(57)【要約】変更された（ある特定の実施形態では、増加した）レベルの１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するように誘導されたカプセル封入された病原体不含異種脈絡叢（ＣＰ）細胞を含有するＣＮＳ植込み型半透過性生体適合性カプセルを使用する、神経系の疾患および障害に対する改善された処置に関する組成物および方法が開示される。カプセルは、開示されるように、免疫学的拒絶も炎症も異物応答反応も惹起することなしに、顕著に（植込み後から１６カ月超）長寿命であるＣＰ細胞による上昇したＣＳＦ産生レベルの誘導が可能であるように選択される。
2018515616.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法であって、
（ａ）１または複数の半透過性生体適合性カプセルを選択するステップであって、前記カプセル中に、哺乳動物脈絡叢組織を機械的および酵素的のいずれかまたは両方によって解離して、直径が約５０μｍ〜約２００μｍでありＣＰ上皮細胞を含むＣＰ細胞クラスターを得ることによって得られた脈絡叢（ＣＰ）組織断片がカプセル封入されており、前記カプセルの実質的に全てが、直径が約４００μｍ〜約８００μｍであり、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００のＣＰ細胞を有する、ステップ；
（ｂ）前記カプセルの１つまたは複数を、前記対象中の１つの中枢神経系（ＣＮＳ）注射部位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２個のＣＮＳ注射部位に投与するステップ；および
（ｃ）前記投与するステップ（ｂ）の前に、（ｂ）と同時に、または（ｂ）に引き続いて、前記１つまたは複数のカプセル中の脈絡叢組織細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップであって、前記脈絡叢誘導剤は、前記接触させるステップがない場合に前記脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルと比較して変更されたレベルで前記１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するように前記脈絡叢組織細胞を誘導する、ステップ
を含む、方法。
【請求項２】
神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法であって、
（ａ）１または複数の半透過性生体適合性カプセルを選択するステップであって、前記カプセル中に、複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を得るのに十分な条件下および時間にわたって多能性細胞の集団を培養することによって得られたｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞がカプセル封入されており、前記カプセルの実質的に全てが、直径が約４００μｍ〜約８００μｍであり、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００のＣＰ細胞を有する、ステップ；
（ｂ）前記カプセルの１つまたは複数を、前記対象中の１つの中枢神経系（ＣＮＳ）注射部位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２個のＣＮＳ注射部位に投与するステップ；および
（ｃ）前記投与するステップ（ｂ）の前に、（ｂ）と同時に、または（ｂ）に引き続いて、前記１つまたは複数のカプセル中の前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップであって、前記脈絡叢誘導剤は、前記接触させるステップの前に脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルと比較して変更されたレベルで前記１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を放出するように前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を誘導する、ステップ
を含む、方法。
【請求項３】
前記脈絡叢誘導剤が、前記接触させるステップがない場合に前記脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルよりも高いレベルでの、前記１または複数のＣＳＦ成分の産生を誘導する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＣＰ細胞を前記脈絡叢誘導剤と接触させるステップが、前記投与するステップ（ｂ）の前に行われる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
前記脈絡叢誘導剤が、
（ａ）Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニスト、
（ｂ）ＧＳＫ３β阻害剤、
（ｃ）ベータ−カテニン活性化因子、
（ｄ）抗酸化剤、および
（ｅ）１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３
から選択される１または複数の薬剤を含む、請求項１または２のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
（１）前記Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニストが、ＷＡＹ−３１６６０６（ＳＦＲＰ阻害剤）、ＩＱ１（ＰＰ２Ａ活性化因子）、ＱＳ１１（ＡＲＦＧＡＰ１活性化因子）、（ヘテロ）アリールピリミジン、または２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、Ｎｏｒｒｉｎ、Ｒ−スポンジン−１、Ｒ−スポンジン−２、Ｒ−スポンジン−３、Ｒ−スポンジン−４から選択され、
（２）前記ＧＳＫ３β阻害剤が、ＳＢ−２１６７６３、ＢＩＯ（６−ブロモインディルビン−３’−オキシム）、塩化リチウム、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、オロト酸リチウム、臭化リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、酢酸リチウム、水酸化リチウム、水素化アルミニウムリチウム、過塩素酸リチウム、硝酸リチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化ホウ素リチウム、酸化リチウム、硫酸リチウム、ヘキサフルオロリン酸リチウム、四酸化リチウム、硫化リチウム、水素化リチウム、リチウムアミド、乳酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、リチウムジメチルアミド、リン酸リチウム、過酸化リチウム、リチウムマンガン酸化物、リチウムメトキシド、メタホウ酸リチウム、ステアリン酸リチウム、またはカチオン性リチウムを含む別のリチウム塩から選択され、
（３）前記ベータ−カテニン活性化因子が、デオキシコール酸（ＤＣＡ）および図５の化合物から選択され、
（４）前記抗酸化剤が、１０−（６’−ユビキノイル）デシルトリフェニルホスホニウム塩（ミトキノール、ＭＩＴＯＱ（登録商標））、ユビキノール（補酵素Ｑ）、トコフェロール、トコトリエノール（ビタミンＥ）、α−トコフェロール、γ−トコフェロール、２−アミノエタンスルホン酸（タウリン）、アスコルビン酸、グルタチオンおよびメラトニンから選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記哺乳動物脈絡叢組織が、前記対象に対して異種または同種である哺乳動物由来である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記哺乳動物脈絡叢組織が、ブタ、ヒツジ、ウシ、ヤギまたは非ヒト霊長類の脈絡叢組織を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ブタ脈絡叢組織が、胎仔脈絡叢組織または新生仔脈絡叢組織を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記胎仔脈絡叢組織または前記新生仔脈絡叢組織が、ヒト病原体を実質的に含まない、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記胎仔脈絡叢組織または前記新生仔脈絡叢組織が、ヒト向性伝染性ブタ内因性レトロウイルスを実質的に含まない、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
（ｉ）前記胎仔脈絡叢組織もしくは前記新生仔脈絡叢組織が、感染性ヒト向性ブタ内因性レトロウイルス（ＰＥＲＶ）を産生することが実質的に不可能であること、または（ｉｉ）前記胎仔脈絡叢組織もしくは前記新生仔脈絡叢組織が、ＰＥＲＶ遺伝子を欠く動物から得られること、のうち少なくとも１つである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記胎仔脈絡叢組織または前記新生仔脈絡叢組織が、ＰＥＲＶ−Ａ  ｅｎｖ遺伝子との組換えが可能なＰＥＲＶ−Ｃ  ｅｎｖ遺伝子を欠く動物から得られる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ｉ）多能性細胞の前記集団が、胚性細胞、臍帯細胞、胎盤細胞、神経堤前駆体、成体組織幹細胞および体細胞組織細胞から選択される供給源から得られること；および
（ｉｉ）多能性細胞の前記集団が、前記複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を得るのに十分な条件下および時間にわたって、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）またはＢＭＰシグナル伝達経路アゴニスト、トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーメンバーまたはＴＧＦ−βシグナル伝達経路アゴニスト、ｎｏｄａｌタンパク質またはｎｏｄａｌシグナル伝達経路アゴニスト、哺乳動物増殖分化因子（ＧＤＦ）またはＧＤＦシグナル伝達経路アゴニスト、Ｗｎｔタンパク質リガンドまたはＷｎｔシグナル伝達経路アゴニスト、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）またはＦＧＦシグナル伝達経路アゴニスト、およびソニックヘッジホッグ（Ｓｈｈ）またはＳｈｈシグナル伝達経路アゴニストから選択される１または複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＰ分化剤を含む培養培地中で培養されること
のいずれか一方または両方である、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニストが、ＷＡＹ−３１６６０６（ＳＦＲＰ阻害剤）、ＩＱ１（ＰＰ２Ａ活性化因子）、ＱＳ１１（ＡＲＦＧＡＰ１活性化因子）、２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、Ｎｏｒｒｉｎ、Ｒ−スポンジン−１、Ｒ−スポンジン−２、Ｒ−スポンジン−３もしくはＲ−スポンジン−４、塩化リチウム、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、オロト酸リチウム、臭化リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、酢酸リチウム、水酸化リチウム、水素化アルミニウムリチウム、過塩素酸リチウム、硝酸リチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化ホウ素リチウム、酸化リチウム、硫酸リチウム、ヘキサフルオロリン酸リチウム、四酸化リチウム、硫化リチウム、水素化リチウム、リチウムアミド、乳酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、リチウムジメチルアミド、リン酸リチウム、過酸化リチウム、リチウムマンガン酸化物、リチウムメトキシド、メタホウ酸リチウム、ステアリン酸リチウム、またはカチオン性リチウムを含む別のリチウム塩から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
カプセル封入された前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞が、前記対象に対して異種または同種である、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
（ｉ）前記カプセルが、前記ＣＮＳ注射部位において慢性炎症を惹起しないこと、および
（ｉｉ）前記ＣＮＳ注射部位における前記カプセルの免疫学的拒絶を好転させるための前記対象への免疫抑制剤の投与が必要とされないこと
のいずれかまたは両方である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１８】
前記１または複数のＣＳＦ成分が、図７Ａ〜Ｊに示される（ｉ）１もしくは複数の増殖因子、（ｉｉ）１もしくは複数のＣＳＦ抗酸化剤、（ｉｉｉ）１もしくは複数の走化性因子、（ｉｖ）１もしくは複数のシャペロンタンパク質、または（ｖ）１もしくは複数のＣＰ産物のうち少なくとも１つを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１９】
（ａ）前記１もしくは複数の増殖因子が、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−ＩＩ、ＦＧＦ−１、ｂＦＧＦ（ＦＧＦ−２）、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１２、ＦＧＦ−１８、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−２、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＥＧＦ、成長ホルモン（ＧＨ）、ＢＭＰ−１、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ−１１、ＢＭＰ−１５、ＧＤＦ−１、ＧＤＦ−７、ＧＤＦ−８、ＧＤＦ−９、神経増殖因子（ＮＧＦ）、ＰＥＤＦ（色素上皮由来因子、ＳｅｒｐｉｎＦ１としても公知）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＩＧＦ２、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＧＤＦ−１５、ＧＤＮＦ、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、アキソトロフィン、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子−アルファ（ＰＤＧＦ−α）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）もしくは神経突起成長促進因子−２／ミッドカイン（ＮＥＧＦ２）から選択され；
（ｂ）前記１もしくは複数のＣＳＦ抗酸化剤が、セルロプラスミン、スーパーオキシドジスムターゼ−１（ＳＯＤ−１）、スーパーオキシドジスムターゼ−２（ＳＯＤ−２、Ｍｎ型）、スーパーオキシドジスムターゼ銅シャペロン（ＣＣＳ）、ＤＪ−１／ＰＡＲＫ７、カタラーゼ、セレノプロテイン（Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｘ、１５ｋＤａ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、グルタチオンレダクターゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ヒドロキシアシルグルタチオンヒドロラーゼもしくはチオレドキシンから選択され；
（ｃ）前記１もしくは複数の走化性因子が、肺胞マクロファージ由来走化性因子−Ｉ（ＡＭＣＦ−Ｉ）、ＡＭＣＦ−ＩＩ、間質細胞由来因子−２、ケモカイン（ＣＸＣモチーフ）リガンド２、ケモカイン（ＣＣＬ８、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４）、ケモカイン（ＣＸＣモチーフ）受容体−４、ケモカイン様因子スーパーファミリー（ＣＫＬＦ−３、ＣＫＬＦ−６、ＣＫＬＦ−７）もしくは神経突起成長促進因子−２／ミッドカイン（ＮＥＧＦ２）から選択され；または
（ｄ）前記シャペロンタンパク質が、トランスサイレチン、リポカリン型プロスタグランジンＤシンターゼ／β−トレース（Ｌ−ＰＧＤＳ）、アポリポタンパク質（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｊ、Ｍ、Ｎ、Ｒ）、リポカリン−６、リポカリン−７、シスタチンＢ、シスタチンＣ、シスタチンＥＭ、シスタチン１１、ヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）ファミリーメンバーもしくはＤＪ−１／ＰＡＲＫ７から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
各カプセル内に、前記ＣＰ細胞が、１マイクロリットル未満のコア容積中に存在する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２１】
前記投与するステップが、約２００、４００、６００、８００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、７５００または９０００個以上、かつ約１０，０００個以下のＣＰ細胞を各々が含有する１または複数のカプセルを投与することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２２】
前記１または複数のカプセルが各々、約４００、６００、８００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００または７５００個以上、かつ約８０００個以下の細胞を含有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記投与するステップが、治療有効量の前記カプセルを前記ＣＮＳ注射部位に投与することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２４】
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００または２０００個以下のカプセルを前記１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個のＣＮＳ注射部位に投与することを含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記カプセル封入されたＣＰ細胞の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０または５０パーセントが、前記投与するステップの後少なくとも６ヵ月間にわたって生存可能であり続ける、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２６】
前記生体適合性カプセルの外側表面が、前記投与するステップの後少なくとも１年間にわたって細胞外マトリックス沈着を実質的に有さない、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２７】
前記カプセルを前記ＣＮＳ注射部位に投与することが、担体溶液中に前記カプセルを含む懸濁物を送達することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２８】
前記担体溶液が、ＮａＣｌ、人工脳脊髄液（ＣＳＦ）、アスコルベートまたは抗炎症剤のうち少なくとも１種を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗炎症剤が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド抗炎症薬およびコネキシンアンタゴニストから選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記対象が、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象が、神経系疾患を有することが既知である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項３２】
前記神経系疾患が、（ａ）ニューロンの死を特徴とする神経変性疾患、および（ｂ）パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、運動ニューロン疾患としても公知）、毛細血管拡張性運動失調症、進行性球麻痺、進行性筋萎縮症、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、脊髄小脳失調症１型（ＳＣＡ１）または加齢性神経変性障害から選択される神経系疾患、から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記神経系疾患が、（ａ）前記神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの前記神経細胞機能のレベルにおける減少を特徴とする疾患、ならびに（ｂ）パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症および抑うつから選択される（ａ）の疾患、から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記神経系疾患が、（ａ）前記神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの前記神経細胞機能のレベルにおける増加を特徴とする疾患、ならびに（ｂ）精神病、統合失調症、てんかん性発作、虚血性脳卒中、および不穏下肢症候群と関連する不眠症から選択される（ａ）の疾患、から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記神経系疾患が、（ａ）前記対象における、前記神経系疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＣＳＦ成分（単数または複数）のレベルと比較して変更されたレベルの前記１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を含む脳脊髄液（ＣＳＦ）の存在を特徴とする疾患、ならびに（ｂ）アルツハイマー病および糖尿病から選択される（ａ）の疾患、から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記神経系疾患が、
（ａ）前記対象における、前記神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における脈絡叢機能のレベルと比較して変更されたレベルの少なくとも１つの前記脈絡叢機能の存在を特徴とする疾患、
（ｂ）スタージ・ウェーバー症候群およびクリペル・トルノネー・ウェーバー症候群から選択される（ａ）の疾患、
（ｃ）前記神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における異常に折り畳まれたタンパク質沈着のレベルと比較した、前記対象の脳組織における異常に折り畳まれたタンパク質沈着のレベルの増加を特徴とする疾患、ならびに
（ｄ）脳アミロイドアンギオパチー、アミロイドーシス−アイスランド型を伴う遺伝性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｉ）、アミロイドーシス−オランダ型を伴う脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、髄膜脳血管および眼球軟髄膜アミロイドーシス、ゲルゾリン関連脊髄および脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス−フィンランド型（ＦＡＦ）、血管バリアントプリオン脳アミロイドーシス、家族性英国型認知症（ＦＢＤ）（家族性脳アミロイドアンギオパチー−英国型または脳血管アミロイドーシス−英国型としても公知）、家族性デンマーク型認知症（眼耳脳遺伝病としても公知）、家族性トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスおよびＰｒＰ脳アミロイドアンギオパチー（ＰｒＰ−ＣＡＡ）から選択される（ｃ）の疾患
から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記神経系疾患が中枢神経系（ＣＮＳ）疾患である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＣＮＳ疾患が、（ｉ）ＣＮＳニューロンの死を特徴とする神経変性疾患、および（ｉｉ）前記ＣＮＳ疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＣＮＳ神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの前記ＣＮＳ神経細胞機能のレベルにおける減少を特徴とするＣＮＳ疾患、およびｉｉｉ）前記ＣＮＳ疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＣＮＳ神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの前記ＣＮＳ神経細胞機能のレベルにおける増加を特徴とするＣＮＳ疾患、のうち少なくとも１つであり、前記ＣＮＳニューロンおよびＣＮＳ神経細胞が、脳、脊髄、網膜、視神経、脳神経、嗅覚神経または嗅上皮のうち少なくとも１つ中に存在する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記神経系疾患が末梢神経系（ＰＮＳ）疾患である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＰＮＳ疾患が、（ｉ）ＰＮＳニューロンの死を特徴とする神経変性疾患、（ｉｉ）前記ＰＮＳ疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＰＮＳ神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの前記ＰＮＳ神経細胞機能のレベルにおける減少を特徴とするＰＮＳ疾患、およびｉｉｉ）前記ＰＮＳ疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＰＮＳ神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの前記ＰＮＳ神経細胞機能のレベルにおける増加を特徴とするＰＮＳ疾患、のうち少なくとも１つであり、前記ＰＮＳニューロンおよびＰＮＳ神経細胞が、末梢神経節または末梢神経のうち少なくとも１つ中に存在する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＣＮＳ注射部位が、前記対象の脳組織中にある、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＣＮＳ注射部位が、前記対象の脳室中にある、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４３】
前記対象中の前記ＣＮＳ注射部位が、
（ａ）前記神経系疾患に罹患した神経細胞線維のための標的部位を含むＣＮＳ部位、
（ｂ）前記神経系疾患に起因して死滅するリスクがあるニューロン細胞を含有するＣＮＳ部位、
（ｃ）前記神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの前記神経細胞機能のレベルにおける減少のリスクがあるニューロン細胞を含有するＣＮＳ部位、
（ｄ）前記神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの前記神経細胞機能のレベルにおける増加のリスクがあるニューロン細胞を含有するＣＮＳ部位、
（ｅ）前記カプセルが血液との接触を実質的に有さないように選択されるＣＮＳ部位、および
（ｆ）前記投与するステップに引き続いて前記カプセルによって分泌されるＣＳＦ成分が、前記対象の脳の至る所にＣＳＦ循環によって分配されるように選択されるＣＮＳ部位
から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４４】
前記生体適合性カプセルが、カチオン性架橋剤で架橋された高マンヌロン酸アルギネートのコア層、半透過性膜を形成するポリカチオンの中間層、およびカチオン性架橋剤で架橋された高マンヌロン酸アルギネートの外層を含み、前記コア層中の高マンヌロン酸アルギネートおよび前記外層中の高マンヌロン酸アルギネートが、同じであるかまたは異なり、約５０％〜約９５％の間のマンヌロン酸残基を含有し、前記ポリカチオン層が、ポリ−Ｌ−リシンからは構成されない、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４５】
