(57)【要約】  本発明は、ケラチノサイト前駆細胞における、特に、成熟した皮膚ならびに／または乾燥および硬度低下の徴候を示す皮膚に対する、ＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する表皮細胞の再生を増加させることを意図した作用物質としての、ペパーミント抽出物の化粧品組成物における使用に関する。本発明は、成熟した皮膚および／または乾燥した皮膚を対象とした、ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する表皮細胞の再生を維持または制御するための美容的ケア方法にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する皮膚の表皮細胞の再生を増加させるために使用するための有効量のＭｅｎｔｈａ  ｐｉｐｅｒｉｔａとも称されるペパーミントの抽出物を含む組成物。
【請求項２】
前記ＮＯＴＣＨタンパク質が、ＮＯＴＣＨ１およびＮＯＴＣＨ２タンパク質であることを特徴とする、請求項１記載の使用。
【請求項３】
無処理コントロールと比較して表現される、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって測定されるＮＯＴＣＨ１またはＮＯＴＣＨ２タンパク質をコードする遺伝子の遺伝子発現の定量（ＲＱ）が、１を超えることを特徴とする、請求項２記載の使用。
【請求項４】
前記抽出物が、水性媒質中の酵素的加水分解によって得られる、気生部分の抽出物であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項記載の使用。
【請求項５】
前記組成物が、該組成物の重量に対して０．００５〜０．５重量％の乾物の該抽出物を含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、顔面、より詳細には、日射に曝露される範囲である、眼の周囲、胸部、口唇および手に適用されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項記載の使用。
【請求項７】
前記皮膚が、乾燥した皮膚または成熟した皮膚などの再生プロセスが乱れた皮膚であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項記載の使用。
【請求項８】
前記組成物が、ブナ（Ｆａｇｕｓ  Ｓｙｌｖａｔｉｃａ）の芽の水性抽出物またはＢｅｌｌｉｓ  ｐｅｒｅｎｎｉｓの花の水性抽出物から選択される、ＮＯＴＣＨタンパク質の発現に対して作用する活性物質を含むことを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項記載の使用。
【請求項９】
前記組成物が、ＵＶスクリーニング剤および／または太陽光を反射することができる粒子を含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０】
ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する皮膚の表皮細胞の再生を維持または制御するための皮膚の美容的ケアのための方法であって、該方法は、皮膚の老化、光老化、皮膚の再生プロセスの乱れによって引き起こされるたるみまたは乾燥の徴候を示す顔面または身体の少なくとも一部への有効量のペパーミント抽出物の適用を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ケラチノサイト前駆細胞、特に、成熟した皮膚および乾燥の徴候を示す皮膚におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する表皮細胞の再生を維持または制御するための化粧品組成物におけるペパーミント（Ｍｅｎｔｈａ  ｐｉｐｅｒｉｔａ）抽出物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来技術
化粧品組成物におけるペパーミント抽出物の使用は、長い間知られている。
【０００３】
例えば、Ｍｅｎｔｈａ  ｐｉｐｅｒｉｔａの抽出物は、仏国特許出願公開第２８４８８５１号明細書の文書において、皮膚に対して鎮静作用を有する活性物質として提唱された。
【０００４】
仏国特許出願公開第２８９５６７８号明細書の文書には、過剰なメラニン形成に関連する皮膚障害を処置するため、ならびに／あるいはメラニンの合成および／もしくは放出を予防するためおよび／または減少させるために、シソ科の少なくとも１つの植物の細胞の抽出物を活性物質として化粧品組成物において使用すること、ならびにまた、特に内部ストレス、例えば、精神的ストレスによって誘導されるメラニン形成のプロセスに関する前記抽出物の特性が開示されている。
【０００５】
しかしながら、これらの文書には、表皮細胞の再生、特に、クローン原性能（ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）が高いケラチノサイトの再生の維持または制御におけるペパーミント抽出物の作用は開示されていない。
【０００６】
それどころか全く予想外に、本発明者らは、ペパーミント抽出物が、ＮＯＴＣＨタンパク質の発現を刺激する能力を有するヒトケラチノサイトに存在するＮＯＴＣＨタンパク質の発現を刺激することを発見した。
【０００７】
表皮を形成しているケラチノサイトの中で、クローン原性能が高い細胞は卓越しており、それらの細胞は、最大量の娘細胞を産生し、それにより、表皮細胞の再生において不可欠な役割を果たし、特に長期間にわたってこの再生を維持する。
【０００８】
これらの特定のケラチノサイトは、本願において「幹細胞」または「ケラチノサイト幹細胞」または「ケラチノサイト前駆細胞」とも称され、表皮を構成している細胞数の１％未満に相当し、その基底層に優先的に配置されており、それによって、ＤＮＡ損傷、特に、日射、特に、大部分が表皮の上部の細胞層でフィルタリングされるＵＶ−Ｂ線の作用によって誘導されるＤＮＡ損傷からそれらの細胞が効果的に保護される。
【０００９】
上記細胞の娘である、一時的増幅細胞（ｔｒａｎｓｉｔ−ａｍｐｌｉｆｙｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ）と称される細胞は、上で定義された「幹細胞」よりも低い再生能を有するが表皮の再生にも関与することから、幹細胞が頻繁に分裂しすぎることがなくなる。
【００１０】
ＮＯＴＣＨタンパク質、例えば、ＮＯＴＣＨ１およびＮＯＴＣＨ２タンパク質は、膜貫通レセプターのファミリーに属しており、膜貫通レセプターは、レセプターと近隣の細胞が有するリガンドとの間の直接的な結合によって活性化される。この結合によって、そのレセプターの細胞内部分（ＮＩＣＤ）がガンマセクレターゼによる切断の後に細胞膜から放出される。次いで、そのＮＩＣＤフラグメントは、ケラチノサイトの核に移動し、そこで転写因子と会合して、一連の標的遺伝子を制御する（Ａｉｔｈａｌ  Ｍ．Ｇ．Ｓ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ．Ｇｅｎｅｔ．（２０１３）Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＮＯＴＣＨ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）。
【００１１】
