(57)【要約】  本発明は、疾患（癌など）の予防及び／又は治療に有用である、ＭＤＭ２阻害剤及び１つ以上の抗癌剤を含む医薬組成物に関する。
2022501394.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＤＭ２阻害剤、及び１つ以上の抗癌剤、並びに任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、構造式：
【化１】
2022501394.tif 000048
の化合物であって、
式中、
【化２】
2022501394.tif 000049
は、
【化３】
2022501394.tif 000050
からなる群から選択され；
Ｂは、Ｃ4~7炭素環であり；
Ｒ1はＨ、置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキル、置換若しくは非置換Ｃ3~8シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、ＯＲa、又はＮＲaＲbであり；
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ3、及びＣＦ3からなる群から選択され；
Ｒ6は、
【化４】
2022501394.tif 000051
であり；
Ｒaは、水素、又は置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキルであり；
Ｒbは、水素、又は置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキルであり；
Ｒc及びＲdは、環Ｂの１つの炭素原子上の置換基であり、
Ｒcは、Ｈ、Ｃ1~3アルキル、Ｃ1~3アルキレン−ＯＲa、ＯＲa、又はハロであり；
Ｒdは、Ｈ、Ｃ1~3アルキル、Ｃ1~3アルキレン−ＯＲa、ＯＲa、又はハロであるか；或いは
Ｒc及びＲdは、それらが結合する炭素と合わせて、任意選択的に酸素又は窒素原子を含有する４〜６員環のスピロ環置換基を形成し；且つ
Ｒeは、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ2ＣＨ3である、化合物、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
【化５】
2022501394.tif 000052
は、
【化６】
2022501394.tif 000053
であり；
Ｂは、
【化７】
2022501394.tif 000054
であり；
Ｒc及びＲdは、Ｆ及びＦ、Ｈ及びＨ、ＯＨ及びＣＨ3、ＣＨ3及びＣＨ3、ＣＨ3及びＯＨ、Ｈ及びＯＨ、ＣＨ2ＣＨ3及びＣＨ2ＣＨ3、並びにＣＨ2ＯＨ及びＣＨ2ＯＨである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
−（ＣＨ2）nＲ1は、Ｈ、ＣＨ3、又はＣＨ2ＣＨ3である、請求項２又は３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
Ｒ2はＨであり；Ｒ3はハロであり；Ｒ4及びＲ5はどちらもＨである、請求項２〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
Ｒ7はハロであり、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10のそれぞれはＨであり、Ｒeは−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ2ＣＨ3である、請求項２〜５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、
【化８】
2022501394.tif 000055
の化合物、及びその対応する医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物から選択される、請求項２〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、化合物１、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である、請求項２〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化９】
2022501394.tif 000056
【請求項９】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である、請求項２〜６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【化１０】
2022501394.tif 000057
【請求項１０】
前記抗癌剤は、ホモハリングトニン、脱メチル化薬、及び／又は代謝拮抗剤を含む化学療法薬から選択され、
好ましくは、前記脱メチル化薬はアザシチジン、デシタビン、ゼブラリン、ファザラビン、又はジヒドロ−５’−シチジンを含み、
好ましくは、前記代謝拮抗剤はシタラビン、アンシタビン、ゲムシタビン、又はトロキサシタビンを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記抗癌剤はＭＥＫ阻害剤から選択され、
好ましくは、前記ＭＥＫ阻害剤は、ピマセルチブ、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、セルメチニブ、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＴＡＫ−７３３、レファメチニブ、ＧＤＣ−０６２３、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６（ＣＨ５１２６７６６）、ＳＬ−３２７、ＢＩ−８４７３２５、又はトラメチニブを含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、式：
【化１１】
2022501394.tif 000058
の構造を有する、化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物であり、
前記抗癌剤はアザシチジン、デシタビン、及び／若しくはシタラビンであるか、
又は、前記抗癌剤はアザシチジン、デシタビン、シタラビン、及び／若しくはトラメチニブである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、式：
【化１２】
2022501394.tif 000059
の構造を有する、化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物であり、
前記抗癌剤はホモハリングトニンである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記抗癌剤は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、エストロゲン受容体阻害剤、ＰＩ３ｋ阻害剤から選択される１つ以上であり、前記ＢＲＡＦ阻害剤は、ソラフェニブ、ＰＬＸ−４７２０、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５、ＳＢ５９０８８５、ＡＺ６２８、ＭＬ７８６６二塩酸塩、ＰＦ−０４８８０５９４、ＴＡＫ−６３２、ＣＥＰ−３２４９６、ＲＯ５１２６７６６、又はダブラフェニブから選択され、前記ＭＥＫ阻害剤は、ピマセルチブ、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、セルメチニブ、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＴＡＫ−７３３、レファメチニブ、ＧＤＣ−０６２３、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６（ＣＨ５１２６７６６）、ＳＬ−３２７、ＢＩ−８４７３２５、又はトラメチニブから選択され、前記エストロゲン受容体阻害剤は、トレミフェン、トレミフェンクエン酸塩、エストリオール、プロピルピラゾールトリオール、ＡＺＤ９４９６、ＬＹ８８０７４、ＧＤＣ−０９２４ラセミ化合物、ＣＭＰ８、ＯＳｐｅｍｉｆｅｎｅ  Ｄ４、バゼドキシフェン、ピペンドキシフェン塩酸塩、ラソフォキシフェン酒石酸塩、４−ヒドロキシタモキシフェン、クエン酸クロミフェン、メストラノール、イドキシフェン、４，４−イミノジフェノール、Ｈ３Ｂ−６５４５、Ｈ３Ｂ−６５４５塩酸塩、ジペノシドＳＶＩＩ、ＤＰＮ、プリナベレル、Ｗａｙ−２０００７０、ニトロミフェン、ＥＲＢ−１９６、エラセストラント（Ｅｌａｃｅｓｔｒａｎｔ）、ＬＳＺ−１０２、（Ｅ／Ｚ）−４−ヒドロキシタモキシフェン、エラセストラント二塩酸塩、ＧＤＣ−０９２７、ＡＺＤ−９８３３、エンドキシフェン、ＬＹ１１７０１８、エストラジオール、ＷＡＹ−２０４６８８、タモキシフェン、タモキシフェンクエン酸塩、又はフルベストラントから選択され、前記ＰＩ３ｋ阻害剤は、イデラリシブ（ＣＡＬ−１０１）、コパンリシブ（ＢＡＹ８０−６９４６）、ブパルリシブ、ＡＺＤ６４８２、ＧＳＫ１０５９６１５、ＧＳＫ２１２６４５８、ＧＳＫ２６３６７７１、ＰＱＲ３０９、ＰＦ−０４６９１５０２、ＡＭＧ３１９、３−メチルアデニン、ｌｙ２９４００２、ワートマニン、ケルセチン、αリノレン酸、ザンデリシブ、ピクチリシブ、ＩＰＩ５４９、ダクトリシブ、フィメピノスタット、ＳＡＲ４０５、デュベリシブ、ＰＩ−１０３、ＧＤＣ−００７７、又はアルペリシブから選択され、
好ましくは、前記抗癌剤は、ダブラフェニブ、トラメチニブ、フルベストラント、アルペリシブから選択される１つ以上である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、式：
【化１３】
2022501394.tif 000060
の構造を有する、化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物であり、
前記抗癌剤は、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、エストロゲン受容体阻害剤、ＰＩ３ｋ阻害剤から選択される１つ以上であり、前記ＢＲＡＦ阻害剤は、ソラフェニブ、ＰＬＸ−４７２０、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５、ＳＢ５９０８８５、ＡＺ６２８、ＭＬ７８６６二塩酸塩、ＰＦ−０４８８０５９４、ＴＡＫ−６３２、ＣＥＰ−３２４９６、ＲＯ５１２６７６６、又はダブラフェニブから選択され、前記ＭＥＫ阻害剤は、ピマセルチブ、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、セルメチニブ、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＴＡＫ−７３３、レファメチニブ、ＧＤＣ−０６２３、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６（ＣＨ５１２６７６６）、ＳＬ−３２７、ＢＩ−８４７３２５、又はトラメチニブから選択され、前記エストロゲン受容体阻害剤は、トレミフェン、トレミフェンクエン酸塩、エストリオール、プロピルピラゾールトリオール、ＡＺＤ９４９６、ＬＹ８８０７４、ＧＤＣ−０９２４ラセミ化合物、ＣＭＰ８、ＯＳｐｅｍｉｆｅｎｅ  Ｄ４、バゼドキシフェン、ピペンドキシフェン塩酸塩、ラソフォキシフェン酒石酸塩、４−ヒドロキシタモキシフェン、クエン酸クロミフェン、メストラノール、イドキシフェン、４，４−イミノジフェノール、Ｈ３Ｂ−６５４５、Ｈ３Ｂ−６５４５塩酸塩、ジペノシドＳＶＩＩ、ＤＰＮ、プリナベレル、Ｗａｙ−２０００７０、ニトロミフェン、ＥＲＢ−１９６、エラセストラント（Ｅｌａｃｅｓｔｒａｎｔ）、ＬＳＺ−１０２、（Ｅ／Ｚ）−４−ヒドロキシタモキシフェン、エラセストラント二塩酸塩、ＧＤＣ−０９２７、ＡＺＤ−９８３３、エンドキシフェン、ＬＹ１１７０１８、エストラジオール、ＷＡＹ−２０４６８８、タモキシフェン、タモキシフェンクエン酸塩、又はフルベストラントから選択され、前記ＰＩ３ｋ阻害剤は、イデラリシブ（ＣＡＬ−１０１）、コパンリシブ（ＢＡＹ８０−６９４６）、ブパルリシブ、ＡＺＤ６４８２、ＧＳＫ１０５９６１５、ＧＳＫ２１２６４５８、ＧＳＫ２６３６７７１、ＰＱＲ３０９、ＰＦ−０４６９１５０２、ＡＭＧ３１９、３−メチルアデニン、ｌｙ２９４００２、ワートマニン、ケルセチン、αリノレン酸、ザンデリシブ、ピクチリシブ、ＩＰＩ５４９、ダクトリシブ、フィメピノスタット、ＳＡＲ４０５、デュベリシブ、ＰＩ−１０３、ＧＤＣ−００７７、又はアルペリシブから選択され、
好ましくは、前記抗癌剤は、ダブラフェニブ、トラメチニブ、フルベストラント、アルペリシブから選択される１つ以上であり、
好ましくは、前記抗癌剤は、ダブラフェニブとトラメチニブとの組み合わせ、又はフルベストラントとアルペリシブとの組み合わせであり、
好ましくは、化合物２と、抗癌剤ダブラフェニブ及びトラメチニブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含み、
或いは、化合物２と、抗癌剤フルベストラント及びアルペリシブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む、請求項１〜９及び１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記医薬組成物、又は前記ＭＤＭ２阻害剤若しくは前記抗癌剤は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、散剤、トローチ剤、サッシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、噴霧剤、軟膏剤、クリーム剤、及び注射剤の形態である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記ＭＤＭ２阻害剤又は前記抗癌剤の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
疾患を予防及び／又は治療するための薬物の調製における医薬組成物の使用であって、前記医薬組成物は、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のＭＤＭ２阻害剤及び抗癌剤を含み、好ましくは前記疾患は癌である、使用。
【請求項１９】
前記癌は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、成人脳／中枢神経系腫瘍、小児脳／中枢神経系腫瘍、乳癌、男性乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、腫瘍のＥｗｉｎｇファミリー、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、頭部及び頸部癌、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌及び下咽頭癌、成人白血病・急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、小児白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、小児における非ホジキンリンパ腫、口腔及び口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体部腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟組織癌、基底及び扁平上皮細胞癌、並びにメラノーマなどの皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウイルムス腫瘍から選択される、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
予防及び／又は治療有効量のＭＤＭ２阻害剤及び抗癌剤を投与することを含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物を、それを必要とする個体に投与することによる、疾患を予防及び／又は治療するための方法であって、好ましくは前記疾患は癌である、方法。
【請求項２１】
前記癌は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、成人脳／中枢神経系腫瘍、小児脳／中枢神経系腫瘍、乳癌、男性乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、腫瘍のＥｗｉｎｇファミリー、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、頭部及び頸部癌、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌及び下咽頭癌、成人白血病・急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、小児白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、小児における非ホジキンリンパ腫、口腔及び口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体部腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟組織癌、基底及び扁平上皮細胞癌、並びにメラノーマなどの皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウイルムス腫瘍から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、メラノーマ、及び乳癌から選択される、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＭＤＭ２阻害剤又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、約０．００５、０．０５、０．５、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００ｍｇ／日の量を含む、約０．００２５〜５０００ｍｇ／日の量で投与される、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＭＤＭ２阻害剤又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、単位投薬量あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの量、例えば、単位投薬量あたり約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ  ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ  ｋｇ、約２７５μｇ  ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ  ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ  ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ  ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇの量で投与される、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の疾患を予防及び／又は治療するための方法。
【請求項２５】
前記抗癌剤、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物のうちの１つ以上は、約０．００５、０．０５、０．５、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００ｍｇ／日の量を含む、約０．００２５〜５０００ｍｇ／日の量で投与される、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の疾患を予防及び／又は治療するための方法。
【請求項２６】
前記抗癌剤、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物のうちの１つ以上は、単位投薬量あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの量、例えば、単位投薬量あたり約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ  ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ  ｋｇ、約２７５μｇ  ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ  ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ  ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ  ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇの量で投与される、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の疾患を予防及び／又は治療するための方法。
【請求項２７】
前記ＭＤＭ２阻害剤、及び前記抗癌剤のうちの１つ以上は、同時に、共に、又は組み合わせで投与される、請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の疾患を予防及び／又は治療するための方法。
【請求項２８】
前記ＭＤＭ２阻害剤、及び前記抗癌剤のうちの１つ以上は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、又は少なくとも５０日間、継続的に投与される、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の疾患を予防及び／又は治療するための方法。
【請求項２９】
前記ＭＤＭ２阻害剤、及び前記抗癌剤のうちの１つ以上は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の治療過程を含む１つ以上の治療過程の間継続的に投与され、各治療過程は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、又は少なくとも５０日間続き、全ての２つの治療過程間の間隔は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間、２週間、３週間、又は４週間である、請求項２０〜２８のいずれか一項に記載の疾患を予防及び／又は治療するための方法。
【請求項３０】
前記ＭＤＭ２阻害剤、及び前記抗癌剤のうちの１つ以上は、同じ経路（経口などの）、又は異なる経路（それぞれ経口及び非経口（注射によるなど）など）によって投与される、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の疾患を予防及び／又は治療するための方法。
【請求項３１】
（ａ）第１の容器内の第１の構成要素であって、請求項１〜１５のいずれか一項により定義されるＭＤＭ２阻害剤、及び任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を備える、第１の構成要素と、
（ｂ）第２の容器内の第２の構成要素であって、請求項１〜１５のいずれか一項により定義される１つ以上の抗癌剤、及び任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を備える、第２の構成要素と、を備えるキット。
【請求項３２】
成人の再発性又は難治性急性骨髄性白血病及び再発性又は難治性高リスク／超高リスク骨髄異形成症候群を治療するための薬物の調製における、化合物２の単体での且つアザシチジン又はシタラビンと組み合わせての使用。
【請求項３３】
化合物２の単体での且つアザシチジン又はシタラビンと組み合わせての投与を含む、成人の再発性又は難治性急性骨髄性白血病及び再発性又は難治性高リスク／超高リスク骨髄異形成症候群の治療法。
【請求項３４】
前記投与法は、
化合物２の投薬量が標準３＋３レジメンに従って増加し、ここで初期投薬量は１５０ｍｇであり、続いて２００ｍｇ、２５０ｍｇ、及び３００ｍｇへと規則的に増加し、経口で１日１回摂取され、各サイクルの１日目で使用を開始され、７日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルであり；
化合物２単体の用量増加の第１段階が完了すると、第２段階、すなわち化合物２の用量増加との組み合わせ投与が開始されてもよく、組み合わせ投与レジメンにおいて、化合物２の投薬量は１００ｍｇから開始し、続いて１５０ｍｇ及び２００ｍｇへと規則的に増加し；アザシチジンは、１日１回の皮下注射による７５ｍｇ／ｍ2の固定投薬量であり、各サイクルの１日目で使用を開始され、７日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルであり；シタラビンは、静脈内注入期間が４時間以上である１日１回の皮下注射による１ｇ／ｍ2の固定投薬量であり、各サイクルの３日目で使用を開始され、５日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
アザシチジン又はシタラビンは、化合物２の経口投与から４時間後に投与され、２つの薬物の組み合わせ治療後に休憩期間が開始される、請求項３３又は３４に記載の方法。
【請求項３６】
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療するための薬物の調製における化合物２の使用。
