(57)【要約】  本発明は、酸化防止剤と共有結合でグラフト結合した半導体コロイドであって、該コロイドが、Ｃ、Ｓｉ、Ｇｅ、Ｓｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｔｅ、Ｂ、Ｎ、Ｐ、Ａｓ、Ａｌ、Ｓｂ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｃｄ、Ｚｎ、Ｏ、Ｃｕ、Ｃｌ、Ｐｂ、Ｔｌ、Ｂｉ、Ｔｉ、Ｕ、Ｂａ、Ｓｒ、Ｌｉ、Ｎｂ、Ｌａ、Ｉ、Ｍｏ、Ｍｎ、Ｃａ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｅｕ、Ｃｒ、Ｂｒ、Ａｇ、Ｐｔ、Ｈｇおよびこれらの組み合わせを含む群から選択される少なくとも１つの元素からなる半導体コロイドである、半導体コロイドに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
酸化防止剤と共有結合でグラフト結合した半導体コロイドであって、コロイドが、Ｃ、Ｓｉ、Ｇｅ、Ｓｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｔｅ、Ｂ、Ｎ、Ｐ、Ａｓ、Ａｌ、Ｓｂ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｃｄ、Ｚｎ、Ｏ、Ｃｕ、Ｃｌ、Ｐｂ、Ｔｌ、Ｂｉ、Ｔｉ、Ｕ、Ｂａ、Ｓｒ、Ｌｉ、Ｎｂ、Ｌａ、Ｉ、Ｍｏ、Ｍｎ、Ｃａ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｅｕ、Ｃｒ、Ｂｒ、Ａｇ、Ｐｔ、Ｈｇおよびこれらの組み合わせを含む群から選択される少なくとも１つの元素によって構成された半導体コロイドである、半導体コロイド。
【請求項２】
半導体コロイドが、酸化亜鉛（ＺｎＯ）のコロイド、またはルチル型二酸化チタン（ＴｉＯ２）のコロイドであることを特徴とする、請求項１に記載のコロイド。
【請求項３】
酸化防止剤が、フェノールアルデヒドまたはフェノール酸であることを特徴とする、請求項１または請求項２に記載のコロイド。
【請求項４】
酸化防止剤が、２−ヒドロキシベンズアルデヒド、３−ヒドロキシベンズアルデヒド、４−ヒドロキシベンズアルデヒド、および３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドを含む群から選択されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載のコロイド。
【請求項５】
酸化防止剤が、３−ヒドロキシベンズアルデヒドであることを特徴とする、請求項４に記載のコロイド。
【請求項６】
酸化防止剤が、３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドであることを特徴とする請求項４に記載のコロイド。
【請求項７】
共有結合性グラフト結合が、半導体コロイドと酸化防止剤との間に配置されたスペーサーアームの形態にあり、スペーサーアームが、１〜８個の範囲の炭素を、好ましくは２〜４個の範囲の炭素を含み、それ自体をコロイドに対して共有結合させることができるアルコキシシラン官能性と、それ自体を酸化防止剤に対して結合させることができるヒドロキシル型、ホスファート型、またはアミン型の官能性とを有することを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載のコロイド。
【請求項８】
スペーサーアームが、３−（アミノプロピル）トリエトキシシランであることを特徴とする、請求項１〜７に記載のコロイド。
【請求項９】
酸化防止剤が、以下のＩＮＣＩ名によって指定された化合物、すなわち、オクタデシルジ−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシヒドロシンナマート、ペンタエリトリチルテトラ−ジ−ｔ−ブチルヒドロキシヒドロシンナマート、２，６−ビス（１，１−ジメチルエチル）−４−メチルフェノール、ビス−エチルヘキシルヒドロキシジメトキシベンジルマロナート、二酸化マンガン、コロイド状白金、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキノン、テトラブチルエチリデンビスフェノール、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオグリコール酸、チオタウリン、チオクト酸、チオジプロピオン酸ジラウリル、アミノエタンスルフィン酸、クエン酸トリエチル、エリソルビン酸ナトリウム、ソルビチルフルフラール、エリソルビン酸、ペリリルアルコール、ピリジルオキシドｔ−ブチルニトロン、エルゴチオネイン、メラトニン、アセチルシステイン、システイン、リジン塩酸塩、カルノシン酸、チロシルヒスチジンＨＣｌ、ヒスチジン塩酸塩、ピリドキシンセリナート、スーパーオキシドジスムターゼ、アミノプロピルアスコルビルホスファート、アスコルビン酸、アスコルビン酸ポリペプチド、アスコルビン酸ジパルミタート、アスコルビン酸グリコシド、アスコルビルリノレアート、アスコルビルメチルシラノールペクチナート、アスコルビルパルミタート、アスコルビルテトライソパルミタート、アスコルビルトコフェリルマレアート、アスコルビルパルミタートホスファート三ナトリウム、アスコルビルスルファート二ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム、メチルシラノールアスコルバート、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビルナトリウム、リン酸アスコルビル／コレステリルナトリウム、テトラヘキシルデシルアスコルバート、リン酸アスコルビルマグネシウム、トコフェロール、トコフェリルアセタート、トコフェリルリノレアート、トコフェリルリノレアート／オレアート、トコフェリルニコチナート、レチノイン酸トコフェリル、ナトリウムトコフェリルホスファート、ジオレイルトコフェリルメチルシラノール、カリウムアスコルビルトコフェリルホスファート、没食子酸ドデシル、エピガロカテキンガラートＥＧＣＧ、没食子酸プロピル、フェルラ酸エチル、フェルラ酸エチルヘキシル、キトサンアスコルバート、キトサングリコラート、アピゲニン、チリロシド、α−アルブチン、アルブチン、バイカリン、クエルセチン、クエルセチンカプリラート、イソクエルセチン＝イソクエルシトリン、イソクエルシトリン、ジエチルヘキシルシリンジリデンマロナート、ジヒドロキシメチルクロモン、ジメトキシジ−ｐ−クレゾール、ジメチルメトキシクロマノール、エチルビスイミノメチルグアイアコールマンガンクロリド、ヘスペリジンメチルカルコン、コウジ酸、コウジ酸ジパルミタート、マデカッソシド、アシアチコシド、マグノロール（５，５’−ジアリル−２，２’−ジヒドロキシビフェニル）、ノルジヒドログアイアレチン酸、フェニルエチルレゾルシノール、レスベラトロール、トロキセルチン（３’，４’，７−トリス（ヒドロキシエチル）ルチン）、グルコシルルチン、ルチン（４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）、二ナトリウムルチニルジスルファート、テトラヒドロビスデメトキ���ジフェルロイルメタン、テトラヒドロデメトキシジフェルロイルメタン、テトラヒドロジフェルロイルメタン、トコシステアミド、トタロール、ヒドロキシデシルユビキノン、ユビキノン、カロテノイド、リコペン、没食子酸、およびコーヒー酸、またはこれらの誘導体を含む群から選択されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれかに記載のコロイド。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のコロイドを含む局所用組成物。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のコロイドを含む、非治療上の使用のための局所用組成物。
