフラスコ内で増殖することができる。プロテインＡセファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を用いた親和性クロマトグラフィーの前に、上清を濾過して濃縮することができる。純度を確保するために、溶出したＩｇＧをゲル電気泳動と高速液体クロマトグラフィーにより確認することができる。緩衝溶液をＰＢＳに交換することが可能であり、１．４３の減衰係数を使用して、濃度をＯＤ２８０で測定することができる。モノクローナル抗体を−８０℃で分取し保管することができる。
【０３４６】
モノクローナル抗体を産生するトランスフェクト−マの生成
ある特定の実施形態において、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体を、例えば、当該技術分野において周知である（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２）組み換えＤＮＡ技術と遺伝子トランスフェクション法の組み合わせを使用して、宿主細胞トランスフェクト−マ内で産生することができる。
【０３４７】
例えば、抗体またはその抗体断片を発現するために、部分的または完全な軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡを、標準的な分子生物学的技術（例えば、対象の抗体を発現するハイブリドーマを使用したＰＣＲ増幅またはｃＤＮＡクローニング）により得ることができ、遺伝子が転写及び翻訳調節配列に作用可能に結合するように、ＤＮＡを発現ベクターに挿入することができる。本文脈中、「作用可能に結合した」という用語は、ベクター内の転写及び翻訳調節配列が、抗体遺伝子の転写と翻訳を制御する意図した機能を果たすように、抗体遺伝子がベクター内にライゲーションされることを意味することを意図している。発現ベクター及び発現調節配列は、使用する発現宿主細胞と適合するように選択される。抗体の軽鎖遺伝子と抗体の重鎖遺伝子を個別のベクターに挿入することができるか、より典型的には、両方の遺伝子を同じ発現ベクターに挿入する。標準的な方法（例えば、抗体遺伝子断片及びベクター上の相補性制限酵素切断部位のライゲーション、または制限酵素切断部位が存在しない場合、平滑末端ライゲーション）により、抗体遺伝子を発現ベクターに挿入する。本明細書に記載する抗体の軽鎖及び重鎖可変領域を使用して、ＶＨセグメントがベクター内のＣＨセグメントに作用可能に結合し、ＶＬセグメントがベクター内のＣＬセグメントに作用可能に結合するように、これらを、所望のアイソタイプの重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を既にコードする発現ベクター挿入することにより、任意の抗体アイソタイプの完全長抗体遺伝子を作製することができる。加えて、または代替的に、組み換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を促進するシグナルペプチドをコードすることができる。シグナルペプチドが、抗体鎖遺伝子のアミノ末端にインフレーム結合するように、抗体鎖遺伝子をベクター内にクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは異種シグナルペプチド（即ち、非免疫グロブリンタンパク質からのシグナルペプチド）であることができる。
【０３４８】
抗原に結合する抗体の性質決定
ある特定の実施形態において、本発明に従った抗ＶＳＩＧ８抗体の結合特異性を、ＥＬＩＳＡ等の既知の抗体結合アッセイ技術により決定する。例示的なＥＬＩＳＡにおいて、マイクロタイタープレートを、精製した抗原（本明細書ではＶＳＩＧ８）に、ＰＢＳ中で０．２５μｇ／ｍＬでコーティングし、ＰＢＳ中の５％ウシ血清アルブミンによりブロックする。抗体の希釈液（例えば、免疫付与したマウスの血漿の希釈液）を各ウェルに加え、３７℃で１〜２時間インキュベーションする。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、続いて３７℃で１時間、アルカリホスファターゼにコンジュゲートした二次試薬（例えば、ヒト抗体に関してはヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬）によりインキュベーションする。洗浄後、プレートをｐＮＰＰ基質（１ｍｇ／ｍＬ）で成長させ、ＯＤ４０５〜６５０で分析する。最も高い力価を生じるマウスを融合に使用するのが好ましい。
【０３４９】
上記のＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ＶＳＩＧ８免疫原と正の反応性を示すハイブリドーマをスクリーニングすることができる。ＶＳＩＧ８に高い結合力で結合するハイブリドーマをサブクローニングし、更に性質決定する。（ＥＬＩＳＡにより）親細胞の反応性を保持する各ハイブリドーマからの１つのクローンを、−１４０℃で保管した５〜１０個のバイアル瓶細胞バンクを作製するために、そして抗体精製のために選択することができる。
【０３５０】
抗ＶＳＩＧ８抗体を精製するために、選択したハイブリドーマを、モノクローナル抗体精製用の２リットルのスピナーフラスコ内で増殖させることができる。プロテインＡセファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を用いた親和性クロマトグラフィーの前に、上清を濾過して濃縮することができる。純度を確保するために、溶出したＩｇＧをゲル電気泳動と高速液体クロマトグラフィーにより確認することができる。緩衝溶液をＰＢＳに交換することが可能であり、１．４３の減衰係数を使用して、濃度をＯＤ２８０で測定することができる。モノクローナル抗体を−８０℃で分取し保管することができる。
【０３５１】
選択した抗ＶＳＩＧ８モノクローナル抗体が固有のエピトープに結合するかどうかを決定するために、各抗体を、市販されている試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，１１１．）を使用してビオチン化することができる。非標識モノクローナル抗体及びビオチン化モノクローナル抗体を使用した競合調査を、上述の、ＶＳＩＧ８でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートを使用して実施することができる。ビオチン化ｍＡｂの結合を、ストレプトアビジン−アルカリホスファターゼプローブを使用して検出することができる。
【０３５２】
精製した抗体のアイソタイプ決定するために、特定のアイソタイプの抗体に特異的な試薬を使用して、アイソタイプＥＬＩＳＡを実施することができる。例えば、ヒトモノクローナル抗体のアイソタイプを決定するために、マイクロタイタープレートのウェルを４℃にて、＾ｇ／ｍＬの抗ヒト免疫グロブリンでコーティングすることができる。１％ＢＳＡでブロックした後、プレートを１〜２時間周囲温度にて、１ｍｕｇ／ｍＬ未満の試験モノクローナル抗体、または精製したアイソタイプコントロールで反応させる。次にウェルを、ヒトＩｇＧ１、またはヒトＩｇＭ特異的アルカリホスファターゼコンジュゲートプローブのいずれかと反応させることができる。プレートを、上述のように成長させ、分析する。
【０３５３】
抗ＶＳＩＧ８ヒトＩｇＧを更に、ウェスタンブロッティングによりそれぞれＶＳＩＧ８、抗原との反応性について試験することができる。手短かに言えば、ＶＳＩＧ８抗原を調製し、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動に供することができる。
【０３５４】
電気泳動の後、分離した抗原をニトロセルロース膜に移し、１０％ウシ胎児血清でブロックし、試験するモノクローナル抗体でプローブする。ヒトＩｇＧ結合を、抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼを使用して検出することができ、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質錠剤（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ）で進めることができる。
【０３５５】
代替の抗ＶＳＩＧ８足場
ある特定の実施形態において、本発明は１つ以上のエピトープ結合ドメインに結合したタンパク質足場を含む抗原結合構築物に関する。かかる改変タンパク質足場は通常、ループ領域、または別様においては許容される表面領域にフォーカスされる突然変異誘発を有するランダムなライブラリーを設計することにより、及び、ファージディスプレイまたは関係する技術により、所与の標的に対して変異体を選択することにより、より得られる。少なくともいくつかの実施形態に従うと、本発明は、アンチカリン、ＤＡＲＰｉｎ、アルマジロ反復タンパク質、プロテインＡ、リポカリン、フィブロネクチンドメイン、アンキリンコンセンサス反復ドメイン、チオレドキシン、化学規制ペプチド等を含むがこれらに限定されない、代替の足場に関する。少なくともいくつかの実施形態に従うと、本発明は、癌、自己免疫、感染症、敗血症の治療のため、または、遺伝子治療、及びｉｎ  ｖｉｖｏ診断の後の、望ましくない免疫活性化を阻害するための治療薬として使用する代替の足場に関する。
【０３５６】
少なくともいくつかの実施形態に従うと、本発明は更に、本明細書に記載する抗原結合構築物と製薬上許容できる担体を含む医薬組成物を提供する。
【０３５７】
本明細書で使用する場合、「タンパク質足場」という用語は、四本鎖もしくは二本鎖抗体であり得る、または抗体のＦｃ領域のみを含み得る、または抗体の１つ以上の定常領域（この定常領域は、ヒトもしくは霊長類由来であってよいか、もしくはヒト及び霊長類定常領域の人工キメラであってよい）免疫グロブリン（Ｉｇ）足場、例えばＩｇＧ足場を含むが、これらに限定されない。かかるタンパク質足場は、例えば、タンパク質足場が完全ＩｇＧを含む場合、１つ以上の定常領域に加えて、抗原結合部位を含んでよい。かかるタンパク質足場は、他のタンパク質ドメイン、例えば、抗原結合部位（例えばエピトープ結合ドメインまたはｓｃＦｖドメインを有するタンパク質ドメイン）に結合可能である。
【０３５８】
「ドメイン」とは、残りのタンパク質とは無関係の、三次構造を有する折りたたまれたタンパク質構造である。通常、ドメインはタンパク質の個々の機能的性質を担っており、多くの場合、タンパク質及び／またはドメインの残りの機能を失うことなく、他のタンパク質に付加、またはこれらから除去、またはこれらに移行してよい。「単一の抗体可変領域」とは、抗体可変領域の配列特性を含む、折りたたまれたポリペプチドドメインである。それ故、単一の抗体可変領域は、完全な抗体可変領域、及び、例えば、１つ以上のループが、抗体可変領域の特徴を持たない配列により置き換えられている改変可変領域、または、ＮもしくはＣ末端が切断されたか、これらの伸長部を含む抗体可変領域、並びに、少なくとも完全長ドメインの結合活性と特異性を保持している可変領域の折りたたまれた断片を含む。
【０３５９】
「免疫グロブリンの単一可変領域」という表現とは、異なるＶ領域またはドメインとは独立して、抗原またはエピトープと特異的に結合する抗体可変領域（ＶＲ、ＶＲＨ、ＶＬ）を意味する。免疫グロブリンの単一可変領域は、他の領域またはドメインが、単一の免疫グロブリン可変領域による抗原結合に必要とされない（即ち、免疫グロブリンの単一可変領域が、追加の可変領域とは関係なく抗原と結合する）、他の異なる可変領域または可変ドメインを有する形式（例えば、ホモまたはヘテロ多量体）で存在することができる。「ドメイン抗体」または「ｄＡｂ」は、本明細書で使用する用語の、抗原に結合可能な「免疫グロブリンの単一可変領域」と同じである。免疫グロブリンの単一可変領域はヒト抗体可変領域であってよいが、（例えば、ＷＯ００／２９００４に記載されているように）齧歯類、テンジクザメ及びラクダ科Ｖ−ＨＨ  ｄＡｂ等の、他の種の単一の抗体可変領域もまた含む。ラクダ科Ｖ−ＨＨは、本来は軽鎖を欠いている抗体を産生する、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ及びグアナコを含む種に由来する、免疫グロブリンの単一可変領域ポリペプチドである。かかるＶ−ＨＨドメインは、当該技術分野において使用できるな標準的な技術に従ってヒト化されてよく、また、かかるドメインは依然として、本発明に従うと「ドメイン抗体」であるとみなされる。本明細書で使用する場合、ＶＨは、ラクダ科Ｖ−ＨＨドメインを含む。ＮＡＲＶは、テンジクザメを含む軟骨魚類にて同定された、別の種類の免疫グロブリンの単一可変領域である。これらのドメインは、新規の抗原受容体可変領域（一般にＶ（ＮＡＲ）またはＮＡＲＶと略される）としてもまた知られている。例えば、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４，６５６−６６５（２００６）、及びＵＳ２００５００４３５１９Ａを参照のこと。
【０３６０】
「エピトープ結合ドメイン」という用語は、異なるＶ領域またはドメインとは独立して、抗原またはエピトープと特異的に結合するドメインを指す。これは、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、例えば、ヒト、ラクダもしくはサメ免疫グロブリンの単一可変領域であってよく、または、ＣＴＬＡ−４（Ｅｖｉｂｏｄｙ（登録商標））；リポカリン；プロテインＡのＺドメイン（Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標），ＳｐＡ）、Ａドメイン（Ａｖｉｍｅｒ（登録商標）／Ｍａｘｉｂｏｄｙ（登録商標））等の、プロテインＡ由来の分子；ＧｒｏＥＩ及びＧｒｏＥＳ等の熱ショックタンパク質；トランスフェリン（トランスボディ）；アンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ（登録商標））；ペプチドアプタマー；Ｃ型レクチンドメイン（テトラネクチン）；ヒト＆＃９４７；クリスタリン及びヒトユビキチン（アフィリン）；ＰＤＺドメイン；ヒトプロテアーゼ阻害剤のスコーピオントキシンクニッツ（ｓｃｏｒｐｉｏｎ  ｔｏｘｉｎｋｕｎｉｔｚ）型ドメイン；アルマジロ反復タンパク質、チオレドキシン及びフィブロネクチン（アドネクチン）；からなる群から選択される足場の誘導体であるドメインであってよく、これらは、天然リガンド以外のリガンドへの結合を得るために、タンパク質改変に供してある。
【０３６１】
抗体のＣＤＲに対応するループを異種配列で置き換え、異なる結合特性を付与する（即ち、エビボディ（Ｅｖｉｂｏｄｙ））。更なる詳細については、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４８（１−２），３１−４５（２００１）を参照のこと。リポカリンは、ステロイド、ビリン、レチノイド及び脂質等の疎水性小分子を運搬する細胞外タンパク質のファミリーである。これらは、操作して異なる標的抗原を結合可能な円錐型構造の開放端に多数のループを持つ固定化した二次構造を有する。アンチカリンは、サイズが１６０〜１８０個のアミノ酸であり、リポカリンに由来する。更なる詳細については、Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １４８２：３３７−３５０（２０００），ＵＳ７２５０２９７Ｂ１及びＵＳ２００７０２２４６３３を参照のこと。アフィボディとは、操作して抗原と結合可能な、黄色ブドウ球菌のプロテインＡに由来する足場である。ドメインは、約５８個のアミノ酸の、３つのヘリックスバンドルからなる。ライブラリーは、表面残基をランダム化することにより生成されている。更なる詳細については、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１７，４５５−４６２（２００４）及びＥＰ１６４１８１８Ａ１を参照のこと。アビマーは、Ａドメイン足場ファミリーに由来するマルチドメインタンパク質である。約３５個のアミノ酸のネイティブドメインは、規定したジスルフィド結合構造をとる。多様性が、Ａドメインのファミリーにより示される自然のバリエーションをシャッフルすることによって生み出される。更なる詳細については、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３（１２），１５５６−１５６１（２００５）及びＥｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ  １６（６），９０９−９１７（Ｊｕｎｅ  ２００７）を参照のこと。
【０３６２】
トランスフェリンは、単量体の血清輸送糖タンパク質である。トランスフェリンを操作して、可能な表面ループにペプチド配列を挿入することによって、異なる標的抗原と結合させることができる。操作トランスフェリン足場の例としては、トランスボディが挙げられる。更なる詳細については、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７４，２４０６６−２４０７３（１９９９）を参照のこと。
【０３６３】
設計したアンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）は、内在性膜タンパク質の細胞骨格への結合を仲立ちするタンパク質ファミリーであるアンキリンに由来する。単一のアンキリン反復は、２つのαヘリックス；βターンからなる３３残基のモチーフである。各反復の最初のαヘリックス及びβターンにおける残基をランダム化によりこれらを操作し、異なる標的抗原を結合することができる。これらの結合界面を、分子数を増やすこと（親和性成熟法）により増大することができる。更なる詳細については、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３２，４８９−５０３（２００３），ＰＮＡＳ  １００（４），１７００−１７０５（２００３）及びＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６９，１０１５−１０２８（２００７）及びＵＳ２００４０１３２０２８Ａ１を参照のこと。
【０３６４】
フィブロネクチンとは、抗原に結合するように操作することができる足場である。アドネクチンは、ヒトフィブロネクチンＩＩＩ型（ＦＮ３）の１５反復単位のうちの１０番目のドメインにおける天然アミノ酸配列の骨格からなる。βサンドイッチの一端にある３つのループを操作して、アドネクチンが対象の治療標的を特異的に認識することを可能にすることができる。更なる詳細については、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．１８，４３５−４４４（２００５）、ＵＳ２００８０１３９７９１、ＷＯ２００５０５６７６４及びＵＳ６８１８４１８Ｂ１を参照のこと。
【０３６５】
ペプチドアプタマーとは、一定の足場タンパク質、通常は、活性部位に挿入された制限された可変ペプチドループを含有するチオレドキシン（ＴｒｘＡ）からなるコンビナトリアル認識分子である。更なる詳細については、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．５：７８３−７９７（２００５）を参照のこと。
【０３６６】
マイクロボディは、３〜４個のシステイン架橋を含有する、長さが２５〜５０アミノ酸の天然マイクロタンパク質 に由来し、マイクロタンパク質の例としては、ＫａｌａｔａＢＩ及びコノトキシン及びノッチン（ｋｎｏｔｔｉｎ）が挙げられる。マイクロタンパク質は、操作して、マイクロタンパク質の全体のフォールドに影響を与えることなく最大２５個のアミノ酸を含めることが可能なループを有する。操作したノッチンドメインの更なる詳細については、ＷＯ２００８０９８７９６を参照のこと。
【０３６７】
他のエピトープ結合領域としては、Ｎｏｎ−Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（２００７，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓｔｅｆａｎ  Ｄｕｂｅｌ）の第７章、及びＰｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １５：１４−２７（２００６）に概説されるヒトβクリスタリン及びヒトユビキチン（アフィリン）、ヒトプロテアーゼ阻害剤のクニッツ型ドメイン、Ｒａｓ結合タンパク質ＡＦ−６のＰＤＺドメイン、サソリ毒素（カリブドトキシン（ｃｈａｒｙｂｄｏ  ｔｏｘｉｎ））、Ｃ型レクチンドメイン（テトラネクチン）を含む、異なる標的抗原結合特性を操作するための足場として使用されているタンパク質が挙げられる。本発明のエピトープ結合ドメインは、これらの代替的タンパク質ドメインのいずれかに由来することができる。
【０３６８】
コンジュゲートまたは免疫複合体
本発明は、エクトドメイン、またはその一部もしくは変異体を含む、ＶＳＩＧ８抗原及びその可溶性部分を含む、免疫療法で使用するためのＶＳＩＧ８抗原のコンジュゲートを包含する。例えば、本発明は、ＶＳＩＧ８抗原のＥＣＤが免疫グロブリンまたはその断片に結合したコンジュゲートを包含する。本発明は、免疫刺激等のＶＳＩＧ８抗原活性を促進または阻害するためのコンジュゲートの使用、並びに、本明細書で記載される移植、自己免疫及び癌発症の治療におけるコンジュゲートの使用を企図する。
【０３６９】
他の態様においては、本発明は、例えば癌を治療するために使用する、抗体（または、（多くは細胞毒性の）ペイロード薬剤に結合した一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）等の抗体または抗体断片）からなる抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を特長とする。抗体は、ＡＤＣを標的癌細胞に結合させる。多くの場合、ＡＤＣは次に、細胞により内在化され、薬剤が細胞内で放出される。標的化によって、副作用はより低くなり、より広い治療域がもたらされる。親水性リンカー（例えばＰＥＧ４Ｍａｌ）は、薬剤がＭＤＲ（多剤耐性）トランスポーターを介して、耐性のある癌細胞から送られることを防止するのに役立つ。
【０３７０】
別の態様では、本発明は、細胞毒素、薬剤（例えば免疫抑制剤）または放射性毒等の治療薬にコンジュゲートした抗ＶＳＩＧ８抗体またはその断片を含む免疫複合体を特長とする。かかるコンジュゲートは、本明細書において「免疫複合体」と呼ばれる。１種以上の細胞毒素を含む免疫複合体は、「免疫毒素」と呼ばれる。細胞毒素または細胞毒性剤としては、細胞に有害な（例えば細胞を殺傷する）任意の作用物質が挙げられる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テニポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、並びにこれらの類似体または同族体が挙げられる。治療薬としては、例えば、代謝拮抗薬（例えばメトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルダカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパクロランブシル（ｔｈｉｏｅｐａ  ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メルファラン、カルマスティン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ及びシスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えばダウノルビシン（以前のダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えばダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、並びに有糸分裂阻害剤（例えばビンクリスチン及びビンブラスチン）もまた挙げられる。
【０３７１】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体にコンジュゲート可能な治療用細胞毒素の他の好ましい例としては、デュオカルマイシン、カリケアマイシン、メイタンシン及びオーリスタチン、並びにこれらの誘導体が挙げられる。カリケアマイシン抗体コンジュゲートの例は、市販されている（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（商標）Ｗｙｅｔｈ）。
【０３７２】
当該技術分野において入手可能なリンカー技術を使用して、細胞毒素を本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体にコンジュゲートすることができる。細胞毒素を抗体にコンジュゲートするために使用されているリンカーの種類の例としては、ヒドラゾン、チオエーテル、エステル、ジスルフィド及びペプチド含有リンカーが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、リソソーム分画内で低ｐＨにより切断を受けやすい、またはプロテアーゼ（カテプシン（例えばカテプシンＢ、Ｃ、Ｄ）等の、腫瘍組織内で優先的に発現するプロテアーゼ等）により切断されやすいリンカーを選択することができる。細胞毒素の種類、リンカー、及び治療薬を抗体にコンジュゲートする方法についての更なる考察については、Ｓａｉｔｏ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５５：１９９−２１５；Ｔｒａｉｌ，Ｐ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８−３３７；Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３：２０７−２１２；Ａｌｌｅｎ，Ｔ．Ｍ．（２００２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ２：７５０−７６３；Ｐａｓｔａｎ，Ｉ．ａｎｄ  Ｋｒｅｉｔｍａｎ，Ｒ．Ｊ．（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ３：１０８９−１０９１；Ｓｅｎｔｅｒ，Ｐ．Ｄ．ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｃ．Ｊ．（２００１）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：２４７−２６４もまた参照のこと。
【０３７３】
本発明の抗体を放射性同位体にコンジュゲートして、放射性免疫複合体とも呼ばれる細胞毒性放射性医薬品を作製することもできる。診断または治療用途のための抗体にコンジュゲート可能な放射性同位元素の例としては、ヨウ素１３１、インジウム１１１、イットリウム９０及びルテチウム１７７が挙げられるが、これらに限定されない。放射性免疫複合体（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）の調製方法は、当該技術分野において確立されている。Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）（ＢｉｏｇｅｎｌＤＥＣ）及びＢｅｘｘａｒ（登録商標）（Ｃｏｒｉｘａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を含む放射性免疫複合体が市販されており、類似の方法を使用して、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体を用いながら放射性免疫複合体を調製することができる。
【０３７４】
本明細書にて開示した抗体もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったコンジュゲートを使用して所与の生体応答を改変することができ、薬剤部位は標準の化学的治療薬に限定されるものとして解釈されるべきではない。例えば、薬剤部位は所望の生物活性を有するタンパク質またはポリペプチドであってよい。かかるタンパク質としては、例えば、酵素的に活性な毒素もしくはその活性断片、例えばアブリン、リシンＡ、シュードモナスエキソトキシン、もしくはジフテリア毒素；腫瘍壊死因子もしくはインターフェロンγ等のタンパク質；または生体応答調節剤、例えばリンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、もしくは他の増殖因子を挙げてよい。
【０３７５】
かかる治療用部位を抗体にコンジュゲートする技術は周知であり、例えば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，”ｏｒ    Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ”，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）；Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）、及びＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：  １１９−５８（１９８２）を参照のこと。
【０３７６】
二重特異性分子
少なくともいくつかの実施形態に従うと、本発明は、多重特異性抗ＶＳＩＧ８抗体もまた包含する。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。別の態様では、本発明は、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗ＶＳＩＧ８抗体またはその断片を含む二重特異性分子を特長とする。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体、またはその抗原結合部を、別の機能分子（例えば別のペプチドまたはタンパク質（例えば、受容体に対する別の抗体またはリガンド））に誘導体化、または結合させて、少なくとも２つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を生成することができる。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗体を実際に、１つより多い別の機能分子に誘導体化または結合して、３つ以上の異なる結合部位及び／または標的分子に結合する多重特異性分子を生成してよく、かかる多重特異性分子もまた、本明細書で使用する場合には「二重特異性分子」という用語に包含されることが意図される。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った二重特異性分子を作製するために、二重特異性分子が得られるように、抗体を、別の抗体、抗体断片、ペプチドまたは結合模倣物等の１つ以上の他の結合分子に、（例えば化学結合、遺伝子融合、非共有結合または別の方法で）機能的に結合することができる。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体の結合特異性の１つはＶＳＩＧ８に対するものであり、 他方は任意の他の抗原に対するものである。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体はＶＳＩＧ８の２つの異なるエピトープに結合してよい。二重特異性抗体を使用して、ＶＳＩＧ８を発現する細胞に細胞毒性剤を局在化させてもよい。二重特異性抗体は完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
【０３７７】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った二重特異性抗体は、異なる構造の２つの標的と同時に結合可能な抗体である。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った二重特異性抗体（ｂｓＡｂ）と二重特異性抗体断片（ｂｓＦａｂ）は、Ｂ細胞抗原またはエピトープに特異的に結合する少なくとも１つのアーム、及び、標的可能なコンジュゲートに特異的に結合する少なくとも１つの別のアームを有する。
【０３７８】
少なくともいくつかの実施形態に従うと、本発明は融合抗体タンパク質もまた包含し、このタンパク質は組み換えにより作製された、同一または異なる特異性を有する、２つ以上の異なる一本鎖抗体または抗体断片が結合した抗原結合分子である。分子操作を使用して、種々の二重特異的融合抗体タンパク質を作製することができる。一形態において、二重特異的融合抗体タンパク質は、例えば、ある抗原に対する１つの結合部位を有するセント（ｓｅｎｔ）と、第２の抗原に対する１つの結合部位を有するＦａｂ断片からなる、一価のものである。別の形態において、二重特異的融合抗体タンパク質は、例えば、ある抗原に対する２つの結合部位を有するＩｇＧと、第２の抗原に対する２つの結合部位を有する２つのｓｃＦｖからなる二価のものである。
【０３７９】
本発明は、「オクトパス抗体」（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照のこと）、並びに、ＶＳＩＧ８、及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照のこと）を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作抗体もまた更に包含する。
【０３８０】
したがって、本発明は、ＶＳＩＧ８に対する少なくとも１つの第１の結合特異性と、第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性分子を含む。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、第２の標的エピトープはＦｃ受容体、例えばヒトＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）またはヒトＦｃα受容体（ＣＤ８９）である。したがって、本発明は、それぞれ、ＦｃγＲ、ＦｃαＲまたはＦｃｓＲ発現エフェクター細胞（例えば単球、マクロファージまたは多形核細胞（ＰＭＮ））と、ＶＳＩＧ８を発現する標的細胞の両方に結合可能な二重特異性分子を含む。これらの二重特異性分子は、ＶＳＩＧ８発現細胞をエフェクター細胞に標的化し、ＶＳＩＧ８発現細胞のファゴサイトーシス、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、サイトカイン放出、またはスーパーオキシドアニオンの生成等の、Ｆｃ受容体が仲立ちするエフェクター細胞活性を誘発する。
【０３８１】
二重特異性分子が多重特異性である本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、分子は更に、抗Ｆｃ結合特異性に加えて、第３の結合特異性を含むことができる。一実施形態では、第３の結合特異性は、抗増大因子（ＥＦ）部分、例えば、細胞毒性活性に関与する表面タンパク質に結合することにより、標的細胞に対する免疫応答を増大させる分子である。
【０３８２】
「抗増大因子部分」は、所与の分子（例えば抗原または受容体）に結合することにより、Ｆｃ受容体または標的細胞抗原に対する結合決定基の影響の増大をもたらす抗体、機能的抗体断片またはリガンドであることができる。「抗増大因子部分」は、Ｆｃ受容体または標的細胞抗原と結合することができる。あるいは、抗増大因子部分は、第１及び第２の結合特異性が結合する実体とは異なる実体に結合することができる。例えば、抗増大因子部分は、（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＩＣＡＭ−１、または、標的細胞に対する免疫応答の増大をもたらす他の免疫細胞を介して）細胞毒性Ｔ細胞と結合することができる。
【０３８３】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、二重特異性分子は、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、または一本鎖Ｆｖを含む、少なくとも１つの抗体またはその抗体断片における結合特異性を含む。抗体は、内容が明示的に参考として組み込まれる米国特許第４，９４６，７７８号（Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されているＦｖまたは一本鎖構築物等の、軽鎖もしくは重鎖二量体、またはその任意の最小の断片であってもよい。
【０３８４】
一実施形態では、Ｆｅｙ受容体に対する結合特異性はモノクローナル抗体によりもたらされ、この結合はヒト免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）により遮断されない。本明細書で使用する場合、「ＩｇＧ受容体」という用語は、染色体１に位置する８つのγ鎖遺伝子のいずれかを意味する。これらの遺伝子は、３つのＦｅｙ受容体クラス、すなわちＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）に分類される、合計で１２個の膜貫通または可溶性受容体アイソフォームをコードする。一つの好ましい実施形態において、Ｆｃγ受容体はヒト高親和性ＦｃγＲＩである。ヒトＦｃγＲＩは７２ｋＤａの分子であり、単量体ＩｇＧに対して高親和性を示す。ある特定の好ましい抗Ｆｃγモノクローナル抗体の産生及び特性決定は、 国際公開第８８／０００５２号、及び米国特許第４，９５４，６１７号（Ｆａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されており、これらの教示は完全に、本明細書に参照として組み込まれる。これらの抗体は、受容体のＦｅｙ結合部位とは異なる位置においてＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩまたはＦｃγＲＩＩＩのエピトープに結合するため、これらの結合は生理学的レベルのＩｇＧによっては実質的に遮断されない。本発明にて有用な特定の抗ＦｃγＲＩ抗体は、ｍＡｂ２２、ｍＡｂ３２，ｍＡｂ４４、ｍＡｂ６２及びｍＡｂ１９７である。ｍＡｂ３２を産生するハイブリドーマは、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関から入手可能であり、ＡＴＣＣアクセッション番号はＨＢ９４６９である。他の実施形態では、抗Ｆｅｙ受容体抗体は、モノクローナル抗体２２（Ｈ２２）のヒト化形態である。Ｈ２２抗体の産生及び特性決定は、Ｇｒａｚｉａｎｏ，Ｒ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（１０）：４９９６−５００２、及び国際公開第９４／１０３３２号に記載されている。Ｈ２２抗体を産生する細胞株は、呼称ＨＡ０２２ＣＬＩの元でアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関に保管されており、アクセッション番号ＣＲＬ１１１７７を有する。
【０３８５】
更に別の好ましい実施態様において、Ｆｃ受容体に対する結合特異性は、ヒトＩｇＡ受容体、例えばＦｃ−α受容体（ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９））に結合する抗体により付与され、この結合は、ヒト免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）により遮断されないことが好ましい。「ＩｇＡ受容体」という用語は、染色体１９に位置する１つのα遺伝子（ＦｃαＲＩ）の遺伝子産物を含むことを目的としている。この遺伝子は、５５〜１０ｋＤａの、選択的スプライシングを受けたいくつかの膜貫通アイソフォームをコードすることが知られている。ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）は単球／マクロファージ、エオシン好性顆粒球及び好中球性顆粒球で構造的に発現するが、非エフェクター細胞集団では発現しない。ＦｃαＲＩはＩｇＡ１とＩｇＡ２の両方に対して中程度の親和性（約５×１０−７Ｍ−１）を有し、この親和性は、Ｇ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦ等のサイトカインに曝露すると増大する（Ｍｏｒｔｏｎ，Ｈ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６：４２３−４４０）。ＩｇＡリガンド結合ドメインの外側のＦｃαＲＩと結合する、Ａ３、Ａ５９、Ａ６２及びＡ７７として同定される４つのＦｃαＲＩ特異的モノクローナル抗体が記載されている（Ｍｏｎｔｅｉｒｏ，Ｒ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１７６４）。
【０３８６】
ＦｃαＲＩ及びＦｃγＲＩが、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った二重特異性分子で用いるのに好ましいトリガー受容体であるが、この理由は、これらが（１）主に免疫エフェクター細胞、例えば単球、ＰＭＮ、マクロファージ及び樹状細胞で発現し、（２）高レベル（例えば、細胞１個あたりで５，０００〜１００，０００個）で発現し、（３）細胞毒性活性（例えば（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス）のメディエーターであり、（４）自身を標的化する自己抗原を含む抗原の、向上した抗原提示を仲立ちするからである。
【０３８７】
ヒトモノクローナル抗体が好ましいが、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った二重特異性分子で使用可能な他の抗体はマウス、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体である。
【０３８８】
本発明の二重特異性分子は、当該技術分野において既知の方法を使用して、構成要素である結合特異性（例えば抗ＦｃＲ及び抗ＶＳＩＧ８結合特異性）をコンジュゲートすることにより調製可能である。例えば、各二重特異性分子の結合特異性を個別に生成した後、互いにコンジュゲートすることが可能である。結合特異性がタンパク質またはペプチドである場合、種々のカップリングまたは架橋剤を共有的コンジュ―ゲーションに使用可能である。架橋剤の例としては、プロテインＡ、カルボジイミド、Ｎ−サクシニミジル−Ｓ−アセチル−チオアセテート（ＳＡＴＡ）、５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）、ｏ−フェニレンジマレイミド（ｏＰＤＭ）、Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、及びスルホスクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン（ｃｙｃｌｏｈａｘａｎｅ）−１−カルボン酸エステル（スルホＳＭＣＣ）が挙げられる（例えば、Ｋａｒｐｏｖｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６０：１６８６；Ｌｉｕ，Ｍ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：８６４８を参照のこと）。他の方法としては、Ｐａｕｌｕｓ（１９８５）Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓ．Ｍｉｔｔ．Ｎｏ．７８，１１８−１３２；Ｂｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１−８３、及びＧｌｅｎｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７−２３７５に記載されているものが挙げられる。好ましい架橋剤は、ＳＡＴＡ及びスルホＳＭＣＣであり、共にＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ．）から入手可能である。結合部位が抗体である場合、これらは２つの重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合を介してコンジュゲートすることができる。特に好ましい実施形態において、ヒンジ領域を修飾して、コンジュゲートの前に、奇数個（好ましくは１個）のスルフヒドリル残基を含有させてよい。
【０３８９】
あるいは、両方の結合特異性を同じベクターにコードして、同じ宿主細胞内で発現させてアセンブルすることができる。二重特異性分子がｍＡｂ×ｍＡｂ、ｍＡｂ×Ｆａｂ、Ｆａｂ×Ｆ（ａｂ’）２またはリガンド×Ｆａｂ融合タンパク質である場合において、本方法が特に有用である。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った二重特異性分子は、１つの一本鎖抗体と１つの結合決定基を含む一本鎖分子、または２つの結合決定基を含む一本鎖二重特異性分子であることができる。二重特異性分子は少なくとも２個の一本鎖分子を含んでよい。二重特異性分子の調製方法は、例えば米国特許第５，２６０，２０３号；同第５，４５５，０３０号；同第４，８８１，１７５号；同第５，１３２，４０５号；同第５，０９１，５１３号；同第５，４７６，７８６号；同第５，０１３，６５３号；同第５，２５８，４９８号；及び同第５，４８２，８５８号に記載されている。
【０３９０】
多重特異性抗体の作製技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の、組み換えによる同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３），ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照）、及び「ノブ−ホール」操作（例えば米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異的抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；制御したＦａｂ−アーム交換（Ｌａｂｒｉｊｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  １１０（１３）：５１４５−５０（２０１３）を参照）；２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば米国特許第４，６７６，９８０号とＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）；ロイシンジッパーを使用した二重特異的抗体の産生（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照）；及び、一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照）；及び、例えばＴｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されている三重特異性抗体の調製によってもまた作製可能である。
【０３９１】
二重特異性分子の、それらの特異的標的への結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば増殖抑制）、またはウェスタンブロットアッセイにより確認することが可能である。これらのアッセイはそれぞれ、通常は、対象の複合体に特異的な標識試薬（例えば抗体）を用いることにより対象の特定のタンパク質−抗体複合体の存在を検出する。例えば、抗体−ＦｃＲ複合体を認識し、これに特異的に結合する酵素結合抗体、または抗体断片等を使用して、ＦｃＲ−抗体複合体を検出することができる。あるいは、種々の他のイムノアッセイのいずれかを使用して複合体を検出することができる。例えば、抗体を放射性標識して、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）で使用することができる（例えば、本明細書に参考として組み込まれるＷｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｂ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ，Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｔｒａｉｎｉｎｇ  Ｃｏｕｒｓｅ  ｏｎ  Ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄ  Ａｓｓａｙ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｔｈｅ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｍａｒｃｈ，１９８６を参照のこと）。放射性同位体は、γカウンターもしくはシンチレーションカウンターを使用するかかる方法により、またはオートラジオグラフィーにより検出することができる。
【０３９２】
抗体及びその医薬組成物の使用
腫瘍増殖と成長、及び／または腫瘍細胞の枯渇に重要な分子経路を阻害することを目的とする腫瘍標的療法とは異なり、癌免疫治療法は、患者自身の免疫系を刺激して癌細胞を取り除き、長く生き残った腫瘍を破壊することを目的としている。種々のアプローチを癌免疫治療法で使用することが可能であり、これらの中には、腫瘍特異的Ｔ細胞応答を誘発するための治療用癌ワクチン、及び、免疫抑制経路を取り除くための免疫活性抗体（即ち、阻害性受容体のアンタゴニスト＝免疫チェックポイント）がある。
【０３９３】
標的療法、または従来の抗癌治療法における臨床応答は、癌細胞が耐性をつけ、腫瘍の再発が生じるので一過性となりがちである。しかし、過去数年間における癌免疫治療法の臨床的使用は、この種類の治療法は長く持続する臨床応答を有していることを示しており、長期間にわたる生存に劇的な影響を示している。しかし、応答が長期間にわたるものであっても、（多数の患者が応答するが、応答が一過性である従来の療法、または標的療法とは対象的に）少数の患者しか応答しない。
【０３９４】
腫瘍が臨床的に検出されるときまでに、免疫耐性及び免疫抑制性質を獲得し、種々のメカニズム及び種々の免疫細胞を介して免疫抑制性腫瘍微小環境を生成することにより、免疫防御系が既にかいくぐられている。したがって、癌免疫治療法において、臨床的効果のために治療法を組み合わせることが必要であることがますます明確になりつつある。
【０３９５】
組み合わせのアプローチが必要であり、免疫療法の恩恵を受ける患者の数を増加させることが予想されており、また、応答する癌の数と種類が拡大することで、現在は、単剤療法として免疫チェックポイントの遮断に有効性を示している初期の発症を十分に超えるチェックポイント剤に対する潜在的な癌の発症が拡大する。免疫賦活アプローチを組み合わせることは、転帰を最大化し、単一のアプローチに対する大部分の腫瘍の耐性メカニズムを克服することを意味する。したがって、非免疫原性と従来考えられている腫瘍も同様に免疫原性となる可能性が高く、また、患者の抗腫瘍免疫応答を増大させるように設計された免疫原性治療薬を同時投与することにより、免疫療法に応答することができる。可能性のあるプライミング剤を本明細書の以下において詳述する。
【０３９６】
劇的に増大した併用療法の効果について、根底にある科学的理論的根拠では、単剤療法としての免疫チェックポイントの遮断が、経路が遮断された場合に「開放」される、予め存在する強力な抗腫瘍免疫応答が存在する場合にのみ、腫瘍の退行を誘発することが主張されている。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、ＶＳＩＧ８特異的抗体、抗体断片、コンジュゲート、及びこれらを含む組成物が、併用療法の癌免疫治療法において、あらゆる種類の癌の治療に使用される。
【０３９７】
本明細書で使用する場合、「治療」という用語は、治療的処理、及び予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）用手段の両方を意味し、この実施例においては、癌の治療に関係する。しかし、後述もするように、抗体と医薬組成物の使用はまた、感染症、敗血症、及び／もしくは自己免疫性状態の治療、並びに／または、遺伝子治療の後での望ましくない免疫活性化の阻害に対しても提供される。治療が必要な対象としては、癌を既に患っている対象、及び、癌が予防される対象が挙げられる。したがって、本明細書において治療される哺乳類は、癌を有すると診断されていてもよいし、または、癌に罹りやすい、もしくは癌になりやすくてもよい。本明細書で使用する場合、「治療すること」という用語は、有害作用の予防、開始の遅延、治療、逆転、弱毒化、緩和、最小化、停止、または、上述の癌性の病気、疾患もしくは状態の認識可能な症状の安定化を意味する。治療には、上述した癌の管理もまた含む。「管理する」とは、病気の重症度を低下させること、病状の発現の頻度を低下させること、かかる症状の発現期間を低下させること、かかる症状の発現の重症度を低下させること、癌細胞の成長または増殖を遅延／低下させること、少なくとも１つの症状の進行を遅延させること、少なくとも１つの測定可能な物理的パラメーターを緩和すること等を意味する。例えば、免疫活性化抗ＶＳＩＧ８抗体は、標的細胞、例えば癌、感染または病原体細胞に対するＴ細胞またはＮＫもしくはサイトカイン免疫を促進する筈であり、それによって、病状に関与する細胞を枯渇させることにより癌または感染症を治療する。逆に、免疫阻害性抗ＶＳＩＧ８抗体は、Ｔ細胞もしくはＮＫ活性、及び／または自己免疫、炎症またはアレルギー状態等のいくつかの免疫疾患の疾患病理学に関与する炎症性サイトカインの分泌を低下させる筈であり、また、それによって、かかる状態に関係し得る疾患の病理学及び組織破壊（例えば、関節リウマチ状態に関係する関節破壊）を治療または緩和する。
【０３９８】
治療目的の「哺乳類」とは、ヒト、飼育動物及び家畜、及び動物園、スポーツまたはペット動物例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシ等を含む、哺乳類として分類される任意の動物を意味する。哺乳類はヒトであることが好ましい。哺乳類は、本明細書で上述した病気、疾患または状態の１つ以上を有すると診断されたヒト、あるいは少なくとも１種の癌に罹りやすいヒトであることが好ましい。
【０３９９】
「治療的有効量」という用語は、哺乳類の病気または疾患を治療するのに効果的な、本発明に従った作用物質の量を意味する。
【０４００】
本発明の治療薬は、対象に単独で、または製薬上許容できる担体と混合した場合、医薬組成物の一部として提供することができる。
【０４０１】
本明細書に記載した抗ＶＳＩＧ８抗体、断片、そのコンジュゲート、もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、及び／または、少なくとも本発明のいくつかの実施形態に従った、これらを含む医薬組成物はまた、併用療法で投与することができる、即ち、他の強化作用物質及び／または他の治療法と組み合わせることができる。少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は（例えばｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｃａｎｃｅｒｔｏｐｉｃｓに見出すことが可能なように）当該技術分野において周知の標準的なケア用癌治療のいずれかと組み合わせて使用することができる。
【０４０２】
例えば、併用療法は、本明細書に記載した少なくとも１種の他の治療用もしくは免疫制御剤、その他の化合物もしくは免疫療法、または免疫刺激法と共に、抗ＶＳＩＧ８抗体、断片、そのコンジュゲート、及び／またはこれらを含む医薬組成物を含むことができる。
【０４０３】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、抗ＶＳＩＧ８抗体と組み合わせて使用可能な治療薬は、抗腫瘍応答を増強する強化剤である。
【０４０４】
本明細書にて開示した抗ＶＳＩＧ８免疫刺激抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、癌免疫治療法用の強化剤と組み合わせるために、種々の方法が利用可能である。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体は、主に、内因性抗腫瘍応答を増大するのに適合した強化剤、例えば放射線治療、凍結治療、抗腫瘍免疫応答を強化する従来の／通常の化学療法、抗腫瘍免疫応答を強化する標的療法、抗血管新生療法、Ｔｒｅｇ及びＭＤＳＣ等の免疫抑制細胞を標的化する治療薬、免疫刺激性抗体、サイトカイン療法、治療用癌ワクチン、養子細胞移入と組み合わせて使用される。
【０４０５】
いくつかの化学療法または抗癌用の従来の薬剤と組み合わせて使用する背景にある科学的理論的根拠は、大部分の化学療法化合物の細胞毒性作用の結果としての癌細胞死が、増強された抗原提示と抗腫瘍免疫応答（即ち、免疫原性細胞死）に繋がる増加した量の腫瘍抗原をもたらし得、抗ＶＳＩＧ８抗体を用いた強力な効果をもたらすということである（Ｚｉｔｖｏｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ，２００８，Ｔｈｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，ｖｏｌ．１１８，ｐａｇｅｓ  １９９１−２００１；Ｇａｌｌｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  １１，ｐａｇｅｓ  ２１５−２３３）。腫瘍細胞死を介して抗腫瘍応答を増強し得る他の併用療法は、放射線治療、凍結治療、手術、及びホルモン除去である。これらの癌治療はそれぞれ、宿主内に腫瘍抗原の源を作り出す。
【０４０６】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、抗癌活性を有することを示すビスホスホネート、特にアミノビスホスホネート（ＡＢＰ）と組み合わせて使用する。
【０４０７】
ＡＢＰに関係する活性のいくつかは、先天性免疫と適応免疫の接点にまたがるヒトγδＴ細胞に存在し、強力な抗腫瘍活性を有する。
【０４０８】
標的療法は、腫瘍細胞の免疫原性死を誘発することにより、または、免疫エフェクター機構を利用することにより、腫瘍特異的免疫応答もまた刺激することができる（Ｇａｌｌｕｚｚｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  １１，ｐａｇｅｓ  ２１５−２３３）。
【０４０９】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従い、癌治療のために、抗ＶＳＩＧ８抗体と組み合わせて作用物質として使用する標的療法を、本明細書に記載する。
【０４１０】
内因性抗腫瘍応答もまた増大させる他の癌免疫療法もまた、養子Ｔ細胞療法、治療用癌ワクチン、免疫抑制低下細胞及びその機能、サイトカイン療法、または免疫刺激性抗体等の免疫エフェクター機構を増強させることにより、本明細書にて開示した抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の効果を強化することができる。
【０４１１】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）及び骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）等の、治療薬が標的とする制御免疫抑制細胞と組み合わせて使用する。一般に使用される多数の化学療法は、Ｔｒｅｇの非特異的標的化を行い、ＴｒｅｇまたはＭＤＳＣの数、または免疫抑制活性を低減させる（Ｆａｃｃｉａｂｅｎｅ  Ａ．ｅｔ  ａｌ  ２０１２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；７２（９）２１６２−７１；Ｂｙｒｎｅ  ＷＬ．ｅｔ  ａｌ  ２０１１，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７１：６９１５２０；Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ  ＤＩ．ａｎｄ  Ｎａｇａｒａｊ  Ｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２００９  Ｖｏｌｕｍｅ  ９，ｐａｇｅｓ  １６２−１７４）。これに関し、いくつかの化学療法薬剤を用いたメトロノーム型治療法は、制御性細胞を調節することにより、免疫抑制効果ではなく免疫刺激をもたらす。したがって、本発明の少なくとも一部の実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、シクロホスファミド、ゲムシタビン、マイトキサントロン、フルダラビン、フルダラビン、ドセタキセル、パクリタキセル、サリドマイド及びサリドマイド誘導体から選択されるがこれら限定されない薬剤と組み合わせて使用する。
【０４１２】
更に、本発明の少なくとも一部の実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、１）Ｔｒｅｇ細胞表面受容体（抗ＣＤ２５ｍＡｂ、ダクリズマブ、バシリキシマブ等）の認識により、Ｔｒｅｇを直接標的化する枯渇もしくは殺傷抗体、または、２）デニレウキンジフチトクス（ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ  ｄｉｆｔｉｔｏｘ）（Ｏｎｔａｋ）（ヒトＩＬ−２とジフテリア毒素の融合タンパク質）、もしくはＬＭＢ−２（ＣＤ２５に対するｓｃＦｖとシュードモナス毒素の融合）等のリガンドに向けられる毒素、並びに、３）ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＯＸ４０及びＧＩＴＲ等のＴｒｅｇ細胞表面受容体を標的とする抗体、または４）前に特定した他のＮＫ受容体を標的化する抗体、小分子もしくは融合タンパク質を含む新規のＴｒｅｇを特異的に標的とする作用物質と組み合わせて使用する。
【０４１３】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、以下で記載するＴＬＲ（Ｔｏｌｌ様受容体）アゴニスト；エクトヌクレオチダーゼ阻害剤、またはＡ２Ａアデノシン受容体の阻害剤等の、アデノシン経路と干渉する作用物質；フレソリムマブ（ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）、レーデリムマブ（ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、メテリムマブ、トラべデルセン、ＬＹ２１５７２９９、ＬＹ２１０９７６等のＴＧＦ−β阻害剤；ＣＣＲ４／ＣＣＬ２／ＣＣＬ２２経路等のケモカイン受容体阻害剤を含む、腫瘍組織へのＴｒｅｇ動員の遮断薬を含む、Ｔｒｅｇの誘発、及び／または機能を攪乱する選択肢のいずれかと組み合わせて使用する。
【０４１４】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、以下で記載する、ＩＤＯ（インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ）阻害剤等の、免疫抑制活性を発揮するサイトカイン及び酵素の阻害剤；ＩＬ−１０、ＩＬ−３５、ＩＬ−４及びＩＬ−１３等の免疫抑制性微小環境を促進する抗炎症性サイトカインの阻害剤；Ｔｒｅｇを減少させ、ＤＣの分化を支えるベバシズマブ（登録商標）を含む、免疫抑制性腫瘍微小環境を阻害するための選択肢のいずれかと組み合わせて使用する。
【０４１５】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、以下で記載する、ビタミンＤ３、またはビタミンＡ代謝産物（レチノイン酸、全トランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ））による抑制機能を有しない成熟骨髄細胞への分化を促進すること；ＣＯＸ２阻害剤、シルデナフィル等のホスホジエステラーゼ５阻害剤、ニトロアスピリン等のＲＯＳ阻害剤によるＭＤＳＣ抑制活性の阻害を含むＭＤＳＣ（骨髄由来の抑制性細胞）を標的とする選択肢のいずれかと組み合わせて使用する。
