【手続補正書】
【提出日】平成22年9月27日(2010.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの抗腫瘍化合物に耐性のある腫瘍の腫瘍細胞の表面で発現される腫瘍抗原に対する、抗体またはその機能的フラグメントの１つを、in vitroにおいて感作させ、作製するための、少なくとも１つの抗腫瘍化合物に耐性のある腫瘍に由来する粉砕ホモジネートおよび／または懸濁液および／または細胞溶解液の使用であって、
ここで、この腫瘍抗原はその前記耐性腫瘍が由来する天然腫瘍の腫瘍細胞の表面では発現されず、この腫瘍抗原は抗腫瘍化合物に対するその腫瘍の耐性に関連する可能性がある、使用。
【請求項２】
前記耐性腫瘍が、耐性が誘発されている少なくとも１つの抗腫瘍化合物による治療処置を受けているか、または受けた、患者の生検および／または外科術により直接得られる、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記耐性腫瘍が、動物に腫瘍系統および／またはヒト腫瘍全体もしくは一部を移植した後、耐性の誘発が望まれる少なくとも１つの抗腫瘍化合物の注射によってこの動物を処置することで誘発される、請求項１に記載に記載の使用。
【請求項４】
前記の少なくとも１種類の抗腫瘍化合物が、化学療法薬、放射線療法薬、ホルモン療法薬、チロシンキナーゼ阻害剤のような化学分子、または抗体から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記の少なくとも１つの抗腫瘍化合物が、性質が異なり、かつ／または作用機序が異なり、かつ／または異なるタンパク質を標的とする少なくとも２つ化合物、優先的には少なくとも３つの化合物からなる、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
少なくとも１つの抗腫瘍化合物に耐性のある腫瘍の表面で発現される腫瘍抗原に対する抗体またはそのフラグメントの１つをin vitroで作製する方法であって、
該耐性腫瘍に由来する粉砕ホモジネートおよび／または懸濁液および／または細胞溶解液を動物に直接感作させることからなる工程、および耐性腫瘍を認識するがその耐性腫瘍が由来する天然腫瘍は認識しない抗体を選択することからなる工程を含む、方法。
【請求項７】
前記感作が、腹腔内注射および／または皮下注射および／または静脈内注射および／または脾臓内注射によって行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記耐性腫瘍が、腫瘍耐性が誘発されている少なくとも前記の抗腫瘍化合物による治療処置を受けているか、または受けた、患者の生検および／または外科術により直接得られる、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記耐性腫瘍が、動物に腫瘍系統および／またはヒト腫瘍全体もしくは一部を移植した後、天然腫瘍耐性の誘発が望まれる少なくとも１つの抗腫瘍化合物の投与によってこの動物を処置することで誘発される、請求項６または請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記耐性腫瘍の表面で発現される腫瘍抗原に対する抗体またはその機能的フラグメントの１つがモノクローナル抗体である、請求項６〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体またはその機能的フラグメントの１つがＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤまたはＩｇＥの群から選択される免疫グロブリンである、請求項６〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体またはその機能的フラグメントの１つがγ１、γ２またはγ４イソ型のＩｇＧである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記機能的フラグメントがＦｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメントおよびダイアボディー、または、ペグ化(pegylated)フラグメントのような、その寿命が延長されたいずれかのフラグメントから選択される、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
次の工程：
ｉ）耐性腫瘍に由来する粉砕ホモジネートおよび／または懸濁液および／または細胞溶解液を動物に直接感作させる工程、
ｉｉ）工程ｉ）で感作させた動物の脾臓細胞を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを得る工程、および
ｉｉｉ）示差的選択により、抗腫瘍処置により誘発される発現であって、耐性腫瘍の腫瘍細胞の表面で発現される抗原を特定に認識する抗体を分泌するハイブリドーマを選択する工程
を含む、請求項６〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
工程ｉ）の前に、次の工程：
ａ）腫瘍系統および／または親腫瘍全体または一部を選択し、動物に移植する工程、
ｂ）これらの被移植動物の一部を少なくとも１つの抗腫瘍化合物で処置する工程、
ｃ）工程ａ）で移植を受けた被処置動物から親腫瘍全体または一部を取り出す工程；
ｄ）工程ｂ）で処置を受けた動物から耐性腫瘍全体または一部を回収する工程、
ｅ）工程ｃ）およびｄ）でそれぞれ全体的にまたは部分的に回収された腫瘍から抗体を示差的に選択するための手段を作製する工程、および