【化１４】
2022501394.tif 000061
【請求項３７】
化合物２を、それを必要とする個体に投与することによる、疾患を予防及び／又は治療するための方法であって、前記方法は、予防及び／又は治療有効量の前記化合物２を投与することを含み、前記疾患は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、方法。
【化１５】
2022501394.tif 000062
【請求項３８】
メラノーマを治療するための薬物の調製における、ダブラフェニブ及びトラメチニブとの組み合わせでの化合物２の使用であって、好ましくは、化合物２と、抗癌剤ダブラフェニブ及びトラメチニブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む、使用。
【請求項３９】
ダブラフェニブ及びトラメチニブとの組み合わせでの化合物２の投与を含む、メラノーマの治療法であって、化合物２と、抗癌剤ダブラフェニブ及びトラメチニブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む、メラノーマの治療法。
【請求項４０】
乳癌を治療するための薬物の調製におけるフルベストラント及びアルペリシブとの組み合わせでの化合物２の使用であって、好ましくは、化合物２と、抗癌剤フルベストラント及びアルペリシブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む、使用。
【請求項４１】
フルベストラント及びアルペリシブとの組み合わせでの化合物２の投与を含む乳癌の治療法であって、好ましくは、化合物２と、抗癌剤フルベストラント及びアルペリシブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む、治療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は薬剤の技術分野に属し、具体的にはＭＤＭ２阻害剤及び１つ以上の抗癌剤を含む医薬組成物、並びに（癌などの）疾患を予防及び／又は治療するためのその使用に属する。
【背景技術】
【０００２】
ＭＤＭ２阻害剤は、腫瘍抑制因子Ｐ５３タンパク質に対するＭＤＭ２腫瘍性タンパク質の結合に干渉し、よってＰ５３活性化因子の薬物としての役割を果たす。新たな証拠によって、Ｐ５３の機能不全が炎症を悪化させ、且つ腫瘍の免疫回避を支援する場合もあり、よってＰ５３の機能不全は、腫瘍形成の免疫駆動因子（ｉｍｍｕｎｅ  ｄｒｉｖｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ）として作用し得ることが判明する（Ｇｕｏ  Ｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１７；７７（９）：２２９２）。
【０００３】
ＭＤＭ２及びＰ５３は、自己調節フィードバックループの一部である（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．７：１１２６（１９９３））。ＭＤＭ２の転写はＰ５３及びＭＤＭ２によって活性化され、更に、Ｐ５３の活性は、少なくとも３つの機序によって阻害される（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．７：１１２６（１９９３））。第１に、ＭＤＭ２タンパク質はＰ５３のトランス活性化ドメインと直接結合し、よってＰ５３が媒介するトランス活性化を阻害する。第２に、ＭＤＭ２タンパク質は核外搬出シグナル配列を含有し、Ｐ５３に結合すると、Ｐ５３の核外搬出を誘発し、よって標的ＤＮＡに対するＰ５３の結合を遮断する。第３に、ＭＤＭ２タンパク質はＥ３ユビキチンリガーゼであり、Ｐ５３に結合すると、Ｐ５３の分解を促進し得る。
【０００４】
分子生物学の研究の進歩により、分子標的療法は医学研究（特に腫瘍研究）の活発な分野となり、また、大半の腫瘍の生物学的挙動は、単一のシグナリング経路によって支配されるのではなく、複数のシグナリング経路の影響を受ける。したがって、従来技術には、異なる標的タンパク質及び／又は異なるシグナリング経路のための組み合わせ投与レジメン及び生成物であって、単一の薬物の投薬量を低減させ、単一の薬物の有毒作用及び副作用を低減させ、且つ／又は相乗的に効果を現し、並びに疾患を予防及び／又は治療する目的を実現することができる、組み合わせ投与レジメン及び生成物に対する需要が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の出願人らは、ＭＤＭ２阻害剤、又はその許容可能な塩、担体、希釈剤、若しくは賦形剤、及び抗癌剤は、特に、ホモハリングトニン（Ｈｏｍｏｈａｒｒｉｎｇｔｏｎｉｎｅ）、脱メチル化薬、及び／又は代謝拮抗剤との共投与で、相乗的に癌を治療し得ることを発見した。特に、本発明の実施形態１〜１０で示されるように、ＭＤＭ２阻害剤（化合物２など）と抗癌剤（デシタビン、アザシチジン、シタラビン、トラメチニブ、ダブラフェニブとトラメチニブとの組み合わせ、又はフルベストラントとアルペリシブとの組み合わせなど）とを組み合わせることで、Ｐ２１タンパク質を予想外なほど有意に上方制御するか、Ｐ２１の蓄積を効果的に誘発するか、又は腫瘍を緩和し、且つ腫瘍の成長を遅延させるか、若しくは腫瘍を退行に導くことができる。
【０００６】
本発明の一態様では、ＭＤＭ２阻害剤、及び１つ以上の抗癌剤、並びに任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物が提供される。
【０００７】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、構造式：
【化１】
2022501394.tif 000003
の化合物であって、
式中、
【化２】
2022501394.tif 000004
は、
【化３】
2022501394.tif 000005
からなる群から選択され；
Ｂは、Ｃ4~7炭素環であり；
Ｒ1はＨ、置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキル、置換若しくは非置換Ｃ3~8シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、ＯＲa、又はＮＲaＲbであり；
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ3、及びＣＦ3からなる群から選択され；
Ｒ6は、
【化４】
2022501394.tif 000006
であり；
Ｒaは、水素、又は置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキルであり；
Ｒbは、水素、又は置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキルであり；
Ｒc及びＲdは、環Ｂの１つの炭素原子上の置換基であり、
Ｒcは、Ｈ、Ｃ1~3アルキル、Ｃ1~3アルキレン−ＯＲa、ＯＲa、又はハロであり；
Ｒdは、Ｈ、Ｃ1~3アルキル、Ｃ1~3アルキレン−ＯＲa、ＯＲa、又はハロであるか；或いは
Ｒc及びＲdは、それらが結合する炭素と合わせて、任意選択的に酸素又は窒素原子を含有する４〜６員環のスピロ環置換基を形成し；且つ
Ｒeは、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲa、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ2ＣＨ3である、化合物、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物である。
【０００８】
好ましい実施形態では、
【化５】
2022501394.tif 000007
は、
【化６】
2022501394.tif 000008
であり；
Ｂは、
【化７】
2022501394.tif 000009
であり；
Ｒc及びＲdは、Ｆ及びＦ、Ｈ及びＨ、ＯＨ及びＣＨ3、ＣＨ3及びＣＨ3、ＣＨ3及びＯＨ、Ｈ及びＯＨ、ＣＨ2ＣＨ3及びＣＨ2ＣＨ3、並びにＣＨ2ＯＨ及びＣＨ2ＯＨである。
【０００９】
好ましい実施形態では、上記の医薬組成物であって、−（ＣＨ2）nＲ1は、Ｈ、ＣＨ3、又はＣＨ2ＣＨ3である、医薬組成物。
【００１０】
好ましい実施形態では、Ｒ2はＨであり；Ｒ3はハロであり；Ｒ4及びＲ5はどちらもＨである。
【００１１】
好ましい実施形態では、Ｒ7はハロであり；Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10のそれぞれはＨであり；Ｒeは−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ2ＣＨ3である。
【００１２】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、化合物１、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である。
【化８】
2022501394.tif 000010
【００１３】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である。
【化９】
2022501394.tif 000011
【００１４】
好ましい実施形態では、抗癌剤は、ホモハリングトニン、脱メチル化薬、及び／又は代謝拮抗剤を含む化学療法薬から選択され、好ましくは、上記の脱メチル化薬はアザシチジン、デシタビン、ゼブラリン、ファザジニウム、又はジヒドロ−５’−シチジンを含み、好ましくは、上記の代謝拮抗剤はシタラビン、アンシタビン、ゲムシタビン、又はトロキサシタビンを含む。
【００１５】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤はＭＥＫ阻害剤から選択される。
【００１６】
好ましくは、上記のＭＥＫ阻害剤は、ピマセルチブ、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、セルメチニブ、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＴＡＫ−７３３、レファメチニブ、ＧＤＣ−０６２３、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６（ＣＨ５１２６７６６）、ＳＬ−３２７、ＢＩ−８４７３２５、又はトラメチニブを含む。
【００１７】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤は、以下から選択される１つ以上である：ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、エストロゲン受容体阻害剤、ＰＩ３ｋ阻害剤。上記のＢＲＡＦ阻害剤は、ソラフェニブ、ＰＬＸ−４７２０、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５、ＳＢ５９０８８５、ＡＺ６２８、ＭＬ７８６６二塩酸塩、ＰＦ−０４８８０５９４、ＴＡＫ−６３２、ＣＥＰ−３２４９６、ＲＯ５１２６７６６、又はダブラフェニブから選択される。上記のＭＥＫ阻害剤は、ピマセルチブ、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、セルメチニブ、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＴＡＫ−７３３、レファメチニブ、ＧＤＣ−０６２３、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６（ＣＨ５１２６７６６）、ＳＬ−３２７、ＢＩ−８４７３２５、又はトラメチニブから選択される。上記のエストロゲン受容体阻害剤は、トレミフェン、トレミフェンクエン酸塩、エストリオール、プロピルピラゾールトリオール、ＡＺＤ９４９６、ＬＹ８８０７４、ＧＤＣ−０９２４ラセミ化合物、ＣＭＰ８、ＯＳｐｅｍｉｆｅｎｅ  Ｄ４、バゼドキシフェン、ピペンドキシフェン塩酸塩、ラソフォキシフェン酒石酸塩、４−ヒドロキシタモキシフェン、クエン酸クロミフェン、メストラノール、イドキシフェン、４，４−イミノジフェノール、Ｈ３Ｂ−６５４５、Ｈ３Ｂ−６５４５塩酸塩、ジペノシドＳＶＩＩ、ＤＰＮ、プリナベレル、Ｗａｙ−２０００７０、ニトロミフェン、ＥＲＢ−１９６、エラセストラント（Ｅｌａｃｅｓｔｒａｎｔ）、ＬＳＺ−１０２、（Ｅ／Ｚ）−４−ヒドロキシタモキシフェン、エラセストラント二塩酸塩、ＧＤＣ−０９２７、ＡＺＤ−９８３３、エンドキシフェン、ＬＹ１１７０１８、エストラジオール、ＷＡＹ−２０４６８８、タモキシフェン、タモキシフェンクエン酸塩、又はフルベストラントから選択される。上記のＰＩ３ｋ阻害剤は、イデラリシブ（ＣＡＬ−１０１）、コパンリシブ（ＢＡＹ８０−６９４６）、ブパルリシブ、ＡＺＤ６４８２、ＧＳＫ１０５９６１５、ＧＳＫ２１２６４５８、ＧＳＫ２６３６７７１、ＰＱＲ３０９、ＰＦ−０４６９１５０２、ＡＭＧ３１９、３−メチルアデニン、ｌｙ２９４００２、ワートマニン、ケルセチン、αリノレン酸、ザンデリシブ、ピクチリシブ、ＩＰＩ５４９、ダクトリシブ、フィメピノスタット、ＳＡＲ４０５、デュベリシブ、ＰＩ−１０３、ＧＤＣ−００７７、又はアルペリシブから選択される。
【００１８】
好ましくは、上記の抗癌剤は、以下から選択される１つ以上である：ダブラフェニブ、トラメチニブ、フルベストラント、アルペリシブ。
【００１９】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤は、以下から選択される１つ以上である：ダブラフェニブ、トラメチニブ、フルベストラント、アルペリシブ。
【００２０】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、以下の式の構造を有する化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物であり、
【化１０】
2022501394.tif 000012
上記の抗癌剤はアザシチジン、デシタビン、又はシタラビンである。
【００２１】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、以下の式の構造を有する化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物であり、
【化１１】
2022501394.tif 000013
上記の抗癌剤はホモハリングトニン（ＨＨＴ、オマセタキシンメペスクシナート）である。
【００２２】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、以下の式の構造を有する化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である。
【化１２】
2022501394.tif 000014
【００２３】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤は、以下から選択される１つ以上である：ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、エストロゲン受容体阻害剤、ＰＩ３ｋ阻害剤。上記のＢＲＡＦ阻害剤は、ソラフェニブ、ＰＬＸ−４７２０、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５、ＳＢ５９０８８５、ＡＺ６２８、ＭＬ７８６６二塩酸塩、ＰＦ−０４８８０５９４、ＴＡＫ−６３２、ＣＥＰ−３２４９６、ＲＯ５１２６７６６、又はダブラフェニブから選択される。上記のＭＥＫ阻害剤は、ピマセルチブ、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、セルメチニブ、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＴＡＫ−７３３、レファメチニブ、ＧＤＣ−０６２３、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６（ＣＨ５１２６７６６）、ＳＬ−３２７、ＢＩ−８４７３２５、又はトラメチニブから選択される。上記のエストロゲン受容体阻害剤は、トレミフェン、トレミフェンクエン酸塩、エストリオール、プロピルピラゾールトリオール、ＡＺＤ９４９６、ＬＹ８８０７４、ＧＤＣ−０９２４ラセミ化合物、ＣＭＰ８、ＯＳｐｅｍｉｆｅｎｅ  Ｄ４、バゼドキシフェン、ピペンドキシフェン塩酸塩、ラソフォキシフェン酒石酸塩、４−ヒドロキシタモキシフェン、クエン酸クロミフェン、メストラノール、イドキシフェン、４，４−イミノジフェノール、Ｈ３Ｂ−６５４５、Ｈ３Ｂ−６５４５塩酸塩、ジペノシドＳＶＩＩ、ＤＰＮ、プリナベレル、Ｗａｙ−２０００７０、ニトロミフェン、ＥＲＢ−１９６、エラセストラント（Ｅｌａｃｅｓｔｒａｎｔ）、ＬＳＺ−１０２、（Ｅ／Ｚ）−４−ヒドロキシタモキシフェン、エラセストラント二塩酸塩、ＧＤＣ−０９２７、ＡＺＤ−９８３３、エンドキシフェン、ＬＹ１１７０１８、エストラジオール、ＷＡＹ−２０４６８８、タモキシフェン、タモキシフェンクエン酸塩、又はフルベストラントから選択される。上記のＰＩ３ｋ阻害剤は、イデラリシブ（ＣＡＬ−１０１）、コパンリシブ（ＢＡＹ８０−６９４６）、ブパルリシブ、ＡＺＤ６４８２、ＧＳＫ１０５９６１５、ＧＳＫ２１２６４５８、ＧＳＫ２６３６７７１、ＰＱＲ３０９、ＰＦ−０４６９１５０２、ＡＭＧ３１９、３−メチルアデニン、ｌｙ２９４００２、ワートマニン、ケルセチン、αリノレン酸、ザンデリシブ、ピクチリシブ、ＩＰＩ５４９、ダクトリシブ、フィメピノスタット、ＳＡＲ４０５、デュベリシブ、ＰＩ−１０３、ＧＤＣ−００７７、又はアルペリシブから選択される。
【００２４】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、以下の式の構造を有する化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である。
【化１３】
2022501394.tif 000015
【００２５】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤は、以下から選択される１つ以上である：ダブラフェニブ、トラメチニブ、フルベストラント、アルペリシブ。
【００２６】
好ましくは、上記の抗癌剤は、ダブラフェニブとトラメチニブとの組み合わせ、フルベストラントとアルペリシブとの組み合わせである。
【００２７】
好ましくは、化合物２と、抗癌剤ダブラフェニブ及びトラメチニブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む。
【００２８】
或いは、化合物２と、抗癌剤フルベストラント及びアルペリシブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む。
【００２９】
好ましい実施形態では、上記の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、散剤、トローチ剤、サッシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、噴霧剤、軟膏剤、クリーム剤、及び注射剤の形態である。
【００３０】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤又は上記の抗癌剤の重量比（又はモル比）は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む。
【００３１】
本発明の別の態様では、疾患を予防及び／又は治療するための薬物の調製における上記の医薬組成物の使用であって、上記の疾患は癌である、使用が提供される。
【００３２】
本発明の別の態様では、予防及び／又は治療有効量の上記のＭＤＭ２阻害剤及び抗癌剤を投与することを含む、上記の医薬組成物を、それを必要とする個体に投与することによる、疾患を予防及び／又は治療するための方法であって、上記の疾患は癌である、方法が提供される。
【００３３】
好ましい実施形態では、上記の癌は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、成人脳／中枢神経系腫瘍、小児脳／中枢神経系腫瘍、乳癌、男性乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、腫瘍のＥｗｉｎｇファミリー、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、頭部及び頸部癌、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌及び下咽頭癌、成人白血病・急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、小児白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、小児における非ホジキンリンパ腫、口腔及び口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体部腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟組織癌、基底及び扁平上皮細胞癌、並びにメラノーマなどの皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウイルムス腫瘍から選択される。
【００３４】
好ましい実施形態では、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、メラノーマ、及び乳癌から選択される。
【００３５】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、約０．００２５〜５０００ｍｇ／日の量で投与される。例えば、これは、約０．００５、０．０５、０．５、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００ｍｇ／日の量で投与される。
【００３６】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、単位投薬量あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの量、例えば、単位投薬量あたり約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ  ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ  ｋｇ、約２７５μｇ  ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ  ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ  ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ  ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇの量で投与される。
【００３７】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤又はその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物のうちの１つ以上は、約０．００５、０．０５、０．５、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００ｍｇ／日の量を含む、約０．００２５〜５０００ｍｇ／日の量で投与される。
【００３８】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤、又はその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物のうちの１つ以上は、単位投薬量あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの量、例えば、単位投薬量あたり約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ  ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ  ｋｇ、約２７５μｇ  ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ  ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ  ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ  ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇの量で投与される。
【００３９】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤、及び上記の抗癌剤のうちの１つ以上は、同時に、共に、又は組み合わせで投与される。
【００４０】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤、及び上記の抗癌剤のうちの１つ以上は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、又は少なくとも５０日間、継続的に投与される。
【００４１】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤、及び上記の抗癌剤のうちの１つ以上は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の治療過程を含む１つ以上の治療過程の間継続的に投与され、各治療過程は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、又は少なくとも５０日間続き、全ての２つの治療過程間の間隔は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間、２週間、３週間、又は４週間である。
