(57)【要約】抗ＣＤ４７抗体分子、該抗体分子の製造、並びにＣＤ４７発現に関連した障害、例えば、ある種の血液のがん及び固形腫瘍の治療における使用が開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗ＣＤ４７抗体分子であって、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含んでなる抗体分子。
【請求項２】
配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含んでなる単離された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる組成物。
【請求項３】
単離された抗ＣＤ４７抗体分子であって、配列番号４に記載のアミノ酸配列の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号６に記載のアミノ酸配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる抗体分子。
【請求項４】
野生型又は突然変異型のＩｇＧ１重鎖定常領域をさらに含んでなる請求項１又は請求項３に記載の単離された抗ＣＤ４７抗体分子。
【請求項５】
野生型又は突然変異型のＩｇＧ４重鎖定常領域をさらに含んでなる請求項１又は請求項３に記載の単離された抗ＣＤ４７抗体分子。
【請求項６】
ＩｇＧ４重鎖定常領域は、Ｓ２２８Ｐ置換及びＬ２３５Ｅ置換のうち一方又は両方を含んでなる、請求項５に記載の単離された抗ＣＤ４７抗体分子。
【請求項７】
配列番号４に記載のアミノ酸配列の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号６に記載のアミノ酸配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）を有している単離された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる組成物。
【請求項８】
抗ＣＤ４７抗体分子は野生型又は突然変異型のＩｇＧ１重鎖定常領域をさらに含んでなる請求項２又は請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
抗ＣＤ４７抗体分子は野生型又は突然変異型のＩｇＧ４重鎖定常領域をさらに含んでなる請求項２又は請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
ＩｇＧ４重鎖定常領域は、Ｓ２２８Ｐ置換及びＬ２３５Ｅ置換のうち一方又は両方を含んでなる、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
配列番号１５、配列番号２３、配列番号２４又は配列番号２５に記載のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１６又は配列番号２６に記載のアミノ酸配列の軽鎖とを含んでなる単離された抗ＣＤ４７抗体分子。
【請求項１２】
配列番号１５、配列番号２３、配列番号２４又は配列番号２５に記載のアミノ酸配列の重鎖及び配列番号１６又は配列番号２６に記載のアミノ酸配列の軽鎖を含んでなる単離された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる組成物。
【請求項１３】
治療（又は予防）を必要とする対象者のがんを治療する（又は予防する）方法であって、単離された抗ＣＤ４７抗体分子を含んでなる組成物を対象者に投与することを含んでなる方法。
【請求項１４】
治療（又は予防）を必要とする対象者のがんを治療する（又は予防する）方法であって、請求項２、７又は１２のいずれか１項に記載の組成物を対象者に投与することを含んでなる方法。
【請求項１５】
前記組成物は、腸管外、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、結腸内、頚管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、脊髄内、滑液内、直腸、口腔、舌下、鼻腔内、又は経皮的な送達によって投与される、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
組成物は皮下に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
組成物は静脈内に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
組成物は化学療法剤又は治療用抗体分子と組み合わせて投与される、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
組成物はオプソニン化抗体分子と組み合わせて投与される、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
オプソニン化抗体分子は、抗ＣＤ１９抗体分子、抗ＣＤ２０抗体分子、又は抗ＣＤ３８抗体分子である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
オプソニン化抗体分子は抗ＣＤ２０抗体分子である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗体分子はリツキシマブである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
がんは血液がんである、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
血液がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ‐ＡＬＬ、Ｂ‐ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、例えば形質転換型ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、末梢性Ｔ細胞性リンパ腫及びバーキットリンパ腫）、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、ＳＬＬ、辺縁帯リンパ腫、ＣＮＳリンパ腫、リヒター症候群、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性赤血球増加、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ＭＧＵＳ、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、及び未分化大細胞リンパ腫で構成される群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
血液がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、例えば形質転換型ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、及びバーキットリンパ腫）、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、リヒター症候群、及び多発性骨髄腫で構成される群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
血液がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又はバーキットリンパ腫である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
がんは固形腫瘍である、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
がんは、肺（例えば非小細胞肺がん、小細胞肺がん）、膵臓、乳房、肝臓、卵巣、精巣、腎臓、膀胱、脊椎、脳、頚部、子宮内膜、結腸／直腸、肛門、食道、胆嚢、胃腸管、皮膚、前立腺、脳下垂体、胃、子宮、膣、及び甲状腺で構成される群から選択された組織のがんである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
がんは腹水を伴い、かつ任意選択で、卵巣の腺癌、子宮の腺癌、乳房の腺癌、結腸の腺癌、胃の腺癌、及び膵臓の腺癌で構成される群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
がんは、膵臓がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、結腸がん、前立腺がん、及び子宮がんで構成される群から選択される、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
抗ＣＤ４７抗体分子をコードしている単離核酸分子であって、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）をコードする核酸配列を含んでなる単離核酸分子。
【請求項３２】
核酸は、配列番号４に記載のアミノ酸配列の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号６に記載のアミノ酸配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる抗ＣＤ４７抗体分子をコードする、請求項３１に記載の単離核酸分子。
【請求項３３】
核酸は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列の重鎖及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列の軽鎖を含んでなる抗ＣＤ４７抗体分子をコードする、請求項３１又は３２に記載の単離核酸分子。
【請求項３４】
請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子を含んでなるベクター。
【請求項３５】
請求項３４に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は概して、分子生物学、免疫学及び腫瘍学に関し、より具体的には、本発明はＣＤ４７に結合する抗体に関する。
【背景技術】
【０００２】
インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）、卵巣がん抗原ＯＡ３、Ｒｈ関連抗原及びＭＥＲ６としても知られる膜貫通型タンパク質ＣＤ４７は、細胞の移動、接着及びＴ細胞機能を含む多数の細胞プロセスに関与する、免疫グロブリンスーパーファミリーの一員である。ＣＤ４７は当初ヒト卵巣がん上の腫瘍抗原として同定され、その後血液系腫瘍及び固形腫瘍の両方を含む多数のヒトの腫瘍型において発現されることが示された。ＣＤ４７と、マクロファージ上で発現される阻害タンパク質であるシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用は、ＣＤ４７を発現している細胞の貪食を防止する。ＣＤ４７は事実上すべての非悪性細胞上に低レベルで発現されており、かつ発現の喪失又は細胞膜分布状態の変化は、特に赤血球（ＲＢＣ）において、老齢細胞又は損傷細胞のマーカーとしての役割を果たす可能性がある。
【０００３】
しかしながら、がん細胞上でのＣＤ４７の高発現は、貪食による取り込み、その後の抗原クロスプレゼンテーション及びＴ細胞活性化を阻止し、このことは総体として腫瘍の免疫回避に寄与する。ある種のヒト白血病は、ＣＤ４７をアップレギュレートしてマクロファージによる殺滅を回避する（特許文献１）。数多くの血液がんにおいて、ＣＤ４７の高発現は臨床転帰不良に関係していると考えられている（例えば非ホジキンリンパ腫、急性リンパ性白血病など）（特許文献２）。同様に、ＣＤ４７の高発現は、小細胞肺がんのような固形腫瘍においても観察されてきた（非特許文献１を参照のこと）。ＣＤ４７‐ＳＩＲＰα相互作用を阻止する作用薬は、ＣＤ４７＋標的細胞の貪食による取り込みを回復し、かつマクロファージ活性化のための閾値を下げる可能性があり、このことは、ＡＤＣＣを可能にする活性を備えた治療用抗体の効力を増強する可能性がある。
【０００４】
今日まで為された進歩にもかかわらず、高レベルのＣＤ４７発現に関係している、がんを含む様々な疾患の治療に使用するための、ＣＤ４７‐ＳＩＲＰα相互作用を阻止するさらなる作用薬が、なおも継続して必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第８，５６２，９９７号明細書
【特許文献２】米国特許第９，０４５，５４１号明細書
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】ワイスコフ（Weiskopf）ら、ザ・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（J. CLIN. INVESTIGATION）、２０１６年、第１２６巻、第７号、ｐ．２６１０−２６２０
【発明の概要】
【０００７】
現在までに開発された多くのＣＤ４７抗体は、細胞の凝集、例えばヒト赤血球の血球凝集を引き起こすことが報告されている（特許文献２を参照）。結果として、細胞（例えば赤血球）の凝集は、この特徴を有する抗ＣＤ４７抗体の治療的有用性を制限する可能性がある。本発明は、ＣＤ４７に結合してＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を妨害するが、抗ＣＤ４７抗体を用いた治療を必要とする対象者、例えばがん（例えば血液がん又は固形腫瘍）の対象者に該抗体が投与される用量では血球凝集活性をほとんど又は全く有していない、抗体を提供する。
【０００８】
本発明は、一部には、ヒトＣＤ４７に高い親和性で結合し、ＣＤ４７‐ＳＩＲＰα相互作用を阻止し、かつＣＤ４７を発現するがん細胞のマクロファージ媒介性の貪食クリアランスを促進すると同時に赤血球の血球凝集をほとんど又は全く引き起こさない、一連の抗体分子の開発及び特徴解析に基づいている。本明細書中に開示される抗ＣＤ４７抗体分子は、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、及びバーキットリンパ腫のモデルにおいて、単一剤として、及びオプソニン化抗体と組み合わされて、顕著な腫瘍成長阻害を示す。本明細書中に開示される抗ＣＤ４７抗体分子は、がん及び前がん状態のような障害の治療、予防及び診断のうち少なくともいずれかを行うために（単独で、又は他の作用薬若しくは治療手段との組み合わせで）使用可能である。本明細書中に記載されるＣＤ４７抗体は、がん又は前がん病変の１以上の症状について、治療し、進行を遅延させ、再発を防止し、又は緩和するのに有用であり、かつ血液系の悪性病変及び腫瘍のうち少なくともいずれかを治療するのに有用である。
【０００９】
ある実施形態では、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子は、赤血球、例えばヒト赤血球の、顕著な、又は検出可能な血球凝集を引き起こすことなく、ＣＤ４７とその同系のＳＩＲＰαリガンドとの間の相互作用を阻止することが可能である。例えば、該抗体分子は、基準の抗ＣＤ４７抗体よりも少ないヒト赤血球の血球凝集しか引き起こさないか、又は基準の抗ＣＤ４７抗体に対して、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％若しくは１０％未満若しくはさらに少ないヒト赤血球の血球凝集しか引き起こさない。典型的な基準の抗体には、Ｂ６Ｈ１２、ＭＡＢＬ、ＢＲＩＣ１２６、及びＣＣ２Ｃ６が挙げられる。
【００１０】
一実施形態では、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子は、有意レベルの赤血球の血球凝集誘発を伴わないＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の強力な阻止、及び、強力な抗がん活性を引き起こす。例えば、記載された抗ＣＤ４７抗体分子は、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子の非存在下でのＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用のレベルと比較して、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％を阻止する。任意選択で、該抗体分子はさらに、基準の抗ＣＤ４７抗体よりも少ないヒト赤血球の血球凝集しか引き起こさないか、又は基準の抗ＣＤ４７抗体に対して９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、若しくは１０％未満若しくはさらに少ないヒト赤血球の血球凝集しか引き起こさない。典型的な基準の抗体には、Ｂ６Ｈ１２、ＭＡＢＬ、ＢＲＩＣ１２６、及びＣＣ２Ｃ６が挙げられる。
【００１１】
１つの実施形態では、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子は、有意又は検出可能なレベルまでは赤血球を貪食しない。別の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、例えば本明細書中に記載された貪食アッセイによって決定されるように、赤血球に対する貪食活性を基準の抗ＣＤ４７抗体に対して低減した（例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％低減した）。典型的な基準の抗体には、Ｂ６Ｈ１２、ＭＡＢＬ、ＢＲＩＣ１２６、及びＣＣ２Ｃ６が挙げられる。
【００１２】
別の実施形態では、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子はマクロファージ活性を増強する。例えば、該抗体分子は、マクロファージ、例えば極性化されていないマクロファージ、又はＭ１若しくはＭ２極性化マクロファージの、貪食活性を増強する。１つの実施形態では、貪食活性は、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子の非存在下でのマクロファージに対して、例えば１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％増強される。
【００１３】
１つの実施形態では、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子は、がん細胞、例えばＡＭＬ細胞に対するマクロファージの貪食活性を増強する。１つの実施形態では、貪食活性は、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子の非存在下でのマクロファージに対して、例えば１％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％増強される。
【００１４】
１つの実施形態では、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子は、オプソニン化抗体（例えば、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ３８抗体、又は抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体抗体のうち１又は複数）と組み合わせて使用された時、その組み合わせの抗腫瘍効果を各抗体の個々での抗腫瘍効果に比べて増強する。別の実施形態では、組み合わせの抗腫瘍効果は、抗ＣＤ４７抗体分子又はオプソニン化抗体のいずれかの個々での活性に比べて、例えば１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％若しくはそれ以上増強される。
【００１５】
１つの態様では、抗ＣＤ４７抗体分子は、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、並びに配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含んでなる。
【００１６】
実施形態において、本発明の抗体分子は（ａ）及び（ｂ）のうち一方又は両方を含んでなり、（ａ）及び（ｂ）は以下のとおり、すなわち：
（ａ）（ｉ）配列番号１６に由来する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であって、例えばチョシア（Chothia ）又はカバット（Kabat ）による軽鎖ＣＤＲ、
（ａ）（ｉｉ）配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１１の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ３、
（ａ）（ｉｉｉ）軽鎖ＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であって、総体として（ａ）（ｉ）及び（ａ）（ｉｉ）の軽鎖ＣＤＲとの相違が１、２、３、４、５、又は６アミノ酸残基以下であるもの；
（ａ）（ｉｖ）配列番号６の軽鎖可変領域；
（ａ）（ｖ）配列番号６の抗原結合性フラグメント；
（ａ）（ｖｉ）アミノ酸配列であって（ａ）（ｉｖ）又はａ）（ｖ）の配列との相違が１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０残基以下であるもの；
（ａ）（ｖｉｉ）アミノ酸配列であって（ａ）（ｉｖ）又は（ａ）（ｖ）の配列とほぼ同一である（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である）もの；並びに
（ｂ）（ｉ）配列番号１５に由来する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であって、例えばチョシア又はカバットによる重鎖ＣＤＲ、
（ｂ）（ｉｉ）配列番号７の重鎖ＣＤＲ１、配列番号８の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９の重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であって、総体として（ｂ）（ｉ）及び（ｂ）（ｉｉ）の重鎖ＣＤＲとの相違が１、２、３、４、５、又は６アミノ酸残基以下であるもの；
（ｂ）（ｉｖ）配列番号４の重鎖可変領域；
（ｂ）（ｖ）配列番号４の抗原結合性フラグメント；
（ｂ）（ｖｉ）アミノ酸配列であって（ｂ）（ｉｖ）又は（ｂ）（ｖ）の配列との相違が１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０残基以下であるもの；並びに
（ｂ）（ｖｉｉ）アミノ酸配列であって（ｂ）（ｉｖ）又は（ｂ）（ｖ）の配列とほぼ同一である（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一である）もの、である。
【００１７】
実施形態において、抗体分子は（ａ）（ｉ）及び（ｂ）（ｉ）を含んでなる。
実施形態において、抗体分子は（ａ）（ｉｉ）及び（ｂ）（ｉｉ）を含んでなる。
実施形態において、抗体分子は（ａ）（ｉｉｉ）及び（ｂ）（ｉｉｉ）を含んでなる。
【００１８】
実施形態において、抗体分子は（ａ）（ｉｖ）及び（ｂ）（ｉｖ）を含んでなる。
実施形態において、抗体分子は（ａ）（ｖ）及び（ｂ）（ｖ）を含んでなる。
実施形態において、抗体分子は（ａ）（ｖｉ）及び（ｂ）（ｖｉ）を含んでなる。
【００１９】
実施形態において、抗体分子はＣＤ４７への結合について本明細書中に記載の抗体と競合する、例えば、本明細書中以下に議論される抗体２．３Ｄ１１と結合について競合する。
【００２０】
実施形態において、本明細書中に記載の抗体分子は、ＣＤ４７上の、本明細書中に記載の抗体、例えば抗体２．３Ｄ１１と、同一の又は重なり合うエピトープに結合する。
実施形態において、抗ＣＤ４７抗体分子は二重特異性抗体分子である。例えば、二重特異性抗体分子は、ＣＤ４７に対する第１の結合特異性（例えば本明細書中に記載されるようなＣＤ４７に結合する抗体）と、第２の結合特異性とを具備することが可能である。第２の結合特異性は、オプソニン化抗体、例えばＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体に結合する抗体から得られた結合ドメインによって付与されることが可能である。
【００２１】
本明細書中に記載された抗体の可変領域配列は様々な定常領域配列に連結されることが可能であることが理解される。例えば、１つの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は野生型の重鎖定常領域（Ｆｃ）を有することが可能である。別の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は突然変異型の重鎖定常領域を有することができる。１つの実施形態では、重鎖定常領域は、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥの重鎖定常領域から選ばれ；好ましくは、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の重鎖定常領域から選ばれる。１つの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、ＩｇＧ１重鎖定常領域、例えば野生型又は突然変異型のＩｇＧ１重鎖定常領域を有する。別の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、ＩｇＧ４重鎖定常領域、例えば野生型又は突然変異型のＩｇＧ４重鎖定常領域を有する。１つの実施形態では、ＩｇＧ４重鎖定常領域は、例えばＥＵナンバリングによる２２８位におけるセリンからプロリンへの置換（Ｓ２２８Ｐ）及び２３５位におけるロイシンからグルタミン酸への置換（Ｌ２３５Ｅ）のうち一方又は両方を含んでなる。
