【手続補正書】
【提出日】平成22年6月9日(2010.6.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む、SIRT3ポリペプチドのレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させる薬剤を同定するための方法：
（a）NAD+を含むアッセイ混合物中のSIRT3ポリペプチドおよびアセチル化アセチル-CoAシンセターゼ2（AceCS2）ポリペプチドと候補薬剤とを接触させる工程；ならびに
（b）該アッセイ混合物中のアセチル化AceCS2のレベルに対する候補薬剤の効果がある場合、該効果を決定する工程
ここで、候補薬剤で処理されていないアッセイ混合物中のアセチル化AceCS2の第二のレベルと比較したアッセイ混合物中のアセチル化AceCS2の第一のレベルの減少が、SIRT3ポリペプチドのレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させる薬剤を示している。
【請求項２】
アセチル化AceCS2ポリペプチドが14C標識アセチル基を含み、かつ工程（b）が14C標識アセチル基の放出を測定することによって行なわれる、請求項1記載の方法。
【請求項３】
以下の工程を含む、アセチル-CoAシンセターゼ2（AceCS2）ポリペプチドのレベル、アセチル化状態、または活性を調整する薬剤を同定するための方法：
（a）アッセイ混合物中のAceCS2ポリペプチドと候補薬剤とを接触させる工程；および
（b）該アッセイ混合物中のAceCS2ポリペプチドのレベル、アセチル化状態、または活性に対する候補薬剤の効果がある場合、該効果を決定する工程。
【請求項４】
以下の工程を含む、SIRT3ポリペプチドのレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させる薬剤を同定するための方法：
（a）SIRT3ポリペプチドおよびアセチル-CoAシンセターゼ2（AceCS2）ポリペプチドを発現する細胞と候補薬剤とをインビトロで接触させる工程；ならびに
（b）該細胞内のアセチル化AceCS2のレベルに対する候補薬剤の効果がある場合、該効果を決定する工程
ここで、候補薬剤で処理されていない細胞中のアセチル化AceCS2の第二のレベルと比較した細胞中のアセチル化AceCS2の第一のレベルの減少が、SIRT3ポリペプチドのレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させる薬剤を示している。
【請求項５】
工程（b）が、アセチル化AceCS2に特異的な抗体を用いる免疫学的アッセイを含む、請求項4記載の方法。
【請求項６】
細胞が、心臓細胞、筋肉細胞、または脳細胞などの哺乳類細胞である、請求項4記載の方法。
【請求項７】
哺乳類細胞がヒト細胞である、請求項6記載の方法。
【請求項８】
（c）候補薬剤の構造または配列を同定する工程
をさらに含む、請求項1または請求項4記載の方法。
【請求項９】
以下の工程を含む、アセチル-CoAシンセターゼ2（AceCS2）ポリペプチドのレベル、アセチル化状態、または活性を調整する薬剤を同定するための方法：
（a）AceCS2ポリペプチドを発現する細胞と候補薬剤とをインビトロで接触させる工程；および
（b）該細胞内のAceCS2ポリペプチドのレベル、アセチル化状態、または活性に対する候補薬剤の効果がある場合、該効果を決定する工程。
【請求項１０】
（i）AceCS2ポリペプチドが、SEQ ID NO:7、11、もしくは12に示された配列を含むか；
（ii）SIRT3ポリペプチドが、GenBankアクセッション番号AAD40851に示されたアミノ酸配列との、少なくとも約85％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか；または
（iii）SIRT3ポリペプチドおよびAceCS2ポリペプチドが精製されている、
前記請求項のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
AceCS2ポリペプチドのアセチル化状態に対する候補薬剤の効果がある場合、工程（b）が、該効果を決定する工程を含む、請求項3または請求項9記載の方法。
【請求項１２】
工程（b）が、アセチル化AceCS2に特異的な抗体を用いる免疫学的アッセイを含む、請求項1または請求項11記載の方法。
【請求項１３】
アセチル化AceCS2ポリペプチドが14C標識アセチル基を含み、かつ工程（b）が14C標識アセチル基の放出を測定することによって行なわれる、請求項11記載の方法。
【請求項１４】
AceCS2ポリペプチドの活性に対する候補薬剤の効果がある場合、工程（b）が、該効果を決定する工程を含む、請求項3または請求項9記載の方法。
【請求項１５】
（i）AceCS2ポリペプチドの活性が、アセテート、ATP、およびコエンザイム-Aの、アセチル-CoAおよびAMPへの酵素的変換であるか；
（ii）AceCS2ポリペプチドの活性が、SIRT3ポリペプチドへの結合である、
請求項14記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
本発明の方法、組成物、およびキットは、本明細書に十分記載されたような特性を包含する。
[請求項101]
以下の工程を含む、SIRT3ポリペプチドのレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させる薬剤を同定するための方法:
(a)SIRT3ポリペプチドおよびアセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドを発現する細胞と候補薬剤とを接触させる工程;ならびに
(b)該細胞内のアセチル化AceCS2のレベルに対する候補薬剤の効果がある場合、該効果を決定する工程。
