(57)【要約】  本明細書では、癌を有する患者におけるなどの腫瘍の成長を阻害するために有用な単剤療法としてまたは併用療法においてＳＲＡ１４１を投与する治療方法が開示される。【選択図】図１Ａ
2022500479.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療する方法であって、
前記癌を有する対象に、治療有効量の式（Ｉ−Ｄ）で表されるＳＲＡ１４１化合物を投与することを含み、
【化１】
2022500479.tif 000013
式中、治療有効量が、１０〜４００ｍｇ／日または１０〜１０００ｍｇ／日の絶対用量である、方法。
【請求項２】
前記対象が、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が、表４の包含基準のうちの１つ以上を有すると特定される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が、Ｃｄｃ７阻害剤療法を以前に受けたことがない、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記治療有効量が、少なくとも１０ｍｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／日、少なくとも８０ｍｇ／日、少なくとも１６０ｍｇ／日、または少なくとも３２０ｍｇ／日である、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記治療有効量が、少なくとも１５ｍｇ／日、少なくとも２５ｍｇ／日、少なくとも５０ｍｇ／日、少なくとも１００ｍｇ／日、少なくとも１５０ｍｇ／日、少なくとも２００ｍｇ／日、少なくとも２５０ｍｇ／日、少なくとも３００ｍｇ／日、少なくとも３５０ｍｇ／日、少なくとも４００ｍｇ／日、少なくとも４５０ｍｇ／日、または少なくとも５００ｍｇ／日である、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記治療有効量が、少なくとも１００ｍｇ／日、少なくとも２００ｍｇ／日、少なくとも３００ｍｇ／日、少なくとも４００ｍｇ／日、少なくとも５００ｍｇ／日、少なくとも６００ｍｇ／日、少なくとも７００ｍｇ／日、少なくとも８００ｍｇ／日、少なくとも９００ｍｇ／日、または少なくとも１０００ｍｇ／日である、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記ＳＲＡ１４１化合物が、経口投与される、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ＳＲＡ１４１化合物が、毎日投与される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記ＳＲＡ１４１化合物が、少なくとも連続５日間、少なくとも連続７日間、または少なくとも連続１４日間投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＳＲＡ１４１化合物が、各週５日の投与、続いて２日の非投与、１週間の毎日の投与、続いて１、２、または３週間の非投与、２または３週間の毎日の投与、続いて１または２週間の非投与、ならびに週間サイクルの２日目および３日目の投与からなる群から選択される投与スケジュールに従って投与される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記治療有効量が、１日１回単一用量で投与される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記治療有効量の半分が、１日２回投与される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記癌が、黒色腫、子宮癌、甲状腺癌、血液癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌、子宮内膜癌、肝細胞癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、小細胞肺癌、神経芽腫、および頭頸部癌からなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）からなる群から選択される血液癌である、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記癌が、ＡＭＬである、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記癌が、転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）である、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記癌が、高いマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｈ）状態を有するものとして分類されない、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記癌が、マイクロサテライト安定性（ＭＳＳ）状態を有すると分類される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＭＳＩ−Ｈ状態が、モノヌクレオチド反復マーカー、ジヌクレオチド反復マーカー、準単型性マーカー、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される反復ＤＮＡ配列の検出によって決定される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記検出が、ＰＣＲ分析、多重ＰＣＲ分析、毛細血管電気泳動、ＤＮＡ配列決定、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される方法によって実行される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌に関連する腫瘍が、染色体不安定性（ＣＩＮ）、主軸チェックポイントアセンブリ欠陥、有糸分裂欠陥、Ｇ１／Ｓチェックポイント欠陥、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を含む、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記癌に関連する腫瘍が、Ｗｎｔシグナル伝達経路変異を含む、請求項１〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記Ｗｎｔシグナル伝達経路変異が、大腸腺腫症（ＡＰＣ）遺伝子変異、ＦＡＴ１変異、ＦＡＴ４変異、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記方法が、アーカイブまたは新鮮腫瘍生検のいずれかを使用して、前記癌に関連する腫瘍をスクリーニングすることをさらに含む、請求項１〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記スクリーニングすることが、組織化学染色による染色体分離のパターンを検査すること、組織化学染色による薬物動態マーカーを検査すること、またはそれらの組み合わせを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記スクリーニングすることが、前記腫瘍が、異常な有糸分裂を呈するかどうかを決定することをさらに含む、請求項２５または２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記スクリーニングすることが、前記ＳＲＡ１４１化合物の前記投与の前に実行される、請求項２５〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
前記スクリーニングすることが、前記ＳＲＡ１４１化合物の前記投与の後に実行される、請求項２５〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記方法が、投与後の前記対象において６００超、１０００超、または１４００ｎｇ／ｍＬ超の前記ＳＲＡ１４１化合物の血漿Ｃｍａｘをもたらす、請求項１〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記方法が、投与後の前記対象において５８００超、１１９００超、または１６４００ｎｇ−ｈ／ｍＬ超の前記ＳＲＡ１４１化合物のＡＵＣｌａｓｔもたらす、請求項１〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記方法が、投与後の前記対象において５００ｎｇ／ｍＬ超、６００ｎｇ／ｍＬ超、９００ｎｇ／ｍＬ超、または１３００ｎｇ／ｍＬ超の前記ＳＲＡ１４１化合物の腫瘍内濃度をもたらす、請求項１〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記腫瘍内濃度が、前記ＳＲＡ１４１化合物の複数回投与後に到達する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記腫瘍内濃度が、前記ＳＲＡ１４１化合物の単一用量後に到達する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記方法が、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害をもたらす、請求項１〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、アミノ酸残基Ｓｅｒ４０および／またはＳｅｒ５３にある、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、前記癌に関連する腫瘍にある、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記癌に関連する前記腫瘍における前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、未治療の腫瘍試料と比較して、少なくとも５０％である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記未治療の腫瘍試料が、前記対象に前記ＳＲＡ１４１化合物を投与する前に得られる生検である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、前記ＳＲＡ１４１化合物の単一用量後である、請求項３５〜３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、前記対象の皮膚にある、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、ウェスタンブロット分析、免疫組織化学（ＩＨＣ）、または液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）によって測定される、請求項３５〜４１のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、前記対象の生検において測定される、請求項３５〜４２のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、前記ＳＲＡ１４１化合物の複数回投与後に測定される、請求項３５〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
前記ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害が、前記ＳＲＡ１４１化合物が、定常状態の血漿濃度に到達した後に測定される、請求項３５〜４４のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記方法が、前記癌に関連する腫瘍または病変の成長阻害をもたらす、請求項１〜４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
前記成長阻害が、ＳＲＡ１４１の投与後の標的病変の第２の直径を、ＳＲＡ１４１の投与前の前記標的病変の第１の直径と比較することによって決定される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記成長阻害が、ＳＲＡ１４１の投与後の標的病変群の第２の直径の合計を、ＳＲＡ１４１の投与前の前記標的病変群の第１の直径の合計と比較することによって決定される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記腫瘍または病変の成長が、未治療の腫瘍と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％阻害される、請求項４６〜４８のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
前記腫瘍の前記成長阻害が、未治療の腫瘍と比較して、少なくとも４７％の最小成長阻害である、請求項４６〜４８のいずれかに記載の方法。
【請求項５１】
前記腫瘍の前記成長阻害が、未治療の腫瘍と比較して、少なくとも９３％の最小成長阻害である、請求項４６〜４８のいずれかに記載の方法。
【請求項５２】
前記方法が、前記癌に関連する腫瘍の退縮をもたらす、請求項１〜５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
前記退縮が、完全退縮である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記方法が、前記癌に関連する腫瘍の細胞毒性をもたらす、請求項１〜５３のいずれかに記載の方法。
【請求項５５】
前記方法が、前記癌に関連する腫瘍の直径の前記合計の少なくとも３０％の減少をもたらす、請求項１〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
前記方法が、前記対象において部分奏効、完全奏効、または安定性疾患をもたらす、請求項１〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５７】
前記方法が、前記対象に、第２の治療有効量の１つ以上の追加の治療を投与することをさらに含む、請求項１〜５６のいずれかに記載の方法。
【請求項５８】
前記１つ以上の追加の治療が、抗腫瘍剤を含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗腫瘍剤が、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）経路阻害剤からなる群から選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗腫瘍剤が、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路阻害剤を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記ＭＡＰＫ阻害剤が、トラメチニブである、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗腫瘍剤が、レチノイド経路調節因子を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６３】
前記レチノイド経路調節因子が、前記ＲＸＲアゴニストであるベキサロテン、または前記ＲＡＲアゴニストであるトレチノイン（オールトランスレチノイン酸、ＡＴＲＡ）である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗腫瘍剤が、アポトーシス調節因子を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６５】
前記アポトーシス調節因子が、アポトーシス誘導因子を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記アポトーシス誘導剤が、ＢＣＬ−２阻害剤を含む、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ＢＣＬ−２阻害剤が、ＡＢＴ−１９９である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記抗腫瘍剤が、ホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェート３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路阻害剤を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＰＩ３Ｋ経路阻害剤が、コパンリシブである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記抗腫瘍剤が、ＰＡＲＰ阻害剤を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項７１】
前記ＰＡＲＰ阻害剤が、ＢＭＮ６７３である、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗腫瘍剤が、オーロラＢキナーゼ阻害剤を含む、請求項５８に記載の方法。
【請求項７３】
前記オーロラＢキナーゼ阻害剤が、バラセルチブである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記１つ以上の追加の治療が、毎日投与される、請求項５７〜７３のいずれかに記載の方法。
【請求項７５】
前記ＳＲＡ１４１化合物および前記１つ以上の追加の治療が、組み合わせて、相乗効果を示す、請求項５７〜７４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年９月２４日に提出された米国仮出願第６２／７３５，７７８号、２０１８年１１月１３日に提出された米国仮出願第６２／７６０，６３８号、および２０１９年２月２６日に提出されたＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０１９６７６号の利益および優先権を主張する。上記参照出願の各々の内容は、それらの全体が参照によって組み込まれる。
【０００２】
配列表
該当なし
【背景技術】
【０００３】
癌は、生体内の細胞の制御されない無制限の成長によって引き起こされる疾患のグループである。癌細胞は通常、正常細胞よりも速く成長するため、癌は、細胞分裂中、特に染色体分裂中にＤＮＡの複製を制御することによって治療することができる。
【０００４】
Ｃｄｃ７は、細胞周期におけるＤＮＡ複製の開始に不可欠なセリン−スレオニンタンパク質キナーゼ酵素である。具体的には、Ｃｄｃ７は、Ｄｂｆ４（ＡＳＫ）などの補因子と複合体を形成し、その基質であるＭＣＭ（ミニ染色体維持）タンパク質をリン酸化する。このリン酸化により、ＤＮＡ上にＣｄｃ４５およびＤＮＡポリメラーゼが組み立てられ、ＭＣＭ複合体を形成し、それによってＤＮＡ複製を開始すると言われている。
【０００５】
Ｃｄｃ７の発現レベルは、様々な癌細胞株およびヒト腫瘍組織において頻繁に上昇するため、抗癌剤標的としてＣｄｃ７に顕著な関心が生じている。Ｃｄｃ７は、ヒト腫瘍に由来する一般に確立された細胞株だけでなく、生体組織から採取された細胞においても過剰発現することが見出されている。
【０００６】
特定のＣｄｃ７阻害剤は、ＨｅｌａおよびＨＣＴ１１６細胞などのヒト腫瘍細胞の成長に影響を及ぼすことが実証されているが、正常な細胞に対して限定的な効果のみを示す。
【０００７】
現在、Ｃｄｃ７阻害剤を使用した癌の治療に有用な有効な治療組成物および方法はない。
【発明の概要】
【０００８】
癌を治療する方法であって、当該方法が、
癌を有する対象に、治療有効量の式（Ｉ−Ｄ）で表されるＳＲＡ１４１化合物を投与することを含み、
【化１】
2022500479.tif 000003
治療有効量が、１０〜４００ｍｇ／日または１０〜１０００ｍｇ／日の絶対用量である、方法を本明細書に記載する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。
【００１０】
いくつかの実施形態では、治療有効量は、少なくとも１０ｍｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／日、少なくとも８０ｍｇ／日、少なくとも１６０ｍｇ／日、または少なくとも３２０ｍｇ／日である。いくつかの実施形態では、治療有効量は、少なくとも１５ｍｇ／日、少なくとも２５ｍｇ／日、少なくとも５０ｍｇ／日、少なくとも１００ｍｇ／日、少なくとも１５０ｍｇ／日、少なくとも２００ｍｇ／日、少なくとも２５０ｍｇ／日、少なくとも３００ｍｇ／日、または少なくとも３５０ｍｇ／日である。
【００１１】
いくつかの実施形態では、ＳＲＡ１４１化合物は、経口投与される。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＳＲＡ１４１化合物は、毎日投与される。いくつかの実施形態では、ＳＲＡ１４１化合物は、少なくとも連続５日間、少なくとも連続７日間、または少なくとも連続１４日間投与される。いくつかの実施形態では、ＳＲＡ１４１化合物は、各週５日の投与、続いて２日の非投与、１週間の毎日の投与、続いて１、２、または３週間の非投与、２または３週間の毎日の投与、続いて１または２週間の非投与、ならびに週間サイクルの２日目および３日目の投与からなる群から選択される投与スケジュールに従って投与される。いくつかの実施形態では、治療有効量は、１日１回単一用量で投与される。いくつかの実施形態では、治療有効量の半分は、１日２回投与される。
【００１３】
いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫、子宮癌、甲状腺癌、血液癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌、子宮内膜癌、肝細胞癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、小細胞肺癌、神経芽細胞腫、および頭頸部癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）からなる群から選択される血液癌である。いくつかの実施形態では、癌は、ＡＭＬである。
【００１４】
いくつかの実施形態では、癌は、転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）である。いくつかの実施形態では、ｍＣＲＣは、高いマイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｈ）状態を有すると分類されない。いくつかの実施形態では、ＭＳＩ−Ｈ状態は、モノヌクレオチド反復マーカー、ジヌクレオチド反復マーカー、準単型性マーカー、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される反復ＤＮＡ配列の検出によって決定される。いくつかの実施形態では、検出は、ＰＣＲ分析、多重ＰＣＲ分析、毛細血管電気泳動、ＤＮＡ配列決定、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される方法によって実行される。
【００１５】
いくつかの実施形態では、癌に関連する腫瘍は、染色体不安定性（ＣＩＮ）、主軸チェックポイントアセンブリ欠陥、有糸分裂欠陥、Ｇ１／Ｓチェックポイント欠陥、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される表現型を含む。いくつかの実施形態では、癌に関連する腫瘍は、Ｗｎｔシグナル伝達経路変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｗｎｔシグナル伝達経路変異は、大腸腺腫症（ＡＰＣ）遺伝子変異、ＦＡＴ１変異、ＦＡＴ４変異、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００１６】
いくつかの実施形態では、方法は、アーカイブまたは新鮮な腫瘍生検のいずれかを使用して関連する腫瘍をスクリーニングすることをさらに含む。いくつかの実施形態では、スクリーニングすることは、組織化学染色による染色体分離のパターンを検査すること、組織化学染色による薬物動態マーカーを検査すること、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、スクリーニングすることは、腫瘍が、異常な有糸分裂を示すかどうかを決定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、スクリーニングすることは、ＳＲＡ１４１化合物の投与前に実行される。いくつかの実施形態では、スクリーニングすることは、ＳＲＡ１４１化合物の投与後に実行される。
【００１７】
いくつかの実施形態では、方法は、投与後の対象において６００超、１０００超、または１４００ｎｇ／ｍＬ超のＳＲＡ１４１化合物の血漿Ｃｍａｘをもたらす。いくつかの実施形態では、方法は、投与後の対象において５８００超、１１９００超、または１６４００ｎｇ−ｈ／ｍＬ超のＳＲＡ１４１化合物のＡＵＣｌａｓｔをもたらす。いくつかの実施形態では、方法は、投与後の対象において５００ｎｇ／ｍＬ超、６００ｎｇ／ｍＬ超、９００ｎｇ／ｍＬ超、または１３００ｎｇ／ｍＬ超のＳＲＡ１４１化合物の腫瘍内濃度をもたらす。いくつかの実施形態では、腫瘍内濃度は、ＳＲＡ１４１化合物の複数回投与後に到達する。いくつかの実施形態では、腫瘍内濃度は、ＳＲＡ１４１化合物の単一用量の後に到達する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、方法は、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害をもたらす。いくつかの実施形態では、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、アミノ酸残基Ｓｅｒ４０またはＳｅｒ５３である。いくつかの実施形態では、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、癌に関連する腫瘍にある。いくつかの実施形態では、癌に関連する腫瘍におけるＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、未治療の腫瘍試料と比較して、少なくとも５０％である。いくつかの実施形態では、未治療の腫瘍試料は、対象にＳＲＡ１４１化合物を投与する前に得られる生検である。いくつかの実施形態では、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、ＳＲＡ１４１化合物の単一用量の後である。いくつかの実施形態では、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、対象の皮膚にある。いくつかの実施形態では、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、ウェスタンブロット分析、免疫組織化学（ＩＨＣ）、または液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）によって測定される。いくつかの実施形態では、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、対象の生検で測定される。いくつかの実施形態では、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、ＳＲＡ１４１化合物の複数回投与後に測定される。いくつかの実施形態では、ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、ＳＲＡ１４１化合物が定常状態の血漿濃度に到達した後に測定される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、方法は、癌に関連する腫瘍の成長阻害をもたらす。いくつかの実施形態では、腫瘍の成長阻害は、未治療の腫瘍と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％の最小成長阻害である。いくつかの実施形態では、腫瘍の成長阻害は、未治療の腫瘍と比較して、少なくとも４７％の最小成長阻害である。いくつかの実施形態では、腫瘍の成長阻害は、未治療の腫瘍と比較して、少なくとも９３％の最小成長阻害である。いくつかの実施形態では、方法は、癌に関連する腫瘍の退縮をもたらす。いくつかの実施形態では、退縮は、完全退縮である。いくつかの実施形態では、方法は、癌に関連する腫瘍の細胞毒性をもたらす。いくつかの実施形態では、方法は、癌に関連する腫瘍の直径の合計の少なくとも３０％の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、方法は、対象において部分奏効、完全奏効、または安定性疾患をもたらす。
【００２０】
いくつかの実施形態では、方法は、癌に関連する腫瘍または病変の成長阻害レベルを決定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、ＳＲＡ１４１の投与後の標的病変の第２の直径を、ＳＲＡ１４１の投与前の標的病変の第１の直径と比較して、標的病変成長が阻害されるかどうかを決定することを含む。いくつかの事例では、腫瘍または病変の成長は、未治療の腫瘍または病変と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％阻害されることが確認される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、方法は、第２の治療有効量の１つ以上の追加の治療を対象に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の治療は、抗腫瘍剤を含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）経路阻害剤の哺乳動物標的からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＭＡＰＫ阻害剤は、トラメチニブである。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、レチノイド経路調節因子を含む。いくつかの実施形態では、レチノイド経路調節因子は、ＲＸＲアゴニストであるベキサロテンまたはＲＡＲアゴニストであるトレチノイン（オールトランスレチノイン酸、ＡＴＲＡ）である。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、アポトーシス調節因子を含む。いくつかの実施形態では、アポトーシス調節因子は、アポトーシス誘導因子を含む。いくつかの実施形態では、アポトーシス誘導剤は、ＢＣＬ−２阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＢＣＬ−２阻害剤は、ＡＢＴ−１９９である。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、ホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェート３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ経路阻害剤は、コパンリシブである。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、ＰＡＲＰ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＡＲＰ阻害剤は、ＢＭＮ６７３である。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、オーロラＢキナーゼ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、オーロラＢキナーゼ阻害剤は、バラセルチブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の治療は、毎日投与される。いくつかの実施形態では、ＳＲＡ１４１化合物および１つ以上の追加の治療は、相乗効果を示す。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
本発明のこれらおよび他の特徴、態様、および利点は、以下の説明および添付の図面に関してよりよく理解されるであろう。
【００２３】
【図１Ａ】急性骨髄性白血病のマウス異種移植片モデルにおけるＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の腫瘍体積を示すグラフである。
【図１Ｂ】急性骨髄性白血病のマウス異種移植片モデルにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の腫瘍重量を示すグラフである。
【図１Ｃ】急性骨髄性白血病のマウス異種移植片モデルにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の体重変化を示すグラフである。
【図２Ａ】急性骨髄性白血病のラット異種移植片モデルにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の平均腫瘍体積を示すグラフである。
【図２Ｂ】急性骨髄性白血病のラット異種移植片モデルにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の体重変化を示すグラフである。