前記高マンヌロン酸アルギネートが、約３００ｋＤａ超かつ１０００ｋＤａ以下の平均分子量を有し、前記ポリカチオン層が、１０ｋＤａと４０ｋＤａとの間の平均分子量を有するポリカチオン性作用物質から形成される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記カプセルを前記ＣＮＳ部位に投与することが、カテーテルを介して前記カプセルを送達することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４７】
送達することが、定位装置を用いて前記カテーテルを制御可能に位置付けることを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記定位装置が、脳深部刺激装置（ＤＢＳ）マイクロドライバー、フレームなし定位ヘッドフレーム、頭蓋取り付け型照準デバイス、レクセルフレームおよびＣｏｓｍａｎ−Ｒｏｂｅｒｔｓ−Ｗｅｌｌｓフレームから選択される定位装置または改変型定位装置を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記カテーテルが、外部カテーテル、閉塞具、プランジャーおよび送達カテーテルを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記神経系疾患が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、プリオン病、運動ニューロン疾患、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、多系統萎縮症−パーキンソン型、多系統萎縮症−小脳型、本態性振戦、進行性核上性麻痺、ジスキネジア、レビー小体型認知症、本態性振戦、薬物誘発性パーキンソニズム、毛細血管拡張性運動失調症、脊髄小脳失調症、小脳変性症、大脳萎縮症、オリーブ橋小脳萎縮症、大脳皮質基底核変性症、ミオクローヌス性小脳性共同運動障害、フリードライヒ運動失調症；静的神経疾患、脳卒中、中枢性疼痛症候群、慢性疼痛、片頭痛、舌咽神経痛、発作性障害、てんかん、脳性麻痺；外傷関連ＣＮＳ疾患、ゲルストマン症候群、閉じ込め症候群、脊髄傷害、進行性神経変性疾患、加齢および認知症と関連する進行性神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、前頭側頭型認知症、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、巨大軸索ニューロパチー、遺伝性神経障害、乳児神経軸索ジストロフィー、クラッベ病、ランドウ・クレフナー症候群、脊髄癆、運動ニューロンおよび神経筋接合部の疾患、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、単肢筋萎縮症、ジストニア、遺伝性痙性対麻痺、アイザック症候群、ランバート・イートン筋無力症症候群、運動ニューロン疾患、不穏下肢症候群、トゥレット症候群；ＣＮＳの炎症性疾患、多発性硬化症；薬物または毒素誘発性ＣＮＳ疾患、神経弛緩薬性悪性症候群、遅発性ジスキネジア、ウィルソン病、神経毒性；代謝不全の神経系疾患、レフサム病、神経系感染性疾患、髄膜炎、急性播種性脳脊髄炎、ギラン・バレー症候群、ＡＩＤＳの神経学的合併症、ボツリヌス中毒、破傷風、神経梅毒、灰白髄炎、狂犬病、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、プリオン病、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ（アメーバ性脳感染症）；神経嚢虫症；精神神経疾患、抑うつ、気分障害；強迫性障害、摂食障害、嗜癖、不安関連障害、双極性障害、注意欠陥過活動性障害、自閉症、統合失調症；神経内分泌疾患、ナルコレプシー、不眠症、ニューロン死、グルタミン酸毒性、タンパク質凝集もしくは沈着、またはアミロイドプラーク形成のうち１もしくは複数と関連するまたはそれを特徴とする疾患、脳アミロイドアンギオパチー、アミロイドーシス−アイスランド型を伴う遺伝性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｉ）、アミロイドーシス−オランダ型を伴う脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、髄膜脳血管および眼球軟髄膜アミロイドーシス、ゲルゾリン関連脊髄および脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス−フィンランド型（ＦＡＦ）、血管バリアントプリオン脳アミロイドーシス、家族性英国型認知症（ＦＢＤ）（家族性脳アミロイドアンギオパチー−英国型または脳血管アミロイドーシス−英国型としても公知）、家族性デンマーク型認知症（眼耳脳遺伝病としても公知）、家族性トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシス、ＰｒＰ脳アミロイドアンギオパチー（ＰｒＰ−ＣＡＡ）；ミトコンドリア機能不全の神経系疾患、正常な健康対照対象において見出されるＲＯＳ産生レベルを超える反応性酸素種（ＲＯＳ）産生レベルを含むミトコンドリア機能不全の神経系疾患；脳由来神経栄養因子関連障害、双極性障害、レット���候群ならびにルビンシュタイン・テイビ症候群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項５１】
神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法であって、
（ａ）直径が約５０μｍ〜約２００μｍでありＣＰ上皮細胞を含むＣＰ細胞クラスターを得るための哺乳動物脈絡叢組織の機械的解離および酵素的解離のいずれかまたは両方によって得られる脈絡叢（ＣＰ）組織断片が中にカプセル封入された１または複数の半透過性生体適合性カプセルを選択するステップであって、前記カプセルの実質的に全てが、直径が約４００μｍ〜約８００μｍであり、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００のＣＰ細胞を有する、ステップ；
（ｂ）前記カプセルの１つまたは複数を、前記対象中の１つの末梢神経系（ＰＮＳ）注射部位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２個のＰＮＳ注射部位に投与するステップ；および
（ｃ）前記投与するステップ（ｂ）の前に、（ｂ）と同時に、または（ｂ）に引き続いて、前記１つまたは複数のカプセル中の脈絡叢組織細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップであって、前記脈絡叢誘導剤は、前記接触させるステップがない場合に前記脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルと比較して変更されたレベルで前記１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するように前記脈絡叢組織細胞を誘導する、ステップ
を含む、方法。
【請求項５２】
神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法であって、
（ａ）複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を得るのに十分な条件下および時間にわたって多能性細胞の集団を培養することによって得られたｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞が中にカプセル封入された１または複数の半透過性生体適合性カプセルを選択するステップであって、前記カプセルの実質的に全てが、直径が約４００μｍ〜約８００μｍであり、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００のＣＰ細胞を有する、ステップ；
（ｂ）前記カプセルの１つまたは複数を、前記対象中の１つの末梢神経系（ＰＮＳ）注射部位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２個のＰＮＳ注射部位に投与するステップ；および
（ｃ）前記投与するステップ（ｂ）の前に、（ｂ）と同時に、または（ｂ）に引き続いて、前記１つまたは複数のカプセル中の前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップであって、前記脈絡叢誘導剤は、前記接触させるステップの前に脈絡叢組織細胞が１たは複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルと比較して変更されたレベルで前記１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を放出するように前記ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を誘導する、ステップ
を含む、方法。
【請求項５３】
前記脈絡叢誘導剤が、前記接触させるステップがない場合に前記脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルよりも高いレベルでの、前記１または複数のＣＳＦ成分の産生を誘導する、請求項５１または５２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２０１５年５月１５日に出願された米国仮出願第６２／１６２，３９０号（この出願は、その全体が参考として本明細書に援用される）に対する利益を主張する。
【０００２】
本開示は一般に、神経変性疾患を含む神経学的な疾患および障害の処置に関する。より具体的には、変更された（例えば、統計的に有意な様式で増加または減少した）レベルの脳脊髄液（ＣＳＦ）成分、ある特定の好ましい実施形態については増加したレベルの特定のＣＳＦ成分を産生するように予想外に誘導され得る、驚くほど長寿命の異種脈絡叢（ＣＰ）細胞を含有する半透過性カプセルを含む中枢神経系（ＣＮＳ）インプラントに関する組成物および方法が記載される。カプセルは、局所的炎症反応を最小化し、アジュバント免疫抑制治療の必要性を回避するために、非免疫原性である。
【背景技術】
【０００３】
神経系の疾患および障害は、有効な改善法がわかっていない重要な医学的、社会的および経済的な課題を提示している。神経変性疾患は、加齢と関連する場合が多く、他の神経学的欠陥と共に、抑うつまたは認知症、ならびに記憶、運動技能、認知技能および知覚能力のうち１もしくは複数の悪化または喪失がしばしば伴う、中枢神経系（ＣＮＳ）および／または末梢神経系（ＰＮＳ）からのニューロン細胞の進行性の喪失を特徴とし得る（Ｓｕｋｓｕｐｈｅｗら、２０１５年  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ７巻：５０２頁；Ｓｃｈａｄｔら、２０１４年  Ｆｒｏｎｔ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ５巻：２５２頁）。アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、統合失調症および他の神経系疾患は、増加する罹患率および医療費に対する増加する影響で、社会的負担になっている。
【０００４】
健康な個体中では正常な神経系の維持および活動への重要な寄与者である神経系細胞の疾患関連変性は、有害な結果を伴う損なわれた神経系機能をもたらし得る。例えば、重要な生理活性分子、例えば、増殖因子、分化因子、組織修復因子、神経伝達物質、解毒タンパク質、タンパク質シャペロンなどを分泌する神経系細胞への損傷または神経系細胞の喪失は、パーキンソン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および他の状態などの、破壊的な疾患を生じ得る。喪失した細胞の正常な機能に、生理学的状態の恒常性維持または変化する生理学的合図への適切な応答が関与する場合、患者に、複数の枯渇した因子のうち１つまたは少数を回復させることを調節されない様式で単純に試みる治療戦略は、典型的には不首尾である。その代り、有効な疾患改変治療には、生理学的濃度で、生物学的に応答性の調節された様式で、これらの細胞によって通常分泌される全ての因子の供給を絶えず再調整することが関与すべきである。
【０００５】
したがって、神経変性を処置するための最近の代替的アプローチには、損傷した細胞を回復、修復または機能的に置換することができる実行可能な治療的細胞をＣＮＳ中に導入することが関与する。ＣＮＳ細胞および組織の成長、分化、修復および／または再構築が進行し得る際に、かかるアプローチによって、置換細胞は、例えば、それらの遺伝子発現およびタンパク質分泌プロファイルにおける量的および／または質的変化を介して進行することによって、局所的環境によって供給される環境的合図に対して柔軟かつ多面的に応答し得ると考えられる。かかるＣＮＳ細胞置換治療は、疾患に起因して喪失した細胞を、初代エフェクター細胞、例えば、パーキンソン病を有する患者において移植されるとドパミン産生ニューロンへと分化し得る胎児中脳組織移植物で直接置換する試みを含んできた（Ｋｏｒｄｏｗｅｒら、１９９５年  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３３２巻（１７号）：１１１８頁；Ｌｉｎｄｖａｌｌ、１９９８年  Ｍｏｖ  Ｄｉｓｏｒｄ．  １３巻補遺１：８３頁；Ｒｏｉｔｂｅｒｇら、２００４年  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｒｅｓ．  ２６巻（４号）：３５５頁；Ｋｅｆａｌｏｐｏｕｌｏｕら、２０１４年  ＪＡＭＡ  Ｎｅｕｒｏｌ．  ７１巻（１号）：８３頁；Ｂｅｇａら、２０１４年  ＪＡＭＡ  ３１１巻（６号）：６１７頁）。
【０００６】
直接的ＣＮＳ細胞置換治療からの脱却として、他の最近同定された代替的治療は、損傷したＣＮＳ組織部位に、ＣＮＳ欠陥を好転させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）ことが可能な細胞を間接的に供給することに焦点を当てている。例えば、脈絡叢（ＣＰ）細胞は、ＣＳＦ産生におけるこれらの特殊化したＣＮＳ細胞の認識された役割を考慮して、特に注目されてきた（例えば、Ｄａｍｋｉｅｒら、２０１３年  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｒｅｖ．  ９３巻：１８４７頁）。脈絡叢（ＣＰ）は、脳室内の特殊化した上皮組織である。その重要な機能の１つは、種々の小動物および非ヒト霊長類疾患モデル研究からの行動的改善および組織学的データによって明らかなように、神経栄養因子、神経保護因子および神経回復因子を提供する脳脊髄液（ＣＳＦ）を分泌することである（Ｒｅｄｚｉｃら、２００５年  Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ．  ７１巻：１頁；Ｂｏｒｌｏｎｇａｎら、２００４年  Ｓｔｒｏｋｅ  ３５巻（９号）：２２０６頁；Ｅｍｅｒｉｃｈら、２００６年  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ｄｉｓ．  ２３巻（２号）：４７１頁；Ｂｏｒｌｏｎｇａｎら、２００８年  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １６巻（１０号）：９８７頁；Ｌｕｏら、２０１３年  Ｊ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｓ  Ｄｉｓ．  ３巻（３号）：２７５頁）。
【０００７】
ＣＮＳにおけるＣＳＦの機能およびターンオーバー速度は、加齢の間に顕著に減少し、このことが、高齢者において生じる多くの神経変性疾患に寄与し得る（Ｒｅｄｚｉｃら、２００５年  Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ．  ７１巻：１頁；Ｃｈｅｎら、２００９年  Ｅｘｐ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．  ４４巻（４号）：２８９頁；Ｃｈｅｎら、２０１２年  Ｅｘｐ  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．  ４７巻（４号）：３２３頁）。最近の知見は、脳内の間質腔を通じたＣＳＦ循環が、動物において睡眠周期の間により有効に生じることを示しており（Ｘｉｅら、２０１３年  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４２巻（６１５６号）：３７３頁）、これは、低減された睡眠が、神経変性に寄与することが公知の老廃副産物のクリアランスの減少およびプラーク形成の増加に寄与し得ることを暗示している（Ｉｌｉｆｆら、２０１４年  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ３４巻（４９号）：１６１８０頁）。しかし、これらの知見は、概日周期全体の間の脳中の損傷部位内での局所的なＣＳＦの継続的な産生が、臨床的に望ましくない結果を有し得ることもまた暗示している。例えば、損傷したＣＮＳ部位における過剰なＣＳＦ産生は、シナプス領域における、活性なシナプスタンパク質または神経伝達物質の、潜在的に最適以下の濃度までの希釈を生じ得る。したがって、ＣＳＦ産生を増加させることがＣＮＳ疾患の処置のための実行可能な治療戦略であるか否かを予測することは困難である。
【０００８】
それにもかかわらず、複数の試みが、ＣＰ由来のＣＳＦ成分または他のＣＰプロセス、産物もしくは代謝物が、最もありそうなことには植込み部位中またはその周囲の種々の細胞型の再プログラミングおよび／または回復によって、損傷した宿主組織を回復させるための二次エフェクターとして作用し得る、ＣＮＳにおける植込みによる脈絡叢（ＣＰ）細胞移植物の使用に向けられてきた。実用的および倫理的な理由のために、ＣＰインプラントは、典型的には異種ＣＰ細胞を使用しており、したがって、異種移植物に対する免疫学的拒絶および／または宿主炎症（例えば、異物応答）反応と対抗するための免疫抑制的で抗炎症的な手段の実行を必要とする。生体適合性で半透過性のアルギネートカプセルは、植込んだカプセルの周囲の組織中に可溶性細胞産物が拡散するのを可能にしつつかかる反応を最小化するための、脳中に治療的細胞を導入するための非免疫原性ビヒクルとして公知である（例えば、ＵＳ６３２２８０４、ＵＳ５８３４００１、ＵＳ６０８３５２３、ＵＳ２００７／１３４２２４、ＵＳ５８６９４６３、ＵＳ２００４／２１３７６８、ＵＳ２００９／００４７３２５）。ＣＮＳ疾患の処置のための生体適合性カプセル内の脈絡叢組織断片の、脳における具体的な植込みは、例えば、ＵＳ２００７／１３４２２４、ならびにＵＳ２００４／２１３７６８およびＵＳ２００９／００４７３２５、ならびに関連の特許出願公開に記載されている。例えば、ＵＳ２００９／００４７３２５に記載されるように、ＣＮＳ組織損傷の植込み部位において局所的な異種移植されたカプセル封入されたＣＰ細胞によるＣＳＦ産生に加えて、新生仔哺乳動物のＣＳＦがＣＳＦ成分において典型的には富化されていることを考慮すると、新生児ＣＰ細胞の使用は、成体ＣＰ細胞によって供給されるものよりも高い濃度の生物学的に活性なＣＳＦ分子を提供し得る。
【０００９】
しかし、治療的異種移植物の開発におけるこれらの進歩にもかかわらず、いくつかの未対応の課題が依然として存在している。例えば、異種ＣＰ組織は、限定的な量で入手可能な可能性があり、新生児ＣＰ細胞が使用される場合であっても、異種移植後に生産されたＣＳＦ成分の量は、神経系欠陥の補正をもたらすには不適切であり得る。
【００１０】
同様に、広範な神経系組織損傷が存在するとき、および／またはレシピエント中にＣＰ含有カプセルの配置のための限定的な空間のみしか存在しないとき、および／または高レベルのＣＳＦ成分産生が所望されるとき、多数のカプセルをＣＮＳ部位に植込まなければならない場合および／または所望のレベルのＣＳＦ産生能を送達するために複数のＣＮＳ植込み部位もしくは反復される侵襲的手順が必要とされる場合、カプセル封入された異種ＣＰ細胞のための植込み部位（例えば、脳組織中の直接的ＣＰカプセル植込みのためのＣＮＳ部位）にさらに損傷を与える現実のリスクが存在する。
【００１１】
ＣＰ異種移植物の長寿命もまた、以前の報告からは不明であるが、慢性神経変性疾患は、長期の治療を必要とし得る。消耗したカプセル封入されたＣＰインプラントを置換するための反復される外科的介入は不便であり、患者にとって潜在的に有害であり、費用がかかる。さらに、異種移植は、ドナーＣＰ組織中に存在する有害な病原体を移植物レシピエント中に不必要に導入するリスクを有している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許第６３２２８０４号明細書
【特許文献２】米国特許第５８３４００１号明細書
【特許文献３】米国特許第６０８３５２３号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
既存の方法論のこれらおよび他の欠点は、ＣＮＳ治療のための異種移植物の開発を妨害し、特に、本開示の前には、損傷したＣＮＳ部位中へのカプセル封入されたＣＰ細胞の植込みが長期の有益な臨床転帰を生じるか否かを予測することは不可能であった。本明細書に開示される実施形態は、これらの必要性に取り組み、他の関連の利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、ある特定の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法を提供し、この方法は、（ａ）１または複数の半透過性生体適合性カプセルを選択するステップであって、カプセル中に、哺乳動物脈絡叢組織を機械的および酵素的のいずれかまたは両方によって解離して、直径が約５０μｍ〜約２００μｍでありＣＰ上皮細胞を含むＣＰ細胞クラスターを得ることによって得られた脈絡叢（ＣＰ）組織断片がカプセル封入されており、カプセルの実質的に全てが、直径が約４００μｍ〜約８００μｍであり、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００のＣＰ細胞を有する、ステップ；（ｂ）カプセルの１つまたは複数を、対象中の１つの中枢神経系（ＣＮＳ）注射部位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２個のＣＮＳ注射部位に投与するステップ；および（ｃ）投与するステップ（ｂ）の前に、（ｂ）と同時に、または（ｂ）に引き続いて、１つまたは複数のカプセル中の脈絡叢組織細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップであって、この脈絡叢誘導剤は、接触させるステップがない場合に脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルと比較して変更された（例えば、統計的に有意な様式で増加または減少した）レベルで１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するように脈絡叢組織細胞を誘導する、ステップ、を含み、このレベルは、ある特定の実施形態では、１または複数のＣＳＦ成分について、接触させるステップがない場合に脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルよりも高い。
【００１５】
ある特定の他の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）１または複数の半透過性生体適合性カプセルを選択するステップであって、前記カプセル中に、複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を得るのに十分な条件下および時間にわたって多能性細胞の集団を培養することによって得られたｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞がカプセル封入されており、カプセルの実質的に全てが、直径が約４００μｍ〜約８００μｍであり、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００のＣＰ細胞を有する、ステップ；（ｂ）カプセルの１つまたは複数を、対象中の１つの中枢神経系（ＣＮＳ）注射部位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２個のＣＮＳ注射部位に投与するステップ；および（ｃ）投与するステップ（ｂ）の前に、（ｂ）と同時に、または（ｂ）に引き続いて、１つまたは複数のカプセル中のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップであって、この脈絡叢誘導剤は、接触させるステップが存在しない場合に脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルと比較して変更された（例えば、統計的に有意な様式で増加または減少した）レベルで１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を放出するようにｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を誘導する、ステップ、を含み、このレベルは、ある特定の実施形態では、１または複数のＣＳＦ成分について、接触させるステップの前に脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルよりも高い。ある特定の実施形態では、ＣＰ細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップは、投与するステップ（ｂ）の前に行われる。ある特定の実施形態では、脈絡叢誘導剤は、（ａ）Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニスト、（ｂ）ＧＳＫ３β阻害剤、（ｃ）ベータ−カテニン活性化因子、（ｄ）抗酸化剤および（ｅ）１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３から選択される１または複数の薬剤を含む。ある特定の実施形態では、（１）Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニストは、ＷＡＹ−３１６６０６（ＳＦＲＰ阻害剤）、ＩＱ１（ＰＰ２Ａ活性化因子）、ＱＳ１１（ＡＲＦＧＡＰ１活性化因子）、（ヘテロ）アリールピリミジン、または２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、Ｎｏｒｒｉｎ、Ｒ−スポンジン−１、Ｒ−スポンジン−２、Ｒ−スポンジン−３、Ｒ−スポンジン−４から選択され、（２）ＧＳＫ３β阻害剤は、ＳＢ−２１６７６３、ＢＩＯ（６−ブロモインディルビン−３’−オキシム）、塩化リチウム、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、オロト酸リチウム、臭化リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、酢酸リチウム、水酸化リチウム、水素化アルミニウムリチウム、過塩素酸リチウム、硝酸リチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化ホウ素リチウム、酸化リチウム、硫酸リチウム、ヘキサフルオロリン酸リチウム、四酸化リチウム、硫化リチウム、水素化リチウム、リチウムアミド、乳酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、リチ��ムジメチルアミド、リン酸リチウム、過酸化リチウム、リチウムマンガン酸化物、リチウムメトキシド、メタホウ酸リチウム、ステアリン酸リチウム、またはカチオン性リチウムを含む別のリチウム塩から選択され、（３）ベータ−カテニン活性化因子は、デオキシコール酸（ＤＣＡ）および図５の化合物から選択され、（４）抗酸化剤は、１０−（６’−ユビキノイル）デシルトリフェニルホスホニウム塩（ミトキノール、ＭＩＴＯＱ（登録商標））、ユビキノール（補酵素Ｑ）、トコフェロール、トコトリエノール（ビタミンＥ）、α−トコフェロール、γ−トコフェロール、２−アミノエタンスルホン酸（タウリン）、アスコルビン酸、グルタチオンおよびメラトニンから選択される。
【００１６】
ある特定の実施形態では、哺乳動物脈絡叢組織は、対象に対して異種または同種である哺乳動物由来である。ある特定の実施形態では、哺乳動物脈絡叢組織は、ブタ、ヒツジ、ウシ、ヤギまたは非ヒト霊長類の脈絡叢組織を含む。ある特定の実施形態では、ブタ脈絡叢組織は、胎仔脈絡叢組織または新生仔脈絡叢組織を含み、これは、ある特定のさらなる実施形態では、ヒト病原体を実質的に含まない。ある特定の関連の実施形態では、胎仔脈絡叢組織または新生仔脈絡叢組織は、ヒト向性伝染性ブタ内因性レトロウイルスを実質的に含まず、ある特定の実施形態では、胎仔もしくは新生仔脈絡叢組織は、感染性ヒト向性ブタ内因性レトロウイルス（ＰＥＲＶ）を産生することが実質的に不可能である、または胎仔もしくは新生仔脈絡叢組織は、ＰＥＲＶ遺伝子を欠く動物から得られる。ある特定のさらなる実施形態では、胎仔脈絡叢組織または新生仔脈絡叢組織は、ＰＥＲＶ−Ａ  ｅｎｖ遺伝子との組換えが可能なＰＥＲＶ−Ｃ  ｅｎｖ遺伝子を欠く動物から得られる。
【００１７】
