【手続補正書】
【提出日】平成22年2月5日(2010.2.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＭ−ＣＳＦに特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体であって、
前記抗体は、配列ＩＤ番号４０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号４１のＣＤＲ２、および配列ＩＤ番号４２のＣＤＲ３を有する重鎖と、配列ＩＤ番号４３のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号４４のＣＤＲ２、および配列ＩＤ番号４５のＣＤＲ３を有する軽鎖と、を備えるか、または、
前記抗体は、配列ＩＤ番号４６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号４７のＣＤＲ２、および配列ＩＤ番号４８のＣＤＲ３を有する重鎖と、配列ＩＤ番号４９のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号５０のＣＤＲ２、および配列ＩＤ番号５１のＣＤＲ３を有する軽鎖と、を備える、
単離ヒトモノクローナル抗体。
【請求項２】
請求項１記載の抗体において、
前記抗体は、配列ＩＤ番号８の１〜１１０のアミノ酸を含む重鎖可変領域と、配列ＩＤ番号１２の１〜９７のアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、を備えるか、または、
前記抗体は、配列ＩＤ番号１６の１〜１１４のアミノ酸を含む重鎖可変領域と、配列ＩＤ番号１８の１〜９７のアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、を備える、
単離ヒトモノクローナル抗体。
【請求項３】
請求項１記載の抗体において、
前記抗体は、配列ＩＤ番号８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列ＩＤ番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を備えるか、または、
前記抗体は、配列ＩＤ番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列ＩＤ番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を備える、
単離ヒトモノクローナル抗体。
【請求項４】
請求項１記載の抗体において、
前記抗体の親和性は約１×１０−８未満である、
単離ヒトモノクローナル抗体。
【請求項５】
請求項１記載の抗体において、
前記抗体は、２つの重鎖を有するものである、
単離ヒトモノクローナル抗体。
【請求項６】
請求項１記載の抗体において、
前記抗体は、２つの軽鎖を有するものである、
単離ヒトモノクローナル抗体。
【請求項７】
配列ＩＤ番号３５のアミノ酸配列を有するペプチドのエピトープに結合する抗体。
【請求項８】
配列ＩＤ番号３６のアミノ酸配列を有するペプチドのエピトープに結合する抗体。
【請求項９】
配列ＩＤ番号３７のアミノ酸配列を有するペプチドのエピトープに結合する抗体。
【請求項１０】
配列ＩＤ番号３８のアミノ酸配列を有するペプチドのエピトープに結合する抗体。
【請求項１１】
請求項１記載の抗体と薬学的に許容される担体とを有する組成物。
【請求項１２】
請求項１記載の抗体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１３】
請求項１２記載のポリヌクレオチドにおいて、
前記重鎖の核酸配列は配列ＩＤ番号１０または配列ＩＤ番号１７を有するものであるか、または、
前記軽鎖の核酸配列は配列ＩＤ番号１４または配列ＩＤ番号１９を有するものである、
ポリヌクレオチド。
【請求項１４】
請求項１２記載のポリヌクレオチド配列を有するベクター。
【請求項１５】
請求項１記載の抗体を発現する細胞。
【請求項１６】
請求項１５記載の細胞において、
前記細胞はハイブリドーマである、
細胞。
【請求項１７】
対象のＧＭ−ＣＳＦを介した炎症性疾患を治療する方法であって、
前記対象に、薬学的に許容される担体と、ＧＭ−ＣＳＦを介した炎症性疾患の治療に有効な量でＧＭ−ＣＳＦに特異的に結合する少なくとも１つの抗体と、を有する組成物を投与する工程を有し、
前記抗体は、配列ＩＤ番号４０のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号４１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号４２のＣＤＲ３を有する重鎖と、配列ＩＤ番号４３のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号４４１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号４５のＣＤＲ３を有する軽鎖と、を備えるか、または、
前記抗体は、配列ＩＤ番号４６のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号４７のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号４８のＣＤＲ３を有する重鎖と、配列ＩＤ番号４９のＣＤＲ１、配列ＩＤ番号５０１のＣＤＲ２および配列ＩＤ番号５１のＣＤＲ３を有する軽鎖と、を備える、
方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法において、
前記対象はヒトである、
方法。
【請求項１９】
請求項１７記載の方法において、
前記抗体は、配列ＩＤ番号８の１〜１１０のアミノ酸を含む重鎖可変領域と、配列ＩＤ番号１２の１〜９７のアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、を備えるか、または、
前記抗体は、配列ＩＤ番号１６の１〜１１４のアミノ酸を含む重鎖可変領域と、配列ＩＤ番号１８の１〜９７のアミノ酸を含む軽鎖可変領域と、を備える、
方法。
【請求項２０】
請求項１７記載の方法において、
前記抗体は、配列ＩＤ番号８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列ＩＤ番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を備えるか、または、
前記抗体は、配列ＩＤ番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列ＩＤ番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を備える、
方法。
【請求項２１】
請求項１７記載の方法において、
前記ＧＭ−ＣＳＦを介した炎症性疾患は関節リウマチ、多発性硬化症、喘息、肺胞タンパク症、結腸癌、肺癌、乳癌、膵癌、白血病、または若年性骨髄単球性白血病である、
方法。
【請求項２２】
ＧＭ−ＣＳＦに特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを作成する方法であって、
