(57)【要約】  本発明は、フラン脂肪酸、フィタン酸およびプリスタン酸、スクアレン、およびいくつかのオリゴマー、ならびにいくつかの「残留性」環境汚染物質、例えば、ポリ塩化ジベンゾダイオキシン、ポリ塩化ジベンゾフラン、ポリ塩化ビフェニル、ポリ臭化ジフェニルエーテル、多環芳香族炭化水素、通常存在し極めて毒性の強い他のもの等の、通常存在するが、構造が異なる他の成分を本質的に含まないことを特徴とする、長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはエステルの新規の精製組成物に関する。さらに、本発明は、当該組成物を得るための精製方法と、食品、特別な医療用途の食品、食品および栄養補助食品、ならびに薬物としてのその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
フラン脂肪酸またはその塩もしくはエステルを実質的に含まず、前記フラン脂肪酸またはその対応する塩もしくはエステルは０．１％以下、すなわち１０００ｐｐｍ以下、好ましくは０．０１％以下、すなわち、１００ｐｐｍ以下の合計濃度を有する、オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはエステルを含む組成物。
【請求項２】
フィタン酸および／またはプリスタン酸またはそれらの対応する塩もしくはエステルを実質的に含まず、前記フィタン酸および／またはプリスタン酸またはそれらの対応する塩もしくはエステルは０．０１％以下、すなわち１００ｐｐｍ以下、好ましくは０．００１％以下、すなわち、１０ｐｐｍ以下の合計濃度を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
スクアレンを実質的に含まず、スクアレンは０．０１％以下、すなわち１００ｐｐｍ以下、好ましくは０．００１％以下、すなわち、１０ｐｐｍ以下の合計濃度を有する、請求項１および２の各々に記載の組成物。
【請求項４】
請求項１〜３に記載の前記長鎖多価不飽和脂肪酸または塩もしくはエステルのオリゴマーを実質的に含まず、前記オリゴマーは１．０％以下の濃度を有する、請求項１〜３の各々に記載の組成物。
【請求項５】
ポリ塩化ジベンゾパラダイオキシン（ＰＣＤＤ）およびポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦ）を実質的に含まず、前記ＰＣＤＤおよび前記ＰＣＤＦは１．０ｐｇ／ｇ以下、好ましくは０．１ｐｇ／ｇ以下の合計濃度を有し、値はＷＨＯの毒性等価係数（ＴＥＦ）に従って決定され、毒性等量（ＴＥＱ）として表される、請求項１〜４の各々に記載の組成物。
【請求項６】
ＰＣＤＤ、ＰＣＤＦ、およびダイオキシン様ポリ塩化ビフェニル（ＤＬ−ＰＣＢ）を実質的に含まず、前記ＰＣＤＤ、ＰＣＤＦ、およびＤＬ−ＰＣＢは５．０ｐｇ／ｇ以下、好ましくは０．５ｐｇ／ｇ以下の合計濃度を有し、値は請求項５に従って決定される、請求項１〜５の各々に記載の組成物。
【請求項７】
ＰＣＢマーカを実質的に含まず、前記ＰＣＢマーカは５．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度を有する、請求項１〜６の各々に記載の組成物。
【請求項８】
ポリ臭化ジフェニルエーテル（ＰＢＤＥ）を実質的に含まず、前記ＰＢＤＥは５．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度である、請求項１〜７の各々に記載の組成物。
【請求項９】
多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）を実質的に含まず、ベンゾ［ａ］ピレンのマーカ物質として表されるこのようなＰＡＨは１．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度を有する、請求項１〜８の各々に記載の組成物。
【請求項１０】
２，２−ビス−（ｐ−ジクロロフェニル）−エタン（ＤＤＥ）および／または２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−１，１−ジクロロエタン（ＤＤＤ）および／または２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−１，１，１−トリクロロエタン（ＤＤＴ）および／またはポリブロモビフェニル（ＰＢＢ）および／またはヘキサクロロベンゼンおよび／またはヘキサクロロシクロヘキサンの異性体等のその他の残留性有機環境汚染物質（ＰＯＰ）を実質的に含まず、前記ＤＤＥおよび／またはＤＤＤおよび／またはＤＤＴは、２．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．２ｎｇ／ｇ以下の合計濃度であり、前記ＰＢＢは、５．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度であり、前記ヘキサクロロベンゼンは、０．１ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．０１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度であり、前記ヘキサクロロシクロヘキサンの異性体は、０．１ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．０１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度である、請求項１〜９の各々に記載の組成物。
【請求項１１】
前記脂肪酸は、海洋由来であり、特に、水産養殖魚を含む魚油由来、またはクリルオイル由来、またはさらに藻類およびその他油糧微生物由来、または選択した菌株の藻類もしくはその他微生物の「単細胞発酵」由来であり、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、Ｃ２０：５  ｎ−３、全シス）および／またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｃ２２：６  ｎ−３、全シス）またはその塩もしくはエステルを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記エステルは、好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記エステルは、グリセリルモノエステルおよび／またはジエステルおよび／またはトリエステルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記アルキルエステルは、エチルエステルであり、ＥＰＡもしくはＥＰＡエチルエステルまたはＤＨＡもしくはＤＨＡエチルエステルの濃度またはそれらの合計は、組成物の１５〜１００重量％、好ましくは５０〜１００重量％である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
ヨーロッパ薬局方（ＥＰ）の指定に従い、ＥＰＡエチルエステルまたはＤＨＡエチルエステルの全重量基準の濃度は、８０％以上、好ましくは９０％以上であるか、またはそれらを合わせた濃度は８０％以上、好ましくは８４％以上であって、ＥＰＡエチルエステルの濃度は４０％以上、ＤＨＡエチルエステルの濃度は３４％以上であり、全オメガ３エチルエステルの濃度の合計は９０％以上である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
米国薬局方（ＵＳＰ）の指定に従い、ＥＰＡエチルエステルおよびＤＨＡエチルエステルの重量基準の合計濃度は、８０．０％〜８８．０％であって、ＥＰＡエチルエステルの濃度は４３．０％〜４９．５％、ＤＨＡエチルエステルの濃度は３４．７％〜４０．３％であり、全オメガ３エチルエステルの濃度の合計は９０％以上である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
ＥＰＡまたはＤＨＡまたはそれらの合計の濃度は、組成物全重量の１５〜１００重量％、好ましくは５０〜１００重量％である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
ａ）オメガ３および／またはオメガ６系列の少なくとも１８個の炭素原子および２〜６個の二重結合を有するアシル基を少なくとも含む、海洋、水産養殖、藻類または発酵由来を含む動物または植物由来の油または脂肪を、アルカリ加水分解もしくは酸加水分解するか、または所望により酵素触媒反応下で好ましくはＣ１〜Ｃ３の脂肪族アルコールとエステル交換する段階と、
ｂ）前記加水分解またはエステル交換の生成物に尿素への完全な包接を用いた精製操作を行い、単離され洗浄された包接錯体を得る段階と、
ｃ）前記包接錯体を水に溶解し、前記溶解後に形成された油相の分離によって、または前記油相を水と混合不可能な有機溶媒、典型的にはヘキサンで抽出し、次に前記溶媒を蒸発乾固することによって、または超臨界流体、特に二酸化炭素により前記包接錯体から直接抽出することによって、請求項１〜１２および１４〜１６の各々に記載の前記組成物を得る段階と
を含む、請求項１〜１２および１４〜１６の各々に記載の組成物の調製方法。
【請求項１９】
蒸留または分子蒸留または「短行程」蒸留によって、飽和成分および低不飽和度のその他成分との尿素の漸進的な錯化による分別、ならびに生成された錯体の除去によって、また向流抽出、硝酸銀水溶液抽出、超臨界流体を用いた抽出および／または分別、その後の前記段階ｂ）の尿素中への包接を行うことによって、段階ａ）の前記加水分解またはエステル交換から得られた生成物に、多価不飽和成分の濃縮の操作を行う段階ａ’）を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記段階ｃ）で回収した前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルに、分子／短行程蒸留または超臨界流体を用いた抽出を行う段階ｄ）を含む、請求項１８および１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の多価不飽和長鎖脂肪酸またはその塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルを含む、組成物の精製方法であって、
ａ）１重量部の前記組成物を、沸点で、所望により最大２０％の水を含む極性溶媒中、好ましくは、メタノールまたはエタノール等のプロトン性溶媒中で少なくとも３重量部の尿素を用いて処理し、前記組成物を含有する尿素包接錯体を生成する段階と、
ｂ）冷却して前記尿素錯体を沈殿させ、前記尿素錯体を濾過または遠心分離により単離する段階と、
ｃ）前記尿素包接錯体を水に溶解し、前記溶解後に形成された油相の分離によって、または前記油相を水と混合不可能な有機溶媒、典型的にはヘキサン等で抽出し、次に前記溶媒を蒸発乾固することによって、または超臨界流体、特に二酸化炭素により前記尿素包接錯体から直接抽出することによって、請求項１〜１２および１４〜１６のいずれか一項に記載の組成物を得る段階と
を含む、方法。
【請求項２２】
濾過によって単離された前記尿素錯体は、事前に尿素を飽和させた前記極性溶媒で洗浄され、その後、水中に溶解されるか、または超臨界状態の流体で抽出される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
動物および／または植物由来の多価不飽和長鎖脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルを含む前記組成物は、海洋由来であり、魚油、おそらくは水産養殖魚、もしくはクリルオイルに由来するか、またはさらに藻類もしくはその他油糧微生物に由来するか、または選択された菌株の藻類もしくは組換え株を含むその他微生物の単細胞発酵に由来し、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡまたはその塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルを含み、あるいは、種子油または植物由来の他の油脂に由来し、１５％以上の多価不飽和成分の平均濃度を有する、請求項２１および２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物が１５〜３０％の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、３段階で連続して合計３〜６重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が３１〜８０％の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、２段階で連続して合計３〜５重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記組成物が８０％超の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、１段階で３〜４重量部、好ましくは４重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
多価不飽和長鎖脂肪酸を含む前記組成物は、前記組成物の１５〜１００％、好ましくは５０〜１００％のＥＰＡエチルエステルもしくはＤＨＡエチルエステルの濃度またはそれらの合計の濃度を有し、あるいは、２つのエチルエステルの合計濃度は８０％以上であって、ＥＰＡエチルエステルは４０％以上、ＤＨＡエチルエステルは３４％以上、全オメガ３酸エチルエステルの合計濃度は９０％以上である、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項２８】
尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、極性溶媒として、４．５〜７重量部の量のメタノールまたは４５〜６５重量部の量のエタノールを使用することによって行われる、請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
段階ｃ）による、水への溶解後の、水と混合不可能な有機溶媒を用いて分離された前記油相の抽出およびその後の前記溶媒の蒸発乾固により、残渣が生じ、残渣は分子蒸留／短行程蒸留される、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
濾過または遠心分離後に、前記尿素包接錯体を単離する前記段階ｂ）から得られた溶液は、濃縮乾固されて、フラン酸、フィタン酸、プリスタン酸、またはその塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステル、およびスクアレンに富む組成物を得、これは、有機溶媒または二酸化炭素等の超臨界状態のその他流体を用いた分子蒸留および／またはクロマトグラフィー操作等の技術による前記化合物の単離に有用である、請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
多価不飽和特性を有するかまたは具体的にはオメガ３系列に属する長鎖脂肪酸またはその誘導体が高含有量であることにより、食品成分、栄養補助食品およびダイエット補助食品、特別な医療目的の食品（機能性食品）、動物および水産養殖で使用するための食品、特殊調製粉乳、化粧品および医薬品として有用な製剤の調製のための、または対応するモノ−、ジ−またはトリグリセリド等のその他誘導体の化学的経路により調製するための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３２】
オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の前記長鎖多価不飽和脂肪酸のモノ−、ジ−またはトリグリセリドの化学的経路または好ましくは酵素的経路による調製のための、請求項１１〜１２および１４〜１６の各々に記載の組成物の使用。
【請求項３３】
所望により、その他薬物、特にスタチンとも組み合わせた、心臓の危険因子、心臓血管および心循環系疾患、例えば、高血圧、凝固異常および血小板凝集、特に家族性および遺伝性の重度および中程度の高トリグリセリド血症（それぞれ５００ｍｇ／ｄｌ超および２００ｍｇ／ｄｌ超）および高コレステロール血症の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
心臓、心臓血管、および心循環系疾患、例えば、冠動脈アテローム性動脈硬化疾患、ならびに心筋梗塞および脳梗塞を含む心臓および大脳の虚血状態の予防および治療における、また心筋梗塞、不整脈ならびに心房および／または心室細動を含む心リズムの開始および伝播が関与する電気由来の疾患、ならびに心不全および代償不全ならびに／またはうっ血性心不全のような心ポンプの機械的欠陥による疾患後の突然心臓死のリスクの低減における使用のための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
てんかんを含む中枢神経系（ＣＮＳ）障害、さまざまな形態のうつ病、双極性障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）による小児疾患、学習および記憶障害、いくつかの形態の統合失調症、アルツハイマー病およびその他さまざまな形態の認知症の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
網膜症および眼球の乾燥症状、メタボリックシンドローム、代謝および肥満に関連する疾患、２型糖尿病、肝機能異常、結合組織および関節の疾患、炎症疾患、自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、および腫瘍疾患の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的製剤。
【請求項３８】
前記エステルは、好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルであり、組成物は請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の方法により得られる、請求項１〜１２および１４〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フラン脂肪酸、フィタン酸およびプリスタン酸、スクアレン、およびいくつかのオリゴマー、ならびにいくつかの「残留性」と定義される環境汚染物質（ＰＯＰ、残留性有機汚染物質）、例えば、ポリ塩化ジベンゾダイオキシン、およびポリ塩化ジベンゾフラン、ポリ塩化ビフェニル、ポリ臭化ジフェニルエーテル、多環芳香族炭化水素、通常存在し極めて毒性の強い他のもの等の、通常存在するが、構造が異なる他の成分を実質的に含まないことを特徴とする、長鎖多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）またはその塩もしくはエステルの新規の精製組成物に関する。さらに、本発明は、当該組成物を得るための精製方法と、動物および水産養殖における使用も含む、食品、特別な医療用途の食品、栄養補助食品およびダイエット補助食品、ならびに薬物としてのその使用とに関する。精製方法は、存在する全ＰＵＦＡの全錯化を行うのに適切な量の尿素を用いた、所望の濃度、通常は高濃度のＰＵＦＡの組成物の処理と、精製ＰＵＦＡならびに構造が異なる他の生成物およびいくつかの「残留性」環境汚染物質を含有する溶媒相を尿素に包接した錯体の濾過による連続した分離および単離とにある。
