【手続補正書】
【提出日】平成22年4月21日(2010.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造を有するオリゴ糖鎖：
2009538386.tif 000001
及び以下の構造を有するオリゴ糖鎖：
2009538386.tif 000002
を含む低分子量ヘパリン（LMWH）組成物：
式中、RはHまたはSO3Naであり；
R1はSO3NaまたはCOCH3であり；
n＝2〜50であり；かつ
組成物は以下の性質を有する：
（ａ）nの平均値が9〜16であり、
（ｂ）モル％によって測定したΔUHNAc,6SGHNS,3S,6Sが5〜15％であり、
（ｃ）重量平均分子量が5500〜8500 Daであり、
（ｄ）抗Xa活性が120〜380 IU/mgであり、
（ｅ）抗Xa活性対抗IIa活性の比が2:1から1:1であり、かつ
（ｆ）（ｅ）の比が対象への投与後30〜120分の間一定である。
【請求項２】
組成物が70〜280 IU/mgの抗IIa活性を有する、請求項１記載のLMWH組成物。
【請求項３】
組成物の重量平均分子量が5700〜7900 Daである、先行するいずれか一項記載のLMWH組成物。
【請求項４】
組成物における鎖の総数の15〜35％が非還元末端でΔ4,5非硫酸化ウロン酸を有する、先行するいずれか一項記載のLMWH組成物。
【請求項５】
組成物における鎖の少なくとも60％が還元末端でN-アセチル化ヘキソサミンを有する、先行するいずれか一項記載のLMWH組成物。
【請求項６】
組成物における鎖の少なくとも80％が還元末端でN-アセチル化ヘキソサミンを有する、先行するいずれか一項記載のLMWH組成物。
【請求項７】
1000 ng/mg未満のへパリナーゼ酵素；1％w/w未満のメタノール；1％w/w未満のエタノール；および2000 ppm未満の遊離の硫酸塩を有する、先行するいずれか一項記載のLMWH組成物。
【請求項８】
抗Xa活性が150〜350 IU/mgである、先行するいずれか一項記載のLMWH組成物。
【請求項９】
抗IIa活性が90〜250 IU/mgである、先行するいずれか一項記載のLMWH組成物。
【請求項１０】
抗IIa活性が100〜250 IU/mgである、先行するいずれか一項記載のLMWH組成物。
【請求項１１】
請求項1〜10のいずれか一項記載のLMWH組成物と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項１２】
組成物が凍結乾燥された、請求項11記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
組成物が液体である、請求項11記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
血栓障害を有するまたはそのリスクを有する対象を処置するために使用される、請求項1〜10のいずれか一項記載のLMWH組成物または請求項11〜13のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
障害が急性冠動脈症候群（ACS）である、請求項14記載の組成物。
【請求項１６】
障害が心筋梗塞である、請求項14記載の組成物。
【請求項１７】
障害がST上昇型心筋梗塞または非ST上昇型心筋梗塞である、請求項16記載の組成物。
【請求項１８】
障害が外科的介入に関連している、請求項14記載の組成物。
【請求項１９】
外科的介入が、血管形成術、経皮的冠動脈インターベンション（PCI）、およびステント留置からなる群より選択される、請求項18記載の組成物。
【請求項２０】
対象が外科的介入を有しうる、外科的介入のリスクを有しうる、または外科的介入から回復しつつある、請求項18記載の組成物。
【請求項２１】
対象が冠動脈バイパス移植手術（CABG）のリスクを有する、請求項20記載の組成物。
【請求項２２】
障害が安定または不安定狭心症である、請求項14記載の組成物。
【請求項２３】
凝固アッセイを用いてLMWH組成物の活性がモニターされうる、請求項14記載の組成物。
【請求項２４】
凝固アッセイが、活性化凝固時間（ACT）または活性化部分トロンボプラスチン時間（aPTT）である、請求項23記載の組成物。
