(57)【要約】  イヌＩＬ４Ｒに結合する抗ＩＬ４Ｒ抗体に関する様々な実施態様が提供される。様々な実施態様において、そのような抗ＩＬ４Ｒ抗体は、イヌ及びネコなどのコンパニオンアニマルにおいて、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、そう痒症、喘息、乾癬、強皮症、及び湿疹などのＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態を治療する方法において使用することができる。抗体又は二重特異性抗体の調製のための、コンパニオンアニマル種の変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド及び変異体軽鎖定常領域に関する様々な実施態様も提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、ここで、該抗体が、ＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１Ｔ（配列番号８５）［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
【請求項２】
イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、ここで、該抗体が、ＲＬＳＹＱＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１ＴＣＶＰＥＮ（配列番号８６）［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
【請求項３】
抗体が、ＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１Ｔ（配列番号８５）［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項２に記載の単離された抗体。
【請求項４】
抗体が、配列番号８８又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１から３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５】
抗体が、配列番号８９又は配列番号９２のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１から４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６】
抗体が、ＳＭＸ１２Ｘ１３ＤＤＸ１４ＶＥＡＤＶＹＱＬＸ１５ＬＷＡＧＸ１６Ｑ（配列番号８７）［ここで、Ｘ１２はＰ又はＬであり、Ｘ１３はＩ又はＭであり、Ｘ１４はＡ又はＦであり、Ｘ１５はＤ又はＨであり、Ｘ１６はＱ又はＴである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１から５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７】
抗体が、ＳＭＸ１２Ｘ１３ＤＤＸ１４ＶＥＡＤＶＹＱＬＸ１５ＬＷＡＧＸ１６Ｑ（配列番号８７）［ここで、Ｘ１２はＰ又はＬであり、Ｘ１３はＩ又はＭであり、Ｘ１４はＡ又はＦであり、Ｘ１５はＤ又はＨであり、Ｘ１６はＱ又はＴである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体。
【請求項８】
抗体が、配列番号９０又は配列番号９３のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、請求項１から７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項９】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ未満、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０−１１Ｍ未満、１ｘ１０−１１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、請求項１から８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１０】
抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌ及び／若しくはネコＩＬ４ポリペプチド並びに／又はイヌ及び／若しくはネコＩＬ１３ポリペプチドの、イヌＩＬ４Ｒ及び／若しくはネコＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、請求項１から１０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１２】
抗体が、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルクローンＢ又はクローンＩ抗体と競合する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１３】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１４】
抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１５】
抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１６】
ａ）ＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨ（配列番号１）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）ＹＩＮＰＸ１ＮＤＧＴＦＹＮＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｇ（配列番号２）［ここで、Ｘ１はＫ又はＡであり、Ｘ２はＫ又はＡであり、Ｘ３はＦ又はＶであり、Ｘ４はＫ又はＱである］又はＹＩＮＰＸ１ＮＤＧＴ（配列番号２６８）［ここで、Ｘ１はＫ又はＡである］のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）ＦＸ５ＹＧＸ６ＡＹ（配列番号３）［ここで、Ｘ５はＮ又はＹであり、Ｘ６はＩ又はＦである］のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１７】
ａ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号８、配列番号２６９、配列番号３０、配列番号２７１、又は配列番号２７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号９又は配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１８】
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
ｂ）配列番号８、配列番号２６９、配列番号３０、配列番号２７１、又は配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び
ｃ）配列番号９又は配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３
を含む重鎖を含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項１９】
ａ）ＲＡＳＱＥＩＳＧＹＬＳ（配列番号４）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）ＡＡＳＸ７Ｘ８ＤＸ９（配列番号５）［ここで、Ｘ７はＴ又はＮであり、Ｘ８はＲ又はＬであり、Ｘ９はＳ又はＴである］のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）ＶＱＹＡＳＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２０】
ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号１５又は配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、請求項１から１９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２１】
ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
ｂ）配列番号１５又は配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３
を含む軽鎖を含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項２２】
（ａ）配列番号１０又は配列番号３２の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号１１又は配列番号３３のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号１２、配列番号２７０、配列番号３４、配列番号２７３のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号１３又は配列番号３５のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号１７又は配列番号３９の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号１８又は配列番号４０のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号１９又は配列番号４１のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号２０又は配列番号４２のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、請求項１６から２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２３】
抗体が、
ａ．（ｉ）配列番号２１又は配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号２２又は配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｂ．（ｉ）配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、又は配列番号２７４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号６１、配列番号６２、配列番号６５、配列番号６６、配列番号２７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｃ．（ｉ）配列番号６７又は配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号６８又は配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２４】
抗体が、配列番号２１、配列番号４３、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、配列番号２７４、配列番号６７、又は配列番号６９のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
抗体が、配列番号２２、配列番号４４、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６５、配列番号６６、配列番号２７５、配列番号６８、又は配列番号７０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２６】
抗体が、
ａ）配列番号２１又は配列番号４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号２２又は配列番号４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；
ｂ）配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、又は配列番号２７４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号６１、配列番号６２、配列番号６５、配列番号６６、又は配列番号２７５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；又は
ｃ）配列番号６７又は配列番号６９のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列及び配列番号６８又は配列番号７０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２７】
イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、該抗体が配列番号３５４のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
【請求項２８】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ未満、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０−１１Ｍ未満、１ｘ１０−１１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、請求項２７に記載の単離された抗体。
【請求項２９】
抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、請求項２７又は請求項２８に記載の抗体。
【請求項３０】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌ及び／若しくはネコＩＬ４ポリペプチド並びに／又はイヌ及び／若しくはネコＩＬ１３ポリペプチドの、イヌＩＬ４Ｒ及び／若しくはネコＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、請求項２７から２９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３１】
抗体が、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルＭ３抗体と競合する、請求項２７から３０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３２】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項２７から３１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３３】
抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、請求項２７から３２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３４】
抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、請求項２７から３３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３５】
ａ）配列番号２７８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号２７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号２８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、請求項２７から３４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３６】
ａ）配列番号２８５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号２８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号２８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、請求項２７から３５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３７】
（ａ）配列番号２８１の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号２８２のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号２８３のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号２８４のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号２８８の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号２８９のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号２９０のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号２９１のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、請求項２７から３６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３８】
抗体が、
ａ．（ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｂ．（ｉ）配列番号３４２又は配列番号３４３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む、請求項２７から３７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項３９】
抗体が、配列番号２９２、配列番号３４２、又は配列番号３４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、請求項２７から３８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４０】
抗体が、配列番号２９３又は配列番号３４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、請求項２７から３９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４１】
抗体が、
ａ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号２９３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；及び／又は
ｂ）配列番号３４２又は配列番号３４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、請求項２７から４０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４２】
ａ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号２９３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；又は
ｂ）配列番号３４２又は配列番号３４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、単離された抗体。
【請求項４３】
イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、該抗体が配列番号３５５のアミノ酸配列を含むエピトープ及び／又は配列番号３５６のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
【請求項４４】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ未満、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０−１１Ｍ未満、１ｘ１０−１１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、請求項４３に記載の単離された抗体。
【請求項４５】
抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、請求項４３又は請求項４４に記載の抗体。
【請求項４６】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌ及び／若しくはネコＩＬ４ポリペプチド並びに／又はイヌ及び／若しくはネコＩＬ１３ポリペプチドの、イヌＩＬ４Ｒ及び／若しくはネコＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、請求項４３から４５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４７】
抗体が、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルＭ８抗体と競合する、請求項４３から４６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４８】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項４３から４７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項４９】
抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、請求項４３から４８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５０】
抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、請求項４３から４９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５１】
ａ）配列番号３１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号３１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号３１２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、請求項４３から５０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５２】
ａ）配列番号３１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号３１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号３１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、請求項４３から５１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５３】
（ａ）配列番号３１３の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号３１４のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号３１５のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号３１６のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号３２０の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号３２１のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号３２２のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号３２３のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、請求項４３から５２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５４】
抗体が、
（ａ）配列番号３２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；
（ｂ）配列番号３２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は
（ｃ）（ａ）のような可変重鎖配列及び（ｂ）のような可変軽鎖配列
を含む、請求項４３から５３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５５】
抗体が、配列番号３２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、請求項４３から５４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５６】
抗体が、配列番号３２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、請求項４３から５５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５７】
抗体が、配列番号３２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、請求項４３から５６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項５８】
配列番号３２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、単離された抗体。
【請求項５９】
イヌＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、該抗体が配列番号３５７のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
【請求項６０】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ未満、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０−１１Ｍ未満、１ｘ１０−１１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒに結合する、請求項５９に記載の単離された抗体。
【請求項６１】
抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒに結合する、請求項５８又は請求項５９に記載の抗体。
【請求項６２】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌＩＬ４ポリペプチド及び／又はイヌＩＬ１３ポリペプチドのイヌＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、請求項５８から６１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６３】
抗体が、イヌＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルＭ９抗体と競合する、請求項５８から６２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６４】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項５８から６３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６５】
抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、請求項５８から６４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６６】
抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、請求項５８から６５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６７】
ａ）配列番号３２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号３２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号３２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、請求項５８から６６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６８】
ａ）配列番号３３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号３３４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号３３５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、請求項５８から６７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項６９】
（ａ）配列番号３２９の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号３３０のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号３３１のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号３３２のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号３３６の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号３３７のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号３３８のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号３３９のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、請求項５８から６８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７０】
抗体が、
ａ．（ｉ）配列番号３４０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｂ．（ｉ）配列番号３４５又は配列番号３４６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む、請求項５８から６９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７１】
抗体が、配列番号３４０、配列番号３４５、又は配列番号３４６のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、請求項５８から７０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７２】
抗体が、配列番号３４１又は配列番号３４７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、請求項５８から７１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７３】
抗体が、
ａ）配列番号３４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；及び／又は
ｂ）配列番号３４５又は配列番号３４６のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、請求項５８から７２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７４】
ａ）配列番号３４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；又は
ｂ）配列番号３４５又は配列番号３４６のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、単離された抗体。
【請求項７５】
ａ）配列番号２９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号２９５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号２９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、イヌＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体。
【請求項７６】
ａ）配列番号３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、イヌＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体。
【請求項７７】
ａ）配列番号３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、請求項７５に記載の単離された抗体。
【請求項７８】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ未満、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０−１１Ｍ未満、１ｘ１０−１１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒに結合する、請求項７５から７７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項７９】
抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒに結合する、請求項７５から７８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８０】
抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌＩＬ４ポリペプチド及び／又はイヌＩＬ１３ポリペプチドのイヌＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、請求項７５から７９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８１】
抗体が、イヌＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルＭ５抗体と競合する、請求項７５から８０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８２】
抗体がモノクローナル抗体である、請求項７５から８１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８３】
抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、請求項７５から８２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８４】
抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、請求項７５から８３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８５】
（ａ）配列番号２９７の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号２９８のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号２９９のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号３００のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号３０４の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号３０５のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号３０６のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号３０７のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、請求項７５から８４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８６】
抗体が、
（ａ）配列番号３０８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；
（ｂ）配列番号３０９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は
（ｃ）（ａ）のような可変重鎖配列及び（ｂ）のような可変軽鎖配列
を含む、請求項７５から８５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８７】
抗体が、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、請求項７５から８６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８８】
抗体が、配列番号３０９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、請求項７５から８７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項８９】
抗体が、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３０９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、請求項７５から８８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項９０】
配列番号３０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３０９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、単離された抗体。
【請求項９１】
抗体が、野生型又は変異体イヌ又はネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む、請求項１から９０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９２】
ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型又は変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体ＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体ＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体ネコＩｇＧ１ｂ  Ｆｃポリペプチド；又は野生型又は変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドである、請求項９１に記載の抗体。
【請求項９３】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して増加したプロテインＡへの結合親和性；野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して低下したＣ１ｑへの結合親和性；及び／又は野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して低下したＣＤ１６への結合親和性を有する、請求項９１又は請求項９２に記載の抗体。
【請求項９４】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して、ヒンジ領域への少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、還元及び／又は非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって決定されるように、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して増加した組換え産生及び／又は増加したヒンジジスルフィド形成を有する、請求項９１から９３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９５】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号１６２の位置２１、２３、２５、８０、２０５、及び／又は２０７に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号１６３の位置５、３８、３９、９４、９７、及び／又は９８に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号１６５の位置５、２１、２３、２４、３８、３９、９３、９７、及び／又は９８に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号１６７の位置２１、２３、２５、８０、及び／又は２０７に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、又は配列番号２０６の位置１６及び／又は１９８に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４及び／又は１６に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、請求項９１から９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９６】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号１６２の位置２１、２３、２５、８０、２０５、及び／又は２０７における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号１６３の位置５、３８、３９、９４、９７、及び／又は９８における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号１６４の位置５、２１、２３、２４、３８、３９、９３、９７、及び／又は９８における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号１６５の位置２１、２３、２５、８０、及び／又は２０７における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、又は配列番号２０６の位置１６及び／又は１９８における少なくとも１つのアミノ酸置換；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４及び／又は１６における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、請求項９１から９５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９７】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号１６２の位置２１に対応する位置におけるスレオニン、配列番号１６２の位置２３に対応する位置におけるロイシン、配列番号１６２の位置２５に対応する位置におけるアラニン、配列番号１６２の位置８０に対応する位置におけるグリシン、配列番号１６２の位置２０５に対応する位置におけるアラニン、及び／又は配列番号１６２の位置２０７に対応する位置におけるヒスチジン；
ｂ）配列番号１６３の位置５に対応する位置におけるプロリン、配列番号１６３の位置３８に対応する位置におけるグリシン、配列番号１６３の位置３９に対応する位置におけるアルギニン、配列番号１６３の位置９３に対応する位置におけるアルギニン、配列番号１６３の位置９７に対応する位置におけるイソロイシン、及び／又は配列番号１６３の位置９８に対応する位置におけるグリシン；
ｃ）配列番号１６４の位置５に対応する位置におけるプロリン、配列番号１６４の位置２１に対応する位置におけるスレオニン、配列番号１６４の位置２３に対応する位置におけるロイシン、配列番号１６４の位置２４に対応する位置におけるイソロイシン、配列番号１６４の位置３８に対応する位置におけるグリシン、配列番号１６４の位置３９に対応する位置におけるアルギニン、配列番号１６４の位置９３に対応する位置におけるアルギニン、配列番号１６４の位置９７に対応する位置におけるイソロイシン、及び／又は配列番号１６４の位置９８に対応する位置におけるグリシン；
