【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年12月16日(2009.12.16)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳における神経系細胞腫脹を防止するための製剤および／または神経系細胞腫脹から派生する外傷性脳障害または脳虚血の負の影響を軽減するための製剤であって、1型スルホニル尿素受容体アンタゴニストを含む製剤。
【請求項２】
前記製剤が、脳へ、静脈内、皮下、筋肉内、皮内、胃内または経口で投与される、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記製剤が、脳へ、静脈内、皮下、筋肉内、皮内、または胃内で投与される、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
前記1型スルホニル尿素受容体アンタゴニストが、スルホニル尿素化合物である、請求項１から３までのいずれかに記載の製剤。
【請求項５】
前記1型スルホニル尿素受容体アンタゴニストがグリベンクラミドまたはトルブタミドである、請求項１から３までのいずれかに記載の製剤。
【請求項６】
前記1型スルホニル尿素受容体アンタゴニストが、レパグリニド、ナテグリニド、メグリチニド、LY397364、LY389382、グリクラジド、グリメピリド、MgADP、およびその組合せからなる群より選択される、請求項１から３までのいずれかに記載の製剤。
【請求項７】
脳梗塞を有している対象の治療の為の、請求項１〜６のいずれかに記載の製剤。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】発明の名称
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の名称】神経系細胞の非選択的陽イオンチャネルおよび脳腫脹を治療する方法
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
本発明は、神経系細胞に見いだされ、細胞腫脹に関わる陽イオンフラックスに関与する、新規イオンチャネルに関する。本発明は、上記イオンチャネルの活性を阻害する化合物をスクリーニングする方法も提供する。NCCa-ATPチャネルのアンタゴニストをスクリーニングし同定する方法を提供する。さらに本発明は、脳における神経系細胞の腫脹を阻害または予防するために上記イオンチャネル活性を阻害する化合物および組成物を使用する治療方法も提供する。神経系細胞腫脹は新規非選択的一価陽イオンATP感受性チャネル（NCCa-ATPチャネル）の開口によって媒介されること、およびこのチャネルは1型スルホニル尿素受容体と共役していることを見いだした。さらに、本発明のNCCa-ATPチャネルを遮断することによって、特にこのチャネルと共役する受容体を拮抗すること、例えばSUR1を拮抗することなどによって、神経系細胞腫脹および細胞死、特にアストロサイト腫脹を阻害できることも見いだした。また本発明は、NCCa-ATPチャネル活性を調節するそのような化合物および組成物を、脳腫脹を治療するために使用することも包含する。本発明は、脳外傷または脳虚血の結果として神経系細胞腫脹および細胞死に起因して起こる脳腫脹の治療方法に関する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
外傷性脳傷害および脳卒中に続いて、周辺の脳は、その正常な応答として、傷害部位を「閉じこめ」て「清掃する」のに重要であると考えられている反応性アストロサイトの生成を含む細胞応答を開始する。神経系細胞の腫脹は、脳虚血および外傷性脳傷害における脳損傷を特徴付ける細胞毒性応答または細胞腫脹応答の一部であり、罹患と死亡の主原因である。Staubら，1993、Kimelbergら，1995を参照されたい。神経系細胞の腫脹を惹起する媒介因子は、例えば細胞外K+の上昇、アシドーシス、神経伝達物質の放出および遊離脂肪酸など、数多く同定されている。Kempskiら，1991、RutledgeおよびKimelberg，1996、Monginら，1999を参照されたい。細胞毒性浮腫は、臨床的には脳腫脹を引き起こす周知の現象であり、脳傷害および脳卒中の転帰を悪化させ、罹患率および死亡率を上昇させる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
ATP合成の阻害またはATP枯渇も、神経系細胞の腫脹、ブレビング、および重篤な場合には、形質膜破壊および細胞死を引き起こす。Jurkowitz-Alexanderら，1993を参照されたい。ATP枯渇に関係する神経系細胞腫脹の機序は、まだ完全には特徴付けられていない。LomnethおよびGruenstein，1989、Juurlinkら，1992、Roseら，1998を参照されたい。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