【０４１６】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、免疫刺激性抗体、または抗腫瘍免疫応答を強化する他の作用物質と組み合わせて使用する（Ｐａｒｄｏｌｌ  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０１２；２０９（２）：２０１−２０９）。免疫刺激性抗体は、免疫機能を直接制御すること、即ち、他の阻害標的を遮断するか、または免疫刺激性タンパク質を増強することにより抗腫瘍免疫を促進する。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体を、イピリムマブ、トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）等の、抗ＣＴＬＡ４ｍＡｂを含む免疫チェックポイントを標的とするアンタゴニスト抗体；ニボルマブ、ＢＭＳ−９３６５５８／ＭＤＸ−１１０６／ＯＮＯ−４５３８、ＡＭＰ２２４、ＣＴ−０１１、ＭＫ−３４７５等の抗ＰＤ−１、ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６、ＲＧ−７４４６／ＭＰＤＬ３２８０Ａ等の抗ＰＤＬ−１アンタゴニスト；ＩＭＰ−３２１、抗ＴＩＭ−３、抗ＢＴＬＡ、抗Ｂ７−Ｈ４、抗Ｂ７−Ｈ３、抗ＶＩＳＴＡ等の抗ＬＡＧ−３；ＣＰ−８７０，８９３、ルカツムマブ（ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、ダセツズマブ等の、抗ＣＤ４０  ｍＡｂを含む免疫活性化タンパク質を標的化するアゴニスト抗体；ＢＭＳ−６６３５１３、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ＰＦ−０５０８２５６６等の抗ＣＤ１３７  ｍＡｂ；抗ＯＸ４０等の抗ＯＸ４０  ｍＡｂ；ＴＲＸ５１８等の抗ＧＩＴＲ  ｍＡｂ；ＣＤＸ−１１２７等の抗ＣＤ２７  ｍＡｂ；及び抗ＩＣＯＳ  ｍＡｂと組み合わせて使用する。
【０４１７】
サイトカインは、免疫系の細胞が互いに連絡して、標的抗原に対して協調して堅強、かつ自己に限定された応答を生成することを可能にする、分子メッセンジャーである。サイトカインベースの治療法は、患者自身の免疫系を刺激して癌を拒絶する直接的な試みを具体化している。癌を撲滅するために免疫系を利用することに対する、過去２０年間にわたる関心の増加は、サイトカインを特性決定し、その広大なシグナル伝達ネットワークを利用して癌治療を進展させるための大きな努力に付随してきた。サイトカインは、腫瘍部位にて免疫エフェクター細胞とストローマ細胞を直接刺激し、細胞毒性エフェクター細胞による腫瘍細胞の認識を向上させる。多数の動物腫瘍モデル研究では、サイトカインは広範な抗腫瘍活性を有し、この活性は、癌治療に対する多数のサイトカインベースのアプローチに転用されていることが示されている（Ｌｅｅ  ａｎｄ  Ｍａｒｇｏｌｉｎ  ２０１１，Ｃａｎｃｅｒｓ  ３（４）：３８５６−９３）。多数のサイトカインが、とりわけＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８及びＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα（インターフェロンα）、ＩＦＮβ、及びＩＦＮγを含む、癌免疫治療法用の抗腫瘍免疫応答を強化する作用物質として前臨床または臨床開発に存在する。
【０４１８】
いくつかのサイトカインは癌治療に認可されており、より多くのサイトカインが開発中である。しかし、治療効果は多くの場合、深刻な副作用、及び不十分な薬物動態学的性質により妨害される。したがって、抗体−サイトカイン融合分子（免疫サイトカイン）、ポリエチレングリコールへの化学的複合体化（ＰＥＧ化）、自己全腫瘍細胞でのサイトカインのトランスジェニック発現、ＤＮＡワクチンへのサイトカイン遺伝子の組み込み、サイトカイン遺伝子を送達するための組み換えウイルスベクター等を含む、薬学動態、並びにその有効性及び／または毒性を改善するために、サイトカインの全身投与に加えて、治療用サイトカインの送達と、その腫瘍部位への局在化に種々の方法を使用することができる。免疫サイトカインの場合、腫瘍特異的抗体または抗体断片へのサイトカインの融合が、標的化した送達、またそれ故、向上した有効性及び薬学動態、並びに副作用の減少を可能にする。
【０４１９】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、上述のとおり、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８及びＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα（インターフェロンα）、ＩＦＮα−２ｂ、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ等のサイトカインを含むサイトカインを、抗腫瘍免疫応答を強化する作用物質として使用することを伴うサイトカイン療法、並びに、送達のための異なる方法と組み合わせて使用する。
【０４２０】
癌ワクチンを使用して、既存の癌を治療する（治療的）、または特定のハイリスクの個体において癌の進行を防止する（予防的）。治療用癌ワクチンは、Ｔ細胞のプライミングの改善、及び抗原提示の改善を可能にし、抗腫瘍免疫応答を強化するための治療薬として使用することができる（Ｍｅｌｌｍａｎ  Ｉ．ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｎａｔｕｒｅ，４８０：２２−２９；Ｓｃｈｌｏｍ  Ｊ，２０１２，Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ；１０４：５９９−６１３）。
【０４２１】
治療用癌ワクチンのいくつかの種類が、前臨床状態、及び臨床開発中である。これらとしては、例えば以下のものが挙げられる。
１）手術中に取り除かれた癌細胞を治療して免疫原性を向上させ、患者に注入して腫瘍細胞内で抗原に対する免疫応答を誘発する全腫瘍細胞ワクチン。腫瘍細胞ワクチンは自己性、即ち、患者自身の腫瘍、または、所与の腫瘍型における、通常２つまたは３つの、確立及び特性決定されたヒト腫瘍細胞株を含有する同種異系（ＧＶＡＸワクチンプラットフォーム等）であることができる。
２）通常はタンパク質またはペプチドである腫瘍抗原（またはいくつかの腫瘍抗原の組み合わせ）を、（場合により、アジュバント、及び／または、ＧＭ−ＣＳＦ等の、樹状細胞の免疫制御剤もしくは誘引剤と共に）投与して免疫系を追加免疫する腫瘍抗原ワクチン。腫瘍抗原はある特定の種類の癌に特異的であってよいが、これらは特定の患者に対して作製されるものではない。
３）ベクターベースの腫瘍抗原ワクチン及びＤＮＡワクチンを、抗原を安定して提供し、抗腫瘍免疫応答を刺激するための方法として使用することができる。
【０４２２】
腫瘍抗原をコードするベクターを（場合により、ＧＭ−ＣＳＦ等の炎症誘発剤または他の誘引剤と共に）患者に注射し、ｉｎ  ｖｉｖｏで細胞に取り込ませて特異的抗原を作製し、次いで所望の免疫応答を誘発する。ベクターを使用して、一度に２つ以上の腫瘍抗原を送達し、免疫応答を増大させてよい。更に、組み換えウイルス、細菌または酵母菌ベクターが自身の免疫応答を引き起こす筈であり、これもまた、全体の免疫応答を増強し得る。
【０４２３】
４）優先的に癌細胞に感染する条件複製単純ヘルペスウイルスの腫瘍内注射を伴う、ＯｎｃｏＶｅｘ／Ｔ−ＶＥＣ等の腫瘍崩壊ウイルスワクチン。ＧＭ−ＣＳＦも発現するように組み換えされたウイルスは、細胞溶解を引き起こす癌細胞内で複製可能であり、新しいウイルスと腫瘍抗原のアレイを放出し、プロセス中でＧＭ−ＣＳＦを分泌する。したがって、かかる腫瘍崩壊ウイルスワクチンは腫瘍微小環境における、抗腫瘍免疫応答を刺激するＤＣの機能を向上させる。
【０４２４】
５）樹状細胞ワクチン（Ｐａｌｕｃｋａ  ａｎｄ  Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ，２１０２，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，１２（４）：２６５−２７７）：樹状細胞（ＤＣ）は腫瘍細胞を貪食し、腫瘍特異的Ｔ細胞に腫瘍抗原を提示する。このアプローチにおいて、ＤＣを癌患者から単離し、腫瘍特異的Ｔ細胞を提示するようにプライミングする。この目的のために、いくつかの方法を使用することができる。ＤＣを腫瘍細胞または溶解物と共に加え、ＤＣを腫瘍抗原のタンパク質またはペプチドと共に加え、腫瘍抗原をＤＣ標的化ｍＡｂに結合する。ＤＣを（ＧＭ−ＣＳＦ等の）刺激因子の存在下で処理し、ｅｘ  ｖｉｖｏで活性化及び成熟させ、次に、癌細胞に対する免疫応答を誘発するために、患者内に再び注入する。照射により（ＧＭ−ＣＳＦ等の）刺激サイトカインを分泌するよう改変した全腫瘍細胞を患者に注入することにより、樹状細胞をｉｎ  ｖｉｖｏでプライミングすることもできる。単球を用いて、同様のアプローチを実施することができる。進行した前立腺癌の治療に対して認可されている治療用癌ワクチンであるＳｉｐｕｌｅｕｃｅｌ−Ｔ（Ｐｒｏｖｅｎｇｅ）は、樹状細胞ワクチンの例である。
【０４２５】
したがって、本発明の少なくとも一部の実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、治療用癌ワクチンと組み合わせて使用する。かかる治療用癌ワクチンの非限定例としては、上述のとおり、全腫瘍細胞ワクチン、腫瘍抗原ワクチン、ベクター系ワクチン、腫瘍崩壊ウイルスワクチン、樹枝細胞ワクチンが挙げられる。
【０４２６】
癌免疫治療法の１つのアプローチは、養子Ｔ細胞療法または養子細胞移入（ＡＣＴ）に基づき、これは、天然の自己腫瘍特異的Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏでの同定及び膨張を伴い、これを次に、癌患者の中に養子移入する（Ｒｅｓｔｉｆｏ  ｅｔ  ａｌ，２０１３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６２（４）：７２７−３６（２０１３）  Ｅｐｕｂ  Ｄｅｃ  ４  ２０１２）。ｅｘ  ｖｉｖｏでの膨張の後、患者に注入し直した細胞を腫瘍に集め、腫瘍の破壊に仲立ちさせることができる。この養子移入の前に、宿主は放射線照射及び／または化学療法により免疫枯渇させることができる。リンパ球の枯渇、養子細胞移入及び（ＩＬ−２等の）Ｔ細胞増殖因子を組み合わせることにより、腫瘍を持つ患者における腫瘍の根絶期間を延ばすことができる。より新規のアプローチは、通常の末梢血Ｔ細胞をｅｘ  ｖｉｖｏで遺伝子組み換えし、腫瘍関連抗原に対する特異性を付与することを伴う。例えば、特に良好な抗腫瘍応答を有するＴ細胞のＴＣＲのクローンをウイルス発現ベクターに挿入して使用し、治療する患者の自己Ｔ細胞に感染させることができる。別の選択肢は、Ｔ−ｂｏｄｙとしても知られる、実質的にキメラ免疫グロブリン−ＴＣＲ分子であるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を使用することである。ＣＡＲは抗体のような特異性を有し、標的細胞の表面（細胞外の標的結合モジュール）上で、ＭＨＣに限定されない構造を認識し、Ｔ細胞を活性化可能なＴＣＲ細胞内領域にグラフトされる（Ｒｅｓｔｉｆｏ  ｅｔ  ａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６２（４）：７２７−３６（２０１３）Ｅｐｕｂ  Ｄｅｃ  ４  ２０１２；及びＳｈｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ４９３：１１１−１１５  ２０１３）。
【０４２７】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書にて開示した癌免疫治療法用の抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、上述の遺伝子組み換えＴ細胞を含む養子細胞移入と組み合わせて使用し、抗腫瘍免疫応答を強化する。
【０４２８】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った、ＶＳＩＧ８特異的抗体、並びに／または代替の足場並びに／もしくは多重特異的及び二重特異性分子並びに免疫複合体、これらを含む組成物を、１種以上の他の治療薬と共に同時投与することができ、この他の投与は、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った組成物と共に、または相乗的に、癌を治療または予防するように作用する。ＶＳＩＧ８に関係する治療薬、及び１種以上の他の治療薬を、いずれかの順序で、または同時に投与することができる。他の治療薬は例えば、細胞毒性剤、放射性毒性剤、または免疫抑制剤である。組成物は（免疫複合体として）作用物質に結合可能であるか、または作用物質とは個別に投与することが可能である。後者（個別投与）の場合、組成物は作用物質の前、後もしくは作用物質と同時に投与することができ、または、他の既知の治療薬（例えば、放射線等の抗癌治療）と共に同時投与することができる。かかる治療薬としてはとりわけ、それ自体だけでは患者に対して毒性または順毒性の量でのみ効果的な、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シスプラチンブレオマイシンサルフェート、カルマスティン、クロラムブシル、及びシクロホスファミドヒドロキシ尿素等の抗新生物薬が含まれる。シスプラチンは４週間毎に、１回あたり１００ｍｇ／用量で静脈内投与し、アドリアマイシンは２１日毎に、１回あたり６０〜７５ｍｇ／ｍＬの用量で静脈内投与する。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったヒト抗ＶＳＩＧ８抗体、またはその抗原結合断片及び／もしくは代替の足場を化学療法剤と同時投与することは、異なるメカニズムにより作用し、ヒト腫瘍細胞に対して細胞毒性効果をもたらす２つの抗癌剤をもたらす。かかる同時投与は、薬剤耐性の発生、または、抗体と非反応性となる腫瘍細胞における抗原性の変化に起因する問題を解決する。別の実施形態において、例えば、対象をサイトカインで治療することにより、対象を更に、ＦｅｙまたはＦｅｙ受容体の発現または活性を制御、例えば向上または阻害する作用物質で治療することができる。多重特異性分子を用いる治療の間に投与するのに好ましいサイトカインとしては、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、及び腫瘍壊死因子（ＴＦαまたはＴＦＰ）が挙げられる。
【０４２９】
標的特異的エフェクター細胞、例えば、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異性分子）に結合したエフェクター細胞もまた、治療薬として使用することができる。標的化のためのエフェクター細胞は、マクロファージ、好中球または単球等のヒト白血球であることができる。他の細胞としては、好酸球、ナチュラルキラー細胞、及び他のＩｇＧまたはＩｇＡ受容体を有する細胞が挙げられる。所望により、エフェクター細胞は治療する対象から得ることができる。標的特異的エフェクター細胞を、生理学的に許容できる溶液中における細胞の懸濁液として投与することができる。投与する細胞の数は、１０８〜１０９個台とすることができるが、治療目的に応じて変化する。一般に、量は、標的細胞（例えば、ＶＳＩＧ８タンパク質を発現する腫瘍細胞）で局在化し、例えばファゴサイトーシス等により細胞の殺傷に影響を及ぼすのに十分である。投与経路もまた変化することができる。
【０４３０】
標的特異的エフェクター細胞を用いる治療法を、標的化細胞を除去するための他の技術と組み合わせて実施することができる。例えば、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異性分子）、並びに／またはこれらの組成物を有するエフェクター細胞を用いる抗腫瘍治療法を、化学療法と組み合わせて使用することができる。
【０４３１】
更に、組み合わせの免疫療法を使用して、２つの異なる細胞毒性エフェクター集団を、腫瘍細胞の排除に動員してよい。例えば、抗ＦｃγＲＩまたは抗ＣＤ３に結合した抗ＶＳＩＧ８抗体を、ＩｇＧまたはＩｇＡ受容体特異的結合と組み合わせて使用してよい。
【０４３２】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った二重特異的及び多重特異性分子もまた使用して、例えば細胞表面上で受容体をキャッピング及び除去することにより、エフェクター細胞でのＦｃγＲまたはＦｃγＲの量を制御することができる。抗Ｆｃ受容体の混合物もまた、この目的のために使用することができる。
【０４３３】
補体を結合するＩｇＧ１、ＩｇＧ-２、もしくはＩｇＧ-３またはＩｇＭのかかる部分等の補体結合部位を有する、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療用組成物（例えば、ヒト抗体、代替の足場多重特異的及び二重特異性分子、並びに免疫複合体）もまた、補体の存在下にて使用することができる。一実施形態では、標的細胞を含む細胞の母集団の、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った結合剤と適切なエフェクター細胞によるｅｘ  ｖｉｖｏ処理は、補体または血清含有補体を加えることにより補うことができる。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った結合剤でコーティングした標的細胞のファゴサイトーシスは、補体タンパク質を結合することにより向上することができる。別の実施形態において、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った組成物（例えば、ヒト抗体、多重特異的及び二重特異性分子）でコーティングした標的細胞はまた、補体により溶解することができる。更に他の実施形態において、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った組成物は、補体を活性化しない。
【０４３４】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療用組成物（例えばヒト抗体、代替の足場多重特異的及び二重特異性分子、並びに免疫複合体）はまた、補体と共に投与することが可能である。
【０４３５】
したがって、本発明の少なくとも一部の実施形態によれば、ヒト抗体、多重特異的または二重特異性分子、及び血清または補体を含む組成物が存在する。補体がヒト抗体、多重特異的または二重特異性分子に近接して位置しているという点で、これらのこれらの組成物は有利である。あるいは、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったヒト抗体、多重特異的または二重特異性分子、及び補体または血清を個別に投与することができる。
【０４３６】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った、本明細書にて開示した抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の「治療的に有効な用量」とは、病徴の重症度の低下、病徴を有しない期間の頻度と長さの増加、寿命の増加、病気の寛解、または、病気の苦しみに起因する障害もしくは能力低下の予防もしくは減少をもたらすのが好ましい。例えば、ＶＳＩＧ８陽性腫瘍の治療に関して、「治療的に有効な用量」とは、未治療の対象と比較して、細胞増殖または腫瘍増殖を少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、更により好ましくは少なくとも約６０％、そして更により好ましくは少なくとも約８０％阻害するのが好ましい。腫瘍増殖を阻害する化合物の能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系で計算することができる。
【０４３７】
あるいは、組成物のこの特性は、化合物の阻害能力を調べることにより評価することができ、アッセイによるかかるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの阻害は、当業者に既知である。治療に有効な量の治療用化合物は、腫瘍サイズを減少させるか、別様においては対象における症状を緩和することができる。
【０４３８】
当業者は、対象のサイズ、対象の症状の重症度、及び、選択した特定の組成物または投与経路等の因子に基づいて治療的有効量を決定することができる。
【０４３９】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った抗ＶＳＩＧ８抗体を、中和抗体として使用することができる。中和抗体（Ｎａｂ）は、特異的抗原と結合、及び中和または阻害することにより、例えば、細胞またはウイルス上で受容体を遮断し、ウイルスの宿主細胞への結合を阻害することにより、生物学的影響を阻害することができる抗体である。ＮＡｂは、活性に必要な重要な表面分子を遮断するか、または、標的細胞上の受容体への作用物質の結合を干渉するかのいずれかにより、作用物質の生物学作用を部分的に、または完全に消滅させる。
【０４４０】
本明細書で使用する場合、「治療薬」とは、モノクローナル及び／もしくはポリクローナル抗体、並びに／または抗原結合断片、並びに／またはこれらを含有するコンジュゲート、並びに／または、本明細書で列挙する癌の治療に使用される、ＶＳＩＧ８ポリペプチドもしくはそのエピトープのいずれか１つに特異的に結合する抗原結合部位を含むこれらの代替足場のいずれか１つである。
【０４４１】
本発明の更なる態様に従うと、治療薬を使用して、癌細胞に向けられるもの等の、Ｔ細胞活性の病理学的阻害を防止することができる。
【０４４２】
本発明の更なる態様に従うと、治療薬を使用して、例えばＴ細胞増殖及びサイトカイン分泌により明らかとなることができるＴ細胞の活性化を阻害することができる。
【０４４３】
したがって、本発明の追加の態様によると、癌の治療または免疫刺激の促進を必要とする対象に、有効量の治療薬のいずれか１つ、並びに／または治療薬のいずれか１つを含み、また更に製薬上許容できる希釈剤もしくは担体を含む医薬組成物を投与することにより、本明細書で列挙する癌の治療方法、及び／または対象のＶＳＩＧ８ポリペプチドが仲立ちする免疫刺激を促進する方法を提供することができる。
【０４４４】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療薬または医薬組成物を、他の化合物または免疫療法と組み合わせて投与してもよい。例えば、併用療法は、腫瘍ワクチン、養子Ｔ細胞治療、Ｔｒｅｇ枯渇、抗体（例えばベバシズマブ、エルビタックス）、ペプチド、ペプチボディ、小分子、細胞毒性及び細胞増殖抑制剤（例えばパクリタキセル、シスプラチン、ビノレルビン、ドセタキセル、ゲムシタビン、テモゾロマイド、イリノテカン、５ＦＵ、カルボプラチン）等の化学療法剤、インターフェロン及びインターロイキン等の免疫調節剤、免疫刺激性抗体、成長ホルモンまたは他のサイトカイン、葉酸、ビタミン、ミネラル、アロマターゼ阻害剤、ＲＮＡｉ、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤等を含むがこれらに限定されない、少なくとも１つの他の治療薬もしくは免疫制御剤、または免疫刺激法と組み合わせた、本発明の化合物を含むことができる。
【０４４５】
少なくともいくつかの実施形態に従うと、免疫細胞、好ましくはＴ細胞を、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで治療薬と接触させ、免疫応答を制御することができる。治療薬と接触させるＴ細胞は、α／β及びγ／δＴ細胞受容体を含むＴ細胞受容体を発現する、任意の細胞であることができる。Ｔ細胞は、ＣＤ４とＣＤ５もまた発現するＴ細胞サブセットを含む、ＣＤ３を発現する全ての細胞を含む。Ｔ細胞としては、ナイーブ細胞とメモリー細胞、及びＣＴＬ等のエフェクター細胞の両方が挙げられる。Ｔ細胞はまた、Ｔｈ１、Ｔｅ１、Ｔｈ２、Ｔｈ２、Ｔｈ３、Ｔｈ１７、Ｔｈ２２、Ｔｒｅｇ、及びＴｒ１細胞等の細胞も含む。Ｔ細胞はまた、ＮＫＴ細胞、及びＴ細胞系統の類似の固有のクラスも含む。
【０４４６】
ＶＳＩＧ８遮断を標準的な癌治療と組み合わせてもよい。ＶＳＩＧ８遮断を、化学療法レジメンと効果的に組み合わせてもよい。これらの場合において、投与される化学療法レジメンの用量を減少させることが可能であり得る。かかる組み合わせの例は、後期の腎細胞癌の治療のためにテムシロリムスと組み合わせる、本明細書にて開示する抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質である。かかる組み合わせの別の例は、後期の腎細胞癌を治療するためにインターロイキン−２（ＩＬ−２）と組み合わせた、及び、イピリムマブまたはＢＭＳ−９３６５５８と組み合わせた、本明細書にて開示した抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質である。ＶＳＩＧ８遮断と化学療法を組み合わせて使用する背後にある科学的な理論的根拠は、大部分の化学療法化合物の細胞毒性作用の結果としての細胞死が、抗原提示経路における腫瘍抗原の量の増加をもたらす筈であるということである。細胞死によるＶＳＩＧ８の遮断と相乗効果をもたらしうる他の併用療法は、放射線治療、凍結治療、手術、及びホルモン除去である。更なる免疫制御剤分子を用いる、他の更なる併用療法は、免疫系の刺激に相乗的に寄与し、癌を根絶する。これらの手順はそれぞれ、宿主内に腫瘍抗原の源を作製する。血管新生阻害剤をＶＳＩＧ８遮断と組み合わせてもよい。血管新生阻害は、腫瘍抗原を宿主の抗原提示経路に供給し得る細胞の死をもたらす。
【０４４７】
ＶＳＩＧ８遮断抗体を、ＦｃαまたはＦｅｙ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞に標的化する二重特異性抗体と組み合わせてもまた使用することができる（例えば、米国特許第５，９２２，８４５号及び同第５，８３７，２４３号を参照）。二重特異性抗体を使用して、２つの個別の抗原を標的化することができる。例えば、抗Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原（例えば、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）二重特異性抗体を使用して、マクロファージを腫瘍部位を標的としている。この標的化は、腫瘍特異的応答をより効率的に活性化し得る。これらの応答におけるＴ細胞アームを、ＶＳＩＧ８遮断を使用して補完する。あるいは、腫瘍抗原、及び樹状細胞特異的細胞表面マーカーに結合する二重特異性抗体を使用して、抗原をＤＣに直接送達してよい。
【０４４８】
腫瘍は、非常に多様なメカニズムにより宿主免疫監視機構を回避する。これらのメカニズムの多くは、腫瘍により発現され、免疫抑制性であるタンパク質の不活性化により克服され得る。これらとしてはとりわけ、ＴＧＦ−β（Ｋｅｈｒｌ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６３：１０３７−１０５０）、ＩＬ−１０（Ｈｏｗａｒｄ，Ｍ．＆  Ｏ’Ｇａｒｒａ，Ａ．（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １３：１９８−２００）、及びＦａｓリガンド（Ｈａｈｎｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４：１３６３−１３６５）が挙げられる。これらの要素のそれぞれに対する抗体を抗ＶＳＩＧ８と組み合わせて使用し、免疫抑制剤の影響を弱め、宿主による腫瘍への免疫応答を付与してよい。
【０４４９】
宿主の免疫応答性を活性化するために使用され得る他の抗体を、抗ＶＳＩＧ８と組み合わせて使用することができる。これらは、ＤＣ機能と抗原提示を活性化する、樹状細胞表面の分子を含む。抗ＣＤ４０抗体は、効果的にＴ細胞ヘルパー活性の代わりとなることができ（Ｒｉｄｇｅ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：４７４−４７８）、ＶＳＩＧ８抗体と組み合わせて使用することができる（Ｉｔｏ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  ２０１（５）５２７−４０）。ＯＸ−４０（Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４：２１６０−２１６９）、４−１ＢＢ（Ｍｅｌｅｒｏ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３：６８２−６８５（１９９７））、及びＩＣＯＳ（Ｈｕｔｌｏｆｆ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  ３９７：２６２−２６６）等の、Ｔ細胞共刺激分子に対する抗体、並びに、ＣＴＬＡ−４（例えば米国特許第５，８１１，０９７号、イピリムマブ（ｉｍｐｌｉｍｕｍａｂ））またはＢＴＬＡ（Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４：６７０−９）、Ｂ７−Ｈ４（Ｓｉｃａ，Ｇ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １８：８４９−６１）、ＰＤ−１等の陰性共刺激分子の活性を遮断する抗体を活性化することによってもまた、Ｔ細胞の活性化の量の増加をもたらしてよい。
【０４５０】
骨髄移植は現在、造血由来の種々の腫瘍を治療するために使用されている。移植片対宿主病はこの治療の結果であるが、移植片対腫瘍応答からは治療的効果が得られる場合がある。ＶＳＩＧ８遮断を使用して、ドナーから移植した腫瘍特異的Ｔ細胞の効果を増加させることができる。腫瘍に対する抗原特異的Ｔ細胞を産生するために、抗原特異的Ｔ細胞のｅｘ  ｖｉｖｏ活性化及び膨張、並びに、これらの細胞のレシピエントへの養子移入を伴ういくつかの実験的治療プロトコールもまた存在する（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｒ．＆  Ｒｉｄｄｅｌｌ，Ｓ．（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：５４６−５１）。これらの方法を使用して、ＣＭＶ等の病原体に対するＴ細胞応答を活性化してもよい。抗ＶＳＩＧ８抗体の存在下におけるｅｘ  ｖｉｖｏ活性化は、養子移入したＴ細胞の頻度及び活性を増加させることが予想され得る。
【０４５１】
任意で、ＶＳＩＧ８に対する抗体を、癌細胞、（組み換えタンパク質、ペプチド及び糖質分子を含む）精製腫瘍抗原、細胞、免疫刺激サイトカインをコードする遺伝子をトランスフェクションした細胞等の免疫原と組み合わせて使用することができる（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：４９１９−２８）。使用可能な腫瘍ワクチンの非限定例としては、大腸癌の治療用のＭＵＣ１のペプチド、卵巣癌の治療のためのＭＵＣ−１／ＣＥＡ／ＴＲＩＣＯＭのペプチド、または、サイトカインＧＭ−ＣＳＦ（以下で更に論じる）を発現するようにトランスフェクションした腫瘍細胞が挙げられる。
【０４５２】
ヒトにおいては、腫瘍の中には、ＲＣＣ等の、免疫原性であることが示されているものがある。ＶＳＩＧ８遮断によりＴ細胞活性化の閾値を上げることにより、宿主の腫瘍応答を活性化することを予測し得ることが予想される。ＶＳＩＧ８遮断は、免疫付与プロトコールと組み合わせた際に最も効果的なようである。腫瘍に対するワクチン接種のための多くの実験的方法が考案されてきている（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．，２０００，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：６０−６２；Ｌｏｇｏｔｈｅｔｉｓ，Ｃ，２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：３００−３０２；Ｋｈａｙａｔ，Ｄ．２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：４１４−４２８；Ｆｏｏｎ，Ｋ．２０００，ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ  Ｓｐｒｉｎｇ：７３０−７３８を参照、Ｒｅｓｔｉｆｏ，Ｎ．ａｎｄ  Ｓｚｎｏｌ，Ｍ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｃｈ．６１，ｐｐ．３０２３−３０４３  ｉｎ  ＤｅＶｉｔａ，Ｖ．ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９７，Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎもまた参照のこと）。これらの方法の１つにおいて、自己または同種異系腫瘍細胞を使用してワクチンを調製する。これらの細胞ワクチンは、腫瘍細胞を形質導入してＧＭ−ＣＳＦを発現した場合に最も効果的であることが示されている。ＧＭ−ＣＳＦは、腫瘍免疫付与のための抗原提示の強力な活性化因子であることが示されている。
【０４５３】
自己免疫疾患の治療のための、抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質、及びそれらを含有する医薬組成物の使用
少なくともいくつかの実施形態に従うと、ＶＳＩＧ８刺激治療薬として機能する、本明細書に記載したＶＳＩＧ８抗体、断片、これらのコンジュゲート、もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、及び／またはこれを含む医薬組成物を任意で、免疫系関連疾患を治療するために使用してよい。
【０４５４】
任意で、免疫系関連状態は、免疫関連状態、本明細書で列挙した自己免疫疾患、移植拒絶反応及び移植片対宿主病、並びに／または、ＶＳＩＧ８が仲立ちする免疫刺激の遮断もしくは促進、本明細書で列挙する免疫関連疾患、並びに／または（免疫刺激を促進もしくは阻害する）免疫療法を含む。
【０４５５】
任意で、免疫状態は自己免疫疾患、移植拒絶反応、または移植片対宿主病から選択される。任意で、治療は、免疫関連状態を治療するのに有用な他の成分と組み合わせる。
【０４５６】
したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った作用物質を使用した多発性硬化症の治療を、例えば、任意で本明細書に記載した多発性硬化症を治療するための、任意の既知の治療薬または方法と組み合わせてよい。
【０４５７】
したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った作用物質を使用した関節リウマチの治療を、例えば、任意で本明細書に記載した関節リウマチを治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせてよい。したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った作用物質を使用したＩＢＤの治療を、例えば、任意で本明細書に記載したＩＢＤを治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせてよい。
【０４５８】
したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った作用物質を使用した乾癬の治療を、例えば、任意で本明細書に記載した乾癬を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせてよい。
【０４５９】
したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った作用物質を使用したＩ型糖尿病の治療を、例えば、任意で本明細書に記載したＩ型糖尿病（ｔｙｐｅｌ  ｄｉａｂｅｔｅｓ）を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせてよい。
【０４６０】
したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った作用物質を使用したぶどう膜炎の治療を、例えば、任意で本明細書に記載したぶどう膜炎を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせてよい。
【０４６１】
したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った作用物質を使用したシェーグレン症候群の治療を、例えば、任意で本明細書に記載したシェーグレン症候群を治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせてよい。
【０４６２】
したがって、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った作用物質を使用した全身性エリテマトーデスの治療を、例えば、任意で本明細書に記載した全身性エリテマトーデスを治療するための任意の既知の治療薬または方法と組み合わせてよい。
【０４６３】
上述の治療法においては、上述の自己免疫または炎症状態の１つを有する対象に、本明細書にて開示した炎症阻害性抗ＶＳＩＧ８抗体もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または本発明に従った抗原結合断片を投与することが好ましく、本明細書にて開示した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、ＶＳＩＧ８が仲立ちする免疫に対する少なくとも１つの影響を模倣するかまたはそれを刺激し、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞もしくはＮＫ活性、及び／または病理に関係する炎症性サイトカインの産生を抑制することにより、例えば、Ｔ細胞寛容、または免疫抑制の延長を引き起こすＴｒｅｇを誘発することにより、病徴を予防または緩和し、潜在的に病気の寛解の延長をもたらす。
【０４６４】
本明細書で列挙する、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療薬及び／またはこれを含む医薬組成物を、例えば、同種（ａｌｉｏ）もしくは異種移植の急性もしくは慢性拒絶、または炎症性もしくは自己免疫疾患を治療もしくは予防するために、または寛容を誘発するために、単独の活性成分として、または、免疫制御レジメンもしくは他の抗炎症薬中の他の薬剤と共に投与してよい。
【０４６５】
感染症を治療するための抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質、及び医薬組成物の使用
少なくともいくつかの実施形態に従い、ＶＳＩＧ８遮断治療薬として機能する、本明細書に記載したＶＳＩＧ８抗体、断片、これらのコンジュゲート、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質及び／もしくは医薬組成物を任意で、感染症を治療するために使用してよい。
【０４６６】
慢性的な感染症は多くの場合、ウイルス特異的Ｔ細胞応答の機能障害の程度を変化させることを特徴とし、この欠陥が、宿主が残存する病原体を取り除くことができない主な理由である。機能的エフェクターＴ細胞が最初、感染症の初期段階に生成されるが、それらは、外来抗原への持続的な曝露の結果、慢性的な感染症の過程において機能を徐々に喪失し、Ｔ細胞の疲弊を生じさせる。疲弊したＴ細胞は、高レベルの複数の同時阻害受容体、例えばＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、及びＬＡＧ３を発現する（Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；２１：１７９−１８６；Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９；１８２：５８９１−５８９７，Ｓｈａｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００７；８：２３９−２４５）。疲弊したＴ細胞によるＰＤ−１の過剰発現が、ＨＩＶ、ＨＣＶ及びＨＢＶを含む慢性的なウイルス感染に苦しむ患者において臨床的に観察された（Ｃｒａｗｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９；２１：１７９−１８６；Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９；１８２：５８９１−５８９７，Ｓｈａｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００７；８：２３９−２４５）。他のウイルス、細菌、及び寄生生物を含む更なる病原体におけるこの経路について、いくつかの調査が行われている（Ｈｏｆｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｖｏｌ  ２０１１，Ａｒｔ．ＩＤ  ４５１６９４，Ｂｈａｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．２０１１；１０８（２２）：９１９６−２０１）。例えば、ＰＤ−１経路は、標準的な盲腸結紮穿刺法により誘発される敗血症モデルを使用して、細菌感染の制御に関与することが示された。ノックアウトマウスにＰＤ−１が存在しないことで、このモデルが敗血症による死から保護された（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ２００９：１０６；６３０３−６３０８）。
【０４６７】
ＰＤ−１またはＣＴＬＡ−４等の同時阻害経路を遮断することにより、Ｔ細胞の疲弊を逆転させることができ（Ｒｉｖａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；１８３：４２８４−９１；Ｇｏｌｄｅｎ−Ｍａｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２００９；８３：９１２２−３０；Ｈｏｆｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｖｏｌ  ２０１１，Ａｒｔ．ＩＤ  ４５１６９４）、これにより、抗ウイルス性免疫機能の回復が可能となる。ウイルス感染を治療するための、同時阻害を遮断する治療的可能性は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路を遮断することにより幅広く研究され、このことは、アカゲザル（Ｖａｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２００９；４５８：２０６−２１０）における急性及び慢性サル免疫不全ウイルス（ＳｒＶ）感染症を含む、いくつかの感染症動物モデル、並びに、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）（Ｂａｒｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．２００６；４３９：６８２−７）、及びＳＪＬ／Ｊマウスのタイラーマウス脳脊髄炎ウイルス（ＴＭＥＶ）モデル（Ｄｕｎｃａｎ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ．２０１１；６：ｅｌ８５４８）等を含む慢性ウイルス感染症のマウスモデルにおいて効果的であることが示された。これらのモデルにおいて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断は抗ウイルス性応答を向上させ、残っているウイルスの除去を促進した。加えて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断は、血漿中の特異的抗ウイルス抗体の産生を増加させることにより明らかとなったように液性免疫を増加させ、これは、改善した細胞応答と組み合わせて、血漿中のウイルス量を減少させ、生残を増加させる。
【０４６８】
本明細書で使用する場合、「感染症及び／または感染病」及び／または「感染症」という用語は、同じ意味で用いられ、個別の宿主生物内における病原性生物学的作用物質の存在及び／または成長により引き起こされる、任意の疾患、病気及び／または状態を含む。本明細書で使用する場合、「感染症」という用語は、臨床的に明白な疾患（即ち、病気の特徴的な医学的徴候及び／もしくは症状）を示し、かつ／またはその経過の大部分もしくは全てが無症候（ａｓｙｍｔｏｍａｔｉｃ）である、上述の疾患、病気及び／または状態を含む。本明細書で使用する場合、「感染症」という用語は、増殖とサイトカイン産生の低下により明らかとなる障害を有する機能性を特徴とする、Ｔ細胞表現型の疲弊をもたらす外来抗原の残存により引き起こされる疾患、病気及び／または状態もまた含む。本明細書で使用する場合、「感染症及び／または感染病」及び／または「感染症」という用語は、以下に記載する、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染及び／または寄生生物感染により引き起こされる感染症、感染病及び／または感染状態のいずれかを更に含む。
【０４６９】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従い、本明細書で列挙する治療薬、及び／またはこれを含む医薬組成物と、感染症を治療するのに効果的な既知の治療薬の組み合わせの使用を提供する。
【０４７０】
本明細書で列挙する治療薬、及び／またはこれを含む医薬組成物を、任意で本明細書に記載した、細菌感染症の治療に使用する１種以上の追加の治療薬と組み合わせて投与することができる。
【０４７１】
本明細書で引用する治療薬、及び／またはこれを含む医薬組成物を、任意で本明細書に記載した、ウイルス感染症の治療に使用する１種以上の追加の治療薬と組み合わせて投与することができる。本明細書で列挙する治療薬、及び／またはこれを含む医薬組成物を、任意で本明細書に記載した、真菌感染症の治療に使用する１種以上の追加の治療薬と組み合わせて投与することができる。
【０４７２】
上述の治療法においては、上述の感染状態の１つを患う対象に、本明細書にて開示した免疫活性抗ＶＳＩＧ８抗体もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または本発明に従った抗原結合断片を投与するのが好ましく、本明細書にて開示したこの抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、ＶＳＩＧ８が仲立ちする少なくとも１つの免疫への効果（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞もしくはＮＫ活性の阻害効果、及び／または炎症性サイトカイン産生の阻害効果）に拮抗するか、または、ＴｒｅｇでのＶＳＩＧ８の刺激効果を阻害することにより、感染した細胞または病原体の枯渇または殺傷を促進し、潜在的に、対象の免疫細胞による病原体または感染細胞の殺傷の向上に基づき、病気の寛解をもたらす。
【０４７３】
敗血症の治療のための、抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合（ＦＵＳＯＮ）タンパク質、及びそれらを含有する医薬組成物の使用
少なくともいくつかの実施形態に従い、ＶＳＩＧ８遮断治療薬として機能する、本明細書に記載したＶＳＩＧ８抗体、断片、これらのコンジュゲート、及び／または医薬組成物を任意で、敗血症を治療するために使用してよい。
【０４７４】
敗血症は潜在的に生命を脅かす、感染症の合併症である。敗血症は、感染症に対する最初の宿主応答が不適切に増幅され、制御不全となった場合に進行する複雑な臨床的症候群を示し、宿主にとって有害となる。敗血症における最初の超炎症性段階（「サイトカインストーム」）の後に、免疫抑制状態が続く（Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１３：２６０−２６８）。「免疫麻痺」とも呼ばれる、免疫障害のこの後の段階では、一次感染、ＨＳＶ及びサイトメガロウイルス等のウイルスの再活性化、並びに、多くの場合は免疫応答性患者にはとりわけ毒性でない生命体による、新しい二次感染の進行の除去が行われないことが明らかとなる。今日の敗血症患者の圧倒的多数は、最初の超炎症性発作から生き延びて、ただ次の数日〜数週間にわたり、敗血症が誘発する複数の臓器機能不全に対する包括的ケアユニットにいることとなる。敗血症が誘発する免疫抑制は、これらの脆弱な患者において支配的な免疫不全としてますます認識されている。一次感染後の病原体の除去障害、及び／または二次感染への罹りやすさは、敗血症に関係する高い罹患率及び死亡率の原因となる。
【０４７５】
阻害タンパク質の上方制御が、敗血症の免疫抑制に存在する臨床メカニズムの１つとして最近明らかになってきた。例えば、ＰＤ−１／ＰＤＬ−１経路は、敗血症の転帰の因子を決定し、抗菌性免疫応答による効果と損傷の繊細なバランスを制御しているようである。実験モデルにおける敗血症の間に、腹腔マクロファージと血液単球がＰＤ−１の量を著しく増加させ、このことは、細胞機能障害の進行と関係していた（Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２００９  ＰＮＡＳ  １０６：６３０３−６３０８）。同様に、敗血症性ショックの患者において、末梢Ｔ細胞におけるＰＤ−１、及び単球におけるＰＤＬ−１の発現が劇的に上方制御された（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  １５：Ｒ７０）。最近の動物研究では、抗−ＰＤ１または抗ＰＤＬ１抗体による、ＰＤ−１／ＰＤＬ−１経路の遮断は、敗血症における生残を向上させたことが示されている（Ｂｒａｈｍａｍｄａｍ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０  Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８８：２３３−２４０；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  １４：Ｒ２２０；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  １７：Ｒ８５）。同様に、抗ＣＴＬＡ４抗体によるＣＴＬＡ−４の遮断は、敗血症における生存を向上させた（Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｓｈｏｃｋ  ３６：３８−４４；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  １７：Ｒ８５）。合わせると、これらの所見は、負の共刺激分子を含む阻害タンパク質の遮断は、敗血症の有害作用を防止するための潜在的な治療的アプローチであることを示唆している（Ｇｏｙｅｒｔ  ａｎｄ  Ｓｉｌｖｅｒ，Ｊ  Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．，８８（２）：２２５−２２６，２０１０）。
【０４７６】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書で列挙する治療薬、及び／またはこれを含む医薬組成物と、敗血症を治療するのに効果的な既知の治療薬の組み合わせの使用を提供する。
【０４７７】
敗血症患者における免疫系の通常存在する活性及び抑制アームの繊細なバランスの回復は、不均衡さの正確な性質、即ち、感染症に対応する病原性生命体、その位置、感染開始から経過した時間、及び個体の他のパラメーターに依存し得る。したがって、ツールの正確な選択は、各個体患者の特定の免疫状態または欠陥に大きくに依存し得、異なる作用物質の組み合わせを必要とする場合がある。
【０４７８】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書で列挙する治療薬及び／またはこれを含む医薬組成物の組み合わせの使用を提供し、これを、敗血症の標準的なケアまたは新規の治療と、敗血症の最初の超炎症性段階におけるサイトカインストームを遮断する治療法と、及び／または敗血症が誘発する免疫抑制段階を克服するための免疫活性効果を有する治療法と、組み合わせることができる。
【０４７９】
敗血症の標準的ケア治療の組み合わせが、「Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｓｅｖｅｒｅ  Ｓｅｐｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｅｐｔｉｃ  Ｓｈｏｃｋ」（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ３９：１６５−２２８）により推奨されており、それらのいくつかを以下に記載する。
【０４８０】
起こりうる全ての病原体（細菌及び／または真菌）に対して活性を有する、広範囲に使用される抗体（治療は敗血症が診断された際に開始するが、特定の抗原は同定されていない）の例としては、セフォタキシム（Ｃｌａｆｏｒａｎ（登録商標））、チカルシリン及びクラブラン酸（Ｔｉｍｅｎｔｉｎ（登録商標））、ピペラシリン及びタゾバクタム（Ｚｏｓｙｎ（登録商標））、イミペネム及びシラスタチン（Ｐｒｉｍａｘｉｎ（登録商標））、メロペネム（Ｍｅｒｒｅｍ（登録商標））、クリンダマイシン（Ｃｌｅｏｃｉｎ）、メトロニダゾール（Ｆｌａｇｙｌ（登録商標））、セフトリアキソン（Ｒｏｃｅｐｈｉｎ（登録商標））、シプロフロキサシン（Ｃｉｐｒｏ（登録商標））、セフェピム（Ｍａｘｉｐｉｍｅ（登録商標））、レボフロキサシン（Ｌｅｖａｑｕｉｎ（登録商標））、バンコマイシン、または一覧の薬剤の任意の組み合わせが挙げられる。
【０４８１】
血管収縮薬の例としては、ノルエピネフィリン、ドーパミン、エピネフィリン、バソプレシンが挙げられる。
【０４８２】
ステロイドの例としては、ハイドロコルチゾン、デキサメタゾン、またはフルドロコルチゾンが挙げられ、静脈内または他の筋肉収縮性治療の例としては、心筋障害を有する敗血症患者用のドブタミンが挙げられる。
【０４８３】
ドロトレコギンα（ｄｒｏｔｒｅｃｏｇｉｎ  ａｌｆａ）（活性化）（ＤｒｏｔＡＡ）等の組み換えヒト活性化プロテインＣ（ｒｈＡＰＣ）。
【０４８４】
β阻害剤は、加えて局所及び全身の炎症を低減する。
【０４８５】
ピルベート、サクシネート、または高用量のインスリン置換等の代謝介入。
【０４８６】
敗血症の新規の潜在的治療法との組み合わせ：
ｓＰＬＡ２−ＩＩＡ（ＬＹ３１５９２０ＮＡ／Ｓ−５９２０等）の選択的阻害剤。理論的根拠：炎症の最中に放出されるＩＩＡ群分泌ホスホリパーゼＡ２（ｓＰＬＡ２−ＩＩＡ）は重度の敗血症で増加し、血漿量は生存と逆相関の関係にある。
【０４８７】
リン脂質エマルション（ＧＲ２７０７７３等）。理論的根拠：前臨床、及びｅｘ  ｖｉｖｏ研究は、リポタンパク質は内毒素と結合して中和することを示し、実験動物研究は、リポタンパク質が投与された際の敗血症死からの防御を示す。内毒素の中和は、リポタンパク質粒子内のリン脂質の量と相関している。
【０４８８】
抗ＴＮＦ−α抗体：理論的根拠：腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）は、敗血症抗ＣＤ１４抗体（ＩＣ１４等）で観察される病態生理学的徴候及び症状の多くを誘発する。理論的根拠：ＣＤ１４等の上流認識分子は、病因において重要な役割を果たす。細菌細胞壁成分は骨髄細胞上のＣＤ１４及びコレセプターに結合し、細胞活性化、及び炎症性メディエーターの産生をもたらす。抗ＣＤ１４モノクローナル抗体（ＩＣ１４）は、内毒素血症の動物及びヒトモデルにおいて、リポ多糖体が誘発する応答を低下させることが示されている。
【０４８９】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の阻害剤、及びこれらの下流シグナル伝達経路。理論的根拠：感染微生物は、その表面に非常に保存された巨大分子（例えばリポ多糖体、ペプチドグリカン）を示す。これらの巨大分子が免疫細胞の表面上のパターン認識受容体（Ｔｏｌｌ様受容体［ＴＬＲ］と呼ばれる）により認識されると、宿主の免疫応答が開始される。これは、敗血症の特徴である過剰な全身性炎症反応の原因となり得る。いくつかのＴＬＲの阻害は、特に、グラム陰性菌の外膜リポ多糖体または内毒素の受容体であるＴＬＲ４における潜在的な治療として評価されている。ＴＬＲ４発現と経路を標的する種々の薬剤が、敗血症の治療可能性を有している（Ｗｉｔｔｅｂｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｖｏｌ  １０  記事ＩＤ  ５６８３９６）。それらの中には、ＴＬＲ４、可溶性ＴＬＲ４、スタチン（Ｒｏｓｕｖａｓｔａｔｉｎ（登録商標）、Ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ（登録商標）等）、ケタミン、ニコチン類似体、エリトラン（Ｅ５５６４）、レサトルビド（ＴＡＫ２４２）を標的化する抗体が挙げられる。加えて、クロロキン等の他のＴＬＲのアンタゴニスト、中和抗体（抗ＴＬＲ−２）によるＴＬＲ−２の阻害も挙げられる。
【０４９０】
ＳＯＣＳ  １（サイトカイン分泌抑制剤）、タラクトフェリン（Ｔａｌａｃｔｏｆｅｒｒｉｎ）即ち組み換えヒトラクトフェリンにおける作用におけるランソプラゾール。理論的根拠：ラクトフェリンは、分泌物と免疫細胞に見出される、抗感染性及び抗炎症性性質を有する糖タンパク質である。ヒトラクトフェリンの組み換え形態であるタラクトフェリンαは類似の性質を有し、胃腸粘膜バリアの完全性を維持するのに重要な役割を果たす。タラクトフェリンは、敗血症の動物モデルにおいて、及び、重度の敗血症を患う患者の臨床試験において有効性を示した（Ｇｕｎｔｕｐａｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２０１３；４１（３）：７０６−７１６）。
【０４９１】
乳脂肪小球ＥＧＦ第ＶＩＩＩ因子（ＭＦＧ−Ｅ８）：アポトーシス細胞と食細胞の架橋分子であり、アポトーシス細胞のファゴサイトーシスを促進する。
【０４９２】
ニコチン及び類似体等の、「コリン作動性抗炎症性経路」のアゴニスト。理論的根拠：迷走神経を刺激することにより、サイトカイン、即ち免疫系メディエーターの産生を減少させ、炎症を遮断する。「炎症性反射」と呼ばれる、この神経「回路」は、マクロファージに発現するニコチン性アセチルコリン受容体のａ７サブユニット（ａ７ｎＡＣｈＲ）上の神経末端部から放出されるアセチルコリンの特定の作用（「コリン作動性抗炎症性経路」と呼ばれるメカニズム）を通して行われる。迷走神経刺激または薬理学的ａ７アゴニストを介するこの経路の活性化により、全身性炎症、ショック、及び敗血症の複数のモデルにおける組織損傷が防止される（Ｍａｔｓｕｄａ  ｅｔ  ａｌ  ２０１２  Ｊ  Ｎｉｐｐｏｎ  Ｍｅｄ  Ｓｃｈ．７９：４−１８；Ｈｕｓｔｏｎ  ２０１２  Ｓｕｒｇ．Ｉｎｆｅｃｔ．１３：１８７−１９３）。
【０４９３】
インフラマソーム経路を標的化する治療薬。理論的根拠：インフラマソーム経路は敗血症における炎症反応に大きく寄与し、決定的な構成成分が、局在化した炎症から悪化した超炎症性宿主応答への移行の誘導を担う（Ｃｉｎｅｌ  ａｎｄ  Ｏｐａｌ  ２００９  Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．３７：２９１−３０４；Ｍａｔｓｕｄａ  ｅｔ  ａｌ  ２０１２  Ｊ  Ｎｉｐｐｏｎ  Ｍｅｄ  Ｓｃｈ．７９：４−１８）。
【０４９４】
幹細胞治療法。理論的根拠：間葉幹細胞（ＭＳＣ）は、損傷した組織を収容する、常在幹細胞を活性化する、パラクリンシグナルを分泌して全身及び局所炎症応答を制限する、免疫細胞を有益に制御する、脅かされた組織におけるアポトーシスを減少させて血管新生を刺激することにより組織の治癒を促進する、及び直接の抗菌活性を示す能力により複数の有益な性質を示す。これらの効果は、敗血症動物モデルにおける臓器機能不全の低下と生残の改善と関係しており、ＭＳＣが治療用添加剤として有用であり得るという証拠をもたらした（Ｗａｎｎｅｍｕｅｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２０１２  Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．１７３：１１３−２６）。
【０４９５】
本明細書にて開示した抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の、免疫活性抗体、サイトカイン療法、免疫調節剤等の他の免疫調節剤との組み合わせ。かかる作用物質は、特に、（先天性及び／または獲得性に関わらない）免疫防御が、例えば敗血症が誘発する超炎症性及び免疫抑制状態において低下する条件において、免疫応答性の増加をもたらす。宿主免疫を増強する治療薬による、敗血症が誘発する免疫抑制状態の逆転は、免疫抑制が記録された患者において、二次感染の発生を低下させ、転帰を改善し得る（Ｈｏｔｃｈｋｉｓｓ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｌａｎｃｅｔ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１３：２６０−２６８；Ｐａｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．１７：１１８）。
【０４９６】
免疫活性抗体は、免疫機能を直接制御する、即ち、他の阻害タンパク質を遮断することにより、または共刺激タンパク質を増強することにより免疫応答を促進する。敗血症の実験モデルは、阻害タンパク質（ＰＤ−１、ＰＤＬ−１またはＣＴＬＡ−４等）の抗体遮断による免疫活性が、敗血症における生存を向上したことを示しており（Ｂｒａｈｍａｍｄａｍ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０  Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．８８：２３３−２４０；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  １４：Ｒ２２０；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  １７：Ｒ８５；Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｓｈｏｃｋ  ３６：３８−４４）、かかる免疫活性剤が、敗血症が誘発する免疫抑制の有害作用を防止するための潜在的な治療法であることを示している（Ｇｏｙｅｒｔ  ａｎｄ  Ｓｉｌｖｅｒ  Ｉ  Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．８８（２）：２２５−２２６，２０１０）。免疫活性抗体としては、以下が挙げられる。１）阻害免疫チェックポイントを標的とするアンタゴニスト抗体としては、抗ＣＴＬＡ４  ｍＡｂ（イピリムマブ、トレメリムマブ等）、抗ＰＤ−１（ニボルマブ、ＢＭＳ−９３６５５８／ＭＤＸ−１１０６／ＯＮＯ−４５３８、ＡＭＰ２２４、ＣＴ−０１１、ランブロジルマブ（ｌａｍｂｒｏｚｉｌｕｍａｂ）、ＭＫ−３４７５等）、抗ＰＤＬ−１アンタゴニスト（ＢＭＳ−９３６５５９／ＭＤＸ−１１０５、ＭＥＤＩ４７３６、ＲＧ−７４４６／ＭＰＤＬ３２８０Ａ等）、抗ＬＡＧ−３（ＩＭＰ−３２１等）、抗ＴＩＭ−３、抗ＢＴＬＡ、抗Ｂ７−Ｈ４、抗Ｂ７−Ｈ３、抗ＶＩＳＴＡが挙げられる。２）免疫活性タンパク質を増強するアゴニスト抗体としては、抗ＣＤ４０  ｍＡｂ（ＣＰ−８７０，８９３、ルカツムマブ（ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、ダセツズマブ等）、抗ＣＤ１３７  ｍＡｂ（ＢＭＳ−６６３５１３、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ＰＦ−０５０８２５６６等）、抗ＯＸ４０  ｍＡｂ（抗ＯＸ４０等）、抗ＧＩＴＲ  ｍＡｂ（ＴＲＸ５１８等）、抗ＣＤ２７  ｍＡｂ（ＣＤＸ−１１２７等）、及び抗ＩＣＯＳ  ｍＡｂが挙げられる。
【０４９７】
免疫エフェクター細胞を直接刺激し、免疫応答を向上させるサイトカイン：ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８及びＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα（インターフェロンα）、ΠΤΝΓβ、ＩＦＮγを、敗血症治療用の抗ＧＥＮ抗体と組み合わせて使用することができる。理論的根拠：サイトカインベースの治療法は、患者自身の免疫系を刺激する直接的な試みを体現している。敗血症の実験モデルは、ＩＬ−７及びＩＬ−１５等のサイトカインの投与が、Ｔ細胞の生存能を促進し、敗血症における改善した生存をもたらすことを示した（Ｕｎｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４：３７６８−３７７９；Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０１０  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８４：１４０１−１４０９）。インターフェロンγ（ＴＰＮγ）は、敗血症が誘発するｉｎ  ｖｉｔｒｏでの単球の免疫抑制状態を逆転させる。ｉｎ  ｖｉｖｏ研究は、ＩＦＮγは、ヒトにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで免疫抑制状態を部分的に逆転させることを示した。ＩＦＮγと顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）は、敗血症を患う患者の、ｅｘ  ｖｉｖｏで刺激した白血球の免疫適合性を回復させる（Ｍｏｕｋｔａｒｏｕｄｉ  ｅｔ  ａｌ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ．２０１０；１４：Ｐ１７；Ｌｅｅｎｔｊｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  Ｖｏｌ  １８６，ｐｐ  ８３８−８４５，２０１２）。
