(57)【要約】本発明は、第４級アンモニウム基を含む化合物、皮膚疾患におけるその使用、及びその調製に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−ＭＳＨ類似体化合物であって、メラノコルチン−１受容体（ＭＣ１Ｒ）に対してアゴニスト活性を呈するα−ＭＳＨの誘導体であり、α−ＭＳＨが結合する前記受容体が、メラノサイト内でメラニンの産生を開始するものであり、α−ＭＳＨ類似体が、その骨格中に第４級アンモニウム基を含む、α−ＭＳＨ類似体化合物。
【請求項２】
式：
Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎが、１〜４であり；
Ｘが、Ａｒｇ、ノルＡｒｇ及びホモＡｒｇから選択される）
を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項５】
（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項６】
（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項７】
（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ノルＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項８】
（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ノルＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項９】
医薬としての使用のための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
局所的に皮膚に適用される、請求項９に記載の使用のための化合物。
【請求項１１】
医薬の製造のための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎが、１〜４であり；
Ｘが、Ａｒｇ、ホモＡｒｇ又はノルＡｒｇから選択される）
又はその薬学的に許容される塩を調製する方法であって、
トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（４−６）を用意するステップと；
トリペプチド（４−６）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐとヒスチジン（３）とを連結するステップと；
第４級アンモニウム化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−とジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とを連結するステップと；
第４級アンモニウム基を保有するジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とテトラペプチドＨｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（３−６）とを連結するステップと
により、Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２を調製する、方法。
【請求項１３】
ＸがホモＡｒｇであり、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ（４−６）が、リジン側鎖の遊離アミノ官能基をグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いて変換することにより、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐから調製される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
第４級アンモニウム基Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎが、１〜４である）
を含むアミノ酸又はペプチド誘導体を調製する方法であって、
第４級アンモニウム化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−の酸塩化物及びペルシリル化基を含むアミノ酸ベースの化合物を使用し、第４級アンモニウム化合物の酸塩化物とアミノ酸ベースの化合物のペルシリル化基とを反応させることによる、方法。
【請求項１５】
式：
Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎが、１〜４であり；
Ｘが、Ａｒｇ、ノルＡｒｇ及びホモＡｒｇから選択される）
を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩を投与することによる治療によって対象を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定のα−ＭＳＨ類似体化合物、使用のための化合物、製造のための化合物の使用、化合物を調製する方法、アミノ酸又はペプチド誘導体を調製する方法、及び治療により対象を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
メラノコルチンは、メラノコルチン−１−受容体（ＭＣ１Ｒ）との相互作用により表皮に色素沈着を誘起するペプチドホルモン系統群を含む。α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）は、一部の非ヒト動物の下垂体中葉から、且つヒトの皮膚のＵＶ暴露されたケラチノサイトから放出される主要な色素性ホルモンである。この１３アミノ酸のペプチドは、式Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ２により表される。α−ＭＳＨはＭＣ１Ｒに結合し、サイクリックＡＭＰ介在性シグナル伝達を誘起し、ＤＯＰＡ前駆物質からメラニンポリマーの合成へと導く。様々なα−ＭＳＨ類似体が、国際公開第２００８０２５０９４号及び国際公開第２０１２１０７５９２号に記載されている。
【０００３】
ヒトにおいて、メラニン及びフェオメラニンの２種類のメラニンが発現し得る。茶色がかった黒色色素メラニンは、光分解に抵抗性であり、活性酸素ラジカルを失活させる能力を有するため、光防護特性を有すると考えられている。フェオメラニンは、赤みを帯び、含硫の色素であり、日光に対する日焼け応答の不十分さが報告されており且つメラノーマ及び非メラノーマの皮膚癌の両方が発生するリスクがより大きいと一般的には考えられている肌の白いヒト対象において発現することが多い。α−ＭＳＨとＭＣ１Ｒとの結合は、アデニル酸シクラーゼの活性化を通して、ユーメラニン形成（eumelanogenesis）を更に刺激する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