考えられる機序の一つは、Na+/K+-ATPアーゼポンプの阻害によるNa+濃度およびK+濃度の変化だろう。しかし、神経系細胞におけるウアバインによるNa+/K+-ATPアーゼポンプの阻害よりに誘発する同程度の浸透圧性腫脹では、大きな脱分極もブレビングも細胞死も起こらない。Jurkowitz-Alexanderら，1992、BrismarおよびCollins，1993を参照されたい。したがって、Na+/K+-ATPアーゼポンプの障害は、神経系細胞の腫脹にとって決定的な機序ではない。これらの研究はいずれも、脳虚血および外傷性脳傷害における脳障害に関係する細胞腫脹に寄与する細胞機序を同定していない。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
ATP感受性陽イオンチャネルのサブタイプの一つは非選択的陽イオンチャネルで、これはCa2+とATPに対して感受性を示すチャネルである。具体的に述べると、非選択的陽イオンチャネルは、細胞内Ca2+（[Ca2+]i）によって活性化され、細胞内ATP（[ATP]i）によって阻害される。Ca2+およびATP感受性チャネルは多くの非神経系細胞タイプで同定されているが、アストロサイトで同定されたことはなく、また他のどの神経系細胞でも同定されていない。Sturgessら，1987、GrayおよびArgent，1990、Raeら，1990、Champignyら，1991、PoppおよびGogelein，1992、Onoら，1994を参照されたい（これらの各文献は参照によりそのまま本明細書に組み込まれるものとする）。これらの非アストロサイトチャネルは、不明確な特徴を持つ不均一な一群を構成している。これらは25〜35pSの単一チャネルコンダクタンスを示し、Na+とK+とをあまり区別せず、陰イオンに対して不透過性であり、二価陽イオンに対しておおむね不透過性であり、細胞質側のほぼ同じ濃度のアデニンヌクレオチド類ATP、ADPおよびAMPによって遮断される。これらの非神経系細胞タイプにおけるこれらの非選択的ATP感受性陽イオンチャネルの機能は謎のままであるが、その理由の一つとして、チャネルの活性化には一般に非生理的濃度のCa2+が要求されることが挙げられる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
したがって脳虚血および外傷性脳傷害における脳損傷と関係する細胞腫脹ならびにその結果として起こる罹患および死亡に寄与する生理学的標的が求められている。また、脳傷害および脳卒中の転帰を悪化させ、罹患率および死亡率を上昇させる、脳腫脹を引き起こす細胞毒性浮腫の特異的治療方法も必要とされている。また、脳損傷を防止するためにこの標的の活性を調整することができる治療化合物も必要とされている。本発明は、神経系細胞中に存在してSURに結合している、新たに特徴付けられたNCCa-ATPチャネルという非選択的カルシウムおよびATP感受性一価陽イオンチャネルを対象とする。さらに本発明は、NCCa-ATPチャネル活性に対するアンタゴニストをスクリーニングまたは同定する方法も提供する。さらに本発明は、このチャネルの活性を阻害し、その結果として、神経系細胞の腫脹および細胞死ならびにそれに付随する神経系損傷（脳腫脹および脳損傷を含む）を防止するために、スルホニル尿素剤および他のSUR1遮断薬などのアンタゴニストを治療的に使用する方法も提供する。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
本発明は、一つには、脳外傷後に反応性神経系細胞中で発現する特殊なチャネル、NCCa-ATPチャネルの発見に基づいている。本発明は、新規Ca2+活性化[ATP]i感受性非特異的陽イオンチャネル（以下、NCCa-ATPチャネルという）を含有する精製組成物を対象とする。本発明の好ましい一態様として、上記組成物は、NCCa-ATPチャネルを発現させる哺乳類神経系細胞または膜調製物を含み、上記哺乳類神経系細胞は、最も好ましくは、新鮮単離反応性アストロサイトである。NCCa-ATPチャネルを含むそのような精製組成物の好ましい一例は、天然反応性アストロサイトに由来する膜調製物である。本明細書で実証するように、NCCa-ATPチャネルを発現させる神経系細胞で細胞内ATPが枯渇すると、NCCa-ATPチャネルが開口し、細胞が腫脹して死ぬ。しかし、そのような細胞上のNCCa-ATPチャネルを遮断すると、その細胞は腫脹して死ぬことがない。また本発明は、一つには、NCCa-ATPチャネルが1型スルホニル尿素受容体によって調節されるという発見、およびこの受容体のアンタゴニストがNCCa-ATPチャネルを遮断して神経系細胞腫脹を阻害する能力を持つという発見にも基づいている。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
