【手続補正書】
【提出日】平成22年5月10日(2010.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞においてヒトＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、該ｄｓＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該相補性の領域が、３０ヌクレオチド未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ。
【請求項２】
前記第１の配列が、表１および２からなる群から選択され、前記第２の配列が、表１および２からなる群から選択される、請求項１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項３】
少なくとも１種の修飾ヌクレオチドを含む、請求項１または２に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項４】
前記修飾ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、およびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基と結合している末端ヌクレオチドからなる群から選択される、請求項３に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項５】
前記修飾ヌクレオチドが、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、２’−デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２’−アミノ−修飾ヌクレオチド、２’−アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミダート、およびヌクレオチドを含む非天然塩基からなる群から選択される、請求項３に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項６】
前記第１の配列が、表１および２からなる群から選択され、前記第２の配列が、表１および２からなる群から選択される、請求項３または５に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項７】
請求項１に記載のｄｓＲＮＡを含む細胞。
【請求項８】
生物において、ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、ｄｓＲＮＡと、薬学的に受容可能な担体とを含み、該ｄｓＲＮＡは、互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該相補性の領域が、３０ヌクレオチド未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する、薬学的組成物。
【請求項９】
前記ｄｓＲＮＡの前記第１の配列が、表１および２からなる群から選択され、前記ｄｓＲＮＡの前記第２の配列が、表１および２からなる群から選択される、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
細胞においてＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための方法であって、
（ａ）該細胞に二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）を導入する工程であって、該ｄｓＲＮＡが互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該相補性の領域が、３０ヌクレオチド未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する工程と、
（ｂ）工程（ａ）において生じた細胞を、該ＰＣＳＫ９遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間維持し、それによって、該細胞におけるＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する工程と
を含む方法。
【請求項１１】
ＰＣＳＫ９遺伝子発現をダウンレギュレートすることによって媒介され得る病理学的過程を治療、予防または管理するための組成物であって、該組成物は、治療上または予防上有効な量のｄｓＲＮＡを含み、該ｄｓＲＮＡは、互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該相補性の領域が、３０ヌクレオチド未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する、組成物。
【請求項１２】
細胞においてＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するためのベクターであって、ｄｓＲＮＡの少なくとも一方の鎖をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結している調節配列を含み、該ｄｓＲＮＡの鎖のうち一方が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的であり、該ｄｓＲＮＡが、３０塩基対未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する、ベクター。
【請求項１３】
請求項１２に記載のベクターを含む細胞。
【請求項１４】
細胞においてヒトＰＣＳＫ９遺伝子の発現レベルを低下させるための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、該ｄｓＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現レベルが低下する、二本鎖リボ核酸。
【請求項１５】
前記接触を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで３０ｎＭ以下で実施する、請求項１４に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１６】
生物においてＰＣＳＫ９遺伝子の発現レベルを低下させるための薬学的組成物であって、請求項１４に記載のｄｓＲＮＡと、薬学的に受容可能な担体とを含む、薬学的組成物。
【請求項１７】
ＰＣＳＫ９が関連している障害を治療するための組成物であって、治療上有効な量の請求項１４に記載のｄｓＲＮＡを含む組成物。
【請求項１８】
前記第１の配列は配列番号１２２９の配列であり、前記第２の配列は配列番号１２３０の配列である、請求項１〜６、１４および１５のいずれか１項に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項１９】
前記第１の配列は配列番号１２２９の配列であり、前記第２の配列は配列番号１２３０の配列である、請求項８、９または１１に記載のｄｓＲＮＡ。
【請求項２０】
前記第１の配列は配列番号１２２９の配列であり、前記第２の配列は配列番号１２３０の配列である、請求項１０に記載の方法。
【請求項２１】
前記第１の配列は配列番号１２２９の配列であり、前記第２の配列は配列番号１２３０の配列である、請求項１２に記載のベクター。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
別の実施形態では、本発明は、細胞においてＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するためのベクターを含む細胞を提供する。このベクターは、本発明のｄｓＲＮＡの１種の少なくとも一方の鎖をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結している調節配列を含む。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
細胞においてヒトＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、該ｄｓＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該相補性の領域が、３０ヌクレオチド未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ。
（項目２）
上記第１の配列が、表１および２からなる群から選択され、上記第２の配列が、表１および２からなる群から選択される、項目１に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目３）