【請求項１２】
親水性および／または親油性、無機および／または有機であるいかなる日焼け止めも含んでいないことを特徴とする、請求項１０または請求項１１に記載の局所用組成物。
【請求項１３】
水性形態、ミセル形態、またはピッカリングエマルション形態であることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の局所用組成物。
【請求項１４】
請求項１〜９のいずれか一項に記載のコロイドを含む栄養補助食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光子の存在下で自己再生する電子のリザーバへとグラフト結合した酸化防止剤の形態の複合体に関する。本発明は、特に、酸化防止剤とグラフト結合した酸化亜鉛コロイドに関し得る。
【０００２】
このようなコロイドの使用分野は、特に化粧品、例えば、日光用組成物、抗加齢組成物、および栄養補助食品に関する。該分野は、喫煙のもしくは糖分の多い食事の有害な影響に対する、または紫外（ＵＶ）線へのおよび／もしくは大気中に存在する汚染物質分子への曝露によって誘発される有害な影響に対する局所的保護に関し得る。
【背景技術】
【０００３】
皮膚は、持続的に再生され、時間の影響を受ける器官である。皮膚が加齢すると、皮膚の細胞の再生は鈍化する。最も古い細胞が蓄積し、くすんだまたは透明感のない様相および元気のない皮膚の印象を与え、皮膚は乾燥して薄くなる。並行して、真皮の変化が現れ、脂肪組織および筋肉組織が喪失するので、支持が失われる。これが皮膚の加齢の過程である。
【０００４】
分子の観点から、皮膚の加齢は細胞修復機序の劣化に関連している。皮膚の加齢は、最初に、遺伝的にプログラムされた個々の「生物時計」によって、次に、「遊離基」として公知の有毒物質によって引き起こされる酸化的損傷に耐える細胞の能力によって決定される。これが、本質的な起源である加齢である。
【０００５】
並行して、外因性の加齢は、各個人に固有の環境要因および行動によって誘導される。例として、このような外的要因には、喫煙、天然もしくは人工の大気汚染物質、ストレス、日光への曝露、アルコール消費、または糖分の多い食事が含まれる。
【０００６】
「天然の大気汚染物質」とは、二酸化硫黄またはオゾンなどの自然活動（火山、鉱石、海洋など）によって生成される汚染物質の粒子および分子を意味する。
【０００７】
「人工の大気汚染物質」とは、多環芳香族炭化水素（ＰＡＨ）、重金属、または農薬など、人為的活動（工場、自動車エンジンなど）によって生成される汚染物質の粒子および分子を意味する。
【０００８】
いくつかのこのような汚染物質分子は、炎症、細胞加齢の加速、またはある特定の皮膚癌さえ引き起こすことができる。このような化合物のうち、残留性有機汚染物質（ＰＯＰ）は、健康に最も危険な大気汚染物質の一部である。該ＰＯＰは概して、皮膚の表面に結合する。該ＰＯＰが吸収された後、酸化ストレス現象が起こり、皮膚加齢プロセスが加速する。
【０００９】
同様に、紫外線は、特に、直接的または間接的に、酸化促進剤と酸化防止剤との間の不均衡の出現につながり、結果として細胞内の、例えば、皮膚の細胞内の酸化ストレスの現象の出現をもたらす。
【００１０】
糖分の多い食事は、細胞から破壊も放出もされることができない糖化タンパク質の出現につながる可能性がある。その結果、遊離基の生成が上昇し、この遊離基の生成の上昇が、酸化促進活性に有利な、したがって人体の生理学的加齢に有利な不均衡を生じる。
【００１１】
アルコール消費および／またはタバコ喫煙は、細胞の代謝を変更し、遊離基の生成を上昇させ、それにより、生成されるこのような遊離基の量と抗酸化防御系との間に不均衡を生じる。
【００１２】
遊離基は、外層に１つ以上の不対電子を有する化学種（分子または原子）として定義してもよい。最も頻度の高い遊離基は、ヒドロキシルラジカル（ＯＨ●）、超酸化物（Ｏ２●−）、一酸化窒素（ＮＯ●）、チオール（ＲＳ●）、またはペルオキシル（ＲＯ２●−）である。遊離基が酸素に相当する場合、ラジカルは、一重項酸素（１Ｏ２）または超酸化物アニオン（Ｏ２●−）など、「活性酸素種」または「ＲＯＳ」と呼ばれる。
【００１３】
遊離基は、周囲の分子に対して非常に反応性の高い不対電子により不安定にされている化学分子である。遊離基は、隣接する分子を損なうように中和された酸化促進剤であり、隣接する分子は次に、遊離基になり、これに隣接する分子もまた同じである。この現象は連鎖反応によって伝搬し、このことが酸化ストレスを構成する。
【００１４】
実際には、各酸化促進分子は、安定化するために、すなわち中和するために、少なくとも１つの電子、または２つもしくは３つの電子が付加されることを必要とする。
【００１５】
皮膚は、日常的に周囲の環境からの攻撃に直面している。このような攻撃から身を守るために、人体は酵素および／または非酵素の酸化防止剤を使用する防御系を発達させた。しかしながら、過剰量の遊離基が生成されると、不均衡が確立し、酸化防止剤防御系が圧倒され、皮膚組織に損傷をもたらす。
【００１６】
酸化防止剤は、酸化可能な基質に対して低濃度で存在するとき、基質の酸化を少なくとも遅延させることができる何らかの物質であるものと定義することができる。
【００１７】
その機能的定義は、特定の触媒特性を有する酵素だけでなく、小さな親水性または脂溶性の分子も含む多数の物質に当てはまる。この優れた物理的および化学的多様性により、酸化防止剤は、細胞内、膜、または細胞外といった、ヒトという生物のすべての区画に存在することができる。
【００１８】
例として、酵素である酸化防止剤にはスーパーオキシドジスムターゼまたはグルタチオンペルオキシダーゼが含まれ、非酵素である酸化防止剤にはビタミン（Ａ、Ｃ、Ｅ）、微量元素（セレン）またはタンパク質（フェリチン）が含まれる。
【００１９】
酸化防止剤の活性により、遊離基によって開始される酸化促進連鎖反応を鈍化させる、遅滞させる、または防止することができる。したがって、酸化防止剤は、遊離基を回避または捕捉することができる予防薬または終結薬である。言い換えれば、酸化防止剤は、ラジカルを、より安定している、酸化促進元素への多電子移動を介した伝搬の位相を阻害する化合物へと変換して、該ラジカルを部分的にまたは完全に安定化する。
【発明の概要】
【００２０】