本発明は、NCCa-ATPチャネルを調節する化合物または組成物、特にこのチャネルのアンタゴニストとして作用し、その結果として、神経系細胞の腫脹とそれに付随する脳腫脹を調節する化合物または組成物をスクリーニングするためにデザインされたアッセイに関する。この目的を達成するには、NCCa-ATPチャネルおよび/またはそれに結合しているSUR1の外側（すなわち細胞外ドメイン）と相互作用（例えば結合）する化合物を検出するために、細胞型アッセイ（細胞型）または非細胞型アッセイを使用することができる。細胞型アッセイは、NCCa-ATPチャネルの生物学的活性（すなわち脱分極）に影響を及ぼす化合物を同定するために使用することができる点で、有利である。本発明は、神経系細胞を試験化合物と接触させ、その試験化合物がNCCa-ATPチャネルの活性を阻害するかどうかを決定することによって、NCCa-ATPチャネルのアンタゴニストをスクリーニングし同定する方法も提供する。一態様として、NCCa-ATPのアンタゴニストである化合物を同定する方法を提供する。ある態様では、チャネルを通過する膜電流を測定するための電気生理学的技術を使ってチャネル機能を定量化することにより、開口したチャネルを遮断するその化合物の能力またはチャネルの開口を防止するその化合物の能力に基づいて、本発明の治療化合物（NCCa-ATPアンタゴニストを含む）を同定する。NCCa-ATPアンタゴニストには、NCCa-ATPチャネル阻害剤、NCCa-ATPチャネル遮断薬、SUR1アンタゴニスト、SUR1阻害剤、および/またはチャネルを通過する膜電流の大きさを減少させる化合物である化合物が包含される。この態様では、ヒトまたは動物から得た神経系細胞調製物のチャネル機能を測定することができ、試験化合物は、溶解した状態で細胞調製物の上に流すことによって、その細胞調製物と接触させることができる。さらに本発明は、NCCa-ATPチャネルのアンタゴニストとして作用しうるスルホニル尿素化合物をスクリーニングする方法も提供する。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
本発明は、NCCa-ATPチャネルを標的にして脳腫脹（例えば脳傷害または脳虚血後に起こる腫脹）を治療するための化合物を同定することを目的とする薬物スクリーニングアッセイに関する。また本発明は、NCCa-ATPチャネルを介して神経系細胞腫脹を調節するための化合物に関する。また本発明は、NCCa-ATPチャネルを標的とすることによる脳腫脹の治療に関する。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
本発明は、哺乳類神経系細胞の腫脹（例えばATP枯渇に応答して起こるもの）の基礎となる機能を持つ新規イオンチャネルに関する。また本発明は、チャネル阻害剤をスクリーニングするための、前記チャネルの使用に関する。さらに本発明は、脳虚血および外傷性脳傷害時の脳損傷を特徴付けるこの細胞腫脹応答を防止するための、前記チャネル機能の阻害剤の使用に関する。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
アジ化ナトリウム（NaN3）は、細胞内ATPを枯渇させることによって「化学的低酸素」を誘発するために使用される代謝毒素である。Swanson，1992を参照されたい。NaN3に対する神経系細胞の形態学的および電気生理学的応答を新規細胞調製物で調べる。成体ラット脳由来の新鮮単離天然反応性アストロサイト（NRA）を使用して、それらを単離直後の天然状態で研究する。反応性アストロサイトは、インビボで活性化または刺激されたアストロサイト（例えば脳障害または神経障害に関係するものなど）である。外傷性脳傷害（TBI）患者の死後脳では、反応性アストロサイトが障害の近傍に見いだされる。脳内の傷害部位を取り囲む反応性アストロサイトの大半は、反応性アストロサイトである。1型反応性アストロサイトが回復可能な反応性アストロサイトの>80％を構成するのに対して、2型反応性アストロサイトは約5％を構成する。反応性アストロサイトは通常は静止条件下で分極している。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