上記方法のある特定の実施形態では、多能性細胞の集団は、胚性細胞、臍帯細胞、胎盤細胞、神経堤前駆体、成体組織幹細胞および体細胞組織細胞から選択される供給源から得られる。ある特定の実施形態では、多能性細胞の集団は、複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を得るのに十分な条件下および時間にわたって、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）またはＢＭＰシグナル伝達経路アゴニスト、トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーメンバーまたはＴＧＦ−βシグナル伝達経路アゴニスト、ｎｏｄａｌタンパク質またはｎｏｄａｌシグナル伝達経路アゴニスト、哺乳動物増殖分化因子（ＧＤＦ）またはＧＤＦシグナル伝達経路アゴニスト、Ｗｎｔタンパク質リガンドまたはＷｎｔシグナル伝達経路アゴニスト、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）またはＦＧＦシグナル伝達経路アゴニスト、およびソニックヘッジホッグ（Ｓｈｈ）またはＳｈｈシグナル伝達経路アゴニストから選択される１または複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＰ分化剤を含む培養培地中で培養される。ある特定のさらなる実施形態では、Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニストは、ＷＡＹ−３１６６０６（ＳＦＲＰ阻害剤）、ＩＱ１（ＰＰ２Ａ活性化因子）、ＱＳ１１（ＡＲＦＧＡＰ１活性化因子）、２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、Ｎｏｒｒｉｎ、Ｒ−スポンジン−１、Ｒ−スポンジン−２、Ｒ−スポンジン−３もしくはＲ−スポンジン−４、塩化リチウム、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、オロト酸リチウム、臭化リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、酢酸リチウム、水酸化リチウム、水素化アルミニウムリチウム、過塩素酸リチウム、硝酸リチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化ホウ素リチウム、酸化リチウム、硫酸リチウム、ヘキサフルオロリン酸リチウム、四酸化リチウム、硫化リチウム、水素化リチウム、リチウムアミド、乳酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、リチウムジメチルアミド、リン酸リチウム、過酸化リチウム、リチウムマンガン酸化物、リチウムメトキシド、メタホウ酸リチウム、ステアリン酸リチウム、またはカチオン性リチウムを含む別のリチウム塩から選択される。
【００１８】
上記方法のある特定の実施形態では、カプセル封入されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞は、対象に対して異種または同種である。ある特定の実施形態では、（ｉ）カプセルは、ＣＮＳ注射部位において慢性炎症を惹起しない、および（ｉｉ）ＣＮＳ注射部位におけるカプセルの免疫学的拒絶を好転させるための対象への免疫抑制剤の投与が必要とされない、のいずれかまたは両方である。ある特定の実施形態では、１または複数のＣＳＦ成分は、図７Ａ〜Ｊに示される（ｉ）１もしくは複数の増殖因子、（ｉｉ）１もしくは複数のＣＳＦ抗酸化剤、（ｉｉｉ）１もしくは複数の走化性因子、（ｉｖ）１もしくは複数のシャペロンタンパク質、または（ｖ）１もしくは複数のＣＰ産物のうち少なくとも１つを含む。ある特定のさらなる実施形態では、（ａ）１もしくは複数の増殖因子は、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−ＩＩ、ＦＧＦ−１、ｂＦＧＦ（ＦＧＦ−２）、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１２、ＦＧＦ−１８、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−２、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＥＧＦ、成長ホルモン（ＧＨ）、ＢＭＰ−１、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ７、ＢＭＰ−１１、ＢＭＰ−１５、ＧＤＦ−１、ＧＤＦ−７、ＧＤＦ−８、ＧＤＦ−９、神経増殖因子（ＮＧＦ）、ＰＥＤＦ（色素上皮由来因子、ＳｅｒｐｉｎＦ１としても公知）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＩＧＦ２、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＧＤＦ−１５、ＧＤＮＦ、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、アキソトロフィン（ａｘｏｔｒｏｐｈｉｎ）、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子−アルファ（ＰＤＧＦ−α）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）もしくは神経突起成長促進因子（ｎｅｕｒｉｔｅ  ｇｒｏｗｔｈ−ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）−２／ミッドカイン（ＮＥＧＦ２）が含まれ得るがこれらに限定されない増殖因子から選択され；（ｂ）１もしくは複数のＣＳＦ抗酸化剤は、セルロプラスミン、スーパーオキシドジスムターゼ−１（ＳＯＤ−１）、スーパーオキシドジスムターゼ−２（ＳＯＤ−２、Ｍｎ型）、スーパーオキシドジスムターゼ銅シャペロン（ＣＣＳ）、ＤＪ−１／ＰＡＲＫ７、カタラーゼ、セレノプロテイン（Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｘ、１５ｋＤａ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、グルタチオンレダクターゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ヒドロキシアシルグルタチオンヒドロラーゼもしくはチオレドキシンから選択され；（ｃ）１もしくは複数の走化性因子は、肺胞マクロファージ由来走化性因子−Ｉ（ＡＭＣＦ−Ｉ）、ＡＭＣＦ−ＩＩ、間質細胞由来因子−２、ケモカイン（ＣＸＣモチーフ）リガンド２、ケモカイン（ＣＣＬ８、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４）、ケモカイン（ＣＸＣモチーフ）受容体−４、ケモカイン様因子スーパーファミリー（ＣＫＬＦ−３、ＣＫＬＦ−６、ＣＫＬＦ−７）もしくは神経突起成長促進因子−２／ミッドカイン（ＮＥＧＦ２）が含まれ得るがこれらに限定されない走化性因子から選択され；または（ｄ）シャペロンタンパク質は、トランスサイレチン、リポカ���ン型プロスタグランジンＤシンターゼ／β−トレース（Ｌ−ＰＧＤＳ）、アポリポタンパク質（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｊ、Ｍ、Ｎ、Ｒ）、リポカリン−６、リポカリン−７、シスタチンＢ、シスタチンＣ、シスタチンＥＭ、シスタチン１１、ヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）ファミリーメンバーもしくはＤＪ−１／ＰＡＲＫ７が含まれ得るがこれらに限定されないタンパク質から選択される。
【００１９】
ある特定の実施形態では、各カプセル内に、ＣＰ細胞は、１マイクロリットル未満のコア容積中に存在する。ある特定の実施形態では、投与するステップは、約２００、４００、６００、８００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、７５００または９０００個以上、かつ約１０，０００個以下のＣＰ細胞を各々が含有する１または複数のカプセルを投与することを含む。ある特定のさらなる実施形態では、１または複数のカプセルは各々、約４００、６００、８００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００または７５００個以上、かつ約８０００個以下の細胞を含有する。ある特定の実施形態では、投与するステップは、治療有効量のカプセルをＣＮＳ注射部位に投与することを含み、これは、ある特定のさらなる実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００または２０００個以下のカプセルを１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個のＣＮＳ注射部位に投与することを含む。
【００２０】
上記方法のある特定の実施形態では、カプセル封入されたＣＰ細胞の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０または５０パーセントが、投与するステップの後少なくとも６ヵ月間にわたって生存可能であり続ける。ある特定の実施形態では、生体適合性カプセルの外側表面は、投与するステップの後少なくとも１年間にわたって細胞外マトリックス沈着を実質的に有さない。ある特定の実施形態では、カプセルをＣＮＳ注射部位に投与することは、担体溶液中にカプセルを含む懸濁物を送達することを含み、これは、ある特定のさらなる実施形態では、ＮａＣｌ、人工脳脊髄液（ＣＳＦ）、アスコルベートまたは抗炎症剤のうち少なくとも１種を含む。ある特定のなおさらなる実施形態では、抗炎症剤は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ステロイド抗炎症薬およびコネキシンアンタゴニストから選択される。
【００２１】
上記方法のある特定の実施形態では、対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。ある特定の実施形態では、対象は、神経系疾患を有することが既知であり、これは、ある特定のさらなる実施形態では、（ａ）ニューロンの死を特徴とする神経変性疾患、および（ｂ）パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、運動ニューロン疾患としても公知）、毛細血管拡張性運動失調症、進行性球麻痺、進行性筋萎縮症、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、脊髄小脳失調症１型（ＳＣＡ１）または加齢性神経変性障害から選択される神経系疾患、から選択される。ある特定の他の実施形態では、神経系疾患は、（ａ）神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの神経細胞機能のレベルにおける減少を特徴とする疾患、ならびに（ｂ）パーキンソン病（ドパミン作動性ニューロン）、アルツハイマー病（ノルアドレナリン作動性ニューロン、Ａｄｏｒｉら  ２０１５年、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  １２９巻（４号）：５４１頁）、ハンチントン病（中型有棘ＧＡＢＡニューロン、ＭＳＮ）、筋萎縮性側索硬化症（運動ニューロン疾患）および抑うつ（セロトニン作動性ニューロン）から選択される（ａ）の疾患、から選択される。ある特定の他の実施形態では、神経系疾患は、（ａ）神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの神経細胞機能のレベルにおける増加を特徴とする疾患、ならびに（ｂ）精神病、統合失調症（活動亢進性ドパミンシグナル伝達）；てんかん性発作（グルタミン酸作動性興奮毒性）、虚血性脳卒中（グルタミン酸作動性興奮毒性）、および不穏下肢症候群と関連する不眠症（過活動性グルタミン酸作動性活性）から選択される（ａ）の疾患、から選択される。ある特定の他の実施形態では、神経系疾患は、（ａ）対象における、神経系疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＣＳＦ成分（単数または複数）のレベルと比較して変更されたレベルの１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を含む脳脊髄液（ＣＳＦ）の存在を特徴とする疾患、ならびに（ｂ）アルツハイマー病および糖尿病から選択される（ａ）の疾患、から選択される。ある特定の他の実施形態では、神経系疾患は、（ａ）対象における、神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における脈絡叢機能のレベルと比較して変更されたレベルの少なくとも１つの脈絡叢機能の存在を特徴とする疾患、（ｂ）スタージ・ウェーバー症候群およびクリペル・トルノネー・ウェーバー症候群から選択される（ａ）の疾患、（ｃ）神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における異常に折り畳まれたタンパク質沈着のレベルと比較した、対象の脳組織における異常に折り畳まれたタンパク質沈着のレベルの増加を特徴とする疾患、ならびに（ｄ）脳アミロイドアンギオパチー、アミロイドーシス−アイスランド型を伴う遺伝性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｉ）、アミロイドーシス−オランダ型を伴う脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、髄膜脳血管および眼球軟髄膜アミロイドーシス（ｍｅｎｉｎｇｏｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｏｃｕｌｏｌｅｐｔｏｍｅｎｉｎｇｅａｌ  ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）、ゲルゾリン関連脊髄および脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス−フィンランド型（ＦＡＦ）、血管バリアントプリオン脳アミロイドーシス（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｖａｒｉａｎｔ  ｐｒｉｏｎ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）、家族性英国型認知症（ＦＢＤ）（家族性脳アミロイドアンギオパチー−英国型または脳血管アミロイドーシス−英国型としても公知）、家族性デンマーク型認知症（眼耳脳遺伝病（ｈｅｒｅｄｏｐａｔｈｉａ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏ−ｏｔｏ−ｅｎｃｅｐｈａｌｉｃａ）としても公知）、家族性トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスおよびＰｒＰ脳アミロイドアンギオパチー（ＰｒＰ−ＣＡＡ）から選択される（ｃ）の疾患から選択される。
【００２２】
上記方法のある特定の実施形態では、神経系疾患は中枢神経系（ＣＮＳ）疾患であり、これは、ある特定の実施形態では、（ｉ）ＣＮＳニューロンの死を特徴とする神経変性疾患、および（ｉｉ）ＣＮＳ疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＣＮＳ神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つのＣＮＳ神経細胞機能のレベルにおける減少を特徴とするＣＮＳ疾患、およびｉｉｉ）ＣＮＳ疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＣＮＳ神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つのＣＮＳ神経細胞機能のレベルにおける増加を特徴とするＣＮＳ疾患、のうち少なくとも１つであり、ＣＮＳニューロンおよびＣＮＳ神経細胞は、脳、脊髄、網膜、視神経、脳神経、嗅覚神経または嗅上皮のうち少なくとも１つ中に存在する。
【００２３】
上記方法のある特定の実施形態では、神経系疾患は末梢神経系（ＰＮＳ）疾患であり、これは、ある特定の実施形態では、（ｉ）ＰＮＳニューロンの死を特徴とする神経変性疾患、および（ｉｉ）ＰＮＳ疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＰＮＳ神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つのＰＮＳ神経細胞機能のレベルにおける減少を特徴とするＰＮＳ疾患、およびｉｉｉ）ＰＮＳ疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＰＮＳ神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つのＰＮＳ神経細胞機能のレベルにおける増加を特徴とするＰＮＳ疾患、のうち少なくとも１つであり、ＰＮＳニューロンおよびＰＮＳ神経細胞は、末梢神経節または末梢神経のうち少なくとも１つ中に存在する。
【００２４】
上記方法のある特定の実施形態では、ＣＮＳ注射部位は、対象の脳組織中にある。ある特定の実施形態では、ＣＮＳ注射部位は、対象の脳室中にある。ある特定の実施形態では、対象中のＣＮＳ注射部位は、（ａ）神経系疾患に罹患した神経細胞線維のための標的部位を含むＣＮＳ部位、好ましくはＣＮＳ注射部位、（ｂ）神経系疾患に起因して死滅するリスクがあるニューロン細胞を含有するＣＮＳ部位、好ましくはＣＮＳ注射部位、（ｃ）神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの神経細胞機能のレベルにおける減少のリスクがあるニューロン細胞を含有するＣＮＳ部位、好ましくはＣＮＳ注射部位、（ｄ）神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの神経細胞機能のレベルにおける増加のリスクがあるニューロン細胞を含有するＣＮＳ部位、好ましくはＣＮＳ注射部位、（ｅ）カプセルが血液との接触を実質的に有さないように選択されるＣＮＳ部位、好ましくはＣＮＳ注射部位、および（ｆ）投与するステップに引き続いてカプセルによって分泌されるＣＳＦ成分が、対象の脳の至る所にＣＳＦ循環によって分配されるように選択されるＣＮＳ部位、好ましくはＣＮＳ注射部位、から選択される。
【００２５】
上記方法のある特定の実施形態では、投与は、ＰＮＳ注射部位などのＰＮＳ部位において行われる。ある特定の実施形態では、対象中のＰＮＳ注射部位は、（ａ）神経系疾患に罹患した神経細胞線維のための標的部位を含むＰＮＳ部位、好ましくはＰＮＳ注射部位、（ｂ）神経系疾患に起因して死滅するリスクがあるニューロン細胞を含有するＰＮＳ部位、好ましくはＰＮＳ注射部位、（ｃ）神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの神経細胞機能のレベルにおける減少のリスクがあるニューロン細胞を含有するＰＮＳ部位、好ましくはＰＮＳ注射部位、（ｄ）神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの神経細胞機能のレベルにおける増加のリスクがあるニューロン細胞を含有するＰＮＳ部位、好ましくはＰＮＳ注射部位、（ｅ）カプセルが血液との接触を実質的に有さないように選択されるＰＮＳ部位、好ましくはＰＮＳ注射部位、および（ｆ）投与するステップに引き続いてカプセルによって分泌されるＣＳＦ成分が、ＰＮＳ注射部位の近傍におけるＰＮＳ組織中またはその周囲に分配されるように選択されるＰＮＳ部位、好ましくはＰＮＳ注射部位、から選択される。
【００２６】
上記方法のある特定の実施形態では、生体適合性カプセルは、カチオン性架橋剤で架橋された高マンヌロン酸アルギネートのコア層、半透過性膜を形成するポリカチオンの中間層、およびカチオン性架橋剤で架橋された高マンヌロン酸アルギネートの外層を含み、コア層中の高マンヌロン酸アルギネートおよび外層中の高マンヌロン酸アルギネートが、同じであるかまたは異なり、約５０％〜約９５％の間のマンヌロン酸残基を含有し、ポリカチオン層は、ポリ−Ｌ−リシンからは構成されない。ある特定のさらなる実施形態では、高マンヌロン酸アルギネートは、約３００ｋＤａ超かつ１０００ｋＤａ以下の平均分子量を有し、ポリカチオン層は、１０ｋＤａと４０ｋＤａとの間の平均分子量を有するポリカチオン性作用物質から形成される。
【００２７】
上記方法のある特定の実施形態では、カプセルをＣＮＳ注射部位に（またはある特定の他の実施形態では、ＰＮＳ注射部位に）投与することは、カテーテルを介してカプセルを送達することを含む。ある特定のさらなる実施形態では、送達することは、定位装置を用いてカテーテルを制御可能に位置付けることを含む。ある特定のなおさらなる実施形態では、定位装置は、定位装置または改変型定位装置、限定ではなく例示的な例として、脳深部刺激装置（ＤＢＳ）マイクロドライバー、「フレームなし」定位ヘッドフレーム、頭蓋取り付け型照準デバイス、レクセルフレーム（Ｌｅｋｓｅｌｌ  ｆｒａｍｅ）、Ｃｏｓｍａｎ−Ｒｏｂｅｒｔｓ−Ｗｅｌｌｓフレーム、もしくは別の類似の改変型定位装置など、または任意の等価物を含み得る。ある特定の実施形態では、カテーテルは、外部カテーテル、閉塞具（ｏｂｄｕｒａｔｏｒ）、プランジャーおよび送達カテーテルを含む。
【００２８】
上記方法のある特定の実施形態では、神経系疾患は、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、プリオン病、運動ニューロン疾患、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、多系統萎縮症−パーキンソン型、多系統萎縮症−小脳型、本態性振戦、進行性核上性麻痺（ｓｕｐｒｏｎｕｃｌｅａｒ  ｐａｌｓｙ）、ジスキネジア、レビー小体型認知症、本態性振戦、薬物誘発性パーキンソニズム、毛細血管拡張性運動失調症、脊髄小脳失調症、小脳変性症、大脳萎縮症、オリーブ橋小脳萎縮症（ｏｌｉｖｏｐｏｔｏｃｅｒｅｂｅｌｌａｒ  ａｔｒｏｐｈｙ）、大脳皮質基底核変性症、ミオクローヌス性小脳性共同運動障害、フリードライヒ運動失調症；静的神経疾患（ｓｔａｔｉｃ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中、中枢性疼痛症候群、慢性疼痛、片頭痛、舌咽神経痛、発作性障害、てんかん、脳性麻痺；外傷関連ＣＮＳ疾患、ゲルストマン症候群、閉じ込め症候群、脊髄傷害、進行性神経変性疾患、加齢および認知症と関連する進行性神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、前頭側頭型認知症（ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌ  ｄｅｍｅｎｔｉａ）、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、巨大軸索ニューロパチー、遺伝性神経障害、乳児神経軸索ジストロフィー、クラッベ病、ランドウ・クレフナー症候群、脊髄癆、運動ニューロンおよび神経筋接合部の疾患、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、単肢筋萎縮症（ｍｏｎｏｍｅｌｉｃ  ａｍｙｏｔｒｏｐｈｙ）、ジストニア、遺伝性痙性対麻痺、アイザック症候群、ランバート・イートン筋無力症症候群、運動ニューロン疾患（ｍｏｔｏｎｅｕｒｏｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）、不穏下肢症候群、トゥレット症候群；ＣＮＳの炎症性疾患、多発性硬化症；薬物または毒素誘発性ＣＮＳ疾患、神経弛緩薬性悪性症候群、遅発性ジスキネジア、ウィルソン病、神経毒性；代謝不全の神経系疾患、レフサム病、神経系感染性疾患、髄膜炎、急性播種性脳脊髄炎、ギラン・バレー症候群、ＡＩＤＳの神経学的合併症、ボツリヌス中毒、破傷風、神経梅毒、灰白髄炎、狂犬病、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、プリオン病、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ（アメーバ性脳感染症）；神経嚢虫症（ｎｅｕｒｏｃｙｓｔｉｃｅｒｏｓｉｓ）；精神神経疾患、抑うつ、気分障害；強迫性障害、摂食障害、嗜癖、不安関連障害、双極性障害、注意欠陥過活動性障害、自閉症、統合失調症；神経内分泌疾患、ナルコレプシー、不眠症、ニューロン死、グルタミン酸毒性、タンパク質凝集もしくは沈着、またはアミロイドプラーク形成のうち１もしくは複数と関連するまたはそれを特徴とする疾患、脳アミロイドアンギオパチー、アミロイドーシス−アイスランド型を伴う遺伝性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｉ）、アミロイドーシス−オランダ型を伴う脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、髄膜脳血管および眼球軟髄膜アミロイドーシス、ゲルゾリン関連脊髄および脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス−フィンランド型（ＦＡＦ）、血管バリアントプリオン脳アミロイドーシス、家族性英国型認知症（ＦＢＤ）（家族性脳アミロイドアンギオパチー−英国型または脳血管アミロイドーシス−英国型としても公知）、家族性デンマーク型認知症（眼耳��遺伝病としても公知）、家族性トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシス、ＰｒＰ脳アミロイドアンギオパチー（ＰｒＰ−ＣＡＡ）；ミトコンドリア機能不全の神経系疾患、正常な健康対照対象において見出されるＲＯＳ産生レベルを超える反応性酸素種（ＲＯＳ）産生レベルを含むミトコンドリア機能不全の神経系疾患；脳由来神経栄養因子関連障害、双極性障害、レット症候群ならびにルビンシュタイン・テイビ症候群から選択される。
【００２９】
別の実施形態については、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）直径が約５０μｍ〜約２００μｍでありＣＰ上皮細胞を含むＣＰ細胞クラスターを得るための哺乳動物脈絡叢組織の機械的解離および酵素的解離のいずれかまたは両方によって得られる脈絡叢（ＣＰ）組織断片が中にカプセル封入された１または複数の半透過性生体適合性カプセルを選択するステップであって、カプセルの実質的に全てが、直径が約４００μｍ〜約８００μｍであり、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００のＣＰ細胞を有する、ステップ；（ｂ）カプセルの１つまたは複数を、対象中の１つの末梢神経系（ＰＮＳ）注射部位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２個のＰＮＳ注射部位に投与するステップ；および（ｃ）投与するステップ（ｂ）の前に、（ｂ）と同時に、または（ｂ）に引き続いて、１つまたは複数のカプセル中の脈絡叢組織細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップであって、脈絡叢誘導剤は、接触させるステップがない場合に脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルと比較して変更されたレベルで１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するように脈絡叢組織細胞を誘導する、ステップを含む。
【００３０】
ある特定の他の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、この方法は、（ａ）複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を得るのに十分な条件下および時間にわたって多能性細胞の集団を培養することによって得られたｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞が中にカプセル封入された１または複数の半透過性生体適合性カプセルを選択するステップであって、カプセルの実質的に全てが、直径が約４００μｍ〜約８００μｍであり、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００のＣＰ細胞を有する、ステップ；（ｂ）カプセルの１つまたは複数を、対象中の１つの末梢神経系（ＰＮＳ）注射部位または２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２個のＰＮＳ注射部位に投与するステップ；および（ｃ）投与するステップ（ｂ）の前に、（ｂ）と同時に、または（ｂ）に引き続いて、１つまたは複数のカプセル中のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を脈絡叢誘導剤と接触させるステップであって、脈絡叢誘導剤は、接触させるステップの前に脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルと比較して変更されたレベルで１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を放出するようにｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を誘導する、ステップを含む。
【００３１】
ある特定のさらなる実施形態では、脈絡叢誘導剤は、接触させるステップがない場合に脈絡叢組織細胞が１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するレベルよりも高いレベルでの、１または複数のＣＳＦ成分の産生を誘導する。
【００３２】
