(57)【要約】本開示は、薬学的活性成分としての使用のための、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物；そのような混合物を作製する方法；髄腔内または脳室内投与に対して適切な医薬組成物における使用のためのそのような混合物を適格とする方法；そのような混合物を含む髄腔内または脳室内投与に対して適切な医薬組成物；およびニーマン−ピック病Ｃ型の処置のために医薬組成物を使用する方法を提供する。
2018517046.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含み、
エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、
総合して１％未満の非置換のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−０」）および１つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１」）を含み、
総合して少なくとも８５％の３つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−３」）、４つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−４」）、５つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−５」）、および６つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−６」）を含み、
総合して１％未満の９つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−９」）および１０のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１０」）を含む、混合物。
【請求項２】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の０．１％未満が総合してＤＳ−０およびＤＳ−１である、請求項１に記載の混合物。
【請求項３】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の０．０１％未満が総合してＤＳ−０およびＤＳ−１である、請求項２に記載の混合物。
【請求項４】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の少なくとも８７％が総合してＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６である、請求項１に記載の混合物。
【請求項５】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の少なくとも９０％が総合してＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６である、請求項４に記載の混合物。
【請求項６】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の０．１％未満が総合してＤＳ−９およびＤＳ−１０である、請求項１に記載の混合物。
【請求項７】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の０．０１％未満が総合してＤＳ−９およびＤＳ−１０である、請求項６に記載の混合物。
【請求項８】
１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含み、
エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、
総合して１％未満の非置換のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−０」）および１つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１」）を含み、
総合して１％未満の９つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−９」）および１０のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１０」）を含み、
０．５０〜０．８０の範囲の平均モル置換（「ＭＳ」）を有する、混合物。
【請求項９】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の０．１％未満が総合してＤＳ−０およびＤＳ−１である、請求項８に記載の混合物。
【請求項１０】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の０．０１％未満が総合してＤＳ−０およびＤＳ−１である、請求項９に記載の混合物。
【請求項１１】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の０．１％未満が総合してＤＳ−９およびＤＳ−１０である、請求項８に記載の混合物。
【請求項１２】
前記ベータ−シクロデキストリン混合物の０．０１％未満が総合してＤＳ−９およびＤＳ−１０である、請求項１１に記載の混合物。
【請求項１３】
前記ＭＳが０．６０〜０．７０の範囲である、請求項８に記載の混合物。
【請求項１４】
前記ＭＳが０．６４〜０．６８の範囲である、請求項１３に記載の混合物。
【請求項１５】
前記ＭＳが約０．６６〜０．６７である、請求項１４に記載の混合物。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のベータ−シクロデキストリン混合物と、薬学的に許容される希釈剤とを含む、医薬組成物。
【請求項１７】
ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり、５ＥＵ以下（「ＮＭＴ」）の内毒素を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり、１．５ＥＵ  ＮＭＴの内毒素を含む、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．５％以下のプロピレングリコールを含む、請求項１６から１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．０１％以下のプロピレングリコールを含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、１ｐｐｍ以下のプロピレンオキシドを含む、請求項１６から２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
髄腔内または脳室内投与に対して適切である、請求項１から２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
約３００〜約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を有する、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの前記ベータ−シクロデキストリン混合物を含む、請求項２２または２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物と、髄腔内、脳室内、または静脈内投与に対して薬学的に許容される希釈剤とを含む医薬組成物であって、
前記組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり５ＥＵ以下（「ＮＭＴ」）の内毒素を含み、
前記組成物は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．５％以下のプロピレングリコールを含み、
前記組成物は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された１ｐｐｍ以下のプロピレンオキシドを含む、医薬組成物。
【請求項２６】
ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり、１．５ＥＵ  ＮＭＴの内毒素を含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．０１％以下のプロピレングリコールを含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、
前記混合物が、総合して３％未満の非置換のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−０」）、１つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１」）、および２つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−２」）を含み、
前記混合物が、総合して少なくとも６５％の５つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−５」）、６つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−６」）、および７つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−７」）を含み、
前記混合物が、総合して３％未満の９つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−９」）および１０のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１０」）を含む、
請求項２５から２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
ニーマン−ピック病Ｃ型を処置する方法であって、治療有効量の請求項１６から２８のいずれか一項に記載の医薬組成物を、ニーマン−ピック病Ｃ型を有する患者に投与することを含む、方法。
【請求項３０】
前記投与が、髄腔内または脳室内投与による、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
約３００ｍｇ〜約２０００ｍｇのベータ−シクロデキストリン混合物を前記患者に投与することを含む、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記投与が、毎週１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、毎月１回、２カ月ごとに１回、または３カ月ごとに１回行われる、請求項２９から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
約９００ｍｇ〜約１８００ｍｇの前記ベータ−シクロデキストリン混合物を前記患者に２週間ごとに１回投与することを含む、請求項２９から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
約９００ｍｇの前記ベータ−シクロデキストリン混合物を前記患者に２週間ごとに１回投与することを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
タウタンパク質、アミロイドペプチド、ニューロフィラメント光タンパク質（ＮＦＬ）、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ステロール、オキシステロール、キトトリオシダーゼ活性、カルビンディン、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ−１）、ＧＭ２またはＧＭ３ガングリオシド、スフィンゴシン、およびスフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）のうちの１つまたは複数の脳脊髄液中レベルをモジュレートするのに十分な量の前記ベータ−シクロデキストリン混合物を投与することを含む、請求項２９から３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
７−ケトコレステロール、７−ケトコレステロール、７β−ヒドロキシコレステロール、２４Ｓ−ヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２７−ヒドロキシコレステロール、およびコレスタン−３β，５α，６β−トリオールのうちの１つまたは複数の血漿中レベルをモジュレートするのに十分な量の前記ベータ−シクロデキストリン混合物を投与することを含む、請求項２９から３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＡ）、グリシン−コンジュゲート３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＧ）、およびタウリン−コンジュゲート３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＴ）のうちの１つまたは複数の尿中レベルをモジュレートするのに十分な量の前記ベータ−シクロデキストリン混合物を投与することを含む、請求項２９から３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
歩行運動、微細運動技能、認知、発話、嚥下、眼球運動、記憶、聴力、および発作から選択されるＮＰＣ重症度スケールの１つまたは複数のドメインスコアを維持または減少させるのに十分な量の前記ベータ−シクロデキストリン混合物を投与することを含む、請求項２９から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のベータ−シクロデキストリン混合物を調製するためのプロセスであって、アルミナ上での吸収クロマトグラフィーでＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰを処理することを含む、プロセス。
【請求項４０】
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰを溶媒沈殿で処理することをさらに含む、請求項３９に記載のプロセス。
【請求項４１】
前記溶媒沈殿が、沈殿剤としてのアセトンと共に水を使用して実施される、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４２】
前記溶媒沈殿が、沈殿剤としてのアセトンと共にメタノールを使用して実施される、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４３】
請求項３９から４２のいずれか一項に記載のプロセスにより作製された、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む、混合物。
【請求項４４】
髄腔内または脳室内投与のための医薬組成物における使用のために、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物を適格とする方法であって、前記方法は、
ａ）前記混合物のエレクトロスプレーＭＳ分析を実施することと、
ｂ）すべてのピークの高さを測定することと、
ｃ）全混合物中の各ベータ−シクロデキストリン種のパーセンテージを計算することと
を含み、
前記混合物が、総合して１％未満のＤＳ−０およびＤＳ−１を含み、
前記混合物が、総合して少なくとも８５％のＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６を含み、
前記混合物が、総合して１％未満のＤＳ−９およびＤＳ−１０を含む場合、前記混合物が使用に対して適格とされる、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願への相互参照
この出願は、２０１６年６月３日に出願された米国仮出願第６２／３４５，７２１号；２０１６年５月３日に出願された同第６２／３３１，３８５号；２０１６年３月２９日に出願された６２／３１４，７６５号；２０１６年３月１５日に出願された同第６２／３０８，７３６号；２０１６年１月８日に出願された同第６２／２７６，７２８号；２０１５年１２月４日に出願された同第６２／２６３，５９９号；２０１５年１１月２日に出願された同第６２／２４９，８７６号；２０１５年１０月２３日に出願された同第６２／２４５，９７４号；２０１５年７月６日に出願された同第６２／１８９，１１４号；２０１５年６月１２日に出願された同第６２／１７５，０７５号および２０１５年６月１０日に出願された同第６２／１７３，８８９号（これらの各々は、参考としてそれらの全体が援用される）の利益を主張する。
【０００２】
２．連邦政府により資金供与された研究または開発についての声明
この発明は、アメリカ合衆国保健福祉省の一機関であるアメリカ国立衛生研究所とのＣｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ａｇｒｅｅｍｅｎｔの遂行においてなされた。米国政府は、この発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
３．背景技術
ニーマン−ピック病Ｃ型（ＮＰＣ）は、ＮＰＣ１またはＮＰＣ２遺伝子のいずれかにおける常染色体の劣性変異により引き起こされるリソソーム脂質貯蔵障害である。通常、周産期初期に症状が現れ、生涯を通して進行する。この障害は多くの場合、神経学的症状、例えば、小脳性運動失調、構語障害、発作、垂直注視麻痺、運動機能障害、嚥下障害、精神病エピソード、および進行性認知症、ならびに肝臓、脾臓、または肺などの他の臓器における全身性症状を含む。ＮＰＣは細胞のコレステロール輸送欠陥として説明されているが、脳内ではＧＭ２およびＧＭ３ガングリオシドなどの他の脂質の蓄積もまた生じている（Ｖａｎｉｅｒ、２０１０年、Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｒｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、５巻：１６頁）。臨床症状および疾患の過程が異なるため、ＮＰＣ１疾患は通常、早期乳児性発症（＜２歳）、遅発性乳児性発症（２〜＜６歳）、若年性発症（６〜＜１５歳）、および青年／成人発症（＞１５歳）に分類される。
【０００４】
ヒトにおいてＮＰＣを処置する取組みは、基質低減療法、例えば、Ｎ−ブチルデオキシノジリマイシン（ミグルスタット、Ｚａｖｅｓｃａ（登録商標））を用いて、グリコスフィンゴリピド合成を阻害することなど、またはクリアランス機序を介して、全体的な脂質貯蔵、特にコレステロールおよびグリコスフィンゴリピドの貯蔵を好転させることに焦点が向けられている。
【０００５】
２−ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンは、ＮＰＣ細胞内での過剰のコレステロール貯蔵を緩和することが示されており（Ａｂｉ−Ｍｏｓｌｅｈ，  Ｌ．ら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ、２００９年、１０６巻（４６号）、１９３１６〜１９３２１頁）、これは細胞の原形質膜からコレステロールを抽出する、関連したシクロデキストリンの以前の報告と一致している（Ｒｏｄａｌ，  Ｓ．  Ｋ．ら、１９９９年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ、１０巻、９６１〜９７４頁）。ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンはまた、ＮＰＣの動物モデルにおいて有益な効果を有することが観察されている。例えば、２−ヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンを含む組成物は、Ｎｐｃ１ノックアウトマウスの肝臓および脳内のコレステロールの不完全なリソソーム輸送を逆転することが報告され、処置のない場合と比較して、これらの変異体において寿命の延長をもたらした（Ｌｉｕ，  Ｂ．ら、２００９年、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ、１０６巻（７号）、２３７７〜２３８２頁；Ｄａｖｉｄｓｏｎら、２００９年、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ４巻：ｅ６９５１頁）。
【０００６】
様々なヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物は、米国、ブラジル、および日本において、救済使用特例下でヒトＮＰＣ患者に投与されており、様々な徴候および症状のなんらかの改善の事例報告がある。しかし、安全性および効力を決定するためのヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物の盲検の臨床治験は完了していない（Ｏｔｔｉｎｇｅｒ，  Ｅ．Ａ．ら、２０１４年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１４巻（３号）、３３０〜３３９頁）。事例報告においてオブザーバーの偏りが起こり得ることを考慮すると、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンが臨床上の利益を提供することを確認する対照臨床研究に対する必要性が存在する。
【０００７】
ＮＰＣの有効な処置は、乳児期初期に、長期的な髄腔内または脳室内投与を必要とし、ヒト患者に以前に使用したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの非経口等級の組成物は、不純物、すなわち、耳毒性があると考えられているプロピレングリコール；沈殿物を形成し、急性の毒性を有することが公知である、ヒドロキシプロピル置換を有さないベータ−シクロデキストリン分子（ＭｕｌｌｅｒおよびＢｒａｕｎｓ、１９８５年、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、２６巻、７７〜８８頁）；および高度に炎症性である細菌性内毒素を含有するので、乳児および小児の脳脊髄液に直接長期投与するには不適切である。したがって、より高い純度のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの医薬組成物に対する必要性が存在する。
【０００８】
加えて、すべての既存の非経口等級のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物は、異なるヒドロキシプロピル置換度を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン種の複合混合物を含有する。混合物内でのこれらの種の比は様々な製造元の間で広く異なり、単一製造元からのバッチ間でさえも異なる。これらの異なる種が複合混合物の薬理効果にどのように寄与するかは公知でない。したがって、このような種のより正確に定義されたおよび正確に制御された混合物、またはフィンガープリントを有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの医薬組成物に対する必要性が存在する。
最後に、ＧＭＰ条件下での商業的規模で、長期的な髄腔内または脳室内投与に適切な、低レベルの不純物を有する、ならびに特定のおよび構造的に定義された組成を有する、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの医薬組成物を製造する方法に対する必要性が存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｖａｎｉｅｒ、Ｏｒｐｈａｎｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｒｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２０１０年）５巻：１６頁
【非特許文献２】Ａｂｉ−Ｍｏｓｌｅｈ，Ｌ．ら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ（２００９年）１０６巻（４６号）１９３１６〜１９３２１頁
【非特許文献３】Ｒｏｄａｌ，Ｓ．Ｋ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｅｌｌ（１９９９年）１０巻９６１〜９７４頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
４．概要
ＮＰＣ１型疾患を有する患者が、既存の非経口等級組成物、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）を使用して、２−ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（「ＨＰＢＣＤ」）の髄腔内投与により処置されている、第Ｉ相治験からの初期データを分析した。ＮＩＨにより行われた、この非無作為抽出、非盲検、単一施設実験において、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢは、増大する用量で、薬物未処置の患者のコホートに腰椎注射を介して投与されている。本発明者らの分析のいくつかには、個々のＩＮＤ下で、別の施設で髄腔内Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢで処置されている３人の患者からのデータも含めた。
【００１１】
本発明者らの分析は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの髄腔内投与はＮＰＣ１型疾患において治療上の利益をもたらすことを確認した。標準的な総計転帰の尺度、ＮＰＣ臨床重症度スケールを使用して、未処置の疾患の自然経過が研究されてきた患者のコホートの０／１３と比較して、７／１５の患者は、疾患が安定または改善していることが観察された。データの事後解析により通知された新規の複合エンドポイントを使用して、本発明者らは、１１／１５の実験患者が疾患の安定または改善を示したのに対して、自然経過のコホートでは疾患が安定しているのは４／１３のみであることを発見した。
【００１２】
しかし、より詳細な分析は、ＨＰＢＣＤの髄腔内投与はＮＰＣ１型疾患のある特定の徴候および症状を改善するものの、それは単に他の徴候および症状の進行を遅延させるだけで、逆説的に他の症状の進行を加速しているようにみえることを示した。特に、聴力損失は、髄腔内Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢを受けた患者において加速されたようにみえる。Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの代表的なバッチを本発明者らが分析したところ、この非経口等級製品は異なる置換度を有するベータ−シクロデキストリン分子の複合混合物を含むことが明らかになったが、これらの種のうちのどれが観察された改善、進行の遅延、および様々な臨床ドメインの進行の加速に寄与しているか公知ではない。
【００１３】
ＨＰＢＣＤがより長い期間の間およびより頻繁な投薬で、脳脊髄液に直接投与される治験に備えるため、本発明者らは、推定される聴器毒素（ｏｔｏｔｏｘｉｎ）であるプロピレングリコール；沈殿物を形成することが公知である、ヒドロキシプロピル置換を有さないベータ−シクロデキストリン分子；および高度に炎症性である細菌性内毒素のレベルを減少させるための方法を開発した。本方法は、特定された不純物を減少させることに成功したが、アルミナを用いた吸収クロマトグラフィーは、単独で使用するか、または溶媒沈殿と組み合わせて使用するかにかかわらず、組成上のフィンガープリントも変化させて、単一のヒドロキシプロピル置換を有するベータ−シクロデキストリン分子（ＤＳ−１）の量を実質的に減少させ、２つのヒドロキシプロピル基を有するベータ−シクロデキストリン分子（ＤＳ−２）の量を減少させたことを本発明者らは観察した。低い置換度を有する分子の優勢が減少すると（ＤＳ−０は意図した通り；ＤＳ−１およびＤＳ−２は意図していない）、混合物の平均置換度（ＤＳａ）が増加した。
【００１４】
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢからのフィンガープリントの変化にもかかわらず、驚くことに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの遺伝子発現プロファイリング実験により評価した場合、コレステロール代謝および輸送に関与していることが公知の遺伝子の発現には変化がなかった。この発見は、より長い期間、任意選択でより頻繁な投薬を用いて、治療効果およびより改善された安全性を備えた、より高度に精製された、および組成上異なるＨＰＢＣＤ組成物を、髄腔内または脳室内経路により、ＮＰＣ疾患を有する患者のＣＳＦに投与することを可能にする。
【００１５】
したがって、第１の態様では、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物が提供される。混合物は、それぞれエレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、総合して１％未満の非置換のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−０」）および１つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１」）；総合して少なくとも８５％の３つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−３」）、４つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−４」）、５つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−５」）、および６つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−６」）；ならびに総合して１％未満の９つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−９」）および１０のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１０」）を含む。
【００１６】
ある特定の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の０．１％未満は総合してＤＳ−０およびＤＳ−１である。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の０．０１％未満は総合してＤＳ−０およびＤＳ−１である。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の少なくとも８７％は総合してＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６である。一部の実施形態では，ベータ−シクロデキストリン混合物の少なくとも９０％は総合してＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６である。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の０．１％未満は総合してＤＳ−９およびＤＳ−１０である。ある特定の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の０．０１％未満は総合してＤＳ−９およびＤＳ−１０である。
【００１７】
別の態様では、混合物は、それぞれエレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、総合して１％未満の非置換のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−０」）および１つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１」）、ならびに総合して１％未満の９つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−９」）および１０のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１０」）を含み、混合物は０．５０〜０．８０の範囲の平均モル置換（「ＭＳ」）を有する。
【００１８】
ある特定の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の０．１％未満は総合してＤＳ−０およびＤＳ−１である。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の０．０１％未満は総合してＤＳ−０およびＤＳ−１である。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の０．１％未満は総合してＤＳ−９およびＤＳ−１０である。ある特定の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の０．０１％未満は総合してＤＳ−９およびＤＳ−１０である。様々な実施形態では、ＭＳは０．６０〜０．７０の範囲である。これらの実施形態の一部では、ＭＳは０．６４〜０．６８の範囲である。ある特定の実施形態では、ＭＳは約０．６６〜０．６７である。
【００１９】
別の態様では、本明細書に記載されているベータ−シクロデキストリン混合物と、薬学的に許容される希釈剤とを含む医薬組成物が提供される。
【００２０】
一部の実施形態では、組成物は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．５％以下のプロピレングリコールを含む。一部の実施形態では、組成物は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．０１％以下のプロピレングリコールを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり、５ＥＵ以下（「ＮＭＴ」）の内毒素を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり、１．５ＥＵ  ＮＭＴの内毒素を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、１ｐｐｍ以下のプロピレンオキシドを含む。
【００２１】
典型的な実施形態では、医薬組成物は髄腔内または脳室内投与に対して適切である。一部の実施形態では、医薬組成物は約３００〜約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を有する。一部の実施形態では、組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬのベータ−シクロデキストリン混合物を含む。
【００２２】
別の態様では、医薬組成物は、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物と、髄腔内、脳室内、または静脈内投与に対して薬学的に許容される希釈剤とを含む。組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり５ＥＵ以下（「ＮＭＴ」）の内毒素、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．５％以下のプロピレングリコール、およびＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、１ｐｐｍ以下のプロピレンオキシドを含む。
【００２３】
一部の実施形態では、組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり１．５ＥＵ  ＮＭＴの内毒素を含む。一部の実施形態では、組成物は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．０１％以下のプロピレングリコールを含む。ある特定の実施形態では、混合物は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、総合して３％未満の非置換のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−０」）、１つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１」）、および２つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−２」）；総合して少なくとも６５％の５つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−５」）、６つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−６」）、および７つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−７」）；ならびに総合して３％未満の９つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−９」）および１０のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１０」）を含む。
【００２４】
別の態様では、ニーマン−ピック病Ｃ型を処置する方法であって、医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。
【００２５】
典型的な実施形態では、組成物は、髄腔内に、または脳室内投与により投与される。一部の実施形態では、本方法は、約３００ｍｇ〜約２０００ｍｇのベータ−シクロデキストリン混合物を患者に投与することを含む。ある特定の実施形態では、本組成物は、毎週１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、毎月１回、２カ月ごとに１回、または３カ月ごとに１回投与される。ある特定の実施形態では、本方法は、約９００ｍｇ〜約１８００ｍｇのベータ−シクロデキストリン混合物を患者に２週間ごとに１回投与することを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、約９００ｍｇのベータ−シクロデキストリン混合物を患者に２週間ごとに１回投与することを含む。
【００２６】
一部の実施形態では、本方法は、タウタンパク質、アミロイドペプチド、ニューロフィラメント光タンパク質（ＮＦＬ）、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ステロール、オキシステロール、キトトリオシダーゼ活性、カルビンディン、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ−１）、ＧＭ２またはＧＭ３ガングリオシド、スフィンゴシン、およびスフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）のうちの１つまたは複数の脳脊髄液中レベルをモジュレートするのに十分な量のベータ−シクロデキストリン混合物を投与することを含む。
【００２７】
一部の実施形態では、本方法は、７−ケトコレステロール、７β−ヒドロキシコレステロール、２４Ｓ−ヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２７−ヒドロキシコレステロール、およびコレスタン−３β，５α，６β−トリオールのうちの１つまたは複数の血漿中レベルをモジュレートするのに十分な量のベータ−シクロデキストリン混合物を投与することを含む。
【００２８】
一部の実施形態では、本方法は、３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（３β−ｓｕｌｆｏｘｙ−７β−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌ−５−ｃｈｏｌｅｎ−２４−ｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＡ）、グリシン−コンジュゲート３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＧ）、およびタウリン−コンジュゲート３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＴ）のうちの１つまたは複数の尿中レベルをモジュレートするのに十分な量のベータ−シクロデキストリン混合物を投与することを含む。
【００２９】
一部の実施形態では、本方法は、歩行運動、微細運動技能（ｆｉｎｅ  ｍｏｔｏｒ  ｓｋｉｌｌ）、認知、発話、嚥下、眼球運動、記憶、聴力、および発作から選択されるＮＰＣ重症度スケールのうちの１つまたは複数のドメインスコアを維持または減少させるのに十分な量のベータ−シクロデキストリン混合物を投与することを含む。
【００３０】
別の態様では、アルミナ上での吸収クロマトグラフィーを用いてＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰを処理することを含む、ベータ−シクロデキストリン混合物を調製するためのプロセスが提示される。
【００３１】
一部の実施形態では、本プロセスは、アルミナ上での吸収クロマトグラフィーと溶媒沈殿の組合せを含む。一部の実施形態では、溶媒沈殿は、沈殿剤としてのアセトンと共に水を使用して実施される。他の実施形態では、溶媒沈殿は、沈殿剤としてのアセトンと共にメタノールを使用して実施される。
【００３２】
別の態様では、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物が、アルミナ上での吸収クロマトグラフィーと溶媒沈殿の組合せを用いて、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰを処理することによって作製される。
【００３３】
さらなる態様では、髄腔内または脳室内投与のための医薬組成物における使用のために、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物を適格とする（ｑｕａｌｉｆｙ）ための方法が提供される。本方法は、（ａ）混合物のエレクトロスプレーＭＳ分析を実施することと、（ｂ）ピーク高さを測定することと、（ｃ）ピーク高さに基づき、全混合物中の各ベータ−シクロデキストリン種のパーセンテージを計算することとを含む。混合物は、使用に対して適格とされている。すなわち、混合物が、総合して１％未満のＤＳ−０およびＤＳ−１、総合して少なくとも８５％のＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６、ならびに総合して１％未満のＤＳ−９およびＤＳ−１０を含む場合、使用に対して十分な品質を有する。
【００３４】
別の態様では、本開示は、薬学的活性成分として、非置換のベータ−シクロデキストリン分子と、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、約３〜約７のベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル基の平均数（「ＤＳａ」）を有する混合物を含む医薬組成物を提供する。好ましい実施形態では、医薬組成物は、０．５％以下のプロピレングリコール、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり１．５ＥＵ以下（「ＮＭＴ」）の内毒素を含み、混合物の１％以下がヒドロキシプロピル基で置換されていない（「ＤＳ−０」）。様々な好ましい実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物は、約０．５８〜約０．６８の範囲の平均モル置換（ＭＳ）を有する（約４．０６〜４．７６の範囲のＤＳａ）。これらの好ましい実施形態のいくつかでは、混合物は、０．５８〜０．６８のＭＳ（４．０６〜４．７６のＤＳａ）を有し、一部の実施形態では約０．６３のＭＳを有する。様々な好ましい実施形態では、混合物は、約０．６５〜約０．６８の範囲の平均モル置換（ＭＳ）（ＤＳａ４．６〜４．７）を有し、一部の実施形態では、約０．６７の平均モル置換を有する。
【００３５】
一部の実施形態では、混合物中のベータ−シクロデキストリンは、構造：
【化１】