皮膚及び他の疾患における処置は進歩してきている一方、化合物及び医薬的処置に関する、当技術分野におけるより多くの及び／又は改善された選択肢に対する必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一態様に基づいて、α−ＭＳＨ類似体の骨格中の第４級アンモニウム基（第４級は、４個の置換基を有する正電荷を帯びた窒素原子）の導入などの改変は、高収率及び／又は高純度を伴い、有効性増大及び／又は効率的な調製を含む利益に関連することを、我々は驚いたことに見出した。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
本発明の一態様では、α−ＭＳＨ類似体化合物は、メラノコルチン−１受容体（ＭＣ１Ｒ）に対してアゴニスト活性を呈するα−ＭＳＨの誘導体であり、α−ＭＳＨが結合する上記受容体は、メラノサイト内でメラニンの産生を開始するものであり、α−ＭＳＨ類似体は、その骨格中に第４級アンモニウム基を含む。
【０００７】
本発明の一態様では、第４級アンモニウム基（α−ＭＳＨ類似体に結び付いている）は、メチル、エチル及びプロピルから独立して選択される３個の置換基を有する。正電荷を帯びたアンモニウム基は、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−中間基でα−ＭＳＨ類似体の骨格に結び付いており、ｎ＝１〜４、好ましくは１〜３、より好ましくは１又は３であることが好ましい。本発明の目的のために、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−中間基は、第４級アンモニウム基の一部である。
【０００８】
本発明の更なる態様では、α−ＭＳＨ類似体（第４級アンモニウム基に結び付いている）は好ましくはヘキサペプチドであり、製造労力及び／又は費用の低下、劣化の影響を受けにくいこと、詳細には重量基準当たりの活性向上及び効力向上を含み、本発明の化合物に付加的利益を提供している。ヘキサペプチドは、以下の６単位：Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２を含むことが好ましく、Ｘは、Ａｒｇ、ホモＡｒｇ及び／又はノルＡｒｇから選択され、好ましくはＡｒｇ又はホモＡｒｇから選択され、高収率及び／又は高純度を伴い、有効性増大及び効率的な調製を含み、化合物に付加的利益を提供している。ホモＡｒｇの選択により、劣化の影響を受けにくいこと、有効性増大、安定性の増加及び高収率の調製方法を含み、更に好ましい利益が提供される。
【０００９】
したがって、本発明は、α−ＭＳＨ類似体化合物であって、メラノコルチン−１受容体（ＭＣ１Ｒ）に対してアゴニスト活性を呈するα−ＭＳＨの誘導体であり、α−ＭＳＨが結合する上記受容体はメラノサイト内でメラニンの産生を開始するものであり、α−ＭＳＨ類似体は、その骨格中に第４級アンモニウム基を含む、α−ＭＳＨ類似体化合物に関する。
【００１０】
本発明は、式：
Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎは、１〜４であり；
Ｘは、Ａｒｇ、ノルＡｒｇ及びホモＡｒｇから選択される）
を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩に更に関する。
【００１１】
好ましい化合物（化合物１）は、
（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である。
【００１２】
好ましい化合物（化合物２）は、
（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である。
【００１３】
好ましい化合物（化合物３）は、
（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である。
【００１４】
好ましい化合物（化合物４）は、
（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である。
【００１５】
好ましい化合物（化合物５）は、
（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ノルＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である。
【００１６】
好ましい化合物（化合物６）は、
（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ノルＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩である。
【００１７】
更なる実施形態では、本発明の化合物は、医薬として使用される。本発明の化合物は、皮膚障害の治療的処置に使用されることが好ましい。本化合物は、色素沈着障害、光線性皮膚症、皮膚癌の予防、及び／又は皮膚細胞中のＤＮＡ修復の処置に使用されることが好ましい。本化合物は、皮膚に局所的に適用されるか、又は持続放出性又は徐放性の製剤を介して適用されることが好ましい。
【００１８】
更なる実施形態では、本発明は、医薬製造に基づいた化合物の使用に関する。本化合物は、好ましくは医薬的使用のための薬学的に活性の生成物に含まれる。
【００１９】
更なる実施形態では、本発明は、化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、又は薬学的に許容されるその塩を調製する方法に関し、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎは、１〜４であり；
Ｘは、Ａｒｇ、ノルＡｒｇ及び／又はホモＡｒｇから選択され、
トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（４−６）を用意するステップと；
トリペプチド（４−６）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐとヒスチジン（３）とを連結するステップと；
第４級アンモニウム化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−とジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とを連結するステップと；
第４級アンモニウム基を保有するジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とテトラペプチドＨｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（３−６）とを連結するステップと
により、化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２を調製する。
【００２０】
