(57)【要約】  式（I）：（式中：R0及びRは、同一であるか又は異なり、それぞれH又はC1-6アルキルであり；R9’及びR9’’は、同一であるか又は異なり、それぞれH又はFであり；Xは、-(alk)n-、-alk-C(=O)-NR-、-alk-NR-C(=O)-又は-alk-C(=O)-であり；R1は、-S(=O)2R'及び非置換又は置換の4〜7員の複素環基から選択され；R2及びR2'は、同一であるか又は異なり、それぞれH又はC1-6アルキルかであるか；あるいはR2とR2'とが、それらが結合しているC原子と一緒になって、C3-6シクロアルキル基を形成し；R3及びR3'は、同一であるか又は異なり、それぞれH、C1-6アルキル、OH又はFであり；R4は、フェニル又は5〜12員の、N含有ヘテロアリール基であり、非置換又は置換であり；alkは、C1-6アルキレンであり；R'は、C1-6アルキルであり；かつnは、0又は1である）のイソオキサゾリルイミダゾピリジンである化合物、又はその医薬上許容される塩。化合物は、p300及び／又はCBPの活性を調節する活性を有し、癌を治療するために使用される。2018517672.tif 000063【選択図】なし
2018517672.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（I）
【化１】
2018517672.tif 000058
（式中：
R0及びRは、同一であるか又は異なり、それぞれH又はC1-6アルキルであり；
R9’及びR9’’は、同一であるか又は異なり、それぞれH又はFであり；
Xは、-(alk)n-、-alk-C(=O)-NR-、-alk-NR-C(=O)-又は-alk-C(=O)-であり；
R1は、-S(=O)2R'及び非置換又は置換の4〜7員の複素環基から選択され：
R2及びR2'は、同一であるか又は異なり、それぞれH又はC1-6アルキルであるか；あるいはR2とR2'とが、それらが結合しているC原子と一緒になって、C3-6シクロアルキル基を形成し；
R3及びR3'は、同一であるか又は異なり、それぞれH、C1-6アルキル、OH又はFであり； 
R4は、フェニル又は5〜12員の、N含有ヘテロアリール基であり、非置換又は置換であり；
alkは、C1-6アルキレンであり；
R'は、C1-6アルキルであり；かつ
nは、0又は1である）
のイソオキサゾリルイミダゾピリジンである化合物、又はその医薬上許容される塩。
【請求項２】
前記イソオキサゾリルイミダゾピリジンが、下記式（Ia）:
【化２】
2018517672.tif 000059
（式中、R9’、R9’’、X、R1、R2、R2’、R3、R3’及びR4のそれぞれが、請求項１中で、式（I）について記載したとおりである）を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記イソオキサゾリルイミダゾピリジンが、下記式（Ib）： 
【化３】
2018517672.tif 000060
（式中：
R9'及びR9''は、式（I）について上記したとおりであり；
Wは、N又はCであり;
W1は、N又はCHであり;
X'は、C1-3アルキレン又は-(CH2)-C(=O)-NH-であり；
R2'は、H、Me又はEtであり；
R5は、Hであり、R6は、-S(=O)2Meであるか、又はR5及びR6は、それらが結合しているW1の原子と一緒になって、ピロリジニル、チオピラニル、ピラニル及びピペリジニルから選択される非置換又は置換の複素環基を形成し；かつ
R7及びR8はそれらが結合しているC又はN原子と一緒になって、フェニル、ピリジニル、ピリミジニル、キノリニル、イソキノリニル、ピロロピリジニル及びキノキサリニルから選択される、非置換又は置換の基を形成する）を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(1-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン-2-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス塩酸塩;
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン;
4-(2-(4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール;
4-(2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール;
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド;
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(テトラヒドロフラン-3-イル)アセトアミド;
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(1-フェニルプロパン-2-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス-塩酸塩;
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-(4-ヒドロキシピペリジン-1-イル)エタン-1-オン;
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(オキセタン-3-イル)アセトアミド;
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-モルホリノエタン-1-オン;
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド;
4-(2-(2-(2-(1H-インドール-1-イル)エチル)-6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス-塩酸塩;
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アセトアミド;
(2S,6R)-4-(1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-イル)-2,6-ジメチルモルホリン;
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エタン-1-オン；
及びその医薬上許容される塩から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式（II）：
【化４】
2018517672.tif 000061
（式中、R1、R2、R2’、R3、R3’、R4、R9’及びR9’’のそれぞれは、式（I）について請求項１に記載したとおりである）の化合物を、式（III）：
【化５】
2018517672.tif 000062
（式中、R0及びRのそれぞれは、式（I）について請求項１に記載したとおりである）のボロン酸で水性エタノール中、Pd(PPh3)4及びNa2CO3の存在下で処理することを含む、請求項１に記載化合物を製造する方法。
【請求項６】
得られた式（I）のイソオキサゾリルイミダゾピリジンをその医薬上許容される塩へと変換させることをさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
医薬上許容される担体又は希釈剤と、有効成分として請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物とを含む、医薬組成物。
【請求項８】
療法による人体又は動物体の治療のための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項９】
p300及び／又はCBP活性のモジュレーターとしての、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
癌の治療における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
前記癌が、ARを発現する癌である、請求項１０に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
p300及び／又はCBP活性のモジュレーターとして使用するための医薬の製造における、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物を、癌の治療を必要とする患者に投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項１４】
前記化合物が、放射線療法と同時に又は連続して投与される；あるいは別の１つの化学療法剤又は複数の化学療法剤と同時に、連続して、又は組み合わせ製剤として投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
癌の予防的又は治療処置において、別々に、同時に又は連続して投与するための、
(a) 請求項１〜４のいずれか1項に記載の化合物；及び
(b) 化学療法剤
を含む製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、一連の新規イソオキサゾリルイミダゾピリジン類並びにそれらのp300及び／又はCBP活性のモジュレーターとしての使用に関する。
【０００２】
発明の背景
遺伝子修飾及びエピジェネティック修飾は、癌疾患の進行の全てのステージにとって重大な意味を持ち、エピジェネティックなサイレンシングは、癌の全ての特徴に関与する遺伝子らの誤制御において重要であることが示されてきた（Jones, P.A. and Baylin, S.B. (2007）“The epigenomics of cancer”, Cell, Vol. 128, pp. 683-692）。根底にある制御を媒介するエピジェネティック修飾としては、DNAメチル化及び翻訳後ヒストン修飾が挙げられる。後者としては、メチル化、アセチル化、及びユビキチン化が挙げられる。DNA脱メチル化剤及びヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、抗腫瘍活性を示して、数多くの剤が、血液学的悪性疾患の治療における使用のために認可されてきた。ヒストン及び非ヒストンタンパク質をアセチル化するヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）を含む、ヒストン修飾を媒介する酵素は、小分子化合物薬物治療の第二世代の標的の波の代表的なものである。
【０００３】
前立腺癌は、男性の中で最も好発する悪性疾患であり、癌での死亡数の第二の主要因である。臨床的に局在化している疾患の治療は典型的には、手術又は放射線療法である。根治的治療の後に全身性に再発した患者、又は局所領域疾患もしくは転移性疾患を呈する患者では、長期的な疾患の制御が主目的である。典型的には、これは、前立腺癌において生存及び進行には、アンドロゲン受容体（AR）機能に非常に依存するため、ARシグナル伝達を抑制する一連のホルモン療法を伴う。ARを標的化した治療は、腫瘍の増殖を阻害するものの、疾患が除去されることはまれであり、AR機能の回復を通して、治療に対する耐性が獲得される。この「去勢抵抗性」前立腺癌（CRPC）への進行は、疾病の致死的な表現型を表す。転移性疾患にかかる50〜60％の間の患者が、CRPCを持っていると推定される。最近、CRPCの治療のために、いくつかの新しい治療剤が認可されてきた。しかしながら、これらは、限られた臨床的有効性を提供し、進行を先延ばしにすることにのみ役立つ。したがって、CRPCの治療において、さらなる進歩を遂げるためには、新規かつ許容可能な剤が必要である。
【０００４】
複数の細胞機構が、CRPCの進行をもたらす。全ての場合において、CRPC表現型の獲得は、AR経路の再活性化を介して媒介される。アセチルトランスフェラーゼp300は、前立腺癌細胞におけるARレベル及びARシグナル伝達活性を直接制御する（Zhong et al., ‘p300 acetyltransferase regulates androgen-receptor degradation and PTEN-deficient prostate tumorigenesis,’ Cancer Res., Vol. 74, pp. 1870-1880, 2014）。したがって、p300活性の治療的な調節は、CRPCの発生をもたらす全ての既知の適応機構を標的化するだろう。認可された治療法及び治験中の治療法は主に、これらの細胞機構のどれか一方のみを標的化する。p300活性の調節は、現在の治療戦略及び他の実験的な治療戦略よりも、CRPCにおいてAR活性をより幅広く調節する機会を直接提供する。さらに、最近認可された薬剤に対する耐性機構は、AR依存的であることが示されてきた（Cai, C. et al., (2011) ‘Intratumoral de novo steroid synthesis activates androgen receptor in castration-resistant prostate cancer and is up-regulated by treatment with Cyp17A1 inhibitors,’ Cancer Res., Vol. 71, pp. 6503-6513）。p300の調節はしたがって、現在の治療法に対する耐性を阻害し、そして改善されかつ持続的な効力及びより大きな臨床的有用性を潜在的に提供するであろう。
【０００５】
p300と共通して、CREB（サイクリックAMP応答配列結合タンパク質）結合タンパク質（CBP）は、ヒト細胞において転写コアクチベーターとして作用するアセチルトランスフェラーゼである。CBP及びp300の両方が、単一のブロモドメイン（BRD）及びリジンアセチルトランスフェラーゼ（KAT）ドメインを持ち、これらは、ヒストン及び非ヒストンタンパク質の翻訳後修飾及びリクルートメントに関与している。保存された機能ドメインにおいて、CBPとp300との間には、高い配列類似性がある（Duncan A. Hay et al, JACS 2014, 135, 9308-9319を参照）。CBP活性の調節はしたがって、一定の癌の治療において、有望な道筋を提供する。したがって、p300及び／又はCBPの活性を調節（例えば、阻害）し得る化合物は、癌治療における興味の対象となる。
【発明の概要】
【０００６】
現在、一連の新規化合物が、p300及び／又はCBP活性を調節する活性を有することが見いだされている。したがって、その化合物らは、癌、特に前立腺癌、を治療することにおける潜在的な有用性を有する。
【０００７】
したがって、本発明は、式（Ｉ）：
【０００８】
【化１】
2018517672.tif 000003
【０００９】
（式中：
R0及びRは、同一であるか又は異なり、それぞれH又はC1-6アルキルであり；
R9’及びR9’’は、同一であるか又は異なり、それぞれH又はFであり；
Xは、-(alk)n-、-alk-C(=O)-NR-、-alk-NR-C(=O)-又は-alk-C(=O)-であり；
R1は、-S(=O)2R'及び非置換又は置換の4〜7員の複素環基から選択され；
R2及びR2'は、同一であるか又は異なり、それぞれH又はC1-6アルキルであるか；あるいはR2とR2'とが、それらが結合しているC原子と一緒になって、C3-6シクロアルキル基を形成し；
R3及びR3'は、同一であるか又は異なり、それぞれH、C1-6アルキル、OH又はFであり；
R4は、フェニルであるか又は5〜12員のN含有ヘテロアリール基であって、非置換又は置換であり；
alkは、C1-6アルキレンであり；
R'は、C1-6アルキルであり；かつ
nは、0又は1である）
のイソオキサゾリルイミダゾピリジンである化合物、又はその塩医薬上許容されるを提供する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、上記の式（I）のイソオキサゾリルイミダゾピリジン又はその医薬上許容される塩及び医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。医薬組成物はさらに、例えば、下記のような１つ以上の追加の化学療法剤を含んでいてもよい。
【００１１】
さらなる態様では、本発明は、p300活性のモジュレーターとして使用するための、上記の式（I）のイソオキサゾリルイミダゾピリジン、又はその医薬上許容される塩を提供する。
【発明の詳細な説明】
【００１２】
