(57)【要約】  本発明は重水素化ケノデオキシコール酸誘導体およびこの化合物を含む薬物組成物に関する。具体的に、本発明は式（I）で表される重水素化ケノデオキシコール酸誘導体および当該化合物、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を含む薬物組成物を公開する。本発明の上記化合物は、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、胆石、原発性胆汁性肝硬変、肝硬変、などの治療および/または予防に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）で表される重水素化ケノデオキシコール酸誘導体、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物。
【化１】
2018505220.tif 000028
（ただし、
R1、R2、R3、R4、R5およびR6はそれぞれ独立に水素または重水素である。
付加条件は、R1、R2、R3、R4、R5またはR6のうち、少なくとも1つが重水素であることである。）
【請求項２】
R2は重水素で、かつ/またはR1は重水素であることを特徴とする、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
以下の群から選ばれる化合物またはその薬学的に許容される塩であることを特徴とする、請求項1に記載の化合物。
【化２】
2018505220.tif 000029
【化３】
2018505220.tif 000030
【請求項４】
非重水素化の化合物以外のものであることを特徴とする、請求項1に記載の化合物。
【請求項５】
前記の非重水素化の化合物は、3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-5β-コラン-24-酸であることを特徴とする、請求項4に記載の一般式I化合物。
【請求項６】
薬学的に許容される担体と、請求項1〜5のいずれか一項に記載の化合物、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物とを含むことを特徴とする、薬物組成物。
【請求項７】
さらにほかの治療薬を含み、前記ほかの治療薬は癌、心血管疾患、炎症、感染症、免疫性疾患、または代謝性疾患を治療する薬物であることを特徴とする、請求項6に記載の薬物組成物。
【請求項８】
注射剤、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤または顆粒剤であることを特徴とする、請求項6に記載の薬物組成物。
【請求項９】
ファルネソイドX受容体（FXR）作動剤および/またはGタンパク質共役胆汁酸受容体（GPBARまたはTGR5）作動剤として有用な薬物組成物の製造における、請求項1に記載の化合物、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物あるいは請求項6に記載の薬物組成物の使用。
【請求項１０】
前記薬物組成物は、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、胆石、原発性胆汁性肝硬変、肝硬変、肝線維化、糖尿病、アテローム性動脈硬化および肥満からなる群から選択される疾患の治療および予防のための薬物の製造に使用されることを特徴とする、請求項9に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬の分野に属する。具体的に、本発明は、新規な重水素化ケノデオキシコール酸誘導体およびこの化合物を含む薬物組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ファルネソイドX受容体（Farnesoid X Receptor、FXR）は、核内受容体（Nuclear Receptor）ファミリーの一員で、主に肝臓、小腸などの腸管系で発現され、胆汁酸代謝やコレステロール代謝などの部分に関与する。胆汁酸は、多くの生理機能を有し、脂肪の吸収、輸送、分配およびコレステロールの動的平衡などの過程において重要な役割を果たす。ファルネソイドX受容体は、ケノデオキシコール酸などの胆汁酸の受容体として、胆汁酸代謝に関与する遺伝子の発現を調節することによって胆汁酸の体内における平衡を維持する。また、ファルネソイドX受容体は、体内におけるブドウ糖の動的平衡およびインスリン抵抗性などの面でおいても重要な機能を発揮する。そのため、ファルネソイドX受容体作動剤は、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、胆石、原発性胆汁性肝硬変、肝硬変、肝線維化、糖尿病、高コレステロール血症、アテローム性動脈硬化、肥満、高トリグリセリド血症などを治療する薬物としての開発が期待されている。
【０００３】
ケノデオキシコール酸および誘導体は一種類のファルネソイドX受容体の作動剤である。特許WO2010059859およびWO2005082925では、一連のケノデオキシコール酸誘導体が公開され、中では、化合物のオベチコール酸（Obeticholic acid）は選択的な、ファルネソイドX受容体作動剤で、化学名は3a,7a -ジヒドロキシ-6a-エチル-5b-コラン-24-酸（3a,7a-dihydroxy-6a-ethyl-5b-cholan-24-oic acid）で、非アルコール性脂肪性肝炎および非アルコール性脂肪性肝関連疾患を治療する用途を有する。現在、オベチコール酸は、第III相臨床研究の段階にある。
【０００４】
オベチコール酸は、肝臓の炎症および線維化レベルなどの改善の面では優れた臨床効果を示し、ある程度の体重の減少およびインスリン感度の増加などの作用もあるが、痒みや低密度リポタンパク質の上昇などの副作用も見られるため、選択性、高い活性および安全性を持つファルネソイドX受容体作動剤の探求はまだ大きな挑戦である。
【０００５】
そのため、本分野ではまだファルネソイドX受容体に優れた作動作用、またはより優れた薬効学/薬物動態学における機能を有する化合物の開発が必要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】WO2010059859
【特許文献２】WO2005082925
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、ファルネソイドX受容体に対する作動活性およびより優れた薬効学/薬物動態学における機能を有する新規な化合物およびその用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の第一の側面では、式（I）で表される重水素化ケノデオキシコール酸誘導体、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【０００９】
【化１】
2018505220.tif 000002
【００１０】
（式中において、
R1、R2、R3、R4、R5およびR6はそれぞれ独立に水素または重水素である。
付加条件は、R1、R2、R3、R4、R5またはR6のうち、少なくとも1つが重水素であることである。）
【００１１】
もう一つの好適な例において、重水素の置換位置での重水素同位元素の含有量が少なくとも自然の重水素同位元素の含有量（0.015％）よりも多く、好ましくは30％、好ましくは50％、好ましくは75％、好ましくは95％、好ましくは99％よりも多い。
【００１２】
もう一つの好適な例において、式（I）化合物は少なくとも重水素原子を1個、好ましくは2個、より好ましくは3個、さらに好ましくは5個、またさらに好ましくは6個含有する。
【００１３】
もう一つの好適な例において、R1は水素または重水素である。
【００１４】
もう一つの好適な例において、R2は水素または重水素である。
【００１５】
もう一つの好適な例において、R3は水素または重水素である。
【００１６】
もう一つの好適な例において、R4およびR5は独立に水素または重水素から選ばれる。
【００１７】
もう一つの好適な例において、R6は水素または重水素である。
【００１８】
もう一つの好適な例において、R1は重水素である。
【００１９】
もう一つの好適な例において、R2は重水素である。
【００２０】
もう一つの好適な例において、R3は重水素である。
【００２１】
もう一つの好適な例において、R4は重水素で、かつ/またはR5は重水素である。
【００２２】
もう一つの好適な例において、R2は重水素で、かつ/またはR1は重水素である。
【００２３】
もう一つの好適な例において、前記化合物は、以下の化合物またはその薬学的に許容される塩からなる群から選ばれる。
【００２４】
【化２】
2018505220.tif 000003
【化３】
2018505220.tif 000004
【００２５】
もう一つの好適な例において、前記化合物は、以下の化合物またはその薬学的に許容される塩からなる群から選ばれる。
【００２６】
【化４】
2018505220.tif 000005
【化５】
2018505220.tif 000006
【化６】
2018505220.tif 000007
【００２７】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、
【化７】
2018505220.tif 000008
で、MS計算値：421、MS測定値：422(M+H)+、444(M+Na)+という特徴を有する。
【００２８】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、
【化８】
2018505220.tif 000009
で、MS計算値：423、MS測定値：424(M+H)+、446(M+Na)+という特徴を有する。
【００２９】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、
【化９】
2018505220.tif 000010
で、MS計算値：426、MS測定値：427(M+H)+、449(M+Na)+という特徴を有する。
【００３０】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、
【化１０】
2018505220.tif 000011
で、MS計算値：425、MS測定値：426(M+H)+、448(M+Na)+という特徴を有する。
【００３１】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、
【化１１】
2018505220.tif 000012
で、MS計算値：428、MS測定値：429(M+H)+、451(M+Na)+という特徴を有する。
【００３２】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、
【化１２】
2018505220.tif 000013
で、MS計算値：429、MS測定値：430(M+H)+、452(M+Na)+という特徴を有する。
【００３３】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、
【化１３】
2018505220.tif 000014
で、MS計算値：422、MS測定値：423(M+H)+、445(M+Na)+という特徴を有する。
【００３４】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、
【化１４】
2018505220.tif 000015
で、MS計算値：427、MS測定値：428(M+H)+、450(M+Na)+という特徴を有する。