ＸがホモＡｒｇである本方法の好ましい方法は、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ（４−６）が、リジン側鎖の遊離アミノ官能基をグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いて変換することにより、トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐから調製されることである。任意選択で、Ｌｙｓ基を一時的に保護し、ＬｙｓのホモＡｒｇへの変換は、α−ＭＳＨ類似体化合物を調製する方法のより後のステップにおいて行われる。
【００２１】
更なる実施形態では、本発明は、第４級アンモニウム基Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎは、１〜４である）
を含むアミノ酸又はペプチド誘導体を調製する方法であって、
第４級アンモニウム化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−の酸塩化物及びペルシリル化基を含むアミノ酸ベースの化合物を使用し、第４級アンモニウム化合物の酸塩化物とアミノ酸ベースの化合物のペルシリル化基とを反応させることによる方法に関する。
【００２２】
更なる実施形態では、本発明は、式：
Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎは、１〜４であり；
Ｘは、Ａｒｇ、ノルＡｒｇ及びホモＡｒｇから選択される）
を有する化合物又は薬学的に許容されるその塩を投与することによる治療によって、対象を処置する方法に関する。
【００２３】
本発明の化合物は、例えばＭＣ１Ｒ結合親和性、効力、及び／又は有効性に関するｉｎ−ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ−ｖｉｖｏの試験において有益な結果をもたらすか、又は安定性の増加を示し、医薬標的としてＭＣ１Ｒ発現を増加させることに特に有用であることを、我々は驚いたことに見出した。更に、本発明の化合物は、安全に且つ効率的に合成され、詳細には高収率であり得ることを我々は見出した。
【００２４】
［発明の詳細な説明］
本発明の目的のために、本明細書で表される用語「α−ＭＳＨ類似体」は、メラノコルチン−１受容体（ＭＣ１Ｒ）に対してアゴニスト活性を呈するα−ＭＳＨの誘導体と定義され、α−ＭＳＨが結合する上記受容体はメラノサイト内でメラニンの産生を開始するものである。
【００２５】
本明細書において、以下の略語が使用されている：Ａｒｇ−アルギニン、Ｄ−Ｐｈｅ−フェニルアラニンのＤ異性体；Ｇｌｕ−グルタミン酸；Ｇｌｙ−グリシン；Ｈｉｓ−ヒスチジン；ホモＡｒｇ−ホモアルギニン（Ａｒｇと比較して、アルキル鎖中に１個の−ＣＨ２−単位が付加されている）；Ｌｙｓ−リジン；Ｍｅｔ−メチオニン；Ｎｌｅ−ノルロイシン；ノルＡｒｇ−ノルアルギニン（Ａｒｇより、アルキル鎖中に１個の−ＣＨ２−単位が少ない）；Ｐｈｅ−フェニルアラニン；Ｓｅｒ−セリン；Ｔｒｐ−トリプトファン。アミノ酸の前の接頭辞「Ｄ」は、Ｄ−異性体の立体配置を示す。他に詳細に明示しない限り、全てのアミノ酸は、Ｌ−異性体の立体配置である。
【００２６】
全てのペプチド及びペプチド誘導体は、アシル化アミノ末端を左側に、且つ直鎖の立体配置の分子の逆末端における、アミド化カルボキシル末端は右側に書かれる。理解されるように、アシル化アミノ末端は、本発明に基づいて他の基により置き換えることができるが、ペプチド及びペプチド誘導体の配向は同一のままである。一般的慣習に従って、左側の最初のアミノ酸は１位に位置し、例えば、Ｎｌｅ（１）はＮｌｅがＮ末端（左側）に位置することを表す。
【００２７】
本明細書では、ホモＡｒｇ及びノルＡｒｇは、厳密にはアミノ酸誘導体であるけれども、アミノ酸として表され得る。同じように、第４級アンモニウム基を含む化合物、ホモＡｒｇ、ノルＡｒｇ及び／又は他のアミノ酸誘導体は、厳密にはペプチド誘導体であるけれども、ペプチドとして表され得る。したがって、当業者は、本文書におけるペプチド分子への言及は（ヘキサペプチド及びα−ＭＳＨ類似体を含む）、それらの誘導体への言及を含むことを理解されたい。
【００２８】
本明細書の全体を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」又は「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変化型は、明記された要素、整数若しくはステップ、又は要素群、整数（複数）又はステップ（複数）の包含を意味するが、いかなる他の要素、整数若しくはステップ、又は要素群、整数（複数）若しくはステップ（複数）も排除しないことを理解されたい。
【００２９】
本発明は、好ましくはα−ＭＳＨ類似体の骨格の一部として第４級アンモニウム基を含むα−ＭＳＨ類似体に関し、α−ＭＳＨ誘導体は好ましくはヘキサペプチドであり、より好ましくは以下の６アミノ酸：−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、式中、Ｘは、Ａｒｇ、ホモＡｒｇ又はノルＡｒｇである、を含むヘキサペプチドである。本発明の一態様に基づいて、Ａｒｇは、有効性増大を含む付加的利益のために、α−ＭＳＨ類似体の骨格中で、ノルＡｒｇ又は好ましくはホモＡｒｇにより置き換えられる。
【００３０】
本発明に基づいて、本化合物は第４級アンモニウム基を好ましくは有する。第４級アンモニウム基は、好ましくはα−ＭＳＨ類似体の骨格の一部であり、好ましくは骨格末端に、最も好ましくはペプチドの１位のアミノ酸単位（本明細書で使用される慣習的表現を使用して、左側）に結び付いており、好ましくはＡｃ単位を置き換えており、好ましくはペプチドの１位のアミノ酸としてＮｌｅ−単位に結び付いている。α−ＭＳＨ類似体骨格に結び付いていることに加えて、第４級アンモニウム基は、それぞれ独立してメチル、エチル、及びプロピル、好ましくはメチル及びエチルから選択される３個の置換基Ｒ１、Ｒ２及びＲ３を含むことが好ましい。第４級アンモニウム基は、中間基−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−によって表されるＲ４基を更に含むことが好ましく、式中、ｎは１〜４であり、好ましくはｎは１〜３であり、より好ましくは１又は３である。第４級アンモニウム基の中間基Ｒ４は、α−ＭＳＨ類似体の骨格に、好ましくは骨格の１位にあるＮｌｅ単位に結び付いていることが好ましい。
【００３１】
好ましい第４級アンモニウム基は、Ｅｔ３ＮＣＨ２ＣＯ−基であり、トリエチルグリシル基と呼ばれ、（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−と書かれ得る。別の好ましい第４級アンモニウム基は、Ｍｅ３Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−基であり、ブチロベタイン基と呼ばれ、（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−と書かれ得る。したがって、本発明に基づいて、第４級アンモニウム基は、トリエチルグリシル基及びブチロベタイン基から好ましくは選択される。
