(57)【要約】本開示は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５配列を含むｒＡＡＶベクターの投与を通した網膜色素変性症の処置のための組成物及び方法に関する。
2022501376.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の組換えアデノ随伴ウイルス血清型８（ｒＡＡＶ８）粒子を含む組成物であって、
前記複数のｒＡＡＶ８粒子の各ｒＡＡＶ８が、非複製であり、
前記複数のｒＡＡＶ８粒子の各ｒＡＡＶ８が、５’から３’で、以下：
（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）をコードする配列；
（ｂ）Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーターをコードする配列；
（ｃ）網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子ＯＲＦ１５アイソフォーム（ＲＰＧＲＯＲＦ１５）をコードする配列；
（ｄ）ポリアデニル化（ポリＡ）シグナルをコードする配列；
（ｅ）３’ＩＴＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含み、
前記組成物が、以下
（ｉ）端点を含んで、１．０×１０１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ間；
（ｉｉ）１．２５×１０１２ＤＮアーゼ耐性粒子（ＤＲＰ）／ミリリットル（ｍＬ）及び１．０×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ間；または
（ｉｉ）端点を含んで、５×１０１０ゲノム粒子（ｇｐ）及び５×１０１２ｇｐ間を含む、前記組成物。
【請求項２】
前記組成物が、端点を含んで、１．２５×１０１２ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ間を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、１×１０１２ｖｇ／ｍＬを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、２．５×１０１２ｖｇ／ｍＬを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、５×１０１２ｖｇ／ｍＬを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、５×１０９ｇｐ、１×１０１０ｇｐ、５×１０１０ｇｐ、１×１０１１ｇｐ、２．５×１０１１ｇｐ  ５×１０１１ｇｐ、１．２５×１０１２ｇｐ、２．５×１０１２ｇｐ、５×１０１２ｇｐ、または１×１０１３を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
医薬的に許容可能な担体をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記医薬的に許容可能な担体が、Ｔｒｉｓ、ＭｇＣｌ２、及びＮａＣｌを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記医薬的に許容可能な担体が、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、及び２００ｍＭ  ＮａＣｌをｐＨ８．０にて含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記医薬的に許容可能な担体が、ポロクサマー１８８を０．００１％にてさらに含む、請求項８または９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＧＲＫ１プロモーターをコードする前記配列が、以下：
１  ｇｇｇｃｃｃｃａｇａ  ａｇｃｃｔｇｇｔｇｇ  ｔｔｇｔｔｔｇｔｃｃ  ｔｔｃｔｃａｇｇｇｇ  ａａａａｇｔｇａｇｇ  ｃｇｇｃｃｃｃｔｔｇ
６１  ｇａｇｇａａｇｇｇｇ  ｃｃｇｇｇｃａｇａａ  ｔｇａｔｃｔａａｔｃ  ｇｇａｔｔｃｃａａｇ  ｃａｇｃｔｃａｇｇｇ  ｇａｔｔｇｔｃｔｔｔ
１２１  ｔｔｃｔａｇｃａｃｃ  ｔｔｃｔｔｇｃｃａｃ  ｔｃｃｔａａｇｃｇｔ  ｃｃｔｃｃｇｔｇａｃ  ｃｃｃｇｇｃｔｇｇｇ  ａｔｔｔａｇｃｃｔｇ
１８１  ｇｔｇｃｔｇｔｇｔｃ  ａｇｃｃｃｃｇｇｇ（配列番号１）の配列を含むまたはこれからなる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする前記配列が、以下：
１  ＭＲＥＰＥＥＬＭＰＤ  ＳＧＡＶＦＴＦＧＫＳ  ＫＦＡＥＮＮＰＧＫＦ  ＷＦＫＮＤＶＰＶＨＬ  ＳＣＧＤＥＨＳＡＶＶ  ＴＧＮＮＫＬＹＭＦＧ
６１  ＳＮＮＷＧＱＬＧＬＧ  ＳＫＳＡＩＳＫＰＴＣ  ＶＫＡＬＫＰＥＫＶＫ  ＬＡＡＣＧＲＮＨＴＬ  ＶＳＴＥＧＧＮＶＹＡ  ＴＧＧＮＮＥＧＱＬＧ
１２１  ＬＧＤＴＥＥＲＮＴＦ  ＨＶＩＳＦＦＴＳＥＨ  ＫＩＫＱＬＳＡＧＳＮ  ＴＳＡＡＬＴＥＤＧＲ  ＬＦＭＷＧＤＮＳＥＧ  ＱＩＧＬＫＮＶＳＮＶ
１８１  ＣＶＰＱＱＶＴＩＧＫ  ＰＶＳＷＩＳＣＧＹＹ  ＨＳＡＦＶＴＴＤＧＥ  ＬＹＶＦＧＥＰＥＮＧ  ＫＬＧＬＰＮＱＬＬＧ  ＮＨＲＴＰＱＬＶＳＥ
２４１  ＩＰＥＫＶＩＱＶＡＣ  ＧＧＥＨＴＶＶＬＴＥ  ＮＡＶＹＴＦＧＬＧＱ  ＦＧＱＬＧＬＧＴＦＬ  ＦＥＴＳＥＰＫＶＩＥ  ＮＩＲＤＱＴＩＳＹＩ
３０１  ＳＣＧＥＮＨＴＡＬＩ  ＴＤＩＧＬＭＹＴＦＧ  ＤＧＲＨＧＫＬＧＬＧ  ＬＥＮＦＴＮＨＦＩＰ  ＴＬＣＳＮＦＬＲＦＩ  ＶＫＬＶＡＣＧＧＣＨ
３６１  ＭＶＶＦＡＡＰＨＲＧ  ＶＡＫＥＩＥＦＤＥＩ  ＮＤＴＣＬＳＶＡＴＦ  ＬＰＹＳＳＬＴＳＧＮ  ＶＬＱＲＴＬＳＡＲＭ  ＲＲＲＥＲＥＲＳＰＤ
４２１  ＳＦＳＭＲＲＴＬＰＰ  ＩＥＧＴＬＧＬＳＡＣ  ＦＬＰＮＳＶＦＰＲＣ  ＳＥＲＮＬＱＥＳＶＬ  ＳＥＱＤＬＭＱＰＥＥ  ＰＤＹＬＬＤＥＭＴＫ
４８１  ＥＡＥＩＤＮＳＳＴＶ  ＥＳＬＧＥＴＴＤＩＬ  ＮＭＴＨＩＭＳＬＮＳ  ＮＥＫＳＬＫＬＳＰＶ  ＱＫＱＫＫＱＱＴＩＧ  ＥＬＴＱＤＴＡＬＴＥ
５４１  ＮＤＤＳＤＥＹＥＥＭ  ＳＥＭＫＥＧＫＡＣＫ  ＱＨＶＳＱＧＩＦＭＴ  ＱＰＡＴＴＩＥＡＦＳ  ＤＥＥＶＥＩＰＥＥＫ  ＥＧＡＥＤＳＫＧＮＧ
６０１  ＩＥＥＱＥＶＥＡＮＥ  ＥＮＶＫＶＨＧＧＲＫ  ＥＫＴＥＩＬＳＤＤＬ  ＴＤＫＡＥＶＳＥＧＫ  ＡＫＳＶＧＥＡＥＤＧ  ＰＥＧＲＧＤＧＴＣＥ
６６１  ＥＧＳＳＧＡＥＨＷＱ  ＤＥＥＲＥＫＧＥＫＤ  ＫＧＲＧＥＭＥＲＰＧ  ＥＧＥＫＥＬＡＥＫＥ  ＥＷＫＫＲＤＧＥＥＱ  ＥＱＫＥＲＥＱＧＨＱ
７２１  ＫＥＲＮＱＥＭＥＥＧ  ＧＥＥＥＨＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＤＲＥＥＥＥＥ  ＫＥＧＥＧＫＥＥＧＥ  ＧＥＥＶＥＧＥＲＥＫ  ＥＥＧＥＲＫＫＥＥＲ
７８１  ＡＧＫＥＥＫＧＥＥＥ  ＧＤＱＧＥＧＥＥＥＥ  ＴＥＧＲＧＥＥＫＥＥ  ＧＧＥＶＥＧＧＥＶＥ  ＥＧＫＧＥＲＥＥＥＥ  ＥＥＧＥＧＥＥＥＥＧ
８４１  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＥ  ＥＥＥＧＥＧＫＧＥＥ  ＥＧＥＥＧＥＧＥＥＥ  ＧＥＥＧＥＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＥＧＥＧＥＥＥ  ＧＥＧＥＧＥＥＥＥＧ
９０１  ＥＧＥＧＥＥＥＧＥＧ  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＫ  ＧＥＥＥＧＥＥＧＥＧ  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＥ  ＧＥＤＧＥＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＥＷＥＧＥＥＥ
９６１  ＥＧＥＧＥＧＥＥＥＧ  ＥＧＥＧＥＥＧＥＧＥ  ＧＥＥＥＥＧＥＧＥＧ  ＥＥＥＥＧＥＥＥＧＥ  ＥＥＧＥＧＥＥＥＧＥ  ＧＥＧＥＥＥＥＥＧＥ
１０２１  ＶＥＧＥＶＥＧＥＥＧ  ＥＧＥＧＥＥＥＥＧＥ  ＥＥＧＥＥＲＥＫＥＧ  ＥＧＥＥＮＲＲＮＲＥ  ＥＥＥＥＥＥＧＫＹＱ  ＥＴＧＥＥＥＮＥＲＱ
１０８１  ＤＧＥＥＹＫＫＶＳＫ  ＩＫＧＳＶＫＹＧＫＨ  ＫＴＹＱＫＫＳＶＴＮ  ＴＱＧＮＧＫＥＱＲＳ  ＫＭＰＶＱＳＫＲＬＬ  ＫＮＧＰＳＧＳＫＫＦ
１１４１  ＷＮＮＶＬＰＨＹＬＥ  ＬＫ（配列番号２）のＲＰＧＲＯＲＦ１５アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＲＰＧＲＯＲＦ１５アミノ酸配列をコードする前記配列が、コドン最適化配列を含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする前記配列が、以下：
１  ａｔｇａｇａｇａｇｃ  ｃａｇａｇｇａｇｃｔ  ｇａｔｇｃｃａｇａｃ  ａｇｔｇｇａｇｃａｇ  ｔｇｔｔｔａｃａｔｔ  ｃｇｇａａａａｔｃｔ
６１  ａａｇｔｔｃｇｃｔｇ  ａａａａｔａａｃｃｃ  ａｇｇａａａｇｔｔｃ  ｔｇｇｔｔｔａａａａ  ａｃｇａｃｇｔｇｃｃ  ｃｇｔｃｃａｃｃｔｇ
１２１  ｔｃｔｔｇｔｇｇｃｇ  ａｔｇａｇｃａｔａｇ  ｔｇｃｃｇｔｇｇｔｃ  ａｃｔｇｇｇａａｃａ  ａｔａａｇｃｔｇｔａ  ｃａｔｇｔｔｃｇｇｇ
１８１  ｔｃｃａａｃａａｃｔ  ｇｇｇｇａｃａｇｃｔ  ｇｇｇｇｃｔｇｇｇａ  ｔｃｃａａａｔｃｔｇ  ｃｔａｔｃｔｃｔａａ  ｇｃｃａａｃｃｔｇｃ
２４１  ｇｔｇａａｇｇｃａｃ  ｔｇａａａｃｃｃｇａ  ｇａａｇｇｔｃａａａ  ｃｔｇｇｃｃｇｃｔｔ  ｇｔｇｇｃａｇａａａ  ｃｃａｃａｃｔｃｔｇ
３０１  ｇｔｇａｇｃａｃｃｇ  ａｇｇｇｃｇｇｇａａ  ｔｇｔｃｔａｔｇｃｃ  ａｃｃｇｇａｇｇｃａ  ａｃａａｔｇａｇｇｇ  ａｃａｇｃｔｇｇｇａ
３６１  ｃｔｇｇｇｇｇａｃａ  ｃｔｇａｇｇａａａｇ  ｇａａｔａｃｃｔｔｔ  ｃａｃｇｔｇａｔｃｔ  ｃｃｔｔｃｔｔｔａｃ  ａｔｃｔｇａｇｃａｔ
４２１  ａａｇａｔｃａａｇｃ  ａｇｃｔｇａｇｃｇｃ  ｔｇｇｃｔｃｃａａｃ  ａｃａｔｃｔｇｃａｇ  ｃｃｃｔｇａｃｔｇａ  ｇｇａｃｇｇｇｃｇｃ
４８１  ｃｔｇｔｔｃａｔｇｔ  ｇｇｇｇａｇａｔａａ  ｔｔｃａｇａｇｇｇｃ  ｃａｇａｔｔｇｇｇｃ  ｔｇａａａａａｃｇｔ  ｇａｇｃａａｔｇｔｇ
５４１  ｔｇｃｇｔｃｃｃｔｃ  ａｇｃａｇｇｔｇａｃ  ｃａｔｃｇｇａａａｇ  ｃｃａｇｔｃａｇｔｔ  ｇｇａｔｔｔｃａｔｇ  ｔｇｇｃｔａｃｔａｔ
６０１  ｃａｔａｇｃｇｃｃｔ  ｔｃｇｔｇａｃｃａｃ  ａｇａｔｇｇｃｇａｇ  ｃｔｇｔａｃｇｔｃｔ  ｔｔｇｇｇｇａｇｃｃ  ｃｇａａａａｃｇｇａ
６６１  ａａａｃｔｇｇｇｃｃ  ｔｇｃｃｔａａｃｃａ  ｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃ  ａａｔｃａｃｃｇｇａ  ｃａｃｃｃｃａｇｃｔ  ｇｇｔｇｔｃｃｇａｇ
７２１  ａｔｃｃｃｔｇａａａ  ａａｇｔｇａｔｃｃａ  ｇｇｔｃｇｃｃｔｇｃ  ｇｇｇｇｇａｇａｇｃ  ａｔａｃａｇｔｇｇｔ  ｃｃｔｇａｃｔｇａｇ
７８１  ａａｔｇｃｔｇｔｇｔ  ａｔａｃｃｔｔｃｇｇ  ａｃｔｇｇｇｃｃａｇ  ｔｔｔｇｇｃｃａｇｃ  ｔｇｇｇｇｃｔｇｇｇ  ａａｃｃｔｔｃｃｔｇ
８４１  ｔｔｔｇａｇａｃａｔ  ｃｃｇａａｃｃａａａ  ａｇｔｇａｔｃｇａｇ  ａａｃａｔｔｃｇｃｇ  ａｃｃａｇａｃｔａｔ  ｃａｇｃｔａｃａｔｔ
９０１  ｔｃｃｔｇｃｇｇａｇ  ａｇａａｔｃａｃａｃ  ｃｇｃａｃｔｇａｔｃ  ａｃａｇａｃａｔｔｇ  ｇｃｃｔｇａｔｇｔａ  ｔａｃｃｔｔｔｇｇｃ
９６１  ｇａｔｇｇａｃｇａｃ  ａｃｇｇｇａａｇｃｔ  ｇｇｇａｃｔｇｇｇａ  ｃｔｇｇａｇａａｃｔ  ｔｃａｃｔａａｔｃａ  ｔｔｔｔａｔｃｃｃｃ
１０２１  ａｃｃｃｔｇｔｇｔｔ  ｃｔａａｃｔｔｃｃｔ  ｇｃｇｇｔｔｃａｔｃ  ｇｔｇａａａｃｔｇｇ  ｔｃｇｃｔｔｇｃｇｇ  ｃｇｇｇｔｇｔｃａｃ
１０８１  ａｔｇｇｔｇｇｔｃｔ  ｔｃｇｃｔｇｃａｃｃ  ｔｃａｔａｇｇｇｇｃ  ｇｔｇｇｃｔａａｇｇ  ａｇａｔｃｇａａｔｔ  ｔｇａｃｇａｇａｔｔ
１１４１  ａａｃｇａｔａｃａｔ  ｇｃｃｔｇａｇｃｇｔ  ｇｇｃａａｃｔｔｔｃ  ｃｔｇｃｃａｔａｃａ  ｇｃｔｃｃｃｔｇａｃ  ｔｔｃｔｇｇｃａａｔ
１２０１  ｇｔｇｃｔｇｃａｇａ  ｇａａｃｃｃｔｇａｇ  ｔｇｃａａｇｇａｔｇ  ｃｇｇａｇａａｇｇｇ  ａｇａｇｇｇａａｃｇ  ｃｔｃｔｃｃｔｇａｃ
１２６１  ａｇｔｔｔｃｔｃａａ  ｔｇｃｇａｃｇａａｃ  ｃｃｔｇｃｃａｃｃｔ  ａｔｃｇａｇｇｇａａ  ｃａｃｔｇｇｇａｃｔ  ｇａｇｔｇｃｃｔｇｃ
１３２１  ｔｔｃｃｔｇｃｃｔａ  ａｃｔｃａｇｔｇｔｔ  ｔｃｃａｃｇａｔｇｔ  ａｇｃｇａｇｃｇｇａ  ａｔｃｔｇｃａｇｇａ  ｇｔｃｔｇｔｃｃｔｇ
１３８１  ａｇｔｇａｇｃａｇｇ  ａｔｃｔｇａｔｇｃａ  ｇｃｃａｇａｇｇａａ  ｃｃｃｇａｃｔａｃｃ  ｔｇｃｔｇｇａｔｇａ  ｇａｔｇａｃｃａａｇ
１４４１  ｇａｇｇｃｃｇａａａ  ｔｃｇａｃａａｃｔｃ  ｔａｇｔａｃａｇｔｇ  ｇａｇｔｃｃｃｔｇｇ  ｇｃｇａｇａｃｔａｃ  ｃｇａｔａｔｃｃｔｇ
１５０１  ａａｔａｔｇａｃａｃ  ａｃａｔｔａｔｇｔｃ  ａｃｔｇａａｃａｇｃ  ａａｔｇａｇａａｇａ  ｇｔｃｔｇａａａｃｔ  ｇｔｃａｃｃａｇｔｇ
１５６１  ｃａｇａａｇｃａｇａ  ａｇａａａｃａｇｃａ  ｇａｃｔａｔｔｇｇｃ  ｇａｇｃｔｇａｃｔｃ  ａｇｇａｃａｃｃｇｃ  ｃｃｔｇａｃａｇａｇ
１６２１  ａａｃｇａｃｇａｔａ  ｇｃｇａｔｇａｇｔａ  ｔｇａｇｇａａａｔｇ  ｔｃｃｇａｇａｔｇａ  ａｇｇａａｇｇｃａａ  ａｇｃｔｔｇｔａａｇ
１６８１  ｃａｇｃａｔｇｔｃａ  ｇｔｃａｇｇｇｇａｔ  ｃｔｔｃａｔｇａｃａ  ｃａｇｃｃａｇｃｃａ  ｃａａｃｔａｔｔｇａ  ｇｇｃｔｔｔｔｔｃａ
１７４１  ｇａｃｇａｇｇａａｇ  ｔｇｇａｇａｔｃｃｃ  ｃｇａｇｇａａａａａ  ｇａｇｇｇｃｇｃａｇ  ａａｇａｔｔｃｃａａ  ｇｇｇｇａａｔｇｇａ
１８０１  ａｔｔｇａｇｇａａｃ  ａｇｇａｇｇｔｇｇａ  ａｇｃｃａａｃｇａｇ  ｇａａａａｔｇｔｇａ  ａａｇｔｃｃａｃｇｇ  ａｇｇｃａｇｇａａｇ
１８６１  ｇａｇａａａａｃａｇ  ａａａｔｃｃｔｇｔｃ  ｔｇａｃｇａｔｃｔｇ  ａｃｔｇａｃａａｇｇ  ｃｃｇａｇｇｔｇｔｃ  ｃｇａａｇｇｃａａｇ
１９２１  ｇｃａａａａｔｃｔｇ  ｔｃｇｇａｇａｇｇｃ  ａｇａａｇａｃｇｇａ  ｃｃａｇａｇｇｇａｃ  ｇａｇｇｇｇａｔｇｇ  ａａｃｃｔｇｃｇａｇ
１９８１  ｇａａｇｇｃｔｃａａ  ｇｃｇｇｇｇｃｔｇａ  ｇｃａｔｔｇｇｃａｇ  ｇａｃｇａｇｇａａｃ  ｇａｇａｇａａｇｇｇ  ｃｇａａａａｇｇａｔ
２０４１  ａａａｇｇｃｃｇｃｇ  ｇｇｇａｇａｔｇｇａ  ａｃｇａｃｃｔｇｇａ  ｇａｇｇｇｃｇａａａ  ａａｇａｇｃｔｇｇｃ  ａｇａｇａａｇｇａｇ
２１０１  ｇａａｔｇｇａａｇａ  ａａａｇｇｇａｃｇｇ  ｃｇａｇｇａａｃａｇ  ｇａｇｃａｇａａａｇ  ａａａｇｇｇａｇｃａ  ｇｇｇｃｃａｃｃａｇ
２１６１  ａａｇｇａｇｃｇｃａ  ａｃｃａｇｇａｇａｔ  ｇｇａａｇａｇｇｇｃ  ｇｇｃｇａｇｇａａｇ  ａｇｃａｔｇｇｃｇａ  ｇｇｇａｇａａｇａｇ
２２２１  ｇａａｇａｇｇｇｃｇ  ａｔａｇａｇａａｇａ  ｇｇａａｇａｇｇａａ  ａａａｇａａｇｇｃｇ  ａａｇｇｇａａｇｇａ  ｇｇａａｇｇａｇａｇ
２２８１  ｇｇｃｇａｇｇａａｇ  ｔｇｇａａｇｇｃｇａ  ｇａｇｇｇａａａａｇ  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａａｃｇｇａａｇａａ  ａｇａｇｇａａａｇａ
２３４１  ｇｃｃｇｇｃａａａｇ  ａｇｇａａａａｇｇｇ  ｃｇａｇｇａａｇａｇ  ｇｇｃｇａｔｃａｇｇ  ｇｃｇａａｇｇｃｇａ  ｇｇａｇｇａａｇａｇ
２４０１  ａｃｃｇａｇｇｇｃｃ  ｇｃｇｇｇｇａａｇａ  ｇａａａｇａｇｇａｇ  ｇｇａｇｇａｇａｇｇ  ｔｇｇａｇｇｇｃｇｇ  ａｇａｇｇｔｃｇａａ
２４６１  ｇａｇｇｇａａａｇｇ  ｇｃｇａｇｃｇｃｇａ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇａａｇａｇｇｇｃｇ  ａｇｇｇｃｇａｇｇａ  ａｇａａｇａｇｇｇｃ
２５２１  ｇａｇｇｇｇｇａａｇ  ａａｇａｇｇａｇｇｇ  ａｇａｇｇｇｃｇａａ  ｇａｇｇａａｇａｇｇ  ｇｇｇａｇｇｇａａａ  ｇｇｇｃｇａａｇａｇ
２５８１  ｇａａｇｇａｇａｇｇ  ａａｇｇｇｇａｇｇｇ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇｇｇｇａｇｇａｇｇ  ｇｃｇａｇｇｇｇｇａ  ａｇｇｃｇａｇｇａｇ
２６４１  ｇａａｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇａａｇｇ  ｃｇａａｇａｇｇａａ  ｇｇｃｇａｇｇｇｇｇ  ａａｇｇａｇａｇｇａ  ｇｇａａｇａａｇｇｇ
２７０１  ｇａａｇｇｃｇａａｇ  ｇｃｇａａｇａｇｇａ  ｇｇｇａｇａａｇｇａ  ｇａｇｇｇｇｇａｇｇ  ａａｇａｇｇａａｇｇ  ａｇａａｇｇｇａａｇ
２７６１  ｇｇｃｇａｇｇａｇｇ  ａａｇｇｃｇａａｇａ  ｇｇｇａｇａｇｇｇｇ  ｇａａｇｇｃｇａｇｇ  ａａｇａｇｇａａｇｇ  ｃｇａｇｇｇｃｇａａ
２８２１  ｇｇａｇａｇｇａｃｇ  ｇｃｇａｇｇｇｃｇａ  ｇｇｇａｇａａｇａｇ  ｇａｇｇａａｇｇｇｇ  ａａｔｇｇｇａａｇｇ  ｃｇａａｇａａｇａｇ
２８８１  ｇａａｇｇｃｇａａｇ  ｇｃｇａａｇｇｃｇａ  ａｇａａｇａｇｇｇｃ  ｇａａｇｇｇｇａｇｇ  ｇｃｇａｇｇａｇｇｇ  ｃｇａａｇｇｃｇａａ
２９４１  ｇｇｇｇａｇｇａａｇ  ａｇｇａａｇｇｃｇａ  ａｇｇａｇａａｇｇｃ  ｇａｇｇａａｇａａｇ  ａｇｇｇａｇａｇｇａ  ｇｇａａｇｇｃｇａｇ
３００１  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇａｇｇａ  ｇｇａｇｇｇａｇａａ  ｇｇｃｇａｇｇｇｃｇ  ａａｇａａｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇａｇａａ
３０６１  ｇｔｇｇａｇｇｇｃｇ  ａａｇｔｃｇａｇｇｇ  ｇｇａｇｇａｇｇｇａ  ｇａａｇｇｇｇａａｇ  ｇｇｇａｇｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇｃｇａａ
３１２１  ｇａａｇａａｇｇｃｇ  ａｇｇａａａｇａｇａ  ａａａａｇａｇｇｇａ  ｇａａｇｇｃｇａｇｇ  ａａａａｃｃｇｇａｇ  ａａａｔａｇｇｇａａ
３１８１  ｇａｇｇａｇｇａａｇ  ａｇｇａａｇａｇｇｇ  ａａａｇｔａｃｃａｇ  ｇａｇａｃａｇｇｃｇ  ａａｇａｇｇａａａａ  ｃｇａｇｃｇｇｃａｇ
３２４１  ｇａｔｇｇｃｇａｇｇ  ａａｔａｔａａｇａａ  ａｇｔｇａｇｃａａｇ  ａｔｃａａａｇｇａｔ  ｃｃｇｔｃａａｇｔａ  ｃｇｇｃａａｇｃａｃ
３３０１  ａａａａｃｃｔａｔｃ  ａｇａａｇａａａａｇ  ｃｇｔｇａｃｃａａｃ  ａｃａｃａｇｇｇｇａ  ａｔｇｇａａａａｇａ  ｇｃａｇａｇｇａｇｔ
３３６１  ａａｇａｔｇｃｃｔｇ  ｔｇｃａｇｔｃａａａ  ａｃｇｇｃｔｇｃｔｇ  ａａｇａａｔｇｇｃｃ  ｃａｔｃｔｇｇａａｇ  ｔａａａａａａｔｔｃ
３４２１  ｔｇｇａａｃａａｔｇ  ｔｇｃｔｇｃｃｃｃａ  ｃｔａｔｃｔｇｇａａ  ｃｔｇａａａｔａａ（配列番号３）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ポリＡシグナルをコードする前記配列が、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡ配列を含む、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ＢＧＨポリＡシグナルをコードする前記配列が、以下：
１  ｔｃｇｃｔｇａｔｃａ  ｇｃｃｔｃｇａｃｔｇ  ｔｇｃｃｔｔｃｔａｇ  ｔｔｇｃｃａｇｃｃａ  ｔｃｔｇｔｔｇｔｔｔ  ｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃ
６１  ｃｇｔｇｃｃｔｔｃｃ  ｔｔｇａｃｃｃｔｇｇ  ａａｇｇｔｇｃｃａｃ  ｔｃｃｃａｃｔｇｔｃ  ｃｔｔｔｃｃｔａａｔ  ａａａａｔｇａｇｇａ
１２１  ａａｔｔｇｃａｔｃｇ  ｃａｔｔｇｔｃｔｇａ  ｇｔａｇｇｔｇｔｃａ  ｔｔｃｔａｔｔｃｔｇ  ｇｇｇｇｇｔｇｇｇｇ  ｔｇｇｇｇｃａｇｇａ
１８１  ｃａｇｃａａｇｇｇｇ  ｇａｇｇａｔｔｇｇｇ  ａａｇａｃａａｔａｇ  ｃａｇｇｃａｔｇｃｔ  ｇｇｇｇａｔｇｃｇｇ  ｔｇｇｇｃｔｃｔａｔ
２４１  ｇｇｃｔｔｃｔｇａｇ  ｇｃｇｇａａａｇａａ  ｃｃａｇｃｔｇｇｇｇ（配列番号４）のヌクレオチド配列を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記５’ＩＴＲをコードする前記配列が、血清型２のＡＡＶ（ＡＡＶ２）の５’ＩＴＲ配列に由来する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記５’ＩＴＲをコードする前記配列が、ＡＡＶ２の５’ＩＴＲの配列と同一である配列を含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記５’ＩＴＲをコードする前記配列が、以下：
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴ（配列番号５）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記３’ＩＴＲをコードする前記配列が、ＡＡＶ２の３’ＩＴＲ配列に由来する、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記３’ＩＴＲをコードする前記配列が、ＡＡＶ２の３’ＩＴＲの配列と同一である配列を含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記３’ＩＴＲをコードする前記配列が、以下：
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ（配列番号６）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ポリヌクレオチドが、コザック配列をさらに含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記コザック配列が、ＧＧＣＣＡＣＣＡＴＧ（配列番号７）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ポリヌクレオチドが、以下：
１  ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣ  ＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣ  ＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣ  ＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧ  ＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧ  ＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣ
６１  ＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣ  ＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣ  ＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧ  ＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣ  ＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡ  ＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧ
１２１  ＣＧＧＣＡＡＴＴＣＡ  ＧＴＣＧＡＴＡＡＣＴ  ＡＴＡＡＣＧＧＴＣＣ  ＴＡＡＧＧＴＡＧＣＧ  ＡＴＴＴＡＡＡＴＡＣ  ＧＣＧＣＴＣＴＣＴＴ
１８１  ＡＡＧＧＴＡＧＣＣＣ  ＣＧＧＧＡＣＧＣＧＴ  ＣＡＡＴＴＧＧＧＧＣ  ＣＣＣＡＧＡＡＧＣＣ  ＴＧＧＴＧＧＴＴＧＴ  ＴＴＧＴＣＣＴＴＣＴ
２４１  ＣＡＧＧＧＧＡＡＡＡ  ＧＴＧＡＧＧＣＧＧＣ  ＣＣＣＴＴＧＧＡＧＧ  ＡＡＧＧＧＧＣＣＧＧ  ＧＣＡＧＡＡＴＧＡＴ  ＣＴＡＡＴＣＧＧＡＴ
３０１  ＴＣＣＡＡＧＣＡＧＣ  ＴＣＡＧＧＧＧＡＴＴ  ＧＴＣＴＴＴＴＴＣＴ  ＡＧＣＡＣＣＴＴＣＴ  ＴＧＣＣＡＣＴＣＣＴ  ＡＡＧＣＧＴＣＣＴＣ
３６１  ＣＧＴＧＡＣＣＣＣＧ  ＧＣＴＧＧＧＡＴＴＴ  ＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣ  ＴＧＴＧＴＣＡＧＣＣ  ＣＣＧＧＧＧＣＣＡＣ  ＣＡＴＧＡＧＡＧＡＧ
４２１  ＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣ  ＴＧＡＴＧＣＣＡＧＡ  ＣＡＧＴＧＧＡＧＣＡ  ＧＴＧＴＴＴＡＣＡＴ  ＴＣＧＧＡＡＡＡＴＣ  ＴＡＡＧＴＴＣＧＣＴ
４８１  ＧＡＡＡＡＴＡＡＣＣ  ＣＡＧＧＡＡＡＧＴＴ  ＣＴＧＧＴＴＴＡＡＡ  ＡＡＣＧＡＣＧＴＧＣ  ＣＣＧＴＣＣＡＣＣＴ  ＧＴＣＴＴＧＴＧＧＣ
５４１  ＧＡＴＧＡＧＣＡＴＡ  ＧＴＧＣＣＧＴＧＧＴ  ＣＡＣＴＧＧＧＡＡＣ  ＡＡＴＡＡＧＣＴＧＴ  ＡＣＡＴＧＴＴＣＧＧ  ＧＴＣＣＡＡＣＡＡＣ
６０１  ＴＧＧＧＧＡＣＡＧＣ  ＴＧＧＧＧＣＴＧＧＧ  ＡＴＣＣＡＡＡＴＣＴ  ＧＣＴＡＴＣＴＣＴＡ  ＡＧＣＣＡＡＣＣＴＧ  ＣＧＴＧＡＡＧＧＣＡ
６６１  ＣＴＧＡＡＡＣＣＣＧ  ＡＧＡＡＧＧＴＣＡＡ  ＡＣＴＧＧＣＣＧＣＴ  ＴＧＴＧＧＣＡＧＡＡ  ＡＣＣＡＣＡＣＴＣＴ  ＧＧＴＧＡＧＣＡＣＣ
７２１  ＧＡＧＧＧＣＧＧＧＡ  ＡＴＧＴＣＴＡＴＧＣ  ＣＡＣＣＧＧＡＧＧＣ  ＡＡＣＡＡＴＧＡＧＧ  ＧＡＣＡＧＣＴＧＧＧ  ＡＣＴＧＧＧＧＧＡＣ
７８１  ＡＣＴＧＡＧＧＡＡＡ  ＧＧＡＡＴＡＣＣＴＴ  ＴＣＡＣＧＴＧＡＴＣ  ＴＣＣＴＴＣＴＴＴＡ  ＣＡＴＣＴＧＡＧＣＡ  ＴＡＡＧＡＴＣＡＡＧ
８４１  ＣＡＧＣＴＧＡＧＣＧ  ＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡ  ＣＡＣＡＴＣＴＧＣＡ  ＧＣＣＣＴＧＡＣＴＧ  ＡＧＧＡＣＧＧＧＣＧ  ＣＣＴＧＴＴＣＡＴＧ
９０１  ＴＧＧＧＧＡＧＡＴＡ  ＡＴＴＣＡＧＡＧＧＧ  ＣＣＡＧＡＴＴＧＧＧ  ＣＴＧＡＡＡＡＡＣＧ  ＴＧＡＧＣＡＡＴＧＴ  ＧＴＧＣＧＴＣＣＣＴ
９６１  ＣＡＧＣＡＧＧＴＧＡ  ＣＣＡＴＣＧＧＡＡＡ  ＧＣＣＡＧＴＣＡＧＴ  ＴＧＧＡＴＴＴＣＡＴ  ＧＴＧＧＣＴＡＣＴＡ  ＴＣＡＴＡＧＣＧＣＣ
１０２１  ＴＴＣＧＴＧＡＣＣＡ  ＣＡＧＡＴＧＧＣＧＡ  ＧＣＴＧＴＡＣＧＴＣ  ＴＴＴＧＧＧＧＡＧＣ  ＣＣＧＡＡＡＡＣＧＧ  ＡＡＡＡＣＴＧＧＧＣ
１０８１  ＣＴＧＣＣＴＡＡＣＣ  ＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧ  ＣＡＡＴＣＡＣＣＧＧ  ＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＴＣＣＧＡ  ＧＡＴＣＣＣＴＧＡＡ
１１４１  ＡＡＡＧＴＧＡＴＣＣ  ＡＧＧＴＣＧＣＣＴＧ  ＣＧＧＧＧＧＡＧＡＧ  ＣＡＴＡＣＡＧＴＧＧ  ＴＣＣＴＧＡＣＴＧＡ  ＧＡＡＴＧＣＴＧＴＧ
１２０１  ＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧ  ＧＡＣＴＧＧＧＣＣＡ  ＧＴＴＴＧＧＣＣＡＧ  ＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧ  ＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴ  ＧＴＴＴＧＡＧＡＣＡ
１２６１  ＴＣＣＧＡＡＣＣＡＡ  ＡＡＧＴＧＡＴＣＧＡ  ＧＡＡＣＡＴＴＣＧＣ  ＧＡＣＣＡＧＡＣＴＡ  ＴＣＡＧＣＴＡＣＡＴ  ＴＴＣＣＴＧＣＧＧＡ
１３２１  ＧＡＧＡＡＴＣＡＣＡ  ＣＣＧＣＡＣＴＧＡＴ  ＣＡＣＡＧＡＣＡＴＴ  ＧＧＣＣＴＧＡＴＧＴ  ＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧ  ＣＧＡＴＧＧＡＣＧＡ
１３８１  ＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣ  ＴＧＧＧＡＣＴＧＧＧ  ＡＣＴＧＧＡＧＡＡＣ  ＴＴＣＡＣＴＡＡＴＣ  ＡＴＴＴＴＡＴＣＣＣ  ＣＡＣＣＣＴＧＴＧＴ
１４４１  ＴＣＴＡＡＣＴＴＣＣ  ＴＧＣＧＧＴＴＣＡＴ  ＣＧＴＧＡＡＡＣＴＧ  ＧＴＣＧＣＴＴＧＣＧ  ＧＣＧＧＧＴＧＴＣＡ  ＣＡＴＧＧＴＧＧＴＣ
１５０１  ＴＴＣＧＣＴＧＣＡＣ  ＣＴＣＡＴＡＧＧＧＧ  ＣＧＴＧＧＣＴＡＡＧ  ＧＡＧＡＴＣＧＡＡＴ  ＴＴＧＡＣＧＡＧＡＴ  ＴＡＡＣＧＡＴＡＣＡ
１５６１  ＴＧＣＣＴＧＡＧＣＧ  ＴＧＧＣＡＡＣＴＴＴ  ＣＣＴＧＣＣＡＴＡＣ  ＡＧＣＴＣＣＣＴＧＡ  ＣＴＴＣＴＧＧＣＡＡ  ＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧ
１６２１  ＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡ  ＧＴＧＣＡＡＧＧＡＴ  ＧＣＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＧＡＡＣ  ＧＣＴＣＴＣＣＴＧＡ  ＣＡＧＴＴＴＣＴＣＡ
１６８１  ＡＴＧＣＧＡＣＧＡＡ  ＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣ  ＴＡＴＣＧＡＧＧＧＡ  ＡＣＡＣＴＧＧＧＡＣ  ＴＧＡＧＴＧＣＣＴＧ  ＣＴＴＣＣＴＧＣＣＴ
１７４１  ＡＡＣＴＣＡＧＴＧＴ  ＴＴＣＣＡＣＧＡＴＧ  ＴＡＧＣＧＡＧＣＧＧ  ＡＡＴＣＴＧＣＡＧＧ  ＡＧＴＣＴＧＴＣＣＴ  ＧＡＧＴＧＡＧＣＡＧ
１８０１  ＧＡＴＣＴＧＡＴＧＣ  ＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡ  ＡＣＣＣＧＡＣＴＡＣ  ＣＴＧＣＴＧＧＡＴＧ  ＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡ  ＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡ
１８６１  ＡＴＣＧＡＣＡＡＣＴ  ＣＴＡＧＴＡＣＡＧＴ  ＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧ  ＧＧＣＧＡＧＡＣＴＡ  ＣＣＧＡＴＡＴＣＣＴ  ＧＡＡＴＡＴＧＡＣＡ
１９２１  ＣＡＣＡＴＴＡＴＧＴ  ＣＡＣＴＧＡＡＣＡＧ  ＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧ  ＡＧＴＣＴＧＡＡＡＣ  ＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴ  ＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧ
１９８１  ＡＡＧＡＡＡＣＡＧＣ  ＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧ  ＣＧＡＧＣＴＧＡＣＴ  ＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧ  ＣＣＣＴＧＡＣＡＧＡ  ＧＡＡＣＧＡＣＧＡＴ
２０４１  ＡＧＣＧＡＴＧＡＧＴ  ＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴ  ＧＴＣＣＧＡＧＡＴＧ  ＡＡＧＧＡＡＧＧＣＡ  ＡＡＧＣＴＴＧＴＡＡ  ＧＣＡＧＣＡＴＧＴＣ
２１０１  ＡＧＴＣＡＧＧＧＧＡ  ＴＣＴＴＣＡＴＧＡＣ  ＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣ  ＡＣＡＡＣＴＡＴＴＧ  ＡＧＧＣＴＴＴＴＴＣ  ＡＧＡＣＧＡＧＧＡＡ
２１６１  ＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣ  ＣＣＧＡＧＧＡＡＡＡ  ＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡ  ＧＡＡＧＡＴＴＣＣＡ  ＡＧＧＧＧＡＡＴＧＧ  ＡＡＴＴＧＡＧＧＡＡ
２２２１  ＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧ  ＡＡＧＣＣＡＡＣＧＡ  ＧＧＡＡＡＡＴＧＴＧ  ＡＡＡＧＴＣＣＡＣＧ  ＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡ  ＧＧＡＧＡＡＡＡＣＡ
２２８１  ＧＡＡＡＴＣＣＴＧＴ  ＣＴＧＡＣＧＡＴＣＴ  ＧＡＣＴＧＡＣＡＡＧ  ＧＣＣＧＡＧＧＴＧＴ  ＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡ  ＧＧＣＡＡＡＡＴＣＴ
２３４１  ＧＴＣＧＧＡＧＡＧＧ  ＣＡＧＡＡＧＡＣＧＧ  ＡＣＣＡＧＡＧＧＧＡ  ＣＧＡＧＧＧＧＡＴＧ  ＧＡＡＣＣＴＧＣＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡ
２４０１  ＡＧＣＧＧＧＧＣＴＧ  ＡＧＣＡＴＴＧＧＣＡ  ＧＧＡＣＧＡＧＧＡＡ  ＣＧＡＧＡＧＡＡＧＧ  ＧＣＧＡＡＡＡＧＧＡ  ＴＡＡＡＧＧＣＣＧＣ
２４６１  ＧＧＧＧＡＧＡＴＧＧ  ＡＡＣＧＡＣＣＴＧＧ  ＡＧＡＧＧＧＣＧＡＡ  ＡＡＡＧＡＧＣＴＧＧ  ＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡ  ＧＧＡＡＴＧＧＡＡＧ
２５２１  ＡＡＡＡＧＧＧＡＣＧ  ＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡ  ＧＧＡＧＣＡＧＡＡＡ  ＧＡＡＡＧＧＧＡＧＣ  ＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡ  ＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣ
２５８１  ＡＡＣＣＡＧＧＡＧＡ  ＴＧＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＧＣＧＡＧＧＡＡ  ＧＡＧＣＡＴＧＧＣＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣ
２６４１  ＧＡＴＡＧＡＧＡＡＧ  ＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡ  ＡＡＡＡＧＡＡＧＧＣ  ＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡ  ＧＧＧＣＧＡＧＧＡＡ
２７０１  ＧＴＧＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＧＡＧＧＧＡＡＡＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡ  ＧＡＡＣＧＧＡＡＧＡ  ＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧ  ＡＧＣＣＧＧＣＡＡＡ
２７６１  ＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧ  ＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＧＣＧＡＴＣＡＧ  ＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣ
２８２１  ＣＧＣＧＧＧＧＡＡＧ  ＡＧＡＡＡＧＡＧＧＡ  ＧＧＧＡＧＧＡＧＡＧ  ＧＴＧＧＡＧＧＧＣＧ  ＧＡＧＡＧＧＴＣＧＡ  ＡＧＡＧＧＧＡＡＡＧ
２８８１  ＧＧＣＧＡＧＣＧＣＧ  ＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣ  ＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧ  ＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＡＧＧＧＧＧＡＡ
２９４１  ＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧ  ＧＧＧＧＡＧＧＧＡＡ  ＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧ
３００１  ＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＧＧＧＡＧＧＡＧ  ＧＧＣＧＡＧＧＧＧＧ  ＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＡＧＧＡ
３０６１  ＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡ  ＡＧＧＣＧＡＧＧＧＧ  ＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＡＡＧＧ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡ
３１２１  ＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧ  ＧＡＧＡＡＧＧＧＡＡ  ＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧ
３１８１  ＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＧＧＧ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣ
３２４１  ＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧ  ＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡ
３３０１  ＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＡＡＧＧＧＧＡＧ  ＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧ  ＧＣＧＡＡＧＧＣＧＡ  ＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡ
３３６１  ＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＣＧＡＧＧＡＡＧＡＡ  ＧＡＧＧＧＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡ
３４２１  ＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡ  ＡＧＧＣＧＡＧＧＧＣ  ＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧ  ＡＡＧＡＧＧＧＡＧＡ  ＡＧＴＧＧＡＧＧＧＣ
３４８１  ＧＡＡＧＴＣＧＡＧＧ  ＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧ  ＡＧＡＡＧＧＧＧＡＡ  ＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧ  ＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＡＡＧＡＡＧＧＣ
３５４１  ＧＡＧＧＡＡＡＧＡＧ  ＡＡＡＡＡＧＡＧＧＧ  ＡＧＡＡＧＧＣＧＡＧ  ＧＡＡＡＡＣＣＧＧＡ  ＧＡＡＡＴＡＧＧＧＡ  ＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡ
３６０１  ＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧ  ＧＡＡＡＧＴＡＣＣＡ  ＧＧＡＧＡＣＡＧＧＣ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡ  ＡＣＧＡＧＣＧＧＣＡ  ＧＧＡＴＧＧＣＧＡＧ
３６６１  ＧＡＡＴＡＴＡＡＧＡ  ＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡ  ＧＡＴＣＡＡＡＧＧＡ  ＴＣＣＧＴＣＡＡＧＴ  ＡＣＧＧＣＡＡＧＣＡ  ＣＡＡＡＡＣＣＴＡＴ
３７２１  ＣＡＧＡＡＧＡＡＡＡ  ＧＣＧＴＧＡＣＣＡＡ  ＣＡＣＡＣＡＧＧＧＧ  ＡＡＴＧＧＡＡＡＡＧ  ＡＧＣＡＧＡＧＧＡＧ  ＴＡＡＧＡＴＧＣＣＴ
３７８１  ＧＴＧＣＡＧＴＣＡＡ  ＡＡＣＧＧＣＴＧＣＴ  ＧＡＡＧＡＡＴＧＧＣ  ＣＣＡＴＣＴＧＧＡＡ  ＧＴＡＡＡＡＡＡＴＴ  ＣＴＧＧＡＡＣＡＡＴ
３８４１  ＧＴＧＣＴＧＣＣＣＣ  ＡＣＴＡＴＣＴＧＧＡ  ＡＣＴＧＡＡＡＴＡＡ  ＧＡＧＣＴＣＣＴＣＧ  ＡＧＧＣＧＧＣＣＣＧ  ＣＴＣＧＡＧＴＣＴＡ
３９０１  ＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴ  ＣＧＡＡＧＧＴＡＡＧ  ＣＣＴＡＴＣＣＣＴＡ  ＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴ  ＣＧＧＴＣＴＣＧＡＴ  ＴＣＴＡＣＧＣＧＴＡ
３９６１  ＣＣＧＧＴＣＡＴＣＡ  ＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣ  ＣＡＴＴＧＡＧＴＴＴ  ＡＡＡＣＣＣＧＣＴＧ  ＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧ  ＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴ
４０２１  ＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡ  ＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴ  ＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴ  ＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣ  ＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣ  ＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧ
４０８１  ＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣ  ＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣ  ＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧ  ＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣ  ＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴ  ＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴ
４１４１  ＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴ  ＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴ  ＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣ  ＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡ  ＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴ  ＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡ
４２０１  ＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡ  ＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴ  ＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴ  ＣＴＡＴＧＧＣＴＴＣ  ＴＧＡＧＧＣＧＧＡＡ  ＡＧＡＡＣＣＡＧＡＴ
４２６１  ＣＣＴＣＴＣＴＴＡＡ  ＧＧＴＡＧＣＡＴＣＧ  ＡＧＡＴＴＴＡＡＡＴ  ＴＡＧＧＧＡＴＡＡＣ  ＡＧＧＧＴＡＡＴＧＧ  ＣＧＣＧＧＧＣＣＧＣ
４３２１  ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴ  ＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧ  ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣ  ＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧ  ＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧ
４３８１  ＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣ  ＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣ  ＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧ  ＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧ  ＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡ  ＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣ
４４４１  ＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ（配列番号８）の配列を含むまたはこれからなる、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記ポリヌクレオチドが、ウッドチャック翻訳後制御エレメント（ＷＰＲＥ）をコードする配列をさらに含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ＷＰＲＥをコードする前記配列が、以下：
１  ａｔｃａａｃｃｔｃｔ  ｇｇａｔｔａｃａａａ  ａｔｔｔｇｔｇａａａ  ｇａｔｔｇａｃｔｇｇ  ｔａｔｔｃｔｔａａｃ  ｔａｔｇｔｔｇｃｔｃ
６１  ｃｔｔｔｔａｃｇｃｔ  ａｔｇｔｇｇａｔａｃ  ｇｃｔｇｃｔｔｔａａ  ｔｇｃｃｔｔｔｇｔａ  ｔｃａｔｇｃｔａｔｔ  ｇｃｔｔｃｃｃｇｔａ
１２１  ｔｇｇｃｔｔｔｃａｔ  ｔｔｔｃｔｃｃｔｃｃ  ｔｔｇｔａｔａａａｔ  ｃｃｔｇｇｔｔｇｃｔ  ｇｔｃｔｃｔｔｔａｔ  ｇａｇｇａｇｔｔｇｔ
１８１  ｇｇｃｃｃｇｔｔｇｔ  ｃａｇｇｃａａｃｇｔ  ｇｇｃｇｔｇｇｔｇｔ  ｇｃａｃｔｇｔｇｔｔ  ｔｇｃｔｇａｃｇｃａ  ａｃｃｃｃｃａｃｔｇ
２４１  ｇｔｔｇｇｇｇｃａｔ  ｔｇｃｃａｃｃａｃｃ  ｔｇｔｃａｇｃｔｃｃ  ｔｔｔｃｃｇｇｇａｃ  ｔｔｔｃｇｃｔｔｔｃ  ｃｃｃｃｔｃｃｃｔａ
３０１  ｔｔｇｃｃａｃｇｇｃ  ｇｇａａｃｔｃａｔｃ  ｇｃｃｇｃｃｔｇｃｃ  ｔｔｇｃｃｃｇｃｔｇ  ｃｔｇｇａｃａｇｇｇ  ｇｃｔｃｇｇｃｔｇｔ
３６１  ｔｇｇｇｃａｃｔｇａ  ｃａａｔｔｃｃｇｔｇ  ｇｔｇｔｔｇｔｃｇｇ  ｇｇａａａｔｃａｔｃ  ｇｔｃｃｔｔｔｃｃｔ  ｔｇｇｃｔｇｃｔｃｇ
４２１  ｃｃｔｇｔｇｔｔｇｃ  ｃａｃｃｔｇｇａｔｔ  ｃｔｇｃｇｃｇｇｇａ  ｃｇｔｃｃｔｔｃｔｇ  ｃｔａｃｇｔｃｃｃｔ  ｔｃｇｇｃｃｃｔｃａ
４８１  ａｔｃｃａｇｃｇｇａ  ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｃ  ｃｇｃｇｇｃｃｔｇｃ  ｔｇｃｃｇｇｃｔｃｔ  ｇｃｇｇｃｃｔｃｔｔ  ｃｃｇｃｇｔｃｔｔｃ
５４１  ｇｃｃｔｔｃｇｃｃｃ  ｔｃａｇａｃｇａｇｔ  ｃｇｇａｔｃｔｃｃｃ  ｔｔｔｇｇｇｃｃｇｃ  ｃｔｃｃｃｃｇｃ（配列番号９）のヌクレオチド配列を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ｒＡＡＶ８粒子の各々が、ＡＡＶ血清型８（ＡＡＶ８）Ｒｅｐタンパク質から単離されたまたはこれに由来するウイルスＲｅｐタンパク質を含む、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ｒＡＡＶ８粒子の各々が、ＡＡＶ血清型８（ＡＡＶ８）Ｃａｐタンパク質から単離されたまたはこれに由来するウイルスＣａｐタンパク質を含む、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物を含む、デバイス。
【請求項３１】
前記デバイスが、マイクロ送達デバイスを含む、請求項３０に記載のデバイス。
【請求項３２】
前記マイクロ送達デバイスが、マイクロニードルを含む、請求項３１に記載のデバイス。
【請求項３３】
前記マイクロニードルが、網膜下送達に好適である、請求項３２に記載のデバイス。
【請求項３４】
前記デバイスが、少なくとも５０μＬの容量を含む、請求項３３に記載のデバイス。
【請求項３５】
前記マイクロ送達デバイスが、マイクロカテーテルを含む、請求項３２に記載のデバイス。
【請求項３６】
前記デバイスが、上脈絡膜送達に好適である、請求項３５に記載のデバイス。
【請求項３７】
前記デバイスが、少なくとも５０μＬの容量を含む、請求項３６に記載のデバイス。
【請求項３８】
網膜色素変性症の処置を必要とする対象において網膜色素変性症を処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項３９】
網膜色素変性症の処置を必要とする対象において網膜色素変性症を処置する方法であって、前記対象に、治療有効量の組成物を投与することを含み、前記投与が、請求項３０〜３８のいずれか１項に記載のデバイスを使用して行われる、前記方法。
【請求項４０】
前記治療有効量の前記組成物を投与することが、前記対象における網膜色素変性症の兆候を改善する、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記網膜色素変性症の兆候が、エリプソイドゾーン（ＥＺ）の、健常ＥＺと比較した場合の、変性を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＥＺの前記変性が、健常ＥＺと比較した場合に、光受容体細胞密度における減少、光受容体繊毛の数における減少、またはそれらの組み合わせを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＥＺの前記変性が、健常ＥＺと比較した場合に、前記ＥＺの幅及び／または面積の減少を含む、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＥＺの前記変性が、健常ＥＺと比較した場合に、前記ＥＺの長さの減少を含み、前記長さが、眼の前後（Ａ／Ｐ）軸、背腹（Ｄ／Ｖ）軸もしくは内外（Ｍ／Ｌ）軸のうちの１つもしくは複数に沿った距離を含む；及び／または前記ＥＺの前記変性が、健常ＥＺと比較した場合に、前記ＥＺの面積の減少を含み、前記面積が、眼の前後（Ａ／Ｐ）軸、背腹（Ｄ／Ｖ）軸もしくは内外（Ｍ／Ｌ）軸のうちの１つもしくは複数に沿った前記距離の２乗のπ倍を含む、請求項４１〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記健常ＥＺが、網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない年齢及び性別が一致する個体のＥＺを含む、請求項４１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない前記年齢及び性別が一致する個体が、網膜色素変性症を発症するリスク因子を有さない、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記健常ＥＺが、所定の対照または閾値を含む、請求項４１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記所定の対照または閾値が、複数の個体からの複数の健常ＥＺの測定から決定された代表値または平均値を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記複数の個体が、前記対象と年齢及び性別が一致する、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記健常ＥＺが、前記対象の非罹患眼を含む、請求項４１〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記非罹患眼が、網膜色素変性症の検出可能な兆候を有さない、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記非罹患眼が、前記ＥＺの検出可能な変性を有さない、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記網膜色素変性症の兆候が、エリプソイドゾーン（ＥＺ）の、ベースラインＥＺと比較した場合の、変性を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項５４】
前記ベースラインＥＺが、前記組成物の投与前の前記対象のＥＺの前記変性の測定を含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記対象のＥＺの前記変性の前記測定が、前記ＥＺの一部における生存もしくは生存可能光受容体の数、前記ＥＺの一部における繊毛の数、前記ＥＺの一部の幅、前記ＥＺの一部における１つもしくは複数の軸に沿った前記ＥＺの長さ、前記ＥＺの一部の面積、またはそれらの任意の組み合わせの決定を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記治療有効量の前記組成物を投与することが、網膜色素変性症の兆候または症状を改善し、前記網膜色素変性症の兆候が、エリプソイドゾーン（ＥＺ）の、健常ＥＺまたはベースラインＥＺと比較した場合の、前記変性を含み、前記改善が、前記ＥＺの幅を、端点を含んで、１μｍ及び２０μｍ間増加させること及び／または前記ＥＺの幅を、端点を含んで、０．８μｍ及び３２０μｍ間増加させることを含む、請求項４３〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記改善が、前記ＥＺの幅を、端点を含んで、３μｍ及び１５μｍ間増加させること及び／または前記ＥＺの幅を、端点を含んで、７μｍ及び１８０μｍ間増加させることを含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記改善が、ベースラインＥＺと比較した場合に、前記ＥＺの幅及び／または面積を、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージ増加させることを含む、請求項４３〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５９】
前記改善が、眼の１つまたは複数のセクターに均一にわたって前記ＥＺの幅を増加させることを含む、請求項４３〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６０】
前記改善が、眼の１つまたは複数のセクターに非均一にわたって前記ＥＺの幅を増加させることを含み、前記増加した幅が、黄斑または１つもしくは複数の中心セクター内で最大であり、前記増加した幅が、１つまたは複数の周辺セクターで最小である、請求項４３〜５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６１】
前記改善が、前記Ａ／Ｐ軸に沿って前記ＥＺの長さを増加させることを含む、請求項４３〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記改善が、前記Ｄ／Ｖ軸に沿って前記ＥＺの長さを増加させることを含む、請求項４３〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記改善が、前記Ｍ／Ｌ軸に沿って前記ＥＺの長さを増加させることを含む、請求項４３〜６２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記改善が、ベースラインＥＺと比較した場合に、前記ＥＺの長さ及び／または面積を、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージ増加させることを含む、請求項５９〜６３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記治療有効量の前記組成物を投与することが、ベースラインＥＺと比較した場合に、前記ＥＺのさらなる変性の速度を減少させるまたはさらなる変性を阻害する、請求項４１〜６４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記組成物の投与後、前記ＥＺの一部における生存もしくは生存可能光受容体の数、前記ＥＺの一部における繊毛の数、前記ＥＺの一部の幅、前記ＥＺの一部における１つもしくは複数の軸に沿った前記ＥＺの長さ前記ＥＺの一部における複数の軸、前記ＥＺの一部の面積、またはそれらの任意の組み合わせが、ベースラインＥＺと比較した場合に、前記ＥＺの一部における生存もしくは生存可能光受容体の数、前記ＥＺの一部における繊毛の数、前記ＥＺの一部の幅、前記ＥＺの一部における１つもしくは複数の軸に沿った前記ＥＺの長さまたはそれらの任意の組み合わせに等しい、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記対象の前記ＥＺの一部の幅もしくは長さ、または健常ＥＺの一部の幅もしくは長さが、光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）を使用して測定される、請求項４３〜６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
前記網膜色素変性症の兆候が、健常レベルの網膜感度と比較して、網膜感度のレベルの減少を含む、請求項４０及び４５〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記網膜感度のレベルが、微小視野計測を使用して測定される、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記網膜感度のレベルの前記測定が、以下：
（ａ）前記対象の眼の眼底の画像を生成すること；
（ｂ）（ａ）の前記画像上に、点のグリッドを投影すること；
（ｃ）前記眼を、（ｂ）の前記グリッド上の各点にて光で刺激すること、ここで各後続の刺激は、前の刺激よりも強度が大きい；
（ｄ）ステップ（ｃ）を少なくとも１回繰り返すこと；
（ｅ）最小閾値を（ｂ）の前記グリッド上の各点に関して決定すること、ここで前記最小閾値は、前記対象が最初に前記光を知覚できる（ｃ）からの光の強度である；
（ｆ）（ｅ）からの最小閾値を、ａｓｂからデシベル（ｄＢ）に変換することを含み、光の最大強度が０ｄＢに等しく、光の最小強度がｄＢスケールの最大ｄＢ値に等しい、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
（ｃ）の前記刺激ステップが、およそ４〜１０００アポスチルブ（ａｓｂ）の範囲を有する光刺激を含む、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記グリッドが、少なくとも３７点を含む、請求項７０または７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記グリッドが、６８点を含むまたはこれからなる、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記点が、眼の１０°をカバーする直径を有する円上に等間隔に配置されている、請求項７０〜７３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７５】
前記円が、黄斑を中心とする、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記網膜感度のレベルを測定することが、（ｂ）の前記グリッド内の各点での前記最小閾値を代表値化して、平均網膜感度を生成することをさらに含む、請求項６９〜７５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７７】
前記健常レベルの網膜感度が、網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない年齢及び性別が一致する個体を使用して決定される、請求項６９〜７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない前記年齢及び性別が一致する個体が、網膜色素変性症を発症するリスク因子を有さない、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記健常レベルの網膜感度が、所定の対照または閾値を使用して決定される、請求項６９〜７６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
前記所定の対照または閾値が、複数の個体からの複数の健常レベルの網膜感度の測定から決定された代表値または平均値を含む、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記複数の個体が、前記対象と年齢及び性別が一致する、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記健常レベルの網膜感度が、前記対象の非罹患眼から測定される、請求項６９〜８１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
前記非罹患眼が、網膜色素変性症の検出可能な兆候を有さない、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記非罹患眼が、網膜感度のレベルにおいて検出可能な減少を有さない、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記網膜色素変性症の兆候が、ベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、網膜感度のレベルの減少を含む、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記ベースラインレベルの網膜感度が、前記組成物の投与前の前記対象の網膜感度のレベルの測定を含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
前記治療有効量の前記組成物を投与することが、健常レベルの網膜感度と比較した場合に、前記対象の網膜感度を回復させる、請求項７９〜８６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８８】
網膜感度を回復させることが、健常レベルの網膜感度と比較した場合に、網膜の一部における平均網膜感度の増加を含む、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記対象の網膜の一部における平均網膜感度が、前記健常レベルの網膜感度における網膜の前記一部における平均網膜感度に等しい、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記治療有効量の前記組成物を投与することが、健常またはベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、前記対象の網膜感度を改善する、請求項８５〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
網膜感度を改善することが、健常またはベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、網膜の一部における平均網膜感度の増加を含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
網膜感度を改善することが、端点を含んで、１及び３０デシベル（ｄＢ）間の平均網膜感度のレベルにおける増加を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
網膜感度を改善することが、端点を含んで、１及び１５ｄＢ間の平均網膜感度のレベルにおける増加を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
網膜感度を改善することが、端点を含んで、２及び１０ｄＢ間の平均網膜感度のレベルにおける増加を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
網膜感度を改善することが、健常またはベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、平均網膜感度のレベルにおいて、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージの平均網膜感度のレベルにおける増加を含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９６】
平均網膜感度のレベルにおける前記増加が、マイクロペリメテリーグリッド内の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５またはその間の任意の数の点で生じる、請求項９１に記載の方法。
【請求項９７】
平均網膜感度のレベルにおける前記増加が、マイクロペリメテリーグリッド内の少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージで生じる、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記治療有効量の前記組成物を投与することが、ベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、前記対象の網膜感度のさらなる減少を阻害するまたは喪失を予防する、請求項８５〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
前記組成物の投与後の前記対象における網膜感度レベルが、前記ベースラインレベルの網膜感度に等しい、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
対象における網膜色素変性症を予防する方法であって、前記対象に予防的有効量の請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含み、前記対象が、網膜色素変性症を発症するリスクを有する、前記方法。
【請求項１０１】
前記対象が、網膜色素変性症を発症するリスク因子を有する、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記因子が、遺伝子マーカー、網膜色素変性症の家族歴、網膜色素変性症の症状またはそれらの組み合わせのうちの１つまたは複数を含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記網膜色素変性症の症状が、視力の減少または喪失を含む、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記視力が、夜間視覚、周辺視覚、色覚またはそれらの任意の組み合わせに関する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０５】
前記組成物が、網膜下経路によって投与される、請求項４０〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記組成物が、網膜下注射または注入によって投与される、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記組成物が、網膜下注射によって投与され、前記注射が、１００μＬまたは最大で１００μＬの容量を含む、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記網膜下注射が、２段階注射を含む、請求項１０６または１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記２段階注射が、以下：
（ａ）マイクロニードルを、前記対象の眼の光受容体細胞層及び網膜色素上皮（ＲＰＥ）層間に挿入すること；
（ｂ）溶液を、前記対象の前記眼の光受容体細胞層及び網膜色素上皮層間に、前記網膜を前記ＲＰＥから部分的に剥離させてブレブを形成するのに十分な量で注射すること；ならびに
（ｃ）前記組成物を、（ｂ）の前記ブレブ内に注射することを含む、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
前記溶液が、平衡塩類溶液を含む、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記組成物が、上脈絡膜経路によって投与される、請求項４０〜１０５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１２】
前記組成物が、上脈絡膜注射または注入によって投与される、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記組成物が、上脈絡膜注射によって投与され、前記注射が、端点を含んで、５０及び１０００μＬ間の容量を含む、請求項１１１または１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
前記注射が、端点を含んで、５０及び３００μＬ間の容量を含む、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
前記上脈絡膜注射が、以下：
（ａ）マイクロ送達デバイスの中空端及び前記対象の眼の上脈絡膜腔を接触させること、ここで前記中空端は開口部を含む；ならびに
（ｂ）前記組成物を、前記マイクロ送達デバイスの前記中空端を通して流して、前記組成物を前記上脈絡膜腔に導入することを含む、請求項１１１〜１１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記マイクロ送達デバイスの前記中空端が、強膜を貫通し、