【請求項２５】
LMWH組成物の抗Xa活性または抗IIa活性の一部または全てが硫酸プロタミンによって中和されうる、請求項14〜24のいずれか一項記載の組成物。
【請求項２６】
LMWH組成物がCABGの前に中和されうる、請求項25記載の組成物。
【請求項２７】
硫酸プロタミンを含む薬学的組成物であって、硫酸プロタミンが、請求項1〜10のいずれか一項記載のLMWH組成物または請求項11〜13のいずれか一項記載の薬学的組成物を投与されかつ退院前に外科的介入の候補者であると分類された患者における抗Xa活性または抗IIa活性の一部または全てを中和するために使用される、薬学的組成物。
【請求項２８】
外科的介入前、外科的介入中、および外科的介入後の一つもしくは複数、または全てでLMWH組成物の抗Xa活性または抗IIa活性がモニターされうる、請求項27記載の組成物。
【請求項２９】
外科的介入がCABGである、請求項27および28のいずれか一項記載の組成物。
【請求項３０】
以下の段階を含む、請求項1〜10のいずれか一項記載のLMWH組成物を製造する方法：
（1）未分画ヘパリン（UFH）試料を、極性の有機溶媒、極性の非有機溶媒、および塩による第一の沈殿に供して、第一の上清を提供する段階；
（2）第一の上清を、極性の有機溶媒および極性の非有機溶媒による第二の沈殿に供して、沈殿物を生じる段階；
（3）沈殿物を可溶化して、非硫酸化ウロン酸連結を切断する酵素によって可溶化沈殿物を切断する段階；
（4）切断された調製物を塩および極性の有機溶媒によって沈殿させて、二糖8〜14個の平均鎖長を有する固体を形成する段階；
（5）固体からの材料をサイズ選択段階に供して、二糖9〜16個の平均鎖長を有する調製物を提供し、それによってLMWH組成物を作製する段階。
【請求項３１】
以下の段階含む、請求項1〜10のいずれか一項記載のLMWH組成物を作製する方法：
二糖8〜14個の平均鎖長を有する前駆体LMWH組成物を提供する段階；および
前駆体LMWH組成物を処理して、二糖9〜16個の平均鎖長を有するLMWHを得る段階。
【請求項３２】
（1）未分画ヘパリン（UFH）試料を、極性の有機溶媒、極性の非有機溶媒、およびナトリウム塩による第一の沈殿に供して、第一の上清を提供する段階；ならびに
（2）第一の上清を、極性の有機溶媒、および極性の非有機溶媒による第二の沈殿に供して、沈殿物を生成する段階
を含み、それによってLMWH組成物を作製する、請求項1〜10のいずれか一項記載のLMWH組成物を作製する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４３】
本発明の他の特色および長所は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
[請求項101]
約5000〜9000 Daの重量平均分子量を有し、かつ
約70〜280の抗IIa活性を有する、
LMWH組成物。
[請求項102]
約100〜250 IU/mgの抗IIa活性を有する、請求項101記載のLMWH組成物。
[請求項103]
約5000〜9000 Daの重量平均分子量を有し、かつ
ACTまたはaPTTによって測定した場合にプロタミンによって少なくとも70%中和可能(neutralizable)である抗IIa活性を有する、
LMWH組成物。
[請求項104]
抗IIa活性がプロタミンの投与後約30分以内に少なくとも70%中和される、請求項103記載のLMWH組成物。
[請求項105]
約5000〜9000 Daの重量平均分子量を有し、かつ
組成物の5〜15%でΔUHNAc,6SGHNS,3S,6Sを有する、
LMWH組成物。
[請求項106]
二糖約9〜16個の平均鎖長を有し、かつ
組成物の5〜15%でΔUHNAc,6SGHNS,3S,6Sを有する、
LMWH組成物。
[請求項107]
重量平均分子量が約5500〜8500 Daである、請求項101、103、および105のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項108]
約100〜400 IU/mgの抗Xa活性をさらに含む、請求項101、103、105、および106のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項109]
