(57)【要約】本開示は、１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１３型（ＨＳＤ１７Ｂ１３または１７β−ＨＳＤ１３）遺伝子発現を阻害することができるＲＮＡｉ剤、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤に関する。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物およびその使用方法も開示する。本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は標的化リガンドと結合して、肝実質細胞を含む細胞への送達を促進してよい。インビボでのＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の送達は、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現の阻害を提供する。ＲＮＡｉ剤を、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝線維症、および硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患を含むＨＳＤ１７Ｂ１３関連疾病および障害の治療方法において使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、前記ＲＮＡｉ剤は：
表２または表３に提供されている配列のうちのいずれか１つと０個または１個のヌクレオチドが異なる少なくとも１７連続ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖と；
前記アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、
を含む、ＲＮＡｉ剤。
【請求項２】
前記アンチセンス鎖は、表２または表３に提供されている配列のうちのいずれか１つのヌクレオチド２〜１８を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３】
前記センス鎖は、表２または表４に提供されているセンス鎖配列のうちのいずれか１つと０個または１個のヌクレオチドが異なる少なくとも１７連続ヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖は、前記アンチセンス鎖と１７連続ヌクレオチドにわたって少なくとも８５％の相補性の領域を有する、請求項１または請求項２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項４】
前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドであるか、または修飾ヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項５】
前記ＲＮＡｉ剤の前記センス鎖および／またはアンチセンス鎖の全てまたは実質的に全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである、請求項１〜３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項６】
前記修飾ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、２’，３’−セコヌクレオチド模倣物、ロックドヌクレオチド、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド、２’−メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、逆位ヌクレオチド、逆位２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、逆位２’−デオキシヌクレオチド、２’−アミノ修飾ヌクレオチド、２’−アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド、シクロプロピルホスホネートデオキシリボヌクレオチド、および３’−Ｏ−メチルヌクレオチドから成る群から選択される、請求項４〜５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項７】
全てもしくは実質的に全ての前記修飾ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、２’−フルオロヌクレオチド、またはこれらの組合せである、請求項５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項８】
前記アンチセンス鎖は、前記表３に提供されている修飾アンチセンス鎖配列のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項９】
前記センス鎖は、前記表４に提供されている修飾センス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１０】
前記アンチセンス鎖は、前記表３に提供されている修飾配列のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖は、前記表４に提供されている修飾配列のうちのいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１１】
前記ＲＮＡｉ剤は、標的化リガンドと連結している、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１２】
前記標的化リガンドは、ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項１１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１３】
前記標的化リガンドは：（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓから成る群から選択される構造を含む、請求項１１または請求項１２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１４】
前記標的化リガンドは、（ＮＡＧ３７）または（ＮＡＧ３７）ｓの構造を含む、請求項１３に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１５】
前記標的化リガンドは、前記センス鎖と連結している、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１６】
前記標的化リガンドは、前記センス鎖の５’末端と連結している、請求項１５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１７】
前記センス鎖は、１８〜３０ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖は、１８〜３０ヌクレオチド長である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１８】
前記センス鎖および前記アンチセンス鎖は、各々、１８〜２７ヌクレオチド長である、請求項１７に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項１９】
前記センス鎖および前記アンチセンス鎖は、各々、１８〜２４ヌクレオチド長である、請求項１８に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２０】
前記センス鎖および前記アンチセンス鎖は、各々、２１ヌクレオチド長である、請求項１９に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２１】
前記ＲＮＡｉ剤は、２つの平滑末端を有する、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２２】
前記センス鎖は、１つまたは２つの末端キャップを含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２３】
前記センス鎖は、１つまたは２つの逆位脱塩基残基を含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２４】
前記ＲＮＡｉ剤は、表５の二本鎖のいずれか１つの構造を有する二本鎖を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖から成る、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２５】
前記ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）；または
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含む、アンチセンス鎖を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２６】
前記センス鎖は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＣＧＵＡＡＧＡＡＧＵＣＵＧＡＵＡＧＡＵＧＡ（配列番号８）；または
ＧＣＣＵＡＧＧＡＣＡＵＵＵＵＵＧＩＡＵＣＡ（配列番号１１）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含み、Ｉはイノシン（ヒポキサンチン）ヌクレオチドである、請求項２５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２７】
全てまたは実質的に全ての前記修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである、請求項２５または２６に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２８】
前記センス鎖は、前記ヌクレオチド配列の３’末端、前記ヌクレオチド配列の５’末端、または両方において逆位脱塩基残基をさらに含む、請求項２５または２６に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項２９】
前記ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）；
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列を含む、から成る、またはから本質的に成り、
前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；前記センス鎖上の全てまたは実質的に全ての前記ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである、
請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３０】
前記センス鎖は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｃｇｕａａｇａａＧｆＵｆＣｆｕｇａｕａｇａｕｇａ（配列番号９）；
ｃｇｕａａｇａａＧｆｕＣｆｕＧｆａｕａｇａｕｇａ（配列番号１０）；
ｇｃｃｕａｇｇａＣｆＡｆＵｆｕｕｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１２）；または
ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列を含み、から成り、またはから本質的に成り、
前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；前記アンチセンス鎖上の全てまたは実質的に全ての前記ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである、
請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３１】
前記センス鎖は、前記ヌクレオチド配列の３’末端、前記ヌクレオチド配列の５’末端、または両方において逆位脱塩基残基をさらに含む、請求項２５〜３０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３２】
前記ＲＮＡｉ剤の前記センス鎖は、標的化リガンドと連結している、請求項２５〜３１のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３３】
前記標的化リガンドは、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有する、請求項３２に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３４】
前記標的化リガンドは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む、請求項３３に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３５】
前記ＲＮＡｉ剤は：ＡＤ０６２１４（配列番号２および１６）；ＡＤ０６２８０（配列番号４および１５）；ＡＤ０６１８７（配列番号５および１６）；ＡＤ０６２７６（配列番号５および１７）；ＡＤ０６２７７（配列番号７および１７）から成る群から選択される二本鎖構造を有する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３６】
前記ＲＮＡｉ剤は：ＡＤ０６２１４（配列番号２および１６）ならびにＡＤ０６２８０（配列番号４および１５）から成る群から選択される二本鎖構造を有する、請求項３５に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３７】
前記標的化リガンドは：
【化１】
2022501040.tif 000050
【化２】
2022501040.tif 000051
を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３８】
前記アンチセンス鎖は、（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）の修飾ヌクレオチド配列から成り、前記センス鎖は、（５’→３’）（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓｃｇｕａａｇａａＧｆＵｆＣｆｕｇａｕａｇａｕｇａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１４）の修飾ヌクレオチド配列から成り、
