(57)【要約】  本開示は、抗原／免疫原の組合せを含む、完全に液体である免疫原性組成物に関する。この免疫原性組成物は、多くの疾病に対する防御を付与するために、最適な量の抗原／免疫原を含む。この組成物は、改善された免疫原性および安定性を示す。このワクチン組成物を調製するためのプロセスも開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ジフテリアトキソイド（Ｄ）、
（ｉｉ）破傷風トキソイド（Ｔ）、
（ｉｉｉ）不活化全細胞百日咳（ｗＰ）または無細胞百日咳（ａＰ）、
（ｉｖ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、
（ｖ）インフルエンザ菌ｂ型抗原（Ηｉｂ）、
（ｖｉ）ＩＰＶ１型が０．５ｍＬ当たり１〜５０ＤＵの量であり、ＩＰＶ３型が０．５ｍＬ当たり１〜５０ＤＵの量である不活化ポリオウイルス抗原（ＩＰＶ）、および
（ｖｉｉ）２−フェノキシエタノールと少なくとも１種の他の保存剤の組合せ
を含む、完全に液体である複数回用量の免疫原性組成物。
【請求項２】
前記組成物中の不活化全細胞百日咳が、百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、および６２２９を１：１：０．２５：０．２５の比で有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
無細胞百日咳抗原が、改変アデニル酸シクラーゼ、百日咳トキソイド（ＰＴ）、線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、ペルタクチン（Ｐ６９またはＰＲＮ）、または線毛タンパク質（ＦＩＭ１、２、および３）から選択される１種または複数の抗原を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
Ｈｉｂ抗原が、シアニル化コンジュゲーション化学または還元的アミノ化コンジュゲーション化学を用いて担体タンパク質にコンジュゲートされたＨｉｂポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）多糖であり、前記シアニル化試薬が、臭化シアン、１−シアノ−４−ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＤＡＰ）、１−シアノ−４−ピロリジノピリジニウムテトラフルオロボレート（ＣＰＰＴ）、１−シアノイミダゾールすなわち、（１−ＣＩ）、１−シアノベンゾトリアゾール（１−ＣＢＴ）、または２−シアノピリダジン−３（２Ｈ）オン（２−ＣＰＯ）から選択され、担体タンパク質が、破傷風トキソイド、ＣＲＭ１９７、ジフテリアトキソイド、髄膜炎菌外膜複合体、破傷風トキソイドの断片Ｃ、百日咳トキソイド、インフルエンザ菌のタンパク質Ｄ、大腸菌ＬＴ、大腸菌ＳＴ、緑膿菌由来の外毒素Ａ、外膜複合体ｃ（ＯＭＰＣ）、ポーリン、トランスフェリン結合タンパク質、ニューモリシン、肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）、肺炎球菌表面付着因子Ａ（ＰｓａＡ）、肺炎球菌ＰｈｔＤ、肺炎球菌表面タンパク質ＢＶＨ−３およびＢＶＨ−１１、炭疽菌の防御抗原（ＰＡ）、炭疽菌の解毒された浮腫因子（ＥＦ）および致死因子（ＬＦ）、卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製されたタンパク質誘導体（ＰＰＤ）、合成ペプチド、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、増殖因子、Ｎ１９のような種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質、鉄取込みタンパク質、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ、ならびにリンカーを有するかまたはリンカーを有さないＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅタンパク質からなる群から選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
ＩＰＶ２型を０．５ｍＬ当たり１〜２０ＤＵの量でさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
ＩＰＶ１型が、Ｍａｈｏｎｅｙ株もしくはＳａｂｉｎ株であり、および／またはＩＰＶ２型が、ＭＥＦ−１株もしくはＳａｂｉｎ株であり、および／またはＩＰＶ３型が、Ｓａｕｋｅｔｔ株もしくはＳａｂｉｎ株である、請求項１または５に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記他の保存剤が、塩化ベンゼトニウム（フェメロール）、フェノール、ｍ−クレゾール、ホルムアルデヒド、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、ｐ−クロロ−ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、ならびにメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、およびブチルパラベンの群から選択されるパラベンエステルの群から選択される、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
２−フェノキシエタノールを０．５ｍＬ当たり１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．５ｍＬ当たり０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．５ｍＬ当たり０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
Ｄ、Ｔ、ｗＰ、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ、およびＩＰＶが、アジュバントに吸着されていない、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１０】
Ｄ、Ｔ、およびＨＢｓＡｇが、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）もしくはリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）などのアルミニウム塩（Ａｌ３＋）、ミョウバン、リン酸カルシウム、ＭＰＬＡ、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドアジュバント、リポソーム、または水中油型エマルジョンの群から選択されるアジュバントに個別に吸着されている、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
Ｄ、Ｔ、ＨＢｓＡｇが、リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）アジュバントに個別に吸着されている、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
Ｄ抗原が、少なくとも５０％の吸着率で、アルミニウム塩に吸着されている、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
Ｔ抗原が、少なくとも４０％の吸着率で、アルミニウム塩に吸着されている、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
ＨＢｓＡｇ抗原が、少なくとも５０％の吸着率で、アルミニウム塩に吸着されている、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
ＩＰＶ抗原が、ＩＰＶ１型の吸着率は１０〜１００％の範囲内で、ＩＰＶ２型の吸着率は６０〜１００％の範囲内で、ＩＰＶ３型の吸着率は１０〜１００％の範囲内で、水酸化アルミニウム塩（Ａｌ（ＯＨ）３）またはリン酸アルミニウム塩（ＡｌＰＯ４）に吸着されている、請求項１、５、または６に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
任意のアジュバントに対するＨｉｂ抗原の吸着率が２０％未満である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１７】
前記組成物中の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）が、０．５ｍＬ当たり０．１〜０．６ｍｇの量である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項１８】
塩化ナトリウムまたはリン酸緩衝生理食塩水から選択される緩衝液をさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
緩衝液として塩化ナトリウムを０．５％〜１．５％の濃度で含む、請求項１８に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
薬学的に許容される輸送体、賦形剤、結合剤、担体、等張剤、乳化剤、または湿潤剤をさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
糖、多価アルコール、界面活性剤、高分子、塩、アミノ酸、またはｐＨ調整剤の群から選択される薬学的に許容される賦形剤を含む、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
単回用量の免疫原性組成物が保存剤を含まない、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
インフルエンザ菌（ａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ血清型および非莢膜株）、肝炎（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧ株）、ロタウイルス、髄膜炎菌Ａ抗原、髄膜炎菌Ｃ抗原、髄膜炎菌Ｗ−１３５抗原、髄膜炎菌Ｙ抗原、髄膜炎菌Ｘ抗原、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗原、髄膜炎菌Ｂ抗原、黄色ブドウ球菌抗原、炭疽菌、ＢＣＧ、ヒト乳頭腫ウイルス、チフス菌抗原、非チフス性サルモネラ抗原、改変アデニル酸シクラーゼ、マラリア抗原（ＲＴＳ、Ｓ）、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、フラビウイルス抗原、デング熱、ジカ熱、エボラ熱、チクングンア熱、日本脳炎、および下痢性抗原の群から選択される１種または複数の抗原をさらに含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２Ｌｆ〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を約１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量、２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量、および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを約１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量、２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量、および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量、２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量、および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜５０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２Ｌｆ〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を約１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２５ＤＵの量および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３１】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２５ＤＵの量、２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）を１〜１０ＤＵの量、および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを約１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３２】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２５ＤＵの量および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３３】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２５ＤＵの量、２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）を１〜１０ＤＵの量、および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３４】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２５ＤＵの量および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３５】
０．５ｍＬの前記組成物が、Ｄ抗原を１０〜２５Ｌｆの量で、Ｔ抗原を２〜１０Ｌｆの量で、ｗＰ抗原を１２〜１６ＩＯＵの量で、ＨＢｓＡｇを７〜１５μｇの量で、Ηｉｂ抗原を７〜１３μｇの量で、ＩＰＶ抗原の、それぞれ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２５ＤＵの量、２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）を１〜１０ＤＵの量、および３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）を１〜２０ＤＵの量で、総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）を０．１〜０．６ｍｇの量で、２−フェノキシエタノールを１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量で、メチルパラベンを０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で、プロピルパラベンを０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の量で含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３６】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３７】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３８】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項３９】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４０】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４１】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４２】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４３】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４４】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４５】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４６】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４７】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ２０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、４ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４８】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項４９】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１．５ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１．５ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１．５ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５０】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５１】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１．５ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１．５ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ４０ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、８ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および３２ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５２】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５３】
０．５ｍＬの前記組成物が、
