【誤訳訂正書】
【提出日】平成22年10月27日(2010.10.27)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  生物学的標本内の１個又はそれ以上の目標細胞の反応を選択的に誘発する選択的細胞反応誘発方法において、
前記生物学的標本における視界内で細胞フレームを照明し、ただし前記視界には、複数個の細胞フレームが含まれるものとし、
前記細胞フレームの画像を撮り込み、
前記画像内の前記１個又はそれ以上の目標細胞の位置を決定し、
前記１個又はそれ以上の目標細胞の位置にエネルギビームを偏向させる
ことよりなり、このエネルギビームは前記１個又はそれ以上の目標細胞のうち少なくとも１個に反応を誘発するに十分なものとした
ことを特徴とする方法。
【請求項２】  前記１個又はそれ以上の目標細胞の位置を決定するステップは、前記１個又はそれ以上の目標細胞に付けられたラベルの有無によって決定するものとした請求項１記載の方法。
【請求項３】  前記反応を、細胞壊死とした請求項１記載の方法。
【請求項４】  前記反応を、光学的削孔とした請求項１記載の方法。
【請求項５】  前記反応を、感光試薬の活性化とした請求項１記載の方法。
【請求項６】  前記反応を、細胞成分の非活性化とした請求項１記載の方法。
【請求項７】  前記反応を、制御運動とした請求項１記載の方法。
【請求項８】  前記反応を、蛍光剤の励起とした請求項１記載の方法。
【請求項９】  前記反応を、フォトブリーチングとした請求項１記載の方法。
【請求項１０】  前記反応を、内部分子脱ケージ化とした請求項１記載の方法。
【請求項１１】  前記反応を、非致死的なものとした請求項１記載の方法。
【請求項１２】  容器に保持した細胞群における個別の細胞の反応を迅速に誘発する反応迅速誘発方法において、
細胞群における第１視界内の第１細胞フレームを照明し、ただし前記第１視界には、複数個の細胞フレームが含まれるものとし、
前記第１視界内の前記第１細胞フレームの画像を撮り込み、
前記画像を参照して前記第１細胞フレーム内における第１個別細胞の位置を決定し、
前記第１個別細胞の位置にエネルギビームを偏向する
ことよりなり、前記エネルギビームは前記第１個別細胞のうちの少なくとも１個に反応を誘発するに十分な量とした
ことを特徴とする方法。
【請求項１３】  更に、
前記第１視界内の第２細胞フレームの画像を撮り込み、
前記画像を参照して前記第２細胞フレームの第２個別細胞の位置を決定し、
前記第２個別細胞の位置にエネルギビームを偏向し、前記エネルギビームは前記第２個別細胞のうちの少なくとも１個に反応を誘発するに十分な量とした
請求項１２記載の方法。
【請求項１４】  更に、
前記細胞群の第２視界内の第１細胞フレームを照明し、
前記第２視界内の第１細胞フレームの画像を撮り込み、
前記画像を参照して前記第２視界内における第１細胞フレームの第３個別細胞の位置を決定し、
前記第３個別細胞の位置にエネルギビームを偏向し、前記エネルギビームは前記第３個別細胞のうちの少なくとも１個に反応を誘発するに十分な量とした
請求項１２記載の方法。
【請求項１５】  前記第２視界内の前記第１細胞フレームを照明するステップは、前記容器を移動し、また前記第１細胞フレームを照明するものとした請求項１４記載の方法。
【請求項１６】  前記反応を、細胞壊死とした請求項１４記載の方法。
【請求項１７】  前記反応を、光学的削孔とした請求項１４記載の方法。
【請求項１８】  前記反応を、感光試薬の活性化とした請求項１４記載の方法。
【請求項１９】  前記反応を、細胞成分の非活性化とした請求項１４記載の方法。
【請求項２０】  前記反応を、制御運動とした請求項１４記載の方法。
【請求項２１】  前記反応を、蛍光剤の励起とした請求項１４記載の方法。
【請求項２２】  前記反応を、フォトブリーチングとした請求項１４記載の方法。
【請求項２３】  前記反応を、内部分子脱ケージ化とした請求項１４記載の方法。
【請求項２４】  前記反応を、非致死的なものとした請求項１４記載の方法。