表皮において、ＮＯＴＣＨは、この組織のホメオスタシスを促進するように細胞の増殖および分化が協調されることを保証することによって必要不可欠な役割を果たす。ＮＯＴＣＨシグナル伝達プロセスの機能不全は、表皮およびその付属器の大きな異常につながり、例えば、不完全な皮膚のバリア、または皮脂を産生する細胞である脂腺細胞の数を減少させることによる不十分な皮脂産生などの機能低下を引き起こす（Ｍｅｌｎｉｋ  ＢＣ，Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．（２０１４），Ｔｈｅ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｉｍｐａｉｒｅｄ  ＮＯＴＣＨ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）。いくつかの障害も、ＮＯＴＣＨシグナル伝達プロセスの機能不全に起因する；アトピー（Ｍｅｌｎｉｋ  ＢＣ，Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ  Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．（２０１４），Ｔｈｅ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｉｍｐａｉｒｅｄ  ＮＯＴＣＨ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｉｎ  Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、活性な表皮性または濾胞性メラノサイトの減少を伴う白斑（Ｓｅｌｅｉｔ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ  Ａｎｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｐａｔｈｏｌ．２０１４  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｂｅｒｒａｎｔ  ＮＯＴＣＨ−１  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｖｉｔｉｌｉｇｏ：ａｎ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ）および一部の癌（Ｎｏｗｅｌｌ  Ｃ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  Ｍｅｄ．（２０１３）Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ＮＯＴＣＨ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ／Ａｉｔｈａｌ  Ｍ．Ｇ．Ｓ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ．Ｇｅｎｅｔ．（２０１３）Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＮＯＴＣＨ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ＤＮＡ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）。したがって、ＮＯＴＣＨの機能不全は、皮脂産生、皮膚のバリア機能または色素沈着に関するか否かを問わず、単独で数多くの皮膚障害の原因になり得る。
【００１２】
いくつかの研究は、共通して、ＮＯＴＣＨによって制御される細胞シグナル伝達が、良好な皮膚修復にとって不可欠であると示唆しており、創傷治癒プロセスのいくつかの段階の制御、特に、血管新生の制御、細胞外マトリックスの産生および炎症に関与すると報告されている（Ｌｉｒｓｔｅｎ  Ａ  Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．（２０１３）Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｗｏｕｎｄ  ｈｅａｌｉｎｇ：ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｆｏｒ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）。
【００１３】
ＮＯＴＣＨの発現は、高齢個体を起源とする、成熟した皮膚（インビボとインビトロの両方）、ケラチノサイト幹細胞、および一時的増幅細胞と称されるその娘細胞において減少していることが示された（Ｐａｌａｚｚｏ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２０１１），１３１，Ｓ１１６−Ｓ１１７．ＮＯＴＣＨ−１  ａｎｄ  ＮＯＴＣＨ−２  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｓｋｉｎ  ａｇｅｉｎｇ  ａｎｄ  ＵＶＢ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ）。
【００１４】
ＮＯＴＣＨシグナル伝達の不活性化は、細胞周期を阻止し、細胞の有糸分裂およびゆえに表皮の再生プロセスを妨げる。このＮＯＴＣＨの不活性化は、ケラチノサイト幹細胞の成熟前の分化も引き起こし、再生ケラチノサイトプールの枯渇という結果を伴う。逆に、ＮＯＴＣＨの発現が増加すると、ケラチノサイトの分化プロセスが減少する（Ｍｏｒａｎｄｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２０１４）Ｓ２  ＮＯＴＣＨ１  ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｈｕｍａｎ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ：ａ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｌｏｏｐ  ｗｉｔｈ  ｓｕｒｖｉｖｉｎ）。これらの研究から、このタンパク質が、表皮の再生を保証する前駆体である未分化なケラチノサイト集団の維持において決定的な役割を果たすことが示された。したがって、加齢に伴うおよびＵＶＢ照射への曝露中の表皮におけるＮＯＴＣＨ発現の消失の実証は、老化および光老化における皮膚細胞の再生の減少の生物学的原因の１つとみなされ得る。
【００１５】
本発明者らは、表皮のケラチノサイト、より正確には、ケラチノサイト前駆細胞とも称される、分裂能力を有するケラチノサイトにおいて、ＮＯＴＣＨタンパク質の発現を著しく刺激することが可能であることをここで示す。
【００１６】
ペパーミント抽出物は、そのケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨ産生に対する刺激作用に起因して、表皮細胞の再生を維持または強化するために特に有益な作用物質である。
【００１７】
特に、表皮の再生プロセスが乱れた場合に、このペパーミント抽出物の新規特性を利用することも可能である。
【００１８】
このことは、特に、一方では、再生能が低下した成熟した皮膚にとってその通りであり、脱水が皮膚の再生プロセスに悪影響を及ぼし得るので、他方では、脱水状態の皮膚にとってその通りである。
【００１９】
実際に、本発明者らは、細胞の水分損失の原因となる高浸透圧環境のせいで、ケラチノサイト前駆細胞が娘細胞を産生する能力が低下することを見出した。したがって、皮膚細胞が脱水に曝されると、その再生能が著しく低下する。
【００２０】
この所見の裏付けは、皮膚の水分の供給および分布を促すことによって表皮の水分バランスを保証することを可能にする水チャネルであるアクアポリン３が不足すると、表皮細胞の増殖および皮膚の創傷治癒が遅れるという事実である（Ｍ  Ｂｏｕｒｙ−Ｊａｍｏｔ，ｅｔ  ａｌ．Ｓｋｉｎ  Ａｑｕａｐｏｒｉｎｓ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｈｙｄｒａｔｉｏｎ，Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ，ａｎｄ  Ｓｋｉｎ  Ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ  Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｅ．Ｂｅｉｔｚ（ｅｄ．），Ａｑｕａｐｏｒｉｎｓ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １９０，２０５ｃ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ（２００９），２０５−２１７）。
【００２１】
さらに、乾燥した環境条件に皮膚が曝露されることに起因して、表皮細胞は、脱水の状況に直面し得る。冷気または連続的な清浄操作に皮膚を曝露すると、皮膚に水分が留まることを可能にする皮膚のバリアの脂質が破壊されることがあり、それによって水分損失がいっそう悪化し、そのプロセスによって、皮膚の細胞は、局所的に水分不足に曝される。酸化性の大気汚染物質（オゾン）または日射への曝露などの他の環境ストレス要因も、水分バリアに悪影響を及ぼすことがある。したがって、表皮は、脱水につながりがちな曝露の状況にあることが多いことがある。