１０Ｌｆの量のＤ抗原、２Ｌｆの量のＴ抗原、１２ＩＯＵの量のｗＰ抗原、８μｇの量のＨＢｓＡｇ、８μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１．５ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２０Ｌｆの量のＤ抗原、４Ｌｆの量のＴ抗原、１４ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１０μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１．５ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン、または
２５Ｌｆの量のＤ抗原、１０Ｌｆの量のＴ抗原、１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ７．５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１．５ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および６ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．５５ｍｇ以下の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、２．５ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．９ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のメチルパラベン、０．１ｍｇ（ｗ／ｖ）の量のプロピルパラベン
のうちのいずれか１つを含む、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【請求項５４】
（ｉ）ジフテリアトキソイド（Ｄ）、
（ｉｉ）破傷風トキソイド（Ｔ）、
（ｉｉｉ）不活化全細胞百日咳（ｗＰ）または無細胞百日咳（ａＰ）、
（ｉｖ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、
（ｖ）インフルエンザ菌ｂ型抗原（Ηｉｂ）、
（ｖｉ）不活化ポリオウイルス抗原（ＩＰＶ）、および
（ｖｉｉ）２−フェノキシエタノールおよび少なくとも１種のパラベンエステルの組合せ
を含む、完全に液体である複数回用量の免疫原性組成物を製造する方法であって、
ａ）混合用の容器／器に通常の生理食塩水を添加するステップと、
ｂ）ジフテリアトキソイドを含む成分Ｉを添加するステップと、
ｃ）破傷風トキソイドを含む成分ＩＩを添加するステップと、
ｄ）不活化全細胞百日咳抗原または無細胞百日咳（ａＰ）を含む成分ＩＩＩを添加するステップと、
ｅ）Ｂ型肝炎表面抗原を含む成分ＩＶを添加するステップと、
ｆ）Ｈｉｂ抗原を含む成分Ｖを添加するステップと、
ｇ）ＩＰＶ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）が０．５ｍＬ当たり１〜５０ＤＵの量であり、ＩＰＶ３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）が０．５ｍＬ当たり１〜５０ＤＵの量であるＩＰＶ抗原を含む成分ＶＩを添加するステップと、
ｈ）０．５ｍＬ当たり１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノールおよび０．５ｍＬ当たり０．１〜１．５ｍｇの量のメチルパラベン、または
０．５ｍＬ当たり１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノールおよび０．５ｍＬ当たり０．０５〜０．２ｍｇの量のプロピルパラベン、または
０．５ｍＬ当たり１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、０．５ｍＬ当たり０．１〜１．５ｍｇの量のメチルパラベン、および０．５ｍＬ当たり０．０５〜０．２ｍｇの量のプロピルパラベン
から選択される保存剤の組合せを添加するステップと、
ｉ）水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨを６．０〜７．０に調整するステップと、
ｊ）メスアップするために通常の生理食塩水を添加するステップと
を含む方法。
【請求項５５】
成分ＶＩが、０．５ｍＬ当たり１〜２０ＤＵの量のＩＰＶ抗原２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）をさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
成分Ｉの調製が、以下のステップ：
ａ）容器／器にリン酸アルミニウムを移すステップと、
ｂ）ジフテリアトキソイドを添加するステップと、
ｃ）酢酸／水酸化ナトリウムを用いてｐＨを４．５〜５．５に調整するステップと、
ｄ）安定化させるステップと、
ｅ）水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨを５．５〜６．５に調整するステップと、
ｆ）ヒスチジン緩衝液を用いて安定化させるステップと
を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
成分ＩＩの調製が、以下のステップ：
ａ）容器／器にリン酸アルミニウムを移すステップと、
ｂ）破傷風トキソイドを添加するステップと、
ｃ）酢酸／水酸化ナトリウムを用いてｐＨを４．５〜５．５に調整するステップと、
ｄ）安定化させるステップと、
ｅ）水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨを５．５〜６．５に調整するステップと、
ｆ）ヒスチジン緩衝液を用いて安定化させるステップと
を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
成分ＩＩＩの調製が、以下のステップ：
ａ）百日咳菌株１３４をホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０〜１５分間不活化するステップと、
ｂ）百日咳菌株５０９をホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０〜１５分間不活化するステップと、
ｃ）百日咳菌株２５５２５および６２２９をホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０〜１５分間不活化するステップと、
ｃ）百日咳菌株６２２９をホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０〜１５分間不活化するステップと、
ｄ）続いて、不活化百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、および６２２９を、１：１：０．２５：０．２５の比で混合するステップと、
ｅ）任意選択で、アルミニウム系アジュバントに吸着させるステップと
を含み、前記プロセスは、チオメルサールを含まず、不活化全細胞百日咳抗原は、塊状化せず、均質を維持し、それによって反応原性が低下し、より長期間にわたりより高い力価がもたらされる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
成分ＩＶの調製が、以下のステップ：
ａ）容器／器にリン酸アルミニウムを移すステップと、
ｂ）Ｂ型肝炎表面抗原を添加するステップと、
ｃ）酢酸／水酸化ナトリウムを用いてｐＨを４．５〜５．５に調整するステップと、
ｄ）安定化させるステップと、
ｅ）水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨを５．８〜６．８に調整するステップと、
ｆ）安定化させるステップと
を含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
成分Ｖの調製が、以下のステップ：
ａ）インフルエンザ菌ｂ型を発酵させるステップと、
ｂ）０．１％ホルムアルデヒドの存在下にて３７℃で２時間不活化するステップと、
ｃ）Ｈｉｂポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）多糖を精製するステップと、
ｄ）アジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーの存在下で臭化シアニル化コンジュゲーション化学を用いて、ステップｃの精製した生成物を破傷風トキソイド（ＴＴ）にコンジュゲートさせるステップと、
ｅ）ステップｄのコンジュゲートを精製するステップと、
ｆ）精製したコンジュゲートを、好ましくは０．２２μｍフィルターで濾過するステップと
を含み、遊離ＰＲＰ百分率は、総精製Ｈｉｂバルクコンジュゲート中５％以下である、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
完全に液体である複数回用量の免疫原性組成物であって、０．５ｍＬの前記組成物が、１０〜２５Ｌｆの量のＤ抗原、２〜１０Ｌｆの量のＴ抗原、１２〜１６ＩＯＵの量のｗＰ抗原、７〜１５μｇの量のＨＢｓＡｇ、７〜１３μｇの量のΗｉｂ抗原、ＩＰＶ抗原、すなわち、それぞれ１〜２５ＤＵの量の１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）、１〜１０ＤＵの量の２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）、および１〜２０ＤＵの量の３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）、０．１〜０．６ｍｇの量の総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）、１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノールを含み、
前記組成物が、以下の方法：
ａ）混合用の容器／器に通常の生理食塩水を添加するプロセスと、
ｂ）ジフテリアトキソイドを含む成分Ｉを添加するプロセスと、
ｃ）破傷風トキソイドを含む成分ＩＩを添加するプロセスと、
ｄ）不活化全細胞百日咳抗原または無細胞百日咳（ａＰ）を含む成分ＩＩＩを添加するプロセスと、
ｅ）Ｂ型肝炎表面抗原を含む成分ＩＶを添加するプロセスと、
ｆ）Ｈｉｂ抗原を含む成分Ｖを添加するプロセスと、
ｇ）ＩＰＶ１型（Ｍａｈｏｎｅｙ株またはＳａｂｉｎ株）が１〜２５ＤＵの量であり、２型（ＭＥＦ−１株またはＳａｂｉｎ株）が１〜１０ＤＵの量であり、３型（Ｓａｕｋｅｔｔ株またはＳａｂｉｎ株）が１〜２０ＤＵの量であるＩＰＶ抗原を含む成分ＶＩを添加するプロセスと、
ｈ）０．５ｍＬ当たり１〜６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノールを添加するプロセスと、
ｉ）水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨを６．０〜７．０に調整するプロセスと、
ｊ）メスアップするために通常の生理食塩水を添加するプロセスと
によって調製される免疫原性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、バイオテクノロジーの分野に関し、より具体的には、抗原／免疫原および保存剤の群を含む複数回用量の混合ワクチン組成物を調製する方法に関する。さらに本開示は、混合ワクチン製造の分野における改良された方法論に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの疾病に対する免疫原性をもたらすことが可能な混合ワクチンは、投与される注射の回数を減少させ、複数回の筋肉内注射と関連する合併症を低減し、投与および製造費用を低減し、貯蔵費用を低減し、ワクチン接種が遅くなるリスクまたはワクチン接種を受けそびれるリスクを低下させ、かつ個別のワクチン接種の数を減らすことによって患者のコンプライアンスを向上させることから、単価ワクチンよりも常に有利である。さらに、混合ワクチンの完全に液体である製剤は、再構成を必要とするものよりも明白な利点を有する。完全に液体であるワクチンにおける平均調製時間は、完全には液体ではないワクチンと比較して、ほぼ半分であることが認められている。ほぼ全て（９７．６％）の医療従事者は、日常の診療において、完全に液体であるワクチンの使用を望むであろうと述べた。（参考文献：Ｓｏｕｂｅｙｒａｎｄ  Ｂ他；Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ  ｗｉｔｈ  ｆｕｌｌｙ−ｌｉｑｕｉｄ  ｖｅｒｓｕｓ  ｎｏｎ−ｆｕｌｌｙ  ｌｉｑｕｉｄ  ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ  ｈｅｘａｖａｌｅｎｔ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ａ  ｔｉｍｅ  ａｎｄ  ｍｏｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ；Ｖａｃｃｉｎｅ２０１５；３３：３９７６−８２）。
【０００３】
現時点で既知の、利用可能な混合ワクチンは、多くの疾患に罹りやすいヒト集団において、１回の注射で望ましいレベルの安全性、有効性、および免疫原性を得るために、適切な免疫原性形態で適切な抗原の適切な配合物を含有していない場合がある。ほんの数種の抗原を追加して作製し得る異なるワクチンの組合せの数は、かなり多い。１〜４種の他の抗原成分（例えば、ＨＩＢ（凍結乾燥されたものまたは液体）、ＨＢＶ、ＩＰＶ、ＨＡＶ）を、ＤＴｗＰまたはＤＴａＰのいずれかに添加することによって、生成可能な４４組の考え得る異なるワクチンの組合せが存在する。この数は、異なる製造業者からの個々の成分を考慮に入れると、数千組に増加するであろう。全ての個々の新規混合ワクチンは（供給元による成分の差異を考慮に入れて）、安全性、安定性、適合性、および有効性を実証するために、個別に開発されなければならないことから、これら全てのワクチンの開発は難度の高い課題となっている。
混合ワクチンの抗原：
ジフテリア抗原および破傷風抗原
ジフテリアおよび破傷風は、それぞれジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）および破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）を原因とする急性感染症である。いずれの場合でも、臨床疾患の原因となるのは、これらの細菌の強力な外毒素である。これらの細菌に対する防御効果を有するワクチンは、毒素を含有しており、この毒素は、化学的に修飾されて、トキソイド、すなわち、もはや毒性はないが、依然として抗原性を有する化学的に修飾された毒素を形成する。ジフテリアおよび破傷風の毒素は、ウシ抽出物を含有する培地でジフテリア菌および破傷風菌を増殖させることによって産生される。これらの毒素は、トキソイド［ジフテリアトキソイド（Ｄ）および破傷風トキソイド（Ｔ）］を生成するために、以下の加熱、ＵＶ、ホルマリン／ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、アセチルエチレンイミンなどを含む処理を用いて不活化される。ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、伝播性海綿状脳症（ＴＳＥ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤおよび変異型ＣＪＤ）に関する懸念は、ワクチンを介して拡散される、ウシ抽出物を含有する増殖培地中に使用されている動物成分から生じることがある。（参考文献：ＷＨＯ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｏｎ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ  Ｓｐｏｎｇｉｆｏｒｍ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｉｅｓ  ｉｎ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ；２００３＆ＥＭＥＡ／ＣＰＭＰ／ＢＷＰ／８１９／０１；２００１年４月２４日）。
百日咳抗原
化学的不活化および熱不活化百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）微生物からなる全細胞ワクチンの１９４０年代における導入は、百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）を原因とする百日咳の発生率の劇的な低下に貢献した。
【０００４】
全細胞ＤＴＰワクチンは、一般的に、複数の局所的有害事象（例えば、注射部位における紅斑、腫脹、および疼痛）、発熱、および他の軽度の全身事象（例えば、傾眠、苛立ち、および食欲不振）を伴う。（参考文献：Ｃｏｄｙ  ＣＬ、Ｂａｒａｆｆ  ＬＪ、Ｃｈｅｒｒｙ  ＪＤ、Ｍａｒｃｙ  ＳＭ、Ｍａｎｃｌａｒｃｋ  ＣＲ；Ｔｈｅ  ｎａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＤＴＰ  ａｎｄ  ＤＴ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ  ａｎｄ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ．Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １９８１；６８：６５０−６０）および（参考文献：Ｌｏｎｇ  ＳＳ、ＤｅＦｏｒｅｓｔ  Ａ、Ｐｅｎｎｒｉｄｇｅ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ他、Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ−ｔｅｔａｎｕｓ−ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｃｙ．Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １９９０；８５：２９４〜３０２ページ）。
【０００５】
より重度の全身事象（例えば、痙攣｛発熱の有無に関わらない｝および筋緊張低下反応性低下発作）は、全細胞ＤＴＰワクチンを受ける小児の間では発生頻度が低い（投与された１，７５０回分に対して１症例の割合）（参考文献：Ｃｏｄｙ  ＣＬ、Ｂａｒａｆｆ  ＬＪ、Ｃｈｅｒｒｙ  ＪＤ、Ｍａｒｃｙ  ＳＭ、Ｍａｎｃｌａｒｃｋ  ＣＲ；Ｔｈｅ  ｎａｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＤＴＰ  ａｎｄ  ＤＴ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｆａｎｔｓ  ａｎｄ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ．Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃｓ  １９８１；６８：６５０−６０）。急性脳症の発生は、さらにいっそう稀である（投与された百万回分に対して０〜１０．５症例の割合）。専門家は、いくつかの稀な症例において、全細胞百日咳ワクチンが永続的な脳損傷を招くことを認めている。（参考文献：Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；ＤＰＴ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ、ａ  ｎｅｗ  ａｎａｌｙｓｉｓ；Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９４年）。