ａ．ｅｘ ｖｉｖｏで末梢血単核細胞とＧＭ−ＣＳＦまたはその抗原フラグメントを混合し、抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体を作成する、前記混合する工程と、
ｂ．前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイブリドーマ細胞を作成する、前記融合する工程と、
ｃ．前記ハイブリドーマ細胞から産生された抗体のＧＭ−ＣＳＦに対する特異的結合性を決定する工程と、
ｄ．ＧＭ−ＣＳＦに特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選択する工程と、
を有し、それによりＧＭ−ＣＳＦに特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項２３】
請求項２２記載の方法において、
前記抗原フラグメントは、配列ＩＤ番号３、４、５、３５、３６、３７、３８、または３９のアミノ酸配列を有するものである、
方法。
【請求項２４】
請求項２２記載の方法において、
前記ハイブリドーマ細胞は、ミスマッチ修復の化学抑制剤に曝露されるものである、
方法。
【請求項２５】
請求項２２記載の方法において、
前記骨髄腫細胞は、ミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ型をコードするポリヌクレオチドを発現するものである、
方法。
【請求項２６】
請求項２５記載の方法において、
ミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ型をコードする前記ポリヌクレオチドは、不活性化されるものであるか、または、
前記ハイブリドーマ細胞は、前記ポリヌクレオチドを除去されている、
方法。
【請求項２７】
請求項２２記載の方法によって生産されるハイブリドーマ細胞。
【請求項２８】
請求項２７記載のハイブリドーマ細胞によって産生される抗体。
【請求項２９】
請求項１記載の抗体を作成する方法であって、
前記抗体の産生に適した条件で宿主細胞を培養する工程と、
前記細胞培養による抗体を回収する工程と、
を有する、方法。
【請求項３０】
配列ＩＤ番号３、配列ＩＤ番号４、配列ＩＤ番号５、配列ＩＤ番号３５、配列ＩＤ番号３６、配列ＩＤ番号３７、配列ＩＤ番号３８、または配列ＩＤ番号３９のアミノ酸配列を有するポリペプチド。
【請求項３１】
炎症性疾患を有する患者のヒトＧＭ−ＣＳＦの生物活性を阻害する方法であって、
炎症性疾患患者に請求項１記載の抗体を投与する工程を有する、方法。
【請求項３２】
請求項３１記載の方法において、
前記炎症性疾患は関節リウマチ、多発性硬化症、または喘息である、
方法。
【請求項３３】
癌患者のヒトＧＭ−ＣＳＦの生物活性を阻害する方法であって、
癌患者に請求項１記載の抗体を投与する工程を有する、方法。
【請求項３４】
請求項３３記載の方法において、
前記癌は白血病である、
方法。
【請求項３５】
請求項３３記載の方法において、
前記癌は若年性骨髄単球性白血病である、
方法。
【請求項３６】
請求項３３記載の方法において、
さらに、化学療法薬を前記患者に投与する工程を有するものである、
方法。
【請求項３７】
請求項３６記載の方法において、
前記抗体は前記化学療法薬と結合されるものである、
方法。
【請求項３８】
炎症性疾患を有する患者のヒトＧＭ−ＣＳＦの生物活性を阻害する方法であって、
炎症性疾患患者に請求項１記載の抗体を投与する工程を有する、
方法。
【請求項３９】
請求項３８記載の方法において、
前記感染症は敗血症性ショックである、
方法。
【請求項４０】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、対象抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を作成し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記ハイブリドーマ細胞がミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ対立遺伝子を発現する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記過剰変異ハイブリドーマ細胞から産生した抗体または前記親ハイブリドーマ細胞によって産生された抗体よりも力価が高い産生抗体について、抗原に対する抗体の結合をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも抗原に対する親和性が高いか、力価が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項４１】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、対象抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を作成し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体の抗原に対する結合をスクリーニングする工程と、前記抗原に対する抗体を哺乳類発現細胞に産生するハイブリドーマ細胞から免疫グロブリン遺伝子をクローニングし、前記哺乳類発現細胞がミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ対立遺伝子を発現し、前記ハイブリドーマ細胞よりも高い力価で抗体を産生する哺乳類発現細胞、または前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体と比較し、抗原に対する親和性の高い抗体を産生する哺乳類発現細胞をスクリーニングする工程とを有し、それによって、対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項４２】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、対象抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を作成し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、親ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、ミスマッチ修復の化学抑制剤少なくとも１種類の存在下で前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、それによって過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも高い力価の抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生された抗体よりも親和性が高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも前記抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