【００２２】
本発明者らは、皮膚の水分損失（「不感水分損失」または「ＩＷＬ」と称される）を２倍にするために粘着性の細片で皮膚のバリアを部分的に除去することによって、このバリアを再構築する（最初のＩＷＬに戻す）プロセスが、皮膚が乾燥しているときに一層遅くなることも観察した。したがって、皮膚の乾燥は、皮膚のバリアが損傷していると、脱水に曝露される時間を延長する。
【００２３】
したがって、本発明は、乾燥したおよび脱水状態の皮膚ならびに／または成熟した皮膚のケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する表皮細胞の再生を維持または制御することを可能にする方法を提案する。
【００２４】
本発明の別の態様は、表皮のケラチノサイト幹細胞が他のケラチノサイトよりも多くのニューロトロフィンＮＧＦ（神経成長因子）を分泌する能力に関する（Ｍａｒｃｏｎｉ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００３）１２１，１５１５−１５２１；Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｃｕｌｔｕｒｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ）。ＮＧＦは、真皮において優勢なＩ型コラーゲンの伸張を、皮膚線維芽細胞を介して刺激することができると示されている（Ｐａｌａｚｚｏ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２０１２）２２７：１０１７−２５，Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎｓ  ｏｎ  ｄｅｒｍａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）。
【００２５】
したがって、本発明は、ＮＯＴＣＨタンパク質の高発現に密接に関連するケラチノサイト幹細胞の状態を維持することによって真皮の堅さおよび弾性のプロセスに寄与することも目的とする。
【００２６】
最後に、著者らは、ＮＯＴＣＨと、ギャップ結合と称される細胞内のコミュニケーションジャンクションとの間の強い関連を予想外に実証した。これらのコミュニケーションジャンクションは、隣接したケラチノサイトが、同期するために、含んでいる小分子を互いに交換することを可能にする。これらのジャンクションは、表皮の制御およびホメオスタシスに関与しており、皮膚の光老化の主因であるＵＶＡ照射によって強い悪影響を受ける（Ｐｒｏｖｏｓｔ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８４：Ｃ５１−Ｃ５９，２００３  Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ  Ａ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔｌｙ  ｄｉｓｒｕｐｔｓ  ｇａｐ  ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ）。
【００２７】
著者らは、ルシファーイエロー色素の移行を追跡することによって測定される、ギャップ結合を介して生じるケラチノサイト間の交換が、ガンマセクレターゼ（ＮＯＴＣＨタンパク質によるシグナル伝達の実行者（ｐｅｒｐｅｔｒａｔｏｒ）である）を阻害することによってＮＯＴＣＨタンパク質によって放出されるシグナルを阻止することによって、大幅に減少したことを認めた。著者らは、ペパーミント抽出物が、この色素のケラチノサイト間の拡散を刺激するが、ＮＯＴＣＨが送るシグナルが、ガンマセクレターゼ阻害剤ＤＡＰＴ（Ｎ−［Ｎ−（３，５−ジフルオロフェナセチル）−Ｌ−アラニル］−Ｓ−フェニルグリシンｔ−ブチルエステル）によって阻止されると、この刺激は生じないという事実も見出した。著者らは、ギャップ結合を介した細胞内交換に対するペパーミント抽出物の刺激作用とは別に、ＮＯＴＣＨおよびそのシグナルを介しても刺激が生じることも示した。
【００２８】
したがって、本発明は、ケラチノサイト前駆細胞を再同期すること、特に、ＵＶＡ照射によって誘導される光老化に立ち向かうことを目的とする処置方法を提案する。
【００２９】
ＮＯＴＣＨタンパク質の産生の刺激に関するペパーミント抽出物の活性の予想外の実証は、特に有益である。なぜなら、皮膚幹細胞におけるＮＯＴＣＨの発現は、年齢とともに減少するからであり、これは、表皮細胞の再生を維持または刺激しようと努力するスキンケアのための化粧品組成物におけるペパーミント抽出物の使用の明らかな根拠となる。
【発明の概要】
【００３０】
発明の目的
したがって、本発明の主要な目的は、ペパーミント抽出物の新規使用を提供することである。
【００３１】
本発明の別の目的は、ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する表皮細胞の再生の維持または制御を意図した美容的ケア方法を提供することである。
【００３２】
本発明はまた、ＮＯＴＣＨの産生が不足している皮膚、成熟した皮膚と称される皮膚、特に、日光にひどく曝露される顔面、胸部および手の範囲の皮膚、ならびに乾燥がより強い身体の範囲、例えば、脚、腕および手、また、眼の周囲、口唇、ならびに硬度低下が顕著であり得る皮膚の範囲、例えば、顎およびおとがい、眼瞼、脇の下、大腿および腹部に特に適している。
【００３３】
本発明の別の目的は、乾燥したかつ／もしくは成熟したかつ／もしくは光老化したおよび／または乾燥したかつ／もしくは脱水状態の皮膚ならびに／あるいはたるみの徴候を示す皮膚を対象とした美容的ケア方法を提供することである。
【００３４】
本発明は、皮膚バリアおよび表皮の修復ならびに皮膚の表層の治癒を加速させるために使用され得る。
【００３５】
発明の要旨
本発明は、ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する、皮膚の表皮細胞の再生を維持または制御するための、ペパーミント抽出物の化粧品組成物における使用に関し、前記組成物は、美容的に許容され得る賦形剤も含む。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】実施例１に照らして、ペパーミント抽出物に曝露して培養したときのケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨ１の発現をヒストグラム形式で示している。
【図２】同様に実施例１に照らして、ペパーミント抽出物に曝露して培養したときのケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨ２の発現をヒストグラム形式で示している。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明は、表皮細胞の再生を維持または制御することを意図した作用物質としてのペパーミント抽出物の化粧品組成物における使用に関し、前記組成物は、美容的に許容され得る賦形剤も含む。
【００３８】
本発明の第１の主題は、ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する皮膚の表皮細胞の再生を増加させるために使用するための有効量のＭｅｎｔｈａ  ｐｉｐｅｒｉｔａとも称されるペパーミント抽出物を含む組成物に関する。
【００３９】
それらの細胞は、好ましくは、一時的増幅ケラチノサイト、およびケラチノサイト幹細胞またはケラチノサイト前駆細胞とも称されるクローン原性能が高いケラチノサイトからなる群より選択される表皮の基底層に位置するケラチノサイトである。
【００４０】
ケラチノサイトの再生は、ケラチノサイトにおけるＮＯＴＣＨ遺伝子の発現を刺激することによって都合よくもたらされ、前記ケラチノサイトにおけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現は、不足している。
【００４１】
