(57)【要約】本発明は、医学療法、一般に、対象のＢ型肝炎ウイルスを阻害する方法に有用な、化合物および組成物を包含する。化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し、各鎖は１９〜２９モノマー長であり、モノマーはＵＮＡモノマーおよび核酸モノマーを含み、化合物はＨＢＶゲノムの配列を標的とする。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一の鎖および第二の鎖を含む化合物であって、各鎖が１９〜２９モノマー長であり、モノマーがＵＮＡモノマーおよび核酸モノマーを含み、化合物が、連続する１４〜２９モノマー長の２本鎖領域を有し、第一の鎖がＲＮＡ干渉におけるパッセンジャー鎖であり、第二の鎖がＲＮＡ干渉におけるガイド鎖であり、化合物が、ＨＢＶゲノムの発現の阻害を標的とする塩基の配列を含む、化合物。
【請求項２】
１〜７個のＵＮＡモノマーを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
第一の鎖の１末端（非ＵＮＡにおける５’末端）にＵＮＡモノマー、第一の鎖の３末端（非ＵＮＡにおける３’末端）にＵＮＡモノマー、および第二の鎖の５’末端から２番目の位置にＵＮＡモノマーを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
第二の鎖の５’末端から２〜８番目の位置のうち、任意の１つまたはそれ以上の位置に、ＵＮＡモノマーを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
塩基配列が、以下のセンス、アンチセンスまたはセンス−アンチセンス対、およびそれらの置換体から選択される、請求項１に記載の化合物：
【表１】
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【請求項６】
以下の対の１つを含む、請求項１に記載の化合物：
配列番号９８７および９８８；
配列番号９９３および９９４；
配列番号９９９および１０００；
配列番号１００５および１００６；
配列番号１００９および１０１０；
配列番号１０１１および１０１２；
配列番号１０１３および１０１４；
配列番号１０１５および１０１６；
配列番号９６９および９７０；
配列番号９７１および９７２；
配列番号９７３および９７４；
配列番号９７７および９７８；
配列番号９８１および９８２；
配列番号９８９および９９０；
配列番号９９７および９９８；および
配列番号９９９および１０００。
【請求項７】
以下の対の１つを含む、請求項１に記載の化合物：
配列番号１１４５および１１４６；
配列番号１１７５および１１７６；
配列番号１１４９および１１５０；
配列番号１１６３および１１６４；
配列番号１１６５および１１６６；
配列番号１１６７および１１６８；
配列番号１１６９および１１７０；
配列番号１１５３および１１５４；
配列番号１１５５および１１５６；
配列番号１１５７および１１５８；
配列番号１１６０および１１６１；
配列番号１１５９および１１６０；
配列番号１１４７および１１４８；および
配列番号１１５１および１１５２。
【請求項８】
ＵＮＡモノマー、天然ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド、または化学修飾されたヌクレオチド、およびそれらの組合せのうち１つ以上を含む３’オーバーハングを有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
デオキシチミジンヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、逆位脱塩基モノマー、逆位チミジンモノマー、Ｌ−チミジンモノマー、またはグリセリルヌクレオチドのうち１つまたはそれ以上を含む３’オーバーハングを有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
１以上の核酸モノマーが、非天然ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド、または化学修飾されたヌクレオチドである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
各核酸モノマーが、２’−Ｏ−メチル基を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
第一の鎖に、１〜８個の、２’−Ｏ−メチル基で修飾された核酸モノマーを含み、かつ第二の鎖に、１〜１１個の、２’−Ｏ−メチル基で修飾された核酸モノマーを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
１以上の２’−メトキシエトキシヌクレオチドを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
１以上の２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチドを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
フッ素を含まない、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
各鎖の各末端における３つのモノマーのうち、１つまたはそれ以上が、ホスホロチオエート結合、キラルなホスホロチオエート結合、またはホスホロジチオエート結合によって連結している、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
第一の鎖の５’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、第一の鎖の３’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、第一の鎖の３’末端から２番目および３番目のモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、および第二の鎖の３’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
輸送部分とコンジュゲートしている、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
糖タンパク質受容体と結合している輸送部分とコンジュゲートしている、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
化合物が、糖タンパク質受容体と結合している輸送部分とコンジュゲートしており、輸送部分が、ガラクトース、ガラクトサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミンを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
ＧａｌＮＡｃ輸送部分とコンジュゲートしている、請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
コレステロール輸送部分とコンジュゲートしている、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
化合物の末端において、輸送部分とコンジュゲートしており、コンジュゲートしていない化合物と比較して、肝臓内への取り込みが増大している、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
脂質ナノ粒子と結合した、請求項１〜２３のいずれかに記載の１以上の化合物を含む、脂質ナノ粒子−オリゴマー化合物。
【請求項２５】
請求項１〜２３のいずれかに記載の１以上の化合物および薬学的に許容し得る担体を含む、組成物。
【請求項２６】
担体が、脂質ナノ粒子またはリポソームを含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
遺伝子Ｘ、Ｃ、ＰおよびＳのＨＢＶ転写物の保存領域を標的とする、請求項１に記載の第一の化合物、ＨＢｓＡｇの阻害を標的とする、請求項１に記載の第二の化合物、遺伝子Ｘ、ＣおよびＳのＨＢＶ転写物の保存領域を標的とする、請求項１に記載の第三の化合物、および薬学的に許容し得る担体を含む、組成物。
【請求項２８】
担体が、脂質ナノ粒子またはリポソームを含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
１５２５〜１５８２、３７４〜４１４、１７７６〜１７８２、２４４〜２５６および１８１８〜１８６６の任意の位置における基準位置を有する、１以上の化合物を含む、組成物。
【請求項３０】
１５２５〜１５８２の基準位置を有する化合物、３７４〜４１４の基準位置を有する化合物、および１７７６〜１７８２の基準位置を有する化合物を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
３分子の化合物を含み、３分子が以下から選択される、組成物：
第一の化合物が配列番号８６７および９０８を含み、第二の化合物が配列番号８８７および９２８を含み、第三の化合物が配列番号８７５および９１６を含む；
第一の化合物が配列番号８８９および９４０を含み、第二の化合物が配列番号８８７および９２８を含み、第三の化合物が配列番号８７５および９１６を含む；
第一の化合物が配列番号８６５および９０６を含み、第二の化合物が配列番号８８７および９２８を含み、第三の化合物が配列番号８７５および９１６を含む；
第一の化合物が配列番号８６９および９１０を含み、第二の化合物が配列番号８８７および９２８を含み、第三の化合物が配列番号８７５および９１６を含む；
第一の化合物が配列番号８６７および９０８を含み、第二の化合物が配列番号８８５および９２６を含み、第三の化合物が配列番号８７５および９１６を含む；および、
第一の化合物が配列番号８６７および９０８を含み、第二の化合物が配列番号８８７および９２８を含み、第三の化合物が配列番号８７７および９１８を含む。
【請求項３２】
ヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡであって、ＨＢＶを標的とし、以下のセンス、アンチセンス、またはセンス−アンチセンス対およびそれらの置換体から選択される配列を有する、ｓｉＲＮＡ：
【表２】
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【請求項３３】
それを必要とする対象において、ＨＢＶ感染症に関連する疾患または症状を予防、改善または処置する方法であって、対象に、有効量の請求項２５に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３４】
組成物の投与が、対象におけるＨＢＶウイルスの力価を減少させる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
対象が、Ｂ型肝炎ウイルス感染症に関連する疾患と診断されている、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
対象が、肝疾患と診断されている、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
それを必要とする対象において、Ｂ型肝炎ウイルスの複製、成熟、増殖または感染を阻害する方法であって、対象に、有効量の請求項２５に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項３８】
組成物の投与が、対象におけるＨＢｓＡｇの血清濃度を減少させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
組成物の投与が、対象におけるＨＢｓＡｇの血清濃度を２−ｌｏｇ１０倍減少させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
組成物の投与が、対象におけるＨＢｓＡｇの血清濃度を、少なくとも７日間、２−ｌｏｇ１０倍減少させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
組成物の投与が、対象におけるＨＢｅＡｇを減少させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
組成物の投与が、対象におけるＨＢＶ ＤＮＡを減少させる、請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
それを必要とする対象において、Ｂ型肝炎ウイルスポリペプチドの発現を阻害する方法であって、対象に、請求項２５に記載の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４４】
それを必要とする対象におけるＢ型肝炎感染症に関連する疾患または症状の予防、改善または処置のための、請求項２５に記載の組成物の使用。
【請求項４５】
医学療法に使用するための、請求項２５に記載の組成物。
【請求項４６】
ヒトまたは動物の身体の処置に使用するための、請求項２５に記載の組成物。
【請求項４７】
それを必要とする対象におけるＢ型肝炎感染症に関連する疾患または症状を予防、改善または処置するための薬物の調製または製造における、請求項２５に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遺伝子サイレンシングにおける、オリゴマーで構成されるバイオ医薬品および治療学の分野に関する。特に、本発明は、Ｂ型肝炎ウイルスに対して作られた治療用オリゴマーの、構造、組成物および方法に関する。
【０００２】
配列表
本願は、ARC1410WO_SL.txtという名前のＡＳＣＩＩファイルとして、電子的に提出された配列表を含む。
【背景技術】
【０００３】
Ｂ型肝炎は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の感染に起因する肝疾患である。その重症度は、数週間続く軽度の疾患から、重篤な、生涯にわたる疾患までになり得る。Ｂ型肝炎は、急性または慢性のいずれかであり得る。急性Ｂ型肝炎ウイルス感染症は、慢性感染症をもたらし得る、短期間の疾患である。慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症は、長期間の健康障害（肝硬変、肝がんおよび死など）をもたらし得る、長期間の疾患である。
【０００４】
Ｂ型肝炎は通常、感染した人間との性的接触による体液の伝達を通して、または薬物注射の針の共有を通して、伝播する。また、感染した母親から彼女の乳児に、出生時に感染し得る。流行地域において、Ｂ型肝炎は、出生時において母親から子供に、または、感染した血液への曝露によって、特に生後５年間における感染した子供から未感染の子供に、最も良く感染する。
【０００５】
最新のＷＨＯの見積もりにおいて、２億４千万人がＢ型肝炎に慢性的に感染（Ｂ型肝炎表面抗原に、少なくとも６ヶ月間陽性であると定義される）している。約７８０，０００人が毎年Ｂ型肝炎感染症で死亡している。
【０００６】
急性Ｂ型肝炎に特異的な処置はない。慢性Ｂ型肝炎感染症は、経口の抗ウイルス薬を含む薬剤で処置できる。ＷＨＯは、テノホビルまたはエンテカビルなどの経口処置の使用を推奨している。ほとんどの人間において、処置はウイルスの複製を抑制するが、Ｂ型肝炎感染症を治療しない。肝がんは急速に進行し、処置の選択肢は制限される。外科手術、化学療法または肝移植は、最大で数年間延命できる。
【０００７】
Ｂ型肝炎表面抗原ＨＢｓＡｇを検出することで、Ｂ型肝炎感染症の検査診断ができる。急性Ｂ型肝炎ウイルス感染症は、ＨＢｓＡｇおよびコア抗原ＨＢｃＡｇに対する免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）抗体の存在によって、特徴付けられる。感染の初期段階において、患者はまた、Ｂ型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）に血清陽性である。ＨＢｅＡｇは通常、ウイルスの高レベルの複製のマーカーである。ＨＢｅＡｇの存在は、感染した個体の血液および体液が高伝染性であることを示す。慢性感染症は、ＨＢｅＡｇの併発を伴う、または伴わない、少なくとも６ヶ月間のＨＢｓＡｇの持続によって、特徴付けられる。ＨＢｓＡｇの持続は、慢性肝疾患および後年の肝がんの発生におけるリスクの主要なマーカーである。
【０００８】
ＨＢＶは、ヘパドナウイルスファミリーのメンバーである。肝細胞に感染できるウイルス粒子は、直径３０〜４２ｎｍであり、外側のエンベロープおよび正二十面体のヌクレオカプシドコアを有する。ヌクレオカプシドは、ウイルスＤＮＡおよび、逆転写酵素活性を有し得るＤＮＡポリメラーゼを封入する。外側のエンベロープは、ウイルス結合に関与し、細胞内に侵入し得るタンパク質を含む。
【０００９】
一般的に、ＨＢＶは４種の同定された遺伝子Ｃ、Ｐ、ＳおよびＸを有する。遺伝子Ｃはコアタンパク質ＨＢｃＡｇをコードする。細胞外タンパク質ＨＢｅＡｇは、プレコアタンパク質からプロセシングされる。ＤＮＡポリメラーゼは、遺伝子Ｐにコードされている。遺伝子Ｓは、小型の表面抗原ＨＢｓＡｇをコードし、これは３種のポリペプチド表面タンパク質（大型、中型および小型）のうちの１つである。遺伝子Ｘは、肝がんの発生に関連し得る。
【００１０】