【請求項２５】  生物学的標本における１個又はそれ以上目標細胞に反応を選択的に誘発する選択的細胞反応誘発方法において、
前記生物学的標本における複数個の細胞フレームよりなる視界のうち一つの視界に対して走査レンズを合焦し、
前記視界内の１個又はそれ以上の細胞フレームを照明し、
前記視界における第１細胞フレームの画像を撮り込み、
前記第１細胞フレームにおける前記１個又はそれ以上の目標細胞の位置を決定し、
前記１個又はそれ以上の目標細胞のうち少なくとも１個に反応を誘発するに十分なエネルギビームを発射し、
前記第１細胞フレームにおける前記１個又はそれ以上の目標細胞の位置に前記エネルギビームを偏向させる
ことよりなることを特徴とする方法。
【請求項２６】  前記反応を、細胞壊死とした請求項２５記載の方法。
【請求項２７】  前記反応を、光学的削孔とした請求項２５記載の方法。
【請求項２８】  前記反応を、感光試薬の活性化とした請求項２５記載の方法。
【請求項２９】  前記反応を、細胞成分の非活性化とした請求項２５記載の方法。
【請求項３０】  前記反応を、制御運動とした請求項２５記載の方法。
【請求項３１】  前記反応を、蛍光剤の励起とした請求項２５記載の方法。
【請求項３２】  前記反応を、非致死的なものとした請求項２５記載の方法。
【請求項３３】  前記第１細胞フレームの画像を撮り込むステップは、ラベル付き細胞の画像を撮り込むものとした請求項２５記載の方法。
【請求項３４】容器に保持した生物学的標本における細胞の画像を撮像する撮り込み装置において、
視界を画定する走査レンズと、
前記視界を、容器内の生物学的標本における複数個の細胞フレームに分割するコンピュータシステムと、
前記視界内の細胞フレームを照明する照明源と、
前記細胞フレームの画像を撮り込む画像撮り込みシステムと、
前記容器を移動させることなく、前記視界内の第２細胞フレームを撮像する反射または回折素子と、および
前記画像を参照して前記生物学的標本における１個またはそれ以上の細胞の組織学的または物理学的特性を決定するコマンドと
を具えたことを特徴とする画像撮り込み装置。
【請求項３５】  前記反射または回折素子を、１個もしくはそれ以上の電流計制御ミラー、１個もしくはそれ以上の圧電傾動プラットフォーム、または１個もしくはそれ以上の音響光学的転向器とした請求項３４記載の装置。
【請求項３６】  前記反射または回折素子を、１個もしくはそれ以上の電流計制御ミラーとした請求項３５記載の装置。
【請求項３７】  更に、前記走査レンズに対して前記生物学的標本の位置を移動させる移動手段を設けた請求項３４記載の装置。
【請求項３８】  前記走査レンズをＦ‐シータ設計とした請求項３４記載の装置。
【請求項３９】  前記視界の直径を、８ｍｍまたはそれ以上とした請求項３４記載の装置。
【請求項４０】  前記視界内における複数個の細胞フレームの数を４個またはそれ以上とした請求項３９記載の装置。
【請求項４１】  前記視界内における複数個の細胞フレームの数を４個またはそれ以上とした請求項３４記載の装置。
【請求項４２】  前記容器は、装置が適正な位置決めおよび合焦を確実に行うようにする特別なマークを有するものとした請求項３４記載の装置。
【請求項４３】  前記容器は、装置が容器を認識できるようにする特別なマークを有するものとした請求項３４記載の装置。
【請求項４４】  前記照明源は、非蛍光細胞の画像を得やすくするバック照明を生ずるものとした請求項３４記載の装置。
【請求項４５】  前記複数個の細胞フレームを、２個またはそれ以上の細胞とした請求項３４記載の装置。
【請求項４６】  前記反射または回折素子を、反射素子とした請求項３４記載の装置。
【請求項４７】  前記反射または回折素子を、回折素子とした請求項３４記載の装置。
【請求項４８】容器に保持した生物学的標本における目標の画像を撮像する撮り込み装置において、
視界を画定する走査レンズと、
前記視界を、容器内の生物学的標本における複数個の目標フレームに分割するコンピュータシステムと、
前記視界内の目標フレームを照明する照明源と、
前記目標フレームの画像を撮り込む画像撮り込みシステムと、