ｄ）配列番号１６５の位置２１に対応する位置におけるスレオニン、配列番号１６５の位置２３に対応する位置におけるロイシン、配列番号１６５の位置２５に対応する位置におけるアラニン、配列番号１６５の位置８０に対応する位置におけるグリシン、及び／又は配列番号１６５の位置２０７に対応する位置におけるヒスチジン；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、若しくは配列番号２０６の位置１６に対応する位置におけるプロリン、及び／又は配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、若しくは配列番号２０６の位置１９８に対応する位置におけるアラニン；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４に対応する位置におけるシステイン、及び／又は配列番号２０７の位置１６に対応する位置におけるプロリン
を含む、請求項９１から９６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９８】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号１６２の位置２１におけるスレオニン、配列番号１６２の位置２３におけるロイシン、配列番号１６２の位置２５におけるアラニン、配列番号１６２の位置８０におけるグリシン、配列番号１６２の位置２０５におけるアラニン、及び／又は配列番号１６２の位置２０７におけるヒスチジン；
ｂ）配列番号１６３の位置５におけるプロリン、配列番号１６３の位置３８におけるグリシン、配列番号１６３の位置３９におけるアルギニン、配列番号１６３の位置９３におけるアルギニン、配列番号１６３の位置９７におけるイソロイシン、及び／又は配列番号１６３の位置９８におけるグリシン；
ｃ）配列番号１６４の位置５におけるプロリン、配列番号１６４の位置２１におけるスレオニン、配列番号１６４の位置２３におけるロイシン、配列番号１６４の位置２４におけるイソロイシン、配列番号１６４の位置３８におけるグリシン、配列番号１６４の位置３９におけるアルギニン、配列番号１６４の位置９３におけるアルギニン、配列番号１６４の位置９７におけるイソロイシン、及び／又は配列番号１６４の位置９８におけるグリシン；
ｄ）配列番号１６５の位置２１におけるスレオニン、配列番号１６５の位置２３におけるロイシン、配列番号１６５の位置２５におけるアラニン、配列番号１６５の位置８０におけるグリシン、及び／又は配列番号１６５の位置２０７におけるヒスチジン；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、若しくは配列番号２０６の位置１６におけるプロリン、及び／又は配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、若しくは配列番号２０６の位置１９８におけるアラニン；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４におけるシステイン、及び／又は配列番号２０７の位置１６におけるプロリン
を含む、請求項９１から９７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９９】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４及び／又は位置３０に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４及び／又は位置２９に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、請求項９１から９８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１００】
野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含む変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む抗体であって、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４及び／又は位置３０に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４及び／又は位置２９に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、抗体。
【請求項１０１】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４及び／又は位置３０における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４及び／又は位置２９における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、請求項９１から１００のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０２】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４に対応する位置におけるロイシン及び／又は位置３０に対応する位置におけるアスパラギン；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４に対応する位置におけるロイシン及び／又は位置２９に対応する位置におけるアスパラギン
を含む、請求項９１から１０１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０３】
変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４におけるロイシン及び／又は位置３０におけるアスパラギン；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４におけるロイシン及び／又は位置２９におけるアスパラギン
を含む、請求項９１から１０２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０４】
抗体が、野生型又は変異体イヌ又はネコ軽鎖定常領域を含む、請求項１から１０３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０５】
抗体が、野生型又は変異体イヌ又はネコ軽鎖κ定常領域を含む、請求項１から１０４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０６】
変異体軽鎖定常領域が、
ａ）配列番号２３５の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２４１の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む野生型イヌ又はネコ軽鎖κ定常領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む、請求項１０４又は請求項１０５に記載の抗体。
【請求項１０７】
変異体軽鎖定常領域を含む抗体が、
ａ）配列番号２３５の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２４１の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む野生型イヌ又はネコ軽鎖κ定常領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む、抗体。
【請求項１０８】
変異体軽鎖定常領域が、
ａ）配列番号２３５の位置１１に対応する位置におけるアラニン及び／又は位置２２に対応する位置におけるアルギニン；又は
ｂ）配列番号２４１の位置１１に対応する位置におけるアラニン及び／又は位置２２に対応する位置におけるアルギニン
を含む野生型ネコ又はイヌ軽鎖κ定常領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む、請求項１０４から１０７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０９】
変異体軽鎖定常領域が、
ａ）配列番号２３５の位置１１におけるアラニン及び／又は位置２２におけるアルギニン；又は
ｂ）配列番号２４１の位置１１におけるアラニン及び／又は位置２２におけるアルギニン
を含む野生型ネコ又はイヌ軽鎖κ定常領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む、請求項１０４から１０８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１０】
軽鎖定常領域が、配列番号２３５、２３６、２４１、及び／又は２４２のアミノ酸配列を含む、請求項１０４から１０９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１１】
抗体が二重特異性抗体である、請求項１から１１０のいずれか一項に記載の抗体
【請求項１１２】
抗体が、
ｉ）第１の野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７又は配列番号１６７の位置１３８に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８及び／若しくは位置１４０、配列番号１６３の位置１３７及び／若しくは位置１３９、配列番号１６５の位置１３７及び／若しくは位置１３９、又は配列番号１６７の位置１３８及び／若しくは位置１４０に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、二重特異性抗体；又は、
ｉｉ）第１の野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４及び／又は位置１５６に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、二重特異性抗体
である、請求項１から１１１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１３】
ｉ）第１の野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む抗体又は二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７又は配列番号１６７の位置１３８に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８及び／若しくは位置１４０、配列番号１６３の位置１３７及び／若しくは位置１３９、配列番号１６５の位置１３７及び／若しくは位置１３９、又は配列番号１６７の位置１３８及び／若しくは位置１４０に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、抗体又は二重特異性抗体；
ｉｉ）第１の野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む抗体又は二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４及び／又は位置１５６に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、抗体又は二重特異性抗体；又は
ｉｉｉ）第１の野生型ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む抗体又は二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０及び／又は位置１３２に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、抗体又は二重特異性抗体。
【請求項１１４】
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７、又は配列番号１６７の位置１３８に対応する位置にトリプトファンを含み；
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８に対応する位置にセリン及び／又は位置１４０に対応する位置にアラニン、配列番号１６３の位置１３７に対応する位置にセリン及び／又は位置１３９に対応する位置にアラニン、配列番号１６５の位置１３７に対応する位置にセリン及び／又は位置１３９に対応する位置にアラニン、又は、配列番号１６７の位置１３８に対応する位置にセリン及び／又は位置１４０に対応する位置にアラニンを含み；
ｃ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４に対応する位置にトリプトファンを含み；
ｄ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４に対応する位置にセリン及び／又は位置１５６に対応する位置にアラニンを含み；
ｅ）第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０に対応する位置にトリプトファンを含み；且つ／又は
ｆ）第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０に対応する位置にセリン及び／又は位置１３２に対応する位置にアラニンを含む
請求項１１２又は請求項１１３に記載の抗体。
【請求項１１５】
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７又は配列番号１６７の位置１３８におけるアミノ酸置換を含み；
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８及び／若しくは位置１４０におけるアミノ酸置換、配列番号１６３の位置１３７及び／若しくは位置１３９におけるアミノ酸置換、配列番号１６５の位置１３７及び／若しくは位置１３９におけるアミノ酸置換、又は配列番号１６７の位置１３８及び／若しくは位置１４０におけるアミノ酸置換を含み；
ｃ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４におけるアミノ酸置換を含み；
ｄ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４及び／又は位置１５６におけるアミノ酸置換を含み；
ｅ）第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０におけるアミノ酸置換を含み；且つ／又は
ｆ）第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０及び／又は位置１３２におけるアミノ酸置換を含む、請求項１１２から１１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１６】
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７、又は配列番号１６７の位置１３８にトリプトファンを含み；
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８にセリン及び／又は位置１４０にアラニン、配列番号１６３の位置１３７にセリン及び／又は位置１３９にアラニン、配列番号１６５の位置１３７にセリン及び／又は位置１３９にアラニン、又は、配列番号１６７の位置１３８にセリン及び／又は位置１４０にアラニンを含み；
ｃ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４にトリプトファンを含み；
ｄ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４にセリン及び／又は位置１５６にアラニンを含み；
ｅ）第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０にトリプトファンを含み；且つ／又は
ｆ）第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０にセリン及び／又は位置１３２にアラニンを含む
請求項１１２から１１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１７】
第１の野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド及び第２の野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが同じＩｇＧサブタイプに由来する、請求項１１２から１１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１８】
第１の野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド及び第２の野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが異なるＩｇＧサブタイプに由来する、請求項１１２から１１７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１９】
抗体が、配列番号１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３７、２３８、２３９、２４０、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、及び／又は２６７のアミノ酸配列を含むＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む、請求項１から１１８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２０】
抗体が、
ａ．（ｉ）配列番号２５又は配列番号４７の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号２６又は配列番号４８の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；
ｂ．（ｉ）配列番号５１又は配列番号５５の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号５２又は配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；
ｃ．（ｉ）配列番号７１、配列番号７２、配列番号７５、配列番号７６、又は配列番号２７６の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号７３、配列番号７４、配列番号７７、配列番号７８、又は配列番号２７７の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；
ｄ．（ｉ）配列番号７９、配列番号８０、配列番号８２、又は配列番号８３の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号８１又は配列番号８４の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；
ｅ．（ｉ）配列番号２４３の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号２４４の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；
ｆ．（ｉ）配列番号３４８又は配列番号３４９の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号３５０の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；又は
ｇ．（ｉ）配列番号３５１又は配列番号３５２の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号２５３の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列
を含む、請求項１から１１９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２１】
抗体が、ＩＬ４Ｒと、ＩＬ１７、ＩＬ３１、ＴＮＦα、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ２３、ＩｇＥ、ＣＤ１１α、ＩＬ６Ｒ、α４−インテグリン（α４−Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ）、ＩＬ１２、ＩＬ１β、又はＢｌｙＳから選択される１つ又は複数の抗原とに結合する二重特異性抗体である、請求項１から１２０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２２】
抗体が、（ｉ）配列番号２４５の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号２４６の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列を含む、請求項１から１２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２３】
抗体が、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はＦａｂ’−ＳＨ断片などの抗体断片である、請求項１から１２２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２４】
請求項１から１２３のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
【請求項１２５】
請求項１２４に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項１２６】
請求項１から１２３のいずれか一項に記載の抗体を発現する宿主細胞。
【請求項１２７】
請求項１２５又は請求項１２６に記載の宿主細胞を培養し、抗体を単離することを含む、抗体を産生する方法。
【請求項１２８】
請求項１から１２３のいずれか一項に記載の抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項１２９】
ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、請求項１から１２３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項１２８に記載の薬学的組成物の治療的有効量をコンパニオンアニマル種に投与することを含む、方法。
【請求項１３０】
コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ、又はウマである、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態が、そう痒性又はアレルギー性状態である、請求項１２９又は請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、そう痒症、喘息、乾癬、強皮症、及び湿疹から選択される、請求項１２９から１３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３３】
抗体又は薬学的組成物が非経口的に投与される、請求項１２９から１３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３４】
抗体又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑液嚢内経路、髄腔内経路、又は吸入経路によって投与される、請求項１２９から１３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３５】
方法が、抗体又は薬学的組成物と組み合わせて、Ｊａｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤を投与することを含む、請求項１２９から１３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３６】
方法が、抗体又は薬学的組成物と組み合わせて、抗ＩＬ１７抗体、抗ＩＬ３１抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＩＬ４抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＩＬ２３抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＣＤ１１α抗体、抗ＩＬ６Ｒ抗体、抗α４−インテグリン抗体（ａｎｔｉ−α４−Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗ＩＬ１２抗体、抗ＩＬ１β抗体、及び抗ＢｌｙＳ抗体から選択される１つ又は複数の抗体を投与することを含む、請求項１２９から１３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３７】
細胞内のＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を低減させる方法であって、請求項１から１２３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６４に記載の薬学的組成物を、細胞外ＩＬ４及び／又はＩＬ１３への抗体の結合を許容する条件下で細胞に曝露し、それにより、ＩＬ４及び／又はＩＬ１３のＩＬ４Ｒへの結合を低減させ、且つ／又は細胞によるＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を低減させることを含む、方法。
【請求項１３８】
細胞がエクスビボで抗体又は薬学的組成物に曝露される、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１３９】
細胞がインビボで抗体又は薬学的組成物に曝露される、請求項１３７に記載の方法。
【請求項１４０】
細胞が、イヌ細胞、ネコ細胞、又はウマ細胞である、請求項１３７から１３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４１】
ＳＴＡＴ６リン酸化の低減によって決定されるように、抗体が細胞内のＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を低減させる、請求項１３７から１４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４２】
細胞が、イヌＤＨ８２細胞である、請求項１３７から１４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４３】
ＩＬ４Ｒへの抗体の結合を許容する条件下で、試料を請求項１から１２３のいずれか一項に記載の抗体又は請求項６４に記載の薬学的組成物と接触させることを含む、コンパニオンアニマル種からの試料中のＩＬ４Ｒを検出するための方法。
【請求項１４４】
試料が、イヌ、ネコ、又はウマから得られた生物学的試料である、請求項１４１に記載の方法。
【請求項１４５】
ＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を阻害する分子をスクリーニングする方法であって、イヌＤＨ８２細胞に分子を曝露し、ＳＴＡＴ６リン酸化の低減があるかどうかを検出することを含む、方法。
【請求項１４６】
分子が、抗ＩＬ４Ｒ抗体又はＩＬ４Ｒの小分子アンタゴニストを含む、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
分子が、抗ＩＬ１３Ｒ抗体又はＩＬ１３Ｒの小分子アンタゴニストを含む、請求項１４５又は請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
分子が、抗ＩＬ４抗体又はＩＬ４の小分子アンタゴニストを含む、請求項１４５から１４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４９】
分子が、抗ＩＬ１３抗体又はＩＬ１３の小分子アンタゴニストを含む、請求項１４５から１４８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
分野
本発明は、単離された抗ＩＬ４受容体（ＩＬ４Ｒ）抗体、例えば、イヌ又はネコＩＬ４Ｒに結合し、ＩＬ４又はＩＬ１３との結合を低減させる抗体と、それを使用する方法、例えば、例としてイヌ及びネコなどのコンパニオンアニマルにおいて、ＩＬ４誘導性及び／若しくはＩＬ１３誘導性状態を治療する方法、又は細胞におけるＩＬ４若しくはＩＬ１３シグナル伝達機能を低減させる方法とに関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
インターロイキン４（ＩＬ４）は、ナイーブＴヘルパー細胞がＴｈ２細胞に分化するように誘導するサイトカインである。ＩＬ４はまた、活性化Ｂ細胞及びＴ細胞の増殖を刺激し、ＩｇＥへのＢ細胞のクラススイッチを誘導することができる。ＩＬ１３は、ＩＬ４と同様の免疫細胞への影響を及ぼす。どちらのサイトカインもアレルギーに関連している。
【０００３】
ＩＬ４受容体は、ＩＬ４Ｒａｌｐｈａ又はＩＬ４Ｒとして知られている。ＩＬ４Ｒは、共通のガンマ鎖受容体と対になり、ＩＬ４に特異的に結合することができる。ＩＬ４ＲはＩＬ１３Ｒａ１と対になることもでき、一緒にそれらはＩＬ４又はＩＬ１３のいずれかに結合することができる。したがって、ＩＬ４Ｒ上の結合部位をブロックすることは、潜在的にＩＬ−４及び／又はＩＬ−１３の結合を低減させ、これら２つのサイトカインのシグナル伝達効果を低減させることができる。
【０００４】
ネコ、イヌ、及びウマなどのコンパニオンアニマルは、アトピー性皮膚炎及びアレルギー状態など、ヒトの皮膚疾患に類似した多くの皮膚疾患を患う。したがって、ＩＬ４誘導性及び／又はＩＬ１３誘導性状態を治療するため、及びＩＬ４／ＩＬ１３シグナル伝達を低減させるために、コンパニオンアニマルＩＬ４又は／及びＩＬ１３をブロックするために特異的に使用することができる方法及び化合物が必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
概要
実施態様１．  イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、ここで、該抗体が、ＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１Ｔ（配列番号８５）［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
実施態様２．  イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、ここで、該抗体が、ＲＬＳＹＱＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１ＴＣＶＰＥＮ（配列番号８６）［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
実施態様３．  抗体が、ＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１Ｔ（配列番号８５）［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、実施態様２に記載の単離された抗体。
実施態様４．  抗体が、配列番号８８又は配列番号９１のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５．  抗体が、配列番号８９又は配列番号９２のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様６．  抗体が、ＳＭＸ１２Ｘ１３ＤＤＸ１４ＶＥＡＤＶＹＱＬＸ１５ＬＷＡＧＸ１６Ｑ（配列番号８７）［ここで、Ｘ１２はＰ又はＬであり、Ｘ１３はＩ又はＭであり、Ｘ１４はＡ又はＦであり、Ｘ１５はＤ又はＨであり、Ｘ１６はＱ又はＴである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様７．  抗体が、ＳＭＸ１２Ｘ１３ＤＤＸ１４ＶＥＡＤＶＹＱＬＸ１５ＬＷＡＧＸ１６Ｑ（配列番号８７）［ここで、Ｘ１２はＰ又はＬであり、Ｘ１３はＩ又はＭであり、Ｘ１４はＡ又はＦであり、Ｘ１５はＤ又はＨであり、Ｘ１６はＱ又はＴである］のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体。
実施態様８．  抗体が、配列番号９０又は配列番号９３のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様９．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ未満、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０−１１Ｍ未満、１ｘ１０−１１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１０．  抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌ及び／若しくはネコＩＬ４ポリペプチド並びに／又はイヌ及び／若しくはネコＩＬ１３ポリペプチドの、イヌＩＬ４Ｒ及び／若しくはネコＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１２．  抗体が、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルクローンＢ又はクローンＩ抗体と競合する、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１３．  抗体がモノクローナル抗体である、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１４．  抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１５．  抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１６．
ａ）ＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨ（配列番号１）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）ＹＩＮＰＸ１ＮＤＧＴＦＹＮＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｇ（配列番号２）［ここで、Ｘ１はＫ又はＡであり、Ｘ２はＫ又はＡであり、Ｘ３はＦ又はＶであり、Ｘ４はＫ又はＱである］又はＹＩＮＰＸ１ＮＤＧＴ（配列番号２６８）［ここで、Ｘ１はＫ又はＡである］のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）ＦＸ５ＹＧＸ６ＡＹ（配列番号３）［ここで、Ｘ５はＮ又はＹであり、Ｘ６はＩ又はＦである］のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１７．
ａ）配列番号１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号８、配列番号２６９、配列番号３０、配列番号２７１、又は配列番号２７３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号９又は配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１８．
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；
ｂ）配列番号８、配列番号２６９、配列番号３０、配列番号２７１、又は配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；及び
ｃ）配列番号９又は配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３
を含む重鎖を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様１９．
ａ）ＲＡＳＱＥＩＳＧＹＬＳ（配列番号４）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）ＡＡＳＸ７Ｘ８ＤＸ９（配列番号５）［ここで、Ｘ７はＴ又はＮであり、Ｘ８はＲ又はＬであり、Ｘ９はＳ又はＴである］のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）ＶＱＹＡＳＹＰＷＴ（配列番号６）のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様２０．
ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号１５又は配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様２１．
ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；
ｂ）配列番号１５又は配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；
ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３
を含む軽鎖を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様２２．（ａ）配列番号１０又は配列番号３２の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号１１又は配列番号３３のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号１２、配列番号２７０、配列番号３４、又は配列番号２７３のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号１３又は配列番号３５のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号１７又は配列番号３９の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号１８又は配列番号４０のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号１９又は配列番号４１のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号２０又は配列番号４２のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、実施態様１６から２１のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様２３．  抗体が、
ａ．（ｉ）配列番号２１又は配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号２２又は配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｂ．（ｉ）配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、又は配列番号２７４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号６１、配列番号６２、配列番号６５、配列番号６６、又は配列番号２７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｃ．（ｉ）配列番号６７又は配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号６８又は配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様２４．  抗体が、配列番号２１、配列番号４３、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、配列番号２７４、配列番号６７、又は配列番号６９のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様２５．  抗体が、配列番号２２、配列番号４４、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６５、配列番号６６、配列番号２７５、配列番号６８、又は配列番号７０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様２６．  抗体が、
ａ）配列番号２１又は配列番号４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号２２又は配列番号４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；
ｂ）配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、又は配列番号２７４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号６１、配列番号６２、配列番号６５、配列番号６６、配列番号２７５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；又は
ｃ）配列番号６７又は配列番号６９のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列及び配列番号６８又は配列番号７０のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様２７．  イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、該抗体が配列番号３５４のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
実施態様２８．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０  １１Ｍ未満、１ｘ１０  １１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、実施態様２７に記載の単離された抗体。
実施態様２９．  抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、実施態様２７又は実施態様２８に記載の抗体。
実施態様３０．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌ及び／若しくはネコＩＬ４ポリペプチド並びに／又はイヌ及び／若しくはネコＩＬ１３ポリペプチドの、イヌＩＬ４Ｒ及び／若しくはネコＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、実施態様２７から２９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３１．  抗体が、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルＭ３抗体と競合する、実施態様２７から３０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３２．  抗体がモノクローナル抗体である、実施態様２７から３１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３３．  抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、実施態様２７から３２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３４．  抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、実施態様２７から３３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３５．
ａ）配列番号２７８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号２７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号２８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、実施態様２７から３４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３６．
ａ）配列番号２８５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号２８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号２８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、実施態様２７から３５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３７．（ａ）配列番号２８１の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号２８２のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号２８３のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号２８４のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号２８８の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号２８９のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号２９０のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号２９１のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、実施態様２７から３６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３８．  抗体が、
