【手続補正書】
【提出日】平成22年4月16日(2010.4.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも３つの疑似ペプチド単位がグラフトした支持体を含む、またはそれからなる多価合成化合物の、細胞増殖及び／又は血管形成の調節解除を含む疾患の治療を意図する医薬の製造のための使用であり、該化合物は下記式（Ｉ）を有する前記使用：            
Ψ
〔（Ｘ）n −Ｙ1 −（Ｚ）i −Ｙ2 −（Ｘ）m 〕k −支持体    （Ｉ）
式中、
各Ｘは独立に任意のアミノ酸を表し；
Ｙ1 およびＹ2 は独立に塩基性側鎖を有するアミノ酸から選ばれ；
Ｚは以下から選ばれ：
−プロリン、ここでプロリンはγ、βもしくはδにおいてヒドロキシル、アミン、Ｃ1 −Ｃ10アルキル、Ｃ1 −Ｃ10アルケニル、Ｃ1 −Ｃ10アルキニル、Ｃ5 −Ｃ12アリール、Ｃ5 −Ｃ14アラルキル、Ｃ5 −Ｃ12ヘテロアリール基により置換されていてもよく、これらの基はそれ自身ハロゲン原子、ＮＯ2 、ＯＨ、Ｃ1 −Ｃ4 アルキル、ＮＨ2 、ＣＮ、トリハロメチル、Ｃ1 −Ｃ4 アシルオキシ、Ｃ1 −Ｃ4 ジアルキルアミノ、グアニジノ基、チオール基から選ばれる１〜６個の置換基で置換されていてもよい；
−天然もしくは非天然のアミノ酸のＮ−アルキル化物；
−ジアルキルアミノ酸；
−環状ジアルキルアミノ酸；または
−ピペコリン酸もしくはその誘導体；
ｎおよびｉは独立に０または１であり；
ｍは０〜３の整数であり；
ｋは３以上の整数であり；そして
Ψは少なくとも１種のプロテアーゼに対して正規のペプチド結合よりも有意に抵抗性である修飾ペプチド結合を表す。
【請求項２】
前記支持体が、直鎖ペプチドもしくは環状ペプチド、直鎖ペプトイドもしくは環状のペプトイド、フォルダマー、直鎖ポリマーもしくは球状デンドロマー、糖またはナノ粒子から選択される、請求項１記載の使用。
【請求項３】
前記支持体が、交互の立体配置Ｄのアラニン（Ａ）残基および立体配置Ｌのリシン（Ｋ）残基からなる環状ヘキサペプチド、または配列SEQ ID NO:１、SEQ ID NO:２、SEQ ID NO:３、SEQ ID NO:４、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:１３、SEQ ID NO:１４、SEQ ID NO:１５、SEQ ID NO:１８もしくはSEQ ID NO:１９の直鎖ペプチドから選択される、請求項２記載の使用。
【請求項４】
前記疑似ペプチド単位が前記支持体に直接グラフトしている、請求項１〜３のいずれかの項記載の使用。
【請求項５】
前記疑似ペプチド単位が前記支持体にスペーサーによってグラフトしている、請求項１〜３のいずれかの項記載の使用。
【請求項６】
ｋが３〜８である、請求項１〜５のいずれかの項記載の使用。
【請求項７】
ｉが１であり、Ｚがプロリン（Ｐ）である、請求項１〜６のいずれかの項記載の使用。
【請求項８】
Ｙ1 およびＹ2 が独立にアルギニン（Ｒ）およびリシン（Ｋ）から選択される、請求項１〜７のいずれかの項記載の使用。
【請求項９】
Ｙ1 がリシン（Ｋ）であり、Ｙ2 がアルギニン（Ｒ）である、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
ｎおよびｍが０である、請求項１〜９のいずれかの項記載の使用。
【請求項１１】
Ψが、還元された結合（−ＣＨ2 ＮＨ−）、レトロ−インバーソ結合（−ＮＨＣＯ−）、メチレンオキシ結合（−ＣＨ2 −Ｏ−）、チオメチレン結合（−ＣＨ2 −Ｓ−）、カルバ結合（−ＣＨ2 −ＣＨ2 −）、ケトメチレン結合（−ＣＯ−ＣＨ2 −）、ヒドロキシエチレン結合（−ＣＨＯＨ−ＣＨ2 −）、（−Ｎ−Ｎ−）結合、Ｅ−アルケン結合、または（−ＣＨ＝ＣＨ−）結合を表す、請求項１〜８のいずれかの項記載の使用。
【請求項１２】
化合物が、図２Ａ（SEQ ID NO:５）、図２Ｂ、図２Ｃ（SEQ ID NO:２０）、図２Ｄ（SEQ ID NO:２１）、図２Ｅ（SEQ ID NO:１６）または図２Ｆ（SEQ ID NO:１７）に構造が記載されている化合物から選択される、請求項１記載の使用。
【請求項１３】
細胞増殖及び／又は血管形成の調節解除を含む前記疾患ががんである、請求項１〜１２のいずれかの項記載の使用。
【請求項１４】
下記を含む、細胞増殖および血管形成の両方を阻害する分子のスクリーニング方法：
ａ）表面ヌクレオリンを発現している細胞を試験分子と接触させ、そして
ｂ）該試験分子の、ヌクレオリンのＲＧＧドメインに結合する能力を測定する。
【請求項１５】
支持体が、ＫＰＧ、ＫＧＰ、ＫＧＣ、またはＫＸ1 ＫＸ4 ＫＸ1 Ｋ（ここでＸ1 は任意であり、リシン（Ｋ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）およびイソロイシン（Ｉ）から選ばれ、Ｘ4 は任意であり、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）およびイソロイシン（Ｉ）から選ばれる）から選ばれるアミノ酸配列を含む非環状ペプチドである化合物を除く、請求項１〜１２のいずれかの項において定義した化合物。