【背景技術】
【０００２】
２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を含む長鎖多価不飽和脂肪酸は、末端メチル基から数えて最初の二重結合の位置に応じて、「オメガ６」（すなわちｎ−６）および「オメガ３」（すなわちｎ−３）として定義される。
【０００３】
２つの酸ファミリーの典型的な代表は、それらが体内で合成されず、食餌と一緒に導入されなければならないという点で「必須」酸として定義されるリノール酸（ＬＡ、Ｃ１８：２  ｎ−６）およびα−リノレン酸（ＡＬＡ、Ｃ１８：３  ｎ−３）である。
【０００４】
これらは両方とも、体内で、エロンガーゼおよびデサチュラーゼと呼ばれる特定の酵素系により鎖延長および不飽和度の増加を受ける。
【０００５】
最も知られているオメガ６酸は、γ−リノレン酸（ＧＬＡ、Ｃ１８：３  ｎ−６）およびアラキドン酸（ＡＲＡ、Ｃ２０：４  ｎ−６）であり、オメガ３酸は、ステアリドン酸（またはモロクチン酸、ＳＤＡ、Ｃ１８：４  ｎ−３）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ、Ｃ２０：４  ｎ−３）、エンエイコサペンタエン酸（Ｃ２１：５  ｎ−３）、ドコサペンタエン酸（またはクルパノドン酸、ＤＰＡ、Ｃ２２：５  ｎ−３）、および特にエイコサペンタエン酸（またはチムノドン酸、ＥＰＡ、Ｃ２０：５  ｎ−３、全シス）およびドコサヘキサエン酸（またはセルボン酸、ＤＨＡ、Ｃ２２：６  ｎ−３、全シス）として定義される。
【０００６】
すべての場合において、長鎖多価不飽和脂肪酸はそれらの間でもさまざまな比で存在し、かなりの量の飽和酸および一価不飽和酸、例えばオレイン酸（Ｃ１８：１  ｎ−９）と混合されている。
【０００７】
自然界で、これらの脂肪酸はリン脂質等のさまざまな形態で見出すことができるが、より頻繁には油（または脂肪）の形態で、すなわち、グリセロール（グリセリド）とのエステルとして見出される。オメガ６酸は特に植物油および種子中で豊富であるのに対し、オメガ３酸、特にＥＰＡおよびＤＨＡは、一般に海洋由来であり、特に魚油、さらに水産養殖魚、またはクリルオイル由来、またはさらに藻類およびその他油糧微生物由来、さらには選択された藻類の菌株もしくはその他微生物から出発した「単細胞発酵」に由来する。
【０００８】
これらの油は、通常いくつかの標準的な初期処理、例えば、漂白および中和が行われ、次に、本技術は、薬学的または栄養的な使用または栄養補助食品用の、実際のＥＰＡおよびＤＨＡのような最も興味深い成分のこれら錯体混合物からの濃縮または単離を含む。
【０００９】
この目的のために、第１の段階において、天然油（グリセリド）は、例えばアルコール性水酸化カリウムを用いた穏やかな加水分解操作を受け、それにより対応するカリウム塩、次いで遊離酸、また所望であればアルキルエステルを得る。別の方法として、またより多くの場合、例えば、過剰な好ましくはＣ１〜Ｃ３の脂肪族アルコールおよびアルカリ性または酸性触媒の存在下においてエステル交換反応が採用され、それにより、所望であればこれらの関連する酸または塩から脂肪酸の対応するアルキルエステルを直接得る。
【００１０】
近年始まったことであるが、当該加水分解またはアルコール分解操作は、化学的経路のほかに、酵素的経路、固定されさえした選択的リパーゼによっても行われる。これによって、いっそう柔軟な反応条件でさえも操作でき、さらに、酵素溶解に対するＰＵＦＡの高い耐性のため、飽和アシルおよび一価不飽和アシルと比較して、さらに部分的にアシル化され、ＰＵＦＡが豊富なグリセロールの中間組成物を、別々の段階で加水分解またはアルコール分解して単離することもできる（例えば、Ｋａｐｏｏｒ  ＲおよびＰａｔｉｌ  ＵＫ、Ｉｎｔ  Ｆｏｏｄ  Ｒｅｓ  Ｊ、１８、４９３、２０１１年参照）。
【００１１】
より一般的な場合に戻ると、第１の段階の次には通常、所望の成分、典型的には、好ましくは主にエチルエステルまたは酸もしくは塩としてのＥＰＡまたはＤＨＡまたは事前に決めた比のそれらの混合物の濃度を増加させるための処理を行う。
【００１２】
より多くの回数繰り返されることが多く、各種方法を組み合わせさえした処理は、
−  適切な分別まではっきりと段取りされた熱分解プロセスを制限するのにより適切な、高真空下での蒸留、通常は分子蒸留または短行程蒸留、
−  高圧（ＨＰＬＣ）でさえ行われるが、実験室規模または分析目的により好適ないくつかのクロマトグラフィー操作、
−  向流抽出、
−  硝酸銀水溶液を用いた抽出、
−  より具体的には、単一成分の分離のための、連続相でかつ「バッチ」クロマトグラフィーを通して行われる、実験規模でクロマトグラフィープロセス（ＳＦＣ）と組み合わせすらした、好適な固定相を用いた超臨界流体（ＳＦＥ）、通常はＣＯ２を用いた抽出、
−  しかし、最も一般的で工業的に認められている場合、アルコール溶液またはその他溶媒および当業者に公知の沈殿防止剤中での尿素錯化反応
を基本的に含む、いくつかの技術が関係するが、特定の条件では、尿素は六方晶で結晶化し得、脂肪酸の直鎖を含むことができるチャネルを形成し、またこのような包接は、基本的にはより直線的な構造を実際に備えた飽和酸および／または一価不飽和酸およびエステルと一緒に起こることが知られている。
形成された包接錯体は、冷却によりアルコール溶液から沈殿し、濾過により回収され、次に溶液からＥＰＡおよびＤＨＡ等のような多価不飽和成分が非常に富んでいる組成物を回収する。したがって、尿素錯化は、実際にはとりわけ飽和成分および一価不飽和成分と一緒に起こるという意味で、「受動的な」プロセスを構成しているが、ＰＵＦＡは母液から高い濃度で回収される。これらの尿素錯体およびその調製についての包括的な調査は、Ｓｃｈｌｅｎｋ  ＨによるＰｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｆａｔｓ  ａｎｄ  Ｏｔｈｅｒ  Ｌｉｐｉｄｓ  Ｖｏｌ  ＩＩ（ＲＴ  Ｈｏｌｍａｒ編）中の「Ｕｒｅａ  ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｏｆ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ」、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．２４３〜２６７（１９５４年）、およびＳｗｅｒｎ  ＤによるＦａｔｔｙ  Ａｃｉｄｓ、Ｐａｒｔ  ３（ＫＳ  Ｍａｒｋｌｅｙ編）中の「Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｏｆ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｕｒｅａ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ」、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．２３０９〜２３５８（１９６３年）によるものである。その他のより具体的な参考文献は以下で与えられる。
【００１３】
ＰＵＦＡ濃縮のためのさまざまな一般的操作については、Ｂｒｅｉｖｉｋ  ＨによるＬｏｎｇ−Ｃｈａｉｎ  Ｏｍｅｇａ−３  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｏｉｌｓ（Ｈ  Ｂｒｅｉｖｉｋ編）中の「Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ」、Ｔｈｅ  Ｏｉｌｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｒｉｄｇｗａｔｅｒ、１１１〜１３０頁（２００７年）、および酵素的経路によるＰＵＦＡの濃縮、１４６〜１５５頁により適切にまとめられている（以後、「Ｂｒｅｉｖｉｋ  ２００７」として報告される）。
【００１４】
一般に、これらの操作はすべて、最終段階である分子蒸留で終了し、プロセス中に導入された有機溶媒を含む残った低沸点画分を除去すること、または特に「オリゴマー」（酸化および分解により生じ、さまざまな重合度を有する極性生成物）により構成された高沸点画分の存在を制限することに対応するが、これらは、ヨーロッパ薬局方（Ｅ．Ｐ．）、モノグラフ１２５０に従ってこれらの不安定な多価不飽和物質に対して行われるいずれかの操作を常に伴う。このようなオリゴマーは、「サイズ排除」または「ゲル浸透」クロマトグラフィーを用いたガスクロマトグラフィー（ＧＣ）により分析されるＰＵＦＡとは異なるように加えられ、実際にはＥ．Ｐ．に従って最大１％でなければならない。
【００１５】
蒸留の代わりに、「超臨界」状態の流体が用いられ、これは単なる抽出のため、かつクロマトグラフィーのために、例えばＥＰＡおよびＤＨＡの段階的分離のために使用される。
【００１６】
また、本発明者らは、天然の多価不飽和物質、特に魚油はさまざまな性質の物質により非常に汚染されており、これらの物質は、薬物または食品または食品サプリメントとして摂取された場合にヒトおよび動物の健康にはすべて有害であり、水産養殖から得られた魚用の食品としてすら有用ではないことを文献から知っている。
【００１７】
このような物質とは、例えば、大気中の作用物質または化学的操作によって生じた天然分解生成物、例えば、エポキシドおよびペルオキシド、ならびに上述のオリゴマーおよびポリマーであるが、ペルオキシドは動脈アテローム発生性（ａｔｅｒｏｇｅｎｉｃ）作用および突然変異誘発活性作用を持つという点で健康に対して潜在的に危険である（例えば、Ｃａｒｒｏｌｌ  ＫＫ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、３５、３３７４、１９７５年）。
【００１８】
どのようにも脂肪酸の組成に構造的に関連していない「天然の」不純物は、コレステロールならびに種子油および海洋起源の油に系統的に存在するいくつかの他の植物性ステロールおよび動物性ステロールによって表される（ＰＣＴ／ＷＯ８７／０３８９９号；Ｃｏｎｎｏｒ  ＷＥおよびＬｉｎ  ＳＥ、Ｍｅｔａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ、３１、１０４６、１９８２年）。
【００１９】
また、いくつかの長鎖分岐鎖炭化水素、例えば、スクアレンＣ３０Ｈ５０等も多くの場合存在する。他の著者もまた、間違いなく無視できない量の、総称してフラン脂肪酸と定義される脂肪酸の多数の環式誘導体の体系的存在を報告しており、これらの物質はすべて、毒物学的側面ではまったく研究されてきていないか、またはかなり部分的にしか研究されていない。そのため、これらの物質の存在は、その構造自体ゆえに、例えば定義上「オメガ３脂肪酸」からなる組成物中において、また安全上の観点ではヒトにおける食品または薬物としての使用に対応する組成物中において不当である。すべてではないが多くのフラン脂肪酸は、Ｅ．Ｐ．６．３、２００８年（Ｅｎｃｌｏｓｕｒｅ参照）の上記モノグラフ１２５０「オメガ３酸エチルエステル９０」から導かれる図１のＧＣ分析にはっきりと示されており、それらの存在は、両方ともいまだに有効であるＥ．Ｐ．８．０の最近のモノグラフ０７／２０１２：１２５０およびＵＳＰ３７の４０５９〜６１ページ（第１表、以下に報告）でさらに確認される。
【００２０】
【表１】
2018515432.tif 000002
【００２１】
これらフラン酸の化学的構造は、たとえ、フラン環の２位に他のジメチル置換誘導体のさらなる存在が示されており、また本発明者らによって確認されたとしても、上記のＨ  Ｂｒｅｉｖｉｋ  ２００７年の書籍、１３０〜１３２頁および引用されているいくつかの参考文献で明らかにされ、報告されている。Ｂｒｅｉｖｉｋに従って、尿素を含むＰＵＦＡの濃縮および分子蒸留の操作により、種々のフラン酸の含有量が部分的に低下した（上記の表６を参照）が、決してゼロではない生成物をもたらす。
【００２２】
おそらくはフラン酸の数が多いことおよびそれらの異なる物理的性質のために、異なる保持時間、結果としてＧＣクロマトグラムの異なる位置から推定されるように、我々はこのような成分を排除するための重要な試みを認識しておらず、これは現在市販されている製品においてもなお存在している。
【００２３】
また、同じく上記の第１表およびここで開示される図１に示されるように、Ｅ．Ｐ．６．３およびＥ．Ｐ．８．０のモノグラフならびにＵＳＰ３７から導かれる、長鎖分岐鎖飽和酸（テトラメチルヘキサデカン酸、ＰｈＡ）であるフィタン酸も通常存在する。フィタン酸は、しばしばアルファ酸化に由来する低級同族体、すなわちプリスタン酸（テトラメチルペンタデカン酸、ＰＡ）またはその塩もしくはエステルと結合される。他のほとんどの酸とは異なり、フィタン酸はベータ酸化によって代謝することができない。例えば、アルファ酸化能力が低いレフサム病患者においては、フィタン酸は血液および組織に蓄積し、末梢性多発ニューロパチー、小脳性運動失調症、色素性網膜炎、無嗅覚および聴力損失を引き起こす。
【００２４】
中で引用されている参考文献と共にその全体が想起される米国特許出願第２０１１／００３３５９５号明細書（国際公開第２０１１／０１８０９６号）は、西洋の食餌において１日当たり２００〜１０００ｍｇのＥＰＡ＋ＤＨＡに基づく組成物を含めることが一般的な合意であることを注意深く説明しているが、海洋および藻類由来のこれらの組成物は、１０００ｐｐｍ（０．１％）以上までの有意な濃度のＰｈＡを含有する（図３ｂ、段落［００３７］、本発明者らのＥｎｃｌ．１の同図参照）ため、何百万人もの消費者の重大な健康問題につながる［段落０００１］。ＰｈＡの使用によって誘発されるいくつかの疾患を引用する（［０００２］および［０００３］）ことに加えて、ＰｈＡの継続的な使用がいくつかのタイプの癌を誘発する可能性があること、またＥＰＡおよびＤＨＡに対する直接の拮抗物質であることに加えて、細胞傷害性および炎症促進性であることも近年の研究で明らかになったことが説明されている（段落［０００４］〜［０００８］）。この特定の成分からＰＵＦＡ混合物を精製するために、当該米国特許出願第２０１１／００３３５９５号明細書は、局所用経路による化粧用途および他の用途に適切であるようにさらに精製されるＰｈＡに富むいくらかの画分を単離することによって、液体または超臨界流体溶離液を用いたクロマトグラフィー分別操作について記述している。
【００２５】
プリスタン酸に関しては、ＰｈＡの重大な毒性作用の多くを共有し、また、例えばツェルウェガー症候群のようないくつかの遺伝病においては体内で蓄積する。
【００２６】
同じ米国特許出願第２０１１／００３３５９５号明細書は、先の出願である国際公開第０１／１０８０９号、欧州特許第１１５７６９２号明細書、米国特許第５，６５６，６６７号明細書（段落［００２５］〜［００２７］）等を参考文献として記載しているが、そのいずれもその手順および目的において、本出願に干渉していない。
【００２７】
国際公開第０１／１０８０９号には、遊離酸またはエステルまたはアミド、特にＥＰＡおよび／またはＤＨＡの形態のＰＵＦＡを、決定された温度および圧力条件における臨界未満または超臨界流体で処理することによって、魚油または他の油の処理中に副生成物として得られ、それにより主に飽和酸および一価不飽和酸を含有するような尿素付加物から回収する手順が記述される。この手順の目的は、工業生産中に副生成物として損失したＰＵＦＡの一部の、部分的に濃縮された形での回収であり、外来成分から精製する目的はない。
【００２８】
欧州特許第１１５７６９２号明細書は、少なくとも８０重量％のＥＰＡおよびＤＨＡならびに３％未満の他の特定のオメガ３成分を含む脂肪酸の組成物を開示している。この手順は、エステル交換プロセスとそれに続く尿素および分子蒸留による適切な分画を含む。
【００２９】
米国特許第５，６５６，６６７号明細書は、少なくとも８０重量％のＥＰＡおよびＤＨＡならびに少なくとも１．０重量％の成分Ｃ２１：５  ｎ−３、または１：２〜２：１の比の少なくとも８０重量％のＥＰＡおよびＤＨＡならびに少なくとも１．５％のＥＰＡおよびＤＨＡとは異なる他のオメガ３酸を含む脂肪酸の組成物について記述している。この場合でも、エステル交換の後に、尿素および分子蒸留による標準的な分画が行われる。
【００３０】
また、米国特許出願第２０１２／０５３２４２号明細書（国際公開第２０１０／１１８７６１号）は、ＰｈＡの含量を低下させる方法を記述しており、それによれば、海洋由来の油は、請求項１に従って鹸化されて対応する塩を生じ、酸性化されて脂肪酸を生じ、このような酸（これは手順の唯一の出発物質を表す）を、１０℃および２７Ｐａの真空下、通常は１００，０００ｇを２４〜４８時間（請求項５、６）、グリセロール勾配で超遠心分離にかけ、次いで、グリセロール勾配を０℃〜−５７℃の温度範囲で結晶化させて、固相と液相とを得、液相はＰｈＡの含有量が９０マイクログラム／ｇ未満の多価不飽和オメガ３酸を含有し、これはデカンテーションによって分離される。
【００３１】
請求項２は、これらの酸がさらにエステル化されてオメガ３酸トリグリセリド（エチルエステルは得られない）を得ることを開示しているが、オメガ３酸の含有量は６５重量％〜９９重量％（請求項１０）、ＰｈＡの含有量は５マイクログラム／ｇ未満（請求項１１）、オメガ３酸は６５重量％〜９５重量％の範囲のＤＨＡ（請求項１４）および５重量％〜３５重量％の範囲のＥＰＡ（請求項１７）を含むことを開示している。
【００３２】
他の請求項１９〜６１は、本質的に、薬学的および栄養的使用のための組成物、栄養サプリメントおよび栄養補助食品、ならびに本組成物に感受性のある病状の治療方法に言及している。
【００３３】
明細書は、市場に導入されたいくつかの製品を報告し、含まれているＤＨＡの純度との有意な相関関係なしにこれらの生成物中のＰｈＡの高い含有量を証明している（図３）米国特許出願第２０１１／００３３５９５号明細書によってすでに報告されているように、ＰｈＡ（およびＰＡ）の悪影響について広く記述している。
【００３４】
また、本発明者らは、当該発明の生成物の分析に対応する実施例３において、後ほど詳述するＰＣＢ、ＰＣＤＤ、ＰＣＤＦおよびベンゾ［ａ］ピレンのような環境汚染物質に関連するいくつかのデータが、ここでも報告されていることに気付いた。提示されたデータのメリットに惑わされることなく、いずれにしろ、本発明者らは、明細書のいずれの点においても、提示された方法は当該物質の含有量を低下させることができず、また同一の事項がいかようにも特許請求されないことが述べられていることを強調する。かかるデータは非常に稀なものであり、とりわけ、汚染物質の含有量が少ないことは、さほど汚染されていない海から得られたものであるか、単純にトリグリセリドの状態の油それ自体の事前精製ゆえに、出発油中の含有量が減少した結果であると考えられる。いくつかの環境汚染物質は、トリグリセリドと比較して低沸点であり、分子蒸留によって除去可能であることが実際に知られている。
【００３５】