前記マイクロ送達デバイスの前記中空端もしくはその延長部が、上脈絡膜腔の一部を横断する、及び／または
前記マイクロ送達デバイスの前記中空端が、脈絡膜を少なくとも１回横断する、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
網膜感度を改善することが、６８点グリッドの中心１６点内の少なくとも５点における少なくとも５ｄＢ、少なくとも６ｄＢ、少なくとも７ｄＢ、少なくとも８ｄＢ、少なくとも９ｄＢ、または少なくとも１０ｄＢの感度における増加を含む、請求項９０に記載の方法。
【請求項１１８】
網膜感度を改善することが、６８点グリッドの中心１６点内の少なくとも５点における少なくとも７ｄＢの感度における増加を含む、請求項１１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１９年４月５日に出願された米国仮特許出願第６２／８３０，１０６号及び２０１８年９月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／７３４，７４６号に対して優先権を主張し、これらの内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
配列表に関する記述
本出願に伴う配列表は、紙媒体の代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含有するテキストファイルの名称は、ＮＩＧＨ−０１６＿Ｎ０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは、約３２ＫＢであり、２０１９年９月１９日に作製され、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子提出されている。
【０００３】
本開示は、ヒト治療薬、生物学的医薬品、ヒトＤＮＡ配列のウイルス送達及びそれらの製造方法の分野に関する。
【背景技術】
【０００４】
網膜色素変性症は、世界中で４，０００人に１人が罹患していると推定される稀な遺伝性疾患である。網膜色素変性症は、網膜の進行性変性を伴い、夜間視覚の喪失、周辺視覚の喪失、色知覚の低減、視力の低減、中心視覚の喪失及び最終的な失明を含む、視覚症状をもたらす。現在、網膜色素変性症に対する治療法はない。ゆえに、網膜色素変性症の処置に対する当該技術分野における差し迫った必要性が存在する。本発明は、網膜色素変性症を処置するための組成物及び方法を提供する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示は、複数の組換えアデノ随伴ウイルス血清型８（ｒＡＡＶ８）粒子を含む組成物を提供し、複数のｒＡＡＶ８粒子の各ｒＡＡＶ８は、非複製であり、複数のｒＡＡＶ８粒子の各ｒＡＡＶ８は、５’から３’で、以下：（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）をコードする配列；（ｂ）Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーターをコードする配列；（ｃ）網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子ＯＲＦ１５アイソフォーム（ＲＰＧＲＯＲＦ１５）をコードする配列；（ｄ）ポリアデニル化（ポリＡ）シグナルをコードする配列；（ｅ）３’ＩＴＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含み、該組成物は、端点を含んで、５×１０９ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）及び２×１０１３ｖｇ／ｍＬ間を含む。
【０００６】
一部の実施形態では、組成物は、端点を含んで、１．０×１０１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ間を含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１０ゲノム粒子（ｇｐ）及び５×１０１２ｇ間を含む。一部の実施形態では、組成物は、端点を含んで、１．２５×１０１２ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ間を含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１２ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、２．５×１０１２ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１２ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０９ｇｐ、１×１０１０ｇｐ、５×１０１０ｇｐ、１×１０１１ｇｐ、２．５×１０１１ｇｐ  ５×１０１１ｇｐ、１．２５×１０１２ｇｐ、２．５×１０１２ｇｐ、５×１０１２ｇｐ、または１×１０１３を含む。
【０００７】
本開示の組成物の一部の実施形態では、組成物は、端点を含んで、０．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１２ｖｇ／ｍＬ間を含む。一部の実施形態では、組成物は、０．５×１０１１ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０９ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１０ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１０ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１１ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、２．５×１０１１ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１１ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１２ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１３ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、２×１０１３ｖｇ／ｍＬを含む。
【０００８】
本開示の組成物の一部の実施形態では、組成物は、端点を含んで、５×１０９ゲノム粒子（ｇｐ）及び５×１０１１ｇｐ間を含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０９ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１０ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１０ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１１ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、２．５×１０１１ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１１ｇｐを含む。
【０００９】
本開示の組成物の一部の実施形態では、組成物は、医薬的に許容可能な担体をさらに含む。一部の実施形態では、医薬的に許容可能な担体は、Ｔｒｉｓ、ＭｇＣｌ２、及びＮａＣｌを含む。一部の実施形態では、医薬的に許容可能な担体は、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、及び２００ｍＭ  ＮａＣｌをｐＨ８．０にて含む。一部の実施形態では、医薬的に許容可能な担体は、ポロクサマー１８８を０．００１％にてさらに含む。
【００１０】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＧＲＫ１プロモーターをコードする配列は、以下：
１  ｇｇｇｃｃｃｃａｇａ  ａｇｃｃｔｇｇｔｇｇ  ｔｔｇｔｔｔｇｔｃｃ  ｔｔｃｔｃａｇｇｇｇ  ａａａａｇｔｇａｇｇ  ｃｇｇｃｃｃｃｔｔｇ
６１  ｇａｇｇａａｇｇｇｇ  ｃｃｇｇｇｃａｇａａ  ｔｇａｔｃｔａａｔｃ  ｇｇａｔｔｃｃａａｇ  ｃａｇｃｔｃａｇｇｇ  ｇａｔｔｇｔｃｔｔｔ
１２１  ｔｔｃｔａｇｃａｃｃ  ｔｔｃｔｔｇｃｃａｃ  ｔｃｃｔａａｇｃｇｔ  ｃｃｔｃｃｇｔｇａｃ  ｃｃｃｇｇｃｔｇｇｇ  ａｔｔｔａｇｃｃｔｇ
１８１  ｇｔｇｃｔｇｔｇｔｃ  ａｇｃｃｃｃｇｇｇ（配列番号１）の配列を含むまたはこれからなる。
【００１１】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列は、以下：
１  ＭＲＥＰＥＥＬＭＰＤ  ＳＧＡＶＦＴＦＧＫＳ  ＫＦＡＥＮＮＰＧＫＦ  ＷＦＫＮＤＶＰＶＨＬ  ＳＣＧＤＥＨＳＡＶＶ  ＴＧＮＮＫＬＹＭＦＧ
６１  ＳＮＮＷＧＱＬＧＬＧ  ＳＫＳＡＩＳＫＰＴＣ  ＶＫＡＬＫＰＥＫＶＫ  ＬＡＡＣＧＲＮＨＴＬ  ＶＳＴＥＧＧＮＶＹＡ  ＴＧＧＮＮＥＧＱＬＧ
１２１  ＬＧＤＴＥＥＲＮＴＦ  ＨＶＩＳＦＦＴＳＥＨ  ＫＩＫＱＬＳＡＧＳＮ  ＴＳＡＡＬＴＥＤＧＲ  ＬＦＭＷＧＤＮＳＥＧ  ＱＩＧＬＫＮＶＳＮＶ
１８１  ＣＶＰＱＱＶＴＩＧＫ  ＰＶＳＷＩＳＣＧＹＹ  ＨＳＡＦＶＴＴＤＧＥ  ＬＹＶＦＧＥＰＥＮＧ  ＫＬＧＬＰＮＱＬＬＧ  ＮＨＲＴＰＱＬＶＳＥ
２４１  ＩＰＥＫＶＩＱＶＡＣ  ＧＧＥＨＴＶＶＬＴＥ  ＮＡＶＹＴＦＧＬＧＱ  ＦＧＱＬＧＬＧＴＦＬ  ＦＥＴＳＥＰＫＶＩＥ  ＮＩＲＤＱＴＩＳＹＩ
３０１  ＳＣＧＥＮＨＴＡＬＩ  ＴＤＩＧＬＭＹＴＦＧ  ＤＧＲＨＧＫＬＧＬＧ  ＬＥＮＦＴＮＨＦＩＰ  ＴＬＣＳＮＦＬＲＦＩ  ＶＫＬＶＡＣＧＧＣＨ
３６１  ＭＶＶＦＡＡＰＨＲＧ  ＶＡＫＥＩＥＦＤＥＩ  ＮＤＴＣＬＳＶＡＴＦ  ＬＰＹＳＳＬＴＳＧＮ  ＶＬＱＲＴＬＳＡＲＭ  ＲＲＲＥＲＥＲＳＰＤ
４２１  ＳＦＳＭＲＲＴＬＰＰ  ＩＥＧＴＬＧＬＳＡＣ  ＦＬＰＮＳＶＦＰＲＣ  ＳＥＲＮＬＱＥＳＶＬ  ＳＥＱＤＬＭＱＰＥＥ  ＰＤＹＬＬＤＥＭＴＫ
４８１  ＥＡＥＩＤＮＳＳＴＶ  ＥＳＬＧＥＴＴＤＩＬ  ＮＭＴＨＩＭＳＬＮＳ  ＮＥＫＳＬＫＬＳＰＶ  ＱＫＱＫＫＱＱＴＩＧ  ＥＬＴＱＤＴＡＬＴＥ
５４１  ＮＤＤＳＤＥＹＥＥＭ  ＳＥＭＫＥＧＫＡＣＫ  ＱＨＶＳＱＧＩＦＭＴ  ＱＰＡＴＴＩＥＡＦＳ  ＤＥＥＶＥＩＰＥＥＫ  ＥＧＡＥＤＳＫＧＮＧ
６０１  ＩＥＥＱＥＶＥＡＮＥ  ＥＮＶＫＶＨＧＧＲＫ  ＥＫＴＥＩＬＳＤＤＬ  ＴＤＫＡＥＶＳＥＧＫ  ＡＫＳＶＧＥＡＥＤＧ  ＰＥＧＲＧＤＧＴＣＥ
６６１  ＥＧＳＳＧＡＥＨＷＱ  ＤＥＥＲＥＫＧＥＫＤ  ＫＧＲＧＥＭＥＲＰＧ  ＥＧＥＫＥＬＡＥＫＥ  ＥＷＫＫＲＤＧＥＥＱ  ＥＱＫＥＲＥＱＧＨＱ
７２１  ＫＥＲＮＱＥＭＥＥＧ  ＧＥＥＥＨＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＤＲＥＥＥＥＥ  ＫＥＧＥＧＫＥＥＧＥ  ＧＥＥＶＥＧＥＲＥＫ  ＥＥＧＥＲＫＫＥＥＲ
７８１  ＡＧＫＥＥＫＧＥＥＥ  ＧＤＱＧＥＧＥＥＥＥ  ＴＥＧＲＧＥＥＫＥＥ  ＧＧＥＶＥＧＧＥＶＥ  ＥＧＫＧＥＲＥＥＥＥ  ＥＥＧＥＧＥＥＥＥＧ
８４１  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＥ  ＥＥＥＧＥＧＫＧＥＥ  ＥＧＥＥＧＥＧＥＥＥ  ＧＥＥＧＥＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＥＧＥＧＥＥＥ  ＧＥＧＥＧＥＥＥＥＧ
９０１  ＥＧＥＧＥＥＥＧＥＧ  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＫ  ＧＥＥＥＧＥＥＧＥＧ  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＥ  ＧＥＤＧＥＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＥＷＥＧＥＥＥ
９６１  ＥＧＥＧＥＧＥＥＥＧ  ＥＧＥＧＥＥＧＥＧＥ  ＧＥＥＥＥＧＥＧＥＧ  ＥＥＥＥＧＥＥＥＧＥ  ＥＥＧＥＧＥＥＥＧＥ  ＧＥＧＥＥＥＥＥＧＥ
１０２１  ＶＥＧＥＶＥＧＥＥＧ  ＥＧＥＧＥＥＥＥＧＥ  ＥＥＧＥＥＲＥＫＥＧ  ＥＧＥＥＮＲＲＮＲＥ  ＥＥＥＥＥＥＧＫＹＱ  ＥＴＧＥＥＥＮＥＲＱ
１０８１  ＤＧＥＥＹＫＫＶＳＫ  ＩＫＧＳＶＫＹＧＫＨ  ＫＴＹＱＫＫＳＶＴＮ  ＴＱＧＮＧＫＥＱＲＳ  ＫＭＰＶＱＳＫＲＬＬ  ＫＮＧＰＳＧＳＫＫＦ
１１４１  ＷＮＮＶＬＰＨＹＬＥ  ＬＫ（配列番号２）のＲＰＧＲＯＲＦ１５アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００１２】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５アミノ酸配列をコードする配列は、コドン最適化配列を含む。一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列は、以下：
１  ａｔｇａｇａｇａｇｃ  ｃａｇａｇｇａｇｃｔ  ｇａｔｇｃｃａｇａｃ  ａｇｔｇｇａｇｃａｇ  ｔｇｔｔｔａｃａｔｔ  ｃｇｇａａａａｔｃｔ
６１  ａａｇｔｔｃｇｃｔｇ  ａａａａｔａａｃｃｃ  ａｇｇａａａｇｔｔｃ  ｔｇｇｔｔｔａａａａ  ａｃｇａｃｇｔｇｃｃ  ｃｇｔｃｃａｃｃｔｇ
１２１  ｔｃｔｔｇｔｇｇｃｇ  ａｔｇａｇｃａｔａｇ  ｔｇｃｃｇｔｇｇｔｃ  ａｃｔｇｇｇａａｃａ  ａｔａａｇｃｔｇｔａ  ｃａｔｇｔｔｃｇｇｇ
１８１  ｔｃｃａａｃａａｃｔ  ｇｇｇｇａｃａｇｃｔ  ｇｇｇｇｃｔｇｇｇａ  ｔｃｃａａａｔｃｔｇ  ｃｔａｔｃｔｃｔａａ  ｇｃｃａａｃｃｔｇｃ
２４１  ｇｔｇａａｇｇｃａｃ  ｔｇａａａｃｃｃｇａ  ｇａａｇｇｔｃａａａ  ｃｔｇｇｃｃｇｃｔｔ  ｇｔｇｇｃａｇａａａ  ｃｃａｃａｃｔｃｔｇ
３０１  ｇｔｇａｇｃａｃｃｇ  ａｇｇｇｃｇｇｇａａ  ｔｇｔｃｔａｔｇｃｃ  ａｃｃｇｇａｇｇｃａ  ａｃａａｔｇａｇｇｇ  ａｃａｇｃｔｇｇｇａ
３６１  ｃｔｇｇｇｇｇａｃａ  ｃｔｇａｇｇａａａｇ  ｇａａｔａｃｃｔｔｔ  ｃａｃｇｔｇａｔｃｔ  ｃｃｔｔｃｔｔｔａｃ  ａｔｃｔｇａｇｃａｔ
４２１  ａａｇａｔｃａａｇｃ  ａｇｃｔｇａｇｃｇｃ  ｔｇｇｃｔｃｃａａｃ  ａｃａｔｃｔｇｃａｇ  ｃｃｃｔｇａｃｔｇａ  ｇｇａｃｇｇｇｃｇｃ
４８１  ｃｔｇｔｔｃａｔｇｔ  ｇｇｇｇａｇａｔａａ  ｔｔｃａｇａｇｇｇｃ  ｃａｇａｔｔｇｇｇｃ  ｔｇａａａａａｃｇｔ  ｇａｇｃａａｔｇｔｇ
５４１  ｔｇｃｇｔｃｃｃｔｃ  ａｇｃａｇｇｔｇａｃ  ｃａｔｃｇｇａａａｇ  ｃｃａｇｔｃａｇｔｔ  ｇｇａｔｔｔｃａｔｇ  ｔｇｇｃｔａｃｔａｔ
６０１  ｃａｔａｇｃｇｃｃｔ  ｔｃｇｔｇａｃｃａｃ  ａｇａｔｇｇｃｇａｇ  ｃｔｇｔａｃｇｔｃｔ  ｔｔｇｇｇｇａｇｃｃ  ｃｇａａａａｃｇｇａ
６６１  ａａａｃｔｇｇｇｃｃ  ｔｇｃｃｔａａｃｃａ  ｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃ  ａａｔｃａｃｃｇｇａ  ｃａｃｃｃｃａｇｃｔ  ｇｇｔｇｔｃｃｇａｇ
７２１  ａｔｃｃｃｔｇａａａ  ａａｇｔｇａｔｃｃａ  ｇｇｔｃｇｃｃｔｇｃ  ｇｇｇｇｇａｇａｇｃ  ａｔａｃａｇｔｇｇｔ  ｃｃｔｇａｃｔｇａｇ
７８１  ａａｔｇｃｔｇｔｇｔ  ａｔａｃｃｔｔｃｇｇ  ａｃｔｇｇｇｃｃａｇ  ｔｔｔｇｇｃｃａｇｃ  ｔｇｇｇｇｃｔｇｇｇ  ａａｃｃｔｔｃｃｔｇ
８４１  ｔｔｔｇａｇａｃａｔ  ｃｃｇａａｃｃａａａ  ａｇｔｇａｔｃｇａｇ  ａａｃａｔｔｃｇｃｇ  ａｃｃａｇａｃｔａｔ  ｃａｇｃｔａｃａｔｔ
９０１  ｔｃｃｔｇｃｇｇａｇ  ａｇａａｔｃａｃａｃ  ｃｇｃａｃｔｇａｔｃ  ａｃａｇａｃａｔｔｇ  ｇｃｃｔｇａｔｇｔａ  ｔａｃｃｔｔｔｇｇｃ
９６１  ｇａｔｇｇａｃｇａｃ  ａｃｇｇｇａａｇｃｔ  ｇｇｇａｃｔｇｇｇａ  ｃｔｇｇａｇａａｃｔ  ｔｃａｃｔａａｔｃａ  ｔｔｔｔａｔｃｃｃｃ
１０２１  ａｃｃｃｔｇｔｇｔｔ  ｃｔａａｃｔｔｃｃｔ  ｇｃｇｇｔｔｃａｔｃ  ｇｔｇａａａｃｔｇｇ  ｔｃｇｃｔｔｇｃｇｇ  ｃｇｇｇｔｇｔｃａｃ
１０８１  ａｔｇｇｔｇｇｔｃｔ  ｔｃｇｃｔｇｃａｃｃ  ｔｃａｔａｇｇｇｇｃ  ｇｔｇｇｃｔａａｇｇ  ａｇａｔｃｇａａｔｔ  ｔｇａｃｇａｇａｔｔ
１１４１  ａａｃｇａｔａｃａｔ  ｇｃｃｔｇａｇｃｇｔ  ｇｇｃａａｃｔｔｔｃ  ｃｔｇｃｃａｔａｃａ  ｇｃｔｃｃｃｔｇａｃ  ｔｔｃｔｇｇｃａａｔ
１２０１  ｇｔｇｃｔｇｃａｇａ  ｇａａｃｃｃｔｇａｇ  ｔｇｃａａｇｇａｔｇ  ｃｇｇａｇａａｇｇｇ  ａｇａｇｇｇａａｃｇ  ｃｔｃｔｃｃｔｇａｃ
１２６１  ａｇｔｔｔｃｔｃａａ  ｔｇｃｇａｃｇａａｃ  ｃｃｔｇｃｃａｃｃｔ  ａｔｃｇａｇｇｇａａ  ｃａｃｔｇｇｇａｃｔ  ｇａｇｔｇｃｃｔｇｃ
１３２１  ｔｔｃｃｔｇｃｃｔａ  ａｃｔｃａｇｔｇｔｔ  ｔｃｃａｃｇａｔｇｔ  ａｇｃｇａｇｃｇｇａ  ａｔｃｔｇｃａｇｇａ  ｇｔｃｔｇｔｃｃｔｇ
１３８１  ａｇｔｇａｇｃａｇｇ  ａｔｃｔｇａｔｇｃａ  ｇｃｃａｇａｇｇａａ  ｃｃｃｇａｃｔａｃｃ  ｔｇｃｔｇｇａｔｇａ  ｇａｔｇａｃｃａａｇ
１４４１  ｇａｇｇｃｃｇａａａ  ｔｃｇａｃａａｃｔｃ  ｔａｇｔａｃａｇｔｇ  ｇａｇｔｃｃｃｔｇｇ  ｇｃｇａｇａｃｔａｃ  ｃｇａｔａｔｃｃｔｇ
１５０１  ａａｔａｔｇａｃａｃ  ａｃａｔｔａｔｇｔｃ  ａｃｔｇａａｃａｇｃ  ａａｔｇａｇａａｇａ  ｇｔｃｔｇａａａｃｔ  ｇｔｃａｃｃａｇｔｇ
１５６１  ｃａｇａａｇｃａｇａ  ａｇａａａｃａｇｃａ  ｇａｃｔａｔｔｇｇｃ  ｇａｇｃｔｇａｃｔｃ  ａｇｇａｃａｃｃｇｃ  ｃｃｔｇａｃａｇａｇ
１６２１  ａａｃｇａｃｇａｔａ  ｇｃｇａｔｇａｇｔａ  ｔｇａｇｇａａａｔｇ  ｔｃｃｇａｇａｔｇａ  ａｇｇａａｇｇｃａａ  ａｇｃｔｔｇｔａａｇ
１６８１  ｃａｇｃａｔｇｔｃａ  ｇｔｃａｇｇｇｇａｔ  ｃｔｔｃａｔｇａｃａ  ｃａｇｃｃａｇｃｃａ  ｃａａｃｔａｔｔｇａ  ｇｇｃｔｔｔｔｔｃａ
１７４１  ｇａｃｇａｇｇａａｇ  ｔｇｇａｇａｔｃｃｃ  ｃｇａｇｇａａａａａ  ｇａｇｇｇｃｇｃａｇ  ａａｇａｔｔｃｃａａ  ｇｇｇｇａａｔｇｇａ
１８０１  ａｔｔｇａｇｇａａｃ  ａｇｇａｇｇｔｇｇａ  ａｇｃｃａａｃｇａｇ  ｇａａａａｔｇｔｇａ  ａａｇｔｃｃａｃｇｇ  ａｇｇｃａｇｇａａｇ
１８６１  ｇａｇａａａａｃａｇ  ａａａｔｃｃｔｇｔｃ  ｔｇａｃｇａｔｃｔｇ  ａｃｔｇａｃａａｇｇ  ｃｃｇａｇｇｔｇｔｃ  ｃｇａａｇｇｃａａｇ
１９２１  ｇｃａａａａｔｃｔｇ  ｔｃｇｇａｇａｇｇｃ  ａｇａａｇａｃｇｇａ  ｃｃａｇａｇｇｇａｃ  ｇａｇｇｇｇａｔｇｇ  ａａｃｃｔｇｃｇａｇ
１９８１  ｇａａｇｇｃｔｃａａ  ｇｃｇｇｇｇｃｔｇａ  ｇｃａｔｔｇｇｃａｇ  ｇａｃｇａｇｇａａｃ  ｇａｇａｇａａｇｇｇ  ｃｇａａａａｇｇａｔ
２０４１  ａａａｇｇｃｃｇｃｇ  ｇｇｇａｇａｔｇｇａ  ａｃｇａｃｃｔｇｇａ  ｇａｇｇｇｃｇａａａ  ａａｇａｇｃｔｇｇｃ  ａｇａｇａａｇｇａｇ
２１０１  ｇａａｔｇｇａａｇａ  ａａａｇｇｇａｃｇｇ  ｃｇａｇｇａａｃａｇ  ｇａｇｃａｇａａａｇ  ａａａｇｇｇａｇｃａ  ｇｇｇｃｃａｃｃａｇ
２１６１  ａａｇｇａｇｃｇｃａ  ａｃｃａｇｇａｇａｔ  ｇｇａａｇａｇｇｇｃ  ｇｇｃｇａｇｇａａｇ  ａｇｃａｔｇｇｃｇａ  ｇｇｇａｇａａｇａｇ
２２２１  ｇａａｇａｇｇｇｃｇ  ａｔａｇａｇａａｇａ  ｇｇａａｇａｇｇａａ  ａａａｇａａｇｇｃｇ  ａａｇｇｇａａｇｇａ  ｇｇａａｇｇａｇａｇ
２２８１  ｇｇｃｇａｇｇａａｇ  ｔｇｇａａｇｇｃｇａ  ｇａｇｇｇａａａａｇ  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａａｃｇｇａａｇａａ  ａｇａｇｇａａａｇａ
２３４１  ｇｃｃｇｇｃａａａｇ  ａｇｇａａａａｇｇｇ  ｃｇａｇｇａａｇａｇ  ｇｇｃｇａｔｃａｇｇ  ｇｃｇａａｇｇｃｇａ  ｇｇａｇｇａａｇａｇ
２４０１  ａｃｃｇａｇｇｇｃｃ  ｇｃｇｇｇｇａａｇａ  ｇａａａｇａｇｇａｇ  ｇｇａｇｇａｇａｇｇ  ｔｇｇａｇｇｇｃｇｇ  ａｇａｇｇｔｃｇａａ
２４６１  ｇａｇｇｇａａａｇｇ  ｇｃｇａｇｃｇｃｇａ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇａａｇａｇｇｇｃｇ  ａｇｇｇｃｇａｇｇａ  ａｇａａｇａｇｇｇｃ
２５２１  ｇａｇｇｇｇｇａａｇ  ａａｇａｇｇａｇｇｇ  ａｇａｇｇｇｃｇａａ  ｇａｇｇａａｇａｇｇ  ｇｇｇａｇｇｇａａａ  ｇｇｇｃｇａａｇａｇ
２５８１  ｇａａｇｇａｇａｇｇ  ａａｇｇｇｇａｇｇｇ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇｇｇｇａｇｇａｇｇ  ｇｃｇａｇｇｇｇｇａ  ａｇｇｃｇａｇｇａｇ
２６４１  ｇａａｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇａａｇｇ  ｃｇａａｇａｇｇａａ  ｇｇｃｇａｇｇｇｇｇ  ａａｇｇａｇａｇｇａ  ｇｇａａｇａａｇｇｇ
２７０１  ｇａａｇｇｃｇａａｇ  ｇｃｇａａｇａｇｇａ  ｇｇｇａｇａａｇｇａ  ｇａｇｇｇｇｇａｇｇ  ａａｇａｇｇａａｇｇ  ａｇａａｇｇｇａａｇ
２７６１  ｇｇｃｇａｇｇａｇｇ  ａａｇｇｃｇａａｇａ  ｇｇｇａｇａｇｇｇｇ  ｇａａｇｇｃｇａｇｇ  ａａｇａｇｇａａｇｇ  ｃｇａｇｇｇｃｇａａ
２８２１  ｇｇａｇａｇｇａｃｇ  ｇｃｇａｇｇｇｃｇａ  ｇｇｇａｇａａｇａｇ  ｇａｇｇａａｇｇｇｇ  ａａｔｇｇｇａａｇｇ  ｃｇａａｇａａｇａｇ
２８８１  ｇａａｇｇｃｇａａｇ  ｇｃｇａａｇｇｃｇａ  ａｇａａｇａｇｇｇｃ  ｇａａｇｇｇｇａｇｇ  ｇｃｇａｇｇａｇｇｇ  ｃｇａａｇｇｃｇａａ
２９４１  ｇｇｇｇａｇｇａａｇ  ａｇｇａａｇｇｃｇａ  ａｇｇａｇａａｇｇｃ  ｇａｇｇａａｇａａｇ  ａｇｇｇａｇａｇｇａ  ｇｇａａｇｇｃｇａｇ
３００１  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇａｇｇａ  ｇｇａｇｇｇａｇａａ  ｇｇｃｇａｇｇｇｃｇ  ａａｇａａｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇａｇａａ
３０６１  ｇｔｇｇａｇｇｇｃｇ  ａａｇｔｃｇａｇｇｇ  ｇｇａｇｇａｇｇｇａ  ｇａａｇｇｇｇａａｇ  ｇｇｇａｇｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇｃｇａａ
３１２１  ｇａａｇａａｇｇｃｇ  ａｇｇａａａｇａｇａ  ａａａａｇａｇｇｇａ  ｇａａｇｇｃｇａｇｇ  ａａａａｃｃｇｇａｇ  ａａａｔａｇｇｇａａ
３１８１  ｇａｇｇａｇｇａａｇ  ａｇｇａａｇａｇｇｇ  ａａａｇｔａｃｃａｇ  ｇａｇａｃａｇｇｃｇ  ａａｇａｇｇａａａａ  ｃｇａｇｃｇｇｃａｇ
３２４１  ｇａｔｇｇｃｇａｇｇ  ａａｔａｔａａｇａａ  ａｇｔｇａｇｃａａｇ  ａｔｃａａａｇｇａｔ  ｃｃｇｔｃａａｇｔａ  ｃｇｇｃａａｇｃａｃ
３３０１  ａａａａｃｃｔａｔｃ  ａｇａａｇａａａａｇ  ｃｇｔｇａｃｃａａｃ  ａｃａｃａｇｇｇｇａ  ａｔｇｇａａａａｇａ  ｇｃａｇａｇｇａｇｔ
３３６１  ａａｇａｔｇｃｃｔｇ  ｔｇｃａｇｔｃａａａ  ａｃｇｇｃｔｇｃｔｇ  ａａｇａａｔｇｇｃｃ  ｃａｔｃｔｇｇａａｇ  ｔａａａａａａｔｔｃ
３４２１  ｔｇｇａａｃａａｔｇ  ｔｇｃｔｇｃｃｃｃａ  ｃｔａｔｃｔｇｇａａ  ｃｔｇａａａｔａａ（配列番号３）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００１３】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ポリＡシグナルをコードする配列は、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡ配列を含む。一部の実施形態では、ＢＧＨポリＡシグナルをコードする配列は、以下：
１  ｔｃｇｃｔｇａｔｃａ  ｇｃｃｔｃｇａｃｔｇ  ｔｇｃｃｔｔｃｔａｇ  ｔｔｇｃｃａｇｃｃａ  ｔｃｔｇｔｔｇｔｔｔ  ｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃ
６１  ｃｇｔｇｃｃｔｔｃｃ  ｔｔｇａｃｃｃｔｇｇ  ａａｇｇｔｇｃｃａｃ  ｔｃｃｃａｃｔｇｔｃ  ｃｔｔｔｃｃｔａａｔ  ａａａａｔｇａｇｇａ
１２１  ａａｔｔｇｃａｔｃｇ  ｃａｔｔｇｔｃｔｇａ  ｇｔａｇｇｔｇｔｃａ  ｔｔｃｔａｔｔｃｔｇ  ｇｇｇｇｇｔｇｇｇｇ  ｔｇｇｇｇｃａｇｇａ
１８１  ｃａｇｃａａｇｇｇｇ  ｇａｇｇａｔｔｇｇｇ  ａａｇａｃａａｔａｇ  ｃａｇｇｃａｔｇｃｔ  ｇｇｇｇａｔｇｃｇｇ  ｔｇｇｇｃｔｃｔａｔ
２４１  ｇｇｃｔｔｃｔｇａｇ  ｇｃｇｇａａａｇａａ  ｃｃａｇｃｔｇｇｇｇ（配列番号４）のヌクレオチド配列を含む。
【００１４】
本開示の組成物の一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列は、血清型２のＡＡＶ（ＡＡＶ２）の５’ＩＴＲ配列に由来する。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列は、ＡＡＶ２の５’ＩＴＲの配列と同一である配列を含む。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列は、以下：
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴ（配列番号５）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００１５】
本開示の組成物の一部の実施形態では、３’ＩＴＲをコードする配列は、ＡＡＶ２の３’ＩＴＲ配列に由来する。一部の実施形態では、３’ＩＴＲをコードする配列は、ＡＡＶ２の３’ＩＴＲの配列と同一である配列を含む。一部の実施形態では、３’ＩＴＲをコードする配列は、以下：
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ（配列番号６）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００１６】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、コザック配列をさらに含む。一部の実施形態では、コザック配列は、ＧＧＣＣＡＣＣＡＴＧ（配列番号７）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００１７】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：
１  ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣ  ＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣ  ＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣ  ＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧ  ＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧ  ＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣ
６１  ＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣ  ＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣ  ＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧ  ＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣ  ＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡ  ＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧ
１２１  ＣＧＧＣＡＡＴＴＣＡ  ＧＴＣＧＡＴＡＡＣＴ  ＡＴＡＡＣＧＧＴＣＣ  ＴＡＡＧＧＴＡＧＣＧ  ＡＴＴＴＡＡＡＴＡＣ  ＧＣＧＣＴＣＴＣＴＴ
１８１  ＡＡＧＧＴＡＧＣＣＣ  ＣＧＧＧＡＣＧＣＧＴ  ＣＡＡＴＴＧＧＧＧＣ  ＣＣＣＡＧＡＡＧＣＣ  ＴＧＧＴＧＧＴＴＧＴ  ＴＴＧＴＣＣＴＴＣＴ
２４１  ＣＡＧＧＧＧＡＡＡＡ  ＧＴＧＡＧＧＣＧＧＣ  ＣＣＣＴＴＧＧＡＧＧ  ＡＡＧＧＧＧＣＣＧＧ  ＧＣＡＧＡＡＴＧＡＴ  ＣＴＡＡＴＣＧＧＡＴ
３０１  ＴＣＣＡＡＧＣＡＧＣ  ＴＣＡＧＧＧＧＡＴＴ  ＧＴＣＴＴＴＴＴＣＴ  ＡＧＣＡＣＣＴＴＣＴ  ＴＧＣＣＡＣＴＣＣＴ  ＡＡＧＣＧＴＣＣＴＣ
３６１  ＣＧＴＧＡＣＣＣＣＧ  ＧＣＴＧＧＧＡＴＴＴ  ＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣ  ＴＧＴＧＴＣＡＧＣＣ  ＣＣＧＧＧＧＣＣＡＣ  ＣＡＴＧＡＧＡＧＡＧ
４２１  ＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣ  ＴＧＡＴＧＣＣＡＧＡ  ＣＡＧＴＧＧＡＧＣＡ  ＧＴＧＴＴＴＡＣＡＴ  ＴＣＧＧＡＡＡＡＴＣ  ＴＡＡＧＴＴＣＧＣＴ
４８１  ＧＡＡＡＡＴＡＡＣＣ  ＣＡＧＧＡＡＡＧＴＴ  ＣＴＧＧＴＴＴＡＡＡ  ＡＡＣＧＡＣＧＴＧＣ  ＣＣＧＴＣＣＡＣＣＴ  ＧＴＣＴＴＧＴＧＧＣ
５４１  ＧＡＴＧＡＧＣＡＴＡ  ＧＴＧＣＣＧＴＧＧＴ  ＣＡＣＴＧＧＧＡＡＣ  ＡＡＴＡＡＧＣＴＧＴ  ＡＣＡＴＧＴＴＣＧＧ  ＧＴＣＣＡＡＣＡＡＣ
６０１  ＴＧＧＧＧＡＣＡＧＣ  ＴＧＧＧＧＣＴＧＧＧ  ＡＴＣＣＡＡＡＴＣＴ  ＧＣＴＡＴＣＴＣＴＡ  ＡＧＣＣＡＡＣＣＴＧ  ＣＧＴＧＡＡＧＧＣＡ
６６１  ＣＴＧＡＡＡＣＣＣＧ  ＡＧＡＡＧＧＴＣＡＡ  ＡＣＴＧＧＣＣＧＣＴ  ＴＧＴＧＧＣＡＧＡＡ  ＡＣＣＡＣＡＣＴＣＴ  ＧＧＴＧＡＧＣＡＣＣ
７２１  ＧＡＧＧＧＣＧＧＧＡ  ＡＴＧＴＣＴＡＴＧＣ  ＣＡＣＣＧＧＡＧＧＣ  ＡＡＣＡＡＴＧＡＧＧ  ＧＡＣＡＧＣＴＧＧＧ  ＡＣＴＧＧＧＧＧＡＣ
７８１  ＡＣＴＧＡＧＧＡＡＡ  ＧＧＡＡＴＡＣＣＴＴ  ＴＣＡＣＧＴＧＡＴＣ  ＴＣＣＴＴＣＴＴＴＡ  ＣＡＴＣＴＧＡＧＣＡ  ＴＡＡＧＡＴＣＡＡＧ
８４１  ＣＡＧＣＴＧＡＧＣＧ  ＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡ  ＣＡＣＡＴＣＴＧＣＡ  ＧＣＣＣＴＧＡＣＴＧ  ＡＧＧＡＣＧＧＧＣＧ  ＣＣＴＧＴＴＣＡＴＧ
９０１  ＴＧＧＧＧＡＧＡＴＡ  ＡＴＴＣＡＧＡＧＧＧ  ＣＣＡＧＡＴＴＧＧＧ  ＣＴＧＡＡＡＡＡＣＧ  ＴＧＡＧＣＡＡＴＧＴ  ＧＴＧＣＧＴＣＣＣＴ
９６１  ＣＡＧＣＡＧＧＴＧＡ  ＣＣＡＴＣＧＧＡＡＡ  ＧＣＣＡＧＴＣＡＧＴ  ＴＧＧＡＴＴＴＣＡＴ  ＧＴＧＧＣＴＡＣＴＡ  ＴＣＡＴＡＧＣＧＣＣ
１０２１  ＴＴＣＧＴＧＡＣＣＡ  ＣＡＧＡＴＧＧＣＧＡ  ＧＣＴＧＴＡＣＧＴＣ  ＴＴＴＧＧＧＧＡＧＣ  ＣＣＧＡＡＡＡＣＧＧ  ＡＡＡＡＣＴＧＧＧＣ
１０８１  ＣＴＧＣＣＴＡＡＣＣ  ＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧ  ＣＡＡＴＣＡＣＣＧＧ  ＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＴＣＣＧＡ  ＧＡＴＣＣＣＴＧＡＡ
１１４１  ＡＡＡＧＴＧＡＴＣＣ  ＡＧＧＴＣＧＣＣＴＧ  ＣＧＧＧＧＧＡＧＡＧ  ＣＡＴＡＣＡＧＴＧＧ  ＴＣＣＴＧＡＣＴＧＡ  ＧＡＡＴＧＣＴＧＴＧ
１２０１  ＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧ  ＧＡＣＴＧＧＧＣＣＡ  ＧＴＴＴＧＧＣＣＡＧ  ＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧ  ＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴ  ＧＴＴＴＧＡＧＡＣＡ
１２６１  ＴＣＣＧＡＡＣＣＡＡ  ＡＡＧＴＧＡＴＣＧＡ  ＧＡＡＣＡＴＴＣＧＣ  ＧＡＣＣＡＧＡＣＴＡ  ＴＣＡＧＣＴＡＣＡＴ  ＴＴＣＣＴＧＣＧＧＡ
１３２１  ＧＡＧＡＡＴＣＡＣＡ  ＣＣＧＣＡＣＴＧＡＴ  ＣＡＣＡＧＡＣＡＴＴ  ＧＧＣＣＴＧＡＴＧＴ  ＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧ  ＣＧＡＴＧＧＡＣＧＡ
１３８１  ＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣ  ＴＧＧＧＡＣＴＧＧＧ  ＡＣＴＧＧＡＧＡＡＣ  ＴＴＣＡＣＴＡＡＴＣ  ＡＴＴＴＴＡＴＣＣＣ  ＣＡＣＣＣＴＧＴＧＴ
１４４１  ＴＣＴＡＡＣＴＴＣＣ  ＴＧＣＧＧＴＴＣＡＴ  ＣＧＴＧＡＡＡＣＴＧ  ＧＴＣＧＣＴＴＧＣＧ  ＧＣＧＧＧＴＧＴＣＡ  ＣＡＴＧＧＴＧＧＴＣ
１５０１  ＴＴＣＧＣＴＧＣＡＣ  ＣＴＣＡＴＡＧＧＧＧ  ＣＧＴＧＧＣＴＡＡＧ  ＧＡＧＡＴＣＧＡＡＴ  ＴＴＧＡＣＧＡＧＡＴ  ＴＡＡＣＧＡＴＡＣＡ
１５６１  ＴＧＣＣＴＧＡＧＣＧ  ＴＧＧＣＡＡＣＴＴＴ  ＣＣＴＧＣＣＡＴＡＣ  ＡＧＣＴＣＣＣＴＧＡ  ＣＴＴＣＴＧＧＣＡＡ  ＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧ
１６２１  ＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡ  ＧＴＧＣＡＡＧＧＡＴ  ＧＣＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＧＡＡＣ  ＧＣＴＣＴＣＣＴＧＡ  ＣＡＧＴＴＴＣＴＣＡ
１６８１  ＡＴＧＣＧＡＣＧＡＡ  ＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣ  ＴＡＴＣＧＡＧＧＧＡ  ＡＣＡＣＴＧＧＧＡＣ  ＴＧＡＧＴＧＣＣＴＧ  ＣＴＴＣＣＴＧＣＣＴ
１７４１  ＡＡＣＴＣＡＧＴＧＴ  ＴＴＣＣＡＣＧＡＴＧ  ＴＡＧＣＧＡＧＣＧＧ  ＡＡＴＣＴＧＣＡＧＧ  ＡＧＴＣＴＧＴＣＣＴ  ＧＡＧＴＧＡＧＣＡＧ
１８０１  ＧＡＴＣＴＧＡＴＧＣ  ＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡ  ＡＣＣＣＧＡＣＴＡＣ  ＣＴＧＣＴＧＧＡＴＧ  ＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡ  ＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡ
１８６１  ＡＴＣＧＡＣＡＡＣＴ  ＣＴＡＧＴＡＣＡＧＴ  ＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧ  ＧＧＣＧＡＧＡＣＴＡ  ＣＣＧＡＴＡＴＣＣＴ  ＧＡＡＴＡＴＧＡＣＡ
１９２１  ＣＡＣＡＴＴＡＴＧＴ  ＣＡＣＴＧＡＡＣＡＧ  ＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧ  ＡＧＴＣＴＧＡＡＡＣ  ＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴ  ＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧ
１９８１  ＡＡＧＡＡＡＣＡＧＣ  ＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧ  ＣＧＡＧＣＴＧＡＣＴ  ＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧ  ＣＣＣＴＧＡＣＡＧＡ  ＧＡＡＣＧＡＣＧＡＴ
２０４１  ＡＧＣＧＡＴＧＡＧＴ  ＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴ  ＧＴＣＣＧＡＧＡＴＧ  ＡＡＧＧＡＡＧＧＣＡ  ＡＡＧＣＴＴＧＴＡＡ  ＧＣＡＧＣＡＴＧＴＣ
２１０１  ＡＧＴＣＡＧＧＧＧＡ  ＴＣＴＴＣＡＴＧＡＣ  ＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣ  ＡＣＡＡＣＴＡＴＴＧ  ＡＧＧＣＴＴＴＴＴＣ  ＡＧＡＣＧＡＧＧＡＡ
２１６１  ＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣ  ＣＣＧＡＧＧＡＡＡＡ  ＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡ  ＧＡＡＧＡＴＴＣＣＡ  ＡＧＧＧＧＡＡＴＧＧ  ＡＡＴＴＧＡＧＧＡＡ
２２２１  ＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧ  ＡＡＧＣＣＡＡＣＧＡ  ＧＧＡＡＡＡＴＧＴＧ  ＡＡＡＧＴＣＣＡＣＧ  ＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡ  ＧＧＡＧＡＡＡＡＣＡ
２２８１  ＧＡＡＡＴＣＣＴＧＴ  ＣＴＧＡＣＧＡＴＣＴ  ＧＡＣＴＧＡＣＡＡＧ  ＧＣＣＧＡＧＧＴＧＴ  ＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡ  ＧＧＣＡＡＡＡＴＣＴ
２３４１  ＧＴＣＧＧＡＧＡＧＧ  ＣＡＧＡＡＧＡＣＧＧ  ＡＣＣＡＧＡＧＧＧＡ  ＣＧＡＧＧＧＧＡＴＧ  ＧＡＡＣＣＴＧＣＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡ
２４０１  ＡＧＣＧＧＧＧＣＴＧ  ＡＧＣＡＴＴＧＧＣＡ  ＧＧＡＣＧＡＧＧＡＡ  ＣＧＡＧＡＧＡＡＧＧ  ＧＣＧＡＡＡＡＧＧＡ  ＴＡＡＡＧＧＣＣＧＣ
２４６１  ＧＧＧＧＡＧＡＴＧＧ  ＡＡＣＧＡＣＣＴＧＧ  ＡＧＡＧＧＧＣＧＡＡ  ＡＡＡＧＡＧＣＴＧＧ  ＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡ  ＧＧＡＡＴＧＧＡＡＧ
２５２１  ＡＡＡＡＧＧＧＡＣＧ  ＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡ  ＧＧＡＧＣＡＧＡＡＡ  ＧＡＡＡＧＧＧＡＧＣ  ＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡ  ＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣ
２５８１  ＡＡＣＣＡＧＧＡＧＡ  ＴＧＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＧＣＧＡＧＧＡＡ  ＧＡＧＣＡＴＧＧＣＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣ
２６４１  ＧＡＴＡＧＡＧＡＡＧ  ＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡ  ＡＡＡＡＧＡＡＧＧＣ  ＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡ  ＧＧＧＣＧＡＧＧＡＡ
２７０１  ＧＴＧＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＧＡＧＧＧＡＡＡＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡ  ＧＡＡＣＧＧＡＡＧＡ  ＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧ  ＡＧＣＣＧＧＣＡＡＡ
２７６１  ＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧ  ＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＧＣＧＡＴＣＡＧ  ＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣ
２８２１  ＣＧＣＧＧＧＧＡＡＧ  ＡＧＡＡＡＧＡＧＧＡ  ＧＧＧＡＧＧＡＧＡＧ  ＧＴＧＧＡＧＧＧＣＧ  ＧＡＧＡＧＧＴＣＧＡ  ＡＧＡＧＧＧＡＡＡＧ
２８８１  ＧＧＣＧＡＧＣＧＣＧ  ＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣ  ＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧ  ＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＡＧＧＧＧＧＡＡ
２９４１  ＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧ  ＧＧＧＧＡＧＧＧＡＡ  ＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧ
３００１  ＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＧＧＧＡＧＧＡＧ  ＧＧＣＧＡＧＧＧＧＧ  ＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＡＧＧＡ
３０６１  ＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡ  ＡＧＧＣＧＡＧＧＧＧ  ＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＡＡＧＧ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡ
３１２１  ＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧ  ＧＡＧＡＡＧＧＧＡＡ  ＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧ
３１８１  ＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＧＧＧ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣ
３２４１  ＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧ  ＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡ
３３０１  ＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＡＡＧＧＧＧＡＧ  ＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧ  ＧＣＧＡＡＧＧＣＧＡ  ＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡ
３３６１  ＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＣＧＡＧＧＡＡＧＡＡ  ＧＡＧＧＧＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡ
３４２１  ＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡ  ＡＧＧＣＧＡＧＧＧＣ  ＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧ  ＡＡＧＡＧＧＧＡＧＡ  ＡＧＴＧＧＡＧＧＧＣ
３４８１  ＧＡＡＧＴＣＧＡＧＧ  ＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧ  ＡＧＡＡＧＧＧＧＡＡ  ＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧ  ＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＡＡＧＡＡＧＧＣ
３５４１  ＧＡＧＧＡＡＡＧＡＧ  ＡＡＡＡＡＧＡＧＧＧ  ＡＧＡＡＧＧＣＧＡＧ  ＧＡＡＡＡＣＣＧＧＡ  ＧＡＡＡＴＡＧＧＧＡ  ＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡ
３６０１  ＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧ  ＧＡＡＡＧＴＡＣＣＡ  ＧＧＡＧＡＣＡＧＧＣ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡ  ＡＣＧＡＧＣＧＧＣＡ  ＧＧＡＴＧＧＣＧＡＧ
３６６１  ＧＡＡＴＡＴＡＡＧＡ  ＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡ  ＧＡＴＣＡＡＡＧＧＡ  ＴＣＣＧＴＣＡＡＧＴ  ＡＣＧＧＣＡＡＧＣＡ  ＣＡＡＡＡＣＣＴＡＴ
３７２１  ＣＡＧＡＡＧＡＡＡＡ  ＧＣＧＴＧＡＣＣＡＡ  ＣＡＣＡＣＡＧＧＧＧ  ＡＡＴＧＧＡＡＡＡＧ  ＡＧＣＡＧＡＧＧＡＧ  ＴＡＡＧＡＴＧＣＣＴ
３７８１  ＧＴＧＣＡＧＴＣＡＡ  ＡＡＣＧＧＣＴＧＣＴ  ＧＡＡＧＡＡＴＧＧＣ  ＣＣＡＴＣＴＧＧＡＡ  ＧＴＡＡＡＡＡＡＴＴ  ＣＴＧＧＡＡＣＡＡＴ
３８４１  ＧＴＧＣＴＧＣＣＣＣ  ＡＣＴＡＴＣＴＧＧＡ  ＡＣＴＧＡＡＡＴＡＡ  ＧＡＧＣＴＣＣＴＣＧ  ＡＧＧＣＧＧＣＣＣＧ  ＣＴＣＧＡＧＴＣＴＡ
３９０１  ＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴ  ＣＧＡＡＧＧＴＡＡＧ  ＣＣＴＡＴＣＣＣＴＡ  ＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴ  ＣＧＧＴＣＴＣＧＡＴ  ＴＣＴＡＣＧＣＧＴＡ
３９６１  ＣＣＧＧＴＣＡＴＣＡ  ＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣ  ＣＡＴＴＧＡＧＴＴＴ  ＡＡＡＣＣＣＧＣＴＧ  ＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧ  ＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴ
４０２１  ＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡ  ＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴ  ＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴ  ＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣ  ＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣ  ＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧ
４０８１  ＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣ  ＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣ  ＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧ  ＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣ  ＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴ  ＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴ
４１４１  ＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴ  ＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴ  ＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣ  ＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡ  ＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴ  ＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡ
４２０１  ＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡ  ＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴ  ＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴ  ＣＴＡＴＧＧＣＴＴＣ  ＴＧＡＧＧＣＧＧＡＡ  ＡＧＡＡＣＣＡＧＡＴ
４２６１  ＣＣＴＣＴＣＴＴＡＡ  ＧＧＴＡＧＣＡＴＣＧ  ＡＧＡＴＴＴＡＡＡＴ  ＴＡＧＧＧＡＴＡＡＣ  ＡＧＧＧＴＡＡＴＧＧ  ＣＧＣＧＧＧＣＣＧＣ
４３２１  ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴ  ＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧ  ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣ  ＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧ  ＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧ
４３８１  ＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣ  ＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣ  ＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧ  ＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧ  ＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡ  ＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣ
４４４１  ＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ（配列番号８）の配列を含むまたはこれからなる。
【００１８】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ウッドチャック翻訳後制御エレメント（ＷＰＲＥ）をコードする配列をさらに含む。一部の実施形態では、ＷＰＲＥは、以下：
１  ａｔｃａａｃｃｔｃｔ  ｇｇａｔｔａｃａａａ  ａｔｔｔｇｔｇａａａ  ｇａｔｔｇａｃｔｇｇ  ｔａｔｔｃｔｔａａｃ  ｔａｔｇｔｔｇｃｔｃ
６１  ｃｔｔｔｔａｃｇｃｔ  ａｔｇｔｇｇａｔａｃ  ｇｃｔｇｃｔｔｔａａ  ｔｇｃｃｔｔｔｇｔａ  ｔｃａｔｇｃｔａｔｔ  ｇｃｔｔｃｃｃｇｔａ
１２１  ｔｇｇｃｔｔｔｃａｔ  ｔｔｔｃｔｃｃｔｃｃ  ｔｔｇｔａｔａａａｔ  ｃｃｔｇｇｔｔｇｃｔ  ｇｔｃｔｃｔｔｔａｔ  ｇａｇｇａｇｔｔｇｔ
１８１  ｇｇｃｃｃｇｔｔｇｔ  ｃａｇｇｃａａｃｇｔ  ｇｇｃｇｔｇｇｔｇｔ  ｇｃａｃｔｇｔｇｔｔ  ｔｇｃｔｇａｃｇｃａ  ａｃｃｃｃｃａｃｔｇ
２４１  ｇｔｔｇｇｇｇｃａｔ  ｔｇｃｃａｃｃａｃｃ  ｔｇｔｃａｇｃｔｃｃ  ｔｔｔｃｃｇｇｇａｃ  ｔｔｔｃｇｃｔｔｔｃ  ｃｃｃｃｔｃｃｃｔａ
３０１  ｔｔｇｃｃａｃｇｇｃ  ｇｇａａｃｔｃａｔｃ  ｇｃｃｇｃｃｔｇｃｃ  ｔｔｇｃｃｃｇｃｔｇ  ｃｔｇｇａｃａｇｇｇ  ｇｃｔｃｇｇｃｔｇｔ
３６１  ｔｇｇｇｃａｃｔｇａ  ｃａａｔｔｃｃｇｔｇ  ｇｔｇｔｔｇｔｃｇｇ  ｇｇａａａｔｃａｔｃ  ｇｔｃｃｔｔｔｃｃｔ  ｔｇｇｃｔｇｃｔｃｇ
４２１  ｃｃｔｇｔｇｔｔｇｃ  ｃａｃｃｔｇｇａｔｔ  ｃｔｇｃｇｃｇｇｇａ  ｃｇｔｃｃｔｔｃｔｇ  ｃｔａｃｇｔｃｃｃｔ  ｔｃｇｇｃｃｃｔｃａ
４８１  ａｔｃｃａｇｃｇｇａ  ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｃ  ｃｇｃｇｇｃｃｔｇｃ  ｔｇｃｃｇｇｃｔｃｔ  ｇｃｇｇｃｃｔｃｔｔ  ｃｃｇｃｇｔｃｔｔｃ
５４１  ｇｃｃｔｔｃｇｃｃｃ  ｔｃａｇａｃｇａｇｔ  ｃｇｇａｔｃｔｃｃｃ  ｔｔｔｇｇｇｃｃｇｃ  ｃｔｃｃｃｃｇｃ（配列番号９）のヌクレオチド配列を含む。
【００１９】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ｒＡＡＶ８粒子の各々は、ＡＡＶ血清型８（ＡＡＶ８）Ｒｅｐタンパク質から単離されたまたはこれに由来するウイルスＲｅｐタンパク質を含む。
【００２０】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ｒＡＡＶ８粒子の各々は、ＡＡＶ血清型８（ＡＡＶ８）Ｃａｐタンパク質から単離されたまたはこれに由来するウイルスＣａｐタンパク質を含む。
【００２１】
本開示は、本開示の組成物を含む、デバイスを提供する。
【００２２】
本開示のデバイスの一部の実施形態では、デバイスは、マイクロ送達デバイスを含む。一部の実施形態では、マイクロ送達デバイスは、マイクロニードルを含む。一部の実施形態では、マイクロニードルは、網膜下送達に好適である。一部の実施形態では、デバイスは、少なくとも５０μＬの容量を含む。一部の実施形態では、デバイスは、５μＬ、１０μＬ、１５μＬ、２０μＬ、２５μＬ、５０μＬ、７５μＬ、１００μＬ、１５０μＬ、２００μＬ、２５０μＬ、３００μＬ、３５０μＬ、４００μＬ、４５０μＬ、５００μＬ、５５０μＬ、６００μＬ、６５０μＬ、７００μＬ、７５０μＬ、８００μＬ、８５０μＬ、９００μＬ  ９５０μＬ、１０００μＬ、またはその間の任意の数のμＬの容量を含む。
【００２３】
本開示のデバイスの一部の実施形態では、デバイスは、マイクロ送達デバイスを含む。一部の実施形態では、マイクロ送達デバイスは、マイクロカテーテルを含む。一部の実施形態では、デバイスは、上脈絡膜送達に好適である。一部の実施形態では、デバイスは、少なくとも５０μＬの容量を含む。一部の実施形態では、デバイスは、５μＬ、１０μＬ、１５μＬ、２０μＬ、２５μＬ、５０μＬ、７５μＬ、１００μＬ、１５０μＬ、２００μＬ、２５０μＬ、３００μＬ、３５０μＬ、４００μＬ、４５０μＬ、５００μＬ、５５０μＬ、６００μＬ、６５０μＬ、７００μＬ、７５０μＬ、８００μＬ、８５０μＬ、９００μＬ  ９５０μＬ、１０００μＬ、またはその間の任意の数のμＬの容量を含む。
【００２４】
本開示は、網膜色素変性症の処置を必要とする対象において網膜色素変性症を処置する方法を提供し、該方法は、対象に、治療有効量の本開示の組成物を投与することを含む。
【００２５】
本開示は、網膜色素変性症の処置を必要とする対象において網膜色素変性症を処置する方法を提供し、該方法は、対象に、治療有効量の組成物を投与することを含み、投与は、本開示のデバイスを使用して行われる。
【００２６】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、対象における網膜色素変性症の兆候を改善する。
【００２７】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症の兆候は、エリプソイドゾーン（ＥＺ）の、健常ＥＺと比較した場合の、変性を含む。一部の実施形態では、ＥＺの変性は、健常ＥＺと比較した場合に、光受容体細胞密度における減少、光受容体繊毛の数における減少、またはそれらの組み合わせを含む。一部の実施形態では、ＥＺの変性は、健常ＥＺと比較した場合に、ＥＺの幅の減少を含み、幅は、光受容体内節及び光受容体外節間の距離を含む。一部の実施形態では、ＥＺの変性は、健常ＥＺと比較した場合に、ＥＺの長さの減少を含み、長さは、眼の前後（Ａ／Ｐ）軸、背腹（Ｄ／Ｖ）軸または内外（Ｍ／Ｌ）軸のうちの１つまたは複数に沿った距離を含む。一部の実施形態では、ＥＺの変性は、健常ＥＺと比較した場合に、ＥＺの面積の減少を含み、面積は、眼の前後（Ａ／Ｐ）軸、背腹（Ｄ／Ｖ）軸または内外（Ｍ／Ｌ）軸のうちの１つまたは複数に沿った距離の２乗のπ倍を含む。
【００２８】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、健常ＥＺは、網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない年齢及び性別が一致する個体のＥＺを含む。一部の実施形態では、網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない年齢及び性別が一致する個体は、網膜色素変性症を発症するリスク因子を有さない。一部の実施形態では、健常ＥＺは、所定の対照または閾値を含む。一部の実施形態では、所定の対照または閾値は、複数の個体からの複数の健常ＥＺの測定から決定された代表値または平均値を含む。一部の実施形態では、複数の個体は、対象と年齢及び性別が一致する。一部の実施形態では、健常ＥＺは、対象の非罹患眼を含む。一部の実施形態では、非罹患眼は、網膜色素変性症の検出可能な兆候を有さない。一部の実施形態では、非罹患眼は、ＥＺの検出可能な変性を有さない。
【００２９】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症の兆候は、エリプソイドゾーン（ＥＺ）の、ベースラインＥＺと比較した場合の、変性を含む。一部の実施形態では、ベースラインＥＺは、組成物の投与前の対象のＥＺの変性の測定を含む。一部の実施形態では、対象のＥＺの変性の測定は、ＥＺの一部における生存もしくは生存可能光受容体の数、ＥＺの一部における繊毛の数、ＥＺの一部の幅、ＥＺの一部における１つもしくは複数の軸に沿ったＥＺの長さ、ＥＺの一部の面積、またはそれらの任意の組み合わせの決定を含む。
【００３０】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、網膜色素変性症の兆候または症状を改善し、網膜色素変性症の兆候は、エリプソイドゾーン（ＥＺ）の、健常ＥＺまたはベースラインＥＺと比較した場合の、変性を含み、改善は、ＥＺの幅を、端点を含んで、１μｍ及び２０μｍ間増加させることを含む。一部の実施形態では、改善は、ＥＺの幅を、端点を含んで、３μｍ及び１５μｍ間増加させることを含む。一部の実施形態では、改善は、ＥＺの幅を、端点を含んで、０．８μｍ及び３２０μｍ間増加させることを含む。
【００３１】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、改善は、ベースラインＥＺと比較した場合に、ＥＺの幅を、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージ増加させることを含む。一部の実施形態では、改善は、眼の１つまたは複数のセクターに均一にわたってＥＺの幅を増加させることを含む。一部の実施形態では、改善は、眼の１つまたは複数のセクターに非均一にわたってＥＺの幅を増加させることを含み、増加した幅は、黄斑または１つもしくは複数の中心セクター内で最大であり、増加した幅は、１つまたは複数の周辺セクターで最小である。
【００３２】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、改善は、Ａ／Ｐ軸に沿ってＥＺの長さを増加させることを含む。一部の実施形態では、改善は、Ｄ／Ｖ軸に沿ってＥＺの長さを増加させることを含む。一部の実施形態では、改善は、Ｍ／Ｌ軸に沿ってＥＺの長さを増加させることを含む。
【００３３】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、改善は、ベースラインＥＺと比較した場合に、ＥＺの長さを、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージ増加させることを含む。
【００３４】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、ベースラインＥＺと比較した場合に、ＥＺのさらなる変性の速度を減少させるまたはさらなる変性を阻害する。一部の実施形態では、組成物の投与後、ＥＺの一部における生存もしくは生存可能光受容体の数、ＥＺの一部における繊毛の数、ＥＺの一部の幅、ＥＺの一部における１つもしくは複数の軸に沿ったＥＺの長さ、ＥＺの一部の面積、またはそれらの任意の組み合わせは、ベースラインＥＺと比較した場合に、ＥＺの一部における生存もしくは生存可能光受容体の数、ＥＺの一部における繊毛の数、ＥＺの一部の幅、ＥＺの一部における１つもしくは複数の軸に沿ったＥＺの長さまたはそれらの任意の組み合わせに等しい。
【００３５】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、対象のＥＺの一部の幅もしくは長さ、または健常ＥＺの一部の幅もしくは長さは、光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）を使用して測定される。
【００３６】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症の兆候は、網膜厚及び／または外顆粒層（ＯＮＬ）厚における、健常網膜厚及び／または健常ＯＮＬ厚と比較した場合の、減少を含む。
【００３７】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、健常網膜厚または健常ＯＮＬ厚は、網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない年齢及び性別が一致する個体のものである。一部の実施形態では、網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない年齢及び性別が一致する個体は、網膜色素変性症を発症するリスク因子を有さない。一部の実施形態では、健常網膜厚または健常ＯＮＬ厚は、所定の対照または閾値を含む。一部の実施形態では、所定の対照または閾値は、複数の個体からの複数の健常網膜厚または健常ＯＮＬ厚の測定から決定された代表値または平均値を含む。一部の実施形態では、複数の個体は、対象と年齢及び性別が一致する。一部の実施形態では、健常網膜厚または健常ＯＮＬ厚は、対象の非罹患眼を含む。一部の実施形態では、非罹患眼は、網膜色素変性症の検出可能な兆候を有さない。一部の実施形態では、非罹患眼は、網膜厚またはＯＮＬ厚の検出可能な減少を有さない。
【００３８】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症の徴候の改善は、ベースライン網膜厚及び／またはＯＮＬ厚と比較した場合に、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚における増加を含む。一部の実施形態では、ベースライン網膜厚及び／またはＯＮＬ厚は、組成物の投与前の網膜厚及び／またはＯＮＬ厚の測定を含む。
【００３９】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、網膜色素変性症の徴候または症状を改善し、網膜色素変性症の徴候は、健常ＥＺと比較した場合に、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚の減少を含む。
【００４０】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、改善は、ベースライン網膜厚及び／またはＯＮＬ厚と比較した場合に、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚を、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージ増加させることを含む。一部の実施形態では、改善は、眼の１つまたは複数のセクターに均一にわたって網膜厚及び／またはＯＮＬ厚を増加させることを含む。一部の実施形態では、改善は、眼の１つまたは複数のセクターに非均一にわたって網膜厚及び／またはＯＮＬ厚を増加させることを含み、増加した厚さは、黄斑または１つもしくは複数の中心セクター内で最大であり、増加した厚さは、１つまたは複数の周辺セクターで最小である。
【００４１】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、ベースライン網膜厚及び／またはＯＮＬ厚と比較した場合に、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚のさらなる変性の速度を減少させるまたはさらなる変性を阻害する。
【００４２】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、対象の網膜厚及び／またはＯＮＬ厚あるいは健常個体の網膜厚及び／またはＯＮＬ厚は、ＯＣＴを使用して測定される。
【００４３】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、組成物の投与前の対象の光受容体外節と比較した場合、光受容体外節の再生を誘導する。
【００４４】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症の兆候は、健常レベルの網膜感度と比較して、網膜感度のレベルの減少を含む。一部の実施形態では、網膜感度のレベルは、微小視野計測を使用して測定される。一部の実施形態では、網膜感度のレベルの測定は、以下：（ａ）対象の眼の眼底の画像を生成すること；（ｂ）（ａ）の画像上に、点のグリッドを投影すること；（ｃ）眼を、（ｂ）のグリッド上の各点にて光で刺激すること、ここで各後続の刺激は、前の刺激よりも強度が大きい；（ｄ）ステップ（ｃ）を少なくとも１回繰り返すこと；（ｅ）最小閾値を（ｂ）のグリッド上の各点に関して決定すること、ここで最小閾値は、対象が最初に光を知覚できる（ｃ）からの光の強度である；（ｆ）（ｅ）からの最小閾値を、ａｓｂからデシベル（ｄＢ）に変換することを含み、光の最大強度は０ｄＢに等しく、光の最小強度はｄＢスケールの最大ｄＢ値に等しい、または光の最大強度は０ｄＢの網膜感度に等しく、光の最小強度は網膜感度を定量化するｄＢスケールの最大ｄＢ値に等しい。一部の実施形態では、（ｃ）の刺激ステップは、およそ４〜１０００アポスチルブ（ａｓｂ）の範囲を有する光刺激を含む。一部の実施形態では、グリッドは、少なくとも３７点を含む。一部の実施形態では、グリッドは、６８点を含むまたはこれからなる。一部の実施形態では、点は、眼の１０°をカバーする直径を有する円上に等間隔に配置されている。一部の実施形態では、円は、黄斑を中心とする。一部の実施形態では、網膜感度のレベルを測定することは、（ｂ）のグリッド内の各点での最小閾値を代表値化して、平均網膜感度を生成することをさらに含む。
【００４５】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、健常レベルの網膜感度は、網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない年齢及び性別が一致する個体を使用して決定される。一部の実施形態では、網膜色素変性症の徴候または症状のいずれも有さない年齢及び性別が一致する個体は、網膜色素変性症を発症するリスク因子を有さない。一部の実施形態では、健常レベルの網膜感度は、所定の対照または閾値を使用して決定される。一部の実施形態では、所定の対照または閾値は、複数の個体からの複数の健常レベルの網膜感度の測定から決定された代表値または平均値を含む。一部の実施形態では、複数の個体は、対象と年齢及び性別が一致する。一部の実施形態では、健常レベルの網膜感度は、対象の非罹患眼から測定される。一部の実施形態では、非罹患眼は、網膜色素変性症の検出可能な兆候を有さない。一部の実施形態では、非罹患眼は、網膜感度のレベルにおいて検出可能な減少を有さない。一部の実施形態では、網膜色素変性症の兆候は、ベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、網膜感度のレベルの減少を含む。一部の実施形態では、ベースラインレベルの網膜感度は、組成物の投与前の対象の網膜感度のレベルの測定を含む。
【００４６】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、健常レベルの網膜感度と比較した場合に、対象の網膜感度を回復させる。一部の実施形態では、網膜感度を回復させることは、健常レベルの網膜感度と比較した場合に、網膜の一部における平均網膜感度の増加を含む。一部の実施形態では、対象の網膜の一部における平均網膜感度は、健常レベルの網膜感度における網膜の一部における平均網膜感度に等しい。
【００４７】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、ベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、対象の網膜感度を改善する。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、ベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、網膜の一部における平均網膜感度の増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、端点を含んで、１及び３０デシベル（ｄＢ）間の平均網膜感度のレベルにおける増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、端点を含んで、１及び１５ｄＢ間の平均網膜感度のレベルにおける増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、端点を含んで、２及び１０ｄＢ間の平均網膜感度のレベルにおける増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、少なくとも５ｄＢ、少なくとも６ｄＢ、少なくとも７ｄＢ、少なくとも８ｄＢ、少なくとも９ｄＢ、または少なくとも１０ｄＢの平均網膜感度のレベルにおける増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、少なくとも７ｄＢの平均網膜感度のレベルにおける増加を含む。
【００４８】