ＨＢＶはパラレトロウイルスであり、これは複製過程で逆転写を用いる、非レトロウイルスである。このウイルスは、細胞に侵入し、宿主のプロセスで産生したＲＮＡを用いて増殖できる。ウイルスゲノムＤＮＡは、細胞核に導入され、ウイルスポリメラーゼで作用し、宿主のＲＮＡポリメラーゼによって、４種のウイルスｍＲＮＡの転写を与え得る。大型のウイルスｍＲＮＡを用いて、逆転写によって新たなゲノムのコピーを作製し、コアタンパク質およびウイルスＤＮＡポリメラーゼを作製する。ウイルスｍＲＮＡはさらにプロセシングされ、新たなウイルス粒子を形成する。
【００１１】
ＨＢＶを、エンベロープタンパク質によって提示されるエピトープに基づく４種の主要な血清型（ａｄｒ、ａｄｗ、ａｙｒ、ａｙｗ）で記述できる。ＨＢＶは、８種の遺伝子型（Ａ〜Ｈ）およびサブ遺伝子型が同定されている。この遺伝子型は、異なる地理的分布を有し、ウイルスの進化および伝達を追跡するのに用いられる。
【００１２】
Ｂ型肝炎の処置における組成物および方法が必要とされている。
【００１３】
Ｂ型肝炎感染症を改善または処置する、新規な手法および組成物について、緊急の必要性がある。
【発明の概要】
【００１４】
本発明は、Ｂ型肝炎感染症に対する治療薬として用いる、新規な分子を提供する。本発明の分子を、Ｂ型肝炎感染症の改善、予防または処置する組成物の医薬品有効成分として、使用できる。
【００１５】
Ｂ型肝炎感染症を処置する本発明の分子は、Ｂ型肝炎ウイルスの任意の複製、成熟、増殖または感染の様式に対して作用し得る。Ｂ型肝炎ウイルスが、１以上の任意のこのプロセスを実行するのを妨げることによって、本発明の分子は、Ｂ型肝炎感染症を改善または処置するのに使用され得る。
【００１６】
本発明の実施態様は、ＨＢＶに対する有効性の増強を有利に与える、１以上の性質を有する分子、およびＢ型肝炎感染症に対する治療薬における組成物または製剤を提供し得、これらは臨床薬を提供し得る。本発明の分子の性質は、それらの構造に起因し、その全体の分子構造は、全体として、著しい利益および性質を与え得る。
【００１７】
本発明の有効な薬剤は、ＨＢＶゲノムの発現を阻害できる、オリゴマー分子を含む。本発明のオリゴマーは、ＨＢＶゲノムの発現をサイレンシングすることによって、対象のＨＢＶ感染症に対する強力な作用を与え得る。
【００１８】
いくつかの実施態様において、広範な新規分子を提供し、この分子は、１以上のリンカー基を包含し得る。リンカー基を、この分子内の鎖に結合させてもよい。各リンカー基を、核酸塩基と結合させてもよい。
【００１９】
いくつかの態様において、リンカー基はモノマーであり得る。モノマーが結合し、鎖状分子を形成してもよい。本発明の鎖状分子において、リンカー基のモノマーを、鎖内の任意の点において結合させてもよい。
【００２０】
ある態様において、リンカー基のモノマーを、鎖の末端付近に存在するように、本発明の鎖状分子と結合させてもよい。鎖状分子の末端を、リンカー基のモノマーによって形成してもよい。
【００２１】
さらなる態様において、鎖状分子の各リンカー基を、核酸塩基と結合させてもよい。鎖状分子内の核酸塩基の存在は、核酸塩基配列を提供し得る。
【００２２】
ある実施態様において、本発明は、リンカー基のモノマーと、特定の天然ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド、または化学修飾されたヌクレオチドとの、新規の組合せを包含する鎖状構造を有する、オリゴマー分子を提供する。
【００２３】
本発明のオリゴマー分子は、ＨＢＶゲノムの構成要素を標的とする、核酸塩基配列を提示し得る。
【００２４】
さらなる態様において、本発明は、Ｂ型肝炎感染症によって生じる疾患の予防、改善または処置における治療法を提供する。本発明の有効な化合物または分子を、Ｂ型肝炎ウイルスによって生じるウイルス感染症の予防または処置に用いてもよい。
【００２５】
本発明は、リンカー基のモノマーを包含するオリゴマー薬剤における、構造、方法および組成物を提供する。本発明のオリゴマー分子を、ＨＢＶを標的とする遺伝子サイレンシングの治療法の製剤において、有効な薬剤として用いてもよい。
【００２６】
本発明の実施態様は以下を含む：
【００２７】
第一の鎖および第二の鎖を含む化合物であって、各鎖は１９〜２９モノマー長であり、モノマーはＵＮＡモノマーおよび核酸モノマーを含み、化合物は１４〜２９個の連続するモノマー長の２本鎖領域を有し、第一の鎖はＲＮＡ干渉におけるパッセンジャー鎖であり、第二の鎖はＲＮＡ干渉におけるガイド鎖であり、化合物が、ＨＢＶゲノムの発現の阻害を標的とする塩基配列を含む、化合物。この化合物は、１〜７個のＵＮＡモノマーを含んでもよい。
【００２８】
いくつかの実施態様において、化合物は、第一の鎖の１末端（非ＵＮＡにおける５’末端）にＵＮＡモノマー、第一の鎖の３末端（非ＵＮＡにおける３’末端）にＵＮＡモノマー、および第二の鎖の５’末端から２番目の位置にＵＮＡモノマーを含んでもよい。化合物は、第二の鎖の５’末端から２〜８番目の、任意の１以上の位置において、ＵＮＡモノマーを含んでもよい。
【００２９】
ある実施態様において、化合物は、ＵＮＡモノマー、天然ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド、または化学修飾されたヌクレオチド、またはそれらの組合せのうち１つまたはそれ以上を伴う３’オーバーハングを有してもよい。３’オーバーハングは、デオキシチミジンヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、逆方向脱塩基モノマー、逆方向チミジンモノマー、Ｌ−チミジンモノマー、またはグリセリルヌクレオチドのうち１つまたはそれ以上を有してもよい。
【００３０】
いくつかの態様において、化合物は、非天然ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドまたは化学修飾されたヌクレオチドである、１以上の核酸モノマーを有してもよい。化合物は、ホスホロチオエート、キラルなホスホロチオエートまたはホスホロジチオエート結合によって、連結した１以上のモノマーを有してもよい。
【００３１】
さらなる態様において、化合物を、輸送部分（例えば、糖タンパク質受容体、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ＧａｌＮＡｃ基と結合する部分またはコレステロール輸送部分など）とコンジュゲートしてもよい。化合物を、輸送部分とコンジュゲートし、コンジュゲートしていない化合物と比較して、肝臓内への取り込みを増大させてもよい。
【００３２】
本発明は、脂質ナノ粒子−オリゴマー化合物を含み、ここで１以上の化合物が脂質ナノ粒子に結合している。
【００３３】
本開示の組成物は、１以上の化合物および薬学的に許容し得る担体を含んでもよい。担体は、脂質ナノ粒子またはリポソームであり得る。
【００３４】
本開示の組成物は、遺伝子Ｘ、Ｃ、ＰおよびＳのＨＢＶ転写物の保存領域を標的とする第一の化合物、ＨＢｓＡｇの阻害を標的とする第二の化合物、遺伝子Ｘ、ＣおよびＳのＨＢＶ転写物の保存領域を標的とする第三の化合物、および薬学的に許容し得る担体を含み得る。
【００３５】
本発明の実施態様は、１５２５〜１５８２、３７４〜４１４、１７７６〜１７８２、２４４〜２５６および１８１８〜１８６６の任意の位置からの基準位置を有する、１以上の化合物を含む組成物を含む。ある実施態様において、組成物は、１５２５〜１５８２の基準位置を有する化合物、３７４〜４１４の基準位置を有する化合物、および、１７７６〜１７８２の基準位置を有する化合物を含み得る。
【００３６】
本発明の実施態様はさらに、対象に有効量の上記組成物を投与することによって、それを必要とする対象において、ＨＢＶ感染症に関連する疾患および症状を予防、改善または処置する方法を想定する。組成物の投与は、対象におけるＨＢＶウイルスの力価を減少し得る。対象は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症に関連する疾患（例えば、肝疾患）と診断されていてもよい。
【００３７】
本発明は、対象に有効量の上記組成物を投与することによって、それを必要とする対象において、Ｂ型肝炎ウイルスの複製、成熟、増殖または感染を阻害する方法を含む。組成物は、対象におけるＨＢｓＡｇの血清濃度を減少させ得る。いくつかの実施態様において、組成物の投与は、対象におけるＨＢｓＡｇの血清濃度を、２−ｌｏｇ１０倍または少なくとも７日間、２−ｌｏｇ１０倍減少させ得る。ある実施態様において、組成物の投与は、対象のＨＢｅＡｇ、または対象のＨＢＶ ＤＮＡを減少させ得る。
【００３８】
本発明はまた、対象に上記組成物を投与することによって、それを必要とする対象において、Ｂ型肝炎ウイルスポリヌクレオチドの発現を阻害する方法および、それを必要とする対象におけるＢ型肝炎感染症に関連する疾患または症状の予防、改善または処置における上記組成物の使用を想定する。
【００３９】
いくつかの態様において、本開示は、医学療法に使用する、またはヒトもしくは動物の身体の処置に使用する、組成物を含む。ある態様において、本発明は、それを必要とする対象において、Ｂ型肝炎感染症に関連する疾患または症状を予防、改善または処置する薬物の調製または製造における、組成物の使用を含む。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、基準ゲノムにおけるＨＢＶタンパク質コード領域および選択された転写物のマップを示す。最上部を、ヌクレオチド位置１／３２２１と指定する。さらなる指定を以下に示す：ｐｒｅ−Ｓ１、大型ＨＢｓＡｇ；ｐｒｅ−Ｓ２、中型ＨＢｓＡｇ；Ｓ、ＨＢｓＡｇ；Ｐ、ポリメラーゼ；Ｘ、ＨＢｘタンパク質；ｐｒｅ−Ｃ、プレコア／ＨＢｅＡｇ；Ｃ、ＨＢコアＡｇ。ｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２／Ｓをコードする、２．４ｋｂ、２．１ｋｂおよび０．７ｋｂの転写物ならびにＸタンパク質をコードする転写物を示す。プレコア／ＨＢｅＡｇタンパク質は、約１７００の位置から始まる、長い、３．５ｋｂの転写物（示していない）から産生するが、コアタンパク質、ポリメラーゼタンパク質およびウイルス複製の鋳型として用いるプレゲノムＲＮＡは、約２００ｎｔのより短い転写物から産生する。あるＵＮＡオリゴマー（ＵＮＡオリゴマー１、ＵＮＡオリゴマー２およびＵＮＡオリゴマー３と呼ぶ）における基準位置の範囲を示す。
【００４１】
【図２】図２は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボでのＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤１および２に含まれ、漸増用量を用いた。ＵＮＡオリゴマーを、脂質ナノ粒子中に製剤し、ヒト肝細胞を（７０％）含む、ＨＢＶ感染したＰｈｏｅｎｉｘ Ｂｉｏ（ＰＸＢ）マウスに静脈内注射した。ＵＮＡオリゴマー１５７６およびＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１５７６、３８０、１７７７）での処置は共に、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【００４２】
【図３】図３は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおける、インビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７７）での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。本研究では漸増用量を用い、マウスに、４日毎に４０日目まで投与し、ウイルスの終点を、４日毎に４４日目までモニターした。
【００４３】
【図４】図４は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７７）での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。本研究では漸増用量を用い、マウスに、４日毎に４０日目まで投与し、ウイルスの終点を、４日毎に４４日目までモニターした。
【００４４】
【図５】図５は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７７）での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。本研究では漸増用量を用い、マウスに、４日毎に４０日目まで投与し、ウイルスの終点を、４日毎に４４日目までモニターした。
【００４５】
【図６】図６は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー１７７７、３８０および１５７８での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【００４６】
【図７】図７は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー１７７７、３８０および１５７８での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【００４７】
【図８】図８は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー１７７７、３８０および１５７８での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【００４８】
【図９】図９は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１５７８、３８０、１７７７）での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。
【００４９】
【図１０】図１０は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１５７８、３８０、１７７７）での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。
【００５０】
【図１１】図１１は、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１５７８、３８０、１７７７）での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。
【００５１】
【図１２】図１２は、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボでのＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。一般的に、ＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルは、ＨＢＶ感染症の研究において頑強なモデルである。ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に製剤し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。本研究では漸増用量を用い、血清ウイルスの終点を、処置の１５日前および処置の少なくとも２２日後にモニターした。各ＵＮＡオリゴマー３８０、１７７７および１５７６での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【００５２】
【図１３】図１３は、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に製剤し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。各ＵＮＡオリゴマー３８０、１７７７および１５７６ならびに同化合物のＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１５７６、３８０、１７７７）での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。この直接比較は、３分子組成物が、驚くべきことに、個々のオリゴマーと比較して、効果の持続時間中、常に効力が増大していたことを示す。
【００５３】
【図１４】図１４は、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に製剤し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。各ＵＮＡオリゴマー３８０、１７７７および１５７６での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【００５４】
【図１５】図１５は、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に製剤し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。本研究では漸増用量計画を用い、マウスを０日目に３ｍｇ／ｋｇ、４日目に５ｍｇ／ｍｌ、８日目に１０ｍｇ／ｍｌで処置し、血清ウイルスの終点を、処置後、１２日目までモニターした。ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７、３８０、１５７８）での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。