[請求項102]
工程(b)が、アセチル化AceCS2に特異的な抗体を用いる免疫学的アッセイを含む、請求項101記載の方法。
[請求項103]
細胞が哺乳類細胞である、請求項101記載の方法。
[請求項104]
哺乳類細胞が、心臓細胞、筋肉細胞、および脳細胞からなる群より選択される、請求項103記載の方法。
[請求項105]
哺乳類細胞がヒト細胞である、請求項103記載の方法。
[請求項106]
(c)候補薬剤の構造または配列を同定する工程
をさらに含む、請求項101記載の方法。
[請求項107]
以下の工程を含む、SIRT3ポリペプチドのレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させる薬剤を同定するための方法:
(a)NAD+を含むアッセイ混合物中のSIRT3ポリペプチドおよびアセチル化アセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドと候補薬剤とを接触させる工程;ならびに
(b)該アッセイ混合物中のアセチル化AceCS2のレベルに対する候補薬剤の効果がある場合、該効果を決定する工程
ここで、候補薬剤で処理されていないアッセイ混合物中のアセチル化AceCS2の第二のレベルと比較したアッセイ混合物中のアセチル化AceCS2の第一のレベルの減少が、SIRT3ポリペプチドのレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させる薬剤を示している。
[請求項108]
アセチル化AceCS2ポリペプチドが14C標識アセチル基を含み、かつ工程(b)が14C標識アセチル基の放出を測定することによって行なわれる、請求項107記載の方法。
[請求項109]
以下の工程を含む、アセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドのレベル、アセチル化状態、または活性を調整する薬剤を同定するための方法:
(a)AceCS2ポリペプチドを発現する細胞と候補薬剤とを接触させる工程;および
(b)該細胞内のAceCS2のレベル、アセチル化状態、または活性に対する候補薬剤の効果がある場合、該効果を決定する工程。
[請求項110]
以下の工程を含む、アセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドのレベル、アセチル化状態、または活性を調整する薬剤を同定するための方法:
(a)アッセイ混合物中のAceCS2ポリペプチドと候補薬剤とを接触させる工程;および
(b)該アッセイ混合物中のAceCS2のレベル、アセチル化状態、または活性に対する候補薬剤の効果がある場合、該効果を決定する工程。
[請求項111]
請求項101記載の方法によって同定される、生物学的に活性な薬剤。
[請求項112]
請求項109記載の方法によって同定される、生物学的に活性な薬剤。
[請求項113]
アセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドのアセチル化状態を調整するための方法であって、AceCS2ポリペプチドを発現する細胞と請求項101記載の方法によって得ることができる薬剤とを接触させる工程を含む、方法。
[請求項114]
アセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドのアセチル化状態を調整するための方法であって、AceCS2ポリペプチドを発現する細胞と請求項109記載の方法によって得ることができる薬剤とを接触させる工程を含む、方法。
[請求項115]
SIRT3のレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させる治療的有効量の薬剤を個体に投与する工程を含む、個体における病理学的状態の処置のための方法であって、
SIRT3がAceCS2を脱アセチル化し;
病理学的状態が、上昇したアセテートレベルを特徴とし;かつ
病理学的状態が処置される、方法。
[請求項116]
病理学的状態が、II型糖尿病、高コレステロール血症、高脂血症、および肥満からなる群より選択される、請求項115記載の方法。
[請求項117]
個体がヒトまたは非ヒト動物である、請求項115記載の方法。
[請求項118]
(i)請求項101記載の方法によって得ることができる薬剤;および
(ii)薬学的に許容される担体
を含む、SIRT3のレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させるための薬学的組成物。
[請求項119]
(i)請求項109記載の方法によって得ることができる薬剤;および
(ii)薬学的に許容される担体
を含む、アセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドのレベル、アセチル化状態、または活性を調整するための薬学的組成物。
[請求項120]
(i)請求項101記載の方法によって得ることができる薬剤を含む容器;ならびに
(ii)該薬剤とSIRT3ポリペプチドおよびアセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドを発現する細胞とを接触させ、かつ該細胞内のアセチル化AceCS2のレベル、アセチル化状態、または活性に対する該薬剤の効果を決定するための取扱説明書
を含む、SIRT3のレベルまたはデアセチラーゼ活性を増加させるためのキット。
[請求項121]
(i)請求項109記載の方法によって得ることができる薬剤を含む容器;ならびに
(ii)AceCS2ポリペプチドを発現する細胞を接触させ、かつAceCS2のレベル、アセチル化状態、または活性に対する該薬剤の効果を決定するための取扱説明書
を含む、アセチル-CoAシンセターゼ2(AceCS2)ポリペプチドのレベル、アセチル化状態、または活性を調整するためのキット。