一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、端点を含んで、１〜６８点間において、少なくとも５ｄＢ、少なくとも６ｄＢ、少なくとも７ｄＢ、少なくとも８ｄＢ、少なくとも９ｄＢ、または少なくとも１０ｄＢの感度における増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０または少なくとも６５点において、少なくとも７ｄＢの感度における増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、６８点グリッドの中心１６点内の少なくとも５点において、少なくとも５ｄＢ、少なくとも６ｄＢ、少なくとも７ｄＢ、少なくとも８ｄＢ、少なくとも９ｄＢ、または少なくとも１０ｄＢの感度における増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、６８点グリッドの中心１６点内の少なくとも５点において、少なくとも７ｄＢの感度における増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、６８点グリッドの少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０または少なくとも６５点において、少なくとも７ｄＢの感度における増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、６８点グリッドの少なくとも６０または少なくとも６５点において、少なくとも７ｄＢの感度における増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、６８点グリッドの全点において、少なくとも５ｄＢ、少なくとも６ｄＢ、少なくとも７ｄＢ、少なくとも８ｄＢ、少なくとも９ｄＢ、または少なくとも１０ｄＢの感度における増加を含む。一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、６８点グリッドの全点において、少なくとも７ｄＢの感度における増加を含む。
【００４９】
一部の実施形態では、網膜感度を改善することは、ベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、平均網膜感度のレベルにおいて、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージの平均網膜感度のレベルにおける増加を含む。一部の実施形態では、平均網膜感度のレベルにおける増加は、マイクロペリメテリーグリッド内の少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５またはその間の任意の数の点で生じる。一部の実施形態では、平均網膜感度のレベルにおける増加は、マイクロペリメテリーグリッド内の少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％またはその間の任意のパーセンテージで生じる。
【００５０】
本開示の網膜色素変性症を処置する方法の一部の実施形態では、治療有効量の組成物を投与することは、ベースラインレベルの網膜感度と比較した場合に、対象の網膜感度のさらなる減少を阻害するまたは喪失を予防する。一部の実施形態では、組成物の投与後の対象における網膜感度レベルは、ベースラインレベルの網膜感度に等しい。
【００５１】
本開示は、対象における網膜色素変性症を予防する方法を提供し、該方法は、対象に予防的有効量の本開示の組成物を投与することを含み、対象は、網膜色素変性症を発症するリスクを有する。一部の実施形態では、対象は、網膜色素変性症を発症するリスク因子を有する。一部の実施形態では、因子は、遺伝子マーカー、網膜色素変性症の家族歴、網膜色素変性症の症状またはそれらの組み合わせのうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、網膜色素変性症の症状は、視力の減少または喪失を含む。一部の実施形態では、視力は、夜間視覚、周辺視覚、色覚またはそれらの任意の組み合わせに関する。
【００５２】
本開示の方法の一部の実施形態では、組成物は、網膜下経路によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、網膜下注射または注入によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、網膜下注射によって投与され、注射は、端点を含んで、５０μＬ及び１０００μＬ間の容量を含む。一部の実施形態では、組成物は、網膜下注射によって投与され、注射は、端点を含んで、５０μＬ及び３００μＬ間の容量を含む。一部の実施形態では、組成物は、網膜下注射によって投与され、注射は、１００μＬまたは最大で１００μＬ（例えば、２５〜１００μＬ、５０〜１００μＬ、７５〜１００μＬ）の容量を含む。一部の実施形態では、網膜下注射は、２段階注射を含む。一部の実施形態では、２段階注射は、以下：（ａ）マイクロニードルを、対象の眼の光受容体細胞層及び網膜色素上皮（ＲＰＥ）層間に挿入すること；（ｂ）溶液を、対象の眼の光受容体細胞層及び網膜色素上皮層間に、網膜をＲＰＥから部分的に剥離させてブレブを形成するのに十分な量で注射すること；ならびに（ｃ）組成物を、（ｂ）のブレブ内に注射することを含む。一部の実施形態では、溶液は、平衡塩類溶液を含む。
【００５３】
本開示の方法の一部の実施形態では、組成物は、上脈絡膜経路によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、上脈絡膜注射または注入によって投与される。一部の実施形態では、組成物は、上脈絡膜注射によって投与され、注射は、端点を含んで、５０及び１０００μＬ間の容量を含む。一部の実施形態では、注射は、端点を含んで、５０及び３００μＬ間の容量を含む。一部の実施形態では、注射は、端点を含んで、５０及び２００μＬ間の容量を含む。一部の実施形態では、注射は、端点を含んで、５０及び１００μＬ間の容量を含む。一部の実施形態では、上脈絡膜注射は、以下：（ａ）マイクロ送達デバイスの中空端及び対象の眼の上脈絡膜腔を接触させること、ここで中空端は開口部を含む；ならびに（ｂ）組成物を、マイクロ送達デバイスの中空端を通して流して、組成物を上脈絡膜腔に導入することを含む。一部の実施形態では、上脈絡膜注射は、マイクロ送達デバイスの中空端が、強膜を貫通し、マイクロ送達デバイスの中空端またはその延長部が、上脈絡膜腔の一部を横断する、及びマイクロ送達デバイスの中空端が、脈絡膜を少なくとも１回横断する場合を含む。
【００５４】
本特許または出願書類は、カラーで作成された少なくとも１つの図面を含有する。カラー図面（複数可）を含む本特許または特許出願公報の写しは、請求及び必要な手数料の支払いに応じて特許庁により提供されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】一方の眼をＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５遺伝子治療ベクターの注射によって網膜色素変性症に関して処置した７人の対象で測定した最良矯正視力（ＢＣＶＡ）を示す表である。ＢＣＶＡは、早期治療糖尿病性網膜症（ＥＤＴＲＳ）文字を使用して、各眼において、ベースライン（注射前）、ＡＡＶ  ＲＰＧＲＯＲＦ１５ベクターの注射後１週間、１か月、３か月、６か月及び９か月の各々にて評価した。３か月及び６か月の変化を、下部に示す。
【図２】一方の眼をＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の注射によって網膜色素変性症に関して処置した７人の対象からのデシベル（ｄＢ）単位で平均閾値網膜感度の微小視野計測測定値を示す表である。平均閾値は、両眼において、注射前（ベースライン時）、及びＡＡＶ  ＲＰＧＲＯＲＦ１５ベクターの注射後少なくとも１か月にて評価した。一部の場合では、６か月及び９か月にて追加の測定値を採取した。３か月及び６か月の変化を、下部に示す。
【図３】３か月での網膜感度変化のグラフである。Ｙ軸では、デシベル（ｄＢ）単位でのベースラインからの網膜感度変化。Ｘ軸では、コホート毎の処置及び未処置眼を示す。ＴＥ＝処置眼、ＣＥ＝対照眼。
【図４Ａ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン時（図４Ａ）及び他方の眼である処置眼におけるＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後３か月（図４Ｂ）でのＪＨ９０  ＯＤ（対照眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図４Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．９であり、一方で、３か月の代表閾値（ｄＢ）は０．８である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝１００％、Ｐ２＝１００％、図４Ａ）、３か月で安定している（Ｐ１＝１００％、Ｐ２＝１００％、図４Ｂ）。ベースライン（図４Ａ）の二変量輪郭楕円面積（ＢＣＥＡ）は：６３％ＢＣＥＡ：０．７°×０．４°、面積＝０．２°２、角度＝−３．１°；９５％ＢＣＥＡ：１．２°×０．７°、面積＝０．７°２、角度＝−３．１°である。３か月（図４Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．５°×０．３°、面積＝０．１°２、角度＝０．２°；９５％ＢＶＣＥＡ：０．９°×０．５°、面積＝０．３°２、角度＝０．２°である。
【図４Ｂ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン時（図４Ａ）及び他方の眼である処置眼におけるＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後３か月（図４Ｂ）でのＪＨ９０  ＯＤ（対照眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図４Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．９であり、一方で、３か月の代表閾値（ｄＢ）は０．８である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝１００％、Ｐ２＝１００％、図４Ａ）、３か月で安定している（Ｐ１＝１００％、Ｐ２＝１００％、図４Ｂ）。ベースライン（図４Ａ）の二変量輪郭楕円面積（ＢＣＥＡ）は：６３％ＢＣＥＡ：０．７°×０．４°、面積＝０．２°２、角度＝−３．１°；９５％ＢＣＥＡ：１．２°×０．７°、面積＝０．７°２、角度＝−３．１°である。３か月（図４Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．５°×０．３°、面積＝０．１°２、角度＝０．２°；９５％ＢＶＣＥＡ：０．９°×０．５°、面積＝０．３°２、角度＝０．２°である。
【図５Ａ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン（図５Ａ）及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後３か月（図５Ｂ）でのＪＨ９０  ＯＳ（処置眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図５Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０であり、一方で、３か月の代表閾値（ｄＢ）は０．９である。固視安定性は、ベースラインで比較的不安定であり（Ｐ１＝３７％、Ｐ２＝８２％、図５Ａ）、３か月で安定している（Ｐ１＝９９％、Ｐ２＝１００％、図５Ｂ）。ベースライン（図５Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：４．４°×２．３°、面積＝８．０°２、角度＝０．２°；９５％ＢＣＥＡ：７．６°×４．０°、面積＝２４．０°２、角度＝０．２°である。３か月（図５Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．６°×０．２°、面積＝８．０°２、角度＝−５．７°；９５％ＢＣＥＡ：１．０°×０．７°、面積＝０．５°２、角度＝−５．７°である。
【図５Ｂ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン（図５Ａ）及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後３か月（図５Ｂ）でのＪＨ９０  ＯＳ（処置眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図５Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０であり、一方で、３か月の代表閾値（ｄＢ）は０．９である。固視安定性は、ベースラインで比較的不安定であり（Ｐ１＝３７％、Ｐ２＝８２％、図５Ａ）、３か月で安定している（Ｐ１＝９９％、Ｐ２＝１００％、図５Ｂ）。ベースライン（図５Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：４．４°×２．３°、面積＝８．０°２、角度＝０．２°；９５％ＢＣＥＡ：７．６°×４．０°、面積＝２４．０°２、角度＝０．２°である。３か月（図５Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．６°×０．２°、面積＝８．０°２、角度＝−５．７°；９５％ＢＣＥＡ：１．０°×０．７°、面積＝０．５°２、角度＝−５．７°である。
【図６Ａ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン時（図６Ａ）及び他方の眼である処置眼におけるＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後３か月（図６Ｂ）でのＡＨ８５  ＯＤ（対照眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図６Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．８であり、一方で、３か月の代表閾値（ｄＢ）は１．４である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝８３％、Ｐ２＝８８％、図６Ａ）、３か月で安定している（Ｐ１＝９６％、Ｐ２＝１００％、図６Ｂ）。ベースライン（図６Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＶＣＥＡ：４．１°×２．３°、面積＝５．０°２、角度＝−１３．６°；９５％ＢＶＣＥＡ：７．１°×２．７°、面積＝１５．０°２、角度＝−１３．６°である。３か月（図６Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＶＣＥＡ：１．１°×０．７°、面積＝０．６°２、角度＝−０．６°；９５％ＢＣＥＡ：１．９°×１．２°、面積＝１．７°２、角度＝−０．６°である。
【図６Ｂ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン時（図６Ａ）及び他方の眼である処置眼におけるＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後３か月（図６Ｂ）でのＡＨ８５  ＯＤ（対照眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図６Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．８であり、一方で、３か月の代表閾値（ｄＢ）は１．４である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝８３％、Ｐ２＝８８％、図６Ａ）、３か月で安定している（Ｐ１＝９６％、Ｐ２＝１００％、図６Ｂ）。ベースライン（図６Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＶＣＥＡ：４．１°×２．３°、面積＝５．０°２、角度＝−１３．６°；９５％ＢＶＣＥＡ：７．１°×２．７°、面積＝１５．０°２、角度＝−１３．６°である。３か月（図６Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＶＣＥＡ：１．１°×０．７°、面積＝０．６°２、角度＝−０．６°；９５％ＢＣＥＡ：１．９°×１．２°、面積＝１．７°２、角度＝−０．６°である。
【図７Ａ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン（図６Ａ）及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後３か月（図６Ｂ）でのＡＨ８５  ＯＳ（処置眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図７Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．９であり、一方で、３か月の代表閾値（ｄＢ）は４．３である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝９８％、Ｐ２＝１００％、図７Ａ）、３か月で安定している（Ｐ１＝９８％、Ｐ２＝１００％、図７Ｂ）。ベースライン（図７Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．８°×０．９°、面積＝０．６°２、角度＝５０．４°；９５％ＢＣＥＡ：１．４°×１．６°、面積＝１．８°２、角度＝５０．４°である。３か月（図７Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．８°×０．８°、面積＝０．５°２、角度＝−９．０°；９５％ＢＣＥＡ：１．５°×１．４°、面積＝１．６°２、角度＝−９．０°である。
【図７Ｂ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン（図６Ａ）及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後３か月（図６Ｂ）でのＡＨ８５  ＯＳ（処置眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図７Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．９であり、一方で、３か月の代表閾値（ｄＢ）は４．３である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝９８％、Ｐ２＝１００％、図７Ａ）、３か月で安定している（Ｐ１＝９８％、Ｐ２＝１００％、図７Ｂ）。ベースライン（図７Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．８°×０．９°、面積＝０．６°２、角度＝５０．４°；９５％ＢＣＥＡ：１．４°×１．６°、面積＝１．８°２、角度＝５０．４°である。３か月（図７Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．８°×０．８°、面積＝０．５°２、角度＝−９．０°；９５％ＢＣＥＡ：１．５°×１．４°、面積＝１．６°２、角度＝−９．０°である。
【図８Ａ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン時（図８Ａ）及び他方の眼である処置眼におけるＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後１か月（図８Ｂ）でのＫＬ９４  ＯＳ（対照眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図８Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．７であり、一方で、１か月の代表閾値（ｄＢ）は０．５である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝９５％、Ｐ２＝１００％、図８Ａ）、１か月で安定している（Ｐ１＝９９％、Ｐ２＝１００％、図８Ｂ）。ベースライン（図８Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：１．１°×０．８°、面積＝０．７°２、角度＝１２．１°；９５％ＢＣＥＡ：２．０°×１．４°、面積＝２．２°２、角度＝１２．１°である。１か月（図８Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．９°×０．６°、面積＝０．４°２、角度＝−１３．５°；９５％ＢＣＥＡ：１．６°×１．１°、面積＝１．３°２、角度＝−１３．５°である。
【図８Ｂ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン時（図８Ａ）及び他方の眼である処置眼におけるＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後１か月（図８Ｂ）でのＫＬ９４  ＯＳ（対照眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図８Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．７であり、一方で、１か月の代表閾値（ｄＢ）は０．５である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝９５％、Ｐ２＝１００％、図８Ａ）、１か月で安定している（Ｐ１＝９９％、Ｐ２＝１００％、図８Ｂ）。ベースライン（図８Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：１．１°×０．８°、面積＝０．７°２、角度＝１２．１°；９５％ＢＣＥＡ：２．０°×１．４°、面積＝２．２°２、角度＝１２．１°である。１か月（図８Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．９°×０．６°、面積＝０．４°２、角度＝−１３．５°；９５％ＢＣＥＡ：１．６°×１．１°、面積＝１．３°２、角度＝−１３．５°である。
【図９Ａ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン（図９Ａ）及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後１か月（図９Ｂ）でのＫＬ９４  ＯＤ（処置眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図９Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．５であり、一方で、１か月の代表閾値（ｄＢ）は３．４である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝９０％、Ｐ２＝９７％、図９Ａ）、１か月で安定している（Ｐ１＝１００％、Ｐ２＝１００％、図９Ｂ）。ベースライン（図９Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：１．２°×１．４°、面積＝１．３°２、角度＝５１．２°；９５％ＢＣＥＡ：２．２°×２．４°、面積＝４．０°２、角度＝５１．２°である。１か月（図９Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．７°×０．６°、面積＝０．４°２、角度＝−１６．７°；９５％ＢＣＥＡ：１．３°×１．１°、面積＝１．１°２、角度＝−１６．７°である。
【図９Ｂ】各々、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン（図９Ａ）及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後１か月（図９Ｂ）でのＫＬ９４  ＯＤ（処置眼）に関する微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。ベースライン（図９Ａ）の代表閾値（ｄＢ）は０．５であり、一方で、１か月の代表閾値（ｄＢ）は３．４である。固視安定性は、ベースラインで安定しており（Ｐ１＝９０％、Ｐ２＝９７％、図９Ａ）、１か月で安定している（Ｐ１＝１００％、Ｐ２＝１００％、図９Ｂ）。ベースライン（図９Ａ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：１．２°×１．４°、面積＝１．３°２、角度＝５１．２°；９５％ＢＣＥＡ：２．２°×２．４°、面積＝４．０°２、角度＝５１．２°である。１か月（図９Ｂ）のＢＣＥＡは：６３％ＢＣＥＡ：０．７°×０．６°、面積＝０．４°２、角度＝−１６．７°；９５％ＢＣＥＡ：１．３°×１．１°、面積＝１．１°２、角度＝−１６．７°である。
【図１０】一方の眼においてＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の注射によって網膜色素変性症に関して処置された３人の対象で測定された平均網膜厚（中心１ｍｍ  ＥＴＤＲＳ円の平均）を説明する表である。平均網膜厚は、光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）によって測定した。平均網膜厚は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射前のベースライン、ならびにＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の注射後１か月及び３か月で測定した。３か月の変化は、下部に示す。
【図１１Ａ】Ｘ連鎖性網膜色素変性症の遺伝子治療後の網膜感度及び構造変化を示す一連の画像である。微小視野計測によって測定した平均網膜感度（デシベル、ｄＢ）及び視野（感度ヒートマップによって表す）は、ベースラインから処置後４か月まで、処置眼において漸進的に改善したが、一方で、未処置眼は安定したままであった。早期治療糖尿病性網膜症試験チャートの読み（文字数）によって測定した視力は、両眼で安定したままであった。
【図１１Ｂ】Ｘ連鎖性網膜色素変性症の遺伝子治療後の網膜感度及び構造変化を示す一連の画像である。黄斑上の網膜外顆粒層（ＯＮＬ）の完全なセグメンテーション（全ＯＣＴラインスキャン）によって、未処置眼では有意な変化がないのと比較して、処置眼において感度向上の領域に対応するＯＮＬの局所的な肥厚（ヒートマップ上で赤色で示す）が明らかになった。中央の列：１、３及び６ｍｍ  ＥＴＤＲＳ黄斑グリッド上のセクター別ＯＮＬ厚変化平均（μｍ）。右の列：変化したＯＮＬ厚のヒートマップ（赤色は厚さの増加を表し、緑色は厚さの減少を表す）。
【図１２Ａ−１】右眼への１．０×１０１１ｇｐ  ＡＡＶ８．ＲＰＧＲを用いた網膜下遺伝子治療後の患者の生微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。各微小視野計測データセットについて、６８検査座の各々での閾値感度を色分けし、網膜の走査型レーザー検眼鏡検査（ＳＬＯ）画像上に重ねた（右上パネル）。閾値感度データは、ヒートマップ（左中央パネル）及び感度周波数のヒストグラムとしても示し、正常な参照曲線を緑色で示す（右中央パネル）。患者の固視は、検査全体を通してリアルタイムでアイトラッカーによって評価し、右上パネルに細かいシアンのドットとしてプロットした。検査中の固視安定性（中心窩からの可動域の程度によって示される）を、右下パネルに示す。両眼で一致している最初の３回の処置前ベースライン視野検査によって証明されるように、学習効果はなく、手術前後の未処置眼も同様である。処置眼だけが網膜機能における有意な改善を示し、遺伝子治療後およそ３〜４か月で最大に達する。
【図１２Ａ−２】同上。
【図１２Ａ−３】同上。
【図１２Ａ−４】同上。
【図１２Ａ−５】同上。
【図１２Ａ−６】同上。
【図１２Ｂ−１】処置していない患者の左眼の生微小視野計測データを示す一連の画像及びグラフである。各微小視野計測データセットについて、６８検査座の各々での閾値感度を色分けし、網膜の走査型レーザー検眼鏡検査（ＳＬＯ）画像上に重ねた（右上パネル）。閾値感度データは、ヒートマップ（左中央パネル）及び感度周波数のヒストグラムとしても示し、正常な参照曲線を緑色で示す（右中央パネル）。患者の固視は、検査全体を通してリアルタイムでアイトラッカーによって評価し、右上パネルに細かいシアンのドットとしてプロットした。検査中の固視安定性（中心窩からの可動域の程度によって示される）を、右下パネルに示す。両眼で一致している最初の３回の処置前ベースライン視野検査によって証明されるように、学習効果はなく、手術前後の未処置眼も同様である。処置眼だけが網膜機能における有意な改善を示し、遺伝子治療後およそ３〜４か月で最大に達する。
【図１２Ｂ−２】同上。
【図１２Ｂ−３】同上。
【図１２Ｂ−４】同上。
【図１２Ｂ−５】同上。
【図１２Ｂ−６】同上。
【図１３】ＡＡＶ  ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドの実施形態の図である。ポリヌクレオチドは、５’から３’で、５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、ロドプシンキナーゼ（ＲＫ）プロモーター、コドン最適化ＲＰＧＲＯＲＦ１５配列（ｃｏＲＰＧＲ）、ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨ）、及び３’ＩＴＲを含む。
【図１４】ヒトの眼の例示の断面図である。
【図１５】線２−２に沿って取った、図１４のヒトの眼の一部の断面図である。
【図１６】線３．３に沿って取った、図１４のヒトの眼の一部の断面であり、流体の存在を伴わない上脈絡膜腔を例示している。
【図１７】線３−３に沿って取った、図１４のヒトの眼の一部の断面であり、流体の存在を伴う上脈絡膜腔を例示している。
【図１８Ａ】上脈絡膜腔に遺伝子治療組成物を投与するマイクロニードルを含むデバイスを図示する概略図である。
【図１８Ｂ】強膜を横切り、上脈絡膜腔に入り、遺伝子治療組成物を送達するマイクロニードルを図示する概略図である。
【図１９】本開示の例示的なマイクロカテーテル先端の写真である。一部の実施形態では、ｄｅｖｉｃｅｐｈａｒｍ．ｎｅｔ／ｉｓｃｉｅｎｃｅ／ＵＳ／ｉｔｒａｃｋ．ｈｔｍにて示されるものなどのマイクロカテーテルを使用してよい。
【図２０】本開示の例示的なマイクロカニューレの概略図である。
【図２１】ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ用量漸増試験で使用した漸増スキームの概略図である。ＤＬＴ＝用量制限毒性；ＭＴＤ＝最大耐量。
【図２２】Ａ〜Ｂは、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの網膜下注射を図示する概略図である。Ａは、硝子体ゲルを除去するためのＢＩＯＭ（登録商標）手術システムを通した標準的な硝子体切除術を示し、Ｂは、その後に続く、必要に応じたＢＳＳの注射による網膜剥離、及び４１ゲージのカニューレを通した網膜下腔への０．１ｍＬベクター懸濁液の注射を示す。
【図２３】ＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングの概略図である。
【図２４Ａ】遍在ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２４Ｂ】遍在ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２４Ｃ】遍在ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２５Ａ】光受容体特異的ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５を生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２５Ｂ】光受容体特異的ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５を生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２５Ｃ】光受容体特異的ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５を生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２６Ａ】潜在的に毒性である短縮型ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２６Ｂ】潜在的に毒性である短縮型ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２６Ｃ】潜在的に毒性である短縮型ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２６Ｄ】潜在的に毒性である短縮型ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子の選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２７Ａ】ＡＡＶ８ベクターから正しい完全長ＲＰＧＲＯＲＦ１５ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子のコドン最適化及び選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２７Ｂ】ＡＡＶ８ベクターから正しい完全長ＲＰＧＲＯＲＦ１５ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子のコドン最適化及び選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２７Ｃ】ＡＡＶ８ベクターから正しい完全長ＲＰＧＲＯＲＦ１５ｍＲＮＡを生成するためのＲＰＧＲ遺伝子のコドン最適化及び選択的スプライシングを示す一連の概略図である。
【図２８】ＲＰＧＲＯＲＦ１５コドン最適化スキームの概略図である（配列番号１６及び１７）。
【図２９】Ａは、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞からの全タンパク質溶解物のウェスタンブロットである。トランスフェクトされていない細胞を陰性対照（ｎｃ）として使用し、これは、４７ｋＤａのみにて陽性バンドを示し、ローディングコントロールＧＡＰＤＨを示している。Ｂは、コドン最適化及び野生型プラスミドトランスフェクト細胞を交互様式にてロードし、２２０ｋＤａ（ＲＰＧＲを示す）でのバンドのシグナル強度を定量化した。ローディングコントロール（ＧＡＰＤＨ）に正規化した後の任意単位（ＡＵ）での強度の箱ひげ図（中央値、箱は下位及び上位四分位数を示し、ひげは最小値及び最大値）である。Ｃは、コドン最適化及び野生型プラスミドトランスフェクト細胞を交互様式にてロードし、２２０ｋＤａ（ＲＰＧＲを示す）でのバンドのシグナル強度を定量化した。倍数変化を提示するために野生型レベルに正規化した後の棒グラフ（平均±ＳＤ）である。データセット（ｎ＝４）の正規分布を確認した後、分散が等しくない対応のあるサンプルの片側ｔ検定によって有意性を検定した。＊ｐ＜０．００５。Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１７；２５（８）：１８５４−１８６５を参照されたい。
【図３０Ａ】ＲＰＧＲ遺伝子の翻訳後に生成される機能的なＯＲＦ１５領域を示す一連の概略図である。
【図３０Ｂ】ＲＰＧＲ遺伝子の翻訳後に生成される機能的なＯＲＦ１５領域を示す一連の概略図である。
【図３０Ｃ】ＲＰＧＲ遺伝子の翻訳後に生成される機能的なＯＲＦ１５領域を示す一連の概略図である。
【図３１Ａ】ＴＴＬ５を用いたＲＰＧＲグルタミル化の概略図である。
【図３１Ｂ】光受容体繊毛のチューブリンを介してＲＰＧＲを光受容体の外節に移動させるグルタミル化の概略図である。
【図３２Ａ】タンパク質のグルタミル化に対するＲＰＧＲ  ＯＲＦ１５欠失の効果の概略図である。
【図３２Ｂ】欠失のためにグルタミル化が減少した欠損ＲＰＧＲＯＲＦ１５の概略図である。
【図３３】Ａは、ＲＰＧＲＯＲＦ１５発現（黒色矢印）が、トランスフェクトされていないサンプル（ＵＮＴ）と比較して、プラスミドを含有するコドン最適化ＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５；ｃｏ）またはｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｗｔ）のいずれかでトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞で検出されたことを示すウェスタンブロットである。短縮型８０ｋＤａタンパク質（白色矢じり）は、コドン最適化プラスミドでトランスフェクトされた細胞と比較して、ＷＴプラスミドでトランスフェクトされた細胞においてＮ末端指向ＲＰＧＲ抗体で検出された。Ａは、コドン最適化プラスミド（コドン最適化ＲＰＧＲ構築物にスプライス変異体を有さない完全長ＲＰＧＲタンパク質（白色矢じり））でトランスフェクトされた細胞における正しいスプライシングを示す。Ｂは、グルタミル化ＲＧＰＲＯＲＦ１５が、ＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化及びＷＴ配列でトランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞においてＧＴ３３５抗体で検出されたことを示すウェスタンブロットである。Ｂは、コドン最適化プラスミドでトランスフェクトされた細胞における正しいグルタミル化を示す（コドン最適化ＲＰＧＲにおけるＧＴ３３５免疫染色で見られる完全長及び完全グルタミル化ＯＲＦ１５）。図３３Ａの８０ｋＤａバンドは、図３３Ｂではグルタミル化されておらず、それゆえ、Ｃ末端が欠失した短縮型ＲＰＧＲ変異体を表している可能性がある。Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１７；２５（８）：１８５４−１８６５を参照されたい。
【図３４】コドン最適化ＲＰＧＲＯＲＦ１５を用いたヒトの眼の遺伝子治療後に生成された一連の画像である。
【図３５】Ａ〜Ｄは、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＲＰＧＲグルタミル化が、Ｃ末端塩基ドメイン及びＧｌｕ−Ｇｌｙリッチ領域の両方を必要とすることを示す一連の概略図、イムノブロット、グラフ及び表である。Ａは、ＡＡＶベクターへとパッケージされたヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５発現構築物の図である。Ｇｌｕ−Ｇｌｙリッチ領域は、赤色で、Ｃ末端塩基ドメインは、マゼンタでマークされている。グルタミル化コンセンサスモチーフの位置は、完全長（ＦＬ）構築物の概略図に示す。Ｂは、ＲＰＧＲ発現構築物を注射したＲｐｇｒ−／−マウスからの網膜抽出物のイムノブロットである。レーン１〜５は、図３５Ａに示す構築物番号と一致し、レーン６は、非注射対照である。完全長ＲＰＧＲ及び程度は低いがＲＰＧＲΔ８６４−９８９は、ＧＴ３３５を用いた検出によって示されるようにグルタミル化されている（中央）。ＲＰＧＲ抗体を用いたプローブにより、組換えＲＰＧＲの発現レベルを示す（上部）。β−アクチンでブロットを再プローブすることにより、ローディングコントロールを提供する（下部）。Ｃは、ＲＰＧＲレベルについて正規化した後のデンシトメトリーによるグルタミル化レベルの定量化であり、サンプル４レベルは任意に１に設定されている。Ｄは、これらの結果を要約している。ＮＤ、決定されず。同様の結果が、２つの独立した実験から得られた。Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ，２０１６，１１３（２１）Ｅ２９２５−Ｅ２９３４を参照されたい。
【図３６】ＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化に使用したホモサピエンスのコドン頻度表である。各コドンは、３ヌクレオチド配列（例えば、ＴＴＴ）で示され、その後に１０００あたりの頻度（例えば、１６．９）及び総数（例えば、３３６，５６２）が続く。ヒトコドン使用表は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  ＩＤを伴うＥｎｓｅｍｂｌデータベース（リリース５７）からの１９，２５０個のヒト遺伝子のセットから計算されており、公開ドメイン：ｇｅｎｏｍｅｓ．ｕｒｖ．ｃａｔ／ＣＡＩｃａｌ／ＣＵ＿  ｈｕｍａｎ＿ｎａｔｕｒｅ．ｈｔｍｌにおいて入手可能である。
【図３７】Ａ〜Ｂは、（図３７Ａ）ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５コード配列及び（図３７Ｂ）ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５コード配列に沿ったシーケンシングプライマーアライメントの概要を提供する概略図である。配列を完全にカバーするために、追加のプライマーを設計し、ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃｄｓのＯＲＦ１５領域内に適用した。これは、プライマーアニーリングが困難であるため、及びｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５のＯＲＦ１５領域でポリ−Ｇ連続が原因でシーケンシング反応が頻繁に中途終止するためである。
【図３８】ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５のＯＲＦ１５内にある高度に反復的な、プリン（アデニン／グアニン）リッチ配列（配列番号１８）の例を提供する概略図である。
【図３９Ａ】ＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化が、主要なコード配列において有意な変化をもたらすことを示すグラフである。ＲＰＧＲＯＲＦ１５の完全ｃｄｓに沿ったＧＣ頻度であって、ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５を用いたものを上部（黒色）に、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５を用いたものを下部（赤色）に示し、灰色の破断は野生型配列からの変化を示している。
【図３９Ｂ】ＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化が、主要なコード配列において有意な変化をもたらすことを示す概略図である。上部でｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５を伴って表示する完全配列（配列番号３）は、サイレント置換を赤で示している。ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５（配列番号１０）配列は、下記の参照の通りに表示される。
【図４０】Ａ〜Ｃは、コドン最適化有効性実験の結果を示す一連のグラフである。Ａは、プラスミドＤＮＡを含有するｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５ミニプレパレーションを示す：濃度は有意に高かった（ｎ＝２４、対応のない両側ｔ検定：ｐ＝０．０００４）。Ｂは、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５ミニプレパレーションを示す：２６０／２８０比率のプラスミドＤＮＡ濃度は、変化しないままであった。Ｃは、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５ミニプレパレーションを示す：マキシプレパレーションにおける全プラスミドのプラスミドＤＮＡ濃度により、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５のクローニング効率の増加が確認された。注記：ｎ＝１としてのエラーバーはない。
【図４１】ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＲＰＧＲＯＲＦ１５導入遺伝子発現を示す写真である。細胞を、ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｗｔ）及びｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｃｏ）プラスミド構築物でトランスフェクトした、または培地のみで処置した（陰性対照）。抗ＲＰＧＲ及びＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２を用いた免疫細胞化学後の共焦点顕微鏡は、トランスフェクトされた細胞における高レベルのＲＰＧＲＯＲＦ１５発現を実証する。
【図４２】Ａ〜Ｄは、ＲＰＧＲＯＲＦ１５発現のウェスタンブロット分析の結果を提供する一連の写真、一連のウェスタンブロット及び１対のグラフである。Ａは、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｗｔ）またはｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｃｏ）プラスミド構築物のいずれかでトランスフェクトしたものを示す。対照プラスミド（ＧＦＰ）を使用して、トランスフェクションに関して対照とし（右上）、ＤＭＥＭを陰性対照（ｎｃ）として使用した。Ｂは、ウェスタンブロットバンドの強度を示す。ウェスタンブロットバンドの強度を定量化した。Ｃは、ローディングコントロール（ＧＡＢＤＨ）に正規化した後の任意単位［ＡＵ］での強度の箱ひげ図（中央値、箱は下位及び上位四分位数を示し、ひげは最小値及び最大値）を示す。Ｄは、倍数変化を提示するために野生型レベルに正規化した後の棒グラフ（平均±標準偏差）を示す。
【図４３】Ａ〜Ｃは、ＲＰＧＲＯＲＦ１５発現のフローサイトメトリー分析の結果を提供する写真及び一連のグラフである。Ａは、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｗｔ）、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｃｏ）プラスミド構築物のいずれかでトランスフェクトしたものを示す。対照プラスミド（ＧＦＰ）を使用して、トランスフェクションに関して対照とし（右上）、ＤＭＥＭを陰性対照として使用した（図示せず）。スケールバー＝２０μＭ。Ｂは、ナイーブ細胞を使用して、適切な感度及び特異性の閾値を設定したものを示す（左のグラフ）。これらの閾値を使用して、ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５またはｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５でトランスフェクトされた検査サンプルを定量化した。Ｃは、任意単位［ＡＵ］での蛍光強度中央値の箱ひげ図（中央値、箱は下位及び上位四分位数を示し、ひげは最小値及び最大値）（ｎ＝９）を示す。
【図４４】本開示の組成物を用いた処置に応答する対象の１か月目での全体的な黄斑感度を示すグラフである。感度は、本開示の微小視野計測法を使用して決定した。
【図４５】本開示の組成物を用いた処置に応答する対象の黄斑内の１６中心点の１か月目での感度を示すグラフである。感度は、本開示の微小視野計測法を使用して決定した。
【図４６】１か月目で５座にて７デシブル以上の改善を有した患者の数を示すグラフである。分析は、ベースライン及び処置後１か月追跡間の平均感度における差に基づいた。感度は、本開示の微小視野計測法を使用して決定した。
【図４７】１か月目で１６中心座の５座にて７デシブル以上の改善を有した患者の数を示すグラフである。分析は、ベースライン及び処置後１か月追跡間の平均感度における差に基づいた。感度は、本開示の微小視野計測法を使用して決定した。
【図４８】本開示の組成物を用いた処置に応答する対象の３か月目での感度を示すグラフである。感度は、本開示の微小視野計測法を使用して決定した。
【図４９】本開示の組成物を用いた処置に応答する対象の３か月目での黄斑の１６中心座内の感度を示すグラフである。感度は、本開示の微小視野計測法を使用して決定した。
【図５０】３か月目で５座にて７デシブル以上の改善を有した患者の数を示すグラフである。分析は、ベースライン及び処置後３か月追跡間の平均感度における差に基づいた。感度は、本開示の微小視野計測法を使用して決定した。
【図５１】３か月目で１６中心座の５座にて７デシブル以上の改善を有した患者の数を示すグラフである。分析は、ベースライン及び処置後３か月追跡間の平均感度における差に基づいた。感度は、本開示の微小視野計測法を使用して決定した。
【図５２−１】Ｘｉｒｉｕｓ臨床治験の一部としてＯＣＴによって評価された対象の記述的要約を提供する表である。
【図５２−２】Ｘｉｒｉｕｓ臨床治験の一部としてＯＣＴによって評価された対象の記述的要約を提供する表である。
【図５３】対象１（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。
【図５４】対象２（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図５５】対象３（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。
【図５６】対象４（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図５７】対象５（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。
【図５８】対象６（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図５９】対象７（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図６０】対象８（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図６１】対象９（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図６２】対象１０（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図６３】対象１１（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。
【図６４】対象１２（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。
【図６５】対象１３（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図６６】対象１４（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。黄色の矢印は、内節及び外節に対応する網膜内の二重線を指し示しており、その出現または厚さの増加は、治療有効性の兆候である。
【図６７】対象１５（図５２に示す通り）の網膜の断面の低倍率（左）及び高倍率（右）画像を提供する１対の写真である。
【図６８】ＯＣＴによって評価した対象の各々において同定された様々な特性を示す一連の写真である。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
本開示は、複数の組換えアデノ随伴ウイルス血清型８（ｒＡＡＶ８）粒子を含む組成物を提供し、複数のｒＡＡＶ８粒子の各ｒＡＡＶ８は、非複製であり、複数のｒＡＡＶ８粒子の各ｒＡＡＶ８は、５’から３’で、以下：（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）をコードする配列；（ｂ）Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーターをコードする配列；（ｃ）網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子ＯＲＦ１５アイソフォーム（ＲＰＧＲＯＲＦ１５）をコードする配列；（ｄ）ポリアデニル化（ポリＡ）シグナルをコードする配列；（ｅ）３’ＩＴＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含み、該組成物は、端点を含んで、５×１０１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）及び２×１０１３ｖｇ／ｍＬ間を含む。
【００５７】
本開示の組成物の一部の実施形態では、組成物は、端点を含んで、０．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１２ｖｇ／ｍＬ間を含む。一部の実施形態では、組成物は、０．５×１０１１ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０９ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１０ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１０ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１１ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、２．５×１０１１ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１１ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１２ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１３ｖｇ／ｍＬを含む。一部の実施形態では、組成物は、２×１０１３ｖｇ／ｍＬを含む。
【００５８】
一部の実施形態では、本開示は、複数の組換えアデノ随伴ウイルス血清型８（ｒＡＡＶ８）粒子を含む組成物を提供し、複数のｒＡＡＶ８粒子の各ｒＡＡＶ８は、非複製であり、複数のｒＡＡＶ８粒子の各ｒＡＡＶ８は、５’から３’で、以下：（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）をコードする配列；（ｂ）Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーターをコードする配列；（ｃ）網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子ＯＲＦ１５アイソフォーム（ＲＰＧＲＯＲＦ１５）をコードする配列；（ｄ）ポリアデニル化（ポリＡ）シグナルをコードする配列；及び（ｅ）３’ＩＴＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含み、該組成物は、端点を含んで、１．０×１０１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ間を含む。
【００５９】
本開示の組成物の一部の実施形態では、組成物は、端点を含んで、５×１０９ゲノム粒子（ｇｐ）及び５×１０１１ｇｐ間を含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０９ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１０ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１０ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、１×１０１１ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、２．５×１０１１ｇｐを含む。一部の実施形態では、組成物は、５×１０１１ｇｐを含む。
【００６０】
一部の実施形態では、組成物は、医薬的に許容可能な担体をさらに含む。一部の実施形態では、医薬的に許容可能な担体は、Ｔｒｉｓ、ＭｇＣｌ２、及びＮａＣｌ、任意選択で２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、及び２００ｍＭ  ＮａＣｌをｐＨ８．０にて含む。一部の実施形態では、医薬的に許容可能な担体は、ポロクサマー１８８を０．００１％にてさらに含む。
【００６１】
本開示は、本開示の組成物を含む、デバイスを提供する。一部の実施形態では、デバイスは、マイクロ送達デバイスを含む。一部の実施形態では、マイクロ送達デバイスは、マイクロニードルを含み、マイクロニードルは、網膜下注射に好適である。一部の実施形態では、マイクロ送達デバイスは、マイクロカテーテルを含み、マイクロカテーテルは、上脈絡膜注射に好適である。
【００６２】
本開示は、網膜色素変性症の処置を必要とする対象において網膜色素変性症を処置する方法を提供し、該方法は、対象に、治療有効量の本開示の組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、対象に治療有効量の対象に投与される組成物を投与することは、網膜色素変性症の徴候または症状を改善する。一部の実施形態では、網膜色素変性症の徴候は、健常もしくは対照ＥＺまたは網膜感度と比較した場合に、エリプソイドゾーン（ＥＺ）の変性及び／または網膜感度の減少を含む。一部の実施形態では、網膜色素変性症の兆候は、健常または対照視力、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚と比較した場合に、視力の減少、網膜厚及び／または外顆粒層（ＯＮＬ）厚の減少を含む。一部の実施形態では、網膜厚は、ＯＮＬ厚を包含するまたは含む。本開示の方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症を処置することは、ＥＺ、網膜感度、視力、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚を回復させる。本開示の方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症を処置することは、ＥＺの変性あるいは網膜感度、視力、網膜厚及び／または外顆粒層（ＯＮＬ）厚の減少を含むがこれに限定されない、網膜色素変性症の徴候または症状の重症度を低減させる。本開示の方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症を処置することは、ＥＺの変性あるいは網膜感度、視力、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚の減少を含むがこれに限定されない、網膜色素変性症の徴候または症状の発症を遅らせる。本開示の方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症を処置することは、ＥＺの変性あるいは網膜感度、視力、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚の減少を含むがこれに限定されない、網膜色素変性症の徴候または症状の進行速度を減少させるまたは進行を阻害する。健常または対照ＥＺ、網膜感度、視力、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚は、例えば、対象と性別及び年齢が一致する個体の、実験的に決定された母集団に基づく閾値、代表値、平均または基準を含み得る。健常または対照ＥＺ、網膜感度、視力、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚は、対象の非罹患眼のものを含み得る。対照ＥＺ、網膜感度、視力、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚は、網膜色素変性症の徴候または症状を改善する組成物の有効性を決定するための処置全体にわたる比較のためのベースラインを形成する本開示の組成物の投与前の対象における時点を含み得る。
【００６３】
ＡＡＶ組成物
本開示の組成物は、哺乳動物への、好ましくは、ヒトへの全身投与または局所投与に好適な網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子ＯＲＦ１５（ＲＰＧＲＯＲＦ１５）を含むポリヌクレオチドを含み得る。本開示の例示的なＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列またはその一部を含む。好ましくは、本開示のＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、ヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列またはその一部を含む。本開示の例示的なＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、遺伝子またはその一部の発現を可能にするまたは増強するための制御エレメントをコードする１つまたは複数の配列をさらに含み得る。例示的な制御エレメントは、プロモーター、イントロン、エンハンサーエレメント、応答エレメント（転写後応答エレメントまたは転写後制御エレメントを含む）、ポリアデノシン（ポリＡ）配列、及び転写の効率的な終止を促進するための遺伝子断片（β−グロビン遺伝子断片及びウサギβ−グロビン遺伝子断片を含む）を含むが、これに限定されない。
【００６４】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、ヒト網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子（ＲＰＧＲ）タンパク質またはその一部に対応するヒト遺伝子またはその一部を含む。ヒトＲＰＧＲは、複数のスプライスされたアイソフォームを含む。アイソフォームＯＲＦ１５  ＲＰＧＲ（ＲＰＧＲＯＲＦ１５）は、光受容体に局在する。一部の実施形態では、ＲＰＧＲタンパク質は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５である。一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、コドン最適化された配列を含む。一部の実施形態では、配列は、哺乳動物における発現のためにコドン最適化される。一部の実施形態では、配列は、ヒトにおける発現のためにコドン最適化される。
【００６５】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、ＲＰＧＲＯＲＦ１５のｃＤＮＡをコードする精製された組換え血清型２（ｒＡＡＶ）からなる。一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：１１９ｂｐ  ＡＡＶ２  ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、１９９ｂｐ  Ｇタンパク質共役ロドプシンキナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーター、３４５９ｂｐヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃＤＮＡ、２７０ｂｐウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ−ポリＡ）、及び１３０ｂｐ  ＡＡＶ２  ３’ＩＴＲを含む一本鎖ＤＮＡ挿入配列、ならびにエレメントに隣接する短いクローニング配列を含有する。
【００６６】
一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、ＲＰＧＲＯＲ１５をコードする配列を含む。一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列は、ヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５配列である。一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列は、以下：
１  ＭＲＥＰＥＥＬＭＰＤ  ＳＧＡＶＦＴＦＧＫＳ  ＫＦＡＥＮＮＰＧＫＦ  ＷＦＫＮＤＶＰＶＨＬ  ＳＣＧＤＥＨＳＡＶＶ  ＴＧＮＮＫＬＹＭＦＧ
６１  ＳＮＮＷＧＱＬＧＬＧ  ＳＫＳＡＩＳＫＰＴＣ  ＶＫＡＬＫＰＥＫＶＫ  ＬＡＡＣＧＲＮＨＴＬ  ＶＳＴＥＧＧＮＶＹＡ  ＴＧＧＮＮＥＧＱＬＧ
１２１  ＬＧＤＴＥＥＲＮＴＦ  ＨＶＩＳＦＦＴＳＥＨ  ＫＩＫＱＬＳＡＧＳＮ  ＴＳＡＡＬＴＥＤＧＲ  ＬＦＭＷＧＤＮＳＥＧ  ＱＩＧＬＫＮＶＳＮＶ
１８１  ＣＶＰＱＱＶＴＩＧＫ  ＰＶＳＷＩＳＣＧＹＹ  ＨＳＡＦＶＴＴＤＧＥ  ＬＹＶＦＧＥＰＥＮＧ  ＫＬＧＬＰＮＱＬＬＧ  ＮＨＲＴＰＱＬＶＳＥ
２４１  ＩＰＥＫＶＩＱＶＡＣ  ＧＧＥＨＴＶＶＬＴＥ  ＮＡＶＹＴＦＧＬＧＱ  ＦＧＱＬＧＬＧＴＦＬ  ＦＥＴＳＥＰＫＶＩＥ  ＮＩＲＤＱＴＩＳＹＩ
３０１  ＳＣＧＥＮＨＴＡＬＩ  ＴＤＩＧＬＭＹＴＦＧ  ＤＧＲＨＧＫＬＧＬＧ  ＬＥＮＦＴＮＨＦＩＰ  ＴＬＣＳＮＦＬＲＦＩ  ＶＫＬＶＡＣＧＧＣＨ
３６１  ＭＶＶＦＡＡＰＨＲＧ  ＶＡＫＥＩＥＦＤＥＩ  ＮＤＴＣＬＳＶＡＴＦ  ＬＰＹＳＳＬＴＳＧＮ  ＶＬＱＲＴＬＳＡＲＭ  ＲＲＲＥＲＥＲＳＰＤ
４２１  ＳＦＳＭＲＲＴＬＰＰ  ＩＥＧＴＬＧＬＳＡＣ  ＦＬＰＮＳＶＦＰＲＣ  ＳＥＲＮＬＱＥＳＶＬ  ＳＥＱＤＬＭＱＰＥＥ  ＰＤＹＬＬＤＥＭＴＫ
４８１  ＥＡＥＩＤＮＳＳＴＶ  ＥＳＬＧＥＴＴＤＩＬ  ＮＭＴＨＩＭＳＬＮＳ  ＮＥＫＳＬＫＬＳＰＶ  ＱＫＱＫＫＱＱＴＩＧ  ＥＬＴＱＤＴＡＬＴＥ
５４１  ＮＤＤＳＤＥＹＥＥＭ  ＳＥＭＫＥＧＫＡＣＫ  ＱＨＶＳＱＧＩＦＭＴ  ＱＰＡＴＴＩＥＡＦＳ  ＤＥＥＶＥＩＰＥＥＫ  ＥＧＡＥＤＳＫＧＮＧ
６０１  ＩＥＥＱＥＶＥＡＮＥ  ＥＮＶＫＶＨＧＧＲＫ  ＥＫＴＥＩＬＳＤＤＬ  ＴＤＫＡＥＶＳＥＧＫ  ＡＫＳＶＧＥＡＥＤＧ  ＰＥＧＲＧＤＧＴＣＥ
６６１  ＥＧＳＳＧＡＥＨＷＱ  ＤＥＥＲＥＫＧＥＫＤ  ＫＧＲＧＥＭＥＲＰＧ  ＥＧＥＫＥＬＡＥＫＥ  ＥＷＫＫＲＤＧＥＥＱ  ＥＱＫＥＲＥＱＧＨＱ
７２１  ＫＥＲＮＱＥＭＥＥＧ  ＧＥＥＥＨＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＤＲＥＥＥＥＥ  ＫＥＧＥＧＫＥＥＧＥ  ＧＥＥＶＥＧＥＲＥＫ  ＥＥＧＥＲＫＫＥＥＲ
７８１  ＡＧＫＥＥＫＧＥＥＥ  ＧＤＱＧＥＧＥＥＥＥ  ＴＥＧＲＧＥＥＫＥＥ  ＧＧＥＶＥＧＧＥＶＥ  ＥＧＫＧＥＲＥＥＥＥ  ＥＥＧＥＧＥＥＥＥＧ
８４１  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＥ  ＥＥＥＧＥＧＫＧＥＥ  ＥＧＥＥＧＥＧＥＥＥ  ＧＥＥＧＥＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＥＧＥＧＥＥＥ  ＧＥＧＥＧＥＥＥＥＧ
９０１  ＥＧＥＧＥＥＥＧＥＧ  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＫ  ＧＥＥＥＧＥＥＧＥＧ  ＥＧＥＥＥＥＧＥＧＥ  ＧＥＤＧＥＧＥＧＥＥ  ＥＥＧＥＷＥＧＥＥＥ
９６１  ＥＧＥＧＥＧＥＥＥＧ  ＥＧＥＧＥＥＧＥＧＥ  ＧＥＥＥＥＧＥＧＥＧ  ＥＥＥＥＧＥＥＥＧＥ  ＥＥＧＥＧＥＥＥＧＥ  ＧＥＧＥＥＥＥＥＧＥ
１０２１  ＶＥＧＥＶＥＧＥＥＧ  ＥＧＥＧＥＥＥＥＧＥ  ＥＥＧＥＥＲＥＫＥＧ  ＥＧＥＥＮＲＲＮＲＥ  ＥＥＥＥＥＥＧＫＹＱ  ＥＴＧＥＥＥＮＥＲＱ
１０８１  ＤＧＥＥＹＫＫＶＳＫ  ＩＫＧＳＶＫＹＧＫＨ  ＫＴＹＱＫＫＳＶＴＮ  ＴＱＧＮＧＫＥＱＲＳ  ＫＭＰＶＱＳＫＲＬＬ  ＫＮＧＰＳＧＳＫＫＦ
１１４１  ＷＮＮＶＬＰＨＹＬＥ  ＬＫ（配列番号２）のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一性、少なくとも９０％同一性、少なくとも９５％同一性、少なくとも９７％同一性、少なくとも９９％同一性を有するまたは同一であるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む。
【００６７】
一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列は、野生型ヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列は、以下：
１  ａｔｇａｇｇｇａｇｃ  ｃｇｇａａｇａｇｃｔ  ｇａｔｇｃｃｃｇａｔ  ｔｃｇｇｇｔｇｃｔｇ  ｔｇｔｔｔａｃａｔｔ  ｔｇｇｇａａａａｇｔ
６１  ａａａｔｔｔｇｃｔｇ  ａａａａｔａａｔｃｃ  ｃｇｇｔａａａｔｔｃ  ｔｇｇｔｔｔａａａａ  ａｔｇａｔｇｔｃｃｃ  ｔｇｔａｃａｔｃｔｔ
１２１  ｔｃａｔｇｔｇｇａｇ  ａｔｇａａｃａｔｔｃ  ｔｇｃｔｇｔｔｇｔｔ  ａｃｃｇｇａａａｔａ  ａｔａａａｃｔｔｔａ  ｃａｔｇｔｔｔｇｇｃ
１８１  ａｇｔａａｃａａｃｔ  ｇｇｇｇｔｃａｇｔｔ  ａｇｇａｔｔａｇｇａ  ｔｃａａａｇｔｃａｇ  ｃｃａｔｃａｇｃａａ  ｇｃｃａａｃａｔｇｔ
２４１  ｇｔｃａａａｇｃｔｃ  ｔａａａａｃｃｔｇａ  ａａａａｇｔｇａａａ  ｔｔａｇｃｔｇｃｃｔ  ｇｔｇｇａａｇｇａａ  ｃｃａｃａｃｃｃｔｇ
３０１  ｇｔｇｔｃａａｃａｇ  ａａｇｇａｇｇｃａａ  ｔｇｔａｔａｔｇｃａ  ａｃｔｇｇｔｇｇａａ  ａｔａａｔｇａａｇｇ  ａｃａｇｔｔｇｇｇｇ
３６１  ｃｔｔｇｇｔｇａｃａ  ｃｃｇａａｇａａａｇ  ａａａｃａｃｔｔｔｔ  ｃａｔｇｔａａｔｔａ  ｇｃｔｔｔｔｔｔａｃ  ａｔｃｃｇａｇｃａｔ
４２１  ａａｇａｔｔａａｇｃ  ａｇｃｔｇｔｃｔｇｃ  ｔｇｇａｔｃｔａａｔ  ａｃｔｔｃａｇｃｔｇ  ｃｃｃｔａａｃｔｇａ  ｇｇａｔｇｇａａｇａ
４８１  ｃｔｔｔｔｔａｔｇｔ  ｇｇｇｇｔｇａｃａａ  ｔｔｃｃｇａａｇｇｇ  ｃａａａｔｔｇｇｔｔ  ｔａａａａａａｔｇｔ  ａａｇｔａａｔｇｔｃ
５４１  ｔｇｔｇｔｃｃｃｔｃ  ａｇｃａａｇｔｇａｃ  ｃａｔｔｇｇｇａａａ  ｃｃｔｇｔｃｔｃｃｔ  ｇｇａｔｃｔｃｔｔｇ  ｔｇｇａｔａｔｔａｃ
６０１  ｃａｔｔｃａｇｃｔｔ  ｔｔｇｔａａｃａａｃ  ａｇａｔｇｇｔｇａｇ  ｃｔａｔａｔｇｔｇｔ  ｔｔｇｇａｇａａｃｃ  ｔｇａｇａａｔｇｇｇ
６６１  ａａｇｔｔａｇｇｔｃ  ｔｔｃｃｃａａｔｃａ  ｇｃｔｃｃｔｇｇｇｃ  ａａｔｃａｃａｇａａ  ｃａｃｃｃｃａｇｃｔ  ｇｇｔｇｔｃｔｇａａ
７２１  ａｔｔｃｃｇｇａｇａ  ａｇｇｔｇａｔｃｃａ  ａｇｔａｇｃｃｔｇｔ  ｇｇｔｇｇａｇａｇｃ  ａｔａｃｔｇｔｇｇｔ  ｔｃｔｃａｃｇｇａｇ
７８１  ａａｔｇｃｔｇｔｇｔ  ａｔａｃｃｔｔｔｇｇ  ｇｃｔｇｇｇａｃａａ  ｔｔｔｇｇｔｃａｇｃ  ｔｇｇｇｔｃｔｔｇｇ  ｃａｃｔｔｔｔｃｔｔ
８４１  ｔｔｔｇａａａｃｔｔ  ｃａｇａａｃｃｃａａ  ａｇｔｃａｔｔｇａｇ  ａａｔａｔｔａｇｇｇ  ａｔｃａａａｃａａｔ  ａａｇｔｔａｔａｔｔ
９０１  ｔｃｔｔｇｔｇｇａｇ  ａａａａｔｃａｃａｃ  ａｇｃｔｔｔｇａｔａ  ａｃａｇａｔａｔｃｇ  ｇｃｃｔｔａｔｇｔａ  ｔａｃｔｔｔｔｇｇａ
９６１  ｇａｔｇｇｔｃｇｃｃ  ａｃｇｇａａａａｔｔ  ａｇｇａｃｔｔｇｇａ  ｃｔｇｇａｇａａｔｔ  ｔｔａｃｃａａｔｃａ  ｃｔｔｃａｔｔｃｃｔ
１０２１  ａｃｔｔｔｇｔｇｃｔ  ｃｔａａｔｔｔｔｔｔ  ｇａｇｇｔｔｔａｔａ  ｇｔｔａａａｔｔｇｇ  ｔｔｇｃｔｔｇｔｇｇ  ｔｇｇａｔｇｔｃａｃ
１０８１  ａｔｇｇｔａｇｔｔｔ  ｔｔｇｃｔｇｃｔｃｃ  ｔｃａｔｃｇｔｇｇｔ  ｇｔｇｇｃａａａａｇ  ａａａｔｔｇａａｔｔ  ｃｇａｔｇａａａｔａ
１１４１  ａａｔｇａｔａｃｔｔ  ｇｃｔｔａｔｃｔｇｔ  ｇｇｃｇａｃｔｔｔｔ  ｃｔｇｃｃｇｔａｔａ  ｇｃａｇｔｔｔａａｃ  ｃｔｃａｇｇａａａｔ