【００４２】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤、及び上記の抗癌剤のうちの１つ以上は、同じ経路（経口などの）、又は異なる経路（それぞれ経口及び非経口（注射によるなど）など）によって投与され、これには、経口、口腔内（ｂｕｃｃａｌｌｙ）、噴霧吸入、舌下、直腸内、経皮、膣粘膜、経粘膜、局所的投与、経鼻若しくは経腸投与、筋肉注射、皮下注射、髄内注射、及び髄腔内などの注射投与、直脳投与、インサイチュ投与、皮下、腹腔内、静脈注射、関節内滑膜、胸骨内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、腹腔、鼻腔、若しくは眼内注射、又はその他の薬物送達経路が含まれる。
【００４３】
本発明の別の態様では、
（ａ）第１の容器内の第１の構成要素であって、上記のＭＤＭ２阻害剤、及び任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を備える、第１の構成要素と、
（ｂ）第２の容器内の第２の構成要素であって、上記の抗癌剤のうちの１つ以上、及び任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を備える、第２の構成要素と、を備えるキットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】インビトロでの、ＴＰ５３野生型及び変異型ＡＭＬ細胞株に対する化合物２単体の増殖阻害効果の図である。
【図２Ａ】ＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞株に対するデシタビン又はアザシチジンとの組み合わせでの化合物２の成長阻害効果の図である。
【図２Ｂ】ＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞株に対するシタラビンとの組み合わせでの化合物２の成長阻害効果の図である。
【図３Ａ】ＳＴＫ１１及びＫＲＡＳ共変異型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株に対する、トラメチニブとの組み合わせでの化合物２の抗増殖効果の図である。
【図３Ｂ−Ｃ】ＳＴＫ１１及びＫＲＡＳ共変異型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株に対する、トラメチニブとの組み合わせでの化合物２の抗増殖効果の図である。
【図４Ａ−Ｂ】ＫＲＡＳ野生型及びＳＴＫ１１野生型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株ＮＣＩ−Ｈ２２６及びＮＣＩ−Ｈ２９２に対する、トラメチニブとの組み合わせでの化合物２の抗増殖効果の図である。
【図５Ａ−Ｂ】図５Ａは、様々な濃度の化合物２単体で処理した後の、ＭＯＬＭ−１３細胞アポトーシスの概略図である。図５Ｂは、図５Ａの化合物２によって誘発されたアポトーシスのフロー分析の選択図である。
【図６】デシタビン、アザシチジン、又はシタラビンと組み合わせた化合物２でＭＯＬＭ−１３細胞を処理した後の細胞アポトーシスの概略図である。
【図７】ＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞中のＳ期細胞の比率を用量依存的に低下させる、化合物２単体の概略図である。
【図８】デシタビン、アザシチジン、及びシタラビンと組み合わせた化合物２で処理されたＭＯＬＭ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３、及びＭＶ−４−１１細胞の周期停止の組み合わせ効果の図である。
【図９Ａ−Ｃ】図９Ａは、化合物２を用いた、骨髄中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞のフロー分析チャートである。図９Ｂは、化合物２を用いた、脾臓中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞のフロー分析チャートである。図９Ｃは、化合物２を用いた、骨髄中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率の概略分析チャートである。
【図９Ｄ】化合物２を用いた、脾臓中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率の概略分析チャートである。
【図１０】動物の２つの群における化合物２単体の生存曲線の分析比較チャートである。
【図１１Ａ】群化及び治療前のＤＭＢＡ誘発ラット中で末梢血ＰＬＴ及びＷＢＣレベルが有意に低下している、ＭＤＳの表現図（Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ  ｄｉａｇｒａｍ）である。
【図１１Ｂ】ＭＤＳラット中の末梢血ＰＬＴ、ＷＢＣ、及びＲＢＣレベルに対して有意な効果を持たない、化合物２単体の概略図である。
【図１１Ｃ】ＭＤＳラット中の骨髄ＰＬＴ、ＷＢＣＢ、及びＲＢＣレベルを有意に回復することの可能な、化合物２単体の概略図である。
【図１２】動物の２つの群におけるアザシチジンと組み合わせた化合物２の生存曲線の分析比較チャートである。
【図１３Ａ−Ｂ】化合物２、アザシチジン、及びこの２つの組み合わせの、腫瘍成長阻害曲線チャート（Ａ）及びマウスにおける体重変化チャート（Ｂ）である。
【図１４Ａ−Ｂ】化合物２、デシタビン、及びこの２つの組み合わせの、腫瘍成長阻害曲線チャート（Ａ）及びマウスにおける体重変化チャート（Ｂ）である。
【図１５】用量依存的な化合物２単体は、ＭＯＬＭ−１３全身性ＡＭＬを有する異種移植腫瘍マウスの生存を有意に延長させる。細胞移植から３日後に１×１０7のＭＯＬＭ−１３細胞（ｎ＝１０／群）を移植したＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスを、担体、２０ｍｇ／ｋｇ（経口投与、２１日の間１日おきに）、５０ｍｇ／ｋｇ（経口投与、７日の間１日１回）、又は１００ｍｇ／ｋｇ（経口投与、７日の間１日１回）の化合物２で処理する。データは、カプラン・マイヤー曲線を描くマウスの生存率として示す。ボンフェローニ多重検定を用いる対数順位検定を、生存曲線の比較に使用する（＊Ｐ＜０．０５）。
【図１６】化合物２は、ＡＭＬ異種移植モデルにおけるＡＺＡ又はＤＥＣのインビボ抗白血病活性を強化する。（Ａ）細胞移植から３日後に１×１０7のＭＯＬＭ−１３細胞（ｎ＝１５／群）を移植したＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスを、担体、５０ｍｇ／ｋｇの化合物２（７日の間毎日のＰＯ）、及び２ｍｇ／ｋｇのＡＺＡ（７日の間毎日）を単体で又は組み合わせて処理する。データは、カプラン・マイヤー曲線を描くマウスの生存率として示す。生存比較にはボンフェローニ多重比較を用いた対数順位を使用する。＊Ｐ＜０．０５。（Ｂ）皮下ＯＣＩ−ＡＭＬ−３腫瘍を有するＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスを、５０ｍｇ／ｋｇの化合物２（１５日の間、１日おきのＰＯ）、２ｍｇ／ｋｇのＡＺＡ（７日の間、毎日のＩＶ）、及び１ｍｇ／ｋｇのＤＥＣ（７日の間毎日のＩＶ）の単体又は組み合わせで処理し、腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を求める。
【図１７】化合物２及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃの単体又は組み合わせで処理したＭＯＬＭ−１３細胞のＲＮＡ配列分析である。（Ａ〜Ｂ）化合物２及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃの単体又は組み合わせによって２４時間影響を受けた後で、異なる発現をした遺伝子の数が統計的に有意であることを示すチャート。（Ｃ〜Ｄ）化合物２及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃの組み合わせで処理した後の、最も有意に変化したシグナリング経路。（Ｅ〜Ｆ）ＭＯＬＭ−１３細胞において、化合物２及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃの単体又は組み合わせに関する、いくつかのＰ５３制御遺伝子の変化。
【図１８】ＡＭＬ細胞を、化合物２とＤＥＣ、ＡＺＡ、及びＡｒａ−Ｃとの組み合わせで処理すると、ＤＮＡ損傷が相乗的に誘発され、Ｐ２１発現が上方制御される。（Ａ〜Ｂ）ＤＥＣ（１００ｎＭ）及びＡＺＡ（０．３３μＭ）で２４時間処理し、続いて新たなＤＥＣ（１００ｎＭ）、ＡＺＡ（０．３３μＭ）、及び化合物２（４０ｎＭ）の単体又は組み合わせで更に２４時間処理した後の、ＭＯＬＭ−１３細胞中のタンパク質の発現。（Ｃ）Ａｒａ−Ｃ（１００ｎＭ）又は化合物２（４０ｎＭ）の単体又は組み合わせで４８時間処理した後の、ＭＯＬＭ−１３細胞中のタンパク質の発現。（Ｄ〜Ｆ）示されるように、化合物２（４０ｎＭ）、ＲＧ−７３８８（４０ｎＭ）、ＤＥＣ（１００ｎＭ）、ＡＺＡ（３μＭ）、及びＡｒａ−Ｃの単体又は組み合わせで４８時間処理した後の、ＭＯＬＭ−１３細胞中のタンパク質の発現。投入されるタンパク質が同じであることを確認するためにβ−アクチンを使用する。（Ｇ）提案される化合物２とＤＥＣ、ＡＺＡ、又はＡｒａ−Ｃとの組み合わせの、ＡＭＬ細胞に対する作用機序。この結果は、３つの独立した結果を表す。ＲＧ−７３８８は対照として用いられ、β−アクチンは、投入されるタンパク質が同じであることを確認するために用いられる。
【図１９Ａ−Ｂ】マウスにおける皮下Ａ３７５皮膚メラノーマ異種移植腫瘍を治療するための、ダブラフェニブ及びトラムチニブ（Ｔｒａｍｔｉｎｉｂ）と組み合わせた化合物２のマウスにおける腫瘍成長阻害曲線チャート及び体重変化チャート（％）である。
【図２０Ａ−Ｂ】マウスにおける皮下ＭＣＦ−７  ＥＲ+乳癌異種移植腫瘍を治療するための、フルベストラント及びアルペリシブと組み合わせた化合物２のマウスにおける腫瘍成長阻害曲線チャート及び体重変化チャート（％）である。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で用いられる技術の参照は、当業者に明白な当該技術の修正又は当該技術の等価な代替物を含む、当該技術分野で共通して理解される技術を参照する。下記の用語は、当業者により十分に理解されていると思われるが、本発明をより良好に解釈するために下記の定義を例示する。
【００４６】
参照により本明細書に組み込まれる、本願で引用される全ての参考文献（参考文献、公認特許、公開特許出願、及び公開特許公報を含む）の内容は、本発明に明示的に含まれる。特に明示しない限り、本発明で使用される全ての技術及び科学用語は、当業者に周知される意味と一致するものとする。
【００４７】
定義
本明細書で使用する場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、又は「関する（ｒｅｌａｔｉｎｇ  ｔｏ）」、及びこれらの他の変形形態は、包括的又は非限定的であり、本明細書に列挙されていない他の要素又は方法工程を除外しない。
【００４８】
本明細書で使用する場合、用語「ＭＤＭ２阻害剤」は、ＭＤＭ２に対する結合に関して競合する物質、Ｐ５３タンパク質に対するＭＤＭ２の結合に影響を及ぼす物質、ＭＤＭ２活性を阻害する物質、又はＭＤＭ２を分解する物質若しくはＭＤＭ２レベルを低下させる遺伝子ツールを指す。
【００４９】
本明細書で使用する場合、用語「ＭＤＭ２関連タンパク質」は、ＭＤＭ２と少なくとも２５％の配列相同性を有し、Ｐ５３又はＰ５３関連タンパク質と相互作用し、且つＰ５３又はＰ５３関連タンパク質を阻害するタンパク質を指す。ＭＤＭ２関連タンパク質の例としては、ＭＤＭＸが挙げられるが、これに限定されない。
【００５０】
本明細書で使用する場合、用語「機能性Ｐ５３」は、正常レベル、高レベル、又は低レベルで発現する野性型Ｐ５３、又はＰ５３の突然変異体若しくは対立遺伝子多型を指し、これらの変異体は、野生型Ｐ５３の少なくとも約５％の活性、例えば野生型の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、又はそれ以上の活性を保持している。
【００５１】
本明細書で使用する場合、用語「Ｐ５３関連タンパク質」は、Ｐ５３と少なくとも２５％の配列相同性を有するタンパク質であって、腫瘍抑制因子としての活性を有し、ＭＤＭ２又はＭＤＭ２関連タンパク質との相互作用によって阻害される、タンパク質を指す。Ｐ５３関連タンパク質の例としては、ｐ６３及びｐ７３が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５２】
本明細書で使用する場合、用語「医薬的に許容可能な塩」は、遊離酸又は遊離塩基の塩を指し、これは一般に、遊離塩基を好適な有機酸又は無機酸と反応させるか、或いは酸を好適な有機塩基又は無機塩基と反応させることによって調製される。この用語は、本発明の任意の化合物のために用いてもよい。代表的な塩としては、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、二硫酸塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カンファースルホン酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エタンジスルホン酸塩、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプテート、グルコン酸塩、ルタメート（ｌｕｔａｍａｔｅ）、グリコールリルアルサニル酸塩（ｇｌｙｃｏｌ  ｌｙｌａｒｓａｎｉｌａｔｅ）、ヘキシレスオルシネート（ｈｅｘｙｌｒｅｓｏｒｃｉｎａｔｅ）（ヘキシレス（ｈｅｘｙｌｒｅｓ）又はシネート（ｃｉｎａｔｅ））、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエート、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシラート、メトブロミド、メトニトラート、メトサルフェート、モノカリウムマレイン酸塩、ムチン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミド、シュウ酸塩、パモ酸塩（ジヒドロキシナフタレート）、パルチミン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、カリウム塩、サリチル酸塩、ナトリウム塩、ステアリン酸塩塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、３−エチルヨード化合物、トリメチルアミン塩及び吉草酸塩が挙げられる。−ＣＯＯＨなどの酸性置換基が存在する場合、これは、剤形で用いるためのアンモニウム塩、モルホリン塩、ナトリウム塩、カリウム塩、バリウム塩、カルシウム塩などを形成し得る。アミノなどの塩基性基（リモノイド又は１，１−ジメチルビグアニドなど）、又はピリジルなどの塩基性ヘテルアリール（ｈｅｔｅｒａｒｙｌ）基が存在する場合、これは、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、ピルビン酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、桂皮酸塩、メシル酸塩、エシレート（ｅｓｉｌａｔｅ）、ピクリン酸塩などなどの酸性塩を形成し得る。好適な塩の概説は、Ｓｔａｈｌ  ａｎｄ  Ｗｅｒｍｕｔｈ「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ」（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）を参照されたい。
【００５３】
本明細書で使用する場合、用語「溶媒和物」とは、二溶媒和物、一溶媒和物、及び半溶媒和物などの、本発明に関連する化合物と溶媒分子との組み合わせ、物理的結合、及び／又は溶媒化である。本発明に関する化合物は、水、メタノール、エタノールなどの、化合物の薬理学的活性又は毒性に有意な影響を及ぼさない医薬的に許容可能な溶媒との溶媒和物形態を形成し得、また、薬理学的均等物として作用し得る。
【００５４】
溶媒和物の１種は水和物である。「水和物」とは、溶媒分子が水である、溶媒和物の特定のサブセットに関する。溶媒和物は、一般的に、薬理学的均等物の一形態としての効果を有し得る。溶媒和物の調製は当該技術分野で既知であり、例えば、酢酸エチル及び水を用いて調製されたフルコナゾールの溶媒和物を記録したＭ．Ｃａｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．，９３（３）：６０１−６１１（２００４）を参照されたい。溶媒和物、半溶媒和物、水和物などの同様の調製は、ｖａｎ  Ｔｏｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＡＰＳ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．，５（１）：Ａｒｔｉｃｌｅ  １２（２００４）及びＡ．Ｌ．Ｂｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．６０３−６０４（２００１）に記載されている。溶媒和物を調製するための代表的且つ非限定的な方法は、本発明の化合物を所望の溶媒（有機溶媒、及び水、又はこれらの混合物）に２０℃超〜約２５℃の温度で溶解させ、続いて、溶液を、結晶を形成するのに十分な速度で冷却して、既知の方法（濾過など）によって結晶を分離することに関連する。分析技法（赤外分光法など）を用いて、溶媒和物の結晶中に溶媒が存在することを確認することができる。
【００５５】
本明細書で使用する場合、「医薬的に許容可能な担体」は、治療薬と共に投与される希釈剤、助剤、賦形剤、又はビヒクルを指し、また、様々な妥当な医学的判断において、妥当な利益／リスク比に相当する過度の毒性、刺激、及びアレルギー反応、又はその他の問題若しくは合併症を伴うことなくヒト及び／又は他の動物の組織と接触するのに好適である。
【００５６】
本発明の医薬組成物又はキットで使用可能な医薬的に許容可能な担体としては、水、及び例えばピーナッツ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油などの石油、動物、植物、又は合成供給源由来の油を含む油などの滅菌液が挙げられるが、これらに限定されない。上記の医薬組成物が静脈投与される場合、水が代表的な担体である。特に注射用の液体担体として、生理食塩水並びにグルコース及びグリセロール水溶液を用いることもできる。好適な薬物賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、マルトース、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリル、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロパンジオール、水、エタノールなどが挙げられる。上記の医薬組成物は、必要に応じて少量の湿潤剤、乳化剤、又はｐＨ緩衝剤を更に含んでもよい。経口用製剤は、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的担体を含んでもよい。例えば、好適な医薬的に許容可能な担体の例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）に記載されている。
【００５７】
本発明の医薬組成物及びキットの様々な構成要素は、全身的に且つ／又は局所的に作用し得る。この目的のために、これらは、注射（例えば、点滴を含む静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、筋肉注射）若しくは経皮投与などの好適な経路によって投与されてもよく、又は経口で、頬側で、経鼻で、経粘膜で、局所で、及び点眼薬形態で投与されてもよく、又は吸入投与されてもよい。これらの投与経路のために、本発明の医薬組成物及びキットの様々な構成要素は、好適な剤形で投与され得る。
【００５８】
本明細書で使用する場合、用語「容器」は、医薬構成要素を収容するための容器である。この容器は、調製、貯蔵、輸送、及び／又は個別／大量販売のために用いることができ、瓶、ポット、バイアル、フラスコ、シリンジ、及びチューブ（クリーム剤物品用などの）、又は医薬品を調製、収容、貯蔵、若しくは分配するための任意の他の容器を包含することが意図される。
【００５９】
本明細書で使用する場合、用語「予防」は、疾患又は状態（癌など）に関して用いられる場合、化合物又は薬物（特許請求される本出願の医薬組成物など）を投与されていない個体と比較して、上記の化合物又は薬物が、個体において、医学的状態の症状の頻度を低減させるか、又はその発病を遅延させることができることを指す。
【００６０】
本明細書で使用する場合、用語「治療」は、疾患又は状態の症状を緩和、軽減、又は改善すること、潜在的な代謝によって生じる症状を改善すること、疾患又は状態の進行を停止するなど疾患又は状態を阻害すること、疾患又は状態を軽減して疾患又は状態を消失させること、疾患又は状態によって生じる病態を軽減すること、或いは疾患又は状態の症状を停止させることを指す。用語「治療」は、更に、再発予防又は段階予防、並びに急性若しくは慢性の徴候、症状、及び／又は機能不全の治療を含む。治療は、症状を阻害するなどのために、症状志向型であってもよい。治療は、短期間で実現されてもよく、中期間で志向されてもよく、又は例えば維持療法の状況下で長期的な治療であってもよい。
【００６１】
本明細書で使用する場合、用語「癌」は、異常且つ制御されていない細胞増殖により引き起こされる新生物又は腫瘍を指す。非限定的な例は、発明を実施するための形態に記載されるそれらの代表的な癌を含む。用語「癌」は、前癌性の癌細胞及び悪性癌細胞を同時に伴う疾患を含む。
【００６２】
本明細書で使用する場合、用語「個体」は、ヒト又は非ヒト動物を含む。例示的なヒト個体は、疾患（本明細書に記載される疾患など）を有するヒト個体（患者として知られる）、又は正常な個体を含む。本発明における「非ヒト動物」は、非哺乳動物（鳥類、両生類、及び爬虫類など）並びに非ヒト霊長類、家畜動物（ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌｓ）及び／又は家畜化動物（ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｅｄ  ａｎｉｍａｌｓ）（例えば、ヒツジ、イヌ、ネコ、畜牛、ブタなど）などの哺乳動物などの全ての脊椎動物を含む。個体がヒト患者（一般に体重が６０ｋｇと計算される）である場合、特に指定しない限り、本発明において記載される投薬量は、実験動物との変換係数（例えば、ヒト投薬量＝マウス投薬量／１２．３）を用いた変換によって得ることができる（Ｋｉｎ  Ｔａｍの「Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ“Ｆｉｒｓｔ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ”ｄｏｓｅ−ａ  ｒｅｖｉｓｉｔ  ｗｉｔｈ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｅｍｐｈａｓｉｓ  ｏｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｄｒｕｇｓ」ＡＤＭＥＴ＆ＤＭＰＫ１（４）（２０１３）６３−７５を参照してよい）。当業者であれば、一般知識、特定個体の重量、疾患の種類、重症度、及びその他の因子に基づいて上記の投薬量を合理的に調節することが可能であり、これら全ての調整された技術的解決法は、本発明の特許請求される技術的解決法の保護範囲に含まれる。
【００６３】
本明細書で使用する場合、用語「有効量」又は「予防及び／又は治療有効量」は、治療される疾患又は状態の１つ以上の症状をある程度緩和するのに十分な、投与薬物又は化合物の量（例えば投薬量）を指す。結果は、疾患若しくは状態の原因の縮小及び／若しくは緩和、又は生物システムの任意の他の所望の変化であり得る。例えば、治療的用途のための「有効量」とは、過度の毒性作用及び副作用を伴うことなしに疾患又は状態の臨床症状の有意な緩和を提供する、（本出願の特許請求される医薬組成物などの）薬物又は化合物の量である。上記の薬物の有効量は、有害細胞の増殖を減少させ（すなわち、ある程度遅延させ、且つ好ましくは停止させ）、癌細胞の数を減少させ、腫瘍のサイズを減少させ、癌細胞が末梢器官に浸潤するのを阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、且つ好ましくは停止させ）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅延させ、且つ好ましくは停止させ）、腫瘍成長をある程度阻害し、ＭＤＭ２及びＭＤＭ２関連タンパク質とＰ５３及びＰ５３関連タンパク質との相互作用を減少させ、並びに／又は、癌に関連する症状のうち１つ以上を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは１００％軽減させることができる。既存の癌細胞の成長を停止させる、且つ／又はこれを殺す投与された化合物又は組成物に関しては、これは、細胞阻害能、及び／又は細胞毒性を有してもよい。
【００６４】