ｆ）工程ｄ）で全体的にまたは部分的に回収された耐性腫瘍に由来する粉砕ホモジネートおよび／または細胞溶解液を調製する工程
をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記腫瘍系統および／または親腫瘍が、肺、結腸、前立腺、乳房、卵巣腫瘍細胞または処置に対する耐性が確認されているいずれかの腫瘍の群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記の少なくとも１種類の抗腫瘍化合物が、化学療法薬、放射線療法薬、ホルモン療法薬、チロシンキナーゼ阻害剤のような化学分子、または抗体から選択される、請求項６〜１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
前記少なくとも１つの抗腫瘍化合物が優先的にモノクローナル抗体からなる、請求項６〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体がモノクローナル抗体であり、それが直接、増殖因子受容体、脈管形成に関連する分子、または同等に細胞移動現象に関連するケモカインおよびインテグリンに対する抗体またはそれらの機能的フラグメントの群から選択される、請求項６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記の少なくとも１つの抗腫瘍化合物が、性質が異なり、かつ／または作用機序が異なり、かつ／または異なるタンパク質を標的とする少なくとも２つの抗腫瘍化合物、優先的には少なくとも３つの抗腫瘍化合物の組合せからなる、請求項６〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記の抗腫瘍化合物の組合せがモノクローナル抗体またはそれらの機能的フラグメントの組合せからなる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記のモノクローナル抗体またはその機能的フラグメントの組合せが、抗ＩＧＦ−ＩＲ、抗ＥＧＦＲ、抗Ｈｅｒ／２ｎｅｕ、抗ＶＥＧＦ、抗ＶＥＧＦＲ、抗ＣＸＣＲ、抗ｃＭＥＴ、抗ＲＯＮ抗体から選択される抗体の組合せからなる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記組合せが抗ＩＧＦ−ＩＲ抗体、抗ＥＧＦＲ抗体および抗Ｈｅｒ／２ｎｅｕ抗体の組合せからなる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記組合せがモノクローナル抗体７Ｃ１０、２２５およびｈ４Ｄ５の組合せからなる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
天然腫瘍細胞の抗原を認識しない抗体を分泌するハイブリドーマを選択するための前記工程ｉｉｉ）が、天然腫瘍と耐性腫瘍の間のハイブリドーマにより分泌される抗体の示差的スクリーニングによって達成される、請求項１４〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記示差的スクリーニングが請求項１５に記載の方法の工程ｅ）で得られた手段を適用することにより達成される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
工程ｉ）の前に付加的な寛容化工程を含む、請求項１５〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記寛容化工程が
前記動物を工程ｃ）に由来するいわゆる「天然」腫瘍から得られた粉砕ホモジネートおよび／または懸濁液および／または細胞溶解液を投与すること、および
前記工程の投与により活性化されたＢ細胞を除去するためにこれらの動物を免疫抑制剤で処理し、それにより該いわゆる「天然」腫瘍に対する潜在的応答を阻害すること
からなる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
抗腫瘍化合物に対する腫瘍の耐性を阻害し得る抗体またはその機能的フラグメントの１つをin vitroで作製および選択する方法であって、または、
少なくとも１つの抗腫瘍化合物に耐性のある腫瘍の表面で発現される腫瘍抗原であって、抗腫瘍化合物に対するその腫瘍の耐性に関連する腫瘍抗原、に対する抗体またはその機能的フラグメントの１つをin vitroで作製および選択する方法であって、
ａ）請求項６〜２６のいずれか一項に記載の抗体またはその機能的フラグメントの１つをin vitroで作製および選択する方法、ここで、該抗体は耐性腫瘍の表面で特異的に発現される腫瘍抗原に対するものであり、該腫瘍抗原はその耐性腫瘍が由来する天然腫瘍の細胞の表面では発現されない；
ｂ）工程ａ）で得られた抗体をin vitroまたはin vivoにおいて抗腫瘍化合物に耐性のある腫瘍と接触させること；および
ｃ）抗腫瘍化合物に対する腫瘍の耐性に対するこの抗体の阻害作用が示されれば、その抗体を選択すること
を含む、方法。
【請求項３０】
治療および／または診断用モノクローナル抗体を作製するために用いられる、請求項６〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１４〜２９のいずれか一項に記載の方法を適用することにより得られる、モノクローナル抗体またはその機能的フラグメントの１つ。
【請求項３２】
前記機能的フラグメントがＦｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメントおよびダイアボディー、またはペグ化フラグメントのような、その寿命が延長されたいずれかのフラグメントから選択される、請求項３１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３３】
請求項３１または３２に記載のモノクローナル抗体またはその機能的フラグメントの１つであって、
抗体が、
ａ）配列番号１、２および３の配列のＣＤＲ領域を含む軽鎖と、
配列番号４、５および６の配列のＣＤＲ領域を含む重鎖と
を含む、抗体、
ｂ）配列番号９、１０および１１の配列のＣＤＲ領域を含む軽鎖と、
配列番号１２、１３および１４の配列のＣＤＲ領域を含む重鎖と
を含む、抗体、
ｃ）配列番号１７、１８および１９の配列のＣＤＲ領域を含む軽鎖と、
配列番号２０、２１および２２の配列のＣＤＲ領域を含む重鎖と
を含む、抗体、
ｄ）配列番号２５、２６および２７の配列のＣＤＲ領域を含む軽鎖と、
配列番号２８、２９および６３０配列のＣＤＲ領域を含む重鎖と
を含む、抗体、
ｅ）配列番号３３、３４および３５の配列のＣＤＲ領域を含む軽鎖と、
配列番号３６、３７および３８の配列のＣＤＲ領域を含む重鎖と
を含む、抗体
からなる群より選択される、モノクローナル抗体またはその機能的フラグメントの１つ。
【請求項３４】
請求項３３に記載の抗体を分泌し得るネズミハイブリドーマであって、
２００６年５月３１日にＣＮＣＭ(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes, Institut Pasteur, Paris (France))にＮｏ．Ｉ−３６１２、Ｎｏ．Ｉ−３６１３、Ｎｏ．Ｉ−３６１４、Ｎｏ．Ｉ−３６１５およびＮｏ．Ｉ−３６１６として寄託されたネズミハイブリドーマ。
【請求項３５】
前記抗体がキメラ抗体であり、マウスとは異種の種の抗体に由来する定常軽鎖および重鎖領域をさらに含む、請求項３３または３４に記載の抗体またはその機能的フラグメントの１つ。
【請求項３６】
前記抗体が、キメラ抗体であり、および前記異種がヒト種である、請求項３５に記載の抗体またはその機能的フラグメントの１つ。
【請求項３７】
次の核酸：
ａ）請求項３３または３４に記載の抗体またはその機能的フラグメントの１つをコードする核酸、ＤＮＡまたはＲＮＡ；
ｂ）ａ）で定義された核酸に相補的な核酸；
ｃ）配列番号４１〜４６、４９〜５４、５７〜６２、６５〜７０、７３〜７８の配列の少なくとも１つのＣＤＲと、または最適なアライメントの後に配列番号４１〜４６、４９〜５４、５７〜６２、６５〜７０、７３〜７８の配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列と強いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る少なくとも１８ヌクレオチドの核酸；および
ｄ）配列番号４８、５６、６４、７２もしくは８０の配列の少なくとも１つの軽鎖および／または配列番号４７、５５、６３、７１もしくは７９の配列の重鎖の１つと、あるいは最適なアライメントの後に配列番号４７、４８、５５、５６、６３、６４、７１、７２、７９または８０の配列と少なくとも８０％の同一性を有する配列と強いストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る少なくとも１８ヌクレオチドの核酸
から選択される、単離された核酸。
【請求項３８】
請求項３７に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項３９】
請求項３８に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項４０】
抗体またはその機能的フラグメントの１つを産生する方法であって、
次の工程：
ａ）培地中、好適な培養条件下で請求項３９に記載の細胞を培養する工程；および
ｂ）それにより培養培地から、または培養細胞から前記抗体またはその機能的フラグメントの１つを回収する工程
を含む、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項４１】
薬剤としての請求項３３または３４に記載の抗体またはその機能的フラグメントの１つ。
【請求項４２】
請求項３３または３４に記載の抗体またはその機能的フラグメントの１つを有効成分として含む組成物。
【請求項４３】
同時使用、個別使用または経時的拡散使用のための組合せ製品として化学療法薬、放射線療法薬または抗体をさらに含む、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
薬剤としての請求項４２または４３に記載の組成物。
【請求項４５】
癌の予防または治療を意図した薬剤を製造するための、請求項４１に記載の抗体および／または請求項４４に記載の組成物の使用。
【請求項４６】
癌が、結腸癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、卵巣癌または膵臓癌から選択される、耐性種の癌である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
耐性腫瘍および／または後期に見られる腫瘍に生物学的に活性な化合物を特異的にターゲッティングすることを意図した薬剤の製造のための、請求項３３または３４に記載の抗体またはその機能的フラグメントの１つの使用。
【請求項４８】
耐性現象に関連する新規な治療標的および／または診断標的を細胞内または細胞外のいずれかで同定する方法であって、モノクローナル抗体を得た後、該モノクローナル抗体により認識されるタンパク質を同定するために、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法を適用することを含む、方法。