(57)【要約】本開示は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）リボ核酸（ＲＮＡ）ワクチン、ならびに当該ワクチンを使用する方法及び当該ワクチンを含む組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、薬学的に許容される担体とを含む、
ＨＳＶワクチン。
【請求項２】
前記少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｂまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｃまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｄまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｅまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質ＩＳまたはその免疫原性断片、及びＨＳＶ−２  ＩＣＰ４タンパク質またはその免疫原性断片から選択される、請求項１に記載のＨＳＶワクチン。
【請求項３】
前記少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｃまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｄまたはその免疫原性断片、及びＨＳＶ−２糖タンパク質ＣとＨＳＶ−２糖タンパク質Ｄまたはそれらの免疫原性断片の組み合わせから選択される、請求項１に記載のＨＳＶワクチン。
【請求項４】
ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｂまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｃまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｄまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｅまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質ＩＳまたはその免疫原性断片、及びＨＳＶ−２  ＩＣＰ４タンパク質またはその免疫原性断片から選択される、少なくとも２つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項５】
ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｂまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｃまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｄまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｅまたはその免疫原性断片、ＨＳＶ−２糖タンパク質ＩＳまたはその免疫原性断片、及びＨＳＶ−２  ＩＣＰ４タンパク質またはその免疫原性断片から選択される、少なくとも１つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームをそれぞれ有する少なくとも２つのＲＮＡポリヌクレオチドを含み、前記オープンリーディングフレームの１つによってコードされる前記ｈＭＰＶ抗原性ポリペプチドは、前記オープンリーディングフレームの他のものによってコードされる前記ｈＭＰＶ抗原性ポリペプチドとは異なる、請求項１〜４のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項６】
前記少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、配列番号２４〜５３または６６〜７７のうちのいずれか１つによって特定されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項７】
前記少なくとも１つのＲＮＡポリペプチドが、配列番号１〜２３もしくは５４〜６４のうちのいずれか１つによって特定される核酸配列によってコードされ、かつ／または前記少なくとも１つのＲＮＡポリペプチドが、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つによって特定される核酸配列を含むか、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つによって特定される核酸配列の断片を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項８】
前記少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、配列番号２４〜５３または６６〜７７のうちのいずれか１つによって特定されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項９】
前記少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、配列番号２４〜５３または６６〜７７のうちのいずれか１つによって特定されるアミノ酸配列に対して９５％〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、配列番号２４〜５３または６６〜７７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片が、膜融合活性を有し、細胞受容体に結合し、ウイルスと細胞膜との融合を引き起こし、かつ／またはウイルスの感染対象細胞への結合に関与する、請求項１〜８のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１１】
前記少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、配列番号２４〜５３または６６〜７７のアミノ酸配列に対して９０％〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片が、膜融合活性を有し、細胞受容体に結合し、ウイルスと細胞膜との融合を引き起こし、かつ／またはウイルスの感染対象細胞への結合に関与する、請求項１〜８のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドが、野生型ｍＲＮＡ配列に対して８０％未満の同一性を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドが、野生型ｍＲＮＡ配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するが、野生型ｍＲＮＡ配列を含まない、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、膜融合活性を有し、細胞受容体に結合し、ウイルスと細胞膜との融合を引き起こし、かつ／またはウイルスの感染対象細胞への結合に関与する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１５】
前記少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドが、少なくとも１つの化学修飾を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１６】
前記化学修飾が、プソイドウリジン、Ｎ１−メチルプソイドウリジン、Ｎ１−エチルプソイドウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、５−メチルウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５−メトキシウリジン及び２’−Ｏ−メチルウリジンから選択される、請求項１５に記載のワクチン。
【請求項１７】
前記化学修飾がウラシルの５位にある、請求項１５または１６に記載のワクチン。
【請求項１８】
前記化学修飾がＮ１−メチルプソイドウリジンまたはＮ１−エチルプソイドウリジンである、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１９】
前記オープンリーディングフレーム中のウラシルの少なくとも８０％が化学修飾を有する、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項２０】
前記オープンリーディングフレーム中のウラシルの少なくとも９０％が化学修飾を有する、請求項１９に記載のワクチン。
【請求項２１】
前記オープンリーディングフレーム中のウラシルの１００％が化学修飾を有する、請求項２０に記載のワクチン。
【請求項２２】
少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドが少なくとも１つの５’末端キャップを更にコードする、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項２３】
前記５’末端キャップが７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐである、請求項２２に記載のワクチン。
【請求項２４】
少なくとも１つの抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片が、ＨｕＩｇＧｋシグナルペプチド（ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ、配列番号７８）、ＩｇＥ重鎖ε−１シグナルペプチド（ＭＤＷＴＷＩＬＦＬＶＡＡＡＴＲＶＨＳ、配列番号７９）、日本脳炎ＰＲＭシグナル配列（ＭＬＧＳＮＳＧＱＲＶＶＦＴＩＬＬＬＬＶＡＰＡＹＳ、配列番号８０）、ＶＳＶｇタンパク質シグナル配列（ＭＫＣＬＬＹＬＡＦＬＦＩＧＶＮＣＡ、配列番号８１）及び日本脳炎ＪＥＶシグナル配列（ＭＷＬＶＳＬＡＩＶＴＡＣＡＧＡ、配列番号：８２）から選択されるシグナルペプチドに融合された、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項２５】
前記シグナルペプチドが、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドのＮ末端に融合された、請求項２４に記載のワクチン。
【請求項２６】
前記シグナルペプチドが、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドのＣ末端に融合された、請求項２４に記載のワクチン。
【請求項２７】
前記抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片が、変異のあるＮ−結合型グリコシル化部位を含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項２８】
ナノ粒子中に製剤化された、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項２９】
前記ナノ粒子が脂質ナノ粒子である、請求項２８に記載のワクチン。
【請求項３０】
前記ナノ粒子が５０〜２００ｎｍの平均直径を有する、請求項２８または２９に記載のワクチン。
【請求項３１】
前記脂質ナノ粒子が、カチオン性脂質と、ＰＥＧ修飾脂質と、ステロールと、非カチオン性脂質とを含む、請求項２９または３０に記載のワクチン。
【請求項３２】
前記脂質ナノ粒子担体が、カチオン性脂質約２０〜６０％、ＰＥＧ修飾脂質０．５〜１５％、ステロール２５〜５５％及び非カチオン性脂質２５％のモル比を有する、請求項３１記載のワクチン。
【請求項３３】
前記カチオン性脂質がイオン性カチオン性脂質であり、前記非カチオン性脂質が中性脂質であり、前記ステロールがコレステロールである、請求項３１または３２に記載のワクチン。
【請求項３４】
前記カチオン性脂質が、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）から選択される、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項３５】
前記ナノ粒子が、０．４未満の多分散値を有する、請求項１〜３４のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項３６】
前記ナノ粒子が、中性のｐＨ値で中性の正味電荷を有する、請求項１〜３５のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項３７】
アジュバントを更に含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項３８】
前記アジュバントがフラジェリンタンパク質またはフラジェリンペプチドである、請求項３７に記載のワクチン。
【請求項３９】
前記フラジェリンタンパク質またはフラジェリンペプチドが、配列番号８９、１２５または１２６のうちのいずれか１つによって特定されるアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載のワクチン。
【請求項４０】
前記オープンリーディングフレームがコドン最適化された、請求項１〜３９のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項４１】
多価である、請求項１〜４０のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項４２】
抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効な量で製剤化された、請求項１〜４１のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項４３】
対象において抗原特異的免疫応答を誘導する方法であって、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のワクチンを、前記対象において抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効な量で前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項４４】
前記抗原特異的免疫応答がＴ細胞の応答またはＢ細胞の応答を含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記対象が前記ワクチンの単回用量の投与を受ける、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記対象が前記ワクチンのブースター用量の投与を受ける、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記ワクチンが、皮内注射または筋肉注射によって前記対象に投与される、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価が、対照と比較して、少なくとも１ｌｏｇ増加する、請求項４３〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価が、対照と比較して、１〜３ｌｏｇ増加する、請求項４３〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価が、対照と比較して、少なくとも２倍増加する、請求項４３〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価が、対照と比較して、少なくとも２〜１０倍増加する、請求項４３〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記対照が、前記ウイルスに対するワクチンの投与を受けたことがない対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価である、請求項４８〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記対照が、前記ウイルスに対する弱毒化生ワクチンまたは不活化ワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価である、請求項４８〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記対照が、前記ウイルスに対する組み換えタンパク質ワクチンまたは精製されたタンパク質ワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価である、請求項４８〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
前記対照が、前記ウイルスに対するＶＬＰワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価である、請求項４８〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記有効量が、前記ウイルスに対する組み換えタンパク質ワクチンまたは精製されたタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／２に減らした用量と同等の用量であり、前記対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価が、前記ウイルスに対する組み換えタンパク質ワクチンまたは精製されたタンパク質ワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価とそれぞれ同等である、請求項４３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記有効量が、前記ウイルスに対する弱毒化生ワクチンまたは不活化ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／２に減らした用量と同等の用量であり、前記対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価が、前記ウイルスに対する弱毒化生ワクチンまたは不活化ワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価とそれぞれ同等である、請求項４３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記有効量が、前記ウイルスに対するＶＬＰワクチンの標準治療用量を少なくとも１／２に減らした用量と同等の用量であり、前記対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価が、前記ウイルスに対するＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である、請求項４３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記有効量が５０μｇ〜１０００μｇの総用量である、請求項４３〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記有効量が、前記対象に合計２回投与される、２５μｇ、１００μｇ、４００μｇまたは５００μｇの用量である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記ウイルスに対する前記ワクチンの有効性が６５％を超える、請求項４３〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ワクチンが、最大２年間、前記ウイルスに対して前記対象を免疫にする、請求項４３〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ワクチンが、２年を超える間、前記ウイルスに対して前記対象を免疫にする、請求項４３〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記対象が前記ウイルスに曝露したことがある、前記対象が前記ウイルスに感染している、または前記対象が前記ウイルスによる感染リスクがある、請求項４３〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記対象が免疫不全状態である、請求項４３〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
対象において抗原特異的免疫応答を誘導する方法にて使用するための請求項１〜４２のいずれか一項に記載のワクチンであって、前記方法は、前記対象において抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効な量で前記ワクチンを前記対象に投与することを含む、前記ワクチン。
【請求項６７】
対象において抗原特異的免疫応答を誘導する方法にて使用するための薬剤の製造における請求項１〜４２のいずれか一項に記載のワクチンの使用であって、前記方法は、前記対象において抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効な量で前記ワクチンを前記対象に投与することを含む、前記使用。
【請求項６８】
請求項１〜４３のいずれか一項に記載のワクチンの少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドをコードする、操作された核酸。
【請求項６９】
対象のワクチン接種に使用するための医薬組成物であって、
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原をコードするｍＲＮＡを有効量で含み、
前記有効量は、投与後１〜７２時間に前記対象の血清中で測定したときに検出可能な抗原レベルをもたらすのに十分なものである、前記医薬組成物。
【請求項７０】
前記抗原のカットオフ指数が１〜２である、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
対象のワクチン接種に使用するための医薬組成物であって、
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原をコードするｍＲＮＡを有効量で含み、
前記有効量は、投与後１〜７２時間に前記対象の血清中で測定したときに、前記抗原に対する中和抗体によってもたらされる１，０００〜１０，０００の中和力価をもたらすのに十分なものである前記医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき、２０１５年１０月２２日に出願された米国特許仮出願第６２／２４５，１５９号、２０１５年１０月２８日に出願された米国特許仮出願第６２／２４７，５７６号、及び２０１５年１０月２９日に出願された米国特許仮出願第６２／２４８，２５２号の利益を主張するものであり、各出願は、その全体が参照により本明細書に援用される。本出願はまた、米国特許法第１１９条（ｅ）に基づき、２０１５年１０月２２日に出願された米国特許仮出願第６２／２４５，０３１号の利益を主張するものであり、当該出願は、その全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）は、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅファミリーの線状二本鎖ＤＮＡウイルスである。単純ヘルペスウイルスファミリーのＨＳＶ−１及びＨＳＶ−２として知られる２つのメンバーは、ヒトに感染する。ＨＳＶ感染症の症状には、口腔、唇及び／または生殖器の皮膚または粘膜における水疱の形成がある。ＨＳＶは、神経浸潤性ウイルスであり、感染個体において、ウイルス再活性化による突発性回帰性エピソードを引き起こし得る。ＨＳＶは、ウイルス活性化期間中の皮膚の感染領域と接触することによって伝染する。
【０００３】
デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）ワクチン接種は、ＨＳＶ抗原などの外来抗原に対する体液性及び細胞性免疫応答を刺激するために使用される１つの技術である。遺伝子操作されたＤＮＡ（例えば、ネイキッドプラスミドＤＮＡ）を生きている宿主に直接注入すると、その細胞のうちの少数が抗原を直接産生し、その結果、防御免疫応答が生じる。しかしながら、この技術では、癌遺伝子の活性化または癌抑制遺伝子の抑制を引き起こし得る挿入突然変異誘発の可能性を含む、潜在的な問題が生じる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
修飾されたＲＮＡ（例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））が、身体の細胞機構に安全に向かい、天然タンパク質から抗体及び細胞の内外で治療活性を有し得る他の完全に新しいタンパク質構築物までに及ぶ、目的とするほぼあらゆるタンパク質を生成することができるという知見に基づいた、リボ核酸（ＲＮＡ）ワクチンが本明細書で提供される。本開示のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを使用すると、例えば、挿入突然変異誘発の可能性というリスクを負うことなく、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に対して、細胞性免疫と体液性免疫の両方を含むバランスの取れた免疫応答を誘導することができる。
【０００５】
ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、感染症の罹患率またはアンメットメディカルニーズの程度もしくはレベルに応じて、様々な環境で利用することができる。ＲＮＡワクチンは、様々な遺伝子型、菌株及び分離株のＨＳＶを治療及び／または予防するために利用することができる。ＲＮＡワクチンは、市販の抗ウイルス治療法と比べて、抗体力価がより大きく、より早い応答をもたらす点で、優れた特性を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡワクチンは、ＲＮＡワクチンが天然の細胞機構を利用することから、翻訳の際に適切なタンパク質コンフォメーションを生じるように良好に設計されると考えられる。ｅｘ  ｖｉｖｏで製造され、望ましくない細胞性応答を惹起し得る従来型ワクチンとは異なり、ＲＮＡワクチンは、より自然な方法で、細胞系にもたらされる。
【０００６】
本開示のいくつかの実施形態は、少なくとも１つの単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片（例えば、ＨＳＶに対する免疫応答を誘導することができる免疫原性断片）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む、ＨＳＶワクチンを提供する。
【０００７】
本開示のいくつかの実施形態は、（ｉ）少なくとも１つの単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片（例えば、ＨＳＶに対する免疫応答を誘導することができる免疫原性断片）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、（ｉｉ）薬学的に許容される担体とを含む、ＨＳＶワクチンを提供する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｂ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｃ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｅ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｉである。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｂ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｃ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｅ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質ＩまたはＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）ＩＣＰ４タンパク質に対して、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有する。
【０００９】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗原ポリペプチドは、非糖原性ポリペプチド、例えば、限定するものではないが、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）ＩＣＰ４タンパク質、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）ＩＣＰ０タンパク質、またはこれらの免疫原性断片である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｂ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｃ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｅ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質ＩまたはＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）ＩＣＰ４タンパク質に対して、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有する。
【００１１】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｃ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄ、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質ＣとＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄの組み合わせ、またはこれらの免疫原性断片である。
【００１２】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含み、水酸化アルミニウム及び３−Ｏ−脱アシル化形態のモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）とともに製剤化される。いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、筋肉注射用に製剤化される。
【００１３】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して９０％を超える同一性を有し、かつ膜融合活性を有する、抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して９５％を超える同一性を有し、かつ膜融合活性を有する、抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して９６％を超える同一性を有し、かつ膜融合活性を有する、抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して９７％を超える同一性を有し、かつ膜融合活性を有する、抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して９８％を超える同一性を有し、かつ膜融合活性を有する、抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して９９％を超える同一性を有し、かつ膜融合活性を有する、抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して９５〜９９％の同一性を有し、かつ膜融合活性を有する、抗原性ポリペプチドをコードする。
【００１４】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗原性ポリペプチドをコードし、かつコドン最適化されたｍＲＮＡである。
【００１５】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗原性ポリペプチドをコードし、野生型ｍＲＮＡ配列に対して８０％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗原性ポリペプチドをコードし、野生型ｍＲＮＡ配列に対して７５％、８５％または９５％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗原性ポリペプチドをコードし、野生型ｍＲＮＡ配列に対して５０〜８０％、６０〜８０％、４０〜８０％、３０〜８０％、７０〜８０％、７５〜８０％または７８〜８０％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗原性ポリペプチドをコードし、野生型ｍＲＮＡ配列に対して４０〜８５％、５０〜８５％、６０〜８５％、３０〜８５％、７０〜８５％、７５〜８５％または８０〜８５％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗原性ポリペプチドをコードし、野生型ｍＲＮＡ配列に対して４０〜９０％、５０〜９０％、６０〜９０％、３０〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８０〜９０％または８５〜９０％の同一性を有する。
【００１６】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９０％を超える同一性を有する核酸によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９５％を超える同一性を有する核酸によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９６％を超える同一性を有する核酸によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９７％を超える同一性を有する核酸によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９８％を超える同一性を有する核酸によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９９％を超える同一性を有する核酸によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９５〜９９％の同一性を有する核酸によってコードされる。
【００１７】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの配列を有する核酸によってコードされ、野生型ｍＲＮＡ配列に対して８０％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの配列を有する核酸によってコードされ、野生型ｍＲＮＡ配列に対して７５％、８５％または９５％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの配列を有する核酸によってコードされ、野生型ｍＲＮＡ配列に対して５０〜８０％、６０〜８０％、４０〜８０％、３０〜８０％、７０〜８０％、７５〜８０％または７８〜８０％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの配列を有する核酸によってコードされ、野生型ｍＲＮＡ配列に対して４０〜８５％、５０〜８５％、６０〜８５％、３０〜８５％、７０〜８５％、７５〜８５％または８０〜８５％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つの配列を有する核酸によってコードされ、野生型ｍＲＮＡ配列に対して４０〜９０％、５０〜９０％、６０〜９０％、３０〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８０〜９０％または８５〜９０％未満の同一性を有する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９０％を超える同一性を有する核酸を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９５％を超える同一性を有する核酸を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９６％を超える同一性を有する核酸を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９７％を超える同一性を有する核酸を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９８％を超える同一性を有する核酸を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９９％を超える同一性を有する核酸を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの核酸配列に対して９５〜９９％の同一性を有する核酸を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの配列を有する核酸を含み、野生型ｍＲＮＡ配列に対して８０％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの配列を有する核酸を含み、野生型ｍＲＮＡ配列に対して７５％、８５％または９５％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの配列を有する核酸を含み、野生型ｍＲＮＡ配列に対して５０〜８０％、６０〜８０％、４０〜８０％、３０〜８０％、７０〜８０％、７５〜８０％または７８〜８０％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの配列を有する核酸を含み、野生型ｍＲＮＡ配列に対して４０〜８５％、５０〜８５％、６０〜８５％、３０〜８５％、７０〜８５％、７５〜８５％または８０〜８５％未満の同一性を有する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つの配列を有する核酸を含み、野生型ｍＲＮＡ配列に対して４０〜９０％、５０〜９０％、６０〜９０％、３０〜９０％、７０〜９０％、７５〜９０％、８０〜９０％または８５〜９０％未満の同一性を有する。
【００２０】
表３は、対象となる国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のアクセッション番号を提供するものである。「表３のアミノ酸配列」という文言は、表３に列挙される１つ以上のＮＣＢＩアクセッション番号によって特定されるアミノ酸配列を指すことを理解されたい。表３のアクセッション番号によって包含される核酸配列及びアミノ酸配列のそれぞれに対して９５％を超える同一性を有する、核酸配列、アミノ酸配列及びバリアントのそれぞれは、本開示の構築物の範囲内に含まれる。
【００２１】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３または６６〜６７（例えば、表２または３）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有する抗原性ポリペプチドをコードし、野生型ｍＲＮＡ配列に対して８０％を超える同一性を有するが、野生型ｍＲＮＡ配列を含まない。
【００２２】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、細胞受容体に結合する抗原性ポリペプチドをコードする。
【００２３】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、ウイルスと細胞膜の融合を引き起こす抗原性ポリペプチドをコードする。
【００２４】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、ＨＳＶの感染対象細胞への結合に関与する抗原性ポリペプチドをコードする。
【００２５】
いくつかの実施形態において、ワクチンは、アジュバントを更に含む。
【００２６】
本開示のいくつかの実施形態は、少なくとも１つの単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む、ＨＳＶワクチンを提供する。
【００２７】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、少なくとも１つの修飾を有する少なくとも１つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、少なくとも１つの修飾を有する少なくとも１つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、少なくとも１つの５’末端キャップを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含み、かつ脂質ナノ粒子内に製剤化される。
【００２９】
いくつかの実施形態において、５’末端キャップは、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐである。
【００３０】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの化学修飾は、プソイドウリジン、Ｎ１−メチルプソイドウリジン、Ｎ１−エチルプソイドウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５−メトキシウリジン及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される。
【００３１】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質と、ＰＥＧ修飾脂質と、ステロールと、非カチオン性脂質とを含む。いくつかの実施形態において、カチオン性脂質はイオン性カチオン性脂質であり、非カチオン性脂質は中性脂質であり、ステロールはコレステロールである。いくつかの実施形態において、カチオン性脂質は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、ジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ノニルヘニコサ−１２，１５−ジエン−１−アミン（Ｌ６０８）及びＮ，Ｎ−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘプタデカン−８−アミン（Ｌ５３０）からなる群から選択される。
【００３２】
いくつかの実施形態において、脂質は、
【化１】
2018536023.tif 000002
である。
【００３３】
いくつかの実施形態において、脂質は、
【化２】
2018536023.tif 000003
である。
【００３４】
本開示のいくつかの実施形態は、少なくとも１つの単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、オープンリーディングフレーム中のウラシルの少なくとも８０％は化学修飾を有し、任意選択により、脂質ナノ粒子内に製剤化される、ＨＳＶワクチンを提供する。
【００３５】
いくつかの実施形態において、オープンリーディングフレーム中のウラシルの１００％が化学修飾を有する。いくつかの実施形態において、化学修飾は、ウラシルの５位にある。いくつかの実施形態において、化学修飾は、Ｎ１−メチルプソイドウリジンである。いくつかの実施形態において、オープンリーディングフレーム中のウラシルの１００％がウラシルの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを有する。
【００３６】
本開示のいくつかの実施形態は、抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効な量でＨＳＶワクチンを対象に投与することを含む、対象において抗原特異的免疫応答を誘導する方法を提供する。
【００３７】
いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫応答は、Ｔ細胞の応答またはＢ細胞の応答を含む。
【００３８】
いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫応答をもたらす方法は、ＨＳＶワクチンの単回投与を伴う。いくつかの実施形態において、方法は、ブースター用量のＨＳＶワクチンを対象に投与することを更に含む。本発明によるブースターワクチンは、本明細書で開示される任意のＨＳＶワクチンを含み得る。
【００３９】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、皮内注射または筋肉注射によって対象に投与される。
【００４０】
また、対象において抗原特異的免疫応答を誘導する方法にて使用するためのＨＳＶワクチンが本明細書で提供され、この方法は対象において抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効な量でＨＳＶワクチンを対象に投与することを含む。
【００４１】
更に、対象において抗原特異的免疫応答を誘導する方法にて使用するための薬剤の製造におけるＨＳＶワクチンの使用が本明細書で提供され、この方法は、抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効な量でＨＳＶワクチンを対象に投与することを含む。
【００４２】
いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも１ｌｏｇ増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、１〜３ｌｏｇ増加する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも２倍増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも５倍増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも１０倍増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、２〜１０倍増加する。
【００４４】
いくつかの実施形態において、対照は、ＨＳＶワクチンの投与を受けたことがない対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、弱毒化生ＨＳＶワクチンまたは不活化ＨＳＶワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、組み換えまたは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、ＨＳＶウイルス様粒子（ＶＬＰ）ワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。
【００４５】
いくつかの実施形態において、有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／２に減らした用量と同等の用量であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００４６】
いくつかの実施形態において、有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／４に減らした用量と同等の用量であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００４７】
いくつかの実施形態において、有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／１０に減らした用量と同等の用量であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００４８】
いくつかの実施形態において、有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／１００に減らした用量と同等の用量であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００４９】
いくつかの実施形態において、有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／１０００に減らした用量と同等の用量であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を１／２〜１／１０００に減らした用量と同等の用量であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、有効量は、２５μｇ〜１０００μｇ、または５０μｇ〜１０００μｇ、または２５〜２００μｇの総用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、１００μｇの総用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、２５μｇの用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、１００μｇの用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、４００μｇの用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、５００μｇの用量である。
【００５２】
本開示の他の態様は、対象において抗原特異的免疫応答を誘導する方法を提供し、この方法は、対象において抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効な量で本明細書に記載されるＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを対象に投与することを含む。
【００５３】
いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫応答は、抗原性ポリペプチド抗体の産生（の増加）を含む。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも１ｌｏｇ増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、１ｌｏｇ〜３ｌｏｇ増加する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも２倍増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも５倍増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも１０倍増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、２倍〜１０倍増加する。
【００５５】
いくつかの実施形態において、対照は、ＨＳＶワクチンの投与を受けたことがない対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、弱毒化生ＨＳＶワクチンまたは不活化ＨＳＶワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、組み換えまたは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、ＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。
【００５６】
いくつかの実施形態において、対象に投与される有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／２に減らした用量と同等の用量（ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン）であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００５７】
いくつかの実施形態において、対象に投与される有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／４に減らした用量と同等の用量（ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン）であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００５８】
いくつかの実施形態において、対象に投与される有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／１０に減らした用量と同等の用量（ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン）であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００５９】
いくつかの実施形態において、有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／１００に減らした用量と同等である対象への投与用量（ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン）であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００６０】
いくつかの実施形態において、対象に投与される有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／１０００に減らした用量と同等の用量（ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン）であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００６１】
いくつかの実施形態において、対象に投与される有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を１／２〜１／１０００に減らした用量と同等の用量（ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン）であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【００６２】
いくつかの実施形態において、対象に投与される有効量は、５０μｇ〜１０００μｇの総用量（ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン）である。いくつかの実施形態において、有効量は、５０μｇ、１００μｇ、２００μｇ、４００μｇ、８００μｇまたは１０００μｇの総用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、２５μｇの用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、５０μｇの用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、１００μｇの用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、２００μｇの用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、４００μｇの用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、５００μｇの用量である。
【００６３】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶに対するＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効性（または有効率）は、６０％超である。
【００６４】
ワクチン有効性は、標準的な分析を使用して評価することができる（例えば、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．２０１０  Ｊｕｎ  １；２０１（１１）：１６０７−１０参照）。例えば、ワクチン有効性は、二重盲検無作為化比較臨床試験によって決定することができる。ワクチン有効性は、非接種者（ＡＲＵ）と接種者（ＡＲＶ）の試験コホート間の罹患率（ＡＲ）の比例的低下で表すことができ、次式を使用して、接種者群における疾患の相対危険度（ＲＲ）から算出することができる。
有効性＝（ＡＲＵ−ＡＲＶ）／ＡＲＵ×１００、及び
有効性＝（１−ＲＲ）×１００
【００６５】
同様に、ワクチン有効率は、標準的な分析を使用して評価することができる（例えば、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．２０１０  Ｊｕｎ  １；２０１（１１）：１６０７−１０参照）。ワクチン有効率は、ワクチン（ワクチンの有効性の高さが既に証明されている場合もある）が集団においてどの程度疾患を低下させるかの評価である。この尺度は、ワクチン自体だけではなく、予防接種プログラムの利点と有害作用の正味のバランスを比較臨床試験よりも自然な条件下で評価することができる。ワクチン有効率は、ワクチン有効性（効力）に比例するが、集団中の標的群がどの程度良好に免疫化されているかということに影響され、また、入院、外来診察または費用の「実際の」結果に影響を与える他の非ワクチン関連因子にも影響される。例えば、一連の感染症例と適切な対照との間の接種率を比較する、後ろ向き症例対照分析を使用することができる。ワクチン有効率は、ワクチン接種を受けたにもかかわらず感染症を発症したオッズ比（ＯＲ）を使用した率差として表すことができる。