用語「置換」は、置換が、置換された原子及び置換基の許容される原子価と一致し、かつ置換が、結果として安定化合物（すなわち、転位環化（rearrangement cyclisation）、又は脱離などの変換が自然に起こることがないもの）をもたらす、という暗黙の規定を含む。一定の実施態様において、単一の原子が、１つより多い置換基で置換されていてもよい（ただし、そのような置換が、その原子の許容される原子価と一致している限り）。一定の実施態様において、置換される基は、１つの置換基で置換されていてもよく、又は複数の炭素原子上で、複数置換されていてもよい。本明細書中に記載される任意の基が置換される場合、それは典型的には下記のようにR10によって置換される。下記のように、基は例えば、基R10によって、モノ−、ジ−、又はトリ−置換されていてもよい。
【００１３】
一定の式（I）のイソオキサゾリルイミダゾピリジン類において、置換基の性質に依存して、キラル炭素原子があってもよく、したがって、化合物は立体異性体として存在してもよい。本発明は、エナンチオマー、ジアステレオマー、及びラセミ混合物などのそれらの混合物を含む、式（I）の化合物の立体異性体などの全ての光学異性体にまで及ぶ。異なる立体異性体は、慣用的な方法によって互いに分けられているか又は分離されてもよく、あるいは任意の所定の異性体が、慣用的な立体選択的合成又は立体特異的合成によって取得されてもよい。
【００１４】
本発明の化合物は、種々の互変異性型で存在し得、本発明がそのような全ての互変異性型を含むことが理解されるべきである。
【００１５】
本発明の一定の化合物が、酸性基及び塩基性基の両方を含み、したがって、一定のpH値では、双性イオンとして存在してもよいことが理解される。
【００１６】
本明細書中で使用される場合、用語「治療する（treat）」及び「処置、処理（treatment）」は、治療処置及び予防的手段又は防止用手段（ここでの目的は、例えば、癌の発生又は転移などの、望ましくない生理的変化又は障害を予防又は減速させる（減らす）ことである）、の両方をいう。「治療」はまた、治療を受けない場合に予測される生存時間と比較して、生存時間を延ばすことも意味し得る。治療を必要とする者には、すでにその状態であるかもしくは障害を持つ者、並びにその状態もしくは障害を発症しやすい者又はその状態もしくは障害が予防されるべき者が含まれる。
【００１７】
語句「医薬上許容される」は、物質又は組成物が、処方物を構成する他の成分及び／又はそれで治療される患者と、化学的及び／又は毒物学的に適合しなくてはならないことを示す。
【００１８】
C1-6アルキル基又は部分は、直鎖状であるか又は分枝している。C1-6アルキル基は典型的には、C1-4アルキル基、又はC1-2アルキル基である。C1-6アルキル基及び部分の例としては、メチル、エチル、n-プロピル、i-プロピル、n-ブチル、i-ブチル、t-ブチル、n-ペンチル、i-ペンチル（すなわち、3-メチルブタ-1-イル）、t-ペンチル（すなわち、2-メチルブタ-2-イル）、ネオペンチル（すなわち、2,2-ジメチルプロパン-1-イル）、n-ヘキシル、i-ヘキシル（すなわち、4-メチルペンタン-1-イル）、t-ヘキシル（すなわち、3-メチルペンタン-3-イル）及びネオペンチル（すなわち、3,3-ジメチルブタン-1-イル）が挙げられる。典型的には、C1-6アルキル基は、メチル（Me）である。誤解を避けるために、２つのアルキル部分が１つの基中に存在する場合、アルキル部分は同一であっても異なっていてもよい。C1-6アルキル基は、非置換であるか、又は典型的には１つ以上の下記の基R10によって置換されている。例えば、C1-6アルキル基は、非置換であるか、又は１、２もしくは３つの下記の基R10によって置換されている。
【００１９】
C1-6アルキレン基又は部分は、非置換もしくは置換の、直鎖状もしくは分枝した、１〜６の炭素原子を含有する飽和二価脂肪族炭化水素基又は部分である。それは典型的には、C1-3アルキレン基又は部分である。例としては、メチレン、エチレン、n-プロピレン及びi-プロピレン基又は部分が挙げられる。それはより典型的には、メチレン又はエチレンである。アルキレン基が置換されている場合、それは典型的には、下記の基R10によって置換されている。
【００２０】
C3-6シクロアルキル基又は部分は、３〜６の炭素原子を有する飽和一価炭化水素環である。したがってそれは、3、4、5又は6員の、飽和結合のみを含む炭素環である。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。一実施態様において、シクロアルキル基はシクロプロピルである。
【００２１】
5〜12員のN含有ヘテロアリール基又は部分は、一価の5〜12員の芳香族複素環基であり、1、2、3、又は4つの窒素原子（典型的には１又は２つのN原子）を含有する。それは、その環のC原子又はN原子のうちの1つを介して結合されており、単環式又は二環式である。一実施態様において、それはC-結合型である。別の実施態様において、それはN-結合型である。それは例えば、5〜7員のN含有単環式ヘテロアリール基、例えば、５又は6員のN含有ヘテロアリール基、であってもよい。5〜12員の、C-結合型、N含有ヘテロアリール基の例としては、ピロリル、イミダゾリル、ピリジル、ピラニジル、ピリミジニル、キノリル、イソキノリル、キナゾリニル、キノキサリニル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル及びピロロピリミジニル基が挙げられる。置換されている場合、5〜12員の、N含有ヘテロアリール基は典型的には、非置換のC1-4アルキル基及び下記の基R11から選択される１つ以上、例えば、１つ、２つ又は３つ、の基によって置換されている。一実施態様において、5〜12員の、N含有ヘテロアリール基は、非置換である。
【００２２】
4〜7員の複素環基は、O、N及びSから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む、飽和一価の４、５、６又は７員の複素環式環である。それは例えば、4〜6員の複素環基であってもよい。それは、その環のC原子のうちの１つを介して、又は環のヘテロ原子を介して結合されている。１つの実施態様において、それはC-結合型である。別の実施態様において、それはN-結合型である。4〜7員の複素環基の例としては、オキセタン、チエタン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロチオピランモルホリン及び以下のN-結合型スピロ基：
【００２３】
【化２】
2018517672.tif 000004
【００２４】
が挙げられる。
【００２５】
4〜7員の複素環基は、非置換であるか、又は典型的には下記の基R10によって置換されている。それは、原子の原子価によって許容されるように、環の炭素原子上又は環のヘテロ原子上で置換されていてもよい。
【００２６】
ハロゲン又はハロ基は、F、Cl、Br又はIである。典型的にはそれは、F、Cl又はBrであり、より典型的にはFである。
【００２７】
C1-6アルコキシ基は、直鎖状又は分枝している。それは典型的には、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、i-プロポキシ、n-プロポキシ、n-ブトキシ、sec-ブトキシ又はtert-ブトキシ基などのC1-4アルコキシ基である。C1-6アルコキシ基は、非置換であるか、又は典型的には１つ以上の下記の基R10によって置換されている。
【００２８】
式（I）においてn=0である場合、部分-(alk)n-は存在せず、したがってXは直接結合である。Xは典型的には、直接結合、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2-C(=O)-NMe-、-CH2-C(=O)-NH-及び-CH2-C(=O)-から選択される。
【００２９】
R1が、4〜7員の複素環基である場合、それは典型的には、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニル、テトラヒロドピラニル、オキセタニル、テトラヒドロチオピラニル又はテトラヒドロフラニル基、あるいは上記の構造を有するN-結合型スピロ基である。それは、非置換であるか、又は例えば、下記の基R10によって置換されている。
【００３０】
R4が、5〜12員のN含有ヘテロアリール基である場合、それは典型的には、ピロリル、イミダゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、キノリル、イソキノリル、キナゾリニル、キノキサリニル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル及びピロロピリミジニルから選択される。より典型的にはそれは、ピリジル、ピリミジニル、キノリル、イソキノリル、キノキサリニル、ピロロピリジニル及びインドリルから選択される。
【００３１】
R4は非置換であるか又は置換されている。置換されている場合、それは例えば、下記の基R11によって、モノ-、ジ-又はトリ-置換されていてもよい。
【００３２】
R9’及びR9’’はそれぞれ、H又はFである。典型的には、R9’はHであり、かつR9’’はH又はFであり、より好ましくはHである。
【００３３】
R10は、非置換のC1-6アルキル、C3-6シクロアルキル、ハロ、OH、C1-6アルコキシ、-C(O)R''、-C(O)2R''、-C(O)NR''2、オキソ(=O)、ジオキソ、-CH2OR''、-S(O)mR''、-NR''C(O)R''、-S(O)mNR''2、及びCF3（式中、mは1又は2であり、各R''は独立してH及び非置換のC1-6アルキルから選択される）から選択される。典型的にはR10は、非置換のC1-6アルキル、ハロ、OH、C1-6アルコキシ、-C(O)R''、-C(O)NR''2、オキソ(=O)及びジオキソから選択される。
【００３４】
R11は、非置換のC1-6アルキル、ハロ、-OH、C1-6アルコキシ、-CN、-OCHF2、-OCF3、-C(O)R''、-C(O)2R''、-C(O)NR''2、-CH2OR''、-S(O)mR''及び-S(O)mNR''2から選択され、式中m及びR''は上記のとおりである。
【００３５】
１つの好ましい実施態様において、本発明のイソオキサゾリルイミダゾピリジンは、下記式（Ia)：
【００３６】
【化３】
2018517672.tif 000005
【００３７】
（式中、R9’、R9’’、X、R1、R2、R2’、R3、R3’及びR4のそれぞれが、式（I）について上記したとおりである）を有する。
【００３８】
本発明の別の好ましい実施態様において、イソオキサゾリルイミダゾピリジンは下記式（Ib)：
【００３９】
【化４】
2018517672.tif 000006
【００４０】
（式中、
R9'及びR9''は、式（I）について上記したとおりであり；
Wは、N又はCであり；
W1は、N又はCHであり；
X'は、C1-3アルキレン又は-(CH2)-C(=O)-NH-であり；
R2'は、H、Me又はEtであり；
R5はHであり、かつR6は-S(=O)2Meであるか、又はR5及びR6は、それらが結合しているW1の原子と一緒になって、ピロリジニル、チオピラニル、ピラニル及びピペリジニルから選択される非置換又は置換の複素環基を形成し；かつ
R7及びR8は、それらが結合しているC又はN原子と一緒になって、フェニル、ピリジニル、ピリミジニル、キノリニル、イソキノリニル、ピロロピリジニル及びキノキサリニルから選択される、非置換又は置換の基を形成する）を有する。
【００４１】
本発明の一態様において、式（I）及び式（Ia）において-X-R1として表される部分、並びに式（Ib）において
【００４２】
【化５】
2018517672.tif 000007
【００４３】
として表される部分は、下記構造：
【００４４】
【化６】
2018517672.tif 000008
【００４５】
から選択される。
【００４６】
本発明の別の態様において、式（I）及び式（Ia）において
【００４７】
【化７】
2018517672.tif 000009
【００４８】
として表される部分、及び式（Ib）において
【００４９】
【化８】
2018517672.tif 000010
【００５０】
として表される部分は、下記構造：
【００５１】
【化９】
2018517672.tif 000011
【００５２】
のうちの１つによって表される。
【００５３】
より典型的には、それは下記構造：
【００５４】
【化１０】
2018517672.tif 000012
【００５５】
のうちの１つによって表される。
【００５６】
上記の式（I）において、R0及びRはそれぞれ独立してH又はC1-6アルキルである。したがって、例えば、R0はHであり、RはC1-6アルキルであるか；RはHであり、R0はC1-6アルキルであるか；R0及びRはそれぞれHであるか；又はR0及びRはそれぞれC1-6アルキルである。これらの変形のそれぞれにおいて、C1-6アルキルは典型的には、メチル又はエチルであり、好ましくはメチルである。
【００５７】
上記の式（I）及び式（Ia）において、R2及びR2'はそれぞれ独立して、H又はC1-6アルキルである。例えば、R2はHであり、R2’はC1-6アルキルであるか；R2’はHであり、R2はC1-6アルキルであるか；R2及びR2’は両方Hであるか；又はR2及びR2’は両方C1-6アルキルである。これらの変形のそれぞれにおいて、C1-6アルキルは典型的にはメチル又はエチルであり、好ましくはメチルである。あるいは、R2及びR2'は、それらが結合しているC原子と一緒になって、例えば、シクロプロピルなどのC3-6シクロアルキル基を形成する。
【００５８】
上記の式（I）、式（Ia）及び式（Ib）の１つの変形において、R9’及びR9’’のそれぞれはHである。別の変形において、R9’及びR9’’のうちの１つはFであり、他方はHである。３つ目の変形において、R9’及びR9’’のそれぞれはFである。
【００５９】
本発明の化合物は、不斉又はキラル中心を含んでいてもよく、したがって、異なる立体異性体として存在し得る。上記の構造式は、ジアステレオマー、エナンチオマー及びラセミ混合物を含む本発明の化合物の全ての立体異性体を包含する。ジアステレオマー及びエナンチオマーは、例えば、鏡像異性的合成を介するなど、の立体選択的な合成ストラテジーによって取得され得る。
【００６０】
本発明の化合物の具体例としては、以下の表に記載された化合物：
【００６１】
【表１−１】
2018517672.tif 000013
【００６２】
【表１−２】
2018517672.tif 000014
【００６３】
【表１−３】
2018517672.tif 000015
【００６４】
【表１−４】
2018517672.tif 000016
【００６５】
及びその医薬上許容される塩が挙げられる。
【００６６】
本発明の化合物は、式（II）の化合物：
【００６７】
【化１１】
2018517672.tif 000017
【００６８】
（式中、R1、R2、R2’、R3、R3’、R4、R9’及びR9’’のそれぞれは、式（I）について上記のとおりである）を、式（III）のボロン酸：
【００６９】
【化１２】
2018517672.tif 000018
【００７０】
（式中、R0及びRのそれぞれは、式（I）について上記のとおりである）で、水性エタノール中、Pd(PPh3)4及びNa2CO3の存在下で処理することを含む工程によって調製されてもよい。水性エタノールは典型的には、30〜70% EtOH/水である。
【００７１】
下に示されるスキームが、本発明の化合物が生成され得る具体的な合成戦略を図示する。
【００７２】
【化１３】
2018517672.tif 000019
【００７３】
上記スキームにおいて使用された略号の略語一覧は、下記の実施例の部分中に提供される。
【００７４】
式（I）のイソオキサゾリルイミダゾピリジンは、従来の方法によって医薬上許容される塩に変換されてもよく、塩は遊離化合物に変換されてもよい。医薬上許容される塩としては、塩酸、臭化水素酸及び硫酸などの無機酸の塩、並びに酢酸、シュウ酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、安息香酸、クエン酸及び酒石酸などの有機酸の塩が挙げられる。遊離カルボキシ置換基を持つ化合物の場合、塩には、上記の酸付加塩並びにナトリウム、カリウム、カルシウム及びアンモニウムの塩の両方が含まれる。後者は、式（I）の遊離ベンズイミダゾリルイソオキサゾール、又はその酸付加塩を、対応する金属塩基又はアンモニアと処置することによって調製される。
【００７５】