【図２Ｃ】急性骨髄性白血病のラット異種移植片モデルにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された個々の対象の腫瘍体積を示すグラフである。
【図３Ａ】血液癌由来細胞株のパネルにおけるＳＲＡ１４１の半数最大阻害濃度（ＩＣ５０）を示すグラフである。
【図３Ｂ】癌の種類によって分類される決定されたＩＣ５０値の要約を示す。
【図３Ｃ】癌と正常細胞との間のＳＲＡ１４１に対する感受性を例示する。
【図３Ｄ】多数の細胞株におけるＣｄｃ７阻害剤ＳＲＡ１４１、ＴＡＫ−９３１、およびＬＹ−３１７７８３３の活性を示す。
【図３Ｅ】７２時間（左カラム）および１４４時間（右カラム）後の７つの細胞株におけるＡＴＰレベル（ＣＴＧ）、代謝活性（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（ＣＴＢ））、細胞のＤＮＡ含有量（ＣｙＱｕａｎｔ）、ならびにエステラーゼ活性（カルセインＡＭ）を測定するように設計された４つの直交アッセイを使用したＩＣ５０値を示す。
【図３Ｆ】ＳＲＡ１４１への異なる曝露時間後の１４４時間におけるＣＴＧおよびＣｙＱｕａｎｔによって決定されるＩＣ５０値を示す。
【図４Ａ】大腸癌（ＣＲＣ）の患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の平均腫瘍体積を示すグラフである。
【図４Ｂ】大腸癌（ＣＲＣ）の患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の体重変化を示すグラフである。
【図５】大腸癌（ＣＲＣ）の患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の個々の対象の腫瘍体積を示すグラフである。
【図６】大腸癌（ＣＲＣ）の患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおける治療の３２日目（Ｄ３２）のＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の平均腫瘍体積を示すグラフである。
【図７Ａ】大腸癌のラット異種移植片モデルにおけるＳＲＡ１４１で治療した動物の平均腫瘍体積を示すグラフである。
【図７Ｂ】大腸癌のラット異種移植片モデルにおけるＳＲＡ１４１を用いた治療後１２時間のリン酸化ＭＣＭ２の低減を示す、体重変化パーセント、ＳＲＡ１４１の腫瘍濃度、および免疫ブロットのグラフを示す。
【図８】抗腫瘍剤と組み合わせてＳＲＡ１４１で連続処理（前処理）された細胞株の細胞成長の阻害（０時間および７２時間の未処理対照と比較した細胞生存率）を示すグラフである。
【図９】抗腫瘍剤と組み合わせてＳＲＡ１４１（「シエラ化合物１」）で共処理された細胞株の成長阻害の相乗効果スコアを示す表を示す。
【図１０Ａ】抗腫瘍剤と組み合わせてＳＲＡ１４１（「シエラ化合物１」）で共処理された細胞株の成長阻害の相乗効果スコアを示す表を示す。
【図１０Ｂ】ゲムシタビン単独またはＳＲＡ１４１と組み合わせて処理したＨＴ−２９細胞の成長阻害パーセントを示すグラフである。
【図１１Ａ】インビトロ生化学アッセイにおけるＳＲＡ１４１によるＣｄｃ７の強力な阻害を示す。
【図１１Ｂ】Ｃｄｃ７へのＳＲＡ１４１結合および解離動態の滞在時間を示す。
【図１２】ＳＲＡ１４１およびＴＡＫ９３１のキノムスクリーニングアッセイの結果を示す。
【図１３】０．０３３および３．３μＭの濃度で８時間（図１３Ａ）〜２４時間（図１３Ｂ）、ならびに０．１および１μＭの濃度で３時間、６時間、および２４時間（図１３Ｃ）ＳＲＡ１４１で処理したＣｏｌｏ−２０５細胞、ならびにＣｄｃ７の下流標的のリン酸化状態の後続評価を用いて０．５および３．３μＭの濃度でＳＲＡ１４１で処理したＭＶ４１１細胞（図１３Ｄ）を示す。
【図１４】２４時間０．１μＭおよび１μＭでのＳＲＡ１４１を用いた治療後のＭＣＭ２のＳｅｒ５３上のリン酸化の定量化を示すグラフである。
【図１５】Ｓ相中（図１５Ａ）およびＭ相の開始時（図１５Ｂ）にＳＲＡ１４１で処理した細胞からのフローサイトメトリデータ、ＳＲＡ１４１で処理した細胞における細胞周期およびＤＮＡマーカーの評価（図１５Ｃ）、ならびにＣｄｃ７阻害剤で処理した細胞集団における有糸分裂細胞の割合の評価（図１５Ｄ）を示す。
【図１６】ＡＰＣ変異を有する、かつ有さない細胞株におけるＳＲＡ１４１感受性の要約を示す。
【図１７】Ｃｏｌｏ−２０５腫瘍異種移植片を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の平均腫瘍体積を示すグラフである。
【図１８】ＳＷ６２０腫瘍異種移植片を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療した動物の平均腫瘍体積を示すグラフである。
【図１９】Ａ２０腫瘍異種移植片を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の平均腫瘍体積を示すグラフである。
【図２０】ＭＤＡ−ＭＢ−４８６乳房腫瘍異種移植片を有するＣＢ−１７  ＳＣＩＤマウスにおけるＳＲＡ１４１単剤療法で治療された動物の平均腫瘍体積を示すグラフである。
【図２１】皮下ＳＷ６２０腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスにおける単回ＳＲＡ１４１投与後に減少したｐＭＣＭ２レベルを示す（図２１Ａに示されるｐＭＣＭ２レベル、図２１Ｂにアクチンに対して定量化および正規化された阻害％）。
【図２２】皮下Ｃｏｌｏ−２０５腫瘍を有する雌ＲｏｗｅｔｔヌードラットにおけるＳＲＡ１４１治療後のｐＭＣＭ２レベルを示す。
【図２３】雌ヌードラットを有する非腫瘍におけるＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって決定されるＳＲＡ１４１血漿濃度を示す。
【図２４Ａ】ＳＲＡ１４１を用いて、かつ用いずに治療した白血病のラット異種移植片モデル由来の腫瘍および代替組織における全ＭＣＭ２、リン酸化ＭＣＭ２、およびｇＨ２ＡＸの免疫組織化学評価を示す。
【図２４Ｂ】白血病のラット異種移植片モデル由来の腫瘍および代替組織におけるリン酸化ＭＣＭ２の免疫組織化学評価を示す。
【図２４Ｃ】ＳＲＡ１４１およびビヒクルで治療された白血病のラット異種移植片モデルからの腫瘍の免疫組織化学およびＨ＆Ｅ評価を示す。
【図２５Ａ】様々な投与量でのＳＲＡ１４１を用いた治療後の異種移植片腫瘍におけるｐＭＣＭ２−Ｓ４０発現の評価結果を示す。
【図２５Ｂ】様々な投与量でのＳＲＡ１４１を用いた治療後のラット異種移植片由来の皮膚試料におけるｐＭＣＭ２−Ｓ４０発現の評価結果を示す。
【図２６】正常なヒト皮膚における全ＭＣＭ２、ｐＭＣＭ２−Ｓ５３、ｐＭＣＭ２−Ｓ４０、およびｇＨ２ＡＸの評価結果を示す。
【図２７】Ｃｏｌｏ−２０５細胞（図２７Ａ、図２７Ｇ）、ＳＷ６２０細胞（図２７Ｂ）、Ａ３７５細胞（図２７Ｃ）、ＫＧ−１細胞（図２７Ｄ）、ＭＯＬＭ−１３細胞（図２７Ｅ、図２７Ｈ）、およびＭＶ４１１細胞（図２７Ｆ）における様々な追加の抗腫瘍剤と組み合わせてＳＲＡ１４１により行われる細胞生存率アッセイの結果を示す。
【図２８】ＲＮＡｉノックダウンによる抗アポトーシス遺伝子の阻害（図２８Ａ）またはＡＢＴ−１９９での処理（図２８Ｂ）後の細胞におけるＳＲＡ１４１を用いた治療の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
有効量のＣｄｃ７阻害剤ＳＲＡ１４１の投与によって、対象、例えば、ヒトにおいて、腫瘍成長を阻害する方法が、本明細書に開示される。有効量のＣｄｃ７阻害剤ＳＲＡ１４１の投与によって、対象、例えば、ヒトにおいて、腫瘍成長を阻害する方法も、本明細書に開示される。併用療法における有効量のＣｄｃ７阻害剤ＳＲＡ１４１の投与によって、対象、例えば、ヒトにおいて、腫瘍成長を阻害する方法もまた、本明細書に開示される。
【００２５】
定義
特許請求の範囲および明細書で使用される用語は、別段明記されない限り、以下に記載されるように定義される。
【００２６】
本発明の実施は、有機化学、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来の技法の使用を含み、これらは当該技術分野の範囲内である。
【００２７】
本願では、多くの技術的表示が参照されるであろう。全ての数字表示、例えば、それらの各々の範囲を含む、適切に、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、５．０、または１０．０の増分による典型的には様々な（＋）または（−）であり得る近似値である。全ての数字表示は「約」という用語が先行するものと理解され得る。本明細書に記載される試薬は例示であり、その同等物は当該技術分野で既知であり得る。
【００２８】
本発明で利用される化合物は、不斉炭素原子（光学中心）または二重結合を有し、ラセミ体、ジアステレオマー、幾何異性体、位置異性体、および個々の異性体（例えば、別々のエナンチオマー）は全て、本発明の範囲内に包含されることが意図される。本発明の化合物はまた、そのような化合物を構成する原子のうちの１つ以上で不自然な割合の原子同位体を含有し得る。例えば、化合物は、例えば、限定なしに、トリチウム（３Ｈ）、ヨウ素−１２５（１２５Ｉ）、または炭素−１４（１４Ｃ）などの放射性同位体で放射標識され得る。本発明の化合物の全ての同位体変形は、放射性かどうかにかかわらず、本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００２９】
「対象」という用語は、ヒト、ならびにサル、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、および齧歯類を含むがこれらに限定されない獣医学および研究上関心のある動物などの哺乳動物を含む、任意の哺乳動物を指す。
【００３０】
対象への薬物および／または療法を「投与すること」またはその「投与」という用語（およびこの句の文法的同等物）は、直接または間接投与の両方を指し、これは医療専門家による対象への投与であり得、自己投与、および／または間接投与であり得、これは対象に薬物および／または療法を処方するか、または処方するように説得する行為であり得る。
【００３１】
「同時投与」という用語は、同じ期間中にそれらの薬理学的効果を発揮する方法で投与される２つ以上の化合物を指す。そのような同時投与は、２つ以上の化合物の同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）、同時（ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｎｅｏｕｓ）、または連続投与のいずれかにより達成することができる。
【００３２】
障害または疾患を「治療すること」またはその「治療」という用語は、障害もしくは疾患、例えば、腫瘍成長もしくは癌の症状を緩和するか、またはそうでなければ臨床結果を含む対象についての何らかの有益なもしくは所望の結果を得るための措置を講じることを指す。任意の有益なまたは所望の臨床結果には、これらに限定されないが、癌の１つ以上の症状の緩和もしくは改善または条件付き生存および腫瘍細胞量もしくは腫瘍体積の低減、疾患の程度の減退、腫瘍進行もしくは疾患進行の遅延もしくは減速、腫瘍および／もしくは疾患状態の改善、緩和、もしくは安定化、または他の有益な結果が含まれ得る。
【００３３】
「インサイチュ」または「インビトロ」という用語は、生存生物とは別に成長する、例えば、組織培養で成長する生存細胞中で起こるプロセスを指す。
【００３４】
「インビボ」という用語は、生存生物中で起こるプロセスを指す。
【００３５】
「Ｃｄｃ７」という用語は、ＣＤＣ７遺伝子によってコードされる細胞分裂サイクル７セリン／トレオニンタンパク質キナーゼを指す。
【００３６】
１つ以上の症状（およびこの句の文法的同等物）の「低減」という用語は、症状（複数可）の重症度もしくは頻度の減少、または症状（複数可）の除去を指す。
【００３７】
明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別段明確に示さない限り、複数の指示物を含むことに留意しなければならない。
【００３８】
本発明の方法
Ｃｄｃ７阻害剤であるＳＲＡ１４１の投与により、対象、例えばヒトにおいて、腫瘍成長を阻害する方法が、本明細書に開示される。化合物、化合物を含むキット、およびそれらの使用方法の詳細な説明は以下に見い出される。
【００３９】
投与
本明細書に開示されるように、本発明の方法は、有効量のＳＲＡ１４１の投与を含む。本開示は、有効量のＳＲＡ１４１が対象に投与される治療方法を提供する。「有効量」または「治療有効量」という用語は、疾患の症状を改善するのに有効な量、例えば、腫瘍の成長を阻害するのに有効な量を指す。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、最大忍容用量（ＭＴＤ）未満である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、１０００ｍｇ／日未満、５００ｍｇ／日未満、または４００ｍｇ／日未満である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、３００ｍｇ／日未満、２００ｍｇ／日未満、１５０ｍｇ／日未満、１００ｍｇ／日未満、または７５ｍｇ／日未満である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、３２４ｍｇ／日未満である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、３２４ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、少なくとも１０ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、１０〜４００ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、１０〜３２４ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、４０〜４００ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、少なくとも１０ｍｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／日、少なくとも８０ｍｇ／日、少なくとも１６０ｍｇ／日、または少なくとも３２０ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、少なくとも１５ｍｇ／日、少なくとも２５ｍｇ／日、少なくとも５０ｍｇ／日、少なくとも７５ｍｇ／日、少なくとも１００ｍｇ／日、少なくとも１５０ｍｇ／日、少なくとも２００ｍｇ／日、少なくとも２５０ｍｇ／日、少なくとも３００ｍｇ／日、または少なくとも３５０ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、１６０ｍｇ／日、３２０ｍｇ／日、３２５ｍｇ／日、３５０ｍｇ／日、または４００ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、１５ｍｇ／日、２５ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、７５ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、または３５０ｍｇ／日である。
【００４０】
単剤療法
一実施形態では、有効量のＣｄｃ７阻害剤は、単剤療法として投与される。
【００４１】
いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、最大忍容用量（ＭＴＤ）未満である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、１０００ｍｇ／日未満、５００ｍｇ／日未満、または４００ｍｇ／日未満である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、３００ｍｇ／日未満、２００ｍｇ／日未満、１５０ｍｇ／日未満、１００ｍｇ／日未満、または７５ｍｇ／日未満である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、３２４ｍｇ／日未満である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１単剤療法の有効量は、３２４ｍｇ／日である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、少なくとも１０ｍｇ／日である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、１０〜４００ｍｇ／日である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、１０〜３２４ｍｇ／日である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、４０〜４００ｍｇ／日である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、少なくとも１０ｍｇ／日、少なくとも２０ｍｇ／日、少なくとも４０ｍｇ／日、少なくとも８０ｍｇ／日、少なくとも１６０ｍｇ／日、または少なくとも３２０ｍｇ／日である。いくつかの態様では、Ｃｄｃ７阻害剤単剤療法の有効量は、少なくとも１５ｍｇ／日、少なくとも２５ｍｇ／日、少なくとも５０ｍｇ／日、少なくとも７５ｍｇ／日、少なくとも１００ｍｇ／日、少なくとも１５０ｍｇ／日、少なくとも２００ｍｇ／日、少なくとも２５０ｍｇ／日、少なくとも３００ｍｇ／日、または少なくとも３５０ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１単剤療法の有効量は、１０ｍｇ／日、２０ｍｇ／日、４０ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、１６０ｍｇ／日、３２０ｍｇ／日、３２５ｍｇ／日、３５０ｍｇ／日、または４００ｍｇ／日である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１単剤療法の有効量は、１５ｍｇ／日、２５ｍｇ／日、５０ｍｇ／日、７５ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、２００ｍｇ／日、２５０ｍｇ／日、３００ｍｇ／日、または３５０ｍｇ／日である。
【００４２】
併用療法
また、本明細書に開示されるように、本発明の方法は、有効量のＳＲＡ１４１を投与し、第２の有効量の１つ以上の追加の治療を同時投与する併用療法を含む。
【００４３】
さらなる治療は、化学療法剤の投与、抗体または抗体断片（免疫チェックポイント阻害剤など）の投与、放射線治療の投与、およびそれらの組み合わせの投与を含むが、これらに限定されない。さらなる治療はまた、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ラパマイシン（ｍＴＯＲ）経路阻害剤の哺乳動物標的などの抗腫瘍剤の投与を含むが、これらに限定されない。抗腫瘍剤はまた、トラメチニブなどの有糸分裂原活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）経路阻害剤を含むことができる。抗腫瘍剤はまた、ＲＸＲアゴニストであるベキサロテン、およびＲＡＲアゴニストであるトレチノインなどのレチノイド経路調節因子を含むことができる。抗腫瘍剤はまた、抗Ｂｃｌ−２剤（例えば、ＡＢＴ−１９９）を含むがこれらに限定されない、アポトーシス誘導因子を含むなど、アポトーシス調節因子を含むことができる。抗腫瘍剤はまた、コパンリシブなどのホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェート３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路阻害剤を含むことができる。抗腫瘍剤はまた、ＢＭＮ６７３などのＰＡＲＰ阻害剤を含み得る。抗腫瘍剤はまた、ＫＵ−６００１９などのＡＴＭキナーゼ阻害剤を含むことができる。抗腫瘍剤はまた、バラセルチブなどのオーロラＢキナーゼ阻害剤を含むことができる。抗腫瘍剤はまた、単極主軸１キナーゼ（Ｍｐｓ１）（例えば、ＣＦＩ−４０２２５７）の阻害剤などのチロシントレオニンキナーゼ（ＴＴＫ）阻害剤を含むことができる。抗腫瘍剤はまた、エルロチニブなどの上皮成長因子（ＥＧＦ）の阻害剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、ゲムシタビンである。いくつかの実施形態では、抗腫瘍剤は、ゲムシタビンではない。
【００４４】
追加の治療はまた、抗腫瘍剤の組み合わせなどの追加の治療の組み合わせを含むことができる。
【００４５】
本発明の特定の実施形態では、有効量のＳＲＡ１４１は、第２の有効量のさらなる治療との併用療法として対象に投与される。いくつかの態様では、第２の有効量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの量である。いくつかの実施形態では、追加の治療の第２の有効量は、０．００１、０．００５、０．０１０、０．０２０、０．０５０、０．１、０．２、０．５、１．０、２．０、５．０、１０．０、または１５．０ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態では、さらなる治療の第２の有効量は、１０〜２０００ｍｇ／ｍ２／日である。いくつかの実施形態では、さらなる治療の第２の有効量は、５０〜１２５０ｍｇ／ｍ２／日である。いくつかの実施形態では、追加の治療の第２の有効量は、５０ｍｇ／ｍ２／日、１００ｍｇ／ｍ２／日、１５０ｍｇ／ｍ２／日、２００ｍｇ／ｍ２／日、３００ｍｇ／ｍ２／日、４００ｍｇ／ｍ２／日、５００ｍｇ／ｍ２／日、６００ｍｇ／ｍ２／日、７００ｍｇ／ｍ２／日、８００ｍｇ／ｍ２／日、９００ｍｇ／ｍ２／日、１０００ｍｇ／ｍ２／日、１１００ｍｇ／ｍ２／日、または１２５０ｍｇ／ｍ２／日である。
【００４６】
同時投与されるは、ＳＲＡ１４１および追加の治療が同時に行われる方法、ＳＲＡ１４１および追加の治療が連続的に行われる方法、ならびにＳＲＡ１４１および追加の治療の一方または両方のいずれかが断続的にもしくは継続的に、または同時に、連続的に、断続的に、および／もしくは継続的にの任意の組み合わせで行われる方法を包含する。当業者は、断続的投与が、薬剤の第１の投与および次いでその同じ薬剤の後の時間での別の投与も含むため、断続的投与が、必ずしも連続的投与と同じではないことを認識するであろう。また、当業者は、断続的投与が、第１の薬剤が再び投与される前に異なる薬剤の投与での薬剤の第１の投与の中断を含むため、断続的投与が、いくつかの態様では連続的投与も包含することを理解する。さらに、当業者は、静脈注射または栄養チューブなどを含む多くの経路によって連続投与を達成することができることも知っているであろう。
【００４７】
その上、より一般的な方法では、「同時投与される」という用語は、対象へのＣｄｃ７阻害剤の個々の投与および追加の治療の個々の投与が任意の時間枠の間で重複するあらゆる全ての方法を包含する。
【００４８】
投与経路
いくつかの態様では、本開示は、ＳＲＡ１４１および／または追加の治療のいずれか一方、または両方、またはそれらの任意の組み合わせが、静脈内、皮下、皮膚、経口、筋肉内、および腹腔内からなる群から選択される経路により投与される方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、ＳＲＡ１４１および／または追加の治療のいずれか一方、または両方、またはそれらの任意の組み合わせが静脈内投与される方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、ＳＲＡ１４１および／または追加の治療のいずれか一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせが経口投与される方法を提供する。
【００４９】
本開示の単位用量形態は、同じまたは異なる物理的形態で、すなわち、カプセルもしくは錠剤を介して経口で、および／または経口で、または静脈内注入を介して液体などによって投与され得ることが、当業者によって理解される。また、各投与の単位用量形態は、特定の投与経路によって異なり得る。いくつかの様々な剤形が、Ｃｄｃ７阻害剤およびさらなる治療の一方または両方について存在し得る。異なる医学的状態は、異なる投与経路の根拠となり得るため、本明細書に記載されるＣｄｃ７阻害剤とさらなる治療との組み合わせの同じ成分は、組成および物理的形態が全く同じであり得るが、状態を緩和するために異なる方法で、またおそらく異なる時間に与えられる必要があり得る。例えば、特に嘔吐を伴う、持続性悪心などの状態は、経口剤形の使用を困難にする可能性があり、そのような場合、別の単位用量形態、おそらく以前またはその後に使用される他の剤形と同一のものを、代わりにまたは加えて吸入、口腔内、舌下、または坐剤経路で投与することが必要であり得る。化学的安定性または薬物動態のような様々な因子に問題があり得るため、特定の剤形が、ＳＲＡ１４１と追加の治療との特定の組み合わせの要件であり得る。
【００５０】
投与スケジュール
一態様では、対象へのＳＲＡ１４１または追加の治療の投与の頻度は、Ｑ１ｄ、Ｑ２ｄ、Ｑ３ｄ、Ｑ４ｄ、Ｑ５ｄ、Ｑ６ｄ、Ｑ７ｄ、Ｑ８ｄ、Ｑ９ｄ、Ｑ１０ｄ、Ｑ１４ｄ、Ｑ２１ｄ、Ｑ２８ｄ、Ｑ３０ｄ、Ｑ９０ｄ、Ｑ１２０ｄ、Ｑ２４０ｄ、またはＱ３６５ｄを含むが、これらに限定されない。「ＱｎＤまたはｑｎｄ」という用語は、「ｎ」日毎に１回の薬物投与を指す。例えば、ＱＤ（またはｑｄ）は、１日毎に１回または１日１回の投与を指し、Ｑ２Ｄ（またはｑ２ｄ）は、２日毎に１回の投与を指し、Ｑ７Ｄは、７日毎に１回または１週間に１回の投与を指し、Ｑ５Ｄは、５日毎に１回の投与などを指す。一態様では、ＳＲＡ１４１および追加の治療は、異なるスケジュールで投与される。
【００５１】
別の態様では、対象へのＳＲＡ１４１もしくは追加の治療の投与の頻度は、各週５日の投与、続いて２日の非投与、１週間の毎日の投与、続いて１、２、もしくは３週間の非投与、２もしくは３週間の毎日の投与、続いて１もしくは２週間の非投与、１日２回の投与、または週間サイクルの２日目および３日目の投与を含むが、これらに限定されない。一態様では、ＳＲＡ１４１および追加の治療は、異なるスケジュールで投与される。
【００５２】
一態様では、本開示は、ＳＲＡ１４１および／またはさらなる治療の一方もしくは両方のいずれか、またはそれらの任意の組み合わせが断続的に投与される方法を提供する。一態様では、本開示は、投与間の少なくとも１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、６０分、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、３週間、または４週間の遅延を有する対象に、ＳＲＡ１４１または追加の治療のうちの１つまたは両方、またはこれらの任意の組み合わせのいずれかを投与することを含む方法を提供する。そのような態様では、遅延を伴う投与は、ＳＲＡ１４１および／またはさらなる治療の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせが、約１０分〜約３６５日の所与の期間にわたって連続的に投与され、次いで約１０分〜約３０日の所与の期間にわたって投与されないパターンに従う。一態様では、本開示は、ＳＲＡ１４１および／または追加の治療のいずれか一方または任意の組み合わせが、他方が連続的に与えられる間に断続的に投与される方法を提供する。
【００５３】
一態様では、本開示は、有効量のＳＲＡ１４１の組み合わせが第２の有効量のさらなる治療と連続的に投与される方法を提供する。
【００５４】
一態様では、本開示は、ＳＲＡ１４１および追加の治療が同時に投与される方法を提供する。一態様では、本開示は、有効量のＳＲＡ１４１の組み合わせが第２の有効量のさらなる治療と連続的に投与される方法を提供する。そのような態様では、用語が、対象が組み合わせにおける両方の成分に曝露されるあらゆる全ての方法を含むため、組み合わせは、「同時投与される」とも言われる。しかしながら、そのような態様は、１つの配合物または組成物のみで与えられる組み合わせに限定されない。特定の濃度のＳＲＡ１４１および追加の治療は、特定の間隔で送達するのにより有利であり得、そのようなものとして、ＳＲＡ１４１の有効量および追加の治療の第２の有効量は、投与される配合物に応じて変わり得る。
【００５５】
いくつかの態様では、本開示は、ＳＲＡ１４１および追加の治療が同時にまたは連続的に投与される方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、有効量のＳＲＡ１４１が第２の有効量の追加の治療の後に続いて投与される方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、第２の有効量の追加の治療が有効量のＳＲＡ１４１の後に続いて投与される方法を提供する。
【００５６】
いくつかの態様では、本開示は、組み合わせが１つの配合物で投与される方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、組み合わせが２つの組成物で投与され、有効量のＳＲＡ１４１が第２の有効量のさらなる治療の配合物とは別の配合物で投与される方法を提供する。
【００５７】
いくつかの態様では、本開示は、有効量のＳＲＡ１４１が第２の有効量の追加の治療の後に続いて投与される方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、第２の有効量の追加の治療が有効量のＳＲＡ１４１の後に続いて投与される方法を提供する。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１および追加の治療が投与され、その後、ＳＲＡ１４１および追加の治療の両方が少なくとも２４時間断続的に投与される。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１および追加の治療は、重複しない１日おきのスケジュールで投与される。いくつかの態様では、追加の治療は、１日目に投与され、ＳＲＡ１４１は、週間スケジュールの２日目および３日目に投与される。
【００５８】
いくつかの態様では、本開示は、有効量のＳＲＡ１４１が第２の有効量のさらなる治療の４時間以上後に投与される方法を提供する。一態様では、本開示は、有効量のＳＲＡ１４１が、第２の有効量の追加の治療の１０分以上、１５分以上、２０分以上、３０分以上、４０分以上、６０分以上、１時間以上、２時間以上、４時間以上、６時間以上、８時間以上、１０時間以上、１２時間以上、２４時間以上、２以上、４日以上、６日以上、８日以上、１０日以上、１２日以上、１４日以上、２１日以上、３０日以上後に投与される方法を提供する。一態様では、本開示は、第２の有効量の追加の治療が、有効量のＳＲＡ１４１の１０分以上、１５分以上、２０分以上、３０分以上、４０分以上、６０分以上、１時間以上、２時間以上、４時間以上、６時間以上８時間以上、１０時間以上、１２時間以上、２４時間以上、２日以上、４日以上、６日以上、８日以上、１０日以上、１２日以上、１４日以上、２１日以上、３０日以上後に投与される方法を提供する。
【００５９】
癌および腫瘍
癌の治療のための方法が開示される。したがって、本開示は、癌の治療を、それを必要とする対象（すなわち、癌を有する対象または癌に罹患している対象）において行う方法であって、本方法は、有効量のＳＲＡ１４１を癌を有する対象に投与することを含み、癌は、黒色腫、子宮癌、甲状腺癌、血液癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌、子宮内膜癌、胆管癌、肝細胞癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、小細胞肺癌、神経芽腫、または頭頸部癌である、方法を提供する。いくつかの態様では、癌は、血液癌、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの態様では、癌は、ＡＭＬである。
【００６０】