【００２２】
別の実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、例えばカッパ又はラムダの軽鎖定常領域から選ばれた軽鎖定常領域を有する。
別の態様では、本発明はさらに、本明細書中に記載された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる組成物を提供する。例えば、組成物は、単離された抗ＣＤ４７抗体分子であって：配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、並びに配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含んでなる抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる。
【００２３】
１つの実施形態では、本明細書中に開示される単離された抗ＣＤ４７抗体分子は、配列番号４に記載のアミノ酸配列又は配列番号４とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の、重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号６に記載のアミノ酸配列又は配列番号６とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の、軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる。
【００２４】
１つの実施形態では、組成物は、配列番号４に記載のアミノ酸配列又は配列番号４とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号６に記載のアミノ酸配列又は配列番号６とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）を有している、単離された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる。
【００２５】
１つの実施形態では、単離された抗ＣＤ４７抗体分子は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列又は配列番号１５とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の重鎖；及び、配列番号１６に記載のアミノ酸配列又は配列番号１６とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の軽鎖を含んでなる。
【００２６】
１つの実施形態では、組成物は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列又は配列番号１５とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、又は９８％、９９％同一の）配列の重鎖；及び、配列番号１６に記載のアミノ酸配列又は配列番号１６とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の軽鎖を含んでなる単離された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる。
【００２７】
前述の抗体分子又は組成物のうちいずれかの実施形態において、参照配列番号（例えば配列番号１５の重鎖又は配列番号１６の軽鎖）とほぼ同一の重鎖及び軽鎖のうち少なくともいずれか一方の配列を含んでなる抗ＣＤ４７抗体分子は、対応する参照ＣＤＲ配列と同一のアミノ酸配列を有する、１、２、又は３個のＶＨ  ＣＤＲ及び１、２、又は３個のＶＬ  ＣＤＲのうち少なくともいずれか一方を含んでなる。
【００２８】
別の態様では、本発明は、対象者のがんを治療する（又は予防する）方法であって、抗ＣＤ４７抗体分子又は単離された抗ＣＤ４７抗体分子を含んでなる組成物を、対象者に投与することを含んでなる方法を提供する。例えば、本発明は、対象者のがんを治療する（又は予防する）方法であって、本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子、又は本明細書中に記載の単離された抗ＣＤ４７抗体分子を含んでなる組成物を、対象者に投与することを含んでなる方法を提供する。
【００２９】
１つの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）；並びに、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含んでなる。
【００３０】
ある実施形態では、組成物、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体を含んでなる組成物は、腸管外（parenteral）、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、結腸内、頚管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、脊髄内、滑液嚢内、直腸、口腔、舌下、鼻腔内、及び経皮的な送達で構成される群から選択された方式で投与される。ある実施形態では、組成物は皮下に投与される。ある実施形態では、組成物は静脈内に投与される。
【００３１】
ある実施形態において、抗ＣＤ４７抗体分子、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体、又は抗ＣＤ４７抗体分子を含んでなる組成物若しくは本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体を含んでなる組成物は、化学療法剤又は第２の治療用抗体分子と組み合わされて投与される。例えば、１つの実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子又は組成物、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子又は組成物は、オプソニン化抗体と組み合わされて投与される。理論に束縛されることは望まないが、オプソニン化抗体は、標的細胞、例えばがん細胞の、貪食若しくは抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）、又は両方を、促進することが可能である。１つの実施形態では、オプソニン化抗体の抗原結合部分は標的抗原に結合する一方、オプソニン化抗体のＦｃ部分は貪食細胞上のＦｃ受容体に結合する。他の実施形態では、オプソニン化抗体の抗原結合部分は標的抗原に結合する一方、オプソニン化抗体のＦｃ部分は、例えばそのＦｃドメインを介して、免疫エフェクター細胞に結合し、このようにして結合したエフェクター細胞（例えば単球、好中球及びナチュラルキラー細胞）による標的細胞の溶解を誘発する。
【００３２】
ある実施形態では、オプソニン化抗体は抗ＣＤ２０抗体分子、例えばリツキシマブである。ある実施形態では、オプソニン化抗体は抗ＣＤ１９抗体分子である。ある実施形態では、オプソニン化抗体は抗ＣＤ３８抗体分子である。ある実施形態では、オプソニン化抗体は抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体抗体分子である。
【００３３】
ある実施形態では、抗体分子は、血液がん、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、及びバーキットリンパ腫）、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、例えば形質転換型ＣＬＬ、リヒター症候群、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、骨髄繊維症、真性赤血球増加、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽細胞性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性リンパ腫及び未分化大細胞リンパ腫で構成される群から選択された血液がんを治療するために使用することが可能である。
【００３４】
１つの実施形態では、がんは、多発性骨髄腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、ＡＭＬ、ＣＬＬ、例えば形質転換型ＣＬＬ、リヒター症候群、又は濾胞性リンパ腫から選ばれた血液がんである。ある実施形態では、抗体分子は固形腫瘍を治療するために使用されることが可能である。ある実施形態では、がんは、肺（例えば非小細胞肺がん、小細胞肺がん）、膵臓、乳房、肝臓、卵巣、精巣、腎臓、膀胱、脊椎、脳、頚部、子宮内膜、結腸／直腸、肛門、子宮内膜、食道、胆嚢、胃腸管、皮膚、前立腺、脳下垂体、胃、子宮、膣、及び甲状腺で構成される群から選択される。ある実施形態では、固形腫瘍はＮ‐メチル‐Ｄ‐アスパラギン酸受容体（ＮＭＤＡ受容体）陽性の奇形腫である。ある実施形態では、がんは、乳がん、結腸がん、胃がん、膵臓がん、子宮がん、及び卵巣がんから選択された腹水を伴うがんである。１つの実施形態では、腹水を伴うがんは腺癌である。
【００３５】
ある実施形態では、がんを予防する方法は、前がん状態又はがんを発症する危険性の増大を伴う状態を治療することを含んでなる。典型的な前がん状態には、多発性骨髄腫及び他の血液系悪性腫瘍を発症する危険性の増大に関係している、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）を含む形質細胞疾患が挙げられる。
【００３６】
別の態様では、本発明は、本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子の少なくとも一部分（例えば、重鎖又は軽鎖の配列のうちの１つ）をコードする、１以上の単離核酸分子を提供する。
【００３７】
１つの実施形態では、該核酸分子は、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）と、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）と、のうち少なくともいずれか一方をコードする核酸配列を含んでなる。企図されるのは、核酸が（ｉ）ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、及びＨＣ  ＣＤＲ３；（ｉｉ）ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３；又は（ｉｉｉ）ＨＣ  ＣＤＲ１、ＨＣ  ＣＤＲ２、ＨＣ  ＣＤＲ３、ＬＣ  ＣＤＲ１、ＬＣ  ＣＤＲ２、及びＬＣ  ＣＤＲ３、をコードするということである。
【００３８】
ある実施形態では、１以上の単離核酸分子は、配列番号４に記載のアミノ酸配列又は配列番号４とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号６に記載のアミノ酸配列又は配列番号６とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）、のうち少なくともいずれか一方を含んでなる抗ＣＤ４７抗体分子をコードする。
【００３９】
ある実施形態では、１以上の単離核酸分子は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列又は配列番号１５とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の重鎖；及び、配列番号１６に記載のアミノ酸配列又は配列番号１６とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の軽鎖、のうち少なくともいずれか一方を含んでなる抗ＣＤ４７抗体分子をコードする。
【００４０】
ある実施形態では、１以上の単離核酸分子は、配列番号４に記載のアミノ酸配列又は配列番号４とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の重鎖可変領域（ＶＨ）；及び、配列番号６に記載のアミノ酸配列又は配列番号６とほぼ同一の（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一の）配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）、のうち少なくともいずれか一方を含んでなる抗ＣＤ４７抗体分子をコードする。
【００４１】
別の態様では、本発明は、本明細書中に記載の核酸分子（例えば、抗ＣＤ４７抗体分子をコードする１以上の単離核酸分子であって、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、並びに、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）、のうち少なくともいずれかをコードする核酸配列を含んでなる核酸分子）を含んでなるベクターを提供する。
【００４２】
別の態様では、本発明は、本明細書中に記載の１以上のベクター（例えば、本明細書中に記載の核酸分子（例えば、抗ＣＤ４７抗体分子をコードする１以上の単離核酸分子であって、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、並びに、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）、のうち少なくともいずれかをコードする核酸配列を含んでなる核酸分子）を含んでなるベクター）を含んでなる細胞を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は、抗ＣＤ４７抗体である２Ｄ３、Ｂ６Ｈ１２、ＡＢ６．１２‐ＩｇＧ４ＰＥ、及び２．３Ｄ１１、並びにｈＩｇＧ対照を含む、ある一定の抗体の存在下における、ジャーカット（Jurkat）細胞へのビオチン化ＳＩＲＰα融合タンパク質（ＳＩＲＰα‐Ｆｃ‐ｂｉｏ）の結合を示す線グラフである。
【図２Ａ】図２Aは、漸増する濃度の未標識の抗体２．３Ｄ１１、Ｂ６Ｈ１２又はアイソタイプ対照とともに予めインキュベーションされたＤＵ‐１４５細胞へのＢ６Ｈ１２‐ＦＩＴＣの結合を示す線グラフである。
【図２Ｂ】図２Bは、漸増する濃度の未標識の抗体２．３Ｄ１１、Ｂ６Ｈ１２又はアイソタイプ対照とともに予めインキュベーションされたＤＵ‐１４５細胞へのビオチン化２．３Ｄ１１（２．３Ｄ１１‐ｂｉｏ）の結合を示す線グラフである。２．３Ｄ１１‐ｂｉｏの結合はＳＡ‐ＦＩＴＣを使用して検出された。
【図２Ｃ】図２Ｃは、０．６７、２、６若しくは１８μｇ／ｍｌの未標識２．３Ｄ１１抗体とともに、又は該抗体を伴わずに、コインキュベーションされたＰａｎｃ‐１細胞への、抗体Ｂ６Ｈ１２‐ＦＩＴＣ（１８μｇ／ｍｌ）の結合を示すグラフ。染色レベルは、１８μｇ／ｍｌのアイソタイプ対照抗体であるマウスＩｇＧ１‐ＦＩＴＣ（ＩＣ）の結合と比較される。
【図３Ａ】図３Ａは、表示の抗ＣＤ４７抗体及びｍＩｇＧ１対照のヒト赤血球への結合を示すグラフである。
【図３Ｂ】図３Ｂは、表示の抗ＣＤ４７抗体及びｍＩｇＧ１対照のカニクイザル（ｃｙｎｏ）赤血球への結合を示すグラフである。
【図３Ｃ】図３Ｃは、表示の抗ＣＤ４７抗体及びｍＩｇＧ１対照のヒト赤血球への結合を示す線グラフである。
【図３Ｄ】図３Ｄは、表示の抗ＣＤ４７抗体及びｍＩｇＧ１対照のｃｙｎｏ赤血球への結合を示す線グラフである。
【図４Ａ−４Ｃ】図４Ａ及び図４Ｂは、対照抗体であるポリクローナルｈＩｇＧ（図４Ａ）又は抗ＣＤ４７抗体である２．３Ｄ１１（図４Ｂ）の存在下での貪食された標的細胞のレベルを示す蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）のドットプロットを示す図である。図示されたイベントはＣＤ１４についてゲーティングされ、ダブレットは除外されている。図４Ｃは、図４Ａ及び図４Ｂにおける貪食された標的に相当する区域を同定する説明図である。
【図５】図５は、対照の抗体（モノクローナルのネズミ科動物ＩｇＧ１；ｍＩｇＧ１若しくはポリクローナルのヒトＩｇＧ；ｈＩｇＧ）又は表示の抗ＣＤ４７抗体の１μｇ／ｍｌ（白抜きの棒）又は１０μｇ／ｍｌ（影付きの棒）での存在下において標的のジャーカット細胞を貪食したマクロファージの比率（％）を示す棒グラフである。
【図６】図６は、対照の抗体（ｈＩｇＧ）、Ｂ６Ｈ１２、又は２．３Ｄ１１と、対照のヒトＩｇＧ抗体又は抗ＣＤ２０抗体リツキシマブのいずれかとの存在下において標的のラージ（Raji）細胞を貪食したマクロファージの比率（％）を示す棒グラフである。抗ＣＤ４７抗体（Ｂ６Ｈ１２、及び２．３Ｄ１１）並びに抗ＣＤ２０抗体は、協同効果を観察するために最適未満の濃度（それぞれ０．３μｇ／ｍｌ及び０．１μｇ／ｍｌ）で使用された。アイソタイプ対照の抗体は合わせた濃度で使用された。
【図７Ａ】図７Ａは、対照の抗体又は表示の抗ＣＤ４７抗体の存在下で標的のラージ細胞を貪食したマクロファージの比率（％）を示す棒グラフである。
【図７Ｂ】図７Ｂは、対照の抗体又は表示の抗ＣＤ４７抗体の存在下で標的のジャーカット細胞を貪食したマクロファージの比率（％）を示す棒グラフである。
【図７Ｃ】図７Ｃは、２．３Ｄ１１染色によって測定された、ラージ、ジャーカット、及びＤＵ‐１４５細胞上でのＣＤ４７発現のレベルを示す線グラフである。細胞は表示の濃度の２．３Ｄ１１‐ｂｉｏとともにインキュベーションされ、染色はＳＡ‐ＦＩＴＣを用いて検出された。
【図８】図８は、表示の各々の抗ＣＤ４７抗体又は対照の用量曲線の存在下における、ヒト赤血球の血球凝集を示している９６ウェルプレートの写真である。
【図９Ａ−９Ｂ】図９Ａ及び図９Ｂは、表示の各々の抗ＣＤ４７抗体又は対照の存在下におけるヒト赤血球（図９Ａ）及びｃｙｎｏ赤血球（図９Ｂ）を貪食したマクロファージの比率（％）を示す棒グラフである。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜図１０Ｃは、ラージリンパ腫異種移植モデルにおける、抗ＣＤ４７抗体２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４又は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔの単独又はリツキシマブとの組み合わせでの効果を概括する線グラフである。図１０Ａは、ラージリンパ腫異種移植モデルにおける抗ＣＤ４７抗体の抗腫瘍効果を示す。アイソタイプ対照（黒色の丸）２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ（白抜きのダイヤ形）及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４（黒色の三角形）が、マウス１匹につき２００μｇとして週３回（t.i.w.）、３週間にわたって投薬された。腫瘍容積の計測値は平均±ＳＥＭとして示されている（ｎ＝１０）。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ラージリンパ腫異種移植モデルにおけるリツキシマブと組み合わされた２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔの抗腫瘍効果を示す。アイソタイプ対照（黒色の丸）及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ（白抜きのダイヤ形）は２００μｇとして週３回投薬され、リツキシマブ（灰色の丸）は５ｍｇ／ｋｇとして週１回（q.w.）投薬され、また２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ／リツキシマブの組み合わせ（白色の正方形）は、それぞれ２００μｇとして週３回及び５ｍｇ／ｋｇとして週１回投薬され；全ての抗体が３週間にわたって投薬された。腫瘍容積の計測値は平均±ＳＥＭとして示されている（ｎ＝８）。
【図１０Ｃ】図１０Ｃは、ラージリンパ腫異種移植モデルにおけるリツキシマブと組み合わされた２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４の抗腫瘍効果を示す。アイソタイプ対照（黒色の丸）及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４（黒色の三角形）は１００μｇとして週３回投薬され、リツキシマブ（灰色の丸）は５ｍｇ／ｋｇとして週１回（ｑ．ｗ．）投薬され、また２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４／リツキシマブの組み合わせ（白色の正方形）は、それぞれ１００μｇとして週３回及び５ｍｇ／ｋｇとして週１回投薬され；全ての抗体が３週間にわたって投薬された。腫瘍容積の計測値は平均±ＳＥＭとして示されている（ｎ＝８）。
【図１１】図１１は、赤血球貪食アッセイにおける、ＣＦＳＥ＋であったＣＤ１４＋細胞の比率（％）を示す線グラフである。ヒト赤血球は健康な供血者から単離され、ＣＦＳＥで標識された。ＲＢＣは、標的とエフェクターとの比率を１０：１として実施例４に記載の貪食アッセイにおいて７日目のヒトマクロファージとともに培養された。３人の供血者のうち１人からの代表データが示されており；黒色の正方形は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１を示し、黒色の丸は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４を示し、黒色の三角形は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔを示し、灰色の丸はヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照を示し、白抜きの三角形はネズミ科動物のＩｇＧ１アイソタイプ対照を示し、影付きの小さなダイヤ形はＢ６Ｈ１２を示す。
【図１２Ａ−１２Ｄ】図１２Ａ〜図１２Ｄは、極性化マクロファージを用いた貪食アッセイにおける、ＣＦＳＥ＋であったＣＤ１４＋細胞の比率（％）を示す棒グラフである。初代ヒト単球は、１００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ‐ＣＳＦ）を含有する培地中で６日間分化せしめられた。６日目に、マクロファージは、Ｍ‐ＣＳＦ単独（図１２Ａ）、Ｍ‐ＣＳＦ＋インターロイキン１０（ＩＬ‐１０）、形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）及びインターロイキン４（ＩＬ‐４）（図１２Ｂ）、Ｍ‐ＣＳＦ＋インターフェロンγ及びリポ多糖類（ＬＰＳ）（図１２Ｃ）、又はＭ‐ＣＳＦ＋デキサメサゾン（図１２Ｄ）のいずれかの存在下で一晩、再播種された。貪食アッセイは、７日目に、標的としてＣＦＳＥ標識されたジャーカット細胞を使用して、実施例４に記載されるようにして実施された。使用された抗体濃度は、以下すなわち：白抜きの棒、０．０８μｇ／ｍＬ；斜線付きの棒、０．４μｇ／ｍＬ；影付きの棒、２μｇ／ｍＬ、によって示されている。
【図１３】図１３は、腫瘍細胞の貪食アッセイにおける、ＣＦＳＥ＋であったＣＤ１４＋細胞の比率（％）を示す図である。初代ヒト単球は、１００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ‐ＣＳＦ）を含有する培地中で７日間分化せしめられた。ＡＭＬ患者由来の凍結骨髄試料が融解され、ＣＦＳＥで標識され、分化したマクロファージとともに標的とエフェクターとの比率を１：１として２時間、表示の抗体の存在下にて培養された。貪食は、実施例４に記載されているようにして定量された。３回の独立した実験からの結果がプールされている。示された各データポイントは個々の供与者である。＊ｐ≦０．０５；＊＊ｐ≦０．０１（対応のないスチューデントｔ検定による）。
【図１４】図１４は、抗ＣＤ４７抗体２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４、又は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔを用いた治療後のラージリンパ腫異種移植モデルにおける腫瘍容積を示すグラフである。ＳＣＩＤ‐Ｂｅｉｇｅマウスにラージ腫瘍細胞が皮下移植され、腫瘍が〜１００ｍｍ３に達した時、該マウスは表示の抗体を２００μｇ／マウスとして週３回、３週間にわたって投与されるために無作為選択された。黒色の丸はヒトポリクローナルＩｇＧを示し、白色の丸は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔを示し、灰色の丸は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４を示し、縞模様の丸は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１を示す。２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ治療群では、２つの腫瘍が３８日目で２０００ｍｍ３に達してそのマウスは終了とされたので、平均腫瘍容積はこの時点の後には報告されなかった。
【図１５】図１５は、多発性骨髄腫細胞の貪食アッセイにおける、ＣＦＳＥ＋であったＣＤ１４＋細胞の比率（％）を示す棒グラフである。初代多発性骨髄腫骨髄試料はＣＦＳＥ標識され、分化したヒトマクロファージとともに２：１の比率で、１０μｇ／ｍＬのアイソタイプ対照（白色の棒）、１０μｇ／ｍＬの２．３Ｄ１１（黒色の棒）、抗ヒトＣＤ３８‐ｈＩｇＧ１（灰色の棒）、又は両方（縞模様の棒）の存在下で、共培養された。単一剤の条件は１０μｇ／ｍＬのアイソタイプ対照で補足されたことに注意されたい。