本発明の複合体は、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）の抗酸化活性を模倣する抗酸化活性を有する。
【００２１】
ＳＯＤの活性は、超酸化物アニオン（Ｏ２●−）を二酸素（Ｏ２）および過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）へと不均化する触媒活性に対応する。この反応の生成物は、不対電子を有さない場合でさえ、酸素遊離基と見なされ、該生成物は、反応性が高く有害である。例として、鉄の存在下で、過酸化水素は分解し、ほとんどの有機構造に対して非常に毒性のあるヒドロキシルラジカル（ＯＨ●）を生成する。このような生成物は、超酸化物アニオンの不均化の反応によって生成される二次ＲＯＳであると見なされる。
【００２２】
生理学的条件下では、このような不均化は緩徐であり、超酸化物アニオンの半減期が延長され、該二次ＲＯＳの生成によって生体高分子の有害な酸化が生じる。残念ながら、このようなＲＯＳの毒性は、超酸化物アニオンの毒性よりもかなり大きい。
【００２３】
ＳＯＤは、超酸化物アニオンの不均化を触媒し、それゆえ加速させることにより、超酸化物の半減期を短縮させ、したがって、超酸化物アニオンの不均化の反応に二次的に生成されるＲＯＳの酸化促進効果を制限する。
【００２４】
さらに、ＳＯＤはまた、他のＲＯＳ、例えば、１Ｏ２またはＲＯＯを除去することもできる。
【００２５】
実際には、ＳＯＤは、多電子移動によって酸化促進剤を還元することができる酵素である。言い換えれば、ＳＯＤはすべてのＲＯＳと反応して、ＲＯＳを安定化することができ、ＲＯＳの酸化促進活性を防止または中和させることができる。
【００２６】
それゆえ、該タンパク質は、ＲＯＳを除去するための、それゆえ酸化ストレスを除去するための機序に不可欠な触媒活性を提供する。
【００２７】
化粧品では、数多くの製品が、内在性起源および／または外因性起源の加齢に対抗するための「抗遊離基」作用としても公知の抗酸化作用を生じるように設計されている。
【００２８】
特に外因性要因によって誘発される酸化ストレスに対する保護は、現在、例えば、植物抽出物の抗酸化的な利点を使用することに基づいている。しかしながら、このような製剤は複雑であり、該製剤は、とりわけ、溶剤および防腐剤を含む非常に多数の成分を使用し、該成分が無害であることは、必ずしも短期的または長期的に確立されているとは限らない。
【００２９】
それゆえ、該製剤にもかかわらず、提案された解決策の大部分の有効性は十分ではないようである。
【００３０】
抗酸化分子の誘導体は、医薬製剤でより一般的に使用されている。しかしながら、該誘導体は、天然状態および等価の用量の酸化防止剤と比較して、有効性が低く、入手可能性が低いという欠点に悩まされている。
【００３１】
遊離基およびその結果に対抗するための従来の解決策は、経時的に均一で持続的な保護効果および／または修復効果を提供するために、頻繁に繰り返して適用する必要がある。
【００３２】
現在、すべての種類のＲＯＳを酸化し、酸化ストレスを低減または除去するために、経時的に安定した活性を有する酵素分子を含む製剤を提案する化粧組成物はない。
【００３３】
この問題を解決するために、本出願者はＳＯＤの効果を模倣する複合体を開発した。
【００３４】
この複合体は、酸化防止剤とコロイドとを組み合わせることから結果として生じ、電子リザーバとして機能し、それにより、すべての遊離基の有害作用と戦うことができる。
【００３５】
より具体的には、本発明は、酸化防止剤と共有結合で、すなわち少なくとも１つの共有結合またはスペーサーアームを介してグラフト結合した半導体コロイドに関する。
【００３６】
これらの半導体コロイドは、Ｃ、Ｓｉ、Ｇｅ、Ｓｎ、Ｓ、Ｓｅ、Ｔｅ、Ｂ、Ｎ、Ｐ、Ａｓ、Ａｌ、Ｓｂ、Ｇａ、Ｉｎ、Ｃｄ、Ｚｎ、Ｏ、Ｃｕ、Ｃｌ、Ｐｂ、Ｔｌ、Ｂｉ、Ｔｉ、Ｕ、Ｂａ、Ｓｒ、Ｌｉ、Ｎｂ、Ｌａ、Ｉ、Ｍｏ、Ｍｎ、Ｃａ、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｅｕ、Ｃｒ、Ｂｒ、Ａｇ、Ｐｔ、Ｈｇおよびこれらの組み合わせを含む群からから選択される少なくとも１つの元素によって有利には構成される。
【００３７】
有利な様式で、本発明の半導体コロイドは、これらの元素のうちの２つまたは３つを含む。
【００３８】
特定の実施では、本発明の半導体コロイドは、酸化亜鉛（ＺｎＯ）のコロイドである。
【００３９】
特定の実施では、本発明の半導体コロイドは、ルチル型二酸化チタン（ＴｉＯ２）のコロイドである。
【００４０】
特定の実施では、本発明の半導体コロイドは、酸化ビスマス（Ｂｉ２Ｏ３）のコロイドである。
【００４１】
概して、「半導体コロイド」という用語は、１個の電子があるものからその他のものへと移動するのに十分小さなエネルギー差を価電子帯と伝導帯との間に有する化合物を意味する。
【００４２】
本発明の意味において、「酸化防止剤」という用語は、化学種に少なくとも１つの電子またはＨ●を付与することができる有機分子を指す。本発明にしたがって、この酸化防止剤は、半導体コロイドの表面に存在する利用可能な官能性と反応して本発明の複合体を生成することができる少なくとも１つの官能性を保有する。
【００４３】
酸化防止剤は、コロイドと酸化防止剤との間に、後述で「スペーサーアーム（複数可）」または「前駆体（複数可）」と呼ばれる１つ以上の共有化学結合の形成によってグラフト結合する。
【００４４】
本発明の複合体は、２つの要素、すなわち、共有結合によって互いに結合したコロイドおよび酸化防止剤を含む。コロイドは、電子リザーバとして作用し、すなわち、その近接性により、電子を酸化防止剤に移動させることができ、リザーバに電子が含まれている限り、および酸化防止剤が電子を探している限り、そのようにすることができる。このように移動した電子によって、酸化防止剤の抗ラジカル機能を再生することができる。したがって、本発明の複合体は、ＳＯＤの活性を模倣する活性を有する、すなわち、該複合体は、複数の電子によって酸化促進剤を還元することができる。
【００４５】
別の特徴に従って、局所適用のために、そして電磁放射への、例えば、紫外（ＵＶ）線への、特にＵＶ−ＡおよびＵＶ−Ｂの範囲における２８０ｎｍ〜４００ｎｍの範囲における曝露に供して、コロイドは光子エネルギーを電子に変換することによって電子が再生する。このことは、リザーバが電子を酸化防止剤に無期限に与える能力を有していることを意味する。
【００４６】
要約すると、コロイドは、電子のリザーバを構成することによって、該コロイドにおいて利用可能な電子の数と同じ数の遊離基と反応することができる、および／またはラジカル化合物すべてを酸化させることができ、したがって中和させることができる酸化防止剤の抗ラジカル活性を再生することができる。この効果は、コロイドと酸化防止剤との間の近接性に関連している。実際、グラフト結合の非存在下で、酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘは、コロイドが反応媒体中に存在するときでさえ、再生しない。
【００４７】
