(57)【要約】  化合物N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン又は前記化合物の薬剤として許容される塩である。化合物は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼ活性に関連する症状又は障害の治療に有用である。化合物を含む薬剤組成物である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物
【化１】
2018505226.tif 000007
N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン、又は前記化合物の薬剤として許容される塩。
【請求項２】
治療法に使用するための、請求項1に記載の化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項３】
ヒトの治療における、請求項2に記載の使用のための化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項４】
非ヒト哺乳動物の治療における、請求項2に記載の使用のための化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項５】
請求項1に記載の化合物又は薬剤として許容される塩と、場合によって薬剤として許容される賦形剤とを含む薬剤組成物。
【請求項６】
ヒトで使用するための、請求項5に記載の薬剤組成物。
【請求項７】
獣医学的使用のための、請求項5に記載の薬剤組成物。
【請求項８】
内分泌障害、心臓血管障害、呼吸器障害、代謝障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症及び/又は神経変性障害、腎臓病、生殖障害、眼及び/若しくは水晶体に影響を及ぼす疾患並びに/又は内耳に影響を及ぼす症状、炎症性障害、肝疾患、疼痛、癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性及びアナフィラキシー性ショック、胃腸系の疾患又は障害、異常な血管新生及び血管新生依存性症状、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、並びに線維性肺疾患から選択される症状又は障害の治療に使用するための、請求項1に記載の化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項９】
障害又は症状が、糖尿病、卒中、線維症、例えば肺線維症、神経障害性疼痛及び糖尿病合併症、例えば神経障害から選択される、請求項8に記載の使用のための化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項１０】
障害又は症状が糖尿病である、請求項9に記載の使用のための化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項１１】
ヒトである哺乳動物の治療における、請求項8から10のいずれか一項に記載の使用のための化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項１２】
非ヒト哺乳動物の治療における、請求項8から10のいずれか一項に記載の使用のための化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項１３】
非ヒト哺乳動物がイヌ又はネコである、請求項12に記載の使用のための化合物又は薬剤として許容される塩。
【請求項１４】
内分泌障害、心臓血管障害、呼吸器障害、代謝障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症及び/又は神経変性障害、腎臓病、生殖障害、眼及び/若しくは水晶体に影響を及ぼす疾患並びに/又は内耳に影響を及ぼす症状、炎症性障害、肝疾患、疼痛、癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性及びアナフィラキシー性ショック、胃腸系の疾患又は障害、異常な血管新生及び血管新生依存性症状、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、並びに線維性肺疾患から選択される症状又は障害を治療するための医薬品の製造における、請求項1に記載の化合物の使用。
【請求項１５】
医薬品がヒトで使用するためである、請求項14に記載の使用。
【請求項１６】
医薬品が獣医学的使用のためである、請求項14に記載の使用。
【請求項１７】
内分泌障害、心臓血管障害、呼吸器障害、代謝障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症及び/又は神経変性障害、腎臓病、生殖障害、眼及び/若しくは水晶体に影響を及ぼす疾患並びに/又は内耳に影響を及ぼす症状、炎症性障害、肝疾患、疼痛、癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性及びアナフィラキシー性ショック、胃腸系の疾患又は障害、異常な血管新生及び血管新生依存性症状、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、並びに線維性肺疾患から選択される症状又は障害を治療する方法であって、このような治療を必要とする哺乳動物に、化合物N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン、又は前記化合物の薬剤として許容される塩を投与することによる、方法。
【請求項１８】
哺乳動物がヒトである、請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項17に記載の方法。
【請求項２０】
非ヒト哺乳動物がイヌ又はネコである、請求項17に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸オキシダーゼ(Nox)に関連する症状又は障害の治療に有用である、N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミンに関する。より具体的には、本発明は、高いNox活性、特にNox4活性が原因であるか又はそれによって引き起こされる種々の疾患の治療で使用するNox阻害剤としてのN2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミンに関する。
【背景技術】
【０００２】
酸化的ストレスの定義は、活性酸素の形成と除去の間の生体内平衡異常である。細胞又は組織における正常な酸化還元状態の変化は、DNA、タンパク質及び脂質を含めた細胞機構の構成要素を傷つけ得る有害なラジカルを生成する可能性がある。細胞の構成要素に、遺伝的変化を引き起こす化学変化をさせる場合、これは一般に、癌又は他の重篤な疾患の形成を促進すると考えられてきた。
【０００３】
酸素ラジカルの供給源-潜在的に酸化的ストレスを生じ得る酸素ラジカル(O2-、H2O2及びOH-)の数多くの生体内発生因子が確認されている:ミトコンドリア内の複合体I及びIII並びにNADPHオキシダーゼ、キサンチンオキシダーゼ、シトクロムP450、金属イオン(コバルト、バナジウム、クロム、銅及び鉄)並びにサイクルを酸化還元できるある種の有機化合物。
【０００４】
一般的な抗酸化物質-数多くの内因性の細胞性抗酸化物質、例えばスーパーオキシドジスムターゼ(SOD)、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ペルオキシレドキシン及びスルフィレドキシンもある。食物から得られるビタミンも、有害な酸素ラジカルから生物を保護する重要な部分と考えられており、多くの食物の供給源中に存在する重要な抗酸化物質の最近の発見により、抗酸化物質の蓄えが増加した。
【０００５】
治療法としての抗酸化物質-ある種の抗酸化物質が疾患を予防し、且つ健康を促進するのに役立ち得ることは極めて明白である。はるかに明白でないのは、どのタイプの抗酸化物質を使用できるかということである。自然食品中に存在する多くの抗酸化物質は、酸化還元活性である。これらのタイプの酸化還元活性物質を単離し、補完医薬品として供給する場合-これは役立つよりも有害な結果をもたらし得る。酸素ラジカルを広く捕捉する、抗酸化物質の標的化されていない適用は、効果がないだけでなく有害ですらあり得ることが臨床試験によって示されている。これは、健常者及び様々な疾患を伴う患者を含めた232,550人の参加者について67のランダム化試験で行われた研究で示された(Bjelakovic G、Nikolova D、Simonetti RG、Gluud C. Cochrane Database Syst Rev. 2008年7月16日;(3):CD004183. Epub 2008年7月16日)。
【０００６】
したがって、酸化還元活性な一般的な抗酸化物質は、有害な酸化還元サイクルを媒介することによって、実際には細胞損傷を加える可能性がある。他の一般的な抗酸化物質は、身体機能を維持するのに必要な正常な細胞の生体内活性を有害に遮断すると予想される。
