【誤訳訂正書】
【提出日】平成22年6月7日(2010.6.7)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
センスＲＮＡ分子を作製するための方法であって、
５’末端および３’末端を有する１本鎖ｃＤＮＡ分子を提供するステップと、
前記１本鎖ｃＤＮＡ分子の３’末端にオリゴデオキシヌクレオチドテイルを結合するステップと、
センス鎖およびアンチセンス鎖を有する２本鎖ＲＮＡポリメラーゼプロモーターを提供するステップであって、前記センス鎖が、前記オリゴデオキシヌクレオチドテイルに相補的な配列を含む１本鎖３’末端オーバーハングを含むステップと、
前記３’末端オーバーハング配列と相補的塩基対形成することによって、前記オリゴデオキシヌクレオチドテイルに前記２本鎖ＲＮＡポリメラーゼプロモーターをアニーリングするステップと、
前記オリゴデオキシヌクレオチドテイルの３’末端に前記２本鎖ＲＮＡポリメラーゼプロモーターのアンチセンス鎖の５’末端をライゲーションするステップと、
前記２本鎖プロモーターを認識するＲＮＡポリメラーゼを使用してＲＮＡ転写を開始し、センスＲＮＡ分子を作製するステップと、
を含む方法。
【請求項２】
前記１本鎖ｃＤＮＡ分子を提供するステップが、５’末端および３’末端を有するｍＲＮＡ転写物を提供するステップと、前記ｍＲＮＡ転写物から１本鎖ｃＤＮＡ分子を合成するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１本鎖ｃＤＮＡ分子の合成が、前記ｍＲＮＡ転写物とＲＮａｓｅＨ-逆転写酵素を反応させるステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記１本鎖ｃＤＮＡ分子の合成が、前記ｍＲＮＡ転写物とオリゴｄＴプライマーを反応させるステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記１本鎖ｃＤＮＡ分子の合成が、前記ｍＲＮＡ転写物とランダムプライマーを反応させるステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記オリゴデオキシヌクレオチドテイルに結合するステップの前に、１本鎖ｃＤＮＡ分子を精製するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記１本鎖ｃＤＮＡ分子を精製するステップの前に、前記ｍＲＮＡ転写物を分解するステップをさらに含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記１本鎖ｃＤＮＡ分子を精製するステップの前に、前記ｍＲＮＡ転写物が分解されない、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記オリゴデオキシヌクレオチドテイルがホモポリマーテイルである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ホモポリマーテイルがポリｄＴテイルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記オリゴデオキシヌクレオチドテイルが、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼを使用して、前記１本鎖ｃＤＮＡ分子の３’末端に結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記２本鎖ＲＮＡポリメラーゼプロモーターがＴ７、Ｔ３またはＳＰ６プロモーターである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１３】
前記２本鎖ＲＮＡポリメラーゼプロモーターがＴ７プロモーターである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記１本鎖３’末端オーバーハングがアデノシン塩基の配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記ライゲーションが、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを使用して実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＲＮＡ転写が、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを使用して開始される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ＲＮＡ転写を開始する前に、第２のｃＤＮＡ鎖を合成するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記第２のｃＤＮＡ鎖がＤＮＡポリメラーゼを使用して合成される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第２のｃＤＮＡ鎖が、前記ＲＮＡポリメラーゼプロモーターのセンス鎖の３’末端オーバーハングの伸長によって合成される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２のｃＤＮＡ鎖がランダムプライマーを使用して合成され、ランダム−プライミングされた第２のｃＤＮＡ断片鎖を作製する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ＲＮＡ転写を開始する前に、ランダム−プライミングされた前記第２のｃＤＮＡ断片鎖が互いにライゲーションする、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
得られるセンスＲＮＡ分子を増幅するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記センスＲＮＡ分子の増幅が、オリゴｄＴとランダムプライマーの組み合わせを使用して開始される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記得られるセンスＲＮＡ分子がポリＡテイルを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ポリＡテイルが、ポリＡポリメラーゼを使用して結合される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記得られるセンスＲＮＡ分子を逆転写し、それによって１本鎖ｃＤＮＡ分子を作製するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記逆転写が、検出可能であるように標識されたヌクレオチドを１本鎖ｃＤＮＡ分子に組み入れることを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記検出可能であるように標識されたヌクレオチドが蛍光色素を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記蛍光色素がｃｙ３またはｃｙ５である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記得られるｃＤＮＡ分子に少なくとも１つの検出可能な標識を結合するステップをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記検出可能であるように標識されたｃＤＮＡを、核酸マイクロアレイに接触させるステップをさらに含む、請求項２７、２８、２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ｍＲＮＡ転写物が哺乳類起源である、請求項２に記載の方法。
【請求項３３】
前記ｍＲＮＡ転写物がヒト起源である、請求項２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ｍＲＮＡ転写物が、生物起源から単離される、請求項２に記載の方法。
【請求項３５】
２本鎖ＲＮＡポリメラーゼプロモーターのセンス鎖が１本鎖３’末端オーバーハング配列を含む、センス鎖およびアンチセンス鎖を有する２本鎖ＲＮＡポリメラーゼプロモーターと、前記２本鎖プロモーターを使用してセンスＲＮＡ分子を作製するための取扱説明物を含み、
前記２本鎖ＲＮＡポリメラーゼプロモーターの１本鎖３’末端オーバーハング配列に相補的なオリゴデオキシヌクレオチドテイルを１本鎖ｃＤＮＡ分子の３’末端に結合するための少なくとも１つの酵素と、前記２本鎖プロモーターを前記ｃＤＮＡ分子の３’末端にライゲーションするための少なくとも１つの酵素をさらに含む、
少なくとも１つのセンスＲＮＡ分子を作製するためのキット。
【請求項３６】
ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼとＴ４ＤＮＡリガーゼをさらに含む、請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
オリゴｄＴプライマー、ランダムプライマー、ｄＮＴＰ、およびＲＮａｓｅ阻害剤をさらに含む、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
ＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、請求項３７に記載のキット。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
本発明の方法は、好ましくは、ｃＤＮＡ第２鎖合成を行わないで実施されるが、ｃＤＮＡ第２鎖は、ｄＮＴＰの存在下においてＤＮＡポリメラーゼを使用するＲＮＡポリメラーゼプロモーターのセンス鎖の３’末端オーバーハングの伸長によって選択的に合成することができることを当業者は認識している。好ましくは、ＤＮＡポリメラーゼはクレノー酵素である。または、ｃＤＮＡ第２鎖合成はランダムプライマーを使用して合成することができる。ランダムプライマーはｃＤＮＡ第１鎖の種々の位置にアニーリングし、ｄＮＴＰの存在下においてＤＮＡポリメラーゼによって伸長されうる。これらのランダム−プライミングされたｃＤＮＡ第２鎖断片が互いに、選択的に、ライゲーションして、第２の１本鎖ｃＤＮＡ分子を作製することができる。このようなｃＤＮＡ第２鎖分子は、インビトロにおける転写中にｃＤＮＡ第１鎖を安定化し（例えば二次および三次構造を除去し）、高収率のｓＲＮＡ分子を生ずることができる。