本明細書に記載される本発明の実施形態のこれらおよび他の態様は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照して明らかになる。本明細書中で言及されるおよび／または出願データシート中に列挙される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国（非米国）特許、外国特許出願および非特許刊行物は全て、各々が個々に組み込まれたかのように、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。本発明の態様および実施形態は、必要に応じて、なおさらなる実施形態を提供するために、種々の特許、出願および刊行物の概念を使用するように改変され得る。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、本明細書に記載するように選択したアルギネート−カプセル封入されたブタ脈絡叢（ＣＰ）細胞を含むカプセルと比較した、アルギネート−カプセル封入されたブタ脈絡叢（ＣＰ）細胞を含むカプセルのランダム試料（選択されていない）による、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの培養培地中へのＶＥＧＦ分泌（ｐｇ  ＶＥＧＦ／μｇ  ＤＮＡ）を示す。
【００３４】
【図２】図２は、示された候補ＣＰ誘導剤への７２時間の曝露によって刺激したブタ脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターの総抗酸化能（ｔｏｔａｌ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ｃａｐａｃｉｔｙ）（ＴＡＣ）を示す。
【００３５】
【図３Ａ】図３Ａは、培地対照値に対して正規化した、示された濃度の塩化リチウム（ＬｉＣｌ）への７２時間の曝露によって刺激したブタ脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターの総抗酸化能（ＴＡＣ）を示す。図３Ｂは、示された濃度の塩化リチウム（ＬｉＣｌ）、炭酸リチウム、タウリンおよびミトキノール（ＭｉｔｏＱ（登録商標））への７２時間の曝露によって刺激したカプセル封入されたブタ脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターの総抗酸化能（ＴＡＣ）を示す。
【図３Ｂ】図３Ａは、培地対照値に対して正規化した、示された濃度の塩化リチウム（ＬｉＣｌ）への７２時間の曝露によって刺激したブタ脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターの総抗酸化能（ＴＡＣ）を示す。図３Ｂは、示された濃度の塩化リチウム（ＬｉＣｌ）、炭酸リチウム、タウリンおよびミトキノール（ＭｉｔｏＱ（登録商標））への７２時間の曝露によって刺激したカプセル封入されたブタ脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターの総抗酸化能（ＴＡＣ）を示す。
【００３６】
【図４】図４は、１２カ月（図４Ａ）または１６カ月（図４Ｂ）にわたり、選択されたアルギネートカプセル封入されたＣＰ細胞を植込んだラット脳の代表的な組織学的断面におけるＰＥＤＦ（色素上皮由来因子、小さい矢印）の免疫ペルオキシダーゼ染色を示し、カプセル内のＣＰ細胞が、ＣＰの機能的特徴を維持したまま１６ヵ月間ｉｎ  ｖｉｖｏで生存したことを示している。カプセル壁（大きい矢印）は、線維性瘢痕または細胞性免疫応答の証拠を示していない。
【００３７】
【図５−１】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−４】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−５】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−６】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−７】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−８】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−９】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１０】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１１】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１２】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１３】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１４】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１５】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１６】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１７】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１８】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−１９】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２０】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２１】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２２】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２３】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２４】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２５】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２６】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２７】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２８】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−２９】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３０】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３１】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３２】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３３】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３４】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３５】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３６】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【図５−３７】図５Ａ〜ＫＫは、米国出願公開番号ＵＳ／２０１４／０１８７５１０に開示される例示的なベータ−カテニン活性化因子を示す。
【００３８】
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｃは、例示的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＰ分化剤を示す。
【図６Ｂ】図６Ａ〜Ｃは、例示的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＰ分化剤を示す。
【図６Ｃ】図６Ａ〜Ｃは、例示的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＰ分化剤を示す。
【００３９】
【図７Ａ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｂ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｃ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｄ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｅ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｆ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｇ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｈ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｉ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【図７Ｊ】図７Ａ〜Ｊは、ＣＳＦ成分として生じ得る例示的なＣＰ産物を示す。
【００４０】
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｂ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｃ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｄ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｅ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｆ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｇ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｈ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｉ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｊ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【図８Ｋ】図８Ａ〜Ｋは、誘導剤（ＬｉＣｌ）による７２時間の曝露によって刺激した脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスターにおいてその発現が変更される（例えば、対照と比較して統計的に有意な様式で増加（８Ａ〜Ｅ）または減少（８Ｆ〜Ｋ）される）例示的なＣＳＦ成分コード遺伝子を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本発明は、本明細書に記載されるある特定の実施形態では、神経変性疾患および他の神経学的疾患を含む神経系の疾患または障害を処置するための組成物および方法に関する。
【００４２】
これらおよび関連の実施形態は、哺乳動物脈絡叢細胞、特に、本明細書に記載される適切に選択された非免疫原性のカプセル封入された異種および／または同種脈絡叢（ＣＰ）細胞含有中枢神経系インプラントが、本明細書で提供される脈絡叢誘導剤と接触させることによって、変更されたレベルの、ある特定の好ましい実施形態では増加したレベルの１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を産生するように誘導され得るという、予期しない知見に基づく。カプセル封入された異種移植された（および／または同種移植された）脈絡叢細胞は、中枢神経系部位（例えば、脳組織）中への植込み後に驚くほど長寿命であり、好ましくは、ヒト病原体を実質的に含まないドナー哺乳動物から得られた異種および／または同種脈絡叢細胞を含有する。本発明の実施形態は、必要とされる植込み部位および植込んだカプセルの数を減少させつつ、脈絡叢細胞異種移植物および／または同種移植物の効力および効能を有利に増加させる；好ましい実施形態はまた、レシピエントへの病原体伝染のリスクを低減させる。
【００４３】
したがって、カプセルの組成およびサイズ、その中に含有される細胞の供給源、調製および数、ならびにＣＰ細胞によるＣＳＦ成分産生を変更させる、ある特定の好ましいＣＳＦ成分についてはそれを増加させる脈絡叢誘導剤の使用を含む、本開示に従う脈絡叢細胞含有カプセルの適切な選択および誘導は、その改善が当技術分野の以前の知識からは予測できなかった神経系疾患の処置のためのＣＰカプセル封入への、新たな有用な改善を示す。
【００４４】
本明細書で初めて開示したように、選択されたカプセル封入された異種および／または同種脈絡叢（ＣＰ）細胞を脈絡叢誘導剤と接触させた後、１または複数のＣＳＦ成分は、変更された（例えば、ＣＰ誘導剤との接触前またはＣＰ誘導剤との接触の非存在下でのレベルと比較して、統計的に有意な様式で増加または減少した）レベルでかかる細胞によって産生され得、これは、ある特定の好ましいＣＳＦ成分については、脈絡叢誘導剤との接触なしの場合に異種移植されたおよび／または同種移植されたＣＰ細胞がＣＳＦ成分（複数可）を産生するレベルよりも高い。
【００４５】
驚くべきことに、中枢神経系（ＣＮＳ）における（またはある特定の実施形態では、末梢神経系（ＰＮＳ）における）選択されたカプセル封入された異種および／または同種脈絡叢（ＣＰ）細胞含有インプラントによるかかる増加した（例えば、統計的に有意な様式で未誘導のレベルよりも高い）レベルのＣＳＦ産生を誘導する効果は、局在化された免疫学的反応または炎症反応、例えば、ＣＰ細胞含有カプセルの免疫拒絶、カプセル上での宿主細胞外マトリックス沈着、またはカプセルに対する異物応答の惹起を実質的に伴わずに、植込み後２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０、２４カ月またはそれを超える期間より長く半透過性カプセル中で生存可能であり続けるＣＰ細胞を使用して達成され得る。
【００４６】
特に、本開示は初めて、本明細書にこれもまた記載されるように選択されたカプセル封入されたＣＰ細胞に対する、本明細書で提供される脈絡叢誘導剤の直接的な影響が、神経保護などのＣＮＳにおける好ましい結果を有するＣＰ細胞によるある特定のＣＳＦ成分の産生における増加を含め、公知のＣＳＦ成分をコードする遺伝子（例えば、図８に示される）の発現レベルを変更させることを記載する。したがって、増加したＣＳＦ産生の有利な効果は、本開示に従う脈絡叢誘導剤を使用することによって達成され得、１または複数のＣＳＦ成分の変更された産生、ある特定の好ましい実施形態では増加した産生が所望され得るいくつかの神経系の疾患もしくは障害または他の状態のいずれかを処置する際の使用のために活用され得る。例えば、限定ではなく例示として、本明細書に開示される実施形態は、正常を下回る、不適切なもしくは最適以下のレベルの１もしくは複数のＣＳＦ成分を特徴とする、および／または加齢プロセス、毒素への曝露もしくは疾患などに起因し得、増加したＣＳＦ産生によって少なくとも部分的に回復され得る１もしくは複数のＣＮＳ活性における欠陥を特徴とする、ある特定のＣＮＳ障害を処置するために使用され得る。
【００４７】
ＣＰ誘導剤
したがって、ある特定の実施形態では、ＣＳＦがＣＮＳにおいて構成的に産生されるという当技術分野での一般的な理解にもかかわらず、本開示は、本明細書に記載されるＣＰ誘導剤が、ある特定のＣＳＦ成分の産生を増加させるようにＣＰ細胞を誘導でき、ある特定の他のＣＳＦ成分（例えば、図８）の減少した産生もまた誘導し得るという驚くべき発見に一部関する。したがって、理論に束縛されることは意図しないが、神経保護成分などのある特定のＣＳＦ成分のより高い産生レベルを促進するようにＣＰ細胞に対して作用することによって、本発明のＣＰ誘導剤は、治療有効量のかかるＣＰ細胞を達成するために実行可能であると以前に考えられていたものよりも少ないカプセル封入された異種移植されたおよび／または同種移植されたＣＰ細胞の植込みを可能にすると考えられる。さらに、非限定的な理論によれば、誘導されたＣＰ細胞異種移植物および／または同種移植物はＣＳＦ成分を産生するので、本発明の方法は、より多い数のＣＮＳ植込み部位におけるより多い数の植込んだカプセルの必要性を回避することによって、およびまた他の細胞型との相互作用を介してその効果がさもなければ中和または希釈され得るＣＰ誘導剤のより高い用量の全身投与の必要性を回避することによって、前例のない効率および安全性を提供する。
【００４８】
さらに、本開示によれば、ニューロンに対する直接的な作用を介した神経保護効果を有すると以前に考えられていたかもしれない薬剤が、ＣＰ誘導剤として有利に作用することが、本明細書で予期せず示されている。本明細書で提供されるＣＰ誘導剤は、ＣＰ組織細胞と接触させた場合にＣＳＦ成分産生を変更させる（例えば、ＣＰ誘導剤が導入されていない対照状況と比較して、統計的に有意な様式で増加または減少させる）ように、ある特定の好ましい実施形態ではＣＳＦ成分産生を増加させるように、即ち、増加したレベル（例えば、ＣＰ誘導剤を導入しない場合に産生されるものよりも統計的に有意な様式で高いレベル）の１または複数のＣＳＦ成分を産生するようにＣＰ細胞を誘導することによって、ＣＰ細胞を誘導することが可能である任意の薬剤を含む。次いで、ＣＳＦ成分（例えば、その代表的な例は、図７および８に開示されている）は、ニューロンに保護効果を付与し得、および／または神経系疾患を処置するための他の有利な効果を生じ得る。しかし、本発明で企図される実施形態は、そのように限定されることを意図せず、その結果、ＣＰ細胞をＣＰ誘導剤と接触させることがＣＳＦ成分の産生を減少させるようにＣＰ細胞を誘導し得る、即ち、減少したレベル（例えば、ＣＰ誘導剤を導入しない場合に産生されるものよりも統計的に有意な様式で低いレベル）の１または複数のＣＳＦ成分を産生し、それによって、処置を受けている対象に臨床的利益を付与するようにＣＰ細胞を誘導することによる実施形態もまた企図される。
【００４９】
例えば、実施例中を含む本明細書の他の箇所にさらに詳細に記載されるように（例えば、図８）、アルカリ金属リチウムは、リチウム（例えば、塩化リチウム（ＬｉＣｌ）または炭酸リチウム）と接触させる前のＣＰ細胞がＣＳＦ成分を産生するレベルと比較して増加したレベル（図８Ａ〜Ｅ）である特定のＣＳＦ成分を産生するようにＣＰ細胞を誘導する脈絡叢誘導剤である一方で、リチウムと接触させる前のＣＰ細胞がＣＳＦ成分を産生するレベルと比較して減少した（図８Ｆ〜Ｋ）ある特定の他のＣＳＦ成分の発現もまた誘導することが本明細書で最初に示された。
【００５０】
リチウムは、神経保護効果を付与する薬剤として長くみなされてきたが、その作用部位および作用機構は、完全には理解されていない。非限定的な理論として、リチウムは、グリコーゲンシンターゼキナーゼ−３ベータ（ＧＳＫ３β）の阻害剤として、ニューロンにおいてＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体媒介性のカルシウム流入を間接的に阻害することによって少なくとも一部作用すると考えられ（例えば、Ｃｈｉｕら、２０１１年  Ｚｈｏｎｇ  Ｎａｎ  Ｄａ  Ｘｕｅ  Ｘｕｅ  Ｂａｏ  Ｙｉ  Ｘｕｅ  Ｂａｎ  ３６巻（６号）：４６１頁（ＰＭＩＤ  ２１７４３１３６）；Ｃｈｉｕら、２０１０年  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｈｅｒ．  １２８巻：２８１頁；Ｒｏｗｅら、２００４年  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ６巻：１頁）、そこから、双極性気分障害を処置することにおけるその現在の臨床的使用ならびに種々のＣＮＳ傷害および神経変性疾患を処置するためのその提唱された使用の根底となる神経保護効果が企図されてきた（同上）。
【００５１】
ＣＮＳにおけるリチウム活性は、ニューロンに対する、および脈絡叢（ＣＰ）による電解質トランスポートを含むＣＮＳ電解質トランスポートに対するその効果と関連するが、ＣＰによるＣＳＦ成分の増強された産生に対するリチウムの影響は、本明細書で最初に開示された効果の前には認識されていなかった。例えば、Ｐｕｌｆｏｒｄら（２００６年  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒ．  Ｄｉｓ．  Ｔｒｅａｔ．  ２巻（４号）：５４９頁）は、臨床的抑うつにおいて検出されている減少したトランスサイレチンレベルを模倣する、ラットＣＰにおける、主要なＣＳＦ成分トランスサイレチンのリチウム誘導性の下方調節を記載した。しかし、かかる観察からは、およびリチウムまたはＣＰ調節の神経保護機構の理解の全般的な欠如を考慮しても、本明細書に開示されるＣＰ細胞によるある特定のＣＳＦ成分の産生における、本明細書に記載されるリチウム誘導性の増加は、予測されてこなかった。
【００５２】
したがって、ある特定の実施形態は、任意の適切なリチウム塩、即ち、カチオン性リチウムを含み、毒性を伴わずにまたは最小の毒性を伴って細胞と接触され得るリチウム化合物、例えば、塩化リチウム、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、オロト酸リチウム、臭化リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、酢酸リチウム、水酸化リチウム、水素化アルミニウムリチウム、過塩素酸リチウム、硝酸リチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化ホウ素リチウム、酸化リチウム、硫酸リチウム、ヘキサフルオロリン酸リチウム、四酸化リチウム、硫化リチウム、水素化リチウム、リチウムアミド、乳酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、リチウムジメチルアミド、リン酸リチウム、過酸化リチウム、リチウムマンガン酸化物、リチウムメトキシド、メタホウ酸リチウム、ステアリン酸リチウム、または当業者に公知であり得る任意の他のリチウム塩を含み得るＣＰ誘導剤を企図する。
【００５３】
同様に、本明細書で提供される他のＣＰ誘導剤は、驚くべきことに、増加したレベルのＣＳＦ成分を産生するようにＣＰ細胞を誘導し、ある特定の実施形態によれば、本明細書に記載されるカプセル封入されたＣＰインプラントの効力を増強するために使用され得る。企図されるＣＰ誘導剤には、Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニスト、ベータ−カテニン活性化因子、抗酸化剤および１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３が含まれる。Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニストは、当技術分野で公知であり、これには、例えば、ＷＡＹ−３１６６０６（Ｂｏｄｉｎｅら、２００９年  Ｂｏｎｅ  ４４巻：１０６３頁；ＳＦＲＰ阻害剤、５−（フェニルスルホニル）−Ｎ−４−ピペリジニル−２−（トリフルオロメチル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩、Ｔｏｃｒｉｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｂｒｉｓｔｏｌ、ＵＫから入手可能なカタログ番号４７６７）、ＩＱ１（Ｍｉｙａｂａｙａｓｈｉら、２００７年  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０４巻：５６６８頁；ＰＰ２Ａ活性化因子）、ＱＳ１１（Ｚｈａｎｇら、２００７年  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０４巻：７４４４頁；ＡＲＦＧＡＰ１活性化因子）、（ヘテロ）アリールピリミジンまたは２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、Ｎｏｒｒｉｎ（例えば、Ｏｈｌｍａｎｎら、２０１２年  Ｐｒｏｇ．  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ３１巻：２４３頁；Ｒｅｙら、２０１０年  Ｄｅｖ．  Ｄｙｎ  ２３９巻：１０２頁；ｅｒｒａｔｕｍ  ２０１０年  Ｄｅｖ．  Ｄｙｎ．  ２３９巻：１０３４頁；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００２６６）、Ｒ−スポンジン−１（例えば、Ｐｅｎｇら、０１３  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．  ３巻：１８８５頁；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１０３８６３３；ＮＭ＿００１２４２９１０．１）、Ｒ−スポンジン−２（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１７８５６５；ＮＭ＿１７８５６５．４；ＮＭ＿００１２８２８６３．１）、Ｒ−スポンジン−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０３２７８４）およびＲ−スポンジン−４（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１０２９８７１．３）が含まれる。例えば、Ｄｏｄｇｅら、２０１１年  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｔｏｘｉｃｏｌ．  ５１巻：２８９頁；Ｃｈｅｎら、２０１０年  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．  Ｌｉｖ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２９９巻：Ｇ２９３頁；Ｂａｒｋｅｒら、２００６年  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ５巻：９９７頁；Ｍｅｉｊｅｒら、２００４年  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｓｃｉ．  ２５巻：４７１頁；ＵＲＬ：ｗｅｂ．ｓｔａｎｆｏｒｄ．ｅｄｕ／ｇｒｏｕｐ／ｎｕｓｓｅｌａｂ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／  ｗｎｔ／  ｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｓにおけるＲ．Ｎｕｓｓｅ博士、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡの研究室のウェブサイトもまた参照のこと。
【００５４】
ある特定の実施形態では、脈絡叢誘導剤（ＣＰ誘導剤）は、ＧＳＫ３β阻害剤、例えば、リチウム塩、例えば、塩化リチウムもしくは炭酸リチウム、または任意の適切なリチウム塩、即ち、カチオン性リチウムを含み、毒性を伴わずにまたは最小の毒性を伴って細胞と接触され得るリチウム化合物、例えば、塩化リチウム、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、オロト酸リチウム、臭化リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、酢酸リチウム、水酸化リチウム、水素化アルミニウムリチウム、過塩素酸リチウム、硝酸リチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化ホウ素リチウム、酸化リチウム、硫酸リチウム、ヘキサフルオロリン酸リチウム、四酸化リチウム、硫化リチウム、水素化リチウム、リチウムアミド、乳酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、リチウムジメチルアミド、リン酸リチウム、過酸化リチウム、リチウムマンガン酸化物、リチウムメトキシド、メタホウ酸リチウム、ステアリン酸リチウム、または当業者に公知であり得る任意の他のリチウム塩であり得る。
【００５５】
ある特定の実施形態では、脈絡叢誘導剤（ＣＰ誘導剤）は、別のＧＳＫ３β阻害剤、例えば、ＳＢ−２１６７６３（Ｃｏｇｈｌａｎら、２０００年  Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  ７巻：７９３頁）またはＢＩＯ（６−ブロモインディルビン−３’−オキシム；Ｓａｔｏら、２００４年  Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．  １０巻：５５頁）であり得る。
【００５６】