いくつかの態様では、癌は、マイクロサテライト不安定性高（ＭＳＩ−Ｈ）状態を有しないと分類され得る。「マイクロサテライト不安定性」という用語は、特定の反復ＤＮＡ配列（例えば、短いタンデムリピートまたは単純な配列リピート）においてゲノム不安定性を有することを特徴とする腫瘍を指す。マイクロサテライト不安定性の検出方法は、Ｗａｎｇ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ  Ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  Ｌｙｎｃｈ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ−Ａ  Ｍｉｎｉ  Ｒｅｖｉｅｗ；ＮＡＪ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ．２０１６；９（１）：５−１１に記載されるそれらの方法を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の方法を含む。特定の実施形態において、マイクロサテライト不安定性は、モノヌクレオチドリピートマーカー（例えば、ＢＡＴ−２５、ＢＡＴ−２６、ＮＲ−２１、ＮＲ−２４、およびＭＯＮＯ−２７、別名、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＭＳＩ多重システム）の検出によって特徴付けられる。特定の実施形態において、マイクロサテライト不安定性は、準単型性マーカーおよびジヌクレオチドリピートマーカー（例えば、ＢＡＴ２５、ＢＡＴ２６、Ｄ２Ｓ１２３、Ｄ５Ｓ３４６、およびＤ１７Ｓ２５０、別名、Ｂａｔｈｅｓｄａパネル）の検出によって特徴付けられる。ＭＳＩは、２つ以上のマーカーにおける不安定性がＭＳＩ−Ｈ、１つのみにおける不安定性がＭＳＩ−Ｌとして分類され、ＭＳＳとして５つのマーカーにおいて観察された不安定性がない場合を使用して、ＭＳＩ−ｈｉｇｈ（ＭＳＩ−Ｈ）、ＭＳＩ−Ｌｏｗ（ＭＳＩ−Ｌ）、およびＭＳ−Ｓｔａｂｌｅ（ＭＳＳ）として分類され得る。試験したマーカーの３０％超が不安定性を示す場合（ＭＳＩ−Ｈ）、試験したマーカーの１０〜３０％が不安定性を示す場合はＭＳＩ−Ｌ、および試験したマーカーの１０％未満が不安定性を示す場合はＭＳＳとしても分類することができる。ＭＳＩステータスは、５、６、７、８、９、１０、または１０個以上のマーカーを使用して試験することができる。いくつかの実施形態では、癌は、ＭＳＳとして分類される。癌は、未知のＭＳＩ状態を有することもでき、すなわち、腫瘍は、ＭＳＩ−Ｈ状態を有することが知られていない。
【００６１】
特定の実施形態における「マイクロサテライト不安定性」という用語はまた、少なくとも１つの参照試料と比較して、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）の喪失と相関することが当該技術分野で知られる１つ以上の反復ＤＮＡ配列を有することによって特徴付けられる腫瘍を指す。
【００６２】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長を阻害する方法であって、腫瘍は、黒色腫、子宮癌、甲状腺癌、血液癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌、子宮内膜癌、胆道癌、肝細胞癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、小細胞肺癌、神経芽腫、または頭頸部癌である、方法を提供する。腫瘍は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）などの血液癌に由来し得る。腫瘍は、ＡＭＬ癌由来であり得る。腫瘍は、転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）に由来し得る。腫瘍は、ＭＳＩ−Ｈ状態を有すると分類されない転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）に由来し得る。腫瘍は、Ｗｎｔシグナル伝達経路変異、例えば、大腸腺腫症（ＡＰＣ）遺伝子変異、ＦＡＴ１変異、ＦＡＴ４変異、またはそれらの組み合わせを有することができる。腫瘍は、ＦＢＸＷ７変異を有することができる。
【００６３】
いくつかの態様では、癌に関連する腫瘍は、アーカイブまたは新鮮な腫瘍生検のいずれかを使用し、ヘマトキシリンおよびエオシン（または同様の染色）による腫瘍切片の組織化学染色を使用して染色体分離のパターンを検査し、腫瘍が異常な有糸分裂（例えば、遅延染色体、後期ブリッジ、多極主軸）を呈するかどうかを、例えば、顕微鏡下で手動または自動化方法のいずれかで判定することによって前向きにスクリーニングされる表現型を含む。いくつかの態様では、異常な有糸分裂の薬物動態マーカーは、ＳＲＡ１４１投与後に治療後の腫瘍生検を使用して組織化学染色によって決定される。治療後の生検は、ＳＲＡ１４１投与の数日後に取得することができ、例えば、ｐＭＣＭ２モニタリングのために同日に生検を取得する（下記参照）。
【００６４】
対象
本開示は、有効量のＳＲＡ１４１を、それを必要とする対象に投与することを提供する。本開示は、さらなる治療との併用療法において有効量のＳＲＡ１４１を、それを必要とする対象に投与することを提供する。いくつかの態様では、対象からの腫瘍は、投与前に遺伝子検査および／シーケンシングでスクリーニングされる。いくつかの態様では、対象からの腫瘍は、投与後に遺伝子検査および／シーケンシングでスクリーニングされる。いくつかの態様では、対象からの腫瘍は、投与後および前の両方にスクリーニングされる。いくつかの態様では、対象からの健康な細胞は、投与前、投与後、または両方に遺伝子検査および／シーケンシングでスクリーニングされる。いくつかの態様では、対象からの腫瘍は、マイクロサテライトまたは反復ＤＮＡなどの特定のバイオマーカーの発現のレベルを決定するために他の生物学的試験またはアッセイでスクリーニングされる。いくつかの態様では、対象からの腫瘍は、遺伝子検査および／シーケンシングならびに他のバイオマーカー試験またはアッセイの両方でスクリーニングされる。
【００６５】
いくつかの態様では、本開示は、対象が哺乳動物である方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、対象が霊長類である方法を提供する。
【００６６】
いくつかの態様では、本開示は、対象がマウスである方法を提供する。
【００６７】
いくつかの態様では、本開示は、対象がヒトである方法を提供する。
【００６８】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍が、黒色腫、子宮癌、甲状腺癌、血液癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌、子宮内膜癌、胆道癌、肝細胞癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、小細胞肺癌、神経芽腫、または頭頸部癌からなる群から選択される癌に罹患しているヒトにある方法を提供する。いくつかの態様では、癌は、血液癌、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好酸球性白血病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの態様では、癌は、ＡＭＬである。いくつかの態様では、癌は、転移性大腸癌（ｍＣＲＣ）である。ｍＣＲＣは、ＭＳＩ−Ｈ状態を有しないと分類することができる。
【００６９】
いくつかの態様では、対象は、ＭＳＩ−Ｈ状態を有しない、染色体不安定性（ＣＩＮ）表現型を有する（例えば、ＣＲＣ  ＣＩＮ表現型は、一般に、マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ）ＣＲＣ腫瘍から互いに排他的である）、主軸チェックポイントアセンブリ欠損症、有糸分裂欠損症、Ｇ１／Ｓチェックポイント欠損症、Ｗｎｔシグナル伝達経路変異（例えば、大腸腺腫症（ＡＰＣ）遺伝子変異、ＦＡＴ１変異、ＦＡＴ４変異、またはそれらの組み合わせ）、またはそれらの組み合わせを有するなど、Ｃｄｃ７阻害に対する感受性を付与すると予想されるゲノム変化を有する腫瘍を有する。
【００７０】
薬物動態
癌の治療のための本明細書に記載の方法は、４００ｎｇ／ｍＬ超、６００ｎｇ／ｍＬ超、１０００ｎｇ／ｍＬ超、または１４００ｎｇ／ｍＬ超のＳＲＡ１４１化合物の血漿Ｃｍａｘをもたらすことができる。癌の治療のための本明細書に記載の方法は、少なくとも５００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも６００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも７００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも８００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも９００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１０００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１１００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１１００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１２００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１３００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１４００ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも１５００ｎｇ／ｍＬのＳＲＡ１４１化合物の血漿Ｃｍａｘをもたらすことができる。
【００７１】
癌の治療のための本明細書に記載の方法は、３０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ超、５８００ｎｇ．ｈ／ｍＬ超、１１９００ｎｇ．ｈ／ｍＬ超、または１６４００ｎｇ．ｈ／ｍＬ超のＳＲＡ１４１化合物のＡＵＣｌａｓｔをもたらし得る。癌の治療のための本明細書に記載の方法は、少なくとも５０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも６０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも７０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも８０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも９０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも１００００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも１１０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも１２０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも１３０００ｎｇ．ｈ／ｍＬ、少なくとも１４０００ｎｇｈ／ｍＬ、少なくとも１５０００ｎｇｈ／ｍＬ、または少なくとも１６０００ｎｇｈ／ｍＬのＳＲＡ１４１化合物のＡＵＣｌａｓｔをもたらすことができる。
【００７２】
癌の治療のための本明細書に記載の方法は、５００ｎｇ／ｍＬ超、６００ｎｇ／ｍＬ超、９００ｎｇ／ｍＬ超、または１３００ｎｇ／ｍＬ超のＳＲＡ１４１化合物の腫瘍内濃度をもたらし得る。癌の治療のための本明細書に記載の方法は、少なくとも５００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも６００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも７００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも８００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも９００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１０００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１１００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１１００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１２００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１３００ｎｇ／ｍＬ、少なくとも１４００ｎｇ／ｍＬ、または少なくとも１５００ｎｇ／ｍＬのＳＲＡ１４１化合物の腫瘍内濃度をもたらすことができる。
【００７３】
キナーゼ阻害
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、インビボキナーゼ阻害、例えば、ＭＣＭ２リン酸化の阻害をもたらす。当該技術分野で既知であるように、Ｓ相およびその後のＤＮＡ複製に入る前に、ゲノムにわたって複製の複数の起源が確立される。これらの複製起点は、複製前複製複合体（ｐｒｅ−ＲＣ）と総称される６つのミニ染色体維持タンパク質（ＭＣＭ２−７）を含む複数の成分から構成される。プレＲＣが確立されると、Ｃｄｃ７はＭＣＭ２をリン酸化し、これはＳ相エントリおよびＤＮＡ複製を開始する。Ｓ相が進行すると、Ｃｄｃ７は、細胞周期の次の相に入る前にＤＮＡ複製が完了するまで、追加の複製起点でＭＣＭ２をリン酸化する。したがって、ＭＣＭ２リン酸化は、Ｃｄｃ７活性の代替マーカーとして使用することができる。
【００７４】
アミノ酸残基Ｓｅｒ４０またはＳｅｒ５３でのリン酸化などのＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害をもたらす癌の治療方法が、本明細書に開示される。ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、癌に関連する腫瘍であり得る。腫瘍におけるＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、未治療の腫瘍試料と比較して、少なくとも５０％であり得る。腫瘍におけるＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、未治療の腫瘍試料と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％であり得る。ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、対象の皮膚にあり得る。ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、ウエスタンブロット分析、免疫組織化学（ＩＨＣ）、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）、またはＬＣ／ＭＳ／ＭＳを含むが、これらに限定されない、当業者に既知のアッセイによって測定することができる。ＭＣＭ２リン酸化のインビボ阻害は、対象の生検において測定することができる。
【００７５】
癌の治療のための本明細書に記載の方法は、対象におけるオフターゲットキナーゼの特異的阻害をもたらさない（すなわち、回避し得る）場合があり、オフターゲットキナーゼは、ＷＥＥ１、ＣＤＫ７、ＣＤＫ８、ＣＤＫ９、およびＬＡＴＳ２からなる群から選択される。癌の治療のための本明細書に記載の方法は、オフターゲットキナーゼの９０％未満の阻害をもたらし得る。
【００７６】
腫瘍阻害
本開示は、有効量の化合物、例えば、ＳＲＡ１４１を使用して、腫瘍の進行を阻害、その凝集の凝集体のサイズを低減、その体積を低減、その直径を低減、および／またはそうでなければその成長を阻害する方法を対象とする。したがって、癌の治療のための本明細書に記載の方法は、癌に関連する腫瘍の成長阻害をもたらすことができる。癌の治療のための本明細書に記載の方法は、癌に関連する腫瘍の細胞毒性をもたらすことができる。癌の治療のための本明細書に記載の方法は、癌に関連する腫瘍の成長阻害および細胞毒性をもたらすことができる。癌の治療のための本明細書に記載の方法は、癌に関連する腫瘍の成長阻害または細胞毒性をもたらすことができる。癌の治療のために本明細書に記載の方法は、癌に関連する腫瘍の退縮をもたらすことができ、完全退縮または部分退縮を含む。また本明細書で提供されるものは、基礎疾患、例えば、癌を治療し、対象の生存を延長する方法である。
【００７７】
一実施形態では、腫瘍の成長の阻害を、それを必要とする対象において行う方法であって、対象に有効量のＳＲＡ１４１を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長を阻害するために有効量のＳＲＡ１４１を対象に投与する方法であって、腫瘍成長が、少なくとも４７％低減される、方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長を阻害するために有効量のＳＲＡ１４１を対象に投与する方法であって、腫瘍成長が、少なくとも９３％低減される、方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長を阻害するために有効量のＳＲＡ１４１を対象に投与する方法であって、腫瘍成長が、腫瘍体積によって測定される場合、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２４％、２６％、２８％、３０％、３２％、３４％、３６％、３８％、４０％、４２％、４４％、４６％、４８％、５０％、５２％、５４％、５６％、５８％、６０％、６２％、６４％、６６％、６８％、７０％、７２％、７４％、７６％、７８％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、または１００％減少する、方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長を阻害するために有効量のＳＲＡ１４１を対象に投与する方法であって、腫瘍の成長が、腫瘍の絶対サイズによって測定される場合、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２４％、２６％、２８％、３０％、３２％、３４％、３６％、３８％、４０％、４２％、４４％、４６％、４８％、５０％、５２％、５４％、５６％、５８％、６０％、６２％、６４％、６６％、６８％、７０％、７２％、７４％、７６％、７８％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、または１００％減少する、方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長を阻害するために有効量のＳＲＡ１４１を対象に投与する方法であって、腫瘍成長が、その種類の腫瘍の腫瘍マーカーの発現レベルによって測定される場合、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２４％、２６％、２８％、３０％、３２％、３４％、３６％、３８％、４０％、４２％、４４％、４６％、４８％、５０％、５２％、５４％、５６％、５８％、６０％、６２％、６４％、６６％、６８％、７０％、７２％、７４％、７６％、７８％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、または１００％減少する。本開示はまた、有効量の化合物ＳＲＡ１４１および第２の有効量の追加の治療を使用して、腫瘍の進行を阻害、その凝集のサイズを低減、その体積を低減、その直径を低減、および／またはそうでなければその成長を阻害する方法を対象とする。また本明細書で提供されるものは、基礎疾患、例えば、癌を治療し、対象の生存を延長する方法である。
【００７８】
一実施形態では、腫瘍の成長の阻害を、それを必要とする対象において行う方法であって、本方法は、対象に有効量のＳＲＡ１４１および第２の有効量の追加の治療を投与することを含む、方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長を阻害するために有効量のＳＲＡ１４１および第２の有効量の追加の治療を対象に投与する方法であって、腫瘍成長が、腫瘍体積によって測定される場合、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２４％、２６％、２８％、３０％、３２％、３４％、３６％、３８％、４０％、４２％、４４％、４６％、４８％、５０％、５２％、５４％、５６％、５８％、６０％、６２％、６４％、６６％、６８％、７０％、７２％、７４％、７６％、７８％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、または１００％減少する。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長を阻害するために有効量のＳＲＡ１４１および第２の有効量の追加の治療を対象に投与する方法であって、腫瘍の成長が、腫瘍の絶対サイズによって測定される場合、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２４％、２６％、２８％、３０％、３２％、３４％、３６％、３８％、４０％、４２％、４４％、４６％、４８％、５０％、５２％、５４％、５６％、５８％、６０％、６２％、６４％、６６％、６８％、７０％、７２％、７４％、７６％、７８％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、または１００％減少する。いくつかの態様では、本開示は、対象に、腫瘍の成長を阻害するための有効量のＳＲＡ１４１および第２の有効量の追加の治療を投与する方法であって、腫瘍成長が、その種類の腫瘍の腫瘍マーカーの発現レベルによって測定される場合、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１４％、１６％、１８％、２０％、２２％、２４％、２６％、２８％、３０％、３２％、３４％、３６％、３８％、４０％、４２％、４４％、４６％、４８％、５０％、５２％、５４％、５６％、５８％、６０％、６２％、６４％、６６％、６８％、７０％、７２％、７４％、７６％、７８％、８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％、または１００％減少する。
【００７９】
臨床評価項目
癌を治療するための方法であり、例えば、対象において腫瘍の成長を阻害する、および／または腫瘍細胞の成長を阻害するための方法であり、方法は、臨床的に関連する評価項目をもたらす。
【００８０】
腫瘍成長は、１つ以上の生体細胞がはるかに急速に成長および分裂する場合に起こり、細胞分裂の正常かつ健康なプロセスと比較して細胞数の増加をもたらす。この現象は、細胞が癌または前癌などの疾患状態にあるという徴候である。また、腫瘍成長はしばしば、凝集した細胞が腫瘍を形成する前の別個の段階で起こる。
【００８１】
当業者が細胞複製速度を測定するために使用することができるいくつかの方法がある。細胞内の全体的な代謝活性は、標識された生物学的製品を介して測定することができる。例えば、細胞に浸透し、特定の酵素および他の因子と相互作用して、検出可能な生成物を生成することができるいくつかの市販の色素（例えば、ＭＴＴ）がある。また、細胞バイオマーカーは、細胞において測定することができる。例えば、ＢｒｄＵアッセイは、チミジン誘導体を細胞ＤＮＡに組み込み、抗体で検出することができる。増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）は、別のそのような検出のためのバイオマーカーである。タグ付け技法の他に、当業者は、細胞計数を可能にするために、例えば、顕微鏡検査またはフローサイトメトリーを使用することもできる。
【００８２】
一態様では、細胞複製は、生活の質（ＱＯＬ）スコア、奏効期間（ＤＯＲ、臨床的有効率（ＣＢＲ）、患者報告転帰（ＰＲＯ）、客観的奏効率（ＯＲＲ）スコア、無病生存率（ＤＦＳ）もしくは無増悪生存率（ＰＦＳ）、無増悪期間（ＴＴＰ）、全生存率、治療成功時間（ＴＴＦ）、ＲＥＣＩＳＴ基準、部分奏効（ＰＲ）、安定疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）、および／または完全奏効（ＣＲ）を含む臨床評価項目によって測定される。臨床評価項目は、当業者に周知の方法を使用して決定することができる。
【００８３】
いくつかの態様では、ＣＲは、任意の病理学的リンパ節（標的または非標的のいずれか）が短軸が＜１０ｍｍに低減する、全ての標的病変の消失である。いくつかの態様では、ＰＲは、ベースライン合計直径を参照して、標的病変の直径の合計の少なくとも３０％減少である。いくつかの態様では、ＰＤは、最小合計を参照として、標的病変の直径の少なくとも２０％増加である（最小である場合、ベースライン合計を含む）。いくつかの態様では、合計は、２０％の相対的な増加に加えて、少なくとも５ｍｍの絶対的な増加を示すことができる。いくつかの態様では、最小合計直径を参照として、ＳＤはＰＲに適格であるのに十分な収縮もＰＤに適格であるのに十分な増加もない。
【００８４】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長が、有効量のＳＲＡ１４１の投与後に、少なくとも約５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、９０、９５、９７、９９、または９９．９％低減する方法を提供する。
【００８５】
いくつかの態様では、本開示は、低減％が１つ以上の臨床評価項目の測定（複数可）に基づいて計算される方法を提供する。
【００８６】
いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長が、ＭＴＴアッセイにおける総細胞計数の増加もしくは減少によって、またはｃｔＤＮＡアッセイにより測定した遺伝子プロファイルの変化によって測定して、有効量のＳＲＡ１４１の投与後に、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、９０、９５、９７、９９、もしくは９９．９％、またはそれらの値以下で低減する方法を提供する。
【００８７】
いくつかの一般的な態様では、本開示は、腫瘍の成長が、有効量のＳＲＡ１４１の投与後に、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、９０、９５、９７、９９、または９９．９％低減する方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、腫瘍の成長が、ＭＴＴアッセイにおける総細胞計数の増加もしくは減少によって、またはｃｔＤＮＡアッセイにより測定した遺伝子プロファイルの変化によって測定して、有効量のＳＲＡ１４１の投与後に少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、９０、９５、９７、９９、または９９．９％低減する方法を提供する。
【００８８】
いくつかの態様では、本開示は、投与が１０μＭ未満のＩＣ５０値および／または１μＭ未満のＧＩ５０値をもたらす方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、投与が投与後２４時間で１０μＭ未満のＩＣ５０値および／または１μＭ未満のＧＩ５０値をもたらす方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、投与が投与後４８時間で１０μＭ未満のＩＣ５０値および／または１μＭ未満のＧＩ５０値をもたらす方法を提供する。
【００８９】
いくつかの態様では、本開示は、投与が少なくとも１、１０、２５、５０、１００、２００、４００、６００、８００、または１０００のＡＵＣをもたらす方法を提供する。
【００９０】
いくつかの態様では、投与が０．００１、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、１、３、５、１０、２０、４０、５０、６０、８０、９０、１００、２００、２５０、３００、３５０、または４００μＭ以下のＩＣ５０値をもたらす方法を提供する。
【００９１】
いくつかの態様では、本開示は、投与が少なくとも０．０１、０．１、１、３、５、１０、２０、４０、５０、６０、８０、９０、１００、２００、２５０、３００、３５０、または４００μＭのＥＣ５０値をもたらす方法を提供する。
【００９２】
いくつかの態様では、本開示は、投与が約１．００１：１〜約５０：１、約１．１：１〜約１５：１、約１．２：１〜約１２：１、約１．２：１〜約１０：１、約１．２：１〜約５：１、または約１．２：１〜約３：１の範囲の治療指数（ＴＩ）値をもたらす方法を提供する。
【００９３】
いくつかの態様では、本開示は、投与が少なくとも０．１μＭ、０．３μＭ、０．５μＭ、０．７μＭ、１μＭ、１．５μＭ、２μＭ、２．５μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、または１０μＭのＧＩ５０値をもたらす方法を提供する。
【００９４】
いくつかの態様では、本開示は、投与が０．１、０．５、１、２μＭ、２．５μＭ、３μＭ、４μＭ、５μＭ、または１０μＭ以下の最大応答観察（最大応答）値をもたらす方法を提供する。
【００９５】
腫瘍成長は、総腫瘍体積を単位として表すことができる。当業者が、固形腫瘍がだいたい球形であるという仮定に基づいて腫瘍体積を計算するために使用することができる、一般的および特定の腫瘍モデルに特異的な両方の式が存在する。これに関して、当業者は、腫瘍体積を測定するために、超音波イメージング、手動もしくはデジタルキャリパー、超音波検査、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、マイクロＣＴ、１８Ｆ−ＦＤＧ−マイクロＰＥＴ、または磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）などの実験ツールを使用することができる。例えば、Ｍｏｎｇａ  ＳＰ，Ｗａｄｌｅｉｇｈ  Ｒ，Ｓｈａｒｍａ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ／ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ  ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  ｇｅｌ  ｆｏｒ  ｐａｌｌｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０００；２３（４）：３８６−ｎ３９２；Ｍａｒｙ  Ｍ．Ｔｏｍａｙｋｏ  Ｃ．，Ｐａｔｒｉｃｋ  Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９８９．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｔｕｍｏｒ  ｓｉｚｅ  ｉｎ  ａｔｈｙｍｉｃ（ｎｕｄｅ）ｍｉｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２４，Ｉｓｓｕｅ  ３，ｐｐ  １４８−１５４；Ｅ  Ｒｉｃｈｔｉｇ，Ｇ  Ｌａｎｇｍａｎｎ，Ｋ  Ｍｕｌｌｎｅｒ，Ｇ  Ｒｉｃｈｔｉｇ  ａｎｄ  Ｊ  Ｓｍｏｌｌｅ，２００４．Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｔｕｍｏｕｒ  ｖｏｌｕｍｅ  ａｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｆｏｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｍｅｌａｎｏｍａｓ．Ｅｙｅ（２００４）１８，６１９−６２３；Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．ＢＭＣ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２００８．８：１６；Ｔｏｍａｙｋｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １９８９，Ｖｏｌｕｍｅ  ２４，Ｉｓｓｕｅ  ３，ｐｐ  １４８−１５４、およびＦａｕｓｔｉｎｏ−Ｒｏｃｈａ  ｅｔ  ａｌ．Ｌａｂ  Ａｎｉｍ（ＮＹ）．２０１３  Ｊｕｎ；４２（６）：２１７−２４（それらの各々は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【００９６】
いくつかの態様では、本開示は、投与が、有効量のＳＲＡ１４１の投与後に、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、９０、９５、９７、９９、または９９．９％の腫瘍体積の低減をもたらす方法を提供する。いくつかの態様では、本開示は、投与が、有効量のＳＲＡ１４１の投与後に、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、９０、９５、９７、９９、または９９．９％の腫瘍サイズの低減をもたらす方法を提供する。
【００９７】
いくつかの態様では、本開示は、投与が、１、２、３、４、６、８、１２、１６、２０、２４、３６、または５２週間後に、少なくとも５％の腫瘍体積の低減をもたらす方法をもたらす方法を提供する。
【００９８】
客観的奏効または腫瘍成長を評価するために、ベースラインでの全体的な腫瘍負荷は、推定され、その後の測定にコンパレータとして使用され得る。測定可能な疾患は、少なくとも１つの測定可能な病変の存在によって定義され得る。
【００９９】
いくつかの態様では、本開示は、複数の測定可能な病変がベースラインで存在する場合、全ての関与する臓器を代表する合計最大５つの病変（および臓器あたり最大２つの病変）までの全ての病変が標的病変として特定され、ベースラインで記録および測定される方法を提供する。いくつかの態様では、標的病変は、それらのサイズ（最長直径を有する病変）に基づいて選択され、全ての関与臓器を代表する。いくつかの態様では、標的病変は、再現可能な繰り返し測定に適したものである。いくつかの場合において、図３のＥｉｓｅｎｈａｕｅｒ，ｅｔ．ａｌ．（２００９）に例示されるように、再現可能に測定することができる次に大きな病変が選択される状況では、最大の病変は、再現可能な測定に適さない。