【００３５】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、非重水素化の化合物以外のものである。
【００３６】
もう一つの好適な例において、前記の非重水素化の化合物は、オベチコール酸で、すなわち3a,7a -ジヒドロキシ-6a-エチル-5b-コラン-24-酸である。
【００３７】
もう一つの好適な例において、前記の化合物は、実施例1〜4に記載の方法で製造される。
【００３８】
本発明の第二の側面では、薬物組成物を製造する方法であって、薬学的に許容される担体を本発明の第一に記載の化合物、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物と混合し、薬物組成物を形成する工程を含む方法を提供する。
【００３９】
本発明の第三の側面では、薬学的に許容される担体と、本発明の第一に記載の化合物、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物とを含む薬物組成物を提供する。
【００４０】
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物は、注射剤、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、または顆粒剤である。
【００４１】
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物は、さらにほかの治療薬を含み、前記のほかの治療薬は癌、心血管疾患、炎症、感染症、免疫性疾患、代謝性疾患、または臓器移植を治療する薬物である。
【００４２】
もう一つの好適な例において、前記の癌は、肺癌、乳癌、前立腺癌、食道癌、直腸癌、結腸癌、血液癌（または悪性血液疾患）、骨癌、腎臓癌、胃癌、肝臓癌または大腸癌を含むが、これらに限定されない。
【００４３】
もう一つの好適な例において、前記の癌は、肝臓癌である。
【００４４】
より好ましくは、前記のほかの治療薬はソラフェニブ、レゴラフェニブ、ドナフェニブ（Donafenib）、シスプラチン、ドキソルビシン、ゲムシタビン、FOLFOX、デシタビン、カペシタビン、スタチン系薬物（ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、メバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、ロスバスタチンなど）、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、メトホルミン、アカルボース、ボグリボース、スルホニルウレア系血糖降下薬（グリピジド、グリクラジド、グリメピリドなど）、ジペプチジルペプチダーゼ-4（DPP-4）阻害剤系血糖降下薬（たとえばシタグリプチン、ビルダグリプチン、サクサグリプチン、アログリプチン、リナグリプチンなど）、ナトリウム依存性グルコース輸送体（SGLT2）阻害剤系血糖降下薬（たとえばダパグリフロジン、カナグリフロジンなど）、グルカゴン様ペプチド-1（GLP-1）受容体作動薬（たとえばエキセナチド、リラグルチド、リキシセナチドなど）、インターフェロン、ポリエチレングリコール-インターフェロン、抗C型肝炎薬（たとえばソホスブビル、テラプレビル、ボセプレビル、ACH-3102、ダクラタスビル、デレオブビル、レジパスビルなど）、抗B型肝炎薬（たとえばラミブジン、アデフォビル、テルビブジン、エンテカビル、テノホビル、クレブジンなど）を含むが、これらに限定されない。
【００４５】
本発明の第四の側面では、ファルネソイドX受容体（FXR）作動剤および/またはGタンパク質共役胆汁酸受容体（GPBARまたはTGR5）作動剤の薬物組成物の製造のための本発明の第一に記載の式(I)化合物、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物、本発明の第三に記載の薬物組成物の使用を提供する。
【００４６】
もう一つの好適な例において、前記の薬物組成物は、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、胆石、原発性胆汁性肝硬変、肝硬変、肝線維化、糖尿病、アテローム性動脈硬化、肥満の治療および予防のための薬物の製造に使用される。
【００４７】
本発明の第五の側面では、ファルネソイドX受容体（FXR）作動剤および/またはGタンパク質共役胆汁酸受容体（GPBARまたはTGR5）作動剤の治療方法または疾患（たとえば癌、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、胆石、原発性胆汁性肝硬変、肝硬変、肝線維化、糖尿病、アテローム性動脈硬化、肥満）の治療方法であって、治療が必要な対象に、本発明の第一に記載の化合物、またはその結晶型、薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物、あるいは本発明の第三に記載の薬物組成物を施用する工程を含む方法を提供する。
【００４８】
もちろん、本発明の範囲内において、本発明の上記の各技術特徴および下記（たとえば実施例）の具体的に記述された各技術特徴は互いに組合せ、新しい、または好適な技術方案を構成できることが理解される。紙数に限りがあるため、ここで逐一説明しない。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本発明者らは、研究した結果、意外にも、本発明の重水素化ケノデオキシコール酸誘導体およびその薬学的に許容される塩は重水素化さていない化合物と比べると、顕著により優れた薬物動態学および/または薬効学の機能を持つため、ファルネソイドX受容体（FXR）作動剤および/またはGタンパク質共役胆汁酸受容体（GPBARまたはTGR5）作動剤としてより適切な化合物で、さらにファルネソイドX受容体（FXR）および/またはGタンパク質共役胆汁酸受容体（GPBARまたはTGR5）に関連する疾患を治療するための薬物の製造により適することを見出した。これに基づき、本発明を完成させた。
【００５０】
定義
本明細書で用いられるように、「ハロゲン」とは、F、Cl、Br、およびIを指す。ハロゲン原子がF、ClおよびBrから選ばれることが好ましい。
【００５１】
本明細書で用いられるように、「より優れた薬物動態学および/または薬効学の機能」とは、より長い薬物半減期（t1/2）、またはより高い薬物暴露量（AUC）、またはより高い最高薬物濃度（Cmax）、またはより低いクリアランスを指す。
【００５２】
本明細書で用いられるように、「重水素化」とは、化合物または基における1個または2個以上の水素が重水素で置換されることを指す。
【００５３】
本明細書で用いられるように、「非重水素化の化合物」とは、重水素原子の含有比率が自然の重水素同位元素の含有量（0.015％）以下の化合物である。
【００５４】
もう一つの好適な例において、重水素の置換位置での重水素同位元素の含有量が自然の重水素同位元素の含有量（0.015％）よりも多く、好ましくは50％、好ましくは75％、好ましくは95％、好ましくは97％、好ましくは99％、好ましくは99.5％よりも多い。
【００５５】
もう一つの好適な例において、式（I）の化合物は少なくとも重水素原子を1個、好ましくは2個、3個、より好ましくは4個、さらに好ましくは6個含有する。
【００５６】
式（I）の化合物において、Oが16Oであることが好ましい。
【００５７】
もう一つの好適な例において、前記化合物において、16Oの酸素原子の存在位置での同位元素の含有量が≧95％、好ましくは≧99％である。
【００５８】
活性成分
本明細書で用いられるように、用語「本発明化合物」とは式（I）で表される化合物である。この用語は、さらに、式（I）の化合物の各種の結晶型、薬学的に許容される塩、水和物または溶媒和物を含む。
【００５９】
ここで、用語「薬学的に許容される塩」とは本発明化合物と酸または塩基とで形成される、薬物として適切な塩である。薬学的に許容される塩は無機塩と有機塩を含む。一種類の好適な塩は、本発明化合物と酸とで形成される塩である。塩の形成に適切な酸は、プロリン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などのアミノ酸を含むが、これらに限定されない。もう一種類の好適な塩は、本発明化合物と塩基とで形成される塩で、たとえばアルカリ金属塩（たとえばナトリウム塩、カリウム塩）、アルカリ土類金属塩（たとえばマグネシウム塩またはカリシウム塩）、アンモニウム塩（たとえば低級アルカノールのアンモニウム塩および他の薬学的に許容されるアミン塩）、たとえばメチルアミン塩、エチルアミン塩、プロピルアミン塩、ジメチルアミン塩、トリメチルアミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、t-ブチルアミン塩、エチレンジアミン塩、ヒドロキシエチルアミン塩、ジヒドロキシエチルアミン塩、トリヒドロキシエチルアミン塩、およびそれぞれモルホリン、ピペラジン、リシンから形成されるアミン塩が挙げられる。
【００６０】
用語「溶媒和物」とは本発明化合物と溶媒分子が配位して形成される特定の比率の錯体をいう。用語「水和物」とは本発明化合物と水が配位して形成される錯体をいう。
【００６１】
また、本発明化合物は、さらに式（I）で表されるケノデオキシコール酸誘導体のエナンチオマー、またはラセミ体を含む。
【００６２】
また、本発明化合物は、さらに式（I）で表されるケノデオキシコール酸誘導体のグルクロン酸抱合体（glucuronides）、タウリン（taurine）抱合体を含む。
【００６３】
また、本発明化合物は、さらに式（I）で表されるケノデオキシコール酸誘導体のプロドラッグを含む。用語「プロドラッグ」は、自身が生物学的活性を有してもよく非活性でもよく、適切の方法で投与された後、生体内で代謝または化学反応を経て式（I）の化合物の一つ、あるいは式（I）の化合物の一つからなる塩または溶液に転換するものを含む。前記のプロドラッグは、前記化合物のカルボン酸エステル、炭酸エステル、リン酸エステル、硝酸エステル、硫酸エステル、スルホン酸エステル、スルホキシドエステル、アミノ化合物、カルバメート、アゾ化合物、ホスファミド、グルコシド、エーテル、アセタールなどの様態を含むが、これらに限定されない。
【００６４】
製造方法
以下、具体的に本発明の式(I)の構造の化合物の製造方法を説明するが、これらの具体的な方法は本発明に対する制限にならない。本発明化合物は、本明細書で説明された、または本分野で知られた各種の合成方法を任意に組合せて便利に製造するができ、このような組合せは本発明が属する分野の技術者が容易にできることである。
【００６５】
本発明で使用される重水素化されていないケノデオキシコール酸誘導体および生理的に許容される塩の製造方法は既知のものである。重水素化されたケノデオキシコール酸誘導体に対応する製造は、相応の重水酸化出発化合物を原料として使用し、同様の経路で合成することができる。たとえば、本発明の式（I）の化合物はWO02072598に記載の製造方法によって製造できるが、相違点は反応において非重水素化の原料に代わって重水素化の原料が使用されることにある。
【００６６】
通常、製造中では、各反応は通常、不活性溶媒において、室温〜還流温度（たとえば0℃〜200℃、好ましくは0℃〜100℃）で行われる。反応時間は、通常、0.1時間〜60時間、好ましくは0.5〜48時間である。
【００６７】
以下の汎用製造経路1および2は本発明の式（I）構造の化合物の合成に使用することができる。
【００６８】
【化１５】
2018505220.tif 000016
