【手続補正書】
【提出日】平成22年9月24日(2010.9.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
宿主細胞において発現されるヒト化抗体またはその断片の産生量を増加させるための方法であって、以下：
ａ）非ヒト哺乳動物種由来の可変領域フレームワーク配列中の規定の位置において保存されるコンセンサス残基を同定する；
ｂ）該非ヒト哺乳動物種のヒト化抗体の可変領域フレームワーク配列中の対応する残基と、該コンセンサス残基を比較する；
ｃ）該ヒト化抗体の可変領域フレームワーク配列中の非コンセンサスアミノ酸残基を同定する；
ｄ）修飾ヒト化抗体またはその断片を産生するために、１以上の非コンセンサスアミノ酸残基を対応するコンセンサス残基と置換する；
ｅ）宿主細胞において、該修飾ヒト化抗体またはその断片を発現させる；そして
ｆ）該細胞から該修飾ヒト化抗体を単離する；
の工程を含み、
ここで該修飾ヒト化抗体の可変領域フレームワーク中の１以上の置換は、該非修飾ヒト化抗体について得られる産生量と比較して、該修飾ヒト化抗体またはその断片の該細胞からの産生量を増加させる、前記方法。
【請求項２】
１以上のアミノ酸が、生物物理学的理由から非コンセンサス残基に置き換えられる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
非ヒト哺乳動物種がマウスである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
宿主細胞が哺乳動物細胞である、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
断片が、抗原結合部位を含む、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
断片が、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、直鎖抗体、二重特異性抗体、からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
置換が重鎖中にある、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
置換が軽鎖中にある、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
置換が、重鎖および軽鎖の両方にある、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
置換が、可変領域フレームワーク配列のコア中にある、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
非コンセンサスアミノ酸がまれなアミノ酸である、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
ヒト化抗体がｈｕＣ２４２である、請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
ヒト化抗体がｈｕＣ２４２であり、そして置換が、Ｋａｂａｔ番号付けスキームによって決定される位の、配列番号１中の１６、２６、４６、もしくは８９より選択される１以上の重鎖可変領域位、または配列番号２中の軽鎖可変領域位４５もしくは７０、あるいは両方における置換であり、そして軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２によって示され、そして重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１によって示される、請求項１ないし１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
ヒト化抗体がｈｕＣ２４２であり、そして置換が、Ｋａｂａｔ抗体残基番号付けスキームによって決定されるアミノ酸残基の、軽鎖中のＱ４５Ｋ／ＲおよびＡ７０Ｄからなる群より選択される１以上であり、そして軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２によって示される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ヒト化抗体がｈｕＣ２４２であり、そして置換が、Ｋａｂａｔ抗体残基番号付けスキームによって決定されるアミノ酸残基の、重鎖中のアミノ酸残基Ｅ１６Ａ、Ｄ２６Ｇ、Ｋ４６ＥおよびＴ８９Ｖからなる群より選択される１つであり、そして重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１によって示される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