式（I）のイソオキサゾリルイミダゾピリジン又はその医薬上許容される塩は、以下、本発明の化合物という。本発明の化合物は、下記の実施例16に記載されるように、生物学的試験において、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（HAT）、p300、に結合することが見出されている。
【００７６】
p300は、複数の生物学的プロセス（増殖、アポトーシス、細胞周期の制御及びDNA損傷応答）の制御に関与する転写コアクチベーターである。p300は主に、Jun、Fos及びE2Fを含む、数多くの腫瘍性タンパク質の転写コファクターとして機能する。そのうえそれは、ヒストンアセチルトランスフェラーゼとして作用し、またp53、p73、及びRbなどの複数の非ヒストンタンパク質もアセチル化できる。p300は、癌の性質に依存して、腫瘍抑制因子として又は腫瘍性タンパク質として作用することが報告されてきた。複数の研究が、p300発現が、疾患の進行及び生存時間の減少と相関することを示してきた。
【００７７】
p300は、ヒト前立腺癌の進行中に上方制御され、ARコアクチベーターであることが示されてきた（Debes, J.D., et al., (2003) ‘p300 in prostate cancer proliferation and progression,’ Cancer Res., Vol. 63, pp. 7638-7640；及びLinja, M.J. et al., (2004) ‘Expression of androgen receptor coregulators in prostate cancer,’ Clin. Cancer Res., Vol. 10, pp. 1032-1040)。
【００７８】
p300は最近、ARタンパク質分解を直接制御することが示されてきた（Zhong et al., 2014)。p300媒介性のARアセチル化は、ARユビキチン化と、それに続くARプロテアソーム分解を阻害することが示されている（Zhong et al., 2014, 前記)。したがって、p300活性の直接的な阻害は、AR分解を促進するだろう。
【００７９】
前立腺癌の高い分子不均一性（molecular heterogeneity）を考えると、適切なバイオマーカーの同定が、標的化小分子化合物療法の効果的な配置及び評価に重大な意味を持つ。ARの回復を介したCRPC表現型発生のマーカーが、p300モジュレーター評価用の患者の層別化のために使用されることが提唱されている。これらには、PSA及び血中循環腫瘍細胞（CTC）数が含まれる。
【００８０】
p300活性の調節のモニタリングを可能とするバイオマーカーの点から、直接的な読出し情報としては；AR及びARスプライスバリアントレベルの決定；PSA、TMPRSS2及びKLK2を含むAR応答性遺伝子のレベルを評価することによるAR活性の調節、が挙げられる。AR機能活性の他の代替マーカーとしては、p21、c-Myc及びp53が挙げられる。CRPCにおける使用のために、AR活性を調節する複数の治療剤が認可されていることを考えれば、p300標的化と、それに続くAR調節の効果を評価するバイオマーカーが、臨床の場においてすでに広く利用可能であり、かつ利用されている。
【００８１】
種々の種類の癌がARを発現することが示されてきた。前立腺癌に加えて、これらには乳癌及び膀胱癌が含まれる。p300活性の調節は、ARが発現されるそのような癌及び他の徴候の治療において、治療有用性を有することが期待されるだろう。そのうえ、p300が、他の核内ホルモン受容体のレベルを制御し、それによって、p300標的化剤の臨床的有用性をさらに拡大させる可能性がある。
【００８２】
本発明の化合物は、p300及び／又はCBP活性のモジュレーターとしての活性を有する。したがって、それは、ARが発現される癌、又は別の臨床的状態を治療するのに使用され得る。治療され得る癌は、ARが発現される、又はARとその他の点で関連している癌である。これらの癌としては、前立腺癌、乳癌及び膀胱癌が挙げられる。前立腺癌は、例えば、去勢抵抗性前立腺癌（CRPC）であり得る。したがって、癌を患っているヒト又は動物患者は、本発明の化合物をそれらに対して投与することを含む方法によって治療され得る。患者の状態はそれによって、改善されるか又は回復され得る。
【００８３】
本発明の化合物はしたがって、癌の治療のために、放射線療法又は別の化学療法剤と組み合わせて、ヒト又は動物患者に投与され得る。したがって、本発明はさらに、癌の治療のために、本発明の化合物、又は本発明の化合物を含む医薬組成物が、放射線療法と同時に又は連続して投与される；あるいは別の（１つ又は複数の）化学療法剤と同時に連続して又は組み合わせ製剤として投与される、併用療法を提供する。
【００８４】
他の１つの化学療法剤又は他の複数の化学療法剤のそれぞれは、治療される癌の種類に対して従来使用される剤であるだろう。前立腺癌の治療のために、本発明の化合物が典型的に組み合わされるであろう化学療法剤のクラスとしては、例えば、例えば、エンザルタミドなどのアンドロゲン受容体遮断薬、及び例えば、アビラテロンなどのCYP17A1（17α-ヒドロキシラーゼ/C17,20リアーゼ）の阻害剤などが挙げられる。併用療法において、本発明の化合物と一緒に投与され得る他の化学療法剤としては、ドセタキセルが挙げられる。
【００８５】
本明細書中で使用される用語「組み合わせ、併用（combination）」は、同時、別々の、又は連続した投与をいう。投与が連続しているか別々である場合、第二成分の投与における遅れは、組み合わせの有益効果を失うほどに遅らすべきではない。
【００８６】
本発明はさらに、例えば、上記の特定の種類の癌などの癌の予防的又は治療処置において、別々に、同時に又は連続して投与するための、
(a) 上記のとおりの本発明の化合物；及び
(b) 化学療法剤
を含む製品を提供する。化学療法剤は、例えば、アンドロゲン受容体遮断薬又はCYP17A1阻害剤であってもよい。より具体的には、それは、エンザルタミド又はアビラテロンであってもよい。
【００８７】
本発明の化合物は、種々の剤形で投与され得、例えば、錠剤、カプセル剤、糖衣錠もしくはフィルムコート錠、溶液、又は懸濁剤等の形態で経口で、あるいは例えば、筋肉内、静脈内又は皮下などの非経口で投与され得る。化合物はしたがって、注射又は注入によって与えられ得る。
【００８８】
投与量は、年齢、体重並びに患者の状態及び投与経路を含む種々の要素に依存する。一日投与量は、幅広い範囲内で変動し得、各特定の症例における個々の要件に適合されるだろう。しかしながら、化合物が大人のヒトに単独で投与される場合に各投与経路について採用される投与量は、典型的には、体重当たり、0.0001〜50 mg/kgの範囲中、最も一般的には0.001〜10 mg/kg、例えば、0.01〜1 mg/kgである。そのような投与量は、例えば、毎日１〜５回与えられ得る。静脈内注射では、適切な一日量は、0.0001〜1 mg/kg体重、好ましくは0.0001〜0.1 mg/kg体重である。一日投与量は、単回投与量として、又は分割された用量計画に従って投与され得る。
【００８９】
本発明の化合物は、医薬上又は獣医学上許容される担体又は希釈剤も含む医薬組成物又は獣医用組成物として使用されるために処方される。組成物は典型的には、従来法に従って調製され、医薬上又は獣医学上適切な形態で投与される。化合物は、例えば、以下のような任意の従来の形態で投与されてもよい：
【００９０】
A）例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、トローチ剤、口中錠、水性もしくは油性懸濁液、溶液、分散性の散剤もしくは顆粒剤、乳剤、硬カプセル剤もしくは軟カプセル剤、又はシロップ剤又はエリキシル剤など経口で。経口での使用を意図した組成物は、医薬組成物の製造者について、当分野で公知の任意の方法に従って調製されてもよく、そのような組成物は、医薬上優雅で味の良い製剤を提供するために、甘味剤、香料、着色剤及び保存剤からなる群から選択される１つ以上の剤を含有し得る。
【００９１】
錠剤は、錠剤の製造に適切な無毒性の医薬上許容される賦形剤と混合されて、有効成分を含有する。これらの賦形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、乳糖、デキストロース、ショ糖、セルロース、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、リン酸カルシウム又はリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；例えば、トウモロコシデンプン、アルギン酸、アルギン酸塩又はデンプングリコール酸ナトリウムなどの造粒剤及び崩壊剤；例えば、デンプン、ゼラチン又はアカシアなどの結合剤；例えば、シリカ、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、ステアリン酸又はタルクなどの潤滑剤；飽和剤；染料、甘味料、レシチン、ポリソルベート類又はラウリン酸ナトリウムなどの湿潤剤であり得る。錠剤は、コーティングされていなくてもよく、又はそれらは、胃腸管中での崩壊及び吸着を遅らせ、それによってより長時間にわたって持続作用を提供する公知の技術によってコーティングされていてもよい。例えば、モノステアリン酸グリセリン又はジステアリン酸グリセリンなどの時間遅延物質が用いられてもよい。そのような製剤は、公知の様式、例えば、混合、顆粒化、錠剤化、糖衣化又はフィルムコーティング工程などの手段、によって製造され得る。
【００９２】
経口用の処方物はまた、有効成分が、例えば、カルボン酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンなどの不活性な固形の希釈剤と混合された硬ゼラチンカプセル剤としても提示され得、あるいは有効成分が、そのままで存在するか、又は水もしくは例えば、ピーナッツ油、流動パラフィン、もしくはオリーブ油などの油溶媒と混合された軟ゼラチンカプセル剤として提示され得る。
【００９３】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適切な賦形剤と混合されて、有効成分を含有する。そのような賦形剤は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム及びアラビアゴムなどの懸濁剤であり；分散剤又は湿潤剤は、例えば、レシチンなどの天然に存在するリン脂質、又は例えばポリオキシエチレンステアリン酸塩などのアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、又は例えばヘプタデカエチルエネオキシセタノールなどのエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、又はポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなどのエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール由来の部分エステルとの縮合生成物、又はポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどのエチレンオキシドと脂肪酸及び無水ヘキシトール由来の部分エステルとの縮合生成物であってもよい。
【００９４】
前記水性懸濁液はまた、例えば、p-ヒドロキシ安息香酸エチル又はn-プロピルなどの1つ以上の保存剤、ショ糖又はサッカリンなどの1つ以上の着色剤なども含んでいてもよい。
【００９５】
油性懸濁剤は、有効成分を例えば、アラキス油、オリーブ油、ゴマ油もしくはココナッツ油などの植物油、又は流動パラフィンなどの鉱物油中に懸濁することによって処方されてもよい。油性懸濁剤は、例えば、みつろう、固形パラフィン又はセチルアルコールなどの増粘剤を含んでいてもよい。
【００９６】
上記のような甘味料及び調味料が、味の良い経口製剤を提供するために添加されてもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤のこの添加によって保存されてもよい。水の添加によって水性懸濁液を調製するのに適切な分散性の散剤及び顆粒剤は、分散剤又は湿潤剤、懸濁剤及び1つ以上の保存剤と混合されて有効成分を提供する。適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤は、すでに上記したそれらによって例証される。例えば甘味料、香料及び着色剤などの追加の賦形剤もまた存在してもよい。
【００９７】
本発明の医薬組成物はまた、水中油型乳剤の形態であってもよい。油相は、例えば、オリーブ油もしくはアラキス油などの植物油、又は例えば、流動パラフィンなどの鉱物油、またはこれらの混合物などであってもよい。適切な乳化剤は、例えばアラビアゴム又はトラガカントゴムなどの天然に存在するゴム、例えば、大豆レシチンなどの天然に存在するリン脂質、並びに例えば、ソルビタンモノオレエートなどの脂肪酸及び無水ヘキシトール由来のエステル及び部分エステル、並びに例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどの前記部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物などであり得る。乳剤はまた、甘味料及び調味料を含んでいてもよい。シロップ剤及びエリキシル剤は、例えば、グリセロール、ソルビトール又はショ糖などの甘味料と一緒に処方されてもよい。具体的には、糖尿病患者用のシロップ剤は、例えばソルビトールなどの、ブドウ糖へと代謝されないか又はごく少量のみがブドウ糖へと代謝される生成物のみを担体として含み得る。
【００９８】
そのような処方物はまた、粘滑薬、保存剤並びに調味料及び着色剤を含んでいてもよい。
【００９９】
B）滅菌された注入可能な水性懸濁液もしくは油性懸濁液の形態で、皮下、又は静脈内、又は筋肉内、又は胸骨内、又は注入法のいずれかによって非経口で。この懸濁液は、上記の湿潤剤及び懸濁剤の適切な分散を使用した公知の技術に従って処方されてもよい。滅菌された注入可能な製剤はまた、無毒の非経口的に許容される希釈剤又は溶剤中の滅菌された注入可能な溶液又は懸濁液（例えば、1,3-ブタンジオール中の溶液）であってもよい。
【０１００】
利用され得る許容されるビヒクル及び溶剤の内には、水、リンゲル溶液及び等張食塩水が含まれる。そのうえ、滅菌、不揮発油が溶剤又は懸濁媒質として慣習的に利用される。この目的のために、合成のモノグリセリド又はジグリセリドを含む任意の無菌性の不揮発油が利用され得る。そのうえ、オレイン酸などの脂肪酸が、注入剤の調製において用途が見いだされる。
【０１０１】
C）エアロゾル又はネブライザー用の溶液の形態で、吸入によって。
【０１０２】
D）薬物と、通常の温度では固体であるが、直腸温度では液体であり、したがって直腸において融解して薬物を放出する適切な非刺激性の賦形剤と、を混合することによって調製される坐剤の形態で、直腸性に。そのような物質は、ココアバター及びポリエチレングリコールである。
【０１０３】
E）クリーム、軟膏剤、ゼリー、洗眼剤、溶液又は懸濁液の形態で、局所的に。
【０１０４】
本発明は、以下の実施例においてさらに説明されている：
【実施例】
【０１０５】
【表２−１】
2018517672.tif 000020
【０１０６】
【表２−２】
2018517672.tif 000021
【０１０７】
一般的な手法
全ての出発物質及び溶剤は、商業的供給源から入手したか、又は文献引用に従って調製した。他に記載されていない限り、全ての反応は撹拌した。有機溶液は、ルーチン的に無水硫酸マグネシウム上で乾燥させた。水素付加は、記載された条件下で、Thales H-cubeフロー反応器上で実行した。
【０１０８】
カラムクロマトグラフィーは、示された量を使用して、プレパックシリカ（230〜400メッシュ、40〜63μM）カートリッジ上で実行した。SCXは、Supelcoから購入し、使用前に1Mの塩化水素で処置した。他に記載されていない限り、精製されるべき反応混合物は、最初にMeOHで希釈し、数滴のAcOHで酸性にした。この溶液は、SCX上に直接ローディングし、MeOHで洗浄した。次に、所望される物質をMeOH中1% NH3で洗浄することによって溶出させた。
【０１０９】
分析方法
逆相高速液体クロマトグラフィー：
分析用HPLCをWaters Xselect CSH C18, 2.5μm, 4.6×30 mmカラム、 0.1% 含水ギ酸中のMeCN中0.1%のギ酸の勾配で溶出；Waters Xbridge BEH C18, 2.5μm, 4.6×30 mmカラム、10 mM 炭酸水素アンモニウム水溶液中のMeCNの勾配で溶出、を使用して実行した。溶出されたピークのUVスペクトルは、Agilent 1100システム上のダイオードアレイ又は可変波長検出器のいずれかを使用して測定した。