【０００６】
全細胞百日咳ワクチン接種の反応原性と重篤な副作用の間の因果関係について言及している複数の報告によって、ワクチン受容が減少し、その結果として再流行することとなった（Ｍｉｌｌｅｒ、Ｄ．Ｌ．、Ｒｏｓｓ、Ｅ．Ｍ．、Ａｌｄｅｒｓｌａｄｅ、Ｒ．、Ｂｅｌｌｍａｎ、Ｍ．Ｈ．、およびＢｒａｗｓｏｎ、Ｎ．Ｓ．Ｂ．（１９８１年）．Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｅｒｉｏｕｓ  ａｃｕｔｅ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｌｌｎｅｓｓ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ：Ｂｒｉｔ  Ｍｅｄ．Ｊ．２８２：１５９５〜１５９９ページ）。
【０００７】
全細胞百日咳（ｗＰ）に関連する有害反応は、そのワクチンの世界的な継続使用における障害であるため、工業国では、ｗＰ系混合ワクチンは、無細胞百日咳系混合ワクチンに徐々に置き換えられた。
【０００８】
より最近では、規定された成分の百日咳ワクチンが開発された。全て液体の六価無細胞百日咳系ワクチン（ＤＴａＰ  ＩＰＶ  ＰＲＰ−Ｔ−ＨＢｓＡｇ）は、過去に報告されている（ＥＰ１０２８７５０）。
【０００９】
Ｉｎｆａｎｒｉｘ（登録商標）Ｈｅｘａ（ＧＳＫ）は、Ｓａｌｋ  ＩＰＶを含有する、現在で唯一世界的に市販されている六価の小児用混合ワクチンである。この製品（ＤＴａＰ３−ＩＰＶ−ＨＢＶ／／Ｈｉｂ）は、使用前に残りのワクチンと再構成するために個別のバイアルに入れてある凍結乾燥されたＨｉｂ抗原ＰＲＰ−Ｔコンジュゲートと共に包装された五価の製品の充填済みシリンジとして販売されている。
【００１０】
第２の六価ワクチンであるＨｅｘｙｏｎ（登録商標）（Ｈｅｘａｃｉｍａ（登録商標）およびＨｅｘａｘｉｍ（登録商標）とも呼ばれる）は、Ｓａｎｏｆｉ  Ｐａｓｔｅｕｒからの全て液体の六価ワクチンであるが、これもａＰを伴う。このワクチンは、欧州および世界における民間市場向けのものである可能性が高い。
【００１１】
ＤＴ、無細胞百日咳、Ｓａｂｉｎ  ＩＰＶ（Ｉ型：４０ＤＵ、２型：８ＤＵ、３型：３２ＤＵ）、単一株不活化ロタウイルス（Ｇ９株すなわち、１１６Ｅ株）、ＴＴにコンジュゲートしたコンジュゲートインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型ＰＲＰ、および組換えＢ型肝炎ワクチンからなる七価混合ワクチンは、Ｂｈａｒａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌによって開発されつつある。
【００１２】
しかし、特に発展途上国の環境における無細胞百日咳（ａＰ）ワクチンの長期有効性に関する懸念が生じている。最近の報告では、百日咳に対する免疫は青年期に弱まること、またこれは、ワクチン注射を完了する前に生後６ヵ月未満であった乳児において、症例が増加する原因となることが示唆されている。ワクチンの有効性は、乳児期にａＰで免疫化された８〜１２歳において２４％であると推定された。オーストラリアにおける観察研究でも、乳児期にａＰワクチンを受けた青年では、ｗＰワクチンを受けた青年においてより高い症例率を示した（相対危険度３．３、９５％信頼区間２．４〜４．５）。
【００１３】
費用の観点から、ａＰ抗原は、歴史的に、製造の違いおよび特許権使用料によって、ｗＰ抗原の費用の１０〜３０倍高額であったため、発展途上国における経済的負担となっていた。結果として、ｗＰ系六価ワクチンの費用は、低資源国の公共部門における使用により適しているであろう。
【００１４】
したがって、発展途上国向けの六価ワクチンにおける全細胞百日咳（ｗＰ）の使用は、費用および特に発展途上国の環境におけるａＰワクチンの長期有効性に関して生じる懸念から、重要になっている。
【００１５】
最良の全細胞百日咳（ｗＰ）ワクチンと比較して、ａＰワクチンは、集団予防接種プログラムにおいて同様に有効とは言えない（Ｖｉｃｋｅｒｓ他、２００６；Ｃｈｅｒｒｙ２０１２）。
【００１６】
高度に免疫化された集団における大流行の最近の研究によって、ａＰワクチンの防御期間があまりにも短いため（Ｋｌｅｉｎら２０１２；Ｍｉｓｅｇａｄｅｓら２０１２）、年長児および青年における免疫の低下ならびにこの年齢群における対応する症例の増加を招く結果となっていることが示された（Ｓｋｏｗｒｏｎｓｋｉ他２００２；Ｋｌｅｉｎ他２０１２）。これは、１０代に十分な防御を提供するｗＰワクチンとは対照的である（Ｋｌｅｉｎ他２０１２）。これらの欠点の結果として、１９９０年代にａＰワクチンに切り替えた国では、百日咳に対する防御が不十分なだけではなく、小児に初回刺激を与えたワクチンは、後の追加免疫ワクチン接種に対する免疫応答を決定する可能性があるため、追加免疫に対する反応性が低い場合もある小児の世代が現在存在する（Ｐｏｄｄａ他１９９５；Ｍａｓｃａｒｔ他２００７；Ｓｈｅｒｉｄａｎ他２０１２；Ｌｉｋｏ、Ｒｏｂｉｓｏｎ、およびＣｉｅｓｌａｋ２０１３；Ｓｍｉｔｓ他２０１３）。
【００１７】
ｗＰの反応原性に寄与する最も重要な要因の１つは、細菌外膜由来の内毒素であるリポオリゴ糖（ＬＯＳ）の存在である。
ｗＰワクチンにおける毒素の不活化は、種々の方法によって行うことが可能であるが、活性な易熱性毒素が、最終製品において検出可能となるべきではない。多くの製造業者によって実践されているｗＰ毒素の不活化のための全細胞百日咳（ｗＰ）バルク処理は、熱処理／ホルマリンを用いる。いくつかの報告では、ｗＰの不活化にチメロサールが使用されている。しかし、チメロサールの使用がＩＰＶの抗原性の損失を招くため（Ｖａｃｃｉｎｅ  １９９４、第１２巻、第９号、８５１〜８５６ページ、Ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｉｍｅｒｏｓａｌ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｃｙ  ｏｆ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅ）、ＩＰＶを含有する混合ワクチンの場合は、経時的にＩＰＶの力価を保持するために、チメロサール含有ｗＰから個別のバイアルで提供するか、または元となる百日咳バルク不活化を変更する必要があることがある。いくつかの抗原、すなわち、活性なＰＴも免疫応答調節物質として働くことがあり、異なるワクチン間では種々の抗原に対する免疫応答に有意差が認められている（ＷＨＯ、１９９３）。
【００１８】
ＬＯＳの化学的抽出は、使用されたｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ試験に応じて、内毒素含有率（２０％）の著しい低下および内毒素に関連する毒性の顕著な低下（最大９７％）をもたらした。ＬＯＳの抽出は、製品の完全性に影響を及ぼすことはなく、より重要な点として、ＤＴＰの力価および／または安定性に影響を及ぼすことはなかった。さらに、抗体およびＴ細胞応答におけるいかなる差異もほぼ認められなかった。（参考文献：Ｗａｌｄｅｌｙ  Ｏｌｉｖｅｉｒａ  Ｄｉａｓ他；Ａｎ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｗｈｏｌｅ  ｃｅｌｌ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ｒｅｄｕｃｅｄ  ｃｏｎｔｅｎｔ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ；Ｈｕｍａｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ＆Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ９：２、３３９〜３４８ページ；２０１２年２月）
Ｂ型肝炎抗原
肝炎ウイルスには種々の株が存在する。Ｂ型肝炎は、ヒトの肝臓に感染するＢ型肝炎ウイルス（ＨｅｐＢ）によって引き起こされる疾患であり、肝炎と称する炎症を引き起こす。この疾患に対するワクチンは、前記ウイルスの外被タンパク質であるＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）のうちの１つを含有する。集団予防接種のために使用されてきたワクチンは、現在入手可能であり、例えば、Ｍｅｒｃｋ製品のＲｅｃｏｍｂｉｖａｘ  ＨＢ（登録商標）およびＣｏｍｖａｘ（登録商標）ならびにＧｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ製品のＥｎｇｅｒｉｘ−Ｂ（登録商標）およびＰｅｄｉａｒｉｘ（登録商標）である。Ｂ型肝炎成分を有する混合ワクチンは、ＨｅｐＢ単一抗原ワクチンと比較して、より高い完了率およびコンプライアンスの結果のいずれにも関連していた。（参考文献：Ｋｕｒｏｓｋｙ他；Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｏｎ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｃｏｍｐｌｉａｎｃｅ  ｉｎ  Ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ；Ｔｈｅ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ、３６（７）：ｅｌ８９〜ｅｌ９６、２０１７年７月）。複数の参考文献では、他の抗原と組み合わせた、リン酸アルミニウムへのＢ型肝炎表面抗原の吸着について言及されている。Ｈｅｘａｖａｃ（登録商標）混合ワクチンは、Ｂ型肝炎成分の免疫原性が低いため、市場から回収された。このため、十分な免疫原性または強化された免疫原性を有するＢ型肝炎抗原を含む混合ワクチン組成物の必要性がある。
インフルエンザ菌（Ｈｉｂ）抗原
インフルエンザ菌は、上気道フローラの正常な部分であるグラム陰性球桿菌である。インフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ  ｂ）は、幼児における侵襲的な血液媒介感染症である髄膜炎の主な原因であり、出生後の最初の２年間における髄膜炎の主な原因である。インフルエンザ菌に対する予防接種は、１９８７年にカナダで、多糖ワクチン［ポリリボースリビトールリン酸（ＰＲＰ）］を用いて開始された。Ｈｉｂのポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）莢膜は、この微生物の主な病原性因子である。ＰＲＰに対する抗体は、血清殺菌活性の最初の寄与因子であり、抗体レベルの増加に伴って侵襲性疾患リスクは低下する。ＰＲＰは、Ｔ細胞非依存性抗原であり、このため、ａ）１８ヵ月未満の乳幼児および小児における不十分な抗体応答の誘導、ｂ）Ｔ細胞依存性抗原を用いた場合にみられるよりも可変的で量的に少ない抗体応答、ｃ）免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）のより高い割合での産生、およびｄ）追加免疫応答の誘導不能を特徴とする。
【００１９】
ＰＲＰ成分のみに基づいた初期ワクチンは、乳児において効果がないことが判明した。さらに、ＰＲＰコンジュゲートワクチンに対する取り組みが行われ、ＰＲＰは、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の外膜タンパク質、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、およびＣＲＭ１９７などの担体タンパク質と呼ばれるタンパク質にコンジュゲートされる。混合ワクチンにＨｉｂ−コンジュゲート成分を含むことは、Ｈｉｂ免疫原性の低下と関連している。さらに、このＨｉｂ−コンジュゲートは、水性媒体中では不安定であり、この形態で長期保存することは不可能である。このため、インフルエンザ菌ｂ（Ｈｉｂ）のＰＲＰ多糖は、乾燥固体として製剤化されることが多く、他の抗原の液体製剤と共に、送達される時点で再構成される。例えば、Ｉｎｆａｎｒｉｘ（登録商標）ｈｅｘａ（Ｗ０９９／４８５２５）である。
ポリオ抗原
様々な種類のワクチンが入手可能である：
−  １９６１年にＡｌｂｅｒｔ  Ｓａｂｉｎ博士によって開発された弱毒化（弱められた）経口ポリオワクチン（ＯＰＶ）。Ｓａｂｉｎ株を含むＯＰＶは経口投与される。
−  １９５５年にＪｏｎａｓ  Ｓａｌｋ博士によって開発された不活化（死菌）ポリオワクチン（ＩＰＶ）。Ｓａｌｋ株を含むＩＰＶは注射として投与される。
−  近年、ホルマリンを用いてＳａｂｉｎ株ポリオウイルスを不活化することによって調製されたＳａｂｉｎ不活化ポリオウイルスが注射剤として開発され、市販の製品としても入手可能となっている。
【００２０】
弱毒化（ＯＰＶ）ポリオワクチンおよび不活化（ＩＰＶ）ポリオワクチンは、いずれもポリオ疾患の世界的な抑制に有効であった。前記ポリオワクチンは、Ｓａｌｋ株またはＳａｂｉｎ株を含むことがある。
【００２１】
１９５５年、Ｊｏｎａｓ  Ｓａｌｋ博士は、野生型ポリオウイルスの不活化に成功し、ひいては、それを注射タイプの製剤にすることを可能にしてＳａｌｋ株と命名した。Ｓａｌｋ株には、ポリオ疾患に対するワクチンに使用されているＭａｈｏｎｅｙ１型、ＭＥＴ２型、およびＳａｕｋｅｔｔ３型が含まれる。Ｓａｂｉｎ株には、Ｓａｂｉｎ１株およびＳａｂｉｎ２株が含まれる。
【００２２】
現時点で許容される標準用量のポリオワクチンは、不活化ポリオウイルス１型（Ｍａｈｏｎｅｙ）を４０Ｄ抗原単位、不活化ポリオウイルス２型（ＭＥＦ−Ｉ）を８Ｄ抗原単位、および不活化ポリオウイルス３型（Ｓａｕｋｅｔｔ）を３２Ｄ抗原単位含有しており、例えば、Ｉｎｆａｎｒｉｘ−ｈｅｘａ（登録商標）である（Ｗ０９９／４８５２５）。
【００２３】
ＩＰＶは、現時点で、アジュバント非添加の単独製剤、またはＤＴ−ＩＰＶ（ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドと共に）および六価−ＩＰＶワクチン（さらに、百日咳、Ｂ型肝炎、インフルエンザ菌ｂ、およびアジュバントと共に）、例えば、Ｉｎｆａｎｒｉｘ（登録商標）ｈｅｘａを含む種々の組合せのいずれかとして入手可能である（Ｗ０９９／４８５２５）。
【００２４】
しかし、ＯＰＶと比較した場合、ＩＰＶの全体的な製造費用は著しく高額である。これは主に以下の要件によるものである：（ｉ）用量当たりより多くのウイルス、（ｉｉ）追加の下流処理（すなわち、濃縮、精製、および不活化）、および関連するＱＣ試験、（ｉｉｉ）下流処理における抗原の損失または低い回収率、ならびに（ｉｖ）封じ込め。これまで、財政的課題が、低所得国および中所得国におけるＩＰＶの革新および実施の主な問題点であった。
【００２５】
ポリオウイルスの根絶に続くＩＰＶの今後の世界的な需要は、現行のレベルである年間８０００万回分から４億５０００万回分に増加し得る。したがって、ＩＰＶの供給を「拡大する」ための取り組みが必要とされる可能性が高い。
【００２６】
本出願人らは、驚くべきことに、低減用量のＩＰＶは、標準用量のＩＰＶ抗原と比較する場合、ポリオに対する非劣性／同等の防御を示すことを発見した。より低用量のＩＰＶ抗原を用いて感染症に対する防御をもたらす低減用量の有効なワクチン製剤は、従来ワクチンの供給が、世界的な需要に対して不十分であるか、従来ワクチンの製造費用が、該ワクチンを発展途上国にとって手頃な価格で販売することの妨げとなっている状況において望ましい。また、現存する市販の製剤と比較して、より低用量のＩＰＶへの曝露は、より安全である可能性がある。このため、より手頃な価格でＩＰＶを入手可能にするための種々の戦略が評価される必要がある。したがって、低減用量のＩＰＶを含む混合ワクチンは、その価格をさらに安価にし、その投与を容易にすることが可能である。
【００２７】
汎発性インフルエンザワクチンの場合、アジュバントの使用は、用量の低減を可能にし、アベイラビリティを増加させ、ワクチンの費用を低減した。したがって、ＩＰＶのアジュバントワクチン製剤は、費用を低減するであろうし、また世界的に使用可能なＩＰＶ用量の数を増加するであろうことが推測された。
【００２８】
さらに、アルミニウム塩は、安全であるとみなされており、すでにＩＰＶを含有する混合ワクチンに使用されており、開発における障害が最も低く、製造費用が高額ではない。しかし、アルミニウムアジュバントが、大幅な用量の低減を可能にすることは知られていない。
【００２９】
加えて、六価ワクチン中に存在する全細胞百日咳抗原は、強い免疫刺激因子であることが証明されている。リン酸アルミニウムアジュバントおよび全細胞百日咳ワクチンの両方の免疫刺激作用によって、我々は低減用量のＩＰＶを用いて良好な免疫応答が得られると推定する。
他の抗原
混合ワクチンに含まれる可能性のある他の抗原は、インフルエンザ菌（血清型ａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆおよび非莢膜株）、肝炎（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧ株）、髄膜炎菌Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｗ、Ｘ、Ｙ、インフルエンザ、肺炎球菌、連鎖球菌、炭疽菌、デング熱、マラリア、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、ＢＣＧ、日本脳炎、ロタウイルス、痘瘡、黄熱、腸チフス、帯状疱疹、水痘ウイルスなどである。
【００３０】
混合ワクチンに使用される抗原の範囲および種類は、乳児、幼児、小児、青年、および成人など、ワクチンが使用される標的集団次第である。最も初期に知られていた混合ワクチンであって、百日咳菌、破傷風菌、ジフテリア菌、および任意選択で不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）、および／またはＢ型肝炎ウイルス、および／またはインフルエンザ菌Ｂ型の感染を防ぐことが可能である混合ワクチンが知られている（例として、ＷＯ９３／２４１４８、ＷＯ９７／００６９７、ＷＯ２０００／０３０６７８、ＷＯ２００８／０２８９５６、ＵＳ６０１３２６４、およびＷＯ２００５０８９７９４を参照）。
【００３１】
しかし、抗原競合の十分に証明されている事象は、多価ワクチンの開発を複雑にし、妨げとなっている。この事象は、複数の抗原を一緒に投与することによって、個別に投与される場合のこれらの抗原に対する免疫応答と比較して、特定の抗原に対する反応がたびたび低下する結果となることが観察されることを指す。
【００３２】