【０１００】
病理学的リンパ節は、結節がＣＴスキャンによって１５ｍｍ以上の短軸を有する場合に測定可能と定義され、いくつかの場合において、標的病変として特定され得る。いくつかの実施形態では、結節の短軸はベースライン合計に寄与する。いくつかの実施形態では、結節の短軸は、結節が固形腫瘍によって関与されるかを判断するために放射線科医によって使用される直径である。いくつかの実施形態において、結節サイズは、画像が取得される平面における２つの寸法として報告される（例えば、ＣＴスキャンについての軸平面、ＭＲＩスキャンについての軸平面、矢状面、または冠状面、スキャンの取得の平面に応じて）。いくつかの実施形態では、寸法のうちの小さい方が短軸である。いくつかの実施形態では、１０ｍｍ以上であるが＜１５ｍｍの短軸を有する病理学的結節は、非標的病変とみなされる。いくつかの実施形態では、＜１０ｍｍの短軸を有する結節は、非病理学的とみなされ、記録も追跡もされない。
【０１０１】
いくつかの態様では、全ての標的病変についての直径（非結節性病変では最長、結節性病変では短軸）の合計は計算され、ベースライン合計直径として報告される。いくつかの態様では、リンパ節を合計に含める場合、短軸のみが合計に追加される。いくつかの態様において、ベースライン合計直径は、客観的な腫瘍成長または退縮を特徴付けるために、参照として使用される。
【０１０２】
いくつかの態様では、疾患の全ての他の病変または部位（病理学的リンパ節を含む）は、非標的病変として特定され、ベースラインで記録される。いくつかの場合において、測定が必要とされず、病変は「存在する」、「不在」、または「明確な進行」として追跡される。「場合によっては、同じ臓器に関与する複数の非標的病変（例えば、「複数の骨盤リンパ節の拡大」または「複数の肝転移」）が記録され得る。
【０１０３】
治療有効量および単位用量形態
一般に、本技術の化合物は、同様の有用性を提供する薬剤の許容される投与様式のいずれかにより治療有効量で投与されることになる。本技術の化合物、すなわち、活性成分の実際の量は、治療される疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康状態、使用される化合物の効力、投与の経路および形態、ならびに当業者に周知の他の因子などの多数の因子に依存することになる。薬物は、少なくとも１日１回、好ましくは１日１回または２回投与することができる。
【０１０４】
そのような薬剤の有効量は、最も効果的で便利な投与経路および最も適切な配合と同様に、日常的な実験により容易に決定することができる。様々な配合物および薬物送達システムが当該技術分野で利用可能である。例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．，ｅｄ．．（１９９５）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．を参照されたい。
【０１０５】
治療有効用量は、当該技術分野で周知の様々な技法を使用して最初に推定することができる。動物実験で使用される初期用量は、細胞培養アッセイで確立された有効濃度に基づく場合がある。ヒト対象に適した投与量範囲は、例えば、動物実験および細胞培養アッセイから得られたデータを使用して決定することができる。
【０１０６】
薬剤、例えば、本明細書に記載の方法で使用される化合物、例えば、Ｃｄｃ７阻害剤ＳＲＡ１４１の有効量または治療有効量または用量は、対象において症状の改善または生存の延長をもたらす薬剤または化合物の量を指す。そのような分子の毒性および治療有効性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効な用量）、ならびに最小有効濃度（ＭＥＣ）または最小有効用量（ＭＥＤ）を決定することによって決定することができる。毒性対治療効果の用量比は、治療指数であり、これは、ＭＴＤまたは重篤な毒性が発現しない最高用量（ＨＮＳＴＤ）対ＭＥＤの比として表すことができる。高い治療指数を示す薬剤が好ましい。
【０１０７】
有効量または治療有効量は、研究者、獣医、医師、または他の臨床医によって求められている、組織、システム、動物、またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出すであろう化合物または薬学的組成物の量である。投与量は、毒性をほとんどまたは全く有さないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内に特に含まれる。投与量は、用いられる剤形および／または利用される投与経路に応じてこの範囲内で変動してもよい。正確な配合、投与経路、投与量、および投与間隔は、対象の状態の詳細を考慮して、当該技術分野で既知の方法に従って選択されるべきである。
【０１０８】
投与量および間隔は、所望の効果を達成するのに十分な活性部分の血漿レベル、すなわち、最小有効濃度（ＭＥＣ）を提供するために、個別に調整されてもよい。ＭＥＣは、各化合物について変動するが、例えば、インビトロデータおよび動物実験から推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投与量は、個々の特徴および投与経路に依存するであろう。局所投与または選択的摂取の場合、薬物の有効な局所濃度は、血漿濃度に関連しないことがある。
【０１０９】
投与される薬剤または組成物の量は、治療される対象の性別、年齢、および体重、罹患の重症度、投与方法、ならびに処方医の判断を含む、様々な因子に依存し得る。
【０１１０】
治療有効量は、有効量のＳＲＡ１４１および第２の有効量の追加の治療のいずれか一方または両方と同じであることも、異なることもできる。これは、本開示が、ＳＲＡ１４１の有効量も追加の治療の第２の有効量も、単独で、疾患の症状を改善する量であってはならない場合でも、本明細書に記載される方法が有効であることを提供するためである（例えば、ＳＲＡ１４１および／または追加の治療の量は、個々の療法として投与される場合、「治療量以下」の量とみなされ得る）。しかしながら、本開示は、治療有効量の組み合わせが提供されなければならないことを提供し、すなわち、組み合わせは、少なくとも疾患の症状の治療に影響を与える。
【０１１１】
単位用量形態は、当業者によって一般的に理解される用語である。単位用量形態は、特定の使用のために販売される薬学的製剤である。製剤は、ほとんどの場合、薬学的に許容される担体または賦形剤の形態である、活性成分（複数可）および不活性成分を含む。複数の単位用量形態は異なる製剤であることが理解される。したがって、１つの単位用量形態は、例えば、各成分の特定の比での２５０ｍｇのＳＲＡ１４１と追加の治療との組み合わせであってもよく、別の完全に異なる単位用量形態は、例えば、上記の各成分の同じ特定の比での７５０ｍｇのＳＲＡ１４１と追加の治療との組み合わせである。よって、単位用量形態によって、ＳＲＡ１４１の有効量およびさらなる治療の第２の有効量は、両方とも同じままであってもよい。もちろん、ＳＲＡ１４１の有効量またはさらなる治療の第２の有効量のいずれか一方が変化する場合、単位用量形態は異なる。
【０１１２】
いくつかの態様では、有効量は、ＳＲＡ１４１化合物に特有であり、すなわち、追加の治療の第２の有効量とは異なる。いくつかの態様では、有効量のＳＲＡ１４１は、「治療有効量」に等しい量、または治療効果および／もしくは有益な効果をもたらす量である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量は、「治療有効量」である。いくつかの態様では、追加の治療の第２の有効量は、「治療有効量」である。いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１の有効量および追加の治療の第２の有効量の両方は、「治療有効量」ではない。いくつかの態様では、第２の有効量は、追加の治療に特有であり、すなわち、第２の有効量は、異なる追加の治療について異なる量である。
【０１１３】
いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１と追加の治療との組み合わせは、１つの単位用量形態で配合される。いくつかの態様では、同じ単位用量形態は、少なくとも４時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、１日、２日、３日、７日、１０日、１４日、２１日、または３０日間にわたって投与される。
【０１１４】
いくつかの態様では、ＳＲＡ１４１と追加の治療との組み合わせは、少なくとも２つの別々に異なる単位用量形態で配合される。いくつかの態様では、第１の有効量は、第１の単位用量形態では第２の単位用量形態とは異なる。いくつかの態様では、有効量のＳＲＡ１４１は、第１の単位用量形態では第２の単位用量形態と同じである。
【０１１５】
いくつかの態様では、第１の単位用量形態は、第２の単位用量形態と同じである。いくつかの態様では、第１の単位用量形態は、第２および第３の単位用量形態と同じである。いくつかの態様では、第１の単位用量形態は、第２、第３、および第４の単位用量形態と同じである。
【０１１６】
本発明の化合物
一態様では、本開示は、化合物ＳＲＡ１４１の使用方法を提供する。
【０１１７】
ＳＲＡ１４１
化合物ＳＲＡ１４１は、化学名：エチル５−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）メチレン４−オキソ−２−｛［４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピペラジニル］アミノ−４，５−ジヒドロフラン−３−カルボキシレートによっても特定される。
【０１１８】
ＳＲＡ１４１は、それが教示する全てについて参照により本明細書に組み込まれる、国際特許公開第ＷＯ２０１２１３３８０２号に開示される化合物である。当業者は、ＳＲＡ１４１の合成方法を国際特許公開第ＷＯ２０１２１３３８０２号に見出すであろう。
【０１１９】
ＳＲＡ１４１構造は、以下に示される：
【化２】
2022500479.tif 000004
【０１２０】
薬学的組成物
腫瘍の成長を阻害するための方法、癌の進行を阻害するための方法、または癌を治療するための方法が本明細書に記載される。該方法は、有効量のＳＲＡ１４１、および任意選択的に、第２の有効量のさらなる治療を投与することを含む。ＳＲＡ１４１および追加の治療は、各々、薬学的組成物に配合することができる。これらの薬学的組成物は、活性化合物（複数可）に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤、または当業者に周知の他の材料を含み得る。そのような材料は、非毒性であるべきであり、活性成分の有効性に干渉するべきではない。担体または他の材料の正確な性質は、投与経路、例えば、経口、静脈内、皮膚または皮下、鼻腔内、筋肉内、腹腔内経路に依存し得る。
【０１２１】
経口投与用の薬学的組成物は、錠剤、カプセル、粉末、または液体形態であり得る。錠剤は、ゼラチンなどの固体担体を含むことができる。液体薬学的組成物は、一般に、液体担体、例えば、水、石油誘導体、動物油もしくは植物油、鉱油、または合成油を含む。生理食塩水、デキストロースもしくは他の糖類溶液、またはグリコール、例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、もしくはポリエチレングリコールを含めることができる。
【０１２２】
静脈内、皮膚、もしくは皮下注射、または罹患部位での注射について、活性成分は、パイロジェンフリーであり、適切なｐＨ、等張性、および安定性を有する非経口的に許容される水性溶液の形態であろう。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、乳酸リンゲル注射などの等張性ビヒクルを使用して適切な溶液を調製することが十分にできる。必要に応じて、防腐剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤、および／または他の添加物を含めることができる。
【０１２３】
組成物は、単独または他の治療と組み合わせて、治療される状態に応じて同時または連続的のいずれかで投与することができる。
【０１２４】
本技術は、様々であり得るので、任意の特定の組成物または薬学的担体に限定されない。一般に、本技術の化合物は、以下の経路：経口、全身（例えば、経皮、鼻腔内、または坐剤）、または非経口（例えば、筋肉内、静脈内、または皮下）投与のうちのいずれか１つにより薬学的組成物として投与されることになる。好ましい投与方法は、罹患の程度に応じて調整することができる便利な１日投与量レジメンを使用する経口である。組成物は、錠剤、丸剤、カプセル、半固体、粉末、徐放性配合物、溶液、懸濁液、エリキシル、エアロゾル、または他の適切な組成物の形態をとることができる。本技術の化合物を投与するための別の好ましい方法は、吸入である。
【０１２５】
配合物の選択は、薬物投与の様式および原薬の生物学的利用能などの様々な因子に依存する。吸入による送達のために、化合物は、液体溶液、懸濁液、エアロゾル噴射剤、または乾燥粉末として配合し、投与に適したディスペンサーに装填することができる。いくつかの種類の薬剤吸入装置、ネブライザー吸入器、定量吸入器（ＭＤＩ）、および乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）がある。ネブライザー装置は、治療剤（液体形態で配合される）を対象の気道に運搬されるミストとして噴霧させる高速気流を生成する。ＭＤＩは、典型的には、圧縮ガスとパッケージされた配合物である。作動時、装置は、測定された量の治療剤を圧縮ガスによって放出し、よって設定された量の薬剤を投与する信頼できる方法を提供する。ＤＰＩは、装置によって呼吸中に対象の吸気流に分散させることができる流動性粉末の形態で治療剤を分配する。流動性粉末を達成するために、治療剤は、ラクトースなどの賦形剤と配合される。測定された量の治療剤は、カプセル形態で貯蔵され、各作動で分配される。
【０１２６】
本技術の化合物の薬学的剤形は、例えば、従来の混合、ふるい分け、溶解、融解、造粒、糖衣錠作製、打錠、懸濁、押出、噴霧乾燥、水簸、乳化、（ナノ／マイクロ）カプセル化、封入、または凍結乾燥プロセスなど、当該技術分野で周知の方法のいずれかによって製造され得る。上記のように、本技術の組成物は、活性分子の薬学的使用のための調製物への加工を促進する１つ以上の生理学的に許容される不活性成分を含むことができる。
【０１２７】
最近、表面積を増加させる、すなわち、粒子サイズを減少させることにより生物学的利用能を増加させることができるという原理に基づいて、特に低い生物学的利用能を示す薬物のための薬学的配合物が開発された。例えば、米国特許第４，１０７，２８８号は、活性材料が高分子の架橋マトリックス上に支持される１０〜１，０００ｎｍのサイズ範囲の粒子を有する薬学的配合物について記載する。米国特許第５，１４５，６８４号は、原薬が表面改質剤の存在下でナノ粒子（４００ｎｍの平均粒径）に粉砕され、次いで液体媒体に分散されて著しく高い生物学的利用能を示す薬学的配合物をもたらす、薬学的配合物の製造について記載する。
【０１２８】
組成物は、一般に、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた本技術の化合物で構成される。許容される賦形剤は、非毒性であり、投与を補助し、特許請求される化合物の治療上の利益に悪影響を及ぼさない。そのような賦形剤は、任意の固体、液体、半固体、またはエアロゾル組成物の場合、一般に当業者に利用可能なガス状賦形剤であり得る。
【０１２９】
固体薬学的賦形剤には、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、脱脂粉乳などが含まれる。液体および半固体賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、および石油、動物、または合成由来のものを含む、様々な油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油などから選択され得る。特に注射可能な溶液について、好ましい液体担体には、水、生理食塩水、水性デキストロース、およびグリコールが含まれる。
【０１３０】
本技術の化合物をエアロゾル形態で分散させるために、圧縮ガスが使用され得る。この目的に適した不活性ガスは、窒素、二酸化炭素などである。他の適切な薬学的賦形剤およびそれらの配合物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１８ｔｈ  ｅｄ．，１９９０）に記載されている。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される塩を含む。「薬学的に許容される塩」という用語は、例としてのみ、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、およびテトラアルキルアンモニウムを含む、当該技術分野で周知の様々な有機および無機対イオンに由来する塩、ならびに分子が塩基性官能基を含有する場合、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、およびシュウ酸塩などの有機または無機酸の塩を指す。好適な塩は、Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｓ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ；２００２に記載されるものを含む。
【０１３２】
本組成物は、所望に応じて、活性成分を含有する１つ以上の単位剤形を含有するパックまたはディスペンサー装置で提供され得る。そのようなパックまたは装置は、例えば、ブリスターパックなどの金属もしくはプラスチック箔、またはガラス、およびバイアルなどのゴム栓を含み得る。パックまたはディスペンサー装置には、投与のための説明書が添付されていてもよい。適合性の薬学的担体中で配合された本技術の化合物を含む組成物はまた、調製され、適切な容器に入れられ、示された状態の治療についてラベル表示され得る。
【０１３３】
配合物中の化合物の量は、当業者によって使用される全範囲内で変動し得る。典型的には、配合物は、重量パーセント（重量％）ベースで、配合物全体に基づいて約０．０１〜９９．９９重量％の本技術の化合物を含有し、残部は、１つ以上の好適な薬学的賦形剤である。好ましくは、化合物は、約１〜８０重量％のレベルで存在する。代表的な薬学的配合物を以下に記載する。
【０１３４】
配合物例
以下は、ＳＲＡ１４１および追加の治療を単独または組み合わせのいずれかで含有する代表的な薬学的配合物である。
【０１３５】
組成物は、単独または他の治療と組み合わせて、治療される状態に応じて同時または連続的のいずれかで投与することができる。
【０１３６】
キット
本開示はまた、ＳＲＡ１４１と任意選択的にさらなる治療との組み合わせおよび使用説明書を含むキットを提供する。本開示は、薬学的組成物（複数可）がＳＲＡ１４１およびさらなる治療を含む１つ以上の薬学的組成物、ならびに使用説明書を含むキットをさらに提供し、任意選択的に、この組み合わせは、少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。
【０１３７】
キットの個々の成分は、別々の容器にパッケージし、そのような容器と関連付けることができ、薬剤または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって規定される形態の通知であり得、この通知は、製造、使用、または販売の機関による承認を反映する。キットは、抗原結合構築物の使用方法または投与レジメンを概説する説明書または指示書を任意に含有し得る。
【０１３８】
いくつかの態様では、本開示は、ＳＲＡ１４１とさらなる治療との組み合わせおよび少なくとも１つの薬学的に許容される担体または賦形剤を含むキットを提供する。
【０１３９】
キットの１つ以上の成分が溶液、例えば、水性溶液、または無菌水性溶液として提供される場合、容器手段はそれ自体が、溶液がそれから対象に投与されるか、またはキットの他の成分に適用および混合され得る、吸入器、シリンジ、ピペット、点眼器、または他のそのような同様の装置であり得る。
【０１４０】
キットの成分はまた、乾燥または凍結乾燥形態で提供され得、キットは、凍結乾燥成分の再構成に好適な溶媒をさらに含有することができる。容器の数またはタイプに関係なく、本明細書に記載されるキットは、患者への組成物の投与を補助するための器具も含み得る。そのような器具は、吸入器、鼻内噴霧装置、シリンジ、ピペット、鉗子、計量スプーン、点眼器、または同様の医学的に承認された送達ビヒクルであり得る。
【０１４１】
本明細書に記載される別の態様では、本明細書に記載される障害の治療、予防、および／または診断、例えば、腫瘍成長の阻害に有用な材料を含有する製造物品が提供される。製造物品は、容器および容器上のまたはそれと関連したラベルまたは添付文書を含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈内溶液バッグなどが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器（複数可）は、単独であるか、または障害の治療、予防、および／もしくは診断に有効な別の組成物と組み合わされた組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって穿刺可能な栓を有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであり得る）。
【０１４２】
本明細書に記載されるこの実施形態における製造物品は、特定の状態を治療するために組成物を使用することができることを示すラベルまたは添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製造物品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、およびデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝剤を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザー観点から所望の他の材料をさらに含み得る。
【０１４３】
ポリペプチドおよび核酸
本明細書に記載される方法に有用な遺伝子、例えば、Ｃｄｃ７の遺伝子のポリペプチドおよび核酸配列が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、本明細書において記載されるか、または本明細書においてデータベース受託番号により言及される配列と少なくとも９５、９６、９７、９８、または９９％同一である。いくつかの実施形態では、本明細書において記載される方法に有用なポリペプチドおよび核酸配列は、本明細書において記載されるか、または本明細書においてデータベース受託番号により言及される配列と１００％同一である。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における「同一性パーセント」という用語は、以下に記載される配列比較アルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴＰおよびＢＬＡＳＴＮまたは当業者に利用可能な他のアルゴリズム）のうちの１つを使用して、または目視検査によって測定して、最大対応について比較および整列される場合、同じであるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の特定のパーセンテージを有する２つ以上の配列または部分配列を指す。用途に応じて、「同一性」パーセントは、比較される配列の領域にわたって、例えば、機能的ドメインにわたって存在するか、あるいは、比較される２つの配列の全長にわたって存在することができる。配列比較について、典型的には、１つの配列が、試験配列が比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列および参照配列がコンピュータに入力され、必要に応じて、部分配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータが指定される。次に、配列比較アルゴリズムは、指定されるプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対する試験配列（複数可）の配列同一性パーセントを計算する。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似法の調査により、これらのアルゴリズム（ＧＡＰ，ＢＥＳＴＦＩＴ，ＦＡＳＴＡ，ａｎｄ  ＴＦＡＳＴＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）のコンピュータ化実装により、または目視検査（一般的には、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００３）を参照）により行われ得る。配列同一性および配列類似性パーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０（１９９０）に記載される、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、国立生物工学情報センター（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）によって公開されている。
【実施例】
【０１４４】
以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の例である。例は、例示目的のみで提供されており、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。使用される数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するための努力がなされたが、もちろん、いくらかの実験誤差および偏差は許容されるべきである。
【０１４５】
本発明の実施は、別段示されない限り、当該技術分野の範囲内のタンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技法、および薬理学の従来の方法を使用するであろう。そのような技法は、文献において完全に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ  ａｎｄ  Ｎ．Ｋａｐｌａｎ  ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｃａｒｅｙ  ａｎｄ  Ｓｕｎｄｂｅｒｇ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３ｒｄ  ＥＤ．（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）  Ｖｏｌｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ（１９９２）を参照されたい。
略語
【表１】
2022500479.tif 000005
【０１４６】
実施例１：マウスＡＭＬ異種移植片モデルのＳＲＡ１４１処理
単剤療法としてのＣｄｃ７阻害剤（化合物Ｉ−Ｄ、別名ＳＲＡ１４１）単独の有効性を、急性骨髄性白血病細胞株ＭＶ−４−１１を使用して異種移植片において試験した。ＭＶ−４−１１異種移植片腫瘍を有する雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、様々な用量でＳＲＡ１４１を投与した。５〜６週齢の雌ＢＡＬＢ／Ｃマウス６０匹に、ＭＶ−４−１１腫瘍細胞を皮下接種した。マウスに、マウス１匹あたり５．０×１０６個の細胞（Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）と１：１の比率で混合）を接種した。３２匹のマウスを選択し、４つの群に無作為化し、（ｉ）ビヒクル対照（０．２ＭのＨＣｌ／０．５％のＭＣ４００）または（ｉｉ）ＳＲＡ１４１の３０または６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで３週間、または（ｉｉｉ）ＳＲＡ１４１の１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤで３週間経口投与した（治療群あたりｎ＝８）。マウスの体重をグループ化する前に週に１回記録し、マウス条件を治療中に毎日記録した。２１日の投与後、マウスを、腫瘍重量測定のために屠殺した。腫瘍成長阻害は、試験の最終日である２１日目に計算した。
【０１４７】
図１Ａに示されるように、２１日目の４つの群の平均腫瘍体積は、ビヒクルで１６１２．６６ｍｍ３、６５５．６８ｍｍ３、３００．７７ｍｍ３、および５３０．８３ｍｍ３であり、それぞれ、３０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ、６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ、および１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤｍｇ／ｋｇ用量レベルであった。個々のマウスの腫瘍重量も計算した（図１Ｂ）。したがって、ＳＲＡ１４１投与は、３０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ、６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ、および１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤｍｇ／ｋｇ用量レベルでそれぞれ５９％、８１％、および６７％の腫瘍成長阻害をもたらした。
【０１４８】
全ての治療は、顕著な体重減少なしで忍容された（図１Ｃ）。２１日目の４つの群の平均相対体重変化（ＲＣＢＷ）は、それぞれ、１２．１１％、１６．３９％、３．１８％、および８．４７％であった。
【０１４９】
これらの結果は、単剤療法としてのＳＲＡ１４１のみが、急性骨髄性白血病の治療のための有効な療法を提供することができることを実証する。
【０１５０】
実施例２：ラットＡＭＬ異種移植片モデルのＳＲＡ１４１治療
単剤療法としてのＣｄｃ７阻害剤（化合物ＳＲＡ１４１）の有効性を、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）のラット異種移植片モデルにおいて試験した（図２）。雌ｒｎｕ／ｒｎｕラットに、１×１０７ＭＶ−４−１１ヒト急性骨髄性白血病細胞を皮下接種した。ＭＶ−４−１１細胞を、１：１のＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）中の０．１ｍＬのＰＢＳの全量で注入した。ラットは、腫瘍が３００〜４００ｍｍ３の平均サイズに到達したときにＳＲＡ１４１治療を開始した。ＭＶ−４−１１腫瘍異種移植片を有するラットに、（ｉ）ビヒクル対照（０．５％のＣＭＣ−Ｎａ／１％のポロキサマー１８８）または（ｉｉ）７日間サイクルの連続５日間７５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤのＳＲＡ１４１を４週間、（ｉｉｉ）７日間サイクルの連続５日間１５０ｍｇ／ｋｇのＱＤのＳＲＡ１４１を４週間経口投与した（治療群あたりｎ＝１０）。腫瘍体積測定を隔週で行い、体重測定を隔週で１５日目まで行った後、試験終了まで毎日行った。腫瘍成長阻害は、試験の最終日である４２日目に計算した。
【０１５１】
図２Ａに示すように、７５ｍｇ／ｋｇのＳＲＡ１４１（８６．１％のＴＧＩ）および１５０ｍｇ／ｋｇのＳＲＡ１４１（８６．７％のＴＧＩ）で治療したラットにおいて、顕著な腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）が観察された。ＳＲＡ１４１を７５ｍｇ／ｋｇで治療したラットにおける追加の研究は、治療の２７日目に９２％のＴＧＩ、および治療の３４日目に８５％のＴＧＩを観察した。腫瘍体積中央値は、ビヒクル対照群について１３２４７（ｎ＝１０）であり、ＳＲＡ１４１治療群７５ｍｇ／ｋｇについて１８３８（ｎ＝８）であり、ＳＲＡ１４１治療群１５０ｍｇ／ｋｇについて１７６４（ｎ＝９）であった。個々のラットあたりの治療の結果を、治療の経過にわたって示す（図２Ｃ）。特に、７５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤでのＳＲＡ１４１を用いた治療は、１回の完全回帰（３回の連続測定では腫瘍体積＜１３．５ｍｍ３）および３回の部分回帰（３回の連続測定では初期体積の＜５０％の腫瘍体積）をもたらした。完全退縮は、試験終了まで継続した。１５０ｍｇ／ｋｇのＱＤでＳＲＡ１４１を用いた治療は、試験完了時に測定可能な腫瘍を有しない１匹の動物で２つの部分回帰を生じた。
【０１５２】
一般に、全ての治療は、顕著な体重減少なしで良好に忍容された（図２Ｂ）。試験の経過中に、３つの動物が死んでいることが見出された（それぞれ、７５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ投与群においてｎ＝２、および１５０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ投与群においてｎ＝１）。これらの死亡の原因は、非治療関連に分類された。
【０１５３】
これらの結果は、単剤療法としてのＳＲＡ１４１がＡＭＬの治療のための有効な療法を提供することができることを実証する。
【０１５４】
実施例３：様々な癌細胞株のＳＲＡ１４１治療
