(57)【要約】  本書面は哺乳動物において多系統萎縮症を治療するための方法及び材料を提供する。具体的には、この方法は、多系統萎縮症を治療するため、哺乳動物に、自家間葉系幹細胞（例えば脂肪由来間葉系幹細胞）を含む組成物を髄腔内投与することを含む。さらに、約5×106から約5×108個の自家間葉系幹細胞を含む組成物を開示する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
多系統萎縮症を有する哺乳動物を治療する方法であって、該哺乳動物に、自家間葉系幹細胞を含む組成物を髄腔内投与することを含む方法。
【請求項２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記組成物が、約5×106から約5×108個の自家間葉系幹細胞を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記多系統萎縮症の進行速度が前記投与ステップ後に低減される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記自家間葉系幹細胞が、脂肪由来間葉系幹細胞又は骨髄由来間葉系幹細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記自家間葉系幹細胞を含む組成物を前記哺乳動物に2回以上髄腔内投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記自家間葉系幹細胞を含む組成物を前記哺乳動物に2回から10回髄腔内投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2015年6月15日出願の米国出願番号第62/175,628号に基づく優先権を主張する。この先行出願の開示は、本出願の開示の一部とみなされ、その全体が本出願に組み込まれる。
【０００２】
背景
1.技術分野
本書面は、多系統萎縮症を治療するための方法及び材料に関する。たとえば、本書面は、多系統萎縮症を治療するために、自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を哺乳動物(たとえばヒト)に髄腔内投与するための方法及び材料を提供する。
【背景技術】
【０００３】
2.背景情報
多系統萎縮症は、散発性及び致死性の多系統進行性疾患であり、進行性自律神経不全症、起立性低血圧、神経因性膀胱/勃起障害、小脳性運動失調、皮質脊髄障害、及びパーキンソン病により特徴づけられる。多系統萎縮症は容赦なく進行し、診断から死亡までの生存期間は2〜4年である。多系統萎縮症は、罹患率が100,000人当たり3〜5人の稀な疾患である。罹患率は、65歳を超える人で28/100,000である。
【発明の概要】
【０００４】
本書面は、多系統萎縮症を治療するための方法及び材料を提供する。たとえば、本書面は、多系統萎縮症を治療するために、自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を使用するための方法及び材料を提供する。
【０００５】
本明細書に記載のとおり、自家脂肪由来間葉系幹細胞は、多系統萎縮症に罹患しているヒトに、多系統萎縮症の1つ以上の症状を改善するため、且つ/又は、多系統萎縮症の進行を遅らせるため、安全に髄腔内投与できる。
【０００６】
一般に、本書面の一態様は、多系統萎縮症を有する哺乳動物を治療する方法を特徴とする。この方法は、哺乳動物に、自家間葉系幹細胞を含む組成物を髄腔内投与することを含むか、又はそのことから本質的になる。哺乳動物は、ヒトでありうる。組成物は、約5×106から約5×108個の自家間葉系幹細胞を含みうる。多系統萎縮症の進行速度は、この投与ステップ後に低減し得る。自家間葉系幹細胞は、脂肪由来間葉系幹細胞又は骨髄由来間葉系幹細胞でありうる。この方法は、自家間葉系幹細胞を含む組成物を哺乳動物に複数回（2回以上）髄腔内投与することを含みうる。この方法は、自家間葉系幹細胞を含む組成物を哺乳動物に2回から10回髄腔内投与することを含みうる。
【０００７】