【０００７】
活性酸素の供給源と役割-次第に明らかになってきたのは、炎症、2型糖尿病、糖尿病合併症、多嚢胞性卵巣症候群、卒中(stroke)、有害な神経系症状及び癌等、多数の病的症状において、活性酸素の過剰な産生及び蓄積を引き起こすのは、ミトコンドリア内の複合体I又はIII等、一般的に酸素ラジカルを漏出しているものではなく、むしろ強力な酸素ラジカルの産生因子(正常な細胞シグナル伝達系の一部)が上向き調節されたものであるということである。したがって、酸化的ストレスの定義は、DNA、タンパク質又は脂質を不可逆的に変化させる酸素ラジカルである必要はないが、それよりも上向き調節されると「正常な」シグナル伝達を次第に妨害して細胞レベルで平衡異常をもたらし、最終的に他の組織及び全身機能を変化させ得る酸素ラジカルである。これの代表例は、メタボリックシンドロームであり、インスリン抵抗性を誘発因子とする血管疾患、2型糖尿病、卒中、腎症、神経障害、心不全及び卒中に関係する(Reaven、「Role of insulin resistance in human disease」、Diabetes 37(12)、1988年)。インスリン抵抗性自体は、適切な受容臓器への選択的なエネルギーの貯蔵を指示するツールとして、正常な身体機能の一部でもある。しかしながら、栄養過剰、又は他の障害、例えば過剰な成長ホルモン産生による先端巨大症若しくはob/obマウスのようなレプチン機能不全等の代謝変化が起こると、これは、メタボリックシンドロームに関係する臓器不全を引き起こし得る無制御インスリン抵抗性による有害な症状を誘発すると予想される。無制御インスリン抵抗性の共通点は、局所及び全身的な酸素ラジカルの過剰産生である(Houstisら、Nature 440、2006年;Katakamら、J cereb blood Flow Metab、2012年1月11日)。
【０００８】
この過剰産生に関して最も興味深い候補の1つは、NADPHオキシダーゼ(Nox)と呼ばれる膜貫通タンパク質(酵素)のファミリーである。Noxの7つのファミリーメンバー(Nox 1〜5及びDuox 1〜2)が同定されており、これらは極めて多くの場合活性酸素の主要又は重要な供給源として認識されており、また増殖(Brarら、Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol、282、2002年)、成長(Brarら、Am J Physiol Cell Physiol、282、2002年)、線維症(Grewalら、Am J Physiol、276、1999年)、移動(Sundaresanら、Science、270、1995年)、アポトーシス(Lundqvist-Gustafssonら、J Leukoc Biol、65、1999年)、分化(Steinbeckら、J Cell Physiol、176、1998年)、細胞骨格再配列(Wuら、J Virol、78、2004年)及び収縮(Rueckschlossら、Exp Gerontol、45、2010年)を含めた、多数の細胞事象において正常な細胞シグナル伝達系の一部として主要な役割も果たす。
【０００９】
NADPHオキシダーゼと疾患-NADPHオキシダーゼ活性低下を伴ういくつかの遺伝的症状が確認されている-Nox2欠損は、微生物の攻撃を殺して中和するための免疫応答を低下させる(慢性肉芽腫症)-内耳におけるNox3欠損は、重力知覚を欠損させ、甲状腺における酵素活性が欠損した二重NADPHオキシダーゼDuox2は、甲状腺機能低下を引き起こす。
【００１０】
しかしながら、Nox活性の増大が多数の疾患の一部であるか又は原因ですらあることの強力な証拠の証である、指数関数的に増加するようにも思われるはるかに多くの刊行物リストがある(Lambeth JD、Review Article「Nox enzymes, ROS, and chronic disease: An example of antagonistic pleiotropy」、Free Radical Biology & Medicine 43、2007年;Takac Iら、「The Nox Family of NADPH Oxidases: Friend or Foe of the Vascular System」、Curr Hypertens Rep. 2011年11月10日;Montezano AC、「Novel Nox homologues in the vasculature: focusing on Nox4 and Nox5」、Clin Sci London 2011年;Bedard Kら、「The Nox family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology」Physiol Rev. 2007年;Camici Mら、「Obesity-related glomerulopathy and podocyte injury: a mini review」、Front Biosci 2012年;Nabeebaccus Aら、「NADPH oxidases and cardiac remodeling」Heart Fai Rev. 2011年;Kuroda Jら、「NADPH oxidase and cardiac failure」J Cardiovasc Transl Res. 2010年;Kuroda Jら、「NADPH oxidase 4 is a major source of oxidative stress in the failing heart」Proc Natl Acad Sci USA 2010年;Maejima Yら、「Regulation of myocardial growth and death by NADPH oxidase」J Mol Cell Cardiol. 2011年;Barnes JLら、「Myofibroblst differentiation during fibrosis: role of NADPH oxidases」Kidney international、2011年;Alison Cave「Selective targeting of NADPH oxidase for cardiovascular protection」Current Opinion in Pharmacology 2009年;Albert van der Vliet「Nox enzymes in allergic airway inflammation」Biochimica et Biophysica Acta 1810、2011年;Pendyala Sら、「Redox regulation of Nox proteins」Respiratory Physiology & Neurobiology 174、2010年;Nair Dら、「Intermittent Hypoxia-Induced Cognitive Deficits Are Mediated by NADPH oxidase Activity in a Murine Model of Sleep Apnea」PLoS ONE、vol. 6、Issue 5、2011年5月;Chia-Hung Hsiehら、「NADPH oxidase Subunit 4-Mediated Reactive Oxygen species Contribute to Cycling Hypoxia-Promoted Tumor Progression in Glioblastoma Multiforme」PloS ONE、vol 6、issue 9、2011年9月;Sedeek Mら、「Molecular mechanisms of hypertension: role of nox family NADPH oxidase」Current Opinion in Nephrology and Hypertension 2009年;Augusto Cら、「Novel Nox homologues in the vasculature: focusing on Nox4 and Nox5」Clinical Science 2011年;Briones AMら、「Differential regulation of Nox1, Nox2 and Nox4 in vascular smooth muscle cells from WKY and SHR」Journal of the American Society of Hypertension 5:3、2011年)。
【００１１】