【０４９８】
チモシンα１等の免疫調節剤。理論的根拠：チモシンα１（Ｔα１）は、先天性及び獲得免疫系の両方において内因性レギュレーターとして機能する、天然の胸腺ペプチドである。これは、Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎、ある特定の癌等のウイルス感染を含む免疫不全関連疾患を治療するために、及びワクチン強化のために、世界中で使用されている。とりわけ、免疫調節剤研究における細菌の進展は、敗血症患者におけるＴα１治療の有益な効果を示している（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  ２０１３，１７：Ｒ８）。
【０４９９】
上述の敗血症治療法において、毒性感染症のために敗血症を患う、または敗血症の進行のリスクを有する対象、例えば、抗生物質または他の薬剤に耐性を有する対象は、本明細書にて開示する免疫刺激性抗ＶＳＩＧ８抗体もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または本発明に従った抗原結合断片が投与されるのが好ましく、本明細書にて開示したこの抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、ＶＳＩＧ８が仲立ちする少なくとも１つの免疫への効果、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞もしくはＮＫ活性の阻害効果、及び／または炎症性サイトカイン産生の阻害効果に拮抗するか、またはＴｒｅｇ上のＶＳＩＧ８の刺激効果を阻害することにより、枯渇を促進、または感染細胞もしくは病原体を殺傷し、潜在的に、対象の内因性免疫細胞による病原体または感染細胞の殺傷の向上に基づき、病気の寛解をもたらす。敗血症は速やかに臓器不全をもたらし得るため、本実施形態においては、インタクトな抗体ではなく、Ｆａｂ等の抗ＶＳＩＧ８抗体断片を投与するのが、インタクトな抗体よりも敗血症及び感染部位に素早く到達し得るので有益であり得る。（かかる治療レジメンにおいて、抗体半減期は、場合によってはこの病気の急速な罹患のために、さほど問題とはならない場合がある。）
【０５００】
遺伝子または細胞治療または移植後の、望ましくない免疫活性化を低下させるための、抗ＶＳＩＧ８抗体またはＶＳＩＧ融合タンパク質、及びそれらを含有する医薬組成物の使用。
本明細書で使用する場合、「遺伝子治療」という用語は、任意の種類の遺伝子治療、ベクターが仲立ちする遺伝子治療、遺伝子導入、ウイルスが仲立ちする遺伝子導入を包含する。
【０５０１】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、ＶＳＩＧ８を標的とし、免疫応答にて阻害活性を有する、本明細書に記載したＶＳＩＧ８抗体、断片、これらのコンジュゲート、及び／または医薬組成物を、種々の遺伝子病の治療に使用する遺伝子治療の後の、望ましくない免疫活性化を低下させるための治療薬として使用することができる。１つの仮説に束縛されるものではないが、かかる抗体は免疫応答においてＶＳＩＧ８様の阻害活性を有し、かつ／または、任意で病原性Ｔ細胞及び／もしくはＮＫ細胞の阻害により、ＶＳＩＧ８免疫阻害活性を増強する。
【０５０２】
遺伝子病の治療のための遺伝子治療産物は、現在臨床試験中である。最近の研究では、遺伝子治療ベクターを使用した、いくつかの遺伝子病における治療の成功が記録されている。遺伝子治療法は、３つの重要な要素、すなわち移される遺伝子、遺伝子が導入される標的組織、及び、遺伝子を標的組織に入れるのを容易にするために用いられるベクター（遺伝子送達賦形剤）を特徴とする。圧倒的多数の遺伝子治療臨床試験は、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、偽型ウイルス及び単純ヘルペスウイルスを含むウイルスベクターを、非常に効率的な送達賦形剤として利用している。しかし、ヒト免疫系と、遺伝子治療ベクターの全ての構成要素との相互作用は、長続きする治療効果に対して大きな制限の１つを示すようである。ヒトでの研究は、ウイルスベクターに対する宿主免疫応答の可能性は高いことを示している。細胞毒性細胞による、中和抗体の形成及び／または形質導入細胞の破壊をもたらすウイルス、または導入遺伝子産物そのものへのかかる免疫応答は、治療効果を非常に妨害する可能性がある（Ｓｅｒｅｇｉｎ  ａｎｄ  Ａｍａｌｆｉｔａｎｏ  ２０１０  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ２：２０１３；Ｍｉｎｇｏｚｚｉ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈ  ２０１３  Ｂｌｏｏｄ  １２２：２３；Ｍａｓａｔ  ｅｔ  ａｌ  ２０１３  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｍｅｄ．１５：３７９）。したがって、免疫応答を回避して、トランスジェニック治療用タンパク質の長期間にわたる発現を促進する方法の開発は、クリニックにおいて遺伝子治療を成功させるための、主な課題の１つとなっている。
【０５０３】
ウイルスベクターによりコードされるトランスジェニックタンパク質に対する免疫応答に影響を及ぼす因子としては、投与経路、ベクター用量、トランスジェニックタンパク質の免疫原性、宿主の炎症状態、及びキャプシドの血清型が挙げられる。これらの因子は、先天性免疫、サイトカイン産生、ＡＰＣ成熟、抗原提示を誘発し、最終的に、機能性エフェクターに対するナイーブＴリンパ球をプライミングすることにより免疫原性に影響を及ぼすと考えられている（Ｍｉｎｇｏｚｚｉ  ａｎｄ  Ｈｉｇｈ  ２０１３  Ｂｌｏｏｄ  １２２：２３）。したがって、まさにこれらのメカニズムを干渉することにより免疫活性化を低下させる着想は、短期間の免疫抑制を誘発し、ベクター投与に続く初期の免疫プライミングを回避し、長期間の寛容を促進するという目的をもって理論的に現れた。
【０５０４】
遺伝子治療の後、特に、複数の注射の後の、望ましくない免疫活性化を阻害する方法として、ベクター送達時に、免疫応答の２つの重複しないチェックポイントを標的とすることによる免疫制御治療を、動物モデルで試験した。マウスまたはサルの肺に中に注入したアデノウイルスベクターによる、ベクターが仲立ちする免疫応答の研究では、抗ＣＤ４０Ｌ抗体による一過性の処置が、アデノウイルスが誘発する免疫応答の抑制をもたらし、結果的に動物にアデノウイルスベクターを再投与することができることが示された。この抗体による手短な治療は、免疫機能の長期間にわたる効果をもたらし及び、Ａｂの効果がもはや大きなものでなくなったときを超えて、アデノウイルス特異的な体液性応答の阻害を延ばし、この共刺激経路の遮断を、遺伝子導入ベクターの投与を可能にする免疫調節レジメンとしての治療可能性として示している（Ｓｃａｒｉａ  ｅｔ  ａｌ．１９９７  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．４：６１１；Ｃｈｉｒｍｕｌｅ  ｅｔ  ａｌ  ２０００  Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：３３４５）。他の研究では、一次ベクター投与の前後にＣＴＬＡ４−Ｉｇと抗ＣＤ４０Ｌ  Ａｂを同時投与することにより、これらの作用物質の免疫抑制効果がもはや存在しなくなった後でも、ベクターに対する免疫応答が低下し、長期間にわたる、アデノウイルスが仲立ちする遺伝子発現が延び、アデノウイルスが仲立ちする二次遺伝子導入を可能にすることが示され、このことは、一過性の免疫抑制治療と共に、持続性アデノウイルスが仲立ちする二次遺伝子導入を得ることが可能になり得ることを示している（Ｋａｙ  ｅｔ  ａｌ  １９９７  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：４６８６）。別の研究では、ＣＴＬＡ４−Ｉｇと抗ＣＤ４０Ｌ  Ａｂを同様に投与することで、各遺伝子導入の最中に治療が行われたことを条件として、ベクターに対する中和抗体の形成が妨げられ、遺伝子導入の発現を可能にした（Ｌｏｒａｉｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００８  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １６：５４１）。更に、単回投与でも、ＣＴＬＡ４−Ｉｇをマウスに投与することで、早い時点で免疫応答の抑制、及び導入遺伝子発現の延長がもたらされた（Ａｄｒｉｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｆｒｏｎｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２：１９９）。しかし、ＣＴＬＡ４−Ｉｇのみでは、導入遺伝子産物に対する免疫応答を恒久的に取り除くには不十分であった。ＣＴＬＡ４−Ｉｇと、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤＬ−２の２つのチェックポイントを標的とする組み合わせ治療により、恐らく、免疫調節の、２つの重複しないメカニズムを標的とすることにより、後の時点で導入遺伝子寛容の相乗的改善がもたされ、長期にわたる導入遺伝子の持続と発現が得られた（Ａｄｒｉｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｆｒｏｎｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２：１９９）。
【０５０５】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従うと、本明細書に記載する可溶性ＶＳＩＧ８タンパク質及び／またはタンパク質をコードする核酸配列を単独で、または、他の免疫調節剤と組み合わせて、もしくは、遺伝子治療に対する免疫応答の制限を克服するように試験された方法及びアプローチのいずれかと組み合わせて、遺伝子治療の後の望ましくない免疫活性化を低下させるために使用することができる。
【０５０６】
現在のアプローチとしては、送達ベクターに対する抗体を有する患者を除外すること、高用量のベクターを投与すること、空のキャプシドを使用して、後のベクター形質導入を可能にする抗ベクター抗体を吸着すること、反復血漿交換（血漿分離交換法）サイクルにより免疫グロブリンを吸着し、抗ベクター抗体の力価を低下させることが挙げられる。
【０５０７】
これらの制限を克服することを試みる新規のアプローチは、大きく２つのカテゴリー、すなわちＡｄベクターそのものの選択的改変と、宿主の先行免疫調節に分けることができる（Ｓｅｒｅｇｉｎ  ａｎｄ  Ａｍａｌｆｉｔａｎｏ  ２０１０  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ２：２０１３）。第１のカテゴリーは、（１）特定の阻害剤またはリガンドのＡｄ−キャプシド表示；（２）Ａｄベクターキャプシド部位全体の共有結合修飾；（３）組織特異的プロモーターと局所局所投与の使用；（４）ゲノム改変抗体の使用；及び（５）キメラまたは代替の血清型抗体の開発等の、いくつかの革新的な方法を含む。
【０５０８】
第２のカテゴリーの方法としては、免疫抑制剤または特定の化合物を使用して、ウイルスベクターにより誘発されることが知られている重要な免疫経路を遮断することが挙げられる。免疫抑制剤は前臨床試験で試験されており、転写ベクター及び導入遺伝子産物に対する免疫応答の防止または根絶に有効性を示している。これらは、シクロスポリンＡ；シクロホスファミド；ＦＫ５０６等の一般的な免疫抑制剤、デキサメタゾン等の糖質コルチコイドまたはステロイド、ＴＬＲ９アンタゴニストオリゴヌクレオチドであるＯＤＮ−２０８８等のＴＬＲ９遮断薬、抗ＴＮＦ−α抗体またはＴＮＦＲ−Ｉｇ抗体、Ｅｒｋ、及び他のシグナル伝達阻害剤（Ｕ０１２６等）を有するＴＮＦ−α遮断薬を含む。臨床設定において、糖質コルチコイドの投与を用いて、重傷の血友病Ｂ患者に対してヒト第ＩＸ因子導入遺伝子を発現する、アデノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを肝臓に遺伝子導入する際に、ウイルス性キャプシドに向けてのＴ細胞応答を鈍らせることに成功している（Ｎａｔｈｗａｎｉ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６５：２３５７）。
【０５０９】
宿主を「全体的に」、そして非特異的に免疫抑制する傾向にある薬剤を利用する以前のアプローチとは対照的に、一層選択的な免疫抑制アプローチが開発されている。これらには、ＣＤ４０とＣＤ１５４、ＩＣＯＳとＩＣＯＳＬ、ＣＤ２８とＣＤ８０またはＣＤ８６（ＣＴＬＡ４−Ｉｇを含む）、ＮＫＧ２ＤとＮＫＧ２Ｄリガンド、ＬＦＡ−１とＩＣＡＭ、ＬＦＡ−３とＣＤ２、４−ＩＢＢと４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０とＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲとＧＩＴＲＬ等の、陽性の共刺激相互作用の遮断をもたらす作用物質、並びに、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−１、ＴＥＶＩ−３、ＫＩＲ等の陰性共刺激受容体、並びに、Ｂ７−Ｈ４とＢ７−Ｈ３に対する受容体を刺激する作用物質の使用が含まれる。これらのいくつかは、前臨床、または臨床移植研究で利用されている（Ｐｉｌａｔ  ｅｔ  ａｌ  ２０１１  Ｓｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２９３）。
【０５１０】
上述の遺伝子もしくは細胞治療、または移植適応症（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）の治療において、細胞もしくは遺伝子治療、または移植組織もしくは臓器を有する、またはこれらを受ける予定の対象には、本明細書にて開示した炎症阻害性抗ＶＳＩＧ８抗体もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または本発明に従った抗原結合断片が投与されるのが好ましく、本明細書にて開示する抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、ＶＳＩＧ８が仲立ちする少なくとも１つの免疫への効果、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞もしくはＮＫ活性への阻害効果、及び／または炎症性サイトカインの産生における阻害効果、またはＴｒｅｇでの刺激効果を増強する、刺激する、または模倣することにより、治療で使用する細胞もしくは遺伝子に対する宿主免疫応答、または、移植細胞、臓器もしくは組織に対する好ましくない免疫応答を予防または低下させる。治療は、移植または注入した細胞、組織または臓器に対する免疫寛容の延長を誘発するのが好ましい。場合によっては、例えば、免疫細胞を含有する移植細胞、組織、または臓器の場合、本明細書にて開示した免疫阻害性抗ＶＳＩＧ８抗体もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または抗原結合断片を、免疫細胞を寛容化し、潜在的に望ましくない免疫応答もしくはＧＶＨＤ免疫反応を防止するために、注入もしくは移植の前に細胞、組織もしくは臓器と、かつ／または潜在的に移植レシピエントの免疫細胞と接触させてよい。
【０５１１】
医薬組成物
他の態様においては、本発明は、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療薬の１つまたはそれらの組み合わせを含有する組成物、例えば医薬組成物を提供する。したがって、本発明は、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療に有効な量の治療薬を含む医薬組成物を特長とする。
【０５１２】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った医薬組成物は更に、癌（ここで、癌は非転移性、侵襲性または転移性である）治療のため、かつ／または本明細書で引用した免疫関連疾患、感染症及び／または敗血症の治療のために使用するのが好ましい。
【０５１３】
「治療」とは、治療的処置と、予防（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）方法の両方を指す。治療が必要な対象としては、既に疾患を患う対象、及び、疾患が予防されるべき対象が挙げられる。したがって、本明細書において治療される哺乳類は、疾患を有すると診断されてよいか、または、疾患に罹りやすい、もしくはなりやすくてよい。治療目的の「哺乳類」とは、ヒト、飼育動物及び家畜、及び動物園、スポーツまたはペット動物例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシ等を含む、哺乳類として分類される任意の動物を意味する。哺乳類はヒトであることが好ましい。
【０５１４】
「治療的有効量」という用語は、哺乳類の病気または疾患を治療するのに効果的な、本発明に従った作用物質の量を意味する。
【０５１５】
本発明の治療薬を、単独で、または、製薬上許容できる担体と混合した医薬組成物の一部として対象に提供することができる。
【０５１６】
投与をレシピエント患者が許容することができる場合、組成物は、「製薬上許容できる担体」であると言われる。本明細書で使用する場合、「製薬上許容できる担体」としては、生理学的に適合する任意の、全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌及び抗カビ剤、等張剤及び吸収遅延剤等が挙げられる。担体は、（例えば注射または注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与に好適であることが好ましい。
【０５１７】
かかる組成物としては、滅菌水、緩衝生理食塩水（例えば、Ｔｒｉｓ−Ｈｃｌ、アセテート、ホスフェート）、ｐＨ剤及びイオン強化剤、及び洗剤及び可溶化剤（例えばポリソルベート２０、ポリソルベート８０）等の、任意で酸化防止剤（例えばアスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えばチメロサール（Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）、ベンジルアルコール）、並びに増量物質（例えばラクトース、マンニトール）等の添加剤が挙げられる。以下に詳述するように、非水溶媒または賦形剤もまた、使用してよい。
【０５１８】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った医薬組成物で用いられ得る好適な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物、植物油（オリーブ油等）、及び、オレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが挙げられる。好適な流動性は、例えばレシチン等のコーティング材料の使用により、分散液の場合には必要な粒径の維持により、及び界面活性剤の使用により維持される。投与経路に応じて、活性化合物、即ち、ＶＳＩＧ８タンパク質または二重特異的分子のいずれか１つと特異的に結合する、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、及び抗原結合断片、並びにこれらを含有するコンジュゲート、並びに／または代替の足場を、材料でコーティングして、この化合物を、酸の作用、及び、化合物を不活性化し得る他の自然条件から保護してよい。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った薬学的化合物は、１種以上の製薬上許容できる塩を含んでよい。「薬剤として許容される塩」とは、親化合物の所望の生物活性を保持し、好ましくない任意の毒性効果を付与しない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９）。そのような塩の例としては、酸付加塩及び塩基添加塩が挙げられる。酸付加塩としては、無毒性無機酸（例えば塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等）に由来するもの、並びに、無毒性有機酸（例えば脂肪族モノ及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸等）に由来するものが挙げられる。塩基添加塩としては、アルカリ土類金属（例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等）由来のもの、及び、無毒性有機アミン（例えばＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等）に由来するものが挙げられる。
【０５１９】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った医薬組成物は、製薬上許容できる抗酸化剤を含んでもよい。製薬上許容できる酸化防止剤の例としては、（１）例えばアスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等の、水溶性酸化防止剤；（２）例えばアスコルビン酸パルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロール等の、油溶性酸化防止剤；及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の、金属キレート剤が挙げられる。
【０５２０】
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等のアジュバントを含有してよい。微生物が存在することを防止することが、上述の滅菌手順、及び、種々の抗菌及び抗カビ剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等を含めることの両方により確保されてよい。組成物中に糖類、塩化ナトリウム等の等張剤が含まれることも望ましい場合がある。加えて、注射可能な薬剤処方の吸収を長引かせることは、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の、吸収遅延剤を含有することによりもたらされる。
【０５２１】
製薬上許容できる担体としては、無菌注射可能な溶液または分散液の即時調製のための、滅菌水溶液または分散液、及び滅菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質のためのかかる媒体及び作用物質の使用は、当該技術分野において公知である。任意の従来の媒体または作用物質が活性化合物と非適合である場合を除き、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った医薬組成物中でこれらを使用することが企図される。補助的活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。
【０５２２】
治療用組成物は通常、製造及び保管条件下で滅菌され、安定していなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または、高濃度の用量に適した、他の整った構成として配合することができる。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、並びにこれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒とすることができる。例えば、レシチン等のコーティング剤を使用することにより、分散液の場合は必要な粒径を維持することにより、そして、界面活性剤を使用することにより、適切な流動性を維持することができる。多くの場合、組成物内に等張剤、例えば糖類、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトール等）、または塩化ナトリウムを含めるのが好ましい。組成物内に、吸収を遅らせる作用物質、例えばモノステアレート塩及びゼラチンを含めることにより、注射可能な組成物の吸収を遅らせることができる。必要に応じて上に挙げた成分の１つまたは組み合わせと共に、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を入れ、それに続く滅菌精密濾過により無菌注射可能な溶液を調製することができる。通常、基本分散媒と、上に列挙した必要な他の成分を含有する滅菌賦形剤に活性化合物を入れることにより分散液を調製する。無菌注射可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め滅菌濾過したその溶液から、活性成分の粉末に加えて追加の所望の成分を得る、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０５２３】
必要に応じて上に挙げた成分の１つまたは組み合わせと共に、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を入れ、続いて滅菌精密濾過することにより、無菌注射可能な溶液を調製することができる。通常、基本分散媒と、上に列挙した必要な他の成分を含有する滅菌賦形剤に活性化合物を入れることにより分散液を調製する。無菌注射可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め滅菌濾過したその溶液から、活性成分の粉末に加えて追加の所望の成分を得る、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０５２４】
本発明の組成物は、当該技術分野において公知の種々の方法の１つ以上を使用して、１つ以上の投与経路により投与することができる。当業者により理解されるように、経路及び／または投与方法は、所望の結果に応じて変化する。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療薬の好ましい投与経路としては、血管内送達（例えば注射もしくは注入）、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、経口、経腸、直腸、肺（例えば吸入）、経鼻、局所（経皮、頬及び舌下を含む）、膀胱内、硝子体内、腹腔内、膣内、脳送達（例えば脳室内、脳内、及び対流増加送達）、ＣＮＳ（例えば髄腔内、脊柱外、及び脊髄内）もしくは非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む）送達、経粘膜（例えば舌下投与）、インプラントを介した投与、または、他の非経口投与経路（例えば、注射もしくは注入による）、または当該技術分野において公知の他の送達経路及び／もしくは投与形態が挙げられる。「非経口的投与」という表現は、本明細書で使用する場合、通常注射による、また、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心腔内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入が挙げられるが、これらに限定されない、経腸及び局所投与以外の投与形態を意味する。特定の実施形態では、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従ったタンパク質、治療薬または医薬組成物を、腹腔内または静脈内投与することができる。
【０５２５】
あるいは、本明細書にて開示したＶＳＩＧ８特異的抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば経鼻、経口、膣、直腸、舌下または局所等の非経口経路を介して投与することができる。
【０５２６】
活性化合物を、迅速な放出から化合物を保護する担体、例えば、インプラント、経皮貼付剤及びマイクロカプセル化送達系を含む制御放出配合物と共に調製することができる。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸等の生分解性・生体適合性ポリマーを使用することができる。かかる配合物の多くの調製方法が特許権を有している、または当業者に一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。
【０５２７】
治療用組成物を当該技術分野において公知の医療デバイスを用いて投与することができる。例えば、好ましい実施形態では、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療用組成物を、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；または同第４，５９６，５５６号に記載されているデバイス等の、針状皮下注射デバイスを用いて投与することができる。本発明において有用な周知のインプラント及びモジュールの例としては、米国特許第４，４８７，６０３号（制御した速度において投薬を分配する、埋込型マイクロ注入ポンプについて開示している）；同第４，４８６，１９４号（皮膚を通して薬剤を投与するための治療用デバイスについて開示している）；同第４，４４７，２３３号（正確な注入速度にて投薬を送達するための、投薬注入ポンプについて開示している）；同第４，４４７，２２４号（連続薬物送達用の、速度を変更可能な埋込型注入装置について開示している）；同第４，４３９，１９６号（複数チャンバ区画を有する浸透性薬物送達システムについて開示している）；及び、同第４，４７５，１９６号（浸透性薬物送達システムについて開示している）が挙げられる。これらの特許は、参考として本明細書に組み込まれる。多くの他のかかるインプラント、送達系及びモジュールが、当業者に知られている。
【０５２８】
ある特定の実施形態において、ｉｎ  ｖｉｖｏでの適切な分配を確実に行うように抗ＶＳＩＧ８抗体を配合することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高親水性化合物を除外する。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った治療用化合物が（所望する場合）確実にＢＢＢを超えるようにするため、治療用化合物を例えばリポソームに配合することができる。リポソームの製造方法については、例えば米国特許第４，５２２，８１１号；同第５，３７４，５４８号；及び同第５，３９９，３３１号を参照のこと。リポソームは、特定の細胞または臓器内に選択的に輸送される１つ以上の部位を含んでよく、よって、標的化薬物送達を向上させる（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照のこと）。例示的な標的化部位としては、葉酸塩またはビオチン（例えば米国特許第５，４１６，０１６号（Ｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．）を参照のこと）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；界面活性剤プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）；ｐｌ２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が挙げられる。Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ；及びＩ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３もまた参照のこと。
【０５２９】
更に他の実施形態では、本発明の免疫複合体を使用して、かかる化合物を本明細書にて開示した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質に結合することにより、ＶＳＩＧ８細胞表面受容体を有する細胞に対して化合物（例えば治療薬、標識、細胞毒素、放射性毒、免疫抑制剤等）を標的化することができる。したがって、本発明は、ＶＳＩＧ８を発現する細胞を（例えば、放射性同位体、蛍光性化合物、酵素または酵素補因子等の検出可能な標識を用いて）ｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで局在化させる方法もまた提供する。あるいは、免疫複合体を使用して、ＶＳＩＧ８抗原に細胞毒素または放射性毒を標的化することにより、ＶＳＩＧ８細胞表面受容体を有する細胞を殺傷することができる。
【０５３０】
本明細書で使用する場合、「製薬上許容できる担体」としては、任意の全ての溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌及び抗カビ剤、等張剤及び吸収遅延剤、並びに生理学的に適合するものが挙げられる。担体は、（例えば注射または注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与に好適であることが好ましい。投与経路に応じて、活性化合物、即ち、ＶＳＩＧ８抗原のエクトドメインを含有する可溶性ポリペプチドコンジュゲート、抗体、免疫複合体、代替の足場、及び／または二重特異的分子を、材料でコーティングして、この化合物を、酸の作用、及び、化合物を不活性化し得る他の自然条件から保護してよい。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った薬学的化合物は、１種以上の製薬上許容できる塩を含んでよい。「薬剤として許容される塩」とは、親化合物の所望の生物活性を保持し、好ましくない任意の毒性効果を付与しない塩を意味する（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９）。このような塩類の例としては、酸付加塩及び塩基添加塩が挙げられる。酸付加塩としては、無毒性無機酸（例えば塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸等）に由来するもの、並びに、無毒性有機酸（脂肪族モノ及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族及び芳香族スルホン酸等）に由来するものが挙げられる。塩基添加塩としては、アルカリ土類金属（例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等）由来のもの、及び、無毒性有機アミン（例えばＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等）に由来するものが挙げられる。
【０５３１】
本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った医薬組成物は、製薬上許容できる抗酸化剤を含んでもよい。製薬上許容できる酸化防止剤の例としては、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等の水溶性酸化防止剤；（２）アスコルビン酸パルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロール等の油溶性酸化防止剤；及び（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の金属キレート剤が挙げられる。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った組成物で用いられ得る好適な水性及び非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、及びそれらの好適な混合物、植物油（オリーブ油等）、及び、オレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが挙げられる。好適な流動性は、例えばレシチン等のコーティング材料の使用により、分散液の場合には必要な粒径の維持により、及び界面活性剤の使用により維持される。
【０５３２】
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等のアジュバントを含有してよい。微生物が存在することを防止することが、上述の滅菌手順、及び、種々の抗菌及び抗カビ剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等を含めることの両方により確保されてよい。組成物中に糖類、塩化ナトリウム等の等張剤が含まれることも望ましい場合がある。加えて、注射可能な薬剤処方の吸収を長引かせることは、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチン等の、吸収遅延剤を含有することによりもたらされる。
【０５３３】
製薬上許容できる担体としては、無菌注射可能な溶液または分散液の即時調製のための、滅菌水溶液または分散液、及び滅菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質のためのかかる媒体及び作用物質の使用は、当該技術分野において公知である。任意の従来の媒体または作用物質が活性化合物と非適合である場合を除き、本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った医薬組成物中でこれらを使用することが企図される。補助的活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。
【０５３４】
治療用組成物は通常、製造及び保管条件下で滅菌され、安定していなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または、高濃度の用量に適した、他の整った構造として配合することができる。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、並びにこれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒とすることができる。例えば、レシチン等のコーティング剤を使用することにより、分散液の場合は必要な粒径を維持することにより、そして、界面活性剤を使用することにより、適切な流動性を維持することができる。多くの場合、組成物内に等張剤、例えば糖類、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトール等）、または塩化ナトリウムを含めるのが好ましい。組成物内に、吸収を遅らせる作用物質、例えばモノステアレート塩及びゼラチンを含めることにより、注射可能な組成物の吸収を遅らせることができる。必要に応じて上に挙げた成分の１つまたは組み合わせと共に、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を入れ、それに続く滅菌精密濾過により、無菌注射可能な溶液を調製することができる。通常、基本性分散媒と、上に列挙した必要な他の成分を含有する滅菌賦形剤に活性化合物を入れることにより分散液を調製する。無菌注射可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め滅菌濾過したその溶液から、活性成分の粉末に加えて追加の所望の成分を得る、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０５３５】
必要に応じて上に挙げた成分の１つまたは組み合わせと共に、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を入れ、、続いて滅菌精密濾過することにより、無菌注射可能な溶液を調製することができる。通常、基本分散媒と、上に列挙した必要な他の成分を含有する滅菌賦形剤に活性化合物を入れることにより分散液を調製する。無菌注射可能な溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、予め滅菌濾過したその溶液から、活性成分の粉末に加えて追加の所望の成分を得る、真空乾燥及びフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０５３６】
単一用量剤形を作製するために担体物質と組み合わせることができる有効成分の量は、治療されている対象、及び特定の投与方法に応じて変化する。単一用量剤形を作製するために担体物質と組み合わせることができる有効成分の量は通常、治療効果を生み出す組成物の量である。通常、１００％中、この量は、製薬上許容できる担体と組み合わせた有効成分の約０．０１％〜約９９％、好ましくは有効成分の約０．１％〜約７０％、最も好ましくは約１％〜約３０％の範囲となる。
【０５３７】
投薬レジメンを調節して、所望の最適の応答（例えば治療的応答）をもたらすようにする。例えば、１回のボーラスを投与してよく、数回に分けた用量を時間の経過とともに投与してよく、または、治療状況の緊急性により用量を比例的に増減させてもよい。投与しやすく均一な用量の投薬単位形態に非経口組成物を調製することは、特に有利である。本明細書で用いる投薬単位形態とは、治療される対象にとって単位用量として好適な、物理的に分離した単位を意味する。各単位は、必要な医薬担体と共に所望の治療効果を生み出すように計算された活性化合物の所定の量を含有する。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った投薬単位形態の規格は、（ａ）活性化合物の固有の特徴と、達成される特定の治療効果、及び（ｂ）個体における過敏症を治療するためにかかる活性化合物を調合するのに、当該技術分野に内在する制限により決定され、それらに直接依存する。
【０５３８】
本明細書にて開示する抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の投与に関して、用量は体重あたり約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には０．０１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲となる。例えば、用量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内とすることができる。例示的な治療レジメンは、週に１回、２週に１回、３週に１回、４週に１回、月に１回、３ヶ月に１回、または３〜６ヶ月に１回の投与を必要とする。本発明の少なくともいくつかの実施形態に従った、本明細書にて開示した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の好ましい投薬レジメンとしては、静脈内投与による１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重が挙げられ、本明細書にて開示した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質には、以下の投与スケジュール：（ｉ）６回の用量を４週毎、次いで３ヶ月毎；（ｉｉ）３週毎；（ｉｉｉ）３ｍｇ／ｋｇ体重で１回、続いて３週毎に１ｍｇ／ｋｇ体重の１つを使用して与えられる。
【０５３９】
いくつかの方法においては、異なる結合特異性を有する２種以上のモノクローナル抗体を同時に投与し、この場合、本明細書にて開示した、投与される各抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の用量は、示した範囲内に収まる。本明細書にて開示した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は通常、複数の機会に投与される。一回用量の間隔は例えば、毎日、週に１回、月に１回、３ヶ月毎、または年に１回とすることができる。抗体の血中濃度を測定して、患者内の抗原を標的化することによって示されるように、間隔は不規則とすることもまた可能である。いくつかの方法においては、用量を調節して、約１〜１０００ｍμｇ／ｍＬ、またいくつかの方法においては約２５〜３００マイクログラム／ｍＬの血漿抗体濃度を達成する。
【０５４０】
あるいは、治療薬を持続放出性配合物として投与することができ、その場合、より頻度の低い投与が必要となる。用量及び頻度は、患者の治療薬の半減期に応じて変化する。一般に、ヒト抗体が最長の半減期を示し、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び非ヒト抗体が続く。融合タンパク質の半減期は幅広く変化し得る。投与の用量及び頻度は、治療が予防的または治療的であるかによって変化し得る。予防用途において、長期間にわたり、比較的低頻度の間隔で比較的少ない用量を投与する。全余命期間に治療を受け続ける患者もいる。治療用において、病気の進行が減少または停止するまで、かつ好ましくは、患者が病気の症状の部分的または完全な回復を示すまで、比較的短い間隔で、比較的多くの用量が場合によって必要である。その後、患者に予防レジメンを投与することができる。
【０５４１】
患者にとって毒性とならずに、特定の患者、組成物、及び投与方法に対する所望の治療用応答を得るのに効果的な有効成分の量を得るために、本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の用量レベルを変化させてよい。選択した用量レベルは、用いられる本発明の特定の化合物、またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与時期、用いている特定の化合物の排泄速度、治療期間、用いる特定の組成物と組み合わせて使用する他の薬剤、化合物及び／または材料、治療されている患者の年齢、性別、体重、状態、総体的な健康及び以前の病歴、並びに医療当業者に既知の同様の要因を含む種々の薬物動態学的因子に応じて変化する。
【０５４２】
以下の条項に、本発明の実施形態を更に記載する。
【０５４３】
第１項。ＶＩＳＴＡとＶ−Ｒ（ＶＳＩＧ８）の相互作用を刺激する、またはそれに拮抗する化合物。
【０５４４】
第２項。ＶＳＩＧ８と特異的に結合する抗体または抗体断片である、第１項に記載の化合物。
【０５４５】
第３項。アゴニスト抗ＶＳＩＧ８抗体または抗体断片である、第１項に記載の化合物。
【０５４６】
第４項。アンタゴニスト抗ＶＳＩＧ８抗体または抗体断片である、第１項に記載の化合物。
【０５４７】
第５項。ヒト化、ヒト、霊長類化、またはキメラ抗ＶＳＩＧ８抗体または抗体断片である、第２、３、または４項に記載の化合物。
【０５４８】
第６項。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４定常領域、またはその断片を含み、任意で、突然変異誘発してＦｃＲまたは補体結合を取り除いた、第５項に記載の抗体。
【０５４９】
第７項。ＩｇＧ１またはＩｇＧ３定常領域またはその一部を含み、任意で、突然変異誘発してＦｃＲまたは補体結合を向上させた、第５項に記載の抗体。
【０５５０】
第８項。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖまたはＦａｂ２である、上に記載の項のいずれかに記載の化合物。
【０５５１】
第９項。Ｔ細胞免疫での抑制効果を誘発するＶＳＩＧ８の細胞外領域を含むポリペプチド、その断片、または、ＶＳＩＧ８の細胞外領域、もしくは配列番号１、２、もしくは３に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％の配列同一性を有する前記ＶＳＩＧ８ポリペプチドの誘導体の少なくとも１つのコピーを含む、第１項に記載の化合物。
【０５５２】
第１０項。ヒト、非ヒト霊長類またはマウスＶＳＩＧ８の細胞外領域全体を含む少なくとも１つのポリペプチドを含む、第９項に記載の化合物。
【０５５３】
第１１項。融合タンパク質である、第９または１０項に記載の化合物。
【０５５４】
第１２項。Ｉｇ融合タンパク質である、第１１項に記載の化合物。
【０５５５】
第１３項。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４定常領域、またはその断片を含み、任意で、突然変異誘発してＦｃＲまたは補体結合を取り除いた、第１２項に記載の化合物。
【０５５６】
第１４項。ＩｇＧ１またはＩｇＧ３定常領域またはその一部を含み、任意で、突然変異誘発してＦｃＲまたは補体結合を向上させた、第１２項に記載の化合物。
【０５５７】
第１５項。水溶性ポリマーに結合して血清半減期が増加した、第１〜１４項のいずれか一項に記載の化合物。
【０５５８】
第１６項。ＰＥＧ化した、第１５項に記載の化合物。
【０５５９】
第１７項。ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８を含む単離した複合体。
【０５６０】
第１８項。前記ＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８はオリゴマーのまたは多量体である、第１７項に記載の複合体。
【０５６１】
第１９項。ＶＩＳＴＡまたはＶＳＩＧ８を発現する組み換え細胞から成る、第１７項または第１８項に記載の複合体。
【０５６２】
第２０項。第１７、１８、または１９項に記載の複合体から成る、単離した細胞膜。
【０５６３】
第２１項。第１７、１８、または１９項に記載のＶＩＳＴＡ−ＶＳＩＧ８複合体に特異的に結合する抗体または抗体断片。
【０５６４】
第２２項。ヒト、ヒト化、霊長類化またはキメラである、第２１項に記載の抗体または抗体断片。
【０５６５】
第２３項。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖまたはＦａｂ２である、第２１または２２項に記載の抗体断片。
【０５６６】
第２４項。小分子である、第１項に記載のアゴニストまたはアンタゴニスト化合物。
【０５６７】
第２５項。ヒト定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４定常領域、またはそれらの変異体を含み、任意で１つ以上の欠失したドメインを含有する第１〜２４項のいずれかに記載の抗体または抗原結合断片。
【０５６８】
第２６項。Ｆｃエフェクター機能及び／もしくはグリコシル化を増減する少なくとも１つの変異、並びに／またはＩｇＧ４  Ｆａｂアーム交換を調節もしくはなくす変異を含有するヒト定常領域を含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【０５６９】
第２７項。前記エフェクター機能はＦｃＲ結合、ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性、脱顆粒、ファゴサイトーシス、及びサイトカイン放出を含む、第２６項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【０５７０】
第２８項。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ）、ＦｖまたはｓｃＦｖ断片、及び、任意で少なくとも１週、２週、３週、または１ヶ月のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を有する最小認識単位からなる群から選択される、上に記載の項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【０５７１】
第２９項。別の部位、例えば治療用部位、検出可能部位、またはｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を変更する（増減する）部位に結合した、上の項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【０５７２】
第３０項。薬剤、放射性核種、フルオロフォア、酵素、毒素、もしくは化学療法剤から選択される治療薬；及び／または、放射性同位体、金属キレーター、酵素、蛍光性化合物、生物発光化合物もしくは化学発光化合物から選択される検出可能なマーカーに結合した、上の項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。
【０５７３】
第３１項。いかなる他の部位にも結合していない、上の項のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質。
【０５７４】
第３２項。前記抗体または抗原結合断片が、別の抗体もしくは抗原結合断片、または融合タンパク質、例えば、ＮＫ及び／またはＴ細胞受容体、例えば、ＮＫ細胞活性を刺激する、もしくはそれに拮抗する、または、ＮＫ細胞が仲立ちする細胞枯渇を阻害するＮｋ細胞受容体、または、ＮＫ細胞が仲立ちする細胞枯渇を促進もしくは活性化するＮＫ細胞受容体に結合した、上の項のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質。
【０５７５】
第３３項。前記阻害性ＮＫ細胞受容体が、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＬＩＬＲＢ１、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ及びＬＩＬＲＢ５からなる群から選択される、第３２項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質。そして、前記ＮＫ活性化受容体は、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＫＩＲ２ＤＳ４  ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ６９、ＤＮＡＸ付属品分子−１（ＤＮＡＭ−１）、２Ｂ４、ＮＫ１．１；キラー免疫グロブリン（Ｉｇ）様活性化受容体（ＫＡＲ）；ＩＬＴ／ＬＩＲ；ＮＫＲＰ−１、ＣＤ６９；ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及びＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅヘテロ二量体、ＮＫＧ２Ｄホモ二量体ＫＩＲ２ＤＳ及びＫＩＲ３ＤＳからなる群から選択される。
【０５７６】
第３４項。本明細書にて開示した結合親和性法のいずれかで決定すると、５００ｎＭを超えない結合親和性（ＫＤ）、例えば、本明細書にて開示した結合親和性法のいずれかにより測定すると、例えば約１０−５、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２Ｍ以下の結合親和性（ＫＤ）でヒト、霊長類またはマウスＶＳＩＧ８と結合する、上に記載の項のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片。
【０５７７】
第３５項。抗体または抗原結合断片が、免疫、または１種以上の免疫細胞において、ＶＳＩＧ８とＶＩＳＴＡの相互作用により誘発される少なくとも１つの効果を（１）増強する、刺激する、もしくは模倣する、または（２）阻害する、拮抗する、もしくは遮断するのかいずれかである、上に記載の項のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質。
【０５７８】
第３６項。免疫に対して以下の免疫活性効果のうちの少なくとも１つの任意の組み合わせの誘発を仲立ちし、前記抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、上の項のいずれかに記載のアンタゴニスト抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質：（ｉ）免疫応答の増加、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の増加、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加、（ｉｖ）ＮＫ細胞活性の増加、（ｖ）Ｔ細胞抑制の緩和、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の増加、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の増加、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の増加、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の増加、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）細胞数、及び／もしくは制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の少なくとも１つの活性の低下もしくは除去、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の低下、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの減少もしくは除去、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ腫瘍形成活性の低下、（ｘｖ）Ｎ２好中球の減少もしくは除去、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球の腫瘍形成活性の低下、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の低下、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の低下、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の低下、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の逆転、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の増加、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の増加、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の刺激、（ｘｘｉｖ）癌細胞のアポトーシスもしくは溶解の誘発、（ｘｘｖ）癌細胞における細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の刺激、（ｘｘｖｉ）癌細胞の直接殺傷の誘発、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の増加、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の誘発の少なくとも１つの任意の組み合わせを、前期抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）。
【０５７９】
第３７項。以下の免疫阻害効果のうちの少なくとも１つの任意の組み合わせの誘発を仲立ちし、前記抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、上の項のいずれかに記載のアンタゴニスト抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の低下、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）細胞数及び／もしくは制御性Ｔ細胞の活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉ）細胞の直接殺傷の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の低下、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の低下。
【０５８０】
第３８項。Ｔ細胞免疫でのＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡの阻害効果を増大させ、かつ／もしくはＣＴＬ活性を阻害し、かつ／または、阻害されたＣＴＬ活性は、１つ以上の炎症性サイトカインの分泌低下、及び／もしくはＣＴＬが仲立ちする標的細胞の殺傷の減少、及び／もしくはＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性化の阻害、及び／もしくはＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖、及び／もしくはＣＤ４＋  Ｔ細胞が仲立ちする細胞枯渇を含む、上に記載の項のいずれかに記載の、免疫調節抗体またはその抗原結合断片。
【０５８１】
第３９項。ＮＫ細胞活性、及び／またはＮＫ細胞増殖、及び／またはＮＫ細胞が仲立ちする細胞枯渇を阻害する、上に記載の項のいずれかに記載の免疫調節抗体もしくはその免疫調節抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質。
【０５８２】
第４０項。免疫においてＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの１つ以上の効果を増強することにより、例えば移植した細胞、組織または臓器に対する、抗原特異的寛容、または抗原特異的免疫応答の抑制の延長を促進する、上に記載の項のいずれかに記載の免疫調節抗体もしくはその免疫調節抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質。
【０５８３】
第４１項。免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの１つ以上の効果を促進することにより、自己抗原、アレルゲン、または炎症作用物質に対する免疫応答を促進する、阻害する上に記載の項のいずれかに記載の免疫調節抗体もしくはその免疫調節抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質。
【０５８４】
第４２項。自己抗原、アレルゲンもしくは炎症作用物質に対する免疫応答の阻害、並びに／または炎症性疾患もしくは応答の治療、並びに／または自己免疫疾患の治療、並びに／または移植拒絶反応、及び／もしく移植片対宿主病の低減もしくは予防で使用するための、上に記載の項のいずれかに記載の免疫調節抗体もしくはその免疫調節抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質。
【０５８５】
第４３項。上の項のいずれかに記載の少なくとも１種の化合物を含む医薬組成物。
【０５８６】
第４４項。上の項のいずれかに記載の少なくとも１種の化合物と抗原を含むワクチン組成物。
【０５８７】
第４５項。上の項に記載の少なくとも１つの抗体もしくはその抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を含む免疫抑制ワクチン組成物であって、前記組成物中の前記抗体もしくはその抗原結合断片は、抗原特異的Ｔ及び／もしくはＢ細胞免疫を抑制するか、または寛容を誘発する、前記免疫抑制ワクチン組成物。
【０５８８】
第４６項。前記免疫が抑制される抗原は、ヒト抗原、腫瘍抗原、病原菌抗原、自己抗原、またはアレルゲン、例えば、ヒト抗原、細胞、もしくは対象に移植される細胞、組織、もしくは臓器の抗原、自己抗原、炎症作用物質、またはアレルゲンである、第４５項に記載のワクチン組成物。
【０５８９】
第４７項。血管内送達（例えば注射もしくは注入）、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、経口、経腸、直腸、肺（例えば吸入）、経鼻、局所（経皮、頬及び舌下を含む）、膀胱内、硝子体内、腹腔内、膣内、脳送達（例えば脳室内、脳内、及び対流増加送達）、ＣＮＳ（例えば髄腔内、脊柱外、及び脊髄内）もしくは非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む）送達、経粘膜（例えば舌下投与）、インプラントを介した投与、または他の非経口投与経路（「非経口的投与」とは、経腸及び局所投与以外の投与形態を指す）から選択される経路による投与に好適な、第４３〜４６項のいずれか一項に記載の組成物。
【０５９０】
第４８項。少なくとも１種の他の活性剤、例えば治療薬または診断用薬、例えば他の免疫調節化合物、化学治療薬、薬剤、サイトカイン、放射性核種、及び酵素を含む、第４３〜４７項のいずれか一項に記載の組成物。
【０５９１】
第４９項。標的細胞（例えば腫瘍または感染細胞）により発現する抗原を含む、第４３〜４７項のいずれか一項に記載の組成物。
【０５９２】