ケラチノサイトの再生は、ケラチノサイトにおけるＮＯＴＣＨ遺伝子発現を刺激することによって都合よく促進され、その刺激は、ＮＯＴＣＨ１またはＮＯＴＣＨ２タンパク質をコードする遺伝子の、１を超え、統計的検定によって有意差がある、遺伝子発現の定量（ＲＱ）に対応すると定義される。ＮＯＴＣＨ遺伝子発現の刺激は、好ましくは、遺伝子発現の定量（参照として使用される変化しない遺伝子と比較したときのＮＯＴＣＨ遺伝子の定量に対応するＲＱ）が、１．２；１．３；１．４；１．５；１．６；１．７；１．８および１．９からなる群より選択される値と等しいかまたはそれより有意に大きい値である。遺伝子発現の定量は、好ましくは、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって測定され、無処理コントロールと比較して表現される。
【００４２】
ペパーミント抽出物は、植物細胞を実験室で培養するための手法によるインビボ培養またはインビトロ培養によって得られる、前記植物を起源とする任意の植物材料から調製された抽出物であり得る。その抽出物を得るための後者の様式では、植物の少なくとも１つの器官を起源とする植物細胞から、分化したまたは未分化な植物細胞を人工的に作製しようと努力される。
【００４３】
使用される植物材料は、植物体全体、または葉、茎、花、種子もしくは根などの植物の一部であり得る。
【００４４】
ペパーミント抽出物は、好ましくは、ペパーミント植物の気生部分の抽出物である。
【００４５】
抽出工程の前に、植物材料が乾燥および／または粉砕され得る。代替法は、収穫されていない植物を乾燥することおよび次いで目的の部分を回収することにある。
【００４６】
抽出物は、当業者に公知の種々の抽出方法によって調製され得る。
【００４７】
本発明では、ペパーミント抽出物（Ｍｅｎｔｈａ  ｐｉｐｅｒｉｔａ）は、少なくとも１つの極性溶媒を用いて得られる。
【００４８】
本発明の文脈では、「極性溶媒」は、双極子モーメントがゼロではない液体、より詳細には、２つの原子間に少なくとも１つの共有結合、ポーリング尺度によるところの０．４超かつ１．７未満（０．４＜ΔＥｎ＜１．７）の電気陰性度の差ΔＥｎを含む化合物を意味すると意図されている。
【００４９】
好ましい極性溶媒は、少なくとも１つのＯ−Ｈ型の極性共有結合を含む化合物からなる極性溶媒である。特に好ましい極性溶媒として、水、Ｃ１−Ｃ４アルコール、例えば、エタノール、Ｃ２−Ｃ６グリコールから選択される溶媒または溶媒混合物、優先的には、グリセロール、ブチレングリコールおよびプロピレングリコールまたはそれらの任意の混合物から選択される溶媒または溶媒混合物が選択される。
【００５０】
好ましい実施形態によれば、細かく微粉砕された植物材料を水に分散し、次いで、その水に酵素を加え、その酵素にとって最適なｐＨに調整しながら、酵素的加水分解を行う。
【００５１】
特定の実施形態によれば、抽出物は、水性媒質中での酵素的加水分解によって得られる、葉などの気生部分の抽出物である。
【００５２】
抽出は、還流による高温条件下で、または室温での解離によって、行われ得る。
【００５３】
前記抽出の重量収量を改善するために、抽出中に超音波を使用することが好都合にも可能である。
【００５４】
抽出プロセスは、例えば、活性炭粒子の存在下において少なくとも１つの極性溶媒の溶液による抽出物の処理、および／または美容的見地もしくは皮膚科学的見地から許容され得る無極性溶媒、特に、６もしくは７個の炭素原子を含むアルカンもしくは超臨界ＣＯ２を用いる抽出物の処理の形態における、沈降、限外濾過もしくは遠心分離による溶媒相と使用された植物材料との分離、脱色および／または精製および／または脱脂の少なくとも１つの工程も含み得る。
【００５５】
抽出プロセスには、抽出物を濃縮するために抽出溶媒を部分的または完全に除去するための工程も追加され得る。
【００５６】
前者の場合、抽出物は通常、かなりの量の有機溶媒が無くなった濃縮物が得られるまで濃縮され；後者の場合、乾燥残渣が得られるまで濃縮される。
【００５７】
あるいは、抽出工程の生成物は、粉末の形態で存在するように、微粒化および／または凍結乾燥され得る。
【００５８】
ペパーミント抽出物は、粉末の形態、または少なくとも１つの美容的に許容され得る溶媒における前記粉末の溶液もしくは懸濁液の形態で化粧品組成物において使用され得、その溶媒は、抽出のために使用されたものと同一であってもよいし、異なってもよい。
【００５９】
本発明の文脈における有用な抽出物の例として、仏国特許出願公開第２８４８８５１号明細書の文書に記載されている方法によって調製される抽出物を使用することが可能である。
【００６０】
商業的に入手可能なペパーミント抽出物を使用することも可能である。例として、Ａｌｂａｎ  Ｍｕｌｌｅｒが販売する、プロピレングリコールによるペパーミントの葉の抽出物、またはＳｉｌａｂがＣＡＬＭＩＳＫＩＮ（登録商標）の名称で販売するペパーミントの葉の抽出物が挙げられる。
【００６１】
別段示されない限り、ミント抽出物の量は、乾物として与えられる。「乾物」は、当業者に公知の任意の方法によって測定され得るような、抽出物の乾燥後の材料の残留量を表すために使用される。その測定は、例えば、仏国特許出願公開第２８４８８５１号明細書に記載されているプロトコルに従って行われ得る。
【００６２】
ペパーミント抽出物は、表皮細胞の再生を維持または制御するため、特に、表皮の基底層に位置する細胞、例えば、クローン原性能が高い細胞および／または一時的増幅細胞におけるＮＯＴＣＨの産生を効果的に刺激するための有効量で存在する。
【００６３】
したがって、本発明の文脈において使用される化粧品組成物は、組成物の重量に対して０．００５〜０．５重量％の乾物の抽出物、好都合には、組成物の総重量に対して０．０２重量％〜０．２重量％の乾物を含み得る。
【００６４】
上に記載されたようなペパーミント抽出物のほかに、本発明に係る組成物は、ペパーミント抽出物と同様の美容的効果および／または相補的な美容的効果を有する１つ以上の他の美容的に許容され得る活性物質、組成物に対して考慮される投与方法に関してより特に選択される賦形剤および／または製剤化ビヒクルを含み得る。
【００６５】
ブナ（Ｆａｇｕｓ  Ｓｙｌｖａｔｉｃａ）の芽の水性抽出物、例えば、ＧａｔｅｆｏｓｓｅがＧａｔｕｌｉｎｅ（登録商標）ＲＰの名称で販売しているもの、またはＢｅｌｌｉｓ  ｐｅｒｅｎｎｉｓの花の水性抽出物、例えば、ＣＬＲがＢｅｌｉｄｅｓ（登録商標）の名称で販売しているものから選択される、正常なヒトケラチノサイトにおけるＮＯＴＣＨの発現に対して作用する活性物質と、ペパーミント抽出物とを組み合わせることが特に可能である。
【００６６】
ケラチノサイト前駆細胞において強く発現され、細胞のアポトーシスに関して保護的な役割を有するタンパク質であるサバイビンの形成を刺激または促進する有効量の抽出物、例えば、サバイビンを含むＣＰＣ（染色体パッセンジャー複合体）と呼ばれるタンパク質複合体を刺激する、Ｃｏｌｅｕｓ  ｆｏｒｓｋｏｌｉｉ、Ｌｉｍｎｏｐｈｉｌａ  ｃｏｎｆｅｒｔａおよびＬｅｐｅｃｈｉｎｉａ  ｃａｕｌｅｓｃｅｎｓの抽出物またはＯｒｙｚａ  ｓａｔｉｖａの抽出物、例えば、Ａｓｈｌａｎｄ製のＳｕｒｖｉｘｙｌ  ＲＺＴＭとペパーミント抽出物を都合良く組み合わせることが可能である。
【００６７】
以下の作用によって皮膚乾燥の徴候の出現を遅らせるかまたは妨げると知られている植物からの１つ以上の抽出物をペパーミント抽出物と組み合わせることが特に可能である：小さな親水性分子によって提供される湿潤効果、ヒアルロン酸の形成を刺激する作用（例えば、Ａｌｐｉｎｉａ  ｇａｌａｎｇａの葉の抽出物）もしくはその分解を阻害する作用、細胞間の水分損失を制限するために表皮のタイトジャンクションの構成物の形成を刺激する作用（例えば、Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓの根の抽出物）、ヒアルロン酸レセプターまたはＣＤ４４の形成を刺激する作用（例えば、Ｖｉｏｌａ  ｔｒｉｃｏｌｏｒの抽出物）、表皮のアドヘレンス、デスモソームおよびコルネオデスモソームジャンクションの形成を刺激する作用（例えば、Ａｒｏｌｅａ  ｌａｖａｎｄａ抽出物）、水分バリア機能に寄与する表皮脂質、特にセラミド、脂肪酸およびコレステロールの形成を刺激する作用（例えば、キビ抽出物）、皮脂、特にスクアレンおよびトリグリセリドの合成を刺激する作用、もしくは逆に５−アルファ−レダクターゼを阻害する作用（例えば、Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍの種子抽出物）、または皮膜形成製剤によって皮膚の表面を部分的に塞ぐ作用。