【０１１０】
分析用LCMSを、Waters Xselect CSH C18, 2.5μm, 4.6×30 mmカラム、 0.1% 含水ギ酸中のMeCN中0.1%のギ酸の勾配で溶出（方法１）；Waters Xbridge BEH C18, 2.5μm, 4.6×30 mmカラム、10 mM 炭酸水素アンモニウム水溶液中のMeCNの勾配で溶出（方法2）、を使用して実行した。溶出されたピークのUV及びマススペクトルを、陽イオン及び陰イオンエレクトロスプレー6120シングル四重極質量分光計を持つAgilent 1200又はAgilent Infinity 1260 LCMSのいずれかの可変波長検出器を使用して測定した。
【０１１１】
分取HPLCを、Waters Xselect CSH C18, 5μm, 19×50 mmカラムを使用して、0.1%含水ギ酸のMeCN中0.1%のギ酸の勾配又は10 mM 炭酸水素アンモニウム水溶液中のMeCNの勾配のいずれか；あるいはWaters Xbridge BEH C18, 5μm, 19×50 mmカラムを使用して、10 mM 炭酸水素アンモニウム水溶液中のMeCNの勾配、のいずれかを使用して実行した。Gilson 215分取HPLC又はVarian PrepStar分取HPLC上の可変波長検出器によって測定された単一波長でのUVによる検出；又は、Waters FractionLynx LCMS上の陽イオン及び陰イオンエレクトロスプレーを持つZQシングル四重極質量分光計並びに二波長検出器によって測定された単一波長における質量及びUVによる検出、に続き、画分を回収した。
【０１１２】
1H NMR 分光法：1H NMRスペクトルは、Bruker Avance III 分光計上で、400 MHzで取得した。クロロホルム-d、ジメチルスルホキシド-d6又はテトラメチルシランの内部標準のいずれかの中心ピークをリファレンスとして使用した。
【０１１３】
1H NMR 分光法：
1H NMRスペクトルは、Bruker Avance III 分光計上で、400 MHzで、残留の重水素化されていない溶剤をリファレンスとして使用して、取得した。
【０１１４】
実施例1：4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(1-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン-2-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス塩酸塩
5-ブロモ-N-(2-モルホリノエチル)-3-ニトロピリジン-2-アミン
【０１１５】
【化１４】
2018517672.tif 000022
【０１１６】
THF(25 mL)中の2-モルホリノエタンアミン(16.58 ml, 126 mmol)を、THF (50 mL)中の5-ブロモ-2-クロロ-3-ニトロピリジン(10 g, 42.1 mmol)に、氷浴中で添加し、得られた混合物を室温で19時間撹拌した。混合物を氷水(400 mL)上に注ぎ、黄色の沈殿を濾過して取り除き、水(100 mL)で洗浄し、真空オーブン中で乾燥させて、5-ブロモ-N-(2-モルホリノエチル)-3-ニトロピリジン-2-アミン(10.85 g, 76%)を、黄色の生成物として得た; m/z 331/333 (M+H)+ (ES+)。
【０１１７】
5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-N-(2-モルホリノエチル)-3-ニトロピリジン-2-アミン
【０１１８】
【化１５】
2018517672.tif 000023
【０１１９】
事前に超音波処理して窒素で脱気した、1,4-ジオキサン/水(3:1, 100 mL)中の炭酸ナトリウム(4.80 g, 45.3 mmol)、5-ブロモ-N-(2-モルホリノエチル)-3-ニトロピリジン-2-アミン(5 g, 15.10 mmol)及び(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ボロン酸(3.83 g, 27.2 mmol)の撹拌スラリーに、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(1.745 g, 1.510 mmol)を窒素下で添加した。さらに、10分間窒素下で超音波処理した後、濃厚な混合物を100℃で、窒素下で16時間撹拌した。混合物を冷却させ、ブライン(200 mL)とEtOAc(200 mL)との間で抽出した。有機層をさらにブライン(200 mL)で洗浄し、乾燥させた(Na2SO4)。フラッシュクロマトグラフィー(120 g, イソヘキサン中0〜100%の酢酸エチル)で、5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-N-(2-モルホリノエチル)-3-ニトロピリジン-2-アミン(4.55 g, 84%)を、明るい橙色の油性の固体として得た; m/z 348 (M+H)+ (ES+)。
5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-N2-(2-モルホリノエチル)ピリジン-2,3-ジアミン
【０１２０】
【化１６】
2018517672.tif 000024
【０１２１】
活性化カーボンタイプ87Lペースト(500 mg)上の5%パラジウムを、エタノール(100 mL)中の5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-N-(2-モルホリノエチル)-3-ニトロピリジン-2-アミンに添加した。混合物を、5バールの圧力で、一晩水素化した。LC-MSが、依然として22%の出発物質の存在を示すので、さらに4時間水素化した。混合物を濾過し、真空中で蒸発させた。粗生成物を、Companion上のクロマトグラフィー(120 gカラム, DCM中0〜10%のMeOH)によって精製して、5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-N2-(2-モルホリノエチル)ピリジン-2,3-ジアミン( mg, %)を暗緑色のガム質として得た; m/z 318 (M+H)+ (ES+)。
【０１２２】
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(1-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン-2-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス塩酸塩
【０１２３】
【化１７】
2018517672.tif 000025
【０１２４】
DMF(10 mL)中の5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-N2-(2-モルホリノエチル)ピリジン-2,3-ジアミン(0.2 g, 0.630 mmol)、3-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)-2-メチルプロパン酸(0.134 g, 0.630 mmol)及びHATU(0.359 g, 0.945 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.220 ml, 1.260 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を2M NaOH(30mL)で処理し、水で希釈し、ジエチルエーテル(2×150mL)抽出した。有機層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、圧力下で蒸発させて、中間体を茶色の油として得た。油を酢酸(2mL)中に溶解し、100℃まで一晩加熱した。混合物を乾燥状態まで蒸発させた。粗生成物を、Companion上でのクロマトグラフィー(40 gカラム, イソヘキサン中0〜100%の酢酸エチル)によって精製した。遊離塩基を酢酸エチル中1M HClで塩酸塩に変換させて、4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(1-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン-2-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス-塩酸塩1(160mg, 44%)を、クリーム色の固体として得た; Rt 1.53分; m/z 494 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 11.82 (s, 1H), 8.37 (d, 1H), 8.15 (d, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.10 - 7.00 (m, 2H), 4.79 (t, 2H), 4.09 - 3.92 (m, 2H), 3.91 - 3.80 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.77 - 3.71 (m, 1H), 3.69 - 3.59 (m, 1H), 3.59 - 3.45 (m, 1H), 3.41 - 3.29 (m, 1H), 3.27 - 3.13 (m, 3H), 3.17 (dd, 1H), 2.93 (dd, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.32 (d, 3H)。
【０１２５】
実施例2：4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン)
5-ブロモ-N2-(2-モルホリノエチル)ピリジン-2,3-ジアミン
【０１２６】
【化１８】
2018517672.tif 000026
【０１２７】
THF/水(120 mL)中の5-ブロモ-N-(2-モルホリノエチル)-3-ニトロピリジン-2-アミン(0.75 g, 2.265 mmol)に、濃水酸化アンモニウム水溶液(1.5 ml, 38.5 mmol)を添加し、次いで亜ジチオン酸ナトリウム(4.64 g, 22.65 mmol)を添加した。混合物を30分間撹拌し、次にEtOAc(100 mL)中に抽出した。有機層をブライン(100 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、真空中で蒸発させて、5-ブロモ-N2-(2-モルホリノエチル)ピリジン-2,3-ジアミン(500 mg, 1.577 mmol, 69.6 %の収率)を、ピンク色の油として得た; m/z 301/303 (M+H)+ (ES+)。
【０１２８】
4-(2-(6-ブロモ-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン
【０１２９】
【化１９】
2018517672.tif 000027
【０１３０】
EtOAc(4.89 ml, 8.30 mmol)中の2,4,6-トリプロピル-1,3,5,2,4,6-トリオキサトリホスフィナン 2,4,6-トリオキシドを、EtOAc(2 mL)中の5-ブロモ-N2-(2-モルホリノエチル)ピリジン-2,3-ジアミン(0.5 g, 1.660 mmol)、DIPEA(0.313 ml, 1.793 mmol)及び3-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン酸(0.355 g, 1.793 mmol)に添加した。得られた混合物を、80℃で4.5時間撹拌し、次に100℃で一晩撹拌した。混合物をNaHCO3(25 mL)、DCM(25 mL)で処理し、層をPhase Separatorカートリッジを通過させて分離した。酢酸(20 mL)を添加し、混合物を100℃で2.5日間撹拌した。混合物を真空中で蒸発させ、2N 水酸化ナトリウム(15 mL)及びDCM(20 mL)で処理した。有機層をPhase Separatorカートリッジを通して回収し、真空中で蒸発させて、赤色の油とした。粗生成物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー(40 gカラム, DCM中0〜4%のMeOH)によって精製して、4-(2-(6-ブロモ-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン(479 mg, 59%)を、淡い茶色の油として得た: m/z 463/465 (M+H)+ (ES+)。
【０１３１】
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン
【０１３２】
【化２０】
2018517672.tif 000028
【０１３３】
事前に超音波処理し窒素で脱気した、3:1の1,4-ジオキサン/水(5 mL)中のナトリウム(103 mg, 0.971 mmol)、4-(2-(6-ブロモ-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン(150 mg, 0.324 mmol)及び(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ボロン酸(82 mg, 0.583 mmol)の撹拌スラリーに、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0) (37.4 mg, 0.032 mmol)を、窒素下で添加した。さらに、10分間窒素下で超音波処理処理した後、濃厚な混合物を100℃で、窒素下で3時間撹拌した。混合物を室温まで冷却し、DCM(15 mL)とブライン(15 mL)との間で分配させ、有機層をPhase Separatorを通して回収し、真空中で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー(12 g, DCM中0〜3%のMeOH)で、4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン 2 (122 mg, 77%)を、淡黄色の油として得た; Rt 1.88分 （方法1）; m/z 480 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: :  8.28 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 1H), 7.12 - 7.05 (m, 2H), 4.36 (t, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.49 (t, 4H), 3.31 - 3.25 (m, 2H), 3.21 - 3.13 (m, 2H), 2.64 (t, 2H), 2.45 (t, 4H), 2.43 (s, 3H), 2.25 (s, 3H)。
【０１３４】
実施例3：4-(2-(4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール
5-ブロモ-3-ニトロ-N-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)ピリジン-2-アミン
【０１３５】
【化２１】
2018517672.tif 000029
【０１３６】
5-ブロモ-2-クロロ-3-ニトロピリジン(5.73 g, 24.15 mmol)を無水THF(50 ml, 610 mmol)及びTEA(10.10 ml, 72.4 mmol)中に窒素下で溶解し、2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エタンアミン塩酸塩(5 g, 30.2 mmol)を添加し、得られた懸濁液を室温で週末にかけて撹拌した。反応混合物を氷/水(100 ml)上へと注ぎ、得られた黄色の沈殿を濾過して取り除き、氷冷水(25 ml)で洗浄し、真空中で乾燥させて、(7.49 g, 92%)を明るい黄色の固体として得た; m/z 330/332 (M+H)+ (ES+)。
【０１３７】
5-ブロモ-N2-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)ピリジン-2,3-ジアミン
【０１３８】
【化２２】
2018517672.tif 000030
【０１３９】