第５０項。ＰＤ−１アゴニスト及びアンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２抗体及び抗体断片、ＴＬＲアゴニスト、ＣＤ４０アゴニストまたはアンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４融合タンパク質、ＣＤ２８アゴニストまたはアンタゴニスト、４−ＩＢＢアゴニストまたはアンタゴニスト、ＣＤ２７またはＣＤ７０アゴニストまたはアンタゴニスト、ＬＡＧ３アゴニストまたはアンタゴニスト、ＴＩＭ３アゴニストまたはアンタゴニスト、ＴＩＧＩＴアゴニストまたはアンタゴニスト、ＩＣＯＳアゴニストまたはアンタゴニスト、ＩＣＯＳリガンドアゴニストまたはアンタゴニストから選択される少なくとも１種の免疫調節剤を含有する他の組成物を含む、またはそれと共に使用される、第４３〜４９項のいずれか一項に記載の組成物。
【０５９３】
第５１項。診断もしくは治療用途のための、上に記載の項のいずれかに記載のＶＳＩＧ８またはＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡアゴニストまたはアゴニストを含有する治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用であって、その方法または使用は、診断または治療を必要とする対象に、上の項のいずれかに記載の、治療上または診断上効果的な量の少なくとも１つのＶＳＩＧ８もしくはＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡアゴニストもしくはアゴニスト、または、第１〜５０項のいずれかに記載の組成物を含む少なくとも１つの用量または組成物を投与することを含む、前記治療及び／もしくは診断方法、または組成物の使用。
【０５９４】
第５２項。個体が、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡが仲立ちする免疫への効果の増減に関係する状態有するかどうかを検出することにおける、抗体もしくは抗原結合断片、もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質または組成物の診断方法及び使用であって、前記方法または使用は、個体からの組織サンプルを化合物、例えば、上に記載の項のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、または組成物と接触させることと、ぞれらへの特異的結合を検出することとを含む、前記診断方法及び使用。
【０５９５】
第５３項。前記病気は、癌、自己免疫疾患、または感染症からなる群から選択される、第５１または５２項に記載の方法または使用。
【０５９６】
第５４項。ＶＳＩＧ８の上方制御もしくは発現、及び／またはＶＳＩＧ８発現細胞の数の増加、またはＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡ発現の下方制御、及び／またはＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡ発現細胞の数の減少を検出する、第５１〜５３項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０５９７】
第５５項。個体からの組織サンプルを、第１〜５４項のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、または組成物と接触させることを含む、個体が、免疫においてＶＳＩＧ８が仲立ちする効果の増減と関係する状態を有するかどうかを検出することを含む、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、または組成物の診断方法または使用であって、前記診断方法はｉｎ  ｖｉｖｏで実施され、前記対象に、上に記載の項のいずれか一項に記載の免疫調節抗体もしくは抗原結合断片、または組成物を投与することと、これらへの特異的結合を検出することとを含む、前記診断方法または使用。
【０５９８】
第５６項。前記病気は、癌、自己免疫疾患、炎症性の状態、アレルギー状態または感染症からなる群から選択される、第５５項に記載の方法または使用。
【０５９９】
第５７項。抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、または組成物を含む診断方法または使用であって、その方法または使用は、対象の病気を診断することを含み、該病気は癌、自己免疫疾患、または感染症からなる群から選択され、前記診断方法はｅｘ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで行われ、個体からのサンプルに、上に記載の項のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片、または組成物を接触させること、または個体にこれらを投与することと、上に記載の項のいずれかに記載の免疫分子または抗体の、前記対象の組織への特異的結合を検出することとを含む、前記診断方法または使用。
【０６００】
第５８項。個体に、治療に有効な量の、上に記載の項のいずれか一項に記載の抗体、抗原結合断片もしくは免疫調節ポリペプチド、または医薬組成物を投与する前に、診断方法または使用を実施する、上に記載の項のいずれかに記載の診断方法または使用。
【０６０１】
第５９項。治療に有効な量の、上に記載の項のいずれか一項に記載の抗体、抗原結合断片もしくは免疫調節ポリペプチド、または医薬組成物は、前記個体が、例えば、０〜３のスケールにおいて少なくとも１である、病気及び／もしくはＡＰＣ細胞によるＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡの発現の増加、並びに／または、ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡを発現する病気及び／もしくはＡＰＣ細胞の数の増加を特徴とする状態を有する場合にのみ投与される、上に記載の項のいずれか一項に記載の診断方法または使用。
【０６０２】
第６０項。ＶＳＩＧ８の発現は、癌細胞、免疫浸潤またはストローマ細胞のうちの１つ以上で検出される、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６０３】
第６１項。抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質の診断方法または使用であって、その方法または使用は、対象から採取した組織サンプルが、ＶＳＩＧ８の発現の増減を伴う免疫状態を示すかどうかを診断することを含み、（ｉ）前記サンプルを、上に記載の項のいずれかに記載の化合物もしくは組成物、またはＶＳＩＧ８の発現を検出する核酸と接触させることと、（ｉｉ）ＶＳＩＧ８の発現を検出する結合または増幅アッセイを実施することと、（ｉｉｉ）これらに基づき、サンプルが、ＶＳＩＧ８の発現の増減と関係する免疫状態を伴う状態を有する個体からのものなのかどうかを診断することとを含む、前記方法または使用。
【０６０４】
第６２項。前記免疫状態は、癌、自己免疫疾患、炎症性の状態、アレルギー状態、感染症または敗血症からなる群から選択される、第６１項に記載の方法または使用。
【０６０５】
第６３項。前記抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、免疫における以下の免疫活性効果のうちの少なくとも１つの任意の組み合わせを仲立ちし、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用：（ｉ）免疫応答の増加、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の増加、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加、（ｉｖ）ＮＫ細胞活性の増加、（ｖ）Ｔ細胞抑制の緩和、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の増加、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の増加、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の増加、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の増加、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）細胞数、及び／もしくは制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の少なくとも１つの活性の低下もしくは除去、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の低下、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの減少もしくは除去、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ腫瘍形成活性の低下、（ｘｖ）Ｎ２好中球の減少もしくは除去、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球の腫瘍形成活性の低下、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞活性化阻害の低下、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の低下、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の低下、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の逆転、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の増加、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の増加、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の刺激、（ｘｘｉｖ）癌細胞のアポトーシスもしくは溶解の誘発、（ｘｘｖ）癌細胞における細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の刺激、（ｘｘｖｉ）癌細胞の直接殺傷の誘発、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の増加、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の誘発。
【０６０６】
第６４項。治療及び診断を必要とする対象における、Ｔ細胞免疫もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）免疫の促進、及び／またはＴｒｅｇもしくはＭＤＳＣの抑制を含み、うえの項のいずれかに記載の少なくとも１つの、治療上または診断上効果的な量の抗体、抗原結合断片、または組成物を投与することを含む、診断もしくは治療用途の、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を含有する組成物の治療及び／もしくは診断方法、または使用であって、かかる抗体または抗原結合断片は、免疫または免疫細胞において、配列番号１、２、または３のポリペプチドに少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するＶＳＩＧ８ポリペプチドの、少なくとも１つの効果を阻害する、弱めるか遮断する、前記治療及び／もしくは診断方法、または使用。
【０６０７】
第６５項。Ｔ細胞免疫においてＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの阻害効果を抑制するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６０８】
第６６項。ＣＴＬ活性を促進するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６０９】
第６７項。ＣＴＬ活性は、１種以上の炎症性サイトカインの分泌、及び／またはＣＴＬが仲立ちする標的細胞の殺傷を含む、第６６項に記載の方法または使用。
【０６１０】
第６８項。ＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性化、及び／またはＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＤ４＋  Ｔ細胞が仲立ちする細胞枯渇を促進するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６１１】
第６９項。ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化、及び／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞が仲立ちする細胞枯渇を促進するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６１２】
第７０項。ＮＫ細胞活性を増強するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６１３】
第７１項。増強されたＮＫ細胞活性は、標的細胞の枯渇、及び／または炎症性サイトカイン放出の増加を含む、第７０項に記載の方法または使用。
【０６１４】
第７２項。Ｔｒｅｇ等の制御性細胞の分化、増殖及び／もしくは活性、並びに／または骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、増殖、浸潤及び／もしくは活性を抑制及び／または低下させるＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６１５】
第７３項。制御性細胞（例えばＴｒｅｇ及びＭＤＳＣ）の、標的部位への浸潤を抑制及び／または低下させるＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６１６】
第７４項。前記標的部位は移植細胞、組織もしくは臓器、または自己免疫性、アレルギー性もしくは炎症性部位もしくは病変部である、第７３項に記載の方法または使用。
【０６１７】
第７５項。ＮＫが仲立ちする細胞枯渇を促進するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６１８】
第７６項。免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの１つ以上の効果を抑制することにより抗腫瘍免疫を促進するＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６１９】
第７７項。癌、敗血症もしくは感染状態、またはこれらの組み合わせの治療で用いられるＶＳＩＧアンタゴニストを使用する、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６２０】
第７８項。治療、診断、使用を必要とする対象における、ＮＫまたはＴ細胞免疫を促進することを含み、上に記載の項のいずれかに記載の、治療上または診断上効果的な量の少なくとも１つの抗体、抗原結合断片、または組成物を投与することを含む、診断もしくは治療用途の、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を含有する組成物の、治療及び／もしくは診断方法、または使用であって、かかる抗体または抗原結合断片は、配列番号１、２、もしくは３のアミノ酸配列を有するポリペプチド（ＶＳＩＧ８）、またはこのアミノ酸配列、もしくは免疫もしくは免疫細胞上の非ヒトＶＳＩＧ８オルソログ、もしくはヒトＶＩＳＴＡと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドの少なくとも１つの効果を阻害する、前記治療及び／もしくは診断方法、または使用。
【０６２１】
第７９項。前記治療される個体が感染症を患っている、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６２２】
第８０項。前記感染症は、ウイルス、細菌、寄生生物、線虫、酵母菌、マイコプラズマ（ｍｙｃｏｐｌａｓｍ）、真菌またはプリオンにより引き起こされる感染症である、第７９項に記載の方法または使用。
【０６２３】
第８１項。前記感染症は、レトロウイルス（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２等、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶまたはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも呼ばれる（ＡＩＤＳ）、及び他の単離物、例えばＨＩＶ−ＬＰ）、ピコルナウイルス（Ｐｉｃｏｍａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばポリオウイルス、肝炎Ａウイルス、エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）、カリシウイルス（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を引き起こす株）、トガウイルス（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）、フラビウイルス（Ｆｌａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばデング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱ウイルス）、コロナウイルス（例えばコロナウイルス）、ラブドウイルス（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、フィロウイルス（例えばエボラウイルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）、オルソミクソウイルス（例えばインフルエンザウイルス）、ブニヤウイルス（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばハンタウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス及びナイロウイルス）、アレナウイルス（出血熱ウイルス）、レオウイルス（例えば、レオウイルス、オルビウイルス及びロタウイルス）、ビルナウイルス、ヘパドナウイルス（Ｂ型肝炎ウイルス）、パルボウイルス（パルボウイルス）、パポーバウイルス（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）、アデノウイルス（大部分のアデノウイルス）、ヘルペスウイルス（Ｈｅｒｐｅｒｖｉｒｉｄａｅ）（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１及び２、水痘・帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス（天然痘ウイルス（ｖｉｒｓｕｅｓ）、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）、及びイリドウイルス（例えばアフリカブタコレラウイルス）、未分類のウイルス（例えば、海綿状脳症の原因物質、Ｄ型肝炎の作用物質、非Ａ型、非Ｂ型肝炎の作用物質（クラス１−内部移動、クラス２−非経口移動（即ちＣ型肝炎））、ノーウォーク及び関連ウイルス、並びにアストロウイルス）、並びに、重症急性呼吸器症候群ウイルス及び呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウエストナイル脳炎、コロナウイルス感染症、ライノウイルス感染症、インフルエンザ、デング熱、出血熱、耳の感染症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、急性発熱咽頭炎、咽頭結膜熱、流行性角結膜炎、乳児性胃腸炎、伝染性単核球症、バーキットリンパ腫、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌、一次ＨＳＶ−１感染症（子どもにおける歯肉口内炎、成人における扁桃炎及び咽頭炎、角結膜炎）、潜在性ＨＳＶ−１感染症（口唇ヘルペス、ヘルペス）、無菌性髄膜炎、サイトメガロウイルス感染症、巨細胞性封入体症、カポジ肉腫、キャッスルマン病、原発性滲出性リンパ腫、インフルエンザ、麻疹、脳炎、感染後脳脊髄炎、ムンプス、過形成性上皮障害（一般的な、扁平、足底及び肛門・性器でのいぼ、喉頭パピローマ、肬贅状表皮発育異常症）、クループ、肺炎、細気管支炎、灰白髄炎、狂犬病、細気管支炎、肺炎、風疹、先天性風疹、出血熱、水痘、デング熱、エボラ感染症、エコーウイルス感染症、ＥＢＶ感染症、第五病、フィロウイルス、フラビウイルス、手足口病、帯状疱疹ウイルス（帯状疱疹）、ヒトパピローマウイルス随伴上皮障害、ラッサ熱、リンパ球性脈絡髄膜炎、パラインフルエンザウイルス感染症、パラミクソウイルス、パルボウイルスＢ１９感染症、ピコルナウイルス、ポックスウイルス感染症、ロタウイルス下痢症、風疹、麻疹、水痘、天然痘感染症により引き起こされる、第７８または７９項に記載の方法または使用。
【０６２４】
第８２項。前記感染症は、アメーバ、鞭毛虫、熱帯熱マラリア原虫、トキソプラズマゴンディ、繊毛虫、球虫、微胞子虫、胞子虫等の原生動物；蠕虫、線虫（回虫）、条虫（サナダムシ）、吸虫（肝蛭）、節足動物、及びプリオンとして知られている異所性タンパク質、から選択される寄生生物により引き起こされる寄生生物感染症である、第７９または８０項に記載の方法または使用。
【０６２５】
第８３項。前記感染症は、敗血症、敗血症性ショック、副鼻腔炎、皮膚感染症、肺炎、気管支炎、髄膜炎、細菌性腟症、尿路感染症（ＵＣＩ）、細菌性胃腸炎、膿痂疹及び丹毒、丹毒、蜂窩織炎、炭疽、百日咳、ライム病、ブルセラ症、腸炎、急性腸炎、テタヌス、ジフテリア、偽膜性腸炎、ガス壊疽、急性食中毒、嫌気性蜂窩織炎、院内感染症、下痢症、乳児髄膜炎、旅行者下痢症、出血性大腸炎、溶血性尿毒症症候群、野兎病、消化性潰瘍、胃及び十二指腸潰瘍、在郷軍人病、ポンティアック熱、レプトスピラ症、リステリア症、皮膚病（ハンセン病）、結核、淋病、新生児眼炎、化膿性関節炎、髄膜炎等の髄膜炎菌性疾患、ウォーターハウス・フリードリヒセン症候群、シュードモナス感染症、ロッキー山紅斑熱、腸チフス型のサルモネラ症、胃腸炎及び全腸炎のサルモネラ症、細菌性赤痢、コアグラーゼ陽性ブドウ球菌感染症、拡散性皮膚感染症（膿痂疹）等の局在化皮膚感染症、非常に局在化した感染症、急性感染性心内膜炎、敗血症、壊死性肺炎、毒素性ショック症候群及びブドウ球菌食中毒等の中毒症、膀胱炎、子宮内膜炎、中耳炎、連鎖球菌咽頭炎、猩紅熱、リウマチ熱、産褥熱、壊死性筋膜炎、コレラ、ペスト（腺ペスト及び肺ペストを含む）からなる群から選択される細菌により引き起こされる感染症及び／または感染病、並びに、ピロリ菌、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｅｌｉａｉ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィラ、マイコバクテリア属（例えば結核菌、Ｍ・アビウム、Ｍ・イントラセルラーエ、Ｍ・カンサシ（ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ・ゴルドネ）、黄色ブドウ球菌、淋菌、髄膜炎菌、リステリア菌、化膿性連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、アガラスチエ連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌（緑色群）、エンテロコッカスフェカリス、ウシ連鎖球菌、連鎖球菌（嫌気性属）、肺炎連鎖球菌、病原性カンピロバクター属、腸球菌属、インフルエンザ菌、炭疽菌、コリネバクテリウムジフテリア、コリネバクテリウム属、豚丹毒菌、ウエルチ菌、破傷風菌、エンテロバクターアエロゲネス、クレブシエラ肺炎桿菌、パスツレラ・マルトシダ、バクテロイデス属、フゾバクテリウム属、ストレプトバチルス・モニリホルム、梅毒トレポネーマ、トレポネーマ・ペルテヌエ、レプトスピラ、及びアクチノミセスイスラエリから選択されるがこれらに限定されない最近により引き起こされる任意の感染症である、第７９または８０項に記載の方法または使用。
【０６２６】
第８４項。前記感染症は、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アスペルギローマ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｏｍａ）、アスペルギルス、バシジオボロミコシス（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｏｍｙｃｏｓｉｓ）、ブラストミセス症、カンジダ症、慢性肺アスペルギルス症、カエルツボカビ症、コクチジオイド真菌症、コニジオボロミコシス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｏｍｙｃｏｓｉｓ）、堅黒穂病（オオムギ）、クリプトコッカス症、皮膚糸状菌、白癬疹、皮膚糸状菌症、毛内糸状菌、昆虫病原糸状菌、仮性皮疽、流行性潰瘍症候群、食道カンジダ症、毛外白癬菌、真菌血症、ヒストプラスマ症、ロボ真菌症、マッソスポラシカジナ（Ｍａｓｓｏｓｐｏｒａ  ｃｉｃａｄｉｎａ）、真菌症、ミコスファエレラフラガリアエ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ  ｆｒａｇａｒｉａｅ）、鼓膜真菌症、パラコクシジオイデス症、病原性真菌、ペニシリウム菌症、サウザンドカンカー病（Ｔｈｏｕｓａｎｄ  ｃａｎｋｅｒｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、白癬、ゼアスポラ（Ｚｅａｓｐｏｒａ）、接合菌症から選択される真菌；アカントアメーバ、アメーバ症、回虫症、鉤虫症、アニサキス症、バベシア症、バランチジウム症、アライグマ回虫、ブラストシスチス（Ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｏｓｉｓ）、カンディルー、シャーガス病、肝吸虫症、コクリオミイヤ属、球虫、チュウゴク肝臓肝蛭クリプトスポリジウム症（Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｌｉｖｅｒ  Ｆｌｕｋｅ  Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｏｓｉｓ）、二核アメーバ症、裂頭条虫症、腎虫（Ｄｉｏｃｔｏｐｈｙｍｅ  ｒｅｎａｌｉｓ）感染症、メジナ虫症、包虫症、象皮病、蟯虫症、肝蛭病、肥大吸虫症、フィラリア症、ランブル鞭毛虫症、顎口虫症、膜様条虫疾患、寄生虫咽喉頭炎症候群、イソスポーラ症、片山熱、リーシュマニア症、リンパ系糸状虫症、マラリア、メタゴニムス症、蝿幼虫症、オンコセルカ症、シラミ症、原発性アメーバ性髄膜脳炎、寄生虫性肺炎、肺吸虫症、疥癬、住血吸虫症、嗜眠性脳炎、糞線虫症、孤虫症、リノスポリジウム症、河川盲目症、条虫症（嚢虫症の原因）、トキソカラ症、トキソプラズマ症、旋毛虫症、トリコモナス症、鞭虫症、トリパノゾーマ症、サナダムシ感染症、クリプトコックス・ネオフォルマンス、ヒストプラスマ・カプスラーツム、コクシジオイデス・イミチス、ブラストミセス・デルマティティディス、トラコーマクラミジア、カンジダ・アルビカンスからなる群から選択されるがこれらに限定されない寄生生物により引き起こされる感染症及び／または感染病である、第７９または８０項に記載の方法または使用。
【０６２７】
第８５項。前記感染症は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、伝染性単核球症、ＥＢＶ、サイトメガロウイルス、ＡＩＤＳ、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、結核、マラリア及び住血吸虫症のいずれかにより引き起こされる、第７９〜８４項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６２８】
第８６項。細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症、寄生虫感染症または敗血症の治療に有用な別の治療薬を含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６２９】
第８７項。免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの１つ以上の効果を抑制することにより、病原菌に対する免疫応答を促進する、上に記載の項のいずれかに記載の方法、組成物、抗体もしくは断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または使用。
【０６３０】
第８８項。細菌感染症の治療に使用する１種以上の追加の治療薬を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の方法、組成物、抗体もしくは断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または使用。
【０６３１】
第８９項。前記作用物質が、アミノグリコシド、カルバペネム、セファロスポリン、マクロライド、リンコサミド（Ｌｉｎｃｏｓａｍｉｄｅ）、ニトロフラン、ペニシリン、ポリペプチド、キノロン、スルホンアミド、テトラサイクリン等の抗生物質、クロファジミン、シクロセリン、シクロセリン、リファブチン、リファペンチン、ストレプトマイシンを含むがこれらに限定されない、マイコバクテリアに対する薬剤、並びに、クロラムフェニコール、ホスホマイシン、メトロニダゾール、ムピロシン、及びチニダゾール等の他の抗菌薬剤、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、第８８項に記載の方法、組成物、抗体もしくは断片、または使用。
【０６３２】
第９０項。ウイルス感染症の治療に使用する１種以上の追加の治療薬を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の方法、組成物、抗体もしくは断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または使用。
【０６３３】
第９１項。前記作用物質が、オセルタミビル（商標名Ｔａｍｉｆｌｕ（登録商標））及びザナミビル（商標名Ｒｅｌｅｎｚａ（登録商標））、Ａｒｂｉｄｏｌ（登録商標）、アダマンタン誘導体（Ａｍａｎｔａｄｉｎｅ（登録商標）、Ｒｉｍａｎｔａｄｉｎｅ（登録商標））、ノイラミニダーゼ阻害剤（Ｏｓｅｌｔａｍｉｖｉｒ（登録商標）、Ｌａｎｉｎａｍｉｖｉｒ（登録商標）、Ｐｅｒａｍｉｖｉｒ（登録商標）、Ｚａｎａｍｉｖｉｒ（登録商標））、プリン類似体グアニン等の、ヌクレオチド類似体逆転写酵素阻害薬（Ａｃｉｃｌｏｖｉｒ（登録商標）／Ｖａｌａｃｙｃｌｏｖｉｒ（登録商標）、Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（登録商標）／Ｖａｌｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（登録商標）、Ｐｅｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（登録商標）／Ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ（登録商標））、及びアデニン（Ｖｉｄａｒａｂｉｎｅ（登録商標））、ピリミジン類似体、ウリジン（Ｉｄｏｘｕｒｉｄｉｎｅ（登録商標）、Ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ（登録商標）、Ｅｄｏｘｕｄｉｎｅ（登録商標））、チミン（Ｂｒｉｖｕｄｉｎｅ（登録商標））、シトシン（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ（登録商標））、ホスカルネット、ヌクレオシド類似体ＮＡＲＴＩ：エンテカビル、Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ（登録商標）、Ｔｅｌｂｉｖｕｄｉｎｅ（登録商標）、Ｃｌｅｖｕｄｉｎｅ（登録商標）、ヌクレオチド類似体／ＮｔＲＴＩ：Ａｄｅｆｏｖｉｒ（登録商標）、テノホビル、Ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ（登録商標）等の核酸阻害剤、インターフェロンα−２ｂ  Ｐｅｇインターフェロンα−２ａ；Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ（登録商標）／Ｔａｒｉｂａｖｉｒｉｎ（登録商標）、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、ロピナビル、リトナビル、テノホビル／エムトリシタビン、エファビレンツ等の抗レトロウイルス薬剤（これらはそれぞれ、単独または種々の組み合わせで使用することができる）ｇｐ４１（エンフビルチド）、Ｒａｌｔｅｇｒａｖｉｒ（登録商標）、Ｆｏｓａｍｐｒｅｎａｖｉｒ（登録商標）、Ｌｏｐｉｎａｖｉｒ（登録商標）及びＡｔａｚａｎａｖｉｒ（登録商標）、Ｍｅｔｈｉｓａｚｏｎｅ（登録商標）、Ｄｏｃｏｓａｎｏｌ（登録商標）、Ｆｏｍｉｖｉｒｓｅｎ（登録商標）、及びＴｒｏｍａｎｔａｄｉｎｅ（登録商標）等のプロテアーゼ阻害剤等の抗ウイルス剤からなる群から選択される、第９０項に記載の方法、組成物、抗体もしくは断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または使用。
【０６３４】
第９２項。真菌感染症の治療に使用する１種以上の追加の治療薬を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の方法、組成物、抗体もしくは断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または使用。
【０６３５】
第９３項。ポリエン抗真菌薬、イミダゾール、トリアゾール、及びチアゾール抗真菌薬、アリルアミン、エキノキャンディンまたは他の抗真菌薬等の、抗真菌薬からなる群から選択される、第９２項に記載の方法、組成物、抗体もしくは断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または使用。
【０６３６】
第９４項。前記治療される個体は癌を患っている、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６３７】
第９５項。前記癌は、乳癌、子宮頚癌、卵巣癌、子宮体癌、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、膀胱癌、肺癌、膵癌、結腸直腸癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、甲状腺濾胞性癌、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、線維肉腫及び横紋筋肉腫、奇形癌、神経芽細胞腫、膠腫、神経膠芽腫、皮膚の良性腫瘍、ケラトアカントーマ、腎癌、未分化大細胞型リンパ腫、食道癌、濾胞性樹状細胞癌腫、精嚢腫瘍、表皮癌腫、脾臓癌、膀胱癌、頭頸癌、胃癌、肝臓癌、骨肉腫、脳腫瘍、網膜癌、胆道癌、小腸癌、唾液腺癌、子宮癌、精巣癌、結合組織癌、脊髄形成異常、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、鼻咽頭癌、神経内分泌癌、中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド、卵管癌、腹膜癌、乳頭漿液ミューラー管（ｍｉｉｌｌｅｒｉａｎ）癌、悪性腹水、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、リ・フラウメニ症候群及びフォン・ヒッペル・リンドウ病（ＶＨＬ）、原発性または転移性のいずれかの、由来が未知の癌（この癌は非転移性、侵襲性または転移性である）からなる群から選択される、第９４項に記載の方法または使用。
【０６３８】
第９６項。前記癌は、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、甲状腺癌、甲状腺濾胞性癌、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、線維肉腫及び横紋筋肉腫、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、奇形癌、神経芽細胞腫、膠腫、グリア芽腫癌、ケラトアカントーマ、未分化大細胞型リンパ腫、食道扁平上皮細胞癌、肝細胞癌癌、濾胞性樹状細胞癌腫、筋肉侵襲性癌、精嚢腫瘍、表皮癌腫、網膜癌、胆道癌、小腸癌、唾液腺癌、結合組織癌、脊髄形成異常、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、鼻咽頭癌、神経内分泌癌、骨髄異形成症候群、中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド、食道癌、卵管癌、腹膜癌、乳頭漿液ミューラー管癌、悪性腹水、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、リ・フラウメニ症候群及びフォン・ヒッペル・リンドウ病（ＶＨＬ）、子宮体癌、乳癌（好ましくは腺管癌浸潤性腺管癌、小葉癌、粘液性腺癌、腺内及び侵襲性腺管癌、並びに硬性腺癌）、結腸腺癌（好ましくは、不十分あるいは十分に分化した侵襲性及び非侵襲性腺癌、不十分あるいは十分に分化した盲腸腺癌、十分あるいは不十分に分化した結腸腺癌のいずれか）、管状腺癌（好ましくはグレード２の上行結腸管状腺癌）、結腸腺癌（デュークスステージＣＩ）、侵襲性腺癌、直腸腺癌（好ましくはグレード３の直腸腺癌、中程度に分化した直腸腺癌、中程度に分化した直腸粘液性腺癌）、肺癌（好ましくは、十分あるいは不十分に分化した非小細胞癌のいずれか）、扁平上皮細胞癌（好ましくは十分あるいは不十分に分化した扁平上皮細胞癌）、角化型扁平上皮細胞癌、腺癌（好ましくは不十分あるいは十分に分化した腺癌）、大型細胞腺癌、小細胞肺癌（好ましくは小細胞肺癌、より好ましくは未分化小細胞肺癌）、前立腺癌（好ましくは、グリーソングレード６〜９の腺癌、浸潤性腺癌、高悪性度の前立腺上皮内腫瘍形成、未分化癌種のいずれか）、胃腺癌（好ましくは中程度に分化した胃腺癌）、卵巣癌腫（好ましくは、嚢胞腺癌、漿液乳頭嚢胞性癌腫、漿液乳頭嚢胞性癌腫、侵襲的漿液乳頭癌種のいずれか）、脳腫瘍（好ましくは星状膠細胞腫、グレード２の星状膠細胞腫でない場合に、好ましくはグレード４の星状膠細胞腫、多形性膠芽腫のいずれか）、腎臓癌（好ましくは明細胞の腎細胞癌）、肝癌（好ましくは肝細胞癌のいずれか、好ましくは低グレードの肝細胞癌種、ファイブロラメラ肝細胞癌）、リンパ腫（好ましくは、ホジキンリンパ腫、及び高〜低グレードの非ホジキンリンパ腫のいずれかであり、また、癌が脳腫瘍である場合、グレード２の星状膠細胞腫ではなく、癌が非ホジキンリンパ腫である場合、大型細胞非ホジキンリンパ腫ではない癌は非転移性、侵襲性または転移性である）から選択される、第９４項に記載の方法または使用。
【０６３９】
第９７項。ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡタンパク質のレベルが、通常の細胞サンプルと比較して増加している、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６４０】
第９８項。前記治療される個体は癌を患っており、腫瘍部位に含まれる前記癌または他の細胞は、ＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡタンパク質を発現しないか、または、通常より高いレベルでＶＳＩＧ８及び／もしくはタンパク質を発現しない、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６４１】
第９９項。前記治療される対象は癌を患っており、病気の細胞、ＡＰＣ、造血細胞、ＮＫ細胞、単球、樹状細胞、好中球、単球、または病気の部位の他の免疫細胞（例えば骨髄サプレッサー細胞）は、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡタンパク質を発現する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６４２】
第１００項。抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、または組成物による治療を含み、治療法は、放射線治療、凍結治療、抗体治療、化学療法、光線力学的治療、手術、ホルモン除去、または従来の薬剤との併用療法の１つ以上を含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６４３】
第１０１項。抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または組成物、並びに細胞毒性薬、腫瘍ワクチン、抗体、ペプチド類、ペプチボディ、小分子、化学療法剤、細胞毒性及び細胞増殖抑制、免疫調節剤、インターフェロン、インターロイキン、免疫刺激性成長ホルモン、サイトカイン、ビタミン、ミネラル、アロマターゼ阻害剤、ＲＮＡｉ、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、及びプロテアソーム阻害剤からなる群から選択される別の治療薬による治療を含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６４４】
第１０２項。抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、または組成物、及び、治療効果を得るための１種以上の強化剤と共に同時にまたは連続的に対象に投与される別の治療薬もしくは造影剤による治療を含み、前記１種以上の強化剤は、放射線治療、従来／通常の抗癌剤強化抗腫瘍免疫応答、抗腫瘍免疫応答を強化する標的療法、免疫抑制細胞Ｔｒｅｇ及び／またはＭＤＳＣを標的化する治療薬、免疫刺激性抗体、サイトカイン療法、養子細胞移入からなる群から選択される、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６４５】
第１０３項。前記従来／通常の抗癌剤は、白金ベースの化合物、抗癌活性を有する抗生物質、アントラサイクリン、アントラセンジオン、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗有糸分裂剤、タキサン、タキソイド、微小管阻害剤、ビンカアルカロイド、葉酸塩アンタゴニスト、トポイソメラーゼ阻害剤、抗エストロゲン薬、抗アンドロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、ＧｎＲｈ類似体、５αレダクターゼ阻害剤、ビスホスホネート（ｂｉｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ）から選択される、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６４６】
第１０４項。白金ベースの化合物（オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン等）、抗癌活性を有する抗生物質（ダクチノマイシン、ブレオマイシン、マイトマイシン−Ｃ、ミトラマイシン等）、及びアントラサイクリン（ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン等）、アントラセンジオン（マイトキサントロン等）、アルキル化剤（ダカルバジン、メルファラン、シクロホスファミド、テモゾロミド、クロラムブシル、ブスルファン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア等）、代謝拮抗薬（フルオロウラシル、ラルチトレキシド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ）、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、ヒドロキシ尿素等）及び葉酸塩アンタゴニスト（メトトレキサート、トリメトプリム、ピリメタミン、ペメトレキセド等）、抗有糸分裂剤（ポロキナーゼ阻害剤等）及び微小管阻害剤（タキサン等）及びタキソイド（パクリタキセル、ドセタキセル等）、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン等）、トポイソメラーゼ阻害剤（エトポシド、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、カンプトテシン等）、抗エストロゲン薬（タモキシフェン、フルベストラント、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン（ｉｏｄｏｘｙｆｅｎｅ）等）、抗アンドロゲン薬（ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド及び酢酸シプロテロン等）、プロゲストゲン（酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（アナストロゾール、レトロゾール、ボロゾール、エクセメスタン）を含む細胞増殖抑制、ＧｎＲＨ類似体（リュープロレリン、ゴセレリン、ブセレリン、デガレリクス等）、フィナステリド等の５αレダクターゼ阻害剤を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくは組成物、もしくは方法もしくは使用、または、ＶＳＩＧ８融合タンパク質。
【０６４７】
第１０５項。白金ベースの化合物を更に含む、項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６４８】
第１０６項。ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤（ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、ベリノスタット、モセチノスタット、アベキシノスタット（ａｂｅｘｉｎｏｓｔａｔ）、エンチノスタット、レスミノスタット（ｒｅｓｍｉｎｏｓｔａｔ）、ギビノスタット（ｇｉｖｉｎｏｓｔａｔ）、キシノスタット（ｑｕｉｓｉｎｏｓｔａｔ）、酪酸ナトリウム等）、プロテアソーム阻害剤（ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、ジスルフィラム等）、ｍＴＯＲ経路阻害剤（テムシロリムス、ラパマイシン、エベロリムス等）、ＰＩ３Ｋ阻害剤（ペリフォシン（ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ）、ＣＡＬ１０１、ＰＸ−８６６、ＩＰＩ−１４５、ＢＡＹ  ８０−６９４６等）、Ｂ−ｒａｆ阻害剤（ベムラフェニブ、ソラフェニブ等）、ＪＡＫ２阻害剤（レスタウルチニブ、パクリチニブ等）、チロシンキナーゼ阻害物質（ＴＫＩ）（エルロチニブ、イマチニブ、スニチニブ、ラパチニブ、ゲフィチニブ、ソラフェニブ、ニロチニブ、トセラニブ（ｔｏｃｅｒａｎｉｂ）、ボスチニブ、ネラチニブ、バタラニブ、レゴラフェニブ、カボザンチニブ等）、他のプロテインキナーゼ阻害剤（クリゾチニブ等）、セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤（例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤等のＲａｓ／Ｒａｆシグナル伝達阻害剤）、セリンプロテアーゼ阻害剤（例えばマトリプターゼ、ヘプシン、ウロキナーゼ）、細胞内シグナル伝達阻害剤（チピファルニブ、ペリホシン等）、ＭＥＫ及び／またはＡＫＴキナーゼを介する細胞シグナル伝達阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤（ＡＺＤ１１５２、ＰＨ７３９３５８、ＶＸ−６８０、ＭＬＮ８０５４、Ｒ７６３、ＭＰ２３５、ＭＰ５２９、ＶＸ−５２８、ＡＸ３９４５９等）、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤（ＣＤＫ２及び／またはＣＤＫ４阻害剤）、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ＸＬを含む生残シグナル伝達タンパク質阻害剤（ＡＢＴ−７３７等）、ＨＳＰ９０阻害剤、治療用モノクローナル抗体（セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ等の抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ、トラスツズマブ、ペルツズマブ等の抗ＥＲＢＢ２  ｍＡｂ、リツキシマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ等の抗ＣＤ２０  ｍＡｂ、及び、アレムツズマブ、ラベツズマブ、アデカツムマブ、オレゴボマブ、オナルツブマブ等の、他の腫瘍抗原を標的とするｍＡｂ等）、ＴＲＡＩＬ経路アゴニスト（ドゥラネルミン（可溶性ｒｈＴＲＡＩＬ）、アポマブ、マパツムマブ、レクサツムマブ、コナツムマブ、ティガツズマブ等）、抗体断片、二重特異的抗体及び二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）（カツマキソマブ、ブリナツモマブ等）、抗体薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）及び他の免疫複合体（イブリツモマブチウキセタン（ｔｒｉｕｘｅｔａｎ）、トシツモマブ、ブレンツキシマブベドチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、クリバツズマブテトラキセタン、ペムツモマブ、トラスツズマブエムタンシン等）、抗血管由来治療薬（ベバシズマブ、エタラチズマブ、ボロシキシマブ、ラムシルマブ、アフリベルセプト、ソラフェニブ、スニチニブ、レゴラフェニブ、アキシチニブ、ニンテダニブ、モテサニブ、パゾパニブ、セディナリブ等）、メタロプロテイナーゼ阻害剤（マリマスタット等）、ウロキナー���プラスミノゲン活性化因子受容体機能阻害剤、カテプシン活性阻害剤からなる群から選択されるがこれらに限定されない標的療法を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６４９】
第１０７項。別の治療薬は、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ、アレムツズマブ、ラベツズマブ、アデカツムマブ、オレゴボマブ、オナルツブマブ、アポマブ、マパツムマブ、レクサツムマブ、コナツムマブ、ティガツズマブ、カツマキソマブ、ブリナツモマブ、イブリツモマブチウキセタン、トシツモマブ、ブレンツキシマブベドチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、クリバツズマブテトラキセタン、ペムツモマブ、トラスツズマブエムタンシン、ベバシズマブ、エタラチズマブ、ボロシキシマブ、ラムシルマブ、アフリベルセプトから選択される別の抗体である、第１０６項に記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６５０】
第１０８項。腫瘍抗原、腫瘍抗原をコードする組み換えウイルス及び細菌ベクター、腫瘍抗原をコードするＤＮＡ系ワクチン、樹状細胞系ワクチンに対して標的化されたタンパク質、全腫瘍細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＣＯＳ及び／またはＦｌｔ−３リガンドを発現する遺伝子改変腫瘍細胞、腫瘍崩壊ウイルスワクチンに対する免疫応答をマウントするために使用されるタンパク質またはペプチドを含む外因性癌ワクチンから選択される治療用癌ワクチンを更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６５１】
第１０９項。以下のＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８及びＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα（インターフェロンα）、ＩＦＮα−２ｂ、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ等のサイトカインの１つ以上から選択されるサイトカイン療法、及び、これらの異なる送達方法を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６５２】
第１１０項。患者の自己天然腫瘍特異的Ｔ細胞の拡張、またはＴ細胞の遺伝子組み換えによる腫瘍抗原に対する特異性の付与から選択されるｅｘ  ｖｉｖｏ治療の後に実施される養子細胞移入治療を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６５３】
第１１１項。前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片は、以下の免疫阻害効果うちの少なくとも１つの任意の組み合わせを仲立ちする抗体または抗原結合断片を含み、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の低下、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）細胞数及び／もしくは制御性Ｔ細胞の活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉ）細胞の直接殺傷の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の低下、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の低下。
【０６５４】
第１１２項。治療及び／または診断を必要とする対象における、Ｔ細胞免疫もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）免疫の抑制、及び／またはＴｒｅｇもしくはＭＤＳＣの促進を含み、上の項のいずれか一項に記載の、治療上または診断上効果的な量の、少なくとも１つの抗体、抗原結合断片または組成物を投与することを含む、診断もしくは治療用途の、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を含有する組成物の治療及び／もしくは診断方法、または使用であって、かかる抗体または抗原結合断片が、免疫または免疫細胞上の、配列番号１、２、もしくは３のアミノ酸配列を有するポリペプチド（ＶＳＩＧ８）、またはオルソログの少なくとも１つの効果を刺激する、模倣する、または促進する、前記治療及び／もしくは診断方法、または使用。
【０６５５】
第１１３項。アレルギー、自己免疫、移植、遺伝子治療、炎症、またはこれらの組み合わせの治療用に使用される、第１１１または１１２項に記載の方法または使用。
【０６５６】
第１１４項。治療される個体は、細胞療法、遺伝子治療または移植組織もしくは臓器を有するか、それを受ける予定であり、治療は、かかる細胞療法、遺伝子治療、または移植組織もしくは臓器と関係する望ましくない免疫活性化を低下させるかまたは阻害する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６５７】
第１１５項。前記抗体もしくはその抗原結合断片、またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、以下のうちの１つ以上をもたらし、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の低下、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）細胞数及び／もしくは制御性Ｔ細胞の活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉ）細胞の直接殺傷の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の低下、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の低下。
【０６５８】
第１１６項。Ｔまたはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの効果を増強するか、刺激するかまたは模倣する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６５９】
第１１７項。Ｔ細胞免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの阻害効果を増大させる、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６６０】
第１１８項。ＣＴＬ活性を阻害する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６６１】
第１１９項。阻害されるＣＴＬ活性は、１つ以上の炎症性サイトカインの分泌低下、及び／またはＣＴＬが仲立ちする標的細胞の殺傷の低下を含む、第１１８項に記載の方法または使用。
【０６６２】
第１２０項。ＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性化、及び／またはＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＤ４＋  Ｔ細胞が仲立ちする細胞枯渇を阻害する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６６３】
第１２１項。ＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化、及び／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞増殖、及び／またはＣＤ８＋  Ｔ細胞が仲立ちする細胞枯渇を阻害する、上に記載ののいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６６４】
第１２２項。ＮＫ細胞活性を阻害する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６６５】
第１２３項。阻害されるＮＫ細胞活性は、標的細胞の枯渇、及び／または炎症性サイトカイン放出の低下を含む、第１２２項に記載の方法または使用。
【０６６６】
第１２４項。Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）等の制御性細胞の分化、増殖及び／もしくは活性、並びに／または骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）の分化、増殖、侵潤及び／もしくは活性を促進及び／または増大させる、上に記載のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６６７】
第１２５項。ＴｒｅｇまたはＭＤＳＣ等の制御性細胞の、病気の部位への浸潤を促進及び／または増大させる、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６６８】
第１２６項。免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの効果の１つ以上を促進することにより、アレルギー性、自己免疫性または炎症性免疫応答を阻害する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６６９】
第１２７項。免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの効果の１つ以上を増強することにより、抗原特異的免疫応答の抗原特異的寛容、または抑制の延長を促進する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６７０】
第１２８項。移植細胞、組織または臓器に対する抗原特異的免疫の寛容、または抑制の延長を誘発する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６７１】
第１２９項。免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの効果の１つ以上を促進することにより、自己抗原、アレルゲン、または炎症作用物質に対する免疫応答を阻害する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６７２】
第１３０項。治療される個体は、細胞療法、遺伝子治療、または移植組織もしくは臓器を有するか、それを受ける予定であり、治療は、かかる細胞療法、遺伝子治療、または移植組織もしくは臓器と関係する望ましくない免疫活性化を低下させるかまたは阻害する、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６７３】
第１３１項。酸逆流／胸やけ、座瘡、尋常性挫瘡、アレルギー及び過敏症、アルツハイマー病、ぜんそく、アテローム性動脈硬化症及び血管閉塞性疾患、任意のアテローム性動脈硬化症、虚血性心疾患、心筋梗塞、脳卒中、末梢血管疾患または血管ステント再狭窄、自己免疫疾患、気管支炎、癌、心臓炎、白内障、腹腔動脈疾患、慢性痛、慢性前立腺炎、硬変、大腸炎、結合織疾患、任意の全身性エリテマトーデス、全身性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、またはシェーグレン症候群及びシェーグレン症候群等の関連する状態（本明細書では、シェーグレン症候群、一次シェーグレン症候群及び二次シェーグレン症候群、並びに、結合織疾患等のシェーグレン症候群に関係する状態または合併症、例えば関節リウマチ、全身性エリテマトーデスまたは強皮症の１つ以上を含む）、肺炎、肺線維症、間質性腎炎、腎膜周辺組織の炎症、糸球体腎炎、尿細管性アシドーシス、手根管症候群、末梢神経炎、脳神経障害、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、硬変、食道、胃、膵臓及び肝臓における炎症（肝炎を含む）、多発性筋炎、レイノー現象、血管炎、自己免疫甲状腺問題、リンパ腫、角膜疾患、クローン病、結晶性関節炎、任意の痛風、偽性痛風、ピロリン酸カルシウム沈着症、認知症、皮膚炎、糖尿病、ドライアイ、湿疹、浮腫、気腫、線維筋痛、胃腸炎、歯肉炎、糸球体腎炎、心臓疾患、肝炎、高血圧、過敏症、炎症性腸疾患、外傷及び虚血の結果を含む炎症性状態、インスリン抵抗性、間質性膀胱炎、虹彩毛様体炎、虹彩炎、関節痛、関節炎、ライム病、メタボリックシンドローム（Ｘ症候群）、多発性硬化症、筋炎、腎炎、肥満、ぶどう膜炎を含む眼疾患、骨減少症、骨粗鬆症、パーキンソン病、骨盤内炎症性疾患、歯周病、多発動脈炎、多発軟骨炎、リウマチ性多発筋痛、乾癬、再灌流傷害、リウマチ性関節炎、リウマチ疾患、関節リウマチ、変形性関節症または乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、副鼻腔炎、「シェーグレン症候群」及びこれに伴う関連状態または合併症（シェーグレン症候群、一次シェーグレン症候群及び二次シェーグレン症候群、関節リウマチ、全身性エリテマトーデスまたは強皮症等の結合織疾患を含む、シェーグレン症候群に関係する状態、及び、肺炎、肺線維症、間質性腎炎等のシェーグレン症候群に関係する合併症の１つ以上等）、腎膜周辺組織の炎症、糸球体腎炎、尿細管性アシドーシス、手根管症候群、末梢神経炎、脳神経障害、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、硬変、食道、胃、膵臓及び肝臓における炎症（肝炎を含む）、多発性筋炎、レイノー現象、血管炎、自己免疫甲状腺問題、リンパ腫、シェーグレン症候群、刺激結腸、脊椎関節症、任意の強直性脊椎炎、反応性関節炎またはライター症候群、全身性カンジダ症、腱炎、移植拒絶反応、ＵＴＩ、腟炎、血管疾患（アテローム血管疾患、血管炎、結節性多発性動脈炎、ヴェゲナー肉芽腫症、チャーグ・ストラウス症候群、または血管炎を含む）から選択される炎症と関係する炎症性または自己免疫疾患または状態を治療するために使用される、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６７４】
