【手続補正書】
【提出日】平成22年10月5日(2010.10.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
調査される患者における糖尿病のインビトロ指標および／またはリスク層化のために、中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−プロＡＤＭ：配列番号２）もしくはその部分ペプチドもしくはそのフラグメントを使用する方法。
【請求項２】
ＩＩ型糖尿病およびその後遺症および同時の病気、特に、内皮機能障害、高リポ蛋白血症、心臓血管系の高血圧調節障害、糖尿病性網膜症、腎症、腎不全、神経障害、糖尿病脚症候群、および心臓血管合併症の指標および／またはリスク層化が行われることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
調査される患者において、指標および／またはリスク層化のために、炎症性マーカー、血管マーカー、および／または糖尿病マーカー／因子の群から選択されるさらなるマーカーをさらに使用する、請求項１または２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記炎症性マーカーが、Ｃ−反応性プロテイン（ＣＲＰ）、例えば、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６、インターロイキン−１βのようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６、３−１１６）、アンギオテンシンＩＩ、エンドセリン−１の群の少なくとも１つのマーカーから選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記血管マーカーが、クレアチンキナーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、ミオグロビン、ナトリウム排泄増加タンパク質、特にＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、またはプロ−ガストリン放出ペプチド（ｐｒｏＧＲＰ）、プロ−エンドセリン−１、プロ−レプチン、プロ−神経ペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−神経ペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、または各事例におけるそれらの部分配列のような、心臓血管系を調節する（プロ）ホルモン類の群の少なくとも１つのマーカーから選択されることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記マーカーの平行決定または同時決定が実施されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
上記決定が、少なくとも１つの患者サンプルに対して実行されることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記決定が、自動化分析デバイスを用いて、特にＫｒｙｐｔｏｒにより実行されることを特徴とする、請求項６〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記決定が、迅速試験により、特に単一パラメーター決定または複数パラメーター決定で実行されることを特徴とする、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、およびその同時の病気および後遺症の前記指標が、臨床決定、特に、薬物適用によるさらなる処置のための患者の層化のためになされるものであることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記指標および／またはリスク層化が、治療の随伴物として、予後のため、予防のため、初期検出および鑑別診断による検出のため、重篤の程度の評価のため、および糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、ならびにその同時の病気および後遺症の経過の評価のためのものであることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ：配列番号２）もしくはその部分ペプチドもしくはその部分フラグメントの、またはマーカー組み合わせにおいて含まれるそれらの、糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、ならびにその同時の病気および後遺症のインビトロ指標および／またはリスク層化のための使用であって、該マーカー組み合わせが、請求項３〜５のいずれか１項によるその他のマーカー、または必要に応じて別の適切なマーカーを含む、使用。
【請求項１３】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法を実行するための診断デバイス。
【請求項１４】
糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、ならびにその同時の病気および後遺症のインビトロ診断および／またはリスク層化のためのキットであって、
マーカーである中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−プロＡＤＭ：配列番号２）もしくはその部分ペプチドもしくはフラグメント、またはマーカー組み合わせに含まれるそれらを決定するための検出試薬であって、ここで、該マーカー組み合わせが、請求項３〜５のいずれか１項によるその他のマーカーである検出試薬、および補助物質を含む、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明の範囲内で、用語「糖尿病」、特にＩＩ型糖尿病（インシュリン抵抗性）は、膵臓中のランゲルハンス島のβ細胞におてけるインシュリンの産生が邪魔されるか、またはインシュリンは存在するが、その標的位置である細胞膜で正確に作用できない、慢性の糖尿病を意味することが理解される。この邪魔されたインシュリンの産生および影響の結果は、高められた血糖値（高血糖症）である。糖尿病プロフィールでは、鑑別が前糖尿病間でなされ、そこでは、実験室化学によって検出され得る「邪魔されたグルコース負荷」は、終期ステージ、そして実際の明らかな糖尿病においてのみ起こる。インシュリン抵抗性は、前糖尿病の病気相の初期に起こる。ほぼ同時に、高リポ蛋白血症および心臓血管系の高血圧機能障害とともに、内皮機能障害が既に発症する。このリスクの群れの結果は、さらに、血管壁における動脈硬化変化である（微小血管障害および大血管障害）、ならびに微小循環問題の結果としての血管合併症である。その他の後遺症および同時の病気は、盲目までに至る糖尿病性網膜症、ならびに腎臓機能不全に至る腎症、神経障害、糖尿病脚症候群、および心臓血管合併症である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
