(57)【要約】本発明は、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を被験体に投与することによって、被験体においてＡＬＳなどの神経学的疾患を処置するための方法を提供する。本発明はまた、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を投与することによって神経炎症を処置するための方法も提供する。一局面において、１１〜１６ヌクレオチドの配列を含むｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を被験体に投与するステップを含む、それを必要とする上記被験体において神経学的疾患を処置するための方法が提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１１〜１６ヌクレオチドの配列を含むｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を被験体に投与するステップを含む、それを必要とする前記被験体において神経学的疾患を処置するための方法であって、
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、ｍｉＲ−１５５の成熟配列に対して完全に相補的であり、かつ完全ホスホロチオエート骨格を有し；
前記オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の３ヌクレオチドが、ロックトヌクレオチドであり、前記オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドが、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドである、方法。
【請求項２】
前記神経学的疾患が筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から６番目のヌクレオチドが、ＤＮＡヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から４番目のヌクレオチドが、ロックトヌクレオチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、少なくとも９個のロックトヌクレオチドを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が１２ヌクレオチドの長さを有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が配列番号２３の配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの細胞においてｍｉＲ−１５５の活性または機能を低減する、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの細胞においてｍｉＲ−１５５標的遺伝子の発現または活性を上方調節する、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの細胞において恒常性遺伝子の発現または活性を上方調節する、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの炎症細胞の活性を低減または阻害する、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、脊髄中への炎症細胞の動員における低減を示す、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの細胞において、組織破壊的遺伝子の発現もしくは活性を下方調節する、および／または組織保護的遺伝子の発現もしくは活性を上方調節する、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記炎症細胞が、ニューロン細胞、単球およびミクログリアからなる群より選択される、請求項８から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
１１〜１６ヌクレオチドの配列を含むｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を投与するステップを含む、神経学的疾患において炎症細胞の活性を低減するための方法であって、
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、ｍｉＲ−１５５の成熟配列に対して完全に相補的であり、かつ完全ホスホロチオエート骨格を有し；
前記オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の３ヌクレオチドが、ロックトヌクレオチドであり、前記オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドが、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドである、方法。
【請求項１６】
１１〜１６ヌクレオチドの配列を含むｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を被験体に投与するステップを含む、それを必要とする前記被験体において神経炎症を処置または好転させるための方法であって、
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、ｍｉＲ−１５５の成熟配列に対して完全に相補的であり、かつ完全ホスホロチオエート骨格を有し；
前記オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の３ヌクレオチドが、ロックトヌクレオチドであり、前記オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドが、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドである、方法。
【請求項１７】
それを必要とする前記被験体が、神経学的疾患に罹患しているか、または神経学的疾患を発症するリスクがある、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記神経学的疾患が筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から６番目のヌクレオチドが、ＤＮＡヌクレオチドである、請求項１５から１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から４番目のヌクレオチドが、ロックトヌクレオチドである、請求項１５から１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、少なくとも９個のロックトヌクレオチドを含む、請求項１５から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が１２ヌクレオチドの長さを有する、請求項１５から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が配列番号２３の配列を有する、請求項１５から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの細胞においてｍｉＲ−１５５の活性または機能を低減する、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの細胞においてｍｉＲ−１５５標的遺伝子の発現または活性を上方調節する、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの細胞において恒常性遺伝子の発現または活性を上方調節する、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの炎症細胞の活性を低減または阻害する、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、脊髄中への炎症細胞の動員における低減を示す、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記オリゴヌクレオチド阻害剤が、投与の際に、ＣＮＳの細胞において、組織破壊的遺伝子の発現もしくは活性を下方調節する、および／または組織保護的遺伝子の発現もしくは活性を上方調節する、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記炎症細胞が、ニューロン細胞、単球およびミクログリアからなる群より選択される、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
神経学的疾患の処置のために被験体を選択するための方法であって、前記被験体のＣＮＳ細胞において、ＩＬ７ｒ、Ｔｌｒ６、Ｍｅｆ２ａ、Ｉｎｐｐ５ｄ、Ｃｔｔｎｂｐ２ｎｌ、１８１００１１Ｏ１０Ｒｉｋ、Ｆａｄｓ１、Ｃｕｘ１、Ａｐ３ｄ１、Ｘ９９３８４、Ｏｌｆｍｌ３、Ｍａｆｂ、Ｃｓｆ１ｒ、Ｔｇｆｂｒ２、Ｂａｃｈ１、Ｓａｌｌ１、Ｒａｐｇｅｆ５、ＣＥＢＰＢ、ＣＣｎｄ１、Ｍｓｒ１、Ｊａｒｉｄ２、Ｍｒ１、ＧｎａｓおよびＭｅｃｐ２からなる群より選択される１個または複数の遺伝子の発現のレベルを決定するステップ；前記被験体の前記ＣＮＳ細胞における前記１個または複数の遺伝子の前記レベルを、前記１個または複数の遺伝子の参照レベルと比較するステップ；ならびに前記参照レベルと比較して、前記ＣＮＳ細胞における前記１または複数の遺伝子の前記レベルにおける増加または減少を有する被験体を前記神経学的疾患の処置のために選択するステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１５年６月５日に出願された米国仮出願第６２／１７１，７４３号（この内容は、その全体が参考として本明細書に援用される）への優先権の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤およびその組成物に関する。本発明は、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を投与することによって、それを必要とする被験体において神経学的疾患および／または神経炎症（ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）を処置または予防するための方法もまた提供する。ｍｉＲ−１５５の活性または機能は、オリゴヌクレオチド阻害剤の投与後に、被験体の中枢神経系（ＣＮＳ）細胞において低減される。