約150〜300 IU/mgの抗Xa活性を有する、請求項108記載のLMWH組成物。
[請求項110]
抗Xa活性がACTまたはaPTTによって測定した場合に少なくとも70%中和可能である、請求項108記載のLMWH組成物。
[請求項111]
抗Xa活性がプロタミン投与後30分以内に少なくとも70%中和される、請求項110記載のLMWH組成物。
[請求項112]
抗Xa活性が、血漿の抗Xa 100 IU当たり約1〜2 mgのLMWH組成物の用量で、プロタミンの投与後30分以内に、少なくとも70%中和されうる、請求項111記載のLMWH組成物。
[請求項113]
5000〜9000 Daの重量平均分子量を有し、かつ
2:1またはそれ未満の抗Xa 対 抗IIa比を含む、
LMWH組成物。
[請求項114]
重量平均分子量が約5500〜8500 Daである、請求項113記載のLMWH組成物。
[請求項115]
組成物の活性がaPTTおよびACTによってモニターされうる、請求項101、103、105、106、および112のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項116]
鎖の非還元末端でΔUおよびI/G構造の混合物を含む、請求項101、103、105、106、および112のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項117]
組成物における鎖の総数の約15%〜35%が非還元末端でΔUを有する、請求項101、103、105、106、および112のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項118]
組成物における鎖の総数の80%またはそれより多くが非還元末端で非硫酸化ΔUを有する、請求項117記載のLMWH組成物。
[請求項119]
組成物における鎖の総数の5%未満が改変還元末端構造を有する、請求項101、103、105、106、および112のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項120]
組成物における鎖の総数の少なくとも60%またはそれより多くが還元末端においてHNAcを含む、請求項101、103、105、106、および112のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項121]
以下の一つまたは複数を有する、請求項101、103、105、106、または112のいずれか一項記載のLMWH組成物:
3%未満のカルシウム含有量;30%未満のナトリウム含有量;1000 ng/mg未満のへパリナーゼ酵素;1.0%w/w未満のメタノール;1.0%w/w未満のエタノール;2.0%未満の塩化物;10重量%未満の水;および2000 ppm未満の遊離の硫酸塩。
[請求項122]
LMWHがエノキサパリンと比較してTFPI放出の少なくとも2倍の増加を提供する、請求項101、103、105、106、または112のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項123]
約30分〜3時間の静脈内半減期を有する、請求項101、103、105、106、または112のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項124]
約1.5〜2.5時間の皮下半減期を有する、請求項101、103、105、106、または112のいずれか一項記載のLMWH組成物。
[請求項125]
以下の構造を有するLMWH組成物:
2009538386.tif 000003
式中
2009538386.tif 000004
RはHまたはSO3Naであり;
R1はSO3NaまたはCOCH3であり;
n=2〜50であり;かつ
組成物は好ましくはnの平均値9〜16、または8〜15を有する。
[請求項126]
以下の構造を有するLMWH組成物:
2009538386.tif 000005
式中
2009538386.tif 000006
XはNaまたはCaであり、RはHまたはSO3Naであり;
R1はSO3NaまたはCOCH3であり;
n=2〜45であり;かつ