一方、複数回用量のワクチンは、有害な微生物による汚染を防ぐために保存剤を含むべきである。発展途上国に輸出されるワクチン製品として、ワクチンが使用される国の環境、流通方法などを考慮すると、保存剤を含有する複数回用量のワクチンが好ましい。使用されている保存剤の例には、塩化ベンゼトニウム（フェメロール）、チオメルサール、フェノール、ホルムアルデヒド、および２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）が含まれることは、当該分野で知られている。ワクチンに適した保存剤は、環境上安全で、細菌に加えて酵母菌および他の真菌に対して有効であるべきであり、ワクチンの免疫原性作用に対する悪影響のないものであるべきである。
【００３３】
チオメルサールは、保存剤として多くのワクチンで広く使用されているエチル水銀の誘導体である。チメロサールは、混入した微生物の増殖を防ぐこと、およびワクチン製品の保存または使用の間に無菌状態を維持することで知られており、ＷＨＯ事前認証（ＰＱ）を取得している多くの混合ワクチンは、保存剤としてチメロサールを含有する。しかし、注射部位における発赤および腫脹を含む、主に遅延型の局所過敏反応の形態であるチオメルサールに対する特定のアレルギー反応（集団の約１６％）に関する報告がある。
【００３４】
さらに、不活化ポリオワクチンに保存剤としてチオメルサールを使用すると、冷蔵庫で保存した場合であっても、１週間以内にワクチン力価が５０％以上低下することが知られているため、不活化ポリオワクチンは、保存剤としてチオメルサールの代わりに２−ＰＥを従来使用している。（Ｖａｃｃｉｎｅ  １９９４、第１２巻、第９号、８５１〜８５６ページ、Ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｉｍｅｒｏｓａｌ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｃｙ  ｏｆ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｏｌｉｏｖｉｒｕｓ  ｖａｃｃｉｎｅ）。
【００３５】
前記混合ワクチン（Ｄ、Ｔ、ｗＰ、Ｈｉｂ、ＨＢｓＡｇ、およびＩＰＶを含む）には、５ｍｇ／ｍＬの濃度で２−ＰＥも使用される（ＷＯ２０１００４６９３４、ＷＯ２００８０２０３２２、およびＷＯ２０１２０９３４０６）。
【００３６】
しかし、２−ＰＥは、２〜８℃で、ＤＰＴ系混合ワクチンにおいて、酵母菌および真菌に対する抗微生物活性が、チメロサールより弱いことが認められている。必要とされる基準を満たすために、２−ＰＥを増量することによって混合ワクチンの保存効果を向上することは、選択肢の１つである。しかし、２ＰＥ濃度の増加は、混合ワクチンの投与対象である年少児における安全性の問題を招く可能性があり、そのため、このようなワクチンの承認に対する規制上の障害に繋がる可能性がある。
【００３７】
したがって、２−ＰＥを、安全基準および規制基準を満たす少なくとも１種の他の保存剤と組み合わせることによって、混合ワクチンの保存効果を向上することは有利であろう。２−ＰＥ以外の使用可能な保存剤の例には、塩化ベンゼトニウム（フェメロール）、パラベンエステル、フェノール、ホルムアルデヒドが含まれることは、当該分野で知られている。
【００３８】
メチルおよびプロピルパラベン、ベンジルアルコールは、ＵＳＰ、ＢＰ、およびＥＰに従った抗微生物試験に合格することが認められた。さらに、これらの保存剤は、非毒性である上に有効である。パラベンの毒性は、身体がこれらの薬物を、容易で速やかに身体から除去するため、比較的低い。マウス腹腔内におけるメチルパラベンのＬＤ５０は１ｇ／ｋｇである。メチルおよびプロピルパラベンの混合物が市販のワクチンに使用されたことは、これまでに認められていない。
【００３９】
本出願人らは、２−フェノキシエタノールとパラベンエステル（例えば、メチル−、プロピル−パラベン）の混合物の保存効果は、２−フェノキシエタノール単独と比較して、比較的により有効であることを発見した。
【００４０】
さらに、本出願人らは、免疫原性、反応原性、安定性、および混合ワクチン組成物中における抗原の適切な形態の維持は、該組成物を製剤化する方法次第であり、この方法には、
ａ）個々の抗原を生成するプロセス、
ｂ）抗原の一連の添加、
ｃ）特定の抗原に対する特定のアジュバントの特定の量での使用、
ｄ）アジュバントへの抗原の個別の吸着または組み合わせた吸着（ここで、組み合わせた吸着は、作業の容易さという形での利点および最初の予め吸着された抗原が、次の抗原を添加する間に部分的または完全に脱着する場合があることを含む欠点を有する。最後のステップで添加した抗原は、先に吸着した抗原が吸着能を飽和させている可能性があり、完全には吸着されないことがある。弱く吸着した抗原は、保存中に脱着される可能性がある。）、
ｅ）アジュバントへの抗原の吸着の程度、
ｆ）最小アルミニウム濃度の使用、
ｇ）最適な濃度および種類の保存剤の使用、
ｈ）撹拌、温度、およびｐＨを含む種々のパラメータの使用
が含まれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００４１】
少なくとも一実施形態は本明細書で満たしている、本開示のいくつかの目的は以下のとおりである：
本開示の目的は、先行技術の１つもしくは複数の問題を改善することまたは少なくとも有用な代替物を提供することである。
【００４２】
本開示の別の目的は、ジフテリア、破傷風、百日咳、ポリオ、インフルエンザ菌、およびＢ型肝炎を原因とする感染症の防止および予防に適した完全に液体である混合ワクチン、またはその臨床徴候の発症もしくは進行を防ぐ、寛解する、もしくは遅延するための完全に液体である混合ワクチンを提供することである。
【００４３】
本開示のさらに別の目的は、標準用量のＩＰＶ抗原と比較する場合、ポリオに対する非劣性／同等の防御を示す、種々の低減用量の不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）抗原を含有する完全に液体である混合ワクチンを提供することである。
【００４４】
本開示のさらに別の目的は、複数回用量の混合ワクチンの保存効果を向上するために、少なくとも１種のパラベン、すなわち、メチルまたはプロピルパラベン保存剤および２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）を含有する完全に液体である混合ワクチンを提供することである。
【００４５】
本開示のさらに別の目的は、改善された免疫原性、低下した反応原性、改善された安定性を示し、さらに前記免疫原性成分それぞれに対するセロプロテクションの基準を満たす混合ワクチンのこのような組成物／製剤を製造する改良された方法を提供することである。
【００４６】
本開示の他の目的および利点は、本開示の範囲を限定することを意図するものではない以下の説明からより明らかとなるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００４７】
他の抗原／免疫原と組み合わせた低減用量の不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）抗原ならびに複数回用量の混合ワクチンの保存効果を向上する保存剤として使用される少なくとも１種のパラベンエステル、すなわち、メチルまたはプロピルパラベンおよび２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）を含む混合ワクチン組成物およびその生成プロセス。
【００４８】
本開示は、
ａ）半合成培地を用いて産生され、続いて解毒され、リン酸アルミニウムアジュバントに個別に吸着されることで免疫原性が増強された高度に精製されたジフテリアトキソイド（Ｄ）と破傷風トキソイド（Ｔ）、
ｂ）特定の比の特異的な百日咳菌株に対して熱不活化と化学的不活化の組合せを使用して調製され、反応原性の低下および力価の上昇が得られた不活化全細胞百日咳菌（ｗＰ）成分、
ｃ）担体タンパク質（ＣＰ）にコンジュゲートしたインフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）莢膜多糖抗原（ＰＲＰ）、
ｄ）ホルムアルデヒド不活化の改良された方法を利用すること、および任意選択でリン酸アルミニウムアジュバントに吸着することによって調製され、標準用量と比較して同程度の有効性を示す低減用量のＳａｌｋまたはＳａｂｉｎ（不活化ポリオウイルス）ＩＰＶ
ｅ）リン酸アルミニウムアジュバントに個別に吸着され、それによって免疫原性が増強されたＢ型肝炎（ＨｅｐＢ）表面抗原、
ｆ）反応原性の低下を確実にすることとなる最小アルミニウム含有量
ｇ）保存剤として、２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）以外に、少なくとも１種のパラベンエステル、すなわち、メチルまたはプロピルパラベン、
を含む混合ワクチン組成物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
本開示は、異なる実施形態の影響を受けやすいが、本開示が、本開示の原理の例示であると考えることができ、本説明で例示され、開示されることの開示の範囲を限定することを意図するものではないとの理解と共に、特定の実施形態は、以下の詳細な考察に示される。実施形態は、当業者に本開示の範囲を徹底して完全に伝えるために提供される。特定の成分および方法に関する多くの詳細が、本開示の実施形態の完全な理解を得るために明記されている。実施形態で提供される詳細が本開示の範囲を限定すると解釈されるべきではないことは、当業者には明白であろう。いくつかの実施形態において、公知の組成物、公知のプロセス、公知の技術は、詳細に記載されていない。
【００５０】
本開示で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのみのものであり、このような用語は、本開示の範囲を限定するとはみなされないものとする。本開示で使用する場合、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という形態は、文脈上明らかに別段の指示がない限り、複数形も含むことを意図することがある。
【００５１】
第１、第２、第３などの用語は、前述の用語が、ある要素、成分、部位、層、または区分を、別の成分、部位、層、または区分から区別するためにのみ使用されることがあるため、本開示の範囲を限定すると解釈されるべきではない。第１、第２、第３などのような用語は、本明細書で使用される場合、本開示によって明らかに指示がない限り、特定の配列または順序を意味しない。本開示は、免疫原性組成物およびそれを調製するためのプロセスを提供する。
【００５２】
「ワクチン」という用語は、任意選択で「免疫原性組成物」という用語と代替可能であり、その逆もまた同様である。
「Ｄ抗原単位」（「国際単位」またはＩＵとも呼ばれる）：ポリオウイルスのＤ抗原型は、防御的に働く中和抗体を誘導する。本明細書で言及されるＤ抗原単位（例として、本発明のワクチン中）は、製剤化されたワクチンの各ヒト用量（典型的に最終体積０．５ｍＬ）に添加される最終的なワクチンの配合前に、吸着されていない各バルクＩＰＶ抗原型の測定された合計Ｄ抗原単位である。Ｄ抗原単位を測定する信頼性の高い方法は、当該分野で公知であり、例えとして、欧州薬局方によって公表されている。例として、Ｄ抗原単位は、以下の実施例１に記載されるとおり、ＥＬＩＳＡ試験を用いて測定されることがある（「ＥＬＩＳＡによるＤ抗原定量化」）。欧州薬局方は、製造業者間でのこのような方法の規格化のために、試験試料（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ−欧州薬局方、事務局で入手可能、例えば、コードＰ  ２１６  ００００）を提供している（Ｐｈａｒｍｅｕｒｏｐａ  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｉｓｓｕｅ、Ｂｉｏ９６−２）。このため、Ｄ抗原単位の値は、当該分野で十分に理解されている。
【００５３】
本明細書において「用量」という用語は、通常本発明のワクチンの１回の投与であり、これは、通常１回の注射である。典型的なヒト用量は０．５ｍＬである。当然ながら、ワクチン投与スケジュールにおいて種々の用量を投与してもよい。
【００５４】
本明細書において「ＩＰＶ」またはこれらの成分を含む免疫原性組成物という用語は、不活化ポリオウイルス１型（例えば、好ましく使用されているとおり、Ｍａｈｏｎｅｙ）、２型（例えば、ＭＥＦ−１）、もしくは３型（例えば、Ｓａｕｋｅｔｔ）、またはＳａｂｉｎ血清型１、２、３といったこれらの型のうち、いずれか２つもしくは３つ全ての組合せを意味することが意図される。本発明の目的のための全用量（または標準用量）ＩＰＶ免疫原性組成物（Ｓａｌｋ系ＩＰＶ１型、２型、および３型のそれぞれのＤ抗原単位が４０−８−３２）の一例は、Ｐｏｌｉｏｖａｃ（登録商標）（Ｓｅｒｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｉｎｄｉａ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．）であり得る。このため、本発明の免疫原性組成物において、Ｓａｌｋ系ＩＰＶの標準用量と比較して（低減された）１分の１、２分の１、３分の１の用量低減があると本明細書で述べられる場合、それぞれ４０、８、および／または３２Ｄ抗原単位であるＩＰＶ１型、２型、および／または３型（各バルクＩＰＶ抗原型で測定される）のＸ％の低減用量と同等であるＤ抗原単位が、前記ワクチンの各用量内に配合されていることを意味している。
【００５５】
本明細書全体を通して、「糖」という用語は、多糖またはオリゴ糖を示すことがあり、またその両方を含む。莢膜糖抗原は、完全長の多糖である場合があり、または細菌の「標準の大きさの糖」および「オリゴ糖」（天然では反復単位が少ないか、または多糖を扱いやすい大きさに縮小しているが、宿主において防御的に働く免疫応答を誘発する能力が依然としてある）にまで及ぶ場合がある。
【００５６】
本開示の第１の実施形態によると、混合ワクチン組成物は、以下に限定されないが、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、全細胞百日咳菌（ｗＰ）、インフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）ＰＲＰ−ＣＰコンジュゲート、Ｂ型肝炎（ＨｅｐＢ）、低減用量の不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）から選択される抗原／免疫原の群を含み、２−フェノキシエタノールおよび少なくとも１種のパラベンエステルの組合せ保存剤を追加として含む。
【００５７】
本開示の第２の実施形態によると、混合ワクチン組成物は、以下に限定されないが、インフルエンザ菌（血清型ａ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆおよび非莢膜株）、肝炎（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、およびＧ株）、髄膜炎菌Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、Ｗ−１３５、またはＸ、インフルエンザ、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、チフス菌抗原、無細胞百日咳抗原、改変アデニル酸シクラーゼ、マラリア抗原（ＲＴＳ、Ｓ）、肺炎球菌、連鎖球菌、炭疽菌、デング熱、マラリア、麻疹、流行性耳下腺炎、風疹、ＢＣＧ、ヒト乳頭腫ウイルス、日本脳炎、デング熱、ジカ熱、エボラ熱、チクングンア熱、ロタウイルス、痘瘡、黄熱、フラビウイルス、帯状疱疹、水痘ウイルス抗原からなる群からそれぞれ選択される１種または複数の抗原をさらに含むことができる。
【００５８】
本開示の第３の実施形態によると、混合ワクチン組成物に使用されるＩＰＶ株は、１型、２型、および３型の群から選択される不活化Ｓａｂｉｎ株、またはＭａｈｏｎｅｙ１型、ＭＥＦ２型、およびＳａｕｋｅｔｔ３型の群から選択される不活化Ｓａｌｋ株を含む。
【００５９】
第３の実施形態の態様のうちの１つにおいて、ポリオウイルスは以下の方法で増殖されてもよい：
−  ＣＣＬ８１−ＶＥＲＯ（サル腎臓）細胞系は、ポリオウイルス、すなわち、ＳａｂｉｎおよびＳａｌｋ株の増殖のための宿主細胞として使用された。
−  ポリオウイルスの望ましい株による宿主細胞の感染および７２時間の培養後、該ウイルスおよび細胞片を含有する培地をプールし、単一の容器に回収した。
−  この濾液を、１００ＫＤａカセットを用いたタンジェンシャルフロー濾過に供し、リン酸緩衝液を用いてダイアフィルトレーションを行い、陰イオン交換クロマトグラフィーを用いて精製した。
−  患者への投与前に、前記ウイルスは、適切な不活化方法を用いて不活化されなければならない。
【００６０】
しかし、本発明者らは、驚くべきことに、ホルムアルデヒド不活化後のＤ抗原の高い損失率が、ポリオウイルス粒子の望ましくない凝集を予想外に招くリン酸緩衝液の存在による可能性があることを発見した。
【００６１】
したがって、本開示の重要な一態様は、以下の
ａ）精製されたウイルスプールを、リン酸緩衝液から、７〜７．５の間のｐＨを有する（３０〜５０ｍＭ）の範囲のトリス緩衝液に緩衝液を交換するステップと、
ｂ）上記混合物に、グリシン（５ｇｍ／Ｌ）を含有するＭ−１９９培地を添加するステップと、
ｃ）０．０２５％ホルムアルデヒドを添加し、続いて混合するステップと、
ｄ）続いて、マグネチックスターラーでウイルスバルクを継続して撹拌しつつ、この混合物を３７℃で５〜１３日間インキュベートするステップと、
ｅ）インキュベーション後の混合物を、７日目に中間ＴＦＦシステム（１００ＫＤａ、０．１ｍ２）に供し、不活化後に最終濾過に供するステップと、
ｆ）続いて、濾過されたバルクを２〜８℃で保存するステップと、
ｇ）Ｄ−Ａｇ単位測定のために、Ｄ−Ａｇ  ＥＬＩＳＡを実施するステップと
を含むホルマリン不活化の改良されたプロセスを含む。
【００６２】
本開示の第４の実施形態によると、混合ワクチン組成物に使用されるＩＰＶ株は、１型、２型、および３型の群から選択される低減用量の不活化Ｓａｂｉｎ株、またはＭａｈｏｎｅｙ１型、ＭＥＦ２型、およびＳａｕｋｅｔｔ３型の群から選択される低減用量の不活化Ｓａｌｋ株を含む。
【００６３】
本開示の第５の実施形態によると、前記ＩＰＶ（ＳａｂｉｎまたはＳａｌｋ株）は、任意のアジュバントに個別に吸着されず、続いて最終的な混合ワクチン組成物に添加される場合がある。
【００６４】
第５の実施形態の好ましい態様によると、前記ＩＰＶ（ＳａｂｉｎまたはＳａｌｋ株）は、混合ワクチン中に存在するアジュバント、より好ましくはリン酸アルミニウム塩または水酸化アルミニウム塩に吸着されてもよく、ＩＰＶ抗原の吸着率は、ＩＰＶ１型では１０〜３０％の範囲内、ＩＰＶ２型では６０〜１００％の範囲内、ＩＰＶ３型では０〜２５％の範囲内であることがある。
【００６５】
本開示の第６の実施形態によると、前記ＩＰＶ（ＳａｂｉｎまたはＳａｌｋ株）成分は、（例えば、他の成分が存在する場合、それとの混合前または混合後）水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）もしくはリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）などのアルミニウム塩（Ａｌ３＋）、ミョウバン、リン酸カルシウム、ＭＰＬＡ、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドアジュバント、リポソーム、もしくは水中油型エマルジョン、またはその組合せの群から選択されるアジュバントに個別に吸着される場合がある。吸着される場合、１種または複数のＩＰＶ成分は、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）またはリン酸アルミニウムに個別に、または混合物として一緒に吸着されてもよい。