別段定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術的及び科学的用語が、本発明が属する技術分野の当業者により通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似又は同等の方法及び材料を、本発明の実施又は試験に使用できるが、好適な方法及び材料を下に記載する。本明細書に言及するすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参照文献は、それらの全体が参照により組み込まれる。抵触する場合、定義を含む本明細書が優先する。加えて、材料、方法、及び例は例示でしかなく、限定を意図しない。
【０００８】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】患者治療プロトコルの概略図である。
【図２】試験スケジュール表の図である。
【図３】歴史的対照（historical control）対自家間葉系幹細胞の髄腔内投与を受けた患者のUMSARS I進行をプロットするグラフを含む図である。左パネルは、群ごとに算定された1カ月当たりのUMSARS I変化を示し、一方で右パネルは、自家間葉系幹細胞の注入後の個々の患者におけるUMSARS Iの経時的変化(細い実線-低用量群灰色、中用量群黒色)を、予想変化(太い破線)に対して示す。
【図４−１】7つの異なる脂肪由来間葉系幹細胞株及び8つの異なる骨髄由来間葉系幹細胞について実施されたRNA-seq解析の結果をプロットするグラフの図である。すべての細胞株を、コンフルエンスで評価した。100万当たり1キロベース当たり1リード（1 reads per kilobase per million(RPKM)）を超えて発現したすべての遺伝子の倍数変化比較を実行した。脂肪由来間葉系幹細胞において富化された上位50遺伝子を列挙する。
【図４−２】図４−１の続き。
【図５】歴史的対照及び自家間葉系幹細胞の髄腔内投与を受けた患者のUMSARS全進行のグラフを含む図である(群1=細胞1000万個、群2=2度投与された細胞5000万個)。上パネルは、全UMSARSの変化を、各群の平均及び標準偏差として示す。下パネルは、群1の患者(左下)及び群2(右下)について、歴史的対照(太線)に見られる平均変化と比較した、全UMSARSの個々の経時的変化を示す。自家間葉系幹細胞を用いて治療されたすべての患者が、対照群の平均よりも低速の疾患進行を示したことに留意されたい。何人かの患者は、6カ月及び12カ月の追跡評価で進行なし又は改善さえ経験した。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本書面は、多系統萎縮症を治療するための方法及び材料を提供する。たとえば、本書面は、多系統萎縮症を治療するために、自家間葉系幹細胞を使用するための方法及び材料を提供する。本明細書に記載のとおり、間葉系幹細胞を、多系統萎縮症に罹患している哺乳動物に、多系統萎縮症の1つ以上の症状を改善するため、且つ/又は、多系統萎縮症の進行を遅らせるため、髄腔内投与し得る。多系統萎縮症を治療するために髄腔内投与できる間葉系幹細胞の例には、自家脂肪由来間葉系幹細胞及び自家骨髄由来間葉系幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【００１１】
いくつかの場合では、図4に列挙した遺伝子を発現するか又はAMSC1〜7について図4に示す範囲内の発現レベルを有する脂肪由来間葉系幹細胞は、多系統萎縮症に罹患している哺乳動物に、多系統萎縮症の1つ以上の症状を改善するため、且つ/又は、多系統萎縮症の進行を遅らせるため、髄腔内投与し得る。
【００１２】
いくつかの場合では、多系統萎縮症は、自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を含む有効量の組成物を(たとえば髄腔内投与を介して)投与することにより治療できる。自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を含有する組成物の有効量は、様々な因子、たとえば健康状態全般、体重、性別、食事、投与の時間及び経路、他の投薬治療、並びに任意の他の関係する臨床学的因子を考慮して、医師が決定できる。本明細書で使用する組成物の「有効量」又は「治療有効量」は、組成物又は調製物が送達される対象に対する有益な効果を提供するのに十分な量である。有効量は、生存率の改善、より迅速な回復、生活の質の改善、又は対象の多系統萎縮症と関連する1つ以上の症状の改善若しくは消失を達成するのに有効な量でありうる。