【００６９】
ただし、R1、R2、R3、R4、R5、R6の定義は前記と同様で、Xはハロゲンである。
【００７０】
合成経路１に示されるように、化合物IIからTHPでヒドロキシ基を保護して化合物IIIを得る。化合物IIIは塩基の作用で化合物Vと置換反応して化合物IVを得る。化合物IVは酸およびメタノールにおいて脱保護およびエステル化反応が生じて化合物VIを得る。化合物VIは還元して化合物VIIを得、最後に加水分解反応を経て本発明化合物Iを得る。上記反応は、不活性溶媒、たとえばジクロロメタン、アセトニトリル、n-ヘキサン、トルエン、テトラヒドロフラン、N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸、ブタノール、プロパノールなどにおいて、温度0〜200℃で行われる。
【００７１】
【化１６】
2018505220.tif 000017
【００７２】
合成経路2に示されるように、メチルエステル化合物XIIからTMSでヒドロキシ基を保護して化合物VIIIを得る。化合物VIIIはアルデヒド系化合物XIとアルドール縮合を経てさらに脱離して化合物IXを得る。化合物IXは還元して化合物VIを得る。化合物VIは加水分解して化合物Xを得、最後に還元作用を経て本発明化合物Iを得る。上記反応は、不活性溶媒、たとえばジクロロメタン、アセトニトリル、n-ヘキサン、トルエン、テトラヒドロフラン、N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸、ブタノール、プロパノールなどにおいて、温度-100℃〜200℃で行われる。
【００７３】
薬物組成物および使用方法
本発明化合物は、優れたファルネソイドX受容体（FXR）および/またはGタンパク質共役胆汁酸受容体（GPBARまたはTGR5）に対する作動作用を有するため、本発明化合物およびその各種の結晶型、薬学的に許容される無機・有機塩、水和物もしくは溶媒和物、並びに本発明化合物を主要活性成分として含有する薬物組成物はファルネソイドX受容体（FXR）および/またはGタンパク質共役胆汁酸受容体（GPBARまたはTGR5）を介する疾患の治療、予防および緩和に有用である。既存技術に基づき、本発明化合物は、癌、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、胆石、原発性胆汁性肝硬変、肝硬変、肝線維化、糖尿病、アテローム性動脈硬化、肥満などの治療に有用である。
【００７４】
本発明の薬物組成物は、安全な有効量の範囲にある本発明化合物または薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤または担体と含む。ここで、「安全有効量」とは、化合物の量が病状の顕著な改善に充分で、重度な副作用が生じないことを指す。通常、薬物組成物は、本発明化合物を0.5〜2000mg/製剤で、好ましくは1〜500mg/製剤で含有する。好ましくは、前記の「製剤」は、カプセルまたは錠である。
【００７５】
「薬学的に許容される担体」とは、ヒトに適用でき、且つ十分な純度および充分に低い毒性を持たなければならない、一種または複数種の相溶性固体または液体フィラーまたはゲル物質を指す。「相溶性」とは、組成物における各成分が本発明の化合物と、またその同士の間で配合することができ、化合物の効果を顕著に低下させないことを指す。薬学的に許容される担体の例の一部として、セルロースおよびその誘導体(たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム、セルロースアセテートなど)、ゼラチン、タルク、固体潤滑剤(たとえばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム)、硫酸カルシウム、植物油(たとえば大豆油、ゴマ油、落花生油、オリーブオイルなど)、多価アルコール(たとえばプロピレングリコール、グリセリン、マンニトール、ソルビトールなど)、乳化剤(たとえばツイン(登録商標))、湿潤剤(たとえばドデシル硫酸ナトリウム)、着色剤、調味剤、安定剤、酸化防止剤、防腐剤、発熱性物質除去蒸留水などがある。
【００７６】
本発明の薬物組成物の施用様態は、特に限定されないが、代表的な施用様態は、経口投与、十二指腸、直腸、胃腸外(静脈内、筋肉内、または皮下)投与、および局部投与を含むが、これらに限定されない。
【００７７】
経口投与に用いられる固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を含む。これらの固体剤形において、活性化合物は通常、少なくとも一種の不活性賦形剤(または担体)、たとえばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムと混合されるが、あるいは、(a)フィラーまたは相溶剤、たとえば、でん粉、乳糖、ショ糖、グルコース、マンニトールやケイ酸、(b)バインダー、たとえば、ヒドロメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖やアラビアゴム、(c)保湿剤、たとえば、グリセリン、(d)崩壊剤、たとえば、寒天、炭酸カルシウム、馬鈴薯澱粉やタピオカ澱粉、アルギン酸、ある複合ケイ酸塩や炭酸ナトリウム、(e)溶液遅延剤、たとえばパラフィン、(f)吸収促進剤、たとえば、アンモニウム化合物、(g)湿潤剤、たとえばセタノール、グリセリンモノステアレート、(h)吸着剤、たとえば、カオリン、また(i)潤滑剤、たとえば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ドデシル硫酸ナトリウム、またはこれらの混合物、のような成分と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤において、剤形に緩衝剤を含んでもよい。
【００７８】
固体剤形、たとえば錠剤、ピル、カプセル剤、丸剤や顆粒剤は、コーディングやシェル剤、たとえば、腸衣および他の本分野で公知の材料で製造することができる。不透明剤を含んでもよく、且つこのような組成物において、活性物または化合物の放出は遅延の様態で消化管のある部分で放出してもよい。使用できる包埋成分の実例として、重合物質やワックス系物質が挙げられる。必要な場合、活性化合部も上記賦形剤のうちの一種または複数種とマイクロカプセルの様態に形成してもよい。
【００７９】
経口投与に用いられる液体剤形は、薬学的に許容される乳液、溶液、懸濁液、シロップまたはチンキ剤を含む。活性化合物の他、液体剤形は、本分野で通常使用される不活性希釈剤、たとえば、水または他の溶媒、相溶剤および乳化剤、たとえば、エタノール、イソプロパノール、炭酸エチル、酢酸エチル、プロピレングリコール、1,3-ブタンジオール、ジメチルホルムアミドおよび油、特に、綿実油、落花生油、コーン油、オリーブ油、ヒマシ油やゴマ油またはこれらの物質の混合物などを含んでもよい。
【００８０】
これらの不活性希釈剤の他、組成物は助剤、たとえば、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、矯味剤や香料を含んでもよい。
【００８１】
活性化合物の他、懸濁液は、懸濁剤、たとえば、エトキシ化イソオクタデカノール、ポリオキシエチレンソルビトールやソルビタンエステル、微晶質セルロース、メトキシアルミニウムや寒天またはこれらの物質の混合物などを含んでもよい。
【００８２】
胃腸外注射用組成物は、生理的に許容される無菌の水含有または無水溶液、分散液、懸濁液や乳液、および再溶解して無菌の注射可能な溶液または分散液にするための無菌粉末を含む。適切な水含有または非水性担体、希釈剤、溶媒または賦形剤は、水、エタノール、多価アルコールおよびその適切な混合物を含む。
【００８３】
局部投与のための本発明化合物の剤形は、軟膏剤、散剤、湿布剤、噴霧剤や吸入剤を含む。活性成分は、無菌条件で生理学的に許容される担体および任意の防腐剤、緩衝剤、または必要よって駆出剤と一緒に混合される。
【００８４】
本発明化合物は、単独で投与してもよいし、あるいは他の薬学的に許容される化合物と併用して投与してもよい。
【００８５】
薬物組成物を使用する場合、安全な有効量の本発明化合物を治療の必要のある哺乳動物(たとえばヒト)に使用し、使用の際の用量は薬学上で効果があるとされる投与量で、体重60kgのヒトの場合、毎日の投与量は、通常0.5〜2000mg、好ましくは1〜500mgである。勿論、具体的な投与量は、さらに投与の様態、患者の健康状況などの要素を考えるべきで、すべて熟練の医者の技能範囲内である。
【００８６】
本発明の化合物は、現有技術における既知の非重水素化化合物と比べ、一連の利点を有する。本発明の主な利点は以下の通りである。
【００８７】
(1) 本発明化合物は、ファルネソイドX受容体（FXR）および/またはGタンパク質共役胆汁酸受容体（GPBARまたはTGR5）に対して優れた作動活性を有する。
【００８８】
（2）化合物がより良い薬物動態学パラメーターの特性を有するように、重水素化の技術によって化合物の生体における代謝を変える。この場合、投与量を変えることによって長期効果のある製剤とすることができる。
【００８９】
（3）重水素で化合物における水素原子を置換し、その重水素同位元素の効果で、化合物の動物体内における薬物濃度を向上させ、薬物の治療効果を上げることができる。
【００９０】
（4）重水素で化合物における水素原子を置換し、一部の代謝産物が抑制され、化合物の安全性を向上させることができる。
【実施例】
【００９１】
以下、具体的な実施例によって、さらに本発明を説明する。これらの実施例は本発明を説明するために用いられるものだけで、本発明の範囲の制限にはならないと理解されるものである。以下の実施例において、具体的な条件が記載されていない実験方法は、通常、通常の条件、あるいはメーカーの薦めの条件で行われた。特に説明しない限り、部と百分率は重量部と重量百分率である。
【００９２】
実施例1  3a,7a-ジヒドロキシ-6a-エチル-7-d-5b-コラン-24-酸(化合物1)の製造
【化１７】
2018505220.tif 000018
【００９３】
1．3a--テトラヒドロピラニルオキシ-7-ケト-5b-コラン-24-酸(化合物3)の製造
フラスコに3a--ヒドロキシ-7-ケト-5b-コラン-24-酸（10.0 g, 25.6 mmol）およびジオキサン（150 mL）を入れ、撹拌して溶解させた。それに順にp-トルエンスルホン酸一水和物(0.49 g，2.56 mmol)および3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(4.31 g, 51.2 mmol)を入れた。室温で1時間撹拌した後、それにアンモニアのメタノール溶液を入れてpH値を8〜9に調整した。濃縮させて揮発性有機物を除去した後、酢酸エチルで抽出した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水の順で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液はロータリーエバポレーターによって真空で溶媒を除去して粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル/石油エーテル=1/3）によって分離・精製してオフホワイトの固体の目的産物を得た(9.72 g，80％)。
【００９４】
2．3a--テトラヒドロピラニルオキシ-6a-エチル-7-ケト-5b-コラン-24-酸(化合物4)の製造