組成物は好ましくはnの平均値7〜13、または8〜12を有する。
[請求項127]
以下の構造を有するLMWH組成物:
2009538386.tif 000007
式中、XはNaまたはCaであり、RはHまたはSO3Naであり;
R1はSO3NaまたはCOCH3であり;
n=2〜50であり;かつ
組成物は好ましくはnの平均値9〜16、または8〜15を有する。
[請求項128]
以下の特徴の一つまたは複数を含むLMWH組成物:
組成物が改変された還元末端構造を実質的に有しないこと;組成物の鎖の少なくとも60%が還元末端でHNAcを有すること;組成物の鎖の90%未満が非還元末端で硫酸化ΔUを有すること;組成物に連結領域が実質的に存在しないこと;組成物が3-O硫酸塩を有する鎖をエノキサパリンまたはダルテパリンより多く有すること;および組成物におけるΔUHNAc,6SGHNS,3S,6S 対 ΔU2SHNS,6SIHNAc,6SGHNS,3S,6Sの比が約4:1またはそれ未満であること。
[請求項129]
組成物が、前記特徴の全てを有する、請求項128記載のLMWH組成物。
[請求項130]
請求項101、103、105、106、112、または125のいずれか一項記載のLMWH組成物と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
[請求項131]
請求項101、103、105、106、112、または125のいずれか一項記載の組成物を対象に投与して、それによって障害を処置する段階を含む、血栓障害を有するまたはそのリスクを有する対象を処置する方法。
[請求項132]
障害が急性冠動脈症候群(ACS)である、請求項131記載の方法。
[請求項133]
障害が心筋梗塞である、請求項131記載の方法。
[請求項134]
障害がST上昇型心筋梗塞または非ST上昇型心筋梗塞である、請求項133記載の方法。
[請求項135]
障害が外科的介入に関連している、請求項131記載の方法。
[請求項136]
外科的介入が、血管形成術、経皮的冠動脈インターベンション(PCI)、およびステント留置からなる群より選択される、請求項135記載の方法。
[請求項137]
対象が外科的介入を有しうる、外科的介入のリスクを有しうる、または外科的介入から回復しつつある、請求項135記載の方法。
[請求項138]
対象が冠動脈バイパス移植手術(CABG)のリスクを有する、請求項137記載の方法。
[請求項139]
障害が安定または不安定狭心症である、請求項131記載の方法。
[請求項140]
凝固アッセイを用いてLMWH組成物の活性をモニターする段階をさらに含む、請求項131記載の方法。
[請求項141]
凝固アッセイが、活性化凝固時間(ACT)または活性化部分トロンボプラスチン時間(aPTT)である、請求項140記載の方法。
[請求項142]
LMWH組成物の抗Xa活性または抗IIa活性の一部または全てを中和するためにLMWH組成物の投与後に硫酸プロタミンを投与する段階をさらに含む、請求項131記載の方法。
[請求項143]
LMWH組成物がCABGの前に中和される、請求項142記載の方法。
[請求項144]
目標ACT値を維持する必要がある対象に請求項101、103、105、106、または125のいずれか一項記載のLMWH組成物の多数回のボーラス注射を投与することによって、目標ACT値を維持する方法。
[請求項145]
以下の段階を含む、患者における血栓障害を処置する方法:
請求項101、103、105、106、または125のいずれか一項記載のLMWH組成物を患者に投与する段階;
退院前に、外科的介入を必要としない、または外科的介入の候補者であると、患者を分類する段階;ならびに
患者が外科的介入の候補者であると分類される場合には、任意で、LMWH組成物をモニターする段階およびLMWH組成物を中和する段階の一方または双方を行う段階。
[請求項146]
手術前、手術中、および手術後の一つもしくは複数、または全てでLMWH組成物の活性をモニターする段階をさらに含む方法であって、患者が外科的介入の候補者であると分類される、請求項145記載の方法。
[請求項147]
