【手続補正書】
【提出日】平成22年8月5日(2010.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インスリン活性を有し、かつ、インスリン類似体のN末端、C末端、または両末端と融合したアルブミンまたはその変異体を含む融合タンパク質であって、インスリン類似体が以下からなる群より選択される式を有する、融合タンパク質：
（a）-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、Xはアルブミンの断片を含むポリペプチドであり、アルブミンの断片は約6〜約30アミノ酸長である；
（b）-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、Xは、KK、KR、RK、およびRRからなる群より選択される連続した2つの塩基性アミノ酸残基の配列を含まないポリペプチドである；
（c）-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、Xは完全長インスリンC-ペプチドを含まないポリペプチドである；
（d）-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、XはIGF-I C-ペプチドの断片を含むポリペプチドであり、ここで、Xは約6〜約30アミノ酸長のポリペプチドである；および
（e）-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、Xは配列-G-Z1-G-Z2n-を有するポリペプチドであって；Z1はチロシンではなく；Z2はn＝0〜10のアミノ酸である。
【請求項２】
アルブミンの断片が、
2010500031.tif 000001
（CoGenesys連結配列No.1）、
2010500031.tif 000002
（CoGenesys連結配列No.2）および
2010500031.tif 000003
（CoGenesys連結配列No.3）からなる群より選択される、請求項1（a）記載の融合タンパク質。
【請求項３】
Xが、アミノ酸配列
2010500031.tif 000004
（CoGenesys連結配列No.7）を有するポリペプチドである、請求項1（c）記載の融合タンパク質。
【請求項４】
（a）Xが、
2010500031.tif 000005
（CoGenesys連結配列No.5）および
2010500031.tif 000006
（CoGenesys連結配列No.6）からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドである；または、
（b）Xが、配列-G-Z1-G-Z2n-P-Q-T-を有するポリペプチドである、
請求項1（e）記載の融合タンパク質。
【請求項５】
（a）Xがチロシン残基を含まないポリペプチドである；または、
（b）Xがポリペプチドのアミノ酸2位にチロシン残基を含まないポリペプチドである、
請求項1（d）または1（e）記載の融合タンパク質。
【請求項６】
アルブミンの断片またはXポリペプチドが、KK、KR、RK、およびRRからなる群より選択される連続した2つの塩基性アミノ酸残基の配列を含まない、請求項1（a）、1（c）、1（d）、または1（e）記載の融合タンパク質。
【請求項７】
請求項1の（a）におけるアルブミンの断片、または請求項1の（b）におけるXポリペプチドが、リジン残基またはアルギニン残基を含まない、請求項1〜6のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項８】
Xが約6〜約30アミノ酸長のポリペプチドである、請求項1（b）、1（c）、または1（e）記載の融合タンパク質。
【請求項９】
（a）IGF-I受容体と結合しないか、もしくは、IGF-Iよりも低い（例えば、IGF-I受容体に対するIGF-Iの親和性を基準として約80％、約60％、約40％、約20％、約10％、もしくは約5％を超えない）親和性で結合する；または
（b）マイトジェン活性を示さないか、もしくは、IGF-Iを基準として約50％を超えない（もしくは、好ましくはIGF-Iを基準として約30％を超えない、もしくは、より好ましくはIGF-Iを基準として約10％を超えない）マイトジェン活性を示す、
請求項1〜8のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
（a）アルブミンまたはその変異体が、インスリン類似体のN末端と融合されている；
（b）アルブミンまたはその変異体が、インスリン類似体のC末端と融合されている；または、
（c）アルブミンまたはその変異体が、インスリン類似体のN末端およびC末端と融合されている、
請求項1〜9のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
N末端リーダー配列またはシグナル配列をさらに含む、請求項1〜10のいずれか一項記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
N末端リーダー配列またはシグナル配列が、