フラスコにジイソプロピルアミン（5.8 g，57.6 mmol）および無水テトラヒドロフラン（400mL）を入れ、-78℃に冷却した。温度を-60℃未満に維持しながら、それに順にn-ブチルリチウム(23.1 mL，2.5M n-ヘキサン溶液)およびヘキサメチルホスホトリアミド(HMPA，10.3 g，57.6 mmol)を滴下した。滴下終了後、温度を-70℃に維持しながら1時間撹拌した。それに事前に-78℃に冷却された3a--テトラヒドロピラニルオキシ-7-ケト-5b-コラン-24-酸(9.1 g，19.2 mmol)の無水テトラヒドロフラン（200 mL）溶液を滴下し、30分間撹拌した。それにゆっくりヨードエタン(29.9 g，192 mmol)の無水テトラヒドロフラン(1000 mL)溶液を滴下し、室温で一晩撹拌した。真空で有機揮発物を除去し、10％塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に5％チオ硫酸ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して目的化合物を得、精製せずにそのまま次の反応に使用した。
【００９５】
3．3a-ヒドロキシ-6a-エチル-7-ケト-5b-コラン-24-酸メチル(化合物5)の製造
前の工程で製造された3a--テトラヒドロピラニルオキシ-6a-エチル-7-ケト-5b-コラン-24-酸の粗生成物を塩化水素のメタノール溶液(2N、120 mL)に溶解させ、還流させながら16時間撹拌した。真空で濃縮させて有機揮発物を蒸発で除去し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併し、順に純水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して残留物を得た。残留物をシリルゲルカラムクロマトグラフィー(20％〜40％酢酸エチル/n-ヘキサン)によって分離・精製して固体を得た(1.8 g、2つの工程の収率21.7％)。
【００９６】
4．3a,7a-ジヒドロキシ-6a-エチル-7-d-5b-コラン-24-酸メチル(化合物6)の製造
フラスコに順に3a-ヒドロキシ-6a-エチル-7-ケト-5b-コラン-24-酸メチル(1.5 g，3.5 mmol)およびメタノール(6 mL)を入れ、撹拌し、重水素化ホウ素ナトリウム(NaBD4，0.3 g，7 mmol，Sigma-Aldrich)を入れた。室温で3時間撹拌した。水で反応をクエンチングし、高真空濃縮した。酢酸エチルで抽出した。有機相を合併して純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して白色固体の目的産物を得た（1.3 g、85％）。
【００９７】
5．3a,7a -ジヒドロキシ-6a-エチル-7-d-5b-コラン-24-酸(化合物1)の製造
反応瓶に順に3a,7a-ジヒドロキシ-6a-エチル-7-d-5b-コラン-24-酸メチル(1.2 g, 2.8 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，2.24 g，5.6 mmol)およびテトラヒドロフラン/メタノール/水(1/3/2，20 mL)を入れた。混合物を40℃で6時間撹拌した。3N塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、濃縮させて固体の粗生成物を得、シリルゲルカラムクロマトグラフィー(5％メタノール/ジクロロメタン)によって分離・精製して目的産物を得た(0.87 g、75％)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3+CD3OD) δ 3.46 (m, 1H), 2.35-0.74 (m, 27H), 0.95 (d, 3H), 0.89-0.92 (m, 6H), 0.68 (s, 3H)。 ESI-MS （m/z）：422 (M+H) +，444 (M+Na) +。
【００９８】
化合物1のもう一つの製造方法：
【化１８】
2018505220.tif 000019
【００９９】
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-エチル-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(2.0 g, 4.6 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，4.0 ml)およびメタノール/水(3/1，20 mL)を入れた。混合物を35℃で16時間撹拌した。濃縮し、水10 mlを入れ、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して化合物5-1を得た(1.7 g，88％)。
【０１００】
反応瓶に順に化合物5-1(1.0 g, 2.4 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，0.5 ml)および水(8.0 mL)を入れた。撹拌しながら重水素化ホウ化ナトリウム(103 mg, 2.4 mmol)を入れ、混合物を100℃で一晩撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(520 mg，51％)。NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.95 (brs, 1H), 4.23-4.01 (m, 2H), 3.16-3.11 (m, 1H), 2.28-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.83 (m, 34H), 0.61 (s, 3H)。
【０１０１】
実施例2  3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-7-d-5b-コラン-24-酸(化合物10)の製造
【化１９】
2018505220.tif 000020
【０１０２】
1．3a--テトラヒドロピラニルオキシ-6a-(エチル-d5)-7-ケト-5b-コラン-24-酸(化合物7)の製造
フラスコにジイソプロピルアミン（2.3 g，23 mmol）および無水テトラヒドロフラン（200mL）を入れ、-78℃に冷却した。温度を-60℃未満に維持しながら、それに順にn-ブチルリチウム(9.2 mL，2.5M n-ヘキサン溶液)およびヘキサメチルホスホトリアミド(HMPA，4.2 g，23 mmol)を滴下した。滴下終了後、温度を-70℃に維持しながら1時間撹拌した。それに事前に-78℃に冷却された3a--テトラヒドロピラニルオキシ-7-ケト-5b-コラン-24-酸(3.6 g，7.6 mmol)の無水テトラヒドロフラン（100 mL）溶液を滴下し、30分間撹拌した。それにゆっくりヨードエタン-d5(6.2 g，38 mmol)の無水テトラヒドロフラン(200 mL)溶液を滴下し、室温で一晩撹拌した。真空で有機揮発物を除去し、10％塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に5％チオ硫酸ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して目的化合物を得、精製せずにそのまま次の反応に使用した。
【０１０３】
2．3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-7-ケト-5b-コラン-24-酸メチル(化合物8)の製造
前の工程で製造された3a--テトラヒドロピラニルオキシ-6a-(エチル-d5)-7-ケト-5b-コラン-24-酸の粗生成物を塩化水素のメタノール溶液(2N、30 mL)に溶解させ、還流させながら16時間撹拌した。真空で濃縮させて有機揮発物を蒸発で除去し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併し、順に純水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して残留物を得た。残留物をシリルゲルカラムクロマトグラフィー(20％〜40％酢酸エチル/n-ヘキサン)によって分離・精製して固体を得た(0.6 g、2つの工程の収率18％)。
【０１０４】
3．3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-7-d-5b-コラン-24-酸メチル(化合物9)の製造
フラスコに順に3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-7-ケト-5b-コラン-24-酸メチル(0.3 g，0.68 mmol)およびメタノール(3 mL)を入れ、撹拌し、重水素化ホウ素ナトリウム(NaBD4，60 mg，1.4 mmol)を入れた。室温で3時間撹拌した。水で反応をクエンチングし、高真空濃縮した。酢酸エチルで抽出した。有機相を合併して純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して白色固体の目的産物を得た（0.25 g、82％）。
【０１０５】
4．3a,7a -ジヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-7-d-5b-コラン-24-酸(化合物10)の製造
反応瓶に順に3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-7-d-5b-コラン-24-酸メチル(0.24 g, 0.54 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，0.44 g，1.1 mmol)およびテトラヒドロフラン/メタノール/水(1/3/2，5 mL)を入れた。混合物を40℃で6時間撹拌した。3N塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、濃縮させて固体の粗生成物を得、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(5％メタノール/ジクロロメタン)によって分離・精製して目的産物を得た(0.18 g、78％)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3+CD3OD) δ 3.47 (m, 1H), 2.36-0.74 (m, 25H), 0.95 (d, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.66 (s, 3H)。 ESI-MS （m/z）：427 (M+H) +，449 (M+Na) +。
【０１０６】
実施例3  3a,7a -ジヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-5b-コラン-24-酸(化合物12)の製造
【化２０】
2018505220.tif 000021
【０１０７】
1．3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-5b-コラン-24-酸メチル(化合物11)の製造
フラスコに順に3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-7-ケト-5b-コラン-24-酸メチル(0.3 g，0.68 mmol)およびメタノール(3 mL)を入れ、撹拌し、水素化ホウ素ナトリウム(NaBH4，60 mg，1.4 mmol)を入れた。室温で3時間撹拌した。水で反応をクエンチングし、高真空濃縮した。酢酸エチルで抽出した。有機相を合併して純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して白色固体の目的産物を得た（0.24 g、81％）。