ａ．（ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｂ．（ｉ）配列番号３４２又は配列番号３４３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む、実施態様２７から３７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様３９．  抗体が、配列番号２９２、配列番号３４２、又は配列番号３４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、実施態様２７から３８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様４０．  抗体が、配列番号２９３又は配列番号３４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、実施態様２７から３９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様４１．  抗体が、
ａ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号２９３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；及び／又は
ｂ）配列番号３４２又は配列番号３４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、実施態様２７から４０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様４２
ａ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号２９３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；又は
ｂ）配列番号３４２又は配列番号３４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、単離された抗体。
実施態様４３．  イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、該抗体が配列番号３５５のアミノ酸配列を含むエピトープ及び／又は配列番号３５６のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
実施態様４４．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０  １１Ｍ未満、１ｘ１０  １１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、実施態様４３に記載の単離された抗体。
実施態様４５．  抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する、実施態様４３又は実施態様４４に記載の抗体。
実施態様４６．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌ及び／若しくはネコＩＬ４ポリペプチド並びに／又はイヌ及び／若しくはネコＩＬ１３ポリペプチドの、イヌＩＬ４Ｒ及び／若しくはネコＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、実施態様４３から４５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様４７．  抗体が、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルＭ８抗体と競合する、実施態様４３から４６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様４８．  抗体がモノクローナル抗体である、実施態様４３から４７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様４９．  抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、実施態様４３から４８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５０．  抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、実施態様４３から４９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５１．
ａ）配列番号３１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号３１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号３１２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、実施態様４３から５０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５２．
ａ）配列番号３１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号３１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号３１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、実施態様４３から５１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５３．（ａ）配列番号３１３の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号３１４のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号３１５のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号３１６のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号３２０の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号３２１のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号３２２のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号３２３のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、実施態様４３から５２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５４．  抗体が、
（ａ）配列番号３２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；
（ｂ）配列番号３２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は
（ｃ）（ａ）のような可変重鎖配列及び（ｂ）のような可変軽鎖配列
を含む、実施態様４３から５３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５５．  抗体が、配列番号３２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、実施態様４３から５４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５６．  抗体が、配列番号３２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、実施態様４３から５５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５７．  抗体が、配列番号３２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、実施態様４３から５６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様５８．  配列番号３２４のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、単離された抗体。
実施態様５９．  イヌＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体であって、該抗体が配列番号３５７のアミノ酸配列を含むエピトープに結合する、単離された抗体。
実施態様６０．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０  １１Ｍ未満、１ｘ１０  １１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒに結合する、実施態様５９に記載の単離された抗体。
実施態様６１．  抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒに結合する、実施態様５８又は実施態様５９に記載の抗体。
実施態様６２．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌＩＬ４ポリペプチド及び／又はイヌＩＬ１３ポリペプチドのイヌＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、実施態様５８から６１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様６３．  抗体が、イヌＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルＭ９抗体と競合する、実施態様５８から６２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様６４．  抗体がモノクローナル抗体である、実施態様５８から６３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様６５．  抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、実施態様５８から６４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様６６．  抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、実施態様５８から６５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様６７．
ａ）配列番号３２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号３２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号３２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、実施態様５８から６６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様６８．
ａ）配列番号３３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号３３４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号３３５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、実施態様５８から６７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様６９．（ａ）配列番号３２９の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号３３０のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号３３１のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号３３２のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号３３６の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号３３７のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号３３８のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号３３９のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、実施態様５８から６８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様７０．  抗体が、
ａ．（ｉ）配列番号３４０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｂ．（ｉ）配列番号３４５又は配列番号３４６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む、実施態様５８から６９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様７１．  抗体が、配列番号３４０、配列番号３４５、又は配列番号３４６のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、実施態様５８から７０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様７２．  抗体が、配列番号３４１又は配列番号３４７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、実施態様５８から７１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様７３．  抗体が、
ａ）配列番号３４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；及び／又は
ｂ）配列番号３４５又は配列番号３４６のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、実施態様５８から７２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様７４．
ａ）配列番号３４０のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；又は
ｂ）配列番号３４５又は配列番号３４６のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４７のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む、単離された抗体。
実施態様７５．
ａ）配列番号２９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；
ｂ）配列番号２９５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及び
ｃ）配列番号２９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列
を含む重鎖を含む、イヌＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体。
実施態様７６．
ａ）配列番号３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、イヌＩＬ４Ｒに結合する単離された抗体。
実施態様７７．
ａ）配列番号３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；
ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及び
ｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列
を含む軽鎖を含む、実施態様７５に記載の単離された抗体。
実施態様７８．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０  １１Ｍ未満、１ｘ１０  １１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒに結合する、実施態様７５から７７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様７９．  抗体が、免疫ブロット分析又はバイオレイヤー干渉法によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒに結合する、実施態様７５から７８のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様８０．  抗体が、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、イヌＩＬ４ポリペプチド及び／又はイヌＩＬ１３ポリペプチドのイヌＩＬ４Ｒへの結合を低減させる、実施態様７５から７９のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８１．  抗体が、イヌＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルＭ５抗体と競合する、実施態様７５から８０のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８２．  抗体がモノクローナル抗体である、実施態様７５から８１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８３．  抗体が、イヌ、イヌ化、ネコ、ネコ化、又はキメラ抗体である、実施態様７５から８２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８４．  抗体が、１つ若しくは複数のマウス可変重鎖フレームワーク領域又は１つ若しくは複数のマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である、実施態様７５から８３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８５．（ａ）配列番号２９７の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列；（ｂ）配列番号２９８のＨＣ−ＦＲ２配列；（ｃ）配列番号２９９のＨＣ−ＦＲ３配列；（ｄ）配列番号３００のＨＣ−ＦＲ４配列；（ｅ）配列番号３０４の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列；（ｆ）配列番号３０５のＬＣ−ＦＲ２配列；（ｇ）配列番号３０６のＬＣ−ＦＲ３配列；又は（ｈ）配列番号３０７のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数をさらに含む、実施態様７５から８４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８６．  抗体が、
（ａ）配列番号３０８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；
（ｂ）配列番号３０９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は  
（ｃ）（ａ）のような可変重鎖配列及び（ｂ）のような可変軽鎖配列
を含む、実施態様７５から８５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８７．  抗体が、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む、実施態様７５から８６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８８．  抗体が、配列番号３０９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、実施態様７５から８７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様８９．  抗体が、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３０９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、実施態様７５から８８のいずれか一項に記載の単離された抗体。
実施態様９０．  配列番号３０８のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３０９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む、単離された抗体。
実施態様９１．  抗体が、野生型又は変異体イヌ又はネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様９２．  ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型又は変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体ＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体ＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃポリペプチド；野生型又は変異体ネコＩｇＧ１ｂ  Ｆｃポリペプチド；又は野生型又は変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドである、実施態様９１に記載の抗体。
実施態様９３．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して増加したプロテインＡへの結合親和性；野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して低下したＣ１ｑへの結合親和性；及び／又は野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して低下したＣＤ１６への結合親和性を有する、実施態様９１又は実施態様９２に記載の抗体。
実施態様９４．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して、ヒンジ領域への少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、還元及び／又は非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって決定されるように、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して増加した組換え産生及び／又は増加したヒンジジスルフィド形成を有する、実施態様９１から９３のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様９５．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号１６２の位置２１、２３、２５、８０、２０５、及び／又は２０７に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号１６３の位置５、３８、３９、９４、９７、及び／又は９８に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号１６５の位置５、２１、２３、２４、３８、３９、９３、９７、及び／又は９８に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号１６７の位置２１、２３、２５、８０、及び／又は２０７に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、又は配列番号２０６の位置１６及び／又は１９８に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４及び／又は１６に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、実施態様９１から９４のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様９６．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号１６２の位置２１、２３、２５、８０、２０５、及び／又は２０７における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｂ）配列番号１６３の位置５、３８、３９、９４、９７、及び／又は９８における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｃ）配列番号１６４の位置５、２１、２３、２４、３８、３９、９３、９７、及び／又は９８における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｄ）配列番号１６５の位置２１、２３、２５、８０、及び／又は２０７における少なくとも１つのアミノ酸置換；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、又は配列番号２０６の位置１６及び／又は１９８における少なくとも１つのアミノ酸置換；及び／又は  
ｆ）配列番号２０７の位置１４及び／又は１６における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、実施態様９１から９５のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様９７．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号１６２の位置２１に対応する位置におけるスレオニン、配列番号１６２の位置２３に対応する位置におけるロイシン、配列番号１６２の位置２５に対応する位置におけるアラニン、配列番号１６２の位置８０に対応する位置におけるグリシン、配列番号１６２の位置２０５に対応する位置におけるアラニン、及び／又は配列番号１６２の位置２０７に対応する位置におけるヒスチジン；
ｂ）配列番号１６３の位置５に対応する位置におけるプロリン、配列番号１６３の位置３８に対応する位置におけるグリシン、配列番号１６３の位置３９に対応する位置におけるアルギニン、配列番号１６３の位置９３に対応する位置におけるアルギニン、配列番号１６３の位置９７に対応する位置におけるイソロイシン、及び／又は配列番号１６３の位置９８に対応する位置におけるグリシン；
ｃ）配列番号１６４の位置５に対応する位置におけるプロリン、配列番号１６４の位置２１に対応する位置におけるスレオニン、配列番号１６４の位置２３に対応する位置におけるロイシン、配列番号１６４の位置２４に対応する位置におけるイソロイシン、配列番号１６４の位置３８に対応する位置におけるグリシン、配列番号１６４の位置３９に対応する位置におけるアルギニン、配列番号１６４の位置９３に対応する位置におけるアルギニン、配列番号１６４の位置９７に対応する位置におけるイソロイシン、及び／又は配列番号１６４の位置９８に対応する位置におけるグリシン；
ｄ）配列番号１６５の位置２１に対応する位置におけるスレオニン、配列番号１６５の位置２３に対応する位置におけるロイシン、配列番号１６５の位置２５に対応する位置におけるアラニン、配列番号１６５の位置８０に対応する位置におけるグリシン、及び／又は配列番号１６５の位置２０７に対応する位置におけるヒスチジン；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、若しくは配列番号２０６の位置１６に対応する位置におけるプロリン、及び／又は配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、若しくは配列番号２０６の位置１９８に対応する位置におけるアラニン；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４に対応する位置におけるシステイン、及び／又は配列番号２０７の位置１６に対応する位置におけるプロリン
を含む、実施態様９１から９６のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様９８．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号１６２の位置２１におけるスレオニン、配列番号１６２の位置２３におけるロイシン、配列番号１６２の位置２５におけるアラニン、配列番号１６２の位置８０におけるグリシン、配列番号１６２の位置２０５におけるアラニン、及び／又は配列番号１６２の位置２０７におけるヒスチジン；
ｂ）配列番号１６３の位置５におけるプロリン、配列番号１６３の位置３８におけるグリシン、配列番号１６３の位置３９におけるアルギニン、配列番号１６３の位置９３におけるアルギニン、配列番号１６３の位置９７におけるイソロイシン、及び／又は配列番号１６３の位置９８におけるグリシン；
ｃ）配列番号１６４の位置５におけるプロリン、配列番号１６４の位置２１におけるスレオニン、配列番号１６４の位置２３におけるロイシン、配列番号１６４の位置２４におけるイソロイシン、配列番号１６４の位置３８におけるグリシン、配列番号１６４の位置３９におけるアルギニン、配列番号１６４の位置９３におけるアルギニン、配列番号１６４の位置９７におけるイソロイシン、及び／又は配列番号１６４の位置９８におけるグリシン；
ｄ）配列番号１６５の位置２１におけるスレオニン、配列番号１６５の位置２３におけるロイシン、配列番号１６５の位置２５におけるアラニン、配列番号１６５の位置８０におけるグリシン、及び／又は配列番号１６５の位置２０７におけるヒスチジン；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、若しくは配列番号２０６の位置１６におけるプロリン、及び／又は配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、若しくは配列番号２０６の位置１９８におけるアラニン；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４におけるシステイン、及び／又は配列番号２０７の位置１６におけるプロリン
を含む、実施態様９１から９７のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様９９．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４及び／又は位置３０に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４及び／又は位置２９に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、実施態様９１から９８のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１００．  野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含む変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む抗体であって、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４及び／又は位置３０に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４及び／又は位置２９に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、抗体。
実施態様１０１．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４及び／又は位置３０における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４及び／又は位置２９における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む、実施態様２７から３６のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１０２．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４に対応する位置におけるロイシン及び／又は位置３０に対応する位置におけるアスパラギン；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４に対応する位置におけるロイシン及び／又は位置２９に対応する位置におけるアスパラギン
を含む、実施態様９７から１０１のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１０３．  変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、野生型イヌ又はネコＩｇＧ  ＣＨ１領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含むＣＨ１領域を含み、ここで、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、
ａ）配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、又は配列番号２３７の位置２４におけるロイシン及び／又は位置３０におけるアスパラギン；又は
ｂ）配列番号２３８の位置２４におけるロイシン及び／又は位置２９におけるアスパラギン
を含む、実施態様９１から１０２のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１０４．  抗体が、野生型又は変異体イヌ又はネコ軽鎖定常領域を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１０５．  抗体が、野生型又は変異体イヌ又はネコ軽鎖κ定常領域を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１０６．  変異体軽鎖定常領域が、
ａ）配列番号２３５の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２４１の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む野生型イヌ又はネコ軽鎖κ定常領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む、実施態様１０４又は実施態様１０５に記載の抗体。
実施態様１０７．  変異体軽鎖定常領域を含む抗体が、
ａ）配列番号２３５の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は
ｂ）配列番号２４１の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換
を含む野生型イヌ又はネコ軽鎖κ定常領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む、抗体。
実施態様１０８．  変異体軽鎖定常領域が、
ａ）配列番号２３５の位置１１に対応する位置におけるアラニン及び／又は位置２２に対応する位置におけるアルギニン；又は
ｂ）配列番号２４１の位置１１に対応する位置におけるアラニン及び／又は位置２２に対応する位置におけるアルギニン
を含む野生型ネコ又はイヌ軽鎖κ定常領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む、実施態様１０４から１０７のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１０９．  変異体軽鎖定常領域が、
ａ）配列番号２３５の位置１１におけるアラニン及び／又は位置２２におけるアルギニン；又は
ｂ）配列番号２４１の位置１１におけるアラニン及び／又は位置２２におけるアルギニン
を含む野生型ネコ又はイヌ軽鎖κ定常領域に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む、実施態様１０４から１０８のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１０．  軽鎖定常領域が、配列番号２３５、２３６、２４１、及び／又は２４２のアミノ酸配列を含む、実施態様１０４から１０９のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１１．  抗体が二重特異性抗体である、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１２．  抗体が、
ｉ）第１の野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７又は配列番号１６７の位置１３８に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８及び／若しくは位置１４０、配列番号１６３の位置１３７及び／若しくは位置１３９、配列番号１６５の位置１３７及び／若しくは位置１３９、又は配列番号１６７の位置１３８及び／若しくは位置１４０に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、二重特異性抗体；又は、
ｉｉ）第１の野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４及び／又は位置１５６に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、二重特異性抗体
である、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１３．
ｉ）第１の野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む抗体又は二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７又は配列番号１６７の位置１３８に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８及び／若しくは位置１４０、配列番号１６３の位置１３７及び／若しくは位置１３９、配列番号１６５の位置１３７及び／若しくは位置１３９、又は配列番号１６７の位置１３８及び／若しくは位置１４０に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、抗体又は二重特異性抗体；
ｉｉ）第１の野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む抗体又は二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４及び／又は位置１５６に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、抗体又は二重特異性抗体；又は
ｉｉｉ）第１の野生型ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び第２の野生型ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む抗体又は二重特異性抗体であって、ここで：
ａ）第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０に対応する位置におけるアミノ酸置換を含み、且つ／又は
ｂ）第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０及び／又は位置１３２に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む、抗体又は二重特異性抗体。
実施態様１１４．
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７、又は配列番号１６７の位置１３８に対応する位置にトリプトファンを含み；
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８に対応する位置にセリン及び／又は位置１４０に対応する位置にアラニン、配列番号１６３の位置１３７に対応する位置にセリン及び／又は位置１３９に対応する位置にアラニン、配列番号１６５の位置１３７に対応する位置にセリン及び／又は位置１３９に対応する位置にアラニン、又は、配列番号１６７の位置１３８に対応する位置にセリン及び／又は位置１４０に対応する位置にアラニンを含み；
ｃ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４に対応する位置にトリプトファンを含み；
ｄ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４に対応する位置にセリン及び／又は位置１５６に対応する位置にアラニンを含み；
ｅ）第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０に対応する位置にトリプトファンを含み；且つ／又は
ｆ）第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０に対応する位置にセリン及び／又は位置１３２に対応する位置にアラニンを含む
実施態様１１２又は実施態様１１３に記載の抗体。
実施態様１１５．
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７又は配列番号１６７の位置１３８におけるアミノ酸置換を含み；
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８及び／若しくは位置１４０におけるアミノ酸置換、配列番号１６３の位置１３７及び／若しくは位置１３９におけるアミノ酸置換、配列番号１６５の位置１３７及び／若しくは位置１３９におけるアミノ酸置換、又は配列番号１６７の位置１３８及び／若しくは位置１４０におけるアミノ酸置換を含み；
ｃ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４におけるアミノ酸置換を含み；
ｄ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４及び／又は位置１５６におけるアミノ酸置換を含み；
ｅ）第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０におけるアミノ酸置換を含み；且つ／又は
ｆ）第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０及び／又は位置１３２におけるアミノ酸置換を含む、実施態様１１２から１１４のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１６．
ａ）第１の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８、配列番号１６３の位置１３７、配列番号１６５の位置１３７、又は配列番号１６７の位置１３８にトリプトファンを含み；
ｂ）第２の変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号１６２の位置１３８にセリン及び／又は位置１４０にアラニン、配列番号１６３の位置１３７にセリン及び／又は位置１３９にアラニン、配列番号１６５の位置１３７にセリン及び／又は位置１３９にアラニン、又は、配列番号１６７の位置１３８にセリン及び／又は位置１４０にアラニンを含み；
ｃ）第１の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４にトリプトファンを含み；
ｄ）第２の変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、又は配列番号２０７の位置１５４にセリン及び／又は位置１５６にアラニンを含み；
ｅ）第１の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０にトリプトファンを含み；且つ／又は
ｆ）第２の変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、又は配列番号２６０の位置１３０にセリン及び／又は位置１３２にアラニンを含む