本発明者らはまた、米国特許第５６７９８０９号明細書、欧州特許第０３４７５０９号明細書および他のもの（段落［００５３］）のようなオメガ３酸を濃縮するために行われる通常の尿素処理（すでに言及した）を扱う書誌参考文献のいくつかの引用に気付いたが、本発明者らが分かっているように、これらの方法のいずれも、本出願とは異なる手順および目的を考慮して、本出願に向けた有効な先行技術を構成するものではなく、ここで議論された米国特許出願第２０１２／００５３２４２号明細書の著者自身は尿素の使用を扱いさえしていない。
【００３６】
米国特許第５６７９８０９号明細書は、脂肪酸のエチルエステルがエタノール中で尿素を用いて処理され、冷却により、不溶性包接錯体を含有する固相が、ＰＵＦＡのエチルエステルが豊富な画分を含む液相から分離することを報告している。
【００３７】
欧州特許第０３４７５０９号は、脂肪酸の混合物を尿素と錯化させ、飽和酸およびほとんどの一価不飽和酸を除去し、次いで濾液を低温で分別晶出させることを記述している。しかし、最も有害な不純物は、天然油性物質とは完全に異なり、環境汚染物質に由来する不純物であって、その多くは特に脂溶性であり、さまざまな脂肪成分（ＰＯＰ、残留性有機汚染物質）と一緒に濃縮される傾向がある。これらの物質の主な特徴は、ある期間の間の残留性、食物連鎖を通じた生体内蓄積、伝播および長距離移動性の可能性、およびそれらの毒性である。これらの物質の多くは明らかに催奇性、突然変異誘発性、および発癌性がある。長い準備段階の後、スウェーデンで２００１年５月２２〜２３日に開催されたＰＯＰに関するストックホルム条約に基づいたこれらの物質に対する最初の公的活動は、１２の異なる化学物質クラス（「ダーティダズン」）をヒトの健康と農業および牧畜を含む環境とにとって最も攻撃的かつ危険なものとして特定した。これらの物質の多くは過去に存在し、一部は現在も農薬（除草剤、殺虫剤、殺真菌剤、殺鼠剤等）として使用されている。条約の締結は、他の工業用途を含むこれらの物質の多くの製造および使用を禁止し、マラリア防除のみにＤＤＴの使用を制限し、他の物質、例えば「ダイオキシン」および「フラン」、一連の化学プロセスおよび／または燃焼の望ましくない副生成物、およびその工業用途がいずれにしても禁止されたままである「ＰＣＢ」の不注意による意図しない製造を制限するためのものであった。
【００３８】
その後数年間に、さまざまなＰＯＰ検討委員会ならびにイタリアのＡＲＰＡのようなさまざまな環境保護庁によって、さらなる残留性有機汚染物質を定義し、管理するという目的が追求された。これを確認するために、海洋生物やおよび植物環境、したがって、海洋由来および植物種子由来の油において、ダイオキシン、ＰＣＢ、臭素難燃剤のような環境汚染物質、さらにＤＤＴおよびその代謝物、ならびにトキサフェン等の農薬等の、多くの場合、比較的高濃度の蓄積について多くの研究が報告している。これらの物質によるヒトおよび動物に与える危険性により、食品および食物連鎖の中の有害物質の含有量について関心が高まっている。汚染物質を含まないか、または汚染物質の含有量が限られている食品は、人気および市場キャパシティが高まっている。したがって、食品中の汚染物質の排除または削減は、特に「ベビーフード産業」および「特殊調製粉乳」における要求に関しては、その販売能力および付加価値を実質的に高める大きな可能性を秘めている。特に、ＥＰＡおよびＤＨＡのような多価不飽和酸と、これらの物質が特に高温での加熱、したがって、現在のところ、実際に環境汚染物質からの精製のためのより一般的な方法である蒸留または分子蒸留もしくは短行程蒸留に対して敏感であるため、その精製のための新たな技術とが市場により要求されている。
【００３９】
多価不飽和を含む油の熱感受性により代表されるこの難点およびより一般的な方法に関連して、米国特許第７，７３２，４８８号明細書（国際公開第０４／００７６５４号）およびそこに引用されている参考文献が参照される。米国特許第７，７３２，４８８号明細書は、油または脂肪の混合物中の環境汚染物質の量を減少させるプロセスを記述しており、これによると、低沸点の「作動」流体を混合物に添加するが、それまでに混合物には少なくとも「ストリッピング」の段階を経させ、その間汚染物質の一部が揮発性「作動」流体と共に留去する。この方法は、改良されているように思われるが、油（トリグリセリド）の精製に限定されてもいるので、油のみが高沸点であるため、ストリッピングの段階で共蒸留（ｃｏ−ｄｉｓｔｉｌｌ）せず、作動流体は「低沸点」と定義されるが、効率的なストリッピング段階のために１８０〜２００℃の温度を必要とするようなエチルエステルまたは脂肪酸等によっても代表され、また最終的には、平均して、とにかく長い加熱時間、副生成物の生成、分子蒸留のような複雑な設備、および高コストを伴う、それらの全除去よりも汚染物質の削減により適しているようであるという点で先行技術に関して決定的ではないようである。
【００４０】
また、先行技術の他に述べられた方法は、いくらかの有効性はあるものの、分子蒸留の技術は、とにかく非常に限定されており、油脂中の環境汚染物質の蓄積という重大な問題の決定的な解決策ではまったくないため、その価値とその用途がひどく減る。ヒトの使用において、治療および栄養価値がある成分であると考えられる多価不飽和脂肪酸またはその誘導体を単離および濃縮することが規則であるため、ヒト用の医療用途および水産養殖を含む動物における栄養的用途に最も有益な製品の新規の直接精製方法が非常に望ましいであろう。
【００４１】
ＰＯＰのより詳細な調査を参照すると、最も一般的で最も有毒な分類の１つは、ダイオキシンという総称で定義され、実際にはポリ塩化ジベンゾパラダイオキシン（ＰＣＤＤ）およびポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦ）という２つの化学ファミリーからなる。
【００４２】
ダイオキシンは意図的に製造されておらず、ヒトにとっての曝露源は、主に汚染された食品、特に動物性油脂の摂取を通じた環境によるものである。
【００４３】
ベンゼン基の塩素原子の数および位置が異なる合計で７５種のダイオキシンの同族体と１３５種のフランの同族体が存在するが、毒性学的観点からこれらのうち、７種のＰＣＤＤおよび１０種のＰＣＤＦは特に興味深い。一般に、ＰＣＤＤ／ＰＣＤＦは個々の化合物として検出されるのではなく、適切な「毒性等価係数」（ＴＥＦ）、より正確には食品サンプルに使用されるＷＨＯ−ＴＥＦをそれぞれが有する、ＰＣＤＦの毒性同族体の混合物として検出される（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ（ＥＣ）１８８１／２００６年、Ｏｆｆ．Ｊ．ＥＵ、Ｌ３６４／５；２００６年１２月２０日、ｐ．２０）。
【００４４】
ＴＥＦ値は、単一の参照値とされる２，３，７，８−テトラクロロジベンゾダイオキシン（２，３，７，８−ＴＣＤＤ）と比較して、種々の塩化化合物のＡｈへの結合親和性を測定することにより、受容体Ａｈの活性化能力（毒性作用の次の誘発の鍵となるステップ）として実験的に決定された。
【００４５】
したがって、ＰＣＤＤ／ＰＣＤＦの全体の濃度は、「毒性等量」または「等価毒性」（ＴＥＱ）として表され、それぞれの濃度を乗じた個々の同族体のＴＥＦ値を合計することによって計算される。検出不能な各同族体のＴＥＱの合計に対する寄与は、定量下限（上限）に等しいと考えられる。
【００４６】
上記規則（ＥＣ）１８８１／２００６年、ｐ．１８に従うヒトによる消費を目的とする海洋由来油の最高ＷＨＯ  ＰＣＤＤ／ＰＣＤＦ  ＴＥＱは２ｐｇ／ｇ油である（Ｂｒｅｉｖｉｋ  ２００７年、２４６〜２４７頁）。ＵＳＰ３７によれば、合格基準は、１ｐｇ／ｇ  ＷＨＯ毒性等量「以下」（ＮＭＴ）に相当する。
【００４７】
化学汚染物質の別のグループは、さまざまに塩化されたビフェニル分子からなるポリ塩化ビフェニル（ＰＣＢ）等の工業用物質によって構成される。ＰＣＢは、貿易および使用が禁止される前は、誘電性流体、農薬、難燃剤、塗料成分等として使用される工業製品として広く使用される工業製品であった。ヒトへの曝露は、環境汚染（埋立、不適切な廃棄物処理、蒸発または火災による大気への排出等）による。
【００４８】
ポリ塩化ビフェニルにはさまざまな２０９の同族体が含まれているが、これらのうち１２種だけが「ダイオキシン」および「フラン」と同様の毒性を示し、したがってダイオキシン様ＰＣＢ（ＤＬ−ＰＣＢ）と呼ばれている。ＤＬ−ＰＣＢについても、毒性等価係数ＴＥＦが決定され、その毒性等価ＴＥＱは通常、ダイオキシンのＴＥＱとともに累積的に与えられる。上記で指定したダイオキシンとＤＬ−ＰＣＢを合わせた最大レベル（ＷＨＯ  ＰＣＤＤ／ＰＣＤＦ−ＤＬ−ＰＣＢ  ＴＥＱ）は１０．０ｐｇ／ｇ油に等しい。
【００４９】
「指標」または「マーカ」と定義された他の６種の同族体（ＩＵＰＡＣ名：ＰＣＢ２８、５２、１０１、１３８、１５３、１８０）は合わせて、ＥＦＳＡ（欧州食品安全機関）によって、非ダイオキシン様ＰＣＢ（ＮＤＬ−ＰＣＢｓ）の存在およびヒトのそれらへの曝露の適切な指標であると考えられる。この値はｎｇ／ｇ油で表される。
【００５０】
ＵＳＰ３７によれば、ＰＣＢマーカ（ＰＣＢ１１８を含む）の合格基準は、ＮＭＴ０．５ｐｐｍ（０．５マイクログラム／ｇ）に制限されている。
【００５１】
ＰＢＤＥはポリブロモジフェニルエーテルであるため、さまざまに臭化されたジフェニルエーテル分子により、ＰＣＢの構造とのいくらかの概念的な類似を有して構成されている。ＰＢＤＥは、臭素原子の数（１〜１０）に応じて数が大きくなる、ＩＵＰＡＣに従って命名された一連の２０９種の同族体を含み、そのうちのいくつかは高度に神経毒性であり発癌性でもある。
【００５２】
ＰＢＤＥは、ポリウレタン発泡体中の難燃剤、プラスチックＡＢＳとして、またポリスチレン中に使用され、「緊急」の残留性化学汚染物質であると考えられている。特定の物品（ｔｅｒｍ）の工業生産はすでに禁止されているが、汚染された水および埋立地でもその存在が実証されており、ＰＢＤＥ（ＤＢＥ−２８、４７、９９、１００、１５３、１５４、および１８３）は合わせて、魚油のサンプル中において最大３．８ｎｇ／ｇ以上であることが強調される（Ｚｅｎｎｅｇｇ  Ｍら、Ｏｒｇａｎｏｈａｌｏｇｅｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、６８、１９６７、２００６年；米国特許第７，７３２，４８８号明細書）。
【００５３】
多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）は、有機物、石油誘導体またはバイオマスの不完全燃焼により生じる２個以上の縮合芳香族環によって形成される化合物である。ＰＡＨは、気団によって気体の状態で輸送されるか、または固体画分に吸着され、発癌性の可能性があると考えられているため毒物学的に興味深い。ＰＡＨは、マーカ物質ベンゾ［ａ］ピレンとして現在表される、検査されるマトリックスに応じたさまざまな化合物の総称として表され、油脂中の最大耐容限界は２ｎｇ／ｇである（Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ（ＥＣ））、１８８１／２００６年、セクション６、ｐ．１８）。
【００５４】
環境汚染の問題は非常に深刻であり、単一の研究で研究し尽くすことはできないが、ヒトの健康ならびに動物および環境の世界には、広範な性質の単一指標が計り知れいなほど有効であり得る。ここで詳細に論じられないが、例として挙げられるＰＯＰとしてはとりわけ、２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−エタン（ＤＤＥ）、２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−１，１−ジクロロエタン（ＤＤＤ）、および２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−１，１，１−トリクロロエタン（ＤＤＴ）（世界環境においてどこでも追跡される）、ポリ臭化ビフェニル（ＰＢＢ）、ヘキサクロロベンゼン、ヘキサクロロシクロヘキサン異性体等がさらに挙げられる。重金属および有機金属化合物であってもヒトの健康および環境にとって重大な問題であり、特にメチル水銀は小児における重大な脳の変化および成人における神経障害を誘発し得るため、欧州の法律では魚製品中０．５ｍｇ／ｋｇの上限が設定されている。しかしながら、重金属は脂質よりもタンパク質に対する親和性が大きいため、魚油中の重金属の存在は大きな問題ではない（Ｂｒｅｉｖｉｋ  ２００７年、１３３頁）。
【００５５】
専門家によれば、多価不飽和脂肪酸の濃縮プロセスを開始する前に、できるだけ多くのＰＯＰを出発油から直接除去しなければならないため、最も高沸点のトリグリセリドと種々のＰＯＰとの沸点の差が大きいことを利用し、それにより、蒸留／分子蒸留操作がより効果的になる（Ｂｒｅｉｖｉｋ  ２００７年、１３３頁）。さらなる利点は、すでに報告されているように、蒸留前にいわゆる「作動流体」（米国特許第７，７３２，４８８号明細書）を添加することによって達成される。
【００５６】
このことにもかかわらず、それぞれが独自の化学的−物理的特徴および異なる沸点を有する、ＰＯＰにおける多数のクラスの存在および多数のクラスのうちのさまざまな分子種の存在は、時間および収率の損失のために非常に労力を要し、コストを増加させ、また一般には、汚染物質の存在を減少させることができるが、事実上完全に排除することは決してなく、単一の製品に好都合である場合は、精製をＰＯＰ全体に範囲を広げることができない。
【００５７】
ＰＯＰの削減のための部分的に有用であるが、決してＰＯＰの存在を排除しない他の方法としては、活性炭による処理および／またはかなり長い時間および高い温度での脱臭プロセスが挙げられるが、相対的には問題があり、蒸留とは競合しない（Ｂｒｅｉｖｉｋ  ２００７、１３３頁）。クロマトグラフィープロセスでさえ、単一の化合物に対してはいくらかの有効性を有することができるが、クロマトグラフィー画像全体に渡って広く分散されるＰＯＰ全体には決して有効ではない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００５８】
したがって、本発明者らは、現在の技術のいずれも、上述のすべての不純物から問題の組成物を精製することができず、収率の深刻な損失を伴いながら繰り返し組み合わせて使用された場合にのみ、種々の法律によって課せられた限界に近づけることができるが、各汚染物質の望ましいであろう実質的な不在を達成することさえないと結論づけた。
【００５９】
例えば、分子蒸留は、たとえ重大な収率損失があっても、より極性の不純物をより多く含む高沸点画分をオリゴマーおよびある他の酸化生成物として確実に除去することができるが、置換度に応じて、広い範囲の蒸留温度を有する上記ポリ塩化汚染物質を完全に排除することはできない。
【００６０】
同様に、超臨界流体の使用は、脂肪酸の抽出によって極性物質を除去することができるが、これらは常に、超臨界溶媒から等しく抽出可能な親油性汚染物質を伴う。ＰＯＰを体系的に排除するための他の技術は利用できないと考えられている。特に、尿素の使用は、単に飽和酸および一価不飽和脂肪酸の包接、その後の単離および排除にふさわしいものとして文献中で提示されており、したがって多価不飽和酸の濃度は、異質な不純物の濃度を高めた場合にそのように伴う。多価不飽和成分の包接は、それらの濃度およびそれらの相対的な不飽和度の増加とともに難度も増すことが困難であると文献から明らかである。
【００６１】
本発明者らが知る限り、既知の技術のいずれも、上記の「フラン」成分、フィチン酸およびプリスタン酸またはそれらの誘導体、スクアレンのような長鎖分岐炭化水素、大部分の多価不飽和酸のポリマー、本質的にＰＯＰのすべてを実質的に含まない多価不飽和組成物を、より特定の場合には単一工程で、もたらすことができない。
【課題を解決するための手段】
【００６２】
それに対して、本発明者らは、すでに所望の濃度および成分比にされた動物および／または植物由来の長鎖多価不飽和脂肪酸を含み、副生成物および汚染物質を含まないが、直接選択的に所望の多価不飽和成分をすべて含み、排出される母溶液中に全汚染物質を単離する、組成物（またはその溶液）からの抽出から本質的になる新規で驚くべき精製技術を特定した。先行技術と異なり、このように、さまざまな議論された汚染物質ファミリーの異なる化学的−物理的性質に関連する異なる抽出方法を用いるのではなく、所望の多価不飽和成分のための特定の選択的な方法のみを採用する。
【００６３】
したがって、第１の態様では、本発明は、フラン脂肪酸またはその塩もしくはエステルを実質的に含まず、当該フラン脂肪酸またはその対応する塩もしくはエステルは０．１％以下、すなわち１０００ｐｐｍ以下、好ましくは０．０１％以下、すなわち、１００ｐｐｍ以下の合計濃度を有する、オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはエステルを含む組成物に関する。
【００６４】
好ましい組成物は、請求項２〜１７に記載されている。
【００６５】
特に当該エステルは、好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステル、またはグリセリルモノエステルおよび／またはジエステルおよび／またはトリエステルであり得る。
【００６６】
第２の態様では、本発明は、上記定義の組成物の調製方法であって、当該エステルは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルであり、
ａ）オメガ３および／またはオメガ６系列の少なくとも１８個の炭素原子および２〜６個の二重結合を有する少なくとも１個のアシル基を含む海洋、水産養殖、藻類または発酵由来を含む動物または植物由来の油または脂肪を、アルカリ加水分解もしくは酸加水分解するか、または所望により酵素触媒反応下で好ましくはＣ１〜Ｃ３の脂肪族アルコールとエステル交換する工程と、
ｂ）上記加水分解またはエステル交換の生成物に尿素への完全な包接を用いた精製操作を行い、単離され洗浄された包接錯体を得る工程と、
ｃ）かかる包接錯体を水に溶解し、当該溶解後に形成された油相の分離によって、または当該油相を水と混合不可能な有機溶媒、典型的にはヘキサンで抽出し、次に当該溶媒を蒸発乾固することによって、または超臨界状態の流体、特に二酸化炭素により包接錯体から直接抽出することによって、上記組成物を得る工程と
を含む方法に関する。
【００６７】
当該調製方法の好ましい態様は、請求項１９および２０に定義されている。
【００６８】
さらなる態様では、本発明は、オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルを含む、組成物の精製方法であって、
ａ）１重量部の上記組成物を、沸点で、所望により最大２０％の水を含む極性溶媒中、好ましくは、メタノールまたはエタノールのような低級アルコール等のプロトン性溶媒中で少なくとも３重量部の尿素を用いて処理し、上記組成物を含有する尿素包接錯体を生成する工程と、
ｂ）冷却してこのような尿素錯体を沈殿させ、濾過または遠心分離により単離する工程と、
ｃ）このような尿素包接錯体を水に溶解し、当該溶解後に形成された油相の分離によって、または当該油相を水と混合不可能な有機溶媒、典型的にはヘキサン等で抽出し、次に当該溶媒を蒸発乾固することによって、または超臨界流体、特に二酸化炭素により尿素包接錯体から直接抽出することによって、精製された組成物を得る工程と
を含む方法に関する。当該精製方法の好ましい態様は、請求項２２〜３０に定義されている。
【００６９】