Nox酵素、特にNox4は、肺線維症に高度に関与することが最近示された。線維症における酸化的ストレスの機能は十分に認識されており(Kinnula VL、Fattman CL、Tan RJ、Oury TD (2005年) Oxidative stress in pulmonary fibrosis: a possible role for redox modulatory therapy. Am J Respir Crit Care Med 172:417〜422頁)、それは、肺線維症並びに多臓器系における線維症の病的な発症において酸化的ストレスが重要な役割を果たすことを示す実質的かつ増加する一連の証拠があるからである(Kuwano K、Nakashima N、Inoshima I、Hagimoto N、Fujita M、Yoshimi M、Maeyama T、Hamada N、Watanabe K、Hara N (2003年) Oxidative stress in lung epithelial cells from patients with idiopathic interstitial pneumonias. Eur Respir J 21:232〜240頁)。したがって、Nox酵素、特にNox4は、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、線維性肺疾患、及び肺癌にも関与するように思われる。
【００１２】
NADPHオキシダーゼのイソ酵素、類似性、相違点及び機能-NADPHオキシダーゼの7種全てのイソ酵素(同定されたもの)は、NADPH及びFADの結合部位並びに6つの膜貫通ドメインを有する方法において、且つそれらが2つのヘム複合体を含むという点において、類似する。全てのNADPHオキシダーゼ型は、同じ基本メカニズムを使用して活性酸素を生成するが、細胞内局在及び作用様式が著しく異なる。酵素Noxファミリーによって生成される活性酸素種は、スーパーオキシドO2-又は過酸化水素H2O2のいずれかである。
【００１３】
Nox1及び2は、p22phoxに構成的に結合し、酵素複合体を活性化させるために、Rac、p47phox、p67phox等の他の成分が完全なNox1活性に必要である。Nox2は、完全活性化のためにRac、p40phox、p47phox及びp67phoxを必要とする。Nox1及び2は、活性化するとO2-を生成する。
【００１４】
Nox3も活性になるために細胞質ゾルタンパク質を構築する必要がある(Chengら、J Biol Chem、279(33)、2004年)。
【００１５】
Nox4もp22phoxと会合しており、この形態で構成的に活性である。Nox4活性は、しかしながら、アセンブリ又はリガンド活性化によってではなく発現によって調節され、このことは、このアイソフォームを他のアイソフォームと区別する(Serranderら、Biochem J. 406、2007年)。誘導されると、Nox4は、一般にNox1及び2より高いレベルで発現する(Agoら、Circulation、109、2004年)。Nox4は、他のNox変異体のようなO2-ではなく主にH2O2を生成すると思われる(Takacら、J. Biol. Chem. 286、2011年)。これがこのアイソフォームを独特なものにしており、なぜならH2O2は、膜を通過し、したがって極めて短い半減期を有するO2-より長い距離で作用する能力を有するからである。
【００１６】
Nox5、Doux1及びDoux2は、Ca2+によって活性化される(De Deken、Wangら、J.Biol Chem.、275(30)、2000年)。
【００１７】
Nox4と疾患-過剰発現したときに多数の異なる疾患に関与していると思われるので、他のアイソフォームと比較したNox4の独特さは、治療標的としての独特さとも関係がある。
【００１８】
Nox4は、誘発されるまで極めて低いレベルではあるが、多くの細胞タイプで普遍的に発現されている。しかしながら、それは主に腎臓、内皮細胞、外膜線維芽細胞、胎盤、平滑筋細胞、破骨細胞に見られ、腫瘍で発現される主要なNoxである(Chamseddineら、Am J Physiol Heart Circ Physiol. 285、2003年;Ellmarkら、Cardiovasc Res. 65、2005年;Van Buulら、Antioxid Redox Signal. 7、2005年;Kawaharaら、BMC Evol Biol. 7、2007年;Krauseら、Jpn J Infect is. 57(5)、2004年;Griendling、Antioxid Redox Signal. 8(9)、2006年)。Nox4は、大部分の乳癌細胞系及び原発性乳房腫瘍で過剰発現されることが判明した。既に形質転換した乳房腫瘍細胞におけるNox4の過剰発現は、腫瘍形成能の増大を示し、Nox4は、この場合にミトコンドリア内で確認された。Nox4は、乳癌を治療するための標的として示唆された(Grahamら、Cancer Biol Ther 10(3)、2010年)。
【００１９】
Nox4は、脳血管内皮細胞でTNF-αによって引き起こされる酸化的ストレス及びアポトーシスを媒介する(Basuroyら、Am J Physiol Cell Physiol vol. 296、2009年)。虚血性卒中に続くその悪影響は、動物モデル及びヒト組織で十分に実証されている。Nox4のノックダウン実験は、神経損傷の領域を劇的に低減させた(Sedwick、PLos Biology、vol.8 issue 9、2010年;Kleinschnitzら、vol.8 issue 9、2010年)。
【００２０】
微小血管及び臍静脈の両方の内皮細胞におけるノックダウン及び過剰発現試験によって、Nox4活性の増大が内皮細胞の増殖及び移動に際して重要な役割を果たすことが実証された(Datlaら、Arterioscler Throm Vasc Biol. 27(11)、2007年)。最初は、Nox2が糖尿病における血管形成欠損の原因であると考えられていたが、焦点は、Nox4へよりシフトした(Zhangら、PNAS、107、2010年;Garriodo-Urbaniら、Plos One 2011年;Takacら、Curr Hypertens Rep、14、2012年)。Nox4は、肺線維症の進行中に上皮細胞死に重要な役割を果たす(Camesecchiら、Antiox Redox Signal. 1:15(3)、2011年)。
【００２１】
Nox4のsiRNA媒介ノックダウンは、糸球体間質細胞及び腎皮質から精製したミトコンドリアにおいてNADPHオキシダーゼ活性を著しく低下させることが更に実証された。ノックダウンは、グルコース誘導によるミトコンドリアのスーパーオキシド産生をブロックした。Nox4は、糖尿病においてミトコンドリア機能障害及び細胞傷害をもたらし得る酸化的ストレスに対する中心的な媒介物として作用することが示唆された(Blockら、PNAS vol. 106、no. 34、2009年)。
【００２２】
Nox4は、ラットの食餌誘発性肥満症で全身的に上向き調節されることも実証された(Jiang、redox rep、16(6)、2011年)。
【００２３】
Nox4は、不全性心臓(failing heart)の病理に強く関係してきた(Nabeebaccus Aら「NADPH oxidases and cardiac remodeling」Heart Fai Rev. 2011年;Kuroda Jら、「NADPH oxidase and cardiac failure」J Cardiovasc Transl Res. 2010年;Kuroda Jら、「NADPH oxidase 4 is a major source of oxidative stress in the failing heart」Proc Natl Acad Sci USA 2010年)。ミトコンドリアNox4活性の増大と「老化性心臓(aging heart)」の機能障害との関係が示唆されている(Tetsuro Agoら、AGING、2010年12月、vol.2 No 12)。
【００２４】
細胞外マトリックス蓄積は、慢性腎臓病の病理の一因となる。増殖因子IGF-I活性は、このプロセスの主要な一因であり、Nox4は、このプロセスにおける媒介物である(Newら、Am J Physiol Cell Physiol. 302(1)、2012年)。レニン-アンギオテンシンの慢性的な活性化と腎臓損傷系の進行との関係が、このプロセスにおける協力因子としてのNox4及びアンギオテンシンIIについて十分に確立されている(Chenら、Mol Cell Biol. 2012年)。
【００２５】
したがって、以上のことから、Nox酵素は生体内でいくつかの機能を有しており、それらは種々の障害にも関与している可能性があると思われる。そのような疾患及び障害の例は、心臓血管障害、呼吸器障害、代謝障害、内分泌障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症及び/又は神経変性障害、腎臓病、生殖障害、眼及び/若しくは水晶体に影響を及ぼす疾患並びに/又は内耳に影響を及ぼす症状、炎症性障害、肝疾患、疼痛、癌、アレルギー性障害、外傷性頭部傷害等の外傷性障害、敗血症性、出血性及びアナフィラキシー性ショック、胃腸系の疾患又は障害、血管新生、血管新生依存性症状である。特にそのような障害に関与していることが判明したとも思われる。その結果、Noxを阻害し得る化合物、特にNox4を選択的に阻害し得る化合物は、Nox酵素、特にNox4が関与する疾患及び障害の治療で使用するのに大変重要であると考えられる。
【００２６】