【００３２】
α−ＭＳＨ類似体は、Ａｒｇ、ホモＡｒｇ及びノルＡｒｇから選択される基を好ましくは含む。α−ＭＳＨ化合物はヘキサペプチドであることが好ましい。ヘキサペプチドの骨格は、以下の６個のアミノ酸：−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、式中、ＸはＡｒｇ、ホモＡｒｇ又はノルＡｒｇである、を含み、−Ｎｌｅは第４級アンモニウム基に結び付いていることが好ましい。本発明の一態様に基づいて、Ａｒｇは、有効性増大を含む付加的利益のために、α−ＭＳＨ類似体の骨格中で、ノルＡｒｇ又は好ましくはホモＡｒｇにより置き換えられる。
【００３３】
好ましいＭＣ１Ｒアゴニストのα−ＭＳＨ類似体分子は：Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−Ｒ４−Ｒ５、式中、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−を表し、Ｒ５は好ましくは−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、式中、ＸはＡｒｇ、ホモＡｒｇ及び／又はノルＡｒｇから選択される、であるα−ＭＳＨ類似体を表す、と表され得る。ＭＣ１Ｒアゴニストのα−ＭＳＨ類似体分子は、ＭＣ１Ｒに対してアゴニスト活性を有するα−ＭＳＨの誘導体と定義され、α−ＭＳＨが結合する上記受容体はメラノサイト内でメラニンの産生を開始するものである。
【００３４】
一態様では、本発明は、（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩に関する。別の態様では、本発明は、（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩に関する。別の態様では、本発明は、（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩に関する。別の態様では、本発明は、（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩に関する。別の態様では、本発明は、（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ−ＣＨ２−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ノルＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩に関する。別の態様では、本発明は、（ＣＨ３）３Ｎ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−ノルＡｒｇ−Ｔｒｐ−ＮＨ２又は薬学的に許容されるその塩に関する。
【００３５】
第４級アンモニウム基は、本発明の化合物に正電荷を与え、これは慣習に基づいて、窒素原子の次に＋記号を付けて、すなわち、Ｎ＋と表すことが好ましい。また、環境に応じて、特定のアミノ酸は塩基として作用し、プロトンを引き付け得て、当技術分野で周知のようにペプチドに電荷をもたらす。一態様に基づいて、本化合物は正電荷を帯びており、薬学的に許容される負電荷を帯びた対イオンと好ましくは結合する。対イオンは、負電荷を帯びた薬学的に許容される陰イオンＹ−であることが好ましい。Ｙ−はまた、複数の負電荷を有し得て、その場合、Ｙ−は本発明の１つ又は複数の化合物内の複数のＮ＋陽イオンと結合し；本発明の化合物は、原則的に複数の第４級アンモニウム基又は他の荷電基も有し得ることが理解されよう。薬学的に許容される陰イオンＹ−の例は、ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３ＰＯ４、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、マレイン酸、マロン酸、メタンスルホン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、及びアスコルビン酸などの有機酸又は無機酸から生じる。任意選択で、これらの化合物は、例えばトリフルオロ酢酸塩のようにハロゲン化される。Ｙ−は、アセテート、クロリド、又はスルフェートであることが好ましく、より好ましくはアセテートである。
【００３６】
好ましい化合物の合成を以下に提供し、本発明に基づいて、第４級アンモニウム基とα−ＭＳＨ類似体とをいかに結び付けるかも一般的に示す。
【００３７】
本発明の化合物は、医薬として医薬的使用のための薬学的に活性の薬剤として好ましくは使用される。本発明の医療適用は治療的性質のものであることが理解されよう。本発明の目的のために、疾患予防は処置という用語に包含されると考えられる。
【００３８】
本発明の化合物は、様々な医療適用の処置及び／又は予防用に、好ましくは排他的な治療的性質の医療適用に有益に使用され得る。本発明の化合物の使用への言及は、薬学的に許容される塩だけでなく、好ましくは本発明の化合物のプロドラッグ、立体異性体、互変異性体、水和物、水素化物及び／又は溶媒和物の使用も含むことが好ましい。
【００３９】
本発明の化合物は、本明細書に示される適用及び投与の処置のための医薬製造において使用され得る。
【００４０】
本発明の化合物は、疾患の処置のために使用されることが好ましく、本化合物は、結合を通して、疾患を標的とする薬物としてＭＣ１Ｒ発現を有益に増加させる。このような疾患の例は、色素沈着障害、光線性皮膚症、皮膚癌の予防、及び／又は皮膚細胞中のＤＮＡ修復（ＵＶ暴露の後／ＵＶ暴露に起因する）である。本明細書の開示は、言及したそれぞれの特定の適用のための、本発明のそれぞれの特定の化合物の使用を含むことが当業者によって最も確実に理解されよう。
【００４１】
一態様では、本発明の化合物は、色素沈着（又は皮膚色素沈着）障害の処置用に使用される。このような障害は、色素沈着過剰でもあり得るが、この場合は詳細には色素沈着低下障害が重大である。本発明の化合物は、メラニン形成を誘起し得て、治療的メラニン形成の誘起に有用であることを我々は見出した。
【００４２】
一態様では、本発明は、本発明に基づいた化合物を用いた色素沈着障害の処置としての皮膚中のメラニン形成の誘起に関する。用語「メラニン形成」は、本明細書で使用されるとき、治療的目的で、メラノサイトと呼ばれるメラニン産生細胞によりメラニンを産生する対象の能力と定義される。治療的メラニン形成を生み出す例は、ＵＶ照射損傷から皮膚を保護すること、例えば、皮膚のしわ、日光皮膚炎及び／又は癌の発達などを防止することである。
【００４３】
色素沈着低下障害の重大で好適な例は白斑である。白斑は、メラニンを含む色素の損失を特徴とする慢性の皮膚状態であり、周囲の無影響の有色素の、より暗色の皮膚組織とは異なる色及び外観を有し、それらと対照を成す不規則に蒼白の脱色性の皮膚をもたらす。一態様では、本発明は、白斑の処置、特にＵＶ光処置との組み合わせに関する。本発明の化合物は、白斑の処置に、詳細には白斑部位の再色素沈着のために使用されることが好ましく、したがって、白斑の皮膚と周囲の皮膚組織との間の対照を減少させる。
