【手続補正書】
【提出日】平成22年6月15日(2010.6.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に純粋なオンコスタチンＭ（ＯＳＭ）が補足された基礎培地を含む培養培地。
【請求項２】
基礎培地に実質的に純粋なインターロイキン６（ＩＬ−６）が追加的に補足された、請求項１に記載の培養培地。
【請求項３】
基礎培地に実質的に純粋な白血病抑制因子（ＬＩＦ）が追加的に補足された、請求項１に記載の培養培地。
【請求項４】
基礎培地に実質的に純粋なＩＬ−６および実質的に純粋なＬＩＦが追加的に補足された、請求項１に記載の培養培地。
【請求項５】
基礎培地がｃＤＲＦである、請求項１に記載の培養培地。
【請求項６】
基礎培地に実質的に純粋な血小板−由来成長因子（ＰＤＧＦ）が追加的に補足された、請求項１に記載の培養培地。
【請求項７】
培養培地にステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ−トコフェロール酢酸からなる群より選択される１つまたは複数の脂質が追加的に補足された、請求項１に記載の培養培地。
【請求項８】
基礎培地がｃＤＲＦであり、ＰＤＧＦおよび化学的に定義された脂質混合物（ＣＤＬＭ）が追加的に補足された、請求項１に記載の培養培地。
【請求項９】
基礎培地がｃＤＲＦｍであり、ＰＤＧＦおよびＣＤＬＭが追加的に補足された、請求項１に記載の培養培地。
【請求項１０】
基礎培地がｃＤＲＦｍであり、ＰＤＧＦおよびＣＤＬＭが追加的に補足された、請求項２に記載の培養培地。
【請求項１１】
基礎培地に実質的に純粋なｊａｇｇｅｄ１（ＪＡＧ１）および／または実質的に純粋なインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）が補足されていない、請求項１に記載の培養培地。
【請求項１２】
培養培地中、ＯＳＭが０．０１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項１に記載の培養培地。
【請求項１３】
培養培地中、ＯＳＭおよびＩＬ−６のそれぞれが、０．０１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項２に記載の培養培地。
【請求項１４】
培養培地中、ＯＳＭおよびＬＩＦのそれぞれが、０．０１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項３に記載の培養培地。
【請求項１５】
培養培地中、ＯＳＭ、ＩＬ−６、およびＬＩＦが、０．０１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項４に記載の培養培地。
【請求項１６】
培養培地が無血清である、請求項１に記載の培養培地。
【請求項１７】
培養培地が血清をさらに含む、請求項１に記載の培養培地。
【請求項１８】
（ａ）ｃＤＲＦｍ；
（ｂ）０．１−１００ｎｇ／ｍｌ  ＰＤＧＦ；
（ｃ）０．０５−５％  ＣＤＬＭ；
（ｄ）０．０１−１０ｎｇ／ｍｌ  ＯＳＭ；および
（ｅ）０．０１−１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６
を含む培養培地。
【請求項１９】
実質的に純粋なＯＳＭが補足された基礎培地を含む培養培地とともに細胞をインキュベートする工程を含む、細胞培養の方法。
【請求項２０】
基礎培地に実質的に純粋なＩＬ−６が追加的に補足されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
基礎培地に実質的に純粋なＬＩＦが追加的に補足されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
基礎培地に実質的に純粋なＩＬ−６および実質的に純粋なＬＩＦが追加的に補足されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
基礎培地がｃＤＲＦである請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
基礎培地に実質的に純粋なＰＤＧＦが追加的に補足されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
基礎培地にステアリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、アラキドン酸、リノレン酸、コレステロール、およびアルファ−トコフェロール酢酸からなる群より選択される１つまたは複数の脂質が追加的に補足されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
基礎培地がｃＤＲＦであり、ＰＤＧＦおよびＣＤＬＭが追加的に補足されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
基礎培地がｃＤＲＦｍであり、ＰＤＧＦおよびＣＤＬＭが追加的に補足されている、請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
基礎培地がｃＤＲＦｍであり、ＰＤＧＦおよびＣＤＬＭが追加的に補足されている、請求項２０に記載の方法。
【請求項２９】
培養培地が実質的に純粋なＪＡＧ１および／または実質的に純粋なＩＬ−１３で補足されていない、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