【００５５】
【図１６】図１６は、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に製剤し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。各ＵＮＡオリゴマー１５７８および１５７５での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【００５６】
【図１７】図１７は、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に製剤し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。各ＵＮＡオリゴマー１５７８および１５７５での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【００５７】
【図１８】図１８は、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察された、ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を示す。ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に製剤し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。各ＵＮＡオリゴマー１５７８および１５７５での処置は、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
本発明は、Ｂ型肝炎感染症に対する治療学として使用される、様々な新規な薬剤および組成物を提供する。本発明の分子を、Ｂ型肝炎感染症の改善、予防または処置における組成物の医薬品有効成分として使用してもよい。
【００５９】
本発明のガレヌス(galenic)分子は、Ｂ型肝炎ウイルスがその１以上のプロセスを実行するのを妨げることができる。本発明の分子を、Ｂ型肝炎感染症の改善または処置に使用してもよく、Ｂ型肝炎ウイルスの複製、成熟、増殖または感染のうち、任意の様式に対して作用し得る。
【００６０】
本発明の新規な薬剤は、ＨＢＶゲノムの発現を阻害する、オリゴマー分子を含む。
【００６１】
本発明の実施態様は、ＨＢＶゲノムの全部分に攻撃することによる、対象におけるＨＢＶ感染症に対する効力の、顕著でかつ、驚くべき増強を与える。特に、本発明の薬剤および組成物は、ＨＢＶにおいて同定されている全ての遺伝子（Ｃ、Ｐ、ＳおよびＸ）を同時に阻害できる。したがって、本開示の化合物および組成物は、Ｘタンパク質およびウイルスポリメラーゼに加えて、小型の表面抗原ＨＢｓＡｇおよび細胞外タンパク質ＨＢｅＡｇを阻害できる。
【００６２】
本発明の化合物の性質は、その分子構造に起因し、その全体の分子構造が、全体として、それらの性質に基づいて、著しい利益を与え得る。本発明の実施態様は、ＨＢＶに対する有効性の増強を有利に与える、１以上の性質を有する分子、およびＢ型肝炎感染症に対する治療薬における組成物または製剤を提供し得、これらは臨床薬を提供し得る。
【００６３】
広範な新規分子を提供し、各分子は、特殊なリンカー基を包含してもよい。リンカー基を、この分子内の鎖に結合させてもよい。各リンカー基を、核酸塩基と結合させてもよい。
【００６４】
いくつかの態様において、リンカー基はモノマーであり得る。モノマーが結合し、鎖状分子を形成してもよい。本発明の鎖状分子において、リンカー基のモノマーを、鎖内の任意の点において結合させてもよい。
【００６５】
ある態様において、リンカー基のモノマーを、鎖の末端付近に存在するように、本発明の鎖状分子と結合させてもよい。鎖状分子の末端を、リンカー基のモノマーで形成してもよい。
【００６６】
本明細書において、鎖状分子はオリゴマーとも呼ばれ得る。
【００６７】
さらなる態様において、鎖状分子の各リンカー基を、核酸塩基と結合させてもよい。鎖状分子内の核酸塩基の存在は、核酸塩基配列を提供し得る。
【００６８】
ある実施態様において、本発明は、リンカー基のモノマーと、特定の天然ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド、または化学修飾されたヌクレオチドとの、新規の組合せを包含する鎖状構造を有する、オリゴマー分子を提供する。
【００６９】
本発明のオリゴマー分子は、ＨＢＶゲノムの構成要素を標的とする、核酸塩基配列を示し得る。いくつかの実施態様において、オリゴマーは、多数の公知のＨＢＶゲノム配列において、保存された、または高度に保存された、ＨＢＶゲノムの一部を標的とし得る。
【００７０】
いくつかの態様において、本発明は、ＨＢＶ核酸分子の、少なくともフラグメントと一致または相補的であり、少なくとも、細胞中に存在するそのようなフラグメントの発現を減少させる、有効なオリゴマー分子を提供する。いくつかの実施態様において、有効なオリゴマー分子は２本鎖であり得る。
【００７１】
任意の特定の理論に拘束されることを意図しないが、細胞の経路は本発明の有効なオリゴマーを用いて、ＲＮＡ干渉経路における配列特異的な制御因子になると考えられる。有効なオリゴマーは、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ複合体）と結合し得、ここでセンス鎖（パッセンジャー鎖とも呼ばれる）およびアンチセンス鎖（ガイド鎖とも呼ばれる）が巻き戻され、アンチセンス差がＲＩＳＣ複合体内において複合体を形成し得る。ガイド鎖は、標的とされる相補的な配列（例えば、ｍＲＮＡにおける標的配列）と結合し得、これは次いで切断され、標的配列を含む核酸分子の不活化をもたらし得る。結果として、標的配列を含むｍＲＮＡの発現は、減少し得る。
【００７２】
いくつかの実施態様において、オリゴマー分子を輸送部分と結合させてもよい。輸送部分の例は、糖タンパク質受容体、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ＧａｌＮＡｃ基、コレステロール、ステロール、植物ステロール、ステロイド、動物ステロール、ラノステロール、スチグマスタノール(stigmastanol)、ジヒドロラノステロール、チモステロール、チモステロール(zymostenol)、デスモステロールおよび７−デヒドロコレステロールを含む。
【００７３】
さらなる態様において、本発明は、Ｂ型肝炎感染症によって生じる疾患の予防、改善または処置における治療法を提供する。本発明の有効な化合物または分子を、Ｂ型肝炎ウイルスによって生じるウイルス感染症の予防または処置に用いてもよい。
【００７４】
本発明は、リンカー基のモノマーを包含するオリゴマー薬剤における、構造、方法および組成物を提供する。本発明のオリゴマー分子を、ＨＢＶを標的とする遺伝子サイレンシングの治療法の製剤において、有効な薬剤として用いてもよい。
【００７５】
本発明は、遺伝子発現の制御における、その活性のために、治療効果を与えるのに有用な、多様な分子を提供する。本発明の分子を、インビトロおよびインビボにおける遺伝子の制御活性またはサイレンシング活性を与えるように、構築する。
【００７６】
本発明の実施態様は、Ｂ型肝炎感染症に対する治療薬として使用する分子を提供し得る。分子を、Ｂ型肝炎感染症を改善、予防または処置する組成物における医薬品有効成分として使用してもよい。
【００７７】
ある実施態様において、有効な分子を、モノマーから構成されるオリゴマーとして構築し得る。本発明のオリゴマーの構造は、特定のヌクレオチドと共に、１以上のリンカー基のモノマーを含み得る。
【００７８】
作用様式
【００７９】
Ｂ型肝炎感染症の処置において、本発明の分子は、Ｂ型肝炎ウイルスの複製、成熟、増殖または感染のうち、任意の様式に対して、作用し得る。Ｂ型肝炎ウイルスが任意の１以上の正常なプロセスを実行するのを妨げることによって、本発明の分子を、Ｂ型肝炎感染症を改善または処置するのに使用できる。
【００８０】
本発明は、ＨＢＶゲノムの全部分を同時に調節することによって、対象のＨＢＶ感染症に対する、予測できない有利な効果を提供できる。
【００８１】
いくつかの実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマー薬剤および本開示の組成物は、各ＨＢＶ遺伝子Ｃ、Ｐ、ＳおよびＸの発現を阻害できる。
【００８２】
いくつかの態様において、本発明のＵＮＡオリゴマー薬剤および本開示の組成物は、遺伝子Ｃ、Ｐ、ＳおよびＸを含む、ＨＢＶの全ての遺伝子の発現を、同時に阻害できる。
【００８３】
特別な態様において、本開示における本発明のＵＮＡオリゴマー組成物は、ＨＢＶの複数の遺伝子（遺伝子ＰおよびＣ、ＰおよびＳ、またはＰおよびＸなど）の発現を、同時に阻害できる。
【００８４】
さらなる態様において、本開示における本発明のＵＮＡオリゴマー組成物は、ＨＢＶの複数の遺伝子（遺伝子Ｐ、ＳおよびＣ、またはＰ、ＸおよびＳ、またはＰ、ＣおよびＸなど）の発現を、同時に阻害できる。
【００８５】
ある態様において、本発明の化合物は、インビボにおいて、対象のＨＢｓＡｇのゲノム源に関係なく、小型の表面抗原ＨＢｓＡｇを阻害できる。
【００８６】
さらなる態様において、本発明の化合物および組成物は、ＨＢＶ細胞外タンパク質ＨＢｅＡｇ、Ｘタンパク質、およびＨＢＶウイルスポリメラーゼを阻害できる。
【００８７】
いくつかの態様において、本発明の治療分子は、Ｂ型肝炎ウイルスの複製サイクルの工程を予防または阻害するのに有効であり得る。
【００８８】
ＨＢＶのウイルス成分は、ヌクレオカプシド、完全または部分的に２本鎖のＤＮＡ（弛緩型環状(relaxed circular)、ｒｃＤＮＡ）、ポリメラーゼ、表面抗原、コアタンパク質、調節性Ｘタンパク質および分泌タンパク質を含み得る。
【００８９】
いくつかの実施態様において、本発明の治療分子は、ウイルス成分の、細胞結合型プロテオグリカンへの接着を予防または阻害するのに有効であり得る。
【００９０】
本発明のある実施態様は、ウイルス成分の、肝細胞受容体への結合を予防または阻害するのに有効であり得る、治療分子を提供する。
【００９１】
さらなる実施態様において、本発明の治療分子は、エンドサイトーシスまたは、ウイルス成分の細胞膜への融合による、ウイルス成分の細胞内への侵入を予防または阻害するのに有効であり得る。
【００９２】
本発明の治療分子は、ウイルス成分の、細胞の細胞質への放出を、予防または阻害するのに有効であり得る。
【００９３】
さらなる実施態様において、本発明の治療分子は、ＨＢＶヌクレオカプシドの細胞内輸送を予防または阻害するのに有効であり得る。
【００９４】
本開示の態様は治療分子を提供し、これは、細胞内のＨＢＶ ｒｃＤＮＡの放出を予防または阻害するのに有効であり得る。
【００９５】
いくつかの実施態様において、本発明の治療分子は、ウイルスポリメラーゼの作用を予防または阻害するのに有効であり得る。
【００９６】
ある実施態様は、細胞内のＨＢＶゲノムＤＮＡの産生を予防または阻害するのに有効であり得る、治療分子を提供し得る。
【００９７】
さらなる実施態様において、本発明の治療分子は、細胞内のウイルスＲＮＡの産生を予防または阻害するのに有効であり得る。
【００９８】
本発明の治療分子は、細胞内のウイルスの複製を予防または阻害するのに有効であり得る。
【００９９】
さらなる実施態様において、治療分子は、細胞内のＨＢＶ調節性Ｘタンパク質を予防または阻害するのに有効であり得る。
【０１００】
本開示のさらなる態様は、細胞内のウイルスＲＮＡの翻訳または逆転写を予防または阻害するのに有効な、治療分子を提供し得る。
【０１０１】
いくつかの実施態様において、本発明の治療分子は、細胞内のウイルスヌクレオカプシドの成熟を予防または阻害するのに有効であり得る。
【０１０２】
ＵＮＡモノマー
いくつかの実施態様において、リンカー基のモノマーは、アンロックドヌクレオモノマー（ＵＮＡモノマー）であってもよく、これは、以下に示される、プロパン−１，２，３−トリ−イル−トリスオキシ構造に基づく、有機小分子である。
【化１】
2018520685.tif 000003
式中、Ｒ１およびＲ２はＨであり、Ｒ１およびＲ２はホスホジエステル結合であってもよく、Ｂａｓｅは核酸塩基であってもよく、Ｒ３は後述する官能基である。
【０１０３】
別の観点において、ＵＮＡモノマーの主原子を、ＩＵＰＡＣ命名法で以下のように表し得る：
【化２】
2018520685.tif 000004
式中、オリゴマー鎖の進行方向は、プロパン残基の１末端から３末端である。
【０１０４】
核酸塩基の例には、ウラシル、チミン、シトシン、５−メチルシトシン、アデニン、グアニン、イノシン、ならびに天然および非天然の核酸塩基アナログが含まれる。
【０１０５】
一般に、ＵＮＡモノマーはヌクレオチドでないため、オリゴマーにおいて少なくとも４つの形態を示し得る。第一に、ＵＮＡモノマーはオリゴマーにおける内部のモノマーであり得、このＵＮＡモノマーは両側において他のモノマーと隣接する。この形態において、ＵＮＡモノマーは、オリゴマーが２本鎖である場合に、塩基対形成に関与し得る（例えば、２本鎖中に核酸塩基を有する他のモノマーが存在する）。
【０１０６】
プロパン−１−イル位およびプロパン−３−イル位の両方に隣接する内部のモノマーとしてのＵＮＡモノマーの例（Ｒ３は−ＯＨ）を以下に示す。
【化３】
2018520685.tif 000005
【０１０７】
第二に、ＵＮＡモノマーは、オリゴマー２本鎖のオーバーハングにおけるモノマーであり得、このＵＮＡモノマーは両側において他のモノマーと隣接する。この形態において、ＵＮＡモノマーは塩基対形成に関与しない。ＵＮＡモノマーは、ヌクレオチドとは異なり、柔軟な有機構造であるため、ＵＮＡモノマーを含むオーバーハングは、オリゴマーにおける柔軟なターミネーターである。
【０１０８】
ＵＮＡモノマーは、オリゴマーのオーバーハングにおいて末端のモノマーであり得、このＵＮＡモノマーはプロパン−１−イル位またはプロパン−３−イル位のいずれかにおいて、１つのモノマーのみと結合している。この形態において、ＵＮＡモノマーは、塩基対形成に関与しない。ＵＮＡモノマーはヌクレオチドとは異なり、柔軟な有機構造であるため、ＵＮＡモノマーを含むオーバーハングは、オリゴマーにおいて柔軟なターミネーターであり得る。
【０１０９】
プロパン−３−イル位に結合した末端モノマーとしてのＵＮＡモノマーの例を以下に示
す。
【化４】
2018520685.tif 000006
【０１１０】
ＵＮＡモノマーは柔軟な分子であり得るため、末端モノマーとしてのＵＮＡモノマーは、多様な立体構造が想定され得る。プロパン−３−イル位に結合した末端モノマーとして、エネルギーを最小化したＵＮＡモノマーの立体構造の例を以下に示す。
【化５】
2018520685.tif 000007
したがって、末端ＵＮＡモノマーを有するＵＮＡオリゴマーは、ｓｉＲＮＡなどの従来の核酸薬剤とは、構造が著しく異なる。例えば、ｓｉＲＮＡは、２本鎖の末端モノマーまたはオーバーハングが安定化されている必要があり得る。対照的に、末端ＵＮＡモノマーの可動性(conformability)は、種々の性質を有するＵＮＡオリゴマーを与え得る。
【０１１１】
特に、ＵＮＡモノマーの構造は、天然に存在するヌクレオチドに結合することが可能である。ＵＮＡオリゴマーは、ＵＮＡモノマー、および天然に存在するヌクレオシドに基づき得る、様々なヌクレオチドから構成された鎖であり得る。
【０１１２】
いくつかの実施態様において、ＵＮＡモノマーの官能基Ｒ３は−ＯＲ４、−ＳＲ４、−ＮＲ４２、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ４、モルホリノ、モルホリン−１−イル、ピペラジン−１−イル、または４−アルカノイル−ピペラジン−１−イルであり得、このＲ４は各Ｒが同一または異なってもよく、Ｈ、アルキル、コレステロール、脂質分子、ポリアミン、アミノ酸、またはポリペプチドであり得る。
【０１１３】
ＵＮＡモノマーは有機分子である。ＵＮＡモノマーは、核酸モノマーまたはヌクレオチドではなく、天然に存在するヌクレオシドまたは修飾された、天然に存在するヌクレオシドでもない。
【０１１４】
本発明のＵＮＡオリゴマーは合成鎖状分子である。本発明のＵＮＡオリゴマーは核酸で
はなく、オリゴヌクレオチドでもない。
【０１１５】
いくつかの実施態様において、上記に示したように、ＵＮＡモノマーは、ＵＮＡ−Ａ（Ａ~と命名）、ＵＮＡ−Ｕ（Ｕ~と命名）、ＵＮＡ−Ｃ（Ｃ~と命名）、およびＵＮＡ−Ｇ（Ｇ~と命名）であり得る。
【０１１６】
本明細書中で使用され得る記号には、ｍＡ、ｍＧ、ｍＣ、およびｍＵが含まれ、これらは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドを指す。
【０１１７】
本明細書中で使用され得る記号には、小文字ｃおよびｕが含まれ、これらは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドを指す。
【０１１８】
本明細書中で使用され得る記号にはｄＴが含まれ、これは２'−デオキシＴヌクレオチドを指す。
【０１１９】
オリゴマー薬剤におけるさらなるモノマー
【０１２０】
本明細書において、オリゴマー配列に関して、記号ＸはＵＮＡモノマーを表す。
【０１２１】
本明細書において、オリゴマー配列に関して、記号Ｎは任意の天然ヌクレオチドモノマーまたは修飾されたヌクレオチドモノマーを表す。