【００１３】
いくつかの場合では、多系統萎縮症を治療するため、約5×106から約5×108個の自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を含有する組成物を、哺乳動物に髄腔内投与し得る。たとえば、多系統萎縮症を治療するため、約5×107個(±約20%)の自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を、哺乳動物に髄腔内投与できる。いくつかの場合では、複数回(たとえば、2回、3回、4回、5回、又はそれ以上)の細胞での治療を、効果を得るか又は効果を維持するために実施できる。
【００１４】
任意の適切な方法を、自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を得るために使用できる。たとえば、別の文献に記載の手法を、自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を得るために使用できる。たとえば、Zukら、Tissue Engineering、7(2):211〜228頁(2001年)及びSotiropoulouら、Stem Cells、24:462〜471頁(2006年)を参照のこと。
【００１５】
いくつかの場合では、自家間葉系幹細胞は、以下のとおり得られる。脂肪組織を採取したのち、組織を断片化し、小片へと切断し、PBS中で洗浄し得る。変色組織及び過剰な脈管構造を除去し、組織をさいの目に切ることができる。組織をハンクスバッファー中約0.075%のコラゲナーゼ(Worhintgton Biochemical Corporation)中に再懸濁し、約37℃でインキュベートできる。組織の視認可能な証拠がなくなるまで、試験管を逆さにしておくことができる。組織消化物を、完全培地(Advanced MEM低グルコース、5%のヒト血小板溶解物、1mL当たり2単位のヘパリン)中で遠心により洗浄できる。いくつかの場合では、細胞をフィルター(たとえば70μm及び/又は40μmフィルター)で濾過し、大きな組織片を除去できる。細胞をプレートし、90%未満のコンフルエンシーで維持し、必要なときに0.25%のトリプシンEDTAを使用して継代できる。適切な数を得るために細胞を増殖させ、リリース試験を完了するために凍結保存できる。いくつかの場合では、回収、洗浄、及び注入のための調製前に、細胞を解凍し、3〜5日間培養条件に戻すことができる。
【００１６】
自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を含有する組成物は、同じ哺乳動物(たとえばヒト)に1回又は2回以上投与できる。たとえば、自家間葉系幹細胞(たとえば脂肪由来間葉系幹細胞)を含有する組成物は、ヒトに少なくとも毎月(たとえば、約1カ月±4日ごとに)、2から36カ月間にわたり髄腔内投与できる。
【００１７】
任意の適切な哺乳動物を本明細書に記載のとおり治療できる。たとえば、ヒト、非ヒト霊長類(たとえばチンパンジー、ヒヒ、又はサル)、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、又はラットを、本明細書に記載のとおり治療できる。
【００１８】
いくつかの場合では、本明細書に記載の方法は、たとえば、多系統萎縮症が治療で改善するかどうかを決定するために、哺乳動物における多系統萎縮症をモニターすることを含みうる。任意の適切な方法を、多系統萎縮症をモニターするために使用できる。たとえば、神経学的検査、MSA評価スコア(UMSARS)、自律神経機能検査、脳のMRI測定、及び/又はPET/SPECTイメージングを、多系統萎縮症の進行をモニターするために使用できる。
【００１９】
いくつかの場合では、本明細書において提供する方法及び材料を、多系統萎縮症以外の病態を治療するために使用できる。たとえば、本明細書において提供する方法及び材料を、パーキンソン病、びまん性レビー小体病、レビー小体型認知症、純粋自律神経失調症、並びに/又はタウオパチー、たとえばアルツハイマー病、前頭側頭認知症、皮質基底核変性症、及び進行性核上性麻痺を治療するために使用できる。いくつかの場合では、間葉系幹細胞は、これらの他の病態のうちの1つ以上に罹患している哺乳動物に、それらの病態の1つ若しくは複数の症状を改善するため、且つ/又は、それらの病態の進行を遅らせるため、髄腔内投与できる。