2018517046.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各存在について独立して、−Ｈまたは−ＨＰであり、ここで、ＨＰは１つまたは複数のヒドロキシプロピル基を含む）のグルコース単位からなる。
【００３６】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのＨＰの平均存在数は約３〜約７である。
【００３７】
一部の実施形態では、Ｒ１とＲ２とを合わせた全存在の少なくとも１５％はＨＰである。
【００３８】
一部の実施形態では、Ｒ３の存在の少なくとも３０％はＨＰである。
【００３９】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％は総合して、約４〜約６のベータ−シクロデキストリン１つ当たりのＨＰの平均存在数を有する。
【００４０】
一部の実施形態では、ＤＳａは約３〜約４である。一部の実施形態では、ＤＳａは３．３±０．３である。一部の実施形態では、ＤＳａは３．７±０．３である。
【００４１】
一部の実施形態では、ＤＳａは約３．５〜約４．５である。一部の実施形態では、ＤＳａは３．８±０．３である。一部の実施形態では、ＤＳａは４．２±０．３である。
【００４２】
一部の実施形態では、ＤＳａは約４〜約５である。一部の実施形態では、ＤＳａは４．３±０．３である。一部の実施形態では、ＤＳａは４．７±０．３である。
【００４３】
一部の実施形態では、ＤＳａは約４．５〜約５．５である。一部の実施形態では、ＤＳａは４．８±０．３である。一部の実施形態では、ＤＳａは５．２±０．３である。
【００４４】
一部の実施形態では、ＤＳａは約５〜約６である。一部の実施形態では、ＤＳａは５．３±０．３である。一部の実施形態では、ＤＳａは５．７±０．３である。
【００４５】
一部の実施形態では、ＤＳａは約５．５〜約６．５である。一部の実施形態では、ＤＳａは５．８±０．３である。一部の実施形態では、ＤＳａは６．２±０．３である。
【００４６】
一部の実施形態では、ＤＳａは約６〜約７である。一部の実施形態では、ＤＳａは６．３±０．３である。一部の実施形態では、ＤＳａは６．７±０．３である。
【００４７】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±１以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％は、ＤＳａ±１以内のＤＳを有する。
【００４８】
一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル基は、構造［ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ］ｎＨ（式中、ｎ≧１であり、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は約３〜約７である）のヒドロキシプロピル鎖として、ベータ−シクロデキストリンのヒドロキシル位置で置換されている。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の少なくとも７０％はｎ＝１を有する。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の３０％未満はｎ＝２を有する。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の１０％未満はｎ＞２を有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は約４〜約６である。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％は総合して、約４〜約６のベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数を有する。
【００４９】
一部の実施形態では、本明細書で開示されている医薬組成物は、薬学的活性成分１グラム当たり、約１０国際単位（ＩＵ）未満、例えば、約６ＩＵ未満、約３ＩＵ未満、または約１．５ＩＵ未満などの内毒素を含有する。内毒素のレベルはリムルス変形細胞溶解物試験により決定する。
【００５０】
一部の実施形態では、薬学的活性成分は、約２重量％未満、例えば、約１重量％未満などの非置換のベータ−シクロデキストリンを含有する。
【００５１】
一部の実施形態では、薬学的活性成分は、約０．５重量％未満、例えば、約０．２重量％未満などのプロピレングリコールまたはプロピレングリコールオリゴマーを含有する。
【００５２】
一部の実施形態では、薬学的活性成分は約１ｐｐｍ未満のプロピレンオキシドを含有する。
【００５３】
一部の実施形態では、医薬組成物は、１ｍＬの蒸留水中の薬学的活性成分の２０％（ｗ／ｖ）溶液が、約２４時間後にＵＶ分光分析で測定した場合、少なくとも２ｍｇ、例えば、少なくとも３ｍｇ、少なくとも４ｍｇ、または少なくとも５ｍｇなどの非エステル化コレステロールを室温で可溶化する薬学的活性成分を含む。
【００５４】
一部の実施形態では、医薬組成物は、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏより低い聴器毒性を示す。一部の実施形態では、聴器毒性は、Ｈｏｕｓｅ  Ｅａｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ−ｏｒｇａｎ  ｏｆ  Ｃｏｒｔｉ  １（ＨＥＩ−ＯＣ１）細胞において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで毒性により決定される。一部の実施形態では、聴器毒性は、被験体、例えば、マウス、ラット、ネコ、イヌ、またはヒトにおいて聴性脳幹反応（ＢＡＥＲ）試験によりｉｎ  ｖｉｖｏで決定される。
【００５５】
一部の実施形態では、医薬組成物は、髄腔内または脳室内投与に対して適切である。
【００５６】
一部の実施形態では、医薬組成物は、約３００〜約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を有する。
【００５７】
一部の実施形態では、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの薬学的活性成分を含む。
【００５８】
一部の実施形態では、医薬組成物の唯一の薬学的活性成分は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰ、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ、またはＣａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａを精製することによって得られる。ある特定の実施形態では、医薬組成物の唯一の薬学的活性成分は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰを精製することによって得られる。ある特定の実施形態では、医薬組成物の唯一の薬学的活性成分は、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏを精製することによって得られる。一部の実施形態では、精製することは、親水性もしくは疎水性の相互作用またはアフィニティ精製を含み、クロマトグラフィー法、例えば、ＨＰＬＣまたはゲルクロマトグラフィーによる精製などを含むことができる。
【００５９】
本開示はまた、ニーマン−ピック病Ｃ型を処置する方法であって、例えば、髄腔内または脳室内投与により、本明細書に記載されているような医薬組成物の治療有効量を、それを必要とする被験体に投与することを含む方法も提供する。一部の実施形態では、本方法は、約３００〜約３０００ｍｇの薬学的活性成分を患者に投与することを含む。一部の実施形態では、投与は、毎週、２週間ごと、３週間ごと、毎月、２カ月ごと、または３カ月ごとに行われる。例えば、本方法は、約６００〜約１８００ｍｇの薬学的活性成分を被験体に、２週間ごとに投与することを含むことができる。
【００６０】
一部の実施形態では、本方法は、タウタンパク質、アミロイドペプチド、ニューロフィラメント光タンパク質（ＮＦＬ）、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ステロール、オキシステロール、キトトリオシダーゼ活性、カルビンディン、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ−１）、ＧＭ２またはＧＭ３ガングリオシド、スフィンゴシン、およびスフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）のうちの１つまたは複数の脳脊髄液中レベルをモジュレートするのに十分な量の薬学的活性成分の投与を含む。
【００６１】
一部の実施形態では、本方法は、７−ケトコレステロール、７−ヒドロキシコレステロール、２４Ｓ−ヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２７−ヒドロキシコレステロール、およびコレスタン−３β，５α，６β−トリオールのうちの１つまたは複数の血漿中レベルをモジュレートするのに十分な量の薬学的活性成分の投与を含む。
【００６２】
一部の実施形態では、本方法は、３−スルホキシ−７−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＡ）、グリシン−コンジュゲート３−スルホキシ−７−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＧ）、およびタウリン−コンジュゲート３−スルホキシ−７−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＴ）のうちの１つまたは複数の尿中レベルをモジュレートするのに十分な量の薬学的活性成分の投与を含む。
【００６３】
一部の実施形態では、本方法は、歩行運動、微細運動技能、認知、発話、嚥下、眼球運動、記憶、聴力、および発作から選択されるＮＰＣ重症度スケールのうちの１つまたは複数のドメインスコアを維持または減少させることをさらに含む。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】図１は、Ｙａｎｊａｎｉｎら、「Ｌｉｎｅａｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  Ａｇｅ  ｏｆ  Ｏｎｓｅｔ，  ｉｎ  Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｔｙｐｅ  Ｃ」、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｐａｒｔ  Ｂ、１５３Ｂ巻：１３２〜１４０頁（２０１０年）による標準的なＮＰＣ臨床重症度スケールの一因となる臨床ドメインを例示している。
【００６５】
【図２】図２は、実施例１に記載されている第Ｉ相治験の初期分析からの結果を要約している。
【００６６】
【図３】図３は、実施例１に記載されている第Ｉ相治験のさらなる分析を要約している。
【００６７】
【図４】図４は、ベースラインからの変化を使用した第Ｉ相治験データの分析を要約している。
【００６８】
【図５】図５は、全ＮＰＣスコアを使用した第Ｉ相治験からの早期結果を要約している。
【００６９】
【図６】図６は、聴力影響を除去した第Ｉ相治験からの早期結果を要約している。
【００７０】
【図７】図７は、新規「ＮＰＣ複合」エンドポイント、または重症度スコアの一因となっている臨床ドメインを要約している。
【００７１】
【図８】図８は、新規ＮＰＣ複合エンドポイントを使用した第Ｉ相治験からの早期結果を要約している。
【００７２】
【図９】図９は、ＣＤスクリーニング法を使用した代表的ＨＰＬＣクロマトグラムを表している。
【００７３】
【図１０】図１０は、ＣＤスクリーニング法において異なる溶媒を使用した、比較ＨＰＬＣクロマトグラムを表している。上側のトレース：メタノール；下側のトレース：アセトニトリル。
【００７４】
【図１１】図１１は、ＣＤスクリーニングカラムを使用した、異なる置換度（ＤＳ）を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの質量分析法抽出イオンクロマトグラムを表している。
【００７５】
【図１２】図１２は、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８逆相カラムを使用した代表的ＨＰＬＣクロマトグラムを表している。
【００７６】
【図１３】図１３は、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｃ１８逆相クロマトグラフィー法において異なる溶媒を使用した比較ＨＰＬＣクロマトグラムを表している。上側のトレース：メタノール；下側のトレース：アセトニトリル。
【００７７】
【図１４】図１４は、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８カラムを使用した、異なる置換度（ＤＳ）を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの質量分析法抽出イオンクロマトグラムを表している。
【００７８】
【図１５】図１５は、ＨＩＬＩＣカラムで異なる溶媒を使用した、比較ＨＰＬＣクロマトグラムを表している。上側のトレース：水勾配中７９％アセトニトリル；下側のトレース：７５％アセトニトリル。
【００７９】
【図１６】図１６は、ＨＩＬＩＣカラムを使用した、異なる置換度（ＤＳ）を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの質量分析法抽出イオンクロマトグラムを表している。
【００８０】
【図１７】図１７は、シリカゲルカラムを使用した、代表的ＨＰＬＣクロマトグラムを表している。
【００８１】
【図１８】図１８は、シリカゲルカラムを使用した、異なる置換度（ＤＳ）を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの質量分析法抽出イオンクロマトグラムを表している。
【００８２】
【図１９】図１９は、市販のＫｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ、バッチＥ０２２３）（上側のトレース）、およびＤ−リモネンとの複合体形成による精製後（下側のトレース）に対する重ね合わせＨＰＬＣトレースを示している。Ｘ軸は分単位での保持時間を示している。
【００８３】
【図２０】図２０は、市販のＫｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ、バッチＥ０２２３）と比較した、水／アセトン混合物（上側のトレース）を使用した溶媒沈殿後に得た試料に対するＨＰＬＣトレースを示している。
【００８４】
【図２１】図２１は、市販のＫｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ、バッチＥ０２２３）（上側のトレース）、ならびに樹脂および木炭処理による精製後（下側のトレース）に対する重ね合わせＨＰＬＣトレースを示している。Ｘ軸は分単位での保持時間を示している。
【００８５】
【図２２】図２２は、市販のＫｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ、バッチＥ０２２３）（上側のトレース）、およびアルミナ浄化による精製後に対する重ね合わせＨＰＬＣトレースを示している。下側のトレースは、アルミナ浄化後の精製された濾液に対するデータを示し、中央のトレースは、アルミナ浄化後の精製された最初のすすぎ液に対するデータを示している。Ｘ軸は分単位での保持時間を示している。
【００８６】
【図２３】図２３は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢのアルミナクロマトグラフィーから得た画分ＡからＨのそれぞれ（Ｅを除く）に対する比較ＨＰＬＣトレースを示している。画分ＡからＨは、試料５．４．３．２．２Ａから５．４．３．２．２Ｈにそれぞれ対応する（Ｅを除く）。Ｘ軸は分単位での保持時間を示している。
【００８７】
【図２４】図２４は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）のアルミナクロマトグラフィーによる精製から収集された画分ＡからＨのそれぞれにおける不純物含有量のパーセンテージのグラフを示している。Ｘ軸上のＡからＨは、試料５．４．３．２．２Ａから５．４．３．２．２Ｈにそれぞれ対応する。Ｙ軸は不純物含有量のパーセントを示す。ＰＧ％＝プロピレングリコールのパーセント（斜線の棒）；他の全不純物％＝全シクロデキストリン関連不純物のパーセント（黒色の棒）；ＢＣＤ％＝非置換のベータ−シクロデキストリンのパーセント（白抜きの棒）；ＨＰＢＣＤ  ＤＳ−１％＝一置換のベータ−シクロデキストリンのパーセント（逆方向の斜線の棒）。
【００８８】
【図２５】図２５は、プロピレングリコール（測定される不純物）およびエチレングリコール（内部標準）を特定している、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）の例示的ガスクロマトグラムを表している。Ｘ軸は分単位での時間を示し、ｙ軸は応答を示している。
【００８９】
【図２６】図２６は、プロピレングリコール誘導体の例示的ガスクロマトグラムを表している。Ｘ軸は分単位での時間を示し、ｙ軸はミリボルト単位での応答を示している。
【００９０】
【図２７】図２７は、ガスクロマトグラフィー試料中のプロピレングリコール濃度を決定する較正グラフを表している。ＰＧ／ＥＧ＝プロピレングリコールのエチレングリコールに対する比は示されている通りである。
【００９１】
【図２８】図２８は、欧州薬局方の方法を使用した、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）（４．１のＤＳａ）の例示的１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを表している。
【００９２】
【図２９】図２９は、第１の実験室からのエレクトロスプレーＭＳスペクトルデータを提示しており、図２９Ａは、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢスペクトルを示し、図２９Ｂは、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）のスペクトルを示す。スペクトルに数を加えて、各ピークのヒドロキシプロピル部分の数を特定している。
【００９３】
【図３０】図３０は、第２の実験室からのエレクトロスプレーＭＳデータを提示しており、図３０ＡはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢのスペクトルを示し、図３０ＢはＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）のスペクトルを示す。
【００９４】
【図３１】図３１は、２つの異なる実験室で実施された、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの３つの異なるロットからのエレクトロスプレーＭＳデータを比較している。
【００９５】
【図３２】図３２は、図３１に示されているＫｌｅｐｔｏｓｅデータを作成するために使用したものと同じ条件を使用して、２つの異なる実験室によるＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）の２つの異なるロットからのエレクトロスプレーＭＳスペクトルを提示している。
【００９６】
【図３３】図３３は、１０９０と１２３０ｍ／ｚとの間のピークを示すために、図２９〜３２と比較してＹ軸が拡大されたエレクトロスプレーＭＳスペクトルを示している。図３３ＡはＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）から得たスペクトルである。図３３ＢはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢから得たスペクトルである。
【００９７】
【図３４】図３４は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢとＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）との間の差異をさらに比較するエレクトロスプレーＭＳデータを提示しており、図３４ＡはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢスペクトルを示し、図３４ＢはＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）のスペクトルを示す。数をスペクトルに加えて、各ピークにおけるヒドロキシプロピル部分の数を特定している。
【００９８】
【図３５】図３５は、９９５と１０９５ｍ／ｚとの間の、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢとＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）との間の追加のＭＳスペクトルの差異を提示しており、図３５ＡはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢスペクトルを示し、図３５ＢはＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）のスペクトルを示す。
【００９９】
【図３６】図３６は、置換フィンガープリントに対する、アルミナ吸着を用いた精製の効果を示すエレクトロスプレーＭＳデータを提示している。図３６ＡはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの出発材料からのスペクトルを示し、図３６Ｂはアルミナ上での吸収クロマトグラフィーと溶媒沈殿（水−アセトン）の組合せにより精製されたバッチＣＹＬ−４０６３からのスペクトルを提示している。
【０１００】
【図３７】図３７は、ある範囲のＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ濃度（０．１ｍＭ〜１０ｍＭ）で処理したＧＭ１８４５３およびＧＭ０５６５９細胞内での選択されたコレステロールホメオスタシス関連遺伝子の発現の倍数変化（ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）を示している。
【０１０１】
【図３８】図３８は、ＮＰＣ１変異についてホモ接合性であるＧＭ１８４５３細胞内での、コレステロールホメオスタシス遺伝子のサブセットの発現の倍数変化を示しており、この中で発現は、４つの異なる組成物に対して、処理により統計学的に有意に異なっていた（ｐ＜０．００１）：ＳＴＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ「標準物質」）；ＡＣ（アルミナクロマトグラフィーにより精製されたＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）；ＳＰ（溶媒沈殿により精製されたＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）；およびＡＰ（アルミナクロマトグラフィーおよび溶媒沈殿により精製されたＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）。
【０１０２】
【図３９】図３９は、ＧＭ１８４５３細胞がＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢおよびアルミニウムへの吸着を含むプロセスにより精製されたＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢのバッチでそれぞれ処理された場合、最も有意に影響を受けたと統計的有意性によりランク付けされた生物学的経路を示している。
【０１０３】
【図４０】図４０は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢのバッチの分取ＣＤスクリーニングクロマトグラフィーによる分離から得た様々な画分のクロマトグラムを示しており、クロマトグラフィーで分離されたヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン種の置換度を示すための注釈が付けられている。
【０１０４】
【図４１】図４１は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢのエレクトロスプレーＭＳスペクトル、「Ｌ」画分、「Ｍ」画分、および「Ｈ」画分を示し、ヒドロキシプロピル置換度によりシグナルを特定するための注釈が付けられており、図４１ＡはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢバッチＥ０２４５を示し、図４１Ｂは「Ｌ」画分（画分２のみ）を示し、図４１Ｃは「Ｍ」画分を示し（画分４〜１５のプール）；図４１Ｄは「Ｈ」画分（画分１６〜２４のプール）を示す。
【０１０５】
【図４２】図４２は、統計的有意性を降順でランク付した、１．０ｍＭの「Ｌ」、「Ｍ」、および「Ｈ」画分でのＮＰＣ細胞の処理により最も影響を受けた１０の生物学的経路を示している。
【０１０６】
【図４３】図４３は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢのバッチ（バッチＥ０２４５）の分取アルミニウム吸着クロマトグラフィーによる分離から得た様々な画分のクロマトグラムを示しており、画分「Ａ」〜「Ｆ」および「Ｋ」を生成するためにプールした数値での画分を示すために注釈が付けられ、クロマトグラフィーで分離されたヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン種の置換度を示すために注釈が付けられている。
【０１０７】
【図４４】図４４は、異なる精製方法の後のＨＰＢＣＤ混合物のクロマトグラムを示しており、図４４Ａは方法ＩＩ〜ＩＸ後の精製されたＨＰＢＣＤ混合物のクロマトグラムを示し、図４４Ｂは、方法ＸおよびＸＩ後の精製されたＨＰＢＣＤ混合物のクロマトグラムを示す。
【０１０８】
【図４５】図４５は、１８カ月の時点でのＮＰＣ第Ｉ相治験データに対して行われた分析を要約している。
【０１０９】
【図４６】図４６は、１８カ月の時点での第Ｉ相治験データの年率変化を示している。
【０１１０】
【図４７】図４７は、１８カ月の時点での第Ｉ相治験データのベースラインからの平均変化を示している。
【０１１１】
【図４８】図４８は、１８カ月の時点での第Ｉ相治験データの応答者分析を示している。
【０１１２】
【図４９】図４９は、聴力に対する処置の影響を示している。
【０１１３】
【図５０】図５０は、聴力に対する処置の影響を要約している。
【発明を実施するための形態】
【０１１４】
６．詳細な説明
６．１．実験的観察
以下の実施例１に詳細に記載されているように、本発明者らは、ＮＩＨにより行われた第Ｉ相治験からの初期データを分析したが、この試験では、ＮＰＣ１型疾患を有する患者は、既存の非経口等級の組成物、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）を使用した２−ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（「ＨＰＢＣＤ」）の髄腔内投与により処置されている。この非無作為抽出の、非盲検、単一施設実験において、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢは、増大する用量で、薬物未処置の患者のコホートに腰椎注射を介して投与されている。本発明者らの分析のいくつかには、個々のＩＮＤ下で、別の施設で髄腔内Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢで処置されている３人の患者からのデータも含めた。
【０１１５】
本発明者らの分析は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの髄腔内投与がＮＰＣ１型疾患において治療上の利益をもたらすことを確認した。標準的な総計転帰の尺度、ＮＰＣ臨床重症度スケールを使用して（Ｙａｎｊａｎｉｎら、「Ｌｉｎｅａｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  Ａｇｅ  ｏｆ  Ｏｎｓｅｔ，  ｉｎ  Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｔｙｐｅ  Ｃ」Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｐａｒｔ  Ｂ、１５３Ｂ巻：１３２〜１４０頁（２０１０年）を参照されたい、また本明細書の図１および表１も参照されたい）、未処置の疾患の自然経過が研究されてきた患者コホートの０／１３と比較して、７／１５の患者は、疾患が安定または改善していることが観察された（図５を参照されたい）。データの事後解析により通知された新規の複合エンドポイント（図７）を使用して、本発明者らは、１１／１５の実験患者が疾患の安定または改善を示したのに対して、自然経過コホートでは疾患が安定しているのは４／１３のみであることを発見した（図８を参照されたい）。本発明者らの分析のいくつかでは、本発明者らは、聴力および聴性脳幹反応（ＡＢＲ）を除去した、ＮＰＣの臨床重症度スコアを使用した。
【０１１６】
しかし、より詳細な分析は、ＨＰＢＣＤの髄腔内投与はＮＰＣ１型疾患のある特定の徴候および症状を改善するものの、それは単に他の徴候および症状の進行を遅延させるだけで、逆説的に他の症状の進行を加速しているようにみえることを示した。特に、聴力損失は、髄腔内Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢを受けた患者において加速されたようにみえる（例えば、図２、３、４を参照されたい）。
【０１１７】
以下の実施例３に詳細に示されているように、本発明者らは様々なクロマトグラフィー法によりＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの代表的バッチを分析した。これらの分析は、この非経口等級の製品が異なる置換度を有するベータ−シクロデキストリン分子の複合混合物を含むことを明らかにした（例えば、図１１、１４、１６、１８を参照されたい）；これらの種のうちのどれが観察された改善、進行の遅延、および様々な臨床ドメインの進行の加速に寄与しているか公知ではない。
【０１１８】
実施例５に記載されているエレクトロスプレー質量分析法を使用したさらなる分析は、実施例１に記載されている第Ｉ相治験で使用したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの置換フィンガープリントには、異なる市販のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）の置換フィンガープリントと比較して、顕著な差異が存在することを実証した。本発明者らは、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢは、置換フィンガープリントにおいてロット間の低い変動性、および低レベルの不純物、とりわけプロピレングリコールを有することを発見した。対照的に、本発明者らは、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）は、その置換フィンガープリントにおいてロット間の高い変動性、および有意に高いレベルのプロピレングリコール（推定される聴器毒素）を示すことを発見した。
【０１１９】
ＨＰＢＣＤがより長い期間の間、およびおそらくより頻繁な投薬で、脳脊髄液に直接投与される治験に備えるために、本発明者らは、実施例６および７に記載されている通り、推定される聴器毒素であるプロピレングリコール、沈殿物を形成することが公知である、ヒドロキシプロピル置換を有さないベータ−シクロデキストリン分子、および高度に炎症性である細菌性内毒素のレベルを減少させるための方法を開発した。本方法は特定された不純物を減少させることに成功したが、アルミナを用いた吸収クロマトグラフィーは、単独で使用するか、または溶媒沈殿と組み合わせて使用するかにかかわらず、組成上のフィンガープリントも変化させ、単一のヒドロキシプロピル置換を有するベータ−シクロデキストリン分子（ＤＳ−１）の量を実質的に減少させ、２つの置換を有するベータ−シクロデキストリン分子（ＤＳ−２）の量を減少させたことを本発明者らは観察した（実施例７；表２０を参照されたい）。低い置換度を有する分子の優勢が減少すると（ＤＳ−０は意図した通り、ＤＳ−１およびＤＳ−２は意図していない）、混合物の平均置換度（ＤＳａ）が増加した。
【０１２０】
実施例８に詳述され、図３５〜３８に要約された通り、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢおよびアルミニウムへの吸着を使用してさらに精製されたＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢのバッチを使用した遺伝子発現プロファイリング実験は、ＮＰＣ１変異についてホモ接合性である細胞上のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物の活性は、異なるヒドロキシプロピル置換度を有する種により別個に寄与された活性の複合であることを実証している。Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢと比較して、組成上のフィンガープリントが変化したにもかかわらず、驚くことに、コレステロール代謝および輸送に関与していることが公知の遺伝子の発現には変化がなかった。この発見は、より長い期間、治療効果およびより高い安全性を備えた、新規の、より高度に精製された、および組成上異なるＨＰＢＣＤ組成物を、髄腔内または脳室内経路により、ＮＰＣ疾患を有する患者のＣＳＦに投与することを可能にする。
【０１２１】
６．２．医薬組成物
本開示は、薬学的活性成分として、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物を含む医薬組成物を提供する。
【０１２２】
６．２．１．薬学的活性成分
薬学的活性成分は、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物である。「薬学的活性成分」という用語は、本開示において「活性医薬成分」の同義語として使用されている。
【０１２３】
６．２．１．１．平均置換度
本明細書で使用される場合、「１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されている」は、ベータ−シクロデキストリン分子の１つまたは複数のヒドロキシル基の水素を、ヒドロキシプロピル基またはヒドロキシプロピルオリゴマーで置き換えることを指す。例えば、「１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されている」とは、１つまたは複数のエーテル連結をもたらすベータ−シクロデキストリン分子上の１つまたは複数のＯ−Ｈ結合内への、１つまたは複数の−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ−置換基の挿入を指すことができる。
【０１２４】
ベータ−シクロデキストリンの混合物中の無水グルコース（ａｎｈｙｄｒｏｇｌｕｃｏｓｅ）単位１個当たりのヒドロキシプロピル基の数は「モル置換」または「ＭＳ」であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  ＢｅｔａｄｅｘについてのＵＳＰモノグラフ（ＵＳＰ  ＮＦ  ２０１５）（「ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフ」）に示された手順に従い決定される。本開示では、「平均モル置換」または「ＭＳａ」という用語は、その用語がＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフにおいて使用されているように、「ＭＳ」の同義語として使用され、「グルコース単位」という用語は、その用語がＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフにおいて使用されているように、「無水グルコース単位」に対する同義語として使用される。
【０１２５】
本明細書で使用される場合、「置換度」または「ＤＳ」は、ベータ−シクロデキストリン分子上で直接的または間接的に置換されているヒドロキシプロピル基の総数を指す。例えば、それぞれが１つのヒドロキシプロピル基で置換されているグルコース単位を含有するベータ−シクロデキストリン分子はＤＳ＝７を有する。別の例では、７つのグルコース単位の１つのみがヒドロキシプロピル基で置換され、そのヒドロキシプロピル基それ自体が別のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子（例えば、２つのヒドロキシプロピル基を含むＨＰの単一の存在を有するベータ−シクロデキストリン）はＤＳ＝２を有する。
【０１２６】
本明細書で使用される場合、「平均置換度」、「平均ＤＳ」、または「ＤＳａ」としても公知の「ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル基の平均数」は、ベータ−シクロデキストリン集団中のヒドロキシプロピル基の総数を、ベータ−シクロデキストリン分子の数で割ったものを指す。例証的な例では、それぞれが１つのヒドロキシプロピル基で置換されているグルコース単位を含有するベータ−シクロデキストリンと、それぞれが２つのヒドロキシプロピル基で置換されているグルコース単位を含有するベータ−シクロデキストリンとの等分混合物はＤＳａ＝１０．５を有する（ＤＳ＝７およびＤＳ＝１４を有する等分のベータ−シクロデキストリンの平均）。別の例証的な例では、７つのグルコース単位のうちの１つのみがヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（すなわち、ＤＳ＝１）３３．３％と、それぞれ１つのヒドロキシプロピル基で置換されているグルコース単位を含有するベータ−シクロデキストリン（すなわち、ＤＳ＝７）６６．７％の混合物はＤＳａ＝５．０を有する。
【０１２７】
ＤＳａは、ＭＳに７をかけることによって決定される。本明細書で使用される場合、ＤＳａは、その用語がＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフにおいて定義されているように、「置換度」の同義語として使用される。
【０１２８】
一部の実施形態では、混合物中のベータ−シクロデキストリンは、構造：
【化２】
2018517046.tif 000004
（式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、各存在について独立して、−Ｈまたは−ＨＰであり、ここで、ＨＰは１つまたは複数のヒドロキシプロピル基を含む）のグルコース単位からなる。
【０１２９】
一部の実施形態では、ＨＰは１つのヒドロキシプロピル基を含む。一部の実施形態では、ＨＰは１つのヒドロキシプロピル基から本質的になる。一部の実施形態では、ＨＰは１つのヒドロキシプロピル基からなる。
【０１３０】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのＨＰの平均存在数は、約３〜約７、例えば、約３〜約６、約３〜約５、約３〜約４、約４〜約７、約４〜約６、約４〜約５、約５〜約７、約５〜約６、または約６〜約７である。
【０１３１】
一部の実施形態では、Ｒ３＝ＨＰの全存在は、Ｒ１＝ＨＰまたはＲ２＝ＨＰのいずれかの全存在より多い。ある特定の実施形態では、Ｒ３＝ＨＰの全存在は、Ｒ１＝ＨＰとＲ２＝ＨＰとを合わせた全存在より多い。
【０１３２】
一部の実施形態では、Ｒ１とＲ２とを合わせた全存在の少なくとも約５％、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、または少なくとも約４５％はＨＰである。
【０１３３】
一部の実施形態では、Ｒ１とＲ２とを合わせた全存在の約９５％以下、例えば、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下、約７０％以下、約６５％以下、約６０％以下、約５５％以下、または約５０％以下はＨＰである。
【０１３４】
一部の実施形態では、ＨＰであるＲ１とＲ２とを合わせたパーセンテージは、約５％〜約９５％、例えば、約１０％〜約９５％、約１５％〜約９５％、約２０％〜約９５％、約２５％〜約９５％、約３０％〜約９５％、約３５％〜約９５％、約４０％〜約９５％、約４５％〜約９５％、約５０％〜約９５％、約５５％〜約９５％、約６０％〜約９５％、約６５％〜約９５％、約７０％〜約９５％、約７５％〜約９５％、約８０％〜約９５％、約８５％〜約９５％、約９０％〜約９５％など；例えば、約５％〜約９０％、約１０％〜約９０％、約１５％〜約９０％、約２０％〜約９０％、約２５％〜約９０％、約３０％〜約９０％、約３５％〜約９０％、約４０％〜約９０％、約４５％〜約９０％、約５０％〜約９０％、約５５％〜約９０％、約６０％〜約９０％、約６５％〜約９０％、約７０％〜約９０％、約７５％〜約９０％、約８０％〜約９０％、約８５％〜約９０％など；例えば、約５％〜約８５％、約１０％〜約８５％、約１５％〜約８５％、約２０％〜約８５％、約２５％〜約８５％、約３０％〜約８５％、約３５％〜約８５％、約４０％〜約８５％、約４５％〜約８５％、約５０％〜約８５％、約５５％〜約８５％、約６０％〜約８５％、約６５％〜約８５％、約７０％〜約８５％、約７５％〜約８５％、約８０％〜約８５％など；例えば、約５％〜約８０％、約１０％〜約８０％、約１５％〜約８０％、約２０％〜約８０％、約２５％〜約８０％、約３０％〜約８０％、約３５％〜約８０％、約４０％〜約８０％、約４５％〜約８０％、約５０％〜約８０％、約５５％〜約８０％、約６０％〜約８０％、約６５％〜約８０％、約７０％〜約８０％、約７５％〜約８０％など；例えば、約５％〜約７５％、約１０％〜約７５％、約１５％〜約７５％、約２０％〜約７５％、約２５％〜約７５％、約３０％〜約７５％、約３５％〜約７５％、約４０％〜約７５％、約４５％〜約７５％、約５０％〜約７５％、約５５％〜約７５％、約６０％〜約７５％、約６５％〜約７５％、約７０％〜約７５％など；例えば、約５％〜約７０％、約１０％〜約７０％、約１５％〜約７０％、約２０％〜約７０％、約２５％〜約７０％、約３０％〜約７０％、約３５％〜約７０％、約４０％〜約７０％、約４５％〜約７０％、約５０％〜約７０％、約５５％〜約７０％、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７０％など；例えば、約５％〜約６５％、約１０％〜約６５％、約１５％〜約６５％、約２０％〜約６５％、約２５％〜約６５％、約３０％〜約６５％、約３５％〜約６５％、約４０％〜約６５％、約４５％〜約６５％、約５０％〜約６５％、約５５％〜約６５％、約６０％〜約６５％など；例えば、約５％〜約６０％、約１０％〜約６０％、約１５％〜約６０％、約２０％〜約６０％、約２５％〜約６０％、約３０％〜約６０％、約３５％〜約６０％、約４０％〜約６０％、約４５％〜約６０％、約５０％〜約６０％、約５５％〜約６０％など；例えば、約５％〜約５５％、約１０％〜約５５％、約１５％〜約５５％、約２０％〜約５５％、約２５％〜約５５％、約３０％〜約５５％、約３５％〜約５５％、約４０％〜約５５％、約４５％〜約５５％、約５０％〜約５５％など；例えば、約５％〜約５０％、約１０％〜約５０％、約１５％〜約５０％、約２０％〜約５０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約５０％、約３５％〜約５０％、約４０％〜約５０％、約４５％〜約５０％など；例えば、約５％〜約４５％、約１０％〜約４５％、約１５％〜約４５％、約２０％〜約４５％、約２５％〜約４５％、約３０％〜約４５％、約３５％〜約４５％、約４０％〜約４５％など；例えば、約５％〜約４０％、約１０％〜約４０％、約１５％〜約４０％、約２０％〜約４０％、約２５％〜約４０％、約３０％〜約４０％、約３５％〜約４０％など；例えば、約５％〜約３５％、約１０％〜約３５％、約１５％〜約３５％、約２０％〜約３５％、約２５％〜約３５％、約３０％〜約３５％など；例えば、約５％〜約３０％、約１０％〜約３０％、約１５％〜約３０％、約２０％〜約３０％、約２５％〜約３０％など；例えば、約５％〜約２５％、約１０％〜約２５％、約１５％〜約２５％、約２０％〜約２５％など；例えば、約５％〜約２０％、約１０％〜約２０％、約１５％〜約２０％など；例えば、約５％〜約１５％、約１０％〜約１５％；または約５％〜約１０％などの範囲である。