本明細書で使用する「神経系細胞」という用語には、アストロサイトが含まれる。「反応性アストロサイト」という用語は、脳内の病変部位または虚血部位に見いだされるアストロサイトを意味する。「天然反応性アストロサイト」または「NRA」という用語は、脳から新しく単離された反応性アストロサイトを意味する。本明細書で使用する「新鮮単離（新しく単離された）」という用語は、脳から精製されたNRA、特に約0〜約72時間前に精製されたNRAを指す。NRAを「脳から精製」という場合の「精製」という単語は、NRAが他の脳組織および/または移植されたゼラチンまたはスポンジから分離されていることを意味し、細胞集団を単に脳から収集するだけでそれ以上細胞の単離を行わないプロセスを指すものではない。本明細書で述べるように、反応性アストロサイトに見いだされるNCCa-ATPチャネルは、新鮮単離細胞だけに存在する。NCCa-ATPチャネルは細胞を培養すると間もなく失われる。NRAは、培養されたアストロサイトと比較して、インビボで脳内に存在する反応性アストロサイトにより近いインビトロモデルになる。「天然」および「新鮮単離」という用語は同義語として用いられる。本明細書で使用する「単離神経系細胞」という用語は、脳から単離された神経系細胞を意味する。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
したがって、NCCa-ATPチャネルを発現させる膜調製物を含む組成物を提供することが、本発明の目的である。例えば膜調製物は、単離天然反応性アストロサイト（NRA）などの神経系細胞（好ましくは新鮮単離天然反応性アストロサイト）から得られる。組成物中のNCCa-ATPチャネルは以下の特徴を持つ：（a）35pSタイプのチャネルである、（b）細胞質Ca2+によって刺激される、（c）細胞質ATPが約0.8mM未満になると開口する、（d）一価陽イオンK+、Cs+、Li+およびNa+に対して透過性であり、1型スルホニル尿素受容体のアンタゴニストによって遮断することができる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
さらに、NCCa-ATPチャネルのアンタゴニストをスクリーニングする方法であって、（a）試験化合物を、NCCa-ATPチャネルを含む組成物と接触させること、および（b）前記チャネルの活性を阻害する試験化合物を、前記試験化合物の存在下および不在下で前記活性を測定することによって同定することを含み、前記活性を阻害する試験化合物をNCCa-ATPチャネルのアンタゴニストであると同定する方法を提供することも、本発明の目的である。例えば、上記組成物は、NCCa-ATPチャネルを発現させる神経系細胞の調製物またはNCCa-ATPチャネルを発現させる膜調製物（例えば単離天然反応性アストロサイト（NRA）から得られる膜調製物）を含みうる。このチャネルに対する化合物の効果としては（a）NCCa-ATPチャネルを遮断すること、（b）NCCa-ATPチャネルを閉鎖すること、（c）NCCa-ATPチャネルが開口するのを防ぐこと、および（d）NCCa-ATPチャネルを通過する膜電流の大きさを減少させることなどを挙げることができる。さらに、NCCa-ATPアンタゴニストである化合物、例えばNCCa-ATPチャネル阻害剤、NCCa-ATPチャネル遮断薬、SUR1アンタゴニスト、SUR1阻害剤および/またはこのチャネルを通過する膜電流の大きさを減少させることができる化合物などを同定することも、本発明の目的である。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
本発明のもう一つの目的は、神経系細胞腫脹を阻害する化合物を同定する方法であって、（a）試験化合物を、NCCa-ATPチャネルを含む組成物と接触させること、および（b）その試験化合物がNCCa-ATPチャネルを遮断するかどうかを決定することを含み、NCCa-ATPチャネルを遮断する試験化合物を、神経系細胞腫脹を阻害するための化合物であると同定する方法を提供することである。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
本発明のもう一つの目的は、脳腫脹を阻害する化合物を同定する方法であって、（a）試験化合物を、NCCa-ATPチャネルを含む組成物と接触させること、および（b）その試験化合物が神経系細胞腫脹を阻害するかどうかを決定することを含み、神経系細胞腫脹を阻害する試験化合物を、脳腫脹を阻害する化合物であると同定する方法を提供することである。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
本発明のもう一つの目的は、動物における神経系細胞腫脹を阻害する化合物を同定する方法であって、（a）試験化合物を、NCCa-ATPチャネルを含む組成物と接触させて、その試験化合物が前記チャネルを遮断するかどうかを決定すること、および（b）前記試験化合物を、脳傷害または脳虚血を持つ動物に投与して、処置された動物の脳腫脹を前記試験化合物が阻害するかどうかを決定することを含み、脳腫脹を阻害する試験化合物を、動物における神経系細胞腫脹を阻害する化合物であると同定する方法を提供することである。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