【００２０】
本発明を、以下の実施例において更に説明するが、これは、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲を限定するものではない。
【００２１】
[実施例]
[実施例1-自家間葉系幹細胞の髄腔内投与]
ウサギに、1×107個の自家間葉系幹細胞を、ウサギ1匹当たり単回の注射又はウサギ1匹当たり3回の注射を介して、12週の期間にわたって注射した。くも膜下炎症、痛み又は発作を伴う無菌性髄膜炎、及び髄腔内腫瘍を形成する細胞の未制御の増殖を含む、急性及び慢性有害事象について、動物をモニターした。各ウサギについて体重に対する器官の比を測定及び算出した。各器官について肉眼検査を実施した。
【００２２】
注射領域のくも膜下腔における少量の間葉系細胞の蓄積を示した1匹のウサギ、及び、注射領域の硬膜外腔に少量の炎症細胞集積を示した1匹を除き、顕著又は異常な発見はなかった。
【００２３】
血液検査結果は、4週後及び12週後の両方で、対照と実験群との間のいかなる有意差も明らかにしなかった。器官対体重比について、対照と実験群との間の有意差はなかった。肉眼及び顕微鏡検査もまた、対照と実験群との間のいかなる有意差も明らかにしなかった。機能評価は、間葉系幹細胞の注射と直接関連する差を明らかにしなかった。
【００２４】
これらの結果は、間葉系幹細胞をそのCSF中に、たとえば髄腔内投与を介して、安全に注射できることを実証する。
【００２５】
[実施例2-自家間葉系幹細胞のヒトへの髄腔内投与]
筋萎縮性側索硬化症(ALS)を有するヒト患者に、1×106個の自家間葉系幹細胞を投与した。患者は処置に対して十分に寛容性であり、安定したバイタルサインを有し、発熱しなかった。間葉系幹細胞投与の1週及び3週後の髄液解析は、ベースライン研究と比較して安定的だった。投与された間葉系幹細胞と関連する有害事象は記録されなかった。
【００２６】
患者のALSは予想された速度で進行し、患者はこの疾患により亡くなった。
【００２７】
[実施例3-多系統萎縮症を治療するための自家間葉系幹細胞の髄腔内投与]
間葉系幹細胞を、多系統萎縮症を有するヒトから得られた脂肪生検から単離する。間葉系幹細胞を増殖させ、リリース基準を満たしたのちに、ヒト使用のためにリリースする。簡潔に述べると、採取後、脂肪組織を断片化し、小片へと切断し、PBS中で洗浄する。変色組織及び過剰な脈管構造を除去し、組織をさいの目に切る。組織をハンクスバッファー中0.075%のコラゲナーゼ(Worhintgton Biochemical Corporation)中に再懸濁し、37℃でインキュベートする。組織の視認可能な証拠がなくなるまで、試験管を逆さにしておく。組織消化物を、完全培地(Advanced MEM低グルコース、5%のヒト血小板溶解物、1mL当たり2単位のヘパリン)中で遠心により洗浄する。いくつかの場合では、細胞をフィルター(たとえば70μm及び40μmフィルター)で濾過し、大きな組織片を除去する。細胞をプレートし、90%未満のコンフルエンシーで維持し、必要なときに0.25%のトリプシンEDTAを使用して継代する。細胞を増殖させ、リリース試験を完了するために凍結保存する。いくつかの場合では、回収、洗浄、及び注入のための調製前に、細胞を解凍し、3〜5日間培養条件に戻す。
【００２８】
リリースされると、間葉系幹細胞(たとえば約1×107個から約1×108個の細胞)をその多系統萎縮症を有する同じヒトに髄腔内注射する。いくつかの場合では、続いて、約1×107個から約1×108個の間葉系幹細胞の髄腔内注射が、毎月、2カ月ごと、6カ月ごと、又は毎年、最長で約3年の間、そのヒトに投与される。
【００２９】
[実施例4-多系統萎縮症の治療を評価するための臨床研究]