ヒト化抗体がｈｕＣ２４２であり、そして置換が、Ｋａｂａｔ抗体残基番号付けスキームによって決定されるアミノ酸残基の、軽鎖中のＱ４５Ｋ／ＲおよびＡ７０Ｄからなる群より選択される１以上、ならびに重鎖中のアミノ酸残基Ｅ１６Ａ、Ｄ２６Ｇ、Ｋ４６ＥおよびＴ８９Ｖからなる群より選択される１以上であり、そして軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２によって示され、そして重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１によって示される、請求項１３ないし１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
ヒト化抗体がｈｕＣ２４２であり、そして置換が、Ｋａｂａｔ抗体残基番号付けスキームによって決定されるアミノ酸残基の、重鎖中のアミノ酸残基Ｅ１６Ａ、Ｄ２６Ｇ、Ｋ４６Ｅ、Ｔ８９Ｖ、Ｋ４６Ｅ／Ｄ２６Ｇ、Ｋ４６Ｅ／Ｋ８２Ｓ、Ｋ４６Ｅ／Ｔ８９Ｖ、Ｋ４６Ｅ／Ｅ１６Ａ／Ｄ２６Ｇ、Ｋ４６Ｅ／Ｋ８２Ｓ／Ｄ２６ＧおよびＫ４６Ｅ／Ｔ８９Ｖ／Ｄ２６Ｇからなる群より選択される１つであり、そして重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１によって示される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
ヒト化抗体がｈｕＣ２４２であり、そして置換が、Ｋａｂａｔ抗体残基番号付けスキームによって決定されるアミノ酸残基の、軽鎖中のＡ７０ＤまたはＱ４５Ｋ／Ｒの１つ、および重鎖中のＫ４６Ｅ、Ｄ２６Ｇ、Ｋ４６Ｅ／Ｄ２６ＧまたはＫ４６Ｅ／Ｔ８９Ｖの１つであり、そして軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号２によって示され、そして重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号１によって示される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
細胞から単離される修飾ヒト化抗体またはその断片の産生量が、非修飾ヒト化抗体について得られる産生量よりも少なくとも２倍またはそれより多い産生量である、請求項１ないし１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１ないし１９のいずれか１項に記載の方法によって産生される抗体またはその断片。
【請求項２１】
単離された核酸であって、重鎖可変領域または軽鎖可変領域をコードする配列の領域中に少なくとも１つの変異を有する、修飾ヒトＣ２４２コード配列を含み、ここで、宿主細胞における該修飾ヒトＣ２４２コード配列の発現は、非修飾Ｃ２４２遺伝子が該宿主細胞において発現される場合よりも多くのＣ２４２抗体タンパク質を産生する、前記単離された核酸。
【請求項２２】
少なくとも１つの変異が、重鎖可変領域アミノ酸モチーフまたは軽鎖可変領域アミノ酸モチーフ、あるいはその両方、をコードする配列の領域中の変異を含む、請求項２１に記載の核酸。
【請求項２３】
モチーフ中の少なくとも１つの変異が、
Ｇｌｎ（ＣＡＧ）をコードするコドンのＬｙｓ（ＡＡＡ）またはＡｒｇ（ＣＧＧ）への置換；
Ａｌａ（ＧＣＴ）をコードするコドンのＡｓｐ（ＧＡＴ）への置換；
Ｇｌｕ（ＧＡＧ）をコードするコドンのＡｌａ（ＧＣＣ）への置換；
Ａｓｐ（ＧＡＣ）をコードするコドンのＧｌｙ（ＧＧＣ）への置換；
Ｌｙｓ（ＡＡＡ）をコードするコドンのＧｌｕ（ＧＡＡ）への置換；または
Ｔｈｒ（ＡＣＣ）をコードするコドンのＶａｌ（ＧＴＣ）への置換；
より選択される、請求項２２に記載の核酸。
【請求項２４】
コドンの置換が、軽鎖中または重鎖中で起こる、請求項２３に記載の核酸。
【請求項２５】
軽鎖置換が：