概して、「Ｃｏｌ」とも呼ばれるコロイドは、分子、例えば、ＺｎＯの分子の規則正しい積み重ねから生じる半導体特性を有する結晶質（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ）粒子（結晶質（ｎｏｎ−ａｍｏｒｐｈｏｕｓ）形態）である。このようなコロイドは、「量子ドット」または「ナノ結晶」と呼ばれることもできる。該コロイドはまた、水性媒体中のコロイドの分散液または懸濁液、および有利には分散液の形態でもあることができる。
【００４８】
コロイドは、先行技術を使用して、例えば、成長する前駆体の「ボトムアップ」アプローチによって合成してもよい。ナノ材料の分野において一般的に使用されているこの種類の合成は、核生成のステップと孤立した原子からの成長のステップとを実施する。これにより、コロイドの大きさをナノメートル規模で制御することができる。
【００４９】
より明確にするために、「Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘ」という用語は、本発明のコロイド、すなわち、例えば、酸化防止剤とグラフト結合した酸化亜鉛のコロイドを指すために使用される。さらに、「ＡｎｔｉＯｘ」は、コロイドにグラフト結合した酸化防止剤を指す。
【００５０】
コロイドのグラフト化または官能化の概念は、当業者の一般的な知識の一部である。グラフト化または官能化は、酸化防止剤とコロイドの表面との間の共有結合の形成に相当する。酸化防止剤をコロイドへ、半導体コロイドと酸化防止剤との間に配置したスペーサーアームを介してグラフト結合させると、コロイドから酸化防止剤への多電子移動に必要な近接性が付与される。
【００５１】
Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘコロイドは、有機分子の存在下で、例えば、有機ラジカルまたは遊離基の存在下で自己再生しているという抗酸化作用を付与する利点を提供する。
【００５２】
有利には、グラフト化した酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘはより安定している。言い換えれば、酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘの半減期が延長する。
【００５３】
Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘコロイドの存在により、反応に二次的なラジカル種、特に一重項酸素および／または過酸化水素の形成を回避することができる。逆に、先行技術の組成物は、二次ラジカル化合物の形成を遮断せず、このことは、酸化促進剤と酸化防止剤との間の不均衡の形成によって並進し、「二次的な」酸化ストレスおよび細胞損傷を生じる。
【００５４】
言い換えれば、本発明のＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘコロイドは、いかなる一次的なおよび／または二次的な酸化促進活性も中和させる。
【００５５】
概して、コロイドの平均の大きさは、数ナノメートルから数十ナノメートルの範囲である。
【００５６】
したがって、コロイドは、有利には０．５ｎｍ〜１０００ｎｍの範囲にあり、より有利には１０ｎｍ〜１００ｎｍの範囲にあり、さらにより有利には約３０ｎｍであり、該大きさは、ＸＲＤによって測定される。
【００５７】
ＸＲＤ（Ｘ線回折）技術は、固体状態の結晶の大きさを測定するために従来から使用されている技術である。
【００５８】
「大きさ」という用語は、コロイド（ＣｏｌまたはＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘ）の最大寸法、例えば、コロイドが球状のときの直径を意味する。これは、グラフト化したコロイド（Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘ）またはグラフト化していないコロイド（Ｃｏｌ）の平均の大きさである。実際には、グラフト化したコロイドＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘの大きさは、概して、先に付与した値の範囲内に収まる。必要に応じて、当業者は、グラフト化していないコロイドＣｏｌの大きさを適合させることができる。
【００５９】
コロイドＣｏｌおよび／またはＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘは、有利には球状である。
【００６０】
当然のことながら、グラフト化は、単一の酸化防止剤の単一の分子をコロイドにグラフト結合させることに限定されない。このことは、少なくとも１種類の酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘの多数の分子を、例えば酸化亜鉛の各ナノ結晶にグラフト結合させることである。
【００６１】
酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘは、少なくとも１個の電子を供与することができる分子である。該ＡｎｔｉＯｘは特に、少なくとも１つの芳香族環をよりも少なくとも１個のヒドロキシル基（−ＯＨ）を含む化合物の群から選択されてもよい。
【００６２】
有利には、酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘは、フェノール、すなわち、少なくとも１個のヒドロキシル基（−ＯＨ）、またはその誘導体もしくは複合体の少なくとも１個を有するフェニルである。
【００６３】
酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘは、特に、以下の化粧品成分国際命名法（ＩＮＣＩ）名によって指定された化合物、すなわち、オクタデシルジ−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシヒドロシンナマート、ペンタエリトリチルテトラ−ジ−ｔ−ブチルヒドロキシヒドロシンナマート、２，６−ビス（１，１−ジメチルエチル）−４−メチルフェノール、ビス−エチルヘキシルヒドロキシジメトキシベンジルマロナート、二酸化マンガン、コロイド状白金、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロキノン、テトラブチルエチリデンビスフェノール、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオグリコール酸、チオタウリン、チオクト酸、チオジプロピオン酸ジラウリル、アミノエタンスルフィン酸、クエン酸トリエチル、エリソルビン酸ナトリウム、ソルビチルフルフラール、エリソルビン酸、ペリリルアルコール、ピリジルオキシドｔ−ブチルニトロン、エルゴチオネイン、メラトニン、アセチルシステイン、システイン、リジン塩酸塩、カルノシン酸、チロシルヒスチジンＨＣｌ、ヒスチジン塩酸塩、ピリドキシンセリナート、スーパーオキシドジスムターゼ、アミノプロピルアスコルビルホスファート、アスコルビン酸、アスコルビン酸ポリペプチド、アスコルビン酸ジパルミタート、アスコルビン酸グリコシド、アスコルビルリノレアート、アスコルビルメチルシラノールペクチナート、アスコルビルパルミタート、アスコルビルテトライソパルミタート、アスコルビルトコフェリルマレアート、アスコルビルパルミタートホスファート三ナトリウム、アスコルビルスルファート二ナトリウム、アスコルビン酸カルシウム、メチルシラノールアスコルバート、アスコルビン酸ナトリウム、リン酸アスコルビルナトリウム、リン酸アスコルビル／コレステリルナトリウム、テトラヘキシルデシルアスコルバート、リン酸アスコルビルマグネシウム、トコフェロール、トコフェリルアセタート、トコフェリルリノレアート、トコフェリルリノレアート／オレアート、トコフェリルニコチナート、レチノイン酸トコフェリル、ナトリウムトコフェリルホスファート、ジオレイルトコフェリルメチルシラノール、カリウムアスコルビルトコフェリルホスファート、没食子酸ドデシル、エピガロカテキンガラートＥＧＣＧ、没食子酸プロピル、フェルラ酸エチル、フェルラ酸エチルヘキシル、キトサンアスコルバート、キトサングリコラート、アピゲニン、チリロシド、α−アルブチン、アルブチン、バイカリン、クエルセチン、クエルセチンカプリラート、イソクエルセチン＝イソクエルシトリン、イソクエルシトリン、ジエチルヘキシルシリンジリデンマロナート、ジヒドロキシメチルクロモン、ジメトキシジ−ｐ−クレゾール、ジメチルメトキシクロマノール、エチルビスイミノメチルグアイアコールマンガンクロリド、ヘスペリジンメチルカルコン、コウジ酸、コウジ酸ジパルミタート、マデカッソシド、アシアチコシド、マグノロール（５，５’−ジアリル−２，２’−ジヒドロキシビフェニル）、ノルジヒドログアイアレチン酸、フェニルエチルレゾルシノール、レスベラトロール、トロキセルチン（３’，４’，７−トリス（ヒドロキシエチル）ルチン）、グルコシルルチン、ルチン（４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）、二ナトリウムルチニ���ジスルファート、テトラヒドロビスデメトキシジフェルロイルメタン、テトラヒドロデメトキシジフェルロイルメタン、テトラヒドロジフェルロイルメタン、トコシステアミド、トタロール、ヒドロキシデシルユビキノン、ユビキノン＝補酵素Ｑ１０、カロテノイド、リコペン、没食子酸、およびコーヒー酸、またはこれらの誘導体を含む群から選択することができる。
【００６４】
特定の実施において、コロイドは、ＺｎＯコロイドまたはＴｉＯ２コロイドであり、ＡｎｔｉＯｘは、該コロイドＣｏｌの表面との共有結合を提供するスペーサーアームの利用可能な官能性と反応することができるアルデヒド基（−ＣＨＯ）または酸基を有する。特定の実施において、酸化防止剤は、フェノールアルデヒドまたはフェノール酸である。
【００６５】
例として、酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘは、この状況では、２−ヒドロキシベンズアルデヒド、３−ヒドロキシベンズアルデヒド、４−ヒドロキシベンズアルデヒド、３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド、２，３−ジヒドロキシベンズアルデヒド、４，５−ジヒドロキシベンズアルデヒド、および有利には３−ヒドロキシベンズアルデヒドまたは３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド（プロトカテクアルデヒド）である。
【００６６】
有利には、またこの実施において、スペーサーアームは、１〜８個の範囲の炭素、好ましくは２〜４個の範囲の炭素を含み、コロイドに対してそれ自体を共有結合させることができるアルコキシシラン官能性および酸化防止剤に対してそれ自体を結合させることができるヒドロキシル型、ホスファート型、またはアミン型の官能性を有する。
【００６７】
有利には、スペーサーアームは、シリカの誘導体であり、有利にはアルコキシシランであり、さらにより有利には、該スペーサーアームは３−（アミノプロピル）トリエトキシシランである。
【００６８】
有利には、スペーサーアームを形成するために使用されるコロイドとシリカ誘導体との比は、１：１〜１０：１の範囲にあり、好ましくは２：１〜３：１の範囲にある。
【００６９】
当然のことながら、スペーサーアームは、ＣｏｌとＡｎｔｉＯｘとの間の近接性が、コロイドから酸化防止剤への多電子移動を可能にするのに十分であるように、共有結合を提供するように酸化防止剤の性質の関数として選択される。
【００７０】
有利には、本発明の酸化防止剤とグラフト結合したコロイドは、３−ヒドロキシベンズアルデヒドとグラフト結合したＺｎＯコロイドまたはＴｉＯ２コロイドである。
【００７１】
酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘの共有結合性グラフト結合は、従来から、酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘまたは酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘの前駆体の官能性とコロイドＣｏｌの表面にある利用可能な官能性との間の反応によって行われる。
【００７２】
コロイドはドープ処理されていない。場合により、該コロイドは、コロイドの合成中に導入される遷移金属を含んでもよい。
【００７３】
「ドープ処理」という用語は、すでに形成されている材料に元素を組み込むことを意味する。材料が合成されている間に、すなわち材料の形成の上流に元素を組み込むことは、ドープ処理されているとは見なされない。
【００７４】
本発明はまた、少なくとも１つの酸化防止剤とグラフト結合したコロイドの使用も提供する。
【００７５】
コロイドＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘは、局所用組成物、例えば化粧組成物において使用することができ、また、非治療上の使用のための化粧組成物においても使用することができる。この組成物は、有利には、親水性エマルション、ミセルエマルションまたはピッカリングエマルション（ミセル組成物の逆形態）である。
【００７６】
組成物が局所使用のためであるとき、製剤は、親油性もしくは親水性、または無機もしくは有機である日焼け止めを有利には含んでいない。日焼け止めの存在は、説明されているように抗酸化作用および自己再生作用を得るために必要かつ不可欠な、ＵＶの透過を防止することにつながるであろう。
【００７７】
本発明の化粧組成物は、論議中の分野で通常である添加物をさらに含んでもよい。
【００７８】
当然のことながら、当業者は、本発明の組成物の有利な特性が、検討中の添加によって分解されない、またはわずかにしか分解されないような様式で、このようないずれかの添加物もしくは補助賦形剤を、および／またはそれらの量を選択することに注意を払うであろう。
【００７９】
コロイドＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘは、栄養補助食品、例えば、プロバイオティクスにおいて使用することもできる。
【００８０】