本明細書で使用する場合、用語「併用投与」、「組み合わせ投与」、「同時投与」、及び類似の語句は、２つ以上の薬剤を共に投与される治療対象を指す。用語「共に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）」とは、各薬剤を同時に、又は任意の順序で規則的に異なる時点で投与することを指す。しかしながら、これらが同時に投与されない場合は、これらが特定の順序で個体に投与され、且つ所望の治療効果を提供するのに十分なほど時間が近く、また、相乗効果を有し得ることを意味する。例えば、本発明のＭＤＭ２阻害剤（化合物１及び化合物２など）は、抗癌剤と同時に投与してもよく、又は任意の順序で規則的に異なる時点で投与してもよい。本発明のＭＤＭ２阻害剤、及び抗癌剤は、任意の好適な形態で、且つ任意の好適な経路を経由して別々に投与されてもよい。本発明のＭＤＭ２阻害剤、及び抗癌剤は共に投与されず、また、これらは、これらを必要とする対象に任意の順序で投与してもよいことを理解されたい。例えば、本発明のＭＤＭ２阻害剤は、抗癌剤の治療様式（放射線療法など）を投与する前に（例えば５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間前に）、それと同時に、又はその後で（例えば５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、又は１２週間後）、これを必要とする個体に投与してもよい。様々な実施形態では、投与される本発明のＭＤＭ２阻害剤（化合物１及び化合物２など）と抗癌剤との間の間隔は、１分、１０分、３０分、１時間未満、１時間、１時間〜２時間、２時間〜３時間、３時間〜４時間、４時間〜５時間、５時間〜６時間、６時間〜７時間、７時間〜８時間、８時間〜９時間、９時間〜１０時間、１０時間〜１１時間、１１時間〜１２時間、２４時間以下、又は４８時間以下である。一実施形態では、組み合わせ治療の構成要素は、１分〜２４時間の間隔で投与される。
【００６５】
本明細書で使用する場合、用語「投薬量」とは、個体の重量の１キログラム（ｋｇ）当たりの作用物質の重量（ミリグラム（ｍｇ）など）を指す。
【００６６】
本明細書で使用する場合、用語「ＩＣ50」は、ＢＣＬ−２又はＭＤＭ２阻害の特定の試験化合物又は薬物の量、濃度、又は投薬量などの、こうした効果を測定するための実験で得られた最大効果の５０％阻害を指す。
【００６７】
本明細書で使用する場合、用語「室温」とは、２５℃±１℃を指す。一方で、実験温度が具体的に示されていない場合は、全て室温である。
【００６８】
本明細書で使用する場合、用語「約」は、本用語によって修飾される数値の±１０％、より好ましくは±５％、最も好ましくは±２％を指し、従って、当業者は、修飾される数値に従って用語「約」の範囲を明確に決定することができる。
【００６９】
用語「Ｃ1~4アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルなどの、１〜４個の炭素原子を含む任意の直鎖又は分枝鎖基を指す。
【００７０】
用語「Ｃ1~3アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルなどの、１〜３個の炭素原子を含む任意の直鎖又は分枝鎖基を指す。
【００７１】
用語「Ｃ1~3アルケン」は、上記の「Ｃ1~3アルキル」から１個の水素原子を除去することにより得られる基を指す。
【００７２】
本明細書で使用する場合、用語「複素環」は、ヘテルアリール（ｈｅｔｅｒａｒｙｌ）環系及びヘテロシクロアルキル環を指す。用語「Ｃ3~8シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルを含む、３〜８個の炭素原子を含有する単環式又は二環式の飽和又は部分不飽和の環系を指し、例えば、上記の環系は独立して選択されるハロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、シアノ、アルキルアミノ、又はアミノのうちの１つ以上、一般的には１〜３つで任意選択的に置換される。用語「ヘテロシクロアルキル」は、合計で４〜１２個の原子を含有する単環式又は二環式の飽和又は部分不飽和の環系を指し、上記の原子のうち１〜５つが、窒素、酸素、及び硫黄から独立して選択され、残りの原子が炭素である。ヘテロシクロアルキルの非限定的な例は、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ジヒドロピロリル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロピリジニル、オキセパニル、ジオキセピニル、チエパニル、及びジアゼパニルであり、これらのそれぞれが、環の原子上で、独立して選択されるハロ、Ｃ1~6アルキル、Ｃ1~6アルコキシ、シアノ、アミノ、カルバモイル、ニトロ、カルボキシル、Ｃ2~7アルケニル、Ｃ2~7アルキニルなどのうちの１つ以上、一般的には１〜３つで任意選択的に置換される。用語「ハロゲン」又は「ハロ」は、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、ヨウ素（Ｉ）、アスタチン（Ａｔ）、及びテネシン（Ｔｓ）を含む、周期系中のＶＩＩＡ群元素及び原子を指す。
【００７３】
本明細書で使用する場合、同様の用語「複素環」、「ヘテロシクロアルキル」、「Ｃ3~8シクロアルキル」、及び「ハロゲン」などは、当該技術分野において一般的な意味を有し、当業者は、一般知識によって、又は従来技術（参照によりその全体が本発明に援用される国際公開第２０１５／１６１０３２号パンフレットなど）を参照することによって、これらの意味を知ることができる。
【００７４】
医薬組成物及びキット
本発明の第１の態様は、ＭＤＭ２阻害剤、及び抗癌剤、並びに任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物に関する。開示されるＭＤＭ２阻害剤は、Ｐ５３又はＰ５３関連タンパク質とＭＤＭ２又はＭＤＭ２関連タンパク質との相互作用を阻害する。本発明のＭＤＭ２阻害剤は、Ｐ５３又はＰ５３関連タンパク質に対するＭＤＭ２又はＭＤＭ２関連タンパク質の悪影響を阻害することにより、細胞の感受性を高めてアポトーシス及び／又は細胞周期停止を誘発する。
【００７５】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、構造式：
【化１４】
2022501394.tif 000016
の化合物であって、
式中、
【化１５】
2022501394.tif 000017
は、
【化１６】
2022501394.tif 000018
からなる群から選択され；
Ｂは、Ｃ4~7炭素環であり；
Ｒ1はＨ、置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキル、置換若しくは非置換Ｃ3~8シクロアルキル、置換若しくは非置換ヘテロシクロアルキル、ＯＲa、又はＮＲaＲbであり；
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ3、及びＣＦ3からなる群から選択され；
Ｒ6は、
【化１７】
2022501394.tif 000019
であり；
Ｒaは、水素、又は置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキルであり；
Ｒbは、水素、又は置換若しくは非置換Ｃ1~4アルキルであり；
Ｒc及びＲdは、環Ｂの１つの炭素原子上の置換基であり、
Ｒcは、Ｈ、Ｃ1~3アルキル、Ｃ1~3アルキレン−ＯＲa、ＯＲa、又はハロであり；
Ｒdは、Ｈ、Ｃ1~3アルキル、Ｃ1~3アルキレン−ＯＲa、ＯＲa、又はハロであるか；或いは
Ｒc及びＲdは、それらが結合する炭素と合わせて、任意選択的に酸素又は窒素原子を含有する４〜６員環のスピロ環置換基を形成し；且つ
Ｒeは、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲa、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ2ＣＨ3である、化合物、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物である。
【００７６】
好ましい実施形態では、
【化１８】
2022501394.tif 000020
は、
【化１９】
2022501394.tif 000021
であり；
Ｂは、
【化２０】
2022501394.tif 000022
であり；
Ｒc及びＲdは、Ｆ及びＦ、Ｈ及びＨ、ＯＨ及びＣＨ3、ＣＨ3及びＣＨ3、ＣＨ3及びＯＨ、Ｈ及びＯＨ、ＣＨ2ＣＨ3及びＣＨ2ＣＨ3、並びにＣＨ2ＯＨ及びＣＨ2ＯＨである。
【００７７】
好ましい実施形態では、−（ＣＨ2）nＲ1は、Ｈ、ＣＨ3、又はＣＨ2ＣＨ3である。
【００７８】
好ましい実施形態では、Ｒ2はＨである。
【００７９】
好ましい実施形態では、Ｒ3はハロである。
【００８０】
好ましい実施形態では、Ｒ4及びＲ5はどちらもＨである。
【００８１】
好ましい実施形態では、Ｒ7はハロである。
【００８２】
好ましい実施形態では、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10のそれぞれはＨである。
【００８３】
好ましい実施形態では、Ｒeは、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ2ＣＨ3である。
【００８４】
好ましい実施形態では、環Ｂと共にＲc及びＲdは、
【化２１】
2022501394.tif 000023
を形成する。
【００８５】
好ましい実施形態では、Ｒ6は、
【化２２】
2022501394.tif 000024
である。
【００８６】
好ましい実施形態では、ＭＤＭ２阻害剤は、
【化２３】
2022501394.tif 000025
から選択される。
【００８７】
好ましい実施形態では、ＭＤＭ２阻害剤は、化合物１、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である。
【化２４】
2022501394.tif 000026
【００８８】
好ましい実施形態では、ＭＤＭ２阻害剤は、化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である。
【化２５】
2022501394.tif 000027
【００８９】
好ましい実施形態では、抗癌剤は、ホモハリングトニン、脱メチル化薬、及び／又は代謝拮抗剤を含む化学療法薬から選択され、好ましくは、上記の脱メチル化薬はアザシチジン、デシタビン、ゼブラリン、ファザジニウム、又はジヒドロ−５’−シチジンを含み、好ましくは、上記の代謝拮抗剤はシタラビン、アンシタビン、ゲムシタビン、又はトロキサシタビンを含む。
【００９０】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、以下の式の構造を有する化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物であり、
【化２６】
2022501394.tif 000028
上記の抗癌剤はアザシチジン、デシタビン、及び／又はシタラビンであり、以下の構造を有する：
アザシチジン、ＣＡＳ番号：３２０−６７−２、
【化２７】
2022501394.tif 000029
デシタビン、ＣＡＳ番号：２３５３−３３−５、
【化２８】
2022501394.tif 000030
シタラビン、ＣＡＳ番号：１４７−９４−４、
【化２９】
2022501394.tif 000031
ダブラフェニブ、トラメチニブ、フルベストラント、及びアルペリシブ。
【００９１】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤は、以下の式の構造を有する化合物２、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物であり、
【化３０】
2022501394.tif 000032
上記の抗癌剤はホモハリングトニン（ＨＨＴ、オマセタキシンメペスクシナート、ＨＨＲＴ）、ＣＡＳ番号：２６８３３−８７−４であり、以下の構造を有する。
【化３１】
2022501394.tif 000033
【００９２】
本発明で使用されるホモハリングトニン、アザシチジン、デシタビン、及び／又はシタラビンは全て市販されており、Ｓｅｌｌｅｃｋ公式ウェブサイト（ｗｅｂｓｉｔ）から購入可能である。
【００９３】
好ましい実施形態では、医薬組成物、又は上記のＭＤＭ２阻害剤若しくは上記の抗癌剤は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、散剤、トローチ剤、サッシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、噴霧剤、軟膏剤、クリーム剤、及び注射剤の形態である。
【００９４】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤及び抗癌剤は、それぞれ個別の製剤の形態である。
【００９５】
本発明では、
（ａ）第１の容器内の第１の構成要素であって、上記のＭＤＭ２阻害剤、及び任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を備え、上記のＭＤＭ２阻害剤は、好ましくは、化合物１及び化合物２などの、本発明の第１の態様で具体的に説明される化合物、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である、第１の構成要素と、
（ｂ）第２の容器内の第２の構成要素であって、上記の抗癌剤のうちの１つ以上、及び任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を備え、上記の抗癌剤は、好ましくは、アザシチジン、デシタビン、及び／又はシタラビンなどの、本発明の第１の態様で具体的に説明されるホモハリングトニン、脱メチル化薬、及び／又は代謝拮抗剤である、第２の構成要素と、を含むキットが提供される。
【００９６】
使用法及び治療法
本発明の第２の態様は、疾患を予防及び／又は治療するための薬物の調製における上記の医薬組成物の使用であって、上記の疾患は癌である、使用に関する。
【００９７】
好ましい実施形態では、上記の医薬組成物は、ＭＤＭ２阻害剤、及び抗癌剤、並びに任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。ＭＤＭ２阻害剤は、好ましくは、化合物１及び化合物２などの、本発明の第１の態様で具体的に説明される化合物、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である。抗癌剤は、好ましくは、アザシチジン、デシタビン、及び／又はシタラビンなどの、本発明の第１の態様で具体的に説明されるホモハリングトニン、脱メチル化薬、及び／又は代謝拮抗剤である。
【００９８】
好ましい実施形態では、上記の癌は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、成人脳／中枢神経系腫瘍、小児脳／中枢神経系腫瘍、乳癌、男性乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、腫瘍のＥｗｉｎｇファミリー、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、頭部及び頸部癌、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌及び下咽頭癌、成人白血病・急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、小児白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、小児における非ホジキンリンパ腫、口腔及び口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体部腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟組織癌、基底及び扁平上皮細胞癌、並びにメラノーマなどの皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウイルムス腫瘍から選択される。
【００９９】
より好ましい実施形態では、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、メラノーマ、及び乳癌から選択される。
【０１００】
加えて、本発明は、成人の再発性又は難治性急性骨髄性白血病及び再発性又は難治性高リスク／超高リスク骨髄異形成症候群を治療するための薬物の調製における、化合物２の単体での且つアザシチジン又はシタラビンと組み合わせての使用に関する。
【０１０１】
また、本発明は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療するための薬物の調製における化合物２の使用に関する。
【化３２】
2022501394.tif 000034
【０１０２】
或いは、本発明は、メラノーマを治療するための薬物の調製における、化合物２の単体での且つダブラフェニブ及びトラメチニブと組み合わせての使用に関する。好ましくは、化合物２とダブラフェニブ及びトラメチニブの組み合わせとの重量比は５０：３０：１である。
【０１０３】
或いは、本発明は、乳癌を治療するための薬物の調製における、化合物２の単体での且つフルベストラント及びアルペリシブと組み合わせての使用に関する。好ましくは、化合物２とフルベストラント及びアルペリシブの組み合わせとの重量比は５０：２０：２５である。
【０１０４】
本発明の第３の態様では、予防及び／又は治療有効量の上記のＭＤＭ２阻害剤及び抗癌剤を投与することを含む、上記の医薬組成物を、それを必要とする個体に投与することによる、疾患を予防及び／又は治療するための方法であって、上記の疾患は癌である、方法に関する。
【０１０５】
好ましい実施形態では、上記の医薬組成物は、ＭＤＭ２阻害剤、及び抗癌剤、並びに任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む。ＭＤＭ２阻害剤は、好ましくは、化合物２などの、本発明の第１の態様で具体的に説明される化合物、及びその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物である。抗癌剤は、好ましくは、アザシチジン、デシタビン、及び／又はシタラビンなどの、本発明の第１の態様で具体的に説明されるホモハリングトニン、脱メチル化薬、及び／又は代謝拮抗剤である。例えば、化合物２及びアザシチジン、化合物２及びデシタビン、並びに化合物２及びシタラビンが投与される。
【０１０６】
好ましい実施形態では、上記の癌は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、成人脳／中枢神経系腫瘍、小児脳／中枢神経系腫瘍、乳癌、男性乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、腫瘍のＥｗｉｎｇファミリー、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、頭部及び頸部癌、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌及び下咽頭癌、成人白血病・急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、白血病−急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、白血病−慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、白血病−慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、小児白血病、肝臓癌、肺癌−非小細胞肺癌、肺癌−小細胞肺癌、肺癌腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、小児における非ホジキンリンパ腫、口腔及び口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体部腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟組織癌、基底及び扁平上皮細胞癌、並びにメラノーマなどの皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウイルムス腫瘍から選択される。
【０１０７】
より好ましい実施形態では、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、メラノーマ、及び乳癌から選択される。
【０１０８】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、約０．００２５〜５０００ｍｇ／日の量で投与される。例えば、これは、約０．００５、０．０５、０．５、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００ｍｇ／日の量、及び各量間の範囲、例えば１ｍｇ〜２０００ｍｇ、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、３０ｍｇ〜９００ｍｇ、３０ｍｇ〜８００ｍｇ、３０ｍｇ〜９００ｍｇ、３０ｍｇ〜８００ｍｇ、３０ｍｇ〜７００ｍｇ、３０ｍｇ〜６００ｍｇ、３０ｍｇ〜５００ｍｇ、３０ｍｇ〜４９０ｍｇ、３０ｍｇ〜４８７ｍｇなどで投与される。
【０１０９】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、単位投薬量あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの量、例えば、単位投薬量あたり約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ  ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ  ｋｇ、約２７５μｇ  ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ  ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ  ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ  ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇの量で投与される。例えば、化合物２、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物が、単位投薬量当たり約２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、及び８０ｍｇ／ｋｇの量で個体に投与される。
【０１１０】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤又はその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物のうちの１つ以上は、約０．００５、０．０５、０．５、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００ｍｇ／日の量を含む、約０．００２５〜５０００ｍｇ／日の量、及び各量の間の範囲、例えば１ｍｇ〜２０００ｍｇ、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、３０ｍｇ〜９００ｍｇ、３０ｍｇ〜８００ｍｇ、３０ｍｇ〜９００ｍｇ、３０ｍｇ〜８００ｍｇ、３０ｍｇ〜７００ｍｇ、３０ｍｇ〜６００ｍｇ、３０ｍｇ〜５００ｍｇ、３０ｍｇ〜４９０ｍｇ、３０ｍｇ〜４８７ｍｇなどで投与される。
【０１１１】
好ましい実施形態では、上記の抗癌剤、又はその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物のうちの１つ以上は、単位投薬量あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの量、例えば、単位投薬量あたり約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ  ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ  ｋｇ、約２７５μｇ  ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ  ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ  ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ  ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇの量で投与される。例えば、アザシチジン、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、単位投薬量当たり約１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、及び５ｍｇ／ｋｇで投与される。例えば、デシタビン、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、単位投薬量当たり約１ｍｇ／ｋｇ及び２ｍｇ／ｋｇで投与される。
【０１１２】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤（化合物２など）、及び上記の抗癌剤のうちの１つ以上は、同時に、共に、又は組み合わせで投与される。
【０１１３】
より好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤及び上記の抗癌剤を連続的に投与する間の時間間隔は、約１分、約５分、約１０分、約１５分、約３０分、約４５分、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約１２時間、約２４時間、約４８時間、約７２時間、約９６時間、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約８週間、又は約１２週間であり得る。