【請求項１６】
支持体が、Ａｉｂ−Ｋ−Ａｉｂ−Ｇ（SEQ ID NO:６）もしくはＫ−Ａｉｂ−Ｇ（SEQ ID NO:７）から選択されたアミノ酸を含む直鎖ペプチド、環状ペプチド、直鎖もしくは環状ペプトイド、フォルダマー、直鎖ポリマーもしくは球状デンドリマー、糖またはナノ粒子から選択される、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
支持体が、SEQ ID NO:８、SEQ ID NO:９、SEQ ID NO:１４、SEQ ID NO:１５、SEQ ID NO:１８およびSEQ ID NO:１９から選ばれるアミノ酸配列からなる直鎖ペプチドである、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
図２Ｂ、図２Ｃ（SEQ ID NO:２０）、図２Ｄ（SEQ ID NO:２１）および図２Ｅ（SEQ ID NO:１６）に構造が記載されている化合物から選択される、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
図２Ｆ（SEQ ID NO:１７）に構造が記載されている、請求項１〜１２のいずれかの項に定義された化合物。
【請求項２０】
請求項１５〜１９のいずれかの項記載の化合物を含む薬剤組成物。
【請求項２１】
炎症性疾患の治療を意図した医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれかの項記載の化合物の使用。
【請求項２２】
前記炎症性疾患が、自己免疫疾患、敗血症、敗血症性ショック、心臓の炎症性疾患、移植片拒絶、外傷、関節の炎症性疾患、胃腸系の炎症性疾患、皮膚の炎症性疾患、呼吸器系の炎症性疾患、およびアレルギーから選択される、請求項２１記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
少なくとも１種のプロテアーゼに対する抵抗性を大きく向上させるような各種化学結合は既知である。従って、有利な態様において、Ψは、還元された結合（−ＣＨ2 ＮＨ−）（または、結合がプロリンとの結合の場合のように第二アミン基のレベルで生じる場合には、（−ＣＨ2 Ｎ−））、レトロ−インバーソ (retro-inverso)結合（−ＮＨＣＯ−）、メチレンオキシ結合（−ＣＨ2 −Ｏ−）、チオメチレン結合（−ＣＨ2 −Ｓ−）、カルバ (carba)結合（−ＣＨ2 −ＣＨ2 −）、ケトメチレン結合（−ＣＯ−ＣＨ2 −）、ヒドロキシエチレン結合（−ＣＨＯＨ−ＣＨ2 −）、（−Ｎ−Ｎ−）結合、Ｅ−アルケン結合、または（−ＣＨ＝ＣＨ−）結合を表す。特に、本発明者らは、還元された結合（−ＣＨ2 ＮＨ−）を用いると少なくとも１種のプロテアーゼに対する抵抗性を有意に向上させうることを見出した。従って有利には、Ψは還元された結合（−ＣＨ2 ＮＨ−）を表す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
有利には、細胞増殖及び／又は血管形成の調節解除を含む前記疾患は、がん、特に上記したうちの１つである。
本発明はまた、下記を含む、細胞増殖および血管形成の両方を阻害する分子のスクリーニング方法にも関する：
ａ）表面ヌクレオリンを発現している細胞を試験分子と接触させ、そして
ｂ）該試験分子の、ヌクレオリンのＲＧＧドメインに結合する能力を測定する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
特に、支持体は、Ａｉｂ−Ｋ−Ａｉｂ−Ｇ（SEQ ID NO:６）もしくはＫ−Ａｉｂ−Ｇ（SEQ ID NO:７）から選択されたアミノ酸を含む直鎖ペプチド、環状ペプチド、直鎖もしくは環状ペプトイド、フォルダマー、直鎖ポリマーもしくは球状デンドリマー、糖またはナノ粒子から選択されうる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１１】
ペプチドF3での結果を図３Ｃの１a に示し、これは、ペプチドF3がIgG のように、HARPにより生じるNIH 3T3 増殖の阻害には導かないことを明らかに示す。
ＨＢ１９での結果を図３Ｄに示し、これは、ＨＢ１９がHARPにより生じるNIH 3T3 増殖の用量依存的阻害に導くことを示す。0.5 μM のＨＢ１９の添加により、４ＭのHARPにより生じる効果の81％を阻害する結果となる。これは明らかに、ヌクレオリンリガンドを内在化して増殖の阻害をもたらしうるようにするのでは十分でないことを示し、そして有効であるためにはヌクレオリンリガンドは多価であり、１または２以上のヌクレオリン分子のＣ末端ドメインにおける１または２以上のＲＧＧ単位に結合する必要があることを示唆する。