複合体が栄養補助食品として使用されるとき、酸化防止剤は、リザーバ、すなわちコロイドの電子含有量までしか再生されない。実際には、このような状況下で、コロイドは紫外線に曝露されておらず、このことは、コロイドが再生するのを防止する。逆に、酸化防止剤ＡｎｔｉＯｘは、コロイドによって構成される電子のリザーバを利用でき、それにより、半減期が延び、有効性が高まる。
【００８１】
Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘを含む栄養補助食品には、従来の賦形剤も含んでもよい。特に、該栄養補助食品は、カプセル剤または錠剤の形態にあってもよい。
【００８２】
本発明および本発明から得られる利点は、本発明を非限定的な様式で説明するよう付与された後続の図面および例からより明確となる。
【図面の簡単な説明】
【００８３】
【図１】酸化防止剤で官能化した後のＺｎＯコロイドのＸ線回折パターンを示す図である。スペクトル線は、六角形のＺｎＯ構造に対応する平面で指標付けされている。
【図２】酸化防止剤（Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘ）で官能化したコロイドについての、および酸化防止剤のみについてのＤＰＰＨ反応速度を示す図である。
【図３】紫外線に曝露されたとき、または暗所に保管されたときの、本発明のコロイドによって分解されたＡＢＴＳ基質の百分率を示す図である。
【図４】暗所に置かれたとき、またはＵＶに曝露されたときの、トコフェロールと比較した、本発明の酸化防止剤（Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘ）で官能化したコロイドの抗酸化活性を示す図である。
【図５】他の酸化防止剤と比較した、本発明の酸化防止剤（Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘ）で官能化したコロイドの抗酸化活性を示す図である。
【図６】他の酸化防止剤と比較した、本発明の酸化防止剤（Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘ）で官能化したコロイドの一次的なおよび／または二次的な酸化促進活性の抑制を示す図である。
【実施例】
【００８４】
例１：ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド
１／コロイドの合成
百分率は、組成物の重量によって与えられる。
【００８５】
無水酢酸亜鉛（２％）および水酸化ナトリウム（１．５％）などの酸化亜鉛前駆体を、溶媒またはエタノール（８５％）とジエチレングリコール（８％）とを含む溶媒の混合物と混合し、オートクレーブ内で密封した。溶媒はまた、ベンジルアルコール、フェノール、オレイルアルコール、ブタノール、プロパノール、イソプロパノール、水、テトラヒドロフラン、エタノール、メタノール、アセトニトリル、トルエン、ＰＧＭＥＡ、ＰＧＰＥ、ＰＧＭＥ、２−メチル−１−プロパノール、またはトリエチレングリコールモノメチルエーテルであってもよい。
【００８６】
塩が溶解するまで、反応媒体を６０℃で約３０分間機械的撹拌下に置いた。次に水（２％）を添加した。粒子の形成の開始を示す曇りが観察された。この反応を６５℃で１時間半維持した。
【００８７】
球状で直径７ｎｍの酸化亜鉛ナノ結晶を収集した。
【００８８】
２／コロイドＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘの調製
本発明のコロイドを、先に得られた酸化亜鉛（ＺｎＯ）コロイドと酸化防止剤３−ヒドロキシベンズアルデヒドの前駆体またはスペーサーアームとを使用して調製した。このようにして、ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドの粒子を得た。実際には、形成されたナノ結晶を、（３−アミノプロピル）トリエトキシシランでその場で官能化した（０．５％）。加えて、溶液はわずかに透明になった。この官能化をさらに３時間実行した。最後に、酸化防止剤３−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．５％）を添加した。反応を９時間維持した。
【００８９】
次に、反応器を周囲温度に冷却した。粒子を収集し、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。次に、この粒子をエタノール中で洗浄し、次に再度遠心分離した。最後に、粒子を水中で所望の濃度（１０％〜１５％の範囲の質量濃度）に分散させた。
【００９０】
ＺｎＯ粒子の大きさが小さいことにより、網羅する領域をより大きくすることができ、したがって、各粒子の表面に、より多数の抗酸化分子をグラフト結合させることができた。
【００９１】
ＺｎＯコロイドの直径は、Ｘ線回折計（ＸＲＤ）によって測定した。回折計によって生じた波長は、１．５４Åに等しいＣｕ−Ｋα線に対応していた。使用した他のパラメータは、４０ｋＶの加速電圧、４０ｍＡの電流、およびＢｒａｇｇ−Ｂｒｅｎｔａｎｏ幾何学的配置に対応していた。
【００９２】
Ｘ線回折パターンは、透過下にあるＣｕ−Ｋα源のＸＲＤを用いて粉末で測定した。酸化防止剤による官能化（グラフト化）の前のコロイドのＸ線回折パターンを図１に示している。
【００９３】
例２：ＴｉＯ２／３−ヒドロキシベンズアルデヒド
前の例と同じ条件下で、ルチル型二酸化チタンに同じ酸化防止剤をグラフト結合させた。５ｇのルチル型二酸化チタンを９５０ｍＬのエタノールと５０ｍＬのジエチレングリコールとの混合物中に分散させた。混合物を６５℃に加熱し、撹拌した。５ｍＬの水を添加し、次に８ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランを添加した。混合物を２時間撹拌した後、５ｇの３−ヒドロキシベンズアルデヒドを添加し、混合物を撹拌したままにしておき、６５℃で９時間加熱した。次に、混合物を周囲温度に冷却した。粒子を収集し、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。次に、この粒子をエタノール中で洗浄し、次に再度遠心分離した。最後に、粒子を水中で所望の濃度に分散させた。
【００９４】
同様の合成は、２−ヒドロキシベンズアルデヒドまたは４−ヒドロキシベンズアルデヒドを酸化防止剤として実施することによって行ってもよい。
【００９５】
例３：ＴｉＯ２／３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド
前の例と同じ条件下で、ルチル型二酸化チタンに、３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドをグラフト結合させた。５ｇのルチル型二酸化チタンを９５０ｍＬのエタノールと５０ｍＬのジエチレングリコールとの混合物中に分散させた。混合物を６５℃に加熱し、撹拌した。５ｍＬの水を添加し、次に８ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランを添加した。混合物を２時間撹拌したままにしておいた後、５ｇの３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒドを添加し、混合物を撹拌したままにしておき、６５℃で９時間加熱した。次に、混合物を周囲温度に冷却した。粒子を収集し、３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。次に、この粒子をエタノール中で洗浄し、次に再度遠心分離した。最後に、粒子を水中で所望の濃度に分散させた。