【００４４】
光線性皮膚症は、ＵＶ照射に対する皮膚の光線過敏に関連する皮膚疾患であり、５種類の一般的部類に分類され得る：特発性光線性皮膚症（多形日光疹（ＰＬＥ）、光線痒疹、種痘様水疱症、慢性光線過敏性皮膚炎、及び日光じん麻疹−ＳＵを含む）；外因性の要因に続発する光線性皮膚症（光毒性反応及び光アレルギー反応を含む）；内因性の要因に続発する光線性皮膚症（骨髄性プロトポルフィリン症−ＥＰＰを含む主にポルフィリン症）；光線増悪性皮膚疾患（自己免疫疾患、感染状態、及び栄養障害を含む）；並びに遺伝性皮膚症。
【００４５】
一態様では、本発明は、光線性皮膚症の処置に関する。本発明の化合物は、光線性皮膚症の処置に、詳細にはＥＰＰ、ＰＬＥ、及びＳＵに対して、最も詳細にはＥＰＰに対して使用されることが好ましい。
【００４６】
皮膚癌は、メラノーマ及び非メラノーマの癌を含む。一般的には、より高い皮膚メラニンレベルは、皮膚癌予防の尺度と考えられる。一態様では、本発明は、癌予防のための本発明の化合物の使用に関する。本発明の化合物は、癌予防、詳細には、メラノーマ及び詳細には非メラノーマを含む皮膚癌の予防に使用されることが好ましい。一般の人々が本発明を通して皮膚癌予防から恩恵を受ける一方、免疫無防備状態の患者（詳細にはＨＩＶ−ＡＩＤＳ患者、同種移植片患者、すなわち、受給者が別の対象から移植片を受け取る、及び／又は免疫抑制薬処方を受けている患者）、受容体機能の損失又は減少に関連する１つ又は複数のＭＣ１Ｒ変異型対立遺伝子を有するヒト対象（好ましくはＶａｌ６０ＬＥＵ（Ｖ６０Ｌ）、Ａｓｐ８４Ｇｌｕ（Ｄ８４Ｅ）、Ｖａｌ９２Ｍｅｔ（Ｖ９２Ｍ）、Ａｒｇ１４２Ｈｉｓ（Ｒ１４２Ｈ）、Ａｒｇ１５１Ｃｙｓ（Ｒ１５１Ｃ）、Ａｒｇ１６０Ｔｒｐ（Ｒ１６０Ｗ）及びＡｓｐ２９４Ｈｉｓ（Ｄ２９４Ｈ）から選択される）を含む特定の患者群が、本発明の化合物の使用から特に恩恵を受ける。
【００４７】
ＵＶ照射が、ＤＮＡに、詳細には真皮（皮膚）細胞のＤＮＡに損傷を起こし得ることは理解される。一態様では、本発明はＤＮＡ修復に関する。したがって、本発明は、好ましくは皮膚内の、詳細には皮膚のＵＶ照射に続くＤＮＡの修復における使用のための本発明の化合物に関する。
【００４８】
本発明の化合物は対象に使用されることが好ましく、上記対象は好ましくは哺乳動物、好ましくはげっ歯類及び／又はヒト、より好ましくはヒトの対象である。
【００４９】
本発明の一態様では、本発明の化合物は、対象の処置用のＵＶ光と併用される。
【００５０】
本明細書で有用な任意の化合物は、当技術分野で既知の様々な投与技術又は送達技術を使用して、対象に投与され得る。投与方式は、処置される対象及び選択された化合物に応じて変わる。様々な態様では、本化合物は、経口的に（又は経腸的に）、非経口的又は局所的に（好ましくは皮膚に対して）投与され得る。
【００５１】
用語「経口的」は、消化管を介した化合物の投与を包含して本明細書で使用される。
【００５２】
用語「非経口的」は、それにより化合物が体循環に導入される、経口投与以外の任意の投与経路を包含して本明細書で使用される。一般的には、非経口投与は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、皮内、眼性、吸入、経鼻、直腸式、腟式、経皮的、バッカル、舌下、又は粘膜性の投与で達成され得る。
【００５３】
用語「粘膜性」は、本明細書で使用されるとき、対象の身体の粘膜（mucosa）（粘膜（mucousmembranes））を利用する方法による化合物の投与を包含し、バッカル、鼻腔内、歯肉、腟式、舌下、肺性、又は直腸組織などであるが、これらに限定されない。
【００５４】
用語「経皮的」は、本明細書で使用されるとき、皮膚に適用され続いて皮膚を通過し体循環へと入る化合物の投与を包含し、経皮製剤、バッカルパッチ、皮膚パッチ、又は経皮的パッチなどであるが、これらに限定されない。
【００５５】
用語「局所的」は、本明細書で使用されるとき、皮膚への投与を包含し、局部効果のための、皮膚、目、又は粘膜領域へのクリーム、ゲル、又は溶液などの適用製剤を含み得る。本発明の化合物は、皮膚投与用の局所用組成物に組み込まれ得る。一態様では、局所用組成物は、皮膚内の適用位置において局部有効性を有し、したがって局部的に投与される。別の態様では、局所用組成物は、化合物が経皮的に（皮膚を通して）血流内へ移動することを必要とし、化合物への全身的暴露をもたらす全身的有効性を有し、したがって経皮的に投与される。
【００５６】
化合物への全身的暴露を達成し得る他の好ましい投与経路は、皮下（「皮膚の下」）及び筋肉内（「筋肉の中」）である。
【００５７】
一態様では、本発明の化合物は、皮膚に局所的に投与される。したがって、本発明は、本発明の化合物を対象の皮膚に投与することに関する。別の態様では、本発明の化合物は、皮膚に非経口的に投与される。したがって、本発明は、本発明の化合物を対象の皮膚を通して投与することに関する。
【００５８】
本発明の化合物は、組成物内に製剤化されることが好ましい。上記組成物は、好ましくは医薬組成物である。上記組成物は、本発明の化合物に加えて、少なくとも１つの薬学的に許容可能な原料を好ましくは含む。そのような薬学的に許容可能な原料の例は、担体、ポリマー、増粘剤、希釈剤、充填剤、緩衝剤、防腐剤及び界面活性剤である。
【００５９】
一態様では、上記組成物は、持続放出性又は制御放出性の製剤であり、化合物への身体のより長い及び／又はより制御された暴露をもたらす。上記組成物は、インプラントであり得る。好ましい一実施形態では、上記化合物は、国際公開第２００６／０１２６６７号に記載されるものなどの長期放出性のインプラント製剤で投与される。
【００６０】
調製プロセス
本発明の化合物は、以下のように好ましくは調製されるが、当業者は本明細書を検討し、本方法を変更したものが利用され得て、また、それらが現在特許請求された発明によって包含されることを理解するであろう。好ましい方法に基づいて、液相又は固相のペプチド合成により、好ましくは続いてクロマトグラフィー精製により、且つ好ましくは凍結乾燥により、本発明の化合物を調製する。
【００６１】
一般的には、本発明は、αＭＳＨ類似体化合物
Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２、
又は薬学的に許容されるその塩の調製に関し、
式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎは、１〜４であり；
Ｘは、Ａｒｇ、ホモＡｒｇ又はノルＡｒｇから選択される、
ステップ１：トリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（４−６）を提供することと；
ステップ２：トリペプチド（４−６）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐとヒスチジン（３）とを連結することと；