第１３２項。急性前ぶどう膜炎、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、急性痛風関節炎、急性壊死性出血性白質脳炎、急性もしくは慢性副鼻腔炎、急性化膿髄膜炎（もしくは他の中枢神経系炎症性疾患）、急性の重度炎症、アジソン病、副腎炎、成人発症真性糖尿病（２型糖尿病）、成人発症特発性副甲状腺機能低下症（ＡＯＩＨ）、無ガンマグロブリン血症、無顆粒球症、血管炎（脈管炎、任意で大型脈管炎を含む）、任意のリウマチ性多発筋痛及び巨細胞（高安）関節炎、アレルギー状態、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、アレルギー性肉芽腫性脈管炎、アレルギー性過敏性障害、アレルギー性神経炎、アレルギー反応、グレアタ脱毛症（ａｌｏｐｅｃｉａ  ｇｒｅａｔａ）、全脱毛症、アルポート症候群、肺胞炎、任意のアレルギー性肺胞炎もしくは線維化性肺胞炎、アルツハイマー病、アミロイド症、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）（ＡＬＳ；ルー・ゲーリッグ病）、好酸球関連疾患、任意の好酸球増加症、アナフィラキシー、強直性脊椎炎、脈管拡張、抗体が仲立ちする腎炎、抗ＧＢＭ／抗ＴＢＭ腎炎、抗原−抗体複合体が仲立ちする疾患、反糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、鵞口瘡、アフタ性口内炎、再生不良性貧血、不整脈、動脈硬化、動脈硬化性疾患、関節炎、任意の関節リウマチ（急性関節炎、もしくは慢性関節リウマチ、慢性関節炎プログレディエント（ｐｒｏｇｒｅｄｉｅｎｔｅ）、変形性関節炎等）、回虫症、アスペルギルス腫、好酸球含有肉芽腫、アスペルギルス症、精子変態（ａｓｐｅｒｍｉｏｇｅｎｅｓｅ）、ぜんそく、任意の気管支ぜんそく（ａｓｔｈｍａ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌｅ）、気管支ぜんそく（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ａｓｔｈｍａ）、もしくは自己免疫ぜんそく、血管拡張性失調症、失調性硬化症、アテローム性動脈硬化症、自閉症、自己免疫性血管性浮腫、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、自己免疫性糖尿病、自己免疫性精巣炎及び卵巣炎を含む、精巣及び卵巣の自己免疫疾患、膠原病に関係する自己免疫疾患、自己免疫性自律神経障害、自己免疫性耳疾患、任意の自己免疫性内耳疾患（ＡＧＥＤ）、自己免疫性甲状腺炎等の甲状腺炎を含む自己免疫性内分泌腺疾患、自己免疫性腸疾患症候群、自己免疫性腺機能不全、自己免疫性難聴、自己免疫性溶血、自己免疫性肝炎、自己免疫性肝臓病的疾患、自己免疫性高脂血症、自己免疫性免疫不全、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性膵炎、自己免疫多腺性内分泌障害、自己免疫性Ｉ型多腺性症候群、自己免疫性網膜症、自己免疫血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、自己免疫性甲状腺疾患、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性胃腸疾患、軸索及び神経細胞ニューロパシー、バロ病、ベーチェット病、良性の家族性及び虚血再灌流傷害、良性リンパ性血管炎、バーガー病（Ｂｅｒｇｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）（ＩｇＡ腎症）、愛鳥家肺、失明、ベック病、閉塞性細気管支炎（非移植性）対ＮＳＩＰ、気管支炎、気管支肺炎アスペルギルス症、ブラットン症候群、水疱性類天疱瘡、カプラン症候群、心筋症、心血管局所貧血、カースルマン症候群、腹腔動脈疾患、腹腔スプルー（グルテン性腸症）、小脳退化、脳虚血、及び脈管化に伴う疾患、シャーガス病、チャネロパチー、任意の癲癇、ＣＮＳのチャネロパチー、脈絡網膜炎、脈絡膜炎、自己免疫性血液疾患、慢性的活性肝炎もしくは自己免疫性の慢性的活性肝炎、慢性接触皮膚炎、慢性エオシン好性肺炎、慢性疲労症候群、慢性肝炎、慢性過敏症肺炎、慢性炎症性関節炎、慢性炎症性脱髄性多発神経障害（ＣＩＤＰ）、慢性難治性炎症、慢性皮膚粘膜カンジダ症、慢性ニューロパシー、任意のＩｇＭポリニューロパシーもしくはＩｇＭが仲立ちするニューロパシー、慢性閉塞性気道疾患、慢性肺炎症性疾患、慢性再発性多病巣性骨髄炎（ＣＲＭＯ）、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）もしくは亜急性甲状腺炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡／良性粘膜類天疱瘡、ＣＮＳ炎症性疾患、ＣＮＳ脈管炎、腹腔疾患、コーガン症候群、寒冷凝集素疾患、ポリープ様大腸炎、大腸炎（潰瘍性大腸炎、潰瘍性大腸炎、膠原性大腸炎等）、Ｔ細胞の湿潤と慢性的な炎症反応を伴う状態、先天性心ブロック、先天性風疹感染症、ケームス陽性貧血、冠動脈疾患、コクサッキー心筋炎、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰沈着、レイノー現象）、クローン病、寒冷グロブリン血症、クッシング症候群、毛様体炎、任意の慢性毛様体炎、異時性毛様体炎、虹彩毛様体炎もしくはフッチ毛様体炎、嚢胞性線維症、サイトカイン誘発毒性、聴覚障害、変性関節炎、脱髄疾患、任意の自己免疫脱髄疾患、脱髄ニューロパシー、デング熱、疱疹状皮膚炎及びアトピー性皮膚炎、接触皮膚炎を含む皮膚炎、皮膚筋炎、急性炎症性成分による皮膚疾患、デビック病（視神経脊髄炎）、糖尿病性大動脈疾患、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症、ダイアモンド・ブラックファン貧血、拡散間質性肺線維症、拡張型心筋症、円板状ループス、白血球漏出を伴う疾患、ドレスラー症候群、デュピュイトラン拘縮、エコーウイルス感染症、アレルギー性もしくはアトピー性湿疹を含む湿疹、ラスマッセン脳炎並びに辺縁系及び／もしくは脳幹性脳炎、脳脊髄炎、任意のアレルギー性脳脊髄炎もしくは脳脊髄炎アレルギー（ａｌｌｅｒｇｉｃａ）及び実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、動脈内膜増殖、心内膜炎、内分泌性眼症、子宮内膜症、心内膜心筋線維症、水晶体過敏性眼内炎（ｅｎｄｏｐｈｔｈａｌｍｉａ  ｐｈａｃｏａｎａｐｈｙｌａｃｔｉｃａ）、眼内炎、腸炎アレルギー（ａｌｌｅｒｇｉｃａ）、好酸球増加−筋痛症候群、好酸球性筋膜炎（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉｃ  ｆａｓｃｉｔｉｓ）、流行性角結膜炎、後天性表皮水疱症（ＥＢＡ）、上強膜、上強膜炎、エプスタイン・バーウイルス感染症、持久性隆起性紅斑、多形紅斑、らい性結節性紅斑、結節性紅斑、胎児赤芽球症、食道運動障害、本態性混合型クリオグロブリン血、篩状、エバンス症候群（Ｅｖａｎ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏症、農夫肺、リウマチ熱（ｆｅｂｒｉｓ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ）、フェルティー症候群、線維筋痛、線維化性肺胞炎、フィラリア症、焦点性分節糸球体硬化（ＦＳＧＳ）、食中毒、前面胃萎縮（ｆｒｏｎｔａｌ，  ｇａｓｔｒｉｃ  ａｔｒｏｐｈｙ）、巨細胞関節炎（時間的関節炎）、巨細胞肝炎、巨細胞多発筋痛、糸球体腎炎（ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｄｅｓ）、慢性もしくは急性糸球体腎炎（例えば一次ＧＮ）等の、ネフローゼ症候群を有する、及び有しない糸球体腎炎（ＧＮ）、グッドパスチャー症候群、痛風性関節炎、顆粒球輸血関連の症候群、リンパ腫肉芽腫症を含む肉芽腫症、多発血管炎を伴う肉芽腫症（ＧＰＡ）、肉芽腫性ブドウ膜炎、グレーブス病（Ｇｒａｖｅ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ギラン・バレー症候群、滴状乾癬（ｇｕｔａｔｔｅ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、発作性血色素尿症（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｕｒｉａ  ｐａｒｏｘｙｓｍａｔｉｃａ）、ハーマン・リッチ病、橋本病、橋本脳炎、橋本甲状腺炎、ヘモクロマトーシス、溶血性貧血もしくは免疫性溶血性貧血（自己免疫溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、溶血性貧血を含む）、血友病Ａ、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症、痛覚過敏症、低ガンマグロブリン血症、性腺機能低下症、副甲状腺機能低下症、特発性尿崩症、特発顔面神経麻痺、特発性甲状腺機能低下症、特発性ＩｇＡ腎症、特発性膜ＧＮもしくは特発性膜腎症、特発性腎炎症候群、特発性肺胞線維症、特発性スプルー、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、ＩｇＥが仲立ちする疾患、任意のアナフィラキシー及びアレルギー性もしくはアトピー性鼻炎、ＩｇＧ４関連硬化性疾患、限局性回腸炎（ｉｌｅｉｔｉｓ  ｒｅｇｉｏｎａｌｉｓ）、免疫複合腎炎、サイトカイン及びＴリンパ球が仲立ちする急性及び遅延過敏症を伴う免疫応答、免疫が仲立ちするＧＮ、免疫調節性リポタンパク質（成人もしくは急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む）、封入体筋炎、感染性関節炎、反精子抗体による不妊症、ブドウ膜の全てもしくは一部の炎症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）炎症性増殖過剰皮膚病、炎症性筋障害、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型（ｔｙｐｅｌ））、膵島炎、間質性膀胱炎、間質性肺疾患、間質性肺線維症、虹彩炎、虚血性再灌流疾患、関節炎、若年性関節炎、若年性皮膚筋炎、若年性糖尿病、小児性インスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）を含む若年発症性（Ｉ型）真性糖尿病、若年発症性関節リウマチ、川崎症候群、乾性角結膜炎、トリパノソーマ症（ｋｙｐａｎｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、ランバート−イートン症候群、リーシュマニア症、らい病、白血球減少、白血球接着不全、白血球破砕性血管炎、白血球減少症、扁平苔癬、硬化性萎縮性苔癬（ｌｉｃｈｅｎ  ｓｃｌｅｒｏｓｕｓ）、木質結膜炎、線状ＩｇＡ皮膚、線状ＩｇＡ疾患（ＬＡＤ）、レフラー症候群、ルポイド肝炎、狼瘡（腎炎、脳炎、小児性、非腎性、腎外、円盤状、脱毛症を含む）、狼瘡（ＳＬＥ）、ディセミナス（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｕｓ）エリテマトーデス、ライム関節炎、ライム病、リンパ様間質肺炎、マラリア、男性及び女性自己免疫性不妊症、上顎の中程度の血管血管炎（川崎病及び結節性多発性動脈炎を含む）、膜様（ｍｅｍｂｒａｎｏ）もしくは膜質（ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ）増殖性ＧＮ（ＭＰＧＮ）（Ｉ型及びＩＩ型、及び急速進行性ＧＮ、膜質ＧＮ（膜質腎症）を含む）、メニエール病、髄膜炎、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発血管炎、片頭痛、微小変化の腎症、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、伝染性単核球症、モーレン潰瘍、ミ��シャ−ハーバーマン病、多発限局性運動性末梢神経炎、複数の内分泌不全、敗血症、外傷もしくは出血に続くもの等の複数の臓器障害症候群、複数の臓器障害症候群、脊椎−眼ＭＳ等の多発性硬化症（ＭＳ）、多発性硬化症、ムンプス、筋疾患、胸腺腫関連の重症筋無力症等の重症筋無力症、重症筋無力症、心筋炎、筋炎、ナルコレプシー、壊死性全腸炎、及び経壁大腸炎、及び自己免疫性炎症性腸疾患、壊死性、皮膚性もしくは過敏性血管炎、新生児性狼瘡症候群（ＮＬＥ）、腎症、ネフローゼ症候群、神経学的疾患、視神経脊髄炎（デビック）、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、好中球減少症、非癌性リンパ球増加、非肉芽腫性ブドウ膜炎、非悪性胸腺腫、眼性および眼窩炎症性疾患、眼性瘢痕性類天疱瘡、卵巣炎、交感性眼炎、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、オプソクローヌもしくはオプソクローヌス・ミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、及び二次ニューロパシー、視神経炎、肉芽腫性精巣炎（ｏｒｃｈｉｔｉｓ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓａ）、変形性関節症、回帰性リウマチ、膵炎、汎血球減少、ＰＡＮＤＡＳ（ストレプトコッカスに関連する小児性自己免疫神経精神病学的疾患）、傍腫瘍性小脳変性症、腫瘍随伴症候群、腫瘍随伴症候群（神経系腫瘍随伴症候群を含む）、任意のランバート・イートン筋無力症候群もしくはイートン・ランバート症候群、寄生虫疾患（例えばリーシュマニア症）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、パリーロンバーグ症候群、毛様体扁平部炎（末梢ぶどう膜炎）、パーソナージュ（Ｐａｒｓｏｎｎａｇｅ）・ターナー症候群、パルボウイルス感染症、天疱瘡様水疱及び皮膚類天疱瘡等の類天疱瘡、天疱瘡（尋常天疱瘡を含む）、紅斑性天疱瘡、落葉性天疱瘡、天疱瘡粘液−膜類天疱瘡、天疱瘡、消化性潰瘍、周期性麻痺、末梢神経炎、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血（貧血悪性熱）、悪性貧血、水晶体抗原性ブドウ膜炎、肺肝硬変、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ型多発性関節炎慢性プリマリア、多発軟骨炎（例えば、不応性もしくは再発多発軟骨炎）、多内分泌自己免疫疾患多内分泌疾患、多腺性症候群、任意の自己免疫性多腺性症候群（もしくは多腺性内分泌障害症候群）、リウマチ性多発筋痛、多発性筋炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、多発ニューロパシー、多発性神経根炎アクタ、心臓切開後症候群、後部ブドウ膜炎、もしくは自己免疫性ぶどう膜炎、
心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、連鎖球菌感染後腎炎、予防接種後症候群、初老期痴呆、原発性胆汁性肝硬変、一次性甲状腺機能低下症、一次性特発性粘液水腫、一次性リンパ球増加症（モノクローナルＢ細胞リンパ球増加症を含む）、測定されていない重要度を有する、任意の良性単クローン性免疫グロブリン血症及び単クローン性免疫グロブリン血症（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｇａｒｎｍｏｐａｔｈｙ）、ＭＧＵＳ、一次性粘液水腫、一次性進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ）、及び再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、原発性硬化性胆管炎、プロゲステロン皮膚炎、全身性進行性硬化症、増殖性関節炎、乾癬（慢性尋常性乾癬、乾癬、乾癬性関節炎等）、肺胞タンパク症、肺浸潤好酸球増加、真正赤血球性貧血もしくは形成不全（ＰＲＣＡ）、赤芽球癆、化膿性もしくは非化膿性副鼻腔炎、爪の膿疱性乾癬及び乾癬、腎盂炎、壊疽性膿皮症、ケルバン甲状腺炎、レイノー現象、反応性関節炎、反復流産、血圧応答の低下、灼熱痛、不応性スプルー、ライター病もしくは症候群、再発性多発軟骨炎、心筋もしくは他の組織の再潅流傷害、再灌流傷害、呼吸促迫症候群、レストレスレッグス症候群、網膜自己免疫、後腹膜線維化症、レイノー症候群、リウマチ疾患、リウマチ熱、リウマチ、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、風疹ウイルス感染症、サンプタ−症候群、サルコイドーシス、住血吸虫症、シュミット症候群、ＳＣＩＤ及びエプスタイン・バールウイルス関連疾患、強膜、強膜炎、強指症（ｓｃｌｅｒｏｄａｃｔｙｌ）、強皮症、任意の全身性強皮症、硬化性胆管炎、伝染性硬化症（ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔａ）、硬化症（全身性硬化症等）、感覚神経聴力障害、血清陰性椎骨関節炎、シーアン症候群、シャルマン症候群、ケイ肺症、シェーグレン症候群、精子及び精巣自己免疫、蝶形骨洞副鼻腔炎、スティーヴンズ−ジョンソン症候群、スティッフマン（もしくはスティッフパーソン）症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、亜急性皮膚エリテマトーデス、突然の聴力障害、スザック症候群、シデナム舞踏病、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）もしくは全身性エリテマトーデス、皮膚ＳＬＥ、全身性壊死性血管炎、ＡＮＣＡ関連脈管炎、任意のチャーグ・ストラウス血管炎もしくは症候群（ＣＳＳ）、脊髄癆、高安動脈炎、末梢血管拡張、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、閉塞性血栓性血管炎（ｔｈｒｏｍｂｏａｎｇｉｉｔｉｓ  ｕｂｉｔｅｒａｎ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、及び、慢性もしくは急性特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を含むＩＴＰ等の自己免疫性、もしくは免疫が仲立ちする血小板減少症を含む、血小板減少症、血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、甲状腺中毒症、組織損傷、トロサ・ハント症候群、中毒性表皮性表皮壊死症、毒性ショック症候群、輸血反応、乳児の一過性低ガンマグロブリン血症、横断性脊髄炎、横断性脊髄炎（ｔｒａｖｅｒｓｅ  ｍｙｅｌｉｔｉｓ）、熱帯性肺好酸球増多症、結核、潰瘍性大腸炎、未分化結合織疾患（ＵＣＴＤ）、蕁麻疹、任意の慢性アレルギー性蕁麻疹及び慢性特発性蕁麻疹（慢性自己免疫性蕁麻疹）、ぶどう膜炎、前ぶどう膜炎、ブドウ膜網膜炎、弁膜炎、血管機能不全、血管炎、脊椎骨関節炎、小水疱性皮膚症、白斑���ヴェゲナー肉芽腫症（多発血管炎を伴う肉芽腫症（ＧＰＡ））、骨髄異形成症候群、もしくはｘ結合超ＩｇＭ症候群から選択される自己免疫性またはアレルギー性疾患を治療するために使用される、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６７５】
第１３３項。多発性硬化症、乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；円板状エリテマトーデス、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ性血管炎、血小板減少性紫斑病、特発性血小板減少症、特発性自己免疫溶血性貧血、赤芽球癆、シェーグレン症候群、リウマチ疾患、結合織疾患、炎症性リウマチ、変性リウマチ、関節外リウマチ、若年性関節リウマチ、関節炎蕁麻疹、筋肉リウマチ、慢性多発性関節炎、クリオグロブリン血症性血管炎、ＡＮＣＡ関連脈管炎、抗リン脂質症候群、重症筋無力症、自己免疫溶血性（ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）貧血、ギラン・バレー症候群、慢性免疫多発神経障害、自己免疫甲状腺炎、インスリン依存性真性糖尿病、Ｉ型糖尿病、アジソン病、膜性腎症、グッドパスチャー疾患、自己免疫性胃炎、自己免疫性萎縮性胃炎、悪性貧血、天疱瘡、尋常天疱瘡、硬変、原発性胆汁性肝硬変、皮膚筋炎、多発性筋炎、繊維筋炎、筋硬症、腹腔動脈疾患、免疫グロブリンＡ腎症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、エバンス症候群、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、関節症性乾癬、グレーヴス病、グレーヴス眼病、強皮症、全身性強皮症、進行性全身性強皮症、ぜんそく、アレルギー、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、一次性粘液水腫、交感性眼炎、自己免疫性ぶどう膜炎、肝炎、慢性作用肝炎、膠原病、強直性脊椎炎、肩関節周囲炎、結節性汎動脈炎、軟骨石灰化、ヴェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、慢性蕁麻疹、水疱性皮膚疾患、類天疱瘡、アトピー性湿疹、小児期自己免疫溶血性貧血、特発性自己免疫溶血性貧血、不応性または慢性自己免疫血球減少、後天性血友病Ａにおける自己免疫抗第ＶＩＩＩ因子抗体の成長防止、寒冷凝集素疾患、視神経脊髄炎、スティッフパーソン症候群、歯肉炎、歯周炎、膵炎、特発性心膜炎、心筋炎、血管炎、胃炎、痛風、痛風性関節炎、及び炎症性皮膚疾患、正補体血症性蕁麻疹様血管炎、心膜炎、筋炎、抗シンセターゼ症候群、強膜炎、マクロファージ活性化症候群、ベーチェット症候群、ＰＡＰＡ症候群、ブラウ症候群、痛風、成人及び青年スティル病、クリオピリノパシー、マック・ウェルズ症候群、家族性寒冷自己炎症性症候群、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、家族性地中海熱、慢性乳児神経皮膚関節炎症候群、リウマチ疾患、リウマチ性多発筋痛、混合性結合織疾患、炎症性リウマチ、変性リウマチ、関節外リウマチ、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、関節炎蕁麻疹、筋肉リウマチ、慢性多発性関節炎、反応性関節炎、ライター症候群、リウマチ熱、再発性多発軟骨炎、レイノー現象、血管炎、クリオグロブリン血症性血管炎、側頭動脈炎、巨細胞動脈炎、高安動脈炎、ベーチェット病、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、自己免疫甲状腺炎、インスリン依存性真性糖尿病、Ｉ型糖尿病、アジソン病、膜性腎症、多腺性自己免疫症候群、グッドパスチャー疾患、自己免疫性胃炎、自己免疫性萎縮性胃炎、悪性貧血、天疱瘡、尋常天疱瘡、硬変、原発性胆汁性肝硬変、特発性肺胞線維症、筋炎、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、多発性筋炎、繊維筋炎、筋硬症、腹腔動脈疾患、腹腔スプルー皮膚炎、免疫グロブリンＡ腎症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、エバンス症候群、アトピー性皮膚炎、乾癬、尋常性乾癬、関節症性乾癬、グレーヴス病、グレーヴス眼病、強皮症、全身性強皮症、進行性全身性強皮症、び漫性強皮症、限局性強皮症、クレスト症候群、ぜんそく、アレルギー性ぜんそく、アレルギー、原発性胆汁性肝硬変、線維筋痛、慢性疲労及び免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、自己免疫性内耳疾患、高ＩｇＤ症候群、シュニッツラー症候群、自己免疫性網膜症、加齢関連黄斑変性症、アテローム性動脈硬化症、慢性前立腺炎、脱毛症、円形脱毛症、全身性脱毛、全脱毛症、自己免疫血小板減少性紫斑病、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、並びにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）からなる群から選択される自己免疫疾患を治療するために使用される、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６７６】
第１３４項。前記診断及び／または治療は、免疫関連状態の治療に有用な別の成分と組み合わされる、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６７７】
第１３５項。前記免疫関連状態の治療に有用な他の成分は、コルチコステロイド、シクロスポリン、シクロホスファミド、プレドニゾン、アザチオプリン、メトトレキサート、ラパマイシン、タクロリムス、レフウノミド（ｌｅｆ  ｕｎｏｍｉｄｅ）もしくはこれらの類似体等の免疫抑制剤；ミゾリビン；マイコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎｅ）もしくはその類似体；ＴＮＦ−α遮断剤もしくはアンタゴニスト等の生物学的製剤、もしくは、任意の炎症性サイトカインを標的化する任意の他の生物学的製剤、非ステロイド性抗炎症薬／Ｃｏｘ−２阻害剤、ヒドロキシクロロキン、スルファサラゾプリン（ｓｕｌｐｈａｓａｌａｚｏｐｒｙｉｎｅ）、金塩、エタネルセプト、インフリキシマブ、ミコフェノール酸モフェチル、バシリキシマブ、アタシセプト、リツキシマブ、シトキサン、インターフェロンβ−１ａ、インターフェロンβ−１ｂ、酢酸ガラティラメル、ミトキサントロン塩酸塩、アナキンラ及び／もしくは他の生物学的製剤及び／もしくは静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）、ＩＦＮ−ｐ−１ａ（ＲＥＢＩＦ（登録商標）、ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）及びＣＩＮＮＯＶＥＸ（登録商標））並びにＩＦＮ−ｐ−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）、ＥＸＴＡＶＩＡ（登録商標）、ＢＥＴＡＦＥＲＯＮ（登録商標）、ＺＩＦＥＲＯＮ（登録商標））；ペプチドであるグラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））；細胞毒性剤であるナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））、カルシニューリン阻害剤（例えばシクロスポリンＡもしくはＦＫ５０６）；免疫抑制マクロライド（例えばラパマイシン）またはその誘導体（例えば４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチル−ラパマイシン、リンパ球ホーミング剤（例えばＦＴＹ７２０）またはその類似体、コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｅｎｅ）；メトトレキサート；レフルノミドもしくはその誘導体；ミゾリビン；マイコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンもしくはその誘導体；免疫抑制モノクローナル抗体（例えば、白血球受容体に対するモノクローナル抗体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２７、Ｂ７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭ）、ＯＸ４０、４−１ＢＢまたはこれらのリガンド）；または他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト、ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）、ベラタセプト）、ＣＤ２８−Ｉｇ、Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ、または他の共刺激剤、または他の接着分子阻害剤、例えばｍＡｂもしくは低分子量阻害剤（ＬＦＡ−１アンタゴニスト、セレクチンアンタゴニスト及びＶＬＡ−４アンタゴニストを含む）、または他の免疫調節剤から選択される、第１３４項に記載の方法または使用。
【０６７８】
第１３６項。遺伝子治療後の望ましくない免疫活性化を低減するのに有用な別の成分を含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６７９】
第１３７項。別の治療薬または治療法と組み合わせた、抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、または組成物による治療を含む、上に記載ののいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６８０】
第１３８項。細胞分裂抑制薬、シクロホスファミド、ゲムシタビン、マイトキサントロン、フルダラビン、サリドマイド、サリドマイド誘導体、ＣＯＸ−２阻害剤、Ｔｒｅｇ細胞表面受容体の認識により、Ｔｒｅｇを直接標的化する枯渇または殺傷抗体、抗ＣＤ２５ダクリズマブ、バシリキシマブ、リガンドに向けられる毒素、デニロイキンディフィトックス（Ｏｎｔａｋ）−ヒトＩＬ−２及びジフテリア毒素の融合タンパク質、またはＬＭＢ−２−ＣＤ２５に対するｓｃＦｖとシュードモナスエキソトキシンとの融合物、Ｔｒｅｇ細胞表面受容体を標的化する抗体、ＴＬＲ調節物質、アデノシン経路を妨げる作用物質、エクトヌクレオチダーゼ阻害剤、またはＡ２Ａアデノシン受容体の阻害剤、ＴＧＦ−β阻害剤、ケモカイン受容体阻害剤、レチノイン酸、全トランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）、ビタミンＤ３、ホスホジエステラーゼ５阻害剤、シルデナフィル、ＲＯＳ阻害剤及びニトロアスピリンから選択される、免疫抑制細胞Ｔｒｅｇ及び／またはＭＤＳＣを標的とする治療薬を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６８１】
第１３９項。ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ３、ＶＩＳＴＡの１つ以上を標的とするアンタゴニスト抗体、及び／またはＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、もしくはＩＣＯＳの１つ以上を標的とするアゴニスト抗体から選択される別の抗体を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質もしくは組成物、または方法もしくは使用。
【０６８２】
第１４０項。治療前、治療と同時、及び／または治療後に、個体の細胞によりＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡタンパク質をアッセイすることを含む、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用。
【０６８３】
第１４１項。治療前に病気及び／または通常の細胞により、任意で、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの発現を検出する抗体もしくは核酸を使用することにより、前記方法が、ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡタンパク質の発現を検出する、第１４０項に記載の方法または使用。
【０６８４】
第１４２項。上に記載の項のいずれか一項に記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片、または組成物の投与前、投与と同時、または投与後に投与され得る、別の診断または治療薬の投与または使用を更に含む、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６８５】
第１４３項。別の治療薬の投与を含む、第１４２項に記載の方法または使用。
【０６８６】
第１４４項。前記他の治療薬は薬剤、別の免疫調節化合物、放射性核種、フルオロフォア、酵素、毒素、または化学療法剤から選択され、前記検出可能な作用物質は、放射性同位体、金属キレーター、酵素、蛍光性化合物、生物発光化合物または化学発光化合物から選択される、第１４３項に記載の方法または使用。
【０６８７】
第１４５項。ＮＫ細胞受容体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片の投与を更に含む、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法または使用。
【０６８８】
第１４６項。ＮＫ細胞受容体に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片は、前記ＮＫ細胞受容体の効果を刺激する、第１４５項に記載の方法または使用。
【０６８９】
第１４７項。ＮＫ細胞受容体に特異的に結合する前記抗体またはその抗原結合断片は、前記ＮＫ細胞受容体の効果に拮抗するか、またはＮＫ細胞活性を阻害するものである、第１４６項に記載の方法または使用。
【０６９０】
第１４８項。前記阻害性ＮＫ細胞受容体が、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＬＩＬＲＢ１、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｅ及びＬＩＬＲＢ５からなる群から選択される、第１４７項に記載の方法または使用。
【０６９１】
第１４９項。前記ＮＫ細胞受容体はＮＫ細胞活性を促進するものである、第１４５項に記載の方法または使用。
【０６９２】
第１５０項。前記ＮＫ細胞活性化受容体は、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、ＫＩＲ２ＤＳ４  ＣＤ２、ＣＤ  １６、ＣＤ６９、ＤＮＡＸアクセサリー分子−１（ＤＮＡＭ−１）、２Ｂ４、ＮＫ１．１；キラー免疫グロブリン（Ｉｇ）様活性化受容体（ＫＡＲ）；ＩＬＴ／ＬＩＲ；ＮＫＲＰ−１、ＣＤ６９；ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及びＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅヘテロ二量体、ＮＫＧ２Ｄホモ二量体ＫＩＲ２ＤＳ及びＫＩＲ３ＤＳからなる群から選択される、第１４９項に記載の方法または使用。
【０６９３】
第１５１項。上に記載の項のいずれかに記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または、上に記載の項のいずれかに記載の方法もしくは使用での使用に好適な抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原断片を選択するためのアッセイ方法であって、前記方法は、（ｉ）配列番号１、２、もしくは３のいずれかに記載されるアミノ酸配列から選択される配列を有するＶＳＩＧ８ポリペプチドに推定上結合する、もしくは、少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチド、この配列もしくは非ヒトＶＳＩＧ８オルソログに結合する１つ以上の抗体もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または、少なくとも１つのＶＳＩＧ８エピトープを含有する、ポリペプチドの断片もしくは変異体であって、断片もしくは変異体が、該ポリペプチド、または非ヒトＶＳＩＧ８オルソログに少なくとも９０％の同一性を有する、前記断片もしくは変異体を得ることと、（ｉｉ）前記抗体または抗原結合断片が前記ＶＳＩＧ８ポリペプチドに特異的に結合するかどうかを決定することと、（ｉｉ）前記抗体または抗原結合断片が、免疫におけるＶＳＩＧ８の少なくとも１つの効果を調節（刺激する、または拮抗する）かどうかを決定することと、かつ、（ｉｖ）（ｉｉ）及び（ｉｉ）が満たされる場合に、前記抗体を、上に記載の項のいずれかに記載の方法または使用において潜在的に有用なものとして選択することと、を含む、前記アッセイ方法。
【０６９４】
第１５２項。前記抗体または抗原結合断片がヒトもしくは非ヒト霊長類抗体またはこれらの断片でない場合に、ヒト化、霊長類化またはキメラ化を更に含む、第１５１項に記載の方法。
【０６９５】
第１５３項。前記抗体または抗原結合断片を誘導するのに使用する免疫原が、配列番号１、２及び３のいずれかに記載のアミノ酸配列から選択される配列を有するか、もしくは該アミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチド、もしくは非ヒトＶＳＩＧ８オルソログもしくは非ヒト（ｎｏｎ−ｈｕｍａｎ）ＶＳＩＧ８オルソログの同一領域に結合するＶＳＩＧ８ポリペプチド、または少なくとも１つのＶＳＩＧ８エピトープを含有するこれらの断片もしくは誘導体を含む、第１５１または１５２項に記載の方法。
【０６９６】
第１５４項。前記抗体または抗原結合断片を誘導するのに使用する免疫原が、配列番号１、２及び３のいずれかに記載されるアミノ酸配列から選択される配列を有するか、またはそのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチド、もしくはｈＶＳＩＧ８の非ヒトオルソログの同一領域に結合するＶＳＩＧ８ポリペプチドを含む、第１５１〜１５３項のいずれかに記載の方法。
【０６９７】
第１５５項。前記抗体またはその抗原結合断片を誘導するのに使用する免疫原が、配列番号１、２及び３のいずれかに記載のアミノ酸配列を有するか、もしくは該アミノ酸配列を少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチド、もしくは非ヒトＶＳＩＧ８オルソログの同一領域に結合するポリペプチド、または、ＶＳＩＧ８ポリペプチドのいずれかの別の部分を含有しないこれらのコンジュゲートからなる、第１５１〜１５４項のいずれかに記載の方法。
【０６９８】
第１５６項。ステップ（ｉｉｉ）は、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの効果に拮抗するかどうかを検出する、第１５１〜１５５項のいずれかに記載の方法。
【０６９９】
第１５７項。ステップ（ｉｉｉ）は、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、免疫におけるＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの効果を刺激するかどうかを検出する、第１５１〜１５６項のいずれかに記載の方法。
【０７００】
第１５８項。前記選択した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、以下の効果のうち少なくとも１つを仲立ちし、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、第１５１〜１５７項に記載の項のいずれかに記載の方法：（ｉ）免疫応答の増加、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の増加、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加、（ｉｖ）ＮＫ細胞活性の増加、（ｖ）Ｔ細胞抑制の緩和、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の増加、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の増加、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の増加、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の増加、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）細胞数、及び／もしくは制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の少なくとも１つの活性の低下もしくは除去、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の低下、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの減少もしくは除去、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ腫瘍形成活性の低下、（ｘｖ）Ｎ２好中球の減少もしくは除去、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球の腫瘍形成活性の低下、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の低下、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の低下、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の低下、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の逆転、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の増加、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の増加、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の刺激、（ｘｘｉｖ）癌細胞のアポトーシスもしくは溶解の誘発、（ｘｘｖ）癌細胞における細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の刺激、（ｘｘｖｉ）癌細胞の直接殺傷の誘発、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の増加、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の誘発。
【０７０１】
第１５９項。前記選択した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、以下の効果のうちの１つ以上を仲立ちすることが示され、前記抗ＶＳＩＧ８抗体または抗原結合断片が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、上に記載の項のいずれかに記載の方法：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の低下、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｖｉｉｉ）インターフェロンγ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）細胞数及び／もしくは制御性Ｔ細胞の活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉ）細胞の直接殺傷の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の低下、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の低下。
【０７０２】
第１６０項。前記選択した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、Ｔ細胞活性、ＮＫ細胞活性に対するＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡの効果、並びに／または１つ以上の炎症性サイトカインの産生を刺激する、またはそれに拮抗する、第１４９〜１５９項のいずれかに記載の方法。
【０７０３】
第１６１項。前記選択した抗体またはＶＳＩＧ８融合タンパク質は、ヒトまたは齧歯類ＶＳＩＧ８の、ＶＩＳＴＡへの結合と競合することが示される、第１４９〜１６０項のいずれかに記載の方法。
【０７０４】
第１６２項。上に記載の項のいずれか一項に記載の免疫調節抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、またはこれらを含有する医薬もしくは診断用組成物。
【０７０５】
第１６３項。癌、感染症、敗血症、自己免疫、炎症、アレルギーもしくは他の免疫状態を治療もしくは診断するため、または、細胞もしくは遺伝子治療、もしくは移植した細胞、組織もしくは臓器に対する望ましくない免疫反応を抑制するための、上に記載の項のいずれか一項に記載の免疫調節抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または、それらを含有する医薬もしくは診断用組成物の使用。
【０７０６】
第１６４項。細胞、組織または臓器の、レシピエントへの移植を含む移植治療法であって、前記細胞、組織または臓器は、前記細胞、組織または臓器を前記レシピエントに注入または移植する前に、上に記載の項のいずれか一項に記載の抗ＶＳＩＧ８抗体もしくは抗原結合断片もしくはＶＳＩＧ８融合タンパク質、または組成物を含有する組成物を使用してｅｘ  ｖｉｖｏで治療される、前記移植治療法。
【０７０７】
第１６５項。前記組成物は、ドナー及び／または移植レシピエントの免疫細胞を含む、第１６４項に記載の方法。
【０７０８】
第１６６項。前記移植した細胞、組織または臓器は、骨髄、他のリンパ系細胞もしくは組織、または幹細胞を含む、第１６４または１６５項に記載の方法。
【０７０９】
第１６７項。上に記載の項のいずれか一項に記載の抗ＶＳＩＧ８抗体または抗体断片の可変重鎖及び／もしくは軽鎖領域ポリペプチドをコードする核酸、または、これを含有するベクターもしくはウイルス。
【０７１０】
第１６８項。第１６７項に記載の少なくとも１つの核酸またはベクターもしくはウイルスを含む、単離または組み換え細胞。
【０７１１】
第１６９項。ハイブリドーマ及び組み換え細菌、酵母菌または真菌、哺乳類、昆虫、両生類、爬虫類、植物、及びトリ細胞または卵から選択される、第１６８項に記載の細胞。
【０７１２】
第１７０項。第１６９項に記載の単離または組み換え細胞を培養することによる、抗ＶＳＩＧ８抗体または抗体断片の作製方法。
【０７１３】
第１７１項。前記細胞は、細菌、酵母菌、真菌、昆虫、植物、爬虫類、哺乳動物細胞またはトリの卵である、第１７０項に記載の方法。
【０７１４】
第１７２項。ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を阻害するための、上に記載の項のいずれか一項に記載のアンタゴニスト化合物の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの使用方法。
【０７１５】
第１７３項。免疫細胞または免疫におけるＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８の抑制効果を阻害するための、上に記載の項のいずれか一項に記載のアンタゴニスト化合物の、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの使用方法。
【０７１６】
第１７４項。Ｔ細胞の活性化、Ｔ細胞増殖もしくはサイトカイン産生における、または骨髄樹状細胞におけるＶＩＳＴＡ及び／またはＶＳＩＧ８の抑制効果を阻害または遮断する、第１７２または１７３項に記載の方法。
【０７１７】
第１７５項。Ｔ抑制（Ｔｓｕｐ）細胞におけるＶＩＳＴＡの促進効果を阻害または遮断する、第１７２または１７３項に記載の方法。
【０７１８】
第１７６項。癌または感染症を治療するために使用される、第１７２〜１７５項のいずれかに記載の方法。
【０７１９】
第１７７項。前記癌は充実性腫瘍、例えば肉腫、癌腫もしくはリンパ腫、または血液癌である、第１７６項に記載の方法。
【０７２０】
第１７８項。前記感染症はウイルス、細菌、原生動物、酵母菌、真菌、または寄生虫症である、第１７６項に記載の方法。
【０７２１】
第１７９項。ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の相互作用を増強するための、上に記載の項のいずれか一項に記載のアゴニスト化合物の使用方法。
【０７２２】
第１８０項。Ｔ細胞の活性化、増殖またはサイトカイン産生におけるＶＩＳＴＡの抑制効果を増強または促進する、第１７９項に記載の方法。
【０７２３】
第１８１項。自己免疫性、アレルギー性または炎症性状態を治療するために使用される、第１７８または１７９項に記載の方法。
【０７２４】
第１８２項。検出可能な標識に結合した、上に記載の項のいずれか一項に記載の化合物。
【０７２５】
第１８３項。上に記載の項のいずれか一項に記載の、診断上または治療的有効量の化合物を含む診断用または治療用組成物。
【０７２６】
第１８４項。ヒトの治療法での使用に好適な、第１８３項に記載の組成物。
【０７２７】
第１８５項。静脈内、皮下または筋肉内投与可能な組成物である、第１８４項に記載の組成物。
【０７２８】
第１８６項。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アゴニストまたはアンタゴニストの投与を更に含む、上に記載の項のいずれか一項に記載の方法。
【０７２９】
第１８７項。前記ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１アゴニストまたはアンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体もしくは抗体断片、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは抗体断片、一価もしくは多量体であり得るＰＤ−Ｌ１ポリペプチドもしくはその断片、一価もしくは多量体であり得るＰＤ−１ポリペプチドもしくはその断片、または、前述のいずれかを含む複合体もしくは融合タンパク質から選択される、第１８６項に記載の方法。
【０７３０】
第１８８項。免疫細胞を、上に記載の項のいずれか一項に記載のアゴニストまたはアンタゴニスト化合物と接触させる方法。
【０７３１】
第１８９項。前記接触した細胞をヒト対象に注入する、第１８８項に記載の方法。
【０７３２】
第１９０項。前記対象は癌または感染症を有する、第１８８または１８９項に記載の方法。
【０７３３】
第１９１項。前記対象は、炎症性、アレルギー性または自己免疫性状態を有する、第１８８または１８９項に記載の方法。
【０７３４】
第１９２項。ＶＳＩＧ８を単独、またはＶＳＩＧ８と共に使用してＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡアゴニストまたはアンタゴニストを同定することを含むスクリーニングアッセイ。
【０７３５】
第１９３項。ＶＳＩＧ８と結合し、ＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡ相互作用を阻害する化合物を同定する結合アッセイである、第１９２項に記載のアッセイ。
【０７３６】
第１９４項。ＶＳＩＧ８と結合し、ＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡ相互作用を増強する化合物を同定する結合アッセイである、第１９２項に記載のアッセイ。
【０７３７】
第１９５項。Ｔ細胞免疫またはサイトカイン産生におけるＶＩＳＴＡ／ＶＳＩＧ８相互作用の効果を阻害する化合物をスクリーニングする機能アッセイである、第１９２項に記載のアッセイ。
【０７３８】
第１９６項。Ｔ細胞免疫またはサイトカイン産生におけるＶＩＳＴＡ／ＶＳＩＧ８相互作用の効果を増強する化合物をスクリーニングする機能アッセイである、第１９２〜１９５項のアッセイ。
【０７３９】
第１９７項。ヒトまたは齧歯類免疫細胞を使用する、第１９２〜１９６項のいずれか一項に記載のアッセイ。
【０７４０】
第１９８項。ヒトＶＩＳＴＡ及び／またはヒトＶＳＩＧ８を発現するトランスジェニック動物を使用する、第１９２〜１９６項のいずれか一項に記載のアッセイ。
【０７４１】
第１９９項。ハイスループットスクリーニングアッセイである、第１９２〜１９８項のアッセイ。
【０７４２】
第２００項。前記ＶＳＩＧ８はヒト、マウス、または非ヒト霊長類ＶＳＩＧ８タンパク質である、上に記載の項のいずれかに記載の化合物または方法。
【０７４３】
第２０１項。ＶＳＩＧ８  ＥＣＤの断片を含む単離ペプチドであって、前記断片は、配列番号１、２もしくは３のいずれか１つに記載されているアミノ酸配列、またはそのアミノ酸配列と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の配列同一性を有する変異体から本質的になるかこれからなる、前記単離ペプチド。
【０７４４】
第２０２項。２〜１０個の前記ＶＳＩＧ８  ＥＣＤポリペプチド断片を含む、第２０１項に記載の単離したポリペプチド。
【０７４５】
第２０３項。前記断片は異種リンカーにより介在され、前記リンカーはＶＳＩＧ８ポリペプチドの断片ではない、第２０１または２０２項に記載の単離したポリペプチド。
【０７４６】
第２０４項。前記リンカーは前記断片に直接または間接的にコンジュゲートしている、第２０３項に記載の単離したペプチド。
【０７４７】
第２０５項。前記リンカーはアミノ酸スペーサーである、第２０２、２０３または２０４項に記載の単離したポリペプチド。
【０７４８】
第２０６項。前記アミノ酸スペーサーは、異なる断片が個々の標的に上手く結合することができるように十分な長さのアミノ酸残基である、第２０５項に記載の単離したペプチド。
【０７４９】
第２０７項。前記リンカーは、５〜５０個のアミノ酸残基、より好ましくは５〜２５個のアミノ酸残基を含むペプチドである、第２０５または２０６項に記載の単離したポリペプチド。
【０７５０】
第２０８項。前記リンカーは、５〜１５個のアミノ酸残基を含むペプチドである、第２０７項に記載の単離したペプチド。
【０７５１】
第２０９項。前記リンカーは、グリシン、セリン及び／もしくはアラニン残基を含むかもしくは基本的にこれらから構成される、または、グリシン、セリン及び／もしくはアラニン残基から主に（少なくとも残基の５０、６０、７０または８０％）構成される、第２０５〜２０８項のいずれかに記載の単離したポリペプチド。
【０７５２】
第２１０項。前記リンカーは、少なくとも４〜４０、４〜３０、４〜２０、または４〜１２個のグリシン、セリン及び／またはアラニン残基を含む、第２０５〜２０９のいずれかに記載の単離したペプチド。
【０７５３】
第２１１項。異種ポリペプチド及び／もしくは半減期延長部位に結合した、第１〜２１０項のいずれに記載の、または、配列番号１、２もしくは３の単離したポリペプチドを含み、前記異種ポリペプチドまたは前記半減期延長部位がＶＳＩＧ８ポリペプチドの断片でないことを条件とする、融合タンパク質。
【０７５４】
第２１２項。前記単離したポリペプチド及び前記異種分子は異種リンカーにより介在されれ、前記リンカーは、ＶＳＩＧ８ポリペプチドの断片であるポリペプチドを含まないことを条件とする、第２１１項に記載の融合タンパク質。
【０７５５】
第２１３項。前記リンカーは前記断片に直接または間接的にコンジュゲートしている、第２１２項に記載の融合タンパク質。
【０７５６】
第２１４項。前記リンカーはアミノ酸スペーサーである、第２１２項または２１３項に記載の融合タンパク質。
【０７５７】
第２１５項。前記アミノ酸スペーサーは、異なる断片が個々の標的に上手く結合することができるように十分な長さのアミノ酸残基である、第２１４項に記載の融合タンパク質。
【０７５８】
第２１６項。前記リンカーは、５〜５０個のアミノ酸残基、より好ましくは５〜２５個のアミノ酸残基を含むペプチドである、第２１４項または２１５項に記載の融合タンパク質。
【０７５９】
第２１７項。前記リンカーは、５〜１５個のアミノ酸残基を含むペプチドである、第２１６項に記載の融合タンパク質。
【０７６０】
第２１８項。前記リンカーは、グリシン、セリン及び／もしくはアラニン残基を含むかもしくは基本的にこれらから構成される、または、グリシン、セリン及び／もしくはアラニン残基から主に（少なくとも残基の５０、６０、７０または８０％）構成される、第２１４〜２１７項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７６１】
第２１９項。前記リンカーは、少なくとも４〜４０、４〜３０、４〜２０、または４〜１２個のグリシン、セリン及び／またはアラニン残基を含む、第２１４〜２１８項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７６２】
第２２０項。半減期延長部位を含むか更に含む、上の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７６３】
第２２１項。前記半減期延長部位は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、モノメトキシＰＥＧ（ｍＰＥＧ）、ＸＴＥＮ分子、ｒＰＥＧ分子、アドネクチン、血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、免疫グロブリン定常領域もしくはその断片、またはアシル基を含む、第２１４〜２２０項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７６４】
第２２２項。前記異種ポリペプチド、半減期延長部位、または他の異種分子を加えることにより、かかる前記異種ポリペプチド、半減期延長部位、または他の異種分子を有しない同一の分子と比較して、前記融合タンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、またはそれ以上増加する、第２１４〜２２１項のいずれか一項に記載の融合タンパク質。
【０７６５】
第２２３項。免疫グロブリン分子またはその断片を含む、第１〜２２２項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７６６】
第２２４項。前記異種ポリペプチドの少なくとも１つは、重鎖及び／または軽鎖Ｃｍ及びＣｍドメインを含む、ヒトまたは非ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチドまたは断片である、第２１４項に記載の融合タンパク質。
【０７６７】
第２２５項。前記異種ポリペプチドの少なくとも１つは、重鎖Ｃｍ及びＣｍドメインを含む、ヒトまたは非ヒト免疫グロブリンＦｃポリペプチドまたは断片である、第２１４項または２１５項に記載の融合タンパク質。
【０７６８】
第２２６項。重鎖及び／または軽鎖ＣＨ１ドメインを含む、第２１４〜２１６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７６９】
第２２７項。重鎖及び／または軽鎖ＣＨ１ドメインを欠いている、第２１４〜２１６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７０】
第２２８項。重鎖ＣＨ１ドメインを欠いている、第２１４〜２１８項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７１】
第２２９項。前記免疫グロブリン分子またはその断片はヒンジ領域を含む、上の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７２】
第２３０項。前記ヒンジ領域はインタクトなヒンジ領域である、第２２９項に記載の融合タンパク質。
【０７７３】
第２３１項。前記免疫グロブリン分子またはその断片は、ヒンジ領域を特徴としない、上の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７４】
第２３２項。ヒト免疫グロブリン分子またはその断片を含む、上に記載の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７５】
第２３３項。前記異種ポリペプチドは、免疫グロブリン重鎖定常領域のＦｃ断片を含むかまたはそれからなる、上に記載の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７６】
第２３４項。前記異種ポリペプチドは、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域のＦｃ断片及びヒンジ領域を含むかまたはそれらからなる、上に記載の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７７】
第２３５項。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ及びＩｇＤからなる群から選択される免疫グロブリンアイソタイプに由来する免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、上に記載の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７８】
第２３６項。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択されるヒト免疫グロブリン重鎖定常領域を含む、上に記載の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７７９】
第２３７項。マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ免疫グロブリン重鎖定常領域、またはこれらの断片を含む、上に記載の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７８０】
第２３８項。エフェクター機能及び／またはグリコシル化を変更する少なくとも１つの変異を含有する免疫グロブリンＦｃ領域を含む、上に記載の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７８１】
第２３９項。前記エフェクター機能は、ＦｃＲ結合、補体結合、ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性、脱顆粒、ファゴサイトーシス、及び／またはサイトカイン放出から選択される、第２３８項に記載の融合タンパク質。
【０７８２】
第２４０項。前記異種配列が、標的細胞に特異的に結合するか、または標的細胞に特異的に結合する別の部位を含む免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む、上の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７８３】
第２４１項。前記標的細胞は、癌、免疫、病原菌細胞、感染細胞、免疫細胞、炎症細胞、病気の部位またはヒトレシピエントに移植される細胞である、第４１項に記載の融合タンパク質。
【０７８４】
第２４２項。前記病原菌細胞は、ウイルス、バクテリア、マイコプラズマ（ｍｙｃｏｐｌａｓｍ）、真菌、酵母菌または寄生生物からなる群から選択される、第２４１項に記載の融合タンパク質。
【０７８５】
第２４３項。前記感染細胞は、ウイルス、バクテリア、マイコプラズマ（ｍｙｃｏｐｌａｓｍ）、真菌、酵母菌または寄生生物からなる群から選択される病原菌に感染している、第２４０項または２４１項に記載の融合タンパク質。
【０７８６】
第２４４項。前記異種ポリペプチドの少なくとも１つは、受容体、ホルモン、サイトカイン、抗原、Ｂ細胞標的、ＮＫ細胞標的、Ｔ細胞標的、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー、ヘッジホッグファミリーメンバー、受容体型チロシンキナーゼ、プロテオグリカン関連分子、ＴＧＦ−βスーパーファミリーメンバー、Ｗｎｔ関連分子、受容体リガンド、樹状細胞標的、骨髄細胞標的、単核細胞／マクロファージ細胞標的、または血管新生標的である、上の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７８７】
第２４５項。前記抗原は腫瘍抗原、自己抗原、アレルゲン、または病原菌抗原である、第２４４項に記載の融合タンパク質。
【０７８８】
第２４６項。前記少なくとも１つの異種ポリペプチドは免疫調節ポリペプチドを含む、上の項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７８９】