【０１３５】
一部の実施形態では、Ｒ３の存在の少なくとも約５％、例えば、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、または少なくとも約５０％がＨＰである。
【０１３６】
一部の実施形態では、Ｒ３の存在の約９５％以下、例えば、約９０％以下、約８５％以下、約８０％以下、約７５％以下、約７０％以下、約６５％以下、約６０％以下、または約５５％以下はＨＰである。
【０１３７】
一部の実施形態では、ＨＰであるＲ３の存在のパーセンテージは、約２０％〜約９０％、例えば、約２５％〜約９０％、約３０％〜約９０％、約３５％〜約９０％、約４０％〜約９０％、約４５％〜約９０％、約５０％〜約９０％、約５５％〜約９０％、約６０％〜約９０％、約６５％〜約９０％、約７０％〜約９０％、約７５％〜約９０％、約８０％〜約９０％、約８５％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２５％〜約８５％、約３０％〜約８５％、約３５％〜約８５％、約４０％〜約８５％、約４５％〜約８５％、約５０％〜約８５％、約５５％〜約８５％、約６０％〜約８５％、約６５％〜約８５％、約７０％〜約８５％、約７５％〜約８５％、約８０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約２５％〜約８０％、約３０％〜約８０％、約３５％〜約８０％、約４０％〜約８０％、約４５％〜約８０％、約５０％〜約８０％、約５５％〜約８０％、約６０％〜約８０％、約６５％〜約８０％、約７０％〜約８０％、約７５％〜約８０％、約２０％〜約７５％、約２５％〜約７５％、約３０％〜約７５％、約３５％〜約７５％、約４０％〜約７５％、約４５％〜約７５％、約５０％〜約７５％、約５５％〜約７５％、約６０％〜約７５％、約６５％〜約７５％、約７０％〜約７５％、約２０％〜約７０％、約２５％〜約７０％、約３０％〜約７０％、約３５％〜約７０％、約４０％〜約７０％、約４５％〜約７０％、約５０％〜約７０％、約５５％〜約７０％、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７０％、約２０％〜約６５％、約２５％〜約６５％、約３０％〜約６５％、約３５％〜約６５％、約４０％〜約６５％、約４５％〜約６５％、約５０％〜約６５％、約５５％〜約６５％、約６０％〜約６５％、約２０％〜約６０％、約２５％〜約６０％、約３０％〜約６０％、約３５％〜約６０％、約４０％〜約６０％、約４５％〜約６０％、約５０％〜約６０％、約５５％〜約６０％、約２０％〜約５５％、約２５％〜約５５％、約３０％〜約５５％、約３５％〜約５５％、約４０％〜約５５％、約４５％〜約５５％、約５０％〜約５５％、約２０％〜約５０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約５０％、約３５％〜約５０％、約４０％〜約５０％、約４５％〜約５０％、約２０％〜約４５％、約２５％〜約４５％、約３０％〜約４５％、約３５％〜約４５％、約４０％〜約４５％、約５％〜約４０％、約１０％〜約４０％、約１５％〜約４０％、約２０％〜約４０％、約２５％〜約４０％、約３０％〜約４０％、約３５％〜約４０％、約２０％〜約３５％、約２５％〜約３５％、約３０％〜約３５％、約２０％〜約３０％、約２５％〜約３０％、または約２０％〜約２５％の範囲である。
【０１３８】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約７０％、例えば、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％が、約４〜約７、例えば、約４〜約６、約４〜約５、約５〜約７、約５〜約６、または約６〜約７のベータ−シクロデキストリン１つ当たりのＨＰの平均存在数を総合して有する。
【０１３９】
一部の実施形態では、約４〜７、例えば、約４〜約６、約４〜約５、約５〜約７、約５〜約６、または約６〜約７のベータ−シクロデキストリン１つ当たりのＨＰの平均存在数を総合して有するベータ−シクロデキストリンのパーセンテージは、約５０％〜約９９％、例えば、約５５％〜約９９％、約６０％〜約９９％、約６５％〜約９９％、約７０％〜約９９％、約７５％〜約９９％、約８０％〜約９９％、約８５％〜約９９％、約９０％〜約９９％、約９５％〜約９９％など；例えば、約５０％〜約９７％など、例えば、約５５％〜約９７％、約６０％〜約９７％、約６５％〜約９７％、約７０％〜約９７％、約７５％〜約９７％、約８０％〜約９７％、約８５％〜約９７％、約９０％〜約９７％、約９５％〜約９７％など；例えば、約５０％〜約９５％、約５５％〜約９５％、約６０％〜約９５％、約６５％〜約９５％、約７０％〜約９５％、約７５％〜約９５％、約８０％〜約９５％、約８５％〜約９５％、約９０％〜約９５％など；例えば、約５０％〜約９０％、約５５％〜約９０％、約６０％〜約９０％、約６５％〜約９０％、約７０％〜約９０％、約７５％〜約９０％、約８０％〜約９０％、約８５％〜約９０％など；例えば、約５０％〜約８５％、約５５％〜約８５％、約６０％〜約８５％、約６５％〜約８５％、約７０％〜約８５％、約７５％〜約８５％、約８０％〜約８５％など；例えば、約５０％〜約８０％、約５５％〜約８０％、約６０％〜約８０％、約６５％〜約８０％、約７０％〜約８０％、約７５％〜約８０％など；例えば、約５０％〜約７５％、約５５％〜約７５％、約６０％〜約７５％、約６５％〜約７５％、約７０％〜約７５％など；例えば、約５０％〜約７０％、約５５％〜約７０％、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７０％など；例えば、約５０％〜約６５％、約５５％〜約６５％、約６０％〜約６５％など；例えば、約５０％〜約６０％、約５５％〜約６０％など；または例えば、約５０％〜約５５％などの範囲である。
【０１４０】
ある特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、薬学的活性成分として、非置換のベータ−シクロデキストリン分子と、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物を含み、この混合物は、約３〜約７のベータ−シクロデキストリン分子１つ当たりのヒドロキシプロピル基の平均数（ＤＳａ）を有する。
【０１４１】
一部の実施形態では、ＤＳａは約３〜約５、例えば、約３〜約４などである。一部の実施形態では、ＤＳａは３．３±０．３、３．５±０．３、または３．７±０．３である。他の実施形態では、ＤＳａは３．２±０．２、３．３±０．２、３．４±０．２、３．５±０．２、３．６±０．２、３．７±０．２、または３．８±０．２である。他の実施形態では、ＤＳａは３．１±０．１、３．２±０．１、３．３±０．１、３．４±０．１、３．５±０．１、３．６±０．１、３．７±０．１、３．８±０．１、または３．９±０．１である。
【０１４２】
一部の実施形態では、ＤＳａは約３．５〜約５．５、例えば、約３．５〜約４．５などである。一部の実施形態では、ＤＳａは３．８±０．３、４．０±０．３、または４．２±０．３である。他の実施形態では、ＤＳａは３．７±０．２、３．８±０．２、３．９±０．２、４．０±０．２、４．１±０．２、４．２±０．２、または４．３±０．２である。他の実施形態では、ＤＳａは３．６±０．１、３．７±０．１、３．８±０．１、３．９±０．１、４．０±０．１、４．１±０．１、４．２±０．１、４．３±０．１、または４．４±０．１である。
【０１４３】
一部の実施形態では、ＤＳａは約４〜約６、例えば、約４〜約５などである。一部の実施形態では、ＤＳａは４．３±０．３、４．５±０．３、または４．７±０．３である。他の実施形態では、ＤＳａは４．２±０．２、４．３±０．２、４．４±０．２、４．５±０．２、４．６±０．２、４．７±０．２、または４．８±０．２である。他の実施形態では、ＤＳａは４．１±０．１、４．２±０．１、４．３±０．１、４．４±０．１、４．５±０．１、４．６±０．１、４．７±０．１、４．８±０．１、または４．９±０．１である。
【０１４４】
一部の実施形態では、ＤＳａは約４．５〜約６．５、例えば、約４．５〜約５．５などである。一部の実施形態では、ＤＳａは４．８±０．３、５．０±０．３、または５．２±０．３である。他の実施形態では、ＤＳａは４．７±０．２、４．８±０．２、４．９±０．２、５．０±０．２、５．１±０．２、５．２±０．２、または５．３±０．２である。他の実施形態では、ＤＳａは４．６±０．１、４．７±０．１、４．８±０．１、４．９±０．１、５．０±０．１、５．１±０．１、５．２±０．１、５．３±０．１、または５．４±０．１である。
【０１４５】
一部の実施形態では、ＤＳａは約５〜約７、例えば、約５〜約６などである。一部の実施形態では、ＤＳａは５．３±０．３、５．５±０．３、または５．７±０．３である。他の実施形態では、ＤＳａは５．２±０．２、５．３±０．２、５．４±０．２、５．５±０．２、５．６±０．２、５．７±０．２、または５．８±０．２である。他の実施形態では、ＤＳａは５．１±０．１、５．２±０．１、５．３±０．１、５．４±０．１、５．５±０．１、５．６±０．１、５．７±０．１、５．８±０．１、または５．９±０．１である。
【０１４６】
一部の実施形態では、ＤＳａは約５．５〜約６．５である。一部の実施形態では、ＤＳａは５．８±０．３、６．０±０．３、または６．２±０．３である。他の実施形態では、ＤＳａは５．７±０．２、５．８±０．２、５．９±０．２、６．０±０．２、６．１±０．２、６．２±０．２、または６．３±０．２である。他の実施形態では、ＤＳａは５．６±０．１、５．７±０．１、５．８±０．１、５．９±０．１、６．０±０．１、６．１±０．１、６．２±０．１、６．３±０．１、または６．４±０．１である。
【０１４７】
一部の実施形態では、ＤＳａは約６〜約７である。一部の実施形態では、ＤＳａは６．３±０．３、６．５±０．３、または６．７±０．３である。他の実施形態では、ＤＳａは６．２±０．２、６．３±０．２、６．４±０．２、６．５±０．２、６．６±０．２、６．７±０．２、または６．８±０．２である。他の実施形態では、ＤＳａは６．１±０．１、６．２±０．１、６．３±０．１、６．４±０．１、６．５±０．１、６．６±０．１、６．７±０．１、６．８±０．１、または６．９±０．１である。
【０１４８】
一部の実施形態では、ＤＳａは約４．１±１５％、約４．２±１５％、約４．３±１５％、約４．４±１５％、または約４．５±１５％、例えば、約４．１±１０％、約４．２±１０％、約４．３±１０％、約４．４±１０％など、または約４．５±１０％、例えば、約４．１±５％、約４．２±５％、約４．３±５％、約４．４±５％、または約４．５±５％などである。例えば、ある特定の実施形態では、ＤＳａは約４．３１±１０％、約４．３２±１０％、約４．３３±１０％、約４．３４±１０％、約４．３５±１０％、約４．３６±１０％、または約４．３７±１０％、例えば、約４．３１±５％、約４．３２±５％、約４．３３±５％、約４．３４±５％、約４．３５±５％、約４．３６±５％、または約４．３７±５％などである。特定の実施形態では、ＤＳａは約４．３４±１０％、例えば、約４．３４±５％などである。
【０１４９】
一部の実施形態では、ＤＳａは約４．３±１５％、約４．４±１５％、約４．５±１５％、約４．６±１５％、または約４．７±１５％、例えば、約４．３±１０％、約４．４±１０％、約４．５±１０％、約４．６±１０％など、または約４．７±１０％、例えば、約４．３±５％、約４．４±５％、約４．５±５％、約４．６±５％、または約４．７±５％などである。例えば、ある特定の実施形態では、ＤＳａは約４．４７±１０％、約４．４８±１０％、約４．４９±１０％、約４．５０±１０％、約４．５１±１０％、約４．５２±１０％、または約４．５３±１０％、例えば、約４．４７±５％、約４．４８±５％、約４．４９±５％、約４．５０±５％、約４．５１±５％、約４．５２±５％、または約４．５３±５％などである。特定の実施形態では、ＤＳａは約４．５０±１０％、例えば、約４．５０±５％などである。
【０１５０】
一部の実施形態では、ＤＳａは約６．１±１５％、約６．２±１５％、約６．３±１５％、約６．４±１５％、または約６．５±１５％、例えば、約６．１±１０％、約６．２±１０％、約６．３±１０％、約６．４±１０％など、または約６．５±１０％、例えば、約６．１±５％、約６．２±５％、約６．３±５％、約６．４±５％、または約６．５±５％などである。例えば、ある特定の実施形態では、ＤＳａは約６．３４±１０％、約６．３５±１０％、約６．３６±１０％、約６．３７±１０％、約６．３８±１０％、約６．３９±１０％、または約６．４０±１０％、例えば、約６．３４±５％、約６．３５±５％、約６．３６±５％、約６．３７±５％、約６．３８±５％、約６．３９±５％、または約６．４０±５％などである。特定の実施形態では、ＤＳａは約６．３７±１０％、例えば、約６．３７±５％などである。
【０１５１】
一部の実施形態では、ＤＳａは約６．３±１５％、約６．４±１５％、約６．５±１５％、約６．６±１５％、または約６．７±１５％、例えば、約６．３±１０％、約６．４±１０％、約６．５±１０％、約６．６±１０％など、または約６．７±１０％、例えば、約６．３±５％、約６．４±５％、約６．５±５％、約６．６±５％、または約６．７±５％などである。例えば、ある特定の実施形態では、ＤＳａは約６．５０±１０％、約６．５１±１０％、約６．５２±１０％、約６．５３±１０％、約６．５４±１０％、約６．５５±１０％、または約６．５６±１０％、例えば、約６．５０±５％、約６．５１±５％、約６．５２±５％、約６．５３±５％、約６．５４±５％、約６．５５±５％、または約６．５６±５％などである。特定の実施形態では、ＤＳａは約６．５３±１０％、例えば、約６．５３±５％などである。
【０１５２】
非置換のベータ−シクロデキストリン分子と、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物内の置換度の分布は変動し得る。例えば、それぞれが１つのヒドロキシプロピル基で置換されているグルコース単位を含有するベータ−シクロデキストリンと、それぞれが２つのヒドロキシプロピル基で置換されているグルコース単位を含有するベータ−シクロデキストリンの等分混合物は、ＤＳａ＝１０．５を有する（ＤＳ＝７およびＤＳ＝１４を有する等分のベータ−シクロデキストリンの平均）。ＤＳａ＝１０．５であるにもかかわらず、この例では混合物内にＤＳ＝１０またはＤＳ＝１１を有するベータ−シクロデキストリンは存在しない。他の場合には、ベータ−シクロデキストリン混合物内のベータ−シクロデキストリンの大部分はＤＳａに近いＤＳを有する。
【０１５３】
本開示の一部の実施形態では、混合物内のベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±Ｘσ（式中、σは標準偏差であり、Ｘは１、２、または３である）以内のＤＳを有する。例えば、一部の実施形態では、混合物内のベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±１σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±１σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±１σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±１σ以内のＤＳを有する。
【０１５４】
一部の実施形態では、混合物内のベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±２σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±２σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±２σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±２σ以内のＤＳを有する。
【０１５５】
一部の実施形態では、混合物内のベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±３σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±３σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±３σ以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±３σ以内のＤＳを有する。
【０１５６】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±１以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±１以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±１以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±１以内のＤＳを有する。
【０１５７】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±０．８以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±０．８以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±０．８以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±０．８以内のＤＳを有する。
【０１５８】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±０．６以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±０．６以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±０．６以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±０．６以内のＤＳを有する。
【０１５９】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±０．５以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±０．５以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±０．５以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±０．５以内のＤＳを有する。
【０１６０】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±０．４以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±０．４以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±０．４以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±０．４以内のＤＳを有する。
【０１６１】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±０．３以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±０．３以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±０．３以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±０．３以内のＤＳを有する。
【０１６２】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±０．２以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±０．２以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±０．２以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±０．２以内のＤＳを有する。
【０１６３】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約５０％、例えば、少なくとも約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はＤＳａ±０．１以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも７０％はＤＳａ±０．１以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９０％はＤＳａ±０．１以内のＤＳを有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも９５％はＤＳａ±０．１以内のＤＳを有する。
【０１６４】
一部の実施形態では、ＭＳは、０．４０〜０．８０、例えば、０．４１〜０．７９、０．４２〜０．７８、０．４３〜０．７７、０．４４〜０．７６、０．４５〜０．７５、０．４６〜０．７４、０．４７〜０．７３、０．４８〜０．７２、０．４９〜０．７１、０．５０〜０．７０、０．５１〜０．６９、０．５２〜０．６８、０．５３〜０．６７、０．５４〜０．６６、０．５５〜０．６５、０．５６〜０．６４、０．５７〜０．６３、０．５８〜０．６２、または０．５９〜０．６１の範囲である。
【０１６５】
ある特定の実施形態では、ＭＳは約０．４０、約０．４１、約０．４２、約０．４３、約０．４４、約０．４５、約０．４６、約０．４７、約０．４８、約０．４９、約０．５０、約０．５１、約０．５２、約０．５３、約０．５４、約０．５５、約０．５６、約０．５７、約０．５８、約０．５９、約０．６０、約０．６１、約０．６２、約０．６３、約０．６４、約０．６５、約０．６６、約０．６７、約０．６８、約０．６９、約０．７０、約０．７１、約０．７２、約０．７３、約０．７４、約０．７５、約０．７６、約０．７７、約０．７８、約０．７９、または約０．８０である。
【０１６６】
ある特定の実施形態では、ＭＳは約０．５７１〜０．６８６（ＤＳａは約４．０〜約４．８）である。これらの実施形態の一部では、ＭＳは約０．５８〜約０．６８の範囲である。現在好ましい実施形態では、ＭＳは０．５８〜０．６８の範囲である。
【０１６７】
様々な実施形態では、ＭＳは少なくとも約０．５５である。ある特定の実施形態では、ＭＳは少なくとも約０．５６、０．５７、０．５８、０．５９、または０．６０である。ある特定の実施形態では、ＭＳは約０．７０以下である。特定の実施形態では、ＭＳは約０．６９、０．６８、０．６７、０．６６、または０．６５以下である。
【０１６８】
ヒドロキシプロピル基は、モノマーとしてベータ−シクロデキストリンに結合することができるか、またはこれら自体が１つまたは複数の追加のヒドロキシプロピル基に順次結合することによって、ヒドロキシプロピルオリゴマーを形成することができ、これが次いでベータ−シクロデキストリンに結合する。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル基は、構造−［ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ］ｎＨ（式中、ｎ≧１である）のヒドロキシプロピル鎖として、ベータ−シクロデキストリンのヒドロキシル位置において置換されており、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は約３〜約７、例えば、約３〜約６、約３〜約５、約３〜約４、約４〜約７、約４〜約６、約４〜約５、約５〜約７、約５〜約６、または約６〜約７である。一部の実施形態では、ｎは１、２、３または４である。
【０１６９】
１つの例証的な例では、構造−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＯＨのヒドロキシプロピル鎖は、ヒドロキシプロピル鎖内に１つのヒドロキシプロピル基を含む（すなわち、ｎ＝１）。別の例証的な例では、構造−［ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｏ］３Ｈのヒドロキシプロピル鎖はヒドロキシプロピル鎖内に３つのヒドロキシプロピル基を含む（すなわち、ｎ＝３）。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は３．３±０．３、３．４±０．３、３．６±０．３、または３．８±０．３である。他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は４．０±０．３、４．２±０．３、４．４±０．３、４．６±０．３、または４．８±０．３である。他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は５．０±０．３、５．２±０．３、５．４±０．３、５．６±０．３、または５．８±０．３である。および他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は６．０±０．３、６．２±０．３、６．４±０．３、６．６±０．３、または６．７±０．３である。
【０１７１】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は３．２±０．２、３．３±０．２、３．４±０．２、３．５±０．２、３．６±０．２、３．７±０．２、または３．８±０．２である。他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は４．０±０．２、４．１±０．２、４．２±０．２、４．３±０．２、４．４±０．２、４．５±０．２、４．６±０．２、４．７±０．２、または４．８±０．２である。他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は５．０±０．２、５．１±０．２、５．２±０．２、５．３±０．２、５．４±０．２、５．５±０．２、５．６±０．２、５．７±０．２、または５．８±０．２である。および他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は６．０±０．２、６．１±０．２、６．２±０．２、６．３±０．２、６．４±０．２、６．５±０．２、６．６±０．２、６．７±０．２、または６．８±０．２である。
【０１７２】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は３．１±０．１、３．２±０．１、３．３±０．１、３．４±０．１、３．５±０．１、３．６±０．１、３．７±０．１、３．８±０．１、または３．９±０．１である。他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は４．０±０．１、４．１±０．１、４．２±０．１、４．３±０．１、４．４±０．１、４．５±０．１、４．６±０．１、４．７±０．１、４．８±０．１、または４．９±０．１である。他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は５．０±０．１、５．１±０．１、５．２±０．１、５．３±０．１、５．４±０．１、５．５±０．１、５．６±０．１、５．７±０．１、５．８±０．１、または５．９±０．１である。および他の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は６．０±０．１、６．１±０．１、６．２±０．１、６．３±０．１、６．４±０．１、６．５±０．１、６．６±０．１、６．７±０．１、６．８±０．１、または６．９±０．１である。
【０１７３】
一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の少なくとも約５０％、例えば、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％はｎ＝１を有する。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の少なくとも７０％はｎ＝１を有する。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の少なくとも９０％はｎ＝１を有する。
【０１７４】
一部の実施形態では、ｎ＝１を有するヒドロキシプロピル鎖のパーセンテージは、約５０％〜約９９％、例えば、約５５％〜約９９％、約６０％〜約９９％、約６５％〜約９９％、約７０％〜約９９％、約７５％〜約９９％、約８０％〜約９９％、約８５％〜約９９％、約９０％〜約９９％、約９５％〜約９９％など；例えば、約５０％〜約９７％など、例えば、約５５％〜約９７％、約６０％〜約９７％、約６５％〜約９７％、約７０％〜約９７％、約７５％〜約９７％、約８０％〜約９７％、約８５％〜約９７％、約９０％〜約９７％、約９５％〜約９７％など；例えば、約５０％〜約９５％、約５５％〜約９５％、約６０％〜約９５％、約６５％〜約９５％、約７０％〜約９５％、約７５％〜約９５％、約８０％〜約９５％、約８５％〜約９５％、約９０％〜約９５％など；例えば、約５０％〜約９０％、約５５％〜約９０％、約６０％〜約９０％、約６５％〜約９０％、約７０％〜約９０％、約７５％〜約９０％、約８０％〜約９０％、約８５％〜約９０％など；例えば、約５０％〜約８５％、約５５％〜約８５％、約６０％〜約８５％、約６５％〜約８５％、約７０％〜約８５％、約７５％〜約８５％、約８０％〜約８５％など；例えば、約５０％〜約８０％、約５５％〜約８０％、約６０％〜約８０％、約６５％〜約８０％、約７０％〜約８０％、約７５％〜約８０％など；例えば、約５０％〜約７５％、約５５％〜約７５％、約６０％〜約７５％、約６５％〜約７５％、約７０％〜約７５％など；例えば、約５０％〜約７０％、約５５％〜約７０％、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７０％など；例えば、約５０％〜約６５％、約５５％〜約６５％、約６０％〜約６５％など；例えば、約５０％〜約６０％、約５５％〜約６０％など；または例えば、約５０％〜約５５％などの範囲である。
【０１７５】
一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の約５０％未満、例えば、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約３％などはｎ＝２を有する。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の３０％未満はｎ＝２を有する。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の１０％未満はｎ＝２を有する。
【０１７６】
一部の実施形態では、ｎ＝２を有するヒドロキシプロピル鎖のパーセンテージは、約５％〜約５０％、例えば、約１０％〜約５０％、約１５％〜約５０％、約２０％〜約５０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約５０％、約３５％〜約５０％、約４０％〜約５０％、約４５％〜約５０％など；例えば、約５％〜約４５％、約１０％〜約４５％、約１５％〜約４５％、約２０％〜約４５％、約２５％〜約４５％、約３０％〜約４５％、約３５％〜約４５％、約４０％〜約４５％など；例えば、約５％〜約４０％、約１０％〜約４０％、約１５％〜約４０％、約２０％〜約４０％、約２５％〜約４０％、約３０％〜約４０％、約３５％〜約４０％など；例えば、約５％〜約３５％、約１０％〜約３５％、約１５％〜約３５％、約２０％〜約３５％、約２５％〜約３５％、約３０％〜約３５％など；例えば、約５％〜約３０％、約１０％〜約３０％、約１５％〜約３０％、約２０％〜約３０％、約２５％〜約３０％など；例えば、約５％〜約２５％、約１０％〜約２５％、約１５％〜約２５％、約２０％〜約２５％など；例えば、約５％〜約２０％、約１０％〜約２０％、約１５％〜約２０％など；例えば、約５％〜約１５％、約１０％〜約１５％；または約５％〜約１０％などの範囲である。
【０１７７】
一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の約５０％未満、例えば、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、または約３％などはｎ＞２を有する。一部の実施形態では、ヒドロキシプロピル鎖の１０％未満はｎ＞２を有する。
【０１７８】
一部の実施形態では、ｎ＞２を有するヒドロキシプロピル鎖のパーセンテージは、約５％〜約５０％、例えば、約１０％〜約５０％、約１５％〜約５０％、約２０％〜約５０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約５０％、約３５％〜約５０％、約４０％〜約５０％、約４５％〜約５０％など；例えば、約５％〜約４５％、約１０％〜約４５％、約１５％〜約４５％、約２０％〜約４５％、約２５％〜約４５％、約３０％〜約４５％、約３５％〜約４５％、約４０％〜約４５％など；例えば、約５％〜約４０％、約１０％〜約４０％、約１５％〜約４０％、約２０％〜約４０％、約２５％〜約４０％、約３０％〜約４０％、約３５％〜約４０％など；例えば、約５％〜約３５％、約１０％〜約３５％、約１５％〜約３５％、約２０％〜約３５％、約２５％〜約３５％、約３０％〜約３５％など；例えば、約５％〜約３０％、約１０％〜約３０％、約１５％〜約３０％、約２０％〜約３０％、約２５％〜約３０％など；例えば、約５％〜約２５％、約１０％〜約２５％、約１５％〜約２５％、約２０％〜約２５％など；例えば、約５％〜約２０％、約１０％〜約２０％、約１５％〜約２０％など；例えば、約５％〜約１５％、約１０％〜約１５％など；または例えば、約５％〜約１０％などの範囲である。
【０１７９】
一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数は約４〜約６である。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの少なくとも約６０％、例えば、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９７％は総合して、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数約４〜約６を有する。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン１つ当たりのヒドロキシプロピル鎖の平均数約４〜約６を総合して有するベータ−シクロデキストリンのパーセンテージは、約６０％〜約９７％、例えば、約６５％〜約９７％、約７０％〜約９７％、約７５％〜約９７％、約８０％〜約９７％、約８５％〜約９７％、約９０％〜約９７％など；例えば、約６０％〜約９５％、約６５％〜約９５％、約７０％〜約９５％、約７５％〜約９５％、約８０％〜約９５％、約８５％〜約９５％、約９０％〜約９５％など、例えば、約６０％〜約９０％、約６５％〜約９０％、約７０％〜約９０％、約７５％〜約９０％、約８０％〜約９０％、約８５％〜約９０％など；例えば、約６０％〜約８５％、約６５％〜約８５％、約７０％〜約８５％、約７５％〜約８５％、約８０％〜約８５％など、例えば、約６０％〜約８０％、約６５％〜約８０％、約７０％〜約８０％、約７５％〜約８０％など、例えば、約６０％〜約７５％、約６５％〜約７５％、約７０％〜約７５％など、例えば、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７０％など、または例えば、約６０％〜約６５％などの範囲である。
【０１８０】
６．２．１．２．置換フィンガープリント
６．２．１．２．１．ＤＳ−０
典型的な実施形態では、薬学的活性成分は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、約２％未満、例えば、約１．５％未満、約１．４％未満、約１．３％未満、約１．２％未満、約１．１％未満、約１．０％未満、約０．９％未満、約０．８％未満、約０．７％未満、約０．６％未満、約０．５％未満、約０．４％未満、約０．３％未満、約０．２％未満、約０．１％未満、約０．０９％未満、約０．０８％未満、約０．０７％未満、約０．０６％未満、または約０．０５％未満などの非置換のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−０」；「ＢＣＤ」）を含有する。
【０１８１】
典型的な実施形態では、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、ベータ−シクロデキストリン混合物の１％以下（「ＮＭＴ」）はヒドロキシプロピル基で置換されていない（ＢＣＤ）。
【０１８２】
一部の実施形態では、薬学的活性成分中の非置換のベータ−シクロデキストリンのレベルは、約０．０５％〜約２％、例えば、約０．０５％〜約１．５％、約０．０５％〜約１．４％、約０．０５％〜約１．３％、約０．０５％〜約１．２％、約０．０５％〜約１．１％、約０．０５％〜約１．０％、約０．０５％〜約０．８％、約０．０５％〜約０．６％、約０．０５％〜約０．５％、約０．０５％〜約０．４％、約０．０５％〜約０．３％、約０．０５％〜約０．２％、約０．０５％〜約０．１％、約０．０５％〜約０．０７％、約０．０７％〜約１．５％、約０．０７％〜約１．４％、約０．０７％〜約１．３％、約０．０７％〜約１．２％、約０．０７％〜約１．１％、約０．０７％〜約１．０％、約０．０７％〜約０．８％、約０．０７％〜約０．６％、約０．０７％〜約０．５％、約０．０７％〜約０．４％、約０．０７％〜約０．３％、約０．０７％〜約０．２％、約０．０７％〜約０．１％、約０．１％〜約１．５％、約０．１％〜約１．４％、約０．１％〜約１．３％、約０．１％〜約１．２％、約０．１％〜約１．１％、約０．１％〜約１．０％、約０．１％〜約０．８％、約０．１％〜約０．６％、約０．１％〜約０．５％、約０．１％〜約０．４％、約０．１％〜約０．３％、約０．１％〜約０．２％、約０．２％〜約１．５％、約０．２％〜約１．４％、約０．２％〜約１．３％、約０．２％〜約１．２％、約０．２％〜約１．１％、約０．２％〜約１．０％、約０．２％〜約０．８％、約０．２％〜約０．６％、約０．２％〜約０．５％、約０．２％〜約０．４％、約０．２％〜約０．３％、約０．３％〜約１．５％、約０．３％〜約１．４％、約０．３％〜約１．３％、約０．３％〜約１．２％、約０．３％〜約１．１％、約０．３％〜約１．０％、約０．３％〜約０．８％、約０．３％〜約０．６％、約０．３％〜約０．５％、約０．３％〜約０．４％、約０．４％〜約１．５％、約０．４％〜約１．４％、約０．４％〜約１．３％、約０．４％〜約１．２％、約０．４％〜約１．１％、約０．４％〜約１．０％、約０．４％〜約０．８％、約０．４％〜約０．６％、約０．４％〜約０．５％、約０．５％〜約１．５％、約０．５％〜約１．４％、約０．５％〜約１．３％、約０．５％〜約１．２％、約０．５％〜約１．１％、約０．５％〜約１．０％、約０．５％〜約０．８％、約０．５％〜約０．６％、約０．６％〜約１．５％、約０．６％〜約１．４％、約０．６％〜約１．３％、約０．６％〜約１．２％、約０．６％〜約１．１％、約０．６％〜約１．０％、約０．６％〜約０．８％、約０．８％〜約１．５％、約０．８％〜約１．４％、約０．８％〜約１．３％、約０．８％〜約１．２％、約０．８％〜約１．１％、約０．８％〜約１．０％、約１．０％〜約１．５％、約１．０％〜約１．４％、約１．０％〜約１．３％、約１．０％〜約１．２％、約１．０％〜約１．１％、約１．１％〜約１．５％、約１．１％〜約１．４％、約１．１％〜約１．３％、約１．１％〜約１．２％、約１．２％〜約１．５％、約１．２％〜約１．４％、約１．２％〜約１．３％、約１．３％〜約１．５％、約１．３％〜約１．４％、または約１．４％〜約１．５％などの範囲である。
【０１８３】
様々な実施形態では、組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物の約０．０１％以下のＢＣＤ、約０．０２％以下のＢＣＤ、約０．０３％以下のＢＣＤ、約０．０４％以下のＢＣＤ、または約０．０５％以下のＢＣＤを含む。
【０１８４】
６．２．１．２．２．ＤＳ−１
典型的な実施形態では、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、ベータ−シクロデキストリン混合物の４％未満は１つのヒドロキシプロピル基だけで置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１」）である。
【０１８５】
様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の３．９％未満、３．８％未満、３．７％未満、３．６％未満、または３．５％未満はＤＳ−１である。ある特定の実施形態では、薬学的活性成分は、３．５％、３．４％、３．３％、３．２％、３．１％、または３．０％未満のＤＳ−１を含む。特定の実施形態では、薬学的活性成分は、２．９％、２．８％、２．７％、２．６％、２．５％、２．４％、２．３％、２．２％、２．１％、または２．０％未満のＤＳ−１を含む。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン分子の混合物は、１．９％、１．８％、１．７％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、または１．０％未満のＤＳ−１を含む。現在好ましい実施形態では、薬学的活性成分は、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％または０．１％未満のＤＳ−１、さらに約０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％未満のＤＳ−１を含む。ある特定の好ましい実施形態では、組成物は、０．０３％未満、さらに０．０２％までも低いＤＳ−１を含む。
【０１８６】
現在好ましい実施形態では、組成物は、約０．０５％未満のＢＣＤおよび約０．０３％未満のＤＳ−１を含む。
【０１８７】
６．２．１．２．３．ＤＳ−２
様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、２つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−２」）の低いパーセンテージを有する。
【０１８８】
様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の３．９％未満、３．８％未満、３．７％未満、３．６％未満、または３．５％未満はＤＳ−２である。ある特定の実施形態では、薬学的活性成分は、３．５％、３．４％、３．３％、３．２％、３．１％、または３．０％未満のＤＳ−２を含む。特定の実施形態では、薬学的活性成分は、２．９％、２．８％、２．７％、２．６％、２．５％、２．４％、２．３％、２．２％、２．１％、または２．０％未満のＤＳ−２を含む。一部の実施形態では、ベータ−シクロデキストリン分子の混合物は、１．９％、１．８％、１．７％、１．６％、１．５％、１．４％、１．３％、１．２％、１．１％、または１．０％未満のＤＳ−２を含む。現在好ましい実施形態では、薬学的活性成分は、０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％または０．１％未満のＤＳ−２、さらに約０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％未満のＤＳ−２を含む。ある特定の好ましい実施形態では、組成物は、０．０３％未満、さらに０．０２％までも低いＤＳ−２を含む。
【０１８９】
６．２．１．２．４．ＤＳ−３
典型的な実施形態では、混合物は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、全混合物のパーセンテージとして、３つのヒドロキシプロピル置換を有する少なくとも１０％のベータ−シクロデキストリン分子（「ＤＳ−３」）を含む。様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、または少なくとも２５％はＤＳ−３である。
【０１９０】