１２０１  ｇｔａｃｔｇｃａｇａ  ｇｇａｃｔｃｔａｔｃ  ａｇｃａｃｇｔａｔｇ  ｃｇｇｃｇａａｇａｇ  ａｇａｇｇｇａｇａｇ  ｇｔｃｔｃｃａｇａｔ
１２６１  ｔｃｔｔｔｔｔｃａａ  ｔｇａｇｇａｇａａｃ  ａｃｔａｃｃｔｃｃａ  ａｔａｇａａｇｇｇａ  ｃｔｃｔｔｇｇｃｃｔ  ｔｔｃｔｇｃｔｔｇｔ
１３２１  ｔｔｔｃｔｃｃｃｃａ  ａｔｔｃａｇｔｃｔｔ  ｔｃｃａｃｇａｔｇｔ  ｔｃｔｇａｇａｇａａ  ａｃｃｔｃｃａａｇａ  ｇａｇｔｇｔｃｔｔａ
１３８１  ｔｃｔｇａａｃａｇｇ  ａｃｃｔｃａｔｇｃａ  ｇｃｃａｇａｇｇａａ  ｃｃａｇａｔｔａｔｔ  ｔｇｃｔａｇａｔｇａ  ａａｔｇａｃｃａａａ
１４４１  ｇａａｇｃａｇａｇａ  ｔａｇａｔａａｔｔｃ  ｔｔｃａａｃｔｇｔａ  ｇａａａｇｃｃｔｔｇ  ｇａｇａａａｃｔａｃ  ｔｇａｔａｔｃｔｔａ
１５０１  ａａｃａｔｇａｃａｃ  ａｃａｔｃａｔｇａｇ  ｃｃｔｇａａｔｔｃｃ  ａａｔｇａａａａｇｔ  ｃａｔｔａａａａｔｔ  ａｔｃａｃｃａｇｔｔ
１５６１  ｃａｇａａａｃａａａ  ａｇａａａｃａａｃａ  ａａｃａａｔｔｇｇｇ  ｇａａｃｔｇａｃｇｃ  ａｇｇａｔａｃａｇｃ  ｔｃｔｔａｃｔｇａａ
１６２１  ａａｃｇａｔｇａｔａ  ｇｔｇａｔｇａａｔａ  ｔｇａａｇａａａｔｇ  ｔｃａｇａａａｔｇａ  ａａｇａａｇｇｇａａ  ａｇｃａｔｇｔａａａ
１６８１  ｃａａｃａｔｇｔｇｔ  ｃａｃａａｇｇｇａｔ  ｔｔｔｃａｔｇａｃｇ  ｃａｇｃｃａｇｃｔａ  ｃｇａｃｔａｔｃｇａ  ａｇｃａｔｔｔｔｃａ
１７４１  ｇａｔｇａｇｇａａｇ  ｔａｇａｇａｔｃｃｃ  ａｇａｇｇａｇａａｇ  ｇａａｇｇａｇｃａｇ  ａｇｇａｔｔｃａａａ  ａｇｇａａａｔｇｇａ
１８０１  ａｔａｇａｇｇａｇｃ  ａａｇａｇｇｔａｇａ  ａｇｃａａａｔｇａｇ  ｇａａａａｔｇｔｇａ  ａｇｇｔｇｃａｔｇｇ  ａｇｇａａｇａａａｇ
１８６１  ｇａｇａａａａｃａｇ  ａｇａｔｃｃｔａｔｃ  ａｇａｔｇａｃｃｔｔ  ａｃａｇａｃａａａｇ  ｃａｇａｇｇｔｇａｇ  ｔｇａａｇｇｃａａｇ
１９２１  ｇｃａａａａｔｃａｇ  ｔｇｇｇａｇａａｇｃ  ａｇａｇｇａｔｇｇｇ  ｃｃｔｇａａｇｇｔａ  ｇａｇｇｇｇａｔｇｇ  ａａｃｃｔｇｔｇａｇ
１９８１  ｇａａｇｇｔａｇｔｔ  ｃａｇｇａｇｃａｇａ  ａｃａｃｔｇｇｃａａ  ｇａｔｇａｇｇａｇａ  ｇｇｇａｇａａｇｇｇ  ｇｇａｇａａａｇａｃ
２０４１  ａａｇｇｇｔａｇａｇ  ｇａｇａａａｔｇｇａ  ｇａｇｇｃｃａｇｇａ  ｇａｇｇｇａｇａｇａ  ａｇｇａａｃｔａｇｃ  ａｇａｇａａｇｇａａ
２１０１  ｇａａｔｇｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇａｔｇｇ  ｇｇａａｇａｇｃａｇ  ｇａｇｃａａａａｇｇ  ａｇａｇｇｇａｇｃａ  ｇｇｇｃｃａｔｃａｇ
２１６１  ａａｇｇａａａｇａａ  ａｃｃａａｇａｇａｔ  ｇｇａｇｇａｇｇｇａ  ｇｇｇｇａｇｇａｇｇ  ａｇｃａｔｇｇａｇａ  ａｇｇａｇａａｇａａ
２２２１  ｇａｇｇａｇｇｇａｇ  ａｃａｇａｇａａｇａ  ｇｇａａｇａａｇａｇ  ａａｇｇａｇｇｇａｇ  ａａｇｇｇａａａｇａ  ｇｇａａｇｇａｇａａ
２２８１  ｇｇｇｇａａｇａａｇ  ｔｇｇａｇｇｇａｇａ  ａｃｇｔｇａａａａｇ  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａｇａｇｇａａａａａ  ｇｇａｇｇａａａｇａ
２３４１  ｇｃｇｇｇｇａａｇｇ  ａｇｇａｇａａａｇｇ  ａｇａｇｇａａｇａａ  ｇｇａｇａｃｃａａｇ  ｇａｇａｇｇｇｇｇａ  ａｇａｇｇａｇｇａａ
２４０１  ａｃａｇａｇｇｇｇａ  ｇａｇｇｇｇａｇｇａ  ａａａａｇａｇｇａｇ  ｇｇａｇｇｇｇａａｇ  ｔａｇａｇｇｇａｇｇ  ｇｇａａｇｔａｇａｇ
２４６１  ｇａｇｇｇｇａａａｇ  ｇａｇａｇａｇｇｇａ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇａｇｇａｇｇｇｔｇ  ａｇｇｇｇｇａａｇａ  ｇｇａｇｇａａｇｇｇ
２５２１  ｇａｇｇｇｇｇａａｇ  ａｇｇａｇｇａａｇｇ  ｇｇａｇｇｇｇｇａａ  ｇａｇｇａｇｇａａｇ  ｇａｇａａｇｇｇａａ  ａｇｇｇｇａｇｇａａ
２５８１  ｇａａｇｇｇｇａａｇ  ａａｇｇａｇａａｇｇ  ｇｇａｇｇａａｇａａ  ｇｇｇｇａｇｇａａｇ  ｇａｇａａｇｇｇｇａ  ｇｇｇｇｇａａｇａｇ
２６４１  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａａｇｇｇｇａｇｇｇ  ａｇａａｇａｇｇａａ  ｇｇａｇａａｇｇｇｇ  ａｇｇｇａｇａａｇａ  ｇｇａｇｇａａｇｇａ
２７０１  ｇａａｇｇｇｇａｇｇ  ｇａｇａａｇａｇｇａ  ａｇｇａｇａａｇｇｇ  ｇａｇｇｇａｇａａｇ  ａｇｇａｇｇａａｇｇ  ａｇａａｇｇｇａａａ
２７６１  ｇｇｇｇａｇｇａｇｇ  ａａｇｇａｇａｇｇａ  ａｇｇａｇａａｇｇｇ  ｇａｇｇｇｇｇａａｇ  ａｇｇａｇｇａａｇｇ  ａｇａａｇｇｇｇａａ
２８２１  ｇｇｇｇａｇｇａｔｇ  ｇａｇａａｇｇｇｇａ  ｇｇｇｇｇａａｇａｇ  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａａｔｇｇｇａｇｇｇ  ｇｇａａｇａｇｇａｇ
２８８１  ｇａａｇｇａｇａａｇ  ｇｇｇａｇｇｇｇｇａ  ａｇａｇｇａａｇｇａ  ｇａａｇｇｇｇａａｇ  ｇｇｇａｇｇａａｇｇ  ａｇａａｇｇｇｇａｇ
２９４１  ｇｇｇｇａａｇａｇｇ  ａｇｇａａｇｇａｇａ  ａｇｇｇｇａｇｇｇｇ  ｇａａｇａｇｇａｇｇ  ａａｇｇｇｇａａｇａ  ａｇａａｇｇｇｇａｇ
３００１  ｇａａｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇａｇａｇｇａ  ａｇａａｇｇｇｇａｇ  ｇｇａｇａａｇｇｇｇ  ａｇｇａａｇａａｇａ  ｇｇａａｇｇｇｇａａ
３０６１  ｇｔｇｇａａｇｇｇｇ  ａｇｇｔｇｇａａｇｇ  ｇｇａｇｇａａｇｇａ  ｇａｇｇｇｇｇａａｇ  ｇａｇａｇｇａａｇａ  ｇｇａａｇｇａｇａｇ
３１２１  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａａｇａａａｇｇｇａ  ａａａｇｇａｇｇｇｇ  ｇａａｇｇａｇａａｇ  ａａａａｃａｇｇａｇ  ｇａａｃａｇａｇａａ
３１８１  ｇａｇｇａｇｇａｇｇ  ａａｇａａｇａｇｇｇ  ｇａａｇｔａｔｃａｇ  ｇａｇａｃａｇｇｃｇ  ａａｇａａｇａｇａａ  ｔｇａａａｇｇｃａｇ
３２４１  ｇａｔｇｇａｇａｇｇ  ａｇｔａｃａａａａａ  ａｇｔｇａｇｃａａａ  ａｔａａａａｇｇａｔ  ｃｔｇｔｇａａａｔａ  ｔｇｇｃａａａｃａｔ
３３０１  ａａａａｃａｔａｔｃ  ａａａａａａａｇｔｃ  ａｇｔｔａｃｔａａｃ  ａｃａｃａｇｇｇａａ  ａｔｇｇｇａａａｇａ  ｇｃａｇａｇｇｔｃｃ
３３６１  ａａａａｔｇｃｃａｇ  ｔｃｃａｇｔｃａａａ  ａｃｇａｃｔｔｔｔａ  ａａａａａｃｇｇｇｃ  ｃａｔｃａｇｇｔｔｃ  ｃａａａａａｇｔｔｃ
３４２１  ｔｇｇａａｔａａｔｇ  ｔａｔｔａｃｃａｃａ  ｔｔａｃｔｔｇｇａａ  ｔｔｇａａｇｔａａ（配列番号１０）のヌクレオチド配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％またはその間の任意のパーセンテージの同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【００６８】
一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする配列は、コドン最適化ヌクレオチド配列を含む。ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、高度に反復的なプリンリッチ領域を３’末端に、及びすぐ上流にスプライス部位を含有し、これはＡＡＶ．ＲＰＧＲベクターのクローニングに重大な課題をもたらし得る。一部の実施形態では、コドン最適化を使用して、ＲＰＧＲＯＲＦ１５タンパク質のアミノ酸配列を変更することなく、ＲＰＧＲＯＲＦ１５転写物の内在性スプライス部位を無効にし、プリンリッチ配列を安定化することができる。一部の実施形態では、ＲＰＧＲタンパク質のグルタミル化などの翻訳後修飾は、コドン最適化後に保存される。一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ヌクレオチド配列は、哺乳動物における発現のためにコドン最適化される。一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ヌクレオチド配列は、ヒトにおける発現のためにコドン最適化される。
【００６９】
一部の実施形態では、コドン最適化された３４５９ｂｐヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃＤＮＡは、以下：
１  ａｔｇａｇａｇａｇｃ  ｃａｇａｇｇａｇｃｔ  ｇａｔｇｃｃａｇａｃ  ａｇｔｇｇａｇｃａｇ  ｔｇｔｔｔａｃａｔｔ  ｃｇｇａａａａｔｃｔ
６１  ａａｇｔｔｃｇｃｔｇ  ａａａａｔａａｃｃｃ  ａｇｇａａａｇｔｔｃ  ｔｇｇｔｔｔａａａａ  ａｃｇａｃｇｔｇｃｃ  ｃｇｔｃｃａｃｃｔｇ
１２１  ｔｃｔｔｇｔｇｇｃｇ  ａｔｇａｇｃａｔａｇ  ｔｇｃｃｇｔｇｇｔｃ  ａｃｔｇｇｇａａｃａ  ａｔａａｇｃｔｇｔａ  ｃａｔｇｔｔｃｇｇｇ
１８１  ｔｃｃａａｃａａｃｔ  ｇｇｇｇａｃａｇｃｔ  ｇｇｇｇｃｔｇｇｇａ  ｔｃｃａａａｔｃｔｇ  ｃｔａｔｃｔｃｔａａ  ｇｃｃａａｃｃｔｇｃ
２４１  ｇｔｇａａｇｇｃａｃ  ｔｇａａａｃｃｃｇａ  ｇａａｇｇｔｃａａａ  ｃｔｇｇｃｃｇｃｔｔ  ｇｔｇｇｃａｇａａａ  ｃｃａｃａｃｔｃｔｇ
３０１  ｇｔｇａｇｃａｃｃｇ  ａｇｇｇｃｇｇｇａａ  ｔｇｔｃｔａｔｇｃｃ  ａｃｃｇｇａｇｇｃａ  ａｃａａｔｇａｇｇｇ  ａｃａｇｃｔｇｇｇａ
３６１  ｃｔｇｇｇｇｇａｃａ  ｃｔｇａｇｇａａａｇ  ｇａａｔａｃｃｔｔｔ  ｃａｃｇｔｇａｔｃｔ  ｃｃｔｔｃｔｔｔａｃ  ａｔｃｔｇａｇｃａｔ
４２１  ａａｇａｔｃａａｇｃ  ａｇｃｔｇａｇｃｇｃ  ｔｇｇｃｔｃｃａａｃ  ａｃａｔｃｔｇｃａｇ  ｃｃｃｔｇａｃｔｇａ  ｇｇａｃｇｇｇｃｇｃ
４８１  ｃｔｇｔｔｃａｔｇｔ  ｇｇｇｇａｇａｔａａ  ｔｔｃａｇａｇｇｇｃ  ｃａｇａｔｔｇｇｇｃ  ｔｇａａａａａｃｇｔ  ｇａｇｃａａｔｇｔｇ
５４１  ｔｇｃｇｔｃｃｃｔｃ  ａｇｃａｇｇｔｇａｃ  ｃａｔｃｇｇａａａｇ  ｃｃａｇｔｃａｇｔｔ  ｇｇａｔｔｔｃａｔｇ  ｔｇｇｃｔａｃｔａｔ
６０１  ｃａｔａｇｃｇｃｃｔ  ｔｃｇｔｇａｃｃａｃ  ａｇａｔｇｇｃｇａｇ  ｃｔｇｔａｃｇｔｃｔ  ｔｔｇｇｇｇａｇｃｃ  ｃｇａａａａｃｇｇａ
６６１  ａａａｃｔｇｇｇｃｃ  ｔｇｃｃｔａａｃｃａ  ｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃ  ａａｔｃａｃｃｇｇａ  ｃａｃｃｃｃａｇｃｔ  ｇｇｔｇｔｃｃｇａｇ
７２１  ａｔｃｃｃｔｇａａａ  ａａｇｔｇａｔｃｃａ  ｇｇｔｃｇｃｃｔｇｃ  ｇｇｇｇｇａｇａｇｃ  ａｔａｃａｇｔｇｇｔ  ｃｃｔｇａｃｔｇａｇ
７８１  ａａｔｇｃｔｇｔｇｔ  ａｔａｃｃｔｔｃｇｇ  ａｃｔｇｇｇｃｃａｇ  ｔｔｔｇｇｃｃａｇｃ  ｔｇｇｇｇｃｔｇｇｇ  ａａｃｃｔｔｃｃｔｇ
８４１  ｔｔｔｇａｇａｃａｔ  ｃｃｇａａｃｃａａａ  ａｇｔｇａｔｃｇａｇ  ａａｃａｔｔｃｇｃｇ  ａｃｃａｇａｃｔａｔ  ｃａｇｃｔａｃａｔｔ
９０１  ｔｃｃｔｇｃｇｇａｇ  ａｇａａｔｃａｃａｃ  ｃｇｃａｃｔｇａｔｃ  ａｃａｇａｃａｔｔｇ  ｇｃｃｔｇａｔｇｔａ  ｔａｃｃｔｔｔｇｇｃ
９６１  ｇａｔｇｇａｃｇａｃ  ａｃｇｇｇａａｇｃｔ  ｇｇｇａｃｔｇｇｇａ  ｃｔｇｇａｇａａｃｔ  ｔｃａｃｔａａｔｃａ  ｔｔｔｔａｔｃｃｃｃ
１０２１  ａｃｃｃｔｇｔｇｔｔ  ｃｔａａｃｔｔｃｃｔ  ｇｃｇｇｔｔｃａｔｃ  ｇｔｇａａａｃｔｇｇ  ｔｃｇｃｔｔｇｃｇｇ  ｃｇｇｇｔｇｔｃａｃ
１０８１  ａｔｇｇｔｇｇｔｃｔ  ｔｃｇｃｔｇｃａｃｃ  ｔｃａｔａｇｇｇｇｃ  ｇｔｇｇｃｔａａｇｇ  ａｇａｔｃｇａａｔｔ  ｔｇａｃｇａｇａｔｔ
１１４１  ａａｃｇａｔａｃａｔ  ｇｃｃｔｇａｇｃｇｔ  ｇｇｃａａｃｔｔｔｃ  ｃｔｇｃｃａｔａｃａ  ｇｃｔｃｃｃｔｇａｃ  ｔｔｃｔｇｇｃａａｔ
１２０１  ｇｔｇｃｔｇｃａｇａ  ｇａａｃｃｃｔｇａｇ  ｔｇｃａａｇｇａｔｇ  ｃｇｇａｇａａｇｇｇ  ａｇａｇｇｇａａｃｇ  ｃｔｃｔｃｃｔｇａｃ
１２６１  ａｇｔｔｔｃｔｃａａ  ｔｇｃｇａｃｇａａｃ  ｃｃｔｇｃｃａｃｃｔ  ａｔｃｇａｇｇｇａａ  ｃａｃｔｇｇｇａｃｔ  ｇａｇｔｇｃｃｔｇｃ
１３２１  ｔｔｃｃｔｇｃｃｔａ  ａｃｔｃａｇｔｇｔｔ  ｔｃｃａｃｇａｔｇｔ  ａｇｃｇａｇｃｇｇａ  ａｔｃｔｇｃａｇｇａ  ｇｔｃｔｇｔｃｃｔｇ
１３８１  ａｇｔｇａｇｃａｇｇ  ａｔｃｔｇａｔｇｃａ  ｇｃｃａｇａｇｇａａ  ｃｃｃｇａｃｔａｃｃ  ｔｇｃｔｇｇａｔｇａ  ｇａｔｇａｃｃａａｇ
１４４１  ｇａｇｇｃｃｇａａａ  ｔｃｇａｃａａｃｔｃ  ｔａｇｔａｃａｇｔｇ  ｇａｇｔｃｃｃｔｇｇ  ｇｃｇａｇａｃｔａｃ  ｃｇａｔａｔｃｃｔｇ
１５０１  ａａｔａｔｇａｃａｃ  ａｃａｔｔａｔｇｔｃ  ａｃｔｇａａｃａｇｃ  ａａｔｇａｇａａｇａ  ｇｔｃｔｇａａａｃｔ  ｇｔｃａｃｃａｇｔｇ
１５６１  ｃａｇａａｇｃａｇａ  ａｇａａａｃａｇｃａ  ｇａｃｔａｔｔｇｇｃ  ｇａｇｃｔｇａｃｔｃ  ａｇｇａｃａｃｃｇｃ  ｃｃｔｇａｃａｇａｇ
１６２１  ａａｃｇａｃｇａｔａ  ｇｃｇａｔｇａｇｔａ  ｔｇａｇｇａａａｔｇ  ｔｃｃｇａｇａｔｇａ  ａｇｇａａｇｇｃａａ  ａｇｃｔｔｇｔａａｇ
１６８１  ｃａｇｃａｔｇｔｃａ  ｇｔｃａｇｇｇｇａｔ  ｃｔｔｃａｔｇａｃａ  ｃａｇｃｃａｇｃｃａ  ｃａａｃｔａｔｔｇａ  ｇｇｃｔｔｔｔｔｃａ
１７４１  ｇａｃｇａｇｇａａｇ  ｔｇｇａｇａｔｃｃｃ  ｃｇａｇｇａａａａａ  ｇａｇｇｇｃｇｃａｇ  ａａｇａｔｔｃｃａａ  ｇｇｇｇａａｔｇｇａ
１８０１  ａｔｔｇａｇｇａａｃ  ａｇｇａｇｇｔｇｇａ  ａｇｃｃａａｃｇａｇ  ｇａａａａｔｇｔｇａ  ａａｇｔｃｃａｃｇｇ  ａｇｇｃａｇｇａａｇ
１８６１  ｇａｇａａａａｃａｇ  ａａａｔｃｃｔｇｔｃ  ｔｇａｃｇａｔｃｔｇ  ａｃｔｇａｃａａｇｇ  ｃｃｇａｇｇｔｇｔｃ  ｃｇａａｇｇｃａａｇ
１９２１  ｇｃａａａａｔｃｔｇ  ｔｃｇｇａｇａｇｇｃ  ａｇａａｇａｃｇｇａ  ｃｃａｇａｇｇｇａｃ  ｇａｇｇｇｇａｔｇｇ  ａａｃｃｔｇｃｇａｇ
１９８１  ｇａａｇｇｃｔｃａａ  ｇｃｇｇｇｇｃｔｇａ  ｇｃａｔｔｇｇｃａｇ  ｇａｃｇａｇｇａａｃ  ｇａｇａｇａａｇｇｇ  ｃｇａａａａｇｇａｔ
２０４１  ａａａｇｇｃｃｇｃｇ  ｇｇｇａｇａｔｇｇａ  ａｃｇａｃｃｔｇｇａ  ｇａｇｇｇｃｇａａａ  ａａｇａｇｃｔｇｇｃ  ａｇａｇａａｇｇａｇ
２１０１  ｇａａｔｇｇａａｇａ  ａａａｇｇｇａｃｇｇ  ｃｇａｇｇａａｃａｇ  ｇａｇｃａｇａａａｇ  ａａａｇｇｇａｇｃａ  ｇｇｇｃｃａｃｃａｇ
２１６１  ａａｇｇａｇｃｇｃａ  ａｃｃａｇｇａｇａｔ  ｇｇａａｇａｇｇｇｃ  ｇｇｃｇａｇｇａａｇ  ａｇｃａｔｇｇｃｇａ  ｇｇｇａｇａａｇａｇ
２２２１  ｇａａｇａｇｇｇｃｇ  ａｔａｇａｇａａｇａ  ｇｇａａｇａｇｇａａ  ａａａｇａａｇｇｃｇ  ａａｇｇｇａａｇｇａ  ｇｇａａｇｇａｇａｇ
２２８１  ｇｇｃｇａｇｇａａｇ  ｔｇｇａａｇｇｃｇａ  ｇａｇｇｇａａａａｇ  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａａｃｇｇａａｇａａ  ａｇａｇｇａａａｇａ
２３４１  ｇｃｃｇｇｃａａａｇ  ａｇｇａａａａｇｇｇ  ｃｇａｇｇａａｇａｇ  ｇｇｃｇａｔｃａｇｇ  ｇｃｇａａｇｇｃｇａ  ｇｇａｇｇａａｇａｇ
２４０１  ａｃｃｇａｇｇｇｃｃ  ｇｃｇｇｇｇａａｇａ  ｇａａａｇａｇｇａｇ  ｇｇａｇｇａｇａｇｇ  ｔｇｇａｇｇｇｃｇｇ  ａｇａｇｇｔｃｇａａ
２４６１  ｇａｇｇｇａａａｇｇ  ｇｃｇａｇｃｇｃｇａ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇａａｇａｇｇｇｃｇ  ａｇｇｇｃｇａｇｇａ  ａｇａａｇａｇｇｇｃ
２５２１  ｇａｇｇｇｇｇａａｇ  ａａｇａｇｇａｇｇｇ  ａｇａｇｇｇｃｇａａ  ｇａｇｇａａｇａｇｇ  ｇｇｇａｇｇｇａａａ  ｇｇｇｃｇａａｇａｇ
２５８１  ｇａａｇｇａｇａｇｇ  ａａｇｇｇｇａｇｇｇ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇｇｇｇａｇｇａｇｇ  ｇｃｇａｇｇｇｇｇａ  ａｇｇｃｇａｇｇａｇ
２６４１  ｇａａｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇａａｇｇ  ｃｇａａｇａｇｇａａ  ｇｇｃｇａｇｇｇｇｇ  ａａｇｇａｇａｇｇａ  ｇｇａａｇａａｇｇｇ
２７０１  ｇａａｇｇｃｇａａｇ  ｇｃｇａａｇａｇｇａ  ｇｇｇａｇａａｇｇａ  ｇａｇｇｇｇｇａｇｇ  ａａｇａｇｇａａｇｇ  ａｇａａｇｇｇａａｇ
２７６１  ｇｇｃｇａｇｇａｇｇ  ａａｇｇｃｇａａｇａ  ｇｇｇａｇａｇｇｇｇ  ｇａａｇｇｃｇａｇｇ  ａａｇａｇｇａａｇｇ  ｃｇａｇｇｇｃｇａａ
２８２１  ｇｇａｇａｇｇａｃｇ  ｇｃｇａｇｇｇｃｇａ  ｇｇｇａｇａａｇａｇ  ｇａｇｇａａｇｇｇｇ  ａａｔｇｇｇａａｇｇ  ｃｇａａｇａａｇａｇ
２８８１  ｇａａｇｇｃｇａａｇ  ｇｃｇａａｇｇｃｇａ  ａｇａａｇａｇｇｇｃ  ｇａａｇｇｇｇａｇｇ  ｇｃｇａｇｇａｇｇｇ  ｃｇａａｇｇｃｇａａ
２９４１  ｇｇｇｇａｇｇａａｇ  ａｇｇａａｇｇｃｇａ  ａｇｇａｇａａｇｇｃ  ｇａｇｇａａｇａａｇ  ａｇｇｇａｇａｇｇａ  ｇｇａａｇｇｃｇａｇ
３００１  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇａｇｇａ  ｇｇａｇｇｇａｇａａ  ｇｇｃｇａｇｇｇｃｇ  ａａｇａａｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇａｇａａ
３０６１  ｇｔｇｇａｇｇｇｃｇ  ａａｇｔｃｇａｇｇｇ  ｇｇａｇｇａｇｇｇａ  ｇａａｇｇｇｇａａｇ  ｇｇｇａｇｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇｃｇａａ
３１２１  ｇａａｇａａｇｇｃｇ  ａｇｇａａａｇａｇａ  ａａａａｇａｇｇｇａ  ｇａａｇｇｃｇａｇｇ  ａａａａｃｃｇｇａｇ  ａａａｔａｇｇｇａａ
３１８１  ｇａｇｇａｇｇａａｇ  ａｇｇａａｇａｇｇｇ  ａａａｇｔａｃｃａｇ  ｇａｇａｃａｇｇｃｇ  ａａｇａｇｇａａａａ  ｃｇａｇｃｇｇｃａｇ
３２４１  ｇａｔｇｇｃｇａｇｇ  ａａｔａｔａａｇａａ  ａｇｔｇａｇｃａａｇ  ａｔｃａａａｇｇａｔ  ｃｃｇｔｃａａｇｔａ  ｃｇｇｃａａｇｃａｃ
３３０１  ａａａａｃｃｔａｔｃ  ａｇａａｇａａａａｇ  ｃｇｔｇａｃｃａａｃ  ａｃａｃａｇｇｇｇａ  ａｔｇｇａａａａｇａ  ｇｃａｇａｇｇａｇｔ
３３６１  ａａｇａｔｇｃｃｔｇ  ｔｇｃａｇｔｃａａａ  ａｃｇｇｃｔｇｃｔｇ  ａａｇａａｔｇｇｃｃ  ｃａｔｃｔｇｇａａｇ  ｔａａａａａａｔｔｃ
３４２１  ｔｇｇａａｃａａｔｇ  ｔｇｃｔｇｃｃｃｃａ  ｃｔａｔｃｔｇｇａａ  ｃｔｇａａａｔａａ（配列番号３）のヌクレオチド配列と少なくとも７０％同一性、少なくとも７５％同一性、少なくとも８０％同一性、少なくとも８５％同一性、少なくとも９０％同一性、少なくとも９５％同一性、少なくとも９７％同一性、少なくとも９９％同一性またはその間の任意のパーセンテージの同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
【００７０】
一部の実施形態では、コドン最適化された３４５９ｂｐヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃＤＮＡは、以下：
１  ａｔｇａｇａｇａｇｃ  ｃａｇａｇｇａｇｃｔ  ｇａｔｇｃｃａｇａｃ  ａｇｔｇｇａｇｃａｇ  ｔｇｔｔｔａｃａｔｔ  ｃｇｇａａａａｔｃｔ
６１  ａａｇｔｔｃｇｃｔｇ  ａａａａｔａａｃｃｃ  ａｇｇａａａｇｔｔｃ  ｔｇｇｔｔｔａａａａ  ａｃｇａｃｇｔｇｃｃ  ｃｇｔｃｃａｃｃｔｇ
１２１  ｔｃｔｔｇｔｇｇｃｇ  ａｔｇａｇｃａｔａｇ  ｔｇｃｃｇｔｇｇｔｃ  ａｃｔｇｇｇａａｃａ  ａｔａａｇｃｔｇｔａ  ｃａｔｇｔｔｃｇｇｇ
１８１  ｔｃｃａａｃａａｃｔ  ｇｇｇｇａｃａｇｃｔ  ｇｇｇｇｃｔｇｇｇａ  ｔｃｃａａａｔｃｔｇ  ｃｔａｔｃｔｃｔａａ  ｇｃｃａａｃｃｔｇｃ
２４１  ｇｔｇａａｇｇｃａｃ  ｔｇａａａｃｃｃｇａ  ｇａａｇｇｔｃａａａ  ｃｔｇｇｃｃｇｃｔｔ  ｇｔｇｇｃａｇａａａ  ｃｃａｃａｃｔｃｔｇ
３０１  ｇｔｇａｇｃａｃｃｇ  ａｇｇｇｃｇｇｇａａ  ｔｇｔｃｔａｔｇｃｃ  ａｃｃｇｇａｇｇｃａ  ａｃａａｔｇａｇｇｇ  ａｃａｇｃｔｇｇｇａ
３６１  ｃｔｇｇｇｇｇａｃａ  ｃｔｇａｇｇａａａｇ  ｇａａｔａｃｃｔｔｔ  ｃａｃｇｔｇａｔｃｔ  ｃｃｔｔｃｔｔｔａｃ  ａｔｃｔｇａｇｃａｔ
４２１  ａａｇａｔｃａａｇｃ  ａｇｃｔｇａｇｃｇｃ  ｔｇｇｃｔｃｃａａｃ  ａｃａｔｃｔｇｃａｇ  ｃｃｃｔｇａｃｔｇａ  ｇｇａｃｇｇｇｃｇｃ
４８１  ｃｔｇｔｔｃａｔｇｔ  ｇｇｇｇａｇａｔａａ  ｔｔｃａｇａｇｇｇｃ  ｃａｇａｔｔｇｇｇｃ  ｔｇａａａａａｃｇｔ  ｇａｇｃａａｔｇｔｇ
５４１  ｔｇｃｇｔｃｃｃｔｃ  ａｇｃａｇｇｔｇａｃ  ｃａｔｃｇｇａａａｇ  ｃｃａｇｔｃａｇｔｔ  ｇｇａｔｔｔｃａｔｇ  ｔｇｇｃｔａｃｔａｔ
６０１  ｃａｔａｇｃｇｃｃｔ  ｔｃｇｔｇａｃｃａｃ  ａｇａｔｇｇｃｇａｇ  ｃｔｇｔａｃｇｔｃｔ  ｔｔｇｇｇｇａｇｃｃ  ｃｇａａａａｃｇｇａ
６６１  ａａａｃｔｇｇｇｃｃ  ｔｇｃｃｔａａｃｃａ  ｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃ  ａａｔｃａｃｃｇｇａ  ｃａｃｃｃｃａｇｃｔ  ｇｇｔｇｔｃｃｇａｇ
７２１  ａｔｃｃｃｔｇａａａ  ａａｇｔｇａｔｃｃａ  ｇｇｔｃｇｃｃｔｇｃ  ｇｇｇｇｇａｇａｇｃ  ａｔａｃａｇｔｇｇｔ  ｃｃｔｇａｃｔｇａｇ
７８１  ａａｔｇｃｔｇｔｇｔ  ａｔａｃｃｔｔｃｇｇ  ａｃｔｇｇｇｃｃａｇ  ｔｔｔｇｇｃｃａｇｃ  ｔｇｇｇｇｃｔｇｇｇ  ａａｃｃｔｔｃｃｔｇ
８４１  ｔｔｔｇａｇａｃａｔ  ｃｃｇａａｃｃａａａ  ａｇｔｇａｔｃｇａｇ  ａａｃａｔｔｃｇｃｇ  ａｃｃａｇａｃｔａｔ  ｃａｇｃｔａｃａｔｔ
９０１  ｔｃｃｔｇｃｇｇａｇ  ａｇａａｔｃａｃａｃ  ｃｇｃａｃｔｇａｔｃ  ａｃａｇａｃａｔｔｇ  ｇｃｃｔｇａｔｇｔａ  ｔａｃｃｔｔｔｇｇｃ
９６１  ｇａｔｇｇａｃｇａｃ  ａｃｇｇｇａａｇｃｔ  ｇｇｇａｃｔｇｇｇａ  ｃｔｇｇａｇａａｃｔ  ｔｃａｃｔａａｔｃａ  ｔｔｔｔａｔｃｃｃｃ
１０２１  ａｃｃｃｔｇｔｇｔｔ  ｃｔａａｃｔｔｃｃｔ  ｇｃｇｇｔｔｃａｔｃ  ｇｔｇａａａｃｔｇｇ  ｔｃｇｃｔｔｇｃｇｇ  ｃｇｇｇｔｇｔｃａｃ
１０８１  ａｔｇｇｔｇｇｔｃｔ  ｔｃｇｃｔｇｃａｃｃ  ｔｃａｔａｇｇｇｇｃ  ｇｔｇｇｃｔａａｇｇ  ａｇａｔｃｇａａｔｔ  ｔｇａｃｇａｇａｔｔ
１１４１  ａａｃｇａｔａｃａｔ  ｇｃｃｔｇａｇｃｇｔ  ｇｇｃａａｃｔｔｔｃ  ｃｔｇｃｃａｔａｃａ  ｇｃｔｃｃｃｔｇａｃ  ｔｔｃｔｇｇｃａａｔ
１２０１  ｇｔｇｃｔｇｃａｇａ  ｇａａｃｃｃｔｇａｇ  ｔｇｃａａｇｇａｔｇ  ｃｇｇａｇａａｇｇｇ  ａｇａｇｇｇａａｃｇ  ｃｔｃｔｃｃｔｇａｃ
１２６１  ａｇｔｔｔｃｔｃａａ  ｔｇｃｇａｃｇａａｃ  ｃｃｔｇｃｃａｃｃｔ  ａｔｃｇａｇｇｇａａ  ｃａｃｔｇｇｇａｃｔ  ｇａｇｔｇｃｃｔｇｃ
１３２１  ｔｔｃｃｔｇｃｃｔａ  ａｃｔｃａｇｔｇｔｔ  ｔｃｃａｃｇａｔｇｔ  ａｇｃｇａｇｃｇｇａ  ａｔｃｔｇｃａｇｇａ  ｇｔｃｔｇｔｃｃｔｇ
１３８１  ａｇｔｇａｇｃａｇｇ  ａｔｃｔｇａｔｇｃａ  ｇｃｃａｇａｇｇａａ  ｃｃｃｇａｃｔａｃｃ  ｔｇｃｔｇｇａｔｇａ  ｇａｔｇａｃｃａａｇ
１４４１  ｇａｇｇｃｃｇａａａ  ｔｃｇａｃａａｃｔｃ  ｔａｇｔａｃａｇｔｇ  ｇａｇｔｃｃｃｔｇｇ  ｇｃｇａｇａｃｔａｃ  ｃｇａｔａｔｃｃｔｇ
１５０１  ａａｔａｔｇａｃａｃ  ａｃａｔｔａｔｇｔｃ  ａｃｔｇａａｃａｇｃ  ａａｔｇａｇａａｇａ  ｇｔｃｔｇａａａｃｔ  ｇｔｃａｃｃａｇｔｇ
１５６１  ｃａｇａａｇｃａｇａ  ａｇａａａｃａｇｃａ  ｇａｃｔａｔｔｇｇｃ  ｇａｇｃｔｇａｃｔｃ  ａｇｇａｃａｃｃｇｃ  ｃｃｔｇａｃａｇａｇ
１６２１  ａａｃｇａｃｇａｔａ  ｇｃｇａｔｇａｇｔａ  ｔｇａｇｇａａａｔｇ  ｔｃｃｇａｇａｔｇａ  ａｇｇａａｇｇｃａａ  ａｇｃｔｔｇｔａａｇ
１６８１  ｃａｇｃａｔｇｔｃａ  ｇｔｃａｇｇｇｇａｔ  ｃｔｔｃａｔｇａｃａ  ｃａｇｃｃａｇｃｃａ  ｃａａｃｔａｔｔｇａ  ｇｇｃｔｔｔｔｔｃａ
１７４１  ｇａｃｇａｇｇａａｇ  ｔｇｇａｇａｔｃｃｃ  ｃｇａｇｇａａａａａ  ｇａｇｇｇｃｇｃａｇ  ａａｇａｔｔｃｃａａ  ｇｇｇｇａａｔｇｇａ
１８０１  ａｔｔｇａｇｇａａｃ  ａｇｇａｇｇｔｇｇａ  ａｇｃｃａａｃｇａｇ  ｇａａａａｔｇｔｇａ  ａａｇｔｃｃａｃｇｇ  ａｇｇｃａｇｇａａｇ
１８６１  ｇａｇａａａａｃａｇ  ａａａｔｃｃｔｇｔｃ  ｔｇａｃｇａｔｃｔｇ  ａｃｔｇａｃａａｇｇ  ｃｃｇａｇｇｔｇｔｃ  ｃｇａａｇｇｃａａｇ
１９２１  ｇｃａａａａｔｃｔｇ  ｔｃｇｇａｇａｇｇｃ  ａｇａａｇａｃｇｇａ  ｃｃａｇａｇｇｇａｃ  ｇａｇｇｇｇａｔｇｇ  ａａｃｃｔｇｃｇａｇ
１９８１  ｇａａｇｇｃｔｃａａ  ｇｃｇｇｇｇｃｔｇａ  ｇｃａｔｔｇｇｃａｇ  ｇａｃｇａｇｇａａｃ  ｇａｇａｇａａｇｇｇ  ｃｇａａａａｇｇａｔ
２０４１  ａａａｇｇｃｃｇｃｇ  ｇｇｇａｇａｔｇｇａ  ａｃｇａｃｃｔｇｇａ  ｇａｇｇｇｃｇａａａ  ａａｇａｇｃｔｇｇｃ  ａｇａｇａａｇｇａｇ
２１０１  ｇａａｔｇｇａａｇａ  ａａａｇｇｇａｃｇｇ  ｃｇａｇｇａａｃａｇ  ｇａｇｃａｇａａａｇ  ａａａｇｇｇａｇｃａ  ｇｇｇｃｃａｃｃａｇ
２１６１  ａａｇｇａｇｃｇｃａ  ａｃｃａｇｇａｇａｔ  ｇｇａａｇａｇｇｇｃ  ｇｇｃｇａｇｇａａｇ  ａｇｃａｔｇｇｃｇａ  ｇｇｇａｇａａｇａｇ
２２２１  ｇａａｇａｇｇｇｃｇ  ａｔａｇａｇａａｇａ  ｇｇａａｇａｇｇａａ  ａａａｇａａｇｇｃｇ  ａａｇｇｇａａｇｇａ  ｇｇａａｇｇａｇａｇ
２２８１  ｇｇｃｇａｇｇａａｇ  ｔｇｇａａｇｇｃｇａ  ｇａｇｇｇａａａａｇ  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａａｃｇｇａａｇａａ  ａｇａｇｇａａａｇａ
２３４１  ｇｃｃｇｇｃａａａｇ  ａｇｇａａａａｇｇｇ  ｃｇａｇｇａａｇａｇ  ｇｇｃｇａｔｃａｇｇ  ｇｃｇａａｇｇｃｇａ  ｇｇａｇｇａａｇａｇ
２４０１  ａｃｃｇａｇｇｇｃｃ  ｇｃｇｇｇｇａａｇａ  ｇａａａｇａｇｇａｇ  ｇｇａｇｇａｇａｇｇ  ｔｇｇａｇｇｇｃｇｇ  ａｇａｇｇｔｃｇａａ
２４６１  ｇａｇｇｇａａａｇｇ  ｇｃｇａｇｃｇｃｇａ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇａａｇａｇｇｇｃｇ  ａｇｇｇｃｇａｇｇａ  ａｇａａｇａｇｇｇｃ
２５２１  ｇａｇｇｇｇｇａａｇ  ａａｇａｇｇａｇｇｇ  ａｇａｇｇｇｃｇａａ  ｇａｇｇａａｇａｇｇ  ｇｇｇａｇｇｇａａａ  ｇｇｇｃｇａａｇａｇ
２５８１  ｇａａｇｇａｇａｇｇ  ａａｇｇｇｇａｇｇｇ  ａｇａｇｇａａｇａｇ  ｇｇｇｇａｇｇａｇｇ  ｇｃｇａｇｇｇｇｇａ  ａｇｇｃｇａｇｇａｇ
２６４１  ｇａａｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇａａｇｇ  ｃｇａａｇａｇｇａａ  ｇｇｃｇａｇｇｇｇｇ  ａａｇｇａｇａｇｇａ  ｇｇａａｇａａｇｇｇ
２７０１  ｇａａｇｇｃｇａａｇ  ｇｃｇａａｇａｇｇａ  ｇｇｇａｇａａｇｇａ  ｇａｇｇｇｇｇａｇｇ  ａａｇａｇｇａａｇｇ  ａｇａａｇｇｇａａｇ
２７６１  ｇｇｃｇａｇｇａｇｇ  ａａｇｇｃｇａａｇａ  ｇｇｇａｇａｇｇｇｇ  ｇａａｇｇｃｇａｇｇ  ａａｇａｇｇａａｇｇ  ｃｇａｇｇｇｃｇａａ
２８２１  ｇｇａｇａｇｇａｃｇ  ｇｃｇａｇｇｇｃｇａ  ｇｇｇａｇａａｇａｇ  ｇａｇｇａａｇｇｇｇ  ａａｔｇｇｇａａｇｇ  ｃｇａａｇａａｇａｇ
２８８１  ｇａａｇｇｃｇａａｇ  ｇｃｇａａｇｇｃｇａ  ａｇａａｇａｇｇｇｃ  ｇａａｇｇｇｇａｇｇ  ｇｃｇａｇｇａｇｇｇ  ｃｇａａｇｇｃｇａａ
２９４１  ｇｇｇｇａｇｇａａｇ  ａｇｇａａｇｇｃｇａ  ａｇｇａｇａａｇｇｃ  ｇａｇｇａａｇａａｇ  ａｇｇｇａｇａｇｇａ  ｇｇａａｇｇｃｇａｇ
３００１  ｇａｇｇａａｇｇａｇ  ａｇｇｇｇｇａｇｇａ  ｇｇａｇｇｇａｇａａ  ｇｇｃｇａｇｇｇｃｇ  ａａｇａａｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇａｇａａ
３０６１  ｇｔｇｇａｇｇｇｃｇ  ａａｇｔｃｇａｇｇｇ  ｇｇａｇｇａｇｇｇａ  ｇａａｇｇｇｇａａｇ  ｇｇｇａｇｇａａｇａ  ａｇａｇｇｇｃｇａａ
３１２１  ｇａａｇａａｇｇｃｇ  ａｇｇａａａｇａｇａ  ａａａａｇａｇｇｇａ  ｇａａｇｇｃｇａｇｇ  ａａａａｃｃｇｇａｇ  ａａａｔａｇｇｇａａ
３１８１  ｇａｇｇａｇｇａａｇ  ａｇｇａａｇａｇｇｇ  ａａａｇｔａｃｃａｇ  ｇａｇａｃａｇｇｃｇ  ａａｇａｇｇａａａａ  ｃｇａｇｃｇｇｃａｇ
３２４１  ｇａｔｇｇｃｇａｇｇ  ａａｔａｔａａｇａａ  ａｇｔｇａｇｃａａｇ  ａｔｃａａａｇｇａｔ  ｃｃｇｔｃａａｇｔａ  ｃｇｇｃａａｇｃａｃ
３３０１  ａａａａｃｃｔａｔｃ  ａｇａａｇａａａａｇ  ｃｇｔｇａｃｃａａｃ  ａｃａｃａｇｇｇｇａ  ａｔｇｇａａａａｇａ  ｇｃａｇａｇｇａｇｔ
３３６１  ａａｇａｔｇｃｃｔｇ  ｔｇｃａｇｔｃａａａ  ａｃｇｇｃｔｇｃｔｇ  ａａｇａａｔｇｇｃｃ  ｃａｔｃｔｇｇａａｇ  ｔａａａａａａｔｔｃ
３４２１  ｔｇｇａａｃａａｔｇ  ｔｇｃｔｇｃｃｃｃａ  ｃｔａｔｃｔｇｇａａ  ｃｔｇａａａｔａａ（配列番号３）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００７１】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、プロモーターを含む。一部の実施形態では、プロモーターは、ロドプシンキナーゼプロモーターを含む。一部の実施形態では、ロドプシンキナーゼプロモーターは、Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ１（ＧＲＫ１）遺伝子のプロモーターから単離されるまたはこれに由来する。一部の実施形態では、プロモーターは、ＧＲＫ１プロモーターである。一部の実施形態では、ＧＲＫ１プロモーターをコードする配列は、以下：
１  ｇｇｇｃｃｃｃａｇａ  ａｇｃｃｔｇｇｔｇｇ  ｔｔｇｔｔｔｇｔｃｃ  ｔｔｃｔｃａｇｇｇｇ  ａａａａｇｔｇａｇｇ  ｃｇｇｃｃｃｃｔｔｇ
６１  ｇａｇｇａａｇｇｇｇ  ｃｃｇｇｇｃａｇａａ  ｔｇａｔｃｔａａｔｃ  ｇｇａｔｔｃｃａａｇ  ｃａｇｃｔｃａｇｇｇ  ｇａｔｔｇｔｃｔｔｔ
１２１  ｔｔｃｔａｇｃａｃｃ  ｔｔｃｔｔｇｃｃａｃ  ｔｃｃｔａａｇｃｇｔ  ｃｃｔｃｃｇｔｇａｃ  ｃｃｃｇｇｃｔｇｇｇ  ａｔｔｔａｇｃｃｔｇ
１８１  ｇｔｇｃｔｇｔｇｔｃ  ａｇｃｃｃｃｇｇｇ（配列番号１）と少なくとも８０％同一性、少なくとも９０％同一性、少なくとも９５％同一性、少なくとも９７％同一性または少なくとも９９％同一性を有する配列を含む。
一部の実施形態では、ＧＲＫ１プロモーターは、以下：
１  ｇｇｇｃｃｃｃａｇａ  ａｇｃｃｔｇｇｔｇｇ  ｔｔｇｔｔｔｇｔｃｃ  ｔｔｃｔｃａｇｇｇｇ  ａａａａｇｔｇａｇｇ  ｃｇｇｃｃｃｃｔｔｇ
６１  ｇａｇｇａａｇｇｇｇ  ｃｃｇｇｇｃａｇａａ  ｔｇａｔｃｔａａｔｃ  ｇｇａｔｔｃｃａａｇ  ｃａｇｃｔｃａｇｇｇ  ｇａｔｔｇｔｃｔｔｔ
１２１  ｔｔｃｔａｇｃａｃｃ  ｔｔｃｔｔｇｃｃａｃ  ｔｃｃｔａａｇｃｇｔ  ｃｃｔｃｃｇｔｇａｃ  ｃｃｃｇｇｃｔｇｇｇ  ａｔｔｔａｇｃｃｔｇ
１８１  ｇｔｇｃｔｇｔｇｔｃ  ａｇｃｃｃｃｇｇｇ（配列番号１）を含むまたはこれからなる。
【００７２】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、ポリアデニル化シグナルを含む。一部の実施形態では、ポリＡシグナルをコードする配列は、ウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡシグナルから単離されたまたはこれに由来するポリＡシグナルを含む。一部の実施形態では、ＢＧＨポリＡシグナルは、以下：
１  ｔｃｇｃｔｇａｔｃａ  ｇｃｃｔｃｇａｃｔｇ  ｔｇｃｃｔｔｃｔａｇ  ｔｔｇｃｃａｇｃｃａ  ｔｃｔｇｔｔｇｔｔｔ  ｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃ
６１  ｃｇｔｇｃｃｔｔｃｃ  ｔｔｇａｃｃｃｔｇｇ  ａａｇｇｔｇｃｃａｃ  ｔｃｃｃａｃｔｇｔｃ  ｃｔｔｔｃｃｔａａｔ  ａａａａｔｇａｇｇａ
１２１  ａａｔｔｇｃａｔｃｇ  ｃａｔｔｇｔｃｔｇａ  ｇｔａｇｇｔｇｔｃａ  ｔｔｃｔａｔｔｃｔｇ  ｇｇｇｇｇｔｇｇｇｇ  ｔｇｇｇｇｃａｇｇａ
１８１  ｃａｇｃａａｇｇｇｇ  ｇａｇｇａｔｔｇｇｇ  ａａｇａｃａａｔａｇ  ｃａｇｇｃａｔｇｃｔ  ｇｇｇｇａｔｇｃｇｇ  ｔｇｇｇｃｔｃｔａｔ
２４１  ｇｇｃｔｔｃｔｇａｇ  ｇｃｇｇａａａｇａａ  ｃｃａｇｃｔｇｇｇｇ（配列番号４）のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一性、少なくとも９７％同一性または１００％同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ＢＧＨポリＡをコードする配列は、以下：
１  ｔｃｇｃｔｇａｔｃａ  ｇｃｃｔｃｇａｃｔｇ  ｔｇｃｃｔｔｃｔａｇ  ｔｔｇｃｃａｇｃｃａ  ｔｃｔｇｔｔｇｔｔｔ  ｇｃｃｃｃｔｃｃｃｃ
６１  ｃｇｔｇｃｃｔｔｃｃ  ｔｔｇａｃｃｃｔｇｇ  ａａｇｇｔｇｃｃａｃ  ｔｃｃｃａｃｔｇｔｃ  ｃｔｔｔｃｃｔａａｔ  ａａａａｔｇａｇｇａ
１２１  ａａｔｔｇｃａｔｃｇ  ｃａｔｔｇｔｃｔｇａ  ｇｔａｇｇｔｇｔｃａ  ｔｔｃｔａｔｔｃｔｇ  ｇｇｇｇｇｔｇｇｇｇ  ｔｇｇｇｇｃａｇｇａ
１８１  ｃａｇｃａａｇｇｇｇ  ｇａｇｇａｔｔｇｇｇ  ａａｇａｃａａｔａｇ  ｃａｇｇｃａｔｇｃｔ  ｇｇｇｇａｔｇｃｇｇ  ｔｇｇｇｃｔｃｔａｔ
２４１  ｇｇｃｔｔｃｔｇａｇ  ｇｃｇｇａａａｇａａ  ｃｃａｇｃｔｇｇｇｇ（配列番号４）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００７３】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、コザック配列をさらに含む。一部の実施形態では、コザック配列は、ＧＧＣＣＡＣＣＡＴＧ（配列番号７）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００７４】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、さらに、ＲＰＧＲＯＲＦ１５のｃＤＮＡをコードする精製された組換え血清型２（ｒＡＡＶ）からなる。一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：１１９ｂｐ  ＡＡＶ２  ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、１９９ｂｐ  Ｇタンパク質共役ロドプシンキナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーター、１０ｂｐコザック配列、３４５９ｂｐヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃＤＮＡ、２７０ｂｐウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ−ポリＡ）、及び１３０ｂｐ  ＡＡＶ２  ３’ＩＴＲを含む一本鎖ＤＮＡ挿入配列、ならびにエレメントに隣接する短いクローニング配列を含有する。コザック配列は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５配列の開始と、例えば、３ｂｐ重複し得る。
【００７５】
一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、以下：
１  ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣ  ＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣ  ＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣ  ＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧ  ＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧ  ＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣ
６１  ＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣ  ＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣ  ＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧ  ＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣ  ＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡ  ＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧ
１２１  ＣＧＧＣＡＡＴＴＣＡ  ＧＴＣＧＡＴＡＡＣＴ  ＡＴＡＡＣＧＧＴＣＣ  ＴＡＡＧＧＴＡＧＣＧ  ＡＴＴＴＡＡＡＴＡＣ  ＧＣＧＣＴＣＴＣＴＴ
１８１  ＡＡＧＧＴＡＧＣＣＣ  ＣＧＧＧＡＣＧＣＧＴ  ＣＡＡＴＴＧＧＧＧＣ  ＣＣＣＡＧＡＡＧＣＣ  ＴＧＧＴＧＧＴＴＧＴ  ＴＴＧＴＣＣＴＴＣＴ
２４１  ＣＡＧＧＧＧＡＡＡＡ  ＧＴＧＡＧＧＣＧＧＣ  ＣＣＣＴＴＧＧＡＧＧ  ＡＡＧＧＧＧＣＣＧＧ  ＧＣＡＧＡＡＴＧＡＴ  ＣＴＡＡＴＣＧＧＡＴ
３０１  ＴＣＣＡＡＧＣＡＧＣ  ＴＣＡＧＧＧＧＡＴＴ  ＧＴＣＴＴＴＴＴＣＴ  ＡＧＣＡＣＣＴＴＣＴ  ＴＧＣＣＡＣＴＣＣＴ  ＡＡＧＣＧＴＣＣＴＣ
３６１  ＣＧＴＧＡＣＣＣＣＧ  ＧＣＴＧＧＧＡＴＴＴ  ＡＧＣＣＴＧＧＴＧＣ  ＴＧＴＧＴＣＡＧＣＣ  ＣＣＧＧＧＧＣＣＡＣ  ＣＡＴＧＡＧＡＧＡＧ
４２１  ＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣ  ＴＧＡＴＧＣＣＡＧＡ  ＣＡＧＴＧＧＡＧＣＡ  ＧＴＧＴＴＴＡＣＡＴ  ＴＣＧＧＡＡＡＡＴＣ  ＴＡＡＧＴＴＣＧＣＴ
４８１  ＧＡＡＡＡＴＡＡＣＣ  ＣＡＧＧＡＡＡＧＴＴ  ＣＴＧＧＴＴＴＡＡＡ  ＡＡＣＧＡＣＧＴＧＣ  ＣＣＧＴＣＣＡＣＣＴ  ＧＴＣＴＴＧＴＧＧＣ
５４１  ＧＡＴＧＡＧＣＡＴＡ  ＧＴＧＣＣＧＴＧＧＴ  ＣＡＣＴＧＧＧＡＡＣ  ＡＡＴＡＡＧＣＴＧＴ  ＡＣＡＴＧＴＴＣＧＧ  ＧＴＣＣＡＡＣＡＡＣ
６０１  ＴＧＧＧＧＡＣＡＧＣ  ＴＧＧＧＧＣＴＧＧＧ  ＡＴＣＣＡＡＡＴＣＴ  ＧＣＴＡＴＣＴＣＴＡ  ＡＧＣＣＡＡＣＣＴＧ  ＣＧＴＧＡＡＧＧＣＡ
６６１  ＣＴＧＡＡＡＣＣＣＧ  ＡＧＡＡＧＧＴＣＡＡ  ＡＣＴＧＧＣＣＧＣＴ  ＴＧＴＧＧＣＡＧＡＡ  ＡＣＣＡＣＡＣＴＣＴ  ＧＧＴＧＡＧＣＡＣＣ
７２１  ＧＡＧＧＧＣＧＧＧＡ  ＡＴＧＴＣＴＡＴＧＣ  ＣＡＣＣＧＧＡＧＧＣ  ＡＡＣＡＡＴＧＡＧＧ  ＧＡＣＡＧＣＴＧＧＧ  ＡＣＴＧＧＧＧＧＡＣ
７８１  ＡＣＴＧＡＧＧＡＡＡ  ＧＧＡＡＴＡＣＣＴＴ  ＴＣＡＣＧＴＧＡＴＣ  ＴＣＣＴＴＣＴＴＴＡ  ＣＡＴＣＴＧＡＧＣＡ  ＴＡＡＧＡＴＣＡＡＧ
８４１  ＣＡＧＣＴＧＡＧＣＧ  ＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡ  ＣＡＣＡＴＣＴＧＣＡ  ＧＣＣＣＴＧＡＣＴＧ  ＡＧＧＡＣＧＧＧＣＧ  ＣＣＴＧＴＴＣＡＴＧ
９０１  ＴＧＧＧＧＡＧＡＴＡ  ＡＴＴＣＡＧＡＧＧＧ  ＣＣＡＧＡＴＴＧＧＧ  ＣＴＧＡＡＡＡＡＣＧ  ＴＧＡＧＣＡＡＴＧＴ  ＧＴＧＣＧＴＣＣＣＴ
９６１  ＣＡＧＣＡＧＧＴＧＡ  ＣＣＡＴＣＧＧＡＡＡ  ＧＣＣＡＧＴＣＡＧＴ  ＴＧＧＡＴＴＴＣＡＴ  ＧＴＧＧＣＴＡＣＴＡ  ＴＣＡＴＡＧＣＧＣＣ
１０２１  ＴＴＣＧＴＧＡＣＣＡ  ＣＡＧＡＴＧＧＣＧＡ  ＧＣＴＧＴＡＣＧＴＣ  ＴＴＴＧＧＧＧＡＧＣ  ＣＣＧＡＡＡＡＣＧＧ  ＡＡＡＡＣＴＧＧＧＣ
１０８１  ＣＴＧＣＣＴＡＡＣＣ  ＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧ  ＣＡＡＴＣＡＣＣＧＧ  ＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣ  ＴＧＧＴＧＴＣＣＧＡ  ＧＡＴＣＣＣＴＧＡＡ
１１４１  ＡＡＡＧＴＧＡＴＣＣ  ＡＧＧＴＣＧＣＣＴＧ  ＣＧＧＧＧＧＡＧＡＧ  ＣＡＴＡＣＡＧＴＧＧ  ＴＣＣＴＧＡＣＴＧＡ  ＧＡＡＴＧＣＴＧＴＧ
１２０１  ＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧ  ＧＡＣＴＧＧＧＣＣＡ  ＧＴＴＴＧＧＣＣＡＧ  ＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧ  ＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴ  ＧＴＴＴＧＡＧＡＣＡ
１２６１  ＴＣＣＧＡＡＣＣＡＡ  ＡＡＧＴＧＡＴＣＧＡ  ＧＡＡＣＡＴＴＣＧＣ  ＧＡＣＣＡＧＡＣＴＡ  ＴＣＡＧＣＴＡＣＡＴ  ＴＴＣＣＴＧＣＧＧＡ
１３２１  ＧＡＧＡＡＴＣＡＣＡ  ＣＣＧＣＡＣＴＧＡＴ  ＣＡＣＡＧＡＣＡＴＴ  ＧＧＣＣＴＧＡＴＧＴ  ＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧ  ＣＧＡＴＧＧＡＣＧＡ
１３８１  ＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣ  ＴＧＧＧＡＣＴＧＧＧ  ＡＣＴＧＧＡＧＡＡＣ  ＴＴＣＡＣＴＡＡＴＣ  ＡＴＴＴＴＡＴＣＣＣ  ＣＡＣＣＣＴＧＴＧＴ
１４４１  ＴＣＴＡＡＣＴＴＣＣ  ＴＧＣＧＧＴＴＣＡＴ  ＣＧＴＧＡＡＡＣＴＧ  ＧＴＣＧＣＴＴＧＣＧ  ＧＣＧＧＧＴＧＴＣＡ  ＣＡＴＧＧＴＧＧＴＣ
１５０１  ＴＴＣＧＣＴＧＣＡＣ  ＣＴＣＡＴＡＧＧＧＧ  ＣＧＴＧＧＣＴＡＡＧ  ＧＡＧＡＴＣＧＡＡＴ  ＴＴＧＡＣＧＡＧＡＴ  ＴＡＡＣＧＡＴＡＣＡ
１５６１  ＴＧＣＣＴＧＡＧＣＧ  ＴＧＧＣＡＡＣＴＴＴ  ＣＣＴＧＣＣＡＴＡＣ  ＡＧＣＴＣＣＣＴＧＡ  ＣＴＴＣＴＧＧＣＡＡ  ＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧ
１６２１  ＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡ  ＧＴＧＣＡＡＧＧＡＴ  ＧＣＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＧＡＡＣ  ＧＣＴＣＴＣＣＴＧＡ  ＣＡＧＴＴＴＣＴＣＡ
１６８１  ＡＴＧＣＧＡＣＧＡＡ  ＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣ  ＴＡＴＣＧＡＧＧＧＡ  ＡＣＡＣＴＧＧＧＡＣ  ＴＧＡＧＴＧＣＣＴＧ  ＣＴＴＣＣＴＧＣＣＴ
１７４１  ＡＡＣＴＣＡＧＴＧＴ  ＴＴＣＣＡＣＧＡＴＧ  ＴＡＧＣＧＡＧＣＧＧ  ＡＡＴＣＴＧＣＡＧＧ  ＡＧＴＣＴＧＴＣＣＴ  ＧＡＧＴＧＡＧＣＡＧ
１８０１  ＧＡＴＣＴＧＡＴＧＣ  ＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡ  ＡＣＣＣＧＡＣＴＡＣ  ＣＴＧＣＴＧＧＡＴＧ  ＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡ  ＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡ
１８６１  ＡＴＣＧＡＣＡＡＣＴ  ＣＴＡＧＴＡＣＡＧＴ  ＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧ  ＧＧＣＧＡＧＡＣＴＡ  ＣＣＧＡＴＡＴＣＣＴ  ＧＡＡＴＡＴＧＡＣＡ
１９２１  ＣＡＣＡＴＴＡＴＧＴ  ＣＡＣＴＧＡＡＣＡＧ  ＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧ  ＡＧＴＣＴＧＡＡＡＣ  ＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴ  ＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧ
１９８１  ＡＡＧＡＡＡＣＡＧＣ  ＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧ  ＣＧＡＧＣＴＧＡＣＴ  ＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧ  ＣＣＣＴＧＡＣＡＧＡ  ＧＡＡＣＧＡＣＧＡＴ
２０４１  ＡＧＣＧＡＴＧＡＧＴ  ＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴ  ＧＴＣＣＧＡＧＡＴＧ  ＡＡＧＧＡＡＧＧＣＡ  ＡＡＧＣＴＴＧＴＡＡ  ＧＣＡＧＣＡＴＧＴＣ
２１０１  ＡＧＴＣＡＧＧＧＧＡ  ＴＣＴＴＣＡＴＧＡＣ  ＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣ  ＡＣＡＡＣＴＡＴＴＧ  ＡＧＧＣＴＴＴＴＴＣ  ＡＧＡＣＧＡＧＧＡＡ
２１６１  ＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣ  ＣＣＧＡＧＧＡＡＡＡ  ＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡ  ＧＡＡＧＡＴＴＣＣＡ  ＡＧＧＧＧＡＡＴＧＧ  ＡＡＴＴＧＡＧＧＡＡ
２２２１  ＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧ  ＡＡＧＣＣＡＡＣＧＡ  ＧＧＡＡＡＡＴＧＴＧ  ＡＡＡＧＴＣＣＡＣＧ  ＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡ  ＧＧＡＧＡＡＡＡＣＡ
２２８１  ＧＡＡＡＴＣＣＴＧＴ  ＣＴＧＡＣＧＡＴＣＴ  ＧＡＣＴＧＡＣＡＡＧ  ＧＣＣＧＡＧＧＴＧＴ  ＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡ  ＧＧＣＡＡＡＡＴＣＴ
２３４１  ＧＴＣＧＧＡＧＡＧＧ  ＣＡＧＡＡＧＡＣＧＧ  ＡＣＣＡＧＡＧＧＧＡ  ＣＧＡＧＧＧＧＡＴＧ  ＧＡＡＣＣＴＧＣＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡ
２４０１  ＡＧＣＧＧＧＧＣＴＧ  ＡＧＣＡＴＴＧＧＣＡ  ＧＧＡＣＧＡＧＧＡＡ  ＣＧＡＧＡＧＡＡＧＧ  ＧＣＧＡＡＡＡＧＧＡ  ＴＡＡＡＧＧＣＣＧＣ
２４６１  ＧＧＧＧＡＧＡＴＧＧ  ＡＡＣＧＡＣＣＴＧＧ  ＡＧＡＧＧＧＣＧＡＡ  ＡＡＡＧＡＧＣＴＧＧ  ＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡ  ＧＧＡＡＴＧＧＡＡＧ
２５２１  ＡＡＡＡＧＧＧＡＣＧ  ＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡ  ＧＧＡＧＣＡＧＡＡＡ  ＧＡＡＡＧＧＧＡＧＣ  ＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡ  ＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣ
２５８１  ＡＡＣＣＡＧＧＡＧＡ  ＴＧＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＧＣＧＡＧＧＡＡ  ＧＡＧＣＡＴＧＧＣＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣ
２６４１  ＧＡＴＡＧＡＧＡＡＧ  ＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡ  ＡＡＡＡＧＡＡＧＧＣ  ＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡ  ＧＧＧＣＧＡＧＧＡＡ
２７０１  ＧＴＧＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＧＡＧＧＧＡＡＡＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡ  ＧＡＡＣＧＧＡＡＧＡ  ＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧ  ＡＧＣＣＧＧＣＡＡＡ
２７６１  ＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧ  ＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＧＣＧＡＴＣＡＧ  ＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣ
２８２１  ＣＧＣＧＧＧＧＡＡＧ  ＡＧＡＡＡＧＡＧＧＡ  ＧＧＧＡＧＧＡＧＡＧ  ＧＴＧＧＡＧＧＧＣＧ  ＧＡＧＡＧＧＴＣＧＡ  ＡＧＡＧＧＧＡＡＡＧ
２８８１  ＧＧＣＧＡＧＣＧＣＧ  ＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣ  ＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧ  ＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＡＧＧＧＧＧＡＡ
２９４１  ＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧ  ＧＧＧＧＡＧＧＧＡＡ  ＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧ
３００１  ＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧ  ＧＡＧＡＧＧＡＡＧＡ  ＧＧＧＧＧＡＧＧＡＧ  ＧＧＣＧＡＧＧＧＧＧ  ＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡ  ＧＧＡＡＧＡＡＧＧＡ
３０６１  ＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡ  ＡＧＧＣＧＡＧＧＧＧ  ＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＡＡＧＧ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡ
３１２１  ＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧ  ＧＡＧＡＡＧＧＧＡＡ  ＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧ
３１８１  ＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＧＧＧ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣ
３２４１  ＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧ  ＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧ  ＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧ  ＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡ  ＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡ
３３０１  ＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧ  ＣＧＡＡＧＧＧＧＡＧ  ＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧ  ＧＣＧＡＡＧＧＣＧＡ  ＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡ
３３６１  ＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧ  ＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧ  ＣＧＡＧＧＡＡＧＡＡ  ＧＡＧＧＧＡＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡ  ＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡ
３４２１  ＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧ  ＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡ  ＡＧＧＣＧＡＧＧＧＣ  ＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧ  ＡＡＧＡＧＧＧＡＧＡ  ＡＧＴＧＧＡＧＧＧＣ
３４８１  ＧＡＡＧＴＣＧＡＧＧ  ＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧ  ＡＧＡＡＧＧＧＧＡＡ  ＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧ  ＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡ  ＡＧＡＡＧＡＡＧＧＣ
３５４１  ＧＡＧＧＡＡＡＧＡＧ  ＡＡＡＡＡＧＡＧＧＧ  ＡＧＡＡＧＧＣＧＡＧ  ＧＡＡＡＡＣＣＧＧＡ  ＧＡＡＡＴＡＧＧＧＡ  ＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡ
３６０１  ＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧ  ＧＡＡＡＧＴＡＣＣＡ  ＧＧＡＧＡＣＡＧＧＣ  ＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡ  ＡＣＧＡＧＣＧＧＣＡ  ＧＧＡＴＧＧＣＧＡＧ
３６６１  ＧＡＡＴＡＴＡＡＧＡ  ＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡ  ＧＡＴＣＡＡＡＧＧＡ  ＴＣＣＧＴＣＡＡＧＴ  ＡＣＧＧＣＡＡＧＣＡ  ＣＡＡＡＡＣＣＴＡＴ
３７２１  ＣＡＧＡＡＧＡＡＡＡ  ＧＣＧＴＧＡＣＣＡＡ  ＣＡＣＡＣＡＧＧＧＧ  ＡＡＴＧＧＡＡＡＡＧ  ＡＧＣＡＧＡＧＧＡＧ  ＴＡＡＧＡＴＧＣＣＴ
３７８１  ＧＴＧＣＡＧＴＣＡＡ  ＡＡＣＧＧＣＴＧＣＴ  ＧＡＡＧＡＡＴＧＧＣ  ＣＣＡＴＣＴＧＧＡＡ  ＧＴＡＡＡＡＡＡＴＴ  ＣＴＧＧＡＡＣＡＡＴ
３８４１  ＧＴＧＣＴＧＣＣＣＣ  ＡＣＴＡＴＣＴＧＧＡ  ＡＣＴＧＡＡＡＴＡＡ  ＧＡＧＣＴＣＣＴＣＧ  ＡＧＧＣＧＧＣＣＣＧ  ＣＴＣＧＡＧＴＣＴＡ
３９０１  ＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴ  ＣＧＡＡＧＧＴＡＡＧ  ＣＣＴＡＴＣＣＣＴＡ  ＡＣＣＣＴＣＴＣＣＴ  ＣＧＧＴＣＴＣＧＡＴ  ＴＣＴＡＣＧＣＧＴＡ
３９６１  ＣＣＧＧＴＣＡＴＣＡ  ＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣ  ＣＡＴＴＧＡＧＴＴＴ  ＡＡＡＣＣＣＧＣＴＧ  ＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧ  ＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴ
４０２１  ＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡ  ＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴ  ＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴ  ＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣ  ＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣ  ＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧ
４０８１  ＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣ  ＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣ  ＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧ  ＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣ  ＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴ  ＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴ
４１４１  ＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴ  ＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴ  ＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣ  ＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡ  ＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴ  ＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡ
４２０１  ＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡ  ＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴ  ＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴ  ＣＴＡＴＧＧＣＴＴＣ  ＴＧＡＧＧＣＧＧＡＡ  ＡＧＡＡＣＣＡＧＡＴ
４２６１  ＣＣＴＣＴＣＴＴＡＡ  ＧＧＴＡＧＣＡＴＣＧ  ＡＧＡＴＴＴＡＡＡＴ  ＴＡＧＧＧＡＴＡＡＣ  ＡＧＧＧＴＡＡＴＧＧ  ＣＧＣＧＧＧＣＣＧＣ
４３２１  ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴ  ＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧ  ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣ  ＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧ  ＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧ  ＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧ
４３８１  ＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣ  ＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣ  ＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧ  ＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧ  ＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡ  ＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣ
４４４１  ＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ（配列番号８）の配列を含むまたはこれからなる。
【００７６】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、ウッドチャック肝炎転写後制御エレメントをさらに含む。一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、ＲＰＧＲＯＲＦ１５のｃＤＮＡをコードする精製された組換え血清型２（ｒＡＡＶ）からなる。一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：１１９ｂｐ  ＡＡＶ２  ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、１９９ｂｐ  Ｇタンパク質共役ロドプシンキナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーター、１０ｂｐコザック配列、３４５９ｂｐヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃＤＮＡ、５８８ｂｐ  ＷＰＲＥ、２７０ｂｐウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ−ポリＡ）、及び１３０ｂｐ  ＡＡＶ２  ３’ＩＴＲを含む一本鎖ＤＮＡ挿入配列、ならびにエレメントに隣接する短いクローニング配列を含有する。一部の実施形態では、ＷＰＲＥをコードする配列は、以下：
１  ａｔｃａａｃｃｔｃｔ  ｇｇａｔｔａｃａａａ  ａｔｔｔｇｔｇａａａ  ｇａｔｔｇａｃｔｇｇ  ｔａｔｔｃｔｔａａｃ  ｔａｔｇｔｔｇｃｔｃ
６１  ｃｔｔｔｔａｃｇｃｔ  ａｔｇｔｇｇａｔａｃ  ｇｃｔｇｃｔｔｔａａ  ｔｇｃｃｔｔｔｇｔａ  ｔｃａｔｇｃｔａｔｔ  ｇｃｔｔｃｃｃｇｔａ
１２１  ｔｇｇｃｔｔｔｃａｔ  ｔｔｔｃｔｃｃｔｃｃ  ｔｔｇｔａｔａａａｔ  ｃｃｔｇｇｔｔｇｃｔ  ｇｔｃｔｃｔｔｔａｔ  ｇａｇｇａｇｔｔｇｔ
１８１  ｇｇｃｃｃｇｔｔｇｔ  ｃａｇｇｃａａｃｇｔ  ｇｇｃｇｔｇｇｔｇｔ  ｇｃａｃｔｇｔｇｔｔ  ｔｇｃｔｇａｃｇｃａ  ａｃｃｃｃｃａｃｔｇ
２４１  ｇｔｔｇｇｇｇｃａｔ  ｔｇｃｃａｃｃａｃｃ  ｔｇｔｃａｇｃｔｃｃ  ｔｔｔｃｃｇｇｇａｃ  ｔｔｔｃｇｃｔｔｔｃ  ｃｃｃｃｔｃｃｃｔａ
３０１  ｔｔｇｃｃａｃｇｇｃ  ｇｇａａｃｔｃａｔｃ  ｇｃｃｇｃｃｔｇｃｃ  ｔｔｇｃｃｃｇｃｔｇ  ｃｔｇｇａｃａｇｇｇ  ｇｃｔｃｇｇｃｔｇｔ
３６１  ｔｇｇｇｃａｃｔｇａ  ｃａａｔｔｃｃｇｔｇ  ｇｔｇｔｔｇｔｃｇｇ  ｇｇａａａｔｃａｔｃ  ｇｔｃｃｔｔｔｃｃｔ  ｔｇｇｃｔｇｃｔｃｇ
４２１  ｃｃｔｇｔｇｔｔｇｃ  ｃａｃｃｔｇｇａｔｔ  ｃｔｇｃｇｃｇｇｇａ  ｃｇｔｃｃｔｔｃｔｇ  ｃｔａｃｇｔｃｃｃｔ  ｔｃｇｇｃｃｃｔｃａ
４８１  ａｔｃｃａｇｃｇｇａ  ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｃ  ｃｇｃｇｇｃｃｔｇｃ  ｔｇｃｃｇｇｃｔｃｔ  ｇｃｇｇｃｃｔｃｔｔ  ｃｃｇｃｇｔｃｔｔｃ
５４１  ｇｃｃｔｔｃｇｃｃｃ  ｔｃａｇａｃｇａｇｔ  ｃｇｇａｔｃｔｃｃｃ  ｔｔｔｇｇｇｃｃｇｃ  ｃｔｃｃｃｃｇｃのヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一性、少なくとも９７％同一性または１００％同一性を有するヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ＷＰＲＥをコードする配列は、以下：
１  ａｔｃａａｃｃｔｃｔ  ｇｇａｔｔａｃａａａ  ａｔｔｔｇｔｇａａａ  ｇａｔｔｇａｃｔｇｇ  ｔａｔｔｃｔｔａａｃ  ｔａｔｇｔｔｇｃｔｃ
６１  ｃｔｔｔｔａｃｇｃｔ  ａｔｇｔｇｇａｔａｃ  ｇｃｔｇｃｔｔｔａａ  ｔｇｃｃｔｔｔｇｔａ  ｔｃａｔｇｃｔａｔｔ  ｇｃｔｔｃｃｃｇｔａ
１２１  ｔｇｇｃｔｔｔｃａｔ  ｔｔｔｃｔｃｃｔｃｃ  ｔｔｇｔａｔａａａｔ  ｃｃｔｇｇｔｔｇｃｔ  ｇｔｃｔｃｔｔｔａｔ  ｇａｇｇａｇｔｔｇｔ
１８１  ｇｇｃｃｃｇｔｔｇｔ  ｃａｇｇｃａａｃｇｔ  ｇｇｃｇｔｇｇｔｇｔ  ｇｃａｃｔｇｔｇｔｔ  ｔｇｃｔｇａｃｇｃａ  ａｃｃｃｃｃａｃｔｇ
２４１  ｇｔｔｇｇｇｇｃａｔ  ｔｇｃｃａｃｃａｃｃ  ｔｇｔｃａｇｃｔｃｃ  ｔｔｔｃｃｇｇｇａｃ  ｔｔｔｃｇｃｔｔｔｃ  ｃｃｃｃｔｃｃｃｔａ
３０１  ｔｔｇｃｃａｃｇｇｃ  ｇｇａａｃｔｃａｔｃ  ｇｃｃｇｃｃｔｇｃｃ  ｔｔｇｃｃｃｇｃｔｇ  ｃｔｇｇａｃａｇｇｇ  ｇｃｔｃｇｇｃｔｇｔ
３６１  ｔｇｇｇｃａｃｔｇａ  ｃａａｔｔｃｃｇｔｇ  ｇｔｇｔｔｇｔｃｇｇ  ｇｇａａａｔｃａｔｃ  ｇｔｃｃｔｔｔｃｃｔ  ｔｇｇｃｔｇｃｔｃｇ
４２１  ｃｃｔｇｔｇｔｔｇｃ  ｃａｃｃｔｇｇａｔｔ  ｃｔｇｃｇｃｇｇｇａ  ｃｇｔｃｃｔｔｃｔｇ  ｃｔａｃｇｔｃｃｃｔ  ｔｃｇｇｃｃｃｔｃａ
４８１  ａｔｃｃａｇｃｇｇａ  ｃｃｔｔｃｃｔｔｃｃ  ｃｇｃｇｇｃｃｔｇｃ  ｔｇｃｃｇｇｃｔｃｔ  ｇｃｇｇｃｃｔｃｔｔ  ｃｃｇｃｇｔｃｔｔｃ
５４１  ｇｃｃｔｔｃｇｃｃｃ  ｔｃａｇａｃｇａｇｔ  ｃｇｇａｔｃｔｃｃｃ  ｔｔｔｇｇｇｃｃｇｃ  ｃｔｃｃｃｃｇｃ（配列番号９）のヌクレオチド配列を含むまたはこれからなる。
【００７７】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドは、５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）に対応する配列及び３’逆方向末端反復（ＩＴＲ）に対応する配列をさらに含む。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、同一である。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、同一でない。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、血清型２のアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ２）から単離されるまたはこれに由来する。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、野生型配列を含む。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、短縮型野生型ＡＡＶ２配列を含む。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、野生型ＡＡＶ２配列と比較した場合に、変異を含む。一部の実施形態では、変異は、置換、挿入、欠失、逆位、または転位を含む。一部の実施形態では、変異は、野生型または変異型配列の短縮または伸長を含む。
【００７８】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＡＡＶは、５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）に対応する配列及び３’逆方向末端反復（ＩＴＲ）に対応する配列を含む。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、同一である。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、同一でない。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、血清型２のアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ２）から単離されるまたはこれに由来する。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、野生型配列を含む。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、短縮型野生型ＡＡＶ２配列を含む。一部の実施形態では、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列は、野生型ＡＡＶ２配列と比較した場合に、変異を含む。一部の実施形態では、変異は、置換、挿入、欠失、逆位、または転位を含む。一部の実施形態では、変異は、野生型または変異型配列の短縮または伸長を含む。
【００７９】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＡＡＶは、複製欠損ＡＡＶの形成に必須のウイルス配列を含む。一部の実施形態では、ウイルス配列は、５’ＩＴＲをコードする配列または３’ＩＴＲをコードする配列の一方または両方と同じ血清型のＡＡＶから単離されるまたはこれに由来する。一部の実施形態では、ウイルス配列、５’ＩＴＲをコードする配列または３’ＩＴＲをコードする配列は、ＡＡＶ２から単離されるまたはこれに由来する。
【００８０】
本開示の組成物の一部の実施形態では、ＡＡＶは、複製欠損ＡＡＶの形成に必須のウイルス配列、５’ＩＴＲをコードする配列及び３’ＩＴＲをコードする配列を含むが、ＡＡＶから単離されるまたはこれに由来するいかなる他の配列も含まない。一部の実施形態では、ＡＡＶは、複製欠損ＡＡＶの形成に必須のウイルス配列、５’ＩＴＲをコードする配列、３’ＩＴＲをコードする配列、及び本開示のＲＰＧＲＯＲＦ１５ポリヌクレオチドをコードする配列を含む、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）である。
【００８１】