第２４７項。前記Ｔ細胞標的は、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ−２  Ｒａ、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＩＬ−２Ｒ、ＡＬＣＡＭ、Ｂ７−１／ＣＤ８０、ＩＬ−４Ｒ、Ｂ７−Ｈ３、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ、ＩＬ−６Ｒ、ＣＣＲ３、ＩＬ−７  Ｒａ、ＣＣＲ４、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ−８  ＲＡ、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＩＬ−１０  Ｒα、ＣＣＲ７、ＩＬ−１０  Ｒβ、ＣＣＲ８、ＩＬ−１２  Ｒｉ、ＣＣＲ９、ＩＬ−１２  Ｒβ２、ＣＤ２、ＩＬ−１３Ｒａｌ、ＩＬ−１３、ＣＤ３、ＣＤ４、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、インテグリンａ４／ＣＤ４９ｄ、ＣＤ５、インテグリンａＥ／ＣＤ１０３、ＣＤ６、インテグリンａＭ／ＣＤ１１ｂ、ＣＤ８、インテグリンａＸ／ＣＤ１１ｃ、インテグリン２／ＣＤ１８、ＫＩＲ／ＣＤ１５８、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＣＤ２８、ＫＩＲ２ＤＬ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＫＩＲ２ＤＬ４／ＣＤ１５８ｄ、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＬＡＧ−３、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４５、ＬＡＩＲ２、ＣＤ８３、ロイコトリエンＢ４  Ｒ１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＣＤ９４、ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ９７、ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２Ｆ−  １０／ＳＬＡＭＦ９、ＮＴ−４、ＣＤ６９、ＮＴＢ−Ａ／ＳＬＡＭＦ６、共通γ鎖／ＩＬ−２  Ｒｙ、オステオポンチン、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＰＤ−１、ＣＲＴＡＭ、ＰＳＧＬ−１、ＣＴＬＡ−４、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１  Ａ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、Ｌ−セレクチン、ＣＸＣＲ３、ＳＩＲＰ  βｉ、ＣＸＣＲ４、ＳＬＡＭ、ＣＸＣＲ６、ＴＣＣＲＡＶＳＸ−１、ＤＮＡＭ−１、チモポエチン、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、ＴＩＭ−１、ＥｐｈＢ６、ＴＩＭ−２、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＩＭ−３、Ｆａｓ  Ｌｉｇａｎｄ／ＴＮＦＳＦ６、ＴＩＭ−４、Ｆｅｙ  ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＩＭ−６、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＴＮＦ  Ｒｌ／ＴＮＦＲＳＦＩＡ、グラニュライシン、ＴＮＦ  Ｒ１１／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦＩＯＡ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＡＩＬ  Ｒ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＩＦＮ−γＲ１、ＴＲＡＩＬ  Ｒ４／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｄ、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＳＬＰ、ＩＬ−１  ＲＩ及びＴＳＬＰ  Ｒからなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９０】
第２４８項。前記単核細胞／マクロファージ細胞標的は、Ｂ７−１／ＣＤ８０、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、Ｂ７−Ｈ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、共通β鎖、インテグリンａ４／ＣＤ４９ｄ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、インテグリンａ  Ｘ／ＣＤ１１ｃ、ＣＣＬ６／Ｃ１０、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ラテクシン、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＬＩＭＰＩＩ／ＳＲ−Ｂ２、ＣＤ４３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ４５、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ６８、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ１６３、ＬＲＰ−１、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬＡＭＦ９、ＭＡＲＣＯ、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＭＤ−１、ＥＣＦ−Ｌ、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ１４７、ＭＧＬ２、エンドグリン／ＣＤ１０５、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、ＦｃγＲ１／ＣＤ６４、オステオポンチン、ＦｃγＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＰＤ−Ｌ２、ＦｃγＲＩＩＣ／ＣＤ３２ｃ、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、Ｆｅｙ  ＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、Ｆｅｙ  ＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＳＬＡＭ、ＧＭ−ＣＳＦ  Ｒａ、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＬＲ３、ＩＦＮ−γＲ１、ＴＬＲ４、ＩＦＮ−γＲ２、ＴＲＥＭ−１、ＩＬ−１  ＲＩＩ、ＴＲＥＭ−２、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＴＲＥＭ−３、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、ＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ−１、２Ｂ４／ＳＬＡＭＦ４、ＩＬ−１０  Ｒａ、ＡＬＣＡＭ、ＩＬ−１０  Ｒ  β、アミノペプチダーゼＮ／ＡＮＰＥＰ、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、共通β鎖、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、ＣＣＲ１、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、ＣＣＲ２、インテグリンａ４／ＣＤ４９ｄ、ＣＣＲ５、インテグリンａ  Ｍ／ＣＤ１１ｂ、ＣＣＲ８、インテグリンａ  Ｘ／ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１５５／ＰＶＲ、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ１４、インテグリンβ３／ＣＤ６１、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＡＩＲ１、ＣＤ４３、ＬＡＩＲ２、ＣＤ４５、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、ＣＤ６８、ＬＩＭＰＩＩ／ＳＲ−Ｂ２、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＣＤ９７、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、ＣＤ１６３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、凝固第ＩＩＩ因子／組織因子、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸ３ＣＬ１、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＸＣＲ４、ＬＲＰ−１、ＣＸＣＲ６、Ｍ−ＣＳＦＲ、ＤＥＰ−１／ＣＤ１４８、ＭＤ−１、ＤＮＡＭ−１、ＭＤ−２、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、ＭＭＲ、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＦｃγＲ１／ＣＤ６４、ＰＳＧＬ−１、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＲＰ１０５、Ｇ−ＣＳＦ  Ｒ、Ｌ−セレクチン、ＧＭ−ＣＳＦ  Ｒａ、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＳＬＡＭ、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＴＣＣＲ／ＷＳＸ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＴＲＥＭ−１、ＩＬ−６  Ｒ、ＴＲＥＭ−２、ＣＸＣＲｌ／ＩＬ−８  ＲＡ、ＴＲＥＭ−３及びＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ−１からなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９１】
第２４９項。前記樹状細胞標的は、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＯＸ−１／ＳＲ−Ｅ１、ＣＤ６８、ＭＡＲＣＯ、ＣＤ１６３、ＳＲ−ＡＩ／ＭＳＲ、ＣＤ５Ｌ、ＳＲＥＣ−Ｉ、ＣＬ−Ｐ１／ＣＯＬＥＣ１２、ＳＲＥＣ−ＩＩ、ＬＩＭＰＩＩ／ＳＲ−Ｂ２、ＲＰ１０５、ＴＬＲ４、ＴＬＲ１、ＴＬＲ５、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ９、４−１ＢＢ  リガンド／ＴＮＦＳＦ９、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３  ｐ４０、４−アミノ−１，８−ナフタルイミド、ＩＬＴ２／ＣＤ８５ｊ、ＣＣＬ２１／６Ｃｋｉｎｅ、ＩＬＴ３／ＣＤ８５ｋ、８−オキソ−ｄＧ、ＩＬＴ４／ＣＤ８５ｄ、８Ｄ６Ａ、ＩＬＴ５／ＣＤ８５ａ、Ａ２Ｂ５、インテグリンａ  ４／ＣＤ４９ｄ、Ａａｇ、インテグリンβ  ２／ＣＤ１８、ＡＭＩＣＡ、ランゲリン、Ｂ７−  ２／ＣＤ８６、ロイコトリエンＢ４Ｒ１、Ｂ７−Ｈ３、ＬＭＩＲ１／ＣＤ３００Ａ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＬＭＩＲ２／ＣＤ３００ｃ、Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、ＬＭＩＲ３／ＣＤ３００ＬＦ、ＣＣＲ６、ＬＭＩＲ５／ＣＤ３００ＬＢ、ＣＣＲ７、ＬＭＩＲ６／ＣＤ３００ＬＥ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＭＡＧ／Ｓｉｇｌｅｃ−４ａ、ＣＤ４３、ＭＣＡＭ、ＣＤ４５、ＭＤ−１、ＣＤ６８、ＭＤ−２、ＣＤ８３、ＭＤＬ−１／ＣＬＥＣ５Ａ、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＭＭＲ、ＣＤ９７、ＮＣＡＭ−Ｌ１、ＣＤ２Ｆ−１０／ＳＬ  ＡＭＦ９、オステオアクチビン／ＧＰＮＭＢ、Ｃｈｅｍ  ２３、ＰＤ−Ｌ２、ＣＬＥＣ−１、ＲＰ１０５、ＣＬＥＣ−２、Ｓｉｇｌｅｃ−２／ＣＤ２２、ＣＲ  ＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、Ｓｉｇｌｅｃ−３／ＣＤ３３、ＤＣ−ＳＩＧＮ、Ｓｉｇｌｅｃ−５、ＤＣ−ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、Ｓｉｇｌｅｃ−６、ＤＣＡＲ、Ｓｉｇｌｅｃ−７、ＤＣＩＲ／ＣＬＥＣ４Ａ、Ｓｉｇｌｅｃ−９、ＤＥＣ−２０５、Ｓｉｇｌｅｃ−１０、Ｄｅｃｔｉｎ−１／ＣＬＥＣ７Ａ、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆ、Ｄｅｃｔｉｎ−２／ＣＬＥＣ６Ａ、ＳＩＧＮＲ１／ＣＤ２０９、ＤＥＰ−１／ＣＤ  １４８、ＳＩＧＮＲ４、ＤＬＥＣ、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、ＴＣＣＲＡＶＳＸ−１、ＦｃγＲ１／ＣＤ６４、ＴＬＲ３、ＦｃγＲＩＩＢ／ＣＤ３２ｂ、ＴＲＥＭ−１、ＦｃγＲＩＩＣ／ＣＤ３２Ｃ、ＴＲＥＭ−２、ＦｃγＲＩＩＡ／ＣＤ３２ａ、ＴＲＥＭ−３、ＦｃγＲＩＩＩ／ＣＤ１６、ＴＲＥＭＬｌ／ＴＬＴ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２及びバニロイドＲ１からなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９２】
第２５０項。前記ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーは、４−１ＢＢ／ＴＮＦＲＳＦ９、ＮＧＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１６、ＢＡＦＦ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、オステオプロテゲリン／ＴＮＦＲＳＦ１１Ｂ、Ｂ  ＣＭＡ／ＴＮＦＲＳＦ１７、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＲＡＮＫ／ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＤｃＲ３／ＴＮＦＲＳＦ６Ｂ、ＴＮＦ  ＲＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＤｃＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ２３、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＤｃＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ２２、ＴＲＡＩＬ  Ｒ１／ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＤＲ６／ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＲＡＩＬ  Ｒ３／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｃ、ＥＤＡＲ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ４／ＴＮＦＲＳＦ  １０Ｄ、Ｆａｓ／ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＲＯＹ／ＴＮＦＲＳＦ１９、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ  １８、ＴＷＥＡＫ  Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１２、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＸＥＤＡＲ、リンフォトキシンβＲ／ＴＮＦＲＳＦ３、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、リンフォトキシン、ＡＰＲＩＬ／ＴＮＦＳＦ  １３、リンフォトキシン／ＴＮＦＳＦ３、ＢＡＦＦ／ＴＮＦＳＦ１３Ｃ、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦ−ａ／ＴＮＦＳＦｌＡ、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦ−／ＴＮＦＳＦｌＢ、ＥＤＡ−Ａ２、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦＳＦ１０、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＲ  ＡＮＣＥ／ＴＮＦＳＦ  １１、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦＳＦ１２及びＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４からなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９３】
第２５１項。前記ヘッジホッグファミリーメンバーは、パッチド及びスムーズンドからなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９４】
第２５２項。前記受容体型チロシンキナーゼは、Ａｘｌ、ＦＧＦ  Ｒ４、Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、ＦＧＦ  Ｒ５、ＤＤＲ１、Ｆｌｔ−３、ＤＤＲ２、ＨＧＦ  Ｒ、Ｄｔｋ、ＩＧＦ−Ｉ  Ｒ、ＥＧＦ  Ｒ、ＩＧＦ−ＩＩ  Ｒ、Ｅｐｈ、ＩＮＳＲＲ、ＥｐｈＡ１、インスリンＲ／ＣＤ２２０、ＥｐｈＡ２、Ｍ−ＣＳＦ  Ｒ、Ｅｐｈ  Ａ３、Ｍｅｒ、ＥｐｈＡ４、ＭＳＰ  Ｒ／Ｒｏｎ、ＥｐｈＡ５、ＭｕＳＫ、ＥｐｈＡ６、ＰＤＧＦ  Ｒａ、ＥｐｈＡ７、ＰＤＧＦ  Ｒβ、ＥｐｈＡ８、Ｒｅｔ、ＥｐｈＢ１、ＲＯＲ１、ＥｐｈＢ２、ＲＯＲ２、ＥｐｈＢ３、ＳＣＦ  Ｒ／ｃ−ｋｉｔ、ＥｐｈＢ４、Ｔｉｅ−１、ＥｐｈＢ６、Ｔｉｅ−２、ＥｒｂＢ２、ＴｒｋＡ、ＥｒｂＢ３、ＴｒｋＢ、ＥｒｂＢ４、ＴｒｋＣ、ＦＧＦ  Ｒｌ、ＶＥＧＦ  Ｒｌ／Ｆｌｔ−１、ＦＧＦ  Ｒ２、ＶＥＧＦ  Ｒ２／Ｆｌｋ−１、ＦＧＦ  Ｒ３、及びＶＥＧＦ  Ｒ３／Ｆｌｔ−４からなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９５】
第２５３項。前記トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）スーパーファミリーメンバーは、アクチビンＲＩＡ／ＡＬＫ−２、ＧＦＲ  ａ−１、アクチビンＲＩＢ／ＡＬＫ−４、ＧＦＲ  ａ２、アクチビンＲＨＡ、ＧＦＲ  ａ−３、アクチビンＲＵＢ、ＧＦＲ  ａ−４、ＡＬＫ−１、ＭＩＳ  ＲＩＩ、ＡＬＫ−７、Ｒｅｔ、Ｂ  ＭＰＲ−Ｉ  Ａ／ＡＬＫ−３、ＴＧＦ−ｂｅｔ  ａ  ＲＩ／ＡＬＫ−５、ＢＭＰＲ−ＩＢ／ＡＬＫ−６、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＢＭＰＲ−ＩＩ、ＴＧＦ−β  ＲＩＩｂ、エンドグリン／ＣＤ１０５及びＴＧＦ−βＲＩＩＩからなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９６】
第２５４項。前記Ｗｎｔ関連分子は、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−８、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−２、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−９、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−３、ｓＦＲＰ−１、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−４、ｓＦＲＰ−２、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−５、ｓＦＲＰ−３、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−６、ｓＦＲＰ−４、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−７、ＭＦＲＰ、ＬＲＰ５、ＬＲＰ６、Ｗｎｔ−１、Ｗｎｔ−８ａ、Ｗｎｔ−３ａ、Ｗｎｔ−ｌＯｂ、Ｗｎｔ−４、Ｗｎｔ−１１、Ｗｎｔ−５ａ、Ｗｎｔ−９ａ及びＷｎｔ−７ａからなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９７】
第２５５項。前記受容体リガンドは、４−１ＢＢリガンド／ＴＮＦＳＦ９、リンフォトキシン、ＡＰＲＩＬ／ＴＮＦＳＦ１３、リンフォトキシン／ＴＮＦＳＦ３、ＢＡＦＦ／ＴＮＦＳＦ１３Ｃ、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＴＮＦ−ａ／ＴＮＦＳＦ１Ａ、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦ＾／ＴＮＦＳＦＩＢ、ＥＤＡ−Ａ２、ＴＲＡＩＬ／ＴＮＦＳＦ１０、Ｆａｓリガンド／ＴＮＦＳＦ６、ＴＲＡＮＣＥ／ＴＮＦＳＦ１１、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦＳＦ１２、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、アンフィレグリン、ＮＲＧ１アイソフォームＧＧＦ２、ベータセルリン、ＮＲＧ１アイソフォームＳＭＤＦ、ＥＧＦ、ＮＲＧ１−ａ／ＨＲＧ１−ａ、Ｅｐｉｇｅｎ、ＮＲＧ１−β１／ＨＲＧ１−β１、エピジェン、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＭＥＦＦ１／トモレグリン−１、ニューレグリン−３、ＴＭＥＦＦ２、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、インスリン、アクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ、アクチビンＣ、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−３、ＢＭＰ−８、ＢＭＰ−３ｂ／ＧＤＦ−１０、ＢＭＰ−９、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−１５、ＢＭＰ−５、デカペンタプレジック、ＢＭＰ−６、ＧＤＦ−１、ＧＤＦ−８、ＧＤＦ−３、ＧＤＦ−９、ＧＤＦ−５、ＧＤＦ−１１、ＧＤＦ−６、ＧＤＦ−１５、ＧＤＦ−７、アルテミン、ニュールツリン、ＧＤＮＦ、パーセフィン、ＴＧＦ−β、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β３、ＬＡＰ（ＴＧＦ−β１）、ＴＧＦ−β５、Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−β１、Ｌａｔｅｎｔ  ＴＧＦ−βｂｐ１、ＴＧＦ−β１．２、Ｌｅｆｔｙ、Ｎｏｄａｌ、ＭＩＳ／ＡＭＨ、酸性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１２、塩基性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−１７、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−２０、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−２１、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−２３、ＦＧＦ−１０、ＫＧＦ／ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−１１、ニューロピリン−１、Ｐ１ＧＦ、ニューロピリン−２、Ｐ１ＧＦ−２、ＰＤＧＦ、ＰＤＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｄ及びＰＤＧＦ−ＡＢからなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９８】
第２５６項。前記腫瘍抗原は、扁平上皮細胞癌抗原１（ＳＣＣＡ−１）、（ＰＲＯＴＥＩＮ  Ｔ４−Ａ）、扁平上皮細胞癌抗原２（ＳＣＣＡ−２）、卵巣癌腫抗原ＣＡ１２５（１Ａ１−３Ｂ；ＫＩＡＡ００４９）、ムチン１（腫瘍関連ムチン；癌腫関連ムチン；多型上皮ムチン；ＰＥＭ；ＰＥＭＴ；ＥＰＩＳＩＡＬＩＮ；腫瘍関連上皮膜抗原；ＥＭＡ；Ｈ２３ＡＧ；落花生反応性泌尿器ムチン；ＰＵＭ；及び乳癌関連抗原ＤＦ３）、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ１−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ１４−３、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ２０−４、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ２０−９、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ３３−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ３７−２、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ５７−１、ＣＴＣＬ腫瘍抗原ｓｅ８９−１、前立腺特異的膜抗原、５Ｔ４癌胎児性栄養膜糖タンパク質、Ｏｒｆ７３カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス、ＭＡＧＥ−Ｃ１（癌／精巣抗原ＣＴ７）、ＭＡＧＥ−Ｂ１抗原（ＭＡＧＥ−ＸＰ抗原；ＤＡＭ１０）、ＭＡＧＥ−Ｂ２抗原（ＤＡＭ６）、ＭＡＧＥ−２抗原、ＭＡＧＥ−４ａ抗原、ＭＡＧＥ−４ｂ抗原、大腸癌抗原ＮＹ−ＣＯ−４５、肺癌抗原ＮＹ−ＬＵ−１２変異体Ａ、癌関連表面抗原、腺癌抗原ＡＲＴ１、腫瘍随伴性脳・精巣癌抗原（腫瘍神経細胞（ｏｎｃｏｎｅｕｒｏｎａｌ）抗原ＭＡ２；腫瘍随伴性神経細胞抗原）、神経腫瘍学的腹部抗原２（ＮＯＶＡ２）、肝細胞癌抗原遺伝子５２０、腫瘍関連抗原ＣＯ−０２９、腫瘍関連抗原ＭＡＧＥ−Ｘ２、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２、Ｔ細胞により認識される扁平上皮細胞癌抗原、血清学的規定大腸癌抗原１、血清学的規定乳癌抗原ＮＹ−ＢＲ−１５、血清学的規定乳癌抗原ＮＹ−ＢＲ−１６、クロモグラニンＡ、副甲状腺分泌タンパク質１、ＤＵＰＡＮ−２、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡ  １９５並びにＬ６からなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０７９９】
第２５７項。前記Ｂ細胞標的は、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤ７８、ＣＤ７９ａ／ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤ８４、ＣＤ８５、ＣＤ８６、ＣＤ８９、ＣＤ９８、ＣＤ１２６、ＣＤ１２７、ＣＤｗ１３０、ＣＤ１３８及びＣＤｗ１５０からなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０８００】
第２５８項。前記血管新生標的は、アンジオポエチン−１、アンジオポエチン様２、アンジオポエチン−２、アンジオポエチン様３、アンジオポエチン−３、アンジオポエチン様７／ＣＤＴ６、アンジオポエチン−４、Ｔｉｅ−１、アンジオポエチン様１、Ｔｉｅ−２、アンジオジェニン、ｉＮＯＳ、凝固第ＩＩＩ因子／組織因子、ｎＮＯＳ、ＣＴＧＦ／ＣＣＮ２、ＮＯＶ／ＣＣＮ３、ＤＡＮＣＥ、ＯＳＭ、ＥＤＧ−１、Ｐｌｆｒ、ＥＧ−ＶＥＧＦ／ＰＫ１、プロリフェリン、トロンボスポンジン、ＲＯＢ０４、エリスロポエチン、トロンボスポンジン−１、キニノスタチン、トロンボスポンジン−２、ＭＦＧ−Ｅ８、トロンボスポンジン−４、一酸化窒素、ＶＧ５Ｑ、ｅＮＯＳ、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ６、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ８、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ４、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ６、ＥｐｈＢ３、エフリン−Ａ１、エフリン−Ａ４、エフリン−Ａ２、エフリン−Ａ５、エフリン−Ａ３、エフリン−Ｂ１、エフリン−Ｂ３、エフリン−Ｂ２、酸性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１２、塩基性ＦＧＦ、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−１６、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−１７、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−１９、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−２０、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−２１、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−２３、ＦＧＦ−１０、ＫＧＦ／ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−１１、ＦＧＦ  Ｒ１、ＦＧＦ  Ｒ４、ＦＧＦ  Ｒ２、ＦＧＦ  Ｒ５、ＦＧＦ  Ｒ３、ニューロピリン−１、ニューロピリン−２、セマフォリン３Ａ、セマフォリン６Ｂ、セマフォリン３Ｃ、セマフォリン６Ｃ、セマフォリン３Ｅ、セマフォリン６Ｄ、セマフォリン６Ａ、セマフォリン７Ａ、ＭＭＰ、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−１２、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１４、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−１５、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１６／ＭＴ３−ＭＭＰ、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−２４／ＭＴ５−ＭＭＰ、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−２５／ＭＴ６−ＭＭＰ、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−３、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−４、ＡＣＥ、ＩＬ−１３  Ｒ１（ＩＬ−１３）Ｃｌｑ  Ｒ１／ＣＤ９３、インテグリン４／ＣＤ４９ｄ、ＶＥ−カドヘリン、インテグリンβ２／ＣＤ１８、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１、ＫＬＦ４、ＣＤ３６／ＳＲ−Ｂ３、ＬＹＶＥ−１、ＣＤ１５１、ＭＣＡＭ、ＣＬ−Ｐ１／ＣＯＬＥＣ１２、ネクチン−２／ＣＤ１１２、凝固第ＩＩＩ因子／組織因子、Ｅ−セレクチン、Ｄ６、Ｐ−セレクチン、ＤＣ−ＳＩＧＮＲ／ＣＤ２９９、ＳＬＡＭ、ＥＭＭＰＲＩＮ／ＣＤ  １４７、Ｔｉｅ−２、エンドグリン／ＣＤ１０５、ＴＮＦ  ＲＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＥＰＣＲ、ＴＮＦ  ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、エリスロポエチンＲ、ＴＲＡＩＬ  Ｒｌ／ＴＮＦＲＳＦＩＯＡ、ＥＳＡＭ、ＴＲＡＩＬ  Ｒ２／ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＦＡＢＰ５、ＶＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−１／ＣＤ５４、ＶＥＧＦ  Ｒ２／Ｆｌｋ−１、ＩＣＡＭ−２／ＣＤ１０２、ＶＥＧＦ  Ｒ３／Ｆｌｔ−４、ＩＬ−１  ＲＩ及びＶＧ５Ｑからなる群から選択される、第２４４〜２４６項のいずれかに記載の融合タンパク質。
【０８０１】
第２５９項。ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの免疫阻害効果を刺激する、上に記載の項のいずれかに記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８０２】
第２６０項。以下の効果のうちの１つ以上を仲立ちし、前記単離したまたは組み換えのＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、第２５９項に記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の低下、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｖｉｉｉ）Ｔ細胞によるインターフェロンγ産生の減少、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉ）細胞数及び／もしくは制御性Ｔ細胞の活性の増加、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の増加、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｉｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖ）細胞への細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉ）細胞の直接殺傷の減少、（ｘｘｖｉｉ）Ｔｈ１７活性の低下、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の低下。
【０８０３】
第２６１項。ＶＳＩＧ８及び／またはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの免疫阻害効果を刺激する、上に記載の項に記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８０４】
第２６２項。以下の効果のうちの１つ以上を仲立ちし、前記単離したまたは組み換えのＶＳＩＧ８ポリペプチドまたは融合タンパク質が、（ｉ）〜（ｘｘｖｉｉ）のうちの１つ以上の逆の効果を誘発し得ることを条件とする、第２６１項に記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質：（ｉ）免疫応答の増加、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の増加、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加、（ｉｖ）ＮＫ細胞活性の増加、（ｖ）Ｔ細胞抑制の緩和、（ｖｉ）炎症性サイトカイン分泌の増加、（ｖｉｉ）ＩＬ−２分泌の増加、（ｖｉｉｉ）Ｔ細胞によるインターフェロンγ産生の増加、（ｉｘ）Ｔｈ１応答の増加、（ｘ）Ｔｈ２応答の増加、（ｘｉ）細胞数、及び／もしくは制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の少なくとも１つの活性の減少もしくは除去、（ｘｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の低下、（ｘｉｉｉ）Ｍ２マクロファージの減少もしくは除去、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージ腫瘍形成活性の低下、（ｘｖ）Ｎ２好中球の減少もしくは除去、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球の腫瘍形成活性の低下、（ｘｖｉｉ）Ｔ細胞活性化阻害の低下、（ｘｖｉｉｉ）ＣＴＬ活性化阻害の低下、（ｘｉｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の低下、（ｘｘ）Ｔ細胞疲弊の逆転、（ｘｘｉ）Ｔ細胞応答の増加、（ｘｘｉｉ）細胞毒性細胞の活性の増加、（ｘｘｉｉｉ）抗原特異的メモリー応答の刺激、（ｘｘｉｖ）癌細胞のアポトーシスもしくは溶解の誘発、（ｘｘｖ）癌細胞における細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の刺激、（ｘｘｉｖ）癌細胞の直接殺傷の誘発、（ｘｘｖｉ）Ｔｈ１７活性の増加、並びに／または（ｘｘｖｉｉ）補体依存性細胞傷害及び／もしくは抗体依存性細胞傷害の誘発。
【０８０５】
第２６３項。Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞におけるＶＳＩＧ８及び／もしくはＶＩＳＴＡの少なくとも１つの効果、または１種以上の炎症性サイトカインの産生を刺激する、またはそれに拮抗する、上の項のいずれかに記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８０６】
第２６４項。ＣＴＬ活性、ＣＤ４＋  Ｔ細胞の活性化、及び／もしくはＣＤ４＋  Ｔ細胞増殖及び／もしくは細胞枯渇のうちの１つ以上、または炎症性サイトカインの分泌を阻害または促進する、上の項のいずれかに記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８０７】
第２６５項。ＮＫ細胞活性を阻害または促進する、上の項のいずれかに記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８０８】
第２６６項。Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の分化、増殖及び／もしくは活性、並びに／またはＴｒｅｇ（Ｔｒｅｇ）、ＭＤＳＣ、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の浸潤を阻害または促進する、上の項のいずれかに記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８０９】
第２６７項。前記Ｔｒｅｇは誘発可能なＴｒｅｇである、第２６６項に記載のポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８１０】
第２６８項。ＮＫ細胞により発現される受容体に特異的に結合する、上に記載の項に記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８１１】
第２６９項。活性化Ｔ細胞、または樹状もしくは骨髄抑制もしくは単核細胞、または好中球細胞により発現される受容体に特異的に結合する、上に記載の項に記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質。
【０８１２】
第２７０項。上に記載の項のいずれかに記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【０８１３】
第２７１項。第２７０項に記載の少なくとも１種のポリヌクレオチドを含む、発現ベクターまたはウイルス。
【０８１４】
第２７２項。前記細胞は、構造的に、または誘発により、ＤＮＡセグメントによりコードされるポリペプチドを発現する、第２７０項に記載の発現ベクター、または第２７１項に記載のポリヌクレオチドを含有するウイルスを含む組み換え細胞。
【０８１５】
第２７３項。第２７２項に記載の組み換え細胞を、前記細胞が、ＤＮＡセグメントまたは核酸によりコードされるポリペプチドを発現する条件下にて培養することと、前記ポリペプチドを回収することとを含む、第２００〜２６９項のいずれかに記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質の作製方法。
【０８１６】
第２７４項。第２００〜２６９項のいずれかに記載の単離したタンパク質もしくは融合タンパク質を含む、または、配列番号１、２、３のいずれかに記載されるＶＳＩＧ８  ＥＣＤタンパク質、第２７０項に記載のポリヌクレオチド、第２７１項に記載の発現ベクターもしくはウイルス、もしくは第２７２項に記載の組み換え細胞を含む医薬組成物。
【０８１７】
第２７５項。癌を患う対象の治療に使用するための、第２７４項に記載の医薬組成物、第２００〜２６９項のいずれかに記載の単離したポリペプチドまたは融合タンパク質、第２７０項に記載のポリヌクレオチド、第２７１項に記載の発現ベクターまたはウイルス、第２７２項に記載の組み換え細胞。
【０８１８】
第２７６項。癌の免疫療法で使用するための、第２７５項に記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８１９】
第２７７項。前記癌は、診断時、または治療前に十分な量のＶＳＩＧ８タンパク質を発現しない、第２７５または２７６項に記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８２０】
第２７８項。前記癌は、診断時、または治療前に、十分な量のＶＳＩＧ８タンパク質を発現する、第２７５または２７６項に記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８２１】
第２７９項。前記医薬組成物、単離したポリペプチド、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、ウイルス、または細胞は、癌の治療に有用な治療薬と組み合わせて、治療が必要な対象に投与される、第２７５〜２７８項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞を含む医薬組成物、癌免疫治療法、またはそれらの使用。
【０８２２】
第２８０項。以下のうちの少なくとも１つを実行するための第２７５〜２７９項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用：（ｉ）免疫応答の増加、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の増加、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加、（ｉｖ）ＮＫ細胞活性の増加、（ｖ）Ｔｈ１７活性の増加、（ｖｉ）Ｔ細胞抑制の緩和、（ｖｉｉ）炎症性サイトカイン分泌の増加、（ｖｉｉｉ）ＩＬ−２分泌の増加、（ｉｘ）Ｔ細胞によるインターフェロンγ産生の増加、（ｘ）Ｔｈ１応答の増加、（ｘｉ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉｉ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の少なくとも１つの減少もしくは除去、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の低下、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージの減少もしくは除去、（ｘｖ）Ｍ２マクロファージ腫瘍形成活性の低下、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球の減少もしくは除去、（ｘｖｉｉ）Ｎ２好中球腫瘍形成活性の低下、（ｘｖｉｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の低下、（ｘｉｘ）ＣＴＬ活性化阻害の低下、（ｘｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の低下、（ｘｘｉ）Ｔ細胞疲弊の逆転、（ｘｘｉｉ）Ｔ細胞応答の増加、（ｘｘｉｉｉ）細胞毒性細胞の活性の増加、（ｘｘｉｖ）抗原特異的メモリー応答の刺激、（ｘｘｖ）癌細胞のアポトーシスもしくは細胞溶解の誘発、（ｘｘｖｉ）癌細胞における細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の刺激、（ｘｘｖｉｉ）癌細胞の直接殺傷の誘発、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害の誘発、並びに／または（ｘｘｉｘ）抗体依存性細胞傷害の誘発。
【０８２３】
第２８１項。放射線治療、凍結治療、抗体治療、化学療法、光線力学的治療、手術、ホルモン除去、標的療法剤、癌ワクチン、または従来の薬剤との併用療法の１つ以上を含む追加の治療法を投与することを更に含む、第２７５〜２８０項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８２４】
第２８２項。前記治療薬または追加の治療法は、細胞毒性薬、腫瘍ワクチン、抗体、ペプチド、ペプチボディ、小分子、化学療法剤、細胞毒性及び細胞増殖抑制剤、免疫調節剤、インターフェロン、インターロイキン、免疫刺激性成長ホルモン、サイトカイン、ビタミン、ミネラル、アロマターゼ阻害剤、ＲＮＡｉ、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、並びにプロテアソーム阻害剤からなる群から選択される、第２７５〜２８１項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞を含む医薬組成物、癌免疫治療法、またはそれらの使用。
【０８２５】
第２８３項。治療効果を得るために、１種以上の治療薬、追加の治療法または強化剤と組み合わせて、対象に同時にまたは連続的に投与される、第２７５〜２８２項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用であって、前記１種以上の強化剤は、放射線治療、従来／通常の抗癌剤強化抗腫瘍免疫応答、抗腫瘍免疫応答を強化する標的療法、免疫抑制細胞Ｔｒｅｇ及び／またはＭＤＳＣを標的化する治療薬、免疫刺激性抗体、サイトカイン療法、並びに養子細胞移入からなる群から選択される、前記医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８２６】
第２８４項。前記従来／通常の抗癌剤は、白金ベースの化合物、抗癌活性を有する抗生物質、アントラサイクリン、アントラセンジオン、アルキル化剤、代謝拮抗薬、抗有糸分裂剤、タキサン、タキソイド、微小管阻害剤、ビンカアルカロイド、葉酸塩アンタゴニスト、トポイソメラーゼ阻害剤、抗エストロゲン薬、抗アンドロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、ＧｎＲｈ類似体、５α−レダクターゼ阻害剤、ビスホスホネート及び抗体からなる群から選択される、第２７５〜２８３項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞を含む医薬組成物、癌免疫治療法、またはそれらの使用。
【０８２７】
第２８５項。前記標的療法剤は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、プロテアソーム阻害剤、ｍＴＯＲ経路阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、チロシンキナーゼ阻害物質（ＴＫＩ）、ＰＩ３Ｋ阻害剤、プロテインキナーゼ阻害剤、セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、細胞内シグナル伝達阻害剤、Ｒａｓ／Ｒａｆシグナル伝達阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、生残シグナル伝達タンパク質阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ阻害剤、治療用モノクローナル抗体、ＴＲＡＩＬ経路アゴニスト、抗血管新生剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、カテプシン阻害剤、ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子受容体機能阻害剤、免疫複合体、抗体薬剤コンジュゲート、抗体断片、二重特異的抗体、二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）からなる群から選択される、第２７５〜２８４項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞を含む医薬組成物、癌免疫治療法、またはそれらの使用。
【０８２８】
第２８６項。前記抗体は、セツキシマブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、トラスツズマブ、ペルツズマブ、リツキシマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ、アレムツズマブ、ラベツズマブ、アデカツムマブ、カツマキソマブ、オナルツブマブ、アポマブ、マパツムマブ、レクサツムマブ、コナツムマブ、ティガツズマブ、カツマキソマブ、ブリナツモマブ、イブリツモマブチウキセタン（ｔｒｉｕｘｅｔａｎ）、トシツモマブ、ブレンツキシマブベドチン、ゲムツズマブオゾガマイシン、クリバツズマブテトラキセタン、ペムツモマブ、トラスツズマブエムタンシン、ベバシズマブ、エタラチズマブ、ボロシキシマブ、ラムシルマブ、アフリベルセプトから選択される、第２７５〜２８５項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞またはそれらの使用。
【０８２９】
第２８７項。免疫抑制細胞Ｔｒｅｇ及び／またはＭＤＳＣを標的とする治療薬は、細胞分裂抑制薬、シクロホスファミド、ゲムシタビン、マイトキサントロン、フルダラビン、サリドマイド、サリドマイド誘導体、ＣＯＸ−２阻害剤、Ｔｒｅｇ細胞表面受容体の認識により、Ｔｒｅｇを直接標的とする枯渇または殺傷抗体、抗ＣＤ２５ダクリズマブ、バシリキシマブ、リガンドに向けられる毒素、デニロイキンディフィトックス（Ｏｎｔａｋ）−ヒトＩＬ−２及びジフテリア毒素の融合タンパク質、またはＬＭＢ−２−ＣＤ２５に対するｓｃＦｖとシュードモナスエキソトキシンとの融合物、Ｔｒｅｇ細胞表面受容体を標的とする抗体、ＴＬＲ調節物質、アデノシン経路を妨げる作用物質、エクトヌクレオチダーゼ阻害剤、またはＡ２Ａアデノシン受容体の阻害剤、ＴＧＦ−β阻害剤、ケモカイン受容体阻害剤、レチノイン酸、全トランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）、ビタミンＤ３、ホスホジエステラーゼ５阻害剤、シルデナフィル、ＲＯＳ阻害剤及びニトロアスピリンからから選択される、第２７５〜２８６項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞またはそれらの使用。
【０８３０】
第２８８項。前記免疫刺激性抗体は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤＬ−１、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ３、ＶＩＳＴＡの１つ以上を標的化するアンタゴニスト抗体、及び／またはＣＤ４０、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＣＤ２８もしくはＩＣＯＳの１つ以上を標的とするアゴニスト抗体から選択される、第２７５〜２８７項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞またはそれらの使用。
【０８３１】
第２８９項。前記治療用癌ワクチンは、腫瘍抗原、腫瘍抗原をコードする組み換えウイルス及び細菌ベクター、腫瘍抗原をコードするＤＮＡ系ワクチン、樹状細胞系ワクチンに対して標的化されたタンパク質、全腫瘍細胞ワクチン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＣＯＳ及び／またはＦｌｔ−３リガンドを発現する遺伝子改変腫瘍細胞、腫瘍崩壊ウイルスワクチンに対する免疫応答をマウントするために使用されるタンパク質またはペプチドを含む外因性癌ワクチンから選択される、第２７５〜２８８項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞またはそれらの使用。
【０８３２】
第２９０項。前記サイトカイン療法は、サイトカインＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８及びＩＬ−２１、ＩＬ−２３、ＩＬ−２７、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮα（インターフェロンα）、ＩＦＮα−２ｂ、ＩＰＮβ、ＩＦＮγのうちの１つ以上、並びに、これらの異なる送達方法から選択される、第２７５〜２８９項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞またはそれらの使用。
【０８３３】
第２９１項。前記養子細胞移入治療法は、患者の自己天然腫瘍特異的Ｔ細胞の拡張、またはＴ細胞の遺伝子組み換えによる腫瘍抗原に対する特異性の付与から選択されるｅｘ  ｖｉｖｏ治療の後で実施される、第２７５〜２９０項のいずれかに記載の医薬組成物、癌免疫治療法、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞またはそれらの使用。
【０８３４】
第２９２項。対象における病気の診断、または診断を補助するためのアッセイであって、前記病気は、癌、自己免疫疾患、または感染症からなる群から選択され、上に記載の項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、及び／もしくは配列番号１、２、３のいずれかに記載されているＶＳＩＧ８  ＥＣＤタンパク質、並びに前記対象から取り出した組織サンプルへの、前記単離したまたは融合タンパク質への特異的結合を検出するための検出器を含む、アッセイ。
【０８３５】
第２９３項。対象の病気の診断、または診断を補助するための診断方法であって、前記病気は、癌、自己免疫疾患、または感染症からなる群から選択され、前記方法を実施するために、第２９２項に記載のアッセイを使用することを含む、前記診断方法。
【０８３６】
第２９４項。対象の病気の診断、または診断を補助するための診断方法であって、前記病気は、癌、自己免疫疾患、または感染症からなる群から選択され、前記診断方法はｅｘ  ｖｉｖｏで実施され、前記対象からの組織サンプルを、第１〜２９３項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、または配列番号１、２、３のいずれかに記載のＶＳＩＧ８  ＥＣＤと接触させることと、前記組織サンプルへの特異的結合を検出することとを含む、前記診断方法。
【０８３７】
第２９５項。対象の病気の診断、または診断を補助するための診断方法であって、該病気は癌、自己免疫疾患、または感染症からなる群から選択され、前記診断方法はｉｎ  ｖｉｖｏで実施され、第１〜２９４項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、または配列番号１、２、３のいずれかに記載のＶＳＩＧ８  ＥＣＤタンパク質を対象に投与することと、組織への特異的結合を検出することとを含む、前記診断方法。
【０８３８】
第２９６項。前記診断方法は、第２００〜２６９項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、第２７０項に記載のポリヌクレオチド、第２７１項に記載の発現ベクターもしくはウイルス、第２７２項に記載の組み換え細胞、第２７４項に記載の医薬組成物、第２７５項に記載の組み換え細胞、または、第２７６〜２９１項のいずれかに記載のタンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物を前記対象に投与することを含む治療法または治療の前に実施される、第２９３〜２９５項のいずれかに記載の方法、または第２９２項に記載のアッセイの使用。
【０８３９】
第２９７項。病気をスクリーニングする、ＶＳＩＧ８が仲立ちする免疫抑制をスクリーニングする、病気の存在もしくは重症度を検出する、病気の予後診断を提供する、病気の進行もしくは再発、並びに治療の有効性、及び／もしくは病気、疾患もしくは状態の評価を監視する、並びに、治療及び／もしくは病気の治療、病気に対する所与の治療法の最適化を選択する、病気の治療を監視する、並びに／もしくは特定の患者もしくは亜集団の治療の適合性を予測する、または、患者もしくは亜集団における治療用生成物の適切な用量を決定するための、第２９３〜２９６項のいずれかに記載の方法。
【０８４０】
第２９８項。前記癌は、乳癌、子宮頚癌、卵巣癌、子宮体癌、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、膀胱癌、肺癌、膵癌、結腸直腸癌、前立腺癌、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病、甲状腺癌、甲状腺濾胞性癌、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、線維肉腫及び横紋筋肉腫、奇形癌、神経芽細胞腫、膠腫、グリア芽腫、皮膚の良性腫瘍、ケラトアカントーマ、腎癌、未分化大細胞型リンパ腫、食道癌、濾胞性樹状細胞癌腫、精嚢腫瘍、表皮癌腫、脾臓癌、膀胱癌、頭頸癌、胃癌、肝癌、骨肉腫、脳腫瘍、網膜癌、胆道癌、小腸癌、唾液腺癌、子宮癌、精巣癌、結合組織癌、脊髄形成異常、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、鼻咽頭癌、神経内分泌癌、中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド、卵管癌、腹膜癌、乳頭漿液ミューラー管（ｍｉｉｌｌｅｒｉａｎ）癌、悪性腹水、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、リ・フラウメニ症候群及びフォン・ヒッペル・リンドウ病（ＶＨＬ）、原発性または転移性のいずれかの、由来が未知の癌（この癌は非転移性、侵襲性または転移性である）からなる群から選択される、第２００〜２６９項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、第２７０項に記載のポリヌクレオチド、第２７１項に記載の発現ベクターもしくはウイルス、第２７２項に記載の組み換え細胞、第２７４項に記載の医薬組成物、第２７５項に記載の使用、または、第２７６〜２９１項のいずれかに記載のタンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、もしくはそれらの使用、第２９２項に記載のアッセイ、または第９４〜９８項のいずれかに記載の方法。
【０８４１】
第２９９項。前記乳癌は乳癌腫であり、腺管癌、浸潤性腺管癌、小葉癌、粘液性腺癌、腺内及び侵襲性腺管癌、並びに硬性腺癌からなる群から選択される、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８４２】
第３００項。前記大腸癌は、不十分あるいは十分に分化した侵襲性及び非侵襲性腺癌、不十分あるいは十分に分化した盲腸腺癌、十分あるいは不十分に分化した結腸腺癌、管状腺癌、好ましくはグレード２の上行結腸管状腺癌、結腸腺癌（デュークスステージＣＩ）、侵襲性腺癌、直腸腺癌、好ましくはグレード３の直腸腺癌、中程度に分化した直腸腺癌、中程度に分化した直腸粘液性腺癌からなる群から選択される、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８４３】
第３０１項。前記肺癌は、十分あるいは不十分に分化した非小細胞癌、扁平上皮細胞癌、好ましくは十分あるいは不十分に分化した扁平上皮細胞癌、角化型扁平上皮細胞癌、腺癌、好ましくは不十分あるいは十分に分化した腺癌、大型細胞腺癌、小細胞肺癌、好ましくは小細胞肺癌、より好ましくは未分化小細胞肺癌からなる群から選択される、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８４４】
第３０２項。前記前立腺癌は、前立腺癌腫であり、グリーソングレード６〜９の腺癌、浸潤性腺癌、高悪性度の前立腺上皮内腫瘍形成、未分化癌腫からなる群から選択される、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８４５】
第３０３項。前記胃癌は中程度に分化した胃腺癌である、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８４６】
第３０４項。前記卵巣癌は、嚢胞腺癌、漿液乳頭嚢胞性癌腫、漿液乳頭嚢胞性癌腫、侵襲的漿液乳頭癌種からなる群から選択される、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８４７】
第３０５項。前記脳腫瘍は、星状膠細胞腫（グレード２の星状膠細胞腫でなく、好ましくはグレード４の星状膠細胞腫であることを条件とする）、または多形性膠芽腫からなる群から選択される、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８４８】
第３０６項。前記脳腫瘍は星状膠細胞腫である、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８４９】
第３０７項。前記腎臓癌は明細胞の腎細胞癌である、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８５０】
第３０８項。肝癌は肝細胞癌である、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８５１】
第３０９項。前記肝細胞癌は低グレードの肝細胞癌種またはファイブロラメラ肝細胞癌である、第３０８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８５２】
第３１０項。前記リンパ腫は、ホジキンリンパ腫、及び高〜低グレードの非ホジキンリンパ腫からなる群から選択される、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８５３】
第３１１項。Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、甲状腺癌、甲状腺濾胞性癌、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、線維肉腫及び横紋筋肉腫、黒色腫、ブドウ膜黒色腫、奇形癌、神経芽細胞腫、膠腫、グリア芽腫癌、ケラトアカントーマ、未分化大細胞型リンパ腫、食道扁平上皮細胞癌、肝細胞癌癌、濾胞性樹状細胞癌腫、筋肉侵襲性癌、精嚢腫瘍、表皮癌腫、網膜癌、胆道癌、小腸癌、唾液腺癌、結合組織癌、脊髄形成異常、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、鼻咽頭癌、神経内分泌癌、骨髄異形成症候群、中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド、食道癌、卵管癌、腹膜癌、乳頭漿液ミューラー管（ｍｉｉｌｌｅｒｉａｎ）癌、悪性腹水、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、リ・フラウメニ症候群及びフォン・ヒッペル・リンドウ病（ＶＨＬ）、子宮体癌、乳癌（好ましくは腺管癌、浸潤性腺管癌、小葉癌、粘液性腺癌、腺内及び侵襲性腺管癌、並びに硬性腺癌のいずれか）、結腸腺癌（好ましくは、不十分あるいは十分に分化した侵襲性及び非侵襲性腺癌、不十分あるいは十分に分化した盲腸腺癌、十分あるいは不十分に分化した結腸腺癌、管状腺癌、好ましくはグレード２の上行結腸管状腺癌、結腸腺癌（デュークスステージＣＩ）、侵襲性腺癌のいずれか）、直腸腺癌（好ましくはグレード３の直腸腺癌、中程度に分化した直腸腺癌、中程度に分化した直腸粘液性腺癌）、肺癌（好ましくは、十分あるいは不十分に分化した非小細胞癌、扁平上皮細胞癌、好ましくは十分あるいは不十分に分化した扁平上皮細胞癌、角化型扁平上皮細胞癌、好ましくは不十分あるいは十分に分化した腺癌、大型細胞腺癌、小細胞肺癌、好ましくは小細胞肺癌、より好ましくは未分化小細胞肺癌のいずれか）前立腺癌（好ましくは、グリーソングレード６〜９の腺癌、浸潤性腺癌、高悪性度の前立腺上皮内腫瘍形成、未分化癌種のいずれか）、胃腺癌（好ましくは中程度に分化した胃腺癌）、卵巣癌腫（好ましくは、嚢胞腺癌、漿液乳頭嚢胞性癌腫、漿液乳頭嚢胞性癌腫、侵襲的漿液乳頭癌種のいずれか）、脳腫瘍（好ましくは星状膠細胞腫、グレード２の星状膠細胞腫でない場合に、好ましくはグレード４の星状膠細胞腫、多形性膠芽腫のいずれか）、腎臓癌（好ましくは明細胞の腎細胞癌）、肝癌（好ましくは肝細胞癌のいずれか、好ましくは低グレードの肝細胞癌種、ファイブロラメラ肝細胞癌）、リンパ腫（好ましくはホジキンリンパ腫、及び高〜低グレードの非ホジキンリンパ腫のいずれか）からなる群から選択される病気を患う対象を治療するための、第２９８項に記載の単離したタンパク質、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、医薬組成物、アッセイまたは方法。