有効率＝（１−ＯＲ）×１００
【００６６】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶに対するＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効性（または有効率）は、６５％超である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶに対するワクチンの有効性（または有効率）は、７０％超である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶに対するワクチンの有効性（または有効率）は、７５％超である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶに対するワクチンの有効性（または有効率）は、８０％超である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶに対するワクチンの有効性（または有効率）は、８５％超である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶに対するワクチンの有効性（または有効率）は、９０％超である。
【００６７】
いくつかの実施形態において、ワクチンは、１年まで（例えば、１回のＨＳＶシーズンの間）、対象をＨＳＶに対して免疫にする。いくつかの実施形態において、ワクチンは、最大２年間、対象をＨＳＶに対して免疫にする。いくつかの実施形態において、ワクチンは、２年を超える間、対象をＨＳＶに対して免疫にする。いくつかの実施形態において、ワクチンは、３年を超える間、対象をＨＳＶに対して免疫にする。いくつかの実施形態において、ワクチンは、４年を超える間、対象をＨＳＶに対して免疫にする。いくつかの実施形態において、ワクチンは、５〜１０年間、対象をＨＳＶに対して免疫にする。
【００６８】
いくつかの実施形態において、対象は、ＨＳＶに曝露したことがあり、ＨＳＶに感染しており、またはＨＳＶによる感染のリスクがある。
【００６９】
いくつかの実施形態において、対象は、免疫不全状態である（免疫系の障害、例えば、免疫系疾患または自己免疫疾患がある）。
【００７０】
いくつかの実施形態において、対象は、約１０歳、約２０歳またはそれ以上（例えば、約１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０歳）の対象である。
【００７１】
いくつかの実施形態において、対象は、約２０歳〜約５０歳の間の年齢（例えば、約２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０歳）の成人である。
【００７２】
本開示のいくつかの態様は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原性ポリペプチドに連結されたシグナルペプチドを含有するＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを提供する。したがって、いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、ＨＳＶ抗原性ペプチドに連結されたシグナルペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含有する。また、本明細書で開示されるＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンをコードする核酸も本明細書で提供される。
【００７３】
いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＩｇＥシグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＩｇＥ  ＨＣ（Ｉｇ重鎖ε−１）シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列ＭＤＷＴＷＩＬＦＬＶＡＡＡＴＲＶＨＳ（配列番号７８）を有する。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＩｇＧκシグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号７９）を有する。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、日本脳炎ＰＲＭシグナル配列（ＭＬＧＳＮＳＧＱＲＶＶＦＴＩＬＬＬＬＶＡＰＡＹＳ、配列番号８０）、ＶＳＶｇタンパク質シグナル配列（ＭＫＣＬＬＹＬＡＦＬＦＩＧＶＮＣＡ、配列番号８１）及び日本脳炎ＪＥＶシグナル配列（ＭＷＬＶＳＬＡＩＶＴＡＣＡＧＡ、配列番号８２）から選択される。
【００７４】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量（例えば、ＨＳＶワクチンの単回用量）は、対照と比較して、２倍〜２００倍（例えば、約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、１８０倍、１９０倍または２００倍）のＨＳＶに対する血清中和抗体の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの単回用量は、対照と比較して、約５倍、５０倍または１５０倍のＨＳＶに対する血清中和抗体の増加をもたらす。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの単回用量は、対照と比較して、約２倍〜１０倍または約４０〜６０倍のＨＳＶに対する血清中和抗体の増加をもたらす。
【００７５】
いくつかの実施形態において、血清中和抗体は、ＨＳＶ  Ａ及び／またはＨＳＶ  Ｂに対するものである。
【００７６】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＭＣ３脂質ナノ粒子またはＬ−６０８脂質ナノ粒子中に製剤化される。
【００７７】
いくつかの実施形態において、方法は、ブースター用量のＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、方法は、第２のブースター用量のＨＳＶワクチンを投与することを更に含む。
【００７８】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の有効性は、フラジェリンアジュバントと組み合わされたとき、特に、１つ以上の抗原をコードするｍＲＮＡが、フラジェリンをコードするｍＲＮＡと組み合わされたとき、著しく向上し得る。
【００７９】
フラジェリンアジュバント（例えば、ｍＲＮＡコード化フラジェリンアジュバント）と組み合わされたＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、市販のワクチン製剤と比べて、抗体力価がより大きく、より早い応答をもたらし得る点で、優れた特性を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、ＲＮＡワクチン、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどは、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンが天然の細胞機構を利用することから、翻訳の際に抗原及びアジュバントの両方にとって適切なタンパク質コンフォメーションを生じるように良好に設計されると考えられる。ｅｘ  ｖｉｖｏで製造され、望ましくない細胞性応答を惹起し得る従来型ワクチンとは異なり、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、より自然な方法で、細胞系にもたらされる。
【００８０】
本開示のいくつかの実施形態は、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片（例えば、抗原性ポリペプチドに対する免疫応答を誘導することができる免疫原性断片）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドと、フラジェリンアジュバントをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）とを含む、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを提供する。
【００８１】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのフラジェリンポリペプチド（例えば、コードされたフラジェリンポリペプチド）は、フラジェリンタンパク質である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのフラジェリンポリペプチド（例えば、コードされたフラジェリンポリペプチド）は、免疫原性フラジェリン断片である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのフラジェリンポリペプチド及び少なくとも１つの抗原性ポリペプチドは、単一のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドによってコードされる。他の実施形態において、少なくとも１つのフラジェリンポリペプチド及び少なくとも１つの抗原性ポリペプチドは、異なるＲＮＡポリヌクレオチドによってそれぞれコードされる。
【００８２】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのフラジェリンポリペプチドは、配列番号８９、１２５または１２６の配列を有するフラジェリンポリペプチドに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％の同一性を有する。
【００８３】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される核酸ワクチンは、化学修飾されている。他の実施形態において、核酸ワクチンは、修飾されていない。
【００８４】
更に他の態様は、第１のウイルス抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを対象に投与することを含み、当該ＲＮＡポリヌクレオチドは、安定化要素を含まず、ワクチンにアジュバントが共配合または共投与されない、対象にワクチン接種を行うための組成物及びその方法を提供する。
【００８５】
他の態様において、本発明は、第１のウイルス抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを対象に投与することを含み、１０μｇ／ｋｇ〜４００μｇ／ｋｇの用量の核酸ワクチンが対象に投与される、対象にワクチン接種を行うための組成物及びその方法である。いくつかの実施形態において、ＲＮＡポリヌクレオチドの用量は、１〜５μｇ、５〜１０μｇ、１０〜１５μｇ、１５〜２０μｇ、１０〜２５μｇ、２０〜２５μｇ、２０〜５０μｇ、３０〜５０μｇ、４０〜５０μｇ、４０〜６０μｇ、６０〜８０μｇ、６０〜１００μｇ、５０〜１００μｇ、８０〜１２０μｇ、４０〜１２０μｇ、４０〜１５０μｇ、５０〜１５０μｇ、５０〜２００μｇ、８０〜２００μｇ、１００〜２００μｇ、１２０〜２５０μｇ、１５０〜２５０μｇ、１８０〜２８０μｇ、２００〜３００μｇ、５０〜３００μｇ、８０〜３００μｇ、１００〜３００μｇ、４０〜３００μｇ、５０〜３５０μｇ、１００〜３５０μｇ、２００〜３５０μｇ、３００〜３５０μｇ、３２０〜４００μｇ、４０〜３８０μｇ、４０〜１００μｇ、１００〜４００μｇ、２００〜４００μｇまたは３００〜４００μｇ／用量である。いくつかの実施形態において、核酸ワクチンは、皮内注射または筋肉注射によって対象に投与される。いくつかの実施形態において、核酸ワクチンは、０日目に対象に投与される。いくつかの実施形態において、第２の用量の核酸ワクチンが２１日目に対象に投与される。
【００８６】
いくつかの実施形態において、対象に投与される核酸ワクチン中には、２５μｇの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態において、対象に投与される核酸ワクチン中には、１００μｇの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態において、対象に投与される核酸ワクチン中には、５０μｇの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態において、対象に投与される核酸ワクチン中には、７５μｇの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態において、対象に投与される核酸ワクチン中には、１５０μｇの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態において、対象に投与される核酸ワクチン中には、４００μｇの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態において、対象に投与される核酸ワクチン中には、２００μｇの用量のＲＮＡポリヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態において、ＲＮＡポリヌクレオチドは、遠位リンパ節と比較して、局所リンパ節において、１００倍高いレベルで蓄積する。他の実施形態において、核酸ワクチンは、化学修飾されており、他の実施形態において、核酸ワクチンは、化学修飾されていない。
【００８７】
本発明の態様は、第１の抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンであって、当該ＲＮＡポリヌクレオチドは、安定化要素及び薬学的に許容される担体または賦形剤を含まず、アジュバントがワクチン中に含まれない、核酸ワクチンを提供する。いくつかの実施形態において、安定化要素は、ヒストンステムループである。いくつかの実施形態において、安定化要素は、野生型配列と比較してＧＣ含量の多い核酸配列である。
【００８８】
本発明の態様は、第１の抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンであって、当該ＲＮＡポリヌクレオチドは、ヒト対象に許容されるパーセンテージで第１の抗原に対する抗体保有基準を上回る抗体力価を付与する、宿主へのｉｎ  ｖｉｖｏ投与用の製剤中に存在する、核酸ワクチンを提供する。いくつかの実施形態において、本発明のｍＲＮＡワクチンによって産生される抗体の力価は、中和抗体の力価である。いくつかの実施形態において、中和抗体の力価は、タンパク質ワクチンよりも大きい。他の実施形態において、本発明のｍＲＮＡワクチンによって産生される中和抗体の力価は、アジュバント添加タンパク質ワクチンよりも大きい。更に他の実施形態において、本発明のｍＲＮＡワクチンによって産生される中和抗体の力価は、１，０００〜１０，０００、１，２００〜１０，０００、１，４００〜１０，０００、１，５００〜１０，０００、１，０００〜５，０００、１，０００〜４，０００、１，８００〜１０，０００、２０００〜１０，０００、２，０００〜５，０００、２，０００〜３，０００、２，０００〜４，０００、３，０００〜５，０００、３，０００〜４，０００または２，０００〜２，５００である。中和力価は、典型的に、プラーク数の５０％減少を達成するのに必要な最大血清希釈として表される。
【００８９】
また、第１の抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンであって、当該ＲＮＡポリヌクレオチドは、安定化要素を有するか、アジュバントとともに製剤化された第１の抗原性ポリペプチドをコードするｍＲＮＡワクチンによって誘発される抗体力価よりも長く持続する高い抗体力価を誘発する、宿主へのｉｎ  ｖｉｖｏ投与用の製剤中に存在する、核酸ワクチンが提供される。いくつかの実施形態において、ＲＮＡポリヌクレオチドは、単回投与後１週間以内に中和抗体を産生するように製剤化される。いくつかの実施形態において、アジュバントは、カチオン性ペプチド及び免疫活性化核酸から選択される。いくつかの実施形態において、カチオン性ペプチドは、プロタミンである。
【００９０】
いくつかの態様は、少なくとも１つの化学修飾を含むか、任意選択により化学修飾を含まないオープンリーディングフレームを有し、当該オープンリーディングフレームは第１の抗原性ポリペプチドをコードする、１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む、核酸ワクチンであって、当該ＲＮＡポリヌクレオチドは、宿主の抗原発現レベルが、安定化要素を有するか、アジュバントとともに製剤化された第１の抗原性ポリペプチドをコードするｍＲＮＡワクチンによってもたらされる抗原発現レベルを著しく超えるように、宿主へのｉｎ  ｖｉｖｏ投与用の製剤中に存在する、核酸ワクチンを提供する。
【００９１】
他の態様は、少なくとも１つの化学修飾を含むか、任意選択により化学修飾を含まないオープンリーディングフレームを有し、当該オープンリーディングフレームは第１の抗原性ポリペプチドをコードする、１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む、核酸ワクチンであって、非修飾型ｍＲＮＡワクチンが同等の抗体力価をもたらすのに必要なＲＮＡポリヌクレオチドよりも、ＲＮＡポリヌクレオチドが少なくとも１／１０少ない、核酸ワクチンを提供する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡポリヌクレオチドは、２５〜１００μｇの用量で存在する。
【００９２】
本発明の態様はまた、少なくとも１つの化学修飾を含むか、任意選択により化学修飾を含まないオープンリーディングフレームを有し、当該オープンリーディングフレームは第１の抗原性ポリペプチドをコードする、１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチド１０μｇ〜４００μｇと、薬学的に許容される担体または賦形剤とを含み、ヒト対象への送達用に製剤化された、使用単位のワクチンを提供する。いくつかの実施形態において、ワクチンは、カチオン性脂質ナノ粒子を更に含む。
【００９３】
本発明の態様は、個体または個体集団においてウイルス株に対する抗原記憶を形成、維持または修復する方法を提供し、この方法は、当該個体または集団に抗原記憶ブースター核酸ワクチンを投与することを含み、当該核酸ワクチンは、（ａ）少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドであって、少なくとも１つの化学修飾を含むか、任意選択により化学修飾を含まず、かつ２つ以上のコドン最適化オープンリーディングフレームを含み、当該オープンリーディングフレームは、一連の参照抗原性ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチドと、（ｂ）任意選択により薬学的に許容される担体または賦形剤とを含む。いくつかの実施形態において、ワクチンは、筋肉内投与、皮内投与及び皮下投与からなる群から選択される経路を介して個体に投与される。いくつかの実施形態において、投与ステップは、組成物の注射に適した装置と対象の筋肉組織とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、投与ステップは、エレクトロポレーションと組み合わせて、組成物の注射に適した装置と対象の筋肉組織とを接触させることを含む。
【００９４】
本発明の態様は、対象にワクチン接種を行う方法を提供し、この方法は、有効量で第１の抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンの２５μｇ／ｋｇ〜４００μｇ／ｋｇの単回用量を対象に投与して、対象にワクチン接種を行うことを含む。
【００９５】
他の態様は、少なくとも１つの化学修飾を含むオープンリーディングフレームを有し、当該オープンリーディングフレームは第１の抗原性ポリペプチドをコードする、１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む、核酸ワクチンであって、非修飾型ｍＲＮＡワクチンが同等の抗体力価をもたらすのに必要なＲＮＡポリヌクレオチドよりも、ＲＮＡポリヌクレオチドが少なくとも１／１０少ない、核酸ワクチンを提供する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡポリヌクレオチドは、２５〜１００μｇの用量で存在する。
【００９６】
他の態様は、修飾ヌクレオチドを含まない（非修飾）オープンリーディングフレームを有し、当該オープンリーディングフレームは第１の抗原性ポリペプチドをコードする、ＬＮＰ製剤化ＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンであって、ＬＮＰで製剤化されていない非修飾型ｍＲＮＡワクチンが同等の抗体力価をもたらすのに必要なＲＮＡポリヌクレオチドよりも、ＲＮＡポリヌクレオチドが少なくとも１／１０少ない、核酸ワクチンを提供する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡポリヌクレオチドは、２５〜１００μｇの用量で存在する。
【００９７】
実施例で示されるデータは、本発明の製剤を使用すると、免疫応答が著しく向上することを示している。化学修飾型ＲＮＡワクチン及び非修飾型ＲＮＡワクチンのどちらも本発明において有用である。驚くべきことに、ワクチンの製造には化学修飾されていないｍＲＮＡを使用して担体中に製剤化することが好ましいという先行技術の方向とは対照的に、化学修飾されたｍＲＮＡ−ＬＮＰワクチンは、必要とされる有効ｍＲＮＡ用量が非修飾型ｍＲＮＡよりもかなり低く、すなわち、ＬＮＰ以外の担体中に製剤化された非修飾型ｍＲＮＡよりも１／１０少ないことが本明細書に記載される。本発明のＲＮＡワクチンは化学修飾型及び非修飾型のどちらも、異なる脂質担体中に製剤化されたｍＲＮＡワクチンよりも良好な免疫応答をもたらす。
【００９８】
他の態様において、本発明は、ウイルス抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを有効量で対象に投与して、対象にワクチン接種を行うことを含む、年齢が６０歳以上の高齢者対象を治療する方法を包含する。
【００９９】
他の態様において、本発明は、ウイルス抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを有効量で対象に投与して、対象にワクチン接種を行うことを含む、年齢が１７歳以下の若年者対象を治療する方法を包含する。
【０１００】
他の態様において、本発明は、ウイルス抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する１つ以上のＲＮＡポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンを有効量で対象に投与して、対象にワクチン接種を行うことを含む、成年対象を治療する方法を包含する。
【０１０１】
いくつかの態様において、本発明は、抗原をコードする少なくとも２つの核酸配列を含む混合ワクチンを用いて対象にワクチン接種を行う方法であり、ここで、ワクチンの用量は、併用治療用量であり、抗原をコードするそれぞれ個々の核酸の用量は、治療未満用量である。いくつかの実施形態において、併用用量は、対象に投与される核酸ワクチン中、ＲＮＡポリヌクレオチド２５μｇである。いくつかの実施形態において、併用用量は、対象に投与される核酸ワクチン中、ＲＮＡポリヌクレオチド１００μｇである。いくつかの実施形態において、併用用量は、対象に投与される核酸ワクチン中、ＲＮＡポリヌクレオチド５０μｇである。いくつかの実施形態において、併用用量は、対象に投与される核酸ワクチン中、ＲＮＡポリヌクレオチド７５μｇである。いくつかの実施形態において、併用用量は、対象に投与される核酸ワクチン中、ＲＮＡポリヌクレオチド１５０μｇである。いくつかの実施形態において、併用用量は、対象に投与される核酸ワクチン中、ＲＮＡポリヌクレオチド４００μｇである。いくつかの実施形態において、抗原をコードするそれぞれ個々の核酸の治療未満用量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０μｇである。他の実施形態において、核酸ワクチンは、化学修飾されており、他の実施形態において、核酸ワクチンは、化学修飾されていない。
【０１０２】
ＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３、５４〜６４及び９０〜１２４のうちの１つであり、少なくとも１つの化学修飾を含む。他の実施形態において、ＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３、５４〜６４及び９０〜１２４のうちの１つであり、いかなるヌクレオチド修飾も含まないか、非修飾である。更に他の実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３及び６６〜６７のうちのいずれかの抗原性タンパク質をコードし、少なくとも１つの化学修飾を含む。他の実施形態において、ＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号２４〜５３及び６６〜６７のうちのいずれかの抗原性タンパク質をコードし、いかなるヌクレオチド修飾も含まないか、非修飾である。
【０１０３】
好ましい態様において、本発明のワクチン（例えば、ＬＮＰ封入化ｍＲＮＡワクチン）は、ワクチン接種された対象の血中または血清中の抗原特異的抗体の予防上及び／または治療上有効なレベル、濃度及び／または力価をもたらす。本明細書で定義されるように、抗体力価という用語は、対象、例えば、ヒト対象において産生される抗原特異的抗体の量を指す。例示的な実施形態において、抗体力価は、陽性結果をなおももたらす最大希釈（連続希釈）の逆数で表される。例示的な実施形態において、抗体力価は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によって決定または測定される。例示的な実施形態において、抗体力価は、中和アッセイ、例えば、マイクロ中和アッセイによって決定または測定される。ある特定の態様において、抗体力価の測定値は、１：４０、１：１００などの比で表される。
【０１０４】
本発明の例示的な実施形態において、有効なワクチンは、１：４０超、１：１００超、１：４００超、１：１０００超、１：２０００超、１：３０００超、１：４０００超、１：５００超、１：６０００超、１：７５００超、１：１００００超の抗体力価をもたらす。例示的な実施形態において、この抗体力価は、ワクチン接種から１０日後、ワクチン接種から２０日後、ワクチン接種から３０日後、ワクチン接種から４０日後、またはワクチン接種から５０日後以降までに、もたらされるか、達成される。例示的な実施形態において、力価は、単回用量のワクチンを対象に投与した後にもたらされるか、達成される。他の実施形態において、力価は、複数回投与後、例えば、第１の用量及び第２の用量（例えば、ブースター用量）後にもたらされるか、達成される。
【０１０５】
本発明の例示的な態様において、抗原特異的抗体は、μｇ／ｍｌ単位で測定されるか、ＩＵ／Ｌ（国際単位／リットル）またはｍＩＵ／ｍｌ（ミリ国際単位／ｍｌ）単位で測定される。本発明の例示的な実施形態において、有効なワクチンは、＞０．５μｇ／ｍｌ、＞０．１μｇ／ｍｌ、＞０．２μｇ／ｍｌ、＞０．３５μｇ／ｍｌ、＞０．５μｇ／ｍｌ、＞１μｇ／ｍｌ、＞２μｇ／ｍｌ、＞５μｇ／ｍｌまたは＞１０μｇ／ｍｌをもたらす。本発明の例示的な実施形態において、有効なワクチンは、＞１０ｍＩＵ／ｍｌ、＞２０ｍＩＵ／ｍｌ、＞５０ｍＩＵ／ｍｌ、＞１００ｍＩＵ／ｍｌ、＞２００ｍＩＵ／ｍｌ、＞５００ｍＩＵ／ｍｌまたは＞１０００ｍＩＵ／ｍｌをもたらす。例示的な実施形態において、この抗体のレベルまたは濃度は、ワクチン接種から１０日後、ワクチン接種から２０日後、ワクチン接種から３０日後、ワクチン接種から４０日後、またはワクチン接種から５０日後以上までに、もたらされるか、達成される。例示的な実施形態において、レベルまたは濃度は、単回用量のワクチンを対象に投与した後にもたらされるか、達成される。他の実施形態において、レベルまたは濃度は、複数回投与後、例えば、第１の用量及び第２の用量（例えば、ブースター用量）後にもたらされるか、達成される。例示的な実施形態において、抗体のレベルまたは濃度は、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によって決定または測定される。例示的な実施形態において、抗体のレベルまたは濃度は、中和アッセイ、例えば、マイクロ中和アッセイによって決定または測定される。
【０１０６】
本発明の種々の実施形態の詳細については、以下の発明を実施するための形態に記載される。本発明の他の特徴、目的及び利点は、発明を実施するための形態及び図面ならびに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【０１０７】
本開示の実施形態は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原をコードするポリヌクレオチドを含む、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを提供する。ＨＳＶは、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅの線状二本鎖ＤＮＡウイルスである。単純ヘルペスウイルスファミリーのＨＳＶ−１及びＨＳＶ−２として知られる２つのメンバーは、ヒトに感染する。ＨＳＶ感染症の症状には、口腔、唇及び／または生殖器の皮膚または粘膜における水疱の形成がある。ＨＳＶは、神経浸潤性ウイルスであり、感染個体において、ウイルス再活性化による突発性回帰性エピソードを引き起こし得る。ＨＳＶは、ウイルス活性化期間中の皮膚の感染領域と接触することによって伝染する。ＨＳＶは、最も一般的には、口腔または生殖器の粘膜を介して感染し、重層扁平上皮で複製された後、重層扁平上皮内の枝状に分かれた無髄知覚神経線維に取り込まれる。次いで、このウイルスは、後根神経節内の神経細胞体に移行し、潜伏細胞感染の状態で存在し続ける（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．（２００６）１９４（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １）：Ｓ１１−Ｓ１８）。
【０１０８】
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１及びＨＳＶ−２）のゲノムは、約８５個のオープンリーディングフレームを含有し、これにより、ＨＳＶは、少なくとも８５個の独自タンパク質を生成することができる。これらの遺伝子は、４種の主要なタンパク質のクラス、すなわち（１）ＨＳＶの最も外側にある脂質二重層に関連するタンパク質（エンベロープ）、（２）内部タンパク質コート（カプシド）、（３）エンベロープとカプシドコートを連結する中間複合体（テグメント）、ならびに（４）複製及び感染を担うタンパク質をコードする。
【０１０９】
エンベロープタンパク質の例には、ＵＬ１（ｇＬ）、ＵＬ１０（ｇＭ）、ＵＬ２０、ＵＬ２２、ＵＬ２７（ｇＢ）、ＵＬ４３、ＵＬ４４（ｇＣ）、ＵＬ４５、ＵＬ４９Ａ、ＵＬ５３（ｇＫ）、ＵＳ４（ｇＧ）、ＵＳ５（ｇＪ）、ＵＳ６（ｇＤ）、ＵＳ７（ｇＩ）、ＵＳ８（ｇＥ）及びＵＳ１０が挙げられる。カプシドタンパク質の例には、ＵＬ６、ＵＬ１８、ＵＬ１９、ＵＬ３５及びＵＬ３８が挙げられる。テグメントタンパク質には、ＵＬ１１、ＵＬ１３、ＵＬ２１、ＵＬ３６、ＵＬ３７、ＵＬ４１、ＵＬ４５、ＵＬ４６、ＵＬ４７、ＵＬ４８、ＵＬ４９、ＵＳ９及びＵＳ１０が含まれる。他のＨＳＶタンパク質には、ＵＬ２、ＵＬ３、ＵＬ４、ＵＬ５、ＵＬ７、ＵＬ８、ＵＬ９、ＵＬ１２、ＵＬ１４、ＵＬ１５、ＵＬ１６、ＵＬ１７、ＵＬ２３、ＵＬ２４、ＵＬ２５、ＵＬ２６、ＵＬ２６．５、ＵＬ２８、ＵＬ２９、ＵＬ３０、ＵＬ３１、ＵＬ３２、ＵＬ３３、ＵＬ３４、ＵＬ３９、ＵＬ４０、ＵＬ４２、ＵＬ５０、ＵＬ５１、ＵＬ５２、ＵＬ５４、ＵＬ５５、ＵＬ５６、ＵＳ１、ＵＳ２、ＵＳ３、ＵＳ８１、ＵＳ１１、ＵＳ１２、ＩＣＰ０及びＩＣＰ４が含まれる。
【０１１０】
標的細胞に最初に遭遇するのがエンベロープ（ＨＳＶ粒子の最も外側の部分）であることから、本開示は、免疫原性物質として、エンベロープに関連する抗原性ポリペプチドを包含する。簡潔に述べれば、表面及び膜タンパク質（糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）、糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）、糖タンパク質Ｈ（ｇＨ）、糖タンパク質Ｌ（ｇＬ））を、単一抗原として、またはアジュバントとの組み合わせもしくはアジュバントなしで、ＨＳＶワクチン抗原として使用することができる。
【０１１１】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質ＤをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質ＢをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄ及び糖タンパク質ＣをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄ及び糖タンパク質Ｅ（または糖タンパク質Ｉ）をコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｂ及び糖タンパク質ＣをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｂ及び糖タンパク質Ｅ（または糖タンパク質Ｉ）をコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）抗原性ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｄ活性を有する。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｃと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）抗原性ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｃ活性を有する。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｂと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）抗原性ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｂ活性を有する。
【０１２０】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｅと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）抗原性ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｅ活性を有する。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｉと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）抗原性ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、ＨＳＶ（ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２）糖タンパク質Ｉ活性を有する。
【０１２２】
本開示の糖タンパク質「活性」について、以下に説明する。
【０１２３】
糖タンパク質Ｃ（ｇＣ）は、ウイルスの宿主細胞への吸着に関与する糖タンパク質であり、例えば、ＨＳＶ−２ウイルスの宿主付着受容体（すなわち、細胞表面ヘパラン硫酸及び／またはコンドロイチン硫酸）への結合を媒介する結合タンパク質として作用する。ｇＣは、宿主補体カスケードの活性化を阻害することによって、宿主免疫の回避（ウイルス免疫回避として知られる）に関与する。具体的には、ｇＣは、宿主の補体成分Ｃ３ｂに結合し、かつ／またはＣ３ｂと相互作用し、次いで、この相互作用により、補体カスケードを調節不能にすることによって宿主免疫応答を阻害する（例えば、宿主補体Ｃ３ｂに結合してウイルスの中和を遮断する）。
【０１２４】
糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）は、細胞表面受容体に結合し、かつ／またはポリオウイルス受容体関連タンパク質及び／もしくはヘルペスウイルス侵入メディエーターを介した細胞吸着に関与する、ウイルス侵入を容易にするエンベロープ糖タンパク質である。ｇＤは、潜在的な宿主細胞侵入受容体（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）／ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）、ポリオウイルス受容体関連タンパク質１（ＰＶＲＬ１）及び／またはポリオウイルス受容体関連タンパク質２（ＰＶＲＬ２）に結合し、例えば、ｇＢ及びｇＨ／ｇＬから構成される融合機構を動員することによって、宿主細胞膜との融合を引き起こすことが提起されている。ｇＤは、宿主細胞受容体ＴＮＦＲＳＦ１４及び／またはＰＶＲＬ１及び／またはＰＶＲＬ２と相互作用し、（１）ｇＢと（プロ融合ドメインを介して）相互作用し（関連するＨＳＶ糖タンパク質、例えば、ｇＨ及び／またはｇＬが存在しないときに生じ得る相互作用）、また、（２）ｇＤは、ｇＨ／ｇＬヘテロ二量体と（プロ融合ドメインを介して）相互作用する（ｇＢが存在しないときに生じ得る相互作用）。したがって、ｇＤは、ｇＢ−ｇＨ／ｇＬ−ｇＤ複合体と関係する。ｇＤはまた、ＵＬ１１テグメントタンパク質と（Ｃ末端を介して）相互作用する。
【０１２５】
糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）のウイルス細胞活性に関与し、ＨＳＶのエンベロープの細胞膜との融合に必要なウイルス糖タンパク質である。ｇＢは、全表面糖タンパク質の中で最も高度に保存されており、融合タンパク質として主に作用して中心的な融合機構を構成する。クラスＩＩＩの膜融合糖タンパク質であるｇＢは、５つの構造ドメインを有する１型膜貫通タンパク質の三量体である。ドメインＩは、２つの内部融合ループを含み、ウイルス−細胞融合中に細胞膜中に入り込むと考えられる。ドメインＩＩは、融合プロセス中にｇＨ／ｇＬと相互作用するとみられ、ドメインＩＩＩは、長いαヘリックスを含有し、ドメインＩＶは、細胞受容体と相互作用する。
【０１２６】
上皮細胞において、糖タンパク質Ｅ／糖タンパク質Ｉ（ｇＥ／ｇＩ）ヘテロ二量体は、新生ビリオンの細胞結合部へのソーティングによるウイルスの細胞間伝播に必要とされる。ウイルスが細胞結合部に到達すると、当該結合部に蓄積する細胞受容体との相互作用を介して、ウイルス粒子が隣接細胞に極めて迅速に伝播され得る。同様に、極性細胞の側底膜側伝播にも関与する。ニューロン細胞において、ｇＥ／ｇＩは、宿主神経系全体にわたる感染の順行性伝播に必須である。ｇＥ／ｇＩヘテロ二量体は、ＵＳ９とともに、ウイルス構造構成要素の軸索先端へのソーティング及び輸送に関与する。ｇＥ／ｇＩヘテロ二量体は、宿主ＩｇＧのＦｃ部分に対する受容体として作用する。ｇＥ／ｇＩのＩｇＧからの解離は酸性ｐＨで生じるため、抗ＨＳＶ抗体のバイポーラ架橋、それに続く細胞内エンドサイトーシス及び分解を伴い得、宿主のＩｇＧ媒介性免疫応答を妨げる。ｇＥ／ｇＩは、ＶＰ２２テグメントタンパク質と（Ｃ末端を介して）相互作用する。この相互作用は、ＶＰ２２のゴルジ体への動員及びビリオンへのパッケージングに必要である。
【０１２７】
本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、ＲＮＡは、少なくとも１つの修飾、例えば、少なくとも１つの化学修飾を有し得る。
【０１２８】
本明細書で提供されるＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、ＤＮＡワクチン接種に関連するリスクの多くを伴うことなく、細胞性免疫と体液性免疫の両方を含むバランスの取れた免疫応答を誘導するために使用することができる。
【０１２９】
国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２７４０号の内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０１３０】
本明細書に記載されるｍＲＮＡワクチンは、現行ワクチンよりもいくつかの点で優れることが見出された。第１に、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）送達は、文献に記載されているプロタミン系手段を含む他の製剤よりも優れ、追加のアジュバントを必要としない。ＬＮＰの使用により、化学修飾型または非修飾型ｍＲＮＡワクチンの有効的な送達が可能になる。更に、ＬＮＰ製剤化ｍＲＮＡワクチンは、修飾型と非修飾型のどちらも、従来型ワクチンよりも著しく優れていることが本明細書で示された。いくつかの実施形態において、本発明のｍＲＮＡワクチンは、従来型ワクチンよりも少なくとも１０倍、２０倍、４０倍、５０倍、１００倍、５００倍または１，０００倍優れている。
【０１３１】
ｍＲＮＡワクチン及び自己複製ＲＮＡワクチンを含む機能性ＲＮＡワクチンは、その作製が試みられてきたが、これらのＲＮＡワクチンの治療有効性は、まだ完全に確立されていない。実に驚くべきことに、本発明者らは、本発明の態様に従って、抗原生成及び中和能力を有する機能性抗体産生の増大を含む、著しく増強され、また多くの点で相乗的である免疫応答をもたらす、ｍＲＮＡワクチンのｉｎ  ｖｉｖｏ送達のための製剤クラスを見出した。これらの結果は、他の種類の脂質系製剤で使用されるｍＲＮＡの用量と比較して極めて低用量のｍＲＮＡが投与された場合でも、達成することができる。本発明の製剤は、機能性ｍＲＮＡワクチンの予防薬及び治療薬としての有効性を確立するのに十分な予想外に著しいｉｎ  ｖｉｖｏ免疫応答を示した。更に、自己複製ＲＮＡワクチンは、免疫原性応答をもたらすのに十分なＲＮＡを細胞に送達するのに、ウイルス複製経路に依存している。本発明の製剤は、強い免疫応答をもたらすのに十分なタンパク質を産生するのにウイルス複製を必要としない。したがって、本発明のｍＲＮＡは、自己複製ＲＮＡではなく、ウイルス複製に必要な構成要素を含まない。
【０１３２】
本発明は、いくつかの態様において、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤が、化学修飾型及び非修飾型ｍＲＮＡワクチンを含むＲＮＡワクチンの有効性を著しく増強するという驚くべき発見に関係する。ＬＮＰ製剤化ｍＲＮＡワクチンの有効性について、いくつかの異なる抗原を使用してｉｎ  ｖｉｖｏで試験した。本明細書に示される結果は、他の市販のワクチンよりも予想外に優れたＬＮＰ製剤化ｍＲＮＡワクチンの有効性を示している。
【０１３３】
増強された免疫応答をもたらすことに加えて、本発明の製剤は、試験した他のワクチンよりも少ない用量で、より迅速な免疫応答をもたらす。本発明のｍＲＮＡ−ＬＮＰ製剤はまた、異なる担体で製剤化されたワクチンに比べて、定量的及び定性的に良好な免疫応答をもたらす。
【０１３４】
本明細書に記載される試験で使用したＬＮＰは、ｓｉＲＮＡを送達するために種々の動物モデル及びヒトにおいて以前から使用されているものである。ＬＮＰ製剤のｓｉＲＮＡ送達に関してなされた観察を考慮すると、ＬＮＰがワクチンに有用であるという事実は、実に驚くべきことである。ＬＮＰ製剤化ｓｉＲＮＡの治療的送達は、一過性ＩｇＭ応答に関連する望ましくない炎症応答の原因となり、典型的に、抗原生成の低減及び免疫応答の低下につながることが観察されている。ｓｉＲＮＡについて観察された知見とは対照的に、本発明のＬＮＰ−ｍＲＮＡ製剤は、一過性のＩｇＭ応答ではなく、予防法及び治療法に十分なＩｇＧレベルの増大をもたらすことが本明細書で示される。
【０１３５】
核酸／ポリヌクレオチド
本明細書で提供されるＨＳＶワクチンは、少なくとも１つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つの（１つ以上の）リボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。「核酸」という用語は、その最も広い意味で、ヌクレオチドの重合体を含む任意の化合物及び／または物質を含む。これらの重合体は、ポリヌクレオチドと呼ばれる。
【０１３６】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３、５４〜６４、または配列番号１〜２３もしくは５４〜６４のうちのいずれか１つから選択される核酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するホモログのうちのいずれかから選択される少なくとも１つの核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３、５４〜６４、または配列番号１〜２３もしくは５４〜６４のうちのいずれか１つから選択される核酸配列と少なくとも９０％（例えば、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．８％または９９．９％）の同一性を有するホモログのうちのいずれか１つから選択される少なくとも１つの核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、配列番号１〜２３または５４〜６４のうちのいずれか１つから選択される核酸配列の少なくとも１つの断片によってコードされる。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１つの化学修飾を有する。
【０１３７】
核酸（ポリヌクレオチドともいう）は、例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ、例えば、β−Ｄ−リボ配置を有するＬＮＡ、α−Ｌ−リボ配置を有するα−ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’−アミノ官能基を有する２’−アミノ−ＬＮＡ、及び２’−アミノ官能基を有する２’−アミノ−α−ＬＮＡを含む）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）もしくはこれらのキメラもしくは組み合わせであってよく、またはこれらを含み得る。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）として機能する。「メッセンジャーＲＮＡ」（ｍＲＮＡ）は、（少なくとも１つの）ポリペプチド（天然、非天然または修飾されたアミノ酸重合体）をコードする任意のポリヌクレオチドであって、これが翻訳されて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕまたはｅｘ  ｖｉｖｏで、コードされているポリペプチドを生成できる任意のポリヌクレオチドを指す。当業者であれば、別途記載される場合を除き、本出願に記載されるポリヌクレオチド配列は、ＤＮＡ配列を表す場合には「Ｔ」を用い、配列がＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を表す場合には、「Ｔ」は「Ｕ」に置き換えられることを理解するであろう。したがって、特定の配列識別番号によって識別されるＤＮＡによってコードされるＲＮＡポリヌクレオチドはいずれも、ＤＮＡによってコードされた対応するＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）配列を含み得、当該ＲＮＡ配列は、ＤＮＡ配列の各「Ｔ」が「Ｕ」に置き換えられているものである。
【０１３９】
ｍＲＮＡ分子の基本構成要素は、典型的に、少なくとも１つのコーディング領域、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’ＵＴＲ、５’キャップ及びポリＡテールを含む。本開示のポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡとして機能し得るが、その設計上の機能的及び／または構造的特徴から野生型ｍＲＮＡとは区別することができ、この特徴は、核酸治療法を用いた有効的なポリペプチド発現に関する既存の課題を解決するのに役立つ。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンのＲＮＡポリヌクレオチドは、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４、２〜３、３〜１０、３〜９、３〜８、３〜７、３〜６、３〜５、３〜４、４〜１０、４〜９、４〜８、４〜７、４〜６、４〜５、５〜１０、５〜９、５〜８、５〜７、５〜６、６〜１０、６〜９、６〜８、６〜７、７〜１０、７〜９、７〜８、８〜１０、８〜９または９〜１０個の抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００個の抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１００個または少なくとも２００個の抗原性ポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンのＲＮＡポリヌクレオチドは、１〜１０、５〜１５、１０〜２０、１５〜２５、２０〜３０、２５〜３５、３０〜４０、３５〜４５、４０〜５０、１〜５０、１〜１００、２〜５０または２〜１００個の抗原性ポリペプチドをコードする。
【０１４１】
本開示のポリヌクレオチドは、いくつかの実施形態において、コドン最適化される。コドン最適化法は、当該技術分野において知られており、本明細書に記載のとおりに使用することができる。コドン最適化を用いると、いくつかの実施形態において、標的生物及び宿主生物におけるコドン頻度を一致させて適切な折り畳みを確保すること、ＧＣ含量に偏りをもたせてｍＲＮＡの安定性を向上させ、もしくは二次構造を低減させること、遺伝子構築物もしくは発現を損なう可能性のあるタンデム反復コドンもしくは塩基ラン（ｂａｓｅ  ｒｕｎ）を最小にすること、転写及び翻訳制御領域をカスタマイズすること、タンパク質輸送配列を挿入もしくは除去すること、コードタンパク質に翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加すること、タンパク質ドメインを付加、除去もしくはシャッフルすること、制限部位を挿入もしくは欠失すること、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を改変すること、翻訳率を調整してタンパク質の様々なドメインの適切な折り畳みを可能にすること、またはポリヌクレオチド内の問題のある二次構造を低減もしくは排除することができる。コドン最適化のツール、アルゴリズム及びサービスは、当該技術分野において知られており、非限定的な例には、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ  ＣＡ）によるサービス及び／または独自の方法が挙げられる。いくつかの実施形態において、最適化アルゴリズムを使用してオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列が最適化される。
【０１４２】
いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドまたはタンパク質（例えば、抗原性タンパク質またはポリペプチド）をコードする天然または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して９５％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドまたはタンパク質（例えば、抗原性タンパク質またはポリペプチド）をコードする天然または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して９０％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドまたはタンパク質（例えば、抗原性タンパク質またはポリペプチド）をコードする天然または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して８５％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドまたはタンパク質（例えば、抗原性タンパク質またはポリペプチド）をコードする天然または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して８０％未満の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドまたはタンパク質（例えば、抗原性タンパク質またはポリペプチド）をコードする天然または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して７５％未満の配列同一性を共有する。
【０１４３】
いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドまたはタンパク質（例えば、抗原性タンパク質またはポリペプチド）をコードする天然または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して６５％〜８５％（例えば、約６７％〜約８５％または約６７％〜約８０％）の配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、コドン最適化配列は、天然または野生型配列（例えば、目的のポリペプチドまたはタンパク質（例えば、抗原性タンパク質またはポリペプチド）をコードする天然または野生型ｍＲＮＡ配列）に対して６５％〜７５％または約８０％の配列同一性を共有する。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、少なくとも１つの修飾を有する少なくとも１つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム、少なくとも１つの５’末端キャップを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含み、かつ脂質ナノ粒子内に製剤化される。ポリヌクレオチドの５’キャッピングは、以下の化学的ＲＮＡキャップアナログを製造元のプロトコールに従って使用して５’−グアノシンキャップ構造を生じさせることで、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応中に同時に達成することができる：３´−Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ［ＡＲＣＡキャップ］、Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ、Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ））。修飾ＲＮＡの５’キャッピングは、ワクシニアウイルスキャッピング酵素を使用して「キャップ０」構造：ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ））を生じさせることによって転写後に達成され得る。キャップ１構造は、ワクシニアウイルスキャッピング酵素と２’−Ｏメチルトランスフェラーゼの両方を使用してｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ−２’−Ｏ−メチルを生じさせることで生成することができる。キャップ２構造は、キャップ１構造から、２’−Ｏメチルトランスフェラーゼを使用して３番目の５’−ヌクレオチドを２’−Ｏ−メチル化することによって生成することができる。キャップ３構造は、キャップ２構造から、２’−Ｏメチルトランスフェラーゼを使用して４番目の５’−ヌクレオチドを２’−Ｏ−メチル化することによって生成することができる。酵素は、好ましくは、組み換え供給源に由来する。
【０１４５】
修飾ｍＲＮＡは、哺乳動物細胞にトランスフェクトされた場合、１２〜１８時間または１８時間超、例えば、２４、３６、４８、６０、７２もしくは７２時間超の安定性を有する。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、コドン最適化ＲＮＡは、例えば、Ｇ／Ｃレベルを増加させたものであり得る。核酸分子のＧ／Ｃ含量は、ＲＮＡの安定性に影響し得る。グアニン（Ｇ）及び／またはシトシン（Ｃ）の残基量を増加させたＲＮＡは、アデニン（Ａ）及びチミン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ）のヌクレオチドを多量に含有する核酸よりも機能的に安定であり得る。ＷＯ０２／０９８４４３は、翻訳領域における配列改変によって安定化されたｍＲＮＡを含有する医薬組成物を開示している。遺伝コードの縮重により、この改変は、既存のコドンを、結果として得られるアミノ酸を変更することなく、より大きなＲＮＡ安定性を助長するコドンに置き換えることによってなされる。このアプローチは、ＲＮＡのコーディング領域に限定される。
【０１４７】
抗原／抗原性ポリペプチド