5-ブロモ-3-ニトロ-N-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)ピリジン-2-アミン(3.5 g, 10.60 mmol)をEtOH(150 ml, 2569 mmol)中に溶解し、Pt-199(タイプ29)(350 mg, 10.60 mmol)を添加し、反応混合物を水素化容器中に置いた。反応混合物をH2(2バール)下に一晩置き、容器を2回、2バールまで再充填した。反応混合物を、セライト床を通過させて濾過し、EtOHでよくすすぎ、濾液を真空中で濃縮して、(3.19 g, 95%)を灰色の固体として得た; m/z 300/302 (M+H)+ (ES+)。
【０１４０】
6-ブロモ-2-(4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン
【０１４１】
【化２３】
2018517672.tif 000031
【０１４２】
5-ブロモ-N2-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)ピリジン-2,3-ジアミン(2 g, 6.33 mmol)、3-(4-メトキシフェニル)プロパン酸(1.369 g, 7.60 mmol)及びHATU(2.89 g, 7.60 mmol)を無水DMF(40 ml, 517 mmol)中に窒素下で溶解した。DIPEA(2.211 ml, 12.66 mmol)を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をEtOAc(250 ml)中に溶解し、水(50 ml)、飽和NaHCO3(50 ml)、水(50 ml)、ブライン(50 ml)で洗浄し、有機物をMgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、アミド中間体を得、それを氷AcOH(45 ml, 786 mmol)中に溶解し、100℃まで一晩加熱し、次に室温で週末にかけて加熱した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をEtOAc(200 ml)中に取り込み、NaHCO3(50 ml)、水(50 ml)、ブライン(50 ml)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、濃厚な茶色の油を得、それをCompanion上のクロマトグラフィー(80 g Graceカラム, EtOAc中0〜10%のMeCN, ドライロードした)によって精製して、6-ブロモ-2-(4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン(2.05 g, 38%)を赤色の油として得た; m/z 444/446 (M+H)+ (ES+)。
【０１４３】
4-(2-(4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール
【０１４４】
【化２４】
2018517672.tif 000032
【０１４５】
事前に超音波処理して窒素で脱気した、3:1の1,4-ジオキサン/水(4 mL)中の炭酸ナトリウム(179 mg, 1.688 mmol)、6-ブロモ-2-(4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン(250 mg, 0.563 mmol)及び(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ボロン酸(119 mg, 0.844 mmol)のスラリーに、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(65.0 mg, 0.056 mmol)を添加した。反応混合物を、100℃で窒素下で1時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を酢酸エチル(30ml)と水(10ml)との間で分配させた。有機相をブライン(2×10ml)で洗浄し、回収し、シリカ上に吸着させた。粗物質をクロマトグラフィー(4g シリカ, DCM中0〜10%のメタノール, グラジエント溶離)によって精製して、4-(2-(4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール3 (27 mg, 10%) を、粘着性のオフホワイト色の固体として得た。; Rt 2.06分; m/z 461 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 8.28 (d, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.22 (d, 2H), 6.85 (d, 2H), 4.23 (t, 2H), 3.82 (dd, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.28 - 3.22 (m, 2H), 3.22 - 3.17 (m, 2H), 3.16 - 3.10 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.65 (d, 2H), 1.62 - 1.55 (m, 2H), 1.55 - 1.46 (m, 1H), 1.20 (dd, 1H), 1.18 (dd, 1H)。
【０１４６】
実施例4：4-(2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール
【０１４７】
6-ブロモ-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン
【０１４８】
【化２５】
2018517672.tif 000033
【０１４９】
5-ブロモ-N2-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)ピリジン-2,3-ジアミン(0.6 g, 1.899 mmol)、3-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン酸(0.452 g, 2.279 mmol)及びHATU (0.866 g, 2.279 mmol)を、無水DMF (12 ml, 155 mmol)中に窒素下で溶解した。DIPEA(0.663 ml, 3.80 mmol)を添加して、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をEtOAc(125 ml)中に溶解し、水(25 ml)、飽和NaHCO3(25 ml)、水(25 ml)、ブライン(25 ml)で洗浄し、有機物をMgSO4上で蒸発させ、濾過し、真空中で濃縮して、アミド中間体を得、それを氷AcOH(25 ml, 437 mmol)中に溶解し、100℃まで一晩加熱し、次に室温で週末にかけて加熱した。反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をEtOAc(100 ml)中に取り込み、NaHCO3(25 ml)、水(25 ml)、ブライン(25 ml)で洗浄し、MgSO4上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、茶色の油を得た（990 mg）。LCMSは、これを〜95%生成物であると示した。粗生成物をCompanion上のクロマトグラフィー(40 gカラム, EtOAc中0〜5%のMeCN, ドライロードした)によって精製して、6-ブロモ-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン(562 mg, 57%)をピンク色の油として得た; m/z 462/464 (M+H)+ (ES+)。
【０１５０】
4-(2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール
【０１５１】
【化２６】
2018517672.tif 000034
【０１５２】
事前に超音波処理して窒素で脱気した、1,4-ジオキサン/水(3:1, 4 mL)中の炭酸ナトリウム(172 mg, 1.622 mmol)、6-ブロモ-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン(250 mg, 0.541 mmol)及び(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ボロン酸(114 mg, 0.811 mmol)のスラリーに、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(62.5 mg, 0.054 mmol)を添加した。反応混合物を100℃で窒素下で1時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を酢酸エチル(30ml)と水(10ml)との間で分配させた。有機相をブライン(2×10ml)で洗浄し、回収し、シリカ上へと吸着させた。粗物質をクロマトグラフィー(4g シリカ, DCM中0〜10%のメタノール, グラジエント溶離)によって精製し、次いで、SCXクロマトグラフィーによって精製して、4-(2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3-(2-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)エチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-6-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール4(34 mg, 13%)を、ガム質のオフホワイト色の固体として得た; Rt 2.11分 （方法1）; m/z 479 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 8.28 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.10 - 7.03 (m, 2H), 4.25 (t, 2H), 3.84 (dd, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.29 - 3.19 (m, 4H), 3.19 - 3.11 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.66 (d, 2H), 1.62 - 1.57 (m, 2H), 1.56 - 1.47 (m, 1H), 1.21 (dd, 1H), 1.17 (dd, 1H)。
【０１５３】
実施例5：4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)チオモルホリン-1,1-ジオキシド
4-(2-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド
【０１５４】
【化２７】
2018517672.tif 000035
【０１５５】
THF(50 mL)中の5-ブロモ-2-クロロ-3-ニトロピリジン(1.4 g, 5.90 mmol)及びTEA(1.644 ml, 11.79 mmol)に、THF(25 mL)中の4-(2-アミノエチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド(1.051 g, 5.90 mmol)を、氷浴中で、滴下によって添加し、得られた混合物を室温で19時間撹拌した。混合物を氷水(400 mL)上に注ぎ、黄色の沈殿を濾過して取り除き、水(100 mL)で洗浄し、真空オーブン中で乾燥させて、生成物を黄色の固体として得た。酸/塩基抽出で、出発物質を除去して、4-(2-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド(1.01 g, 45%)を、結晶性の黄色の固体として得た; m/z 379/381 (M+H)+ (ES+)。
【０１５６】
4-(2-((5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド
【０１５７】
【化２８】
2018517672.tif 000036
【０１５８】
事前に超音波処理して窒素で脱気した、1,4-ジオキサン/水(3:1, 40 mL)中の炭酸ナトリウム(0.847 g, 7.99 mmol)、4-(2-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン-1,1-ジオキシド(1.01 g, 2.66 mmol)及び(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ボロン酸(0.676 g, 4.79 mmol)の撹拌スラリーに、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(0.308 g, 0.266 mmol)を、窒素下で添加した。さらに、10分間窒素下で超音波処理処理した後、濃厚な混合物を100℃で、窒素下で3時間撹拌した。混合物を冷却させ、1M HClで酸性化し、酢酸エチル(100mL)で抽出した。水層を、2M NaOHで再度塩基性化し、EtOAc(200 mL)で抽出した。有機層をさらにブライン(200 mL)で洗浄し、乾燥させて(MgSO4)、4-(2-((5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド(1.03 g, 88%)を、茶色の粘着性の固体として得た; m/z 396 (M+H)+ (ES+)。
【０１５９】
4-(2-((3-アミノ-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド
【０１６０】
【化２９】
2018517672.tif 000037
【０１６１】
活性化カーボンタイプ87Lペースト(100 mg)上の5%パラジウムを、エタノール(50 mL)中の4-(2-((5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド(1.03 g, 2.60 mmol)に添加した。容器を、5バールの圧力で一晩H2で満たし、次に、混合物を、セライトを通して濾過し、真空中で蒸発させた。粗生成物をCompanion上でのクロマトグラフィー(40 gカラム, DCM中0〜10%のMeOH)によって精製して、4-(2-((3-アミノ-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド(0.44 g, 42%)を茶色のガム質として得た; m/z 366 (M+H)+ (ES+)。
【０１６２】
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)チオモルホリン-1,1-ジオキシド
【０１６３】
【化３０】
2018517672.tif 000038
【０１６４】
DMF(10 mL)中の4-(2-((3-アミノ-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド(0.21 g, 0.575 mmol)、3-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン酸(0.114 g, 0.575 mmol)及びHATU(0.328 g, 0.862 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.201 ml, 1.149 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を2M NaOH(30mL)で処理し、水で希釈し、ジエチルエーテル(2×150mL)(×2)で抽出した。有機層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、圧力下で蒸発させて、アミド中間体を得、それを酢酸(2mL)中に溶解し、100℃まで一晩加熱した。混合物を乾燥状態まで蒸発させ、残渣をCompanion上のフラッシュクロマトグラフィー(40 gカラム, DCM中0〜10%のMeOH)によって精製して、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー(イソヘキサン中0〜100%の酢酸エチル)によるさらなる精製によって、4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド(114 mg, 36%)を、オフホワイト色の固体として得た; Rt 1.89分 （方法1）; m/z 528 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 8.27 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.27 - 7.20 (m, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 2H), 4.36 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.31 - 3.24 (m, 2H), 3.19 - 3.12 (m, 2H), 2.98 (s, 8H), 2.86 (t, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。