本発明による精製された特に好ましい組成物によれば、脂肪酸が、海洋由来であり、特に、水産養殖魚を含む魚油もしくは「クリルオイル」に由来し、または藻類およびその他油糧微生物に由来し、または選択した菌株の藻類もしくはその他微生物の「単細胞発酵」に由来し、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、Ｃ２０：５  ｎ−３、全シス）および／またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｃ２２：６  ｎ−３、全シス）またはその塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルを含むことが想定される。
【００７０】
好都合には、上記の好ましい精製組成物において、アルキルエステルはエチルエステルであり、ＥＰＡもしくはＥＰＡエチルエステル、またはＤＨＡもしくはＤＨＡエチルエステル、またはそれらの合計の濃度は、組成物全重量の１５〜１００％、好ましくは５０〜１００％である。
【００７１】
本発明のさらなる態様として、当該精製組成物は、化学的経路および酵素的経路の両方によって、新規な脂質誘導体の合成のために使用することができる。これらの中でも特に、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡのすでに述べたグリセリルモノエステルおよび／またはジエステルおよび／またはトリエステルは、組成物の１５〜１００重量％、好ましくは５０〜１００重量％含まれる。
【００７２】
本発明はまた、多価不飽和特性を有するか、または具体的にはオメガ３系列に属するか、または対応するモノ−、ジ−もしくはトリグリセリド等のその他誘導体の化学的経路により調製するための、長鎖脂肪酸またはその誘導体が高含有量であることにより、食品成分、栄養補助食品およびダイエット補助食品、特別な医療目的の食品（機能性食品）、動物における使用および水産養殖のための食品、特殊調製粉乳、化粧品および医薬品として有用な製剤の調製のための、上記の好ましい精製組成物の使用に関する。
【００７３】
さらなる態様において、本発明は、その他薬物、特にスタチンとも組み合わせた、心臓の危険因子、心臓血管および心循環系疾患、例えば、高血圧、凝固異常および血小板凝集、特に家族性および遺伝性の重度および中程度の高トリグリセリド血症（それぞれ５００ｍｇ／ｄｌ超および２００ｍｇ／ｄｌ超）および高コレステロール血症の予防および治療における使用、心臓、心臓血管、および心循環系疾患、例えば、冠動脈アテローム性動脈硬化疾患、ならびに心筋梗塞および脳梗塞を含む心臓および大脳の虚血状態の予防および治療における、また心筋梗塞、不整脈ならびに心房および／または心室細動を含む心律動の開始および伝播が関与する電気が原因の疾患、ならびに心不全および代償不全ならびに／またはうっ血性「心不全」のような心ポンプの機械的欠陥による疾患に起因する突然心臓死のリスクの低減における使用、さらに、てんかんを含む中枢神経系（ＣＮＳ）障害、さまざまな形態のうつ病、双極性障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）による小児疾患、学習および記憶障害、さまざまな形態の統合失調症、アルツハイマー病およびその他認知症の予防および治療における使用、ならびに最後に、網膜症およびドライアイ症状、メタボリックシンドローム、代謝のおよび肥満に関連する障害、２型糖尿病、肝障害、結合組織および関節疾患、炎症、自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬および腫瘍疾患の予防および治療における使用のための上記精製組成物に関する。
【００７４】
本発明の好都合な処理および発展は、以下の従属クレームから推定される。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】種々のフラン脂肪酸の出発バッチのＧＣ分析を示す図である。
【図２】本発明の実施例１のＧＣピークを示す図である。
【図３】本発明の実施例１のＧＣピークを示す図である。
【図４】本発明の実施例１ＣのＧＣピークを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００７６】
本発明書では、多価不飽和酸の塩は、薬理学的に許容されるのであれば、アルカリ金属、例えば、ナトリウムおよびカリウム、アルカリ土類金属、例えば、カルシウム、塩基性アミノ酸、例えば、リジンおよびアルギニン、メグルミン、コリンならびにモノ−、ジ−およびトリエタノールアミン等との塩に代表される。
【００７７】
アルキルエステルは、天然「ワックス」中に発見される際に極長鎖でさえある脂肪族アルコールとのエステルによって代表されるが、好ましくは、より低級のアルコールＣ１〜Ｃ３とのエステルにより代表される。
【００７８】
さらに、これらの精製組成物は、化学的にまたは酵素的に変性されると、対応するモノ−、ジ−およびトリグリセリド等のような他の誘導体の精製組成物を提供できることが明らかである。
【００７９】
これらのグリセリドも、ｓｎ−１もしくはｓｎ−２位のモノアシルグリセロール（例えば、オメガ３モノアシルグリセロール）、またはｓｎ−１，２もしくはｓｎ−１，３位のジアシルグリセロール、またはここでもトリアシルグリセロールとして報告される。
【００８０】
特定のリパーゼを介したこれらのアシルグリセロールの酵素的生成は、文献による正確な実験条件によって行われ、これは例えば、「Ｂｒｅｖｉｋ  ２００７」、ｐｐ．１５７〜１５９によくまとまっている。
【００８１】
この方法は、本質的に、文献の要件に対して過剰な量の尿素中に多価不飽和物質を包接することに基づいている。
【００８２】
実際には、多価不飽和物質の濃縮プロセスがまだ行われていない天然生成物で起こるように、主に飽和成分および一価不飽和成分が組成物中にある場合には、包接プロセスはこれらに優先される。しかし、尿素が過剰に使用された場合には多価不飽和成分すべてを錯化することも可能であり、結局のところは、飽和成分および一価不飽和成分が組成物中に比較的少ないか、または殆どもしくは全く存在しない場合と同様に容易であることを本発明者らは確認した。飽和成分および一価不飽和成分が本質的に存在しない場合には、過剰な尿素は必要とすらされず、全錯化は、１段階で容易に達成できることを本発明者らは発見した。これは総じて驚くべきことである。これらの場合、このプロセスは、中鎖および長鎖脂肪酸の両方またはその塩もしくはエステル、例えば、ＬＡ、ＡＬＡ、ＡＲＡおよび上記に引用した他のものならびにＥＰＡおよびＤＨＡについてはスムーズに起こる。さらに本発明者らが発見したように、文献の標準的な操作を通して、これらの生成物すべてを生成した尿素錯体から容易に回収することもできる。
【００８３】
しかしながら、新規の操作のより驚くべき側面は、溶媒相中で錯化されていないまま残っている不純物、副生成物、および上記の汚染物質の実質的にすべてを１回の操作段階で除去できることである。いずれの場合でも、本発明者らは以下で、または個々に、または分類ごとに分けて報告するように、本発明者らは、構造上は脂肪酸、エステルおよびそれらのほとんどの単純な誘導体に類似していない物質ほとんどすべて、本発明者らがここで構造上「嵩張りのある」化合物と定義する物質、例えば、脂肪酸中で分岐する鎖を含むもののほとんど、または縮合もしくは非縮合、飽和もしくは不飽和の有機環および多環式化合物をこの言明に含める。
【００８４】
このように、精製プロセスは、実質的に上記汚染物質のすべてに及び、例えば、すべての酸フラン（ａｃｉｄｓ  ｆｕｒａｎ）、長鎖分岐脂肪酸および炭化水素、ならびにダイオキシンおよびフラン、ポリ塩化ビフェニル、ポリ臭化ジフェニルエーテル、単純な、および縮合された環式および多環式炭化水素、ならびにその他ＰＯＰが挙げられる。
【００８５】
この精製プロセスでは、各濃度間隔に含まれる上記物質それぞれおよび同じ間隔でのそれらの合計が、それらが由来する組成物と比較して、少なくとも５分の１（少なくとも８０％の減少）に、または好ましくは少なくとも１０分の１（少なくとも９０％の減少）に減少するか、またはさらに大部分の場合、それらは「本質的にゼロ」または「ゼロ」になるであろう。「本質的にゼロ」と定義された含有量は、定量下限（ＬＯＱ）で特定される安全策としてだが、検出限界（ＬＯＤ）未満の濃度を示し、一方で、ＬＯＤ未満の値がゼロであると特定された場合、これはゼロと定義される。
【００８６】
これらの望ましくない物質すべての除去の程度は、操作によって推奨されるように母液および汚染負荷の除去のための尿素錯体の慎重な洗浄によっても明らかに得られる。しかし、既知の文献によって強調されるように、洗浄溶媒により、錯体が部分的に再分解するため、かなりの収率損失が明らかに懸念されるため、決して十分ではない。
【００８７】
本発明のプロセスで得られる間隔および最大レベルの詳細について、以下に示す。
【００８８】
ペルオキシ誘導体、金属イオンおよび有機金属化合物のオリゴマーおよびポリマーの一部または大部分ならびにいくつかのステロール物質も削減される。
【００８９】
重要な考慮点は、本発明の精製方法が、先行技術における、蒸留時間を延長したり、または「ストリッピング」温度を変更したり、もしくは超臨界流体を用いたクロマトグラフィーによる精製の場合に廃棄される画分の数もしくは量を変更したりするように、出発物質中に存在する除去すべき汚染物質および副生成物の含有量に応じて変更する必要がないことである。
【００９０】
新規のプロセスでは、代わりに、汚染された海で捕獲された、したがって非常にＰＯＰが豊富であるため、市場で拒否されたか、または割引価格で販売された魚からの油、またはフィタン酸が豊富な魚油給餌廃棄食品、または高汚染地帯からの植物油のような非常に汚染された任意の材料を使用することが好都合である。
【００９１】
結論として、本発明に係る精製方法の第１の態様によれば、多価不飽和酸またはその塩もしくはエステルが少ない、すなわち含有量が１５〜３０％に等しい組成物は、合計３〜６重量部の尿素を用いて３段階で連続的に処理でき、最初に主に飽和または一価不飽和酸との錯体を得た後、多価不飽和酸との錯体を徐々に得、次に錯体を混ぜ合わせ、酸を回収してから、所望されていれば、多価不飽和酸の最初の含有量が同じく低いが、上記の不純物すべてを実質的に含まない組成物を得、錯化プロセスの最終母液で除去される。この操作は、天然生成物と比べて、多価不飽和成分の濃度が同様かまたはわずかに高い精製組成物を得るのによく適している。本発明者らによれば、天然生成物の多価不飽和成分は、多くの種子油では１５％超、または、例えば、多くの魚油の場合のように、約２０〜３０％、典型的には１８％のＥＰＡ＋１２％のＤＨＡであると言えよう。
【００９２】
本発明による精製方法の第２の態様によれば、多価不飽和酸またはその塩もしくはエステルを中程度の含有量で、すなわち３１〜８０％に等しい含有量を有する組成物は、合計３〜５重量部の尿素を用いて２段階で連続的に処理を行うことができる。
【００９３】
本発明の第２の態様では、低濃度組成物から出発して、文献に報告されている、上述のすべての濃縮方法を用いて、精製ステップで使用される中程度の濃度のこのような組成物を得ることができる。
【００９４】
これらの方法の中でも、所望の濃縮度に応じて量を変えることによる、出発物質に対して０．１重量部〜最大３重量部、通常１〜２重量部の用量で使用される尿素を用いる錯化技術のみを使用することが特に好ましい。
【００９５】
飽和脂肪酸が豊富で多価不飽和酸が少ない得られた第１の錯体を単離し、除去すると、濃縮された多価不飽和酸を予め単離することなく、濃縮液の母液を直接使用して精製ステップを続けることが可能である。
【００９６】
この操作により、多価不飽和酸が中程度の濃度、例えば、Ｅ．Ｐ．５．０の２０６３モノグラフによれば５０〜６０重量％以上だが、濃縮ステップの処理のタイプおよび回数に応じて３０〜８０重量％、好ましくは５０〜８０重量％の範囲でもある精製組成物を容易に得ることが可能になる。
【００９７】
本発明による精製方法の第３の態様によれば、多価不飽和酸またはその塩もしくはエステルを高含有量で、すなわち８０％超の含有量を有する組成物は、１段階で合計３〜４重量部、好ましくは４重量部の尿素を用いた処理を行うことができる。
【００９８】
このプロセスの有利な変形は、最終蒸留の直前に尿素を用いて錯化することによって、または所望であれば、存在し得る反応の残留有機溶媒を完全に除去することを可能にする超臨界流体で抽出することによって精製を行うことである。
【００９９】
このようにして進められた当該操作により、ＥＰモノグラフ１２５０によって要求されるような８０重量％超の多価不飽和成分ＥＰＡおよび／またはＤＨＡ、ならびに９０重量％超の全オメガ３、または８０〜１００重量％の範囲のＥＰＡおよび／またはＤＨＡの濃度の精製組成物を容易に得ることができる。
【０１００】
油脂の天然組成物から出発し、既に知られている他の処理ステップを含む高度に精製された多価不飽和酸の組成物の調製のための本発明のプロセスの全体的な記載を完全にするために、操作を以下のように簡単に説明することができる。
−  オメガ３および／またはオメガ６系列の２〜６個の二重結合ならびに１８個以上の炭素原子を有する少なくとも１個のアシル基を含む、海洋、水産養殖、藻類または発酵由来を含む動物または植物由来の適切な油または脂肪を、専門家に知られている標準的な手順に従って、アルカリ加水分解もしくは酸加水分解するか、または好ましくはＣ１〜Ｃ３の脂肪族アルコールとエステル交換し、
−  所望する場合、生成物を、すべて専門家に知られている標準的な手順に従って、本質的にＥＰＡまたはＤＨＡのみを含有する組成物の単離も含み、所望の濃縮度および最終組成物の成分比の変動が得られるまで続けられる、蒸留、分子蒸留または「短行程」蒸留、飽和または一価不飽和（または一般にあまり不飽和でない）成分の尿素との漸進的な錯化による分別、続いて、錯体の除去、向流抽出、硝酸銀水溶液抽出、超臨界流体を用いた抽出および／または分別、クロマトグラフィー操作による、多価不飽和成分の濃縮の任意のプロセスにかけ、
−  本発明による必須の精製ステップのように、上記のようにして得られ、任意で多価不飽和成分中に濃縮された粗組成物を、尿素への本質的に完全な包接によって精製プロセスにかけ、続いて得られた包接錯体を単離し完全に洗浄し、最後の水への溶解、その後、組成物の溶媒抽出によって（または超臨界流体を用いて）精製された多価不飽和成分を回収し、その後、蒸発乾固させ、
−  所望する場合、精製組成物の最終的な回収は、専門家に知られている標準的な手順に従って、分子／短行程蒸留または超臨界流体を用いた抽出により行われる。
【０１０１】
任意により、精製組成物は、濃縮または成分比の調整のさらなる処理をさらに進めるか、または化学的手段によって変性させ、対応するモノ−、ジ−、またはトリグリセリドのような他の誘導体を精製状態で含めることができ、これもまた本発明の趣旨の範囲内である。
【０１０２】
さらに任意により、脂質包接錯体の濾過後、精製ステップの母溶液は濃縮乾固することで、フラン酸、フィタン酸、プリスタン酸、またはその塩もしくはアルキルエステル、およびスクアレンに富む組成物を得ることができる。当該組成物は、公知の技術、例えば、有機溶媒または二酸化炭素等の超臨界状態のその他流体を用いた分子蒸留および／またはクロマトグラフィープロセスによる当該組成物の単離に有用である。
【０１０３】
新規の錯化操作の実行は、これが追加的であり、異なる目的のために行われる点のみが文献とは異なるが、操作は実質的には異なっていない。当該操作は、好ましくは、依然として、例えば、前述のＳｃｈｌｅｎｋ  ＨおよびＳｗｅｒｎ  Ｄによって報告されているように、多価不飽和脂肪酸のメタノールまたはエタノール溶液、部分的に水性のエタノール（最大２０％の水を含む）または他の等価の極性溶媒を使用する。プロセスで使用する溶媒の量は、通常、４．５〜７重量部のメタノールまたは４５〜６５重量部のエタノールであり、これに少なくとも３重量部の尿素が添加され、短時間で沸点まで加熱されてから完全な溶液にする。その後、約０℃（通常＋２５／−２０℃の範囲）に冷却して、所望の多価不飽和酸の尿素錯体の沈殿を得、次に上記のようにすべての汚染物質を含む溶液を廃棄する。新規の操作は尿素錯体を使用し、母液を除去するが、文献のプロセスで起こることとは正反対であることが明らかである。
【０１０４】
尿素を用いたこの処理段階は、好ましくは、以下のように実施される。
−  組成物が１５〜３０％の上記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有する場合、組成物の１重量部を、３段階で連続して合計３〜６重量部の尿素を用いて処理し、
−  組成物が３１〜８０％の上記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有する場合、組成物の１重量部を、２段階で連続して合計３〜５重量部の尿素を用いて処理し、
−  組成物が８０％超の上記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有する場合、組成物の１重量部を、１段階で３〜４重量部、好ましくは４重量部の尿素を用いて処理する。
【０１０５】
有用な変更は、尿素包接錯体の第２のアリコートを回収し、プロセスの収率を改善するために、除去する前に、例えば半分の体積になるまで母溶液を濃縮することである。
【０１０６】
沈殿した固体を、おそらくは尿素が飽和しているメタノールまたはエタノールで慎重に洗浄し、損失を最小限に抑えるために冷却した後、水に溶解させ、精製組成物を油相として分離するか、またはヘキサン等のような非水混和性の有機溶媒によって抽出する。溶媒の蒸発後、当該分野の専門家に周知であるように、また分子蒸留等のような任意の他の文献の処理のように、必要とされる高度に精製された形態の多価不飽和酸がこのようにして得られる。
【０１０７】
別の方法として、精製組成物は、洗浄した固体錯体から超臨界流体、特にＣＯ２を用いて直接抽出する。
【０１０８】
既知の方法に関して特に重要な態様は、尿素の量に関する。尿素の量は、当該既知のプロセスにおいては、多価不飽和成分の損失の一切を回避するために慎重に制限されるが、本発明によれば、全材料の定量的回収のために適切であるように過剰でなければならない。当然ながら、量は、精製される物質の組成に依存するが、一般には３〜４または５重量部以上からなる。しかしながら、当該過剰量は、濃縮された多価不飽和化合物の場合は減少するため、飽和または一価不飽和化合物の競争錯生成を低減し、３重量部程度の尿素が通常十分であることが注目に値する。
【０１０９】
本発明の使用では、本発明者らは、処理が、他の飽和成分および一価不飽和成分を失って、濃縮度の増加に伴い実際ますます重要になるとしても、多価不飽和脂肪酸に基づいて各タイプの任意の濃度の組成物を扱い精製した。さらに、組成物は、ヒトによる消費または薬学的使用にますます興味深いものとなるが、動物、例えば、水産養殖における食品として、食品および未精製組成物中に既に存在する副生成物および汚染物質（ＰＯＰ）を再利用することが認められてさえいないことも明らかである。
【０１１０】
新規のプロセスに従って処理されるいくつかの組成物は、非限定例としてさらに詳細にここで報告される。