【００６８】
ペパーミント抽出物は、水和特性を有する、１つ以上の分子および／または１つ以上の植物抽出物、例えば、グリコール、特にグリセロール、あるいは天然のポリオール、天然もしくは合成のセラミド、尿素、ヒアルロン酸または乳酸とも組み合わされ得る。
【００６９】
単独でまたは組み合わせて使用されると皮膚細胞におけるアクアポリンの発現を増加させる１つの活性物質または複数の活性物質、例えば、Ａｊｕｇａ  ｔｕｒｋｅｓｔａｎｉｃａ抽出物、Ｐａｅｏｎｉａ  ｓｕｆｆｒｕｔｉｃａ抽出物、バラ、ｋｎｉｐｈｏｐｈｉａ  ｕｖａｒｉａ、Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｕｓ、Ｏｒｉｚａ  ｓａｔｉｖａ、Ｍａｌｖａ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ、Ｓａｎｇｕｉｓｏｒｂａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｏｎｏｐｏｒｄｕｍ  ａｃａｎｔｈｒｉｕｍ、Ｚｅａ  ｍａｙｓ、Ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌａ  ｕｌｍａｒｉａ、Ｓａｌｉｘ  ａｌｂａ、ＲｈｏｄｏｐｈｙｃｃｅａまたはＣｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ抽出物およびアスコルビン酸２−グルコシドとペパーミント抽出物を組み合わせることが特に有益である。
【００７０】
ペパーミント抽出物は、ラン科（Ｏｒｃｈｉｄａｃｅａｅ）、特に、表皮細胞のアクアポリンに対する作用を有する、バンダ属の少なくとも１つのラン、例えば、Ｖａｎｄａ  ｃｏｅｒｕｌｅａランの抽出物、またはデンドロビウム属またはファレノプシス属に属する１つ以上の植物からの少なくとも１つの抽出物と化粧品組成物において都合よく組み合わされ得る。
【００７１】
抗酸化特性を有する１つ以上の分子または植物抽出物、例えば、ポリフェノール、タンニン酸、エピガロカテキンおよびそれを含む天然の抽出物、エピガロカテキン−３−ガレート、アントシアニン、カロテン、ローズマリー抽出物、オリーブの葉の抽出物、緑茶、リスベラトロールおよびその誘導体、ピクノゲノール、エルゴチオネイン、Ｎ−アセチルシステイン、ビオチン、キレート剤、イデベノン、植物抽出物、例えば、Ｐｒｏｖｉｔａｌ製のＰｒｏｎａｌｅｎ  Ｂｉｏｐｒｏｔｅｃｔ  ＴＭ、コエンザイムＱ１０、バイオフラボノイド、ＳＯＤ（スーパーオキシドジスムターゼ）、フィタントリオール、リグナン、メラトニン、ピドレート、トコフェロールエステルまたはその塩、アスコルビン酸およびその塩、アルギニンピロリドンカルボキシレート、セレンベースの誘導体、グルタチオン、ならびにリン酸ビタミンＥおよびエルゴチオネインを含むトコトリエノールおよびビタミンＥの様々なアイソフォームをペパーミント抽出物と組み合わせることも特に有益であり得る。
【００７２】
ペパーミント抽出物は、ＵＶＡおよびＵＶＢタイプの日射に対する化学的または物理的スクリーニング剤、例えば、皮膚に対するこの照射の影響を軽減することができる粒子および／または太陽光を反射することができる粒子からなるスクリーニング剤と組み合わされるかまたは組み合わされない合成スクリーニング剤と都合よく組み合わされ得る。
【００７３】
ＵＶスクリーニング剤は、無機ＵＶスクリーニング剤、有機親水性ＵＶスクリーニング剤および有機脂溶性ＵＶスクリーニング剤から選択され得る。
【００７４】
「有機親水性ＵＶスクリーニング剤」は、本組成物の水相に溶解され得るかまたはコロイド型もしくはミセル型で分散され得る、２８０ｎｍ〜４００ｎｍの範囲の波長の紫外線（ＵＶ）を吸収する任意の有機化合物を意味すると意図されている。
【００７５】
「有機脂溶性ＵＶスクリーニング剤」は、その分子状態で油に溶解され得るかまたはコロイド型もしくはミセル型で油に分散され得る、２８０ｎｍ〜４００ｎｍの範囲の波長の紫外線を吸収する任意の有機化合物を意味すると意図されている。
【００７６】
本発明の組成物は、金属酸化物色素から選択される少なくとも１つの無機ＵＶスクリーニング剤を都合よく含む。
【００７７】
これらの色素は、チタンの酸化物（非晶質のもの、またはルチル型および／もしくはアナターゼ型で結晶化されたもの）、鉄の酸化物、亜鉛の酸化物、ジルコニウムの酸化物またはセリウムの酸化物であることが好都合である。
【００７８】
金属酸化物色素粒子は、通常、５ｎｍ〜１００ｎｍ、好ましくは、１０ｎｍ〜５０ｎｍの平均サイズ（Ｄ５０）を有する。
【００７９】
色素は、表面処理されていることがあり、つまり、酸化ケイ素、金属酸化物、例えば、酸化セリウム、アルミナ、シリカ、アルミニウム化合物、ケイ素化合物またはそれらの混合物、アミノ酸、蜜ろう、脂肪酸、脂肪アルコール、陰イオン界面活性剤、レシチン、脂肪酸のナトリウム塩、カリウム塩、亜鉛塩、鉄塩またはアルミニウム塩、（チタンまたはアルミニウムの）金属アルコキシド、ポリエチレン、アルキルシラン、ポリジアルキルシロキサンおよびポリアルキルヒドロシロキサンを含む群から選択されるシリコーン、タンパク質（コラーゲン、エラスチン）、アルカノールアミンまたはヘキサメタリン酸ナトリウムなどの化合物による化学的、電子的、機械化学的および／または機械的な性質の１つ以上の表面処理を受けていることがある。
【００８０】
親水性ＵＶスクリーニング剤には、下記にＩＮＣＩ名または化学名で示される以下のＵＶスクリーニング剤が利用され得る：
−ＣＨＩＭＥＸがＭＥＸＯＲＹＬ（登録商標）ＳＸの名称で販売しているテレフタリリデンジカンフルスルホン酸（ＩＮＣＩ名：テレフタリリデンジカンフルスルホン酸）
−ビス−ベンゾアゾリル誘導体、例えば、欧州特許第６６９３２３号および米国特許第２，４６３，２６４号に記載されているもの、より詳細には、Ｈａａｒｍａｎｎ  ＆  Ｒｅｉｍｅｒが商品名ＮＥＯ  ＨＥＬＩＯＰＡＮ（登録商標）ＡＰとして販売している化合物フェニルジベンゾイミダゾールテトラスルホン酸二ナトリウム
−ｐ−アミノ安息香酸（ＩＮＣＩ名：ＰＡＢＡ）およびその誘導体、例えば、１−（４−アミノベンゾエート）−１，２，３−プロパントリオール（ＩＮＣＩ名：グリセリルＰＡＢＡ）およびＢＡＳＦがＵＶＩＮＵＬ（登録商標）Ｐ２５の名称で販売しているＰＥＧ−２５ＰＡＢＡ、
−特に、ＭＥＲＣＫが商品名ＥＵＳＯＬＥＸ（登録商標）２３２として販売している、２−フェニルベンズイミダゾール−５−スルホン酸（ＩＮＣＩ名：フェニルベンズイミダゾールスルホン酸）
−サリチル酸トリエタノールアミン、
−ＣＨＩＭＥＸがＭＥＸＯＲＹＬ（登録商標）ＳＬの名称で販売している３−（４’−スルホベンジリデン）カンフル（ＩＮＣＩ名：ベンジリデンカンフルスルホン酸）、
−参照名Ｔｉｎｏｓｏｒｂ（登録商標）ＭとしてまたはＦＡＩＲＭＯＵＮＴ  ＣＨＥＭＩＣＡＬがＭＩＸＸＩＭ（登録商標）ＢＢ／１００として販売しているメチレンビス−ベンゾトリアゾリルテトラメチルブチルフェノール（ＵＳＡＮ名：ビスオクトリゾール）；
−ＣＨＩＭＥＸが「ＭＥＸＯＲＹＬ  ＳＯ」の名称で販売している３−（４’−トリメチルアンモニウムベンジリデン）−１−ボルナン−２−オンメチルスルフェート（ＩＮＣＩ名：カンファーベンザルコニウムメトスルフェート）、
−商品名ＵＶＩＮＵＬ（登録商標）ＭＳ４０として販売されているベンゾフェノン−４。
【００８１】
紫外線を遮蔽し、本質的には親油性であり（非水性液体に溶解または分散され）、ポリマー粒子などの粒径の小さい親水性支持体への吸着によって親水性にされた有機分子である有機親水性ＵＶスクリーニング剤として使用することも可能である。例えば、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）の粒子に吸着された親油性ＵＶスクリーニング剤であるビス−エチルヘキシルオキシフェノールメトキシフェニルトリアジンが挙げられ得る。したがって、有機親水性ＵＶスクリーニング剤は、有機ポリマーなどの紫外線を遮蔽できない親水性支持体に吸着または吸収された、紫外線を遮蔽する有機親油性分子であり得る。
【００８２】