Ｑ４５Ｋ／Ｒ、ここでＧｌｎ（ＣＡＧ）はＬｙｓ（ＡＡＡ）またはＡｒｇ（ＣＧＧ）に置換される；あるいは
Ａ７０Ｄ、ここでＡｌａ（ＧＣＴ）はＡｓｐ（ＧＡＴ）に置換される；
より選択される、請求項２１ないし２４のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項２６】
重鎖置換が：
Ｅ１６Ａ、ここでＧｌｕ（ＧＡＧ）はＡｌａ（ＧＣＣ）に置換される；
Ｄ２６Ｇ、ここでＡｓｐ（ＧＡＣ）はＧｌｙ（ＧＧＣ）に置換される；
Ｋ４６Ｅ、ここでＬｙｓ（ＡＡＡ）はＧｌｕ（ＧＡＡ）に置換される；または
Ｔ８９Ｖ、ここでＴｈｒ（ＡＣＣ）はＶａｌ（ＧＴＣ）に置換される；
より選択される、請求項２１ないし２４のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項２７】
配列が変異体Ｃ２４２遺伝子産物をコードする、請求項２１ないし２６のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項２８】
遺伝子産物が抗体である、請求項２１ないし２７のいずれか１項に記載の核酸。
【請求項２９】
請求項２１ないし２７のいずれか１項に記載の核酸を含む細胞。
【請求項３０】
変異抗体であって、配列番号１［ｈｕＣ２４２］の重鎖および配列番号２［ｈｕＣ２４２］の軽鎖を含む可変領域を有する親抗体において１以上のアミノ酸置換を含み、ここで宿主細胞における該変異抗体の発現は、該親抗体が該宿主細胞において発現された場合よりも多くの変異抗体タンパク質を産生する、前記変異抗体。
【請求項３１】
置換が、Ｋａｂａｔ番号付けスキームによって決定される位置の、配列番号２中の４５および７０、あるいは前記配列番号１中の１６、２６、４６、または８９より選択される１以上の位置における置換である、請求項３０に記載の抗体。
【請求項３２】
前記置換が、Ｋａｂａｔ番号付けスキームによって決定される位置の、軽鎖中のＱ４５Ｋ／ＲまたはＡ７０Ｄ、あるいは、重鎖中のＥ１６Ａ、Ｄ２６Ｇ、Ｋ４６ＥまたはＴ８９Ｖからなる群より選択される、請求項３０または３１に記載のの抗体。
【請求項３３】
変異抗体が、そのエピトープ結合断片である、請求項３０ないし３２のいずれか１項に記載の変異抗体。
【請求項３４】
エピトープ結合断片が、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、直鎖抗体、二重特異性抗体、からなる群より選択される、請求項３３に記載の変異抗体。
【請求項３５】
宿主細胞において発現されるヒト化抗体またはその断片の産生量を増加させるための方法であって、以下：
ａ）非ヒト哺乳動物属由来の可変領域フレームワーク配列中の規定の位置において保存されるコンセンサス残基を同定する；
ｂ）該非ヒト哺乳動物属のヒト化抗体の可変領域フレームワーク配列中の対応する残基と、該コンセンサス残基を比較する；
ｃ）該ヒト化抗体の可変領域フレームワーク配列中の非コンセンサスアミノ酸残基を同定する；
ｄ）修飾ヒト化抗体またはその断片を産生するために、１以上の非コンセンサスアミノ酸残基を対応するコンセンサス残基と置換する；
ｅ）宿主細胞において該修飾ヒト化抗体を発現させる；そして
ｆ）該細胞から該修飾ヒト化抗体を単離する；
の工程を含み、
ここで該修飾ヒト化抗体の可変領域フレームワーク中の１以上の置換は、該非修飾ヒト化抗体について得られる産生量と比較して、該修飾ヒト化抗体またはその断片の該細胞からの産生量を増加させる、前記方法。
【請求項３６】
宿主細胞において発現される抗体またはその断片の産生量を増加させるための方法であって、以下：
ａ）非ヒト哺乳動物種由来の可変領域フレームワーク配列中の規定の位置において保存されるコンセンサス残基を同定する；
ｂ）該非ヒト哺乳動物種の候補抗体の可変領域フレームワーク配列中の対応する残基と、該コンセンサス残基を比較する；
ｃ）該候補抗体の可変領域フレームワーク配列中の非コンセンサスアミノ酸残基を同定する；
ｄ）修飾候補抗体またはその断片を産生するために、１以上の非コンセンサスアミノ酸残基を対応するコンセンサス残基と置換する；
ｅ）宿主細胞において該修飾候補抗体を発現させる；そして
ｆ）該細胞から該修飾候補抗体を単離する；
工程を含み、
ここで該修飾候補抗体の可変領域フレームワーク中の１以上の置換は、該非修飾候補抗体について得られる産生量と比較して、該修飾候補抗体またはその断片の該細胞からの産生量を増加させる、前記方法。