多系統萎縮症(ギルマン基準に基づく推定)及びUMSARS Iスコア≦17を有する24人の成人のヒトを、進行しすぎている症例を除外するために選択する。簡潔に述べると、組み入れ基準は以下のとおりである。(1)臨床基準及び標準化自律神経系検査に基づいて多系統萎縮症の診断を受けた30〜80歳の参加者。このアプローチは、非常に高い特異度で多系統萎縮症を有する患者の同定を可能にするが、自然な疾患経過への介入が患者の転帰に有意義な影響を及ぼす病期の患者の登録を可能にするのに、十分な感度の高さである。したがって、患者は、パーキンソニズムサブタイプ(MSA-P)又は小脳サブタイプ(MSA-C)の多系統萎縮症推定のためのギルマン基準を満たし、UMSARS Iスコア≦17を有し、多系統萎縮症を示唆する自律神経機能検査での発見(CASS≧5及び/又はTST%無汗症≧25%)を有するよう選択される。(2)MSA診断が記録された時点から4年未満の参加者。(3)少なくとも3年の予測生存期間を有する参加者。(4)インフォームドコンセントを与える意志があり、それが可能な参加者。並びに(5)MMSEにより評価される「正常」な認知。>24の値が必要である。以下の条件のいずれかにより、参加者は除外される。(1)妊娠又は授乳中の女性、及び許容可能な避妊法を実践していない妊娠可能性のある女性。本研究において許容可能な避妊法は、外科不妊手術、子宮内避妊器具、パートナーの精管切除、二重保護法(殺精子剤を伴うコンドーム又はペッサリー)、必要な二次的避妊法を伴うホルモン避妊薬(すなわち、経口避妊薬、避妊パッチ、長時間作用型注射用避妊薬)である。(2)安全な完了を不可能にしうるか、又は結果に影響を及ぼしうる、臨床的意義のある又は不安定な内科的又は外科的病態を有する参加者。これらには、顕著なCNS又は自律神経障害を引き起こす病態、たとえば鬱血性心不全、直近(<6カ月)の心筋梗塞、心肺疾患、重症の管理不良高血圧、血小板減少症(<50×109/L)、重症貧血(<8g/dL)、免疫抑制状態、肝臓又は腎臓疾患(クレアチニン>2.3mg/dL)、管理不良糖尿病(HbA1c >10g%)、アルコール依存症、悪性新生物、アミロイドーシス、管理不良甲状腺機能低下症、交感神経切除、不安定な末梢神経障害、同時感染、日常生活の運動性及び活動を損なう整形外科的問題、脳血管障害、神経毒又は神経刺激薬への曝露、薬物によるパーキンソニズム(神経遮断薬、アルファ-メチルドーパ、レセルピン、メトクロプラミドを含む)が含まれる。(3)ベースラインの前、60日以内に、治験薬を服用した参加者。(4)自律神経機能に影響を及ぼしうる投薬。患者がそれらの薬物を服用した場合、自律神経系検査前に保留される。ミドドリン、抗コリン作用性のアルファ及びベータアドレナリン拮抗薬又は自律神経機能に影響を及ぼす他の薬物を用いた治療は、自律神経評価の48時間前に取りやめる。1日当たり0.2mgまでのフルドロコルチゾン用量は許容される。(5)パーキンソン病の特徴を有する疾患、たとえばびまん性レビー小体病、進行性核上性麻痺、本態性振戦症、遺伝性オリーブ橋小脳萎縮症、又は脳炎後パーキンソニズム。(6)認知症(DSM-IV基準-Amer. Psych. Assoc.、1994年)。ミニメンタルステート検査のスコアは、>24でなければならない。(7)電撃療法の既往歴。(8)パーキンソン病についての脳外科手術の既往歴。(9)MRI不適合性ペースメーカーを有する患者を含む、MRIスキャニングについ��の禁忌を有する患者。並びに(10)活動性全身感染又は脊髄注射部位に近接する局所感染を有する患者。
【００３０】
細胞を脂肪組織から単離する。簡潔に述べると、皮下脂肪生検を、各ヒトの腹部又は大腿部のいずれかから採る。実際の生検の部位は、一般外科医が処置の時点で決定する。対象は、局所麻酔薬(通常は1%リドカイン)を生検の部位に与えられる。脂肪生検は、小さな(1〜2インチ)切開を通じてなされ、およそ15ccの皮下脂肪が皮膚の下から除去される。生検部位は、抜糸を要しない皮内吸収性縫合糸を用いて縫合される。縫合糸は、1〜3週で再吸収される。
【００３１】
細胞をエクスビボで増殖させ、リリース基準解析中に凍結保存する。細胞を、表現型、マイコプラズマ、培養物無菌性、及び細胞遺伝学的解析について試験する。リリース基準を満たさない細胞は、患者に投与しない。第1の生検から得られた組織からの細胞増殖がない場合、第2の生検からもう1度実施を試みる。第2の試みでも細胞が増殖しなかった場合、それ以上は試みない。
【００３２】