【００６６】
前記ＩＰＶ（ＳａｂｉｎまたはＳａｌｋ株）成分は、以下の手順によってアルミニウム塩に吸着されてもよい：
−  最終アルミニウム（Ａｌ３＋）濃度を０．１〜０．８ｍｇ／用量の間にするため、オートクレーブで処理したＡｌ（ＰＯ）４またはＡｌ（ＯＨ）３の望ましい体積を５０ｍＬ容器に入れ、
−  調整されたＤ−Ａｇ単位と共にＩＰＶバルクを添加し、希釈剤（１０ｘＭ−１９９＋０．５％グリシン）を用いてメスアップし、
−  最終配合物のｐＨを調整し、ｐＨが６〜７．５の間の最終配合物を得る。
【００６７】
第６の実施形態の態様のうちの１つにおいて、ホルマリン不活化ＩＰＶは、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、および６．８から選択されるｐＨ、好ましくは６．５のｐＨで、血清型毎に０．１ｍｇ／用量、０．２ｍｇ／用量、０．３ｍｇ／用量、０．４ｍｇ／用量、０．５ｍｇ／用量、０．６ｍｇ／用量、０．７ｍｇ／用量、および０．８ｍｇ／用量から選択される濃度、好ましくは０．１ｍｇ／用量〜１．２５ｍｇ／用量の間の濃度を有するアルミニウム（Ａｌ３＋）に吸着され得る。
【００６８】
第６の実施形態のさらに別の態様において、トリス存在下におけるホルマリン不活化後のＤ抗原の回復率は、５０％、６０％、７０％、または８０％のいずれかである可能性があり、リン酸アルミニウム吸着後の吸着率は、７０％〜８０％、８０％〜９０％、９０％〜９９％、または９５％〜９９％の間である可能性がある。
【００６９】
本開示の第７の実施形態によると、ジフテリア毒素（外毒素）および破傷風毒素（外毒素）は、それぞれジフテリア菌および破傷風菌から得られ、続いて適当な不活化方法を用いて解毒された。このようにして得られたジフテリアトキソイド（Ｄ）および破傷風トキソイド（Ｔ）は、ゲル濾過クロマトグラフィーを用いて精製されてもよい。このようにして得られた精製されたＤＴは、さらに混合ワクチンの配合のために使用された。
【００７０】
第７の実施形態の態様のうちの１つにおいて、ジフテリア毒素は、以下の組合せのうちの任意の１つで、最適な濃度の以下の成分からなる半合成培地でジフテリア菌を増殖させることによって産生される：
組合せ１：
カゼイン加水分解物、マルトース一水和物、氷酢酸、乳酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、β−アラニン、ピメリン酸、ニコチン酸、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化第一マンガン、Ｌ−シスチン、塩化カルシウム二水和物、オルトリン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸第一鉄、およびＷＦＩ。
組合せ２：
カゼイン加水分解物、マルトース一水和物、氷酢酸、乳酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、β−アラニン、ピメリン酸、ニコチン酸、塩化第一マンガン、Ｌ−シスチン、塩化カルシウム二水和物、オルトリン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸第一鉄、およびＷＦＩ。
組合せ３：
カゼイン加水分解物、マルトース一水和物、氷酢酸、乳酸ナトリウム、β−アラニン、ピメリン酸、ニコチン酸、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化第一マンガン、Ｌ−シスチン、塩化カルシウム二水和物、オルトリン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、およびＷＦＩ。
組合せ４：
酵母エキス、マルトース一水和物、氷酢酸、乳酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、β−アラニン、ピメリン酸、ニコチン酸、硫酸銅、硫酸亜鉛、塩化第一マンガン、Ｌ−シスチン、塩化カルシウム二水和物、オルトリン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、硫酸第一鉄、およびＷＦＩ。
【００７１】
第７の実施形態の第２の態様によると、破傷風毒素は、以下の組合せのうちの任意の１つで、最適な濃度の以下の成分からなる半合成培地で破傷風菌を増殖させることによって産生される：
組合せ１：
カゼイン消化物、塩化カルシウム、リン酸水素二カリウム、無水ブドウ糖、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、リボフラビン、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸、Ｌ−シスチン、塩化第二鉄、ビタミンＢ１２溶液、ビオチン、濃ＨＣｌ、ＮａＯＨ、無水エタノール、およびＷＦＩ。
組合せ２：
カゼイン消化物、塩化カルシウム、β−アラニン、リン酸水素二カリウム、無水ブドウ糖、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、リボフラビン、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸、Ｌ−シスチン、塩化第二鉄、ビタミンＢ１２溶液、ビオチン、濃ＨＣｌ、ＮａＯＨ、無水エタノール、およびＷＦＩ。
組合せ３：
カゼイン消化物、塩化カルシウム、リン酸水素二カリウム、無水ブドウ糖、塩化ナトリウム、硫酸亜鉛、リボフラビン、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸、Ｌ−シスチン、塩化第二鉄、ビタミンＢ１２溶液、ビオチン、濃ＨＣｌ、ＮａＯＨ、無水エタノール、およびＷＦＩ。
組合せ４：
カゼイン加水分解物、塩化カルシウム、リン酸水素二カリウム、無水ブドウ糖、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化第一マンガン、リボフラビン、塩酸チアミン、塩酸ピリドキシン、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸、Ｌ−シスチン、塩化第二鉄、ビタミンＢ１２溶液、ビオチン、濃ＣＨｌ、ＮａＯＨ、無水エタノール、およびＷＦＩ。
【００７２】
第７の実施形態のさらに別の態様において、ジフテリア毒素および破傷風毒素は、以下の加熱、ＵＶ、ホルマリン／ホルムアルデヒド、アセチルエチレンイミンなどを含む不活化方法のうちの１つまたはその組合せを用いて解毒された。
【００７３】
本開示の第８の実施形態によると、混合ワクチン組成物に使用される肝炎（Ｈｅｐ）抗原は、Ｂ型肝炎株（ＨＢｓＡｇ）の表面から得られた肝炎抗原を含む。
第９の実施形態の態様のうちの１つにおいて、ＨＢｓＡｇは、以下の方法のうちの１つによって作製され得る：
−  ＨＢＶ感染中には、大量のＨＢｓＡｇが肝臓で合成され、血流に放出されているため、慢性Ｂ型肝炎キャリアの血漿から前記抗原を粒子形態で精製することによる方法
−  組換えＤＮＡ方法によってそのタンパク質を発現する方法
本開示の第９の実施形態によると、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）は、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）もしくはリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）などのアルミニウム塩（Ａｌ３＋）、ミョウバン、リン酸カルシウム、ＭＰＬＡ、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドアジュバント、リポソーム、もしくは水中油型エマルジョン、またはその組合せの群から選択されるアジュバントに個別に吸着される。
【００７４】
さらに好ましくは、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、およびＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）は、リン酸アルミニウムに個別に吸着される。
第９の実施形態の態様のうちの１つにおいて、ジフテリアトキソイド（Ｄ）抗原は、少なくとも５０％の吸着率で、リン酸アルミニウムに吸着した。
【００７５】
第９の実施形態の別の態様において、破傷風トキソイド（Ｔ）抗原は、少なくとも４０％の吸着率で、リン酸アルミニウムに吸着した。
第９の実施形態のさらに別の態様において、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）は、少なくとも７０％の吸着率で、リン酸アルミニウムに吸着した。
【００７６】
本開示の第１０の実施形態によると、本開示の混合ワクチンに使用されるＨｉｂ抗原は、インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）株７６０７０５の莢膜多糖から得られる。
第１０の実施形態の一態様によると、Ｈｉｂ  ＰＲＰ抗原は、以下に限定されないが、ＣＲＭ１９７、ジフテリアトキソイド、髄膜炎菌外膜複合体、破傷風トキソイドの断片Ｃ、百日咳トキソイド、インフルエンザ菌のタンパク質Ｄ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌ＳＴ、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａ、外膜複合体ｃ（ＯＭＰＣ）、ポーリン、トランスフェリン結合タンパク質、ニューモリシン、肺炎球菌表面タンパク質Ａ（ＰｓｐＡ）、肺炎球菌表面付着因子Ａ（ＰｓａＡ）、肺炎球菌ＰｈｔＤ、肺炎球菌表面タンパク質ＢＶＨ−３およびＢＶＨ−１１、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）の防御抗原（ＰＡ）、炭疽菌の解毒された浮腫因子（ＥＦ）および致死因子（ＬＦ）、卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ツベルクリンの精製されたタンパク質誘導体（ＰＰＤ）、合成ペプチド、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、増殖因子、Ｎ１９のような種々の病原体由来抗原からの複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質、鉄取込みタンパク質、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ、ならびにＳ．ａｇａｌａｃｔｉａｅタンパク質からなる担体タンパク質の群から選択される担体タンパク質にコンジュゲートされる。
【００７７】
さらに好ましくは、Ｈｉｂ  ＰＲＰは、Ｅｌｌｉｓ他によるＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｕｓｅｓ  ｏｆ  Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｔｙｐｅ  Ｂ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、１９９４：３７〜６９ページにＫｎｉｓｋｅｒｎ他による「Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ：ｄｅｓｉｇｎ，ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ」ですでに開示されている、ＣＮＢｒ化学、還元的アミノ化化学、シアニル化化学、または任意の他の化学によって、破傷風トキソイド（ＴＴ）にコンジュゲートされる。
【００７８】
第１０の実施形態の第２の態様によると、前記担体タンパク質は、本開示の組成物中、遊離形態およびコンジュゲート形態の両方で存在し、非コンジュゲート形態は、好ましくは、全体としての組成物中の担体タンパク質の総量の２０％以下であり、より好ましくは、５重量％未満で存在する。
【００７９】
第１０の実施形態の第３の態様によると、Ｈｉｂ抗原は、実質的にいずれのアジュバントにも吸着されていない。
第１０の実施形態の第４の態様によると、Ｈｉｂ抗原は、何らかのアジュバントに計画的または意図的に吸着させなくてもよい。
【００８０】
第１０の実施形態の第５の態様によると、任意のアジュバントに対するＨｉｂ抗原の吸着率は２０％未満である。
本開示の第１１の実施形態によると、本開示の混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の製剤は、好ましくは、特定の比で混合された百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、および６２２９から作製され、続いて、チオメルサールを含まず、このため反応源生の低下と力価の上昇がもたらされる、改良された不活化方法を用いることによって不活化され、ｗＰ抗原は、アルミニウム系アジュバントに吸着されてもされなくてもよい。
【００８１】
第１１の実施形態の一態様によると、本開示の混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の製剤は、好ましくは、１：１：０．２５：０．２５の比で混合された百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、および６２２９から作製される。
【００８２】
第１１の実施形態の第２の態様によると、混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の製剤は、以下の加熱、ＵＶ、ホルマリン／ホルムアルデヒド、アセチルエチレンイミンなどを含む不活化処理のうちの１つまたは複数を用いて不活化された。
【００８３】
さらに好ましくは、混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の製剤は、熱処理と化学的処理の組合せを用いて不活化された。さらに好ましくは、ホルムアルデヒドの存在下にて５６±２℃で１０〜１５分間熱不活化された場合、ｗＰバルクは、塊状化せず、容易に均質化される状態を維持し、それによって反応原性が低下し、より長期間にわたるより高いｗＰ力価がもたらされる。
【００８４】
第１１の実施形態の第３の態様によると、混合ワクチン組成物に使用される全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の製剤は、（例えば、他の成分が存在する場合、それとの混合前または混合後）水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、またはその組合せなどのアルミニウム系アジュバントに吸着されてもされなくてもよい。吸着される場合、１種または複数のｗＰ株（すなわち、１３４、５０９、２５５２５、および６２２９）は、個別に、または混合物として一緒に吸着されてもよい。
【００８５】
本開示の第１２の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【００８６】
【表１】
2022502469.tif 000002
【００８７】
を含む。
本開示の第１３の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【００８８】
【表２】
2022502469.tif 000003
【００８９】
を含む。
本開示の第１４の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【００９０】
【表３】
2022502469.tif 000004
【００９１】
を含む。
本開示の第１５の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【００９２】
【表４】
2022502469.tif 000005
【００９３】
を含む。
本開示の第１６の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【００９４】
【表５】
2022502469.tif 000006
【００９５】
を含む。
本開示の第１７の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【００９６】
【表６】
2022502469.tif 000007
【００９７】
を含む。
本開示の第１８の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【００９８】
【表７】
2022502469.tif 000008
【００９９】
を含む。
本開示の第１９の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１００】
【表８】
2022502469.tif 000009
【０１０１】
を含む。
本開示の第２０の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１０２】
【表９】
2022502469.tif 000010
【０１０３】
を含む。
本開示の第２１の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１０４】
【表１０】
2022502469.tif 000011
【０１０５】
を含む。
本開示の第２２の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１０６】
【表１１】
2022502469.tif 000012
【０１０７】
を含む。
本開示の第２３の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１０８】
【表１２】
2022502469.tif 000013
【０１０９】
を含む。
本開示の第２４の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１１０】
【表１３】
2022502469.tif 000014
【０１１１】
を含む。
本開示の第２５の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１１２】
【表１４】
2022502469.tif 000015
【０１１３】
を含む。
本開示の第２６の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１１４】
【表１５】
2022502469.tif 000016
【０１１５】
を含む。
本開示の第２７の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１１６】
【表１６】
2022502469.tif 000017
【０１１７】
を含む。
本開示の第２８の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１１８】