前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆位脱塩基デオキシリボース残基であり；（ＮＡＧ３７）ｓは次の化学構造：
【化３】
2022501040.tif 000052
を有する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項３９】
前記アンチセンス鎖は、（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）の修飾ヌクレオチド配列から成り、前記センス鎖は、（５’→３’）（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓｃｇｕａａｇａａＧｆｕＣｆｕＧｆａｕａｇａｕｇａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１５）の修飾ヌクレオチド配列から成り、
前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆位脱塩基デオキシリボース残基であり；（ＮＡＧ３７）ｓは次の化学構造：
【化４】
2022501040.tif 000053
を有する、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項４０】
前記アンチセンス鎖は、（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）の修飾ヌクレオチド配列から成り、前記センス鎖は、（５’→３’）（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓｇｃｃｕａｇｇａＣｆＡｆＵｆｕｕｕｕｇｉａｕｃａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１６）の修飾ヌクレオチド配列から成り、
前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆位脱塩基デオキシリボース残基であり；（ＮＡＧ３７）ｓは次の化学構造：
【化５】
2022501040.tif 000054
を有する、請求項３０に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項４１】
前記アンチセンス鎖は、（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）の修飾ヌクレオチド配列から成り、前記センス鎖は、（５’→３’）（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１７）の修飾ヌクレオチド配列から成り、
前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆位脱塩基デオキシリボース残基であり；（ＮＡＧ３７）ｓは次の化学構造：
【化６】
2022501040.tif 000055
を有する、請求項３０に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項４２】
前記アンチセンス鎖は、（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）の修飾ヌクレオチド配列から成り、前記センス鎖は、（５’→３’）（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１７）の修飾ヌクレオチド配列から成り、
前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓはホスホロチオエート結合であり；（ｉｎｖＡｂ）は逆位脱塩基デオキシリボース残基であり；（ＮＡＧ３７）ｓは次の化学構造：
【化７】
2022501040.tif 000056
を有する、請求項３０に記載のＲＮＡｉ剤。
【請求項４３】
組成物であって、前記組成物は、薬剤的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤を含む組成物。
【請求項４４】
前記組成物は、ＨＳＤ１７Ｂ１３の発現を阻害するための第二ＲＮＡｉ剤をさらに含む、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
前記組成物は、１つ以上の追加の治療薬をさらに含む、請求項４３または４４に記載の組成物。
【請求項４６】
細胞内のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現の阻害方法であって、前記方法は、請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の組成物の有効量を細胞に導入することを含む、方法。
【請求項４７】
前記細胞は、対象内である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記対象は、ヒト対象である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現を、少なくとも約３０％阻害する、請求項４６〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
ＨＳＤ１７Ｂ１３関連疾病または障害の治療方法であって、前記方法は、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の組成物の治療有効量を、それを必要とするヒト対象に投与することを含む、方法。
【請求項５１】
前記疾病は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、アルコール性脂肪肝疾患、または硬変症である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＲＮＡｉ剤を、前記ヒト対象の体重ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ〜約５．０ｍｇの投与量で投与する、請求項４６〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＲＮＡｉ剤を、２回以上の用量で投与する、請求項４６〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の組成物の使用であって、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現により少なくとも部分的に媒介される疾病、障害、または症状の治療のための、使用。
【請求項５５】
前記症状は、肝臓の硬変症である、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
請求項１〜４２のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤または請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の組成物の使用であって、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現により少なくとも部分的に媒介される疾病、障害、または症状の治療のための医薬組成物の製剤のための、使用。
【請求項５７】
前記疾病は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、または硬変症などのアルコール性もしくは非アルコール性脂肪肝疾患である、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項５８】
前記ＲＮＡｉ剤を、前記ヒト対象の体重ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ〜約５．０ｍｇの投与量で投与する、請求項４３〜４５のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２０１９年８月２２日に出願された米国特許仮出願第６２／８９０，２２０号、２０１８年１１月３０日に出願された米国特許仮出願第６２／７７３，７０７号、および２０１８年９月１９日に出願された米国特許仮出願第６２／７７３，３２０号の優先権を主張し、これらの各々の内容はその全文を参照することにより本明細書に組み入れられる。
【０００２】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ書式で提出された配列リストを含み、その全文を参照することにより本明細書に組み入れられる。ＡＳＣＩＩ複製物は、ファイル名３０６６７−ＷＯ＿ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔであり、容量は７５ｋｂである。
【０００３】
技術分野
本開示は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、例えば、１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１３型遺伝子発現を阻害するための二本鎖ＲＮＡｉ剤、１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１３型ＲＮＡｉ剤を含む組成物、およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
肝脂肪滴タンパク質１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１３型（通常、ＨＳＤ１７Ｂ１３、１７β−ＨＳＤ１３、ＨＳＤ１７β１３、１７β−ＨＳＤ１３、１７β−ＨＳＤ１３型、または１７Β−ＨＳＤ１３と呼ぶ）は、１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（１７β−ＨＳＤ）ファミリーのメンバーである。１７β−ＨＳＤファミリーは、性ホルモン、脂肪酸、および胆汁酸の還元または酸化に関与する１４酵素から成る。組織分布、細胞内局在、および酵素選択性は様々なファミリーメンバー間で異なる。１７β−ＨＳＤファミリーは、ステロイド、脂質、およびレチノイドを含む多種多様な基質特異性を示す。
【０００５】
１７β−ＨＳＤ１３タンパク質は、体内の広範囲な組織にわたって分布しており、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子（あるいは、１７β−ＨＳＤ１３遺伝子と呼ぶ）によりコードされる。最も高い発現レベルは、肝臓内の肝実質細胞で見られることが知られているが、一方で、低レベルは、卵巣、骨髄、腎臓、脳、肺、骨格筋、膀胱、および精巣内で検出され得る。１７Β−ＨＳＤ１３の機能は完全に理解されていないが、１７β−ＨＳＤ−４、−７、−１０、および−１２を含む１７β−ＨＳＤファミリーメンバーのいくつかは、炭水化物および脂肪酸代謝に関与することが示された。これは、１７Β−ＨＳＤ１３が脂質代謝経路においても関与し得ることを示唆している。肝臓の１７Β−ＨＳＤ１３上方制御が脂肪肝を有する患者において観察されたことが報告され、これは、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の病因においてこの酵素の役割を支持している。
【０００６】
Ｗｅｎ  Ｓｕらは、以前に、ＮＡＦＬＤ患者における脂肪滴（ＬＤ）関連タンパク質として１７Β−ＨＳＤ１３を同定し、１７Β−ＨＳＤ１３はＬＤの表面上に特異的に局在化された最も大量に発現されたＬＤタンパク質のうちの１つであったことを報告した。（Ｗｅｎ  Ｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｒｅｖｅａｌｓ  １７β−ＨＳＤ１３  ａｓ  ａ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎ  ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ，１１１  ＰＮＡＳ  １１４３７−１１４４２（２０１４））。さらに、１７Β−ＨＳＤ１３のレベルは、ＮＡＦＬＤ患者およびマウスの肝臓において上方制御されることが分かった。過剰発現はＬＤの数および大きさの増大をもたらしたが、ＨＳＤ１７Ｂ１３の遺伝子サイレンシングは、培養肝実質細胞においてオレイン酸誘発ＬＤ生成を減弱した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける１７β−ＨＳＤ１３タンパク質の肝内過剰発現は、肝臓における脂質生合成およびトリグリセリド（ＴＧ）含有率を著しく増加させて脂肪肝表現型に至ることが示された。
【０００７】
ＮＡＦＬＤおよび非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の病因におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現を意味づける更なる証拠は、Ｎ．Ｓ．Ａｂｕｌ−Ｈｕｓｎ  ｅｔ．ａｌ．，Ａ  Ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｔｒｕｎｃａｔｉｎｇ  ＨＳＤ１７Ｂ１３  Ｖａｒｉａｎｔ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ，３７８  Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．１０９６−１１０６（２０１８）により提供された。このグループはゲノムワイド関連解析を行い、アラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）のレベル低下と関連したＨＳＤ１７Ｂ１３におけるスプライスバリアント（ｒｓ７２６１３５６７：ＴＡ）を明らかにし、脂肪肝を有する患者においてより少ない肝損傷および肝炎を示した。スプライスバリアントは、機能タンパク質の切断型欠損を引き起こし、ＨＳＤ１７Ｂ１３が通常肝細胞障害を促進し得る生成物を生じることを示唆している。
【０００８】
ＮＡＦＬＤは、世界的に主要な健康問題である。ＮＡＦＬＤは障害の重症度で変わる肝臓状態の連続体および結果として生じる線維症を含む包括的用語である。これらのうち、肝臓の脂肪過多（脂肪肝）は単独で一般的にはＮＡＦＬと呼ばれ、ＮＡＳＨは通常炎症および肝実質細胞傷害（脂肪性肝炎）を有するより重症なプロセスとして定義される。一般的に、ＮＡＳＨは線維症を併発し、硬変症に進行することが多い。ＮＡＦＬのみの患者は、有害転帰のより低いリスクを保有するが、ＮＡＳＨの存在は肝臓および非肝臓関連転帰のリスクを増大する。ＮＡＳＨに関連する有害な肝臓の転としては、肝不全、硬変症、および肝細胞がんが挙げられる。非肝臓関連有害転帰は、通常、循環器疾患および悪性腫瘍増大に関連する。