【０１６５】
実施例6：2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(テトラヒドロフラン-3-イル)アセトアミド
tert-ブチル 2-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)アセタート
【０１６６】
【化３１】
2018517672.tif 000039
【０１６７】
水浴中で冷やしたTHF(50 mL)中の5-ブロモ-2-クロロ-3-ニトロピリジン(10 g, 42.1 mmol)とtert-ブチル 2-アミノアセタート塩酸塩(21.18 g, 126 mmol)との混合物に、THF(15 mL)中のTEA(29.4 ml, 211 mmol)を滴下によって添加した。得られた橙色の混合物を、室温で24時間撹拌し、次に氷水(250 mL)を添加した。黄色の沈殿をEtOAc(300 mL)中に抽出し、有機層をブライン(300 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、真空中で蒸発させて、tert-ブチル 2-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)アセタート(11.85 g, 83%)を茶色の油として得た; m/z 290/292 (M+H)+ (ES+)。
【０１６８】
tert-ブチル 2-((5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)アセタート
【０１６９】
【化３２】
2018517672.tif 000040
【０１７０】
事前に超音波処理して窒素で脱気した、1,4-ジオキサン/水(3:1, 100 mL)中の炭酸ナトリウム(7.51 g, 70.9 mmol)、tert-ブチル 2-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)アセタート(7.85 g, 23.63 mmol)及び(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ボロン酸(6.00 g, 42.5 mmol)の撹拌スラリーに、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(2.73 g, 2.363 mmol)を窒素下で添加した。さらに、10分間窒素下で超音波処理処理した後、濃厚な混合物を100℃で、窒素下で16時間撹拌した。混合物を冷却させ、水(200mL)で希釈し、EtOAc(200 mL)で抽出した。有機層をブライン(200 mL)でさらに洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濾過して取り除き、真空中で蒸発させた。粗生成物をシリカゲル上でのクロマトグラフィー(220gカラム, イソヘキサン中0〜100%のDCM)によって精製して、tert-ブチル 2-((5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)アセタート(4.28 g, 47%)を橙色の固体として得た; m/z 349 (M+H)+ (ES+)。
【０１７１】
tert-ブチル 2-((3-アミノ-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ピリジン-2-イル)アミノ)アセタート
【０１７２】
【化３３】
2018517672.tif 000041
【０１７３】
活性化カーボンタイプ87Lペースト(400 mg)上の5%パラジウムを、エタノール(50 mL)中のtert-ブチル 2-((5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)アセタート(4.14 g, 11.88 mmol)に添加した。容器を1バールの圧力で44時間にわたってH2で満たした。混合物を濾過し、真空中で蒸発させて、tert-ブチル 2-((3-アミノ-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ピリジン-2-イル)アミノ)アセタート(3.32 g, 86%)を、暗茶色の油として得た; m/z 319 (M+H)+ (ES+)。
【０１７４】
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)酢酸
【０１７５】
【化３４】
2018517672.tif 000042
【０１７６】
DMF(5 mL)中のtert-ブチル 2-((3-アミノ-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ピリジン-2-イル)アミノ)アセタート(1.2 g, 3.77 mmol)、3-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン酸(0.747 g, 3.77 mmol)及びHATU(2.150 g, 5.65 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(1.317 ml, 7.54 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を2M NaOH(30mL)で処理し、水で希釈し、ジエチルエーテル(2×150mL)(×2)で抽出した。有機層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、圧力下で蒸発させて、茶色の油として中間体を得た。油を酢酸(5mL)中に溶解し、100Cまで一晩加熱した。混合物を乾燥状態まで蒸発させ、残渣をCompanion上のクロマトグラフィー(40 gカラム, DCM中0〜10%のMeOH)によって精製して、2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)酢酸(0.675 g, 21%)を、暗緑色の固体として得た; m/z 425 (M+H)+ (ES+)。
【０１７７】
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(テトラヒドロフラン-3-イル)アセトアミド
【０１７８】
【化３５】
2018517672.tif 000043
【０１７９】
DMF(5 mL)中の2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)酢酸(0.075 g, 0.177 mmol)、テトラヒドロフラン-3-アミン(0.018 g, 0.212 mmol)及びHATU(0.101 g, 0.265 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.062 ml, 0.353 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を圧力下で蒸発させて、残渣を分取HPLC(Waters, Acidic (0.1% ギ酸), Acidic, Waters X-Select Prep-C18, 5μm, 19×50 mmカラム, 水中20〜50%のMeCN)によって精製して、2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(テトラヒドロフラン-3-イル)アセトアミド6 (25mg, 28%)を、淡いピンク色の固体として得た; Acidic, Rt 1.74分 （方法1）; m/z 494 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: : 8.73 (d, 1H), 8.27 (d, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.26 - 7.18 (m, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 2H), 4.98 (s, 2H), 4.31 - 4.21 (m, 1H), 3.86 - 3.81 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.74 (dd, 1H), 3.71 - 3.65 (m, 1H), 3.51 (dd, 1H), 3.18 - 3.09 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.20 - 2.05 (m, 1H), 1.84 - 1.69 (m, 1H)。
【０１８０】
7 4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(1-フェニルプロパン-2-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス-塩酸塩
【０１８１】
【化３６】
2018517672.tif 000044
【０１８２】
EtOAc (3151μl, 0.630 mmol)中の5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-N2-(2-モルホリノエチル)ピリジン-2,3-ジアミン(200 mg, 0.630 mmol)、2-メチル-3-フェニルプロパン酸(103 mg, 0.630 mmol)、T3P (EtOAc中50重量%)(938μl, 3.15 mmol)、DIPEA (121μl, 0.693 mmol)の混合物を、70℃で一晩添加した。混合物を、飽和NaHCO3水溶液(10 mL)で希釈し、酢酸エチル(15 mL)で抽出し、乾燥させ(MgSO4)、乾燥状態まで蒸発させた。油を氷酢酸(3 mL)中に再溶解し、100℃で16時間加熱した。混合物を室温まで冷却し、揮発油を真空中で除去した。粗生成物をCompanion上のクロマトグラフィー(12 gカラム, DCM中0〜10%のMeOHに次いで、イソヘキサン中0〜100%の酢酸エチル)によって精製した。酢酸エチル中1M HClを、酢酸エチル中の粗生成物に添加して、4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(1-フェニルプロパン-2-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス-塩酸塩(0.047 g, 14%)を、クリーム色の固体として得た; Rt 1.32分 （方法1）; m/z 442 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 11.63 (s, 1H), 8.35 (d, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.32 - 7.24 (m, 4H), 7.23 - 7.17 (m, 1H), 4.71 (t, 2H), 4.55 (s, 2H), 4.04 - 3.93 (m, 2H), 3.90 - 3.78 (m, 2H), 3.57 (dd, 2H), 3.49 - 3.38 (m, 1H), 3.28 - 3.11 (m, 3H), 3.00 (dd, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.36 (d, 3H)。
【０１８３】
実施例8：2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-(4-ヒドロキシピペリジン-1-イル)エタン-1-オン
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-(4-ヒドロキシピペリジン-1-イル)エタン-1-オン
【０１８４】
【化３７】
2018517672.tif 000045
【０１８５】
DMF(5 mL)中の2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)酢酸(0.075 g, 0.177 mmol)、ピペリジン-4-オール(0.021 g, 0.212 mmol)及びHATU(0.101 g, 0.265 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.062 ml, 0.353 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を圧力下で蒸発させた。粗残渣を、分取HPLC(Waters, Acidic (0.1% ギ酸), Acidic, Waters X-Select Prep-C18, 5μm, 19×50 mmカラム, 水中20〜50%のMeCN)によって精製し、次にシリカゲル上でのクロマトグラフィー(12 gカラム, DCM中0〜10%のMeOH)によって精製して、2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-(4-ヒドロキシピペリジン-1-イル)エタノン(15 mg, 17%)を、淡黄色の固体として得た; Rt 1.71分 （方法1）, m/z 508 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: : 8.25 (d, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.21 (dd, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 2H), 5.29 (d, 2H), 4.83 (d, 1H), 3.86 (dt, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 3.40 - 3.31 (m, 2H), 3.12 - 3.05 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.93 - 1.82 (m, 1H), 1.77 - 1.66 (m, 1H), 1.56 - 1.44 (m, 1H), 1.35 - 1.23 (m, 1H)。
【０１８６】
実施例9：1-(4-((2-(1-(4-クロロフェニル)プロパン-2-イル)-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-1-イル)メチル)ピペリジン-1-イル)エタン-1-オン 
1-(4-((2-(1-(4-クロロフェニル)プロパン-2-イル)-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-1-イル)メチル)ピペリジン-1-イル)エタン-1-オン
【０１８７】
【化３８】
2018517672.tif 000046
【０１８８】