一部の実施形態では、宿主細胞においてｒＡＡＶを作製するために使用されるプラスミドＤＮＡは、選択マーカーを含む。例示的な選択マーカーは、抗生物質抵抗性遺伝子を含むが、これに限定されない。例示的な抗生物質抵抗性遺伝子は、アンピシリン及びカナマイシンを含むが、これに限定されない。例示的な選択マーカーは、薬物または小分子抵抗性遺伝子を含むが、これに限定されない。例示的な選択マーカーは、ｄａｐＤ及び、ｄａｐＤ発現を制御または抑制するｌａｃＯ／Ｐ構築物を含むがこれに限定されない抑制性オペレーターを含むが、これに限定されず、プラスミド選択は、オペレーターリプレッサータイトレーション（ＯＲＴ）が可能なプラスミドで形質転換された細胞を投与または接触させることにより行われる。例示的な選択マーカーは、ｃｃｄ選択遺伝子を含むが、これに限定されない。一部の実施形態では、ｃｃｄ選択遺伝子は、毒性ｃｃｄＢ遺伝子を発現するように操作された宿主細胞株を救済するｃｃｄＡ選択遺伝子をコードする配列を含む。例示的な選択マーカーは、ｓａｃＢを含むが、これに限定されず、ＲＮＡを宿主細胞に投与するまたは接触させて、スクロース培地中でのｓａｃＢ遺伝子の発現を抑制する。例示的な選択マーカーは、Ｈｏｋ（宿主殺傷遺伝子）及びＳｏｋ（殺傷の抑制）から構成されるｐａｒＡＢ＋座などの分離殺傷機構を含むが、これに限定されない。
【００８２】
ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５構造
ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃＤＮＡをコードする精製された組換え血清型２アデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）からなる。
【００８３】
一部の実施形態では、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、５’ＩＴＲをコードする配列、３’ＩＴＲをコードする配列ならびに血清型８アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ８）から単離された及び／またはこれに由来するキャプシドタンパク質をコードする配列のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、５’ＩＴＲをコードする短縮型配列ならびに、血清型２アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ２）から単離された及び／またはこれに由来する３’ＩＴＲをコードする配列、ならびに血清型８アデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ８）から単離された及び／またはこれに由来するキャプシドタンパク質をコードする配列を含む。一部の実施形態では、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、野生型ＡＡＶ２  ＩＴＲ（野生型５’ＩＴＲ及び野生型３’ＩＴＲ）を含む。
【００８４】
一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（ｂ）哺乳動物細胞における発現に好適なプロモーター、（ｃ）ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡ、及び（ｄ）３’ＩＴＲを含む、一本鎖ＤＮＡ挿入配列（加えて、各エレメントに隣接する短いクローニング部位）を含有する。
【００８５】
一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（ｂ）哺乳動物細胞における発現に好適なプロモーター、（ｃ）ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡ、（ｃ）ポリアデニル化シグナル、及び（ｄ）ｂｐ  ３’ＩＴＲを含む、一本鎖ＤＮＡ挿入配列（加えて、各エレメントに隣接する短いクローニング部位）を含有する。
【００８６】
一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（ｂ）哺乳動物細胞における発現に好適なプロモーター、（ｃ）コザック配列、（ｄ）ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡ、（ｅ）ポリアデニル化シグナル、及び（ｆ）ｂｐ  ３’ＩＴＲを含む、一本鎖ＤＮＡ挿入配列（加えて、各エレメントに隣接する短いクローニング部位）を含有する。
【００８７】
一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：（ａ）５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（ｂ）哺乳動物細胞における発現に好適なプロモーター、（ｃ）ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡ、（ｄ）転写後制御エレメント（ＰＲＥ）、（ｅ）ポリアデニル化配列（ポリＡ）、及び（ｆ）３’ＩＴＲを含む、一本鎖ＤＮＡ挿入配列（加えて、各エレメントに隣接する短いクローニング部位）を含有する。
【００８８】
一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：（ａ）１１９ｂｐ  ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（ｂ）プロモーター、任意選択で、１９９ｂｐ  ＧＲＫ１プロモーター、（ｃ）ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡ、（ｄ）２７０ｂｐウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ−ポリＡ）、及び（ｅ）１３０ｂｐ  ３’ＩＴＲを含む、一本鎖ＤＮＡ挿入配列（加えて、各エレメントに隣接する短いクローニング部位）を含有する。
【００８９】
一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：（ａ）１１９  ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（ｂ）プロモーター、任意選択で、１９９ｂｐ  ＧＲＫ１プロモーター、（ｃ）コザック配列、（ｄ）ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡ、（ｅ）２７０ｂｐウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ−ポリＡ）、及び（ｆ）１３０  ３’ＩＴＲを含む、一本鎖ＤＮＡ挿入配列（加えて、各エレメントに隣接する短いクローニング部位）を含有する。
【００９０】
一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：（ａ）１１９  ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（ｂ）プロモーター、任意選択で、１９９ｂｐ  ＧＲＫ１プロモーター、（ｃ）ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡ、（ｄ）５８８ｂｐウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御エレメント（ＷＰＲＥ）、（ｅ）２７０ｂｐウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ−ポリＡ）、及び（ｆ）１３０  ３’ＩＴＲを含む、一本鎖ＤＮＡ挿入配列（加えて、各エレメントに隣接する短いクローニング部位）を含有する。
【００９１】
一部の実施形態では、各２０ｎｍ  ＡＡＶビリオンは、以下：（ａ）１１９ｂｐ  ５’逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（ｂ）プロモーター、任意選択で、１９９ｂｐ  ＧＲＫ１プロモーター、（ｃ）１０ｂｐコザック配列、（ｄ）ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡ、（ｅ）５８８ｂｐウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御エレメント（ＷＰＲＥ）、（ｆ）２７０ｂｐウシ成長ホルモンポリアデニル化配列（ＢＧＨ−ポリＡ）、及び（ｇ）１３０ｂｐ  ３’ＩＴＲを含む、一本鎖ＤＮＡ挿入配列（加えて、各エレメントに隣接する短いクローニング部位）を含有する。
【００９２】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、哺乳動物細胞における発現が可能なプロモーターをコードする配列を含み得る。好ましくは、本開示のＡＡＶまたはＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５構築物は、ヒト細胞における発現が可能なプロモーターをコードする配列を含み得る。本開示の例示的なプロモーターは、構成的に活性なプロモーター、細胞型特異的プロモーター、ウイルスプロモーター、哺乳動物プロモーター、及びハイブリッドまたは組換えプロモーターを含むが、これに限定されない。本開示の組成物の一部の実施形態では、ＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃＤＮＡは、Ｇタンパク質共役受容体キナーゼ１（ＧＲＫ１）プロモーターの制御下にある。
【００９３】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、転写後制御エレメント（ＰＲＥ）をコードする配列を含み得る。本開示の例示的なＰＲＥは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御エレメント（ＷＰＲＥ）を含むが、これに限定されない。本開示の組成物の一部の実施形態では、ＡＡＶは、ウイルスＳ転写物の３’領域を起源とし、本開示の治療用ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードするｃＤＮＡの直接下流にある５８８ｂｐ  ＷＰＲＥを含む。このＷＰＲＥは、ｍＲＮＡプロセシング及びイントロンのない遺伝子の輸送を増強するように作用する、ネイティブｍＲＮＡ転写産物の高レベルの発現のために重要である。本開示の組成物の一部の実施形態では、ＷＰＲＥは、翻訳開始部位の切除によりウイルスＸ抗原の発現を防止するように修飾されている。このことは、Ｗｅ２プロモーター／エンハンサーを欠失させること、及びＷｅ１プロモーターを突然変異させることによって達成されている。
【００９４】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、ポリアデノシン（ポリＡ）配列を含み得る。本開示の例示的なポリＡ配列は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化（ＢＧＨ−ポリＡ）配列を含むが、これに限定されない。ＢＧＨ−ポリＡ配列は、遺伝子発現を増強するために使用され、ＳＶ４０及びヒトコラーゲンポリＡなどの他のポリＡ配列よりも３倍高い発現レベルをもたらすことが示されている。この増加した発現は、上流のプロモーターまたは導入遺伝子の型と大いに独立している。ＢＧＨ−ポリＡ及びＷＰＲＥ配列の両方を使用して発現レベルを増加させることは、注射されるＡＡＶまたはプラスミドベクターのより低い全体的用量を可能にし、そのことで宿主免疫応答が生成される可能性がより低くなる。
【００９５】
剤形
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、全身または局所投与用に製剤化され得る。好ましくは、本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、局所投与用に製剤化され得る。
【００９６】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、注射または注入のための懸濁液として製剤化され得る。
【００９７】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、硝子体内注射もしくは注入、網膜下注射もしくは注入、または上脈絡膜注射もしくは注入を含むがこれに限定されない、任意の経路による注射または注入のために製剤化され得る。
【００９８】
本明細書に記載の組成物のいずれにおいても、組成物中のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の量は、絶対量（ゲノム粒子（ｇｐまたはｐｇ））または濃度（ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ））として表され得る。「ゲノム粒子」の値は、「ベクターゲノム」の値と同等である。
【００９９】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、端点を含んで、０．５×１０１０ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ間、例えば、０．５×１０１０ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、０．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、０．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１×１０１２ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、２×１０１２ｖｇ／ｍＬ及び１×１０１３ｖｇ／ｍＬ間の濃度にて製剤化され得る。本明細書で使用する場合、ｖｇ／ｍＬは、ｑＰＣＲまたはｄｄＰＣＲなどの定量的アッセイで測定された、溶液１ｍＬあたりのｒＡＡＶベクターゲノムの数を指す。一部の実施形態では、本開示の組成物は、０．５×１０１１ｖｇ／ｍＬまたは１×１０１２ｖｇ／ｍｌの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約０．５×１０１１ｖｇ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約１×１０１２ｖｇ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約５×１０１２ｖｇ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約１×１０１３ｖｇ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約５×１０９ｇｐ／ｍＬ及び１×１０１３ｇｐ／ｍＬ、例えば、０．５×１０１０ｇｐ／ｍＬ及び１×１０１３ｇｐ／ｍＬ、０．５×１０１１ｇｐ／ｍＬ及び１×１０１３ｇｐ／ｍＬ、０．５×１０１２ｇｐ／ｍＬ及び１×１０１３ｇｐ／ｍＬ、１×１０１２ｇｐ／ｍＬ及び１×１０１３ｇｐ／ｍＬ、２×１０１２ｇｐ／ｍＬ及び１×１０１３ｇｐ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約１×１０１０ｇｐ／ｍｌの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約５×１０１０ｇｐ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約１×１０１１ｇｐ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約２．５×１０１１ｇｐ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約５×１０１１ｇｐ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、ベクターゲノム（ｖｇ）は、ＤＮアーゼを用いて粒子を処置した後、すなわちＤＮアーゼ耐性粒子（ＤＲＰ）として、ｑＰＣＲまたはｄｄＰＣＲなどの定量的アッセイによって決定される。
【０１００】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、端点を含んで、０．５×１０１０ＤＮアーゼ耐性粒子（ＤＲＰ）／ミリリットル（ｍＬ）及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ間、例えば、０．５×１０１０ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、０．５×１０１１ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、０．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、１×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、２×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ間の濃度にて製剤化され得る。本明細書で使用する場合、ＤＲＰ／ｍＬは、本明細書に開示の方法によって測定された、溶液１ｍＬあたりのｒＡＡＶ  ＤＮアーゼ耐性粒子の数を指す。一部の実施形態では、本開示の組成物は、０．５×１０１１ＤＲＰ／ｍＬまたは１×１０１２ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約０．５×１０１１ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約１×１０１２ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。
【０１０１】
一部の実施形態では、本開示の組成物は、約５×１０９ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、例えば、０．５×１０１０ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、０．５×１０１１ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、０．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、１×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ、２×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ及び１×１０１３ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約１×１０１０ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約５×１０１０ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約１×１０１１ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約２．５×１０１１ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約５×１０１１ＤＲＰ／ｍＬの濃度にて製剤化され得る。
【０１０２】
一部の実施形態では、本開示の組成物は、１．２５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ及び１．０×１０１３ＤＲＰ／ｍＬ間、例えば、１．２５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、１．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、１．７５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、２．０×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、２．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、３．０×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、３．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、４．０×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、４．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、５．０×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、５．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、６．０×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、６．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、７．０×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、７．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、８．０×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、８．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、９．０×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、９．５×１０１２ＤＲＰ／ｍＬ、または１．０×１０１３ＤＲＰ／ｍＬを含む。
【０１０３】
本開示の組成物は、本開示の希釈剤を使用して、投与前に希釈され得る。一部の実施形態では、希釈剤は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の調製のために使用される製剤緩衝液と同一である。一部の実施形態では、希釈剤は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の調製のために使用される製剤緩衝液と同一でない。
【０１０４】
本開示の組成物は、完全及び中空ＡＡＶ粒子を含み得る。一部の実施形態では、完全ＡＡＶ粒子は、本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５をコードする一本鎖ＤＮＡを含む。当業者は、例えば、透過型電子顕微鏡分析、ｑＰＣＲまたはｄｄＰＣＲを通して、ＡＡＶ粒子が完全であるか中空であるかを決定することができる。本開示の組成物の一部の実施形態では、組成物は、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、６５％、少なくとも６７％、少なくとも６９％、少なくとも７０％、少なくとも７１％、少なくとも７２％、少なくとも７３％、少なくとも７６％、少なくとも７５％、少なくとも７６％、少なくとも７７％、少なくとも７８％、少なくとも７９％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の完全ＡＡＶ粒子を含む。一部の実施形態では、組成物は、少なくとも７０％の完全ＡＡＶ粒子を含む。
【０１０５】
投与
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、網膜下、直接網膜、上脈絡膜または硝子体内送達によって対象の眼に投与され得る。
【０１０６】
網膜下投与
網膜下送達は、網膜下腔への注射または注入を含み得る。本開示の一部の実施形態では、網膜下送達は、網膜下腔への注射または注入を含む。一部の実施形態では、網膜下送達は、網膜下腔への１つまたは複数の注射または注入を含む。一部の実施形態では、網膜下送達は、網膜下腔への少なくとも１つの注射または注入を含む。一部の実施形態では、網膜下送達は、網膜下腔への複数の注射または注入を含む。
【０１０７】
網膜下送達は、網膜下腔内の流体充填ブレブへの注射または注入を含み得る。本開示の一部の実施形態では、網膜下送達は、網膜下腔への注射または注入を含む。一部の実施形態では、網膜下送達は、網膜下腔内の流体充填ブレブへの１回または複数の注射または注入を含む。一部の実施形態では、網膜下送達は、網膜下腔内の流体充填ブレブへの少なくとも１回の注射または注入を含む。一部の実施形態では、網膜下送達は、網膜下腔内の流体充填ブレブへの複数の注射または注入を含む。
【０１０８】
網膜下腔は、神経感覚網膜の下の空間である。網膜下注射の間、物質を、光受容体細胞及び網膜色素上皮（ＲＰＥ）層間に注射し、その間に空間を作製する。小さな網膜切開を通して注射を行うと、網膜剥離が作製され得る。注射物質によって生成された網膜の、剥離して持ち上げられた層は、「ブレブ」と称される。一部の実施形態では、網膜下注射によって作製された穴は、注射溶液が投与後に硝子体腔に著しく逆流し戻ることがないほど十分に小さい。好ましくは、注射は、神経感覚網膜に自己封鎖する入口点を作製する、すなわち、注射針が取り外されると、針によって作製された穴が再封鎖され、注射物質がほとんどまたは実質的にまったく穴を通して放出されなくなる。
【０１０９】
一部の実施形態では、網膜下注射に使用されるデバイスは、マイクロ送達デバイスを含む。一部の実施形態では、マイクロ送達デバイスは、網膜下注射に好適なマイクロニードルを含む。好適なマイクロニードルは、市販されている。一部の実施形態では、マイクロニードルは、ＤＯＲＣ  ４１Ｇテフロン（登録商標）網膜下注射針（Ｄｕｔｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＢＶ，Ｚｕｉｄｌａｎｄ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を含む。一部の実施形態では、デバイスは、少なくとも５０μＬの容量を含む。一部の実施形態では、デバイスは、少なくとも１００μＬまたは最大で１００μＬ（例えば、２５〜１００μＬ、５０〜１００μＬ、７５〜１００μＬ）の容量を含む。一部の実施形態では、デバイスは、少なくとも２００μＬの容量を含む。一部の実施形態では、デバイスは、対象に投与されることになるＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の容量に加えて、８０〜１１０μＬのデッドボリューム（すなわち、デバイスをプライミングするために使用されるが、注射または回収できない組成物の容量）を含む。
【０１１０】
一部の実施形態では、網膜下注射は、ＡＡＶ粒子を含む組成物を、直接視覚ガイダンスの下で、手術顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、送達することによって行うことができる。例示的なアプローチの一つは、網膜下注射は、ハミルトンシリンジ及び３４ゲージ針（ＥＳＳ  ｌａｂｓ，ＵＫ）を用いて、後極から上網膜まで通る強膜トンネルアプローチを使用するものである。あるいは、網膜下注射は、ＷＰＩシリンジ及びベベル３５Ｇ針システム（Ｗｏｒｌｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）を使用する網膜下注射の前に３３Ｇ針を用いて前房穿刺を使用して行うことができる。追加の代替手段は、ＷＰＩ  Ｎａｎｏｆｉｌシリンジ（ＷＰＩ、部品番号ＮＡＮＯＦＩＬ）及び３４ゲージＷＢＩ  Ｎａｎｏｆｉｌ針（ＷＰＩ、部品番号ＮＦ３４ＢＬ−２）である。
【０１１１】
一部の実施形態では、網膜下注射は、２段階網膜下注射を含む。一部の実施形態では、２段階網膜下注射は、以下：（ａ）網膜下注射針を、対象の眼の光受容体細胞層及び網膜色素上皮（ＲＰＥ）層間に挿入すること；（ｂ）溶液を、対象の眼の光受容体細胞層及び網膜色素上皮層間に、網膜をＲＰＥから部分的に剥離させてブレブを形成するのに十分な量で注射すること；ならびに（ｃ）組成物を、ブレブ内に注射することを含む。一部の実施形態では、溶液は、平衡塩類溶液を含む。
【０１１２】
一部の実施形態では、網膜下送達は、硝子体切除術及び網膜下腔への注射を含む。一部の実施形態では、手術は、ＢＩＯＭ（登録商標）（双眼倒像鏡）硝子体切除システムを用いて実施し得る。例えば、対象は、硝子体切除術及び後部硝子体の剥離を受け得る（図２２Ａ）。一部の実施形態では、網膜下注射の前に、網膜を、最大で０．５ｍＬの平衡塩類溶液（ＢＳＳ）で剥離し得る。一部の実施形態では、網膜下注射の前に、網膜を、０．０５〜０．５ｍＬのＢＳＳで剥離し得る。一部の実施形態では、網膜下注射の前に、網膜を、０．１〜０．５ｍＬのＢＳＳで剥離し得る。一部の実施形態では、網膜下注射の前に、網膜を、硝子体注射セットに接続された４１ゲージの網膜下カニューレを通して注射された０．１〜０．５ｍＬの平衡塩類溶液（ＢＳＳ）で剥離し得る（図２２Ｂ）。一部の実施形態では、網膜下注射の前に、網膜を、０．０１〜１．０ｍＬ、０．０５〜１．０ｍＬ、０．１〜１ｍＬ、０．０１〜０．５ｍＬ、０．０５〜０．５ｍＬ、または０．１〜０．５ｍＬのＢＳＳで剥離し得る。一部の実施形態では、網膜下注射の前に、網膜を、約０．０５ｍＬ、約０．１ｍＬ、約０．２ｍＬ、約０．３ｍＬ、約０．４ｍＬ、約０．５ｍＬ、または約０．６ｍＬのＢＳＳで剥離し得る。次に、単回用量のウイルスベクターを、同じ入口部位を通して網膜下液へと注射し得る。少量の流体で黄斑剥離が生じる場合は、眼球後部（例えば、鼻側視神経乳頭）の追加の網膜下部位をさらに選択して、最大で全用量（例えば、０．１ｍＬ）のベクターを送達し得る。これにより、過度な中心窩の伸展が回避される。網膜剥離の予期せぬ合併症が発生した場合（例えば、ガスを用いた処置を必要とする黄斑円孔が生じた場合）、ベクターの注射は、後日まで延期され得る。
【０１１３】
一部の実施形態では、網膜下送達は、１回より多い網膜下注射を含む。一部の実施形態では、網膜下送達は、眼の異なる位置に投与される複数の網膜下注射を含む。一部の実施形態では、網膜下送達は、眼の同じ位置に異なる時間にて投与される複数の網膜下注射を含む。一部の実施形態では、追加の網膜下注射は、前の網膜下注射の少なくとも１週間、２週間、３週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月６か月、１２か月、１８か月、２４か月、または３年後に行われる。一部の実施形態では、網膜下送達は、眼の異なる位置及び異なる時間の両方にて投与される複数の網膜下注射を含む。
【０１１４】
上脈絡膜投与
上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔への注射または注入を含み得る。本開示の一部の実施形態では、上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔への注射または注入を含む。一部の実施形態では、上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔への１回または複数の注射または注入を含む。一部の実施形態では、上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔への少なくとも１回の注射または注入を含む。一部の実施形態では、上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔への複数の注射または注入を含む。
【０１１５】
上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔の流体充填ブレブへの注射または注入を含み得る。本開示の一部の実施形態では、上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔への注射または注入を含む。一部の実施形態では、上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔の流体充填ブレブへの１回または複数の注射または注入を含む。一部の実施形態では、上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔の流体充填ブレブへの少なくとも１回の注射または注入を含む。一部の実施形態では、上脈絡膜送達は、上脈絡膜腔の流体充填ブレブへの複数の注射または注入を含む。
【０１１６】
上脈絡膜腔は、強膜及び網膜の脈絡膜間の空間である。上脈絡膜注射の間、この空間に物質が注射される。上脈絡膜腔は、後眼部の円周を横切る。組成物を上脈絡膜腔に送達することにより、組成物が、脈絡膜、網膜色素上皮、及び網膜（光受容体細胞を含む）に、高濃度にて（及び空間内で希釈されずに）直接送達され得、組成物の生物学的利用能が注射または注入の部位にて保存または維持され得る。
【０１１７】
図１４〜１７は、ヒトの眼１０の様々な図である（図１５〜１７は、断面図である）。特定の領域を同定する一方で、当業者は、現行の同定された領域が眼１０の全体を構成せず、むしろ、同定された領域が、本明細書の実施形態の考察に好適な簡略化された例として提示されていることを認識するだろう。眼１０は、前眼部１２（水晶体の前で水晶体を含む眼の部分）及び後眼部１４（水晶体の後ろの眼の部分）の両方を含む。前眼部１２は、角膜１６及び水晶体１８によって境界され、後眼部１４は、強膜２０及び水晶体１８によって境界される。前眼部１２は、虹彩２４及び角膜１６間の前眼房２２、ならびに水晶体１８及び虹彩２４間の後眼房２６にさらに細分される。角膜１６及び強膜２０は、それらが出会う点で集合的に輪部３８を形成する。眼の前眼部１２上の強膜２０の露出部分は、結膜４５と称される透明な膜によって保護されている（例えば、図１５及び１６を参照されたい）。強膜２０の下には、脈絡膜２８及び網膜２７があり、集合的に網膜脈絡膜組織と称される。硝子体液３０（「硝子体」とも称される）は、毛様体３２（毛様体筋及び毛様体突起を含む）及び網膜２７間に位置する。網膜２７の前部は、鋸状縁３４を形成する。脈絡膜２８及び強膜２０間の疎性結合組織、または潜在的な空間は、上脈絡膜と呼ばれる。図１５は、上皮４０、ボーマン層４１、間質４２、デスメ膜４３、及び内皮４４から構成される角膜１６を図示する。図１６は、強膜２０とその周囲のテノン嚢４６または結膜４５、上脈絡膜腔３６、脈絡膜２８、及び網膜２７であって、実質的に上脈絡膜腔３６に流体及び／または組織分離がない場合を例示する（すなわち、この構成の場合、その空間が「潜在的な」上脈絡膜腔である）。図３に示すように、強膜２０は、約５００μｍ及び７００μｍ間の厚さを有する。図１７は、強膜２０とその周囲のテノン嚢４６または結膜４５、上脈絡膜腔３６、脈絡膜２８、及び網膜２７であって、流体５０が上脈絡膜腔３６にある場合を例示する。
【０１１８】
本明細書で使用する場合、「上脈絡膜腔」という用語は、強膜２０及び脈絡膜２８間に位置する眼１０の領域内の空間（または容量）及び／または潜在的空間（または潜在的容量）を説明する。この領域は、２つの隣接する組織の各々に由来する長い着色突起が密集した層から構成されている；ただし、上脈絡膜腔及びその隣接組織における流体または他の物質の蓄積が原因で、この領域に空間が発生し得る。上脈絡膜腔は、眼の何らかの病状を原因とするまたは何らかの外傷もしくは外科的介入を原因とする、流体の蓄積によって拡大され得る。一部の実施形態では、流体の蓄積を、上脈絡膜への薬物製剤の送達、注射及び／または注入によって意図的に作製して、上脈絡膜腔３６を作製及び／またはさらに拡大する（すなわち、その中へ本開示の遺伝子治療組成物を配置することによる）。この容量は、ぶどう膜強膜流出のための経路として機能する可能性があり（すなわち、流体が圧力に依存しないプロセスを通して眼から出る自然のプロセス）、強膜からの脈絡膜剥離の場合に空間となり得る。
【０１１９】
図１４の破線は、眼１０の赤道を表す。一部の実施形態では、接触ステップは、赤道及び輪部３８間の位置（すなわち、眼球１０の前部１２）で強膜の外表面を貫通することを含み得る。例えば、一部の実施形態では、位置は、輪部３８の後方約２ミリメートル及び１０ミリメートル（ｍｍ）間である。他の実施形態では、位置は、眼１０のほぼ赤道である。なおも他の実施形態では、位置は、眼１０の赤道の後方である。このようにして、本開示の遺伝子治療組成物は、強膜内の少なくとも１つの流路を通して上脈絡膜腔３６に（例えば、針、マイクロニードル、カテーテル、またはマイクロカテーテルを介して）導入することができ、注入事象中（例えば、注射中）に少なくとも１つの流路から離れて上脈絡膜腔３６を通って流れることができる。
【０１２０】
上脈絡膜経路
本開示の組成物は、網膜下経路によって投与される場合に治療上の利益を提供するが、網膜疾患または網膜障害を有する対象（特に網膜損傷が重度で組織が弱っている場合）では、疾患で弱った網膜に追加の損傷を引き起こすことなく網膜下経路によって投与することが困難であり得る。さらに、網膜下注射が網膜に永久的な損傷を引き起こさない場合でも、注射の物理的制約のために、注射ごとに投与され得る最大容量は制限されている。
【０１２１】
上脈絡膜注射または注入は、硝子体内または網膜下経路を使用することによって直面する課題の多くを克服する。上脈絡膜注射または注入を使用して、網膜疾患を処置し、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の細胞へのアクセスを、網膜またはＲＰＥ自体に任意の医療デバイスを接触させることなく提供し得る。上脈絡膜経路によって行われる注射または注入は、ＲＰＥ及び網膜の領域を標的とし得る。部分的に、遺伝子治療組成物の製剤及び使用される分散方法（受動的対能動的）に応じて、組成物は、標的注射部位よりも網膜またはＲＰＥのより広い表面にわたって均一に広がることができる。単一の手順内または複数の手順の過程で、上脈絡膜投与は、網膜の外表面全体にわたる複数の位置での複数の注射または注入を可能にする。
【０１２２】
上脈絡膜腔は、最大１ｍＬの注射または注入組成物を保持し得る。さらに、上脈絡膜腔に注射または注入された組成物は、後眼部へと迅速に拡散し得る。ただし、上脈絡膜腔から硝子体への組成物の拡散は、組成物の親油性及び分子量が増加するにつれて低減する。本開示の組成物の好ましい実施形態では、組成物は、ウイルスベクターを含み、それゆえ、これらの組成物は、ＲＰＥを越えて拡散して硝子体に到達しない。
【０１２３】
本開示は、エリプソイドゾーン（ＥＺ）、網膜感度、視力、網膜厚もしくはＯＮＬ厚、またはそれらの組み合わせを改善する目的で、網膜の複数の焦点領域への上脈絡膜経路による、本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与する方法を提供する。網膜神経細胞は、各眼の視野全体の空間マップを形成する。左右各々のヒトの眼に関して、及び対象の視点から、視野の左半分は、網膜の右半分の神経細胞によって知覚される。逆に、左右各々のヒトの眼に関して、及び対象の視点から、視野の右半分は、網膜の左半分の神経細胞によって知覚される。
【０１２４】
一部の実施形態では、上脈絡膜注射に使用されるデバイスは、マイクロ送達デバイスを含む。一部の実施形態では、マイクロ送達デバイスは、上脈絡膜注射に好適なマイクロカテーテルを含む。好適なマイクロカテーテルは、市販されている。一部の実施形態では、デバイスは、少なくとも５０μＬの容量を含む。一部の実施形態では、デバイスは、少なくとも１００μＬまたは最大で１００μＬ（例えば、２５〜１００μＬ、５０〜１００μＬ、７５〜１００μＬ）の容量を含む。一部の実施形態では、デバイスは、少なくとも２００μＬの容量を含む。一部の実施形態では、デバイスは、対象に投与されることになるＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の容量に加えて、５０〜２００μＬのデッドボリューム（すなわち、デバイスをプライミングするために使用されるが、注射または回収できない組成物の容量）を含む。
【０１２５】
本開示の方法の一部の実施形態に従い、視野の左右軸にわたるＥＺ、網膜感度、視力、網膜厚もしくはＯＮＬ厚、またはそれらの組み合わせを改善するために、本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を、上脈絡膜経路によって、眼の網膜の左半分の少なくとも１つの焦点位置及び網膜の右半分の少なくとも１つの焦点位置に投与して、網膜の能力、及び、結果として対象の視覚システムを改善して、改善された視力をこれら２つの領域で使用して、光源を比較区別し、それゆえに視覚を改善し得る。この原理は、一般に視野の上半分対下半分、及び視野の左半分対右半分を含む、視野の任意の軸に適用される。
【０１２６】
より正確に、網膜が少なくとも２つの部分に分割される場合、本開示の方法の一部の実施形態では、本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、上脈絡膜経路によって、網膜の第１部分の少なくとも１つの焦点位置に、及び網膜の第２部分の少なくとも１つの焦点位置に投与され得る。好ましくは、網膜の第１部分の少なくとも１つの焦点位置及び網膜の第２部分の少なくとも１つの焦点位置は、網膜の反対側にあり、これは、網膜の中心を二等分する理論線によって接続することができる。一部の実施形態では、網膜の中心は、網膜の画像上に重ねられた円の中心であり、円は３６０度を含む。一部の実施形態では、網膜の中心は、網膜の中心窩であり、網膜は、１つまたは複数の写真をマージすることによって、物理的に平坦化されているまたは理論的に平坦化されている。網膜の中心が網膜の画像上に重ねられた円の中心であり、円が３６０度を含むものを含む一部の実施形態では、網膜は、端点を含んで、１〜３６０の部分に分割され得、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、上脈絡膜経路によって、網膜の第１部分の少なくとも１つの焦点位置及び網膜の第２部分の少なくとも１つの焦点位置に投与され得、網膜の第１部分及び第２部分は、円上で互いに正反対である（例えば、０°及び１８０°または９０°及び２７０°）。網膜の中心が網膜の画像上に重ねられた円の中心であり、円が３６０度を含むものを含む一部の実施形態では、網膜は、端点を含んで、１〜３６０の部分に分割され得、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、上脈絡膜経路によって、網膜の第１部分の少なくとも１つの焦点位置及び網膜の第２部分の少なくとも１つの焦点位置に投与され得、網膜の第１部分及び第２部分は、位置の範囲内で円上で互いに反対である（例えば、０〜３０°及び１８０〜２１０°または９０〜１２０°及び２７０〜３００°）。
【０１２７】
本開示の方法の一部の実施形態では、本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、上脈絡膜経路によって、網膜の少なくとも１対の対向位置に投与され得る。一部の実施形態では、本開示の遺伝子治療ベクターは、上脈絡膜経路によって、網膜の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２０、１４０、１４０、１６０、１８０またはその間の任意の数の対の対向位置に投与され得る。
【０１２８】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物が、上脈絡膜経路によって、網膜の少なくとも１対の対向位置に投与され得るものを含む、本開示の方法の一部の実施形態では、第１の位置で提供される用量及び対となる第２の位置で提供される用量は、同一である。
【０１２９】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物が、上脈絡膜経路によって、網膜の少なくとも１対の対向位置に投与され得るものを含む、本開示の方法の一部の実施形態では、第１の位置で提供される用量及び対となる第２の位置で提供される用量は、同一でない。一部の実施形態では、第１の位置で提供される用量及び対となる第２の位置で提供される用量は、様々な注射または注入量を含む。一部の実施形態では、第１の位置で提供される用量は、対となる第２の位置で提供される用量よりも大きな容量を含む。一部の実施形態では、第２の位置で提供される用量は、対となる第１の位置で提供される用量よりも大きな容量を含む。一部の実施形態では、第１の位置で提供される用量及び対となる第２の位置で提供される用量は、様々な濃度のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を含む。一部の実施形態では、第１の位置で提供される用量は、対となる第２の位置で提供される用量よりも高い濃度を含む。一部の実施形態では、第１の位置で提供される用量は、対となる第２の位置で提供される用量よりも高い濃度を含む。一部の実施形態では、第２の位置で提供される用量は、対となる第１の位置で提供される用量よりも高い濃度を含む。
【０１３０】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物が、上脈絡膜経路によって、網膜の少なくとも２対の対向位置に投与され得るものを含む、本開示の方法の一部の実施形態では、第１の対の対向位置に提供される用量及び第２の対の対向位置に提供される用量は、同一である。
【０１３１】
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物が、上脈絡膜経路によって、網膜の少なくとも２対の対向位置に投与され得るものを含む、本開示の方法の一部の実施形態では、第１の対の対向位置に提供される用量及び第２の対の対向位置に提供される用量は、同一でない。一部の実施形態では、第１の対の対向位置に提供される用量及び第２の対の対向位置に提供される用量は、様々な注射または注入量を含む。一部の実施形態では、第１の対の対向位置に提供される用量は、第２の対の対向位置に提供される用量よりも大きな容量を含む。一部の実施形態では、第２の対の対向位置に提供される用量は、第１の対の対向位置に提供される用量よりも大きな容量を含む。一部の実施形態では、第１の対の対向位置に提供される用量及び第２の対の対向位置に提供される用量は、様々な濃度の遺伝子治療濃度を含む。一部の実施形態では、第１の対の対向位置に提供される用量は、第２の対の対向位置に提供される用量よりも高い濃度を含む。一部の実施形態では、第２の対の対向位置に提供される用量は、第１の対の対向位置に提供される用量よりも高い濃度を含む。
【０１３２】
上脈絡膜デバイス
上脈絡膜投与は、標準的な小ゲージ針を使用して行われ得る。ただし、上脈絡膜投与のための特殊なデバイスもまた企図される。
【０１３３】
マイクロニードル
【０１３４】
マイクロニードルは、任意の年齢の対象への投与に使用し得るが、解剖学的構造の寸法が小さいため、マイクロニードルは、本開示の組成物の子供（小児患者）への送達に特に有用であり得る。
【０１３５】
本開示のマイクロニードルは、最小限の付帯的損傷で強膜及び／または上脈絡膜腔への貫通を容易にする斜角を含み得る。マイクロニードルの斜角表面は、約２０度未満の先端角度、及び約２．５未満の斜角幅に対する斜角高さの比率を規定する。一実施形態では、斜角をつけたマイクロニードルは、眼の上脈絡膜腔への正確及び再現性のある薬物送達を可能にする。
【０１３６】
一部の実施形態では、マイクロニードルは、第１端部及び第２端部を有し、その間の空間が管腔を規定する。マイクロニードルの第１端部は、斜角面を含み得る。斜角面は、第１斜角度及び、第１斜角度とは異なる第２斜角度を規定する。一部の実施形態では、第１斜角度は、第２斜角度よりも小さい。一部の実施形態では、第１斜角度は約２０度未満であり、第２斜角度は約３０度未満である。
【０１３７】
一部の実施形態では、本開示のマイクロニードルは、狭い管腔（例えば、３０ゲージ、３２ゲージ、３４ゲージ、３６ゲージ以上などのゲージサイズ）を規定して、上脈絡膜薬物送達を可能にすると同時に、マイクロニードルによる強膜の貫通によって形成される流路の直径を最小に抑えることができる。一部の実施形態では、本開示のマイクロニードルの管腔及び斜角のアスペクト比は、他の眼内注射経路に使用される標準的な小ゲージ針（例えば、２７ゲージ及び３０ゲージ針）とは別である。例えば、本明細書に記載の実施形態に含まれるマイクロニードルは、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１４／０３６００９、米国特許第９，６３６，２５３号、米国特許第９，７８８，９９５号、米国特許第８，８０８，２２５号、及び米国特許第８，１９７，４３５号（これらの内容は各々、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のもののいずれかであることができる。
【０１３８】
カニューレ
【０１３９】
一部の実施形態では、マイクロ送達デバイスは、カニューレを含むまたはこれからなり、マイクロ送達デバイスの中空第１端部は、針を含むまたはこれからなる。カニューレは、細長い管状管腔を含み得る。細長い管状管腔は、カニューレを、管腔を通して針の中空第１端部から出し、前進または展開させる力を提供するばねまたはガス貯蔵部などの力要素をさらに含み得る。あるいは、または加えて、力要素は、針の中空第１端部及び／またはカニューレを通して遺伝子治療組成物を流す力を提供し得る。
【０１４０】
力要素は、プッシュロッド、またはプッシュロッド及びカニューレ間のプランジャーにより、カニューレに機械的に連結し得る。あるいは、力要素の端部を、カニューレのセクションと直接的に対とし得る。力要素、力要素プランジャーまたは力要素プッシュロッドは、芯筒または他の形状の取り付け具により、カニューレと接続し得る。
【０１４１】
使用前、カニューレの第１端部は、マイクロ送達デバイスの針及び本体の中にある。カニューレは、力要素によって展開されると、針の中空第１端部から伸びるように構成される。カニューレは、展開されたときに針の遠位先端からカニューレの遠位端を伸ばすことができる長さを有する。カニューレは、針の中空第１端部から、遺伝子治療組成物の意図された送達部位まで展開される長さで構成される。一実施形態では、展開状態の針の中空第１端部からのカニューレの長さは、２〜１５ｍｍの範囲である。非常に短い長さの展開カニューレは、投与用物質を、針貫通部位から好ましい方向に指向するのに有用である。具体的には、針の遠位先端から６〜１２ｍｍの範囲にある展開長により、カニューレを毛様体扁平部にて眼に導入して、網膜への潜在的な損傷を回避し、カニューレの遠位先端を後部網膜の近くに配置して、眼の視覚的に最も重要な部分に投与用物質を送達することが可能となる。
【０１４２】
カニューレは、針管腔の内径以下の直径を有するサイズであり、針管腔内に摺動可能に配置される。カニューレは、遺伝子治療組成物を受け取るための第２端部及び遺伝子治療組成物を送達するための第１端部を有する。一実施形態では、カニューレの第１端部は、組織（例えば、眼の強膜の外表面及び／または内表面）に入るための、非侵襲性の先端を提供する丸みを帯びた外形を伴って構成される。
【０１４３】
貯蔵部のサイズは、送達される組成物の容量に対して適切に構成され得る。貯蔵部は、例えば、０．１マイクロリットル〜１０００マイクロリットルの範囲の送達容量に合わせたサイズにされ得る。本開示の組成物は、プランジャーによって、またはプランジャーに作用する力要素を作動させて貯蔵部内のプランジャーを動かし、投与用物質に送達力を提供することによって、手動で送達され得る。少量の投与の場合、カニューレの管腔は、遺伝子治療組成物の貯蔵部としても機能し得る。少量の投与の場合、カニューレの管腔は、遺伝子治療組成物の貯蔵部としても機能し得、プランジャーは、カニューレの管腔内で遠位に移動して、投与用物質に送達力を提供するように構成され得る。
【０１４４】
一実施形態では、展開力は、針の第１端部の組織への前進（強膜の外表面の貫通）の直後または同時に作動する。この作動は、ユーザによるまたはデバイスの第１端部の機構による力要素の解放によって、行われ得る。
【０１４５】
一実施形態では、マイクロ送達デバイスはまた、マイクロ送達デバイスの第１端部に固定されたシールを備えた組織界面を含み、それにより、展開力の適用中に針管腔を密封する。遠位シールは、カニューレ挿入デバイスの第１端部で組織表面に圧力を加えることによって針の第１端部によって貫通可能であり、貫通された組織界面は、針上で摺動可能になり、針を組織内に前進させることが可能となる。シールを貫通すると、針の第１端部からカニューレを送達するための経路が開かれる。力要素を備えたカニューレ挿入デバイスは、針によるシールの貫通及び強膜の外表面への針の第１端部の前進の前または同時に作動される。結果として得られる自己作動展開機構は、針挿入（例えば、ピアシング）の方向及び速度に関係なく、針が組織上または組織内に配置されるとすぐにカニューレの送達経路の開放を確実にする。自己作動機構は、カニューレを眼の上脈絡膜腔に投与するためのカニューレ挿入デバイスの簡単な片手操作を可能にする。
【０１４６】
一実施形態では、組織界面及びシールは、管状筺体に取り付けられている。管状筺体は、針の外側に適合し、その長さに沿ったある点で針の表面に封着され得る。一実施形態では、筺体は、筺体及び針間で圧縮される弾性要素によって密封され得る。それゆえ、弾性要素は、環状であり得る。一実施形態では、弾性要素は、デバイスの筺体及び本体間で圧縮され得る。弾性要素は、筺体の近位端またはその近くに存在し得る。一実施形態では、弾性要素は、筺体及び針間のシールとして機能する。一実施形態では、弾性要素は、近位方向への筺体の移動を制限する摩擦要素または構成要素として機能し、それによって、針が組織を貫通するときに、組織界面によって組織表面に対して力を加える。一部の実施形態では、遠位要素は、組織界面及び遠位シールを含み、遠位筺体のない針の外側に摺動可能に取り付けられる。
【０１４７】
シールの針貫通及び眼への挿入によって針管腔第１端部からの経路が開かれると、カニューレは、針の遠位端部がカニューレを受け入れる空間に到達するまで、針の第１端部から伸長または展開することができない。特に、強膜組織は非常に弾力性があり、針先が上脈絡膜腔に通過する際に針先を効果的に密封する。そのため、強膜の固有の特性により、カニューレが強膜に入ることはできない。針の第１端部が上脈絡膜腔などの下層空間に到達すると、カニューレは、針から前進して出てその空間に展開することができる。この機構により、カニューレは、針の第１端部でカニューレを受け入れることができる位置に向けられる。カニューレの展開後、本開示の組成物を、カニューレの管腔を通して眼に送達し得る。
【０１４８】
カニューレ挿入デバイスの可撓性カニューレは、適切な機械的特性を備えて設計され、カニューレが上脈絡膜腔内に前進するために曲がることを可能にする好適な屈曲弾性率を有し、カニューレの近位部への展開力により、カニューレが空間内に前進することを可能にする好適な軸方向圧縮剛性を有する。機械的特性は、カニューレ材料及びカニューレ寸法の選択によって好適に調整することができる。加えて、カニューレは、機械的特性を調整するための特徴を有し得る。ワイヤーなどの補強要素をカニューレの管腔または壁に配置して、軸方向の座屈強度を高め得る。カニューレの第１先端は、また、カニューレの遠位部分の座屈強度及び可撓性の両方を調整するため、例えば、コイルまたはコーティングにより補強され得る。コイルは、金属または高弾性ポリマーから製作することができ、カニューレの外表面、カニューレの内表面またはカニューレの壁内に配置することができる。カニューレは、ポリエーテルブロックアミド（ＰＥＢＡ）、ポリアミド、ペルフルオロアルコキシポリマー、フッ素化エチレンプロピレンポリマー、エチレンテトラフルオロエチレン共重合体、エチレンクロロトリフルオロエチレン共重合体ポリスチレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニリデン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン−プロピレンブロック共重合体、ポリウレタン、テレフタル酸ポリエチレン、ポリジメチルシロキサン、ポリ塩化ビニル、ポリエーテルイミド及びポリイミドなどのポリマーから製作され得る。一部の用途では、カニューレは、ニッケルチタン超弾性合金（ニチノール）などの可撓性金属から製作され得る。
【０１４９】
本開示の組成物の送達は、組織界面によって補助され得る。組織界面は、任意選択で、眼の表面に力を加えて、遺伝子治療組成物の逆流を防ぐために、強膜の外表面で少なくとも１つの流路の密封を補助し得る。適切な針の長さ及び方向で、マイクロ送達デバイスを使用して、カニューレを展開し、本開示の組成物を上脈絡膜腔に送達し得る。
【０１５０】
本開示の一部の実施形態では、針は、カニューレが針の管腔を通過することを可能にする直径を有する剛性材料を含み、典型的には、２０ゲージ〜４０ゲージの範囲（例えば、外径０．９１ｍｍ未満／内径０．６ｍｍ）にあり、針の長さは、眼の強膜の外表面に到達するのに好適である。針は、デバイスの本体または筒に固定され、組織を貫通する間に針の深さを正確に制御するために、本体に関して一般には摺動または移動しない。
【０１５１】
針の中空第１端部は、貫通を補助するために、斜角をつけるまたは鋭利にしてよい。斜角度は、特定の標的への進入を容易にするように設計され得る。例えば、１８度の斜角度という短い斜角を使用して、より狭い空間にカニューレを挿入し得る。１５度の斜角度の中斜角針を使用して、上脈絡膜腔などの空間にカニューレを挿入し得る。１２度の斜角度などの長い斜角を使用して、前眼房または後眼房にカニューレを挿入し得る。
【０１５２】
針は、金属、セラミック、高弾性率ポリマーまたはガラスから構築され得る。組織内の針の長さは、カニューレ挿入の標的位置及び解剖学的な可変性による標的位置の変動に合うように選択される。針の有効全長は、針の第１端部組織界面の表面の長さである。組織界面は、組織への針の前進中に針上を摺動可能に移動し、組織界面を通って突出する針の長さの漸進的な増加及び組織への前進中の密封を可能にする。カニューレは、針が適切な位置に到達すると自動的に展開され、適切な位置は、針の有効全長よりも短くあり得る。展開のための力の解放及び結果かかる時間は、カニューレの展開長さ及び力要素からの力の量に応じて、およそ０．１〜３秒で、迅速に生じる。展開の時間はまた、カニューレの前進に連結した減衰または摩擦機構によって制御されて、カニューレの前進または展開の速度を制限し得る。力要素からの力の解放は、針の追加の前進の必要がないということを、視覚的及び触覚的フィードバックの両方で、医師に伝える。迅速な展開事象は、医師に、針の前進を停止させるのに十分な時間を与え、組織厚における患者間の差に対応するための効果的な可変針長をもたらす。可変針長及び展開の自己作動は、上脈絡膜腔など、通常は開いていない空間へのカニューレ挿入に特に有用である。上脈絡膜腔の場合、針の有効全長は、挿入角度に応じて、１ｍｍ〜４ｍｍの範囲である。針の有効全長は、例えば、０．３ｍｍ〜３ｍｍ、０．３５〜２ｍｍ、１ｍｍ〜４ｍｍ、１０〜１５ｍｍであり得る。
【０１５３】
本開示の一部の実施形態では、マイクロコ送達デバイスは、カニューレに展開力を提供するための手段を含む。本開示の一部の実施形態では、デバイスは、デバイス内の貯蔵部から遺伝子治療組成物を送達するための力を提供するための手段を含む。本明細書に記載の手段は、例えば、カニューレの展開または投与用物質の送達を達成するために、ユーザによって（直接的または間接的に）「押し込む」または圧縮することができる圧縮可能な貯蔵部またはレバーであり得る。あるいは、一実施形態では、手段は、付勢手段または力要素（例えば圧縮ばねまたは加圧ガス）を備えた機構である。
【０１５４】
デバイスは、使い捨て及び／または単回使用であり得る。あるいは、デバイスは、再利用可能であり得る。
【０１５５】
本開示の方法による使用が企図される追加のカニューレ挿入デバイスは、例えば、ＷＯ２０１７／１５８３６６に記載されている（その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１５６】
マイクロカテーテル
【０１５７】
本開示の一部の実施形態では、マイクロ送達デバイスは、マイクロカテーテルを含む。本開示のマイクロカテーテルは、本開示のマイクロカニューレに類似しているが、マイクロカテーテルは、強膜の外表面を貫通し、上脈絡膜腔に接触してから、内側先端を上脈絡膜腔にさらに延ばして、遺伝子治療組成物を標的位置に送達し得る。
【０１５８】
本開示の例示的なマイクロカテーテルには、ｉＬｕｍｉｎ（商標）レーザーダイオードベースのマイクロ照明システム（ｉＳｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）に任意選択で接続されたｉＴｒａｃｋ（商標）２５０Ａマイクロカテーテル（ｉＳｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）が含まれるが、これに限定されない（例えば、Ｐｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６（２）：ｅ１７１４０を参照されたい）。
【０１５９】
２段階注射
本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、２段階手順によって投与され得る。ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の注射は、適切に認定され、経験を有する網膜外科医によって行われる。例えば、上脈絡膜経路を介して網膜下腔に組成物を注射するために、網膜を最初に脈絡膜から剥離させ得る（これは非常に薄く、所々で融合し得る）。これには、２段階で組成物送達を行うことを伴う。２段階手順の利点は、網膜剥離のいかなる予期せぬ合併症も保守的に管理され、組成物の硝子体への流出に関する懸念を最小化することができることである。中心窩を剥離するために必要な流体の容量は可変であるため、第１段階からベクターを除去することにより、ゲノム粒子に関して正確な一貫した用量を、依然として網膜下腔に適用することができる。
【０１６０】
最初に、対象は、それぞれの試験眼において後部硝子体の剥離を受ける。網膜は、例えば、網膜下腔に注射された０．１〜０．５ｍＬの平衡塩類溶液（ＢＳＳ）（「ブレブ」を形成する）で剥離され得る。少なくとも１つの用量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物が、同じ入口部位を通して網膜下液へと注射され得る。
【０１６１】
手順の第２段階では、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を、注射用に調製する。少なくとも１つの用量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物が、同じ入口部位を通って網膜下腔に、及びブレブ内に注射される。網膜下腔への送達は、黄斑の任意の領域（黄斑の複数の領域を含む）を標的とすることができるが、可能であれば中心窩も含むことができる。いずれの場合にも、網膜下液が、眼底自発蛍光によって同定されるように、脈絡網膜の変性をまだ受けていない中央領域のエッジ境界を全て覆うように、ベクターが注射される。
【０１６２】
他の実施形態では、２段階手順を使用して、最初に十分な量の緩衝液または他の液体を注入して「ブレブ」を生成するまたはコンパクトな空間を拡張すること、及び第２段階において、遺伝子治療組成物を追加の液体の導入によって作製されたブレブへとまたは拡張された空間へと注射することによって、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を上脈絡膜腔へと送達する。
【０１６３】
上脈絡膜アプローチを介して眼の任意の部分に送達するために、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物は、例えば、マイクロニードル、マイクロカニューレ、またはマイクロカテーテルによって送達され得る。一部の実施形態では、遺伝子治療組成物は、マイクロカテーテルによって送達され得る。
【０１６４】
コルチコステロイド
本開示の方法の一部の実施形態では、コルチコステロイドのコース（例えば、経口コルチコステロイド）を、対象に、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前、投与中及び／または投与後に投与することができる。例えば、コルチコステロイドの２１日間コースは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与日の２日前、または３日前に開始され得る。一部の実施形態では、経口コルチコステロイドは、約９週間投与される（例えば、６０ｍｇで２１日間、その後６週間の漸減用量が続く）。一部の実施形態では、コルチコステロイドは、テトリアムシノロン（ｔｅｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ）、プレドニゾロン及び／またはプレドニゾンである。コルチコステロイドは、手術及び／またはベクター／導入遺伝子に起因する炎症を減少し得る。あるいは、またはこのコルチコステロイドに加えて、対象に、例えば、深部テノン嚢下アプローチを介して、手術時またはその前後にトリアムシノロンを投与することができる。一部の実施形態では、最大で約１ｍＬのトリアムシノロンが、手術時またはその前後に投与される。一部の実施形態では、投与されるトリアムシノロンの濃度は、１０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬ、または約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、もしくは約５０ｍｇ／ｍＬである。一実施形態では、約４０ｍｇ／ｍＬの濃度の最大または約１ｍＬのトリアムシノロンが、対象に、手術時またはその前後に投与される。
【０１６５】
エリプソイドゾーン
エリプソイドゾーン（ＥＺ）は、網膜の光受容体内節／外節（ＩＳ／ＯＳ）境界にある構造である。網膜色素変性症を有する対象では、眼の前後軸に沿って測定する場合に、ＥＺは変性しており幅が低減している。網膜色素変性症を有する対象では、ＥＺは、網膜色素変性症が進行するにつれてその消失が健常網膜及び罹患網膜間の境界を示すため、網膜の使用可能な視野のマーカーである。理論に拘束されることを望まないが、網膜色素変性症を有する対象におけるＥＺの変質は、光受容体の数の低減、光受容体の繊毛の数の低減、またはそれらの組み合わせの結果として生じ得る。ＲＰＧＲ遺伝子における突然変異は、Ｘ連鎖型ＲＰ（ＸＬＲＰ）の７０〜９０％を占め、ＲＰＧＲのＯＲＦ１５アイソフォームが光受容体で発現している。光受容体の外節は、その光受容体内節との接合部がＥＺであり、特殊な感覚繊毛を含有する。これらの感覚繊毛は、光受容体機能、それゆえ視覚にとって必要不可欠である。ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、光受容体受容体繊毛に局在し、網膜色素変性症を有する対象において観察される網膜変性は、繊毛の欠損を含む。加えて、ＲＰＧＲは、光受容体の生存能力にとって重要である、光受容体外節でのタンパク質輸送にも関与する。ゆえに、ＥＺ幅またはＥＺ面積は、網膜色素変性症の処置に対する治療の有効性を評価するために使用できる、価値のある客観的な臨床測定値である。
【０１６６】
本開示は、網膜色素変性症の処置を必要とする対象において網膜色素変性症を処置する方法を提供し、該方法は、対象に、治療有効量の本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、対象に、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することは、網膜色素変性症の徴候または症状を改善する。一部の実施形態では、網膜色素変性症の徴候は、エリプソイドゾーン（ＥＺ）の変性を含む。一部の実施形態では、ＥＺの変性は、光受容体細胞密度における減少、光受容体繊毛の数における減少、またはそれらの組み合わせを含む。一部の実施形態では、ＥＺの変性は、眼の中心窩を中心とするＯＣＴ  ｚスタックの横断図面における前後（Ａ／Ｐ）軸に沿ったＥＺの幅の減少として測定することができる。一部の実施形態では、ＥＺの変性は、背腹軸及び内外軸に沿った眼の１つまたは複数のセクターにおける変性を含む。セクターに分けた眼の例は、図１１Ｂにおいて見ることができる。
【０１６７】
本開示の方法の一部の実施形態では、対象は、対照ＥＺと比較した場合に、ＥＺの検出可能な変性を有する。一部の実施形態では、対照ＥＺは、ＥＺの厚さが健常対象では年齢及び性別によって変動し得るため、対象と年齢及び性別が一致する健常個体からのＥＺを含む。一部の実施形態では、対照ＥＺは、対象と年齢及び性別が一致する個体からの複数のＥＺの測定値の代表値を含む。一部の実施形態では、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前のＳＤ−ＯＣＴ上の対象のＥＺは、任意のＢスキャンの鼻側及び耳側縁内にあり、最下方及び上方Ｂスキャンでは不可視である。
【０１６８】
本開示の方法の一部の実施形態では、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することは、ＥＺの検出可能な変性を有する対象のＥＺを回復させる。一部の実施形態では、ＥＺを回復させることは、光受容体の数、繊毛の数、またはそれらの組み合わせを増加させることを含む。一部の実施形態では、ＥＺを回復させることは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後にＥＺの幅を増加させることを含む。一部の実施形態では、幅におけるこの増加は、正常ＥＺゾーンの幅への（すなわち、対照対象からの完全に健常ＥＺへの）増加である。一部の実施形態では、ＥＺゾーンの幅は、部分的に回復する。一部の実施形態では、ＥＺの幅における増加は、健常ＥＺの幅の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％への幅における増加を含む。一部の実施形態では、ＥＺを回復させることは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後にＥＺの面積を増加させることを含む。一部の実施形態では、面積におけるこの増加は、正常ＥＺゾーンの面積への（すなわち、対照対象からの完全に健常ＥＺへの）増加である。一部の実施形態では、ＥＺゾーンの面積は、部分的に回復する。一部の実施形態では、ＥＺの面積における増加は、健常ＥＺの面積の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％への面積における増加を含む。
【０１６９】
本開示の方法の一部の実施形態では、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することは、光受容体外節の再生を誘導する。理論に拘束されることを望まないが、光受容体外節の再生は、毛様体輸送の遺伝的回復に連結し得る。一部の実施形態では、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後の、ＯＣＴ上の以前に変性した黄斑の領域にわたるＥＺの再出現は、光受容体外節の再生に連結し得る。一部の実施形態では、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することは、ＯＣＴによって可視化される、網膜肥厚及び／またはＯＮＬ肥厚を誘導する。
【０１７０】