前記容器を移動させることなく、前記視界内の第２目標フレームを撮像する反射または回折素子と、および
前記画像を参照して前記生物学的標本における目標の特性を決定するコマンドと
を具えたことを特徴とする画像撮り込み装置。
【請求項４９】  前記目標を、細胞とした請求項４８記載の装置。
【請求項５０】  前記目標を、細胞の成分とした請求項４８記載の装置。
【請求項５１】  前記目標を、蛋白質または遺伝子成分とした請求項４８記載の装置。
【請求項５２】  前記視界の直径を、８ｍｍまたはそれ以上とした請求項４８記載の装置。
【請求項５３】  前記視界内における複数個の目標の数を４個またはそれ以上とした請求項５２記載の装置。
【請求項５４】  前記２個またはそれ以上のフレームは、それぞれ、複数個の目標を含むものとした請求項５２記載の装置。
【請求項５５】  前記視界内における複数個の目標の数を４個またはそれ以上とした請求項４８記載の装置。
【請求項５６】  前記２個またはそれ以上のフレームは、それぞれ、複数個の目標を含むものとした請求項４８記載の装置。
【請求項５７】  前記照明源は、非蛍光細胞の画像を得やすくするバック照明を生ずるものとした請求項４８記載の装置。
【請求項５８】  前記走査レンズをＦ‐シータ設計とした請求項４８記載の装置。
【請求項５９】  前記反射または回折素子を、反射素子とした請求項４８記載の装置。
【請求項６０】  前記反射または回折素子を、回折素子とした請求項４８記載の装置。
【請求項６１】容器に保持した生物学的標本における細胞の画像を撮像する撮り込み装置において、
視界を画定する走査レンズと、
前記視界を、容器内の生物学的標本における複数個の細胞フレームに分割するコンピュータシステムと、
前記視界内の細胞フレームを照明する照明源と、
前記細胞フレームの画像を撮り込む画像撮り込みシステムと、および
前記画像を参照して前記生物学的標本における細胞の組織学的または物理学的特性を決定するコマンドと
を具えたことを特徴とする画像撮り込み装置。
【請求項６２】  前記視界の直径を、８ｍｍまたはそれ以上とした請求項６１記載の装置。
【請求項６３】  前記視界内における複数個の細胞フレームの数を４個またはそれ以上とした請求項６２記載の装置。
【請求項６４】  前記視界内における複数個の細胞フレームの数を４個またはそれ以上とした請求項６１記載の装置。
【請求項６５】  さらに、照明する手段であって、前記容器を移動することなく前記第１視界内の第２細胞フレームを撮像する手段を設けた請求項６１記載の装置。
【請求項６６】  前記照明源は、非蛍光細胞の画像を得やすくするバック照明を生ずるものとした請求項６１記載の装置。
【請求項６７】  前記走査レンズをＦ‐シータ設計とした請求項６１記載の装置。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
エネルギビームによって誘発される反応の性質はエネルギビームの性質に依存する。反応は致死的なもの又は非致死的なものとすることができる。エネルギビームで誘発される反応の例としては、壊死、寿命死、光学的削孔（周囲の媒体に存在する物質、例えば、遺伝子材料を侵入させるため）、細胞分解、細胞運動（レーザトウィーザ：laser tweezers）、細胞化合物のカッティング、感光物質の活性化、蛍光試薬の励起、フォトブリーチング、及び分子脱ケージ化（アンケージング）がある。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
本発明は、更に、生物学的標本内の個別の細胞の形態学的又は生理学的特徴を決定する装置を意図する。従って、本発明装置は、細胞群における非致死的反応を直接又は間接的に誘発し、この反応を測定する。このような非致死的な反応としては、光学的削孔、細胞運動（レーザトウィーザ）、細胞化合物のカッティング（レーザシザーズ）、感光物質の活性化、蛍光試薬の励起がある。このような非致死的反応は、細胞の内外におけるフォトブリーチング、フォトブリーチングリカバリ、分子脱ケージ化の技術によって照準される細胞の反応がある。このような装置の実施例は、