【０００９】
世界的に、ＮＡＦＬＤの有病率は、約２５％と推定される。米国では、ＮＡＦＬＤ症例数は２０１５年の８３．１百万人（人工の約２５％）から２０３０年には１００．９百万人にまで増加すると予測されている。ＮＡＳＨは、これらの症例の割合が増加し、ＮＡＦＬＤに罹患している成人の２０％から２７％に増加すると予想されている。この増加している疾病の罹患率は、確実に経済的負担をもたらし、肝臓移植を要する末期肝疾患患者数の増加および肝細胞がんの劇的な増加の両方が同時に起こるだろう。他の肝疾患の発症率と比較して、ＮＡＳＨにおいて生じる肝細胞がんの症例は、患者が硬変症になり、がんの定期的スクリーニングを行う前に、より大きなパーセンテージ（約３５〜５０％）で起こる。これは、他の原因のものより、大きく根治療法に効果が少ない腫瘍を、しばしばもたらす。
【００１０】
アルコールによる肝疾患（ＡＲＬＤ）も世界的に蔓延しており、過剰な持続的アルコール使用により引き起こされる進行性肝疾患を表す。ＡＲＬＤの様々な疾病状態が存在し、アルコール性脂肪肝（アルコール性脂肪過多症）、アルコール性肝炎、および硬変症が挙げられる。
【００１１】
現在、ＮＡＳＨまたは他の疾病およびＮＡＦＬＤもしくはＡＲＬＤに該当する病態の治療のための承認された医薬品はない。
【発明の概要】
【００１２】
新規ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子特異的ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤（本明細書においてＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉトリガー、またはトリガーとも呼ばれる）、例えば、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を選択的および効果的に阻害することができる二本鎖ＲＮＡｉ剤が必要である。さらに、とりわけ、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患などの疾病を治療するための新規ＨＳＤ１７Ｂ１３特異的ＲＮＡｉ剤を含む組成物に対するニーズがある。
【００１３】
概して、本開示は、本明細書に記載されている、新規ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物、ならびにＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤およびＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物を使用するインビトロおよび／またはインビボでのＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現の阻害方法を特徴とする。本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、対象、例えば、ヒトまたは動物対象におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を選択的および効果的に減少、阻害、または発現停止させることができる。
【００１４】
記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患に関連する症状および疾病の治療処置（予防的（prophylactic）および予防（preventative）処置を含む）のための方法において使用することができる。本明細書に開示されている方法は、皮下注射または静脈内投与などの当技術分野で公知のいずれかの適切な方法を使用して、対象、例えば、ヒトまたは動物対象に１つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を投与することを含む。
【００１５】
１つの態様では、本開示は、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、該ＲＮＡｉ剤はセンス鎖（パッセンジャー鎖とも呼ぶ）およびアンチセンス鎖（ガイド鎖とも呼ぶ）を含む、ＲＮＡｉ剤を特徴とする。センス鎖およびアンチセンス鎖は、部分的、実質的、または完全に相互に相補的であり得る。本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖の長さは、各々、１６〜４９ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、独立して、１７〜２６ヌクレオチド長である。センス鎖およびアンチセンス鎖は、同じ長さであってもよく、異なる長さであってもよい。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、独立して、２１〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、独立して、２１〜２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方は、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、独立して、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は、独立して、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、または４９ヌクレオチド長である。本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤は、ＨＳＤ１７Ｂ１３を発現する細胞への送達次第、インビボまたはインビトロで１つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害する。
【００１６】
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヒトＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子（例えば、配列番号１参照）を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表１に開示されている配列のうちのいずれかの配列を有するＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の一部を標的とする。
【００１７】
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤に含むことができるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖の例を、表３および表４に提供する。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤二本鎖の例を表５に提供し、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化リガンドと連結していると示されている特定のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の化学構造および概略図を、図１Ａ〜１０Ｄおよび図１１Ａ〜１１Ｅに図示する。本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖から成るまたはそれに含まれる１９ヌクレオチドコアストレッチ配列の例を表２に示す。
【００１８】
別の態様では、本開示は、インビボでの哺乳類などの対象における肝細胞へのＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の送達方法を特徴とする。本明細書において、かかる方法において使用するための組成物も記載する。
【００１９】
１つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、当技術分野において公知のいずれかのオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、細胞または組織を標的にするように送達することができる。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド（すなわち、肝臓内の肝実質細胞で大量に発現されるアシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有する化合物を含むリガンド）などの標的化基とＲＮＡｉ剤を共有結合で連結または結合することにより細胞または組織を標的にするように送達する。いくつかの実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、ガラクトースまたはガラクトース誘導体クラスターを含む、から成る、またはから本質的に成る。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ガラクトース誘導体Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化基または標的化リガンドと結合している。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体またはＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体を含むまたはから成る。
【００２０】
いくつかの実施形態では、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む標的化基または標的化リガンドと結合している本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、肝細胞、および肝実質細胞、特に、受容体媒介エンドサイトーシスまたは他の手段によって選択的にインターナライズされる。
【００２１】
いくつかの実施形態では、標的化基は、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の３’または５’末端と連結している。いくつかの実施形態では、標的化基は、センス鎖の５’末端と連結している。
【００２２】
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を肝実質細胞に送達するために有用な標的化リガンドおよび標的化基は、例えば、国際公開第２０１８／０４４３５０号および国際公開２０１７／１５６０１２号（これらの全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に開示されている。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、本明細書中、表６にそれぞれ定義されている（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有する１つ以上の標的化リガンドと連結することができる。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の５’末端において３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン部分を含む標的化リガンドと結合しており、標的化リガンドが、本明細書中、表６にそれぞれ定義されている（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓの構造を有する。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本明細書において、表５に開示されている二本鎖構造を有する１つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物を記載する。
【００２５】
別の態様では、本開示は、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現の阻害方法であって、該方法は、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害することができるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の量を対象または対象の細胞に投与することを含み、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は表２または表３のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つの配列を含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現の阻害方法であって、該方法は、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害することができるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の量を対象または対象の細胞に投与することを含み、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、該センス鎖は表２または表４のセンス鎖ヌクレオチド配列のうちのいずれか１つの配列を含む、方法を開示する。いくつかの実施形態では、本明細書において、細胞または対象のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現の阻害方法であって、該方法は、表４の配列のうちのいずれかの配列を含むセンス鎖、および表３の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を有するＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、細胞または対象に投与することを含む、方法を開示する。本明細書において、かかる方法において使用するための組成物も開示する。
【００２６】