様々な実施形態では、混合物は、全混合物のパーセンテージとして、３０％以下、例えば、２９％以下、２８％以下、２７％以下、２６％以下、２５％以下、２４％以下、２３％以下、２２％以下、２１％以下、２０％以下、１９％以下、１８％以下、１７％以下、１６％以下、または１５％以下などのＤＳ−３を含む。
【０１９１】
ある特定の実施形態では、全混合物中のＤＳ−３のパーセンテージは、１０％〜３０％、例えば、１１％〜２９％、１２％〜２８％、１３％〜２７％、１４％〜２６％、１５％〜２５％、１６％〜２４％、１７％〜２３％、１８％〜２２％、または１９％〜２１％などの範囲である。
【０１９２】
様々な実施形態では、混合物は、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、または約２５％のＤＳ−３を含む。
【０１９３】
６．２．１．２．５．ＤＳ−４
典型的な実施形態では、混合物は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、全混合物のパーセンテージとして、４つのヒドロキシプロピル置換を有する少なくとも２０％のベータ−シクロデキストリン分子（「ＤＳ−４」）を含む。様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、または少なくとも３５％はＤＳ−４である。
【０１９４】
様々な実施形態では、混合物は、全混合物のパーセンテージとして、４０％以下、例えば、３９％以下、３８％以下、３７％以下、３６％以下、３５％以下、３４％以下、３３％以下、３２％以下、３１％以下、３０％以下、２９％以下、２８％以下、２７％以下、２６％以下、または２５％以下などのＤＳ−４を含む。
【０１９５】
ある特定の実施形態では、全混合物中のＤＳ−４のパーセンテージは、２０％〜４０％、例えば、２１％〜３９％、２２％〜３８％、２３％〜３７％、２４％〜３６％、２５％〜３５％、２６％〜３４％、２７％〜３３％、２８％〜３２％、または２９％〜３１％などの範囲である。
【０１９６】
様々な実施形態では、混合物は、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、約３０％、約３１％、約３２％、約３３％、約３４％、または約３５％のＤＳ−４を含む。
【０１９７】
６．２．１．２．６．ＤＳ−５
典型的な実施形態では、混合物は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、全混合物のパーセンテージとして、５つのヒドロキシプロピル置換を有する少なくとも１５％のベータ−シクロデキストリン分子（「ＤＳ−５」）を含む。様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、少なくとも２１％、少なくとも２２％、少なくとも２３％、少なくとも２４％、少なくとも２５％、少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、または少なくとも３０％はＤＳ−５である。
【０１９８】
様々な実施形態では、混合物は、全混合物のパーセンテージとして、３５％以下、例えば、３４％以下、３３％以下、３２％以下、３１％以下、３０％以下、２９％以下、２８％以下、２７％以下、２６％以下、２５％以下、２４％以下、２３％以下、２２％以下、２１％以下、または２０％以下などのＤＳ−５を含む。
【０１９９】
ある特定の実施形態では、全混合物中のＤＳ−５のパーセンテージは、１５％〜３５％、例えば、１６％〜３４％、１７％〜３３％、１８％〜３２％、１９％〜３１％、２０％〜３０％、２１％〜２９％、２２％〜２８％、２３％〜２７％、または２４％〜２６％などの範囲である。
【０２００】
様々な実施形態では、混合物は、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、約２７％、約２８％、約２９％、または約３０％のＤＳ−５を含む。
【０２０１】
６．２．１．２．７．ＤＳ−６
典型的な実施形態では、混合物は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、全混合物のパーセンテージとして、６つのヒドロキシプロピル置換を有する少なくとも５％のベータ−シクロデキストリン分子（「ＤＳ−６」）を含む。様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の少なくとも６％、少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、または少なくとも２０％はＤＳ−６である。
【０２０２】
様々な実施形態では、混合物は、全混合物のパーセンテージとして、２５％以下、例えば、２４％以下、２３％以下、２２％以下、２１％以下、２０％以下、１９％以下、１８％以下、１７％以下、１６％以下、１５％以下、１４％以下、１３％以下、１２％以下、１１％以下、または１０％以下などのＤＳ−６を含む。
【０２０３】
ある特定の実施形態では、全混合物中のＤＳ−６のパーセンテージは、５％〜２５％、例えば、６％〜２４％、７％〜２３％、８％〜２２％、９％〜２１％、１０％〜２０％、１１％〜１９％、１２％〜１８％、１３％〜１７％、または１４％〜１６％などの範囲である。
【０２０４】
様々な実施形態では、混合物は、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、または約１７％のＤＳ−６を含む。
【０２０５】
６．２．１．２．８．ＤＳ−７
典型的な実施形態では、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、全混合物のパーセンテージとして、ベータ−シクロデキストリン混合物の１０％未満は７つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−７」）である。様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物の９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満はＤＳ−７である。
【０２０６】
ある特定の実施形態では、全混合物中のＤＳ−７のパーセンテージは１％〜１０％、例えば、２％〜９％、３％〜８％、４％〜７％、または５％〜６％などの範囲である。
【０２０７】
様々な実施形態では、混合物は約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％、または約１％のＤＳ−７を含む。
【０２０８】
６．２．１．２．９．ＤＳ−８
典型的な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、全混合物のパーセンテージとして、８つのヒドロキシプロピル基で置換されている２％未満のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−８」）を含む。様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの１．５％未満、１．４％未満、１．３％未満、１．２％未満、１．１％未満、１％未満、０．９％未満、０．８％未満、０．７％未満、０．６％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、０．１％未満、０．０９％未満、０．０８％未満、０．０７％未満、０．０６％未満、０．０５％未満、０．０４％未満、０．０３％未満、０．０２％未満、または０．０１％未満はＤＳ−８である。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、全混合物中のＤＳ−８のパーセンテージは、０．０１％〜２％、例えば、０．０２％〜１．９％、０．０３％〜１．８％、０．０４％〜１．７％、０．０５％〜１．６％、０．０６％〜１．５％、０．０７％〜１．４％、０．０８％〜１．３％、０．０９％〜１．２％、０．１％〜１．１％、０．２％〜１％、０．３％〜０．９％、０．４％〜０．８％、または０．５％〜０．７％などの範囲である。
【０２１０】
様々な実施形態では、混合物は、約１．５％、約１．４％、約１．３％、約１．２％、約１．１％、約１％、約０．９％、約０．８％、約０．７％、約０．６％、約０．５％、約０．４％、約０．３％、約０．２％、約０．１％、約０．０９％、約０．０８％、約０．０７％、約０．０６％、約０．０５％、約０．０４％、約０．０３％、約０．０２％、または約０．０１％のＤＳ−８を含む。
【０２１１】
６．２．１．２．１０．ＤＳ−９
典型的な実施形態では、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、全混合物のパーセンテージとして、ベータ−シクロデキストリン混合物の１％以下は９つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−９」）である。様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０９％以下、０．０８％以下、０．０７％以下、０．０６％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０３％以下、０．０２％以下、または０．０１％以下はＤＳ−９である。
【０２１２】
６．２．１．２．１１．ＤＳ−１０
典型的な実施形態では、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、全混合物のパーセンテージとして、ベータ−シクロデキストリン混合物の１％以下は１０のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１０」）である。様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリンの０．９％以下、０．８％以下、０．７％以下、０．６％以下、０．５％以下、０．４％以下、０．３％以下、０．２％以下、０．１％以下、０．０９％以下、０．０８％以下、０．０７％以下、０．０６％以下、０．０５％以下、０．０４％以下、０．０３％以下、０．０２％以下、または０．０１％以下はＤＳ−１０である。
【０２１３】
６．２．１．２．１２．プロファイル
様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物は、全混合物のパーセンテージとして、総合して少なくとも７５％のＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６を含有する。ある特定の実施形態では、混合物中のベータ−シクロデキストリンの少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、または少なくとも９８％は総合してＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６である。
【０２１４】
様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物は、全混合物のパーセンテージとして、約７５％〜約９８％、例えば、約７６％〜約９７％、約７７％〜約９６％、約７８％〜約９５％、約７９％〜約９４％、約８０％〜約９３％、約８１％〜約９２％、約８２％〜約９１％、約８３％〜約９０％、約８４％〜約８９％、約８５％〜約８８％、または約８６％〜約８７％などの範囲のＤＳ−３、ＤＳ−４、ＤＳ−５、およびＤＳ−６を総合して含む。
【０２１５】
典型的な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物は、全混合物のパーセンテージとして、総合して少なくとも２５％のＤＳ−５およびＤＳ−６を含む。ある特定の実施形態では、混合物中のベータ−シクロデキストリンの少なくとも２６％、少なくとも２７％、少なくとも２８％、少なくとも２９％、少なくとも３０％、少なくとも３１％、少なくとも３２％、少なくとも３３％、少なくとも３４％、少なくとも３５％、少なくとも３６％、少なくとも３７％、少なくとも３８％、少なくとも３９％、少なくとも４０％、少なくとも４１％、少なくとも４２％、少なくとも４３％、少なくとも４４％、少なくとも４５％、少なくとも４６％、少なくとも４７％、少なくとも４８％、少なくとも４９％、または少なくとも５０％は総合してＤＳ−５およびＤＳ−６である。
【０２１６】
様々な実施形態では、ベータ−シクロデキストリン混合物は、全混合物のパーセンテージとして、約２５％〜約５０％、例えば、約２６％〜約４９％、約２７％〜約４８％、約２８％〜約４７％、約２９％〜約４６％、約３０％〜約４５％、約３１％〜約４４％、約３２％〜約４３％、約３３％〜約４２％、約３４％〜約４１％、約３５％〜約４０％、約３６％〜約３９％、または約３７％〜約３８％などの範囲のＤＳ−５およびＤＳ−６を総合して含む。
【０２１７】
様々な実施形態では、全混合物のパーセンテージとして、最も優勢であるベータ−シクロデキストリン種はＤＳ−４である。
【０２１８】
６．２．１．３．出発材料
ある特定の実施形態では、本開示は、唯一の薬学的活性成分が、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰ、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ、およびＣａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａから選択される１つまたは複数のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品を精製することによって得られる医薬組成物について記載している。
【０２１９】
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰおよびＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰは、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ  Ｐｈａｒｍａ、Ｌｅｓｔｒｅｍ、Ｆｒａｎｃｅから入手可能なヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品である。Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰは、約４．３のＤＳａを有する、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの非経口等級の内毒素制御された組成物である。Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰは、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰより高いＤＳａを有する、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの内毒素制御された組成物である。Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏは、約６．３７のＤＳａを有する、非経口等級のヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンであり、Ｓｐｈｉｎｇｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、ＣＴＤ  Ｈｏｌｄｉｎｇｓ，Ｉｎｃ．の一部門、Ａｌａｃｈｕａ、Ｆｌｏｒｉｄａ、ＵＳＡから粉末状または滅菌の液体形態で入手可能である。Ｃａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａは、約４．１〜約５．１のＤＳａ、例えば、約４．５のＤＳａを有する薬学的等級のヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリンであり、Ｗａｃｋｅｒ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ、Ｍｕｅｎｃｈｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙから入手可能である。
【０２２０】
例証的な例では、医薬組成物は、唯一の薬学的活性成分がＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰを精製することによって得られる医薬組成物である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、唯一の薬学的活性成分が親水性相互作用により、例えば、ＨＰＬＣ精製により、またはアフィニティ精製、例えば、アフィニティクロマトグラフィーにより、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）を精製することによって得られる医薬組成物である。様々な実施形態では、薬学的活性成分は、本明細書の実施例６、７および９に記載されている手順の１つまたは複数によりＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）を精製することによって得られる。
【０２２１】
様々な実施形態では、精製は、より高い活性、例えば、非エステル化コレステロールに対してより高い親和性を有するＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰの一部分または画分を提供する。
【０２２２】
他の実施形態では、医薬組成物は、唯一の薬学的活性成分が、親水性相互作用により、例えば、ＨＰＬＣ精製により、またはアフィニティ精製、例えば、アフィニティクロマトグラフィーにより、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（ＣＴＤ）を精製することによって得られる医薬組成物である。様々な実施形態では、薬学的活性成分は、本明細書の実施例６、７および９に記載されている手順の１つまたは複数を使用して、アルミナ上での吸収クロマトグラフィーでＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏを精製することによって得られる。
【０２２３】
一部の実施形態では、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（ＣＴＤ）から精製された医薬組成物は、１つまたは複数のヒドロキシル位置においてヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン分子の混合物であって、非置換のベータ−シクロデキストリン分子を任意選択で含む混合物と、髄腔内、脳室内、または静脈内投与に対して薬学的に許容される希釈剤とを含む。組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり、５ＥＵ以下（「ＮＭＴ」）の内毒素と、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法により測定した場合、０．５％以下のプロピレングリコールと、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、１ｐｐｍ以下のプロピレンオキシドとを含む。
【０２２４】
一部の実施形態では、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（ＣＴＤ）から精製された医薬組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり、１．５ＥＵ  ＮＭＴの内毒素を含む。一部の実施形態では、組成物は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに示されたＨＰＬＣ法で測定した場合、０．０１％以下のプロピレングリコールを含む。
【０２２５】
ある特定の実施形態では、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（ＣＴＤ）から精製された薬学的活性成分は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、総合して５％未満、例えば、４．５％未満、４％未満、３．５％未満、３％未満、２．５％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．５％未満、または０．１％未満の非置換のベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−０」）、１つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１」）、および２つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−２」）を含む。
【０２２６】
ある特定の実施形態では、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（ＣＴＤ）から精製された薬学的活性成分は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、総合して少なくとも５０％、例えば、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％の５つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−５」）、６つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−６」）、および７つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−７」）を含む。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（ＣＴＤ）から精製された薬学的活性成分は、エレクトロスプレーＭＳスペクトルのピーク高さで決定した場合、総合して５％未満、例えば、４．５％未満、４％未満、３．５％未満、３％未満、２．５％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．５％未満、または０．１％未満の９つのヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−９」）および１０のヒドロキシプロピル基で置換されているベータ−シクロデキストリン（「ＤＳ−１０」）を、含む。
【０２２８】
さらなる他の実施形態では、医薬組成物は、唯一の薬学的活性成分が、親水性相互作用により、例えば、ＨＰＬＣ精製により、またはアフィニティ精製、例えば、アフィニティクロマトグラフィーにより、Ｃａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰを精製することによって得られる医薬組成物である。様々な実施形態では、薬学的活性成分は、本明細書の実施例６、７および９に記載されている手順の１つまたは複数により、Ｃａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰを精製することによって得られる。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰ、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ、およびＣａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａから選択される１つまたは複数のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品を精製することは、複合体形成、沈殿、および吸着クロマトグラフィーのうちの１種または複数種を含む。一部の実施形態では、精製は、１種の方法、例えば、吸着クロマトグラフィーを含む。一部の実施形態では、精製は、２種またはそれ超の方法、例えば、吸着クロマトグラフィーと組み合わせた沈殿を含む。精製が組み合わせて使用される２種またはそれ超の方法を含む場合、これらの方法は、任意の順序で組み合わせて、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品を精製することができる。例証的な例では、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰまたはＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏを最初に吸着クロマトグラフィーに付し、次いでクロマトグラフィーのステップからの１つまたは複数の選択された画分を、沈殿溶媒系からの溶媒沈殿に付して、さらなる精製を実行することができる。代替の例では、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰを、最初に沈殿溶媒系からの溶媒沈殿に付し、次いで沈殿物を吸着クロマトグラフィーに付して、さらなる精製を実行することができる。
【０２３０】
一部の実施形態では、１つまたは複数のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品、例えば、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰまたはＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏの精製は、非置換の（ＤＳ＝０）および／または一置換の（ＤＳ＝１）ベータ−シクロデキストリンの除去によりＤＳａの増加をもたらす。例証的な例では、ＤＳａ＝４．３４を有するＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰの市販の試料は、０．６％の非置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝０）および３．６８％の一置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝１）を含有する。ＤＳ＝０およびＤＳ＝１の種の除去後のＤＳａは、以下の方程式を使用して計算することができる：
ｘ（０）＋ｙ（１）＋ｚ（ＤＳａ）＝４．３４
ｘ＋ｙ＋ｚ＝１
（式中、ｘ＝非置換のベータ−シクロデキストリンの割合；ｙ＝一置換のベータ−シクロデキストリンの割合；ｚ＝ＤＳ≧２を有するベータ−シクロデキストリンの割合である）。この場合、ＤＳ＝０およびＤＳ＝１を有するベータ−シクロデキストリンの除去後に得られた試料のＤＳａは４．５である。
【０２３１】
したがって、ある特定の実施形態では、本開示はＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰ、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ、およびＣａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａから選択される１つまたは複数のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品、特にＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰまたはＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏを精製するための方法であって、製品中のプロピレングリコールもしくはプロピレングリコールオリゴマーの量（例えば、溶媒沈殿による）および／または非置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝０）の量および／もしくは一置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝１）の量を（例えば、吸着クロマトグラフィーにより）減少させる精製方法を提供する。製品中の非置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝０）の量および／または一置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝１）の量が減少されるこのような実施形態のいくつかでは、精製された製品は増加したＤＳａを示す。したがって、ある特定の実施形態では、本開示は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰ、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ、およびＣａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａから選択される１つまたは複数のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品、特にＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰまたはＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）ＣｙｃｌｏのＤＳａを増加させるための方法であって、例えば、本明細書に記載されている１つまたは複数の精製ステップ、例えば、吸着クロマトグラフィーなどに従い、製品中の非置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝０）および／または一置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝１）の量を減少させることを含む方法を提供する。
【０２３２】
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰ、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ、およびＣａｖａｓｏｌ（登録商標）Ｗ７  ＨＰ  Ｐｈａｒｍａはそれぞれ報告されたＤＳａを有するが、上で論じたように、ＤＳａは平均の尺度であり、したがってこれらのヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品のそれぞれは、異なるＤＳ値を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンで構成される。一部の実施形態では、本明細書に記載されている薬学的活性成分は、これらの製品の１つまたは複数から、本明細書に記載されているＤＳａを有する１つまたは複数のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン画分を単離することによって得られる。
【０２３３】
６．２．２．内毒素レベル
ある特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、低レベルの細菌性内毒素を含有する。低レベルの細菌性内毒素は、開示された医薬組成物を、ある特定の経路により、例えば、髄腔内または脳室内投与を介して、より高いレベルの内毒素を有する他の組成物を用いて安全に投与し得るよりも長い期間の間かつより高いレベルで投与することを可能にする。
【０２３４】
本明細書で使用される場合、「ＩＵ」とは、米国薬局方内（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ（ＵＳＰ））内毒素単位（Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｕｎｉｔ（「ＥＵ」））としても公知である細菌性内毒素の国際単位を指す。組成物中の細菌性内毒素のレベル（ＩＵ；同義語として、ＥＵ）は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている「＜８５＞  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓ  Ｔｅｓｔ」、ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，  Ｉｎｔｅｒｉｍ  Ｒｅｖｉｓｉｏｎ  Ａｎｎｏｕｎｃｅｍｅｎｔ、２０１１年４月１日付け（「ＵＳＰ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ」）において示された手順に従い、リムルス変形細胞溶解物試験により決定される。
【０２３５】
一部の実施形態では、医薬組成物は、薬学的活性成分１グラム当たり、約１０ＩＵ未満、例えば、約６、約５、約４、約３、約２、約１．５、約１．２、約１ＩＵ、約０．８ＩＵ、約０．６ＩＵ、約０．５ＩＵ、約０．４ＩＵ、約０．３ＩＵ、約０．２ＩＵ、約０．１ＩＵ、約０．０７ＩＵ、または約０．０５ＩＵ未満などの内毒素を含有する。一部の実施形態では、医薬組成物は、ベータ−シクロデキストリン混合物１グラム当たり、約０．０５ＩＵ〜約１０ＩＵ、例えば、約０．０５ＩＵ〜約６ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約５ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約４ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約３ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約２ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約１．５ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約１．２ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約１ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約０．８ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約０．６ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約０．５ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約０．４ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約０．３ＩＵ、約０．０５ＩＵ〜約０．２ＩＵ、または約０．０５ＩＵ〜約０．１ＩＵの内毒素の範囲のレベルの細菌性内毒素を含有する。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、５ＥＵ／ｇ以下の（「ＮＭＴ」）ベータ−シクロデキストリン混合物、４ＥＵ／ｇ  ＮＭＴのベータ−シクロデキストリン混合物、３ＥＵ／ｇ  ＮＭＴのベータ−シクロデキストリン混合物、または２ＥＵ／ｇ以下のベータ−シクロデキストリン混合物を含む。好ましい実施形態では、医薬組成物は１．５ＥＵ／ｇ  ＮＭＴのベータ−シクロデキストリン混合物を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、１．４ＥＵ／ｇ  ＮＭＴのベータ−シクロデキストリン混合物、１．３ＥＵ／ｇ  ＮＭＴのベータ−シクロデキストリン混合物、１．２ＥＵ／ｇ  ＮＭＴのベータ−シクロデキストリン混合物、１．１ＥＵ／ｇ  ＮＭＴのベータ−シクロデキストリン混合物、または１．０ＥＵ／ｇ  ＮＭＴのベータ−シクロデキストリン混合物を含む。
【０２３７】
６．２．３．プロセス不純物
ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの混合物を含む医薬組成物は、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの合成から生じる不純物を含有し得る。このような不純物は、未反応の出発材料、例えば、非置換のベータ−シクロデキストリンおよびプロピレンオキシドなど、ならびに反応副産物、例えば、プロピレングリコールおよびプロピレングリコールオリゴマーなどを含み得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物は、このような不純物の１種または複数種のレベルの減少を示す。
【０２３８】
６．２．３．１．プロピレングリコール
一部の実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約１％未満、例えば、約０．９％、０．８％、０．７％、０．６％、または０．５％未満などのプロピレングリコールを含む。様々な実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約０．４％、０．３％、０．２％または０．１％未満のプロピレングリコールを含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約０．０９％、０．０８％、０．０７％未満、または約０．０５％未満のプロピレングリコールを含む。現在好ましい実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、０．５％以下のプロピレングリコールを含む。
【０２３９】
一部の実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約０．０５％〜約１％のプロピレングリコール、例えば、約０．０５％〜約０．８％、約０．０５％〜約０．６％、約０．０５％〜約０．５％、約０．０５％〜約０．４％、約０．０５％〜約０．３％、約０．０５％〜約０．２％、約０．０５％〜約０．１％、約０．０５％〜約０．０７％、約０．０７％〜約１％、約０．０７％〜約０．８％、約０．０７％〜約０．６％、約０．０７％〜約０．５％、約０．０７％〜約０．４％、約０．０７％〜約０．３％、約０．０７％〜約０．２％、約０．０７％〜約０．１％、約０．１％〜約１％、約０．１％〜約０．８％、約０．１％〜約０．６％、約０．１％〜約０．５％、約０．１％〜約０．４％、約０．１％〜約０．３％、約０．１％〜約０．２％、約０．２％〜約１％、約０．２％〜約０．８％、約０．２％〜約０．６％、約０．２％〜約０．５％、約０．２％〜約０．４％、約０．２％〜約０．３％、約０．３％〜約１％、約０．３％〜約０．８％、約０．３％〜約０．６％、約０．３％〜約０．５％、約０．３％〜約０．４％、約０．４％〜約１％、約０．４％〜約０．８％、約０．４％〜約０．６％、約０．４％〜約０．５％、約０．５％〜約１％、約０．５％〜約０．８％、約０．５％〜約０．６％、約０．６％〜約１％、約０．６％〜約０．８％、または約０．８％〜約１．０％などのプロピレングリコールを含む。
【０２４０】
一部の実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約０．０１％未満のプロピレングリコールモノマーを含む。一部の実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約０．２％未満のプロピレングリコールダイマーを含む。一部の実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約０．２％未満のプロピレングリコールトリマーを含む。
【０２４１】
６．２．３．２．プロピレンオキシド
一部の実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約１ｐｐｍ未満、例えば、約０．８ｐｐｍ未満、約０．６ｐｐｍ未満、約０．５ｐｐｍ未満、約０．４ｐｐｍ未満、約０．３ｐｐｍ未満、約０．２ｐｐｍ未満、約０．１ｐｐｍ未満、約０．０７ｐｐｍ未満、または約０．０５ｐｐｍ未満などのプロピレンオキシドを含有する。例えば、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約１、約０．８、約０．６、約０．５、約０．４、約０．３、約０．２、約０．１、約０．０７、または約０．０５ｐｐｍのプロピレンオキシドを有することができる。
【０２４２】
一部の実施形態では、薬学的活性成分は、ＵＳＰ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ  Ｂｅｔａｄｅｘモノグラフに従い決定された、約０．０５〜約１ｐｐｍ、例えば、約０．０５〜約０．８、約０．０５〜約０．６、約０．０５〜約０．５、約０．０５〜約０．４、約０．０５〜約０．３、約０．０５〜約０．２、約０．０５〜約０．１、約０．１〜約１、約０．１〜約０．８、約０．１〜約０．６、約０．１〜約０．５、約０．１〜約０．４、約０．１〜約０．３、約０．１〜約０．２、約０．２〜約１、約０．２〜約０．８、約０．２〜約０．６、約０．２〜約０．５、約０．２〜約０．４、約０．２〜約０．３、約０．３〜約１、約０．３〜約０．８、約０．３〜約０．６、約０．３〜約０．５、約０．３〜約０．４、約０．４〜約１、約０．４〜約０．８、約０．４〜約０．６、約０．４〜約０．５、約０．５〜約１、約０．５〜約０．８、約０．５〜約０．６、約０．６〜約１、約０．６〜約０．８、または約０．８〜約１ｐｐｍなどの範囲のプロピレンオキシドの量を有する。
【０２４３】
６．２．４．他の組成上の特徴
本開示の薬学的活性成分と、任意選択で、１種または複数種の追加の治療剤、例えば、セクション４．３．３．に記載されている組合せ治療剤などとを含むヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物が本明細書で提供される。
【０２４４】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約１００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、例えば、約１００〜約１８００、約１００〜約１６００、約１００〜約１５００、約１００〜約１２００、約１００〜約１０００、約１００〜約８００、約１００〜約６００、約１００〜約５００、約１００〜約４００、約１００〜約３００、約１００〜約２００、約２００〜約２０００、約２００〜約１８００、約２００〜約１６００、約２００〜約１５００、約２００〜約１２００、約２００〜約１０００、約２００〜約８００、約２００〜約６００、約２００〜約５００、約２００〜約４００、約２００〜約３００、約３００〜約２０００、約３００〜約１８００、約３００〜約１６００、約３００〜約１５００、約３００〜約１２００、約３００〜約１０００、約３００〜約８００、約３００〜約６００、約３００〜約５００、約３００〜約４００、約４００〜約２０００、約４００〜約１８００、約４００〜約１６００、約４００〜約１５００、約４００〜約１２００、約４００〜約１０００、約４００〜約８００、約４００〜約６００、約４００〜約５００、約５００〜約２０００、約５００〜約１８００、約５００〜約１６００、約５００〜約１５００、約５００〜約１２００、約５００〜約１０００、約５００〜約８００、約５００〜約６００、約６００〜約２０００、約６００〜約１８００、約６００〜約１６００、約６００〜約１５００、約６００〜約１２００、約６００〜約１０００、約６００〜約８００、約８００〜約２０００、約８００〜約１８００、約８００〜約１６００、約８００〜約１５００、約８００〜約１２００、または約８００〜約１０００ｍｇなどの薬学的活性成分を含む。例えば，医薬組成物は、約１００、約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約８００、約１０００、約１２００、約１４００、約１５００、約１６００、約１８００、または約２０００ｍｇの薬学的活性成分を含むことができる。
【０２４５】
一部の実施形態では、投与のための医薬組成物、例えば、髄腔内投与に対して適切な医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、例えば、約１０〜約１８０、約１０〜約１５０、約１０〜約１２０、約１０〜約１００、約１０〜約８０、約１０〜約６０、約１０〜約５０、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２０、約２０〜約２００、約２０〜約１８０、約２０〜約１５０、約２０〜約１２０、約２０〜約１００、約２０〜約８０、約２０〜約６０、約２０〜約５０、約２０〜約４０、約２０〜約３０、約３０〜約２００、約３０〜約１８０、約３０〜約１５０、約３０〜約１２０、約３０〜約１００、約３０〜約８０、約３０〜約６０、約３０〜約５０、約３０〜約４０、約４０〜約２００、約４０〜約１８０、約４０〜約１５０、約４０〜約１２０、約４０〜約１００、約４０〜約８０、約４０〜約６０、約４０〜約５０、約５０〜約２００、約５０〜約１８０、約５０〜約１５０、約５０〜約１２０、約５０〜約１００、約５０〜約８０、約５０〜約６０、約６０〜約２００、約６０〜約１８０、約６０〜約１５０、約６０〜約１２０、約６０〜約１００、約６０〜約８０、約８０〜約２００、約８０〜約１８０、約８０〜約１５０、約８０〜約１２０、約８０〜約１００、約１００〜約２００、約１００〜約１８０、約１００〜約１５０、約１００〜約１２０、約１２０〜約２００、約１２０〜約１８０、約１２０〜約１５０、約１５０〜約２００、約１５０〜約１８０、または約１８０〜約２００ｍｇ／ｍＬなどの薬学的活性成分の濃度を有する。例えば、医薬組成物は、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、または約２００ｍｇ／ｍＬの薬学的活性成分の濃度を有することができる。ある特定の実施形態では、髄腔内投与のための医薬組成物は、約２００ｍｇ／ｍＬの薬学的活性成分の濃度を有する。