ある特定の企図された実施形態中には含まれるが、ある特定の他の企図された実施形態からは明示的に排除されて、脈絡叢誘導剤（ＣＰ誘導剤）は、抗酸化剤、例えば、ミトキノール（例えば、Ａｎｔｉｐｏｄｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、Ａｕｃｋｌａｎｄ、ＮＺから商標ＭＩＴＯＱ（登録商標）の下で入手可能な１０−（６’−ユビキノイル）デシルトリフェニルホスホニウム塩、Ｎｉｅｒｏｂｉｓｚら、２０１０年  Ｃｏｍｐ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  １５８巻（２号）：１２５頁、またはＷＯ／０５／０１９２３２、米国特許第７，８８８，３３５号、ＷＯ／０５／０１９２３３もしくは米国特許第７，８８８，３３４号に開示されるミトコンドリアにより標的化される任意の他の抗酸化剤）、ユビキノール（補酵素Ｑ、Ｗａｎｇら、２０１３年  Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．  ４８巻（１号）：６９頁）、トコフェロール、トコトリエノール（ビタミンＥ、Ｔｒａｂｅｒら、２０１１年  Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ．  ５１巻（５号）：１０００頁）、α−トコフェロール、γ−トコフェロール、２−アミノエタンスルホン酸（タウリン）、アスコルビン酸、グルタチオンまたはメラトニンであり得る。
【００５７】
ある特定の企図された実施形態中には含まれるが、ある特定の他の企図された実施形態からは明示的に排除されて、脈絡叢誘導剤（ＣＰ誘導剤）は、ベータ−カテニン活性化因子、例えば、デオキシコール酸（ＤＣＡ）または本明細書で図５中に示される化合物のいずれかであり得、これらの化合物は、米国出願公開番号ＵＳ２０１４／０１８７５１０に開示されている。
【００５８】
ある特定の企図された実施形態中には含まれるが、ある特定の他の企図された実施形態からは明示的に排除されて、脈絡叢誘導剤（ＣＰ誘導剤）は、タウリンであり得る（図３ｂ）。タウリン、または２−アミノエタンスルホン酸は、アミノ酸システインの誘導体である。タウリンは、神経系の発生および機能において重要な役割を有することが公知であるが（例えば、Ｇｅｂａｒａら、２０１５年  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．  １４巻（３号）：３６９頁；Ｓｈｉｖａｒａｊら、２０１２年  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７巻（８号）：ｅ４２９３５頁；Ｘｕら、２０１５年  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ．  ５９０巻：５２頁；Ｅｌ  Ｉｄｒｉｓｓｉら、２０１３年  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ４５巻（４号）：７３５頁；Ｊｏｎｇら、２０１２年  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ４２巻（６号）：２２２３頁；Ｓｃｈａｆｆｅｒら、２００９年  Ｃａｎ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ８７巻（２号）：９１頁）Ｇｅｂａｒａら、２０１５年；Ｓｈｉｖａｒａｊら、２０１２年；Ｘｕら、２０１５年；Ｅｌ  Ｉｄｒｉｓｓｉら、２０１３年）、本明細書で提供されるＣＰ誘導剤としてのその活性を含む、ＣＰ機能に対するその効果は、本開示の前には記載されてこなかった。
【００５９】
本明細書に記載するように、本開示のＣＰ誘導剤は、ＣＰ誘導剤と接触させない場合のＣＰ細胞によるかかるＣＳＦ成分（複数可）の産生のレベルとは異なる（即ち、統計的に有意な様式で）レベルで、１または複数のＣＳＦ成分の産生（コードする遺伝子の発現、生合成、分泌、エクスポート、トランスポート、および／または細胞外環境中への放出を含む）を変更する（例えば、増加または減少させる、ある特定の好ましい実施形態では、増加させる）ようにＣＰ細胞を誘導し、これは、ある特定の好ましい実施形態では、ＣＰ細胞をＣＰ誘導剤と接触させるステップが省かれる場合の産生のレベルよりも高いレベルである。当業者は、ＣＰ細胞によって産生されるＣＳＦ成分が、確立された技術および慣用的な方法論を使用して検出され得る規定された化学的構造を有する、多数の規定され十分に特徴付けられたペプチド、タンパク質および他の生物学的に活性な物質（例えば、Ｒｅｄｚｉｃら、２００５年  Ｃｕｒｒ．  Ｔｏｐｉｃｓ  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．  ７１巻：１頁；例えば、図７を参照のこと）を含むことを認識する。
【００６０】
例えば、ペプチドまたはタンパク質である多くのＣＳＦ成分をコードするポリヌクレオチド配列についての、およびかかるペプチドまたはタンパク質のコードされたアミノ酸配列についての公のデータベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ）の受託番号が、図７（図７Ａ〜７Ｊ）に示される。したがって、ＣＰ細胞による１または複数の特定のＣＳＦ成分の産生の決定は、種々のアプローチのいずれかによって、例えば、核酸ハイブリダイゼーションベースの技術によるＣＳＦ成分コード遺伝子の発現の検出によって、例えば、ＣＳＦ成分コードＲＮＡ配列のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅によって（例えば、Ｗａｎｇら、２００９年  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｇｅｎｅｔ．  １０巻（１号）：５７頁）；および／またはプローブ配列アレイ（例えば、ＧＥＮＥＣＨＩＰ（登録商標）アレイ、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）中に存在する相補的なオリゴヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド配列へのＣＳＦ成分コードＲＮＡもしくはｃＤＮＡのハイブリダイゼーションによって；および／またはＲＮＡ配列決定（または「ＲＮＡ−ｓｅｑ」、例えば、Ｉｌｌｕｍｉｎａの合成による配列決定（ＳＢＳ）化学、Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡを使用する次世代配列決定（ＮＧＳ））によるＣＳＦ成分コード転写産物の同定によって（Ｂｅｎｔｌｅｙら、２００８年  Ｎａｔｕｒｅ、４５６巻：５３頁）；および／またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによって（例えば、Ｙｉｎら、１９９８年  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．  ７８３巻：３４７頁；Ｓｗａｎｇｅｒら、２０１１年  Ｍｅｔｈｓ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ７１４巻：１０３頁）、または本明細書（例えば、図７および８中）で提供されるＣＳＦ成分のいずれかをコードするＲＮＡ配列もしくはそれらの対応するＤＮＡ配列のうちいずれか１もしくは複数の全てまたは部分などの特異的核酸配列の存在を決定するための当技術分野で公知の他の核酸検出技術によって、達成され得る。
【００６１】
さらにまたはあるいは、ＣＰ細胞による１または複数の特定のＣＳＦ成分（例えば、図７または８の）の産生の決定は、かかるＣＳＦ成分を含むペプチドもしくはタンパク質または関連の電解質、代謝物もしくは異化産物の検出によって、例えば、特定の免疫化学的、生化学的もしくは放射化学的アッセイによって、または他の検出可能なインジケーター部分を介して、液体クロマトグラフィーおよび／もしくは質量分析によって（例えば、Ｈｏｌｔｔａら、２０１５年  Ｊ．  Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １４巻：６５４頁；Ｃｈｉａｓｓｅｒｉｎｉら  ２０１４年  Ｊ．  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  １０６巻：１９１頁；Ｎａｕｒｅｅｎら、２０１４年  Ｃｈｉｌｄｓ  Ｎｅｒｖ．  Ｓｙｓｔ．  ３０巻：１１５５頁；Ｄａｖｉｄｓｓｏｎら、２００５年  Ｄｉｓ．  Ｍａｒｋｅｒｓ  ２１巻：８１頁；Ａｌｕｉｓｅら  ２００８年  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ａｃｔａ  １７８２巻：５４９頁；Ｂｏｎｋら、２００１年  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔ  ７巻：６頁；Ｃａｓａｄｏら、２０１４年  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ３５巻：１１８１頁）、機能的磁気共鳴画像化（ｆＭＲＩ、例えば、Ｊａｓａｎｏｆｆ、２００７年  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  １７巻：５９３頁；Ｂｅｌｌら、２０００年  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐ．  ７巻：１２５９頁）などによって、あるいは他の適用可能な検出技術によって、達成され得る。ＣＳＦ成分は、例えば、Ｒ．Ａ．  Ｆｉｓｈｍａｎ、Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  Ｆｌｕｉｄ  ｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ、Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、１９８０年；Ｃｕｔｌｅｒら、１９８２年  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  １１巻：１頁；およびＨｅｒｓｈｅｙら、１９８０年  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ８巻：４２６頁にも記載されている。
【００６２】
ＣＳＦ成分
脳脊髄液（ＣＳＦ）は、複数の電解質トランスポートチャネルを有する基底外側および頂端膜ドメインへのそれらの極性化に関して、ならびにそれらの構成的ＣＳＦ分泌活性に関して注目すべき、脳室を裏打ちする特殊化した上衣細胞である脈絡叢上皮細胞によって、中枢神経系（ＣＮＳ）において産生される。ＣＳＦは、電解質、抗酸化剤、代謝物、メディエーター、ならびにいくつかの増殖因子、走化性因子、シャペロンタンパク質、アポリポタンパク質、免疫グロブリン、ヘモグロビン、酵素、デフェンシン、ヒストン、ケラチンおよび他の細胞骨格関連タンパク質が可変的に含まれるタンパク質が限定なしに含まれ得るＣＳＦ分子成分の複雑な混合物を含む。
【００６３】
ＣＳＦプロテオームが含まれるＣＳＦ組成物は、大規模に特徴付けられており、種々の病理と関連するバイオマーカーが記載されている（例えば、Ｂｏｒａら、２０１２年  Ｊ．  Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １１巻：３１４３頁；Ｗｈｉｔｉｎら、２０１２年  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７巻（１１号）：ｅ４９７２４頁；Ｐｅｒｒｉｎら、２０１３年  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８巻（５号）：３６４３１４頁；Ｎａｕｒｅｅｎら、２０１３年  Ｆｌｕｉｄ  Ｂａｒｒｉｅｒｓ  ＣＮＳ  １０巻：３４頁；Ｆｒａｉｓｉｅｒら、２０１４年  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ９巻（４号）：ｅ９３６３７頁）。
【００６４】
したがって、例えば、ヒトまたは動物組織から得られたＣＳＦを含有し、ＣＳＦの産生が可能であり、ＣＳＦまたは１もしくは複数のＣＳＦ成分を産生するのに十分な条件下および時間にわたってｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持された細胞（例えば、ＣＰ細胞）または組織（例えば、ＣＰ組織または組織断片）からの上清流体または馴化培養培地などもまた含有する生物学的試料における、１または複数のＣＳＦ成分の量的提示における関連の変更（例えば、統計的に有意な増加または減少）の検出は、当業者に公知である。したがって、本開示を考慮すると、ＣＰ誘導剤による誘導に応答したＣＰ組織細胞による１または複数のＣＳＦ成分の、変更された（例えば、適切な対照と比較して、統計的に有意な様式で増加または減少した）産生、ある特定の好ましいＣＳＦ成分については増加した産生は、既存の方法論の使用によって慣用的に決定され得る。
【００６５】
ある特定の実施形態によれば、本明細書で提供される脈絡叢誘導剤は、変更された（例えば、対照と比較して、統計的に有意な様式で増加または減少した）レベルの、ある特定の好ましい実施形態では増加したレベルの１または複数のＣＳＦ成分、例えば、図７および／または図８に示され、以下のうち１または複数を含むＣＰ産物および／またはＣＳＦ成分を産生するように、ＣＰ組織細胞またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化したＣＰ細胞を誘導し得ることが企図される：
ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−ＩＩ、ＦＧＦ−１、ｂＦＧＦ（ＦＧＦ−２）、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１２、ＦＧＦ−１８、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ／ＶＥＧＦ−２、ＥＧＦ、成長ホルモン（ＧＨ）、ＢＭＰ−１、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−１１、ＢＭＰ−１５、ＧＤＦ−１、ＧＤＦ−７、ＧＤＦ−８、ＧＤＦ−９、ＧＤＦ−１０、ＧＤＦ−１１、神経増殖因子（ＮＧＦ）、ＰＥＤＦ（色素上皮由来因子、ＳｅｒｐｉｎＦ１としても公知）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ＩＧＦ２、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３、ＮＴ−４、ＧＤＦ−１５、ＧＤＮＦ、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、アキソトロフィン、ヘパリン結合性ＥＧＦ様増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子−アルファ（ＰＤＧＦ−α）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）もしくは神経突起成長促進因子−２／ミッドカイン（ＮＥＧＦ２）であり得る増殖因子；
セルロプラスミン、スーパーオキシドジスムターゼ−１（ＳＯＤ−１）、スーパーオキシドジスムターゼ−２（ＳＯＤ−２、Ｍｎ型）、スーパーオキシドジスムターゼ銅シャペロン（ＣＣＳ）、ＤＪ−１／ＰＡＲＫ７、カタラーゼ、セレノプロテイン（Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｘ、１５ｋＤａ）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼｍｕ２（筋肉）、グルタチオンレダクターゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ヒドロキシアシルグルタチオンヒドロラーゼもしくはチオレドキシンであり得るＣＳＦ抗酸化剤；
肺胞マクロファージ由来走化性因子−Ｉ（ＡＭＣＦ−Ｉ）、ＡＭＣＦ−ＩＩ、間質細胞由来因子−２、ケモカイン（ＣＸＣモチーフ）リガンド２、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２５、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４）、ケモカイン（ＣＸＣモチーフ）受容体−２、ケモカイン（ＣＸＣモチーフ）受容体−４、ケモカイン様因子スーパーファミリー（例えば、ＣＫＬＦ−３、ＣＫＬＦ−６、ＣＫＬＦ−７）もしくは神経突起成長促進因子−２／ミッドカイン（ＮＥＧＦ２）であり得る走化性因子；および／または
トランスサイレチン、リポカリン型プロスタグランジンＤシンターゼ／β−トレース（Ｌ−ＰＧＤＳ）、アポリポタンパク質（例えば、アポリポタンパク質Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｈ、Ｊ、Ｍ、Ｎ、ＯまたはＲ）、リポカリン−６、リポカリン−７、リポカリン−１５、シスタチンＢ、シスタチンＣ、シスタチンＥＭ、シスタチン１１、ヒートショックタンパク質（ＨＳＰ）ファミリーメンバーもしくはＤＪ−１／ＰＡＲＫ７であり得るシャペロンタンパク質。
【００６６】
任意の所与のＣＳＦ成分が、本明細書に開示されるアミノ酸配列（例えば、受託番号による、または本明細書で参照により組み込まれる参照刊行物中の開示による、または当業者に公知のとおり、など）を有して存在し得、または本明細書に開示されるポリヌクレオチド配列（例えば、受託番号による、または本明細書で参照により組み込まれる参照刊行物中の開示による、または当技術分野で公知のとおり、など）によってコードされ得ること、およびまた、任意の所与のＣＳＦ成分が、本明細書に開示されるアミノ酸配列もしくはポリヌクレオチド配列（例えば、受託番号による、または参照刊行物中の開示による、など）に対して、それぞれ少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８もしくは９９パーセント同一であるアミノ酸配列を有し得、またはそのようなポリヌクレオチド配列によってコードされ得ることが理解される（Ｓｔｅｖｅｎｓら、２００５年  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ  １８巻（２号）：１５０頁）。したがって、これに関して、本明細書に開示される配列（例えば、受託番号による、など）に対して１００パーセント未満同一であるＣＳＦ成分またはコード配列がバリアントとして企図され、かかるバリアントは、蓄積または獲得された変異、対立遺伝子バリエーション、翻訳後または転写後プロセシング、翻訳または転写エラーなどの産物であることから生じ得る。同種または異種組織がＣＰ細胞の供給源であるバリアント、例えば、本明細書に開示されるＣＳＦ成分の同種または異種ホモログが、本明細書に開示されるアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列（例えば、受託番号による、など）に対して、それぞれ少なくとも５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８または９９パーセント同一であり得るバリアントもまた企図される。
【００６７】
ポリペプチド（アミノ酸）またはポリヌクレオチド配列を比較する場合、２つの配列は、以下に記載するように最大の対応のためにアラインメントさせた場合に、２つの配列中のアミノ酸またはヌクレオチドの配列が同じである場合、「同一」と言われる。２つの配列間の比較は、典型的には、配列類似性の局所的領域を同定および比較するための比較ウインドウにわたって配列を比較することによって実施される。「比較ウインドウ」とは、本明細書で使用する場合、少なくとも約２０連続する位置、通常は３０〜約７５、４０〜約５０のセグメントを指し、そこで、１つの配列が、２つの配列を最適にアラインメントさせた後に、同じ数の連続する位置の参照配列と比較され得る。
【００６８】
比較のための配列の最適なアラインメントは、デフォルトパラメーターを使用して、Ｌａｓｅｒｇｅｎｅ（商標）スイートのバイオインフォマティクスソフトウェア（ＤＮＡＳＴＡＲ，Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）中のＭｅｇａｌｉｇｎ（商標）プログラムを使用して実施され得る。このプログラムは、以下の参考文献に記載されるいくつかのアラインメントスキームを具体化する：Ｄａｙｈｏｆｆ，  Ｍ．Ｏ．（１９７８年）Ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  ｃｈａｎｇｅ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  −  Ｍａｔｒｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ．、Ｄａｙｈｏｆｆ，  Ｍ．Ｏ．（編）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ  ５巻、補遺３、３４５頁；Ｈｅｉｎ  Ｊ．、１９９０年  Ｕｎｉｆｉｅｄ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｓ、６２６頁；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ｈｉｇｇｉｎｓ，  Ｄ．Ｇ．およびＳｈａｒｐ，  Ｐ．Ｍ．、１９８９年  ＣＡＢＩＯＳ  ５巻：１５１頁；Ｍｙｅｒｓ，  Ｅ．Ｗ．およびＭｕｌｌｅｒ  Ｗ．、１９８８年  ＣＡＢＩＯＳ  ４巻：１１頁；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，  Ｅ．Ｄ．、１９７１年  Ｃｏｍｂ．  Ｔｈｅｏｒ  １１巻：１０５頁；Ｓａｎｔｏｕ，  Ｎ．  Ｎｅｓ、１９８７年  Ｍ．、Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｅｖｏｌ．  ４巻：４０６頁；Ｓｎｅａｔｈ，  Ｐ．Ｈ．Ａ．およびＳｏｋａｌ，  Ｒ．Ｒ．、１９７３年  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ  −  ｔｈｅ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｔａｘｏｎｏｍｙ、Ｆｒｅｅｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｗｉｌｂｕｒ，  Ｗ．Ｊ．およびＬｉｐｍａｎ，  Ｄ．Ｊ．、１９８３年  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．，  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８０巻：７２６頁。
【００６９】
あるいは、比較のための配列の最適なアラインメントは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ、１９８１年  Ａｄｄ．  ＡＰＬ．  Ｍａｔｈ  ２巻：４８２頁の局所的同一性アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、１９７０年  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４８巻：４４３頁の同一性アラインメントアルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、１９８８年  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５巻：２４４４頁の類似性についての検索方法によって、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ化された実行によって、または検査によって、実施され得る。
【００７０】
パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適切なアルゴリズムの好ましい例は、それぞれＡｌｔｓｃｈｕｌら、１９７７年  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５巻：３３８９頁およびＡｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０年  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５巻：４０３頁に記載されるＢＬＡＳＴアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムである。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２．０は、例えば、２またはそれを超えるポリペプチドまたはポリヌクレオチド間のパーセント配列同一性を決定するために、本明細書に記載されるパラメーターと共に使用され得る。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを介して公に入手可能である。
【００７１】
例示的な一例では、累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメーターＭ（マッチする残基の対についての報酬スコア；常に、＞０）およびＮ（ミスマッチする残基についてのペナルティスコア；常に、＜０）を使用して計算され得る。各方向でのワードヒットの伸長は、以下の場合に停止される：累積アラインメントスコアが、その達成された最大値から量Ｘだけ下落する場合；累積スコアが、１もしくは複数の負のスコアの残基アラインメントの蓄積に起因してゼロもしくはそれ未満になる場合；またはいずれかの配列の末端に到達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、ＴおよびＸは、アラインメントの感度およびスピードを決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列について）は、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、および１０の期待値（Ｅ）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ、１９８９年  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９巻：１０９１５頁を参照のこと）アラインメント、５０の（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４および両方の鎖の比較を使用する。
【００７２】
あるいは、ＲＮＡ配列分析（例えば、上および実施例に記載されるＲＮＡ−ｓｅｑ）から得られる配列が、参照ゲノムとアラインメントされる。例えば、各試料についてのＲＮＡ配列読み取りは、ＲＮＡ−ｓｅｑ読み取りを参照ゲノムに対してアラインメントさせるためのＴｏｐｈａｔ（ｖ２．０．１３）ソフトウェア、Ｔｏｐｈａｔによってマッピングされた読み取りを、アセンブルされたトランスクリプトームを生成するために潜在的な転写物へとアセンブルするＣｕｆｆＬｉｎｋｓソフトウェア、および２またはそれを超える異なる生物学的条件からアセンブルされた読み取りを受け取り、異なる条件（例えば、誘導された条件対対照条件）下での遺伝子および転写物の示差的発現についてそれらを分析するためのＣｕｆｆＤｉｆｆソフトウェア（例えば、Ｇｈｏｓｈら、Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＲＮＡ−Ｓｅｑ  Ｄａｔａ  Ｕｓｉｎｇ  ＴｏｐＨａｔ  ａｎｄ  Ｃｕｆｆｌｉｎｋｓ．  ２０１６年  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２０１６年；１３７４巻：３３９〜６１頁を参照のこと）を使用して、参照ゲノムにマッピングされ得る（例えば、Ｅｎｓｅｍｂｌ  Ｓｓｃｒｏｆａ１０．２、およびＤａｔａｂａｓｅ  ｆｏｒ  Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ，Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＤＡＶＩＤ）、Ｓａｍｂｏｒｓｋｉら、Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｕｍ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｅａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｐｈａｓｅ、２０１３年  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｐｒｏｄ．  ２０１３年１２月１２日；８９巻（６号）：１３４頁）；Ｄｅｎｎｉｓら、ＤＡＶＩＤ：  Ｄａｔａｂａｓｅ  ｆｏｒ  Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ，  Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、２００３年  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．  ４巻（５号）：Ｐ３頁；Ｈｕａｎｇら、ＤＡＶＩＤ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ：  ｅｘｐａｎｄｅｄ  ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ａｎｄ  ｎｏｖｅｌ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍｓ  ｔｏ  ｂｅｔｔｅｒ  ｅｘｔｒａｃｔ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ｆｒｏｍ  ｌａｒｇｅ  ｇｅｎｅ  ｌｉｓｔｓ．  ２００７年  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２００７年７月；３５巻（ウェブサーバー刊行）：Ｗ１６９〜７５頁；Ｈｕａｎｇら、Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｌａｒｇｅ  ｇｅｎｅ  ｌｉｓｔｓ  ｕｓｉｎｇ  ＤＡＶＩＤ  ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ、２００９年  Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．  ２００９年；４巻（１号）：４４〜５７頁）。ライブラリー正規化について、種々の方法、例えば、古典的なｆｐｋｍ、幾何学的、四分位または他の方法が、種々のクロスレプリケート（ｃｒｏｓｓ−ｒｅｐｌｉｃａｔｅ）分散推定法（例えば、合併、条件毎、盲検（ｂｌｉｎｅ）またはポアソン法、例えば、ｈｔｔｐウェブサイト：／／ｃｏｌｅ−ｔｒａｐｎｅｌｌ−ｌａｂ．ｇｉｔｈｕｂ．ｉｏ／ｃｕｆｆｌｉｎｋｓ／ｃｕｆｆｄｉｆｆ／＃ｌｉｂｒａｒｙ−ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ−ｍｅｔｈｏｄｓを参照のこと）と組み合わせて適用され得る（例えば、ｈｔｔ��ウェブサイト：／／ｃｏｌｅ−ｔｒａｐｎｅｌｌ−ｌａｂ．ｇｉｔｈｕｂ．ｉｏ／ｃｕｆｆｌｉｎｋｓ／ｃｕｆｆｄｉｆｆ／＃ｌｉｂｒａｒｙ−ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ−ｍｅｔｈｏｄｓを参照のこと）。