幅における増加は、本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前のＥＺの幅（「ベースライン」測定値）を、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後のＥＺの幅と比較することによって測定することができる。一部の実施形態では、ＥＺの幅は、ベースライン時、及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後１週間、１か月、２か月、３か月、４か月、６か月、９か月または１２か月のうちの少なくとも１つで測定される。一部の実施形態では、ＥＺの幅は、ベースライン時、及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後１か月で測定される。一部の実施形態では、ＥＺの幅は、ベースライン時、及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後３か月で測定される。一部の実施形態では、ＥＺの幅は、ベースライン時、ならびに本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後１か月、３か月、及び４か月で測定される。
【０１７１】
一部の実施形態では、ＥＺを回復させることは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後のＥＺの幅をベースライン時のＥＺと比較した場合に、ＥＺの幅を増加させることを含む。一部の実施形態では、ＥＺの幅を増加させることは、端点を含んで、１〜２０μｍのＡ／Ｐ軸に沿った幅における増加を含む。一部の実施形態では、ＥＺの幅を増加させることは、端点を含んで、３〜１５μｍのＡ／Ｐ軸に沿った幅における増加を含む。一部の実施形態では、ＥＺの幅を増加させることは、少なくとも１μｍのＡ／Ｐ軸に沿った幅における増加を含む。
【０１７２】
一部の実施形態では、ＥＺを回復させることは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後のＥＺの幅をベースライン時のＥＺの幅と比較した場合に、ＥＺの幅を増加させることを含む。一部の実施形態では、Ａ／Ｐ軸に沿ったＥＺの幅における増加は、眼の１つを超えるセクターにわたって均一である。一部の実施形態では、Ａ／Ｐ軸に沿ったＥＺの幅における増加は、眼の１つを超えるセクターにわたって不均一である。
【０１７３】
一部の実施形態では、ＥＺを回復させることは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後のＥＺの面積をベースライン時のＥＺと比較した場合に、ＥＺの面積を増加させることを含む。一部の実施形態では、ＥＺの面積を増加させることは、端点を含んで、０．８〜３２４μｍ２の面積における増加を含む。一部の実施形態では、ＥＺの面積を増加させることは、端点を含んで、７〜１８０μｍ２の面積における増加を含む。一部の実施形態では、ＥＺの面積を増加させることは、少なくとも０．８μｍ２の増加を含む。
【０１７４】
一部の実施形態では、ＥＺを回復させることは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後のＥＺの面積をベースライン時のＥＺの面積と比較した場合に、ＥＺの面積を増加させることを含む。一部の実施形態では、ＥＺの面積における増加は、眼の１つを超えるセクターにわたって均一である。一部の実施形態では、ＥＺの面積における増加は、眼の１つを超えるセクターにわたって不均一である。
【０１７５】
一部の実施形態では、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することは、組成物の投与後のＥＺをベースライン時のＥＺと比較した場合に、ＥＺのさらなる変性を阻害する。治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することがＥＺのさらなる変性を阻害するこれらの実施形態では、ベースライン時及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後の測定値を比較した場合に、ＥＺの幅における変化はない。
【０１７６】
一部の実施形態では、ＥＺの厚さにおける変化は、網膜感度における変化と相関する。例えば、網膜色素変性症を有する対象におけるＥＺの幅における増加は、網膜感度における増加と正の相関がある。
【０１７７】
光コヒーレンストモグラフィ
本開示の方法の一部の実施形態では、ＥＺ、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚は、光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）を使用して画像化される。ＯＣＴは、コヒーレント光を使用してマイクロメートルの解像度の、眼の２次元及び３次元画像をキャプチャする画像化技術である。一部の実施形態では、ＯＣＴ画像化は、中心窩を中心とする眼の領域を含む画像のｚスタックをキャプチャする。画像のｘ−ｙ平面は、眼の背腹軸及び内外軸に沿っている。次に、画像のｚスタックは、処理ソフトウェア（例えば、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｙｅ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ、バージョン１．９．１０．０；Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）にインポートされ、３次元及び横断図面が生成される。一部の実施形態では、ＥＺの境界は、網膜の横断図面に手動で描かれる。一部の実施形態では、横断図面におけるＥＺの最大幅を測定する。一部の実施形態では、横断図面におけるＥＺの最大幅を手動で測定する。一部の実施形態では、ＥＺ面積は、一連のＢスキャン（数は、取得数に依存する）から測定し、次いで、面積を計算する。一部の実施形態では、ＥＺ面積は、正面の方法論によって測定する。
【０１７８】
一部の実施形態では、ＯＣＴ（例えば、スペクトルドメインＯＣＴまたはＳＤ−ＯＣＴ）は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前（「ベースライン」時）、ならびにＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後約３か月で、約６か月で、約１２か月で、約１８か月で及び／または約２４か月で行うことができる。投与後の測定値をベースライン測定値と比較して、ＯＣＴ画像化を介したＥＺ測定値、網膜厚及び／またはＯＮＬ厚が、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後に改善するか否かを見ることができる。
【０１７９】
視野計測
微小視野計測は、眼底画像化、網膜感度マッピング及び固視分析を組み合わせたものである。網膜画像は、走査型レーザー検眼鏡検査（ＳＬＯ）によって取得され、アイトラッカーがリアルタイムで眼球運動を補正する。例示的な微小視野計測システムには、ＭＡＩＡ（ＣｅｎｔｅｒＶｕｅ  ＳｐＡ，Ｐａｄｏｖａ，Ｉｔａｌｙ）が含まれる。例示的な自動静的視野計測システムには、Ｏｃｔｏｐｕｓ  ９００（Ｈａａｇ−Ｓｔｒｅｉｔ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｂｅｒｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が含まれる。
【０１８０】
一部の実施形態では、微小視野計測は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前（「ベースライン」時）、ならびにＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後約３か月で、約６か月で、約１２か月で、約１８か月で及び／または約２４か月で測定することができる。投与後の測定値をベースライン測定値と比較して、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後に微小視野計測が改善するか否かを見ることができる。
【０１８１】
網膜感度
網膜感度は、対象が知覚できる最小の光レベルである。網膜の領域にわたる網膜感度は、視野計測（例えば、微小視野計測及び／または自動静的視野計測）を使用して測定される。一部の実施形態では、走査型レーザー検眼鏡（ＳＬＯ）を使用して、網膜の高解像度画像を作製する。次に、点刺激のグリッドをＳＬＯ画像の網膜の領域に投影し、グリッドの各点での各刺激に対する患者の反応を測定して、その位置での最小知覚刺激を決定する。
【０１８２】
微小視野計測がＭＡＩＡデバイスを使用して行われるものを含む、微小視野計測を行うための本開示の組成物及び方法の一部の実施形態では、グリッドは、少なくとも３０点を含む。一部の実施形態では、グリッドは、３７点グリッドである。一部の実施形態では、グリッドは、６８点グリッドである。一部の実施形態では、刺激のサイズは、ゴールドマンＩＩＩ（視覚範囲の０．４３°の直径）である。一部の実施形態では、背景輝度は、４アポスチルブ（ａｓｂ）である。一部の実施形態では、刺激として適用される最大輝度は、約１０００ａｓｂである。一部の実施形態では、アッセイされる眼の領域は、黄斑の全部または一部を含む。一部の実施形態では、アッセイされる眼の領域は、黄斑である。一部の実施形態では、アッセイされる領域は、黄斑内の眼の１０°直径領域である。一部の実施形態では、アッセイされる領域は、中心窩を中心とする眼の１０°直径領域である。
【０１８３】
自動静的視野計測がＯｃｔｏｐｕｓ  ９００デバイスを使用して行われるものを含む、視野計測を行うための本開示の組成物及び方法の一部の実施形態では、グリッドは、少なくとも３０点を含む。一部の実施形態では、グリッドは、３７点グリッドである。一部の実施形態では、グリッドは、６８点グリッドである。一部の実施形態では、刺激のサイズは、ゴールドマンＩＩＩ（視覚範囲の０．４３°の直径）である。一部の実施形態では、背景輝度は、４アポスチルブ（ａｓｂ）である。一部の実施形態では、刺激として適用される最大輝度は、約１０００ａｓｂである。一部の実施形態では、アッセイされる眼の領域は、黄斑の全部または一部を含む。一部の実施形態では、アッセイされる眼の領域は、黄斑である。一部の実施形態では、アッセイされる領域は、黄斑内の眼の１０°直径領域である。一部の実施形態では、アッセイされる領域は、中心窩を中心とする眼の１０°直径領域である。
【０１８４】
微小視野計測がＭＡＩＡデバイスを使用して行われるものを含む、微小視野計測を行うための本開示の組成物及び方法の一部の実施形態では、刺激輝度は、アポスチルブ（ａｓｂ）で測定される。Ａｓｂは、輝度の絶対単位であり、各ａｓｂは、０．３１８３カンデラ／ｍ２に等しい。デシベル（ｄＢ）スケールは、網膜感度評価において使用される刺激のダイナミックレンジを報告するために使用されるｌｏｇ１０ベースのスケールである。一部の実施形態では、微小視野計測機器によって送達される最小及び最大の刺激強度は、それぞれ、３６ｄＢ及び０ｄＢに設定され、これらの値の間のｄＢスケールが計算される。一部の実施形態では、ｄＢ報告は色分けされており、黒色は無反応（暗点）を表し、赤色は異常であり、黄色は疑わしく、緑は正常である。
【０１８５】
視野計測がＯｃｔｏｐｕｓ  ９００デバイスを使用して行われるものを含む、視野計測を行うための本開示の組成物及び方法の一部の実施形態では、刺激輝度は、アポスチルブ（ａｓｂ）で測定される。Ａｓｂは、輝度の絶対単位であり、各ａｓｂは、０．３１８３カンデラ／ｍ２に等しい。デシベル（ｄＢ）スケールは、網膜感度評価において使用される刺激のダイナミックレンジを報告するために使用されるｌｏｇ１０ベースのスケールである。一部の実施形態では、視野計測機器によって送達される最小及び最大の刺激強度は、それぞれ、４７ｄＢ及び０ｄＢに設定され、これらの値の間のｄＢスケールが計算される。一部の実施形態では、ｄＢ報告は色分けされており、黒色は無反応（暗点）を表し、赤色は異常であり、黄色は疑わしく、緑は正常である。
【０１８６】
網膜感度を測定するために、様々な刺激投影戦略を使用することができる。一部の実施形態では、各点での各刺激は、反応に（例えば、見えないから見えるへの）変化が生じるまで、４ｄＢの漸増ステップで繰り返し送達される。一部の実施形態では、その後、反応に別の（すなわち、見えるから見えないへの）変化が生じるまで、刺激を２ｄＢ段階に変える。網膜感度の閾値は、刺激が網膜の単一点上に漸増強度で投影されたときに刺激が対象によって見られるｄＢ単位の最小値である。
【０１８７】
一部の実施形態では、平均網膜感度は、点刺激のグリッド内の全ての点にわたるｄＢ単位の閾値の代表値である。一部の実施形態では、網膜感度における改善は、少なくとも３、４、５、６、７、８、もしくは９または１６中心座で観察される。一部の実施形態では、網膜感度における改善は、１６中心座の少なくとも５において観察される。
【０１８８】
本開示は、網膜色素変性症の処置を必要とする対象において網膜色素変性症を処置する方法を提供し、該方法は、対象に、治療有効量の本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することを含む。一部の実施形態では、対象に、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することは、網膜色素変性症の徴候または症状を改善する。一部の実施形態では、網膜色素変性症の徴候は、網膜感度の喪失を含む。一部の実施形態では、網膜感度は、微小視野計測で測定される。一部の実施形態では、微小視野計測で網膜感度を測定することは、（ａ）対象の眼の眼底を画像化すること；（ｂ）対象の眼の眼底画像上に、点のグリッドを投影すること；（ｃ）眼を、グリッド上の各点にて光刺激で繰り返し刺激すること、ここで各漸進刺激は、前の刺激よりも強度が大きく、刺激はおよそ４〜１０００アポスチルブ（ａｓｂ）の範囲である；（ｄ）最小閾値をグリッド上の各点に関して決定すること、ここで最小閾値は、対象が最初に刺激を知覚できる光刺激の強度である；及び（ｅ）最小閾値を、ａｓｂからｄＢスケールのデシベル（ｄＢ）に変換することを含み、最大刺激は０ｄＢに設定され、最小刺激はスケールの最大ｄＢ値に設定されている。一部の実施形態では、最大刺激は、約１０００ａｓｂであり、０ｄＢに設定され、最小刺激は、約４ａｓｂであり、３６ｄＢに設定される。一部の実施形態では、グリッドは、６８点を含むまたはこれからなる。一部の実施形態では、点は、眼の１０°をカバーする直径を有する円上に等間隔に配置されている。一部の実施形態では、円は、黄斑を中心とする。一部の実施形態では、円は、中心窩を中心とする。一部の実施形態では、網膜感度の微小視野計測測定は、グリッド内の各点で測定された最小閾値を代表値化して、平均網膜感度を生成することをさらに含む。
【０１８９】
一部の実施形態では、対象は、対照対象における網膜感度と比較した場合に、網膜感度の検出可能な喪失を有する。対照対象は、例えば、対象と年齢及び性別が一致する網膜色素変性症を有さない健常対象である。
【０１９０】
本開示の方法の一部の実施形態では、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することは、対象の網膜感度を回復させる。網膜感度は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前（「ベースライン」時）、及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後に測定でき、２つの測定値を比較して、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後に網膜感度が改善するか否かを見ることができる。一部の実施形態では、網膜感度の喪失を回復させることは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後の網膜感度をベースライン網膜感度と比較した場合に、平均網膜感度における増加を含む。一部の実施形態では、平均網膜感度における増加は、端点を含んで、１〜３０デシベル（ｄＢ）の増加を含む。一部の実施形態では、平均網膜感度における増加は、端点を含んで、１〜１５ｄＢの増加を含む。一部の実施形態では、平均網膜感度における増加は、端点を含んで、２〜１０ｄＢの増加を含む。
【０１９１】
本開示の方法の一部の実施形態では、網膜感度を回復させることは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後の網膜感度をベースライン時の網膜感度と比較した場合に、グリッドの少なくとも１点での閾値感度における増加を含む。一部の実施形態では、少なくとも１点での閾値感度における増加は、端点を含んで、１〜３６デシベル（ｄＢ）間の増加を含む。一部の実施形態では、少なくとも１点での閾値感度における増加は、端点を含んで、１〜１５デシベル（ｄＢ）の増加を含む。一部の実施形態では、少なくとも１点での閾値感度における増加は、端点を含んで、２〜１０デシベル（ｄＢ）の増加を含む。一部の実施形態では、少なくとも１ｄＢの閾値感度における増加は、端点を含んで、１〜６８点間における少なくとも１ｄＢの増加を含む。一部の実施形態では、少なくとも１ｄＢの閾値感度における増加は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０または少なくとも６５点における、少なくとも１ｄＢの増加を含む。
【０１９２】
本開示の方法の一部の実施形態では、網膜感度を回復させることは、本開示のＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後の網膜感度をベースライン時の網膜感度と比較した場合に、少なくとも１Ｄｂの閾値網膜感度を有する点の数における増加を含む。一部の実施形態では、閾値感度が１ｄＢを超える点の数は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に、端点を含んで、１〜６８点間で増加する。一部の実施形態では、閾値感度が１ｄＢを超える点の数は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に、少なくとも１点増加する。一部の実施形態では、閾値感度が１ｄＢを超える点の数は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に、少なくとも１５点増加する。一部の実施形態では、閾値感度が１ｄＢを超える点の数は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に、少なくとも２０点増加する。一部の実施形態では、閾値感度が１ｄＢを超える点の数は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に、少なくとも２５点増加する。一部の実施形態では、中心１６座の少なくとも５座で少なくとも５ｄｂの増加が、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に観察される。一部の実施形態では、中心１６座の少なくとも５座で少なくとも６ｄｂの増加が、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に観察される。一部の実施形態では、中心１６座の少なくとも５座で少なくとも７ｄｂの増加が、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に観察される。一部の実施形態では、中心１６座の少なくとも５座で少なくとも８ｄｂの増加が、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５の投与後に観察される。
【０１９３】
本開示の方法の一部の実施形態では、治療有効量のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後の網膜感度をベースライン時の網膜感度と比較した場合に、対象の網膜感度の任意のさらなる喪失を阻害する。
【０１９４】
網膜感度における増加は、微小視野計測を使用して、本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前の網膜感度（「ベースライン」測定値）を、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後の網膜感度と比較することによって測定することができる。一部の実施形態では、網膜感度は、ベースライン時、及び本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後１週間、１か月、２か月、３か月、４か月、６か月、９か月、１２か月、１８か月、２４か月または３年のうちの少なくとも１つで測定される。一部の実施形態では、網膜感度は、ベースライン時、及びＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後１か月で測定される。一部の実施形態では、網膜感度は、ベースライン時、及び本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後３か月で測定される。一部の実施形態では、網膜感度は、ベースライン時、ならびにＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後１か月、３か月及び４か月で測定される。
【０１９５】
視野
視野は、眼が中心点に焦点を合わせたときに物体を見ることができる眼の総領域で
ある。視野の範囲は、網膜感度分析を通して決定することができる。一部の実施形態では、視野は、視野計測によって測定される網膜の領域の部分であり、少なくとも１ｄＢの刺激に対する反応が測定される。
【０１９６】
固視
微小視野計測は、固視、または偏心視域（ＰＲＬ）と呼ばれることもある、選択された視覚標的を見ようとするプロセスを測定することもできる。正常な対象では、中心窩が、固視に関して網膜の好んで使用される領域である。中心窩が罹患すると、固視が低下し、対象は中心窩外領域を使用する。固視は、例えば、１秒間に２５回眼球運動を追跡し、結果の分布をＳＬＯ画像上にプロットすることによって評価できる。全体的な点群が、ＰＲＬを説明する。
【０１９７】
固視安定性
微小視野計測を使用して、固視安定性を測定することもできる。固視安定性は、２通りに測定できる。１つ目では、固視安定性は、固視試行測定時間中に、それぞれ、１°または２°の距離内に位置する固視点（Ｐ１及びＰ２）のパーセンテージを計算することによって測定される。固視点の７５％以上がＰ１内にある場合、固視は安定していると分類される。固視点の７５％未満がＰ１内にあるが、固視点の７５％以上がＰ２内にある場合、固視は比較的不安定であると分類される。固視点の７５％未満がＰ２内にある場合、固視は不安定である。２つ目では、固視試行中の水平及び垂直の眼の位置の標準的な除算に基づいて、所与の比率で固視点群を包含する楕円の面積を計算する（二変量輪郭楕円面積）。
【０１９８】
視力
視力とは、視覚の明瞭性を指し、一定の基準に従って、所定の距離にある文字または数字を識別する能力によって測定される。一部の実施形態では、視力は、固視中に測定され、中心、または中心窩の視力の指標である。最良矯正視力（ＢＣＶＡ）は、早期治療糖尿病性網膜症試験（ＥＴＤＲＳ）チャートを使用して測定できる。ＥＤＴＲＳチャートは、等しい難易度の行ごとに５文字あるチャートであり、行間及び行内の間隔は対数スケールで低減する。一部の実施形態では、ＢＣＶＡ検査は、最低３文字が読めない行に到達するまで、対象にチャートを（最大から最小の文字に向かって）読み下ろさせることを含む。一部の実施形態では、ＢＣＶＡ検査は、全ての文字が識別できる最小の文字列を対象に読ませ、次に、最低３文字が読めない行に到達するまでチャートを下るまで続けることを含む。一部の実施形態では、ＢＣＶＡスコアは、患者が行の５文字全てを正しく同定できる最後の行を決定し、ＥＴＤＲＳチャートからその行のログスコアを決定し、全ての文字が正しく同定される最後の行を超えて正確に同定される各文字について０．０２ログ単位を引くことによって計算される。
【０１９９】
一部の実施形態では、ＢＣＶＡは、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前（「ベースライン」時）、ならびにＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後約３か月で、約６か月で、約１２か月で、約１８か月で及び／または約２４か月で測定することができる。投与後の測定値をベースライン測定値と比較して、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後にＢＣＶＡが改善するか否かを見ることができる。
【０２００】
自発蛍光
生存可能な網膜組織の領域における変化を評価するために、眼底自発蛍光を測定することができる。一部の実施形態では、眼底自発蛍光は、共焦点走査型レーザー検眼鏡を使用して記録することができる。一部の実施形態では、眼底自発蛍光は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与前（「ベースライン」時）、ならびにＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後約３か月で、約６か月で、約１２か月で、約１８か月で及び／または約２４か月で測定することができる。投与後の測定値をベースライン測定値と比較して、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与後に眼底自発蛍光が改善するか否かを見ることができる。
【０２０１】
リスク因子
本開示は、網膜色素変性症を発症するリスクを有する対象において網膜色素変性症を予防する方法を提供し、該方法は、対象に、予防的有効量の本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物を投与することを含む。
【０２０２】
一部の実施形態では、対象は、網膜色素変性症の１つまたは複数のリスク因子を有する。一部の実施形態では、１つまたは複数のリスク因子は、遺伝的リスク因子、網膜色素変性症の家族歴または網膜色素変性症の症状を含む。
【０２０３】
網膜色素変性症は、遺伝性遺伝子疾患である。Ｘ連鎖性網膜色素変性症（ＸＬＲＰ）では、網膜色素変性症の発症につながる遺伝子突然変異が、Ｘ染色体上にある。ＸＬＲＰは、およそ１５，０００人に１人発症すると推定されている。ＸＬＲＰがＸ連鎖性であるため、祖父がＸＬＲＰを有した男性は、Ｘ連鎖性網膜色素変性症に関連する突然変異を遺伝する可能性が５０％ある。ゆえに、一部の実施形態では、網膜色素変性症の発症のリスク因子は、網膜色素変性症の家族歴である。網膜色素変性症の家族歴を有する対象は、予防的有効量の本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与を通して、ＸＬＲＰの発症を予防することができる。
【０２０４】
一部の実施形態では、網膜色素変性症の発症のリスク因子は、遺伝的リスク因子を含む。網膜色素変性症の発症に関する例示的な（Ｅｘｅｍｐａｒｙ）遺伝的リスク因子としては、ＸＬＲＰを引き起こす突然変異（例えば、ＲＰＧＲにおける突然変異）が挙げられるが、これに限定されない。ゆえに、本開示の方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症の発症は、予防的有効量の本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与を通して、ＲＰＧＲにおける突然変異などの網膜色素変性症を引き起こすことが知られている突然変異を有する対象において予防され得る。
【０２０５】
一部の実施形態では、網膜色素変性症の発症に関するリスク因子は、網膜色素変性症の症状を含む。一部の実施形態では、網膜色素変性症の症状は、夜間視覚の喪失、周辺視覚の喪失、視力の喪失、色覚の喪失またはそれらの組み合わせを含む。網膜色素変性症の軽度の症状は、疾患の初期段階で発生し得、網膜色素変性症の診断前に発生し得る。ゆえに、本開示の方法の一部の実施形態では、網膜色素変性症の発症は、夜間視覚または周辺視覚の軽度の喪失などの網膜色素変性症に関連する症状を有する対象において予防され得、予防的有効量の本開示のＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５組成物の投与を通して、網膜色素変性症を予防することができる。
【０２０６】
ほぼ暗闇でのアジリティ迷路（Ｎｅａｒ  Ｄａｒｋｎｅｓｓ  Ａｇｉｌｉｔｙ  Ｍａｚｅ）
本開示の対象のベースライン視力または視力の改善は、対象を、低光または暗条件を特徴とし、対象者が回避するための１つまたは複数の障害物を含む囲い地を通過させることによって測定され得る。対象は、任意選択で、本開示の処置方法によって提供される、本開示の組成物を必要とし得る。対象は、任意選択で、本開示の処置方法によって提供される、本開示の組成物を、一方または両方の眼に、１つまたは複数の用量及び／または手順／注射で受けている。囲い地は、屋内または屋外にあり得る。囲い地は、日光を再現するレベルから完全な暗闇をシミュレートするレベルの管理された光レベルを特徴とする。この範囲内で、囲い地の管理された光レベルは、本開示の組成物を受ける前の本開示の対象の視力が低減している可能性がある自然の夕暮れまたは夕方の光レベルを再現するように設定されることが好ましくあり得る。本開示の組成物の投与後、対象は、全ての光レベルで視力及び／または機能的視覚が改善されている可能性があるが、改善は、自然の夕暮れまたは夕方の光レベル（屋内または屋外）を再現するものを含む、より低い光レベルで測定されることが好ましい。機能的視覚は、例えば、Ｃｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．４６：２４７−５９（２０１８）に記載されているような、マルチルミナンスモビリティテスト（ＭＬＭＴ）を使用して評価され得る。
【０２０７】
囲い地の一部の実施形態では、１つまたは複数の障害物は、囲い地内にある１つまたは複数の指定された経路及び／またはコースと並んでいる。対象による囲い地の通過の成功には、指定された経路を横断すること、及び指定されていない経路の横断を回避することが含まれ得る。対象による囲い地の通過の成功には、経路内または経路の近くに配置された１つまたは複数の障害物との接触を回避しながら、指定された経路を含む任意の経路を横断することを含み得る。対象による囲い地の通過の成功または改善には、（例えば、正常な視力を有する健常個体と比較した場合または対象による以前の横断と比較した場合に）指定された開始位置から指定された終了位置の経路を横切るために必要な時間を低減させて、経路内または経路の近くに配置された１つまたは複数の障害物との接触を回避しながら、指定された経路を含む任意の経路を横断することを含み得る。一部の実施形態では、囲い地は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０の経路または指定された経路を含み得る。指定された経路は、意図された開始位置及び意図された終了位置を含有するものとして実験者によって指定された経路を同定することにより、指定されていない経路とは異なり得る。
【０２０８】
囲い地の一部の実施形態では、１つまたは複数の障害物は、本開示の表面に固定されていない。一部の実施形態では、１つまたは複数の障害物は、本開示の表面に固定されている。一部の実施形態では、１つまたは複数の障害物は、囲い地の床、壁、及び天井を含むがこれに限定されない、囲い地の内面に固定されている。一部の実施形態では、１つまたは複数の障害物は、固体物体を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の障害物は、液体物体（例えば、「障害池」）を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の障害物は、任意の組み合わせまたは配列で、少なくとも１つの経路に沿ってまたは経路のすぐ近くに、対象が迂回するべき物体；対象が踏み越えるべき物体；歩行するまたは立つことによりバランスをとるべき物体；上り坂、下り坂、またはそれらの組み合わせを有する物体；触れるべき物体（例えば、対象の見る能力を決定する及び／または奥行き知覚を判断するため）；その下を歩行するまたは立つことにより横断するべき物体（例えば、物体を回避するために１つまたは複数の方向を曲げることを含む）を含む。囲い地の一部の実施形態では、１つまたは複数の障害物は、指定された順序で対象者が遭遇する必要がある。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、対象のベースライン視力または視力の改善及び／または機能的視覚は、対象を、低光または暗条件を特徴とし、対象者が回避するための１つまたは複数の障害物を含むコースまたは囲い地を通過させることによって測定され得、ここでコースまたは囲い地は、施設内に存在する。特定の実施形態では、施設は、モジュール式照明システム及び一連の異なるモビリティコースフロアレイアウトを含む。ある特定の実施形態では、１つの部屋が、１組の照明装置を備えた全てのモビリティコースを収容する。例えば、モビリティ試験中に一度に１つのコースを設定してよく、同じ部屋／照明装置は、使用中のコース（フロアレイアウト）に関係なく、モビリティ試験に使用できる。特定の実施形態では、試験のために提供される異なるモビリティコースは、難度が異なるように設計されており、より難度が高いコースは、経路のコントラストが低く障害物を見るのが困難であり、より簡単なコースは、経路のコントラストが高く、障害物を見やすい。
【０２１０】
囲い地の一部の実施形態では、対象は、例えば、精度及び／または速度のベースライン測定値を確立するため、あるいは対象を、網膜疾患を有するまたは網膜疾患を発症するリスクがあると診断するために、本開示の組成物の投与前に試験されてよい。一部の実施形態では、対象は、（例えば、視力を改善する組成物の有効性をモニターする及び／または試験するために）ベースライン測定値からの変化を決定するまたは健常個体からのスコアと比較するために、本開示の組成物の投与後に試験されてよい。
【０２１１】
補償光学適用走査型レーザー検眼鏡検査（ＡＯＳＬＯ）
本開示の対象の網膜細胞生存率のベースライン測定値または改善された測定値は、１つまたは複数のＡＯＳＬＯ技術によって測定され得る。走査型レーザー検眼鏡検査（ＳＬＯ）を使用して、対象の眼の網膜の個別の層を観察し得る。好ましくは、補償光学（ＡＯ）をＳＬＯに組込んで（ＡＯＳＬＯ）、眼の角膜及び水晶体を含むがこれに限定されない前眼部の構造によって通常引き起こされるＳＬＯのみからの画像におけるアーティファクトを補正する。ＳＬＯのみを使用することにより生成されるアーティファクトは、結果得られる画像の解像度を低減させる。補償光学は、網膜の層の単一の細胞の解像度を可能にし、正常またはインタクトな網膜細胞（例えば、正常またはインタクトな光受容体細胞）からの方向性後方散乱光（導波光）を検出する。
【０２１２】
本開示の一部の実施形態では、ＡＯＳＬＯ技術を使用して、インタクトな細胞が導波及び／または検出可能な信号を生成する。一部の実施形態では、インタクトでない細胞は、導波及び／または検出可能な信号を生成しない。
【０２１３】
ＡＯＳＬＯは、対象の網膜またはその一部を画像化するために、及び好ましくは評価するために使用され得る。一部の実施形態では、対象は、一方または両方の網膜を、ＡＯＳＬＯ技術を使用して画像化される。一部の実施形態では、対象は、一方または両方の網膜を、（例えば、処置後の後続の比較のためのベースライン測定値を決定する及び／または、網膜疾患の存在及び／または重症度を決定するために）本開示の組成物の投与前に、ＡＯＳＬＯ技術を使用して画像化される。一部の実施形態では、対象は、一方または両方の網膜を、（例えば、組成物の有効性を決定するため及び／または処置の結果得られた改善に関して投与後の対象をモニターするために）本開示の組成物の投与後に、ＡＯＳＬＯ技術を使用して画像化される。
【０２１４】
本開示の一部の実施形態では、網膜を、共焦点または非共焦点（分割検出器）ＡＯＳＬＯのいずれかによって画像化して、１つまたは複数の網膜細胞の密度を評価する。一部の実施形態では、１つまたは複数の網膜細胞は、光受容体細胞を含むがこれに限定されない。一部の実施形態では、１つまたは複数の網膜細胞は、錐体光受容体細胞を含むがこれに限定されない。一部の実施形態では、１つまたは複数の網膜細胞は、桿体光受容体細胞を含むがこれに限定されない。一部の実施形態では、密度は、細胞の数／ミリメートルとして測定される。一部の実施形態では、密度は、生細胞または生存可能細胞の数／ミリメートルとして測定される。一部の実施形態では、密度は、インタクトな細胞の数／ミリメートル（本開示のＡＡＶ粒子または導入遺伝子配列を含む細胞）として測定される。一部の実施形態では、密度は、応答性細胞の数／ミリメートルとして測定される。一部の実施形態では、応答性細胞は、機能性細胞である。
【０２１５】
一部の実施形態では、ＡＯＳＬＯを使用して、対象の網膜内の光受容体細胞のモザイクの画像をキャプチャし得る。一部の実施形態では、モザイクは、インタクトな細胞、インタクトでない細胞、またはそれらの組み合わせを含む。一部の実施形態では、モザイクの画像は、網膜全体、内節、外節またはその一部の画像を含む。一部の実施形態では、モザイクの画像は、本開示の組成物を含むまたはそれに接触する網膜の一部を含む。一部の実施形態では、モザイクの画像は、本開示の組成物を含むまたはそれに接触する網膜の一部に並置する網膜の一部を含む。一部の実施形態では、モザイクの画像は、処置領域及び未処置領域を含み、処置領域は、本開示の組成物を含むまたはそれに接触し、未処置領域は、本開示の組成物を含まないまたはそれに接触しない。
【０２１６】
一部の実施形態では、ＡＯＳＬＯを単独でまたは光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）と組み合わせて使用して、対象の網膜、網膜の一部または網膜細胞を直接可視化し得る。一部の実施形態では、補償光学をＯＣＴと組み合わせて（ＡＯ−ＯＣＴ）使用して、対象の網膜、網膜の一部、または網膜細胞を直接可視化し得る。
【０２１７】
本開示の一部の実施形態では、外節または内節を共焦点または非共焦点（分割検出器）ＡＯＳＬＯのいずれかによって画像化して、その中の細胞の密度または、外節、内側節、もしくはその組み合わせの完全性のレベルを評価する。一部の実施形態では、ＡＯＳＬＯを使用（ｓｕｅｄ）して、内節、外節またはそれらの組み合わせの直径を検出し得る。
【０２１８】
例示的なＡＯＳＬＯシステムを、図５７に示す。
【０２１９】
ＡＯＳＬＯ及び様々な技術の追加の説明は、少なくともＧｅｏｒｇｉｏｕ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｒ  Ｊ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  ２０１７；０：１−８；Ｓｃｏｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２０１４；５５：４２４４−４２５１；及びＴａｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．２０１７；５８：３６０８−３６１５に記載され得る。
【０２２０】
医薬製剤
本開示の組成物は、原薬を含み得る。一部の実施形態では、原薬は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５を含むまたはこれからなる。一部の実施形態では、原薬は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５及び製剤緩衝液を含むまたはこれからなる。一部の実施形態では、製剤緩衝液は、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、及び２００ｍＭ  ＮａＣｌをｐＨ８．０にて含む。一部の実施形態では、製剤緩衝液は、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、及び２００ｍＭ  ＮａＣｌをｐＨ８．０にて、ポロクサマー１８８を０．００１％にて伴って含む。
【０２２１】
賦形剤
本開示の組成物は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５医薬品を含み得る。一部の実施形態では、医薬品は、原薬及び製剤緩衝液を含むまたはこれからなる。一部の実施形態では、医薬品は、製剤緩衝液に希釈された原薬を含むまたはこれからなる。一部の実施形態では、医薬品は、製剤緩衝液に最終医薬品ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５ベクターゲノム（ｖｇ）濃度に希釈されたＡＡＶ２−ＲＰＧＲＯＲＦ１５原薬を含むまたはこれからなる。
【０２２２】
眼用製剤
本開示の組成物は、眼球注射または注入のための最適濃度にてＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５原薬を含む、本質的にこれからなる、またはこれからなるように製剤化され得る。
【０２２３】
本開示の組成物は、本開示のＡＡＶの安定性を増加または増強する１つまたは複数の緩衝液を含み得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、本開示のＡＡＶの安定性を確実にするまたは増強する１つまたは複数の緩衝液を含み得る。あるいは、または加えて、本開示の組成物は、ＡＡＶ粒子凝集を予防する、低減する、または最小化する１つまたは複数の緩衝液を含み得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、ＡＡＶ粒子凝集を予防する、低減する、または最小化する１つまたは複数の緩衝液を含み得る。
【０２２４】
本開示の組成物は、中性またはわずかに塩基性のｐＨを誘導または維持する１つまたは複数の構成要素を含み得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、端点を含んで、７及び９間の中性またはわずかに塩基性のｐＨを誘導または維持する１つまたは複数の構成要素を含む。一部の実施形態では、本開示の組成物は、約８のｐＨを誘導または維持する１つまたは複数の構成要素を含む。一部の実施形態では、本開示の組成物は、７．５及び８．５間のｐＨを誘導または維持する１つまたは複数の構成要素を含む。一部の実施形態では、本開示の組成物は、７．７及び８．３間のｐＨを誘導または維持する１つまたは複数の構成要素を含む。一部の実施形態では、本開示の組成物は、７．９及び８．１間のｐＨを誘導または維持する１つまたは複数の構成要素を含む。一部の実施形態では、本開示の組成物は、８のｐＨを誘導または維持する１つまたは複数の構成要素を含む。
【０２２５】
本開示の組成物及び細胞の接触後、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、遺伝子またはその一部を発現し、遺伝子またはその一部によってコードされる生成物の生成をもたらす。一部の実施形態では、細胞は、標的細胞である。一部の実施形態では、標的細胞は、網膜細胞である。一部の実施形態では、網膜細胞は、神経細胞である。一部の実施形態では、神経細胞は、光受容体である。一部の実施形態では、細胞は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、またはｉｎ  ｓｉｔｕである。細胞がｉｎ  ｖｉｖｏであるものを含む、一部の実施形態では、接触は、対象への組成物の投与後に生じる。一部の実施形態では、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５またはその一部を発現し、ＲＰＧＲＯＲＦ１５タンパク質の発現の治療有効レベルにて、遺伝子またはその一部によってコードされる生成物の生成をもたらす。
【０２２６】
物理力価：ゲノム力価は、ｑＰＣＲを使用して決定される。この方法は、ゲノムのコピー数の定量化を可能にする。ベクターストックのサンプルは、緩衝液に希釈する。サンプルをＤＮアーゼ処理し、ウイルスキャプシドをプロテイナーゼＫで溶解してゲノムＤＮＡを放出する。次いで、希釈系列を、作成する。各サンプルの複製物を、ＣＡＧ配列に対して特異的なＴａｑｍａｎベースのプライマー／プローブセットを使用するｑＰＣＲに供する。標準曲線は、標準プラスミド希釈系列の線状範囲において各点の代表値を取ること及び各点についての代表ＣＴ値に対してログコピー数をプロットすることによって生成される。一部の実施形態では、標準曲線において使用されるプラスミドＤＮＡは、スーパーコイル構造である。一部の実施形態では、標準曲線において使用されるプラスミドＤＮＡは、線状構造である。線状化プラスミドは、例えば、ＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素での消化により調製し、アガロースゲル電気泳動により可視化し、製造元の指示に従ってＱＩＡｑｕｉｃｋゲル抽出キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製することができる。標準曲線を生成するために使用されるプラスミド内で切断する他の制限酵素も、適切であり得る。一部の実施形態では、標準としてのスーパーコイルプラスミドの使用は、線状化プラスミドの使用と比較して、ＡＡＶベクターの力価を増加させた。ｒＡＡＶベクターの力価は、標準曲線から計算することができ、ＤＮアーゼ耐性粒子（ＤＲＰ）／ｍＬとして表される。
【０２２７】
ドロップレットデジタルＰＣＲ（ｄｄＰＣＲ）：ｄｄＰＣＲは、ゲノム力価を測定するためのｑＰＣＲの代替として、またはｑＰＣＲに加えて使用できる。ｄｄＰＣＲは、標準的なＰＣＲ反応においてＴａｑポリメラーゼを使用して、事前に検証されたプライマーまたはプライマー／プローブアッセイを使用して複合サンプルから標的ＤＮＡ断片を増幅させる。ＰＣＲ反応は、増幅前に数千の個別の反応容器に分割され、データは反応終点で取得される。ｄｄＰＣＲは、標準曲線を伴わずにＤＮＡの直接及び独立した定量化を提供し、正確及び再現性のあるデータを提供できる。終点測定により、反応効率から独立して核酸定量が可能になる。ｄｄＰＣＲは、様々に混入されたサンプルからの極めて低い標的定量に使用できる。
【０２２８】
完全：中空比率（分析用超遠心分離）：ＡＡＶ８粒子の完全：中空比率は、分析用超遠心分離（ＡＵＣ）を使用して決定され得る。ＡＵＣは、非破壊的であることで他の方法よりも有利であり、これは、サンプルが追加検査のためにＡＵＣの後で回収され得ることを意味する。中空及び完全ＡＡＶ８粒子を含むサンプルは、超遠心分離中にＡＡＶ８がそれを通して移動する液体組成物に適用される。１つまたは複数のＡＡＶ８粒子の沈降速度の測定は、ＡＡＶ粒子のサイズ及び形状に関する流体力学的情報を提供する。沈降平衡の測定は、ＡＡＶ８粒子の溶液モル質量、化学量論、会合定数、及び溶液の非理想性に関する熱力学的情報を提供する。ＡＵＣ中に取得される例示的な測定は、放射状濃度分布、つまり「スキャン」である。一部の実施形態では、スキャンは、数分（速度沈降に関して）から数時間（平衡沈降に関して）の範囲に及ぶ間隔で取得される。本開示の方法のスキャンは、光学測定（例えば、吸光度、干渉及び／または蛍光）を含み得る。超遠心分離速度は、端点を含んで、１０，０００回転／分（ｒｐｍ）及び７５，０００ｒｐｍ間の範囲であり得る。完全ＡＡＶ８粒子及び中空ＡＡＶ８粒子がＡＵＣによる明確な測定を実証するため、サンプルの完全／中空比率は、この方法を使用して決定され得る。
【０２２９】
ベクター同一性（ＤＮＡ）：このアッセイは、ウイルスＤＮＡ配列の確認を提供する。このアッセイは、ウイルスキャプシドを消化すること及びウイルスＤＮＡを精製することによって行われる。ＤＮＡは、可能な場合には、順方向及び逆方向の両方で最小２倍の範囲で配列決定される（一部の領域、例えば、ＩＴＲは、配列決定に問題がある）。ＤＮＡシーケンシングコンティグを、予期される配列と比較して、同一性を確認する。
【０２３０】
複製能獲得ＡＡＶ：試験品を使用して、野生型アデノウイルスの存在下または非存在下でＨＥＫ２９３細胞を形質導入する。３回の連続ラウンドの細胞増幅を実施するものとし、総ゲノムＤＮＡは、各増幅ステップで抽出する。
【０２３１】
ｒｃＡＡＶ８は、リアルタイム定量ＰＣＲによって検出する。２つの配列は、単離されたゲノムＤＮＡである；１つはＡＡＶ２  Ｒｅｐ遺伝子に特異的であり、１つはＨＥＫ２９３細胞の内因性遺伝子（ヒトアルブミン）に特異的である。Ｒｅｐ遺伝子／細胞の相対コピー数を、決定する。陽性対照は、単独でまたはｒＡＡＶベクター調製物の存在下で検査された野生型ＡＡＶウイルス血清型８である。
【０２３２】
アッセイの検出限界を、各検査バッチについて検証する。検出限界は、１０ｒｃＡＡＶ／１×１０＾８、または１×１０＾１０ゲノムコピーの検査サンプルである。検査サンプルがＲｅｐ配列に関して陰性である場合、このサンプルの結果は：複製無し、＜１０ｒｃＡＡＶ／１×１０＾８（または１×１０＾１０）ゲノムコピーの検査サンプルとして報告されるだろう。検査サンプルがＲｅｐ配列に関して陽性である場合、このサンプルの結果は：複製として報告されるであろう。
【０２３３】
総ＤＮＡ：Ｐｉｃｏｇｒｅｅｎ試薬は、二本鎖ＤＮＡに結合し、高発光複合体（λ励起＝４８０ｎｍ−λ発光＝５２０ｎｍ）を形成する超高感度蛍光核酸染色剤である。この蛍光発光強度は、溶液中のｄｓＤＮＡ量に比例する。既知の濃度を有するＤＮＡ標準曲線を使用することで、検査サンプル中のＤＮＡ含量が、測定された蛍光を変換することによって取得される。
【０２３４】
ＡＡＶ組成物の安定性
本開示の組成物は、＜−６０℃で保管される場合に、長期安定性を維持する。例えば、本開示の組成物は、端点を含んで、−８０℃及び４０℃（およそヒトの体温）間の温度で保管される場合に、長期安定性を維持する。例えば、本開示の組成物は、端点を含んで、−８０℃及び５℃間の温度で保管される場合に、長期安定性を維持する。例えば、本開示の組成物は、−８０℃、−２０℃または５℃で保管される場合に、長期安定性を維持する。一部の実施形態では、本開示の組成物は、液体または懸濁液として製剤化され、１つまたは複数の容器（例えば、バイアル）中に等分され、＜−６０℃で保管される。一部の実施形態では、本開示の組成物は、液体または懸濁液として製剤化され、１つまたは複数の容器（例えば、バイアル）中に等分され、−８０℃、−２０℃または５℃で保管される。
【０２３５】
本開示の組成物は、＜−６０℃で保管される場合に、長期安定性を維持するために最適な表面積対体積比率を有する容器にて提供され得る。本開示の組成物は、−８０℃、−２０℃または５℃で保管される場合に、長期安定性を維持するために最適な表面積対体積比率を有する容器にて提供され得る。一部の実施形態では、本開示の組成物は、液体または懸濁液として製剤化され、１つまたは複数の容器（例えば、バイアル）中に等分され、全ての保管要件が考慮される場合に、可能な限り大きな表面積対体積比率を有する１つまたは複数の容器に保管される。
【０２３６】
本開示の組成物は、周囲相対湿度で保管される場合に、長期安定性を維持する。
【実施例】
【０２３７】
実施例１：ヒト対象における網膜色素変性症のための遺伝子治療
網膜色素変性症（ＲＰ）の遺伝子確定診断を受けた１８歳以上の男性対象に、単回用量のＡＡＶ  ＲＰＧＲＯＲＦ１５遺伝子治療ベクターを網膜下注射した。試験は、６つの用量コホートを含み、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ用量は、５×１０９ｇｐ（コホート１）、１×１０１０ｇｐ（コホート２）、５×１０１０ｇｐ（コホート３）、及び１×１０１１ｇｐ（コホート４）、２．５×１０１１ｇｐ（コホート５）、及び５×１０１１ｇｐ（コホート６）とした。その後、対象を１２か月間追跡し、最良矯正視力（ＢＣＶＡ）、微小視野計測を介した網膜感度及び固視、ならびに光コヒーレンストモグラフィ（ＯＣＴ）を介した網膜厚に関して評価した。対象処置及び分析のための方法は、実施例３に提供する。
【０２３８】
遺伝子治療手術
ＡＡＶ８．ＲＫ．ｃｏＲＰＧＲベクターを、２段階網膜下注射を介して黄斑下腔に送達した。簡潔には、Ａｌｃｏｎ  Ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎビジョンシステム（Ａｌｃｏｎ  Ｉｎｃ，Ｆｏｒｔ  Ｗｏｒｔｈ，ＵＳＡ）を使用して、標準的な２３ゲージの３ポート経毛様体扁平部硝子体切除術を行った。後部硝子体剥離を誘導し、続いて中心部硝子体切除術及び周辺硝子体切除術を行った。小さな網膜下液ブレブを、硝子体注射セットに接続された４１Ｇ網膜下カニューレ（Ｄｕｔｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  ＢＶ，Ｚｕｉｄｌａｎｄ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用した平衡塩類溶液の網膜下注射によって最初に開始した。次に、ブレブを、同じ入口部位を通して適切な濃度で０．１ｍｌのウイルスベクターをさらに網膜下注射することによって拡大し、黄斑の医原性剥離をもたらした。全ての強膜切開術は、吸収性ポリグラクチン縫合糸で固定し、手順の最後に硝子体腔を流体が充填されたままにした。標準プロトコルの一部として、対象は、遺伝子治療の２日前に開始して、２１日間コースの経口プレドニゾン／プレドニゾロンを、１ｍｇ／ｋｇ／日にて１０日間、続いて０．５ｍｇ／ｋｇにて７日間、０．２５ｍｇ／ｋｇにて３日間、及び０．１２５ｍｇ／ｋｇにて３日間受けた。
【０２３９】
視覚機能検査
最良矯正視力（ＢＣＶＡ）は、早期治療糖尿病性網膜症試験（ＥＴＤＲＳ）チャートを使用して、予定された各来院時に測定した（図１）。
【０２４０】
網膜感度は、黄斑の中心１０度をカバーする標準的な６８刺激（１０−２）グリッドを使用して、薄明視微小視野計測（ＭＡＩＡ，ＣｅｎｔｅｒＶｕｅ  ＳｐＡ，Ｐａｄｏｖａ，Ｉｔａｌｙ）によって測定した。微小視野計測生データを、図４〜９に開示する。各パネルでは、左上から時計回りに以下を示す：眼底の走査型レーザー検眼鏡検査（ＳＬＯ）画像；感度値（３６ｄＢスケール、紫＝０から緑＝３６まで色分け）及びズームされたＳＬＯ画像上に偏心視域（ＰＲＬ）のマップ；３６（左）〜０（右）のスケールで代表閾値（ｄＢ）を示すバー；閾値のヒストグラム、検査は灰色で示し、正規分布は緑色で示す；固視安定性を、安定（緑色）、比較的不安定（黄色）及び不安定（赤色）で示し、Ｐ１及びＰ２における固視点のパーセンテージを開示するバー；眼球運動の振幅を、度単位の距離（ｙ軸）対分単位の時間（ｘ軸）として示す固視グラフ；上記の固視プロットの点群に対応する計算された二変量輪郭楕円領域；ＰＲＬ領域、Ｐ１及びＰ２を示すズームされたＳＬＯ画像上の固視プロット；０ｄＢ（紫色）から３６ｄＢ（緑色）の感度のヒートマップを上に重ねた、完全なＳＬＯ画像上の補間された感度プロット。
【０２４１】
結果
コホート３及び４患者の処置眼において、平均網膜感度、感度ヒストグラム及び視野（ヒートマップを参照されたい）における有意な向上が見られた。網膜厚において１１μｍの増加が、３か月でＡＨ８５（コホート３）の処置眼で見られた（図１０）。全ての処置眼において、視力はベースラインに戻ったまたは最小限改善した。空気タンポナーデ後に解消した、高近視での術後持続性網膜下液の１例（ＪＨ９０）を除いて、有害事象は無かった（図１０に示す）。１人の対象は、ＡＡＶ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５を用いた処置後３か月で、中心１ｍｍ  ＥＤＴＲＳ円において１１ｍｍの平均網膜厚における増加を示した（図１０）。
【０２４２】
実施例２：網膜色素変性症のための遺伝子治療後の対象における視野喪失の逆転
網膜色素変性症（ＲＰ）は、網膜の光受容体に罹患する神経変性疾患である。それは、進行性の視野狭窄及び最終的な失明を引き起こす。網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子（ＲＰＧＲ）遺伝子における機能喪失型突然変異は、全ＲＰの１５〜２０％を占める。ＲＰＧＲは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターのコーディング能力の範囲内にあるが、３’末端の高度に反復的なプリンリッチ領域及びこれのすぐ上流のスプライス部位により、ＡＡＶ．ＲＰＧＲベクターのクローニングにおいて重大な課題が生じており、いくつかのグループが、前臨床検査中のスプライシングミスまたは短縮型変異体を報告している。コドン最適化を使用して、アミノ酸配列を変更することなく、光受容体特異的ＲＰＧＲ転写物の、内在性スプライス部位を無効にし、プリンリッチ配列を安定化させることができる。鍵となる翻訳後修飾であるＲＰＧＲタンパク質のグルタミル化も、コドン最適化後に保存され、さらに重要なことに、ヒトＲＰＧＲ疾患の２つのマウスモデルでＡＡＶ８ベクターを使用して送達した場合に機能的効果が見られた。
【０２４３】
ＲＰＧＲ遺伝子治療のためのＡＡＶベクターの検証
ＲＰＧＲの網膜スプライセオフォーム（ｓｐｌｉｃｅｏｆｏｒｍ）である、ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、高度に反復的なプリンリッチエクソン（またはオープンリーディングフレーム）１５を含有し、これはウイルスベクタークローニング中に突然変異ならびにエラーを起こしやすい。ヒト遺伝子治療用の安定したベクターを作製するために、ＡＡＶ血清型８ベクター構築物は、ヒト光受容体特異的ロドプシンキナーゼプロモーター（ＲＫ）によって駆動されるヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化バージョン（ｃｏＲＰＧＲ）を含有する。ベクターを、Ｒｐｇｒ−／−マウスで検査し、野生型ＲＰＧＲＯＲＦ１５と同一のグルタミル化パターンを伴う完全長ＲＰＧＲタンパク質を生成し、網膜電図（ＥＲＧ）振幅で最大６か月間測定して、網膜機能を救済することが示された。臨床グレードのＡＡＶ８．ＲＫ．ｃｏＲＰＧＲベクターを、網膜下注射を通してＲｐｇｒ−／−マウスにおいて検証した。免疫染色は、ヒトＲＰＧＲと、その既知の相互作用パートナーであるＲＰＧＲ相互作用タンパク質１（ＲＰＧＲＩＰ１）との、光受容体結合繊毛の領域における共局在を示した。
【０２４４】
遺伝子治療手術
ＡＡＶ８．ＲＫ．ｃｏＲＰＧＲベクターを、２段階網膜下注射を介して黄斑下腔に送達した。簡潔には、Ａｌｃｏｎ  Ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎビジョンシステム（Ａｌｃｏｎ  Ｉｎｃ，Ｆｏｒｔ  Ｗｏｒｔｈ，ＵＳＡ）を使用して、標準的な２３ゲージの３ポート経毛様体扁平部硝子体切除術を行った。後部硝子体剥離を誘導し、続いて中心部硝子体切除術及び周辺硝子体切除術を行った。小さな網膜下液ブレブを、硝子体注射セットに接続された４１Ｇ網膜下カニューレ（Ｄｕｔｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  ＢＶ，Ｚｕｉｄｌａｎｄ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を使用した平衡塩類溶液の網膜下注射によって最初に開始した。次に、ブレブを、同じ入口部位を通して適切な濃度で０．１ｍｌのウイルスベクターをさらに網膜下注射することによって拡大し、黄斑の医原性剥離をもたらした。全ての強膜切開術は、吸収性ポリグラクチン縫合糸で固定し、手順の最後に硝子体腔を流体が充填されたままにした。標準プロトコルの一部として、患者は、遺伝子治療の２日前に開始して、２１日間コースの経口プレドニゾン／プレドニゾロンを、１ｍｇ／ｋｇ／日にて１０日間、続いて０．５ｍｇ／ｋｇにて７日間、０．２５ｍｇ／ｋｇにて３日間、及び０．１２５ｍｇ／ｋｇにて３日間受けた。
【０２４５】
視覚機能検査
最良矯正視力（ＢＣＶＡ）は、早期治療糖尿病性網膜症試験（ＥＴＤＲＳ）チャートを使用して、予定された各来院時に測定した。網膜感度は、黄斑の中心１０度をカバーする標準的な６８刺激（１０−２）グリッドを使用して、薄明視微小視野計測（ＭＡＩＡ，ＣｅｎｔｅｒＶｕｅ  ＳｐＡ，Ｐａｄｏｖａ，Ｉｔａｌｙ）によって測定した。学習効果を最小限に抑えるために、ベースラインで２日間にわたって各眼で３回の微小視野計測検査を行い、３回目の試行の結果をデータ分析に進めた。
【０２４６】
結果
以前の自然史試験では、ＲＰＧＲ関連網膜色素変性症の網膜変性は、ＯＣＴで外顆粒層（ＯＮＬ）の薄厚化として見られ、最終的にエリプソイドゾーン（ＥＺ）及び視野の喪失がもたらされる、光受容体外節の短縮化を特徴とすることが示された。
【０２４７】
ＡＡＶ  ＲＰＧＲＯＲＦ１５の網膜下注射は、ＲＰＧＲ関連ＲＰの網膜遺伝子治療を受けている患者において網膜変性を逆転させた（Ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ：ＮＣＴ０３１１６１１３）。この観察の新規性は、他の臨床試験に影響を及ぼす。網膜遺伝子治療後の視野の長期保存が予測されたが、１×１０１１ｇｐのＡＡＶ８．ＲＰＧＲを投与された２４歳の患者において、３か月間にわたる視野喪失の予期せぬ逆転が観察された。患者は、２週間で処置眼における視覚明瞭性及び視野の主観的な改善を説明した。機能性評価では、視力はベースラインから変化しないことが示されたが、網膜感度は、処置眼で４か月間にわたって０．７ｄＢから７．５ｄＢに漸進的に改善した（図１１）。黄斑ＯＣＴの完全なセグメンテーションにより、感度向上の領域に地理的に対応する外顆粒層の肥厚ならびに光受容体外節の長さと対応する振幅（約２０μｍ）が明らかになった。この肥厚は、視覚機能の改善が観察されなかった最低用量（０．５×１０１０ｇｐ）を投与された患者の処置眼では見られなかった。
【０２４８】
これまで、ＲＰにおいて視覚を改善するという概念は、一般に、幹細胞処置の領域にあると考えられていたが、これらの早期観察は、遺伝子治療が変性の速度を遅くするだけでなく、「休止状態の」（機能不全の）光受容体を救済することによっていくつかの機能的及び解剖学的欠損を逆転させることができる可能性を提起した。
【０２４９】
表１は、高用量遺伝子治療後に網膜感度の向上が観察された患者及び最低用量を受けた対照参加者の人口統計学及び確認された病原性ＲＰＧＲ突然変異を示す。
表１．治験参加者は、臨床的に確認されたＸ連鎖性網膜色素変性症及びＲＰＧＲ内に遺伝的に確認された突然変異を有する白人男性である。
【表１】
2022501376.tif 000003
【０２５０】
患者は、一方の眼に高用量（１．０×１０１１ｇｐ）で問題なくＲＰＧＲ遺伝子治療を受け、網膜下液は術後１日までに消散した。対象の処置及び分析の方法を、実施例３に提供する。処置の２週間後、患者は、処置眼における視覚明瞭性及び視野の主観的改善を説明し、これは、１か月の追跡調査での網膜感度の微小視野計測検査によって裏付けられた（図１１及び図１２の生データ）。５週間で、患者は、主観的な傍中心暗点を伴う処置眼の部分的な視覚退行に気づいた。微小視野計測検査により、処置眼の網膜感度における減少が確認された（平均閾値感度＝０．０ｄＢ）。
【０２５１】
実施例３：網膜色素変性症の遺伝子治療の臨床治験
１．０：治験の計画
１．１：試験の全般的デザイン
網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子をコードするアデノ随伴ウイルスベクター（ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ）の単回網膜下注射の安全性、忍容性及び有効性を、Ｘ連鎖性網膜色素変性症（ＸＬＲＰ）を有する対象において評価した。遺伝的に確認されたＸＬＲＰを有する男性対象におけるＡＡＶ８−ＲＰＧＲの第１／２相、ヒト初回投与、多施設、用量漸増介入試験を実施した。試験は、２部で実施した：第Ｉ部は、用量漸増試験であり、第ＩＩ部は、最大耐量（ＭＴＤ）拡大試験とした（第Ｉ部で決定する）。
【０２５２】
本試験は、２４か月の評価期間にわたって１１回の来院からなる。スクリーニング／ベースライン来院時に、各対象を、両眼の適格性に関して評価した。一方の眼だけが処置を受け（「試験眼」）、未処置眼は「僚眼」として指定した。「試験眼」の選択は、臨床的根拠に基づいて行われ、一般には、罹患した悪い方の眼である。これは、詳細に議論され、インフォームドコンセントプロセスの一部として各対象が同意した。
【０２５３】
注射日来院（来院２、０日目）で、対象は、試験眼にＡＡＶ８−ＲＰＧＲを投与するための網膜下注射手順の一部として、硝子体切除術及び医原性網膜剥離を受けた。手術及び／またはベクター／導入遺伝子がもたらす炎症を最小限に抑えるため、全対象は、手術予定日の２日前に開始して、２１日間コースの経口コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン／プレドニゾン）を受けた（詳細についてはセクション３．８を参照されたい）。
【０２５４】
対象を、試験手順のスケジュールに示されているように、試験を通して安全性及び有効性について評価した（表２を参照されたい）。安全性評価は、有害事象（ＡＥ）発生の報告（用量制限毒性（ＤＬＴ）を含む）；完全眼科検査（倒像眼底検査、細隙灯検査、眼内圧［ＩＯＰ］、前房及び硝子体炎症の等級付けならびに水晶体混濁分類システムＩＩＩ［ＬＯＣＳ  ＩＩＩ］白内障の等級付けを含む）；眼底撮影；バイタルサイン；及び臨床検査評価（臨床検査安全性パラメータ、ウイルス排出及び免疫原性を含む）に基づいた。有効性評価は、ＢＣＶＡ、ＳＤ−ＯＣＴ、眼底自発蛍光、微小視野計測、視野、コントラスト感度、低輝度視力（ＬＬＶＡ）、全視野刺激閾値検査（ＦＳＴ）、色覚、及び読み検査に基づいた。有効性評価（例えば、ＢＣＶＡ）の結果として収集された安全性情報はいずれも、適応できる場合は、全体的な安全性評価にも使用した。
【０２５５】
白内障を発症した対象は、臨床的に必要と思われる場合、白内障手術を受けてよい；手術を行う場合、来院９（１年目）または来院１１（２年目）の少なくとも４週前に実施するものとする。
表２：試験手順のスケジュール
【表２−１】
2022501376.tif 000004
【表２−２】
2022501376.tif 000005
【表２−３】
2022501376.tif 000006
表２：試験手順のスケジュール（続き）
【表２−４】
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【表２−５】
2022501376.tif 000008
略語：ＡＥ＝有害事象；ＢＣＶＡ＝最良矯正視力；ＥＴ＝早期終了；ＥＴＤＲＳ＝早期治療糖尿病性網膜症試験；ＩＯＰ＝眼内圧；ＬＯＣＳ  ＩＩＩ＝水晶体混濁分類システムＩＩＩ；ＦＳＴ＝全視野刺激閾値検査；ＬＬＶＡ＝低輝度視力；ＳＡＥ＝重篤な有害事象；ＳＤ−ＯＣＴ＝スペクトラルドメイン光コヒーレンストモグラフィ
別段の指定がない限り、全ての手順は両眼に対して行われるものとする。
ａ  スクリーニング／ベースライン来院は、来院２の８週間以内（±２週間）に行う必要がある。
ｂ  任意の時点で対象が中止した場合、早期終了（ＥＴ）来院が行われるものとする。
ｃ  臨床的に指示された場合、対象は、予定外の来院のために施設に戻る必要があり得る。少なくとも、以下の評価を行うものとする：完全眼科検査、ＢＣＶＡ、ＳＤ−ＯＣＴ、眼底自発蛍光、ＡＥ／ＳＡＥモニタリング、及び併用薬物治療レビュー。
ｄ  血液学及び臨床化学を含む。
ｅ  来院１で利用できない場合にのみ実施される。
ｆ  倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む。
ｇ  試験眼のみ。
ｈ  対象に、２１日間コースの経口プレドニゾン／プレドニゾロンを与え、薬物を来院２の２日前に服用し始めるように指示するものとする。対象は、１ｍｇ／ｋｇ／日プレドニゾン／プレドニゾロンを合計１０日間（ベクター注射の２日前に開始して、注射当日、及びその後７日間）；続いて０．５ｍｇ／ｋｇ／日を７日間；０．２５ｍｇ／ｋｇ／日を２日間；及び０．１２５ｍｇ／ｋｇ／日を２日間（合計２１日間）服用するものとする。
ｉ  Ｐｅｌｌｉ  Ｒｏｂｓｏｎチャートを、コントラスト感度に使用するものとする。
ｊ  血液、涙（両眼）、唾液、及び尿のサンプルを、ウイルス排出アッセイのために収集するものとする。
ｋ  ＥＴ来院での免疫原性サンプリングは、１年目の来院の前に来院がある場合にのみ実施するものとする。
ｌ  ＳＡＥは、対象が、書面によるインフォームドコンセント／アセントを提供する時点から来院１１（または該当する場合は、ＥＴ来院）まで収集するものとする。非重篤ＡＥは、来院２から来院１１（または該当する場合は、ＥＴ来院）まで収集するものとする。
ｍ  ３重で行うものとする
ｎ  第ＩＩ部のみ
【０２５６】
対象は、２年目の評価を完了した場合に、試験を完了したと見なした。治験の終了は、最後の対象が、２年目の評価（または中途中止の事象においては早期終了［ＥＴ］評価）を完了した日、または最後の対象が追跡不能となった場合は最後のデータ回収の日である。
【０２５７】
１．２：用量制限毒性
ＤＬＴは、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲに関連すると見なされる以下の事象のいずれかとして定義した：
・ベースラインと比較して、早期治療糖尿病性網膜症試験（ＥＴＤＲＳ）チャートで≧３０文字のＢＣＶＡにおける持続的な低減；持続的とは、回復するまで４８時間以上続く事と定義され、回復とは、視力（ＶＡ）がベースラインＶＡの１０文字以内に戻る事と定義される。手術の密接な時間的関連（＜２４時間以内）で発生する手術関連事象については例外である。
・硝子体の炎症、硝子体炎（標準化されたＮｕｓｓｅｎｂｌａｔｔ硝子体炎症スケール等級付けを使用して＞グレード３）（Ｎｕｓｓｅｎｂｌａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．１９８５；９２（４）：４６７−４７１）。
・手術の合併症に直接起因しない、任意の臨床的に重大な網膜損傷の観察（例えば、網膜萎縮）。
・視力喪失または視力を脅かす事象を除く、任意の臨床的に関連のある疑わしい予期せぬ重篤な有害反応（セクション６．２．１．２で定義する）。
【０２５８】
スクリーニング時に３重でＢＣＶＡ評価を行った場合、ＢＣＶＡ結果の中央値を、ＢＣＶＡ計算のベースラインからの変化に使用した。
【０２５９】
１．３：第Ｉ部：用量漸増試験
試験は、３＋３漸増スキーム（Ｓｔｏｒｅｒ，Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ．１９８９；４５（３）：９２５−９３７）を、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの投与に使用した；漸増スキームの概略図を図２１に表示する。
【０２６０】
試験は、最大で６つの用量コホートを含み、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ用量は、５×１０９ｇｐ（コホート１）、１×１０１０ｇｐ（コホート２）、５×１０１０ｇｐ（コホート３）、及び１×１０１１ｇｐ（コホート４）、２．５×１０１１ｇｐ（コホート５）、及び５×１０１１ｇｐ（コホート６）とした。各適格な対象の試験眼にＡＡＶ８−ＲＰＧＲを投与し、ＤＬＴに関してモニターした。
【０２６１】
独立データモニタリング委員会（ＤＭＣ）を使用して、安全性データをレビューしてから、より高い用量レベルへの漸増が可能か否か確認した。ＤＬＴの基準を満たす安全事象をもたらす手術合併症の可能性がある。このような場合、ＤＭＣは、事象がＤＬＴであるか否かに関する最終的な判断を下し得る。
【０２６２】
ＤＭＣは、少なくとも３人の対象が特定のレベルで投薬された場合に、各コホートに関する安全性データをレビューする。ただし、コホート内の２人の対象がＤＬＴ（複数可）を有する場合、安全性データがＤＭＣによってレビューされるまで、投薬は後続の対象に進まない。
【０２６３】
用量漸増に関する決定を下す目的で、ＤＭＣは、最後に投薬されたコホートの各対象から少なくとも４週間収集された安全性データをレビューした。加えて、ＤＭＣは、以前に投薬された全てのコホートから収集された累積安全性データをレビューし、用量漸増を決定する際にこれらの所見を考慮に入れた。
【０２６４】
コホート１で投薬される各対象間には最低４週あった。ＤＭＣによって別段の指定がない限り、コホート２以降で投与される対象間の間隔に制限はない。
【０２６５】