GenKyoTex SAによるいくつかの特許出願は、Nox阻害剤として使用するための種々のピラゾロ及びピラゾリン誘導体に関する。したがって、PCT出願WO 2010/035217、WO 2010/035219、WO 2010/035220、WO 2010/035221、WO 2011/036651、WO2011/101804及びWO2011/101805には、Noxに関係するいくつかの症状及び障害が記載されており、課題に関する種々の文献源が言及されている。前記出願及びそのなかで言及された文献に含まれている情報を、参照により本明細書に組み込む。
【００２７】
上記で指摘したように、Nox4は、他の疾患のなかでも卒中に関与している。卒中は、世界的に主要な死因の第2位であり、生存者は社会生活並びに仕事を遂行する能力に影響する重篤な認知困難を伴う障害をもつことが多い。これは、患者及び近親者の苦難に加えて、社会及び保健医療システムにとっても極めて高い費用を要する。卒中患者の新しい効果的な治療がないと、今後45年間に卒中罹病者をケアする費用は米国だけで2兆2千万ドルを超えると予想される。
【００２８】
卒中は、2つの主要なカテゴリーに分類される。血液供給の中断を引き起こす虚血性と血管の破裂から生じる出血性である。両方とも、血液供給の妨害によって起こる急速な脳機能の損失を誘発する。虚血性卒中は、明らかに最も一般的な形態であって症例の87%を占めるが、9%は脳内出血によるものであり、残り4%はクモ膜下出血によるものである。
【００２９】
虚血性卒中の病態生理学は複雑であり、患者の回復は、神経組織への血液供給が欠乏した時間の長さに依存する。3時間超酸素が欠乏した脳組織は、不可逆的に損傷を受けると予想される。病態生理学には、興奮毒性メカニズム、炎症経路、酸化損傷、イオン平衡異常、アポトーシス、血管新生及び内因性ニューロン保護が含まれる。更に、戻ってくる血液によって既に低灌流の領域に白血球が再侵入すると、それらが小血管を閉塞させ、更なる虚血をもたらす可能性がある。
【００３０】
卒中を管理するための異なる戦略は;予防的治療のためにリスクグループを特定すること;虚血性卒中発作後の結果を改善するための基本である早期治療を伴う連続したケアによる卒中管理の基準を設定するために、証拠に基づいた臨床診療指針の開発、教え込み、及び普及である。現在承認されている2つの治療のうちの1つは、血栓溶解を誘発する組織プラスミノゲン活性化因子(tPA)のIV投与であり、これにより凝血塊が除去され、脳組織への血液供給が復活し得る。もう一方の方法は、機械的に凝血塊を除去して血液供給を復活させるものである。他の取り組み方法は、初期研究中であり、いくつかは臨床試験中である。関心のある新しい有望な治療法には、神経保護剤の投与、虚血脳の冷却及び閉塞動脈を再生するためのステントの使用が含まれる。
【００３１】
したがって、虚血性卒中発作の治療方法は一般に、例えば組織プラスミノゲン活性化因子(tPA)の静脈内投与によって血流から機械的な障害(血餅)を取り除くことを含む。血流からの機械的な障害の除去と、その前又は後の神経保護剤の投与とを組み合わせることは、アポトーシスを含めた不可逆的な傷害から脳の虚血性ニューロンを守るのに役立つ可能性があると考えられる。しかしながら、今日現在まで、卒中の効果的な治療のための神経保護剤は提供されていない。したがって、改善された卒中の治療、特に神経保護剤の投与による、好ましくは虚血脳における血餅の除去と組み合わせた、改善された治療の必要性が依然としてあると思われる。
【００３２】
WO2014/064118として公開されている、国際出願第PCT/EP2013/072098号では、一般式
【００３３】
【化１】
2018505226.tif 000002
【００３４】
のトリアジン誘導体は、Nox、好ましくはNox4に関連する症状又は障害の治療に有用であると開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３５】
【特許文献１】PCT出願WO 2010/035217
【特許文献２】PCT出願WO 2010/035219
【特許文献３】PCT出願WO 2010/035220
【特許文献４】PCT出願WO 2010/035221
【特許文献５】PCT出願WO 2011/036651
【特許文献６】PCT出願WO2011/101804
【特許文献７】PCT出願WO2011/101805
【特許文献８】WO2014/064118として公開されている、国際出願第PCT/EP2013/072098号
【非特許文献】
【００３６】
【非特許文献１】Bjelakovic G、Nikolova D、Simonetti RG、Gluud C. Cochrane Database Syst Rev. 2008年7月16日;(3):CD004183. Epub 2008年7月16日
【非特許文献２】Reaven、「Role of insulin resistance in human disease」、Diabetes 37(12)、1988年
【非特許文献３】Houstisら、Nature 440、2006年
【非特許文献４】Katakamら、J cereb blood Flow Metab、2012年1月11日
【非特許文献５】Brarら、Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol、282、2002年
【非特許文献６】Brarら、Am J Physiol Cell Physiol、282、2002年
【非特許文献７】Grewalら、Am J Physiol、276、1999年
【非特許文献８】Sundaresanら、Science、270、1995年
【非特許文献９】Lundqvist-Gustafssonら、J Leukoc Biol、65、1999年
【非特許文献１０】Steinbeckら、J Cell Physiol、176、1998年
【非特許文献１１】Wuら、J Virol、78、2004年
【非特許文献１２】Rueckschlossら、Exp Gerontol、45、2010年
【非特許文献１３】Lambeth JD、Review Article「Nox enzymes, ROS, and chronic disease: An example of antagonistic pleiotropy」、Free Radical Biology & Medicine 43、2007年
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【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３７】
上記で言及したように、トリアジン誘導体は、Nox4阻害剤としての使用について以前に記載されている。しかしながら、本発明者らは、今回、薬学的使用に重要な他の驚くほど優れた特性、例えば驚くほど高い動力学的溶解度及びCaco-2透過性と併せて、Nox1及びNox2の両方と比較してNox4に驚くほど高い選択性を有するトリアジン誘導体を確認した。
【課題を解決するための手段】
【００３８】
したがって、第一の態様によれば、化合物N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン、又はその薬剤として許容される塩が提供されている。
【００３９】
上記で指摘したように、本発明の化合物は、Nox4阻害剤であり、したがって治療法に有用である。その結果、別の態様によれば、化合物N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン、又はその薬剤として許容される塩は、治療法で使用するために提供されている。
【００４０】
いくつかの実施形態では、治療法は、ヒト患者の治療を対象としており、すなわち化合物は、ヒト(薬学的)使用のためのものである。
【００４１】
いくつかの他の実施形態では、治療法は、愛玩動物等の非ヒト哺乳動物の治療を対象としており、すなわち化合物は、獣医学的使用のためのものである。
【００４２】
別の態様では、化合物N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン、又は前記化合物の薬剤として許容される塩、及び場合によって薬剤として許容される賦形剤を含む、薬剤組成物が提供されている。
【００４３】
いくつかの実施形態では、薬剤組成物は、ヒトで使用するため、すなわちヒト対象の治療のためのものである。
【００４４】
いくつかの他の実施形態では、薬剤組成物は、例えばイヌ又はネコ等の動物の治療に適した獣医学的組成物である。
【００４５】
別の態様によれば、化合物N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン、又はその薬剤として許容される塩は、高いNox活性、より具体的には高いNox4活性に関連する、例えばそれが原因であるか又はそれによって引き起こされる疾患の治療に使用するために提供されている。
【００４６】