【０１０８】
2．3a,7a -ジヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-5b-コラン-24-酸(化合物12)の製造
反応瓶に順に3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d5)-5b-コラン-24-酸メチル(0.24 g, 0.54 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，0.44 g，1.1 mmol)およびテトラヒドロフラン/メタノール/水(1/3/2，5 mL)を入れた。混合物を40℃で6時間撹拌した。3N塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、濃縮させて固体の粗生成物を得、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(5％メタノール/ジクロロメタン)によって分離・精製して目的産物を得た(0.16 g、72％)。  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.97 (brs, 1H), 4.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.50 (s, 1H), 3.14-3.13 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 29H), 0.61 (s, 3H)。ESI-MS （m/z）：426 (M+H) +，448 (M+Na) +。
【０１０９】
実施例4  3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d3)-7-d-5b-コラン-24-酸(化合物18)の製造
【化２１】
2018505220.tif 000022
【０１１０】
1．3α,7-ビス(トリメチルシリルオキシ)-5β-6-コレン-24-酸メチル(化合物14)の製造
四口フラスコに順にジイソプロピルアミノリチウム(68 ml，135.9 mmol，2M in THF/ヘプタン/エチルベンゼン)、無水テトラヒドロフラン(50 ml)を入れた。-70℃で撹拌しながら、混合液にトリメチルクロロシラン(12.1 g，111.1mmol)を入れ、窒素ガスの保護下で30分間撹拌した。-70℃程度でゆっくり2,3α-ヒドロキシ-7-オキソ-コラン-24-酸メチルのテトラヒドロフラン溶液(10.0 g，化合物13を50 mlテトラヒドロフランに溶解させたもの)を滴下し、滴下は約半時間で終了し、-70℃程度で1時間撹拌した。-70℃程度でトリエチルアミン(35.2 g，348 mmol)を入れ、1時間撹拌した後自然に室温に昇温し、一晩撹拌した。氷浴において、混合液にゆっくり炭酸水素ナトリウム溶液を入れて反応をクエンチングし、抽出し、水相を酢酸エチルで抽出し、有機相を合併し、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(EA:PE=2％)にかけて目的化合物12.9 gを得、収率：95％であった。
【０１１１】
2．3α-ヒドロキシ-6-(エチレン-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(化合物15)の製造
四口フラスコに順に前の工程で製造された3α,7-ビス(トリメチルシリルオキシ)-5β-6-コレン-24-酸メチル(11.0 g，18.2 mmol)、ジクロロメタン(60 ml)を入れた。-40℃で撹拌しながら、混合液に(エチル-d3)アルデヒド(2.1 ml，36.4 mmol)を入れ、-60℃程度で10分間撹拌した。ゆっくり三フッ化ホウ素-ジエチルエーテルのジクロロメタン混合液（10.0 ml BF3.OEt2を20 ml ジクロロメタンに溶解させたもの）を滴下し、滴下終了後温度を-60℃に維持しながら3時間撹拌し、自然に室温に昇温し、一晩撹拌した。氷浴において、混合液にゆっくり炭酸水素ナトリウム溶液を入れ、均一に撹拌し、抽出し、ジクロロメタン（60 ml）で水相を洗浄し、有機相を合併して3N塩酸を入れ、氷浴で1時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウムでクエンチングし、さらに抽出してジクロロメタンで水相を洗浄し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(EA:PE=25％〜35％)にかけて目的化合物6.1 gを得、収率：70％であった。
【０１１２】
3．3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d3)-7-ケト-5b-コラン-24-酸メチル(化合物16)の製造
フラスコに順に3α-ヒドロキシ-6-(エチレン-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.18 g，0.42 mmol)および酢酸(10 mL)、濃塩酸(0.5 ml)、二酸化白金(20mg)を入れた。室温で空気を置換した後12h水素添加反応させ、ろ過し、濃縮して目的化合物を得た(0.17 g，94％)。
【０１１３】
4．3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d3)-7-ケト-5b-コラン-24-酸(化合物17)の製造
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.17 g, 0.39 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，8.0 ml)およびメタノール/水(4.5/1，11 mL)を入れた。混合物を35℃で16時間撹拌した。濃縮し、水を入れ、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(0.14 g，79％)。
【０１１４】
5．3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d3)-7-d-5b-コラン-24-酸(化合物18)の製造
反応瓶に順に3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d3)-7-ケト-5b-コラン-24-酸(65 mg, 0.15 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，200 mg)および水(3.0 mL)を入れた。撹拌しながら重水素化ホウ化ナトリウム(13 mg, 0.30 mmol)を入れた。混合物を100℃で16時間撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(45 mg，69％)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.95 (brs, 1H), 4.31 (s, J = 4.0 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.14-3.13 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 31H), 0.61 (s, 3H)。 ESI-MS (m/z): 425 (M+H) +，447 (M+Na) +。
【０１１５】
実施例5  3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d3)-5b-コラン-24-酸(化合物19)の製造
【化２２】
2018505220.tif 000023
【０１１６】
反応瓶に順に3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d3)-7-ケト-5b-コラン-24-酸(65 mg, 0.15 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，200 mg)および水(3.0 mL)を入れた。撹拌しながら水素化ホウ化ナトリウム(13 mg, 0.30 mmol)を入れた。混合物を100℃で16時間撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(51 mg，78％)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.97 (brs, 1H), 4.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.50 (s, 1H), 3.14-3.13 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 31H), 0.61 (s, 3H)。ESI-MS (m/z): 424 (M+H) +，446(M+Na) +。
【０１１７】
実施例6  3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d4)-7-d-5b-コラン-24-酸(化合物23)の製造
【化２３】
2018505220.tif 000024
【０１１８】
1．3α-ヒドロキシ-6-(エチレン-d4)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(化合物20)の製造
四口フラスコに順に3α,7-ビス(トリメチルシリルオキシ)-5β-6-コレン-24-酸メチル(11.0 g，18.2 mmol)、ジクロロメタン(60 ml)を入れた。-40℃で撹拌しながら、混合液にアセトアルデヒド-d4(2.1 ml，36.4 mmol)を入れ、-60℃程度で10分間撹拌した。-60℃程度でゆっくり三フッ化ホウ素-ジエチルエーテルのジクロロメタン混合液（10.0 ml BF3.OEt2を20 ml ジクロロメタンに溶解させたもの）を滴下し、滴下終了後温度を-60℃に維持しながら3時間撹拌し、自然に室温に昇温し、一晩撹拌した。氷浴において、混合液にゆっくり炭酸水素ナトリウム溶液を入れ、均一に撹拌し、抽出し、ジクロロメタンで水相を洗浄し、有機相を合併して3N塩酸を入れ、氷浴で1時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウムでクエンチングし、さらに抽出してジクロロメタンで水相を洗浄し、有機相を合併し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(EA:PE=25％〜35％)にかけて目的化合物5.2 gを得、収率：59％であった。
【０１１９】
2．3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(化合物21)の製造
フラスコに順に3α-ヒドロキシ-6-(エチレン-d4)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.18 g，0.42 mmol)および酢酸(10 mL)、濃塩酸(0.5 ml)、二酸化白金(20 mg)を入れ、室温で空気を置換した後12h水素添加反応させ、ろ過し、濃縮して目的化合物を得た(0.16 g，88％)。
【０１２０】
3．3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d4)-7-ケト-5b-コラン-24-酸(化合物22)の製造
