【手続補正書】
【提出日】平成22年4月5日(2010.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトTNF-αに結合し、イムノグロブリン重鎖または軽鎖可変ドメインを含み、前記可変ドメインが新世界ザルに由来する配列を有する少なくとも1種類の相補性決定領域(CDR)を含み、前記CDRが、AATKLQS（配列番号１）、EASSLQS（配列番号２）、EASKLQS（配列番号３）、およびSASNLET（配列番号４）からなる群より選択される、組換えドメイン抗体(dAb)。
【請求項２】
前記CDRがCDR2である、請求項１に記載の組換えdAb。
【請求項３】
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号７）；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQAIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号８）；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLLPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号９）；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQAIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLLPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号１０）；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKPPKLLIYSASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号５０）；
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPSRFSGRGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号５１）；および
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLYSASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLLPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号５２）：
からなる配列より選択される配列を有する、請求項１または２に記載の組換えdAb。
【請求項４】
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQAIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPS
RFSGSGSGTDFTLTISSLLPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号１０）：
の配列を有する、請求項３に記載の組換えdAb。
【請求項５】
CDR1および/またはCDR3を改変して抗原結合を改善する、請求項１から４のいずれか一項に記載の組換えdAb。
【請求項６】
ヒトで低い免疫原性を有する、請求項１から５のいずれか一項に記載の組換えdAb。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項に記載のdAbをコードする、単離核酸分子。
【請求項８】
請求項１から６のいずれか一項に記載の組換えドメイン抗体(dAb)を有効量、薬剤として許容しうる担体または希釈剤とともに含む、薬剤組成物。
【請求項９】
請求項１から６のいずれか一項に記載の組換えdAb有効量と試料を接触させること、および結合したdAbの量を検出することを含む、試料中のヒトTNF-αを検出する方法。
【請求項１０】
前記試料が生物試料である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
請求項８に記載の薬剤組成物の有効量をヒト被験者に投与することを含む、前記被験者のヒトTNF-α活性により特徴づけられる疾病を治療する方法。
【請求項１２】
ヒトTNF-α活性により特徴づけられる疾病が、
炎症、炎症疾患、ならびに敗血症性ショック、内毒素性ショック、グラム陰性菌敗血、および有毒ショック症候群を含む敗血症；関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、変形性関節症、および痛風性関節炎を含む自己免疫疾患、アレルギー、多発性硬化症、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎、およびネフローゼ症候群；感染による発熱および筋肉症を含む伝染病、ならびに感染に続いておこる悪液質；移植片対宿主拒絶反応；腫瘍増殖または転移；成人呼吸窮迫症候群、ショック肺、慢性肺炎症性疾患、肺サルコイドーシス、肺線維症、および珪肺症を含む肺疾病；クローン病および潰瘍性大腸炎を含む炎症性腸疾患；心臓疾病；炎症性骨疾病、肝炎、凝固障害、火傷、再かん流傷害、ケロイド形成、および瘢痕組織形成
からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
＜発明の概要＞
第一の態様において、ヒトTNF-αに結合する組換えドメイン抗体(dAb)を本発明は提供し、前記dAbはイムノグロブリン重鎖または軽鎖可変ドメインを含み、前記可変ドメインは新世界ザルに由来する配列を有する少なくとも1つの相補性決定領域(CDR)を含み、ここで前記CDRは、AATKLQS（配列番号１）、EASSLQS（配列番号２）、EASKLQS（配列番号３）、SASNLET（配列番号４）からなる群より選択される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
第一の態様において、ヒトTNF-αに結合する組換えドメイン抗体(dAb)を本発明は提供し、前記dAbはイムノグロブリン重鎖または軽鎖可変ドメインを含み、前記可変ドメインは新世界ザルに由来する配列を有する少なくとも1種類の相補性決定領域(CDR)を含み、ここで前記CDRは、AATKLQS（配列番号１）、EASSLQS（配列番号２）、EASKLQS（配列番号３）、SASNLET（配列番号４）からなる群より選択される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
本発明の好ましいある実施態様において、以下のdAb（化合物１４５と示される）を生産するために、dAbアクセプター配列のCDR2配列（SASELQS；配列番号４９）を置換するように、マーモセットCDR配列SASNLET（配列番号４）がdAbアクセプター配列に移植される：
＜化合物１４５＞
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDSYLHWYQQKPGKAPKLLIYSASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVVWRPFTFGQGTKVEIKR（配列番号７）
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
4つのCDR配列、すなわちフクロウサル配列１（配列番号４２）からのAATKLQS（配列番号１）、フクロウサル配列２（配列番号４３）からのEASSLQS（配列番号２）、マーモセット配列１（配列番号２５）からのEASKLQS（配列番号３）、マーモセット配列２（配列番号２６）からのSASNLET（配列番号４）が、図２に説明されて示されるアミノ酸配列より選択された。フクロウサル配列５、YASSLQS（配列番号４８）が、アオテュス・ナンサイナアエ(Aotus nancyinaae)(マのヨザル、Ma's night monkey)cDNA配列と同一であることが発見され、他の全ての配列は独自のものであった。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
【図１】アクセプターdAbのアミノ酸（配列番号６）、およびヌクレオチド配列（配列番号５）を示す。
【図２−１】11種のマーモセットおよび6種のフクロウサルVκ遺伝子セグメントのヌクレオチド、およびアミノ酸配列を示す。
【図２−２】図２―１のの続きを表す。
【図２−３】図２―２のの続きを表す。
【図２−４】図２―３のの続きを表す。
【図２−５】図２―４のの続きを表す。
【図３】アクセプターdAbのアミノ酸（配列番号６）、およびヌクレオチド配列（両方の鎖；配列番号５および５３）を示す。CDR2を含む領域を切除するKpnIおよびSanDIの制限酵素切断部位を図中に示す。切除されるCDR2残基を下線で示す。
【図４】図２で示されるヌクレオチド(A；それぞれ、配列番号５、３６、５４から５６、３７、５７から５９、１４、６０から６２、１５、６３から６５)、およびアミノ酸(B；それぞれ、配列番号６、４２、６６から６８、４３、６９から７１、２５、７２から７４、２６、７５から７７)配列のクローニングおよび最終配列確認の間に使用されるオリゴヌクレオチドを示す配列アラインメントを示す。
【図５】TNFが組換えTNFレセプターに結合することを阻害するCDR2移植dAbの能力を示す。試験されるdAbは以下のとおりである：フクロウサル１（CDR=AATKLQS；配列番号１）, フクロウサル２（CDR=EASSLQS；配列番号２）、マーモセット１（CDR=EASKLQS；配列番号３）、マーモセット２（CDR=SASNLET；配列番号４）、およびアクセプター（CDR=SASELQS；配列番号４９）。
【図６】アクセプターdAb（化合物１４５）に対して相対的な、マウスL929線維芽細胞に対するTNFの細胞毒性活性を中和する化合物１００および１２３の改善される能力を示す。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2009519720000001.app