約8週後、自家間葉系幹細胞を、各ヒトに髄腔内注射を介して投与する。自家間葉系幹細胞を4℃でシリンジ内に配し、12時間以内に投与する。腰椎穿刺針をくも膜下腔内に配し、ベースラインCSF試料を採集する。このベースラインCSF試料を、有核細胞総数(差次とともに)、総CSFタンパク質、グルコース、IgGレベル、免疫グロブリン合成速度及び指数、オリゴクローナルバンド及びMSCマーカーを強調した細胞診について解析する。CSF(10mL)はまた、サイトカインの測定のために保持される。腰椎穿刺を、腰椎くも膜下腔内へと、標準的な腰椎レベル2と5との間の後部椎間アプローチを介して実施する。正確なレベルは、解剖学的考慮に基づき、各患者について個別に決定される。次に、2〜10mLの乳酸リンゲル液中の間葉系幹細胞をCSF内に、1〜2分かけて、フリーハンドの送達を介して注入し、続いて、1mLの乳酸リンゲルを用いてフラッシュする。細胞注入後、患者に寛容性があった場合、彼らを15分ごとに2時間(必要に応じて看護スタッフの助けを借りて)水平位置で回転させ、CSF中での細胞の均一分布を最大化する。
【００３３】
対象を、髄腔内注射中及びその直後の有害事象について観察する。患者のバイタルサイン(痛みを含む)を15分ごとに1時間、次に、1時間ごとに4時間、次に、4時間ごとに、注射の少なくとも48時間後である退院までモニターする。
【００３４】
各8人の患者の3つの患者群にわたって、間葉系幹細胞の用量を増やして使用する(図1)。群1は、単回用量の細胞を受ける。群2及び3は、1カ月置いて2回用量の細胞を受ける。送達される細胞の最低用量は、1×107個である。群1の患者は、細胞1×107個の単回髄腔内用量を投与される。群2の患者は、細胞5×107個の1回の髄腔内用量を投与され、続いて1カ月(±4日)後に、細胞5×107個の第2の髄腔内用量を投与される。群3の患者は、細胞1×108個の1回の髄腔内用量を投与され、続いて1カ月(±4日)後に、細胞1×108個の第2の髄腔内用量を投与される。
【００３５】
すべての患者を、定期的に最低でも12カ月間追跡調査する(図2)。初期臨床追跡調査は毎週実施し、最大8週間、血液、CSF、及びMRI評価を予定する。しかるのちに、6カ月及び12カ月の時点で患者に臨床評価を下す。3カ月と9カ月の時点で電話追跡調査を実施する。臨床状態により追加評価が指示される場合、それを実施する。
【００３６】
いくつかの場合では、群1、2、又は3の患者は、細胞5×107個(±20%)の用量を6カ月(±1カ月)に1度、全部で4回の追加髄腔内注射を受ける。5mLの乳酸リンゲル液中の自家間葉系幹細胞が1〜2分かけて投与される。
【００３７】
[実施例5-多系統萎縮症の治療を評価するための臨床研究]
実施例4の群1及び2のすべての患者の注射を完了した。これらの患者のそれぞれを、少なくとも8週追跡調査した。5人の患者が1年間の追跡調査を完了した。詳細には、8人の患者が、単回用量の細胞1×107個を受け、8人の患者が、2回用量の細胞5×107個を受け、1人の患者が、2回用量の細胞1×108個を受けた。
【００３８】
安全性及び寛容性実験は非常に陽性だった。この時点まで、自家間葉系幹細胞の髄腔内注射に起因する深刻な有害事象は観察されなかった。1人の患者が、一時的な嵌頓鼠径ヘルニアを髄腔内注射の4週後に経験し、これは観察のための入院を要したが、自然に解消した。この事象は、深刻な有害事象として分類されるが、無関係であることが確定された。
【００３９】
予定されていたMRI研究(1回目の間葉系幹細胞注射の7週後、2回目の間葉系幹細胞注射の3週後)により、髄腔内間葉系幹細胞投与領域の馬尾周辺の局所神経根肥厚が無症候でイメージングにより発見されたことが、4人の患者において観察された。すべての患者が神経学的検査に変化なく、完全に無症候だったのであり、依然として無症候であって、4人の患者全員が用量群2に属していた。このイメージングによる発見は確定的ではなかった一方で、この現象は間葉系幹細胞の「移植」応答であることが疑われた。臨床的にもCSF研究に基づいても、神経炎症の示唆はなかった。
【００４０】
1人の患者では、腰椎穿刺を繰り返した領域で硬膜下血腫の証拠がイメージングにより得られた。これは、完全に無症候であり、予定されていたMRIイメージングにより偶然発見されたにすぎない。神経根又は脊髄に差し障りはなく、神経学的検査に変化はないままだった。
【００４１】