このような症状及び障害の例は、例えばNoxに関連するか又はNoxによって媒介される上記で言及したもの、例えば内分泌障害、心臓血管障害、呼吸器障害、代謝障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症及び/又は神経変性障害、腎臓病、生殖障害、眼及び/若しくは水晶体に影響を及ぼす疾患並びに/又は内耳に影響を及ぼす症状、炎症性障害、肝疾患、疼痛、癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性及びアナフィラキシー性ショック、胃腸系の疾患又は障害、異常な血管新生及び血管新生依存性症状、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、並びに線維性肺疾患から選択される症状及び障害である。
【００４７】
一態様によれば、それを必要とする哺乳動物において、前記哺乳動物に化合物N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン、又は前記化合物の薬剤として許容される塩を投与することによって、Nox、特にNox4の活性を阻害する方法を提供している。
【００４８】
一態様によれば、本発明の化合物は、卒中、例えば虚血性卒中の治療における神経保護剤として使用するためのものである。
【００４９】
一態様によれば、本明細書で言及した障害のいずれかの治療のための医薬品を製造するための本明細書で定義された化合物の使用が提供されている。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
一般に、本明細書で使用されているいずれの用語も、本発明が属する分野内で受け入れられているその通常の意味が与えられているはずである。しかしながら、明確にするために、以下にいくつかの定義を示し、特に指定のない限り又は内容から明らかでない限り、本明細書及び添付の特許請求の範囲の全体にわたって適用するものとする。
【００５１】
用語「内分泌障害」は、内分泌系の障害を意味しており、内分泌腺の分泌不全及び分泌過多、又は内分泌腺の腫瘍であってもよい。糖尿病及び多嚢胞性卵巣症候群は、内分泌障害の例である。
【００５２】
用語「心臓血管障害又は疾患」は、アテローム性動脈硬化症、特に、高血圧症、I型又はII型糖尿病の心臓血管合併症、内膜肥厚、冠状動脈性心疾患、脳血管、冠血管又は動脈痙攣、内皮機能不全、うっ血性心不全を含む心不全、末梢動脈疾患、再狭窄、ステント、卒中、虚血発作によって引き起こされる外傷、臓器移植後等の血管合併症、心筋梗塞、高血圧症、アテローム性動脈硬化プラークの形成、血小板凝集、狭心症、動脈瘤、大動脈解離、虚血性心疾患、心肥大、肺塞栓症、深部静脈血栓症を含む血栓性事象、臓器移植、開心術、血管形成術、出血性ショック、心臓、脳、肝臓、腎臓、網膜及び腸を含む虚血臓器の血管形成術等の場合の虚血後の血流又は酸素運搬の回復によって引き起こされる傷害を含むが、それだけには限定されない内皮機能不全に関連する疾患又は障害を含む。
【００５３】
用語「呼吸器障害又は疾患」は、気管支喘息、気管支炎、アレルギー性鼻炎、成人呼吸症候群、嚢胞性線維症、肺ウィルス感染(インフルエンザ)、肺高血圧症、特発性肺線維症及び慢性閉塞性肺疾患(COPD)を含む。
【００５４】
用語「アレルギー性障害」には、枯草熱及び喘息が含まれる。
【００５５】
用語「外傷性障害(traumatism)」には、多発性外傷性障害(polytraumatism)が含まれる。
【００５６】
用語「代謝に影響する疾患又は障害」には、肥満、メタボリックシンドローム及びII型糖尿病が含まれる。
【００５７】
用語「皮膚疾患又は障害」には、乾癬、湿疹、皮膚炎、創傷治癒及び瘢痕形成が含まれる。
【００５８】
用語「骨障害」には、骨粗鬆症(osteoporosis)、オステオポローシス(osteoporosis)、骨硬化症、歯周炎、及び上皮小体機能亢進症が含まれる。
【００５９】
用語「神経変性疾患又は障害」は、特にアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、てんかん及び筋ジストロフィー等のニューロンのレベルにおける中枢神経系(CNS)の変性又は変調によって特徴付けられる疾患又は状態を含む。これは、白質脳症、及び白質異栄養症等の神経炎症性及び脱髄性の状態又は疾患を更に含む。用語「脱髄性」は、軸索の周りのミエリンの分解を含むCNSの状態又は疾患を意味する。本発明において、脱髄性疾患という用語は、多発性硬化症、進行性多病巣性白質脳障害(PML)、脊髄症、CNS内の自己反応性白血球に関係する任意の神経炎症症状、先天性代謝異常、異常髄鞘形成による神経障害、薬剤誘発性脱髄、放射線誘発性脱髄、遺伝性脱髄症状、プリオン誘発性脱髄症状、脳炎誘発性脱髄又は脊髄損傷等の細胞を脱髄するプロセスを含む症状を含むものである。好ましくは、症状は、多発性硬化症である。
【００６０】
用語「腎臓病又は障害」には、糖尿病性腎症、腎不全、糸球体腎炎、アミノグリコシド及び白金化合物の腎毒性並びに過活動膀胱が含まれる。特定の実施形態では、本発明による用語には、慢性腎臓病又は障害が含まれる。
【００６１】
用語「生殖障害又は疾患」には、勃起不全、受精障害(fertility disorder)、前立腺肥大症及び良性前立腺肥大症が含まれる。
【００６２】
用語「眼及び/又は水晶体に影響を及ぼす疾患又は障害」には、糖尿病性白内障を含む白内障、白内障手術後の水晶体の再混濁化、糖尿病性及び他の形態の網膜症が含まれる。
【００６３】
用語「内耳に影響を及ぼす症状」には、老人性難聴、耳鳴り、メニエール病及び他の平衡問題、卵形嚢結石症(utriculolithiasis)、前庭片頭痛、並びに騒音性聴力損失及び薬物性難聴(聴器毒性)が含まれる。
【００６４】
用語「炎症性障害又は疾患」は、炎症性腸疾患、敗血症、敗血症性ショック、成人呼吸困難症候群、膵炎、外傷により誘発されたショック、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、関節リウマチ、慢性関節リウマチ、動脈硬化症、脳内出血、脳梗塞、心不全、心筋梗塞、乾癬、嚢胞性線維症、卒中、急性気管支炎、慢性気管支炎、急性細気管支炎、慢性細気管支炎、変形性関節症、痛風、脊髄炎、強直性脊椎炎、ロイター症候群、乾癬性関節炎、脊椎関節炎、若年性関節炎若しくは若年性強直性脊椎炎、反応性関節炎、感染性関節炎若しくは感染後関節炎、淋菌性関節炎、梅毒性関節炎、ライム病、「脈管炎症候群」によって誘発された関節炎、結節性多発性動脈炎、アナフィラキシー性脈管炎、Luegenec肉芽腫症、リウマチ様多発性筋痛、関節細胞リウマチ、カルシウム結晶沈着関節炎、偽性痛風、非関節炎性リウマチ、粘液嚢炎、腱滑膜炎、上顆炎症(テニス肘)、手根管症候群、反復使用(タイピング)障害、混合型関節炎、神経障害性関節症、出血性関節炎、血管性紫斑病、肥厚性骨関節症、多中心性細網組織球症、特定の疾患によって誘発された関節炎、血液色素沈着、鎌状赤血球疾患及び他のヘモグロビン異常、高リポタンパク血症、異ガンマグロブリン血症、上皮小体機能亢進症、先端巨大症、家族性地中海熱、ベーチェット病、全身性自己免疫疾患エリテマトーデス、多発性硬化症及びクローン病若しくは再発性多発性軟骨炎のような疾患、慢性炎症性腸疾患(IBD)又はNADPHオキシダーゼを阻害するのに十分な用量で治療有効量の式(I)によって表される化合物を哺乳動物に投与することを必要とする関連疾患を表す。
【００６５】
用語「肝疾患又は障害」には、肝線維症、アルコール誘発性線維症、脂肪症及び非アルコール性脂肪性肝炎が含まれる。
【００６６】
用語「関節炎」は、急性リウマチ性関節炎、慢性関節リウマチ、クラミジア関節炎、慢性吸収性関節炎、強直性(anchylous)関節炎、腸疾患に基づく関節炎、フィラリア性関節炎、淋病性関節炎、痛風性関節炎、血友病性関節炎、肥厚性関節炎、若年性慢性関節炎、ライム関節炎、新生子ウマ関節炎、結節性関節炎、アルカプトン尿性関節炎、乾癬性関節炎若しくは化膿性関節炎、又はNADPHオキシダーゼを阻害するのに十分な用量で治療有効量の式(I)によって表される化合物を哺乳動物に投与することを必要とする関連疾患を表す。
【００６７】
用語「疼痛」には、炎症性疼痛に関連する痛覚過敏が含まれる。
【００６８】
用語「癌」は、癌腫(例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、骨膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、腎癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頚癌、睾丸腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、膀胱癌又は上皮癌)又はNADPHオキシダーゼを阻害するのに十分な用量で治療有効量の式(I)によって表される化合物を哺乳動物に投与することを必要とする関連疾患を表す。
【００６９】
用語「胃腸系の疾患又は障害」には、胃粘膜障害虚血性腸疾患管理、腸炎/結腸炎、癌化学療法、又は好中球減少症が含まれる。
【００７０】