ａ）例えば、海洋由来であり、魚油もしくはクリルオイル、または水産養殖魚の油から、またはさらに藻類もしくはその他油糧微生物から出発して得られる、または選択された菌株の藻類もしくは組換え微生物を含むその他微生物等の「単細胞発酵」、または例えば、種子油もしくは植物由来の他の油脂に由来する、動物および／または植物由来の長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルを含む組成物であって、当該組成物は、それらが由来する動物／植物由来の油脂と本質的に同濃度、一般に１５〜２０％超の多価不飽和成分を有する、組成物。
ｂ）任意のものに由来し、例えば、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、Ｃ２０：５  ｎ−３、全ｃｉｓ）および／またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｃ２２：６  ｎ−３、全ｃｉｓ）を任意の比で、１５％超の濃度で、または概して２０〜５０％超の平均濃度で、または５０〜１００％の特に高濃度で含む、脂肪酸オメガ３および／またはオメガ６の組成物または塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステル。
ｃ）典型的には、最低５０％のＥＰＡエチルエステル（最低２５〜４０％）＋ＤＨＡエチルエステル（最低２０〜４０％）、および最低５５％、６０％、または６５％の全オメガ３酸のエチルエステルを含む、ヨーロッパ薬局方（ＥＰ５．０）のモノグラフＮｏ．２０６３に基本的に記載される「オメガ３酸エチルエステル６０」の組成物。
ｄ）ＥＰＡエチルエステルもしくはＤＨＡエチルエステル、またはこれらの合計の濃度が組成物の５０〜１００％である、長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルを含む組成物。
ｅ）典型的には、最低８０％のＥＰＡエチルエステルおよびＤＨＡエチルエステル（そのうち、最低４０％のＥＰＡエチルエステルおよび最低３４％のＤＨＡエチルエステル）、ならびに最低９０％の全オメガ３酸のエチルエステルを含む、Ｅ．Ｐ．ｓｕｐｐｌ．２０００以降のモノグラフＮｏ．１２５０に基本的に記載される「オメガ３酸エチルエステル９０」の組成物。
ｆ）典型的には、８００ｍｇ／ｇ以上（ＮＬＴ）８８０ｍｇ／ｇ以下（ＮＭＴ）のＥＰＡエチルエステル（ＥＰＡｅｅ）およびＤＨＡエチルエステル（ＤＨＡｅｅ）、ＮＬＴ４３０ｍｇ／ｇかつＮＭＴ４９５ｍｇ／ｇのＥＰＡｅｅ、ＮＬＴ３４７ｍｇ／ｇかつＮＭＴ４０３ｍｇ／ｇ以下のＤＨＡｅｅ、およびＮＬＴ合計９０重量％のオメガ３酸のエチルエステルを含む、ＵＳＰ３７のモノグラフ「オメガ３酸エチルエステル」に基本的に記載される組成物。
ｇ）典型的には、少なくとも８０重量％のオメガ３多価不飽和脂肪酸を含み、そのうちＥＰＡおよびＤＨＡは１：２〜２：１の比率で存在し、脂肪酸すべての少なくとも７５重量％を占め、その他オメガ３酸Ｃ２０、Ｃ２１およびＣ２２は少なくとも３重量％を構成し、当該酸はすべて、薬学的に許容される塩または誘導体の形態で存在し得る、伊国特許第１２３５８７９号明細書に基本的に記載される、脂肪酸の組成物。
ｈ）ＥＰＡエチルエステルもしくはＤＨＡエチルエステルの濃度は組成物の８０％以上、好ましくは９０％以上であり、これらの濃度の合計は組成物の５０％〜１００％である、長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルを含む組成物。
【０１１１】
しかし、既に上述したように、本発明の方法に従った精製後、全組成物は、多数のフラン脂肪酸の全種、フィタン酸およびプリスタン酸、またはそれらの塩もしくはアルキルエステル、スクアレン、ならびに動植物界全体に遍在して分布している多くの農薬および環境汚染物質（ＰＯＰ）といった、プロセスを通じて完全に除去され、既に繰り返し引用され記載された不純物による適切で明らかな修正の増加を除いて、基本的に同じ多価不飽和成分濃度を有する対応する組成物をもたらすことが依然として理解される。
【０１１２】
例えば、栄養補助食品、医療用途の食品、薬物等の動物、特にヒトにおける非常に多様な用途に左右されやすい、全精製組成物中の多価不飽和成分の濃度は、組成物の全重量に対して「重量基準の」濃度として表されるとさらに理解すべきである。考慮された方法は、ガスクロマトグラフィーＧＣの方法であるが、分析は、１００％の純物質と比較して行われ、必要なＧＣ感度係数を決定する。多くの場合は低純度組成物に対して行われるように、単純にクロマトグラフ領域の比から推定される濃度は、極めて深刻な評価誤差をもたらす場合があるが、これは、明らかに多くの不純物がガスクロマトグラフィーカラム内に残っており、機器の検出器によって明らかにされないためであり、したがって、サンプルの合計ＧＣ領域を減少させ、よって、ＥＰＡおよびＤＨＡ等の多価不飽和成分の過大評価につながることが周知である。
【０１１３】
本発明のプロセスに従う精製後、多数の多価不飽和脂肪酸の精製組成物が得られたが、これらのうち、当然ながら限定的ではないいくつかの例を、以下で手短に大まかに報告する。
１）オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはエステルを含む組成物。
２）脂肪酸は、海洋由来であり、特に、魚油もしく「クリルオイル」に由来し、または水産養殖魚油に由来し、またはさらには藻類およびその他油糧微生物由来、または選択した菌株の藻類もしくは組換え微生物を含むその他微生物の「単細胞発酵」由来の、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、Ｃ２０：５  ｎ−３、全シス）および／またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｃ２２：６  ｎ−３、全シス）またはその塩もしくはエステルを任意の比で含む、１）に定義した組成物。
３）エステルは、好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルである、２）に定義した組成物。
４）エステルは、グリセリンモノエステルおよび／またはジエステルおよび／またはトリエステルである、２）に定義した組成物。
５）アルキルエステルはエチルエステルであり、ＥＰＡもしくはＥＰＡエチルエステルまたはＤＨＡもしくはＤＨＡエチルエステルの濃度またはそれらの濃度の合計は、組成物の１５〜１００重量％、好ましくは５０〜１００重量％である、３）に定義した組成物。
６）ＥＰＡエチルエステルおよびＤＨＡエチルエステルの濃度の合計は、８０重量％以上、好ましくは８４重量％以上であって、ＥＰＡエチルエステルの濃度は４０重量％以上、ＤＨＡエチルエステルの濃度は３４重量％以上であり、全オメガ３エチルエステルの濃度の合計は９０重量％以上である、５）に定義した組成物。
７）ＥＰＡエチルエステルおよびＤＨＡエチルエステルの濃度の合計は、８０重量％〜８８重量％であって、ＥＰＡエチルエステルの濃度は４３重量％〜４９．５重量％、ＤＨＡエチルエステルの濃度は３４．７重量％〜４０．３重量％以上であり、全オメガ３酸のエチルエステルの濃度の合計は９０重量％以上である、５）に定義した組成物。
８）ＥＰＡエチルエステルまたはＤＨＡエチルエステルの濃度は８０重量％以上、好ましくは９０重量％以上である、５）に定義した組成物。
９）ＥＰＡまたはＤＨＡまたはそれらの合計の濃度は、組成物重量の１５〜１００％、好ましくは５０〜１００％である、４）に定義した組成物。
【０１１４】
これらすべての組成物は、
−  ０．１％以下、すなわち１０００ｐｐｍ以下、好ましくは０．０１％以下、すなわち、１００ｐｐｍ以下の合計濃度のフラン脂肪酸またはその対応する塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルを合わせたものを含むことを特に特徴とする。
【０１１５】
当該組成物はまた、一般に、
−  ０．０１％以下、すなわち１００ｐｐｍ以下、好ましくは０．００１％以下、すなわち、１０ｐｐｍ以下の合計濃度のフィタン酸および／またはプリスタン酸またはそれらの対応する塩もしくはアルキルエステル、
−  ０．０１％以下、すなわち１００ｐｐｍ以下、好ましくは０．００１％以下、すなわち、１０ｐｐｍ以下の濃度のスクアレン、
−  １．０％以下の濃度の酸のオリゴマーまたは塩もしくはエステル、
−  １．０ｐｇ／ｇ以下、好ましくは０．１ｐｇ／ｇ以下の合計濃度の（値はＷＨＯの毒性等価係数（ＴＥＦ）に従って決定され、毒性等量（ＴＥＱ）として表される）、ポリ塩化ジベンゾ−ｐ−ダイオキシン（ＰＣＤＤ）およびポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦ）、
−  ５．０ｐｇ／ｇ以下、好ましくは０．５ｐｇ／ｇ以下の合計濃度の（値は上記で定義したように（ＴＥＱ）決定される）、ＰＣＤＤ、ＰＣＤＦ、ポリ塩化ビフェニル（ＰＣＢ）、およびダイオキシン様ポリ塩化ビフェニル（ＤＬ−ＰＣＢ）、
−  ５．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度のＰＣＢマーカ、
−  ５．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度のポリ臭化ジフェニルエーテル（ＰＢＤＥ）、
−  １．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．１ｎｇ／ｇ以下のマーカ物質ベンゾ［ａ］ピレンとして表される、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）を合わせたもの、
−  ２．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．２ｎｇ／ｇ以下の合計濃度の２，２−ビス−（ｐ−ジクロロフェニル）エタン（ＤＤＥ）および／または２，２−ビス−（ｐ−ジクロロフェニル）−１，１−ジクロロエタン（ＤＤＤ）および／または２，２−ビス−（ｐ−ジクロロフェニル）−１，１，１−トリクロロエタン（ＤＤＴ）を含むその他の環境的な「残留性有機汚染物質」（ＰＯＰ）、５．０ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度の、ポリ臭化ビフェニル（ＰＢＢ）、０．１ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．０１ｎｇ／ｇ以下の濃度のヘキサクロロベンゼン、０．１ｎｇ／ｇ以下、好ましくは０．０１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度のヘキサクロロシクロヘキサン異性体を含むことをさらに特徴とする。
【０１１６】
精製プロセスにおいて、オリゴマーは、出発材料中の含有量と比較して、どんな場合でも記載された範囲の下限値まで単純に減少されており、他の各物質は、これらの濃度範囲で含まれ、その合計が同範囲内にあることが見出されるが、当該含有量は、由来する未精製組成物中の含有量と比較して、少なくとも１／５に減少され、もしくは好ましくは少なくとも１／１０に減少され、または大半の場合では「本質的にゼロ」または「ゼロ」である。
【０１１７】
次に、上記に詳述される精製組成物すべては、当該技術分野において既知の全技術に従って、そのまま、または好適な希釈剤、賦形剤、沈殿防止剤等および／または好適な防腐剤、酸化防止剤等が添加されて処方され、当該技術分野において既知のあらゆる製剤を生成し、提案される適応症すべてで使用できる。当該製剤は、その直接の包接体に加え、例えば、さまざまな食品において、または先行技術に従って得られたマイクロもしくはナノカプセル化製品の形態で、ドロップ剤、軟ゼラチンカプセル、硬ゼラチン自己密封カプセル、錠剤としての経口用途のための製剤、所望であれば固形支持体への吸着後または包接錯体として、さらに必要であれば、当技術分野において既知の通り、胃抵抗性（ｇａｓｔｒｏ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ）製剤等においても、または当該技術分野において周知のようにクリーム、軟膏等として局所使用のための製剤、または注射投与のための、例えば滅菌後、ならびに／または必要であれば、化学的改変および／もしくは物理的改変の後に、筋肉内用途のバイアル、ゆっくりとした静脈内滴注等のための製剤、例えば、当該技術分野において周知のようにエマルション中のグリセリドとして、含む。
【０１１８】
それらの使用に関して、これらの精製組成物およびそれらの製剤は、任意の種類および任意の目的の食品または食品成分、例えば、栄養補助食品およびダイエット補助食品、薬学的用途では新規かつ控除可能な（ｄｅｄｕｃｔｉｂｌｅ）特別な医療目的の食品（機能性食品）、動物用および水産養殖用の食品、特殊調製粉乳食品、化粧品および医薬品としての調製および使用に関し、これらはすべて、長鎖脂肪酸またはその誘導体を含むか長鎖脂肪酸またはその誘導体に富み、多価不飽和性質を有するか、または特にオメガ３系列に属する。あるいは、これらの精製組成物およびそれらの製剤の用途は、等しく良好に精製されることとなる対応するモノ−、ジー、またはトリグリセリド等のその他誘導体の、化学的経路による、または好ましくは、文献に記載された適切なリパーゼによる酵素的経路による調製に関する。
【０１１９】
あらゆる用途について、しかし特に薬学的用途について、調製品は好ましくは、濃縮され、多価不飽和成分、特に、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡまたはそれらの塩もしくはエチルエステルに富むことになる。
【０１２０】
非常に、かつますます重要であるのは、飲料およびサプリメントも含む特別な医療目的の食品、すなわち機能性食品であり、この特別な医療目的の食品は、特定の成分、例えば、特に、健康のためにある特定の利益をもたらすことができる（強化食品）あらゆる形態のオメガ３酸を含む。これらの特定の利益は、最終的には、それらの特定の成分の薬学的用途から控除される、新規なものでもあり得る。これらの機能性食品は、現在、英語ではＦＯＳＨＵ（Ｆｏｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｕｓｅ）または日本語ではトクホとして知られる。
【０１２１】
以下に列挙されるあらゆる用途、特に薬学的用途は、使用される全精製組成物にまったくフラン脂肪酸が含まれていないと考えられる場合、さまざまな著者が魚油の心臓保護作用（例えば、Ｇ．Ｓｐｉｔｅｌｌｅｒ、Ｌｉｐｉｄｓ  ４０、７５５、２００５年等）、抗炎症作用（Ｔ．Ｗａｋｉｍｏｔｏら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １０８、１７５３３、２０１１年等）および類似の活性をフラン脂肪酸が持っていると考える文献に基づいては、全くもって明らかかつ予測可能ではないと思われる。
【０１２２】
特に、組成物の使用は、その他薬物、特にスタチンとも組み合わせた、心臓の危険因子、心臓血管および心循環系疾患、例えば、特に家族性および遺伝性の高血圧、重度および中程度の高トリグリセリド血症（それぞれ５００ｍｇ／ｄｌ超および２００ｍｇ／ｄｌ超）および高コレステロール血症、ならびに例えば凝固異常および血小板凝集等の予防および治療に関する。
【０１２３】
大きく関連性のある用途は、心臓、心臓血管、および心循環系疾患、例えば、冠動脈アテローム性動脈硬化疾患、ならびに心筋梗塞および脳梗塞を含む心臓および大脳の虚血状態の予防および治療のため、また心筋梗塞、不整脈ならびに心房および／または心室細動を含む心律動の開始および伝播が関与する電気由来の疾患、ならびに心不全および代償不全ならびに／またはうっ血性「心不全」のような心ポンプの機械的欠陥による疾患の後の突然心臓死のリスクの低減のためのものである。
【０１２４】
その他の薬学的用途では、組成物は、てんかんを含む中枢神経系（ＣＮＳ）障害、さまざまな形態のうつ病、双極性障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）による小児疾患、学習および記憶障害、さまざまな形態の統合失調症、アルツハイマー病およびその他認知症の予防および治療のために使用される。
【０１２５】
さらに他の薬学的用途としては、網膜症およびドライアイ症状、メタボリックシンドローム、代謝のおよび肥満に関連する障害、２型糖尿病、肝障害、結合組織および関節疾患、炎症、自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬および腫瘍疾患の予防および治療が挙げられる。
【０１２６】
実験実施例
次に、本発明は、いくつかの実施例により説明されるが、これら実施例はいかなる限定する目的も持たない。次いで、これらの実施例は、単なる例示を目的として提示されるため、多くの他の原料を使用してもよく、また多くの他のプロセスの変形が実行されてもよく、多くの他の精製ＰＵＦＡの組成物を得ることができるが、これらは本発明の範囲内に含まれる。
【０１２７】
実施例１
精製は、ヨーロッパ薬局方のモノグラフ１２５０（オメガ３酸エチルエステル９０、バッチ２０１３０８）に従って、高濃度のＰＵＦＡのロットに対して行い、より正確には、ＰＵＦＡ＿ＥＥまたはＰＵＦＡｅｅとも呼ぶオメガ３酸のエチルエステルのロットに対して行われ、通常通りに分析および承認した。このロット中のＥＰＡエチルエステルおよびＤＨＡエチルエステルの含有量は比較的多いのに対し、その他のオメガ３エステルは比較的減少しているが、組成物全体はヨーロッパ薬局方に指定される制限内のものである。酸価、アニシジン、過酸化物、およびオリゴマーも薬局方の要件に従っている。
【０１２８】
同じ精製が、例えば米国薬局方により記述される制限を持つ生成物を用いて実現可能であることは明らかである。
【０１２９】
分析方法
さまざまなＰＵＦＡ＿ＥＥの含有割合は、ＧＣＭＳ分析（質量分析法と合わせたガスクロマトグラフィー）により決定した。この方法により、ＧＣ条件を変更することができ、保持時間を延ばし、個々のピークの特定への先入観なしに（それでもなお、薬局方の図に示されるような順序に留まる）、個々のピークをより良好に分離する。試験用サンプルは、２５０ｍｇ±０．１ｍｇのサンプルを正確に計量し、メスフラスコ内で１０ｍＬのイソオクタンで希釈することにより２０ｍｇ／ｍＬで溶解し、５ｍｇのブチルヒドロキシトルエンを添加した。
【０１３０】
【表２】
2018515432.tif 000003
【０１３１】
ＰＵＦＡ＿ＥＥのピークは、質量スペクトルの文献調査により特定される。各エチルエステルの量は、必要であれば、適切な補正係数を用いて面積正規化により計算される。
【０１３２】
ＧＣＭＳクロマトグラフィー条件は以下のようにまとめられる。
【０１３３】
この出発バッチのガスクロマトグラフィーピークは図２に示しているが、質量分析法により支持されるそれらの属性および濃度％は第２表に報告される。
【０１３４】
【表３】
2018515432.tif 000004
【０１３５】
上記データから、当該ＰＵＦＡ＿ＥＥのバッチは優れた品質であり、ヨーロッパ薬局方の要件を満たすことが明らかであり、ＥＰＡエチルエステル＝５０．８１重量％、かつＤＨＡエチルエステル＝３９．４６重量％である（面積の％比は、対応する感度係数で正規化および補正される）。しかし、ＰＵＦＡ＿ＥＥのバッチは、エチルエステルの形態でもある少なくとも３種のフラン酸を含有し、採用した分析方法（ガスクロマトグラフィー保持時間、ＲＴ：４６．８７分、５３．７９分、６２．０８分；それらの含有割合：０．１６％、０．２３％、および０．２２％）の定量下限（ＬＯＱ＞０．０１％）を超える量であった。薬局方により明示的に禁止されているわけではないが、その存在の可能性を事実上強調するこれらのフラン脂肪酸は、申告されたＰＵＦＡ構造に合致せず、したがって、少なくともヒトへの使用からは、栄養補助食品等としても、またより明白であることには薬物としての使用も排除すべきである。
