【手続補正書】
【提出日】平成22年3月4日(2010.3.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のａ）〜ｆ）群から選択されるアミノ酸配列からなるトロンビン変異体を含むトロンビン阻害剤の抗凝固効果の阻害剤。
ａ）配列番号１に示されるトロンビン変異体Ｗ２１５Ａ／Ｅ２１７Ａのアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し、配列番号１の２６３位及び２６５位に相当する位置にアラニン残基を有するアミノ酸配列であって、前記トロンビン阻害剤に結合するトロンビン変異体をコードするアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、配列番号１の２６３位及び２６５位に相当する位置にアラニン残基を有するアミノ酸配列であって、前記トロンビン阻害剤に結合するトロンビン変異体をコードするアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２に示されるトロンビン変異体Ｗ２１５Ａのアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し、配列番号２の２６３位に相当する位置にアラニン残基を有するアミノ酸配列であって、前記トロンビン阻害剤に結合するトロンビン変異体をコードするアミノ酸配列；及び
ｆ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、配列番号２の２６３位に相当する位置にアラニン残基を有するアミノ酸配列であって、前記トロンビン阻害剤に結合するトロンビン変異体をコードするアミノ酸配列。
【請求項２】
トロンビン阻害剤が直接トロンビン阻害剤である、請求項１に記載の阻害剤。
【請求項３】
直接トロンビン阻害剤が、アルガトロバン又はその誘導体若しくはアナログ、ヒルジン又はその組換え若しくは合成の誘導体若しくはアナログ、トリペプチドＰｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇの誘導体、クロロメチルケトン誘導体、キシメラガトラン又はその誘導体、代謝産物、若しくはアナログ、アニオン結合エキソサイト阻害剤、及びＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーからなる群から選択される、請求項２に記載の阻害剤。
【請求項４】
直接トロンビン阻害剤がアルガトロバンである、請求項３に記載の阻害剤。
【請求項５】
ヒルジンの、組換え又は合成の、誘導体又はアナログが、ビバリルジン、レピルジン、及びデシルジンからなる群から選択される、請求項３に記載の阻害剤。
【請求項６】
キシメラガトランの代謝産物がメラガトランである、請求項３に記載の阻害剤。
【請求項７】
トロンビン阻害剤が間接トロンビン阻害剤である、請求項１に記載の阻害剤。
【請求項８】
間接トロンビン阻害剤がヘパリン、クマリン、デルマタン、又はトロンボモジュリンである、請求項７に記載の阻害剤。
【請求項９】
トロンビン変異体が配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれかに記載の阻害剤。
【請求項１０】
トロンビン変異体が配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜８のいずれかに記載の阻害剤。
【請求項１１】
トロンビン変異体が患者に非経口投与される、請求項１〜１０のいずれかに記載の阻害剤。
【請求項１２】
トロンビン変異体が患者に腹腔内、静脈内、皮下、又は筋肉内投与される、請求項１１に記載の阻害剤。
【請求項１３】
トロンビン変異体が患者に静脈内投与される、請求項１２に記載の阻害剤。
【請求項１４】
トロンビン変異体が、体重１ｋｇ当たり約０．１ｎｇ〜約５００ｍｇの投与量で患者に投与される、請求項１３に記載の阻害剤。
【請求項１５】
トロンビン変異体が、少なくとも３μｇ／ｍｌの血漿濃度を達成するのに十分な投与量で患者に投与される、請求項１３に記載の阻害剤。
【請求項１６】
トロンビン変異体が、３．７５μｇ／ｍｌの血漿濃度を達成するのに十分な投与量で患者に投与される、請求項１５に記載の阻害剤。
【請求項１７】
患者に止血剤を投与することをさらに含む、請求項１〜１６のいずれかに記載の阻害剤。
【請求項１８】
止血剤が活性化第VII因子又は活性化プロトロンビン複合体濃縮製剤である、請求項１７に記載の阻害剤。
【請求項１９】
トロンビン変異体及び止血剤が同時投与される、請求項１７に記載の阻害剤。
【請求項２０】
トロンビン変異体及び止血剤が順次投与される、請求項１７に記載の阻害剤。
【請求項２１】
以下のステップを含む、患者の血漿又は全血中の直接トロンビン阻害剤の濃度を定量する方法。
ａ）前記患者から血漿又は全血試料を得るステップ；
ｂ）前記血漿又は全血試料にトロンボモジュリンを添加するステップ；
ｃ）一連の試験チャンバーに、様々な濃度に上昇させたトロンビン変異体をロードするステップ；
ｄ）前記血漿又は全血試料を前記試験チャンバーの各々に等量添加するステップ；
ｅ）前記試験チャンバーの各々における前記血漿又は全血試料の凝血開始までの時間を測定するステップ；
ｆ）凝血開始までの時間が最も短い試験チャンバーを選択するステップ；及び
ｇ）前記血漿又は全血試料中の前記直接トロンビン阻害剤の濃度が、選択しなかった試験チャンバーにおける前記トロンビン変異体の濃度と比較して、選択した試験チャンバーにおける前記トロンビン変異体の濃度に相当する濃度に最も近い濃度であると評価するステップ。
【請求項２２】
トロンビン変異体が、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の方法。
ａ）配列番号１に示されるトロンビン変異体Ｗ２１５Ａ／Ｅ２１７Ａのアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し、配列番号１の２６３位及び２６５位に相当する位置にアラニン残基を有するアミノ酸配列であって、前記トロンビン阻害剤に結合するトロンビン変異体をコードするアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、配列番号１の２６３位及び２６５位に相当する位置にアラニン残基を有するアミノ酸配列であって、前記トロンビン阻害剤に結合するトロンビン変異体をコードするアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２に示されるトロンビン変異体Ｗ２１５Ａのアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有し、配列番号２の２６３位に相当する位置にアラニン残基を有するアミノ酸配列であって、前記トロンビン阻害剤に結合するトロンビン変異体をコードするアミノ酸配列；及び
ｆ）配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、配列番号２の２６３位に相当する位置にアラニン残基を有するアミノ酸配列であって、前記トロンビン阻害剤に結合するトロンビン変異体をコードするアミノ酸配列。
【請求項２３】
トロンビン変異体が配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
トロンビン変異体が配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
直接トロンビン阻害が、アルガトロバン又はその誘導体若しくはアナログ、ヒルジン又はその組換え若しくは合成の誘導体若しくはアナログ、トリペプチドＰｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇの誘導体、クロロメチルケトン誘導体、キシメラガトラン又はその誘導体、代謝産物、若しくはアナログ、アニオン結合エキソサイト阻害剤、及びＲＮＡ／ＤＮＡアプタマーからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
直接トロンビン阻害剤がアルガトロバンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ヒルジンの組換え又は合成の誘導体又はアナログが、ビバリルジン、レピルジン、及びデシルジンからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
キシメラガトランの代謝産物がメラガトランである、請求項２５に記載の方法。