本発明のこれらの目的のそれぞれにおいて、前記組成物は、好ましくは、NCCa-ATPチャネルを発現させる神経系細胞の調製物またはNCCa-ATPチャネルを発現させる膜調製物（好ましくは単離天然反応性アストロサイト（NRA）に由来するもの）を含む。本発明のさらにもう一つの目的は、1型スルホニル尿素受容体のアンタゴニストである化合物、例えばスルホニル尿素化合物、ベンズアミド誘導体またはイミダゾリン誘導体などを用いる上述の方法を提供することである。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
本発明のさらにもう一つの目的は、対象の脳における神経系細胞腫脹を防止する方法であって、有効量の、NCCa-ATPチャネルを遮断する化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む製剤を、前記対象に投与することを含む方法を提供することである。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
本発明のさらにもう一つの目的は、対象における神経系細胞腫脹から派生する外傷性脳傷害または脳虚血の負の影響を軽減する方法であって、有効量の、NCCa-ATPチャネルを遮断する化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む製剤を、前記対象に投与することを含む方法を提供することである。そのような投与は、脳への直接送達、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与、皮内投与、胃内投与および経口投与であることができる。また、そのような化合物の例として、1型スルホニル尿素受容体のアンタゴニスト、例えばスルホニル尿素に似たグリベンクラミドおよびトルブタミド、ならびに他のインスリン分泌促進因子、例えばレパグリニド、ナテグリニド、メグリチニド、ミダグリゾール、LY397364、LY389382、グリクラジド、グリメピリド、MgADP、およびその組合せなどが挙げられる。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
本発明のさらにもう一つの目的は、NCCa-ATPチャネルを遮断する化合物と薬学的に許容できる担体とを含む製剤を使って対象の脳における神経系細胞腫脹を防止または阻害するための製剤であって、前記化合物の量が、糖尿病を治療するための製剤に含まれる前記化合物の量よりも、少なくとも10倍は多い製剤を提供することである。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
結果
神経系細胞腫脹におけるNCCa-ATPチャネルの役割
チャネルの特徴
実施例1：NaN3を用いたATP枯渇による形態変化
培養神経系細胞はATPが枯渇すると腫脹することが示されている。Jurkowitz-Alexanderら，1992、Jurkowitz-Alexanderら，1993を参照されたい。ATPが枯渇した新鮮単離NRAも細胞腫脹を起こす。脳の虚血または外傷性傷害も、脳神経系細胞におけるATPの枯渇を引き起こす。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
実施例7：NRAにおけるSURの存在を確認する
NRAにSUR受容体が存在するかどうかを決定するために、これらの細胞に対するグリベンクラミドの結合を蛍光顕微鏡法によって評価する。上述したように皮質下白質への刺創とゼラチンスポンジの移植によって、8週齢のウィスターラットを傷つける。8日後に、傷つけた動物から得たホルムアルデヒド固定脳の組織片を、20nM FITC結合グリベンクラミドと共に室温で60分間インキュベートする。ゼラチンスポンジの蛍光像では、標識された細胞がスポンジの空洞を裏打ちしている様子がみえる。脳の傷害に隣接する部分では、グリベンクラミド結合が基本的にみとめられない。これらのデータは、通常は皮質下白質に存在しないSURが、外傷性傷害後の神経系細胞では発現されることを示している。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８４】
NCCa-ATPチャネルを遮断し神経系細胞腫脹を阻害する化合物または組成物のアッセイ
実施例9：スルホニル化合物の効果
スルホニル尿素化合物はスルホニル尿素受容体を調節することが知られている。スルホニル尿素受容体は一般的には調節成分としてKATPチャネルと会合していて、ラットNRAを含むさまざまな組織に見いだされる。注目すべきことに、KATPチャネルKir6.1およびKir6.2はラットNRAには存在しない（図7B）。アウトサイドアウトパッチではNCCa-ATPチャネルをSURリガンドであるジアゾキシドで活性化することができる（図9Aおよび9B）。NaN3は単離された膜パッチではチャネル活性を誘発しないが、これは、NaN3が、チャネルに対する直接作用ではなくATP枯渇を介して働くことを示している。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０１】
