【手続補正書】
【提出日】平成22年7月28日(2010.7.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１０−６Ｍ以下の親和性（ＫＤ）でＥｐｈＢ３の細胞外ドメインと結合し、ＥｐｈＢ３との結合について抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５のいずれかと７５％超で競合する、抗体。
【請求項２】
抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５のいずれかと同じＥｐｈＢ３のエピトープに結合する、請求項２に記載の抗体。
【請求項３】
抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５のいずれかの１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む、抗体。
【請求項４】
前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、ヒト抗体、一本鎖抗体または抗体フラグメントである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５】
ＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が、別の抗ＥｐｈＢ３抗体の対応するＣＤＲの対応する残基で置換されている、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６】
ＣＤＲ内の１つまたは２つのアミノ酸が改変されている、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７】
ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５の抗体に対して、可変軽鎖領域または可変重鎖領域のいずれかにわたり少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を保持している、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８】
ヒト抗体配列の定常領域ならびにヒト抗体配列の１つ以上の重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９】
前記ヒト抗体配列が、個別のヒト配列、ヒトコンセンサス配列、個別のヒト生殖細胞系列配列またはヒトコンセンサス生殖細胞系列配列である、請求項８に記載の抗体。
【請求項１０】
前記重鎖定常領域が、改変されているかまたは改変されていない、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、それらのフラグメントまたはそれらの組み合わせである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
ＥｐｈＢ３に対して１０−７、１０−８または１０−９Ｍ以下の結合親和性を有する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２】
前記ＣＤＲにおいて保存的置換を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１３】
低リスク残基および中程度のリスク残基において保存的変更または非保存的変更を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１４】
前記軽鎖定常領域が、改変されているかもしくは改変されていないラムダ軽鎖定常領域、カッパ軽鎖定常領域、それらのフラグメントまたはそれらの組み合わせである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１５】
ＥｐｈＢ３のリン酸化を誘導する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
ＥｐｈＢ３のオリゴマー化を誘導する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
ＥｐｈＢ３の内部移行を誘導する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
ＥｐｈＢ３の分解を誘導する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
ＥｐｈＢ３のシグナル伝達を誘導する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
ＥｐｈＢ３へのエフリンＢの結合を阻害する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２１】
癌細胞の増殖を阻害する、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
肺癌細胞、卵巣癌細胞、食道癌細胞、結腸癌細胞または乳癌細胞の増殖を阻害する、請求項２１に記載の抗体。
【請求項２３】
別の診断薬または治療薬に結合体化されている、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２４】
癌の処置に有用なＥｐｈＢ３タンパク質の細胞外ドメインに対する抗体についてスクリーニングする方法であって、該方法は：
ＥｐｈＢ３のＥＣＤを含むポリペプチドを、抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８またはＸＰＡ．０４．０４８の少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む候補抗体と接触させる工程；
該ポリペプチドに対する該候補抗体の結合親和性を検出する工程、および
少なくとも１０−６Ｍの結合親和性が検出される場合に該候補抗体を癌の処置に有用な抗体と同定する工程、
を含む、方法。
【請求項２５】
抗体を体系的に変化させ、そして癌の処置に有用なＥｐｈＢ３タンパク質の細胞外ドメインに対する抗体についてスクリーニングする方法であって、該方法は：
抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５のＣＤＲ内の１つまたは２つのアミノ酸に対する改変を含む候補抗体を調製する工程、
ＥｐｈＢ３のＥＣＤを含むポリペプチドを該候補抗体と接触させる工程
該ポリペプチドに対する該候補抗体の結合親和性を検出する工程、および
少なくとも１０−６Ｍの結合親和性が検出される場合に、該候補抗体を癌の処置に有用な抗体と同定する工程
を含む、方法。
【請求項２６】
癌の処置に有用なＥｐｈＢ３タンパク質の細胞外ドメインに対する抗体についてスクリーニングする方法であって、該方法は：
肺細胞、卵巣細胞、食道細胞、結腸細胞または乳房細胞を、抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４もしくはＸＨＡ．０５．８８５の少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む候補抗体あるいは１つ以上のＣＤＲ内に１つもしくは２つのアミノ酸の改変を含む抗体と接触させる工程；
該細胞の増殖または生存を検出する工程；および