ステップ３：第４級アンモニウム化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−とジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とを連結することと；
ステップ４：第４級アンモニウム基を保有するジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（１−２）とテトラペプチドＨｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（３−６）とを連結することと、
により、化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２を調製する。
【００６２】
化合物を精製し（ステップ５）；好ましくは化合物を濃縮し（ステップ６）；且つ好ましくは化合物を凍結乾燥する（ステップ７）ことが好ましい。
【００６３】
詳細には、−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（式のＲ５を表す）、式中、ＸはＡｒｇ又はホモＡｒｇである、を含む本発明の化合物の合成ステップは、以下のより詳細なステップ：
ステップ１：エタノール中のＰｄ／Ｃ触媒を用いた水素化分解によるトリペプチドＤ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ（４−６）の脱保護；
ステップ２ａ：ジクロロメタンとジメチルホルムアミドの混合物中のＨＢＴＵ／ＤＩＰＥＡを用いた、脱保護されたトリペプチド（４−６）と（Ｆｍｏｃ）及び（Ｔｒｔ）保護されたヒスチジン（３）との連結；
ステップ２ｂ：ＨＯＡｃ／Ｈ２０混合物中の保護された（３−６）ペプチドの脱トリチル化；
ステップ２ｃ：Ｈ２Ｏ／メタノール及びＮａＯＨと共にジオキサンの混合物中の（３−６）ペプチドのＦｍｏｃ保護基の開裂；
ステップ３：第４級アンモニウム化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−と、ジペプチドベースの化合物Ｎｌｅ−Ｇｌｕ（Ｏｔ．Ｂｕ）との連結；
ステップ４：ジメチルホルムアミド中のＤＣＣ／ＨＯＯＢｔを用いた、第４級アンモニウム基を既に保有している（１−２）ジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ（Ｏｔ．Ｂｕ）と、（３−６）ペプチドとの連結；
ステップ４ａ：８ＮＨＣｌ及びフェノールを用いた処置による、２（Ｇｌｕ）残基の側鎖からのＯｔ．Ｂｕ保護基の除去；
ステップ５：Ｃ−１８カラム及び精製水／アセトニトリル／ＴＦＡ溶離液を使用した予備ＲＰ−ＨＰＬＣによるペプチドの精製；
ステップ６：同一の成分から構成されているがアセトニトリル含有量がより高い溶離液を用いた、同一のクロマトグラフカラムを使用した濃縮ステップ。有機溶媒を蒸発により除去する；
ステップ７：有機溶媒の蒸発後に得られた水溶液の凍結乾燥
を含む。
【００６４】
これらのより特定の各合成ステップは、上述の一般的な調製方法に独立して導入され、好ましいプロセスに到達し得る。したがって、好ましい各ステップは、本発明の化合物の調製のための好ましい条件を別々に表している。
【００６５】
好ましい態様では、以下に更に説明されるように、ホモＡｒｇ基の導入は、最初のＬｙｓ組み込み及びＬｙｓのホモＡｒｇへの変換により好ましくは起きる。任意選択で、ＬｙｓのホモＡｒｇへの変換は、調製のより後のステップにおいて行われ、例えばトリフルオロアセチル基を用いたＬｙｓ基の一時的保護を必要とする。
【００６６】
本明細書で使用される略語は、当業者に容易に理解されるであろうが、以下のリストを便宜のためにのみ提供する：
Ａｃ：アセチル又はＣＨ３−ＣＯ−
ＢＣＡＴ：ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルビジイミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
Ｅｔ３ＮＣＨ２ＣＯ−基：トリエチルグリシル基
Ｆｍｏｃ：フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ：ベンゾトリアゾリルテトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＯＢＴ：３−ヒドロキシ−３，４ジヒドロ−４オキソ−ベンゾトリアジン
Ｍｅ３Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−基：ブチロベタイン基
ＯｔＢｕ−基：Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル基
Ｔｒｔ−基：トリチル基
ＴＭＳ：トリメチルシリル
【００６７】
第４級アンモニウム基の連結プロセス
第４級アンモニウム基は、容易な加工条件を使用して高収率をもたらし、α−ＭＳＨ類似体に有益に導入され得ることを、我々は驚いたことに見出した。このようなプロセスは、国際公開第２００８０２５０９４号のα−ＭＳＨ類似体への結び付きを可能にし、プロセスを明確にする目的上、この式は、本明細書に参照により組み込まれる。第４級アンモニウム基とα−ＭＳＨ類似体とを結び付けるための好ましいプロセスを以下に述べる。
【００６８】
ペルシリル化基を、好ましくはＮｌｅ基である、α−ＭＳＨ類似体の１位（右末端；Ａｃ基を置き換える側）でアミノ酸に結び付けることが好ましい。本反応プロセスでは、α−ＭＳＨ類似体のペルシリル化基を第４級アンモニウム基で置き換える。
【００６９】
更なる実施形態では、本発明は、第４級アンモニウム基Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎは、１〜４である）
を含むアミノ酸又はペプチドを調製する方法に関し、
第４級アンモニウム化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−の酸塩化物及びペルシリル化基を含むアミノ酸ベースの化合物を使用し、
（ステップａ：）第４級アンモニウム化合物の酸塩化物とアミノ酸ベースの化合物のペルシリル化基とを反応させることによる。
【００７０】
アミノ酸ベースの化合物は、アミノ酸又はペプチドであることが好ましい。アミノ酸ベースの化合物は、Ｎｌｅを末端基として含むことが好ましく、より好ましくはアミノ酸ベースの化合物は、ジペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕであり、最も好ましくはペルシリル化１−２ジペプチドＴＭＳ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ（Ｏｔ．Ｂｕ）−ＯＴＭＳである。第４級アンモニウム化合物Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−の酸塩化物は、ＴＭＳ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ（Ｏｔ．Ｂｕ）−ＯＴＭＳと反応することが好ましい。
【００７１】