【図１６】図１６は、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４を単独又はダラツムマブとの組み合わせで用いて治療されたマウスにおける腫瘍容積の減少を示すグラフである。ＣＢ．１７ＳＣＩＤマウスにＨ９２９腫瘍細胞が移植された。腫瘍が１００〜１５０ｍｍ３の平均サイズに達した時、動物は対照群又は治療群へと無作為選択された。黒色の丸はアイソタイプ対照を示し、黒色の正方形は１０μｇ／マウスで単回投与として投与されたダラツムマブを示し、黒色の三角形は３０μｇ／マウスとして週３回、３週間にわたって投与された２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４を示し、黒色のダイヤ形は、単独療法の用量の２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４及びダラツムマブの組み合わせを示す。
【図１７】図１７は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）細胞の貪食アッセイにおける、ＣＦＳＥ＋であったＣＤ１４＋細胞の比率（％）を示すグラフである。ＣＬＬ患者の末梢血由来のＣＤ１９＋／ＣＤ５＋腫瘍細胞はＣＦＳＥ標識され、分化したヒトマクロファージとともに２：１の比率で、様々な濃度の２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４（丸）及びアイソタイプ対照（三角形）の存在下で、共培養された。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
発明の詳細な説明
本発明は、ヒトＣＤ４７を含むＣＤ４７に特異的に結合し、かつ、細胞の顕著な凝集、例えば赤血球の血球凝集を引き起こすことなく、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を変調する、例えば阻止、阻害、低減、拮抗、中和又は他の方法で干渉する、抗体分子に関する。多くの他のＣＤ４７抗体、例えばＢ６Ｈ１２、ＭＡＢＬ、ＢＲＩＣ１２６、ＣＣ２Ｃ６は、ヒト赤血球の血球凝集を引き起こすことが報告されてきた（例えば米国特許第９，０４５，５４１号明細書、ウノ（Uno）Ｓ、キノシタ（Kinoshita）Ｙ、アズマ（Azuma）Ｙら、オンコロジー・リポーツ（ONCOL. REP.）、２００７年、第１７巻、ｐ．１１８９−９４；キクチ（Kikuchi）Ｙ、ウノ（Uno）Ｓ、ヨシムラ（Yoshimura）Ｙら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（BlOCHEM. BlOPHYS. RES. COMMUN.）、２００４年、第３１５巻、ｐ．９１２−８）。細胞の凝集は、多くの治療用抗ＣＤ４７抗体の重大な限界を表している。２．３Ｄ１１抗体分子を含む本開示の抗ＣＤ４７抗体分子は、凝集（例えば血球凝集）の望ましからぬ影響を回避することにより治療的にＣＤ４７を標的とすることの効力を高める一方、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を阻止する能力は維持することにより、ＣＤ４７を発現する細胞の貪食を促進する。さらに発見されたのは、２．３Ｄ１１抗体が予想外なことに、Ｂ６Ｈ１２とは異なり２．３Ｄ１１は血球凝集又は赤血球貪食を引き起こさないにもかかわらず、ＣＤ４７への結合について抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２と交差競合するということである。
【００４５】
別途定義されないかぎり、本発明に関して使用される科学用語及び専門用語は、当業者によって一般に理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈からそうでないことが必要とされないかぎり、単数形の用語は複数を含むものとし、かつ複数形の用語は単数を含むものとする。概して、本明細書中に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、並びにタンパク質及びオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドの化学及びハイブリダイゼーションに関連して利用される名称、及びそれらの技法は、当分野において良く知られておりかつ一般に使用されるものである。標準的な技法が、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、並びに組織培養及び形質転換（例えばエレクトロポレーション、リポフェクション）に使用される。酵素反応及び精製の技法は、製造業者の説明書に従って、又は当分野で一般に行われているように若しくは本明細書中に記載されるようにして、実施される。本明細書中に記載される技法及び手順は概して、当分野において良く知られた従来の方法に従って、かつ本明細書全体にわたって引用及び議論される様々な一般的及びより具体的な参照文献に記載されているようにして、実施される。例えば、サムブルック（Sambrook）ら、「モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・マニュアル（MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL）」、第２版、１９８９年、米国ニューヨーク州コールド・スプリング・ハーバーのコールド・スプリング・ハーバー研究所出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press）を参照されたい。本明細書中に記載の分析化学、有機合成化学、並びに医薬品化学及び製薬化学に関連して利用される名称、並びにそれらの実験的な手順及び技法は、当分野において良く知られておりかつ一般に使用されるものである。標準的な技法が、化学合成、化学分析、製剤、調合及び送達、並びに患者の治療のために使用される。
【００４６】
［ＣＤ４７］
インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）、卵巣がん抗原ＯＡ３、Ｒｈ関連抗原及びＭＥＲ６としても知られるＣＤ４７は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する複数回膜貫通型受容体である。ＣＤ４７の発現及び活性のうち少なくともいずれか一方は多くの疾患及び障害、例えばがんに関与してきた。ＣＤ４７はマクロファージ上のＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質α）と相互作用し、かつそれにより貪食作用を阻害する。
【００４７】
典型的なヒトＣＤ４７タンパク質のアミノ酸配列は配列番号１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１７６８．１）に提供されている。典型的なヒトＣＤ４７タンパク質をコードするｍＲＮＡの配列は、配列番号２（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１７７７）に提供されている。
【００４８】
［抗体分子］
本明細書中で使用されるように、用語「抗体分子」は、抗原に特異的に結合するために、十分な免疫グロブリン重鎖可変領域からの配列及び十分な免疫グロブリン軽鎖可変領域からの配列のうち少なくともいずれか一方を含んでなる、ポリペプチド又はポリペプチドの組み合わせを指す。該用語は、完全長の抗体に加えてそのフラグメント、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを含んでなる。典型的には、抗体分子は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３の配列を含んでなる。抗体分子には、ヒト抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体及びそれらの抗原結合性フラグメントが含まれる。ある実施形態では、抗体分子は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域セグメント、例えば免疫グロブリン可変ドメインを提供するアミノ酸配列又は免疫グロブリン可変ドメイン配列、を含んでなるタンパク質を含んでなる。
【００４９】
抗体分子のＶＨ鎖又はＶＬ鎖は、重鎖又は軽鎖定常領域のうち全部又は一部をさらに備え、それにより免疫グロブリン重鎖又は軽鎖をそれぞれ形成することが可能である。抗体分子は、２本の重鎖が任意選択で少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結されており、かつ重鎖及び軽鎖の各対がジスルフィド結合で連結されている、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖との典型的な四量体であることが可能である。
【００５０】
抗体分子は、重鎖（又は軽鎖）免疫グロブリン可変領域セグメントのうち一方又は両方を含んでなることが可能である。本明細書中で使用されるように、用語「重鎖（又は軽鎖）免疫グロブリン可変領域セグメント」とは、重鎖（又は軽鎖）免疫グロブリン可変領域全体、又はそのフラグメントであって、抗原に結合する能力を有するものを指す。重鎖又は軽鎖セグメントが抗原に結合する能力は、それぞれ軽鎖又は重鎖と対になされた該セグメントを用いて計測される。ある実施形態では、完全長の可変領域よりも短い重鎖又は軽鎖セグメントは、適正な鎖と対になされた時、完全長の鎖がそれぞれ軽鎖又は重鎖と対になされた時に観察される親和性の少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は９５％の親和性を伴って結合することになる。
【００５１】
免疫グロブリン可変領域セグメントは基準配列又はコンセンサス配列とは異なっていてもよい。本明細書中で使用されるように、「異なる」とは、基準配列又はコンセンサス配列中の残基が、異なる残基又は欠失若しくは挿入残基のいずれかに置き換わっていることを意味する。
【００５２】
本発明の組成物及び方法は、特定の配列、又は該配列に対してほぼ同一であるか又は類似している配列、例えば、特定の配列と少なくとも８５％、９０％、９５％同一であるか又はそれ以上同一である配列を有している、ポリペプチド及び核酸を包含する。アミノ酸配列の観点では、用語「ほぼ同一である」は、本明細書中で使用されるように、第１のアミノ酸配列であって第２のアミノ酸配列中のアラインメントされたアミノ酸残基に対して、ｉ）同一であるか、又はｉｉ）保存的置換である、十分又は最小限の数のアミノ酸残基を含有しており、第１及び第２のアミノ酸配列が共通の構造的ドメイン及び共通の機能的活性のうち少なくともいずれか一方を有することが可能であるようになっている、第１のアミノ酸配列を指す。例えば、基準配列（例えば本明細書中に提供される配列）に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する共通の構造的ドメインを含有するアミノ酸配列である。
【００５３】
ヌクレオチド配列の観点では、用語「ほぼ同一である」は、本明細書中で使用されるように、第１の核酸配列であって第２の核酸配列中のアラインメントされたヌクレオチドに対して同一である十分又は最小限の数のヌクレオチドを含有しており、第１及び第２のヌクレオチド配列が共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、又は共通の構造的ポリペプチドドメイン若しくは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするようになっている、第１の核酸配列を指す。例えば、基準配列（例えば本明細書中に提供される配列）に対して少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するヌクレオチド配列である。
【００５４】
用語「機能的バリアント」とは、天然に存在する配列に対してほぼ同一のアミノ酸配列を有しているか、又はほぼ同一のヌクレオチド配列によってコードされており、かつ天然に存在する配列の１以上の活性を有する能力のある、ポリペプチドを指す。
【００５５】
配列間の相同性又は配列同一性（該用語は本明細書中では互換的に使用される）の計算は以下のように実施される。２つのアミノ酸配列の、又は２つの核酸配列の同一性（％）を決定するためには、配列は最適な比較を行う目的でアラインメントされる（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２のアミノ酸又は核酸の配列のうち一方又は両方にギャップが導入されることが可能であり、かつ非相同な配列は比較の目的で無視されることが可能である）。好ましい実施形態では、比較の目的でアラインメントされる基準配列の長さは、該基準配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％又は６０％、かつさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％）、又は１００％である。その後、対応するアミノ酸部位又はヌクレオチド部位におけるアミノ酸残基又はヌクレオチドが比較される。第１の配列の部位が第２の配列の対応する部位と同一のアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められている場合、これらの分子はその部位において同一である（本明細書中で使用されるように、アミノ酸又は核酸の「同一性」はアミノ酸又は核酸の「相同性」と等価である）。
【００５６】
２つの配列の間の同一性（％）は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要のあるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮に入れた、両配列によって共有される同一部位の数の関数である。
【００５７】
配列の比較、及び２つの配列の間の同一性（％）の決定は、数学的アルゴリズムを使用して遂行可能である。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列の間の同一性（％）は、ＧＣＧソフトウェア・パッケージ（http://www.gcg.comにおいて利用可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれているニードルマン（Needleman ）及びブンシュ（Wunsch）（ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J. MOL. BlOL. ）、１９７０年、第４８巻、ｐ．４４４−４５３）のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｕｍ６２行列又はＰＡＭ２５０行列のいずれかと、ギャップ重み付け（gap weight）１６、１４、１２、１０、８、６、又は４及び長さ重み付け（length weight ）１、２、３、４、５、又は６とを用いて、決定される。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列の間の同一性（％）は、ＧＣＧソフトウェア・パッケージ（http://www.gcg.comにおいて利用可能）のＧＡＰプログラムを使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列と、ギャップ重み付け４０、５０、６０、７０、又は８０及び長さ重み付け１、２、３、４、５、又は６とを用いて、決定される。特に好ましい一連のパラメータ（及び別段の定めがない限り使用されるべきもの）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、及びフレームシフトギャップペナルティ５のＢｌｏｓｕｍ６２スコアリング行列である。
【００５８】
２つのアミノ酸配列又はヌクレオチド配列の間の同一性（％）は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．マイヤーズ（Meyers）及びＷ．ミラー（Miller）のアルゴリズム（コンピュータ・アプリケーションズ・イン・ザ・バイオサイエンシズ（CABIOS）、１９８９年、第４巻、ｐ．１１−１７）を使用して、ＰＡＭ１２０の重み付き残基表（weight residue table）、ギャップ長ペナルティ１２及びギャップペナルティ４を用いて決定可能である。
【００５９】
本明細書中に記載された核酸及びタンパク質の配列は、公的データベースに対する検索を実施するための「クエリ配列」として、例えば他のファミリーメンバー又は関連配列を同定するために、使用可能である。そのような検索は、アルトシュル（Altschul）ら、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J. MOL. BlOL. ）、１９９０年、第２１５巻、ｐ．４０３−１０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実施可能である。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実施可能である。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実施可能である。比較の目的でギャップ付きアラインメントを得るためには、Ｇａｐｐｅｄ‐ＢＬＡＳＴが、アルトシュル（Altschul）ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（NUCLEIC ACIDS RES.）、１９９７年、第２５巻、ｐ．３３８９−３４０２に記載されているようにして利用可能である。ＢＬＡＳＴ及びＧａｐｐｅｄ‐ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えばＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用可能である（http://www. ncbi.nlm.nih.govにて利用可能）。
【００６０】
本発明の分子が、該分子の機能にほとんど影響を及ぼさない追加の保存的又は非本質的なアミノ酸置換を有しうることは、了解されている。
抗体分子は、重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書中ではＶＨと略記される）及び軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書中ではＶＬと略記される）を含んでなることが可能である。別例において、抗体は２つの重（Ｈ）鎖可変領域及び２つの軽（Ｌ）鎖可変領域又はこれらの抗体結合フラグメントを含んでなる。免疫グロブリンの軽鎖はカッパ又はラムダの種類のものであってよい。１つの実施形態では、抗体分子はグリコシル化されている。抗体分子は、抗体依存性細胞障害作用及び補体媒介性細胞障害作用のうち少なくともいずれかについて機能的であってもよいし、又はこれらの活性のうち一方又は両方について非機能的であってもよい。抗体分子は完全な抗体であってもよいし完全な抗体の抗原結合性フラグメントであってもよい。
【００６１】
抗体分子には、完全長の抗体の「抗原結合性フラグメント」、例えば対象となる標的抗原に特異的に結合する能力を保持している、完全長の抗体の１以上のフラグメントが含まれる。完全長の抗体の「抗原結合性フラグメント」という用語に包含される、抗原結合性フラグメントの例には、（ｉ）Ｆａｂフラグメントであって、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインで構成されている単価のフラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）又はＦ（ａｂ’）２フラグメントであって、ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインで構成されているＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶＬ及びＶＨドメインで構成されているＦｖフラグメント、（ｖ）抗体の単一の腕のＶＬ及びＶＨドメインが一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を生じるようにポリペプチドリンカーを介してともに連結されて構成されているｓｃＦｖ、（ｖｉ）ＶＨドメインで構成されている、ｄＡｂフラグメント（ウォード（Ward）ら、ネイチャー（NATURE）、１９８９年、第３４１巻、ｐ．５４４−５４６）、並びに（ｖｉｉ）機能性を保持している単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、が挙げられる。
【００６２】
本明細書中で使用されるように、抗体とは、免疫グロブリンの構造的及び機能的な特性、特に抗原結合特性、を含んでなるポリペプチド、例えば四量体又は一本鎖のポリペプチドを指す。典型的には、ヒト抗体は２つの同一な軽鎖及び２つの同一な重鎖を含んでなる。鎖はそれぞれ可変領域を含んでなる。
【００６３】
重鎖可変（ＶＨ）及び軽鎖可変（ＶＬ）領域は、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と名付けられた超可変領域、そのところどころに組み入れられた「フレームワーク領域」（ＦＲ）と名付けられたより保存された領域へとさらに細分されることが可能である。ヒト抗体は、フレームワーク領域ＦＲ１〜ＦＲ４によって隔てられた、３つのＶＨ  ＣＤＲ及び３つのＶＬ  ＣＤＲを有する。ＦＲ及びＣＤＲの範囲は正確に定義されている（カバット（Kabat ）、Ｅ．Ａ．ら、「シーケンシズ・オブ・プロテインズ・オブ・イムノロジカル・イントレスト（SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST）」、第５版、米国保健福祉省（U.S. Department of Health and Human Services）、ＮＩＨ出版物番号９１−３２４２、１９９１年；及びチョシア（Chothia ）、Ｃ．ら、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J. MOL. BIOL. ）、１９８７年、第１９６巻、ｐ．９０１−９１７）。ＶＨ及びＶＬはそれぞれ典型的には、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲがアミノ末端からカルボキシル末端へと次の順序すなわち：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４として配置されて、構成されている。
【００６４】
免疫グロブリン重鎖及び軽鎖はジスルフィド結合によって接続されることが可能である。重鎖定常領域は典型的には３つの定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含んでなる。軽鎖定常領域は典型的にはＣＬドメインを含んでなる。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は典型的には、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）など、宿主の組織又は因子への抗体の結合を媒介する。
【００６５】
さらに他の実施形態では、抗体分子は、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥの重鎖定常領域から選ばれた；特に、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の（例えばヒトの）重鎖定常領域から選ばれた、重鎖定常領域を有する。別の実施形態では、抗体分子は、例えばカッパまたはラムダの（例えばヒトの）軽鎖定常領域から選ばれた軽鎖定常領域を有する。定常領域は、抗体の性質を改変するために（例えば、Ｆｃ受容体との結合、抗体のグリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞の機能、及び補体機能のうち少なくともいずれかの、１つ以上を増大又は減少させるために）、変更されること、例えば突然変異せしめられること、が可能である。１つの実施形態では、抗体はエフェクター機能を有し、かつ補体を固定することが可能である。他の実施形態では、抗体はエフェクター細胞の動員又は補体の固定を行わない。別の実施形態では、抗体はＦｃ受容体に結合する能力が低下しているか又は結合する能力を有していない。例えば、抗体はＦｃ受容体への結合を支持しないアイソタイプ若しくはサブタイプ、フラグメント、又は他の突然変異体であり、例えばそれは突然変異したか又は欠失したＦｃ受容体結合領域を有している。
【００６６】
１つの実施形態では、本明細書中に記載のＣＤ４７抗体分子はＩｇＧ４定常領域を含んでなる。１つの実施形態では、ＩｇＧ４定常領域は野生型の定常領域である。別の実施形態では、ＩｇＧ４定常領域は、突然変異を、例えばＥＵナンバリング（カバット（Kabat）、Ｅ．Ａ．ら、上述）による、例えばＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅのうち一方又は両方を、含んでなる。１つの実施形態では、本明細書中に記載のＣＤ４７抗体分子はＩｇＧ１定常領域を含んでなる。
【００６７】