実施態様１１２から１１５のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１７．  第１の野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド及び第２の野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが同じＩｇＧサブタイプに由来する、実施態様１１２から１１６のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１８．  第１の野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド及び第２の野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドが異なるＩｇＧサブタイプに由来する、実施態様１１２から１１７のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１１９．  抗体が、配列番号１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３７、２３８、２３９、２４０、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、及び／又は２６７のアミノ酸配列を含むＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１２０．  抗体が、
ａ．（ｉ）配列番号２５又は配列番号４７の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号２６又は配列番号４８の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；
ｂ．（ｉ）配列番号５１又は配列番号５５の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号５２又は配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；
ｃ．（ｉ）配列番号７１、配列番号７２、配列番号７５、配列番号７６、又は配列番号２７６の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号７３、配列番号７４、配列番号７７、配列番号７８、又は配列番号２７７の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；
ｄ．（ｉ）配列番号７９、配列番号８０、配列番号８２、又は配列番号８３の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号８１又は配列番号８４の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列；又は
ｅ．（ｉ）配列番号２４３の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号２４４の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列
を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１２１．  抗体が、ＩＬ４Ｒと、ＩＬ１７、ＩＬ３１、ＴＮＦα、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ２３、ＩｇＥ、ＣＤ１１α、ＩＬ６Ｒ、α４−インテグリン（α４−Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ）、ＩＬ１２、ＩＬ１β、又はＢｌｙＳから選択される１つ又は複数の抗原とに結合する二重特異性抗体である、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１２２．  抗体が、（ｉ）配列番号２４５の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号２４６の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列を含む、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１２３．  抗体が、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又はＦａｂ’−ＳＨ断片などの抗体断片である、前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体。
実施態様１２４．  前述の実施態様のいずれか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
実施態様１２５．  実施態様１２４に記載の核酸を含む宿主細胞。
実施態様１２６．  実施態様１から１２３のいずれか一項に記載の抗体を発現する宿主細胞。
実施態様１２７．  実施態様１２５又は実施態様１２６に記載の宿主細胞を培養し、抗体を単離することを含む、抗体を産生する方法。
実施態様１２８．  実施態様１から１２３のいずれか一項に記載の抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
実施態様１２９．  ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態を有するコンパニオンアニマル種を治療する方法であって、実施態様１から１２３のいずれか一項に記載の抗体又は実施態様１２８に記載の薬学的組成物の治療的有効量をコンパニオンアニマル種に投与することを含む、方法。
実施態様１３０．  コンパニオンアニマル種がイヌ、ネコ、又はウマである、実施態様１２９に記載の方法。
実施態様１３１．  ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態が、そう痒性又はアレルギー性状態である、実施態様１２９又は実施態様１３０に記載の方法。
実施態様１３２．  ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、そう痒症、喘息、乾癬、強皮症、及び湿疹から選択される、実施態様１２９から１３１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３３．  抗体又は薬学的組成物が非経口的に投与される、実施態様１２９から１３２のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３４．  抗体又は薬学的組成物が、筋肉内経路、腹腔内経路、脳脊髄内経路、皮下経路、動脈内経路、滑液嚢内経路、髄腔内経路、又は吸入経路によって投与される、実施態様１２９から１３３のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３５．  方法が、抗体又は薬学的組成物と組み合わせて、Ｊａｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤を投与することを含む、実施態様１２９から１３４のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３６．  方法が、抗体又は薬学的組成物と組み合わせて、抗ＩＬ１７抗体、抗ＩＬ３１抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＩＬ４抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＩＬ２３抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＣＤ１１α抗体、抗ＩＬ６Ｒ抗体、抗α４−インテグリン抗体（ａｎｔｉ−α４−Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗ＩＬ１２抗体、抗ＩＬ１β抗体、及び抗ＢｌｙＳ抗体から選択される１つ又は複数の抗体を投与することを含む、実施態様１２９から１３５のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１３７．  細胞内のＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を低減させる方法であって、実施態様１から１２３のいずれか一項に記載の抗体又は実施態様６４に記載の薬学的組成物を、細胞外ＩＬ４及び／又はＩＬ１３への抗体の結合を許容する条件下で細胞に曝露し、それにより、ＩＬ４及び／又はＩＬ１３のＩＬ４Ｒ受容体への結合を低減させ、且つ／又は細胞によるＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を低減させることを含む、方法。
実施態様１３８．  細胞がエクスビボで抗体又は薬学的組成物に曝露される、実施態様１３７に記載の方法。
実施態様１３９．  細胞がインビボで抗体又は薬学的組成物に曝露される、実施態様１３８に記載の方法。
実施態様１４０．  細胞が、イヌ細胞、ネコ細胞、又はウマ細胞である、実施態様１３７から１３９のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４１．  ＳＴＡＴ６リン酸化の低減によって決定されるように、抗体が細胞内のＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達を低減させる、実施態様１３７から１４０のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４２．  細胞が、イヌＤＨ８２細胞である、実施態様１３７から１４１のいずれか一項に記載の方法。
実施態様１４３．  ＩＬ４Ｒへの抗体の結合を許容する条件下で、試料を実施態様１から１２３のいずれか一項に記載の抗体又は実施態様１２８に記載の薬学的組成物と接触させることを含む、コンパニオンアニマル種からの試料中のＩＬ４Ｒを検出するための方法。
実施態様１４４．  試料が、イヌ、ネコ、又はウマから得られた生物学的試料である、実施態様１４１に記載の方法。
実施態様１４５．  ＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を阻害する分子をスクリーニングする方法であって、イヌＤＨ８２細胞に分子を曝露し、ＳＴＡＴ６リン酸化の低減があるかどうかを検出することを含む、方法。
実施態様１４６．  分子が、抗ＩＬ４Ｒ抗体又はＩＬ４Ｒの小分子アンタゴニストを含む、実施態様１４５に記載の方法。
実施態様１４７．  分子が、抗ＩＬ１３Ｒ抗体又はＩＬ１３Ｒの小分子アンタゴニストを含む、実施態様１４５又は実施態様１４６に記載の方法。
実施態様１４８．  分子が、抗ＩＬ４抗体又はＩＬ４の小分子アンタゴニストを含む、実施態様１４５から１４７のいずれか一項に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、クローンＢ及びクローンＩマウスモノクローナル抗体クローンの重鎖及び軽鎖アミノ酸配列のアラインメントである。
【図２Ａ−２Ｂ】図２Ａ及び図２Ｂは、クローンＢとそれに続いてクローンＩ（図２Ａ）を用いた、及びクローンＩとそれに続いてクローンＢを用いたイヌＩＬ４Ｒ競合エピトープ結合解析のグラフである。
【図３Ａ−３Ｂ】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｄは、クローンＢ又はクローンＩとそれに続いてイヌＩＬ４を用いた（図３Ａ）；クローンＢ又はクローンＩとそれに続いてイヌＩＬ１３を用いた（図３Ｂ）；イヌＩＬ４とそれに続いてクローンＢ又はクローンＩを用いた（図３Ｃ）；及びイヌＩＬ１３とそれに続いてクローンＢ又はクローンＩを用いた（図３Ｄ）、イヌＩＬ４Ｒ競合的結合解析のグラフである。
【図３Ｃ−３Ｄ】図３Ａ、３Ｂ、３Ｃ、及び３Ｄは、クローンＢ又はクローンＩとそれに続いてイヌＩＬ４を用いた（図３Ａ）；クローンＢ又はクローンＩとそれに続いてイヌＩＬ１３を用いた（図３Ｂ）；イヌＩＬ４とそれに続いてクローンＢ又はクローンＩを用いた（図３Ｃ）；及びイヌＩＬ１３とそれに続いてクローンＢ又はクローンＩを用いた（図３Ｄ）、イヌＩＬ４Ｒ競合的結合解析のグラフである。
【図４Ａ−４Ｂ】図４Ａ及び４Ｂは、非還元（−ＤＴＴ、左パネル）及び還元（＋ＤＴＴ、右パネル）条件下において、クローンＩ（図４Ａ）及び対照としての抗ヒトＦｃ抗体（図４Ｂ）でプローブされたネコ、ウマ、ネズミ、ヒト、及びイヌのＩＬ４Ｒ  ＥＣＤポリペプチドの免疫ブロットである。
【図５Ａ−５Ｃ】図５Ａは、イヌＩＬ４Ｒエピトープマッピング解析のために使用されるイヌ／ヒトＩＬ４ＲＥＣＤハイブリッドポリペプチドの図解である。図５Ｂ及び５Ｃは、クローンＩ（図５Ｂ）及び対照としての抗ヒトＦｃ抗体（図５Ｃ）でプローブされた、５Ａに図示されるイヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、様々なイヌ／ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤハイブリッドポリペプチドの免疫ブロットである。
【図６Ａ−６Ｃ】図６Ａは、追加のイヌＩＬ４Ｒエピトープマッピング解析のために使用されるイヌ／ヒトＩＬ４ＲＥＣＤハイブリッドポリペプチドの図解である。図６Ｂ及び６Ｃは、クローンＩ（図６Ｂ）及び対照としての抗ヒトＦｃ抗体（図６Ｃ）でプローブされた、６Ａに図示されるイヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、及び様々なイヌ／ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤハイブリッドポリペプチドの免疫ブロットである。
【図７Ａ−７Ｃ】図７Ａは、追加のイヌＩＬ４Ｒエピトープマッピング解析に使用された、表１にさらに記載されているイヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤアラニン突然変異体ポリペプチドを同定する。図７Ｂ及び７Ｃは、クローンＩ（図７Ｂ）及び対照としての抗ヒトＦｃ抗体（図７Ｃ）でプローブされた、ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、及び様々なイヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤアラニン突然変異体ポリペプチドの免疫ブロットである。
【図８】図８は、イヌＩＬ４、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、及びイヌＩＬ１３Ｒ  ＥＣＤの複合体の３次元モデルである。第１のエピトープは、矢印によって同定される。
【図９Ａ−９Ｂ】図９Ａは、イヌＩＬ４Ｒエピトープマッピング解析のために使用されるイヌ／ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤハイブリッドポリペプチドの図解である。図９Ｂは、Ｍ３、Ｍ８、及びＭ９抗体でプローブされたイヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、及び様々なイヌ／ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤハイブリッドポリペプチドのウエスタンブロッティング解析をまとめたものである。
【０００７】
特定の配列の記述
2022500037.tif 000002
2022500037.tif 000003
2022500037.tif 000004
2022500037.tif 000005
2022500037.tif 000006
2022500037.tif 000007
2022500037.tif 000008
2022500037.tif 000009
2022500037.tif 000010
2022500037.tif 000011
2022500037.tif 000012
2022500037.tif 000013
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2022500037.tif 000041
2022500037.tif 000042
2022500037.tif 000043
2022500037.tif 000044
2022500037.tif 000045
【発明を実施するための形態】
【０００８】
特定の実施態様の説明
イヌＩＬ４Ｒ及び／又はネコＩＬ４Ｒに結合する抗体が提供される。ＩＬ４Ｒに結合する抗体を形成することができる抗体重鎖及び軽鎖も提供される。さらに、１つ又は複数の特定の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体、重鎖、及び軽鎖が提供される。イヌ又はネコＩＬ４Ｒに対する抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。イヌ又はネコＩＬ４Ｒに対する抗体を産生又は精製する方法も提供される。イヌ及び／又はネコのＩＬ４／ＩＬ１３に対する抗体を使用する治療方法が提供される。そのような方法には、限定されるものではないが、コンパニオンアニマル種におけるＩＬ４誘導性状態及び／又はＩＬ１３誘導性状態を治療する方法が含まれる。コンパニオンアニマル種からの試料中の可溶性ＩＬ４Ｒを検出する方法が提供される。ＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を阻害する分子（例えば、抗ＩＬ４Ｒ、抗ＩＬ１３Ｒ、抗ＩＬ４、及び抗ＩＬ１３抗体、並びにＩＬ４Ｒ、ＩＬ１３Ｒ、ＩＬ４、及びＩＬ１３の小分子アンタゴニスト）をスクリーニングする方法も提供される。
【０００９】
本明細書で提供されるイヌ又はネコのＩＬ４Ｒ抗体との関連で使用され得る、プロテインＡへの結合の増加、Ｃ１ｑへの結合の減少、ＣＤ１６への結合の減少、安定性の増加、組換え産生の増加、及び／又はヒンジジスルフィド形成の増加を有する、イヌ及びネコなどのコンパニオンアニマルからの変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドも提供される。さらに、本明細書で提供されるのは、抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む二重特異性抗体の調製のための、イヌ、ネコ、及びウマなどのコンパニオンアニマルからの変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド及び変異体軽鎖定常領域である。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗体断片は、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド又は変異体軽鎖定常領域を含む。変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを組み込んだ抗ＩＬ４Ｒ抗体及び二重特異性抗体を調製するための方法が提供される。
【００１０】
ＩＬ４Ｒに対する新規の抗体、例えば、イヌＩＬ４Ｒ及び／又はネコＩＬ４Ｒに結合する抗体が提供される。本明細書で提供される抗ＩＬ４Ｒ抗体には、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、マウス抗体、キメラ抗体、イヌ化抗体、ネコ化抗体、及び二重特異性抗体が含まれる。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、クローンＢ、クローンＩ、Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、又はＭ９などの単離されたマウスモノクローナル抗体である。
【００１１】
ハイブリドーマクローンは、標準的なハイブリドーマ技術を使用してイヌＩＬ４Ｒによるマウスの免疫化の後に得られた。モノクローナル抗体クローンＢ、クローンＩ、Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、及びＭ９が、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）スクリーニング、結合親和性アッセイ、及びインビトロ中和アッセイに続いて、さらなる調査のために選択された。クローンＢ及びクローンＩの重鎖及び軽鎖が配列決定され、配列アラインメントにより分析された（図１；配列番号２７（クローンＢ  ＨＣ）、配列番号２８（クローンＢ  ＬＣ）、配列番号４９（クローンＩ  ＨＣ）、及び配列番号５０（クローンＩ  ＬＣ））。Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、及びＭ９の可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）もまた、配列決定された（配列番号２９２（Ｍ３  ＶＨ）、配列番号２９３（Ｍ３  ＶＬ）、配列番号３０８（Ｍ５  ＶＨ）、配列番号３０９（Ｍ５  ＶＬ）、配列番号３２４（Ｍ８  ＶＨ）、配列番号３２５（Ｍ８  ＶＬ）、配列番号３４０（Ｍ９  ＶＨ）、及び配列番号３４１（Ｍ９  ＶＬ））。
【００１２】
モノクローナル抗体クローンＢ及びクローンＩのアミノ酸配列も本明細書で提供される。例示的なコンセンサスＣＤＲ配列は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨ（配列番号１）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＹＩＮＰＸ１ＮＤＧＴＦＹＮＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｇ（配列番号２）（ここで、Ｘ１はＫ又はＡであり、Ｘ２はＫ又はＡであり、Ｘ３はＦ又はＶであり、Ｘ４はＫ又はＱである）、又はＹＩＮＰＸ１ＮＤＧＴ（配列番号２６８）（ここで、Ｘ１はＫ又はＡである）；ＣＤＲ−Ｈ３：ＦＸ５ＹＧＸ６ＡＹ（配列番号３）（ここで、Ｘ５はＮ又はＹであり、Ｘ６はＩ又はＦである）、ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＱＥＩＳＧＹＬＳ（配列番号４）；ＣＤＲ−Ｌ２：ＡＡＳＸ７Ｘ８ＤＸ９（配列番号５）（ここで、Ｘ７はＴ又はＮであり、Ｘ８はＲ又はＬであり、Ｘ９はＳ又はＴである）；及びＣＤＲ−Ｌ３：ＶＱＹＡＳＹＰＷＴ（配列番号６）として同定された。
【００１３】
また、例えば、モノクローナル抗体クローンＢの可変重鎖ＣＤＲ（配列番号７、配列番号８、配列番号２６９、及び配列番号９）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号２７０、及び配列番号１３）、及び可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、及び配列番号２０）が提供される。モノクローナル抗体クローンＢの可変重鎖及び可変軽鎖のアミノ酸配列は、リーダー配列有り無し両方で提供される（配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、及び配列番号２４）。クローンＢの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、リーダー配列有り無し両方で提供される（配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、及び配列番号２８）。
【００１４】
別の例として、モノクローナル抗体クローンＩの、可変重鎖ＣＤＲ（配列番号２９、配列番号３０、配列番号２７１、配列番号２７２、及び配列番号３１）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号３６、配列番号３７、及び配列番号３８）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号２７３、及び配列番号３５）、及び可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、及び配列番号４２）が提供される。モノクローナル抗体クローンＩの可変重鎖及び可変軽鎖のアミノ酸配列は、リーダー配列有り無し両方で提供される（配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、及び配列番号４６）。クローンＩの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列は、リーダー配列有り無し両方で提供される（配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、及び配列番号５０）。
【００１５】
さらなる例として、Ｍ３の、可変重鎖ＣＤＲ（配列番号２７８、配列番号２７９、配列番号２８０）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号２８５、配列番号２８６、及び配列番号２８７）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号２８１−２８４）、及び可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号２８８−２９１）が提供される。
【００１６】
別の例として、Ｍ５の、可変重鎖ＣＤＲ（配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号３０１、配列番号３０２、及び配列番号３０３）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号２９７−３００）、及び可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号３０４−３０７）が提供される。
【００１７】
本明細書でさらに例示されるのは、Ｍ８の、可変重鎖ＣＤＲ（配列番号３１０、配列番号３１１、配列番号３１２）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号３１７、配列番号３１８、及び配列番号３１９）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号３１３−３１６）、及び可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号３２０−３２３）である。
【００１８】
また、本明細書で例示されるのは、Ｍ９の、可変重鎖ＣＤＲ（配列番号３２６、配列番号３２７、配列番号３２８）、可変軽鎖ＣＤＲ（配列番号３３３、配列番号３３４、及び配列番号３３５）、可変領域重鎖フレームワーク配列（配列番号３２９−３３２）、及び可変領域軽鎖フレームワーク配列（配列番号３３６−３３９）である。
【００１９】
モノクローナル抗体クローンＢ、クローンＩ、Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、及びＭ９に由来するキメラ、イヌ化、及びネコ化抗体も本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、及び配列番号５４などの、クローンＢに由来するキメラ抗体のアミノ酸配列が提供される。いくつかの実施態様では、配列番号５５、配列番号５６、配列番号５７、及び配列番号５８などの、クローンＩに由来するキメラ抗体のアミノ酸配列が提供される。いくつかの実施態様では、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、及び配列番号７４などの、イヌ化クローンＢのアミノ酸配列が提供される。いくつかの実施態様では、配列番号６３、配列番号６４、配列番号２７４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号２７５、配列番号７５、配列番号７６、配列番号２７６、配列番号７７、配列番号７８、及び配列番号２７７などのイヌ化クローンＩのアミノ酸配列が提供される。いくつかの実施態様では、配列番号６７、配列番号６８、配列番号７９、配列番号８０、及び配列番号８１などのクローンＢに由来するネコ化抗体のアミノ酸配列が提供される。いくつかの実施態様では、配列番号６９、配列番号７０、配列番号８２、配列番号８３、及び配列番号８４などのクローンＩに由来するネコ化抗体のアミノ酸配列が提供される。いくつかの実施態様では、配列番号３４２、配列番号３４３、配列番号３４４、配列番号３４８、配列番号３４９、及び配列番号３５０などの、Ｍ３に由来するイヌ化抗体のアミノ酸配列が提供される。いくつかの実施態様では、配列番号３４５、配列番号３４６、配列番号３４７、配列番号３５１、配列番号３５２、及び配列番号３５３などの、Ｍ９に由来するイヌ化抗体のアミノ酸配列が提供される。
【００２０】
本明細書で使用される場合、Ｋｄなどの数値項は、科学的測定に基づいて計算されるため、適正な測定誤差の影響を受ける。場合によっては、数値項は、最も近い有効数字に丸められた数値が含まれてもよい。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「ａ」又は「ａｎ」は、別段の定めがない限り、「少なくとも１つ」又は「１つ又は複数」を意味する。本明細書で使用される場合、「又は」という用語は、別段の定めがない限り、「及び／又は」を意味する。多数項従属請求項の文脈では、他の請求項を参照する際の「又は」の使用は、それらの請求項を代替としてのみ参照する。
【００２２】
本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーなど）及び三重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ＳｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディなど）を含む様々な抗体構造を包含する。イヌ、ネコ、ウマの種には、多くの哺乳動物によって共有される異なる種類（クラス）の抗体がある。
【００２３】
抗体という用語には、限定されるものではないが、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体）及び（Ｆａｂ’）２（化学的に結合したＦ（ａｂ’）２を含む）など、抗原に結合できる断片が含まれる。抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれ、断片の各々が単一の抗原結合部位を有する２つの同一の抗原結合断片と、名称が容易に結晶化するその能力を反映する残りの「Ｆｃ」断片とが生成される。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）２断片を生じる。抗体という用語には、限定されるものではないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びマウス、ヒト、カニクイザル、イヌ、ネコ、ウマなどの様々な種の抗体も含まれる。さらに、本明細書で提供される全ての抗体構築物について、他の生物からの配列を有する変異体もまた企図される。したがって、抗体のマウスバージョンが開示される場合、当業者は、マウス配列に基づく抗体をネコ、イヌ、ウマなどの配列に変換する方法を理解するであろう。抗体断片には、一本鎖ｓｃＦｖ、タンデムｄｉ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、タンデムｔｒｉ−ｓｄｃＦｖ、ミニボディなどのいずれかの配向も含まれる。抗体断片には、ナノボディ（ｓｄＡｂ、軽鎖を含まない重鎖の可変ドメインの対などの単一単量体ドメインを有する抗体）も含まれる。抗体断片は、いくつかの実施態様では、特定の種であると言及することができる（例えば、マウスｓｃＦｖ又はイヌｓｃＦｖ）。これは、構築物の供給源ではなく、非ＣＤＲ領域の少なくとも一部の配列を示す。いくつかの実施態様では、抗体は、標識を含むか、又は第２の部分にコンジュゲートされている。
【００２４】
用語「標識」及び「検出可能な標識」は、特定の結合対のメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能にするために抗体又はその被分析物に付着した部分を意味する。特定の結合対の標識されたメンバーは、「検出可能に標識された」と言及される。したがって、用語「標識された結合タンパク質」は、結合タンパク質の同定をもたらす標識が組み込まれたタンパク質を指す。いくつかの実施態様では、標識は、視覚的又は機器的手段、例えば、放射性同位元素で標識されたアミノ酸の組み込み、又は標識されたアビジン（例えば、光学的又は比色法によって検出することができる蛍光マーカー又は酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部分のポリペプチドへの付着によって検出可能なシグナルを生成することができる検出可能なマーカーである。ポリペプチドの標識の例には、限定されるものではないが、以下が含まれる：放射性同位元素又は放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ、又は１５３Ｓｍ）；色素原、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基；二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体の結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；及びガドリニウムキレートなどの磁性剤。免疫測定法に一般的に使用される標識の代表的な例には、光を生成する部分、例えば、アクリジニウム化合物、及び蛍光を生成する部分、例えば、フルオレセインが含まれる。この点については、部分自体は検出可能に標識され得ないが、さらに別の部分との反応で検出可能になり得る。
【００２５】
用語「モノクローナル抗体」は、抗体の実質的に均一な集団の抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。さらに、通常、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。
したがって、モノクローナル抗体の試料は、抗原上の同じエピトープに結合することができる。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、又は米国特許第８１６５６７号に記載されているような組換えＤＮＡ法によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554に記載された技術を使用して生成されたファージライブラリーから単離され得る。
【００２６】
いくつかの実施態様では、モノクローナル抗体は、クローンＢ、クローンＩ、Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、及びＭ９から選択された単離されたマウス抗体である。
【００２７】
「アミノ酸配列」は、ペプチド又はタンパク質のアミノ酸残基の配列を意味する。用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために交換可能に使用され、最小の長さに限定されない。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然又は非天然のアミノ酸残基を含み得、限定されるものではないが、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、二量体、三量体、及び多量体を含む。全長タンパク質とその断片の両方が定義によって含まれる。その用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアル化、アセチル化、リン酸化などを含む。さらに、本開示の目的のために、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加、及び置換（一般に本質的に保存的）などの修飾を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発などによる計画的なものであり得るか、あるいはタンパク質を産生する宿主の突然変異又はＰＣＲ増幅に起因するエラーなどによる偶発的なものであり得る。
【００２８】
本明細書で使用される場合、ペプチド、ポリペプチド、又は抗体配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」及び「相同性」は、配列を整列させ、必要ならばギャップを導入して、最大のパーセント配列同一性を達成した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない場合の、特定のペプチド又はポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭＥＧＡＬＩＮＥＴＭ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
【００２９】
いくつかの実施態様では、変異体は、配列を整列させ、必要ならばギャップを導入して、最大のパーセント配列同一性を達成した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮しない場合、参照核酸分子又はポリペプチドと少なくとも約５０％の配列同一性を有する。そのような変異体には、例えば、ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端において１つ又は複数のアミノ酸残基が付加されている、欠失しているポリペプチドが含まれる。いくつかの実施態様では、変異体は、参照核酸又はポリペプチドの配列と、少なくとも約５０％の配列同一性、少なくとも約６０％の配列同一性、少なくとも約６５％の配列同一性、少なくとも約７０％の配列同一性、少なくとも約７５％の配列同一性、少なくとも約８０％の配列同一性、少なくとも約８５％の配列同一性、少なくとも約９０％の配列同一性、少なくとも約９５％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有する。
【００３０】
「点突然変異」とは、単一のアミノ酸残基を含む突然変異である。突然変異は、アミノ酸の欠損、あるアミノ酸残基の別のアミノ酸残基への置換、又は追加のアミノ酸残基の挿入であり得る。
【００３１】
「アミノ酸置換」は、ポリペプチド中のあるアミノ酸の別のアミノ酸による置換を指す。いくつかの実施態様では、アミノ酸置換は、保存的置換である。非限定的な例示的な保存的アミノ酸置換を表２に示す。アミノ酸置換を目的の分子に導入し、その生成物を所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、改善されたＡＤＣＣ又はＣＤＣ、改善された組換え産生、及び／又は改善された薬物動態についてスクリーニングすることができる。
【００３２】
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【００３３】
アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ化することができる。
(1)  疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
(2)  中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
(3)  酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
(4)  塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
(5)  鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
(6)  芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
【００３４】
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを必要とするであろう。
【００３５】
本明細書で使用される「アミノ酸誘導体」は、ヒトに見いだされる２０種類の一般的な天然アミノ酸のうちの１つではない、任意のアミノ酸、修飾アミノ酸、及び／又はアミノ酸類似体を指す。例示的なアミノ酸誘導体には、ヒトには見いだされない天然アミノ酸（例えば、いくつかの微生物に見いだされ得るセレノシステイン及びピロリジン）及び非天然アミノ酸が含まれる。例示的なアミノ酸誘導体には、限定されるものではないが、化学製品製造業者を通じて市販されているアミノ酸誘導体が含まれる（例えば、参照により本明細書に組み込まれるｓｉｇｍａａｌｄｒｉｃｈ．ｃｏｍ／ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ／ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍｌ？ＴａｂｌｅＰａｇｅ＝１６２７４９６５、２０１７年５月６日にアクセス）。宿主細胞、真正細菌合成酵素に由来する直交アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素、直交ｔＲＮＡｓ、及びアミノ酸誘導体を利用する翻訳系を使用して、特定の位置で１つ又は複数のアミノ酸誘導体をポリペプチドに組み込むことができる。さらなる説明は、例えば、米国特許第９６２４４８５号を参照のこと。
【００３６】
いくつかの実施様態では、ポリペプチドは、アミノ酸誘導体によるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、アミノ酸誘導体は、アラニン誘導体、システイン誘導体、アスパラギン酸誘導体、グルタミン酸誘導体、フェニルアラニン誘導体、グリシン誘導体、ヒスチジン誘導体、イソロイシン誘導体、リジン誘導体、ロイシン誘導体、メチオニン誘導体、アスパラギン誘導体、プロリン誘導体、グルタミン誘導体、アルギニン誘導体、セリン誘導体、スレオニン誘導体、バリン誘導体、トリプトファン誘導体、又はチロシン誘導体である。
【００３７】
本明細書で使用される「ＩＬ４Ｒ」は、ＩＬ４に結合するＩＬ４受容体サブユニットアルファの全体又は断片を含むポリペプチドである。
【００３８】
例えば、「ＩＬ４Ｒ」は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）、及びコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、及びウマ）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源からのＩＬ４Ｒポリペプチドを指す。この用語はまた、ＩＬ４Ｒの天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体若しくは対立遺伝子変異体、又はＩＬ４Ｒの人工変異体、例えば、標識されたＩＬ４Ｒポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、ＩＬ４Ｒは、ＩＬ４に結合する細胞外ドメイン断片である。いくつかのそのような実施態様では、ＩＬ４Ｒは、ＩＬ４Ｒ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と呼ばれ得る。いくつかの実施態様では、ＩＬ４Ｒは、配列番号９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、又は１１７のアミノ酸配列を含む。
【００３９】
本明細書で使用される「ＩＬ４」は、ＩＬ４Ｒに結合するＩＬ４の全体又は断片を含むポリペプチドである。
【００４０】
例えば、ＩＬ４は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）、及びコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、及びウマ）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源からのＩＬ４ポリペプチドを指す。この用語はまた、ＩＬ４の天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体若しくは対立遺伝子変異体、又はＩＬ４の人工変異体、例えば、標識されたＩＬ４ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、ＩＬ４は、配列番号１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、若しくは１２３のアミノ酸配列、又はそれらのプロセシングされたバージョンを含む。いくつかの実施態様では、ＩＬ４は、配列番号１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０又は１３１のアミノ酸配列を含む。
【００４１】
本明細書で使用される「ＩＬ１３」は、ＩＬ４Ｒに結合するＩＬ１３の全体又は断片を含むポリペプチドである。
【００４２】
例えば、ＩＬ１３は、特に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）、及びコンパニオンアニマル（例えば、イヌ、ネコ、及びウマ）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源からのＩＬ１３ポリペプチドを指す。この用語はまた、ＩＬ１３の天然に存在する変異体、例えば、スプライス変異体若しくは対立遺伝子変異体、又はＩＬ１３の人工変異体、例えば、標識されたＩＬ１３ポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、ＩＬ１３は、配列番号１５４若しくは１５５のアミノ酸配列、又はそれらのプロセシングされたバージョンを含む。いくつかの実施態様では、ＩＬ３１は、配列番号１５６、１５７、１５８又は１５９のアミノ酸配列を含む。
【００４３】
本明細書で使用される「ＩＬ１３Ｒ」又は「ＩＬ１３Ｒａ１」は、ＩＬ４Ｒと対になってＩＬ４又はＩＬ１３に結合するＩＬ１３Ｒの全体又は断片を含むポリペプチドである。
【００４４】