【０１２２】
本明細書において、オリゴマー配列に関して、記号Ｑは非天然、修飾された、また
は化学修飾された、ヌクレオチドモノマーを表す。Ｑモノマーがオリゴマーの一方の鎖に存在し、他方の鎖と対形成しない場合、モノマーは任意の塩基が結合し得る。Ｑモノマーが一方の鎖に存在し、他方の鎖のモノマーと対形成する場合、Ｑモノマーは、他方の鎖の対応する対形成する位置におけるモノマーと相補的である、任意の塩基が結合し得る。
【０１２３】
核酸モノマーの例は、非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドを含み、当分野で公知のそのような任意のヌクレオチドを含む。
【０１２４】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、当分野で公知のそのような任意のヌクレオチドを含み、例えば、２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチド、２’−デオキシリボヌクレオチド、２’−デオキシプリンヌクレオチド、ユニバーサル塩基ヌクレオチド、５−Ｃ−メチル−ヌクレオチドおよび逆位デオキシ脱塩基モノマー残基(inverted deoxyabasic monomer residue)を含む。
【０１２５】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、３’末端が安定化したヌクレオチド、３’−グリセリルヌクレオチド、３’−逆位脱塩基ヌクレオチド、３’−逆位チミジンおよびＬ−チミジンを含む。
【０１２６】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、ロックド核酸ヌクレオチド、２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレン−（Ｄ−リボフラノシル）ヌクレオチド、２’−メトキシエトキシ（ＭＯＥ）ヌクレオチド、２’−メチル−チオ−エチル、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、および２'−Ｏ−メチルヌクレオチドを含む。
【０１２７】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、２’−アミノヌクレオチド、２’−Ｏ−アミノヌクレオチド、２’−Ｃ−アリルヌクレオチド、および２’−Ｏ−アリルヌクレオチドを含む。
【０１２８】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、Ｎ６−メチルアデノシンヌクレオチドを含む。
【０１２９】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、修飾された塩基５−（３−アミノ）プロピルウリジン、５−（２−メルカプト）エチルウリジン、５−ブロモウリジン；８−ブロモグアノシン、または７−デアザアデノシンを有するヌクレオチドモノマーを含む。
【０１３０】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、２’−Ｏ−アミノプロピル置換されたヌクレオチドを含む。
【０１３１】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、２’−Ｏ−グアニジノプロピル置換されたヌクレオチドを含む。
【０１３２】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、プソイドウリジンを含む。
【０１３３】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、ヌクレオチドの２’−ＯＨ基の、２’−Ｒ、２’−ＯＲ、２’−ハロゲン、２’−ＳＲ、２’−アミノ、２’−アジドへの置換を含み、ここでＲは、Ｈ、アルキル、フッ素置換されたアルキル、アルケニル、またはアルキニルを含む。
【０１３４】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、ヌクレオチドの２’−ＯＨ基の、２’−Ｒまたは２’−ＯＲへの置換を含み、ここでＲは、ＣＮ、ＣＦ３、アルキルアミノ、またはアラルキルを含む。
【０１３５】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、修飾された糖（Ｆ−ＨＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、二環式の糖またはＬＮＡなど）を含むヌクレオチドを含む。
【０１３６】
非天然、修飾された、および化学修飾されたヌクレオチドモノマーの例は、２’−オキサ−３’−アザ−４’ａ−カルバヌクレオシドモノマー、３−ヒドロキシメチル−５−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール）−イソオキサゾリジンモノマーおよび５’−トリアゾリル−２’−オキサ−３’−アザ−４’ａ−カルバヌクレオシドモノマーを含む。
【０１３７】
修飾されたヌクレオチドのいくつかの例は、Saenger, Principles of Nucleic Acid Structure, Springer-Verlag, 1984において、与えられている。
【０１３８】
ＵＮＡモノマーを含む、オリゴマー化合物
【０１３９】
本発明の態様は、ＵＮＡを含むオリゴマー化合物における、構造および組成物を提供し得る。オリゴマー薬剤は、１以上のＵＮＡモノマーを包含し得る。本発明のオリゴマー分子を、遺伝子制御の治療学または遺伝子サイレンシングの治療学における、製剤の有効な薬剤として用いてもよい。
【０１４０】
いくつかの実施態様において、本発明は、ＵＮＡモノマーと、特定の天然ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドまたは化学修飾されたヌクレオチドとの新規な組合せを包含する構造を有する、オリゴマー化合物を提供する。
【０１４１】
さらなる態様において、オリゴマー化合物は、薬理活性分子であり得る。本発明のＵＮＡオリゴマーを、遺伝子発現の制御、およびＲＮＡ干渉法、ならびにアンチセンス、ＲＮＡブロッキングおよびマイクロＲＮＡ戦略において、医薬品有効成分として用いてもよい。
本発明のＵＮＡオリゴマーは、式Iの構造を有し得る。
【化６】
2018520685.tif 000008
式中、Ｌ１は結合であり、ｎは１９〜２９であり、各Ｌ２において、Ｌ２は、化学式−Ｃ１−Ｃ２−Ｃ３−を有するＵＮＡリンカー基であり、ここでＲはＣ２に結合し、化学式−ＯＣＨ（ＣＨ２Ｒ３）Ｒ５を有し、Ｒ３は−ＯＲ４、−ＳＲ４、−ＮＲ４２、−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ４、モルフォリノ、モルホリン−１−イル、ピペラジン−１−イルまたは４−アルカノイル−ピペラジン−１−イルであり、Ｒ４は、各Ｒ４において同一または異なっており、Ｈ、アルキル、コレステロール、脂質分子、ポリアミン、アミノ酸またはポリペプチドであり、Ｒ５は核酸塩基であり、またはＬ２（Ｒ）は、リボースなどの糖であり、Ｒは核酸塩基であり、または、Ｌ２は修飾されたリボースなどの修飾された糖であり、Ｒは核酸塩基である。ある実施態様において、核酸塩基は、修飾された核酸塩基であり得る。Ｌ１は、ホスホジエステル結合であり得る。
【０１４２】
本発明のＵＮＡオリゴマーは、短鎖分子であり得る。ＵＮＡオリゴマーは、２本鎖対であり得る。したがって、ＵＮＡオリゴマーは、２本鎖の第一の鎖および第二の鎖を有し得、第二の鎖は、核酸塩基について、第一の鎖と相補的であるが、３つ以下のミスマッチが起こり得る。ＵＮＡオリゴマー２本鎖は、オーバーハングを有し得る。
【０１４３】
いくつかのＵＮＡオリゴマーが、米国特許第8,314,227号および米国特許出願公開第20110313020 Al号において、議論されている。
【０１４４】
ＵＮＡオリゴマーの標的は、標的核酸であり得る。いくつかの実施態様において、標的は、対象の任意のｍＲＮＡであり得る。ＵＮＡオリゴマーは、ＲＮＡ干渉における遺伝子サイレンシングに有効であり得る。
【０１４５】
ＵＮＡオリゴマーは、２本鎖を与える２つの鎖を含み得る。２本鎖は、第一の鎖（パッセンジャー鎖またはセンス鎖とも呼ばれる）および第二の鎖（ガイド鎖または園地センス鎖とも呼ばれる）から構成され得る。
【０１４６】
いくつかの態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、２本鎖構造の任意の鎖または両方の鎖の任意の位置において、任意の数のモノマー間ホスホロチオエート結合を有し得る。
【０１４７】
いくつかの実施態様において、ＵＮＡオリゴマーの任意の１以上のモノマー間結合は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート（ジチオアートを含む）、キラルなホスホロチオエート、および他の化学的に修飾された形態であり得る。
【０１４８】
本発明のＵＮＡオリゴマーは、２本鎖対を含み、これらは一般的に相補的である。
したがって、例えば、配列番号１は、２本鎖の第一の鎖を示し得、配列番号２は、２本鎖の第二の鎖を示し得、これは、第一の鎖と相補的である。
【０１４９】
例えば、第一の鎖における記号「Ｎ」は、第二の鎖の対応する位置のモノマーに相補的な、任意のヌクレオチドを示し得る。本開示の例示的なＵＮＡオリゴマーを、２モノマー長のオーバーハングと共に示すが、１〜８モノマー長またはそれ以上のオーバーハングが用いられ得る。
【０１５０】
鎖またはオリゴマー内の記号「Ｘ」は、ＵＮＡモノマーを示す。ＵＮＡモノマーがオリゴマーの一方の鎖に存在し、他方の鎖と対形成しない場合、モノマーは任意の塩基が結合し得る。ＵＮＡモノマーがオリゴマーの一方の鎖に存在し、他方の鎖のモノマーと対形成する場合、ＵＮＡモノマーは、他方の鎖の対応する対形成する位置におけるモノマーと相補的である、任意の塩基が結合し得る。
【０１５１】
さらに、オリゴマーがＵＮＡモノマーで終わる場合、上記で示した位置の番号付けに従って、その末端位置は、ヌクレオチドに関して、５’末端の代わりに１末端となり、または、上記で示した位置の番号付けに従って、その末端位置は、ヌクレオチドに関して、３’末端の代わりに３末端となる。例えば、以下のＵＮＡオリゴマーは、第一の鎖において、ＵＮＡモノマーの１末端およびＵＮＡモノマーの３末端を有し、第二の鎖において、ＵＮＡモノマーの３末端およびヌクレオチドの５’末端を有する。
【化７】
2018520685.tif 000009
【０１５２】
鎖の相補性は、ミスマッチを含み得る。ある実施態様において、鎖の相補性は、１〜３、またはそれ以上のミスマッチを含み得る。
【０１５３】
いくつかの実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、第一の鎖の１末端において、１以上のＵＮＡモノマーを有し得、第一の鎖の３末端において、１以上のＵＮＡモノマーを有し得る。
【０１５４】
さらなる実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、第二の鎖の３末端において、１以上のＵＮＡモノマーを含み得る。
【０１５５】
ある実施態様において、本発明の２本鎖ＵＮＡオリゴマーは、第一の鎖の１末端に１以上のＵＮＡモノマー、第一の鎖の３末端に１以上のＵＮＡモノマー、および第二の鎖の３末端に１以上のＵＮＡモノマーを有し得る。
【０１５６】
本発明のＵＮＡオリゴマーは、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長である。
【０１５７】
ある実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、１９〜２３モノマー長の第一の鎖を有し得る。
【０１５８】
ある実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、１９〜２１モノマー長の２本鎖領域を有し得る。
【０１５９】
さらなる実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、１９〜２３モノマー長の第二の鎖を有し得る。
【０１６０】
ある実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、１９モノマー長の第一の鎖および、２１モノマー長の第二の鎖を有し得る。
【０１６１】
ある実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、２０モノマー長の第一の鎖および、２１モノマー長の第二の鎖を有し得る。
【０１６２】
ある実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、２１モノマー長の第一の鎖および、２１モノマー長の第二の鎖を有し得る。
【０１６３】
ある実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、２２モノマー長の第一の鎖および、２１モノマー長の第二の鎖を有し得る。
【０１６４】
遺伝子発現を阻害する本発明のＵＮＡオリゴマーは、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は１９〜２９モノマー長である。モノマーはＵＮＡモノマーおよび核酸ヌクレオシドモノマーであり得る。オリゴマーは、１４〜２９モノマー長の２本鎖構造を有し得る。ＵＮＡオリゴマーは、標的遺伝子を標的とし、従来のｓｉＲＮＡと比較して減少したオフターゲット効果を示し得る。いくつかの実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマーは、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は１９〜２３モノマー長である。
【０１６５】
別の態様において、ＵＮＡオリゴマーは、平滑末端であり得、または１以上のオーバーハングを有し得る。いくつかの実施態様において、第一の鎖および第二の鎖は、鎖間の連結オリゴマーと連結してもよく、一端の連結ループと２本鎖領域を形成してもよい。
【０１６６】
ある実施態様において、オーバーハングは１または２モノマー長であり得る。
【０１６７】
オーバーハングの例は、ＵＮＡモノマー、天然ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、修飾されたヌクレオチドまたは化学修飾されたヌクレオチド、およびそれらの組合せのうち１つ以上を含み得る。
【０１６８】
オーバーハングの例は、デオキシチミジンヌクレオチド、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、逆方向脱塩基モノマー、逆方向チミジンモノマー、Ｌ−チミジンモノマー、またはグリセリルヌクレオチドのうち１つ以上を含み得る。
【０１６９】
ＵＮＡオリゴマーは、細胞中の標的核酸の切断を仲介し得る。いくつかのプロセスにおいて、ＵＮＡオリゴマーの第二の鎖（少なくとも一部分が、標的核酸と相補的であり得る）は、標的核酸にハイブリダイズできるガイド鎖として作用し得る。
【０１７０】
第二の鎖は、ＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み込まれ得る。
【０１７１】
本開示のＵＮＡオリゴマーは、遺伝子サイレンシング活性に適合する、天然に存在する核酸ヌクレオチドおよびその修飾体を含み得る。
【０１７２】
いくつかの態様において、ＵＮＡオリゴマーは、遺伝子発現を阻害できる、２本鎖構造分子である。
【０１７３】
本明細書において、鎖という用語は、モノマーの単一の連鎖を指し、この鎖は任意の数の内部モノマーおよび２つの末端モノマーを有し、各末端モノマーは、鎖が終結するように、一方の側において１つの内部モノマーと結合し、他方の側ではモノマーと結合しない。
【０１７４】
ＵＮＡオリゴマーのモノマーは、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、ギャップ結合(gapped linkage)、および他の変形を介して結合してもよい。
【０１７５】
いくつかの実施態様において、ＵＮＡオリゴマーは、第一の鎖と第二の鎖との間の相補性において、ミスマッチを含み得る。他の実施態様において、ＵＮＡオリゴマーは１つ、２つ、または３つのミスマッチを含み得る。ミスマットは、２本鎖領域の任意の位置において、生じ得る。
【０１７６】
ＵＮＡオリゴマーの標的は、標的遺伝子の標的核酸であり得る。
【０１７７】
ＵＮＡオリゴマーは、２本鎖領域の外側に１つまたは２つのオーバーハングを有し得る。オーバーハングは、第一の鎖または第二の鎖の末端における、対形成していない部分であり得る。第一および第二の鎖のオーバーハング部分の長さは、同一または異なり得る。
【０１７８】
ＵＮＡオリゴマーは、少なくとも１つの平滑末端を有し得る。平滑末端は、オーバーハング部分を持たず、平滑末端における２本鎖領域は、第一および第二の鎖の両方が、同一の位置で終結する。
【０１７９】
ＵＮＡオリゴマーは、ＲＩＳＣの長さであり得、これは、ＵＮＡオリゴマーが２５塩基対未満の長さの２本鎖を有することを意味する。
【０１８０】
ある実施態様において、ＵＮＡオリゴマーは、それ自身でフォールドし、自身とハイブリダイズし、２本鎖領域の末端に結合ループを有する２本鎖領域を形成する、単一鎖であり得る。