細胞生存率に対するＳＲＡ１４１の濃度依存的効果は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）発光アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を７２時間の薬物インキュベーション期間を用いて、２３５個の癌細胞株のパネルにおいて決定した。ＳＲＡ１４１と異なる濃度でインキュベーションした後、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存アッセイを使用して、癌細胞株において５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
【０１５５】
ＳＲＡ１４１は、膀胱（５６７３、ＲＴ１１２／８４）、肉腫（１４３Ｂ、ＣＡＤＯ−ＥＳ１、ＲＤ−ＥＳ、Ａ６７３）、結腸および盲腸（Ｃｏｌｏ−２０５、ＤＬＤ−１、ＬＳ１０３４、ＳＫ−ＣＯ−１、ＳＮＵ−Ｃ１）、腎臓（ＵＯ．３１）、頭頸部（ＣＮＥ−２Ｚ、ＲＰＭＩ−２６５０）、黒色腫（Ａ２０５８、Ａ８７５）、および胃（ＨＧＣ−２７）系統のものを含む、様々な固形腫瘍細胞株において強力な阻害活性（ＩＣ５０＜３μＭ）を示した。
【０１５６】
顕著な活性は、血液由来の細胞株においても観察された。試験した５９個の血液癌細胞株の結果を図３Ａに示す。これらの結果は、単剤療法としてのＳＲＡ１４１のみが、急性骨髄性白血病（図３Ａ、「Ｃ」と表される細胞株）および慢性好酸球性白血病（図３Ａ、「Ｌ」と表される細胞株）等の血液癌の治療のための有効な療法を提供することができることを実証する。顕著な活性は、ｉ全てのライン（ＲＳ４１１、ＳＵＰ−Ｂ１５、Ｒｅｈ）、ならびに他の白血病およびリンパ腫（ＫＨＹＧ−１およびＪｅＫｏ−１）においても観察された。
【０１５７】
決定されたＩＣ５０値の要約を図３Ｂに要約し、癌の種類別に分類する。全体的に、血液癌株は、固形腫瘍株よりも高い感受性を示し、後者の中で、大腸癌株は最も感受性の高いものであった。
【０１５８】
Ｃｏｌｏ−２０５結腸癌細胞におけるＳＲＡ１４１の正常なヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）との差異的細胞傷害活性を、０．０３〜３３．３μＭの範囲の薬物濃度（４８時間インキュベーション）で評価した。処理後、ヨウ化プロピジウムで標識された細胞をフローサイトメトリーによって分析して、アポトーシス媒介性ＤＮＡ断片化の結果としてサブＧ１画分中に見出される死亡細胞の割合を決定した。図３Ｃに示されるように、癌細胞と正常細胞との間でＳＲＡ１４１に対する感受性に顕著な差が観察された。特に、癌細胞の６２％が死亡しており、１μＭ〜１０μＭの化合物濃度でサブＧ１画分に見出されていた。対照的に、正常細胞の１０％未満は、サブＧ１画分によって決定されるようにアポトーシス性であり、Ｃｄｃ７阻害後の非形質転換細胞の最小細胞毒性を示す公開された報告と一致した（Ｍｏｎｔａｇｎｏｌｉ，２００４）。したがって、これらの所見は、腫瘍と非形質転換組織との間のＳＲＡ１４１の潜在的な治療指数を支持する。
【０１５９】
図３ＣのパートＢに示されるように、２つの異なる生存率アッセイを使用した実験は、ＳＲＡ１４１が、他のＣｄｃ７阻害剤であるＴＡＫ−９３１およびＬＹ−３１７７８３３と比較して、多数の細胞株において同等または優れたインビトロ活性を有することを実証した。まとめると、ＳＲＡ１４１は、いくつかの適応症にわたって多数の細胞株において強力な抗増殖活性を示した。
【０１６０】
ＳＲＡ１４１の抗増殖活性を、ＡＴＰレベル（ＣＴＧ）、代謝活性（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｂｌｕｅ（ＣＴＢ））、細胞のＤＮＡ含有量（ＣｙＱｕａｎｔ）、およびエステラーゼ活性（Ｃａｌｃｅｉｎ  ＡＭ）を測定するように設計された４つの直交アッセイを使用して、７つの細胞株（Ｃｏｌｏ−２０５、ＳＷ６２０、ＳＮＵ−３９８、ＮＣＩ−Ｈ７１６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＮＣＩ−Ｈ１５７３、およびＳＷ１１１６）においてさらに特徴付けた。各アッセイフォーマット内の細胞株の相対感受性は、概して一致していた。図３Ｄに示すように、試験した全てのアッセイおよび細胞株にわたって７２時間（左カラム）と比較した場合、ＳＲＡ１４１効力の一貫した増加が１４４時間（右カラム）のより長い治療期間で観察され、最適な抗腫瘍活性のために連続的な標的カバレッジが必要であることを示唆した。単剤療法ＳＲＡ１４１  ＩＣ５０は、ＳＲＡ１４１への異なる曝露時間の後、１４４時間でＣＴＧおよびＣｙＱｕａｎｔによっても決定された。図３Ｅに示されるように、前の評価と一致して、ＳＲＡ１４１効力は、２４時間を超える治療持続時間（２４時間左カラム、４８時間中カラム、または７２時間右カラム）で増加した。
【０１６１】
実施例４：ＣＲＣの患者由来の異種移植マウスモデルのＳＲＡ１４１治療
単剤療法としてのＣｄｃ７阻害剤（化合物ＳＲＡ１４１）の有効性を、大腸癌（ＣＲＣ）の患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルにおいて試験した。ＣＴＧ−１００９患者由来のＡＰＣおよびＴＰ５３変異型大腸腫瘍異種移植片を有する雌ｎｕ／ｎｕマウスに、（ｉ）ビヒクル対照（０．１ＭのＨＣｌ／０．５％のＭＣ）または（ｉｉ）１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤで２８日間ＳＲＡ１４１を投与したか、または（ｉｉｉ）７日間サイクルの連続する２日間１５０ｍｇ／ｋｇのＱＤで２８日間ＳＲＡ１４１を投与した（ＳＲＡ１４１治療群あたりｎ＝８、ｎ＝６ビヒクル対照群、チャンピオン研究１２５０−００３）。腫瘍成長阻害は、試験の最終日である３２日目に計算した。ＳＲＡ１４１の１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤおよび１５０ｍｇ／ｋｇのＱＤ群の多くの動物への投薬は、体重減少に起因して一時的に中断された（図４Ｂ）。これらの投与休日は、それぞれ、ＳＲＡ１４１の１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤおよび１５０ｍｇ／ｋｇのＱＤ治療群における１〜３日（ｎ＝１および３匹の動物）、４〜８日（ｎ＝７および０匹の動物）の範囲であった。
【０１６２】
図４Ａに示されるように、ＳＲＡ１４１の投与は、それぞれ、１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤおよび１５０ｍｇ／ｋｇのＱＤ用量レベルで４９％および３６％の腫瘍成長阻害をもたらした。
【０１６３】
ＳＲＡ１４１後に観察された平均腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は４９．４％（Ｐ＝０．００５７）であった（１２０ｍｇ／ｋｇ、５−７Ｄおよびその後のＱＤ投与の範囲の用量休日でＱＤ  ５Ｄに投与された）。実験中に４回または６回投与されたＳＲＡ１４１は、Ｄ３２上で３５．８％の平均ＴＧＩをもたらした（Ｐ＝０．０３８５）。ＳＲＡ１４１後に観察された平均ＴＧＩ（１２０ｍｇ／ｋｇ、５−７Ｄの範囲の用量休日でＱＤ５Ｄを投与し、その後のＱＤ投与）は４９．４％であった（Ｐ＝０．００５７）。平均ビヒクル腫瘍体積（ＴＶ）からの個々のＴＧＩは、２３．５、３１．３、４７．８、５０．８、５９．９、６３．６、および６８．６％であった。実験中に４回または６回投与されたＳＲＡ１４１は、Ｄ３２上で３５．８％の平均ＴＧＩをもたらした（Ｐ＝０．０３８５）。４用量を有する３匹のマウスは、平均ビヒクルＴＶからのＴＧＩを１２．４、２７．２、および５３．２％で有した。６回投与を受けた５匹のマウスは、１５．６、１８．２、４８．２、６５．２、および７１．２％のＴＧＩ形態の平均ビヒクルＴＶを有した。個々のマウスあたりの各治療の結果を、治療の経過にわたって（図５）および３２日目（図６）に示す。したがって、ＳＲＡ１４１による単剤療法は、試験のＤ３２で決定されるように、顕著な腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）をもたらした。
【０１６４】
一般に、全ての治療は、治療の終了までに十分に忍容され、ビヒクル（閉じた円）と比較して顕著な体重減少はなかった。１２０ｍｇ／ｋｇ群（閉じた正方形）で最初の５日間投与後に適度な体重減少が観察されたが、薬物休日数日後にビヒクルレベルまで回復した（図４Ｂ）。
【０１６５】
これらの結果は、単剤療法としてのＳＲＡ１４１が、ＡＰＣおよびＴＰ５３変異ＣＲＣ設定における大腸癌の治療のための効果的な療法を提供することができることを実証する。
【０１６６】
実施例５：ＣＲＣの患者由来の異種移植ラットモデルのＳＲＡ１４１治療
単剤療法としてのＣｄｃ７阻害剤（化合物ＳＲＡ１４１）の有効性を、大腸癌（ＣＲＣ）のラット異種移植片モデルにおいて試験した（図７）。雌Ｒｏｗｅｔｔヌードラットに、２×１０７ＣＯＬＯ−２０５ヒト大腸癌細胞を皮下接種した。全てのラットを、腫瘍細胞注射の２４時間前にγ照射（４Ｇｙ）した。ＣＯＬＯ−２０５細胞を、１：１Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）中の０．２ｍＬのＰＢＳ中に注入した。Ｃｏｌｏ−２０５腫瘍異種移植片を有する雌ヌードラットに、（ｉ）ビヒクル対照（０．５％のＣＭＣ−Ｎａ／１％のＬｕｔｒｏｌ  Ｆ−６８）または（ｉｉ）ＳＲＡ１４１の１５０ｍｇ／ｋｇを７日サイクルの連続５日間、６週間にわたって１日１回（ＱＤ）経口投与した、または（ｉｉｉ）ＳＲＡ１４１の７５ｍｇ／ｋｇを７日サイクルの連続５日間、６週間にわたって１日２回（ＢＩＤ）経口投与した（治療群あたりｎ＝７）。腫瘍成長阻害は、全てのビヒクル対照動物が試験に残った最終日である３１日目に計算した。腫瘍体積測定および体重測定を隔週で行った。
【０１６７】
図７Ａに示されるように、ＳＲＡ１４１の投与は、１５０ｍｇ／ｋｇのＱＤおよび７５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ用量レベルにおいて、それぞれ５０％および９３％の顕著な腫瘍成長阻害をもたらした。４／７ラットにおいて、完全な腫瘍退縮が観察された。さらに、７匹の動物のうち４匹において完全な腫瘍退縮（３回の連続測定で測定可能な腫瘍がないと定義される）が観察され、７５ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ用量で７匹の動物のうち１匹において部分退縮（３回の連続測定で初期体積の＜５０％の腫瘍体積）が観察された。４つ全ての完全退縮は、試験完了まで継続した。
【０１６８】
図７Ｂに示されるように、約１．２μＭの腫瘍ＳＲＡ１４１濃度は、ビヒクルで治療したラットと比較して、リン酸化ＭＣＭ２（セリン５３）のおよそ５０％の減少をもたらし、Ｃｄｃ７の選択的阻害が腫瘍細胞生存と互換性がないことを示唆した。Ｃｏｌｏ−２０５腫瘍を有するラットを単一用量のＳＲＡ１４１またはビヒクルで治療し、腫瘍を１２時間後に収集した。治療群あたり３匹の動物から調製した腫瘍ホモジネートを、ＬＣ／ＭＳＭＳまたはウェスタンブロットによって分析した。結果は、単剤療法としてのＳＲＡ１４１が、大腸癌の治療のための有効な療法を提供することができることを実証する。
【０１６９】
実施例６：ＳＲＡ１４１と追加の抗腫瘍剤との組み合わせ
癌細胞を感作するための抗腫瘍剤と組み合わせたＣｄｃ７阻害剤の有効性を確認するために、ヒト癌細胞において実験を行った。
【０１７０】
併用評価方法：
併用スクリーニングは、ＳＲＡ１４１およびパートナー化合物の共処理投薬スケジュールを使用して実施した。エンハンサー（ＳＲＡ１４１）およびエンハンサー（パートナー化合物）の両方を時間０（０時間）で添加した。細胞を、７２時間の治療時間全体にわたってＳＲＡ１４１およびエンハンサーに曝露した。全てのデータポイントは自動化されたプロセスを介して収集され、品質管理の対象となり、独自のソフトウェアを使用して分析された。アッセイプレートは、それらが以下の品質管理基準に合格した場合に受け入れられた：相対生値が実験全体を通して一貫しており、Ｚ因子スコアが０．６を超え、未処理／ビヒクル対照がプレート上で一貫して挙動した。
【０１７１】
増殖阻害（ＧＩ）を細胞増殖の尺度として利用した。ＧＩパーセンテージは、以下の試験および式を適用することによって計算される：
【数１】
2022500479.tif 000006
式中、Ｔは、７２または９６時間における被験試料のシグナル測定値であり、Ｖは、未処理／ビヒクル処理対照測定値であり、Ｖ０は、時間０における未処理／ビヒクル対照測定値である（Ｔ０プレートとも口頭で称される）。この式は、国立癌研究所のＮＣＩ−６０高スループットスクリーニングで使用される成長阻害計算から導出される。０％のＧＩリーディングは、成長阻害を表さず、７２または９６時間におけるＴリーディングがそれぞれの期間におけるＶリーディングと同等である場合に生じるであろう。ＧＩ  １００％は完全な成長阻害（細胞停滞）を表し、この場合、化合物で７２または９６時間処理した細胞は、Ｔ０対照細胞と同じエンドポイント読み取りを有するであろう。２００％のＧＩは、培養ウェル中の全ての細胞の完全死（細胞毒性）を表し、この場合、７２または９６時間におけるＴリーディングは、Ｔ０対照（ゼロ付近またはゼロでの値）よりも低くなる。これらのＧＩ計算を、組み合わせ画面の全ての単剤および組み合わせデータ分析に使用した。
【０１７２】
細胞生存率の尺度としての阻害：０％の阻害レベルは、処理による細胞成長の阻害を表さない。１００％の阻害は、治療ウィンドウ中の細胞数の倍増を表さない。細胞増殖抑制および細胞傷害性治療の両方は、１００％の阻害率をもたらすことができる。阻害パーセンテージは、以下のように計算される：Ｉ＝１−Ｔ／Ｕ（式中、Ｔが治療され、Ｕが未治療である）。
【０１７３】
相乗効果スコア分析
Ｌｏｅｗｅ添加度を超える組み合わせ効果を測定するために、シナジースコアと呼ばれる相乗的相互作用の強さを特徴付けるためにスカラー測定を使用した。相乗効果スコアは次のように計算される。
相乗効果スコア＝ｌｏｇｆＸ  ｌｏｇｆＹ  Σｍａｘ（０，Ｉｄａｔａ）（Ｉｄａｔａ−ＩＬｏｅｗｅ）
【０１７４】
マトリックス中の各成分剤および組み合わせ点の分画阻害は、全てのビヒクル処理対照ウェルの中央値と比較して計算される。相乗効果スコア方程式は、相加性のためのＬｏｅｗｅモデルを使用して、成分剤の活性から数値的に導出されるモデル表面を超えて、マトリックスの各点で実験的に観察された活性体積を積分する。相乗効果スコア方程式（上記）の追加の用語は、個々の薬剤に使用される様々な希釈因子について正規化し、実験全体にわたる相乗効果スコアの比較を可能にするために使用される。陽性阻害ゲーティングまたはＩｄａｔａ乗数を含めることで、ゼロ効果レベル付近のノイズを除去し、高い活性レベルで発生する相乗的相互作用の結果をバイアスする。より高い最大成長阻害（ＧＩ）効果を有する組み合わせ、または低濃度で相乗的である組み合わせは、より高い相乗効果スコアを有する。ベースライン自己交差値に統計的に優先するシナジースコアとのこれらの組み合わせは、相乗効果と見なすことができる。ＧＩ効果の大きさは、検査される各細胞株について変化する細胞の成長速度に連結され得る。
【０１７５】
効力シフトをアイソボログラムを使用して評価し、これは、その効果に到達するために必要な単剤用量と比較して、所望の効果レベルを達成するために組み合わせてどれだけ少ない薬物が必要であるかを実証した。示された阻害レベルを通過することに対応する濃度の遺伝子座を特定することによって、アイソボログラムを描画した。これは、他の単剤の濃度にわたる用量マトリックス内の各単剤濃度の交差点を見つけることによって行われる。実際には、各垂直濃度ＣＹは、応答面Ｚ（ＣＸ、ＣＹ）において選択された効果レベルを与える垂直用量と組み合わされた水平濃度ＣＸを識別するために二項アルゴリズムが使用される間、固定される。次いで、これらの濃度は線形補間によって接続され、アイソボログラムディスプレイを生成する。相乗的相互作用については、アイソボログラム輪郭が相加性閾値を下回り、原点に近づき、拮抗的相互作用が相加性閾値を上回る。エラーバーは、アイソボログラムを生成するために使用される個々のデータポイントから生じる不確実性を表す。各交差点の不確実性は、二項を用いた応答誤差から推定され、Ｚ−σＺ（ＣＸ、ＣＹ）およびＺ＋σＺ（ＣＸ、ＣＹ）がＩｃｕｔを交差する濃度を求め、式中、σＺは、効果スケール上の残留誤差の標準偏差である。
【０１７６】
相乗効果スコア分析：ロエベボリュームスコア分析
Ｌｏｅｗｅボリュームスコアは、Ｌｏｅｗｅ添加度モデルを超える組み合わせ相互作用の全体的な大きさを評価するために使用される。Ｌｏｅｗｅ  Ｖｏｌｕｍｅは、表現型活性（正のＬｏｅｗｅ  Ｖｏｌｕｍｅ）における相乗的増加と相乗的アンタゴニズム（負のＬｏｅｗｅ  Ｖｏｌｕｍｅ）を区別する際に特に有用である。現在のデータセットと同様に、アンタゴニズムが観察されると、Ｌｏｅｗｅ  Ｖｏｌｕｍｅは、アンタゴニズムと特定の薬物標的活性または細胞遺伝子型との間に何らかの相関があるかどうかを検査するように評価される。このモデルは、組み合わせ用量マトリックス表面がそれ自体と交差する薬物のいずれかと区別できない非相乗的組み合わせ相互作用として添加性を定義する。添加性の計算は、（Ｘ／ＸＩ）＋（Ｙ／ＹＩ）＝１を満たすＩＬｏｅｗｅであり、ここでＸＩおよびＹＩは、観察された組み合わせ効果Ｉのための単剤有効濃度である。例えば、５０％阻害が１μＭの薬物Ａまたは１μＭの薬物Ｂによって別々に達成される場合、０．５μＭのＡおよび０．５μＭのＢの組み合わせも５０％阻害されるべきである。Ｌｏｅｗｅ添加度を超えて観察された活性は、相乗的相互作用を特定する。本分析のために、実験的に収集された単剤用量応答曲線から構築されたそれらのそれぞれのＬｏｅｗｅ添加度モデルと、経験的に由来する組み合わせマトリックスを比較した。用量応答マトリックスにわたるこの過剰な相加性の要約は、Ｌｏｅｗｅ  Ｖｏｌｕｍｅと称される。正のＬｏｅｗｅ  Ｖｏｌｕｍｅは相乗効果を示唆し、負のＬｏｅｗｅ  Ｖｏｌｕｍｅは拮抗作用を示唆する。前述のように、シナジースコアはポジティブゲート値であり、潜在的なアンタゴニズムを測定するために使用することはできない。
【０１７７】
Ｃｄｃ７阻害剤と抗腫瘍剤との併用で癌細胞を死滅させる有効性を確認するために、Ｃｏｌｏ−２０５大腸腺癌細胞および急性骨髄性白血病細胞において、抗腫瘍剤との併用での連続治療またはＣｄｃ７阻害剤ＳＲＡ１４１を用いた同時治療のいずれかで実験を行った。ラパマイシン（ｍＴＯＲ）経路の哺乳動物標的の阻害剤、ＤＮＡポリメラーゼの阻害剤、受容体チロシンキナーゼの阻害剤（ＲＴＫ）、有糸分裂原活性化タンパク質キナーゼ経路（ＭＡＰＫ）の阻害剤、またはホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスフェート３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路の阻害剤と組み合わせて使用する場合の癌細胞を感作するためのＣｄｃ７阻害剤の有効性を確認するために、ヒトＣｏｌｏ−２０５大腸腺癌細胞をＳＲＡ１４１で順次処理し、その後、単一薬剤としてエベロリムス、アフィジコリン、またはミドスタウリンで処理した（図８）。Ｃｏｌｏ−２０５細胞のフラスコをＳＲＡ１４１（１μＭおよび２００ｎＭ）およびＤＭＳＯ対照で４８時間前処理し、細胞を洗浄し、３８４ウェルプレートに播種し、プレートを６時間インキュベートした後、単剤としてプレーティングした６時間後にエベロリムス、アフィジコリンまたはミドスタウリンで処理した。７２時間後、ＡＴＰレベルをＡＴＰｌｉｔｅを使用して測定した。ＳＲＡ１４１によるＣＯＬＯ−２０５細胞の前処理は、ミドスタウリンに対する感受性の増加に向かってエンハンサーの効力シフトを示し、ＤＭＳＯ前処理と比較して２００ｎＭのＳＲＡ１４１前処理で３．１９  ＥＣ５０倍の変化が観察された。アフィジコリンについては、ＤＭＳＯ前処理と比較して、１μＭのＳＲＡ１４１前処理で４．６０  ＥＣ５０倍の変化が観察された。エベロリムスについては、ＤＭＳＯ前処理と比較して、２００ｎＭのＳＲＡ１４１前処理で３．３  ＥＣ５０倍の変化が観察された。
【０１７８】
Ｃｄｃ７阻害剤とＭＡＰＫ経路阻害剤またはＰＩ３Ｋ経路阻害剤との組み合わせで、癌細胞を死滅させるため、および癌の治療に使用するための有効性を確認するために、Ｃｏｌｏ−２０５細胞を、ＭＡＰＫ経路阻害剤、トラメチニブ、ＰＩ３Ｋ経路阻害剤、コパンリシブ、ならびに抗代謝産物（抗葉酸塩）、メトトレキサートで同時に処理した（図９および１０Ａ）。細胞を０日目に３８４ウェルプレートに播種し、プレートを２４時間インキュベートし、細胞にトラメチニブおよびコパンリシブをＳＲＡ１４１と組み合わせて投与し、７２時間後、ＡＴＰレベルをＡＴＰｌｉｔｅを使用して測定した。ＣＯＬＯ−２０５細胞において、ＭＡＰＫ経路およびＰＩ３Ｋ経路の阻害剤並びに抗葉酸抗代謝産物、メトトレキサートとの同時併用処理による強力な相乗効果が観察された。
【０１７９】
有糸分裂原活性化タンパク質キナーゼ経路（ＭＡＰＫ）の阻害剤、レチノイド経路の調節剤、アポトーシス調節剤、ＰＡＲＰ阻害剤、またはラパマイシン（ｍＴＯＲ）経路の哺乳動物標的の阻害剤と組み合わせて使用した場合の癌細胞を感作するためのＣｄｃ７阻害剤の有効性を確認するために、ヒト急性骨髄性白血病細胞、ＭＯＬＭ−１３細胞をＳＲＡ１４１で順次処理し、続いて単一薬剤としてトラメチニブまたはベキサロテンで処理した（図８）。ＭＯＬＭ−１３細胞のフラスコをＳＲＡ１４１（１μＭおよび２００ｎＭ）およびＤＭＳＯ対照で４８時間前処理し、細胞を洗浄し、３８４ウェルプレートに播種し、プレートを残して６時間インキュベートし、その後、単剤としてプレーティングした後６時間、トラメチニブまたはベキサロテンで処理した。７２時間後、ＡＴＰレベルをＡＴＰｌｉｔｅを使用して測定した。トラメチニブについては、ＤＭＳＯ前処理と比較して、２００ｎＭのＳＲＡ１４１前処理で２．６３  ＥＣ５０倍の変化が観察された。ベキサロテンについては、ＤＭＳＯ前処理と比較して、２００ｎＭのＳＲＡ１４１前処理で２．６３  ＥＣ５０倍の変化が観察された。エベロリムスについては、ＤＭＳＯ前処理と比較して、２００ｎＭのＳＲＡ１４１前処理で３．２５  ＥＣ５０倍の変化が観察された。
【０１８０】
癌細胞を死滅させるための、および癌の治療のための併用療法として使用するためのレチノイド経路の調節因子、アポトーシス調節因子、またはＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせたＣｄｃ７阻害剤の有効性を確認するために、ヒトＭＯＬＭ−１３およびＫＧ−１細胞を、ＰＡＲＰ阻害剤ＢＭＮ６７３、アポトーシス調節因子ＡＢＴ−１９９、レチノイド経路調節因子、ベキサロテン、またはレチノイド経路調節因子トレチノインで同時に処理した（図９および１０Ａ）。細胞を０日目に３８４ウェルプレートに播種し、プレートを残して２４時間インキュベートし、細胞に、ＳＲＡ１４１と組み合わせたＢＭＮ６７３、ＡＢＴ−１９９、ベキサロテン、またはトレチノインを投与し、７２時間後、ＡＴＰレベルをＡＴＰｌｉｔｅを使用して測定した。ＭＯＬＭ−１３細胞は、ＢＭＮ６７３（ＰＡＲＰ阻害剤）、ＡＢＴ−１９９（ＢＣＬ−２阻害剤）、ベキサロテン、およびトレチノイン（レチノイド経路の調節因子）について強力な相乗効果を示した。これらの結果は、Ｃｄｃ７阻害剤と、ｍＴＯＲ経路の阻害剤、ＤＮＡポリメラーゼの阻害剤、および受容体チロシンキナーゼの阻害剤、ならびにＭＡＰＫ経路の阻害剤、レチノイド経路の調節剤、アポトーシスの調節剤、またはＰＡＲＰ阻害剤との組み合わせの使用を含む併用療法が、Ｃｄｃ７阻害剤との連続投与または同時投与のいずれかで癌細胞を死滅させるのに有効であることを確認し、Ｃｄｃ７阻害剤と、ｍＴＯＲ経路の阻害剤、ＤＮＡポリメラーゼの阻害剤、および受容体チロシンキナーゼの阻害剤、ならびにＭＡＰＫ経路の阻害剤、レチノイド経路の調節剤、アポトーシスの調節剤、またはＰＡＲＰ阻害剤との組み合わせの投与が、有効な癌治療レジメンであることを示す。
【０１８１】
Ｃｄｃ７阻害剤と複製ストレス誘発性抗腫瘍剤ゲムシタビンとの組み合わせの有効性を確認するために、ヒトＨＴ−２９大腸腺癌細胞を、濃度を増加させるゲムシタビン（０．０３７〜１μＭ）で９６時間処理した。図１０Ｂに示されるデータは、１００ｎｍを超えるゲムシタビン用量が、処理された細胞のほぼ１００％の成長阻害をもたらしたことを実証する。さらに、１．１μＭまたは３．３μＭのいずれかの濃度でのＳＲＡ１４１の添加は、ゲムシタビンの阻害効果を実質的に低下させた。
【０１８２】
実施例７：生化学アッセイにおけるＳＲＡ１４１の有効性および選択性
ＳＲＡ１４１によるＣｄｃ７の阻害は、インビトロキナーゼアッセイを使用して測定した。
【０１８３】
図１１Ａに示されるように、ＳＲＡ１４１は、インビトロ生化学アッセイにおいてＣｄｃ７の強力な阻害を示した（ＩＣ５０＝４ｎＭ）。アッセイ前１時間のＣｄｃ７酵素とのＳＲＡ１４１のプレインキュベーションは、化合物の効力が適度に改善され（ＩＣ５０＝１．４ｎＭ）、潜在的に有利な阻害剤結合動態によるＣｄｃ７の強力な阻害が確認された。これらの所見は、図１１Ｂに示されるように、Ｃｄｃ７にＳＲＡ１４１結合するための長い滞留時間（ｔ１／２＝２１５分）および遅い解離動態（Ｋｏｆｆ＝５ｎＭで０．００３２）を示す急速希釈研究と一致する。
【０１８４】
Ｃｄｃ７に対するＳＲＡ１４１の選択性を、約４３０個の天然および変異体キナーゼを含有するＤｉｓｃｏｖｅｒＸキノムスクリーニングアッセイを使用して評価した。最小限のオフターゲットキナーゼ活性が、５００ｎＭの化合物濃度で検出された。Ｃｄｃ７に対するＳＲＡ１４１の選択性をＴＡＫ−９３１と比較した。キノムスクリーニングアッセイの結果（図１２）は、ＳＲＡ１４１が、５００ｎＭの化合物濃度でのＴＡＫ−９３１と比較してより少ないオフターゲット活性を有することを実証する。
【０１８５】
実施例８：いくつかの細胞周期キナーゼの細胞基質に対するＳＲＡ１４１の効果
Ｃｏｌｏ−２０５細胞を、Ｃｄｃ７（ＭＣＭ２、Ｓｅｒ４０／４１およびＳｅｒ５３）、ならびに推定オフターゲットキナーゼＣＤＫ８（ＳＴＡＴ１、Ｓｅｒ７２７）、ＣＤＫ７および９（ＲＮＡ  ｐｏｌＩＩ、Ｓｅｒ２）、ＬＡＴＳ２（ＹＡＰ１、Ｓｅｒ１２７）、ならびにＣＤＫ９（Ｇｒｅｇｏｒｙ，２０１５）によって間接的に制御されることが知られているＭＣＬ−１のレベルの下流標的のリン酸化状態のその後の評価を用いて、ＳＲＡ１４１（０．０３３〜３．３μＭの濃度で）で８〜２４時間処理した。
【０１８６】
ＭＶ４１１細胞も用量依存的様式でＳＲＡ１４１で処理し（０．５〜３．３μＭの濃度で）、その後、Ｓｅｒ４０／４１およびＳｅｒ５３でＭＣＭ２のリン酸化状態について評価した。
【０１８７】
図１３に示すように、これらの研究ではＣｄｃ７レベルは変化しなかったが、Ｓｅｒ４０／４１およびＳｅｒ５３におけるその標的ＭＣＭ２のリン酸化は、０．０３３μＭ（Ｃｏｌｏ−２０５）および０．５μＭ（ＭＶ４１１）から始まる濃度依存的な方法で減少し、細胞における強固なオンターゲット阻害を実証した。
【０１８８】
ＳＲＡ１４１〜１μＭの濃度では、細胞基質のいずれについてもリン酸化状態（またはＭＣＬ−１のタンパク質レベル）に顕著な変化はなかった。ＳＴＡＴ１、ＹＡＰ１、およびＭＣＬ−１の最小阻害は、３．３μＭで観察されたが、全タンパク質レベルの共事故低減は、これらの所見がＳＲＡ１４１媒介性細胞死に起因していた可能性があることを示唆している。
【０１８９】
合わせて、これらのデータは、細胞設定におけるＳＲＡ１４１の効力および選択性を確認する。
【０１９０】
実施例９：ＡＭＬ三次元（３Ｄ）培養物中のＳＲＡ１４１の活性
ＳＲＡ１４１の活性を、それぞれ、３つのＡＭＬ細胞株（ＥＯＬ−１、Ｍｏｌｍ−１６、およびＭＶ−４−１１）ならびに３つのＡＭＬ  ＰＤＸモデル（ＡＭ５５１２、ＡＭ７４４０およびＡＭ７５７７）から調製したインビトロおよびエクスビボ３次元（３Ｄ）培養で調査した。腫瘍培養物をＳＲＡ１４１（０．０８〜３３μＭ）で５日間処理した。ＳＲＡ１４１は、６つのモデルのうちの５つにおいて強力な抗細胞活性（ＩＣ５０範囲０．１５〜１．６μＭ）を示し、ＡＭ５５１２調製物において減少した活性が認められた（ＩＣ５０＝３．２μＭ、表１）。この後者のモデルはまた、シタラビンおよびシスプラチン（ＩＣ５０＞８．９μＭ）に対して比較的耐性であった。
【表２】
2022500479.tif 000007
【０１９１】
ＳＲＡ１４１（０．３〜５μＭ）の抗増殖活性も、正常なヒト骨髄性（ｎ＝３）および１４日間インキュベートされたＡＭＬ−芽細胞前駆体を使用してメチルセルロース成長マトリックスで実施された追加の３Ｄ成長研究において評価した。
【０１９２】
通常の骨髄調製物の平均ＳＲＡ１４１  ＩＣ５０値は０．２５μＭであったが、ＡＭＬ試料の平均ＩＣ５０値はおよそ０．１６μＭであった（耐性前駆体試料ＡＭＬ８１０を検閲し、表２）。陽性対照、シトシンアラビノシド（Ａｒａ  Ｃ）は、正常骨髄およびＡＭＬ芽細胞前駆体試料の両方について等電位ＩＣ５０値（約０．００４μＭ）を有した。各試料［（Ｐｒｉｍａｒｙ  ＡＭＬ  ＩＣ５０）÷（ＢＭＮＣ対照ＩＣ５０）］について治療指数も計算した。表２に示されるように、９個の一次ＡＭＬ試料のうち５個は、ＴＩ（ＡＭＬ２００、ＡＭＬ９１７、ＡＭＬ９１５、ＡＭＬ１９０、およびＡＭＬ７１７）でＳＲＡ１４１に応答したが、９個の試料のうち２個のみが、ＴＩでＡｒａ−Ｃに応答した（ＡＭＬ２００およびＡＭＬ２５０）。
【０１９３】
まとめると、これらのデータは、ＳＲＡ１４１が、ＡＭＬ  ３Ｄ培養において強力な細胞毒性活性を有し、正常な骨髄前駆体よりも潜在的な治療指数を有することを実証する。
【表３】
2022500479.tif 000008
【０１９４】
実施例１０：培養細胞におけるＳＲＡ１４１によるＣｄｃ７阻害の耐久性
薬物誘発性Ｃｄｃ７阻害の耐久性を、２つの濃度のＳＲＡ１４１（０．１μＭおよび１μＭ）で４８時間処理したＣｏｌｏ−２０５細胞において調査し、続いて、直ちに細胞収穫、または薬物インキュベートの除去、続いて細胞収穫前にさらに２４時間のインキュベーションのいずれかを行った。Ｃｄｃ７活性の標的部位であるＳｅｒ５３におけるＭＣＭ２のリン酸化を、２つの条件の間で比較した。
【０１９５】
図１４に示されるように、この研究からのデータは、０．１μＭの薬物濃度での化合物ウォッシュアウトの２４時間後までにＣｄｃ７活性の回復を示し、一方、より高いインキュベーション濃度（１μＭ）のウォッシュアウトの２４時間後に長期のｐＭＣＭ２阻害が観察された。これらの結果は、標的オフレートが遅く、結果として酵素阻害が延長されることを示した前例の生化学アッセイと一致する。
【０１９６】
実施例１１：ＳＲＡ１４１細胞周期感受性分析
細胞周期の様々な段階でのＳＲＡ１４１処理に対する感受性は、二重チミジンブロックと同期したＣｏｌｏ−２０５細胞において決定した。ブロック放出時に、細胞がＳ相またはＭ相のいずれかに到達したときに、ＳＲＡ１４１（１μＭ）を添加した。
【０１９７】
図１５に示されるように、ヨウ化プロピジウムで標識された細胞のフローサイトメトリー分析は、細胞が前のＳ相中にＳＲＡ１４１で処理されることを条件に、アポトーシス細胞を示すサブＧ１集団がＭ相を経過するにつれて蓄積されたことを実証したが（図１５Ａ）、Ｓ相完了後に処理が開始された場合（Ｍ相の開始）は蓄積されなかった（図１５Ｂ）。ＳＲＡ１４１を最初にＭ相で添加した場合、サブＧ１の蓄積が遅れ、細胞がＳＲＡ１４１の存在下で後続のＳ相を進行してからアポトーシスの徴候を示す必要があった。
【０１９８】
これらのデータは、ＭＣＭ２／ＭＣＭ４リン酸化によって媒介される可能性が最も高い複製起点発火であるＳ相におけるＣｄｃ７機能の阻害が、細胞が複製不足ＤＮＡで有糸分裂に入り、アポトーシス細胞死の誘導をもたらすという仮説を支持する。
【０１９９】
図１５Ｃに示すように、０．１μＭのＳＲＡ１４１で４８時間処理したＣｏｌｏ−２０５細胞を、ウエスタンブロットによって細胞周期およびＤＮＡ損傷マーカーについて評価した。結果は、ＳＲＡ１４１を用いた治療後のＧ２／Ｍ相の有糸分裂マーカーの存在を実証する。これらの結果は、ＳＲＡ１４１で４８時間処理したＣｏｌｏ−２０５およびＳＷ６２０細胞集団が有糸分裂における細胞の蓄積を有することを実証する高含有量イメージングの使用によって得られたデータと一致する（図１５Ｄ）。有糸分裂における細胞の割合は、他のＣｄｃ７阻害剤と比較して、ＳＲＡ１４１で処理した集団においてより大きい。
【０２００】
実施例１２：インビトロ細胞遺伝子感受性分析
２３５細胞株パネルのＳＲＡ１４１感受性の分析は、大腸癌が最も感受性の高い固形腫瘍株の中にあることを実証した（図１６）。さらに、２３５個の細胞株のゲノムおよびメチル化パターンのバイオインフォマティクス分析は、ＦＡＴ１の変異がＳＲＡ１４１感受性と相関することを示した。大腸癌において一般的に変化するＷｎｔシグナル伝達経路におけるＦＡＴ１の役割を考慮して、我々はさらに、１６個の大腸癌株の感受性と、他の２つのＷｎｔ経路遺伝子、ＡＰＣおよびＦＡＴ４における変異の存在との間の相関を検討した。
【０２０１】
結果は、染色体不安定（ＣＩＮ）大腸腫瘍に一般的に見られるＡＰＣ変異が、ＳＲＡ１４１に対する感受性の増加と関連していたことを示す（ｐ＝０．０４、図１６）。ＦＡＴ４変異はＳＲＡ１４１感受性と統計的に相関すると判断されなかったが、最も感受性の高い３つの株がＦＡＴ４変異を保有することが見出された。これらの予備データは、ＣＩＮ大腸癌におけるＳＲＡ１４１の使用を支持する。
【０２０２】
実施例１３：Ｃｏｌｏ−２０５大腸異種移植片研究（マウス）