本明細書で使用される「ガンマＣ受容体」は、ＩＬ４Ｒと対になってＩＬ４に結合する共通ガンマ鎖受容体の全体又は断片を含むポリペプチドである。
【００４５】
抗体の「ＩＬ４Ｒ結合ドメイン」という用語は、ＩＬ４Ｒに結合する抗ＩＬ４Ｒ抗体の軽鎖及び重鎖によって形成される結合ドメインを意味する。
【００４６】
いくつかの実施態様では、ＩＬ４Ｒ結合ドメインは、それがヒトＩＬ４Ｒに結合するよりも高い親和性でイヌＩＬ４Ｒに結合する。いくつかの実施様態では、ＩＬ４Ｒ結合ドメインはネコＩＬ４Ｒに結合する。
【００４７】
本明細書で使用される「ＩＬ４／ＩＬ１３シグナル伝達機能」は、ＩＬ４がＩＬ１３Ｒ若しくはガンマＣ受容体と対になったＩＬ４Ｒに結合するとき、又はＩＬ１３がＩＬ１３Ｒと対になったＩＬ４Ｒに結合するときに生じる任意の細胞効果を指す。細胞効果は、ＳＴＡＴ６リン酸化、Ｔヘルパー細胞のＴｈ２細胞への分化、Ｂ細胞及び／又はＴ細胞増殖の活性化、及び／又はＩｇＥへのＢ細胞クラススイッチの誘導を含み得る。
【００４８】
本明細書で使用される場合、用語「エピトープ」は、抗原結合分子（例えば、抗体、抗体断片、又は抗体結合領域を含む足場タンパク質）が結合する標的分子（例えば、タンパク質、核酸、炭水化物又は脂質などの抗原）上の部位を指す。エピトープは、アミノ酸、ポリペプチド、又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基をしばしば含み、特定の三次元構造特性並びに特定の電荷特性を有する。エピトープは、標的分子の隣接残基又は並置された不隣接残基（例えば、アミノ酸、ヌクレオチド、糖、脂質部分）の両方から形成することができる。隣接残基（例えば、アミノ酸、ヌクレオチド、糖、脂質部分）から形成されるエピトープは、通常、変性溶媒への曝露で保持されるが、一方三次元の折り畳みによって形成されるエピトープは、通常、変性溶媒による処理で失われる。エピトープは、限定されるものではないが、少なくとも３個、少なくとも５個又は８−１０個の残基（例えば、アミノ酸又はヌクレオチド）を含み得る。いくつかの例では、エピトープは、長さが２０残基（例えば、アミノ酸又はヌクレオチド）未満、１５残基未満、又は１２残基未満である。２つの抗体は、それらが抗原に対して競合的結合を示す場合、抗原内の同じエピトープに結合し得る。いくつかの実施態様では、エピトープは、抗原結合分子上のＣＤＲ残基までの一定の最小距離によって同定することができる。いくつかの実施態様では、エピトープは、上記の距離によって同定することができ、さらに、抗体残基と抗原残基との間の結合（例えば、水素結合）に関与するそれらの残基に限定することができる。エピトープは、様々なスキャンによっても同定することができ、例えば、アラニン又はアルギニンスキャンは、抗原結合分子が相互作用できる１つ又は複数の残基を示すことができる。明示的に示さない限り、エピトープとして残基のセットは、特定の抗体に対するエピトープの一部であることから、他の残基を排除するものではない。むしろ、そのようなセットの存在は、エピトープの最小のシリーズ（又は種のセット）を示す。したがって、いくつかの実施態様では、エピトープとして同定された残基のセットは、抗原上のエピトープの残基の排他的リストではなく、抗原に関連する最小のエピトープを指定する。
【００４９】
いくつかの実施態様では、エピトープは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）又はネコＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号１００）のＬ４１とＴ５０の範囲内にあり、例えばＲ３６とＮ５５の範囲内にある。例えば、エピトープは、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９１、又は配列番号９２のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施態様では、エピトープは、アミノ酸配列ＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１Ｔ［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］（配列番号８５）を含む。いくつかの実施態様では、エピトープは、アミノ酸配列ＲＬＳＹＱＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１ＴＣＶＰＥＮ［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］（配列番号８６）を含む。
【００５０】
いくつかの実施態様では、エピトープは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）又はネコＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号１００）のアミノ酸Ｓ６４とＱ８５の範囲内にある。例えば、エピトープは、配列番号９０又は配列番号９３のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施態様では、エピトープは、アミノ酸配列ＳＭＸ１２Ｘ１３ＤＤＸ１４ＶＥＡＤＶＹＱＬＸ１５ＬＷＡＧＸＱ［ここで、Ｘ１２はＰ又はＬであり、Ｘ１３はＩ又はＭであり、Ｘ１４はＡ又はＦであり、Ｘ１５はＤ又はＨであり、Ｘ１６はＱ又はＴである］（配列番号８７）を含む。
【００５１】
いくつかの実施態様では、エピトープは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）のアミノ酸Ｄ６５とＮ７８の範囲内にある。例えば、エピトープは、配列番号３５４のアミノ酸配列を含み得る。
【００５２】
いくつかの実施態様では、第１のエピトープは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）のアミノ酸Ｇ２４とＡ５６の範囲内にあり、第２のエピトープは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤのアミノ酸Ｒ７９とＩ９０の範囲内にある。例えば、第１のエピトープは、配列番号３５５のアミノ酸配列を含み得、第２のエピトープは、配列番号３５６のアミノ酸配列を含み得る。
【００５３】
いくつかの実施態様では、エピトープは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）のアミノ酸Ｒ７９とＶ９８の範囲内にある。例えば、エピトープは、配列番号３５７のアミノ酸配列を含み得る。
【００５４】
用語「ＣＤＲ」は、当業者に対する少なくとも１つの識別方法によって定義される相補性決定領域を意味する。いくつかの実施態様では、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けスキーム、Ｋａｂａｔの番号付けスキーム、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａの組み合わせ、ＡｂＭの定義、接触の定義、又はＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ若しくは接触の定義の組み合わせのいずれかに従って定義することができる。抗体内の様々なＣＤＲは、その適切な数と鎖の種類によって指定することができ、限定されるものではないが、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−ＨＣ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３が含まれる。用語「ＣＤＲ」は、本明細書では、超可変ループを含む「超可変領域」又はＨＶＲも包含するために使用される。
【００５５】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、（ａ）配列番号１、配列番号７、又は配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２、配列番号２６８、配列番号８、配列番号２６９、配列番号３０、配列番号２７１又は配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ２；又は（ｃ）配列番号３、配列番号９、又は配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｈ３を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、（ａ）配列番号４、配列番号１４、又は配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号５、配列番号１５、又は配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ２；又は（ｃ）配列番号６、配列番号１６、又は配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。
【００５６】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、（ａ）配列番号１、配列番号７、又は配列番号２９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；（ｂ）配列番号２、配列番号２６８、配列番号８、配列番号２６９、配列番号３０、配列番号２７１、又は配列番号２７２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；又は（ｃ）配列番号３、配列番号９、又は配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、（ａ）配列番号４、配列番号１４、又は配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；（ｂ）配列番号５、配列番号１５、又は配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；又は（ｃ）配列番号６、配列番号１６、又は配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。
【００５７】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ａ）配列番号２７８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；ｂ）配列番号２７９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及びｃ）配列番号２８０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ａ）配列番号２８５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；ｂ）配列番号２８６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及びｃ）配列番号２８７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。
【００５８】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ａ）配列番号３１０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；ｂ）配列番号３１１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及びｃ）配列番号３１２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ａ）配列番号３１７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；ｂ）配列番号３１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及びｃ）配列番号３１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。
【００５９】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ａ）配列番号３２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；ｂ）配列番号３２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及びｃ）配列番号３２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ａ）配列番号３３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；ｂ）配列番号３３４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及びｃ）配列番号３３５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。
【００６０】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ａ）配列番号２９４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ１配列；ｂ）配列番号２９５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ２配列；及びｃ）配列番号２９６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｈ３配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ａ）配列番号３０１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ１配列；ｂ）配列番号３０２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ２配列；及びｃ）配列番号３０３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有するＣＤＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。
【００６１】
本明細書で使用される用語「可変領域」は、少なくとも３つのＣＤＲを含む領域を指す。いくつかの実施態様では、可変領域は、３つのＣＤＲ及び少なくとも１つのフレームワーク領域（「ＦＲ」）を含む。用語「重鎖可変領域」又は「可変重鎖」は、少なくとも３つの重鎖ＣＤＲを含む領域を指すために交換可能に使用される。用語「軽鎖可変領域」又は「可変軽鎖」は、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲを含む領域を指すために交換可能に使用される。いくつかの実施態様では、可変重鎖又は可変軽鎖は、少なくとも１つのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３、及びＨＣ−ＦＲ４から選択される少なくとも１つの重鎖フレームワーク領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３、及びＬＣ−ＦＲ４から選択される少なくとも１つの軽鎖フレームワーク領域を含む。フレームワーク領域は、軽鎖ＣＤＲ間又は重鎖ＣＤＲ間に並置され得る。例えば、抗体は、以下の構造を有する可変重鎖を含み得る：（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＣ−ＣＤＲ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＣ−ＣＤＲ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＣ−ＣＤＲ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）。抗体は、以下の構造を有する可変重鎖を含み得る：（ＨＣ−ＣＤＲ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＣ−ＣＤＲ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＣ−ＣＤＲ３）。抗体はまた、以下の構造を有する可変軽鎖を含み得る：（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＬＣ−ＣＤＲ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＬＣ−ＣＤＲ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＬＣ−ＣＤＲ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）。抗体はまた、以下の構造を有する可変軽鎖を含み得る：（ＬＣ−ＣＤＲ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＬＣ−ＣＤＲ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＬＣ−ＣＤＲ３）。
【００６２】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、（ａ）配列番号１０又は配列番号３２の可変領域重鎖フレームワーク１（ＨＣ−ＦＲ１）配列、（ｂ）配列番号１１又は配列番号３３のＨＣ−ＦＲ２配列、（ｃ）配列番号１２、配列番号２７０、配列番号３４、配列番号２７３のＨＣ−ＦＲ３配列、（ｄ）配列番号１３又は配列番号３５のＨＣ−ＦＲ４配列、（ｅ）配列番号１７又は配列番号３９の可変領域軽鎖フレームワーク１（ＬＣ−ＦＲ１）配列、（ｆ）配列番号１８又は配列番号４０のＬＣ−ＦＲ２配列、（ｇ）配列番号１９又は配列番号４１のＬＣ−ＦＲ３配列、又は（ｈ）配列番号２０又は配列番号４２のＬＣ−ＦＲ４配列のうちの１つ又は複数を含む。
【００６３】
いくつかの実施様態では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、
ａ．（ｉ）配列番号２１又は配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号２２又は配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｂ．（ｉ）配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、又は配列番号６４、又は配列番号２７４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号６１、配列番号６２、配列番号６５、又は配列番号６６、配列番号２７５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｃ．（ｉ）配列番号６７又は配列番号６９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号６８又は配列番号７０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む。
【００６４】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号２１、配列番号４３、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６３、配列番号６４、配列番号２７４、配列番号６７、若しくは配列番号６９の可変重鎖配列、及び／又は（ａ）配列番号２２、配列番号４４、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６５、配列番号６６、配列番号２７５、配列番号６８、若しくは配列番号７０の可変軽鎖配列を含む。
【００６５】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号２５、配列番号４７、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８２、若しくは配列番号８３の重鎖配列、及び／又は配列番号２６、配列番号４８、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７７、配列番号７８、配列番号２７７、配列番号８１、若しくは配列番号８４の軽鎖配列を含む。
【００６６】
いくつかの実施様態では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、
ａ．（ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は  
ｂ．（ｉ）配列番号３４２又は配列番号３４３のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む。
【００６７】
いくつかの実施様態では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、
ａ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号２９３のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列；又は
ｂ）配列番号３４２又は配列番号３４３のアミノ酸配列を含む可変重鎖配列、及び配列番号３４４のアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列
を含む。
【００６８】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号２９２、配列番号３４２、若しくは配列番号３４３の可変重鎖配列及び／又は（ａ）配列番号２９３、若しくは配列番号３４４の可変軽鎖配列を含む。
【００６９】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号３４８若しくは配列番号３４９の重鎖配列及び／又は配列番号３５０の軽鎖配列を含む。
【００７０】
いくつかの実施様態では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、（ａ）配列番号３２４のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｂ）配列番号３２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｃ）（ａ）のような可変重鎖配列及び（ｂ）のような可変軽鎖配列
を含む。
【００７１】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号３２４の可変重鎖配列及び／又は（ａ）配列番号３２５の可変軽鎖配列を含む。
【００７２】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号３４８若しくは配列番号３４９の重鎖配列及び／又は配列番号３５０の軽鎖配列を含む。
【００７３】
いくつかの実施様態では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、
ａ．（ｉ）配列番号３４０のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列；又は
ｂ．（ｉ）配列番号３４５又は配列番号３４６のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｉｉ）配列番号３４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような可変重鎖配列及び（ｉｉ）のような可変軽鎖配列
を含む。
【００７４】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号３４０、配列番号３４５、若しくは配列番号３４６の可変重鎖配列及び／又は（ａ）配列番号３４１、若しくは配列番号３４７の可変軽鎖配列を含む。
【００７５】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号３４８若しくは配列番号３４９の重鎖配列及び／又は配列番号３５０の軽鎖配列を含む。
【００７６】
いくつかの実施様態では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、抗体が、（ａ）配列番号３０８のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変重鎖配列；（ｂ）配列番号３０９のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は１００％の配列同一性を有する可変軽鎖配列；又は（ｃ）（ａ）のような可変重鎖配列及び（ｂ）のような可変軽鎖配列を含む、請求項７５から８５のいずれか一項に記載の単離された抗体を含む。
【００７７】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号３０８の可変重鎖配列及び／又は（ａ）配列番号３４１若しくは配列番号３０９の可変軽鎖配列を含む。
【００７８】
本明細書で使用される用語「定常領域」は、少なくとも３つの定常ドメインを含む領域を指す。用語「重鎖定常領域」又は「定常重鎖」は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む領域を指すために交換可能に使用される。非限定的な例示的な重鎖定常領域には、γ、δ、α、ε、及びμが含まれる。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体は、ＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体は、ＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体は、ＩｇＡ抗体であり、μ定常領域を含む抗体は、ＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体は、ＩｇＥ抗体である。特定のアイソタイプは、さらにサブクラスに分類することができる。例えば、ＩｇＧ抗体には、限定されるものではないが、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）抗体、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）抗体、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）抗体、及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体が含まれ；ＩｇＡ抗体には、限定されるものではないが、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）抗体及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が含まれ；ＩｇＭ抗体には、限定されるものではないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２が含まれる。用語「軽鎖定常領域」又は「定常軽鎖」は、軽鎖定常ドメイン、ＣＬを含む領域を指すために交換可能に使用される。非限定的な例示的な軽鎖定常領域には、λ及びκが含まれる（例えば、配列番号２３５又は２４１）。ドメイン内の機能を変えない欠失及び改変は、特に明記しない限り、用語「定常領域」の範囲内に包含される。イヌ、ネコ、及びウマは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭなどの抗体クラスを有する。イヌＩｇＧ抗体クラスには、ＩｇＧ−Ａ、ＩｇＧ−Ｂ、ＩｇＧ−Ｃ、及びＩｇＧ−Ｄがある。ネコＩｇＧ抗体クラスには、ＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ、及びＩｇＧ２がある。ウマＩｇＧ抗体クラスには、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６、及びＩｇＧ７がある。
【００７９】
「断片結晶化可能ポリペプチド」又は「Ｆｃポリペプチド」は、エフェクター分子及び細胞と相互作用する抗体分子の部分である。それは、免疫グロブリン重鎖のＣ末端部分を含む。本明細書で使用される場合、Ｆｃポリペプチドは、Ｆｃポリペプチド全体の１つ又は複数の生物学的活性を有するＦｃドメインの断片を含む。いくつかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、ＦｃＲｎに結合する能力である。いくつかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、Ｃ１ｑに結合する能力である。いくつかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、ＣＤ１６に結合する能力である。いくつかの実施態様では、Ｆｃポリペプチドの生物学的活性は、プロテインＡに結合する能力である。Ｆｃポリペプチドの「エフェクター機能」は、刺激に応答して任意の抗体によって全体的又は部分的に遂行される作用又は活性であり、補体固定化及び／又はＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）誘導を含み得る。
【００８０】
用語「ＩｇＸ  Ｆｃ」は、Ｆｃ領域が特定の抗体アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭなど）に由来することを意味し、ここで「Ｘ」は抗体アイソタイプを示す。したがって、「ＩｇＧ  Ｆｃ」は、γ鎖のＦｃ領域を示し、「ＩｇＡ  Ｆｃ」はα鎖のＦｃ領域を示し、「ＩｇＤ  Ｆｃ」は、δ鎖のＦｃ領域を示し、「ＩｇＥ  Ｆｃ」は、ε鎖のＦｃ領域を示し、「ＩｇＭ  Ｆｃ」は、μ鎖のＦｃ領域を示す。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＬ１を含む。「ＩｇＸ−Ｎ−Ｆｃ」は、Ｆｃ領域が抗体アイソタイプの特定のサブクラス（イヌＩｇＧサブクラスＡ、Ｂ、Ｃ、又はＤ；ネコＩｇＧサブクラス１、２ａ、又は２ｂ；又はウマＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６、又はＩｇＧ７など）に由来することを示し、ここで「Ｎ」はサブクラスを示す。
【００８１】
いくつかの実施態様では、ＩｇＸ  Ｆｃポリペプチド又はＩｇＸ−Ｎ−Ｆｃポリペプチドは、イヌ、ネコ、又はウマなどのコンパニオンアニマルに由来する。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ−Ａ、ＩｇＧ−Ｂ、ＩｇＧ−Ｃ、又はＩｇＧ−Ｄなどのイヌγ重鎖から単離される。いくつかの例では、ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、又はＩｇＧ２ｂなどのネコγ重鎖から単離される。他の例では、ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６、又はＩｇＧ７などのウマγ重鎖から単離される。
【００８２】
用語「ＩｇＸ  Ｆｃ」及び「ＩｇＸ  Ｆｃポリペプチド」は、特に明記しない限り、野生型ＩｇＸ  Ｆｃポリペプチド及び変異体ＩｇＸ  Ｆｃポリペプチドを含む。
【００８３】
「野生型」は、天然に生じるポリペプチドの非変異バージョン、又はその断片を指す。野生型ポリペプチドは、組換えにより産生されてもよい。
【００８４】
いくつかの実施態様では、野生型ＩｇＧＦｃポリペプチドは、配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、又は配列番号２５３を含む。
【００８５】
「変異体」は、単一又は複数の非天然アミノ酸の置換、欠失、及び／又は付加によって参照ポリペプチドと異なるポリペプチドである。いくつかの実施態様では、変異体は、参照ポリペプチド（例えば、野生型ポリペプチド）の少なくとも１つの生物学的活性を保持する。
【００８６】
本明細書で使用される「変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド」は、単一又は複数のアミノ酸置換、欠失、及び／又は付加によって参照ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドとは異なり、且つ参照ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性を実質的に保持するＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドである。
【００８７】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、コンパニオンアニマル種の変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、変異体ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、又はネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド（例えば、変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃポリペプチド、変異体イヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチド、変異体イヌＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチド、変異体ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃポリペプチド、変異体ネコＩｇＧ１ｂ  Ｆｃポリペプチド、又は変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチド）は、参照（例えば、野生型）ポリペプチドが実質的に欠いている活性を有する。例えば、いくつかの実施態様では、変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃポリペプチド、変異体イヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチド、又は変異体イヌＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡに結合する。
【００８８】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、改変されたプロテインＡ結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡへの増加した結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、プロテインＡカラムクロマトグラフィーを使用して精製され得る。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、改変されたＣＤ１６結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、ＣＤ１６への減少した結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃは、低下したＡＤＣＣ免疫応答を有し得る。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、改変されたＣ１ｑ結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、Ｃ１ｑへの低下した結合親和性を有する。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、補体固定化を低減させ得る。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃは、低減した補体媒介性免疫応答を有し得る。
【００８９】
「ヒンジ」は、プロリンに富み、少なくとも１つのシステイン残基を含み、重鎖定常領域のＣＨ１とＣＨ２の間に位置する、Ｆｃポリペプチド又は変異体Ｆｃポリペプチドの任意の部分を指す。
【００９０】
いくつかの実施態様では、ヒンジは、同じヒンジ領域内、同じＦｃポリペプチド内で、別個のＦｃポリペプチドのヒンジ領域と、又は別個のＦｃポリペプチドとジスルフィド結合を形成することができる。いくつかの実施態様では、ヒンジは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、又は少なくとも１０個のプロリン残基を含む。
【００９１】
いくつかの実施態様では、変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して、ヒンジ領域などにおいて少なくとも１つの追加の鎖間ジスルフィド結合を有する。いくつかの実施態様では、少なくとも１つの追加の鎖間ジスルフィド結合を有する変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して、増加した鎖間安定性を有する。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドなどの野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して、ヒンジ領域への少なくとも１つのアミノ酸修飾を有する。
【００９２】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、異なるアイソタイプのＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドからのヒンジ領域又はヒンジ領域の一部を含む。いくつかの実施態様では、イヌＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドなどの変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、野生型ネコＩｇＧ１ａ又はＩｇＧ１ｂ  Ｆｃポリペプチドからのヒンジ領域を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、野生型ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドに対して増加した組換え産生及び／又は増加したヒンジジスルフィド形成を有する。いくつかの実施態様では、増加した組換え産生及び／又は増加したヒンジジスルフィド形成は、還元及び／又は非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって決定することができる。
【００９３】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、ａ）配列番号１６２の位置２１、２３、２５、８０、２０５、及び／又は２０７に対応する位置での少なくとも１つのアミノ酸置換；ｂ）配列番号１６３の位置５、３８、３９、９４、９７、及び／又は９８に対応する位置での少なくとも１つのアミノ酸置換；ｃ）配列番号１６５の位置５、２１、２３、２４、３８、３９、９３、９７、及び／又は９８に対応する位置での少なくとも１つのアミノ酸置換；ｄ）配列番号１６７の位置２１、２３、２５、８０、及び／又は２０７に対応する位置での少なくとも１つのアミノ酸置換；ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、又は配列番号２０６の位置１６及び／又は１９８に対応する位置での少なくとも１つのアミノ酸置換；及び／又はｆ）配列番号２０７の位置１４及び／又は１６に対応する位置での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。
【００９４】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、ａ）配列番号１６２の位置２１、２３、２５、８０、２０５、及び／又は２０７での少なくとも１つのアミノ酸置換；ｂ）配列番号１６３の位置５、３８、３９、９４、９７、及び／又は９８での少なくとも１つのアミノ酸置換；ｃ）配列番号１６４の位置５、２１、２３、２４、３８、３９、９３、９７、及び／又は９８での少なくとも１つのアミノ酸置換；ｄ）配列番号１６５の位置２１、２３、２５、８０、及び／又は２０７での少なくとも１つのアミノ酸置換；ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、又は配列番号２０６の位置１６及び／又は１９８での少なくとも１つのアミノ酸置換；及び／又はｆ）配列番号２０７の位置１４及び／又は１６での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。
【００９５】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、
ａ）配列番号１６２の、位置２１に対応する位置におけるスレオニン、位置２３に対応する位置におけるロイシン、位置２５に対応する位置におけるアラニン、位置８０に対応する位置におけるグリシン、位置２０５に対応する位置におけるアラニン、及び／又は位置２０７に対応する位置におけるヒスチジン；
ｂ）配列番号１６３の、位置５に対応する位置におけるプロリン、位置３８に対応する位置におけるグリシン、位置３９に対応する位置におけるアルギニン、位置９３に対応する位置におけるアルギニン、位置９７に対応する位置におけるイソロイシン、及び／又は位置９８に対応する位置におけるグリシン；
ｃ）配列番号１６４の、位置５に対応する位置におけるプロリン、位置２１に対応する位置におけるスレオニン、位置２３に対応する位置におけるロイシン、位置２４に対応する位置におけるイソロイシン、位置３８に対応する位置におけるグリシン、位置３９に対応する位置におけるアルギニン、位置９３に対応する位置におけるアルギニン、位置９７に対応する位置におけるイソロイシン、及び／又は位置９８に対応する位置におけるグリシン；
ｄ）配列番号１６５の、位置２１に対応する位置におけるスレオニン、位置２３に対応する位置におけるロイシン、位置２５に対応する位置におけるアラニン、位置８０に対応する位置におけるグリシン、及び／又は位置２０７に対応する位置におけるヒスチジン；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、又は配列番号２０６の位置１６に対応する位置におけるプロリン及び／又は位置１９８に対応する位置におけるアラニン；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４に対応する位置におけるシステイン、及び／又は配列番号２０７の位置１６に対応する位置におけるプロリン
を含む。
【００９６】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、
ａ）配列番号１６２の、位置２１におけるスレオニン、位置２３におけるロイシン、位置２５におけるアラニン、位置８０におけるグリシン、位置２０５におけるアラニン、及び／又は位置２０７におけるヒスチジン；
ｂ）配列番号１６３の、位置５におけるプロリン、位置３８におけるグリシン、位置３９におけるアルギニン、位置９３におけるアルギニン、位置９７におけるイソロイシン、及び／又は位置９８におけるグリシン；
ｃ）配列番号１６４の、位置５におけるプロリン、位置２１におけるスレオニン、位置２３におけるロイシン、位置２４におけるイソロイシン、位置３８におけるグリシン、位置３９におけるアルギニン、位置９３におけるアルギニン、位置９７におけるイソロイシン、及び／又は位置９８におけるグリシン；
ｄ）配列番号１６５の、位置２１におけるスレオニン、位置２３におけるロイシン、位置２５におけるアラニン、位置８０におけるグリシン、及び／又は位置２０７におけるヒスチジン；
ｅ）配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、又は配列番号２０６の位置１６におけるプロリン及び／又は位置１９８におけるアラニン；及び／又は
ｆ）配列番号２０７の位置１４におけるシステイン、及び／又は位置１６におけるプロリン
を含む。
【００９７】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、又は２１６のアミノ酸配列を含む。
【００９８】
二重特異性抗体は、２つの異なるエピトープ又は標的分子に対する結合特異性を有する。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、同じ標的分子の２つの異なるエピトープに結合する。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片であり得る。
【００９９】
いくつかの実施態様では、抗体は、「ノブ」突然変異を含む第１の変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド及び「ホール」突然変異を含む第２の変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む。非限定的な例示的なノブ及びホールの突然変異は、例えば、Merchant, A. M. et al. An efficient route to human bispecific IgG. Nat Biotechnol, 16(7):677-81 (1998)に記載されている。