生物学的標本の細胞フレームを照明する照明源と、
細胞フレームの画像を撮り込む画像撮り込み装置と、
画像を参照して生物学的標本内における第１個別細胞の位置を決定する第１制御手段と、
少なくとも１個又はそれ以上の個別細胞における反応を誘発するに十分なエネルギを発射するエネルギ源と、
形態学的又は生理学的特徴に関して第１個別細胞を調べるに十分なエネルギビームで第１個別細胞を通過させる第２制御手段と、
前記調べる第１個別細胞の反応を測定する検出器と、
を具えることを特徴とする。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
更に、本発明の他の発明は、多数のケージ化化合物を含む生物学的標本における個別の細胞の形態学的又は生理学的特徴を決定する装置において、
細胞フレームの画像を撮り込む画像撮り込み装置と、
ケージ化化合物のうちの少なくとも１個又はそれ以上の脱ケージ化に十分なエネルギビームをケージ化化合物の１個又はそれ以上に通過させる第１制御手段と、
１個又はそれ以上のケージ化化合物を解体するに十分なエネルギビームを発射するエネルギ源と、
ケージ化化合物の１個又はそれ以上が脱ケージ化した化合物の反応に応じて形態学的又は生理学的特徴の変化の進行をモニタする第２制御手段と
を具えたことを特徴とする。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
他の反応としては内部分子脱ケージ化がある。このようなプロセスにおいて、標本を、本発明方法を開始する前にケージ化分子と組み合わせる。このようなケージ化分子は、Ｌ‐アスパラギン酸のベータ‐２，６‐ジニトロベンジル・エステル、又は８‐ヒドロキシピレン‐１，３，６‐トリス‐スルフォン酸の１‐（２‐ニトロフェニル）エチルエステルがある。同様に、アルファ‐カルボキシル‐２‐ニトロベンジル（ＣＮＢ）及び５‐カルボキシルメソキシ‐２‐ニトロベンジル（ＣＭＮＢ）を含むケージ化グループを、生物学的に活性分子、例えば、エーテル、チオエーテル、エステル、アミン、又は同様の機能グループにリンクさせることもできる。用語「内部分子脱ケージ化」は、分子解放が細胞表面又は細胞内で生ずることを意味するものとする。このような脱ケージ化実験は、細胞膜の浸透性及び細胞信号伝達のような迅速な分子プロセスを調べる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３７】
他の反応としては、外部分子脱ケージ化がある。この反応は、内部分子ケージ化とほぼ同様のプロセスを使用する。しかし、外部分子脱ケージ化においては、脱ケージ化された分子は目標細胞内に取り付けたり、組み込んだりしない。その代わり、周囲の目標細胞のケージ化及び脱ケージ化分子への反応が本発明装置及び方法によって画像化される。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
この実施例は、エネルギビームで加熱することにより細胞を壊死させる処置を説明したが、当業者であれば、エネルギビームによって他の反応を細胞に誘発することができることは認識されるであろう。このような他の反応としては、ニームズ（１９９６年Niemz 論文参照）によって検証されたように、例えば、光学‐機械的崩壊、光学的解離、光学的切除、光学‐化学的反応がある。例えば、混合細胞内の感光物質（例えば、ヘムトポルフィリン誘導体、すず‐エチオプルプリン、ルテチウム・テキサフィリン）(１９９８年 Oleinick及びEvansの論文参照)は、照射によって目標細胞内で特別に活性化する。更に、細胞膜内に小さい移行孔を生じて遺伝子又は他の物質が侵入することができるようになる（１９９６年Palumbo 氏らの論文参照）。更に、蛋白質又は遺伝子物質のような細胞内又は細胞表面における特別な分子は、指向性のあるエネルギビームによって不活性化され得る（１９９９年Grate 氏及びWilson氏の論文；及び１９８８年Jay 氏の論文参照）。