【背景技術】
【０００３】
臨床試料のｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）プロファイリングにより、ｍｉＲ−１５５が、散発性および家族性の両方の筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）患者の脊髄および末梢単球において上方調節されることが実証されている（Ｂｕｔｏｖｓｋｙら、２０１２年；Ｋｏｖａｌら、２０１３年）。ＡＬＳは、種々の神経障害性細胞機構によって開始され得る複雑な疾患である。開始事象に関わらず、ＡＬＳは、単球性炎症細胞の局所的および全身的なＭ１極性化と関連する。ＡＬＳ患者および動物モデルでは、ミクログリアを含む非ニューロン細胞の炎症が、ニューロン死に寄与する（Ｂｏｉｌｌｅｅら、２００６年；Ｎａｇａｉら２００７年）。脊髄に入る脊髄ミクログリア細胞および循環単球のＭ１極性化は、ｍｉＲ−１５５の増加した発現と関連し、少なくとも部分的にその結果である（Ｂｕｔｏｖｓｋｙら、２０１２年）。ＡＬＳの前臨床モデルであるＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスでは、ｍｉＲ−１５５発現は、常在性ミクログリアおよび末梢単球において上方調節される（Ｂｕｔｏｖｓｋｙら、２０１２年；Ｋｏｖａｌら、２０１３年）。ＳＯＤ１Ｇ９３ＡマウスにおけるｍｉＲ−１５５の遺伝的欠失は、有意に延長された生存（５１日間）、脊髄中への末梢単球の低減された動員、およびＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスにおける病的状態に特徴的な調節不全のミクログリアシグネチャーの逆転を生じる（Ｂｕｔｏｖｓｋｙら、２０１４年）。さらに、ｍｉＲ−１５５の遺伝的消失は、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスの脾臓Ｌｙ６ＣＨｉ単球および脊髄におけるｍｉＲＮＡ／遺伝子およびタンパク質シグネチャーを、組織破壊的なＭ１型から組織保護的なＭ２型へとシフトさせる。さらに、直接的（脳室内注射）または全身的投与によるｍｉＲ−１５５の薬理学的阻害はまた、ＳＯＤ１Ｇ９３Ａマウスの生存を改善し（Ｋｏｖａｌら、２０１３年；Ｂｕｔｏｖｓｋｙら、２０１４年）、疾患関連ミクログリアシグネチャーを逆転させる（Ｂｕｔｏｖｓｋｙら、２０１４年）。
【０００４】
抗ｍｉＲ−１５５の薬理学的投与を評価する以前の研究（Ｋｏｖａｌら、２０１３年；Ｂｕｔｏｖｓｋｙら、２０１４年）は、マウスｍｉＲ−１５５を標的化する化合物を利用した。マウスｍｉＲ−１５５配列（ＵＵＡＡＵＧＣＵＡＡＵＵＧＵＧＡＵＡＧＧＧＧＵ）は、ガイド鎖の１２位における単一のヌクレオチドが、ヒトｍｉＲ−１５５配列（ＵＵＡＡＵＧＣＵＡＡＵＣＧＵＧＡＵＡＧＧＧＧＵ）とは異なる（ｍｉＲＢａｓｅ  ２１、ｗｗｗ．ｍｉｒｂａｓｅ．ｏｒｇ）。以前の研究は、ＡＬＳの処置における抗ｍｉＲ−１５５化合物の役割を示しているが、本発明は、ヒトｍｉＲ−１５５の活性または機能を下方調節するさらなるオリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、被験体の細胞においてｍｉＲ−１５５の活性または機能をモジュレートするためのオリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与は、投与後に、被験体のＣＮＳ細胞においてｍｉＲ−１５５の活性または機能を下方調節する。ある特定の実施形態では、ＣＮＳ細胞は、単球、リンパ球、ミクログリア、マクロファージおよびニューロン細胞である。一部の実施形態では、ＣＮＳ細胞には、脊髄中に遊走できる末梢血中の細胞；例えば、末梢血単球、末梢血リンパ球などが含まれる。
【０００６】
一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、１１〜１６ヌクレオチドの配列を含み、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ｍｉＲ−１５５の成熟配列に対して完全に相補的であり、かつ完全ホスホロチオエート骨格を有し；オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の３ヌクレオチドは、ロックトヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から４番目のヌクレオチドはロックトヌクレオチドである、および／またはオリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から６番目のヌクレオチドはＤＮＡヌクレオチドである。
【０００７】
一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、１２ヌクレオチドの長さを有する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、少なくとも９個のロックトヌクレオチドを含有する。一部の他の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、最大で１、２、３、４または５個のＤＮＡヌクレオチドを含有する。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドは、ＤＮＡヌクレオチドである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも６番目および／または８番目のヌクレオチドは、ＤＮＡヌクレオチドである。なおさらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、５’末端から２番目、６番目および８番目の位置にＤＮＡヌクレオチドを含む。
【０００８】
一実施形態では、本発明に従うｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳの炎症細胞の活性を低減または阻害する。炎症細胞には、リンパ球、単球、マクロファージおよびミクログリアが含まれる。一実施形態では、単球、リンパ球、ＮＫ細胞、好中球などの末梢血中の細胞は、脊髄中に遊走し、ＣＮＳの炎症細胞として作用し得る。一部の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、脊髄中への炎症細胞の動員または遊走を下方調節する。
【０００９】
別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳ細胞において、ｍｉＲ−１５５の１個または複数の標的遺伝子を上方調節する。さらに別の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳの細胞において恒常性遺伝子の発現または活性を上方調節する。さらに別の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳの細胞において、組織破壊的遺伝子の発現もしくは活性を下方調節する、および／または組織保護的遺伝子の発現もしくは活性を上方調節する。
【００１０】
本発明は、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を含む組成物およびその使用もまた提供する。一実施形態では、本発明は、治療有効量の本発明のｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を被験体に投与するステップを含む、それを必要とする被験体において神経学的疾患を処置するための方法を提供する。ｍｉＲ−１５５の活性または機能は、オリゴヌクレオチド阻害剤の投与後に、被験体のＣＮＳ細胞において低減される。一実施形態では、神経学的疾患は、ＡＬＳである。
【００１１】
一実施形態では、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤を被験体に投与するステップを含む、それを必要とする被験体において神経炎症を処置または好転（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）させるための方法を提供する。これらの実施形態では、神経炎症のための処置を必要とする被験体は、ＡＬＳなどの神経学的疾患に罹患している可能性がある、またはそれを発症するリスクがある。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、抗ｍｉＲ−１５５化合物をトランスフェクトしたＭＶ４−１１ヒト単球性細胞における、ｍｉＲ−１５５の２個の直接的なシードマッチした標的遺伝子の発現を示す。
【００１３】
【図２】図２Ａは、未処理細胞と比較した、抗ｍｉＲ−１５５化合物と共に受動的にインキュベートしたミクログリア細胞における、直接的なシードマッチした標的ＣＳＦ１Ｒの相対的発現を示す。図２Ｂは、未処理細胞と比較した、抗ｍｉＲ−１５５化合物と共に受動的にインキュベートしたミクログリア細胞における、第２のシードマッチした標的ＯＬＦＭＬ３の相対的発現を示す。
【００１４】
【図３】図３は、抗ｍｉＲ−１５５化合物で処置したＳＯＤ１マウスから単離したミクログリア細胞における、予測されたまたは検証されたｍｉＲ−１５５のシードマッチした標的における遺伝子発現変化の「ヒートマップ」表示を示す。
【００１５】
【図４】図４は、≧２の抗ｍｉＲ−１５５化合物によって≧４のマウスにおいて上方調節されたｍｉＲ−１５５標的遺伝子のセットの発現における変化倍数（ｆｏｌｄ−ｃｈａｎｇｅ）を示す。
【００１６】
【図５】図５は、抗ｍｉＲ−１５５化合物で処置したマウスにおける、ミクログリア恒常性遺伝子についてのアノテートされた遺伝子発現プロファイルを示す。
【００１７】