【０８５４】
第３１２項。免疫状態を患う対象における免疫状態の治療に使用するための、第２７４項に記載の医薬組成物、第２００〜２６９項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、第２７０項に記載のポリヌクレオチド、第２７１項に記載の発現ベクターもしくはウイルス、または第２７２項に記載の組み換え細胞。
【０８５５】
第３１３項。前記医薬組成物、単離したポリペプチド、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、ウイルスまたは細胞は、免疫状態の治療に有用な治療薬と組み合わせて、免疫状態の治療が必要な対象に投与される、第３１２項に記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８５６】
第３１４項。免疫状態の治療を必要とする対象において免疫状態を治療するための、第３１２または３１３項に記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８５７】
第３１５項。前記タンパク質、前記ポリヌクレオチド、前記発現ベクターもしくはウイルス、前記組み換え細胞、または前記医薬組成物は、免疫関連疾患の治療、並びに／または、遺伝子もしくは細胞療法、もしくは細胞、組織、及び／もしくは臓器の対象への移植に続く望ましくない免疫活性化の低下に使用され、免疫応答の阻害、Ｔ細胞活性の低下、ＮＫ細胞活性の低下、制御性細胞活性の増強、Ｔ細胞抑制の増強、免疫制御性細胞活性の増強、免疫寛容確立の誘発、炎症性サイトカイン分泌の低下、Ｔｈ１−Ｔｈ２免疫バランスの再確立、自己抗原に対する免疫メモリー応答の低下、炎症性免疫細胞の減少または除去、自己反応性免疫細胞の減少または除去の少なくとも１つが可能である、第３１２〜３１４項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８５８】
第３１６項。以下のうちの少なくとも１つを実行するための、第３１２〜３１５項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用：（ｉ）免疫応答の低下、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の低下、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の低下、（ｉｖ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の減少、（ｖ）Ｔ細胞活性の低下、（ｖｉ）Ｔｈ１７活性の低下、（ｖｉｉ）炎症性サイトカイン分泌の低下、（ｖｉｉｉ）ＩＬ−２分泌の低下、（ｉｘ）Ｔ細胞によるインターフェロンγ産生の低下、（ｘ）Ｔｈ１応答の低下、（ｘｉ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉｉ）制御性Ｔ細胞、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の増加、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の増加、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージの増加、（ｘｖ）Ｍ２マクロファージ活性の増加、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球の増加、（ｘｖｉｉ）Ｎ２好中球活性の増加、（ｘｖｉｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の増加、（ｘｉｘ）ＣＴＬ活性化阻害の増加、（ｘｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の増加、（ｘｘｉ）Ｔ細胞枯渇の増加、（ｘｘｉｉ）Ｔ細胞応答の低下、（ｘｘｉｉｉ）細胞毒性細胞の活性の低下、（ｘｘｉｖ）抗原特異的メモリー応答の低下、（ｘｘｖ）細胞のアポトーシスもしくは溶解の阻害、（ｘｘｖｉ）細胞における細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の低下、（ｘｘｖｉｉ）細胞の直接殺傷の減少、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害の減少、並びに／または（ｘｘｉｘ）抗体依存性細胞媒介細胞傷害の減少。
【０８５９】
第３１７項。前記免疫状態は自己免疫疾患、移植拒絶反応、及び移植片対宿主病からなる群から選択される、第３１２〜３１６項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８６０】
第３１８項。前記自己免疫疾患は、多発性硬化症、乾癬；関節リウマチ；乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；円板状エリテマトーデス、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎；クローン病；良性リンパ性血管炎、血小板減少性紫斑病、特発性血小板減少症、特発性自己免疫溶血性貧血、赤芽球癆、シェーグレン症候群、リウマチ疾患、結合織疾患、炎症性リウマチ、変性リウマチ、関節外リウマチ、若年性関節リウマチ、関節炎蕁麻疹、筋肉リウマチ、慢性多発性関節炎、クリオグロブリン血症性血管炎、ＡＮＣＡ関連脈管炎、抗リン脂質症候群、重症筋無力症、自己免疫溶血性貧血、ギラン・バレー症候群、慢性免疫多発神経障害、自己免疫甲状腺炎、インスリン依存性真性糖尿病、Ｉ型糖尿病、アジソン病、膜性腎症、グッドパスチャー疾患、自己免疫性胃炎、自己免疫性萎縮性胃炎、悪性貧血（ａｎａｅｍｉａ）、天疱瘡、尋常天疱瘡、硬変、原発性胆汁性肝硬変、皮膚筋炎、多発性筋炎、繊維筋炎、筋硬症、腹腔動脈疾患、免疫グロブリンＡ腎症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、エバンス症候群、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、関節症性乾癬、グレーヴス病、グレーヴス眼病、強皮症、全身性強皮症、進行性全身性強皮症、ぜんそく、アレルギー、原発性胆汁性肝硬変、橋本甲状腺炎、一次性粘液水腫、交感性眼炎、自己免疫性ぶどう膜炎、肝炎、慢性作用肝炎、膠原病、強直性脊椎炎、肩関節周囲炎、結節性汎動脈炎、軟骨石灰化、ヴェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、慢性蕁麻疹、水疱性皮膚疾患、類天疱瘡、アトピー性湿疹、水疱性類天疱瘡、瘢痕性類天疱瘡、白斑、アトピー性湿疹、湿疹、慢性蕁麻疹、自己免疫性蕁麻疹、正補体血症性蕁麻疹様血管炎、低補体血症性蕁麻疹様血管炎、自己免疫性リンパ増殖症候群、デビック病、サルコイドーシス、悪性貧血、小児期自己免疫溶血性貧血、特発性自己免疫溶血性貧血、不応性または慢性自己免疫血球減少、後天性血友病Ａにおける自己免疫抗第ＶＩＩＩ因子抗体の成長防止、寒冷凝集素疾患、視神経脊髄炎、スティッフパーソン症候群、歯肉炎、歯周炎、膵炎、心筋炎、血管炎、胃炎、痛風、痛風性関節炎、及び炎症性皮膚疾患、正補体血症性蕁麻疹様血管炎、心膜炎、特発性心膜炎、筋炎、抗シンセターゼ症候群、強膜炎、マクロファージ活性化症候群、ベーチェット症候群、ＰＡＰＡ症候群、ブラウ症候群、痛風、成人及び青年スティル病、クリオピリノパシー、マック・ウェルズ症候群、家族性寒冷自己炎症性症候群、新生児期発症多臓器性炎症性疾患、家族性地中海熱、慢性乳児神経皮膚関節炎症候群、リウマチ疾患、リウマチ性多発筋痛、混合性結合織疾患、炎症性リウマチ、変性リウマチ、関節外リウマチ、若年性関節炎、若年性関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、関節炎蕁麻疹、筋肉リウマチ、慢性多発性関節炎、反応性関節炎、ライター症候群、リウマチ熱、再発性多発軟骨炎、レイノー現象、血管炎、クリオグロブリン血症性血管炎、側頭動脈炎、巨細胞動脈炎、高安動脈炎、ベーチェット病、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、自己免疫甲状腺炎、インスリン依存性真性糖尿病、Ｉ型糖尿病、アジソン病、膜性腎症、多腺性自己免疫症候群、グッドパスチャー疾患、自己免疫性胃炎、自己免疫性萎縮性胃炎、悪性貧血（ａｎａｅｍｉａ）、天疱瘡、尋常天疱瘡、硬変、原発性胆汁性肝硬変、特発性肺胞線維症、筋炎、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、多発性筋炎、繊維筋炎、筋硬症、腹腔動脈疾患、腹腔スプルー皮膚炎、免疫グロブリンＡ腎症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、エバンス症候群、アトピー性皮膚炎、乾癬、尋常性乾癬、関節症性乾癬、グレーヴス病、グレーヴス眼病、強皮症、全身性強皮症、進行性全身性強皮症、び漫性強皮症、限局性強皮症、クレスト症候群、ぜんそく、アレルギー性ぜんそく、アレルギー、原発性胆汁性肝硬変、線維筋痛、慢性疲労及び免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、自己免疫性内耳疾患、高ＩｇＤ症候群、シュニッツラー症候群、自己免疫性網膜症、加齢関連黄斑変性症、アテローム性動脈硬化症、慢性前立腺炎、脱毛症、円形脱毛症、全身性脱毛、全脱毛症、自己免疫（ｕｔｏｉｍｍｕｎｅ）血小板減少性紫斑病、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、並びにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）からなる群から選択される、第３１２〜３１６項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８６１】
第３１９項。再発寛解型多発性硬化症、一次性進行性多発性硬化症、二次性進行性多発性硬化症、進行性再発型多発性硬化症、慢性進行性多発性硬化症、移行性／進行性多発性硬化症、急速悪化性多発性硬化症、臨床的に確実な多発性硬化症、Ｍａｒｂｕｒｇ変異型としても知られている悪性多発性硬化症、急性多発性硬化症、多発性硬化症関連状態、乾癬性関節炎、痛風及び偽痛風、若年性特発性関節炎、スティル病、リウマチ様血管炎、関節リウマチ関連状態、円板状ループス、狼瘡性関節炎、狼瘡性間質性肺炎、狼瘡性腎炎、骨関節結核を含む全身性エリテマトーデス関連状態、抗リン脂質抗体症候群、心臓の種々の部分の炎症（心膜炎、心筋炎、及び心内膜炎等）、肺炎及び胸膜炎、胸膜炎、胸膜滲出、慢性びまん性間質性肺疾患、肺高血圧症、肺塞栓、肺出血、及び伸縮性肺症候群、ループス頭痛、ギラン・バレー症候群、無菌性髄膜炎、脱髄症候群、モノニューロパシー、多発性単神経炎、脊髄症、脳神経障害、多発神経障害、血管炎、膠原性大腸炎、リンパ球性大腸炎、虚血性大腸炎、空置大腸炎、ベーチェット病、不確定性大腸炎、血小板減少性紫斑病、特発性自己免疫溶血性貧血、赤芽球癆、クリオグロブリン血症性血管炎、ＡＮＣＡ関連脈管炎、抗リン脂質症候群、自己免疫溶血性貧血、ギラン・バレー症候群、慢性免疫多発神経障害、自己免疫甲状腺炎、特発性糖尿病、若年性糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ）、若年発症成人型糖尿病、成人性潜在自己免疫糖尿病、妊娠糖尿病、Ｉ型糖尿病関連状態、膜性腎症、自己免疫性胃炎、尋常天疱瘡、硬変、繊維筋炎、腹腔動脈疾患、免疫グロブリンＡ腎症、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、エバンス症候群、アトピー性皮膚炎、乾癬、グレーヴス眼病、全身性強皮症、ぜんそく、アレルギー、前ぶどう膜炎（または虹彩毛様体炎）、中間ぶどう膜炎（毛様体扁平部炎）、後部ブドウ膜炎（または脈絡網膜炎）、全ぶどう膜炎形態、肝炎、ヴェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発血管炎、慢性蕁麻疹、水疱性皮膚疾患、類天疱瘡、アトピー性湿疹、デビック病、小児期自己免疫溶血性貧血、不応性または慢性自己免疫血球減少、後天性血友病Ａにおける自己免疫抗第ＶＩＩＩ因子抗体の成長防止、寒冷凝集素疾患、視神経脊髄炎、スティッフパーソン症候群、歯肉炎、歯周炎、膵炎、心筋炎、血管炎、胃炎、痛風、痛風性関節炎、並びに、乾癬、尋常性乾癬及び乾癬性紅皮症（乾癬紅皮症）を含む非膿疱性乾癬、汎発性膿疱性乾癬（ｖｏｎ  Ｚｕｍｂｕｓｃｈ型膿疱性乾癬）を含む膿疱性乾癬、掌蹠膿疱症（持続性掌蹠（ｐａｌｍｏｐｌａｎａｒ）膿疱症、Ｂａｒｂｅｒ型膿疱性乾癬、脚の膿疱性乾癬）、環状膿疱性乾癬、連続性肢端皮膚炎、疱疹状膿痂疹、薬剤誘発性乾癬、逆性乾癬、おむつ部乾癬、脂漏性乾癬、滴状乾癬、爪乾癬、乾癬性関節炎、アトピー性皮膚炎、湿疹、酒さ、蕁麻疹、及び座瘡からなる群から選択される炎症性皮膚疾患、正補体血症性蕁麻疹様血管炎、心膜炎、抗シンセターゼ症候群、強膜炎、マクロファージ活性化症候群、ベーチェット症候群、ＰＡＰＡ症候群、ブラウ症候群、痛風、成人及び青年スティル病、クリオピリノパシー（ｃｒｙｒｏｐｙｒｉｎｏｐａｔｈｙ）、マック・ウェルズ症候群、家族性寒冷自己炎症性症候群、新生児期発症���臓器性炎症性疾患、家族性地中海熱、慢性乳児神経皮膚関節炎症候群、全身型若年性特発性関節炎、高ＩｇＤ症候群、シュニッツラー症候群、自己免疫性網膜症、加齢関連黄斑変性症、アテローム性動脈硬化症、慢性前立腺炎、並びにＴＮＦ受容体関連周期性症候群（ＴＲＡＰＳ）から選択される自己免疫疾患を治療するための、第３１２〜３１７項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８６２】
第３２０項。前記治療は、前記状態の治療に有用な別の成分と組み合わされる、第３１２〜３１９項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８６３】
第３２１項。前記免疫関連状態の治療に有用な他の成分は、免疫抑制剤（コルチコステロイド、シクロスポリン、シクロホスファミド、プレドニゾン、アザチオプリン、メトトレキサート、ラパマイシン、タクロリムス、レフルノミド、もしくはこれらの類似体等）；ミゾリビン；マイコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンもしくはその誘導体；生物学的作用物質（ＴＮＦα遮断薬もしくはアンタゴニスト、もしくは、任意の炎症性サイトカインを標的化する任意の他の生物学的製剤、非ステロイド性抗炎症薬／Ｃｏｘ−２阻害剤、ヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、金塩、エタネルセプト、インフリキシマブ、ミコフェノール酸モフェチル、バシリキシマブ、アタシセプト、リツキシマブ、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）（シクロホスファミド）、インターフェロンβ−１ａ、インターフェロンβ−１ｂ、酢酸ガラティラメル、ミトキサントロン塩酸塩、アナキンラ及び／もしくは他の生物学的製剤及び／もしくは静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）、ＩＦＮ−β−１ａ（ＲＥＢＩＦ（登録商標）ＡＶＯＮＥＸ（登録商標）及びＣＩＮＮＯＶＥＸ（登録商標））及びＩＦＮ−β−１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）、ＥＸＴＡＶＩＡ（登録商標）、ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）、ＺＩＦＥＲＯＮ（登録商標）））等）；ペプチドであるグラチラマー酢酸塩（ＣＯＰＡＸＯＮＥ（登録商標））；細胞毒性剤でありカルシニューリン阻害剤であるナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、ミトキサントロン（ＮＯＶＡＮＴＲＯＮＥ（登録商標））；シクロスポリンＡ；ＦＫ５０６；免疫抑制性マクロライド；ラパマイシン；ラパマイシン誘導体；リンパ球ホーミング剤である４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチル−ラパマイシン（ＦＴＹ７２０）；ＦＴＹ７２０の類似体；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプリン；メトトレキサート；レフルノミドもしくはこの類似体；ミゾリビン；マイコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンもしくはその誘導体；免疫抑制モノクローナル抗体、白血球受容体に対するモノクローナル抗体、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２７、Ｂ７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭ）、ＯＸ４０、４−１ＢＢもしくはこれらのリガンドに対するモノクローナル抗体；または他の免疫調節化合物、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト、ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）、ベラタセプト）、ＣＤ２８−Ｉｇ、Ｂ７−Ｈ４−Ｉｇ、または他の共刺激作用物質、または接着分子阻害剤、ｍＡｂもしくは低分子量阻害剤、ＬＦＡ−１アンタゴニスト、セレクチンアンタゴニスト及びＶＬＡ−４アンタゴニスト、または別の免疫調節作用物質から選択される、第３１２〜３２０項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８６４】
第３２２項。感染症を患う対象における感染症の治療に使用するための、第２７４項に記載の医薬組成物、第２００〜２６９項のいずれかに記載の単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、第２７０項に記載のポリヌクレオチド、第２７１項に記載の発現ベクターもしくはウイルス、または第２７２項に記載の組み換え細胞。
【０８６５】
第３２３項。前記タンパク質、前記ポリヌクレオチド、前記発現ベクターもしくはウイルス、前記組み換え細胞、前記医薬組成物、または前記使用は感染症の治療に使用され、以下のうちの少なくとも１つが可能である、第３２２項に記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞またはそれらの使用：（ｉ）免疫応答の増加、（ｉｉ）Ｔ細胞の活性化の増加、（ｉｉｉ）細胞傷害性Ｔ細胞活性の増加、（ｉｖ）ＮＫ細胞活性の増加、（ｖ）Ｔｈ１７活性の増加、（ｖｉ）Ｔ細胞抑制の緩和、（ｖｉｉ）炎症性サイトカイン分泌の増加、（ｖｉｉｉ）ＩＬ−２分泌の増加、（ｉｘ）Ｔ細胞によるインターフェロンγ産生の増加、（ｘ）Ｔｈ１応答の増加、（ｘｉ）Ｔｈ２応答の低下、（ｘｉｉ）制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の少なくとも１つの減少もしくは除去、（ｘｉｉｉ）制御性細胞活性、及び／もしくは骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ｉＭＣ、間葉ストローマ細胞、ＴＩＥ２発現単球の１つ以上の活性の低下、（ｘｉｖ）Ｍ２マクロファージの減少もしくは除去、（ｘｖ）Ｍ２マクロファージ腫瘍形成活性の低下、（ｘｖｉ）Ｎ２好中球の減少、（ｘｖｉｉ）Ｎ２好中球活性の低下、（ｘｖｉｉｉ）Ｔ細胞の活性化阻害の低下、（ｘｉｘ）ＣＴＬ活性化阻害の低下、（ｘｘ）ＮＫ細胞活性化阻害の低下、（ｘｘｉ）Ｔ細胞疲弊の逆転、（ｘｘｉｉ）Ｔ細胞応答の増加、（ｘｘｉｉｉ）細胞毒性細胞の活性の増加、（ｘｘｉｖ）抗原特異的メモリー応答の刺激、（ｘｘｖ）癌細胞のアポトーシスもしくは細胞溶解の誘発、（ｘｘｖｉ）癌細胞における細胞毒性もしくは細胞増殖抑制効果の刺激、（ｘｘｖｉｉ）癌細胞の直接殺傷の誘発、並びに／または（ｘｘｖｉｉｉ）補体依存性細胞傷害の誘発、並びに／または（ｘｘｉｘ）抗体依存性細胞傷害の誘発。
【０８６６】
第３２４項。前記感染症は慢性感染症であり、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染症及び／または他の寄生生物感染症により引き起こされる病気から選択される、第３２１〜３２３項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８６７】
第３２５項。前記感染症は敗血症をもたらす、第３２１〜３２４項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８６８】
第３２６項。前記感染症は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、伝染性単核球症、ＡＩＤＳ、結核、マラリア及び住血吸虫症から選択される、第３２１〜３２４項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８６９】
第３２７項。前記治療は、感染症の治療を必要とする対象において、感染症を治療するのに有用な別の成分、または、遺伝子治療後の望ましくない免疫活性化を低下させるのに有用な別の成分と組み合わされる、第３２１〜３２６項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８７０】
第３２８項。前記他の成分は、細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症、寄生虫感染症または敗血症の治療に有用な治療薬である、第３２１〜３２７項のいずれかに記載の医薬組成物、単離したポリペプチドもしくは融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、またはそれらの使用。
【０８７１】
第３２９項。ＶＳＩＧ８アゴニストまたはアンタゴニスト化合物とは別個の、またはこれらとコンジュゲートしているＶＩＳＴＡアゴニストまたはアンタゴニスト化合物を更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の化合物、組成物、方法または使用。
【０８７２】
第３３０項。好ましくは抗ＶＳＩＧ８抗体、ＶＳＩＧ８タンパク質またはＶＳＩＧ８融合タンパク質を含むＶＳＩＧ８アゴニストまたはアンタゴニスト化合物とは別個の、またはこれらとコンジュゲートしているＶＩＳＴＡアゴニストまたはアンタゴニストを更に含む、上に記載の項のいずれかに記載の融合タンパク質、医薬組成物、単離したポリペプチド、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞、または方法もしくは使用。
【０８７３】
第３３０項。治療、好ましくはＴ細胞またはＮＫ免疫の阻害における使用のための、単独で、または本明細書にて開示した他の治療薬または活性物質（特に免疫阻害剤）のいずれかと組み合わせての、例えば、自己免疫、アレルギー、炎症、移植（ｔｒａｎｓｐｐｌａｎｔ）または敗血症の治療における、上に記載の項のいずれかに記載のＶＳＩＧ８融合タンパク質、医薬組成物、単離したポリペプチド、ポリヌクレオチド、発現ベクターもしくはウイルス、組み換え細胞の使用方法、または方法もしくは使用。
【実施例】
【０８７４】
実施例１：推定上のＶＩＳＴＡ受容体としての、Ｖｓｉｇ８の最初の同定
ＶＩＳＴＡ多量体への結合に基づく、Ｖ−Ｒとして同定されるＶＳＩＧ８
ＶＩＳＴＡの可溶性オリゴマーまたは多量体版（即ち、組み換え蛍光性ＶＩＳＴＡ１９−ｄｅｘ）を使用して、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ（ＵＫ）ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ．ｃｏｍにより作製した膜タンパク質ライブラリー（約３８００個の独自の遺伝子）をスクリーニングし、ハイスループット結合アッセイにて推定上の結合パートナーを同定した。ＶＩＳＴＡのオリゴマー化を促進することにより、Ｖ−ＲのＶＩＳＴＡへの結合を増強させるために、この可溶性リガンドを設計した。遺伝子はＨＥＫ２９３細胞のアレイ内で発現し、蛍光色素が結合したリガンドを、結合パートナーを発現する細胞の検出のために使用する。
【０８７５】
このスクリーニング法を使用して、ＶＩＳＴＡ１９−ｄｅｘを使用して、ＶＩＳＴＡに対する結合パートナーとしてＶＳＩＧ８を同定した。この結果に基づいて、ＶＳＩＧ８を他の結合アッセイ及び機能アッセイで評価し、このタンパク質がＶＩＳＴＡ受容体であるかどうかを確認した。
【０８７６】
抗ＶＳＩＧ８モノクローナル抗体による、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが仲立ちするＴ細胞抑制の逆転  組み換えＶＩＳＴＡ−Ｉｇ融合タンパク質は、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）が仲立ちするｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴ細胞増殖、及びサイトカイン産生を、用量依存的に抑制する。 したがって、抗ＶＳＩＧ８抗体、例えばＯｒｉｇｅｎｅから市販されているもの（アゴニストまたはアンタゴニスト活性を有しない遮断／中和抗体）の存在下において、ＶＩＳＴＡ−Ｆｃの抑制効果が阻害される。
【０８７７】
本アッセイ（ａｓｓｙ）において、９６ウェルプレートを、３７℃で１時間、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）のみ、または抗ＣＤ３とＶＩＳＴＡ−Ｉｇのいずれかでコーティングする。抗ＣＤ３及びＶＩＳＴＡ−Ｉｇをそれぞれ、２．５及び１０ｕｇ／ｍＬの最終濃度にて使用する。健全なドナーの末梢血からの、２０万個の精製ヒトＴ細胞を各ウェルに加える。
【０８７８】
抗ＶＳＩＧ  ｍＡｂの存在下において、２重の実験を行う。プレートを３７℃で５日間インキュベーションする。５日目において、３０ＵＬの上清をサイトカイン（ＩＦＮ−γ及びＩＬ−２）分析のために取り除き、２５ＵＬのトリチウム標識チミジンを細胞培養に加える。細胞を更に８時間培養した後で、トリチウムの組み込みにより細胞増殖を測定する。本アッセイの結果は、抗ＶＳＩＧ８抗体がＴ細胞活性のＶＩＳＴＡ−Ｉｇ抑制を阻害するかまたは逆転させることを明らかにする筈である。
【０８７９】
ＶＳＩＧ８ノックアウト細胞株におけるＶＩＳＴＡ機能の遮断（方法１）
ＶＳＩＧ８遺伝子特異的ｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子を構築し、ＶＳＩＧ８遺伝子をノックダウンする（Ｓｉｇｍａ製のＭｉｓｓｉｏｎ  ｓｈＲＮＡ粒子、ＴＣＲライブラリー）。Ｊｕｒｋａｔ細胞に、最適化した感染多重度でｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子を形質導入し、非特異的な遺伝子欠失を持たない標的遺伝子の、９０％を超えるノックダウンを達成する。形質導入した細胞を次に、ピューロマイシン薬剤の存在下で選択する。標的遺伝子の特異性、及びノックダウンの程度を定量ＰＣＲにより確認する。次に、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇの存在下または不存在下にて、細胞を抗ＣＤ３により刺激する。ＣＤ６９の量をフローサイトメトリーにより評価し、７２時間後に、培養血清中でＥＬＩＳＡによりＩＬ−２の発現を測定する。
【０８８０】
本アッセイは、ＶＳＩＧ８遺伝子がノックアウト細胞である細胞が、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが仲立ちする抑制に対して不応性であることを明らかにする筈である。
【０８８１】
ＶＳＩＧ８ノックアウト細胞株におけるＶＩＳＴＡ機能の遮断（方法２）
ＶＳＩＧ８遺伝子特異的ｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子を構築して、ＶＳＩＧ８をノックダウンする（Ｍｉｓｓｉｏｎ  ｓｈＲＮＡ粒子、Ｓｉｇｍａ製のＴＣＲライブラリー）。健全なドナーからのＴ細胞に、最適化した感染多重度でｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子を形質導入し、非特異的な遺伝子欠失を持たない標的遺伝子の、９０％を超えるノックダウンを達成する。形質導入した細胞を、ピューロマイシン剤の存在下にて選択する。標的遺伝子の特異性、及びノックダウンの程度を定量ＰＣＲにより確認する。抗ＣＤ３が仲立ちするＴ細胞増殖アッセイを、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇのの存在下または不存在下にて、上述のとおりに実施する。次に、サイトカイン及び細胞増殖を評価する。
【０８８２】
本アッセイは同様に、ＶＳＩＧ８遺伝子がノックアウト細胞である細胞が、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが仲立ちする抑制に対して不応性であることを明らかにする筈である。
【０８８３】
ｑＰＣＲによるＶＳＩＧ８の発現の検出
ＶＳＩＧ８がＶＩＳＴＡ受容体であることを更に確認するために、Ｔ細胞によるＶＳＩＧ８の発現を検出するアッセイを行う。特に、ｑＰＣＲアッセイを行い、これにて、全脾臓細胞のサンプルに対して、濃縮したヒトＴ細胞の母集団中のＶＳＩＧ８の発現を比較した。
【０８８４】
ｃＤＮＡサンプルを、示した細胞から単離したＲＮＡから調製した。ＶＳＩＧ８の相対的発現を、ＭｏｃｋトランスフェクションしたＣＯＳ７細胞を対照として使用し、計算した。（Ａ）偽またはＶＳＩＧ８トランスフェクションＣＯＳ７細胞のいずれかを、それぞれ陰性（−Ｖｅ）または陽性（＋Ｖｅ）対照として使用した。ＶＳＩＧ８の発現はＶＳＩＧ８トランスフェクションＣＯＳ７細胞では検出されたが、ｍｏｃｋトランスフェクションＣＯＳ７細胞では検出されなかった。これは、ｑＰＣＲアッセイにおけるＶＳＩＧ８同定の特異性を確認する。ＶＳＩＧ８の発現を、ヒト末梢血からの全ヒト脾臓（Ｂ）、及び濃縮ＣＤ３＋  Ｔ細胞で検出した。
【０８８５】
ＶＳＩＧ８の相対的発現を、ΔＣｔ発現式を使用して計算した。予想通り、濃縮したＴ細胞の母集団は、全脾臓細胞サンプルと比較して、非常に高レベルのＶＳＩＧ８  ｍＲＮＡを発現した。これらの結果を図１ＸＸＸに示す。
【０８８６】
実施例２：ＶＳＩＧ８がＶＩＳＴＡ受容体であることを確証する実験
材料及び方法
ＶＳＩＧ８がＶＩＳＴＡポリペプチドに特異的に結合することを確認する実験
２９３細胞を、１０％  ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を含むＤＭＥＭ中で増殖させた。ＶＳＩＧ８によるトランスフェクションの前日に、細胞をトリプシン処理し、総体積が１０ｍＬの１０ｃｍ皿に、１：４で分割した。トランスフェクションの日に、２９３が６０〜８０％コンフルエンスに到達した際に、現在の培地を取り除き、１０ｃｍ皿を５ｍＬの新鮮な培地で交換する。
【０８８７】
Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の取扱説明書に従い、トランスフェクションを実施する。５マイクログラムのＤＮＡを３０ＵＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ３０００と混合し、２９３細胞に加える前に１０分間、室温でインキュベーションする。５〜６時間後に培地を交換し、１０ｍＬの新鮮な培地を加える。
【０８８８】
２日後、培地を取り除き、３ｍＬのＰＢＳ／０．５ｍＭのＥＤＴＡ／０．０２％のアジドを１０ｃｍ皿に加える。１０分間室温でインキュベーションした。細胞をピペット処理し、単一細胞の懸濁液を作製する。細胞を遠心分離にかけ、５％  ＦＢＳ／０．５ｍＭ  ＥＤＴＡを含むＰＢＳ、及び２０μｇ／ｍＬのＶＩＳＴＡ−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）またはＥｐｏＲ−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）のいずれかを含む０．０２％アジ化ナトリウムの中で再懸濁する。細胞を氷上で３０分間インキュベーションし、緩衝液で洗浄して、上述のとおりに遠心分離にかける。次に、インキュベーションして得られた細胞を、抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ−ＡＰＣを含む染色緩衝液中で、１：２００で再懸濁し（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、氷上で３０分間インキュベーションする。その後、次いで細胞を洗浄して遠心分離にかけ、ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  ８パラメーターフローサイトメーターにかける。
【０８８９】
抗ＶＳＩＧ８血清によるブロッキングのために、１：２０ラット血清を加え、氷上で３０分間インキュベーションし、次いで洗浄して、上述のとおりにＶＩＳＴＡ−Ｉｇで染色する。
【０８９０】
抗ＶＩＳＴＡ抗体で遮断するために、４μｇ／ｍＬのＭＡＢまたは２μｇ／ｍＬのＦａｂ、続いて２０ｕｇ／ｍＬのＶ−ＩｇまたはＥＰＯ−Ｒ−Ｉｇを細胞に加える。次に、この混合物を氷上で３０分間インキュベーションする。
【０８９１】
ＤＮＡ構築物はバイシストロニックＧＦＰを含有する。ＧＦＰは通常、標的遺伝子に対して比例して発現するため、ＧＦＰ＋細胞を分析のためにゲーティングする。
【０８９２】
細胞−細胞コンジュゲーション試験
Ａ２０細胞をＰＢＳ中で一度洗浄し、続いて、ＰＢＳ中で１×１０６／ｍＬにて再懸濁した。１ｍＬの細胞に、１ＵＬのＦａｒ−ｒｅｄまたはＶｉｏｌｅｔ染料（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＤＭＳＯ中で再構築）を加えた。室温にて２０分間インキュベーションした。５分間、１０％  ＦＢＳを含む６ｍＬのＨＢＳＳを加えた。細胞を１×１０６／ｍＬにて、ＨＢＳＳ中で再懸濁する。
【０８９３】
結合のために、１×１０５個のＦａｒ  Ｒｅｄ標識細胞（０．１ｍＬ）を、１×１０５個のｖｉｏｌｅｔ標識細胞（０．１ｍＬ）と、９６ウェルプレート内で組み合わせる。細胞を混合し、３７℃で４５〜６０分間インキュベーションする。フローサイトメトリーを使用して、細胞の蛍光を読み取る（Ｆａｒ−ｒｅｄシグナルについてはＡＰＣチャネル、ＶｉｏｌｅｔシグナルについてはＶｉｏｌｅｔ  １チャネル）。二重陽性母集団は細胞−細胞結合を示す。
【０８９４】
フローサイトメトリーによるＶＳＩＧ８の発現
血液サンプルを、通常は健常であり、地域の母集団から無作為に選択された、少なくとも１８歳のドナーから入手した。次に、ドナーの血液を単離チューブから５０ｍＬのコニカルビーカーに移した。
【０８９５】
血液２５ｍＬあたり１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ１０７７（ＳＩＧＭＡ、１０７７１）を、血液と混合しないように注意しながら下に配置した。次に、細胞を中断無しに室温で２５分間、１２５０ｇで遠心分離にかけた。
【０８９６】
遠心分離後、白血球をＦｉｃｏｌｌの界面層から単離し、血清と単離細胞を続いて、４０ｍＬのハンクス緩衝塩類溶液（ＨＢＳＳ）内に希釈した。その後、細胞混合物を４℃で１０分間、４５３ｇ（１５００ｒｐｍ）で遠心分離にかけた。
【０８９７】
細胞を含有する得られた遠心分離物を次に、５０ｍＬのＨＢＳＳ中で再懸濁し、異なるＥｐｐｅｎｄｏｒｆチューブに５００μＬを移して計数した。１×１０５個の細胞を各ウェルに加え、これらを上述のとおりに遠心分離にかけた。
【０８９８】
次に、細胞を１０ｕｇ／ｍＬのウサギ抗ＶＳＩＧ８（ＡｂｃａｍまたはＮｏｖｕｓ）、１：１００のＦｃＲ阻害剤（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、１．２５ｕｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ、２ｕｇ／ｍＬのＣＤ１６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）及び、ＣＤ１４  ＢＶ４２１、ＣＤ２０  ＰＥ、ＣＤ８  ＰｅｒＣＰ  Ｃｙ５．５、ＣＤ４  ＰＥＣｙ７、ＣＤ５６  ＰＥＣｙ７用のリネージマーカーを含有する１００μＬのＰＢＳの中で再懸濁した。
【０８９９】
次に、細胞を前述のように４℃にて２０分間インキュベーションし、続いて１００μＬのＰＢＳで洗浄し、上述のとおりに遠心分離にかけた。次に細胞を、ヤギ抗ウサギＩｇＧ  ＡＰＣを含有する１００μＬのＰＢＳ中で、４℃にて１５分間再懸濁し、続いて、１００μＬのＰＢＳで洗浄し、再び上述のとおりに遠心分離にかけた。
【０９００】
次に、得られたサンプルをＭｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣＳＱｕａｎｔフローサイトメーターにかけた。
【０９０１】
ＲＮＡ−ｓｅｑによるＶＳＩＧ８の発現分析
ｑＰＣＲアッセイを行い、これにて、全脾臓細胞のサンプルに対して、濃縮したヒトＴ細胞の母集団中のＶＳＩＧ８の発現を比較した。
【０９０２】
ｃＤＮＡサンプルを、示した細胞から単離したＲＮＡから調製した。ＶＳＩＧ８の相対的発現を、ＭｏｃｋトランスフェクションしたＣＯＳ７細胞を対照として使用し、計算した。（Ａ）偽またはＶＳＩＧ８トランスフェクションＣＯＳ７細胞のいずれかを、それぞれ陰性（−Ｖｅ）または陽性（＋Ｖｅ）対照として使用した。
【０９０３】
ＶＳＩＧ８の発現は、ＶＳＩＧ８トランスフェクションＣＯＳ７細胞で検出されたが、ｍｏｃｋトランスフェクションＣＯＳ７細胞では検出されなかった。これは、ｑＰＣＲアッセイにおけるＶＳＩＧ８同定の特異性を確認する。ＶＳＩＧ８の発現を、ヒト末梢血からの全ヒト脾臓（Ｂ）、及び濃縮ＣＤ３＋  Ｔ細胞で検出した。
【０９０４】
ＶＳＩＧ８の相対的発現を、ΔＣｔ発現式を使用して計算した。予想通り、濃縮したＴ細胞の母集団は、全脾臓細胞サンプルと比較して、非常に高レベルのＶＳＩＧ８  ｍＲＮＡを発現した。
【０９０５】
Ａ２０／ＤＯ１１  １０アッセイにおけるＶＳＩＧ８抗血清の機能的効果
細胞株の生成：完全長ｈＶＩＳＴＡ  ｃＤＮＡを増幅し、Ｂｌｕｅ  Ｓｋｙ製のバイシストロニックベクターｐＥＦ−ＭＣＳ−ＩＲＥＳ−ＺｓＧｒｅｅｎのＮｈｅＩ−ＥｃｏＲＩ部位にクローニングした。メーカーの取扱説明書によりＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒキットＶ（Ｌｏｎｚａ，カタログ番号ＶＡＣＡ  １００３）を使用して、３つの構築物（ｈＶＩＳＴＡ／ＧＦＰ及びＧＦＰ−のみ）をＡ２０マウスＢ細胞株にトランスフェクションした。安定して発現する細胞を、Ｇ４１８選択（１ｍｇ／ｍＬ）における増殖から単離した。細胞を高ＧＦＰ発現に関して分類し、Ｇ４１８選択（１．０ｍｇ／ｍＬ）下にて増殖させた。ＧＦＰ高発現細胞を、続いて各細胞株に関して単一細胞で分類し、クローン母集団を、Ｇ４１８選択の元で増殖及び継代し作製した。得られた細胞プールを、Ａ２０−ＧＦＰ（ＧＦＰのみを発現）、並びにＡ２０−ｈＶＩＳＴＡ（完全長ヒトＶＩＳＴＡ及びＧＦＰを発現）と命名した。
【０９０６】
培地のプロトコール：５０ｍＬのＦＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  ＣｅｌｌＧｒｏ，ロット番号１０３２８３ＨＩ）、５ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｏｎｚａ，１７−６０２Ｅ）１０，０００Ｕ／ｍＬ、５ｍＬのＬ−グルタミン（１００ｘ）（Ｇｉｂｃｏ，２５０３０−０８１）、及び５ｍＬのＨＥＰＥＳ（１Ｍ）（Ｆｉｓｈｅｒ，ＢＰ２９９−１００）、５０μＭのβ−メルカプトエタノール（Ｆｉｓｈｅｒ，カタログ番号０３４４６−１００）を含む、混ぜ合わせた５００ｍＬのＲＰＭＩ１６４０（Ｃｏｒｎｉｎｇ，１０−０４０−ＣＶ）。各実験において、培地を新しく作成した。
【０９０７】
ＤＯ１１．１０  Ｔ細胞の単離：ＤＯ１１．１０  ＣＤ４＋Ｔ細胞をトランスジェニックＤＯ１１．１０マウスから直接単離した。マウス（週齢６〜１０）を安楽死させ、脾臓を滅菌して取り除いた。２つの滅菌スライドガラスを使用して、脾臓を、５ｍＬの１０％  ＦＢＳ培地内の単一細胞懸濁液に処理して入れ、４５３ｇにて５分間、細胞を遠心分離にかけた。１０ｍＬの１０％  ＦＢＳ培地を加え、４０μＭのセルストレーナーに通して濾過し、上述のとおりに遠心分離にかけた。メーカーの指示に従い、ＣＤ４  Ｔ細胞単離キットＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  １３０−０９５−２４８）を使用した陰性選択により、ＣＤ４  Ｔ細胞の単離を実施した。
【０９０８】
Ｇ４１８選択培地（１．０ｍｇ／ｍＬ）中でＡ２０−ＧＦＰ及びＡ２０−ｈＶＩＳＴＡを、これらが約２〜３×１０６細胞／ｍＬに到達するまで培養した。細胞を完全培地（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｆｕｌｌ  ｍｅｄｉｕｍ）で洗浄し、１×１０６細胞／ｍＬの濃度で再懸濁した。細胞を１０，０００ｒａｄで照射した。ステップ５．３で記載の十に離細胞を遠心分離にかけ、１０％  ＦＢＳ培地中で２×１０６細胞／ｍＬの濃度で再懸濁し、適切なウェルに５０μＬを加えた。
【０９０９】
５０μＬの完全培地中の４倍濃度の対照またはＶＳＩＧ８ラット血清をＡ２０細胞に加え、室温で４５分間インキュベーションした。血清の最終希釈は１：２００であった。５０μＬの一次ＤＯ１１．１０  Ｔ細胞を、１０％  ＦＢＳ培地内で２×１０６細胞／ｍＬの濃度で適切なウェルに加えた。最終的に、ＯＶＡペプチド（ＩＳＱ；ＩＳＱＡＶＨＡＡＨＡＥＩＮＥＡＧＲ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，カタログ番号ＰＯＶ−３６３６−ＰＩ）を１０％  ＦＢＳ培地内で４倍濃度に希釈し、５０μＬをＡ２０及びＤＯ１１．１０細胞に加え、所望の最終濃度に到達させた。ｏｖａペプチドは、図の一覧で注記している場合を除き、１２．５ｎｇ／ｍＬの最終濃度となった。
【０９１０】
細胞を３日間３７℃及び５％  ＣＯ２でインキュベーションした。３日目に、９６ウェルプレートを上述のとおりに遠心分離にかけ、後述のようにＣＤ２５の発現をアッセイした。９６ウェルＵ底プレートを４５３ｇで５分間遠心分離にかけ、血清を取り除いた（ＩＦＮγまたはＩＬ−２分析に関しては、セクション５で使用）。細胞を２００μＬの染色緩衝液（Ｍｇ２＋及びＣａ２＋を含まない、１ｘＨＢＳＳ中の５％  ＦＢＳ）で洗浄し、再び遠心分離にかけた。以下の抗体：ＣＤ２５−ＡＰＣ  １：２００（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号１０２０３４）及びマウスＦｃＲ結合阻害剤１：２００（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅカタログ番号１２０−００３−８５５）を含有する５０μＬの染色緩衝液中で細胞を再懸濁した。暗所で、氷上で２０分間インキュベーションした。１５０μＬの染色緩衝液を加え、上述のとおりに遠心分離にかけた。２００μＬの染色緩衝液で細胞を洗浄して再び遠心分離にかけ、１％  ＢＳＡを含む１００μＬのＰＢＳ中で細胞を再懸濁した。
【０９１１】
Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＭＡＣＳＱｕａｎｔ  ８パラメーターフローサイトメーターにサンプルを供し、ＣＤ４＋  Ｔ細胞母集団におけるＣＤ２５の発現について、ＦｌｏｗＪｏ  ９．７．５を使用して分析した。一連の数の中心傾向を規定する統計量である幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、治療を比較する規定の統計量として使用した。
【０９１２】
結果
本実験の結果は、ＶＳＩＧ８は、以下で提供する上述の材料及び方法に記載されているとおりに影響を受けるＶＩＳＴＡ受容体であることを証明している。これらの実験は、ＶＳＩＧ８がＶＩＳＴＡ受容体であることを確証する更なる証拠を提供する。
【０９１３】
特に、これらの実験は、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇキメラタンパク質が、特異的で抗体可逆的な方法で、ＶＳＩＧ８を過剰発現する細胞を結合可能であることを示し、ＶＳＩＧ８  ｍＲＮＡ及びタンパク質発現分析は、ＶＳＩＧ８はリンパ球により発現し、推定上のＶＩＳＴＡ受容体について予想されたとおりに、ＮＫ及びＣＤ８＋  Ｔ細胞で最も高く発現したことを明らかにし、また、機能アッセイは、ＶＳＩＧ８に特異的な抗血清は、ＶＩＳＴＡが仲立ちするＴ細胞応答の抑制を逆転させたことを示した。これらを合わせると、これらの結果は、ＶＳＩＧ８は機能的な結合パートナー、即ちＶＩＳＴＡに対する受容体であるという発明者らの仮説を確実なものとしている。
【０９１４】
結合結果
ヒトＶＳＩＧ８  ＩＲＥＳ  ＧＦＰまたはＰＤ１  ＩＲＥＳ  ＧＦＰをそれぞれ２９３細胞にトランスフェクションし、続いて、これらの細胞をＶＩＳＴＡ−Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ）、ＥｐｏＲ−Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ）、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ十九量体、またはｈＩＸ−５（ＩＮＸ製のＶＩＳＴＡ−ＩｇＧ１）で染色した。フローサイトメトリーにより、ＧＦＰ陽性細胞にて結合をアッセイした。
【０９１５】
図８に示すとおり、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ）及びＶＩＳＴＡ十九量体は共に、ＶＳＩＧ８を過剰発現する細胞をしっかりと染色したが、ＰＤ１過剰発現細胞への結合についての目印は示されていない（図８を参照）。また、ｈＩＸ−５及びＥｐｏＲ−Ｉｇは、ＶＳＩＧ８またはＰＤ１を過剰発現する細胞のいずれかの結合についても徴候を示していない （図８を参照）。これらの結果は、ＶＩＳＴＡポリペプチドは、予測したＶＩＳＴＡ受容体について予想されたとおりに、ＶＳＩＧ−８に特異的に結合することを確証している。より具体的には、図８は、ＶＩＳＴＡ融合タンパク質が、ＶＳＩＧ８を過剰発現する２９３細胞に特異的に結合することを示す。これらの結合実験において、ＩＲＥＳ  ＧＦＰバイシストロニックベクターを含有するＶＳＩＧ８またはＰＤ１のいずれかを、２９３細胞にトランスフェクションした。ＧＦＰ陽性細胞をゲーティングし、以下の融合タンパク質、すなわちＶＩＳＴＡ  Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＥｐｏＲ−Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ｈＩＸ−５（ＩＮＸ  ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ）、及びＶＩＳＴＡ十九量体（ＩＮＸ  ＶＩＳＴＡ多量体）に関して、フローサイトメトリーにより結合を評価した。抗ＩｇＧ二次抗体を使用して、融合タンパク質を検出した。
【０９１６】
図８の実験に示すように、ＶＩＳＴＡ融合タンパク質は、ＶＳＩＧ８を過剰発現する２９３細胞に特異的に結合する。これらの実験において、ＩＲＥＳ  ＧＦＰバイシストロニックベクターを含有するＶＳＩＧ８またはＰＤ１のいずれかを、２９３細胞にトランスフェクションした。ＧＦＰ陽性細胞をゲーティングし、以下の融合タンパク質、すなわちＶＩＳＴＡ  Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＥｐｏＲ−Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ｈＩＸ−５（ＩＮＸ  ＶＩＳＴＡ−Ｉｇ）、及びＶＩＳＴＡ十九量体（ＩＮＸ  ＶＩＳＴＡ多量体）について、フローサイトメトリーにより結合をアッセイした。二次抗ＩｇＧを使用して、融合タンパク質を検出した。
【０９１７】
ＶＩＳＴＡ−ＩｇとＶＳＩＧ８との相互作用の特異性を更に試験するために、図９に示す、ＶＳＩＧ８及びＶＩＳＴＡに対して、ＶＩＳＴＡ  ＩｇとＶＳＩＧ８との相互作用を遮断する抗体の能力を比較する実験を行った。これらの実験では、２９３細胞を図８に示すようにトランスフェクションし、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇで染色した（Ａ及びＢについてはＲ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ＣについてはＶＩＳＴＡ十九量体）。ＶＳＩＧ８を免疫付与したラットまたは対照ラットからの血清を使用して、相互作用を潜在的に遮断した（Ａ、Ｃ）。加えて、ＶＩＳＴＡ抗体（ｍＡｂ）及びＦａｂ（Ｆａｂ）をまた、対照抗体と比較しての、相互作用を遮断する能力について試験した（Ｂ、Ｃ）。
【０９１８】
図９の実験から確認できるように、対照ラットではなくＶＳＩＧ８で免疫付与したラットの抗血清の存在下において、結合は非常に低下し、このことは、ＶＩＳＴＡ−ＩｇとＶＳＩＧ８との特異的相互作用を示している（図９Ａ）。更に、複数の抗ＶＩＳＴＡ抗体及びＦａｂもまた、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８との相互作用を特異的に遮断することができた（図９Ｂ）。更に、ＶＩＳＴＡ十九量体についても同様の研究を行った際、ＶＩＳＴＡ結合の逆転がまた観察された（図９Ｃ）。
【０９１９】
マウスとヒトＶＳＩＧ８は８６％の相同性であるので、ヒトＶＩＳＴＡ−ＩｇがマウスＶＳＩＧ８に、同様に優先的に結合するかどうかを確認するための実験を実施した。これらの実験は図１０に含まれる。これらの実験では、２９３細胞をマウスＶＳＩＧ８またはＰＤ１でトランスフェクションし、上述のとおりに、ヒトＶＩＳＴＡ−Ｉｇ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）で染色した。図１０の結果は、ＶＩＳＴＡ−Ｉｇが、マウスＶＳＩＧ８を過剰発現する細胞への結合能力が低いことを示す。 ｍＶＳＩＧ８群からのＧＦＰ陽性細胞の小集団が、ＰＤ１対照群と比較してＶＩＳＴＡ−Ｉｇにより結合された。特に、ＶＩＳＴＡ−ＩｇとｍＶＳＩＧ８の間には少量の結合が見られたが、ＶＩＳＴＡ−ＩｇとＰＤ１との間に結合は観察されなかった（図１０）。
【０９２０】
図１１に示す追加の実験を実施し、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の結合をアッセイした。これらの実験では異なる系、即ち細胞−細胞コンジュゲーションアッセイを使用して、ＶＩＳＴＡを過剰発現する細胞がＶＳＩＧ８を過剰発現する細胞に結合するかどうかを検出した。ＰＤＬ１とＰＤ１を陽性対照として使用し、ＶＳＩＧ８−ＶＳＩＧ８を陰性対照として使用した。これらの実験ではＡ２０細胞を使用し、これをＶＩＳＴＡ、ＶＳＩＧ８、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ１でトランスフェクションした後、蛍光染料で標識した。これらのトランスフェクト細胞を共に培養し、フローサイトメトリーにより、細胞のコンジュゲーション、または互いの細胞母集団の結合について確認した。二重陽性細胞は、コンジュゲーションの程度を示す。ＶＳＩＧ８／ＶＳＩＧ８を陰性対照として使用し、ＰＤ１／ＰＤ−Ｌ１を陽性対照として使用した。このシステムを使用することで予想されたように、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の結合は、陰性対照サンプルとの結合よりも高いレベルを示した。しかし、コンジュゲートした細胞の割合（％）に基づくと、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ１に見られるほど、相互作用は強力ではなかった。
【０９２１】
図１２及び１３に示す追加の実験を行い、フローサイトメトリー（ＶＳＩＧ８タンパク質の発現を検出するため）、及びＲＮＡｓｅｑ（ＶＳＩＧ８  ｍＲＮＡ発現を検出するため）を使用することにより、特異的細胞によるＶＳＩＧ８の発現をアッセイした。これらの実験を、２種類の市販されている抗体を使用して実施した。
【０９２２】
図１２の実験において、ＶＳＩＧ８に対する抗体は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞とＮＫ細胞に結合したことが示された。これらの実験では、単離して、２種類の市販されている（即ち、Ａｂｃａｍ及びＮＯＶＵＳから販売されている）抗ＶＳＩＧ８抗体で染色したヒトＰＭＢＣを使用した。ＣＤ１４、ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ５６のリネージ株を使用して、抗ＶＳＩＧ８抗体に結合した異なる免疫細胞集団を同定した。これらの実験の結果、特にヒトＰＢＭＣの染色パターンは、ＣＤ８＋  Ｔ細胞集団とＣＤ５６＋  ＮＫ細胞集団における堅強な発現を示した。ＣＤ１４＋単球とＣＤ４＋  Ｔ細胞は、抗体分析により陽性に染色しなかった。具体的には、図１２に示すように、ＶＳＩＧ８に対する抗体は、ＣＤ８＋  Ｔ細胞とＮＫ細胞に特異的に結合した。
【０９２３】
図１３に示す、発明者らにより行われた追加の実験を実施して、他の単離したＰＢＭＣ母集団によるＲＮＡ−ｓｅｑを使用して、ＶＳＩＧ８  ｍＲＮＡ発現を検出した。実験では、ヒトＰＢＭＣを、ＶＳＩＧ８のＲＮＡ−ｓｅｑ分析のより測定したｍＲＮＡのフローサイトメトリー発現により単離した。この技術を使用することで、ＣＤ４＋  Ｔ細胞とＣＤ８＋  Ｔ細胞において伝達暗号を検出したが、ＣＤ２０＋  Ｂ細胞またはＣＤ１４＋  単球においては検出しなかった。加えて、Ｊｕｒｋａｔ  Ｔ細胞株株を同様に、ｍＲＮＡ発現について確認した。図１３の結果は、ＶＳＩＧ８  ｍＲＮＡがヒトＣＤ４＋及びＣＤ８＋  Ｔ細胞で発現することを示した。
【０９２４】
発明者らは追加の実験を行い、ＶＩＳＴＡの生物活性におけるＶＳＩＧ８／ＶＩＳＴＡ結合相互作用の機能的効果を評価した。本出願で開示するように、ＶＩＳＴＡはＴ細胞応答を抑制することが示された。図１４に含まれるこれらの実験は、ＶＩＳＴＡがＶＳＩＧ８を介してＴ細胞にシグナル伝達し、Ｔ細胞の活性化を抑制する決定的な証拠をもたらした。 これらの実験では、ＧＦＰ（対照）またはＶＩＳＴＡ＋ＧＦＰのいずれかを発現するＡ２０細胞を、ＩＳＱペプチドの存在下においてＤＯ１１．１０  Ｔ細胞でインキュベーションした。７２時間の時点で、ＣＤ２５の発現によりＴ細胞の活性化を測定した。
【０９２５】
これらの実験では、ヒトＶＩＳＴＡを過剰発現するＡ２０細胞を、これらの細胞がｉｎ  ｖｉｔｒｏでマウスＴ細胞応答を抑制することが可能であるので使用した。具体的に、実験においては、これらのＡ２０細胞にＩＳＱペプチドをパルスする。ＩＳＱペプチドに対して特異的なＤＯ１１．１０  ＣＤ４＋  Ｔ細胞をマウスの脾臓から単離し、パルスしたＡ２０細胞と共にインキュベーションする。７２時間後、Ｔ細胞の活性化状態をＣＤ２５の発現により測定する。本システムにおいて、Ａ２０細胞におけるＶＩＳＴＡの過剰発現は、ＤＯ１１．１０  Ｔ細胞応答の抑制をもたらす。
【０９２６】
抗ＶＩＳＴＡ抗体は抑制を逆転させることが可能である（データは示さず）。この系を使用して、我々は、ＶＳＩＧ８抗血清を追加することで、ＶＩＳＴＡが仲立ちする抑制も同様に逆転または阻害するのかどうかを試験した。示すように、対照血清はＶＩＳＴＡの抑制を逆転させなかった。対照的に、ＶＳＩＧ８抗血清を追加することで、増強されたＴ細胞応答が得られた。この結果は更に、ＶＩＳＴＡとＶＳＩＧ８の結合は機能的効果を有する、即ち、この結合相互作用は、ＶＩＳＴＡが関係する生物活性（特にその、Ｔ細胞応答における阻害効果）を誘発し得、ＶＩＳＴＡアンタゴニストを使用して、免疫におけるＶＩＳＴＡの阻害効果（即ち、Ｔ細胞応答におけるＶＩＳＴＡの阻害効果）を阻害できることを確証する。図１４の結果は、ＶＳＩＧ８がＶＩＳＴＡ受容体であり、ＶＩＳＴＡはＶＳＩＧ８を介してＴ細胞にシグナル伝達し、抑制シグナルを誘発することを実証する。
【０９２７】
ＶＳＩＧ８マウスに関する他の表現型データは、ＶＳＩＧ８とＶＩＳＴＡの更なる機能的関係の二次的証拠を提供する。予備分析が、ＶＳＩＧ８ノックアウトマウスに関して存在する（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｏｕｓｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．ｏｒｇ／）。Ｔ細胞とＮＫ  Ｔ細胞区画についての変化を含めて、いくつかのパラメーターには、ＷＴ及びＶＳＩＧ８  ＫＯマウスとの間に統計的に差があることが発見された。変化は以下のリンク：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｏｕｓｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．ｏｒｇ／ｄａｔａ／ｇｅｎｅｓ／ＭＧＩ：３６４２９９５＃ｓｅｃｔｉｏｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓで確認することができる。
【０９２８】
実施例３：Ａ２０機能アッセイ
本実施例は更に、同じＶＳＩＧ発現Ａ２０系（Ｂ細胞）におけるＶＳＩＧ８の機能を評価する。一般に、アッセイは以下のステップを含む：
２または２４時間の、Ａ２０−ＶＳＩＧ８細胞の処理
【０９２９】
１．Ｉｇ処理：１つの群はＥｐｏＲ−Ｉｇにより、他方はＶＩＳＴＡ−Ｉｇにより
【０９３０】
２．活性化
・ＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍＬ）／イオノマイシン（０．５μｇ／ｍＬ）
・ＬＰＳ（１０μｇ／ｍＬ）
・ａＣＤ４０（１０μｇ／ｍＬ）／ＩＬ−４（１０ｎｇ／ｍＬ）
・未処理
【０９３１】
３．読出し：
ｉ．細胞のカウント
ｉｉ．フロー（ＣＤ８６、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＰＤ１、ＭＨＣ−ＩＩ−１Ａ）
ｉｉｉ．サイトカイン（Ｌｕｍｉｎｅｘ、３２−ｐｌｅｘ）
ｉｖ．ＲＮＡ  Ｓｅｑ
【０９３２】
この機能アッセイで使用する詳細の方法及び材料を以下で説明する。
【０９３３】
材料及び方法
電気穿孔法によりＤＮＡをＡ２０にトランスフェクションすることにより、Ａ２０−ｈＶＳＩＧ８細胞株を作製する。ネオマイシンを用いて細胞を選択し、続いて、ＧＦＰ＋細胞を分類する（安定したプール）。細胞をラット抗ＶＳＩＧ８血清で染色することによりヒトＶＳＩＧ８タンパク質の発現を確認する。
【０９３４】
１００万個のＡ２０細胞の半分を、ＥｐｏＲ−ＩｇまたはＶＩＳＴＡ−Ｉｇと共に２４ウェルプレートに播種する。細胞の活性化の４種類の計画使用する：１−ＰＭＡ（１０ｎｇ／ｍＬ）／イオノマイシン（０．５ｕｇ／ｍＬ）、２−ＬＰＳ（１０ｕｇ／ｍＬ）、３−抗ＣＤ４０（１０ｕｇ／ｍＬ）／ＩＬ−４（１０ｎｇ／ｍＬ）、４−未処理。細胞を別々の２回の時点（インキュベーションの２時間及び２４時間）で回収する。分析は、細胞の計数、フローサイトメーター（ＣＤ８６、ＰＤ１、ＭＨＣ−ＩＩ−１Ａ）、上清のタンパク質分析（Ｌｕｍｉｎｅｘ）、遺伝子発現分析（ＲＮＡ  ｓｅｑ）を含む。
【０９３５】
結果
２４時間、ＰＭＡ／イオノマイシン処理を使用して、かつ、ＬＰＳまたは抗ＣＤ４０／ＩＬ−４を使用したさほど強くない強度で、Ａ２０−ｈＶＩＳＧ８細胞を活性化した。本実験の結果が図１５に含まれる。ＶＩＳＴＡ−Ｉｇによりこれらの細胞を処理する際に、活性化を伴い、及び活性化を伴わずに、ＰＤ１が上方制御されることが確認できる。加えて、Ａ２０−ＧＦＰの対照を使用して、ＰＤ１の上方制御が特異的、即ち、ＶＩＳＴＡ／ＶＳＩＧ８結合相互作用の結果であることを確認する。
【０９３６】
本出願で引用する参照文献
以下の参照文献を本出願で引用する。これらの参照文献の内容、及び本出願で引用した他の全ての参考文献は、それら全体が参照により組み込まれる。
１  Ｄｏｎｇ，Ｃ．，Ｊｕｅｄｅｓ，Ａ．Ｅ．，Ｔｅｍａｎｎ，Ｕ．Ａ．，Ｓｈｒｅｓｔａ，Ｓ．，Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｒｕｄｄｌｅ，Ｎ．Ｈ．ａｎｄ  Ｆｌａｖｅｌｌ，Ｒ．Ａ．，ＩＣＯＳ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００１．４０９：９７−１０１。
２  Ｓｕｈ，Ｗ．Ｋ．，Ｇａｊｅｗｓｋａ，Ｂ．Ｕ．，Ｏｋａｄａ，Ｈ．，Ｇｒｏｎｓｋｉ，Ｍ．Ａ．，Ｂｅｒｔｒａｍ，Ｅ．Ｍ．，Ｄａｗｉｃｋｉ，Ｗ．，Ｄｕｎｃａｎ，Ｇ．Ｓ．，Ｂｕｋｃｚｙｎｓｋｉ，Ｊ．，Ｐｌｙｔｅ，Ｓ．，Ｅｌｉａ，Ａ．，Ｗａｋｅｈａｍ，Ａ．，Ｉｔｉｅ，Ａ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｓ．，Ｄａ  Ｃｏｓｔａ，Ｊ．，Ａｒｙａ，Ｓ．，Ｈｏｒａｎ，Ｔ．，Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｐ．，Ｇａｉｄａ，Ｋ．，Ｏｈａｓｈｉ，Ｐ．Ｓ．，Ｗａｔｔｓ，Ｔ．Ｈ．，Ｙｏｓｈｉｎａｇａ，Ｓ．Ｋ．，Ｂｒａｙ，Ｍ．Ｒ．，Ｊｏｒｄａｎａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｍａｋ，Ｔ．Ｗ．，Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  Ｂ７−Ｈ３  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｈｅｌｐｅｒ  ｔｙｐｅ  １−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３．４：８９９−９０６。
３  Ｂｏｒｒｉｅｌｌｏ，Ｆ．，Ｓｅｔｈｎａ，Ｍ．Ｐ．，Ｂｏｙｄ，Ｓ．Ｄ．，Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ，Ａ．Ｎ．，Ｔｉｖｏｌ，Ｅ．Ａ．，Ｊａｃｏｂｙ，Ｄ．，Ｓｔｒｏｍ，Ｔ．Ｂ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｅ．Ｍ．，Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，Ｂ７−１ａｎｄ  Ｂ７−２  ｈａｖｅ  ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ，ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｏｌｅｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｃｌａｓｓ  ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７．６：３０３−３１３。
４  Ｃｈａｍｂｅｒｓ，Ｃ．Ａ．，Ｓｕｌｌｉｖａｎ，Ｔ．Ｊ．ａｎｄ  Ａｌｌｉｓｏｎ，Ｊ．Ｐ．，Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ＣＴＬＡ−４−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ４＋  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９７．７：８８５−８９５。
５  Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ，Ｐ．，Ｐｅｎｎｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｍ．，Ｔｉｍｍｓ，Ｅ．，Ｗａｋｅｈａｍ，Ａ．，Ｓｈａｈｉｎｉａｎ，Ａ．，Ｌｅｅ，Ｋ．Ｐ．，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｃ．Ｂ．，Ｇｒｉｅｓｓｅｒ，Ｈ．ａｎｄ  Ｍａｋ，Ｔ．Ｗ．，Ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ｗｉｔｈ  ｅａｒｌｙ  ｌｅｔｈａｌｉｔｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｉｎ  Ｃｔｌａ−４．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９５．２７０：９８５−９８８。