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.16 g, 0.36 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，8.0 ml)およびメタノール/水(4.5/1，11 mL)を入れた。混合物を35℃で16時間撹拌した。濃縮し、水を入れ、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(0.12 g，73％)。
【０１２１】
4．3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d4)-7-d-5b-コラン-24-酸(化合物23)の製造
反応瓶に順に3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d4)-7-ケト-5b-コラン-24-酸(60 mg, 0.14 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，200 mg)および水(3.0 mL)を入れた。撹拌しながら重水素化ホウ化ナトリウム(13 mg, 0.30 mmol)を入れ、混合物を100℃で16時間撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(40 mg，67％)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.97 (brs, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.16-3.11 (m, 1H), 2.28-2.19 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 30H), 0.61 (s, 3H)。 ESI-MS (m/z): 426 (M+H) +，448 (M+Na) +。
【０１２２】
実施例7  3a,7a-ジヒドロキシ-6a-(エチル-d4)-5b-コラン-24-酸(化合物24)の製造
【化２４】
2018505220.tif 000025
【０１２３】
反応瓶に順に3a-ヒドロキシ-6a-(エチル-d4)-7-ケト-5b-コラン-24-酸(30 mg, 0.07 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，200 mg)および水(2.0 mL)を入れた。撹拌しながら水素化ホウ化ナトリウム(10 mg, 0.15 mmol)を入れ、混合物を100℃で16時間撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(22 mg，70％)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.97 (brs, 1H), 4.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.50 (s, 1H), 3.14-3.13 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 30H), 0.61 (s, 3H)。ESI-MS (m/z): 425 (M+H) +，447 (M+Na)+。
【０１２４】
実施例8  3a,7a -ジヒドロキシ-6a-エチル-7,23,23-d3-5b-コラン-24-酸(化合物25)の製造
【化２５】
2018505220.tif 000026
【０１２５】
3a,7a -ジヒドロキシ-6a-エチル-7-d-5b-コラン-24-酸(0.2 g)を重水酸化ナトリウムの重水溶液に溶解させ、室温で24時間撹拌した。高真空で回転乾燥して溶媒を蒸発で除去し、残留物を重水酸化ナトリウムの重水溶液に溶解させ、室温で続いて24時間撹拌した。3N塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、濃縮させて固体の粗製品を得、シリルゲルカラムクロマトグラフィー(5％メタノール/ジクロロメタン)によって分離・精製して目的化合物を得た。 ESI-MS (m/z): 424 (M+H) +，446 (M+Na) +。
【０１２６】
実施例9：ラットにおける薬物動態学の評価
7〜8週齡の雄Sprague-Dawleyラットで、体重は約210gで、各群に6匹ずつ、1 μmol/min/kgの投与量で、(a)コントロール群：オベチコール酸または(b)試験群：実施例1〜8で製造された化合物を十二指腸から投与した。2.5 mL/hの投与流速で1時間投与した。その血漿薬物動態学および胆汁排泄動態学における違いを比較した。
【０１２７】
ラットを標準飼料で飼養し、水を与えた。試験の16時間前から飼料を止めた。薬物は生理食塩水で溶解させた。左大腿静脈から採血し、採血の時点は投与前0.5時間、投与後0.5時間、1時間、1.5時間、2時間、2.5時間、3時間および3.5時間であった。投与期間および投与後2.5時間以内で15 minおきにそれぞれ胆汁を収集した。
【０１２８】
血漿および胆汁は分析前は-70℃で保存した。LC-MS/MSによって血漿および胆汁における本発明化合物の濃度を測定した。薬物動態学のパラメーターは、各動物の異なる時点における血中薬物濃度および胆汁における薬物濃度によって計算された。
【０１２９】
結果から、コントロール化合物であるオベチコール酸に対し、本発明化合物は動物の体内でより高い血漿暴露量および薬物胆汁排泄量（Biliary Secretion、胆汁分泌）を持つため、より良い薬効学の特性と治療効果があることがわかった。
【０１３０】
実施例10：本発明化合物のファルネソイドX受容体（FXR）に対する体外における薬効学評価
本発明化合物のファルネソイドX受容体（FXR）に対する作動はRecruitment Coactivator Assay、すなわちAlphaScreen技術によって測定し、具体的な体外薬効学評価の試験プロトコールは文献J Pharmacol Exp Ther 350:56-68, July 2014を参照する。
【０１３１】
実験結果は表1に示す。本発明に係る化合物はファルネソイドX受容体（FXR）に対して優れた作動活性を有することがわかる。
【０１３２】
【表１】
2018505220.tif 000027
【０１３３】
実施例11  薬物組成物
化合物（実施例1〜8）                          10 g
カルボキシメチルデンプン                      12 g
微晶質セルロース                              180g
【０１３４】
通常の方法で、上記物質を均一に混合した後、普通のゼラチンカプセルに入れ、1000個のカプセルを得た。
【０１３５】
各文献がそれぞれ単独に引用されるように、本発明に係るすべての文献は本出願で参考として引用する。また、本発明の上記の内容を読み終わった後、この分野の技術者が本発明を各種の変動や修正をすることができるが、それらの等価の様態のものは本発明の請求の範囲に含まれることが理解されるべきである。
【手続補正書】
【提出日】平成29年8月16日(2017.8.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
ケノデオキシコール酸および誘導体は一種類のファルネソイドX受容体の作動剤である。特許WO2010059859およびWO2005082925では、一連のケノデオキシコール酸誘導体が公開され、中では、化合物のオベチコール酸（Obeticholic acid）は選択的な、ファルネソイドX受容体作動剤で、化学名は3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-5β-コラン-24-酸（3α,7α-dihydroxy-6α-ethyl-5β-cholan-24-oic acid）で、非アルコール性脂肪性肝炎および非アルコール性脂肪性肝関連疾患を治療する用途を有する。現在、オベチコール酸は、第III相臨床研究の段階にある。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
もう一つの好適な例において、前記の非重水素化の化合物は、オベチコール酸で、すなわち3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-5β-コラン-24-酸である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
実施例1  3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-7-d-5β-コラン-24-酸(化合物1)の製造
【化１７】
2018505220.tif 000031
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９３】
1．3α-テトラヒドロピラニルオキシ-7-ケト-5β-コラン-24-酸(化合物3)の製造
フラスコに3α-ヒドロキシ-7-ケト-5β-コラン-24-酸（10.0 g, 25.6 mmol）およびジオキサン（150 mL）を入れ、撹拌して溶解させた。それに順にp-トルエンスルホン酸一水和物(0.49 g，2.56 mmol)和3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(4.31 g, 51.2 mmol)を入れた。室温で1時間撹拌した後、それにアンモニアのメタノール溶液を入れてpH値を8〜9に調整した。濃縮させて揮発性有機物を除去した後、酢酸エチルで抽出した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水の順で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液はロータリーエバポレーターによって真空で溶媒を除去して粗製品を得た。粗製品をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル/石油エーテル=1/3）によって分離・精製してオフ白色の固体の目的産物を得た(9.72 g，80％)。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
2．3α-テトラヒドロピラニルオキシ-6α-エチル-7-ケト-5β-コラン-24-酸(化合物4)の製造
フラスコにジイソプロピルアミン（5.8 g，57.6 mmol）および無水テトラヒドロフラン（400mL）を入れ、-78℃に冷却した。温度を-60℃未満に維持しながら、それに順にn-ブチルリチウム(23.1 mL，2.5M n-ヘキサン溶液)およびヘキサメチルホスホトリアミド(HMPA，10.3 g，57.6 mmol)を滴下した。滴下終了後、温度を-70℃に維持しながら1時間撹拌した。それに事前に-78℃に冷却された3α-テトラヒドロピラニルオキシ-7-ケト-5β-コラン-24-酸(9.1 g，19.2 mmol)の無水テトラヒドロフラン（200 mL）溶液を滴下し、30分間撹拌した。それにゆっくりヨードエタン(29.9 g，192 mmol)の無水テトラヒドロフラン(1000 mL)溶液を滴下し、室温で一晩撹拌した。真空で有機揮発物を除去し、10％塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に5％チオ硫酸ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して目的化合物を得、精製せずにそのまま次の反応に使用した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９５】