LMWH組成物の活性をモニターする段階、およびCABGの前に抗Xa活性、抗IIa活性、もしくはその双方の一部または全てを中和する段階の一方または双方をさらに含む方法であって、患者がCABGの候補者であると分類される、請求項145記載の方法。
[請求項148]
以下の段階を含む、請求項101、103、105、106、または125のいずれか一項記載のLMWH組成物によって処置した対象をモニターする方法:
請求項101、103、105、106、または125のいずれか一項記載のLMWH組成物を投与された対象における活性化凝固時間(ACT)または活性化部分トロンボプラスチン時間(aPTT)を評価する段階。
[請求項149]
以下の段階を含む、請求項101、103、105、106、または125のいずれか一項記載のLMWH組成物を投与された対象を処置する方法:
対象におけるLMWH組成物の抗Xa活性、抗IIa活性、または双方の一部または全てを中和するために、対象に硫酸プロタミンを投与する段階。
[請求項150]
以下の段階を含む、LMWH組成物を製造する方法:
(1)未分画ヘパリン(UFH)試料を、極性の有機溶媒、極性の非有機溶媒、および塩による第一の沈殿に供して、第一の上清を提供する段階;
(2)第一の上清を、極性の有機溶媒および極性の非有機溶媒による第二の沈殿に供して、沈殿物を生じる段階;
(3)沈殿物を可溶化して、非硫酸化ウロン酸連結を切断する酵素によって可溶化沈殿物を切断する段階;
(4)切断された調製物を塩および極性の有機溶媒によって沈殿させて、二糖8〜14個の平均鎖長を有する固体を形成する段階;
(5)固体からの材料をサイズ選択段階に供して、二糖9〜16個の平均鎖長を有する調製物を提供し、それによってLMWH組成物を作製する段階。
[請求項151]
以下の段階含む、二糖約9〜16個の平均鎖長を有するLMWH組成物を作製する方法:
二糖約8〜14個の平均鎖長を有する前駆体LMWH組成物を提供する段階;および
前駆体LMWH組成物を処理して、二糖約9〜16個の平均鎖長を有するLMWHを得る段階。
[請求項152]
(1)未分画ヘパリン(UFH)試料を、極性の有機溶媒、極性の非有機溶媒、およびナトリウム塩による第一の沈殿に供して、第一の上清を提供する段階;ならびに
(2)第一の上清を、極性の有機溶媒、および極性の非有機溶媒による第二の沈殿に供して、沈殿物を生成する段階
を含み、それによってLMWH組成物を作製する、LMWH組成物を作製する方法。
[請求項153]
UFH調製物に存在する一つまたは複数のN-アセチルおよびエポキシドの量を決定する段階、
その量を予め選択した基準と比較する段階、および
予め選択した基準を満たすか否かに基づいてUFH調製物に関する決定を下す段階
を含み、それによってUFH調製物を評価または加工する、
LMWH組成物への加工に対するUFH調製物の適切性を決定するために、未分画ヘパリン(UFH)調製物を評価または加工する方法。
[請求項154]
中間体LMWH調製物における一つまたは複数の硫酸化イズロン酸、ウロン酸に連結したN-硫酸化ヘキソサミン、エポキシド、および6-O硫酸化ヘキソサミンの量を、未分画ヘパリン(UFH)出発物質における同じ構造部分の量と比較する段階、ならびに
出発物質と中間体LMWH調製物の間の予め選択した基準を満たすか否かに基づいて中間体LMWH調製物に関する決定を下す段階
を含み、それによって中間体LMWH調製物を評価または加工する、
LMWH組成物への加工に対する中間体調製物の適切性を決定するために、中間体LMWH調製物を評価または加工する方法。
[請求項155]
以下の段階を含む、LMWH調製物を評価または加工する方法:
LMWH組成物を提供する段階、および
表10Aの構造が表10Aに提供される範囲に存在するか否かを決定し、それによってLMWH調製物を評価する段階。
[請求項156]
以下の段階を含む、LMWH調製物を評価または加工する方法:
LMWH組成物を提供する段階、および
表11Aの構造が表11Aに提供される範囲に存在するか否かを決定し、それによってLMWH調製物を評価する段階。
[請求項157]
LMWH組成物を2D NMRによって分析する段階;および
表11Aに記載されたピークの一つまたは複数が表11Aにおいて記述される範囲に存在するか否かを決定する段階
を含み、それによってLMWH調製物を評価する、LMWH調製物を評価する方法。