抗体の定常領域を変更する方法は当分野において既知である。変更された機能、例えば細胞上のＦｃＲのようなエフェクターリガンド又は補体のＣ１成分に対する変更された親和性、を備えた抗体は、抗体の定常部分の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基に置き換えることにより生産可能である（例えば、欧州特許第３８８，１５１Ａ１号明細書、米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び米国特許第５，６４８，２６０号明細書）。ネズミ科動物又はその他の生物種の免疫グロブリンに提供されれば上記の機能を低減又は排除するであろう、同じような変更について、述べることも考えられる。
【００６８】
用語「免疫グロブリン」は、生化学的に識別することが可能な様々な大別された種類のポリペプチドを含んでなる。当業者であれば、重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、又はイプシロン（γ、μ、α、δ、ε）として、その中にいくつかのサブクラス（例えばγ１〜γ４）を伴ってクラス分けされることを認識するであろう。抗体の「クラス」をＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ  ＩｇＤ、又はＩｇＥとしてそれぞれ決定するのは、この鎖の性質である。免疫グロブリンのサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１などはよく特性解析がなされており、機能的特殊性を付与することが知られている。これらのクラス及びアイソタイプそれぞれについての改変型は、本開示に照らせば当業者には容易に認識可能であり、従って本開示の範囲内にある。すべての免疫グロブリンクラスは本開示の範囲内にある。軽鎖はカッパ又はラムダ（κ、λ）のいずれかとしてクラス分けされる。重鎖のクラスはそれぞれカッパ又はラムダ軽鎖のいずれかと結合しうる。
【００６９】
本明細書中で使用されるように、抗体分子という用語は、完全型のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体（例えばサメの単一ドメイン抗体（例えばＩｇＮＡＲ又はそのフラグメント））、少なくとも２つの完全型抗体から形成された多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及びそれらが所望の生物活性を示す限りにおいて抗体フラグメント、を含んでなる。
【００７０】
適切な抗体には、限定するものではないが、モノクローナル、単一特異性、ポリクローナル、多特異性、ヒト抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、コンジュゲート抗体（例えば他のタンパク質、放射標識、又は細胞毒素にコンジュゲート又は融合せしめられた抗体）、小モジュール式免疫薬（Small Modular ImmunoPharmaceutical）（「ＳＭＩＰ（商標）」）、一本鎖抗体、ラクダ科動物の（cameloid）抗体、及び抗体フラグメントが挙げられる。
【００７１】
ある実施形態では、抗体分子はヒト化抗体である。ヒト化抗体とは、ヒトのフレームワーク領域と、ヒト以外、例えばマウス又はラットの免疫グロブリン由来の１以上のＣＤＲとを含んでなる免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは「ドナー」と呼ばれることが多く、またフレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは「アクセプタ」と呼ばれることが多いが、とはいえ実施形態において、供給源やプロセスの限定が意味されるものではない。典型的には、ヒト化抗体はヒト化された軽鎖及びヒト化された重鎖の免疫グロブリンを含んでなる。
【００７２】
「免疫グロブリンドメイン」とは、免疫グロブリン分子の可変ドメイン又は定常ドメイン由来のドメインを指す。免疫グロブリンドメインは、典型的には、約７個のβストランドで形成された２つのβシートと、保存されたジスルフィド結合とを含有する（例えば、Ａ．Ｆ．ウィリアムズ（Williams）及びＡ．Ｎ．バークレイ（Barclay ））、アニュアル・レビュー・オブ・イムノロジー（ANN. REV. IMMUNOL.）、１９８８年、第６巻、ｐ．３８１−４０５を参照）。
【００７３】
本明細書中で使用されるように、「免疫グロブリン可変ドメイン配列」とは、免疫グロブリン可変ドメインの構造を形成することが可能なアミノ酸配列を指す。例えば、該配列は、天然に存在する可変ドメインのアミノ酸配列のうち全部又は一部を含みうる。例えば、該配列は、１個、２個又はそれ以上の、Ｎ末端又はＣ末端アミノ酸、内部アミノ酸を省いていてもよいし、１以上の挿入物又は追加の末端アミノ酸を含んでいてもよいし、その他の変更を含んでいてもよい。１つの実施形態では、免疫グロブリン可変ドメイン配列を含んでなるポリペプチドは、別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と会合して、標的結合構造（又は「抗原結合部位」）、例えば標的抗原と相互作用する構造体を、形成することが可能である。
【００７４】
抗体又は抗体分子は、哺乳動物、例えばげっ歯動物（例えばマウス若しくはラット）、ウマ、ブタ、又はヤギに由来することが可能である。ある実施形態では、抗体又は抗体分子は組換え細胞を使用して生産される。ある実施形態では、抗体又は抗体分子は、例えば、マウス、ラット、ウマ、ブタ、又は他の生物種由来であって、ヒトの定常領域ドメイン及び可変領域ドメインのうち少なくともいずれか一方を有している、キメラ抗体である。
【００７５】
［多重特異性抗体］
ある実施形態では、抗体分子は多重特異性抗体分子であって、例えば、抗体分子は複数の免疫グロブリン可変ドメイン配列を含んでなり、その複数のうち第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列は第１のエピトープに対する結合特異性を有し、かつ複数のうち第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列は第２の異なるエピトープに対する結合特異性を有する。実施形態において、第１及び第２のエピトープは、同一の抗原上に、例えば同一のタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上に存在する。別の実施形態では、第１及び第２のエピトープは重なり合っている。実施形態において、第１及び第２のエピトープは重なり合っていない。実施形態において、第１及び第２のエピトープは異なる抗原上に、例えば異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。別の実施形態では、多重特異性抗体分子は第３、第４、又は第５の免疫グロブリン可変ドメインを含んでなる。実施形態において、多重特異性抗体分子は、二重特異性抗体分子、三重特異性抗体分子、又は四重特異性抗体分子である。
【００７６】
二重特異性抗体は、２つの抗原に特異的に結合することが可能な抗体分子である。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２の異なるエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列とによって特徴付けられる。第１及び第２のエピトープは、同一の抗原上に、例えば同一のタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にあってよい。第１及び第２のエピトープは重なり合っていてもよいし、重なり合っていなくてもよい。ある実施形態において、第１及び第２のエピトープは異なる抗原上に、例えば異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。該二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を備えた抗原結合部位をともに規定する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を備えた抗原結合部位をともに規定する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、を含んでなることができる。１つの実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体とを含んでなる。該二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する抗原結合部位を含有する半抗体、又はそのフラグメントと、第２の異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗原結合部位を含有する半抗体、又はそのフラグメントとを含んでなることができる。１つの実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する、ｓｃＦｖ、又はそのフラグメントと、第２の異なるエピトープに対する結合特異性を有する、ｓｃＦｖ、又はそのフラグメントとを含んでなる。実施形態において、第１のエピトープはＣＤ４７上に位置し、かつ第２のエピトープは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３８、又はＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体上に位置している。
【００７７】
［抗ＣＤ４７抗体分子］
本発明は、単離された、組換え及び合成のうち少なくともいずれかの、ヒト、霊長類、げっ歯類、哺乳類、キメラ、ヒト化及びＣＤＲ移植型のうち少なくともいずれかの抗ＣＤ４７抗体、並びに、１つの抗ＣＤ４７抗体分子の少なくとも一部分をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含んでなる、組成物及びコード化核酸分子を提供する。本発明はさらに、限定するものではないが、診断用及び治療用の組成物、方法及びデバイスを含む、そのような核酸及び抗体を作製及び使用する方法を含む。
【００７８】
本明細書中で言及される用語「単離（された）タンパク質」又は「単離（された）抗体分子」は、タンパク質又は抗体分子であって、その起源又は派生供給源に基づいて（１）天然に見出されるタンパク質と会合していないか、（２）同じ供給源由来の他のタンパク質を含まないか、（３）異なる生物種由来の細胞によって発現されるか、又は（４）天然には存在しないものを意味する。
【００７９】
本発明の典型的な抗体分子には、以下に配列で示されるような、可変重鎖領域（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）領域のうち少なくともいずれか、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤ２、及びＣＤ３、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤ２、及びＣＤＲ３、並びに完全な重鎖及び軽鎖を有している、２．３Ｄ１１抗体が挙げられる。
【００８０】
≪抗体２．３Ｄ１１≫
実施例において示されるように、抗体２．３Ｄ１１は、赤血球の顕著な血球凝集を引き起こすことなくＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断する能力を有する、新規な抗体であることが発見された。２．３Ｄ１１抗体の個々の重鎖及び軽鎖の可変領域の配列、並びにそのような可変領域配列を含有する抗体分子について以下に述べる。
【００８１】
リーダー配列を備えた可変重鎖（ＶＨ）：
ＭＫＨＬＷＦＦＬＬＬＶＡＡＰＲＷＶＬＳＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＧＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＶＳＩＲＳＩＮＷＷＮＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＹＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＫＳＫＮＱＦＳＬＫＬＮＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＩＡＶＴＤＹＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号３）。
【００８２】
リーダー配列を伴わない可変重鎖（ＶＨ）：
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＧＴＬＳＬＴＣＡＶＳＧＶＳＩＲＳＩＮＷＷＮＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＥＩＹＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＫＳＫＮＱＦＳＬＫＬＮＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＧＧＩＡＶＴＤＹＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号４）。
【００８３】
リーダー配列を備えた可変軽鎖（ＶＬ）：
ＭＥＡＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＳＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＦＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＤＷＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５）。
【００８４】
リーダー配列を伴わない可変軽鎖（ＶＬ）：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＥＳＶＳＳＮＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＦＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＤＷＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６）。
【００８５】
ＶＨ相補性決定領域１（ＶＨ  ＣＤＲ１）：
ＳＩＮＷＷＮ（配列番号７）。
ＶＨ相補性決定領域２（ＶＨ  ＣＤＲ２）：
ＥＩＹＨＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号８）。
【００８６】
ＶＨ相補性決定領域３（ＶＨ  ＣＤＲ３）：
ＤＧＧＩＡＶＴＤＹＹＹＹＧＬＤＶ（配列番号９）。
ＶＬ相補性決定領域１（ＶＬ  ＣＤＲ１）：
ＲＡＳＥＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号１０）。
【００８７】
ＶＬ相補性決定領域２（ＶＬ  ＣＤＲ２）：
ＧＡＦＮＲＡＴ（配列番号１１）。
ＶＬ相補性決定領域３（ＶＬ  ＣＤＲ３）：
ＱＱＲＳＤＷＦＴ（配列番号１２）。
【００８８】
2018535692.tif 000002
【００８９】
2018535692.tif 000003
【００９０】
2018535692.tif 000004
【００９１】
2018535692.tif 000005
ある実施形態では、本発明の典型的な抗体は、それぞれが配列番号４の残基３１〜３６、５１〜６６及び９９〜１１４に対応している相補性決定配列ＣＤＲ１〜３を備えた重鎖可変ドメインを含んでなる。ある実施形態では、本発明の典型的な抗体は、それぞれが配列番号４の残基１〜３０、３７〜５０、６７〜９８及び１１５〜１２５に対応しているフレームワーク配列ＦＲ１〜ＦＲ４を備えた重鎖可変ドメインを含んでなる。ある実施形態では、本発明の典型的な抗体は、それぞれが配列番号６の残基２４〜３４、５０〜５６及び８９〜９６に対応している相補性決定配列ＣＤＲ１〜３を備えた軽鎖可変ドメインを含んでなる。ある実施形態では、本発明の典型的な抗体は、それぞれが配列番号６の残基１〜２３、３５〜４９、５７〜８８及び９７〜１０６に対応しているフレームワーク配列ＦＲ１〜ＦＲ４を備えた軽鎖可変ドメインを含んでなる。
【００９２】
ある実施形態では、重鎖可変領域配列、例えば配列番号４のＶＨ配列は、当分野で既知の様々な重鎖定常領域配列に共有結合で連結されうることが企図されている。同様に、軽鎖可変領域配列、例えば配列番号６のＶＬは、当分野で既知の様々な軽鎖定常領域配列に共有結合で連結されうることが企図されている。例えば、重鎖可変領域配列は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４分子に由来する重鎖定常領域配列と共に使用されうる。
【００９３】
ある実施形態では、抗体の重鎖の定常領域は、アミノ酸配列：
【００９４】
2018535692.tif 000006
を有するヒトＩｇＧ１アイソタイプのものである。
【００９５】
ある実施形態では、ヒトＩｇＧ１定常領域は、抗体のグリコシル化を防止するためにアミノ酸Ａｓｎ２９７（枠で囲まれている）において改変され、例えばＡｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）である。ある実施形態では、該抗体の定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するためにアミノ酸Ｌｅｕ２３５（枠で囲まれている）において改変され、例えばＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）又はＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３５Ａ）である。ある実施形態では、該抗体の定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するためにアミノ酸Ｌｅｕ２３４（枠で囲まれている）において改変され、例えばＬｅｕ２３４Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ）である。ある実施形態では、該抗体の定常領域はアミノ酸Ｇｌｕ２３３（枠で囲まれている）において改変され、例えばＧｌｕ２３３Ｐｒｏ（Ｅ２３３Ｐ）である。いくつかの実施形態では、該抗体の定常領域はアミノ酸２３４及び２３５の両方において変更され、例えばＬｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）である。ある実施形態では、該抗体の定常領域はアミノ酸２３３、２３４及び２３４において変更され、例えばＧｌｕ２３３Ｐｒｏ、Ｌｅｕ２３４Ａｌａ、及びＬｅｕ２３５Ａｌａ（Ｅ２３３Ｐ  Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）である（アーマー（Armour）ＫＬら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（EUR. J. IMMUNOL.）、１９９９年、第２９巻、第８号、ｐ．２６１３−２４）。残基番号は全て、ＥＵナンバリング（カバット（Kabat ）、Ｅ．Ａ．ら、上述）によるものである。
【００９６】
ある実施形態では、抗体の重鎖の定常領域は、アミノ酸配列：
【００９７】
2018535692.tif 000007
を有するヒトＩｇＧ２アイソタイプのものである。
【００９８】
ある実施形態では、ヒトＩｇＧ２定常領域は、抗体のグリコシル化を防止するためにアミノ酸Ａｓｎ２９７（枠で囲まれている）において改変され、例えばＡｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）であり、ここで残基の番号はＥＵナンバリング（カバット（Kabat ）、Ｅ．Ａ．ら、上述）によるものである。
【００９９】
ある実施形態では、抗体の重鎖の定常領域は、アミノ酸配列：
【０１００】
2018535692.tif 000008
を有するヒトＩｇＧ３アイソタイプのものである。
【０１０１】
ある実施形態では、ヒトＩｇＧ３定常領域は、抗体のグリコシル化を防止するためにアミノ酸Ａｓｎ２９７（枠で囲まれている）において改変され、例えばＡｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）である。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ３定常領域は半減期を延長するためにアミノ酸Ａｒｇ４３５（枠で囲まれている）において改変され、例えばＡｒｇ４３５Ｈ（Ｒ４３５Ｈ）である。残基番号は全て、ＥＵナンバリング（カバット（Kabat ）、Ｅ．Ａ．ら、上述）によるものである。
【０１０２】
ある実施形態では、抗体の重鎖の定常領域は、アミノ酸配列：
【０１０３】
2018535692.tif 000009
を有するヒトＩｇＧ４アイソタイプのものである。
【０１０４】
ある実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、鎖交換を防止又は低減するためにヒンジ領域内において改変され、例えば、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域はＳｅｒ２２８（枠で囲まれている）において改変され、例えばＳｅｒ２２８Ｐｒｏ（Ｓ２２８Ｐ）である。他の実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、Ｆｃ受容体相互作用を変更するためにアミノ酸Ｌｅｕ２３５（枠で囲まれている）において改変され、例えばＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｌ２３５Ｅ）である。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域はＳｅｒ２２８及びＬｅｕ３３５の両方において改変され、例えばＳｅｒ２２８Ｐｒｏ及びＬｅｕ２３５Ｇｌｕ（Ｓ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ）であり、かつ配列番号２１のアミノ酸配列を含んでなる。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ４定常領域は、抗体のグリコシル化を防止するためにアミノ酸Ａｓｎ２９７（枠で囲まれている）において改変され、例えばＡｓｎ２９７Ａｌａ（Ｎ２９７Ａ）である。残基番号は全て、ＥＵナンバリング（カバット（Kabat ）、Ｅ．Ａ．ら、上述）によるものである。
【０１０５】
ある実施形態では、抗体の重鎖の定常領域は、アミノ酸配列：
ＧＳＡＳＡＰＴＬＦＰＬＶＳＣＥＮＳＰＳＤＴＳＳＶＡＶＧＣＬＡＱＤＦＬＰＤＳＩＴＬＳＷＫＹＫＮＮＳＤＩＳＳＴＲＧＦＰＳＶＬＲＧＧＫＹＡＡＴＳＱＶＬＬＰＳＫＤＶＭＱＧＴＤＥＨＶＶＣＫＶＱＨＰＮＧＮＫＥＫＮＶＰＬＰＶＩＡＥＬＰＰＫＶＳＶＦＶＰＰＲＤＧＦＦＧＮＰＲＫＳＫＬＩＣＱＡＴＧＦＳＰＲＱＩＱＶＳＷＬＲＥＧＫＱＶＧＳＧＶＴＴＤＱＶＱＡＥＡＫＥＳＧＰＴＴＹＫＶＴＳＴＬＴＩＫＥＳＤＷＬＧＱＳＭＦＴＣＲＶＤＨＲＧＬＴＦＱＱＮＡＳＳＭＣＶＰＤＱＤＴＡＩＲＶＦＡＩＰＰＳＦＡＳＩＦＬＴＫＳＴＫＬＴＣＬＶＴＤＬＴＴＹＤＳＶＴＩＳＷＴＲＱＮＧＥＡＶＫＴＨＴＮＩＳＥＳＨＰＮＡＴＦＳＡＶＧＥＡＳＩＣＥＤＤＷＮＳＧＥＲＦＴＣＴＶＴＨＴＤＬＰＳＰＬＫＱＴＩＳＲＰＫＧＶＡＬＨＲＰＤＶＹＬＬＰＰＡＲＥＱＬＮＬＲＥＳＡＴＩＴＣＬＶＴＧＦＳＰＡＤＶＦＶＱＷＭＱＲＧＱＰＬＳＰＥＫＹＶＴＳＡＰＭＰＥＰＱＡＰＧＲＹＦＡＨＳＩＬＴＶＳＥＥＥＷＮＴＧＥＴＹＴＣＶＡＨＥＡＬＰＮＲＶＴＥＲＴＶＤＫＳＴＧＫＰＴＬＹＮＶＳＬＶＭＳＤＴＡＧＴＣＹ（配列番号３３）
を有するヒトＩｇＭアイソタイプのものである。
【０１０６】