【０２４６】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物は、動物に投与された場合、低レベルの聴器毒性を示す。一部の実施形態では、医薬組成物は、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏより低い聴器毒性を示す。聴器毒性は、Ｈｏｕｓｅ  Ｅａｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ−ｏｒｇａｎ  ｏｆ  Ｃｏｒｔｉ１（ＨＥＩ−ＯＣ１）細胞内の毒性によりｉｎ  ｖｉｔｒｏで、または動物、例えば、マウス、ラット、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー、もしくはヒトなどにおける聴性脳幹反応（ＢＡＥＲ）試験によりｉｎ  ｖｉｖｏで評価することができる。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｌｅｉｇｈ−Ｐａｆｆｅｎｒｏｔｈ，  Ｅ．ら、「Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ  Ｍｅａｓｕｒｅｓ  ｏｆ  Ｏｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ」、２００５年９月、９巻、１号、１０〜１６頁、Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｏｎ  Ｈｅａｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｈｅａｒｉｎｇ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ６  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｐｅｅｃｈ−Ｌａｎｇｕａｇｅ−Ｈｅａｒｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎを参照されたい。
【０２４７】
一部の実施形態では、医薬組成物、例えば、髄腔内投与に対して適切な医薬組成物は、約３００〜約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、例えば、約３００〜約４００、約３００〜約３５０、約３５０〜約４５０、または約３５０〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲の重量オスモル濃度を有する。一部の実施形態では、組成物は、約３００、約３２０、約３５０、約３８０、約４００、約４２０、または約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を有する。
【０２４８】
本明細書中に記載されている医薬組成物、例えば、髄腔内または脳室内投与に対して適切な医薬組成物に対して適切な希釈剤は、等張生理食塩溶液を含む。例えば、髄腔内投与に対して適切な医薬組成物などの組成物はまた、Ｅｌｌｉｏｔｔｓ  Ｂ（登録商標）溶液（Ｌｕｋａｒｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ、ＬＬＣ、Ｓｃｏｔｃｈ  Ｐｌａｉｎｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、ＵＳＡ製の緩衝された髄腔内電解質／デキストロース注射液）で希釈してもよい。
【０２４９】
一部の実施形態では、注射用医薬組成物は、活性医薬成分（ベータ−シクロデキストリン分子の混合物）を水に溶解し、塩化ナトリウムを０．９％ｗ／ｖまで加え、必要に応じて０．０１Ｎ水酸化ナトリウムを用いてｐＨを６．０〜８．０に調節することによって作製される。次いで、医薬組成物をバイアルに無菌化濾過し、オートクレーブする。製品は安定しており、１５〜２５℃で貯蔵することができる。
【０２５０】
組成物は通常、薬学的に許容される担体を通常含む、滅菌の医薬組成物の一部として供給されることになる。この組成物は任意の適切な形態であることができる（所望の投与方法に応じて）。例えば、医薬組成物は水溶液として製剤化し、髄腔内注射または髄腔内注入により投与することができる。
【０２５１】
一部の実施形態では、医薬組成物は、１用量当たり本開示の薬学的活性成分のある量を含有する単位用量形態を含む。このような単位は、例えば、限定ではないが約５ｍｇ〜約５ｇ、例えば、５ｍｇ〜約４ｇ、５ｍｇ〜約３ｇ、５ｍｇ〜約２ｇ、５ｍｇ〜約１ｇ、約５０ｍｇ〜約５ｇ、約５０ｍｇ〜約４ｇ、約５０ｍｇ〜約３ｇ、約５０ｍｇ〜約２ｇ、約５０ｍｇ〜約１ｇ、約２００ｍｇ〜約５ｇ、約２００ｍｇ〜約４ｇ、約２００ｍｇ〜約３ｇ、約２００ｍｇ〜約２ｇ、約２００ｍｇ〜約１ｇ、約４００ｍｇ〜約５ｇ、約４００ｍｇ〜約４ｇ、約４００ｍｇ〜約３ｇ、約４００ｍｇ〜約２ｇ、約４００ｍｇ〜約１ｇ、約５００ｍｇ〜約５ｇ、約５００ｍｇ〜約４ｇ、約５００ｍｇ〜約３ｇ、約５００ｍｇ〜約２ｇ、約５００ｍｇ〜約１ｇ、約６００ｍｇ〜約５ｇ、約６００ｍｇ〜約４ｇ、約６００ｍｇ〜約３ｇ、約６００ｍｇ〜約２ｇ、約６００ｍｇ〜約１ｇ、約８００ｍｇ〜約５ｇ、約８００ｍｇ〜約４ｇ、約８００ｍｇ〜約３ｇ、約８００ｍｇ〜約２ｇ、約８００ｍｇ〜約１ｇ、約１ｇ〜約５ｇ、約１ｇ〜約４ｇ、約１ｇ〜約３ｇ、約１ｇ〜約２ｇ、約１２００ｍｇ〜約５ｇ、約１２００ｍｇ〜約４ｇ、約１２００ｍｇ〜約３ｇ、約１２００ｍｇ〜約２ｇ、約１４００ｍｇ〜約５ｇ、約１４００ｍｇ〜約４ｇ、約１４００ｍｇ〜約３ｇ、約１４００ｍｇ〜約２ｇ、約１６００ｍｇ〜約５ｇ、約１６００ｍｇ〜約４ｇ、約１６００ｍｇ〜約３ｇ、約１６００ｍｇ〜約２ｇ、約１８００ｍｇ〜約５ｇ、約１８００ｍｇ〜約４ｇ、約１８００ｍｇ〜約３ｇ、または約１８００ｍｇ〜約２ｇの薬学的活性成分を含有することができる。ある特定の実施形態は、約９００ｍｇ、約１２００ｍｇ、および約１８００ｍｇの薬学的活性成分を含有する単位用量を含む。
【０２５２】
ある特定の実施形態では、単位用量は、約２００ｍｇ〜約９００ｍｇの間の本開示の薬学的活性成分、例えば、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５５０ｍｇ、約６００ｍｇ、約６５０ｍｇ、約７００ｍｇ、約７５０ｍｇ、約８００ｍｇ、約８５０ｍｇ、または約９００ｍｇなどの薬学的活性成分を含有することができる。
【０２５３】
本開示のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物の医薬組成物は、所望の度合の純度を有する薬学的活性成分を、通常当技術分野で利用されている、任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤（これらのすべてが本明細書で「担体」と呼ばれている）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｆｉｅｒ）、非イオン性洗剤、抗酸化剤、および他の様々な添加剤と混合することによって、凍結乾燥された製剤または水溶液として貯蔵用に調製することができる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１６版（Ｏｓｏｌ編、１９８０年）を参照されたい。
【０２５４】
一部の実施形態では、緩衝剤は、約２ｍＭ〜約５０ｍＭ、例えば、約２〜約４０、約２〜約３０、約２〜約２０、約２〜約１０、約１０〜約５０、約１０〜約４０、約１０〜約３０、約１０〜約２０、約２０〜約５０、約２０〜約４０、約２０〜約３０、または約４０〜約５０ｍＭなどの生理学的条件に近似する範囲にｐＨを維持するのを助けるために使用される。例えば、１種または複数種の緩衝剤は、約２、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５、または約５０ｍＭの濃度で存在することができる。本開示と共に使用するのに適切な緩衝剤として、有機酸と無機酸の両方およびその塩、例えば、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム−クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸−クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝液（例えば、コハク酸−コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸−水酸化ナトリウム混合物、コハク酸−コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸−酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸−酒石酸カリウム混合物、酒石酸−水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸−フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸−フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム−フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸−グルコン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｇｌｙｃｏｎａｔｅ）混合物、グルコン酸−水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸−グルコン酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｇｌｙｕｃｏｎａｔｅ）混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸−シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸−水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸−シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸−乳酸ナトリウム混合物、乳酸−水酸化ナトリウム混合物、乳酸−乳酸カリウム混合物など）および酢酸緩衝液（例えば、酢酸−酢酸ナトリウム混合物、酢酸−水酸化ナトリウム混合物など）が挙げられる。加えて、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液およびトリメチルアミン塩、例えば、Ｔｒｉｓなどを使用することができる。
【０２５５】
一部の実施形態では、微生物の成長を遅滞させるために、０．０１％〜１％（ｗ／ｖ）、例えば、０．１％〜１％、０．２％〜１％、０．３％〜１％、０．５％〜１％、０．０１％〜０．５％、０．０２％〜０．５％、０．０５％〜０．５％、０．１％〜０．５％、０．２％〜０．５％、または０．０５％〜０．２％（ｗ／ｖ）などの範囲の量の保存剤を加える。例えば、約０．０２％、約０．０５％、約０．１％、約０．２％、約０．５％、約０．８％（ｗ／ｖ）の量の保存剤を加えることができる。本開示と共に使用するのに適切な保存剤として、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ハロゲン化ベンザルコニウム（ｂｅｎｚａｌｃｏｎｉｕｍ  ｈａｌｉｄｅ）（例えば、クロリド、ブロミド、およびヨージド）、塩化ヘキサメトニウム、およびアルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベンなど、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、および３−ペンタノールが挙げられる。
【０２５６】
一部の実施形態では、時には「安定剤」として公知の等張化剤は、本開示の液体組成物の等張性を確定するために加えられ、多価糖アルコール、例えば三価またはそれより高い糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールなどが挙げられる。安定剤とは、充填剤（ｂｕｌｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）から、治療剤を可溶化するかまたは変性もしくは容器壁への付着を阻止するのを助ける添加剤までの機能の範囲であり得る広いカテゴリーの賦形剤を指す。典型的な安定剤は、多価糖アルコール（上記に列挙されている）；アミノ酸、例えば、アルギニン、リシン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ−ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなど、有機糖または糖アルコール、例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオイニシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクチトール、グリセロールなど（イノシトールなどのシクリトールを含む）；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；硫黄を含有する還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウムなど；低分子量ポリペプチド（例えば、１０またはそれより少ない残基のペプチド）；タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたはイムノグロブリンなど；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドンなど、単糖、例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなど；二糖、例えば、ラクトース、マルトース、スクロースなど、および三糖（ｔｒｉｓａｃｃａｃｈａｒｉｄｅ）、例えば、ラフィノースなど；ならびに多糖、例えば、デキストランなどであり得る。一部の実施形態では、安定剤は、薬学的活性成分１重量部当たり、０．１〜１０，０００重量、例えば、薬学的活性成分１重量部当たり、０．１〜１，０００、０．２〜２，０００、０．５〜５，０００、１〜１０，０００、または１〜１，０００重量の範囲で存在する。例えば、安定剤は、薬学的活性成分の１重量部当たり、約０．２、約０．５、約１、約５、約１０、約２０、約５０、約１００、約２００、約５００、約１，０００、約２，０００、約５，０００、または約８，０００重量で存在することができる。
【０２５７】
一部の実施形態では、治療剤を可溶化するのを助け、ならびに撹拌誘発性凝集から活性成分を保護するために、イオン性界面活性剤を加える。一部の実施形態では、治療剤を可溶化するのを助け、ならびに撹拌誘発性凝集から活性成分を保護するために、非イオン性界面活性剤または洗剤（「湿潤剤」としても公知）を加える。適切な非イオン性界面活性剤として、ポリソルベート（２０、８０など）、ポロキサマー（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒ）（１８４、１８８など）、プルロニックポリオール、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０など）が挙げられる。一部の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約１．０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約０．０５ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．０７ｍｇ／ｍＬ〜約０．２ｍｇ／ｍＬ、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．３ｍｇ／ｍＬ、または約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬなどの範囲で存在する。例えば、非イオン性界面活性剤は、約０．０５、約０．０７、約０．０８、約０．１、約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．８、または約１．０ｍｇ／ｍＬで存在することができる。
【０２５８】
追加の様々な賦形剤として、充填剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒が挙げられる。
【０２５９】
一部の実施形態では、本明細書の医薬組成物はまた、治療剤の組合せ、例えば、本開示の薬学的活性成分（本明細書に記載されているベータ−シクロデキストリンの混合物）に加えて第２の治療剤も含有する。適切な組合せ治療剤の例は以下のセクション４．３．３で提供されている。
【０２６０】
一部の実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物は水性媒体中で脂質を可溶化する。水性媒体は、例えば、蒸留水もしくは脱イオン水であり得、または被験体の体内の水性環境、例えば、血液、脳脊髄液、もしくはリンパ液であり得る。組成物の可溶化能力は、例えば、ＵＶ分光分析またはＨＰＬＣによりモニターされるような、溶液のＵＶ透過率特性で通常測定することができ、透過率の低減は溶液中の懸濁物の形成と相関している。一部の実施形態では、可溶化される脂質は、非エステル化またはエステル化コレステロール；コレステロール代謝物、例えば、７−ケトコレステロール、７β−ヒドロキシコレステロール、２４Ｓ−ヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２７−ヒドロキシコレステロール、およびコレスタン−３β，５α，６β−トリオール；スフィンゴ脂質；糖脂質；セラミド；ガングリオシド、例えば、ＧＭ２（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−３−ヒドロキシ−２−（オクタデカノイルアミノ）オクタデカ−４−エン−１−イル２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−［５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−α−Ｄ−ガラクト−ノン−２−ウロピラノノシル（ｕｌｏｐｙｒａｎｏｎｏｓｙｌ）−（２→３）］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−β−Ｄ−グルコピラノシド）またはＧＭ３（モノシアロジヘキソシルガングリオシド）；またはそれらの任意の組合せを含む。
【０２６１】
本明細書で使用される場合、１体積当たりの重量（「重量／体積」または「ｗ／ｖ」）の溶液とは、水の体積中に溶解された溶質の重量を指す。例証的な例では、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの１０％（ｗ／ｖ）溶液は、１０ｍＬの水溶液中に１ｇの溶質を有する。別の例では、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの２０％（ｗ／ｖ）溶液は１ｍＬの水溶液中に２００ｍｇの溶質を有する。
【０２６２】
一部の実施形態では，本明細書に記載されている薬学的活性成分の２０％（ｗ／ｖ）溶液１ｍＬは、約２４時間後、例えば、ＵＶ分光分析で測定した場合、少なくとも２ｍｇ、例えば、少なくとも３ｍｇ、少なくとも４ｍｇ、少なくとも５ｍｇ、少なくとも６ｍｇ、少なくとも７ｍｇ、少なくとも８ｍｇ、または少なくとも１０ｍｇなどの非エステル化コレステロールを室温で蒸留水に可溶化する。一部の実施形態では、約２００ｍｇの薬学的活性成分は、約２４時間後に測定した場合、少なくとも２ｍｇ、例えば、少なくとも３ｍｇ、少なくとも４ｍｇ、少なくとも５ｍｇ、少なくとも６ｍｇ、少なくとも７ｍｇ、少なくとも８ｍｇ、または少なくとも１０ｍｇなどの非エステル化コレステロールを室温で蒸留水に可溶化する。
【０２６３】
６．３．処置の方法
本開示は、ニーマン−ピック病Ｃ型（ＮＰＣ）、例えば、ニーマン−ピック病Ｃ１型（ＮＰＣ１）またはニーマン−ピック病Ｃ２型（ＮＰＣ２）などを処置する方法であって、本明細書に記載されているような医薬組成物の治療有効量を、ニーマン−ピック病を有する被験体に投与することを含む方法を提供する。
【０２６４】
本明細書で使用される場合、「被験体」とは、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、ウマなどである。一部の実施形態では、哺乳動物は、霊長類、例えば、サル、チンパンジー、またはヒトなどである。例えば、被験体は、ヒト被験体、すなわち、ヒト患者であり得る。ある特定の実施形態では、患者は小児患者または成人患者である。小児ヒト患者は、早期乳児性発症（年齢２歳未満）、遅発性乳児性発症（年齢２〜６歳未満）、若年性発症（年齢６〜１５歳未満）および青年発症（年齢１５歳またはそれより上）を特徴とする疾患を有する小児患者を含む。
【０２６５】
「処置する」、「処置すること」または「処置」という用語は、１種または複数種の脂質バイオマーカーのレベルまたはセクション４．３．４に記載されている治療効果を、ベースラインレベルと比較して有益にモジュレートするための本明細書に記載されている医薬組成物の投与を指す。例示的な処置段階は、セクション４．３．４．２に定義されているようなＮＰＣ重症度スケールの１つまたは複数のドメインのスコアが以前のベースライン値と比較して減少する、本明細書に記載されている医薬組成物の繰返し投与を含む。
【０２６６】
「維持する」、「維持すること」または「維持」という用語は、セクション４．３．４に記載されているような１つまたは複数の生物学的効果のベースラインレベルを一定に保つための本明細書に記載されている医薬組成物の投与を指す。投与の維持段階は、投与なし、またはプラセボ投与と比較した場合、ＮＰＣの進行を阻止することができる。維持段階の例証的な例は、セクション４．３．４．２に定義されているようなＮＰＣ重症度スケールの１つまたは複数のドメインのスコアがベースライン値と同じレベルで保持される、本明細書に記載されている医薬組成物の繰返し投与である。
【０２６７】
６．３．１．ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン医薬組成物の投与
一部の実施形態では、本方法は、１回の投与当たり、約２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、例えば、約２００〜約２８００、約２００〜約２６００、約２００〜約２５００、約２００〜約２４００、約２００〜約２２００、約２００〜約２０００、約２００〜約１８００、約２００〜約１６００、約２００〜約１５００、約２００〜約１２００、約２００〜約１１００、約２００〜約１０００、約２００〜約８００、約２００〜約７００、約２００〜約６００、約２００〜約５００、約２００〜約４００、約２００〜約３００、約３００〜約３０００、約３００〜約２８００、約３００〜約２６００、約３００〜約２５００、約３００〜約２４００、約３００〜約２２００、約３００〜約２０００、約３００〜約１８００、約３００〜約１６００、約３００〜約１５００、約３００〜約１２００、約３００〜約１１００、約３００〜約１０００、約３００〜約８００、約３００〜約７００、約３００〜約６００、約３００〜約５００、約３００〜約４００など；例えば、約４００〜約３０００、約４００〜約２８００、約４００〜約２６００、約４００〜約２５００、約４００〜約２４００、約４００〜約２２００、約４００〜約２０００、約４００〜約１８００、約４００〜約１６００、約４００〜約１５００、約４００〜約１２００、約４００〜約１１００、約４００〜約１０００、約４００〜約８００、約４００〜約７００、約４００〜約６００、約４００〜約５００など；例えば、約５００〜約３０００、約５００〜約２８００、約５００〜約２６００、約５００〜約２５００、約５００〜約２４００、約５００〜約２２００、約５００〜約２０００、約５００〜約１８００、約５００〜約１６００、約５００〜約１５００、約５００〜約１２００、約５００〜約１１００、約５００〜約１０００、約５００〜約８００、約５００〜約７００、約５００〜約６００など；例えば、約６００〜約３０００、約６００〜約２８００、約６００〜約２６００、約６００〜約２５００、約６００〜約２４００、約６００〜約２２００、約６００〜約２０００、約６００〜約１８００、約６００〜約１６００、約６００〜約１５００、約６００〜約１２００、約６００〜約１１００、約６００〜約１０００、約６００〜約８００、約６００〜約７００など；例えば、約７００〜約３０００、約７００〜約２８００、約７００〜約２６００、約７００〜約２５００、約７００〜約２４００、約７００〜約２２００、約７００〜約２０００、約７００〜約１８００、約７００〜約１６００、約７００〜約１５００、約７００〜約１２００、約７００〜約１１００、約７００〜約１０００、約７００〜約８００など；例えば、約８００〜約３０００、約８００〜約２８００、約８００〜約２６００、約８００〜約２５００、約８００〜約２４００、約８００〜約２２００、約８００〜約２０００、約８００〜約１８００、約８００〜約１６００、約８００〜約１５００、約８００〜約１２００、約８００〜約１１００、約８００〜約１０００など；例えば、約１０００〜約３０００、約１０００〜約２８００、約１０００〜約２６００、約１０００〜約２５００、約１０００〜約２４００、約１０００〜約２２００、約１０００〜約２０００、約１０００〜約１８００、約１０００〜約１６００、約１０００〜約１５００、約１０００〜約１２００、約１０００〜約１１００など；例えば、約１１００〜約３０００、約１１００〜約２８００、約１１００〜約２６００、約１１００〜約２５００、約１１００〜約２４００、約１１００〜約２２００、約１１００〜約２０００、約１１００〜約１８００、約１１００〜約１６００、約１１００〜約１５００、約１１００〜約１２００など；例えば、約１２００〜約３０００、約１２００〜約２８００、約１２００〜約２６００、約１２００〜約２５００、約１２００〜約２４００、約１２００〜約２２００、約１２００〜約２０００、約１２００〜約１８００、約１２００〜約１６００、約１２００〜約１５００など；例えば、約１５００〜約３０００、約１５００〜約２８００、約１５００〜約２６００、約１５００〜約２５００、約１５００〜約２４００、約１５００〜約２２００、約１５００〜約２０００、約１５００〜約１８００、約１５００〜約１６００など；例えば、約１６００〜約３０００、約１６００〜約２８００、約１６００〜約２６００、約１６００〜約２５００、約１６００〜約２４００、約１６００〜約２２００、約１６００〜約２０００、約１６００〜約１８００など；例えば、約１８００〜約３０００、約１８００〜約２８００、約１８００〜約２６００、約１８００〜約２５００、約１８００〜約２４００、約１８００〜約２２００、約１８００〜約２０００など；例えば、約２０００〜約３０００、約２０００〜約２８００、約２０００〜約２６００、約２０００〜約２５００、約２０００〜約２４００、約２０００〜約２２００など；例えば、約２２００〜約３０００、約２２００〜約２８００、約２２００〜約２６００、約２２００〜約２５００、約２２００〜約２４００など；例えば、約２４００〜約３０００、約２４００〜約２８００、約２４００〜約２６００、約２４００〜約２５００など；例えば、約２５００〜約３０００、約２５００〜約２８００、約２５００〜約２６００など；例えば、約２６００〜約３０００、約２６００〜約２８００；または約２８００〜約３０００ｍｇなどの薬学的活性成分を被験体に投与することを含む。
【０２６８】
一部の実施形態では、投薬スケジュールは、毎週１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、月１回、２カ月ごとに１回、または３カ月ごとに１回の投与からなる。例えば、本方法は、１回の投与当たり約２００、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１０００、約１２００、約１４００、約１５００、約１６００、約１８００、約２０００、約２２００、約２４００、約２５００、または約３０００ｍｇの薬学的活性成分を被験体に投与することを含むことができる。
【０２６９】
一部の実施形態では、投与は、１回の投与当たり単回用量で行う。他の実施形態では、医薬組成物は、１回の投与当たり、全用量を２回分の用量、３回分の用量、またはさらに４回分の用量に分割した分割用量で、例えば、１週間、２週間、１カ月間、２カ月間などにわたり、具体的には２週間にわたり投与される。組成物はまた連続的に、または処置している状態、投与経路ならびに被験体の年齢、体重および状態に応じてその中の任意の有効な範囲もしくは値で投与されてもよい。
【０２７０】
一部の実施形態では、本開示の医薬組成物は髄腔内または脳室内投与に対して適切である。ある特定の実施形態では、医薬組成物の髄腔内投与は髄腔内ポートを介する。これらの実施形態のいくつかでは、ポートはＣｅｌｓｉｔｅ（登録商標）ポート（Ｂ．Ｂｒａｕｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｆｒａｎｃｅ）である。ある特定の実施形態では、髄腔内投与は、髄腔内緩徐ボーラス（投与される体積に応じて１〜２分間）腰椎穿刺注射（投与最大速度＝４．５ｍＬ／分）として投与することを含む。ある特定の実施形態では、腰椎穿刺の技術は、ＷｈｉｔｅａｃｒｅまたはＳｐｒｏｔｔｅ針などの非切断針の使用、硬膜線維に並行した挿入、および抜針前のスタイレットの置換えを含む。ある特定の実施形態では、注射前に、投与される体積と等しいＣＳＦ液の体積を除去する。
【０２７１】
別の例証的な例では、脳室内投与はＯｍｍａｙａリザーバーを介することができる。
【０２７２】
本明細書に記載されているＮＰＣの処置のために、薬学的活性成分、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物の有効用量は、約０．００１〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．１〜約１０００、約１〜約１０００、約１０〜約１０００、約２０〜約１０００、約５０〜約１０００、約１００〜約１０００、約２００〜約１０００、約３００〜約１０００、約４００〜約１０００、約５００〜約１０００、約６００〜約１０００、約８００〜約１０００など；例えば、約０．１〜約８００、約１〜約８００、約１０〜約８００、約２０〜約８００、約５０〜約８００、約１００〜約８００、約２００〜約８００、約３００〜約８００、約４００〜約８００、約５００〜約８００、約６００〜約８００など；例えば、約０．１〜約６００、約１〜約６００、約１０〜約６００、約２０〜約６００、約５０〜約６００、約１００〜約６００、約２００〜約６００、約３００〜約６００、約４００〜約６００、約５００〜約６００など；例えば、約０．１〜約５００、約１〜約５００、約１０〜約５００、約２０〜約５００、約５０〜約５００、約１００〜約５００、約２００〜約５００、約３００〜約５００、約４００〜約５００など；例えば、約０．１〜約４００、約１〜約４００、約１０〜約４００、約２０〜約４００、約５０〜約４００、約１００〜約４００、約２００〜約４００、約３００〜約４００など；例えば、約０．１〜約３００、約１〜約３００、約１０〜約３００、約２０〜約３００、約５０〜約３００、約１００〜約３００、約２００〜約３００など；例えば、約０．１〜約２００、約１〜約２００、約１０〜約２００、約２０〜約２００、約５０〜約２００、約１００〜約２００など；例えば、約０．１〜約１００、約１〜約１００、約１０〜約１００、約２０〜約１００、約５０〜約１００など；例えば、約０．１〜約５０、約１〜約５０、約１０〜約５０、約２０〜約５０など；例えば、約０．１〜約２０、約１〜約２０、約１０〜約２０など；例えば、約０．１〜約１０、約１〜約１０；または約０．１〜約１ｍｇ／ｋｇなどの範囲であり得る。
【０２７３】
一部の実施形態では、本方法は、ＮＰＣの症状を減少させるために、投与が、毎週、２週間ごと、３週間ごと、または毎月生じる処置段階を含む。
【０２７４】
一部の実施形態では、本方法は、疾患の定常状態を維持するために、投与が、３週間ごと、毎月、２カ月ごと、または３カ月ごとに生じる維持段階を含む。
【０２７５】
一部の実施形態では、医薬組成物はボーラスとして投与され、これに続いて、連続的な維持用量で投与される。
【０２７６】
ある特定の実施形態では、医薬組成物は髄腔内または脳室内投与を介して毎月投与される。ある特定の実施形態では、医薬組成物は髄腔内または脳室内投与を介して連続的に投与される。
【０２７７】
一部の実施形態では、本方法は、９００ｍｇの薬学的活性成分が初期用量として患者に投与される処置段階と、９００ｍｇ未満の薬学的活性成分が髄腔内投与により隔週投与される維持段階とを含む。
【０２７８】
６．３．２．複数の投与経路
一部の実施形態では、本方法は、複数の投与経路を使用して薬学的活性成分を投与することを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、薬学的活性成分を（ｉ）髄腔内または脳室内投与により、および（ｉｉ）静脈内に投与することを含む。これらの実施形態は、中枢神経系と末梢器官の両方におけるコレステロール蓄積の減少を有用に可能にする。
【０２７９】
一部の実施形態では、静脈内投与は、約２００ｍｇ／ｋｇ〜約４０００ｍｇ／ｋｇのベータ−シクロデキストリン混合物を、静脈内注入により、６〜８時間にわたり患者に投与することを含む。一部の実施形態では、静脈内投与は、約５００ｍｇ／ｋｇ〜約４０００ｍｇ／ｋｇのベータ−シクロデキストリン混合物を静脈内注入により６〜８時間にわたり患者に投与することを含む。
【０２８０】
典型的な実施形態では、医薬組成物は、約２００ｍｇ／ｍＬのベータ−シクロデキストリン混合物を含む。ある特定の他の実施形態では、医薬組成物は、約２５０ｍｇ／ｍＬのベータ−シクロデキストリン混合物を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、３日ごとに１回、毎週１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、毎月１回、２カ月ごとに１回、または３カ月ごとに１回投与される。ある特定の実施形態では、静脈内投与は生後直ちに開始する。ある特定の他の実施形態では、静脈内投与は、髄腔内（または脳室内）投与が開始された後に開始される。一部の実施形態では、処置の効力を決定するため、および投薬スケジュールの調節のために患者の肝臓体積、脾臓体積、および／または肝臓酵素活性がモニターされる。
【０２８１】
６．３．３．併用療法
本開示のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン医薬組成物が任意選択で利用され得る併用療法の方法が以下に記載されている。一部の実施形態では、本開示の併用法は、少なくとも２種の薬剤の被験体への投与を含み、第１の薬剤は本明細書に記載されているヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物（例えば、本明細書に記載されている医薬組成物で）であり、追加の薬剤（複数可）は組合せ治療剤である。ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物および組合せ治療剤（複数可）は、同時に（例えば、本明細書に記載されているような医薬組成物で）、逐次的に、または別個に投与することできる。
【０２８２】
本開示の併用療法の方法は、相加効果より大きい、すなわち、相乗効果をもたらすことができ、例えば、それぞれが個々に投与された場合のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物と組合せ治療剤から予想される利益の合計より大きい治療上の利益をもたらす。
【０２８３】
一部の実施形態では、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物および組合せ治療剤は、同時にまたは逐次的のいずれかで並行的に投与される。本明細書で使用される場合、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物および組合せ治療剤は、これらが同一の日、例えば、同じ被験体の来診（ｖｉｓｉｔ）中に被験体に投与される場合、逐次的に投与されると言われる。逐次投与は、１、２、３、４、５、６、７、または８時間の間をあけて生じ得る。対照的に、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物および組合せ治療剤は、これらが異なる日に被験体に投与された場合、別個に投与されると言われ、例えば、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物および組合せ治療剤は、１日、２日または３日、１週、２週または１カ月の間隔で投与することができる。本開示の方法において、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物の投与は、組合せ治療剤の投与に先行するまたはこれに続くことができる。
【０２８４】
非限定的例として、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物および組合せ治療剤はある期間にわたり並行的に投与することができ、これに続く第２の期間で、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物および組合せ治療剤の投与を交互に行う。
【０２８５】
ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物および組合せ治療剤を投与する潜在的相乗効果のために、このような薬剤は、薬剤の１つまたは両方が単独で投与された場合には治療的に有効でない量で、治療的に有効な組合せとして投与することができる。
【０２８６】
ある特定の実施形態では、組合せ治療剤はビタミンＥまたはその誘導体、酵素補充療法、ステロイド、グルコシルトランスフェラーゼ酵素阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、または分子のシャペロン活性化因子である。
【０２８７】
ビタミンＥまたはビタミンＥ誘導体として、これらに限定されないが、アルファ−トコフェロール、デルタ−トコフェロール、およびトコフェロール誘導体が挙げられる。一部の実施形態では、ビタミンＥ誘導体として、エステル化トコフェロール、例えば、酢酸トコフェリル、および化学的に関連したトコフェロール誘導体、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれているＰＣＴ公開第ＷＯ２０１４／０７８５７３号に記載されているものなどが挙げられる。
【０２８８】
酵素補充療法として、これらに限定されないがアガルシダーゼベータ（Ｆａｂｒａｚｙｍｅ（登録商標））、イミグルセラーゼ（Ｃｅｒｅｚｙｍｅ（登録商標））、ベラグルセラーゼ（ｖｅｒｌａｇｌｕｃｅｒａｓｅ）アルファ（ＶＰＲＩＶ（商標））、タリグルセラーゼ（Ｅｌｅｌｙｓｏ（商標））、アルグルコシダーゼアルファ（Ｍｙｏｚｙｍｅ（登録商標）またはＬｕｍｉｚｙｍｅ（登録商標））、ラロニダーゼ（Ａｌｄｕｒａｚｙｍｅ（登録商標））、イデュルスルファーゼ静脈内（Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標））、およびガルスルファーゼ（Ｎａｇｌａｚｙｍｅ（商標））が挙げられる。
【０２８９】
ステロイドとして、これらに限定されないが、神経ステロイド、例えば、アロプレグナノロンおよびガナキソロン（ｇａｎａｘｏｌｏｎｅ）などが挙げられる。
【０２９０】
グルコシルトランスフェラーゼ酵素阻害剤として、これらに限定されないが、グルコセラミドシンターゼ阻害剤、例えば、ミグルスタット（Ｚａｖｅｓｃａ（登録商標））などが挙げられる。
【０２９１】
ＨＤＡＣ阻害剤として、これらに限定されないが、ボリノスタット（ｖｉｒｏｎｏｓｔａｔ）、ロミデプシン、トリコスタチンＡ、バルプロエート、ブチレート、トラポキシン、およびアピシジンが挙げられる。
【０２９２】
分子のシャペロン活性化因子として、これに限定されないが、アリモクロモルが挙げられる。
【０２９３】
６．３．４．本方法の生物学的効果
６．３．４．１．バイオマーカーに対する効果
一部の実施形態では、ＮＰＣを処置する方法は、１つまたは複数の脂質、例えば、１つまたは複数の身体器官、例えば、脳内に蓄積され、疾患症状をもたらす非エステル化コレステロールまたはガングリオシドなどのレベルを維持またはモジュレートすることを含む。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の脂質のレベルをモジュレートすることは、１つまたは複数の脂質のレベルを低下させることを含む。一部の実施形態では、本方法の効力は、処置の開始前（ベースラインレベル）および開始後の１つまたは複数の脂質の貯蔵レベルを測定することによって決定される。例えば、一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数の脂質のレベルを約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％低下させる。
【０２９４】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数の脂質のレベルを２０％±５％、２５％±５％、３０％±５％、３５％±５％、４０％±５％、４５％±５％、５０％±５％、５５％±５％、６０％±５％、６５％±５％、７０％±５％、７５％±５％、８０％±５％、８５％±５％、９０％±５％、または９５％±５％低下させる。
【０２９５】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数の脂質のレベルを２０％±３％、２５％±３％、３０％±３％、３５％±３％、４０％±３％、４５％±３％、５０％±３％、５５％±３％、６０％±３％、６５％±３％、７０％±３％、７５％±３％、８０％±３％、８５％±３％、９０％±３％、９５％±３％、または９７％±３％低下させる。
【０２９６】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数の脂質のレベルを２０％±２％、２５％±２％、３０％±２％、３５％±２％、４０％±２％、４５％±２％、５０％±２％、５５％±２％、６０％±２％、６５％±２％、７０％±２％、７５％±２％、８０％±２％、８５％±２％、９０％±２％、９５％±２％、または９７％±２％低下させる。
【０２９７】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数の脂質のレベルを少なくとも約２０％、例えば、少なくとも約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％低下させる。
【０２９８】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数の脂質のレベルを約２０％〜約９７％、例えば、約２０％〜約９５％、約２０％〜約９０％、約２０％〜約８５％、約２０％〜約８０％、約２０％〜約７５％、約２０％〜約７０％、約２０％〜約６５％、約２０％〜約６０％、約２０％〜約５５％、約２０％〜約５０％、約２０％〜約４５％、約２０％〜約４０％、約２０％〜約３５％、約２０％〜約３０％、約２０％〜約２５％など；例えば、約２５％〜約９７％、約２５％〜約９５％、約２５％〜約９０％、約２５％〜約８５％、約２５％〜約８０％、約２５％〜約７５％、約２５％〜約７０％、約２５％〜約６５％、約２５％〜約６０％、約２５％〜約５５％、約２５％〜約５０％、約２５％〜約４５％、約２５％〜約４０％、約２５％〜約３５％、約２５％〜約３０％など；例えば、約３０％〜約９７％、約３０％〜約９５％、約３０％〜約９０％、約３０％〜約８５％、約３０％〜約８０％、約３０％〜約７５％、約３０％〜約７０％、約３０％〜約６５％、約３０％〜約６０％、約３０％〜約５５％、約３０％〜約５０％、約３０％〜約４５％、約３０％〜約４０％、約３０％〜約３５％など；例えば、約３５％〜約９７％、約３５％〜約９５％、約３５％〜約９０％、約３５％〜約８５％、約３５％〜約８０％、約３５％〜約７５％、約３５％〜約７０％、約３５％〜約６５％、約３５％〜約６０％、約３５％〜約５５％、約３５％〜約５０％、約３５％〜約４５％、約３５％〜約４０％など；例えば、約４０％〜約９７％、約４０％〜約９５％、約４０％〜約９０％、約４０％〜約８５％、約４０％〜約８０％、約４０％〜約７５％、約４０％〜約７０％、約４０％〜約６５％、約４０％〜約６０％、約４０％〜約５５％、約４０％〜約５０％、約４０％〜約４５％など；例えば、約４５％〜約９７％、約４５％〜約９５％、約４５％〜約９０％、約４５％〜約８５％、約４５％〜約８０％、約４５％〜約７５％、約４５％〜約７０％、約４５％〜約６５％、約４５％〜約６０％、約４５％〜約５５％、約４５％〜約５０％など；例えば、約５０％〜約９７％、約５０％〜約９５％、約５０％〜約９０％、約５０％〜約８５％、約５０％〜約８０％、約５０％〜約７５％、約５０％〜約７０％、約５０％〜約６５％、約５０％〜約６０％、約５０％〜約５５％など；例えば、約５５％〜約９７％、約５５％〜約９５％、約５５％〜約９０％、約５５％〜約８５％、約５５％〜約８０％、約５５％〜約７５％、約５５％〜約７０％、約５５％〜約６５％、約５５％〜約６０％など；例えば、約６０％〜約９７％、約６０％〜約９５％、約６０％〜約９０％、約６０％〜約８５％、約６０％〜約８０％、約６０％〜約７５％、約６０％〜約７０％、約６０％〜約６５％など；例えば、約６５％〜約９７％、約６５％〜約９５％、約６５％〜約９０％、約６５％〜約８５％、約６５％〜約８０％、約６５％〜約７５％、約６５％〜約７０％など；例えば、約７０％〜約９７％、約７０％〜約９５％、約７０％〜約９０％、約７０％〜約８５％、約７０％〜約８０％、約７０％〜約７５％など；例えば、約７５％〜約９７％、約７５％〜約９５％、約７５％〜約９０％、約７５％〜約８５％、約７５％〜約８０％など；例えば、約８０％〜約９７％、約８０％〜約９５％、約８０％〜約９０％、約８０％〜約８５％など；例えば、約８５％〜約９７％、約８５％〜約９５％、約８５％〜約９０％など；例えば、約９０％〜約９７％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９７％などの範囲で低下させる。
【０２９９】
ＮＰＣ患者において、１つまたは複数の脂質の貯蔵レベルを測定することは、脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、または尿の試料中の１つまたは複数のバイオマーカーをモニタリングすることによって実施することができる。一部の実施形態では、ＣＳＦを使用して、１つまたは複数の脂質の排出レベルを直接的に決定する。一部の実施形態では、１つまたは複数の脂質のレベルの変化によりモジュレートされてきた下流のタンパク質バイオマーカーがモニターされる。一部の実施形態では、本方法は、タウタンパク質、アミロイドペプチド、ニューロフィラメント光タンパク質（ＮＦＬ）、グリア線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、ステロール、オキシステロール、キトトリオシダーゼ活性、カルビンディン、リソソーム関連膜タンパク質１（ＬＡＭＰ−１）、ＧＭ２またはＧＭ３ガングリオシド、スフィンゴシン、およびスフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）のうちの１つまたは複数の脳脊髄液中レベルをモジュレートする、例えば、ベースラインレベルに対して低下させるのに十分な量の薬学的活性成分を投与することを含む。
【０３００】
一部の実施形態では、血漿試料は、処置の開始前および開始後に血液中に存在する１つまたは複数の脂質、例えば、コレステロールまたはコレステロール代謝物のレベルを決定するために使用される。一部の実施形態では、本方法は、７−ケトコレステロール、７β−ヒドロキシコレステロール、２４Ｓ−ヒドロキシコレステロール、２５−ヒドロキシコレステロール、２７−ヒドロキシコレステロール、およびコレスタン−３β，５α，６β−トリオールのうちの１つまたは複数の血漿中レベルをモジュレートする、例えば、ベースラインレベルに対して低下させるのに十分な量の薬学的活性成分を投与することを含む。
【０３０１】
他の脂質、例えば、ＮＰＣ１患者の尿中に報告されてきた、３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＡ）、グリシン−コンジュゲート３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＧ）、およびタウリン−コンジュゲート３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＴ）のような代謝物などをモニタリングすることは、有用なバイオマーカーを提供し得る（Ｍａｅｋａｗａ，  Ｍ．ら、「Ｆｏｃｕｓｅｄ  ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ  ｕｓｉｎｇ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ  ｔａｎｄｅｍ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  ｆｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｔｙｐｅ  Ｃ  ａｎｄ  ３β−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．」Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＯｎｌｉｎｅＦｉｒｓｔ、２０１５年３月２日公開）。一部の実施形態では、本方法は、３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＡ）、グリシン−コンジュゲート３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＧ）、およびタウリン−コンジュゲート３β−スルホキシ−７β−Ｎ−アセチルグルコサミニル−５−コレン−２４−酸（ＳＮＡＧ−Δ５−ＣＴ）のうちの１つまたは複数の尿中レベルをモジュレートする、例えば、ベースラインレベルに対して低下させるのに十分な量の薬学的活性成分を投与することを含む。
【０３０２】
６．３．４．２．治療効果
一部の実施形態では、本開示の方法は、ＮＰＣの１つまたは複数の症状に対して有益な効果を有する。
【０３０３】
ＮＰＣの疾患進行を特徴付け、定量化する１つの尺度は、ＮＰＣ重症度スケールの使用を介するものであり、このスケールは、９つの主要ドメイン（歩行運動、認知、眼球運動、微細運動技能、聴力、記憶、発作、発話、および嚥下）および８つの副次的ドメイン（聴性脳幹反応、挙動、笑いによるカタプレキシー、反射亢進、失禁、ナルコレプシー、精神的（ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ）、および呼吸器の問題）における臨床的徴候および症状を決定する（Ｙａｎｊａｎｉｎら、「Ｌｉｎｅａｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  Ａｇｅ  ｏｆ  Ｏｎｓｅｔ，  ｉｎ  Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｔｙｐｅ  Ｃ」、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｐａｒｔ  Ｂ、１５３Ｂ巻：１３２〜１４０頁（２０１０年））（「Ｙａｎｊａｎｉｎ、２０１０年」）。全臨床重症度スコア（または「全スコア」）は、主要および副次的ドメインのそれぞれにおけるすべての評価の総計であり、個々のドメインスコアのすべての合計により決定される。以下の表１を参照されたい。また図１も参照されたい。
【表１−１】
2018517046.tif 000005
【表１−２】
2018517046.tif 000006
【０３０４】
一部の実施形態では、本方法は、歩行運動、微細運動技能、認知、発話、嚥下、眼球運動、記憶、聴力、発作、聴性脳幹反応、挙動、笑いによるカタプレキシー、反射亢進、失禁、ナルコレプシー、精神的、および呼吸器の問題から選択されるＮＰＣ重症度スケールの１つまたは複数のドメインスコアを維持または減少させることを含む。一部の実施形態では、本方法は、歩行運動、微細運動技能、認知、発話、嚥下、眼球運動、記憶、聴力、および発作から選択されるＮＰＣ重症度スケールのうちの１つまたは複数のドメインスコアを維持または減少させることを含む。一部の実施形態では、本方法は、歩行運動、微細運動技能、認知、発話、嚥下、記憶、および発作から選択されるＮＰＣ重症度スケールの１つまたは複数のドメインスコアを維持または減少させることを含む。一部の実施形態では、本方法は、歩行運動、微細運動技能、認知、および嚥下から選択されるＮＰＣ重症度スケールの１つまたは複数のドメインスコアを維持または減少させることを含む。
【０３０５】
一部の実施形態では、患者の状態を改善する処置は、ベースラインスコアと比較して、ＮＰＣ重症度スケールの１つまたは複数のドメインのスコアを減少させることを含む。一部の実施形態では、スコアの減少は、ベースラインスコアと比較して、約２０％〜約９５％、例えば、約３０％〜約９５％、約４０％〜約９５％、約５０％〜約９５％、約６０％〜約９５％、約７０％〜約９５％、約８０％〜約９５％、約９０％〜約９５％など；例えば、約３０％〜約９０％、約４０％〜約９０％、約５０％〜約９０％、約６０％〜約９０％、約７０％〜約９０％、約８０％〜約９０％など；例えば、約２０％〜約８０％、約３０％〜約８０％、約４０％〜約８０％、約５０％〜約８０％、約６０％〜約８０％、約７０％〜約８０％など；例えば、約２０％〜約７０％、約３０％〜約７０％、約４０％〜約７０％、約５０％〜約７０％、約６０％〜約７０％など；例えば、約２０％〜約６０％、約３０％〜約６０％、約４０％〜約６０％、約５０％〜約６０％など；例えば、約２０％〜約５０％、約３０％〜約５０％、約４０％〜約５０％など；例えば、約２０％〜約４０％、約３０％〜約４０％；または約２０％〜約３０％などの範囲である。例えば、スコアの減少は、ベースラインスコアと比較して、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％であり得る。
【０３０６】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数のドメインのスコアを２０％±５％、２５％±５％、３０％±５％、３５％±５％、４０％±５％、４５％±５％、５０％±５％、５５％±５％、６０％±５％、６５％±５％、７０％±５％、７５％±５％、８０％±５％、８５％±５％、９０％±５％、または９５％±５％減少させる。
【０３０７】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数のドメインのスコアを２０％±３％、２５％±３％、３０％±３％、３５％±３％、４０％±３％、４５％±３％、５０％±３％、５５％±３％、６０％±３％、６５％±３％、７０％±３％、７５％±３％、８０％±３％、８５％±３％、９０％±３％、９５％±３％、または９７％±３％減少させる。
【０３０８】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインレベルに対して、１つまたは複数のドメインのスコアを２０％±２％、２５％±２％、３０％±２％、３５％±２％、４０％±２％、４５％±２％、５０％±２％、５５％±２％、６０％±２％、６５％±２％、７０％±２％、７５％±２％、８０％±２％、８５％±２％、９０％±２％、９５％±２％、または９７％±２％減少させる。
【０３０９】
一部の実施形態では、患者の状態を改善する処置は、ベースライン全スコアと比較して、ＮＰＣ重症度スケールの全スコアを減少させることを含む。一部の実施形態では、全スコアの減少は、ベースラインの全スコアと比較して、約２０％〜約９７％、例えば、約２５％〜約９７％、約３０％〜約９７％、約３５％〜約９７％、約４０％〜約９７％、約４５％〜約９７％、約５０％〜約９７％、約５５％〜約９７％、約６０％〜約９７％、約６５％〜約９７％、約７０％〜約９７％、約７５％〜約９７％、約８０％〜約９７％、約８５％〜約９７％、約９０％〜約９７％など；例えば、約２０％〜約９５％、約２５％〜約９５％、約３０％〜約９５％、約３５％〜約９５％、約４０％〜約９５％、約４５％〜約９５％、約５０％〜約９５％、約５５％〜約９５％、約６０％〜約９５％、約６５％〜約９５％、約７０％〜約９５％、約７５％〜約９５％、約８０％〜約９５％、約８５％〜約９５％、約９０％〜約９５％など；例えば、約２０％〜約９０％、約２５％〜約９０％、約３０％〜約９０％、約３５％〜約９０％、約４０％〜約９０％、約４５％〜約９０％、約５０％〜約９０％、約５５％〜約９０％、約６０％〜約９０％、約６５％〜約９０％、約７０％〜約９０％、約７５％〜約９０％、約８０％〜約９０％、約８５％〜約９０％など；例えば、約２０％〜約８５％、約２５％〜約８５％、約３０％〜約８５％、約３５％〜約８５％、約４０％〜約８５％、約４５％〜約８５％、約５０％〜約８５％、約５５％〜約８５％、約６０％〜約８５％、約６５％〜約８５％、約７０％〜約８５％、約７５％〜約８５％、約８０％〜約８５％など；例えば、約２０％〜約８０％、約２５％〜約８０％、約３０％〜約８０％、約３５％〜約８０％、約４０％〜約８０％、約４５％〜約８０％、約５０％〜約８０％、約５５％〜約８０％、約６０％〜約８０％、約６５％〜約８０％、約７０％〜約８０％、約７５％〜約８０％など；例えば、約２０％〜約７５％、約２５％〜約７５％、約３０％〜約７５％、約３５％〜約７５％、約４０％〜約７５％、約４５％〜約７５％、約５０％〜約７５％、約５５％〜約７５％、約６０％〜約７５％、約６５％〜約７５％、約７０％〜約７５％など；例えば、約２０％〜約７０％、約２５％〜約７０％、約３０％〜約７０％、約３５％〜約７０％、約４０％〜約７０％、約４５％〜約７０％、約５０％〜約７０％、約５５％〜約７０％、約６０％〜約７０％、約６５％〜約７０％など；例えば、約２０％〜約６５％、約２５％〜約６５％、約３０％〜約６５％、約３５％〜約６５％、約４０％〜約６５％、約４５％〜約６５％、約５０％〜約６５％、約５５％〜約６５％、約６０％〜約６５％など；例えば、約２０％〜約６０％、約２５％〜約６０％、約３０％〜約６０％、約３５％〜約６０％、約４０％〜約６０％、約４５％〜約６０％、約５０％〜約６０％、約５５％〜約６０％など；例えば、約２０％〜約５５％、約２５％〜約５５％、約３０％〜約５５％、約３５％〜約５５％、約４０％〜約５５％、約４５％〜約５５％、約５０％〜約５５％など；例えば、約２０％〜約５０％、約２５％〜約５０％、約３０％〜約５０％、約３５％〜約５０％、約４０％〜約５０％、約４５％〜約５０％など；例えば、約２０％〜約４５％、約２５％〜約４５％、約３０％〜約４５％、約３５％〜約４５％、約４０％〜約４５％など；例えば、約２０％〜約４０％、約２５％〜約４０％、約３０％〜約４０％、約３５％〜約４０％など；例えば、約２０％〜約３５％、約２５％〜約３５％、約３０％〜約３５％など；例えば、約２０％〜約３０％、約２５％〜約３０％など；または例えば、約２０％〜約２５％などの範囲である。例えば、ベースラインの全スコアと比較して、ＮＰＣ重症度スケールの全スコアの減少は約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、または約９７％であり得る。
【０３１０】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインの全レベルに対して、全スコアを２０％±５％、２５％±５％、３０％±５％、３５％±５％、４０％±５％、４５％±５％、５０％±５％、５５％±５％、６０％±５％、６５％±５％、７０％±５％、７５％±５％、８０％±５％、８５％±５％、９０％±５％、または９５％±５％減少させる。
【０３１１】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインの全レベルに対して、全スコアを２０％±３％、２５％±３％、３０％±３％、３５％±３％、４０％±３％、４５％±３％、５０％±３％、５５％±３％、６０％±３％、６５％±３％、７０％±３％、７５％±３％、８０％±３％、８５％±３％、９０％±３％、９５％±３％、または９７％±３％減少させる。
【０３１２】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインの全レベルに対して、全スコアを２０％±２％、２５％±２％、３０％±２％、３５％±２％、４０％±２％、４５％±２％、５０％±２％、５５％±２％、６０％±２％、６５％±２％、７０％±２％、７５％±２％、８０％±２％、８５％±２％、９０％±２％、９５％±２％、または９７％±２％減少させる。
【０３１３】
一部の実施形態では、患者の状態を一定に保持する維持段階は、ベースラインスコアと比較して、ＮＰＣ重症度スケールのドメインのスコアをある範囲内に保持することを含む。一部の実施形態では、スコアの維持とは、ベースラインレベルのスコアの約１５％以内、例えば、約１０％または約５％以内などのスコアを指す。
【０３１４】
一部の実施形態では、本方法は、ベースラインスコアに対して、５％±３％、１０％±３％、または１５％±３％以内であるスコアをもたらす。一部の実施形態では、本方法は、ベースラインスコアに対して、５％±２％、１０％±２％、または１５％±２％以内であるスコアをもたらす。
【０３１５】
一部の実施形態では、患者の状態を一定に保持する維持段階は、ベースライン全スコアと比較して、ＮＰＣ重症度スケールの全スコアをある範囲内に保持することを含む。一部の実施形態では、全スコアの維持とは、ベースラインレベルでの全スコアの約１５％以内の、例えば、約１０％または約５％以内などの全スコアを指す。
【０３１６】
一部の実施形態では、本方法は、ベースライン全スコアに対して、５％±３％、１０％±３％、または１５％±３％以内である全スコアをもたらす。一部の実施形態では、本方法は、ベースライン全スコアに対して、５％±２％、１０％±２％、または１５％±２％以内である全スコアをもたらす。
【０３１７】
本開示の方法の効力を特徴付けるために使用することができる他の尺度として、処置後の変化について臨床医による盲検の臨床全般印象度（ｂｌｉｎｄｅｄ  Ｃｌｉｎｉｃｉａｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｌｏｂａｌ  ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈａｎｇｅ）（ＣＧＩ−臨床医）または変化について介護者による臨床全般印象度（Ｃａｒｅｇｉｖｅｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｌｏｂａｌ  ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈａｎｇｅ）（ＣＧＩ−介護者）、タイムドアップアンドゴー（Ｔｉｍｅｄ  Ｕｐ  ａｎｄ  Ｇｏ）（ＴＵＧ）試験、９ホールペグ試験（９−ＨＰＴ）、および生活の質尺度、例えば、米国国立衛生研究所のＰＲＯＭＩＳ−ＰＲＯ（患者報告転帰測定情報システム−患者報告転帰）介護者による生活の質の評定などを含む包括的ドメインが挙げられる。
【０３１８】
本開示の方法は臨床的安全性尺度を特徴とすることができ、これには、臨床的有害事象の特徴付けおよび重症度；例えば、ＢＡＥＲ試験による聴能学検査；臨床検査室試験、例えば、血液学、臨床化学、凝固、尿検査、ＣＳＦ分析；バイタルサイン；身体的および神経系試験の知見；ならびに心電図の１つまたは複数が含まれる。
【０３１９】
６．３．５．他のリソソーム蓄積症の処置
実施例８において実証されているように（セクション５．８．２．５を参照されたい）、本明細書に記載されているヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物は、オートファジーに関係する遺伝子に対して顕著な効果を有し、本明細書に記載されている薬学的活性成分および医薬組成物は、他のリソソーム蓄積症における欠陥のある特定の結果を好転させるのに有効であることを実証している。
【０３２０】
したがって、別の態様では、ニーマン−ピック病Ｃ型（ＮＰＣ）以外のリソソーム蓄積症を処置するための方法であって、本明細書に記載されているような医薬組成物の治療有効量を、ＮＰＣ以外のリソソーム蓄積症を有する被験体に投与することを含む方法が提示される。
【０３２１】
様々な実施形態では、リソソーム蓄積症は、アスパルチルグルコサミン尿症、ウォルマン病、シスチン蓄積症、ダノン病、ファブリ病、ファーバー病、フコース蓄積症、ゴーシェ病、ＧＭ１−ガングリオシドーシスＩ／ＩＩ／ＩＩＩ型、ＧＭ２−ガングリオシドーシス、アルファ−マンノシドーシスＩ／ＩＩ型、ベータ−マンノシドーシス、異染性白質萎縮症、シアリドーシスＩ／ＩＩ型、ムコリピドーシスＩＶ型、シャイエ症候群、ハンター症候群、サンフィリポ症候群Ａ、サンフィリポ症候群Ｂ、サンフィリポ症候群Ｃ、サンフィリポ症候群Ｄ、ガラクトシアリドーシスＩ／ＩＩ型、クラッベ病、サンドホフ病、フォークト−スピールマイヤー病、ハーラー症候群、ニーマン−ピックＣ型以外のニーマン−ピック病、Ｉ細胞病（ムコリピドーシスＩＩ）、偽性ハーラーポリジストロフィー、モルキオ症候群、マロトー−ラミー症候群、スライ症候群、ムコ多糖症ＩΧ型、多発性スルファターゼ欠損症、バッテン病、テイ−サックス病、ポンペ病、バッテン病、バッテン病、遅発乳児性北部てんかん（ｌａｔｅ  ｉｎｆａｎｔｉｌｅ  Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｅｐｉｌｅｐｓｙ）、濃化異骨症、シンドラー病、シアル酸尿症、およびサラ病から選択される。
【０３２２】
ある特定の実施形態では、リソソーム蓄積症は、テイ−サックス病、スフィンゴリピド症、ゴーシェ病、ムコリピドーシス、ガラクトシアリドーシス、サラ障害、シスチン蓄積症、ダノン病、ファブリ病、ファーバー病、リポフスチノース、ポンペ病、ガングリオシド蓄積症、ＩＳＳＤ、クラッベ病、ＮＰＣ以外のニーマン−ピック病、白質萎縮症、ハーラー病、シェイエ病、ハンター病、サンフィリポ病、サンドホフ病、シンドラー疾患、バッテン障害、またはウォルマン病である。
【０３２３】
さらなる実施形態では、リソソーム蓄積症は、ＮＰＣ以外のニーマン−ピック病、テイ−サックス病、ファブリ病、ファーバー病、サンフィリポ病、バッテン障害、またはウォルマン病である。
【実施例】
【０３２４】
７．実施例
以下の実施例は、限定としてではなく、例証および例示として提供される。
【０３２５】
７．１．（実施例１：ニーマン−ピック病Ｃ型に対する第Ｉ相治験）
第１相治験は、以下のプロトコールに従い、市販の非経口等級のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物を使用してＮＩＨにより開始された。
【０３２６】
７．１．１．プロトコール
ＮＩＨにより行われた、この第１相、非無作為抽出、非盲検、単一施設実験において、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ、Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）を、それぞれ２００ｍｇの初期用量、これに続いて、３００、４００ｍｇ、および９００ｍｇへ段階的に増大する用量で、３人の患者の薬物未処置コホートに、腰椎注射を介して、髄腔内に投与する。コホート内のすべての患者（１つのコホートにつき３人の患者）は毎月１回のＨＰ−ベータ−ＣＤを少なくとも２用量について受け、用量を段階的に増大する決定は、安全性および生化学的データに基づく。その後の用量の段階的増大は３００ｍｇまでの増加量で実行する。安全性は、有害事象（ＡＥ）、聴能学評価、臨床検査室試験、バイタルサイン、健康診断、胸部Ｘ線および心電図（ＥＣＧ）により評価する。生化学的効力は、血漿２４（Ｓ）−ＨＣのベースラインからの変化で測定する。ＰＫは血漿ＨＰ−ベータ−ＣＤについて評価する。
【０３２７】
７．１．２．薬物製品（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）
この第Ｉ相治験に使用した、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品は、約４．３４±１０％のＤＳａを有するＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）であった。
【０３２８】
７．１．３．組み入れ基準
患者適格性組み入れ基準は以下の通りであった：
１）いずれかの性別および任意の民族性の、登録時に２歳以上かつ２５歳以下の年齢である。
２）以下のうちの１つに基づくＮＰＣ１の診断：
ａ）２つのＮＰＣ１変異、
ｂ）フィリピン染色陽性および少なくとも１つのＮＰＣ１変異、
ｃ）以下のいずれかと組み合わせた垂直性核上性注視麻痺（ＶＳＮＧＰ）：
ｉ）１つのＮＰＣ１変異、または
ｉｉ）フィリピン染色陽性およびＮＰＣ２変異なし。
３）ＮＰＣ１の少なくとも１つの神経学的症状発現を有する患者。例えば、これらに限定されないが、聴力損失、垂直性核上性注視麻痺、運動失調、認知症、ジストニー、発作、構語障害、または嚥下障害。
４）評価および追跡調査のためにＮＩＨ  ＣＣを繰り返し訪問することができる。
５）ミグルスタットを服用する場合、患者はベースライン評価前に３カ月以上の間薬物の一定の用量を服用していなければならず、治験期間の間その用量レベルを維持する意思がなければならない。
６）年齢に適したマルチビタミン剤を除いてすべての非処方せんサプリメントを中断する意思がある。
７）出産年齢の女性は、治験期間の間有効な避妊方法を使用する意思がなければならない。
８）連続的な血液およびＣＳＦの採取を含めた、治験設計のすべての態様に参加する意思がある。
【０３２９】
７．１．４．除外基準
患者適格性除外基準は以下の通りであった：
１）治験登録時に、２歳未満または２５歳より上の年齢である。
２）被験体は、被験体の体重が、生理食塩水または薬物の投薬のいずれかに対して０．２ＥＵ／ｋｇを上回る内毒素レベルをもたらす場合、除外される。
３）本プロトコールの要件を満たす患者の能力を妨げるＮＰＣ１の重篤な症状発現。
４）神経学的無症候性の患者。
５）ＮＰＣ１を処置しようと、任意の形態のシクロデキストリンを受けたことのある患者。シクロデキストリンを賦形剤として含有する別の医療適用に対する別の薬物調製物での処置であれば、患者は除外しない。
６）シクロデキストリンまたは製剤の構成要素に対する過敏症反応の病歴。
７）実験中の任意の時点において妊娠または授乳中である。
８）ＣＮＳの感染症または任意の全身性感染症が疑われる患者。
９）腰椎穿刺を実施する能力に影響する脊髄の変形。
１０）腰部における皮膚感染症。
１１）１，５００未満の絶対的好中球カウント（ＡＮＣ）として定義される好中球減少。
１２）血小板減少症（１立方ミリメートル当たり７５，０００未満の血小板カウント）。
１３）撹乱されたＣＳＦ循環の証拠。
１４）麻酔に対する禁忌。
１５）抗凝血剤を以前に使用したことがあるか、または出血障害の病歴／存在があり、臨床的出血のより高い危険性、または２より大きいＩＮＲを有する。
１６）急性肝疾患の臨床的証拠がある、黄疸または右上腹部痛の症状を有する患者。
１７）年齢および性別に対して正常より２標準偏差下回ると定義される貧血の存在。
１８）１８歳以上の年齢の被験体に対しては、ＣＫＤ−ＥＰＩクレアチニン２００９方程式を利用して、ｅＧＦＲを自動的に計算し、ＮＩＨ  ＣＣ実験室により報告する。１８歳以上の年齢の被験体は、ｅＧＦＲが６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満またはそれに等しい場合除外される。年齢＜１８歳の被験体に対しては、ＮＫＤＥＰ計算機を利用する（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｋｄｅｐ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｌａｂ−ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ／ｇｆｒ−ｃａｌｃｕｌａｔｏｒｓ／ｃｈｉｌｄｒｅｎ−ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ−ｕｎｉｔ．ｓｈｔｍｌ）。結果は、＞７５ｍＬ／分／１．７３ｍ２またはそれ未満と報告される。年齢＜１８歳の被験体は、ｅＧＦＲが７５  １５ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満またはそれに等しい場合、除外される。
１９）適切に採取された尿検査検体からの尿沈渣の微視的評価に対して、高倍率視野当たり（または＞２５／ミクロＬ）５個またはそれ超の赤血球として、米国泌尿器科学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＡＵＡ））により定義されている単一の尿検査での血尿。患者は、その後の２つの尿検体がＡＵＡにより定義されているような血尿に対して陰性であった場合、除外されない。
２０）タンパク質尿（尿検査で、タンパク質１＋）。ただし、患者の主要な医療提供者もしくはＮＩＨへの腎臓病学についての相談により、または正常な尿タンパク質クレアチニン比の状況および臨床症状（浮腫、高血圧）の不在下において、良性として評価および分類された場合を除く。
２１）活発な肺疾患、酸素要件または血液の酸素飽和を低減する臨床的に有意な病歴、肺の治療、または活発な吸引を必要とする。
２２）聴器毒性についてモニターする純音閾値評価（ｐｕｒｅ−ｔｏｎｅ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）（５００Ｈｚ〜８０００Ｈｚ）を含めた、行動的聴能学評価を完了することができない患者およびベースラインにおいてＯＡＥが確実に得られない患者。
２３）登録前２カ月の期間にわたり頻度、種類または期間において安定せず、登録前２カ月の期間にわたり抗てんかん薬物（体重調節用以外）の用量の変更を必要とする、または発作を制御するために３種またはそれ超の抗てんかんの薬物を必要とする、進行中の発作を有する患者。
２４）研究者の意見では、プロトコールに従うことができない、または参加の危険性を潜在的に増加させる特定の健康上の懸念を有する患者。
【０３３０】
７．１．５．臨床データの初期の分析
この実験からの初期のデータを、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの髄腔内投与を同様に使用した別の施設での個々のＩＮＤからの追加データ（「Ｉ−ＩＮＤ」）と共に以下の通り分析した：
【０３３１】
７．１．５．１．初期データの分析の概要
本発明者らは分析を実施して、ＮＩＨ被験体と、別の施設でのＩ−ＩＮＤ実験からの３人の被験体との両方を含んだデータセットにおいて、ＮＰＣ臨床重症度スコアおよびその主要ドメインの変化率を調査した。主要な知見が以下に列挙されている：
【０３３２】
表２および表３（以下を参照されたい）を比較すると、薬物用量は、ＮＰＣ臨床重症度スコアおよびそのドメインの変化率に影響しており、最も重度の変化が聴力において観察されている。
【０３３３】
シクロデキストリンは、ＮＰＣ臨床重症度スコアおよびその構成要素における低下速度を概して低減する（表４）（以下）。これは眼球運動、聴力、および発作を除くすべての構成要素に当てはまる。
【０３３４】
シクロデキストリンとＮＩＨ自然経過研究との比較を、ＮＩＨ被験体に限定すると（表５）、パターンはまた、眼球運動を除いて、よりゆっくりとした速度で低下するシクロデキストリン群と一致する。
【０３３５】
第Ｉ相治験データの初期分析からの結果が図２〜３に要約されている。
【０３３６】
７．１．５．２．分析方法
以下の分析の目的は、１２人のＮＩＨ第１相研究被験体（「ＣＤＡ」で始まるＩＤ）および同様にＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢで髄腔内処置を受けている、別の場所からの３人の被験体（「Ｉ−ＩＮＤ」で始まるＩＤ）における時間経過による変化を理解することであった。以下の結果は、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンを受けた１５人の被験体に基づく。被験体ＣＤＡ１１３およびＣＤＡ１１４は、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンのある用量をまだ受けていなかったので、以下の分析には含まれていない。１５人の被験体のうちの４人（被験体ＣＤＡ１１０、ＣＤＡ１１１、ＣＤＡ１１２、およびＩ−ＩＮＤ−３）は、ベースラインおよび６カ月でのデータが利用可能であり、残りの１１人の被験体（ＣＤＡ１０１〜ＣＤＡ１０９、Ｉ−ＩＮＤ−１）はベースライン、６カ月、および１２カ月でのデータが利用可能である。
【０３３７】
本発明者らは、時間経過による変化の推定された傾きを得るために線形混合モデルを使用した。「線形混合モデル」の中の混合という単語は、モデルが「固定」効果と「ランダム」効果の両方を含むという事実を表すために使用されている。モデルの「ランダム」部分は、各被験体に対して繰り返された測定、またはデータの縦方向の性質を説明するものである。モデルの「固定」部分は、時間経過による平均変化の推定値、すなわち変化の傾きを提供する。この手法は、すべての収集されたデータを利用し、交互作用項によって、群内の異なる変化率の探求を可能にするので、有利である。このモデルは、非構造化された相関行列と仮定してフィットされるが、これは、複数の測定間の相関関係についていかなる仮定もなされず、各相関関係が推定されることを意味する。将来の分析では、用量などの共変量の効果を探究するために以下のモデルに共変量を加えることができる。
【０３３８】
本発明者らは、本分析で提示された各モデルに対する回帰診断法を計算し、ＣｏｏｋのＤを使用して、潜在的な異常値／影響力の大きい観察値を特定し、異常値／影響力の大きい観察値が特定されたモデルを再フィットさせた（注：異常値／影響力の大きい観察値とは、０．４またはそれ超のＣｏｏｋのＤ値を有する観察値と定義される）。本発明者らは、ＣｏｏｋのＤが、潜在的な異常値を特定するために転帰および任意の共変量の両方を含むことから、ＣｏｏｋのＤを目的の診断として選択した。異常値が特定された場合、２セットのモデルが提示される。提示された第１のモデルは完全なデータセットに基づき、第２のモデルセットは異常値を除去したデータに基づく。この分析に対して、ベースライン値だけでなく、Ｉ−ＩＮＤ−１被験体のすべての値を除去した。これらの値は表２および表３の最後の２つの欄に存在する。これら２つの分析から得た結果は、第１相研究の１５人の被験体という比較的小さな試料サイズであり、モデルに含まれる観察値の合計が４１であることから（全部のデータセットが含まれる場合）、かなり異なる可能性があることに注目されたい。
【０３３９】
本発明者らはまた、第１相の被験体と、ＮＩＨ自然経過データセットとの比較に対して同じ手法を使用した。ＮＩＨ自然経過データセットは、Ｙａｎｊａｎｉｎら、「Ｌｉｎｅａｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  Ａｇｅ  ｏｆ  Ｏｎｓｅｔ，  ｉｎ  Ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  Ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｔｙｐｅ  Ｃ」、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｇｅｎｅｔ．  Ｐａｒｔ  Ｂ、１５３Ｂ巻：１３２〜１４０頁（２０１０年）に記載されている。
【０３４０】
ここに提示された分析のため、本発明者らは、シクロデキストリンを受けた被験体に基本モデルをフィットさせた（表２に提示されている）。この分析に対して、１年の期間にわたり対応するＮＰＣ転帰の推定された変化を提示する。表３では、受け取る用量を制御しながら、時間経過による平均変化に対する結果を提示している。表４および表５は、シクロデキストリン被験体を、ＮＩＨ自然経過研究の匹敵する年齢範囲の被験体と比較したモデルを提示している。提示された結果は、２つの群のそれぞれにおける推定された傾きおよび２つの群間での傾きの均一性を試験するためのｐ値である。
【０３４１】
７．１．５．３．シクロデキストリンを受けた被験体における時間経過による変化
表２は、少なくとも１用量のシクロデキストリンを受けた１５人の被験体に対する、全体的なＮＰＣスコアおよびその構成要素のそれぞれに対する平均の傾きを提示している。これらの結果は、１年にわたる転帰における変化率についての情報を提供する。これらの率は、以前の分析において提示された全自然経過集団において観察されたものよりも低い。注：本発明者らは３１の総スコアを有した１人のＩ−ＩＮＤ被験体に対するベースラインデータを除去した（聴力を除いた総スコアが３１、歩行運動が４、嚥下が３、微細運動が４、および認知が４であった）。全体的には、この被験体は時間経過により改善した。加えて、１人のＮＩＨ被験体は、このドメイン内の５という高値により眼球運動分析において異常値であった。全データセットに対する分析は欄２および３に提示され、異常値を除去した場合に得た結果は欄４および５に提示されている。
【表２】
2018517046.tif 000007
【０３４２】
表３は、モデルの一部として用量を含む分析結果を含有する。これらのモデルは薬物用量の効果についての情報を提供する。聴力を検討する場合この効果に注目されたい。用量がモデルに含まれる場合、時間経過による変化に対する傾きはもはや有意ではない。
【表３】
2018517046.tif 000008
【０３４３】
７．１．５．４．第１相およびＩ−ＩＮＤ被験体と、自然経過研究の対応する被験体との比較
シクロデキストリンの効果をより良く理解するために、第１相およびＩ−ＩＮＤ研究の被験体と、ＮＩＨ自然経過研究の匹敵する年齢の被験体とを比較した。この比較のため、データセットは、単一の時点のデータより多くのデータを有し、６〜２６歳の年齢である被験体に限定した。混合モデルを、時間、処置群およびモデルにおける処置群の交互作用項による時間にフィットさせた。以下の表４はこの分析から得た結果を提示している。
【０３４４】
表４に提示された結果は、眼球運動および聴力のサブドメインを除き、自然経過集団と比較して、シクロデキストリン群のよりゆっくりとした変化率と一致している。
【表４】
2018517046.tif 000009
【０３４５】
７．１．５．５．第１相の被験体と、自然経過研究の対応する被験体との比較
ＮＩＨ集団内でのシクロデキストリンの効果をより良く理解するために、第１相研究の被験体と、自然経過研究の匹敵する年齢の被験体とを比較した。この比較のため、データセットは、１つより多くの時点のデータを有し、６〜２６歳の間の年齢の被験体に限定した。混合モデルを、時間、処置群およびモデルにおける処置群の交互作用項による時間にフィットさせた。以下の表はこれらの分析から得た結果を提示しており、表４の結果と同様である。いくつかの異常値を有する発作の転帰はいくらか不安定であることに注目されたい。全データセットの結果のみが提示されている。眼球運動を除いて、シクロデキストリン群のすべての率は、自然経過研究において観察されたものより低い。
【表５】
2018517046.tif 000010
【０３４６】
７．１．５．６．ミグルスタットを使用したことのある被験体のみを比較する分析
以下に提示された結果は、期間中にミグルスタットを使用した被験体を含む。これは、自然経過研究からの８人の被験体と、第１相研究からの１４人の被験体とを含む。次いで、この集団に対して表４に提示された分析を再び実行した。これらの結果は以下の表６に提示されている。
【表６】
2018517046.tif 000011
【０３４７】
以下の表７は、ＮＩＨ被験体のみを含む結果を提示している。Ｉ−ＩＮＤからの３人の被験体はこの比較については除去する。ここで提示された結果は、上記表５で提示されたものと同様である。２つの集団の間の差異は、自然経過研究の５人のＮＩＨ被験体および第１相研究の１人のＮＩＨ被験体が、これらの被験体が任意の時点でミグルスタットの不使用を報告したため集団から除去されたことである。
【表７】
2018517046.tif 000012
【０３４８】
７．１．６．臨床データのさらなる分析
同じＮＩＨ治験データセットについてさらなる分析を実施したが、上に記載された分析に含まれていなかった４つのデータ点が対照データセットに含まれていた。これらの分析は図４、５、６および８に要約されている。
【０３４９】
７．２．（実施例２：薬物製品の標準的分析）
実施例Ｉに記載されている第Ｉ相治験で使用したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン製品は、ＤＳａが約４．３４±１０％である、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ、Ｆｒａｎｃｅ）であった。製造業者が実施したＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの２つの例示的なロットの標準的分析が次の４ページに示されている。
ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＨＰＢ非経口等級（例示的バッチ１）ページ１／２
定義：
ヒドロキシプロピルベータデクスはベータデクスの部分置換されたポリ（ヒドロキシプロピル）エーテルである。
ＣＡＳ  ｎ°：１２８４４６−３５−５
ＥＩＮＥＣＳ：４２０−９２０−１
ＩＮＣＩ：ヒドロキシプロピルシクロデキストリン
仕様：
Ａ）性質
外観  白色またはほとんど白色の、非晶質または結晶性の粉末。
溶解度  水およびプロピレングリコールに自由に溶解する。
Ｂ）識別
【表８−１】
2018517046.tif 000013
Ｃ）試験
【表８−２】
2018517046.tif 000014
ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＨＰＢ非経口等級（例示的バッチ１）ページ２／２
【表８−３】
2018517046.tif 000015
典型的な値：
【表８−４】
2018517046.tif 000016
コメント：
Ｒｏｑｕｅｔｔｅが使用する方法は、薬局方モノグラフと比較されている、ＥＰまたはＵＳＰまたは内部の検証済みの方法であり得る。
この物質は、非経口調製物の製造における使用に対して適切である。
順守：
現在の薬局方：Ｅ．Ｐ．（１８０４）およびＵ．Ｓ．Ｐ／Ｎ．Ｆ．
貯蔵：
貯蔵：
−  十分密閉した容器に保存する。
−  吸湿性製品：制御された部屋の条件下で取り扱う。
再試験日：
−  その元の包装で３年。
＊コンプライアンスデータ−試験を実施しなかった
＊＊モニタリングプラン
ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＨＰＢ非経口等級（例示的バッチ２）ページ１／２
定義：
ヒドロキシプロピルベータデクスはベータデクスの部分置換されたポリ（ヒドロキシプロピル）エーテルである。
ＣＡＳ  ｎ°：１２８４４６−３５−５
ＥＩＮＥＣＳ：４２０−９２０−１
ＩＮＣＩ：ヒドロキシプロピルシクロデキストリン
仕様：
Ａ）性質
外観  白色またはほとんど白色の、非晶質または結晶性の粉末。
溶解度  水およびプロピレングリコールに自由に溶解。
Ｂ）識別
【表８−５】
2018517046.tif 000017
Ｃ）試験
【表８−６】
2018517046.tif 000018
ＫＬＥＰＴＯＳＥ（登録商標）ＨＰＢ非経口等級（例示的バッチ２）ページ２／２
【表８−７】
2018517046.tif 000019
典型的な値：
【表８−８】
2018517046.tif 000020
コメント：
Ｒｏｑｕｅｔｔｅが使用する方法は、薬局方モノグラフと比較されている、ＥＰまたはＵＳＰまたは内部の検証済みの方法であり得る。
この物質は、非経口の調製物の製造における使用に対して適切である。
順守：
現在の薬局方：Ｅ．Ｐ．（１８０４）およびＵ．Ｓ．Ｐ／Ｎ．Ｆ．
貯蔵：
−  十分に密閉した容器に保存する。
−  吸湿性製品：制御された部屋の条件下で取り扱う。
再試験日：
−  その元の包装で３年。
＊コンプライアンスデータ−試験を実施しなかった
＊＊モニタリングプラン
【０３５０】