すべての前述の適応症は、さらに、例えば、Ｐｓｃｈｙｒｅｍｂｅｌ、Ｄｅ  Ｇｒｕｙｔｅｒ、Ｂｅｒｌｉｎ、２００４に記載されている。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
糖尿病のインビトロ診断および／またはリスク層化のための方法であって、
中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−プロＡＤＭ：配列番号２）もしくはその部分ペプチドもしくはそのフラグメントの決定が、調査される患者において実行されることを特徴とする、方法。
（項目２）
ＩＩ型糖尿病およびその後遺症および同時の病気、特に、内皮機能障害、高リポ蛋白血症、心臓血管系の高血圧調節障害、糖尿病性網膜症、腎症、腎不全、神経障害、糖尿病脚症候群、および心臓血管合併症のインビトロ診断および／またはリスク層化が行われることを特徴とする、項目１に記載の方法。
（項目３）
調査される患者において、決定が、炎症性マーカー、血管マーカー、および／または糖尿病マーカー／因子の群から選択される少なくとも１つのさらなるマーカーでさらに実施される、項目１または２のいずれか１項に記載の方法。
（項目４）
上記炎症性マーカーが、Ｃ−反応性プロテイン（ＣＲＰ）、例えば、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、ＩＬ−６、インターロイキン−１βのようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６、３−１１６）、アンギオテンシンＩＩ、エンドセリン−１の群の少なくとも１つのマーカーから選択される、項目１〜３のいずれか１項に記載の方法。
（項目５）
上記血管マーカーが、クレアチンキナーゼ、骨髄ペルオキシダーゼ、ミオグロビン、ナトリウム排泄増加タンパク質、特にＡＮＰ（もしくはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、またはプロ−ガストリン放出ペプチド（ｐｒｏＧＲＰ）、プロ−エンドセリン−１、プロ−レプチン、プロ−神経ペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−神経ペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、または各事例におけるそれらの部分配列のような、心臓血管系を調節する（プロ）ホルモン類の群の少なくとも１つのマーカーから選択されることを特徴とする、項目１〜４のいずれか１項に記載の方法。
（項目６）
上記マーカーの平行決定または同時決定が実施されることを特徴とする、項目１〜５のいずれか１項に記載の方法。
（項目７）
上記決定が、少なくとも１つの患者サンプルに対して実行されることを特徴とする、項目１〜６のいずれか１項に記載の方法。
（項目８）
上記決定が、自動化分析デバイスを用いて、特にＫｒｙｐｔｏｒにより実行されることを特徴とする、項目１〜７のいずれか１項に記載の方法。
（項目９）
上記決定が、迅速試験により、特に単一パラメーター決定または複数パラメーター決定で実行されることを特徴とする、項目１〜８のいずれか１項に記載の方法。
（項目１０）
臨床決定、特に、糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、およびその同時の病気および後遺症の処置または治療のための薬物適用によるさらなる処置のための患者の層化のための診断が実行されることを特徴とする、項目１〜９のいずれか１項に記載の方法。
（項目１１）
治療の随伴物として、予後のため、予防のため、初期検出および鑑別診断による検出のため、重篤の程度の評価のため、および糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、ならびにその同時の病気および後遺症の経過の評価のための診断および／またはリスク層化が行われることを特徴とする、項目１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
（項目１２）
中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ：配列番号２）もしくはその部分ペプチドもしくはその部分フラグメントの、またはマーカー組み合わせにおいて含まれるその糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、ならびにその同時の病気および後遺症のインビトロ診断および／またはリスク層化のための使用であって、該マーカー組み合わせが、項目３〜５のいずれか１項によるマーカー、または必要に応じて別の適切なマーカーを含む、使用。
（項目１３）
項目１〜１１のいずれか１項に記載の方法を実行するための診断デバイス。
（項目１４）
糖尿病、特にＩＩ型糖尿病、ならびにその同時の病気および後遺症のインビトロ診断および／またはリスク層化のためのキットであって、
マーカーである中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−プロＡＤＭ：配列番号２）もしくはその部分ペプチドもしくはフラグメント、またはマーカー組み合わせに含まれるそれを決定するための検出試薬を含み、ここで、該マーカー組み合わせが、項目３〜５のいずれか１項によるその他のマーカー、および補助物質を含む、キット。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明の範囲内では、「中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ：配列番号２)」は、プロプロアドレノメデュリンの配列番号１（図１）を有する４５〜９２のアミノ酸配列（４５位はＧｌｕであり、９２位はＶａｌ）（Ｋｉｔａｍｕｒａ  Ｋ，Ｓａｋａｔａ  Ｊ，Ｋａｎｇａｗａ  Ｋ，Ｋｏｊｉｍａ  Ｍ，Ｍａｔｓｕｏ  Ｈ，Ｅｔｏ  Ｔ．Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  １９９３：１９４：７２０〜７２５）、および／または配列番号２（図２）を有するアミノ酸配列１〜４８を有するヒトタンパク質またはポリペプチドであることが理解される。プロアドレノメデュリンのこのフラグメントは、「中央領域プロアドレノメデュリン（ＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ）」（欧州特許第ＥＰ１４８８２０９Ｂ１号明細書）と呼ばれ、そして大きな血漿安定性を示し、これは、特に有利である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