用量コホートごとに３〜６人の対象が計画されている；ただし、各コホートに登録された実際の対象数は、観察された毒性に依存する。コホート内で処置された最初の３人の対象でＤＬＴが観察されない場合は、次の用量コホートへの漸増を進めることができる。３人の対象のコホート内で１つのＤＬＴが報告された場合、追加の３人の対象を同じ用量にて処置するものとする。追加の３人の対象でそれ以上のＤＬＴが報告されない場合は、次の用量コホートへの漸増を進めることができる。コホート（３人または６人の対象）内で≧２人の対象がＤＬＴ（複数可）を有する場合、最大耐量（ＭＴＤ）を、以前の（より低い）用量として同定するものとする。コホート１（３人または６人の対象）内でＤＬＴを有する≧２人の対象が報告された場合、このプロトコル下での投薬を中止するものとし、プロトコルの修正後にさらなる調査が行われ得る。
【０２６６】
１．４：第ＩＩ部：最大耐量拡大試験
ＭＴＤが同定されると、最大４５人の追加の対象を、２：１配分比率にて無作為化した。対象は、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲを、ＭＴＤで（ＭＴＤコホート）、または低用量（実薬対照コホート）、ＭＴＤを下回る３つの用量レベル（例えば、ＭＴＤ＝５×１０１１ｇｐの場合には、低用量＝５×１０１０ｇｐ）のいずれかで受けた。試験の第ＩＩ部は、割付けた用量に、無作為化及び二重盲検化し、処置投与に対して非盲検化した。
【０２６７】
１．５：対象の数
全体として、試験にはおよそ６３人の対象：第Ｉ部において１８人、第ＩＩ部において４５人を登録することが予期された。
【０２６８】
１．６：試験デザイン及び用量選択についての考察
本試験デザインには、欧州医薬品庁（ＥＭＡ）及び食品医薬品局（ＦＤＡ）が発行した、ヒト初回投与試験におけるリスクの軽減及び臨床試験における遺伝子治療の使用に関するガイドラインを使用した（ＩＣＨ−Ｅ４，Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｄｏｓｅ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １９９４；ＥＭＡ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ，Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｏｎ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｔｏ  ｉｄｅｎｔｉｆｙ  ａｎｄ  ｍｉｔｉｇａｔｅ  ｒｉｓｋｓ  ｆｏｒ  ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−ｈｕｍａｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｊｕｌｙ  ２００７，Ｃｏｎｃｅｐｔ  ｐａｐｅｒ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｒｅｖｉｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ‘Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｏｎ  ４  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｔｏ  ｉｄｅｎｔｉｆｙ  ａｎｄ  ｍｉｔｉｇａｔｅ  ｒｉｓｋｓ  ｆｏｒ  ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−ｈｕｍａｎ  ５  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ’．Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２０１６；ＥＭＡ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｑｕａｌｉｔｙ，ｎｏｎ−ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｍａｒｃｈ  ２０１５；ＦＤＡ  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ−ｐｈａｓｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｊｕｎｅ  ２０１５）。独立したＤＭＣを使用して、安全性データをレビューしてから、全ての用量漸増の決定を行う。
【０２６９】
試験に含まれる対象は、活動性ＸＬＲＰ疾患の代表であり、転帰測定における有意義な変化の観察を最適化するように選択される。計画されたサンプルサイズは、３＋３漸増スキームと一致した。２４か月の前向き治験期間は、ベクター及び／または導入遺伝子／投与手順に関連する任意のＡＥをモニターするのに十分な期間であると見なされる。
【０２７０】
この臨床試験で使用した開始用量は、５×１０９ｇｐ  ＡＡＶ８−ＲＰＧＲとした。この用量は、主に、本試験の依頼者（ＮｉｇｈｔｓｔａＲｘ）によって実施されたＡＡＶ８−ＲＰＧＲ  ２６週単回用量毒性及び生体内分布試験ならびにオックスフォード大学にて実施されたマウス試験（Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１７；２５（８）：１８５４−１８６５）からのヒト等価用量（硝子体容量に基づいて計算した）に基づいた。Ｆｉｓｃｈｅｒの試験では、１．５×１０９ｇｐ  ＡＡＶ８−ＲＰＧＲを用いた処置は、Ｃ５７ＢＬ／６ＪＷＴにおいて毒性眼作用をもたらさなかった。依頼者の毒性及び生体内分布試験の結果は、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲが、雄Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおいて１×１０９及び３．５４×１０９ｇｐ／眼の用量レベルにて十分に忍容されることを示した。ＮＯＡＥＬ（無毒性量）は、マウスにおいて３．５４×１０９ｇｐ／眼より大きいと決定され、これは、開始用量と比較して７００倍の安全域を提供する。
【０２７１】
本試験における第２及び第３の用量レベルは、１×１０１０及び５×１０１０ｇｐとした。これらの用量増量は、ＲＰＧＲ発現に関して狭い安全範囲の可能性を考慮して、前の用量レベルから１対数未満の増加である（すなわち、それぞれ、５×１０９及び１×１０１０ｇｐ）。より少ない用量増量は、意義のある情報を追加すると予期されなかった。さらに、サル試験では、ＡＡＶ８−ＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質をコードするＡＡＶ８ウイルス粒子）の用量閾値が同定されて、毒性を伴わずに遺伝子産物を標的細胞に効果的に送達し、最も高い安全な用量は、１×１０１０ｇｐであると同定された（Ｖａｎｄｅｎｂｅｒｇｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ．２０１１；３（８８）：８８ｒａ５４）。ＣＮＧＡ３関連１色覚を有する患者における網膜下ＡＡＶ−ＣＮＧＡ３ベクター（ｒＡＡＶ８．ｈＣＮＧＡ３）の安全性及び忍容性を評価する進行中の第１／２相臨床治験では、患者は、ベクターを、１×１０１０及び１×１０１１ｇｐ間の用量にて受ける（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別番号：ＮＣＴ０２６１０５８２）。１×１０１０ｇｐを投薬された対象におけるこの臨床試験からの予備結果は、許容可能な安全性を実証し（Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｂｓｔｒａｃｔ  ５２０７．２０１６  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｖｉｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ）、最大１×１０１１ｇｐの高用量も同様であった。
【０２７２】
第４（１×１０１１ｇｐ）、第５及び第６（２．５×１０１１及び５×１０１１ｇｐ）用量レベルは、前の用量レベルから０．５未満の対数増加とし、用量探索範囲の上限にてより保守的なアプローチを確実にした。マウスにおけるＮＯＡＥＬは、臨床最大用量（５×１０１１ｇｐ）と比較して７倍の安全域を提供する。
【０２７３】
毒物学種におけるＡＡＶ８−ＲＰＧＲ用量の要約を、表３に提示する。網膜下送達用のＡＡＶ８ベクターを用いた他の前臨床及び臨床試験からの安全性及び有効性所見も比較のために含んでいる。
表３．臨床治験に関する毒性学安全域
【表３】
2022501376.tif 000009
＊：硝子体容量は、ベクターの網膜下注射後の種による差を補正するための安全域の計算に使用される。ヒト：マウスの硝子体容量の比率は、１：１０００であり、ヒト：サルは、１：２．４である（Ａｔｓｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。
【０２７４】
眼科学的適応症におけるＨＥＤの計算に使用される硝子体容量基準（マウス及びヒト間の硝子体容量では１０００倍の差）及びＡＡＶ８ベクターの網膜下注射を用いた安全な、高用量投与の知識（Ｖａｎｄｅｎｂｅｒｇｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）に従い、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲを用いた高用量は、導入遺伝子を通した安全なＲＰＧＲ発現が用量の下限で狭い範囲を呈さない場合に、可能であり得る。
【０２７５】
網膜の下面にＡＡＶ８−ＲＰＧＲを適用するには、硝子体切除後の網膜剥離が必要である。そのため、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの網膜下注射は、硝子体切除術及び網膜剥離に関連するリスクを伴い、これには、術中及び術後合併症：感染症（最も注目すべきは、感染性眼内炎；ＩＯＰの低下及び上昇；脈絡膜剥離；黄斑浮腫；硝子体出血；視覚障害；変視症；ならびに光視症が含まれる（Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．１９９５；１０２：７７５−７８１；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１９９６；１２１（６）：６１５−６２２；Ｂａｎｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １９９７；１０４（９）：１４４２−１４５２；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  １４５２−１４５３；Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００１；１３２（６）：８８１−８８７；Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．２００６；１１３（１）：４２−４７．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｄｅｃ  １９；Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００９；２７（１２）：１６５６−１６６３；Ｒｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ２０１０；１１７（９）：１８５１−１８５７）。硝子体切除術によって引き起こされる術後の眼内炎症は、しばしば一過性の視覚障害を伴う。硝子体切除術の長期合併症は、白内障の形成であり、追加の外科手順（白内障摘出術）が必要になる場合がある（Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｒｅｃｃｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。ベクターに対する潜在的な免疫応答に起因する炎症を最小限に抑えるために、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲを投与されている対象には経口コルチコステロイドのコースを与えるものとする。
【０２７６】
ＭＴＤが同定され、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの安全性及び忍容性が成人で実証されたら、≧１０歳の対象を、試験の第ＩＩ部に登録した。１０歳のカットオフは、参加している小児対象が、試験評価を遵守し、適切に行うことができ、黄斑（すなわち、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ処置投与領域）に浸食している十分に進行した疾患を有することを保障する。
【０２７７】
第ＩＩ部では、対象を、「ＭＴＤコホート」、「実薬対照コホート」、または未処置対象に無作為化した。これにより、並行した、実薬対照群及び処置用量の盲検化が可能になり、有効性及び安全性転帰の堅牢性が向上した。実薬対照コホートは、ＭＴＤを下回る３つの用量レベルである。これは、これら２つのコホート間の用量において１〜１．５対数差を保証し、治療量以下の低用量の可能性を軽減しながら、用量反応の同定を可能にする。
【０２７８】
１．７：評価項目
主要評価項目。安全性の主要評価項目は、２４か月間にわたる、用量制限毒性（ＤＬＴ）及び処置下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率とした。
【０２７９】
副次的評価項目及び探索的評価項目。試験の副次的評価項目には、以下を含んだ：
・３、６、１２、１８、及び２４か月での微小視野計測におけるベースラインからの変化。
・３、６、１２、１８、及び２４か月での最良矯正視力（ＢＣＶＡ）におけるベースラインからの変化。
・３、６、１２、１８、及び２４か月でのスペクトルドメイン光コヒーレンストモグラフィ（ＳＤ−ＯＣＴ）におけるベースラインからの変化。
・３、６、１２、１８、及び２４か月での自発蛍光におけるベースラインからの変化。
【０２８０】
本試験の探索的評価項目には、以下を含んだ：
・３、６、１２、１８及び２４か月での他の解剖学的転帰及び機能的転帰におけるベースラインからの変化。
【０２８１】
２．０：対象の選択及び離脱
２．１：組み入れ基準
対象は、以下の組み入れ基準を全て満たす場合に、試験参加について適格である。
１．対象／親（該当する場合）が、試験への参加に関するインフォームドコンセントを提供する意思及び能力がある
２．男性であり、全ての試験評価を遵守し、適切に行うことができる
・第Ｉ部：≧１８歳
・第ＩＩ部：≧１０歳
３．ＸＬＲＰ（ＲＰＧＲ突然変異を伴う）の遺伝的に確認された診断を有する
４．両眼の黄斑領域内に臨床的に目に見える活動性疾患を有し、次のように定義されている：
スクリーニング時に測定されたＳＤ−ＯＣＴのエリプソイドゾーン（ＥＺ）は、任意のＢスキャンの鼻側及び耳側縁内にある必要があり、最下方及び上方Ｂスキャンでは不可視である必要がある。
５．コホートレベルに基づいて、以下の基準を満たすＢＣＶＡを両眼に有する：
・コホート１：光知覚以上
・コホート２〜３：３４〜７３ＥＴＤＲＳ文字のＢＣＶＡ（６／１２または２０／４０スネレン視力以下だが、６／６０または２０／２００スネレン視力以上に相当する）。
・コホート４〜６及び第ＩＩ部：３４ＥＴＤＲＳ文字のＢＣＶＡ以上（６／６０または２０／２００スネレン視力以上に相当する）。
【０２８２】
２．２：除外基準
対象は、以下の除外基準のうちのいずれかを満たす場合、試験参加について適格ではない。
１．いずれかの眼に弱視の病歴を有する
２．ＡＡＶ８−ＲＰＧＲを用いた処置後３か月間、バリア避妊法（該当する場合）を使用することを望まない
３．治験責任医師の意見において、試験への参加のために対象を危険にさらす可能性がある、試験の結果に影響を与える可能性がある、試験診断検査を行う対象の能力に影響を与える可能性がある、または試験に参加する対象の能力に影響を与える可能性がある、任意の他の重大な眼または非眼疾患／障害を有する。これは、以下を含み得るが、これに限定されない：
・臨床的に重大な白内障
・経口コルチコステロイドに対する禁忌
４．過去１２週間に治験医薬品を含む別の研究試験に参加したことがある、または遺伝子／細胞療法を、以前の任意の時点で受けたことがある（インテリジェント網膜インプラントシステムの埋め込み、繊毛神経栄養因子療法、神経成長因子療法を含むが、これに限定されない）。
【０２８３】
２．３：対象の離脱基準
各対象は、不利益を被ることなくいつでも試験から離脱する権利を有する。加えて、治験責任医師は、以下を含む何らかの理由で必要であると治験責任医師が見なした場合は、いつでも対象を試験から中止し得る：
・重大なプロトコルの逸脱
・試験要件の重大なノンコンプライアンス
・試験評価を遵守し続けることができなくなるＡＥ
・追跡不能
・死亡
・その他（電子症例報告書［ｅＣＲＦ］に明記される）。
【０２８４】
対象が試験を中止した事象では、離脱の理由はｅＣＲＦに記録するものとする。対象が早期に試験を中止した事象では、施設は、適切なあらゆる努力を払って、試験手順のスケジュールに概説するようにＥＴ来院が確実に行われるようにされたい（表２を参照されたい）。ＡＥを原因として対象が離脱した場合、治験責任医師は、事象が解決または安定するまで追跡を手配するものとする。コンセント／アセントを撤回する対象に関して、データは、彼らの最後の利用可能な試験来院まで収集するものとする。ＭＴＤコホートから離脱した対象は、置き換えることが可能であり得る。
【０２８５】
試験からの離脱は、離脱の時点までに取得された対象のデータの除外をもたらさないものとする。
【０２８６】
３．０：試験処置
３．１：処置法
注射日来院（来院２、０日目）に、対象は、試験眼における硝子体切除術及び網膜剥離を受け、その後、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの単回網膜下注射を受けた（詳細に関しては、セクション３．４を参照されたい）。対象は、５×１０９ｇｐ（コホート１）、１×１０１０ｇｐ（コホート２）、５×１０１０ｇｐ（コホート３）、１×１０１１ｇｐ（コホート４）、２．５×１０１１ｇｐ（コホート５）、または５×１０１１ｇｐ（コホート６）のＡＡＶ８−ＲＰＧＲ用量を受けた。（詳細に関しては、セクション１．３を参照されたい）。
【０２８７】
３．２：試験薬の記述
原薬は、ＲＰＧＲをコードする組換えヒト相補的デオキシリボ核酸（ｃＤＮＡ）を含有するＡＡＶ８ベクター（ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ）とした。ベクターゲノム（ＡＡＶ８−ｃｏＲＰＧＲ−ＢＧＨ、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲとして知られる）は、強力な構成的発現カセット、ロドプシンキナーゼプロモーター、ＲＰＧＲをコードするコドン最適化ヒトｃＤＮＡ（ｃｏＲＰＧＲ）、及びウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡ配列と隣接するＡＡＶ２逆方向末端反復配列から構成される。網膜特異的アイソフォームＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化ヒトコード配列を合成した；ＲＰＧＲＯＲＦ１５のＷＴ配列も合成し、クローニングのためにｐＣＭＶ６−ＸＬベクターバックボーンまたはｐＵＣ５７ベクターバックボーンにて提供した。
【０２８８】
ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ医薬品は、滅菌２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液、ｐＨ８．０で製剤化され、１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、及び０．００１％ＰＦ６８を含有する。医薬品は、５×１０１２ｇｐ／ｍＬの標的濃度を有する、透明からわずかに乳白色の、無色滅菌ろ過懸濁液である。
【０２８９】
３．３：包装、ラベル付け、調製及び保管
ＡＡＶ８−ＲＰＧＲは、ラベル付きの滅菌ポリプロピレンチューブで供給し、各チューブには０．３ｍＬのベクター懸濁液を含有した。ゆえに、各チューブは、合計で１．５×１０１２ｇｐを含有した。
【０２９０】
ＡＡＶ８−ＲＰＧＲは、最大０．１ｍＬの総量にて送達した。所望の用量のＡＡＶ８−ＲＰＧＲを送達するための医薬品の調製及び希釈に関する指示は、試験手順書に提供した。
【０２９１】
出荷前に、各バイアルは、ラベル付けした二次容器に入れた。医薬品は、アクセス制御、温度モニター付き冷凍庫にて、＜−６０℃（＜−７６°Ｆ）で保管した。
【０２９２】
治験薬は、規制基準を遵守してラベル付けされ（一次または二次容器のいずれか）、プロトコル試験番号、依頼者名、製品名、力価、バイアル及びロット番号、有効期限、保管条件、ならびに注意事項を含んだ。
【０２９３】
３．４：硝子体切除術手順及びＡＡＶ８−ＲＰＧＲの注射
本試験で使用される網膜下注射技術は、オックスフォードでの依頼者のコロイデレミアプログラムならびに米国、カナダ及びドイツでの他の国際的な医師主導治験で開発されたものと類似した。現在までに、１８５人以上の対象が以下に説明する技術を使用して４人の網膜外科医によって注射されている。
【０２９４】
ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの注射は、適切に認定され、経験を有する網膜外科医によって行われるものとした。最初に、対象は、標準的な硝子体切除術及び後部硝子体剥離を受けた（図２６Ａ〜２６Ｂ）。全ての手術は、標準ＢＩＯＭ（登録商標）（双眼倒像鏡）（ＯＣＵＬＵＳ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）硝子体切除システムを使用して実施した。２３ゲージ縫合アプローチが、創傷漏出の任意の潜在的なリスクを回避するために、通常推奨された。容易であると思われる場合は、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの網膜下注射の前に、網膜を、硝子体注射セットに接続された４１ゲージの網膜下カニューレを通して注射された０．１〜０．５ｍＬの平衡塩類溶液（ＢＳＳ）で剥離した。単回用量のＡＡＶ８−ＲＰＧＲを、同じ入口部位を通して網膜下液に注射した。少量の流体で黄斑剥離が生じる場合は、後眼部（例えば、鼻側視神経乳頭）にある追加の網膜下部位も選択して、最大で全０．１ｍＬのベクターを送達し得る。これにより、過度な中心窩の伸展が回避される。
【０２９５】
網膜剥離の予期せぬ合併症が発生した場合（例えば、ガスを用いた処置を必要とする黄斑円孔が生じた場合）、ベクターの注射は、後日まで延期され得る。
【０２９６】
対象を、術中及び術後ＡＥの発生についてモニターした。試験薬及び／または外科手順との関係に関係なく、全てのＡＥを、対象の医療記録に記録し、ｅＣＲＦにて報告した。
【０２９７】
３．５：無作為化
本試験の用量漸増部分は、無作為化しなかった。
【０２９８】
第ＩＩ部では、試験眼を割付けた後、対象を、２：１の比率にて、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ  ＭＴＤまたは低用量のＡＡＶ８−ＲＰＧＲ、実薬対照コホートのＭＴＤから３つの用量レベル（例えば、ＭＴＤ＝５×１０１１ｇｐの場合には、低用量＝５×１０１０ｇｐ）のいずれかを受けるように無作為化した。
【０２９９】
無作為化は、無作為化番号への処置群の無作為割付けを自動化する検証済みシステムを使用して生成した。対象が適格であると見なされると、治験実施施設（または承認被指名人）がシステムにアクセスし、対象を、標準のブロック無作為化を使用して無作為化した。無作為化番号は、センター番号及び対象番号を含んだ。
【０３００】
３．６：試験盲検化
試験の第Ｉ部は、非盲検とした。
【０３０１】
第ＩＩ部は、二重盲検とした（対象、外科医、治験責任医師／施設チーム、依頼者を、割付けられた用量に対して盲検化し、処置投与に関しては非盲検とした）。
【０３０２】
３．７：試験薬管理記録
試験薬の受領及び調剤の記録は、全ての使用済み及び未使用の試験薬の完全な管理を提供するために、試験が終了するまで各試験センターによって保持された。調剤ログは、依頼者（またはその被指名人）によって確認された。試験センターは、試験の終了時に、現地の手順に従って全ての使用済みバイアルを破壊し、全ての未使用の試験薬を依頼者（またはその被指名人）に返却した。最終的な薬物の管理記録は、依頼者（またはその被指名人）によって検証された。
【０３０３】
３．８：併用療法
対象は、過去１２週間に治験医薬品を含む別の研究試験に参加する、または遺伝子／細胞療法を、以前の任意の時点で受けることはできない（ＩＲＩＳ埋め込み、繊毛神経栄養因子療法、神経成長因子療法を含むが、これに限定されない）。
【０３０４】
試験を通して、治験責任医師は、適切な支持療法を提供するために必要であると思われる任意の併用薬物治療または処置を処方した。併用薬物治療の詳細は、スクリーニング／ベースライン来院時に収集し、全ての試験来院（該当する場合は、ＥＴ来院を含む）時に更新した。試験中に服用した併用薬物治療（プレドニゾン／プレドニゾロンを含む）は、対象の医療記録及びｅＣＲＦに記録するものとした；これに対する例外は、試験手順を実施する過程で使用されるあらゆる薬物治療である（例えば、麻酔、拡張点眼薬）。
【０３０５】
手術に起因する炎症及びベクター／導入遺伝子に対する潜在的または予期せぬ免疫応答を最小限に抑えるため、成人対象には、手術の３日前に開始して９週コースの経口コルチコステロイドを与える：６０ｍｇで２１日間、その後６週の漸減用量が続く。投薬計画は、第ＩＩ部で処置される小児対象に合わせて調整する（セクション９．８を参照されたい）。対象はまた、手術時に、深部テノン嚢下アプローチを介して投与される、最大１ｍＬのトリアムシノロン（４０ｍｇ／ｍＬ）を用いて処置され得る。
【０３０６】
３．９：処置コンプライアンス
本試験は、最大０．１ｍＬ  ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの単回網膜下注射を含んだ。それゆえ、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲを用いた処置コンプライアンスの指標は必要なかった。プレドニゾン／プレドニゾロンの使用遵守は、ｅＣＲＦに記録した。
【０３０７】
４．０：試験来院及び手順
試験手順のスケジュールを、表２に提示する。来院は、以下により詳細に記載する。
【０３０８】
４．１：来院１（スクリーニング／ベースライン来院）
治験責任医師は、試験の目的、手順及び各潜在的な試験対象に対する対象の責任について説明した。プロトコル要件を満たす対象の意思及び能力を決定した。
【０３０９】
試験固有の手順の前に、書面によるインフォームドコンセントを取得した。対象または親は、治験責任医師または彼／彼女の被指名人の立会いのもとで、コンセント文書のコピー１部に署名し、日付を記入した。原本の署名された文書は、試験施設で保持し、追加のコピーを、対象の医療記録に残した；コピーは、対象または親に渡した。該当する場合、アセント文書は、対象が記入した。
【０３１０】
インフォームドコンセント／アセントを得た後、対象を評価して、適格性を決定した。スクリーニング評価はベースライン測定と見なされ、以下からなる：
・人口統計学
・眼の病歴及び以前の薬物治療を含む、病歴
・血圧及び脈拍
・安全な血液サンプルの収集（血液学及び臨床化学）
・ＲＰＧＲ突然変異スクリーニング（以前に実施されていない場合のみ）
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびに水晶体ＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ＊
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ＊
・眼底自発蛍光
・微小視野計測＊
・眼底撮影
・視野＊
・コントラスト感度検査
・色覚検査
・読み速度検査
・ＦＳＴ
・ウイルス排出
・免疫原性サンプリング
・ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
・無作為化＊＊
＊評価は三重に収集した。三重検査を容易にするために、来院は２日間にわたって実施した。ＢＣＶＡ及びＬＬＶＡを、初日に２回及び２日目に１回（瞳孔拡張前）測定することが推奨された。３つ全てのＢＣＶＡ値及び３つ全てのＬＬＶＡ値は、ｅＣＲＦに記録する必要がある。最高ＢＣＶＡスコアを使用して、対象の適格性を定義した。ＬＬＶＡは、各ＢＣＶＡ評価の直後に実施した。視野及び微小視野計測の結果を、レビューのためにＣＲＣに送った。データは、ＣＲＣ内で生成及び照合され、試験データベースに含めるために依頼者または被指名人にエクスポートされた。
＊＊無作為化は、第ＩＩ部のみ。
【０３１１】
組み入れ基準の全てを満たし、除外基準のいずれも満たさない対象は、試験眼を割付け、試験に登録した。第ＩＩ部では、対象は次に、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ処置群（ＭＴＤコホート、実薬対照コホート、または未処置対照）に無作為化され、処置用量に対して盲検化したままとした。無作為化及び対象番号の割付けの詳細については、セクション３．５を参照されたい。
【０３１２】
次の試験来院（来院２）は、スクリーニング／ベースライン来院から８週間以内（±２週間）に予定するものとした。対象に、２１日間コースの経口プレドニゾン／プレドニゾロンを与え、次の試験来院（来院２）の２日前に薬の服用を開始するように指示した。該当する場合、対象にさらに、処置された時点から３か月間、バリア避妊を使用するように指示した。
【０３１３】
４．２：来院２（０日目、手術／注射日来院）
来院２では、手術前に以下の評価を行った：
・血圧及び脈拍
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
・コルチコステロイドコンプライアンスレビュー
【０３１４】
その後、対象は硝子体切除術を受け、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲの網膜下注射を受ける（詳細については、セクション３．４を参照されたい）。対象を、手順中のＡＥの発生について注意深くモニターした。対象は、術後追跡（それぞれ、来院３［１日目］及び来院４［７日目］）のために、手術後１日及び次に７日に、施設に泊まり込むことができるまたは戻ることができる。
【０３１５】
４．３：来院３（術後１日目来院）
最初の術後来院である来院３では、以下の評価を行った：
・血圧及び脈拍
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ウイルス排出
・免疫原性サンプリング
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
・コルチコステロイドコンプライアンスレビュー
【０３１６】
該当する場合、対象に、処置時点から３か月間、バリア避妊を使用するという要件を再度伝えた。
【０３１７】
４．４：来院４（術後７日目来院±３日）
２回目の術後来院である来院４では、以下の評価を行った：
・血圧及び脈拍
・安全な血液サンプルの収集（血液学及び臨床化学）
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ウイルス排出
・免疫原性サンプリング
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
・コルチコステロイドコンプライアンスレビュー
【０３１８】
４．５：来院５（１か月目±７日）
来院５では、以下の評価を行った：
・安全な血液サンプルの収集（血液学及び臨床化学）
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ
・眼底自発蛍光
・微小視野計測
・ウイルス排出
・免疫原性サンプリング
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
・コルチコステロイドコンプライアンスレビュー
【０３１９】
４．６：来院６（３か月目±７日）
来院６では、以下の評価を行った：
・安全な血液サンプルの収集（血液学及び臨床化学）
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ
・眼底自発蛍光
・微小視野計測
・コントラスト感度検査
・色覚検査
・免疫原性サンプリング
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
【０３２０】
４．７：来院７（６か月目±１４日）
来院７では、以下の評価を行った：
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ
・眼底自発蛍光
・微小視野計測
・眼底撮影
・視野
・コントラスト感度検査
・色覚検査
・読み速度検査
・ＦＳＴ
・免疫原性サンプリング
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
【０３２１】
４．８：来院８（９か月目±１４日）
来院８では、以下の評価を行った：
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ
・眼底自発蛍光
・微小視野計測
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
【０３２２】
４．９：来院９（１年目±１４日）
来院９では、以下の評価を行った：
・安全な血液サンプルの収集（血液学及び臨床化学）
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ＊
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ＊
・眼底自発蛍光
・微小視野計測
・眼底撮影
・視野
・コントラスト感度検査
・色覚検査
・読み速度検査
・ＦＳＴ
・免疫原性サンプリング
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
＊評価は三重に収集した。三重検査を容易にするために、来院は２日間にわたって実施した。ＢＣＶＡ及びＬＬＶＡを、初日に２回及び２日目に１回（瞳孔拡張前）測定することが推奨された。３つ全てのＢＣＶＡ値及び３つ全てのＬＬＶＡ値は、ｅＣＲＦに記録した。ＬＬＶＡは、各ＢＣＶＡ評価の直後に実施するものとする。
【０３２３】
白内障を発症した対象は、臨床的に必要と思われる場合、白内障手術を受けてよい；手術を行う場合、来院９（１年目）または来院１１（２年目）の少なくとも４週前に実施するものとする。
【０３２４】
４．１０：来院１０（１８か月目±１４日）
来院１０では、以下の眼評価を行った：
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ
・眼底自発蛍光
・微小視野計測
・眼底撮影
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
【０３２５】
４．１１：来院１１（２年目±１４日、試験来院の終了）
来院１１では、以下の眼評価を行った：
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ＊
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ＊
・眼底自発蛍光
・微小視野計測
・眼底撮影
・視野
・コントラスト感度検査
・色覚検査
・読み速度検査
・ＦＳＴ
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
＊評価は三重に収集した。三重検査を容易にするために、来院は２日間にわたって実施した。ＢＣＶＡ及びＬＬＶＡを、初日に２回及び２日目に１回（瞳孔拡張前）測定することが推奨された。３つ全てのＢＣＶＡ値及び３つ全てのＬＬＶＡ値は、ｅＣＲＦに記録した。ＬＬＶＡは、各ＢＣＶＡ評価の直後に実施した。
【０３２６】
４．１２：早期終了（ＥＴ）来院
対象が任意の時点で試験を中止する事象では、施設は、適切なあらゆる努力を払って、ＥＴ来院が確実に実施されるようにされたい。以下の評価を行うものとする：
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ＊
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＬＬＶＡ＊
・眼底自発蛍光
・微小視野計測
・眼底撮影
・視野
・コントラスト感度検査
・色覚検査
・読み速度検査
・ＦＳＴ
・免疫原性サンプリング
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
＊評価は三重に収集した。三重検査を容易にするために、来院は２日間にわたって実施するものとする。ＢＣＶＡ及びＬＬＶＡを、初日に２回及び２日目に１回（瞳孔拡張前）測定することが推奨される。３つ全てのＢＣＶＡ値及び３つ全てのＬＬＶＡ値は、ｅＣＲＦに記録する必要がある。ＬＬＶＡは、各ＢＣＶＡ評価の直後に実施するものとする。
【０３２７】
４．１３：予定外の来院
臨床的に指示された場合、対象は、予定外の来院のために施設に戻る必要があり得る。少なくとも、以下の評価を行うものとする。
・倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けを含む、完全眼科検査
・ＥＴＤＲＳ  ＢＣＶＡ
・ＳＤ−ＯＣＴ
・ＡＥ／ＳＡＥモニタリング
・併用薬物治療レビュー
【０３２８】
５．０：有効性の評価
５．１：最良矯正視力（ＢＣＶＡ）
試験期間にわたるＶＡにおける変化を評価するために、ＢＣＶＡを、両眼に関して、表２に示す時間にてＥＴＤＲＳ  ＶＡチャートを使用して評価した。
【０３２９】
ＢＣＶＡ検査を瞳孔拡張の前に行い、距離屈折を実行してからＢＣＶＡを測定した。最初に、文字を、チャートから４メートルの距離にて読んだ。４メートルで＜２０文字を読んだ場合、１メートルで検査を行うものとする。ＢＣＶＡは、対象が正しく読んだ文字数として報告した。スクリーニング／ベースライン来院時、眼は、以下の場合に試験に適格であった：
・光の知覚以上を有する（コホート１のみ）、または
・３４〜７３ＥＴＤＲＳ文字のＢＣＶＡ（６／１２または２０／４０スネレン視力以下だが、６／６０または２０／２００スネレン視力以上に相当する）を有する（コホート２〜３）
・３４ＥＴＤＲＳ文字以上のＢＣＶＡ（６／６０または２０／２００スネレン視力以上に相当する）を有する（コホート４［該当する場合、５及び６］及びＭＴＤコホート）
【０３３０】
ＢＣＶＡについて、評価者は、評価の実施に関して適切に認定されていた。ＢＣＶＡは、全ての対象に関して、来院１、９、及び１１（またはＥＴ来院）で２日間にわたって３重で行った。ＢＣＶＡを、初日に２回及び２日目に１回実施することが推奨された。全ての値は、ｅＣＲＦに入力した。
【０３３１】
５．２：スペクトラルドメイン光コヒーレンストモグラフィ（ＳＤ−ＯＣＴ）
ＳＤ−ＯＣＴは、表２に示す時間にて両眼に対して行った。ＳＤ−ＯＣＴ測定は、対象の瞳孔の拡張後、施設で認定技術者によって取られた。全てのＯＣＴスキャンは、施設から中央読影センター（ＣＲＣ）に提出し、そこでスキャンが評価された；ＣＲＣは、データを電子データキャプチャ（ＥＤＣ）システムに入力するものとする。ＳＤ−ＯＣＴを使用して、エリプソイドゾーンの完全性ならびに外顆粒層及び脈絡膜からのシグナルにおける減少を定量化した。加えて、中心窩の変化を評価した。
【０３３２】
５．３：眼底自発蛍光
生存可能な網膜組織の領域における変化を評価するために、眼底自発蛍光は、表２に示す時間にて両眼に対して行った。全ての眼底自発蛍光画像は、対象の瞳孔の拡張後、施設で認定技術者によって行われ、レビューのためにＣＲＣに送られた；ＣＲＣは、データをＥＤＣシステムに入力した。
【０３３３】
５．４：微小視野計測
微小視野計測は、表２に示す時間にて両眼に対して実施した。微小視野計測は、全ての対象に対して、来院１で２日間にわたって３重で行った。微小視野計測は、黄斑内の網膜感度における変化を評価するために、認定技術者によって実施された。全ての微小視野計測画像は、レビューのために施設によってＣＲＣに送られた；ＣＲＣは、データをＥＤＣシステムに入力した。
【０３３４】
５．５：視野
視野は、必要な視野計測設備が利用可能な施設でのみ、表２に示す時間にて両眼で評価した。視野は、全ての対象に対して、来院１で２日間にわたって３重で評価した。視野出力は、レビューのためにＣＲＣに送られた。データは、ＣＲＣ内で生成及び照合され、試験データベースに含めるために依頼者または被指名人にエクスポートされた。
【０３３５】
５．６：コントラスト感度
コントラスト感度は、表２に示す時間にて両眼に対して測定した。コントラスト感度は、Ｐｅｌｌｉ  Ｒｏｂｓｏｎチャートを使用して瞳孔拡張の前に測定した。コントラスト感度について、評価者は、評価の実施に関して適切に認定されていた。
【０３３６】
５．７：低輝度視力（ＬＬＶＡ）
ＬＬＶＡは、表２に示す時間にて両眼に対して測定した。検査は、ＢＣＶＡ検査の後、瞳孔拡張の前に行った。ＬＬＶＡは、２．０対数単位の中性密度フィルターを各眼の前に被せて配置し、対象に通常照明のＥＴＤＲＳチャートを読ませることによって測定した。最初に、文字を、チャートから４メートルの距離にて読んだ。４メートルで＜２０文字を読む場合、１メートルで検査を行うものとする。ＬＬＶＡは、対象が正しく読んだ文字数として報告した。ＬＬＶＡは、全ての対象に対して、来院１ならびに来院９及び１１（またはＥＴ来院）で２日間にわたって３重で行った。ＬＬＶＡを、初日に２回及び２日目に１回実施することが推奨された。全ての値は、ｅＣＲＦに入力された。
【０３３７】
５．８：全視野刺激閾値検査（ＦＳＴ）
ＦＳＴは、両眼に対して、暗順応期間後、表２に示す時間にて、必要なＦＳＴ設備が利用可能な施設でのみ測定した。ＦＳＴ測定は、適切に認定された技術者によって行われた。
【０３３８】
５．９：色覚
色覚を、両眼に対して、瞳孔拡張の前に、表２に示す時間にて検査した。眼を、各評価で別々に同じ順序で検査した。色覚検査について、評価者は、評価の実施に関して適切に認定されていた。
【０３３９】
５．１０：読み検査
読み能力を、瞳孔拡張の前に、表２に示す時間にて両眼に対して評価した。読み検査は、依頼者が各施設に提供した。読み検査について、評価者は、評価の実施に関して適切に認定されていた。
【０３４０】
６．０：安全性の評価
６．１：用量制限毒性
ＤＬＴの定義については、セクション１．２を参照されたい。
【０３４１】
６．２：有害事象の評価、記録、及び報告
６．２．１定義
６．２．１．１有害事象
ＡＥは、臨床治験対象における任意の不都合な医学的発生であり、必ずしも試験薬物治療／外科手順との因果関係を有するわけではない。それゆえ、ＡＥとは、治験医薬品またはこのプロトコルに記載する外科手順と関連するか否かにかかわらず、試験薬物治療／外科手順の使用と一時的に関連する、任意の好ましくない及び意図しない兆候（異常な臨床検査所見を含む）、症状、または疾患であることができる。
【０３４２】
ＡＥには、任意の既存の状態（ＸＬＲＰ以外）または試験中に悪化する（すなわち、頻度または強度において増加する）疾病も含まれる。
【０３４３】
６．２．１．２重篤な有害事象
ＳＡＥとは、以下：
・死に至る
・生命を脅かす
・入院加療または現在の入院の延長を要する
・持続的または重大な障害／無能力をもたらす
・先天性異常／出生時欠損である
・視力喪失をもたらすまたは視力を脅かす
・別の重要な医学的事象（複数可）である、任意の不都合な医学的発生として定義される。
【０３４４】
「重篤な」の定義における「生命を脅かす」という用語は、事象の時に対象が死亡するリスクがある事象を指す。これは、仮にそれがより重度であった場合に死亡を引き起こす可能性のある事象を指さない。
【０３４５】
悪化していない選択的処置を含む、既存の状態の入院は、ＳＡＥを構成しない。
【０３４６】
死をもたらさない、生命を脅かさないまたは入院を必要としない可能性のある他の事象は、適切な医学的判断に基づいて、その事象が、対象を危険にさらし得、上記の転帰のうちの１つを予防するために医学的または外科的介入が必要であり得る場合に、ＳＡＥと見なされ得る。
【０３４７】
以下の視力喪失または視力を脅かす事象を、ＳＡＥとして報告するものとした：
・手術関連事象を除いて、ベースラインと比較したＥＴＤＲＳチャートでの≧１５文字のＶＡにおける持続的な低減。持続的とは、回復まで４８時間以上続くと定義される；回復とは、ベースラインＶＡの１０文字以内に戻ったＶＡと定義される。
・ＶＡ低減の手術関連事象は、手術の密接な時間的関連（＜２４時間以内）にて発生するＶＡ低減として定義される。これらの事象は、ＳＡＥとしては報告されない、ただし、治験責任医師の見解において、持続期間または重症度の観点からのそれらの進展が外科手順に関して典型的でない場合、それらはＡＥとして報告するものとする。これには、術後ＶＡ低減の異常な経過が、手術もしくは試験薬物治療に起因する別の合併症に関連している場合、または術後ＶＡ低減の異常な経過が、別の同定可能な原因に起因し得る場合が含まれるが、これに限定されない。
・視力の永久的喪失を防ぐために、治験責任医師の見解において、任意の外科的または医学的介入を実際にまたは潜在的に必要とするＡＥ。
【０３４８】
６．２．２有害事象の記録
ＳＡＥは、対象または親（該当する場合）が書面によるインフォームドコンセントを提供した時点から来院１１（または該当する場合は、ＥＴ来院もしくは予定外の来院）まで収集するものとした。重篤でないＡＥは、来院２から来院１１（または該当する場合は、ＥＴ来院もしくは予定外の来院）まで収集するものとした。対象に、「前回の来院からどうでしたか？」などの非誘導質問を使用することによって、任意の予定外の来院を含む、全ての来院でＡＥの発生について質問した。
【０３４９】
治験責任医師によって観察されたまたは対象によって報告された試験中に発生した全てのＡＥは、試験薬物治療または外科手順に起因するか否かにかかわらず、対象の医療記録及びｅＣＲＦに記録するものとした。臨床検査結果またはバイタルサイン測定値における任意の臨床的に重大な変化（治験責任医師が決定する）は、ＡＥとして記録するものとした。
【０３５０】
以下の情報を各ＡＥに関してｅＣＲＦに記録するものとした：説明、発症日及び終了日、転帰、重症度、試験薬物治療／試験手順との関連性の評価、取られた措置、ならびに事象が重篤と見なされるか否かの確認（重篤度の定義についてはセクション６．２．１．２を参照されたい）。追跡情報は、必要に応じて提供するものとする（追跡手順の詳細についてはセクション６．２．３を参照されたい）。事象の重症度は、以下のスケールで評価するものとした：１．＝軽度（徴候または症状を認識しているが、容易に忍容される）２．＝中程度（通常の活動を妨げるのに十分な不快感）３．＝重度（無能力、通常の活動を行うことができない）。ＡＥの関連性を指定する場合には、試験薬物治療または外科手順のいずれかにもっともらしい関係があるか否かを考慮するものとする。
【０３５１】
以下は、本試験で使用した関連性の定義である：無関係：試験薬物治療／外科手順の投与と時間的に合理的に関連していない、または、試験薬物治療／外科手順の曝露が発生していない  おそらく関連なし：事象の発生を説明する因子（証拠）がある（例えば、基礎疾患の進行または事象に関連する可能性が高い併用薬物治療）または事象について説得力のある代替説明がある  関連あるかもしれない：試験薬物治療／外科手順の投与に関して臨床的または生物学的に合理的であるが、事象が別の同様に可能性のある原因によるものであった可能性がある  おそらく関連あり：試験薬物治療／外科手順の投与に関して臨床的／生物学的に合理的であり、事象が他の要因及び原因よりも試験薬物治療／外科手順への曝露／投与によって説明される可能性が高い  明らかに関連あり：試験薬物治療／外科手順の投与に関して、事象の発症の因果関係であり、事象を説明する他の原因がない。
【０３５２】
ＡＥ重症度及び試験薬物治療または外科手順との関係は、治験責任医師または医学的に認定された被指名人によって施設で評価されるものとした。
【０３５３】
６．２．３有害事象の追跡
対象が回復するまたは対象の試験への参加が完了するまで、ＡＥを追跡するものとした。
【０３５４】
薬物関連ＡＥの結果として試験から離脱した対象は、事象が、解決、鎮静、安定化する、または対象もしくは親（該当する場合）がコンセントを撤回する、または追跡不能となるまで追跡するものとする。
【０３５５】
全てのＳＡＥは、試験薬物治療または外科手順への帰属に関係なく、事象が、解決、鎮静、安定化する、または対象もしくは親（該当する場合）がコンセントを撤回する、または追跡不能となるまで追跡するものとする。依頼者（または被指名人）は、ＳＡＥ報告を完了まで追跡するものとする。治験責任医師には、ＳＡＥ報告の完全な評価及び文書化のために、要求された追加情報を適時提供することを期待した。
【０３５６】
６．２．４重篤な有害事象及びＤＬＴの報告
治験責任医師は、直ちに（事象を知ってから２４時間以内に）いかなるＳＡＥ（及び／またはＤＬＴ）も依頼者（またはその被指名人）に報告するものとする。最初の報告は、対象及び事象に関する詳細を提供するより詳細な報告で迅速に追跡するものとする。病院の報告書、剖検報告書及び他の文書のコピーを、提供するものとする（該当する場合）。
【０３５７】
依頼者は、予期せぬ重篤な副作用の疑い（ＳＵＳＡＲ）を、治験実施施設、施設内審査委員会／独立倫理委員会（ＩＲＢ／ＩＥＣ）及び現在の法律に準拠した規制当局に報告するものとする。致命的または生命を脅かす全ての症例は、依頼者が治験責任医師から最初の報告を受け取ってから７日以内に報告するものとした。全ての非致命的または生命を脅かさない症例は、最初の治験責任医師の報告から最大１５日以内に報告するものとした。依頼者はまた、定期的な安全性報告を、ＩＲＢ／ＩＥＣ及び規制当局に必要に応じて提供するものとする。
【０３５８】
６．２．５データモニタリング委員会（ＤＭＣ）
本試験では、独立したＤＭＣを使用して、試験対象の安全性及び利益を保障し、治験中の遺伝子治療介入の安全性及びリスク／ベネフィットを評価した。試験中定期的な間隔で、ＤＭＣは、進捗状況及び蓄積された試験データをレビューし、用量漸増に関する推奨を含む、試験の安全性の側面について依頼者に助言を提供した（セクション１．３を参照されたい）。ＤＭＣは、進行中のデータが、遺伝子治療、その投与方法、及び／または試験デザインがもはや試験対象の最善の利益ではないことを示しているというコンセンサスがある場合は依頼者に通知するものとした。
【０３５９】
６．３：妊娠
試験対象の女性パートナーにおいて臨床試験中に生じた妊娠は全て、妊娠通知フォームに記録するものとする。治験責任医師は、直ちに（事象を知ってから２４時間以内に）妊娠を依頼者（またはその被指名人）に報告するものとする。加えて、可能であれば、対象が父である妊娠の転帰を記録し、先天性異常または出生時欠損に関して出産まで追跡するものとする。
【０３６０】
６．４：完全眼科検査
完全眼科検査を、表２に示す時間にて両眼に対して実施した。眼科検査には、倒像眼底検査、細隙灯検査、ＩＯＰ、前房及び硝子体炎症の等級付けならびにＬＯＣＳ  ＩＩＩ白内障の等級付けが含まれた。同じ細隙灯機及び照明条件を、全ての所与の対象の試験来院全てにわたって使用するものとする。
【０３６１】
白内障を発症した対象は、臨床的に必要と思われる場合、白内障手術を受けてよい；手術を行う場合、来院９（１年目）または来院１１（２年目）の少なくとも４週前に実施するものとする。
【０３６２】
６．５：眼底撮影
網膜周辺における漸進的な網膜変化の客観的な臨床評価を補助するために、眼底撮影を、表２に示す時間にて両眼に対して行った。眼底撮影は、瞳孔拡張後に認定技術者によって行われた。全ての眼底写真は、レビューのために施設によってＣＲＣに送られた；ＣＲＣは、データをＥＤＣシステムに入力した。
【０３６３】
６．６：バイタルサイン
バイタルサイン（脈拍ならびに収縮期血圧及び拡張期血圧）を、表２に示す時間にて測定した。バイタルサインは、対象が少なくとも５分間座った後に測定した。
【０３６４】
６．７：臨床検査値評価
６．７．１臨床検査値安全パラメータ
血液サンプルは、表２に示す時間にて、血液学及び臨床化学パラメータの測定のために収集した。サンプルは、分析のために中央検査室に送った。
【０３６５】
評価する血液学及び臨床化学パラメータを表４に概説する。
【０３６６】
表４．臨床検査値安全パラメータ
【表４】
2022501376.tif 000010
【０３６７】
６．７．２ウイルス排出
血液、涙（両眼）、唾液及び尿のサンプルを、表２に示す時間にて収集し、ベクターゲノムのポリメラーゼ連鎖反応増幅によって検査して、ベクター排出及び分散の証拠に関してアッセイした。サンプルは、分析のために中央検査室に送った。
【０３６８】
６．７．３免疫原性
免疫原性を評価するために、表２に示す時間にて採血した。イムノアッセイを、ＡＡＶ８−ＲＰＧＲに対する抗体及び細胞ベースの応答を評価するために計画した。酵素結合免疫スポットアッセイを、導入遺伝子に対するＴ細胞媒介免疫応答に使用し、抗体応答を、酵素結合免疫吸着アッセイベースの方法を使用してアッセイした。全ての免疫原性サンプルは、将来の分析のために中央検査室に送られ、保管された。
【０３６９】
７．０：統計的考察
７．１：サンプルサイズ
試験デザインの性質上、公式なサンプルサイズの計算は行わなかった。ＭＴＤ用量での３０人の対象のサンプルサイズは、発生率が≧１０％の事象が９５％の確率で同定されるだろうことを保証する。
【０３７０】
７．２：欠測データの管理手順
全ての対象の両眼の完全なデータを取得するために、あらゆる合理的な努力を払われたい。ただし、欠測観測値は発生し得る。脱落及び欠測観測値の取り扱いは、それらの性質及び頻度に依存するだろう。安全性及び有効性のデータは、観察されたデータのみに対して分析するものとする。欠測データは代入しないものとする。
【０３７１】
７．３：分析セット
７．３．１安全性分析セット
安全性分析セットは、試験処置（硝子体切除術／ＡＡＶ８−ＲＰＧＲ）を受ける全ての対象からなった。安全性分析セットは、人口統計学、ベースライン特徴及び安全性分析の主要な母集団であった。
【０３７２】
７．３．２完全分析セット
完全分析セットは、少なくとも１つのベースライン後の有効性評価のデータが少なくとも一方の眼で利用可能であった全ての対象を含んだ。完全分析セットを、有効性分析に使用した。
【０３７３】
７．４：記述統計
要約統計量を、両眼（試験眼対僚眼）について提示した。公式な統計比較は、行わなかった。カテゴリカル／二値データに関して、各カテゴリに属する対象の数及び割合は、その９５％信頼区間（ＣＩ）を伴って経時的に提示した。連続データは、平均、及びその９５％ＣＩ、標準偏差、中央値、最小値及び最大値を使用して、経時的に要約した。９５％ＣＩは、両側であった。要約は、第Ｉ部では用量及び全体ごとに、第ＩＩ部では群（ＭＴＤ用量及び低用量）ごとに生成した。
【０３７４】
７．５：人口統計学及びベースライン特徴
安全性分析セット及び完全分析セットに関して、人口統計学及びベースラインの眼の特徴を要約した。
【０３７５】
７．６：安全性分析
反対側の眼への、試験処置（手術／試験薬物治療）の潜在的な全身作用のため、眼の評価及びＡＥを、眼（試験眼及び僚眼）ごとに要約し、一方で全身評価は、対象レベルで分析した。公式な統計的検定は、安全性分析に関して行わなかった。安全性分析は、安全性分析セットで行った。
【０３７６】
７．６．１有害事象
ＡＥは、医薬品規制用語集を使用してコード化した。データベースロック時の現在の辞書のバージョンを、使用した。ＡＥは、器官別大分類及び基本語によって要約した。ＡＥを経験している眼／対象の数、及び事象の数の両方を要約した。同様の要約を、試験薬／手順関連ＡＥ、中止につながるＡＥ、及びＳＡＥに関して生成した。ＡＥは、最大重症度、試験薬／手順との関係、及び発症までの時間ごとに要約した。
【０３７７】
ＤＬＴの対象別リストを準備した。
【０３７８】
７．６．２眼の安全性評価
ＩＯＰ及びＩＯＰにおけるベースラインからの変化、異常な細隙灯検査所見及び倒像眼底検査所見、ならびに前房及び硝子体炎症の等級付けは、来院及び眼ごとに要約した。
【０３７９】
水晶体混濁カテゴリ及びベースラインからのシフトは、来院及び眼ごとに要約した。
【０３８０】
眼底写真所見のカテゴリ（無し／軽度／中程度／重度）は、来院及び眼ごとに要約した。
【０３８１】
ＢＣＶＡにおいてベースラインから１０文字及び１５文字低減した対象の数を、来院及び眼ごとに表にした。
【０３８２】
７．６．３臨床検査評価及びバイタルサイン
臨床検査評価及びバイタルサインは、記述様式で要約した。
【０３８３】
７．７：有効性分析
有効性評価は、本質的に眼球であるため、眼（試験眼及び僚眼）ごとに表にした。有効性データは、記述統計を使用して要約した。
【０３８４】
ＢＣＶＡにおけるベースラインからの変化を、来院及び目ごとに表にした。
【０３８５】
７．７．１アルファ調整
アルファ調整は、この探索的１／２相試験には適用可能ではなかった。
７．８：中間分析
第Ｉ部では、各用量コホートの後に探索的中間分析を実施した。第ＩＩ部では、処置用量に対する盲検化を維持したまま、３、６、１２、１８及び２４か月で副次的評価項目を分析した。
【０３８６】
実施例４：網膜色素変性症の遺伝子治療のためのＲＰＧＲＯＲＦ１５導入遺伝子の調製
ＲＰＧＲ遺伝子を、選択的にスプライシングする（図２３）。二つの主要なＲＰＧＲアイソフォームは、エクソン１〜１９（ＲＰＧＲＥ×１〜１９）によってコードされる構成的変異体であり、ＲＰＧＲＥ×１〜１９のエクソン１〜１４からなるＲＰＧＲＯＲＦ１５アイソフォームには、オープンリーディングフレーム１５と呼ばれる固有のＣ末端エクソンが続く。偏在ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡを生成するスプライシング事象を、図２４Ａ〜２４Ｃに示す。光受容体特異的ＲＰＧＲ  ｍＲＮＡ−ＲＰＧＲＯＲＦ１５を生成するスプライシング事象を、図２５Ａ〜２５Ｃに示す。ＲＰＧＲＯＲＦ１５アイソフォームは、脊椎動物の光受容体繊毛で発現する。
【０３８７】
ＲＰＧＲＯＲＦ１５アイソフォームは、高度に反復的なプリンリッチエクソン（またはオープンリーディングフレーム）１５を含有し、これはウイルスベクタークローニング中に突然変異ならびにエラーを起こしやすい（図２６Ａ〜２６Ｄ）。ＲＰＧＲは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターのコーディング能力の範囲内にあるが、３’末端の高度に反復的なプリンリッチ領域及びこの領域のすぐ上流のスプライス部位により、ＡＡＶ．ＲＰＧＲベクターのクローニングにおいて重大な課題が生じており、いくつかのグループが、前臨床検査中のスプライシングミスまたは短縮型変異体を報告している。
【０３８８】
コドン最適化ＲＰＧＲＯＲＦ１５の配列を、以下に提供する：
ＡＴＧＡＧＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣＴＧＡＴＧＣＣＡＧＡＣＡＧＴＧＧＡＧＣＡＧＴＧＴＴＴＡＣＡＴＴＣＧＧＡＡＡＡＴＣＴＡＡＧＴＴＣＧＣＴＧＡＡＡＡＴＡＡＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＴＴＣＴＧＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＧＡＣＧＴＧＣＣＣＧＴＣＣＡＣＣＴＧＴＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＧＡＧＣＡＴＡＧＴＧＣＣＧＴＧＧＴＣＡＣＴＧＧＧＡＡＣＡＡＴＡＡＧＣＴＧＴＡＣＡＴＧＴＴＣＧＧＧＴＣＣＡＡＣＡＡＣＴＧＧＧＧＡＣＡＧＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＧＡＴＣＣＡＡＡＴＣＴＧＣＴＡＴＣＴＣＴＡＡＧＣＣＡＡＣＣＴＧＣＧＴＧＡＡＧＧＣＡＣＴＧＡＡＡＣＣＣＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＡＡＣＴＧＧＣＣＧＣＴＴＧＴＧＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＣＡＣＴＣＴＧＧＴＧＡＧＣＡＣＣＧＡＧＧＧＣＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＡＴＧＣＣＡＣＣＧＧＡＧＧＣＡＡＣＡＡＴＧＡＧＧＧＡＣＡＧＣＴＧＧＧＡＣＴＧＧＧＧＧＡＣＡＣＴＧＡＧＧＡＡＡＧＧＡＡＴＡＣＣＴＴＴＣＡＣＧＴＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＡＣＡＴＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＧＡＴＣＡＡＧＣＡＧＣＴＧＡＧＣＧＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＡＣＡＴＣＴＧＣＡＧＣＣＣＴＧＡＣＴＧＡＧＧＡＣＧＧＧＣＧＣＣＴＧＴＴＣＡＴＧＴＧＧＧＧＡＧＡＴＡＡＴＴＣＡＧＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＴＧＧＧＣＴＧＡＡＡＡＡＣＧＴＧＡＧＣＡＡＴＧＴＧＴＧＣＧＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＣＧＧＡＡＡＧＣＣＡＧＴＣＡＧＴＴＧＧＡＴＴＴＣＡＴＧＴＧＧＣＴＡＣＴＡＴＣＡＴＡＧＣＧＣＣＴＴＣＧＴＧＡＣＣＡＣＡＧＡＴＧＧＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＧＴＣＴＴＴＧＧＧＧＡＧＣＣＣＧＡＡＡＡＣＧＧＡＡＡＡＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＣＴＡＡＣＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＣＡＡＴＣＡＣＣＧＧＡＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＴＣＣＧＡＧＡＴＣＣＣＴＧＡＡＡＡＡＧＴＧＡＴＣＣＡＧＧＴＣＧＣＣＴＧＣＧＧＧＧＧＡＧＡＧＣＡＴＡＣＡＧＴＧＧＴＣＣＴＧＡＣＴＧＡＧＡＡＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＡＣＣＴＴＣＧＧＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＴＴＴＧＧＣＣＡＧＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＧＡＡＣＣＴＴＣＣＴＧＴＴＴＧＡＧＡＣＡＴＣＣＧＡＡＣＣＡＡＡＡＧＴＧＡＴＣＧＡＧＡＡＣＡＴＴＣＧＣＧＡＣＣＡＧＡＣＴＡＴＣＡＧＣＴＡＣＡＴＴＴＣＣＴＧＣＧＧＡＧＡＧＡＡＴＣＡＣＡＣＣＧＣＡＣＴＧＡＴＣＡＣＡＧＡＣＡＴＴＧＧＣＣＴＧＡＴＧＴＡＴＡＣＣＴＴＴＧＧＣＧＡＴＧＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＧＡＡＧＣＴＧＧＧＡＣＴＧＧＧＡＣＴＧＧＡＧＡＡＣＴＴＣＡＣＴＡＡＴＣＡＴＴＴＴＡＴＣＣＣＣＡＣＣＣＴＧＴＧＴＴＣＴＡＡＣＴＴＣＣＴＧＣＧＧＴＴＣＡＴＣＧＴＧＡＡＡＣＴＧＧＴＣＧＣＴＴＧＣＧＧＣＧＧＧＴＧＴＣＡＣＡＴＧＧＴＧＧＴＣＴＴＣＧＣＴＧＣＡＣＣＴＣＡＴＡＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＴＡＡＧＧＡＧＡＴＣＧＡＡＴＴＴＧＡＣＧＡＧＡＴＴＡＡＣＧＡＴＡＣＡＴＧＣＣＴＧＡＧＣＧＴＧＧＣＡＡＣＴＴＴＣＣＴＧＣＣＡＴＡＣＡＧＣＴＣＣＣＴＧＡＣＴＴＣＴＧＧＣＡＡＴＧＴＧＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＡＧＴＧＣＡＡＧＧＡＴＧＣＧＧＡＧＡＡＧＧＧＡＧＡＧＧＧＡＡＣＧＣＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＧＴＴＴＣＴＣＡＡＴＧＣＧＡＣＧＡＡＣＣＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＴＣＧＡＧＧＧＡＡＣＡＣＴＧＧＧＡＣＴＧＡＧＴＧＣＣＴＧＣＴＴＣＣＴＧＣＣＴＡＡＣＴＣＡＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＧＡＴＧＴＡＧＣＧＡＧＣＧＧＡＡＴＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＴＣＣＴＧＡＧＴＧＡＧＣＡＧＧＡＴＣＴＧＡＴＧＣＡＧＣＣＡＧＡＧＧＡＡＣＣＣＧＡＣＴＡＣＣＴＧＣＴＧＧＡＴＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＧＧＣＣＧＡＡＡＴＣＧＡＣＡＡＣＴＣＴＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＧＧＣＧＡＧＡＣＴＡＣＣＧＡＴＡＴＣＣＴＧＡＡＴＡＴＧＡＣＡＣＡＣＡＴＴＡＴＧＴＣＡＣＴＧＡＡＣＡＧＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＴＣＴＧＡＡＡＣＴＧＴＣＡＣＣＡＧＴＧＣＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＡＣＡＧＣＡＧＡＣＴＡＴＴＧＧＣＧＡＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＣＴＧＡＣＡＧＡＧＡＡＣＧＡＣＧＡＴＡＧＣＧＡＴＧＡＧＴＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＧＴＣＣＧＡＧＡＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＣＡＡＡＧＣＴＴＧＴＡＡＧＣＡＧＣＡＴＧＴＣＡＧＴＣＡＧＧＧＧＡＴＣＴＴＣＡＴＧＡＣＡＣＡＧＣＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＴＡＴＴＧＡＧＧＣＴＴＴＴＴＣＡＧＡＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣＣＣＧＡＧＧＡＡＡＡＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＡＡＧＡＴＴＣＣＡＡＧＧＧＧＡＡＴＧＧＡＡＴＴＧＡＧＧＡＡＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧＡＡＧＣＣＡＡＣＧＡＧＧＡＡＡＡＴＧＴＧＡＡＡＧＴＣＣＡＣＧＧＡＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＡＡＡＣＡＧＡＡＡＴＣＣＴＧＴＣＴＧＡＣＧＡＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＡＡＧＧＣＣＧＡＧＧＴＧＴＣＣＧＡＡＧＧＣＡＡＧＧＣＡＡＡＡＴＣＴＧＴＣＧＧＡＧＡＧＧＣＡＧＡＡＧＡＣＧＧＡＣＣＡＧＡＧＧＧＡＣＧＡＧＧＧＧＡＴＧＧＡＡＣＣＴＧＣＧＡＧＧＡＡＧＧＣＴＣＡＡＧＣＧＧＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＴＧＧＣＡＧＧＡＣＧＡＧＧＡＡＣＧＡＧＡＧＡＡＧＧＧＣＧＡＡＡＡＧＧＡＴＡＡＡＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＧＡＴＧＧＡＡＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＡＧＧＧＣＧＡＡＡＡＡＧＡＧＣＴＧＧＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＡＴＧＧＡＡＧＡＡＡＡＧＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＧＡＡＣＡＧＧＡＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＧＧＧＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＣＣＡＧＡＡＧＧＡＧＣＧＣＡＡＣＣＡＧＧＡＧＡＴＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣＧＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＣＡＴＧＧＣＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡＴＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＡＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧＡＧＧＧＡＡＡＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＡＣＧＧＡＡＧＡＡＡＧＡＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡＴＣＡＧＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＡＧＡＧＡＡＡＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＡＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＣＧＡＡＧＡＧＧＧＡＡＡＧＧＧＣＧＡＧＣＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧＧＡＡＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＧＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＧＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧＧＡＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＧＧＡＡＴＧＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＧＣＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＴＧＧＡＧＧＧＣＧＡＡＧＴＣＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＧＧＧＡＡＧＧＧＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＧＧＧＡＧＡＡＧＧＣＧＡＧＧＡＡＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＧＡＡＡＧＴＡＣＣＡＧＧＡＧＡＣＡＧＧＣＧＡＡＧＡＧＧＡＡＡＡＣＧＡＧＣＧＧＣＡＧＧＡＴＧＧＣＧＡＧＧＡＡＴＡＴＡＡＧＡＡＡＧＴＧＡＧＣＡＡＧＡＴＣＡＡＡＧＧＡＴＣＣＧＴＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＡＧＣＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＴＣＡＧＡＡＧＡＡＡＡＧＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＧＧＧＡＡＴＧＧＡＡＡＡＧＡＧＣＡＧＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＴＧＣＣＴＧＴＧＣＡＧＴＣＡＡＡＡＣＧＧＣＴＧＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＧＣＣＣＡＴＣＴＧＧＡＡＧＴＡＡＡＡＡＡＴＴＣＴＧＧＡＡＣＡＡＴＧＴＧＣＴＧＣＣＣＣＡＣＴＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＡＴＡＡ（配列番号３）。