さらなる態様では、本開示は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患を原因とする疾病または症状の治療方法（予防的（prophylactic）および予防（preventative）処置を含む）であって、該方法は、表２もしくは３の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を有するＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、本明細書において、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患を原因とする疾病または症状の治療方法（予防的（preventative）治療を含む）であって、該方法は、表２もしくは３の配列のうちのいずれかの配列を含むセンス鎖を有するＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を記載する。本明細書において、かかる方法において使用するための組成物も記載する。
【００２７】
いくつかの実施形態では、インビボで肝細胞、特に、肝実質細胞にＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物であって、該組成物は：標的化基と連結または結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む、組成物を記載する。いくつかの実施形態では、標的化基は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンである。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）と、０個または１個のヌクレオチドが異なる核酸塩基配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）と、わずか１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）と、０個または１個のヌクレオチドが異なる核酸塩基配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号３は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
【００２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）と、わずか１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり、センス鎖はアンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者が明白に理解するように、本明細書に開示されている修飾ヌクレオチド配列中に見られるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に通常存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全ヌクレオシド間結合を示す図１１Ａ〜１１Ｅ参照）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり、センス鎖はアンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）と、わずか１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり、センス鎖はアンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者が明白に理解するように、本明細書に開示されている修飾ヌクレオチド配列中に見られるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に通常存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全ヌクレオシド間結合を示す図１１Ａ〜１１Ｅ参照）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり、センス鎖はアンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００３１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）と、０個または１個のヌクレオチドが異なる核酸塩基配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）と、わずか１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）と、０個または１個のヌクレオチドが異なる核酸塩基配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号６は、アンチセンス鎖の１〜２１位（５’→３’）に位置する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）と、わずか１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり、センス鎖はアンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者が明白に理解するように、本明細書に開示されている修飾ヌクレオチド配列中に見られるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に通常存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全ヌクレオシド間結合を示す図１１Ａ〜１１Ｅ参照）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり、センス鎖はアンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）と、わずか１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり、センス鎖はアンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者が明白に理解するように、本明細書に開示されている修飾ヌクレオチド配列中に見られるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に通常存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、全ヌクレオシド間結合を示す図１１Ａ〜１１Ｅ参照）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり、センス鎖はアンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
【００３４】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＣＧＵＡＡＧＡＡＧＵＣＵＧＡＵＡＧＡＵＧＡ（配列番号８）と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）と、わずか１個の核酸塩基が異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含み、全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであるアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＣＧＵＡＡＧＡＡＧＵＣＵＧＡＵＡＧＡＵＧＡ（配列番号８）と、わずか１個の核酸塩基が異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含み、全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであるセンス鎖を含む。
【００３５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＣＵＡＧＧＡＣＡＵＵＵＵＵＧＩＡＵＣＡ（配列番号１１）と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含み、Ｉはイノシン（ヒポキサンチン）ヌクレオチドであるセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）と、わずか１個の核酸塩基が異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含み、全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであるアンチセンス鎖、およびヌクレオチド配列（５’→３’）ＧＣＣＵＡＧＧＡＣＡＵＵＵＵＵＧＩＡＵＣＡ（配列番号１１）と、わずか１個の核酸塩基が異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含み、Ｉはイノシン（ヒポキサンチン）ヌクレオチドであり、全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであるセンス鎖を含む。
【００３６】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃｇｕａａｇａａＧｆＵｆＣｆｕｇａｕａｇａｕｇａ（配列番号９）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃｇｕａａｇａａＧｆＵｆＣｆｕｇａｕａｇａｕｇａ（配列番号９）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、該センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、該センス鎖は５’末端と共有結合で連結されている標的化リガンドも含み、該標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００３７】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃｇｕａａｇａａＧｆｕＣｆｕＧｆａｕａｇａｕｇａ（配列番号１０）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃｇｕａａｇａａＧｆｕＣｆｕＧｆａｕａｇａｕｇａ（配列番号１０）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、該センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、該センス鎖は５’末端と共有結合で連結されている標的化リガンドも含み、該標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００３８】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃｕａｇｇａＣｆＡｆＵｆｕｕｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１２）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃｕａｇｇａＣｆＡｆＵｆｕｕｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１２）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、該センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、該センス鎖は５’末端と共有結合で連結されている標的化リガンドも含み、該標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００３９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、該センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、該センス鎖は５’末端と共有結合で連結されている標的化リガンドも含み、該標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００４０】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖、および修飾ヌクレオチド配列（５’→３’）ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）から成る、から本質的に成る、またはこれを含むセンス鎖を含み、該センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、該センス鎖は５’末端と共有結合で連結されている標的化リガンドも含み、該標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００４１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）；または
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖およびセンス鎖両方の全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドである。
【００４２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）；または
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖およびセンス鎖両方の全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり；センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は５’末端と共有結合で連結する標的化リガンドも含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）；または
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；アンチセンス鎖およびセンス鎖両方の全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり；センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は５’末端と共有結合で連結する標的化リガンドも含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含み；それぞれのアンチセンス鎖配列はアンチセンス鎖の１〜２１位に位置する。
【００４４】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）対：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）および