【０１３６】
ＰＯＰの分析は、ＰＣＤＤおよびＰＣＤＦの合計が０．０６ｐｇ／ｇの毒性等量（ＴＥＱ）ＷＨＯであり、ＤＬ−ＰＣＢとの累積合計は、０．２８ｐｇ／ｇ  ＴＥＱ  ＷＨＯに等しく、ＰＣＢマーカの合計は１５ｎｇ／ｇであり、ＰＢＤＥの合計は０．４４ｎｇ／ｇであり、ＩＰＡの合計は０．１ｎｇ／ｇのベンゾ［ａ］ピレンに等しいことを示す。
【０１３７】
上記と同様に、以下のプロセスに従って調製された生成物について得られた結果も提示する。
【０１３８】
手順
撹拌棒、冷却管および温度計を備えた四ツ口フラスコに１５００ｍＬのメタノールおよび７５０ｇの尿素を入れ、撹拌しながら加熱還流させ、透明溶液を得る。
【０１３９】
次に、わずかに黄色い２５０ｇのＰＵＦＡ＿ＥＥの油性混合物（ＰＵＦＡ＿ＥＥ：尿素の重量比は１：３）を添加し、混合物を沸騰させながら１０分間撹拌し、静置されているときに表面上に油性物質をほとんど示さない乳白色の溶液を得た。
【０１４０】
錯化が完了したと仮定して、さらなる５００ｍＬのメタノールおよび２５０ｇの尿素（ＰＵＦＡ＿ＥＥ：尿素の全重量比は１：４）を添加し、ここでも数分間撹拌しながら加熱還流し、次に混合物が冷却するまで放置する。
【０１４１】
この操作後、好ましくは、この反応は２０００ｍＬのメタノールおよび１０００ｇの尿素を、同量の２５０ｇのＰＵＦＡ＿ＥＥに対して直接使用することで実行されることが明らかである。
【０１４２】
この反応に次いで、尿素に包接したＰＵＦＡ＿ＥＥの錯体の沈殿が５８〜６０℃で開始する。温度が３０℃に達したら、フラスコを窒素雰囲気下にて密閉し、約５℃の冷却装置に移し、約２０時間（一晩）撹拌せずに静置する。
【０１４３】
最後に、沈殿物を吸引しながらブフナー漏斗で濾過して回収し、ブフナーフィルタによく押しつぶして母液を完全に除去し、各々が予め＋５℃まで冷却された、尿素で飽和した３００ｍＬのメタノール溶液（１６０ｇの尿素を１０００ｍＬのメタノールに溶解して得た）２部で連続して完全に洗浄し、これにより無色の洗浄水を得る。
【０１４４】
次に、白色結晶沈殿物をより低い温度および圧力下で乾燥させ、９５５ｇの尿素錯体を得、そこからＰＵＦＡ＿ＥＥを約３０℃で２０００ｍＬの５％ＮａＣｌ水溶液に溶解することで回収した。これにより、表面上に分離した油が浮いた濁った溶液が生じる。
【０１４５】
次に、油相を、６００ｍＬのｎ−ヘキサン２部で連続して抽出し、緩やかに１０分間撹拌する。
【０１４６】
上部有機層は、水相から分離され集められ、次にｎ−ヘキサンは減圧下にて、約３５℃まで外部加熱されて恒量になるまで蒸発乾固し、それにより２１０ｇの無色の油性残渣が得られる。この油性残渣は、精製状態で所望のＰＵＦＡ＿ＥＥからなり、これは、窒素雰囲気下にて５℃の冷却装置内で密閉容器に入れて保管する。
【０１４７】
生成物は通常、さらなる操作なしでそのまま使用される。例えば、両方とも専門家に公知である標準条件下における迅速な分子蒸留によって、または超臨界流体を用いた抽出によって、どんな微量の溶媒もさらに除去できる。欧州特許第１６８５２２２号明細書に従って、少量のシリカゲル、溶離液ｎ−ヘキサンの迅速なパーコレーションによって、どんな微量の極性物質も除去できる。
【０１４８】
生成物は前述の通りＧＣＭＳによって分析でき、ガスクロマトグラフィーピークは図３に示しているが、質量分析法により支持されるそれらの属性および濃度（重量％）は第３表に報告される。
【０１４９】
【表４】
2018515432.tif 000005
【０１５０】
ＥＰＡエチルエステル含有量は４９．９４重量％、ＤＨＡエチルエステル含有量は４０．２１重量％という結果になった。
【０１５１】
これらのデータよりから推定される最も明白な考察は、上述された３つのフラン脂肪酸のエチルエステルに対応するピークが完全に消えたことに関する。
【０１５２】
ガスクロマトグラフィー面積のわずかな増加もまた、オリゴマー構造を持つ生成物の少なくとも部分的な除去を示す。
【０１５３】
ＰＯＰの値はすべて基本的にゼロである。
【０１５４】
実施例１Ａ
実施例１の方法に従うが、２００ｍＬの沸騰メタノール中における２５ｇのＰＵＦＡ＿ＥＥと１００ｇの尿素との最初の処理後、未反応の物質をすべて完全に錯化させるべく、乳白色溶液にさらに５０ｍＬの沸騰メタノールに溶解させた２５ｇの尿素を添加し（ＰＵＦＡ＿ＥＥ：尿素の全重量比は１：５）、次に混合物を加熱して、さらに１０分間沸騰させた。
【０１５５】
さらに実施例１の方法に従い、最後に、得られた精製油性残渣の重量は、比例してわずかに増加し、そのガスクロマトグラフィー写真は、実施例１に従って得たものと実質的に等しい。
【０１５６】
実施例１Ｂ
錯化のメタノール母液および実施例１に従って得られた洗浄用メタノール液を混ぜ合わせ、約５０％のメタノールが除去されるまで、減圧下で約３５℃まで外部加熱して濃縮し、白色沈殿物の形成が始まる。
【０１５７】
沈殿を助けるため、混合物を１０分間氷浴中に置き、その後固体沈殿物を減圧下にてブフナー漏斗にて濾過により収集し、よく押しつぶして完全に母液を除去した。
【０１５８】
その後、沈殿物を、既に前述したように連続して予め＋５℃に冷却した１００ｍＬの尿素飽和メタノール溶液２部で慎重に洗浄し、無色の洗浄水を得た。
【０１５９】
次に、白色結晶沈殿物を減圧下にて乾燥させ、１７８ｇの生成物を得、これより、約３０℃での１０００ｍＬの５％ＮａＣｌ水溶液における溶解および１０分間の穏やかな撹拌下での２００ｍＬのｎ−ヘキサンアリコートを用いた２回の抽出による、実施例１に記載した油性包接物質の回収に進む。
【０１６０】
上部有機相を分離して集める一方、水相は廃棄し、次に、ｎ−ヘキサン溶液を、減圧下にて約３５℃まで槽で濃縮乾固し、６．０ｇの油性残渣を得る。この油性残渣を分析のために窒素下にて５℃で容器中に保管する。
【０１６１】
しかしながら、ＧＣＭＳ分析は、ガスクロマトグラフィーピークを示さず、したがって、油性物質の構造は、個々のＰＵＦＡのエチルエステルが完全に存在していないオリゴマーに起因する。
【０１６２】
実施例１Ｃ
メタノール母液および実施例１Ｂに従って得られたメタノール洗浄水を混ぜ合わせ、減圧下で約３５℃まで外部加熱しながら乾燥するまで濃縮し、蝋状の油性半固体残渣を得る。この油性半固体残渣はその後の分析により、尿素、限られた量の尿素に包接されたおよび包接されていないＰＵＦＡ＿ＥＥ、ならびにＰＵＦＡ＿ＥＥ構造を有していないかまたは完全に異物である多数の不純物からなることが示される。
【０１６３】
この残渣から、続いて、例えば、実施例１または１Ｂに記載されるように尿素錯体中に包接されていないものも含む、存在するＰＵＦＡ＿ＥＥおよび有機物質すべてを完全に回収し、それにより、１０００ｍＬの５％ＮａＣｌ水溶液中に残渣を約３０℃で溶解させ、次に穏やかに撹拌しながら、３００ｍＬのｎ−ヘキサンアリコートを用いて２回抽出する。
【０１６４】
次に水相を廃棄する一方、２つの上部有機相を分離して混ぜ合わせ、次にｎ−ヘキサンを、減圧下にて約３５℃の水槽で乾燥するまで濃縮し、３４ｇの油性の蝋状残渣を得る。この蝋状残渣を分析のために窒素下にて５℃で容器中に保管する。
【０１６５】
ＧＣＭＳ分析は前述の通り行われ、ガスクロマトグラフィーピークは図４に示されるが、質量分析法により支持されるそれらの属性および濃度％は第４表に報告される。
【０１６６】
【表５】
2018515432.tif 000006
【０１６７】
しかしながら、両方とも原料に対して、特に実施例１で言及された精製された画分に対して合計ＧＣ面積は大きく減少する（約−４０／−４５％）ため、これらの濃度％は、機器の検出器によって明らかにならない物質（オリゴマーおよびポリマー、分解生成物等）を考慮することなく、単に全面積に対するＧＣの個々の面積の％として表されるため、単なる示唆的な意味を持つ。
【０１６８】
この比較的小さな画分のＥＰＡエチルエステルの含有量は５６．０７重量％である一方、ＤＨＡエチルエステルの含有量は３０．７２重量％である。
【０１６９】
ＧＣデータ全体から推定される（ｄｅｄｕｃｔｉｂｌｅ）最初の最も明らかな考察は、濃度が大きく増加した、出発物質中に存在する３つのフラン脂肪酸の対応するピーク（それぞれ、ＲＴ：４６．８３分、５３．７５分、６２．０４分；含有割合：２．３５％、２．８１％、および２．３３％）の存在に関し、値は得られた画分の重量の減少におおよそ反比例する。
【０１７０】
また、新たな４つのピークの出現は、出発物質のＧＣスペクトルに検出されない新たな４つのフラン酸に対応することも明らかであるが、これは、明らかにそれらの濃度が分析方法の検出限界（ＬＯＤ）および定量下限（ＬＯＱ）未満であった（それぞれ、ＲＴ：４８．６２分、５０．９７分、５８．８５分、６４．６４分、含有割合：０．１５％、０．４９％、０．５２％、および０．２１％）ためである。
【０１７１】
フィタン酸エチルエステルとして特定された１つのＧＣピーク（ＲＴ：２４．２８分、含有量０．１７％）の存在も見出され、この場合、出発物質における検出および計量（ｄｏｓｉｎｇ）が欠如していることは当然であるが、薬局方で明示的に禁止されてはいないものの、この物質の毒性は、近年、いっそう明らかになり、ヒトの健康に対して危険であることがわかっているため、最も慎重な製造業者の一部においては、高価なクロマトグラフィー操作にもかかわらず、その存在を検出限界および定量下限未満に制限すべくかなりの労力が費やされている。
【０１７２】
最後に、式Ｃ３０Ｈ５０を有するため、脂肪酸構造を有していない長鎖脂肪族炭化水素であるスクアレンに対応する１つのピーク（ＲＴ：６５．９２分、含有量１：２９％）が注目されるが、検出限界未満の濃度のため出発生成物においてこれも検出されない。
【０１７３】
ＰＯＰの分析によると、ＰＣＤＤおよびＰＣＤＦが合計０．４８ｐｇ／ｇ  ＴＥＱ  ＷＨＯ、ＤＬ−ＰＣＢが累積で２．３ｐｇ／ｇ  ＴＥＱ  ＷＨＯであり、マーカＰＣＢが合計１１８ｎｇ／ｇ（０．１１８ｐｐｍ）、ＰＢＤＥが合計３．１ｎｇ／ｇ、最後にベンゾ［ａ］ピレンに関連する物質が０．７ｎｇ／ｇである。
【０１７４】
この画分または類似の画分は通常廃棄されるが、必要に応じて、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡのエチルエステルの非常に適当な量の回収のために、また特別な目的で使用されるエチルフィタネートおよびフラン脂肪酸のエチルエステル等の他の副生成物の単離のためにも使用することができる。
【０１７５】
このような物質の回収に関してまったく関心が持たれない場合、精製プロセスは、実施例１Ａに記載されるものに加えて、実施例１Ｂおよび１Ｃの段階も省略し、したがって、実施例１の操作のみに限定されることで、操作が明らかに単純化し、その関連コストは低減される。
【０１７６】
実施例２
実施例１で使用した同ロットのオメガ３酸のエチルエステル（図２に示すＧＣピーク、ピークの属性および濃度重量％は第２表に報告される）を使用したため、同じ分析方法を使用した。また、手順は幾分類似しており、溶媒としてのエタノールの使用によるいくつかの変形例が示唆されているが、これにより非常に小さくなった溶媒能を持つことになる。
【０１７７】
手順
４００ｍＬのエタノールおよび７５ｇの尿素をフラスコに入れ、その後、撹拌しながら加熱還流させ、少量の尿素がまだ溶解されていない十分な溶液を得る。
【０１７８】
次いで２５ｇのＰＵＦＡ＿ＥＥの油性混合物（ＰＵＦＡ：尿素の重量比は１：３）を添加し、次に、混合物をさらに１０分間撹拌しながら沸騰させ、残留懸濁液がほとんどない黄色っぽい混合物を得る。
【０１７９】
撹拌しながら、所望の錯体が沈殿し始める６５℃で冷却させる。３０℃でフラスコを窒素下にて密閉し、約５℃の冷却装置に入れ、一晩静置し沈殿を完了させる。
【０１８０】
最後に、沈殿物をブフナー漏斗で濾過して収集し、よく押しつぶして母液のほとんどを除去し、各々が予め＋５℃まで冷却された、５０ｍＬの尿素飽和エタノール溶液（３０ｇの尿素を２００ｍＬのエタノールに溶解して得た）２部で完全に洗浄し、これにより最後に無色の洗浄水を得た。
【０１８１】
乾燥後、７４．６ｇの白色結晶沈殿物を得、これより、約３０℃での２００ｍＬの５％ＮａＣｌ水溶液における溶解およびその後の各々１００ｍＬのｎ−ヘキサン２部を用いた抽出による精製ＰＵＦＡ＿ＥＥの回収に進む。
【０１８２】
２つの有機相を水相から分離してプールし、その後ｎ−ヘキサンを約３５℃で減圧下にて恒量になるまで蒸発乾固させ、１１．９ｇの精製ＰＵＦＡ＿ＥＥからなる無色の油性残渣を得、約５℃で窒素雰囲気中で保管した。
【０１８３】
生成物は通常そのまま使用される。所望する場合、実施例１に報告される公知の方法を用いてどんな微量の溶媒または極性不純物も除去できる。
【０１８４】
ＧＣＭＳ分析によると、組成物は全体として図３および第３表に既に記載された組成物と類似していることが示される。より詳細には、出発原料中に存在する３つのフラン酸のエチルエステルがまったく存在していないことが確認されている。
【０１８５】
実施例２Ａ
尿素に包接したＰＵＦＡ＿ＥＥの錯体の濾過により単離され、実施例２において前述された洗浄用エタノールと一緒にプールされたエタノール母液は、約３５℃で減圧下にて濃縮され、エタノール約５０％を除去し、微量の沈殿物のみを得る。
【０１８６】
次いで、さらに２５ｇの尿素（初期反応の状況については、ＰＵＦＡ：尿素の全重量比が１：４）を添加し、混合物をゆっくりと撹拌しながら１０分かけて沸騰させ、完全な溶液を得る。
【０１８７】
その後、撹拌しながら冷却させ、約６０℃で沈殿を開始させ、その後、約５℃の冷却装置内で一晩静置する。
【０１８８】
最後に、沈殿物をブフナー漏斗で濾過して回収し、押しつぶして母液を完全に除去し、各々が例えば実施例２に記載されるように、予め＋５℃まで冷却された、５０ｍＬの尿素飽和エタノール溶液２部でよく洗浄する。
【０１８９】
乾燥後、このようにして３４．５ｇの白色結晶沈殿物を得、これより、基本的には実施例２に記載のように、２００ｍＬの５％ＮａＣｌ水溶液における溶解および１００ｍＬのｎ−ヘキサン２部を用いた抽出により、ＰＵＦＡ＿ＥＥを回収する。
【０１９０】
実施例２に従うｎ−ヘキサン抽出物の蒸発乾固により、５．８ｇのこれもまた精製ＰＵＦＡ＿ＥＥにより構成された無色の油性残渣をさらに得、５℃で窒素下にて保管する。
【０１９１】
ＧＣＭＳ分析では、生成物の純度を確認し、その組成は図３および第３表に記載のものと基本的に同じであるため、生成物は実施例２の生成物にプールされ、したがって１７．７ｇの全収率が得られることを示す。
【０１９２】
ＰＯＰの分析によれば、それらの含有量は「本質的にゼロ」である。
【０１９３】
実施例２Ｂ
エタノール母液および前の相のエタノール洗浄液を減圧下にて約３５℃の温度で濃縮乾固し、次に、まだ存在する尿素に包接されたＰＵＦＡ＿ＥＥおよびＰＵＦＡ以外の尿素に包接されていない他の物質を最後に回収するために、得られた蝋状固体残渣を、基本的に実施例１Ｃの手順により、５％ＮａＣｌ水溶液で処理し、ｎ−ヘキサンを用いて２回抽出する。
【０１９４】
最後に、水相を廃棄する一方で、ｎ−ヘキサンの蒸発乾固のために、８．２ｇの蝋状固体残渣を回収し、分析および特定の物質の最後の回収のために＋５℃で窒素下にて保管する。
【０１９５】
実施例１Ｃに報告されるデータと比較して、ＧＣＭＳ分析は、ＧＣ面積の１０％程度のかなりの減少を示し、このことは、ＥＰＡおよびＤＨＡのエステルの大部分が、精製プロセスの結果生じる不純物を含有するこの画分中に残っていたことを示し、これは実施例１Ｃの３．６ｇと比べて重量８．２ｇであり、すなわち約２．３倍多いことによっても示される。
【０１９６】
ＧＣ面積比は、ＥＰＡエステル含有量が５６．９４％であり、ＤＨＡエステル含有量が３４．６８％であることを示す。
【０１９７】
異質不純物の写真は、実施例１Ｃの写真にほぼ完全に重ね合わせることができるが、ただし、その濃度は、より希釈されていることにより約２．３倍低いこと分かっている。
【０１９８】
したがって、３つのフラン脂肪酸のエチルエステルは、原料で既に強調されているように、４４．９１分（０．７１％）、５１．８３分（０．９１％）および６０．１０分（０．８３％）であり、他の３つのフラン酸のエステルは、４８．９３分（０．１６％）、５７．１１分（０．１８％）、６２．４６分（０．０９％）であると分かっているが、実施例１ＣによるＲＴが４８．６２分であるエステルのみが、この場合、検出限界未満に留まる。
【０１９９】
また、エチルフィタネートは２３．２１分（０．０３％）、スクアレンは６３．６４分（０．７０％）であると明らかになった。
【０２００】
ＰＯＰさえも、出発原料よりも２〜３倍高い濃度を示すが、実施例１Ｃの画分の濃度には達しない。
【０２０１】
実施例３（文献による）
中程度の濃度のオメガ３酸のエチルエステルのバッチを精製に使用する。
【０２０２】
ＰＵＦＡの開始濃度はその生成物源に依存し、例えば、魚油は通常、２０〜３０％の最大含有量でオメガ３を有し、典型的な生成物は１８％のＥＰＡおよび１２％のＤＨＡを有することが周知である。かなり大まかな指標では、飽和酸、一価不飽和酸、およびｎ−３系（少量のｎ−６系）多価不飽和酸を含み、各種類は大まかに組成物の１／３になる。
【０２０３】
エステル交換または加水分解の後、例えば、低沸点画分の蒸留により、または飽和成分および一価不飽和成分、ならびに／またはＥＰＡおよびＤＨＡほど不飽和でない成分の部分的な選択的錯化により、中程度の量の尿素を用いて中程度の濃度の組成物が得られる。
【０２０４】
本実施例３では、ヨーロッパ薬局方６．３のモノグラフ２０６３が示す組成物の１つ（オメガ３酸エチルエステル）と明らかに一致しているオメガ３酸のエチルエステル（バッチ０６５／０７）のロットに使用する。これは、全面積と比べたときのそのＧＣ面積の比として測定した場合に、エチルエステルの形態でＥＰＡ３６．１％およびＤＨＡ２６．９％を含有する。これらのデータは、特定の「サイズ排除」クロマトグラフィーから得た面積を減じると、それぞれ３３．０重量％および２４．６重量％に相当する。
【０２０５】
その他の成分は、飽和成分（Ｃ１８：０（０．６％））、一価不飽和成分（例えば、Ｃ１８：１  ｎ９（６．９％）、Ｃ１８：１  ｎ７（２．７％）、Ｃ２０：１  ｎ９（２．０％）、Ｃ２２：１  ｎ１１（１．７％））、および多価不飽和成分（例えば、Ｃ１８：２  ｎ６（１．１％）、Ｃ１８：３  ｎ３（０．７％）、Ｃ１８：４  ｎ３（２．０％）、Ｃ２０：４  ｎ６（２．４％）、Ｃ２０：４  ｎ３（１．９％）、Ｃ２１：５  ｎ３（１．７％）、Ｃ２２：５  ｎ６（０．８％）、およびＣ２２：５  ｎ３（５．２％））である。
【０２０６】
多くの他の成分はすべて０．５％未満である。
【０２０７】
３つのフラン酸のエチルエステルは、実施例１に使用されるロットで既に強調されるように、このサンプル中でもそれぞれ約０．２％の濃度で検出され、またフィタン酸エチルエステルは０．１６％の濃度で検出される。
【０２０８】
ＰＯＰの分析によれば、ＷＨＯ  ＴＥＱとして表されたとき、ＰＣＤＤおよびＰＣＤＦの合計は０．５６ｐｇ／ｇであり、ＤＬ−ＰＣＢに添加された場合は３．６ｐｇ／ｇ  ＴＥＱに達し、ＰＣＢマーカは７５ｎｇ／ｇ、ＰＢＤＥは５．２ｎｇ／ｇであり、ベンゾ［ａ］ピレンは実質的に存在しないことを示す。