有機脂溶性ＵＶスクリーニング剤は、特に、種々のファミリーの化学的化合物から選択され得る。特に、パラ−アミノ安息香酸誘導体、サリチル酸誘導体、桂皮酸誘導体、アミノベンゾフェノン、アントラニル酸誘導体、ジベンゾイルメタン誘導体、［ベータ］，［ベータ］’−ジフェニルアクリレート誘導体、ベンジリデンカンファー誘導体、フェニルベンゾトリアゾール誘導体、トリアジン誘導体、ビス（レソルシニル）トリアジン、イミダゾリン誘導体、ベンザルマロネート誘導体、４，４−ジアリールブタジエン誘導体、ベンゾオキサゾール誘導体、メロシアニンおよびそれらの混合物が挙げられ得る。
【００８３】
本組成物におけるＵＶスクリーニング剤の含有量は、本組成物の総重量に対して０．５〜４０重量％、好ましくは、５〜３０重量％、なおもより優先的には、１０〜２０重量％で都合よく変動する。
【００８４】
本組成物は、好ましい適用方法または投与方法に応じて通常使用される任意のガレヌス製剤の形態で存在し得る。これらの組成物は、通常の方法に従って調製される。
【００８５】
公知の方法で、本組成物は、化粧品の分野において慣例の佐剤、例えば、脂肪性物質、乳化剤、親水性または親油性のゲル化剤、親水性または親油性の活性物質、保存剤、酸化防止剤、香料、充填剤および染料を含み得る。
【００８６】
本組成物は、好ましくは、皮膚への適用に向けて製剤化される。前記組成物は、顔面または身体の皮膚に適用されたとき、ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する表皮細胞の再生を維持または制御するために特に求められている効果を有する。
【００８７】
本組成物は、特に、乾燥の徴候を示す皮膚または成熟した皮膚および／もしくは乾燥した皮膚に適するように製剤化される。本発明は特に、再生プロセスが乱れた皮膚、例えば、ＮＯＴＣＨの産生が不足している皮膚、例えば、乾燥した皮膚または成熟した皮膚と称される皮膚に適している。
【００８８】
本組成物は、皮膚、特に、顔面、より詳細には、日光にひどく曝露される眼の周囲、胸部および手の範囲の皮膚、ならびに乾燥がより強い身体の範囲、例えば、脚、腕および手、また、口唇ならびに硬度低下が顕著であり得る皮膚の範囲、例えば、顎およびおとがい、眼瞼、脇の下、大腿および腹部に適用される。
【００８９】
本化粧品組成物は、例えば、水性、水性−アルコール性もしくは油性の溶液、溶液タイプの分散液またはローションもしくはセラムタイプの分散液、水中油型もしくは油中水型エマルジョンまたはグリセロールベースもしくはシリコーンベースの相を含むエマルジョン、ミルクタイプの液状もしくは半液状の粘稠度のもの、クリームタイプの懸濁液もしくはエマルジョン、水性（ヒドロゲル）または無水ゲル、マイクロエマルジョン、マイクロカプセル、あるいは連続液相または半液相に分散された微小粒子、あるいはイオン性および／または非イオン性のタイプの小胞分散液の形態であり得る。
【００９０】
本組成物は、例えば、ケアクリーム、ケアゲル、マスク、化粧品、例えば、マスカラもしくは口紅、またはメーキャップリムーバーの形態、あるいはマスク、スティックまたはパッチの形態で存在し得る。
【００９１】
本組成物がエマルジョンであるとき、それは、油を含む脂相、ならびに化粧品の分野において慣習的に使用されているものから選択される乳化剤および乳化補助剤を含む。
【００９２】
化粧品において有用な油のうち、水添ポリイソブテンおよび液状ワセリンなどの鉱油、シアバター、ヒマワリまたは杏仁から得られる植物油、動物油、合成油、特に、Ｐｕｒｃｅｌｌｉｎオイル、ミリスチン酸イソプロピルおよびパルミチン酸エチルヘキシル、ならびにフルオロオイル、例えば、ペルフルオロポリエーテルが挙げられ得る。脂肪アルコール、脂肪酸、例えば、ステアリン酸、ろう、特に、パラフィン、カルナウバろうまたは蜜ろうを使用することも可能である。シリコーン油、例えば、シクロメチコンおよびジメチコーンならびにシリコーンワックス、樹脂およびゴムを使用することも可能である。
【００９３】
乳化剤としては、例えば、ステアリン酸グリセリル、ポリソルベート６０、ＰＰＧ−３ミリスチルエーテル、セチルジメチコーンコポリオールなどのシリコーン乳化剤、およびモノステアリン酸ソルビタンもしくはトリステアリン酸ソルビタン、ステアリン酸ＰＥＧ−４０、またはオキシエチレン化モノステアリン酸ソルビタン（２０ＥＯ）が挙げられ得る。
【００９４】
親水性ゲル化剤としては、カルボン酸ポリマー、アクリルコポリマー、ポリアクリルアミド、セルロースベースの誘導体などの多糖類、天然ゴムおよび粘土が挙げられ得る。
【００９５】
親油性ゲル化剤としては、ベントン（ｂｅｎｔｏｎｅｓ）などの改質粘土、ステアリン酸アルミニウムなどの脂肪酸の金属塩、ならびに疎水性シリカまたはエチルセルロースおよびポリエチレンが挙げられ得る。
【００９６】
これらの賦形剤は、その性質に応じて、脂相、水相および／または脂質小胞に取り込まれる。
【００９７】
上に記載されたように、本発明は、ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する皮膚、特に、成熟した皮膚および／または乾燥した皮膚の表皮細胞の再生を維持または制御することを意図した美容剤としてのペパーミント抽出物の使用に関する。「成熟した皮膚」は、３５歳を超えた人、４０歳を超えた人または４５歳を超えた人の皮膚を意味すると意図されている。
【００９８】
本発明の別の主題は、上で定義されたペパーミント抽出物、またはケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する皮膚の表皮細胞の再生を維持もしくは制御するための有効量の前記抽出物を含む上で定義されたような化粧品組成物を使用する美容的ケア方法である。
【００９９】
本発明のなおも別の主題は、ケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現不足に関連する皮膚の表皮細胞の再生を維持または制御するための皮膚の美容的ケアのための方法であり、その方法は、皮膚の再生プロセスが乱れることによって引き起こされる皮膚の老化、光老化、たるみまたは乾燥の徴候を示す顔面または身体の少なくとも一部に有効量のペパーミント抽出物を適用することを含む。
【０１００】
本発明の別の主題は、成熟した皮膚または乾燥の徴候を示す皮膚の美容的ケアのための方法であり、その方法は、上に記載されたような有効量のペパーミント抽出物または上で定義されたような前記抽出物を含む組成物の顔面または身体を少なくとも一部に適用することを含む。
【０１０１】
本発明の美容的方法は、上に記載された組成物を毎日または１日に数回、局所的に適用することによって行われ得る。
【０１０２】
表皮の再生を維持または制御するためのペパーミント抽出物の使用に関する本発明の第１の主題について記載された特徴は、本発明の第２の主題を構成する本発明の方法の特徴に適用される。
【０１０３】
以下の実施例から明確に明らかになるように、本出願人は、特に、クローン原性能が高い細胞または幹細胞において、ＮＯＴＣＨタンパク質発現を刺激するためのペパーミント抽出物の利点を実証した。
【０１０４】
本発明の他の目的、特徴および利点は、単に例証として与えられるペパーミント抽出物に対する上述の特性を実証する試験の例およびこの作用物質を使用した化粧品組成物の例に関して与えられる以下の説明的な記載に照らすと明らかになる。
【０１０５】
実施例では、別段示されない限り、すべてのパーセンテージが重量パーセントで表され、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧である。
【実施例】
【０１０６】
実施例１：ＮＯＴＣＨタンパク質をコードする遺伝子の発現に対するペパーミント抽出物の効果の評価
本研究は、クローンを形成する能力が高いケラチノサイト（「ケラチノサイト幹細胞」または「幹細胞」または「前駆細胞」とも称される）またはその能力が中間もしくは低いケラチノサイト（一時的増幅細胞と称される娘細胞）を解析および識別することができる、ＢａｒｒａｎｄｏｎおよびＧｒｅｅｎが開発した方法（Ｂａｒｒａｎｄｏｎ  Ｙ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｈ．；Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９８７，８４：２３０２−２３０６）に従ってケラチノサイトクローンを用いて行った。
【０１０７】
本研究の目的は、培養下の幹細胞に対するペパーミント抽出物の効果を評価することであった。
【０１０８】