3人の患者が、腰椎穿刺のうちの少なくとも1回のあとに軽度から中程度の頭痛を認めたが、これは、その位置の性質から予想されたものだった。すべてが、介入なしに自然に解消した。
【００４２】
群2の1人の患者が、第1の間葉系幹細胞投与の10時間後に発熱を経験した。発熱はおよそ30時間続き、Tmaxは38.9度だった。感染の示唆はなかった。発熱は、介入なしに自然に解消した。その病因は確定されていない。
【００４３】
2人の患者が、膀胱障害と関連する多系統萎縮症に一般的に生じる尿路感染症を経験したが、これは間葉系幹細胞の投与とは無関係である。3人の患者が、一時的な背下部又は臀部の不快感を報告した。1人の患者は、一時的に腓筋が痙攣し、別の1人の患者は、不定期的な下肢筋攣縮を認め、別の1人の患者は、治療の約1カ月後に疲労度の増加を感じた。これらの事象の病因は不確定だが、間葉系幹細胞の投与と直接関連する可能性は低い。
【００４４】
以下の表は、有害事象を、19人の患者に見られたタイプ、重症度、及び起因性について要約する(表1)。
【００４５】
【表１】
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【００４６】
3カ月以上の遅い追跡調査をした患者の大半が、治療からの利益を報告した。これらの患者が説明した利益は、疾患進行を遅らせることから、顕著な機能改善にまで至る範囲のものである。対照的に、多系統萎縮症の自然な経過を徹底的に研究し、疾患は、統一多系統萎縮症評価尺度第1部(the first part of the Unified Multiple System Atrophy Rating Scale、UMSARS I、症状及び日常生活動作を行う能力の機能スコア)で1カ月当たり0.375から0.66ポイントの速度で、予測可能に進行する。本研究の患者と類似した病期の参加患者及び本質的に同一の組み入れ/除外基準を伴う最近完了したリファンピシン治療治験におけるプラセボ群は、研究の48週をかけて6ポイント(4週当たり0.5ポイント)の進行速度を示した。この他の研究からのデータを、予測進行勾配(「歴史的対照」)を生成するために使用し、それを、自家間葉系幹細胞の髄腔内投与を受けた患者において観察された進行と対比させた(図3)。
【００４７】
予測速度で又はそれを超えて進行したか又は進行すると予期された患者は、3人しかいなかった。他の11人の患者は、予測未満で進行したか又は進行すると予期された。実際に、複数の患者が、(a)進行の欠如又は(b)改善のいずれかを示すスコアで研究を完了したか又は完了すると予期された。
【００４８】
これらの結果は、自家間葉系幹細胞の髄腔内投与を、多系統萎縮症を治療するために使用できることを実証する。
【００４９】
24人の患者が、髄腔内間葉系幹細胞注射を受けたあとの1年の追跡調査を完了した。安全性及び有効性データは、非常に好ましいままである。治療は概して、有害事象がほとんどなく、十分寛容性だった。馬尾のMRIイメージングの変化(本明細書に記載のとおり)が観察され、別の患者は、治療後の一時的な背下部及び脚部の痛みを報告した。しかしながら、起因性の深刻な有害事象は観察されなかった。他方、有効性データは陽性であり続けた。患者は概して、予想よりも低い速度で進行し、何人かは疾患進行が観察されなかった一方で、他の人は治療後の年間を通じて改善が観察された。歴史的対照群の平均よりも速い進行速度を経験した患者はいなかった(図5)。
【００５０】
他の実施形態
本発明がその詳細な説明と併せて説明された一方で、前述の説明は、添付の特許請求の範囲により定義される本発明の範囲を例示することが意図されており、それを限定することは意図されていないことが理解されるべきである。他の態様、利点、及び改変は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１】
2018517743.tif 000003
【図２】
2018517743.tif 000004
【図３】
2018517743.tif 000005
【図４−１】
2018517743.tif 000006
【図４−２】
2018517743.tif 000007
【図５】
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【国際調査報告】
2018517743.tif 000009