６  Ｔｉｖｏｌ，Ｅ．Ａ．，Ｂｏｒｒｉｅｌｌｏ，Ｆ．，Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ，Ａ．Ｎ．，Ｌｙｎｃｈ，Ｗ．Ｐ．，Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ，Ｊ．Ａ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，Ｌｏｓｓ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４  ｌｅａｄｓ  ｔｏ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆａｔａｌ  ｍｕｌｔｉｏｒｇａｎ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ，ｒｅｖｅａｌｉｎｇ  ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＴＬＡ−４．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９５．３：５４１−５４７。
７  Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ，Ｈ．，Ｎｏｓｅ，Ｍ．，Ｈｉａｉ，Ｈ．，Ｍｉｎａｔｏ，Ｎ．ａｎｄ  Ｈｏｎｊｏ，Ｔ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｌｕｐｕｓ−ｌｉｋｅ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｂｙ  ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＰＤ−１  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａｎ  ＩＴＩＭ  ｍｏｔｉｆ−ｃａｒｒｙｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １９９９．１１：１４１−１５１。
８  Ｋｅｉｒ，Ｍ．Ｅ．，Ｌｉａｎｇ，Ｓ．Ｃ．，Ｇｕｌｅｒｉａ，Ｉ．，Ｌａｔｃｈｍａｎ，Ｙ．Ｅ．，Ｑｉｐｏ，Ａ．，Ａｌｂａｃｋｅｒ，Ｌ．Ａ．，Ｋｏｕｌｍａｎｄａ，Ｍ．，Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．，Ｓａｙｅｇｈ，Ｍ．Ｈ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，Ｔｉｓｓｕｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ１  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００６．２０３：８８３−８９５。
９  Ｏｒｔｌｅｒ，Ｓ．，Ｌｅｄｅｒ，Ｃ．，Ｍｉｔｔｅｌｂｒｏｎｎ，Ｍ．，Ｚｏｚｕｌｙａ，Ａ．Ｌ．，Ｋｎｏｌｌｅ，Ｐ．Ａ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｋｒｏｎｅｒ，Ａ．ａｎｄ  Ｗｉｅｎｄｌ，Ｈ．，Ｂ７−Ｈ１  ｒｅｓｔｒｉｃｔｓ  ｎｅｕｒｏａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｆｉｎｅｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ＣＮＳ  ｄａｍａｇｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｌｅｓｉｏｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００８．３８：１７３４−１７４４。
１０  Ｚｈｕ，Ｇ．，Ａｕｇｕｓｔｉｎｅ，Ｍ．Ｍ．，Ａｚｕｍａ，Ｔ．，Ｌｕｏ，Ｌ．，Ｙａｏ，Ｓ．，Ａｎａｎｄ，Ｓ．，Ｒｉｅｔｚ，Ａ．Ｃ．，Ｈｕａｎｇ，Ｊ．，Ｘｕ，Ｈ．，Ｆｌｉｅｓ，Ａ．Ｓ．，Ｆｌｉｅｓ，Ｓ．Ｊ．，Ｔａｍａｄａ，Ｋ．，Ｃｏｌｏｎｎａ，Ｍ．，ｖａｎ  Ｄｅｕｒｓｅｎ，Ｊ．Ｍ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｂ７−Ｈ４−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ａｕｇｍｅｎｔｅｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｎａｔｅ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｂｌｏｏｄ  ２００９．１１３：１７５９−１７６７。
１１  Ｃｈｅｎ，Ｙ．，Ｗａｎｇ，Ｑ．，Ｓｈｉ，Ｂ．，Ｘｕ，Ｐ．，Ｈｕ，Ｚ．，Ｂａｉ，Ｌ．ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ，Ｘ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｓａｎｄｗｉｃｈ  ＥＬＩＳＡ  ｆｏｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＰＤ−Ｌ１（ＣＤ２７４）  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒａ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ａｇｅｓ  ａｓ  ｗｅｌｌ  ａｓ  ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓ  ｏｆ  ＰＤ−Ｌ１（＋）  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ２０１１。
１２  Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，Ｒ．Ｊ．，Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．，Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５．２３：５１５−５４８。
１３  Ｚｈｕ，Ｙ．，Ｙａｏ，Ｓ．，Ｉｌｉｏｐｏｕｌｏｕ，Ｂ．Ｐ．，Ｈａｎ，Ｘ．，Ａｕｇｕｓｔｉｎｅ，Ｍ．Ｍ．，Ｘｕ，Ｈ．，Ｐｈｅｎｎｉｃｉｅ，Ｒ．Ｔ．，Ｆｌｉｅｓ，Ｓ．Ｊ．，Ｂｒｏａｄｗａｔｅｒ，Ｍ．，Ｒｕｆｆ，Ｗ．，Ｔａｕｂｅ，Ｊ．Ｍ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｌ．，Ｌｕｏ，Ｌ．，Ｚｈｕ，Ｇ．，Ｃｈｅｎ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｂ７−Ｈ５  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｖｉａ  ＣＤ２８Ｈ．Ｎａｔ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２０１３．４：２０４３。
１４  Ｂｒａｎｄｔ，Ｃ．Ｓ．，Ｂａｒａｔｉｎ，Ｍ．，Ｙｉ，Ｅ．Ｃ．，Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｊ．，Ｇａｏ，Ｚ．，Ｆｏｘ，Ｂ．，Ｈａｌｄｅｍａｎ，Ｂ．，Ｏｓｔｒａｎｄｅｒ，Ｃ．Ｄ．，Ｋａｉｆｕ，Ｔ．，Ｃｈａｂａｎｎｏｎ，Ｃ．，Ｍｏｒｅｔｔａ，Ａ．，Ｗｅｓｔ，Ｒ．，Ｘｕ，Ｗ．，Ｖｉｖｉｅｒ，Ｅ．ａｎｄ  Ｌｅｖｉｎ，Ｓ．Ｄ．，Ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒ  Ｂ７−Ｈ６  ｉｓ  ａ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＮＫｐ３０  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００９．２０６：１４９５−１５０３。
１５  Ｗａｎｇ，Ｌ．，Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ，Ｒ．，Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｌ．，Ｗａｓｉｕｋ，Ａ．，Ａｈｏｎｅｎ，Ｃ．，Ｇｕｏ，Ｙ．，Ｌｕ，Ｌ．Ｆ．，Ｇｏｎｄｅｋ，Ｄ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．，Ｆａｖａ，Ｒ．Ａ．，Ｆｉｓｅｒ，Ａ．，Ａｌｍｏ，Ｓ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ，Ｒ．Ｊ．，ＶＩＳＴＡ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｌｉｇａｎｄ  ｔｈａｔ  ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１１．２０８：５７７−５９２。
１６  Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｅｍｐｅｒｅ，Ｌ．Ｆ．，Ｗａｎｇ，Ｌ．，Ｐａｎｔｔａｚｉ，Ｅ．，Ｍａｋ，Ｊ．，Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ，Ｓ．，Ｃｅｅｒａｚ，Ｓ．，Ｓｕｒｉａｗｉｎａｔａ，Ａ．Ａ．，Ｙａｎ，Ｓ．，Ｅｒｎｓｔｏｆｆ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｎｏｅｌｌｅ，Ｒ．Ｊ．，ＶＩＳＴＡ  ｉｓ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ．ｉｎ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）。
１７  ＬｅＭｅｒｃｉｅｒ，Ｉ．，Ｌｉｎｅｓ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｅｒｇｅｎｔ，Ｐ．，Ｌｉ，Ｊ．，Ｎｏｅｌｌｅ，Ｒ．Ｊ．ａｎｄ  Ｗａｎｇ，Ｌ．，ＶＩＳＴＡ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｉｎ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）。
１８  Ｗｏｌｃｈｏｋ，Ｊ．Ｄ．，Ｋｌｕｇｅｒ，Ｈ．，Ｃａｌｌａｈａｎ，Ｍ．Ｋ．，Ｐｏｓｔｏｗ，Ｍ．Ａ．，Ｒｉｚｖｉ，Ｎ．Ａ．，Ｌｅｓｏｋｈｉｎ，Ａ．Ｍ．，Ｓｅｇａｌ，Ｎ．Ｈ．，Ａｒｉｙａｎ，Ｃ．Ｅ．，Ｇｏｒｄｏｎ，Ｒ．Ａ．，Ｒｅｅｄ，Ｋ．，Ｂｕｒｋｅ，Ｍ．Ｍ．，Ｃａｌｄｗｅｌｌ，Ａ．，Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ａ．，Ａｇｕｎｗａｍｂａ，Ｂ．Ｕ．，Ｚｈａｎｇ，Ｘ．，Ｌｏｗｙ，Ｉ．，Ｉｎｚｕｎｚａ，Ｈ．Ｄ．，Ｆｅｅｌｙ，Ｗ．，Ｈｏｒａｋ，Ｃ．Ｅ．，Ｈｏｎｇ，Ｑ．，Ｋｏｒｍａｎ，Ａ．Ｊ．，Ｗｉｇｇｉｎｔｏｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｇｕｐｔａ，Ａ．ａｎｄ  Ｓｚｎｏｌ，Ｍ．，Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｍｅｌａｎｏｍａ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１３．３６９：１２２−１３３。
１９  Ｉｌｉｏｐｏｕｌｏｓ，Ｄ．，Ｋａｖｏｕｓａｎａｋｉ，Ｍ．，Ｉｏａｎｎｏｕ，Ｍ．，Ｂｏｕｍｐａｓ，Ｄ．ａｎｄ  Ｖｅｒｇｉｎｉｓ，Ｐ．，Ｔｈｅ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ＰＤ−１  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｂａｌａｎｃｅ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｖｉａ  ｍｉＲ−２１．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１１．４１：１７５４−１７６３。
２０  Ａｎｓａｒｉ，Ｍ．Ｊ．，Ｓａｌａｍａ，Ａ．Ｄ．，Ｃｈｉｔｎｉｓ，Ｔ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｒ．Ｎ．，Ｙａｇｉｔａ，Ｈ．，Ａｋｉｂａ，Ｈ．，Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｔ．，Ａｚｕｍａ，Ｍ．，Ｉｗａｉ，Ｈ．，Ｋｈｏｕｒｙ，Ｓ．Ｊ．，Ａｕｃｈｉｎｃｌｏｓｓ，Ｈ．，Ｊｒ．ａｎｄ  Ｓａｙｅｇｈ，Ｍ．Ｈ．，Ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１（ＰＤ−１）  ｐａｔｈｗａｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｉｎ  ｎｏｎｏｂｅｓｅ  ｄｉａｂｅｔｉｃ（ＮＯＤ）  ｍｉｃｅ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２００３．１９８：６３−６９。
２１  Ｂｅｒｔｓｉａｓ，Ｇ．Ｋ．，Ｎａｋｏｕ，Ｍ．，Ｃｈｏｕｌａｋｉ，Ｃ．，Ｒａｐｔｏｐｏｕｌｏｕ，Ａ．，Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒａｋｉ，Ｅ．，Ｇｏｕｌｉｅｌｍｏｓ，Ｇ．，Ｋｒｉｔｉｋｏｓ，Ｈ．，Ｓｉｄｉｒｏｐｏｕｌｏｓ，Ｐ．，Ｔｚａｒｄｉ，Ｍ．，Ｋａｒｄａｓｓｉｓ，Ｄ．，Ｍａｍａｌａｋｉ，Ｃ．ａｎｄ  Ｂｏｕｍｐａｓ，Ｄ．Ｔ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ，ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ，ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ  １／ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ  ｌｉｇａｎｄ  １  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ２００９．６０：２０７−２１８。
２２  Ｐｒｏｋｕｎｉｎａ，Ｌ．，Ｃａｓｔｉｌｌｅｊｏ−Ｌｏｐｅｚ，Ｃ．，Ｏｂｅｒｇ，Ｆ．，Ｇｕｎｎａｒｓｓｏｎ，Ｉ．，Ｂｅｒｇ，Ｌ．，Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ，Ｖ．，Ｂｒｏｏｋｅｓ，Ａ．Ｊ．，Ｔｅｎｔｌｅｒ，Ｄ．，Ｋｒｉｓｔｊａｎｓｄｏｔｔｉｒ，Ｈ．，Ｇｒｏｎｄａｌ，Ｇ．，Ｂｏｌｓｔａｄ，Ａ．Ｉ．，Ｓｖｅｎｕｎｇｓｓｏｎ，Ｅ．，Ｌｕｎｄｂｅｒｇ，Ｉ．，Ｓｔｕｒｆｅｌｔ，Ｇ．，Ｊｏｎｓｓｅｎ，Ａ．，Ｔｒｕｅｄｓｓｏｎ，Ｌ．，Ｌｉｍａ，Ｇ．，Ａｌｃｏｃｅｒ−Ｖａｒｅｌａ，Ｊ．，Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｒ．，Ｇｙｌｌｅｎｓｔｅｎ，Ｕ．Ｂ．，Ｈａｒｌｅｙ，Ｊ．Ｂ．，Ａｌａｒｃｏｎ−Ｓｅｇｏｖｉａ，Ｄ．，Ｓｔｅｉｎｓｓｏｎ，Ｋ．ａｎｄ  Ａｌａｒｃｏｎ−Ｒｉｑｕｅｌｍｅ，Ｍ．Ｅ．，Ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｉｎ  ＰＤＣＤ１  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ２００２．３２：６６６−６６９。
２３  Ｏｚｋａｙｎａｋ，Ｅ．，Ｗａｎｇ，Ｌ．，Ｇｏｏｄｅａｒｌ，Ａ．，ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｋ．，Ｑｉｎ，Ｓ．，Ｏ’Ｋｅｅｆｅ，Ｔ．，Ｄｕｏｎｇ，Ｔ．，Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．，Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ−Ｒａｍｏｓ，Ｊ．Ｃ．，Ｒｏｔｔｍａｎ，Ｊ．Ｂ．，Ｃｏｙｌｅ，Ａ．Ｊ．ａｎｄ  Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｗ．Ｗ．，Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｃａｎ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２．１６９：６５４６−６５５３。
２４  Ｗａｔｓｏｎ，Ｍ．Ｐ．，Ｇｅｏｒｇｅ，Ａ．Ｊ．ａｎｄ  Ｌａｒｋｉｎ，Ｄ．Ｆ．，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｃｏｒｎｅａｌ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ  ２００６．４７：３４１７−３４２２。
２５  Ｐｏｄｏｊｉｌ，Ｊ．Ｒ．，Ｌｉｕ，Ｌ．Ｎ．，Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｓ．Ａ．，Ｃｈｉａｎｇ，Ｍ．Ｙ．，Ｇｏｉｎｇｓ，Ｇ．Ｅ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｌａｎｇｅｒｍａｎｎ，Ｓ．ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，Ｓ．Ｄ．，Ｂ７−Ｈ４Ｉｇ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｓ  ＥＡＥ  ｖｉａ  ＩＬ−１０／Ｔｒｅｇ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  ２０１３．４４：７１−８１。
２６  Ｓｉｃａ，Ｇ．Ｌ．，Ｃｈｏｉ，Ｉ．Ｈ．，Ｚｈｕ，Ｇ．，Ｔａｍａｄａ，Ｋ．，Ｗａｎｇ，Ｓ．Ｄ．，Ｔａｍｕｒａ，Ｈ．，Ｃｈａｐｏｖａｌ，Ａ．Ｉ．，Ｆｌｉｅｓ，Ｄ．Ｂ．，Ｂａｊｏｒａｔｈ，Ｊ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｂ７−Ｈ４，ａ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ，ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００３．１８：８４９−８６１。
２７  Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｈａｏ，Ｊ．，Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ｍｕｉ，Ａ．，Ａｏ，Ｚ．，Ｖｅｒｃｈｅｒｅ，Ｃ．Ｂ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｏｕ，Ｄ．ａｎｄ  Ｗａｒｎｏｃｋ，Ｇ．Ｌ．，Ｂ７−Ｈ４  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｏｎｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｉｓｌｅｔ  ａｌｌｏｇｒａｆｔｓ．Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２０１２．２１：９９−１１１。
２８  Ｙａｍａｕｒａ，Ｋ．，Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｔ．，Ｂｏｅｎｉｓｃｈ，Ｏ．，Ｙｅｕｎｇ，Ｍ．，Ｙａｎｇ，Ｓ．，Ｍａｇｅｅ，Ｃ．Ｎ．，Ｐａｄｅｒａ，Ｒ．，Ｄａｔｔａ，Ｓ．，Ｓｃｈａｔｔｏｎ，Ｔ．，Ｋａｍｉｍｕｒａ，Ｙ．，Ａｚｕｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｎａｊａｆｉａｎ，Ｎ．，Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｂ７−Ｈ４  ｉｎ  ａｌｌｏｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ２０１０．１０：２３５５−２３６２。
２９  Ｙｉ，Ｋ．Ｈ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｆｉｎｅ  ｔｕｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ｂ７−Ｈ３  ａｎｄ  Ｂ７−Ｈ４．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２００９．２２９：１４５−１５１。
３０  Ｗａｎｇ，Ｘ．，Ｈａｏ，Ｊ．，Ｍｅｔｚｇｅｒ，Ｄ．Ｌ．，Ａｏ，Ｚ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｏｕ，Ｄ．，Ｖｅｒｃｈｅｒｅ，Ｃ．Ｂ．，Ｍｕｉ，Ａ．ａｎｄ  Ｗａｒｎｏｃｋ，Ｇ．Ｌ．，Ｂ７−Ｈ４  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｔ  Ｃｅｌｌｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＥＲＫ，ＪＮＫ，ｐ３８，ａｎｄ  ＡＫＴ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ２０１２．７：ｅ２８２３２。
３１  Ｔｅｒａｗａｋｉ，Ｓ．，Ｔａｎａｋａ，Ｙ．，Ｎａｇａｋｕｒａ，Ｔ．，Ｈａｙａｓｈｉ，Ｔ．，Ｓｈｉｂａｙａｍａ，Ｓ．，Ｍｕｒｏｉ，Ｋ．，Ｏｋａｚａｋｉ，Ｔ．，Ｍｉｋａｍｉ，Ｂ．，Ｇａｒｂｏｃｚｉ，Ｄ．Ｎ．，Ｈｏｎｊｏ，Ｔ．ａｎｄ  Ｍｉｎａｔｏ，Ｎ．，Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｄ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｔｅｔｒａｍｅｒｉｚｅｄ  ＰＤ−Ｌ１  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｏｍａｉｎ  ｔｏ  ＰＤ−１−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ：  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００７．１９：８８１−８９０。
３２  Ｓｅｄｙ，Ｊ．Ｒ．，Ｇａｖｒｉｅｌｉ，Ｍ．，Ｐｏｔｔｅｒ，Ｋ．Ｇ．，Ｈｕｒｃｈｌａ，Ｍ．Ａ．，Ｌｉｎｄｓｌｅｙ，Ｒ．Ｃ．，Ｈｉｌｄｎｅｒ，Ｋ．，Ｓｃｈｅｕ，Ｓ．，Ｐｆｅｆｆｅｒ，Ｋ．，Ｗａｒｅ，Ｃ．Ｆ．，Ｍｕｒｐｈｙ，Ｔ．Ｌ．ａｎｄ  Ｍｕｒｐｈｙ，Ｋ．Ｍ．，Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｔｔｅｎｕａｔｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｅｎｔｒｙ  ｍｅｄｉａｔｏｒ．Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００５．６：９０−９８。
３３  Ｐａｒｉｓｉ，Ｓ．，Ｂａｔｔｉｓｔａ，Ｍ．，Ｍｕｓｔｏ，Ａ．，Ｎａｖａｒｒａ，Ａ．，Ｔａｒａｎｔｉｎｏ，Ｃ．ａｎｄ  Ｒｕｓｓｏ，Ｔ．，Ａ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｌｏｏｐ  ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ  Ｄｉｅｓ１  ａｎｄ  ｍｉＲ−１２５ａ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ＢＭＰ４  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２０１２．２６：３９５７−３９６８。
３４  Ｙｏｕｎｇｎａｋ，Ｐ．，Ｋｏｚｏｎｏ，Ｙ．，Ｋｏｚｏｎｏ，Ｈ．，Ｉｗａｉ，Ｈ．，Ｏｔｓｕｋｉ，Ｎ．，Ｊｉｎ，Ｈ．，Ｏｍｕｒａ，Ｋ．，Ｙａｇｉｔａ，Ｈ．，Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｄ．Ｍ．，Ｃｈｅｎ，Ｌ．ａｎｄ  Ａｚｕｍａ，Ｍ．，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｂ７−Ｈ１  ａｎｄ  Ｂ７−ＤＣ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２００３．３０７：６７２−６７７。
３５  Ｂｕｔｔｅ，Ｍ．Ｊ．，Ｋｅｉｒ，Ｍ．Ｅ．，Ｐｈａｍｄｕｙ，Ｔ．Ｂ．，Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ａｎｄ  Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．，Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  ｄｅａｔｈ−１  ｌｉｇａｎｄ  １  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｂ７−１  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｔｏ  ｉｎｈｉｂｉｔ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２００７．２７：１１１−１２２。
３６  Ｓｈａｒｐｅ，Ａ．Ｈ．ａｎｄ  Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｇ．Ｊ．，Ｔｈｅ  Ｂ７−ＣＤ２８  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２．２：１１６−１２６。
３７  Ｂａｒｔｅｌ  Ｐ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｔｏ  ｄｅｔｅｃｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｄ．Ａ．Ｈａｒｔｌｅｙ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；ｐｐ  １５３−１７９。
３８  Ｂeｒａｎｇｅｒ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｇｅｔｔｉｎｇ  ｍｏｒｅ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ｓｙｓｔｅｍ：Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｆｕｓｉｏｎｓ  ｔｏ  ＬｅｘＡ  ａｒｅ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｂａｉｔｓ  ｆｏｒ  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ．ＮＡＲ  ２５：２０３５−３６。
３９  Ｆｏｒｍｓｔｅｃｈｅｒ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（２００５）  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍａｐｐｉｎｇ：ａ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｃａｓｅ  ｓｔｕｄｙ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１５：３７６８４。
４０  Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎｅ  Ｍ．，Ｒａｉｎ  Ｊ．Ｃ．，ａｎｄ  Ｌｅｇｒａｉｎ  Ｐ．（１９９７）  Ｔｏｗａｒｄ  ａ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｙｅａｓｔ  ｇｅｎｏｍｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｅｘｈａｕｓｔｉｖｅ  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ｓｃｒｅｅｎｓ．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１６：２７７−８２。
４１  Ｒａｉｎ  Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍａｐ  ｏｆ  Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ．Ｎａｔｕｒｅ  ４０９：２１１−１５。
４２  Ｖｏｊｔｅｋ  Ａ．ａｎｄ  Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ  Ｓ．Ｍ．（１９９５）  Ｒａｓ−Ｒａｆ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ：ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２５５：３３１４２。
４３  Ｗｏｊｃｉｋ  Ｊ．，Ｂｏｎｅｃａ  Ｉ．Ｇ．，ａｎｄ  Ｌｅｇｒａｉｎ  Ｐ．（２００２）  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍａｐｓ  ｉｎ  ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２３：７６３−７０。
【０９３７】
ＶＳＩＧ８配列
配列番号１：ヒトＶＳＩＧ８ポリペプチド配列
1 mrvggafhll lvclspalls avringdgqe vlylaegdnv rlgcpyvldp edygpngldi
61 ewmqvnsdpa hhrenvflsy qdkrinhgsl phlqqrvrfa asdpsqydas inlmnlqvsd
121 tatyecrvkk ttmatrkviv tvqarpavpm cwteghmtyg ndvvlkcyas ggsqplsykw
181 akisghhypy ragsytsqhs yhselsyqes fhssinqgln ngdlvlkdis raddglyqct
241 vannvgysvc vvevkvsdsr rigviigivl gsllalgcla vgiwglvccc cggsgaggar
301 gafgygnggg vgggacgdla seiredavap gckasgrgsr vthllgyptq nvsrslrrky
361 apppcggped valapctaaa aceagpspvy vkvksaepad caegpvqckn gllv
配列番号２：ハツカネズミＶＳＩＧ８ポリペプチド配列
1 mgvrgalhll lvclspalls avringdgqe vmylaegdnv rlgcpylldp edlgtnsldi
61 ewmqvnseps hrenvfltyq dkrighgnlp hlqqrvrfaa sdpsqydasi nlmnlqvsdt
121 atyecrvkkt tmatrkvivt vqarpavpmc wteghmskgn dvvlkcfang gsqplsykwa
181 kisghshpyr agayhsqhsf hselsyqesf hstinqglgn gdlllkgina dddglyqctv
241 anhvgysvcv vevkvsdsqr vgmivgavlg sllmlaclal giwglicccc ggggaggarg
301 afgygvgggv gggacgdlas eirvdaeapg ckasgrgsrv thllgyptqn vsrslrrkya
361 pppcggpedv alvprtasas ceagpspvyi kvksaepadc adcaqveqrs ckdgllv
／／
配列番号３：カニクイザルＶＳＩＧ８ポリペプチド配列
1 mgvggafhll lvclspalls avringdgqe vlylaegdnv rlgcpyvldp edygpngldi
61 ewmqvnsdpa hhrenvflsy qdkrinhgnl phlqqrvrfa asdpsqydas inlmnlqvsd
121 tatyecrvkk ttmatrkviv tvqarpavpm cwteghmthg ndvvlkcyan ggsqplsykw
181 akisghhypy ragsytsqhs yhselsyqes fhssinqgln ngdlvlkdis raddglyqct
241 vannvgysvc vvevkvsdsr rigviigail gsllalgcla vgiwglvccc cggsgaggar
301 gafgygnggg vgggacgdla seiredavap gckasgrgsr vthllgyptq nvsrslrrky
361 apppcggpen valapctaaa aceagpspvy vkvksaepad caegpvqckn gllv
／／
配列番号４：ヒトＶＳＩＧ８核酸配列
1 agacggagga aacaccgagc ctagagacat gagagttgga ggagcattcc accttctact
61 cgtgtgcctg agcccagcac tgctgtctgc tgtgcggatc aacggggatg gacaggaggt
121 cctgtacctg gcagaaggtg ataatgtgag gctgggctgc ccctacgtcc tggaccctga
181 ggactatggt cccaatgggc tggacatcga gtggatgcag gtcaactcag accccgccca
241 ccaccgagag aacgtgttcc ttagttacca ggacaagagg atcaaccatg gcagccttcc
301 ccatctgcag cagagggtcc gctttgcagc ctcagaccca agccagtacg atgcctccat
361 caacctcatg aacctgcagg tatctgatac agccacttat gagtgccggg tgaagaagac
421 caccatggcc acccggaagg tcattgtcac tgtccaagca cgacctgcag tgcccatgtg
481 ctggacagag ggccacatga catatggcaa cgatgtggtg ctgaagtgct atgccagtgg
541 gggctcccag cccctctcct acaagtgggc caagatcagt gggcaccatt acccctatcg
601 agctgggtct tacacctccc agcacagcta ccactcagag ctgtcctacc aggagtcctt
661 ccacagctcc ataaaccaag gcctgaacaa tggggacctg gtgttgaagg atatctccag
721 agcagatgat gggctgtatc agtgcacagt ggccaacaac gtgggctaca gtgtttgtgt
781 ggtggaggtg aaggtctcag actcccggcg tataggcgtg atcatcggca tcgtcctggg
841 ctctctgctc gcgctgggct gcctggccgt aggcatctgg gggctcgtct gctgctgctg
901 cgggggctcc ggggctggcg gcgcccgcgg tgccttcggc tacggcaacg gcggcggggt
961 cggcggaggg gcctgcggcg acttggctag tgagatcaga gaggacgccg tggcgcccgg
1021 gtgcaaggcc agcgggcgcg gcagccgcgt cacccacctc ctggggtacc cgacgcagaa
1081 cgtcagccgc tccctgcgcc gcaagtacgc gcctcccccc tgcggcggcc ccgaggacgt
1141 ggccctggcg ccctgcaccg ccgccgccgc ctgcgaagcg ggcccctccc cggtctacgt
1201 caaggtcaag agcgcggagc cggctgactg cgccgagggg ccggtgcagt gcaagaacgg
1261 cctcttggtg tgagcgcgcg cgccgggccg ggctgcgccc cagccaggag gagggcgcgg
1321 ggctctctgt ctgcagctgg ggacacgtcg gggctgggga cgacctcgct cgccccaggc
1381 tgccaggcgg ctgggggtga aggcatttcc ctaaggaaat gcgtagggag gcagagc
配列番号５：ハツカネズミＶＳＩＧ８核酸配列
1 gactcattgc atcttcctgc caccccgggc agtgtctggg ccctccgctc cccctccctc
61 cacctgcccc ttccacccac caccaccagc ccactggagc ccagctcagg cggaggaaag
121 accaagccta gagacatggg agttcgagga gcactccatc ttctacttgt gtgcctgagc
181ccagcactgt tgtctgctgt aaggatcaac ggggatggcc aggaggtcat gtacctggca
241 gaaggtgaca atgtgaggct aggctgtccc tacctcctgg atcctgagga tttgggtacc
301 aacagtctgg acattgagtg gatgcaagtc aactcagagc cctcacacag ggagaatgtt
361 tttcttactt atcaagacaa gaggataggt catggcaacc tcccccatct gcagcagagg
421 gtccgctttg cagcctcaga ccccagccag tacgatgcct ccatcaacct catgaacctg
481 caggtatctg acacagcaac ctatgagtgc cgggtgaaga agaccaccat ggccaccagg
541 aaggtcattg tcactgtcca agcacgtcct gcggtgccca tgtgttggac ggaaggccac
601 atgtcaaagg gcaacgatgt ggtgctgaag tgctttgcca acggaggctc tcagcccctc
661 tcctacaagt gggccaagat cagtgggcac agtcacccct accgagctgg ggcttaccac
721 tcacagcaca gcttccactc tgagctttct taccaagagt cattccacag caccatcaac
781 caaggcctgg gcaacggaga cctgctgttg aagggcatca acgcagacga cgatgggctg
841 tatcagtgca cagtggccaa ccatgtgggc tacagcgtct gtgtggtaga ggtgaaagtc
901 tcagactccc agcgagtagg catgatcgtt ggagcagtgc tgggctcttt gctcatgctg
961 gcctgcctgg cactaggcat ctgggggctc atctgctgct gctgcggagg cggcggggcc
1021 ggtggtgccc gaggtgcctt cggctacggg gtcggcggcg gggtcggcgg aggggcctgc
1081 ggcgacttgg ctagtgagat cagagtggac gccgaggcgc ccgggtgtaa ggccagcggg
1141 cgcggcagcc gcgtcaccca cctcctgggg tacccggcgc agaacgtcag ccgctccagg
1201 cgccgcaagt acgcgcctcc gccctgcggc ggccccgagc acgtggccct agtgccccgc
1261 accgcctccg cctcctgcga agcgggtccc tcccccgtct acatcaaggt caagagcgcg
1321 gagccggccg actgcgccga ctgtgcccag gtcgagcagc gctcgtgcaa ggacggcctc
1381 ttagtgtgag cgcacagcac cgggctgcgc cccggctggg aggtggttcg ggggctctct
1441 gcccgcagct ggggacaggt tcgggccagc agacctggct ctctcattgg ccacctagcg
1501 gtggtaagga aatttccctc tgagaagcca agccgggcag accctcctcc cctgtagtgg
1561 gaggagaggc gggggagaca gaaaacagtt cagagctctc cctcacccct ggtttccagg
1621 gagaggaagg gagaggagag ctgtcggtat cccagaaccg cagaggtaca acccagatgt
1681 ccccagccaa ggcgagggcc ccccagccct gggtaggtgg atgtcagggc tgaattgctc
1741 tgtgtgtgag atctgagctc caaggcaaca gtgttagcac aataaagaaa cttaaagact
1801 gg
配列番号６：ヒトＶＩＳＴＡ（代替名：Ｂ７−Ｈ５；Ｂ７Ｈ５；ＤＤ１α；ＧＩ２４；ＰＰ２１３５；ＳＩＳＰ１）アミノ酸配列
1 mgvptaleag swrwgsllfa lflaaslgpv aafkvatpys lyvcpegqnv tltcrllgpv
61 dkghdvtfyk twyrssrgev qtcserrpir nltfqdlhlh hgghqaants hdlaqrhgle
121 sasdhhgnfs itmrnltlld sglycclvve irhhhsehrv hgamelqvqt gkdapsncvv
181 ypsssqdsen itaaalatga civgilclpl illlvykqrq aasnrraqel vrmdsniqgi
241 enpgfeaspp aqgipeakvr hplsyvaqrq psesgrhlls epstplsppg pgdvffpsld
301 pvpdspnfev i
配列番号７：ハツカネズミＶＩＳＴＡアミノ酸配列
1 mgvpavpeas sprwgtllla iflaasrglv aafkvttpys lyvcpegqna tltcrilgpv
61 skghdvtiyk twylssrgev qmckehrpir nftlqhlqhh gshlkanash dqpqkhglel
121 asdhhgnfsi tlrnvtprds glycclviel knhhpeqrfy gsmelqvqag kgsgstcmas
181 neqdsdsita aalatgaciv gilclplill lvykqrqvas hrraqelvrm dsntqgienp
241 gfettppfqg mpeaktrppl syvaqrqpse sgryllsdps tplsppgpgd vffpsldpvp
301 dspnseai
配列番号８：ハツカネズミＶＩＳＴＡアミノ酸配列
1 mgvpavpeas sprwgtllla iflaasrglv aafkvttpys lyvcpegqna tltcrilgpv
61 skghdvtiyk twylssrgev qmckehrpir nftlqhlqhh gshlkanash dqpqkhglel
121 asdhhgnfsi tlrnvtprds glycclviel knhhpeqrfy gsmelqvqag kgsgstcmas
181 neqdsdsita aalatgaciv gilclplill lvykqrqvas hrraqelvrm dssntqgien
241 pgfettppfq gmpeaktrpp lsyvaqrqps esgryllsdp stplsppgpg dvffpsldpv
301 pdspnseai
配列番号９：ヒトＶＩＳＴＡ（代替名：Ｂ７−Ｈ５；Ｂ７Ｈ５；ＤＤ１α；ＧＩ２４；ＰＰ２１３５；ＳＩＳＰ１）核酸配列
1 gggggcgggt gcctggagca cggcgctggg gccgcccgca gcgctcactc gctcgcactc
61 agtcgcggga ggcttccccg cgccggccgc gtcccgcccg ctccccggca ccagaagttc
121 ctctgcgcgt ccgacggcga catgggcgtc cccacggccc tggaggccgg cagctggcgc
181 tggggatccc tgctcttcgc tctcttcctg gctgcgtccc taggtccggt ggcagccttc
241 aaggtcgcca cgccgtattc cctgtatgtc tgtcccgagg ggcagaacgt caccctcacc
301 tgcaggctct tgggccctgt ggacaaaggg cacgatgtga ccttctacaa gacgtggtac
361 cgcagctcga ggggcgaggt gcagacctgc tcagagcgcc ggcccatccg caacctcacg
421 ttccaggacc ttcacctgca ccatggaggc caccaggctg ccaacaccag ccacgacctg
481 gctcagcgcc acgggctgga gtcggcctcc gaccaccatg gcaacttctc catcaccatg
541 cgcaacctga ccctgctgga tagcggcctc tactgctgcc tggtggtgga gatcaggcac
601 caccactcgg agcacagggt ccatggtgcc atggagctgc aggtgcagac aggcaaagat
661 gcaccatcca actgtgtggt gtacccatcc tcctcccagg atagtgaaaa catcacggct
721 gcagccctgg ctacgggtgc ctgcatcgta ggaatcctct gcctccccct catcctgctc
781 ctggtctaca agcaaaggca ggcagcctcc aaccgccgtg cccaggagct ggtgcggatg
841 gacagcaaca ttcaagggat tgaaaacccc ggctttgaag cctcaccacc tgcccagggg
901 atacccgagg ccaaagtcag gcaccccctg tcctatgtgg cccagcggca gccttctgag
961 tctgggcggc atctgctttc ggagcccagc acccccctgt ctcctccagg ccccggagac
1021 gtcttcttcc catccctgga ccctgtccct gactctccaa actttgaggt catctagccc
1081 agctggggga cagtgggctg ttgtggctgg gtctggggca ggtgcatttg agccagggct
1141 ggctctgtga gtggcctcct tggcctcggc cctggttccc tccctcctgc tctgggctca
1201 gatactgtga catcccagaa gcccagcccc tcaacccctc tggatgctac atggggatgc
1261 tggacggctc agcccctgtt ccaaggattt tggggtgctg agattctccc ctagagacct
1321 gaaattcacc agctacagat gccaaatgac ttacatctta agaagtctca gaacgtccag
1381 cccttcagca gctctcgttc tgagacatga gccttgggat gtggcagcat cagtgggaca
1441 agatggacac tgggccaccc tcccaggcac cagacacagg gcacggtgga gagacttctc
1501 ccccgtggcc gccttggctc ccccgttttg cccgaggctg ctcttctgtc agacttcctc
1561 tttgtaccac agtggctctg gggccaggcc tgcctgccca ctggccatcg ccaccttccc
1621 cagctgcctc ctaccagcag tttctctgaa gatctgtcaa caggttaagt caatctgggg
1681 cttccactgc ctgcattcca gtccccagag cttggtggtc ccgaaacggg aagtacatat
1741 tggggcatgg tggcctccgt gagcaaatgg tgtcttgggc aatctgaggc caggacagat
1801 gttgccccac ccactggaga tggtgctgag ggaggtgggt ggggccttct gggaaggtga
1861 gtggagaggg gcacctgccc cccgccctcc ccatccccta ctcccactgc tcagcgcggg
1921 ccattgcaag ggtgccacac aatgtcttgt ccaccctggg acacttctga gtatgaagcg
1981 ggatgctatt aaaaactaca tggggaaaca ggtgcaaacc ctggagatgg attgtaagag
2041 ccagtttaaa tctgcactct gctgctcctc ccccaccccc accttccact ccatacaatc
2101 tgggcctggt ggagtcttcg cttcagagcc attcggccag gtgcgggtga tgttcccatc
2161 tcctgcttgt gggcatgccc tggctttgtt tttatacaca taggcaaggt gagtcctctg
2221 tggaattgtg attgaaggat tttaaagcag gggaggagag tagggggcat ctctgtacac
2281 tctgggggta aaacagggaa ggcagtgcct gagcatgggg acaggtgagg tggggctggg
2341 cagaccccct gtagcgttta gcaggatggg ggccccaggt actgtggaga gcatagtcca
2401 gcctgggcat ttgtctccta gcagcctaca ctggctctgc tgagctgggc ctgggtgctg
2461 aaagccagga tttggggcta ggcgggaaga tgttcgccca attgcttggg gggttggggg
2521 gatggaaaag gggagcacct ctaggctgcc tggcagcagt gagccctggg cctgtggcta
2581 cagccaggga accccacctg gacacatggc cctgcttcta agccccccag ttaggcccaa
2641 aggaatggtc cactgagggc ctcctgctct gcctgggctg ggccaggggc tttgaggaga
2701 gggtaaacat aggcccggag atggggctga cacctcgagt ggccagaata tgcccaaacc
2761 ccggcttctc ccttgtccct aggcagaggg gggtcccttc ttttgttccc tctggtcacc
2821 acaatgcttg atgccagctg ccataggaag agggtgctgg ctggccatgg tggcacacac
2881 ctgtcctccc agcactttgc agggctgagg tggaaggacc gcttaagccc aggtgttcaa
2941 ggctgctgtg agctgtgttc gagccactac actccagcct ggggacggag caaaactttg
3001 cctcaaaaca aattttaaaa agaaagaaag aaggaaagag ggtatgtttt tcacaattca
3061 tgggggcctg catggcagga gtggggacag gacacctgct gttcctggag tcgaaggaca
3121 agcccacagc ccagattccg gttctcccaa ctcaggaaga gcatgccctg ccctctgggg
3181 aggctggcct ggccccagcc ctcagctgct gaccttgagg cagagacaac ttctaagaat
3241 ttggctgcca gaccccaggc ctggctgctg ctgtgtggag agggaggcgg cccgcagcag
3301 aacagccacc gcacttcctc ctcagcttcc tctggtgcgg ccctgccctc tcttctctgg
3361 acccttttac aactgaacgc atctgggctt cgtggtttcc tgttttcagc gaaatttact
3421 ctgagctccc agttccatct tcatccatgg ccacaggccc tgcctacaac gcactaggga
3481 cgtccctccc tgctgctgct ggggaggggc aggctgctgg agccgccctc tgagttgccc
3541 gggatggtag tgcctctgat gccagccctg gtggctgtgg gctggggtgc atgggagagc
3601 tgggtgcgag aacatggcgc ctccaggggg cgggaggagc actaggggct ggggcaggag
3661 gctcctggag cgctggattc gtggcacagt ctgaggccct gagagggaaa tccatgcttt
3721 taagaactaa ttcattgtta ggagatcaat caggaattag gggccatctt acctatctcc
3781 tgacattcac agtttaatag agacttcctg cctttattcc ctcccaggga gaggctgaag
3841 gaatggaatt gaaagcacca tttggagggt tttgctgaca cagcggggac tgctcagcac
3901 tccctaaaaa cacaccatgg aggccactgg tgactgctgg tgggcaggct ggccctgcct
3961 gggggagtcc gtggcgatgg gcgctggggt ggaggtgcag gagccccagg acctgctttt
4021 caaaagactt ctgcctgacc agagctccca ctacatgcag tggcccaggg cagaggggct
4081 gatacatggc ctttttcagg gggtgctcct cgcggggtgg acttgggagt gtgcagtggg
4141 acagggggct gcaggggtcc tgccaccacc gagcaccaac ttggcccctg gggtcctgcc
4201 tcatgaatga ggccttcccc agggctggcc tgactgtgct gggggctggg ttaacgtttt
4261 ctcagggaac cacaatgcac gaaagaggaa ctggggttgc taaccaggat gctgggaaca
4321 aaggcctctt gaagcccagc cacagcccag ctgagcatga ggcccagccc atagacggca
4381 caggccacct ggcccattcc ctgggcattc cctgctttgc attgctgctt ctcttcaccc
4441 catggaggct atgtcaccct aactatcctg gaatgtgttg agagggattc tgaatgatca
4501 atatagcttg gtgagacagt gccgagatag atagccatgt ctgccttggg cacgggagag
4561 ggaagtggca gcatgcatgc tgtttcttgg ccttttctgt tagaatactt ggtgctttcc
4621 aacacacttt cacatgtgtt gtaacttgtt tgatccaccc ccttccctga aaatcctggg
4681 aggttttatt gctgccattt aacacagagg gcaatagagg ttctgaaagg tctgtgtctt
4741 gtcaaaacaa gtaaacggtg gaactacgac taaa
//
配列番号１０：ヒトＶＩＳＴＡ（代替名：Ｂ７−Ｈ５；Ｂ７Ｈ５；ＤＤ１α；ＧＩ２４；ＰＰ２１３５；ＳＩＳＰ１）コード核酸配列
1 ctcgccgcgc tgagccgcct cgggacggag ccatgcggcg ctgggcctgg gccgcggtcg
61 tggtccccct cgggccgcag ctcgtgctcc tcgggggcgt cggggcccgg cgggaggcac
121 agaggacgca gcagcctggc cagcgcgcag atccccccaa cgccaccgcc agcgcgtcct
181 cccgcgaggg gctgcccgag gcccccaagc catcccaggc ctcaggacct gagttctccg
241 acgcccacat gacatggctg aactttgtcc ggcggccgga cgacggcgcc ttaaggaagc
301 ggtgcggaag cagggacaag aagccgcggg atctcttcgg tcccccagga cctccaggtg
361 cagaagtgac cgcggagact ctgcttcacg agtttcagga gctgctgaaa gaggccacgg
421 agcgccggtt ctcagggctt ctggacccgc tgctgcccca gggggcgggc ctgcggctgg
481 tgggcgaggc ctttcactgc cggctgcagg gtccccgccg ggtggacaag cggacgctgg
541 tggagctgca tggtttccag gctcctgctg cccaaggtgc cttcctgcga ggctccggtc
601 tgagcctggc ctcgggtcgg ttcacggccc ccgtgtccgg catcttccag ttctctgcca
661 gtctgcacgt ggaccacagt gagctgcagg gcaaggcccg gctgcgggcc cgggacgtgg
721 tgtgtgttct catctgtatt gagtccctgt gccagcgcca cacgtgcctg gaggccgtct
781 caggcctgga gagcaacagc agggtcttca cgctacaggt gcaggggctg ctgcagctgc
841 aggctggaca gtacgcttct gtgtttgtgg acaatggctc cggggccgtc ctcaccatcc
901 aggcgggctc cagcttctcc gggctgctcc tgggcacgtg agggcgccca ggggggctgg
961 cgaggagctg ccgccggatc ccggggaccc tcctactgat gcccgtggtc accacaataa
1021 agagccctcc accctcaaaa aaaaaaaaaa aaaaa
//
配列番号１１：ハツカネズミＶＩＳＴＡコード核酸配列
1 ctcgccgcgc tgagccgcct cgggacggag ccatgcggcg ctgggcctgg gccgcggtcg
61 tggtccccct cgggccgcag ctcgtgctcc tcgggggcgt cggggcccgg cgggaggcac
121 agaggacgca gcagcctggc cagcgcgcag atccccccaa cgccaccgcc agcgcgtcct
181 cccgcgaggg gctgcccgag gcccccaagc catcccaggc ctcaggacct gagttctccg
241 acgcccacat gacatggctg aactttgtcc ggcggccgga cgacggcgcc ttaaggaagc
301 ggtgcggaag cagggacaag aagccgcggg atctcttcgg tcccccagga cctccaggtg
361 cagaagtgac cgcggagact ctgcttcacg agtttcagga gctgctgaaa gaggccacgg
421 agcgccggtt ctcagggctt ctggacccgc tgctgcccca gggggcgggc ctgcggctgg
481 tgggcgaggc ctttcactgc cggctgcagg gtccccgccg ggtggacaag cggacgctgg
541 tggagctgca tggtttccag gctcctgctg cccaaggtgc cttcctgcga ggctccggtc
601 tgagcctggc ctcgggtcgg ttcacggccc ccgtgtccgg catcttccag ttctctgcca
661 gtctgcacgt ggaccacagt gagctgcagg gcaaggcccg gctgcgggcc cgggacgtgg
721 tgtgtgttct catctgtatt gagtccctgt gccagcgcca cacgtgcctg gaggccgtct
781 caggcctgga gagcaacagc agggtcttca cgctacaggt gcaggggctg ctgcagctgc
841 aggctggaca gtacgcttct gtgtttgtgg acaatggctc cggggccgtc ctcaccatcc
901 aggcgggctc cagcttctcc gggctgctcc tgggcacgtg agggcgccca ggggggctgg
961 cgaggagctg ccgccggatc ccggggaccc tcctactgat gcccgtggtc accacaataa
1021 agagccctcc accctcaaaa aaaaaaaaaa aaaaa
//
【図１】
2018505911.tif 000004
【図２】
2018505911.tif 000005
【図３】
2018505911.tif 000006
【図４】
2018505911.tif 000007
【図５】
2018505911.tif 000008
【図６】
2018505911.tif 000009
【図７】
2018505911.tif 000010
【図８】
2018505911.tif 000011
【図９】
2018505911.tif 000012
【図１０】
2018505911.tif 000013
【図１１】
2018505911.tif 000014
【図１２】
2018505911.tif 000015
【図１３】
2018505911.tif 000016
【図１４】
2018505911.tif 000017
【図１５】
2018505911.tif 000018
【図１６−１】
2018505911.tif 000019
【図１６−２】
2018505911.tif 000020
【図１６−３】
2018505911.tif 000021
【図１６−４】
2018505911.tif 000022
【図１６−５】
2018505911.tif 000023
【図１６−６】
2018505911.tif 000024
【図１６−７】
2018505911.tif 000025
【図１６−８】
2018505911.tif 000026
【図１６−９】
2018505911.tif 000027
【図１６−１０】
2018505911.tif 000028
【図１６−１１】
2018505911.tif 000029
【配列表】
2018505911000001.app
【国際調査報告】
2018505911.tif 000030
2018505911.tif 000031