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｂまたは免疫応答を誘導することができる免疫原性断片（例えば、配列番号１、６、１２、１８、６６または７１）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｃまたは免疫応答を誘導することができる免疫原性断片（例えば、配列番号２、７、１３、１９、６７または７２）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｄまたは免疫応答を誘導することができる免疫原性断片（例えば、配列番号３、１１、１４、２０、６８または７５）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｅまたは免疫応答を誘導することができる免疫原性断片（例えば、配列番号４、８、１５、２１、６９または７３）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
【０１５１】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ−２糖タンパク質Ｉまたは免疫応答を誘導することができる免疫原性断片（例えば、配列番号５、１０、１３、１６、２２、７０または７４）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ−２  ＩＣＰ４タンパク質または免疫応答を誘導することができる免疫原性断片（例えば、配列番号９、２３または７７）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、ＨＳＶ−２  ＩＣＰ０タンパク質または免疫応答を誘導することができる免疫原性断片（例えば、配列番号１７または７６）をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、配列番号１〜２３または５４〜６４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つから選択される核酸によってコードされた少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、配列番号９０〜１２４（例えば、表１または３）のうちのいずれか１つから選択される核酸を含む少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶワクチンは、少なくとも１つの化学修飾を含む、少なくとも１つの修飾を有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含む。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドは、２５アミノ酸よりも長く、５０アミノ酸よりも短い。したがって、ポリペプチドには、遺伝子産物、天然ポリペプチド、合成ポリペプチド、ホモログ、オルソログ、パラログ、断片ならびに前述の他の等価物、バリアント及びアナログが含まれる。ポリペプチドは、単一分子であってもよいし、二量体、三量体または四量体などの多分子複合体であってもよい。ポリペプチドはまた、単鎖ポリペプチドまたは抗体もしくはインスリンなどの多鎖ポリペプチドを含み得、会合または連結され得る。多鎖ポリペプチドには、最も一般的に、ジスルフィド結合が認められる。ポリペプチドという用語はまた、少なくとも１つのアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工的化学的アナログになっているアミノ酸高分子に対しても適用され得る。
【０１５７】
「ポリペプチドバリアント」という用語は、そのアミノ酸配列が天然配列または参照配列とは異なる分子を指す。アミノ酸配列バリアントは、天然配列または参照配列と比較して、アミノ酸配列内の特定の位置に置換、欠失及び／または挿入を有し得る。通常、バリアントは、天然配列または参照配列に対して少なくとも５０％の同一性を有する。いくつかの実施形態において、バリアントは、天然配列または参照配列と少なくとも８０％または少なくとも９０％の同一性を共有する。
【０１５８】
いくつかの実施形態において、「バリアント模倣体」が提供される。本明細書で使用されるとき、「バリアント模倣体」という用語は、活性化配列を模倣し得る少なくとも１つのアミノ酸を含有するものである。例えば、グルタミン酸は、リン酸化スレオニン及び／またはリン酸化セリンの模倣体として作用し得る。あるいは、バリアント模倣体は、失活化をもたらすか、模倣体を含有する不活性化産物をもたらすことができ、例えば、フェニルアラニンは、チロシンの不活性化置換として作用し、アラニンは、セリンの不活性化置換として作用することができる。
【０１５９】
「オルソログ」は、種分化によって共通の祖先遺伝子から進化した異なる種の遺伝子を指す。通常、オルソログは、進化の過程で同じ機能を保持する。オルソログの特定は、新たに配列決定されるゲノムの遺伝子機能の信頼性の高い予測に重要である。
【０１６０】
「アナログ」は、１つ以上のアミノ酸の変更、例えば、アミノ酸残基の置換、付加または欠失による違いはあるが、親ポリペプチドまたは出発ポリペプチドの特性のうちの１つ以上を引き続き保持している、ポリペプチドバリアントを含むことを意味する。
【０１６１】
「パラログ」は、ゲノム内の重複によって関連する遺伝子（またはタンパク質）である。オルソログは、進化の過程で同じ機能を保持しているが、パラログは、元の機能に関連しているとしても、新しい機能を進化させている。
【０１６２】
本開示は、バリアント及び誘導体を含む、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドをベースにしたいくつかの種類の組成物を提供する。これらには、例えば、置換、挿入欠失及び共有結合によるバリアント及び誘導体が含まれる。「誘導体」という用語は、「バリアント」という用語と同義的に使用されるが、一般的に、参照分子または出発分子と比較して、任意の方法で修飾及び／または変更されている分子を指す。
【０１６３】
したがって、参照配列、特に本明細書で開示されるポリペプチド配列に対して置換、挿入及び／または付加、欠失ならびに共有結合による修飾を含有するペプチドまたはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、本開示の範囲内に含まれる。例えば、配列タグまたは１つ以上のリジンなどのアミノ酸をペプチド配列に（例えば、Ｎ末端またはＣ末端に）付加することができる。配列タグは、ペプチドの検出、精製または位置決定のために使用することができる。リジンは、ペプチドの溶解性を増大させ、またはビオチニル化を可能にするために使用することができる。あるいは、ペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列のカルボキシ末端領域及びアミノ末端領域に位置するアミノ酸残基を任意選択的に欠失させて、切断型配列を提供してもよい。あるいは、その配列の用途、例えば、可溶性であり、または固体支持体に連結されたより大きな配列の一部として配列を発現させるなどに応じて、特定のアミノ酸（例えば、Ｃ末端残基またはＮ末端残基）を欠失させてもよい。代替的な実施形態において、シグナル配列、終結配列、膜貫通ドメイン、リンカー、多量体形成ドメイン（例えば、ｆｏｌｄｏｎ領域など）及び同等物のための配列（またはこれらをコードする配列）を、同一または類似の機能を達成する代替配列と置換してもよい。そのような配列は、当業者には容易に特定可能である。本明細書で提供される配列のいくつかは、例えば、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの調製直前に削除され得る配列タグまたは末端ペプチド配列を（例えば、Ｎ末端またはＣ末端に）含有することも理解されたい。
【０１６４】
ポリペプチドに関する「置換バリアント」は、天然配列または出発配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が削除され、その代わりに同じ位置に別のアミノ酸が挿入されたものである。置換は、分子中のアミノ酸が１つのみ置換された単一の置換であってもよいし、同一分子中の２つ以上のアミノ酸が置換された複数の置換であってもよい。
【０１６５】
本明細書で使用されるとき、「保存的アミノ酸置換」という用語は、配列中に通常存在するアミノ酸を、同様の大きさ、電荷または極性を有する別のアミノ酸で置き換える置換を指す。保存的置換の例には、イソロイシン、バリン及びロイシンなどの非極性（疎水性）残基を別の非極性残基にする置換が挙げられる。同様に、保存的置換の例には、ある極性（親水性）残基を別の極性残基にする置換、例えば、アルギニンとリジンの間、グルタミンとアスパラギンの間、及びグリシンとセリンの間の置換が挙げられる。加えて、リジン、アルギニンまたはヒスチジンなどの塩基性残基を別の塩基性残基にする置換、またはアスパラギン酸またはグルタミン酸などのある酸性残基を別の酸性残基にする置換も保存的置換の更なる例である。非保存的置換の例には、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニンもしくはメチオニンなどの非極性（疎水性）アミノ酸残基をシステイン、グルタミン、グルタミン酸もしくはリジンなどの極性（親水性）残基にする置換、及び／または極性残基を非極性残基にする置換が挙げられる。
【０１６６】
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに関する「特徴」は、分子のうち、明確に異なる、アミノ酸配列ベースの構成要素またはヌクレオチドベースの構成要素としてそれぞれ定義される。ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの特徴には、表面発現、局所的高次構造形状、折り畳み、ループ、半ループ、ドメイン、半ドメイン、部位、末端またはこれらの任意の組み合わせが含まれる。
【０１６７】
ポリペプチドに関して本明細書で使用されるとき、「ドメイン」という用語は、１つ以上の特定可能な構造的または機能的特徴または特性（例えば、結合能力、タンパク質−タンパク質相互作用の部位としての機能）を有するポリペプチドモチーフを指す。
【０１６８】
ポリペプチドに関して本明細書で使用されるとき、「部位」という用語は、それがアミノ酸に基づく実施形態に関する場合、「アミノ酸残基」及び「アミノ酸側鎖」と同義的に使用される。ポリペプチドに関して本明細書で使用されるとき、「部位」という用語は、それがヌクレオチドに基づく実施形態に関する場合、「ヌクレオチド」と同義的に使用される。部位は、ポリペプチドベースの分子またはポリヌクレオチドベースの分子内のうちで修飾、操作、改変、誘導体化または変更され得るペプチドまたはポリペプチドまたはポリヌクレオチド内の位置を表す。
【０１６９】
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドに関して本明細書で使用されるとき、「末端」という用語は、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの端部をそれぞれ指す。かかる端部は、ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの最初の部位または最後の部位のみに限定されるものではなく、末端領域に付加されたアミノ酸またはヌクレオチドを含み得る。ポリペプチドベースの分子は、Ｎ末端（遊離アミノ基（ＮＨ２）を有するアミノ酸で終わる）と、Ｃ末端（遊離カルボキシル基（ＣＯＯＨ）を有するアミノ酸で終わる）の両方を有することを特徴とし得る。タンパク質は、場合によって、ジスルフィド結合または非共有結合性の力によって一緒になった複数のポリペプチド鎖から構成される（多量体、オリゴマー）。これらのタンパク質は、複数のＮ末端及びＣ末端を有する。あるいは、ポリペプチドの末端は、状況に応じて、有機コンジュゲートなどの非ポリペプチドベースの部分で開始または終結するように修飾されてもよい。
【０１７０】
当業者によって認識されるように、タンパク質断片、機能性タンパク質ドメイン及び相同タンパク質もまた、目的のポリペプチドの範囲内であるとみなされる。例えば、参照タンパク質の１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００または１００超のアミノ酸長の任意のタンパク質断片（すなわち、参照ポリペプチド配列よりも少なくとも１アミノ酸残基分短いがそれ以外では同一であるポリペプチド配列）が本明細書で提供される。別の例において、本明細書に記載される配列のうちのいずれかに対して、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％同一である２０、３０、４０、５０または１００アミノ酸のストレッチを含む任意のタンパク質を本開示に従って利用することができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、本明細書に記載または参照される配列のうちのいずれも、示されるように、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上の変異を含む。
【０１７１】
本開示のポリペプチド分子またはポリヌクレオチド分子は、参照分子（例えば、参照ポリペプチドまたは参照ポリヌクレオチド）、例えば、当該技術分野に記載の分子（例えば、操作または設計された分子または野生型分子）とある程度の配列類似性または配列同一性を共有し得る。「同一性」という用語は、当該技術分野において知られているように、配列を比較することによって決定される２つ以上のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの配列間の関係性を指す。当該技術分野において、同一性はまた、２つ以上のアミノ酸残基または核酸残基のストリング間のマッチ数によって決定される配列間の配列関係性の度合いを意味する。同一性は、特定の数学的モデルまたはコンピュータープログラム（例えば、「アルゴリズム」）によって処理されたギャップアライメント（存在する場合）を有する２つ以上の配列のうちより小さい配列間での同一マッチ率を評価する。関連するペプチドの同一性は、既知の方法によって容易に算出することができる。ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列に適用される「同一性パーセント」は、配列をアライメントし、必要に応じて、最大同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後に、第２の配列のアミノ酸配列または核酸配列中の残基と同一であるアミノ酸または核酸の候補配列中の残基（アミノ酸残基または核酸残基）のパーセンテージとして定義される。アライメントのための方法及びコンピュータープログラムは、当該技術分野においてよく知られている。同一性は、同一性パーセントの算出に依存するが、算出に導入されるギャップ及びペナルティーによって値が異なり得ることは理解される。一般に、特定のポリヌクレオチドまたはポリペプチドのバリアントは、本明細書に記載され、当業者に知られている配列アライメントプログラム及びパラメーターによって決定したとき、特定の参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの配列に対して、少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％であるが、１００％未満の配列の同一性を有する。そのようなアライメントツールには、ＢＬＡＳＴスイートのものが含まれる（Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｆ．Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９７），“Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）。別の多く用いられるローカルアライメント手法は、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムに基づくものである（Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ．（１９８１）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｍｍｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．”  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−１９７）。動的計画法に基づいた一般的なグローバルアライメント手法は、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムである（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｃ．Ｄ．（１９７０）“Ａ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ａｐ���ｌｉｃａｂｌｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｆｏｒ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ．”  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３．）。より最近では、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズムを含む他の最適グローバルアライメント法よりも高速にヌクレオチド及びタンパク質配列のグローバルアライメントを生成するといわれるＦａｓｔ  Ｏｐｔｉｍａｌ  Ｇｌｏｂａｌ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（ＦＯＧＳＡＡ）が開発されている。他のツールについては、本明細書において、具体的には、以下の「同一性」の定義において記載される。
【０１７２】
本明細書で使用されるとき、「相同性」という用語は、高分子、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）間及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関係性を指す。マッチする残基のアライメントによって決定された類似性または同一性の閾値レベルを共有する高分子（例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）及び／またはポリペプチド分子）は、相同と呼ばれる。相同性は、分子間の関係を記述する定性的用語であり、定量的な類似性または同一性に基づき得る。類似性または同一性は、２つの比較配列間の配列マッチの程度を定義する定量的用語である。いくつかの実施形態において、高分子は、その配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％同一または類似であれば、互いに「相同」であるとみなされる。「相同」という用語は、必然的に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。２つのポリヌクレオチド配列は、当該配列がコードするポリペプチドが、少なくとも２０アミノ酸の少なくとも１つのストレッチについて、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または更には９９％であれば、相同であるとみなされる。いくつかの実施形態において、相同なポリヌクレオチド配列は、一意に指定された少なくとも４〜５アミノ酸のストレッチをコードする能力を特徴とする。６０ヌクレオチド長未満のポリヌクレオチド配列の場合、相同性は、一意に指定された少なくとも４〜５アミノ酸のストレッチをコードする能力によって決定される。２つのタンパク質配列は、当該タンパク質が、少なくとも２０アミノ酸の少なくとも１つのストレッチについて、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％または９０％同一であれば、相同であるとみなされる。
【０１７３】
相同性は、比較される配列が進化上共通の起源から分化したことを示唆する。「ホモログ」という用語は、共通の祖先配列に由来することにより第２のアミノ酸配列または核酸配列に関連する第１のアミノ酸配列または核酸配列（例えば、遺伝子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）またはタンパク質配列）を指す。「ホモログ」という用語は、種分化の事象によって分離した遺伝子間及び／もしくはタンパク質間の関係、または遺伝子重複の事象によって分離した遺伝子間及び／もしくはタンパク質間の関係に適用され得る。
【０１７４】
多タンパク質及び多成分ワクチン
本開示は、単一の抗原性ポリペプチドをそれぞれコードする複数のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含むＨＳＶワクチン、及び１つを超える抗原性ポリペプチドを（例えば、融合ポリペプチドとして）コードする単一のＲＮＡポリヌクレオチドを含むＨＳＶワクチンを包含する。したがって、第１のＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するＲＮＡポリヌクレオチドと、第２のＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するＲＮＡポリヌクレオチドとを含むワクチン組成物は、（ａ）第１のＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードする第１のＲＮＡポリヌクレオチドと、第２のＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードする第２のＲＮＡポリヌクレオチドとを含むワクチン、ならびに（ｂ）第１及び第２のＨＳＶ抗原性ポリペプチドを（例えば、融合ポリペプチドとして）コードする単一のＲＮＡポリヌクレオチドを含むワクチンを包含することを理解されたい。本開示のＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、いくつかの実施形態において、それぞれが異なるＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する２〜１０個（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個）またはそれ以上のＲＮＡポリヌクレオチド（または２〜１０個もしくはそれ以上の異なるＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードする単一のＲＮＡポリヌクレオチド）を含む。
【０１７５】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドは、シグナルペプチド（例えば、配列番号２８１または配列番号２８２）に融合されたＨＳＶ抗原性ポリペプチドをコードする。したがって、ＨＳＶ抗原性ペプチドに連結されたシグナルペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含むＨＳＶワクチンが提供される。
【０１７６】
更に、シグナルペプチドに融合された本明細書に開示される任意のＨＳＶ抗原性ポリペプチドを含むＨＳＶワクチンが本明細書で提供される。シグナルペプチドは、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【０１７７】
シグナルペプチド
いくつかの実施形態において、ＨＳＶポリヌクレオチドによってコードされる抗原性ポリペプチドは、シグナルペプチドを含む。シグナルペプチドは、Ｎ末端の１５〜６０アミノ酸タンパク質を含み、典型的に、分泌経路において膜を通過する移行に必要であり、したがって、真核生物及び原核生物の両生物において、大部分のタンパク質が分泌経路へ入ることを普遍的に制御している。シグナルペプチドは、一般に、長さの異なるＮ末端領域（通常、正に荷電したアミノ酸を含む）と、疎水性領域と、短いカルボキシ末端ペプチド領域の３つの領域からなる。真核生物において、新生前駆タンパク質（プレタンパク質）のシグナルペプチドは、リボソームを粗面小胞体（ＥＲ）膜に向かわせ、膜を通過して伸長するペプチド鎖の輸送を開始する。しかしながら、シグナルペプチドは、成熟タンパク質の最終目的地に関与しない。配列中に更なるアドレスタグを欠いている分泌タンパク質は、普通は外部環境に分泌される。シグナルペプチドは、小胞体（ＥＲ）に存在するシグナルペプチダーゼによって前駆タンパク質から切断されるか、切断されないまま膜アンカーとして機能する。近年、シグナルペプチドのより進んだ見解が導き出されており、ある特定のシグナルペプチドの機能及び免疫優性は、これまで予想されていたよりも極めて多岐にわたることが示されている。
【０１７８】
シグナルペプチドは、典型的に、プロセシングのために、新規合成タンパク質の小胞体（ＥＲ）への標的化を促進するように機能する。ＥＲプロセシングにより成熟エンベロープタンパク質が生成され、そこでシグナルペプチドは、典型的に、宿主細胞のシグナルペプチダーゼによって切断される。シグナルペプチドはまた、タンパク質の細胞膜への標的化を促進し得る。本開示のＨＳＶワクチンは、例えば、人工シグナルペプチドをコードするＲＮＡポリヌクレオチドを含み得、シグナルペプチドをコードする配列は、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドのコード配列に作動可能に連結され、当該配列とインフレームである。したがって、本開示のＨＳＶワクチンは、いくつかの実施形態において、シグナルペプチドに融合されたＨＳＶ抗原性ポリペプチドを含む抗原性ポリペプチドを生成する。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドのＮ末端に融合される。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドのＣ末端に融合される。
【０１７９】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドに融合されるシグナルペプチドは、人工シグナルペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンによってコードされるＨＳＶ抗原性ポリペプチドに融合される人工シグナルペプチドは、免疫グロブリンタンパク質、例えば、ＩｇＥシグナルペプチドまたはＩｇＧシグナルペプチドから得られる。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンによってコードされるＨＳＶ抗原性ポリペプチドに融合されるシグナルペプチドは、ＭＤＷＴＷＩＬＦＬＶＡＡＡＴＲＶＨＳ（配列番号７９）の配列を有するＩｇ重鎖ε−１シグナルペプチド（ＩｇＥ  ＨＣ  ＳＰ）である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンによってコードされるＨＳＶ抗原性ポリペプチドに融合されるシグナルペプチドは、ＭＥＴＰＡＱＬＬＦＬＬＬＬＷＬＰＤＴＴＧ（配列番号７８）の配列を有するＩｇＧｋ鎖Ｖ−ＩＩＩ領域のＨＡＨシグナルペプチド（ＩｇＧｋＳＰ）である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンによってコードされるＨＳＶ抗原性ポリペプチドは、配列番号７８〜８２のシグナルペプチドに融合された配列番号２４〜５３または６６〜７７のうちの１つに記載されるアミノ酸配列を有する。本明細書で開示される例は、限定を意図するものではなく、プロセシングのためのタンパク質のＥＲへの標的化及び／またはタンパク質の細胞膜への標的化を促進することが当該技術分野において知られているあらゆるシグナルペプチドを本開示に従って使用することができる。
【０１８０】
シグナルペプチドは、１５〜６０アミノ酸長を有し得る。例えば、シグナルペプチドは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９または６０アミノ酸長を有し得る。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、２０〜６０、２５〜６０、３０〜６０、３５〜６０、４０〜６０、４５〜６０、５０〜６０、５５〜６０、１５〜５５、２０〜５５、２５〜５５、３０〜５５、３５〜５５、４０〜５５、４５〜５５、５０〜５５、１５〜５０、２０〜５０、２５〜５０、３０〜５０、３５〜５０、４０〜５０、４５〜５０、１５〜４５、２０〜４５、２５〜４５、３０〜４５、３５〜４５、４０〜４５、１５〜４０、２０〜４０、２５〜４０、３０〜４０、３５〜４０、１５〜３５、２０〜３５、２５〜３５、３０〜３５、１５〜３０、２０〜３０、２５〜３０、１５〜２５、２０〜２５または１５〜２０アミノ酸長を有し得る。
【０１８１】
シグナルペプチドは、典型的に、ＥＲプロセシング中に切断部位で新生ポリペプチドから切断される。本開示のＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンによって産生される成熟ＨＳＶ抗原性ポリペプチドは、典型的に、シグナルペプチドを含まない。
【０１８２】
化学修飾
本開示のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、いくつかの実施形態において、少なくとも１つの単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該ＲＮＡは、少なくとも１つの化学修飾を含む。
【０１８３】
「化学修飾」及び「化学修飾された（化学修飾型）」という用語は、アデノシン（Ａ）、グアノシン（Ｇ）、ウリジン（Ｕ）、チミジン（Ｔ）またはシチジン（Ｃ）のリボヌクレオシドまたはデオキシリボヌクレオシドに対する、その位置、パターン、パーセントまたは集団のうちの少なくとも１つにおける修飾を指す。一般に、これらの用語は、天然に存在する５’末端のｍＲＮＡキャップ部分におけるリボヌクレオチド修飾を指すものではない。
【０１８４】
ポリヌクレオチドの修飾には、限定するものではないが、本明細書に記載されるものが含まれ、化学修飾を含む修飾が含まれるが、これらに明示的に限定されるものではない。ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、天然、非天然である修飾を含み得、またはポリヌクレオチドは、天然及び非天然修飾の組み合わせを含み得る。ポリヌクレオチドは、任意の有用な修飾を含み得、例えば、糖、核酸塩基またはヌクレオシド間結合（例えば、リン酸、ホスホジエステル連結またはホスホジエステル主鎖への結合）の修飾を含み得る。
【０１８５】
ポリペプチドに関して、「修飾」という用語は、標準形の２０アミノ酸セットに対する修飾を指す。本明細書で提供されるポリペプチドは、アミノ酸の置換、挿入または置換と挿入の組み合わせを含有する場合も、「修飾された」とみなされる。
【０１８６】
ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、いくつかの実施形態において、種々の（１つを超える）異なる修飾を含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドの特定領域は、１つ、２つまたはそれ以上の（任意選択により異なる）ヌクレオシド修飾またはヌクレオチド修飾を含有する。いくつかの実施形態において、修飾型ＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、修飾型ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、細胞または生物に導入されると、非修飾型ポリヌクレオチドと比べて、細胞または生物のそれぞれにおいて低減された分解を示す。いくつかの実施形態において、修飾型ＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、修飾型ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、細胞または生物に導入されると、細胞または生物のそれぞれにおいて低減された免疫原性（例えば、低減された先天性応答）を示し得る。
【０１８７】
ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、いくつかの実施形態において、所望の機能または特性を達成するために、ポリヌクレオチドの合成中または合成後に導入される非天然修飾型ヌクレオチドを含む。修飾は、ヌクレオチド間結合、プリン塩基もしくはピリミジン塩基、または糖に存在してもよい。修飾は、化学合成またはポリメラーゼ酵素を用いて、鎖の末端または鎖の他の場所に導入することができる。ポリヌクレオチドのいずれの領域も化学修飾され得る。
【０１８８】
本開示は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）の修飾されたヌクレオシド及びヌクレオチドを提供する。「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書において「核酸塩基」ともいう）との組み合わせで含有する化合物を指す。「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドを指す。修飾されたヌクレオチドは、任意の有用な方法によって、例えば、化学的、酵素的または組み換え的に、１つ以上の修飾されたヌクレオシドまたは非天然ヌクレオシドを含むように合成することができる。ポリヌクレオチドは、連結されたヌクレオシドの１つまたは複数の領域を含み得る。そのような領域は、様々な主鎖結合を有し得る。結合は、標準的なホスホジエステル結合であってよく、この場合、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチドの領域を含むことになる。
【０１８９】
修飾されたヌクレオチドの塩基対合は、標準的なアデノシン−チミン、アデノシン−ウラシルまたはグアノシン−シトシンの塩基対だけでなく、ヌクレオチド及び／または非標準的塩基もしくは修飾された塩基を含む修飾ヌクレオチドの間で形成される塩基対も包含され、ここで、水素結合ドナーと水素結合アクセプターの配置は、非標準的塩基と標準的塩基との間、または２つの相補的な非標準的塩基構造（例えば、少なくとも１つの化学修飾を有するポリヌクレオチドにおけるものなど）との間の水素結合を可能にするものである。そのような非標準的塩基対合の一例は、修飾されたヌクレオチドのイノシンとアデニン、シトシンまたはウラシルとの間の塩基対合である。塩基／糖またはリンカーの任意の組み合わせを本開示のポリヌクレオチドに組み込むことができる。
【０１９０】
化学修飾を含むがこれらに限定されない、本開示の組成物、ワクチン、方法及び合成手順に有用なポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）の修飾は、限定するものではないが、次のものが含まれる：２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−メチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、１，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン、１−メチルアデノシン、２’−Ｏ−メチルアデノシン、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（リン酸）、２−メチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６イソペンテニルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン、２’−Ｏ−メチルアデノシン、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（リン酸）、イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、Ｎ６−アセチルアデノシン、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−メチル−Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、７−デアザ−アデノシン、Ｎ１−メチル−アデノシン、Ｎ６，Ｎ６（ジメチル）アデニン、Ｎ６−シス−ヒドロキシ−イソペンテニル−アデノシン、α−チオ−アデノシン、２（アミノ）アデニン、２（アミノプロピル）アデニン、２（メチルチオ）Ｎ６（イソペンテニル）アデニン、２−（アルキル）アデニン、２−（アミノアルキル）アデニン、２−（アミノプロピル）アデニン、２−（ハロ）アデニン、２−（ハロ）アデニン、２−（プロピル）アデニン、２’−アミノ−２’−デオキシ−ＡＴＰ、２’−アジド−２’−デオキシ−ＡＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アミノアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アジドアデノシンＴＰ、６（アルキル）アデニン、６（メチル）アデニン、６−（アルキル）アデニン、６−（メチル）アデニン、７（デアザ）アデニン、８（アルケニル）アデニン、８（アルキニル）アデニン、８（アミノ）アデニン、８（チオアルキル）アデニン、８−（アルケニル）アデニン、８−（アルキル）アデニン、８−（アルキニル）アデニン、８−（アミノ）アデニン、８−（ハロ）アデニン、８−（ヒドロキシル）アデニン、８−（チオアルキル）アデニン、８−（チオール）アデニン、８−アジド−アデノシン、アザアデニン、デアザアデニン、Ｎ６（メチル）アデニン、Ｎ６−（イソペンチル）アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデノシン、７−メチルアデニン、１−デアザアデノシンＴＰ、２’フルオロ−Ｎ６−Ｂｚ−デオキシアデノシンＴＰ、２’−ＯＭｅ−２−アミノ−ＡＴＰ、２’Ｏ−メチル−Ｎ６−Ｂｚ−デオキシアデノシンＴＰ、２’−ａ−エチニルアデノシンＴＰ、２−アミノアデニン、２−アミノアデノシンＴＰ、２−アミノ−ＡＴＰ、２’−ａ���トリフルオロメチルアデノシンＴＰ、２−アジドアデノシンＴＰ、２’−ｂ−エチニルアデノシンＴＰ、２−ブロモアデノシンＴＰ、２’−ｂ−トリフルオロメチルアデノシンＴＰ、２−クロロアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトアデノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシアデノシンＴＰ、２−フルオロアデノシンＴＰ、２−ヨードアデノシンＴＰ、２−メルカプトアデノシンＴＰ、２−メトキシ−アデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−トリフルオロメチルアデノシンＴＰ、３−デアザ−３−ブロモアデノシンＴＰ、３−デアザ−３−クロロアデノシンＴＰ、３−デアザ−３−フルオロアデノシンＴＰ、３−デアザ−３−ヨードアデノシンＴＰ、３−デアザアデノシンＴＰ、４’−アジドアデノシンＴＰ、４’−炭素環式アデノシンＴＰ、４’−エチニルアデノシンＴＰ、５’−ホモ−アデノシンＴＰ、８−アザ−ＡＴＰ、８−ブロモ−アデノシンＴＰ、８−トリフルオロメチルアデノシンＴＰ、９−デアザアデノシンＴＰ、２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、２−チオシチジン、３−メチルシチジン、５−ホルミルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、５−メチルシチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、２’−Ｏ−メチルシチジン、２’−Ｏ−メチルシチジン、５，２’−Ｏ−ジメチルシチジン、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチルシチジン、リシジン、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチルシチジン、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、Ｎ４，Ｎ４−ジメチル−２’−ＯＭｅ−シチジンＴＰ、４−メチルシチジン、５−アザ−シチジン、プソイド−イソ−シチジン、ピロロ−シチジン、α−チオ−シチジン、２−（チオ）シトシン、２’−アミノ−２’−デオキシ−ＣＴＰ、２’−アジド−２’−デオキシ−ＣＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アミノシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アジドシチジンＴＰ、３（デアザ）５（アザ）シトシン、３（メチル）シトシン、３−（アルキル）シトシン、３−（デアザ）５（アザ）シトシン、３−（メチル）シチジン、４，２’−Ｏ−ジメチルシチジン、５（ハロ）シトシン、５（メチル）シトシン、５（プロピニル）シトシン、５（トリフルオロメチル）シトシン、５−（アルキル）シトシン、５−（アルキニル）シトシン、５−（ハロ）シトシン、５−（プロピニル）シトシン、５−（トリフルオロメチル）シトシン、５−ブロモ−シチジン、５−ヨード−シチジン、５−プロピニ��シトシン、６−（アゾ）シトシン、６−アザ−シチジン、アザシトシン、デアザシトシン、Ｎ４（アセチル）シトシン、１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、１−メチル−プソイドイソシチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、２−メトキシ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−メトキシ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−チオ−プソイドイソシチジン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、ピロロ−プソイドイソシチジン、ゼブラリン、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）シチジンＴＰ、２，２’−無水−シチジンＴＰ塩酸塩、２’フルオロ−Ｎ４−Ｂｚ−シチジンＴＰ、２’フルオロ−Ｎ４−アセチル−シチジンＴＰ、２’−Ｏ−メチル−Ｎ４−アセチル−シチジンＴＰ、２’Ｏ−メチル−Ｎ４−Ｂｚ−シチジンＴＰ、２’−ａ−エチニルシチジンＴＰ、２’−ａ−トリフルオロメチルシチジンＴＰ、２’−ｂ−エチニルシチジンＴＰ、２’−ｂ−トリフルオロメチルシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトシチジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシシチジンＴＰ、２’−Ｏ−メチル−５−（１−プロピニル）シチジンＴＰ、３’−エチニルシチジンＴＰ、４’−アジドシチジンＴＰ、４’−炭素環式シチジンＴＰ、４’−エチニルシチジンＴＰ、５−（１−プロピニル）アラ−シチジンＴＰ、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオシチジンＴＰ、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオシチジンＴＰ、５−アミノアリル−ＣＴＰ、５−シアノシチジンＴＰ、５−エチニルアラ−シチジンＴＰ、５−エチニルシチジンＴＰ、５’−ホモ−シチジンＴＰ、５−メトキシシチジンＴＰ、５−トリフルオロメチル−シチジンＴＰ、Ｎ４−アミノ−シチジンＴＰ、Ｎ４−ベンゾイル−シチジンＴＰ、プソイドイソシチジン、７−メチルグアノシン、Ｎ２，２’−Ｏ−ジメチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、ワイオシン、１，２’−Ｏ−ジメチルグアノシン、１−メチルグアノシン、２’−Ｏ−メチルグアノシン、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（リン酸）、２’−Ｏ−メチルグアノシン、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（リン酸）、７−アミノメチル−７−デアザグアノシン、７−シアノ−７−デアザグアノシン、アルカエオシン、メチルワイオシン、Ｎ２，７−ジメチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２，２’−Ｏ−トリメチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２，７−トリメチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、Ｎ２，７，２’−Ｏ−トリメチルグアノシン、６−チオ−グアノシン、７−デアザ−��アノシン、８−オキソ−グアノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、α−チオ−グアノシン、２（プロピル）グアニン、２−（アルキル）グアニン、２’−アミノ−２’−デオキシ−ＧＴＰ、２’−アジド−２’−デオキシ−ＧＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アミノグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アジドグアノシンＴＰ、６（メチル）グアニン、６−（アルキル）グアニン、６−（メチル）グアニン、６−メチル−グアノシン、７（アルキル）グアニン、７（デアザ）グアニン、７（メチル）グアニン、７−（アルキル）グアニン、７−（デアザ）グアニン、７−（メチル）グアニン、８（アルキル）グアニン、８（アルキニル）グアニン、８（ハロ）グアニン、８（チオアルキル）グアニン、８−（アルケニル）グアニン、８−（アルキル）グアニン、８−（アルキニル）グアニン、８−（アミノ）グアニン、８−（ハロ）グアニン、８−（ヒドロキシル）グアニン、８−（チオアルキル）グアニン、８−（チオール）グアニン、アザグアニン、デアザグアニン、Ｎ（メチル）グアニン、Ｎ−（メチル）グアニン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、６−メトキシ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、１−Ｍｅ−ＧＴＰ、２’フルオロ−Ｎ２−イソブチル−グアノシンＴＰ、２’Ｏ−メチル−Ｎ２−イソブチル−グアノシンＴＰ、２’−ａ−エチニルグアノシンＴＰ、２’−ａ−トリフルオロメチルグアノシンＴＰ、２’−ｂ−エチニルグアノシンＴＰ、２’−ｂ−トリフルオロメチルグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオログアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−クロログアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオログアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトグアノシンＴＰ、２’−デオキシ−２’−
ｂ−チオメトキシグアノシンＴＰ、４’−アジドグアノシンＴＰ、４’−炭素環式グアノシンＴＰ、４’−エチニルグアノシンＴＰ、５’−ホモ−グアノシンＴＰ、８−ブロモ−グアノシンＴＰ、９−デアザグアノシンＴＰ、Ｎ２−イソブチル−グアノシンＴＰ、１−メチルイノシン、イノシン、１，２’−Ｏ−ジメチルイノシン、２’−Ｏ−メチルイノシン、７−メチルイノシン、２’−Ｏ−メチルイノシン、エポキシクエオシン、ガラクトシル−クエオシン、マンノシルクエオシン、クエオシン、アリルアミノ−チミジン、アザチミジン、デアザチミジン、デオキシ−チミジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、２−チオウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチルウリジン、５−ヒドロキシウリジン、５−メチルウリジン、５−タウリノメチル−２−チオウリジン、５−タウリノメチルウリジン、ジヒドロウリジン、プソイドウリジン、（３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン、１−メチル−３−（３−アミノ−５−カルボキシプロピル）プソイドウリジン、１−メチルプソイドウリジン、１−エチル−プソイドウリジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、２’−Ｏ−メチルプソイドウリジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、２−チオ−２’−Ｏ−メチルウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン、３，２’−Ｏ−ジメチルウリジン、３−メチル−プソイド−ウリジンＴＰ、４−チオウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル、５，２’−Ｏ−ジメチルウリジン、５，６−ジヒドロ−ウリジン、５−アミノメチル−２−チオウリジン、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン、５−カルバモイルメチルウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチルウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチルウリジンメチルエステル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、５−カルバモイルメチルウリジンＴＰ、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチルウリジン、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウリジン、５−メトキシカルボニルメチルウリジン、５−メチルウリジン，）、５−メトキシウリジン、５−メチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチル−２−セレノウリジン、５−メチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−メチルジヒドロウリジン、５−オキシ酢酸−ウリジンＴＰ、５−オキシ酢酸−メチルエステル−ウリジンＴＰ、Ｎ１−メチル−プソイド−ウラシル、Ｎ１−エチル−プソイド−ウラシル、ウリジン５−オキシ酢酸、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−ウリジンＴＰ、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオウリジンＴＰ、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチルウリジンＴＰ、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）ウリジンＴＰ、５−プロピニルウラシル、α−チオ−ウリジン、１（アミノアル���ルアミノ−カルボニルエチルエニル）−２（チオ）−プソイドウラシル、１（アミノアルキルアミノカルボニルエチルエニル）−２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、１（アミノアルキルアミノカルボニルエチルエニル）−４（チオ）プソイドウラシル、１（アミノアルキルアミノカルボニルエチルエニル）−プソイドウラシル、１（アミノカルボニルエチルエニル）−２（チオ）−プソイドウラシル、１（アミノカルボニルエチルエニル）−２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、１（アミノカルボニルエチルエニル）−４（チオ）プソイドウラシル、１（アミノカルボニルエチルエニル）−プソイドウラシル、１置換２（チオ）−プソイドウラシル、１置換２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、１置換４（チオ）プソイドウラシル、１置換プソイドウラシル、１−（アミノアルキルアミノ−カルボニルエチルエニル）−２−（チオ）−プソイドウラシル、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイドウリジンＴＰ、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−プソイド−ＵＴＰ、１−エチル−プソイド−ＵＴＰ、２（チオ）プソイドウラシル、２’デオキシウリジン、２’フルオロウリジン、２−（チオ）ウラシル、２，４−（ジチオ）プソイドウラシル、２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルロ−グアノシン、２’−アミノ−２’−デオキシ−ＵＴＰ、２’−アジド−２’−デオキシ−ＵＴＰ、２’−アジド−デオキシウリジンＴＰ、２’−Ｏ−メチルプソイドウリジン、２’デオキシウリジン、２’フルオロウリジン、２’−デオキシ−２’−ａ−アミノウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−アジドウリジンＴＰ、２−メチルプソイドウリジン、３（３アミノ−３カルボキシプロピル）ウラシル、４（チオ）プソイドウラシル、４−（チオ）プソイドウラシル、４−（チオ）ウラシル、４−チオウラシル、５（１，３−ジアゾール−１−アルキル）ウラシル、５（２−アミノプロピル）ウラシル、５（アミノアルキル）ウラシル、５（ジメチルアミノアルキル）ウラシル、５（グアニジニウムアルキル）ウラシル、５（メトキシカルボニルメチル）−２−（チオ）ウラシル、５（メトキシカルボニル−メチル）ウラシル、５（メチル）２（チオ）ウラシル、５（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル、５（メチル）４（チオ）ウラシル、５（メチルアミノメチル）−２（チオ）ウラシル、５（メチルアミノメチル）−２，４（ジチオ）ウラシル、５（メチルアミノメチル）−４（チオ）ウラシル、５（プロピニル）ウラシル、５（トリフルオロメチル）ウラシル、５−（２−アミノプロピル）ウラシル、５−（アルキル）−２−（チオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）−２，４（ジチオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）−４（チオ）プソイドウラシル、５−（アルキル）プソイドウラシル、５−（アルキル）ウラシル、５−（アルキニル）ウラシル、５−（アリルアミノ）ウラシル、５−（シアノアルキル）ウラシル、５−（ジアルキルアミノアルキル）ウラシル、５−（ジメチルアミノアルキル）ウラシル、５−（グアニジニウムアルキル）ウラシル、５−（ハロ）ウラシル、５−（１，３−ジアゾール−１−アル���ル）ウラシル、５−（メトキシ）ウラシル、５−（メトキシカルボニルメチル）−２−（チオ）ウラシル、５−（メトキシカルボニル−メチル）ウラシル、５−（メチル）２（チオ）ウラシル、５−（メチル）２，４（ジチオ）ウラシル、５−（メチル）４（チオ）ウラシル、５−（メチル）−２−（チオ）プソイドウラシル、５−（メチル）−２，４（ジチオ）プソイドウラシル、５−（メチル）−４（チオ）プソイドウラシル、５−（メチル）プソイドウラシル、５−（メチルアミノメチル）−２（チオ）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）−２，４（ジチオ）ウラシル、５−（メチルアミノメチル）−４−（チオ）ウラシル、５−（プロピニル）ウラシル、５−（トリフルオロメチル）ウラシル、５−アミノアリル−ウリジン、５−ブロモ−ウリジン、５−ヨード−ウリジン、５−ウラシル、６（アゾ）ウラシル、６−（アゾ）ウラシル、６−アザ−ウリジン、アリルアミノ−ウラシル、アザウラシル、デアザウラシル、Ｎ３（メチル）ウラシル、プソイド−ＵＴＰ−１−２−エタン酸、プソイドウラシル、４−チオ−プソイド−ＵＴＰ、１−カルボキシメチル−プソイドウリジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、１−プロピニル−ウリジン、１−タウリノメチル−１−メチル−ウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、１−タウリノメチル−プソイドウリジン、２−メトキシ−４−チオ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、（±）１−（２−ヒドロキシプロピル）プソイドウリジンＴＰ、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）プソイドウリジンＴＰ、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）プソイドウリジンＴＰ、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）アラ−ウリジンＴＰ、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）ウリジンＴＰ、（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）アラ−ウリジンＴＰ、（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）ウリジンＴＰ、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ＵＴＰ、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）プソイドウリジンＴＰ、１−（２，２−ジエトキシエチル）プソイドウリジンＴＰ、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（２−ヒドロキシエチル）プソイドウリジンＴＰ、１−（２−Ｍエトキシエチル）プソイドウリジンＴＰ、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（３，４−ジメトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロ��ル）プソイド−ＵＴＰ、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ＵＴＰ、１−（３−シクロプロピル−プロパ−２−イニル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−アジドベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−ブロモベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−クロロベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−フルオロベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−ヨードベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−メタンスルホニルベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−メトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−メチルベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−ニトロベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ＵＴＰ、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−（４−チオメトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）プソイドウリジンＴＰ、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ＵＴＰ、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ＵＴＰ、１，６−ジメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］プソイドウリジンＴＰ、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイドウリジンＴＰ、１−アセチルプソイドウリジンＴＰ、１−アルキル−６−（１−プロピニル）−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−（２−プロピニル）−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−アリル−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−エチニル−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−ホモアリル−プソイド−ＵＴＰ、１−アルキル−６−ビニル−プソイド−ＵＴＰ、１−アリルプソイドウリジンＴＰ、１−アミノメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−ベンゾイルプソイドウリジンＴＰ、１−ベンジルオキシメチルプソイドウリジンＴＰ、１−ベンジル−プソイド−ＵＴＰ、１−ビオチニル−