ＣＡＬＭＩＳＫＩＮ（登録商標）をはじめとしたいくつかの抽出物を、以下の表に報告される用量で試験した。それらの用量は、細胞培養液中のその市販の溶液の重量パーセントとして表現されている。
【表１】
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【０１０９】
Ｉ．ＮＨＫ細胞の処理
２６歳の女性ドナーの腹壁形成術を起源とする正常ヒトケラチノサイト（ＮＨＫ）を使用する。
【０１１０】
それらの細胞を、１２ウェルプレートにおいて１ウェルあたり１２５０００細胞の播種密度で、Ｐ６を含むＥｐｉｌｉｆｅ培地中でコンフルエンスにした。次いで、それらの細胞を、いかなる補充も含まないＥｐｉｌｉｆｅ培地中において最終使用濃度で即時調製された種々の活性成分で処理する。処理の２４時間後に、全ＲＮＡを抽出するためにそれらの細胞を回収する。
【０１１１】
ＩＩ．リアルタイム定量的ＰＣＲ（ＲＴ−ｑＰＣＲ）
ＩＩ．１  ＭｉｃｒｏＬａｂＳＴＡＲ（ＨＡＭＩＬＴＯＮ）を用いた全ＲＮＡの入手
細胞培養液を除去し、２５０μｌの溶解緩衝液ＲＬＴ（Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ  ＲＮＡキット，Ｒｅｆ．７４０７０９．４，Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌに供給されているもの）を加える。細胞スクレイパーを用いて細胞を掻き取り、次いで、細胞溶解産物を１．２ｍｌの深ウェルプレート（Ｎｕｃｌｅｏｓｐｉｎ  ＲＮＡキットに供給されているもの）に回収する。次いで、全ＲＮＡを抽出する。得られた全ＲＮＡの溶液を、ＭｉｃｒｏｌａｂＳＴＡＲに連結されたマイクロプレートリーダーであるｓｐｅｃｔｒｏｓｔａｒＮＡＮＯ（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ）を用いてアッセイする。
【０１１２】
この装置は、ロボットプラットフォームを動かすコンピュータに接続されており、結果を解析するための特定のソフトウェアを有する。その手法には、３８４ウェルマイクロプレート（黒色３８４μｃｌｅａｒプレートＬｏＢａｓｅ  ｒｅｆ：７８８８７６，Ｇｒｅｉｎｅｒ）、そのロボットが実行するピペッティング操作およびｓｐｅｃｔｒｏｓｔａｒＮＡＮＯリーダーが生成する値を確認することができるポジティブコントロール（ＲＮＡ  ２５０  ｒｅｆ：ＡＭ７１５５  Ａｐｐｌｉｅｄ）が必要である。
【０１１３】
ＩＩ．２  相補ＤＮＡの合成
使用される逆転写（ＲＴ）キットは、供給されるプロトコルに従って使用されるＨｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｒｅｆ．４３６８８１３，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ−Ａｐｐｌｉｅｄ）である。５００ｎｇの全ＲＮＡを水に希釈して、最終体積を２５μｌにする。次いで、それらを、下記に示されるように前もって調製された２５μｌのＨｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ２Ｘ反応混合物の存在下において、２５℃で１０分間、次いで３７℃で２時間インキュベートする。異なる操作をＭｉｃｒｏｌａｂＳＴＡＲプラットフォームによって行い、異なるインキュベーションをＴＲｏｂｏｔ（Ｂｉｏｍｅｔｒａ）において行う。
【０１１４】
１つの反応に対するＨｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ２Ｘ反応混合物は、以下の組成を有する：
試薬                  体積
ＲＴ緩衝液            ５μｌ
ｄＮＴＰ緩衝液        ２μｌ
ランダムプライマー    ５μｌ
ＲＮａｓｅＯＵＴ      ０．５μｌ
ＲＴ                  ２．５μｌ
Ｈ２Ｏ                １０μｌ
【０１１５】
ＩＩ．３  リアルタイム定量的ＰＣＲ
処理の効果を、７９００ＨＴの高速９６ウェルブロックおよびＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ−Ａｐｐｌｉｅｄ製の試薬を用いるリアルタイム定量的ＰＣＲによって評価する。使用されるＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイプライマーは、以下である：
−ハウスキーピング遺伝子：ベータ−２−ミクログロブリン（β２Ｍ）：Ｈｓ９９９９９９０７＿ｍ１
−ＮＯＴＣＨ１標的遺伝子：Ｈｓ００４１３１８７
−ＮＯＴＣＨ２標的遺伝子：Ｈｓ００２２５７４７
１つの反応に対する反応混合物：
ＴａｑＭａｎ  ＦａｓｔユニバーサルＰＣＲマスターミックス（２Ｘ）（Ｒｅｆ  ４３５２０４３，１０μｌ）
ＴａｑＭａｎ遺伝子発現アッセイ２０Ｘ（Ｈｓ００００００００＿ｍ１），１μｌ
Ｈ２Ｏ，４μｌ
【０１１６】
１５μｌの上記混合物を、７９００ＨＴ装置のために特別に設計された９６ウェルプレート（ｒｅｆ  ４３４６９０６）のウェルに入れ；５μｌの水（ブランク用）、または５μｌのｃＤＮＡ連続希釈物（範囲用）、または５μｌのサンプルを対応するウェルに加える。すべての工程が、ＭｉｃｒｏｌａｂＳＴＡＲによって行われる。
【０１１７】
ＩＩ．４．結果の解析
リアルタイム定量的ＰＣＲは、その効率が９０％〜１１０％である場合に利用され得る。この効率は、適切な細胞から抽出されたｃＤＮＡの連続希釈物から標準的な範囲を設定することによって評価される。得られた傾きの値は、増幅効率を反映し；２ｎの法則（ｎ＝サイクル数、すなわち４０）が満たされ、傾きの値が−３．３２であるとき、ＰＣＲは１００％の効率である。各サンプルについて、シグナルが現れるサイクル数を、ＳＤＳ２．３ソフトウェアによって測定し；標準的な範囲を用いて確立された較正直線によって、転写物のコピー数に関する濃度が算出され得る。同じアッセイでは、目的の転写物の発現レベルを、ハウスキーピング遺伝子のベータ−２−ミクログロブリンについて得られた値に対して標準化する。この遺伝子は、その発現が構成的かつ不変であり、特に逆転写工程の効率のばらつきに起因する、アッセイ間の量の任意の変動を克服することを可能にする。転写活性の定量は、標的遺伝子およびハウスキーピング遺伝子のＣｔ（サイクル閾値）の差によって測定される。これは、相対的定量であり、以下の計算によって得られ、ここで、無処理が１に等しい。
ＲＱ＝２−ΔΔＣｔ＝２−（処理された標的遺伝子−Ｃｔ無処理の標的遺伝子）／２−（Ｃｔ処理されたハウスキーピング遺伝子−無処理のハウスキーピング遺伝子）
【０１１８】
転写活性の統計学的に有意な変動を評価するために、スチューデントのｔ検定を使用した。各条件を３つ組で行う（同じ条件下で３つの無処理および３つの処理）。それらの２つのデータ行列を比較することによって、フィッシャーのＦ検定が第一に適用される。有意な転写の変動は、アルファ＝０．０５未満のスチューデントのｔ検定の値を有する変動である。結果の項に提示されるデータは、無処理サンプルに対する処理サンプルにおいて得られた量の比であり、すべてがハウスキーピング遺伝子ベータ−２−ミクログロブリンと比較されている。
【０１１９】
スチューデントの統計的検定を用いて、溶媒コントロールに応じて活性成分を比較した。結果は、ｐ＜０．０５（＊）の場合に有意であると見なした。
【０１２０】
結果
ＮＯＴＣＨ遺伝子発現の刺激は、ＣＡＬＭＩＳＫＩＮ（登録商標）ペパーミント抽出物溶液の場合に観察される。
【０１２１】
結果を図１および２に示す。
【０１２２】
ＮＯＴＣＨ１遺伝子は、ＮＯＴＣＨ２よりも低濃度の抽出物に反応することに注意されたい。
【０１２３】
結論
ペパーミント抽出物は、ＮＯＴＣＨ１およびＮＯＴＣＨ２の遺伝子発現を刺激する。
【０１２４】
結果から、ペパーミント抽出物は、０．０９％〜１．５％の濃度範囲においてＮＯＴＣＨ１タンパク質の発現を刺激するだけでなく、０．３７５％〜１．５％の濃度範囲においてＮＯＴＣＨ２の発現も刺激することが示され、この抽出物は、ＮＯＴＣＨタンパク質ファミリーのいくつかの代表に対して効果的である。
【０１２５】
実施例２−化粧品組成物
ペパーミント抽出物を、以下の化粧品組成物において、表皮細胞の再生を維持または制御するための活性物質として使用する。
１−ローション
【０１２６】
以下の活性物質を含む水溶液を調製する（重量パーセント）：
％