ＯＳＭが培養培地中０．０１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項１９に記載の方法。
【請求項３１】
培養培地中、ＯＳＭおよびＩＬ−６がそれぞれ０．０１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項２０に記載の方法。
【請求項３２】
培養培地中、ＯＳＭおよびＬＩＦがそれぞれ０．０１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項２１に記載の方法。
【請求項３３】
培養培地中、ＯＳＭ、ＩＬ−６、およびＬＩＦがそれぞれ０．０１ｎｇ／ｍｌから１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度で存在する、請求項２２に記載の方法。
【請求項３４】
培養培地が無血清である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３５】
培養培地が血清をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項３６】
細胞が軟骨細胞である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３７】
軟骨細胞が脱分化される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
軟骨細胞が間葉系肝細胞に由来する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
軟骨細胞がヒト軟骨細胞である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
軟骨細胞がヒト関節軟骨細胞である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
軟骨細胞が初代である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
細胞を継代する工程をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項４３】
キレート剤を含む溶液で細胞をインキュベートすることによって細胞が継代される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
キレート剤がＥＤＴＡである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
ＥＤＴＡが０．１ｍＭから１ｍＭまでの濃度で溶液中に存在する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
３２５ユニット／ｍｌ以下のトリプシンを含む溶液で細胞をインキュベートすることによって細胞が継代される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
溶液が０．１ｍＭから１ｍＭまでのＥＤＴＡを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
細胞が２０，０００個／ｃｍ２以下の密度で播種される、請求項１９に記載の方法。
【請求項４９】
軟骨細胞を培養する方法であって、該軟骨細胞を培養培地でインキュベートする工程を含み、該培養培地が、
（ａ）ｃＤＲＦｍ；
（ｂ）０．１−１００ｎｇ／ｍｌ  ＰＤＧＦ；
（ｃ）０．０５−５％ＣＤＬＭ；
（ｄ）０．０１−１０ｎｇ／ｍｌ  ＯＳＭ；および
（ｅ）０．０１−１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６：
を含む、培養方法。
【請求項５０】
請求項１に記載の培養培地を用いて培養される軟骨細胞。
【請求項５１】
請求項１９に記載の方法を用いて培養される軟骨細胞。
【請求項５２】
請求項４９に記載の方法を用いて培養される軟骨細胞。
【請求項５３】
対象における軟骨欠損を治療するための医薬組成物であって、請求項１に記載の方法を用いて培養された軟骨細胞を含む医薬組成物。
【請求項５４】
対象における軟骨欠損を治療するための医薬組成物であって、請求項１９に記載の方法を用いて培養された軟骨細胞を含む医薬組成物。
【請求項５５】
対象における軟骨欠損を治療するための医薬組成物であって、請求項４９に記載の方法を用いて培養された軟骨細胞を含む医薬組成物。
【請求項５６】
軟骨細胞および請求項１に記載の培養培地を含む組成物。
【請求項５７】
軟骨細胞および
（ａ）ｃＤＲＦｍ；
（ｂ）０．１−１００ｎｇ／ｍｌ  ＰＤＧＦ；
（ｃ）０．０５−５％ＣＤＬＭ；
（ｄ）０．０１−１０ｎｇ／ｍｌ  ＯＳＭ；および
（ｅ）０．０１−１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−６
を含む培養培地を含む組成物。
【請求項５８】
培養培地であって、
（ａ）実質的に純粋なＰＤＧＦおよびＣＤＬＭのいずれか一方または両方；および
（ｂ）実質的に純粋なＯＳＭ、実質的に純粋なＩＬ−６、および実質的に純粋なＬＩＦのいずれか一つまたは複数：
が補足された基礎培地を含む、培養培地。
【請求項５９】
基礎培地がｃＤＲＦである、請求項５８に記載の培養培地。
【請求項６０】
基礎培地がｃＤＲＦｍである、請求項５８に記載の培養培地。
【請求項６１】
基礎培地が実質的に純粋なＰＤＧＦおよびＣＤＬＭで補足された、請求項５８に記載の培養培地。