【表１７】
2022502469.tif 000018
【０１１９】
を含む。
本開示の第２９の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１２０】
【表１８】
2022502469.tif 000019
【０１２１】
を含む。
本開示の第３０の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１２２】
【表１９】
2022502469.tif 000020
【０１２３】
を含む。
本開示の第３１の実施形態によると、複数回用量の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１２４】
【表２０】
2022502469.tif 000021
【０１２５】
を含む。
本開示の第３２の実施形態によると、最終の単回投与の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１２６】
【表２１】
2022502469.tif 000022
【０１２７】
を含む。
本開示の第３３の実施形態によると、最終の単回投与の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１２８】
【表２２】
2022502469.tif 000023
【０１２９】
を含む。
本開示の第３４の実施形態によると、最終の単回投与の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１３０】
【表２３】
2022502469.tif 000024
【０１３１】
を含む。
本開示の第３５の実施形態によると、最終の単回投与の混合ワクチン組成物／製剤は、
【０１３２】
【表２４】
2022502469.tif 000025
【０１３３】
を含む。
ＮＭＴ−以下
本開示の第３６の実施形態によると、最終の混合ワクチン組成物のうちの１種または複数の抗原は、いずれのアジュバントにも実質的に吸着されていなくてもよい。
【０１３４】
本開示の第３７の実施形態によると、免疫原性組成物のｐＨは、ｐＨ６．０〜ｐＨ８．０の範囲内、より好ましくはｐＨ６．０〜ｐＨ７．５の範囲内、さらにより好ましくはｐＨ６．２〜ｐＨ７．２の範囲内、最も好ましくはｐＨ６．３〜ｐＨ６．８の範囲内であってもよい。
【０１３５】
本開示の第３８の実施形態によると、免疫原性組成物は、炭酸塩、リン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩、および酒石酸塩、加えて、望ましいｐＨを得るように選択された比でリン酸ナトリウムおよび／またはリン酸カリウムを含有するリン酸緩衝剤を含む、より複雑な有機緩衝剤からなる群から選択される緩衝剤をさらに含んでもよい。別の実施例において、緩衝剤は、望ましいｐＨを得るために配合されるトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、すなわち、「Ｔｒｉｓ」を含有する。さらに別の実施例において、緩衝剤は、ハンクス塩を用いた最小必須培地であり得る。ＨＥＰＥＳ、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（ＰＩＰＥＳ）、および２−エタンスルホン酸（ＭＥＳ）などの他の緩衝液も本開示によって想定される。前記緩衝液は、本開示の免疫原性組成物の安定化に役立つ。緩衝液の量は、０．１ｍＭ〜１００ｍＭの範囲内であってよく、好ましくは５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、２５ｍＭ、２６ｍＭ、２７ｍＭ、２８ｍＭ、２９ｍＭ、および３０ｍＭから選択されてもよい。
【０１３６】
前記実施形態のさらに別の態様において、免疫原性組成物は、界面活性剤、高分子、および塩からなる群から選択される薬学的に許容される賦形剤をさらに含んでもよい。界面活性剤の例には、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などの非イオン性界面活性剤が含まれてもよい。高分子の例には、デキストラン、カルボキシメチルセルロース、ヒアルロン酸、シクロデキストリンなどが含まれてもよい。塩の例には、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＫＨ２ＰＯ４、Ｎａ２ＨＰＯ４．２Ｈ２Ｏ、ＣａＣｌ２、ＭｇＣｌ２などが含まれてもよい。好ましくは、塩はＮａＣｌであってもよい。通常、塩の量は、１００ｍＭ〜２００ｍＭの範囲内であってもよい。
【０１３７】
ヒスチジン、グリシン、アルギニン、およびリジンなどのアミノ酸は、免疫原性組成物の安定化のために添加されてもよい。
本開示の第３９の実施形態によると、免疫原性組成物は、水酸化アルミニウム（Ａｌ（ＯＨ）３）もしくはリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）などのアルミニウム塩（Ａｌ３＋）、ミョウバン、リン酸カルシウム、ＭＰＬＡ、３Ｄ−ＭＰＬ、ＱＳ２１、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチドアジュバント、リポソーム、または水中油型エマルジョンからなる群から選択される１種または複数のアジュバントをさらに含んでもよい。
【０１３８】
さらに好ましくは、前記組成物は、アジュバントとしてリン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）を含む。
さらに好ましくは、前記組成物は、アジュバントとして水酸化アルミニウム（ＡｌＯＨ３）を含む。
【０１３９】
第３９の実施形態の態様のうちの１つにおいて、最終製剤の抗原は、ｉｎ  ｓｉｔｕリン酸アルミニウムゲルもしくは既製のリン酸アルミニウムゲル、またはその組合せに吸着されてもよい。
【０１４０】
第３９の実施形態の好ましい態様のうちの１つにおいて、本開示の組成物は、アジュバントを２．５ｍｇ／０．５ｍＬ以下の量、具体的には、１．５ｍｇ／０．５ｍＬ〜０．１ｍｇ／０．５ｍＬの量で含有してもよい。
【０１４１】
本開示の第４０の実施形態によると、免疫原性組成物は、油水エマルジョン、Ｍｆ−５９、リポソーム、リポ多頭、サポニン、リピドＡ、リピドＡ誘導体、モノホスホリルリピドＡ、３−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ、ＡＳ０１、ＡＳ０３、オリゴヌクレオチド、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧを含むオリゴヌクレオチドおよび／もしくはリポソーム、フロイントアジュバント、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、高分子、ブロック共重合体を含むポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体のような共重合体、高分子ｐ１００５、ＣＲＬ−８３００アジュバント、ムラミルジペプチド、ＴＬＲ−４アゴニスト、フラジェリン、グラム陰性菌由来フラジェリン、ＴＬＲ−５アゴニスト、ＴＬＲ−５受容体に結合能力のあるフラジェリン断片、α−Ｃ−ガラクトシルセラミド、キトサン、インターロイキン−２、ＱＳ−２１、ＩＳＣＯＭＳ、スクアレン混合物（ＳＡＦ−１）、Ｑｕｉｌ  Ａ、コレラ毒素Ｂサブユニット、ポリホスファゼンおよびその誘導体、マイコバクテリウム細胞壁調製物、ミコール酸誘導体、非イオン性ブロック共重合体界面活性剤、ＯＭＶ、ｆＨｂｐ、サポニン、ステロールと脂質の組合せからなる群から選択される免疫刺激成分をさらに含んでもよい。
【０１４２】
本開示の第４１の実施形態によると、免疫原性組成物は、塩化ベンゼトニウム（フェメロール）、フェノール、ｍ−クレゾール、チオメルサール、ホルムアルデヒド、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、クロロブタノール、ｐ−クロロ−ｍ−クレゾール、もしくはベンジルアルコール、またはその組合せからなる群から選択される保存剤をさらに含んでもよい。ワクチン組成物は、単回の予防接種のための保存剤を含むか、または複数回の予防接種（すなわち、「複数回用量」キット）のための保存剤を含んでもよい。複数回用量の準備には、保存剤の包含が好ましい。複数回用量の組成物に保存剤を含むことの代替（または追加）として、前記組成物は、物質を除去するための無菌アダプターを有する容器に収められてもよい。通常、保存剤の量は、０．１ｍｇ〜５０ｍｇの範囲内であってもよい。
【０１４３】
本開示の第４２の実施形態によると、免疫原性組成物は、望まれる投与経路および製剤に応じて、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ゲル化または粘度増強添加物、香味剤、着色剤などのような補助物質をさらに含んでもよい。
【０１４４】
本開示の第４３の実施形態によると、免疫原性組成物は、完全に液体であってもよいが、これに限定されるものではない。液体製剤の適当な形態には、望ましいｐＨに緩衝された溶液、懸濁剤、エマルジョン、シロップ剤、等張水溶液、粘性組成物、およびエリキシル剤が含まれてもよい。
【０１４５】
本開示の免疫原性組成物は、ローション剤、ゲル剤、噴霧剤、軟膏、または他の適当な技術を含み経皮製剤の形態であってもよい。経鼻投与または呼吸器（粘膜）投与が望ましい場合（例えば、エアゾール吸入または吹送）、組成物は、圧迫スプレーディスペンサー、ポンプディスペンサー、またはエアゾールディスペンサーの形態であって、これによって分配され得る。エアゾール剤は、通常、炭化水素を用いて圧力を加えられいる。ポンプディスペンサーは、好ましくは、定用量または特定の粒径を有する用量を分配し得る。溶液、懸濁剤、およびゲル剤の形態である場合、いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、有効成分に加えて大量の水（好ましくは精製水）を含有する。
【０１４６】
本開示の第４４の実施形態によると、前記混合ワクチンは、２〜８℃で１２〜３６ヵ月、２５℃で２〜６ヵ月、３７℃で１週間〜４週間安定していると思われる。
本開示の第４５の実施形態によると、免疫原性組成物は、ジフテリア、破傷風、百日咳、Ｂ型肝炎ウイルス、インフルエンザ菌ｂ型、ポリオウイルスの感染の発症を低減するためか、またはこれらの感染を含む健康状態を予防するための方法であって、非経口、皮下、皮内、筋肉内、腹腔内、もしくは静脈内投与、または注入投与、またはインプラントからの徐放、または目薬による投与、または経鼻、直腸、頬側、膣内、経口、胃内、粘膜、経舌、肺胞粘膜、歯肉粘膜、嗅粘膜、もしくは呼吸粘膜投与、または予防接種の他の全ての投与経路を介して、免疫学的に有効な量の免疫原性組成物をヒト対象に投与することを伴う方法における使用のために製剤化されてもよい。
【０１４７】
本開示の第４６の実施形態によると、免疫原性組成物は、単回用量バイアルもしくは複数回用量バイアル（２回用量または５回用量または１０回用量バイアル）または複数回用量キットとして、または充填済みシリンジとして製剤化が可能であり、前記免疫原性組成物は、単回用量スケジュールまたは好ましくは、ワクチン接種の初回コース後に、必要であれば、続く１〜３年後の時間間隔で、１〜３回の個別の用量を投与する複数回用量スケジュールで投与されてもよい。投与計画も、少なくとも部分的に、防御免疫を付与するために必要とされる追加免疫用量の必要性をふまえて決定されるであろう。
【０１４８】
さらに好ましくは、前記免疫原性組成物は、第１用量、および続く１〜３年後の時間間隔をあけた第２用量からなる２回用量レジメンに従って、ヒト対象または２歳以下の小児に投与するために製剤化されてもよい。
【０１４９】
さらに好ましくは、前記免疫原性組成物は、他の薬物または他の任意のワクチンと同時に投与されてもよい。
本開示の第４７の実施形態によると、出願人は、改善された免疫原性および低下した反応原性を有する複数回用量の完全に液体である混合ワクチンは、ｉ）個々の抗原を生成するプロセス、ｉｉ）抗原の一連の添加、ｉｉｉ）特定の抗原に対する特定のアジュバントの特定の量での使用、ｉｖ）アジュバントへの抗原の個別の吸着または組み合わせた吸着、ｖ）アジュバントへの抗原の吸着の程度、ｖｉ）最小アルミニウム濃度の使用、ｖｉｉ）最適な濃度および種類の保存剤の使用、およびｖｉｉｉ）撹拌、温度、およびｐＨを含む種々のパラメータの使用を考慮に入れた上で、以下に開示されるプロセスによってワクチンが製造された場合に得られることを発見した。
ＳＩＩＰＬ混合ワクチンに使用される株の生物学的供給源：
ジフテリアトキソイド：
ジフテリア菌ＰＷ８  ＣＮ２０００株は、１９７３年に凍結乾燥形態で、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｌｏｎｄｏｎ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍから、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｃ．Ｒ．Ｉ．）Ｋａｓａｕｌｉ、Ｈｉｍａｃｈａｌ  Ｐｒａｄｅｓｈ、Ｉｎｄｉａによって得られた。この株を復活させ、マスターシードロット−ジフテリア菌ＣＮ２０００  Ａ１としてＣ．Ｒ．Ｉ．Ｋａｓａｕｌｉでさらに凍結乾燥した。
破傷風トキソイド：
破傷風菌Ｈａｒｖａｒｄ株Ｎｏ．４９２０５は、凍結乾燥形態で、Ｒｉｊｋｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｖｏｏｒ  ｄｅ  Ｖｏｌｋｓｇｅｚｏｎｄｈｅｉｄ（Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ  Ｃ．Ｒ．Ｉ．Ｋａｓａｕｌｉによって得られた。
百日咳：
ＳＩＩＰＬでの百日咳ワクチンバルクの製造は、百日咳菌の４種の株、すなわち、株１３４、５０９、６２２９、および２５５２５の使用を伴う。株１３４および５０９のマスターシードは、もともとＲｉｊｋｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓからのもので、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ａｕｔｈｏｒｉｔｙ、Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｋａｓａｕｌｉ、Ｈｉｍａｃｈａｌ  Ｐｒａｄｅｓｈ、Ｉｎｄｉａを介して得られた。株６２２９および２５５２５のマスターシードは、もともとＬｉｓｔｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｅｎｇｌａｎｄからのものである。
Ｂ型肝炎：
Ｒｈｅｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｇｅｒｍａｎｙ）は、ＨＢｓＡｇ表面抗原遺伝子を含有する組換えＨａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ株を構築した。Ｒｈｅｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈは、マスター細胞バンク（ＭＣＢ  Ｈａｎｓｅｎｕｌａｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ  Ｋ３／８−１株ＡＤＷ、１２／９４）も設立し、このバンクにおいて全ての特性評価試験が実施された。
インフルエンザ菌ｂ型：
細胞基質の産生のための供給源微生物は、インフルエンザ菌ｂ型、株７６０７０５である。この株は、１９７６年１１月に、２歳２ヵ月の男児（１９７４年８月１４日に出生）からもともと単離された。Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｒｅ（ＡＭＣ）、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｍｓｔｅｒｄａｍにて、−７０℃で保存する前に、この株の３回の継代培養を行った。この株は、ＳＩＩＰＬとＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＶＩ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）の共同研究の一環としてＳＩＩＰＬに移送された。
ＩＰＶ：
前記株およびＳａｌｋポリオウイルスの供給元は，以下に提示される。
ポリオウイルス１型：
株：Ｍａｈｏｎｅｙ
供給元：Ｂｉｌｔｈｏｖｅｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ
ポリオウイルス２型：
株：ＭＥＦ１
供給元：Ｂｉｌｔｈｏｖｅｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ
ポリオウイルス３型：
株：Ｓａｕｋｅｔｔ
供給元：Ｂｉｌｔｈｏｖｅｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ
本明細書全体を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変化形は、定めた要素、完全体、もしくはステップ、または要素、完全体、もしくはステップの群を含むことを意味するが、任意の他の要素、完全体、もしくはステップ、または要素、完全体、もしくはステップの群を除外することを意味するのではないと理解されるであろう。
【０１５０】
「少なくとも」または「少なくとも１種」という表現の使用は、その使用が、本発明の実施形態において、望ましい目的または結果のうちの１つまたは複数を達成するためである場合があることから、１種または複数の要素、成分、または数量の使用を示唆する。本発明の特定の実施形態が記載されているが、これらの実施形態は、実施例としてのみの目的で提示されており、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。本発明の範囲内における、本発明の製剤に対する変形または改変は、本明細書の開示を検討する上で当業者に想到される場合がある。このような変形または改変は、十分に本発明の趣旨の範囲内である。
【０１５１】
種々の物理的パラメータ、寸法，および数量のために与えられた数値は、単に近似値であり、該物理的パラメータ、寸法、または数量に割り付けられた数値より高い値は、本明細書に反対の記載がない限り、本発明の範囲内に含まれることが想定される。
【０１５２】
本明細書において、好ましい実施形態の特定の特徴にかなりの重点が置かれているが、本開示の原理から逸脱することなく、好ましい実施形態に多くの追加の特徴が追加される可能性があり、また多くの変更が行われる可能性があることは、理解されるであろう。本開示の好ましい実施形態におけるこられの変更および他の変更は、本明細書の開示から当業者には明らかであろうし、前述の記述事項は、制限としてではなく、単に本開示の例示として解釈されるべきであることが、明確に理解されるべきである。
利点
本明細書で上記される本開示は、以下に限定されないが、Ｄ、Ｔ、ｗＰ、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ  ＰＲＰ−ＴＴコンジュゲート、およびＩＰＶを含む混合ワクチン組成物の実現、ならびにその製造方法を含む、いくつかの技術的な進歩および利点を有する。他の混合ワクチン組成物と比較した場合、本開示は以下の利点を提供する：