用語「血管新生」には、出芽型(sprouting)血管新生、陥入型(intussusceptive)血管新生、血管形成、動脈形成及びリンパ管形成が含まれる。血管新生は、既存の毛細管又は後毛細管細静脈からの新しい血管の形成であり、癌、関節炎及び炎症等の病的症状で起こる。血管新生刺激に際して血管が侵入できる皮膚、筋肉、腸、結合組織、関節、骨等の組織を含めた多種多様な組織、又は組織化された組織からなる臓器は、疾患症状における血管新生を支持することができる。本明細書では、用語「血管新生依存性症状」は、血管新生又は血管形成のプロセスが病的症状を持続又は増強する症状を表すものである。血管形成は、内皮細胞前駆体である血管芽細胞から生じる新しい血管の形成の結果である。どちらのプロセスも、新しい血管形成をもたらし、血管新生依存性症状という用語の意味に含まれる。同様に、用語「血管新生」は、本明細書では、新たな血管形成、例えば血管形成から生じるもの、並びに既存の血管、毛細管及び細静脈の分枝及び出芽から生じるものを含むものである。
【００７１】
用語「血管新生阻害性」は、それが新血管新生の程度、量、又は速度の低下に有効であることを表す。組織における内皮細胞の増殖又は移動の程度、量又は速度の低下をもたらすことは、血管新生を阻害することの具体例である。血管新生阻害活性は、どのような癌の治療にも特に有用であり、なぜならそれは腫瘍増殖プロセスを標的とし、腫瘍組織の新血管新生がなければ、その腫瘍組織は必要な栄養素が得られず、増殖が遅くなり、更なる増殖が止まり、退縮し、最終的に壊死して腫瘍が死滅するからである。更に、血管新生阻害活性は、転移の形成に対して特に有効であるので、どのような癌の治療にも特に有用であり、なぜならそれらの形成にも転移性癌細胞が原発腫瘍から進出できるように原発腫瘍の血管新生が必要とされ、且つ続発部位でのそれらの樹立に転移の増殖を支持するための新血管新生が必要とされるからである。
【００７２】
本明細書では、「治療」及び「治療する」等は、一般に、所望の薬理学的及び生理学的効果を得ることを表す。効果は、疾患、その症候若しくは症状を予防若しくは部分的に予防するという点で予防的であってもよく、且つ/又は疾患、その疾患に起因する症状、症候若しくは悪影響の部分的若しくは完全な治癒の点で治療的であってもよい。用語「治療」は、本明細書では、哺乳動物、特にヒトにおける疾患のどのような治療も網羅し:(a)疾患に罹患しやすいが、まだそれを有すると診断されていない対象において疾患が生じるのを予防すること;(b)疾患を抑制すること、すなわち、その進行を阻止すること;或いは疾患を緩和すること、すなわち、疾患及び/又はその症候若しくは症状を退行させること、を含む。
【００７３】
用語「対象」は、本明細書では、哺乳動物を意味する。本発明によって検討された哺乳動物には、霊長類のようなヒト及び非ヒト哺乳動物、農場の動物、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ等のような家畜、並びにイヌ及びネコ等のような愛玩動物が含まれる。
【００７４】
「有効量」は、治療対象に治療効果を与える化合物の量を意味する。治療効果は、客観的(すなわち、ある試験又はマーカーによって測定可能)又は主観的(すなわち、対象が効果を指摘するか、又は感じる)であってよい。
【００７５】
本発明において使用されている用語「阻害剤」は、Nox、特にNox4の活性を完全若しくは部分的に阻害し、且つ/又は活性酸素種(ROS)の生成を阻害又は低減する分子と定義される。
【００７６】
「薬剤として許容される」は、一般に安全、非毒性であって、生物学的にも他の形でも望ましくないものではない薬剤組成物を調製するのに有用であることを表し、獣医学的使用並びにヒトの薬学的使用として有用であることを含む。
【００７７】
表現「本発明の化合物」は、特に指示がない限り又は文脈から明らかでない限り、化合物N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミンの薬剤として許容される塩を意味するものともみなすべきである。
【００７８】
本発明の化合物は、Nox阻害剤である。より具体的には、本発明の化合物は、Nox4阻害剤である。Noxアイソフォームは、Nox4のように疾患に関与するだけでなく、生体における種々の重要な生物学的機能も有しているという事実を考慮すると、1種類の特定のNoxアイソフォーム、すなわちNox4を主に阻害する能力は、本化合物の重要な利点であると考えられる。
【００７９】
プロセス条件に応じて、本発明の化合物は、中性又は塩の形態で得られる。本発明の化合物の酸付加塩は、それ自体が既知の方法で、アルカリ等の塩基性薬剤を用いて、又はイオン交換によって、遊離塩基に変換することができる。得られた遊離塩基は、有機又は無機酸との塩を形成することもできる。本発明の化合物のアルカリ付加塩は、それ自体が既知の方法で、酸等の酸性薬剤を用いて、又はイオン交換によって、遊離酸に変換することができる。得られた遊離酸は、有機又は無塩基との塩を形成することもできる。
【００８０】
酸又は塩基付加塩の調製に際して、好ましくは適切に治療上許容される塩を形成する酸又は塩基を使用する。このような酸の例は、ヒドロハロゲン酸(hydrohalogen acid)、硫酸、リン酸、硝酸、脂肪族、脂環式、芳香族又は複素環式のカルボン酸又はスルホン酸、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、p-ヒドロキシ安息香酸、エンボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、ハロゲンベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸又はナフタレンスルホン酸である。塩基付加塩には、無機塩基、例えばアンモニウム又はアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩等、並びに有機塩基、例えばアルコキシド、アルキルアミド、アルキル及びアリールアミン等から誘導されるものが含まれる。本発明の塩を調製するのに有用な塩基の例には、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウム等が含まれる。
【００８１】
医薬配合物は、通常、活性物質、すなわち本発明の化合物、又はその薬剤として許容される塩を従来の薬学的賦形剤と混合することによって調製される。配合物は、既知の方法、例えば造粒、圧縮、マイクロカプセル化、スプレーコーティング等によって更に調製することができる。配合物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、懸濁剤、坐剤又は注射剤の剤形で、従来の方法によって調製することができる。液体配合物は、活性物質を水又は他の適当なビヒクルに溶解又は懸濁することによって調製することができる。錠剤及び顆粒剤は、従来の方法によってコーティングしてもよい。
【００８２】
臨床使用には、本発明の化合物は、経口、直腸、非経口又は他の投与様式に応じた医薬配合物に製剤化される。これらの医薬調製物は、本発明の更なる目的である。
【００８３】
通常、有効量の活性化合物は、調製物の0.1〜95質量%、好ましくは非経口用の調製物の0.2〜20質量%、好ましくは経口投与用の調製物の1〜50質量%である。
【００８４】
特定の化合物の投与レベル及び投与頻度は、使用する特定の化合物の力価、その化合物の代謝安定性及び作用期間、患者の年齢、体重、一般的な健康、性別、食事、投与の様式及び時間、排出速度、薬物の組合せ、治療すべき症状の重症度、並びに治療法を受けている患者を含めた種々の要因に応じて異なると予想される。1日投与量は、例えば、体重1キロ当たり約0.001mg〜約100mgの範囲であってよく、単回又は複数回、例えばそれぞれ約0.01mg〜約25mgの用量で投与される。通常、このような投与量は、経口で投与されるが、非経口投与も選択することができる。
【００８５】
本発明の化合物を含有する医薬配合物を経口投与用の投与単位の形態で調製する際、化合物は、固体の粉末状成分、例えばラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アミロペクチン、セルロース誘導体、ゼラチン、又は別の適当な成分、並びに崩壊剤及び平滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、フマル酸ステアリルナトリウム及びポリエチレングリコールワックスと混合することができる。混合物を次いで顆粒剤に加工し、又は錠剤に圧縮する。
【００８６】
軟ゼラチンカプセル剤は、本発明の活性化合物、植物油、脂肪、又は軟ゼラチンカプセル剤用の他の適当なビヒクルの混合物を含有するカプセルで調製することができる。硬ゼラチンカプセル剤は、活性化合物の顆粒を含有していてもよい。硬ゼラチンカプセル剤は、本発明の化合物を、固体の粉末状成分、例えばラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、ジャガイモデンプン、コーンスターチ、アミロペクチン、セルロース誘導体又はゼラチンと併せて含有していてもよい。
【００８７】