ＣＧＵＡＡＧＡＡＧＵＣＵＧＡＵＡＧＡＵＧＡ（配列番号８）；または
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）および
配列中Ｉはイノシン（ヒポキサンチン）ヌクレオチドである、ＧＣＣＵＡＧＧＡＣＡＵＵＵＵＵＧＩＡＵＣＡ（配列番号１１）
と０個または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成り、から本質的に成り、またはこれを含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖両方の全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドである。
【００４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）対：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡＣＧ（配列番号３）および
ＣＧＵＡＡＧＡＡＧＵＣＵＧＡＵＡＧＡＵＧＡ（配列番号８）；または
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧＧＣ（配列番号６）および
配列中Ｉはイノシン（ヒポキサンチン）ヌクレオチドである、ＧＣＣＵＡＧＧＡＣＡＵＵＵＵＵＧＩＡＵＣＡ（配列番号１１）
と０個または１個のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含み、アンチセンス鎖およびセンス鎖両方の全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり；センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は５’末端と共有結合で連結する標的化リガンドも含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）；
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤はアンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；センス鎖上の全てまたは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドである。
【００４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）；
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖を含み、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み；センス鎖の全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり；アンチセンス鎖およびセンス鎖両方の全てもしくは実質的に全てのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり；センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は５’末端と共有結合で連結する標的化リガンドも含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００４８】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列対（５’→３’）：
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）および
ｃｇｕａａｇａａＧｆＵｆＣｆｕｇａｕａｇａｕｇａ（配列番号９）；
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）および
ｃｇｕａａｇａａＧｆｕＣｆｕＧｆａｕａｇａｕｇａ（配列番号１０）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）および
ｇｃｃｕａｇｇａＣｆＡｆＵｆｕｕｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１２）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）および
ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）；または
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）および
ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）
の１つと０個または１個のヌクレオチドが異なる修飾ヌクレオチド配列から成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合である。
【００４９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、次のヌクレオチド配列対（５’→３’）：
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａＵｆｃＡｆｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号２）および
ｃｇｕａａｇａａＧｆＵｆＣｆｕｇａｕａｇａｕｇａ（配列番号９）；
ｕｓＣｆｓａｓＵｆｃＵｆａｕｃａｇＡｆｃＵｆｕＣｆｕＵｆａＣｆｓｇ（配列番号４）および
ｃｇｕａａｇａａＧｆｕＣｆｕＧｆａｕａｇａｕｇａ（配列番号１０）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）および
ｇｃｃｕａｇｇａＣｆＡｆＵｆｕｕｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１２）；
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａＡｆａＡｆａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号５）および
ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）；または
ｕｓＧｆｓａｓＵｆｃＣｆａａａａａＵｆｇＵｆｃＣｆｕＡｆｇＧｆｓｃ（配列番号７）および
ｇｃｃｕａｇｇａＣｆａＵｆｕＵｆｕｕｇｉａｕｃａ（配列番号１３）
の１つから成る、から本質的に成る、またはこれを含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、前記配列中、ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、それぞれ、２’−Ｏ−メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、イノシン、またはウリジンであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、それぞれ、２’−フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンであり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；センス鎖はヌクレオチド配列の３’末端および５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖は５’末端と共有結合で連結する標的化リガンドも含み、標的化リガンドはＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【００５０】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡ（配列番号２６）；または
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧ（配列番号４１）
から成る群から選択されるヌクレオチド配列と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含む。
【００５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡ（配列番号２６）；および
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧ（配列番号４１）
から成る群から選択されるヌクレオチド配列と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含み、全てまたは実質的に全ての前記修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。
【００５２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡ（配列番号２６）；または
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧ（配列番号４１）；
から成る群から選択されるヌクレオチド配列と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含み、全てもしくは実質的に全ての前記修飾ヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、配列番号２６または配列番号４１は、それぞれ、アンチセンス鎖のヌクレオチド１〜１９位（５’→３’）に位置する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡ（配列番号２６）；および
ＵＡＡＧＡＡＧＵＣＵＧＡＵＡＧＡＵＧＡ（配列番号６７）；
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧ（配列番号４１）および
配列中Ｉはイノシンヌクレオチドである、ＣＵＡＧＧＡＣＡＵＵＵＵＵＧＩＡＵＣＡ（配列番号８６）
から成る群から選択されるヌクレオチド配列対と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を各々含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
【００５４】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＣＡＵＣＵＡＵＣＡＧＡＣＵＵＣＵＵＡ（配列番号２６）；および
ＵＡＡＧＡＡＧＵＣＵＧＡＵＡＧＡＵＧＡ（配列番号６７）；
ＵＧＡＵＣＣＡＡＡＡＡＵＧＵＣＣＵＡＧ（配列番号４１）および
配列中Ｉはイノシンヌクレオチドである、ＣＵＡＧＧＡＣＡＵＵＵＵＵＧＩＡＵＣＡ（配列番号８６）
から成る群から選択されるヌクレオチド配列対と、０個または１個の核酸塩基が異なる核酸塩基配列を各々含むアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、全てまたは実質的に全ての前記修飾ヌクレオチドは修飾ヌクレオチドである。
【００５５】
いくつかの実施形態では、１つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む、本明細書に記載されている組成物を、キット、容器、パック、ディスペンサー、プレフィルドシリンジ、またはバイアル中に包装する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている組成物を、例えば、皮下注射により非経口投与する。
【００５６】
本明細書で使用されるとき、用語「オリゴヌクレオチド」および「ポリヌクレオチド」は、その各々が独立して修飾されていてもよく修飾されていなくてもよい連結されたヌクレオチドの重合体を意味する。
【００５７】
本明細書で使用されるとき、「ＲＮＡｉ剤」（ＲＮＡｉトリガーとも呼ぶ）は、配列特異的方法で標的ｍＲＮＡのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物の翻訳を分解または阻害（例えば、適切な条件下で分解または阻害）することができるＲＮＡまたはＲＮＡ様（例えば、化学的に修飾されたＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含む組成物を意味する。本明細書で使用されるとき、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉機構（すなわち、哺乳類細胞のＲＮＡ干渉経路機構（RNA誘導サイレンシング複合体またはＲＩＳＣ）との相互作用によりＲＮＡ干渉を誘導する）、またはいずれかの代替の機構もしくは経路により機能し得る。この用語が本明細書で使用されるとき、ＲＮＡｉ剤は、主にＲＮＡ干渉機構により機能すると考えられるが、開示されているＲＮＡｉ剤は、いずれもの特定の経路または作用機序に束縛も限定もされない。本明細書に開示されているＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖から成り、短鎖（または低分子）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、およびダイサー基質が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、標的化されているｍＲＮＡ（すなわち、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ）と少なくとも部分的に相補的である。ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチドおよび／または１つ以上の非ホスホジエステル結合を含むことができる。
【００５８】
本明細書で使用されるとき、所与の遺伝子の発現を表す場合、用語「発現停止する」、「低減する」、「阻害する」、「下方制御する」、または「ノックダウンする」は、遺伝子から転写されたＲＮＡレベルまたは遺伝子が転写された細胞、細胞群、組織、臓器、もしくは対象におけるｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチド、タンパク質、もしくはタンパク質サブユニットのレベルにより測定されるとき、遺伝子の発現が細胞、細胞群、組織、臓器、もしくは対象が本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤で治療される場合に、そのように治療されていない第二細胞、細胞群、組織、臓器、もしくは対象と比較して低減することを意味する。