本発明によれば、上記炎症性マーカーは、Ｃ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦ−αのようなサイトカイン、例えばＩＬ−６、インターロイキン−１βのようなインターロイキン、プロカルシトニン（１−１１６、３−１１６）、アンギオテンシンＩＩ、エンドセリン−１、およびＶＣＡＭまたはＩＣＡＭのような接着分子の群の少なくとも１つのマーカーから選択され得、そして上記血管マーカーは、クレアチンキナーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、ミオグロビン、ナトリウム排泄増加タンパク質、特にＡＮＰ（またはＡＮＦ）、プロＡＮＰ、ＮＴ−プロＡＮＰ、ＢＮＰ、プロＢＮＰ、ＮＴ−プロＢＮＰ、各例におけるそれらの部分配列、ＣＲＰの群の少なくとも１つのマーカーから選択され得る。さらに、この用語はまた、特にプロ−ガストリン放出ペプチド（ｐｒｏＧＲＰ）、プロ−エンドセリン−１、プロ−レプチン、プロ−神経ペプチド−Ｙ、プロ−ソマトスタチン、プロ−神経ペプチド−ＹＹ、プロ−オピオメラノコルチン、または各事例におけるそれらの部分配列のような、心臓血管系を調節する（プロ）ホルモン類を意味することが理解される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
別の実施形態では、少なくとも１つの糖尿病マーカー／因子がさらに決定され得る。糖尿病マーカー／因子は、本発明によれば、アディポネクチン、炭水化物、コレステロール（ＬＤＨ）およびその他のような脂質、肥満度指数（ＢＭＩ）、年齢、血圧、ＨＯＭＡ−ＩＲ（恒常性モデル評価−インシュリン抵抗性指数、測定のために、Ｍａｔｔｈｅｗｓ  ＤＲ，Ｈｏｓｋｅｒ  ＪＰ，Ｒｕｄｅｎｓｋｉ  ＡＳ，Ｎａｙｌｏｒ  ＢＡ，Ｔｒｅａｃｈｅｒ  ＤＦ，Ｔｕｒｎｅｒ  ＲＣ，Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ：Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  Ｂ−ｃｅｌｌ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｆａｓｔｉｎｇ  Ｐｌａｓｍａ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  ａｎｄ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍａｎ．Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ２８：４１２−４１９．１９８５を参照のこと）のようなものである。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
（実施例１）
ＭＲ−プロＡＤＭアッセイは、Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒら（Ｍｏｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＮＧ，Ｓｔｒｕｃｋ  Ｊ，Ａｌｏｎｓｏ  Ｃ，Ｂｅｒｇｍａｎｎ  Ａ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｉｄｒｅｇｉｏｎａｌ  ｐｒｏａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌｉｎ  ｉｎ  ｐｌａｓｍａ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｕｍｉｎｏｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ．Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ．２００５  Ｏｃｔ；５１（１０）：１８２３−９）に従って実行した。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
ＭＲ−プロＡＤＭは、邪魔されないグルコース負荷をもつ１００人の健常試験被験体、邪魔されたグルコース負荷を既にもつ６０人の患者、および明らかなＩＩ型糖尿病（「ＤＭＩＩ」：と略される）を有する２００人の患者で決定された。これら２００人の患者は、任意の後遺症を患わない１００人の糖尿病患者、および糖尿病性腎症および糖尿病性網膜症のような後遺症を既に患っていた１００人の糖尿病患者に分割された。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
図３は、ＤＭＩＩの重篤の増加した程度とともにＭＲ−プロＡＤＭ値における顕著な増加を示す。ＤＭＩＩ患者のこれら２つの群は、特に、健常コントロールおよび邪魔されたグルコース負荷を有する患者とは異なる。驚くべきことに、最も高いＭＲ−プロＡＤＭ値は、既に糖尿病後遺症を示したＤＭＩＩ患者で見出された。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
【表１−２】
2010509575.tif 000001
既に存在する制限された微小循環とＭＲ−プロＡＤＭ値との間の関係はまた、ＤＭＩＩを有する５０人の患者におけるＭＲ−ｐｒｏＡＤＭ値と、休止前腕皮膚反応微小循環灌流（ＲＣＭＰ：Ａ  Ｅｎｒｉｑｕｅ  Ｃａｂａｌｌｅｒｏ，Ｒｏｌａ  Ｓａｏｕａｆ，Ｓｕｂｏｄｈ  Ａｒｏｒａ，Ｓｕ  Ｃ  Ｌｉｍ，Ｆｒａｎｋ  Ｗ  ＬｏＧｅｒｆｏ，Ｅｄｗａｒｄ  Ｓ  Ｈｏｒｔｏｎ，Ａｒｉｓｔｉｄｉｓ  Ｖｅｖｅｓ．Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏ−  ａｎｄ  ｍａｃｒｏ−ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ｉｓ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｉｎ  ｔｈｏｓｅ  ａｔ  ｒｉｓｋ  ｆｏｒ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ４８：１８５６−１８６２，１９９９）として測定された循環流れとの間顕著な相関（ｒ＝０．４３、Ｐ＝０．００２）によって示される。