第４級アンモニウムの連結プロセスは、上に定義したようなα−ＭＳＨ類似体の調製に使用されることが好ましく、より好ましくは第４級アンモニウム基は、ヘキサペプチドＮｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｘ−Ｔｒｐ−ＮＨ２
式中、ＸはＡｒｇ、ノルＡｒｇ及びホモＡｒｇから選択される、及び上に定義した他の好ましい特定の化合物に結び付いている。本プロセスは、上述のプロセスのステップ３で使用されることが好ましい。
【００７２】
ステップａは、好ましくはアセトニトリルである溶媒中で行われることが好ましい。ステップａでは過剰の酸塩化物が使用されることが好ましい。ステップａにステップｂが続くことが好ましい：類似体の脱シリル化。ステップｂは、好ましくは水飽和酢酸エチルである溶媒中で行われることが好ましい。過剰の酸塩化物は、ステップｂで消滅させられることが好ましい。ステップａ及び／又はステップｂにステップｃが続くことが好ましい：過剰の沈殿物を濾別する。それに続くステップｄを使用することが好ましい：濾液を蒸発により濃縮する。それに続くステップｅを使用することが好ましい：残渣を、好ましくはジメトキシエタンである溶媒で摩砕する。
【００７３】
上述の好ましい第４級アンモニウム化合物は、Ｒ１Ｒ２Ｒ３Ｎ＋−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、メチル、エチル、及びプロピルから独立して選択され；
ｎは、１〜４である）
である。
【００７４】
これらの第４級アンモニウム化合物の酸塩化物が、本プロセスにおいて使用されることが好ましい。特に好ましい第４級アンモニウム化合物は、トリエチルグリシン及びブチロベタインである。それらの酸塩化物は、本発明の上述のプロセスにおいて好ましい。
【００７５】
ホモＡｒｇ単位の化合物への導入プロセス
本発明の化合物は、ホモＡｒｇ単位を含み得る。ホモＡｒｇ単位は、上述のステップ１のトリペプチドにホモＡｒｇ単位として導入され得る。
【００７６】
ホモＡｒｇアミノ酸誘導体は、容易で効率的な加工条件を使用して、経費低減のための高収率をもたらし、本発明のペプチド誘導体に有益に導入され得ることを、我々は驚いたことに見出した。
【００７７】
したがって、本発明は、α−ＭＳＨ類似体の調製プロセスに関し、好ましくは本発明の化合物は、最初にＤ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐを調製し、続いてリジン側鎖の遊離アミノ官能基とグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）との反応により、Ｌｙｓ基をホモＡｒｇ基に変換してホモＡｒｇ基を含む。Ｄ−Ｐｈｅ−ホモＡｒｇ−Ｔｒｐの直接合成の代わりに、最初にリジン基を導入し、次にリジン基をホモＡｒｇに変換して、高収率を伴う経費低減へと導くことを我々は見出した。
【００７８】
上述のステップ１の前に、リジン基を導入してホモＡｒｇに変換することが好ましい。任意選択で、リジン基は上述のステップ１の前に導入されるが、本発明の化合物の調製のより後のステップにおいてホモＡｒｇに変換され得る。その場合には、リジン基の遊離アミノ官能基は好ましくは一時的に保護される。保護は、例えば、トリフルオロアセチル基などを用いて実行され得る。より後のステップで脱保護化の後に、Ｌｙｓはグアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いてホモＡｒｇに変換される。
【実施例】
【００７９】
以下の実施例は、本発明に対して例証的なものであり、本発明の範囲を特定の実施例に限定することを望むものではなく提供される。
【００８０】
実施例１：第４級アンモニウム化合物とジペプチドとの連結
過剰のトリエチルグリシン又はブチロベタインの酸塩化物を、アセトニトリル中のペルシリル化された１−２ジペプチドＴＭＳ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ（Ｏｔ．Ｂｕ）−ＯＴＭＳと連結する。いったん反応が完結すると、過剰の酸塩化物は消滅させられ、ジペプチドは水飽和酢酸エチルの添加により脱シリル化される。沈殿した過剰のトリエチルグリシン又はブチロベタインを濾別し、濾液を蒸発により濃縮し、残渣をジメトキシエタンを用いて摩砕する。収率は７０％であった。
【００８１】
実施例２：化合物１、２、３及び４の調製及びキャラクタリゼーション
本発明の化合物１及び２を、上述の加工ステップ１〜７を使用して調製した。［３−６］ヘキサペプチドに連結するステップ３では、Ｎ−無保護の１−２ジペプチド（Ｎｌｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ））を、上述のステップａ、ｂ、ｃ、ｄ及びｅに従い、好ましい溶媒を用いてそれぞれトリエチルグリシン及びブチロベタインの酸塩化物と反応させた。これらのステップに従い、化合物１に関して、トリエチルグリシル基（Ｅｔ３ＮＣＨ２ＣＯ−）においてアミノ酸の１位（ノルロイシン）に結び付き、化合物２に関して、ブチロベタイン基（Ｍｅ３Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−）においてアミノ酸の１位（ノルロイシン）に結び付くという結果を得た。
【００８２】
本発明の化合物３及び４は、それぞれトリエチルグリシン及びブチロベタインの組み込みを含み、上述の化合物１及び２の合成ステップを使用して一般的に調製されたが、以下のように、アミノ酸アルギニン（５）をより高度の相同体ホモアルギニンによって置き換えるという修正を用いた：ステップ１の合成の前に、保護されたリジン誘導体をトリペプチド４〜６のレベルで組み込み、次にリジントリペプチドを部分的に脱保護し、グアニル化試薬ベンゾトリアゾール−１−カルボキサミジニウムトシレート（ＢＣＡＴ）を用いてリジン側鎖の遊離アミノ官能基をホモアルギニンに変換した。その結果、両方の化合物３及び４はホモＡｒｇ単位を含んだ。更に、化合物３は、アミノ酸の１位（ノルロイシン）に結び付いたトリエチルグリシル基（Ｅｔ３ＮＣＨ２ＣＯ−）を有し、一方、化合物４は、アミノ酸の１位（ノルロイシン）に結び付いたブチロベタイン基（Ｍｅ３Ｎ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ）を有した。
【００８３】
化合物１、２、３及び４の同定及び純度をＭＳ（トリフルオロアセテート陰イオンを含まない）及びＨＰＬＣにより確認し、以下の結果を得た：
【表１】
2018515601.tif 000002
５００ＭＨｚ陽子スペクトルを用いて固有情報を更に提供した。
【００８４】
実施例３：ｃＡＭＰに対する効果