ＰＥＧ２−プソイドウリジンＴＰ、１−ビオチニルプソイドウリジンＴＰ、１−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シアノメチルプソイドウリジンＴＰ、１−シクロブチルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロヘプチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロヘキシル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロオクチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロペンチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−シクロプロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−エチル−プソイド−ＵＴＰ、１−ヘキシル−プソイド−ＵＴＰ、１−ホモアリルプソイドウリジンＴＰ、１−ヒドロキシメチルプソイドウリジンＴＰ、１−イソ−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−Ｍｅ−２−チオ−プソイド−ＵＴＰ、１−Ｍｅ−４−チオ−プソイド−ＵＴＰ、１−Ｍｅ−アルファ−チオ−プソイド−ＵＴＰ、１−メタンスルホニルメチルプソイドウリジンＴＰ、１−メトキシメチルプソイドウリジンＴＰ、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−（置換フェニル）プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−アジド−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−エチル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ＵＴＰ、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−モルホリノメチルプソイドウリジンＴＰ、１−ペンチル−プソイド−ＵＴＰ、１−フェニル−プソイド−ＵＴＰ、１−ピバロイルプソイドウリジンＴＰ、１−プロパルギルプソイドウリジンＴＰ、１−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、１−プロピニル−プソイドウリジン、１−ｐ−トリル−プソイド−ＵＴＰ、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、１−チオメトキシメチルプソイドウリジンＴＰ、１−チオモルホリノメチルプソイドウリジンＴＰ、１−トリフルオロアセチルプソイドウリジンＴＰ、１−トリフルオロメチル−プソイド−ＵＴＰ、１−ビニルプソイドウリジンＴＰ、２，２’−無水−ウリジンＴＰ、２’−ブロモ−デオキシウリジンＴＰ、２’−Ｆ−５−メチル−２’−デオキシ−ＵＴＰ、２’−ＯＭｅ−５−Ｍｅ−ＵＴＰ、２’−ＯＭｅ−プソイド−ＵＴＰ、２’−ａ−エチニルウリジンＴＰ、２’−ａ−トリフルオロメチルウリジンＴＰ、２’−ｂ−エチニルウリジンＴＰ、２’−ｂ−トリフルオロメチルウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−メルカプトウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ａ−チオメトキシウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アミノウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−アジドウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ブロモウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−クロロウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−フルオロウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−ヨードウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−メルカプトウリジンＴＰ、２’−デオキシ−２’−ｂ−チオメトキシウリジンＴＰ、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、２−メトキシウリジン、２’−Ｏ−メチル−５−（１−プロピニル）ウリジンＴＰ、３−アルキル−プソイド−ＵＴＰ、４’−アジドウリジンＴＰ、４’−炭素環式ウリジンＴＰ、４’−エチニルウリジンＴＰ、５−（１−プロピニル）アラ−ウリジンＴＰ、５−（２−フラニル）ウリジンＴＰ、５−シアノウリジンＴＰ、５−ジメチルアミノウリジンＴＰ、５’−ホモ−ウリジンＴＰ、５−ヨード−２’−フルオロ−デオキシウリジンＴＰ、５−フェニルエチニルウリジンＴＰ、５−トリ重水素メチル−６−重水素ウリジンＴＰ、５−トリフルオロメチル−ウリジンＴＰ、５−ビニルアラウリジンＴＰ、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ＵＴＰ、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ＵＴＰ、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ＵＴＰ、６−（置換フェニル）−プソイド−ＵＴＰ、６−アミノ−プソイド−ＵＴＰ、６−アジド−プソイド−ＵＴＰ、６−ブロモ−プソイド−ＵＴＰ、６−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、６−クロロ−プソイド−ＵＴＰ、６−シアノ−プソイド−ＵＴＰ、６−ジメチルアミノ−プソイド−ＵＴＰ、６−エトキシ−プソイド−ＵＴＰ、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ＵＴＰ、６−エチル−プソイド−ＵＴＰ、６−フルオロ−プソイド−ＵＴＰ、６−ホルミル−プソイド−ＵＴＰ、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ＵＴＰ、６−ヒドロキシ−プソイド−ＵＴＰ、６−ヨード−プソイド−ＵＴＰ、６−イソ−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、６−メトキシ−プソイド−ＵＴＰ、６−メチルアミノ−プソイド−ＵＴＰ、６−メチル−プソイド−ＵＴＰ、６−フェニル−プソイド−ＵＴＰ、６−フェニル−プソイド−ＵＴＰ、６−プロピル−プソイド−ＵＴＰ、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ＵＴＰ、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ＵＴＰ、６−トリフルオロメチル−プソイド−ＵＴＰ、アルファ−チオ−プソイド−ＵＴＰ、プソイドウリジン１−（４−メチルベンゼンスルホン酸）ＴＰ、プソイドウリジン１−（４−メチル安息香酸）ＴＰ、プソイドウリジンＴＰ１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイドウリジンＴＰ１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイドウリジンＴＰ１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイドウリジンＴＰ１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイドウリジンＴＰ１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイドウリジンＴＰ１−メチルホスホン酸、プソイドウリジンＴＰ１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、プソイド−ＵＴＰ−Ｎ１−ｐ−安息香酸、ワイブトシン、ヒドロキシワイブトシン、イソワイオシン、ペルオキシワイブトシン、低修飾ヒドロキシワイブトシン、４−デメチルワイオシン、２，６−（ジアミノ）プリン、１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル：１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノチアジン−ｌ−イル、１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、１，３，５−（トリアザ）−２，６−（ジオキサ）−ナフタレン、２（アミノ）プリン、２，４，５−（トリメチル）フェニル、２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルロ−シチジン、２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルロ−アデニン、２’メチル、２’アミノ、２’アジド、２’フルロ−ウリジン、２’−アミノ−２’−デオキシリボース、２−アミノ−６−クロロ−プリン、２−アザ−イノシニル、２’−アジド−２’−デオキシリボース、２’フルオロ−２’−デオキシリボース、２’−フルオロ−修飾塩基、２’−Ｏ−メチル−リボース、２−オキソ−７−アミノピリドピリミジン−３−イル、２−オキソ−ピリドピリミジン−３−イル、２−ピリジノン、３ニトロピロール、３−（メチル）−７−（プロピニル）イソカルボスチリリル、３−（メチル）イソカルボスチリリル、４−（フルオロ）−６−（メチル）ベンゾイミダゾール、４−（メチル）ベンゾイミダゾール、４−（メチル）インドリル、４，６−（ジメチル）インドリル、５ニトロインドール、５置換ピリミジン、５−（メチル）イソカルボスチリリル、５−ニトロインドール、６−（アザ）ピリミジン、６−（アゾ）チミン、６−（メチル）−７−（アザ）インドリル、６−クロロ−プリン、６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノチアジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノチアジン−１−イル、７−（アミノアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（アザ）インドリル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノチアジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキル−ヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノチアジン−１−イル、７−（グアニジニウムアルキルヒドロキシ）−１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、７−（プロピニル）イソカルボスチリリル、７−（プロピニル）イソカルボスチリリル、プロピニル−７−（アザ）インドリル、７−デアザ−イノシニル、７−置換１−（アザ）−２−（チオ）−３−（アザ）−フェノキサジン−１−イル、７−置換１，３−（ジアザ）−２−（オキソ）−フェノキサジン−１−イル、９−（メチル）−イミジゾピリジニル、アミノインドリル、アントラセニル、ビス−オルト−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ビス−オルト−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ジフルオロトリル、ヒポキサンチン、イミジゾピリジニル、イノシニル、イソカルボスチリリル、イソグアニシン、Ｎ２−置換プリン、Ｎ６−メチル−２−アミノ−プリン、Ｎ６−置換プリン、Ｎ−アルキル化誘導体、ナフタレニル、ニトロベンゾイミダゾリル、ニトロイミダゾリル、ニトロインダゾリル、ニトロピラゾリル、ヌブラリン、Ｏ６−置換プリン、Ｏ−アルキル化誘導体、オルト−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、オルト−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、オキソホルミシンＴＰ、パラ−（アミノアルキルヒドロキシ）−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、パラ−置換−６−フェニル−ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ペンタセニル、フェナントラセニル、フェニル、プロピニル−７−（アザ）イン
ドリル、ピレニル、ピリドピリミジン−３−イル、ピリドピリミジン−３−イル、２−オキソ−７−アミノ−ピリドピリミジン−３−イル、ピロロ−ピリミジン−２−オン−３−イル、ピロロピリミジニル、ピロロピリジニル、スチルベンジル、置換１，２，４−トリアゾール、テトラセニル、ツベルシジン、キサンチン、キサントシン−５’−ＴＰ、２−チオ−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、７−デアザ−２−アミノ−プリン、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、２−アミノ−リボシド−ＴＰ、ホルマイシンＡＴＰ、ホルマイシンＢＴＰ、ピロロシンＴＰ、２’−ＯＨ−アラ−アデノシンＴＰ、２’−ＯＨ−アラ−シチジンＴＰ、２’−ＯＨ−アラ−ウリジンＴＰ、２’−ＯＨ−アラ−グアノシンＴＰ、５−（２−カルボメトキシビニル）ウリジンＴＰ、及びＮ６−（１９−アミノ−ペンタオキサノンアデシル）アデノシンＴＰ。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、前述の修飾核酸塩基の少なくとも２つ（例えば、２、３、４つまたはそれ以上）の組み合わせを含む。
【０１９２】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）中の修飾核酸塩基は、プソイドウリジン（ψ）、２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、２’−Ｏ−メチルウリジン、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）、１−エチル−プソイドウリジン（ｅ１ψ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、α−チオ−グアノシン、α−チオ−アデノシン、５−シアノウリジン、４’−チオウリジン７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）及び２，６−ジアミノプリン、（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、２，８−ジメチルアデノシン、２−ゲラニルチオウリジン、２−リシジン、２−セレノウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−５，６−ジヒドロウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイドウリジン、３−メチルプソイドウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）−２’−Ｏ−メチルウリジンメチルエステル、５−アミノメチル−２−ゲラニルチオウリジン、５−アミノメチル−２−セレノウリジン、５−アミノメチルウリジン、５−カルバモイルヒドロキシメチルウリジン、５−カルバモイルメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−ゲラニルチオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−セレノウリジン、５−シアノメチルウリジン、５−ヒドロキシシチジン、５−メチルアミノメチル−２−ゲラニルチオウリジン、７−アミノカルボキシプロピル−デメチルワイオシン、７−アミノカルボキシプロピルワイオシン、７−アミノカルボキシプロピルワイオシンメチルエステル、８−メチルアデノシン、Ｎ４，Ｎ４−ジメチルシチジン、Ｎ６−ホルミルアデノシン、Ｎ６−ヒドロキシメチルアデノシン、アグマチジン、環式Ｎ６−スレオニルカルバモイルアデノシン、グルタミル−クエオシン、メチル化低修飾ヒドロキシワイブトシン、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチルシチジン、ゲラニル化５−メチルアミノメチル−２−チオウリジン、ゲラニル化５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、Ｑ塩基、ｐｒ��Ｑ０塩基、ｐｒｅＱ１塩基、ならびにこれらの２つ以上の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの化学修飾ヌクレオシドは、プソイドウリジン、１−メチル−プソイドウリジン、１−エチル−プソイドウリジン、５−メチルシトシン、５−メトキシウリジン及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリリボヌクレオチドなどのＲＮＡポリリボヌクレオチド）は、前述の修飾核酸塩基の少なくとも２つ（例えば、２、３、４つまたはそれ以上）の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、前述の修飾核酸塩基の少なくとも２つ（例えば、２、３、４つまたはそれ以上）の組み合わせを含む。
【０１９３】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）中の修飾核酸塩基は、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）、１−エチル−プソイドウリジン（ｅ１ψ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、プソイドウリジン（ψ）、α−チオ−グアノシン及びα−チオ−アデノシンからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチドは、化学修飾を含むがこれらに限定されない、前述の修飾核酸塩基の少なくとも２つ（例えば、２、３、４つまたはそれ以上）の組み合わせを含む。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、プソイドウリジン（ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、１−エチル−プソイドウリジン（ｅ１ψ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、１−エチル−プソイドウリジン（ｅ１ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、２−チオウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、２’−Ｏ−メチルウリジンを含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、２’−Ｏ−メチルウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。いくつかの実施形態において、ポリリボヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなどのＲＮＡ）は、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
【０１９５】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチドなどのＲＮＡポリヌクレオチド）は、特定の修飾で均一に修飾される（例えば、完全に修飾される、配列全体にわたって修飾される）。例えば、ポリヌクレオチドは、１−メチル−プソイドウリジンで均一に修飾され得、すなわち、ｍＲＮＡ配列中の全てのウリジン残基が１−メチル−プソイドウリジンで置き換えられる。同様に、ポリヌクレオチドは、配列中に存在するあらゆる種類のヌクレオシド残基が上記のものなどの修飾残基で置き換えられることによって、均一に修飾され得る。
【０１９６】
修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−プソイドイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）及び２−チオ−５−メチル−シチジンが挙げられる。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾ウリジンである。修飾ウリジンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）、１−エチル−プソイドウリジン（ｅ１ψ）、５−メトキシウリジン、２−チオウリジン、５−シアノウリジン、２’−Ｏ−メチルウリジン及び４’−チオウリジンが挙げられる。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）及びＮ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）が挙げられる。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、８−オキソ−グアノシン及び７−メチル−８−オキソ−グアノシンが挙げられる。
【０２００】
本開示のポリヌクレオチドは、分子の全長にわたって部分的にまたは完全に修飾され得る。例えば、本発明のポリヌクレオチドまたはその所定の配列領域（例えば、ポリＡテールを含む、または含まないｍＲＮＡ）中の１つ以上または全てまたは所与の種類のヌクレオチド（例えば、プリンもしくはピリミジン、またはＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つ以上もしくは全て）が均一に修飾され得る。いくつかの実施形態において、本開示のポリヌクレオチド（またはその所与の配列領域）中の全てのヌクレオチドＸが、修飾ヌクレオチドであり、ここで、Ｘは、ヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのうちのいずれか１つ、または組み合わせＡ＋Ｇ、Ａ＋Ｕ、Ａ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、Ｇ＋Ｃ、Ｕ＋Ｃ、Ａ＋Ｇ＋Ｕ、Ａ＋Ｇ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ＋ＣもしくはＡ＋Ｇ＋Ｃのうちのいずれか１つである。
【０２０１】
ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドを約１％〜約１００％（全体的なヌクレオチド含有量に対して、またはヌクレオチドの１つ以上の種類（すなわち、Ａ、Ｇ、ＵまたはＣのうちのいずれか１つ以上）に対して）、またはその間の任意のパーセンテージ（例えば、１％〜２０％、１％〜２５％、１％〜５０％、１％〜６０％、１％〜７０％、１％〜８０％、１％〜９０％、１％〜９５％、１０％〜２０％、１０％〜２５％、１０％〜５０％、１０％〜６０％、１０％〜７０％、１０％〜８０％、１０％〜９０％、１０％〜９５％、１０％〜１００％、２０％〜２５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、２０％〜７０％、２０％〜８０％、２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜１００％、５０％〜６０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、５０％〜９０％、５０％〜９５％、５０％〜１００％、７０％〜８０％、７０％〜９０％、７０％〜９５％、７０％〜１００％、８０％〜９０％、８０％〜９５％、８０％〜１００％、９０％〜９５％、９０％〜１００％及び９５％〜１００％）含有し得る。任意の残りのパーセンテージは、非修飾のＡ、Ｇ、ＵまたはＣの存在によって占められることは理解されるであろう。
【０２０２】
ポリヌクレオチドは、最小１％及び最大１００％の修飾ヌクレオチド、またはその間の任意のパーセンテージ、例えば、少なくとも５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも１０％の修飾ヌクレオチド、少なくとも２５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも５０％の修飾ヌクレオチド、少なくとも８０％の修飾ヌクレオチド、もしくは少なくとも９０％の修飾ヌクレオチドを含有し得る。例えば、ポリヌクレオチドは、修飾ウラシルまたは修飾シトシンなどの修飾ピリミジンを含有し得る。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド中のウラシルの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％が、修飾ウラシル（例えば、５−置換ウラシル）によって置き換えられる。修飾ウラシルは、単一の特有な構造を有する化合物によって置き換えられてもよいし、異なる構造（例えば、２、３、４つまたはそれ以上の特有な構造）を有する複数の化合物によって置き換えられてもよい。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド中のシトシンの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％が、修飾シトシン（例えば、５−置換シトシン）によって置き換えられる。修飾シトシンは、単一の特有な構造を有する化合物によって置き換えられてもよいし、異なる構造（例えば、２、３、４つまたはそれ以上の特有な構造）を有する複数の化合物によって置き換えられてもよい。
【０２０３】
したがって、いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンは、５’ＵＴＲエレメント、任意選択によりコドン最適化オープンリーディングフレームならびに３’ＵＴＲエレメント、ポリ（Ａ）配列及び／またはポリアデニル化シグナルを含み、当該ＲＮＡは、化学修飾されていない。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、プソイドウリジン（ψ）、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ウリジン（ｓ２Ｕ）、４−チオ−ウリジン（ｓ４Ｕ）、４−チオ−プソイドウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５−アミノアリル−ウリジン、５−ハロ−ウリジン（例えば、５−ヨード−ウリジンまたは５−ブロモ−ウリジン）、３−メチル−ウリジン（ｍ３Ｕ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５−カルボキシメチル−ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１−カルボキシメチル−プソイドウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５−アミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５−カルバモイルメチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−プソイドウリジン、５−タウリノメチル−ウリジン（τｍ５Ｕ）、１−タウリノメチル−プソイドウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１−タウリノメチル−４−チオ−プソイドウリジン、５−メチル−ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）、１−エチル−プソイドウリジン（ｅ１ψ）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１−メチル−４−チオ−プソイドウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、３−メチル−プソイドウリジン（ｍ３ψ）、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、５−メチル−ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−メトキシ−ウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、Ｎ１−メチル−プソイドウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３ψ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウリ��ン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α−チオ−ウリジン、２’−Ｏ−メチル−ウリジン（Ｕｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’−Ｏ−メチル−プソイドウリジン（ψｍ）、２−チオ−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び５−（イソペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１−チオ−ウリジン、デオキシチミジン、２’−Ｆ−アラ−ウリジン、２’−Ｆ−ウリジン、２’−ＯＨ−アラ−ウリジン、５−（２−カルボメトキシビニル）ウリジン及び５−［３−（１−Ｅ−プロペニルアミノ）］ウリジンが挙げられる。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、５−アザ−シチジン、６−アザ−シチジン、プソイドイソシチジン、３−メチル−シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−ホルミル−シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４−メチル−シチジン（ｍ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−プソイドイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−プソイドイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−プソイドイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−プソイドイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α−チオ−シチジン、２’−Ｏ−メチル−シチジン（Ｃｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１−チオ−シチジン、２’−Ｆ−アラ−シチジン、２’−Ｆ−シチジン及び２’−ＯＨ−アラ−シチジンが挙げられる。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、２−アミノ−プリン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノ−６−ハロ−プリン（例えば、２−アミノ−６−クロロ−プリン）、６−ハロ−プリン（例えば、６−クロロ−プリン）、２−アミノ−６−メチル−プリン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｉ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６−グリシニルカルバモイル−アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６−メチル−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６−ジメチル−アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６−アセチル−アデノシン（ａｃ６Ａ）、７−メチル−アデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、α−チオ−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチル−アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（リン酸）（Ａｒ（ｐ））、２−アミノ−Ｎ６−メチル−プリン、１−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、２’−Ｆ−アラ−アデノシン、２’−Ｆ−アデノシン、２’−ＯＨ−アラ−アデノシン及びＮ６−（１９−アミノ−ペンタオキサノンアデシル）−アデノシンが挙げられる。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドには、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４−デメチル−ワイオシン（ｉｍＧ−１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、低修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７−デアザ−グアノシン、クエオシン（Ｑ）、エポキシクエオシン（ｏＱ）、ガラクトシル−クエオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル−クエオシン（ｍａｎＱ）、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチル−イノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、α−チオ−グアノシン、２’−Ｏ−メチル−グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’−Ｏ−メチル−イノシン（Ｉｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（リン酸）（Ｇｒ（ｐ））、１−チオ−グアノシン、Ｏ６−メチル−グアノシン、２’−Ｆ−アラ−グアノシン、及び２’−Ｆ−グアノシンが挙げられる。
【０２０８】
ＨＳＶワクチン
ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写
本開示のＨＳＶワクチンは、ｍＲＮＡ（例えば、修飾されたｍＲＮＡ）などの少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含む。ｍＲＮＡは、例えば、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写鋳型」と呼ばれる鋳型ＤＮＡからｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１つの化学修飾を有する。少なくとも１つの化学修飾には、明示的に限定されるものではないが、本明細書に記載の任意の修飾が含まれ得る。
【０２０９】
ＲＮＡのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写は、当該技術分野において知られており、ＷＯ／２０１４／１５２０２７（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている。例えば、いくつかの実施形態において、ＲＮＡ転写産物は、ＲＮＡ転写産物を生成するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応において、増幅されていない線状ＤＮＡ鋳型を使用して生成される。いくつかの実施形態において、ＲＮＡ転写産物は、酵素的キャッピングによりキャッピングされる。いくつかの実施形態において、ＲＮＡ転写産物は、クロマトグラフ法により、例えば、オリゴｄＴ基質を使用して精製される。いくつかの実施形態は、ＤＮａｓｅの使用を除外する。いくつかの実施形態において、ＲＮＡ転写産物は、Ｔ７ファージＲＮＡポリメラーゼ及び所望の化学物質のヌクレオチド三リン酸を利用する酵素的ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応により、目的遺伝子をコードする増幅されていない線状ＤＮＡ鋳型から合成される。任意数のＲＮＡポリメラーゼまたはバリアントを本発明の方法で使用することができる。ポリメラーゼは、ファージＲＮＡポリメラーゼ、例えば、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３  ＲＮＡポリメラーゼ、ＳＰ６  ＲＮａポリメラーゼ及び／または変異ポリメラーゼ（例えば、限定するものではないが、化学修飾された核酸及び／またはヌクレオチドを含む修飾核酸及び／または修飾ヌクレオチドを組み込むことができるポリメラーゼ）から選択され得るが、これらに限定されない。
【０２１０】
いくつかの実施形態において、増幅されていない線状化プラスミドＤＮＡをｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写の鋳型ＤＮＡとして利用する。いくつかの実施形態において、鋳型ＤＮＡは、単離されたＤＮＡである。いくつかの実施形態において、鋳型ＤＮＡは、ｃＤＮＡである。いくつかの実施形態において、ｃＤＮＡは、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、限定するものではないが、ＨＳＶ  ＲＮＡ、例えば、ＨＳＶ  ｍＲＮＡの逆転写によって形成される。いくつかの実施形態において、細胞は、例えば、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉであり、例えば、ＤＨ−１細胞にプラスミドＤＮＡ鋳型をトランスフェクトする。いくつかの実施形態において、トランスフェクトした細胞を培養してプラスミドＤＮＡを複製し、その後、プラスミドＤＮＡを単離及び精製する。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ鋳型は、５’側に位置し、目的遺伝子に作動可能に連結されたＲＮＡポリメラーゼプロモーター、例えば、Ｔ７プロモーターを含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写鋳型は、５’非翻訳（ＵＴＲ）領域をコードし、オープンリーディングフレームを含有し、３’ＵＴＲ及びポリＡテールをコードする。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写鋳型の特定の核酸配列の組成及び長さは、鋳型によってコードされるｍＲＮＡに依存する。
【０２１２】
「５’非翻訳領域」（ＵＴＲ）は、ポリペプチドをコードしていない開始コドン（すなわち、リボソームによって翻訳されるｍＲＮＡ転写産物の最初のコドン）から直接上流（すなわち、５’側）にあるｍＲＮＡの領域を指す。
【０２１３】
「３’非翻訳領域」（ＵＴＲ）は、ポリペプチドをコードしていない終止コドン（すなわち、翻訳の終結を伝達するｍＲＮＡ転写産物のコドン）から直接下流（すなわち、３’側）にあるｍＲＮＡの領域を指す。
【０２１４】
「オープンリーディングフレーム」は、開始コドン（例えば、メチオニン（ＡＴＧ））で始まり、終止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧまたはＴＧＡ）で終わり、かつポリペプチドをコードするＤＮＡの連続ストレッチである。
【０２１５】
「ポリＡテール」は、多数の連続したアデノシン一リン酸を含有する、３’ＵＴＲから下流、例えば、直接下流（すなわち、３’側）にあるｍＲＮＡの領域である。ポリＡテールは、１０〜３００個のアデノシン一リン酸を含有し得る。例えば、ポリＡテールは、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０または３００個のアデノシン一リン酸を含有し得る。いくつかの実施形態において、ポリＡテールは、５０〜２５０個のアデノシン一リン酸を含有する。関連する生物学的環境内（例えば、細胞内、ｉｎ  ｖｉｖｏ）において、ポリ（Ａ）テールは、例えば、細胞質内での酵素分解からｍＲＮＡを保護するように機能し、また転写終結、核からのｍＲＮＡの輸送及び翻訳を助ける。
【０２１６】
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、２００〜３，０００個のヌクレオチドを含む。例えば、ポリヌクレオチドは、２００〜５００、２００〜１０００、２００〜１５００、２００〜３０００、５００〜１０００、５００〜１５００、５００〜２０００、５００〜３０００、１０００〜１５００、１０００〜２０００、１０００〜３０００、１５００〜３０００または２０００〜３０００個のヌクレオチドを含み得る。
【０２１７】
治療方法
ヒト及び他の動物におけるＨＳＶの予防及び／または治療のための組成物（例えば、医薬組成物）、方法、キット及び試薬が本明細書で提供される。ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、治療薬または予防薬として使用することができる。これは、感染症の予防及び／または治療のための薬剤として使用することができる。例示的な態様において、本開示のＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、ＨＳＶからの予防的保護を提供するために使用される。ＨＳＶからの予防的保護は、本開示のＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの投与後に達成され得る。ワクチンは、１回、２回、３回、４回またはそれ以上投与することができるが、ワクチンを１回投与すれば十分であり得る（その後、任意選択により１回のブースターを行う）。あまり望ましくはないが、感染個体にワクチンを投与して治療応答を達成することが可能である。用量は適宜調整する必要があり得る。
【０２１８】
いくつかの実施形態において、本開示のＨＳＶワクチンは、対象におけるＨＳＶ感染を予防する方法として使用することができ、この方法は、当該対象に本発明の少なくとも１つのＨＳＶワクチンを投与することを含む。他の実施形態において、本発明のＨＳＶワクチンは、対象におけるＨＳＶ一次感染を阻害する方法として使用することができ、この方法は、当該対象に本発明の少なくとも１つのＨＳＶワクチンを投与することを含む。他の実施形態において、本発明のＨＳＶワクチンは、対象におけるＨＳＶ感染を治療する方法として使用することができ、この方法は、当該対象に本発明の少なくとも１つのＨＳＶワクチンを投与することを含む。他の実施形態において、本発明のＨＳＶワクチンは、対象におけるＨＳＶ感染の発生率を低減する方法として使用することができ、この方法は、当該対象に本発明の少なくとも１つのＨＳＶワクチンを投与することを含む。他の実施形態において、本発明のＨＳＶワクチンは、ＨＳＶに感染した第１の対象からＨＳＶに感染していない第２の対象へのＨＳＶの伝染を阻害する方法として使用することができ、この方法は、当該第１の対象及び当該第２の対象のうちの少なくとも一方に本発明の少なくとも１つのＨＳＶワクチンを投与することを含む。
【０２１９】
本開示の態様において、ＨＳＶに対する対象の免疫応答を誘発する方法が提供される。方法は、少なくとも１つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含むＨＳＶ  ＲＮＡワクチンを対象に投与することを伴い、これにより、当該対象において、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片に特異的な免疫応答を誘導するものであり、当該対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価は、ワクチン接種後、ＨＳＶに対する従来型ワクチンを予防上有効な用量で接種した対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価と比較して増加する。「抗抗原性ポリペプチド抗体」は、抗原性ポリペプチドに特異的に結合する血清抗体である。
【０２２０】
予防上有効な用量は、臨床的に許容されるレベルでウイルスの感染を防ぐ治療上有効な用量である。いくつかの実施形態において、治療上有効な用量は、ワクチンの添付文書に列挙される用量である。従来型ワクチンは、本明細書で使用されるとき、本発明のＲＮＡワクチン以外のワクチンを指す。例えば、従来型ワクチンには、生きた微生物のワクチン、死滅した微生物のワクチン、サブユニットワクチン、タンパク質抗原ワクチン、ＤＮＡワクチンなどが含まれるが、これらに限定されない。例示的な実施形態において、従来型ワクチンは、規制当局の承認を受け、かつ／または国内医薬品規制機関、例えば、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）もしくは欧州医薬品庁（ＥＭＡ）によって登録されたワクチンである。
【０２２１】
いくつかの実施形態において、対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価は、ワクチン接種後、ＨＳＶに対する従来型ワクチンを予防上有効な用量で接種した対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価と比較して、１ｌｏｇ〜１０ｌｏｇ増加する。
【０２２２】
いくつかの実施形態において、対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価は、ワクチン接種後、ＨＳＶに対する従来型ワクチンを予防上有効な用量で接種した対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価と比較して、１ｌｏｇ増加する。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価は、ワクチン接種後、ＨＳＶに対する従来型ワクチンを予防上有効な用量で接種した対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価と比較して、２ｌｏｇ増加する。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価は、ワクチン接種後、ＨＳＶに対する従来型ワクチンを予防上有効な用量で接種した対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価と比較して、３ｌｏｇ増加する。
【０２２５】
いくつかの実施形態において、対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価は、ワクチン接種後、ＨＳＶに対する従来型ワクチンを予防上有効な用量で接種した対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価と比較して、５ｌｏｇ増加する。
【０２２６】
いくつかの実施形態において、対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価は、ワクチン接種後、ＨＳＶに対する従来型ワクチンを予防上有効な用量で接種した対象の抗抗原性ポリペプチド抗体力価と比較して、１０ｌｏｇ増加する。
【０２２７】
本発明の他の態様において、ＨＳＶに対する対象の免疫応答を誘発する方法が提供される。方法は、少なくとも１つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡポリヌクレオチドを含むＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを対象に投与することを伴い、これにより、当該対象において、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片に特異的な免疫応答を誘導するものであり、当該対象における免疫応答は、ＨＳＶに対する従来型ワクチンをＲＮＡワクチンに対して２倍〜１００倍の用量レベルで接種した対象における免疫応答と同等である。
【０２２８】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して２倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２２９】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して３倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して４倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して５倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して１０倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２３３】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して５０倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２３４】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して１００倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２３５】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して１０〜１０００倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２３６】
いくつかの実施形態において、対象の免疫応答は、従来型ワクチンをＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して１００〜１０００倍の用量レベルで接種した対象の免疫応答と同等である。
【０２３７】
他の実施形態において、免疫応答は、対象における抗抗原性ポリペプチド抗体力価を決定することによって評価される。
【０２３８】
他の態様において、本発明は、少なくとも１つのＨＳＶ抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片をコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含むＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを対象に投与することによって、当該対象において、ＨＳＶに対する免疫応答を誘発する方法であり、これにより、当該対象において、ＨＳＶ抗原性ポリペプチドまたはその免疫原性断片に特異的な免疫応答を誘導するものであり、当該対象における免疫応答は、ＨＳＶに対する従来型ワクチンを予防上有効な用量で接種した対象において誘発される免疫応答と比較して２日〜１０週間早く誘導される。いくつかの実施形態において、対象における免疫応答は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンに対して２倍〜１００倍の用量である予防上有効な用量の従来型ワクチンを接種した対象において誘導される。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、対象における免疫応答は、予防上有効な用量の従来型ワクチンを接種した対象において誘発される免疫応答と比較して、２日早く誘導される。
【０２４０】
いくつかの実施形態において、対象における免疫応答は、予防上有効な用量の従来型ワクチンを接種した対象において誘発される免疫応答と比較して、３日早く誘導される。
【０２４１】
いくつかの実施形態において、対象における免疫応答は、予防上有効な用量の従来型ワクチンを接種した対象において誘発される免疫応答と比較して、１週間早く誘導される。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、対象における免疫応答は、予防上有効な用量の従来型ワクチンを接種した対象において誘発される免疫応答と比較して、２週間早く誘導される。
【０２４３】
いくつかの実施形態において、対象における免疫応答は、予防上有効な用量の従来型ワクチンを接種した対象において誘発される免疫応答と比較して、３週間早く誘導される。
【０２４４】
いくつかの実施形態において、対象における免疫応答は、予防上有効な用量の従来型ワクチンを接種した対象において誘発される免疫応答と比較して、５週間早く誘導される。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、対象における免疫応答は、予防上有効な用量の従来型ワクチンを接種した対象において誘発される免疫応答と比較して、１０週間早く誘導される。
【０２４６】
本開示の態様は、第１の抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有するＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを対象に投与することによって、ＨＳＶに対する対象の免疫応答を誘発する方法を更に含み、当該ＲＮＡポリヌクレオチドは、安定化要素を含まず、ワクチンにアジュバントが共配合または共投与されない。
【０２４７】
広域スペクトルＨＳＶワクチン
