【手続補正書】
【提出日】平成21年9月28日(2009.9.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む核酸構築物であって、
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結された、ＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記構築物由来の発現の特異的調節を提供する、核酸構築物。
【請求項２】
前記シス活性調節領域が細胞特異的調節を提供する、請求項１に記載の構築物。
【請求項３】
前記シス活性調節領域が組織特異的調節を提供する、請求項１に記載の構築物。
【請求項４】
前記シス活性調節領域が細胞周期特異的調節を提供する、請求項１に記載の構築物。
【請求項５】
前記シス活性調節領域がインビボで腫瘍特異的調節を提供する、請求項１に記載の構築物。
【請求項６】
前記シス活性調節領域がインビボで放射線誘導発現を提供する、請求項１に記載の構築物。
【請求項７】
前記シス活性調節領域がインビボでエストロゲン誘導発現を提供する、請求項１に記載の構築物。
【請求項８】
前記構築物が、前記融合プロモーターに作動可能に連結されたｓｈＲＮＡをコードする配列をさらに含む、請求項１に記載の構築物。
【請求項９】
前記構築物が、前記融合プロモーターに作動可能に連結されたｓｉＲＮＡの２つの鎖をコードする配列をさらに含む、請求項１に記載の構築物。
【請求項１０】
前記基本プロモーター領域がＰｏｌＩＩＩプロモーターに由来する、請求項１に記載の構築物。
【請求項１１】
前記ＰｏｌＩＩＩ基本プロモーターがＵ６基本プロモーターである、請求項１０に記載の構築物。
【請求項１２】
前記ＰｏｌＩＩＩ基本プロモーターがＨ１基本プロモーターである、請求項１０に記載の構築物。
【請求項１３】
前記ＰｏｌＩＩＩ基本プロモーターがｔＲＮＡ基本プロモーターである、請求項１０に記載の構築物。
【請求項１４】
前記ＰｏｌＩＩＩ基本プロモーターが変異ＰｏｌＩＩ基本プロモーターであり、前記変異ＰｏｌＩＩ基本プロモーターが、ＰｏｌＩＩの代わりにＰｏｌＩＩＩに優先的に結合する、請求項１０に記載の構築物。
【請求項１５】
前記ＰｏｌＩＩシス活性調節領域が、ＣＭＶ初期中間調節領域を含む、請求項１に記載の構築物。
【請求項１６】
前記ＰｏｌＩＩシス活性調節領域が、完全なＰｏｌＩＩ調節領域から基本プロモーターを欠いたものを含む、請求項１に記載の構築物。
【請求項１７】
疾患関連遺伝子のｍＲＮＡをターゲティングするＲＮＡｉ作用因子をコードする配列をさらに含む、請求項１に記載の構築物。
【請求項１８】
ＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含むベクターであって、
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にするベクター。
【請求項１９】
前記融合プロモーターに作動可能に連結されたＲＮＡｉ作用因子をコードする領域をさらに含む、請求項１８に記載のベクター。
【請求項２０】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｉＲＮＡである、請求項１９に記載のベクター。
【請求項２１】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｈＲＮＡである、請求項１９に記載のベクター。
【請求項２２】
前記ベクターがプラスミドである、請求項１８に記載のベクター。
【請求項２３】
前記ベクターがウイルスベースのベクターである、請求項１８に記載のベクター。
【請求項２４】
前記ベクターが複製欠損性を示す、請求項１８に記載のベクター。
【請求項２５】
前記ベクターが複製能力を示す、請求項１８に記載のベクター。
【請求項２６】
コード配列に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む細胞であって、前記融合プロモーターが、
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする細胞。
【請求項２７】
前記コード配列がＲＮＡｉ作用因子をコードする、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｉＲＮＡである、請求項２７に記載の細胞。
【請求項２９】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｈＲＮＡである、請求項２７に記載の細胞。
【請求項３０】
前記融合プロモーターおよび前記ＲＮＡｉ作用因子が１つのベクター中に存在する、請求項２７に記載の細胞。
【請求項３１】
前記ベクターがプラスミドである、請求項３０に記載の細胞。
【請求項３２】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項３０に記載の細胞。
【請求項３３】
前記細胞が細胞培養物中に存在する、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３４】
前記細胞が動物細胞である、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３５】
前記動物細胞がヒト細胞である、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３６】
前記細胞が昆虫細胞である、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３７】
前記細胞が植物細胞である、請求項３３に記載の細胞。
【請求項３８】
前記細胞が動物中に存在する、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３９】
前記動物がヒトである、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４０】
前記動物がウシである、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４１】
前記動物がブタである、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４２】
前記動物がヒツジである、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４３】
前記動物がネコである、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４４】