多様な別々の試験において、機能性ＭＣ１Ｒを発現している２名の異なる提供者に由来する２つの異なるヒトのメラノサイト培養物、コード１７５０及び１７５３を使用して、化合物１、２、３及び４の試験を行った。メラノサイトを０．３＊１０６細胞／ウェルの密度で蒔いて培養した。４８時間後、異なる化合物濃度を用いて１時間、メラノサイトを処置した。化合物を用いない対照を全ての実験に含めた。いくつかの実験では、参照化合物ＮＤＰ−ＭＳＨを含めた。５０μｌの１ＮのＨＣｌの添加により反応を停止させ、各ウェルの上澄み液を使用して、Ｓｕｚｕｋｉ  １９９６年（Ｓｕｚｕｋｉ  Ｉ、Ｃｏｎｅ  ＲＤ、Ｉｍ  Ｓ、Ｎｏｒｄｌｕｎｄ  ＪＪ、Ａｂｄｅｌ−Ｍａｌｅｋ  Ｚ：「Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｍｅｌａｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｈｏｒｍｏｎｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＭＣ１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｌａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ」。Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ１３７：１６２７−１６３３、１９９６年）に記載されるように、ラジオイムノアッセイを使用してｃＡＭＰを測定した。各化合物群に含まれる３通りのウェルを用いて、各ウェルからの重複試料の検査を行った。異なる試験からの結果は、メラノサイト培養物における違い及び異なる継代数に起因して、比較することはできない。群ごとの６ｃＡＭＰ測定手段を、対照群の％として表した。ＡＮＯＶＡを使用してニューマンコイルス検定に従って、統計解析を実行した。いくつかの場合では、独立ｔ検定を使用した。
【００８５】
以下は、試験で示された化合物を比較する結果である：
試験１では、化合物１、２、及び３をメラノサイト１７５０に関して評価し、ｃＡＭＰを測定した。
【００８６】
化合物２は、最低投与量（１０−８Ｍ）で、その最大効果（対照に対して）を達成し、これは対照と比較してｐ＜０．０５で統計的有意差があった。
【００８７】
化合物３は、最高の全体的有効性値（１０−７Ｍで対照に対して３２７％；これは対照と比較してｐ＜０．０５で統計的有意差があった）を示した。
【００８８】
試験２では、化合物１、２、及び３をメラノサイト１７５３に関して評価し、ｃＡＭＰを測定した。
【００８９】
化合物１は、最高の全体的有効性値（１０−７Ｍで対照に対して４３１％）を達成し、これは対照と比較してｐ＜０．０５で統計的有意差があった。
【００９０】
化合物２は、１０−１１Ｍで有効性を既に示した（化合物の最低投与量が有効性を示し、これは対照と比較してｐ＜０．０５で統計的有意差があった）。
【００９１】
化合物３は、最低投与量（１０−９Ｍ）で、その最大効果を達成し、これは対照と比較してｐ＜０．０５で統計的有意差があった。
【００９２】
試験３では、化合物４及び参照ＮＤＰ−ＭＳＨをメラノサイト１７５３及びｃＡＭＰに関して評価した。
【００９３】
化合物４は、参照化合物ＮＤＰ−ＭＳＨより機能が優れ、最高有効性を達成し（１０−７Ｍで２５３％対１０−７Ｍで２０２％）、これは対照と比較してｐ＜０．０５で統計的有意差があった。
【００９４】
化合物１、２、３及び４は、ＭＣ１Ｒ応答のセカンドメッセンジャーであるｃＡＭＰの測定試験に関して優れた有効性結果を示したと結論を下す。
【００９５】
実施例４：チロシナーゼ活性に対する効果
多様な別々の試験において、機能性ＭＣ１Ｒを発現している２名の異なる提供者に由来する２つの異なるヒトのメラノサイト培養物、コード１７５０及び１７５３を使用して、化合物１、２、３及び４の試験を行った。メラノサイトを０．３＊１０６細胞の密度で６０ｍｍディッシュに蒔いて培養した（３通りのディッシュ／群）。４８時間後、メラノサイトを１日おきに合計６日間、各化合物の異なる投与量を用いて処置した。化合物を用いない対照を全ての実験に含めた。いくつかの実験では、参照化合物ＮＤＰ−ＭＳＨを含めた。処置５日目、３Ｈ−ラベル付きの、チロシナーゼに対する基体であるチロシンを添加し、２４時間後、Ｓｕｚｕｋｉらによって記載されたように（実施例３を参照されたい）、上澄み液をチロシナーゼ活性に関する検査を行うために保存した。各群に含まれる３通りのディッシュを用いて、それぞれからの重複試料の検査を行った。各ディッシュ内の細胞数を計数し、チロシナーゼ活性をｄｐｍ／１０６細胞数及び対照の％として表した。別々の試験間の試験結果は、メラノサイト培養物における違い及び異なる継代数に起因して、比較することはできない。ＡＮＯＶＡを使用してニューマンコイルス検定に従って、統計解析を実行した。
【００９６】
このチロシナーゼ活性化試験は、上述のｃＡＭＰ試験の早期のセカンドメッセンジャー効果と比較して、ＭＣ１Ｒ活性化後の後期の現象に関連することが理解されよう。上に指摘したように、チロシナーゼ活性は処置日数を必要とする。以下は、試験で示された化合物の比較結果である：
試験４では、化合物１、２及び参照ＮＤＰ−ＭＳＨをメラノサイト１７５０に関して評価し、チロシナーゼを測定した。
【００９７】
化合物１及び２は両方とも、参照化合物ＮＤＰ−ＭＳＨより正に機能が優れ、より高い有効性（１７８％対１７１％対１６６％）を有し、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍの濃度で、両方とも対照と比較して（ｐ＜０．０５で）統計的有意差があった。
【００９８】
試験５では、化合物３及び４をメラノサイト１７５０に関して評価し、チロシナーゼを測定した。
【００９９】
化合物３及び４は、同様の有効性を示し、これは１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍの濃度で、対照と比較してｐ＜０．０５で統計的有意差があった。
【０１００】
試験６では、化合物１、２、３及び４をメラノサイト１７５３に関して評価し、チロシナーゼを測定した。
【０１０１】
化合物１及び２は、同一の投与量で同様の有効性を示し、これは１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍの濃度で、対照と比較して（ｐ＜０．０５で）統計的有意差があった。
【０１０２】
化合物１及び２は両方とも化合物３及び４より勝り、同一の投与量で同様の有効性も示し、１０−１０Ｍ〜１０−７Ｍの濃度で、両方とも対照と比較してｐ＜０．０５で統計的有意差があった。
【０１０３】
化合物１、２、３及び４はまた、チロシナーゼの測定試験においても優れた有効性を示し、ＭＣ１Ｒに関するアゴニスト活性に続く後期の現象を表していると結論を下す。
【０１０４】
広範に記載したように、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示されるように、多数の変形及び／又は修正が本発明に対してなされ得ることが当業者には理解されよう。したがって、本実施形態は、全ての事項において例証的なものとして、限定的なものではないと考えられる。
【国際調査報告】
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