ある実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域はＦｃＲｎ結合を増強するために改変される。ＦｃＲｎへの結合を増強するＦｃ突然変異の例は、Ｍｅｔ２５２Ｔｙｒ、Ｓｅｒ２５４Ｔｈｒ、Ｔｈｒ２５６Ｇｌｕ（それぞれＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ）（ダッラクア（Dall'Acqua）ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. BlOL. CHEM.）、２００６年、第２８１巻、第３３号、ｐ．２３５１４−２３５２４）、又はＭｅｔ４２８Ｌｅｕ及びＡｓｎ４３４Ｓｅｒ（Ｍ４２８Ｌ、Ｎ４３４Ｓ）（ザレフスキー（Zalevsky）ら、ネイチャー・バイオテクノロジー（NATURE BIOTECH. ）、２０１０年、第２８巻、第２号、ｐ．１５７−１５９）である。残基番号は全て、ＥＵナンバリング（カバット（Kabat ）、Ｅ．Ａ．ら、上述）によるものである。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域は抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）のうち少なくともいずれか一方を変更するために改変され、例えば、ナツメ（Natsume）ら、キャンサー・リサーチ（CANCER RES. ）、２００８年、第６８巻、第１０号、ｐ．３８６３−７２；イドゥソギー（Idusogie）ら、ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジー（J. IMMUNOL.）、２００１年、第１６６巻、第４号、ｐ．２５７１−５：ムーア（Moore ）ら、ｍＡｂｓ、２０１０年、第２巻、第２号、ｐ．１８１−１８９；ラザー（Lazar ）ら、米国科学アカデミー紀要（PROC. NATL. ACAD. SCI. USA）、２００６年、第１０３巻、第１１号、ｐ．４００５−４０１０、シールズ（Shields ）ら、ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. BIOL. CHEM.）、２００１年、第２７６巻、第９号、ｐ．６５９１−６６０４；シュターフェンハーゲン（Stavenhagen ）ら、キャンサー・リサーチ（CANCER RES. ）、２００７年、第６７巻、第１８号、ｐ．８８８２−８８９０；シュターフェンハーゲン（Stavenhagen ）ら、アドバンシズ・イン・エンザイム・レギュレーション（ADVAN. ENZYME REGUL.）、２００８年、第４８巻、ｐ．１５２−１６４；アレグレ（Alegre）ら、ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジー（J. IMMUNOL.）、１９９２年、第１４８巻、ｐ．３４６１−３４６８に記載されたアミノ酸改変である。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ定常領域はヘテロダイマー化を誘発するために改変される。例えば、ＣＨ３ドメイン内においてＴｈｒ３６６のアミノ酸改変、例えばより嵩高なアミノ酸（例えばＴｒｙ）を用いた置換（Ｔ３６６Ｗ）を有している重鎖は、部位Ｔｈｒ３６６、Ｌｅｕ３６８、及びＴｙｒ４０７におけるあまり嵩高くないアミノ酸（例えば、それぞれＳｅｒ、Ａｌａ及びＶａｌ）へのアミノ酸改変（Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ）を有するＣＨ３ドメインを有している別の重鎖と優先的に対を形成することができる。ＣＨ３改変によるヘテロダイマー化は、例えば相対するＣＨ３ドメイン上でＳｅｒ３５４をＣｙｓに（Ｓ３５４Ｃ）かつＹ３４９をＣｙｓに（Ｙ３４９Ｃ）変更することによる、ジスルフィド結合の導入によってさらに安定させることが可能である（カーター（Carter）、ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（J. IMMUNOL.METHODS）、２００１年、第２４８巻、ｐ．７−１５を参照）。
【０１０９】
ある実施形態では、抗体の軽鎖の定常領域は、アミノ酸配列：
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２２）
を有するヒトのカッパ定常領域である。
【０１１０】
ある実施形態では、抗体の軽鎖の定常領域は、アミノ酸配列：
ＧＱＰＫＡＮＰＴＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＧＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＫＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣ（配列番号３４）
を有するヒトのラムダ定常領域である。
【０１１１】
2018535692.tif 000010
を含んでなる。
【０１１２】
2018535692.tif 000011
を含んでなる。
【０１１３】
2018535692.tif 000012
を含んでなる。
【０１１４】
2018535692.tif 000013
を含んでなる。
【０１１５】
ある実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は（ａ）及び（ｂ）のうち一方又は両方を含んでなり、（ａ）及び（ｂ）は以下のとおり、すなわち：
（ａ）（ｉ）軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、例えばチョシア（Chothia ）又はカバット（Kabat ）の軽鎖ＣＤＲであって配列番号１６に由来するもの、
（ａ）（ｉｉ）配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１１の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２の軽鎖ＣＤＲ３、
（ａ）（ｉｉｉ）軽鎖ＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であって、総体として（ａ）（ｉ）及び（ａ）（ｉｉ）の軽鎖ＣＤＲと多くとも１、２、３、４、５、又は６アミノ酸残基しか異なっていないもの；
（ａ）（ｉｖ）配列番号６の軽鎖可変領域；
（ａ）（ｖ）配列番号６の抗原結合性フラグメント；
（ａ）（ｖｉ）アミノ酸配列であって（ａ）（ｉｖ）又は（ａ）（ｖ）の配列から多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０残基しか異なっていないもの；
（ａ）（ｖｉｉ）アミノ酸配列であって（ａ）（ｉｖ）又は（ａ）（ｖ）の配列とほぼ同一（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一）であるもの；
並びに
（ｂ）（ｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３、例えばチョシア（Chothia ）又はカバット（Kabat ）の重鎖ＣＤＲであって配列番号１５に由来するもの、
（ｂ）（ｉｉ）配列番号７の重鎖ＣＤＲ１、配列番号８の重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９の重鎖ＣＤＲ３、
（ｂ）（ｉｉｉ）重鎖ＣＤＲのＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であって、総体として（ｂ）（ｉ）及び（ｂ）（ｉｉ）の重鎖ＣＤＲと多くとも１、２、３、４、５、又は６アミノ酸残基しか異なっていないもの；
（ｂ）（ｉｖ）配列番号４の重鎖可変領域；
（ｂ）（ｖ）配列番号４の抗原結合性フラグメント；
（ｂ）（ｖｉ）アミノ酸配列であって（ｂ）（ｉｖ）又は（ｂ）（ｖ）の配列から多くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０残基しか異なっていないもの；
並びに
（ｂ）（ｖｉｉ）アミノ酸配列であって（ｂ）（ｉｖ）又は（ｂ）（ｖ）の配列とほぼ同一（例えば少なくとも８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、又は９９％同一）であるもの
である。
【０１１６】
ある構成において、抗体分子は：（ａ）（ｉ）、及び（ｂ）のうち任意の１つ；（ａ）（ｉｉ）、及び（ｂ）のうち任意の１つ；（ａ）（ｉｉｉ）、及び（ｂ）のうち任意の１つ；（ａ）（ｉｖ）、及び（ｂ）のうち任意の１つ；（ａ）（ｖ）、及び（ｂ）のうち任意の１つ；（ａ）（ｖｉ）、及び（ｂ）のうち任意の１つ；（ａ）（ｖｉｉ）、及び（ｂ）のうち任意の１つ；（ｂ）（ｉ）、及び（ａ）のうち任意の１つ；（ｂ）（ｉｉ）、及び（ａ）のうち任意の１つ；（ｂ）（ｉｉｉ）、及び（ａ）のうち任意の１つ；（ｂ）（ｉｖ）、及び（ａ）のうち任意の１つ；（ｂ）（ｖ）、及び（ａ）のうち任意の１つ；（ｂ）（ｖｉ）、及び（ａ）のうち任意の１つ；（ｂ）（ｖｉｉ）、及び（ａ）のうち任意の１つ；を含んでなる。ある構成において、抗体分子は：（ａ）（ｉ）及び（ｂ）（ｉ）；（ａ）（ｉｉ）及び（ｂ）（ｉｉ）；（ａ）（ｉｉｉ）及び（ｂ）（ｉｉｉ）；（ａ）（ｉｖ）及び（ｂ）（ｉｖ）；（ａ）（ｖ）及び（ｂ）（ｖ）；又は（ａ）（ｖｉ）及び（ｂ）（ｖｉ）を含んでなる。
【０１１７】
企図されるのは、ある種の用途、例えば本明細書中に記載の治療的介入に関して、血球凝集活性をほとんど又は全く有していない抗ＣＤ４７抗体には、本明細書中に記載の抗体のうち１つ又はそれ以上、例えば、２．３Ｄ１１抗体及びそのバリアント、加えて血球凝集活性をほとんど又は全く伴わずにＣＤ４７に結合してＣＤ４７‐ＳＩＲＰα相互作用を妨害することが当分野において知られている抗体、例えば米国特許第９，０４５，５４１号明細書に記載の抗体、例えば、２Ａ１、２Ａ１‐ｘｉ、ＡＢ６．１２、ＡＢ６．１２‐ＩｇＧ１、ＡＢ６．１２‐ＩｇＧ４Ｐ及びＡＢ６．１２‐ＩｇＧ４ＰＥと称される抗体、が含まれるということである。例えば、抗体ＡＢ６．１２は、米国特許第９，０４５，５４１号明細書の表１に述べられたような配列番号１１の重鎖可変配列及び配列番号４２の軽鎖可変配列（それぞれ、本明細書中に開示される配列番号２７及び２８に対応している）を含んでなる。さらなる典型的な抗体は、配列番号２９の可変重鎖及び配列番号３０の可変軽鎖を含んでなる抗ＣＤ４７抗体５Ｆ９Ｇ４であって、リウ（Liu ）ら、プロス・ワン（PLoS ONE）、２０１６年、第１０巻、第９号、ｅ０１３７３４５に記載されている。
【０１１８】
本明細書中に記載された抗体分子は、基準物と比較してアミノ酸配列中に軽微な変動を有する場合があり、例えば、基準配列（例えば配列番号１５の重鎖又は配列番号１６の軽鎖）に対して、少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有しうる。突然変異には、その側鎖が同類であるアミノ酸ファミリー（例えばアスパラギン酸及びグルタミン酸）の範囲内で生じる置換である保存的アミノ酸置換が含まれうる。
【０１１９】
本発明の抗体分子は改変された形態で発現されることが可能である。例えば、追加のアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、精製時又はその後の操作及び保管中の宿主細胞内における安定性及び残存率を向上させるために、抗体分子のＮ末端に付加されることが可能である。さらに、ペプチド部分が、精製を容易にするために本発明の抗体分子に付加されることが可能である。そのような領域は、抗体分子又はその少なくとも１つのフラグメントの最終調製に先立って除去されることが可能である。そのような方法は、数多くの標準的な実験手引き書、例えばサムブルック、上述；オースベル（Ausubel ）ら編、「カレント・プロトコールズ・イン・モレキュラー・バイオロジー（CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY）」、米国ニューヨーク州ニューヨークのジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（John Wiley and Sons, Inc. ）、１９８７−２００１年に記載されている。
【０１２０】
企図されるのは、提供される抗体が、該抗体に対する抗イディオタイプ抗体分子、並びに、抗イディオタイプ抗体分子及び抗イディオタイプ抗体分子の少なくとも一部分をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含んでなるコード化核酸分子を含んでなる組成物、の生成に使用されうるということである。
【０１２１】
抗体分子は、標準的な結合アッセイ、例えば、ＢＩＡＣｏｒｅ（商標）を基にした結合アッセイを使用した測定で、≦１μΜ、例えば≦１００ｎＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、及びより好ましくは≦１ｎＭの平衡結合定数でＣＤ４７に結合する。
【０１２２】
本発明の抗体分子は、基準の抗ＣＤ４７抗体、例えばＢ６Ｈ１２、２Ｄ３、ＭＡＢＬ、ＣＣ２Ｃ６、ＢＲＩＣ１２６と比較して特性解析されうる。抗体Ｂ６Ｈ１２は、例えば米国特許第５，０５７，６０４号及び同第９，０１７，６７５号明細書に記載されており、アブカム（Abcam ）、ピーエルシー（PLC ）、サンタクルーズ・バイオテクノロジー・インコーポレイテッド（Santa Cruz Biotechnology, Inc.）及びイーバイオサイエンス・インコーポレイテッド（eBioscience, Inc. ）から市販されており、かつ、配列番号３１の重鎖可変領域及び配列番号３２の軽鎖可変領域を含んでなる。抗体ＭＡＢＬは、例えば、ウノ（Uno ）Ｓ、キノシタ（Kinoshita ）Ｙ、アズマ（Azuma ）Ｙら、オンコロジー・レポーツ（ONCOL. REP. ）、２００７年、第１７巻、ｐ．１１８９−９４、及びキクチ（Kikuchi ）Ｙ、ウノ（Uno ）Ｓ、ヨシムラ（Yoshimura ）Ｙら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（BlOCHEM. BlOPHYS. RES. COMMUN.）、２００４年、第３１５巻、ｐ．９１２−８に記載されている。抗体ＣＣ２Ｃ６は、例えばマルチナ・サイファート（Martina Seiffert）ら、ブラッド（BLOOD ）、１９９７年、第９４巻、第１１号、ｐ．３６３３−３６４３に記載されており、サンタクルーズ・バイオテクノロジー・インコーポレイテッドから市販されている。抗体ＢＲＩＣ１２６は、例えばアベント（Avent ）ら、バイオケミカル・ジャーナル（BlOCHEM. J. ）、１９８８年、第２５１巻、ｐ．４９９−５０５に記載されている。抗体２Ｄ３はイーバイオサイエンス・インコーポレイテッドから市販されており、かつ他の基準抗体とは異なりＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の結合に干渉しない。
【０１２３】
［抗体分子の発現］
本発明の核酸は、本発明の抗体分子をコードしている内因性ＤＮＡを含有する宿主細胞において発現されることが可能である。そのような方法は、例えば米国特許第５，５８０，７３４号、同第５，６４１，６７０号、同第５，７３３，７４６号、及び同第５，７３３，７６１号明細書に記載されているように、当分野において良く知られている。同様に、例えば上述のサムブルックら、及び上述のオースベルらも参照されたい。当業者は、本発明のタンパク質をコードする核酸の発現に利用可能な多数の発現系について知識が豊富である。抗体分子、該抗体分子の特定部分又はバリアントの生産に有用な細胞培養物の例証となるのは、哺乳動物細胞である。哺乳動物細胞系は多くの場合、単層の形態の細胞となるが、哺乳動物の細胞懸濁液又はバイオリアクタも使用可能である。完全型のグリコシル化タンパク質を発現することが可能な多くの適切な宿主細胞株が当分野において開発されており、該細胞株にはＣＯＳ‐１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、ＣＯＳ‐７（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ‐１６５１）、ＨＥＫ２９３、ＢＨＫ２１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ‐１０）、ＣＨＯ（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６１０）及びＢＳＣ‐１（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ‐２６）細胞株、ｈｅｐ  Ｇ２細胞、Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３、ＳＰ２／０‐Ａｇ１４、ＨｅＬａ細胞などであって、例えば米国バージニア州マナッサスのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（American Type Culture Collection）から容易に入手可能なものが挙げられる。酵母及び細菌の宿主細胞も使用可能であり、当業者には良く知られている。本発明の核酸又はタンパク質の生産に有用な他の細胞は、例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション・カタログ・オブ・セルライン・アンド・ハイブリドーマ（American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and hybridomas ）又はその他の既知若しくは商用の供給元から、周知及び／又は入手可能である。
【０１２４】
発現ベクターは、下記の発現制御配列、例えば、限定するものではないが、複製開始点；プロモータ（例えばＳＶ４０の後期又は初期プロモータ、ＣＭＶプロモータ（米国特許第５，１６８，０６２号；同第５，３８５，８３９号明細書）、ＨＳＶのｔｋプロモータ、ｐｇｋ（ホスホグリセリン酸キナーゼ）プロモータ、ＥＦ‐１αプロモータ（米国特許第５，２６６，４９１号明細書）、少なくとも１つのヒト免疫グロブリンプロモータ；エンハンサー、及び／又は、プロセシング情報部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位（例えばＳＶ４０大型Ｔ抗原ポリＡ付加部位）、並びに転写終結配列）のうち１以上を備えることが可能である。例えば、オースベル（Ausubel ）ら、上述；サムブルック（Sambrook）ら、上述を参照されたい。
【０１２５】
発現ベクターは任意選択で少なくとも１つの選択可能なマーカーを含む。そのようなマーカーには、例えば、限定するものではないが、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ、米国特許第４，３９９，２１６号；同第４，６３４，６６５号；同第４，６５６，１３４号；同第４，９５６，２８８号；同第５，１４９，６３６号；同第５，１７９，０１７号明細書）、アンピシリン、ネオマイシン（Ｇ４１８）、ミコフェノール酸、又はグルタミン合成酵素（ＧＳ、米国特許第５，１２２，４６４号；同第５，７７０，３５９号；及び同第５，８２７，７３９号明細書）の、真核細胞培養のための耐性、並びに大腸菌及びその他の細菌又は原核生物における培養のためのテトラサイクリン又はアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。上記宿主細胞のための適切な培地及び培養条件は当分野において既知である。適切なベクターは当業者には容易に明白となろう。宿主細胞へのベクター構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ‐デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染、又はその他の既知の方法によって達成可能である。そのような方法は当分野において、例えばサムブルック（Sambrook）、上述；オースベル（Ausubel ）、上述などによって説明されている。
【０１２６】
核酸挿入物は、適正なプロモータに作動可能なように連結されなければならない。発現構築物はさらに、転写開始、終結のための部位、及び転写される領域内に、翻訳のためのリボソーム結合部位を含有することになろう。構築物によって発現された成熟した転写物のコード化部分は、好ましくは、翻訳されるｍＲＮＡの先頭に翻訳開始コドン及び末尾に適正に配置された終結コドン（例えばＵＡＡ、ＵＧＡ又はＵＡＧ）を備えることになり、哺乳動物又は真核生物の細胞発現にはＵＡＡ及びＵＡＧが好ましい。
【０１２７】
真核生物の宿主細胞が使用される場合、ポリアデニル化又は転写終結因子の配列がベクターに通常は組み込まれる。終結因子配列の一例はウシ成長ホルモン遺伝子由来のポリアデニル化配列である。転写物の正確なスプライシングのための配列も含まれることが可能である。スプライシング配列の一例は、ＳＶ４０由来のＶＰ１イントロンである（スピローグ（Sprague ）ら、ジャーナル・オブ・ヴィロロジー（J. VIROL. ）、１９８３年、第４５巻、ｐ．７７３−７８１）。加えて、宿主細胞における複製を制御するための遺伝子配列が、当分野で知られているようにしてベクターに組み込まれることが可能である。
【０１２８】
［抗体分子の単離及び精製］
本明細書中に記載された抗体分子は、良く知られた方法、例えば、限定するものではないが、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウム又はエタノール沈澱、酸抽出、陰イオン又は陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーによって、組換え細胞培養物から回収及び精製されることが可能である。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）も精製のために使用可能である。例えば、コリガン（Colligan）、「カレント・プロトコールズ・イン・イムノロジー（Current Protocols in Immunology ）」、又は「カレント・プロトコールズ・イン・プロテイン・サイエンス（Current Protocols in Protein Science）」、米国ニューヨーク州ニューヨークのジョン・ワイリー・アンド・サンズ（John Wiley and Sons ）、１９９７−２００１年を参照されたい。
【０１２９】
本明細書中に記載された抗体分子は、当然ながら、精製された生成物、化学合成手法の生成物、並びに、真核生物の宿主、例えば酵母、高等植物、昆虫及び哺乳動物の細胞などから組換え技法によって生産された生成物、を含みうる。組換え生産の手法において使用される宿主に応じて、本発明の抗体分子はグリコシル化されることも可能であるし、グリコシル化されないことも可能であり、グリコシル化されることが好ましい。そのような方法は、数多くの標準的実験手引き書、例えばサムブルック（Sambrook）、上述；オースベル（Ausubel ）、上述、コリガン（Colligan）、「プロテイン・サイエンス（Protein Science ）」、上述などに記載されている。
【０１３０】
［核酸分子］
本発明の核酸分子は、ＲＮＡの形態、例えばｍＲＮＡ、ｈｎＲＮＡ、ｔＲＮＡ若しくは任意の他の形態、又はＤＮＡの形態、例えば、限定するものではないが、クローニングにより得られたか若しくは合成生産されたｃＤＮＡ及びゲノムＤＮＡ、又はこれらの任意の組み合わせであることが可能である。ＤＮＡは、三本鎖、二本鎖若しくは一本鎖、又はこれらの任意の組み合わせであることが可能である。該ＤＮＡ又はＲＮＡの少なくとも１本の鎖の任意の部分は、センス鎖としても知られるコード鎖であることも可能であるし、アンチセンス鎖とも呼ばれる非コード鎖であることも可能である。
【０１３１】
本発明の単離核酸分子には、任意選択で１以上のイントロン、例えば、限定するものではないが、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のうち少なくともいずれかであって少なくとも１つの重鎖のもの（例えば配列番号７〜９）又は軽鎖のもの（例えば配列番号１０〜１２）のような、少なくとも１つのＣＤＲの少なくとも１つの特定部分を備えた、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含んでなる核酸分子；抗ＣＤ４７抗体分子又は可変領域（例えば配列番号４及び６）のためのコード配列を含んでなる核酸分子；並びに、上記のものとはかなり異なるが、遺伝コードの縮重により、本明細書中に記載されているか当分野で既知であるかのうち少なくともいずれか一方の少なくとも１つの抗ＣＤ４７抗体分子をなおもコードしているヌクレオチド配列を含んでなる核酸分子、が含まれうる。遺伝コードが当分野において良く知られていることを考えると、本発明の特定の抗ＣＤ４７抗体分子をコードするそのような縮重した核酸バリアントを生成することは、当業者には日常的作業である。例えばオースベル（Ausubel ）ら、上述を参照されたい。またそのような核酸バリアントは本発明に含まれる。ある実施形態では、２．３Ｄ１１抗体の重鎖可変ドメイン及びヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインをコードする核酸分子は、配列番号３５を含んでなる。ある実施形態では、２．３Ｄ１１抗体の重鎖可変ドメイン及びヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメインをコードする核酸分子は、配列番号３６を含んでなる。ある実施形態では、２．３Ｄ１１抗体の重鎖可変ドメイン並びにＳｅｒ２２８Ｐｒｏ及びＬｅｕ２３５Ｇｌｕ置換を備えたヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメインをコードする核酸分子は、配列番号３７を含んでなる。ある実施形態では、２．３Ｄ１１抗体の軽鎖可変ドメイン及びヒトのカッパ定常ドメインをコードする核酸分子は、配列番号３８を含んでなる。
【０１３２】
本明細書中に示されるように、抗ＣＤ４７抗体分子をコードする核酸を含んでなる本発明の核酸分子には、限定するものではないが、単独で抗体フラグメントのアミノ酸配列をコードしているもの；抗体全体又はその一部分のコード配列；抗体、フラグメント又は一部分、加えて追加の配列の、コード配列、例えば、前述の追加のコード配列の有無にかかわらず、少なくとも１つのシグナルリーダーペプチド又は融合ペプチドのコード配列、例えば少なくとも１つのイントロンであって、追加の非コード配列、例えば、限定するものではないが５’及び３’非コード配列、例えば転写されるが翻訳されない配列であって、転写、ｍＲＮＡプロセシング、例えばスプライシング及びポリアデニル化シグナル（例えば、リボソーム結合及びｍＲＮＡの安定性）において役割を果たすものを伴ったもの；追加のアミノ酸をコードする追加のコード配列、例えば追加の機能性を提供するものなど、を含みうる。よって、抗体分子をコードする配列はマーカー配列に融合されることが可能であり、マーカー配列は例えば抗体分子のフラグメント又は一部分を含んでなるその融合した抗体分子の精製を容易にするペプチドをコードする配列などである。
【０１３３】
［核酸の構築］