（a）アルブミンリーダー配列、インスリンリーダー配列、MPIF-1シグナル配列、スタニオカルシンシグナル配列、インベルターゼシグナル配列、酵母接合因子αシグナル配列、K.ラクティス（K. lactis）キラー毒素リーダー配列、免疫グロブリンIgシグナル配列、フィビュリン（Fibulin）B前駆体シグナル配列、クラスタリン前駆体シグナル配列、インスリン様増殖因子結合タンパク質4シグナル配列、酸ホスファターゼ（PHO5）リーダー、MFoz-1のプレ配列、Oグルカナーゼ（BGL2）のプレ配列、S.ディアスタティクス（S. diastaticus）グルコアミラーゼII分泌リーダー配列；S.カールスベルゲンシス（S. carlsbergensis）αガラクトシダーゼ（MEL1）分泌リーダー配列；カンジダグルコアミラーゼリーダー配列；バキュロウイルス発現系に用いるためのgp67シグナル配列；およびS.セレビシエ（S. cerevisiae）インベルターゼ（SUC2）リーダーからなる群より選択される;または、
（b）
ハイブリッドシグナル配列
（
2010500031.tif 000007
）；HSA／MFα-1ハイブリッドシグナル配列
（
2010500031.tif 000008
）；K.ラクティスキラー／MFα-1融合リーダー配列
（
2010500031.tif 000009
）；HSAのプレ-プロ領域の変異体
（
2010500031.tif 000010
）；HSAのプレ-プロ領域の変異体
（
2010500031.tif 000011
）；HSAのプレ-プロ領域の変異体
（
2010500031.tif 000012
）；HSAのプレ-プロ領域の変異体
（
2010500031.tif 000013
）；改変HSAリーダー
（
2010500031.tif 000014
）；改変HSAリーダー
（
2010500031.tif 000015
）；改変HSA（A14）リーダー
（
2010500031.tif 000016
）；改変HSA（S14）リーダー
（
2010500031.tif 000017
）、改変HSA（G14）リーダー
（
2010500031.tif 000018
）；改変HSA（G14）リーダー
（
2010500031.tif 000019
）；コンセンサスシグナル配列
（
2010500031.tif 000020
）；K.ラクティスキラー毒素プレプロ配列
（
2010500031.tif 000021
）；および、イヌリナーゼ配列
（
2010500031.tif 000022
）からなる群より選択される、
請求項11記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
請求項1〜12のいずれか一項記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項13記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１５】
請求項14記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１６】
請求項15記載の宿主細胞を発酵させる段階を含む、アルブミン-インスリン融合タンパク質を調製するための方法。
【請求項１７】
請求項1〜12のいずれか一項記載の融合タンパク質と薬学的添加剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項１８】
（a）エアロゾル投薬形態;
（b）鼻送達のために製剤化されているエアロゾル投薬形態;
（c）肺送達のために製剤化されているエアロゾル投薬形態;
（d）鼻送達および肺送達のために製剤化されているエアロゾル投薬形態;
（e）液体エアロゾル投薬形態;
（f）乾燥粉末エアロゾル投薬形態;
（g）噴射剤を利用するpMDIに用いるために製剤化されているエアロゾル投薬形態;
（h）非CFC噴射剤である噴射剤を利用するpMDIに用いるために製剤化されているエアロゾル投薬形態;
（i）噴霧乾燥粉末エアロゾル；
（j）凍結乾燥粉末エアロゾル；または、
（k）これらの任意の組み合わせ
からなる群より選択される投薬形態へ製剤される、請求項17記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
液体エアロゾルが、以下からなる群より選択される平均直径を有する液滴を含む、請求項18記載の薬学的エアロゾル組成物：
（a）約2〜約10ミクロン；
（b）約2〜約6ミクロン；
（c）約2ミクロン未満；
（d）約5〜約100ミクロン；および
（e）30〜約60ミクロン。
【請求項２０】
医用薬剤を調製するための、請求項18記載の薬学的組成物の使用であって、医用薬剤が代謝障害の治療において有用である、使用。
【請求項２１】
代謝障害が糖尿病である、請求項20記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