直腸投与用の投与単位は、(i)中性脂肪基剤と混合した活性物質を含有する坐剤の形態;(ii)植物油、パラフィン油若しくはゼラチン直腸カプセル剤用の他の適当なビヒクルとの混合物で活性物質を含有するゼラチン直腸カプセル剤の形態;(iii)既製のマイクロ浣腸剤の形態;又は(iv)投与の直前に適当な溶媒に溶解させる乾燥マイクロ浣腸剤製剤の形態で調製することができる。
【００８８】
経口投与用の液体調製物は、シロップ剤又は懸濁剤、例えば0.2%〜20質量%の有効成分、並びに糖又は糖アルコールとエタノール、水、グリセリン、プロピレングリコール及びポリエチレングリコールの混合物とからなる残余を含有する液剤又は懸濁剤の形態で調製することができる。所望の場合、このような液体調製物は、着色剤、矯味矯臭剤、サッカリン及びカルボキシメチルセルロース又は他の増粘剤を含有していてもよい。経口投与用の液体調製物は、使用前に適当な溶媒に溶解させる乾燥粉末の形態で調製することもできる。
【００８９】
非経口、例えば静脈内投与用の液剤は、薬剤として許容される溶媒における本発明の化合物の溶液として、好ましくは0.1%〜10質量%の濃度で調製することができる。これらの液剤は、安定化成分及び/又は緩衝成分も含有していてよく、アンプル又はバイアルの形態で単位用量に分配される。非経口投与用の液剤は、使用前に即時に適当な溶媒に溶解させる乾燥調製物として調製することもできる。
【００９０】
本発明の化合物は、1種又は複数の追加の治療活性薬剤と併せて使用又は投与することもできる。それらの成分は、同時又は順次に投与するために、同じ配合物又は別々の配合物中にあってよい。
【００９１】
したがって、本発明の更なる態様では:
(A)本発明の化合物と、
(B)別の治療薬と
を含み、それによって(A)及び(B)が薬剤として許容される賦形剤と混合されて製剤化される、組合せ製品が提供される。
【００９２】
このような組合せ製品は、他の治療薬と併せた本発明の化合物の投与をもたらし、したがって別々の配合物として提供することができ、ここで、それらの配合物の少なくとも1つは本発明の化合物を含み、少なくとも1つは他の治療薬を含み、又は複合調製物(combined preparation)として提供(すなわち製剤化)することができる(すなわち本発明の化合物と他の治療薬を含む単一配合物として提供することができる)。
【００９３】
したがって、
(1)本発明の化合物、別の治療薬、及び薬剤として許容される賦形剤、例えばアジュバント、希釈剤又は担体を含む医薬配合物;又は
(2)構成要素として、
(a)本明細書で定義された本発明の化合物を薬剤として許容される賦形剤、例えばアジュバント、希釈剤又は担体と混合して含む医薬配合物と、
(b)別の治療薬を薬剤として許容される賦形剤、例えばアジュバント、希釈剤又は担体と混合して含む医薬配合物と
を含むパーツのキットであって、ここで構成要素(a)及び(b)がそれぞれ、もう一方と併せて投与するのに適した形態で提供される、パーツのキット
が更に提供される。
【００９４】
いくつかの特定実施形態では、本発明の化合物は、抗癌剤と組み合せて悪性過剰増殖性疾患の治療に使用される。このような併用療法は、抗癌剤に対する腫瘍耐性をもたらし得るNox4の抗アポトーシス効果を相殺するために、癌の化学療法において特に有用な可能性がある。
【００９５】
したがって、
(1)先に定義された本発明の化合物、抗癌剤、及び薬剤として許容される賦形剤、例えばアジュバント、希釈剤又は担体を含む医薬配合物;又は
(2)構成要素として、
(a)本明細書で定義された本発明の化合物を薬剤として許容される賦形剤、例えばアジュバント、希釈剤又は担体と混合して含む医薬配合物と、
(b)抗癌剤を薬剤として許容される賦形剤、例えばアジュバント、希釈剤又は担体と混合して含む医薬配合物と
を含むパーツのキットであって、ここで構成要素(a)及び(b)がそれぞれ、もう一方と併せて投与するのに適した形態で提供される、パーツのキット
が更に提供される。
【００９６】
上記パーツのキットのいずれかにおける構成要素(a)及び(b)は、同時に、順番に、又は互いに別々に投与することができる。
【００９７】
本発明の化合物は、癌の治療のために、他の治療様式、例えば放射線照射と併せて使用又は投与することもできる。
【００９８】
一態様によれば、それを必要とする患者において、治療有効量の本明細書で定義された本発明の化合物を前記患者に投与することにより、Nox、特にNox4の活性を阻害する方法が提供されている。患者は、どのような哺乳動物であってもよいが、好ましくはヒトである。
【００９９】
治療すべき患者は、Nox、特にNox4活性の増大に関連する症状若しくは障害に苦しんでいる者、又はそのような症状若しくは障害を発症するリスクのある患者であってよい。このような症状及び障害の例は、心臓血管障害、呼吸器障害、代謝障害、皮膚障害、骨障害、神経炎症及び/又は神経変性障害、腎臓病、生殖障害、眼及び/若しくは水晶体に影響を及ぼす疾患並びに/又は内耳に影響を及ぼす症状、炎症性障害、肝疾患、疼痛、癌、アレルギー性障害、外傷性障害、敗血症性、出血性及びアナフィラキシー性ショック、胃腸系の疾患又は障害、血管新生、血管新生依存性症状、肺感染症、急性肺傷害、肺動脈性高血圧症、閉塞性肺障害、線維性肺疾患、並びに肺癌である。
【０１００】
一実施形態では、本発明の化合物は、卒中の治療に使用するためのものである。特定の一実施形態では、卒中は虚血性である。本発明の化合物は、卒中の治療において神経保護活性を有すると考えられる。したがって、本発明の化合物は、虚血性卒中の治療において、血餅の除去と併せて適切に使用される。特定の一実施形態では、本発明の化合物は、虚血性卒中の治療において、tPAと併せて使用される。
【０１０１】
本発明の化合物は、任意の哺乳動物対象、例えばヒト又は動物(非ヒト哺乳動物)の治療に有用である。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、治療対象はヒトである。いくつかの他の実施形態では、治療対象は、非ヒト哺乳動物、例えば農場の動物のような家畜、愛玩動物、又は実験動物である。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、治療した非ヒト哺乳動物は、愛玩動物である。いくつかの実施形態では、愛玩動物はイヌである。いくつかの他の実施形態では、愛玩動物はネコである。他の実施形態では、治療対象は、農場の動物、例えばウシ、又はブタ、又はヒツジである。他の実施形態では、治療対象は、ウマである。
【０１０４】
本発明は、以下の非限定的な実施例によって例示される。
【実施例】
【０１０５】
(実施例1)
N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミンの調製
【０１０６】
【化２】
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【０１０７】
1-カルバムイミドアミド-N-(3,4-ジメチルフェニル)メタンイミドアミド塩酸塩(1)の調製
濃HCl(2.17mL、25.99mmol)を、CH3CN(7.5mL)に溶かした3,4-ジメチルアニリン(3.00g、24.76mmol)及びジシアンジアミド(2.18g、25.99mmol)を含有するバイアルに加えた。バイアルを密封した後、反応物を125℃で15分間加熱した。混合物を約50℃まで冷却した後、ビグアナイド塩酸塩が沈殿し始めた。固体をろ過によって捕集し、CH3CNで洗浄して表題化合物(5.49g、92%)を得た。
【０１０８】
6-(クロロメチル-2-N-(3,4-ジメチルフェニル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン(2)の調製
NaH(0.91g、22.71mmol)のEtOH(25mL)溶液に1-カルバムイミドアミド-N-(3,4-ジメチルフェニル)メタンイミドアミド塩酸塩(5.49g、22.71mmol)を加え、反応混合物を室温で3時間撹拌した。クロロ酢酸エチル(2.42mL、22.71mmol)を滴下し、反応混合物を4日間撹拌した。沈殿した生成物をろ過によって捕集し、エタノール(3×10ml)及び水(2×10mL)で洗浄して表題化合物(1.32g、22%)を得た。
【０１０９】
N2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(p-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン(3)の調製
6-(クロロメチル-2-N-(3,4-ジメチルフェニル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン(400mg、1.52mmol)及び1-(4-メチルフェニル)ピペラジン(347mg、1.97mmol)をアセトニトリル(25mL)に溶解し、DIPEA(0.53mL、3.0mmol)を加えた。反応混合物を80℃で2時間加熱し、室温まで冷却した。水を5mL加え、反応混合物を0℃まで冷却し、ろ過した。薄桃色固体を水で洗浄し、真空中で乾燥させた。固体をDCMに再溶解させ、5%NaHCO3で洗浄した。水相をDCM(×2)で洗浄し、複合有機相をブラインで洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濃縮して、淡黄色固体として表題生成物400mgを得た。収率65.3%。MS m/z 404 [M+1]+。HPLC純度(98%)。