本発明の単離核酸は、当分野においてよく知られた、（ａ）組換え法、（ｂ）合成技法、（ｃ）精製技法、又はこれらの組み合わせを使用して作製可能である。該核酸は、好都合には、本発明のポリヌクレオチドに加えて配列を含んでなることが可能である。例えば、１以上のエンドヌクレアーゼ制限部位を含んでなるマルチクローニング部位が、ポリヌクレオチドの単離を助けるために該核酸に挿入されることが可能である。さらに、翻訳可能な配列が、本発明の翻訳されたポリヌクレオチドの単離を助けるために挿入されることが可能である。例えば、ヘキサヒスチジンマーカー配列は、本発明のタンパク質を精製するための便利な手段を提供する。本発明の（コード配列以外の）核酸は、任意選択で、本発明のポリヌクレオチドのクローニング及び発現のうち少なくともいずれかのためのベクター、アダプター、又はリンカーである。さらなる配列がそのようなクローニング及び発現のうち少なくともいずれか一方の配列に付加されて、クローニング及び発現のうち少なくともいずれかにおける該配列の機能を最適化するか、ポリヌクレオチドの単離を助けるか、又は細胞内へのポリヌクレオチドの導入を向上させることが可能である。クローニングベクター、発現ベクター、アダプター、及びリンカーの使用は、当分野において良く知られている。（例えば、オースベル（Ausubel ）、上述；又はサムブルック（Sambrook）、上述を参照されたい）。
【０１３４】
本発明の単離核酸組成物、例えばＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、又はこれらの任意の組み合わせは、当業者に既知のいくつものクローニング方法論を使用して、生物学的供給源から得ることが可能である。いくつかの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下で選択的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプローブが、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡライブラリの中の所望の配列を同定するために使用される。ＲＮＡの単離、並びにｃＤＮＡ及びゲノムのライブラリの構築については、当業者に良く知られている。（例えば、オースベル（Ausubel ）、上述；又はサムブルック（Sambrook）、上述を参照されたい）。
【０１３５】
［抗体分子組成物］
治療的用途については、抗体は薬学的に許容可能な担体と組み合わされることが好ましい。本明細書中で使用されるように、「薬学的に許容可能な担体」とは、合理的なベネフィット・リスク比相応の、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、又はその他の問題若しくは合併症を伴わない、人間及び動物の組織と接触しての使用に適した、バッファー、担体、及び賦形剤を意味する。担体は、調合物の他の成分と混合可能であり、かつ被投与者に対して有害でないという意味において「許容可能」であるべきである。薬学的に許容可能な担体には、バッファー、溶媒、分散媒、コーティング剤、等張化剤及び吸収遅延剤などであって、薬務行政に適合するものが挙げられる。薬学的に活性な物質についてのそのような媒体及び作用薬の使用は、当分野において既知である。
【０１３６】
従って、本発明の抗体分子組成物は、任意の適切な賦形剤、例えば、限定するものではないが、希釈剤、結合剤、安定剤、バッファー、塩、脂肪親和性の溶媒、保存剤、アジュバントなどのうち少なくとも１つを含んでなることが可能である。薬学的に許容可能な賦形剤が好ましい。そのような滅菌溶液の、及び該溶液を調製する方法の非限定的な例は当分野において良く知られており、例えば、限定するものではないが、ジェンナロ（Gennaro）編、「レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンシズ（REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES ）」、第１８版、米国ペンシルバニア州イーストンのマック・パブリッシング社（Mack Publishing Co. ）、１９９０年に記載されたものである。該抗体分子、フラグメント又はバリアントの組成物の投与様式、溶解度及び安定性のうち少なくともいずれかに適している、薬学的に許容可能な担体は、当分野で良く知られているようにして、又は本明細書中に記載されるようにして、日常作業的に選択されることが可能である。
【０１３７】
本発明の組成物に有用な製薬用賦形剤及び添加剤には、限定するものではないが、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、及び炭水化物（例えば糖、例えば単糖類、二糖類、三糖類、四糖類、及びオリゴ糖類；誘導体化された糖、例えばアルジトール、アルドン酸、エステル化糖など；並びに多糖類又は糖ポリマー）が含まれ、これらは単独でも組み合わせでも存在して、単独又は組み合わせにて重量比又は体積比で１〜９９．９９％を構成することが可能である。典型的なタンパク質賦形剤には、例えばヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）のような血清アルブミン、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）、ゼラチン、カゼインなどが挙げられる。代表的なアミノ酸／抗体分子構成要素であって、緩衝能においても機能することが可能なものには、アラニン、グリシン、アルギニン、ベタイン、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、システイン、リジン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、フェニルアラニン、アスパルテームなどが挙げられる。
【０１３８】
本発明において使用するのに適した炭水化物賦形剤には、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ‐マンノース、ソルボースなどのような単糖類；ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオースなどのような二糖類；ラフィノース、メレチトース、バクガデキストリン、デキストラン、デンプンなどのような多糖類；及びマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール  ソルビトール（グルシトール）、ミオイノシトールなどのようなアルジトール、が挙げられる。本発明で使用される好ましい炭水化物賦形剤は、マンニトール、トレハロース、及びラフィノースである。
【０１３９】
抗体分子組成物はさらに、バッファー又はｐＨ調整剤を含むことも可能であり；典型的には、バッファーは有機酸又は有機塩基から調製された塩である。代表的なバッファーには、有機酸塩、例えばクエン酸、酢酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、若しくはフタル酸の塩；トリス、トロメタミン塩酸塩、又はリン酸バッファーが挙げられる。
【０１４０】
加えて、本発明の抗体分子組成物は、ポリマー賦形剤／添加剤、例えばポリビニルピロリドン、フィコール（ポリマー糖）、デキストラート（例えばシクロデキストリン、例えば２‐ヒドロキシプロピル‐β‐シクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、香料、抗微生物剤、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、界面活性剤（例えばポリソルベート、例えば「ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０」及び「ＴＷＥＥＮ８０」）、脂質（例えばリン脂質、脂肪酸）、ステロイド（例えばコレステロール）、並びにキレート剤（例えばＥＤＴＡ）を含むことができる。
【０１４１】
本発明による抗体分子組成物で使用するのに適している上記及びさらなる既知の製薬賦形剤及び／又は添加剤は、例えば、「レミントン：ザ・サイエンス・アンド・プラクティス・オブ・ファーマシー（REMINGTON: THE SCIENCE and PRACTICE OF PHARMACY ）」第１９版、ウィリアムズ・アンド・ウィリアムズ（Williams and Williams ）、１９９５年、及び「フィジシャンズ・デスク・リファレンス（PHYSICIAN'S DESK REFERENCE）」第５２版、米国ニュージャージー州モントヴェールのメディカル・エコノミクス（Medical Economics ）、１９９８年に掲載されているように、当分野において既知である。好ましい担体又は賦形剤材料は、炭水化物（例えば糖類及びアルジトール）並びにバッファー（例えばシトラート）又はポリマー剤である。
【０１４２】
本発明は、薬学的に許容可能な調合物中に少なくとも１つの抗ＣＤ４７抗体分子を含んでなる安定な組成物を提供する。保存調合物は、少なくとも１つの既知の保存剤、又は少なくとも１つのフェノール、ｍ‐クレゾール、ｐ‐クレゾール、ｏ‐クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば６水化物）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム及びチメロサール、若しくは水性希釈剤中のこれらの混合物で構成される群から任意に選択されたものを含有する。任意の適切な濃度又は混合物、例えば０．００１〜５％、又はその中の任意の範囲若しくは値、例えば、限定するものではないが、０．００１、０．００３、０．００５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０３、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．３、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、又はこの中の任意の範囲若しくは値が、当分野で知られているようにして使用可能である。非限定的な例には、保存剤なし、０．１〜２％のｍ‐クレゾール（例えば０．２、０．３、０．４、０．５、０．９、又は１．０％）、０．１〜３％のベンジルアルコール（例えば０．５、０．９、１．１．、１．５、１．９、２．０、又は２．５％）、０．００１〜０．５％のチメロサール（例えば０．００５又は０．０１％）、０．００１〜２．０％のフェノール（例えば０．０５、０．２５、０．２８、０．５、０．９、又は１．０％）、０．０００５〜１．０％のアルキルパラベン（例えば０．０００７５、０．０００９、０．００１、０．００２、０．００５、０．００７５、０．００９、０．０１、０．０２、０．０５、０．０７５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．５、０．７５、０．９、又は１．０％）などが挙げられる。
【０１４３】
本明細書中に開示された抗体を含有する医薬組成物は、投与量単位の形態で提供されることが可能であり、かつ任意の適切な方法によって調製されることが可能である。医薬組成物はその意図された投与経路に適合するように調合されるべきである。投与経路の例は、静脈内（ＩＶ）、皮内、吸入、経皮的、局所、経粘膜、及び直腸投与である。モノクローナル抗体のための好ましい投与経路はＩＶ注入である。有用な調合物は製薬分野で既知の方法によって調製可能である。例えば、「レミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンシズ（REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES ）」、１９９０年、上述を参照されたい。腸管外投与に適している調合物構成要素には、無菌の希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、不揮発油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン；酸化防止剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；バッファー、例えばアセタート、シトラート又はホスファート；及び張度の調整のための作用薬、例えば塩化ナトリウム又はデキストロース、が挙げられる。
【０１４４】
静脈内投与については、適切な担体には生理的食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（米国ニュージャージー州パーシッパニーのバスフ（BASF））又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は製造及び保管の条件下で安定でなくてはならず、かつ微生物から守られなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体のポリエチレングリコール）、並びにこれらの適切な混合物を含有する溶媒又は分散媒であってよい。
【０１４５】
ある実施形態では、薬学的に許容可能な組成物は、１０ｍＭヒスチジン、２８０ｍＭスクロース、及び０．０１％のＴＷＥＥＮ８０、ｐＨ６．０の中に抗ＣＤ４７抗体を含んでなる。
【０１４６】
医薬調合物は無菌であることが好ましい。滅菌は任意の適切な方法、例えば滅菌濾過膜を用いる濾過によって達成可能である。組成物が凍結乾燥される場合、濾過滅菌は凍結乾燥及び再構成の前又は後に行われることが可能である。
【０１４７】
本発明の組成物は様々な形態であってよい。これらには、例えば、液体、半固体及び固体の剤形、例えば液体溶液（例えば注射可能かつ注入可能な溶液）、分散物又は懸濁液、及びリポソームが含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療適用に依存する。典型的な好ましい組成物は、注射可能又は注入可能な溶液の形態である。好ましい投与様式は腸管外（例えば、静脈内、皮下、眼内、腹腔内、筋肉内）投与である。好ましい実施形態では、調製物は静脈内への注入又は注射によって投与される。別の好ましい実施形態では、調製物は筋肉内又は皮下への注射によって投与される。
【０１４８】
「腸管外投与」及び「腸管外投与される」という言葉は、本明細書中で使用されるように、経腸投与及び局所的投与以外の投与様式であって通常は注射によるものを意味し、かつ、限定するものではないが、静脈内、筋肉内、皮下、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、硝子体内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、吸入、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内への注射及び注入が含まれる。
【０１４９】
［製造品］
本発明は、包装材料と、所定のバッファー及び保存剤のうち少なくともいずれか一方を伴った少なくとも１つの抗ＣＤ４７抗体分子の、任意選択で水性希釈剤中の溶液を含んでなる少なくとも１つのバイアルと、を含んでなる製造品を提供する。水性希釈剤は任意選択で、薬学的に許容可能な保存剤をさらに含んでなる。保存剤には、フェノール、ｍ‐クレゾール、ｐ‐クレゾール、ｏ‐クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチルなど）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウム及びチメロサール、又はこれらの混合物で構成される群から選択されたものが挙げられる。調合物中で使用される保存剤の濃度は、抗微生物効果を生じるのに十分な濃度である。そのような濃度は選択された保存剤に依存し、当業者により容易に決定される。
【０１５０】
他の賦形剤、例えば等張化剤、バッファー、酸化防止剤、保存剤増強剤は、任意選択で、かつ好ましくは、希釈剤に添加されることが可能である。グリセリンのような等張化剤は一般に既知濃度で使用される。生理学的に忍容されたバッファーが、ｐＨ制御を向上させるために添加されることが好ましい。調合物は、広範囲のｐＨ、例えば約ｐＨ４．０〜約ｐＨ１０．０、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ９．０、又は約ｐＨ６．０〜約ｐＨ８．０に及ぶことが可能である。
【０１５１】
他の添加剤、例えば薬学的に許容可能な可溶化剤であってＴＷＥＥＮ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウラート）、ＴＷＥＥＮ４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミタート）、ＴＷＥＥＮ８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８（ポリオキシエチレン‐ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、及びＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のようなもの又は非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート２０若しくは８０、若しくはポロキサマー１８４若しくは１８８、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）ポリオール、若しくはその他のブロックコポリマー、並びに、ＥＤＴＡ及びＥＧＴＡのようなキレート剤が、凝集を低減するために調合物又は組成物に任意選択で添加されることが可能である。これらの添加剤は、調合物を投与するためにポンプ容器又はプラスチック容器が使用される場合に特に有用である。薬学的に許容可能な界面活性剤の存在は、タンパク質が凝集する傾向を緩和する。
【０１５２】
［治療適用］
加えて、本発明は、ある種類の細胞における、例えばその細胞がＣＤ４７発現レベルの上昇を示すある種のがんにおける、ＣＤ４７発現レベルの上昇に関連した障害を治療する方法を提供する。その結果、本発明は、治療を必要としている対象者、例えばがんの対象者を治療する方法を提供する。該方法は、治療を必要としている対象者に、有効な量の、抗ＣＤ４７抗体又は抗ＣＤ４７抗体を含んでなる組成物を投与することを含んでなる。
【０１５３】
本明細書中で使用されるように、「対象者」及び「患者」という用語は、本発明の方法によって治療される生物体を指す。そのような生物体には好ましくは、限定するものではないが、哺乳動物（例えばネズミ科動物、類人猿、ウマ科動物、ウシ亜科動物、ブタ、イヌ科動物、ネコ科動物など）が含まれ、より好ましくはヒトが含まれる。本明細書中で使用されるように、用語「治療する」、「治療（処置）」及び「治療すること」は、結果的にその状態、疾患、障害などの好転、すなわちそれらの症状の改善をもたらす、何らかの効果、例えば、減少させること、低減すること、変調すること、改善すること又は排除すること、を含んでいる。
【０１５４】
本明細書中で使用されるように、用語「有効な量」とは、有益又は所望の結果をもたらすのに十分な化合物（例えば抗ＣＤ４７抗体分子）の量を指す。有効な量は、１又はそれ以上の投与、適用又は投薬量で投与されることが可能であり、かつ特定の調合又は投与経路に限定されることは意図されていない。一般に、治療上有効な量の活性成分は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内にある。投与される投薬量は、既知の要因、例えばその特定の作用薬の薬力学的特性、並びにその投与様式及び投与経路；被投与者の年齢、健康状態、及び体重；治療されるべき疾患又は兆候の種類及び程度、症状の性質及び程度、併用療法の種類、治療の頻度、並びに所望される効果、に応じて変化することができる。初期投薬量は所望の血中レベル又は組織内レベルを急速に達成するために上位レベルを超えて増加されることが可能である。別例として、初期投薬量は最適量より少ないことも可能であり、かつ毎日の投薬量が治療の過程において次第に増加されてもよい。ヒトの投薬量は、例えば、０．５ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇまで行うように設計された従来の第１相用量漸増試験において、最適化されることが可能である。投薬頻度は、投与経路、投薬量、抗体の血清中半減期、及び治療される疾患のような要因に応じて変化することが可能である。典型的な投薬頻度は１日１回、１週間に１回及び２週間に１回である。モノクローナル抗体を基にした医薬品の調合は当分野の技術の範囲内にある。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は凍結乾燥され、次いで投与時に緩衝生理食塩水中で再構成される。
【０１５５】
本発明は、細胞、組織、臓器、動物又は患者のがんを治療する方法を提供する。がんの例には、限定するものではないが、固形腫瘍、軟部組織腫瘍、造血器腫瘍及び転移性病巣が挙げられる。造血器腫瘍の例には、白血病、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞系、Ｔ細胞系若しくはＦＡＢのＡＬＬ、急性骨髄白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、例えば、形質転換型ＣＬＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、有毛細胞白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、リンパ腫、ホジキン病、悪性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、又はリヒター症候群（リヒターの形質転換）が挙げられる。固形腫瘍の例には、様々な臓器系の悪性病変、例えば肉腫、腺癌、及び癌腫であって、例えば、侵されるのが頭頚部（咽頭を含む）、甲状腺、肺（小細胞又は非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、乳房、リンパ、胃腸（例えば、口、食道、胃、肝臓、膵臓、小腸、結腸及び直腸、肛門管）、生殖器及び尿生殖路（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱、卵巣、子宮、子宮頚部、子宮内膜、前立腺、睾丸）、ＣＮＳ（例えば神経細胞若しくは膠細胞、例えば神経芽細胞腫若しくは神経膠腫）、又は皮膚（例えば黒色腫）であるものが挙げられる。ある実施形態では、固形腫瘍はＮＭＤＡ受容体陽性の奇形腫である。ある実施形態では、がんは、乳がん、結腸がん、膵臓がん（例えば膵神経内分泌腫瘍（ＰＮＥＴ）又は膵管腺癌（ＰＤＡＣ））、胃、子宮がん、又は卵巣がんから選ばれる。
【０１５６】
１つの実施形態では、がんは腹水を伴うがんである。腹水は数多くの種類のがんの症状であり、進行した肝臓病のようないくつかの状態によって引き起こされる場合もある。腹水を引き起こしやすい種類のがんは、乳房、肺、大腸（結腸）、胃、膵臓、卵巣、子宮（子宮内膜）及び腹膜のがんである。いくつかの実施形態では、腹水を伴うがんは、乳がん、結腸がん、膵臓がん、胃、子宮がん、又は卵巣がんから選ばれる。いくつかの実施形態では、がんは胸膜滲出を伴い、例えば肺がんである。
【０１５７】
さらなる血液がんには、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）（例えば、前白血病、不応性貧血、Ｐｈ陰性慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、骨髄様化生）、非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、末梢性Ｔ細胞性リンパ腫及びバーキットリンパ腫）、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫；Ｂ細胞前リンパ球性白血病；リンパ形質細胞性リンパ腫；脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（±有毛リンパ球）；有毛細胞白血病；プラスマ細胞骨髄腫／プラスマ細胞腫；ＭＡＬＴ型の節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫；節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（±単球様Ｂ細胞）；濾胞性リンパ腫；マントル細胞リンパ腫；びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫；バーキットリンパ腫；前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病；Ｔ細胞前リンパ球性白血病；Ｔ細胞顆粒リンパ性白血病；アグレッシブＮＫ細胞白血病；成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病（ＨＴＬＶ１陽性）；節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、鼻型；腸管症型Ｔ細胞性リンパ腫；肝脾γ‐δＴ細胞性リンパ腫；皮下脂肪織炎様Ｔ細胞性リンパ腫；菌状息肉腫／セザリー症候群；未分化大細胞リンパ腫、Ｔ／ｎｕｌｌ細胞型、原発性皮膚型；未分化大細胞リンパ腫、Ｔ／ｎｕｌｌ細胞型、原発性全身型；末梢性Ｔ細胞性リンパ腫、特徴付け不能なもの；血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症又は骨髄線維症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、辺縁帯リンパ腫、ＣＮＳリンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、及び前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、が挙げられる。