【０１８１】
５個のＵＮＡモノマーを含み、１以上のＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表１に示す。
【０１８２】
表１：５個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表１−１】
2018520685.tif 000010
【表１−２】
2018520685.tif 000011
【０１８３】
４個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表２に示す。
表２：４個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表２−１】
2018520685.tif 000012
【表２−２】
2018520685.tif 000013
【０１８４】
４個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表３に示す。
表３：４個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表３−１】
2018520685.tif 000014
【表３−２】
2018520685.tif 000015
【０１８５】
３個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表４に示す。
表４：３個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表４−１】
2018520685.tif 000016
【表４−２】
2018520685.tif 000017
【０１８６】
６個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表５に示す。
表５：６個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表５】
2018520685.tif 000018
【０１８７】
７個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表６に示す。
表６：７個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表６】
2018520685.tif 000019
【０１８８】
５個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表７に示す。
表７：５個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表７】
2018520685.tif 000020
【０１８９】
６個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表８に示す。
表８：６個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表８】
2018520685.tif 000021
【０１９０】
５個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表９に示す。
表９：５個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表９】
2018520685.tif 000022
【０１９１】
６個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表１０に示す。
表１０：６個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表１０】
2018520685.tif 000023
【０１９２】
４個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表１１に示す。
表１１：４個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表１１】
2018520685.tif 000024
【０１９３】
５個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表１２に示す。
表１２：５個のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表１２】
2018520685.tif 000025
【０１９４】
７個以上のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、ＵＮＡオリゴマーの例を表１３に示す。
表１３：７個以上のＵＮＡモノマーおよび、さらにＱモノマーを含む、オリゴマー化合物
【表１３】
2018520685.tif 000026
【０１９５】
本発明のオリゴマー化合物は、表１〜１３に示された構造のうち、任意の１つを有し得る。
【０１９６】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは、Ｑモノマーであり得る。
【０１９７】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーはＱモノマーであり得、Ｑモノマーの数は、２０個未満である。
【０１９８】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーはＱモノマーであり得、Ｑモノマーの数は、１２個未満である。
【０１９９】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーはＱモノマーであり得、Ｑモノマーの数は、１０個未満である。
【０２００】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーはＱモノマーであり得、Ｑモノマーの数は、８個未満である。
【０２０１】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーはＱモノマーであり得、Ｑモノマーの数は、１〜２０個である。
【０２０２】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーはＱモノマーであり得、Ｑモノマーの数は、１〜１５個である。
【０２０３】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーはＱモノマーであり得、Ｑモノマーの数は、１〜９個である。
【０２０４】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドであり得る。
【０２０５】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドであり得、２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドの数は、２０個未満である。
【０２０６】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドであり得、２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドの数は、１２個未満である。
【０２０７】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドであり得、２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドの数は、１０個未満である。
【０２０８】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドであり得、２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドの数は、８個未満である。
【０２０９】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドであり得、２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドの数は、１〜２０個である。
【０２１０】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドであり得、２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドの数は、１〜１５個である。
【０２１１】
いくつかの実施態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーは２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドであり得、２’−Ｏ−メチル修飾されたリボヌクレオチドの数は、１〜９個である。
【０２１２】
さらなる態様において、本発明のオリゴマー化合物は、第一の鎖および第二の鎖を有し得、各鎖は独立に、１９〜２３モノマー長であり、ＵＮＡモノマーでない任意のモノマーはＱモノマーであり得、オリゴマー化合物はフッ素を含まない。
【０２１３】
本発明の実施態様は、ＨＢＶに対する有効な薬剤であり、フッ素を含まない、オリゴマー化合物を有利に提供する。
【０２１４】
本発明の方法は、対象におけるＨＢＶ疾患の処置および／または予防を含む。対象は、ヒトの対象を含む、哺乳類の対象であり得る。
【０２１５】
ＨＢＶ成分標的配列
【０２１６】
本明細書において、「Ｒｅｆ Ｐｏｓ」は、基準位置を指し、これは、ＨＢＶゲノムにおける基準ヌクレオチドの数的位置である。基準位置は、本発明のオリゴマー化合物のセンス鎖における５’末端に、標的に関して対応する位置である。基準位置は、基準のゲノムに基づくヌクレオチドの数的位置であり、本明細書において、基準のゲノムは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ２（受入番号ＨＥ９７４３７６）である。したがって、基準位置の番号単独で、基準ゲノム由来の、ある配列を指し、各配列は、本発明のオリゴマー化合物において用いられ得る。表１４は、ＨＢＶ基準ゲノムにおけるゲノム位置を示す。
表１４；ＨＢＶゲノム位置
【表１４】
2018520685.tif 000027
【０２１７】
図１は、基準ゲノムＨＥ９７４３７６における、ＨＢＶタンパク質コード領域および、選択された転写物のマップを示す。ヌクレオチド位置１／３２２１を最上部と指定する。さらなる指定を以下に示す：ｐｒｅ−Ｓ１、大型ＨＢｓＡｇ；ｐｒｅ−Ｓ２、中型ＨＢｓＡｇ；Ｓ、ＨＢｓＡｇ；Ｐ、ポリメラーゼ；Ｘ、ＨＢｘタンパク質；ｐｒｅ−Ｃ、プレコア／ＨＢｅＡｇ；Ｃ、ＨＢコアＡｇ。ｐｒｅ−Ｓ１／ｐｒｅ−Ｓ２／Ｓをコードする、２．４ｋｂ、２．１ｋｂおよび０．７ｋｂの転写物ならびにＸタンパク質をコードする転写物を示す。プレコア／ＨＢｅＡｇタンパク質は、約１７００の位置から始まる、長い、３．５ｋｂの転写物（示していない）から産生するが、コアタンパク質、ポリメラーゼタンパク質およびウイルス複製の鋳型として用いるプレゲノムＲＮＡは、約２００ｎｔのより短い転写物から産生する。
【０２１８】
あるＵＮＡオリゴマー（ＵＮＡオリゴマー１、ＵＮＡオリゴマー２およびＵＮＡオリゴマー３と呼ぶ）における基準位置の範囲を図１に示す。
【０２１９】
いくつかの態様において、本開示における、本発明のオリゴマーは、ＨＢＶコアおよびポリメラーゼタンパク質をコードする、長い転写物を標的とし得る。
【０２２０】
ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー
【０２２１】
ＨＢＶ成分を標的とする、本発明の塩基配列の例を、表１５に示す。
【０２２２】
本発明のオリゴマー化合物を、各鎖が２１モノマー長である、第一の鎖および第二の鎖を有するように、形成してもよい。第一の鎖は、表１５（センス）に示すように、結合した塩基の配列を含む、１９個の連続するモノマーおよび、３’末端に２個の追加のオーバーハングモノマーを有し得る。第二の鎖は、表１５（アンチセンス）に示すように、結合した塩基の配列を含む、１９個の連続するモノマーおよび、３’末端に２個の追加のオーバーハングモノマーを有し得る。オーバーハングモノマーは、ＮＮ、ＱＱ、ＸＸ、ＮＸ、ＮＱ、ＸＮ、ＸＱ、ＱＮおよびＱＸのうちいずれかであり得る。例えば、ＸＱは、ＵＮＡ−Ｕ／ｍＵまたはＵＮＡ−Ｕ／＊／ｄＴであり得る。
【０２２３】
本発明のオリゴマー化合物は、モノマーから構成され得る。モノマーは、結合した塩基を有し得る。本発明のオリゴマー化合物は、結合した塩基の配列を有し得る。表１５に示される塩基配列は、配列における各塩基のどのモノマーが結合しているかを示さない。したがって、表１５に示される各配列は、多数の小分子を指し、各小分子はＵＮＡモノマーおよび核酸モノマーで構成される。
【０２２４】
いくつかの態様において、本発明のオリゴマー化合物は、結合した塩基（例えば表１５に示すように）およびその置換体の配列によって記述され得る。本明細書において、置換体は、本明細書でさらに記述されるように、別々に置換されたＵＮＡモノマー、および別々に置換または修飾された核酸モノマーを含む。
【０２２５】
いくつかの実施態様において、各鎖の各末端における、３つのモノマーのうちの１つ以上を、ホスホロチオエート結合、キラルなホスホロチオエート結合またはホスホロジチオエート結合によって、連結してもよい。
【０２２６】
例えば、化合物は、第一の鎖の５’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、第一の鎖の３’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、第一の鎖の３’末端から２番目および３番目の２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、および第二の鎖の３’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合を有してもよい。
【０２２７】
ある実施態様において、化合物は、第一の鎖の５’末端における２つまたは３つのホスホロチオエート結合、第一の鎖の３’末端における２つまたは３つのホスホロチオエート結合、および第二の鎖の３’末端における１つのホスホロチオエート結合を有してもよい。
【０２２８】
さらなる実施態様において、化合物は、第一の鎖の５’末端における１〜３つのホスホロチオエート結合、第一の鎖の３’末端における２つまたは３つのホスホロチオエート結合、第二の鎖の５’末端における２つのホスホロチオエート結合、および第二の鎖の３’末端における２つのホスホロチオエート結合を有してもよい。
【０２２９】
いくつかの実施例において、化合物は、第一の鎖の３’末端、第二の鎖の３’末端、または第一の鎖の３’末端および第二の鎖の３’末端の両方において、デオキシチミジンヌクレオチドを有してもよい。
【０２３０】
いくつかの態様において、化合物は１〜５個のＵＮＡモノマーを含み得る。
【０２３１】
ある態様において、化合物は３個のＵＮＡモノマーを含み得る。
【０２３２】
いくつかの実施態様において、化合物は、第一の鎖の１末端（５’末端）においてＵＮＡモノマー、第一の鎖の３末端（３’末端）において、ＵＮＡモノマー、および第二の鎖の３’末端から２番目の位置において、ＵＮＡモノマーを含み得る。
【０２３３】
ある実施態様において、化合物は、第二の鎖の５’末端から２〜８番目（シード領域(seed region)）の任意の１つまたはそれ以上の位置において、ＵＮＡモノマーを含み得る。
表１５：ＨＢＶセンス配列およびアンチセンス配列
【表１５−１】
2018520685.tif 000028
【表１５−２】
2018520685.tif 000029
【表１５−３】
2018520685.tif 000030
【表１５−４】
2018520685.tif 000031
【表１５−５】
2018520685.tif 000032
【表１５−６】
2018520685.tif 000033
【表１５−７】
2018520685.tif 000034
【表１５−８】
2018520685.tif 000035
【表１５−９】
2018520685.tif 000036
【表１５−１０】
2018520685.tif 000037
【表１５−１１】
2018520685.tif 000038
【表１５−１２】
2018520685.tif 000039
【０２３４】
ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー
【０２３５】
ＨＢＶ成分を標的とする、本発明の塩基配列の例を、表１６に示す。
【０２３６】
本発明のオリゴマー化合物を、各鎖が２１モノマー長である、第一の鎖および第二の鎖を含むように、形成してもよい。第一の鎖は、表１６（センス）に示すように、結合した塩基の配列を含む、１９個の連続するモノマーおよび、３’末端に２個の追加のオーバーハングモノマーを有し得る。第二の鎖は、表１６（アンチセンス）に示すように、結合した塩基の配列を含む、１９個の連続するモノマーおよび、３’末端に２個の追加のオーバーハングモノマーを有し得る。オーバーハングモノマーは、ＮＮ、ＱＱ、ＸＸ、ＮＸ、ＮＱ、ＸＮ、ＸＱ、ＱＮおよびＱＸのうちいずれかであり得る。例えば、ＸＱは、ＵＮＡ−Ｕ／ｍＵまたはＵＮＡ−Ｕ／＊／ｄＴであり得る。
表１６：ＨＢＶセンス配列およびアンチセンス配列