Ｃｏｌｏ−２０５腫瘍異種移植片を有する雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、（ｉ）ビヒクル（０．２ＭのＨＣｌ／０．５％のＭＣ４００）または（ｉｉ）ＳＲＡ１４１の３０または６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤを１７日間経口投与した、または（ｉｉｉ）ＳＲＡ１４１の１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤを１７日間経口投与した（治療群あたりｎ＝８）。腫瘍成長阻害は、試験の最終日である１６日目に計算した。
【０２０３】
全ての治療は忍容されたが、過度の体重減少（＞１５％減少）に起因して、ＳＲＡ１４１の６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤから２匹のマウスについては２日間、および１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤ治療群から２匹のマウスについては１日および５日間、投薬を一時的に中断した。
【０２０４】
図１７に示されるように、ＳＲＡ１４１投与は、３０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ、６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ、および１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤ用量レベルでそれぞれ１５％、５８％、および３７％の腫瘍成長阻害をもたらした。これらの予備データは、大腸癌におけるＳＲＡ１４１の使用を支持する。
【０２０５】
実施例１４：ＳＷ６２０大腸異種移植片研究（マウス）
ＳＷ６２０腫瘍異種移植片を有する雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、（ｉ）ビヒクル（０．１ＭのＨＣｌ／０．５％のＭＣ４００）または（ｉｉ）ＳＲＡ１４１の６０ｍｇ／ｋｇを４日間連続して３回投与し（ＴＩＤ）、続いて２日間投与休日を２１日間投与した、または（ｉｉｉ）ＳＲＡ１４１の１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤを２１日間経口投与した（治療群あたりｎ＝１０）。腫瘍成長阻害は、試験の最終日である２１日目に計算した。全てのビヒクル対照動物は、２１日目に試験に残った。
【０２０６】
６０ｍｇ／ｋｇのＴＩＤでＳＲＡ１４１で治療した１０匹のマウスのうち４匹は、２０％を超える最大体重減少を経験した。これらの動物への投薬は、体重減少が２０％未満に回復するまで中止した。ＳＲＡ１４１の１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤで治療したマウスはいずれも２０％の体重減少閾値を満たしていなかった。
【０２０７】
図１８に示されるように、ＳＲＡ１４１投与は、６０ｍｇ／ｋｇのＴＩＤおよび１２０ｍｇ／ｋｇのＱＤでそれぞれ７８％および７３％の腫瘍成長阻害をもたらした。これらの予備データは、大腸癌におけるＳＲＡ１４１の使用を支持する。
【０２０８】
実施例１５：ＭＶ−４−１１ヒト白血病全身生存試験
ＭＶ−４−１１癌細胞を静脈内に接種した雌ＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスに、（ｉ）ビヒクル対照（０．１ＭのＨＣｌ／０．５％のＭＣ４００、経口）または（ｉｉ）ＳＲＡ１４１を、最初は６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで、０日目から２１日目の７日間のサイクルの連続５日間投与し、その後、顕著な体重減少に起因して、２２日目から７３日目の同じスケジュールで４０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで投与した（治療群あたりｎ＝１０）。癌モデルの全身的性質を考慮すると、生存は、この研究における唯一の有効性エンドポイントであった。
【０２０９】
一般に、ＳＲＡ１４１を用いた治療は、体重減少データに基づいて忍容された。１０匹のＳＲＡ１４１治療マウスのうちの１匹は、２０％超の体重減少を経験した。
【０２１０】
ＳＲＡ１４１治療群の５匹の動物は、恐らく疾患進行ではなく技術的エラーまたは忍容性に起因して試験の１７日目および１８日目に死亡していることが見出された。早期死亡者を含む全ての動物の生存期間の中央値は、ビヒクルおよびＳＲＡ１４１治療群ではそれぞれ６６日および３５日であり、早期死亡者が検閲されたＳＲＡ１４１治療群では９９日を超えた。したがって、検閲された治療群の生存の増加は、白血病治療におけるＳＲＡ１４１の使用を支持する。
【０２１１】
実施例１６：Ａ２０免疫能性リンパ腫異種移植片モデル（マウス）
Ａ２０腫瘍異種移植片を有する免疫能のある雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、（ｉ）対照（ＰＢＳ、腹腔内）または（ｉｉ）ＳＲＡ１４１の１２０ｍｇ／ｋｇを経口投与した、群あたりｎ＝８匹の動物）。投薬は、０日目〜４日目、７日目〜１１日目、および１４日目〜１８日目に発生した。腫瘍成長阻害は、試験の最終日である２３日目に計算した。
【０２１２】
一般に、ＳＲＡ１４１を用いた治療は、忍容された。１匹の動物は、２０％を超える体重減少を経験し、その後、安楽死させた。
【０２１３】
図１９に示されるように、ＳＲＡ１４１投与は、５９％の腫瘍成長阻害をもたらした。これらの予備データは、リンパ腫におけるＳＲＡ１４１の使用を支持する。
【０２１４】
実施例１７：ＭＤＡ−ＭＢ−４８６乳房異種移植片研究（マウス）
ＭＤＡ−ＭＢ−４８６乳房腫瘍異種移植片を有する雌ＣＢ−１７  ＳＣＩＤマウスに、（ｉ）ビヒクル対照（０．１ＭのＨＣｌ／０．５％のＭＣ４００）または（ｉｉ）ＳＲＡ１４１の３０または６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤを５週間経口投与した（治療群あたりｎ＝１０）。腫瘍成長阻害は、試験の最終日である３５日目に計算した。
【０２１５】
ビヒクル対照および３０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤ処理でのＳＲＡ１４１は、十分に忍容された。ＳＲＡ１４１で６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤで治療した１０匹のマウスのうち６匹は、２０％を超える最大体重減少を経験した。１８日目および１９日目にこれらの動物への投薬を一時的に中断し、長引いた体重減少に起因して１匹の動物を安楽死させた。
【０２１６】
図２０に示されるように、ＳＲＡ１４１投与は、３０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤおよび６０ｍｇ／ｋｇのＢＩＤでそれぞれ、２６％および５３％の腫瘍成長阻害をもたらした。これらの予備データは、乳癌におけるＳＲＡ１４１の使用を支持する。
【０２１７】
実施例１８：マウスＳＷ６２０大腸異種移植片モデルＰＫ／ＰＤ評価
Ｃｄｃ７の直接基質である腫瘍ホスホ−ＭＣＭ２（ｐＭＣＭ２）およびＣｄｃ７阻害の下流マーカーに対するＳＲＡ１４１治療の効果は、ＳＷ６２０異種移植片を有するマウスにおいて決定した。ｐＭＣＭ２の変化は、原始的なＰＫ／ＰＤモデルを構築するための薬物投与後４８時間にわたる腫瘍および血漿中のＳＲＡ１４１濃度と相関した。
【０２１８】
具体的には、皮下ＳＷ６２０腫瘍を有する雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに、３０、６０、または１２０ｍｇ／ｋｇのＳＲＡ１４１の単一経口用量を投与した（群あたりｎ＝１５）。対照動物にビヒクル（０．１ＭのＨＣｌ／０．５％のＭＣ４００、ｎ＝１０）を投与した。治療の２、４、８、２４、および４８時間後に、各群の３つの動物（対照についてｎ＝２）を終了させ、血漿および腫瘍を分析のためにサンプリングした。
【０２１９】
図２１に示されるように、ｐＭＣＭ２レベルは、単一ＳＲＡ１４１投与後に減少し、３０ｍｇ／ｋｇ〜６０ｍｇ／ｋｇ用量では２〜４時間、１２０ｍｇ／ｋｇ用量では２〜８時間でピークに達した（図２１Ａに示されるｐＭＣＭ２レベル、図２１Ｂでアクチンに定量化および正規化された阻害％）。約１、１．５、および２μｇ／ｍＬの最大ＳＲＡ１４１血漿濃度も、３０ｍｇ／ｋｇ用量、６０ｍｇ／ｋｇ用量、および１２０ｍｇ／ｋｇ用量で投与後２〜４時間で観察された。薬物の腫瘍濃度は類似していた。この研究からのＰＫおよびＰＤデータの相関は、ｐＭＣＭ２を５０％阻害するには、約１．１μＭの循環血漿濃度および腫瘍内組織濃度が必要であることを示唆した。
【０２２０】
実施例１９：ラットＣｏｌｏ−２０５大腸異種移植片モデルＰＫ／ＰＤ評価
ＳＲＡ１４１治療後のｐＭＣＭ２の腫瘍阻害は、皮下Ｃｏｌｏ−２０５腫瘍を有する雌Ｒｏｗｅｔｔヌードラットにおいても決定された。ＳＲＡ１４１の単一経口用量（７５または１５０ｍｇ／ｋｇ）の１２時間後に、動物を終了させ、腫瘍を分析のためにサンプリングした（群あたりｎ＝３）。対照動物に、Ｃｏｌｏ−２０５ラットモデルで使用されるのと同じビヒクルを投与した（実施例５を参照されたい、群あたりｎ＝３）。７５ｍｇ／ｋｇ用量および１５０ｍｇ／ｋｇ用量のそれぞれの投与後１２時間に、約０．５μｇ／ｍＬおよび０．９μｇ／ｍＬのＳＲＡ１４１腫瘍濃度を観察した。単一用量のＳＲＡ１４１の１２時間後、ｐＭＣＭ２は、対照の約５０％〜６０％阻害された（図２２）。これらの結果は、１μＭの腫瘍内組織濃度が、ＭＣＭ２リン酸化（ｐＭＣＭ２）を５０％阻害するのに十分であることを示唆している。
【０２２１】
実施例２０：インビボ非臨床薬物動態要約
インビトロ分布研究では、ＳＲＡ１４１がヒトおよびラット血漿タンパク質（＞９０％）に高度に結合したのに対し、マウスおよびイヌマトリックス（５８％〜７７％）において中程度の結合が観察されたことが示された。加えて、ＳＲＡ１４１は、任意の種マトリックス中の赤血球に優先的に分画しなかった。
【０２２２】
前臨床およびヒト肝細胞において実施されるインビトロ代謝研究は、ラット、イヌ、およびヒト調製物においてＳＲＡ１４１の良好な代謝安定性を示す。１１個の代謝物が種にわたって特定され、そのうち６個がヒトマトリックスで発生した。１つのヒト特異的な代謝物が特定されたが、微量レベルでのみ特定された。マウス、ラット、およびイヌ肝細胞代謝物プロファイルは、他の全てのヒト代謝物を含有した。
【０２２３】
臨床的に適切な濃度では、ＳＲＡ１４１は、ＣＹＰ３Ａ４／５のインビトロ時間および代謝依存性阻害（ＩＣ５０＝６．２〜６．７μＭ）、ならびにヒト有機アニオン輸送体ＯＡＴＰ１Ｂ１、ＯＡＴＰ１Ｂ３、およびＯＡＴ３のインビトロ阻害（１０μＭで＞５０％阻害）を示した。まとめると、これらのインビトロＣＹＰおよびトランスポーター阻害データは、ＳＲＡ１４１が、このＣＹＰアイソフォームまたはこれらのトランスポーターの基質であることが知られている同時投与薬物の代謝および／または分布を潜在的に変化させ得ることを示唆する。
【０２２４】
ＳＲＡ１４１（遊離塩基懸濁液として提示）は、３１％〜５４％の範囲の絶食マウス、ラットおよびイヌにおける中程度の絶対経口生物学的利用能（Ｆ％）とともに、サルにおける明らかなより低い経口生物学的利用能（Ｆ％＝１％〜３３％）を実証した。懸濁液中の二塩酸塩としての提示は、どの種においても顕著に曝露を増加させないように見えた。イヌにおけるさらなる研究は、懸濁液中の二塩酸塩の絶対経口生物学的利用能が、食後投与後に改善され得ることを示唆した。しかしながら、イヌにおける別の研究では、２つの提案された臨床薬物製品カプセル提示の投与後に、中程度の絶対経口生物学的利用能が認められ（Ｆ％＝４１％〜６２％）、食事状態は、経口生物学的利用能に顕著な効果を有さないように見えた。経口投与後の全身曝露（Ｃｍａｘ、ＡＵＣ）は、一般に用量の増加に伴い増加したが、用量比例法未満で増加した。
【０２２５】
雌ヌードラットを有する非腫瘍を５０ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ×１２日）または１００または１５０ｍｇ／ｋｇ（オン５日／オフ２日／オン５日）でＳＲＡ１４１（経路あたりｎ＝３）で経口治療した。ビヒクルは、水中０．５％のＣＭＣ−Ｎａ／１％ルトロールであった。ＳＲＡ１４１血漿濃度は、最後の用量後にＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって決定した。図２３に示すように、全身曝露は、経口用量が５０ｍｇ／ｋｇ〜１５０ｍｇ／ｋｇに増加するにつれて増加した。
【０２２６】
実施例２１：インビボ非臨床毒性要約
ＳＲＡ１４１を評価する毒性試験は、ラットおよびイヌにおいて、最大４サイクル（１サイクルにつき５日間オン／２日間オフ）の単回経口投与および反復経口投与後に実施した。加えて、ＳＲＡ１４１の潜在的な遺伝毒性をインビトロで評価した。表３に示す所見の要約。
【表４】
2022500479.tif 000009
【０２２７】
ラットおよびイヌの反復投与毒性試験の所見は、ＳＲＡ１４１関連毒性の潜在的な標的臓器、胆嚢／胆道系、リンパ組織（脾臓、胸腺、リンパ節およびＧＡＬＴ）、骨髄、肝臓、腎臓、雄および雌生殖管、末梢白血球、および唾液腺であり、イヌが最も感受性の高い種であるように見える。
【０２２８】
胆道系への影響は、高発生率で、ラットおよびイヌの両方において一貫して観察された。しかしながら、これらの胆道変化は、一般に、最小〜軽度であり、部分的であった（両方の種における胆道過形成）、または完全に可逆的であった（イヌにおける胆嚢、ラットに存在しない組織）。さらに、動物における薬物誘導胆道所見は、ヒトにおける同様の所見を確実に予測していない（Ｈａｉｌｅｙ，２０１３；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，２００４）。
【０２２９】
胆道およびクッパー細胞の変化は、ラットにＳＲＡ１４１を２８日間繰り返し投与した後に認められた唯一の所見であり、血液学的および臨床化学的変化が付随した。しかしながら、ラットにおける用量範囲研究では、肝臓（肝細胞変性）、脾臓（赤血球の減少）および胃（炎症および上皮過形成）を含む他の臓器および組織の変化が特定された。ラットにおける２８日間の試験において同等の所見が観察されなかった理由は明らかではないが、枢動試験における薬物の周期的投与は、異なる毒性学的転帰に寄与した可能性がある。７日間のラット研究および２８日間のイヌ研究において、製剤、用量および投薬期間の違いにもかかわらず、胆道系を超えたいくつかの組織変化の類似性は、イヌがＳＲＡ１４１に対してラットよりも感受性が高い場合があることを示唆している。
【０２３０】
接合唾液腺の変化は、罹患したイヌにとって有害であると見なされるが、ヒトにおける同等の唾液腺の発生率が低く、かつ欠如しているため、この潜在的な標的はヒトに不確実な臨床的関連性をもたらす。同様に、間欠投与サイクルに関連する末梢白血球の周期的変化とともに、リンパ系組織における変化の小さな大きさおよび回復可能性は有害ではないと判断され、これらの変化は相互関連であり得、白血球輸送における一過性組織および末梢血の変化を表し得る。骨髄の潜在的に有害な減少した細胞性はまた、白血球輸送におけるこの提案された変化に関連し得る。胸腺の減少は、他のリンパ系組織の変化よりも重度であったが、この組織の変化は、ストレスに部分的または完全に二次的であり、直接的なＳＲ１４１関連毒性を反映していない可能性がある。
【０２３１】
２８日間のイヌ試験では、胆嚢、腎小管、および骨髄の変化により影響を受ける男性との潜在的な性差があったようである。しかしながら、各試験群の動物の数が少なく、男女差の大きさが低いため、組織応答における特定の性差を確定的に決定することができない。
【０２３２】
ＳＲＡ１４１は、インビトロ細菌逆突然変異およびヒトリンパ球染色体収差アッセイにおける突然変異原性および包成長性の両方において陰性であった。
【０２３３】
結論として、これらの研究の結果は、ＳＲＡ１４１の投与後の毒性所見が、一般に、臨床環境で監視可能であり、支持療法が利用可能であり、かつ／または進行した腫瘍学研究集団ではあまり関連性がないことを示す。具体的には、ＭＴＤおよび４週間の５日間の投与スケジュールのオン／２日オフ後の最高非重症毒性用量（ＨＮＳＴＤ）は、ラットおよびイヌにおいて、それぞれ１００ｍｇ／ｋｇ／日（６００ｍｇ／ｍ２／日）および１０ｍｇ／ｋｇ／日（２００ｍｇ／ｍ２／日）であると見なされた。
【０２３４】
実施例２２：ＳＲＡ１４１  ＣＲＣ臨床試験
臨床試験は、ＭＳＩ−Ｈ状態を有する患者を除外することによって濃縮されたＣＩＮ表現型の転移性ＣＲＣを有する患者における癌の治療におけるＳＲＡ１４１単剤療法の有効性を確認するために実施されるが、いくつかの場合において、染色体不安定性の高い他の癌は、将来探索される。
【０２３５】
腫瘍学的臨床試験のためのヒト当量の開始用量は、典型的には、げっ歯類の１０％における重篤な毒性用量（ＳＴＤ１０）の１０分の１、または非げっ歯類における重篤な毒性が発現しない最高用量（ＨＮＳＴＤ）の１／６のいずれか低い用量である（ＩＣＨ  Ｓ９，２００９）。ＧＬＰ中心毒性試験（実施例２１を参照）からのデータは、ラットにおいて１００ｍｇ／ｋｇ／日（６００ｍｇ／ｍ２／日、試験された最高用量）の最大忍容用量（ＳＴＤ１０の代替物としてのＭＴＤ）、およびより感受性が高い種としてイヌにおいて１０ｍｇ／ｋｇ／日（２００ｍｇ／ｍ２／日）のＨＮＳＴＤを示した。したがって、５４ｍｇの絶対用量（６０ｋｇ患者の場合）に等しい３３．３ｍｇ／ｍ２／日（０．９０ｍｇ／ｋｇ／日）のヒト当量用量（ＨＥＤ）が利用される。対象の安全性のさらなる保証のために、経口投与されるより低いＳＲＡ１４１開始用量１０ｍｇが使用される。
【０２３６】
臨床投薬スケジュールは、抗腫瘍活性、すなわち、５日オン／２日オフを実証した前臨床投薬スケジュールと一致する。ＳＲＡ１４１は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセルで供給される。ＳＲＡ１４１カプセルは、追加のデータに基づいて治験依頼者から指示がない限り、空腹時に服用される（対象は、投与前少なくとも２時間および投与後１時間絶食する）。
【０２３７】
用量漸増段階
用量漸増段階が実施される。転移性ＣＲＣを有する１５〜５０名の対象が登録される。加速滴定設計が利用される。最初は単一の対象からなるコホートは、漸増する用量のＳＲＡ１４１を受ける。初期用量漸増は、新たな安全性プロファイルに基づいて、臨床的に適切であると見なされる限り、１００％まで増加して進行する。ＳＲＡ１４１関連のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ−Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ（ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ）グレード２以上の毒性が特定のコホートにおいてサイクル１中に観察されると、そのコホートは３〜６人の対象に拡大され、その後の用量レベルコホートはローリング６設計に従う。その後、ＳＲＡ１４１の用量は、利用可能な全ての安全性データのレビューの後に決定される増分で漸増される。例えば、代替のスケジュールが追求される場合、治験依頼者によって別段決定されない限り、ＳＲＡ１４１の用量は、ＭＴＤが特定されるまでエスカレートされる。代替スケジュールを伴う用量漸増は、いつでも開始され、並行して、または元のスケジュールで継続的な用量漸増の代わりに実行される。
【０２３８】
ＤＬＴ評価期間は、サイクル１の１日目の第１の用量から治療の第１のサイクルの終了までである。いくつかの場合において、ＤＬＴ評価に対して評価可能ではない、例えば、ＳＲＡ１４１の不忍容性／毒性以外の理由でＤＬＴ評価期間を完了しない対象が置き換えられる。
【０２３９】
ＤＬＴは、（ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ  ｖ４．０３によって）ＳＲＡ１４１に非常に関連している、またはおそらく関連しているとみなされる場合、以下のいずれかの事象として定義される：
−投与を控え、および／またはサポートケアを提供しても＞７日間続くグレード４の好中球減少症、貧血、または血小板減少症、
−グレード４の発熱性好中球減少症、
−グレード３以上の出血を伴うグレード３以上の血小板減少、
−グレード３以上の非血液毒性、グレード３の吐き気、嘔吐、および／または下痢に関連する例外で、適切な予防または治療、疲労、ならびに一過性および無症候性グレード３の臨床検査異常がない場合。（詳細についてはプロトコルを参照）
−不忍容性または毒性に起因して、計画された用量のＳＲＡ１４１の７５％を受けることができない。
【０２４０】
用量制限毒性は、用量漸増決定の目的で考慮されるが、累積毒性が明らかになった場合、漸増またはＲＰ２Ｄの次の用量レベルを決定する際に考慮される。
【０２４１】
用量拡大段階
用量拡大段階も実施される。腫瘍が既知の高マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ−Ｈ）状態ではない転移性ＣＲＣを有する約３０名の対象を、単一の拡張コホートに登録して、安全性プロファイルをさらに特徴付け、予備的有効性を評価する。いくつかの場合において、拡大コホートの登録は、抗腫瘍活性の証拠がある場合、またはＳＲＡ１４１血漿濃度が、新たな非臨床データに基づいて最小有効閾値に到達する場合、ＭＴＤまたはＲＰ２Ｄの決定の前に開始される。ＳＲＡ１４１は、提案されたＲＰ２Ｄで投与され、試験の用量漸増段階の結果に基づいてスケジュールされる。いくつかの場合において、ＳＲＡ１４１のＲＰ２Ｄは、ＭＴＤ以下である。あるいは、登録がＲＰ２Ｄの決定の前に開始される場合、ＳＲＡ１４１は、各対象の登録時に用量漸増段階中にクリアされた最高用量で最初に投与される。同じスケジュールのより高い用量レベルがエスカレーションコホートにおいて安全であると決定されると、いくつかの場合において、対象はより高い用量レベルにエスカレートされる。
【０２４２】
方法論
ＳＲＡ１４１治療は、初期コホート（複数可）において、２８日間のサイクルで、５日間オン／２日間オフスケジュールで１日１回経口投与される。代替投与スケジュールは、新たな安全性および忍容性データに基づいて考慮される。
【０２４３】
本治験は、スクリーニング、治療、安全性フォローアップ（ＳＦＵ）および長期フォローアップから構成される。いくつかの場合において、治療期間は、疾患進行、許容できない毒性、および妊娠を含む所定の基準のうちの１つが満たされるまで継続される。
【０２４４】
スクリーニングおよびベースライン評価は、ＷＯＣＢＰ対象の人口統計学、疾患履歴、ベースライン疾患評価、ベースライン安全性評価、および妊娠試験のために実行される。ＰＤｎおよび遡及的ゲノム評価のための前処理（ベースライン）試料を収集する。
【０２４５】
安全性評価を実施する：
−連続的有害事象（ＡＥ）評価および併用治療のレビュー、
−サイクル１中および各後続サイクルの１日目、およびＳＦＵで、投与前および投与後２〜３時間で毎週バイタルサイン、
−サイクル１および２中に毎週、およびサイクル３から隔週、次いでサイクル７以降は毎月、およびＳＦＵで臨床生化学、
−サイクル１〜３の間は毎週、その後のサイクルの間は隔週、およびＳＦＵで血液学的検査、
−ＳＦＵでのトロポニン、各サイクルの１日目およびＳＦＵでの尿検査、
−サイクル２の１日目およびＳＦＵの心エコー図、
−サイクル１、２の１日目、および各第３の後続サイクル、およびＳＦＵで心電図（ＥＣＧ）（局所読み取り）、
−サイクル１の１日目および１９日目の中心ＥＣＧ（投与後の複数の時点で）、ならびに
−臨床的に示されるように、症状に応じた身体検査。
【０２４６】
加えて、直立性バイタルサインを含む集中的な血圧モニタリングは、サイクル１の１日目のＳＲＡ１４１の第１の用量の後に行われる。
【０２４７】
有効性が評価される：
−サイクル１の１日目後およびＳＦＵで８週間毎に、胸部、腹部、骨盤、および全ての疾患の疑われる部位のＣＴ／ＭＲＩによる腫瘍評価（文書化された疾患進行のために中止した対象を除く）、
−サイクル１の１日目後およびＳＦＵで４週間毎に臨床評価および血清癌胚性抗原（ＣＥＡ）レベル、および
−生存ステータス
【０２４８】
薬物キエクティクスを評価する：
−サイクル１の１日目および１９日目の２４時間の集中的ＰＫサンプリング。
−Ｃ３、４、５、および８の１日目のプレドースサンプリング
【０２４９】
薬物動態を評価する。代替組織（皮膚パンチ生検）および腫瘍組織を収集し、ＰＤｎバイオマーカーｐＭＣＭ２について分析する。皮膚パンチ試料は、ベースラインおよび投与後４〜８時間（すなわち、ＳＲＡ１４１の予想Ｃｍａｘ）のサイクル１の１８日目または１９日目に収集される。いくつかの場合において、ＳＲＡ１４１の血漿濃度が谷レベル（Ｃｍｉｎ）に到達するときのサイクル１またはそれ以降のサイクルの後期時点における第３の皮膚パンチ生検は、ＳＲＡ１４１用量レベルを超える測定可能なバイオマーカー効果が、１８日目または１９日目から用量後の４〜８時間から観察された対象から収集される。第３の皮膚パンチ生検のタイミングは、新たなＰＫおよびＰＤｎデータに基づいて治験依頼者によって伝達される。皮膚生検試料は、漸増用量段階に登録された全ての被験者および拡張用量段階で少なくとも１０名の対象から必要とされる。腫瘍組織は、ベースライン時およびサイクル１の４日目または５日目、投与後４〜８時間の拡大用量段階の少なくとも６人の対象から必要とされる。拡大用量段階の追加の対象および漸増用量段階の対象からの腫瘍組織は、任意である。
【０２５０】
ゲノムを評価する。アーカイブまたは新鮮な腫瘍組織（原発性または転移性）ならびに血液試料は、ベースラインでの遡及的ゲノム分析のために収集され、ＳＲＡ１４１治療応答に関連するゲノム変化を探索する。血液試料もＳＦＵで収集される。
【０２５１】
包含基準
臨床試験の対象は、以下の基準に基づいて選択される：
−任意の治験固有の手順、サンプリング、および分析の前に書面によるインフォームドコンセント
−同意を得た時点で１８歳に達した
−組織学的および／または細胞学的に確認された転移性ＣＲＣ
−フルオロウラシルまたはカペシタビン、オキサリプラチン、およびイリノテカンを含むレジメンでの事前治療
−少なくとも１２週間の寿命
−対象がＩＭＰの第１の用量を受ける前１週間以内に測定される、表４に示される範囲内の血液学的および生化学的指標
【表５】
2022500479.tif 000010
−世界保健機関（ＷＨＯ）のパフォーマンスステータス０−１
−ＲＥＣＩＳＴ基準に従ってラジオグラフィックで測定可能な疾患
−ＩＭＰの第１の用量の前１８ヶ月以内に収集された、または治験依頼者によって承認され、遡及的腫瘍プロファイリングまたはアクセス可能な腫瘍、ならびに腫瘍組織の収集のための生検に同意する意欲のために利用可能なアーキアーチ腫瘍組織
−拡大段階に登録された最小６名の対象については、アクセス可能な腫瘍、およびＰＤｎアッセイのための腫瘍組織の収集のために最大２回の腫瘍生検に同意する意欲
【０２５２】
除外基準
対象は、以下の基準に基づいて、臨床試験から除外される：
−ＣｄＣ７阻害剤を用いた任意の以前の治療
−既知の高マイクロサテライト不安定性、すなわち、ＭＳＩ−Ｈを有する大腸癌
−以下の以前または現在の抗癌療法を受けている
ａ．ＳＲＡ１４１の第１の用量の４週間以内の任意の標的病変（測定可能な疾患として使用される病変）の放射線療法（症状対照、および病変が測定可能な疾患として使用されない場合を除く）
ｂ．ＳＲＡ１４１の第１の用量の３週間以内の化学療法
ｃ．ＳＲＡ１４１の第１の用量の前に、４週間以内に以前の免疫療法、またはそれがより短く、治験依頼者によって承認される場合は５半減期
ｄ．ＳＲＡ１４１の初回投与前６週間以内のニトロソウレアまたはマイトマイシンＣ
ｅ．ＳＲＡ１４１の第１の用量の前に、４週間以内に他のＩＭＰまたは標的療法、またはそれがより短く、治験依頼者によって承認されている場合は５半減期
−治験責任医師の見解では、ＣＹＰ４５０酵素に影響を及ぼすことが知られている自然療法薬、ハーブサプリメント、または他の代替療法の現在の投与
−治験責任医師の見解で試験のコンプライアンスまたは安全性に影響を及ぼすほど重症である現在の非処方薬またはアルコール依存症
−治験依頼者によって承認されない限り、約９５％以上の予想される５年間の無疾患生存率に関連する適切に治療された腫瘍を除く、過去２年以内の他の悪性腫瘍
−ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥグレード１を超える以前の治療の継続的な毒性症状。これの例外は、脱毛症または特定の毒性であり、治験責任医師および治験依頼者または治験依頼者の指定モニターの意見において、対象を除外すべきではない
−新規または進行中の脳転移。過去６か月間の中枢神経系転移の病歴（拡大コホートのみ）。いくつかの場合において８週間にわたって放射線学的に安定している脳転移を有する対象は、漸増コホートに含まれる。
−妊娠中または授乳中の女性。妊娠可能性のある女性（ＷＯＣＢＰ）は、血清または尿妊娠検査の陰性スクリーニング（すなわち、初回投与の７日以内）を有し、治験を通じておよびその後６ヶ月間、ＩＭＰの初回投与から有効な避妊要件に従うことに同意しない限り、
−妊娠可能性のあるパートナーが、治験中およびその後６ヶ月間、避妊要件に従うことにより、子供を父親にしない措置を講じることに同意しない限り、子供を産むことができる。妊娠中または授乳中のパートナーがいる対象は、試験中およびＳＲＡ１４１の最終投与後６か月間、胎児または新生児への曝露を防ぐためにコンドームと殺精子ゲルを使用することを推奨しなければならない
−対象がまだ回復していない専攻手術
−非悪性全身性疾患による高い医学的リスク（能動的非制御性感染を含む）
−陰性ウイルス負荷で制御され、治験依頼者によって承認されない限り、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、またはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）について血清学的に陽性であることが知られている
−治験依頼者によって承認されない限り、同時にうっ血性心不全などの深刻な心または心血管の状態、ニューヨーク心臓協会［ＮＹＨＡ］基準によるクラスＩＩＩ／ＩＶの心疾患の病歴、ベースラインで左心室駆出率＜４５％、過去６か月以内の心虚血の病歴、治療を必要とする顕著な心不整脈の病歴、虚血性脳血管疾患または症状性末梢血管疾患の病歴
−成人においてＱＴｃＦ＞４５０ミリ秒および成人女性において＞４７０ミリ秒
−ＩＭＰの最初の用量の８週間以内の骨髄の２５％超に対する事前の骨髄移植または広範囲の放射線療法
−いくつかの場合においてＩＭＰの吸収を顕著に変化させる胃腸（ＧＩ）機能の障害またはＧＩ疾患（例えば、潰瘍性疾患、制御されていない吐き気、嘔吐、下痢、または吸収不良症候群）
噛んだり砕いたりせずにカプセルを飲み込むことができない
−ＳＲＡ１４１またはその賦形剤に対する既知のアレルギー、過敏症、または不忍容性
−本臨床試験の参加者であるか、または別の介入臨床試験の参加を計画している。ＩＭＰの投与を伴わず、治験責任医師および治験依頼者または治験依頼者の指定者の意見において対象に許容できない負担を課さない観察試験または介入臨床試験への参加は許容される
−治験責任医師または治験依頼者の意見では対象を臨床試験の良好な候補としない任意の他の条件。
【０２５３】
ＲＥＣＩＳＴ基準
この試験における疾患奏効の評価は、改訂されたＲＥＣＩＳＴ基準ｖ１．１に従って行われる。ＲＥＣＩＳＴ基準は、それが教示する全てについて参照によって本明細書に組み込まれる、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（Ｎｅｗ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｕｒｓ：Ｒｅｖｉｓｅｄ  ＲＥＣＩＳＴ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（ｖｅｒｓｉｏｎ  １．１）．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２００９）においてより詳細に記載される。
【０２５４】
ベースラインでは、腫瘍病変／リンパ節は一般に、以下のように測定可能または測定不能に分類される：
【０２５５】
測定可能
腫瘍病変：一般に、少なくとも１つの寸法で正確に測定され（測定面での最長直径が記録され）、最小サイズは以下である：
−ＣＴスキャンによる１０ｍｍ（ＣＴスキャンスライス厚は５ｍｍ以下、イメージングガイダンスについてはＡｐｐｅｎｄｉｘ  ＩＩ  ｉｎ  Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，［Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ，２００９］を参照されたい）
−臨床検査による１０ｍｍキャリパー測定（キャリパーで正確に測定することができない病変は測定不能として記録されるべきである）
−胸部Ｘ線による２０ｍｍ
【０２５６】
悪性リンパ節：病理学的に拡大し、測定可能であるとみなされるには、リンパ節は、ＣＴスキャンによって評価される場合、一般に短軸が１５ｍｍである（ＣＴスキャンスライス厚は５ｍｍ以下であることが推奨される）。ベースラインおよびフォローアップでは、短軸のみが一般に測定され、追跡される。
【０２５７】
測定不能
小さな病変（１０ｍｍ未満の最長直径または１０以上〜１５ｍｍ未満の短軸を有する病理学的リンパ節）、および真に測定不能な病変を含む、全ての他の病変。真に測定不能とみなされる病変は、一般に、軟膜疾患、腹水、胸水または心嚢液、炎症性乳房疾患、皮膚または肺のリンパ管性病変、再現可能なイメージング技法によって測定可能ではない身体検査によって特定される腹部腫瘤／腹部臓器肥大を含む。
【０２５８】
骨病変、嚢胞性病変、および以前に局所療法で治療された病変は、特定のコメントを必要とする：