【図６】図６は、≧２の抗ｍｉＲ−１５５化合物によって≧４のマウスにおいて上方調節されたミクログリア恒常性遺伝子のセットの発現における変化倍数を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、ｍｉＲ−１５５の活性または機能を阻害するオリゴヌクレオチド阻害剤、ならびにその組成物および使用を提供する。ヒトでは、ｍｉＲ−１５５は、ＭＩＲ１５５宿主遺伝子即ちＭＩＲ１５５ＨＧによってコードされ、ヒト第２１染色体上に位置する。ｐｒｅ−ｍｉＲ−１５５の両方のアームが成熟ｍｉＲＮＡを生じ得るので、ｐｒｅ−ｍｉＲ−１５５のプロセシング産物は、ｍｉＲ−１５５−５ｐ（５’アームから）およびｍｉＲ−１５５−３ｐ（３’アームから）と称される。ヒトｍｉＲ−１５５−５ｐおよびｍｉＲ−１５５−３ｐについての成熟配列を以下に示す：
ヒト成熟ｍｉＲ−１５５−５ｐ（配列番号１）
５’−ＵＵＡＡＵＧＣＵＡＡＵＣＧＵＧＡＵＡＧＧＧＧＵ−３’
ヒト成熟ｍｉＲ−１５５−３ｐ（配列番号２）
５’−ＣＵＣＣＵＡＣＡＵＡＵＵＡＧＣＡＵＵＡＡＣＡ−３’
【００１９】
ｍｉＲ−１５５−５ｐは、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球および顆粒球を含む造血細胞において発現される（Ｌａｎｄｇｒａｆら２００７年）。ｍｉＲ−１５５−５ｐは、骨髄造血および赤血球形成の両方の制御において非常に重要な分子である。このｍｉＲＮＡは、初期幹前駆段階にある造血幹前駆細胞において高度に発現され、より成熟した造血細胞（例えば、リンパ球、赤血球）へのそれらの分化をブロックする。ｍｉＲ−１５５−５ｐ発現は、これらの系譜に沿って細胞が成熟するにつれて漸進的に減少し、成熟造血細胞では約２００分の１である（Ｍａｓａｋｉら２００７年；Ｇｅｒｌｏｆｆら２０１５年）。
【００２０】
以前の研究により、ｍｉＲ−１５５がＡＬＳ患者の脊髄および末梢単球において上方調節されることが示されている。米国特許出願第１４／３５０，９７７号（ＵＳ２０１４／０２３５６９７として公開）は、ｍｉＲ−１５５の阻害剤を投与することによって、ＡＬＳなどの神経変性疾患を診断および処置する方法を開示している。この出願は、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００２１】
本発明は、ヒトｍｉＲ−１５５の活性または機能を低減または阻害するオリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。本発明に関して、用語「オリゴヌクレオチド阻害剤」、「抗ｍｉＲ」、「アンタゴニスト」、「アンチセンスオリゴヌクレオチド即ちＡＳＯ」、「オリゴマー」、「抗ｍｉｃｒｏＲＮＡオリゴヌクレオチド即ちＡＭＯ」または「ミックスマー（ｍｉｘｍｅｒ）」は、広く使用され、ｍｉＲＮＡに完全にまたは部分的にハイブリダイズし、それによって標的ｍｉＲＮＡの機能または活性を抑制することによって、標的ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）の活性または機能を阻害する、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、改変型リボヌクレオチド、改変型デオキシリボヌクレオチドまたはそれらの組合せを含むオリゴマーを包含する。
【００２２】
用語「ｍｉＲ−１５５」は、本明細書で使用する場合、ｐｒｉ−ｍｉＲ−１５５、ｐｒｅ−ｍｉＲ−１５５、ｍｉＲ−１５５−５ｐおよびｈｓａ−ｍｉＲ−１５５−５ｐを含む。
【００２３】
一実施形態では、本発明は、１１〜１６ヌクレオチドの長さを有するｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を提供する。種々の実施形態では、ｍｉＲ−１５５を標的化するオリゴヌクレオチド阻害剤は、１１、１２、１３、１４、１５または１６ヌクレオチド長である。一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、１２ヌクレオチドの長さを有する。
【００２４】
本発明に従うｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤の配列は、生理的条件下でｍｉＲ−１５５−５ｐにハイブリダイズし、被験体の細胞においてｍｉＲ−１５５−５ｐの活性または機能を阻害するのに十分に、ｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列に対して相補的である。例えば、一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列に対して少なくとも部分的に相補的な配列、例えば、ｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列に対して少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％相補的な配列を含む。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列に対して実質的に相補的、即ち、ｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列に対して少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％相補的であり得る。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列に対して１００％または完全に相補的な配列を含む。オリゴヌクレオチド阻害剤の配列は、オリゴヌクレオチド阻害剤配列が、天然に存在するヌクレオチドの代わりに改変型ヌクレオチドを含む場合であっても、ｍｉＲ−１５５に対して相補的であるとみなされると理解される。例えば、ｍｉＲ−１５５の成熟配列が、特定の位置においてグアノシンヌクレオチドを含む場合、オリゴヌクレオチド阻害剤は、対応する位置において、改変型シチジンヌクレオチド、例えば、ロックトシチジンヌクレオチドまたは２’−フルオロ−シチジンを含み得る。
【００２５】
用語「約」は、本明細書で使用する場合、＋／−１０％の、より好ましくは＋／−５％の変動を包含することを意図し、かかる変動は、本発明の実施に適切である。
【００２６】
一部の実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤の配列全体が、ヒトｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列に対して完全に相補的である。種々の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の配列が部分的に、実質的にまたは完全に相補的であるヒトｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列は、配列番号１の５’末端からヌクレオチド１〜１７、またはヌクレオチド２〜１７、またはヌクレオチド２〜１６、またはヌクレオチド２〜１５、またはヌクレオチド２〜１４、またはヌクレオチド２〜１３、またはヌクレオチド２〜１２を含む。一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の配列が部分的に、実質的にまたは完全に相補的であるヒトｍｉＲ−１５５−５ｐの成熟配列は、配列番号１の５’末端からヌクレオチド２〜１３を含む。
【００２７】
一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、少なくとも１つの骨格改変、例えば、少なくとも１つのホスホロチオエート、モルホリノまたはホスホノカルボキシレート（ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）ヌクレオチド間連結を含有する（例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，６９３，１８７号および同第７，０６７，６４１号を参照のこと）。ある特定の実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、完全にホスホロチオエート連結される。
【００２８】
一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、少なくとも１個の改変型ヌクレオチド、例えば、ロックトヌクレオチド、または他の糖もしくは塩基改変を含有するヌクレオチドを含有する。用語「ロックトヌクレオチド」、「ロックト核酸単位」、「ロックト核酸残基」または「ＬＮＡ単位」は、本開示を通じて相互交換可能に使用され得、二環式ヌクレオシドアナログを指す。例えば、適切なオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＢＳＮを含有するオリゴヌクレオチドとそれらの相補的標的鎖との間で形成される複合体に増強された熱安定性を付与する１つまたは複数の「コンフォメーション的に拘束された」または二環式糖ヌクレオシド改変（ＢＳＮ）から構成され得る。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、２’−Ｏ，４’−Ｃ−メチレンリボヌクレオシド（構造Ａ）を含有するロックトヌクレオチド即ちＬＮＡを含有し、ここで、リボース糖部分は、「ロックト」コンフォメーションである。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、少なくとも１つの２’，４’−Ｃ架橋２’デオキシリボヌクレオシド（ＣＤＮＡ  構造Ｂ）を含有する。例えば、その両方がそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，４０３，５６６号およびＷａｎｇら（１９９９年）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、９巻：１１４７〜１１５０頁を参照のこと。さらに別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、構造Ｃで示される構造を有する改変型ヌクレオシドを少なくとも１個含有する。ｍｉＲ−１５５を標的化するオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＢＳＮ（ＬＮＡ、ＣＤＮＡなど）または他の改変型ヌクレオチドと、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドとの組合せを含有し得る。