前記動物がイヌである、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４５】
前記動物がトリである、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４６】
前記細胞が植物中に存在する、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４７】
前記細胞が真菌中に存在する、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４８】
コード配列に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む遺伝子構築物を含む複数の細胞を含む非ヒトトランスジェニック生物であって、前記ＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターが、
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする非ヒトトランスジェニック生物。
【請求項４９】
前記コード配列がＲＮＡｉ作用因子をコードする、請求項４８に記載の生物。
【請求項５０】
前記生物が動物である、請求項４８に記載の生物。
【請求項５１】
前記生物が植物である、請求項４８に記載の生物。
【請求項５２】
請求項１〜請求項１７のいずれか１項に記載の核酸構築物、および
使用説明書
を含むキット。
【請求項５３】
前記核酸構築物が単回使用形態で包装されている、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】
前記核酸構築物がベクター中に存在する、請求項５２に記載のキット。
【請求項５５】
前記核酸構築物が、前記ＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターに作動可能に連結されたコード配列をさらに含む、請求項５２に記載のキット。
【請求項５６】
請求項１〜請求項１７のいずれか１項に記載の核酸構築物であって、前記核酸構築物が、前記融合プロモーターに作動可能に連結されたｓｈＲＮＡまたはｓｉＲＮＡ配列をさらに含む核酸構築物、および
薬学的に許容可能な担体または賦形剤
を含む薬学的組成物。
【請求項５７】
前記組成物を注射用組成物として処方する、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項５８】
前記組成物を局所投与のために処方する、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項５９】
前記組成物をリポソーム組成物として処方する、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項６０】
前記組成物がウイルスベクターを含む、請求項５６に記載の薬学的組成物。
【請求項６１】
遺伝子構築物の作製方法であって、
ＲＮＡｉ作用因子をコードする核酸配列をＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターに作動可能に連結させる工程であって、前記プロモーターが、前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩＩ基本プロモーターを含む工程
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする、方法。
【請求項６２】
前記融合プロモーターが、ＲＮＡｉ作用因子をコードする前記核酸の細胞特異的発現を提供する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｈＲＮＡである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｉＲＮＡである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
ＲＮＡ作用因子コード配列に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む遺伝子構築物を含む、細胞中にＲＮＡｉ作用因子を発現する組成物であって、前記ＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターが、
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結された、ＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を提供する組成物。
【請求項６６】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｈＲＮＡである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｉＲＮＡである、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６８】
遺伝子構築物を含むベクターを含む、細胞中の標的遺伝子の発現を阻害するための組成物であって、
前記構築物が、前記標的遺伝子にターゲティングされるＲＮＡｉ作用因子をコードする核酸配列に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含み、前記融合プロモーターが、
ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域、および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を提供する組成物。
【請求項６９】
前記細胞が生物中に存在する、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
前記構築物が組織特異的調節エレメントを含み、前記標的遺伝子を前記組織特異的調節エレメントに対応する組織の細胞中で優先的に阻害する、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７１】
前記構築物が腫瘍特異的調節エレメントを含み、前記標的遺伝子を前記組織特異的調節エレメントに対応する腫瘍の細胞中で優先的に阻害する、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７２】