細胞増殖または細胞生存の減少が検出される場合に、該候補抗体を癌の処置に有用な抗体と同定する工程
を含む、方法。
【請求項２７】
癌に罹患している被験体を処置するための組成物であって、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体を治療有効量において含む、組成物。
【請求項２８】
前記癌が、肺癌、卵巣癌、食道癌、結腸癌または乳癌である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記組成物は、第２の治療薬と組合わせて投与されることを特徴とする、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物は、放射線治療または手術と組合わせて投与されることを特徴とする、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
ＥｐｈＢ３を発現している腫瘍細胞を標的化するための組成物であって、放射性核種または他のトキシンに結合体化されている請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体を含む、組成物。
【請求項３２】
前記被験体が、哺乳動物である、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記被験体が、ヒトである、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項３５】
制御性調節配列に作動可能に連結された請求項３４に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項３６】
請求項３５に記載のベクターまたは請求項３４に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
【請求項３７】
抗体を作製するために請求項３６に記載の宿主細胞を使用する方法であって、適当な条件下で請求項３６に記載の宿主細胞を培養する工程および該抗体を回収する工程を含む、方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法によって作製される抗体。
【請求項３９】
少なくとも９５重量％の均質性で精製されている、請求項１〜２３または３８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４０】
請求項３９に記載の抗体および薬学的に許容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項４１】
容器内に包装されており、治療有効量の本発明の抗体を含む請求項１〜２３または３８または３９のいずれか一項に記載の抗体を含むキットであって、該キットは、必要に応じて第２の治療薬を備え、該容器に添付されているかまたは該容器とともに包装されているラベルをさらに備え、該ラベルには、該容器の内容物が記載されており、癌を処置するための該容器の該内容物の使用に関する適用および／または指示が提供される、キット。
【請求項４２】
前記容器が、バイアルまたはビンまたは予め充填された注射器である、請求項４１に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明の別の実施形態において、少なくとも９５重量％の均質性に精製されている上述の抗体が、提供される。なおも別の実施形態において、上述の（ａｆｏｒｅｍｅｎｔｉｏｎｍｅｄ）抗体および薬学的に許容可能なキャリアを含む薬学的組成物が、提供される。さらに別の実施形態において、容器内に包装された治療有効量の本発明の抗体を含む、上述の抗体を含むキットが、提供され、ここで、そのキットは、必要に応じて第２の治療薬を備え、その容器に添付されているかまたはその容器とともに包装されているラベルをさらに備え、そのラベルには、容器の内容物が記載されており、癌を処置するための容器の内容物の使用に関する適用および／または指示を提供する。別の実施形態において、容器がバイアルまたはビンまたは予め充填された注射器である上述のキットが、提供される。
本発明の好ましい実施形態では、例えば以下の抗体などが提供される：
（項目１）
１０−６Ｍ以下の親和性（ＫＤ）でＥｐｈＢ３の細胞外ドメインと結合し、ＥｐｈＢ３との結合について抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５のいずれかと７５％超で競合する、抗体。
（項目２）
抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５のいずれかと同じＥｐｈＢ３のエピトープに結合する、項目２に記載の抗体。
（項目３）
抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５のいずれかの１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む、抗体。
（項目４）
前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト操作抗体、ヒト抗体、一本鎖抗体または抗体フラグメントである、項目１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目５）
ＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が、別の抗ＥｐｈＢ３抗体の対応するＣＤＲの対応する残基で置換されている、項目１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６）
ＣＤＲ内の１つまたは２つのアミノ酸が改変されている、項目１〜５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７）
ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５の抗体に対して、可変軽鎖領域または可変重鎖領域のいずれかにわたり少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を保持している、項目１〜６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８）
ヒト抗体配列の定常領域ならびにヒト抗体配列の１つ以上の重鎖可変フレームワーク領域および軽鎖可変フレームワーク領域を含む、項目１〜７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目９）
前記ヒト抗体配列が、個別のヒト配列、ヒトコンセンサス配列、個別のヒト生殖細胞系列配列またはヒトコンセンサス生殖細胞系列配列である、項目８に記載の抗体。
（項目１０）
前記重鎖定常領域が、改変されているかまたは改変されていない、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、それらのフラグメントまたはそれらの組み合わせである、項目１〜９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１）
ＥｐｈＢ３に対して１０−７、１０−８または１０−９Ｍ以下の結合親和性を有する、項目１〜１０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２）