3．3α-ヒドロキシ-6α-エチル-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(化合物5)の製造
前の工程で製造された3α-テトラヒドロピラニルオキシ-6α-エチル-7-ケト-5β-コラン-24-酸の粗製品を塩化水素のメタノール溶液(2N、120 mL)に溶解させ、環流させながら16時間撹拌した。真空で濃縮させて有機揮発物を蒸発で除去し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併し、順に純水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して残留物を得た。残留物をシリルゲルカラムクロマトグラフィー(20％〜40％酢酸エチル/n-ヘキサン)によって分離・精製して固体を得た(1.8 g、2つの工程の収率21.7％)。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９６】
4．3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-7-d-5β-コラン-24-酸メチル(化合物6)の製造
フラスコに順に3α-ヒドロキシ-6α-エチル-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(1.5 g，3.5 mmol)およびメタノール(6 mL)を入れ、撹拌し、重水素化ホウ素ナトリウム(NaBD4，0.3 g，7 mmol，Sigma-Aldrich)を入れた。室温で3時間撹拌した。水で反応をクエンチングし、高真空濃縮した。酢酸エチルで抽出した。有機相を合併して純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して白色固体の目的産物を得た（1.3 g、85％）。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９７】
5．3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-7-d-5β-コラン-24-酸(化合物1)の製造
反応瓶に順に3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-7-d-5β-コラン-24-酸メチル(1.2 g, 2.8 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，2.24 g，5.6 mmol)およびテトラヒドロフラン/メタノール/水(1/3/2，20 mL)を入れた。混合物を40℃で6時間撹拌した。3N塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、濃縮させて固体の粗製品を得、シリルゲルカラムクロマトグラフィー(5％メタノール/ジクロロメタン)によって分離・精製して目的産物を得た(0.87 g、75％)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3+CD3OD) δ 3.46 (m, 1H), 2.35-0.74 (m, 27H), 0.95 (d, 3H), 0.89-0.92 (m, 6H), 0.68 (s, 3H)。 ESI-MS （m/z）：422 (M+H) +，444 (M+Na) +。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０１】
実施例2  3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-7-d-5β-コラン-24-酸(化合物10)の製造
【化１９】
2018505220.tif 000032
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０２】
1．3α-テトラヒドロピラニルオキシ-6α-(エチル-d5)-7-ケト-5β-コラン-24-酸(化合物7)の製造
フラスコにジイソプロピルアミン（2.3 g，23 mmol）および無水テトラヒドロフラン（200mL）を入れ、-78℃に冷却した。温度を-60℃未満に維持しながら、それに順にn-ブチルリチウム(9.2 mL，2.5M n-ヘキサン溶液)およびヘキサメチルホスホトリアミド(HMPA，4.2 g，23 mmol)を滴下した。滴下終了後、温度を-70℃に維持しながら1時間撹拌した。それに事前に-78℃に冷却された3α-テトラヒドロピラニルオキシ-7-ケト-5β-コラン-24-酸(3.6 g，7.6 mmol)の無水テトラヒドロフラン（100 mL）溶液を滴下し、30分間撹拌した。それにゆっくりヨードエタン-d5(6.2 g，38 mmol)の無水テトラヒドロフラン(200 mL)溶液を滴下し、室温で一晩撹拌した。真空で有機揮発物を除去し、10％塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に5％チオ硫酸ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して目的化合物を得、精製せずにそのまま次の反応に使用した。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
2．3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(化合物8)の製造
前の工程で製造された3α-テトラヒドロピラニルオキシ-6α-(エチル-d5)-7-ケト-5β-コラン-24-酸の粗製品を塩化水素のメタノール溶液(2N、30 mL)に溶解させ、環流させながら16時間撹拌した。真空で濃縮させて有機揮発物を蒸発で除去し、酢酸エチルで抽出し、有機相を合併し、順に純水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して残留物を得た。残留物をシリルゲルカラムクロマトグラフィー(20％〜40％酢酸エチル/n-ヘキサン)によって分離・精製して固体を得た(0.6 g、2つの工程の収率18％)。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
3．3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-7-d-5β-コラン-24-酸メチル(化合物9)の製造
フラスコに順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.3 g，0.68 mmol)およびメタノール(3 mL)を入れ、撹拌し、重水素化ホウ素ナトリウム(NaBD4，60 mg，1.4 mmol)を入れた。室温で3時間撹拌した。水で反応をクエンチングし、高真空濃縮した。酢酸エチルで抽出した。有機相を合併して純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して白色固体の目的産物を得た（0.25 g、82％）。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０５】
4．3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-7-d-5β-コラン-24-酸(化合物10)の製造
反応瓶に順に3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-7-d-5β-コラン-24-酸メチル(0.24 g, 0.54 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，0.44 g，1.1 mmol)およびテトラヒドロフラン/メタノール/水(1/3/2，5 mL)を入れた。混合物を40℃で6時間撹拌した。3N塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、濃縮させて固体の粗製品を得、シリルゲルカラムクロマトグラフィー(5％メタノール/ジクロロメタン)によって分離・精製して目的産物を得た(0.18 g、78％)。 1H NMR (400 MHz, CDCl3+CD3OD) δ 3.47 (m, 1H), 2.36-0.74 (m, 25H), 0.95 (d, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.66 (s, 3H)。 ESI-MS （m/z）：427 (M+H) +，449 (M+Na) +。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０６】
実施例3  3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-5β-コラン-24-酸(化合物12)の製造
【化２０】
2018505220.tif 000033
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
1．3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-5β-コラン-24-酸メチル(化合物11)の製造
フラスコに順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.3 g，0.68 mmol)およびメタノール(3 mL)を入れ、撹拌し、水素化ホウ素ナトリウム(NaBH4，60 mg，1.4 mmol)を入れた。室温で3時間撹拌した。水で反応をクエンチングし、高真空濃縮した。酢酸エチルで抽出した。有機相を合併して純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮して白色固体の目的産物を得た（0.24 g、81％）。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０８】
2．3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-5β-コラン-24-酸(化合物12)の製造
反応瓶に順に3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d5)-5β-コラン-24-酸メチル(0.24 g, 0.54 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，0.44 g，1.1 mmol)およびテトラヒドロフラン/メタノール/水(1/3/2，5 mL)を入れた。混合物を40℃で6時間撹拌した。3N塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、濃縮させて固体の粗製品を得、シリルゲルカラムクロマトグラフィー(5％メタノール/ジクロロメタン)によって分離・精製して目的産物を得た(0.16 g、72％)。  1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.97 (brs, 1H), 4.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.50 (s, 1H), 3.14-3.13 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 29H), 0.61 (s, 3H)。ESI-MS （m/z）：426 (M+H) +，448 (M+Na) +。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０９】