【０１１４】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤（化合物２など）、及び上記の抗癌剤（アザシチジン、デシタビン、及びシタラビンなど）のうち１つ以上を含む医薬組成物は、一体の投薬単位として投与され、毎日の投与時間としては、１回、２回、３回、４回、５回、又は６回が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１５】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤（化合物２など）、及び上記の抗癌剤（アザシチジン、デシタビン、及びシタラビンなど）のうち１つ以上は、それぞれ別個の投薬単位として投与され、毎日の投与時間としては、１回、２回、３回、４回、５回、又は６回が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１６】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤（化合物２など）、及び上記の抗癌剤（アザシチジン、デシタビン、及びシタラビンなど）のうちの１つ以上は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、又は少なくとも５０日間、継続的に投与される。
【０１１７】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤（化合物２など）、及び上記の抗癌剤（アザシチジン、デシタビン、及びシタラビンなど）のうちの１つ以上は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の治療過程を含む１つ以上の治療過程の間継続的に投与され、各治療過程は、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、又は少なくとも５０日間続き、全ての２つの治療過程間の間隔は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間、２週間、３週間、又は４週間である。
【０１１８】
好ましい実施形態では、上記のＭＤＭ２阻害剤（化合物２など）、及び上記の抗癌剤（アザシチジン、デシタビン、及びシタラビンなど）のうちの１つ以上は、同じ経路（経口などの）、又は異なる経路（それぞれ経口及び非経口（注射によるなど）など）によって投与され、これには、経口、口腔内（ｂｕｃｃａｌｌｙ）、噴霧吸入、舌下、直腸内、経皮、膣粘膜、経粘膜、局所的投与、経鼻若しくは経腸投与、筋肉注射、皮下注射、髄内注射、及び髄腔内などの注射投与、直脳投与、インサイチュ投与、皮下、腹腔内、静脈注射、関節内滑膜、胸骨内、肝臓内、病巣内、頭蓋内、腹腔、鼻腔、若しくは眼内注射、又はその他の薬物送達経路が含まれる。
【０１１９】
加えて、本発明は、化合物２の単体での且つアザシチジン又はシタラビンと組み合わせての投与を含む、成人の再発性又は難治性急性骨髄性白血病及び再発性又は難治性高リスク／超高リスク骨髄異形成症候群の治療法に関する。
【０１２０】
好ましい実施形態では、投与方法は以下の通りである：
化合物２の投薬量が標準３＋３レジメンに従って増加し、ここで初期投薬量は１５０ｍｇであり、続いて２００ｍｇ、２５０ｍｇ、及び３００ｍｇへと規則的に増加し、経口で１日１回摂取され、各サイクルの１日目で使用を開始され、７日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルであり；
化合物２単体の用量増加の第１段階が完了すると、第２段階、すなわち化合物２の用量増加との組み合わせ投与が開始されてもよく、組み合わせ投与レジメンにおいて、化合物２の投薬量は１００ｍｇから開始し、続いて１５０ｍｇ及び２００ｍｇへと規則的に増加し；アザシチジンは、１日１回の皮下注射による７５ｍｇ／ｍ2の固定投薬量であり、各サイクルの１日目で使用を開始され、７日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルであり；シタラビンは、静脈内注入期間が４時間以上である１日１回の皮下注射による１ｇ／ｍ2の固定投薬量であり、各サイクルの３日目で使用を開始され、５日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルである。
【０１２１】
好ましい実施形態では、アザシチジン又はシタラビンは、化合物２の経口投与から４時間後に投与され、２つの薬物の組み合わせ治療後に休憩期間が開始される。
【０１２２】
また、本発明は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療するための薬物の調製における化合物２の使用に関する。
【化３３】
2022501394.tif 000035
【０１２３】
或いは、本発明は、メラノーマを治療するための薬物の調製における、化合物２の単体での且つダブラフェニブ及びトラメチニブと組み合わせての使用に関する。好ましくは、化合物２とダブラフェニブ及びトラメチニブの組み合わせとの重量比は５０：３０：１である。
【０１２４】
或いは、本発明は、乳癌を治療するための薬物の調製における、化合物２の単体での且つフルベストラント及びアルペリシブと組み合わせての使用に関する。好ましくは、化合物２とフルベストラント及びアルペリシブの組み合わせとの重量比は５０：２０：２５である。
【実施例】
【０１２５】
実施形態
本発明の目的及び技術的解決法をより明らかにするため、本発明を下記の特定の実施形態と組み合わせて更に説明する。これらの実施形態は、本発明の範囲を限定するのではなく、単に本発明を説明するために用いられることを理解されたい。更に、以下の実施形態で言及されない特定の実験的方法は、全て従来法に従って実施される。
【０１２６】
データ分析
腫瘍成長曲線が描かれ、ここでＸ軸は観察時間を示し、Ｙ軸は対応する腫瘍容量を示す（幾何平均）。３つ以上の群間の比較はＯｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡを使用する。Ｆ値が有意な差を有する場合、ＡＮＯＶＡ分析後に複数の比較が実施されるべきである。全てのデータ分析はＳＰＳＳ１８．０を用いる。グラフ作製にはＰｒｉｓｍ（第６版）を用いる。リンパ球に浸潤する腫瘍の分析にはＡｔｔｕｎｅ  ＮｘＴフローサイトメーター（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．）を用いる。データ取得及び分析は、Ａｎａｌｙｓｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ１．６．３ワークステーション（ＡＢ  ｓｃｉｅｘ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）を用いる。ＭＯＬＭ−１３全身モデルの場合、合計生存期間中央値を分析してカプラン・マイヤー曲線を生成するために最後のマウスの死亡日が用いられる。様々な治療群の生存曲線を比較するために対数順位検定及びボンフェローニ多重検定が用いられる。
【０１２７】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）細胞増殖実験
抗増殖効果を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）実験によって検出する。細胞を９６ウェルプレートに接種し、様々な濃度の試験物質で２４〜７２時間処理する。一般的には、９組の用量の試験物質が選択され、５μｌ／ウェルで９６ウェルプレートに添加される。組合せ実験の場合、２つの試験物質の最終体積は、５μｌ／ウェルである。各試験用量を３つの反復ウェルに供する。１００μｌの希釈剤を、対照群と同じ培養皿上の３〜６つの選択されたウェルに添加し、更に３〜６つのウェルをブランク対照として設定する。ブランク対照に加え、９５μｌの細胞懸濁液（細胞対照群の細胞が試験が必要な時にウェルの底部でちょうどコンフルエントになるのを保証するのに好適な細胞数を含有する）を同じ９６ウェルプレートの各ウェルに添加する。培養皿を３７℃のＣＯ2インキュベーター内で２４〜７２時間培養する。培養が完了したら、９６ウェルプレート及びＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を室温で３０分間平衡させ、続いて１００μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を各ウェルに添加する。培養皿を、振盪機上で２分間均質に混合し、続いて室温で１０分間放置し、その後、Ｂｉｏｔｅｋ  ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＩＭＦマイクロプレートリーダーを用いて蛍光値を読み取る。３つの反復ウェルの平均蛍光値を使用し、細胞生存率のパーセンテージを以下の式によって計算する：
細胞生存率（％）＝（試験ウェルの蛍光値−陰性対照ウェルの蛍光値）/（溶媒対照群の蛍光値−陰性対照群の蛍光値）×１００％
ＩＣ50の計算には、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ６．０ソフトウェア（Ｇｏｌｄｅｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｇｏｌｄｅｎ，ＣｏｌＯＲａｄｏ，ＵＳＡ）の非線形回帰データ分析法を使用する。
【０１２８】
組み合わせ実験の場合、細胞生存率を計算するために、単一の薬物対照の３つの反復ウェルの平均蛍光値を正規化する。組み合わせ曲線と単一の薬物曲線とのＩＣ５０を比較して、組み合わせ薬物群の曲線が左に移動しているか否かを観察することによって２つの化合物の相乗効果を判定する。細胞レベルでの組み合わせ投与実験の場合、ＣａｌｃｕＳｙｎプログラムを用いて組み合わせ指数（ＣＩ）を計算し、その結果を更に分析する（Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．（２０１０）．Ｄｒｕｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｓｙｎｅｒｇｙ  ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ  ｍｅｔｈｏｄ．Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７０，４４０−４４６）。２つの薬物の組み合わせのＣＩ値が＜０．９である場合は、２つの薬物の組み合わせが相乗効果を有することを示し、ＣＩ値＝０．９は、２つの薬物の組み合わせが相加効果を有することを示し、ＣＩ値＞０．９は、２つの薬物の組み合わせが拮抗効果を有することを示す。
【０１２９】
インビボ有効性実験のための評価方法
動物に腫瘍細胞を接種した後、動物の生死状況を毎日監視し、定期点検には、腫瘍成長、並びに動作及び活動、食物及び水の摂取量、体重の変化（体重は毎週２回測定する）、外見及び兆候、又はその他の異常事態などの、動物の日々の挙動に対する薬物治療の効果を観察することが含まれる。群における動物の死亡総数及び副作用は、各群の動物の数に基づいて記録する。投与、並びに腫瘍及び体重の測定を含む全てのプロセスは、層流キャビネット内で実施する。
【０１３０】
ヒト腫瘍免疫不全マウスの皮下異種移植腫瘍モデルを、細胞接種法により確立し（Ｇｏｕｌｄ  ＳＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１５  ２１，４３１−４３９、及びＳｏｕｅｒｓ  ＡＪ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＢＴ−１９９，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ＢＣＬ−２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ａｃｈｉｅｖｅｓ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｈｉｌｅ  ｓｐａｒｉｎｇ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ，Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２  １９．２０２−２０８を参照可能である）、対数期の腫瘍細胞を回収し、続いて計数後に１×ＰＢＳ中に再懸濁し、細胞懸濁液の濃度を２．５〜５×１０7／ｍＬに調節する。腫瘍細胞を、１ｍＬシリンジ（第４ニードル）を用いて５〜１０×１０6／０．２ｍＬ／マウスで免疫不全マウスの右側背部に皮下接種する（実験動物は、Ｂｅｉｊｉｎｇ  Ｖｉｔａｌ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．ＳＣＸＫ（Ｂｅｉｊｉｎｇ）２０１６−０００６から購入する）。動物の全ての実験作業は、ＧｅｎｅＰｈａｒｍａ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．及びＳｕｚｈｏｕ  Ｙａｓｈｅｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．の実験動物使用管理基準を厳格に順守する。関連パラメータの計算は、Ｃｈｉｎａ  ＣＦＤＡの「Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｎｏｎ−ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｄｒｕｇｓ」を参照する。
【０１３１】
全身性及び皮下ＡＭＬ異種移植モデルを、雌のＮＯＤ  ＳＣＩＤマウス内で生成する。全ての動物実験は、ＧｅｎｅＰｈａｒｍａ（Ｓｕｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）の動物施設で実施する。
【０１３２】
全身性ＡＭＬモデルの場合、６〜８週齢の雌のＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスを、シクロホスファミド（１５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で２日間継続的に前処理する。続いて、ＭＯＬＭ−１３全身性ＡＭＬ異種移植モデルを、１×１０7細胞を尾静脈に静脈接種することにより確立する。
【０１３３】
皮下モデルの場合、６〜８週齢のマウスの腹部の右側部にＯＣＩ−ＡＭＬ−３細胞（１×１０6）を皮下注射する。細胞接種から約１０日後、約１００〜１５０ｍｍ3の平均腫瘍容積を達成した原発腫瘍サイズに基づいてマウスをランダムに群化する。
【０１３４】
実験中は毎週２回、動物の体重及び腫瘍サイズを測定する。死亡の有無などの動物の状況及び状態は毎日観察する。定期監視は、腫瘍成長、及び正常な動物の挙動に対する治療の影響を含み、そのうち、特定の内容としては、実験動物の活動、食物及び水の摂取量、体重の増減、眼、体毛、及びその他の異常状況が挙げられる。実験中に観察される死亡及び臨床症状は、全て元データに記録される。投与、並びにマウスの体重及び腫瘍容量の測定の全作業は層流キャビネット内で実施する。実験プロトコルの要件に従い、最終投与の後で、血漿及び腫瘍組織を回収し、体重を計量し、写真を撮影し、データを記録する。血漿及び腫瘍サンプルを、更なる使用のために−８０℃で低温保存する。
【０１３５】
毎週２回、ノギスを用いて腫瘍の直径を測定する。腫瘍容量（ＴＶ）の計算公式は以下の通りである：ＴＶ＝ａ×ｂ2／２。この計算公式では、ａ及びｂはそれぞれ腫瘍測定値の長さ及び幅を表す。相対的腫瘍容量（ＲＴＶ）の計算公式は以下の通りである：ＲＴＶ＝Ｖt／Ｖ1。この計算公式では、Ｖ1は群化されて投与された場合の腫瘍容量であり、Ｖtは、投与後の特定の日に測定した場合の腫瘍容量である。
【０１３６】
抗腫瘍活性の評価指数は、相対的腫瘍増殖速度Ｔ／Ｃ（％）であり、それぞれ計算公式は以下の通りであり：相対的腫瘍増殖速度Ｔ／Ｃ（％）＝（ＴRTV／ＣRTV）×１００％、ＴRTVは治療群のＲＴＶであり、ＣRTVはビヒクル対照群のＲＴＶである。腫瘍寛解率（％）は、治療後の腫瘍保有マウス中に現れるＳＤ（安定疾患）、ＰＲ（部分的奏効）、及びＣＲ（完全奏効）の数を群中のマウスの合計数で割り、１００％を掛けることによって導出される。
【０１３７】
動物の体重の変化（％）＝（測定体重−群化時の体重）／群化時の体重×１００％。
【０１３８】
有効性評価の判定基準：Ｃｈｉｎａ  ＣＦＤＡの「Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｎｏｎ−ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｄｒｕｇｓ」（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００６）によれば、統計分析によるＴ／Ｃ（％）値≦４０％、及びｐ＜０．０５は有効である。マウスの体重減少が２０％を超えるか、或いは薬物関連死亡数が２０％を超える場合、薬物の投薬量に強い毒性があり、過度の毒性投薬量として表されるものと考えられる。Ｔ／Ｃパーセンテージは、抗腫瘍有効性の指標であり、ＮＣＩは、＜４２％のＴ／Ｃ値は有意な抗腫瘍活性を有するものとみなしている。＜１０％のＴ／Ｃ値は極めて有意な抗腫瘍活性を有するものとみなされ、これらが毒性及びいくつかのその他の要件（ＤＮ−２活性レベルとして知られる）を満たす場合、ＮＣＩは、これらを臨床試験の合理性の証拠として用いる。
【０１３９】
相乗的分析は以下の式を用いる（Ｇｏｕｌｄ  ＳＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１５  ２１，４３１−４３９が参照可能である）：相乗因子＝（（Ａ／Ｃ）×（Ｂ／Ｃ））／（ＡＢ／Ｃ）；Ａ＝Ａ薬剤のみの群のＲＴＶ値；Ｂ＝Ｂ薬剤のみの群のＲＴＶ値；Ｃ＝ビヒクル対照群のＲＴＶ値；ＡＢ＝ＡＢ組み合わせ群のＲＴＶ値（Ｃｌａｒｋｅ  Ｒ．，Ｉｓｓｕｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｅｎｄｐｏｉｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｍｏｄｅｌｓ［Ｊ］，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，１９９７，４６  （２−３）：２５５−２７８）。相乗因子＞１の場合、これらは相乗効果を有し、相乗因子＝１の場合、これらは相加効果を有し、相乗因子＜１の場合、これらは拮抗効果を有する。
【０１４０】
実施形態１．化合物２の調製
【化３４】
2022501394.tif 000036
米国特許第９７４５３１４号明細書、国際公開第２０１５／１６１０３２号パンフレット、及びＡｇｕｉｌａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１７（６０）２８１９−２８３９に開示される一工程法又は多工程法に従いＭＤＭ２阻害剤、化合物２を調製する。
【０１４１】
実施形態２．ヒト由来ＡＭＬ癌細胞株に対する化合物２の単体又は組み合わせでの抗増殖効果
２．１．ヒト由来ＡＭＬ癌細胞株に対する化合物２単体の抗増殖効果
上記の「ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）細胞増殖実験」を参照する。ＣＴＧ実験における、化合物２単体の、ＡＭＬ（急性骨髄性白血病）細胞ＭＯＬＭ−１３、ＭＶ−４−１１、及びＯＣＩ−ＡＭＬ−３の３つのＴＰ５３野生型、並びにＡＭＬ細胞株ＨＬ−６０及びＳＫＭ−１の２つのＴＰ５３変異型に対するインビトロ増殖阻害効果。この実験では、ＭＯＬＭ−１３及びＭＶ−４−１１細胞株の両方がＡＭＬ細胞株のＴＰ５３野生型及びＦＬＴ３−ＩＴＤ変異型であり、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３細胞株は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ変異を含まないＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞株である。ＭＶ−４−１１細胞株はＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−９５９１（商標）、混合型Ｂ骨髄単球性白血病由来であり、ＨＬ−６０細胞株はＡＴＣＣ（登録商標）ＣＣＬ−２４０（商標）、急性前骨髄性白血病由来であり、ＭＯＬＭ−１３細胞株はＢｅｎａ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎリソース番号：ＢＮＣＣ３４０５６８、ヒト急性骨髄性白血病細胞由来である。ＯＣＩ−ＡＭＬ−３細胞株はＣｏｂｉｏｅｒ（Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）から購入する。ＳＫＭ−１は、ＪＣＲＢ細胞バンク（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋ（ＪＣＲＢ））から購入する。急性骨髄性白血病細胞株は、１０％のウシ胎仔血清（ＡＵＳＧＥＮＥＸ，Ｃａｔ＃ＦＢＳＳＡ５００−Ｓ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｔ＃Ｃ１１８７５５００ＢＴ）中で培養する（ＩＭＤＭ培地（Ｇｉｂｃｏ，Ｃａｔ＃Ｃ１２４４０５００ＢＴ）中で培養されるＭＶ−４−１１を除く）。全ての細胞株は遺伝子同定に供され、微生物汚染を含まない。別段指定されない限り、ＣＴＧ実験においては、細胞は薬物で７２時間処理する。図１に示すように、ＴＰ５３野生型及び変異型ＡＭＬ細胞株に対する化合物２単体のインビトロでの増殖阻害効果を研究するために、ＭＯＬＭ−１３、ＭＶ−４−１１、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３、ＨＬ−６０、及びＳＫＭ−１細胞を漸増用量の化合物２単体で処理する。７２時間後、細胞生存をＣＴＧ法により測定し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６を用いて成長阻害曲線を描く。細胞生存パーセンテージを平均±ＳＥＭとして表す（ｎ＝２又は３である）。
【０１４２】
研究結果は、上記５つの試験されたＡＭＬ細胞株においては、ＴＰ５３野生型細胞株は化合物２の薬物効果に対して敏感であり、ＴＰ５３変異型細胞株は化合物２の効果に対して敏感でないことを示す。具体的には、表１に示すように、ＴＰ５３野生型ＭＯＭＬ−１３、ＭＶ−４−１１、及びＯＣＩ−ＡＭＬ−３細胞株における化合物２のＩＣ５０値は、それぞれ２６．８±４．９ｎＭ、１６５．９±４２．４ｎＭ、及び３１５．６±９７ｎＭである。これらの細胞株において、化合物２単体に対して最も敏感な細胞株は、ＡＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１３及びＭＶ−４−１１のＴＰ５３野生型及びＦＬＴ３−ＩＴＤ変異型である。第２に、化合物２単体に対して比較的敏感な細胞株は、ＦＬＴ３−ＩＴＤ変異を含まないＴＰ５３野生型ＯＣＩ−ＡＭＬ−３細胞株である。比較すると、ＴＰ５３変異型細胞株における化合物２の抗増殖効果は弱く、ＨＬ−６０及びＳＫＭ−１細胞株におけるＩＣ５０値はそれぞれ２５５８．３±５８１．５ｎＭ及び８９４７．３±５６９．６ｎＭである。
【０１４３】
【表１】
2022501394.tif 000037
【０１４４】
２．２．ヒト由来ＡＭＬ癌細胞株に対する化合物２の組み合わせでの抗増殖効果
ＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞株に対する、デシタビン、アザシチジン、又はシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）との組み合わせでの化合物２の成長阻害効果を、図２Ａ及び２Ｂに示す。ＡＭＬ細胞を、勾配濃度の化合物２、デシタビン、アザシチジン、及びシタラビンの単体又は組み合わせで３日間処理し、細胞成長阻害活性をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光法により検出する。細胞生存パーセンテージを平均±ＳＥＭとして表す（ｎ＝３）。
【０１４５】
結果は、化合物２が、デシタビン（ＤＥＣ）、アザシチジン（ＡＺＡ）、及びシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）を含む脱メチル化薬との組み合わせで投与される場合、上記の組み合わせ投与の全てで抗増殖効果が改善されることを示す。
【０１４６】
図２Ａから、脱メチル化薬デシタビン及びアザシチジンとの組み合わせでの化合物２の特定のＣＩ値及び元の投薬量−効果成長阻害曲線が分かる。図２Ｂから、シタラビンとの組み合わせでの化合物２の特定のＣＩ値及び元の投薬量−効果成長阻害曲線が分かる。デシタビンとの組み合わせでの化合物２の組み合わせ投与応答曲線は左に移動し、組み合わせ指数（ＣＩ）は０．９未満であり、これは、デシタビンの２薬組み合わせが相乗効果を有することを示す。
【０１４７】
インビトロ実験で、化合物２は、単体で用いられたときに、ＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞株における、特にＡＭＬ細胞株のＴＰ５３野生型及びＦＬＴ３−ＩＴＤ変異型におけるＡＭＬ細胞に対して有意な抗増殖効果を有するだけではなく、化合物２は、脱メチル化薬（デシタビン及びアザシチジン）並びに従来の化学療法薬シタラビンを含むその他の治療薬物との組み合わせで、組み合わせ投与後にＩＣ５０値の減少を示し、また、組み合わせ投与曲線及び単一薬物曲線のＩＣ５０と比較して、組み合わせ投与群曲線が左に移動することが観察される点が優れているということが分かる。したがって、化合物２が、脱メチル化薬（デシタビン及びアザシチジン）並びに従来の化学療法薬シタラビンを含むその他の治療薬物との組み合わせで用いられる場合、これは相乗効果を有し、また、その抗増殖効果は有意に改善される。