２種以上のＨＳＶ株に感染するリスクのある状況が想定される。ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）治療用ワクチンは、限定するものではないが、製造スピード、認められた地理的脅威に適合するようにワクチンを迅速に調整できる能力などを含むいくつかの因子により、混合ワクチン手法に特に適している。更に、当該ワクチンは、人体を利用して抗原性タンパク質を産生するので、より大きくより複雑な抗原性タンパク質の産生に適しており、これにより、ヒト対象における適切な折り畳み、表面発現、抗原提示などが可能となる。２種以上のＨＳＶ株から保護するために、第１のＨＳＶの少なくとも１つの抗原性ポリペプチドタンパク質（またはその抗原性部分）をコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を含み、第２のＨＳＶの少なくとも１つの抗原性ポリペプチドタンパク質（またはその抗原性部分）をコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を更に含む、混合ワクチンを投与することができる。ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、例えば、単一の脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中に一緒に製剤化されてもよいし、共投与が予定されている別々のＬＮＰ中に製剤化されてもよい。
【０２４８】
フラジェリンアジュバント
フラジェリンは、約５００アミノ酸の単量体タンパク質であり、重合することにより、細菌の動きに関与する鞭毛を形成する。フラジェリンは、種々の有鞭毛型細菌（例えばＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）及び無鞭毛型細菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉなど）によって発現されている。自然免疫系細胞（樹状細胞、マクロファージなど）によるフラジェリンの感知は、Ｔｏｌｌ様受容体５（ＴＬＲ５）ならびにＮｏｄ様受容体（ＮＬＲ）Ｉｐａｆ及びＮａｉｐ５によって媒介される。ＴＬＲ及びＮＬＲは、自然免疫応答及び適応免疫応答を活性化する役割を担うことが特定されている。したがって、フラジェリンは、ワクチンにおいて、アジュバント効果をもたらす。
【０２４９】
既知のフラジェリンポリペプチドをコードするヌクレオチド及びアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ  ＧｅｎＢａｎｋデータベースにおいて公開されている。なかでも、Ｓ．Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｈ．Ｐｙｌｏｒｉ、Ｖ．Ｃｈｏｌｅｒａ、Ｓ．ｍａｒｃｅｓｅｎｓ、Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｔ．Ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｅｉ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、Ｒ．ｍｅｌｉｌｏｔｉ、Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｒ．ｌｕｐｉｎｉ、Ｂ．ｃｌａｒｒｉｄｇｅｉａｅ、Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｕｓ、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ及びＥ．ｃｏｌｉに由来するフラジェリン配列が知られている。
【０２５０】
フラジェリンポリペプチドは、本明細書で使用されるとき、完全長フラジェリンタンパク質、その免疫原性断片、及びフラジェリンタンパク質またはその免疫原性断片に対して少なくとも５０％の配列同一性を有するペプチドを指す。例示的なフラジェリンタンパク質には、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ（ＵｎｉＰｒｏエントリー番号Ｑ５６０８６）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（Ａ０Ａ０Ｃ９ＤＧ０９）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ（Ａ０Ａ０Ｃ９ＢＡＢ７）、及びＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ（Ｑ６Ｖ２Ｘ８）ならびに配列番号８９、１２５または１２６に由来するフラジェリンが挙げられる。いくつかの実施形態において、フラジェリンポリペプチドは、フラジェリンタンパク質またはその免疫原性断片（例えば、配列番号８９、１２５または１２６）に対して、少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％配列の同一性を有する。
【０２５１】
いくつかの実施形態において、フラジェリンポリペプチドは、免疫原性断片である。免疫原性断片は、免疫応答を惹起するフラジェリンタンパク質の一部である。いくつかの実施形態において、免疫応答は、ＴＬＲ５免疫応答である。免疫原性断片の一例は、ヒンジ領域の全てまたは一部が欠失しているか、他のアミノ酸で置き換えられているフラジェリンタンパク質である。例えば、抗原性ポリペプチドは、ヒンジ領域に挿入され得る。ヒンジ領域は、フラジェリンの超可変領域である。フラジェリンのヒンジ領域は、「Ｄ３ドメインまたはＤ３領域」、「プロペラドメインまたはプロペラ領域」、「超可変ドメインまたは超可変領域」及び「可変ドメインまたは領可変域」とも呼ばれる。「ヒンジ領域の少なくとも一部」は、本明細書で使用されるとき、フラジェリンのヒンジ領域の任意の部分またはヒンジ領域全体を指す。他の実施形態において、フラジェリンの免疫原性断片は、フラジェリンの２０、２５、３０、３５または４０アミノ酸Ｃ末端断片である。
【０２５２】
フラジェリン単量体は、ドメインＤ０〜Ｄ３によって形成される。ステムを形成する０及びＤ１は、縦に並んだ長いアルファヘリックスから構成され、種々の細菌間で高度に保存されている。Ｄ１ドメインは、ＴＬＲ５活性化に有用ないくつかのアミノ酸ストレッチを含む。Ｄ１ドメイン全体または当該ドメイン内の活性領域のうちの１つ以上がフラジェリンの免疫原性断片である。Ｄ１ドメイン内の免疫原性領域の例には、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ  ＦｌｉＣフラジェリンの残基８８〜１１４及び残基４１１〜４３１が挙げられる。８８〜１００領域の１３アミノ酸のうち、ＳａｌｍｏｎｅｌｌａフラジェリンとＴＬＲ５活性化を保持したままの他のフラジェリンとの間で少なくとも６置換が可能である。したがって、フラジェリンの免疫原性断片は、ＴＬＲ５を活性化し、ＳａｌｍｏｎｅｌｌａのＦｌｉＣの８８〜１００の配列（ＬＱＲＶＲＥＬＡＶＱＳＡＮ、配列番号１２７）に対して５３％以上同一である１３アミノ酸モチーフを含有する、フラジェリン様配列を含む。
【０２５３】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、フラジェリンと１つ以上の抗原性ポリペプチドの融合タンパク質をコードするＲＮＡを含む。本明細書で使用される「融合タンパク質」とは、構築物の２つの構成要素の連結を指す。いくつかの実施形態において、抗原性ポリペプチドのカルボキシ末端がフラジェリンポリペプチドのアミノ末端に融合または連結される。他の実施形態において、抗原性ポリペプチドのアミノ末端がフラジェリンポリペプチドのカルボキシ末端に融合または連結される。融合タンパク質は、例えば、１，２、３、４、５、６個またはそれ以上の抗原性ポリペプチドに連結した１、２、３、４、５、６個またはそれ以上のフラジェリンポリペプチドを含み得る。２つ以上のフラジェリンポリペプチド及び／または２つ以上の抗原性ポリペプチドが連結される場合、そのような構築物は、「多量体」と呼ばれることがある。
【０２５４】
融合タンパク質の各構成要素は、互いに直接連結されてもよいし、リンカーを介して接続されてもよい。例えば、リンカーは、アミノ酸リンカーであってよい。ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンによってコードされる、融合タンパク質の構成要素を連結するためのアミノ酸リンカーは、例えば、リジン残基、グルタミン酸残基、セリン残基及びアルギニン残基からなる群から選択される少なくとも１つの要素を含み得る。いくつかの実施形態において、リンカーは、１〜３０、１〜２５、１〜２５、５〜１０、５、１５または５〜２０アミノ酸長である。
【０２５５】
他の実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、少なくとも２つの個別のＲＮＡポリヌクレオチドを含み、一方は１つ以上の抗原性ポリペプチドをコードし、他方はフラジェリンポリペプチドをコードする。少なくとも２つのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子などの担体中に一緒に製剤化され得る。
【０２５６】
治療及び予防組成物
例えば、ヒト及び他の動物におけるＨＳＶの予防、治療及び／または診断のための組成物（例えば、医薬組成物）、方法、キット及び試薬が本明細書で提供される。ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、治療薬または予防薬として使用することができる。これは、感染症の予防及び／または治療のための薬剤として使用することができる。いくつかの実施形態において、本発明のＨＳＶワクチンは、免疫エフェクター細胞のプライミングにおける使用が想定され得、例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をｅｘ  ｖｉｖｏで活性化させた後、対象に注入（再注入）する。
【０２５７】
例示的な実施形態において、本明細書に記載されるＲＮＡポリヌクレオチドを含有するＨＳＶワクチンは、対象（例えば、ヒト対象などの哺乳動物対象）に投与することができ、ＲＮＡポリヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｖｏで翻訳されて抗原性ポリペプチドを産生する。
【０２５８】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、細胞、組織または生物において、ポリペプチド（例えば、抗原または免疫原）の翻訳を誘導し得る。例示的な実施形態において、かかる翻訳は、ｉｎ  ｖｉｖｏで生じるが、かかる翻訳がｅｘ  ｖｉｖｏ、培地またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで生じる実施形態も想定され得る。例示的な実施形態において、細胞、組織または生物を、抗原性ポリペプチドをコードする少なくとも１つの翻訳可能領域を有するポリヌクレオチドを含有するＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを含有する組成物の有効量と接触させる。
【０２５９】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの「有効量」は、少なくとも部分的には、標的組織、標的細胞型、投与手段、ポリヌクレオチドの物理的特性（例えば、大きさ及び修飾ヌクレオシドの程度）及びＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの他の構成要素、ならびに他の決定因子に基づいて提供される。一般に、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物の有効量は、細胞中の抗原産生に相関して誘導されたまたはブーストされた免疫応答をもたらす。一般に、少なくとも１つの化学修飾を有するＲＮＡポリヌクレオチドを含有するＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、好ましくは、同じ抗原またはペプチド抗原をコードする同様の非修飾型ＲＮＡポリヌクレオチドを含有する組成物よりも有効である。抗原産生の増加は、細胞トランスフェクションの増加（ＲＮＡワクチンでトランスフェクトされた細胞のパーセンテージ）、ポリヌクレオチドからのタンパク質翻訳の増加、核酸分解の低下（例えば、修飾ポリヌクレオチドからのタンパク質翻訳期間の延長によって示される）、または宿主細胞の抗原特異的免疫応答の変化によって示され得る。
【０２６０】
「医薬組成物」という用語は、有効物質と不活性または活性担体との組み合わせを指し、これにより、組成物は、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏにおける診断用途または治療用途に特に適したものになる。「薬学的に許容される担体」は、対象への投与後または投与時に、望ましくない生理学的作用を引き起こさない。医薬組成物中の担体は、有効成分と適合性があり、有効成分を安定化することが可能であるという意味においても「許容される」ものでなければならない。有効物質の送達のための薬学的担体として１つ以上の可溶化剤を利用することができる。薬学的に許容される担体の例には、剤形として使用可能な組成物を達成する、生体適合性ビヒクル、アジュバント、添加剤及び希釈剤が挙げられるが、これらに限定されない。他の担体の例には、コロイド状酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース及びラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。更なる好適な薬学的担体及び希釈剤ならびにその使用のための薬学的必要物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、本開示によるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン（ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む）は、ＨＳＶの治療のために使用することができる。
【０２６２】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、能動免疫スキームの一環として健康な個体に対して、または潜伏期間中もしくは発症後の活動性感染中の感染初期に、予防的または治療的に投与することができる。いくつかの実施形態において、細胞、組織または対象に提供される本開示のＲＮＡワクチンの量は、免疫予防に有効な量であり得る。
【０２６３】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、他の予防化合物または治療化合物とともに投与することができる。非限定的な例として、予防化合物または治療化合物は、アジュバントまたはブースターであり得る。ワクチンなどの予防組成物に関して本明細書で使用されるとき、「ブースター」という用語は、予防（ワクチン）組成物の追加投与を指す。ブースター（またはブースターワクチン）は、予防組成物の先の投与後に投与され得る。予防組成物の初回投与からブースター投与までの時間は、限定するものではないが、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１５分、２０分３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、３６時間、２日、３日、４日、５日、６日、１週、１０日、２週、３週、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、１８ヶ月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年、１１年、１２年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、１８年、１９年、２０年、２５年、３０年、３５年、４０年、４５年、５０年、５５年、６０年、６５年、７０年、７５年、８０年、８５年、９０年、９５年または９９年超であり得る。例示的な実施形態において、予防組成物の初回投与からブースター投与までの時間は、限定するものではないが、１週、２週、３週、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月または１年であり得る。
【０２６４】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、当該技術分野において知られている不活化ワクチンの投与と同様に、筋肉内または皮内に投与することができる。
【０２６５】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、感染症の罹患率またはアンメットメディカルニーズの程度もしくはレベルに応じて、様々な環境で利用することができる。非限定的な例として、ＲＮＡワクチンは、種々の感染症を治療及び／または予防するために利用することができる。ＲＮＡワクチンは、一般に利用可能な抗ウイルスと比べて、抗体力価がより大きく、早い応答をもたらす点で、優れた特性を有する。
【０２６６】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン及びＲＮＡワクチン組成物ならびに／または複合体を、任意選択により、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて含む、医薬組成物が本明細書で提供される。
【０２６７】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、単独で、または１つ以上の他の構成成分とともに、製剤化または投与することができる。例えば、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン（ワクチン組成物）は、限定するものではないが、アジュバントを含む他の構成成分を含み得る。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ＲＮＡワクチンは、アジュバントを含まない（アジュバントフリーである）。
【０２６９】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて、製剤化または投与することができる。いくつかの実施形態において、ワクチン組成物は、少なくとも１つの追加の有効物質、例えば、治療上有効な物質、予防上有効な物質または両方の組み合わせなどを含む。ワクチン組成物は、無菌でも、パイロジェンフリーでも、無菌とパイロジェンフリーの両方であってもよい。ワクチン組成物などの医薬品の製剤化及び／または製造において一般的に検討すべき項目は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５（その全体を参照により本明細書に援用する）に認めることができる。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、ヒト、ヒト患者または対象に投与される。本開示の目的上、「有効成分」という文言は、一般に、その中に含有されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンまたはポリヌクレオチド、例えば、抗原性ポリペプチドをコードするＲＮＡポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）を指す。
【０２７１】
本明細書に記載されるワクチン組成物の製剤は、薬理学分野で知られているまたはこれ以後開発される任意の方法によって調製することができる。一般に、そのような調製法は、有効成分（例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）と、賦形剤及び／または１つ以上の他の副成分とを一緒にするステップと、次いで、必要であり、かつ／または望ましい場合には、製品を所望の単回または複数回用量単位に分割、成形及び／または包装するステップとを含む。
【０２７２】
本開示による医薬組成物中の有効成分、薬学的に許容される賦形剤及び／または任意追加の成分の相対量は、治療を受ける対象の特性、体格及び／または状態に応じて、更には、組成物が投与される経路に応じて、変動し得る。例として、組成物は、０．１％〜１００％、例えば、０．５〜５０％、１〜３０％、５〜８０％、少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含み得る。
【０２７３】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、（１）安定性を高め、（２）細胞トランスフェクションを増加させ、（３）（例えば、デポ製剤からの）持続放出もしくは遅延放出を可能にし、（４）体内分布を変え（例えば、特定の組織または細胞型への標的化）、（５）コードされたタンパク質のｉｎ  ｖｉｖｏでの翻訳を増加させ、かつ／または（６）コードされたタンパク質（抗原）のｉｎ  ｖｉｖｏでの放出プロファイルを変える、１つ以上の賦形剤を使用して製剤化することができる。賦形剤には、従来の賦形剤、例えば、溶媒、分散媒、希釈剤または他の液体ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張化剤、増粘剤または乳化剤、保存剤のいずれか及び全てに加えて、限定するものではないが、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェル型ナノ粒子、ペプチド、タンパク質、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンがトランスフェクトされた細胞（例えば、対象への移植用）、ヒアルロニダーゼ、ナノ粒子模倣体及びこれらの組み合わせが含まれ得る。
【０２７４】
安定化要素
真核生物の天然ｍＲＮＡ分子は、５’キャップ構造または３’ポリ（Ａ）テールなどの他の構造的特徴に加えて、安定化要素、例えば、限定するものではないが、その５’端にある非翻訳領域（ＵＴＲ）（５’ＵＴＲ）及び／またはその３’端にあるＵＴＲ（３’ＵＴＲ）を含有することがわかっている。５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲはいずれも、典型的に、ゲノムＤＮＡから転写されるものであり、未成熟ｍＲＮＡの要素である。５’キャップ及び３’ポリ（Ａ）テールなどの成熟ｍＲＮＡの特徴的な構造特徴は、通常、ｍＲＮＡプロセシング中に、転写された（未成熟）ｍＲＮＡに付加される。３’ポリ（Ａ）テールは、典型的に、転写されたｍＲＮＡの３’端に付加される一続きのアデニンヌクレオチドであり、最大約４００個のアデニンヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態において、３’ポリ（Ａ）テールの長さは、個々のｍＲＮＡの安定性に関して必須の要素であり得る。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンは、１つ以上の安定化要素を含み得る。安定化要素には、例えば、ヒストンステムループが含まれ得る。３２ｋＤａのタンパク質であるステムループ結合タンパク質（ＳＬＢＰ）が特定されている。ＳＬＢＰは、核と細胞質の両方において、ヒストンメッセージの３’端にあるヒストンステムループに会合する。その発現レベルは、細胞周期によって調節され、Ｓ期中にピークを迎え、そのときにヒストンｍＲＮＡレベルも上昇する。このタンパク質は、Ｕ７  ｓｎＲＮＰによるヒストンｐｒｅ−ｍＲＮＡの効率的な３’端プロセシングに必要であることがわかっている。ＳＬＢＰは、プロセシング後もステムループに会合し続け、次いで、細胞質中で、成熟ヒストンｍＲＮＡのヒストンタンパク質への翻訳を刺激する。ＳＬＢＰのＲＮＡ結合ドメインは、後生動物及び原生動物にわたって保存されており、そのヒストンステムループへの結合は、ループ構造に依存する。最小結合部位は、ステムループに対して、５’側の少なくとも３つのヌクレオチド及び３’側の２つのヌクレオチドである。
【０２７６】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンは、コーディング領域、少なくとも１つのヒストンステムループ及び任意選択によりポリ（Ａ）配列またはポリアデニル化シグナルを含む。ポリ（Ａ）配列またはポリアデニル化シグナルは、一般に、コードされたタンパク質の発現レベルを向上させるものとされる。コードされたタンパク質は、いくつかの実施形態において、ヒストンタンパク質、レポータータンパク質（例えば、ルシフェラーゼ、ＧＦＰ、ＥＧＦＰ、β−ガラクトシダーゼ、ＥＧＦＰ）またはマーカーもしくは選択タンパク質（例えば、α−グロビン、ガラクトキナーゼ及びキサンチン：グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＧＰＴ））ではない。
【０２７７】
いくつかの実施形態において、ポリ（Ａ）配列またはポリアデニル化シグナルと少なくとも１つのヒストンステムループの組み合わせは、この両方は、自然では本質的に代替的機構を示すが、相乗的に作用して、個々の要素のいずれかで観察されるレベルを超えてタンパク質発現を増加させる。ポリ（Ａ）と少なくとも１つのヒストンステムループの組み合わせの相乗効果は、要素の順序またはポリ（Ａ）配列の長さに依存しないことがわかっている。
【０２７８】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンは、ヒストン下流要素（ＨＤＥ）を含まない。「ヒストン下流要素」（ＨＤＥ）は、天然ステムループの３’側に約１５〜２０個のヌクレオチドのプリンリッチポリヌクレオチドストレッチを含み、これは、ヒストンｐｒｅ−ｍＲＮＡの成熟ヒストンｍＲＮＡへのプロセシングに関与するＵ７  ｓｎＲＮＡの結合部位を表す。理想的には、本発明の核酸は、イントロンを含まない。
【０２７９】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンは、エンハンサー配列及び／またはプロモーター配列を含有しても含有しなくてもよく、当該配列は、修飾されていても非修飾でもよく、活性化されていても不活性化されていてもよい。いくつかの実施形態において、ヒストンステムループは、通常、ヒストン遺伝子に由来し、当該構造のループを形成する、短い配列からなるスペーサーによって隔てられた２つの隣接する部分的または完全に逆相補的な配列の分子内塩基対合を含む。不対合ループ領域は、典型的に、ステムループ要素のいずれとも塩基対合できない。これは、多くのＲＮＡ二次構造に重要な構成要素であるため、ＲＮＡでより頻繁に生ずるが、同様に一本鎖ＤＮＡにも存在し得る。ステムループ構造の安定性は、通常、対合領域の長さ、ミスマッチまたはバルジの数、及び塩基組成に依存する。いくつかの実施形態において、ゆらぎ塩基対合（非ワトソン−クリック塩基対合）が生じ得る。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのヒストンステムループ配列は、１５〜４５の長さのヌクレオチドを含む。
【０２８０】
他の実施形態において、ＲＮＡワクチンは、１つ以上のＡＵリッチ配列が除去され得る。これらの配列は、ＡＵＲＥＳと呼ばれることもあり、３’ＵＴＲ中に認められる不安定化配列である。ＡＵＲＥＳは、ＲＮＡワクチンから除去され得る。あるいは、ＡＵＲＥＳをＲＮＡワクチン中に残してもよい。
【０２８１】
ナノ粒子形成
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、ナノ粒子中に製剤化される。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、脂質ナノ粒子中に製剤化される。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、カチオン性脂質ナノ粒子と呼ばれる脂質−ポリカチオン複合体中に製剤化される。脂質ナノ粒子の形成は、当該技術分野において知られている方法及び／または米国特許出願公開第２０１２０１７８７０２号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって達成することができる。非限定的な例として、ポリカチオンには、カチオン性のペプチドまたはポリペプチドを挙げることができ、限定するものではないが、ポリリジン、ポリオルニチン及び／またはポリアルギニンならびに国際公開第ＷＯ２０１２０１３３２６号または米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１４２８１８号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているカチオン性ペプチドなどがある。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、限定するものではないが、コレステロールまたはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）などの非カチオン性脂質を含む脂質ナノ粒子中に製剤化される。
【０２８２】
脂質ナノ粒子製剤は、限定するものではないが、カチオン性脂質成分の選択、カチオン性脂質の飽和の程度、ＰＥＧ化の性質、全成分の比率、及び大きさなどの生物物理的パラメーターによる影響を受け得る。Ｓｅｍｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０１０  ２８：１７２−１７６、その全体を参照により本明細書に援用する）による一例では、脂質ナノ粒子製剤は、５７．１％のカチオン性脂質、７．１％のジパルミトイルホスファチジルコリン、３４．３％のコレステロール及び１．４％のＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡで構成される。別の例として、カチオン性脂質の組成を変えると、ｓｉＲＮＡが種々の抗原提示細胞により効率的に送達されることが示された（Ｂａｓｈａ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１１  １９：２１８６−２２００、その全体を参照により本明細書に援用する）。
【０２８３】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、３５％〜４５％のカチオン性脂質、４０％〜５０％のカチオン性脂質、５０％〜６０％のカチオン性脂質及び／または５５％〜６５％のカチオン性脂質を含み得る。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子の脂質とＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の比は、５：１〜２０：１、１０：１〜２５：１、１５：１〜３０：１及び／または少なくとも３０：１であってよい。
【０２８４】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤におけるＰＥＧ比を増やしても減らしてもよく、かつ／またはＰＥＧ脂質の炭素鎖長をＣ１４からＣ１８に変更して脂質ナノ粒子製剤の薬物動態及び／もしくは体内分布を変えてもよい。非限定的な例として、脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質、ＤＳＰＣ及びコレステロールと比較して、０．５％〜３．０％、１．０％〜３．５％、１．５％〜４．０％、２．０％〜４．５％、２．５％〜５．０％及び／または３．０％〜６．０％の脂質モル比のＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ（Ｒ−３−［（ω−メトキシ−ポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル）］−１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−アミン）（本明細書においてＰＥＧ−ＤＯＭＧとも呼ばれる）を含有し得る。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧは、限定するものではないが、ＰＥＧ−ＤＳＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）、ＰＥＧ−ＤＭＧ（１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール）及び／またはＰＥＧ−ＤＰＧ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール、メトキシポリエチレングリコール）などのＰＥＧ脂質で置き換えられてもよい。カチオン性脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、Ｃ１２−２００及びＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡなどの当該技術分野において知られている任意の脂質から選択することができる。
【０２８５】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン製剤は、少なくとも１つの脂質を含むナノ粒子である。脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ、９８Ｎ１２−５、Ｃ１２−２００、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ、ＰＥＧ−ＤＭＧ、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ノニルヘニコサ−１２，１５−ジエン−１−アミン（Ｌ６０８）、Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−［（１Ｓ，２Ｒ）−２−オクチルシクロプロピル］ヘプタデカン−８−アミン（Ｌ５３０）、ＰＥＧ化脂質及びアミノアルコール脂質から選択することができる。
【０２８６】
いくつかの実施形態において、脂質は、
【化３】
2018536023.tif 000004
である。
【０２８７】
いくつかの実施形態において、脂質は、
【化４】
2018536023.tif 000005
である。
【０２８８】
いくつかの実施形態において、脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−Ｄ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＯＤＭＡ及びアミノアルコール脂質などのカチオン性脂質であってよい。アミノアルコールカチオン性脂質は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１５０６２５号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている脂質であってもよく、かつ／または当該特許出願公開に記載されている方法によって作製されてもよい。非限定的な例として、カチオン性脂質は、２−アミノ−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ，２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（ＵＳ２０１３０１５０６２５の化合物１）、２−アミノ−３−［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（ＵＳ２０１３０１５０６２５の化合物２）、２−アミノ−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−［（オクチルオキシ）メチル］プロパン−１−オール（ＵＳ２０１３０１５０６２５の化合物３）、及び２−（ジメチルアミノ）−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］−２−｛［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］メチル｝プロパン−１−オール（ＵＳ２０１３０１５０６２５の化合物４）、またはこれらの任意の薬学的に許容される塩もしくは立体異性体であってよい。
【０２８９】
脂質ナノ粒子製剤は、典型的に、脂質、特に、イオン性カチオン性脂質、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）またはジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）を含み、中性脂質のステロール及び粒子の凝集を減少させることができる分子、例えばＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質を更に含む。
【０２９０】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、（ｉ）２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される少なくとも１つの脂質と、（ｉｉ）ＤＳＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＯＰＥ及びＳＭから選択される中性脂質と、（ｉｉｉ）ステロール、例えば、コレステロールと、（ｉｖ）ＰＥＧ−脂質、例えば、ＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡとから、カチオン性脂質２０〜６０％：中性脂質５〜２５％：ステロール２５〜５５％：ＰＥＧ脂質０．５〜１５％のモル比で、本質的に構成される。
【０２９１】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択されるカチオン性脂質を、モル基準で２５％〜７５％、例えば、モル基準で３５％〜６５％、４５％〜６５％、６０％、５７．５％、５０％または４０％含む。
【０２９２】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で０．５％〜１５％、例えば、モル基準で３％〜１２％、５％〜１０％または１５％、１０％もしくは７．５％の中性脂質を含む。中性脂質の例には、限定するものではないが、ＤＳＰＣ、ＰＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ及びＳＭが挙げられる。いくつかの実施形態において、製剤は、モル基準で５％〜５０％（例えば、モル基準で１５％〜４５％、２０％〜４０％、４０％、３８．５％、３５％または３１％）のステロールを含む。ステロールの非限定的な例は、コレステロールである。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で０．５％〜２０％（例えば、モル基準で０．５％〜１０％、０．５％〜５％、１．５％、０．５％、１．５％、３．５％または５％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質を含む。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質は、平均分子量が２，０００ＤａのＰＥＧ分子を含む。いくつかの実施形態において、ＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質は、平均分子量が２，０００未満、例えば、約１，５００Ｄａ、約１，０００Ｄａまたは約５００ＤａのＰＥＧ分子を含む。ＰＥＧ修飾脂質の非限定的な例は、ＰＥＧ−ジステアロイルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）（本明細書においてＰＥＧ−Ｃ１４またはＣ１４−ＰＥＧとも呼ばれる）及びＰＥＧ−ｃＤＭＡが挙げられる（Ｒｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１０７，２７６−２８７（２００５）において更に考察されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０２９３】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される２５〜７５％のカチオン性脂質と、０．５〜１５％の中性脂質と、５〜５０％のステロールと、０．５〜２０％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質とを含む。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される３５〜６５％のカチオン性脂質と、３〜１２％の中性脂質と、１５〜４５％のステロールと、０．５〜１０％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質とを含む。
【０２９５】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される４５〜６５％のカチオン性脂質と、５〜１０％の中性脂質と、２５〜４０％のステロールと、０．５〜１０％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質とを含む。
【０２９６】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される６０％のカチオン性脂質と、７．５％の中性脂質と、３１％のステロールと、１．５％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質とを含む。
【０２９７】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される５０％のカチオン性脂質と、１０％の中性脂質と、３８．５％のステロールと、１．５％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質とを含む。
【０２９８】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される５０％のカチオン性脂質と、１０％の中性脂質と、３５％のステロールと、４．５％または５％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質と、０．５％の標的化脂質を含む。
【０２９９】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される４０％のカチオン性脂質と、１５％の中性脂質と、４０％のステロールと、５％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質とを含む。
【０３００】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）及びジ（（Ｚ）−ノナ−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される５７．２％のカチオン性脂質と、７．１％の中性脂質と、３４．３％のステロールと、１．４％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質とを含む。
【０３０１】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、モル基準で、ＰＥＧ脂質、ＰＥＧ−ｃＤＭＡ（ＰＥＧ−ｃＤＭＡは、Ｒｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，１０７，２７６−２８７（２００５）において更に考察されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する）から選択される５７．５％のカチオン性脂質と、７．５％の中性脂質と、３１．５％のステロールと、３．５％のＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質とを含む。
【０３０２】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質２０〜７０％：中性脂質５〜４５％：コレステロール２０〜５５％：ＰＥＧ修飾脂質０．５〜１５％のモル比の脂質混合物から本質的に構成される。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質２０〜６０％：中性脂質５〜２５％：コレステロール２５〜５５％：ＰＥＧ修飾脂質０．５〜１５％のモル比の脂質混合物から本質的に構成される。
【０３０３】
いくつかの実施形態において、脂質モル比は、５０／１０／３８．５／１．５（ｍｏｌ％  カチオン性脂質／中性脂質（例えばＤＳＰＣ）／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質（例えばＰＥＧ−ＤＭＧ、ＰＥＧ−ＤＳＧまたはＰＥＧ−ＤＰＧ））、５７．２／７．１１３４．３／１．４（ｍｏｌ％  カチオン性脂質／中性脂質（例えばＤＰＰＣ）／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質（例えばＰＥＧ−ｃＤＭＡ））、４０／１５／４０／５（ｍｏｌ％  カチオン性脂質／中性脂質（例えばＤＳＰＣ）／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質（例えばＰＥＧ−ＤＭＧ））、５０／１０／３５／４．５／０．５（ｍｏｌ％  カチオン性脂質／中性脂質（例えばＤＳＰＣ）／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質（例えばＰＥＧ−ＤＳＧ））、５０／１０／３５／５（カチオン性脂質／中性脂質（例えばＤＳＰＣ）／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質（例えばＰＥＧ−ＤＭＧ））、４０／１０／４０／１０（ｍｏｌ％  カチオン性脂質／中性脂質（例えばＤＳＰＣ）／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質（例えばＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡ））、３５／１５／４０／１０（ｍｏｌ％  カチオン性脂質／中性脂質（例えばＤＳＰＣ）／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質（例えばＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡ））、または５２／１３／３０／５（ｍｏｌ％  カチオン性脂質／中性脂質（例えばＤＳＰＣ）／Ｃｈｏｌ／ＰＥＧ修飾脂質（例えばＰＥＧ−ＤＭＧまたはＰＥＧ−ｃＤＭＡ）である。
【０３０４】
脂質ナノ粒子組成物及びその作製方法の非限定的な例は、例えば、Ｓｅｍｐｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：１７２−１７６；Ｊａｙａｒａｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２），Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，５１：８５２９−８５３３、及びＭａｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２１，１５７０−１５７８（そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている。
【０３０５】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質とを含み得、任意選択により、非カチオン性脂質を含み得る。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、４０〜６０％のカチオン性脂質と、５〜１５％の非カチオン性脂質と、１〜２％のＰＥＧ脂質と、３０〜５０％の構造的脂質とを含み得る。別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質５０％と、非カチオン性脂質１０％と、ＰＥＧ脂質１．５％と、構造的脂質３８．５％とを含み得る。更に別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質５５％と、非カチオン性脂質１０％と、ＰＥＧ脂質２．５％と、構造的脂質３２．５％とを含み得る。いくつかの実施形態において、カチオン性脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ及びＬ３１９などの本明細書に記載される任意のカチオン性脂質であってよい。
【０３０６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される脂質ナノ粒子製剤は、４成分脂質ナノ粒子であり得る。脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質と、非カチオン性脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質とを含み得る。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、４０〜６０％のカチオン性脂質と、５〜１５％の非カチオン性脂質と、１〜２％のＰＥＧ脂質と、３０〜５０％の構造的脂質とを含み得る。別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質５０％と、非カチオン性脂質１０％と、ＰＥＧ脂質１．５％と、構造的脂質３８．５％とを含み得る。更に別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質５５％と、非カチオン性脂質１０％と、ＰＥＧ脂質２．５％と、構造的脂質３２．５％とを含み得る。いくつかの実施形態において、カチオン性脂質は、限定するものではないが、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ及びＬ３１９などの本明細書に記載される任意のカチオン性脂質であってよい。
【０３０７】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質と、非カチオン性脂質と、ＰＥＧ脂質と、構造的脂質とを含み得る。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、５０％のカチオン性脂質ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡと、１０％の非カチオン性脂質ＤＳＰＣと、１．５％のＰＥＧ脂質ＰＥＧ−ＤＯＭＧと、３８．５％の構造的脂質コレステロールとを含み得る。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、５０％のカチオン性脂質ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡと、１０％の非カチオン性脂質ＤＳＰＣと、１．５％のＰＥＧ脂質ＰＥＧ−ＤＯＭＧと、３８．５％の構造的脂質コレステロールとを含み得る。非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、５０％のカチオン性脂質ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡと、１０％の非カチオン性脂質ＤＳＰＣと、１．５％のＰＥＧ脂質ＰＥＧ−ＤＭＧと、３８．５％の構造的脂質コレステロールとを含み得る。更に別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、５５％のカチオン性脂質Ｌ３１９と、１０％の非カチオン性脂質ＤＳＰＣと、２．５％のＰＥＧ脂質ＰＥＧ−ＤＭＧと、３２．５％の構造的脂質コレステロールとを含み得る。
【０３０８】
ワクチン組成物中の有効成分、薬学的に許容される賦形剤及び／または任意追加の成分の相対量は、治療を受ける対象が何であるか、体格及び／または状態に応じて、更には、組成物が投与される経路に応じて、変動し得る。例えば、組成物は、０．１％〜９９％（ｗ／ｗ）の有効成分を含み得る。例として、組成物は、０．１％〜１００％、例えば、０．５〜５０％、１〜３０％、５〜８０％、少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含み得る。
【０３０９】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチン組成物は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを含み得、ＭＣ３と、コレステロールと、ＤＳＰＣと、ＰＥＧ２０００−ＤＭＧとを含む脂質ナノ粒子、クエン酸三ナトリウム緩衝液、スクロース及び注射用水中で製剤化される。非限定的な例として、組成物は、２．０ｍｇ／ｍＬの薬剤物質（例えば、ＨＳＶをコードするポリヌクレオチド）と、２１．８ｍｇ／ｍＬのＭＣ３と、１０．１ｍｇ／ｍＬのコレステロールと、５．４ｍｇ／ｍＬのＤＳＰＣと、２．７ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ２０００−ＤＭＧと、５．１６ｍｇ／ｍＬのクエン酸三ナトリウムと、７１ｍｇ／ｍＬのスクロースと、１．０ｍＬの注射用水とを含む。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、１０〜５００ｎｍ、２０〜４００ｎｍ、３０〜３００ｎｍまたは４０〜２００ｎｍの平均直径を有する。いくつかの実施形態において、ナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子）は、５０〜１５０ｎｍ、５０〜２００ｎｍ、８０〜１００ｎｍまたは８０〜２００ｎｍの平均直径を有する。
【０３１１】
リポソーム、リポプレックス及び脂質ナノ粒子
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチン医薬組成物は、限定するものではないが、ＤｉＬａ２リポソーム（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ））、ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ））、中性ＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）系リポソーム（例えば、卵巣癌のためのｓｉＲＮＡ送達（Ｌａｎｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｙ  ２００６  ５（１２）１７０８−１７１３）、その全体を参照により本明細書に援用する）及びヒアルロナン被覆リポソーム（Ｑｕｉｅｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｉｓｒａｅｌ））などのリポソーム中に製剤化されてもよい。
【０３１２】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０６０２９３号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている凍結乾燥されたゲル相リポソーム組成物で製剤化され得る。
【０３１３】
ナノ粒子製剤は、リン酸コンジュゲートを含み得る。リン酸コンジュゲートは、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環時間を延長させ得、かつ／またはナノ粒子の標的化送達を増大させ得る。本発明で使用されるリン酸コンジュゲートは、ＷＯ２０１３０３３４３８または米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１９６９４８号（そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって作製することができる。非限定的な例として、リン酸コンジュゲートは、国際公開第ＷＯ２０１３０３３４３８号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている式のうちのいずれか１つの化合物を挙げることができる。
【０３１４】
ナノ粒子製剤は、ポリマーコンジュゲートを含み得る。ポリマーコンジュゲートは、水溶性コンジュゲートであってよい。ポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開第２０１３００５９３６０号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている構造を有し得る。いくつかの態様において、本発明のポリヌクレオチドとのポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開第２０１３００７２７０９号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載の方法及び／またはセグメント化ポリマー試薬を使用して作製することができる。他の態様において、ポリマーコンジュゲートは、限定するものではないが、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１９６９４８号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載のポリマーコンジュゲートなどのように、環部分を含むペンダント側鎖基を有し得る。
【０３１５】
ナノ粒子製剤は、対象における本発明のナノ粒子の送達を向上させるコンジュゲートを含み得る。更に、コンジュゲートは、対象におけるナノ粒子の食作用クリアランスを抑制し得る。いくつかの態様において、コンジュゲートは、ヒト膜タンパク質ＣＤ４７から設計された「自己」ペプチド（例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１３，３３９，９７１−９７５、その全体を参照により本明細書に援用する）によって記載された「自己」粒子）であってよい。Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚらによって示されたように、自己ペプチドは、マクロファージが媒介するナノ粒子のクリアランスを遅延させ、ナノ粒子の送達を向上させた。他の態様において、コンジュゲートは、膜タンパク質ＣＤ４７であってもよい（例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０１３，３３９，９７１−９７５参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚらは、ＣＤ４７が、「自己」ペプチドと同様に、スクランブルペプチド及びＰＥＧ被覆ナノ粒子と比較して、対象における循環粒子の比率を増大し得ることを示した。