実施例15
NCCa-ATPチャネルの用量依存的遮断をもたらすことができる試験化合物の能力を決定するためのインビトロアッセイ
NCCa-ATPチャネル遮断化合物は、NCCa-ATPチャネルに対する試験化合物の直接的阻害効果を決定する方法によって同定することができる。化合物の阻害効果を示すには、インサイドアウトパッチを使用する。K+チャネル、特にKATPチャネルがパッチ電流に寄与していないことを保証するために、Cs+を電荷担体として使用する。チャネル活性を大幅に減少させる化合物であって、そのチャネル活性が35pS陽イオンチャネルによるものであることが示される場合、そのような化合物は、NCCa-ATPチャネルを遮断し神経系細胞腫脹および脳腫脹を阻害することができる化合物であると同定される。さまざまな濃度の化合物を使って、NCCa-ATPチャネルがその化合物によって用量依存的に遮断されるかどうかを決定する。50％阻害が観測される濃度（EC50）およびチャネル活性が完全に失われる濃度を決定する。NRAにおける試験化合物による遮断に対する本発明のNCCa-ATPチャネルの感受性を比較することができる。チャネル活性の50％阻害をもたらす試験化合物の濃度を決定するためのこのインビトロアッセイを使って、ある循環血漿濃度範囲が得られるように、動物モデルでの用量を策定することができる。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０５】
本発明の方法
本発明は、今まで知られていなかったイオンチャネルであって、哺乳類神経系細胞中に見いだされ、細胞腫脹に役割を果たすイオンチャネルを提供する。さらに本発明は、上記のチャネルに対するアンタゴニストをスクリーニングする方法、ならびに上記のチャネルに対するアンタゴニスト（グリベンクラミドやトルブタミドなどのスルホニル尿素化合物を含む）の、哺乳動物における脳腫脹の治療薬としての新しい用途も提供する。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０６】
NCCa-ATPチャネルと相互作用する化合物（例えば同チャネルと結合する化合物、同チャネルを開口させる化合物、同チャネルを遮断する化合物）を同定するための本発明の方法では（i）細胞型アッセイおよび/または（ii）非細胞型アッセイ系を使用する。そのような化合物はNCCa-ATPチャネル活性のアンタゴニストまたはアゴニストとして作用しうる。本発明の好ましい一態様では、NCCa-ATPチャネルの透過性を遮断および/または阻害するアンタゴニストを、神経系細胞腫脹および/または脳腫脹を治療する方法に利用する。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０７】
細胞型アッセイでは、NCCa-ATPチャネル（好ましくは機能的NCCa-ATPチャネル）を発現させる神経系細胞を使用する。好ましい細胞はNRAである。非細胞型アッセイ系には、NCCa-ATPチャネル（好ましくは機能的NCCa-ATPチャネル）を発現させる膜調製物が含まれる。細胞型アッセイには、例えば化合物結合アッセイ、細胞状態（正常、ブレビング、腫脹）の顕微鏡観察、および化合物へのばく露前とばく露後の両方でチャネル電流を測定することなどが含まれるが、これらに限るわけではない。NCCa-ATPチャネルまたはSUR1と相互作用する化合物、NCCa-ATPチャネルまたはSUR1に結合する化合物、またはNCCa-ATPチャネルまたはSUR1を遮断するもしくは開口させる化合物を同定するために、NCCa-ATPチャネルを発現させる膜調製物を含む組成物を使用することができる。「NCCa-ATPチャネルを発現させる」という用語は、機能的NCCa-ATPチャネルを持つことを意味する。本明細書で使用する「機能的NCCa-ATPチャネル」という用語は、検出することが可能なNCCa-ATPチャネルを意味する。NCCa-ATPチャネルの好ましい検出方法の一つは、チャネルが開口、閉鎖および/または遮断されるかどうかを、インビトロまたはインビボで決定することによる方法である。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１３】
本明細書に記載するアッセイでは、神経系細胞腫脹を調節する化合物（例えば、NCCa-ATPチャネルに結合するまたは同チャネルを遮断するリガンドによって活性化される神経系細胞腫脹に関与する他の事象に影響を及ぼす化合物）を同定することもできる。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１４】
本発明によってスクリーニングされる化合物