【００７３】
非限定的な例示的例として、異なって発現された遺伝子（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  Ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  Ｇｅｎｅ）（ＤＥＧ）が、Ｃｕｆｆｄｉｆｆソフトウェアプログラムからの「ｇｅｎｅ＿ｅｘｐ．ｄｉｆｆ」アウトプットを使用して同定され得る。対照と「誘導された」試料との間のＤＥＧを検出するために、２つのフィルタリングプロセスが適用され得る。第１に、Ｃｕｆｆｄｉｆｆステータスコードを使用して、各試料において「ＯＫ」ステータスのみを有する遺伝子を得る。ステータスコード「ＯＫ」は、各条件が、発現レベルの信頼性のある計算のために十分な配列読み取りを遺伝子座中に含有すること、およびその試験が、その試料中の遺伝子発現レベルを首尾よく計算することを示している。第２のフィルタリングのために、発現レベルにおける２倍の変化が計算され、比較されている試料（対照対誘導された）間の２倍超の変化を示す遺伝子のみが選択される。オントロジー分析のために、選択された遺伝子のリストが、機能的アノテーションの包括的なセットを得るために、ＤＡＶＩＤソフトウェア（Ｈｕａｎｇら  ２００９年  Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ．  ２００９年；４巻（１号）：４４〜５７頁；Ｈｕａｎｇら  ２００７年  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２００７年３５巻（ウェブサーバー刊行）：Ｗ１６９〜７５頁；Ｄｅｎｎｉｓら、２００３年  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．  ４巻（５号）：Ｐ３頁）に適用される。カテゴリー、例えば、遺伝子−疾患関連、ホモログマッチ、遺伝子オントロジーまたは経路カテゴリーなどが選択され得る。次いで、ＤＡＶＩＤは、アノテーションタームおよびそれらの関連する遺伝子を列挙する機能的アノテーションチャートを生成する。
【００７４】
ある特定の実施形態では、「配列同一性の百分率」は、少なくとも２０の位置の比較ウインドウにわたって２つの最適にアラインメントされた配列を比較することによって決定され、ここで、比較ウインドウ中のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適なアラインメントのために、参照配列（これは、付加も欠失も含まない）と比較して、２０パーセントまたはそれ未満、通常は５〜１５パーセント、または１０〜１２パーセントの付加または欠失（即ち、ギャップ）を含み得る。百分率は、同一のアミノ酸残基または核酸塩基が両方の配列中に存在する位置の数を決定してマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を参照配列中の位置の総数（即ち、ウインドウサイズ）によって除算し、結果に１００を乗算して配列同一性の百分率を得ることによって計算される。
【００７５】
遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載される特定のＣＳＦ成分ポリペプチドをコードし得る多くのヌクレオチド配列が存在することが、当業者に理解される。これらのポリヌクレオチドの一部は、本明細書に開示されるアミノ酸配列を有するＣＳＦ成分ポリペプチドをコードする元のポリヌクレオチド配列のヌクレオチド配列に対して最小の配列同一性を有する。それにもかかわらず、コドン使用（ｃｏｄｏｎ  ｕｓａｇｅ）における差異に起因して変動するポリヌクレオチドは、本開示によって明示的に企図される。ある特定の実施形態では、哺乳動物発現のためにコドン最適化された配列が具体的に企図される。
【００７６】
ＣＰ細胞供給源
本明細書で開示される実施形態は、ＣＮＳ中への投与のための、治療的な異種および／または同種ＣＰ細胞を含有する、改善された生体適合性、非免疫原性、半透過性のアルギネートカプセルに関する。ある特定の実施形態では、ＣＰ異種移植に関する以前の教示を改変することによって、ＣＰ組織断片が調製され得、ＣＰ細胞含有カプセルが、本明細書の他の場所に記載されるように選択され得る。かかるカプセルの調製および使用のための一般的方法論は、例えば、ＵＳ６３２２８０４、ＵＳ５８３４００１、ＵＳ６０８３５２３、ＵＳ２００７／１３４２２４、ＵＳ５８６９４６３、ＵＳ２００４／２１３７６８、ＵＳ２００９／０２１４６６０およびＵＳ２００９／００４７３２５に記載されている。ＣＮＳ疾患の処置のための生体適合性カプセル内の異種脈絡叢組織断片の脳における植込みは、例えば、ＵＳ２００７／１３４２２４、およびＵＳ２００４／２１３７６８、ＵＳ２００５／０２６５９７７、ＵＳ６０８３５２３、およびＵＳ２００９／００４７３２５ならびに関連の特許出願公開に記載されている。ＵＳ２００９／００４７３２５は、異種移植のための新生仔ＣＰ細胞の例示的な調製を記載している。
【００７７】
しかし、ＣＰ組織および／またはＣＰ細胞の生物学的供給源に関して、本発明の実施形態は、そのように限定されることを意図せず、その結果、哺乳動物脈絡叢組織が、本明細書に記載されるように選択され誘導された、治療的異種ＣＰ細胞を含有する生体適合性、非免疫原性、半透過性のアルギネートカプセルで処置されている対象に対して異種である哺乳動物から得ることができる実施形態もまた、本明細書で企図される。したがって、ＣＰ組織は、ブタ、ヒツジ、ウシ、ヤギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物供給源から得ることができる。ある特定の他の実施形態では、ＣＰ細胞は、処置を受けている対象に対して同種である生物学的供給源から得ることができ、例えば、供給源は、対象と同じ種の遺伝的に非同一の個体由来の組織であり得る。
【００７８】
ある特定の例示的な例示的実施形態では、ＣＰ細胞への分化が可能な同種または異種多能性細胞は、複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化したＣＰ細胞を得るのに十分な条件下および時間にわたってｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養され得る。ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）からのヒトＣＰ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成およびマウスＥＳＣからのマウスＣＰ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ生成のための条件は、例として、Ｗａｔａｎａｂｅら、２０１２年  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ３２巻（４５号）：１５９３４頁およびＳｔｅｒｎｂｅｒｇら、２０１４年  Ｒｅｇｅｎ  Ｍｅｄ  ９巻（１号）：５３頁に記載されている。これらおよび関連の実施形態での使用のための多能性細胞は、胚性細胞、例えば、胚性幹細胞、胚性幹細胞由来クローン性胚性前駆体細胞株、神経堤前駆体を含み得、ならびに／または非胚性細胞、例えば、体細胞組織由来の、臍帯細胞、胎盤細胞、歯髄細胞、成体組織幹細胞および／もしくは間葉系幹細胞のうち１もしくは複数もまた含み得、これらについての調製方法は、当業者に公知である（例えば、Ｌｏｅｆｆｌｅｒら、２００２年  Ｃｅｌｌｓ  Ｔｉｓｓｕｅｓ  Ｏｒｇａｎｓ  １７１巻（１号）：８〜２６頁）。
【００７９】
これらおよび関連の実施形態では、多能性細胞は、図６（図６Ａ〜６Ｃ）に開示されるｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＰ分化剤のいずれかなどの１または複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＰ分化剤を含む培養培地中で培養され得る。例えば、多能性細胞は、複数のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化した脈絡叢（ＣＰ）細胞を得るために十分な条件下および時間にわたって、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）またはＢＭＰシグナル伝達経路アゴニスト、トランスフォーミング増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーメンバーまたはＴＧＦ−βシグナル伝達経路アゴニスト、哺乳動物増殖分化因子（ＧＤＦ）またはＧＤＦシグナル伝達経路アゴニスト、ＶＥＧＦ、Ｗｎｔタンパク質リガンドまたはＷｎｔシグナル伝達経路アゴニスト、ソニックヘッジホッグ（Ｓｈｈ）、Ｓｈｈシグナル伝達経路アゴニスト（例えば、合成小分子アゴニスト、例えば、パルモルファミン（ｐｕｒｍｏｒｐｈａｍｉｎｅ）および／またはＳＡＧ、Ｓｔａｎｔｏｎら  ２００９年  Ｍｏｌ．  ＢｉｏＳｙｓｔ  ６巻：４４頁を参照のこと）、および線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）またはＦＧＦシグナル伝達経路アゴニストのうち１または複数を含む培養培地中で培養され得る（例えば、Ｗａｔａｎａｂｅら、２０１２年  Ｊｌ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ３２巻（４５号）：１５９３４頁；Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇら  ２０１４年、Ｒｅｇｅｎ  Ｍｅｄ、９巻（１号）：５３頁を参照のこと；例えば、Ｗａｒｄら  ２０１５年  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓ０３０６−４５２２巻（１５号）００４１５頁；Ｌｉｄｄｅｌｏｗ、２０１５年  Ｆｒｏｎｔ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ９巻（３２号）：１頁）；Ｈｕａｎｇら  ２００９年  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ３４０巻（２号）：４３０頁）；Ｓｃｈｏｂｅｒら、２００１年  Ｊ  Ｃｏｍｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  ４３９巻（１号）：３２頁もまた参照のこと）。
【００８０】
例えば、Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニストは、ＷＡＹ−３１６６０６（ＳＦＲＰ阻害剤、５−（フェニルスルホニル）−Ｎ−４−ピペリジニル−２−（トリフルオロメチル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩、Ｂｏｄｉｎｅら、２００９年  Ｂｏｎｅ  ４４巻：１０６３頁）、ＩＱ１（ＰＰ２Ａ活性化因子、Ｍｉｙａｂａｙａｓｈｉら、２００７年  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０４巻：５６６８頁）、ＱＳ１１（ＡＲＦＧＡＰ１活性化因子、Ｚｈａｎｇら、２００７年  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０４巻：７４４４頁）、（ヘテロ）アリールピリミジンまたは２−アミノ−４−［３，４−（メチレンジオキシ）ベンジル−アミノ］−６−（３−メトキシフェニル）ピリミジン、Ｎｏｒｒｉｎ（例えば、Ｏｈｌｍａｎｎら、２０１２年  Ｐｒｏｇ．  Ｒｅｔｉｎ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ３１巻：２４３頁；Ｒｅｙら、２０１０年  Ｄｅｖ．  Ｄｙｎ  ２３９巻：１０２頁；ｅｒｒａｔｕｍ  ２０１０年  Ｄｅｖ．  Ｄｙｎ．  ２３９巻：１０３４頁；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００２６６）、Ｒ−スポンジン−１（例えば、Ｐｅｎｇら、０１３  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ．  ３巻：１８８５頁；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１０３８６３３；ＮＭ＿００１２４２９１０．１）、Ｒ−スポンジン−２（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１７８５６５；ＮＭ＿１７８５６５．４；ＮＭ＿００１２８２８６３．１）、Ｒ−スポンジン−３（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿０３２７８４）およびＲ−スポンジン−４（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１０２９８７１．３）のうち１または複数を含み得る。Ｗｎｔシグナル伝達経路アゴニストは、ある特定の実施形態では、任意の適切なリチウム塩、即ち、カチオン性リチウムを含み、毒性を伴わずにまたは最小の毒性を伴って細胞と接触され得るリチウム化合物、例えば、塩化リチウム、炭酸リチウム、クエン酸リチウム、オロト酸リチウム、臭化リチウム、フッ化リチウム、ヨウ化リチウム、酢酸リチウム、水酸化リチウム、水素化アルミニウムリチウム、過塩素酸リチウム、硝酸リチウム、リチウムジイソプロピルアミド、水素化ホウ素リチウム、酸化リチウム、硫酸リチウム、ヘキサフルオロリン酸リチウム、四酸化リチウム、硫化リチウム、水素化リチウム、リチウムアミド、乳酸リチウム、テトラフルオロホウ酸リチウム、リチウムジメチルアミド、リン酸リチウム、過酸化リチウム、リチウムマンガン酸化物、リチウムメトキシド、メタホウ酸リチウム、ステアリン酸リチウム、または当業者に公知であり得る任意の他のリチウム塩もまた含み得る。
【００８１】
ある特定の他の好ましい実施形態は、処置を受けている対象に対して異種である組織から調製されるカプセル封入された脈絡叢組織断片を企図する。例えば、ヒトの処置のために、カプセル封入された異種ＣＰ細胞は、非ヒト供給源、好ましくは非ヒト哺乳動物供給源から得ることができることが想定される。ある特定のかかる実施形態では、本明細書に記載される半透過性生体適合性（例えば、アルギネート）カプセル中にカプセル封入されるＣＰ細胞を含有するＣＰ組織の非ヒト哺乳動物供給源は、ブタ組織であり得る。ある特定のさらなる実施形態は、本発明の方法における使用のためにカプセル封入されるＣＰ細胞の供給源としての新生仔ブタＣＰ組織に関し、ここで、「新生仔」は、誕生直後から最大で３月齢までの任意の時点において得られる組織を含むと理解され得る。
【００８２】
本開示のある特定の実施形態によれば、ヒト病原体を実質的に含まない、特に、ヒト向性伝染性ブタ内因性レトロウイルス（ＰＥＲＶ）を実質的に含まない可能性がある胎仔または新生仔ＣＰ組織（例えば、胎仔または新生仔ブタＣＰ組織）の使用に由来する驚くべき利点もまた提供される。「実質的に含まない」とは、ヒト病原体を検出するための通常の手段またはヒト向性伝染性ＰＥＲＶを検出するための通常の手段が、統計的に有意な様式で、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の程度の信頼度で、かかる病原体またはＰＥＲＶを検出することができない状況を指すと理解すべきである。
【００８３】
これに関して、ブタの組織および細胞をかかる移植物に十分に適したものにする多くの特徴にもかかわらず、ＰＥＲＶは、ヒト中への異種移植のためのブタの組織および細胞の使用に伴う重篤な健康および安全性のリスクを提示する。特に、移植に使用されるブタドナー細胞中に存在し得るＰＥＲＶは、ヒト細胞に感染することが可能である（Ｆｉｓｈｍａｎ、１９９８年  Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ８６２巻：５２頁；Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ｕ．Ｓ．８，０８８，９６９；Ｐａｒｋら、２００８年  Ｊ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  １８巻：１７３５頁；Ｈｅｃｔｏｒら  ２００７年  Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  １４巻：２２２頁）。対照的に、ニュージーランドのオークランド島では、定義された基準のセットによって病原体を含まないことが示されており、ＰＥＲＶがヒト細胞に感染する能力と以前に関連付けられていた全長ＰＥＲＶ−Ｃ遺伝子座がそれらのゲノムから欠けている家畜化ブタ（Ｓｕｓ  ｓｃｒｏｆａ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）の集団が同定されている（Ｇａｒｋａｖｅｎｋｏら、２００８年  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  １７巻：１３８１頁；Ｈｅｃｔｏｒら  ２００７年  Ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  １４巻：２２２頁）。病原体を含まない動物は、ＰＥＲＶ−Ａ  ｅｎｖ遺伝子との組換えが可能なＰＥＲＶ−Ｃ  ｅｎｖ遺伝子を欠くブタのサブセットを含んだ（同上）。
【００８４】
したがって、本開示のある特定の実施形態の実施では、本明細書に記載するように選択、投与および誘導される、半透過性生体適合性カプセル中に存在するＣＰ細胞の異種組織供給源が、ヒト向性ＰＥＲＶを実質的に含まない胎仔または新生仔ブタＣＰ組織を含むことが企図される。ある特定のさらなる実施形態では、ＣＰ組織は、ＰＥＲＶ−Ａ  ｅｎｖ遺伝子との組換えが可能なＰＥＲＶ−Ｃ  ｅｎｖ遺伝子を欠き、または確立された遺伝子編集技術、例えば、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）−Ｃａｓ９編集を使用して、任意のまたは全てのＰＥＲＶ遺伝子を欠くように遺伝子操作された動物から得られる（例えば、Ｊｉｎｅｋら、２０１２年  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３７巻：８１６頁；Ｄｏｕｄｎａら、２０１４年  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３４６巻：１２５８０９６頁）。
【００８５】
ＣＰの調製およびカプセル封入
一般に、本明細書に開示されるある特定の実施形態を実施するために使用され得る材料、方法および技術は、Ｅｌｌｉｏｔｔおよび共同研究者ら（例えば、ＵＳ２００９／００４７３２５；ＵＳ８，１２９，１８６）、Ｖａｓｃｏｎｃｅｌｌｏｓら（例えば、ＵＳ２００９／０２１４６６０）、Ｄｉｏｎｎｅら（例えば、ＵＳ６，３２２，８０４；ＵＳ６，０８３，５２３）、Ｍａｊｏｒら（例えば、ＵＳ５，７５３，４９１）、Ｍｏｎｕｋｉら（例えば、ＵＳ８，７４８，１７６；Ｗａｔａｎａｂｅら、２０１２年  Ｊｌ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ３２巻（４５号）：１５９３４頁もまた参照のこと）の刊行物の１または複数において、ならびに／またはＵＳ２００７／０１３４２２４（Ｈａｒｌｏｗら）、ＵＳ４，８９２，５３８（Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら）および／もしくはＵＳ２０１２／０００３１９０（Ｙａｍｏａｈら）において見出され得る、脈絡叢組織および細胞調製物、半透過性生体適合性カプセル、例えば、アルギネートカプセルなど、および／またはカプセルの脳植込みを含むＣＮＳ投与に関する教示の適応中に本明細書に記載される改善を取り込むことによって達成され得、これらの刊行物は全て、参照によって組み込まれるが、個々にもいずれの組合せにおいても、本明細書に開示された組合せに従う改善を教示も示唆もできない。
【００８６】
本明細書で初めて開示されたある特定の好ましい実施形態によれば、本明細書で列挙された処置する方法に従うＣＰ組織断片および／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化したＣＰ細胞が中にカプセル封入された１または複数の半透過性生体適合性カプセル（例えば、アルギネートカプセル）を選択するステップを含むことによって特定の利点が得られ得ることが、驚くべきことに発見された。
【００８７】
具体的には、本開示の前には予測できなかった様式で、ＣＮＳ部位に投与されるカプセルの寸法、および各カプセル中に含まれるＣＰ細胞の数が、カプセル封入された細胞による細胞１つ当たりのＣＳＦ成分産生レベルに寄与する。直観に反して、非限定的な理論によれば、ＣＰ誘導剤による誘導後の細胞１つ当たりのＣＳＦ成分を含む、細胞１つ当たりの増加したＣＳＦ成分産生は、各カプセル中に存在する細胞の数と単純かつ直接的には比例しなかったが、その代り、約４００μｍ〜約８００μｍの直径を有し、約１マイクロリットル未満の内部容積を典型的には有するように選択され、１カプセル当たり約２００〜約１０，０００の細胞を含有するカプセルを使用して達成されることが見出され、ここで、「約」は、５０％未満、より好ましくは４０％未満、より好ましくは３０％未満、より好ましくは２０％、１５％、１０％または５％未満、列挙された量よりも多いまたは少なくてもよい量的変動を示すことが理解され得る。
【００８８】
したがって、ある特定の好ましい実施形態では、約２００、４００、６００、８００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、７５００または９０００個以上、かつ約１０，０００個以下のＣＰ細胞を各々が含有する半透過性生体適合性カプセルが選択される。ある特定の好ましい実施形態では、約４００、６００、８００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００または７５００個以上、かつ約８０００個以下の細胞を各々が含有するカプセルが選択される。
【００８９】
ある特定の好ましい実施形態では、約４００μｍ〜約８００μｍ、約５００μｍ〜約７００μｍ、約４５０μｍ〜約７５０μｍまたは約４００μｍ〜約７００μｍの直径を有し、各々が約１マイクロリットル未満の内部容積を典型的には有する半透過性生体適合性（例えば、アルギネート）カプセルが調製され得る。
【００９０】
選択は、当業者が精通した種々の技術のいずれかによって達成され得る。例えば、本明細書に記載されるように、また引用された参考文献に示される確立された方法論に従って調製された半透過性生体適合性カプセルは、顕微鏡下で可視化され得、そしてマイクロマニピュレーター、マイクロニードル、マイクロキャピラリーピペット、パッチ−クランプデバイスなどを使用して、含まれる容積の細胞による較正された占有度（例えば、実験的に確立された一貫したカプセル占有度、および／または比色もしくは蛍光マーカー、例えば、生体染色もしくはＤＮＡ結合性色素を使用することによる、など）に従って手動で選択され得る。あるいは、自動化設備、例えば、大粒子フローソーター（ｌａｒｇｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｆｌｏｗ  ｓｏｒｔｅｒ）（例えば、ＣＯＰＡＳ（商標）ＦｌｏｗＰｉｌｏｔ（商標）プラットフォーム、Ｕｎｉｏｎ  Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃａ  Ｉｎｃ．、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）、粒子サイズ分析器、デジタル画像分析器、フローサイトメーターなどが、カプセル封入されたＣＰ細胞を含有する半透過性生体適合性カプセルの調製物を処理するために使用され得る。
【００９１】
好ましい実施形態では、ＣＰ組織断片および／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化したＣＰ細胞が中に「カプセル封入された」本発明の半透過性生体適合性カプセルは、視覚的顕微鏡検査の際に、カプセルの外側表面上に検出可能な細胞または細胞の部分を実質的に示さず、カプセル内側からカプセル表面へと突出する細胞または細胞の部分を実質的に示さない、カプセルを含む。
【００９２】
非限定的な理論によれば、カプセル直径、カプセル封入されたＣＰ細胞の数、およびカプセル内側から外側カプセル表面へと突出する細胞または細胞の部分を含む細胞または細胞の部分からのカプセル外側表面の実質的な自由の、本明細書に記載される基準に従う選択は、対象中の中枢神経系（ＣＮＳ）部位へのカプセルの投与または植込み、例えば、神経系疾患を有することが既知の哺乳動物対象または神経系疾患を有することが疑われる哺乳動物対象の脳組織における植込みに引き続いて、検出可能な組織拒絶（例えば、免疫拒絶）または炎症反応（例えば、異物応答）をほとんどまたは全く惹起しないカプセルを、有利なことに生じると考えられる。さらに、本発明の方法に従ってｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＮＳ部位における植込みによって対象に投与されるカプセル封入されたＣＰ細胞は、驚くべき予期しなかった長寿命を示し、局在化された免疫学的反応または慢性炎症反応、例えば、ＣＰ細胞含有カプセルの免疫拒絶、カプセル上での宿主細胞外マトリックス沈着、またはカプセルに対する異物応答の惹起を実質的に伴わずに、植込み後２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１８、２０、２４カ月またはそれを超える期間より長く半透過性生体適合性（例えば、アルギネート）カプセル中で生存可能であり続けることができる。したがって、ある特定の実施形態では、カプセルは、投与の過程において植込み後にＣＮＳ部位において慢性炎症を惹起せず、および／またはＣＮＳ部位におけるカプセルの免疫学的拒絶を好転させるための対象への免疫抑制剤（例えば、Ｃｒａｆｔら、２００５年  Ｅｘｐ．  Ｏｐｉｎ．  Ｔｈｅｒ．  Ｔａｒｇｅｔｓ  ９巻：８８７頁；Ｊｈａら、２０１４年  Ｒｅｃｅｎｔ  Ｐａｔ．  Ｉｎｆｌａｍｍ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ８巻：１１８頁；Ｂｅｌｌａｖａｎｃｅら、２０１４年  Ｆｒｏｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５巻：１３６頁；Ｌｏｓｓｉｎｓｋｙら、２００４年  Ｈｉｓｔｏｌ．  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈ．  １９巻：５３５頁、およびそれらの中で引用された参考文献）の投与は必要とされない。
【００９３】
さらに、本明細書に開示されるように選択される半透過性生体適合性（例えば、アルギネート）カプセルの小さい封入容積は、カプセル封入されたＣＰ細胞インプラントの調製および送達における効率および節約を可能にし、ＣＰ誘導剤と接触させる本明細書に記載されるステップにより、植込み部位において最小の組織空間を占有し、それによって、投与するステップに伴う組織破壊の量を最小化しつつ、脳組織に強力なＣＳＦ供給源を送達する能力をさらに提供する。
【００９４】
神経系障害