【０２５９】
骨病変：
−骨スキャン、ＰＥＴスキャン、または単純フィルムは、一般に骨病変を測定するための適切なイメージング技法とみなされない。しかしながら、骨病変の存在または消失を確認するために、これらの技法を使用することができる。
−ＣＴまたはＭＲＩのような断面イメージング技法によって評価することができる、特定可能な軟部組織成分を伴う、溶解性骨病変または混合溶解性−芽球性病変は、軟部組織成分が上記の測定可能性の定義を満たす場合、一般に測定可能な病変とみなされる。
−芽球性骨病変は一般に測定不能である。
【０２６０】
嚢胞性病変：
−放射線写真で定義された単純嚢胞についての基準を満たす病変は、定義によって、単純嚢胞であるため、一般に悪性病変（測定可能でも測定不能でもない）とみなされない。
−嚢胞性転移を表すと考えられる「嚢胞性病変」は、上記の測定可能性の定義を満たす場合、一般に測定可能な病変とみなされる。しかしながら、非嚢胞性病変が同じ対象に存在する場合、これらは標的病変としての選択に好ましい。
【０２６１】
以前の局所治療を受けた病変：
−以前に照射された領域、または他の局所領域療法を受けた領域にある腫瘍病変は、病変において増悪が示されていない限り、通常は測定可能とみなされない。試験プロトコルは一般に、そのような病変が一般に測定可能とみなされる条件を詳述する。
【０２６２】
評価の方法
全ての測定は、臨床的に評価される場合キャリパーを使用して、一般にメートル表記で記録される。全てのベースライン評価は、一般に、治療開始にできるだけ近く、治療の開始前の４週間以内に行われる。
【０２６３】
ベースラインおよびフォローアップ中に特定および報告された各病変を特徴付けるために、同じ評価方法および同じ技法が一般に使用される。追跡される病変（複数可）を画像化することができるが、臨床検査によって評価可能でない限り、臨床検査ではなく、一般に、イメージングに基づく評価が常に行われる。
【０２６４】
臨床病変は、表面的であり、キャリパーを使用して評価されるように１０ｍｍ以上の直径（例えば、皮膚結節）である場合、一般に測定可能とみなされる。皮膚病変の症例について、病変のサイズを推定するルーラーを含むカラー写真による文書化が提案される。上記のように、病変が臨床検査およびイメージングの両方によって評価することができる場合、より客観的であり、またいくつかの場合では試験の最後に再調査されるため、イメージング評価が一般に行われる。
【０２６５】
特に新規病変の特定において、ＣＴはＸ線よりも感度が高いため、特に増悪が重要なエンドポイントである場合、胸部ＣＴは一般に胸部Ｘ線よりも好まれる。しかしながら、いくつかの場合において、胸部Ｘ線上での病変は、それらが明確に定義され、含気肺によって囲まれる場合、測定可能とみなされる。
【０２６６】
ＣＴは、一般に、奏効評価のために選択される病変を測定するために現在利用可能な再現可能な最良の方法である。このガイドラインは、ＣＴスライス厚が５ｍｍ以下であるという仮定に基づいて、ＣＴスキャンでの病変の測定可能性を定義している。ＣＴスキャンが５ｍｍを超えるスライス厚を有する場合、測定可能な病変についての最小サイズは、スライス厚の２倍である。ＭＲＩはまた、特定の状況において（例えば、ボディスキャンについて）許容される。客観的腫瘍奏効評価のためのＣＴおよびＭＲＩの両方の使用に関する詳細は、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌからの刊行物に提供される。
【０２６７】
超音波は、一般に病変サイズの評価において有用ではなく、一般に測定方法として使用されない。超音波検査は、後日の独立した再調査のためにそれらの全体で再現することができず、オペレーター依存的であるため、一般に、同じ技法および測定が１つの評価から次の評価まで行われることを保証することはできない（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）においてより詳細に記載される）。試験の経過において超音波によって新規病変が特定される場合、ＣＴまたはＭＲＩによる確認が一般に推奨される。ＣＴでの放射線曝露について懸念がある場合、いくつかの場合において選択された事例においてＣＴの代わりにＭＲＩが使用される。
【０２６８】
客観的な腫瘍評価のための内視鏡検査および腹腔鏡検査技法の利用は、一般に推奨されない。しかしながら、それらは一般に、生検が得られる場合に完全な病理学的奏効を確認するために、または完全奏効または外科的切除後の再発がエンドポイントである試験における再発を決定するために有用である。
【０２６９】
腫瘍マーカー単独は、一般に、客観的な腫瘍奏効を評価するために使用されない。しかしながら、マーカーが初期に正常上限を超える場合、それらは一般に、完全奏効にあるとみなされる対象について正規化される。
【０２７０】
細胞学および組織学は、プロトコルによって必要とされるまれな場合（例えば、既知の残存良性腫瘍が残り得る胚細胞腫瘍のような腫瘍タイプにおける残存病変）においてＰＲとＣＲとを区別するために一般に使用される。滲出液が治療の潜在的な有害効果であることが知られる（例えば、特定のタキサン化合物または血管新生阻害剤を含む）場合、治療中に出現または悪化する任意の滲出液の腫瘍性起源の細胞学的確認は、奏効（または安定性疾患）と進行性疾患とを区別するために、測定可能な腫瘍が奏効または安定性疾患の基準を満たしているか一般に考慮される。
【０２７１】
腫瘍奏効評価
客観的奏効または将来の進行を評価するために、ベースラインでの全体的な腫瘍負荷は、一般に推定され、その後の測定にコンパレータとして使用される。測定可能な疾患は、一般に、少なくとも１つの測定可能な病変の存在によって定義される。
【０２７２】
複数の測定可能な病変がベースラインで存在する場合、全ての関与する臓器を代表する合計最大５つの病変（および臓器あたり最大２つの病変）までの全ての病変は、一般に標的病変として特定され、ベースラインで記録および測定される（これは、対象が１つまたは２つの関与する臓器部位のみを有する場合、それぞれ最大２つおよび４つの病変が記録されることを意味する）。標的病変は、一般にそれらのサイズ（最長直径を有する病変）に基づいて選択され、一般に全ての関与臓器を代表するが、加えて一般に再現可能な繰り返し測定に適したものである。いくつかの場合において、図３のＥｉｓｅｎｈａｕｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（２００９）に例示されるように、再現可能に測定することができる次に大きな病変が一般に選択される状況では、最大の病変は、再現可能な測定に適さない。
【０２７３】
リンパ節は、正常な解剖学的構造であり、いくつかの場合において腫瘍によって関与されなくてもイメージングによって見ることができるため、特記に値する。測定可能と定義され、いくつかの場合において標的病変として特定される病理学的結節は、一般にＣＴスキャンによって１５ｍｍ以上の短軸の基準を満たす。これらの結節の短軸のみが一般にベースライン合計に寄与する。結節の短軸は一般に、結節が固形腫瘍によって関与されるかを判断するために放射線科医によって通常使用される直径である。結節サイズは、通常、画像が取得される平面における２つの寸法として報告される（ＣＴスキャンについて、これはほとんど常に軸平面であり、ＭＲＩについて、いくつかの場合において取得の平面は軸平面、矢状面、または冠状面である）。これらの寸法のうちの小さい方が短軸である。例えば、２０ｍｍ×３０ｍｍと報告される腹部結節は、２０ｍｍの短軸を有し、悪性の測定可能な結節として適格である。この例では、２０ｍｍが結節測定として記録される。全ての他の病理学的結節（１０ｍｍ以上であるが＜１５ｍｍの短軸を有するもの）は、一般に非標的病変とみなされる。＜１０ｍｍの短軸を有する結節は、一般に非病理学的とみなされ、一般に記録も追跡もされない。
【０２７４】
全ての標的病変についての直径（非結節性病変では最長、結節性病変では短軸）の合計は、一般に計算され、ベースライン合計直径として報告される。リンパ節を合計に含める場合、上記のように、短軸のみが合計に追加される。ベースライン合計直径は、一般に、疾患の測定可能な寸法において任意の客観的な腫瘍退縮をさらに特徴付けるために、参照として使用される。
【０２７５】
病理学的リンパ節を含む全ての他の病変（または疾患の部位）は、一般に非標的病変として特定され、一般にベースラインで記録される。測定は一般に不要であり、これらの病変は一般に「存在する」、「存在しない」、またはまれな場合「明確な進行」として追跡される（詳細は後述される）。加えて、同じ臓器に関与する複数の非標的病変を症例記録フォームで単一項目（例えば、「複数の骨盤リンパ節の拡大」または「複数の肝転移」）として記録することが可能である。
【０２７６】
奏効基準
完全奏効（ＣＲ）：全ての標的病変の消失。任意の病理学的リンパ節（標的か非標的かに関係なく）は、短軸が＜１０ｍｍに低減する。
【０２７７】
部分奏効（ＰＲ）：ベースライン合計直径を参照として、標的病変の直径の合計の少なくとも３０％減少。
【０２７８】
進行性疾患（ＰＤ）：最小合計を参照として、標的病変の直径の合計の少なくとも２０％増加（これは、試験で最小である場合、ベースライン合計を含む）。２０％の相対的な増加に加えて、合計は、一般に、少なくとも５ｍｍの絶対的な増加を実証する。（注記：１つ以上の新規病変の出現も、一般に進行とみなされる）。
【０２７９】
安定性疾患（ＳＤ）：最小合計直径を参照として、ＰＲに適格であるのに十分な収縮もＰＤに適格であるのに十分な増加もない。
【０２８０】
標的病変として特定されるリンパ節は、一般に結節が１０ｍｍ未満に退縮した場合でも、一般に（ベースライン検査と同じ解剖平面で測定される）実際の短軸測定を記録する。これは、リンパ節が標的病変として含まれる場合、正常なリンパ節は一般に＜１０ｍｍの短軸を有すると定義されるため、完全奏効基準が満たされる場合でも、いくつかの場合、病変の「合計」がゼロにならないことを意味する。したがって、症例報告書または他のデータ収集方法は、いくつかの場合、ＣＲに適格となるために、各結節が一般に＜１０ｍｍの短軸を達成する別のセクションに記録される標的結節性病変を有するように設計される。ＰＲ、ＳＤ、およびＰＤについて、結節の実際の短軸測定は、好ましくは標的病変の合計に含まれる。
【０２８１】
試験中、ベースラインで記録される全ての病変（結節および非結節）は、一般に、非常に小さい場合（例えば、２ｍｍ）でも、その後の各評価でそれらの実際の測定を記録する。しかしながら、時々ベースラインで標的病変として記録される病変またはリンパ節がＣＴスキャンで非常に弱くなり、いくつかの場合では放射線科医が正確な寸法を割り当てることに違和感があり、いくつかの場合において、それらを「測定するには小さすぎる」と報告する。これが発生する場合、一般に、値が症例報告書に記録されることが重要である。病変が消失した可能性が高いことが放射線科医の意見である場合、測定は一般に０ｍｍと記録される。病変が存在すると考えられ、かすかに見られるが、測定するには小さすぎる場合、５ｍｍのデフォルト値が一般に割り当てられる。（注記：一般に、リンパ節は通常、正常な場合は定義可能なサイズを有し、後腹膜のように脂肪によって囲まれることが多いため、このルールがリンパ節に使用される可能性は低いが、リンパ節が存在すると考えられ、かすかに見られるが、測定するには小さすぎる場合、５ｍｍのデフォルト値は、一般に、この状況においても割り当てられる）。このデフォルト値は、５ｍｍのＣＴスライス厚から導出される（ただし、変動するＣＴスライス厚で一般に変化しない）。これらの病変の測定は、潜在的に再現不能であり、したがって、このデフォルト値を提供することは、測定エラーに基づく偽奏効または進行を防止する。しかしながら、繰り返すが、放射線科医が実際の寸法を提供することができる場合、それが５ｍｍ未満であっても、一般に記録される。
【０２８２】
非結節性病変が「断片化」する場合、断片化した部分の最長直径が一般に加算されて、標的病変合計が計算される。同様に、病変が合体するとき、それらの間の平面は一般に維持され、各個々の病変の最大直径測定を得るのに役立つ。病変が真に合体して、分離できなくなった場合、この場合における最長直径のベクトルは、一般に「合体病変」についての最大の最長直径である。
【０２８３】
いくつかの非標的病変は、いくつかの場合において実際に測定可能であるが、一般に測定されず、代わりに一般にプロトコルにおいて指定される時点で定性的にのみ評価される。
【０２８４】
完全奏効（ＣＲ）：全ての非標的病変の消失および腫瘍マーカーレベルの正常化。全てのリンパ節は、非病理学的なサイズである（＜１０ｍｍの短軸）。
【０２８５】
非ＣＲ／非ＰＤ：１つ以上の非標的病変（複数可）の持続および／または正常限界を超える腫瘍マーカーレベルの維持。
【０２８６】
進行性疾患（ＰＤ）：既存の非標的病変の明らかな増悪（下記コメント参照）。（注記：１つ以上の新規病変の出現も増悪とみなされる）。
【０２８７】
対象が測定可能な疾患を有する場合、非標的疾患に基づいて「明らかな増悪」を達成するために、一般に、非標的疾患における実質的な悪化の全体的なレベルがあり、標的疾患におけるＳＤまたはＰＲの存在下でも、全体的な腫瘍負荷は、療法の中止に値するほど十分に増加している。１つ以上の非標的病変のサイズの控えめな「増加」は、通常、明らかな増悪状態に適格となるには不十分である。標的疾患のＳＤまたはＰＲにもかかわらず非標的疾患の変化のみに基づいた全体的な増悪の指定は、したがって、一般に極めてまれである。
【０２８８】
測定不能な疾患のみを有する対象は、測定可能な疾患を有することが試験参加の基準ではない場合、いくつかの第ＩＩＩ相試験において発生する。上記と同じ一般的な概念がここで適用されるが、この例では、測定不能な疾患の負荷の増加の解釈に織り込む測定可能な疾患の評価はない。非標的疾患の悪化は一般に容易に定量化されないため（定義により：全ての病変が真に測定不能である場合）、明らかな増悪について対象を評価するときに一般に適用することができる有用な試験は、測定不能な疾患の変化に基づく全体的な疾患負荷の増加の大きさが、測定可能な疾患についてＰＤを宣言するために必要となるであろう増加、すなわち、「体積」の追加の７３％増加（これは測定可能な病変における直径２０％増加と同等である）を表す腫瘍負荷の増加に相当するかを考慮することである。例は、胸水の「微量」から「多量」への増加、リンパ管炎性疾患の限局性から広範囲への増加を含むか、またはいくつかの場合において、プロトコルにおいて「療法の変更を必要とするのに十分」と記載される。「明らかな増悪」が見られる場合、対象は、一般にその時点で全体的なＰＤを有しているとみなされる。測定不能な疾患に適用する客観的な基準を有することが理想的であるが、その疾患の性質は、そうすることを一般に非常に困難にし、したがって、増加は一般に実質的である。
【０２８９】
新規悪性病変の出現は、一般に疾患増悪を示し、したがって、新規病変の検出に関するいくつかのコメントは一般に重要である。一般に、新規放射線写真病変の特定のための特定の基準はないが、新規病変の発見は一般に明らかであり、すなわち、一般に、スキャン技法の相違、画像診断法の変更、または腫瘍以外のものを表すと考えられる所見（例えば、いくつかの場合において、いくつかの「新規」骨病変は、単に既存病変の治癒または再発である）に起因しない。これは、対象のベースライン病変が部分または完全奏効を示す場合に特に重要である。例えば、肝臓病変の壊死は、ＣＴスキャンレポートで「新規」嚢胞性病変として頻繁に報告されるが、一般にそうではない。
【０２９０】
ベースラインでスキャンされなかった解剖学的位置におけるフォローアップ試験で特定される病変は、一般に新規病変とみなされ、一般に疾患増悪を示す。この例は、ベースラインで内臓疾患を有し、試験中に脳のＣＴまたはＭＲＩが指示され、これが転移を明らかにする対象である。対象の脳転移は、ベースラインでの脳イメージングが行われなかった場合でも、一般にＰＤの証拠であるとみなされる。
【０２９１】
例えば、その小さなサイズのために、新規病変が明らかでない場合、継続的な療法およびフォローアップ評価は、一般に、それが真に新規疾患を表すかを明らかにする。繰り返しスキャンが確実に新規病変があることを確認する場合、増悪は、一般に、初期スキャンの日付を使用して宣言される。
【０２９２】
ＦＤＧ−ＰＥＴ奏効評価は追加の試験を必要とするが、増悪（特に「新規」疾患の可能性）の評価においてＣＴスキャンを補完するためにＦＤＧ−ＰＥＴスキャンの使用を組み込むことが合理的な場合がある。ＦＤＧ−ＰＥＴイメージングに基づく新規病変は、一般に、以下のアルゴリズムに従って特定される：
ａ．ベースラインでの陰性ＦＤＧ−ＰＥＴ、フォローアップでの陽性＊ＦＤＧ−ＰＥＴは、一般に、新規病変に基づくＰＤの徴候である。＊「陽性」ＦＤＧ−ＰＥＴスキャン病変は、一般に、減衰補正画像での周囲組織の取り込みの２倍を超える取り込みでＦＤＧ  ａｖｉｄであるものを意味する。
ｂ．ベースラインでのＦＤＧ−ＰＥＴなし、およびフォローアップでの陽性ＦＤＧ−ＰＥＴ：
−フォローアップでの陽性ＦＤＧ−ＰＥＴがＣＴによって確認される新規疾患部位に対応する場合、これは一般にＰＤである。
−フォローアップでの陽性ＦＤＧ−ＰＥＴがＣＴで新規疾患部位として確認されない場合、追加のフォローアップＣＴスキャンが一般に行われ、その部位で真に増悪が発生しているか決定される（そうである場合、ＰＤの日付は初期異常ＦＤＧ−ＰＥＴスキャンの日付となる）。「陽性」ＦＤＧ−ＰＥＴスキャン病変は、一般に、減衰補正画像での周囲組織の取り込みの２倍を超える取り込みでＦＤＧ  ａｖｉｄであるものを意味する。
−フォローアップでの陽性ＦＤＧ−ＰＥＴが解剖学的画像に基づいて増悪していないＣＴの既存の疾患部位に対応する場合、これは一般にＰＤではない。
【０２９３】
最良の全体的な奏効の評価
最良の全体的な奏効は、一般に、試験治療の開始から治療の終了までに記録された最良の奏効である。この試験において療法の終了後まで奏効が文書化されない場合、代替の抗癌療法が行われていない限り、一般的に治療後評価が最良の全体的な奏効の決定において考慮される。対象の最良の全体的な奏効の割り当ては、一般に、標的疾患および非標的疾患の両方の所見に依存し、一般に、新規病変の出現も考慮に入れる。
【０２９４】
一般に、プロトコルで指定された各時点で、奏効評価が行われると想定される。表５は、ベースラインで測定可能な疾患を有する対象についての各時点での全体的な奏効状態計算の要約を提供する。
【０２９５】
対象が測定不能な（したがって非標的）疾患のみを有する場合、表６が一般に使用される。
【０２９６】
特定の時点でイメージング／測定が全く行われない場合、対象は、一般にその時点で評価不能（ＮＥ）である。評価時に病変測定のサブセットのみが行われる場合、個々の欠損病変（複数可）の寄与が割り当てられた時点の奏効を変化させないという説得力のある議論がなされない限り、通常、その場合は、その時点で一般にＮＥともみなされる。これはＰＤの場合に起こる可能性が最も高いであろう。例えば、対象が、３つの測定された病変で５０ｍｍのベースライン合計を有し、フォローアップで２つの病変のみが評価されたが、それらが８０ｍｍの合計をもたらした場合、対象は、欠損病変の寄与に関係なく、一般にＰＤ状態を達成している。
【０２９７】
対象についての全てのデータが知られると、最良の全体的な奏効が一般に決定される。
【０２９８】
完全または部分奏効の確認が一般に必要とされない試験における最良の奏効決定：これらの試験における最良の奏効は、一般に、全ての時点にわたる最良の奏効として定義される（例えば、第１の評価でＳＤ、第２の評価でＰＲ、および最後の評価でＰＤを有する対象は、ＰＲの最良の全体的な奏効を有する）。ＳＤが最良の奏効であると考えられる場合、これは、一般に、ベースラインからのプロトコル指定最小時間も満たす。ＳＤがそうでなければ最良の時点での奏効であるときに最小時間が満たされない場合、対象の最良の奏効は、一般に、その後の評価に依存する。例えば、第１の評価でＳＤ、第２でＰＤを有し、ＳＤについての最小期間を満たさない対象は、ＰＤの最良の奏効を有するであろう。第１のＳＤ評価後にフォローアップを受けない同じ対象は、一般に評価不能とみなされる。
【０２９９】
結節性疾患が標的病変の合計に含まれ、結節が「正常な」サイズ（＜１０ｍｍ）に減少する場合、いくつかの場合において、それらはスキャンで報告された測定を依然として有する。結節のサイズの増加に基づいて増悪を過大評価しないために、結節が正常でも、この測定は一般に記録される。先に述べたように、これは、いくつかの場合において、ＣＲを有する対象が、症例報告書（ＣＲＦ）に「ゼロ」の合計を有さないことを意味する。
【０３００】
その時点での疾患増悪の客観的な証拠なしに治療の中止を必要とする健康状態の全体的な悪化を有する対象は、一般に「症状悪化」として報告される。治療の中止後であっても客観的な増悪を文書化するためのあらゆる努力が一般に行われる。症状悪化は、一般に客観的奏効の記述子ではなく、それは、試験療法を停止するための理由である。そのような対象の客観奏効状態は、一般に、表５〜表６に示されるように、標的および非標的疾患の評価によって決定される。
【０３０１】
「ＥＰ、早期死亡および評価不能」を定義する条件は、試験特異的であり、一般に（治療期間、治療周期性に応じて）各プロトコルにおいて明確に記載される。
【０３０２】
いくつかの状況では、残存疾患と正常組織とを区別することが難しい。完全奏効の評価がこの決定に依存する場合、完全奏効の状態を割り当てる前に、残存病変を調査（穿刺吸引／生検）することが一般に推奨される。いくつかの場合において、残存する放射線写真異常が線維症または瘢痕を表すと考えられる場合における生検と同様の方法でＣＲへと奏効をアップグレードするために、ＦＤＧ−ＰＥＴが使用される。
【０３０３】
増悪の明らかでない所見（例えば、非常に小さく不確実な新規病変、嚢胞性変化、または既存の病変の壊死）について、いくつかの場合において、治療は、次の予定された評価まで継続される。次の予定された評価で、増悪が確認される場合、増悪の日付は、一般に、増悪が疑われた早い方の日付である。
【表６】
2022500479.tif 000011
【表７】
2022500479.tif 000012
【０３０４】
奏効の期間
全体的な奏効の期間は、一般に、ＣＲ／ＰＲの測定基準が最初に満たされる時間（最初に記録される方）から、再発性または進行性疾患が試験で記録される最初の日付まで測定される。
【０３０５】
全体的な完全奏効の期間は、一般に、ＣＲの測定基準が最初に満たされる時間から、再発性疾患が客観的に文書化される最初の日付まで測定される。
【０３０６】
安定性疾患は、一般に、治療の開始から（無作為化試験では、無作為化の日から）進行の基準が満たされるまで、試験の最小合計を参照として測定される（ベースライン合計が最小である場合、これがＰＤの計算の参照である）。
【０３０７】
実施例２３：ＳＲＡ１４１  ＣＩＮ癌臨床試験
染色体不安定性の高い率を有する癌を有する患者の治療におけるＳＲＡ１４１単剤療法の有効性を確認するために、実施例２２に記載のように臨床試験を実施する。
【０３０８】
実施例２４：代替のＳＲＡ１４１投与レジメン
十分な臨床安全性および忍容性、ＰＫおよび活性バイオマーカーデータが利用可能になったら、代替スケジュールを調査する。いくつかの場合において、治験依頼者と治験責任医師との間の話し合いの後、治験中の任意の時点で代替投与スケジュールを考慮する。いくつかの場合において、代替スケジュールの必要性は、新たな安全性および忍容性データ、ＰＫおよび／またはＰＤｎデータによって示される。いくつかの場合において、代替のスケジュールは、以下の例を含むが、これらに限定されない：７日オン／７日オフ、１４日オン／１４日オフ、１日２回投与、または他の変形を含む。代替の投薬スケジュールコホートは、いくつかの場合において、連続スケジュールコホートと並行して、または連続スケジュールコホートの代わりに開始する。
【０３０９】
代替投与スケジュールの初期開始用量は、以前のコホートからの安全性、忍容性、およびＰＫ結果に依存するであろう。ＭＴＤが以前のスケジュールと特定された後に別のスケジュールをテストする場合、新しいスケジュールの開始総週用量は、前のスケジュールのＭＴＤでの総週用量を超えない。ＭＴＤが前のスケジュールで特定されていない場合、いくつかの場合において用量漸増ステップが発生するが、用量漸増は、一般に、週あたりの総用量に基づいて５０％を超えない。
【０３１０】
実施例２５：ビフェノタイプＢ骨髄単球性白血病のラットＭＶ−４−１１異種移植片モデルにおけるＳＲＡ１４１治療の免疫組織化学評価
皮下二表現型Ｂ骨髄単球性白血病ＭＶ−４−１１腫瘍を有するラットを、７５ｍｇ／ｋｇのＳＲＡ１４１またはビヒクル、ＢＩＤで、または１００ｍｇ／ｋｇのＳＲＡ１４１、ＱＤで５日間治療した。最後の用量の投与の１２時間後に、動物から腫瘍を収集した。ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍および／または皮膚を、全ＭＣＭ２、セリン４０でのリン酸化ＭＣＭ２（ｐＭＣＭ２−Ｓ４０）およびセリン５３でのリン酸化ＭＣＭ２（ｐＭＣＭ２−Ｓ５３）、セリン４１でのリン酸化ＭＣＭ２（ｐＭＣＭ２−Ｓ４１）、ならびに定常状態でのセリン１３９でのリン酸化ヒストンＨ２Ａ．Ｘについて免疫組織化学によって評価した。
【０３１１】
図２４Ａおよび図２４Ｂに示されるように、腫瘍中のＳ４０およびＳ５３におけるｐＭＣＭ２の実質的な減少は、皮膚組織の変化と相関し、皮膚生検を利用して、ＳＲＡ１４１のオンターゲット活性を実証し得ることを示唆している。Ｃｄｃ７ではなく、Ｓ４１がＣｄｋによってリン酸化されるため、予想通り、ＳＲＡ１４１治療後にｐＭＣＭ２−Ｓ４１の影響は見られなかった。したがって、データは、ＳＲＡ１４１がＣｄｃ７阻害に対する特異性を有することをさらに実証する。腫瘍を、有糸分裂細胞のマーカーであるｐＨＨ３についての免疫組織化学によって、またはヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色することによっても分析した。図２４Ｃに示される結果は、５日間の投与後、ＳＲＡ１４１で治療された腫瘍が、ビヒクルと比較してより少ない有糸分裂細胞およびアポトーシス細胞の存在の増加をもたらしたことを実証し、ＳＲＡ１４１で治療されたＭＶ−４−１１腫瘍における抗腫瘍活性の存在を示唆する。
【０３１２】
異種移植腫瘍の評価
異種移植片腫瘍（間質または周囲のラット組織ではないが）における腫瘍細胞をスコア化した。スコアリングは、主成分を用いて半定量的に行い、腫瘍細胞を、差動強度およびＨスコアでのパーセンテージとして、総ＭＣＭ２、ｐＭＣＭ２−Ｓ５３、ｐＭＣＭ２−Ｓ４０、およびｇＨ２ＡＸ反応性についてスコアリングする。パーセンテージおよび強度測定は、各異種移植片試料内の腫瘍の同じ相対領域内の科学者によって推定される（下端から１つの４０倍視野）。
【０３１３】
異種移植片組織を評価するために使用されるＨスコアアプローチは、対応する差動強度で４点半定量尺度（０、１＋、２＋、３＋）で核染色を有する腫瘍細胞の割合を記録することを必要とする。この尺度では、０＝ゼロ、陰性または非特異的染色、１＋＝低または弱い染色、２＋＝中または中程度の染色、および３＋＝高または強い染色である。
【０３１４】
Ｈスコアは、発現強度（褐色染色）を有する細胞の割合に、それらの対応する差動強度を４点半定量尺度（０、１＋、２＋、３＋）で乗じて合計することによって計算される。したがって、スコアは０〜３００の範囲である。
【０３１５】
Ｈスコア＝［（％ａｔ＜１）×０］＋［（％ａｔ１＋）×１］＋［（％ａｔ２＋）×２］＋［（％ａｔ３＋）×３］
【０３１６】
ラット皮膚の評価
ラット皮膚試料中の表皮の上皮細胞を、２つの科学者によって共同スコア化した。総ＭＣＭ２、ｐＭＣＭ２−Ｓ５３、ｐＭＣＭ２−Ｓ４０、およびｇＨ２ＡＸ反応性について表皮細胞を陽性細胞の計数としてスコアリングするために、主成分を用いて定量的にスコアリングを行った。各皮膚試料について、４つの均等に分布する領域を審査のためにマークした。領域を各皮膚試料中の同じおおよその位置に整列させた。ｐＭＣＭ２−Ｓ５３およびｐＭＣＭ２−Ｓ４０について、４つの代表領域における１０倍視野における陽性細胞の数を計数した。ｇＨ２ＡＸについては、４つの代表的な領域における２０倍視野における陽性細胞の数を計数した。強度に関係なく、染色が１０倍または２０倍で容易に観察された場合、細胞を計数した。同じ総面積を一貫して捕捉するために、細胞は平坦な表皮内でのみ計数され、陥入領域では計数されなかった。
【０３１７】
各皮膚試料について分析した領域にわたって計数された陽性皮膚細胞の数を、各バイオマーカーについて平均した。次に、ｐＭＣＭ２−Ｓ５３およびｐＭＣＭ２−Ｓ４０の陽性皮膚細胞の平均数を、全ＭＣＭ２の陽性皮膚細胞の平均数と比較してパーセンテージとして表した。ｇＨ２ＡＸの陽性皮膚細胞の平均数に２を乗じて、２０倍対１０倍（正規化）でのその評価を説明し、次いで、総ＭＣＭ２の平均に対するパーセンテージとしても表された。
【０３１８】
皮膚細胞計数は、各試料について同じおおよその位置にある複数の皮膚領域（総ＭＣＭ２については２つの領域、ｐＭＣＭ２については４つの領域、およびｇＨ２ＡＸ）における２つの独立した科学者によって計数された陽性細胞の数（任意の強度で）を記録することによって実行した。各バイオマーカーについて各皮膚領域で記録された陽性細胞の数を、各試料について平均した。ｐＭＣＭ２−Ｓ５３、ｐＭＣＭ２−Ｓ４０、およびｇＨ２ＡＸ（倍率について正規化）の平均細胞計数を、合計ＭＣＭ２のパーセンテージと比較した。ｇＨ２ＡＸについては２０倍、他の全てのマーカーについては１０倍で細胞計数を行った。
【０３１９】
平均計数（ｐＭＣＭ２、ｇＨ２ＡＸ）＝［領域１ｐｏｓ細胞］＋［領域２ｐｏｓ細胞］＋［領域３ｐｏｓ細胞］＋［領域４ｐｏｓ細胞］／４
【０３２０】
平均計数（合計ＭＣＭ２）＝［領域１ｐｏｓ細胞］＋［領域４ｐｏｓ細胞］／２
【０３２１】
合計の割合（ｐＭＣＭ２）＝［平均計数ｐＭＣＭ２］／［平均計数合計ＭＣＭ２］×１００
【０３２２】
合計の割合（ｇＨ２ＡＸ）＝［平均計数ｇＨ２ＡＸ×２（正規化）］／［平均計数合計ＭＣＭ２］×１００
【０３２３】
図２５Ａおよび図２５Ｂに示される結果は、ラットＭＶ−４−１１異種移植片モデルにおける腫瘍および皮膚の両方におけるｐＭＣＭ２−Ｓ４０の用量依存的減少を示す。
【０３２４】
実施例２６：ヒト腫瘍および皮膚の免疫組織化学評価
ホルマリン固定パラフィン包埋ヒト腫瘍およびヒト正常皮膚試料を、総ＭＣＭ２、ｐＭＣＭ２−Ｓ５３、ｐＭＣＭ２−Ｓ４０、およびｇＨ２ＡＸについて免疫組織化学によって評価した。
【０３２５】
ヒト腫瘍の評価
ヒト転移性結腸癌試料中の腫瘍細胞（間質または周囲の非腫瘍性組織成分ではないが）をスコア化した。Ｈスコアを、前述の通りに計算した（実施例２５）。
【０３２６】
ヒト皮膚の評価
ヒト皮膚試料中の表皮の上皮細胞を、２つの科学者によって共同スコア化した。総ＭＣＭ２、ｐＭＣＭ２−Ｓ５３、ｐＭＣＭ２−Ｓ４０、およびｇＨ２ＡＸ反応性について表皮細胞を陽性細胞の計数としてスコアリングするために、主成分を用いて定量的にスコアリングを行った。各皮膚試料について、２つの均等に分布した領域を審査のためにマークした。各皮膚試料中の同じおおよその位置に領域を整列させ、ＭＣＭ２およびｐＭＣＭ２について１０倍で評価した。ｇＨ２ＡＸについて、２つの領域で出願された２０倍における陽性細胞の数を計数した。強度に関係なく、染色が１０倍または２０倍で容易に観察された場合、細胞を計数した。同じ総面積を一貫して捕捉するために、細胞は平坦な表皮内でのみ計数され、陥入領域では計数されなかった。
【０３２７】
各皮膚試料について分析した領域にわたって計数された陽性皮膚細胞の数を、各バイオマーカーについて平均した。次に、ｐＭＣＭ２−Ｓ５３およびｐＭＣＭ２−Ｓ４０の陽性皮膚細胞の平均数を、全ＭＣＭ２の陽性皮膚細胞の平均数と比較してパーセンテージとして表した。ｇＨ２ＡＸの陽性皮膚細胞の平均数に２を乗じて、２０倍対１０倍（正規化）でのその評価を説明し、次いで、総ＭＣＭ２の平均に対するパーセンテージとしても表された。
【０３２８】
皮膚細胞計数は、実施例２５に記載されるように実施した。
【０３２９】
平均計数（総ＭＣＭ２、ｐＭＣＭ２、ｇＨ２ＡＸ）＝［領域１ｐｏｓ細胞］＋［領域２ｐｏｓ細胞］／２
【０３３０】
合計の割合（ｐＭＣＭ２）＝［平均計数ｐＭＣＭ２］／［平均計数合計ＭＣＭ２］×１００
【０３３１】
合計の割合（ｇＨ２ＡＸ）＝［平均計数ｇＨ２ＡＸ×２（正規化）］／［平均計数合計ＭＣＭ２］×１００
【０３３２】
正常なヒト組織の免疫組織化学評価は、ｐＭＣＭ−Ｓ４０のベースラインレベルが測定可能であり、ビヒクルを用いた治療後のラット皮膚試料と同等のレベルであることを実証する（図２６）。したがって、ヒト皮膚は、ＳＲＡ１４１オンターゲット薬物力学を評価するための合理的な代替組織であるように見える。
【０３３３】
実施例２７：様々な癌細胞株におけるＳＲＡ１４１と追加の抗腫瘍剤との組み合わせ
ＳＲＡ１４１と９つの標的抗腫瘍剤との組み合わせ活性を、固形腫瘍細胞株（Ｃｏｌｏ−２０５、ＳＷ６２０、Ａ３７５（Ｖ６００Ｅ黒色腫））、および血液癌細胞株（ＫＧ−１、ＭＯＬＭ−１３、ＭＶ４１１）において評価した。細胞生存率を、前述のＣＴＧおよびＣＴＢｌｕｅアッセイ（実施例３）を使用して評価した。内部対照としてスタウロスポリンを使用して９６ウェルプレートでアッセイを行った。細胞を、単一薬剤（第Ｉ相）またはＳＲＡ１４１と第２薬剤（第ＩＩ相）の組み合わせで７２時間インキュベートした。
【０３３４】
第Ｉ相では、ＡＢＴ−１９９、ＡＴＭキナーゼ阻害剤ＫＵ−６００１９、オーロラＢキナーゼ阻害剤バラセルチブ、ＭＥＫ阻害剤トラメチニブ、ＰＩ３Ｋ経路阻害剤コパンリシブ、レチノイド経路阻害剤ベキサロテンおよびトレチノイン、トレオニンチロシンキナーゼ（ＴＴＫ）阻害剤ＣＦＩ−４０２２５７、ならびに上皮成長因子阻害剤エルロチニブの６つの細胞株全てにおいて、以下の９つの薬剤のそれぞれについて、２０％阻害濃度（ＩＣ２０）および５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した。