実施例4  3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-7-d-5β-コラン-24-酸(化合物18)の製造
【化２１】
2018505220.tif 000034
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１２】
3．3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(化合物16)の製造
フラスコに順に3α-ヒドロキシ-6-(エチレン-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.18 g，0.42 mmol)および酢酸(10 mL)、濃塩酸(0.5 ml)、二酸化白金(20mg)を入れた。室温で空気を置換した後12h水素添加反応させ、ろ過し、濃縮して目的化合物を得た(0.17 g，94％)。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
4．3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸(化合物17)の製造
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.17 g, 0.39 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，8.0 ml)およびメタノール/水(4.5/1，11 mL)を入れた。混合物を35℃で16時間撹拌した。濃縮し、水を入れ、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(0.14 g，79％)。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１４】
5．3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-7-d-5β-コラン-24-酸(化合物18)の製造
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸(65 mg, 0.15 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，200 mg)および水(3.0 mL)を入れた。撹拌しながら重水素化ホウ化ナトリウム(13 mg, 0.30 mmol)を入れた。混合物を100℃で16時間撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(45 mg，69％)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.95 (brs, 1H), 4.31 (s, J = 4.0 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.14-3.13 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 31H), 0.61 (s, 3H)。 ESI-MS (m/z): 425 (M+H) +，447 (M+Na) +。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
実施例5  3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-5β-コラン-24-酸(化合物19)の製造
【化２２】
2018505220.tif 000035
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１６】
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d3)-7-ケト-5β-コラン-24-酸(65 mg, 0.15 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，200 mg)および水(3.0 mL)を入れた。撹拌しながら水素化ホウ化ナトリウム(13 mg, 0.30 mmol)を入れた。混合物を100℃で16時間撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(51 mg，78％)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.97 (brs, 1H), 4.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.50 (s, 1H), 3.14-3.13 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 31H), 0.61 (s, 3H)。ESI-MS (m/z): 424 (M+H) +，446(M+Na) +。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１７】
実施例6  3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-7-d-5β-コラン-24-酸(化合物23)の製造
【化２３】
2018505220.tif 000036
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２０】
3．3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-7-ケト-5β-コラン-24-酸(化合物22)の製造
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-7-ケト-5β-コラン-24-酸メチル(0.16 g, 0.36 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(10％，8.0 ml)およびメタノール/水(4.5/1，11 mL)を入れた。混合物を35℃で16時間撹拌した。濃縮し、水を入れ、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(0.12 g，73％)。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２１】
4．3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-7-d-5β-コラン-24-酸(化合物23)の製造
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-7-ケト-5β-コラン-24-酸(60 mg, 0.14 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，200 mg)および水(3.0 mL)を入れた。撹拌しながら重水素化ホウ化ナトリウム(13 mg, 0.30 mmol)を入れ、混合物を100℃で16時間撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(40 mg，67％)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.97 (brs, 1H), 4.32 (s, 1H), 4.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 3.16-3.11 (m, 1H), 2.28-2.19 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 30H), 0.61 (s, 3H)。 ESI-MS (m/z): 426 (M+H) +，448 (M+Na) +。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２２】
実施例7  3α,7α-ジヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-5β-コラン-24-酸(化合物24)の製造
【化２４】
2018505220.tif 000037
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
反応瓶に順に3α-ヒドロキシ-6α-(エチル-d4)-7-ケト-5β-コラン-24-酸(30 mg, 0.07 mmol)、水酸化ナトリウム水溶液(50％，200 mg)および水(2.0 mL)を入れた。撹拌しながら水素化ホウ化ナトリウム(10 mg, 0.15 mmol)を入れ、混合物を100℃で16時間撹拌した。室温に冷却し、1N塩酸を入れてpH値を2〜3に調整し、ろ過し、純水で洗浄して乾燥して目的化合物を得た(22 mg，70％)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 11.97 (brs, 1H), 4.32 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 4.07 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.50 (s, 1H), 3.14-3.13 (m, 1H), 2.27-2.20 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H), 1.93-0.84 (m, 30H), 0.61 (s, 3H)。ESI-MS (m/z): 425 (M+H) +，447 (M+Na)+。
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２４】
実施例8  3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-7,23,23-d3-5β-コラン-24-酸(化合物25)の製造
【化２５】
2018505220.tif 000038
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２５】
3α,7α-ジヒドロキシ-6α-エチル-7-d-5β-コラン-24-酸(0.2 g)を重水酸化ナトリウムの重水溶液に溶解させ、室温で24時間撹拌した。高真空で回転乾燥して溶媒を蒸発で除去し、残留物を重水酸化ナトリウムの重水溶液に溶解させ、室温で続いて24時間撹拌した。3N塩酸でpH値を2〜3に調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を合併し、順に純水および食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過し、濃縮させて固体の粗製品を得、シリルゲルカラムクロマトグラフィー(5％メタノール/ジクロロメタン)によって分離・精製して目的化合物を得た。 ESI-MS (m/z): 424 (M+H) +，446 (M+Na) +。
【国際調査報告】
2018505220.tif 000039
2018505220.tif 000040
2018505220.tif 000041
2018505220.tif 000042