本発明によってスクリーニングされる化合物としては、NCCa-ATPチャネルに結合して同チャネルを開口させる（すなわちアゴニスト）か、同チャネルを遮断する（すなわちアンタゴニスト）、有機化合物、ペプチド、抗体およびその断片、ペプチドミメティックで挙げられるが、これらに限るわけではない。神経系細胞腫脹または脳腫脹の治療に使用するには、チャネルを遮断する化合物が好ましい。チャネルを開口させるかまたはチャネルを開口した状態に保つアゴニストとしては、例えばペプチド、抗体またはその断片、およびNCCa-ATPチャネルのSUR1サブユニット（または、その部分）を含み、循環中のSUR1リガンドに結合して、それを「中和」する他の有機化合物などが挙げられる。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１７】
本発明によってスクリーニングすることができる他の化合物としては、例えば、血液脳関門を横切って、適当な神経系細胞に侵入し、NCCa-ATPチャネル遺伝子またはNCCa-ATPチャネル活性に関与する他の何らかの遺伝子の発現に（例えば遺伝子発現に関与する調節領域または転写因子と相互作用することなどによって）影響を及ぼすことができる小さい有機分子、またはNCCa-ATPチャネルの活性またはNCCa-ATPチャネル活性に関与する他の何らかの細胞内因子の活性に影響を及ぼすそのような化合物を挙げることができるが、これらに限るわけではない。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２５】
したがって本発明は、神経系細胞腫脹および神経系細胞死ならびに脳腫脹の治療または軽減、特に外傷性脳傷害に関係する脳発作、中枢神経系損傷、末梢神経系損傷、脳卒中などの脳虚血、または浮腫、傷害または外傷に関係する合併症および/または浮腫、傷害または外傷から派生する合併症の治療または軽減に有用である。そのような損傷または合併症の特徴として、明白な脳損傷または脳異常を挙げることができ、その症状は、本明細書に記載の活性化合物または活性物質の有効量の投与を含む本発明の方法によって減少させることができる。本発明の具体的一態様によれば、有効量の活性化合物を投与することによって、開いたままでは神経系細胞腫脹および神経系細胞死につながるチャネルを遮断することができる。SUR1に対するさまざまなアンタゴニストは、このチャネルを遮断するのに適している。適切なSUR1アンタゴニストの例には、グリベンクラミド、トルブタミド、レパグリニド、ナテグリニド、メグリチニド、ミダグリゾール、LY397364、LY389382、グリクラジド、グリメピリド、MgADP、およびそれらの組合せなどがあるが、これらに限るわけではない。本発明の好ましい一態様では、SUR1アンタゴニストが、グリベンクラミドおよびトルブタミドからなる群より選択される。例えば神経系細胞を分極状態に保つ方法や、強い脱分極を防止する方法など（ただしこれらに限らない）、神経系細胞腫脹および神経系細胞死を防止するためのさらに他の治療「戦略」も採用することができる。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３４】
単離細胞中で、および傷害を受けたラット脳をin situで、ATP枯渇に応答して起こる細胞のブレビングおよび腫脹ならびにネクローシス細胞死を減少させる能力について、テニダップを評価する。テニダップがR1型アストロサイト中のKir2.3チャネルを開口させるかどうかを評価するために、NCCa-ATPチャネルの状態の評価に関して本明細書に説明した方法と同様の方法を使用する。テニダップがR1型アストロサイト中のKir2.3チャネルを開口させ、ATP枯渇に応答して起こる細胞ブレビングおよび細胞死を減少させることを示す、このような実験の結果により、TBIまたは脳虚血に起因する脳腫脹および細胞毒性浮腫の治療に、テニダップが有用であることが示されるだろう。有効量のテニダップとは、神経系細胞の腫脹およびネクローシス細胞死を阻害するこの薬物の能力によって脳腫脹または脳虚血を減少させることができる量である。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３６】
したがって、本発明のもう一つの目的は、神経系細胞腫脹を阻害する化合物を同定する方法であって、（a）試験化合物を、Kir2.3チャネルを含む組成物と接触させること、および（b）その試験化合物がKir2.3チャネルを開口させるかどうかを決定することを含み、Kir2.3チャネルを開口させる試験化合物を、神経系細胞腫脹を阻害する化合物であると同定する方法を提供することである。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３８】