【表１６−１】
2018520685.tif 000040
【表１６−２】
2018520685.tif 000041
【０２３７】
ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー
【０２３８】
本発明の実施態様は、ＨＢＶを標的とする有効な薬剤である、オリゴマー分子を提供し得る。
【０２３９】
ＨＢＶ成分を標的とする、本発明のＵＮＡオリゴマーの例を、表１７に示す。表１７は「センス」および「アンチセンス」対を示す。
表１７：ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー（センス（Ｓ）−アンチセンス（ＡＳ））
【表１７−１】
2018520685.tif 000042
【表１７−２】
2018520685.tif 000043
【表１７−３】
2018520685.tif 000044
【０２４０】
ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー
【０２４１】
本発明の実施態様は、ＨＢＶを標的とする有効な薬剤である、オリゴマー分子を提供し得る。
【０２４２】
ＨＢＶ成分を標的とする、本発明のＵＮＡオリゴマーの例を、表１８に示す。表１８は「センス」および「アンチセンス」対を示す。
表１８：ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー（センス（Ｓ）−アンチセンス（ＡＳ））
【表１８−１】
2018520685.tif 000045
【表１８−２】
2018520685.tif 000046
【０２４３】
ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー
【０２４４】
本発明の実施態様は、ＨＢＶを標的とする有効な薬剤である、オリゴマー分子を提供し得る。
【０２４５】
ＨＢＶ成分を標的とする、本発明のＵＮＡオリゴマーの例を、表１９に示す。表１９は「センス」および「アンチセンス」対を示す。
表１９：ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー（センス（Ｓ）−アンチセンス（ＡＳ））
【表１９−１】
2018520685.tif 000047
【表１９−２】
2018520685.tif 000048
【０２４６】
ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー
【０２４７】
本発明の実施態様は、ＨＢＶを標的とする有効な薬剤である、オリゴマー分子を提供し得る。
【０２４８】
ＨＢＶ成分を標的とする、本発明のＵＮＡオリゴマーの例を、表２０に示す。表２０は「センス」および「アンチセンス」対を示す。
表２０：ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー（センス（Ｓ）−アンチセンス（ＡＳ））
【表２０】
2018520685.tif 000049
【０２４９】
本明細書の表において、ｒＮは、Ｎを指し、これはリボヌクレオチドであり、ｍＮは、化学修飾された２’−ＯＭｅリボヌクレオチドを指し、文字間のアスタリスク＊は、ホスホロチオエート結合を指し、ｄＮは、デオキシリボヌクレオチドを指し、ｆは、２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチドを指す。
【０２５０】
本発明のさらなる化合物を、表２１に示す。
表２１：ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマー（センス（Ｓ）−アンチセンス（ＡＳ））
【表２１】
2018520685.tif 000050
【０２５１】
ＨＢＶに対して使用する組成物
【０２５２】
本発明の実施態様は、ＨＢＶを標的とする有効な薬剤である、オリゴマー分子の組成物を提供し得る。
【０２５３】
ＨＢＶウイルス感染症に対して使用する組成物は、複数のウイルス遺伝子産物を抑制するためのターゲティングを提供し得る。
【０２５４】
任意の特定の理論に拘束されることを意図しないが、ＨＢＶのＰ、Ｓ、ＣおよびＸ遺伝子をコードする、特定のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、重複し得る。
【０２５５】
いくつかの実施態様において、本発明の組成物は、ＨＢｓＡｇにおけるＨＢＶゲノム転写物またはＯＲＦを標的とする、オリゴマー化合物を含み得る。例えば、これらの実施態様は、ＨＢＶゲノムＤＮＡの位置に関係なく、ＨＢｓＡｇの発現を阻害できる。
【０２５６】
さらなる実施態様において、組成物は、ＨＢｅＡｇにおけるＨＢＶゲノム転写物またはＯＲＦを標的とする、オリゴマー化合物を含み得る。
【０２５７】
さらなる実施態様において、組成物は、Ｘタンパク質におけるＨＢＶゲノム転写物またはＯＲＦを標的とする、オリゴマー化合物を含み得る。
【０２５８】
さらなる実施態様において、組成物は、ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐ）におけるＨＢＶゲノム転写物またはＯＲＦを標的とする、オリゴマー化合物を含み得る。
【０２５９】
ある実施態様において、組成物は、遺伝子Ｘ、ＳおよびＣからの転写物またはオープンリーディングフレームの保存されたＨＢＶゲノム領域を標的とする、オリゴマー化合物を含み得る。
【０２６０】
ある実施態様において、組成物は、遺伝子Ｘ、Ｓ、ＣおよびＰからの転写物またはオープンリーディングフレームの保存されたＨＢＶゲノム領域を標的とする、オリゴマー化合物を含み得る。
【０２６１】
いくつかの態様において、本発明の組成物は、ＨＢＶを標的とする有効な薬剤として、オリゴマー化合物２分子を含む。
【０２６２】
２分子組成物の例は、１４０３〜１６２３の範囲の基準位置を含む化合物および、１５５〜５５０の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２６３】
２分子組成物の例は、１５７５〜１５８１の範囲の基準位置を含む化合物および、２４５〜４１４の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２６４】
２分子組成物の例は、１５２５〜１６０４の範囲の基準位置を含む化合物および、３７４〜４１４の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２６５】
２分子組成物の例は、１５２５〜１６０４の範囲の基準位置を含む化合物および、１７７６〜１８１８の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２６６】
２分子組成物の例は、３７４〜４１４の範囲の基準位置を含む化合物および、１７７６〜１７８２の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２６７】
２分子組成物の例は、基準位置１５７８を含む化合物および、基準位置３８０を含む化合物を含む、組成物を含む。２分子組成物の例は、基準位置１５７８を含む化合物および、基準位置３７６または４１１を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２６８】
２分子組成物の例は、基準位置１５７５および３７６、１５７５および３８０、１５７５および５１１、１５８１および３７６、１５８１および３８０、ならびに１５８１および４１１を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２６９】
２分子組成物の例は、基準位置１５７８を含む化合物および、基準位置１７７７を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２７０】
２分子組成物の例は、基準位置１５７８および１７８０、１５７８および１７８２、１５７５および１７７７、１５７５および１７８０、１５７５および１７８２、１５８１および１７７７、１５８１および１７８０、１５８１および１７８２、１５７６および１７７７、１５７６および１７８０、または１５７６および１７８２を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２７１】
例えば、２分子組成物は、表２２に示されるように、化合物１５７８および３８０を含み得る。
表２２；ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマーの２分子組成物（センス（Ｓ）−アンチセンス（ＡＳ））
【表２２】
2018520685.tif 000051
【０２７２】
ＨＢＶにおける、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物
【０２７３】
いくつかの態様において、本発明の組成物は、ＨＢＶを標的とする有効な薬剤として、オリゴマー化合物３分子を含む。
【０２７４】
３分子組成物の例は、１４０３〜１６２３の範囲の基準位置を含む化合物、１５５〜５５０の範囲の基準位置を含む化合物および、１６２４〜１９３０の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２７５】
３分子組成物の例は、１５２５〜１５８２の範囲の基準位置を含む化合物、２４５〜４１４の範囲の基準位置を含む化合物および、１７７７〜１８１８の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２７６】
３分子組成物の例は、１５２５〜１６０４の範囲の基準位置を含む化合物、３７４〜４１４の範囲の基準位置を含む化合物および、１７７６〜１７８２の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２７７】
３分子組成物の例は、１５２５〜１５８２の範囲の基準位置を含む化合物、３７４〜４１４の範囲の基準位置を含む化合物および、１７７６〜１７８２の範囲の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２７８】
３分子組成物の例は、基準位置１５７８を含む化合物、基準位置３８０を含む化合物、および基準位置１７７７を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２７９】
３分子組成物の例は、基準位置１５７６を含む化合物、基準位置３８０を含む化合物、および基準位置１７７７を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２８０】
３分子組成物の例は、基準位置１５７５を含む化合物、基準位置３８０を含む化合物、および基準位置１７７７を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２８１】
３分子組成物の例は、基準位置１５７８を含む化合物、基準位置１７７７を含む化合物、および基準位置３７６または４１１を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２８２】
３分子組成物の例は、基準位置１５７８を含む化合物、基準位置１７８０または１７８２を含む化合物、および基準位置３７６または４１１を含む化合物を含む、組成物を含む。
【０２８３】
３分子組成物の例は、以下の基準位置を含む化合物を含む、組成物を含む：
１５７８、１７７７および３７６；１５７８、１７７７および３８０；１５７８、１７７７および４１１；１５７８、１７８０および３７６；１５７８、１７８０および３８０；１５７８、１７８０および４１１；１５７８、１７８２および３７６；１５７８、１７８２および３８０；１５７８、１７８２および４１１；
１５７５、１７７７および３７６；１５７５、１７７７および３８０；１５７５、１７７７および４１１；１５７５、１７８０および３７６；１５７５、１７８０および３８０；１５７５、１７８０および４１１；１５７５、１７８２および３７６；１５７５、１７８２および３８０；１５７５、１７８２および４１１；
１５８１、１７７７および３７６；１５８１、１７７７および３８０；１５８１、１７７７および４１１；１５８１、１７８０および３７６；１５８１、１７８０および３８０；１５８１、１７８０および４１１；１５８１、１７８２および３７６；１５８１、１７８２および３８０；１５８１、１７８２および４１１；
１５７６、１７７７および３７６；１５７６、１７７７および３８０；１５７６、１７７７および４１１；１５７６、１７８０および３７６；１５７６、１７８０および３８０；１５７６、１７８０および４１１；１５７６、１７８２および３７６；１５７６、１７８２および３８０；１５７６、１７８２および４１１；
１５７８、１８１８および３７６；１５７８、１８１８および３８０；１５７８、１８１８および４１１；
１５７５、１８１８および３７６；１５７５、１８１８および３８０；１５７５、１８１８および４１１。
【０２８４】
例えば、３分子組成物は、表２３に示されるように、化合物１５７８、３８０および１７７７を含み得る。
表２３：ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマーの３分子組成物（センス（Ｓ）−アンチセンス（ＡＳ））
【表２３】
2018520685.tif 000052
【０２８５】
本明細書の表において、ｒＮは、Ｎを指し、これはリボヌクレオチドであり、ｍＮは、化学修飾された２’−ＯＭｅリボヌクレオチドを指し、文字間の＊は、ホスホロチオエート結合を指し、ｄＮは、デオキシリボヌクレオチドを指す。
【０２８６】
ＨＢＶ配列
【０２８７】
ＨＢＶにおける公知の配列のいくつかの例を、表２４に示す。
表２４：ＨＢＶにおける配列
【表２４−１】
2018520685.tif 000053
【表２４−２】
2018520685.tif 000054
【表２４−３】
2018520685.tif 000055
【０２８８】
ＨＢＶ疾患を処置する方法
【０２８９】
本発明の方法は、哺乳類の対象における様々な疾患の処置および予防を含む。対象はヒトまたは哺乳類であり得る。
【０２９０】
本発明の方法において、処置または予防を必要とする対象に、有効量の本発明のオリゴマー化合物を投与できる。
【０２９１】
本発明のオリゴマー化合物の有効量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜５０．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量であり得る。
【０２９２】
本発明の方法において、標的ｍＲＮＡ発現を、対象において、少なくとも５日間減少さ得る。ある実施態様において、標的ｍＲＮＡ発現を、対象において、少なくとも１０日間または１５日間減少させ得る。
【０２９３】
本開示の方法において、オリゴマー化合物の投与は、炎症反応をもたらし得らない。
【０２９４】
さらなる実施態様において、本発明は、細胞を本発明のオリゴマー化合物で処理することによって、細胞中の標的遺伝子の発現を阻害する方法を含む。
【０２９５】
さらなる実施態様において、本発明は、哺乳類に、本発明のオリゴマー化合物を含む組成物を投与することによって、哺乳類における標的遺伝子の発現を阻害する方法を含む。
【０２９６】
医薬組成物
【０２９７】
いくつかの態様において、本発明は、オリゴマー化合物および薬学的に許容し得る担体を含む、医薬組成物を提供する。
【０２９８】
医薬組成物は、局所投与または全身投与が可能であり得る。いくつかの態様において、医薬組成物は、投与の任意の様式が可能であり得る。ある態様において、投与は、静脈内、皮下、肺内、筋肉内、腹腔内、経皮的、経口的または鼻腔投与であり得る。
【０２９９】
本発明の実施態様は、脂質製剤におけるオリゴマー化合物を含む、医薬組成物を含む。
【０３００】
いくつかの実施態様において、医薬組成物は、カチオン性脂質、アニオン性脂質、ステロール、ペグ化脂質、および前記の任意の組合せから選択される、１以上の脂質を含み得る。
【０３０１】
ある実施態様において、医薬組成物は、リポソームを実質的に含まなくてもよい。
【０３０２】
さらなる実施態様において、医薬組成物は、リポソームまたはナノ粒子を含んでもよい。
【０３０３】
本発明の有効な分子の輸送における、脂質および脂質組成物のいくつかの例は、WO/2015/074085に与えられ、これは、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
【０３０４】
さらなる実施態様において、医薬組成物は、ウイルスベクターまたは細菌ベクター内のオリゴマー化合物を含み得る。
【０３０５】
本開示の医薬組成物は、当分野で公知の、担体、希釈剤または賦形剤を含み得る。医薬組成物の例は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro ed. 1985)に記述されている。
【０３０６】
医薬組成物における賦形剤の例は、抗酸化剤、懸濁剤、分散剤、保存剤、緩衝剤、等張化剤および界面活性剤を含む。
【実施例】
【０３０７】
実施例１：ルシフェラーゼレポーターアッセイ
【０３０８】