実施例４：コロイドＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘ（ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド）の抗酸化活性の反応速度と遊離酸化防止剤（ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド）の反応速度との比較
【００９６】
コロイドＣｏｌ／ＡｎｔｉＯｘの作用速度は、２，２−ジフェニル−１−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）の分解速度を測定することによって推定した。
【００９７】
ＤＰＰＨは、その遊離基の容量を安定して保つ分子である。このラジカル種は、５２０ｎｍでの光（溶液の紫色）を吸収し、酸化防止剤による中和の後、無色または淡黄色になる。したがって、時間の関数としてラジカルＤＰＰＨの吸収の測定の強度を測定することによって中和反応を監視することが可能である。
【００９８】
その目的のために、２つのエタノール溶液を次のように調製した。
−［ＤＰＰＨ］０濃度が０．１ｍｏｌ／ＬであるＤＰＰＨを含有する対照溶液、および
−［ＤＰＰＨ］０濃度が０．１ｍｏｌ／ＬであるＤＰＰＨと、（Ｃｌ５０測定結果に基づいて決定されるように）２時間後にＤＰＰＨの９０％が消費されるような濃度の酸化防止剤とを含有する試験溶液。
【００９９】
吸光度は、ＵＶ／可視／ＮＩＲ分光計によって測定した。２．５ｍＬの溶液をポリスチレン容器内へと注入した（光路＝１ｃｍ）。３１０ｎｍ〜７００ｍｍのＵＶ／可視吸収スペクトルを３００秒間測定した。５２０ｎｍでの吸光度の値により、Ｂｅｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ式を使用して、所与の時間におけるラジカルＤＰＰＨの濃度を測定することができた：
Ａ５２０ｎｍ（τ）＝εＤＰＰＨ．ｌ．［ＤＰＰＨ］τ
【０１００】
該式によると、Ａは、測定された吸光度に相当し、εＤＰＰＨは、ＤＰＰＨの質量係数に相当し、ｌ（ｃｍ）は、試料を通る光路に相当し、［ＤＰＰＨ］τ（ｇ／Ｌ）は、試料の質量濃度に相当する。
【０１０１】
得られた曲線は、反応速度または「速度論的」定数κおよび反応の半減期定数τ１／２に戻らせることができる速度論モデルを使用して完成となった。
【０１０２】
酸化防止剤（ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド）で官能化したコロイドの作用速度と、遊離の、つまりグラフト化していない酸化防止剤（３−ヒドロキシベンズアルデヒド）の作用速度とを示すグラフを図２に示している。
【０１０３】
本結果は、ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド酸化防止剤が遊離の３−ヒドロキシベンズアルデヒドよりもＤＰＰＨと迅速に反応することを示している。
【０１０４】
例５：Ｃｏｌ／ＡｎｔｉＯｘコロイドの抗酸化活性の再生の評価
５．１／経時的評価
８ｍＭのＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）酸）のストック溶液を、メトミオグロビンと過酸化水素とを含む３ｍＭの溶液とともに等量でインキュベートして、ＡＢＴＳラジカルカチオンを生成した。得られた溶液を、１５０ｍＭのＮａＣｌを含有するリン酸緩衝液（０．２Ｍ、およびｐＨ７．４）で希釈して、７３４ｎｍで１．５の吸光度を得た。
【０１０５】
水中に２４０ｇ／Ｌで分散した３０μＬのＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド（例２）の試料を、水中の０．０７ｍＭ  ＡＢＴＳカチオン溶液２９７０μＬに添加した後、暗所で撹拌の下に置いた。
【０１０６】
３０分のインキュベーション後、ＡＢＴＳは完全に分解された。
【０１０７】
ＡＢＴＳ基剤全体の分解のこのステップの後に得られた溶液を分離した。溶液の一画分を暗所に置き、残りの画分をＵＶ照射下に置いた。３０分間の曝露（暗所またはＵＶ下）の後、３０μＬのＡＢＴＳの濃縮溶液（７ｍＭ）を添加した後、溶液をもう一度、５時間撹拌しながら暗所に置いた。次に、３０分ごとに吸光度を測定した。
【０１０８】
データを図３に示している。
【０１０９】
本結果は、ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドコロイドを含有し、紫外線に曝露された溶液が、暗所に残存しているＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドコロイドを含有する溶液よりもかなり大きなＡＢＴＳ分解能を有していることを示している。暗所に置かれた溶液について観察されたＡＢＴＳ分解活性は、ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド複合体に固有の残余の抗ラジカル活性に相当する。したがって、１２０分後、ＡＢＴＳの６５％が、紫外線に曝露された溶液によって分解されたのに対し、暗所に残存している溶液では１８％が分解された。
【０１１０】
結論として、本発明のＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドコロイドは、該コロイドが紫外線に曝露されると、該コロイドの抗酸化活性を再生する能力を有している。
【０１１１】
５．２／トコフェロールとの比較
ポイント４．１．にあるように溶液を調製するためのプロトコルを、０．５ｇ／ＬのＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドコロイドの濃度および１．５ｇ／Ｌのトコフェロールの濃度を用いて繰り返した。
【０１１２】
得られた溶液を分離した。溶液の一画分を暗所に置き、残余の画分をＵＶ照射下に置いた。３０分間の（暗所へのまたはＵＶへの）曝露の後、３０μＬのＡＢＴＳの濃縮溶液（７ｍＭ）を添加した後、吸光度を測定した。
【０１１３】
データを図４に示している。
【０１１４】
本結果は、トコフェロールを含有する溶液が、ＵＶへの曝露後または暗所への曝露後に同じＡＢＴＳ分解能（２２％）を有していたことを示している。
【０１１５】
ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドコロイドを含有し、暗所に曝露された溶液は、トコフェロールよりも非常にかなり大きなＡＢＴＳ分解能を有していた（７６％）。この活性は、ＵＶへの曝露後にさらに上昇した（８９％）。
【０１１６】