【０２０９】
手順
尿素１５０ｇの沸騰メタノール溶液を調製し、次に、上記脂肪酸（ＰＵＦＡ：尿素の重量比は１：１．５）のエチルエステルの混合物１００ｇを添加する。
【０２１０】
実施例１に従って進めると、混合物を約５℃まで一晩かけて冷却し、さまざまな酸エステルの尿素包接錯体により構成される多量の沈殿物を得る。
【０２１１】
次に、実施例１のように、沈殿物をブフナー漏斗で濾過し、よく押しつぶして母液を除去し、＋５℃まで冷却した尿素飽和メタノール溶液で完全に洗浄する（文献の記述においては通常推奨されない）
【０２１２】
常に実施例１に従って、乾燥後、沈殿物を５％ＮａＣｌ水溶液に溶解し、分離した油をｎ−ヘキサンを用いて２回抽出する。
【０２１３】
次いで、溶媒を蒸発させて約４２ｇの油性残渣を得る。油性残渣は、飽和酸、一価不飽和酸、およびＥＰＡおよびＤＨＡほど不飽和ではない多価不飽和酸のエチルエステルから主に構成され、またＧＣ分析により示されるように、ＥＰＡおよびＤＨＡのエステルを合計１０〜１５％含む。
【０２１４】
しかしながら、この残渣中では、出発物質中に存在する３つのフラン酸およびフィタン酸のエステルがまったく存在しないことが注目され、またさらに特定の分析によって上記の種類の農薬（ＰＯＰ）がまったく存在しないことを確認する。
【０２１５】
しかし、文献によると、生成物のこの画分は、廃棄されるかまたは限られた量の存在するＥＰＡおよびＤＨＡのエステルを回収するために使用される。
【０２１６】
実施例３Ａ（文献による）
洗浄用メタノール水とともにプールされた実施例３のメタノール母液を、例えば実施例１Ｃに示すように濃縮乾固し、次に、残渣を５％ＮａＣｌ水溶液に溶解し、分離した油相をｎ−ヘキサンで２回抽出する。
【０２１７】
水相の除去後、有機溶媒を蒸発乾固し、実施例３の操作の間、尿素と錯化していないＰＵＦＡエステルを含む橙褐色の油性残渣５６ｇを得る。
【０２１８】
本生成物のＧＣ分析によれば、ＧＣ面積の比に基づいて、ＥＰＡおよびＤＨＡのエチルエステルの含有量は、ＥＰＡ５０．１％およびＤＨＡ３６．３％に対応して８６．４％であることが示される。
【０２１９】
しかしながら、合計ＧＣ面積は非常に小さく、物質の色自体が明らかに分解物質の蓄積を示すため、分子蒸留等による精製ステップに進む必要があることが明らかである。結論として、標準的な文献の条件下での蒸留後、ＥＰＡ４９．０重量％およびＤＨＡ３６．２重量％、合計で８５．２重量％をエチルエステルの形態で含む淡黄色の組成物が得られる。さらに、生成物は、微量の飽和酸および一価不飽和酸のエステルを含有し、２．５％のＣ２０：４  ｎ６および０．８％のＣ２２：５  ｎ６に加えて、約２％のＣ１８：４  ｎ３、約０．５％のＣ２０：４  ｎ３、１．６％のＣ２１：５  ｎ３、および１．８％のＣ２２：５  ｎ３を含有する。
【０２２０】
数が大幅に減ったその他の成分は、それぞれ０．５％未満であるが、フィタン酸のエチルエステルおよびフラン酸のエステルすべてが、実質的に原料中の含有量と比べてほぼ２倍の濃度であるという重大な欠点を表す。
【０２２１】
種々のＰＯＰでさえも完全に保存され、得られた組成物の重量に反比例して増加しているため、出発生成物と比べてほぼ２倍の濃度である。
【０２２２】
実施例３Ｂ（新規）
実施例３Ａに従って得られた５６ｇの蒸留組成物を、実施例１に記載のように２２４ｇの尿素の沸騰メタノール溶液（ＰＵＦＡ：尿素の重量比は１：４）に撹拌しながら添加する。
【０２２３】
本プロセスは実施例１に従って引き続き行い、冷却後、最後にＰＵＦＡの尿素包接錯体の多量の沈殿物を濾過により収集する。常に実施例１に従い、沈殿物の完全な洗浄の後、同じ方法に従って、ＰＵＦＡ＿ＥＥの回収を行い、最後に、４９重量％のＥＰＡエステルおよび３６重量％以上のＤＨＡエステル（合計重量含有量が８５％超）の実質的に同じ含有量を有するが、フィタン酸およびフラン酸のエステルはまったく含まず、また残留性有機汚染物質ＰＯＰも含まない、精製された無色の油を得る。
【０２２４】
所望する場合、例えば、残った微量の有機溶媒を除去するために、生成物にさらに分子蒸留または超臨界流体を用いた抽出を行うことができる。さまざまな不純物を含む錯化段階のメタノール濾液を除去できる。分析のために、例えば実施例１Ｃに従って回収される場合、１２ｇの油性物質が得られ、これはＥＰＡおよびＤＨＡのエチルエステル（所望する場合、尿素によるさらなる錯化によって回収に対処できる）を約７０％含むが、原料中に存在する不純物およびＰＯＰすべてを、約１０倍高い濃度で含有する。
【０２２５】
実施例３Ｃ（新規）
実施例３Ａに従って得られた橙褐色の５６ｇの粗組成物サンプルを、実施例３Ｂに従って処理し、同様に、２２４ｇの尿素の沸騰メタノール溶液（ＰＵＦＡ：尿素の重量比は１：４）に添加する。
【０２２６】
尿素に包接したＰＵＦＡの錯体を単離し洗浄することにより、同様の方法で精製された、無色の油の形態であり、フィタン酸およびフラン酸のエステルならびに残留性有機汚染物質ＰＯＰをまったく含まない４８ｇのＰＵＦＡ＿ＥＥを回収する。
【０２２７】
非常に少量の低沸点画分の分子蒸留により、例えば、ＥＰＡ＿ＥＥを４７重量％、ＤＨＡ＿ＥＥを３８重量％以上含有する、高度に精製された組成物を得る（Ｅ．Ｐ．およびＵＳＰの指定に従い、全重量含有量は８５％超）。
【０２２８】
ＥＰＡおよびＤＨＡよりも低い不飽和度を有するＰＵＦＡのエステルを含むその他の微量成分は、実質的に実施例３Ａの開始生成物とは異ならない。
【０２２９】
あるいは、実施例３Ａに記載され、事前の単離なしで５６ｇの粗ＰＵＦＡ組成物を含む母液であるメタノール水溶液を使用し、このメタノール溶液を加熱して沸騰させ、２２４ｇの尿素を添加する（ＰＵＦＡ：尿素の重量比は１：４）。
【０２３０】
次いで、前述の通り進めると、本実施例３Ｃで前述したものと完全に同等のＰＵＦＡの精製組成物が最終的に得られる。
【０２３１】
実施例３Ｄ（新規）
その他の成分の中でも、すべて低い含有量を有するが、フィタン酸およびフラン酸のエステルならびにＰＯＰを実質的に含まない、一価不飽和酸および多価不飽和酸のさまざまなエステルを含有し、実施例３の手順に従って得られる物質サンプルを、実施例３Ｃ等に従って得られるように、高い総含有量を有し、これもまた同じ不純物を含まない８５重量％以上のＥＰＡおよびＤＨＡのエチルエステルのサンプルと混合する。サンプル比は、精製ステップの間に得られる重量に基づき、例えば４２：４８である。
【０２３２】
得られたサンプルの組成は、実施例３に記載の出発生成物の組成と実質的に等しく、重量百分率で約３３．０％のＥＰＡエチルエステルおよび約２４．６％のＤＨＡエチルエステルを含有するが、高度に精製されており、すなわち、フィタン酸およびフラン酸のエチルエステルならびにＰＯＰを実質的に含まないという利点を有する。
【０２３３】
また、少量のＰＵＦＡのその他のエステル成分は、本質的に同じ含有量を有する。
【０２３４】
あるいは、同じ実施例３および３Ｃ等に従って得られた包接生成物の混合物に直接進み、完全に洗浄し、次に、例えばＥＰＡ３３．０重量％およびＤＨＡ２４．６重量％、すなわち中程度の濃度で、上述の不純物をまったく含まない、包接された全ＰＵＦＡの回収に進む。
【０２３５】
実施例３Ｅ（新規）
さらなる代替例として、実施例３に記載のようにＥＰＡおよびＤＨＡが中程度の濃度である、長鎖脂肪酸のエチルエステルの同バッチのサンプルを、尿素を過剰に、例えば、存在する脂肪酸のエステルすべてとの包接錯体を得られるような量（脂肪酸エステル：尿素の重量比が１：４以上）で含む沸騰メタノール溶液を用いて１段階で処理する。
【０２３６】
既に記載したように冷却により沈殿し、収集され、完全に洗浄された錯体からは、反応サンプルと同一組成を基本的に有するが、フィタン酸およびフラン酸のエチルエステルならびにＰＯＰをまったく含まない、無色の油性組成物を通常の方法を用いて回収する。
【図１】
2018515432.tif 000007
【図２】
2018515432.tif 000008
【図３】
2018515432.tif 000009
【図４】
2018515432.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】平成28年10月26日(2016.10.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
フラン脂肪酸またはその塩もしくはエステルを実質的に含まず、どんな場合も、０．０１％以下、すなわち、１００ｐｐｍ以下の合計濃度の前記フラン脂肪酸またはその対応する塩もしくはエステルを含有する、オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはエステルを含む組成物。
【請求項２】
フィタン酸および／またはプリスタン酸またはそれらの対応する塩もしくはエステルを実質的に含まず、どんな場合も、０．００１％以下、すなわち、１０ｐｐｍ以下の合計濃度の前記フィタン酸および／またはプリスタン酸またはそれらの対応する塩もしくはエステルを含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
スクアレンを実質的に含まず、どんな場合も、０．００１％以下、すなわち、１０ｐｐｍ以下の濃度のスクアレンを含有する、請求項１および２の各々に記載の組成物。
【請求項４】
請求項１〜３に記載の前記長鎖多価不飽和脂肪酸または塩もしくはエステルのオリゴマーを実質的に含まず、どんな場合も、１．０％以下の濃度の前記オリゴマーを含有する、請求項１〜３の各々に記載の組成物。
【請求項５】
ポリ塩化ジベンゾパラダイオキシン（ＰＣＤＤ）およびポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦ）を実質的に含まず、どんな場合も、０．１ｐｇ／ｇ以下の合計濃度の前記ＰＣＤＤおよび前記ＰＣＤＦを含有し、値はＷＨＯの毒性等価係数（ＴＥＦ）に従って決定され、毒性等量（ＴＥＱ）として表される、請求項１〜４の各々に記載の組成物。
【請求項６】
ＰＣＤＤ、ＰＣＤＦ、およびダイオキシン様ポリ塩化ビフェニル（ＤＬ−ＰＣＢ）を実質的に含まず、どんな場合も、０．５ｐｇ／ｇ以下の合計濃度の前記ＰＣＤＤ、ＰＣＤＦ、およびＤＬ−ＰＣＢを含有し、値は請求項５に従って決定される、請求項１〜５の各々に記載の組成物。
【請求項７】
ＰＣＢマーカを実質的に含まず、どんな場合も、０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度の前記ＰＣＢマーカを含有する、請求項１〜６の各々に記載の組成物。
【請求項８】
ポリ臭化ジフェニルエーテル（ＰＢＤＥ）を実質的に含まず、どんな場合も、０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度のこのようなＰＢＤＥを含有する、請求項１〜７の各々に記載の組成物。
【請求項９】
多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）を実質的に含まず、どんな場合も、０．１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度の、ベンゾ［ａ］ピレンのマーカ物質として表されるこのようなＰＡＨを含有する、請求項１〜８の各々に記載の組成物。
【請求項１０】
２，２−ビス−（ｐ−ジクロロフェニル）−エタン（ＤＤＥ）および／または２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−１，１−ジクロロエタン（ＤＤＤ）および／または２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−１，１，１−トリクロロエタン（ＤＤＴ）および／またはポリブロモビフェニル（ＰＢＢ）および／またはヘキサクロロベンゼンおよび／またはヘキサクロロシクロヘキサンの異性体を含む残留性有機環境汚染物質（ＰＯＰ）を実質的に含まず、どんな場合も、０．２ｎｇ／ｇ以下の合計濃度の前記ＤＤＥおよび／またはＤＤＤおよび／またはＤＤＴ、０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度の前記ＰＢＢ、０．０１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度の前記ヘキサクロロベンゼン、０．０１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度の前記ヘキサクロロシクロヘキサンの異性体を含有する、請求項１〜９の各々に記載の組成物。
【請求項１１】
前記脂肪酸は、海洋由来であり、特に、水産養殖魚を含む魚油由来、またはクリルオイル由来、または藻類由来、または選択した菌株の藻類もしくはその他微生物の「単細胞発酵」由来であり、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、Ｃ２０：５  ｎ−３、全シス）および／またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｃ２２：６  ｎ−３、全シス）またはその塩もしくはエステルを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記エステルは、好ましくはＣ１〜Ｃ１〜Ｃ３のアルキルエステルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記エステルは、グリセリルモノエステルおよび／またはジエステルおよび／またはトリエステルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記アルキルエステルは、エチルエステルであり、ＥＰＡもしくはＥＰＡエチルエステルまたはＤＨＡもしくはＤＨＡエチルエステルまたはそれらの合計の濃度は、組成物の１５〜１００重量％、好ましくは５０〜１００重量％である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
ヨーロッパ薬局方（ＥＰ）の指定に従い、ＥＰＡエチルエステルまたはＤＨＡエチルエステルの重量基準の濃度は、８０％以上、好ましくは９０％以上であるか、またはそれらの合計は８０％以上、好ましくは８４％以上であって、ＥＰＡエチルエステルの濃度は４０％以上、ＤＨＡエチルエステルの濃度は３４％以上であり、全オメガ３エチルエステルの濃度の合計は９０％以上である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
米国薬局方（ＵＳＰ）の指定に従い、ＥＰＡエチルエステルおよびＤＨＡエチルエステルの重量基準の合計濃度は、８０．０％〜８８．０％であって、ＥＰＡエチルエステルの濃度は４３．０％〜４９．５％、ＤＨＡエチルエステルの濃度は３４．７％〜４０．３％であり、全オメガ３エチルエステルの濃度の合計は９０％以上である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
ＥＰＡまたはＤＨＡまたはそれらの合計の濃度は、組成物の１５〜１００重量％、好ましくは５０〜１００重量％である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１２および１４〜１６の各々に記載の組成物の調製方法であって、
ａ）オメガ３および／またはオメガ６系列の少なくとも１８個の炭素原子ならびに２〜６個の二重結合を有するアシル基を少なくとも含む、海洋、水産養殖、藻類または発酵由来を含む動物または植物由来の油または脂肪を、アルカリ加水分解もしくは酸加水分解するか、または所望により酵素触媒反応下で好ましくはＣ１〜Ｃ３の脂肪族アルコールとエステル交換する段階と、
ｂ）前記加水分解またはエステル交換の生成物に尿素への完全な包接を用いた精製操作を行い、単離され洗浄された包接錯体を得る段階と、
ｃ）前記包接錯体を水に溶解し、前記溶解後に形成された油相の分離によって、または前記油相を水と混合不可能な有機溶媒、典型的にはヘキサンで抽出し、次に前記溶媒を蒸発乾固することによって、または超臨界流体、特に二酸化炭素により前記包接錯体から直接抽出することによって、請求項１〜１２および１４〜１６の各々に記載の前記組成物を得る段階と
を含む、方法。
【請求項１９】
蒸留または分子蒸留または「短行程」蒸留によって、飽和成分および低不飽和度のその他成分との尿素の漸進的な錯化による分別、ならびに生成された錯体の除去によって、また向流抽出、硝酸銀水溶液抽出、超臨界流体を用いた抽出および／または分別、その後の前記段階ｂ）の尿素中への包接を行うことによって、段階ａ）の前記加水分解またはエステル交換から得られた生成物に、多価不飽和成分の濃縮の操作を行う段階ａ’）を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記段階ｃ）で回収した前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルに、分子／短行程蒸留または超臨界流体を用いた抽出を行う段階ｄ）を含む、請求項１８および１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の多価不飽和長鎖脂肪酸またはその塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のエステルを含む、組成物の精製方法であって、
ａ）１重量部の前記組成物を、沸点で、所望により最大２０％の水を含む極性溶媒中、好ましくは、メタノールまたはエタノール等のプロトン性溶媒中で少なくとも３重量部の尿素を用いて処理し、前記組成物を含有する全尿素包接錯体を生成する段階と、
ｂ）冷却して前記尿素錯体を沈殿させ、前記尿素錯体を濾過または遠心分離により単離し、事前に尿素を飽和させた前記極性溶媒で洗浄する段階と、
ｃ）前記尿素包接錯体を水に溶解し、前記溶解後に形成された油相の分離によって、または前記油相を水と混合不可能な有機溶媒、典型的にはヘキサンで抽出し、次に前記溶媒を蒸発乾固することによって、または超臨界流体、特に二酸化炭素により前記尿素包接錯体から直接抽出することによって、請求項１〜１２および１４〜１６のいずれか一項に記載の前記組成物を得る段階と
を含む、方法。
【請求項２２】
動物および／または植物由来の前記多価長鎖不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルを含む前記組成物は、海洋由来であり、魚油、おそらくは水産養殖魚、もしくはクリルオイルに由来するか、またはさらに藻類もしくはその他油糧微生物に由来するか、または選択された菌株の藻類もしくは組換え株を含むその他微生物の単細胞発酵に由来し、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡまたはその塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルを含み、あるいは種子油または植物由来の他の油脂に由来し、１５％以上の多価不飽和成分の平均濃度を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物が１５〜３０％の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、３段階で連続して合計３〜６重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項２１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物が３１〜８０％の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、２段階で連続して合計３〜５重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項２１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記組成物が８０％超の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、１段階で３〜４重量部、好ましくは４重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項２１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