当業者は、本明細書に記載されるカプセル封入されたＣＰ細胞組成物の投与の臨床的適切さを示し得る、および／または本明細書に記載されるカプセル封入されたＣＰ細胞組成物の投与が適応され得る、いくつもの診断的、外科的および／または他の臨床的基準に精通する。例えば、Ｓｏｎｔｈｅｉｍｅｒ，  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ、２０１５年  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ／Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；「Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  第１９版（Ｒ．Ｓ．  Ｐｏｒｔｅｒ編、２０１１年、Ｍｅｒｃｋ，  Ｉｎｃ．、ＮＪ）；Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｏｋｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤのウェブサイト、ｗｗｗ．ｎｉｎｄｓ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ／ｍｉｓｃ／ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ＿ｔｅｓｔｓ．ｈｔｍにおける「Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｔｅｓｔｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ」；Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  −ＩＩ巻、第４版、Ｂｒａｄｌｅｙら（編）、２００４年  Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ  Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ／Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ；Ｎｏｎ−Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｎｏｎｔｕｍｏｒ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ−Ｆｉｒｓｔ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｆａｓｃｉｃｌｅ）、Ｄ．Ｎ．  Ｌｅｗｉｓら（編）、２０１０年  Ａｍｅｒ．  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、Ａｎｎａｐｏｌｉｓ  Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＭＤ；Ｂｒａｄｌｅｙ’ｓ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第６版）、Ｒ．Ｂ．  Ｄａｒｏｆｆら（編）、２０１２年  Ｓａｕｎｄｅｒｓ／Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡを参照のこと。したがって、神経系の障害もしくは疾患を有する患者または神経系の障害もしくは疾患を有することが疑われる患者の診断および臨床的モニタリングのための基準は、当業者に周知である。
【００９５】
したがって、本明細書に記載される組成物および方法は、対象におけるその存在またはそれを有するリスクが熟練の臨床医にとって明らかな広範囲の神経系疾患において有益な使用を見出し得ることが企図される。したがって、本明細書に見出される教示に従って処置される神経系疾患の非限定的な例には、例えば、パーキンソン病、多系統萎縮症−パーキンソン型、多系統萎縮症−小脳型、進行性核上性麻痺、レビー小体型認知症、本態性振戦、薬物誘発性パーキンソニズム、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、プリオン病、運動ニューロン疾患、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、静的神経疾患、例えば、脳卒中、ＣＮＳ外傷、てんかんを含む発作性障害；加齢および認知症と関連するものを含む進行性神経変性疾患、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病など；運動ニューロンおよび神経筋接合部の疾患；ハンチントン病；多発性硬化症；ＣＮＳ腫瘍、特に、神経芽細胞腫、神経膠腫、星状細胞腫を含む脳腫瘍；髄膜炎、ボツリヌス中毒、破傷風、神経梅毒、灰白髄炎、狂犬病、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、プリオン病、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ  ｆｏｗｌｅｒｉ（アメーバ性脳感染症）を含む神経系の感染性疾患；神経嚢虫症；抑うつ、気分障害を含む精神神経疾患；強迫性障害、統合失調症；ニューロン死、グルタミン酸毒性、タンパク質凝集および／または沈着（例えば、アミロイドプラーク形成）、正常な健康対照対象において見出されるものを超える反応性酸素種（ＲＯＳ）産生レベルを含むミトコンドリア機能不全のうち１または複数と関連するまたはそれを特徴とする疾患；脳由来神経栄養因子関連障害、ならびに他の神経系疾患が含まれる。
【００９６】
したがって、ある特定の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、この神経系疾患は、ニューロンの死を特徴とする神経変性疾患である。例えば、これらおよび関連の実施形態は、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法を企図し、この神経系疾患は、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、さもなければ運動ニューロン疾患として公知）、進行性球麻痺、進行性筋萎縮症、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、脊髄小脳失調症１型（ＳＣＡ１）または加齢性神経変性障害のうち少なくとも１つであり得る。しかし、包含される実施形態は、そのように限定されることを意図せず、その結果、ニューロンの死を特徴とする他の神経変性疾患を処置する方法もまた企図される。
【００９７】
ある特定の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、この神経系疾患は、神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの神経細胞機能のレベルにおける減少を特徴とする。例えば、これらおよび関連の実施形態は、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法を企図し、この神経系疾患は、パーキンソン病（ドパミン作動性ニューロンの機能のレベルにおける減少が存在する）、アルツハイマー病（ノルアドレナリン作動性ニューロンの機能のレベルにおける減少が存在する、例えば、Ａｄｏｒｉら  ２０１５年、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  １２９巻（４号）：５４１頁を参照のこと）、ハンチントン病（中型有棘ＧＡＢＡニューロン（ＭＳＮ）の機能のレベルにおける減少が存在する）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ、運動ニューロンの機能のレベルにおける減少が存在する）および抑うつ（セロトニン作動性ニューロンの機能のレベルにおける減少が存在する）のうち少なくとも１つであり得る。
【００９８】
ある特定の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、この神経系疾患は、神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における神経細胞機能のレベルと比較した、少なくとも１つの神経細胞機能のレベルにおける増加を特徴とする。例えば、これらおよび関連の実施形態は、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法を企図し、この神経系疾患は、精神病、統合失調症（活動亢進性ドパミンシグナル伝達として顕在化し得る、神経細胞のレベルにおける増加が存在する）；てんかん性発作（グルタミン酸作動性興奮毒性として顕在化し得る、神経細胞のレベルにおける増加が存在する）、虚血性脳卒中（グルタミン酸作動性興奮毒性として顕在化し得る、神経細胞のレベルにおける増加が存在する）、および不穏下肢症候群と関連する不眠症（過活動性グルタミン酸作動性活性として顕在化し得る、神経細胞のレベルにおける増加が存在する）のうち少なくとも１つであり得る。
【００９９】
ある特定の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、この神経系疾患は、対象における、神経系疾患を有さないことが既知の対照対象におけるＣＳＦ成分（単数または複数）のレベルと比較して変更されたレベルの１または複数の脳脊髄液（ＣＳＦ）成分を含む脳脊髄液（ＣＳＦ）の存在を特徴とする。代表的なＣＳＦ成分は、図７に示される。例えば、これらおよび関連の実施形態は、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法を企図し、この神経系疾患は、アルツハイマー病および糖尿病のうち少なくとも１つであり得る。
【０１００】
ある特定の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、この神経系疾患は、対象における、神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における脈絡叢機能のレベルと比較して変更されたレベルの少なくとも１つの脈絡叢機能の存在を特徴とする。例えば、これらおよび関連の実施形態は、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法を企図し、この神経系疾患は、スタージ・ウェーバー症候群もしくはクリペル・トルノネー・ウェーバー症候群、または認識された診断的徴候および症状を有するいくつかの他の臨床的に同定可能な先天的神経系疾患のいずれか、であり得る。
【０１０１】
ある特定の実施形態では、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法が提供され、対象におけるこの神経系疾患は、神経系疾患を有さないことが既知の対照対象における沈着のレベルと比較した、対象の神経系中の内皮および平滑筋細胞における増加した（例えば、統計的に有意な様式で）アミロイド沈着の二次的影響である（例えば、Ｇｈｉｓｏら、２００１年  Ｊ．  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓ．  ３巻：６５頁）。例えば、これらおよび関連の実施形態は、神経系疾患を有することが既知の対象または神経系疾患を有することが疑われる対象を処置する方法を企図し、この神経系疾患は、脳アミロイドアンギオパチー、アミロイドーシス−アイスランド型を伴う遺伝性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｉ）、アミロイドーシス−オランダ型を伴う脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、髄膜脳血管および眼球軟髄膜アミロイドーシス、ゲルゾリン関連脊髄および脳アミロイドアンギオパチー、家族性アミロイドーシス−フィンランド型（ＦＡＦ）、血管バリアントプリオン脳アミロイドーシス、さもなければ家族性脳アミロイドアンギオパチー−英国型もしくは脳血管アミロイドーシス−英国型として公知の家族性英国型認知症（ＦＢＤ）、眼耳脳遺伝病としても公知の家族性デンマーク型認知症、家族性トランスサイレチン（ＴＴＲ）アミロイドーシスまたはＰｒＰ脳アミロイドアンギオパチー（ＰｒＰ−ＣＡＡ）であり得る（Ｇｈｉｓｏら  ２００１年  Ｊ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓ  ３巻：６５頁）。
【０１０２】
処置する方法
好ましい実施形態は、神経系疾患を有することが既知のヒトもしくは非ヒト哺乳動物または神経系疾患を有することが疑われるヒトもしくは非ヒト哺乳動物である対象を処置する方法を企図する。したがって、哺乳動物には、ヒトもまた含まれ得、家畜化動物、例えば、実験動物、家畜および家庭のペット（例えば、げっ歯類、ネコ、イヌ、ウサギおよび他のウサギ目動物、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、他の有蹄動物など）、ならびにまた非家畜化動物、例えば、野生生物などもまた含まれ得る。
【０１０３】
「治療有効量」とは、哺乳動物、好ましくはヒトに投与された場合に、哺乳動物、好ましくはヒトにおける神経系の疾患または状態の処置をもたらすのに十分な、本開示に従う組成物または調製物の量を指す。「治療有効量」を構成する、かかる組成物または調製物、例えば、本明細書に記載される脈絡叢（ＣＰ）細胞および／または本明細書で提供される脈絡叢誘導剤がその中にカプセル封入された１もしくは複数の選択された半透過性生体適合性カプセルの量は、その組成物または調製物、神経系の疾患または状態およびその重症度、ならびに処置される哺乳動物の年齢に依存して変動するが、当業者自身の知識および本開示を考慮して、当業者によって慣用的に決定され得る。
【０１０４】
「処置する」または「処置」とは、目的の疾患もしくは障害（例えば、神経変性疾患）を有する哺乳動物、好ましくはヒトにおける目的の神経系の疾患、障害もしくは状態の症状を治癒、軽減するため、および／またはかかる目的の神経系の疾患、障害もしくは状態に寄与する根底となる欠損もしくはその原因を修正するための治療を指し、適切な未処置の対照と比較して、実質的かつ統計的に有意な程度の阻害または修復（完全である必要はないが）、例えば、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれを超える阻害または修復まで、神経系の疾患、障害もしくは状態に寄与する欠損した分子成分、細胞成分および／もしくは組織成分、ならびに／または神経系の疾患、障害もしくは状態に寄与する有害なプロセスを、阻害する（例えば、損なう、低減させるまたは防止する、例えば、統計的に有意な様式で減少させる）または修復する（例えば、置換する、補充するまたは代用する）ことを含み；この疾患、障害または状態から生じる徴候または症状を部分的または完全に緩和すること、例えば、疾患と関連する炎症性病変を低減させること、１または複数の正常ニューロン細胞および／またはグリア細胞の構造および／または機能を回復させることなども含む。
【０１０５】
ＣＰ細胞を含有する生体適合性半透過性アルギネートカプセルの調製およびＣＮＳ部位中への植込みのための一般的方法論は、例えば、ＵＳ６３２２８０４、ＵＳ５８３４００１、ＵＳ６０８３５２３、ＵＳ２００７／１３４２２４、ＵＳ５８６９４６３、ＵＳ２００４／２１３７６８、ＵＳ２００９／００４７３２５、およびその中に列挙された参考文献を含む関連の刊行物に記載されており、本明細書の教示に従って改変され得る。したがって、当技術分野で公知の外科的手順が、本開示を考慮すると、カプセルをＣＮＳ注射部位に投与するステップが、カテーテルを介してカプセルを送達することを含むある特定の実施形態への適応のために企図され、このカテーテルは、例えば、外部カテーテル、閉塞具、プランジャーまたは送達カテーテルを含み得る。ある特定のさらなる実施形態では、送達することは、定位装置を用いてカテーテルを制御可能に位置付けることを含み、これは、ある特定のなおさらなる実施形態では、脳深部刺激装置（ＤＢＳ）マイクロドライバーまたは本発明の方法における使用のために改変され得る類似の装置を含み得る。
【０１０６】
上記方法のある特定の実施形態では、カプセルをＣＮＳ注射部位に（またはある特定の他の実施形態では、ＰＮＳ注射部位に）投与することは、カテーテルを介してカプセルを送達することを含む。ある特定のさらなる実施形態では、投与することは、定位装置を用いてカテーテルを制御可能に位置付けることによって送達することを含む。ある特定のなおさらなる実施形態では、定位装置は、例示的な例示として、限定なしに、脳深部刺激装置（ＤＢＳ）マイクロドライバー、「フレームなし」定位ヘッドフレーム、頭蓋取り付け型照準デバイス、レクセルフレーム、Ｃｏｓｍａｎ−Ｒｏｂｅｒｔｓ−Ｗｅｌｌｓフレーム、もしくは別の類似の改変型定位装置など、または任意の等価物、例えば、Ｂｏｔら、２０１５年  Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔ．  Ｆｕｎｃｔ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ９３巻：３１６頁；Ｓｈａｒｍａら、２０１４年  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｉｎｄｉａ  ６２巻：５０３頁；Ｌａｒｓｏｎら、２０１２年  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ７０巻（１  Ｓｕｐｐｌ  Ｏｐｅｒａｔｉｖｅ）：９５頁；Ｋｅｌｍａｎら、２０１０年  Ｓｔｅｒｅｏｔａｃｔ．  Ｆｕｎｃｔ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ８８巻：２８８頁；Ｓｔａｒｒら、２０１０年  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  １１２巻：４７９頁；Ｓｔａｒｒら、２００９年  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  Ｃｌｉｎ．  Ｎ．  Ａｍ．  ２０巻：１９３頁に記載されるデバイスのいずれかを含み得る。ある特定の実施形態では、カテーテルは、外部カテーテル、閉塞具、プランジャーおよび送達カテーテルを含む。
【０１０７】
これらおよび関連の実施形態では、本明細書に記載されるカプセルの１つまたは複数の投与は、本明細書で言及される所望の解剖学的位置への、ある特定の好ましい実施形態では、本明細書で提供されるＣＮＳ注射部位（またはＰＮＳ注射部位）としての送達を含み得る。投与は、処置されている特定の医学的適応症に特異的であり得る、および／または送達のための標的注射部位に特異的であり得る、例えば、二重カテーテル送達システムを介した送達を含み得る。例示的な二重カテーテル送達システムは、外部ガイドカテーテルシステムおよび内部カプセル送達システムを含み得る。外部ガイドカテーテルシステムは、ＣＮＳ組織またはＰＮＳ組織中への挿入の際の組織損傷を低減させるように、鈍な末端であり得、そのように設計され得、また、カテーテルが組織から部分的または完全に引き抜かれるときに、注射部位においてカプセル送達後に送達されたカプセルの１つまたは複数によって占有される、適切な標的（レシピエント）組織中の空間を創出するようにも設計される。カプセルは、プランジャーシステムを使用して内部カテーテル中に負荷され、次いで、そうして負荷された内部カテーテルシステムは、例えば、ある特定の好ましい実施形態では定位装置などの標的化／ガイド／照準デバイスを使用するガイドされた送達のための外部ガイドカテーテルシステム中に挿入される。
【０１０８】
例えば、処置されている適応症に特異的な制御されたカプセル送達を確実にするために、ＣＮＳまたはＰＮＳ組織中の標的化部位におけるカプセル送達デバイス全体は、マイクロドライブシステムを使用して段階的な様式で正確な増分でゆっくりと引き込まれ得、それによって、本明細書で注射部位と呼ばれ、カプセル送達デバイスによって制御可能に放出される１または複数の送達されたカプセルを収容できる、ＣＮＳ（またはＰＮＳ）組織中の空間を創出する。送達デバイスの各増分での引き込みの間に、内部カテーテルのプランジャーは、外部カテーテルの引き抜きによって創出された空間的位置における空間（例えば、注射部位）中に１または複数のカプセルをゆっくりと送達するために押圧され得る。カプセル送達デバイス全体を増分的に引き込み、その後注射部位（例えば、ＣＮＳ注射部位またはＰＮＳ注射部位）に１または複数のカプセルを送達するために内部カテーテルのプランジャーを押圧する、このプロセスは、注射部位への送達が望まれる全てまたは実質的に全てのカプセルが標的化部位に送達されるまで、反復され得る。内部カテーテル内の、および／またはカプセル送達デバイスの引き抜きによって創出された空間的位置における空間（例えば、注射部位）におけるカプセル配置の構成は、一部の実施形態では、注射部位における層状構成のカプセルとして提供され得、各層は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個もしくはそれを超えるカプセルを含み、および／またはかかる構成は、ある特定の他の実施形態では、１層当たり１つのカプセルだけを収容できる直径を有するように比例する、注射部位中の積み重ねられた単一カプセルの一次元円柱状構成として提供され得る。注射部位の好ましい構成およびかかる注射部位内のカプセル配置の好ましい構成は、処置が所望される特定の医学的適応症の関数として、および／もしくは所望の注射部位の特定の解剖学的位置の関数として変動し得、ならびに／または各部位において送達されるカプセルの数にとって適切であり得る。注射部位におけるカプセルの構成は、例えば、内部カテーテルのプランジャーが注射部位中に所望の数のカプセルを制御可能に放出するように押圧される距離に対して、カプセル送達デバイス全体が引き込まれる距離を変動させることによっても制御され得る。
【０１０９】
例えば、本明細書に記載されるように調製される半透過性生体適合性カプセルは、注射部位において積み重ねられたカプセルの円柱を得るために単一のカテーテル送達システムの末端において送達管として形成されたＣＮＳ注射部位中へのカテーテルからの放出によって、パーキンソン病を有する患者の被殻中に投与されている。Ｓｎｏｗら、２０１５年６月、Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＮＴＣＥＬＬ（登録商標）［ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  （ａｌｇｉｎａｔｅ−ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ）  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｃｈｏｒｏｉｄ  ｐｌｅｘｕｓ  ｃｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｘｅｎｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ］  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  （ＰＤ）：  ２６  ｗｅｅｋｓ  ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ．  Ｐｏｓｔｅｒ  ｓｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  １９ｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｍｏｖｅｍｅｎｔ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ。
【０１１０】
本明細書の他の箇所で注目するように、ある特定の企図された実施形態は、ＣＰ細胞を含有する本明細書に記載される生体適合性カプセルを１または複数の末梢神経系（ＰＮＳ）部位、例えばＰＮＳ注射部位に投与することを含む方法に関する。ＰＮＳ注射部位へのかかる投与は、ＰＮＳの処置のために当技術分野で開発された方法論を使用することによって実施され得る。ＰＮＳ注射部位への投与は、例えば、ＣＮＳ部位のために本明細書で記載される器具使用／装置に対応するガイドされたカテーテルまたは他の適切な器具使用を介した、ＣＰ含有カプセルの導入によって達成され得る。ＰＮＳ注射部位への投与のために、当業者は、任意選択で超音波ガイダンスを用いる神経または神経節および周辺領域中への薬理学的薬剤の注射などによって多くの局所麻酔技術および領域麻酔（ｒｅｇｉｏｎａｌ  ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ）技術が慣用的に実施される位置を含む、ＰＮＳがアクセスされ得るいくつかの解剖学的位置のいずれかを認識する。
【０１１１】
注射は、例えば、本明細書に記載される生体適合性カプセル（これは、非限定的な例として、直径が４００〜８００マイクロメートルであり得る）を収容するのに十分に大きい内径を有する１７ゲージ〜２２ゲージの針を用いて実施され得る。ＣＮＳへのカプセルの導入は、ＣＮＳ血管に損傷を与えることなしに脳中への注射が可能な特殊化したカテーテルを望ましくは使用し得るが、ＰＮＳ注射部位への送達のためにアクセスされ得る末梢部位については、注射部位の近傍における間葉系組織中の血管への損傷などの偶発的な脈管損傷は、特に懸念ではない場合がある。
【０１１２】
ＰＮＳ注射部位への投与は、好ましくは、皮膚および／または他の隣接組織を介してＰＮＳ部位へと貫通することができる針を使用する。例えば、Ｈａｄｚｉｃ’ｓ  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｎｅｒｖｅ  Ｂｌｏｃｋｓ  ａｎｄ  Ａｎａｔｏｍｙ  ｆｏｒ  Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ−Ｇｕｉｄｅｄ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｒ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ）（２０１１年）、Ａｄｍｉｒ  Ｈａｄｚｉｃ編、７２２頁、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、ＩＳＢＮ−１３：９７８−０−０７１５−４９６１−５を参照のこと。例えば、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ  ａｎｄ  Ａｃｕｔｅ  Ｐａｉｎ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ（２００７年）、Ａｄｍｉｒ  Ｈａｄｚｉｃ編、１２５９頁、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、ＩＳＢＮ  ００７１４４９０６Ｘ、９７８００７１４４９０９６もまた参照のこと。例えば、Ｃａｒｎｅｉｒｏ  ＨＭ、Ｔｅｉｘｅｉｒａ  ＫＩ、ｄｅ  Ａｖｉｌａ  ＭＰ、Ｌｉｍｏｎｇｉ  ＲＭ、Ｍａｇａｃｈｏ  Ｌ．（２０１６年）Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｅｄｌｅ  Ｐａｔｈ，  Ａｎｅｓｔｈｅｔｉｃ  Ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ，  ａｎｄ  Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ  ｉｎ  Ｒｅｔｒｏｂｕｌｂａｒ  ａｎｄ  Ｐｅｒｉｂｕｌｂａｒ  Ｂｌｏｃｋｓ．  Ｒｅｇ  Ａｎｅｓｔｈ  Ｐａｉｎ  Ｍｅｄ．  ４１巻（１号）：３７〜４２頁もまた参照のこと。例えば、Ｊｅｇａｎａｔｈａｎ  ＶＳ１、Ｊｅｇａｎａｔｈａｎ  ＶＰ．（２００９年）Ｓｕｂ−Ｔｅｎｏｎ’ｓ  ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ：  ａ  ｗｅｌｌ  ｔｏｌｅｒａｔｅｄ  ａｎｄ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ．  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ２０巻（３号）：２０５〜９頁もまた参照のこと。
【０１１３】
好ましい実施形態では、投与するステップは、ＣＰ細胞を含有する、本明細書に記載される生体適合性半透過性アルギネートカプセルの治療有効量を投与することを含み、これは、ある特定の実施形態では、約２００、４００、６００、８００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、７５００または９０００個以上、かつ約１０，０００個以下のＣＰ細胞を各々が含有する１または複数のカプセルを投与することを含み得る。ある特定の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００または２０００個以下のカプセルが、ＣＮＳ（またはＰＮＳ）注射部位に投与され得る。ある特定の実施形態では、カプセルは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２個またはそれを超えるＣＮＳ（またはＰＮＳ）注射部位に投与され得る。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、カプセルを１または複数のＣＮＳ（またはＰＮＳ）注射部位に投与することは、ＮａＣｌ、人工脳脊髄液（ＣＳＦ）、アスコルベートまたは抗炎症剤のうち少なくとも１つを例えば含み得る担体溶液中にカプセルを含む懸濁物を送達することを含み得る。例示的な抗炎症剤は、当技術分野で公知の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）もしくはステロイド抗炎症薬から選択され得（例えば、Ｂｒｕｎｔｏｎら（編）、Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ−第１２版  ２０１１年  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、および／またはコネキシンアンタゴニストもまた含み得る（例えば、Ｃｈｅｎら  ２０１４年  Ｂｒａｉｎ  １３７巻（第８部）：２１９３頁；Ｚｈａｎｇら  ２０１４年  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ、５８８巻（８号）：１３６５頁；Ｄａｖｉｄｓｏｎら  ２０１４年  ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ９巻（５号）：ｅ９６５８８頁）。