【化１】
2018517704.tif 000003
【００２９】
本発明に関してその対応するロックトヌクレオチドによってＤＮＡまたはＲＮＡヌクレオチドを置換することに言及する場合、用語「対応するロックトヌクレオチド」は、ＤＮＡ／ＲＮＡヌクレオチドが、それが置き換えたＤＮＡ／ＲＮＡヌクレオチドと同じ天然に存在する窒素性塩基、または化学的に改変された同じ窒素性塩基を含有するロックトヌクレオチドによって置き換えられていることを意味することを意図する。例えば、窒素性塩基Ｃを含有するＤＮＡヌクレオチドの対応するロックトヌクレオチドは、同じ窒素性塩基Ｃ、または５−メチルシトシンなどの、化学的に改変された同じ窒素性塩基Ｃを含有し得る。
【００３０】
用語「非ロックトヌクレオチド」は、ロックトヌクレオチドとは異なるヌクレオチドを指す、即ち、用語「非ロックトヌクレオチド」は、ＤＮＡヌクレオチド、ＲＮＡヌクレオチド、ならびに改変がロックト改変でない点を除いて塩基および／または糖が改変された改変型ヌクレオチドを含む。
【００３１】
一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、少なくとも９個のロックトヌクレオチドを含有する。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の３ヌクレオチドは、ロックトヌクレオチドである。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の４ヌクレオチドは、ロックトヌクレオチドである。さらに別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から最初のヌクレオチドは、ロックトヌクレオチドである。
【００３２】
ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個または少なくとも５個のＤＮＡヌクレオチドを含有する。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドは、ＤＮＡヌクレオチドである。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目および６番目のヌクレオチドは、ＤＮＡヌクレオチドである。さらに別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目、６番目および８番目のヌクレオチドは、ＤＮＡヌクレオチドである。
【００３３】
一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、１１〜１６ヌクレオチドの配列を含み、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ｍｉＲ−１５５の成熟配列に対して完全に相補的であり、かつ完全ホスホロチオエート骨格を有し；オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の３ヌクレオチドは、ロックトヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から４番目のヌクレオチドもまた、ロックトヌクレオチドである。なおさらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から６番目のヌクレオチドはＤＮＡヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、１２ヌクレオチドの長さを有する。一部の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、少なくとも９個のロックトヌクレオチドを含有する。
【００３４】
一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤は、配列番号２３の配列を含む。
【００３５】
種々の実施形態では、ｍｉＲ−１５５−５ｐのオリゴヌクレオチド阻害剤は、表１から選択される配列を有する。
【表１】
2018517704.tif 000004
【００３６】
本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、塩基改変または置換を有する改変型ヌクレオチドを含み得る。ＲＮＡ中の天然または未改変の塩基は、プリン塩基アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）（ＤＮＡはチミン（Ｔ）を有する）である。複素環式塩基部分とも称される改変型塩基には、他の合成および天然の核酸塩基、例えば、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミンおよび２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピニルウラシルおよびシトシン、ならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルならびに他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ（５−ブロモ、５−トリフルオロメチルならびに他の５−置換ウラシルおよびシトシンを含む）、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、２−Ｆ−アデニン、２−アミノ−アデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニンならびに３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンが含まれる。ある特定の実施形態では、ｍｉＲ−１５５を標的化するオリゴヌクレオチド阻害剤は、塩基改変（例えば、５−メチルシチジン）と組み合わせて、１つまたは複数のＢＳＮ改変を含む。
【００３７】
本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、改変型糖部分を有するヌクレオチドを含み得る。代表的な改変型糖には、炭素環式または非環式の糖、それらの２’位、３’位または４’位のうち１つまたは複数において置換基を有する糖、および糖の１個または複数の水素原子の代わりに置換基を有する糖が含まれる。ある特定の実施形態では、糖は、２’位に置換基を有することによって改変される。さらなる実施形態では、糖は、３’位に置換基を有することによって改変される。他の実施形態では、糖は、４’位に置換基を有することによって改変される。糖が、それらの位置のうち１つよりも多くにおいて改変を有し得ること、またはオリゴヌクレオチド阻害剤が、１つの位置において糖改変を有する１個もしくは複数のヌクレオチドを有し得、異なる位置において糖改変を有する１個もしくは複数のヌクレオチドもまた有し得ることもまた企図される。
【００３８】
本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤中の企図される糖改変には、ＯＨ；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−もしくはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−もしくはＮ−アルケニル；Ｏ−、Ｓ−もしくはＮ−アルキニル；またはＯ−アルキル−Ｏ−アルキルから選択される置換基が含まれるがこれらに限定されず、ここで、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルで置換されていても置換されていなくてもよい。一実施形態では、改変には、２’−メトキシエトキシ（２’−Ｏ−（２−メトキシエチル）または２’−ＭＯＥとしても公知の２’−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）、即ち、アルコキシアルコキシ基が含まれる。別の改変には、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、即ち、２’−ＤＭＡＯＥとしても公知のＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基、および２’−ジメチルアミノエトキシエトキシ（当該分野で２’−Ｏ−ジメチル−アミノ−エトキシ−エチルまたは２’−ＤＭＡＥＯＥとしても公知）即ち、２’−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）２が含まれる。
【００３９】
さらなる糖置換基には、アリル（−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２）、−Ｏ−アリル、メトキシ（−Ｏ−ＣＨ３）、アミノプロポキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）およびフルオロ（Ｆ）が含まれる。２’位（２’−）上の糖置換基は、アラビノ（上）位置またはリボ（下）位置にあり得る。１つの２’−アラビノ改変は、２’−Ｆである。他の類似の改変は、糖部分上の他の位置、特に、３’末端ヌクレオシド上または２’−５’連結されたオリゴヌクレオチド中の糖の３’位、および５’末端ヌクレオチドの５’位においてもなされ得る。ある特定の実施形態では、糖改変は、２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル）、２’−ハロ（例えば、２’−フルオロ、２’−クロロ、２’−ブロモ）および４’チオ改変である。
【００４０】
その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６，８３８，２８３号に記載されるものなどの、安定性を増強し、効力を改善するためのオリゴヌクレオチド阻害剤の他の改変が当該分野で公知であり、本発明の方法における使用に適切である。例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ送達および安定性を促進するために、オリゴヌクレオチド阻害剤は、その３’末端において、コレステロール部分などのステロイド、ビタミン、脂肪酸、炭水化物もしくはグリコシド、ペプチド、または他の小分子リガンドに連結され得る。