結論として、本発明のＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドコロイドは、従来の酸化防止剤よりも有効な抗ラジカル活性を有しており、該コロイドが紫外線に曝露されると、該コロイドの抗酸化活性を再生する能力を有している。
【０１１７】
例６：本発明の酸化防止剤（ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド）で官能化したコロイドの抗酸化活性の評価
ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドコロイドの抗酸化活性を、２，２−ジフェニル−１−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）の分解を測定することによって推定した。
【０１１８】
本結果を、選択した酸化防止剤試料のＣＩ５０および／またはｍｇ当量もしくはμｍｏｌ当量で表した。この方法は、酸化現象に起因する電子および／またはプロトンの移動によって遊離基を捕捉する分子の能力を示している。プロトコルは次のとおりであった。
−エタノールＤＰＰＨ溶液を０．１ｍＭで調製し、
−試験すべき試料（酸化防止剤）を、４ｍｇ〜４０ｍｇの範囲に収まるさまざまな質量で調製し、
−ＰＭＭＡ（ポリ（メチルメタクリラート））容器内で、３９００μＬのＤＰＰＨ溶液を、試験すべき試料１００μＬと混合した。反応は、周囲温度でのインキュベーションの下で２時間行われ、次に、５１５ｎｍでの吸光度を測定し、および
−抗酸化活性の百分率を、論議の試料の濃度（μＭ）の関数としてプロットした。
【０１１９】
抗酸化活性の百分率は、次式を使用して決定した。
％抗酸化活性＝（１−（Ａ試料／Ａブランク））×１００
式中、Ａ試料は、試料の吸光度に相当するのに対し、Ａブランクは、いかなる試料も含有しない溶液の吸光度に相当する（１００μＬのエタノール＋３９００μＬのＤＰＰＨ／エタノール溶液）。
【０１２０】
得られた曲線は、線形部分および漸近部分を有している。線形域は、％ＡＯ＝χ×［試料］の形にある。
【０１２１】
この式により、存在するラジカルの５０％を捕捉することができる試料濃度を決定することができる、つまり、論議の試料のｇ／ＬのＣＩ５０（５０％抑制する最低濃度）を決定することができる。
ＣＩ５０＝５０／χ
式中、χは線形回帰直線の傾きを表す。
【０１２２】
例２のコロイド（ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒド）の抗酸化活性を、以下に列挙する従来の酸化防止剤の抗酸化活性と比較した。
−０．５ｇ／Ｌに希釈した３０μＬの試料を、０．０７ｍＭのＡＢＴＳの２９７０Ｌ溶液中に入れた。
−４０％超のエピガロカテキンガラート（ＥＧＣＧ）を含有する緑茶抽出物、
−８７．３％のα−トコフェロール＋１２．７％のダイズ油、
−１００％のＬ−アスコルビン酸（ビタミンＣ）、および
−１００％の没食子酸プロピル。
【０１２３】
本結果を図５に示している。
【０１２４】
図５は、本発明のコロイドのＣＩ５０が約０．０３ｇ／Ｌであった、すなわち、従来の酸化防止剤のＩＣ５０よりも非常に低かったことを示している。言い換えれば、本発明のＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドの、遊離基の５０％を捕捉するために必要な濃度は、従来の酸化防止剤の該濃度よりも低い。
【０１２５】
さらに、０．１５ｇ／Ｌ以下の濃度で他の酸化防止剤よりも高い、０．１５ｇ／Ｌを超える濃度で同様の抗酸化活性を観察した。
【０１２６】
したがって、ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルダイドの抗酸化活性は、試験した他の酸化防止剤の抗酸化活性よりも大きかった。
【０１２７】
例７：一次的なおよび二次的な遊離基の生成に対する本発明の組成物の保護力の評価
本試行は、捕捉分子としてＤＩＰＰＭＰＯ（５−（ジイソプロポキシホスホリル）−５−メチル−１−ピロリン−Ｎ−オキシド）を使用することによって、競合する捕捉実験を実施するために、電子常磁性共鳴（ＥＰＲ）と連関させた「スピントラッピング」法によって実行した。この化合物は、この技術を使用してスーパーオキシドラジカルを検出および研究するために従来から使用されている。
【０１２８】
付加物ＤＩＰＰＭＰＯ−ＯＯＨのシグナルの強度の変化を、クリーム剤の存在下および非存在下での時間の関数として監視した。本方法は、クリーム剤の存在下および非存在下でのモデルラジカル（ＴＥＭＰＯＬまたは１−オキシル−２，２，６，６−テトラメチル−４−ヒドロキシピペリジン）の分解速度を試験することによって評価した。試行の持続時間、すなわち、２０分間にわたって、４つの実験（対照＋３つの試料）についてＴＥＭＰＯＬからのシグナルの喪失は観察されなかった。また、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）の存在下での対照分析を行った。
【０１２９】
【表１】
2022502346.tif 000002
【０１３０】
表２：時間の関数としてのＤＩＰＰＭＰＯ−ＯＯＨシグナルの抑制の百分率。
【０１３１】
表に示されている値は、３回の同一の実験の平均である（変動は１０％未満である）。
【０１３２】
抑制速度を図６に示している。
【０１３３】
異なるスーパーオキシドラジカルトラッピング特性を各試料について観察した。
【０１３４】
試料Ｂは、ＤＩＰＰＭＰＯ−ＯＯＨ付加物のシグナルが３分で４８％（５分で５３％）低減したことを示しており、酸化活性の半分が抑制されたことを示唆した。
【０１３５】
試料Ｃは、ＤＩＰＰＭＰＯ−ＯＯＨ付加物のシグナルが３分で２０％（５分で４４％）低減したことを示しており、試料Ｂの抑制よりも有効性の低い抑制を示唆した。
【０１３６】
本発明の複合体、すなわち試料Ａ（ＺｎＯ／３−ヒドロキシベンズアルデヒドコロイド）については、ＤＩＰＰＭＰＯ−ＯＯＨ付加物に相当するシグナルは観察されなかった。したがって、生成されたスーパーオキシドラジカルをすべて捕捉した。
【０１３７】
これらの実験中に、追加のラジカルの形成が観察された（本発明の試料を除く）。本出願者によると、新たなラジカルは、スーパーオキシドラジカルまたは過酸化水素（スーパーオキシドラジカルの自発的不均化によって生成される）との反応に利用可能な遷移金属塩の存在を包含するＨａｂｅｒ  Ｗｅｉｓｓ反応またはＦｅｎｔｏｎ反応から生じたように見えた。したがって、ヒドロキシルラジカルが生成され、クリームの構成要素と反応して、ＤＩＰＰＭＰＯ上の付加物の形で観察される新たなラジカルまたは「二次ラジカル」を生成するように見えるであろう。
【０１３８】
結論として、本発明のコロイドは、スーパーオキシド型の遊離基を捕捉するために試験された他の化合物よりも大きな能力を有する。また、本発明のコロイドを用いて二次ラジカル種の生成は観察されず、ＲＯＳを抑制し、したがって酸化ストレスを抑制することに対して全体的な有効性を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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