【０１５８】
例えば本明細書中に記載された抗体分子を含む、抗ＣＤ４７抗体は、がんに関連した障害、例えばがん誘発性の脳症を治療するために使用されることも可能である。
例えば本明細書中に記載された抗体分子を含む、抗ＣＤ４７抗体は、炎症性、自己免疫性、線維性、線維増殖性、アトピー性、又は血管形成性の障害を治療するために使用されることも可能である。炎症性障害の例には、限定するものではないが、慢性閉塞性肺疾患、喘息、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患（クローン病及び潰瘍性大腸炎を含む）、多発性硬化症、乾癬、虚血再潅流傷害、敗血症性ショック、加齢黄斑変性症（例えば滲出型加齢黄斑変性症）、アテローム硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、心血管疾患、脈管炎、１型及び２型糖尿病、メタボリック症候群、糖尿病性網膜症、再狭窄症が挙げられる。自己免疫性疾患の例には、限定するものではないが、喘息、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、１型糖尿病、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、橋本甲状腺炎、グレーブス病、ギラン‐バレー症候群、自己免疫性肝炎、及び重症筋無力症が挙げられる。線維性疾患の例には、限定するものではないが、強皮症、肝線維症、膵線維症、慢性閉塞性肺疾患、糖尿病性腎症、サルコイドーシス、特発性肺線維症、肝硬変、嚢胞性線維症、神経線維腫症、子宮内膜症、術後類線維腫、及び再狭窄症が挙げられる。アトピー性疾患の例には、限定するものではないが、アトピー性皮膚炎、アトピー性喘息、及びアレルギー性鼻炎が挙げられる。
【０１５９】
本発明の方法及び組成物は、他の治療剤及び治療手段（modality）のうち少なくともいずれか一方と組み合わせて使用されることが可能である。本明細書中で使用されるように、「組み合わせて」適用されるという用語は、対象者が障害を患う過程において該対象者に２つ（又はそれ以上）の異なる治療が送達されて、患者に対するそれらの治療の効果がある時点で重複するようになっている、ということを意味するように了解される。ある実施形態では、一方の治療の送達は第２の送達が始まる時にはまだ行われており、その結果、適用という点で重複が存在する。これは、本明細書中では「同時に行われる」又は「同時送達」と呼ばれることもある。他の実施形態では、一方の治療の送達は他方の治療の送達が始まる前に終了する。いずれの場合にせよいくつかの実施形態において、治療は組み合わされた適用であることから一層効果的である。例えば、第２の治療は、第２の治療が第１の治療の存在しない状態で適用された場合に見られるであろうよりも、一層効果的、例えば、第２の治療がより控えめであっても同等の効果が見られるか若しくは第２の治療が症状をより大きく低減する、又は、類似の状況が第１の治療について見られる。いくつかの実施形態では、送達は、症状、又はその障害に関係する他のパラメータの低減が、一方の治療が他方の存在しない状態で送達された場合に観察されるであろうものよりも、大きいようになっている。２つの治療の効果は、部分的に相加的であってもよいし、全体的に相加的であってもよいし、相加的より大きいものであってもよい。送達は、第２の治療が送達される時に送達済みの第１の治療の効果がまだ検出可能であるようになっていてもよい。
【０１６０】
１つの実施形態では、本発明の方法は、抗ＣＤ４７分子、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子、例えば本明細書中に記載の組成物又は調製物を、１以上のさらなる治療法、例えば外科手術、放射線療法、又は別の治療的調製物の投与と組み合わせて、対象者に投与することを含む。１つの実施形態では、さらなる治療法は化学療法、例えば細胞毒性薬を含みうる。１つの実施形態では、さらなる治療法は、標的設定型治療法、例えばチロシンキナーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、又はプロテアーゼ阻害剤を含みうる。１つの実施形態では、さらなる治療法は、抗炎症化合物、抗血管新生化合物、抗線維化化合物、又は抗増殖化合物、例えばステロイド、生物学的免疫修飾物質、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、アプタマー、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、融合タンパク質、サイトカイン、サイトカイン受容体、気管支拡張剤、スタチン、抗炎症剤（例えばメトトレキサート）、又はＮＳＡＩＤを含みうる。別の実施形態では、さらなる治療法は異なる部類の治療法を組み合わせることを含むことも考えられる。多糖調製物及びさらなる治療法が、同時に又は連続して適用されることが可能である。
【０１６１】
多糖調製物と組み合わせて投与されることが可能な典型的な細胞毒性薬には、抗微小管作用薬、トポイソメラーゼ阻害剤、抗代謝物、タンパク質合成及び分解阻害剤、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、プラチナ製剤、核酸合成の阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ阻害剤、例えばボリノスタット（ＳＡＨＡ、ＭＫ０６８３）、エンチノスタット（ＭＳ‐２７５）、パノビノスタット（ＬＢＨ５８９）、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ロミデプシン（ＦＫ２２８、デプシペプチド））、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素、エチレンイミン、スルホン酸アルキル、トリアゼン、葉酸アナログ、ヌクレオシドアナログ、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤、ビンカアルカロイド、タキサン、エポチロン、インターカレート剤、シグナル伝達経路に干渉する能力のある作用薬、アポトーシス及び放射線照射を促進する作用薬、又は毒剤を送達するために表面タンパク質に結合する抗体分子コンジュゲート、が挙げられる。１つの実施形態では、本明細書中に記載の調製物とともに投与されることが可能な細胞毒性薬は、プラチナ系作用薬（例えばシスプラチン）、シクロホスファミド、ダカルバジン、メトトレキサート、フルオロウラシル、ゲムシタビン、カペシタビン、ヒドロキシ尿素、トポテカン、イリノテカン、アザシチジン、ボリノスタット、イキサベピロン、ボルテゾミブ、タキサン（例えばパクリタキセル又はドセタキセル）、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、コルヒチン、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン又はエピルビシン）ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、１‐デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、リシン、又はメイタンシノイドである。
【０１６２】
１つの実施形態では、本発明の方法は、抗ＣＤ４７抗体分子、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子を、オプソニン化抗体と組み合わせて対象者に投与することを含む。
【０１６３】
実施形態では、オプソニン化抗体は、標的細胞（例えば腫瘍細胞）の貪食作用若しくは抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）、又は両方を容易にすることが可能である。１つの実施形態では、オプソニン化抗体の抗原結合部分は標的抗原に結合する一方、オプソニン化抗体のＦｃ部分は貪食細胞上のＦｃ受容体に結合する。他の実施形態では、オプソニン化抗体の抗原結合部分は標的抗原に結合する一方、オプソニン化抗体のＦｃ部分は、例えばそのＦｃドメインを介して、免疫エフェクター細胞に結合し、このようにして結合したエフェクター細胞（例えば単球、好中性およびナチュラルキラー細胞）による標的細胞の溶解を引き起こす。１つの実施形態では、オプソニン化抗体は、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＣＤ３０抗体、又は抗ＣＤ３３抗体のうち１以上を、単独又は組み合わせて含みうる。
【０１６４】
抗ＣＤ４７抗体分子、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子は、ＣＤ１９阻害剤と組み合わされて対象者に投与されうる。ＣＤ１９阻害剤は、抗体、抗体のフラグメント若しくはコンジュゲート、又は細胞療法であってよい。典型的な抗ＣＤ１９抗体又は該抗体のフラグメント若しくはコンジュゲートには、限定するものではないが、ブリナツモマブ、ＳＡＲ３４１９（サノフィ（Sanofi））、ＭＥＤＩ‐５５１（メディミューン・エルエルシー（Medlmmune LLC ））、コンボトックス（Combotox）、ＤＴ２２１９ＡＲＬ（メーソニック・キャンサー・センター（Masonic Cancer Center ））、ＭＯＲ‐２０８（ＸｍＡｂ‐５５７４とも呼ばれる；モルフォシス（MorphoSys ））、ＸｍＡｂ‐５８７１（ゼンコア（Xencor））、ＭＤＸ‐１３４２（ブリストル・マイヤーズ・スクイブ（Bristol-Myers Squibb））、ＳＧＮ‐ＣＤ１９Ａ（シアトル・ジェネティクス（Seattle Genetics））、及びＡＦＭ１１（アフィメド・セラピューティクス（Affimed Therapeutics））が挙げられる。ある実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、がん（例えばＢ細胞リンパ腫及び白血病、例えば急性リンパ芽球性白血病）の治療のためにＣＤ１９阻害剤と組み合わされて対象者に投与されうる。
【０１６５】
抗ＣＤ４７抗体分子、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子は、ＣＤ２０阻害剤と組み合わされて対象者に投与されうる。ＣＤ２０阻害剤は、小分子、抗体、抗体のフラグメント若しくはコンジュゲート、又は細胞療法であってよい。典型的な抗ＣＤ２０抗体には、限定するものではないが、リツキシマブ、オファツムマブ 、オクレリズマブ、ベルツズマブ、オビヌツズマブ、ＴＲＵ‐０１５（トルビオン・ファーマシューティカルズ（Trubion Pharmaceuticals ））、オカラツズマブ、及びＰｒｏ１３１９２１（ジェネンテック（Genentech ））が挙げられる。ある実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、がん又はがんに関連した障害、例えば非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、ＮＭＤＡ受容体陽性の奇形腫、又はがん誘発性の脳症、の治療のためにＣＤ２０阻害剤と組み合わされて対象者に投与されうる。ある実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、自己免疫性疾患、例えば慢性関節リウマチ又は重症筋無力症の治療のためにＣＤ２０阻害剤と組み合わされて対象者に投与されうる。
【０１６６】
抗ＣＤ４７抗体分子、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子は、ＣＤ３８阻害剤と組み合わされて対象者に投与されうる。ＣＤ３８阻害剤は、小分子、抗体、抗体のフラグメント若しくはコンジュゲート、又は細胞療法であってよい。１つの典型的な抗ＣＤ３８抗体はダラツムマブ （ジョンソン・アンド・ジョンソン（Johnson and Johnson ））である。ある実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、がん（例えば多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、及び白血病）の治療のためにＣＤ３８阻害剤と組み合わされて対象者に投与されうる。
【０１６７】
抗ＣＤ４７抗体分子、例えば本明細書中に記載の抗ＣＤ４７抗体分子は、ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体阻害剤と組み合わされて対象者に投与されうる。抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体阻害剤は、抗体、抗体のフラグメント若しくはコンジュゲート、又は細胞療法であってよい。１つの典型的な抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体抗体はトラスツズマブ（ジェネンテック）である。ある実施形態では、抗ＣＤ４７抗体分子は、がん（例えば乳がん、胃がん、例えば胃腺癌、卵巣がん、肺腺癌、子宮がん、唾液管癌、睾丸生殖細胞腫瘍、及び食道腫瘍）の治療のために抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ受容体抗体と組み合わされて対象者に投与されうる。
【０１６８】
説明全体にわたって、組成物及びキットが特定の構成要素を有している、備えている（含んでいる）、若しくは含んでなるとして記載される場合、又は、プロセス及び方法が特定のステップを有している、備えている（含んでいる）、若しくは含んでなるとして記載される場合、企図されるのは、さらに、その列挙された構成要素で本質的に構成されているか若しくは該構成要素で構成されている本発明の組成物及びキットが存在すること、並びに、その列挙された処理ステップ及び方法ステップで本質的に構成されているか若しくは該処理ステップ及び方法ステップで構成されている本発明のプロセス及び方法が存在すること、である。
【０１６９】
実施例
本発明の実行については先述の例から一層十分に理解されることになるが、それらの例は単に例証を目的として本明細書中に提示されており、かつどのようにも本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１７０】
実施例１  −  抗ＣＤ４７抗体分子の生成
本実施例は、マウスにおける抗ＣＤ４７抗体の生産について説明する。
ヒト免疫グロブリンの免疫レパートリーをネズミ科動物のレパートリーの代わりに担持している遺伝子操作マウス（ハーバー・アンタイボディーズ非公開株式会社（Harbour Antibodies BV ））が、可溶性ＣＤ４７‐Ｆｃ融合タンパク質を用いて免疫化された。抗ＣＤ４７モノクローナル抗体分子を発現する２８個のハイブリドーマが、脾細胞の骨髄腫細胞株との融合、スクリーニング及びクローニングの後に単離された。単離されたハイブリドーマには、２．３Ｄ１１、４．２Ｂ４、４．２Ｃ１１、４．１Ｈ１２、４．１２Ｅ２、２．１５Ａ５、２．７Ｂ６、２．１２Ｆ６、２．１５Ｅ４、２．３Ａ９、２．５Ｅ６、２．６Ｄ３、４．２Ｃ４、２．３Ｄ３、２．９Ｆ９、及び２．１Ｄ２と呼ばれる抗体分子を発現するハイブリドーマが含まれていた。単離されたハイブリドーマは、完全にヒトの可変ドメインとラットの定常ドメインとを備えた、重鎖及び軽鎖の両方を有する抗体分子を発現した。
【０１７１】
典型的な単離された抗ＣＤ４７抗体２．３Ｄ１１（以降「２．３Ｄ１１」と呼ばれる）は配列が決定され、以下さらに特性解析された。
【０１７２】
2018535692.tif 000014
を有する。
【０１７３】
2018535692.tif 000015
を有する。
【０１７４】
ひとたび単離されると、従来の組換えＤＮＡ技法を使用して、重鎖の定常領域はヒトＩｇＧ１（配列番号１７）、ヒトＩｇＧ４（配列番号２０）又はＳｅｒ２２８Ｐｒｏ及びＬｅｕ２３５Ｇｌｕ置換を含有するヒトＩｇＧ４（配列番号２１）に由来する重鎖定常領域に置き換えられ、かつ、軽鎖の定常領域はヒトのカッパ定常領域（配列番号２２）に置き換えられた。
【０１７５】
2018535692.tif 000016
を有する。
【０１７６】
2018535692.tif 000017
を有する。
【０１７７】
2018535692.tif 000018
を有する。
【０１７８】
2018535692.tif 000019
を有する。
【０１７９】
実施例２：抗ＣＤ４７抗体のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの特性解析
実施例１で生成された２．３Ｄ１１抗体は、その生物学的特性及び活性を確認するために、一連のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイで試験された。２．３Ｄ１１抗体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を強力に阻害して腫瘍細胞の貪食を増強することが見出された。驚いたことに、かつ予想外なことに、２．３Ｄ１１は、Ｂ６Ｈ１２とは異なり２．３Ｄ１１が血球凝集又は赤血球貪食作用を誘発しないにもかかわらず、ＣＤ４７への結合について基準の抗体Ｂ６Ｈ１２と交差競合することが見出された。
【０１８０】
《Ｉ  −  ＳＩＲＰαを阻止する活性》
ＳＩＲＰαはＣＤ４７の天然のリガンドである。２．３Ｄ１１がＣＤ４７‐ＳＩＲＰα相互作用を阻止する能力はフローサイトメトリーに基づいたアッセイを使用して計測され、該アッセイにおいてＣＤ４７を発現するジャーカット細胞は、抗ＣＤ４７抗体又は対照のモノクローナル抗体とともにインキュベートされ（抗体の用量設定は３倍希釈系列で１０μｇ／ｍｌ〜０．１７ｎｇ／ｍｌ）、洗浄され、次いでＳＩＲＰα‐Ｆｃ‐ｂｉｏ（７．５μｇ／ｍｌ；事前の力価測定から〜ＥＣ７０として測定）とともにインキュベートされた。細胞に結合したＳＩＲＰαはストレプトアビジン‐アロフィコシアニン（ＳＡ‐ＡＰＣ）を使用して検出された。図１に示されるように、２．３Ｄ１１抗体はＣＤ４７‐ＳＩＲＰα相互作用を強力に阻止した。
【０１８１】
《ＩＩ  −  ２．３Ｄ１１はＣＤ４７への結合についてＢ６Ｈ１２と競合する》
図２Ａ〜図２Ｃに示されたように、抗ＣＤ４７抗体であるＢ６Ｈ１２及び２．３Ｄ１１は、ＣＤ４７に対する結合について相互に交差競合（阻止）し、この２つの抗体の結合エピトープの間に重なり合いがあることが示唆されている。
【０１８２】
ＣＤ４７についてのそれらの交差競合を研究するために２つの手法が使用された。
第１に、ＤＵ‐１４５（ＣＤ４７を発現するヒト前立腺がん細胞株）細胞は、様々な濃度の精製された抗ＣＤ４７抗体又は対照抗体とともにプレインキュベートされ、洗浄され、次いで自己阻止及び交差阻止について評価するために該抗体のビオチン化体で染色された（図２Ａ〜図２Ｂ）。抗体のビオチン化体は、ストレプトアビジン・フルオレセインイソチオシアネート（ＳＡ‐ＦＩＴＣ）で検出された。第２に、Ｐａｎｃ‐１（ＣＤ４７を発現する膵癌細胞株）細胞はＢ６Ｈ１２及び濃度を漸増させた非標識２．３Ｄ１１とともに共インキュベートされた（図２Ｃ）。いずれの場合にも、２．３Ｄ１１はＣＤ４７への結合についてＢ６Ｈ１２と競合したが、このことは２つの抗体が重なり合っているエピトープに結合することを示している。
【０１８３】
《ＩＩＩ  −  カニクイザルＣＤ４７への２．３Ｄ１１の結合》
２．３Ｄ１１がカニクイザル（ｃｙｎｏ）のＣＤ４７に結合する能力について評価された。簡潔に述べると、ヒト及びｃｙｎｏの赤血球（ＲＢＣ）が単離されて各抗体の希釈系列と反応せしめられ、フローサイトメトリーによって分析された。図３Ａ〜図３Ｄに示されるように、２．３Ｄ１１はヒト及びｃｙｎｏ両方のＲＢＣに結合する。
【０１８４】
《ＩＶ  −  ２．３Ｄ１１は標的がん細胞の貪食作用を増強する》
ＣＤ４７は腫瘍細胞上でアップレギュレートされる細胞表面受容体であり、かつその天然のリガンドＳＩＲＰαとの相互作用により免疫回避に寄与するとも考えられている。ＣＤ４７によるマクロファージ上のＳＩＲＰαの連結反応は貪食活性の減少をもたらす。標的細胞の貪食作用に対する２．３Ｄ１１抗体の効果が評価された。
【０１８５】
簡潔に述べると、エフェクター細胞（初代ヒトマクロファージ（ヒト末梢血から単離されてＭ‐ＣＳＦを用いて７日間分化せしめられたＣＤ１４＋単球））は、標的細胞（カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識されたジャーカット細胞又はラージ細胞）とともに１：１〜１：４（エフェクター：標的）の比率で、抗ＣＤ４７抗体又はアイソタイプ対照の存在下で２時間、共培養された。貪食作用は、フローサイトメトリーによる計測で、ＣＤ１４＋細胞全体についての割合（％）としてのＣＤ１４＋ＣＦＳＥ＋イベントとして計測された。貪食作用を阻害するサイトカラシンＤが対照として使用された。図４Ａ〜図４Ｂ及び図５に示されるように、共培養物中の２．３Ｄ１１の存在は標的細胞の貪食作用を増強した。
【０１８６】
さらに、図６に示されるように、２．３Ｄ１１は抗ＣＤ２０抗体リツキシマブと協働してラージ細胞貪食作用を促進する。これらの結果は、腫瘍細胞貪食作用が、２．３Ｄ１１との併用時にオプソニン化抗体（例えば抗ＣＤ２０抗体）の存在下で増強されることが可能であることを示唆する。加えて、図７Ａ〜図７Ｃに示されるように、貪食作用は標的細胞上のＣＤ４７発現のレベルによって影響を受ける場合がある。２．３Ｄ１１は、〜３００ｎｇ／ｍＬのＥＣ５０を伴ってラージ腫瘍細胞株標的の貪食作用を高めた（データは示されていない）。
【０１８７】
《Ｖ  −  ２．３Ｄ１１の血球凝集活性》
２．３Ｄ１１の血球凝集させる能力について判断するために、ヒトＲＢＣは、用量範囲の抗ＣＤ４７抗体、例えば２．３Ｄ１１、４．２Ｂ４、４．２Ｃ１１、４．１Ｈ１２、４．１２Ｅ２、２Ｄ３、Ｂ６Ｈ１２、及びＡＢ６．１２‐ＩｇＧ４ＰＥ、又は対照と共に、９６ウェルプレート中でインキュベートされた。血球凝集の証跡は、凝集せしめられていないＲＢＣの点状のドットに対して混濁として現われている、沈殿しないＲＢＣの存在によって実証された。
【０１８８】
思いがけないことに、図８に示されるように、抗体２．３Ｄ１１は、血球凝集を引き起こすことが知られているＢ６Ｈ１２抗体との結合競合にもかかわらず、試験されたいずれの濃度においても赤血球凝集活性を示さなかった。
【０１８９】
《ＶＩ  −  ２．３Ｄ１１は標的赤血球の貪食作用を増強しない》
ＲＢＣへの２．３Ｄ１１の結合が、マクロファージによる貪食作用での取り込みの増大をもたらすかどうかを判断するために、上記のセクションＩＶに記載されたものに類似の貪食作用アッセイが、標的としてヒト又はｃｙｎｏのＲＢＣを使用してエフェクター：標的の比率１：１０で実施された。図９に示されるように、２．３Ｄ１１は、貪食作用を増強したＢ６Ｈ１２とは対照的に、ヒト及びｃｙｎｏのＲＢＣ貪食作用に対してごくわずかな影響しか及ぼさなかった。
【０１９０】
まとめると、２．３Ｄ１１によって媒介される貪食作用の増大は、正常な白血球及びＲＢＣを上回って腫瘍細胞について優先的である。
実施例３  −  腫瘍モデルにおける抗ＣＤ４７抗体のｉｎ  ｖｉｖｏでの効能
実施例１に記載されたようにして野生型ヒトＩｇＧ４（「２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４」）又はＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ二重突然変異型ヒトＩｇＧ４（「２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ」）のいずれかとして生産された２．３Ｄ１１の抗腫瘍活性は、バーキットリンパ腫ラージの異種移植モデルにおいて判断された。
【０１９１】
メスのＣＢ．１７ＳＣＩＤマウスに、５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）中の１×１０７個のラージＢ腫瘍細胞が皮下注射され、腫瘍が１００ｍｍ３に達した時に治療が開始された。アイソタイプ対照、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ抗体は、表示された用量で３週間にわたり、１週間に３回、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射された。リツキシマブは５ｍｇ／ｋｇとして週に一度、３週間にわたってｉ．ｐ．注射された。体重及び腫瘍容積は１週間に２度計測された。
【０１９２】
２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ（２００μｇ／マウス、ｔ．ｉ．ｗ．）の抗腫瘍効力は、バーキットリンパ腫のラージモデルにおいて比較された。図１０Ａに示されるように、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４抗体及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ抗体はいずれもこの異種移植モデルにおいて抗腫瘍活性を実証した。アイソタイプ対照群が２０００ｍｍ３に達した時（２４日目）、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４抗体及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ抗体の腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）活性はそれぞれ９７％及び７１％であった。
【０１９３】