【００４１】
被験体への本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与は、被験体の細胞においてｍｉＲ−１５５の活性または機能を低減または阻害する。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、中枢神経系（ＣＮＳ）の細胞においてｍｉＲ−１５５の活性または機能を低減させる。用語「ＣＮＳの細胞」または「ＣＮＳの炎症細胞」は、本明細書で使用する場合、リンパ球、単球、マクロファージ、グリア細胞、例えば、ミクログリアおよびアストロサイト、ならびにニューロン細胞を含む。一実施形態では、ＣＮＳの細胞は、脊髄中に遊走できる、末梢もしくは循環単球、または末梢血リンパ球である。別の実施形態では、ＣＮＳの細胞は、ミクログリアである。
【００４２】
一部の実施形態では、本発明のある特定のオリゴヌクレオチド阻害剤は、他のｍｉＲ−１５５阻害剤と比較して、末梢単球またはミクログリアなどのＣＮＳの細胞において、ｍｉＲ−１５５の活性または機能のより高い阻害を示し得る。用語「他のｍｉＲ−１５５阻害剤」は、核酸阻害剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗ｍｉＲ、アンタゴｍｉＲ、ミックスマー、ギャップマー（ｇａｐｍｅｒ）、アプタマー、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡもしくは低分子ヘアピンＲＮＡ；抗体もしくはその抗原結合性断片；および／またはｍｉＲ−１５５の発現もしくは活性を阻害する薬物を含む。本発明の特定のオリゴヌクレオチド阻害剤は、本発明の他のオリゴヌクレオチド阻害剤と比較して、ＣＮＳ細胞において、ｍｉＲ−１５５のより高い阻害を示し得る可能性がある。用語「より高い」は、本明細書で使用する場合、定量的により多いこと、または統計的に有意により多いことを指す。
【００４３】
本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与は、被験体の細胞においてｍｉＲ−１５５標的遺伝子の発現または活性を上方調節する。ｍｉＲ−１５５の標的遺伝子には、ＩＬ７ｒ、Ｔｌｒ６、Ｍｅｆ２ａ、Ｉｎｐｐ５ｄ、Ｃｔｔｎｂｐ２ｎｌ、１８１００１１Ｏ１０Ｒｉｋ、Ｆａｄｓ１、Ｃｕｘ１、Ａｐ３ｄ１、Ｘ９９３８４、Ｏｌｆｍｌ３、Ｍａｆｂ、Ｃｓｆ１ｒ、Ｔｇｆｂｒ２、Ｂａｃｈ１、Ｓａｌｌ１、Ｒａｐｇｅｆ５、ＣＥＢＰＢ、ＣＣｎｄ１、Ｍｓｒ１、Ｊａｒｉｄ２、Ｍｒ１、ＧｎａｓおよびＭｅｃｐ２が含まれるがこれらに限定されない。一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳの細胞において、ｍｉＲ−１５５の少なくとも４個の標的遺伝子の発現または活性を上方調節する。一部の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドによって上方調節される標的遺伝子には、ＩＬ７ｒ、Ｔｌｒ６、Ｍｅｆ２ａ、Ｉｎｐｐ５ｄ、Ｃｔｔｎｂｐ２ｎｌ、Ｓａｌｌ１、Ｊａｒｉｄ２、Ｍｒ１、ＧｎａｓおよびＭｅｃｐ２が含まれる。別の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳの細胞において恒常性遺伝子の発現または活性を上方調節する。本発明は、ｍｉＲ−１５５阻害剤の活性を決定するための手段として、４個またはそれを超える遺伝子の発現における変化（遺伝子発現シグネチャー）、または恒常性遺伝子の発現における変化を使用することを包含する。一部の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与の際に、ｍｉＲ−１５５標的遺伝子の発現または活性において、それらの間の値を含め、約１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍または８倍の変化が存在する。一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与の際に、ｍｉＲ−１５５標的遺伝子の発現または活性において、それらの間の値を含め、少なくとも約２倍、３倍、４倍または５倍の変化が存在する。
【００４４】
一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、他のｍｉＲ−１５５阻害剤と比較して、ＣＮＳ細胞において、ｍｉＲ−１５５標的遺伝子のより高い上方調節を示す。一部の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、他のｍｉＲ−１５５阻害剤と比較して、ＣＮＳの細胞において、ｍｉＲ−１５５の少なくとも４個の標的遺伝子のより高い上方調節を示す。一部の他の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、他のｍｉＲ−１５５阻害剤と比較して、ＣＮＳの細胞において、恒常性遺伝子のより高い上方調節を示す。一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、他のｍｉＲ−１５５阻害剤と比較して、ＣＮＳ細胞において、ＩＬ７ｒ、Ｔｌｒ６、Ｍｅｆ２ａ、Ｉｎｐｐ５ｄ、Ｃｔｔｎｂｐ２ｎｌ、Ｓａｌｌ１、Ｊａｒｉｄ２、Ｍｒ１、ＧｎａｓおよびＭｅｃｐ２からなる群より選択される１個または複数の遺伝子の発現または活性のより高い上方調節を示す。別の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、他のｍｉＲ−１５５阻害剤と比較して、ＣＮＳ細胞において、恒常性遺伝子の活性または機能のより高い上方調節を示す。種々の実施形態では、「より高い上方調節」は、他のｍｉＲ−１５５阻害剤と比較した、ｍｉＲ−１５５標的遺伝子の発現または活性における、それらの間の値を含め、約２倍、３倍、４倍または５倍の増加を含む。
【００４５】
一部の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳの炎症細胞の活性を低減または阻害する。ミクログリアを含む非ニューロン細胞の炎症が、ＡＬＳにおけるニューロン死に寄与することが示されている（Ｂｏｉｌｌｅｅら、２００６年；Ｎａｇａｉら、２００７年）。用語「ＣＮＳの炎症細胞の活性」は、ＣＮＳの単球およびミクログリアによって媒介される１つまたは複数の炎症応答を指す。炎症応答には、サイトカインおよび／またはケモカインの分泌、走化性、炎症した領域への単球、マクロファージ、好中球などの免疫系の細胞の遊走または浸潤、食作用、反応性酸素種および一酸化窒素の放出などが含まれるがこれらに限定されない。一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、単球およびミクログリアなどの細胞によって媒介される炎症応答を下方調節することによって、ＣＮＳの炎症細胞の活性を下方調節する。例えば、一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、神経炎症に罹患している被験体の脊髄中への循環単球の遊走または動員を下方調節する。別の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳの単球、マクロファージおよび／またはミクログリア細胞による、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６などの炎症性サイトカインの産生を下方調節する。
【００４６】
局所的組織環境に依存して、単球、マクロファージおよびミクログリアが、Ｍ１（炎症促進性／組織破壊的）またはＭ２（抗炎症性／組織保護的）表現型へと分化／極性化し得ることが公知である。一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤は、ＣＮＳの細胞において、Ｍ２／組織保護的表現型に向かう単球、マクロファージおよびミクログリアの極性化を指示する遺伝子の発現または活性を上方調節する。
【００４７】
本発明は、本発明に従うｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を被験体に投与するステップを含む、それを必要とする被験体において神経学的疾患を処置するための方法を提供する。ｍｉＲ−１５５の活性または機能は、オリゴヌクレオチド阻害剤の投与後に、被験体のＣＮＳの細胞において低減される。一実施形態では、神経学的疾患を処置するための方法は、１１〜１６ヌクレオチドの配列を有するｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を投与するステップを含み、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ｍｉＲ−１５５の成熟配列に対して完全に相補的であり、かつ完全ホスホロチオエート骨格を有し；前記オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の３ヌクレオチドは、ロックトヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドである。さらなる実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から６番目のヌクレオチドもまた、ＤＮＡヌクレオチドである。本発明に従って処置され得る神経学的疾患には、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、多発性硬化症（ＭＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）誘導性神経炎症、アルコール誘導性神経炎症、外傷性脳傷害を含む急性および慢性の中枢神経系（ＣＮＳ）傷害、自己免疫性脳脊髄炎、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、脳卒中、脳腫瘍、心虚血、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、網膜色素変性症（ＲＰ）ならびに神経障害性疼痛が含まれる。ある特定の実施形態では、神経学的疾患を処置するための方法は、配列番号２３の配列を有するオリゴヌクレオチド阻害剤を投与するステップを含む。