DMF(5 mL)中の2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)酢酸(0.130 g, 0.306 mmol)、オキセタン-3-アミン(0.022 g, 0.306 mmol)及びHATU(0.175 g, 0.459 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.107 ml, 0.613 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を圧力下で蒸発させて、残渣を分取HPLC(Waters, Acidic (0.1% ギ酸), Acidic, Waters X-Select Prep-C18, 5μm, 19×50 mmカラム, 水中20〜50%のMeCN)によって精製して、2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(オキセタン-3-イル)アセトアミド(0.057 g, 37%)を淡い灰色の固体として得た; Rt 1.74分 （方法1）; m/z 480 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 9.23 (d, 1H), 8.26 (d, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.21 (dd, 1H), 7.12 - 7.03 (m, 2H), 5.01 (s, 2H), 4.87 - 4.77 (m, 1H), 4.73 (t, 2H), 4.46 (t, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.19 - 3.06 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。
【０１８９】
実施例10：4-(2-(1-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン-2-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール
4-(2-(1-(3-フルオロ-4-メトキシフェニル)プロパン-2-イル)-1-((テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)メチル)-1H-ベンゾ[d]イミダゾール-5-イル)-3,5-ジメチルイソオキサゾール
【０１９０】
【化３９】
2018517672.tif 000047
【０１９１】
DMF(5 mL)中のHATU(0.175 g, 0.459 mmol)、モルホリン(0.027 g, 0.306 mmol)及び2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)酢酸(0.130 g, 0.306 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.107 ml, 0.613 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を圧力下で蒸発させて、残渣を分取HPLC(Waters, Acidic (0.1% ギ酸), Acidic, Waters X-Select Prep-C18, 5μm, 19×50 mmカラム, 水中35〜65%のMeCN)によって精製して、2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-モルホリノエタノン(53mg, 4.4 %)を、淡いピンク色の固体として得た; Acidic, Rt 1.86分 (方法); m/z 494 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 8.24 (d, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.20 (dd, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 2H), 5.30 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.75 - 3.68 (m, 2H), 3.68 - 3.63 (m, 2H), 3.63 - 3.55 (m, 2H), 3.50 - 3.41 (m, 2H), 3.15 - 3.05 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。
【０１９２】
実施例11：4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド
4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド
【０１９３】
【化４０】
2018517672.tif 000048
【０１９４】
DMF(10 mL)中の4-(2-((3-アミノ-5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ピリジン-2-イル)アミノ)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド (0.21 g, 0.575 mmol)、3-(4-メトキシフェニル)プロパン酸(0.104 g, 0.575 mmol)及びHATU(0.328 g, 0.862 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.201 ml, 1.149 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を2M NaOH (30mL)で処理し、水で希釈し、ジエチルエーテル(2×150mL)で抽出した。有機層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、圧力下で蒸発させて、中間体を茶色の油として得た。油を酢酸(2mL)中に溶解し、100℃まで一晩加熱した。混合物を乾燥状態まで蒸発させ、残渣をCompanion上でのクロマトグラフィー(40 gカラム, DCM中0〜10%のMeOH)によって精製し、次いでフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製して、4-(2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)チオモルホリン 1,1-ジオキシド (142mg, 48%)を、オフホワイト色の固体として得た; Rt 1.83分 （方法1）; m/z 510 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 8.27 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 7.24 (d, 2H), 6.86 (d, 2H), 4.33 (t, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.30 - 3.21 (m, 2H), 3.19 - 3.11 (m, 2H), 2.97 (s, 8H), 2.84 (t, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.24 (s, 3H)。
【０１９５】
実施例12：4-(2-(2-(2-(1H-インドール-1-イル)エチル)-6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス-塩酸塩
4-(2-(2-(2-(1H-インドール-1-イル)エチル)-6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス-塩酸塩
【０１９６】
【化４１】
2018517672.tif 000049
【０１９７】
DMF(10 mL)中の5-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-N2-(2-モルホリノエチル)ピリジン-2,3-ジアミン(0.2 g, 0.630 mmol)、3-(1H-インドール-1-イル)プロパン酸(0.119 g, 0.630 mmol)及びHATU(0.359 g, 0.945 mmol)の撹拌溶液に、 DIPEA(0.220 ml, 1.260 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を2M NaOH (30mL)で処理し、水で希釈し、ジエチルエーテル(2×150mL)で抽出した。有機層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、圧力下で蒸発させて、中間体を茶色の油として得た。油を酢酸(2mL)中に溶解し、100℃まで一晩加熱した。混合物を乾燥状態まで蒸発させ、残渣をCompanion上のクロマトグラフィー(40 gカラム, DCM中0〜10%のMeOH)によって精製した。粗生成物を、酢酸エチル中1M HClで、そのHCl塩に変換させて、4-(2-(2-(2-(1H-インドール-1-イル)エチル)-6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)エチル)モルホリン ビス-塩酸塩 (142 mg, 41%)を、褐色のガム質として得た;生成物を、LCMS (Agilent, X-Select, Waters X-Select C18, 2.5μm, 4.6×30 mm, Acidic (0.1% ギ酸) 4分法, 5〜95% MeCN/水)によって解析した: Rt 1.44分 （方法1）; m/z 471 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 11.28 (s, 1H), 8.36 (d, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.59 - 7.54 (m, 2H), 7.50 (d, 1H), 7.14 (ddd, 1H), 7.04 (ddd, 1H), 6.46 (dd, 1H), 4.81 (t, 2H), 4.65 (t, 2H), 3.97 (d, 2H), 3.75 (t, 2H), 3.59 (t, 2H), 3.52 (d, 2H), 3.43 (t, 2H), 3.10 (s, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.26 (s, 3H)。
【０１９８】
実施例13：2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アセトアミド
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アセトアミド
【０１９９】
【化４２】
2018517672.tif 000050
【０２００】
DMF(5 mL)中の2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)酢酸(0.130 g, 0.306 mmol)、テトラヒドロ-2H-ピラン-4-アミン(0.031 g, 0.306 mmol)及びHATU(0.175 g, 0.459 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.107 ml, 0.613 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を圧力下で蒸発させ、残渣を分取HPLC(Waters, Acidic (0.1% ギ酸), Acidic, Waters X-Select Prep-C18, 5μm, 19×50 mmカラム, 水中20〜50%のMeCN)によって精製して、2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-N-(テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イル)アセトアミド(21mg, 13%)を、淡いピンク色の固体として得た; Rt 1.78分 （方法1）; m/z 508 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 8.49 (d, 1H), 8.28 (d, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.12 - 7.04 (m, 2H), 4.99 (s, 2H), 3.86 - 3.81 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.80 - 3.73 (m, 1H), 3.34 (td, 2H), 3.20 - 3.07 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.72 (dd, 2H), 1.50 - 1.37 (m, 2H)。
【０２０１】
実施例14：(2S,6R)-4-(1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-イル)-2,6-ジメチルモルホリン
1-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)プロパン-2-オール
【０２０２】
【化４３】
2018517672.tif 000051
【０２０３】
THF(10 mL)中の1-アミノプロパン-2-オール(3.25 ml, 42.1 mmol)を、氷水(50 mL)中で冷却したTHF(50 mL)中の5-ブロモ-2-クロロ-3-ニトロピリジン(5 g, 21.06 mmol)に添加したところ、黄色の溶液がもたらされ、次に室温で16時間であった。橙色の溶液を氷水(300 mL)上に注ぎ、沈殿を15分間撹拌し、濾過して取り除いて、乾燥した後に、1-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)プロパン-2-オール(5.81 g, 100%)を明るい橙色の固体として得た; m/z 277/279 (M+H)+ (ES+)。
【０２０４】
1-((3-アミノ-5-ブロモピリジン-2-イル)アミノ)プロパン-2-オール
【０２０５】
【化４４】
2018517672.tif 000052
【０２０６】
THF/水(12 mL)中の1-((5-ブロモ-3-ニトロピリジン-2-イル)アミノ)プロパン-2-オール(3.5 g, 12.68 mmol)に、濃アンモニア水溶液(0.494 ml, 12.68 mmol)を添加し、次いで亜ジチオン酸ナトリウム(26.0 g, 127 mmol)を添加した。混合物を室温で16時間撹拌した後、吸引下で乾燥状態まで蒸発させた。固体を酢酸エチル(300ml)中で30分間スラリー状にした後、濾過して取り除いた。これをもう一度繰り返して、1-((3-アミノ-5-ブロモピリジン-2-イル)アミノ)プロパン-2-オール(1.68 g, 6.35 mmol, 50.1 %の収率)を、クリーム色の蝋状の固体として得た; m/z 247/249 (M+H)+ (ES+)。
【０２０７】
1-(6-ブロモ-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オール
【０２０８】
【化４５】
2018517672.tif 000053
【０２０９】
DMF(25 mL)中の1-((3-アミノ-5-ブロモピリジン-2-イル)アミノ)プロパン-2-オール(1.6 g, 6.50 mmol)、3-(4-メトキシフェニル)プロパン酸(1.757 g, 9.75 mmol)及びHATU(3.71 g, 9.75 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(2.271 ml, 13.00 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で72時間撹拌し、次にさらに3-(4-メトキシフェニル)プロパン酸(1.757 g, 9.75 mmol)、HATU(3.71 g, 9.75 mmol)及びDIPEA(2.271 ml, 13.00 mmol)を添加し、撹拌を室温で一晩継続した。混合物を2M NaOH(30 mL)で処理し、水で希釈し、ジエチルエーテル(2×150mL)で抽出した。有機層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、圧力下で蒸発させて粗アミド中間体を得、それを氷酢酸(20 ml, 5.51 mmol)に再溶解し、100℃で、窒素下で20時間加熱した。混合物を冷却し、乾燥状態まで蒸発させた。混合物をDCM(100mL)で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(100mL)で洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、蒸発させて中間体を得た。中間体をメタノール(30mL)中に溶解し、炭酸カリウム(3.81 g, 27.6 mmol)で処理した後、室温で30分間撹拌した。混合物を乾燥状態まで蒸発させ、酢酸エチル(100mL)中に再溶解し、水(100mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、乾燥状態まで蒸発させ、ジエチルエーテルで粉砕して、1-(6-ブロモ-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オール(1.635 g, 33%)を、淡い紫色の固体として得た; m/z 390/392 (M+H)+ (ES+)。