【０３８９】
コドン最適化を使用して、アミノ酸配列を変更することなく、光受容体特異的ＲＰＧＲ転写物の、内在性スプライス部位を無効にし、プリンリッチ配列を安定化させた（図２７Ａ〜２７Ｃ）。コドン最適化を使用して、（１）反復的なプリン配列及びクリプティックなスプライス部位を除去した；（２）ポリＡシグナルを除去し、アウトオブフレーム停止コドンを減少した；（３）最小のＣｐＧを伴う最適なヒトｔＲＮＡコドンバイアスを検討した（図２８）。ヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化バージョン（ｃｏＲＰＧＲ）は、ウェスタンブロットを介して示されるように、サイズが補正されたタンパク質を生成した（図２９Ａ〜２９Ｃ）。Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１７；２５（８）：１８５４−１８６５を参照されたい。
【０３９０】
鍵となる翻訳後修飾であるＲＰＧＲタンパク質のグルタミル化も、コドン最適化後に保存された。ｉｎ  ｖｉｖｏでのＲＰＧＲグルタミル化は、Ｃ末端塩基ドメイン及びＧｌｕ−Ｇｌｙリッチ領域の両方を必要とする（図３５Ａ〜３５Ｄ）。Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ，２０１６，１１３（２１）Ｅ２９２５−Ｅ２９３４を参照されたい。ＲＰＧＲは、ＴＴＬＬ５でグルタミル化され、グルタミル化は、ＲＰＧＲを光受容体繊毛のチューブリンに沿って移動させる（図３０Ａ〜３０Ｃ及び図３１Ａ〜３１Ｂ）。ＯＲＦ１５が欠失したＲＰＧＲは、グルタミル化が減少する；ゆえに、欠失ＲＰＧＲは欠損している（図３２Ａ〜３２Ｂ）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成されたコドン最適化ＲＰＧＲは、正しいスプライシング及び正しいグルタミル化を実証した（図３３Ａ〜３３Ｂ）。Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２０１７；２５（８）：１８５４−１８６５を参照されたい。ヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化バージョン（ｃｏＲＰＧＲ）を、ヒトＲＰＧＲ遺伝子治療において使用した（図３４）。
【０３９１】
実施例５：ＡＡＶ−ＲＰＧＲ組成物の最適化
本試験は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５コーディング配列（ｃｄｓ）のコドン使用の最適化を実証する。ＲＰＧＲＯＲＦ１５などの困難な配列においてコドンを最適化する最も重要な利点は、配列の忠実度を改善する可能性にある。結果得られるアミノ酸配列を変化させることなくヌクレオチドを変化させることは、配列をより安定させ、遺伝子治療用のベクターの生成中に、自然突然変異を生じにくくする可能性がある。この最適化は、導入遺伝子カセットにおいてアクセサリー制御エレメントを使用することなく、より高い導入遺伝子発現をさらにもたし得る。コドン配列が確立されると、追加のｉｎ  ｖｉｔｒｏ調査を実施して、ＡＡＶ８血清型からのキャプシドを伴うシュードタイプの組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを操作することを目的とした遺伝子治療戦略を開発及び最適化し、一方で、ＲＰＧＲＯＲＦ１５に突然変異を有する患者において遺伝子置換療法用に最適化されたＡＡＶベクターに関して十分に特徴決定された、ＡＡＶ２からのｇｕｔｔｅｄゲノムを使用した。
【０３９２】
遺伝子のｃｄｓは、核酸配列のペプチドへの翻訳のための鋳型として機能する。このプロセスには、メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）転写産物、リボソーム複合体及びアミノ酸に含有されるｃｄｓが関与し、これらは転移リボ核酸（ｔＲＮＡ）分子に結合する。ｃｄｓ内の３つの連続したヌクレオチド（例えば、ＵＵＡ）は、コドンを構成する。ｔＲＮＡ分子は、相補的なアンチコドン配列（例えば、ＡＡＵ）を有し、リボソーム複合体内のコドン配列に短く結合し、単一アミノ酸（例えば、ロイシン）に寄与する。それらは、ｃｄｓによってコードされる成長中のペプチドを形成する成長中のアミノ酸鎖に運んでいる。限られたパッケージング能力を有するベクターシステムとしてＡＡＶを使用する遺伝子治療の文脈では、コドン最適化は、ＡＡＶ産生サイクルにおけるよりクリーンなデザイン及びより高い効率につながる、発現カセットにおけるウッドチャック肝炎ウイルス転写後制御エレメント（ＷＰＲＥ）などの追加のシス作用制御エレメントを伴わずに導入遺伝子発現を増加させる可能性を提供する。さらに、システイン／グアニン含量を改善して、クローニングに干渉し得る不要な反復配列及び／または制限部位を取り除くために、導入遺伝子の翻訳されたアミノ酸配列を変更せずにヌクレオチド配列を変えることができる（サイレント置換）。これらはしばしば、ＲＰＧＲＯＲＦ１５などの困難な配列においてコドンを最適化する最も重要な利点：配列の忠実度を改善する可能性である。結果得られるアミノ酸配列を変化させることなくヌクレオチドを変化させることは、配列をより安定させ、遺伝子治療用のベクターの生成中に、自然突然変異を生じにくくする可能性がある。
【０３９３】
組換えＡＡＶは、網膜遺伝子治療の至適基準になり、過去１０年間で複数の臨床治験を成功に導いている。前臨床モデル、ならびにヒト患者における優れた安全性プロファイル、及び新しい標的遺伝子に適応するためのその構成要素の万能性は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５送達のためのベクターシステムとしてのＡＡＶの選択における重要な因子である。
【０３９４】
異なるＡＡＶ血清型は、ＡＡＶ表面タンパク質及び標的細胞受容体間の特異的相互作用により、異なる発現パターンをもたらす。例えば、天然に存在する血清型ＡＡＶ２は、網膜色素上皮を形質導入するのに非常に効率的であるが、導入遺伝子を光受容体細胞に送達することにおいてはあまり効果的ではない。対照的に、ＡＡＶ８キャプシド構造は、哺乳動物光受容体細胞によるビリオンの迅速及び効率的な取り込みをもたらす。
【０３９５】
光受容体は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５を発現しており、接続繊毛に局在するようにそれを指向し、ＲＰＧＲＯＲＦ１５は、接続繊毛と呼ばれるボトルネック構造に沿って細胞内タンパク質輸送を組織化する。機能性ＲＰＧＲＯＲＦ１５を有さない光受容体は、オプシンなどの高度に発現されるタンパク質が蓄積してしまい、光受容体機能障害及び最終的な細胞死がもたらされる。
【０３９６】
光受容体は、ＲＰＧＲＯＲＦ１５遺伝子送達のための標的細胞集団である；そのため、ＡＡＶ８キャプシドタンパク質を、ＸＬＲＰ遺伝子治療の候補ウイルス血清型として選択した。全ての網膜遺伝子治療治験におけるＡＡＶ２ベースの導入遺伝子カセットが成功したため、ＡＡＶ８キャプシドタンパク質とＡＡＶ２ベースのゲノムを組み合わせた、シュードタイプ構築物である、ＡＡＶ２／８が開発された。簡潔には、治療用導入遺伝子カセットに、ＡＡＶ２逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列が隣接しており、これがベクター産生中のゲノムのパッケージングを調整し、治療用導入遺伝子の標的細胞の核への送達が成功した後の第２鎖合成の開始点として機能する。
【０３９７】
材料及び方法
表５は、試験で使用した検査物質及び対照物質の説明を提供する。
【表５−１】
2022501376.tif 000011
【表５−２】
2022501376.tif 000012
【０３９８】
検査システム
ＨＥＫ２９３Ｔ、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ、及び６６１Ｗ細胞を含むいくつかの細胞培養を、以下のために使用した：
・野生型配列または最適化コドン配列からの、ＲＰＧＲＯＲＦ１５発現のレベルを試験する
・配列分析のためにＲＰＧＲタンパク質を過剰発現させる
・組換えＡＡＶの産生
・ＡＡＶ形質導入効率を検査する
【０３９９】
全ての細胞培養作業は、別段の記述がない限り、定期的に整備されたクラスＩＩ細胞培養フードで行われ、フラスコを、３７℃及び５％ＣＯ２にて、Ｇａｌａｘｙ  Ｒインキュベーター（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ＡＧ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）でインキュベートした。別段の記述がない限り、全ての培地を、新たに調製し、水浴中で３７℃に予熱した。使用した個々の細胞培養システムを、以下に説明する。
【０４００】
ヒト胎児腎臓２９３Ｔ細胞（ＨＥＫ２９３Ｔ）：ＨＥＫ２９３Ｔは、ヒト胎児腎臓細胞株である。細胞は、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｅｎｇｌａｎｄ，Ｐｏｒｔｏｎ  Ｄｏｗｎ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，ＳＰ４  ０ＪＧ，ＵＫから入手した。
【０４０１】
細胞は、１．５ｍＬ  ９０％ＦＢＳ  １０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中２×１０６個の細胞のアリコートにて、−１９６℃で液体窒素内で保管した。アリコートは、素早く解凍し、単一細胞懸濁液に混同した後で、１０ｍＬ完全細胞培養培地（８８％ＤＭＥＭ［Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ］、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００ＩＵ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンで置換、ならびに１０％ＦＢＳ［全てＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙ  Ｌｔｄ．，Ｄｏｒｓｅｔ，ＵＫ］）において、必要に応じて、蘇生した。次に、細胞を、１２００×ｇで５分間４℃にて回転させ、１ｍＬ培養培地に再懸濁し、ピペットして単細胞懸濁液を達成してから、細胞を、必要な容量の培地を伴うＴ７５フラスコ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗｔｏｎ  ＮＣ，ＵＳＡ）に播種した。細胞に新鮮な培地を２４時間後に供給して、損傷細胞及び非接着細胞を取り除き、正常な増殖速度が達成されるまで毎日モニターした（３〜５日間）。
【０４０２】
安定した増殖が確立されたら、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、２〜３日ごとに新たに調製した培地で培養し、７５％〜８０％のコンフルエンスで継代した：古い培地を取り除き、細胞を、５ｍＬの予熱した０．０１Ｍリン酸緩衝液（ＰＢＳ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ．，Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）で１回洗浄してから、２ｍＬのＰＢＳ中の０．２５％トリプシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を２分間加えた。細胞を、溶液に持ち込み、８ｍＬの完全細胞培養培地（上記を参照されたい）を加えた。次に、２ミリリットルのこの懸濁液を、新しいＴ７５フラスコに移し、１３ｍＬの培地を加えた。
【０４０３】
ヒト神経芽細胞腫由来細胞：ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、接着性の神経芽細胞由来細胞である。それらは、神経芽細胞腫を有する４歳の女性の骨髄生検から単離した、オリジナルのＳＫ−Ｎ−ＳＨ細胞からのサブクローンである。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、ＥＣＡＣＣ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｅｎｇｌａｎｄ，Ｐｏｒｔｏｎ  Ｄｏｗｎ，Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，ＳＰ４  ０ＪＧ，ＵＫから元々得た。
【０４０４】
細胞は、１．５ｍＬ  ９０％ＦＢＳ  １０％ＤＭＳＯ中２×１０６個の細胞のアリコートにて、−１９６℃で液体窒素内で保管した。培養培地の組成が：２ｍＭグルタミン、１％非必須アミノ酸、１５％ＦＢＳ、１００μｇ／ｍＬペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（全てＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を伴うアール平衡塩類溶液（ＥＭＥＭ［ＥＢＳＳ］）を有するハムＦ１２及びイーグル最小必須培地の１対１の混合物であったことを除いて、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞について記載した通りに蘇生を行った。細胞を、Ｔ７５フラスコで維持し、１：５０比率でサブコンフルエント（７０％〜８０％）な培養物として分割した、すなわち、およそ５×１０４個の細胞／ｃｍ２で播種した。細胞培養培地の構成を除いて、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞について記載した通りに分割を再度行った。神経細胞特異的分化を誘導するために、培地を、１．６×１０−８Ｍテトラデカノイルホルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）及び１０−５Ｍレチノイン酸（ＲＡ、両方ともＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含有する培地に、播種の２４時間後に交換した。
【０４０５】
マウス錐体光受容体様細胞：６６１Ｗ細胞株は、ヒト光受容体間レチノール結合タンパク質（ＩＲＢＰ）プロモーターの制御下でシミアンウイルス（ＳＶ）４０Ｔ抗原を発現するトランスジェニックマウス株の網膜腫瘍から、元々クローン化した。短波長及び中波長の感受性錐体オプシンの発現などの、錐体光受容体細胞の細胞特徴及び生化学的特徴を実証することが報告されているため、「錐体光受容体様細胞」と記載する。
【０４０６】
細胞株は、物質移動合意書に基づいてＤｒ  Ｍｕａｙｙａｄ  Ｒ．Ａｌ−Ｕｂａｉｄｉ（Ｏｋｌａｈｏｍａ，ＵＳＡ）から輸入し、彼の指示に厳密に従って培養した。アリコートを長期保管用に凍結保存し、培養培地組成：４０μｇ／Ｌヒドロコルチゾン、４０μｇ／Ｌプロゲステロン、０．０３２ｇ／Ｌプトレシン、４０μＬ／Ｌ  β−メルカプトエタノール、１００ｍｇ／Ｌペニシリン、１００ｍｇ／Ｌストレプトマイシン（全てＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、及び７．５％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）を有するＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を除いて、ＨＥＫ２９３Ｔ及びＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞について記載した通りに、必要に応じて蘇生した。
【０４０７】
細胞を、Ｔ７５フラスコで維持し、１：５比率でサブコンフルエント（７０％〜８０％）な培養物としての分割を、細胞培養培地の構成を除いて、再度ＨＥＫ２９３Ｔ細胞について記載した通りに行った。
【０４０８】
検査システムの理論的根拠：これらの治験において使用された細胞株、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＳＨ  ＳＹ５Ｙ、及び６６１Ｗは、正常なヒト細胞、ヒト神経細胞、及び光受容体細胞の代表である。
【０４０９】
ヒトＨＥＫ２９３Ｔは、アデノウイルス５で安定して形質転換された正常なヒト胎児腎臓細胞であり、単一クローンは２９３回目の実験から単離された（２９３Ｔ）。２９３Ｔ細胞株は、ＳＶ４０ラージＴ抗原を含有し、効率的なプラスミド複製が可能である。アデノウイルスは、非神経細胞よりも効率的に神経系統の細胞に形質導入することが知られており、ＨＥＫ２９３細胞は、未熟神経細胞の多くの特性を有する。トランスクリプトーム分析を通して、これらの細胞は、副腎細胞（いくつかの神経細胞特徴を伴う腎臓関連細胞）に最もよく似ていることが見出された。それゆえ、ＨＥＫ２９３／ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、アデノウイルスまたはＡＡＶによって効率的に形質導入される胎児副腎前駆細胞（神経細胞特徴を伴う）である。ヒトＳＨ−ＳＹ５Ｙは、骨髄由来細胞株（ＳＫ−Ｎ−ＳＨ）に由来し、神経機能の細胞モデルとしてよく使用される。加えて、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、神経細胞系統に沿って分化する能力を有する。それゆえ、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、より多くの神経細胞特徴を伴うモデルを代表する。
【０４１０】
マウス６６１Ｗ細胞株は、光受容体間レチナール結合タンパク質プロモーター（ＩＲＢＰ）の制御下でＳＶ−４０Ｔ抗原を発現する網膜腫瘍からクローン化した。それらの高度に形質転換された状態にもかかわらず、６６１Ｗ細胞は、光受容体細胞のいくつかのマーカーを発現することが示されている。それゆえ、これらの細胞は、光受容体特異的タンパク質アイソフォームであるＲＰＧ−ＯＲＦ１５の発現を検査するのに有用であり、動物に移行する前に非常に有用な検査システムを提供し得る。
【０４１１】
実験方法
導入遺伝子検出：ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、抗体ベースの検出方法によって導入遺伝子発現レベルを評価するために、ＣＡＧ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５及びＣＡＧ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５プラスミド構築物でトランスフェクトした。全ての抗体ベースの検出方法は、別段の記述がない限り、所与の希釈率で以下の一次抗体及び二次抗体を利用した。抗体は、凍結融解サイクルを回避するために、製造元の指示に従ってアリコートとして保管した。使用した抗体を、表６及び表７に記載する。
【０４１２】
表６：導入遺伝子発現レベルの評価において使用した一次抗体。
【表６−１】
2022501376.tif 000013
【表６−２】
2022501376.tif 000014
【表６−３】
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【０４１３】
表７：導入遺伝子発現レベルの評価において使用した二次抗体
【表７】
2022501376.tif 000016
【０４１４】
免疫細胞化学及びフローサイトメトリー：ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、それぞれの発現プラスミドを用いたトランスフェクションによる導入遺伝子（ＲＰＧＲＯＲＦ１５）の発現に使用した。ＲＰＧＲＯＲＦ１５の間接標識には、２つのインキュベーションステップが必要であり、最初にＲＰＧＲＯＲＦ１５に指向した一次抗体を用い、次に適合性のある二次抗体を用い、コンジュゲート蛍光色素を以下の濃度にて用いた（表８）。
【０４１５】
表８：ＲＰＧＲＯＲＦ１５の間接標識のために使用した一次抗体及び二次抗体の組み合わせ。
【表８】
2022501376.tif 000017
【０４１６】
トランスフェクションの４８時間後、細胞を洗浄してから、氷冷０．０１Ｍ  ＰＢＳ中およそ１〜５×１０６個の細胞／ｍＬに再懸濁した。１％（ｖ／ｖ）パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）にて１０分間４℃にて固定した後、細胞を、１２０×ｇで５分間４℃にて穏やかにペレット化した。水溶液を慎重に吸引し、細胞を、ブロッキング溶液（ＰＢＳ−Ｔ［０．０１Ｍ  ＰＢＳ中０．１％トリトン−Ｘ］中１０％［ｗ／ｖ］ロバ血清）に再懸濁した。３０分後、細胞を、上記の通りに再度回転させ、上清を除去した。一次抗体溶液を適切な濃度で加え、サンプルを室温で２時間インキュベートした。３つの洗浄ステップ（細胞を、１２０×ｇで５分間４℃にてペレット化し、上清を除去し、細胞を氷冷ＰＢＳ−Ｔに再懸濁した）後、蛍光色素標識二次抗体（任意選択でＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素を二次抗体溶液に１：５０００にて加えた）を、３０分間暗所で室温にて加え、その後同じ洗浄手順を行った。細胞は、同じ日のさらなるプロセスまで氷上に保った。
【０４１７】
細胞懸濁液を、ポリ−Ｌ−リジンでコーティングされたガラススライド（Ｇｅｒｈａｒｄ  Ｍｅｎｚｅｌ  ＧｍｂＨ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に滴下して加えた、またはＰｒｏＬｏｎｇ（登録商標）Ｇｏｌｄ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）にマウントして、蛍光顕微鏡検査を行った。あるいは、ＣｙＡｎ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ（ＡＤＰ）ＬＸ高性能リサーチフローサイトメーター（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｌｔｄ，Ｈｉｇｈ  Ｗｙｃｏｍｂｅ，ＵＫ）を、オックスフォード大学のフローサイトメトリー施設（Ｔｈｅ  Ｊｅｎｎｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｎｕｆｆｉｅｌｄ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）にて使用して、細胞をフローサイトメトリーにかけた。この９色デジタルフローアナライザーは、３つの固体レーザー（４８８、６３５、及び４０５ｎｍ）を特徴とし、１秒間に最大５００，０００イベントを分析する。ゲート設定は、＜１の偽発見率の陽性対照から得られたデータ及びその蛍光強度中央値に基づいて選択した。
【０４１８】
液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析：導入遺伝子（ＲＰＧＲＯＲＦ１５）の発現を、下記の方法に従って、それぞれの発現プラスミドを用いたＨＥＫ２９３Ｔ細胞のトランスフェクション後に、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）によって評価した。
【０４１９】
トランスフェクションの４８時間後、細胞を洗浄し、０．０１Ｍ  ＰＢＳを含む懸濁液に入れてから、１２０×ｇ及び４℃にて１０分間回転させた。ペレットを、５００μＬの０．０１Ｍ  ＰＢＳに再懸濁した後、遠心分離を繰り返した。上清を廃棄し、細胞ペレットを、１回の凍結融解サイクルにかけてから、２００μＬ氷冷ラジオ免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液と１つの溶解したコンプリートミニＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテルタブレット（Ｒｏｃｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｌｔｄ．，Ｗｅｌｗｙｎ  Ｇａｒｄｅｎ  Ｃｉｔｙ，ＵＫ）／１０ｍＬのＲＩＰＡ緩衝液を加えた。細胞ペレットを、モーター駆動のグラインダー（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でポリプロピレンペレットペッスルを用いて機械的に破砕し、細胞断片を、１４，０００ｒｐｍ及び４℃にて３０分間スピンダウンした。上清は、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ビシンコニン酸（ＢＣＡ）タンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造元の指示に従って使用して定量化した。マイクロプレート手順を使用して、総タンパク質の比色定量を行った：最初に、作業試薬及び９つのＢＳＡ標準を、２５〜２０００μｇ／ｍＬの範囲の最終濃度で調製した。２５μＬの各標準または未知のサンプル複製物を白色９６マイクロプレートウェルにピペットで移した後、２００μＬの作業試薬を加え、プレートをシェーカーで３０秒間混合してから、３７℃で３０分間インキュベートした。プレートを室温まで冷却した後、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ  ＥＺ  Ｒｅａｄ４００プレートリーダーで５６２ｎｍの吸光度を評価した。
【０４２０】
サンプルを、１μｇ／μＬ総タンパク質濃度まで希釈し、レムリ緩衝液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で２０分間室温にて変性させた。７．５％ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル（Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ（商標）ＴＧＸ（商標）プレキャストゲル、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．，Ｈｅｍｅｌ  Ｈｅｍｐｓｔｅａｄ，ＵＫ）を使用して、１０μｇ総タンパク質を、ウェルごとにロードし、１００Ｖで２時間電気泳動した（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）。製造元の指示に従って、ＥＺＢｌｕｅ（商標）ゲル染色試薬（ＳＩＧＭＡ）を使用して、タンパク質を染色した：ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを、過剰水で５分間ずつ３回すすいで、ＳＤＳを除去してから、ＥＺＢｌｕｅゲル染色試薬でゲルを２時間室温にてシェーカー上でインキュベートした。次に、ゲルを、過剰水で２時間洗浄してから、画像を撮影し、使い捨てメスで適切なバンドを切除した。バンドを、１．５ｍＬエッペンドルフチューブに移し、オックスフォード大学のプロテオミクスセンター（Ｄｕｎｎ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）でさらに処理するまで、４℃にて保管した。サンプルを、トリプシン、リジンＣ、リジンＮ、ペプシン、ギ酸、エラスターゼ、及びＶ８プロテアーゼを使用して消化分解した後、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを続けた。ペプチド断片は、それらの配列同一性に沿って記録され、ヒトプロテオームと一致させた。全ての検査は、プロテオミクスセンターの確立された手順に従って実施した。
【０４２１】
ウェスタンブロット：トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＲＰＧＲの発現レベルは、以下のプロトコルに従ってウェスタンブロット分析によって評価した。プラスミドトランスフェクション実験からのタンパク質サンプルを調製し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用して分離した。
【０４２２】
ゲルを、０．２μＭの孔径を伴うポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜（Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ（登録商標）Ｔｕｒｂｏ（商標）Ｍｉｄｉ  ＰＶＤＦ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ）上に慎重に配置し、タンパク質を、Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ  Ｔｕｒｂｏ転写スターターシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を、製造元の指示に従って使用して、ｍｉｄｉ設定を使用して（７分間２５Ｖにて）ブロットした。次に、ＰＶＤＦ膜を、標的タンパク質及びローディングコントロールのサイズに応じて切片へと切断して、それぞれの一次抗体（表６）及び／または二次抗体（表７）を用いて独立して染色した。
【０４２３】
製造元の指示に従って、ＰＶＤＦ膜を、ブロックし、洗浄し、ＳＮＡＰ  ｉ．ｄ．（商標）タンパク質検出システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｕ．Ｋ．）Ｌｔｄ．，Ｆｅｌｔｈａｍ，ＵＫ）において抗体溶液とインキュベートした。簡潔には、膜を適切なサイズのウェルに配置し、タンパク質をロードした側をウェルのオープンチャンバーに向けて上向きにした。０．１％トリトン−Ｘを伴う０．０１Ｍ  ＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）を、１％ＢＳＡと組み合わせた。非特異的結合をブロックするために、１％ＢＳＡを伴う１０ｍＬ  ＰＢＳ−Ｔを各ウェルに加え、ＰＶＤＦ膜を通して溶液を吸引するために真空を適用した。一次抗体溶液（３ｍＬ）をウェルに適用し、静置して１０分間室温にてインキュベートしてから、真空を適用し、その後およそ３０ｍＬ  ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄した。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合二次抗体とのインキュベーションは、一次抗体溶液と同じステップに従った。最後の洗浄ステップの後、膜をウェルから取り出し、化学発光の活性化を可能にするためにＬｕｍｉｎａｔａ  ｆｏｒｔｅ  ＥＬＩＳＡ  ＨＲＰ基質とインキュベートした。膜切片は、ＢＡＳカセット２０４０（ＦＵＪＩＦＩＬＭ  ＵＫ  Ｌｔｄ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＵＫ）で慎重に再構成して、暗室内でＣＬ−Ｘｐｏｓｕｒｅ（商標）フィルム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に曝露した。フィルムは、コンパクトＸ４自動Ｘ線フィルムプロセッサー（Ｘｏｇｒａｐｈ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｇｌｏｕｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で現像し、得られたフィルムは、Ｅｐｓｏｎ  Ｐｅｒｆｅｃｔｉｏｎ  Ｖ３０フラットベッドスキャナー（Ｅｐｓｏｎ（ＵＫ）Ｌｔｄ．，Ｈｅｒｔｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用してスキャンし、非圧縮タグ付き画像ファイル形式（ＴＩＦＦ）、１６ビット色深度及び１２００ｄｐｉの解像度とした。
【０４２４】
ＲＰＧＲのコドン最適化において使用する方法
Ｇｅｎｅｉｏｕｓソフトウェア（Ｍａｃ  ＯＳ  Ｘ  １０．７．５ではバージョン６．１．６；Ｂｉｏｍａｔｔｅｒｓ  Ｌｔｄ，Ａｕｃｋｌａｎｄ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）を使用して、参照ヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５  ヌクレオチド配列に関して、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のコンセンサスｃｄデータベース（ＣＣＤＳ）を検索した。完全なｃｄｓを、ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）アルゴリズム（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＵＳＡ）にかけて、遺伝子発現の効率にとって重要である、様々なパラメータを最適化した。それには、コドン使用バイアス、ＧＣ含量、ＣｐＧジヌクレオチド含量、ｍＲＮＡ二次構造、クリプティックなスプライシング部位、中途ポリＡ部位、内部カイ部位及びリボソーム結合部位、ネガティブＣｐＧアイランド、ＲＮＡ不安定モチーフ（ＡＲＥ）、反復配列（直接反復、逆反復、及びＤｙａｄリピート）、ならびにクローニングに干渉し得る制限部位が含まれる。使用したコドン頻度表を図３６に示す。
【０４２５】
網膜特異的アイソフォームＲＰＧＲＯＲＦ１５のコドン最適化ヒトｃｄｓは、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔによって合成された。ＲＰＧＲＯＲＦ１５の野生型配列は、ＯｒｉＧｅｎｅによって合成され、ｐＣＭＶ６−ＸＬベクターバックボーンで提供され、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔによってｐＵＣ５７ベクターバックボーンでクローニング用に提供された。
【０４２６】
配列は、オックスフォード大学の生化学部のＳｏｕｒｃｅ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅサービスによりサンガー法シーケンシングによって確認された。このために、複数のサンプルを、１００ｎｇ／μＬプラスミドＤＮＡで調製し、適切なシーケンシングプライマーを、３．２ｐｍｏｌ／μＬで追加して、予測された配列に沿った様々な位置で読み取りを開始した（図３７）。サンプルは、標準的な検査手順に従って分析した。
【０４２７】
コドン最適化
遺伝子のｃｄｓは、核酸配列のペプチドへの翻訳のための鋳型として機能する。このプロセスには、ｍＲＮＡ転写産物、リボソーム複合体、及びアミノ酸に含有されるｃｄｓが関与し、これらはｔＲＮＡ分子に結合する。ｃｄｓ内の３つの連続したヌクレオチド（例えば、ＵＵＡ）は、コドンを構成する。ｔＲＮＡ分子は、相補的なアンチコドン配列（例えば、ＡＡＵ）を有し、リボソーム複合体内のコドン配列に短く結合し、単一アミノ酸（例えば、ロイシン）に寄与する。それらは、ｃｄｓによってコードされる成長中のペプチドを形成する成長中のアミノ酸鎖に運んでいる。
【０４２８】
コドンの３つの位置の各々をコードするために利用可能な４つのヌクレオチドで、４３＝６４個のコドンを形成することができる。３つの組み合わせが、停止シグナル（ＵＡＡ、ＵＡＧ、ＵＧＡ）をコードするため、２０個のアミノ酸に対して６１の可能な組み合わせが利用可能である。この冗長性により、複数のコドンが同じアミノ酸に翻訳される：例えば、ロイシンは、コドン配列ＵＵＡ、ＵＵＧ、ＣＵＵ、ＣＵＣ、ＣＵＡ、またはＣＵＧに付加する。高度に発現する遺伝子は、いわゆる主要なコドンを優先的に使用する。
【０４２９】
ヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃｄｓは、Ｃ末端エクソンとして、高度に反復的な、プリンリッチ突然変異ホットスポットを有する１１５２アミノ酸タンパク質をコードする。ランダム突然変異が導入されていないこのアイソフォームをクローニングすることは困難であり、ポリメラーゼがグアニンリピートで停止する傾向があるため、アデニン／グアニンリッチ領域のダイレクトシーケンスも同様である。ＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃｄｓのコドン使用を最適化して、クローニングプロセス中の配列忠実度を高め、臨床ベクター設計における以前の問題を回避する可能性のある構築物を提供した。加えて、同義の主要なコドンを導入することを通してＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃｄｓのコドン適応指数（ＣＡＩ）を増加させると、可能な場合には、導入遺伝子カセットにアクセサリー制御エレメントを使用せずに、より高い導入遺伝子発現をもたらす可能性がある。これは、プロモーターまたはポリアデニル化部位を伴わなくても、ＲＰＧＲＯＲＦ１５のｃｄｓがすでに、ｇｕｔｔｅｄ  ＡＡＶゲノムの逆方向末端反復間の利用可能なスペースの４分の３以上を満たしているため、重要である。
【０４３０】
ヒトＲＰＧＲＯＲＦ１に関するデータベースクエリの結果は、３４５９ｂｐ長ｃｄｓ（ＣＣＤＳ  ３５２２９．１）であった。これは、Ｘ連鎖性網膜色素変性症ＧＴＰアーゼ制御因子アイソフォームＣとして知られており、Ｘｐ２１．１のＸ染色体のマイナス鎖上の遺伝子ＩＤ６１０３から転写及びスプライシングされた。
【０４３１】
この配列は、均衡のとれた４７．２％のＧＣ含量及び８４．１℃の融解温度を特徴としたが、３６％アデニン及び３５．５％グアニンを含むピリミジンに対してプリン（７２％）が過剰であった。この不均衡は、さらにｃｄｓ内で局部的に最も顕著であった。中心ＯＲＦ１５領域の１つの特定の９５９塩基対断片（図３８）では、ヌクレオチドの９３％がプリン（５６％グアニン＞３７％アデニン＞＞６％シトシン＞１％チミジン）であった。
【０４３２】
この限られた変動性により、ｃｄｓの２４５８〜２７９９間の領域における１５〜３３ｂｐ長さのヌクレオチド配列の高い割合での反復及び複数のポリグアニン連続（５’−ＧＧＧＧＡＧＧＧＧ−３’）がもたらされ、Ｇの長い連続がポリメラーゼの鋳型を巻き戻す能力を阻害するため、シーケンスが難しいことで有名である。
【０４３３】
反復性のプリンリッチヌクレオチド配列の別の結果は、アミノ酸頻度がグルタミン酸（２６．６％）及びグリシン（１５．４％）に偏っており、１７個の他のアミノ酸（メチオニンは数えない）は全て、ケースの０．７％〜６．６％のみであることを特徴とする。野生型ヒトＲＰＧＲＯＲＦ１５ｃｄｓのこれらの特定の特徴は、ほぼ確実に遺伝子の遺伝的不安定性に寄与し、それによって患者集団に見られる突然変異の高い出現率がもたらされる。
【０４３４】
ＲＰＧＲに最適化されたコーディング配列
ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５のＣＡＩの分析では、マイナーコドン（存在量の少ないコドン）を１０％使用した０．７３の中程度ＣＡＩが示されたが、メジャーコドン、すなわちホモサピエンスにおける所与のアミノ酸に関して使用頻度が最も高いコドンの使用は３２％のみであった。この最適なコドンの頻度（ＦＯＰ）は、コドンの最適化中に、より高いコドンクオリティ群を優先して変更した：１％マイナーコドンのみを変更しないまま残し、メジャーコドンの頻度を５６％まで増加させた。これは、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５に関してＣＡＩを０．８７に改善した。
【０４３５】
ＣＡＩを増加させることに加えて、コドン最適化はまた、ＭｆｅＩ制限部位及びいくつかのシス作用エレメント、例えば潜在的スプライス部位（ＧＧＴＧＡＴ）、４つのポリアデニル化シグナル（３つのＡＡＴＡＡＡ及び１つのＡＴＴＡＡＡ）、２つのポリＴ（ＴＴＴＴＴＴ）、及び１つのポリＡ（ＡＡＡＡＡＡＡ）部位を除去した。ＧＣ含量及び好ましくないピークは、ｍＲＮＡの半減期を延長するために最適化した。リボソーム結合の可能性を減らし、ｍＲＮＡの安定性を下げ得る二次構造形成（ステムループ）を無効にした。ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５及びｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５間のペアワイズパーセント同一性は、７７．２％であり、大半の変化がＯＲＦ１５領域で発生していた（図３９）。
【０４３６】
コドン最適化ＲＰＧＲは、野生型ＲＰＧＲよりも高い配列忠実度を示す
ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５の合成配列は、下流ＡＡＶベクター産生のためにＶｅｃｔｏｒ  ＢｉｏＬａｂｓ  ｐＡＡＶ２プラスミドにそれを上手くサブクローニングするために必要なステップ全体にわたって配列の偏差を示さなかった。ＧｅｎＳｃｒｉｐｔでｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５を含有するオリジナルのプラスミド産物の合成にはおよそ６週間かかった。ＧｅｎＳｃｒｉｐｔによるｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５の合成には、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５と比較しておよそ２倍の時間がかかった（およそ１２週間）。ｐＡＡＶ２プラスミドへのサブクローニングへの途中にあるｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５が関与する全ての後続のステップは、正しい断片サイズを有するクローンの数が少なかったことを示した：ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５で形質転換した後のＸＬ１０−Ｇｏｌｄ細菌の２４コロニーのうち、予期した断片サイズを備えたサンプルは３つだけであった（図４０）。対照的に、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５のクローニングは、２４のうち１８の陽性クローンをもたらした。さらに、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５ミニプレパレーションからのプラスミドＤＮＡ濃度は、およそ５０％高く（ｎ＝２４、対応のない、両側ｔ検定：ｐ＝０．０００４）、一方で２６０／２８０比率は、変化しないままであった。
【０４３７】
サブクローニングの様々な段階でｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５構築物をシーケンスすることは、ＯＲＦ１５領域内の反復的な性質及びポリ−Ｇ連続のために、大きな課題であった。いくつかの領域は、長いグアニン連続を伴うプリンリッチ領域（例えば、図３８）における読み過ごしを改善するために、デオキシグアノシン三リン酸（ｄＧＴＰ）シーケンシングの使用を必要とした。この技術が、良好な読み過ごしを提供する一方で、バンド圧縮を導入する可能性が高くなる（標準的なサンガー反応では、類似分子デオキシイノシン三リン酸［ｄＩＴＰ］をｄＧＴＰの代わりに使用するのはこのためである）。
【０４３８】
８つの独立したクローニング実験では（各構築物についてｎ＝４）、代表して３０回のシーケンスランが、野生型構築物の完全なカバレッジを得るために必要であり、一方でｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５配列には平均して８回のシーケンスランが十分であった。参照に対する配列データのアラインメントは、ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５には（主に）単一ヌクレオチドの欠失、挿入、及び点突然変異が多数あるが、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５には無いことを明らかにした（表９）。
【０４３９】
表９は、クローニング中のＤＮＡプラスミド変化の変更の比較を提供する。
【表９−１】
2022501376.tif 000018
【表９−２】
2022501376.tif 000019
【０４４０】
ＰｈｒｅｄクオリティスコアＱ２０、Ｑ３０、及びＱ４０を含む鍵となるパラメータ（Ｑ２０は９９％、Ｑ３０は９９．９％、及びＱ４０は９９．９９％のベースコール精度を示す）（表１０）、平均信頼及び予期エラーの数は、ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５の方がｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５に対して有意に弱かった（表１１）。データは、平均±標準偏差として示し、ｐ値は、偽発見率（ＦＤＲ）補正法を使用して多重比較のために補正した。
【０４４１】
表１０は、Ｐｈｒｅｄクオリティスコアを提供する。
【表１０】
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【０４４２】
表１１は、平均信頼及び予期エラーを提供する。
【表１１】
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【０４４３】
ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５の優れた配列忠実度の最終的な証拠は、マンチェスターのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＮＧＲＬ）によって提供された。ＣＡＧプロモーター領域（１５２７ｂｐ）を、はるかに小さいヒトロドプシンキナーゼプロモーター（１９９ｂｐ）と交換して、ＡＡＶの組換え産生、ならびに光受容体細胞への局在化を補助した後、両構築物（ＲＫ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５及びＲＫ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５）を、適切なプライマーとともにＮＧＲＬに送り、職員は配列の同一性に関して盲検化されたままとした。鋳型としてＲＫ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５で３４回シーケンス反応を実行した後、累積データは、７４のあいまいなヌクレオチドコール（例えば、グアニン及びアデニンについて等しいシグナル）及び６つの潜在的な挿入／欠失突然変異（４つの潜在的な挿入及び２つの潜在的な欠失）を示した。これらは全て、ＲＰＧＲＯＲＦ１５の突然変異ホットスポットであるプリンリッチＯＲＦ１５領域にて見出された。対照的に、ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５構築物は、少なくとも２倍のカバレッジでシーケンスされ、シーケンス反応はちょうど半分で、プラスミドに突然変異は見出されなかった。
【０４４４】
コドン最適化ＲＰＧＲは、野生型ＲＰＧＲよりも高い発現レベルをもたらす
ＲＰＧＲＯＲＦ１５の発現レベルに対するコドン適応指数（ＣＡＩ）増加の影響を分析するために、ＣＡＧ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５及びＣＡＧ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５プラスミド構築物を、直接比較に使用して、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞でトランスフェクション実験を行った。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、ヒトを起源とするため、種特異的コドン頻度分布を共有し、これは、ホモサピエンスに関する最適化の基礎として機能した。ＣＡＧ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５でトランスフェクトした細胞は、野生型構築物ＣＡＧ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５でトランスフェクトした細胞よりも、多くのＲＰＧＲＯＲＦ１５を産生すると仮説を立てた。この仮説を検査するため、トランスフェクトした細胞におけるＲＰＧＲＯＲＦ１５を定量化するためにいくつかの実験的手段を取った。まず、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、ＣＡＧ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５及びＣＡＧ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５プラスミド構築物でトランスフェクトし、免疫細胞化学（ＩＣＣ）に関して処理して、導入遺伝子検出が、抗体結合によって検出できるか否かを確立した。図４１は、そのような実験からの代表的な画像を示し、この場合、細胞は、培地のみ（陰性対照）、ＣＡＧ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｗｔ）、またはＣＡＧ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５（ｃｏ）でトランスフェクトされており、抗ＲＰＧＲで染色した。
【０４４５】
ウェスタンブロット分析を使用して、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞からの全細胞溶解物における発現レベルを評価した。４つの独立した６ウェルプレートトランスフェクションで、各々ｗｔＲＰＧＲ及びｃｏＲＰＧＲを技術的に複製し、構築物ごとに合計数８を産生した。これらの溶解物からのアリコートを、２つのゲル上で並行して実行し、結果得られたバンドの平均シグナル強度を比較した（図４２）。Ｓｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋ検定は、データセットの正規性に関する帰無仮説を保持し（ｐ＝０．０６〜０．１９）、一元配置分散分析は、コドン最適化構築物を反映する平均シグナル強度＝３２．０±８．２８任意単位［ＡＵ］（平均±標準誤差）及び野生型構築物でトランスフェクトされた細胞からのシグナル＝８．１１±１．６３ＡＵ間の差の統計的有意性を示した（ｐ＝０．０１、ｎ＝８）。
【０４４６】
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）も、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＲＰＧＲＯＲＦ１５の発現レベルを測定するために使用した。上記と同様の設定で、６ウェルプレートを用いた３つの独立した実験を実施し、各々、ＣＡＧ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５、ＣＡＧ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５、ＣＡＧ．ｅＧＦＰ（トランスフェクションに関する陽性対照として）または培地のみ（陰性対照として）のいずれかでトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を有するウェルを３回技術的に複製した。
【０４４７】
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）も、トランスフェクトされたＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＲＰＧＲＯＲＦ１５の発現レベルを測定するために使用した。上記と同様の設定で、６ウェルプレートを用いた３つの独立した実験を実施し、各々、ＣＡＧ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５、ＣＡＧ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５、ＣＡＧ．ｅＧＦＰ（トランスフェクションに関する陽性対照として）または培地のみ（陰性対照として）のいずれかでトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を有するウェルを３回技術的に複製した。
【０４４８】
ＣＡＧ．ｅＧＦＰでトランスフェクトされた細胞は、回収時にｅＧＦＰ発現を示し、これは、トランスフェクションが成功し、細胞がプラスミドコード導入遺伝子を産生するのに十分な時間を有したことを示す。ＩＣＣプロトコルの後、これらの細胞を使用して、それらは二次抗体のみとインキュベートしたため、遠赤範囲で蛍光に関してＦＡＣＳゲーティングの下端を設定した。次に、陽性対照（ウサギ抗β−アクチン及びロバ抗ウサギとコンジュゲートしたＡｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ６３５に曝露されたナイーブＨＥＫ２９３Ｔ細胞）を使用して、蛍光ゲート設定の上限を規定した。ＣＡＧ．ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５構築物でトランスフェクトされた細胞は、野生型構築物であるＣＡＧ．ｗｔＲＰＧＲＯＲＦ１５でトランスフェクトされた細胞よりも高い蛍光強度を示した（図４３）。Ｓｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋ検定は、データセットの正規性に関する帰無仮説を棄却し（ｐ＜０．０５）、Ｋｒｕｓｋａｌ  Ｗａｌｌｉｓノンパラメトリック検定は、コホート間の強力な統計的な差を実証した（ｐ＜０．０１、ｎ＝９）。
【０４４９】
実施例６：黄斑内及び黄斑近傍の治療有効性の微小視野計測測定
対象は、ＡＡＶ−ｃｏＲＰＧＲＯＲＦ１５粒子を含む本開示の組成物を用いて処置した。処置の前に、全６８座のベースライン微小視野計測測定を行った。処置後の様々な時点にて、全６８座の追跡微小視野計測測定を行った。図４４〜５１は、６８座の全領域及び中心１６セットの座の両方を治療有効性について評価する本試験の結果を提供する。
【０４５０】
実施例７：網膜厚によって示される治療有効性の眼測定
Ｘｉｒｉｕｓ分析の結果は、ＯＣＴ分析による網膜厚の二重線の出現によって証明されるように、処置を受けている参加者の治療転帰の改善を明らかにする。この所見を実証するデータを、図５２〜６８に提供する。
【０４５１】
実施例８：網膜色素変性症の遺伝子治療の臨床治験
６．０試験の目的及び評価項目
６．１目的
この試験の目的は、ＸＬＲＰを有する対象におけるＡＡＶ８−ＲＰＧＲの単回網膜下注射の安全性、忍容性及び有効性を評価することである。
【０４５２】
評価項目
主要有効性評価項目
主要有効性評価項目は、１２か月で、黄斑完全性評価（ＭＡＩＡ）微小視野計測によって評価された１０−２グリッドの１６中心座の≧５でベースラインから≧７ｄＢの改善を有する試験眼の割合である。
【０４５３】
安全性評価項目
主要安全性評価項目は、１２か月間にわたるＴＥＡＥの発生率である。
副次的評価項目
・１、２、３、６、及び９か月で、ＭＡＩＡ微小視野計測によって評価された１０−２グリッドの１６中心座の≧５でベースラインから≧７ｄＢの改善を有する試験眼の割合
・１、２、３、６、９、及び１２か月で、ＭＡＩＡ微小視野計測によって評価された１０−２グリッドの６８座の≧５でベースラインから≧７ｄＢの改善を有する試験眼の割合
・１、２、３、６、９、及び１２か月での、微小視野計測におけるベースラインからの変化
・１、２、３、６、９、及び１２か月での、ＢＣＶＡにおけるベースラインからの変化
・１、２、３、６、９、及び１２か月での、Ｏｃｔｏｐｕｓ  ９００視野計によって評価された視野におけるベースラインからの変化
探索的評価項目
・６か月及び１２か月での、マルチルミナンスモビリティテスト（ＭＬＭＴ）におけるベースラインからの変化
・３か月及び１２か月での、２５項目視覚機能質問票（ＶＦＱ−２５）におけるベースラインから変化（成人のみ）
・１、２、３、６、９、及び１２か月での、ＳＤ−ＯＣＴにおけるベースラインからの変化
・１、２、３、６、９、及び１２か月での、眼底自発蛍光におけるベースラインからの変化
・１、３、６、９、及び１２か月での、他の解剖学的転帰及び機能的転帰におけるベースラインからの変化
【０４５４】
治験の計画
用量拡張、バージョン９
対象を、１：１：１の割付け率にて、高用量群（２．５×１０＾１１ｇｐ）、低用量群（５×１０＾１０ｇｐ）、及び未処置群に無作為化した。処置群では、依頼者、治験責任医師及び対象は、割付けられた用量に対して盲検化するものとする（すなわち、二重盲検化）。処置眼評価及び非処置眼評価の潜在的なバイアスをさらに最小限に抑えるため、スクリーニング／ベースライン来院（来院１）時及び３か月目（来院６）以降の全ての主観的眼科評価は、盲検化された評価者によって実施されるものとする。
【０４５５】
試験データは、各対象の両眼について収集するものとする。処置には、全身麻酔下での侵襲的外科手順が必要とされるため、依頼者、治験責任医師及び対象は、試験手順（すなわち、硝子体切除術及び網膜下注射）に対して非盲検化されるものとするが、処置群内では、依頼者、治験責任医師及び対象は、割付けられた用量に対して盲検化されるものとする。処置眼評価及び非処置眼評価の潜在的なバイアスをさらに最小限に抑えるため、スクリーニング／ベースライン来院（来院１）時及び３か月目（来院６）以降の全ての主観的眼科評価は、盲検化された評価者によって実施されるものとする。
組み入れ基準
１．対象／親／法定後見人（該当する場合）が、試験への参加に関するインフォームドコンセント／アセントを提供する意思及び能力がある
２．男性、≧１０歳であり、全ての試験評価を遵守し、適切に行うことができる
３．ＲＰＧＲ遺伝子における病原性突然変異の記述
４．以下の基準を満たすＢＣＶＡを両眼に有する：
・３４ＥＴＤＲＳ文字以上のＢＣＶＡ（６／６０または２０／２００スネレン視力以上に相当する）。
５．≧０．１ｄＢ及び≦８ｄＢの、微小視野計測によって評価した試験眼における平均総網膜感度
【０４５６】
除外基準：
対象は、以下の除外基準のうちのいずれかを満たす場合、試験参加には適格ではない。
１．いずれかの眼に弱視の病歴を有する
２．ＡＡＶ８−ＲＰＧＲを用いた処置後３か月間、バリア避妊法（該当する場合）を使用する、または性交を控えることを望まない
３．治験責任医師の意見において、試験への参加のために対象を危険にさらす可能性がある、試験の結果に影響を与える可能性がある、試験診断検査を行う対象の能力に影響を与える可能性がある、または試験に参加する対象の能力に影響を与える可能性がある、任意の他の重大な眼または非眼疾患／障害を有する。これは、以下を含み得るが、これに限定されない：
ａ．臨床的に重大な白内障
ｂ．経口コルチコステロイドに対する禁忌
ｃ．網膜手術に対する不適切性
４．過去１２週間に治験医薬品を含む別の研究試験に参加したことがある、または遺伝子／細胞療法を、以前の任意の時点で受けたことがある（インテリジェント網膜インプラントシステムの埋め込み、繊毛神経栄養因子療法、神経成長因子療法を含むが、これに限定されない）。
【０４５７】
試験処置
対象を、以下のうちの１つに割付けた：高用量（２．５×１０＾１１ｇｐ）、低用量（５×１０＾１０ｇｐ）、または未処置の対照群。試験薬は、実施例３と同じである。９．５無作為化
【０４５８】
試験盲検化
有効性評価項目として使用した眼科評価（ＢＣＶＡ、ＬＬＶＡ、微小視野計測、コントラスト感度及びＶＦＱ−２５）は、適切に認定された盲検化された評価者によって実施される。手術直後の来院では、手術の臨床的兆候（すなわち、発赤、腫れ）が明らかであり得るため、評価者の盲検化は実行可能でないだろう。それゆえ、盲検化されていない評価者は、全ての眼科評価を、来院３（１日目）、来院４（７日目）、来院５（１か月目）、及び来院５．９（２か月目）で行う。来院６（３か月目）以降は、手術の兆候が消え、手術を受けていない対象と手術を受けて積極的な処置を受けた対象を臨床的に区別できないはずであるため、盲検化された評価者を使用する。
【０４５９】
ＡＡＶ８−ＲＰＧＲを用いた処置後３、６、９及び１２か月目での盲検化評価
・最良矯正視力
・低輝度視力
・微小視野計測
・コントラスト感度
・２５項目の視覚機能質問票
【０４６０】
９．８併用療法
対象は、経口コルチコステロイドのコースを処方される。加えて、手術時に、対象（成人及び小児）は、最大１ｍＬのトリアムシノロン、４０ｍｇ／ｍＬ溶液を用いて処置され得、これは、深部テノン嚢下アプローチを介して投与される必要がある。
【０４６１】
成人の場合、６０ｍｇの経口プレドニゾン／プレドニゾロンを、最初の２１日間（手術の３日前に開始）処方し、その後、以下の通りに週毎に漸減し、合計９週間処置を行う：
−３日目から１７日目（２１日間）：経口で６０ｍｇを１日１回
１８日目から２４日目（７日間）：経口で５０ｍｇを１日１回
２５日目から３１日目（７日間）：経口で４０ｍｇを１日１回
３２日目から３８日目（７日間）：経口で３０ｍｇを１日１回
３９日目から４５日目（７日間）：経口で２０ｍｇを１日１回
４６日目から５２日目（７日間）：経口で１０ｍｇを１日１回
５３日目から５９日目（７日間）：経口で５ｍｇを１日１回。
【０４６２】
２か月目の来院（来院５．９）で炎症が観察された場合は、経口及び／または眼内経路を介して、対象の臨床状態、及び治験責任医師の判断に基づいて、コルチコステロイド療法を再開するものとする。
【０４６３】
小児対象の場合、経口プレドニゾロン／プレドニゾンは、手術の３日前に開始される。開始用量は、対象のキログラム体重に基づき、最大で６０ｍｇの開始用量（１ｍｇ単位で四捨五入）とする。後続の用量は乗数を有し、追加の６週間にわたって適切な漸減を提供し、処置は合計９週間にわたるものとする。小児対象用の漸減レジメンは下記を参照されたい：
【０４６４】
−３日目から１７日目（２１日間）：開始用量（ＳＤ）経口で１ｍｇ／ｋｇ／１日１回（最大用量６０ｍｇを１日１回）
１８日目から２４日目（７日間）：経口でＳＤ×０．８３ｍｇを１日１回
２５日目から３１日目（７日間）：経口でＳＤ×０．６７ｍｇを１日１回
３２日目から３８日目（７日間）：経口でＳＤ×０．５ｍｇを１日１回
３９日目から４５日目（７日間）：経口でＳＤ×０．３３ｍｇを１日１回
４６日目から５２日目（７日間）：経口でＳＤ×０．１７ｍｇを１日１回
５３日目から５９日目（７日間）：経口でＳＤ×０．０８ｍｇを１日１回
【０４６５】
２か月目の来院（来院５．９）で炎症が観察された場合は、経口及び／または眼内経路を介して、対象の臨床状態、及び治験責任医師の判断に基づいて、コルチコステロイド療法を再開するものとする。
【０４６６】
有効性の評価
最良矯正視力
試験期間にわたるＶＡにおける変化を評価するために、ＢＣＶＡを、ＥＴＤＲＳ  ＶＡチャートを使用して両眼に関して評価する。
【０４６７】
ＢＣＶＡ検査を瞳孔拡張の前に行い、距離屈折を実行してからＢＣＶＡを測定するものとする。最初に、文字を、チャートから４メートルの距離にて読む。４メートルで＜２０文字を読む場合、１メートルで検査を行うものとする。ＢＣＶＡは、対象が正しく読んだ文字の数として報告する。
【０４６８】
スクリーニング／ベースライン来院時、眼は、３４ＥＴＤＲＳ文字以上のＢＣＶＡを有する場合に、試験に適格であるものとする。
【０４６９】
ＢＣＶＡについて、評価者は、評価の実施に関して適切に認定されているものとする。
【０４７０】
来院１（スクリーニング／ベースライン）時のＢＣＶＡ値が、以前のＸＯＬＡＲＩＳ試験来院（該当する場合）と比較して試験眼において≧±１０文字の向上または喪失である場合、ＢＣＶＡを追加で２回繰り返さねばならず、結果として来院１にて合計でＢＣＶＡ測定は３回行われる。追加のＢＣＶＡ測定を容易にするために、この来院は２日間にわたって実施するものとし、ＢＣＶＡを、１日目に２回及び２日目に１回（瞳孔拡張前）測定する。３回のＢＣＶＡ値は全て、ｅＣＲＦに記録する必要がある。最高スコアを、対象の適格性を決定するために使用するものとする。
【０４７１】
来院１（スクリーニング／ベースライン）時のＢＣＶＡ値が、以前のＸＯＬＡＲＩＳ試験来院と比較して試験眼において＜±１０文字差である場合、ＢＣＶＡは１回収集し、繰り返さないものとする。
【０４７２】
対象が、以前にＸＯＬＡＲＩＳ試験に参加していなかった場合、ベースライン時のＢＣＶＡ評価は、３重で行う必要がある。
【０４７３】
スペクトラルドメイン光コヒーレンストモグラフィ（ＳＤ−ＯＣＴ）
ＳＤ−ＯＣＴは、実施例３の通りに行う
【０４７４】
眼底自発蛍光
眼底自発蛍光画像は、実施例３の通りに撮影する。
【０４７５】
ＭＡＩＡ微小視野計測
ＭＡＩＡ微小視野計測は、実施例３の通りに行う。
【０４７６】
視野検査（視野計測）
視野は、両眼で評価する。視野は、全ての対象に対して、来院１で２日間にわたって３重で評価するものとする。視野は、Ｏｃｔｏｐｕｓ  ９００視野計を使用して評価する。
【０４７７】
コントラスト感度
コントラスト感度は、実施例３の通りに測定する。
【０４７８】
低輝度視力
低輝度視力は、実施例３の通りに測定する。
【０４７９】
マルチルミナンスモビリティテスト
ＭＬＭＴは、来院１（スクリーニング／ベースライン）、来院７（６か月目）、及び来院９（１２か月目）にて実施する。評価には、コースを通過する時間、障害物との衝突の数、及び異なる照明条件下で通過する能力を含む。
【０４８０】
視覚機能質問票
成人対象は、来院１（スクリーニング／ベースライン）、来院６（３か月目）、来院９（１２か月目）または該当する場合はＥＴ来院時に、ＶＦＱ−２５を完了する。
【０４８１】
安全性の評価
安全性評価は、実施例３１２．２．４の通りに行う
【０４８２】
有効性分析
有効性評価は、本質的に眼球であるため、眼（試験眼及び僚眼）ごとに表にする。有効性データは、記述統計を使用して要約するものとする。
【０４８３】
網膜感度における改善及び網膜感度におけるベースラインからの変化は、来院及び眼ごとに表にする。
【０４８４】
中心グリッド（すなわち、中心１６座）及びグリッド全体（すなわち、全６８座）の両方について、網膜感度が改善された眼の割合を、ベータ＝０．００１のＢｅｒｇｅｒ−Ｂｏｏｓ補正（Ｂｅｒｇｅｒ  １９９４）を用いたＦｉｓｈｅｒ正確−Ｂｏｓｃｈｌｏｏ検定を使用して、試験群間で比較する（高用量対未処置；低用量対未処置）。加えて、試験群間の比率における差は、Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ及びＮｕｒｍｉｎｅｎの方法（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ  １９８５）を使用して計算された対応する９５％ＣＩを伴って提示する。
【０４８５】
中心グリッド及びグリッド全体の両方での、平均感度におけるベースラインからの変化は、ベースライン値及び試験群（高用量、低用量、及び未処置）を共変数として含む、ＡＮＣＯＶＡモデルを使用して試験群間で比較する。試験群間の平均における差、及びその９５％ＣＩは、同じＡＮＣＯＶＡモデルから導出するものとする。
【０４８６】
参照による組込み
あらゆる相互参照または関連特許もしくは出願を含む、本明細書に引用した全ての文献は、明示的に除外されない限り、または別に限定されない限り、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。任意の文献の引用は、それが、本明細書に開示されたもしくは請求されたいずれかの発明に関する先行技術であること、または、それ単独で、もしくは任意の他の１つまたは複数の参考文献との任意の組み合わせで、任意のそのような発明を教示、示唆、もしくは開示することを認めるものではない。さらに、本文献中の用語の任意の意味または定義が、参照により組み込まれる文献における同じ用語の任意の意味または定義と矛盾する限りにおいて、本文献中でその用語に割付けられた意味または定義が適用されるものとする。
【０４８７】
他の実施形態
本開示の特定の実施形態を図示し、説明してきたが、本開示の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な他の変更及び修正を行うことができる。添付の特許請求の範囲は、本開示の範囲内にあるそのような全ての変更及び修正を含む。
【図１】
2022501376.tif 000022
【図２】
2022501376.tif 000023
【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ−１】
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【図１２Ａ−２】
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【図１２Ａ−３】
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【図１２Ａ−４】
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【図１２Ａ−５】
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【図１２Ａ−６】
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【図１２Ｂ−１】
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【図１２Ｂ−２】
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【図１２Ｂ−３】
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【図１２Ｂ−４】
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【図１２Ｂ−５】
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【図１２Ｂ−６】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２６Ａ】
2022501376.tif 000070
【図２６Ｂ】
2022501376.tif 000071
【図２６Ｃ】
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【図２６Ｄ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２７Ｃ】
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【図２８】
2022501376.tif 000077
【図２９】
2022501376.tif 000078
【図３０Ａ】
2022501376.tif 000079
【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
2022501376.tif 000090
【図３８】
2022501376.tif 000091
【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
2022501376.tif 000099
【図４６】
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【図４７】
2022501376.tif 000101
【図４８】
2022501376.tif 000102
【図４９】
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【図５０】
2022501376.tif 000104
【図５１】
2022501376.tif 000105
【図５２−１】
2022501376.tif 000106
【図５２−２】
2022501376.tif 000107
【図５３】
2022501376.tif 000108
【図５４】
2022501376.tif 000109
【図５５】
2022501376.tif 000110
【図５６】
2022501376.tif 000111
【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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