ルシフェラーゼに基づくレポータープラスミドを、ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）２ベクター(Promega, Madison, WI)に基づいて、作製した。レポーターｐ（１−２０）を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）２におけるＳＶ４０で促進されるウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子の終止コドンの下流の、マルチクローニング領域内にクローニングしたＥｃｏ ＲＩ消化部位に対して、位置１から２５００の配列を含むオリゴヌクレオチドで作製し、これは、人工３’ＵＴＲ配列の制御下でウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を発現した。そして、ウミシイタケルシフェラーゼ活性を、転写物の安定性および翻訳効率における、人工３’ＵＴＲの効果の指標として、用いた。ｐｓｉＣＨＥＣＫ（商標）２ベクターはまた、構成的に発現するホタルルシフェラーゼ遺伝子を含んでおり、これは、導入効率を正規化する内部標準として役立つ。
【０３０９】
全５０００個のＨｅｐＢ３細胞(American Type Culture Collection)を、遺伝子導入の１日前に、９６ウェルプレートのウェル上に蒔いた。細胞を、０．１ｍＭ非必須アミノ酸および１０％ＦＢＳ(Life Technologies, Carlsbad, CA)を添加した、１００μｌのＤＭＥＭ(Life Technologies, Carlsbad, CA)中において、３７℃でインキュベートした。培地を、遺伝子導入の直前に、９０μｌの新たな培地に交換した。レポータープラスミドおよびＵＮＡオリゴマーを、遺伝子導入試薬と共に、同時導入し、リポフェクタミン（商標）３０００(Life Technologies, Carlsbad, CA)を用いて、レポータープラスミド（１００ｎｇ）および様々な量のＵＮＡオリゴマーを、Ｐ３０００と共に、製造者の説明書に従って、細胞に導入した。
【０３１０】
デュアルルシフェラーゼレポーターアッセイシステム（ＤＬＲアッセイシステム、Promega, Madison, WI）を用いて、レポーターシステムに基づいて、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２におけるデュアルレポーターアッセイを行った。導入の２４時間後、細胞を、リン酸緩衝生理食塩水で、穏やかに１回洗浄した。５０μｌのＰａｓｓｉｖｅ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ(Promega, Madison, WI)のウェルに、細胞を添加し、穏やかに撹拌しながら、２０分間室温でインキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、Ｃｙｔａｔｉｏｎ３イメージングリーダー(BioTek, Winooski, VT)を用いて測定し、レポーター発現におけるＵＮＡオリゴマーの効果を、細胞数および導入効率を正規化した、ウミシイタケ／ホタルの比に基づいて、計算した。
【０３１１】
実施例２：ＵＮＡオリゴマーのＨＢＶ阻害効果を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２アッセイを用いて観察した。１ｎＭの濃度での６日間において、基準位置１５７８を有するものとして指定された、表１９の各ＵＮＡオリゴマー化合物における標的発現の阻害割合を、７７％〜９７％であると決定した。したがって、基準位置１５７８を有する、表１９の全てのＵＮＡオリゴマー化合物は、標的発現のサイレンシングに使用可能であった。
【０３１２】
実施例３：ＵＮＡオリゴマーのＨＢＶ阻害効果を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２アッセイを用いて観察した。１ｎＭの濃度での６日間において、基準位置１７７７を有するものとして指定された、表１９の各ＵＮＡオリゴマー化合物における標的発現の阻害割合を、７７％〜９２％であると決定した。したがって、基準位置１７７７を有する、表１９の全てのＵＮＡオリゴマー化合物は、標的発現のサイレンシングに使用可能であった。
【０３１３】
実施例４：ＵＮＡオリゴマーのＨＢＶ阻害効果を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２アッセイを用いて観察した。１ｎＭの濃度での６日間において、基準位置３８０を有するものとして指定された、表１９の各ＵＮＡオリゴマー化合物における標的発現の阻害割合を、８７％〜９４％であると決定した。したがって、基準位置３８０を有する、表１９の全てのＵＮＡオリゴマー化合物は、標的発現のサイレンシングに使用可能であった。
【０３１４】
実施例５：ＵＮＡオリゴマーのＨＢＶ阻害効果を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２アッセイを用いて観察した。１ｎＭの濃度での６日間において、基準位置１５７６を有するものとして指定された、表１９のＵＮＡオリゴマー化合物における標的発現の阻害割合を、９３％であると決定した。したがって、基準位置１５７６を有するＵＮＡオリゴマー化合物は、標的発現の調節に使用可能であった。
【０３１５】
実施例６：ＵＮＡオリゴマーのＨＢＶ阻害効果を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２アッセイを用いて観察した。１ｎＭの濃度での６日間において、基準位置１５７５を有するものとして指定された、表１９のＵＮＡオリゴマー化合物における標的発現の阻害割合を、９０％であると決定した。したがって、基準位置１５７５を有するＵＮＡオリゴマー化合物は、標的発現の調節に使用可能であった。
【０３１６】
実施例７：ＵＮＡオリゴマーのＨＢＶ阻害効果を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２アッセイを用いて観察した。１ｎＭの濃度での６日間において、基準位置１５８０を有するものとして指定された、表１９のＵＮＡオリゴマー化合物における標的発現の阻害割合を、９５％であると決定した。したがって、基準位置１５８０を有するＵＮＡオリゴマー化合物は、標的発現の調節に使用可能であった。
【０３１７】
実施例８：ＵＮＡオリゴマーのＨＢＶ阻害効果を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２アッセイを用いて観察した。表１７における本発明のＵＮＡオリゴマーは、表２５に示されるように、標的発現を阻害するＩＣ５０を示すことがわかった。
表２５：ＨＢＶを標的とするＵＮＡオリゴマーのＩＣ５０
【表２５】
2018520685.tif 000056
【０３１８】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマー化合物は、ＨＢＶ標的発現の調節に使用可能であった。本発明のＵＮＡオリゴマー化合物は、標的発現の阻害において、インビトロでピコモル濃度の活性を示した。いくつかの実施態様において、本発明のＵＮＡオリゴマー化合物は、標的発現の阻害における約ＩＣ５０＜２００ｐＭという、インビトロでの驚くほど高い活性を示した。
【０３１９】
実施例９：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のヒト化ＰＸＢマウスモデルにおいて観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤１および２に含まれていた。
【０３２０】
ＵＮＡオリゴマーを、脂質ナノ粒子に処方または同時に処方し、ＨＢＶ感染Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｂｉｏ（ＰＸＢ）マウスに静脈内注射した。マウスは、推定で７０％以上の交換率でヒト肝細胞を含む、遺伝子型：ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋／ＳＣＩＤ［ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋：Ｂ６；１２９ＳｖＥｖ−Ｐｌａｕ，ＳＣＩＤ：Ｃ．Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ Ｊｃｌ］であった。
【０３２１】
本研究では、マウスを、０日目に３ｍｇ／ｋｇ、４日目に５ｍｇ／ｋｇ、８日目に１０ｍｇ／ｋｇで処理をする、漸増用量を用いた。
【０３２２】
図２に示されるように、ＵＮＡオリゴマー１５７６およびＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７）での処理は共に、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３２３】
表２６に示されるように、ＵＮＡオリゴマー１５７６およびＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７）での処理は共に、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
表２６：血清ＨＢｅＡｇのウイルス終点
【表２６】
2018520685.tif 000057
【０３２４】
表２７に示されるように、ＵＮＡオリゴマー１５７６およびＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７）での処理は共に、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
表２７：血清ＨＢＶ ＤＮＡのウイルス終点
【表２７】
2018520685.tif 000058
【０３２５】
図２、表２６および表２７における組成物は、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物である（１７７７（配列番号１００５および１００６）、３８０（配列番号９７３および９７４）、１５７６（配列番号９８９および９９０））。
【０３２６】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。全て（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇおよびＨＢＶ ＤＮＡ）のウイルス終点において、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１５７６、３８０、１７７）での処理は、ＵＮＡオリゴマー１５７６よりも、著しく優れていた。
【０３２７】
実施例１０：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＰＸＢマウスモデルにおいて観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３２８】
ＵＮＡオリゴマーを、脂質ナノ粒子に同時に処方し、ＨＢＶ感染Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｂｉｏ（ＰＸＢ）マウスに静脈内注射した。マウスは、推定で７０％以上の交換率でヒト肝細胞を含む、遺伝子型：ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋／ＳＣＩＤ［ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋：Ｂ６；１２９ＳｖＥｖ−Ｐｌａｕ，ＳＣＩＤ：Ｃ．Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ Ｊｃｌ］であった。
【０３２９】
本研究では、マウスに、４日毎に、４０日目まで投与する漸増用量を用い、ウイルス終点を、４日毎に、４４日目までモニターした。
【０３３０】
図３に示されるように、ＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７７）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。図３の組成物は、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物である（１７７７（配列番号１００５および１００６）、３８０（配列番号９７３および９７４）、１５７６（配列番号９８９および９９０））。
【０３３１】
図４に示されるように、ＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７７）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。図４の組成物は、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物である（１７７７（配列番号１００５および１００６）、３８０（配列番号９７３および９７４）、１５７６（配列番号９８９および９９０））。
【０３３２】
図５に示されるように、ＵＮＡオリゴマー３分子（１５７６、３８０、１７７７）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。図５の組成物は、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物である（１７７７（配列番号１００５および１００６）、３８０（配列番号９７３および９７４）、１５７６（配列番号９８９および９９０））。
【０３３３】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３３４】
実施例１１：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＰＸＢマウスモデルにおいて観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３３５】
ＵＮＡオリゴマーを、脂質ナノ粒子に処方または同時に処方し、ＨＢＶ感染Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｂｉｏ（ＰＸＢ）マウスに静脈内注射した。マウスは、推定で７０％以上の交換率でヒト肝細胞を含む、遺伝子型：ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋／ＳＣＩＤ［ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋：Ｂ６；１２９ＳｖＥｖ−Ｐｌａｕ，ＳＣＩＤ：Ｃ．Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ Ｊｃｌ］であった。
【０３３６】
血清のウイルス終点を、１回の投与後１５日目までモニターした。
【０３３７】
図６に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー１７７７（配列番号１１７９および１１８０）、３８０（配列番号１１７３および１１７４）および１５７８（配列番号１１７５および１１７６）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３３８】
図７に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー１７７７（配列番号１１７９および１１８０）、３８０（配列番号１１７３および１１７４）および１５７８（配列番号１１７５および１１７６）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３３９】
図８に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー１７７７（配列番号１１７９および１１８０）、３８０（配列番号１１７３および１１７４）および１５７８（配列番号１１７５および１１７６）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３４０】
図９に示されるように、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７（配列番号１１７９および１１８０）、３８０（配列番号１１７３および１１７４）および１５７８（配列番号１１７５および１１７６））での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。
【０３４１】
図１０に示されるように、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７（配列番号１１７９および１１８０）、３８０（配列番号１１７３および１１７４）および１５７８（配列番号１１７５および１１７６））での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。
【０３４２】
図１１に示されるように、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７（配列番号１１７９および１１８０）、３８０（配列番号１１７３および１１７４）および１５７８（配列番号１１７５および１１７６））での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。
【０３４３】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３４４】