多価不飽和長鎖脂肪酸を含む前記組成物は、前記組成物の１５〜１００％、好ましくは５０〜１００％のＥＰＡエチルエステルもしくはＤＨＡエチルエステルの濃度またはそれらの合計の濃度を有し、あるいは、２つのエチルエステルの合計濃度は８０％以上であって、ＥＰＡエチルエステルは４０％以上、ＤＨＡエチルエステルは３４％以上、全オメガ３酸エチルエステルの合計濃度は９０％以上である、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、極性溶媒として、４．５〜７重量部の量のメタノールまたは４５〜６５重量部の量のエタノールを使用することによって行われる、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
段階ｃ）による、水への溶解後の、水と混合不可能な有機溶媒を用いて分離された前記油相の抽出およびその後の前記溶媒の蒸発乾固により、残渣が生じ、残渣は分子蒸留／短行程蒸留される、請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
濾過または遠心分離後に、前記尿素包接錯体を単離する前記段階ｂ）から得られた溶液は、濃縮乾固されて、フラン酸、フィタン酸、プリスタン酸、またはその塩もしくは好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステル、およびスクアレンに富む組成物を得、前記組成物は、有機溶媒または二酸化炭素等の超臨界状態のその他流体を用いた分子蒸留および／またはクロマトグラフィー操作等の技術による前記化合物の単離に有用である、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
多価不飽和特性を有するかまたは具体的にはオメガ３系列に属する長鎖脂肪酸またはその誘導体が高含有量であることにより、食品成分、栄養補助食品およびダイエット補助食品、特別な医療目的の食品（機能性食品）、動物および水産養殖で使用するための食品、特殊調製粉乳、化粧品および医薬品として有用な製剤の調製のための、または対応するモノ−、ジ−またはトリグリセリド等のその他誘導体の化学的経路により調製するための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３１】
オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の前記長鎖多価不飽和脂肪酸のモノ−、ジ−またはトリグリセリドの化学的経路または好ましくは酵素的経路による調製のための、請求項１１〜１２および１４〜１６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３２】
所望により、その他薬物、特にスタチンとも組み合わせた、心臓の危険因子、心臓血管および心循環系疾患、例えば、高血圧、凝固異常および血小板凝集、特に家族性および遺伝性の重度および中程度の高トリグリセリド血症（それぞれ５００ｍｇ／ｄｌ超および２００ｍｇ／ｄｌ超）および高コレステロール血症の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
心臓、心臓血管、および心循環系疾患、例えば、冠動脈アテローム性動脈硬化疾患、ならびに心筋梗塞および脳梗塞を含む心臓および大脳の虚血状態の予防および治療における、また心筋梗塞、不整脈ならびに心房および／または心室細動を含む心リズムの開始および伝播が関与する電気由来の疾患、ならびに心不全および代償不全ならびに／またはうっ血性心不全のような心ポンプの機械的欠陥による疾患後の突然心臓死のリスクの低減における使用のための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
てんかんを含む中枢神経系（ＣＮＳ）障害、さまざまな形態のうつ病、双極性障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）による小児疾患、学習および記憶障害、いくつかの形態の統合失調症、アルツハイマー病およびその他さまざまな形態の認知症の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
網膜症および眼球の乾燥症状、メタボリックシンドローム、代謝および肥満に関連する疾患、２型糖尿病、肝機能異常、結合組織および関節の疾患、炎症疾患、自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、および腫瘍疾患の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の組成物および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的製剤。
【請求項３７】
前記エステルは、好ましくはＣ１〜Ｃ３のアルキルエステルであり、組成物は請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の方法により得られる、請求項１〜１２および１４〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【手続補正書】
【提出日】平成29年4月26日(2017.4.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはエステルを含む組成物であって、前記組成物は、合計濃度が０．０１％以下、すなわち１００ｐｐｍ以下のフラン脂肪酸またはその対応する塩もしくはエステルを含み、前記組成物は、
ａ）１重量部の前記組成物を、沸点で、所望により最大２０％の水を含む極性溶媒中、好ましくは、メタノールまたはエタノール等のプロトン性溶媒中で少なくとも３重量部の尿素を用いて処理し、前記組成物を含有する尿素包接錯体を生成する段階と、
ｂ）冷却して前記尿素錯体を沈殿させ、前記尿素錯体を濾過により単離し、事前に尿素を飽和させた前記極性溶媒で洗浄する段階と、
ｃ）前記尿素包接錯体を水に溶解し、前記溶解後に形成された油相を、前記油相を水と混合不可能な有機溶媒、典型的にはヘキサンで抽出し、次に前記溶媒を蒸発乾固することによって、または超臨界流体、特に二酸化炭素により前記尿素包接錯体から直接抽出することによって分離する段階と
を含む精製方法によって得られる、組成物。
【請求項２】
前記組成物は、０．００１％以下、すなわち、１０ｐｐｍ以下の合計濃度でフィタン酸および／またはプリスタン酸またはそれらの対応する塩もしくはエステルを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物は、０．００１％以下、すなわち、１０ｐｐｍ以下の濃度でスクアレンを含む、請求項１および２の各々に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物は、１．０％以下の濃度で、請求項１に定義した前記長鎖多価不飽和脂肪酸または塩もしくはエステルのオリゴマーを含む、請求項１〜３の各々に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物は、０．１ｐｇ／ｇ以下の合計濃度でポリ塩化ジベンゾパラダイオキシン（ＰＣＤＤ）およびポリ塩化ジベンゾフラン（ＰＣＤＦ）を含有し、値はＷＨＯの毒性等価係数（ＴＥＦ）に従って決定され、毒性等量（ＴＥＱ）として表される、請求項１〜４の各々に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物は、０．５ｐｇ／ｇ以下の合計濃度でＰＣＤＤ、ＰＣＤＦ、およびダイオキシン様ポリ塩化ビフェニル（ＤＬ−ＰＣＢ）を含有し、値は請求項５に従って決定される、請求項１〜５の各々に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物は、０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度でＰＣＢマーカを含有する、請求項１〜６の各々に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物は、０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度でポリ臭化ジフェニルエーテル（ＰＢＤＥ）を含有する、請求項１〜７の各々に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物は、０．１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度で、ベンゾ［ａ］ピレンのマーカ物質として表される多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）を含有する、請求項１〜８の各々に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物は、２，２−ビス−（ｐ−ジクロロフェニル）−エタン（ＤＤＥ）および／または２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−１，１−ジクロロエタン（ＤＤＤ）および／または２，２−ビス−（ｐ−クロロフェニル）−１，１，１−トリクロロエタン（ＤＤＴ）および／またはポリブロモビフェニル（ＰＢＢ）および／またはヘキサクロロベンゼンおよび／またはヘキサクロロシクロヘキサンの異性体等の残留性有機環境汚染物質（ＰＯＰ）を含み、前記ＤＤＥおよび／またはＤＤＤおよび／またはＤＤＴは０．２ｎｇ／ｇ以下の合計濃度であり、前記ＰＢＢは０．５ｎｇ／ｇ以下の合計濃度であり、前記ヘキサクロロベンゼンは０．０１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度であり、前記ヘキサクロロシクロヘキサンの異性体は０．０１ｎｇ／ｇ以下の合計濃度である、請求項１〜９の各々に記載の組成物。
【請求項１１】
前記脂肪酸は、海洋由来であり、特に、水産養殖魚を含む魚油由来、またはクリルオイル由来、またはさらに藻類およびその他油糧微生物由来、または選択した菌株の藻類またはその他微生物の「単細胞発酵」由来であり、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、Ｃ２０：５  ｎ−３、全シス）および／またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、Ｃ２２：６  ｎ−３、全シス）またはその塩もしくはエステルを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記エステルは、好ましくはＣ１〜Ｃ１〜Ｃ３のアルキルエステルである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記アルキルエステルは、エチルエステルであり、ＥＰＡもしくはＥＰＡエチルエステルまたはＤＨＡもしくはＤＨＡエチルエステルまたはそれらの合計の濃度は、組成物の１５〜１００重量％、好ましくは５０〜１００重量％である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
ヨーロッパ薬局方（ＥＰ）の指定に従い、ＥＰＡエチルエステルまたはＤＨＡエチルエステルの重量基準の濃度は、８０％以上、好ましくは９０％以上であるか、またはそれらの合計は８０％以上、好ましくは８４％以上であって、ＥＰＡエチルエステルの濃度は４０％以上、ＤＨＡエチルエステルの濃度は３４％以上であり、全オメガ３エチルエステルの濃度の合計は９０％以上である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
米国薬局方（ＵＳＰ）の指定に従い、ＥＰＡエチルエステルおよびＤＨＡエチルエステルの重量基準の合計濃度は、８０．０％〜８８．０％であって、ＥＰＡエチルエステルの濃度は４３．０％〜４９．５％、ＤＨＡエチルエステルの濃度は３４．７％〜４０．３％であり、全オメガ３エチルエステルの濃度の合計は９０％以上である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の前記長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはエステルは、オメガ３および／またはオメガ６系列の少なくとも１８個の炭素原子および２〜６個の二重結合を有するアシル基を少なくとも含む、海洋、水産養殖、藻類または発酵由来を含む動物または植物由来の油または脂肪を、アルカリ加水分解もしくは酸加水分解するか、または所望により酵素触媒反応下で好ましくはＣ１〜Ｃ３の脂肪族アルコールとエステル交換し、次に請求項１に開示の精製方法にかけることによって得られる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記加水分解またはエステル交換から得られる前記長鎖多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはエステルは、蒸留または分子蒸留または「短行程」蒸留によって、飽和成分および低不飽和度のその他成分との尿素の漸進的な錯化による分別、ならびに生成された錯体の除去によって、また向流抽出、硝酸銀水溶液抽出、超臨界流体を用いた抽出および／または分別、その後、請求項１に従って前記段階ａ）の尿素中への包接を行うことによって、多価不飽和成分の濃縮の操作にかけられる、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記方法は、前記段階ｃ）で回収した前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルに、分子／短行程蒸留または超臨界流体を用いた抽出を行う段階ｄ）を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が１５〜３０％の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、３段階で連続して合計３〜６重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が３１〜８０％の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、２段階で連続して合計３〜５重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が８０％超の前記多価不飽和脂肪酸またはその塩もしくはアルキルエステルの含有量を有し、尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、１重量部の前記組成物を、１段階で３〜４重量部、好ましくは４重量部の尿素を用いて処理することによって実行される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
尿素を用いた前記組成物の前記段階ａ）の処理は、極性溶媒として、４．５〜７重量部の量のメタノールまたは４５〜６５重量部の量のエタノールを使用することによって行われる、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
多価不飽和特性を有するかまたは具体的にはオメガ３系列に属する長鎖脂肪酸またはその誘導体が高含有量であることにより、食品成分、栄養補助食品およびダイエット補助食品、特別な医療目的の食品（機能性食品）、動物および水産養殖で使用するための食品、特殊調製粉乳、化粧品および医薬品として有用な製剤の調製のための、または対応するモノ−、ジ−もしくはトリグリセリド等のその他誘導体の化学的経路により調製するための、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項２４】
オメガ３および／またはオメガ６系列に属し、２〜６個の二重結合および１８個以上の炭素原子を有する、動物および／または植物由来の前記長鎖多価不飽和脂肪酸のモノ−、ジ−もしくはトリグリセリドの化学的経路または好ましくは酵素的経路による調製のための、請求項１１〜１５の各々に記載の組成物の使用。
【請求項２５】
所望により、その他薬物、特にスタチンとも組み合わせた、心臓の危険因子、心臓血管および心循環系疾患、例えば、高血圧、凝固異常および血小板凝集、特に家族性および遺伝性の重度および中程度の高トリグリセリド血症（それぞれ５００ｍｇ／ｄｌ超および２００ｍｇ／ｄｌ超）および高コレステロール血症の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１５の各々に記載の組成物。
【請求項２６】
心臓、心臓血管、および心循環系疾患、例えば、冠動脈アテローム性動脈硬化疾患、ならびに心筋梗塞および脳梗塞を含む心臓および大脳の虚血状態の予防および治療における、また心筋梗塞、不整脈ならびに心房および／または心室細動を含む心リズムの開始および伝播が関与する電気由来の疾患、ならびに心不全および代償不全ならびに／またはうっ血性心不全のような心ポンプの機械的欠陥による疾患後の突然心臓死のリスクの低減における使用のための、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
てんかんを含む中枢神経系（ＣＮＳ）障害、さまざまな形態のうつ病、双極性障害、注意欠陥多動障害（ＡＤＨＤ）による小児疾患、学習および記憶障害、いくつかの形態の統合失調症、アルツハイマー病およびその他さまざまな形態の認知症の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
網膜症および眼球の乾燥症状、メタボリックシンドローム、代謝および肥満に関連する疾患、２型糖尿病、肝機能異常、結合組織および関節の疾患、炎症疾患、自己免疫疾患、潰瘍性大腸炎、乾癬、および腫瘍疾患の予防および治療における使用のための、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の組成物および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的製剤。
【国際調査報告】
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