【０１００】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、ノブ突然変異を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８；配列番号１６３の位置１３７；配列番号１６５の位置１３７；配列番号１６７の位置１３８；配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、若しくは配列番号２０７の位置１５４；又は配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、若しくは配列番号２５３の位置１３０に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８；配列番号１６３の位置１３７；配列番号１６５の位置１３７；配列番号１６７の位置１３８；配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、若しくは配列番号２０７の位置１５４；又は配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、若しくは配列番号２５３の位置１３０におけるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８；配列番号１６３の位置１３７；配列番号１６５の位置１３７；配列番号１６７の位置１３８；又は配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、若しくは配列番号２０７の位置１５４；又は配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、若しくは配列番号２５３の位置１３０に対応する位置にトリプトファンを含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８；配列番号１６３の位置１３７；配列番号１６５の位置１３７；配列番号１６７の位置１３８；配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、若しくは配列番号２０７の位置１５４；又は配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、若しくは配列番号２５３の位置１３０にトリプトファンを含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１９５、１９６、１９７、１９８、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、又は２６０のアミノ酸配列を含む。
【０１０１】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、ホール突然変異を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８及び／若しくは位置１４０；配列番号１６３の位置１３７及び／若しくは位置１３９；配列番号１６５の位置１３７及び／若しくは位置１３９；配列番号１６７の位置１３８及び／若しくは位置１４０；配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、若しくは配列番号２０７の位置１５４及び／若しくは位置１５６；並びに／又は配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、若しくは配列番号２５３の位置１３０及び／若しくは位置１３２に対応する位置におけるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８及び／若しくは位置１４０；配列番号１６３の位置１３７及び／若しくは位置１３９；配列番号１６５の位置１３７及び／若しくは位置１３９；配列番号１６７の位置１３８及び／若しくは位置１４０；配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、若しくは配列番号２０７の位置１５４及び／若しくは位置１５６；又は配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、若しくは配列番号２５３の位置１３０及び／若しくは位置１３２におけるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８に対応する位置におけるセリン及び／又は位置１４０に対応する位置におけるアラニン；配列番号１６３の位置１３７に対応する位置におけるセリン及び／又は位置１３９に対応する位置におけるアラニン；配列番号１６５の位置１３７に対応する位置におけるセリン及び／又は位置１３９に対応する位置におけるアラニン；配列番号１６７の位置１３８に対応する位置におけるセリン及び／又は位置１４０に対応する位置におけるアラニン；配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、若しくは配列番号２０７の位置１５４に対応する位置におけるセリン及び／又は位置１５６に対応する位置におけるアラニン；又は配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２、若しくは配列番号２５３の位置１３０に対応する位置におけるセリン及び／若しくは位置１３２に対応する位置におけるアラニンを含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１６２の位置１３８におけるセリン及び／又は位置１４０におけるアラニン；配列番号１６３の位置１３７におけるセリン及び／又は位置１３９におけるアラニン；配列番号１６５の位置１３７におけるセリン及び／又は位置１３９におけるアラニン；配列番号１６７の位置１３８におけるセリン及び／又は位置１４０におけるアラニン；配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５、配列番号２０６、若しくは配列番号２０７の位置１５４におけるセリン及び／又は位置１５６におけるアラニン；又は配列番号２４７、配列番号２４８、配列番号２４９、配列番号２５０、配列番��２５１、配列番号２５２、若しくは配列番号２５３の位置１３０におけるセリン及び／若しくは位置１３２におけるアラニンを含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号１９９、２００、２０１、２０２、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、又は２６７のアミノ酸配列を含む。
【０１０２】
さらに、重鎖がその意図された軽鎖と特異的に対になることを容易にするために、ＣＨ１と軽鎖との間の界面アミノ酸を、形状及び電荷−電荷相互作用において相補的になるように、変異させてもよい。
【０１０３】
いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、若しくは配列番号２３７の位置２４及び／若しくは位置３０に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は配列番号２３８の位置２４及び／若しくは位置２９に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＣＨ１領域を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、若しくは配列番号２３７の位置２４及び／若しくは位置３０における少なくとも１つのアミノ酸置換；又は配列番号２３８の位置２４及び／若しくは位置２９における少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＣＨ１領域を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、若しくは配列番号２３７の位置２４に対応する位置におけるロイシン及び／若しくは位置３０に対応する位置におけるアスパラギン；又は配列番号２３８の位置２４に対応する位置におけるロイシン及び／若しくは位置２９に対応する位置におけるアスパラギンを含むＣＨ１領域を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２２７、配列番号２２８、配列番号２２９、配列番号２３０、若しくは配列番号２３７の位置２４におけるロイシン及び／若しくは位置３０におけるアスパラギン；又は配列番号２３８の位置２４におけるロイシン及び／若しくは位置２９におけるアスパラギンを含むＣＨ１領域を含む。いくつかの実施態様では、変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドは、配列番号２３１、２３２、２３３、２３４、２３９、又は２４０のアミノ酸配列を含むＣＨ１領域を含む。
【０１０４】
いくつかの実施態様では、相補的変異体軽鎖定常領域は、配列番号２３５又は配列番号２４１の位置１１及び／又は位置２２に対応する位置における少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、変異体軽鎖定常領域は、配列番号２３５又は配列番号２４１の位置１１及び／又は位置２２における少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、変異体軽鎖定常領域は、配列番号２３５又は配列番号２４１の位置１１に対応する位置にアラニン及び／又は位置２２に対応する位置にアルギニンを含む。いくつかの実施態様では、変異体軽鎖定常領域は、配列番号２３５又は配列番号２４１の位置１１にアラニン及び／又は位置２２にアルギニンを含む。いくつかの実施態様では、変異体軽鎖定常領域は、配列番号２３６又は２４２のアミノ酸配列を含む。
【０１０５】
用語「キメラ抗体」又は「キメラ」は、重鎖又は軽鎖の一部が、特定の供給源又は種に由来し、一方、重鎖又は軽鎖の残りの少なくとも一部が、異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、第１の種（マウス、ラット、カニクイザルなど）からの少なくとも１つの可変領域及び第２の種（ヒト、イヌ、ネコ、ウマなど）からの少なくとも１つの定常領域を含む抗体を指す。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域及び少なくとも１つのイヌ定常領域を含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域及び少なくとも１つのネコ定常領域を含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体の全ての可変領域は、第１の種に由来し、キメラ抗体の全ての定常領域は、第２の種に由来する。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、コンパニオンアニマルからの定常重鎖領域又は定常軽鎖領域を含む。いくつかの実施態様では、キメラ抗体は、マウス可変重鎖及び軽鎖、並びにコンパニオンアニマル定常重鎖及び軽鎖を含む。例えば、キメラ抗体は、マウス可変重鎖及び軽鎖、並びにイヌ定常重鎖及び軽鎖を含み得；キメラ抗体は、マウス可変重鎖及び軽鎖、並びにネコ定常重鎖及び軽鎖を含み得；又はキメラ抗体は、マウス可変重鎖及び軽鎖、並びにウマ定常重鎖及び軽鎖を含み得る。
【０１０６】
「イヌキメラ」又は「イヌキメラ抗体」は、イヌに由来する重鎖の少なくとも一部又は軽鎖の少なくとも一部を有するキメラ抗体を指す。「ネコキメラ」又は「ネコキメラ抗体」は、ネコに由来する重鎖の少なくとも一部又は軽鎖の少なくとも一部を有するキメラ抗体を指す。いくつかの実施態様では、イヌキメラ抗体は、マウス可変重鎖及び軽鎖、並びにイヌ定常重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施態様では、ネコキメラ抗体は、マウス可変重鎖及び軽鎖、並びにネコ定常重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、マウス可変重鎖フレームワーク領域又はマウス可変軽鎖フレームワーク領域を含むキメラ抗体である。
【０１０７】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、（ｉ）配列番号５１又は配列番号５５の重鎖アミノ酸配列；（ｉｉ）配列番号５２又は配列番号５６の軽鎖アミノ酸配列；又は（ｉｉｉ）（ｉ）のような重鎖アミノ酸配列及び（ｉｉ）のような軽鎖配列を含むキメラ抗体を含む。
【０１０８】
本明細書で使用される「イヌ抗体」は、イヌにおいて産生された抗体；イヌ免疫グロブリン遺伝子を含む、又はイヌ免疫グロブリンペプチドを含む、非イヌ動物において産生された抗体；又は抗体レパートリーがイヌ免疫グロブリン配列に基づく、ファージディスプレイなどのインビトロ法を使用して選択された抗体を包含する。用語「イヌ抗体」は、イヌ配列である配列の属を意味する。したがって、この用語は、抗体が作成されたプロセスを指定するのではなく、関連する配列の属を指定する。
【０１０９】
「イヌ化抗体」とは、非イヌ可変領域の一部の少なくとも１つのアミノ酸が、イヌ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている抗体を意味する。いくつかの実施態様では、イヌ化抗体は、少なくとも１つのイヌ定常領域（例えば、γ定常領域、α定常領域、δ定常領域、ε定常領域、μ定常領域など）又はその断片を含む。いくつかの実施態様では、イヌ化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などの抗体断片である。用語「イヌ化」はまた、非イヌ免疫グロブリンの最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は抗体の他の抗原結合配列など）である非イヌ（例えば、マウス）抗体の形態を意味する。イヌ化抗体には、レシピエントのＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非イヌ種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換されているイヌ免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含めることができる。いくつかの例では、イヌ免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非イヌ残基によって置換されている。さらに、イヌ化抗体は、レシピエント抗体においても、移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列においても見出されないが、抗体の性能をさらに向上させ、最適化するために含まれる残基を含むことができる。
【０１１０】
いくつかの実施態様では、マウス可変重鎖又はマウス可変軽鎖の一部における少なくとも１つのアミノ酸残基は、イヌ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている。いくつかの実施態様では、修飾された鎖は、イヌ定常重鎖又はイヌ定常軽鎖に融合される。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号５９、６０、６３若しくは６４の可変重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号６１、６２、６５若しくは６６の可変軽鎖アミノ酸配列を含むイヌ化抗体である。
【０１１１】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ＩｇＧ−Ａ、ＩｇＧ−Ｂ、ＩｇＧ−Ｃ、及びＩｇＧ−Ｄ定常領域から選択されるイヌ重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、本明細書に記載されるように、野生型又は変異体イヌＩｇＧ−Ａ、ＩｇＧ−Ｂ、ＩｇＧ−Ｃ、又はＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むイヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃポリペプチド；配列番号１６３又は１６４のアミノ酸配列を含むイヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃポリペプチド；（ｃ）配列番号１６５又は１６６のアミノ酸配列を含むイヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチド；又は（ｄ）配列番号１６７のアミノ酸配列を含むイヌＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号１６８、１６９、１９５、又は１９９のアミノ酸配列を含む変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃポリペプチド；配列番号１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１９６、又は２００のアミノ酸配列を含む変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃポリペプチド；（ｃ）配列番号１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９７、又は２０１のアミノ酸配列を含む変異体イヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチド；又は（ｄ）配列番号１９４、１９８、又は２０２のアミノ酸配列を含む変異体イヌＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチドを含む。
【０１１２】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、イヌκ軽鎖定常領域などのイヌ軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、野生型イヌκ軽鎖定常領域（例えば、配列番号２３５）又は変異体イヌκ軽鎖定常領域（例えば、配列番号２３６）を含む。
【０１１３】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、クローンＢ、クローンＩ、Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、又はＭ９のイヌ化可変重鎖、及び配列番号７１、７２、７５、７６、２７６、３４８、３４９、３５１、又は３５２などの変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、クローンＢ、クローンＩ、Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、又はＭ９のイヌ化可変軽鎖、及び配列番号７３、７４、７７、７８、２７７、３５０、又は３５２などの野生型イヌκ軽鎖定常領域を含む。
【０１１４】
本明細書で使用される「ネコ抗体」は、ネコにおいて産生された抗体；ネコ免疫グロブリン遺伝子を含む、又はネコ免疫グロブリンペプチドを含む、非ネコ動物において産生された抗体；又は抗体レパートリーがネコ免疫グロブリン配列に基づく、ファージディスプレイなどのインビトロ法を使用して選択された抗体を包含する。用語「ネコ抗体」は、ネコ配列である配列の属を意味する。したがって、この用語は、抗体が作成されたプロセスを指定するのではなく、関連する配列の属を指定する。
【０１１５】
「ネコ化抗体」とは、非ネコ可変領域の一部の少なくとも１つのアミノ酸が、ネコ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている抗体を意味する。いくつかの実施態様では、ネコ化抗体は、少なくとも１つのネコ定常領域（例えば、γ定常領域、α定常領域、δ定常領域、ε定常領域、μ定常領域など）又はその断片を含む。いくつかの実施態様では、ネコ化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などの抗体断片である。用語「ネコ化」はまた、非ネコ免疫グロブリンの最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２又は抗体の他の抗原結合配列など）である非ネコ（例えば、マウス）抗体の形態を意味する。ネコ化抗体には、レシピエントのＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非ネコ種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換されているネコ免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含めることができる。いくつかの例では、ネコ免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ネコ残基によって置換されている。さらに、ネコ化抗体は、レシピエント抗体においても、移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列においても見出されないが、抗体の性能をさらに向上させ、最適化するために含まれる残基を含むことができる。
【０１１６】
いくつかの実施態様では、マウス可変重鎖又はマウス可変軽鎖の一部における少なくとも１つのアミノ酸残基は、ネコ可変領域からの対応するアミノ酸で置換されている。いくつかの実施態様では、修飾された鎖は、ネコ定常重鎖又はネコ定常軽鎖に融合される。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号６７若しくは６９の可変重鎖アミノ酸配列及び／又は配列番号６８若しくは７０の可変軽鎖アミノ酸配列を含むネコ化抗体である。
【０１１７】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ、及びＩｇＧ２定常領域から選択されるネコ重鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、本明細書に記載されるように、野生型又は変異体ネコＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ、又はＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号２０３又は２０４のアミノ酸配列を含むネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃポリペプチド；配列番号２０５又は２０６のアミノ酸配列を含むネコＩｇＧ１ｂ  Ｆｃポリペプチド；又は（ｃ）配列番号２０７のアミノ酸配列を含むネコＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、配列番号２０８、２０９、２１０、２１７、２１８、２２２、又は２２３のアミノ酸配列を含む変異体ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃポリペプチド；配列番号２１１、２１２、２１３、２１９、２２０、２２４、又は２２５のアミノ酸配列を含む変異体ネコＩｇＧ１ｂ  Ｆｃポリペプチド；又は（ｃ）配列番号２１４、２１５、２１６、２２１、又は２２６のアミノ酸配列を含む変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドを含む。
【０１１８】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ネコκ軽鎖定常領域などのネコ軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、野生型ネコκ軽鎖定常領域（例えば、配列番号２４１）又は変異体ネコκ軽鎖定常領域（例えば、配列番号２４２）を含む。
【０１１９】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、クローンＢ又はクローンＩのネコ化可変重鎖、及び配列番号７９、８０、８２、又は８３などの変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを含む。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、クローンＢ又はクローンＩのネコ化可変軽鎖、及び配列番号８１又は８４などのネコκ軽鎖定常領域を含む。
【０１２０】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、ＩＬ４Ｒと、ＩＬ１７、ＩＬ３１、ＴＮＦα、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ２３、ＩｇＥ、ＣＤ１１α、ＩＬ６Ｒ、α４−インテグリン（α４−Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ）、ＩＬ１２、ＩＬ１β、ＢｌｙＳなどの異なる標的分子とに対する結合特異性を有する二重特異性抗体である。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、イヌ化又はネコ化クローンＢ又はクローンＩ可変重鎖と、変異体κ定常領域と対になることができる「ノブ」変異体イヌ又はネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドとを含む（例えば、配列番号２４３）。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、異なる標的分子（例えば、イヌ又はネコＩＬ３１）に向けられた可変重鎖と、「ホール」変異体イヌ又はネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドとを含む（例えば、配列番号２４５）。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、イヌ化又はネコ化クローンＢ又はクローンＩ可変軽鎖と、ノブＦｃポリペプチドと対になることができる可変κ定常領域とを含む（例えば、配列番号２４４）。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、異なる標的分子（例えば、イヌ又はネコＩＬ３１）に向けられた可変軽鎖と、ホールＦｃポリペプチドと対になることができる野生型κ定常領域とを含む（例えば、配列番号２４６）。
【０１２１】
他の二重特異性抗体配列を調製することができる。例えば、いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、イヌ化又はネコ化クローンＢ又はクローンＩ可変重鎖と、変異体κ定常領域と対になることができる「ホール」変異体イヌ又はネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドとを含む。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、異なる標的分子（例えば、イヌ又はネコＩＬ３１）に向けられた可変重鎖と、「ノブ」変異体イヌ又はネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドとを含む。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、イヌ化又はネコ化クローンＢ又はクローンＩ可変軽鎖と、ホールＦｃポリペプチドと対になることができる可変κ定常領域とを含む。いくつかの実施態様では、二重特異性抗体は、異なる標的分子（例えば、イヌ又はネコＩＬ３１）に向けられた可変軽鎖と、ノブＦｃポリペプチドと対になることができる野生型κ定常領域とを含む。
【０１２２】
用語「親和性」は、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の総和の強度を意味する。通常、分子ＸのそのパートナーＹへの親和性は、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、例えば、免疫ブロット、ＥＬＩＳＡ  ＫＤ、ＫｉｎＥｘ  Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、又は表面プラズモン共鳴装置などの当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。
【０１２３】
用語「ＫＤ」、「Ｋｄ」、「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」は、抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すために交換可能に使用される。いくつかの実施態様では、抗体のＫｄは、オクテット（登録商標）システム（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＬＬＣ、カリフォルニア州フレモント）などのバイオセンサーを供給業者の指示書に従って使用するバイオレイヤー干渉法を使用することによって測定される。簡潔には、ビオチン化抗原をセンサーチップに結合させ、抗体の会合を９０秒間モニターし、解離を６００秒間モニターする。希釈及び結合ステップ用のバッファーは、２０ｍＭリン酸、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．２である。ドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線を差し引く。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏデータ解析ソフトウェアを使用して２：１の結合モデルにフィッティングさせ、会合速度定数（ｋｏｎ）、解離速度定数（ｋｏｆｆ）及びＫｄを決定する。平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。用語「ｋｏｎ」は、抗体の抗原への会合の速度定数を指し、用語「ｋｏｆｆ」は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数を指す。
【０１２４】
抗原又はエピトープに「結合する」という用語は、当技術分野でよく理解されている用語であり、そのような結合を決定する方法も当技術分野でよく知られている。分子は、それが特定の細胞又は物質と反応するか、会合するか、又は親和性を有し、反応、会合、又は親和性が、例えば免疫ブロット、ＥＬＩＳＡ  ＫＤ、ＫｉｎＥｘ  Ａ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、表面プラズモン共鳴装置などの当技術分野で知られている１つ又は複数の方法によって検出可能である場合、「結合」を示すといわれる。
【０１２５】
「表面プラズモン共鳴」とは、例えばＢＩＡｃｏｒｅＴＭ（ニュージャージー州ピスカタウェイのＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社傘下のＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（スウェーデン、ウプサラ））を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することにより、リアルタイムの生体分子特異的相互作用の分析を可能にする光学現象を意味する。さらなる説明については、Jonsson et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51: 19-26を参照。
【０１２６】
「バイオレイヤー干渉法」とは、バイオセンサーチップ上の固定化タンパク質のレイヤーと内部リファレンスレイヤーから反射された光の干渉パターンを分析する光学分析技術を指す。バイオセンサーチップに結合した分子の数の変化は、リアルタイムで測定できる干渉パターンの変化を引き起こす。バイオレイヤー干渉法のための非限定的で例示的な装置は、オクテット（登録商標）システム（Ｐａｌｌ  ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＬＬＣ）である。例えば、Abdiche et al., 2008, Anal. Biochem. 377: 209-277を参照。
【０１２７】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、バイオレイヤー干渉法によって測定されるように、５ｘ１０−６Ｍ未満、１ｘ１０−６Ｍ未満、５ｘ１０−７Ｍ未満、１ｘ１０−７Ｍ未満、５ｘ１０−８Ｍ未満、１ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、５ｘ１０−１１Ｍ未満、１ｘ１０−１１Ｍ未満、５ｘ１０−１２Ｍ未満、又は１ｘ１０−１２Ｍ未満の解離定数（Ｋｄ）でイヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、バイオレイヤー干渉法で測定されるように、５ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−６Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−７Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−７Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−８Ｍ，５ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−８Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−９Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−９Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−７Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−７Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−８Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−８Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−９Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−９Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−１０Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−６Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−７Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−８Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−８Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−９Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−９Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−８Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−８Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−９Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−９Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−１０Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−７Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−８Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと５ｘ１０−９Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−９Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと５ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−８Ｍと５ｘ１０−９Ｍの間、１ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−９Ｍの間、１ｘ１０−８Ｍと５ｘ１０−１０Ｍの間、１ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、１ｘ１０−８Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−８Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−８Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−９Ｍと１ｘ１０−９Ｍの間、５ｘ１０−９Ｍと５ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−９Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−９Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、５ｘ１０−９Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、５ｘ１０−９Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−９Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−９Ｍと５ｘ１０−１０Ｍの間、１ｘ１０−９Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、１ｘ１０−９Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−９Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−９Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−９Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−１０Ｍと１ｘ１０−１０Ｍの間、５ｘ１０−１０Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−１０Ｍと５ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−１０Ｍと１ｘ１０−１１Ｍの間、１ｘ１０−１０Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−１０Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−１１Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−１１Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、５ｘ１０−１１Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間、１ｘ１０−１１Ｍと５ｘ１０−１２Ｍの間、又は１ｘ１０−１１Ｍと１ｘ１０−１２Ｍの間のＫｄ値でイヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、免疫ブロット分析によって決定されるように、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒに結合する。
【０１２８】
いくつかの実施態様では、ＩＬ４Ｒへの結合について本明細書に記載の抗ＩＬ４Ｒ抗体（クローンＢ又はクローンＩなど）と競合する抗ＩＬ４Ｒ抗体が提供される。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗体のいずれかとの結合と競合する抗体を作製又は使用することができる。いくつかの実施態様では、イヌＩＬ４Ｒ又はネコＩＬ４Ｒへの結合においてモノクローナルクローンＢ又はクローンＩ抗体と競合する抗ＩＬ４Ｒ抗体が提供される。
【０１２９】
用語「ベクター」は、クローン化ポリヌクレオチド又は宿主細胞内で増殖することができるポリヌクレオチドを含むように操作することができるポリヌクレオチドを記述するために使用される。ベクターは、以下の要素のうちの１つ以上を含むことができる：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つ又は複数の調節配列（例えば、プロモーター又はエンハンサーなど）、あるいは１つ又は複数の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子及び比色分析において使用され得る遺伝子、例えば、β−ガラクトシダーゼなど）。用語「発現ベクター」は、宿主細胞において目的のポリペプチドを発現するために使用されるベクターを指す。
【０１３０】
「宿主細胞」は、ベクター又は単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得るか、又はレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞でも真核細胞でもよい。例示的な真核細胞には、例えば霊長類又は非霊長類動物細胞などの哺乳動物細胞；酵母などの真菌細胞；植物細胞；及び昆虫細胞が含まれる。非限定的且つ例示的な哺乳動物細胞には、限定されるものではないが、ＮＳ０細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）、２９３細胞及びＣＨＯ細胞、並びにこれらの誘導体、例えば２９３−６Ｅ、ＤＧ４４、ＣＨＯ−Ｓ及びＣＨＯ−Ｋ細胞が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれ、自然、偶発的又は意図的な突然変異により、子孫は元の親と（形態又はゲノムＤＮＡ相補体が）必ずしも完全に同じではない。宿主細胞には、本明細書で提供されるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドをインビボでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【０１３１】
本明細書で使用される用語「単離された」とは、天然で通常見出されるか又は生成される成分の少なくともいくつかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」という。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、ポリペプチドを含む上清を、それを産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離すること」と見なされる。同様に、ポリヌクレオチドが、天然で通常見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡなど）の一部ではない場合、又は、例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合、それが産生された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されている場合、「単離された」という。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離された」といわれる場合がある。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、プロテインＡカラムクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、及びＣＨＴクロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを使用して精製される。
【０１３２】
「コンパニオンアニマル種」という用語は、人間のコンパニオンになるのに適した動物を指す。いくつかの実施態様では、コンパニオンアニマル種は、イヌ、ネコ、又はウマである。いくつかの実施態様では、コンパニオンアニマル種は、イヌ、ネコ、ウサギ、フェレット、モルモット、齧歯動物等の小型哺乳類である。いくつかの実施態様では、コンパニオンアニマル種は、ウマ、ウシ、ブタ等の家畜である。
【０１３３】
「低減させる（ｒｅｄｕｃｅ）」又は「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」ことは、参照と比較して、活性、機能又は量を減少させる、低減させる又は抑制することを意味する。いくつかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、２０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、５０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、「低減させる」又は「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％又はそれ以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。いくつかの実施態様では、上記の量は、ある期間にわたる対照用量（プラセボなど）に対して、同じ期間にわたって抑制又は低減される。本明細書で使用される「参照」とは、比較目的のために使用される任意の試料、標準、又はレベルを指す。参照は、健常又は非罹患試料から得ることができる。いくつかの例では、参照は、コンパニオンアニマルの非罹患又は無処置試料から得られる。いくつかの例では、参照は、特定の種の１つ又は複数の健常動物から得られ、それらは、試験又は治療されている動物ではない。