【０１４８】
実施形態３．非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株における、化合物２の単剤又は他の治療薬物との組み合わせでの抗増殖活性
３．１  ＫＲＡＳ及びＳＴＫ１１共変異非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ４６０、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２における化合物２単剤の抗増殖活性
上記の「ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）細胞増殖実験」を参照されたい。ＣＴＧ実験では、ＳＴＫ１１及びＫＲＡＳの共変異を含む３つの非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ４６０、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２における化合物２の単剤としての抗増殖作用を試験した。中でも、Ａ５４９細胞株、ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞株、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞株は全て、Ｎａｎｊｉｎｇ  Ｃｏｂｉｏｅｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄから購入した。全ての細胞株は遺伝認証されており、また微生物汚染を含まない。別段指定されない限り、ＣＴＧ実験では、細胞は薬物で７２時間処理される。
【０１４９】
図３Ａ〜３Ｃに示すように、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ４６０、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞株における化合物２のＩＣ５０値は、それぞれ３３ｎＭ、３３０μＭ、及び７９ｎＭである。
【０１５０】
３．２  ＳＴＫ１１及びＫＲＡＳ共変異非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ４６０、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２における化合物２及びトラメチニブでの組み合わせ治療の抗増殖活性
上記の「ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）細胞増殖実験」を参照されたい。ＣＴＧ実験では、３つのＳＴＫ１１及びＫＲＡＳ共変異非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ４６０、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２において、化合物２及びトラメチニブの組み合わせの抗増殖作用を試験した。別段指定されない限り、ＣＴＧ実験では、細胞は薬物で７２時間処理される。
【０１５１】
図３Ａ〜３Ｄに示すように、化合物２及びトラメチニブの組み合わせは、ＳＴＫ１１及びＫＲＡＳの共変異を含む非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ４６０、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２の成長を阻害した。上記の３つの細胞株を、勾配濃度の化合物２、トラメチニブの単剤又は組み合わせで３日間処理し、細胞成長阻害活性をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光法により検出した。細胞生存のパーセンテージは平均±ＳＥＭで表す（ｎ＝３）。
【０１５２】
結果は、化合物２がトラメチニブとの組み合わせで用いられたときは、抗増殖活性が改善されたことを示した。
【０１５３】
化合物２及びトラメチニブの特定のＣＩ値及び元の投薬量−効果成長阻害曲線を図３Ａ、３Ｂ、及び３Ｃに示した。トラメチニブとの組み合わせでの化合物２の組み合わせ薬物応答曲線は左に移動し、組み合わせ指数（ＣＩ値）は０．９未満であり、これは、化合物２をトラメチニブと組み合わせて用いたときに相乗効果が存在したことを示す。
【０１５４】
要約すると、化合物２単剤は、ＳＴＫ１１及びＫＲＡＳ共変異を含む非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株Ａ５４９、ＮＣＩ−Ｈ４６０、及びＮＣＩ−Ｈ２１２２において強力な抗増殖活性を有する。重要なことに、化合物２及びトラメチニブの組み合わせは、相乗的な抗増殖作用を示した。
【０１５５】
３．３  ＫＲＡＳ野生型及びＳＴＫ１１野生型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株ＮＣＩ−Ｈ２２６及びＮＣＩ−Ｈ２９２における化合物２及びトラメチニブの抗増殖活性
上記の「ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＴＧ）細胞増殖実験」を参照されたい。ＣＴＧ実験では、ＫＲＡＳ野生型及びＳＴＫ１１野生型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株ＮＣＩ−Ｈ２２６及びＮＣＩ−Ｈ２９２において、化合物２及びトラメチニブの組み合わせの抗増殖作用を試験した。
【０１５６】
中でも、ＮＣＩ−Ｈ２２６細胞株はＮａｎｊｉｎｇ  Ｃｏｂｉｏｅｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞株はＩｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。全ての細胞株は遺伝認証されており、また微生物汚染を含まない。別段指定されない限り、ＣＴＧ実験では、細胞は薬物で７２時間処理される。
【０１５７】
図４Ａ〜４Ｂに示されるように、化合物２及びトラメチニブの組み合わせは、ＫＲＡＳ野生型及びＳＴＫ１１野生型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株ＮＣＩ−Ｈ２２６及びＮＣＩ−Ｈ２９２の成長を阻害した。上記の２つの細胞株を、勾配濃度の化合物２、トラメチニブの単剤又は組み合わせで３日間処理し、細胞成長阻害活性をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光法により検出した。細胞生存のパーセンテージは平均±ＳＥＭで表す（ｎ＝３）。
【０１５８】
結果は、化合物２がトラメチニブとの組み合わせで用いられたときは、抗増殖活性が改善されたことを示した。
【０１５９】
化合物２及びトラメチニブの特定のＣＩ値及び元の投薬量−効果成長阻害曲線を図４Ａ、及び４Ｂに示した。細胞を、トラメチニブ及び化合物２のモル濃度比約１：３の組み合わせで処理した場合（特に、２つのモル濃度比が０．３３μＭ：１μＭ〜１μＭ：３μＭである場合）、応答曲線は左に移動し、組み合わせ指数（ＣＩ値）は０．９未満であり、これは、化合物２をトラメチニブと組み合わせて用いたときに相乗効果が存在したことを示す。
【０１６０】
要約すると、化合物２単剤は、ＫＲＡＳ野生型及びＳＴＫ１１野生型非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株ＮＣＩ−Ｈ２２６及びＮＣＩ−Ｈ２９２における強力な抗増殖活性を有する。重要なことに、化合物２及びトラメチニブの組み合わせは、相乗的な抗増殖作用を示した。
【０１６１】
実施形態４．化合物２の単独又は組み合わせでのインビトロ投与は、癌細胞のアポトーシス及び周期停止を誘発する
４．１．化合物２単体はＭＯＬＭ−１３ＡＭＬのアポトーシスを誘発する
Ｐ５３シグナリング経路の活性化は、細胞のアポトーシス、周期停止、又は老化を誘発し得る。全ての試験されたＡＭＬ細胞株において、野生型ＴＰ５３及びＦＬＴ３−ＩＴＤ変異を有するＭＯＬＭ−１３細胞株は、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３及びＭＶ−４−１１と比較して、化合物２の薬物効果に対してより高い感受性を示す。したがって、単体の、又はデシタビン、アザシチジン、若しくはシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）と組み合わせた化合物２で処理した後でＭＯＭＬ−１３細胞のアポトーシスを分析するために、アネキシンＶ−ＰＩ蛍光プローブ及びフローサイトメーターを用いる。
【０１６２】
図５Ａ及び図５Ｂに示すように、図５Ａでは、ＭＯＬＭ−１３細胞を用量０．０１μＭ、０．０４μＭ、０．１１μＭ、０．３３μＭ、又は１μＭの化合物２でインビトロ処理し、４８時間後、細胞を回収し、Ａｎｎｅｎｉｘ  Ｖ−ＦＩＴＣ／ＰＩを用いて染色し、フローサイトメーターでアポトーシスを検出する。アポトーシスのパーセンテージを平均±ＳＥＭとして表す（ｎ＝３）。図５Ｂは、図５Ａの化合物２によって誘発されたアポトーシスのフロー分析の選択図である。陰性対照群と比較すると、Ｐ＜０．０００１である。
【０１６３】
結果は、化合物２はアポトーシスを有意に誘発することができ（Ｐ＜０．０００１）、その効果は用量依存性であることを示す。化合物２単体は、ＭＯＬＭ−１３細胞のアポトーシスを用量依存的に誘発する。例えば、４０ｎＭ、１１０ｎＭ、及び１０００ｎＭの化合物２で４８時間処理した後では、アポトーシスを起こしたＭＯＬＭ−１３細胞（Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ＋細胞）は、それぞれ約３１．０％、５５．１％、及び９６．８％である。これらのデータは、ＡＭＬ細胞に対する化合物２の成長阻害効果は、これが細胞のプログラム細胞死を誘発するという事実に関連することを示す。
【０１６４】
４．２．デシタビン、アザシチジン、又はシタラビンと組み合わせた化合物２は、ＭＯＬＭ−１３ＡＭＬのアポトーシスを相乗的に誘発する
研究は、デシタビン、アザシチジン、又はシタラビンの全てが、ＡＭＬ細胞のアポトーシスを誘発し得ることを報告している（Ｈｏｌｌｅｎｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｏｓｓｅｎｋｏｐｐｅｌｅ  ａｎｄ  Ｌｏｗｅｎｂｅｒｇ，２０１５；Ｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１７）。本発明は、更に、ＭＯＬＭ−１３細胞のアポトーシスに対する、脱メチル化薬（デシタビン又はアザシチジンなど）又はシタラビンとの組み合わせでの化合物２の効果を評価する。
【０１６５】
ＭＯＬＭ−１３細胞を０．０４μＭの化合物２（ＡＭＬ細胞における化合物２単体の研究は、この濃度が最小有効濃度であることを示す）、及び好適な濃度のデシタビン、アザシチジン、又はシタラビンで４８時間処理する。図６に示すように、ＭＯＬＭ−１３細胞を、０．１μＭのデシタビン（ＤＥＣ）、３μＭのアザシチジン（ＡＺＡ）、又は０．１μＭのシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）と組み合わせた０．０４μＭの化合物２でインビトロ処理し、４８時間後、細胞を回収し、Ａｎｎｅｎｉｘ  Ｖ−ＦＩＴＣ／ＰＩを用いて染色し、フローサイトメーターでアポトーシスを検出する。ブランク群と比較して（Ｐ＜０．０５）、化合物２単体群と比較して（Ｐ＜０．０５）、化学療法薬（デシタビン、アザシチジン、又はシタラビン）単体群と比較して（Ｐ＜０．０５）、アポトーシス細胞（Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ＋細胞）のパーセンテージを平均±ＳＥＭとして表す（ｎ＝３）。結果は、対照又は単一の薬物治療と比較すると、アザシチジン、デシタビン、又はシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）との組み合わせでの化合物２は、アポトーシス比を有意に上昇させ、且つアポトーシスを相乗的に誘発させ得ることを示す。
【０１６６】
４．３．ＡＭＬ細胞周期の進行に対する化合物２の効果
ＭＯＭＬ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３、及びＭＶ−４−１１細胞（ＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞株）を、様々な濃度の化合物２で４８時間処理し、続いてヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を用いて細胞を染色し、総細胞中のＧ０／Ｇ１、Ｓ、及びＧ２／Ｍ期における細胞のパーセンテージを、フローサイトメトリの分析法によって求め、ＡＭＬ細胞の細胞周期の進行に対する化合物２の効果を研究する。
【０１６７】
図７に示すように、化合物２単体は、ＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞中のＳ期細胞の比率を用量依存的に低下させる。ＭＯＬＭ−１３（Ａ）、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３（Ｂ）、及びＭＶ−４−１１（Ｃ）を０．０１μＭ、０．０４μＭ、０．１１μＭ、０．３３μＭ、又は１μＭの化合物２でインビトロ処理し、４８時間後、細胞を回収し、ＰＩを用いて染色し、フローサイトメーターで細胞周期停止を検出する。図中の結果は代表的な結果であり、ここで、ＭＯＬＭ−１３細胞においては、結果は平均±ＳＥＭ（ｎ＝２）を表し、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３及びＭＶ−４−１１細胞においては、数値は単一ウェルの実験結果である。３つの種類の試験されたＡＭＬ細胞株において、化合物２で処理した群を対照群と比較し、化合物２はＳ期細胞のパーセンテージを用量依存的に減少させる。
【０１６８】
結果は、ＡＭＬ細胞に対する化合物２の成長阻害効果は、細胞周期停止に関連し得ることを示す。化合物２単体は、ＭＯＭＬ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３、及びＭＶ−４−１１細胞株におけるＳ期細胞のパーセンテージを明白に減少させ得る。
【０１６９】
４．４．ＡＭＬ細胞の細胞周期の進行に対する、デシタビン、アザシチジン、又はシタラビンと組み合わせた化合物２の投与の効果
ＭＯＭＬ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３、及びＭＶ−４−１１細胞を、好適な濃度のデシタビン、アザシチジン、又はシタラビンと組み合わせた化合物２（０．０１μＭ又は０．３３μＭ）で処理し、４８時間後、細胞の周期分布もフローサイトメーターで検出する。
【０１７０】
図８は、ＭＯＬＭ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３、及びＭＶ−４−１１細胞を、デシタビン、アザシチジン、又はシタラビン（Ａｒａ−Ｃ）と組み合わせた化合物２で処理して、細胞周期停止の相乗効果は見られないことを示す。ＭＯＬＭ−１３細胞は、０．０５μＭのデシタビン、１μＭのアザシチジン、及び０．０５μＭのシタラビンと組み合わせた０．０１μＭの化合物２で処理し、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３細胞は、１μＭのデシタビン、３μＭのアザシチジン、及び０．３３μＭのシタラビンと組み合わせた０．３３μＭの化合物２で処理し、ＭＶ−４−１１細胞は、０．３３μＭのデシタビン、３μＭのアザシチジン、及び０．３３μＭのシタラビンと組み合わせた０．３３μＭの化合物２で処理する。薬物で４８時間処理した後、細胞を回収してＰＩを用いて染色する。サンプルをフローサイトメーターで検出し、続いて、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアの細胞周期プログラムを用いてデータ分析を実施する。図中の結果は、単一ウェルの実験結果である。
【０１７１】
結果は、ＭＯＭＬ−１３、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３、及びＭＶ−４−１１細胞を、デシタビン、アザシチジン、又はシタラビンと組み合わせた化合物２で処理し、細胞周期停止時に相乗的に改善された効果は生成されないことを示す。これは、デシタビン、アザシチジン、又はシタラビンと組み合わせた化合物２の相乗的な抗増殖活性は、細胞周期停止に関連しない場合があることを示す。
【０１７２】
実施形態５．インビボ薬物有効性評価
全身性ＡＭＬモデルの場合、６〜８週齢の雌のＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスを、シクロホスファミド（１５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で２日間継続的に前処理する。続いて、ＭＯＬＭ−１３全身性ＡＭＬ異種移植モデルを、１×１０7細胞を尾静脈に静脈接種することにより確立する。細胞は３日間成長し、続いてこれを、担体と、化合物２（５０ｍｇ／ｋｇを７日間毎日経口投与する）と、ＡＺＡ（１．５ｍｇ／ｋｇ、７日間毎日静脈注射する）と、を用いた単一薬物又は組み合わせ薬物の治療のためにランダムに群分けする。治療プロセス中、及び治療完了後に、疾患の進行によって生じる後肢不全麻痺（ＨＬＰ）又は腹部膨満、及び＞２０％の体重減少に関してマウスを監視する。
【０１７３】
皮下モデルの場合、６〜８週齢のマウスの腹部の右側部にＯＣＩ−ＡＭＬ−３細胞（１×１０6）を皮下注射する。細胞接種から約１０日後、約１００〜１５０ｍｍ3の平均腫瘍容積を達成した原発腫瘍サイズに基づいてマウスをランダムに群化する。化合物２を、単体、又はＡＺＡ（２ｍｇ／ｋｇ、７日間毎日静脈注射する）若しくはＤＥＣ（１ｍｇ／ｋｇ、７日間毎日静脈注射する）との組み合わせで（５０ｍｇ／ｋｇ、１５日間、１日おきに経口投与する）投与する。腫瘍容量を、毎週２回ノギスを用いて測定し、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ2によってｍｍ3単位で表し、式中、ａ及びｂはそれぞれ腫瘍の長直径及び短直径である。効力の測定のため、以下の式に従いＴ／Ｃ（％）値を計算し：Ｔ／Ｃ（％）＝（ＴRTV／ＣRTV）×１００％；式中、ＴRTVは治療群の相対的腫瘍容量（ＲＴＶ）であり、ＣRTVは対照群のＲＴＶである。ＲＴＶ＝Ｖt／Ｖ1であり；式中、Ｖ1及びＶtは、それぞれ、治療１日目（ｄａｙ  １）の平均腫瘍容積、及び特定の時点（ｄａｙ  ｔ）の平均腫瘍容積である。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）は、以下の式に従い計算する：ＴＧＩ（％）＝１００−Ｔ／Ｃ（％）。
【０１７４】
５．１．ヒトＭＯＬＭ−１３ＡＭＬ細胞のマウス異種移植腫瘍モデルにおける化合物２単体の抗腫瘍効果
インビトロ細胞実験では、ＭＯＬＭ−１３は、化合物２に対して敏感なヒトＡＭＬ細胞株のうちの１つであり、ＩＣ５０値は２６．８±４．９ｎＭである。全身性ＭＯＬＭ−１３マウス異種移植モデルを確立し、投薬量８０ｍｇ／ｋｇの経口（ｐｏ）及び２日間に１回（ｑ２ｄ）投与レジメン後の化合物２の抗白血病効果をモデル中で評価する（表７の５７番レジメンに対応する）。実験は２つの群を有し、各群には１５体の動物があり、１群中で、５体の動物がＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率の分析に用いられ、残る１０体の動物がマウスの生存状態の記録に用いられる。細胞接種から１８日後、実験レジメンに従い、各群から５体の動物をランダムに選択し、骨髄及び脾臓を回収し、フローサイトメトリを用いて骨髄及び脾臓中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率を分析して動物の疾患負荷を評価する。
【０１７５】
図９Ａ及び図９Ｂに示すように、化合物２は、ヒト由来ＭＯＬＭ−１３ＡＭＬマウス異種移植腫瘍のマウス骨髄及び脾臓中のヒトＣＤ４５＋細胞の比率を有意に減少させる。図９Ａは骨髄中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞のフロー分析図であり、図９Ｂは脾臓中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞のフロー分析図であり、図９Ｃ及び９Ｄは骨髄及び脾臓中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率のサマリ分析チャートである。図中では、ＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率は、全ての生細胞を計上する比率であり、マン・ホイットニーＵ検定法により統計的に分析される。ビヒクル群においては、ヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率を分析する日に、＞２０％の生存条件を記録するための１体のマウスの体重減少が人道的エンドポイントに達するため、動物を安楽死させ、ヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率を分析するための骨髄及び脾臓を回収し、示されるように、ビヒクル群はｎ＝６であり、化合物２群はｎ＝５である。
【０１７６】
結果は、ビヒクル対照群においては、ヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率は、群内で比較的大きな個体差を有し、ここで骨髄中のＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率は０．４１％〜１６．７％であり、脾臓中の比率は０．３９％〜１．４０％であることを示す。しかしながら、化合物２の投与群においては、実験動物の骨髄及び脾臓中のヒトＣＤ４５＋ＡＭＬ細胞の比率は全て０．１％未満であり、また、２つのデータ群を比較すると、これらは統計的に有意な差を有する。上記のデータは、化合物２がマウスの白血病負荷を有意に低減させ得ることを示す。
【０１７７】
生存分析は、図１０に示すように、Ｐ＜０．０００１であることを示し、化合物２又はビヒクルの投与は、ＭＯＬＭ−１３細胞接種後３日目に開始する（ｎ＝１０）。ログランク検定を使用して、２つの動物群の生存曲線を分析及び比較する。投与治療の開始後１５日目に、ビヒクル対照群中の動物が死亡し始め、２１日目には全ての動物が死亡した。表２に示すように、ビヒクル対照群中の動物の生存期間中央値は１８．５日であり、化合物２の治療（８０ｍｇ／ｋｇ）により生存期間中央値を１８．５日延長して（１００％延長）、３７．０日を達成することができる。
【０１７８】
確立したＭＯＬＭ−１３は散在性の全身系腫瘍であるため、その悪性度及び疾患進行の両方が比較的危険である。結果は、化合物２はヒトＭＯＬＭ−１３（ＡＭＬ）異種移植腫瘍を有するマウスの生存期間を有意に延長し、化合物２は、ヒトＭＯＬＭ−１３（ＡＭＬ）異種移植腫瘍を有するマウスの中央生存期間を有意に延長し、化合物２は単一の薬物として有意な抗ＡＭＬ効果を有することを示す。
【０１７９】
【表２】
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【０１８０】
５．２．ジメチルベンゾアントラセン誘導性ラット骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）モデルにおける化合物２単体の抗ＭＤＳ効果
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）は、造血幹細胞から誘導される異種性の骨髄クローン性疾患であり、これは、無効造血、難治性血球減少、造血不全、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に形質転換する高いリスクとして示される、骨髄性細胞の分化及び発育異常を特徴とする。化合物２単体のインビボ抗腫瘍効果を評価するためには複数のヒト由来のラットＭＤＳモデルを使用する。表３は、ジメチルベンゾアントラセン誘導ラット骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）モデルにおける抗腫瘍効果を示し、化合物２は、経口（ｐｏ）且つ２日間に１回（ｑ２ｄ）レジメンに従い投与される。
【０１８１】
【表３】
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【０１８２】
ラット骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）モデルは、化学的突然変異誘発物質のジメチルベンゾアントラセン（ＤＭＢＡ）を用いて構築される。ラットＭＤＳモデルにおいて、骨髄像及び血液像の変化は、ヒト骨髄異形成症候群のそれと同様であり、これは薬物の抗ＭＤＳ効果研究に用いることが可能であることが確認される。ＤＭＢＡは５０ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される。ラットＭＤＳモデルを確立するために合計４週間にわたり１週間に１回のレジメンに従うこと。ＤＭＢＡ投与の終了から１週間後（２８日目）に、定期血液検査のために尾静脈から末梢血を採取して、モデルが成功裏に確立されたか否かを判定する。
【０１８３】