【００４８】
本発明は、本発明に従うｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を投与することによって、それを必要とする被験体において神経炎症を処置または好転させるための方法もまた包含する。ｍｉＲ−１５５の活性または機能は、オリゴヌクレオチド阻害剤の投与後に、被験体のＣＮＳの細胞において低減される。神経炎症のための処置を必要とする被験体は、神経学的疾患、例えば、ＡＬＳ、多発性硬化症、アルツハイマー病、日本脳炎ウイルス誘導性神経炎症、アルコール誘導性神経炎症、外傷性脳傷害を含む急性および慢性の中枢神経系傷害、自己免疫性脳脊髄炎、パーキンソン病、ハンチントン病、脳卒中、脳腫瘍、心虚血、加齢性黄斑変性、網膜色素変性症ならびに神経障害性疼痛に罹患している可能性がある、またはかかる神経学的疾患を発症するリスクがある。
【００４９】
一実施形態では、本発明は、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤を投与するステップを含む、神経学的疾患において炎症細胞の活性を低減または阻害するための方法を提供する。ｍｉＲ−１５５の活性または機能は、オリゴヌクレオチド阻害剤の投与後に、中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症細胞において低減される。本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与は、炎症細胞の種々の活性、例えば、サイトカインおよび／またはケモカインの分泌、走化性、炎症した領域への単球、マクロファージ、好中球などの免疫系の細胞の遊走または浸潤、食作用、反応性酸素種および一酸化窒素の放出などを下方調節し得る。一実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、脊髄中への炎症細胞の動員または遊走を下方調節することによって、炎症細胞の活性を低減または阻害する。別の実施形態では、オリゴヌクレオチド阻害剤は、Ｍ１／炎症促進性／組織破壊的表現型に関与する遺伝子の発現を下方調節すること、および／またはＭ２／抗炎症性／組織保護的表現型に関与する遺伝子を上方調節することによって、炎症細胞の活性を低減または阻害する。
【００５０】
好ましくは、被験体への本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与は、神経学的疾患と関連する１つまたは複数の症状または病態の改善を生じる。例えば、一実施形態では、ＡＬＳに罹患している患者への本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与は、脚、手、肩、腕および他の身体部分における筋力低下を低減する；筋痙攣を低減する；発話を改善する；歩行能力を改善する、など。一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤の投与は、ＣＮＳ中に存在するニューロンの炎症を低減する。
【００５１】
本明細書で使用する場合、用語「被験体」または「患者」は、ヒトおよび他の霊長類（例えば、チンパンジーならびに他の類人猿およびサル種）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマ）、飼育哺乳動物（例えば、イヌおよびネコ）、実験動物（例えば、げっ歯類、例えば、マウス、ラットおよびモルモット）、ならびに鳥（例えば、家禽、野鳥および猟鳥、例えば、ニワトリ、シチメンチョウおよび他のキジ類の鳥、アヒル、ガチョウなど）が含まれるがこれらに限定されない任意の脊椎動物を指す。一部の実施形態では、被験体は哺乳動物である。他の実施形態では、被験体はヒトである。
【００５２】
本明細書に記載されるｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤のいずれかは、ｍｉＲ−１５５オリゴヌクレオチド阻害剤をコードする発現ベクターを細胞に送達することによって、標的細胞（例えば、単球）に送達され得る。「ベクター」は、細胞の内側に目的の核酸を送達するために使用され得る物質の組成物である。直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物に会合したポリヌクレオチド、プラスミド、およびウイルスが含まれるがこれらに限定されない多数のベクターが、当該分野で公知である。したがって、用語「ベクター」は、自律的に複製するプラスミドまたはウイルスを含む。ウイルスベクターの例には、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが含まれるがこれらに限定されない。特定の一実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターまたはアデノウイルスベクターである。発現構築物は、生細胞中で複製され得、または合成により作製され得る。本出願の目的のために、用語「発現構築物」、「発現ベクター」および「ベクター」は、一般的な説明的意味において本発明の適用を実証するために相互交換可能に使用され、本発明を限定することは意図しない。
【００５３】
一実施形態では、ｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を発現させるための発現ベクターは、オリゴヌクレオチド阻害剤をコードするポリヌクレオチド配列に作動可能に連結したプロモーターを含む。語句「作動可能に連結した」または「転写制御下にある」は、本明細書で使用する場合、ＲＮＡポリメラーゼによる転写の開始およびポリヌクレオチドの発現を制御するために、プロモーターがポリヌクレオチドに対して正確な位置および配向にあることを意味する。
【００５４】
本明細書で使用する場合、「プロモーター」は、遺伝子の特異的転写を開始するために必要な、細胞の合成機構または導入された合成機構によって認識されるＤＮＡ配列を指す。適切なプロモーターには、ＲＮＡ  ｐｏｌ  Ｉ、ｐｏｌ  ＩＩ、ｐｏｌ  ＩＩＩおよびウイルスプロモーター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーターおよびラウス肉腫ウイルスの長い末端反復）が含まれるがこれらに限定されない。一実施形態では、プロモーターは、単球特異的プロモーター、例えば、ＣＤ１４プロモーター、ＣＤ６８プロモーターなどである。別の実施形態では、プロモーターは、ミクログリア特異的プロモーター、例えば、ＣＸ３ＣＲ１プロモーター、Ｆ４／８０プロモーターなどである。
【００５５】
ある特定の実施形態では、ｍｉＲ−１５５オリゴヌクレオチド阻害剤をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したプロモーターは、誘導性プロモーターであり得る。誘導性プロモーターは、当該分野で公知であり、これには、テトラサイクリンプロモーター、メタロチオネインＩＩＡプロモーター、ヒートショックプロモーター、ステロイド／甲状腺ホルモン／レチノイン酸応答エレメント、アデノウイルス後期プロモーター、および誘導性マウス乳癌ウイルスＬＴＲが含まれるがこれらに限定されない。
【００５６】
発現構築物および核酸を細胞に送達する方法は、当該分野で公知であり、これには、例えば、リン酸カルシウム共沈殿、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、リポフェクション、ポリアミントランスフェクション試薬を用いるトランスフェクション、細胞超音波処理、高速微小発射体（ｈｉｇｈ  ｖｅｌｏｃｉｔｙ  ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ）を使用する遺伝子銃（ｇｅｎｅ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）、および受容体媒介性トランスフェクションが含まれ得る。
【００５７】
本発明は、ＡＬＳなどの神経学的疾患を診断するための方法、および神経学的疾患のための処置を受けている患者の臨床状態をモニタリングするための方法もまた提供する。例えば、本発明は、本発明の抗ｍｉＲ−１５５化合物の投与が、対照処理細胞と比較して、ＳＯＤ１マウス（ＡＬＳのマウスモデル）から単離されたミクログリア細胞において独自のセットの遺伝子を上方調節または下方調節することを示している。本発明は、ＡＬＳを診断するため、およびｍｉＲ−１５５阻害剤によるＡＬＳ処置の進行をモニタリングするために、この独自のセットの遺伝子に基づく遺伝子発現シグネチャーを使用することを企図する。
【００５８】
例えば、一実施形態では、本発明は、ＡＬＳまたは神経炎症の処置のために被験体を選択するための方法であって、被験体のＣＮＳ細胞において、ＩＬ７ｒ、Ｔｌｒ６、Ｍｅｆ２ａ、Ｉｎｐｐ５ｄ、Ｃｔｔｎｂｐ２ｎｌ、１８１００１１Ｏ１０Ｒｉｋ、Ｆａｄｓ１、Ｃｕｘ１、Ａｐ３ｄ１、Ｘ９９３８４、Ｏｌｆｍｌ３、Ｍａｆｂ、Ｃｓｆ１ｒ、Ｔｇｆｂｒ２、Ｂａｃｈ１、Ｓａｌｌ１、Ｒａｐｇｅｆ５、ＣＥＢＰＢ、ＣＣｎｄ１、Ｍｓｒ１、Ｊａｒｉｄ２、Ｍｒ１、ＧｎａｓおよびＭｅｃｐ２からなる群より選択される１個または複数の遺伝子の発現のレベルを決定するステップ；被験体のＣＮＳ細胞における１個または複数の遺伝子のレベルを、同じ１個または複数の遺伝子の参照レベルと比較するステップ；ならびに参照レベルと比較して、ＣＮＳ細胞における１個または複数の遺伝子のレベルにおける減少を有する被験体をＡＬＳまたは神経炎症の処置のために選択するステップを含む、方法を提供する。一実施形態では、ＡＬＳまたは神経炎症の処置のために被験体を選択するための方法は、同じ遺伝子の参照レベルと比較して、被験体のＣＮＳ細胞におけるＩＬ７ｒ、Ｔｌｒ６、Ｍｅｆ２ａ、Ｉｎｐｐ５ｄ、Ｃｔｔｎｂｐ２ｎｌ、Ｓａｌｌ１、Ｊａｒｉｄ２、Ｍｒ１、ＧｎａｓおよびＭｅｃｐ２からなる群より選択される少なくとも４個の遺伝子のレベルを決定するステップを含む。ある特定の実施形態では、ＡＬＳまたは神経炎症の処置のために被験体を選択するための方法は、同じ遺伝子の参照レベルと比較して、被験体のＣＮＳ細胞におけるＩＬ７ｒ、Ｔｌｒ６、Ｍｅｆ２ａ、Ｉｎｐｐ５ｄ、Ｃｔｔｎｂｐ２ｎｌ、Ｓａｌｌ１、Ｊａｒｉｄ２、Ｍｒ１、ＧｎａｓおよびＭｅｃｐ２からなる群より選択される少なくとも４個の遺伝子のレベルを決定するステップ；ならびに参照レベルと比較して、ＣＮＳ細胞における選択された遺伝子のレベルにおける多くとも２分の１の減少を有する被験体をＡＬＳまたは神経炎症の処置のために選択するステップを含む。一実施形態では、ＣＮＳの細胞は、被験体の脳脊髄液（ＣＳＦ）を得ることによって得られ得る。一実施形態では、参照レベルは、対照オリゴヌクレオチド処理細胞における同じ遺伝子の発現のレベルである。別の実施形態では、参照レベルは、健康な被験体（例えば、神経変性障害の２つもしくはそれを超える症状を示さない被験体、神経変性障害と診断されていない被験体、および／または神経変性疾患の家族歴を有さない被験体）における同じ遺伝子の発現のレベルである。