【０３１６】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、対象における本発明のナノ粒子の送達を向上させるコンジュゲートを含むナノ粒子中に製剤化される。コンジュゲートは、ＣＤ４７膜であってもよいし、コンジュゲートは、先に記載された「自己」ペプチドなどの、ＣＤ４７膜タンパク質に由来するものであってもよい。他の実施形態において、ナノ粒子は、ＰＥＧと、ＣＤ４７のコンジュゲートまたはその誘導体とを含み得る。更に他の実施形態において、ナノ粒子は、上述の「自己」ペプチドと、膜タンパク質ＣＤ４７の両方を含んでもよい。
【０３１７】
いくつかの実施形態において、「自己」ペプチド及び／またはＣＤ４７タンパク質は、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの送達のために、本明細書に記載されるように、ウイルス様粒子または偽ビリオンにコンジュゲートされ得る。
【０３１８】
他の実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン医薬組成物は、本発明のポリヌクレオチドと、分解可能な結合を有し得るコンジュゲートとを含む。コンジュゲートの非限定的な例には、イオン性水素原子を含む芳香族部分、スペーサー部分、及び水溶性ポリマーが挙げられる。非限定的な例として、分解可能な結合を有するコンジュゲートを含む医薬組成物及び当該医薬組成物を送達するための方法は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１８４４４３号に記載されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０３１９】
ナノ粒子製剤は、炭水化物担体と、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンとを含む炭水化物ナノ粒子であり得る。非限定的な例として、炭水化物担体は、無水物変性フィトグリコーゲンもしくはグリコーゲン型物質、フィトグリコーゲンオクテニルコハク酸，フィトグリコーゲンβ−デキストリン、または無水物変性フィトグリコーゲンβ−デキストリンを挙げることができるが、これらに限定されない（例えば、国際公開第ＷＯ２０１２１０９１２１号参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３２０】
本発明のナノ粒子製剤は、粒子の送達を改善するために、界面活性剤またはポリマーで被覆されてもよい。いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、限定するものではないが、ＰＥＧコーティング及び／または中性の表面電荷を有するコーティングなどの親水性コーティングで被覆され得る。親水性コーティングは、限定するものではないが、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンなどの大きなペイロードを含むナノ粒子を中枢神経系内に送達するのに役立ち得る。非限定的な例として、親水性コーティングを含むナノ粒子及び当該ナノ粒子を作製する方法は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１８３２４４号に記載されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０３２１】
いくつかの実施形態において、本発明の脂質ナノ粒子は、親水性ポリマー粒子であり得る。親水性ポリマー粒子及び親水性ポリマー粒子の作製方法の非限定的な例は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０２１０９９１号に記載されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０３２２】
他の実施形態において、本発明の脂質ナノ粒子は、疎水性ポリマー粒子であり得る。
【０３２３】
脂質ナノ粒子製剤は、カチオン性脂質を、迅速に排除される脂質ナノ粒子（ｒｅＬＮＰ）として知られる生分解性カチオン性脂質に置き換えることによって改善され得る。限定するものではないが、ＤＬｉｎＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ及びＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡなどのイオン性カチオン性脂質は、時間の経過とともに血漿中及び組織中に蓄積することがわかっており、潜在的な毒性原になり得る。迅速に排除される脂質の迅速な代謝により、ラットにおける脂質ナノ粒子の忍容性及び治療指数が１ｍｇ／ｋｇの用量から１０ｍｇ／ｋｇの用量の大きさで改善し得る。酵素的に分解されるエステル結合を含めると、ｒｅＬＮＰ製剤の活性を維持したまま、カチオン性構成成分の分解及び代謝プロファイルが改善し得る。エステル結合は、脂質鎖中に内在してもよいし、脂質鎖の末端に終端で位置してもよい。内部エステル結合は、脂質鎖中の任意の炭素を置き換えてもよい。
【０３２４】
いくつかの実施形態において、内部エステル結合は、飽和炭素のいずれの側に位置してもよい。
【０３２５】
いくつかの実施形態において、免疫応答は、ナノ化学種、ポリマー及び免疫原を含み得る脂質ナノ粒子を送達することによって誘発され得る（米国特許出願公開第２０１２０１８９７００号及び国際公開第ＷＯ２０１２０９９８０５号、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３２６】
ポリマーは、ナノ化学種を封入し得、またはナノ化学種を部分的に封入し得る。
免疫原は、組み換えタンパク質、修飾ＲＮＡ及び／または本明細書に記載されるポリヌクレオチドであってよい。いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、ワクチン、限定するものではないが、病原体に対するワクチンなどにおける使用のために製剤化され得る。
【０３２７】
脂質ナノ粒子は、脂質ナノ粒子が粘膜バリアを通過するように粒子の表面特性を操作して変更してもよい。粘液は、限定するものではないが、口腔（例えば、頬及び食道の膜ならびに扁桃腺組織）、眼、消化管（例えば、胃、小腸、大腸、結腸、直腸）、鼻、呼吸器（例えば、鼻、咽頭、気管及び気管支の膜）及び生殖器（例えば、膣、子宮頸部及び尿道の膜）などの粘膜組織に位置する。１０〜２００ｎｍよりも大きいナノ粒子は、薬剤封入効率が高く、幅広い薬物の持続的送達をもたらす能力において好ましいが、粘膜バリアに迅速に拡散するには大きすぎると考えられている。粘液は、連続的に、分泌され、排出され、廃棄または消化され、再利用されるので、捕捉された粒子の大部分は、数秒内または数時間内に粘膜組織から除去され得る。低分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で高密度に被覆された大きなポリマーナノ粒子（直径２００ｎｍ〜５００ｎｍ）は、水中で拡散する同じ粒子よりもわずかに４〜６倍遅く、粘液を通って拡散した（Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ  ２００７  １０４（５）：１４８２−４８７；Ｌａｉ  ｅｔ  ａｌ．Ａｄｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ  Ｒｅｖ．２００９  ６１（２）：１５８−１７１、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。ナノ粒子の輸送は、通過速度ならびに／または蛍光顕微鏡法、例えば、限定するものではないが、光褪色後蛍光回復法（ＦＲＡＰ）及び高解像多重粒子追跡法（ＭＰＴ）を使用して決定することができる。非限定的な例として、粘膜バリアを通過できる組成物は、米国特許第８，２４１，６７０号または国際公開第ＷＯ２０１３１１００２８号（そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているように作製することができる。
【０３２８】
粘液を通過するように操作された脂質ナノ粒子は、ポリマー材料（例えば、ポリマーコア）及び／またはポリマー−ビタミンコンジュゲート及び／またはトリブロックコポリマーを含み得る。ポリマー材料には、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリ（スチレン）、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル及びポリアリレートを挙げることができるが、これらに限定されない。ポリマー材料は、生分解性及び／または生体適合性であり得る。生体適合性ポリマーの非限定的な例は、国際公開第ＷＯ２０１３１１６８０４号に記載されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する。ポリマー材料は、更に、照射されてもよい。非限定的な例として、ポリマー材料は、ガンマ照射され得る（例えば、国際公開第ＷＯ２０１２８２１６５号参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。具体的なポリマーの非限定的な例には、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレンビニルアセテートポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＥＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−ＰＰＯ−ｃｏ−Ｄ，Ｌ−ラクチド）、ポリアルキルシアノアクラレート、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えば、ポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリアルキレンテレフタレート、例えば、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、例えば、ポリ（ビニルアセテート）、ポリビニルハライド、例えば、ポリ（ビニルクロリド）（ＰＶＣ）、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリウレタン、誘導体化セルロース、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリル酸のポリマー、例えば、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）及びこれらのコポリマー及び混合物、ポリジオキサノン及びそのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ、トリメチレンカーボネートならびにポリビニルピロリドンが挙げられる。脂質ナノ粒子は、限定するものではないが、ブロックコポリマー（国際公開第ＷＯ２０１３０１２４７６号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている分岐ポリエーテル−ポリアミドブロックコポリマーなど）及び（ポリ（エチレングリコール））−（ポリ（プロピレンオキシド））−（ポリ（エチレングリコール））トリブロックコポリマー（例えば、米国特許出願公開第２０１２０１２１７１８号、米国特許出願公開第２０１００００３３３７号及び米国特許第８，２６３，６６５号参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）などのコポリマーで被覆され得、またはこれらと会合し得る。コポリマーは、ＧＲＡＳ（一般に安全と認められる）ポリマーであってよく、脂質ナノ粒子の形成は、新規の化学実体が生じないような方法で作製され得る。例えば、脂質ナノ粒子は、新規の化学実体を形成することなく、依然としてヒト粘液を迅速に通過することができる、ポロキサマー被覆ＰＬＧＡナノ粒子を含み得る（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１１  ５０：２５９７−２６００、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。ヒト粘液を通過することができるナノ粒子を生成するための非限定的な拡張可能な方法は、Ｘｕらによって記載されている（例えば、Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ２０１３，１７０（２）：２７９−８６参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３２９】
ポリマー−ビタミンコンジュゲートのビタミンは、ビタミンＥであってよい。コンジュゲートのビタミン部分は、限定するものではないが、ビタミンＡ、ビタミンＥ、他のビタミン、コレステロール、疎水性部分または他の界面活性剤の疎水性構成成分（例えば、ステロール鎖、脂肪酸、炭化水素鎖及びアルキレンオキシド鎖）などの他の好適な構成成分で置換されてもよい。
【０３３０】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン医薬組成物は、限定するものではないが、ＤｉＬａ２リポソーム（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ））、ＳＭＡＲＴＩＣＬＥＳ（登録商標）（Ｍａｒｉｎａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ））、中性ＤＯＰＣ（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）系リポソーム（例えば、卵巣癌のためのｓｉＲＮＡ送達（Ｌａｎｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ＆Ｔｈｅｒａｐｙ  ２００６  ５（１２）１７０８−１７１３、その全体を参照により本明細書に援用する））及びヒアルロナン被覆リポソーム（Ｑｕｉｅｔ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｉｓｒａｅｌ））などのリポソーム中に製剤化されてもよい。
【０３３１】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０６０２９３号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている凍結乾燥されたゲル相リポソーム組成物で製剤化され得る。
【０３３２】
ナノ粒子製剤は、リン酸コンジュゲートを含み得る。リン酸コンジュゲートは、ｉｎ  ｖｉｖｏ循環時間を延長させ得、かつ／またはナノ粒子の標的化送達を増大させ得る。本発明で使用されるリン酸コンジュゲートは、ＷＯ２０１３０３３４３８または米国特許出願公開第２０１３０１９６９４８号（そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって作製することができる。非限定的な例として、リン酸コンジュゲートは、国際公開第ＷＯ２０１３０３３４３８号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている式のうちのいずれか１つの化合物を挙げることができる。
【０３３３】
ナノ粒子製剤は、ポリマーコンジュゲートを含み得る。ポリマーコンジュゲートは、水溶性コンジュゲートであってよい。ポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開第２０１３００５９３６０号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている構造を有し得る。いくつかの態様において、本発明のポリヌクレオチドとのポリマーコンジュゲートは、米国特許出願公開第２０１３００７２７０９号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載の方法及び／またはセグメント化ポリマー試薬を使用して作製することができる。他の態様において、ポリマーコンジュゲートは、限定するものではないが、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１９６９４８号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載のポリマーコンジュゲートなどのように、環部分を含むペンダント側鎖基を有し得る。
【０３３４】
粘液を通過するように操作された脂質ナノ粒子は、限定するものではないが、ポリヌクレオチド、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、例えばジメチルジオクタデシル−臭化アンモニウムなどのカチオン性界面活性剤）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、Ｎ−アセチルシステイン、ムグワート、ブロメライン、パパイン、クレロデンドラム、アセチルシステイン、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アムブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルゾリン、チモシンβ４ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、エルドステイン）及びｒｈＤＮａｓｅを含む各種ＤＮａｓｅなどの表面改質剤を含み得る。表面改質剤は、粒子表面に埋め込むか、粒子表面にからませてもよいし、脂質ナノ粒子の表面上に配置してもよい（例えば、コーティング、吸着、共有結合または他のプロセスによって）（例えば、米国特許出願公開第２０１００２１５５８０号及び米国特許出願公開第２００８０１６６４１４号及びＵＳ２０１３０１６４３４３参照、そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３３５】
いくつかの実施形態において、粘液を通過する脂質ナノ粒子は、本明細書に記載される少なくとも１つのポリヌクレオチドを含み得る。ポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子中に封入され得、かつ／または粒子の表面上に配置され得る。ポリヌクレオチドは、脂質ナノ粒子に共有結合的に結合され得る。粘液を通過する脂質ナノ粒子製剤は、複数のナノ粒子を含み得る。更に、製剤は、粘液と相互作用し、かつ粘液を通過する脂質ナノ粒子の粘膜組織への送達を増大させ得る粘膜付着を低減させる周辺粘液の構造特性及び／または付着性を変え得る粒子を含有してもよい。
【０３３６】
他の実施形態において、粘液を通過する脂質ナノ粒子は、粘膜通過を向上させるコーティングを含む低張製剤であり得る。製剤は、送達される上皮に対して低張であり得る。
【０３３７】
低張製剤の非限定的な例は、国際公開第ＷＯ２０１３１１００２８号に認めることができ、その内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、粘膜バリアを通過する送達を向上させるために、ＲＮＡワクチン製剤は、低張液を含んでもよいし、低張液であってもよい。低張液は、限定するものではないが、粘液を通過する粒子などの粘液不活性粒子が膣上皮表面に到達できる速度を上げることが可能であることがわかった（例えば、Ｅｎｓｉｇｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２０１３，３４（２８）：６９２２−９参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３３９】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンは、限定するものではないが、Ｓｉｌｅｎｃｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｌｏｎｄｏｎ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）社のＡＴＵＰＬＥＸ（商標）系、ＤＡＣＣ系、ＤＢＴＣ系及び他のｓｉＲＮＡリポプレックス技術、ＳＴＥＭＧＥＮＴ（登録商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）社のＳＴＥＭＦＥＣＴ（商標）、ならびにポリエチレンイミン（ＰＥＩ）またはプロタミンに基づいた標的化及び非標的化核酸送達などのリポプレックスとして製剤化される（Ａｌｅｋｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００８  ６８：９７８８−９７９８；Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０１２  ５０：７６−７８；Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００６  １３：１２２２−１２３４；Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００６  １３：１３６０−１３７０；Ｇｕｔｂｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｕｌｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１０  ２３：３３４−３４４；Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ２０１０  ８０：２８６−２９３；Ｗｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９  ３２：４９８−５０７；Ｗｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００８  ３１：１８０−１８８；Ｐａｓｃｏｌｏ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．４：１２８５−１２９４；Ｆｏｔｉｎ−Ｍｌｅｃｚｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３４：１−１５；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５，２３：７０９−７１７；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００７  ６；１０４：４０９５−４１００；ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２００８  １９：１２５−１３２、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３４０】
いくつかの実施形態において、そのような製剤はまた、限定するものではないが、肝細胞、免疫細胞、腫瘍細胞、内皮細胞、抗原提示細胞及び白血球を含む様々な細胞種をｉｎ  ｖｉｖｏで受動的または能動的に指向するように、構築または組成変更され得る（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１０  １８：１３５７−１３６４；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５  ２３：７０９−７１７；Ｊｕｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００９  １１９：６６１−６７３；Ｋａｕｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ２０１０  ８０：２８６−２９３；Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００６  １３：１２２２−１２３４；Ｓａｎｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ２００６  １３：１３６０−１３７０；Ｇｕｔｂｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｕｌｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１０  ２３：３３４−３４４；Ｂａｓｈａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１１  １９：２１８６−２２００；Ｆｅｎｓｋｅ  ａｎｄ  Ｃｕｌｌｉｓ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．２００８  ５：２５−４４；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００８  ３１９：６２７−６３０；Ｐｅｅｒ  ａｎｄ  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１１  １８：１１２７−１１３３、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。製剤の肝細胞への受動的標的化の一例には、アポリポタンパク質Ｅに結合し、ｉｎ  ｖｉｖｏで当該製剤の肝細胞への結合及び取り込みを促進することが示されている、ＤＬｉｎ−ＤＭＡ、ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ及びＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ系脂質ナノ粒子製剤が挙げられる（Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１０  １８：１３５７−１３６４、その全体を参照により本明細書に援用する）。製剤はまた、限定するものではないが、葉酸、トランスフェリン、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）及び抗体標的化アプローチによって例示されるように、その表面上に異なるリガンドを発現させることによって選択的に標的化され得る（Ｋｏｌｈａｔｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０１１  ８：１９７−２０６；Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ  ａｎｄ  Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ．２０１１  １６：１３８８−１４１２；Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｍｅｍｂｒ  Ｂｉｏｌ．２０１０  ２７：２８６−２９８；Ｐａｔｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｔｈｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．２００８  ２５：１−６１；Ｂｅｎｏｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２０１１  １２：２７０８−２７１４；Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．２００８  ５：３０９−３１９；Ａｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１０  １８：１３５７−１３６４；Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１２  ８２０：１０５−１１６；Ｂｅｎ−Ａｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１２  ７５７：４９７−５０７；Ｐｅｅｒ  ２０１０  Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏ���  Ｒｅｌｅａｓｅ．２０：６３−６８；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．２００７  １０４：４０９５−４１００；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１１  ７２１：３３９−３５３；Ｓｕｂｒａｍａｎｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１０  １８：２０２８−２０３７；Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５  ２３：７０９−７１７；Ｐｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００８  ３１９：６２７−６３０；Ｐｅｅｒ  ａｎｄ  Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．２０１１  １８：１１２７−１１３３、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３４１】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、固形脂質ナノ粒子として製剤化される。固形脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）は、平均直径が１０００ｎｍまでの間である球形であり得る。ＳＬＮは、親油性分子を可溶化することができ、かつ界面活性剤及び／または乳化剤で安定化し得る固形脂質コアマトリックスを有する。他の実施形態において、脂質ナノ粒子は、自己組織化脂質ポリマーナノ粒子であり得る（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｎａｎｏ，２００８，２（８），ｐｐ  １６９６−１７０２参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。非限定的な例として、ＳＬＮは、国際公開第ＷＯ２０１３１０５１０１号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているＳＬＮであってもよい。別の非限定的な例として、ＳＬＮは、国際公開第ＷＯ２０１３１０５１０１号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法またはプロセスによって作製することができる。
【０３４２】
当該製剤は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンによって細胞のトランスフェクションを増やし、かつ／またはコードされたタンパク質の翻訳を増やすことができ得るが、リポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子を利用して、ポリヌクレオチドが目的とするタンパク質産生の効率を改善することができる。かかる例の１つには、脂質封入を使用してポリプレックスプラスミドＤＮＡの効果的な全身送達を可能にすることがある（Ｈｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００７  １５：７１３−７２０、その全体を参照により本明細書に援用する）。リポソーム、リポプレックスまたは脂質ナノ粒子はまた、ポリヌクレオチドの安定性を増大させるために使用することができる。
【０３４３】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、制御放出及び／または標的化送達用に製剤化することができる。本明細書で使用されるとき、「制御放出」は、治療成果を達成する特定の放出パターンに一致する、医薬組成物または化合物の放出プロファイルを指す。いくつかの実施形態において、ＲＮＡワクチンは、制御放出及び／または標的化送達のために、本明細書に記載され、かつ／または当該技術分野において知られている送達物質中に、封入され得る。本明細書で使用されるとき、「封入する」という用語は、閉じ込められること、取り囲むこと、または包み込むことを意味する。本発明の化合物の製剤に関するとき、封入は、実質的なものであっても、完全なものであっても、部分的なものであってもよい。「実質的に封入された」という用語は、本発明の医薬組成物または化合物の少なくとも５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９超または９９．９９９％超が送達物質内に閉じ込められ、取り囲まれ、または包み込まれることを意味する。「部分的な封入」は、本発明の医薬組成物または化合物の１０％未満、１０、２０、３０、４０、５０％以下が送達物質内に閉じ込められ、取り囲まれ、または包み込まれることを意味する。有利には、封入は、蛍光及び／または電子顕微鏡写真を使用して本発明の医薬組成物または化合物の漏出または活性を測定することによって決定することができる。例えば、本発明の医薬組成物または化合物の少なくとも１、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、９９．９、９９．９９または９９．９９％超が送達物質中に封入される。
【０３４４】
いくつかの実施形態において、制御放出製剤は、限定するものではないが、トリブロックコポリマーを含み得る。非限定的な例として、製剤は、２つの異なる種類のトリブロックコポリマーを含み得る（国際公開第ＷＯ２０１２１３１１０４号及び同第ＷＯ２０１２１３１１０６号、そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３４５】
他の実施形態において、ＲＮＡワクチンは、脂質ナノ粒子中または迅速に排除される脂質ナノ粒子中に封入することができ、次いで、この脂質ナノ粒子または迅速に排除される脂質ナノ粒子は、本明細書に記載され、かつ／または当該技術分野において知られているポリマー、ヒドロゲル及び／または外科用シーラント内に封入され得る。非限定的な例として、ポリマー、ヒドロゲルまたは外科用シーラントは、ＰＬＧＡ、エチレンビニルアセテート（ＥＶＡｃ）、ポロキサマー、ＧＥＬＳＩＴＥ（登録商標）（Ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ａｌａｃｈｕａ，ＦＬ））、ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）（Ｈａｌｏｚｙｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ））、フィブリノゲンポリマー（Ｅｔｈｉｃｏｎ  Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｅｌｉａ，ＧＡ））、ＴＩＳＳＥＬＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ））、ＰＥＧ系シーラント及びＣＯＳＥＡＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ））などの外科用シーラントであってよい。
【０３４６】
他の実施形態において、脂質ナノ粒子は、対象に注射されたときにゲルを形成し得る、当該技術分野において知られている任意のポリマー内に封入されてもよい。別の非限定的な例として、脂質ナノ粒子は、生分解性であり得るポリマーマトリックス内に封入されてもよい。
【０３４７】
いくつかの実施形態において、制御放出及び／または標的化送達のためのＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン製剤はまた、少なくとも１つの制御放出コーティングを含み得る。制御放出コーティングには、ＯＰＡＤＲＹ（登録商標）、ポリビニルピロリドン／ビニルアセテートコポリマー、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＬ（登録商標）、ＥＵＤＲＡＧＩＴ  ＲＳ（登録商標）、及びエチルセルロース水性分散体（ＡＱＵＡＣＯＡＴ（登録商標）及びＳＵＲＥＬＥＡＳＥ（登録商標））などのセルロース誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン制御放出及び／または標的化送達製剤は、ポリカチオン性側鎖を含有し得る少なくとも１つの分解性ポリエステルを含み得る。分解性ポリエステルには、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態において、分解性ポリエステルは、ＰＥＧ化ポリマーを形成するためのＰＥＧコンジュゲートを含み得る。
【０３４９】
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むＲＮＡワクチン制御放出及び／または標的化送達製剤は、米国特許第８，４０４，２２２号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている少なくとも１つのＰＥＧ及び／またはＰＥＧ関連ポリマー誘導体を含み得る。
【０３５０】
他の実施形態において、少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むＲＮＡワクチン制御放出送達製剤は、米国特許出願公開第２０１３０１３０３４８号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている制御放出ポリマー系であってよい。
【０３５１】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、治療用ナノ粒子中に封入され得、これは、本明細書において「治療用ナノ粒子ＲＮＡワクチン」と呼ばれる。治療用ナノ粒子は、本明細書に記載される方法及び当該技術分野において知られている方法、例えば、限定するものではないが、国際公開第ＷＯ２０１０００５７４０号、同第ＷＯ２０１００３０７６３号、同第ＷＯ２０１０００５７２１号、同第ＷＯ２０１０００５７２３号及び同第ＷＯ２０１２０５４９２３号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１０２６２４９１号、同第ＵＳ２０１００１０４６４５号、同第ＵＳ２０１０００８７３３７号、同第ＵＳ２０１０００６８２８５号、同第ＵＳ２０１１０２７４７５９号、同第ＵＳ２０１０００６８２８６号、同第ＵＳ２０１２０２８８５４１号、同第ＵＳ２０１３０１２３３５１号及び同第ＵＳ２０１３０２３０５６７号、ならびに米国特許第８，２０６，７４７号、同第８，２９３，２７６号、同第８，３１８，２０８号及び同第８，３１８，２１１号（そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載の方法によって製剤化され得る。他の実施形態において、治療用ポリマーナノ粒子は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０１４０７９０号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載の方法によって特定することができる。
【０３５２】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子ＲＮＡワクチンは、持続放出用に製剤化することができる。本明細書で使用されるとき、「持続放出」は、特定の期間にわたってある放出速度に従う、医薬組成物または化合物を指す。特定の期間には、時間、日、週、月、及び年が含まれるが、これらに限定されない。非限定的な例として、持続放出性ナノ粒子は、ポリマーと、限定するものではないが、本発明のポリヌクレオチドなどの治療薬とを含み得る（国際公開第２０１００７５０７２号ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１００２１６８０４号、同第ＵＳ２０１１０２１７３７７号及び同第ＵＳ２０１２０２０１８５９号参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。別の非限定的な例において、持続放出性製剤は、限定するものではないが、結晶、巨大分子ゲル及び／または微粒子懸濁液などの、持続的なバイオアベイラビリティを可能にする作用物質を含み得る（米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１５０２９５号参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３５３】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、標的特異的になるように製剤化することができる。非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、コルチコステロイドを含み得る（国際公開第ＷＯ２０１１０８４５１８号参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、国際公開第ＷＯ２００８１２１９４９号、同第ＷＯ２０１０００５７２６号、同第ＷＯ２０１０００５７２５号、同第ＷＯ２０１１０８４５２１号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１０００６９４２６号、同第ＵＳ２０１２０００４２９３号及び同第ＵＳ２０１００１０４６５５号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているナノ粒子中に製剤化され得る。
【０３５４】
いくつかの実施形態において、本発明のナノ粒子は、ポリマーマトリックスを含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、限定するものではないが、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマレート、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）またはこれらの組み合わせなどの２つ以上のポリマーを含み得る。
【０３５５】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ジブロックコポリマーを含み得る。いくつかの実施形態において、ジブロックコポリマーは、ＰＥＧを、限定するものではないが、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフマレート、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリリジン、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）またはこれらの組み合わせなどのポリマーとの組み合わせで含み得る。更に他の実施形態において、ジブロックコポリマーは、国際公開第ＷＯ２０１３１２００５２号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているものなどの高Ｘジブロックコポリマーであってよい。
【０３５６】
非限定的な例として、治療用ナノ粒子は、ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマーを含む（米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０００４２９３号及び米国特許第８，２３６，３３０号参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。別の非限定的な例において、治療用ナノ粒子は、ＰＥＧ及びＰＬＡまたはＰＥＧ及びＰＬＧＡのジブロックコポリマーを含むステルスナノ粒子である（米国特許第８，２４６，９６８号及び国際公開第ＷＯ２０１２１６６９２３号参照、そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）。更に別の非限定的な例において、治療用ナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１７２４０６号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているステルスナノ粒子または標的特異型ステルスナノ粒子である。
【０３５７】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、多元ブロックコポリマーを含み得る（例えば、米国特許第８，２６３，６６５号及び同第８，２８７，９１０号ならびに米国特許出願公開第２０１３０１９５９８７号参照、そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３５８】
更に別の非限定的な例において、脂質ナノ粒子は、ブロックコポリマーＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧを含む（例えば、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．“Ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ  ａｓ  ａ  Ｔｇｆ−β１  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｖｅｈｉｃｌｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｗｏｕｎｄ  Ｈｅａｌｉｎｇ．”  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３  ２０（１２）：１９９５−２０００においてＴＧＦ−β１遺伝子の送達ビヒクルとして使用され、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｔｈｅｒｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌ”  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００３  ２０（６）：８８４−  ８８８；及びＣｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｎｏｎ−ｉｏｎｉｃ  ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ  ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｉｎ  ｒａｔ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ．”  Ｊ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ．２００７  １１８：２４５−２５３において制御された遺伝子送達系として使用された、感熱性ヒドロゲル（ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧ）参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。本開示のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ−ＰＥＧブロックコポリマーを含む脂質ナノ粒子中に製剤化され得る。
【０３５９】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、多元ブロックコポリマーを含み得る（例えば、米国特許第８，２６３，６６５号及び同第８，２８７，９１０号ならびに米国特許出願公開第２０１３０１９５９８７号参照、そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３６０】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるブロックコポリマーは、非ポリマーミセルとブロックコポリマーとを含むポリイオン複合体中に含まれていてもよい（例えば、米国特許出願公開第２０１２００７６８３６号参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３６１】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つのアクリルポリマーを含み得る。アクリルポリマーには、アクリル酸、メタクリル酸、アクリル酸とメタクリル酸のコポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、エトキシエチルメタクリレート、シアノエチルメタクリレート、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、ポリシアノアクリレート及びこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。
【０３６２】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つのポリ（ビニルエステル）ポリマーを含み得る。ポリ（ビニルエステル）ポリマーは、ランダムコポリマーなどのコポリマーであってよい。非限定的な例として、ランダムコポリマーは、国際公開第ＷＯ２０１３０３２８２９号または米国特許出願公開第２０１３０１２１９５４号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているものなどの構造を有し得る。いくつかの態様において、ポリ（ビニルエステル）ポリマーは、本明細書に記載されるポリヌクレオチドにコンジュゲートされ得る。
【０３６３】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つのジブロックコポリマーを含み得る。ジブロックコポリマーは、限定するものではないが、ポリ（乳）酸−ポリ（エチレン）グリコールコポリマーであってよい（例えば、国際公開第ＷＯ２０１３０４４２１９号参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。非限定的な例として、治療用ナノ粒子を使用して癌を治療することができる（国際公開第ＷＯ２０１３０４４２１９号参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３６４】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、本明細書に記載され、かつまたは当該技術分野において知られている、少なくとも１つのカチオン性ポリマーを含み得る。
【０３６５】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つのアミン含有ポリマー、限定するものではないが、ポリリジン、ポリエチレンイミン、ポリ（アミドアミン）デンドリマー、ポリ（β−アミノエステル）（例えば、米国特許第８，２８７，８４９号参照、その全体を参照により本明細書に援用する）及びこれらの組み合わせなどを含み得る。他の実施形態において、本明細書に記載されるナノ粒子は、国際公開第ＷＯ２０１３０５９４９６号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているものなどのアミンカチオン性脂質を含み得る。いくつかの態様において、カチオン性脂質は、アミノ−アミンまたはアミノ−アミド部分を有し得る。
【０３６６】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、ポリカチオン性側鎖を含有し得る少なくとも１つの分解性ポリエステルを含み得る。分解性ポリエステルには、ポリ（セリンエステル）、ポリ（Ｌ−ラクチド−ｃｏ−Ｌ−リジン）、ポリ（４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンエステル）及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態において、分解性ポリエステルは、ＰＥＧ化ポリマーを形成するためのＰＥＧコンジュゲートを含み得る。
【０３６７】
他の実施形態において、治療用ナノ粒子は、少なくとも１つの標的化リガンドのコンジュゲートを含み得る。標的化リガンドは、当該技術分野において知られている任意のリガンド、限定するものではないが、モノクローナル抗体などであってよい（Ｋｉｒｐｏｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００６  ６６：６７３２−６７４０、その全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３６８】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子は、水溶液に製剤化され得、これを使用して癌を標的にしてもよい（国際公開第ＷＯ２０１１０８４５１３号及び米国特許出願公開第２０１１０２９４７１７号参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３６９】
いくつかの実施形態において、治療用ナノ粒子ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン（例えば、少なくとも１つのＲＮＡワクチンを含む治療用ナノ粒子）は、米国特許第８，４０４，７９９号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）においてＰｏｄｏｂｉｎｓｋｉらが記載した方法を使用して製剤化することができる。
【０３７０】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、合成ナノ担体中に封入され、当該担体に結合し、かつ／または当該担体と会合し得る。合成ナノ担体には、国際公開第ＷＯ２０１０００５７４０号、同第ＷＯ２０１２１４９４５４号及び同第ＷＯ２０１３０１９６６９号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１１０２６２４９１号、同第ＵＳ２０１００１０４６４５号、同第ＵＳ２０１０００８７３３７号及び同第ＵＳ２０１２０２４４２２２号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載のものが含まれるが、これらに限定されない。合成ナノ担体は、当該技術分野において知られている方法及び／または本明細書に記載される方法を使用して製剤化することができる。非限定的な例として、合成ナノ担体は、国際公開第ＷＯ２０１０００５７４０号、同第ＷＯ２０１００３０７６３号及び同第ＷＯ２０１２１３５０１号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１１０２６２４９１号、同第ＵＳ２０１００１０４６４５号、同第ＵＳ２０１０００８７３３７号及び同第ＵＳ２０１２０２４４２２号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって製剤化することができる。他の実施形態において、合成ナノ担体の製剤は、国際公開第ＷＯ２０１１０７２２１８号及び米国特許第８，２１１，４７３号（そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法を使用して凍結乾燥され得る。更に他の実施形態において、限定するものではないが、合成ナノ担体を含む本発明の製剤は、米国特許出願公開第２０１３０２３０５６８号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって凍結乾燥または再構成され得る。
【０３７１】
いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドを放出する反応基を含有し得る（国際公開第ＷＯ２０１２０９５２５５２号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１２０１７１２２９号参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３７２】
いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、合成ナノ担体の送達からの免疫応答を向上させる免疫活性化剤を含有し得る。非限定的な例として、合成ナノ担体は、免疫系のＴｈ１系応答を向上させ得るＴｈ１免疫活性化剤を含み得る（国際公開第ＷＯ２０１０１２３５６９号及び米国特許出願公開第２０１１０２２３２０１号参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３７３】
いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、標的化放出用に製剤化され得る。いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、指定のｐＨで、かつ／または所望の時間間隔後にポリヌクレオチドを放出するように製剤化される。非限定的な例として、合成ナノ粒子は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを２４時間後、かつ／またはｐＨ４．５で放出するように製剤化され得る（国際公開第ＷＯ２０１０１３８１９３号及び同第ＷＯ２０１０１３８１９４号ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１１００２０３８８号及び同第ＵＳ２０１１００２７２１７号、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３７４】
いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、本明細書に記載されるポリヌクレオチドの制御放出及び／または持続放出用に製剤化され得る。非限定的な例として、持続放出用の合成ナノ担体は、当該技術分野において知られている方法、本明細書に記載される方法、ならびに／または国際公開第ＷＯ２０１０１３８１９２号及び米国特許出願公開第２０１００３０３８５０号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって製剤化することができる。
【０３７５】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、制御放出及び／または持続放出用に製剤化され得、製剤は、結晶性側鎖（ＣＹＳＣ）ポリマーであるポリマーを少なくとも１つ含む。ＣＹＳＣポリマーは、米国特許第８，３９９，００７号に記載されており、その全体を参照により本明細書に援用する。
【０３７６】
いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、ワクチンとして使用するために製剤化され得る。いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、少なくとも１つの抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを封入し得る。非限定的な例として、合成ナノ担体は、少なくとも１つの抗原とワクチン剤形のための賦形剤とを含み得る（国際公開第ＷＯ２０１１１５０２６４号及び米国特許出願公開第２０１１０２９３７２３号参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。別の非限定的な例として、ワクチン剤形は、同じ抗原または異なる抗原を含む少なくとも２つの合成ナノ担体と、賦形剤とを含み得る（国際公開第ＷＯ２０１１１５０２４９号及び米国特許出願公開第２０１１０２９３７０１号参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。ワクチン剤形は、本明細書に記載される方法、当該技術分野において知られている方法、ならびに／または国際公開第ＷＯ２０１１１５０２５８号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１２００２７８０６号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって選択され得る。
【０３７７】
いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、少なくとも１つのアジュバントをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含み得る。非限定的な例として、アジュバントは、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、ジメチルジオクタデシルアンモニウムクロリド、ジメチルジオクタデシルアンモニウムホスフェートまたはジメチルジオクタデシルアンモニウムアセテート（ＤＤＡ）、及びマイコバクテリウム総脂質抽出物の無極性分画または当該無極性分画の一部を含み得る（例えば、米国特許第８，２４１，６１０号参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。他の実施形態において、合成ナノ担体は、少なくとも１つのポリヌクレオチドと、アジュバントとを含み得る。非限定的な例として、アジュバントを含む合成ナノ担体は、国際公開第ＷＯ２０１１１５０２４０号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１１０２９３７００号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって製剤化することができる。
【０３７８】
いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、ウイルス由来のペプチド、断片または領域をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを封入し得る。非限定的な例として、合成ナノ担体には、国際公開第ＷＯ２０１２０２４６２１号、同第ＷＯ２０１２０２６２９号及び同第ＷＯ２０１２０２４６３２号ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１２００６４１１０号、同第ＵＳ２０１２００５８１５３号及び同第ＵＳ２０１２００５８１５４号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているナノ担体を挙げることができる。
【０３７９】
いくつかの実施形態において、合成ナノ担体は、体液性応答及び／または細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を誘起することが可能であり得るポリヌクレオチドに結合され得る（例えば、国際公開第ＷＯ２０１３０１９６６９号参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３８０】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、双性イオン脂質中に封入され、当該脂質に結合し、かつ／または当該脂質と会合し得る。双性脂質及び双性脂質の使用方法の非限定的な例は、米国特許出願公開第２０１３０２１６６０７号に記載されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する。いくつかの態様において、双性イオン脂質は、本明細書に記載されるリポソーム及び脂質ナノ粒子で使用することができる。
【０３８１】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、米国特許出願公開第２０１３０１９７１００号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているコロイド状ナノ担体中に製剤化され得る。
【０３８２】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、経口投与用に最適化され得る。ナノ粒子は、限定するものではないが、キトサンまたはその誘導体などの少なくとも１つのカチオン性バイオポリマーを含み得る。非限定的な例として、ナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１２０２８２３４３号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって製剤化することができる。
【０３８３】
いくつかの実施形態において、ＬＮＰは、脂質ＫＬ５２を含む（米国特許出願公開第２０１２／０２９５８３２号に開示されているアミノ脂質、その全体を参照により本明細書に明示的に援用する）。ＬＮＰ投与の活性及び／または安全性（ＡＬＴ／ＡＳＴ、白血球数及びサイトカイン誘導の１つ以上を調べることによって決定される）は、かかる脂質を組み込むことによって改善され得る。ＫＬ５２を含むＬＮＰは、静脈内及び／または１用量以上で投与され得る。いくつかの実施形態において、ＫＬ５２を含むＬＮＰの投与は、ＭＣ３を含むＬＮＰと比較して、同量または改善したｍＲＮＡ及び／またはタンパク質発現をもたらす。
【０３８４】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、更に小さなＬＮＰを使用して送達されてもよい。そのような粒子は、直径が０．１μｍ未満から最大１００ｎｍ、例えば、限定するものではないが、０．１μｍ未満、１．０μｍ未満、５μｍ未満、１０μｍ未満、１５μｍ未満、２０μｍ未満、２５μｍ未満、３０μｍ未満、３５μｍ未満、４０μｍ未満、５０μｍ未満、５５μｍ未満、６０μｍ未満、６５μｍ未満、７０μｍ未満、７５μｍ未満、８０μｍ未満、８５μｍ未満、９０μｍ未満、９５μｍ未満、１００μｍ未満、１２５μｍ未満、１５０μｍ未満、１７５μｍ未満、２００μｍ未満、２２５μｍ未満、２５０μｍ未満、２７５μｍ未満、３００μｍ未満、３２５μｍ未満、３５０μｍ未満、３７５μｍ未満、４００μｍ未満、４２５μｍ未満、４５０μｍ未満、４７５μｍ未満、５００μｍ未満、５２５μｍ未満、５５０μｍ未満、５７５μｍ未満、６００μｍ未満、６２５μｍ未満、６５０μｍ未満、６７５μｍ未満、７００μｍ未満、７２５μｍ未満、７５０μｍ未満、７７５μｍ未満、８００μｍ未満、８２５μｍ未満、８５０μｍ未満、８７５μｍ未満、９００μｍ未満、９２５μｍ未満、９５０μｍ未満または９７５μｍ未満であってよい。
【０３８５】
他の実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、約１ｎｍ〜約１００ｎｍ、約１ｎｍ〜約１０ｎｍ、約１ｎｍ〜約２０ｎｍ、約１ｎｍ〜約３０ｎｍ、約１ｎｍ〜約４０ｎｍ、約１ｎｍ〜約５０ｎｍ、約１ｎｍ〜約６０ｎｍ、約１ｎｍ〜約７０ｎｍ、約１ｎｍ〜約８０ｎｍ、約１ｎｍ〜約９０ｎｍ、約５ｎｍ〜約１００ｎｍ、約５ｎｍ〜約１０ｎｍ、約５ｎｍ〜約２０ｎｍ、約５ｎｍ〜約３０ｎｍ、約５ｎｍ〜約４０ｎｍ、約５ｎｍ〜約５０ｎｍ、約５ｎｍ〜約６０ｎｍ、約５ｎｍ〜約７０ｎｍ、約５ｎｍ〜約８０ｎｍ、約５ｎｍ〜約９０ｎｍ、約１０〜約５０ｎｍ、約２０〜約５０ｎｍ、約３０〜約５０ｎｍ、約４０〜約５０ｎｍ、約２０〜約６０ｎｍ、約３０〜約６０ｎｍ、約４０〜約６０ｎｍ、約２０〜約７０ｎｍ、約３０〜約７０ｎｍ、約４０〜約７０ｎｍ、約５０〜約７０ｎｍ、約６０〜約７０ｎｍ、約２０〜約８０ｎｍ、約３０〜約８０ｎｍ、約４０〜約８０ｎｍ、約５０〜約８０ｎｍ、約６０〜約８０ｎｍ、約２０〜約９０ｎｍ、約３０〜約９０ｎｍ、約４０〜約９０ｎｍ、約５０〜約９０ｎｍ、約６０〜約９０ｎｍ及び／または約７０〜約９０ｎｍの直径であり得る、更に小さなＬＮＰを使用して送達されてもよい。
【０３８６】
いくつかの実施形態において、そのようなＬＮＰは、マイクロ流体ミキサーを備える方法を使用して合成される。例示的なマイクロ流体ミキサーには、限定するものではないが、スリット型インターデジタルマイクロミキサーを挙げることができ、例えば、限定するものではないが、Ｍｉｃｒｏｉｎｎｏｖａ（Ａｌｌｅｒｈｅｉｌｉｇｅｎ  ｂｅｉ  Ｗｉｌｄｏｎ，Ａｕｓｔｒｉａ））社製によるもの及び／またはジグザグヘリンボーンマイクロミキサー（ＳＨＭ）があり（Ｚｈｉｇａｌｔｓｅｖ，Ｉ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｏｔｔｏｍ−ｕｐ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｌｉｍｉｔ  ｓｉｚｅ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｗｉｔｈ  ａｑｕｅｏｕｓ  ａｎｄ  ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  ｃｏｒｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｍｉｌｌｉｓｅｃｏｎｄ  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｍｉｘｉｎｇ．Ｌａｎｇｍｕｉｒ．２０１２．２８：３６３３−４０）、公開されている（Ｂｅｌｌｉｖｅａｕ，Ｎ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  ｌｉｍｉｔ−ｓｉｚｅ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｓｉＲＮＡ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ−Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ．２０１２．１：ｅ３７；Ｃｈｅｎ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｐｉｄ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｉＲＮＡ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｌｉｐｉｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｅｎａｂｌｅｄ  ｂｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．２０１２．１３４（１６）：６９４８−５１、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３８７】
いくつかの実施形態において、ＳＨＭを備えるＬＮＰの生成方法は、少なくとも２つの流入流れの混合を更に含み、この混合は、微細構造誘導型カオス的移流（ＭＩＣＡ）によって生じる。この方法によれば、流体流れは、ヘリンボーンのパターンに存在する流路を通って流れ、回転流を引き起こし、流体が互いに折り重なる。この方法はまた、流体が循環している間に表面が方向性を変える、流体混合のための表面を含み得る。ＳＨＭを使用してＬＮＰを生成する方法には、米国特許出願公開第２００４／０２６２２２３号及び同第２０１２／０２７６２０９号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に明示的に援用する）に開示されているものが含まれる。
【０３８８】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、限定するものではないが、スリット型インターデジタル微細構造ミキサー（ＳＩＭＭ−Ｖ２）または標準スリット型インターデジタルマイクロミキサー（ＳＳＩＭＭ）またはキャタピラー（ＣＰＭＭ）またはジェット衝突（（ＩＪＭＭ）Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  ｆｕｒ  Ｍｉｋｒｏｔｅｃｈｎｉｋ  Ｍａｉｎｚ  ＧｍｂＨ（Ｍａｉｎｚ  Ｇｅｒｍａｎｙ）社製）などのマイクロミキサーを使用して生成された脂質ナノ粒子中に製剤化され得る。
【０３８９】
いくつかの実施形態において、本開示のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、マイクロ流体技術を使用して生成された脂質ナノ粒子中に製剤化され得る（Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅｓ，Ｇｅｏｒｇｅ  Ｍ．Ｔｈｅ  Ｏｒｉｇｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ．Ｎａｔｕｒｅ，２００６  ４４２：３６８−３７３；及びＡｂｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈａｏｔｉｃ  Ｍｉｘｅｒ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２  ２９５：６４７−６５１参照、そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）。非限定的な例として、制御されたマイクロ流体製剤は、マイクロ流路内にある低いレイノルズ数の定常圧による駆動流の流れを混合する受動的方法を伴う（例えば、Ａｂｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｈａｏｔｉｃ  Ｍｉｘｅｒ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２  ２９５：６４７６５１参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３９０】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、限定するものではないが、Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）社製またはＤｏｌｏｍｉｔｅ  Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ（Ｒｏｙｓｔｏｎ，ＵＫ）社製のものなどのマイクロミキサーチップを使用して生成された脂質ナノ粒子中に製剤化され得る。マイクロミキサーチップを、スリット及び再結合メカニズムにより２つ以上の流体流れを迅速に混合するために使用することができる。
【０３９１】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、国際公開第ＷＯ２０１３０６３４６８号または米国特許第８，４４０，６１４号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている薬物封入マイクロスフェアを使用した送達用に製剤化され得る。マイクロスフェアは、国際公開第ＷＯ２０１３０６３４６８号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）または（ＶＩ）の化合物を含み得る。他の態様において、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを細胞に送達するには、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、脂質が有用である（国際公開第ＷＯ２０１３０６３４６８号参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０３９２】
いくつかの実施形態において、本開示のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、約１０〜約１００ｎｍ、例えば、限定するものではないが、約１０〜約２０ｎｍ、約１０〜約３０ｎｍ、約１０〜約４０ｎｍ、約１０〜約５０ｎｍ、約１０〜約６０ｎｍ、約１０〜約７０ｎｍ、約１０〜約８０ｎｍ、約１０〜約９０ｎｍ、約２０〜約３０ｎｍ、約２０〜約４０ｎｍ、約２０〜約５０ｎｍ、約２０〜約６０ｎｍ、約２０〜約７０ｎｍ、約２０〜約８０ｎｍ、約２０〜約９０ｎｍ、約２０〜約１００ｎｍ、約３０〜約４０ｎｍ、約３０〜約５０ｎｍ、約３０〜約６０ｎｍ、約３０〜約７０ｎｍ、約３０〜約８０ｎｍ、約３０〜約９０ｎｍ、約３０〜約１００ｎｍ、約４０〜約５０ｎｍ、約４０〜約６０ｎｍ、約４０〜約７０ｎｍ、約４０〜約８０ｎｍ、約４０〜約９０ｎｍ、約４０〜約１００ｎｍ、約５０〜約６０ｎｍ、約５０〜約７０ｎｍ約５０〜約８０ｎｍ、約５０〜約９０ｎｍ、約５０〜約１００ｎｍ、約６０〜約７０ｎｍ、約６０〜約８０ｎｍ、約６０〜約９０ｎｍ、約６０〜約１００ｎｍ、約７０〜約８０ｎｍ、約７０〜約９０ｎｍ、約７０〜約１００ｎｍ、約８０〜約９０ｎｍ、約８０〜約１００ｎｍ及び／または約９０〜約１００ｎｍの直径を有する脂質ナノ粒子中に製剤化され得る。
【０３９３】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、約１０〜５００ｎｍの直径を有し得る。
【０３９４】
いくつかの実施形態において、脂質ナノ粒子は、１００ｎｍ超、１５０ｎｍ超、２００ｎｍ超、２５０ｎｍ超、３００ｎｍ超、３５０ｎｍ超、４００ｎｍ超、４５０ｎｍ超、５００ｎｍ超、５５０ｎｍ超、６００ｎｍ超、６５０ｎｍ超、７００ｎｍ超、７５０ｎｍ超、８００ｎｍ超、８５０ｎｍ超、９００ｎｍ超、９５０ｎｍまたは１０００ｎｍ超の直径を有し得る。
【０３９５】
いくつかの態様において、脂質ナノ粒子は、国際公開第ＷＯ２０１３０５９９２２号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている限界寸法の脂質ナノ粒子であってよい。限界寸法の脂質ナノ粒子は、水性コアまたは疎水性コアを取り囲む脂質二重層を含み得、ここで、脂質二重層は、限定するものではないが、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、セファリン、セレブロシド、Ｃ８〜Ｃ２０の脂肪酸ジアシルホスファチジルコリン及び１−パルミトイル−２−オレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）などのリン脂質を含み得る。他の態様において、限界寸法の脂質ナノ粒子は、限定するものではないが、ＤＬＰＥ−ＰＥＧ、ＤＭＰＥ−ＰＥＧ、ＤＰＰＣ−ＰＥＧ及びＤＳＰＥ−ＰＥＧなどのポリエチレングリコール脂質を含み得る。
【０３９６】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、国際公開第ＷＯ２０１３０６３５３０号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている送達方法を使用して、特定の場所に送達し、局在化させ、及び／または集中させてもよい。非限定的な例として、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを対象に送達する前に、それと同時に、またはその後に、空のポリマー粒子を対象に投与してもよい。空のポリマー粒子は、対象と接触すると、体積が変化し、対象内の特定の位置に、留まり、埋め込まれ、固定化され、または捕捉される。
【０３９７】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、有効物質放出系中に製剤化され得る（例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１０２５４５号参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。有効物質放出系は、１）触媒活性をもつ核酸とハイブリダイズするオリゴヌクレオチドインヒビター鎖に結合した少なくとも１つのナノ粒子と、２）治療上有効な物質（例えば、本明細書に記載されるポリヌクレオチド）に結合した少なくとも１つの基質分子に結合した化合物とを含み得、ここで、治療上有効な物質は、触媒活性をもつ核酸による基質分子の切断によって放出される。
【０３９８】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、非細胞性物質を含む内側コアと、細胞膜を含む外表面とを含むナノ粒子中に製剤化され得る。細胞膜は、細胞由来でもよいし、ウイルス由来の膜であってもよい。非限定的な例として、ナノ粒子は、国際公開第ＷＯ２０１３０５２１６７号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって作製することができる。別の非限定的な例として、本明細書に記載されるＲＮＡワクチンを送達するために、国際公開第ＷＯ２０１３０５２１６７号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているナノ粒子を使用してもよい。
【０３９９】
いくつかの実施形態において、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、多孔性ナノ粒子に支持された脂質二重層（原細胞）中に製剤化され得る。原細胞については、国際公開第ＷＯ２０１３０５６１３２号に記載されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０４００】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、米国特許第８，４２０，１２３号及び同第８，５１８，９６３号ならびに欧州特許第ＥＰ２０７３８４８Ｂ１号（そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているポリマーナノ粒子中、またはこれらに記載されている方法によって作製されたポリマーナノ粒子中に製剤化され得る。非限定的な例として、米国特許第８，５１８，９６３号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているナノ粒子または当該特許に記載されている方法によって作製されたナノ粒子などのポリマーナノ粒子は、高いガラス転移温度を有し得る。別の非限定的な例として、経口製剤及び非経口製剤のためのポリマーナノ粒子は、欧州特許第ＥＰ２０７３８４８Ｂ１号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって作製され得る。
【０４０１】
他の実施形態において、本明細書に記載されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、イメージングで使用されるナノ粒子中に製剤化され得る。ナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１２９６３６号（その全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているものなどのリポソームナノ粒子であってよい。非限定的な例として、リポソームは、ガドリニウム（ＩＩＩ）２−｛４，７−ビス−カルボキシメチル−１０−［（Ｎ，Ｎ−ジステアリルアミドメチル−Ｎ’−アミド−メチル］−１，４，７，１０−テトラ−アザシクロドデカ−１−イル｝−酢酸及び中性の完全に飽和したリン脂質成分を含み得る（例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１２９６３６号参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０４０２】
いくつかの実施形態において、本発明において使用することができるナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１３０３４８号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって形成される。
【０４０３】
本発明のナノ粒子は、限定するものではないが、欠乏すると貧血から神経管欠陥に及ぶ健康被害をもたらし得るものなどの栄養素を更に含み得る（例えば、国際公開第ＷＯ２０１３０７２９２９号に記載のナノ粒子参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。非限定的な例として、栄養素は、第一鉄塩、第二鉄塩または元素状の鉄、ヨウ素、葉酸、ビタミンまたは微量栄養素であってよい。
【０４０４】
いくつかの実施形態において、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、膨潤性ナノ粒子中に製剤化され得る。膨潤性ナノ粒子は、限定するものではないが、米国特許第８，４４０，２３１号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているものであってよい。非限定的な実施形態として、本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを肺系統に送達するために、膨潤性ナノ粒子が使用され得る（例えば、米国特許第８，４４０，２３１号参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。
【０４０５】
本発明のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、限定するものではないが、米国特許第８，４４９，９１６号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されるものなどのポリ酸無水物ナノ粒子中に製剤化され得る。本発明のナノ粒子及びマイクロ粒子を幾何学的に操作して、マクロファージ応答及び／または免疫応答を制御してもよい。いくつかの態様において、幾何学的に操作された粒子は、限定するものではないが、肺送達などの標的化送達用の本発明のポリヌクレオチドを組み込むために、様々な形状、大きさ及び／または表面電荷を有し得る（例えば、国際公開第ＷＯ２０１３０８２１１１号参照、その内容全体を参照により本明細書に援用する）。幾何学的に操作される粒子の他の物理的特徴には、限定するものではないが、窓形成、角度のあるアーム、非対称性、表面粗さ及び電荷が含まれ得、これにより、細胞と組織との相互作用を変えることができる。非限定的な例として、本発明のナノ粒子は、国際公開第ＷＯ２０１３０８２１１１号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって作製することができる。
【０４０６】
いくつかの実施形態において、本発明のナノ粒子は、水溶性ナノ粒子、例えば、限定するものではないが、国際公開第ＷＯ２０１３０９０６０１号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されるものなどであってよい。ナノ粒子は、良好な水溶性を示すために、小型で双性イオンのリガンドを有する無機ナノ粒子であってもよい。ナノ粒子はまた、小さな流体力学的直径（ＨＤ）、時間、ｐＨ及び塩濃度に対する安定性、ならびに低レベルの非特異的タンパク質結合を有し得る。
【０４０７】
いくつかの実施形態において、本発明のナノ粒子は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３０１７２４０６号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって開発され得る。
【０４０８】
いくつかの実施形態において、本発明のナノ粒子は、限定するものではないが、米国特許出願公開第２０１３０１７２４０６号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されているものなどのステルスナノ粒子または標的特異的ステルスナノ粒子である。本発明のナノ粒子は、米国特許出願公開第２０１３０１７２４０６号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって作製することができる。
【０４０９】
他の実施形態において、ステルスまたは標的特異的ステルスナノ粒子は、ポリマーマトリックスを含み得る。ポリマーマトリックスは、限定するものではないが、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリ酸無水物、ポリヒドロキシ酸、ポリプロピルフメレート、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリレート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリ尿素、ポリスチレン、ポリアミン、ポリエステル、ポリ酸無水物、ポリエーテル、ポリウレタン、ポリメタクリレート、ポリアクリレート、ポリシアノアクリレートまたはこれらの組み合わせなどの２つ以上のポリマーを含み得る。
【０４１０】
いくつかの実施形態において、ナノ粒子は、高密度の核酸層を有するナノ粒子−核酸ハイブリッド構造であってよい。非限定的な例として、ナノ粒子−核酸ハイブリッド構造は、米国特許出願公開第２０１３０１７１６４６号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に記載されている方法によって作製することができる。ナノ粒子は、限定するものではないが、本明細書に記載されるポリヌクレオチド及び／または当該技術分野において知られているポリヌクレオチドなどの核酸を含み得る。
【０４１１】
本発明のナノ粒子の少なくとも１つは、コアナノ構造に埋め込まれ得、またはナノ構造内もしくはナノ構造上で少なくとも１つのペイロードを運搬もしくは会合することが可能である低密度の多孔性３Ｄ構造もしくはコーティングで被覆され得る。少なくとも１つのナノ粒子を含むナノ構造の非限定的な例は、国際公開第ＷＯ２０１３１２３５２３号に記載されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０４１２】
ワクチン投与方法
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、治療上有効な成果をもたらす任意の経路によって投与され得る。これらには、皮内、筋肉内及び／または皮下投与が含まれるが、これらに限定されない。本開示は、それを必要とする対象にＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを投与することを含む方法を提供する。正確な必要量は、対象の種、年齢及び全身状態、疾患の重症度、特定の組成物、その投与様式、その活性様式などに応じて、対象ごとに変化し得る。ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物は、典型的に、投与の容易性及び用量の均一性のために単位剤形で製剤化される。しかしながら、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物の一日の総用量は、堅実な医学的判断の範囲内で主治医によって決定され得ることが理解されるであろう。任意の特定の患者に対する具体的な治療上有効な用量レベル、予防上有効な用量レベル、適切なイメージング用量レベルは、治療対象の疾病及び疾病の重症度、採用される特定の化合物の活性、採用される特定の組成物、患者の年齢、体重、全身状態、性別及び食生活、採用される特定の化合物の投与の時間、投与経路及び排泄速度、治療の継続期間、採用される特定の化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、ならびに医学分野でよく知られている同様の因子を含む、種々の因子に依存し得る。
【０４１３】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物は、１日につき対象の体重１ｋｇ当たり、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．００５ｍｇ／ｋｇ〜０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．００１ｍｇ／ｋｇ〜０．００５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な用量レベルで、１日１回以上、週１回以上、月１回以上などで投与されて、所望の治療効果、診断効果、予防効果またはイメージング効果を得ることができる（例えば、国際公開第ＷＯ２０１３０７８１９９号に記載されている単位用量範囲を参照、その全体を参照により本明細書に援用する）。所望の用量は、１日３回、１日２回、１日１回、２日に１回、３日に１回、毎週、２週ごと、３週ごと、４週ごと、２ヶ月ごと、３ヶ月ごと、６ヶ月ごとなどに送達され得る。ある特定の実施形態において、所望の用量は、複数回投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回またはそれ以上の投与）を用いて送達され得る。複数回投与が採用される場合、本明細書に記載されるものなどの分割投薬計画を使用してもよい。例示的な実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物は、０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜０．０１ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ〜約０．００７５ｍｇ／ｋｇ、例えば、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ、約０．００２ｍｇ／ｋｇ、約０．００３ｍｇ／ｋｇ、約０．００４ｍｇ／ｋｇまたは約０．００５ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な用量レベルで投与され得る。
【０４１４】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物は、０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜０．２５０ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜０．５００ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜０．７５０ｍｇ／ｋｇまたは０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜１．０ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な用量レベルで、１回または２回（またはそれ以上）投与され得る。
【０４１５】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物は、０．０１００ｍｇ、０．０２５ｍｇ、０．０５０ｍｇ、０．０７５ｍｇ、０．１００ｍｇ、０．１２５ｍｇ、０．１５０ｍｇ、０．１７５ｍｇ、０．２００ｍｇ、０．２２５ｍｇ、０．２５０ｍｇ、０．２７５ｍｇ、０．３００ｍｇ、０．３２５ｍｇ、０．３５０ｍｇ、０．３７５ｍｇ、０．４００ｍｇ、０．４２５ｍｇ、０．４５０ｍｇ、０．４７５ｍｇ、０．５００ｍｇ、０．５２５ｍｇ、０．５５０ｍｇ、０．５７５ｍｇ、０．６００ｍｇ、０．６２５ｍｇ、０．６５０ｍｇ、０．６７５ｍｇ、０．７００ｍｇ、０．７２５ｍｇ、０．７５０ｍｇ、０．７７５ｍｇ、０．８００ｍｇ、０．８２５ｍｇ、０．８５０ｍｇ、０．８７５ｍｇ、０．９００ｍｇ、０．９２５ｍｇ、０．９５０ｍｇ、０．９７５ｍｇもしくは１．０ｍｇの総用量またはこれらの総用量を送達するのに十分な用量レベルで、２回（例えば、０日目及び７日目、０日目及び１４日目、０日目及び２１日目、０日目及び２８日目、０日目及び６０日目、０日目及び９０日目、０日目及び１２０日目、０日目及び１５０日目、０日目及び１８０日目、０日目及び３ヶ月後、０日目及び６ヶ月後、０日目及び９ヶ月後、０日目及び１２ヶ月後、０日目及び１８ヶ月後、０日目及び２年後、０日目及び５年後または０日目及び１０年後）投与され得る。より高い用量及びより低い用量ならびに投与頻度が本開示に包含される。例えば、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物は、３回または４回投与され得る。
【０４１６】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン組成物は、０．０１０ｍｇ、０．０２５ｍｇ、０．１００ｍｇもしくは０．４００ｍｇの総用量またはこれらの総用量を送達するのに十分な用量レベルで、２回（例えば、０日目及び７日目、０日目及び１４日目、０日目及び２１日目、０日目及び２８日目、０日目及び６０日目、０日目及び９０日目、０日目及び１２０日目、０日目及び１５０日目、０日目及び１８０日目、０日目及び３ヶ月後、０日目及び６ヶ月後、０日目及び９ヶ月後、０日目及び１２ヶ月後、０日目及び１８ヶ月後、０日目及び２年後、０日目及び５年後または０日目及び１０年後）投与され得る。
【０４１７】
いくつかの実施形態において、対象にワクチン接種を行う方法にて使用されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、対象へのワクチン接種に有効な量で、１０μｇ／ｋｇ〜４００μｇ／ｋｇの核酸ワクチンの単回用量が対象に投与される。いくつかの実施形態において、対象にワクチン接種を行う方法にて使用されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンは、対象へのワクチン接種に有効な量で、１０μｇ〜４００μｇの核酸ワクチンの単回用量を介して、対象に投与される。
【０４１８】
本明細書に記載されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン医薬組成物は、鼻腔内、気管内または注射可能（例えば、静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、皮内、心臓内、腹腔内及び皮下）などの本明細書に記載される剤形に製剤化することができる。
【０４１９】
ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチン製剤及び使用方法
本開示のいくつかの態様は、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの製剤を提供し、ここで、ＨＳＶ  ＲＮＡワクチンは、対象において抗原特異的免疫応答（例えば、抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチドに特異的な抗体の産生）をもたらすのに有効な量で製剤化される。「有効量」は、抗原特異的免疫応答をもたらすのに有効なＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの用量である。また、対象の抗原特異的免疫応答を誘導する方法も本明細書で提供される。
【０４２０】
いくつかの実施形態において、抗原特異的免疫応答は、本明細書で提供されるＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンを投与した対象において産生された抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価を測定することによって特徴付けられる。抗体力価は、対象内の抗体の量、例えば、特定の抗原（例えば、抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド）または抗原のエピトープに特異的である抗体の量の測定値である。抗体力価は、典型的に、陽性結果をもたらす最大希釈の逆数で表される。例えば、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）が、抗体力価を決定するための一般的なアッセイである。
【０４２１】
いくつかの実施形態において、抗体力価は、対象が感染したかどうかを評価し、または免疫付与が必要かどうかを決定するために使用される。いくつかの実施形態において、抗体力価は、自己免疫応答の強さを決定し、ブースター免疫が必要であるかを決定し、以前のワクチンが有効であったかを決定し、かつ最近または以前のあらゆる感染を特定するために使用される。本開示によれば、抗体力価は、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンによって、対象において誘導された免疫応答の強さを決定するために使用される。
【０４２２】
いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも１ｌｏｇ増加する。例えば、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも１．５、少なくとも２、少なくとも２．５または少なくとも３ｌｏｇ増加し得る。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、１、１．５、２、２．５または３ｌｏｇ増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、１〜３ｌｏｇ増加する。例えば、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、１〜１．５、１〜２、１〜２．５、１〜３、１．５〜２、１．５〜２．５、１．５〜３、２〜２．５、２〜３または２．５〜３ｌｏｇ増加し得る。
【０４２３】
いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも２倍増加する。例えば、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍または少なくとも１０倍増加し得る。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、２、３、４、５，６、７、８、９または１０倍増加する。いくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、２〜１０倍増加する。例えば、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、対照と比較して、２〜１０、２〜９、２〜８、２〜７、２〜６、２〜５、２〜４、２〜３、３〜１０、３〜９、３〜８、３〜７、３〜６、３〜５、３〜４、４〜１０、４〜９、４〜８、４〜７、４〜６、４〜５、５〜１０、５〜９、５〜８、５〜７、５〜６、６〜１０、６〜９、６〜８、６〜７、７〜１０、７〜９、７〜８、８〜１０、８〜９または９〜１０倍増加し得る。
【０４２４】
対照は、いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの投与を受けたことがない対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、弱毒化生ＨＳＶワクチンの投与を受けたことがある対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。弱毒化ワクチンは、毒性を低下させることによって作製された生存能力のある（生きた）ワクチンである。弱毒化されたウイルスは、改変されていない生きたウイルスと比較して、無害または低毒性になるように改変される。いくつかの実施形態において、対照は、ＨＳＶ不活化ワクチンの投与を受けた対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、組み換えまたは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチンの投与を受けた対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。組み換えタンパク質ワクチンは、典型的に、異種発現系（例えば、細菌または酵母）で産生されたタンパク質抗原または大量の病原性生物から精製されたタンパク質抗原のいずれかを含む。いくつかの実施形態において、対照は、ＨＳＶウイルス様粒子（ＶＬＰ）ワクチン（例えば、ウイルスカプシドタンパク質を含有するが、ウイルスゲノムを含まないので、子孫ウイルスを複製／産生することができない粒子）の投与を受けたことがある対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価である。いくつかの実施形態において、対照は、融合前または融合後のＦタンパク質を含むか、２つの組み合わせを含む、ＶＬＰ  ＨＳＶワクチンである。
【０４２５】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量と比較して少ない用量である。本明細書で提供される「標準治療」は、医学的または心理学的治療ガイドラインを指し、全般的または特定的であり得る。「標準治療」は、科学的証拠及び所与の状態の治療に関わる医療専門家間の協力に基づいた適切な治療法を規定している。これは、ある特定のタイプの患者、疾病または臨床環境に対して医師／臨床医が従うべき診断及び治療プロセスである。「標準治療用量」は、本明細書に記載されるとき、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの用量であって、医師／臨床医または他の医療専門家が、ＨＳＶまたはＨＳＶ関連状態を治療または予防するための標準治療ガイドラインに従いながら、ＨＳＶまたはＨＳＶ関連状態を治療または予防するために対象に投与する用量である。
【０４２６】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量を投与した対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【０４２７】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、組み換えまたは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／２に減らした用量と同等の用量である。例えば、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、組み換えまたは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも１／３、少なくとも１／４、少なくとも１／５、少なくとも１／６、少なくとも１／７、少なくとも１／８、少なくとも１／９または少なくとも１／１０に減らした用量と同等の用量であり得る。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡワクチンの有効量は、組み換えまたは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を少なくとも少なくとも１／１００、少なくとも１／５００または少なくとも１／１０００に減らした用量と同等の用量である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、組み換えまたは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を１／２、１／３、１／４、１／５、１／６、１／７、１／８、１／９、１／１０、１／２０、１／５０、１／１００、１／２５０、１／５００または１／１０００に減らした用量と同等の用量である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡワクチンの有効量を投与した対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくはタンパク質ＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、組み換えまたは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を１／２〜１／１０００（例えば、１／２〜１／１００、１／１０〜１／１０００）に減らした用量と同等の用量であり、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【０４２８】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチンの標準治療用量を１／２〜１／１０００、１／２〜１／９００、１／２〜１／８００、１／２〜１／７００、１／２〜１／６００、１／２〜１／５００、１／２〜１／４００、１／２〜１／３００、１／２〜１／２００、１／２〜１／１００、１／２〜１／９０、１／２〜１／８０、１／２〜１／７０、１／２〜１／６０、１／２〜１／５０、１／２〜１／４０、１／２〜１／３０、１／２〜１／２０、１／２〜１／１０、１／２〜１／９、１／２〜１／８、１／２〜１／７、１／２〜１／６、１／２〜１／５、１／２〜１／４、１／２〜１／３、１／３〜１／１０００、１／３〜１／９００、１／３〜１／８００、１／３〜１／７００、１／３〜１／６００、１／３〜１／５００、１／３〜１／４００、１／３〜１／３００、１／３〜１／２００、１／３〜１／１００、１／３〜１／９０、１／３〜１／８０、１／３〜１／７０、１／３〜１／６０、１／３〜１／５０、１／３〜１／４０、１／３〜１／３０、１／３〜１／２０、１／３〜１／１０、１／３〜１／９、１／３〜１／８、１／３〜１／７、１／３〜１／６、１／３〜１／５、１／３〜１／４、１／４〜１／１０００、１／４〜１／９００、１／４〜１／８００、１／４〜１／７００、１／４〜１／６００、１／４〜１／５００、１／４〜１／４００、１／４〜１／４００、１／４〜１／２００、１／４〜１／１００、１／４〜１／９０、１／４〜１／８０、１／４〜１／７０、１／４〜１／６０、１／４〜１／５０、１／４〜１／４０、１／４〜１／３０、１／４〜１／２０、１／４〜１／１０、１／４〜１／９、１／４〜１／８、１／４〜１／７、１／４〜１／６、１／４〜１／５、１／４〜１／４、１／５〜１／１０００、１／５〜１／９００、１／５〜１／８００、１／５〜１／７００、１／５〜１／６００、１／５〜１／５００、１／５〜１／４００、１／５〜１／３００、１／５〜１／２００、１／５〜１／１００、１／５〜１／９０、１／５〜１／８０、１／５〜１／７０、１／５〜１／６０、１／５〜１／５０、１／５〜１／４０、１／５〜１／３０、１／５〜１／２０、１／５〜１／１０、１／５〜１／９、１／５〜１／８、１／５〜１／７、１／５〜１／６、１／６〜１／１０００、１／６〜１／９００、１／６〜１／８００、１／６〜１／７００、１／６〜１／６００、１／６〜１／５００、１／６〜１／４００、１／６〜１／３００、１／６〜１／２００、１／６〜１／１００、１／６〜１／９０、１／６〜１／８０、１／６〜１／７０、１／６〜１／６０、１／６〜１／５０、１／６〜１／４０、１／６〜１／３０、１／６〜１／２０、１／６〜１／１０、１／６〜１／９、１／６〜１／８、１／６〜１／７、１／７〜１／１０００、１／７〜１／９００、１／７〜１／８００、１／７〜１／７００、１／７〜１／６００、１／７〜１／５００、１／７〜１／４００、１／７〜１／３００、１／７〜１／２００、１／７〜１／１００、１／７〜１／９０、１／７〜１／８０、１／７〜１／７０、１／７〜１／６０、１／７〜１／５０、１／７〜１／４０、１／７〜１／３０、１／７〜１／２０、１／７〜１／１０、���／７〜１／９、１／７〜１／８、１／８〜１／１０００、１／８〜１／９００、１／８〜１／８００、１／８〜１／７００、１／８〜１／６００、１／８〜１／５００、１／８〜１／４００、１／８〜１／３００、１／８〜１／２００、１／８〜１／１００、１／８〜１／９０、１／８〜１／８０、１／８〜１／７０、１／８〜１／６０、１／８〜１／５０、１／８〜１／４０、１／８〜１／３０、１／８〜１／２０、１／８〜１／１０、１／８〜１／９、１／９〜１／１０００、１／９〜１／９００、１／９〜１／８００、１／９〜１／７００、１／９〜１／６００、１／９〜１／５００、１／９〜１／４００、１／９〜１／３００、１／９〜１／２００、１／９〜１／１００、１／９〜１／９０、１／９〜１／８０、１／９〜１／７０、１／９〜１／６０、１／９〜１／５０、１／９〜１／４０、１／９〜１／３０、１／９〜１／２０、１／９〜１／１０、１／１０〜１／１０００、１／１０〜１／９００、１／１０〜１／８００、１／１０〜１／７００、１／１０〜１／６００、１／１０〜１／５００、１／１０〜１／４００、１／１０〜１／３００、１／１０〜１／２００、１／１０〜１／１００、１／１０〜１／９０、１／１０〜１／８０、１／１０〜１／７０、１／１０〜１／６０、１／１０〜１／５０、１／１０〜１／４０、１／１０〜１／３０、１／１０〜１／２０、１／２０〜１／１０００、１／２０〜１／９００、１／２０〜１／８００、１／２０〜１／７００、１／２０〜１／６００、１／２０〜１／５００、１／２０〜１／４００、１／２０〜１／３００、１／２０〜１／２００、１／２０〜１／１００、１／２０〜１／９０、１／２０〜１／８０、１／２０〜１／７０、１／２０〜１／６０、１／２０〜１／５０、１／２０〜１／４０、１／２０〜１／３０、１／３０〜１／１０００、１／３０〜１／９００、１／３０〜１／８００、１／３０〜１／７００、１／３０〜１／６００、１／３０〜１／５００、１／３０〜１／４００、１／３０〜１／３００、１／３０〜１／２００、１／３０〜１／１００、１／３０〜１／９０、１／３０〜１／８０、１／３０〜１／７０、１／３０〜１／６０、１／３０〜１／５０、１／３０〜１／４０、１／４０〜１／１０００、１／４０〜１／９００、１／４０〜１／８００、１／４０〜１／７００、１／４０〜１／６００、１／４０〜１／５００、１／４０〜１／４００、１／４０〜１／３００、１／４０〜１／２００、１／４０〜１／１００、１／４０〜１／９０、１／４０〜１／８０、１／４０〜１／７０、１／４０〜１／６０、１／４０〜１／５０、１／５０〜１／１０００、１／５０〜１／９００、１／５０〜１／８００、１／５０〜１／７００、１／５０〜１／６００、１／５０〜１／５００、１／５０〜１／４００、１／５０〜１／３００、１／５０〜１／２００、１／５０〜１／１００、１／５０〜１／９０、１／５０〜１／８０、１／５０〜１／７０、１／５０〜１／６０、１／６０〜１／１０００、１／６０〜１／９００、１／６０〜１／８００、１／６０〜１／７００、１／６０〜１／６００、１／６０〜１／５００、１／６０〜１／４００、１／６０〜１／３００、１／６０〜１／２００、１／６０〜１／１００、１／６０〜１／９０、１���６０〜１／８０、１／６０〜１／７０、１／７０〜１／１０００、１／７０〜１／９００、１／７０〜１／８００、１／７０〜１／７００、１／７０〜１／６００、１／７０〜１／５００、１／７０〜１／４００、１／７０〜１／３００、１／７０〜１／２００、１／７０〜１／１００、１／７０〜１／９０、１／７０〜１／８０、１／８０〜１／１０００、１／８０〜１／９００、１／８０〜１／８００、１／８０〜１／７００、１／８０〜１／６００、１／８０〜１／５００、１／８０〜１／４００、１／８０〜１／３００、１／８０〜１／２００、１／８０〜１／１００、１／８０〜１／９０、１／９０〜１／１０００、１／９０〜１／９００、１／９０〜１／８００、１／９０〜１／７００、１／９０〜１／６００、１／９０〜１／５００、１／９０〜１／４００、１／９０〜１／３００、１／９０〜１／２００、１／９０〜１／１００、１／１００〜１／１０００、１／１００〜１／９００、１／１００〜１／８００、１／１００〜１／７００、１／１００〜１／６００、１／１００〜１／５００、１／１００〜１／４００、１／１００〜１／３００、１／１００〜１／２００、１／２００〜１／１０００、１／２００〜１／９００、１／２００〜１／８００、１／２００〜１／７００、１／２００〜１／６００、１／２００〜１／５００、１／２００〜１／４００、１／２００〜１／３００、１／３００〜１／１０００、１／３００〜１／９００、１／３００〜１／８００、１／３００〜１／７００、１／３００〜１／６００、１／３００〜１／５００、１／３００〜１／４００、１／４００〜１／１０００、１／４００〜１／９００、１／４００〜１／８００、１／４００〜１／７００、１／４００〜１／６００、１／４００〜１／５００、１／５００〜１／１０００、１／５００〜１／９００、１／５００〜１／８００、１／５００〜１／７００、１／５００〜１／６００、１／６００〜１／１０００、１／６００〜１／９００、１／６００〜１／８００、１／６００〜１／７００、１／７００〜１／１０００、１／７００〜１／９００、１／７００〜１／８００、１／８００〜１／１０００、１／８００〜１／９００または１／９００〜１／１０００に減らした用量と同等の用量である。前述などのいくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。いくつかの実施形態において、有効量は、組み換えＨＳＶタンパク質ワクチン標準治療用量を１／２、１／３、１／４、１／５、１／６、１／７、１／８、１／９、１／１０、１／２０、１／３０、１／４０、１／５０、１／６０、１／７０、１／８０、１／９０、１／１００、１／１１０、１／１２０、１／１３０、１／１４０、１／１５０、１／１６０、１／１７０、１／１２８０、１／１９０、１／２００、１／２１０、１／２２０、１／２３０、１／２４０、１／２５０、１／２６０、１／２７０、１／２８０、１／２９０、１／３００、��／３１０、１／３２０、１／３３０、１／３４０、１／３５０、１／３６０、１／３７０、１／３８０、１／３９０、１／４００、１／４１０、１／４２０、１／４３０、１／４４０、１／４５０、１／４３６０、１／４７０、１／４８０、１／４９０、１／５００、１／５１０、１／５２０、１／５３０、１／５４０、１／５５０、１／５６０、１／５７６０、１／５８０、１／５９０、１／６００、１／６１０、１／６２０、１／６３０、１／６４０、１／６５０、１／６６０、１／６７０、１／６８０、１／６９０、１／７００、１／７１０、１／７２０、１／７３０、１／７４０、１／７５０、１／７６０、１／７７０、１／７８０、１／７９０、１／８００、１／８１０、１／８２０、１／８３０、１／８４０、１／８５０、１／８６０、１／８７０、１／８８０、１／８９０、１／９００、１／９１０、１／９２０、１／９３０、１／９４０、１／９５０、１／９６０、１／９７０、１／９８０、１／９９０または１／１０００に減らした用量と同等（または少なくとも同等）の用量である。前述などのいくつかの実施形態において、対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価は、組み換えもしくは精製されたＨＳＶタンパク質ワクチン、または弱毒化生ＨＳＶワクチンもしくは不活化ＨＳＶワクチン、またはＨＳＶ  ＶＬＰワクチンの標準治療用量を投与した対照の対象において産生される抗ＨＳＶ抗原性ポリペプチド抗体の力価と同等である。