定期血液検査の結果は、ＤＭＢＡ治療を受けたラットの総血小板数算定（ＰＬＴ）、赤血球数算定（ＲＢＣ）、網状赤血球数（ＲＥＴ）、ヘモグロビン（ＨＧＢ）、及び総白血球数算定（ＷＢＣＢ）の全てが、正常な動物のそれと比較して有意に減少したことを示す。動物を、２８日目のＰＬＴレベルに基づいてランダムにグループ分けし、ここでビヒクル対照群（ビヒクル）、化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）及び化合物２（３０ｍｇ／ｋｇ）の２つの投薬量群（表３の２３番レジメンに相当する）、並びに健康対照群（未処置）が完全に準備され、各群は５体の動物を有する。
【０１８４】
図１１Ａに示すように、グループ分け及び治療前にＤＭＢＡによって誘発されたラットにおいて末梢血ＰＬＴ及びＷＢＣレベルが有意に低下したＭＤＳ。ＤＭＢＡ投与後、動物をＰＬＴレベルに基づいてランダムにグループ分けし、ビヒクル対照群及び化合物２の２つの投薬量群のＰＬＴ及びＷＢＣＢレベルは同程度であるが、どちらも健康対照群（ｐ＜０．０００１）のそれよりも低い。ビヒクル対照群及び化合物２の２つの投薬量群のＲＢＣレベルは、健康対照群のそれと比較してわずかに減少するが、これらは統計的に有意な差を有さない。
【０１８５】
化合物２は、１０ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇの、ｐ．ｏ．、ｑ２ｄ×２１日レジメンに従って投与される。投与後、定期血液分析用の動物の各群からの末梢血及び骨髄細胞。末梢血の定期血液分析、図１１Ｂに示す通りの結果、化合物２単体はＭＤＳラットの末梢血のＰＬＴ、ＷＢＣＢ、及びＲＢＣレベルに対して明白な効果を有さない。
【０１８６】
しかしながら、定期骨髄分析、図１１Ｃに示す通りの結果、化合物２単体はＭＤＳラットの骨髄のＰＬＴ、ＷＢＣＢ、及びＲＢＣレベルを有意に回復させることができる。特に、健康対照ラットの骨髄の平均ＰＬＴ値は１６８±１６．４４（細胞／μＬ）であり、ＭＤＳモデル群中のラットの骨髄の平均ＰＬＴ値は５２±２．４９（細胞／μＬ）であり、これは、健康対照群（ｐ＜０．００１）のそれと比較して統計的に有意な差を有する。しかしながら、化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）及び化合物２（３０ｍｇ／ｋｇ）の治療を受けたラットの骨髄のＰＬＴレベルは全て上昇し、平均値は、１１６±９．３５（細胞／μＬ、ＭＤＳモデル群と比較して（Ｐ＞０．０５））、及び１２４．２±２３．８（細胞／μＬ、ＭＤＳモデル群と比較して、Ｐ＜０．０５）である。
【０１８７】
別の態様では、定期骨髄分析の結果では、対照群のラットの平均ＷＢＣＢ値は９０．４２±９．６５（細胞／μＬ）であり、ＭＤＳモデル群のラットの骨髄の平均ＷＢＣＢ値は１６．８９±２．７５（細胞／μＬ）であり、これは、健康対照群のラットのそれと比較して統計的に有意な差を有する（Ｐ＜０．００１）。化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）及び化合物２（３０ｍｇ／ｋｇ）の治療を受けたラットの骨髄のＷＢＣＢレベルは全て上昇し、平均値は、４７．５±１０．１３（細胞／μＬ、ビヒクル対照群と比較して、Ｐ＞０．０５）及び６２．５３±１３．０８（細胞／μＬ、ＭＤＳモデル群と比較して、Ｐ＜０．０５）である。
【０１８８】
更に、健康対照群のラットの平均ＲＢＣ値は０．１９±０．０２（細胞／μＬ）であり、ＭＤＳモデル群のラットの骨髄の平均ＲＢＣ値は０．０４±０．０１（細胞／μＬ）であり、これは、健康対照群のラットのそれと比較して統計的に有意な差を有する（Ｐ＜０．００１）。化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）及び（３０ｍｇ／ｋｇ）の治療を受けたラットの骨髄のＲＢＣレベルは全て上昇し、平均値は、０．１０±０．０１である（細胞／μＬ、ＭＤＳモデル群と比較して（Ｐ＜０．０５））、及び０．０８±０．０２（細胞／μＬ、ビヒクル対照群と比較して（Ｐ＞０．０５））。
【０１８９】
インビトロＭＤＳの結果は、ＭＤＳモデル群の動物の投与後、ＰＬＴ、ＷＢＣＢ、及びＲＢＣレベルが健康対照群の動物のそれと比較され、全て有意に減少することを示し、更に、検出された時点で、実験動物は依然としてＭＤＳ血液学的変化を有することを示す。化合物２の投与は、ＭＤＳ骨髄のＰＬＴ、ＷＢＣＢ、及びＲＢＣレベルを有意に回復させることができる。
【０１９０】
５．３．ヒトＭＯＬＭ−１３ＡＭＬのマウス異種移植腫瘍モデルにおけるアザシチジンと組み合わせた化合物２の抗腫瘍効果
インビトロ実験において、ＭＯＬＭ−１３細胞株のＴＰ５３野生型は、化合物２に対して中程度に敏感である。全身腫瘍モデルを、尾静脈を介してＭＯＬＭ−１３腫瘍細胞を接種することにより確立し、投与は細胞接種後３日目で開始し、投与日を１日目と定義する。化合物２を、３０ｍｇ／ｋｇ、ｑ２ｄレジメンに従って２１日間投与する。アザシチジンを、１．５ｍｇ／ｋｇ、ｑｄレジメンに従って７日間投与する（表７の８１番レジメンに相当する）。
【０１９１】
図１２に示すように、化合物２又はビヒクルの投与は、ＭＯＬＭ−１３細胞接種後３日目に開始する（ｎ＝１５）。ログランク検定を使用して、２つの動物群の生存曲線を分析及び比較する。結果をボンフェローニ多重検定により補正する（Ｐ＜０．０５）。表４を参照すると、ビヒクル対照群のマウスは１５日目に死亡を開始し（細胞接種後１７日）、２０日目には全てのマウスが死亡し、生存期間中央値は１６日である。化合物２投与群の動物の中央生存期間は２４日である（ビヒクル対照群と比較して（Ｐ＜０．０１））。アザシチジン単体もまた、マウスの生存を有意に延長させることができ、中央生存期間は２４日である（ビヒクル対照群と比較して（Ｐ＜０．０１））。アザシチジンと組み合わせた化合物２の群は、マウスの生存期間を更に延長することができ、中央生存期間は３０日に達する（ビヒクル対照群、化合物２単体の群、及びアザシチジンの群と比較して（全てＰ値は＜０．０１））。
【０１９２】
【表４】
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【０１９３】
結果は、経口投与レジメンにおいて、ＭＯＬＭ−１３ヒトＡＭＬ細胞のマウス異種移植腫瘍に対する化合物２単体の腫瘍成長阻害効果は有意であることを示す。良好な耐容性を示す投薬量では、化合物２とアザシチジンとの組み合わせ治療は、ヒトＭＯＬＭ−１３（ＡＭＬ）異種移植腫瘍を有するマウスの生存期間を有意に延長させることができ、ＭＯＬＭ−１３全身腫瘍モデルにおいては、これはマウスの生存期間を有意に延長させる。
【０１９４】
５．４．ヒトＯＣＩ−ＡＭＬ−３ＡＭＬのマウス異種移植腫瘍モデルにおけるアザシチジン又はデシタビンとの組み合わせでの化合物２の抗腫瘍効果
インビトロ細胞実験において、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３は、化合物２の治療に対して比較的敏感なヒトＡＭＬ細胞株であり、ＩＣ５０値は３１５．６±９７ｎＭである。アザシチジン又はデシタビンとの組み合わせでの化合物２の抗ＡＭＬ効果を評価するために、ＯＣＩ−ＡＭＬ−３細胞を用いてマウス異種移植腫瘍モデルを確立する。
【０１９５】
図１３Ａ及び表５に示すように、モデルにおいては、化合物２を、５０ｍｇ／ｋｇ投薬量、経口、ｑ２ｄ×１５日間レジメンに従って投与し、これは腫瘍成長を阻害することができず、Ｔ／Ｃ値は８４．８％である（Ｐ＞０．０５）。アザシチジンを、２ｍｇ／ｋｇ、尾静脈注射、ｑｄ×７日間、薬物退薬７日間、続いてｑｄ×２日間のレジメン（表７の６８番レジメンに相当する）に従い、７日間にわたって投与する。実験の終了時（１５日目）、これらは全て有意な抗腫瘍活性を示さず、Ｔ／Ｃ値は５６．６％である（Ｐ＞０．０５）。アザシチジン（２ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせでの化合物２（５０ｍｇ／ｋｇ）は明白な改善された抗腫瘍効果を示し、Ｔ／Ｃ値は４３．４％であり、相乗因子は１．１１である。結果は、組み合わせ投与は相乗効果を有することを示す。
【０１９６】
【表５】
2022501394.tif 000041
【０１９７】
図１４Ａ及び表６に示すように、デシタビン（１ｍｇ／ｋｇ）を、尾静脈注射、ｑｄ×７ｄ、薬物退薬７日間、続いてｑｄ×２日間レジメンに従って投与する。実験の終了時（１５日目）、これも明白な抗腫瘍活性を示さず、Ｔ／Ｃ値は６４．９％である（Ｐ＞０．０５）。しかしながら、デシタビン（１ｍｇ／ｋｇ）との組み合わせでの化合物２（５０ｍｇ／ｋｇ）は明白な改善された抗腫瘍効果を示し、投与から１５日後で、Ｔ／Ｃ値は４４．９％である。相乗分析は、２つの薬物の組み合わせ投与は相乗効果を有し、相乗因子は１．２２であることを示す。
【０１９８】
結果は、アザシチジン又はデシタビンと組み合わせでの化合物２は、ＲＴＶ値、Ｔ／Ｃ値、及び相乗因子の観点からすると、単体で用いられるアザシチジン（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅａｎｒ）及びデシタビンよりも優れていることを示す。各治療群で有意な体重減少は観察されない。
【０１９９】
【表６】
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【０２００】
５．５．ヒト由来ＭＯＬＭ−１３及びＯＣＩ−ＡＭＬ−３ＡＭＬマウス異種移植腫瘍モデルにおける、単体又は組み合わせでの化合物２のインビボ抗腫瘍効果
新規診断及び進行ＡＭＬ患者においてアザシチジン及びデシタビンの両方の奏効率は比較的低い。完全寛解及び血球数回復が不完全な完全寛解の総合的奏効率は、一般に２０％〜３０％である（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。ＡＺＡ及びＤＥＣ治療を継続的に受ける場合であっても、全ての患者が再発疾患を発症する。化合物２の単体又は組み合わせでのインビボ抗腫瘍効果を評価するために、複数のヒト由来ＡＭＬ癌細胞のマウス異種移植腫瘍モデルを用いる。表７は、ヒト由来ＡＭＬ癌細胞のマウス異種移植腫瘍モデルの抗腫瘍効果を示し、化合物２は、経口（ｐｏ）且つ２日間に１回（ｑ２ｄ）レジメンに従い投与する。
【０２０１】
図１５に示すように、２０ｍｇ／ｋｇの化合物２単体を用いた治療は、野生型ＴＰ５３を発現するＭＯＬＭ−１３全身ＡＭＬ異種移植片の生存を有意に延長させる。細胞移植から３日後に１×１０7のＭＯＬＭ−１３細胞（ｎ＝１０／群）を移植したＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスを、担体、２０ｍｇ／ｋｇ（経口投与、２１日の間１日おきに）、５０ｍｇ／ｋｇ（経口投与、７日の間１日１回）、又は１００ｍｇ／ｋｇ（経口投与、７日の間１日１回）の化合物２で処理する。データは、カプラン・マイヤー曲線を描くマウスの生存率として示す。ボンフェローニ多重検定を用いた対数順位検定を、生存曲線の比較に使用した（＊Ｐ＜０．０５）。
【０２０２】
【表７】
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【０２０３】
図１６に示すように、化合物２はＡＭＬ異種移植モデルにおけるＡＺＡ又はＤＥＣのインビボ抗白血病活性を強化する。
（Ａ）細胞移植から３日後に１×１０7のＭＯＬＭ−１３細胞（ｎ＝１５／群）を移植したＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスを、担体、５０ｍｇ／ｋｇの化合物２（７日の間毎日ＰＯ）、及び２ｍｇ／ｋｇのＡＺＡ（７日の間毎日）の単体又は組み合わせで処理する。データは、カプラン・マイヤー曲線を描くマウスの生存率として示す。生存比較にはボンフェローニ多重比較を用いた対数順位を使用する。＊Ｐ＜０．０５。
（Ｂ）皮下ＯＣＩ−ＡＭＬ−３腫瘍を有するＮＯＤ  ＳＣＩＤマウスを、５０ｍｇ／ｋｇの化合物２（１５日の間、１日おきのＰＯ）、２ｍｇ／ｋｇのＡＺＡ（７日の間、毎日のＩＶ）、及び１ｍｇ／ｋｇのＤＥＣ（７日の間毎日のＩＶ）の単体又は組み合わせで処理し、腫瘍成長阻害（ＴＧＩ）を求める。
【０２０４】
上記の結果は、ヒトＭＯＬＭ−１３ＡＭＬのマウス全身異種移植腫瘍モデルにおいては、化合物２は有意な腫瘍成長阻害効果を示し、ジメチルベンゾアントラセン誘導ラット骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）モデルにおいて、これは有意な抗ＭＤＳ効果を示すことを示す。組み合わせ投与の場合、ヒトＭＯＬＭ−１３ＡＭＬのマウス全身異種移植腫瘍モデル、及びヒトＯＣＩ−ＡＭＬ−３ＡＭＬのマウス皮下異種移植腫瘍モデルにおいては、その他の抗癌剤との組み合わせでの化合物２は、これらの各々の単体で得ることができるものよりもより良好な抗腫瘍効果を得て、相乗効果を達成することができる。単一の薬物及び組み合わせ投与の研究においては、腫瘍を有する動物は、上記の治療に対して良好な耐性を有し、化合物２は、単一の薬物として、又は他の治療薬との組み合わせでＡＭＬ及びＭＤＳの診療室治療に用いられ得ることを示す。
【０２０５】
この研究では、単一の薬物として、又は他の治療薬との組み合わせで、最も効果的なＭＤＭ２阻害剤のうちの１つ（化合物２）を、ＡＭＬ細胞株及び異種移植片中で試験する。インビトロ実験は、化合物２は、ＴＰ５３野生型ＡＭＬ細胞株に対して効果的な抗増殖活性を有することを実証する。抗増殖活性は、ＴＰ５３野生型及びＦＬＴ３−ＩＴＤ変異型ＡＭＬ細胞において特に有意である。組み合わせ治療においては、化合物２は、その他の治療薬（脱メチル化薬（アザシチジン及びデシタビン）及び化学療法剤シタラビンを含む）の抗増殖活性を強化する。ヒトＭＯＬＭ−１３全身異種移植片においては、化合物２単体の治療が腫瘍成長を有意に阻害し、最小有効投薬量は２０ｍｇ／ｋｇである。より高い投薬量の化合物２（８０ｍｇ／ｋｇ）は、より強力な抗腫瘍活性を達成する。化合物２を、（１）皮下ＯＣＩ−ＡＭＬ−３及び全身ＭＯＬＭ−１３モデルにおいてアザシチジン；（２）皮下ＯＣＩ−ＡＭＬ−３モデルにおいてデシタビンとの組み合わせで使用する場合、強化された抗白血病活性を記録する。
【０２０６】
とりわけ、ＡＭＬは複雑な核型を有する異質性の高い疾患である。この疾患において、ＦＬＴ３及びＮＰＭ１は最も一般的な突然変異遺伝子である。新たに発生したＡＭＬの場合、ＦＬＴ３及びＮＰＭ１の突然変異頻度は、それぞれ最大２８％及び２７％である。上述したように、単一の薬物としての化合物２は、インビトロ及びインビボで、ＦＬＴ３−ＩＴＤ変異を有するＡＭＬ細胞において効果的な抗白血病活性を有する。ＦＬＴ３−ＩＴＤ変異を有するＭＯＬＭ−１３ＡＭＬ全身異種移植モデルにおいては、化合物２単体が有意に疾患負荷を緩和し、且つマウスの生存を延長させることができる。単一の薬物と比較して、化合物２とアザシチジン又はＦＬＴ３阻害剤との組み合わせ治療は、より強力な抗ＡＭＬ活性を達成する。ＮＰＭ１変異を有するＯＣＩ−ＡＭＬ−３ＡＭＬ異種移植モデルにおいては、化合物２並びに脱メチル化薬（アザシチジン及びデシタビン）及び従来の化学療法薬シタラビン（Ａｒａ）の組み合わせ治療は、相乗的な抗ＡＭＬ効果を生成する。これらの結果は、化合物２がＦＬＴ３及びＮＰＭ１変異を示すＡＭＬにおける広範な応用可能性を有することを示す。
【０２０７】
実施形態６．化合物２の単体及びアザシチジン又はシタラビンとの組み合わせでの用量増加の第一相臨床試験
この試験の目的は、成人の再発性又は難治性急性骨髄性白血病（Ｒ／Ｒ  ＡＭＬ）及び再発性又は難治性高リスク／超高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）などの血液腫瘍を有する患者における、化合物２の単体及びアザシチジン又はシタラビンとの組み合わせでの安全性及び耐性を判定することである。
【０２０８】
実験薬物、投薬量、及び投与方法
化合物２の実験薬物はカプセル状であり、各カプセルは２５ｍｇ又は５０ｍｇの化合物２を含有し、唯一の賦形剤は微結晶セルロースである。実験薬物の化合物２は、日光を避けて２〜８℃の密封した貯蔵庫中にあるべきである。
【０２０９】
化合物２の投薬量は標準３＋３レジメンに従って増加し、ここで初期投薬量は１５０ｍｇであり、続いて２００ｍｇ、２５０ｍｇ、及び３００ｍｇへと規則的に増加し、経口で１日１回（ＱＤ）摂取され、各サイクルの１日目で使用を開始され、７日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、各２８日が投与サイクルである。
【０２１０】
化合物２単体の用量増加の第１段階が完了すると、第２段階、すなわち化合物２の用量増加との組み合わせ投与を開始してもよい。組み合わせ投与レジメンにおいて、化合物２の投薬量は１００ｍｇから開始し、続いて１５０ｍｇ及び２００ｍｇへと規則的に増加する。アザシチジンは、１日１回の皮下注射による７５ｍｇ／ｍ2の固定投薬量であり、各サイクルの１日目で使用を開始され、７日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、各２８日が投与サイクルである。シタラビンは、皮下注射による１ｇ／ｍ2の固定投薬量であり、静脈内注入時間は４時間以上、１日１回であり、各サイクルの３日目で使用を開始され、５日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、各２８日が投与サイクルである。アザシチジン又はシタラビンは、化合物２の経口投与から４時間後に投与される。２つの薬物の組み合わせ治療後、休憩期間に入る。
【０２１１】
実施形態７．ＤＥＣ、ＡＺＡ、又はＡｒａ−Ｃと組み合わせた化合物２によるＡＭＬ細胞の治療、Ｐ５３経路の相乗的活性化、並びに細胞周期の進行及びミスマッチ修復を伴う遺伝子の下方制御
ＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃとの組み合わせでの化合物２の潜在的作用機序を発見するために、ＲＮＡ配列分析のため、化合物２、ＡＺＡ、又はＡｒａ−Ｃの単体又は組み合わせで２４時間治療したＭＯＬＭ−１３細胞を用いる。差次的遺伝子発現分析は、ＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃと組み合わせた化合物２による治療の差次的遺伝子発現量は、ＤＭＳＯ対照と最も比較されることを示す（図１７Ａ〜Ｂ）。ＫＥＧＧシグナリング経路分析は、ＡＺＡと組み合わせて化合物２を用いることで、Ｐ５３シグナリング経路中の関連遺伝子の上方制御、並びにＤＮＡ複製、ミスマッチ修復、及び細胞周期の進行に関連する遺伝子の下方制御がもたらされることを示す（図１７Ｃ）。化合物２とＡｒａ−Ｃとの組み合わせにより、Ｐ５３シグナリング経路中の関連遺伝子の上方制御、及び細胞周期に関連する細胞の下方制御がもたらされる（図１７Ｄ）。Ｐ５３関連経路を相乗的に上方制御する化合物２及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃを考慮し、Ｐ５３制御遺伝子の差次的発現を更に分析する。ヒートマップの結果は、化合物２は、インビトロでＭＯＬＭ−１３細胞中のＰ５３標的遺伝子の有意な上方制御を誘起し得ることを示す。一般に、これら２つの組み合わせでの誘起効果は、２つの薬物の単独でよりも明らかに優れている（図１７Ｅ〜Ｆ）。これらは、Ｐ５３活性化マーカーのＧＤＦ１５（ＭＩＣ−１としても知られる）、プロアポトーシス遺伝子のＢＢＣ３（ＰＵＭＡをコードする）、ＭＤＭ２、ＢＡＸ、及びＦＡＳ、並びに、細胞周期の進行に関連する陰性制御因子のＣＤＫＮ１Ａ（Ｐ２１をコードする）及びＧＡＤＤ４５を含む。同様に、化合物２とＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃとの組み合わせでの治療の後で、ＳＥＳＮ１及びＳＥＳＮ２の両方が上昇し、２つの両方がＭＴＯＲＣ１の陰性制御因子である。ＣＤＣ２０、ＣＣＮＢ１、及びＰＬＫ１を含んだ後の、組み合わせ治療後に、細胞周期の進行を伴う腫瘍性タンパク質をコードする遺伝子は、有意に下方制御される。ＭＣＭ４及びＭＣＭ２などのＤＮＡ複製を伴う遺伝子でも同様の効果が観察される。化合物２とＡｒａ−Ｃとの組み合わせ治療において、Ｐ５３制御遺伝子の増加のレベルはより有意である。これらのデータは、ＤＥＣ、ＡＺＡ、又はＡｒａ−Ｃと組み合わせた化合物２による治療が、相乗的にＰ５３経路を活性化させ、且つ細胞周期の進行及びミスマッチ修復を伴う遺伝子を下方制御し得ることを示す。
【０２１２】
図１７に示すように、（Ａ〜Ｂ）チャートは、化合物２及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃの単体又は組み合わせの影響を２４時間受けた後で、差次的に発現する遺伝子の数が統計的に有意であることを示す。（Ｃ〜Ｄ）化合物２及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃの組み合わせで処理した後の、最も有意に変化したシグナリング経路。（Ｅ〜Ｆ）ＭＯＬＭ−１３細胞において、化合物２及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃの単体又は組み合わせに関する、いくつかのＰ５３制御遺伝子の変化。
【０２１３】
実施形態８．ＡＭＬ細胞を化合物２及びＤＥＣ、ＡＺＡ、又はＡｒａ−Ｃの組み合わせで処理すると、ＤＮＡ損傷を誘起することができ、また、Ｐ２１の発現が相乗的に上方制御される
したがって、これらの特定されたシグナリング経路を伴うタンパク質変化を評価する。図１８Ａ〜Ｃに示すように、組み合わせ治療は、ＤＮＡ損傷を有意に増加させることができ、これはγ−Ｈ２ＡＸの発現量によって実証される。上述したように、化合物２がＰ５３を活性化させた後、これはＰ５３及びＰ２１の蓄積を更に誘起する。ＤＥＣ及びＡＺＡは、メチルトランスフェラーゼＩ（ＤＮＭＴ１）の機能を阻害することにより細胞中で低いＤＮＡメチル化を誘起する低メチル化薬である。多くの研究が、ＤＮＭＴ１は腫瘍細胞中でＵＨＲＦ１及びＨＤＡＣ１タンパク質と複合体を形成し、これは様々な癌遺伝子（Ｐ１６ＩＮＫ４Ａ、Ｐ１４ＡＲＦ、及びＰ２１などの）プロモーターと結合してその発現を阻害し、腫瘍成長を促進することを示す。シタラビンは、ＤＮＡ損傷を誘起し、ＡＴＭ／ＡＴＲ−Ｐ５３−Ｐ２１シグナルのカスケードを更に活性化させ、細胞中のＤＮＡ合成を阻害し、細胞増殖を妨害する、ピリミジンヌクレオシド類似体である。
【０２１４】
上記の証拠に基づき、低メチル化薬ＤＥＣ及びＡＺＡ又はＡｒａ−Ｃと組み合わせた化合物２による治療の、Ｐ５３、脱メチル化マーカータンパク質ＤＮＭＴ１、及び共通の標的タンパク質Ｐ２１に対する制御効果、並びにアポトーシスマーカータンパク質の溶菌性ＰＡＲＰ−１（ｌｙｔｉｃ  ＰＡＲＰ−１）の発現を更に検出する。予想と一致して、野生型ＴＰ５３を発現する癌細胞を化合物２で治療すると、Ｐ５３は安定化し、Ｐ５３経路は活性化され、Ｐ５３及びＰ２１の蓄積がもたらされる。ＡＺＡ又はＤＥＣによる治療は、ＤＮＭＴ１をほぼ完全に除去する。Ａｒａ−Ｃ単体は、Ｐ２１に対して有意な上方制御効果を有する。最も重要なことに、単一の薬物による治療と比較して、化合物２とＤＥＣ、ＡＺＡ、又はＡｒａ−Ｃとの組み合わせでの治療は、Ｐ２１タンパク質を相乗的に上方制御することができる（図１６Ｄ〜Ｆ）。更に、化合物２はＤＥＣ、ＡＺＡ、又はＡｒａ−Ｃと相乗的に効果を発揮し、アポトーシスマーカー、すなわちＰＡＲＰ−１溶菌（ＰＡＲＰ−１  ｌｙｓｉｓ）の生成を誘起する（図１８Ｄ〜Ｆ）。ＲＧ−７３８８は本実験の対照として導入する。Ｐ５３及びＰ２１に対するその効果は、化合物２と同様である。ＤＥＣ、ＡＺＡ、及びＡｒａ−Ｃと組み合わせたＲＧ−７３８８もまた、Ｐ５３及びＰ２１の発現を有意に上方制御し、ＰＡＲＰ−１溶菌の生成を更に誘起することができる（図１８Ｄ〜Ｆ）。潜在的作用機序を図１８に示す。手短に言えば、化合物２はＭＤＭ２−Ｐ５３と相互作用する小分子阻害剤である。これは、ＭＤＭ２タンパク質と結合することにより、Ｐ５３に対するＭＤＭ２の阻害効果を排除し、Ｐ５３の抗癌機能を回復させる。化合物２はＰ５３の抗癌機能を回復させ、Ｐ２１の発現を更に誘起することができる。ＤＥＣ、ＡＺＡ、及びＡｒａ−Ｃは、γ−Ｈ２ＡＸの発現増加を誘起し、これはＤＮＡ損傷が増加したことを示す。ＤＮＡ損傷は、更にＰ５３及びＰ２１を活性化させる。更に、ＡＺＡ又はＤＥＣによる治療は、Ｐ２１上のＤＮＭＴ１−ＵＨＲＦ１−ＨＤＡＣ１複合体の阻害を予防し、化合物２によるＰ２１の発現を更に相乗的に誘起することができる。Ａｒａ−Ｃ治療もまた、Ｐ５３−Ｐ２１経路を活性化させて、Ｐ２１タンパク質の発現を更に相乗的に誘起する。
【０２１５】
図１８に示すように、（Ａ〜Ｂ）ＤＥＣ（１００ｎＭ）及びＡＺＡ（０．３３μＭ）で２４時間処理し、続いて新たなＤＥＣ（１００ｎＭ）、ＡＺＡ（０．３３μＭ）、及び化合物２（４０ｎＭ）の単体又は組み合わせで更に２４時間処理した後の、ＭＯＬＭ−１３細胞中のタンパク質の発現。（Ｃ）Ａｒａ−Ｃ（１００ｎＭ）又は化合物２（４０ｎＭ）の単体又は組み合わせで４８時間処理した後の、ＭＯＬＭ−１３細胞中のタンパク質の発現。（Ｄ〜Ｆ）示されるように、化合物２（４０ｎＭ）、ＲＧ−７３８８（４０ｎＭ）、ＤＥＣ（１００ｎＭ）、ＡＺＡ（３μＭ）、及びＡｒａ−Ｃの単体又は組み合わせで４８時間処理した後の、ＭＯＬＭ−１３細胞中のタンパク質の発現。投入されるタンパク質が同じであることを確認するためにβ−アクチンを使用する。（Ｇ）提案される化合物２及びＤＥＣ、ＡＺＡ、又はＡｒａ−Ｃの組み合わせの、ＡＭＬ細胞に対する作用機序。この結果は、３つの独立した結果を表す。ＲＧ−７３８８は対照として用いられ、β−アクチンは、投入されるタンパク質が同じであることを確認するために用いられる。
【０２１６】
結論としては、データは、組み合わせ治療においては観察されるＰ２１の誘起は強力であり、これは相乗的な抗増殖活性の効果に少なくとも部分的に由来しており、ＡＺＡ、ＤＥＣ、又はＡｒａ−Ｃと組み合わせた化合物２で治療した後では、全てがアポトーシスの誘起を増加させ得ることを強く示す。
【０２１７】
実施形態９．ＢＡＬＢ／ｃ免疫欠損マウスの皮下Ａ３７５皮膚メラノーマ異種移植モデルにおける化合物２とダブラフェニブ及びトラメチニブとの組み合わせのインビボ有効性研究
皮下Ａ３７５皮膚メラノーマ異種移植モデルにおける単一の薬物としての化合物２、並びに化合物２とダブラフェニブ及びトラメチニブとの組み合わせの治療効果を評価するためにインビボ研究を実施した。実験の設計を表８に示す。