７．３．（実施例３：ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物のＨＰＬＣ分離）
様々なクロマトグラフィーの方法を使用して、市販の非経口等級のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン医薬組成物、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（第Ｉ相治験で使用したバッチ）中のシクロデキストリン混合物の複雑性を評価した。
【０３５１】
７．３．１．ＣＤスクリーニングカラム
欧州薬局方モノグラフ番号１８０４（ヒドロキシプロピルベータデクス）（２００９年１月１日改訂）からのＨＰＬＣ法を使用して、市販のＫｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＢＰ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）中の構成要素を分離した。
【０３５２】
ＨＰＬＣ条件：固定相：ＣＤスクリーニング、粒径５μｍ（ＣｈｉｒｏＱｕｅｓｔ）、カラム：ｌ＝２５０ｍｍ、φ＝４．０ｍｍ；温度：３０℃。移動相：移動相Ａ：水；移動相Ｂ：水：メタノール（１０：９０Ｖ／Ｖ）。流量：１．０ｍＬ／分；検出：Ａｌｌｔｅｃｈ３３００蒸発型光散乱検出器；キャリアガス：窒素；流量：１．５Ｌ／分；エバポレーター温度：７０℃；注入：２０μＬ。
勾配プログラム（欧州薬局方の方法）：
【表８−９】
2018517046.tif 000021
【０３５３】
図９は、ＣＤスクリーニングＨＰＬＣ法におけるＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ（ＤＳａ＝４．２）ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの結果を表している。ＤＳが増加する順に種が溶出した。非置換ベータ−シクロデキストリンは約５分で溶出し、一置換のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンは約６分で溶出した。図１０は、メタノールおよびアセトニトリル溶媒勾配（メタノールでの勾配：０分  ３０％Ｂ、４０分  １００％Ｂ；アセトニトリルでの勾配：０〜５分  １８％Ｂ、２５分  ４０％Ｂ。他の方法パラメーターはそのままであった）を有するＣＤスクリーニングカラムを使用して、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの比較によるクロマトグラムを表している。移動相の溶媒強度および極性に応じて、保持時間は変化した。
【０３５４】
質量分析法での検出方法：６４６０三重四重極質量分析計を備えた、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２６０  ＨＰＬＣ。Ａｇｉｌｅｎｔジェット流エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）供給源、ネガティブモード、ｍ／ｚ５００〜３０００；フラグメント生成機（ｆｒａｇｍｅｎｔｏｒ）電圧：３５Ｖ、供給源パラメーター：気体温度：３００℃、気体流：１３Ｌ／分、ネブライザー：６０ｐｓｉ、シース気体流：１１Ｌ／分、シース気体温度（ヒーター）：４００℃、キャピラリー電圧：３５００Ｖ。ＨＰＬＣ−ＭＳ測定のために、移動相中の水の代わりにギ酸アンモニウム緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ＝６．０）を添加した。
【０３５５】
図１１は、ＨＰＬＣ−ＭＳ分析からの試料の抽出イオンクロマトグラムを示している。ＢＣＤ＝非置換のベータ−シクロデキストリン；ＤＳｘ＝ｘのＤＳを有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン。例えば、「ＤＳ３」は、ＤＳ＝３を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンを指す。
【０３５６】
７．３．２．逆相Ｃ１８クロマトグラフィー
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）（セクション５．３．１で使用したものと同じバッチ）を分析した。分析カラム（４ｍｍ×２５０ｍｍ）にＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ１８シリカゲルを充填した。試験した１セットの条件は以下を含んだ：固定相：ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐＲＰ１８シリカゲル、粒径２５〜４０μｍ（Ｍｅｒｃｋ）、カラム：ｌ＝２５０ｍｍ、φ＝４．０ｍｍ；温度：３０℃。移動相：移動相Ａ：水；移動相Ｂ：水：メタノールＲ（１０：９０Ｖ／Ｖ）。勾配プログラムは以下の条件を使用した：１０％移動相Ｂ勾配で０分〜１００％移動相Ｂで２０分。流量：１．０ｍＬ／分；検出：Ａｌｌｔｅｃｈ３３００蒸発型光散乱検出器；キャリアガス：窒素；流量：１．５Ｌ／分；エバポレーター温度：７０℃。
【０３５７】
図１２は、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅＣ１８固定相上のＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（ＤＳａ＝４．２）の典型的なＨＰＬＣクロマトグラムを示している。図１３は、メタノールおよびアセトニトリル溶媒勾配を有するＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｃ１８カラムを使用した、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの比較クロマトグラムを示している。（メタノールでの勾配：０分１０％Ｂ、１５分３０％Ｂ、４０分８０％Ｂ。アセトニトリルでの勾配：０分５％Ｂ、４０分８０％Ｂ。本方法の他のパラメーターは変化させなかった。）
【０３５８】
セクション５．３．１に記載されている質量分析法の条件を使用した。図１４は、ＨＰＬＣ−ＭＳ分析と異なるＤＳを有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの抽出イオンクロマトグラムを示している。
【０３５９】
７．３．３．親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）
親水性相互作用液体クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）は、通常逆相クロマトグラフィーに使用されている溶離液を有する親水性固定相を使用している。この手法は、分析物が増加する極性の順で溶出し得るような液−液分配クロマトグラフィー原理を使用している。本明細書に記載されている方法は、シリカゲル表面へ結合するアミノプロピル基を含有するアミノカラムを使用した。
【０３６０】
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）（セクション５．３．１で使用したものと同じバッチ）を分析した。ＨＰＬＣ条件：固定相：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  ＮＨ２、粒径５μｍ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ  Ｎａｇｅｌ）、カラム：ｌ＝２５０ｍｍ、φ＝４．０ｍｍ；温度：３０℃。移動相：移動相Ａ：アセトニトリル−水（８０：２０Ｖ／Ｖ）；移動相Ｂ：水。流量：１．０ｍＬ／分；検出：Ａｇｉｌｅｎｔ３８５蒸発型光散乱検出器；キャリアガス：窒素；流量：１．２Ｌ／分；エバポレーター温度：５０℃；ネブライザー温度：３０℃。
【０３６１】
図１５は、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  ＮＨ２カラム上でＨＩＬＩＣ方法を使用したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの分離を示している。
【０３６２】
質量分析法条件は、セクション５．３．１に記載されているものと同じであった。図１６は、ＨＰＬＣ−ＭＳ分析と異なるＤＳを有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの抽出イオンクロマトグラムを示している。ＢＣＤ＝非置換のベータ−シクロデキストリン；ＤＳｘ＝ｘのＤＳを有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン。例えば、「ＤＳ３」は、ＤＳ＝３を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンを指す。このＨＰＬＣ法では、より高いＤＳ置換ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンが最初に溶出した。
【０３６３】
７．３．４．シリカゲルクロマトグラフィー
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＢＰ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）（セクション５．３．１で使用したものと同じバッチ）を分析した。ＨＰＬＣ法：固定相：ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｓｉ−６０、粒径５μｍ（Ｍｅｒｃｋ）、カラム：ｌ＝２５０ｍｍ、φ＝４．０ｍｍ；温度：３０℃。移動相：移動相Ａ：アセトニトリル−０．１Ｍギ酸アンモニウムｐＨ＝７．５（８０：２０Ｖ／Ｖ）；移動相Ｂ：０．１Ｍギ酸アンモニウムｐＨ＝７．５。流量：１．０ｍＬ／分；検出：Ａｇｉｌｅｎｔ３８５蒸発型光散乱検出器；キャリアガス：窒素；流量：１．２Ｌ／分；エバポレーター温度：５０℃；ネブライザー温度：３０℃。
【０３６４】
図１７は、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  Ｓｉ  ６０カラムを使用したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの構成要素の分離を示している。この事例では、試料をベータ−シクロデキストリンでスパイクして、検出を促進させた。
【０３６５】
質量分析法条件は、セクション５．３．１に記載されているものと同じであった。図１８は、異なるＤＳを有する、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの抽出イオンクロマトグラムを示す。ＢＣＤ＝非置換のベータ−シクロデキストリン；ＤＳｘ＝ｘのＤＳを有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン。例えば、「ＤＳ３」はＤＳ＝３を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンを指す。このＨＰＬＣ法では、より高いＤＳ置換ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンが最初に溶出した。
【０３６６】
７．４．（実施例４：改善された分析法）
７．４．１．ガスクロマトグラフィー
ヒドロキシプロピルベータデクス中のプロピレングリコール（ＰＧ）含有量を決定するための正式な欧州薬局方モノグラフの方法は、ＨＰＢＣＤに対して約０．５％のみという定量化限界がある。したがって、より感度の良い分析法が必要とされ、（欧州薬局方ヒドロキシプロピルベータデクス分析、モノグラフ番号：１８０４、２００９年１月１日改訂と比較して）修正された試料調製を用いた改善された方法が開発された。本方法を使用して、欧州薬局方の方法での検出限界よりはるかに高い感度である０．０１％レベル（ＨＰＢＣＤに対して）でＰＧを定量化した。
【０３６７】
本方法の条件は以下の通りであった：装置：ガスクロマトグラフ：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＧＣ−１７Ａ；検出器：水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）；インジェクター：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＡＯＣ−５０００オートインジェクター；ソフトウエア：Ｓｈｉｍａｄｚｕ  クラス−ＶＰ７．４バージョン；気体：キャリアガス：ヘリウム（９９．９９９％）、他の気体：窒素（９９．９９９％）、合成空気（９９．９９９％）、水素（Ｗｈａｔｍａｎ水素発生器より）。
カラム：Ｓｕｐｅｌｃｏ  Ｓｕｐｅｒｃｏｗａｘ−１０（３０ｍ×０．３２ｍｍ×１．０μｍ）
【表８−１０】
2018517046.tif 000022
プロピレングリコール保持時間は約６．３５分；内部標準エチレングリコール保持時間は約７．１５分。
【０３６８】
５つの較正点：０．１と２ｍｇ／ｍＬとの間で、ＨＰＢＣＤに関係して、０．０１％、０．０２％、０．０５％、０．１％、０．２％ＰＧに対応する。
【０３６９】
較正ストック溶液を、１０ｍＬ目盛り付きガラスフラスコ中に正確に秤量した約２００ｍｇのプロピレングリコールの溶液から調製し、精製水をマークまで充填した（表１４）。以下の表に列挙した濃度を得るため、十分な希釈を実施した。標的濃度（以下の表１４を参照されたい）を達成したら、この溶液から１ｍＬ、１００μＬの内部標準溶液（ＩＳＴ）、５００ｍｇのＮａＣｌおよび１ｍＬの水をねじ口バイアルに加え、溶液を１ｍＬのジクロロメタン（ＤＣＭ）で抽出した。試料を有機相から収集し、直接注入した。
【表８−１１】
2018517046.tif 000023
【０３７０】
較正溶液ＫＡＬ２を使用して、５つの並行した測定（要件：ＲＳＤ＜５％−ＰＧとＥＧの面積比のＲＳＤ）を実施することによって系の適性を決定した。
【０３７１】
抽出ブランク試料：１ｍＬのＤＣＭを、０．１ｍＬのＩＳＴ溶液、５００ｍｇのＮａＣｌおよび２ｍＬの蒸留水に加え、次いで、０．５分間激しく撹拌し、静置させた。相が分離した後、約０．２ｍＬのＤＣＭ相をバイアルに入れた。
【０３７２】
試料調製：１ｍＬのＤＣＭを、ねじ口バイアル中の１．０ｇのＨＰＢＣＤ試料、０．１ｍＬのＩＳＴ溶液、５００ｍｇのＮａＣｌおよび２ｍＬの蒸留水に加え、０．５分間激しく撹拌し、静置させた。相が分離した後、約０．２ｍＬのＤＣＭ相をバイアルに加える。約０．１８％のＰＧを含有するＫｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ）試料の代表的なクロマトグラムが図２５に示されている。
【０３７３】
プロピレングリコール／エチレングリコール（ＰＧ／ＥＧ）重量を、ＰＧ／ＥＧピーク面積の関数として、濃度比（ｍｇ／ｍＬ）で示す較正曲線をプロットすることにより、ＨＰＢＣＤ試料のプロピレングリコール（ＰＧ）含有量を計算した。ＨＰＢＣＤ試料において、不明パラメーターはＰＧ含有量であり、これを他の３つの因子および較正曲線の方程式から誘導した。
【０３７４】
その二置換および三置換誘導体からモノプロピレングリコールを分離する本方法の適性が図２６に示されている。過剰置換されたグリコールはいくつかのピークを示し、沸点がより高いことから後で溶出した。出発材料および最終的な試料中のジプロピレングリコールおよびトリプロピレングリコール含有量を試験した。
【０３７５】
表１４に記載されているように、ＨＰＢＣＤに関係した、０．０１％、０．０２％、０．０５％、０．１％、０．２％ＰＧに対応する０．１〜２ｍｇ／ｍＬの間のＰＧ濃度の５つの試料を試験することにより、本方法の線形性を証明した。各試料を三連で分析して、本方法の精度を評価した。表１５は、精度および線形性分析の実験データを要約している。較正セットの線形性曲線は図２７に示されている。
【表８−１２】
2018517046.tif 000024
表１５のデータは、本方法が０．０１〜０．２％のＰＧ含有量範囲において線形であることを示した。
【０３７６】
７．４．２．分析ＨＰＬＣ
残留するＢＣＤ（非置換のベータ−シクロデキストリン）含有量、置換度１のＨＰＢＣＤ画分、およびＢＣＤ以外のシクロデキストリン（ＣＤ）関連の不純物の合計を、欧州薬局方７．８（ヒドロキシプロピルベータデクス、モノグラフ番号：１８０４、２００９年１月１日改訂）のＨＰＬＣ法を用いて、およびセクション５．３．１に記載されている通り決定した。物質の分布フィンガープリントも同じ方法を用いて記録した。
【０３７７】
７．４．３．ＮＭＲ
平均置換度（ＤＳａ）は、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルから、ヒドロキシプロピル基のメチル基の３つのプロトンからのシグナルと、無水グルコース単位のＣ１炭素（アノマープロトン）に結合しているプロトンからのシグナルとの比から計算した。
【０３７８】
約１．２ｐｐｍ（Ａ）におけるメチル基からの二重線および＋５ｐｐｍと＋５．４ｐｐｍ（Ｂ）との間のアノマープロトンのシグナルのピーク面積を、１Ｈ  ＮＭＲから測定した。例示的スペクトルが図２８に示されている。参考として、アノマープロトンのピーク面積を７．０に設定した。これは、７つのプロトンがベータ−シクロデキストリン誘導体においてこのピークを提供するからである。基準ピークを割り当てた後、式：ＤＳａ＝Ａ／３を使用して平均置換度を計算した。
【０３７９】
７．４．４．コレステロール可溶化アッセイ
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでコレステロール可溶化アッセイを以下の通り実施した。蒸留水中のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物試験溶液を室温で撹拌し、この時点で、ある量のコレステロールが溶解されていないままであるように、過剰量の非エステル化コレステロールを加える。２４時間後、固体を濾過して取り除き、溶液中に存在するコレステロールをＨＰＬＣ法で測定する。
【０３８０】
ＨＰＬＣ条件：分析カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  １２０、Ｃ８、５μｍ、１００ｍｍ×４．０ｍｍ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ  Ｎａｇｅｌ）；カラム温度：４０℃；移動相：アセトニトリル：水＝７８：２２；流量：１．５ｍＬ／分；注入体積：２０μＬ；検出器：ＵＶ  ２１０ｎｍ；停止時間：５分。
【０３８１】
１０ｍｇのコレステロールを秤量し、１０ｍＬのアセトニトリル／イソプロパノール（７５：２５）に移すことによって、コレステロールのストック溶液を調製する。ストック溶液をＨＰＬＣ移動相で１０倍に希釈することによって（０．１ｍｇ／ｍＬの濃度を得るため）、コレステロールの基準溶液を調製する。
【０３８２】
溶解度実験に対する試料を、濾過後、アセトニトリルで２倍に希釈し、必要な場合、追加のＨＰＬＣ移動相をさらなる希釈のために使用する。
【０３８３】
溶解されたコレステロールの濃度を以下の方程式で決定する：
コレステロール濃度（ｍｇ／ｍＬ）＝（面積Ｓ／面積Ｒ）×濃度Ｒ
面積Ｓ＝試料溶液のクロマトグラムからのコレステロールのピーク面積
面積Ｒ＝基準溶液のクロマトグラムからのコレステロールのピーク面積
濃度Ｒ＝較正標準溶液（ｍｇ／ｍＬ）中のＳＢＥＣＤ−ＷＳの濃度。
【０３８４】
７．５．（実施例５：エレクトロスプレーＭＳ分析）
上記実施例２において考察されたように、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢは、０．５８〜０．６８（ＤＳａ４．０６〜４．７６）の平均モル置換を有し、２つの代表的なバッチは、０．６２（ＤＳａ４．３４）の平均モル置換を有する。異なる製造業者から入手可能なヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）は約０．９１（ＤＳａ６．３７）の報告されたより高い平均モル置換を有する。
【０３８５】
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢおよびＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）（ＣＴＤ  Ｈｏｌｄｉｎｇｓ，Ｉｎｃ．）（「Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）」）の市販の試料に対して、２つの異なる実験室がエレクトロスプレー質量分析法分析を実施した。
【０３８６】
第１の実験室で使用した方法は以下の通りであった。約５０μｇのヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（「ＨＰＢＣＤ」）試料を、水中で、８０％メタノール中の１ｍＬの１％ギ酸に溶解した。このＨＰＢＣＤ溶液をＡＰＩ−４０００質量分析器（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に注入した。ポジティブイオンエレクトロスプレーモードをｍ／ｚ１１００から２０００までのＭＳスキャニングに適用した。ＭＳスペクトル（１０〜１５の平均スキャン）を記録した。β−シクロデキストリンのプロピレンオキシド付加産物の各シグナルの高さを測定し、ＨＰＢＣＤのプロピレンオキシド付加物集団を個々のシグナルの高さの合計から計算した。Ａｎａｌｙｓｔ  １．５１ソフトウエア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）をＭＳ動作に使用した。図２９に示されている通り、第１の実験室からのエレクトロスプレーＭＳデータは、平均モル置換の差異が、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（図２９Ａ）およびＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）（図２９Ｂ）におけるヒドロキシプロピル置換の著しく異なる度合および分布により引き起こされることを実証している。スペクトルに数を加えて、各ピークのヒドロキシプロピル部分の数を特定している。
【０３８７】
第２の実験室で使用した方法は以下の通りであった。試料を水中１ｍｇ／ｍＬで調製し、エレクトロスプレー用に１：１水：アセトニトリル中約５μＭに希釈した。６００ｎＬ／分の直接注入速度（１５０℃でのシース気体および１５００ＶのＶｃａｐ電位で５Ｌ／分の流量）で、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｎａｎｏｓｐｒａｙ供給源を使用してイオンを形成した。ＥＳＩ供給源とイオン移動度ドリフトチューブとの境界面の電位を最適なシグナル強度に対して調節した。スペクトルは、ドリフトチューブを通して単一の電位において３分間蓄積され、エレクトロスプレープルーム中の複数のクラスのイオンの間のイオン移動度の分離を明確に示している。使用した分析器は、線形の、低電界イオン移動度質量分析器であるＡｇｉｌｅｎｔ  ６５６０であり、イオンファンネル技術を利用したＭＳサンプリング開口部にＩＭドリフトチューブを収容したＡｇｉｌｅｎｔ  Ｑ−ＴＯＦの実質的改造バージョンと考えることができる。図３０に示されている第２の実験室からのエレクトロスプレーＭＳデータは、置換フィンガープリントにおける差異を裏付けている（図３０Ａ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）と３０Ｂ（Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標））を比較）。データはまた、エレクトロスプレーＭＳが、異なる実験室が慣例的に使用することによって、再現性よくヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物のフィンガープリントを作成することができる十分に堅固な分析用ツールであることを裏付けている。
【０３８８】
図３１は、２つの異なる実験室が実施した、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの３つの異なるロットからのエレクトロスプレーＭＳデータを比較しており（図３１Ａおよび３１Ｂは、第２の実験室であり、図３１Ｃは第１の実験室）、置換フィンガープリントはロット間でほぼ同一であることを実証している。上記実施例２で考察されたように、置換フィンガープリントにおけるロット間の低い変動性は、平均モル置換がＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの２つの例示的なロット間で同一であるという観察と一致する。図３２は、図３１Ａおよび３１Ｂに示されているＫｌｅｐｔｏｓｅデータを生成するために使用したものと同じ条件を使用した、２つの異なる実験室によるＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）の２つの異なるロット（図３２Ａは第１の実験室であり、図３２Ｂは第２の実験室である）からのエレクトロスプレーＭＳスペクトルを提示しており、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）置換フィンガープリントにおける有意なロット間の変動性が存在することを実証している。
【０３８９】
図３３は、１０９０と１２３０ｍ／ｚとの間のピークを示すように、図２９〜３２と比較してＹ軸が拡大されている、第２の実験室からのエレクトロスプレーＭＳスペクトルを示している。図３３Ａは、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）から得たスペクトルである。図３３ＢはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢから得たスペクトルである。スペクトルは、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）（プロピレングリコールピークは図３３Ａに標識されている）においてプロピレングリコールの有意なレベルが存在し、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢには存在しないことを示す。Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢは、少量ではあるが、検出可能な量の非置換のシクロデキストリンを有し、これは図３３Ｂに標識されたピークにより示されている。
【０３９０】
図３４は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢとＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）試料との間のさらなる差異を示している：１）ＤＳは２つの試料の間で有意に異なる。Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）は、アキシャルのヒドロキシルとエカトリアルのヒドロキシルとの両方を含まなければならない縮合反応を示す；２）両方の試料の主要なイオンは固体中に存在するアンモニアからのＮＨ４＋付加イオン（ａｄｄｕｃｔｉｏｎ）である。ＭＨ＋イオンはまた各ＤＳに対しても存在する；３）主要なイオンのそれぞれに対する同位体クラスターは、アンモニウム付加物の二重に荷電したホモ二量体を示す。Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）の場合、プロトン化されたイオンの二重に荷電したダイマーもまた見られる；４）両方の材料は、プロトンとアンモニウムの両方の付加イオンからの二重に荷電したホモ二量体を示す；５）ＤＳ６〜ＤＳ７の場合のｍ／ｚ１５３０において認められた二重に荷電したヘテロ−ダイマーは両材料において形成されているが、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢよりもＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）においてはるかにより集中している；６）これらの差異のすべては８０％ＡＣＮ中に２．５μＭの濃度で維持されている。これは、ダイマーが強い分子間の結合を有することを示している。
【０３９１】
図３５は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢとＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）の試料間での追加の差異は、ホモとヘテロの両方の起源の三重に荷電したダイマーの形態であることを示している。これらは、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）におけるより大きな強度を示し、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢには実質的には不在である。
【０３９２】
要約すれば、エレクトロスプレーＭＳ分析は、実施例１に記載されている第Ｉ相治験に使用されたヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの置換フィンガープリントに、市販のＴｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）Ｃｙｃｌｏ（商標）である異なるヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物の置換フィンガープリントと比較して有意な差異があることを実証している。Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢは、置換フィンガープリントにおいてロット間の低い変動性、および低レベルの不純物、とりわけプロピレングリコールを有する。対照的に、Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）は、その置換フィンガープリントにおいてロット間の高い変動性、および有意により高いレベルの、推定される聴器毒素であるプロピレングリコールを示す。Ｔｒａｐｐｓｏｌ（登録商標）はまたホモとヘテロの両起源の三重に荷電したシクロデキストリンダイマーを示し、これらはＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢにおいて不在である。
【０３９３】
７．６．（実施例６：ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物の精製）
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ中のプロピレングリコール（ＰＧ）および非置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝０）不純物をさらに減少させるこれらの能力について、３つの精製方法（複合体形成、沈殿、および吸着）を調査した。
【０３９４】
７．６．１．有機化合物を用いた複合体形成／結合
実験５．６．１Ａ：１．０ｇのＨＰＢＣＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＢＰ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ））を水（１０ｍＬ）に溶解した。ｐ−キシレン（試行＃５．６．１．１）またはトルエン（試行＃５．６．１．２）（１．０ｍＬ）を溶液に加え、混合物を室温で２４時間および５〜７℃で１時間撹拌した。０．４５μｍ酢酸セルロース膜フィルターを介して乳白色溶液を濾過し、濾液を４０℃で乾燥まで蒸発させた。
【０３９５】
試行＃５．６．１．１：０．７ｇ；収率：７０％。
【０３９６】
試行＃５．６．１．２：０．８ｇ；収率：８０％。
【０３９７】
実験５．６．１Ｂ：２．０ｇＨＰＢＣＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＢＰ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ））を水（４ｍＬ）に溶解した。Ｄ−リモネン（試行＃５．６．１．３、０．０４ｍＬ、約１０当量）またはＬ−メントール（試行＃５．６．１．４、０．０４ｇ、約１０当量）またはベンジルアルコール（試行＃５．６．１．５、０．０３ｍＬ、約１０当量）またはコレステロール（試行＃５．６．１．６、０．１ｇ、約１０当量）を溶液に加えて、混合物を室温で７２時間撹拌した。溶液を５℃で４時間保持した。
【０３９８】
試行＃５．６．１．４および試行＃５．６．１．５は、透明な溶液のままであり、沈殿物は形成されなかった。
【０３９９】
試行＃５．６．１．３および試行＃５．６．１．６は沈殿物を形成した。試行＃５．６．１．３および試行＃５．６．１．６からの溶液を、０．４５μｍ酢酸セルロース膜フィルターを介してそれぞれ濾過し、濾液を乾燥するまで、４０℃で蒸発させた。
【０４００】
試行＃５．６．１．３：２．１ｇ；収率：１０５％。
【０４０１】
試行＃５．６．１．６：１．４ｇ；収率：７０％。
【０４０２】
選択的複合体形成または小分子との結合から誘導された試料に対する結果は、表９に要約されている。
【表９】
2018517046.tif 000025
【０４０３】
試行＃５．６．１．１、＃５．６．１．２、および＃５．６．１．３は、市販のＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰと比較して、非置換のベータ−シクロデキストリン含有量の低減を示した。加えて、試行＃５．６．１．３の中でＤ−リモネンは、一置換のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（「ＨＰＢＣＤ  ＤＳ＝１」）、および他のシクロデキストリン関連不純物のレベルの低減を示した（図１９を参照されたい）。図１９は、保持時間約５分で不純物である非置換のベータ−シクロデキストリン（ＢＣＤ）、保持時間約６分で一置換のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（ＤＳ−１）、および保持時間約７．４分でＤＳ＝２を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（ＤＳ−２）を示している。
【０４０４】
７．６．２．沈殿
一般的方法：１．０ｇのＨＰＢＣＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＢＰ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ））を５ｍＬまたは２ｍＬの溶媒（Ｓ）に溶解し、５０ｍＬまたは２０ｍＬ沈殿剤（ＰＡ）中に沈殿させた。濾過した固体材料を３ｍＬのＰＡで３回すすいだ。例外は試行＃５．６．２．１１であった。１．０ｇのＨＰＢＣＤを水（２ｍＬ）に溶解し、クロロホルム（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、デカントし、乾燥するまで４０℃で蒸発させた。各試行に対する調製は表１０に要約されている。
【表１０】
2018517046.tif 000026
【０４０５】
溶媒沈殿実験の分析結果が表１１に要約されている。
【表１１】
2018517046.tif 000027
【０４０６】
表１１に示されている通り、沈殿は、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン試料中のプロピレングリコールのレベルを減少させた。メタノールを、沈殿剤としてのアセトン、アセトニトリル、またはクロロホルムと組み合わせてそれぞれ使用している試行＃５．６．２．１０、５．６．２．２、および５．６．２．３は、プロピレングリコールレベルをそれぞれ９２％、８１％、および２２％減少させることができた。水を、沈殿剤としてのアセトンまたはアセトニトリルとそれぞれと組み合わせて使用している試行＃５．６．２．７．２および５．６．２．８．２は、プロピレングリコールレベルを＞９５％減少させた（試行＃５．６．２．７．２と、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）とを比較している図２０を参照されたい）。比較において、水およびクロロホルムを使用している試行＃５．６．２．１１は、市販のＫｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＰＢ（登録商標）と比較して、プロピレングリコールレベルを有意に変化させなかった。
【０４０７】
７．６．３．吸着
７．６．３．１．アルミナでの浄化
２．０ｇのＨＰＢＣＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＢＰ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ））をメタノール（８ｍＬ、試行＃５．６．３．１．１）またはエタノール（８ｍＬ、試行＃５．６．３．１．２）に溶解し、アルミナ（２．０ｇ、酸化アルミニウム９０標準化済み、Ｍｅｒｃｋ）と共に室温で３０分間撹拌した。アルミナを濾過して除き、メタノールまたはエタノール（３×２ｍＬ）、および水（３×２ｍＬ）で洗浄した。濾液（ＳＺ）および第１のすすぎ溶媒（Ｍ１［メタノール］またはＥ１［エタノール］）を、乾燥するまで４０℃で蒸発させた。
試行＃５．６．３．１．１：試料５．６．３．１．１−ＳＺ：１．６ｇ；収率：８０％。
試行＃５．６．３．１．１：試料５．６．３．１．１−Ｍ１：０．２ｇ；収率：１０％。
試行＃５．６．３．１．２：試料５．６．３．１．２−ＳＺ：１．５ｇ；収率：７５％。
試行＃５．６．３．１．２：試料５．６．３．１．２−Ｅ１：０．２ｇ；収率：１０％。
【０４０８】
７．６．３．２．アルミナ上でのクロマトグラフィー
試行＃５．６．３．２．１：２．０ｇのＨＰＢＣＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＢＰ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ））をメタノール（２ｍＬ）に溶解し、アルミナ（１０ｇ、酸化アルミニウム９０標準化済み、Ｍｅｒｃｋ）を介して、メタノール、流量：３ｍＬ／分、１分／画分、３０画分と共にクロマトグラフィーにかけた。カラムを水で洗浄した、流量：１０ｍＬ／分、２０分（Ｗ）。以下の画分を合わせ、乾燥するまで４０℃で蒸発させた：
試料５．６．３．２．１Ａ：第２画分：０．５ｇ、収率：２５％。
試料５．６．３．２．１Ｂ：第３〜８画分：１．１ｇ、収率：５５％。
試料５．６．３．２．１Ｃ：第９〜１４画分：０．２ｇ、収率：１０％。
試料５．６．３．２．１Ｄ：第１５〜Ｗ画分：０．２ｇ、収率：１０％。
【０４０９】
試行＃５．６．３．２．２：５．０ｇのＨＰＢＣＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ  ＨＢＰ（登録商標）（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ））をメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、アルミナ（２００ｇ、酸化アルミニウム９０標準化済み、Ｍｅｒｃｋ）を介して、以下の溶媒勾配を用いてクロマトグラフィーにかけた：１００％メタノール、流量：５ｍＬ／分、３分／画分、第１〜３０画分；８０％メタノール、２０％水、５ｍＬ／分、３分／画分、第３１〜４３画分；５０％メタノール−水、５ｍＬ／分、３分／画分、第４４〜６０画分；１００％水、５ｍＬ／分、３分／画分、第６１〜７０画分；洗浄（Ｗ）：１００％水、１０ｍＬ／分、３０分。
【０４１０】
以下の画分を合わせ、乾燥するまで４０℃で蒸発させた：
試料５．６．３．２．２Ａ：第０〜５画分：０．１ｇ、収率：２％。
試料５．６．３．２．２Ｂ：第６〜１０画分：０．６ｇ、収率：１２％。
試料５．６．３．２．２Ｃ：第１１〜１６画分：０．５ｇ、収率：１０％。
試料５．６．３．２．２Ｄ：第１７〜４５画分：１．１ｇ、収率：２２％。
試料５．６．３．２．２Ｅ：第４６〜５１画分：０．５ｇ、収率：１０％。
試料５．６．３．２．２Ｆ：第５２〜５６画分：０．９ｇ、収率：１８％。
試料５．６．３．２．２Ｇ：第５７〜６６画分：０．５ｇ、収率：１０％。
試料５．６．３．２．２Ｈ：第６７〜Ｗ画分：１．３ｇ、収率：２６％。
【０４１１】
７．６．４．アニオン交換樹脂
試行＃５．６．３．３：１．０ｇのＨＰＢＣＤを水（１０ｍＬ）に溶解し、０．１Ｎ  ＮａＯＨを用いて、１０〜１２（ユニバーサルｐＨ紙、Ｍｅｒｃｋ  ｐＨ１〜１４により測定）の間にｐＨを設定した。溶液を５．０ｇのアニオン交換樹脂（Ｐｕｒｏｌｉｔｅ、製品コード：４７１１１）で１４時間撹拌した。樹脂を濾過して除き、濾液をカチオン交換樹脂（Ｐｕｒｏｌｉｔｅ、製品コード：１５１３１）で中和し、木炭で処理した。固体試料を乾燥するまで４０℃で蒸発させることによって単離し、試料５．６．３．３、収率：０．９ｇ、９０％を得た。
【０４１２】
吸着からの試料の特徴付け
【表１２】
2018517046.tif 000028
【表１３】
2018517046.tif 000029
【０４１３】
表１２および１３のデータのグラフによる表示が図２１〜２４に示されている。画分ＡからＨは試料５．６．３．２．２Ａから５．６．３．２．２Ｈにそれぞれ対応する。アニオン交換樹脂、これに続く木炭での処理は、不純物の一部を減少させる役目を果たしたが（試行＃５．６．３．３、図２１）、酸化アルミニウム吸着はＣＤ関連の不純物レベル（試行＃５．６．３．１、図２２）を減少させるのに有効であることが判明し、これはクロマトグラフィーに適用した場合にはさらに有効であった（図２３）。図２１〜２３は、保持時間約５分で不純物である非置換のベータ−シクロデキストリン（ＢＣＤ）を示し、ならびに保持時間約６分で一置換のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（ＤＳ−１）および保持時間約７．４分でＤＳ＝２を有するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（ＤＳ−２）を示している。試行＃５．６．３．２．２で採取した８つの画分（Ａ〜Ｈ）が図２４に示されている。画分Ｂ〜Ｄは標的不純物、プロピレングリコールおよびＢＣＤを極めて低濃度で含有した。画分Ａ〜Ｇにおいて、ＢＣＤは定量化限界より下に減少した。同時に、画分Ａ〜Ｆにおいて、ＤＳ−１  ＨＰＢＣＤ含有量は０．１５％未満であった（９６％またはそれより大きな減少）；およびＣＤ関連の他の不純物は画分Ｂ〜Ｄにおいて有意に低減した。これらの知見に基づき、Ａｌ２Ｏ３ベースのクロマトグラフィーはＨＰＢＣＤからＣＤ関連不純物を効率的に除去するのに適切とみなされた。
【０４１４】
７．７．（実施例７：より大きなスケールでの精製）
第ＩＩ相治験に備えるため、３つの精製方法（沈殿、アルミナ上での吸着、および沈殿とアルミナ吸収の組合せ）を、より大きなスケールで、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ中のプロピレングリコール（ＰＧ）および非置換のベータ−シクロデキストリン（ＤＳ＝０）不純物を減少させるこれらの能力について調査した。精製をＨＰＢＣＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＢＰ（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ））の１０ｇバッチに対して実施した。沈殿もまた３０ｇバッチに対して実施した。１０ｇバッチから得た結果が表１６、１７および１８に示されている。３０ｇバッチから得た結果が表１９に示されている。
【０４１５】
７．７．１．溶媒沈殿
１０ｇのＨＰＢＣＤの調製の間、アセトンを用いた水からの沈殿を行った。ＨＰＢＣＤを半当量の水（１０ｍｌの水中２０ｇのＨＰＢＣＤ）に溶解し、５倍の体積（１００ｍｌ）のアセトンに注ぎ入れ、デカントした後、２倍の体積（４０ｍｌ）のアセトンで３回洗浄した。超音波および撹拌を使用して、３０〜６０分間かけて溶解させた。濾過前に、アセトンで３回洗浄することによって、沈殿物の粘着性の性質を減少させた。収率は８７〜９３％であった。
【０４１６】
３０ｇのスケールでは、ＨＰＢＣＤの溶解のため、水の代わりにメタノールを使用した。４３ｇのＨＰＢＣＤを４３ｍｌのメタノールに溶解し、次いで４３０ｍｌのアセトンに注ぎ入れた。アセトン（４３ｍｌ）で３回洗浄後、沈殿物は容易に濾過された。収率は９９％であった。ＧＣの結果に基づき、精製中にメタノールを使用することは、水を使用するよりも速く、より良い収率をもたらした。
【０４１７】
７．７．２．アルミナ上でのクロマトグラフィー