１．完全に液体である混合ワクチン。
【０１５３】
２．標準用量（４０−８−３２ＤＵ）と比較して同等の有効性示す、標準用量と比較して低減用量のＩＰＶ抗原。
３．Ｄ、Ｔ、ｗＰ、ＨｅｐＢ、Ｈｉｂ、ＩＰＶ抗原の改善された免疫原性。
【０１５４】
４．１２ヵ月の期間にわたって試験された２〜８℃および室温における改善された安定性。
５．伝播性海綿状脳症（ＴＳＥ）またはウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）を除いた半合成培地を用いて産生され、高度に精製されたジフテリアトキソイド（Ｄ）および破傷風トキソイド（Ｔ）。
【０１５５】
６．全細胞百日咳菌（ｗＰ）抗原は、百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、および６２２９を、１：１：０．２５：０．２５の比で含み、それによって百日咳菌に対する力価および免疫原性が改善されている。
【０１５６】
７．熱不活化およびホルムアルデヒド不活化の組合せを用いた、全細胞百日咳菌（ｗＰ）成分の改良された不活化方法。このプロセスはチオメルサールを含まず、不活化全細胞百日咳抗原は、塊状化せず、均質を維持し、それによって反応原性が低下し、より長期間にわたるより高い力価がもたらされる。
【０１５７】
８．総インフルエンザ菌ｂ型ＰＲＰ−ＴＴコンジュゲートバルク中の少ない遊離ＰＲＰ（７％未満）。
９．任意のアジュバントに対するＨｉｂ抗原の吸着率は、２０％未満である。
【０１５８】
１０．リン酸アルミニウムアジュバントに個別に吸着され、それによって力価および免疫原性が改善された、ジフテリアトキソイド抗原（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）抗原、およびＢ型肝炎（ＨｅｐＢ）表面抗原の改善された吸着プロファイル。
【０１５９】
１１．反応原性の低下を確実にすることとなる最小総アルミニウム含有量（Ａｌ３＋）。
１２．保存剤として最適化された濃度の２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）および少なくとも１種のパラベンエステル（メチルパラベンまたはプロピルパラベン）、したがって、複数回用量の完全に液体である混合ワクチンの抗微生物能が効果的に維持されている。
【実施例】
【０１６０】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を実証するために含まれる。続く実施例において開示される組成物および技術が、本発明者によって見出された本発明の実施において十分に機能する技術を代表し、このため、その実施のための好ましい様式を構成すると考えられることは、当業者によって理解されるべきである。しかし、当業者は、本開示をふまえて、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、開示される特定の実施形態に多くの変更が行われる可能性があり、依然として同様または類似の結果が得られることを理解するべきである。
【０１６１】
実施例１
本開示に従ったワクチン組成物の種々の組合せ
【０１６２】
【表２５−１】
2022502469.tif 000026
【０１６３】
【表２５−２】
2022502469.tif 000027
【０１６４】
【表２５−３】
2022502469.tif 000028
【０１６５】
【表２５−４】
2022502469.tif 000029
【０１６６】
さらに、水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いて、組成物のｐＨを、上記で開示されるとおり約６．０〜７．０に調整し、通常の生理食塩水（０．９％）を添加することによってメスアップする。前記ワクチンは、製造プロセス中を使用される微量のグルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、ネオマイシン、ストレプトマイシン、およびポリミキシンＢを含有することがある。
【０１６７】
【表２６−１】
2022502469.tif 000030
【０１６８】
【表２６−２】
2022502469.tif 000031
【０１６９】
【表２６−３】
2022502469.tif 000032
【０１７０】
さらに、水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いて、組成物のｐＨを、上記で開示されるとおり約６．０〜７．０に調製し、通常の生理食塩水（０．９％）を添加することによってメスアップする。前記ワクチンは、製造プロセス中を使用される微量のグルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、ネオマイシン、ストレプトマイシン、およびポリミキシンＢを含有することがある。
【０１７１】
実施例２
インフルエンザ菌ｂ型コンジュゲートバルクの製造プロセス
製造ステップの大局を、図１のフローチャートに示す。該プロセスの５３ステップのそれぞれは、以下に簡潔に記載される：
ステップ１：接種物第Ｉ段階振盪フラスコ（Ｓ１）：
ワーキングシードロットバイアルを用いて、濾過された種培地０．２２μｍを含有する接種物段階振盪フラスコに接種する。作業体積２５ｍＬの使い捨てＰＥＴＧ１２５ｍＬフラスコを使用する。この段階は、制御された撹拌（２００±５０ｒｐｍ）および温度（３６±２℃）のインキュベーター振盪機で行われる。適切な細菌増殖（ＯＤ５９０≧１．０）が得られた後、この培養物を、ステップ２に記載される次の接種物段階（Ｓ２段階）に移行する。培養物の純度を確認するため、インプロセス管理としてグラム染色を実施する（グラム陰性球桿菌）。
ステップ２：接種物第ＩＩ段階振盪フラスコ（Ｓ２）：
Ｓ２接種物段階は、作業体積８００ｍＬの２Ｌフェルンバッハフラスコ（Ｓ２ＡおよびＳ２Ｂ）からなる。Ｓ２Ａフラスコは、ＯＤ５９０が合格基準内となるまで、ＯＤ５９０の測定に使用され、Ｓ２Ｂフラスコは、Ｓ３段階の接種のために使用される。Ｓ１接種物段階と同じ濾過滅菌した培地を用いて、両フラスコをバッチ処理する。Ｓ１段階フラスコを用いて、第ＩＩ段階振盪フラスコの両方に接種する。この段階は、制御された撹拌（２００±５０ｒｐｍ）および温度（３６±２℃）のインキュベーター振盪機で行われる。適切な細菌増殖（ＯＤ５９０≧１．０）が得られた後、この培養物を、ステップ３に記載される次の接種物段階（Ｓ３段階）に移行する。培養物の純度を確認するため、インプロセス管理としてグラム染色を実施する（グラム陰性球桿菌）。
ステップ３：接種物第ＩＩＩ段階発酵槽：
Ｓ３接種物段階は、作業体積３５Ｌの１２０Ｌ発酵槽からなる。先の接種物段階と同じ培地を用いて、発酵槽をバッチ処理する。Ｓ２段階フラスコを用いて、接種物発酵槽に接種する。増殖は、接種物発酵槽で、温度（３６±２℃）、ＤＯ（設定値１０％）、撹拌（３００〜６００ｒｐｍ）、通気（１〜５ＬＰＭ）、背圧（０．２バール）にて行われる。適切な細菌増殖（ＯＤ５９０≧１．０）が得られた後、この培養物を、ステップ４に記載される次の生成段階（Ｓ４段階）に移行する。培養物の純度を確認するため、プロセス内管理としてグラム染色を実施する（グラム陰性球桿菌）。
ステップ４：１２００Ｌ規模の生成発酵：
１２００Ｌ生成発酵槽の作業体積は８００Ｌである。これを、基本培地成分を用いてバッチ処理し、ｉｎ  ｓｉｔｕで蒸気滅菌する。続いて、０．２２μｍフィルターに通した後、種々の培地補充物を添加する。ステップ３から得られたＳ３段階培養物を用いて、この発酵槽に接種する。発酵は、制御された溶存酸素（設定値２０％）、温度（３６±２℃）、ｐＨ（７．１〜７．４）、撹拌（４０〜４００ｒｐｍ）、通気（５０〜３００ＬＰＭ）、および背圧（０．２バール）の下で行われる。発酵過程の間に、個別に２回の栄養素の添加を追加する。
ＯＤ５９０を測定することによって（ＯＤ５９０≧３．５）増殖をモニターし、静止段階に達した後に発酵は完了したと判断される。増殖期および静止期の間、多糖生成物が分泌され、培養ブロス中に蓄積する。培養物の純度を確認するため、インプロセス管理としてグラム染色を実施する（グラム陰性球桿菌）。
ステップ５：ホルマリン処理：
化学物質（ホルマリン）を使用することによって、このステップで生物負荷を減少させる。０．１％ホルマリンを添加し、発酵させたブロスを、３７℃で２時間以上インキュベートする。ホルマリン処理後、容器を直ちに１５℃未満に冷却する。ホルマリン添加によって生物負荷が減少されることは、立証されている。これは、培養期間後の培養平板によって確認される。生物負荷が減少したブロスは、ステップ６に記載されるとおりに回収できる状態である。
ステップ６：連続遠心分離による回収：
初期の回収ステップとして連続遠心分離を採用する。このステップは、不活化バイオマスから粗ブロスを含有する多糖を分離するために実施される。ＯＤ５９０の低下によって評価される９０％超のバイオマスの除去を目的として連続遠心分離機を使用する。この遠心分離機を、約１５０００ｇおよび液体流速２００〜５００Ｌ／時間で作動させる。遠心分離後の上清を、ステップ７に記載されるとおりに、さらに処理する。
ステップ７：５０ＬＰ深層濾過：
遠心分離後の上清を、５０ＬＰ深層フィルターに通し、細胞残屑のような粗大物質を除去する。このステップは、生成物に濾液を通過させ、ステップ８に記載されるとおりに追加の深層フィルターに繋がる。
ステップ８：９０ＬＰ深層濾過：
５０ＬＰ深層フィルターからの濾液を、さらに９０ＬＰ深層フィルター（名目上０．２２μｍの等級）に通し、先の深層フィルターによって保持されなかったと思われる全ての不溶性物質をさらに除去する。このステップは、該濾液が基本的に細胞残屑を含まず、確実に０．２２μｍフィルターを通過できることを保証する。続く濾過ステップは、ステップ９に記載される。
ステップ９および１０：０．２２μｍ濾過：
９０ＬＰ深層フィルターからの濾液を、さらに０．２２μｍフィルターに通し、その濾液を保持タンクに回収する。
ステップ１１および１２：１００ｋＤ濃縮およびダイアフィルトレーション：
このステップは、培地成分および小さい分子量の不純物を除去するために行われる。さらに、作業体積を縮小するため、濃縮を行う。Ｈｉｂ多糖（ＰＲＰ）の分子量が５００ｋＤ以上であるため、１００ｋＤの分子量カットオフが選択される。前記ブロスを約１０倍に濃縮し、続いて、５倍量以上の０．０１Ｍ  ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）を用いてダイアフィルトレーションを行う。この残留物中に得られた生成物を、「粗ＰＲＰ」と称し、ステップ１３に記載されるとおりに、さらに処理する。濃縮したブロスを、０．２２μｍフィルターを介した移送口を通してＤＳＰ区域に移し、確実に細菌がＤＳＰ区域に移行されないようにする。
ステップ１３：ＣＴＡＢ沈殿：
ＣＴＡＢ（セチル−トリメチルアンモニウムブロミド）は、カチオン性界面活性剤であり、多糖の沈殿のために使用される。ＣＴＡＢは、親水性領域に加えて疎水性部位からなり、タンパク質、核酸、および多糖を沈殿させる。ステップ１２から得られた粗ＰＲＰを、１％ＣＴＡＢ濃度で沈殿させ、２時間超インキュベートする。このＣＴＡＢペレットの回収は、ステップ１４に記載される。
ステップ１４、１５、および１６：ＣＴＡＢペレットの遠心分離、回収、および保存：
ＳＥＺ−３、ＦＦにおいて、ＣＴＡＢペレットを、連続遠心分離機を使用して、１５０００ｒｐｍで遠心分離する。このＣＴＡＢペレットを回収し、重量を測定し、等分し、さらに処理するために−２０℃以下で保存する。これは、第１のインプロセス保持ステップである。
ステップ１７および１８：ＣＴＡＢペーストの解凍および溶解：
凍結したＣＴＡＢペーストを、室温に解凍する。解凍したペレットを、５．８５％ＮａＣｌ溶液に溶解する。この溶解は、撹拌タンクで行われ、多糖生成物は、水相に可溶化される。前記タンクには、いくらかの溶解しない物質が含まれ、これは、沈殿したタンパク質および核酸由来のものである。この懸濁液を、ステップ１９に記載されるとおりに、さらに処理する。
ステップ１９：遠心分離：
ステップ１８から得られた物質を、２〜８℃、５０００〜６５００ｒｐｍで、２０〜３０分間遠心分離し、溶解しない物質を除去する。遠心分離後の上清を回収し、ステップ２０に記載されるとおりに、さらに処理する。
ステップ２０：７２％エタノール沈殿：
７２％エタノールを用いてＰＲＰを沈殿させる。９６％エタノールを用いて、ステップ１９で得られた上清に対する最終濃度が７２％のエタノールを生成する。この沈殿は、２〜８℃で一晩の間に行われる。得られた沈殿物を、ステップ２１に記載されるとおりに回収する。
ステップ２１および２２：遠心分離およびペレットの溶解：
７２％エタノール沈殿物を、２〜８℃、５０００〜６５００ｒｐｍにおける２０〜３０分間の遠心分離によって回収する。視覚的に透明になるまで、得られたペレットをＷ．Ｆ．Ｉ．に溶解する。可溶化されたペレットの次の処理は、ステップ２３に記載される。
ステップ２３：ＤＯＣおよび３２％エタノール沈殿：
ステップ２２から得られた物質に、６％酢酸ナトリウムおよび１％デオキシコール酸ナトリウム（ＤＯＣ）を添加する。９６％エタノールを用いて、最終濃度が３２％のエタノールを生成する。ＤＯＣおよび３２％アルコールのいずれも、多糖は液相に留めるが、タンパク質不純物の沈殿を促す。この沈殿は、２〜８℃で一晩の間（８時間以上）に行われる。
ステップ２４：遠心分離：
ステップ２３から得られた物質を、２〜８℃、５０００〜６５００ｒｐｍで、２０〜３０分間遠心分離し、沈殿物を除去する。遠心分離後の上清を回収し、ステップ２５に記載されるとおりに、さらに処理する。
ステップ２５：深層濾過および炭素濾過：
ステップ２４で得られた上清溶液は可溶性ＰＲＰを含有しており、この上清溶液を、深層濾過に供した後に、炭素濾過を行って核酸および着色料を除去する。核酸の除去は、２６０ｎｍ（Ａ２６０）における吸光度を間欠的に測定することによってモニターされる。目標とするＡ２６０に達した後、該溶液を０．２２ｍμフィルターで濾過し、この濾過した溶液を、ステップ２６に記載されとおりにさらに処理する。
ステップ２６：６４％エタノール沈殿：
ステップ２５で得られた濾過された物質を、９６％エタノールを用いて、最終濃度が６４％のエタノールでさらに沈殿させる。この沈殿は、２〜８℃で一晩の間に行われる。得られた沈殿物を、遠心分離によって回収し、ステップ２７に記載されるとおりに、さらに処理する。
ステップ２７：ペレットの回収および溶解：
上清をデカンテーションして廃棄し、ペレットを回収する。このペレットを、室温でＷ．Ｆ．Ｉ．に溶解する。
ステップ２８：３００ｋＤ濃縮およびダイアフィルトレーション：
溶解したペレットの溶液を、３００ｋＤ  ＮＭＷＣＯ膜を用いて濃縮する。これを、８倍量以上（ＮＬＴ）のＷ．Ｆ．Ｉ．を用いて、さらにダイアフィルトレーションを行う。得られた残留物を、ステップ２９に記載されるとおりに、さらに処理する。
ステップ２９および３０：０．２２μｍ濾過および精製されたＰＲＰの保存：
３００ｋＤ  ＵＦ残留物を、生物負荷を最小限に抑えるための浄化ステップとして、０．２２μｍフィルターに通す。得られた精製されたＰＲＰを等分し、ステップ３１に記載されるとおりに、さらに使用するまで、−２０℃以下で保存する。精製されたＰＲＰのサンプルを、Ｑ．Ｃ．分析に出す。
ステップ３１：解凍およびプール：
コンジュゲートのバッチサイズに基づいて、ステップ３０から得られた適切な量の天然多糖を解凍する。ステップ３２に記載されるとおりに、さらに処理するために必要とされる、プールされた物質のＰＲＰ含有量を分析する。
ステップ３２：１００ｋＤ濃縮：
プールされた精製された多糖は、さらに処理するために、最小濃度（８〜１２ｍｇ／ｍＬ）であることが必要とされる。プール多糖濃度が目標値よりも低い場合、プールされた多糖溶液を、１００ｋＤ  ＵＦ  ＮＭＷＣＯ膜を用いて濃縮する。濃縮後にサンプルを抜き取り、次のステップ（ステップ３３）のための最小濃度に達しているか確認する。
ステップ３３：アルカリ解重合：
ステップ３２から得られた濃縮した多糖（７４ｇ／１１０ｇに相当）を、軽度のアルカリ条件下で、炭酸塩−重炭酸塩緩衝液を用いて解重合する。目標の多糖サイズに達した後、解重合した多糖を、ステップ３４に記載されるとおりに、活性化する。
ステップ３４：多糖の活性化：
ステップ３３で得られた解重合された多糖を、臭化シアンを用いて活性化する。この活性化は、窒素環境下で行われる。臭化シアンは毒性の高い化学物質であり、この化学物質を取り扱う際には、適切な注意を要する。
【０１７２】
ステップ３５：リンカーの結合：
ステップ３４から得られた反応混合物に、新たに調製されたアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）溶液を６〜１０分以内に添加する。この反応溶液は、２〜１０℃で、１６時間以上かけて行われる。ＡＤＨリンカーの役割は、コンジュゲーション反応のために必要なアミン基を多糖内にもたらすことである。
ステップ３６：濃縮およびダイアフィルトレーション：
ステップ３５から得られた反応混合物を濃縮し、１０ｋＤ  ＮＭＷＣＯ  ＵＦ膜を用いて、体積毎にリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）でダイアフィルトレーションを行い、遊離ＡＤＨを除去する。ＡＤＨの除去をＨＰＬＣでモニターし、遊離ＡＤＨレベルが５％未満に達するまでダイアフィルトレーションを継続する。得られた残留物に、５倍量以上のＭＥＳ−ＮａＣｌ緩衝液でさらにダイアフィルトレーションを行う。これを、２０ｍｇ／ｍＬ以上の濃度が得られるまで、さらに濃縮する。この濃縮して処理したＰＲＰを、ステップ３７に記載されるとおりに、さらに使用するまで、２〜８℃で維持する。
ステップ３７および３８：０．２２μｍ濾過および処理したＰＲＰの保存：
ステップ３６からの残留物を、浄化ステップとしての役割を果たす、０．２２μｍフィルターに通す。これは、グレードＣ区域で実施されるプロセス中、生物負荷レベルが制御されていることも保証する。濾過して活性化した多糖を回収し、サンプルを取り、等分し、さらに処理するまで２〜８℃で保存する。ＰＲＰの分子サイズ（ｋＤ）、ＰＲＰ含有量、およびＰＲＰ活性化の程度を含む分析のために、処理した多糖プールからサンプルを抜き取る。処理したＰＲＰのさらなる処理は、ステップ４０に記載される。
ステップ３９：ＴＴ１０ｋＤ濃縮およびダイアフィルトレーション：
コンジュゲーション反応には、２つの成分、すなわち、処理した多糖および担体タンパク質（ＴＴ）が必要である。担体タンパク質を濃縮し、１０ｋＤ  ＵＦ  ＮＭＷＣＯ膜を用いて、ＭＥＳ−ＮａＣｌ緩衝液でダイアフィルトレーションを行う。次に、このダイアフィルトレーションを行った担体タンパク質を、同じ膜を用いて、２０ｍｇ／ｍＬ以上にさらに濃縮する。
ステップ４０：コンジュゲーション：
コンジュゲーション反応には、２つの成分、すなわち、処理した多糖および担体タンパク質（ＴＴ）が必要である。活性化した多糖成分は、ステップ３８から得られる。担体タンパク質は、ステップ３９から得られる。この２つの成分を、その比がＰＲＰ：ＴＴ＝１：１（ｗ／ｗ）となる適切な量で、ＥＤＣの存在下、撹拌しながら混合する。コンジュゲーション反応を、ＨＰＬＣでモニターし、タンパク質の変換（遊離タンパク質のコンジュゲートへの変換に基づく）が８５％以上に達するまで継続する。