【０４２９】
いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、５０〜１０００μｇの総用量である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、５０〜１０００、５０〜９００、５０〜８００、５０〜７００、５０〜６００、５０〜５００、５０〜４００、５０〜３００、５０〜２００、５０〜１００、５０〜９０、５０〜８０、５０〜７０、５０〜６０、６０〜１０００、６０〜９００、６０〜８００、６０〜７００、６０〜６００、６０〜５００、６０〜４００、６０〜３００、６０〜２００、６０〜１００、６０〜９０、６０〜８０、６０〜７０、７０〜１０００、７０〜９００、７０〜８００、７０〜７００、７０〜６００、７０〜５００、７０〜４００、７０〜３００、７０〜２００、７０〜１００、７０〜９０、７０〜８０、８０〜１０００、８０〜９００、８０〜８００、８０〜７００、８０〜６００、８０〜５００、８０〜４００、８０〜３００、８０〜２００、８０〜１００、８０〜９０、９０〜１０００、９０〜９００、９０〜８００、９０〜７００、９０〜６００、９０〜５００、９０〜４００、９０〜３００、９０〜２００、９０〜１００、１００〜１０００、１００〜９００、１００〜８００、１００〜７００、１００〜６００、１００〜５００、１００〜４００、１００〜３００、１００〜２００、２００〜１０００、２００〜９００、２００〜８００、２００〜７００、２００〜６００、２００〜５００、２００〜４００、２００〜３００、３００〜１０００、３００〜９００、３００〜８００、３００〜７００、３００〜６００、３００〜５００、３００〜４００、４００〜１０００、４００〜９００、４００〜８００、４００〜７００、４００〜６００、４００〜５００、５００〜１０００、５００〜９００、５００〜８００、５００〜７００、５００〜６００、６００〜１０００、６００〜９００、６００〜９００、６００〜７００、７００〜１０００、７００〜９００、７００〜８００、８００〜１０００、８００〜９００または９００〜１０００μｇの総用量である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０または１０００μｇの総用量である。いくつかの実施形態において、有効量は、対象に合計２回投与される、２５〜５００μｇの用量である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、対象に合計２回投与される、２５〜５００、２５〜４００、２５〜３００、２５〜２００、２５〜１００、２５〜５０、５０〜５００、５０〜４００、５０〜３００、５０〜２００、５０〜１００、１００〜５００、１００〜４００、１００〜３００、１００〜２００、１５０〜５００、１５０〜４００、１５０〜３００、１５０〜２００、２００〜５００、２００〜４００、２００〜３００、２５０〜５００、２５０〜４００、２５０〜３００、３００〜５００、３００〜４００、３５０〜５００、３５０〜４００、４００〜５００または４５０〜５００μｇの用量である。いくつかの実施形態において、ＨＳＶ  ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ワクチンの有効量は、対象に合計２回投与される、２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００μｇの総用量である。
【０４３０】
追加の実施形態
１．５’末端キャップと、少なくとも１つの単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）抗原性ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームと、３’ポリＡテールとを有する少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む、ＨＳＶワクチン。
【０４３１】
２．当該少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドが、配列番号１〜２３もしくは５４〜６４のうちのいずれか１つによって特定される配列、または配列番号１〜２３もしくは５４〜６４のうちのいずれか１つによって特定される配列の断片によってコードされる、段落１に記載のワクチン。
【０４３２】
３．当該少なくとも１つのｍＲＮＡポリヌクレオチドが、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つによって特定される配列、または配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つによって特定される配列の断片を含む、段落１に記載のワクチン。
【０４３３】
４．当該少なくとも１つの抗原性ポリペプチドが、配列番号２４〜５３もしくは６６〜７７のうちのいずれか１つによって特定される配列、または配列番号２４〜５３もしくは６６〜７７のうちのいずれか１つによって特定される配列の断片を含む、段落１に記載のワクチン。
【０４３４】
５．当該５’末端キャップが、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐであるか、これを含む、段落１〜４のいずれか１つに記載のワクチン。
【０４３５】
６．当該オープンリーディングフレーム中のウラシルの１００％が当該ウラシルの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、段落１〜５のいずれか１つに記載のワクチン。
【０４３６】
７．ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０００−ＤＭＧを含む、脂質ナノ粒子中に製剤化される、段落１〜６のいずれか１つに記載のワクチン。
【０４３７】
８．当該脂質ナノ粒子が、クエン酸三ナトリウム緩衝液、スクロース及び水を更に含む、段落７に記載のワクチン。
【０４３８】
９．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つによって特定される配列またはその断片を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９０〜１２４のうちのいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ワクチン。
【０４３９】
１０．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９０のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９０のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ワクチン。
【０４４０】
１１．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９１のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９１のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４１】
１２．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９２のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９２のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４２】
１３．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９３のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９３のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４３】
１４．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９４のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９４のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４４】
１５．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９５のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９５のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４５】
１６．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９６のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９６のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４６】
１７．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９７のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９７のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４７】
１８．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９８のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９８のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４８】
１９．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号９９のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号９９のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４４９】
２０．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１００のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１００のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５０】
２１．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０１のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０１のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５１】
２２．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０２のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０２のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５２】
２３．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０３のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０３のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５３】
２４．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０４のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０４のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５４】
２５．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０５のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０５のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５５】
２６．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０６のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０６のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５６】
２７．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０７のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０７のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５７】
２８．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０８のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０８のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５８】
２９．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１０９のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１０９のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４５９】
３０．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１０のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１０のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６０】
３１．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１１のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１１のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６１】
３２．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１２のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１２のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６２】
３３．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１３のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１３のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６３】
３４．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１４のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１４のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６４】
３５．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１５のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１５のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６５】
３６．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１６のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１６のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６６】
３７．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１７のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１７のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６７】
３８．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１８のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１８のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６８】
３９．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１１９のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１１９のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４６９】
４０．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１２０のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１２０のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４７０】
４１．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１２１のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１２１のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４７１】
４２．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１２２のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１２２のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４７２】
４３．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１２３のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１２３のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４７３】
４４．５’末端キャップ７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ及び３’ポリＡテールを有し、配列番号１２４のいずれか１つによって特定される配列を含む、少なくとも１つのメッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含み、当該配列番号１２４のいずれか１つによって特定される配列のウラシルヌクレオチドは、当該ウラシルヌクレオチドの５位にＮ１−メチルプソイドウリジンを含むように修飾されている、ＨＳＶワクチン。
【０４７４】
４５．ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ、コレステロール、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０００−ＤＭＧを含む、脂質ナノ粒子中に製剤化される、段落９〜４４のいずれか１つに記載のワクチン。
【０４７５】
本発明は、その適用において、以下の説明に記載され、または図面に示される構築物の詳細及び構成要素の配置に限定されない。本発明は、他の実施形態が可能であり、様々な方法で実践または実行することができる。また、本明細書で使用される表現及び用語は、説明を目的としており、限定的なものとみなされるべきではない。本明細書における「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」または「ｈａｖｉｎｇ（有する）」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有する）」、「ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ（伴う）」及びこれらの変形の使用は、その後に列挙される項目を包含することを意味する。
【実施例】
【０４７６】
実施例１：ポリヌクレオチドの製造
本開示によれば，ポリヌクレオチド及び／またはその部分もしくは領域の製造は、「Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＲＮＡ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ」と題された国際公開第ＷＯ２０１４／１５２０２７号（その内容全体を参照により本明細書に援用する）に教示されている方法を利用して達成することができる。
【０４７７】
精製方法には、国際公開第ＷＯ２０１４／１５２０３０号及び国際公開第ＷＯ２０１４／１５２０３１号（そのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する）に教示されているものが含まれ得る。
【０４７８】
ポリヌクレオチドの検知法及び特性評価法は、国際公開第ＷＯ２０１４／１４４０３９号（その全体を参照により本明細書に援用する）に教示されているように実施することができる。
【０４７９】
本開示のポリヌクレオチドの特徴付けは、ポリヌクレオチドマッピング、逆転写酵素シーケンシング、電荷分布解析、ＲＮＡ不純物の検出または前述の２つ以上の任意の組み合わせを使用して達成することができる。「特徴付け」には、ＲＮＡ転写産物の配列を決定すること、ＲＮＡ転写産物の純度を決定すること、またはＲＮＡ転写産物の電荷不均一性を決定することが含まれる。そのような方法は、例えば、国際公開第ＷＯ２０１４／１４４７１１号及び国際公開第ＷＯ２０１４／１４４７６７号に教示されており、そのそれぞれの内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０４８０】
実施例２：キメラポリヌクレオチドの合成
本開示によれば、三リン酸化学反応を使用して、キメラポリヌクレオチドの２つの領域または部分を連結またはライゲートすることができる。例えば、１００ヌクレオチド以下の第１の領域または部分は、５’リン酸及び末端３’ｄｅｓＯＨまたは遮断ＯＨにより、化学的に合成される。領域が８０ヌクレオチドよりも長い場合、ライゲーション用の２つの鎖として合成することができる。
【０４８１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）を使用して第１の領域または部分を非位置的に改変された領域または部分として合成する場合、５’リン酸への変換と、それに続く３’末端キャッピングとが行われ得る。
【０４８２】
一リン酸保護基は、当該技術分野において知られているもののいずれかから選択することができる。
【０４８３】
キメラポリヌクレオチドの第２の領域または部分は、化学合成またはＩＶＴ方法のいずれかを使用して合成することができる。ＩＶＴ方法は、修飾されたキャップを有するプライマーを利用することができるＲＮＡポリメラーゼを含み得る。あるいは、１３０ヌクレオチドまでのキャップを化学的に合成し、ＩＶＴ領域またはＩＶＴ部分に連結してもよい。
【０４８４】
ライゲーション法では、ＤＮＡ  Ｔ４リガーゼによるライゲーションと、それに続くＤＮＡｓｅ処理により、コンカテマー化が容易に回避されるものである。
【０４８５】
キメラポリヌクレオチド全体をリン酸−糖骨格で作製する必要はない。領域または部分のうちの１つがポリペプチドをコードする場合、かかる領域または部分は、リン酸−糖骨格を含み得る。
【０４８６】
次に、任意の既知のクリックケミストリー、オルトクリックケミストリー、ソルリンク（ｓｏｌｕｌｉｎｋ）または当業者に知られている他のバイオコンジュゲート化学反応を使用して、ライゲーションを行う。
【０４８７】
合成経路
一連の出発セグメントを使用してキメラポリヌクレオチドを作製することができる。かかるセグメントには、
（ａ）通常の３’ＯＨを含む、キャップ及び保護された５’セグメント（ＳＥＧ．１）、
（ｂ）ポリペプチドのコーディング領域及び通常の３’ＯＨを含み得る、５’三リン酸セグメント（ＳＥＧ．２）、ならびに
（ｃ）コルジセピンを含み、または３’ＯＨを含まない、キメラポリヌクレオチドの３’端（例えばテール）用の５’リン酸セグメント（ＳＥＧ．３）
が含まれる。
【０４８８】
合成（化学的合成またはＩＶＴ合成）後に、セグメント３（ＳＥＧ．３）をコルジセピンで処理し、次いで、ピロホスファターゼで処理して、５’リン酸を生成させる。
【０４８９】
次いで、ＲＮＡリガーゼを使用して、セグメント２（ＳＥＧ．２）をＳＥＧ．３にライゲーションすることができる。次いで、ライゲーションされたポリヌクレオチドを精製し、ピロホスファターゼで処理して、二リン酸を切断する。次いで、処理されたＳＥＧ．２−ＳＥＧ．３構築物を精製し、５’末端にＳＥＧ．１をライゲーションする。キメラポリヌクレオチドの更なる精製ステップが実施されてもよい。
【０４９０】
キメラポリヌクレオチドがポリペプチドをコードする場合、ライゲーションされたセグメントまたは連結されたセグメントは、次のように表すことができる。５’ＵＴＲ（ＳＥＧ．１）、オープンリーディングフレームまたはＯＲＦ（ＳＥＧ．２）及び３’ＵＴＲ＋ポリＡ（ＳＥＧ．３）。
【０４９１】
各ステップの収率は、９０〜９５％にもなり得る。
【０４９２】
実施例３：ｃＤＮＡ生成のためのＰＣＲ
ｃＤＮＡを調製するためのＰＣＲ工程は、Ｋａｐａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）による２×  ＫＡＰＡ  ＨＩＦＩ（商標）ＨｏｔＳｔａｒｔ  ＲｅａｄｙＭｉｘを使用して実施することができる。このシステムは、２×  ＫＡＰＡ  ＲｅａｄｙＭｉｘ  １２．５μｌ、フォワードプライマー（１０μＭ）０．７５μｌ、リバースプライマー（１０μＭ）０．７５μｌ、鋳型ｃＤＮＡ  １００ｎｇを含み、ｄＨ２Ｏで２５．０μｌに希釈される。反応条件は、９５℃で５分であってよく、９８℃で２０秒、次に５８℃で１５秒、次に７２℃で４５秒を２５サイクル、次に７２℃で５分、次に終了まで４℃で反応を実施することができる。
【０４９３】
ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＰＵＲＥＬＩＮＫ（商標）ＰＣＲ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を製造元の説明書に従って使用して、反応をクリーンアップすることができる（５μｇまで）。より大きな反応には、許容量がより大きい製品を使用したクリーンアップが必要とされ得る。クリーンアップに続いて、ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）を使用してｃＤＮＡを定量し、アガロースゲル電気泳動で分析して、当該ｃＤＮＡが予想されるサイズであることを確認することができる。次いで、ｃＤＮＡをシーケンシング解析に供した後、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応に進む。
【０４９４】
実施例４：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応により、ＲＮＡポリヌクレオチドが生成される。かかるポリヌクレオチドは、化学修飾ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含む、本開示のポリヌクレオチドの領域または部分を含み得る。化学修飾ＲＮＡポリヌクレオチドは、均一に修飾されたポリヌクレオチドであり得る。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応は、カスタムのヌクレオチド三リン酸（ＮＴＰ）混合物を利用する。ＮＴＰは、化学修飾ＮＴＰ、または天然ＮＴＰと化学修飾ＮＴＰの混合物を含み得る。
【０４９５】
典型的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応は、以下を含む。
１）鋳型ｃＤＮＡ  １．０μｇ
２）１０×転写バッファー  ２．０μｌ
（４００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１９０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、５０ｍＭ  ＤＴＴ、１０ｍＭ  スペルミジン）
３）カスタムＮＴＰ（各２５ｍＭ）  ０．２μｌ
４）ＲＮａｓｅ阻害剤  ２０Ｕ
５）Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ  ３０００Ｕ
６）ｄＨ２Ｏ  最大２０．０μｌ、及び
７）３７℃で３〜５時間のインキュベーション。
【０４９６】
粗ＩＶＴ混合物は、翌日のクリーンアップに備えて、４℃で終夜保存され得る。次いで、１ＵのＲＮａｓｅフリーＤＮａｓｅを使用して、元の鋳型を消化する。３７℃で１５分のインキュベーション後に、ＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡＣＬＥＡＲ（商標）キット（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を製造元の説明書に従って使用して、ｍＲＮＡを精製することができる。このキットは５００μｇまでのＲＮＡを精製することができる。このクリーンアップに続いて、ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）を使用してＲＮＡポリヌクレオチドを定量し、アガロースゲル電気泳動で分析して、ＲＮＡポリヌクレオチドが適切なサイズであり、かつＲＮＡの分解が起きていないことを確認することができる。
【０４９７】
実施例５：酵素キャッピング
ＲＮＡポリヌクレオチドのキャッピングは、以下のとおりに実施される。この場合、混合物は、ＩＶＴ  ＲＮＡ  ６０μｇ〜１８０μｇ及びｄＨ２Ｏの最大７２μｌを含む。混合物を６５℃で５分間インキュベートしてＲＮＡを変性させた後、これを直ちに氷に移す。
【０４９８】
次いで、本プロトコールは、１０×キャッピングバッファー（０．５Ｍ  トリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、６０ｍＭ  ＫＣｌ、１２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２）（１０．０μｌ）、２０ｍＭ  ＧＴＰ（５．０μｌ）、２０ｍＭ  Ｓ−アデノシルメチオニン（２．５μｌ）、ＲＮａｓｅ阻害剤（１００Ｕ）、２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（４００Ｕ）、ワクシニアキャッピング酵素（グアニリルトランスフェラーゼ）（４０Ｕ）、ｄＨ２Ｏ（最大２８μｌ）の混合と、ＲＮＡが６０μｇの場合は３０分間、ＲＮＡが１８０μｇの場合は最大２時間の３７℃でのインキュベーションとを伴う。
【０４９９】
次いで、ＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡＣＬＥＡＲ（商標）キット（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）を製造元の説明書に従って使用して、ＲＮＡポリヌクレオチドを精製することができる。このクリーンアップに続いて、ＮａｎｏＤｒｏｐ（商標）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用してＲＮＡを定量し、アガロースゲル電気泳動で分析して、ＲＮＡポリヌクレオチドが適切なサイズであり、かつＲＮＡの分解が起きていないことを確認することができる。ＲＮＡポリヌクレオチド産物はまた、逆転写ＰＣＲを行ってシーケンシング用のｃＤＮＡを生成させることで、配列決定を行ってもよい。
【０５００】
実施例６：ポリＡテーリング反応
ｃＤＮＡ中にポリＴがない場合は、最終産物のクリーニング前にポリＡテーリング反応を実施する必要がある。これは、キャップされたＩＶＴ  ＲＮＡ（１００μｌ）、ＲＮａｓｅ阻害剤（２０Ｕ）、１０×テーリングバッファー（０．５Ｍ  トリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２．５Ｍ  ＮａＣｌ、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ２）（１２．０μｌ）、２０ｍＭ  ＡＴＰ（６．０μｌ）、ポリＡポリメラーゼ（２０Ｕ）、ｄＨ２Ｏ  最大１２３．５μｌを混合し、３７℃で３０分間インキュベートすることによって行われる。ポリＡテールが転写産物中に既に存在する場合には、テーリング反応を飛ばして、ＡｍｂｉｏｎのＭＥＧＡＣＬＥＡＲ（商標）キット（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）によるクリーンアップ（５００μｇまで）に直接進むことができる。ポリ−Ａポリメラーゼは、酵母中で発現された組み換え酵素であってよい。
【０５０１】
ポリＡテーリング反応の処理能力または完全性は、常に正確なサイズのポリＡテールをもたらすとは限らないことを理解されたい。したがって、およそ４０〜２００ヌクレオチド、例えば、約４０、５０、６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１５０〜１６５、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４または１６５のポリＡテールは、本開示の範囲内である。
【０５０２】
実施例７：キャッピングアッセイ
タンパク質発現アッセイ
本明細書で教示されるキャップのいずれかを含有し、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を、等しい濃度で細胞にトランスフェクトすることができる。トランスフェクションから６、１２、２４及び／または３６時間後に、培養培地中に分泌されたタンパク質の量を、ＥＬＩＳＡによってアッセイすることができる。より高いレベルのタンパク質を培地中に分泌する合成ポリヌクレオチドは、より高い翻訳能力のあるキャップ構造を有する合成ポリヌクレオチドに該当する。
【０５０３】
純度分析合成
本明細書で教示されるキャップのいずれかを含有し、ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドは、変性アガロース尿素ゲル電気泳動またはＨＰＬＣ分析を使用して、純度について比較することができる。電気泳動で単一の統合されたバンドを有するＲＮＡポリヌクレオチドは、複数のバンドまたは縞状のバンドを有するポリヌクレオチドと比較して、純度の高い生成物に該当する。単一のＨＰＬＣピークを有する化学修飾ＲＮＡポリヌクレオチドも、純度の高い生成物に該当する。キャッピング反応の効率が高いほど、より純粋なポリヌクレオチド集団を与える。
【０５０４】
サイトカイン分析
本明細書で教示されるキャップのいずれかを含有し、ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドは、複数の濃度で細胞にトランスフェクトすることができる。トランスフェクションから６、１２、２４及び／または３６時間後に、培養培地中に分泌されたＴＮＦ−α及びＩＦＮ−βなどの炎症促進性サイトカインの量を、ＥＬＩＳＡによってアッセイすることができる。より高いレベルの炎症誘発性サイトカインを培地中に分泌させるＲＮＡポリヌクレオチドは、免疫活性化キャップ構造を含有するポリヌクレオチドに該当する。
【０５０５】
キャッピング反応効率
本明細書で教示されるキャップのいずれかを含有し、ポリペプチドをコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドは、ヌクレアーゼ処理後にＬＣ−ＭＳによって、キャッピング反応効率について分析することができる。キャップされたポリヌクレオチドのヌクレアーゼ処理により、ＬＣ−ＭＳによって検出可能である、遊離ヌクレオチドとキャップされた５’−５−三リン酸キャップ構造との混合物が得られる。ＬＣ−ＭＳスペクトルにおけるキャップされた生成物の量は、反応からの総ポリヌクレオチドのパーセントとして表すことができ、キャッピング反応効率に対応する。キャッピング反応効率の高いキャップ構造は、ＬＣ−ＭＳによると、キャップされた生成物の量が多い。
【０５０６】
実施例８：修飾ＲＮＡまたはＲＴ  ＰＣＲ産物のアガロースゲル電気泳動
個々のＲＮＡポリヌクレオチド（体積２０μｌ中２００〜４００ｎｇ）または逆転写されたＰＣＲ産物（２００〜４００ｎｇ）を、非変性１．２％アガロースＥ−Ｇｅｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））上のウェルにローディングし、製造元のプロトコールに従って１２〜１５分間、泳動する。
【０５０７】
実施例９：Ｎａｎｏｄｒｏｐによる修飾ＲＮＡの定量及びＵＶスペクトルデータ
ＴＥバッファー（１μｌ）中の化学修飾ＲＮＡポリヌクレオチドをＮａｎｏｄｒｏｐ（商標）ＵＶ吸光度測定に使用して、化学合成またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応からの各ポリヌクレオチドの収率を定量する。
【０５０８】
実施例１０：リピドイドを使用した修飾ｍＲＮＡの製剤化
ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ポリヌクレオチドは、細胞に加える前に、設定した比で、ポリヌクレオチドをリピドイドと混合することにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験用に製剤化することができる。ｉｎ  ｖｉｖｏ製剤は、全身循環を促進するために追加成分の添加を必要とすることがある。これらのリピドイドのｉｎ  ｖｉｖｏ作用に好適な粒子を形成する能力を試験するために、ｓｉＲＮＡ−リピドイド製剤に使用される標準的な製剤化プロセスを出発点として使用することができる。粒子の形成後に、ポリヌクレオチドを加え、複合体と一体化させる。封入効率は標準的な色素排除アッセイを使用して決定される。
【０５０９】
実施例１１：免疫原性試験
本試験は、ＨＳＶタンパク質の１つまたは組み合わせをコードするｍＲＮＡポリヌクレオチドを含む候補ＨＳＶワクチンのマウスにおける免疫原性を試験するように設計する。
【０５１０】
アジュバントありまたはなしの候補ＨＳＶワクチンを静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、鼻腔内（ＩＮ）または皮内（ＩＤ）でマウスに免疫付与する。合計４回の免疫付与を３週の間隔で行い（すなわち、０、３、６及び９週目）、血清を各免疫付与後３３〜５１週目まで採取する。糖タンパク質Ｃまたは糖タンパク質Ｄに対する血清抗体力価をＥＬＩＳＡによって決定する。１０〜１６週目に各マウスから採取した血清をプールし、硫酸アンモニウム（Ｓｉｇｍａ）沈降、続いてＤＥＡＥ（Ｐｉｅｒｃｅ）バッチ精製を使用することによって全ＩｇＧを精製する。ＰＢＳに対する透析後、精製された抗体を免疫電子顕微鏡法、抗体親和性試験及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ保護アッセイに使用する。
【０５１１】
実施例１２：ＨＳＶによるげっ歯類抗原刺激
本試験は、ＨＳＶタンパク質の１つまたは組み合わせをコードする化学修飾型または非修飾型ｍＲＮＡを含むＨＳＶワクチンを使用して、致死的抗原刺激に対する候補ＨＳＶワクチンのコットンラットにおける有効性を試験するように設計する。致死量のＨＳＶでコットンラットに抗原刺激を行う。
【０５１２】
動物は、０週目及び３週目に、アジュバントありまたはなしの候補ＨＳＶワクチンを静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、鼻腔内（ＩＮ）または皮内（ＩＤ）で免疫付与する。次いで、７週目に、致死量のＨＳＶでＩＶ、ＩＭまたはＩＤにより動物に抗原刺激を行う。エンドポイントは、感染後１３日目、死亡または安楽死である。３０％を超える体重減少、極度の嗜眠または麻痺によって決定される、重大な疾患を呈する動物は安楽死させる。体温及び体重を毎日評価し、記録する。
【０５１３】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤を使用する実験において、製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質及び構造的脂質を５０：１０：１．５：３８．５の比で含み得る。例えば、カチオン性脂質はＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ（５０ｍｏｌ％）であり、非カチオン性脂質はＤＳＰＣ（１０ｍｏｌ％）であり、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＯＭＧ（１．５ｍｏｌ％）であり、構造的脂質はコレステロール（３８．５ｍｏｌ％）である。
【０５１４】
実施例１３：ＨＳＶによる非ヒト霊長類抗原刺激
本試験は、ＨＳＶタンパク質の１つまたは組み合わせをコードする化学修飾型または非修飾型ｍＲＮＡを含むＨＳＶワクチンを使用して、非致死的抗原刺激に対する候補ＨＳＶワクチンのアフリカミドリザルにおける有効性を試験するように設計する。減少用量のＨＳＶで動物に抗原刺激を行う。
【０５１５】
動物は、０週目及び３週目に、アジュバントありまたはなしの候補ＨＳＶワクチンを静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）または皮内（ＩＤ）で免疫付与する。次いで、７週目に、減少用量のＨＳＶでＩＶ、ＩＭまたはＩＤにより動物に抗原刺激を行う。エンドポイントは、感染後１３日目である。体温及び体重を毎日評価し、記録する。
【０５１６】
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤を使用する実験において、製剤は、カチオン性脂質、非カチオン性脂質、ＰＥＧ脂質及び構造的脂質を５０：１０：１．５：３８．５の比で含み得る。例えば、カチオン性脂質はＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ（５０ｍｏｌ％）であり、非カチオン性脂質はＤＳＰＣ（１０ｍｏｌ％）であり、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＯＭＧ（１．５ｍｏｌ％）であり、構造的脂質はコレステロール（３８．５ｍｏｌ％）である。
【０５１７】
実施例１４：マイクロ中和アッセイ
９６ウェルマイクロタイタープレートで、トリプシンを含むウイルス増殖培地（ＶＧＭ）５０μｌ中に、サル血清またはヒト血清の連続２倍希釈物（１：５０〜１：１２，８００）を９つ作製する。５０μＬのＨＳＶを血清希釈物に加え、室温で６０分間インキュベートする。血清を含まないＨＳＶ陽性対照ウェルとＨＳＶまたは血清を含まない陰性対照ウェルを各プレート上に三重で含める。血清ＨＳＶ混合物をインキュベートしている間に、コンフルエントな単層をトリプシン処理（Ｇｉｂｃｏ  ０．５％ウシ脾臓トリプシンＥＤＴＡ）することによって細胞の単一細胞懸濁液を調製し、懸濁した細胞を５０ｍｌ遠心管に移し、上部を滅菌ＰＢＳで覆い、穏やかに混合する。次いで、細胞を２００ｇで５分間ペレット化し、上清を吸引し、細胞をＰＢＳ中に再懸濁させる。この手順を１回繰り返し、細胞を３×１０５／ｍｌの濃度で、ブタトリプシンを含むＶＧＭ中に再懸濁させる。次いで、１００μｌの細胞を血清ウイルス混合物に加え、プレートをＣＯ２中３５℃で５日間インキュベートする。８０％アセトンのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いてプレートを室温で１５分間固定し、空気乾燥させ、次いで、０．５％ゼラチン及び２％ＦＣＳを含有するＰＢＳで３０分間ブロックする。糖タンパク質Ｃまたは糖タンパク質Ｄに対する抗体を０．５％ゼラチン／２％ＦＣＳ／０．５％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳで希釈し、室温で２時間インキュベートする。ウェルを洗浄し、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウスＩｇＧを加え、更に２時間インキュベーションする。洗浄後、Ｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩を加え、陽性対照ウェルと比較して発色が５０％減少した血清の力価として中和力価を定義する。
【０５１８】
当業者であれば、以下の表１に記載されるヌクレオチド配列は、例えば、限定するものではないが、発現及びＲＮＡ安定性を増大させるために、修飾されてよく、これらについても本発明に包含されることを認識するであろう。表１に記載される配列の誘導体及びそのバリアントは、本発明に含まれるとみなされる。
【０５１９】
本明細書に記載される配列のそれぞれは、化学修飾された配列、または修飾ヌクレオチドを含まない非修飾の配列を包含する。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
2018536023.tif 000009
【表１−５】
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【表１−６】
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【表１−７】
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【表１−８】
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【表１−９】
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【表１−１０】
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【表１−１１】
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【表１−１２】
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【表１−１３】
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【表１−１４】
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【表１−１５】
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【表１−１６】
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【表１−１７】
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【表１−１８】
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【表１−１９】
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【表１−２０】
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【表１−２１】
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【表１−２２】
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【表１−２３】
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【表１−２４】
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【表１−２５】
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【表１−２６】
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【表１−２７】
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【表１−２８】
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【表１−２９】
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【表１−３０】
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【表１−３１】
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【表１−３２】
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【表１−３３】
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【表１−３４】
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【表１−３５】
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【表１−３６】
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【表１−３７】
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【表１−３８】
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【表１−３９】
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【表１−４０】
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【表１−４１】
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最初に下線のある配列は、５’ＵＴＲを表す。５’ＵＴＲは、表１に列挙される構築物のいずれかに含まれている場合もあれば、省略されている場合もある。
２番目に下線のある配列は、３’ＵＴＲを表す。３’ＵＴＲは、表１に列挙される構築物のいずれかに含まれている場合もあれば、省略されている場合もある。
【表２−１】
2018536023.tif 000047
【表２−２】
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【表２−３】
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【表２−４】
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【表２−５】
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【表２−６】
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【表２−７】
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【表２−８】
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【表２−９】
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【表２−１０】
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【表２−１１】
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【表２−１２】
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【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【表３−４】
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【表３−５】
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【表３−６】
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【表３−７】
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【表３−８】
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【表３−９】
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【表３−１０】
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【表３−１１】
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【表４】
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【表５−１】
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【表５−２】
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【表５−３】
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【表５−４】
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【表５−５】
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【表６】
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【０５２０】
等価物
当業者であれば、通常の実験を用いるだけで、本明細書に記載される本開示の具体的な実施形態の等価物を数多く認識または確認できるであろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【０５２１】
本明細書で開示される全ての参考文献は、特許文書を含め、その全体が参照により本明細書に援用される。
【配列表】
2018536023000001.app
【国際調査報告】
2018536023.tif 000077
2018536023.tif 000078
2018536023.tif 000079
2018536023.tif 000080
2018536023.tif 000081
2018536023.tif 000082