ＨＰＢＣＤをメタノールに溶解して、約１ｍｇ／ｍｌの溶液を得た。例えば、１０．０ｇのＨＰＢＣＤをメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、メタノールを用いて、流量５ｍＬ／分でアルミナ（２２０ｇのアルミナ充填の１８０ｃｍ３カラム）を介したクロマトグラフィーにかけ、画分を、１０分間ごとに全部で８〜２０画分採取した。溶離液は１００％メタノールであった。１０ｇの精製されたＨＰＢＣＤを製造するために、純粋な製品に対して収率７０〜７５％で、２０〜２２ｇの出発材料を使用した。
【０４１８】
７．７．３．アルミナ上でのクロマトグラフィーと溶媒沈殿の組合せ
組合せプロトコールに対して、上に記載されているような溶媒沈殿に続いて１０．０ｇのＨＰＢＣＤバッチに対して、上に記載されているアルミナ上でのクロマトグラフィーを行った。
【表１６】
2018517046.tif 000030
【表１７】
2018517046.tif 000031
【表１８】
2018517046.tif 000032
【表１９】
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【０４１９】
表２０は３つの精製方法からの結果を比較する。
【表２０】
2018517046.tif 000034
【０４２０】
７．７．４．置換フィンガープリントに対する精製の効果
エレクトロスプレーＭＳ分析を本質的には実施例５（第２の実験室）に記載されている通り、バッチＣＹＬ−４０６３のアリコート、アルミナ上での吸収クロマトグラフィーと溶媒沈殿（水−アセトン）の組合せにより精製したバッチ、およびＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの親ロットのアリコートに対して実施した。スペクトルは図３６で比較されており、図３６Ａは出発材料からのスペクトルを示し、図３６Ｂは精製されたバッチからのスペクトルを示している。見てわかる通り、精製により非置換のベータ−シクロデキストリン分子（「ＤＳ−０」）、単一のヒドロキシプロピル置換を有するほぼすべてのシクロデキストリン分子（「ＤＳ−１」）が排除され、２つのヒドロキシプロピル置換を有するシクロデキストリン分子（「ＤＳ−２」）の濃度が減少している。スペクトルはまた、相対的割合、したがってより高度に置換されたヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン種、ＤＳ３、ＤＳ４、ＤＳ５、ＤＳ６およびＤＳ７の分布におけるわずかな変化を示唆している。
【０４２１】
１４バッチのＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（「ＥＯｘｘｘ」）および精製されたバッチＣＹＬ−４０６３のピーク分布を定量化した。総シグナルに寄与している各ピークのシグナルおよび各ピークのパーセンテージが表２１に要約されている。
【表２１】
2018517046.tif 000035
【０４２２】
７．８．（実施例８：遺伝子発現プロファイルに対する精製の効果）
実施例７で考察されたように、大きなスケールでの精製努力により、推定される聴器毒素であるプロピレングリコール；沈殿物を形成することが公知である、ヒドロキシプロピル置換を有さないベータ−シクロデキストリン分子（ＤＳ−０）；および高度に炎症性である細菌性内毒素を減少させることに成功した。しかし、アルミナを用いた吸収クロマトグラフィーは、単独で使用するか、または溶媒沈殿と組み合わせて使用するかにかかわらず、組成プロファイル、またはフィンガープリントも有意に変化させ、ＤＳ−１ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの量を実質的に減少させ、エレクトロスプレーＭＳにより分析されたバッチ（アルミナを用いた吸収クロマトグラフィーと溶媒沈殿の組合せにより精製）において、ＤＳ−２ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンの量を減少させ、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ中に存在するより高度に置換されている種（ＤＳ３、ＤＳ４、ＤＳ５、ＤＳ６、ＤＳ７）の存在および比に対する明らかな効果はほとんどなかったことが観察された。
【０４２３】
組成のフィンガープリントの実質的な変化の潜在的薬理効果を評価するために、遺伝子発現プロファイリングを実施した。
【０４２４】
７．８．１．材料と方法
７．８．１．１．細胞
ＧＭ１８４５３細胞（ＮＰＣ１変異についてホモ接合性である）および野生型ＧＭ０５６５９細胞を、Ｃｏｒｉｅｌｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから得た。細胞株を１０％ＦＢＳ、ＤＭＥＭ、および１００単位／ｍｌのペニシリンおよびストレプトマイシン中で培養した。５００，０００個の細胞／ウェルをシクロデキストリン処理前に１０ｕｇ／ｍｌのマイトマイシンで同期化した。ヒドロキシプロピルシクロデキストリン（ＨＰＣＤ）を、研究で使用した濃度範囲（０．１ｍＭ〜１０ｍＭ）でＰＢＳに溶解した。
【０４２５】
７．８．１．２．ＲＮＡ調製および全トランスクリプトーム分析
ＮＰＣ１（ＧＭ１８４５３）および野生型細胞（ＧＭ０５６５９）を溶解し、Ｔｒｉｚｏｌ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してＲＮＡを抽出した。次いで、細胞をＤＮＡｓｅＩ（Ｑｉａｇｅｎ）処理に付した。試料の純度および濃度を、Ｑｕｂｉｔ分光光度計と、Ｎａｎｏ  Ｄｒｏｐ  ＮＤ−１０００の両方でチェックし、Ａｇｉｌｅｎｔ  ２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを使用して、ＲＮＡ完全性（ＲＩＮ）を評価した。製造業者の指示に従いＲｉｂｏＭｉｎｕｓ（商標）Ｅｕｋａｒｙｏｔｅキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、抽出したｍＲＮＡを富化した。ＲＮＡの最終量は１つの反応当たり１０μｇであった。Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  ＳＭＡＲＴｅｒ  Ｓｔｒａｎｄｅｄ  ＲＮＡ−Ｓｅｑキットを使用して生成したｃＤＮＡライブラリーは、１５０〜２５０ｂｐの範囲でサイズ選択され、Ｉｌｌｕｍｉｎａにより提供されたプロトコールに従い配列が決められた。試料は、７５ｂｐ  フォワードプライマーおよび３５  リバースプライマーを用いて、ＨｉＳｅｑ２０００プラットフォームを使用して配列決定した。
【０４２６】
７．８．１．３．ＲＮＡ配列データ分析
ｃＤＮＡライブラリーの配列決定は、１つの試料当たり２０９４１１３４〜４２３７５１２８の対となったリードをもたらした。より高いマッピング品質のため、塩基リードを５０の塩基対にトリミングした。色が配置された（ｃｏｌｏｒ−ｓｐａｃｅｄ）すべてのリードを、Ｂｏｗｔｉｅバージョン１．０．０を使用したＴｏｐＨａｔ  ｖ２．１．０を使用してヒト基準ゲノム（Ｅｎｓｅｍｂｌ、リリース７３）に対して整列させた。遺伝子発現レベルを評価するためのＲＰＫＭに対する値（１００万のマッピングされたリード当たりのキロベースの転写物当たりのリード）を、Ｃｕｆｆｌｉｎｋｓ  ｖ２．０．２で計算し、未加工のカウントを、Ｅｎｓｅｍｂｌ（リリース７３）からダウンロードしたタンパク質コーディング遺伝子の遺伝子アノテーションを使用してＩｌｌｕｍｉｎａ  ＢａｓｅＳｐａｃｅ  Ｃｏｒｅ  Ａｐｐｓを用いて検索した。差次的発現／倍数変化を、ｅｄｇｅＲを用いて未加工のカウントに対して推定した。すべてのプログラムをこれらのデフォルトパラメーターと共に使用し、新規の接合点を発見しないようにＴｏｐＨａｔを設定した。
【０４２７】
ＴＩＢＣＯ  Ｓｐｏｔｆｉｒｅ（バージョン６．５）を使用して各遺伝子に対する倍数変化を視覚化した。ツリーマップと棒グラフの組合せを使用して、差次的遺伝子発現変化を示した。１０ｍＭ  ＨＰＣＤ処理に対する全トランスクリプトーム変化を観察するため、棒グラフ図が最適であることが判明した。
【０４２８】
７．８．１．４．ＲＮＡ配列アッセイ検証分析
未加工のＲＮＡ配列の塩基リードを、選択されたセットのコレステロールホメオスタシス遺伝子の指向性コンピューター分析に付して、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ処理に対する応答性を確立した。選択された遺伝子を以下の表２２に列挙した。
【表２２】
2018517046.tif 000036
【０４２９】
７．８．１．５．代謝経路分析
すべてのシクロデキストリン細胞処理を分析して、１８４５３ＮＰＣ１細胞株内で影響を受けた主要代謝経路を決定した。Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓソフトウエアを使用して、遺伝子ごとに遺伝子ＩＤ、倍数変化およびｐ値を使用して、Ｖｏｌｃａｎｏ散布図を作成した。これらのプロットは、様々な処理に対して上方調節されたおよび下方調節された遺伝子を示す。次いで、遺伝子の群を、特定の代謝経路（−ｌｏｇ１０（ｐＡＣＣＣ））  対  これらの差次的発現レベル（−Ｄｌｏｇ１０（ｐＯＲＡ）を摂動させるこれらの能力について確率加重する。経路を摂動させる可能性が高い遺伝子メンバーの確率マッピングは、他の経路を摂動させることへの他の遺伝子メンバーの関与を必ずしも排除しない。
【０４３０】
これらのデータは、Ｋｙｏｔｏ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅｓ（ＫＥＧＧ）データベース（リリース７３．０＋／０３−１６，３月１５日）（Ｋａｎｅｈｉｓａら、２０００年；Ｋａｎｅｈｉｓａら、２００２年）から得た経路、Ｇｅｎｅ  Ｏｎｔｏｌｏｇｙ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍデータベース（２０１４年９月１９日）（Ａｓｈｂｕｒｎｅｒら、２０００年；Ｇｅｎｅ  Ｏｎｔｏｌｏｇｙ  Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ、２００１年）からの遺伝子オントロジー、ｍｉＲＢａｓｅ（リリース２１）およびＴＡＲＧＥＴＳＣＡＮ（ＴａｒｇｅｔＳｃａｎリリース６．２（２０１５年３月更新））データベース（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ−Ｊｏｎｅｓら、２００８年；ＫｏｚｏｍａｒａおよびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ−Ｊｏｎｅｓ、２０１４年；Ｆｒｉｅｄｍａｎら、２００９年；Ｇｒｉｍｓｏｎら、２００７年）からのｍｉＲＮＡ、ならびにＫＥＧＧデータベース（リリース７３．０＋／０３−１６、３月１５日）（Ｋａｎｅｈｉｓａら、２０００年；Ｋａｎｅｈｉｓａら、２００２年）からの疾患との関連で分析した。
【０４３１】
Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｑｉａｇｅｎ）は、（Ｄｒａｇｈｉｃｉら、２００７年；Ｔａｒｃａら、２００９年、Ｋｈａｔｒｉら、２００７年）により提案されたインパクト解析を使用して、経路についてスコアを付ける。インパクト解析は２種類の証拠を使用する：ｉ）所与の経路において差次的に発現した（ＤＥ）遺伝子の過剰表示、およびｉｉ）経路トポロジーにわたり測定された発現変化を伝えることによって計算されるその経路の摂動。これらの態様は、２つの独立した確率値、ｐＯＲＡおよびｐＡｃｃにより記録され、次いで、独特の包括的ｐ値においてこれらは組み合わせられる。遺伝子およびそれらの相互作用で構成される経路トポロジーはＫＥＧＧデータベースから得られる（Ｋａｎｅｈｉｓａら、２０００年；Ｋａｎｅｈｉｓａら、２０１０年；Ｋａｎｅｈｉｓａら、２０１２年；Ｋａｎｅｈｉｓａら、２０１４年）。
【０４３２】
第１の確率、ｐＯＲＡは、単なる偶然で観察されたものより大きなまたはこれと等しい、所与の経路上のいくつかのＤＥ遺伝子を得る確率を表す（Ｄｒａｇｈｉｃｉら、２００３年；Ｄｒａｇｈｉｃｉ  ２０１１年）。実験で測定されたＮ個の遺伝子が存在し、これらのＭ個が所与の経路上にあると考える。ＤＥ遺伝子の先験的な選択に基づき、Ｍ個の遺伝子のうちのＫ個が差次的に発現したことが判明した。所与の経路上に正確にｘ個の差次的に発現された遺伝子を観察する確率を、超幾何学的分布に基づき計算する：超幾何学は離散型分布であるため、所与の経路上に単なる偶然でｘ個未満の遺伝子を観察する確率は、経路上に１個または２個または．．．またはｘ−１個の遺伝子を有する確率を合計することによって計算することができる：
【化３】
2018517046.tif 000037
【０４３３】
観察されたものより大きなまたはこれと等しい、所与の経路上のいくつかのＤＥ遺伝子を得る、過剰表示ｐ値を計算するために、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙツールは、ｐＯＲＡ＝ｐ（ｘ）＝１−ｐ（ｘ−１）を計算する：
【化４】
2018517046.tif 000038
【０４３４】
第２の確率、ｐＡｃｃは、各経路で測定された摂動の量に基づき計算される。摂動係数は、以下を使用して経路上の各遺伝子に対して計算される：
【化５】
2018517046.tif 000039
【０４３５】
示されている方程式において、項ΔＥ（ｇ）は、遺伝子ｇの符号付きの、正規化された測定された発現変化を表し、α（ｇ）は遺伝子の種類に基づく先験的な重みである。２番目の項はこのような各遺伝子Ｎ（ｕ）の下流遺伝子の数により正規化された、標的遺伝子ｇの直接的な上流にあるすべての遺伝子ｕの摂動係数の合計である。βの値は、遺伝子ｇとｕとの間の相互作用の強度を定量化する。βの符号は、相互作用の種類を表す：活性化様シグナルに対してプラス、および阻害様シグナルに対してマイナス。続いて、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ分析は、摂動係数ＰＦ（ｇ）と観察されたｌｏｇ倍数変化との間の差異として、各遺伝子レベルＡｃｃ（ｇ）における正味の摂動蓄積を計算する：
【化６】
2018517046.tif 000040
【０４３６】
経路上のすべての遺伝子に対して上記方程式（上記を参照されたい）を組み合わせることによって得られる、線形方程式の系を解くことによりすべての摂動の蓄積を同時に計算する。すべての遺伝子の摂動蓄積が計算されると、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙは、遺伝子のすべての絶対的蓄積の合計として、経路の総蓄積を計算する。単なる偶然でより大きな総蓄積（ｐＡｃｃ）を得る有意性を、ブートストラップを介して評価する。
【０４３７】
フィッシャー法を使用して、２種類の証拠、ｐＯＲＡおよびｐＡｃｃを組み合わせて、１つの最終的なｐ値にする。次いで、ＦＤＲおよびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉを使用して、このｐ値を多重比較に対して補正する。Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉは２つのうちで最も単純で、より保守的である（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ、１９３５年；Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ、１９３６年）。これは、比較の総数により加重される各比較に対してより厳格な閾値を課すことにより偽発見率を減少させる。ＦＤＲは、より多くの偽陽性を発見する範囲においてより強力である（ＢｅｎｊａｍｉｎｉおよびＨｏｃｈｂｅｒｇ、１９９５年；ＢｅｎｊａｍｉｎｉおよびＹｅｋｕｔｉｅｌｉ、２００１年）。これは、偽陽性の全体的なパーセンテージが選択された閾値より下であることを確実にする。
【０４３８】
７．８．２．結果
７．８．２．１．アッセイ検証
完全なトランスクリプトーム分析を実施する前に、ＧＭ１８４５３およびＧＭ０５６５９細胞を、ある範囲のＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの濃度（０．１ｍＭ〜１０ｍＭ）で処理し、選択されたコレステロールホメオスタシス−関連遺伝子に対する効果を評価した。
【０４３９】
結果は以下の表２３に一覧にされており、図３７においてグラフ化されている。結果は倍数変化として表現されている（ｌｏｇ（ＦＣ））。
【表２３−１】
2018517046.tif 000041
【表２３−２】
2018517046.tif 000042
【０４４０】
結果は、ホモ接合性のＮＰＣ１細胞に対するＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの用量依存性効果を実証し、試験した３つの濃度のうちで、１．０ｍＭ  Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢが有意なデータを提供するのに適切であることをさらに実証している。
【０４４１】
７．８．２．２．精製された組成物の分析
７．８．２．２．１．事前に選択したコレステロールホメオスタシス遺伝子の発現に対する効果
実施例７において考察されたように、アルミナへの吸着を含む精製プロトコールは、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物の置換フィンガープリントを有意に変化させることが判明した。これらの変化が組成物の薬理効果をどのように変えるか評価するために、（ｉ）様々に精製された組成物および（ｉｉ）ＧＭ１８４５３細胞中Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（これはＮＰＣ１変異についてホモ接合性である）のコレステロールホメオスタシス遺伝子の発現に対する効果を比較した。
【０４４２】
驚いたことに、いかなる差異も発見されなかった。
【０４４３】
図３８は、ＮＰＣ１変異についてホモ接合性である、コレステロールホメオスタシス遺伝子のサブセットのＧＭ１８４５３細胞における発現の倍数変化を示し、４つの異なる組成物に対して、処理により発現は統計学的に有意に異なった（ｐ＜０．００１）：ＳＴＤ（Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ「標準」）；ＡＣ（アルミナクロマトグラフィーにより精製されたＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）；ＳＰ（溶媒沈殿により精製されたＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）；およびＡＰ（アルミナクロマトグラフィーおよび溶媒沈殿により精製されたＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ）。精製プロトコールおよびそれぞれの組成物についての詳細は、実施例７を参照されたい。
【０４４４】
アルミナ精製された組成物の低いＤＳ種の除去にもかかわらず、精製された組成物のいずれもが、試験した濃度のいずれにおいても、親組成物、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（「ＳＴＤ」）と実際には異なることはなかった。したがって、組成物の関連する薬理学的活性、すなわち、コレステロールホメオスタシスに対するその効果は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ中に存在するより高度に置換されている種に宿っているようにみえる。なぜなら、非置換のベータ−シクロデキストリン分子（ＤＳ−０）、一置換のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（ＤＳ−１）の除去、および二置換のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン（ＤＳ−２）の実質的な減少は、ＮＰＣ１細胞内のコレステロールホメオスタシス遺伝子の発現を変化させる組成物の能力に対して認識できる効果を有していなかったからである。
【０４４５】
７．８．２．２．２．全ゲノム分析
上に記載されている分析において、ＮＰＣ１変異により引き起こされた主要な欠陥に対する関連性に対して事前に選択しておいた遺伝子の発現の変化を評価し、ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンでの処理によりその発現が統計学的に有意に異なる、事前に選択した遺伝子のそのサブセットのみの発現に対する効果を比較した。低いＤＳ種の除去が、関連する薬理学的活性に対して感知できるほどの効果はないという観察を確認し、組成物間の可能な差異をさらに探究するため、全ゲノム分析を実施して、統計ベースで、処理により最も影響を受けた生物学的経路を特定した。
【０４４６】
１．０ｍＭのＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢおよび１．０ｍＭの精製されたバッチＣＹＬ−４０６３で処理したＮＰＣ１細胞の全ゲノム経路の分析を実施した。実施例７に詳細に記載されているように、ＣＹＬ−４０６３は、アルミナ上での吸収クロマトグラフィーと溶媒沈殿の組合せによりＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢから調製した。実施例７の表２１に示されている通り、精製は、低いＤＳ種の優勢を有意に減少させ、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ中の１６．２％のＤＳ−０、ＤＳ−１、およびＤＳ−２の平均集団含有量と比較して、ＣＹＬ−４０６３中のシクロデキストリン種の３．２％のみが総合的に０、１、および２置換を有した。
【０４４７】
図３９に示されている通り、１．０ｍＭのＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢでの処理により統計学的に最も有意に影響を受けたとして特定された上位４つの経路のうち、３つはまた１．０ｍＭのＣＹＬ−４０６３での処理により最も統計学的に影響を受けた上位４つの経路の中にある：ｅｒｂＢシグナル伝達経路、ＭＡＰＫシグナル伝達経路、およびＧｎＲＨシグナル伝達経路。これらの結果は、ＣＹＬ−４０６３からの低いＤＳ種の除去にもかかわらず、ＧＭ１８４５３細胞に対するヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン混合物の全体的な活性においてほとんど摂動がないことを確認している。
【０４４８】
さらに、ステロイド生合成経路、すなわち、これらの細胞におけるＮＰＣ１変異により引き起こされた主要な欠陥により直接的に影響を受けた経路は、１．０ｍＭのＣＹＬ−４０６３での処理により２番目に最も有意に影響を受けた経路であるが、１．０ｍＭのＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢでの処理により、６番目に最も統計学的に有意な影響を受けた経路でしかないことも観察された。これらの結果は、コレステロールホメオスタシスに対する組成物の効果は、精製された組成物中により大きな濃度で存在する、より高度に置換されているシクロデキストリン種に宿るという仮説と一致する。
【０４４９】
７．８．２．３．異なる置換度を有する画分の活性
異なるヒドロキシプロピル置換度を有するシクロデキストリン種の差次的な寄与を直接評価するために、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢのバッチを、それぞれ低い、中間、および高いヒドロキシプロピル置換度を有する３つのプールに分画し、これらのプールした画分の、ＮＰＣ１細胞中の遺伝子発現に対する効果を試験した。
【０４５０】
７．８．２．３．１．方法
（ａ）分画
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢバッチＥ０２４５から画分を調製した。Ｅ０２４５出発材料中のベータ−シクロデキストリン種の分布は表２１（実施例７）に示されており、以下の表２４に関連する部分が抜粋されている。
【表２４】
2018517046.tif 000043
【０４５１】
Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（バッチＥ０２４５）の１５ｇの試料をＣＤ−スクリーニングカラム上で本質的には上記実施例５．３．１に記載されている通り分離し、画分を収集した。図４０は、分取ＣＤ−スクリーニングクロマトグラフィーの分離から得た様々な画分のクロマトグラムを示し、クロマトグラフィーで分離したヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン種の置換度を示す注釈が付いている。
【０４５２】
画分２を、低い置換度を有する画分、「Ｌ」（ＣＹＬ−４１０３）として選択した。中程度の置換度の種を有する画分、画分「Ｍ」（ＣＹＬ−４１０４）は画分４〜１５のプールである。高い置換度を有する画分、画分「Ｈ」（ＣＹＬ−４１０５）は、画分１６〜２４のプールである。図４１は、（Ａ）Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢバッチＥ０２４５のエレクトロスプレーＭＳスペクトルを示し、ヒドロキシプロピル置換度によるシグナルを特定する注釈が付いている；（Ｂ）「Ｌ」のプールした画分；（Ｃ）「Ｍ」のプールした画分；および（Ｄ）「Ｈ」のプールした画分。
【０４５３】
（ｂ）発現プロファイリング
ＮＰＣ細胞株ＧＭ１８４５３（ウェル当たり５００，０００細胞）を１．０ｍＭの「Ｌ」、「Ｍ」、および「Ｈ」画分で並行して処理した。ＲＮＡを各処理から単離し、これに続いて以前の方法に従いｃＤＮＡライブラリーを作成した。ｃＤＮＡライブラリーの配列決定は、試料１つ当たり２８８９１２８７から５０２４５７２１の対となったリードをもたらした。より高いマッピング品質のため、塩基リードを５０塩基対にトリミングした。Ｂｏｗｔｉｅバージョン１．０．０を使用したＴｏｐＨａｔ  ｖ２．１．０を使用して、色が配置されたすべてのリードをヒト基準ゲノム（Ｅｎｓｅｍｂｌ、リリース７３）に対して整列させた。Ｃｕｆｆｌｉｎｋｓ  ｖ２．０．２を用いて遺伝子発現レベルに対するＲＰＫＭ（１００万のマッピングされたリード当たりのキロベースの転写物当たりのリード）値を計算し、Ｅｎｓｅｍｂｌ（リリース７３）からダウンロードしたタンパク質コーディング遺伝子の遺伝子アノテーションを使用したＩｌｌｕｍｉｎａ  ＢａｓｅＳｐａｃｅ  Ｃｏｒｅ  Ａｐｐｓを用いて未加工のカウントを検索した。差次的発現／倍数変化を、ｅｄｇｅＲを用いて未加工のカウントで推定した。すべてのプログラムは、これらのデフォルトパラメーターと共に使用し、新規の接合点を発見しないよう、ＴｏｐＨａｔを設定した。ＴＩＢＣＯ  Ｓｐｏｔｆｉｒｅ（バージョン７．０）を使用して、各遺伝子に対する倍数変化を視覚化した。ツリーマップと棒グラフの組合せを使用して、差次的遺伝子発現の変化を示した。
【０４５４】
比較のため、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢおよび分画されていない精製されたバッチＣＹＬ−４０７７を使用して、同様の分析を実施した（実施例７を参照されたい）。
【０４５５】
７．８．２．３．２．結果
「Ｌ」、「Ｍ」、および「Ｈ」画分での処理により、統計ベースで最も影響を受けた１０の生物学的経路を特定するために全ゲノムトランスクリプトーム分析を実施した。
【０４５６】
図４２は、１．０ｍＭの「Ｌ」、「Ｍ」、および「Ｈ」画分を用いたＮＰＣ細胞の処理により最も影響を受けた１０の生物学的経路を示しており、統計的有意性の降順でランク付けした。本発明者らの早期観察と一致して、「Ｌ」画分はステロイド生合成経路において遺伝子の発現に統計学的に有意な変化を引き起こさなかった。著しく対照的に、ステロイド生合成経路は「Ｍ」画分でのＮＰＣ１細胞の処理により統計学的に最も有意に影響を受けた生物学的経路である。「Ｍ」画分は、３、４、５および６つのヒドロキシプロピル置換を有するベータ−シクロデキストリン種（ＤＳ３、ＤＳ４、ＤＳ５、およびＤＳ６）から主になる。主にＤＳ５、ＤＳ６、およびＤＳ７を含む「Ｈ」画分もまた、コレステロール生合成経路の遺伝子の発現に変化を引き起こし、コレステロール生合成経路は２番目に最も有意な経路のようにみえる。
【０４５７】
これらの結果は、コレステロールホメオスタシスを回復する能力が、より高いヒドロキシプロピル置換度を有するＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ中に存在するシクロデキストリン種に宿っているという直接的証拠を提供する。
【０４５８】
７．８．２．４．画分と、分画されていない組成物の比較
異なるヒドロキシプロピル置換度を有するシクロデキストリン種が、ＮＰＣ細胞における遺伝子発現に異なる影響を与えるという本発明者らの観察に対する推論は、全体としての組成物の全体的な薬理学的活性が、組成上のフィンガープリント、すなわち、組成物中に存在する、異なってヒドロキシプロピル化された種の相対的な割合に依存するはずであるというものである。
【０４５９】
１．０ｍＭの（ｉ）分画されていないＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ、（ｉｉ）アルミナ上での吸収クロマトグラフィーおよび選択的溶媒沈殿によりＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢから精製された、分画されていないＣＹＬ−４０７７、（ｉｉｉ）「Ｌ」画分、（ｉｖ）「Ｍ」画分、または（ｖ）「Ｈ」画分のいずれかを用いたＮＰＣ細胞の処理後の特定の遺伝子ごとの（すなわち、ＧｅｎｅＩＤ）ベースでの遺伝子発現変化を比較することにより、この仮説を確認した。
【０４６０】
発現がＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢにより１．０ｍＭで有意に影響を受けた遺伝子の６４％はまた、１．０ｍＭで精製されたバッチ（バッチＣＹＬ−４０７７）を用いた処理により有意に影響を受けることを観察した。
【０４６１】
この共有されたパーセンテージは、発現が、１．０ｍＭのＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢおよび１．０ｍＭの「Ｌ」、「Ｍ」、および「Ｈ」画分のうちのいずれか１つ（それぞれ３７％、４３％および４８％）での両方の処理により有意に影響を受けた遺伝子のパーセンテージより著しく高い。
【０４６２】
同様に、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢとＣＹＬ−４０７７の両方により影響を受けた、遺伝子における６４％の共有された同一性は、発現が、１．０ｍＭのＣＹＬ−４０７７ならびに１．０ｍＭの「Ｌ」、「Ｍ」、および「Ｈ」画分のうちのいずれか１つ（それぞれ４１％、３８％および４４％）での両方の処理により有意に影響を受けた遺伝子のパーセンテージより著しく高い。
【０４６３】
７．８．２．５．オートファジーに関与している遺伝子
ヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリンは、ＮＰＣ疾患において蓄積するプロテオリピド凝集物の自食性クリアランスを増強することが実証されている。（Ｓｏｎｇら、２０１４年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２８９巻（１４号）、１０２１１〜１０２２２頁）。したがって、１．０ｍＭおよび１０．０ｍＭのＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ、ＣＹＬ−４０７７、ならびに「Ｈ」、「Ｍ」および「Ｌ」画分のそれぞれを用いた処理のＧＭ１８４５３  ＮＰＣ細胞におけるオートファジー関連遺伝子の発現に対する効果を分析した。
【０４６４】
表２５は、処理によるその発現の変化が統計学的に有意である（ｐ＜０．０５）すべてのオートファジー遺伝子を示し、１．０ｍＭの濃度がオートファジー関連遺伝子に対してほとんど効果がなかったことを実証している。
【表２５】
2018517046.tif 000044
【０４６５】
表２６は、処理によるその発現の変化が、１０．０ｍＭの濃度において統計学的に有意であった（ｐ＜０．０５）すべてのオートファジー遺伝子を示している。
【表２６】
2018517046.tif 000045
【０４６６】
１０．０ｍＭを使用した結果は、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢおよびＣＹＬ−４０７７がオートファジーに関与している遺伝子の発現に対して同様の効果を有することを実証し、これらの効果はより高い置換度を有する種により寄与されることをさらに実証し、「Ｈ」画分および「Ｍ」画分と比較して、「Ｌ」画分はオートファジーに関与している遺伝子の発現に対して最小の効果を有する。
【０４６７】
７．８．３．考察
遺伝子発現プロファイル実験を使用して、非経口等級のヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン組成物、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢが、ＮＰＣ１変異についてホモ接合性である細胞においてコレステロールホメオスタシス遺伝子の発現レベルを修復し、オートファジー関連遺伝子の発現を増加させ得ることを実証した。これらのデータは、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢの髄腔内投与が、ＮＰＣ疾患を有する患者において症状を安定化させるまたはその進行を遅延させるのに有効であることを実証している第Ｉ相ヒト治験からのデータと一致する。臨床データとの相関関係は、遺伝子発現アッセイが潜在能力のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの尺度を提供し得ることを実証する。
【０４６８】
エレクトロスプレーＭＳは、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢが、再現可能な割合で異なる程度のヒドロキシプロピル化を有するベータ−シクロデキストリン分子を含有する複合混合物であることを実証している。
【０４６９】
プロセス関連およびＫｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢからの他の不純物を除去するために本発明者らが開発した精製プロセスは、低い置換度を有するベータ−シクロデキストリン種を偶発的に除去し、組成上のフィンガープリントを変える。遺伝子発現プロファイル実験は、組成上のフィンガープリントのこの変化にもかかわらず、ＮＰＣ変異についてホモ接合性である細胞内のコレステロール生合成経路において遺伝子の発現を正常化する組成物の能力には有意な変化がなかったことを実証した。
【０４７０】
これらのデータは、関連する薬理学的活性は、精製中に排除されたものよりも大きな置換度を有する種によって主に寄与されることを示唆した。
【０４７１】
複合混合物を、低い（「Ｌ」）、中間（「Ｍ」）、および高い（「Ｈ」）ヒドロキシプロピル置換度を有するベータ−シクロデキストリン種を有するプールに分画し、ＮＰＣ細胞における遺伝子発現に対する効果を評価することによってこの推測を確認した。結果は、「Ｌ」画分は、コレステロール生合成経路またはオートファジーにおける遺伝子の発現に対して明らかな効果がないのに対して、「Ｍ」および「Ｈ」画分はコレステロール生合成およびオートファジー遺伝子の発現に、有意に影響を与えることを実証した。これらの実験は、全体としての組成物の薬理学的活性は、異なるヒドロキシプロピル置換度を有するベータ−シクロデキストリン種により別個に寄与される活性の複合であり、全体的な薬理学的活性は、組成上のフィンガープリント、すなわち、組成物中に存在する異なってヒドロキシプロピル化された種の相対的割合に依存することをさらに実証した。
【０４７２】
全体としての組成物の薬理学的活性は、異なるヒドロキシプロピル置換度を有する、ベータ−シクロデキストリン種により別個に寄与される活性の複合ではあるが、本発明者らの精製プロセスにより除去される、低いヒドロキシプロピル置換度を有する種は、偶発的にも、仮にあったとしても、ＮＰＣ疾患の処置に薬理学的に関連する混合物の特定の活性にはほとんど寄与しない。この発見は、より長い期間、治療効果およびより高い安全性を備えた、本発明者らが開発した、新規の、より高度に精製された、および組成上異なるＨＰＢＣＤ組成物を、髄腔内または脳室内経路により、ＮＰＣ疾患を有する患者のＣＳＦに投与することを可能にする。
【０４７３】
７．９．（実施例９：代替の分取画分の方法論）
クロマトグラフィー分離のためのＣＤ−スクリーニングカラムを使用した遺伝子発現プロファイリング実験に使用するために、実施例８で考察された通り、異なる平均置換度を有する３つの画分を調製した。
【０４７４】
代替として、本質的には上記実施例５．７．２に記載されている通り、アルミナカラムを使用して、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢ（バッチＥ０２４５）の画分も調製した。試料をアルミナカラムに適用し、１００％メタノールで、定組成で溶出させた。図４３は様々な画分のクロマトグラムを示し、画分「Ａ」〜「Ｆ」および「Ｋ」を生成するためにプールした数値での画分を示す注釈付きで、さらにクロマトグラフィーにより分離されたヒドロキシプロピルベータ−シクロデキストリン種の置換度を示す注釈付きである。
【０４７５】
実験パラメーターをさらに最適化させて、ＤＳ２およびＤＳ３のＨＰＢＣＤの喪失を最小にして、Ｋｌｅｐｔｏｓｅ（登録商標）ＨＰＢからできるだけ多くの非置換のＢＣＤおよびＤＳ１ＨＰＢＣＤを除去した。精製方法の詳細は以下に記載されている：
それぞれの試験した方法に対して同一のパラメーター（方法ＩＩ〜ＸＩ）：
２１０ｇアルミナカラム；
３０ｍｌ／分流量；
１００秒／画分；
６０秒遅延時間。
溶離液としてＭｅＯＨのみ：
方法ＩＩ。２１ｇのＫｌｅｐｔｏｓｅ、３０画分、溶離液：１００％ＭｅＯＨ定組成溶離、収率：７９．４％
方法ＩＩＩ。１０．５ｇのＫｌｅｐｔｏｓｅ、３０画分、溶離液：１００％ＭｅＯＨ定組成溶離、収率：７２．３％
方法ＩＶ。１５ｇのＫｌｅｐｔｏｓｅ、３０画分、溶離液：１００％ＭｅＯＨ定組成溶離、収率：７７．７％  溶離液としてＭｅＯＨ＋水：
方法Ｖ。１０．４ｇのＫｌｅｐｔｏｓｅ、３０画分、溶離液：１００％ＭｅＯＨ定組成溶離（収率：７３．８％）＋３０画分、１００％ＭｅＯＨ定組成溶離（６０画分の全収率：７５．９％）＋３０画分、３ステップ定組成溶離（９０、８０、７０％ＭｅＯＨ、それぞれ１５分間）、各ステップ間に短い（１００秒）遷移勾配溶出、９０画分の全収率：８３．１％
方法ＶＩ。１０．５ｇのＫｌｅｐｔｏｓｅ、溶離液：ＭｅＯＨ＋水、７５画分、２０分１００→８０％ＭｅＯＨ勾配溶出、１０６分間の８０％ＭｅＯＨ定組成溶離、収率：８２．８％
方法ＶＩＩ。方法ＶＩと同じだが、８０％の代わりに７０％ＭｅＯＨ、収率：９１．２％
方法ＶＩＩＩ。１０．５ｇのＫｌｅｐｔｏｓｅ、溶離液：ＭｅＯＨ＋水、７５％ＭｅＯＨ定組成溶離、３０画分、収率：８６．４％
方法ＩＸ。１０．６ｇのＫｌｅｐｔｏｓｅ、溶離液：ＭｅＯＨ＋水、７０％ＭｅＯＨ定組成溶離、３０画分、収率：８９．２％  溶離液としてＥｔＯＨ（９６％純度）＋水：
方法Ｘ。１０．５ｇＫｌｅｐｔｏｓｅ、３０画分、溶離液：１００％ＥｔＯＨ定組成溶離（収率：２７．６％）＋３０画分、７０％ＥｔＯＨ定組成溶離、６０画分の全収率：８２．１％
方法ＸＩ。１０．５ｇのＫｌｅｐｔｏｓｅ、６０画分、溶離液：８０％ＥｔＯＨ定組成溶離、収率：８２．３％
【０４７６】
図４４は、異なる精製方法後のＨＰＢＣＤ混合物のクロマトグラムを示している。精製後の混合物中のＤＳ２／ＤＳ１の比が表２７に要約されている。
【表２７】
2018517046.tif 000046
【０４７７】
７．１０．（実施例１０：１８カ月の時点でのＮＰＣに対する第Ｉ相治験）
１８カ月の時点での効力結果を含めた、ニーマン−ピック病Ｃ型に対する第Ｉ相治験からのデータについてさらなる分析を行った。結果が図４５〜５０に示されている。図４５に要約されているように、年率換算した傾き、ベースラインからの変化、および応答者分析を使用して、１８カ月の第Ｉ相治験データを分析した。年率変化から、１８カ月の処置結果は、ＨＰＢＣＤ混合物が疾患を改変する治療であることを示している（図４６）。ＨＰＢＣＤ混合物は、ＮＰＣ患者のベースラインからの疾患の一貫した改善または安定化を示している（図４７）。ＨＰＢＣＤ混合物による処置はまた、より大きなパーセンテージの応答者が疾患の安定または改善を示していることを示す（図４８）。処置の聴力に対する影響は主に高周波数範囲にあり、影響は補聴器で補正可能である（図４９）。図５０は、聴力に対する処置の影響に関して今日までの結論を要約している。
【０４７８】
８．均等物および参照による組み込み
本出願において言及されたすべての刊行物、特許、特許出願および他の文献は、それぞれ個々の刊行物、特許、特許出願または他の文献が、すべての目的のために参照により組み込まれることが個々に示されているのと同じ程度に、すべての目的のためにこれら全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【０４７９】
様々な特定の実施形態が例示および記載されてきたが、本開示の精神および範囲から逸脱することなく様々な変更を行うことができることが認識されるであろう。
【図１】
2018517046.tif 000047
【図２】
2018517046.tif 000048
【図３】
2018517046.tif 000049
【図４】
2018517046.tif 000050
【図５】
2018517046.tif 000051
【図６】
2018517046.tif 000052
【図７】
2018517046.tif 000053
【図８】
2018517046.tif 000054
【図９】
2018517046.tif 000055
【図１０】
2018517046.tif 000056
【図１１】
2018517046.tif 000057
【図１２】
2018517046.tif 000058
【図１３】
2018517046.tif 000059
【図１４】
2018517046.tif 000060
【図１５】
2018517046.tif 000061
【図１６】
2018517046.tif 000062
【図１７】
2018517046.tif 000063
【図１８】
2018517046.tif 000064
【図１９】
2018517046.tif 000065
【図２０】
2018517046.tif 000066
【図２１】
2018517046.tif 000067
【図２２】
2018517046.tif 000068
【図２３】
2018517046.tif 000069
【図２４】
2018517046.tif 000070
【図２５】
2018517046.tif 000071
【図２６】
2018517046.tif 000072
【図２７】
2018517046.tif 000073
【図２８】
2018517046.tif 000074
【図２９】
2018517046.tif 000075
【図３０】
2018517046.tif 000076
【図３１】
2018517046.tif 000077
【図３２】
2018517046.tif 000078
【図３３】
2018517046.tif 000079
【図３４】
2018517046.tif 000080
【図３５】
2018517046.tif 000081
【図３６】
2018517046.tif 000082
【図３７】
2018517046.tif 000083
【図３８】
2018517046.tif 000084
【図３９】
2018517046.tif 000085
【図４０】
2018517046.tif 000086
【図４１】
2018517046.tif 000087
【図４２】
2018517046.tif 000088
【図４３】
2018517046.tif 000089
【図４４】
2018517046.tif 000090
【図４５】
2018517046.tif 000091
【図４６】
2018517046.tif 000092
【図４７】
2018517046.tif 000093
【図４８】
2018517046.tif 000094
【図４９】
2018517046.tif 000095
【図５０】
2018517046.tif 000096
【国際調査報告】
2018517046.tif 000097
2018517046.tif 000098