【手続補正書】
【提出日】平成22年8月4日(2010.8.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を含有してなる組み換え細菌。
【請求項２】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項１に記載の組み換え細菌。
【請求項３】
産生されたエタノールが、嫌気性条件下の無機塩培地中での非気体状発酵生成物の全量の５０％超を構成している、請求項１又は２に記載の組み換え細菌。
【請求項４】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体が、ｐｄｃ、ａｄｈＡ及びａｄｈＢを包含している、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体が、ザイモモナス・モビリス（Zymomonas mobilis）由来である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項６】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体がリボソームＲＮＡオペロンに組み込まれている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項７】
リボソームＲＮＡオペロンが、ｒｒｎＡ、ｒｒｌＥ、ｒｒｎＣ、ｒｒｎＤ、ｒｒｎＥ、ｒｒｎＧ及びｒｒｎＨからなる群より選択される遺伝子を包含する、請求項６に記載の組み換え細菌。
【請求項８】
組み換え細菌が抗生物質マーカーを含有していない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項９】
抗生物質マーカーが、アプラマイシン、カナマイシン、テトラサイクリン、アンピシリン及びクロラムフェニコールからなる群より選択される、請求項８に記載の組み換え細菌。
【請求項１０】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が除去又は不活性化されている、請求項１から９のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項１１】
除去又は不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、
（ａ）ＮＡＤＨ酸化のための発酵経路に関与しているタンパク質をコードする遺伝子；又は、
（ｂ）ピルビン酸代謝のための代替経路に関与しているタンパク質をコードする遺伝子；
である、請求項１０に記載の組み換え細菌。
【請求項１２】
除去又は不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域を包含している遺伝子、ｌｄｈＡ、ａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｆｒｄオペロン、ｃａｓＡＢ、及びｍｇｓＡからなる群より選択される、請求項１０又は１１に記載の組み換え細菌。
【請求項１３】
除去又は不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、内因性遺伝子である、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項１４】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子をさらに包含する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項１５】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が、分泌タンパク質、ポリサッカラーゼ、グルカナーゼ、エンドグルカナーゼ、エキソグルカナーゼ、セロビオヒドラーゼ、β−グルコシダーゼ、エンド−１，４−β−キシラナーゼ、β−キシロシダーゼ、α−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、アセチルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、β−グルカナーゼ、ヘミセルラーゼ、アラビノシダーゼ、マンナナーゼ、ペクチンヒドロラーゼ又はペクチン酸リアーゼをコードする遺伝子である、請求項１４に記載の組み換え細菌。
【請求項１６】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が、ｅｓｔＺ遺伝子である、請求項１４又は１５に記載の組み換え細菌。
【請求項１７】
ｅｓｔＺ遺伝子が、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）由来のものである、請求項１６に記載の組み換え細菌。
【請求項１８】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が、ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子を包含している、請求項１４又は１５に記載の組み換え細菌。
【請求項１９】
ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子が、大腸菌（Escherichia coli）由来のものである、請求項１８に記載の組み換え細菌。
【請求項２０】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が、ｃｅｌＹ遺伝子を包含している、請求項１４又は１５に記載の組み換え細菌。
【請求項２１】
ｃｅｌＹ遺伝子が、黒脚病菌（Erwinia chrysanthemi）由来のものである、請求項２０に記載の組み換え細菌。
【請求項２２】
さらにｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域を包含しており、当該ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域が内因性の遺伝子領域であるか又は大腸菌（Escherichia coli）由来のものである、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項２３】
細菌が、
（ａ）アシネトバクター属（Acinetobacter）、グルコノバクター属（Gluconobacter）、エシェリキア属（Escherichia）、ザイモモナス属（Zymomonas）、ジオバクター属（Geobacter）、シェワネラ属（Shewanella）、サルモネラ属（Salmonella）、シゲラ属（Shigella）、エンテロバクター属（Enterobacter）、シトロバクター属（Citrobacter）、エルウィニア属（Erwinia）、セラチア属（Serratia）、プロテウス属（Proteus）、ハフニア属（Hafnia）、エルシニア属（Yersinia）、モルガネラ属（Morganella）、エドワードジエラ属（Edwardsiella）及びクレブシエラ属（Klebsiella）からなる群より選択されるグラム陰性細菌；
（ｂ）大腸菌（Escherichia coli.）；又は、
（ｃ）バチルス属（Bacillus）、クロストリジウム属（Clostridium）、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）、ジオバチラス属（Geobacillus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ラクトコッカス属（Lactococcus）、オエノコッカス属（Oenococcus）、連鎖球菌属（Streptococcus）及びユーバクテリウム属（Eubacterium）からなる群より選択されるグラム陽性細菌；
である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項２４】
細菌が、
（ａ）大腸菌ＫＯ１１株（ＡＴＣＣ５５１２４）由来である；
（ｂ）大腸菌ＳＺ１１０株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）由来である；
（ｃ）大腸菌ＬＹ１６５株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５２）である；
（ｄ）大腸菌ＬＹ１６８株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５３）である；又は
（ｅ）株ＬＹ１４９、ＬＹ１５１、ＬＹ１５８、ＬＹ１５９、ＬＹ１６０、ＬＹ１６０ｉｍ、ＬＹ１６１、ＬＹ１６３、ＬＹ１６８ｉｍ、ＬＹ１６９、ＬＹ１７０、ＬＹ１７２、ＬＹ１７２ｉｍ、ＬＹ１７３、ＬＹ１７８、ＬＹ１８０、ＬＹ１８６、ＢＷ３４−ＸＺ１０６、ＢＷ３４−ＸＺ１０７、ＢＷ３４−ＸＺ１０８、ＢＷ３４−ＸＺ１０９、ＢＷ３４−ＸＺ１１０、ＢＷ３４−ＸＺ１１１、ＢＷ３４−ＸＺ１１２、ＢＷ３４−ＸＺ１１３、ＢＷ３４−ＸＺ１１４、ＢＷ３４−ＸＺ１１５、ＢＷ３４−ＸＺ１１６、ＢＷ３４−ＸＺ１１７、ＢＷ３４−ＸＺ１１８、ＢＷ３４−ＸＺ１１９、ＢＷ３４−ＸＺ１２０、ＢＷ３４−ＸＺ１２１、ＢＷ３４−ＸＺ１２２、ＢＷ３４−ＸＺ１２３及びＢＷ３４−ＸＺ１２４からなる群から選ばれるいずれか１つである、
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項２５】
（ａ）細菌が嫌気性条件下でエタノールを発酵主生成物として産生する；又は
（ｂ）組み換え細菌が無機塩培地で生育できる、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項２６】
無機塩培地が
（ａ）キシロース；又は、
（ｂ）ベタイン；
の少なくとも１種を含有している、請求項２５に記載の組み換え細菌。
【請求項２７】
大腸菌ＳＺ１１０株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）、ＬＹ１６５株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５２）、又はＬＹ１６８株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５３）。
【請求項２８】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を宿主細菌に組み込み、それによって異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌を産生する工程を包含している、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組み換え細菌を産生する方法。
【請求項２９】
オリゴ糖源を請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組み換え細菌とエタノール産生に適した条件下で接触させ、それによりオリゴ糖源からエタノールを産生することを包含する、エタノールをオリゴ糖源から産生する方法。