【０３３５】
第ＩＩ相では、アッセイを、各薬剤の存在下で固定濃度（各薬剤についてはＩＣ２０およびＩＣ５０）およびＳＲＡ１４１の組み合わせで繰り返し、アッセイは、ＳＲＡ１４１の濃度の範囲にわたって行われた。Ｂｌｉｓｓ  Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅモデルを使用して、組み合わせ指数（ＣＩ）値を計算した（例えば、Ｆｏｕｃｑｕｉｅｒ  ａｎｄ  Ｇｕｅｄｊ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．２０１５  ３（３）（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい）。ＣＩ値が１未満（ＣＩ＜１）は、組み合わせ効果が予想される付加効果よりも大きいことを示す。
【０３３６】
Ｃｏｌｏ−２０５細胞における併用処理の結果（図２７Ａおよび図２７Ｇ）は、ＳＲＡ１４１およびバラセルチブが、特に０．０１２μＭのバラセルチブの存在下で相乗的に作用することを実証する。対照的に、ＳＲＡ１４１およびベキサロテンとの組み合わせは、拮抗効果を有するように見える。トラメチニブおよびコパンリシブは、Ｃｏｌｏ−２０５細胞においてＳＲＡ１４１とわずかな付加効果を有するように見える。
【０３３７】
ＳＷ６２０細胞における併用処理の結果（図２７Ｂ）は、バラセルチブ、トラメチニブ、およびコパンリシブが全てＳＲＡ１４１にわずかな添加効果を有することを示す。Ａ３７５（図２７Ｃ）およびＫＧ−１（図２７Ｄ）細胞における併用処理の結果は、バラセルチブではなく、トラメチニブまたはコパンリシブがＳＲＡ１４１とわずかな付加効果を有することを示す。
【０３３８】
ＭＯＬＭ−１３細胞における併用処理の結果（図２７Ｅ）は、ＡＢＴ−１９９およびＳＲＡ１４１が、特に０．１μＭのＡＢＴ−１９９の存在下で相乗的に作用することを実証する。加えて、バラセルチブ（図２７Ｈ）、トラメチニブ、コパンリシブ、ベキサロテン、およびトレチノインは全て、ＭＯＬＭ−１３細胞においてＳＲＡ１４１によるわずかな添加効果を実証する。
【０３３９】
ＭＶ４１１細胞における併用処理の結果（図２７Ｆ）は、バラセルチブ、コパンリシブ、およびトレチノインが全てＳＲＡ１４１でわずかな添加効果を有することを示す。
【０３４０】
実施例２８：ＳＲＡ１４１は、抗アポトーシス遺伝子の阻害と相乗作用する
抗アポトーシス遺伝子ＢＣＬ−ＸＬ、ＢＣＬ−２、およびＭＣＬ−１は、ＲＮＡｉノックダウンを使用してＨＣＴ１１６およびＨｅｌａ細胞で阻害された。細胞を９６ウェルプレート中に２０００細胞／ウェルで播種し、最終濃度１０ｎＭのＲＮＡｉ／Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＲＮＡｉｍａｘ溶液でトランスフェクトした。形質転換細胞を、用量の範囲で７２時間ＳＲＡ１４１で処理した。ＣＴＲＬ（非毒性対照ＲＮＡｉ）、ＢＣＬ−２、ＢＣＬ−ＸＬ、またはＭＣＬ−１に対するＲＮＡｉでトランスフェクトされた処理された細胞の細胞生存率を、前述のＣＴＢｌｕｅアッセイを使用して測定した（実施例３）。図２８Ａに示されるデータは、ＲＮＡｉによって阻害される抗アポトーシス遺伝子がＳＲＡ１４１と相乗効果を実証する。
【０３４１】
抗アポトーシス遺伝子ＢＣＬ−２は、前述の０．１μＭのＡＢＴ−１９９で処理することによって、Ｍｏｌｍ−１３細胞において阻害された（実施例６および２４を参照されたい）。細胞を、０．０４μＭ〜３．３０μＭのＳＲＡ１４１濃度で０．１μＭのＡＢＴ−１９９およびＳＲＡ１４１で７２時間処理した。ＢＣＬ−２阻害およびＳＲＡ１４１との相乗効果は、１未満の組み合わせ指数値によって示されるように、以下の濃度のＳＲＡ１４１：０．１２μＭ、０．３７μＭ、１．１０μＭ、および３．３０μＭ（図２８Ｂ）で実証された（実施例２４を参照されたい）
【０３４２】
実施例２９：Ｃｄｃ７阻害剤の臨床試験評価
ヒト患者における癌の治療のためのＣｄｃ７阻害剤の有効性をさらに確認するために、臨床試験を実施する。好適な患者としては、癌（例えば、乳癌、結腸癌、肺癌、血液癌、例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、黒色腫、子宮癌、甲状腺癌、慢性好酸球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、膀胱癌、子宮頸癌、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌、子宮内膜癌、肝細胞癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、小細胞肺癌、神経芽腫ならびに頭頸部癌）と診断された患者が挙げられる。患者には、Ｃｄｃ７阻害剤ＳＲＡ−１４１を経口投与する。最大有効投与量は、上記の動物実験から変換された最適用量から開始して確認される。動物（すなわち、ラットおよび／またはマウス）研究からのヒト当量投与量の決定は、当業者に知られている技術（Ｎａｉｒ，Ａ．ａｎｄ  Ｊａｃｏｂ，Ｓ．Ｊ．Ｂａｓｉｃ  Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ；Ｍａｒｃｈ  ２０１６  ７（２）：２７−３１）。ＳＲＡ−１４１の投与量は、１００〜５，０００ｍｇ、１００〜１，０００ｍｇ、１，０００〜２，０００ｍｇ、２，０００〜３，０００ｍｇ、３，０００〜４，０００ｍｇ、４，０００〜５，０００ｍｇ、１，５００〜２，５００ｍｇ、５００〜１，０００ｍｇ、１，０００〜１，５００ｍｇ、１，５００〜２，０００ｍｇ、２，０００ｍｇ〜２，５００ｍｇ、２，５００〜３，０００ｍｇ、３，０００〜３，５００ｍｇ、３，５００〜４，０００ｍｇ、４，０００〜４，５００ｍｇ、または４，５００〜５，０００ｍｇであり得る。ＳＲＡ−１４１は、１日１回、１日２回、１日３回、隔日、１週間、１ヶ月、１日１回の投与で１〜７日間、続いて１〜２８日の非投与、１〜２８日の１日１回の投与、続いて１〜２８日の非投与を投与することができる。患者は疾患進行についてモニタリングされる。
【０３４３】
実施例３０：追加の抗腫瘍剤（複数可）と組み合わせたＣｄｃ７阻害剤の臨床試験評価
ヒト患者におけるｍＴＯＲ経路の阻害剤、ＤＮＡポリメラーゼの阻害剤、および受容体チロシンキナーゼの阻害剤、ならびにＭＡＰＫ経路の阻害剤、レチノイド経路の調節剤、アポトーシスの調節剤、またはＰＡＲＰ阻害剤と組み合わせたＣｄｃ７阻害剤の有効性をさらに確認するために、臨床試験を実施する。好適な患者としては、癌（例えば、乳癌、結腸癌、肺癌、血液癌、例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、黒色腫、子宮癌、甲状腺癌、慢性好酸球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、膀胱癌、子宮頸癌、大腸癌（ＣＲＣ）、胃癌、子宮内膜癌、肝細胞癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、脳癌、肉腫、小細胞肺癌、神経芽腫ならびに頭頸部癌）と診断された患者が挙げられる。患者には、Ｃｄｃ７阻害剤ＳＲＡ−１４１を経口投与する。患者には、ヒト患者におけるｍＴＯＲ経路の阻害剤、ＤＮＡポリメラーゼの阻害剤、および受容体チロシンキナーゼの阻害剤、ならびにＭＡＰＫ経路の阻害剤、レチノイド経路の調節剤、アポトーシスの調節剤、ＰＡＲＰ阻害剤、または抗葉酸代謝産物が同時に投与される。投与される最大有効投与量は、当該技術分野の一般的な技量に既知の技法を使用して決定される。患者は疾患進行についてモニタリングされる。
【０３４４】
引用文献
●Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）
●Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）
●Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）
●Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ  ａｎｄ  Ｎ．Ｋａｐｌａｎ  ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）
●Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）
●Ｃａｒｅｙ  ａｎｄ  Ｓｕｎｄｂｅｒｇ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）  Ｖｏｌｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ（１９９２）
●Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．５，１４５，６８４
●Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，１０７，２８８
●Ｍｏｎｇａ  ＳＰ，Ｗａｄｌｅｉｇｈ  Ｒ，Ｓｈａｒｍａ  Ａ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ／ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ  ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  ｇｅｌ  ｆｏｒ  ｐａｌｌｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０００；２３（４）：３８６−３９２
●Ｍａｒｙ  Ｍ．Ｔｏｍａｙｋｏ  Ｃ．，Ｐａｔｒｉｃｋ  Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，１９８９．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｔｕｍｏｒ  ｓｉｚｅ  ｉｎ  ａｔｈｙｍｉｃ（ｎｕｄｅ）  ｍｉｃｅ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ２４，Ｉｓｓｕｅ  ３，ｐｐ  １４８−１５４
●Ｅ  Ｒｉｃｈｔｉｇ，Ｇ  Ｌａｎｇｍａｎｎ，Ｋ  Ｍｕｌｌｎｅｒ，Ｇ  Ｒｉｃｈｔｉｇ  ａｎｄ  Ｊ  Ｓｍｏｌｌｅ，２００４．Ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ  ｔｕｍｏｕｒ  ｖｏｌｕｍｅ  ａｓ  ａ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｐａｒａｍｅｔｅｒ  ｆｏｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｍｅｌａｎｏｍａｓ．Ｅｙｅ（２００４）  １８，６１９−６２３
●Ｊｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．ＢＭＣ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ２００８．８：１６
●Ｔｏｍａｙｋｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １９８９，Ｖｏｌｕｍｅ  ２４，Ｉｓｓｕｅ  ３，ｐｐ  １４８−１５４
●Ｆａｕｓｔｉｎｏ−Ｒｏｃｈａ  ｅｔ  ａｌ．Ｌａｂ  Ａｎｉｍ（ＮＹ）．２０１３  Ｊｕｎ；４２（６）：２１７−２４
●Ｂｏｎｔｅ  Ｄ，Ｌｉｎｄｖａｌｌ  Ｃ，Ｌｉｕ  Ｈ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｄｃ７−Ｄｂｆ４  ｋｉｎａｓｅ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃａｎｃｅｒｓ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｉｓ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐ５３  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｎｅｏｐｌａｓｉａ．２００８；Ｓｅｐ；１０（９）：９２０−３１．
●Ｃａｄｉｇａｎ  ＫＭ．Ｗｎｔ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：  ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ  ａｔ  ｔｈｅ  ｓｕｒｆａｃｅ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２００６；１１９（３）：３９５−４０２．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：  ｈｔｔｐ：／／ｊｃｓ．ｂｉｏｌｏｇｉｓｔｓ．ｏｒｇ／ｃｇｉ／ｄｏｉ／１０．１２４２／ｊｃｓ．０２８２６
●Ｃｈｅｎｇ  ＡＮ，Ｊｉａｎｇ  ＳＳ，Ｆａｎ  ＣＣ，ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｃｄｃ７  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ａ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｄ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｄｃ７  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ＤＮＡ−ｄａｍａｇｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１３；３３７（２）：２１８−２５．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：  ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｃａｎｌｅｔ．２０１３．０５．００８
●Ｃｒｅｍｏｌｉｎｉ  Ｃ，Ｓｃｈｉｒｒｉｐａ  Ｍ，Ａｎｔｏｎｉｏｔｔｉ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｍＣＲＣ−ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ−ｂａｓｅｄ  ａｌｇｏｒｉｔｈｍ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１５；１２（１０）：６０７−１９．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：  ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｎｒｃｌｉｎｏｎｃ．２０１５．１２９
●Ｄｉｅｎｓｔｍａｎｎ  Ｒ，Ｖｅｒｍｅｕｌｅｎ  Ｌ，Ｇｕｉｎｎｅｙ  Ｊ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｕｂｔｙｐｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１７  ［ｃｉｔｅｄ  ２０１７  Ｍａｒ  ３］；１７．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ．ｐｒｏｘｙ．ｌｉｂ．ｕｍｉｃｈ．ｅｄｕ／ｎｒｃ／ｊｏｕｒｎａｌ／ｖ１７／ｎ２／ｐｄｆ／ｎｒｃ．２０１６．１２６．ｐｄｆ
●Ｆｅｒｌａｙ  Ｊ，Ｓｏｅｒｊｏｍａｔａｒａｍ  Ｉ，Ｅｒｖｉｋ  Ｍ，Ｄｉｋｓｈｉｔ  Ｒ，Ｅｓｅｒ  Ｓ，Ｍａｔｈｅｒｓ  Ｃ，Ｒｅｂｅｌｏ  Ｍ，Ｐａｒｋｉｎ  ＤＭ，Ｆｏｒｍａｎ  Ｄ，Ｂｒａｙ，Ｆ．ＧＬＯＢＯＣＡＮ  ２０１２  ｖ１．０，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ：  ＩＡＲＣ  ＣａｎｃｅｒＢａｓｅ  Ｎｏ．１１  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ；２０１３．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｇｌｏｂｏｃａｎ．ｉａｒｃ．ｆｒ，ａｃｃｅｓｓｅｄ  ｏｎ  １４  Ｍａｙ  ２０１８．
●Ｆｏｄｄｅ  Ｒ，Ｋｕｉｐｅｒｓ  Ｊ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  Ｃ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＡＰＣ  ｔｕｍｏｕｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｇｅｎｅ  ｃａｕｓｅ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２００１；３（４）：４３３−８．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｅｕｔｉｌｓ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｅｕｔｉｌｓ／ｅｌｉｎｋ．ｆｃｇｉ？ｄｂｆｒｏｍ＝ｐｕｂｍｅｄ＆ｉｄ＝１１２８３６２０＆ｒｅｔｍｏｄｅ＝ｒｅｆ＆ｃｍｄ＝ｐｒｌｉｎｋｓ％５Ｃｎｐａｐｅｒｓ２：／／ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ／ｄｏｉ／１０．１０３８／３５０７０１２９
●Ｇｒｅｇｏｒｙ  ＧＰ，Ｈｏｇｇ  ＳＪ，Ｋａｔｓ  ＬＭ，ｅｔ  ａｌ．ＣＤＫ９  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｄｉｎａｃｉｃｌｉｂ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  Ｍｃｌ−１  ｔｏ  ｉｎｄｕｃｅ  ｄｕｒａｂｌｅ  ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ＭＹＣ−ｄｒｉｖｅｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ．２０１５；２９：１４３７−１４４１．
●Ｇｕｉｎｎｅｙ  Ｊ，Ｄｉｅｎｓｔｍａｎｎ  Ｒ，Ｗａｎｇ  Ｘ，ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｓｕｂｔｙｐｅｓ  ｏｆ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１６  Ｏｃｔ  １２  ［ｃｉｔｅｄ  ２０１７  Ｍａｒ  １７］；２１（１１）：１３５０−６．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ｄｏｉｆｉｎｄｅｒ／１０．１０３８／ｎｍ．３９６７
●Ｈａｉｌｅｙ  ＪＲ，Ｎｏｌｄ  ＪＢ，Ｂｒｏｗｎ  ＲＨ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｌｉａｒｙ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ｌｅｓｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  Ｒａｔ  Ａｄｖｅｒｓｅ／Ｎｏｎ−ａｄｖｅｒｓｅ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．２０１３；４２（５）：８４４−８５４
●Ｈｏｕ  Ｙ，Ｗａｎｇ  Ｈ−Ｑ，Ｂａ  Ｙ．Ｈｉｇｈ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｄｉｖｉｓｉｏｎ  ｃｙｃｌｅ  ７  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｐｏｏｒ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌａｒｇｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１２；２９（５）：３４９８−５０３．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｌｉｎｋ．ｓｐｒｉｎｇｅｒ．ｃｏｍ／１０．１００７／ｓ１２０３２−０１２−０２２３−ｙ
●Ｈｏｗｌａｄｅｒ  Ｎ，Ｎｏｏｎｅ  ＡＭ，Ｋｒａｐｃｈｏ  Ｍ，Ｍｉｌｌｅｒ  Ｄ，Ｂｉｓｈｏｐ  Ｋ，Ｋｏｓａｒｙ  ＣＬ，Ｙｕ  Ｍ，Ｒｕｈｌ  Ｊ，Ｔａｔａｌｏｖｉｃｈ  Ｚ，Ｍａｒｉｏｔｔｏ  Ａ，Ｌｅｗｉｓ  ＤＲ，Ｃｈｅｎ  ＨＳ，Ｆｅｕｅｒ  ＥＪ，Ｃｒｏｎｉｎ  ＫＡ（ｅｄｓ）．ＳＥＥＲ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  Ｒｅｖｉｅｗ，１９７５−２０１４，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，ｈｔｔｐ：／／ｓｅｅｒ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｃｓｒ／１９７５＿２０１４／，ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２０１６  ＳＥＥＲ  ｄａｔａ  ｓｕｂｍｉｓｓｉｏｎ，ｐｏｓｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＳＥＥＲ  ｗｅｂ  ｓｉｔｅ，Ａｐｒｉｌ  ２０１７
●Ｈｕｇｇｅｔｔ  ＭＴ，Ｔｕｄｚａｒｏｖａ  Ｓ，Ｐｒｏｃｔｏｒ  Ｉ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｄｃ７  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｄｕｅ  ｔｏ  ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＤＮＡ  ｏｒｉｇｉｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ．Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１６  Ａｐｒ；７（１４）：１８４９５−５０７．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．ｃｏｍ／ａｂｓｔｒａｃｔ／７６１１
●ＩＣＨ  Ｈａｒｍｏｎｉｓｅｄ  Ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ：Ｎｏｎｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｆｏｒ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｓ９．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ．２００９．
●Ｉｗａｉ  Ｋ，Ｇｏｔｏｕ  Ｍ，Ｙａｍａｎａｋａ  Ｋ，Ｏｈａｓｈｉ  Ａ．Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｔｏ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ  ｔｈｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ａｆｆｅｃｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＣＤＣ７−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＴＡＫ−９３１．ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ２０１８．Ａｂｓｔｒａｃｔ  ２３１２．
●Ｌａｒａｓａｔｉ，＆  Ｄｕｎｃｋｅｒ，Ｂ．Ｐ．（２０１６）．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  Ｇｏｖｅｒｎｉｎｇ  ＤＤＫ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｇｅｎｅｓ，８（１），３．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．３３９０／ｇｅｎｅｓ８０１０００３
●Ｍｏｎｔａｇｎｏｌｉ  Ａ，Ｔｅｎｃａ  Ｐ，Ｓｏｌａ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｄｃ７  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｐ５３−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ  Ｔｈａｔ  Ｉｓ  Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００４；６４（１９）：７１１０−６．
●Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ａｃｅｂｅｓ  Ｓ，Ｐｒｏｃｔｏｒ  Ｉ，Ｌｏｄｄｏ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＤＮＡ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｂｅｆｏｒｅ  ｉｔ  ｓｔａｒｔｓ：Ｃｄｃ７  ａｓ  ａ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｐ５３−ｍｕｔａｎｔ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１０  Ｏｃｔ；１７７（４）：２０３４−４５．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／２０７２４５９７
●Ｓｃｈｕｋｋｅｎ  ＫＭ，Ｆｏｉｊｅｒ  Ｆ．ＣＩＮ  ａｎｄ  Ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．ＢｉｏＥｓｓａｙｓ．２０１８；４０（１）：１−９．
●Ｓｗｏｒｄｓ  Ｒ，Ｍａｈａｌｉｎｇａｍ  Ｄ，Ｏ’Ｄｗｙｅｒ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ．Ｃｄｃ７  ｋｉｎａｓｅ  −  Ａ  ｎｅｗ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１０  Ｊａｎ；４６（１）：３３−４０．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｅｊｃａ．２００９．０９．０２０
●Ｔｈｅｒｋｉｌｄｓｅｎ  Ｃ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  ＴＫ，Ｈｅｎｒｉｃｈｓｅｎ−Ｓｃｈｎａｃｋ  Ｔ，Ｌａｄｅｌｕｎｄ  Ｓ，Ｎｉｌｂｅｒｔ  Ｍ．Ｔｈｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ＫＲＡＳ，ＮＲＡＳ，ＢＲＡＦ，ＰＩＫ３ＣＡ  ａｎｄ  ＰＴＥＮ  ｆｏｒ  ａｎｔｉ−ＥＧＦＲ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ：Ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ  ａｎｄ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ．Ａｃｔａ  Ｏｎｃｏｌ（Ｍａｄｒ）．２０１４；５３（７）：８５２−６４．
●Ｘｉａｎｇ  ＳＹ，Ｌｉｌｌｙ  Ｅ．Ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＣＤＣ７  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＬＹ３１７７８３３）  ｉｍｐａｃｔｓ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ａｎｄ  ｈａｓ  ｒｏｂｕｓｔ  ａｎｄ  ｄｕｒａｂｌｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ＰＤＸ  ｔｕｍｏｒ  ｍｏｄｅｌｓ．ＡＡＣＲ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ２０１６．Ｌａｔｅ  ｂｒｅａｋｉｎｇ  ａｂｓｔｒａｃｔ．
●Ｚｅｈｉｒ  Ａ，Ｂｅｎａｙｅｄ  Ｒ，Ｓｈａｈ  ＲＨ，ｅｔ  ａｌ．Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｌａｎｄｓｃａｐｅ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｆｒｏｍ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  １０，０００  ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ［Ｉｎｔｅｒｎｅｔ］．２０１７；２３（６）．Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｆｒｏｍ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ｄｏｉｆｉｎｄｅｒ／１０．１０３８／ｎｍ．４３３３
【図１Ａ】
2022500479.tif 000014
【図１Ｂ】
2022500479.tif 000015
【図１Ｃ】
2022500479.tif 000016
【図２Ａ】
2022500479.tif 000017
【図２Ｂ】
2022500479.tif 000018
【図２Ｃ】
2022500479.tif 000019
【図３Ａ】
2022500479.tif 000020
【図３Ｂ】
2022500479.tif 000021
【図３Ｃ】
2022500479.tif 000022
【図３Ｄ】
2022500479.tif 000023
【図３Ｅ】
2022500479.tif 000024
【図３Ｆ】
2022500479.tif 000025
【図４Ａ】
2022500479.tif 000026
【図４Ｂ】
2022500479.tif 000027
【図５】
2022500479.tif 000028
【図６】
2022500479.tif 000029
【図７Ａ】
2022500479.tif 000030
【図７Ｂ】
2022500479.tif 000031
【図８】
2022500479.tif 000032
【図９−１】
2022500479.tif 000033
【図９−２】
2022500479.tif 000034
【図１０Ａ】
2022500479.tif 000035
【図１０Ｂ】
2022500479.tif 000036
【図１１】
2022500479.tif 000037
【図１２】
2022500479.tif 000038
【図１３】
2022500479.tif 000039
【図１４】
2022500479.tif 000040
【図１５Ａ】
2022500479.tif 000041
【図１５Ｂ】
2022500479.tif 000042
【図１５Ｃ】
2022500479.tif 000043
【図１５Ｄ】
2022500479.tif 000044
【図１６】
2022500479.tif 000045
【図１７】
2022500479.tif 000046
【図１８】
2022500479.tif 000047
【図１９】
2022500479.tif 000048
【図２０】
2022500479.tif 000049
【図２１Ａ】
2022500479.tif 000050
【図２１Ｂ】
2022500479.tif 000051
【図２２】
2022500479.tif 000052
【図２３】
2022500479.tif 000053
【図２４Ａ】
2022500479.tif 000054
【図２４Ｂ】
2022500479.tif 000055
【図２４Ｃ】
2022500479.tif 000056
【図２５Ａ】
2022500479.tif 000057
【図２５Ｂ】
2022500479.tif 000058
【図２６】
2022500479.tif 000059
【図２７Ａ】
2022500479.tif 000060
【図２７Ｂ】
2022500479.tif 000061
【図２７Ｃ】
2022500479.tif 000062
【図２７Ｄ】
2022500479.tif 000063
【図２７Ｅ】
2022500479.tif 000064
【図２７Ｆ】
2022500479.tif 000065
【図２７Ｇ】
2022500479.tif 000066
【図２７Ｈ】
2022500479.tif 000067
【図２８Ａ】
2022500479.tif 000068
【図２８Ｂ】
2022500479.tif 000069
【国際調査報告】
2022500479.tif 000070
2022500479.tif 000071