更に、光学的ブリーチングを使用して、細胞内運動、例えば、細胞膜内における蛋白質の拡散、細胞の有糸（核）分裂中の細胞内微小管の運動を測定することができる（１９９７年発行Ｊ．セル  サイエンス１１０（９）及び１０４１頁におけるLadha 氏らの１９９７年の論文；１９９１年発行Ｊ．セル  サイエンス１００（第１章）２０５頁のCentonze氏及びBorisy氏の論文；１９９９年２月トレンズ・セル・ビオル（第２部）６１〜６５頁のWhite 氏及びStelzer 氏の論文；１９９９年８月Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １６巻（８号）１１５３〜１１６２頁のMeyvis氏らの論文参照）。更に、ケージ化化合物の光分解、又はマルチフォトンによる脱ケージ化を含む脱ケージ化を使用して一時的かつ空間的分析で生物学的活性生成物又は他の興味ある生成物の放出を制御することができる（１９９２年Ｊ．セル・バイオロジー１１９〜３６７頁のTheriot 氏及びMitchison 氏の論文；１９９４年ＰＮＡＳ９１巻（１４号）６６２９頁のDenk氏の論文参照）。特定の目標細胞に指向させた電磁放射を使用して目標細胞において反応を誘発するこれらメカニズムも本発明に組み込むことができる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０４】
実施例１１：脱ケージ化研究
ケージ化化合物を使用して生物学的プロセスを素早く研究することには、非活性状態にある生物学的関連物質の結合（即ち、ケージ化）があり、ケージ化物質を生物学的標本内に拡散させ（比較的ゆっくりとしたプロセスで）、次にレーザを使用して光分解反応を誘発し（比較的速いプロセスで）、その場でミリ秒単位で物質を解放（即ち、脱ケージ化）する。次に、生物学的標本を短い時間にわたり顕微鏡観察し、生物学的プロセスにおける脱ケージ化されない物質の効果を決定する。おき重要な物質のケージとしては、以下のものがある即ち、ダイオキシジン(Dioxygen)、環式ＡＤＰ‐リボース（ｃＡＤＰＲ）、ニコチン酸アデニン・ジニュークレオチド・フォスフェート（ＮＡＡＤＰ）、一酸化窒素（ＮＯ）、カルシウム、Ｌアスパラギン酸塩、及びアデノシン・トリフォスフェート（ＡＴＰ）がある。走化性は、脱ケージ化化合物によって研究することができる生理学的特徴の一つの例である。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０５】
脱ケージ化研究には、生物学的標本の生物学的標本にレーザ光を照射し、次いで時系列的に顕微鏡により標本を観察することが含まれる。本発明装置はこの研究における有用性ははっきりとしている。特別な例としては、Ｌ‐アスパラギン酸塩に指向するE.coli走化性の研究がある（１９９９年Jasuja氏らの論文参照）。アスパラギン酸のベータ‐２，６‐ジニトロベンジル・エステル、及び８‐ヒドロキシピレン‐１，３，６‐トリス‐スルフォン酸の１‐（２‐ニトロフェニル）エチル・エステルを、E.coliを含むウェル（窪み）付きプレートの窪みに添加する。処置レーザで照射する際に、Ｌアスパラギン酸塩及び発蛍光団の８‐ヒドロキシピレン‐１，３，６‐トリス‐スルフォン酸（ピラニン：pyranine）の局部的脱ケージ化が誘発される。Ｌ‐アスパラギン酸塩は、E.coliのための化学的誘引物質として作用し、その後の蛍光画像（照明レーザを使用する）において、ピラニン発蛍光団は、照射した局部領域で生じた脱ケージ化の度合を示すインジケータとして作用する。脱ケージ化現象における可視波長光、例えば、バックライトによって照明された近傍のE.coliの経時的画像を使用して、局部的に脱ケージ化されたＬ‐アスパラギン酸塩に対する微生物の化学走化性反応を測定する。本発明の特徴によって、それぞれ潜在的な抗微生物試薬を添加した多数のウェル（窪み）を迅速にスクリーニングして微生物の走化性反応を決定する。この実施例によれば、当業者であれば、処置レーザによって脱ケージ化を誘発し、次いで時系列的に顕微鏡観察し、多数のサンプルを自動的に有用な情報を得る他の実施例を考えつくことができるであろう。