前記阻害を放射線に応答して誘導する、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７３】
前記阻害を、有効量の非ペプチドおよび非ヌクレオチド化学種の存在に応答して誘導する、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７４】
前記化学種がエストロゲンである、請求項７３に記載の組成物。
【請求項７５】
遺伝子機能を分析する方法であって、
細胞中の遺伝子発現を阻害する工程であって、前記阻害がＲＮＡｉ作用因子をコードする核酸配列に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む遺伝子構築物由来のＲＮＡｉ作用因子の発現に起因し、前記融合プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする工程、および
前記阻害後に前記細胞における生物学的変化を決定する工程であって、前記生物学的変化が前記遺伝子の機能を示す工程
を含む方法。
【請求項７６】
前記決定が、少なくとも１つの生物学的特徴を前記細胞の発現が阻害されないコントロール細胞と比較する工程を含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記細胞を、前記遺伝子構築物を含むベクターでトランスフェクトする工程をさらに含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
前記ベクターがプラスミドである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
標的を治療標的として実証する方法であって、
細胞中の推定治療標的遺伝子の発現を阻害する工程であって、前記阻害がＲＮＡｉ作用因子をコードする核酸配列に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む遺伝子構築物由来のＲＮＡｉ作用因子の発現に起因し、前記融合プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする工程、および
前記阻害後の前記細胞における生物学的変化が治療効果と対応するかどうかを決定する工程であって、前記生物学的変化の前記治療効果との対応は前記遺伝子が治療標的遺伝子であることを示す工程
を含む方法。
【請求項８１】
小分子試験化合物の生物学的効果の正のコントロールを得る方法であって、
第１細胞を試験化合物と接触させる工程と、
ＲＮＡｉ作用因子をコードする配列に作動可能に連結された、発現の特異的調節を提供するＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む遺伝子構築物由来のＲＮＡｉ作用因子の発現を使用して比較細胞中の標的遺伝子を阻害する工程であって、前記融合プロモーターがＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする工程、および
前記第１細胞中の前記試験化合物の効果を、前記比較細胞中の前記標的遺伝子の阻害効果と比較する工程
を含む方法。
【請求項８２】
前記試験化合物を、前記標的遺伝子に対して活性であるように予め選択する、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記比較工程は、前記試験化合物が前記阻害効果に付加的な効果を有するかどうかを決定する工程を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
標的遺伝子の阻害が有益な効果を提供する疾患または病態を治療するための組成物であって、
ＲＮＡｉ作用因子をコードする核酸配列に作動可能に連結された、発現を特異的に調節するＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む遺伝子構築物を含む薬理学的有効量のベクター
を含み、前記融合プロモーターが、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域、および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を提供する、組成物。
【請求項８５】
前記ベクターがプラスミドである、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８６】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８７】
前記被験体がヒトである、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８８】
前記被験体が非ヒト動物である、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８９】
前記被験体が植物である、請求項８４に記載の組成物。
【請求項９０】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｈＲＮＡである、請求項８４に記載の組成物。
【請求項９１】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｉＲＮＡである、請求項８４に記載の組成物。
【請求項９２】
標的遺伝子の阻害によって有益な効果を提供する疾患または病態の治療薬の調製における、ＲＮＡｉ作用因子をコードする配列に作動可能に連結された、発現の特異的調節を提供するＰｏｌＩＩＩ／ＰｏｌＩＩ融合プロモーターを含む遺伝子構築物を含むベクターの使用であって、前記融合プロモーターが、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ結合基本プロモーター領域、および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたＰｏｌＩＩプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を提供する使用。
【請求項９３】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項９２に記載の使用。
【請求項９４】
前記ベクターがプラスミドである、請求項９２に記載の使用。
【請求項９５】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｈＲＮＡである、請求項９２に記載の使用。
【請求項９６】
前記ＲＮＡｉ作用因子がｓｉＲＮＡである、請求項９２に記載の使用。