【００５９】
本明細書で使用されるとき、用語「配列」および「ヌクレオチド配列」は、標準用語を使用して文字の連続で記載される核酸塩基またはヌクレオチドの連続または順序を意味する。
【００６０】
本明細書で使用されるとき、「塩基」、「ヌクレオチド塩基」、または「核酸塩基」は、ヌクレオチドの構成成分である複素環式ピリミジンまたはプリン化合物であり、主要なプリン塩基であるアデニンおよびグアニン、主要なピリミジン塩基であるシトシン、チミン、およびウラシルが挙げられる。核酸塩基を、さらに修飾してもよく、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、非特異的（promiscuous）塩基、サイズが拡大された塩基、およびフッ化塩基が挙げられるが、これらに限定されない。（例えば、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００８参照）。かかる修飾ヌクレオチド（修飾ヌクレオチドを含むホスホラミダイト化合物を含む）の合成は、当技術分野において公知である。
【００６１】
本明細書で使用されるとき、別段の指定がない限り、用語「相補的」は、第二核酸塩基またはヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖または一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド）と関連する第一核酸塩基またはヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤センス鎖または標的化ｍＲＮＡ）を説明するために使用される場合、加水分解（哺乳類の生理的条件下において塩基対水素結合を生成（さもなければ、適切なインビボもしくはインビトロ条件））および特定の標準条件下において第二ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドと二本鎖または二重らせん構造を形成する第一ヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの能力を意味する。当業者は、ハイブリダイゼーション試験に最も適切な条件セットを選択することができるだろう。相補的配列としては、ワトソン・クリック塩基対または非ワトソン・クリック塩基対が挙げられ、天然または、少なくとも上記ハイブリダイゼーションの要件を満たす程度までの修飾ヌクレオチドもしくはヌクレオチド模倣物が挙げられる。配列決定または相補性は、修飾と無関係である。例えば、本明細書で定義されているａおよびＡｆは、同一性または相補性を決定する目的のために、Ｕ（またはＴ）と相補的であり、Ａと等しい。
【００６２】
本明細書で使用されるとき、「完全に（perfectly）相補的」または「完全に（fully）相補的」は、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズされた対において、第一オリゴヌクレオチドの連続配列における全て（１００％）の塩基が、第二オリゴヌクレオチドの連続配列における同数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続配列は、第一または第二ヌクレオチド配列の全てまたは一部を含んでよい。
【００６３】
本明細書で使用されるとき、「部分的に相補的」は、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズされた対において、第一オリゴヌクレオチドの連続配列における全てではないが少なくとも７０％の塩基が第二オリゴヌクレオチドの連続配列における同数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続配列は、第一または第二ヌクレオチド配列の全てまたは一部を含んでよい。
【００６４】
本明細書で使用されるとき、「実質的に相補的」は、核酸塩基またはヌクレオチド配列分子のハイブリダイズされた対において、第一オリゴヌクレオチドの連続配列における全てではないが少なくとも８５％の塩基が第二オリゴヌクレオチドの連続配列における同数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続配列は、第一または第二ヌクレオチド配列の全てまたは一部を含んでよい。
【００６５】
本明細書で使用されるとき、用語「相補的」、「完全に相補的」、「部分的に相補的」、および「実質的に相補的」は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖およびＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの配列間の核酸塩基またはヌクレオチドマッチングに関して使用される。
【００６６】
本明細書で使用されるとき、用語「実質的に同一」または「実質的同一性」は、核酸に適用されるとき、ヌクレオチド配列（またはヌクレオチド配列の一部）が参照配列と比較して、少なくとも約８５％以上の配列同一性、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有することを意味する。配列同一性のパーセンテージを、比較ウインドウにわたって２つの最適に整列された配列の比較によって決定する。パーセンテージを、同種の核酸塩基が対応位置数を得るための双方の配列において存在する位置数を決定し、対応位置数を比較ウインドウ内の総位置数で割り、その結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出する。本明細書に開示されている本発明は、本明細書に開示されているヌクレオチド配列と実質的に同一なヌクレオチド配列を包含する。
【００６７】
本明細書で使用されるとき、用語「治療する」、「治療」、および同様な用語は、対象の疾病の１つ以上の症状の数、重症度、および／または頻度を軽減または緩和するために行われる方法またはステップを意味する。本明細書で使用されるとき、「治療する」および「治療」は、対象の疾病の１つ以上の症状の数、重症度、および／または頻度の予防、管理、予防処置、および／または阻害または低減を含み得る。
【００６８】
本明細書で使用されるとき、言回し「細胞への導入」は、ＲＮＡｉ剤を表す場合、ＲＮＡｉ剤を細胞に機能的に送達することを意味する。言回し「機能的送達」は、ＲＮＡｉ剤が期待生理活性、例えば、遺伝子発現の配列特異的阻害を有することを可能とする方法で、ＲＮＡｉ剤を細胞に送達することを意味する。
【００６９】
別段の記載がない限り、本明細書で使用されるとき、シンボル
【化１】
2022501040.tif 000002
の使用は、本明細書に記載されている本発明の範囲によるいずれかの基または複数の基が連結し得ることを意味する。
【００７０】
本明細書で使用されるとき、用語「異性体」は、同一分子式を有するが、これらの原子の結合の性質もしくは配列またはこれらの原子の空間的配列が異なる化合物を表す。これらの原子の空間的配列が異なる異性体は、「立体異性体」と呼ばれる。相互の鏡像でない立体異性体は「ジアステレオマー」と呼ばれ、重ねることができない鏡像である立体異性体は「鏡像異性体」と呼ばれ、または光学異性体と呼ばれることもある。４つの同一でない置換基と結合した炭素原子は、「キラル中心」と呼ばれる。
【００７１】
本明細書で使用されるとき、構造において特定の立体配座を有すると特に同定されない限り、不斉中心が存在し、従って、鏡像異性体、ジアステレオマー、または他の立体異性配置を生じる各構造に関して、本明細書に開示されている各構造は、これらの光学的に純粋な形態およびラセミ体を含むかかる全ての可能な異性体を表すものとする。例えば、本明細書に開示されている構造は、単一の立体異性体だけでなく、ジアステレオマー混合物も包含するものとする。
【００７２】
本明細書のクレームで使用されるとき、言回し「から成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」は、クレーム中で明記されていない要素、ステップ、または成分を除外する。本明細書のクレームで使用されるとき、言回し「から本質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」は、クレームの範囲を明記されている材料またはステップならびにクレームされた本発明の基本的および新規特性に実質的に影響を与えないものに限定する。
【００７３】
当業者は、本明細書に開示されている化合物および組成物が、化合物もしくは組成物が配置される環境に依存してプロトン化または脱プロトン化される状態において特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ原子）を有してよいと容易に理解および認識するだろう。したがって、本明細書で使用されるとき、本明細書に開示されている構造は、例えば、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＨなどの特定の官能基がプロトン化または脱プロトン化され得ることを想定する。本明細書における開示は、当業者により容易に理解されるように、環境（ｐＨなど）に基づいたプロトン化の状態に関わらず、開示された化合物および組成物を包含するものとする。同様に、反応活性プロトンまたは塩基原子を含む本明細書に記載されている化合物も、対応する化合物の塩形態を表すと理解されるべきである。本明細書に記載されている化合物は、遊離酸、遊離塩基、または塩形態であり得る。本明細書に記載されている化合物の薬剤的に許容可能な塩は、本発明の範囲内であると理解されるべきである。
【００７４】
本明細書で使用されるとき、用語「連結された（ｌｉｎｋｅｄ）」または「結合された（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）」は、２つの化合物または分子間の繋がりを表す場合、２つの化合物または分子が共有結合によって接続していることを意味する。記載がない限り、本明細書で使用されるとき、用語「連結された（ｌｉｎｋｅｄ）」および「結合された（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）」は、媒介する原子もしくは原子群が存在するかしないかに関わらず、第一化合物および第二化合物間の繋がりを表し得る。
【００７５】
本明細書で使用されるとき、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、言回し「含むが、限定されない（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ）」という意味で本明細書において使用され、これと互換的に使用される。用語「または（ｏｒ）」は、文脈上特に明記されていない限り、用語「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」という意味で本明細書において使用され、これと互換的に使用される。
【００７６】
特に規定されない限り、本明細書で使用される全ての技術および科学用語は、当業者が通常に理解するのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様または均等な方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な方法および材料を以下に記載する。本明細書で記載される全ての出版物、特許出願、特許および他の参考文献は、これらの全文を参照することによって本明細書に組み入れられる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先する。加えて、材料、方法、および実施例は、例証だけであり、限定的するものではない。
【００７７】
本発明の他の目的、特徴、態様、および利点は、図を付随する以下の詳細な説明、およびクレームから明白となるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】図１Ａ〜１Ｄ．遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１４の化学構造図。
【００７９】
【図２】図２Ａ〜２Ｄ．遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２８０の化学構造図。
【００８０】
【図３】図３Ａ〜３Ｄ．遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６１８７の化学構造図。
【００８１】
【図４】図４Ａ〜４Ｄ．遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２７６の化学構造図。
【００８２】
【図５】図５Ａ〜５Ｄ．遊離酸の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２７７の化学構造図。
【００８３】
【図６】図６Ａ〜６Ｄ．ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１４の化学構造図。
【００８４】
【図７】図７Ａ〜７Ｄ．ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２８０の化学構造図。
【００８５】
【図８】図８Ａ〜８Ｄ．ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６１８７の化学構造図。
【００８６】
【図９】図９Ａ〜９Ｄ．ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２７６の化学構造図。
【００８７】
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｄ．ナトリウム塩の形態で示されている、センス鎖の５’末端における（ＮＡＧ３７）ｓの三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２７７の化学構造図。
【００８８】
【図１１Ａ】図１１Ａ．（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６；図１および６参照）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１４（表３〜５参照）の修飾センスおよびアンチセンス鎖の概略図。図１１Ａ〜１１Ｅでは次の略語を使用している：ａ、ｃ、ｇ、ｉ、およびｕは、２’−Ｏ−メチル修飾ヌクレオチドであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、およびＵｆは、２’−フルオロ修飾ヌクレオチドであり；ｏは、ホスホジエステル結合であり；ｓは、ホスホロチオエート結合であり；ｉｎｖＡｂは、逆位脱塩基残基であり；（ＮＡＧ３７）ｓは、表６に図示されている構造を有する三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン標的化リガンドである。図１１Ａは、配列番号２および１４を開示している。