【０２１８】
【表８】
2022501394.tif 000044
【０２１９】
ヒトＡ３７５細胞株をＣｏｂｉｏｅｒから購入した。細胞株は遺伝認証されており、また微生物汚染を有さない。Ａ３７５細胞を、１０％のウシ胎児血清（カタログ番号１００９９−１４１Ｃ、ＧＩＢＣＯ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリンＧ、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（カタログ番号１５１４０−１２２、ＧＩＢＣＯ）を追加したＤＭＥＭ（カタログ番号Ｃ１１９９５５００ＢＴ、ＧＩＢＣＯ）中で培養した。細胞を、５％のＣＯ2を含む加湿したインキュベーター中、３７℃でインキュベートした。
【０２２０】
乳鉢中で化合物２を０．２％ＨＰＭＣに懸濁させることによって、化合物２を均質懸濁液にした。懸濁液を１週間に１回調製し、４℃で貯蔵した。使用前に製剤を室温にしてから十分に混合した。化合物２を経口胃管栄養法（ＰＯ）により１０ｍＬ／ｋｇの用量で投与した。ダブラフェニブをＳｅｌｌｅｃｋから購入した。超音波を用いてダブラフェニブを０．５％ＨＰＭＣ中に懸濁させ、均質懸濁液を調製した。懸濁液を１週間に１回調製し、４℃で貯蔵した。ダブラフェニブを経口胃管栄養法（ＰＯ）により１０ｍＬ／ｋｇの用量で投与した。トラメチニブをＳｅｌｌｅｃｋから購入した。１％のＣＭＣ、０．５％のＴｗｅｅｎ８０、及び０．５％のＭＣ中に懸濁させることによって透明の溶液を得、トラメチニブを均質懸濁液にした。溶液を３日ごとに調製し、４℃で貯蔵した。トラメチニブを経口胃管栄養法（ＰＯ）により１０ｍＬ／ｋｇの用量で投与した。
【０２２１】
６〜８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを本研究に使用した。接種した動物の数は５５体であり、証明書番号は２０２００３０６６であり、ライセンス番号はＳＣＸＫ（Ｓｕ）２０１８−０００８であり、動物の供給者はＧｅｍＰｈａｒｍａｔｅｃｈ  Ｃｏ，Ｌｔｄであった。
【０２２２】
結果を図１９及び表９に示す。７日間にわたり毎日５０ｍｇ／ｋｇで投与された単剤としての化合物２は、効果的な抗腫瘍活性を発揮し、Ｔ／Ｃ値は５８．２５％であった。３週間にわたり毎日投与された３０ｍｇ／ｋｇのダブラフェニブと１ｍｇ／ｋｇのトラメチニブとの組み合わせは、有意な抗腫瘍活性を示し、Ｔ／Ｃ値は１１．７８％であった（ビヒクル対照と比較してｐ＜０．００１）。化合物２をダブラフェニブとトラメチニブとの組み合わせに添加することは、有意に強化された抗腫瘍活性を示し、Ｔ／Ｃ値は０．７５％に達した（ビヒクル対照と比較してｐ＜０．０１、化合物２群と比較してｐ＜０．０５）。対応する相乗効果比は９．１０であり、これは相乗的な抗腫瘍効果を示す。重要なことには、ダブラフェニブ及びトラメチニブと組み合わせた化合物２で治療した群において、動物は研究期間中に１００％の客観的奏効率を達成し、ＣＲは２／５、ＰＲは３／５であった。
【０２２３】
図１９及び表９の結果は、化合物２とダブラフェニブ及びトラメチニブとの組み合わせは、皮膚メラノーマ異種移植モデルにおいて相乗的抗腫瘍活性を発揮することを示し、これは、皮膚メラノーマの治療におけるこの組み合わせの治療応用の可能性を示す。
【０２２４】
【表９】
2022501394.tif 000045
【０２２５】
実施形態１０．ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの皮下ＭＣＦ−７ＥＲ+乳癌異種移植モデルにおける化合物２とフルベストラント及びアルペリシブとの組み合わせのインビボ有効性研究。皮下ＭＣＦ−７ＥＲ+乳癌異種移植モデルにおける化合物２とフルベストラント及びアルペリシブとの組み合わせの治療効果を評価するために、インビボ研究を実施した。実験の設計を表１０に示す。
【０２２６】
【表１０】
2022501394.tif 000046
【０２２７】
ヒトＭＣＦ−７細胞株をＣｏｂｉｏｅｒから購入した。細胞株は遺伝的に同定され、微生物汚染を有さない。ＭＣＦ−７細胞を、１０％のウシ胎児血清（カタログ番号１００９９−１４１Ｃ、ＧＩＢＣＯ）、１００Ｕ／ｍＬのペニシリンＧ、及び１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（カタログ番号１５１４０−１２２、ＧＩＢＣＯ）を追加したＭＥＭ（カタログ番号Ｃ１２５７１５００ＢＴ、ＧＩＢＣＯ）中で培養した。細胞を、５％のＣＯ2を含む加湿したインキュベーター中、３７℃でインキュベートした。
【０２２８】
乳鉢中で化合物２を０．２％ＨＰＭＣに懸濁させることによって、化合物２を均質懸濁液にした。懸濁液を１週間に１回調製し、４℃で貯蔵する。使用前に製剤を室温にしてから十分に混合した。化合物２を経口胃管栄養法（ＰＯ）により１０ｍＬ／ｋｇの用量で投与した。フルベストラント（バッチ番号：Ｓ１１９１１７）をＳｅｌｌｅｃｋから購入した。フルベストラントを、コーン油に溶解し、ボルテックスし、超音波処理して透明な溶液とすることにより調製した。溶液は使用前に新たに調製した。フルベストラントを皮下注射（ＳＣ）により１０ｍＬ／ｋｇの用量で与えた。アルペリシブ（バッチ番号：ＨＹ−１５２４４）をＭＣＥから購入した。０．５％ＣＭＣ−Ｎａ中に懸濁させ、ボルテックスし、超音波処理することにより、アルペリシブを均質懸濁液にした。アルペリシブの懸濁液を１週間に１回調製し、４℃で貯蔵した。使用前に製剤を室温にしてから十分に混合した。アルペリシブを経口胃管栄養法（ＰＯ）により１０ｍＬ／ｋｇの用量で投与した。
【０２２９】
６〜８週齢の雌のＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを本研究に使用した。接種した動物の数は７０体であり、証明書番号は２０２００１８９５であり、ライセンス番号はＳＣＸＫ（Ｓｕ）２０１８−０００８であり、動物の供給者はＧｅｍＰｈａｒｍａｔｅｃｈ  Ｃｏ，Ｌｔｄであった。
【０２３０】
結果を図２０及び表１１に示す。５０ｍｇ／ｋｇの化合物２と２５ｍｇ／ｋｇのアルペリシブとの組み合わせは、効果的な抗腫瘍活性を発揮し、Ｔ／Ｃ値は３８．９２％であった。３週間にわたる毎日の２０ｍｇ／ｋｇのフルベストラントと２５ｍｇ／ｋｇのアルペリシブとの組み合わせは有意な抗腫瘍活性を示し、Ｔ／Ｃ値は３１．１９％であった。フルベストラントとアルペリシブとの組み合わせへの化合物２の添加は有意な強化された抗腫瘍活性を示し、０％のＴ／Ｃ値を達成した。更に、化合物２とフルベストラント及びアルペリシブとの三重の組み合わせは、研究期間中に１００％の客観的奏効率を達成し、ＣＲは２であった。
【０２３１】
全ての治療期間で有意な重量減少は観察されなかった。
【０２３２】
図２０及び表１１は、化合物２とフルベストラント及びアルペリシブとの組み合わせが、ＥＲ+乳癌異種移植モデルにおいて相乗的抗腫瘍活性を発揮することを示し、これは、ＥＲ+乳癌の治療におけるこの組み合わせの治療応用の可能性を示す。
【０２３３】
【表１１】
2022501394.tif 000047
【０２３４】
本明細書で説明されたものに加えて、上記の説明に従えば、当業者には本発明の様々な修正が明らかになるであろう。そのような変更形態はまた、添付の特許請求の範囲内に含まれるように意図される。本願に引用される各参考文献（全ての特許、特許出願、学術論文、書籍、及び任意の他の出版物を含む）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
2022501394.tif 000063
【図２Ａ】
2022501394.tif 000064
【図２Ｂ】
2022501394.tif 000065
【図３Ａ】
2022501394.tif 000066
【図３Ｂ−Ｃ】
2022501394.tif 000067
【図４Ａ−Ｂ】
2022501394.tif 000068
【図５Ａ−Ｂ】
2022501394.tif 000069
【図６】
2022501394.tif 000070
【図７】
2022501394.tif 000071
【図８】
2022501394.tif 000072
【図９Ａ−Ｃ】
2022501394.tif 000073
【図９Ｄ】
2022501394.tif 000074
【図１０】
2022501394.tif 000075
【図１１Ａ】
2022501394.tif 000076
【図１１Ｂ】
2022501394.tif 000077
【図１１Ｃ】
2022501394.tif 000078
【図１２】
2022501394.tif 000079
【図１３Ａ−Ｂ】
2022501394.tif 000080
【図１４Ａ−Ｂ】
2022501394.tif 000081
【図１５】
2022501394.tif 000082
【図１６】
2022501394.tif 000083
【図１７】
2022501394.tif 000084
【図１８】
2022501394.tif 000085
【図１９Ａ−Ｂ】
2022501394.tif 000086
【図２０Ａ−Ｂ】
2022501394.tif 000087
【手続補正書】
【提出日】令和3年3月25日(2021.3.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＤＭ２阻害剤、及び１つ以上の抗癌剤、並びに任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む、癌を予防及び／又は治療するための医薬組成物であって、
前記ＭＤＭ２阻害剤は、構造式：
【化１】
2022501394.tif 000088
の化合物、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物であり、
式中、
【化２】
2022501394.tif 000089
は、
【化３】
2022501394.tif 000090
であり；
Ｂは、
【化７】
2022501394.tif 000091
であり；
Ｒ1はＨ、又はＣ1~4アルキルであり；
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10の各々は、Ｈであり；Ｒ3はハロであり；Ｒ7はハロであり；
Ｒ6は、
【化４】
2022501394.tif 000092
であり；
Ｒaは、水素、又はＣ1~4アルキルであり；
Ｒbは、水素、又はＣ1~4アルキルであり；
Ｒc及びＲdは、環Ｂの１つの炭素原子上の置換基であり、
Ｒcは、Ｈ、Ｃ1~3アルキル、Ｃ1~3アルキレン−ＯＲa、ＯＲa、又はハロであり；
Ｒdは、Ｈ、Ｃ1~3アルキル、Ｃ1~3アルキレン−ＯＲa、ＯＲa、又はハロであり；
Ｒeは、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ2ＣＨ3である、医薬組成物。
【請求項２】
前記式中、（ＣＨ２）ｎＲ１はＨ、ＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ３であり、Ｒeは−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＳＯ2ＣＨ3である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、
【化８】
2022501394.tif 000093
の化合物、及びその対応する医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、
化合物１：
【化９】
2022501394.tif 000094
化合物２：
【化１０】
2022501394.tif 000095
及びこれらの医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記抗癌剤は、化学療法薬、脱メチル化薬、代謝拮抗剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、エストロゲン受容体阻害剤、及びＰＩ３ｋ阻害剤から選択され、
前記化学療法薬はホモハリングトニンであり、
前記脱メチル化薬はアザシチジン、デシタビン、ゼブラリン、ファザラビン、及びジヒドロ−５’−シチジンから選択され、
前記代謝拮抗剤はシタラビン、アンシタビン、ゲムシタビン、及びトロキサシタビンから選択され、
前記ＭＥＫ阻害剤は、ピマセルチブ、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、セルメチニブ、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＴＡＫ−７３３、レファメチニブ、ＧＤＣ−０６２３、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６（ＣＨ５１２６７６６）、ＳＬ−３２７、ＢＩ−８４７３２５、及びトラメチニブから選択され、
前記ＢＲＡＦ阻害剤は、ソラフェニブ、ＰＬＸ−４７２０、レゴラフェニブ（ＢＡＹ７３−４５０６）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５、ＳＢ５９０８８５、ＡＺ６２８、ＭＬ７８６６二塩酸塩、ＰＦ−０４８８０５９４、ＴＡＫ−６３２、ＣＥＰ−３２４９６、ＲＯ５１２６７６６、又はダブラフェニブから選択され、前記ＭＥＫ阻害剤は、ピマセルチブ、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、セルメチニブ、ＰＤ９８０５９、Ｕ０１２６−ＥｔＯＨ、ＴＡＫ−７３３、レファメチニブ、ＧＤＣ−０６２３、ＲＯ４９８７６５５、ＲＯ５１２６７６６（ＣＨ５１２６７６６）、ＳＬ−３２７、ＢＩ−８４７３２５、及びトラメチニブから選択され、
前記エストロゲン受容体阻害剤は、トレミフェン、トレミフェンクエン酸塩、エストリオール、プロピルピラゾールトリオール、ＡＺＤ９４９６、ＬＹ８８０７４、ＧＤＣ−０９２４ラセミ化合物、ＣＭＰ８、ＯＳｐｅｍｉｆｅｎｅ  Ｄ４、バゼドキシフェン、ピペンドキシフェン塩酸塩、ラソフォキシフェン酒石酸塩、４−ヒドロキシタモキシフェン、クエン酸クロミフェン、メストラノール、イドキシフェン、４，４−イミノジフェノール、Ｈ３Ｂ−６５４５、Ｈ３Ｂ−６５４５塩酸塩、ジペノシドＳＶＩＩ、ＤＰＮ、プリナベレル、Ｗａｙ−２０００７０、ニトロミフェン、ＥＲＢ−１９６、エラセストラント（Ｅｌａｃｅｓｔｒａｎｔ）、ＬＳＺ−１０２、（Ｅ／Ｚ）−４−ヒドロキシタモキシフェン、エラセストラント二塩酸塩、ＧＤＣ−０９２７、ＡＺＤ−９８３３、エンドキシフェン、ＬＹ１１７０１８、エストラジオール、ＷＡＹ−２０４６８８、タモキシフェン、タモキシフェンクエン酸塩、及びフルベストラントから選択され、
前記ＰＩ３ｋ阻害剤は、イデラリシブ（ＣＡＬ−１０１）、コパンリシブ（ＢＡＹ８０−６９４６）、ブパルリシブ、ＡＺＤ６４８２、ＧＳＫ１０５９６１５、ＧＳＫ２１２６４５８、ＧＳＫ２６３６７７１、ＰＱＲ３０９、ＰＦ−０４６９１５０２、ＡＭＧ３１９、３−メチルアデニン、ｌｙ２９４００２、ワートマニン、ケルセチン、αリノレン酸、ザンデリシブ、ピクチリシブ、ＩＰＩ５４９、ダクトリシブ、フィメピノスタット、ＳＡＲ４０５、デュベリシブ、ＰＩ−１０３、ＧＤＣ−００７７、及びアルペリシブから選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＭＤＭ２阻害剤は、式：
【化１１】
2022501394.tif 000096
の構造を有する、化合物２、又はその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物であり、
前記抗癌剤はホモハリングトニン、アザシチジン、デシタビン、シタラビン、ダブラフェニブ、トラメチニブ、フルベストラント、及びアルペリシブから選択される１つ以上である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
化合物２と、抗癌剤ダブラフェニブ及びトラメチニブの組み合わせ、又はこれらのうちいずれかと、の重量比は、１００：１〜１：１００であり、これは、１００：１、９５：１、９０：１、８５：１、８０：１、７５：１、７０：１、６５：１、６０：１、５５：１、５０：１、４５：１、４０：１、３５：１、３０：１、２５：１、２０：１、１５：１、１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、０．８：１、１：１、１．６：１、８：１５、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、１：５０、１：５５、１：６０、１：６５、１：７０、１：７５、１：８０、１：８５、１：９０、１：９５、又は１：１００を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬組成物、又は前記ＭＤＭ２阻害剤若しくは前記抗癌剤は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、散剤、トローチ剤、サッシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、噴霧剤、軟膏剤、クリーム剤、及び注射剤の形態である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記癌は、副腎皮質癌、進行癌、肛門癌、再生不良性貧血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨転移、成人脳／中枢神経系腫瘍、小児脳／中枢神経系腫瘍、乳癌、男性乳癌、小児癌、原発不明癌、キャッスルマン病、子宮頸癌、結腸／直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、腫瘍のＥｗｉｎｇファミリー、眼癌、胆嚢癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、頭部及び頸部癌、ホジキン病、カポジ肉腫、腎臓癌、喉頭癌及び下咽頭癌、成人白血病・急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、小児白血病、肝臓癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺癌腫瘍、皮膚リンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、鼻腔及び副鼻腔の癌、鼻咽腔癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、小児における非ホジキンリンパ腫、口腔及び口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、陰茎癌、下垂体部腫瘍、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、成人軟組織癌、基底及び扁平上皮細胞癌、並びにメラノーマなどの皮膚癌、小腸癌、胃癌、精巣癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宮肉腫、膣癌、外陰癌、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、並びにウイルムス腫瘍から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、メラノーマ、及び乳癌から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＭＤＭ２阻害剤、及び前記抗癌剤のうちの１つ以上は、同時に、共に、又は組み合わせで投与されるように処方され、前記ＭＤＭ２阻害剤、及び前記抗癌剤のうちの１つ以上は、同じ経路又は異なる経路により投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記ＭＤＭ２阻害剤又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、約０．００５、０．０５、０．５、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００ｍｇ／日の量を含む、約０．００２５〜５０００ｍｇ／日の量で投与されるように処方され、
前記ＭＤＭ２阻害剤又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、単位投薬量あたり約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ、約２７５μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ／ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ／ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ／ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇの量を含む、単位投薬量あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの量、で投与されるように処方され、
前記抗癌剤のうちの１つ以上、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、約０．００５、０．０５、０．５、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００ｍｇ／日の量を含む、約０．００２５〜５０００ｍｇ／日の量で投与されるように処方され、
前記抗癌剤のうちの１つ以上、又はその医薬的に許容可能な塩若しくは溶媒和物は、単位投薬量あたり約１μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、約１２５μｇ／ｋｇ、約１５０μｇ／ｋｇ、約１７５μｇ／ｋｇ、約２００μｇ／ｋｇ、約２２５μｇ／ｋｇ、約２５０μｇ／ｋｇ、約２７５μｇ／ｋｇ、約３００μｇ／ｋｇ、約３２５μｇ／ｋｇ、約３５０μｇ／ｋｇ、約３７５μｇ／ｋｇ、約４００μｇ／ｋｇ、約４２５μｇ／ｋｇ、約４５０μｇ／ｋｇ、約４７５μｇ／ｋｇ、約５００μｇ／ｋｇ、約５２５μｇ／ｋｇ、約５５０μｇ／ｋｇ、約５７５μｇ／ｋｇ、約６００μｇ／ｋｇ、約６２５μｇ／ｋｇ、約６５０μｇ／ｋｇ、約６７５μｇ／ｋｇ、約７００μｇ／ｋｇ、約７２５μｇ／ｋｇ、約７５０μｇ／ｋｇ、約７７５μｇ／ｋｇ、約８００μｇ／ｋｇ、約８２５μｇ／ｋｇ、約８５０μｇ／ｋｇ、約８７５μｇ／ｋｇ、約９００μｇ／ｋｇ、約９２５μｇ／ｋｇ、約９５０μｇ／ｋｇ、約９７５μｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１２５ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１７５ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇの量、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇを含む、単位投薬量あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇの量で投与されるように処方されている、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
化合物２の投薬量が標準３＋３レジメンに従って増加し、ここで初期投薬量は１５０ｍｇであり、続いて２００ｍｇ、２５０ｍｇ、及び３００ｍｇへと規則的に増加し、経口で１日１回摂取され、各サイクルの１日目で使用を開始され、７日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルであり；
化合物２単体の用量増加の第１段階が完了すると、第２段階、すなわち化合物２の用量増加との組み合わせ投与が開始されてもよく、組み合わせ投与レジメンにおいて、化合物２の投薬量は１００ｍｇから開始し、続いて１５０ｍｇ及び２００ｍｇへと規則的に増加し；アザシチジンは、１日１回の皮下注射による７５ｍｇ／ｍ2の固定投薬量であり、各サイクルの１日目で使用を開始され、７日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルであり；シタラビンは、静脈内注入期間が４時間以上である１日１回の皮下注射による１ｇ／ｍ2の固定投薬量であり、各サイクルの３日目で使用を開始され、５日間継続的に摂取され、続いて２１日間中断され、２８日毎が投与サイクルであり、
アザシチジン又はシタラビンは、化合物２の経口投与から４時間後に投与され、２つの薬物の組み合わせ治療後に休憩期間が開始される、
請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
（ａ）第１の容器内の第１の構成要素であって、請求項１〜１０のいずれか一項により定義されるＭＤＭ２阻害剤、及び任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を備える、第１の構成要素と、
（ｂ）第２の容器内の第２の構成要素であって、請求項１〜１０のいずれか一項により定義される１つ以上の抗癌剤、及び任意選択的に医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を備える、第２の構成要素と、を備えるキット。
【請求項１５】
骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を治療するための医薬組成物であって、化合物２：
【化１４】
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又はその医薬的に許容可能な塩又は溶媒和物を含む、医薬組成物。
【国際調査報告】
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