【０１１５】
好ましくは、カプセル封入されたＣＰ細胞の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０または５０パーセントが、投与するステップの後少なくとも６ヵ月間にわたって生存可能であり続ける。より好ましくは、カプセル封入されたＣＰ細胞の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０または５０パーセントが、投与するステップの後少なくとも７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７または１８ヵ月間にわたって生存可能であり続ける。より好ましくは、カプセル封入されたＣＰ細胞の少なくとも５、１０、２０、３０、４０または５０パーセントが、投与するステップの後少なくとも７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４ヵ月間にわたって生存可能であり続ける。より好ましくは、カプセル封入されたＣＰ細胞の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０または５０パーセントが、投与するステップの後少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０年またはそれを超える期間にわたって生存可能であり続ける。好ましくは、生体適合性カプセルの外側表面は、投与するステップの後少なくとも６ヵ月間にわたって、より好ましくは、投与するステップの後少なくとも７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４ヵ月間にわたって、より好ましくは、投与するステップの後少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０年またはそれを超える期間にわたって、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）沈着を実質的に有さないままであり続ける。
【０１１６】
植込んだカプセル封入されたＣＰ細胞の生存率および状態をモニタリングすることは、種々の既存の技術のいずれかによって直接的または間接的に達成され得る。例えば、対象の神経学的機能の臨床的評価、またはニューロン１８Ｆ−フルオロドパおよび／もしくは１１Ｃ−テトラベナジン（ｔｅｔｒａｂｅｎｚｉｎｅ）代謝によるドパミン作動性神経機能のポジトロン断層撮影（ＰＥＴ）評価、ＣＳＦの生化学的分析、あるいは死後分析は、誘導されたＣＰインプラントによる増加したＣＳＦ産生に由来する回復した機能性を間接的に示し得る。別の例として、ＣＮＳ炎症は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）技術（Ｓｉｂｓｏｎら、２０１１年  Ｍｅｔｈｓ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ７１１巻：３７９頁；ＭｃＡｔｅｅｒら、２０１１年  Ｍｅｔｈｓ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ６８０巻：１０３頁）によって、または１もしくは複数のバイオマーカー、例えば、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、ＩＬ−６もしくは他のマーカーの、ＣＳＦ中および／もしくは循環中でのレベルを決定する方法（例えば、Ｌｉｎｄｑｖｉｓｔら、２０１３年  Ｂｒａｉｎ  Ｂｅｈａｖ．  Ｉｍｍｕｎ．  ３３巻：１８３頁；Ｆｒｏｄｌら、２０１４年  Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、４８巻：２９５〜３０３頁；Ｐｏｌａｃｈｉｎｉら、２０１４年  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２６６巻：２６６頁；Ｓａｔｉｚａｂａｌら、２０１２年  Ｎｅｕｒｏｌ．  ７８巻：７２０頁）によって、評価され得る。これらおよび関連の技術は、手順関連炎症が消失した後に、植込んだカプセル封入されたＣＰ細胞が、ＥＣＭ沈着を伴う異物応答を伴うと予測される炎症反応を誘発している可能性があるか否かを決定するために使用され得る。
【０１１７】
本明細書に記載されるＣＮＳ植込み後のカプセル封入されたＣＰ細胞の驚くべき長寿命を考慮すると、ある特定のさらなる実施形態は、カプセル封入された細胞をＣＮＳ注射部位に投与するステップと同時に、または投与するステップに引き続いて、かかるＣＰ細胞を本明細書で提供されるＣＰ誘導剤と接触させることを企図する。ある特定のかかる実施形態では、Ｏｍｍａｙａレザバ（Ｏｍｍａｙａ、１９６３年  Ｌａｎｃｅｔ  ２巻：９８頁；Ｄｕｄｒｉｃｋ、２００６年  Ｊ．  Ｐａｒｅｎｔｅｒ．  Ｅｎｔｅｒａｌ．  Ｎｕｔｒ．  ３０巻（補遺１）：Ｓ４７頁）が、カプセル植込みのＣＮＳ部位またはその近傍に据えられたカテーテルへのレザバからの流体連絡を提供するために、対象の頭皮下に皮下植込みされ得る。かかるレザバを介して、またはＣＮＳ部位の近傍への流体送達が達成され得る他の類似のデバイスを介して、カプセル封入されたＣＰ組織細胞は、１回または複数回、ＣＰ誘導剤を有益に受ける対象について同定され得る任意の時間間隔（例えば、毎日、１週間に２、３、４、５もしくは６回、毎週、隔週（ｂｉｗｅｅｋｌｙ）、毎月、隔月（ｂｉｍｏｎｔｈｌｙ）、年４回、半年毎、毎年、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５年またはそれを超える期間にわたる任意の他の間隔）で、ＣＰ誘導剤と接触され得る。
【０１１８】
本発明のいくつかの実施形態の実施は、逆の事項が具体的に示されない限り、当業者の技術範囲内のウイルス学、免疫学、微生物学、分子生物学および組換えＤＮＡ技術における通常の方法を使用することが理解され、それらの多くは、例示目的のために以下に記載される。かかる技術は、文献中で完全に説明されている。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（２００９年）；Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第３版、Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９５年；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第３版、２００１年）；Ｍａｎｉａｔｉｓら  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８２年）；ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｉ巻およびＩＩ巻（Ｄ．  Ｇｌｏｖｅｒ編）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｎ．  Ｇａｉｔ編、１９８４年）；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（Ｂ．  ＨａｍｅｓおよびＳ．  Ｈｉｇｇｉｎｓ編、１９８５年）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ（Ｂ．  ＨａｍｅｓおよびＳ．  Ｈｉｇｇｉｎｓ編、１９８４年）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８６年）；Ｐｅｒｂａｌ、Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４年）および同様の他の参考文献を参照のこと。
【０１１９】
標準的な技術が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）に使用され得る。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様書に従って、または当技術分野で一般に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施され得る。これらおよび関連の技術および手順は、当技術分野で周知の通常の方法に従って、または本明細書を通じて引用および議論される種々の一般的な参考文献およびより具体的な参考文献中に記載されるように、一般に実施され得る。具体的な定義が提供されない限り、本明細書に記載される分子生物学、分析化学、合成有機化学ならびに医薬品化学および製薬化学と併せて利用される命名法、ならびにそれらの実験室手順および技術は、当技術分野で周知であり、一般に使用される。標準的な技術は、組換え技術、分子生物学的、微生物学的、化学的合成、化学分析、医薬調製物、製剤および送達、ならびに患者の処置に使用され得る。
【０１２０】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用する場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「この（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数形の言及を含む。文脈が他を要求しない限り、本明細書を通じて、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのバリエーションは、述べられた１つの要素もしくは整数または要素もしくは整数の群を含むが、任意の他の要素もしくは整数または要素もしくは整数の群を排除しないことを意味すると理解される。本明細書中の各実施形態は、他を明らかに述べない限り、変更すべきことは変更して、全ての他の実施形態に適用される。
【０１２１】
等価物：本発明の特定のステップ、要素、実施形態および適用が、例示を目的として本明細書で示され記載されてきたが、特に、本発明の精神および範囲から逸脱することなしに上述の教示を考慮して当業者によって改変がなされ得るので、本発明がそれらに限定されないことが当然理解される。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲による場合を除いては限定されない。
【０１２２】
以下の実施例は、例示として示されるのであって、限定ではない。
【実施例】
【０１２３】
（実施例１）
上昇した脳脊髄液（ＣＳＦ）産生についての脈絡叢（ＣＰ）細胞含有カプセルの選択
この実施例は、ＣＳＦ産生の代表的な指標としてＣＳＦ成分ＶＥＧＦを使用する、上昇したＣＳＦ産生についてのＣＰ細胞含有カプセルの選択を記載する。
【０１２４】
新生仔ブタ脈絡叢組織を、ＵＳ２００９／００４７３２５およびＵＳ２００９／０２１４６６０に本質的に記載されるように、処理し、アルギネートカプセル中にカプセル封入した。簡潔に述べると、ＣＰ組織を、新生仔ブタ脳から無菌的に解剖し、ハサミを用いて細かく切り刻み、コラゲナーゼおよびサーモリシンで消化し、５５０μｍステンレス鋼フィルターを通過させ、ペレット化し、穏やかに再懸濁して、直径が約５０〜２００μｍの細胞クラスターを含む組織断片を得た。ＣＰ細胞クラスターを、室温で４０分間の単位重力沈降（ｕｎｉｔ  ｇｒａｖｉｔｙ  ｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ）２回によって血液細胞から分離した。沈んだＣＰ細胞を、１ｍＬ当たりおよそ３，０００クラスターの密度でＲＰＭＩ培地／２％新生仔ブタ血清中に再懸濁し、超低付着フラスコ中で６〜７日間記載されるように培養して、球状、卵形および分枝状のＣＰ細胞クラスターを得た。細胞クラスターを、高マンヌロン酸含有アルギネートを含有する無菌食塩溶液中でインキュベートし、液滴生成器によって１０９ｍＭの塩化カルシウムゲル化溶液中に液滴噴霧し、ポリ−Ｌ−オルニチンおよびアルギネートで引き続いてコーティングして、その実質的に全てが直径約４００μｍ〜約８００μｍである半透過性カプセルを得た。次いで、カプセルを、回転する５０ｍＬチューブ中で５５ｍＭの等浸透圧クエン酸ナトリウムで２分間処理した。カプセルを、血清を含有する培養培地中で維持し、アリコートを試料採取して、細胞生存率を確認した。
【０１２５】
細胞１つ当たりの分泌されたＶＥＧＦの量を、同等の数の選択されていない（ランダムな）ＣＰ細胞含有カプセルおよび選択されたＣＰ細胞含有カプセルのアリコートにおいて比較した。選択されたＣＰ細胞含有カプセルを、直接的顕微鏡観察に基づいて、１カプセル当たり２００〜１０，０００のカプセル封入された細胞の存在について手動で選び、これらのカプセルは、カプセル内側から突出している細胞または細胞性突起によっても、表層に付着した細胞または組織断片によっても中断されない、滑らかな外側表面を示した。２４ウェルマルチウェルプレートの培養ウェルに、５００の選択されていない（ランダムな）ＣＰ細胞含有カプセルまたは５００の選択されたカプセルのいずれかを播種し、３７℃で２４時間培養した。上清流体のアリコートを収集し、製造業者の指示に従ってＥＬＩＳＡキット（Ｈｕｍａｎ  ＶＥＧＦ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（商標）ＥＬＩＳＡ、カタログ番号ＤＶＥ００、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）を使用してＶＥＧＦについてアッセイした。細胞培養物のアリコートもまた、供給業者の指示に従ってＱｕａｎｔ  ｉＴ（商標）Ｐｉｃｏｇｒｅｅｎ  ｄｓＤＮＡアッセイ（カタログ番号Ｐ７５８９、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．／Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を使用するＤＮＡ定量のために収集して、各ウェル中の細胞の相対数を決定した。
【０１２６】
培養ウェルの比較ＤＮＡ定量により、５００の選択されたカプセル（１カプセル当たり２００〜１０，０００のカプセル封入された細胞）を受けているウェルが、５００の選択されていない（ランダムな）カプセルを受けたウェルよりも３倍多いＤＮＡを含有していたことが明らかになった。驚くべきことに、５００の選択されたカプセルを受けたウェルの上清流体は、選択されていない（ランダムな）カプセル培養物由来の上清よりも６倍多いＶＥＧＦを含有していた。試料を、１細胞当たりの分泌されたＶＥＧＦの量の反映としてＤＮＡ含量に対して正規化した場合、選択されたカプセルは、驚くべきことに、選択されていないカプセルよりも、ＤＮＡ  １μｇ当たり２倍よりもわずかに多いＶＥＧＦを分泌することが見出された（図１）。この結果は、細胞１つ当たりの増加したＶＥＧＦ産生とより高い細胞密度との間の対応が以前に報告されていない限り、予測できたことではない。
【０１２７】
（実施例２）
脈絡叢誘導剤の同定
この実施例は、誘導剤の非存在下でＣＰ細胞がＣＳＦ成分を産生するレベルよりも高いレベルでＣＳＦ成分を産生するように哺乳動物脈絡叢（ＣＰ）細胞を誘導する薬剤の同定を記載する。ＣＳＦは、抗酸化剤として機能する複数の成分を含有することが公知である（例えば、Ｋｏｌｍａｋｏｖａら、２０１０年  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ４巻：４１頁）；集合的に、これらの成分の抗酸化特性は、総抗酸化能（ＴＡＣ）と呼ばれ得る。
【０１２８】
ＣＰ細胞を含む脈絡叢（ＣＰ）細胞クラスター（５×１０３クラスター／ｍＬ）を、カプセル封入なしで実施例１に上記したように調製し、２４ウェル超低（細胞）付着プレート中で、５％ＣＯ２インキュベーター中３７℃でｉｎ  ｖｉｔｒｏで２４時間または７２時間培養し、培養物上清を、製造業者の指示に従ってＯｘｉＳｅｌｅｃｔ（商標）ＴＡＣアッセイ（カタログ番号ＳＴＡ−３６０、Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して総抗酸化能（ＴＡＣ）について試験した。ＴＡＣアッセイにおける培地成分からの干渉を回避するために、培養物を、１０ｍＭのニコチンアミドを補充した無血清無フェノールＲＰＭＩ培地中でインキュベートした。候補ＣＰ誘導剤のパネルもまた、ＣＰ細胞によるＴＡＣ生成に対する影響について試験した。培養培地単独を受けた、または各候補ＣＰ誘導剤を含むがＣＰ細胞クラスターを含まない対照ウェルもまたインキュベートし、ＴＡＣについて試験した。代表的な候補ＣＰ誘導剤は表１に示したとおりであった。
【表１】
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【０１２９】
ＴＡＣアッセイの結果は図２に示される。試験した候補ＣＰ誘導剤の中で、塩化リチウムは、７２時間後に容易に検出可能であった、ＣＰ細胞による上昇したＴＡＣレベルの放出を促進した。
【０１３０】
したがって、さらなる実験では、ＣＰクラスター（５×１０３クラスター／ｍＬ）を、変動するＬｉＣｌ濃度の存在下で、１０ｍＭのニコチンアミドを含有する無血清無フェノールＲＰＭＩ培地中で７２時間インキュベートして、ＣＰ細胞が、用量依存的様式でＬｉＣｌに応答して上清中に抗酸化活性を放出するか否かを決定した。結果は図３Ａに示され、図中、ＬｉＣｌの非存在下でＣＰクラスターによって放出されたバックグラウンドＴＡＣレベルを減算し、ＣＰ細胞の存在なしのそれぞれの培地／ＬｉＣｌ中で検出されたあらゆるＴＡＣシグナルについて補正した後の、ＬｉＣｌに応答してＣＰクラスターによって放出された検出可能なＴＡＣレベルが示される。
【０１３１】
ある特定の誘導因子が、カプセル封入されたＣＰによるＣＳＦ成分の分泌を増加させることができることを決定するために、１０００のＣＰ含有カプセルを、ＬｉＣｌを含む種々の誘導因子ありまたはなしで２４ウェルマルチウェルプレート中で３７℃で２４時間培養した。上清流体のアリコートを収集し、実施例１に記載されるようにＶＥＧＦについてアッセイした。細胞培養物のアリコートもまた、ＤＮＡ定量のために収集して、実施例１に記載されるように各ウェル中の細胞の相対数を決定した。結果は図３Ｂに示され、ＬｉＣｌおよび炭酸リチウムの両方が、誘導因子なしで培養されたカプセル封入されたＣＰによって分泌されたレベルを上回る、カプセル封入されたＣＰによるＶＥＧＦ分泌を誘導した。さらに、２つの他の薬剤、タウリンおよびＭｉｔｏＱもまた、カプセル封入されたＣＰによるＶＥＧＦ分泌を誘導した。
【０１３２】
本明細書で提供される誘導剤との接触後にＣＰ細胞において発現レベルが変更された遺伝子を同定するためのさらなる実験において、１２〜１３日齢の子ブタから得、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで２０〜２２日間培養したＣＰ細胞を含有するＣＰクラスター（５×１０３クラスター／ｍＬ）を、１２ｍＭのＬｉＣｌの非存在下（対照）または存在下（誘導剤処理）で、１０ｍＭのニコチンアミドを含有する無血清無フェノールＲＰＭＩ培地中で７２時間インキュベートした。細胞ペレットを回収し、０．２５ｍｌのＴＲＩ（商標）Ｒｅａｇｅｎｔ（カタログ番号Ｔ９４２４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を添加して細胞を溶解させた。溶解物を、およそ１０回ピペットで吸引・排出し、ＲＮＡ−Ｓｅｑ分析まで−８０℃で貯蔵した。対照および処理したＣＰクラスターからの結果を比較し、図８に示すが、この図は、ＬｉＣｌへの曝露後にＣＰ細胞において発現レベルが増加した（図８Ａ〜Ｅ）または減少した（図８Ｆ〜Ｋ）複数のブタ遺伝子を列挙し、これらの遺伝子は、公知のＣＳＦ成分をコードする遺伝子として同定された。ヒトＣＳＦ成分をコードする対応するヒト遺伝子を、確立されたオルソロジー分析によって同定した（Ｇｒｏｅｎｅｎら、２０１２年  Ｎａｔｕｒｅ  ４９１巻（７４２４号）：３９３〜８頁）。
【０１３３】
（実施例３）
免疫抑制レジメンを伴わないＣＮＳに植込まれたカプセル封入された異種脈絡叢（ＣＰ）細胞の長期ｉｎ  ｖｉｖｏ生存
１カプセル当たり２００〜１０，０００のＣＰ細胞を含む、アルギネートカプセル封入された新生仔ブタ脈絡叢（ＣＰ）クラスターを、上記ならびにＵＳ２００９／００４７３２５およびＵＳ２００９／０２１４６６０に記載されたように調製した。カプセル（１レシピエント当たり１０個）を、げっ歯類脳植込みのために設計されたカテーテルを使用して、複数の麻酔されたスプラーグドーリーラットの線条中に外科的に植込んだ。動物を、１〜１６ヵ月間維持し（最初の実験については、月々の時点を、１ヵ月の時点から開始して収集した；引き続く実験は、１２ヵ月の時点から開始する確証的データを提供した）、各１ヵ月間隔で、試料動物を、死後脳の組織学的試験のために人道的に屠殺した。抗炎症処置も免疫抑制処置も投与しなかった。
【０１３４】
組織学的知見により、屠殺のための各時点（９、１２または１６ヵ月）において、生細胞が、植込まれたカプセル内に存在し、カプセルに対する宿主免疫学的拒絶、炎症反応または異物応答（例えば、線維性瘢痕）の検出可能な証拠がほとんどまたは全く存在しなかったことが示された。図４を参照のこと。死後脳組織を、ＣＰ細胞によって産生される多機能性ＣＳＦ成分、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ、ＳｅｒｐｉｎＦ１としても公知）の免疫組織学的染色のために処理した（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｇａｒｃｉａら、２００７年  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  （Ｂｅｒｌ．）  ８５巻：１５〜２２頁；Ｂａｒｎｓｔａｂｌｅら、２００４年  Ｐｒｏｇ．  Ｒｅｔｉｎ．  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．  ２３巻：５６１頁；Ｂｅｃｅｒｒａら、１９９５年  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０巻：２５９９２頁；Ｏｒｇａｚら、２０１１年  Ｍｅｌａｎｏｍａ  Ｒｅｓ．  ２１巻：２８５頁）。ＰＥＤＦは、クラスター内のクラスター中（図４）ならびに周囲のラット脳組織中に存在するＣＰ細胞において、容易に検出可能であった。
【０１３５】
上記種々の実施形態は、さらなる実施形態を提供するために組み合わされ得る。本明細書で言及されるおよび／または出願データシート中に列挙される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願および非特許刊行物は全て、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる。これらの実施形態の態様は、必要に応じて、なおさらなる実施形態を提供するために種々の特許、出願および刊行物の概念を使用するために改変され得る。
【０１３６】
これらおよび他の変化が、上で詳述した説明を考慮して、これらの実施形態に対してなされ得る。一般に、以下の特許請求の範囲では、使用される用語は、特許請求の範囲を、本明細書および特許請求の範囲に開示される具体的実施形態に限定すると解釈すべきではなく、かかる特許請求の範囲が権利付与される等価物の全範囲と共に、全ての可能な実施形態を含むと解釈すべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図５−５】
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【図５−６】
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【図５−７】
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【図５−８】
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【図５−９】
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【図５−１０】
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【図５−１１】
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【図５−１２】
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【図５−１３】
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【図５−１４】
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【図５−１５】
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【図５−１６】
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【図５−１７】
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【図５−１８】
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【図５−１９】
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【図５−２０】
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【図５−２１】
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【図５−２２】
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【図５−２３】
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【図５−２４】
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【図５−２５】
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【図５−２６】
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【図５−２７】
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【図５−２８】
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【図５−２９】
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【図５−３０】
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【図５−３１】
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【図５−３２】
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【図５−３３】
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【図５−３４】
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【図５−３５】
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【図５−３６】
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【図５−３７】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
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【図７Ｈ】
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【図７Ｉ】
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【図７Ｊ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
2018515616.tif 000062
【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図８Ｉ】
2018515616.tif 000067
【図８Ｊ】
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【図８Ｋ】
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【国際調査報告】
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