【００８９】
【図１１Ｂ】図１１Ｂ．（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６参照）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２８０（表３〜５参照）の修飾センスおよびアンチセンス鎖の概略図。図１１Ｂは、配列番号４および１５を開示している。
【００９０】
【図１１Ｃ】図１１Ｃ．（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６参照）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６１８７（表３〜５参照）の修飾センスおよびアンチセンス鎖の概略図。図１１Ｃは、配列番号５および１６を開示している。
【００９１】
【図１１Ｄ】図１１Ｄ．（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６参照）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２７６（表３〜５参照）の修飾センスおよびアンチセンス鎖の概略図。図１１Ｄは、配列番号５および１７を開示している。
【００９２】
【図１１Ｅ】図１１Ｅ．（ＮＡＧ３７）ｓの構造（表６参照）を有するＮ−アセチル−ガラクトサミン三座リガンドと結合しているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２７７（表３〜５参照）の修飾センスおよびアンチセンス鎖の概略図。図１１Ｄは、配列番号７および１７を開示している。
【発明を実施するための形態】
【００９３】
ＲＮＡｉ剤
本明細書において、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤（本明細書において、ＨＳＤ１７Ｂ１３もしくは１７β−ＨＳＤ１３  ＲＮＡｉ剤、またはＨＳＤ１７Ｂ１３もしくは１７β−ＨＳＤ１３  ＲＮＡｉトリガーとも呼ぶ）を記載する。各ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む。センス鎖およびアンチセンス鎖は、各々、１６〜４９ヌクレオチド長であり得る。センス鎖およびアンチセンス鎖は、同じ長さであってもよく、異なる長さであってもよい。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、各々独立して、１７〜２７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、各々独立して、１９〜２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖両方は、各々、２１〜２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、各々、２１〜２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は約１９ヌクレオチド長であるが、アンチセンス鎖は約２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は約２１ヌクレオチド長であるが、アンチセンス鎖は約２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は２３ヌクレオチド長であるが、アンチセンス鎖は２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖両方は、各々、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖は、各々独立して、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、約１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４ヌクレオチドの二本鎖長を有する。
【００９４】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の生成において使用されるヌクレオチド配列の例を、表２、３、および４に示す。表２、３、および４のセンス鎖およびアンチセンス鎖配列を含むＲＮＡｉ剤二本鎖の例を表５に示し、図１Ａ〜１０Ｄおよび図１１Ａ〜１１Ｅに図示する。
【００９５】
いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖間の完全、実質的、または部分的相補性の領域は、１６〜２６（例えば、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または２６）ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖の５’末端においてまたは５’末端の近くに（例えば、この領域は、完全、実質的、または部分的相補的でない０、１、２、３、または４ヌクレオチドによりアンチセンス鎖の５’末端から分離されていてよい）存在する。
【００９６】
本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡにおける同数のヌクレオチドのコアストレッチ配列（本明細書において、「コアストレッチ」または「コア配列」とも呼ぶ）と少なくとも８５％同一性を有する少なくとも１６連続ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖におけるコアストレッチ配列と１００％（完全に）相補的または少なくとも約８５％（実質的に）相補的であり、したがって、センス鎖コアストレッチ配列は、通常、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ標的に存在する同じ長さのヌクレオチド配列（例えば、標的配列と呼ぶこともある）と完全に同一または少なくとも約８５％同一性である。いくつかの実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１９ヌクレオチド長である。
【００９７】
本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡにおける同数のヌクレオチドのコアストレッチと、および対応するセンス鎖における同数のヌクレオチドのコアストレッチと少なくとも８５％相補性を有する少なくとも１６連続ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖コアストレッチは、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ標的に存在する同じ長さのヌクレオチド配列（例えば、標的配列）と１００％（完全に）相補的または少なくとも約８５％（実質的に）相補的である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１７ヌクレオチド長である。センス鎖コアストレッチ配列は対応するアンチセンスコア配列と同じ長さであってもよく、異なる長さであってもよい。
【００９８】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖は、アニールして二本鎖を形成する。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、部分的、実質的、または完全に相互に相補的であり得る。相補的二本鎖領域内では、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンスコアストレッチ配列と少なくとも８５％相補的または１００％相補的である。いくつかの実施形態では、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の対応する１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３ヌクレオチド配列と少なくとも８５％または１００％相補的である少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３ヌクレオチドの配列を含む（すなわち、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンスおよびアンチセンスコアストレッチ配列は、少なくとも８５％塩基対または１００％塩基対である少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、または少なくとも２３ヌクレオチドの領域を有する）。
【００９９】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２または表３のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかと、０個、１個、２個、または３個のヌクレオチドが異なる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２または表４のセンス鎖配列のうちのいずれかと、０個、１個、２個、または３個のヌクレオチドが異なる。
【０１００】
いくつかの実施形態では、センス鎖および／またはアンチセンス鎖は、コアストレッチ配列の３’末端、５’末端、または３’末端と５’末端との両方において付加的１個、２個、３個、４個、５個、または６個のヌクレオチド（伸長）を必要に応じておよび独立して含む。存在する場合、アンチセンス鎖付加的ヌクレオチドは、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡにおける対応する配列と相補的であってもよく、相補的でなくてもよい。存在する場合、センス鎖付加的ヌクレオチドは、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡにおける対応する配列と同一性であってもよく、同一性でなくてもよい。存在する場合、アンチセンス鎖付加的ヌクレオチドは、存在する場合、対応するセンス鎖の付加的ヌクレオチドと相補的であってもよく、相補的でなくてもよい。
【０１０１】
本明細書で使用されるとき、伸長は、センス鎖コアストレッチ配列および／またはアンチセンス鎖コアストレッチ配列の５’末端および／または３’末端において１個、２個、３個、４個、５個、または６個のヌクレオチドを含む。センス鎖の伸長ヌクレオチドは、対応するアンチセンス鎖において、ヌクレオチドと相補的であってもよく、相補的でなくてもよく、コアストレッチ配列ヌクレオチドあるいは伸長ヌクレオチドのいずれかである。逆に、アンチセンス鎖の伸長ヌクレオチドは、対応するセンス鎖において、ヌクレオチドと相補的であってもよく、相補的でなくてもよく、コアストレッチヌクレオチドあるいは伸長ヌクレオチドのいずれかである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方は、３’および５’伸長を含む。いくつかの実施形態では、１つの鎖の３’伸長ヌクレオチドの１つ以上は、他の鎖の１つ以上の５’伸長ヌクレオチドと塩基対となる。他の実施形態では、１つの鎖の３’伸長ヌクレオチドの１つ以上は、他の鎖の１つ以上の５’伸長ヌクレオチドと塩基対にならない。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、３’伸長を有するアンチセンス鎖および５’伸長を有するセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、伸長ヌクレオチドは対でなくなり、オーバーハングを形成する。本明細書で使用されるとき、「オーバーハング」は、本明細書に開示されているＲＮＡｉ剤のハイブリダイズされたまたは二本鎖部分の一部を形成しないセンス鎖あるいはアンチセンス鎖のいずれかの末端に位置する１つ以上の不対ヌクレオチドのストレッチを表す。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、または６ヌクレオチド長の３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、１、２、または３ヌクレオチド長の３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖伸長ヌクレオチドの１つ以上は、対応するＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ配列と相補的であるヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖伸長ヌクレオチドの１つ以上は、対応するＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ配列と相補的でないヌクレオチドを含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、または５ヌクレオチド長の３’伸長を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖伸長ヌクレオチドの１つ以上は、アデノシン、ウラシル、もしくはチミジンヌクレオチド、ＡＴジヌクレオチド、またはＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ配列におけるヌクレオチドと対応または同一であるヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、３’センス鎖伸長は、次の配列、これらに限定されないが：Ｔ、ＵＴ、ＴＴ、ＵＵ、ＵＵＴ、ＴＴＴ、またはＴＴＴＴ（各々５’から３’で記載）の１つを含むまたはこれから成る。
【０１０４】
センス鎖は、３’伸長および／または５’伸長を有することができる。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、または６ヌクレオチド長の５’伸長を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖伸長ヌクレオチドの１つ以上は、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ配列におけるヌクレオチドと対応または同一であるヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、センス鎖５’伸長は、次の配列、これらに限定されないが：ＣＡ、ＡＵＡＧＧＣ、ＡＵＡＧＧ、ＡＵＡＧ、ＡＵＡ、Ａ、ＡＡ、ＡＣ、ＧＣＡ、ＧＧＣＡ、ＧＧＣ、ＵＡＵＣＡ、ＵＡＵＣ、ＵＣＡ、ＵＡＵ、Ｕ、ＵＵ（各々５’から３’で記載）の１つである。