【０１３４】
本明細書で使用される用語「実質的に減少した」とは、当業者が、２つの値の間の差が、前記値によって測定される生物学的特性との関連において統計的に有意であると見なすような、数値と参照数値との間の十分に大きな減少を意味する。いくつかの実施態様では、実質的に減少した数値は、参照値と比較して、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％のいずれか１つよりも大きく減少する。
【０１３５】
用語「薬学的製剤」及び「薬学的組成物」は、有効成分の生物活性を効果的にするような形態であり、製剤が投与される対象にとって許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
【０１３６】
「薬学的に許容される担体」とは、対象への投与用の、「薬学的組成物」をともに含む治療剤とともに使用するための、当技術分野で一般的な無毒の固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、処方助剤又は担体を指す。薬学的に許容される担体は、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、製剤の他の成分と適合性がある。薬学的に許容される担体は、用いられる製剤に適している。薬学的に許容される担体の例には、アルミナ；ステアリン酸アルミニウム；レシチン；ヒト血清アルブミン、イヌ又は他の動物アルブミンなどの血清タンパク質；リン酸、クエン酸、トロメタミン又はＨＥＰＥＳバッファー等のバッファー；グリシン；ソルビン酸；ソルビン酸カリウム；飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物；水；塩又は電解質、例えばプロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ又は三ケイ酸マグネシウム；ポリビニルピロリドン、セルロース系物質；ポリエチレングリコール；スクロース；マンニトール；又はアルギニンを含むがこれに限定されないアミノ酸が含まれる。
【０１３７】
薬学的組成物は、凍結乾燥形態で保存することができる。したがって、いくつかの実施態様では、この調製方法には凍結乾燥工程が含まれる。その後、凍結乾燥組成物は、イヌ、ネコ又はウマへの投与前に、通常は非経口投与に適した水性組成物として再調製され得る。他の実施態様では、特に、抗体が熱変性及び酸化変性に対して非常に安定している場合、薬学的組成物は、イヌ、ネコ又はウマへ直接投与できるか又は適切な希釈で投与できる液体として、すなわち水性組成物として保存することができる。凍結乾燥組成物は、滅菌注射用水（ＷＦＩ）で再構成することができる。ベンジルアルコールなどの静菌剤が含まれてもよい。したがって、本発明は、固体又は液体形態の薬学的組成物を提供する。
【０１３８】
薬学的組成物のｐＨは、投与時で約ｐＨ５から約ｐＨ８までの範囲であり得る。本発明の組成物は、治療目的で使用される場合、無菌である。無菌状態は、滅菌濾過膜（例えば、０．２ミクロン膜）による濾過を含む、当技術分野で公知のいくつかの手段のいずれによっても得ることができる。無菌状態は、抗菌剤の有無にかかわらず維持され得る。
【０１３９】
本発明の抗体又は抗体を含む薬学的組成物は、ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態を治療するために有用であり得る。本明細書で使用される場合、「ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態」は、ＩＬ４／ＩＬ１３濃度の上昇したレベル又は変化した勾配に関連する、それらによって引き起こされる、又はそれらによって特徴づけられる疾患を意味する。そのようなＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態には、そう痒性又はアレルギー性疾患が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施態様では、ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態は、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、そう痒症、喘息、乾癬、強皮症、又は湿疹である。ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態は、イヌ又はネコを含むがこれらに限定されないコンパニオンアニマルにおいて示され得る。
【０１４０】
本明細書で使用される場合、「治療」は、有益な又は所望の臨床結果を得るための手法である。本明細書で使用される「治療」は、コンパニオンアニマルを含む哺乳動物における疾患の治療薬の投与又は適用を包含する。本開示の目的のために、有益な又は所望の臨床結果には、１つ又は複数の症状の緩和、疾患の程度の軽減、疾患の伝播の予防又は遅延、疾患の再発の予防又は遅延、疾患の進行の遅延又は減速、病状の改善、疾患又は疾患の進行の抑制、疾患又はその進行の抑制又は減速、その発生の阻止、及び（部分又は完全）寛解のいずれか１つ又は複数を含むがこれらに限定されない。「治療」には、増殖性疾患の病理学的結果の低減も含まれる。本明細書で提供される方法は、治療のこれらの態様のいずれか１つ又は複数を企図している。上記のとおり、治療という用語は、障害の全ての側面の百パーセントの除去を必要としない。
【０１４１】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む薬学的組成物は、ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態を治療するために、本明細書の方法に従って利用することができる。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む薬学的組成物は、ＩＬ４／ＩＬ１３誘導性状態を治療するために、イヌ又はネコなどのコンパニオンアニマルに投与される。
【０１４２】
物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの「治療的有効量」は、治療する疾患の種類、病状、疾患の重症度及び経過、治療目的の種類、以前の治療、病歴、以前の治療に対する応答、担当獣医の裁量、動物の年齢、性別及び体重、並びに物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの動物における望ましい応答を誘発する能力等の要因によって異なる。また、治療的有効量とは、物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの毒性又は有害作用よりも治療的に有益な作用が上回る量である。治療的有効量は、１つ又は複数の投与において送達され得る。治療的有効量は、必要な用量及び期間で所望の治療的又は予防的結果を得るのに有効な量を指す。
【０１４３】
いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む薬学的組成物は、皮下投与、静脈内注入、又は筋肉内注射によって非経口的に投与される。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む薬学的組成物は、ボーラス注射として、又は一定期間にわたる持続注入によって投与される。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む薬学的組成物は、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、動脈内、滑液嚢内、髄腔内、又は吸入経路によって投与される。
【０１４４】
本明細書に記載の抗ＩＬ４Ｒ抗体は、用量あたり０．１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、用量あたり０．５ｍｇ／ｋｇ体重から５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、用量あたり１ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、０．５ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１０ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、２０ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５０ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、１ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、５ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、０．５ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲、又は５ｍｇ／ｋｇ体重から５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与され得る。
【０１４５】
抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む薬学的組成物は、一度に又は一連の治療にわたってコンパニオンアニマルに投与することができる。例えば、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む薬学的組成物は、少なくとも１回、複数回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、又は少なくとも５回投与され得る。
【０１４６】
いくつかの実施態様では、用量は、少なくとも２週間又は３週間連続して週に１回投与され、いくつかの実施態様では、この治療サイクルは、２回以上繰り返され、任意選択で、１週間以上の無治療が組み入れられる。他の実施態様では、治療的有効量は、２から５日間連続して１日１回投与され、いくつかの実施態様では、この治療サイクルは、２回以上繰り返され、任意選択で、１日以上又は数週間の無治療が組み入れられる。
【０１４７】
１種以上のさらなる治療剤「と組み合わせた」投与には、同時（同時発生の）及び任意の順序での連続的又は逐次的な投与が含まれる。用語「同時に」とは、本明細書では、投与の少なくとも一部が時間的に重複するか又は一方の治療剤の投与が他方の治療剤の投与と比較して短期間内にある、２種以上の治療剤の投与を指すのに使用される。例えば、２種以上の治療剤は、およそ指定された分数以下の時間間隔で投与される。用語「逐次的に」とは、本明細書では、１種以上の薬剤の投与が１種以上の他の薬剤の投与の中止後にも継続するか、又は１種以上の薬剤の投与が１種以上の他の薬剤の投与の前に開始される、２種以上の治療剤の投与を指すのに使用される。例えば、２種以上の治療剤の投与は、指定された分数位以上の時間間隔で投与される。本明細書において使用される場合、「〜と組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」とは、一つの治療様式に別の治療様式を加えた投与を指す。すなわち、「〜と組み合わせて（ｉｎ  ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ）」は、動物に対し、他の治療様式の投与前、投与中又は投与後の、一つの治療様式の投与を指す。
【０１４８】
いくつかの実施態様では、本方法は、抗ＩＬ４Ｒ抗体と、又は抗ＩＬ４Ｒ抗体、Ｊａｋ阻害剤、Ｔｙｋ２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤を含む薬学的組成物と組み合わせて投与することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、抗ＩＬ４Ｒ抗体と、又は抗ＩＬ４Ｒ抗体、抗ＩＬ３１抗体、抗ＩＬ１７抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＤ２５抗体、抗ＩＬ４抗体、抗ＩＬ１３抗体、抗ＩＬ２３抗体、抗ＩｇＥ抗体、抗ＣＤ１１α抗体、抗ＩＬ６Ｒ抗体、抗α４−インテグリン抗体（ａｎｔｉ−α４−Ｉｎｔｅｒｇｒｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗ＩＬ１２抗体、抗ＩＬ１β抗体、若しくは抗ＢｌｙＳ抗体を含む薬学的組成物と組み合わせて投与することを含む。
【０１４９】
本明細書で提供されるのは、抗体のＩＬ４Ｒへの結合を許容する条件下で、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む薬学的組成物を細胞に曝露する方法である。いくつかの実施態様では、細胞は、イヌ細胞、ネコ細胞、又はウマ細胞である。いくつかの実施態様では、細胞は、イヌＤＨ８２細胞である。いくつかの実施態様では、細胞はエクスビボで抗体又は薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施態様では、細胞はインビボで抗体又は薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施態様では、細胞は抗ＩＬ−４抗体に曝露される。いくつかの実施態様では、細胞は、細胞外ＩＬ４Ｒへの抗体の結合を許容する条件下で、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は薬学的組成物に曝露される。いくつかの実施態様では、細胞は、対象への腹腔内、筋肉内、静脈内注射を含むがこれらに限定されない、本明細書に記載の投与方法のいずれか１つ又は複数によって、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は薬学的組成物にインビボで曝露され得る。いくつかの実施態様では、細胞は、抗体又は薬学的組成物を含む培養培地に細胞を曝露することによって、抗ＩＬ４Ｒ抗体又は薬学的組成物にエクスビボで曝露され得る。いくつかの実施態様では、抗体又は薬学的組成物を含む培地に細胞を曝露する前に、細胞膜の透過性は、当業者によって理解される任意の数の方法（細胞を電気穿孔すること又は細胞を塩化カルシウムを含む溶液の曝露することなど）の使用によって影響を受け得る。
【０１５０】
本明細書で提供されるのは、ＩＬ４Ｒ誘導性状態の検出、診断及びモニタリングのために抗ＩＬ４Ｒ抗体、ポリペプチド及びポリヌクレオチドを使用する方法である。本明細書で提供されるのは、コンパニオンアニマルが抗ＩＬ４Ｒ抗体療法に応答するかどうかを決定する方法である。いくつかの実施態様では、本方法は、抗ＩＬ４Ｒ抗体を使用して、動物がＩＬ４Ｒを発現する細胞を有するかどうかを検出することを含む。いくつかの実施態様では、検出の方法は、試料を抗体、ポリペプチド、又はポリヌクレオチドと接触させ、結合のレベルが参照又は比較試料（対照など）のレベルと異なるかどうかを決定することを含む。いくつかの実施態様では、本方法は、本明細書に記載の抗体又はポリペプチドが対象動物に対して適切な治療であるかどうかを決定するために有用であり得る。
【０１５１】
いくつかの実施態様では、試料は生物学的試料である。用語「生物学的試料」は、生物又は以前に生物であったものからの物質の量を意味する。いくつかの実施態様では、生物学的試料は、細胞又は細胞／組織溶解物である。いくつかの実施態様では、生物学的試料は、限定されるものではないが、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、滑液、及び上皮細胞を含む。
【０１５２】
いくつかの実施態様では、細胞又は細胞／組織溶解物を抗ＩＬ４Ｒ抗体と接触させ、抗体と細胞との間の結合が決定される。試験細胞が同じ組織型の参照細胞と比較して結合活性を示す場合、それは、対象が抗ＩＬ４Ｒ抗体による治療から利益を得るであろうことを示し得る。いくつかの実施態様では、試験細胞は、コンパニオンアニマルの組織に由来する。
【０１５３】
特異的抗体−抗原結合を検出するための当技術分野で知られている様々な方法を使用することができる。実施することができる例示的な免疫測定法には、蛍光偏光免疫測定法（ＦＰＩＡ）、蛍光蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、比濁阻害免疫測定法（ＮＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、及び放射性免疫測定法（ＲＩＡ）が含まれる。指標部分又は標識基は、対照抗体に結合させることができ、アッセイ装置及び適合性のある免疫測定法手順の利用可能性によってしばしば決定される方法の様々な使用の必要性を満たすように選択される。適切な標識には、限定されるものではないが、放射性核種（例えば、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、又は３２Ｐ）、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、又はβ−ガラクトシダーゼ）、蛍光部分又はタンパク質（例えば、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン、ＧＦＰ、又はＢＦＰ）、又は発光部分（例えば、カリフォルニア州パロアルトのＱｕａｎｔｕｍ  Ｄｏｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって供給されたＱｄｏｔＴＭナノ粒子）が含まれる。上記の様々な免疫測定法を実施する際に使用される一般的な技術は、当業者に知られている。
【０１５４】
診断の目的のために、抗体を含むポリペプチドは、放射性同位元素、蛍光標識、及び当技術分野で知られている様々な酵素基質標識を含むがこれらに限定されない検出可能な部分で標識することができる。標識を抗体にコンジュゲートさせる方法は、当技術分野で知られている。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は標識される必要はなく、その存在は第１の抗ＩＬ４Ｒ抗体に結合する第２の標識抗体を使用して検出することができる。いくつかの実施態様では、抗ＩＬ４Ｒ抗体は、競合的結合アッセイ、直接及び間接サンドイッチアッセイ、及び免疫沈降アッセイなどの任意の公知のアッセイ方法において使用することができる。Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)。抗ＩＬ４Ｒ抗体及びポリペプチドは、インビボイメージングなどのインビボ診断アッセイのために使用することもできる。一般に、抗体又はポリペプチドは、免疫シンチグラフィー（ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｏｇｒａｐｈｙ）を使用して目的の細胞又は組織が局在化され得るように、放射性核種（１１１Ｉｎ、９９Ｔｃ、１４Ｃ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、３Ｈ、又は本明細書に概説されているものを含む他の任意の放射性核種標識など）で標識される。抗体はまた、当技術分野で周知の技術を使用して、病理学における染色試薬として使用することもできる。
【０１５５】
いくつかの実施態様では、一次抗体は診断のために使用され、二次抗体は治療薬として使用される。いくつかの実施態様では、第１及び第２の抗体は異なる。いくつかの実施態様では、第１及び第２の抗体は、別個のエピトープに結合することによって、両方とも同時に抗原に結合することができる。
【０１５６】
本明細書で提供されるのは、イヌＤＨ８２細胞に分子を曝露し、ＳＴＡＴ６リン酸化の低減があるかどうかを検出することを含む、ＩＬ４及び／又はＩＬ１３シグナル伝達機能を阻害する分子をスクリーニングするための方法である。いくつかの実施態様では、分子は、抗ＩＬ４Ｒ抗体又はＩＬ４Ｒの小分子アンタゴニストを含む。いくつかの実施態様では、分子は、抗ＩＬ４Ｒ抗体又はＩＬ１３Ｒの小分子アンタゴニストを含む。いくつかの実施態様では、分子は、抗ＩＬ４Ｒ抗体又はＩＬ４の小分子アンタゴニストを含む。いくつかの実施態様では、分子は、抗ＩＬ４Ｒ抗体又はＩＬ１３の小分子アンタゴニストを含む。
【０１５７】
以下の例は、本開示の特定の態様を説明するものであり、本開示を限定することを意図したものではない。
【実施例】
【０１５８】
実施例１
ＩＬ４及びＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ試薬の調製
（１）全長イヌＩＬ４Ｒ（配列番号９４）、イヌ、ネコ、ウマ、マウス、若しくはヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９、１００、１０１、１０２、又は１０３）、又はイヌ、ネコ、若しくはウマＩＬ４（配列番号１２１、１２２、又は１２３）、（２）１つ若しくは複数のＨｉｓ６、ヒトＦｃ、及び／又はＦＬＡＧタグ、（３）１つ又は複数のリンカー配列、並びに（４）リーダー配列、を含む融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列が合成され、別々の哺乳動物発現プラスミドにクローニングされた。プラスミドを別々に２９３細胞にトランスフェクトし、培養し、分泌されたＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ又はＩＬ４融合ポリペプチドを含む上清を別々に収集して濾過した。ｐｏｌｙ−Ｈｉｓ融合タンパク質はＮｉ−ＮＴＡカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してアフィニティー精製し、ヒトＦｃ融合タンパク質はＣａｐｔｉｖＡ（登録商標）プロテインＡアフィニティーレジン（Ｒｅｐｌｉｇｅｎ）を使用してアフィニティー精製した。精製された融合タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって確認された（データ非表示）。融合タンパク質（処理の前と後）は以下の表３にまとめられる。
【０１５９】
2022500037.tif 000047
【０１６０】
実施例２
イヌＩＬ４Ｒに結合するマウスモノクローナル抗体の同定
マウスモノクローナル抗体は、精製したイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１０７）を免疫原として用いた標準的な免疫化の後に同定された。免疫化の間に異なるアジュバントが使用され（Ａｋｅｓｏｂｉｏ，Ｉｎｃ，Ｃｈｉｎａ）、モノクローナル抗体は標準的なハイブリドーマ技術によって得られた。
【０１６１】
ＩＬ４Ｒ結合抗体を産生するクローンをスクリーニングするために、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を開発した。最初に、ビオチン化ＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１０７）をストレプトアビジンでコーティングしたウェルに導入した。次いで、免疫化した血清をウェルに加え、洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート抗マウス抗体で検出した。イヌＩＬ４Ｒ結合抗体の存在は、陽性シグナルを発生させた。１２１を超えるＥＬＩＳＡ陽性のトップクローンが同定された。
【０１６２】
１２１種の抗体クローンを、ＥＬＩＳＡによってイヌＩＬ４とイヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤとの間の相互作用をブロックする能力についてスクリーニングした。イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１０９）を、抗ヒトＦｃでコーティングされたウェルに固定化した。ハイブリドーマ上清を加え、続いてビオチン化イヌＩＬ４＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１２７）、次いでストレプトアビジン−ＨＲＰを加えた。シグナルの減少は、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤとイヌＩＬ４の間の相互作用の低減を示唆した。１１種のクローンが同定され、クローンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、及びＫとして指定された。クローンのそれぞれをさらに培養し、生成されたＩｇＧ抗体を標準のプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製した。
【０１６３】
各クローンのイヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤへの結合は、バイオセンサーアッセイ（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって確認された。最初に、ビオチン化イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１０７）をストレプトアビジンセンサーチップに結合させた。次いで、１１種の各抗体クローンのイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ結合センサーチップへの結合を評価した。
【０１６４】
実施例３
クローンＢ及びクローンＩ抗体は、ＩＬ４のイヌＩＬ４Ｒへの結合をブロックする
１１種の抗体が、抗体−ＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ複合体がリガンドであるイヌＩＬ４の結合を低減させる能力について、バイオセンサーアッセイ（Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって評価された。ビオチン化イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１０７）をストレプトアビジンセンサーチップ上で捕捉した。ＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ結合チップは、２０μｇ／ｍＬの１１種のマウス抗体（クローンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、及びＫ）のそれぞれに個別に曝露され、ＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ−抗体バイナリー複合体を形成させた。次いで、複合体結合チップを高濃度（２４０μｇ／ｍＬ）のイヌＩＬ４＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１２７）に曝露した。クローンＢ及びＩのイヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ−抗体複合体はイヌＩＬ４に結合できず、クローンＢ及びＩの両方が中和抗体であることを示唆している。
【０１６５】
実施例４
モノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡ配列の同定
ハイブリドーマクローンＢ及びＩをペレット化し、全ＲＮＡを抽出した。マウス免疫グロブリン（Ｉｇ）可変ドメインを増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、標準的な手法を使用してｃＤＮＡを得た。各クローンの重鎖及び軽鎖を配列決定し、配列アラインメントによって分析した（それぞれ、図１Ａ及び図１Ｂ）。クローンＢの例示的なＣＤＲ配列は、配列番号７ー９及び１４ー１６として同定され、クローンＩの例示的なＣＤＲ配列は、配列番号２９ー３１及び３６ー３８として同定された。例示的なコンセンサスＣＤＲ配列は、ＣＤＲ−Ｈ１：ＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨ（配列番号１）、ＣＤＲ−Ｈ２：ＹＩＮＰＸ１ＮＤＧＴＦＹＮＧＸ２Ｘ３Ｘ４Ｇ（配列番号２）（ここで、Ｘ１はＫ又はＡであり、Ｘ２はＫ又はＡであり、Ｘ３はＦ又はＶであり、Ｘ４はＫ又はＱである）、又はＹＩＮＰＸ１ＮＤＧＴ（ここで、Ｘ１はＫ又はＡである（配列番号２６８））；ＣＤＲ−Ｈ３：ＦＸ５ＹＧＸ６ＡＹ（配列番号３）（ここで、Ｘ５はＮ又はＹであり、Ｘ６はＩ又はＦである）、ＣＤＲ−Ｌ１：ＲＡＳＱＥＩＳＧＹＬＳ（配列番号４）；ＣＤＲ−Ｌ２：ＡＡＳＸ７Ｘ８ＤＸ９（配列番号５）（ここで、Ｘ７はＴ又はＮであり、Ｘ８はＲ又はＬであり、Ｘ９はＳ又はＴである）；及びＣＤＲ−Ｌ３：ＶＱＹＡＳＹＰＷＴ（配列番号６）として同定された。
【０１６６】
実施例５
抗ＩＬ４Ｒ−ｍＡｂクローンＢ及びＩの発現及び精製  
リーダー配列（配列番号２７、２８、４９、及び５０）を有する全長クローンＢ及びＩの重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を化学的に合成し、ＣＨＯ宿主細胞へのトランスフェクションに適した別個の発現ベクターにクローニングした。クローンＢ及びクローンＩベクターを、別個のＣＨＯ宿主細胞にトランスフェクトし、培養した。クローンＢ及びクローンＩ抗体を、一段階プロテインＡカラムクロマトグラフィーによって培地から精製した。
【０１６７】
ｐＨの関数としてのクローンＢ及びＩ抗体の熱安定性を、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって測定した。異なるｐＨでの各抗体の融解温度（Ｔｍ）を以下の表４に示す。バッファーと１２μｇの抗体を、１Ｘタンパク質サーマルシフト色素（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号４４６１１４６）と混合した。融解曲線解析を、ＳｔｅｐＯｎｅ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号４３７６３５７）を用いて行った。製造元の指示に従い、温度を２５℃から９９℃まで１％の勾配率で上昇させた。データをＰｒｏｔｅｉｎＴｈｅｒｍａｌ  ＳｈｉｆｔＴＭ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖ１．０（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号４４６６０３８）によって分析し、タンパク質融解曲線の一次導関数をとって得られた最高値として計算されるＴｍを決定した。
【０１６８】
2022500037.tif 000048
【０１６９】
実施例６
イヌＩＬ４Ｒ結合活性の実証
クローンＢ及びＩ抗体はそれぞれ、治療活性のために十分な可能性のある動態でイヌＩＬ４Ｒに対する親和性を示した。結合解析は、以下のようにオクテットバイオセンサーを使用して行った。簡潔には、イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１０７）をアミン化学によってビオチン化した。遊離の未反応ビオチンは、大規模な透析によって除去された。ビオチン化イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６をストレプトアビジンセンサーチップ上で捕捉した。クローンＢ又はＩ抗体とイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６（２５μｇ／ｍＬ）との会合を６００秒間モニターした。解離を６００秒間モニターした。ドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線を差し引いた。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏＴＭデータ解析ソフトウェアを使用して１：１の結合モデルにフィッティングさせ、ｋｏｎ、ｋｏｆｆ、及びＫｄを決定した。希釈及び全結合ステップ用のバッファーは、２０ｍＭリン酸、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．２であった。クローンＢ抗体とイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６のＫｄは２．０３ｘ１０−９Ｍであり、クローンＩ抗体とイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６のＫｄは１．７９ｘ１０−９Ｍであった。
【０１７０】
また、オクテットバイオセンサーを使用して、代替的な結合アッセイを行った。イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１０９）が、抗ヒトＦｃ結合センサーチップ上で捕捉された。クローンＢ又はＩ抗体とイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６との会合を６００秒間モニターした。解離を６００秒間モニターした。希釈及び全結合ステップ用のバッファーは、２０ｍＭリン酸、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．２であった。クローンＢ抗体とイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６のＫｄは約１０−１０Ｍであり、クローンＩ抗体とイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６のＫｄは２．７５ｘ１０−１０Ｍであった。第２のアッセイで観察された親和性の増加は、クローンＢ及びＩ抗体のイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６に対するアビディティーが、イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６よりも増加したことに起因し得る。さらに、アミン結合は、クローンＢ及びＩ抗体と相互作用するイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−Ｈｉｓ６の親和性に影響を与える可能性がある。
【０１７１】
実施例７
クローンＢ及びＩ抗体は同じＩＬ４Ｒエピトープ群に対して競合する
エピトープ結合解析は、オクテットバイオセンサーを使用して行った。イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１０９）が、抗ヒトＦｃ結合センサーチップ上で捕捉された。クローンＢ抗体（５０μｇ／ｍＬ）とイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６との会合を６００秒間モニターした。複合体結合チップを簡単に洗浄し、次いでクローンＩ抗体（５０μｇ／ｍＬ）に曝露した。洗浄工程及びクローンＩ抗体への曝露の後、イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６とのさらなる会合は観察されず（図２Ａ）、クローンＢ及びＩ抗体が同じエピトープ群に結合することを示唆している。また、逆の結合アッセイも行った。Ｃｌｏｎｅ  Ｉ抗体（５０μｇ／ｍＬ）と、抗ヒトＦｃ結合センサーチップに捕捉されたイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６との会合を６００秒間モニターした。複合体結合チップを簡単に洗浄し、次いでクローンＢ抗体（５０μｇ／ｍＬ）に曝露した。洗浄工程及びクローンＢ抗体への曝露の後、イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６とのさらなる会合は観察されず（図２Ｂ）、再び、クローンＢ及びクローンＩ抗体が同じエピトープ群に結合することを示唆している。
【０１７２】
実施例８
クローンＢ及びクローンＩ抗体は、ＩＬ４及びＩＬ１３のＩＬ４Ｒへの結合をブロックする
クローンＢ、クローンＩ、イヌＩＬ４、及びイヌＩＬ１３リガンドのイヌＩＬ４Ｒへの様々な結合解析を、オクテットバイオセンサーを使用して行った。イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１０９）が、抗ヒトＦｃ結合センサーチップ上で捕捉された。クローンＢ又はクローンＩ抗体（２５μｇ／ｍＬ）とイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６との会合を６００秒間モニターした。複合体結合チップを簡単に洗浄し、次いで、イヌＩＬ４＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１２７；５０μｇ／ｍＬ）又はイヌＩＬ１３＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１５７；５０μｇ／ｍＬ）に曝露し、６００秒間モニターした。イヌＩＬ４（図３Ａ）又はイヌＩＬ１３（図３Ｂ）の結合はほとんど又は全く観察されず、クローンＢ及びＩ抗体がイヌＩＬ４及びイヌＩＬ１３のイヌＩＬ４Ｒへの結合をブロックすることを示唆している。
【０１７３】
また、逆の結合アッセイも行った。イヌＩＬ４＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１２７；５０μｇ／ｍＬ）又はイヌＩＬ１３＿Ｃ−Ｈｉｓ６（配列番号１５７；５０μｇ／ｍＬ）と、抗ヒトＦｃ結合センサーチップに捕捉されたイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６との会合を６００秒間モニターした。複合体結合チップを簡単に洗浄し、次いでクローンＢ抗体（５０μｇ／ｍＬ）又はクローンＩ抗体（５０μｇ／ｍＬ）に曝露し、６００秒間モニターした。ＩＬ４及びＩＬ１３がＩＬ４Ｒに結合した後（それぞれ、図３Ｃ及び図３Ｄ）、クローンＢ又はクローンＩとのさらなる会合が観察された。これらの結果は、クローンＢ及びクローンＩがそれぞれ、イヌＩＬ４又はイヌＩＬ１３よりもＩＬ４Ｒに対して高い親和性を有することを示唆している。
【０１７４】
実施例９
ウエスタン解析によるＩＬ４Ｒに対するクローンＢ及びＩ抗体の免疫反応性
イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１０９）を認識するクローンＢ及びＩ抗体の能力をウエスタンブロットによって調べた。精製されたイヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６を、還元条件下（ＤＴＴの存在下）又は非還元条件下（ＤＴＴの非存在下）で、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写し、クローンＢ又はＩ抗体、続いてヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰを使用してプローブした。クローンＢ及びＩ抗体による免疫反応性陽性シグナルは、非還元条件下の試料でのみ観察され、このことはジスルフィド結合がエピトープコンフォメーションの維持に重要であり得、クローンＢ及びＩ抗体に対するエピトープが不連続であるか又は立体構造的であり得ることを示唆している。
【０１７５】
ネコ、ウマ、ネコ、及びヒトのＩＬ４Ｒに対するクローンＩ抗体の交差反応性も調べた。イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１０９）、ネコＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１１１）、ウマＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１１３）、マウスＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１１５）、及びヒトＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１１７）（０．１μｇ／レーン）はそれぞれ、還元（＋ＤＴＴ）又は非還元（−ＤＴＴ）条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離された。タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写し、ブロットをクローンＩ抗体（０．３μｇ／ｍＬ）でプローブし、ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰによって可視化した（図４Ａ）。対照として、ブロットを剥がし、ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ−ＨＲＰでプローブし、ＩＬ４Ｒ−ＥＣＤタンパク質の存在を可視化した（図４Ｂ）。クローンＩ抗体は、非還元条件下で、イヌＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６と免疫反応し、ネコＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６とはより少ない程度で免疫反応した（図４Ａ、それぞれレーン５及び１）。ウマ、ネズミ、ヒトのＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６融合ポリペプチドとは低いバックグラウンド反応性が観察された（図４Ａ、それぞれレーン２、３、及び４）。
【０１７６】
実施例１０
ネコＩＬ４Ｒ結合親和性
免疫ブロットアッセイでは、クローンＩとネコＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６の間の結合が、クローンＩとネコＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６の間の結合と比較して、わずかに減少していることが検出された。この知見は、オクテットバイオセンサーによって測定されたインビトロ結合親和性と一致していた。ビオチン化ネコＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６（配列番号１１１）をストレプトアビジンセンサーチップ上で捕捉した。クローンＩ抗体（２５μｇ／ｍＬ）とネコＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６との会合を６００秒間モニターした。解離を６００秒間モニターした。ドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線を差し引いた。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏＴＭデータ解析ソフトウェアを使用して１：１の結合モデルにフィッティングさせ、ｋｏｎ、ｋｏｆｆ、及びＫｄを決定した。希釈及び全結合ステップ用のバッファーは、２０ｍＭリン酸、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．２であった。クローンＩ抗体とネコＩＬ４Ｒ−ＥＣＤ＿Ｃ−ＨｕＦｃ＿Ｈｉｓ６のＫｄは１．１ｘ１０−９Ｍであった。
【０１７７】
実施例１１
クローンＩ抗体に対するイヌＩＬ４Ｒ結合エピトープの同定
クローンＩ抗体によって（及びおそらくクローンＢ抗体によっても）認識されるイヌＩＬ４Ｒエピトープを調べた。クローンＩ抗体は、ヒトＩＬ４Ｒ−ＥＣＤとの交差反応性の低いバックグラウンドを示したので、イヌＩＬ４Ｒのエピトープマッピングを容易にするために、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）及びヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号１０３）配列の多数のハイブリッドタンパク質が、リーダー配列（配列番号１３２）及びＣ末端ヒトＦｃ−Ｈｉｓ６タグを用いて設計された。イヌ及びヒトのＥＣＤ配列を３つのセグメント（Ａ、Ｂ、及びＣ）に分割し、それらのセグメントに基づいて、ＡからＣの順に６つの異なるハイブリッドポリペプチド構築物を調製した（図５Ａ及び下の表５を参照）。
【０１７８】
2022500037.tif 000049
【０１７９】
ハイブリッド１−６ポリペプチドのそれぞれをコードするヌクレオチド配列を含むプラスミド構築物を２９３細胞に一過性にトランスフェクトし、上清を３倍に濃縮した。各融合ポリペプチドを、非還元（−ＤＴＴ）条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写した。ブロットは、クローンＩ抗体（図５Ｂ）又は対照としての抗ヒトＦｃ抗体（図５Ｃ）を使用してプローブされた。イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤセグメントＡ及びＢの両方の存在は、最も強いシグナルを与えた（ハイブリッド４、図５Ｂ、レーン６）。イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤセグメントＡ単独（ハイブリッド１、図５Ｂ、レーン３）又はセグメントＣとの組み合わせ（ハイブリッド６、図５Ｂ、レーン８）は明らかなシグナルを与え、セグメントＡが主要なエピトープを含み得ることが示唆された。一方、セグメントＢ単独（ハイブリッド２、図５Ｂ、レーン４）又はセグメントＣとの組み合わせ（ハイブリッド５、図５Ｂ、レーン７）はより弱いシグナルを与え、セグメントＢが補助的な（又はマイナーな）エピトープを含み得ることが示唆された。
【０１８０】
この情報に基づいて、イヌＩＬ４Ｒのエピトープをさらに限局化するために、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）及びヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号１０３）配列のさらなるハイブリッドタンパク質が、リーダー配列（配列番号１３２）及びＣ末端ヒトＦｃ−Ｈｉｓ６タグを用いて設計された。イヌ及びヒトのＥＣＤ配列のセグメントＡ及びＢをさらに分割し、イヌ又はヒト配列のアミノ酸残基数の増加に基づいて、追加の８つのハイブリッドポリペプチド構築物（ハイブリッド７ー１４）を調製した（図６Ａ及び以下の表６を参照）。