実施例１２：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。一般的に、ＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルは、ＨＢＶ感染症の研究において頑強なモデルであり、薬剤効果および効力における、直接的な臨床上の適切性を提供し得る。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３４５】
ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に、処方または同時に処方し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。
【０３４６】
本研究は、マウスを、０日目に３ｍｇ／ｋｇ、４日目に５ｍｇ／ｋｇ、８日目に１０ｍｇ／ｋｇで処理する、漸増用量の計画を用いた。
【０３４７】
血清ウイルスの終点を、処置の１５日前および処置の少なくとも２２日後にモニターした。
【０３４８】
図１２に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー３８０（配列番号９７３および９７４）、１７７７（配列番号１００５および１００６）、および１５７６（配列番号１００３および１００４）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３４９】
図１３に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー３８０（配列番号９７３および９７４）、１７７７（配列番号１００５および１００６）、および１５７６（配列番号１００３および１００４）ならびに同一の化合物のＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１５７６、３８０、１７７７）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。この直接比較は、３分子組成物が、驚くべきことに、個々のオリゴマーと比較して、効果の持続時間中、常に効力が増大していたことを示す。
【０３５０】
図１４に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー３８０（配列番号９７３および９７４）、１７７７（配列番号１００５および１００６）、および１５７６（配列番号１００３および１００４）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３５１】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３５２】
実施例１３：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３５３】
ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に同時に処方し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。
【０３５４】
本研究は、マウスを、０日目に３ｍｇ／ｋｇ、４日目に５ｍｇ／ｋｇ、８日目に１０ｍｇ／ｋｇで処理する、漸増用量の計画を用いた。
【０３５５】
血清ウイルスの終点を、処置後１２日目までモニターした。
【０３５６】
図１５に示されるように、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７（配列番号１１７９および１１８０）、３８０（配列番号１１７３および１１７４）および１５７８（配列番号１１７５および１１７６））での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。インビボでの用量依存的な応答は、ＵＮＡオリゴマー組成物の薬理的効果を示す。
【０３５７】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３５８】
実施例１４：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルで観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。一般的に、ＡＡＶ−ＨＢＶマウスモデルは、ＨＢＶ感染症の研究において頑強なモデルであり、薬剤効果および効力における、直接的な臨床上の適切性を提供し得る。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３５９】
ＵＮＡオリゴマーを脂質ナノ粒子中に処方、または同時に処方し、組換えＨＢＶゲノムの、肝臓へのＡＡＶを介する輸送後に、活性なＨＢＶ複製を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内注射した。
【０３６０】
本研究は、マウスを、０日目に３ｍｇ／ｋｇ、４日目に５ｍｇ／ｋｇ、８日目に１０ｍｇ／ｋｇで処理する、漸増用量の計画を用いた。
【０３６１】
血清ウイルスの終点を、処置の１５日前および処置の少なくとも２２日目後にモニターした。
【０３６２】
図１６に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー１５７８（配列番号９９３および９９４）および１５７５（配列番号９８８および９８９）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３６３】
図１７に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー１５７８（配列番号９９３および９９４）および１５７５（配列番号９８８および９８９）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｅＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３６４】
図１８に示されるように、各ＵＮＡオリゴマー１５７８（配列番号９９３および９９４）および１５７５（配列番号９８８および９８９）での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢＶ ＤＮＡにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた（平均値±ＳＥＭ）。
【０３６５】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３６６】
実施例１５：ＵＮＡオリゴマーのＨＢＶ阻害効果を、ｐｓｉＣＨＥＣＫ２アッセイで観察した。１以上の２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチドを含むＵＮＡオリゴマー化合物における、標的発現の阻害割合を測定した。
【０３６７】
表２８に示されるように、ＵＮＡオリゴマー化合物は、１０ｎＭにおいて、標的発現の少なくとも８７％の阻害を示した。
表２８：ＵＮＡオリゴマーの活性
【表２８】
2018520685.tif 000059
【０３６８】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３６９】
実施例１６：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＰＸＢマウスモデルにおいて観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３７０】
ＵＮＡオリゴマーを、脂質ナノ粒子に処方または同時に処方し、ＨＢＶ感染Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｂｉｏ（ＰＸＢ）マウスに静脈内注射した。マウスは、推定で７０％以上の交換率でヒト肝細胞を含む、遺伝子型：ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋／ＳＣＩＤ［ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋：Ｂ６；１２９ＳｖＥｖ−Ｐｌａｕ，ＳＣＩＤ：Ｃ．Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ Ｊｃｌ］であった。
【０３７１】
表２９に示されるように、両方のＵＮＡオリゴマーでの処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
表２９：ＨＢｓＡｇ（％対照）（ｈＡｌｂで正規化）
【表２９】
2018520685.tif 000060
【０３７２】
したがって、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３７３】
実施例１７：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＰＸＢマウスモデルにおいて観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３７４】
ＵＮＡオリゴマーを、脂質ナノ粒子に処方または同時に処方し、ＨＢＶ感染Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｂｉｏ（ＰＸＢ）マウスに静脈内注射した。マウスは、推定で７０％以上の交換率でヒト肝細胞を含む、遺伝子型：ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋／ＳＣＩＤ［ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋：Ｂ６；１２９ＳｖＥｖ−Ｐｌａｕ，ＳＣＩＤ：Ｃ．Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ Ｊｃｌ］であった。
【０３７５】
表３０に示されるように、３分子ＵＮＡオリゴマー組成物での処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
表３０：血清ＨＢｓＡｇ（％対照）（ｈＡｌｂで正規化）
【表３０】
2018520685.tif 000061
【０３７６】
表３０における組成物は：
ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７（配列番号１００５および１００６）、３８０（配列番号９７３および９７４）、および１５７５（配列番号９８７および９８８））；
ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７（配列番号１００５および１００６）、３８０（配列番号９７３および９７４）、および１５７８（配列番号９９３および９９４））；
ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７（配列番号１００５および１００６）、３８０（配列番号９７３および９７４）、および１５７６（配列番号９８９および９９０））である。
【０３７７】
したがって、本発明の３分子ＵＮＡオリゴマー組成物は、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３７８】
実施例１８：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＰＸＢマウスモデルにおいて観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３７９】
ＵＮＡオリゴマーを、脂質ナノ粒子に処方または同時に処方し、ＨＢＶ感染Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｂｉｏ（ＰＸＢ）マウスに静脈内注射した。マウスは、推定で７０％以上の交換率でヒト肝細胞を含む、遺伝子型：ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋／ＳＣＩＤ［ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋：Ｂ６；１２９ＳｖＥｖ−Ｐｌａｕ，ＳＣＩＤ：Ｃ．Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ Ｊｃｌ］であった。
【０３８０】
表３１に示されるように、３分子ＵＮＡオリゴマー組成物での処理は、遺伝子型Ａｅ、Ｂｊ、ＣおよびＤにおいて、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
表３１：血清ＨＢｓＡｇ（％対照）（ｈＡｌｂで正規化）
【表３１】
2018520685.tif 000062
【０３８１】
表３１の組成物は、ＵＮＡオリゴマー３分子組成物（１７７７（配列番号１００５および１００６）、３８０（配列番号９７３および９７４）、および１５７８（配列番号９９３および９９４））である。
【０３８２】
したがって、本発明の３分子ＵＮＡオリゴマー組成物は、インビボにおいて、様々な遺伝子型にわたって、著しく、予測できない程有利な、ＨＢＶ阻害効果を示した。
【０３８３】
実施例１９：ＵＮＡオリゴマーにおけるインビボでのＨＢＶ阻害効果を、ＨＢＶ感染症のＰＸＢマウスモデルにおいて観察した。本発明のＵＮＡオリゴマーは、ホスホロチオエート結合を有し、インビボにおいて、ＨＢＶ血清感染のパラメータの著しい減少を示した。本研究において、ＵＮＡオリゴマーは、脂質ナノ粒子製剤に含まれていた。
【０３８４】
ＵＮＡオリゴマーを、脂質ナノ粒子に処方または同時に処方し、ＨＢＶ感染Ｐｈｏｅｎｉｘ Ｂｉｏ（ＰＸＢ）マウスに静脈内注射した。マウスは、推定で７０％以上の交換率でヒト肝細胞を含む、遺伝子型：ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋／ＳＣＩＤ［ｃＤＮＡ−ｕＰＡｗｉｌｄ／＋：Ｂ６；１２９ＳｖＥｖ−Ｐｌａｕ，ＳＣＩＤ：Ｃ．Ｂ−１７／Ｉｃｒ−ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ Ｊｃｌ］であった。
【０３８５】
表３２に示されるように、ＵＮＡオリゴマーでの処理は、ＰＢＳ対照群と比較して、ウイルス終点の血清ＨＢｓＡｇにおける、迅速かつ持続的な減少を生じた。
表３２：ＨＢｓＡｇ（％対照）（ｈＡｌｂで正規化した）
【表３２】
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【０３８６】
したがって、ホスホロチオエート結合（ＰＳ）を含む、本発明のＵＮＡオリゴマーは、インビボにおいて、著しく、予測できない程有利なＨＢＶ阻害効果を、より長い持続期間（１５日目〜２０日目）で示した。ホスホロチオエート結合は以下であった：第一の鎖の５’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、第一の鎖の３’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、第一の鎖の３’末端から２番目および３番目のモノマー間の１つのホスホロチオエート結合、および第二の鎖の３’末端における２つのモノマー間の１つのホスホロチオエート結合。
【０３８７】
実施例２０：ＨＢＶ基準ゲノムＨＢ９７４３７６（３２２１ｂｐ）
配列番号１１８１
【化８−１】
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【化８−２】
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【化８−３】
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【０３８８】
本明細書で具体的に言及する全ての刊行物、特許および書籍は、全ての目的について、参照により本明細書に取り込まれる。
【０３８９】
記載された特定の方法論、プロトコル、材料および試薬は様々であり得るため、本明細書がこれらに限定されないことが理解される。また、本明細書中で用いた用語は、特定の実施態様のみを説明する目的のものであり、添付の特許請求の範囲によって包含される、本発明の範囲を限定する意図ではないことも理解される。
【０３９０】
本明細書および添付の特許請求の範囲において、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上明らかな他の指示がない限り、複数形を含むことを注記しておく。さらに、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１以上の」および「少なくとも１つの」は、本明細書において、交換可能に使用され得る。また、用語「含む」、「含んでいる」、「含有する」、「包含する」および「有する」は、交換可能に使用され得ることも注記しておく。
【０３９１】
さらなる詳述なしに、当業者は、上述の記載に基づいて、本発明を十分な範囲で利用できると考えられる。したがって、以下の具体的な実施態様は、単なる説明として解釈されるべきであり、いかなる方法においても本開示の残部の限定とはならない。
【０３９２】
本明細書に開示される全ての特徴は、任意の組合せで組み合わせてよい。本明細書に開示される各特徴を、同一、等価、または同様の目的を果たす代替の特徴によって、置換してもよい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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