【０１１０】
(実施例2)
それぞれのNoxアイソフォームのIC50を決定するための全細胞アッセイ
本発明の化合物のNox4選択性を、WO2014/064118に例示されている2つの化合物(A)、(B)、すなわちN2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(3-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン及びN2-(3-クロロ-4-メチルフェニル)-6-((4-(3-メトキシフェニル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミンのものと;WO2014/064118の範囲に含まれる2つの構造的に近い化合物(C)、(D)、すなわちN2-(3,4-ジメチルフェニル)-6-((4-(m-トリル)ピペラジン-1-イル)メチル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミン及び6-((4-(4-クロロフェニル)ピペラジン-1-イル)メチル)-N2-(3,4-ジメチルフェニル)-1,3,5-トリアジン-2,4-ジアミンのものと比較した。本発明の化合物と一緒に化合物A〜Dの構造式をTable 1(表1)に示す。
【０１１１】
【表１】
2018505226.tif 000004
【０１１２】
Nox1アッセイ
ヒトNox1を安定に発現するように改変されたCHO細胞を、10%FBS及び1%pen/strepを含有するDMEM/F12 gibco 31331中、37℃、5%CO2の空気中で増殖させた。トリプシンによる接着細胞の剥離によって培養物から細胞を捕集した。
【０１１３】
全細胞中の活性酸素種の生成を測定するルミネセンスアッセイを使用した。ルミノールをスーパーオキシドと反応させて発光させ、光をルミノメーター(Synergy/2マイクロプレートリーダー、BioTek社)で測定する。
【０１１４】
阻害剤を化合物プレート中のDMSO(100%)に希釈し、次いでハンクス緩衝溶液に移し、アッセイプレートではDMSOは全てのウェルで2%であった。
【０１１５】
アッセイ手順、最終ウェル体積100μl、96ウェルプレート:阻害剤(20μl)を加え、次いで細胞懸濁液(細胞100000個/ウェル)を加え、37℃で30分インキュベートし、PMA(0.9μM/ウェル)をルミノール反応ミックス(ルミノール0.1mM/ウェル及びHRP 3.2U/ウェル)に加え、次いでこの刺激ミックスをウェルに加える。次いでプレートを直後に、更に1時間かけて(読み取りは5分ごとの段階で)読み取った。データは曲線の線形部分について計算し、IC50を決定した。
【０１１６】
化合物(Nox阻害剤)を3倍の作業濃度で希釈し、200μM〜0.003μMまで11段階で滴定した。
【０１１７】
Nox2アッセイ
細胞:ヒト血液をLabjoy AB社、ルンド、スウェーデンから軟膜で購入し、好中球を単離するために同じ日に調製した。血液成分は、Ficoll-Paque Plusを用いて密度勾配遠心分離によって分離した。血漿、PBMC及びFicollを除去してから、赤血球をデキストラン沈降によって除去した。残りの赤血球を溶解させてから、好中球を洗浄及びカウントした。単離した好中球をアッセイするまでMg及びCaを含まないHBSSに再懸濁させて氷上で保持した。
【０１１８】
緩衝液:イソルミノール緩衝液は、イソルミノール(0.175mg/ml)及びHRPフラクションII(1.75U/ml)を含有していた。これらの原料を4倍の作業濃度でHBSS中に希釈することによって緩衝液を調製した。
【０１１９】
手順:化合物(Nox阻害剤)を4倍の作業濃度で希釈し、100μM〜0.006μMまで1:4段階で滴定した。最終濃度30ng/mlまで、PMAを4倍の作業濃度でイソルミノール緩衝液中に希釈した。化合物は、ウェル中に最終DMSO濃度1%を有しており;したがってDMSO対照1%がプレート上に含まれていた。25μlの希釈した化合物又は対照/ウェルを白色96ウェルプレートに加えた。イソルミノール緩衝液中に希釈したPMA 25μl/ウェルを各ウェルに加えた。非刺激対照ウェルには、イソルミノール緩衝液だけを加えた。好中球を洗浄し、Mg及びCaを含むHBSSに細胞2×106個/mlで再懸濁させ、直後に50μlの好中球細胞懸濁液/ウェルを加え、それに続いてルミネセンス測定が即時開始された。FluoStar Optima(BMG Labtech社)を用いてルミネセンスを測定した。Mac OS X用のPrism 5(Prism 5.0 Software、米国カリフォルニア州San Diego)を用いてグラフを実施した。阻害剤を、阻害剤が存在しない細胞対照と比較して、50%阻害(IC50)で評価した。
【０１２０】
Nox4アッセイ
細胞:Nox4を安定に発現するHEK(CJ Nox4)をRedoxis AB社(ルンド)から購入した。FBS(10%)、ペニシリン(10 U/ml)ストレプトマイシン(100μg/ml)及びネオマイシン(200μg/ml)を補充したL-グルタミンを含むRPMI 1640中、37℃、5%CO2の空気中で接着細胞を培養した。
【０１２１】
Nox4によって生成した過酸化水素を、Fluorescan Ascentプレートリーダータイプ374でAmplex red(Molecular Probes社)を用いて測定した(蛍光発光:590及び励起:544)。トリプシンによる接着細胞の剥離によって培養物から細胞を捕集した。細胞を、200lのアッセイ体積中50000個の細胞の密度で96ウェルプレートに播種した。阻害剤を30分(37℃)加え、次いで試薬を加えて、Amplex Red 35mM及び0.17 U/mlセイヨウワサビペルオキシダーゼの最終濃度を得た。Nox4活性は、100分まで毎分読み取って測定した。異なるNox4阻害剤の阻害曲線を、阻害剤が存在しない細胞対照と比較して、50%阻害(IC50)で評価した。Y軸:過酸化水素のターンオーバー;x軸:阻害剤の濃度。阻害剤を化合物プレート中のDMSO(100%)に希釈し、次いでハンクス緩衝溶液に移し、アッセイプレートではDMSOは全てのウェルで2%であった。
【０１２２】
化合物(Nox阻害剤)を3倍の作業濃度で希釈し、200μM〜0.003μMまで11段階で滴定した。得られた結果をTable 2(表2)に示す。
【０１２３】
【表２】
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【０１２４】
Table 2(表2)からわかるように、本発明の化合物は、Nox4のIC50が非常に低いことと同時に、Nox1及びNox2の両方のIC50が高いことを示す。
【０１２５】
(実施例3)
Caco-2透過性アッセイ
Hubatchら、Nature Protocols、2007年、2、2111〜2119頁に記載の試験プロトコルを用いて、Caco-2透過性を、化合物A〜D及び本発明の化合物について試験濃度1〜10μMで測定した。
【０１２６】
Caco-2膜透過性は、公表されたプロトコルに従って実施した。[Hubatch]Caco-2細胞単層(継代94〜105)を透過性フィルター支持体上で増殖させ、播種後21日目の輸送研究に用いた。実験前に、薬液10μMを調製し、37℃まで温めた。
【０１２７】
実験前に、Caco-2フィルターを予熱したHBSSで洗浄し、その後モニターする方向に応じてドナー溶液を先端側又は側底側に適用することによって実験を開始した。輸送実験を、pH7.4で、先端及び側底チャンバーの両方で実施した。実験を37℃で500rpmの撹拌速度で行った。化合物の質量バランスを計算するために、受容区画(receiver compartment)を15、30、及び60分で試料採取し、60分でドナーチャンバーから最終試料も採取した。実験終了直後に、フィルターインサートを予熱したHBSSで洗浄し、膜の完全性をチェックした。これは、経上皮電気抵抗(TEER)測定によって行った。実験は、傍細胞マーカー14Cマンニトールを含めること、及び実験中にその透過性をモニターすることによって検証された。マンニトールは、細胞単層の完全性測定に使用される傍細胞マーカーである。
【０１２８】
試験化合物をこのようにしてCaco-2細胞層の先端又は側底側のいずれかに加えて、吸収(先端から側底、Papp(a-b))又は分泌(側底から先端、Papp(b-a))方向の透過性をそれぞれ測定した。流出は、Papp(b-a)をPapp(a-b)で割ったものとして計算される。結果をTable 3(表3)に示す。
【０１２９】
【表３】
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【国際調査報告】
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