【０２１０】
1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オール
【０２１１】
【化４６】
2018517672.tif 000054
【０２１２】
事前に超音波処理して窒素で脱気した、1,4-ジオキサン/水(4:1, 40 mL)中の炭酸ナトリウム(1.332 g, 12.57 mmol)、1-(6-ブロモ-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オール(1.635 g, 4.19 mmol)及び(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)ボロン酸(1.063 g, 7.54 mmol)の撹拌スラリーに、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(0.484 g, 0.419 mmol)を窒素下で添加した。さらに、10分間窒素下で超音波処理処理した後、濃厚な混合物を、90℃で、窒素下で16時間撹拌した。混合物を冷却させ、ブライン(20 mL)とEtOAc(20 mL)との間で抽出した。有機層をさらにブライン(20 mL)で洗浄し、乾燥させ(Na2SO4)、真空中で蒸発させた。粗生成物を、Companion上のクロマトグラフィー(80 gカラム, イソヘキサン中0〜100%の酢酸エチル)によって精製して、1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オール(1.32 g, 68%)を、クリーム色の固体として得た; m/z 407.1 (M+H)+ (ES+)。
【０２１３】
1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オン
【０２１４】
【化４７】
2018517672.tif 000055
【０２１５】
DCM(40 ml, 8.00 mmol)中の1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オール(1.32 g, 3.25 mmol)とDMP(4.13 g, 9.74 mmol)との混合物を、室温で72時間撹拌した。さらにDMP(0.5モル当量)を添加し、混合物を16時間撹拌した。2 MのNaHCO3水溶液を、発泡が止まるまで添加した。層を分離し、水層をDCM(3×100 mL)で抽出した。組み合わされた有機層をブライン(100 mL)で洗浄し、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、真空中で還元して、黄色の固体を得、それをCompanion上でのクロマトグラフィー(80 gカラム, イソヘキサン中0〜100%の酢酸エチル)で精製して、1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オン(1.3 g, 79%)を、白色の固体として得た; m/z 405 (M+H)+ (ES+)。
【０２１６】
(2S,6R)-4-(1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-イル)-2,6-ジメチルモルホリン
【０２１７】
【化４８】
2018517672.tif 000056
【０２１８】
1,2-ジクロロエタン(5ml)中の1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-オン(150 mg, 0.371 mmol)、(2S,6R)-2,6-ジメチルモルホリン(128 mg, 1.113 mmol)及びチタンイソプロポキシド(329μl, 1.113 mmol)の溶液を、80℃まで16時間加熱した。混合物をチタンイソプロポキシド(329μl, 1.113 mmol)で処理し、さらに4時間加熱した。室温まで冷却した後、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド(236 mg, 1.113 mmol)を添加し、反応混合物を室温で16時間撹拌した。飽和NaHCO3水溶液(10ml)を添加し、混合物を10分間撹拌した後、有機相を、PhaseSepカートリッジを介して回収した。シリカを添加し、溶剤を真空中で除去した。粗物質をクロマトグラフィー(12g シリカ, DCM中0〜10%のメタノール, グラジエント溶離)によって精製して、次に分取HPLC(Varian, Acidic (0.1% ギ酸), Acidic, Waters X-Select Prep-C18, 5μm, 19×50 mmカラム, 水中15〜35%のMeCN)によって精製した。単離された画分を真空中で蒸発させ、固体を酢酸エチル中の1M HClに溶解して、(2R,6S)-4-(1-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)プロパン-2-イル)-2,6-ジメチルモルホリン ビス-塩酸塩(28mg, 12%)を、淡い茶色の固体として得た; Rt 1.73分（方法1）; m/z 504 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 8.29 (d, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.28 (d, 2H), 6.87 (d, 2H), 4.80 (dd, 1H), 4.54 (dd, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.83 - 3.76 (m, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.37 - 3.28 (m, 3H), 3.24 - 3.16 (m, 3H), 2.75 (t, 1H), 2.71 - 2.62 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.19 (d, 3H), 1.18 (d, 3H), 1.16 (d, 3H)。
【０２１９】
実施例15：2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エタン-1-オン
2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エタン-1-オン
【０２２０】
【化４９】
2018517672.tif 000057
【０２２１】
DMF(5 mL)中の2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)酢酸(0.130 g, 0.306 mmol)、ピロリジン-3-オール(0.027 g, 0.306 mmol)及びHATU(0.175 g, 0.459 mmol)の撹拌溶液に、DIPEA(0.107 ml, 0.613 mmol)を滴下によって添加し、得られた茶色の溶液を室温で16時間撹拌した。混合物を圧力下で蒸発させ、残渣を分取HPLC(Waters, Acidic (0.1% ギ酸), Acidic, Waters X-Select Prep-C18, 5μm, 19×50 mmカラム, 水中20〜50%のMeCN)によって精製して、2-(6-(3,5-ジメチルイソオキサゾール-4-イル)-2-(3-フルオロ-4-メトキシフェネチル)-3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-3-イル)-1-(3-ヒドロキシピロリジン-1-イル)エタノン(45mg, 28%)を、水色の固体として得た; Rt 1.64分 （方法1）; m/z 494 (M+H)+ (ES+); 1H NMR (d6-DMSO) δ: 8.24 (dd, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.11 - 7.05 (m, 2H), 5.77 (s, 1H), 5.26 - 5.01 (m, 3H), 4.44 (s, 0.5H), 4.30 (s, 0.5H), 3.81 (s, 3H), 3.79 - 3.69 (m, 2H), 3.55 - 3.42 (m, 1H), 3.12 (s, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.09 - 1.75 (m, 2H)。
【０２２２】
実施例16：生物学的試験
EP300及びBRD4 BD1への結合の表面プラズモン共鳴（BIAcore）解析
EP300及びBRD4への化合物の結合のBIAcoreデータを、T200 BIAcore装置を4℃で使用して取得した。His-tagged EP300ブロモドメイン（1046-1163）及びBRD4ブロモドメイン1（49-170）タンパク質を、キャプチャー法及びアミンカップリング法の組み合わせを介してNTAチップ上に捕捉した。NTA基を最初に30mM塩化ニッケルでキレート化し、次に0.2 M N-エチル-N'-(ジエチルアミノプロピル)-カルボジイミド（EDC）及び0.05M N-ヒドロキシコハク酸イミド（NHS）で活性化した。
PBS 0.05% Tween-20中9.6μMに希釈されたブロモドメインタンパク質を10μl/分で注入し、共有結合させた。エタノールアミン注入は、表面上の未反応部分をキャップして、カップリングしていないタンパク質を除去するために実施した。典型的な固定化は、表面上に〜2〜4kRUの固定化タンパク質をもたらした。
試験化合物を、ランニングバッファー（0.005% Tween-20を含むPBS, 0.1% DMSO）中1、10、100、1000及び10000 nMの溶液を得るために、段階希釈した。試験は、終始90μL/分の流量を使用して、ランニングバッファーの5回繰り返しの注射からなるバッファーでの空試験を点在させた、化合物の濃度を上昇させながらの注射から構成された。
1:1 相互作用モデルを使用してBIAevaluation（GE Healthcare）でセンサーグラムを解析してka及びkd値を得、結合の結合の速度論を説明した。KD値は、kd及びkaの商から導き出した。全ての化合物を、EP300及びBRD42ブロモドメイン表面に対して2回試験し、速度論及び親和性パラメーターの幾何平均を得た。試験した全ての化合物が、0.5〜10,000 nMの範囲内のKD値を示した。
【０２２３】
細胞生存率解析
22Rv1細胞株はATCC（UK）から取得し、供給者の推奨法に従って培養した。代表的な化合物の細胞増殖阻害活性を、CellTiter-Glo（登録商標） Luminescent Cell Viability Assayキット（Promega, USA）を使用して決定した。
22Rv1細胞を、10% ウシ胎児血清、2mM グルタミン、1mM ピルビン酸ナトリウム及び100ユニットのペニシリン-100μg のストレプトマイシンを含有するRPMI 1640培地中で維持した。細胞を、37℃で、95% O2及び5% CO2の加湿雰囲気下でインキュベートした。2000個の細胞を、Poly-D-リジン（PDL）コーティングした96ウェルの黒色の透明底プレート（VWR, UK）の各ウェル当たり、50μLの増殖培地中に播種した。48時間後、培地を除去し、希釈した試験化合物を含有する増殖培地で置換した。化合物の希釈は、DMSO貯蔵液を10mMの最高濃度から半分ログ（half log）間隔で、合計7回希釈分を段階希釈することによって行った。各希釈時点の1μlのアリコートを、99μlの増殖培地に添加して、50μLを細胞を含む各ウェルに添加し、最高濃度の時点（1% DMSO）で、100μMの化合物を供給した。1% DMSO処理細胞が、ハイコントロールの役割を果たした。
細胞をさらに72時間、37℃でインキュベートし、細胞生存率をCellTiter-Glo（登録商標） Luminescent Cell Viability Assayを、製造者の指示に従って使用して決定した。簡単には、増殖培地の容積と等量のCellTiter-Glo（登録商標）試薬を、各ウェルに添加した。プレートをおよそ2分間振とうさせ、室温（22oC）で10分間インキュベートした。発光シグナルをEnvisionプレートリーダーを、1秒／ウェルのインテグレーションタイムで使用して測定した。
全データを、６つのハイコントロールの平均値に対して適合させた。最大半抑制濃度（IC50）を、Dotmaticsソフトウェア（UK）を使用して、データを4パラメーターのロジスティック曲線にフィットさせて算出した。試験した全ての化合物が、100nM〜100μM、典型的には100nM〜30μM、の範囲内、のIC50値を示した。
細胞ベースのアッセイは、系の複雑性が原因で、いくらかの変動性を示す可能性があり、アッセイの条件を変動させるために、これらのアッセイの結果も変動し得ることが理解される。いくらかのレベルの細胞増殖阻害は、化合物が特定の細胞におけるいくらかの阻害活性を有することを意味している一方で、試験した最も高い濃度未満での阻害の欠如は必ずしも化合物が細胞に対して阻害活性を有していないことを示すものではない。
【０２２４】
実施例17：錠剤の組成
それぞれ0.15 gの重さで、25 mgの本発明の化合物を含有する錠剤は、以下の通りに製造される：
10,000個の錠剤の組成
本発明の化合物（250 g）
乳糖（800 g）
トウモロコシデンプン（415g）
タルク粉末（30 g）
ステアリン酸マグネシウム（5 g）
本発明の化合物、乳糖及びトウモロコシデンプンの半分を混合する。混合物を次に、0.5 mmの網目サイズの篩を押し通す。トウモロコシデンプン（10 g）を温かい水（90 ml）に懸濁する。得られたペーストを使用して、粉末を顆粒化する。顆粒を乾燥させ、1.4 mmの網目サイズの篩上で、小さな断片へと粉砕する。残りの分量のデンプン、タルク及びマグネシウムを添加し、注意深く混合し、錠剤へと加工する。
【０２２５】
実施例18：注射用処方物
本発明の化合物                      200 mg
塩化水素水溶液0.1M又は
水酸化ナトリウム水溶液0.1M適量     pH4.0〜7.0に調製
滅菌水適量                          10 mLに調製
本発明の化合物を水の大半（35°-40℃）中に溶解し、pHを必要に応じて塩化水素又は水酸化ナトリウムで4.0〜7.0の間に調整する。次にバッチの容積を水で整え、滅菌ミクロポアフィルターを通して、滅菌した10 mLの琥珀色のガラスバイアル（タイプ1）中に濾過し、滅菌した栓及びオーバーシールで密封する。
【０２２６】
実施例19：筋肉内注射剤
本発明の化合物                            200 mg
ベンジルアルコール                        0.10 g
グリコフロール75                          1.45 g
注射剤に適量の水                          3.00 mLに調製
本発明の化合物を、グリコフロール中に溶解する。次にベンジルアルコールを添加して溶解させ、水を3 mlになるまで添加する。次に混合物を滅菌ミクロポアフィルターを通して濾過し、滅菌した3 mlのガラスバイアル（タイプ1）中に密封する。
【０２２７】
実施例20：シロップ処方物
本発明の化合物                            250 mg
ソルビトール溶液                          1.50 g
グリセロール                              2.00 g
安息香酸ナトリウム                        0.005 g
香料                                      0.0125 mL
純水適量                                  5.00 mLに調製
本発明の化合物をグリセロールと純水の大半との混合物中に溶解する。次に、その溶液に、安息香酸ナトリウムの水溶液を添加し、次いで、ソルビトール溶液を添加し、最後に香料を添加する。容積を純水で調整し、よく混合する。
【国際調査報告】
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