本発明のさらにもう一つの目的は、動物における神経系細胞腫脹および/または脳腫脹を阻害する化合物を同定する方法であって、（a）試験化合物を、Kir2.3チャネルを含む組成物と接触させること、および（b）その試験化合物がKir2.3チャネルを開口させるかどうかを決定することを含み、Kir2.3チャネルを開口させる試験化合物を、動物における神経系細胞腫脹および/または脳腫脹を阻害するための化合物であると同定する方法を提供することである。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４０】
本発明のさらにもう一つの目的は、動物における神経系細胞腫脹を阻害する化合物を同定する方法であって、（a）試験化合物を、Kir2.3チャネルを含む組成物と接触させ、その試験化合物がKir2.3チャネルを開口させるかどうかを決定すること、および（b）その試験化合物を、脳傷害または脳虚血を持つ動物に投与して、その試験化合物が、処置された動物の脳腫脹を阻害するかどうかを決定することを含み、脳腫脹を阻害する試験化合物を、動物における神経系細胞腫脹を阻害する化合物であると同定する方法を提供することである。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４１】
また、対象の脳における神経系細胞腫脹を防止する方法であって、有効量の、Kir2.3チャネルを開口させる化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む製剤を、前記対象に投与することを含む方法を提供することも、本発明の目的である。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４２】
本発明のさらにもう一つの目的は、対象における神経系細胞腫脹から派生する外傷性脳傷害または脳虚血の負の影響を軽減する方法であって、有効量の、Kir2.3チャネルを開口させる化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む製剤を、前記対象に投与することを含む方法を提供することである。Kir2.3チャネルに対する化合物の効果を評価する方法を提供する本発明の目的では、好ましい化合物はテニダップである。例えば、上記の製剤により、約10mg/日〜約500mg/日の1日量のテニダップが得られる。また、脳内に直接投与するのであれば、テニダップの1日量は約500mg/日〜1.5g/日またはそれ以上である。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４３】
神経系細胞腫脹および脳腫脹を治療する方法および医薬製剤
本発明の組成物
本発明では、本明細書に開示する活性物質を含む組成物を使用した治療方法も考えられる。これらの組成物として、好ましくは、治療有効量の、1つ以上の活性化合物または活性物質と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物が挙げられる。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５０】
一定の状況では、特に治療の初期には、患者の血流中にかなり高用量の活性剤を維持することが重要になりうる。そのようなかなり高い用量には、他の適応症での使用よりも数倍高い用量が含まれうる。例えば、経口または静脈内グリベンクラミドの典型的な抗糖尿病用量は1日あたり約2.5mg/kg〜約15mg/kgであり、経口または静脈内トルブタミドの典型的な抗糖尿病用量は1日あたり約0.5g/kg〜約2.0g/kgであり、経口グリクラジドの典型的な抗糖尿病用量は1日あたり約30mg/kg〜約120mg/kgであるが、神経系細胞腫脹および脳腫脹を遮断するには、これよりはるかに高い用量が必要になりうる。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５１】
例えば、有効量の、NCCa-ATPチャネルを遮断する化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む製剤を対象に投与することによって、その対象の脳における神経系細胞腫脹を防止する方法に関する本発明の一態様では、そのような製剤が、約0.1〜約100グラムのトルブタミドまたは約0.5〜約150ミリグラムのグリベンクラミドを含みうる。有効量の、NCCa-ATPチャネルを遮断する化合物と、薬学的に許容できる担体とを含む製剤を対象に投与することによって、その対象において神経系細胞腫脹から派生する外傷性脳傷害または脳虚血の負の影響を軽減する方法に関する本発明のもう一つの態様では。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６４】
本明細書で使用する「適切な用量レベル」という表現は、インビボでNCCa-ATPチャネルを効果的に遮断し、神経系細胞腫脹を予防するか減少させることができるほど十分に高い循環濃度をもたらすのに足りる化合物レベルを指す。