少なくとも１種の修飾ヌクレオチドを含む、項目１に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目４）
少なくとも１種の修飾ヌクレオチドを含む、項目２に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目５）
上記修飾ヌクレオチドが、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチド、５’−ホスホロチオエート基を含むヌクレオチドおよびコレステリル誘導体またはドデカン酸ビスデシルアミド基と結合している末端ヌクレオチドからなる群から選択される、項目３に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目６）
上記修飾ヌクレオチドが、２’−デオキシ−２’−フルオロ修飾ヌクレオチド、２’−デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２’−アミノ−修飾ヌクレオチド、２’−アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミダート、およびヌクレオチドを含む非天然塩基からなる群から選択される、項目３に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目７）
上記第１の配列が、表１および２からなる群から選択され、上記第２の配列が、表１および２からなる群から選択される、項目３に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目８）
上記第１の配列が、表１および２からなる群から選択され、上記第２の配列が、表１および２からなる群から選択される、項目６に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目９）
項目１に記載のｄｓＲＮＡを含む細胞。
（項目１０）
生物において、ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、ｄｓＲＮＡと、薬学的に受容可能な担体とを含み、該ｄｓＲＮＡは、互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該相補性の領域が、３０ヌクレオチド未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する、薬学的組成物。
（項目１１）
上記ｄｓＲＮＡの上記第１の配列が、表１および２からなる群から選択され、上記ｄｓＲＮＡの上記第２の配列が、表１および２からなる群から選択される、項目１０に記載の薬学的組成物。
（項目１２）
上記ｄｓＲＮＡの上記第１の配列が、表１および２からなる群から選択され、上記ｄｓＲＮＡの上記第２の配列が、表１および２からなる群から選択される、項目１０に記載の薬学的組成物。
（項目１３）
細胞においてＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するための方法であって、
（ａ）該細胞に二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）を導入する工程であって、該ｄｓＲＮＡが互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該相補性の領域が、３０ヌクレオチド未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する工程と、
（ｂ）工程（ａ）において生じた細胞を、該ＰＣＳＫ９遺伝子のｍＲＮＡ転写物の分解を得るのに十分な時間維持し、それによって、該細胞におけるＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する工程と
を含む方法。
（項目１４）
ＰＣＳＫ９遺伝子発現をダウンレギュレートすることによって媒介され得る病理学的過程を治療、予防または管理する方法であって、該方法は、このような治療、予防または管理を必要とする患者に、治療上または予防上有効な量のｄｓＲＮＡを投与する工程を含み、該ｄｓＲＮＡは、互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該相補性の領域が、３０ヌクレオチド未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する、方法。
（項目１５）
細胞においてＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害するためのベクターであって、ｄｓＲＮＡの少なくとも一方の鎖をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結している調節配列を含み、該ｄｓＲＮＡの鎖のうち一方が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的であり、該ｄｓＲＮＡが、３０塩基対未満の長さであり、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現を阻害する、ベクター。
（項目１６）
項目１５に記載のベクターを含む細胞。
（項目１７）
細胞においてヒトＰＣＳＫ９遺伝子の発現レベルを低下させるための二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）であって、該ｄｓＲＮＡが、互いに相補的である少なくとも２種の配列を含み、センス鎖が、第１の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＰＣＳＫ９をコードするｍＲＮＡの少なくとも一部と実質的に相補的である相補性の領域を含む第２の配列を含み、該ｄｓＲＮＡが、該ＰＣＳＫ９を発現する細胞と接触した際、該ＰＣＳＫ９遺伝子の発現レベルが低下する、二本鎖リボ核酸。
（項目１８）
上記接触によって、上記ＰＣＳＫ９遺伝子の発現レベルが低下する、項目１７に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目１９）
上記接触を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで３０ｎＭ以下で実施する、項目１７に記載のｄｓＲＮＡ。
（項目２０）
生物においてＰＣＳＫ９遺伝子の発現レベルを低下させるための薬学的組成物であって、項目１７に記載のｄｓＲＮＡと、薬学的に受容可能な担体とを含む、薬学的組成物。
（項目２１）
ＰＣＳＫ９が関連している障害を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、治療上有効な量の項目１７に記載のｄｓＲＮＡを投与する工程を含む、方法。
（項目２２）
ＰＣＳＫ９関連障害を治療する方法であって、このような治療を必要とする患者に、治療上有効な量の項目１７に記載のｄｓＲＮＡを投与する工程を含む方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０４】
１Ｕ、Ｃ、Ａ、Ｇ：リボヌクレオチドに対応する；Ｔ：デオキシチミジン；ｕ、ｃ、ａ、ｇ：２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドに対応する；Ｕｆ、Ｃｆ、Ａｆ、Ｇｆ：２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチドに対応する；ヌクレオチドが配列中に記されている場合には、それらは３’−５’ホスホジエステル基によって連結している；「ｓ」が差し込まれたヌクレオチドは、３’−Ｏ−５’−Ｏホスホロチオジエステル基によって連結している；接頭辞「ｐ−」によって表されない限り、オリゴヌクレオチドは、最も５’のヌクレオチドに５’−リン酸基を有していない；すべてのオリゴヌクレオチドは、最も３’のヌクレオチドに３’−ＯＨを保持する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０９】
１Ｕ、Ｃ、Ａ、Ｇ：リボヌクレオチドに対応する；Ｔ：デオキシチミジン；ｕ、ｃ、ａ、ｇ：２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチドに対応する；Ｕｆ、Ｃｆ、Ａｆ、Ｇｆ：２’−デオキシ−２’−フルオロリボヌクレオチドに対応する；ｍｏｃ、ｍｏｕ、ｍｏｇ、ｍｏａ：２’−ＭＯＥヌクレオチドに対応する；ヌクレオチドが、配列中に記されている場合には、それらは３’−５’ホスホジエステル基によって連結している；ａｂ：３’−末端無塩基ヌクレオチド；「ｓ」が差し込まれたヌクレオチドは、３’−Ｏ−５’−Ｏホスホロチオジエステル基によって連結している；  接頭辞「ｐ−」によって表されない限り、オリゴヌクレオチドは、最も５’のヌクレオチドに５’−リン酸基を有していない；すべてのオリゴヌクレオチドは、最も３’のヌクレオチドに３’−ＯＨを保持する。