前記ＣＤＲにおいて保存的置換を含む、項目１〜１１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１３）
低リスク残基および中程度のリスク残基において保存的変更または非保存的変更を含む、項目１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１４）
前記軽鎖定常領域が、改変されているかもしくは改変されていないラムダ軽鎖定常領域、カッパ軽鎖定常領域、それらのフラグメントまたはそれらの組み合わせである、項目１〜１３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１５）
ＥｐｈＢ３のリン酸化を誘導する、項目１〜１４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１６）
ＥｐｈＢ３のオリゴマー化を誘導する、項目１〜１５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１７）
ＥｐｈＢ３の内部移行を誘導する、項目１〜１６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１８）
ＥｐｈＢ３の分解を誘導する、項目１〜１７のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１９）
ＥｐｈＢ３のシグナル伝達を誘導する、項目１〜１８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２０）
ＥｐｈＢ３へのエフリンＢの結合を阻害する、項目１〜１９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２１）
癌細胞の増殖を阻害する、項目１〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２２）
肺癌細胞、卵巣癌細胞、食道癌細胞、結腸癌細胞または乳癌細胞の増殖を阻害する、項目２１に記載の抗体。
（項目２３）
別の診断薬または治療薬に結合体化されている、項目１〜２２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目２４）
癌の処置に有用なＥｐｈＢ３タンパク質の細胞外ドメインに対する抗体についてスクリーニングする方法であって、該方法は：
ＥｐｈＢ３のＥＣＤを含むポリペプチドを、抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８またはＸＰＡ．０４．０４８の少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む候補抗体と接触させる工程；
該ポリペプチドに対する該候補抗体の結合親和性を検出する工程、および
少なくとも１０−６Ｍの結合親和性が検出される場合に該候補抗体を癌の処置に有用な抗体と同定する工程、
を含む、方法。
（項目２５）
抗体を体系的に変化させ、そして癌の処置に有用なＥｐｈＢ３タンパク質の細胞外ドメインに対する抗体についてスクリーニングする方法であって、該方法は：
抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４またはＸＨＡ．０５．８８５のＣＤＲ内の１つまたは２つのアミノ酸に対する改変を含む候補抗体を調製する工程、
ＥｐｈＢ３のＥＣＤを含むポリペプチドを該候補抗体と接触させる工程
該ポリペプチドに対する該候補抗体の結合親和性を検出する工程、および
少なくとも１０−６Ｍの結合親和性が検出される場合に、該候補抗体を癌の処置に有用な抗体と同定する工程
を含む、方法。
（項目２６）
癌の処置に有用なＥｐｈＢ３タンパク質の細胞外ドメインに対する抗体についてスクリーニングする方法であって、該方法は：
肺細胞、卵巣細胞、食道細胞、結腸細胞または乳房細胞を、抗体ＸＰＡ．０４．００１、ＸＰＡ．０４．０１３、ＸＰＡ．０４．０１８、ＸＰＡ．０４．０４８、ＸＨＡ．０５．３３７、ＸＨＡ．０５．２００、ＸＨＡ．０５．１１１、ＸＨＡ．０５．００５、ＸＨＡ．０５．２２８、ＸＨＡ．０５．０３０、ＸＨＡ．０５．９６４もしくはＸＨＡ．０５．８８５の少なくとも１、２、３、４、５または６個のＣＤＲを含む候補抗体あるいは１つ以上のＣＤＲ内に１つもしくは２つのアミノ酸の改変を含む抗体と接触させる工程；
該細胞の増殖または生存を検出する工程；および
細胞増殖または細胞生存の減少が検出される場合に、該候補抗体を癌の処置に有用な抗体と同定する工程
を含む、方法。
（項目２７）
癌に罹患している被験体を処置する方法であって、項目１〜２６のいずれか一項に記載の抗体を治療有効量において投与する工程を含む、方法。
（項目２８）
前記癌が、肺癌、卵巣癌、食道癌、結腸癌または乳癌である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
第２の治療薬が投与される、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記被験体が、放射線治療または手術によってさらに処置される、項目２８に記載の方法。
（項目３１）
ＥｐｈＢ３を発現している腫瘍細胞を標的化する方法であって、放射性核種または他のトキシンに結合体化されている項目１〜３０のいずれか一項に記載の抗体を投与する工程を含む、方法。
（項目３２）
前記被験体が、哺乳動物である、項目２７〜３１に記載の方法。
（項目３３）
前記被験体が、ヒトである、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
項目１〜２３のいずれか一項に記載の抗体の重鎖または軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
（項目３５）
制御性調節配列に作動可能に連結された項目３４に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
（項目３６）
項目３５に記載のベクターまたは項目４８に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
（項目３７）
抗体を作製するために項目３６に記載の宿主細胞を使用する方法であって、適当な条件下で項目３６に記載の宿主細胞を培養する工程および該抗体を回収する工程を含む、方法。
（項目３８）
項目３７に記載の方法によって作製される抗体。
（項目３９）
少なくとも９５重量％の均質性で精製されている、項目１〜２３または３８のいずれか一項に記載の抗体。
（項目４０）
項目３９に記載の抗体および薬学的に許容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
（項目４１）
容器内に包装されており、治療有効量の本発明の抗体を含む項目１〜４０のいずれか一項に記載の抗体を含むキットであって、該キットは、必要に応じて第２の治療薬を備え、該容器に添付されているかまたは該容器とともに包装されているラベルをさらに備え、該ラベルには、該容器の内容物が記載されており、癌を処置するための該容器の該内容物の使用に関する適用および／または指示が提供される、キット。
（項目４２）
前記容器が、バイアルまたはビンまたは予め充填された注射器である、項目４１に記載のキット。