項４３】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、対象抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を作成し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体の抗原に対する結合をスクリーニングする工程と、抗原に対する抗体を哺乳類発現細胞に産生するハイブリドーマ細胞から免疫グロブリン遺伝子をクローニングする工程と、ミスマッチ修復遺伝子の化学抑制剤少なくとも１種類存在下、前記哺乳類発現細胞をインキュベートする工程と、前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体と比べ、抗原に対する親和性が高い抗体を分泌する哺乳類発現細胞をスクリーニングする工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項４４】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、対象抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を作成し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、ミスマッチ修復遺伝子の化学抑制剤少なくとも１種類存在下、前記ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、抗原結合抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程と、前記過剰変異ハイブリドーマ細胞から哺乳類発現細胞に免疫グロブリン遺伝子をクローニングする工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項４５】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、対象抗原に対する抗体を作成する抗体産生細胞を作成し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、親ハイブリドーマ細胞を形成する工程であって、前記親ハイブリドーマ細胞はミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ対立遺伝子を有し、ミスマッチ修復が欠損しているものである、前記混合させる工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることにより、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記過剰変異ハイブリドーマ細胞から産生した抗体の抗原に対する抗体結合性をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞から産生される抗体よりも抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞と比べ、抗体の力価が上昇した過剰変異ハイブリドーマ細胞の２回目のスクリーニングを行う工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項４６】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、対象抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を作成し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合する工程であって、前記骨髄腫細胞は天然でミスマッチ修復が欠損しており、それによって、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記親ハイブリドーマ細胞のミスマッチ修復遺伝子が欠損しているものである、前記混合する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記過剰発現ハイブリドーマ細胞から産生された抗体の抗原に対する抗体結合性について、１回目のスクリーニングを行う工程と、前記親ハイブリドーマ細胞により産生された抗体よりも抗原への親和性が高い抗体を産生する、過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程と、親ハイブリドーマ細胞よりも高い力価の抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも親和性の高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞について、２回目のスクリーニングを行う工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親細胞により産生される抗体よりも、前記抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項４７】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、前記対象抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を作成し、前記抗体産生細胞はミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ対立遺伝子を有し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記親ハイブリドーマ細胞はミスマッチ修復を欠損しているものである、前記混合する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも親和性が高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも前記抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項４８】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を作成し、抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、前記骨髄腫細胞が天然でミスマッチ修復を欠損することで、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記ハイブリドーマ細胞のミスマッチ修復が欠損している工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも親和性が高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞または前記親細胞により産生される抗体よりも前記抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程と、前記過剰変異ハイブリドーマ細胞から哺乳類発現細胞に免疫グロブリン遺伝子をクローニングする工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項４９】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、末梢血単核細胞と対象抗原または対象抗原を発現する抗原提示細胞を有する細胞抽出物とをｅｘ ｖｉｖｏで混合し、前記対象抗原に対する抗体を産生する抗体産生細胞を作成し、抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合することで、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体について抗原に対する抗体結合性をスクリーニングする工程と、前記ハイブリドーマ細胞から哺乳類発現細胞に免疫グロブリン遺伝子をクローニングし、前記発現細胞は天然でミスマッチ修復を欠損しており、前記発現細胞をインキュベートすることで突然変異を誘発し、前記親発現細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異発現細胞、または前記親発現細胞により産生される抗体よりも親和性が高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異発現細胞をスクリーニングする工程と、前記親発現細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異発現細胞または前記親細胞により産生される抗体よりも前記抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異発現細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する過剰変異発現細胞を作成する方法。
【請求項５０】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記ハイブリドーマ細胞はミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ対立遺伝子を発現する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記過剰変異ハイブリドーマ細胞から産生される抗体または前記親ハイブリドーマ細胞によって産生されるものよりも力価が高い産生細胞について、抗原に対する抗体結合性をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも抗原に対する親和性が高いか、力価が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項５１】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体の抗原に対する結合性をスクリーニングする工程と、前記抗原に対する抗体を産生するハイブリドーマ細胞から哺乳類発現細胞に免疫グロブリン遺伝子をクローニングし、前記哺乳類発現細胞がミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ対立遺伝子を発現し、前記ハイブリドーマ細胞よりも高い力価で抗体を産生する哺乳類発現細胞、または前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体と比べ、抗原に対する親和性の高い抗体を産生する哺乳類発現細胞をスクリーニングする工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項５２】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、ミスマッチ修復の化学抑制剤少なくとも１種類の存在下で前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、それによって過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも高い力価の抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生された抗体よりも親和性が高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも前記抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項５３】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、抗原に対する抗体を産生するハイブリドーマ細胞から哺乳類発現細胞に免疫グロブリン遺伝子をクローニングする工程と、ミスマッチ修復の化学抑制剤少なくとも１種類の存在下で前記哺乳類発現細胞をインキュベートする工程と、前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体と比べ、抗原に対する親和性の高い抗体を分泌する哺乳類発現細胞をスクリーニングする工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項５４】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、ミスマッチ修復の化学抑制剤少なくとも１種類存在下、前記ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、抗原結合抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項５５】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記親ハイブリドーマ細胞がミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ対立遺伝子を有し、ミスマッチ修復が欠損している工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記過剰変異ハイブリドーマ細胞から産生された抗体の抗原に対する抗体結合性をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞から産生される抗体よりも抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞と比べ、抗体の力価が上昇した過剰変異ハイブリドーマ細胞の２回目のスクリーニングを行う工程と、前記親ハイブリドーマ細胞によって産生されるものよりも力価が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項５６】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、前記親骨髄腫細胞のミスマッチ修復が天然で欠損することで、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記ハイブリドーマ細胞のミスマッチ修復が欠損している工