【００５９】
本発明はまた、抗ｍｉＲ−１５５化合物による処置の効力を評価するための方法であって、抗ｍｉＲ−１５５化合物による処置の前に、被験体の細胞において、１個または複数の遺伝子の発現のレベルを決定するステップであって、１個または複数の遺伝子が、ＣＮＳ細胞においてモジュレートされた遺伝子のセット、例えば、ＩＬ７ｒ、Ｔｌｒ６、Ｍｅｆ２ａ、Ｉｎｐｐ５ｄ、Ｃｔｔｎｂｐ２ｎｌ、Ｓａｌｌ１、Ｊａｒｉｄ２、Ｍｒ１、ＧｎａｓおよびＭｅｃｐ２から選択される、ステップ；抗ｍｉＲ−１５５化合物による処置の後に、被験体の細胞において、同じ１個または複数の遺伝子の発現のレベルを決定するステップ；ならびに処置の前および後の発現レベルに基づいて、処置が有効である、あまり有効でない、または有効でないことを決定するステップを含む、方法を提供する。即ち、一実施形態では、抗ｍｉＲ−１５５化合物に応答して上方調節または下方調節されたと本明細書に開示される標的遺伝子は、抗ｍｉＲ−１５５処置の臨床的効力についてのバイオマーカーとして機能する。
【００６０】
本発明は、本明細書に開示されるｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤および薬学的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物もまた提供する。一実施形態では、医薬組成物は、有効用量の、１１〜１６ヌクレオチドの配列を有するｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤を含み、オリゴヌクレオチド阻害剤は、ｍｉＲ−１５５の成熟配列に対して完全に相補的であり、かつ完全ホスホロチオエート骨格を有し；オリゴヌクレオチド阻害剤の３’末端から少なくとも最初の３ヌクレオチドは、ロックトヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチド阻害剤の５’末端から少なくとも２番目のヌクレオチドは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ヌクレオチドである。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、有効用量の、配列番号２３の配列を有するオリゴヌクレオチド阻害剤を含む。さらに他の実施形態では、医薬組成物は、表１に列挙された配列から選択される配列を有するオリゴヌクレオチド阻害剤を含む。
【００６１】
「有効用量」は、有益なまたは所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。本発明のｍｉＲ−１５５のオリゴヌクレオチド阻害剤の有効用量は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇまたは約５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇであり得る。有効用量とみなされるものの正確な決定は、患者の大きさ、年齢、障害の型、および阻害剤の形態（例えば、ネイキッドオリゴヌクレオチドまたは発現構築物など）を含む、各患者にとって個別の要因に基づき得る。したがって、投薬量は、本開示および当該分野の知識から、当業者によって容易に確認され得る。臨床適用が企図される場合、医薬組成物は、意図した適用に適切な形態で調製される。一般に、これは、発熱物質、およびヒトまたは動物にとって有害であり得る他の不純物を本質的に含まない組成物の調製を必然的に伴う。
【００６２】
本発明の医薬組成物は、オリゴヌクレオチド阻害剤を、全身的または中枢神経系に局所的に（直接的送達）送達するために製剤化され得る。中枢神経系（ＣＮＳ）中への医薬品薬剤／医薬組成物の送達は、血液脳関門の存在に起因して困難である。種々の薬物送達戦略が、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切ったＣＮＳ中への活性薬剤の送達を改善するために使用されてきた。例えば、全身投与される活性薬剤をＣＮＳに送達するために、ナノ担体の内側へのそれらのカプセル封入を介してそれらの固有の物理化学的特徴を遮蔽することによって、輸送不能な薬物がＢＢＢを横切るのを可能にするコロイド性薬物ナノ担体（即ち、ミセル、リポソームおよびナノ粒子）が、使用され得る。近年、内因性トランスポーター、例えば、脳毛細血管内皮由来の受容体トランスポーター、担体トランスポーターおよび能動排出トランスポーターが、リガンドとして使用されており、送達効力を改善するためにナノ担体系中に取り込まれる。本発明は、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤をＣＮＳに送達するために、これらおよび他の当該分野で認識された技術によって調製された医薬組成物を包含する。
【００６３】
一実施形態では、コロイド分散系、例えば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセルおよびリポソームを含む脂質ベースの系が、本発明のオリゴヌクレオチド阻害剤のための送達ビヒクル、またはそれらを発現する構築物として、使用され得る。本発明の核酸を送達するのに適切であり得る市販の脂肪エマルジョンには、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（登録商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（登録商標）ＩＩ、Ｌｉｐｏｓｙｎ（登録商標）ＩＩＩ、Ｎｕｔｒｉｌｉｐｉｄおよび他の類似の脂質エマルジョンが含まれる。送達ビヒクルとしてのｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に好ましいコロイド系は、リポソーム（即ち、人工膜小胞）である。かかる系の調製および使用は、当該分野で周知である。例示的な製剤は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ５，９８１，５０５；ＵＳ６，２１７，９００；ＵＳ６，３８３，５１２；ＵＳ５，７８３，５６５；ＵＳ７，２０２，２２７；ＵＳ６，３７９，９６５；ＵＳ６，１２７，１７０；ＵＳ５，８３７，５３３；ＵＳ６，７４７，０１４；およびＷＯ０３／０９３４４９にも開示されている。
【００６４】
ある特定の実施形態では、送達に使用されるリポソームは、米国付与前公開第２０１１００７６３２２号に詳細に記載されるＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）などの両性リポソームである。ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）上の表面電荷は、完全に可逆性であり、それを核酸の送達に特に適切なものにしている。ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）は、注射を介して送達され、安定なままであり、凝集体を含まず、細胞膜を横切って核酸を送達できる。
【００６５】
他の実施形態では、本発明の医薬組成物は、脳脊髄液（ＣＳＦ）中への脳室内（ＩＣＶ）注射／注入、髄腔内注射、硬膜外注射、対流強化（ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｅｄ）送達（ＣＥＤ）によるカテーテルを使用した脳実質中への薬物溶液の実質内注入、および脳実質中への生分解性薬物送達ビヒクルの直接移植を介して、中枢神経系に直接投与され得る。ＣＮＳに活性薬剤を送達する種々の経路は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｔｏｐｉｃ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ：  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ２巻、２号中のＣ．  ＬｅｉおよびＣ．  Ｗａｎｇによる論文、表題「Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」中に開示されている。
【００６６】
一般に、送達ビヒクルを安定にし、標的細胞による取込みを可能にするために、適切な塩および緩衝液を用いることが望ましい。本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される担体または水性媒体中に溶解または分散された阻害剤ポリヌクレオチドを含む有効量の送達ビヒクル（例えば、リポソームまたは他の複合体もしくは発現ベクター）を含む。語句「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」は、動物またはヒトに投与された場合に、有害な、アレルギー性のまたは他の都合の悪い反応を生じない分子実体および組成物を指す。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」は、ヒトへの投与に適切な医薬品などの医薬品を製剤化する際の使用に許容される、溶媒、緩衝液、溶液、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。薬学的に活性な物質のためのかかる媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が本発明の活性成分と不適合性である場合を除き、治療組成物におけるその使用が企図される。補足的な活性成分もまた、組成物のベクターまたはポリヌクレオチドを不活性化しない限り、組成物中に取り込まれ得る。