アルブミン-インスリン融合タンパク質の医薬製剤にはエアロゾル製剤が含まれうる。適したエアロゾル製剤には、本質的にすべての吸入粒子がアルブミン-インスリン融合タンパク質を含む、肺送達、鼻送達またはその両方のための水性製剤、噴射剤を利用する製剤、または噴射剤を利用しない製剤が含まれうる。アルブミン-インスリン融合タンパク質の適したエアロゾル製剤には、乾燥粉末エアロゾル製剤（例えば、乾燥粉末、噴射剤を利用するエアロゾル製剤）が含まれうる。アルブミン-インスリン融合タンパク質は、エアロゾル製剤中に任意の適した濃度または濃度範囲で存在しうる。水性エアロゾル製剤に関しては、アルブミン-インスリン融合タンパク質は例えば、約0.05mg／mL、約0.1mg／mL、約2mg／mL、約40mg／mLまたは約100mg／mLから約600mg／mLまで、約0.05mg／g、約0.1mg／g、約2mg／g、約40mg／gまたは約100mg／gから約990mg／gまでの濃度範囲（または0.1mg／mLから最大600mg／mLまでの間の1mg／g刻みの任意の増分）で存在しうる。アルブミン-インスリン融合タンパク質のエアロゾル製剤は、肺内腔、鼻内腔またはその両方の適切な領域へのアルブミン-インスリン融合タンパク質の有効な送達を与えることができる。いくつかの態様において、エアロゾル製剤は、約120秒未満、好ましくは約60秒未満、より好ましくは約30秒未満、最も好ましくは約15秒未満で、肺にアルブミン-インスリン融合タンパク質の有効濃度を送達することができる。
[請求項101]
インスリン活性を有し、かつ、インスリン類似体のN末端、C末端、または両末端と融合したアルブミンまたはその変異体を含む融合タンパク質であって、インスリン類似体が以下からなる群より選択される式を有する、融合タンパク質:
(a)-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、Xはアルブミンの断片を含むポリペプチドであり、アルブミンの断片は約6〜約30アミノ酸長である;
(b)-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、Xは、KK、KR、RK、およびRRからなる群より選択される連続した2つの塩基性アミノ酸残基の配列を含まないポリペプチドである;
(c)-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、Xは完全長インスリンC-ペプチドを含まないポリペプチドである;
(d)-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、XはIGF-I C-ペプチドの断片を含むポリペプチドであり、ここで、Xは約6〜約30アミノ酸長のポリペプチドである;および
(e)-B(1-30)-X-A(1-21)-、式中、Xは配列-G-Z1-G-Z2n-を有するポリペプチドであって;Z1はチロシンではなく;Z2はn=0〜10のアミノ酸である。
[請求項102]
アルブミンの断片が、
2010500031.tif 000023
(CoGenesys連結配列No.1)、
2010500031.tif 000024
(CoGenesys連結配列No.2)および
2010500031.tif 000025
(CoGenesys連結配列No.3)からなる群より選択される、請求項101(a)記載の融合タンパク質。
[請求項103]
Xが、アミノ酸配列
2010500031.tif 000026
(CoGenesys連結配列No.7)を有するポリペプチドである、請求項101(c)記載の融合タンパク質。
[請求項104]
Xが、
2010500031.tif 000027
(CoGenesys連結配列No.5)および
2010500031.tif 000028
(CoGenesys連結配列No.6)からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドである、請求項101(e)記載の融合タンパク質。
[請求項105]
Xがチロシン残基を含まないポリペプチドである、請求項101(d)または101(e)記載の融合タンパク質。
[請求項106]
Xが、ポリペプチドのアミノ酸2位にチロシン残基を含まないポリペプチドである、請求項101(d)または101(e)記載の融合タンパク質。
[請求項107]
Xが、配列-G-Z1-G-Z2n-P-Q-T-を有するポリペプチドである、請求項101(e)記載の融合タンパク質。
[請求項108]
アルブミンの断片またはXポリペプチドが、KK、KR、RK、およびRRからなる群より選択される連続した2つの塩基性アミノ酸残基の配列を含まない、請求項101(a)、101(c)、101(d)、または101(e)記載の融合タンパク質。
[請求項109]
101(a)におけるアルブミンの断片、または101(b)におけるXポリペプチドが、リジン残基またはアルギニン残基を含まない、請求項101〜108のいずれか一項記載の融合タンパク質。
[請求項110]
Xが約6〜約30アミノ酸長のポリペプチドである、請求項101(b)、101(c)、または101(e)記載の融合タンパク質。
[請求項111]
(a)IGF-I受容体と結合しないか、もしくは、IGF-Iよりも低い(例えば、IGF-I受容体に対するIGF-Iの親和性を基準として約80%、約60%、約40%、約20%、約10%、もしくは約5%を超えない)親和性で結合する;または
(b)マイトジェン活性を示さないか、もしくは、IGF-Iを基準として約50%を超えない(もしくは、好ましくはIGF-Iを基準として約30%を超えない、もしくは、より好ましくはIGF-Iを基準として約10%を超えない)マイトジェン活性を示す、
請求項101〜110のいずれか一項記載の融合タンパク質。
[請求項112]
アルブミンまたはその変異体が、インスリン類似体のN末端と融合されている、請求項101〜111のいずれか一項記載の融合タンパク質。
[請求項113]