【０１８１】
2022500037.tif 000050
【０１８２】
ハイブリッド７−１４ポリペプチドのそれぞれをコードするヌクレオチド配列を含むプラスミド構築物を２９３細胞に一過性にトランスフェクトし、上清を３倍に濃縮した。各ハイブリッドポリペプチドを、非還元（−ＤＴＴ）条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、タンパク質をＰＶＤＦ膜に転写した。ブロットは、クローンＩ抗体（図６Ｂ）又は対照としての抗ヒトＦｃ抗体（図６Ｃ）を使用してプローブされた。セグメントＡのＣ末端の半分とセグメントＢの中央部分の両方の存在は、最も強いシグナルを与えた（図６Ｂ；ハイブリッド７、１１、及び１３；それぞれレーン３、７、及び９）。
【０１８３】
クローンＩによって認識されるイヌＩＬ４Ｒエピトープのアミノ酸残基をさらに同定するために、配列番号９９に基づくアラニン突然変異を有する複数の突然変異体イヌＩＬ４  ＥＣＤ配列が、リーダー配列（配列番号１３２）及びＣ末端ヒトＦｃ−Ｈｉｓ６タグを用いて設計され、２９３細胞において発現された。細胞上清を３倍に濃縮し、非還元（−ＤＴＴ）条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ＰＶＤＦ膜に転写した。ブロットは、クローンＩ抗体（図７Ｂ）又は対照としての抗ヒトＦｃ抗体（図７Ｃ）を使用してプローブされた。微細なエピトープマッピングの結果は、以下の表７に要約される。結果は、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９５）のアミノ酸Ｍ４４及びＧ４５がエピトープ結合に関与していることを示唆している。
【０１８４】
2022500037.tif 000051
【０１８５】
イヌＩＬ４（配列番号１２１）、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）及びイヌＩＬ１３Ｒ  ＥＣＤ（配列番号１６１）の複合体の三次元モデルを構築した（図８）。イヌＩＬ４Ｒのエピトープ１が、図８で同定される。上記の研究結果の解析と三次元タンパク質モデリング解析は、クローンＢ及びＩは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）又はネコＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号１００）のＬ４１とＴ５０の範囲内、例えばＲ３６とＮ５５の範囲内などに存在する第１のエピトープに結合することを示唆している。例えば、第１のエピトープは、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９１、又は配列番号９２のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施態様では、第１のエピトープは、アミノ酸配列ＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１Ｔ［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］（配列番号８５）を含む。いくつかの実施態様では、第１のエピトープは、アミノ酸配列ＲＬＳＹＱＬＸ１０ＦＭＧＳＥＮＸ１１ＴＣＶＰＥＮ［ここで、Ｘ１０はＤ又はＮであり、Ｘ１１はＨ又はＲである］（配列番号８６）を含む。
【０１８６】
研究結果の分析と３次元タンパク質モデリングもまた、クローンＢ及びＩは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号９９）又はネコＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ（配列番号１００）のアミノ酸Ｓ６４とＱ８５の範囲内の第２のエピトープに結合することを示唆している。例えば、第２のエピトープは、配列番号９０又は配列番号９３のアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施態様では、第２のエピトープは、アミノ酸配列ＳＭＸ１２Ｘ１３ＤＤＸ１４ＶＥＡＤＶＹＱＬＸ１５ＬＷＡＧＸＱ［ここで、Ｘ１２はＰ又はＬであり、Ｘ１３はＩ又はＭであり、Ｘ１４はＡ又はＦであり、Ｘ１５はＤ又はＨであり、Ｘ１６はＱ又はＴである］（配列番号８７）を含む。
【０１８７】
実施例１２
キメラ、イヌ化、及びネコ化抗体の発現と精製
クローンＢ又はＩ可変重鎖ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧ−Ａ、ＩｇＧ−Ｂ、ＩｇＧ−Ｃ、若しくはＩｇＧ−Ｄ、又は野生型ネコＩｇＧ−１ａ、ＩｇＧ−１ｂ、若しくはＩｇＧ−２Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２２７、２２８、２２９、２３０、２３７、２３８、２３９、又は２４０を含むＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド）、又はそのようなＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドの変異体（例えば、配列番号１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２３１、２３２、２３３、２３４、２３９、又は２４０を含む変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド）などの異なる動物種の重鎖定常領域に融合され得る。キメラ重鎖の例示的なアミノ酸配列には、配列番号５１（クローンＢ可変ＨＣ及びイヌＩｇＧ−Ｂ）及び配列番号５５（クローンＩ可変ＨＣ及びイヌＩｇＧ−Ｂ）が含まれる。さらに、クローンＢ又はＩ可変軽鎖ポリペプチドは、野生型イヌ又はネコ軽鎖定常領域（例えば、配列番号２３５又は２４１）、又はそのようなポリペプチドの変異体（例えば、配列番号２３６又は２４２）などのコンパニオンアニマル種の軽鎖定常領域に融合され得る。キメラ軽鎖の例示的なアミノ酸配列には、配列番号５２（クローンＢ可変ＬＣ及びイヌκ軽鎖定常領域）及び配列番号５６（クローンＩ可変ＬＣ及びイヌκ軽鎖定常領域）が含まれる。
【０１８８】
クローンＢ及びＩの可変重鎖及び可変軽鎖は、ＣＤＲ移植のテンプレートとして適切なイヌ及びネコの生殖系列抗体アミノ酸配列を検索して選択することにより、イヌ化及びネコ化された。配列は、３次元構造モデリングを使用してさらに最適化された。設計されたクローンＢ及びＩ可変重鎖及び可変軽鎖ポリペプチドのイヌ化及びネコ化変異体の例には、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号２７４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号２７５、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、及び配列番号７０が含まれる。
【０１８９】
イヌ化又はネコ化重鎖ポリペプチドは、野生型イヌＩｇＧ−Ａ、ＩｇＧ−Ｂ、ＩｇＧ−Ｃ、若しくはＩｇＧ−Ｄ、又は野生型ネコＩｇＧ−１ａ、ＩｇＧ−１ｂ、若しくはＩｇＧ−２Ｆｃポリペプチド（例えば、配列番号１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２２７、２２８、２２９、２３０、２３７、２３８、２３９、又は２４０を含むＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド）、又はそのようなＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドの変異体（例えば、配列番号１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２３１、２３２、２３３、２３４、２３９、又は２４０を含む変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド）の重鎖定常領域に融合され得る。イヌ化又はネコ化可変重鎖及び変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドの例示的なアミノ酸配列には、配列番号７１、７２、７５、７６、７９、８０、８２、及び８３が含まれる。
【０１９０】
イヌ化又はネコ化軽鎖ポリペプチドは、野生型イヌ又はネコ軽鎖定常領域（例えば、配列番号２３５又は２４１）、又はそのようなポリペプチドの変異体（例えば、配列番号２３６又は２４２）などのコンパニオンアニマル種の軽鎖定常領域に融合され得る。イヌ化又はネコ化可変軽鎖及びκ軽鎖定常領域の例示的なアミノ酸配列には、配列番号７３、７４、７７、７８、８１、及び８４が含まれる。
【０１９１】
イヌ又はネコＩｇＧに融合したクローンＢ及びＩ可変重鎖、及びイヌ又はネコ定常軽鎖に融合したクローンＢ及びＩ可変軽鎖のキメラポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を合成し、ＣＨＯ宿主細胞へのトランスフェクションに適した発現ベクターにクローニングした。イヌ化及びネコ化クローンＩポリペプチドをコードするヌクレオチド配列も合成され、発現ベクターにクローニングした。ＨＣ及びＬＣヌクレオチド配列の各ペアを、ＣＨＯ宿主細胞にトランスフェクトした。細胞を培養し、クローンＢ、クローンＩ、キメラＢ、及びキメラＩ抗体をプロテインＡカラムクロマトグラフィーによって培地から精製した。
【０１９２】
ベクターは、ＦｒｅｅｓｔｙｌｅＭａｘＴＭトランスフェクション試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＣＨＯ−Ｓ細胞におけるパイロットスケールのトランスフェクションを実行するためにも使用することができる。馴化培地を清澄化することにより、上清を回収する。抗体は、プロテインＡクロマトグラフィーを用いて１回で精製することができ、さらなる調査のために使用することができる。
【０１９３】
精製された抗体調製物は、１つ又は複数の薬学的に許容される添加物と混合され、濾過によって滅菌され、本発明の薬学組成物を調製することができる。例示的な抗体調製物又は薬学的組成物は、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、そう痒症、喘息、乾癬、強皮症、又は湿疹などのＩＬ４Ｒ誘導性状態を有するイヌ又はネコに治療的有効量で投与され得る。
【０１９４】
実施例１３
プロテインＡ結合の増加及び／又は補体結合の減少及び／又はＣＤ１６結合の減少のための変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド。
プロテインＡ親和性を使用した抗体の精製は、十分に開発されたプロセスである。しかしながら、イヌＩｇＧの４つのサブタイプのうち、ＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ（例えば、配列番号１６３又は配列番号１６４）のみがプロテインＡ結合親和性を有する。イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃ（例えば、配列番号１６２）、ＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃ（例えば、配列番号１６５又は配列番号１６６）、及びＩｇＧ−ＤＦｃ（例えば、配列番号１６７）は、プロテインＡ結合親和性が弱いか、測定できない。変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃ、ＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃ、及びＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチドは、改変されたプロテインＡ結合のために設計された。
【０１９５】
さらに、イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃは補体活性を有し、Ｃ１ｑに結合するが、イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃは、Ｃ１ｑに対する結合親和性が弱いか、測定できない。Ｃ１ｑ結合を潜在的に低減させ、且つ／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチドを設計した。
【０１９６】
さらに、イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃは、ＣＤ１６結合活性を有する。ＣＤ１６のＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃへの結合を潜在的に低減させるため、且つ／又はＡＤＣＣを潜在的に低減させるために、変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチドを設計した。
【０１９７】
以下の表８は、イヌＩｇＧ  ＦｃサブタイプのプロテインＡ及びＣ１ｑ結合特性をまとめたものである。注目すべきは、野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃサブタイプのうち、Ｃ１ｑ結合を欠き、且つプロテインＡに結合するものがないことである。
【０１９８】
2022500037.tif 000052
【０１９９】
２つのアプローチを使用して、プロテインＡ結合を増加させるための変異体イヌＩｇＧ−Ａ、ＩｇＧ−Ｃ、及びＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチドを設計した。第１のアプローチでは、変異体イヌＩｇＧ−Ａ、ＩｇＧ−Ｃ、及びＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチドは、イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃと同じプロテインＡ結合モチーフ配列（例えば、それぞれ、配列番号１６３、配列番号１６５、及び配列番号１６７）を有するように設計された。第２のアプローチでは、変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃ  Ｉ（２１）Ｔ／Ｑ（２０７）Ｈ（配列番号１６９）、変異体イヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃ  Ｉ（２１）Ｔ（配列番号１８１）、及び変異体イヌＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃ  Ｉ（２１）Ｔ／Ｑ（２０７）Ｈ（配列番号１９４）は、イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ配列に対応するようにプロテインＡ結合領域に１つ又は２つのアミノ酸置換を含めて設計された。
【０２００】
さらに、表９に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換を有する、プロテインＡ結合が増加した変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃ、ＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃ、及びＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃポリペプチドを調製することができる。
【０２０１】
2022500037.tif 000053
【０２０２】
Ｃ１ｑのイヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃへの結合を潜在的に低減させ、且つ／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、配列番号１６３又は配列番号１６５のそれぞれの位置９３に対応するアミノ酸位置に、Ｌｙｓを除く任意のアミノ酸によるＬｙｓのアミノ酸置換を有する変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチドを調製することができる。これらのアミノ酸置換は、補体活性を示さないと理解されているイヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃと比較した、イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃのタンパク質配列及び３Ｄ構造モデリングの解析後に同定された。例えば、変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ  Ｋ（９３）Ｒ（配列番号１７０）及び変異体イヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃ  Ｋ（９３）Ｒ（配列番号１８２）を調製することができる。野生型イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃを含む融合タンパク質と比較した場合、ヒトＣ１ｑと変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ  Ｋ（９３）Ｒを含む融合タンパク質との間の結合の低減が観察された。
【０２０３】
ＣＤ１６のＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃへの結合を潜在的に低減させるため、且つ／又はＡＤＣＣを潜在的に低減させるために、表１０に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換を有する変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ及びＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃポリペプチドを調製することができる。アミノ酸置換は、ＡＤＣＣ活性を示さないと理解されているＩｇＧ−Ａ及びＩｇＧ−Ｄと比較した、イヌＩｇＧ−Ｂ及びＩｇＧ−Ｃのタンパク質配列及び３Ｄ構造モデリングの解析後に同定された。
【０２０４】
2022500037.tif 000054
【０２０５】
野生型イヌＩｇＧ−Ｃ  ＦｃはプロテインＡ結合を欠き、Ｃ１ｑ結合を有するため、プロテインＡに結合し、低減したＣ１ｑへの結合を有する二重変異体イヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃは、表９に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換をＫ（９３）Ｒ置換又はＫ（９３）Ｘ置換［ここで、ＸはＬｙｓを除く任意のアミノ酸である］と組み合わせることによって調製することができる。Ｃ１ｑへの結合が低減し、ＣＤ１６への結合が低減した二重変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ又は二重変異体イヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃは、表１０に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換をＫ（９３）Ｒ置換又はＫ（９３）Ｘ置換［ここで、ＸはＬｙｓを除く任意のアミノ酸である］と組み合わせることによって調製することができる。プロテインＡに結合し、Ｃ１ｑ及びＣＤ１６への結合が低減した三重変異体イヌ−ＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃは、表９に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換及び表１０に記載されている１つ又は複数のアミノ酸置換を、Ｋ（９３）Ｒ置換又はＫ（９３）Ｘ置換［ここで、ＸはＬｙｓを除く任意のアミノ酸である］と組み合わせることによって調製することができる。
【０２０６】
任意の変異体イヌＩｇＧ  ＦｃのプロテインＡ、ＣＤ１６、及び／又はＣ１ｑへの結合を決定し、別のＩｇＧ  Ｆｃ（例えば、対応する野生型イヌＩｇＧ  Ｆｃ、別の野生型若しくは変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃ、又は別のコンパニオンアニマルの野生型若しくは変異体ＩｇＧ  Ｆｃなど）のプロテインＡ、ＣＤ１６、及び／又はＣ１ｑへの結合と比較することができる。
【０２０７】
結合解析は、オクテットバイオセンサーを使用して行うことができる。簡潔には、標的分子（例えば、プロテインＡ、Ｃ１ｑ、ＣＤ１６など）が、ビオチン化され、遊離の未反応ビオチンが（例えば、透析によって）除去され得る。ビオチン化標的分子は、ストレプトアビジンセンサーの先端上に捕捉される。標的分子と様々な濃度（例えば、１０μｇ／ｍＬ）のＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドとの会合を、指定された時間、又は定常状態に達するまでモニターする。解離を、指定された時間、又は定常状態に達するまでモニターする。ドリフトを補正するために、バッファーのみのブランク曲線を差し引くことができる。データを、ＦｏｒｔｅＢｉｏＴＭデータ解析ソフトウェアを使用して１：１の結合モデルにフィッティングさせ、ｋｏｎ、ｋｏｆｆ、及びＫｄを決定する。
【０２０８】
プロテインＡ結合の増加（例えば、精製を容易にするため）、Ｃ１ｑ結合の減少（例えば、補体媒介性免疫応答の低減）、ＣＤ１６結合の低減（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害の低減）、及び／又は安定性の増加のための例示的な変異体イヌＩｇＧポリペプチドとして、配列番号１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、及び１９４が挙げられる。そのような変異体イヌＩｇＧポリペプチドは、クローンＢ又はＩ可変重鎖配列、イヌ化クローンＢ又はＩ可変重鎖配列、又は上記の実施例に記載のＣＤＲ配列と組み込まれ得る。
【０２０９】
実施例１４
補体結合の減少及び／又はヒンジジスルフィド形成の増強及び／又は組換え産生の増強のための変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド
ネコＩｇＧの３つのサブタイプ、ＩｇＧ１ａ  Ｆｃ（配列番号２０３又は配列番号２０４）、ＩｇＧ１ｂ  Ｆｃ（配列番号２０５又は配列番号２０６）、及びＩｇＧ２  Ｆｃ（配列番号２０７）のそれぞれは、プロテインＡ結合親和性を有する。ただし、ネコＩｇＧ２  ＦｃのみがＣ１ｑへの結合親和性が弱いか測定できないが、一方、ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃ、ＩｇＧ１ｂ  ＦｃはＣ１ｑに結合する。Ｃ１ｑ結合を潜在的に低減させるため、及び／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、変異体ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ  Ｆｃポリペプチドが設計された。
【０２１０】
以下の表１１は、ネコＩｇＧ  ＦｃサブタイプのプロテインＡ及びＣ１ｑ結合特性をまとめたものである。注目すべきは、野生型ウマＩｇＧ  Ｆｃサブタイプのうち、Ｃ１ｑ結合を欠き、且つプロテインＡに結合するものがないことである。
【０２１１】
2022500037.tif 000055
【０２１２】
Ｃ１ｑのネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ  Ｆｃへの結合を潜在的に低減させ、且つ／又は補体媒介性免疫応答を潜在的に低減させるために、配列番号２０３、配列番号２０４、配列番号２０５又は配列番号２０６の位置１９８に対応するアミノ酸位置に、Ｐｒｏを除く任意のアミノ酸によるＰｒｏのアミノ酸置換を有する変異体ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ  Ｆｃポリペプチドを調製することができる。これらのアミノ酸置換は、補体活性を示さないと理解されているネコＩｇＧ２  Ｆｃと比較した、ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃ及びＩｇＧ１ｂ  Ｆｃのタンパク質配列及び３Ｄ構造モデリングの解析後に同定された。例えば、変異体ネコＩｇＧ１  ＦｃポリペプチドＰ（１９８）Ａ（配列番号２０９、２１０、２１２、及び２１３）を調製することができる。
【０２１３】
任意の変異体ネコＩｇＧ  ＦｃのＣ１ｑへの結合を決定し、別のＩｇＧ  Ｆｃ（例えば、対応する野生型ネコＩｇＧ  Ｆｃ、別の野生型若しくは変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃ、又は別のコンパニオンアニマルの野生型若しくは変異体ＩｇＧ  Ｆｃなど）のＣ１ｑへの結合と比較することができる。実施例１３に記載されている結合アッセイを使用することができる。
【０２１４】
ネコＩｇＧヒンジを改変し、ジスルフィド形成を増強するために、いくつかのオルソログヒンジ構造の三次元タンパク質モデリング解析を使用した。ネコＩｇＧヒンジでのジスルフィド形成を増強するために、ネコＩｇＧ１ａ（配列番号２０３又は配列番号２０４）（例えば、Ｋ１６Ｐ）、ネコＩｇＧ１ｂ（配列番号２０５又は配列番号２０６）、又はネコＩｇＧ２（配列番号２０７）（例えば、Ｋ（１６）Ｐ）の位置１６に対応する位置でリジンをプロリンで置換することにより、ヒンジ配列を改変することができる。改変されたヒンジを有する変異体ネコＩｇＧポリペプチドのアミノ酸配列の例には、配列番号２０８、配列番号２１１、及び配列番号２１５が含まれる。
【０２１５】
ネコＩｇＧ２ヒンジでのジスルフィド形成を増加させるために、アミノ酸をシステインで置換することによりヒンジ配列を改変することができる。例えば、改変されたヒンジを有する変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃ（配列番号２１４）は、配列番号２０７の位置１４に対応するアミノ酸位置でＧｌｙをＣｙｓで置換することによって調製された。
【０２１６】
三次元タンパク質モデリングを使用して、組換え産生の増強及びヒンジジスルフィド形成の改善のために、異なるＩｇＧアイソタイプからのヒンジ領域からの配列を含むネコ変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドを設計した。ネコＩｇＧ１ａ又はＩｇＧ１ｂのヒンジ領域からの配列（例えば、配列番号２１６）を含む変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃポリペプチドを調製することができる。変異体ＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドの組換え産生のレベル及び／又はヒンジジスルフィド形成のレベルを決定し、還元及び非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって別のＩｇＧ  Ｆｃ（例えば、同じ又は異なるアイソタイプの対応する野生型ＩｇＧ  Ｆｃ、又は別のコンパニオンアニマルの野生型若しくは変異体ＩｇＧ  Ｆｃなど）のレベルと比較することができる。
【０２１７】
Ｃ１ｑ結合の減少（例えば、補体媒介性免疫応答の低減）及び／又はヒンジジスルフィド形成の増強及び／又は組換え産生の増強のための例示的な変異体ネコＩｇＧポリペプチドには、配列番号２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、及び２１６が含まれる。そのような変異体ネコＩｇＧポリペプチドは、クローンＢ又はＩ可変重鎖配列、ネコ化クローンＢ又はＩ可変重鎖配列、又は上記の実施例に記載のＣＤＲ配列と組み込まれ得る。
【０２１８】
実施例１５
二重特異性抗体用の変異体イヌ、ネコ、及びウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド
ノブインホールヘテロ二量体化アプローチを使用して、二重特異性イヌ、ネコ、又はウマ抗体の調製を可能にするために、変異体イヌＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、変異体ネコＩｇＧ  Ｆｃポリペプチド、及び変異ウマＩｇＧ  Ｆｃポリペプチドの対形成を調べた。二重特異性抗体は、２つの異なる標的に対する２つの抗体の特異性を組み合わせる。最初に、１つの鎖が嵩高いアミノ酸（ノブ）を含み、もう１つの鎖が同じ一般的な位置にある小さなアミノ酸（ホール）を含むように、ＣＨ３界面に突然変異を導入することによって、重鎖対形成を設計した。さらに、重鎖がその意図された軽鎖と特異的に対になることを容易にするために、ＣＨ１と軽鎖との間の界面アミノ酸を、形状及び電荷−電荷相互作用において相補的になるように、変異させてもよい。
【０２１９】
イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ（配列番号１６３）の位置１３７に対応する位置に、イヌＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃ（配列番号１６５）の位置１３７に対応する位置に、又はイヌＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃ（配列番号１６７）の位置１３８に対応する位置に、チロシンからトリプトファンへのアミノ酸置換（Ｔ１３８Ｗ又はＴ１３７Ｗ）をノブとして導入することができる。第１の変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃ、ＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ、ＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃ、及びＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃのアミノ酸配列の例は、それぞれ、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、及び配列番号１９８である。
【０２２０】
イヌＩｇＧ−Ａ（配列番号１６２）又はＩｇＧ−Ｄ（配列番号１６７）の位置１３８に対応する位置にスレオニンからセリンへのアミノ酸置換、及び位置１４０に対応する位置にロイシンからアラニンへのアミノ酸置換（Ｔ１３８Ｓ、Ｌ１４０Ａ）、又はイヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ（配列番号１６３）又はＩｇＧ−Ｃ（配列番号１６５）の位置１３７に対応する位置にスレオニンからセリンへのアミノ酸置換、及び位置１３９に対応する位置にロイシンからアラニンへのアミノ酸置換（Ｔ１３７Ｓ、Ｌ１３９Ａ）をホールとして導入することができる。第２の変異体イヌＩｇＧ−Ａ  Ｆｃ、ＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ、ＩｇＧ−Ｃ  Ｆｃ、及びＩｇＧ−Ｄ  Ｆｃのアミノ酸配列の例は、配列番号１９９、配列番号２００、配列番号２０１、及び配列番号２０２である。
【０２２１】
イヌＩｇＧ−Ａ  ＣＨ１（配列番号２２７）、イヌＩｇＧ−Ｂ  ＣＨ１（配列番号２２８）、イヌＩｇＧ−Ｃ  ＣＨ１（配列番号２２９）、又はイヌＩｇＧ−Ｄ  ＣＨ１（配列番号２３０）の、位置２４に対応する位置にアラニンからロイシンへのアミノ酸置換、及び位置３０に対応する位置にセリンからアスパラギンへのアミノ酸置換（Ａ２４Ｌ、Ｓ３０Ｄ）を導入することができる。変異体イヌＩｇＧ−Ａ  ＣＨ１、ＩｇＧ−Ｂ  ＣＨ１、ＩｇＧ−Ｃ  ＣＨ１、及びＩｇＧ−Ｄ  ＣＨ１のアミノ酸配列の例は、配列番号２３１、配列番号２３２、配列番号２３３、及び配列番号２３４である。
【０２２２】
イヌκ定常領域（配列番号２３５）の位置１１に対応する位置にフェニルアラニンからアラニンへのアミノ酸置換、及び位置２２に対応する位置にセリンからアルギニンへのアミノ酸置換（Ｆ１１Ａ、Ｓ２２Ｒ）を導入することができる。変異体イヌκ定常領域のアミノ酸配列の例は、配列番号２３６である。
【０２２３】
ネコＩｇＧ１ａ  Ｆｃ（配列番号２０３又は配列番号２０４）、ネコＩｇＧ１ｂ  Ｆｃ（配列番号２０５又は配列番号２０６）、又はネコＩｇＧ２（配列番号２０７）の位置１５４に対応する位置にスレオニンからトリプトファンへのアミノ酸置換（Ｔ１５４Ｗ）をノブとして導入することができる。第１の変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃ、ＩｇＧ１ａ  Ｆｃ、及びＩｇＧ１ｂ  Ｆｃのアミノ酸配列の例は、配列番号２１７、配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２２０、及び配列番号２２１である。
【０２２４】
ネコＩｇＧ１ａ（配列番号２０３又は配列番号２０４）、ネコＩｇＧ−ｂ  Ｆｃ（配列番号２０５又は配列番号２０６）、又はネコＩｇＧ２  Ｆｃ（配列番号２０７）の位置１５４に対応する位置にスレオニンからセリンへのアミノ酸置換、及び位置１５６に対応する位置にロイシンからアラニンへのアミノ酸置換（Ｔ１５４Ｓ、Ｌ１５６Ａ）を、ホールとして導入することができる。第２の変異体ネコＩｇＧ２  Ｆｃ、ＩｇＧ１ａ  Ｆｃ、及びＩｇＧ１ｂ  Ｆｃのアミノ酸配列の例は、配列番号２２２、配列番号２２３、配列番号２２４、配列番号２２５、及び配列番号２２６である。
【０２２５】
ネコＩｇＧ１  ＣＨ１（配列番号２３７）の位置２４に対応する位置にアラニンからロイシンへのアミノ酸置換、及び位置３０に対応する位置にセリンからアスパラギンへのアミノ酸置換、又はネコＩｇＧ２  ＣＨ１（配列番号２３８）の位置２４に対応する位置にアラニンからロイシンへのアミノ酸置換、及び位置２９に対応する位置にセリンからアスパラギンへのアミノ酸置換を導入することができる。変異体ネコＩｇＧ１  ＣＨ１及びＩｇＧ２  ＣＨ１のアミノ酸配列の例は、配列番号２３９及び配列番号２４０である。
【０２２６】
ネコκ定常領域（配列番号２４１）の位置１１に対応する位置にフェニルアラニンからアラニンへのアミノ酸置換、及び位置２２に対応する位置にセリンからアルギニンへのアミノ酸置換（Ｆ１１Ａ、Ｓ２２Ｒ）を導入することができる。変異体ネコκ定常領域のアミノ酸配列の例は、配列番号２４２である。
【０２２７】
ウマＩｇＧ１  Ｆｃ（配列番号２４７）、ウマＩｇＧ２  Ｆｃ（配列番号２４８）、ウマＩｇＧ３  Ｆｃ（配列番号２４９）、ウマＩｇＧ４  Ｆｃ（配列番号２５０）、ウマＩｇＧ５  Ｆｃ（配列番号２５１）、ウマＩｇＧ６  Ｆｃ（配列番号２５２）、又はウマＩｇＧ７  Ｆｃ（配列番号２５３）の、位置１３０に対応する位置にスレオニンのトリプトファンへのアミノ酸置換（Ｔ１３０Ｗ）をノブとして導入することができる。第１の変異体ウマＩｇＧ１Ｆｃ、ＩｇＧ２  Ｆｃ、ＩｇＧ３  Ｆｃ、ＩｇＧ４  Ｆｃ、ＩｇＧ５  Ｆｃ、ＩｇＧ６  Ｆｃ、及びＩｇＧ７  Ｆｃのアミノ酸配列の例は、それぞれ、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、及び配列番号２６０である。
【０２２８】
ウマＩｇＧ１  Ｆｃ（配列番号２４７）、ウマＩｇＧ２  Ｆｃ（配列番号２４８）、ウマＩｇＧ３  Ｆｃ（配列番号２４９）、ウマＩｇＧ４  Ｆｃ（配列番号２５０）、ウマＩｇＧ５  Ｆｃ（配列番号２５１）、ウマＩｇＧ６  Ｆｃ（配列番号２５２）、又はウマＩｇＧ７  Ｆｃ（配列番号２５３）の、位置１３０に対応する位置にスレオニンからセリンへのアミノ酸置換、及び位置１３２に対応する位置にロイシンからアラニンへのアミノ酸置換（Ｔ１３０Ｗ）をホールとして導入することができる。第２の変異体ウマＩｇＧ１Ｆｃ、ＩｇＧ２  Ｆｃ、ＩｇＧ３  Ｆｃ、ＩｇＧ４  Ｆｃ、ＩｇＧ５  Ｆｃ、ＩｇＧ６  Ｆｃ、及びＩｇＧ７  Ｆｃのアミノ酸配列の例は、それぞれ、配列番号２６１、配列番号２６２、配列番号２６３、配列番号２６４、配列番号２６５、配列番号２６６、及び配列番号２６７である。
【０２２９】
上記のアプローチは、ＩＬ４Ｒ、及びＩＬ１７、ＩＬ３１、ＴＮＦα、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＩＬ４、ＩＬ１３、ＩＬ２３、ＩｇＥ、ＣＤ１１α、ＩＬ６Ｒ、α４−インテグリン、ＩＬ１２、ＩＬ１β、又はＢｌｙＳなどの他の標的に対する二重特異性抗体を調製するために使用することができる。例えば、イヌＩＬ４Ｒ及びイヌＩＬ３１に対する二重特異性抗体は、配列番号２４３のアミノ酸配列（イヌ化クローンＩ可変ＨＣ  ｖ２及び変異体ＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ  Ｃ１ｑ−、ＣＤ１６−（二重特異性ノブを有する））、配列番号２４４（イヌ化クローンＩ可変ＬＣ  ｖ２及び可変イヌκ定常領域）、配列番号２４５（イヌ化抗イヌＩＬ３１クローンＭ１４可変ＨＣ及び変異体イヌＩｇＧ−Ｂ  Ｆｃ  Ｃ１ｑ−、ＣＤ１６−（二重特異性ホールを有する））、及び配列番号２４６（イヌ化抗イヌＩＬ３１クローンＭ１４可変ＬＣ及びイヌκ定常領域）を用いて調製され得る。
【０２３０】
実施例１６
イヌＩＬ４Ｒに結合するさらなるマウスモノクローナル抗体の同定
マウスモノクローナル抗体は、２９３細胞によって産生されたイヌＩＬ４Ｒ細胞外ドメインを免疫原として使用する標準的な免疫化を使用して同定された。免疫化の間に異なるアジュバントが使用され（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）、モノクローナル抗体は標準的なハイブリドーマ技術によって得られた。イヌＩＬ４Ｒ結合抗体を産生するクローンをスクリーニングするために、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を開発した。最初に、イヌＩＬ４Ｒをビオチン化し、次いでそれをストレプトアビジンでコーティングしたウェルに導入した。次いで、免疫化した血清をウェルに加え、洗浄し、ＨＲＰコンジュゲート抗マウス抗体で検出した。イヌＩＬ４Ｒ結合抗体の存在は、陽性シグナルを発生させた。高い結合シグナルを有する１００を超えるＥＬＩＳＡ陽性クローンが同定された。
【０２３１】
さらに、中和（イヌＩＬ４ブロッキング）ＥＬＩＳＡを行った。イヌＩＬ４Ｒへのそれらの結合が、イヌＩＬ４によって阻害され得る４つのクローンが同定された。イヌＩＬ４のイヌＩＬ４Ｒへの結合は、Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、及びＭ９の４つのクローンによって阻害された。
【０２３２】
ハイブリドーマ細胞培養物から４つのマウス抗体を精製し、バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＯｃｔｅｔＲｅｄ）を使用して、イヌＩＬ４Ｒに対するそれらの親和性を測定した。ビオチン化イヌＩＬ４Ｒを、ストレプトアビジンセンサーチップに結合させた。４つの候補のＫｄは、全て１０ｎＭ未満であった。
【０２３３】
実施例１７
Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８、及びＭ９のＶＨ及びＶＬ配列の同定
Ｍ３、Ｍ５、Ｍ８及びＭ９を産生するハイブリドーマ細胞をペレット化した。ＲＮＡを抽出し、マウス免疫グロブリン（Ｉｇ）可変ドメインを増幅するためのオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、標準的な手法を使用してｃＤＮＡを得た。４つのクローンのそれぞれの可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）が決定された（配列番号２９２（Ｍ３  ＶＨ）、配列番号２９３（Ｍ３  ＶＬ）、配列番号３０８（Ｍ５  ＶＨ）、配列番号３０９（Ｍ５  ＶＬ）、配列番号３２４（Ｍ８  ＶＨ）、配列番号３２５（Ｍ８  ＶＬ）、配列番号３４０（Ｍ９  ＶＨ）、配列番号３４１（Ｍ９  ＶＬ））。
【０２３４】
実施例１８
ＣＨＯ細胞からのマウス−イヌキメラ抗体の発現と精製
キメラ抗体をコードするＤＮＡ配列が、マウスＶＨ及びマウスＶＬをイヌ定常重鎖ＩｇＧ−Ｂ及びイヌ定常軽鎖（カッパ）に融合させるために設計された。ヌクレオチド配列は化学的に合成され、ＣＨＯ宿主細胞へのトランスフェクションに適した発現ベクターに挿入された。ＣＨＯ細胞へのトランスフェクション後、軽鎖又は重鎖タンパク質、あるいはその両方が細胞から分泌された。４つのキメライヌＩｇＧ−Ｂは全て、一段階プロテインＡカラムクロマトグラフィーによって精製された。イヌＩＬ４Ｒに対するそれらの親和性は、バイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＯｃｔｅｔＲｅｄ）を使用して＜１０ｎＭであることが確認された。
【０２３５】
実施例１９
ＣＨＯ細胞からのイヌ化及び発現
マウス（Ｍ３、Ｍ９）ＶＨ及びＶＬは、ＣＤＲ移植のテンプレートとして適切なイヌ生殖系列抗体配列を検索して選択し、続いてタンパク質モデリングを行うことにより、イヌ化された。イヌ化可変軽鎖Ｍ３（配列番号３４４）及びイヌ化可変軽鎖Ｍ９（配列番号３４７）をイヌＣＬカッパに融合させた（その結果、それぞれ、配列番号３５０及び３５３を得た）。Ｍ３のイヌ化可変重鎖（配列番号３４２及び配列番号３４３）及びＭ９のイヌ化可変重鎖（配列番号３４４及び配列番号３４５）を変異体イヌＩｇＧ−Ｂに融合させ、その結果、それぞれ、配列番号３４８、配列番号３４９、配列番号３５１、及び配列番号３５２を得た。重鎖と軽鎖は容易に発現され、プロテインＡカラムを用いて一段階で精製された。
【０２３６】
イヌ化された抗体は良好に発現し、イヌＩＬ４Ｒへの結合親和性は≦１ｎＭを維持した。  
【０２３７】
実施例２０
イヌＩＬ４Ｒ細胞ベースのシグナル伝達アッセイの開発
悪性組織球増殖症に由来するイヌマクロファージ様細胞株であるイヌＤＨ８２細胞をＡＴＣＣ（ＣＲＬ１０３８９）から購入し、９６ウェルプレートに１０ｅ５細胞／ウェルで播種し、（ＡＴＣＣにより推奨される１５％のＦＢＳ  Ｄ−ＭＥＭ中で）３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。細胞の血清飢餓及び抗体プレインキュベーションは、各ウェルの培地を、５％ＣＯ２、３７℃で１時間、ＦＢＳを含まないＤ−ＭＥＭ中で段階希釈した抗ＩＬ４Ｒ又はハイブリドーマ上清調製物と交換することによって行った。次いで、イヌＩＬ４サイトカイン（ＲｎＤ  ＡＦ７５４）を、５％ＣＯ２、３７℃で、１ｎｇ／ｍＬ（最終濃度）で各ウェルに１５分間加えた。２０マイクロリットルの停止溶液（Ｍ−ｐｅｒ  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＃７８５０１）を各ウェルに加えた。各ウェルにおけるＩＬ４誘導性ＳＴＡＴ６リン酸化は、抗リン酸化ＳＴＡＴ６（ＲｎＤ  ＭＡＢ３７１７）ウエスタンブロッティングによってアッセイされた。
【０２３８】
Ｍ３、Ｍ８及びＭ９マウス抗体は、抗リン酸化ＳＴＡＴ６ウエスタンブロットによって評価されるように、ＳＴＡＴ６リン酸化を阻害した。
【０２３９】
実施例２１
Ｍ３、Ｍ８及びＭ９イヌＩＬ４Ｒ結合エピトープの同定
Ｍ３、Ｍ８、及びＭ９はウエスタンブロットに基づいてヒトＩＬ４Ｒを認識しなかったが、イヌＩＬ４Ｒに強く反応するため、キメライヌ−ヒトＩＬ４Ｒ融合分子の組み合わせを作製し、発現させ、各抗体が結合する最小のイヌセグメントを同定した。
【０２４０】
図９Ａは、イヌＩＬ４Ｒエピトープマッピング解析に使用されるイヌ／ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤハイブリッドポリペプチドを示す（上記の実施例１１のエピトープマッピングにおいて使用されるのと同じハイブリッド構築物）。図９Ｂは、イヌＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤ、及び異なるイヌ／ヒトＩＬ４Ｒ  ＥＣＤハイブリッドポリペプチドが、Ｍ３、Ｍ８、及びＭ９抗体でプローブされたウエスタンブロッティング解析をまとめたものである。表中でＮＲは、抗体がそれぞれのウエスタンブロットにおいてハイブリッドＩＬ４Ｒ  ＥＣＤに対して反応性でなかったことを示し、ヒトＩＬ４Ｒ配列に置き換えられたイヌＩＬ４Ｒ配列が抗体結合（エピトープ）にとって重要であることを示している。
【０２４１】
Ｍ３は、配列ＤＦＭＧＳＥＮＨＴＣＶＰＥＮ（配列番号３５４）を有するエピトープに結合することが決定された。Ｍ８は、配列ＧＳＶＫＶＬＨＥＰＳＣＦＳＤＹＩＳＴＳＶＣＱＷＫＭＤＨＰＴＮＣＳＡ（配列番号３５５）を有する第１のエピトープ及び配列ＲＥＤＳＶＣＶＣＳＭＰＩ（配列番号３５６）を有する第２のエピトープに結合することが決定された。Ｍ９は、配列ＲＥＤＳＶＣＶＣＳＭＰＩＤＤＡＶＥＡＤＶ（配列番号３５７）を有するエピトープに結合することが決定された。
【図１】
2022500037.tif 000056
【図２Ａ−２Ｂ】
2022500037.tif 000057
【図３Ａ−３Ｂ】
2022500037.tif 000058
【図３Ｃ−３Ｄ】
2022500037.tif 000059
【図４Ａ−４Ｂ】
2022500037.tif 000060
【図５Ａ−５Ｃ】
2022500037.tif 000061
【図６Ａ−６Ｃ】
2022500037.tif 000062
【図７Ａ−７Ｃ】
2022500037.tif 000063
【図８】
2022500037.tif 000064
【図９Ａ−９Ｂ】
2022500037.tif 000065
【国際調査報告】
2022500037.tif 000066
2022500037.tif 000067
2022500037.tif 000068
2022500037.tif 000069
2022500037.tif 000070