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記過剰発現ハイブリドーマ細胞から産生された抗体の抗原に対する抗体結合性について、１回目のスクリーニングを行う工程と、前記親ハイブリドーマ細胞により産生された抗体よりも抗原への親和性が高い抗体を産生する、過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程と、親ハイブリドーマ細胞よりも高い力価の抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも親和性の高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞について、２回目のスクリーニングを行う工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親細胞により産生される抗体よりも前記抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を作成する方法。
【請求項５７】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、前記抗体産生細胞にミスマッチ修復遺伝子のドミナントネガティブ対立遺伝子を導入し、前記抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合して親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記親ハイブリドーマ細胞のミスマッチ修復が欠損している工程と、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成する工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも親和性が高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞または前記親細胞により産生される抗体よりも前記抗原に対する親和性が高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項５８】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合し、前記骨髄腫細胞が天然でミスマッチ修復を欠損することで、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記ハイブリドーマ細胞がミスマッチ修復を欠損し、前記親ハイブリドーマ細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させることで、過剰変異ハイブリドーマ細胞を形成させる工程と、前記親ハイブリドーマ細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞、または前記親ハイブリドーマ細胞により産生される抗体よりも親和性が高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異ハイブリドーマ細胞をスクリーニングする工程と、前記過剰変異ハイブリドーマ細胞から哺乳類発現細胞に免疫グロブリン遺伝子をクローニングする工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法。
【請求項５９】
標的抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する哺乳類発現細胞を作成する方法であって、対象抗原を負荷した動物から単離された骨髄または末梢血細胞を培養し、前記対象抗原に対する抗体を産生する細胞を単離し、抗体産生細胞と骨髄腫細胞を融合することで、親ハイブリドーマ細胞を形成し、前記ハイブリドーマ細胞から産生される抗体について、抗原に対する抗体結合性をスクリーニングする工程と、前記ハイブリドーマ細胞から哺乳類発現細胞に免疫グロブリン遺伝子をクローニングし、前記発現細胞のミスマッチ修復が天然で欠損し、前記発現細胞をインキュベートし、突然変異を誘発させ、前記親発現細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異発現細胞、または前記親発現細胞により産生される抗体よりも親和性が高い抗原に結合する抗体を産生する過剰変異発現細胞をスクリーニングする工程と、前記親発現細胞よりも力価の高い抗体を産生する過剰変異発現細胞、または前記親細胞により産生される抗原に高い親和性を示す抗体を産生する過剰変異発現細胞を選択する工程とを有し、それによって、前記対象抗原に特異的に結合する抗体を産生する過剰変異発現細胞を作成する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
本発明の好適な抗体は、標的抗原のエピトープ、例えば立体構造エピトープに特異的に結合する。本発明の抗体は、例えば（これに限定されるものではないが）ＧＭ−ＣＳＦ、好ましくはヒトＧＭ−ＣＳＦ（配列ＩＤ番号１）、より好ましくは成熟ヒトＧＭ−ＣＳＦ（配列ＩＤ番号２）など、好ましくは疾患関連抗原に向かう。一部の実施形態では、前記抗原が結合するエピトープが、配列ＩＤ番号１または配列ＩＤ番号２で示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも５個の連続アミノ酸を有する。他の実施形態では、前記抗原が結合するエピトープが、配列ＩＤ番号１または配列ＩＤ番号２で示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも１０個の連続アミノ酸を有する。他の実施形態では、前記抗原が結合するエピトープが、配列ＩＤ番号１または配列ＩＤ番号２で示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも１５個の連続アミノ酸を有する。他の実施形態では、前記抗原が結合するエピトープが、配列ＩＤ番号１または配列ＩＤ番号２で示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも２０個の連続アミノ酸を有する。さらに他の実施形態では、前記抗原が結合するエピトープが、配列ＩＤ番号１または配列ＩＤ番号２で示されるアミノ酸配列のうち、少なくとも２５個の連続アミノ酸を有する。本発明の特定の好適な実施形態では、前記抗体が結合するＧＭ−ＣＳＦのエピトープが、配列ＩＤ番号３３−３６の少なくとも１つのアミノ酸配列を有する。抗体産生細胞は２００７年１月１８日（１０Ｇ９）、および２００７年１月３１日（Ｅ１０）にＡｍｅｒ．Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔ．Ｃｏｌｌ．（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９）に掲載され、受入番号ＰＴＡ−８１７３およびＰＴＡ−８１９３を割り当てられた。本発明の抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体の例は、そのような細胞によって産生される抗体である。