アルブミンまたはその変異体が、インスリン類似体のC末端と融合されている、請求項101〜112のいずれか一項記載の融合タンパク質。
[請求項114]
アルブミンまたはその変異体が、インスリン類似体のN末端およびC末端と融合されている、請求項101〜113のいずれか一項記載の融合タンパク質。
[請求項115]
N末端リーダー配列またはシグナル配列をさらに含む、請求項101〜114のいずれか一項記載の融合タンパク質。
[請求項116]
N末端リーダー配列またはシグナル配列が、アルブミンリーダー配列、インスリンリーダー配列、MPIF-1シグナル配列、スタニオカルシンシグナル配列、インベルターゼシグナル配列、酵母接合因子αシグナル配列、K.ラクティス(K. lactis)キラー毒素リーダー配列、免疫グロブリンIgシグナル配列、フィビュリン(Fibulin)B前駆体シグナル配列、クラスタリン前駆体シグナル配列、インスリン様増殖因子結合タンパク質4シグナル配列、酸ホスファターゼ(PHO5)リーダー、MFoz-1のプレ配列、Oグルカナーゼ(BGL2)のプレ配列、S.ディアスタティクス(S. diastaticus)グルコアミラーゼII分泌リーダー配列;S.カリスベルゲンシス(S. carisbergensis)αガラクトシダーゼ(MEL1)分泌リーダー配列;カンジダグルコアミラーゼリーダー配列;バキュロウイルス発現系に用いるためのgp67シグナル配列;およびS.セレビシエ(S. cerevisiae)インベルターゼ(SUC2)リーダーからなる群より選択される、請求項115記載の融合タンパク質。
[請求項117]
N末端リーダー配列またはシグナル配列が、
(
2010500031.tif 000029
);HSA/MFα-1ハイブリッドシグナル配列
(
2010500031.tif 000030
);K.ラクティスキラー/MFα-1融合リーダー配列
(
2010500031.tif 000031
);HSAのプレ-プロ領域の変異体
(
2010500031.tif 000032
);HSAのプレ-プロ領域の変異体
(
2010500031.tif 000033
);HSAのプレ-プロ領域の変異体
(
2010500031.tif 000034
);HSAのプレ-プロ領域の変異体
(
2010500031.tif 000035
);改変HSAリーダー
(
2010500031.tif 000036
);改変HSAリーダー
(
2010500031.tif 000037
);改変HSA(A14)リーダー
(
2010500031.tif 000038
);改変HSA(S14)リーダー
(
2010500031.tif 000039
)、改変HSA(G14)リーダー
(
2010500031.tif 000040
);改変HSA(G14)リーダー
(
2010500031.tif 000041
);コンセンサスシグナル配列
(
2010500031.tif 000042
);K.ラクティスキラー毒素プレプロ配列
(
2010500031.tif 000043
);および、イヌリナーゼ配列
(
2010500031.tif 000044
)からなるハイブリッドシグナル配列の群より選択される、請求項115記載の融合タンパク質。
[請求項118]
請求項101〜117のいずれか一項記載の融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
[請求項119]
請求項118記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
[請求項120]
請求項119記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
[請求項121]
請求項120記載の宿主細胞を発酵させる段階を含む、アルブミン-インスリン融合タンパク質を調製するための方法。
[請求項122]
請求項101〜117のいずれか一項記載の融合タンパク質と薬学的添加剤とを含む、薬学的組成物。
[請求項123]
請求項101〜117のいずれか一項記載の融合タンパク質と薬学的添加剤とを含む、薬学的エアロゾル組成物。
[請求項124]
鼻送達、肺送達、またはその両方のために製剤化されている、請求項123記載の薬学的エアロゾル組成物。
[請求項125]
液体エアロゾルまたは乾燥粉末エアロゾルである、請求項124記載の薬学的エアロゾル組成物。
[請求項126]
液体エアロゾルが、以下からなる群より選択される平均直径を有する液滴を含む、請求項125記載の薬学的エアロゾル組成物:
(a)約2〜約10ミクロン;
(b)約2〜約6ミクロン;
(c)約2ミクロン未満;
(d)約5〜約100ミクロン;および
(e)30〜約60ミクロン。
[請求項127]
乾燥粉末エアロゾルが、噴霧乾燥粉末エアロゾルまたは凍結乾燥粉末エアロゾルである、請求項125記載の薬学的エアロゾル組成物。
[請求項128]
請求項101〜117のいずれか一項記載の融合タンパク質を含む、噴射剤を利用するpMDIに用いるための薬学的エアロゾル組成物。
[請求項129]
噴射剤が非CFC噴射剤である、請求項128記載の薬学的エアロゾル組成物。
[請求項130]
医用薬剤を調製するための、請求項122記載の薬学的組成物の使用であって、医用薬剤が代謝障害の治療において有用である、使用。
[請求項131]
代謝障害が糖尿病である、請求項130記載の方法。