Ｃａｌｍｉｓｋｉｎ（登録商標）                ２
グリセロール                                  ３．０
Ｍａｌｖａ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ抽出物        ０．２
Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａヘテロシド  ０．０２
高および低分子量ヒアルロン酸                  ０．０５
賦形剤                                        ｑ．ｓ．１００
【０１２７】
Ｃａｌｍｉｓｋｉｎ（登録商標）は、植物の気生部分から調製された、Ｓｉｌａｂが販売するペパーミント抽出物の溶液である。
【０１２８】
上記ローションを毎日顔面に適用する。
２−日中用保湿クリーム
【０１２９】
保湿エマルジョンを調製する。その処方を下記に示す（重量％）：
％
相Ａ
Ｃａｌｍｉｓｋｉｎ（登録商標）                              ０．７５
Ｖａｎｄａ  ｃｏｅｒｕｌｅａ抽出物の１％溶液                ０．３
フェノキシエタノール                                        ０．５
キサンタンガム                                              ０．２
アクリレート／Ｃ２０−３０アクリル酸アルキルクロスポリマー  ０．１５
ＥＤＴＡ四ナトリウム                                        ０．１
水                                                          ｑ．ｓ．
相Ｂ
水素化ポリイソブテン                                        ４
スクアラン                                                  ３
カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド                        ３
ペンチレングリコール                                        ３
ステアリン酸グリセリル                                      ３
ステアリン酸ＰＥＧ−１００                                  ２．５
蜜ろう                                                      １．５
炭酸ジカプリリル                                            １．５
セチルアルコール                                            １
ステアリルアルコール                                        １
ジメチコーン                                                １
相Ｃ
水酸化ナトリウム                                            ０．０４
水                                                          ｑ．ｓ．１００
【０１３０】
相Ａのゲル化剤を水に分散させ、次いで、８０〜８５℃に加熱した後、化合物を溶解する。相Ｂの化合物を８５℃に加熱して均一な相を形成させる。相Ａを、Ｙｓｔｒａｌミキサーを用いて相Ｂに乳化する。
【０１３１】
最後に、この油／水エマルジョンを、水酸化ナトリウム水溶液を用いて中和し、次いで冷却する。
【０１３２】
得られる組成物は、顔面、特に、老化または皮膚の乾燥の徴候を示す範囲に適用されることを意図された保湿クリームである。
３−ＳＰＦ５０日焼け防止クリーム
ＩＮＣＩ                                                        重量％
ペパーミント抽出物                                              ０．１
水                                                              ｑ．ｓ．１００
ジカプリン酸／ジカプリル酸ブチレングリコール                    １０．６
メトキシケイ皮酸エチルヘキシル                                  ７．５
メチレンビス−ベンゾトリアゾリルテトラメチルブチルフェノール    ５
炭酸ジカプリリル                                                ４
ブチレングリコール                                              ３．７
ビス−エチルヘキシルオキシフェノールメトキシフェニルトリアジン  ３
ジメチコーン                                                    ２
カプリリルメチコーン                                            ２
ＶＰ／エイコセンコポリマー                                      ２
ベヘニルアルコール                                              ２
グリセロール                                                    ２
リン酸セチルカリウム                                            ２
セテアリルアルコール                                            １．２
フェニルベンズイミダゾールスルホン酸                            １
トロメタミン                                                    １
フェノキシエタノール                                            ０．９
【０１３３】
このクリームは、５０に等しいＳＰＦ値を有する。このＵＶスクリーニング剤とペパーミント抽出物との併用によって、表皮を紫外線から保護することが可能になり、ケラチノサイト前駆細胞による皮膚の細胞の再生を維持することが可能になる。
【図１】
2018505883.tif 000003
【図２】
2018505883.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成29年10月10日(2017.10.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚のケラチノサイトの再生を増加させるためおよびＮＯＴＣＨタンパク質の発現が不足しているケラチノサイト前駆細胞におけるＮＯＴＣＨタンパク質の発現を刺激するための美容剤であって、該美容剤は、ペパーミントの抽出物からなることを特徴とする、美容剤。
【請求項２】
前記ＮＯＴＣＨタンパク質が、ＮＯＴＣＨ１タンパク質およびＮＯＴＣＨ２タンパク質であることを特徴とする、請求項１記載の美容剤。
【請求項３】
定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって測定されるＮＯＴＣＨ１またはＮＯＴＣＨ２タンパク質をコードする遺伝子の遺伝子発現の定量（ＲＱ）が１を超えることを特徴とする、請求項２記載の美容剤。
【請求項４】
前記ペパーミント抽出物が、ペパーミントの気生部分の水性の酵素的抽出物であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項記載の美容剤。
【国際調査報告】
2018505883.tif 000005
2018505883.tif 000006
2018505883.tif 000007
2018505883.tif 000008
2018505883.tif 000009
2018505883.tif 000010