ラージの異種移植モデルでは、クロドロネート投与によるマクロファージの枯渇が腫瘍成長阻止の低減をもたらしたので、２．３Ｄ１１誘導体の抗腫瘍活性は少なくとも部分的にはマクロファージに依存していた。腫瘍随伴マクロファージ（ＴＡＭ）の数及び分極状態も２．３Ｄ１１誘導体治療によって変調された（データは示されていない）。
【０１９４】
ラージのモデルは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫患者の第一選択療法として使用される抗ＣＤ２０抗体であるリツキシマブに感受性であることが示されている。リツキシマブ（５ｍｇ／ｋｇ、ｑ．ｗ．）と組み合わされた２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４（１００μｇ／マウス、ｔ．ｉ．ｗ．）及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ（２００μｇ／マウス、ｔ．ｉ．ｗ．）の抗腫瘍効力が、ラージのモデルにおいて評価された。治療開始後１９日目における２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔの結果は図１０Ｂに概括されている。２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ抗体単独のＴＧＩ活性は５１％であり、リツキシマブのＴＧＩは６７％であった。組み合わされた時、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ及びリツキシマブは９６％のＴＧＩを達成し、組み合わされた抗体による腫瘍成長阻害の相乗的な向上が示された。図１０Ｃは、治療開始後１９日目における２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４の結果を概括している。データは、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４が単独療法の設定において非常に強力であって、上述の実験の結果に類似した腫瘍退縮（治療開始時の１２４ｍｍ３から１９日目の４７ｍｍ３へ）及び９６％のＴＧＩをもたらしているが、半量の２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４抗体しか使用していない、ということを示している。２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４の高い能力は、リツキシマブとの組み合わせについて見込まれる付加的効果を評価することを困難にしている。しかしながら、初期の時点である１２日目において、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４治療群には腫瘍の無いマウスが１匹だけであり、一方組み合わせ治療群には腫瘍の無いマウスが５匹であったことは注目すべきである。上述のすべての実験において、体重減少は報告されなかった。
【０１９５】
まとめると、２．３Ｄ１１の投与は、単一剤として、及びオプソニン化抗体との組み合わせで、バーキットリンパ腫のモデルにおいて強い腫瘍成長阻害をもたらした。
実施例４  −  抗ＣＤ４７抗体のＦＣ型バリアント
３つの異なるＦｃ型で生産された２．３Ｄ１１の活性について、多様なアッセイで判断された。２．３Ｄ１１は、野生型ヒトＩｇＧ４（「２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４」）若しくはＳ２２８Ｐ／Ｌ２３５Ｅ二重突然変異型ヒトＩｇＧ４（「２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ」）又は野生型ＩｇＧ１（「２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１」）を用いて生産された。
【０１９６】
《Ｉ  −  ＲＢＣ貪食作用》
ヒト赤血球（ＲＢＣ）は健康な供血者から単離され、ＣＦＳＥで標識された。標識されたＲＢＣは、７日目のヒトマクロファージとともに、２．３Ｄ１１抗体、アイソタイプ対照、又は抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２の存在下で、標的とエフェクターとの比率を１０：１として２時間培養された。培養後、細胞はトリプシン処理され、抗ＣＤ１４‐ＡＰＣで染色され、フローサイトメトリーによって分析された。
【０１９７】
貪食作用は、ＣＤ１４＋イベント（マクロファージ）であってさらにＣＦＳＥ＋でもあり従って標的を飲み込んだものの割合（％）として定量された（イベントはシングレットについてゲーティングされた）。アイソタイプ対照又は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４若しくは２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ抗体の間で有意差は観察されなかったが、Ｂ６Ｈ１２は強力にＲＢＣ貪食作用を引き起こした。代表的なデータは図１１に示されている。
【０１９８】
《ＩＩ  −  極性化マクロファージによる貪食作用》
初代ヒト単球は、１００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ‐ＣＳＦ）の存在下で６日間分化せしめられた。６日目に、マクロファージは、（Ａ）Ｍ‐ＣＳＦ単独、極性化されていないマクロファージを生じるもの、（Ｂ）Ｍ‐ＣＳＦ＋インターロイキン１０（ＩＬ‐１０）、形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）及びインターロイキン４（ＩＬ‐４）、マクロファージをＭ２表現型へと極性化するもの、（Ｃ）Ｍ‐ＣＳＦ＋インターフェロンγ及びリポ多糖（ＬＰＳ）、マクロファージをＭ１表現型へと極性化するもの、又は（Ｄ）Ｍ‐ＣＳＦ＋デキサメサゾン（Ｄｅｘ）、マクロファージを強力なＭ２表現型へと極性化するもの、のいずれかの存在下に一晩、再播種された。
【０１９９】
貪食作用アッセイは７日目に、標的としてＣＦＳＥ標識されたジャーカット細胞を使用して、上述のようにして実施された。結果は図１２Ａ〜図１２Ｄに概括されており、同図は、抗ＣＤ４７抗体２．３Ｄ１１が、Ｆｃ型にかかわらず、Ｍ１及びＭ２極性化マクロファージいずれによる貪食作用も増強することを実証している。
【０２００】
《ＩＩＩ  −  腫瘍細胞貪食作用》
初代ヒト単球は、１００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ‐ＣＳＦ）の存在下で７日間分化せしめられた。ＡＭＬ患者又は健康な供与者由来の凍結骨髄試料は融解され、ＣＦＳＥで標識され、分化せしめられたマクロファージとともに２時間、標的とエフェクターとの比率を１：１として、１０又は５μｇ／ｍＬのうちいずれかの、表示の抗体の存在下で培養された。貪食作用は上述のようにして定量された。結果は図１３に概括されており、同図は、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４抗ＣＤ４７抗体がいずれもＡＭＬ患者由来の骨髄細胞の貪食作用を刺激することを実証している。
【０２０１】
《ＩＶ  −  バーキットリンパ腫ラージの異種移植モデル》
ＳＣＩＤ‐Ｂｅｉｇｅマウスに、５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ中の１×１０７個のラージＢ腫瘍細胞が皮下注射され、腫瘍が１００ｍｍ３に達した時に治療が開始された。アイソタイプ対照（ポリクローナルのヒトＩｇＧ）、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１抗体が、２００μｇの抗体を用いて１週間に３回、３週間にわたって腹腔内に（ｉ．ｐ．）注射された。体重及び腫瘍容積は１週間に２回計測された。
【０２０２】
図１４に示されるように、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４及び２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔの抗ＣＤ４７抗体はこの異種移植モデルにおいて抗腫瘍活性を実証したが、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４ｍｔ抗体は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４又は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ１抗体のいずれよりも顕著に劣る腫瘍成長阻害を示した。
【０２０３】
実施例５  −  抗体２．３Ｄ１１及び抗ＣＤ３８抗体は多発性骨髄腫細胞のマクロファージ貪食作用を増強するように相乗的に作用する
本実施例は、２．３Ｄ１１に由来する抗体が抗ＣＤ３８オプソニン化抗体とともに相乗的に作用することを示す。
【０２０４】
初代ヒト単球は、１００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ‐ＣＳＦ）の存在下で７日間分化せしめられた。初代多発性骨髄腫骨髄試料はＣＦＳＥ標識され、１０μｇ／ｍＬの抗体２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４、抗ヒトＣＤ３８‐ｈＩｇＧ１抗体（ＭＡＢ１１３５、ジー・アンド・ピー・バイオサイエンシズ（G and P Biosciences））、又は両方の存在下で（単一剤の条件は１０μｇ／ｍＬのアイソタイプ対照で補われた）、分化せしめられたヒトマクロファージとともに２：１の比率で共培養された。
【０２０５】
貪食作用はフローサイトメトリーによって評価され、ＣＦＳＥ陽性であるマクロファージの割合（％）として報告された。結果は図１５に概括されており、同図は、抗ＣＤ４７抗体と抗ＣＤ３８抗体との組み合わせがいずれか一方の抗体単独と比較して、多発性骨髄腫細胞の貪食作用を相乗的に増強することを示している。
【０２０６】
まとめると、ここで示された結果は、抗ＣＤ４７抗体２．３Ｄ１１が、単独及びオプソニン化抗体との組み合わせのいずれにおいても、多発性骨髄腫の前臨床モデルにおいて強固な腫瘍細胞貪食作用及び腫瘍クリアランスを誘発することを実証している。
【０２０７】
実施例６  −  抗体２．３Ｄ１１及び抗ＣＤ３８抗体は多発性骨髄腫のネズミ科動物異種移植モデルにおいて腫瘍量を低減するように相乗的に作用する
本実施例は、２．３Ｄ１１由来の抗体が多発性骨髄腫のネズミ科動物モデルにおいて抗ＣＤ３８オプソニン化抗体と組み合わされたときに観察可能な相乗的な特質について説明する。
【０２０８】
８〜１２週齢のメスのＣＢ．１７ＳＣＩＤマウス（チャールス・リバー（Charles River ））は、５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ中の１×１０７個のＨ９２９腫瘍細胞を右脇腹に皮下注射された。細胞の注射体積は０．１ｍＬ／マウスであった。腫瘍が平均１００〜１５０ｍｍ３の大きさに達した時、動物は対照群又は治療群に無作為選択された。治療群には、３０μｇ／マウス（１週間に３回、３週間にわたり腹腔内（ｉ．ｐ．）注射）の２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４、１０μｇ／マウス（単回投与でｉ．ｐ．注射）のダラツムマブ、及び２つの抗体の組み合わせが含まれた。腫瘍容積は、式（長さ＊幅２＊０．５２）を使用してキャリパで週に２回計測された。結果は図１６に示されており、２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４及びダラツムマブの組み合わせの抗腫瘍活性が単一剤単独のいずれよりも大きいことを実証している。
【０２０９】
実施例７  −  抗体２．３Ｄ１１は慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）細胞の貪食作用を増強する
本実施例は、２．３Ｄ１１由来の抗体によって媒介される慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）細胞の貪食作用の増強について説明する。
【０２１０】
初代ヒト単球は、１００ｎｇ／ｍＬの組換えヒトマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ‐ＣＳＦ）の存在下で７日間分化せしめられた。ＣＬＬ患者の末梢血由来のＣＤ１９＋／ＣＤ５＋腫瘍細胞はＣＦＳＥ標識され、分化せしめられたヒトマクロファージとともに２：１の比率で２時間、抗体２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４又はアイソタイプ対照（ｈＩｇＧ４定常領域を備えた抗ＤＮＰ抗体）の存在下で共培養された。貪食作用は、上述のようにしてフローサイトメトリーによって評価され、ＣＦＳＥ陽性であるＣＤ１４＋マクロファージの割合（％）として報告された。
【０２１１】
結果は図１７に概括されており、同図は２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４がｉｎ  ｖｉｔｒｏでのマクロファージによる初代ＣＬＬ細胞の貪食作用を著しく高める能力を実証している。これらのデータは、様々な病期のＣＬＬが２．３Ｄ１１  ＩｇＧ４治療に応答しうることを示唆している。
【０２１２】
参照による組み込み
本明細書中で引用された特許文献及び科学論文各々の全開示内容は、あらゆる目的のために参照により組み込まれる。
【０２１３】
等価物
本発明は、本発明の思想又は本質的特徴から逸脱することなく他の特定の形態で具体化されうる。したがって先述の実施形態は、あらゆる点において、本明細書中に記載の発明を限定するのではなく例証するものとみなされるべきである。よって本発明の範囲は、先述の説明によってではなく添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の等価の意味及び範囲の範囲内に入る全ての変更は、特許請求の範囲に包含されるように意図されている。
【図１】
2018535692.tif 000020
【図２Ａ】
2018535692.tif 000021
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ−４Ｃ】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８】
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【図９Ａ−９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２Ａ−１２Ｄ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年7月21日(2017.7.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗ＣＤ４７抗体分子であって、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含んでなる抗体分子。
【請求項２】
配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）を含んでなる単離された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる組成物。
【請求項３】
単離された抗ＣＤ４７抗体分子であって、配列番号４に記載のアミノ酸配列の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号６に記載のアミノ酸配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる抗体分子。
【請求項４】
野生型又は突然変異型のＩｇＧ１重鎖定常領域をさらに含んでなる請求項１又は請求項３に記載の単離された抗ＣＤ４７抗体分子。
【請求項５】
野生型又は突然変異型のＩｇＧ４重鎖定常領域をさらに含んでなる請求項１又は請求項３に記載の単離された抗ＣＤ４７抗体分子。
【請求項６】
ＩｇＧ４重鎖定常領域は、Ｓ２２８Ｐ置換及びＬ２３５Ｅ置換のうち一方又は両方を含んでなる、請求項５に記載の単離された抗ＣＤ４７抗体分子。
【請求項７】
配列番号４に記載のアミノ酸配列の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号６に記載のアミノ酸配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）を有している単離された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる組成物。
【請求項８】
抗ＣＤ４７抗体分子は野生型又は突然変異型のＩｇＧ１重鎖定常領域をさらに含んでなる請求項２又は請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
抗ＣＤ４７抗体分子は野生型又は突然変異型のＩｇＧ４重鎖定常領域をさらに含んでなる請求項２又は請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
ＩｇＧ４重鎖定常領域は、Ｓ２２８Ｐ置換及びＬ２３５Ｅ置換のうち一方又は両方を含んでなる、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
配列番号１５、配列番号２３、配列番号２４又は配列番号２５に記載のアミノ酸配列の重鎖と、配列番号１６又は配列番号２６に記載のアミノ酸配列の軽鎖とを含んでなる単離された抗ＣＤ４７抗体分子。
【請求項１２】
配列番号１５、配列番号２３、配列番号２４又は配列番号２５に記載のアミノ酸配列の重鎖及び配列番号１６又は配列番号２６に記載のアミノ酸配列の軽鎖を含んでなる単離された抗ＣＤ４７抗体分子と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は希釈剤とを含んでなる組成物。
【請求項１３】
治療（又は予防）を必要とする対象者のがんを治療する（又は予防する）方法であって、請求項１に記載の単離された抗ＣＤ４７抗体分子を対象者に投与することを含んでなる方法。
【請求項１４】
治療（又は予防）を必要とする対象者のがんを治療する（又は予防する）方法であって、請求項２、７又は１２のいずれか１項に記載の組成物を対象者に投与することを含んでなる方法。
【請求項１５】
前記組成物は、腸管外、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、腹内、嚢内、軟骨内、洞内、腔内、結腸内、頚管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、腹腔内、胸膜腔内、前立腺内、肺内、直腸内、脊髄内、滑液内、直腸、口腔、舌下、鼻腔内、又は経皮的な送達によって投与される、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
組成物は皮下に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
組成物は静脈内に投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
組成物は化学療法剤又は治療用抗体分子と組み合わせて投与される、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
組成物はオプソニン化抗体分子と組み合わせて投与される、請求項１３〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
オプソニン化抗体分子は、抗ＣＤ１９抗体分子、抗ＣＤ２０抗体分子、又は抗ＣＤ３８抗体分子である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
オプソニン化抗体分子は抗ＣＤ２０抗体分子である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
抗体分子はリツキシマブである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
がんは血液がんである、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
血液がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ‐ＡＬＬ、Ｂ‐ＡＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、例えば形質転換型ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、末梢性Ｔ細胞性リンパ腫及びバーキットリンパ腫）、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、ＳＬＬ、辺縁帯リンパ腫、ＣＮＳリンパ腫、リヒター症候群、多発性骨髄腫、骨髄線維症、真性赤血球増加、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ＭＧＵＳ、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、及び未分化大細胞リンパ腫で構成される群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
血液がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、例えば形質転換型ＣＬＬ、マントル細胞リンパ腫、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫、及びバーキットリンパ腫）、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、リヒター症候群、及び多発性骨髄腫で構成される群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
血液がんは急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又はバーキットリンパ腫である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
がんは固形腫瘍である、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
がんは、肺（例えば非小細胞肺がん、小細胞肺がん）、膵臓、乳房、肝臓、卵巣、精巣、腎臓、膀胱、脊椎、脳、頚部、子宮内膜、結腸／直腸、肛門、食道、胆嚢、胃腸管、皮膚、前立腺、脳下垂体、胃、子宮、膣、及び甲状腺で構成される群から選択された組織のがんである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
がんは腹水を伴い、かつ任意選択で、卵巣の腺癌、子宮の腺癌、乳房の腺癌、結腸の腺癌、胃の腺癌、及び膵臓の腺癌で構成される群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
がんは、膵臓がん、卵巣がん、乳がん、胃がん、結腸がん、前立腺がん、及び子宮がんで構成される群から選択される、請求項１３〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
抗ＣＤ４７抗体分子をコードしている単離核酸分子であって、配列番号７に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＨＣ  ＣＤＲ１）、配列番号８に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域２（ＨＣ  ＣＤＲ２）、配列番号９に記載のアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域３（ＨＣ  ＣＤＲ３）、配列番号１０に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＬＣ  ＣＤＲ１）、配列番号１１に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域２（ＬＣ  ＣＤＲ２）、及び配列番号１２に記載のアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域３（ＬＣ  ＣＤＲ３）をコードする核酸配列を含んでなる単離核酸分子。
【請求項３２】
核酸は、配列番号４に記載のアミノ酸配列の重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号６に記載のアミノ酸配列の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでなる抗ＣＤ４７抗体分子をコードする、請求項３１に記載の単離核酸分子。
【請求項３３】
核酸は、配列番号１５に記載のアミノ酸配列の重鎖及び配列番号１６に記載のアミノ酸配列の軽鎖を含んでなる抗ＣＤ４７抗体分子をコードする、請求項３１又は３２に記載の単離核酸分子。
【請求項３４】
請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の核酸分子を含んでなるベクター。
【請求項３５】
請求項３４に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
【国際調査報告】
2018535692.tif 000046
2018535692.tif 000047
2018535692.tif 000048