【００６７】
注射可能な使用に適切な薬学的形態には、例えば、無菌の水性溶液または分散物、および無菌の注射可能な溶液または分散物の即座の調製のための無菌粉末が含まれる。一般に、これらの調製物は、無菌であり、容易な注射可能性（ｉｎｊｅｃｔａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度まで流動的である。調製物は、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。適切な溶媒または分散媒は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および植物油を含有し得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされ得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射可能な組成物の延長された吸収は、組成物における、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。
【００６８】
無菌の注射可能な溶液は、望ましい場合には任意の他の成分（例えば、上に列挙した通り）と共に、溶媒中に適切な量で活性化合物を取り込み、その後、濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散物は、基本分散媒および例えば上に列挙した通りの所望の他の成分を含有する無菌ビヒクル中に、種々の無菌化された活性成分を取り込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法には、以前に無菌濾過されたその溶液から活性成分（複数可）プラス任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる、真空乾燥およびフリーズドライ技術が含まれる。
【００６９】
本発明の組成物は一般に、中性または塩形態で製剤化され得る。薬学的に許容される塩には、例えば、無機酸（例えば、塩酸またはリン酸）または有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸など）から誘導される酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成される）が含まれる。タンパク質の遊離カルボキシル基と形成される塩は、無機塩基（例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムまたは水酸化第二鉄）からまたは有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなど）からも誘導され得る。
【００７０】
製剤化の際に、組成物は、好ましくは、投薬製剤と適合性の様式で、治療的に有効な量で投与される。製剤は、種々の剤形、例えば、注射可能な液剤、経口延長放出剤形などで容易に投与され得る。水性溶液中での非経口投与のために、例えば、溶液は一般に、適切に緩衝化され、液体希釈剤は、例えば十分な食塩水またはグルコースで最初に等張性にされる。かかる水性溶液は、例えば、静脈内、皮下および皮内投与に使用され得る。好ましくは、無菌水性媒体は、特に本開示に照らして、当業者に公知のように用いられる。投薬量における幾分かの変動が、処置されている被験体の状態に依存して必然的に生じる。投与を担う人は、いずれの事象においても、個々の被験体に適切な用量を決定する。さらに、ヒト投与のために、調製物は、規制機関によって要求される無菌性、発熱性、全般的安全性および純度の標準を満たすべきである。
【００７１】
本発明のある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、投与のためのデバイスで包装され、または投与のためのデバイス内に貯蔵される。注射可能な製剤のためのデバイスには、注射ポート、オートインジェクター、注射ポンプおよび注射ペンが含まれるがこれらに限定されない。エアロゾル化製剤または粉末製剤のためのデバイスには、吸入器、注入器、吸引器などが含まれるがこれらに限定されない。したがって、本発明は、本明細書に記載される障害のうち１つまたは複数を処置または予防するための本発明の医薬組成物を含む投与デバイスを含む。
【００７２】
本発明は、限定として解釈すべきではない以下のさらなる実施例によってさらに例示される。当業者は、本開示に照らして、本発明の精神および範囲から逸脱することなしに、開示された具体的実施形態に対して多くの変化がなされ得るが、同様または類似の結果がなおも得られ得ることを理解すべきである。
【００７３】
本開示を通じて言及される全ての特許および非特許文献は、全ての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【００７４】
（実施例１：ヒト単球性細胞における２つの直接的なシードマッチした標的（Ｃｕｘ１およびＣＥＢＰＢ）の発現に対する抗ｍｉＲ−１５５化合物の効果）
抗ｍｉＲ−１５５化合物を、ヌクレオフェクション（ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ）によってＭＶ４−１１ヒト単球性細胞に送達した。２つの直接的なシードマッチした標的（Ｃｕｘ１およびＣＥＢＰＢ）の調節を、未処理細胞と比較してリアルタイムＰＣＲによって測定した。標識された化合物は、分析した２つの標的の最も高い調節を実証した（図１）。
【００７５】
（実施例２：ミクログリア細胞による抗ｍｉＲ−１５５化合物の受動的取込みは、ｍｉＲ−１５５標的遺伝子の発現を上方調節する）
成体ＳＯＤ１マウスから単離したミクログリアを、１μＭの最終濃度の抗ｍｉＲ−１５５化合物（配列番号２１、２３、２５、２６および３）を含有する培養培地中で受動的にインキュベートした。２つの直接的なシードマッチした標的（８、７および６ヌクレオチドの結合部位）であるＣＳＦ１ＲおよびＯＬＦＭＬ３の発現を、抗ｍｉＲ−１５５化合物で受動的に処理した細胞および未処理細胞において、リアルタイムＰＣＲによって測定した（図２）。
【００７６】
（実施例３：ＳＯＤ１マウスへの抗ｍｉＲ−１５５化合物の投与は、ミクログリアにおいてｍｉＲ−１５５標的遺伝子の発現を上方調節する）
６つの抗ｍｉＲ−１５５化合物（配列番号２７、２１、２２、２３、２５、２６および３）を、ＳＯＤ１マウス（処置１つ当たりｎ＝６〜８匹のマウス）中に、単回の脳室内（ｉ．ｃ．ｖ．）注射を介して２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。注射の５日後、ミクログリアを細胞選別によって単離し、ｍＲＮＡを、Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇコードセットによる遺伝子発現のために回収した。予測または検証されたｍｉＲ−１５５のシードマッチした標的の遺伝子発現プロファイルのヒートマップを図３に示す。ヒートマップは、各抗ｍｉＲ−１５５化合物に応答した各遺伝子についての食塩水に対するｌｏｇ１０倍の変化を示している（所与の処置群中の全ての動物についての平均）。この遺伝子シグネチャーの選択のために統計的カット（ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｃｕｔ）は使用しなかった。配列番号２３を有する抗ｍｉＲ−１５５化合物および配列番号３を有する抗ｍｉＲ−１５５化合物は、最大数の直接的ｍｉＲ−１５５標的の抑制解除を示した。
【００７７】
Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ遺伝子発現コードセットをさらに分析し、≧２の抗ｍｉＲ−１５５化合物によって≧４のマウスにおいて上方調節された直接的標的遺伝子のセットを、抗ｍｉＲ活性についての遺伝子発現シグネチャーを示すために選択した。図４は、各抗ｍｉＲ−１５５化合物についての、この遺伝子発現シグネチャーについての変化倍数結果を示す。マン−ホイットニーノンパラメトリック検定によって、配列番号２３を有する抗ｍｉＲ化合物および配列番号３を有する抗ｍｉＲ化合物は、このセットの標的の有意な上方調節を示した。
【００７８】
Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ遺伝子発現コードセットを、ＳＯＤ１マウスでは下方調節されるがｍｉＲ−１５５ノックアウトマウスではその発現がある程度まで回復されるミクログリア恒常性遺伝子についてアノテートした。食塩水に対する、このセット中の各遺伝子についての平均変化倍数を、各抗ｍｉＲ−１５５化合物について計算し、ｌｏｇ１０変化倍数を使用してヒートマップを生成した（図５）。配列番号２３を有する抗ｍｉＲ−１５５化合物および配列番号３を有する抗ｍｉＲ−１５５化合物は、この遺伝子セットにおいて、最大数の遺伝子の発現を回復した。配列番号２５を有する抗ｍｉＲ−１５５化合物もまた、これらの遺伝子標的の抑制解除に向かう傾向を示した。
【００７９】
上記ミクログリア恒常性遺伝子セットから、≧２の抗ｍｉＲ−１５５化合物によって≧４のマウスにおいて上方調節された直接的標的遺伝子のセットを、抗ｍｉＲ活性についての遺伝子発現シグネチャーを示すために選択した。図６は、各抗ｍｉＲ−１５５化合物についての、この遺伝子発現シグネチャーについての変化倍数結果を示す。マン−ホイットニーノンパラメトリック検定によって、配列番号２３を有する抗ｍｉＲ化合物および配列番号３を有する抗ｍｉＲ化合物は、このセットの恒常性遺伝子標的の有意な上方調節を示した。配列番号２５を有する抗ｍｉＲ−１５５化合物もまた、この遺伝子発現シグネチャーの抑制解除に向かう傾向を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2018517704.tif 000012
2018517704.tif 000013