ステップ４１：クエンチング：
コンジュゲーション反応が、変換（ステップ４０）の合格基準まで進んだ後、クエンチングによって反応を停止する。リン酸ＥＤＴＡ緩衝液を用いて、コンジュゲーション反応をクエンチする。続いて、このコンジュゲーション反応液を、ステップ４２に記載されるとおりに処理する。
ステップ４２：３０ＳＰおよび０．２２μｍ濾過：
ステップ４１から得られたコンジュゲートを３０ＳＰフィルターで濾過し、続いて、０．２２μｍ濾過を行う。これによって、あらゆる大きな凝集物を確実に除去する。濾過したコンジュゲートを、ステップ４３に記載されるとおりに処理する。
ステップ４３：３００ｋＤ限外濾過およびダイアフィルトレーション：
ステップ４２から得られたコンジュゲーション反応混合物に、３００ｋＤ  ＵＦ  ＮＭＷＣＯ膜を用いて、０．０５％生理食塩水でダイアフィルトレーションを行う。ダイアフィルトレーションを実施して、コンジュゲーション試薬および未反応のＴＴを除去する。得られた残留物を、ステップ４４に記載されるとおりに、さらに処理する。
ステップ４４および４５：０．２２μｍ濾過および粗コンジュゲートの保存：
ステップ４３からの残留物を、浄化ステップとしての役割を果たす、０．２２μｍフィルターに通す。これは、グレードＣ区域で実施されるプロセス中、生物負荷レベルが制御されていることも保証する。濾過した粗コンジュゲートを回収し、サンプルを取り、さらに処理するまで２〜８℃で保存する。粗コンジュゲートのさらなる処理は、ステップ４６に記載される。
ステップ４６：粗コンジュゲートの希釈：
ステップ４５からの粗コンジュゲートを、Ｗ．Ｆ．Ｉ．を用いて、目標濃度である４±１ｍｇ／ｍＬまで希釈し、必要に応じて、ステップで４７に記載される沈殿ステップによってさらに処理する。
ステップ４７：硫酸アンモニウム沈殿：
希釈したコンジュゲート反応混合物をさらに処理し、硫酸アンモニウム（５０％ｗ／ｖ原液）を用いて、遊離ＰＲＰを除去する。この沈殿ステップは、１５℃未満で撹拌しながら行われる。沈殿ステップによって、コンジュゲートは沈殿物中に促され、遊離ＰＲＰは上清中に残る。硫酸アンモニウムの添加後に、得られた懸濁液を、１５℃未満で撹拌することなく、１２時間以上保存する。
ステップ４８：ペレットの回収および溶解：
ステップ４７から得られた懸濁液を、約７０００ｇ、２〜８℃で、４０±１０分間遠心分離する。上清をデカンテーションによって廃棄し、得られたペレットをトリス−生理食塩水で溶解する。
ステップ４９：３００ｋＤダイアフィルトレーション：
ステップ４８から得られた溶液を、３０ＳＰ深層フィルターで濾過し、３００ｋＤ  ＮＭＷＣＯ膜を用いて、２０ｍＭトリス−生理食塩水でダイアフィルトレーションを行う。
ステップ５０：ＧＰＣクロマトグラフィー精製：
ステップ４９から得られた溶液を、サイズ排除クロマトグラフィーのために、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  ＨＷ−６５Ｆヒドロキシル化メタクリルポリマービーズゲルを含有する約７０ＬのＧＰＣカラムに充填する。処理したコンジュゲート（硫酸アンモニウム処理後）に対するＧＰＣクロマトグラフィーの使用によって、得られた物質中の遊離ＰＲＰレベルが低下する。このカラムを、２０ｍＭトリス０．９％ＮａＣｌで溶出し、Ａ２８０に基づいて画分を回収する。遊離ＰＲＰ、比、および分子サイズに対する合格基準に基づいて適切な画分をプールし、このプールを、ステップ５１に記載されるとおりに、さらに処理する。
ステップ５１：３００ｋＤダイアフィルトレーション：
ステップ５０から得られたプールしたコンジュゲート溶出液に、３００ｋＤ  ＵＦ  ＮＭＷＣＯ膜を用いて、２０ｍＭトリスでダイアフィルトレーションを行う。この残留物体積の目標を、その中のＰＲＰ含有量が約１ｍｇ／ｍＬとなるようする。
ステップ５２および５３：０．２２μｍ濾過：
ステップ５１から得られたバルクコンジュゲートを、グレードＡ環境下にて０．２２μｍフィルターで濾過し、無菌状態を確保する。０．２２μｍフィルターの完全性試験をする。濾過したバルクコンジュゲートからのサンプルを、完了を分析するためのＱ．Ｃ．に出す。濾過したコンジュゲートに、「無菌Ｈｉｂバルクコンジュゲート」とラベルし、２〜８℃で保存する。バルクコンジュゲートは、２〜８℃で最大３ヵ月間保存されるであろうし、その後、使用されない場合は、−７０℃で最大１年間の合計期間の保存が可能である。
得られたＨｉｂ  ＰＲＰ−ＴＴコンジュゲート抗原の品質特性は以下のとおりであった：
ＰＲＰ含有量（μｇ／０．５ｍＬ）：８．１
比（ＰＲＰ：ＴＴ）：０．５
遊離ＰＲＰ（％）：４．８％
ＰＭＷ（ｋＤ）：９８３
平均ＭＷ（ｋＤ）：７５２
実施例３
不活化ｗＰ抗原を製造するプロセス
全細胞百日咳（ｗＰ）抗原の不活化方法：
ホルムアルデヒド存在下にて５６℃で１０分間の不活化、ホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１５分間の不活化、のヒミン（ｈｙｍｉｎｅ）存在下にて５６℃で１０分間の不活化、ヒミン存在下にて５６℃で１５分間の不活化、および５６℃で３０分間の加熱のみの不活化を含む、種々の実験を実施した後、不活化方法の最適化を行う。これらの方法を用いた力価における有意差は認められない。これらの方法からホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０分間が選択され、これは、この方法を用いて製造された百日咳細胞集団が、上記の他の方法と比較して、より均質であるからである。
不活化ｗＰ抗原を製造するプロセスは、以下のステップ：
ａ）百日咳菌株１３４をホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０〜１５分間不活化するステップ
ｂ）百日咳菌株５０９をホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０〜１５分間不活化するステップ
ｃ）百日咳菌株２５５２５および６２２９をホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０〜１５分間不活化するステップ
ｃ）百日咳菌株６２２９をホルムアルデヒドの存在下にて５６℃で１０〜１５分間不活化するステップ
ｄ）続いて、不活化百日咳菌株１３４、５０９、２５５２５、および６２２９を、１：１：０．２５：０．２５の比で混合するステップ
ｅ）任意選択で、アルミニウム系アジュバントに吸着されるステップ
を含む。
【０１７３】
このプロセスはチオメルサールを含まず、不活化全細胞百日咳抗原は、塊状化せず、均質を維持し、それによって反応原性が低下し、より長期間にわたるより高い力価がもたらされる。
【０１７４】
実施例４
不活化ポリオウイルス（ＩＰＶ）を製造するプロセス
１．ポリオウイルスは以下の方法によって増殖されてもよい：
ａ）ＣＣＬ８１−ＶＥＲＯ（サル腎臓）細胞系を、ポリオウイルス、すなわち、ｓａｂｉｎおよびｓａｌｋ株の増殖のための宿主細胞として使用した。
【０１７５】
ｂ）宿主細胞をポリオウイルスの望ましい株で感染させ、７２時間培養した後、該ウイルスおよび細胞残屑を含有する培地をプールし、１つの容器に集めた。
ｃ）この濾液を、１００ＫＤａカセットを用いたタンジェンシャルフロー濾過に供し、リン酸緩衝液を用いたダイアフィルトレーションを行い、陰イオン交換クロマトグラフィー用いて精製した。
【０１７６】
ｄ）患者に投与する前に、該ウイルスは適切な不活化方法を用いて不活化されていなければならない。
２．以下のステップを含むホルマリン不活化：
ａ）精製したウイルスプールの緩衝液を、リン酸緩衝液から、ｐＨが７〜７．５の間であり、３０〜５０ｍＭの範囲内のトリス緩衝液に交換した。
【０１７７】
ｂ）上記の混合物に、グリシン（５ｇｍ／Ｌ）を含有するＭ−１９９培地を添加した。
ｃ）０．０２５％ホルムアルデヒドを添加し、続いて混合した。
ｄ）続いて、この混合物を、マグネチックスターラーでウイルスバルクの撹拌を継続しつつ、３７℃で５〜１３日間インキュベートした。
【０１７８】
ｅ）インキュベーション後の混合物を、７日目に中間ＴＦＦシステム（１００ＫＤａ、０．１ｍ２）に供し、不活化後の最終濾過を行った。
ｆ）続いて、濾過したバルクを２〜８℃で保存した。
【０１７９】
ｇ）Ｄ−Ａｇ単位決定のためのＤ−Ａｇ  ＥＬＩＳＡを実施した。
ｈ）ＩＰＶ１型、２型、および３型の一価プールバルクを混合して、三価または二価ＩＰＶ（ＳａｌｋまたはＳａｂｉｎ血清型）を形成した。
【０１８０】
ｉ）最終製剤のｐＨを調整して、ｐＨが６〜６．８の間の最終製剤を得た。
ｊ）最終的な混合ワクチン組成物に添加されたＩＰＶ抗原（ＳａｂｉｎまたはＳａｌｋ株）を、混合ワクチン中に存在するアジュバント（リン酸のアルミニウム塩）に吸着させ、このＩＰＶ抗原の吸着率は、ＩＰＶ１型では１０〜３０％の範囲内、ＩＰＶ２型では６０〜１００％の範囲内、ＩＰＶ３型では０〜２５％の範囲内であることが認められた。
３．個別にアルミニウム塩に吸着させる場合のＩＰＶ（ＳａｂｉｎおよびＳａｌｋ株）の製剤手順：
ａ）最終アルミニウム（Ａｌ３＋）濃度が０．１〜０．８ｍｇ／用量となるように、オートクレーブで処理したＡｌＰＯ４の望ましい量を５０ｍＬ容器に取る
ｂ）Ｄ−Ａｇ単位を調整したＩＰＶバルクを添加し、希釈剤（１０×Ｍ−１９９＋０．５％グリシン）を用いてメスアップする
ｃ）最終製剤のｐＨを調整して、ｐＨが６〜６．８の間の最終製剤を得る
４）記載に従って三価または二価ＩＰＶ（ＳａｌｋまたはＳａｂｉｎ血清型）に製剤化されるアルミニウム吸着一価プール
結果：
リン酸アルミニウム（ＡｌＰＯ４）塩へのＩＰＶ１型、２型、および３型（ＳａｂｉｎおよびＳａｌｋ）の吸着率は、少なくとも９０％であることが認められた。
【０１８１】
出願人は、（ポリオウイルス抗原の標準用量が、１型−４０ＤＵ、２型−８ＤＵ、３型−３２ＤＵであるのに対して）ポリオウイルス抗原の用量を２分の１に低減することができた。
【０１８２】
【表２７】
2022502469.tif 000033
【０１８３】
実施例５
混合ワクチンを製造するプロセス
この実施例は、Ｄ、Ｔ、ｗＰ、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ  ＰＲＰ−ＴＴコンジュゲート、ＩＰＶ、および保存剤を含む混合ワクチン組成物を製造するプロセスの概要を提示する：
成分Ｉ  −  アルミニウム吸着ジフテリアトキソイド
成分ＩＩ  −  アルミニウム吸着破傷風トキソイド
成分ＩＩＩ  −  （実施例３に記載される）ｗＰ抗原
成分ＩＶ  −  アルミニウム吸着Ｂ型肝炎表面抗原
成分Ｖ  −  （実施例２に記載される）Ｈｉｂ  ＰＲＰコンジュゲート
成分ＶＩ  −  （実施例４に記載される）ＩＰＶ抗原
１．アルミニウム吸着ジフテリアトキソイドを含む成分Ｉの調製：
ａ）容器／器にリン酸アルミニウムを移す
ｂ）ジフテリアトキソイドを添加する
ｃ）酢酸／水酸化ナトリウムを用いてｐＨを４．５〜５．５に調整する
ｄ）安定するまで待つ
ｅ）水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨを５．５〜６．５に調整する
ｆ）安定するまで待つ
２．アルミニウム吸着破傷風トキソイドを含む成分ＩＩの調製：
ａ）容器／器にリン酸アルミニウムに移す
ｂ）破傷風トキソイドを添加する
ｃ）酢酸／水酸化ナトリウムを用いてｐＨを４．５〜５．５に調整する
ｄ）安定するまで待つ
ｅ）水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨを５．５〜６．５に調整する
ｆ）安定するまで待つ
３．アルミニウム吸着Ｂ型肝炎表面抗原を含む成分ＩＶの調製：
ａ）容器／器にリン酸アルミニウムを移す
ｂ）Ｂ型肝炎表面抗原を添加する
ｃ）酢酸／水酸化ナトリウムを用いてｐＨを４．５〜５．５に調整する
ｄ）安定するまで待つ
ｅ）水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨを５．５〜６．５に調整する
ｆ）安定するまで待つ
４．Ｄ、Ｔ、ｗＰ、ＨＢｓＡｇ、Ｈｉｂ  ＰＲＰ−ＴＴコンジュゲート、ＩＰＶ、および保存剤を含む混合ワクチン組成物を製造するプロセス
１．混合用の器／容器への通常の生理食塩水を添加した。
【０１８４】
２．成分Ｉを添加した。
３．成分Ｉと成分ＩＩを混合し、室温で３０〜４０分間撹拌した。
４．上記の混合物に成分ＩＩＩを添加し、続いて室温で３０〜６０分間撹拌した。
【０１８５】
５．ステップ４で得られた混合物に成分ＩＶを添加し、続いて室温で３０〜６０分間撹拌した。
６．ステップ５で得られた混合物に成分Ｖを添加し、続いて６〜１６℃で３０〜６０分間撹拌した。
【０１８６】
７．ステップ６で得られた混合物に成分ＶＩを添加し、続いて６〜１６℃で撹拌した。
８．ステップ７で得られた混合物に、以下で開示される保存剤の組合せのうちの１つを６〜１６℃で添加した。
【０１８７】
ａ）０．５ｍＬ当たり１ｍｇ〜０．５ｍＬ当たり６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノール、または
ｂ）０．５ｍＬ当たり１ｍｇ〜０．５ｍＬ当たり６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノールおよび０．５ｍＬ当たり０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の濃度で使用されるメチルパラベン、または
ｃ）０．５ｍＬ当たり１ｍｇ〜０．５ｍＬ当たり６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノールおよび０．５ｍＬ当たり０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の濃度で使用されるプロピルパラベン、または
ｄ）０．５ｍＬ当たり１ｍｇ〜０．５ｍＬ当たり６ｍｇ（ｖ／ｖ）の量の２−フェノキシエタノールおよび０．５ｍＬ当たり０．１〜１．５ｍｇ（ｗ／ｖ）の濃度で使用されるメチルパラベンおよび０．５ｍＬ当たり０．０５〜０．２ｍｇ（ｗ／ｖ）の濃度で使用されるプロピルパラベン。
【０１８８】
９．ｐＨを確認し、必要に応じて、水酸化ナトリウム／炭酸ナトリウムを用いてｐＨ６．０〜７．５に調整した。
１０．ステップ９で得られた生理食塩水（０．９％）を用いてメスアップし、続いて３時間撹拌した。
【０１８９】
実施例６
抗原の吸着、力価、および安定性プロファイル
【０１９０】
【表２８】
2022502469.tif 000034
【０１９１】
【表２９】
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【０１９２】
【表３０】
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【０１９３】
所見：
−  半分の用量濃度のＩＰＶを用いて製造された六価ワクチンバッチは、有望な試験結果を示した。
−  半分の濃度のＩＰＶで製造された六価ワクチンのＩＰＶのｉｎ  ｖｉｖｏ有効性は、規定量のＩＰＶを用いた現時点で入手可能なワクチン（ＳＩＩＰＬによって製造された市販のＰｏｌｉｏｖａｃ）に相当することが認められた。
【０１９４】
実施例７
抗微生物性能力試験
本発明者らは、Ｄ、Ｔ、ｗＰ、Ｈｉｂ、ＨＢｓＡｇ、およびＩＰＶワクチンを含有する複数回用量の混合ワクチンを開発する一方で、最初に、保存剤として当該分野で従来使用されてきた２−フェノキシエタノール（２−ＰＥ）を、２．５ｍｇ／０．５ｍＬの用量濃度で添加することによって、抗微生物能に対する試験を実施した。しかし、２−ＰＥは、ＤＰＴ系混合ワクチンにおいて、酵母菌および真菌に対する抗微生物活性が、チオメルサールより弱いことが認められた。
【０１９５】
必要とされる基準を満たすために、２−ＰＥ（保存剤）を増量することは、ワクチンの投与対象である幼児における安全性の問題を招く可能性があり、最終製品の安定性にも影響を及ぼす可能性がある。さらに、前記ワクチンに含有される保存剤の量は、ワクチンの安全性に関して、ＵＳ薬局方、欧州薬局方、ＷＨＯ薬局方、またはその組合せにおいて定義される必要条件を満たすべきである。
【０１９６】
この点に関して、本発明者らは、安全性および抗微生物能の両方の基準を満たす複数回用量混合ワクチンにおけるパラベンのような他の保存剤と２−ＰＥを組み合わせることによって、抗微生物能に対する必要条件を満たすことが可能である新規の組成物を開発するための取り組みとして、実験を実施した。本開示において、抗微生物能試験は、ワクチン製品に関してＷＨＯによって要求される欧州薬局方カテゴリーＢ（ＥＰ−Ｂ）基準に従って実施された。
【０１９７】
【表３１】
2022502469.tif 000037
【０１９８】
抗微生物性能力のスクリーニング：
実施例１に開示される六価混合ワクチン製剤を、それぞれ０時間にワクチン製剤中１０５〜１０６ＣＦＵ／ｍＬの量で、異なる４種類の細菌−黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ番号６５３８）、緑膿菌（ＡＴＣＣ番号９０２７）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）（ＡＴＣＣ番号８７３９）、およびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｒｌｅｔｔａｅ（環境分離株ＥＭＩ）、１種の酵母菌−Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ（ＡＴＣＣ番号１０２３１）、ならびに１種の真菌−Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ（ＡＴＣＣ番号１６４０４）を含む合計６種類の微生物と共に接種した。次に、細菌、真菌、酵母菌のサンプルを、０時間、２４時間、７日目、１４日目、および２８日目に回収し、固体培地で培養し、コロニー数を３日目および５日目の間に計数し、コロニーの対数減少を算出した。この結果を以下の表３８に示す。
【０１９９】
【表３２−１】
2022502469.tif 000038
【０２００】
【表３２−２】
2022502469.tif 000039
【０２０１】
所見：
−  異なる組合せで製造された全ての六価ワクチンが、欧州薬局方カテゴリーＢに従った保存剤の有効性に適合することが認められることが観察された。しかし、異なる組合せが使用された場合、その有効性は変化することが認められた。
−  ２ＰＥ、ＭＰ、およびＰＰを含有する六価ワクチンの保存剤の有効性が、保存剤、すなわち、２ＰＥ単独、２ＰＥとＰＰ、２ＰＥとＭＰ、およびＰＰとＭＰといった他の組合せと比較して極めて有効であることが認められた。
−  ０．５％の２ＰＥとＰＰおよびＭＰを含有する六価ワクチンの保存剤の有効性が、同じ組合せであるが、０．４％の２ＰＥを含有するものと比較してより有効であることが認められたことも注目される。
【０２０２】
実施例８
ＳＩＩＰＬの低減用量の混合ワクチン対Ｅａｓｙ  Ｓｉｘ（Ｐａｎａｃｅａ）
【０２０３】
【表３３】
2022502469.tif 000040
【国際調査報告】
2022502469.tif 000041
2022502469.tif 000042
2022502469.tif 000043