【０１０５】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の生成において使用される配列の例を、表２、３、および４に示す。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２または３の配列のうちのいずれかの配列を含む。特定の実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表３の修飾配列のうちのいずれか１つを含むまたはこれから成る。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２または３の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列（５’末端から３’末端）１〜１７、２〜１５、２〜１７、１〜１８、２〜１８、１〜１９、２〜１９、１〜２０、２〜２０、１〜２１、または２〜２１を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２または４の配列のうちのいずれかの配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２または４の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列（５’末端から３’末端）１〜１８、１〜１９、１〜２０、１〜２１、２〜１９、２〜２０、２〜２１、３〜２０、３〜２１、または４〜２１を含む。特定の実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表４の修飾配列のうちのいずれか１つの修飾配列を含むまたはこれから成る。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、同数のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、異なる数のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両末端とも、平滑末端でない。本明細書で使用されるとき、「平滑末端」は、２つのアニールされた鎖の末端ヌクレオチドが相補的である（相補塩基対を形成する）二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を表す。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端は、フレイド末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖３’末端およびアンチセンス鎖の５’末端は、フレイド末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両末端は、フレイド末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両末端とも、フレイド末端でない。本明細書で使用されるとき、フレイド末端は、２つのアニールされた鎖の末端ヌクレオチドが対を形成する（すなわち、オーバーハングを形成しない）が相補的でない（すなわち、非相補対を形成する）二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を表す。いくつかの実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤の１つの鎖の末端における１つ以上の不対ヌクレオチドは、オーバーハングを形成する。不対ヌクレオチドは、センス鎖であっても、アンチセンス鎖であってもよく、３’または５’オーバーハングのいずれかを生成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は：平滑末端およびフレイド末端、平滑末端および５’オーバーハング末端、平滑末端および３’オーバーハング末端、フレイド末端および５’オーバーハング末端、フレイド末端および３’オーバーハング末端、２つの５’オーバーハング末端、２つの３’オーバーハング末端、５’オーバーハング末端および３’オーバーハング末端、２つのフレイド末端、または２つの平滑末端を含む。通常、存在する場合、オーバーハングは、センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖との両方の３’末端に位置する。
【０１０８】
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチドから成り得る。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の実質的に全てのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的に全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチド結合、例えば、１つ以上のホスホロチオエート結合からさらに成り得る。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチドおよび１つ以上のヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、２’−修飾ヌクレオチドを、修飾ヌクレオシド間結合で結合する。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、塩、混合塩、または遊離酸として製造または提供する。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、ナトリウム塩として製造する。当技術分野において周知であるかかる形態は、本明細書に開示されている本発明の範囲内である。
【０１１０】
修飾ヌクレオチド
様々なオリゴヌクレオチド構築物において使用される場合、修飾ヌクレオチドは、これらの化合物の血清安定性を同時に向上しながら、細胞内の化合物の活性を保つことができ、オリゴヌクレオチド構築物の投与時のヒトにおけるインターフェロン活性化の可能性を最小化することもできる。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。本明細書で使用されるとき、「修飾ヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（２’−ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ヌクレオチドの少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）は、修飾ヌクレオチドである。本明細書で使用されるとき、修飾ヌクレオチドとしては、デオキシリボヌクレオチド、ヌクレオチド模倣物、脱塩基ヌクレオチド、２’−修飾ヌクレオチド、逆位ヌクレオチド、修飾核酸塩基含有ヌクレオチド、架橋ヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’，３’−セコヌクレオチド模倣物（アンロックド核酸塩基類似体）、ロックドヌクレオチド、３’−Ｏ−メトキシ（２’ヌクレオシド間結合）ヌクレオチド、２’−Ｆ−アラビノヌクレオチド、５’−Ｍｅ，２’−フルオロヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド、ビニルホスホネート含有ヌクレオチド、およびシクロプロピルホスホネート含有ヌクレオチドを挙げることができるが、これらに限定されない。２’−修飾ヌクレオチド（すなわち、５員糖環の２’位に水酸基以外の基を有するヌクレオチド）としては、２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、２’−フルオロヌクレオチド（本明細書において、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドとも呼ぶ）、２’−デオキシヌクレオチド、２’−メトキシエチル（２’−Ｏ−２−メトキシエチル）ヌクレオチド（２’−ＭＯＥとも呼ぶ）、２’−アミノヌクレオチド、および２’−アルキルヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。所与の化合物における全ての位置を一様に修飾することは必要ではない。逆に、２個以上の修飾を、単一のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤またはさらにその単一ヌクレオチドに組み込むことができる。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖を、当技術分野において公知の方法によって合成および／または修飾することができる。１つのヌクレオチドにおける修飾は、別のヌクレオチドにおける修飾と無関係である。
【０１１２】
修飾ヌクレオチドとしては、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンおよびＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン、（例えば、２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、または５−プロピニルシトシン）、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−アルキル（例えば、６−メチル、６−エチル、６−イソプロピル、または６−ｎ−ブチル）誘導体、アデニンおよびグアニンの２−アルキル（例えば、２−メチル、２−エチル、２−イソプロピル、または２−ｎ−ブチル）および他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、２−チオシトシン、５−ハロウラシル、シトシン、５−プロピニルウラシル、５−プロピニルシトシン、６−アゾウラシル、６−アゾシトシン、６−アゾチミン、５−ウラシル（シュードウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−スルフヒドリル、８−チオアルキル、８−ヒドロキシルおよび他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ（例えば、５−ブロモ）、５−トリフルオロメチル、および他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、３−デアザグアニン、ならびに３−デアザアデニンなどの合成および天然核酸塩基が挙げられる。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’および／または３’末端は、「脱塩基部位」または「脱塩基ヌクレオチド」とも呼ぶことができる脱塩基残基（Ａｂ）を含むことができる。脱塩基残基（Ａｂ）は、糖部分の１’位に核酸塩基を欠いているヌクレオチドまたはヌクレオシドである。（例えば、米国特許第５，９９８，２０３号参照）。いくつかの実施形態では、脱塩基残基を、ヌクレオチド配列中、内部に配置することができる。いくつかの実施形態では、ＡｂまたはＡｂＡｂを、アンチセンス鎖の３’末端に付加することができる。いくつかの実施形態では、センス鎖の５’末端は、１つ以上の付加的脱塩基残基（例えば、（Ａｂ）または（ＡｂＡｂ））を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＵＵＡｂ、ＵＡｂ、またはＡｂを、センス鎖の３’末端に付加する。いくつかの実施形態では、脱塩基（デオキシリボース）残基を、リビトール（脱塩基リボース）残基で置換することができる。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の全てまたは実質的に全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。本明細書で使用されるとき、存在する実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであるＲＮＡｉ剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖両方における４個以下（すなわち、０個、１個、２個、３個、または４個）のヌクレオチドがリボヌクレオチド（すなわち、未修飾）であるＲＮＡｉ剤である。本明細書で使用されるとき、存在する実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであるセンス鎖は、センス鎖における２個以下（すなわち、０個、１個、または２個）のヌクレオチドがリボヌクレオチド（すなわち、未修飾）であるセンス鎖である。本明細書で使用されるとき、存在する実質的に全てのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであるアンチセンス鎖は、センス鎖における２個以下（すなわち、０個、１個、または２個）のヌクレオチドがリボヌクレオチド（すなわち、未修飾）であるアンチセンス鎖である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の１つ以上のヌクレオチドは、未修飾リボヌクレオチドである。
【０１１５】
修飾ヌクレオシド間結合
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の１つ以上のヌクレオチドは、非標準結合または主鎖により連結している（すなわち、修飾ヌクレオシド間結合または修飾主鎖）。修飾ヌクレオシド間結合または主鎖としては、ホスホロチオエート基（本明細書において小文字「ｓ」と表す）、キラルホスホロチオエート、チオホスフェート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキル−ホスホトリエステル、アルキルホスホネート（例えば、メチルホスホネートまたは３’−アルキレンホスホネート）、キラルホスホネート、ホスフィネート、ホスホラミダイト（例えば、３’−アミノホスホラミダイト、アミノアルキルホスホラミダイト、またはチオノホスホラミダイト）、チオノアルキル−ホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノ結合、通常３’−５’結合を有するボラノリン酸、ボラノリン酸の２’−５’結合類似体、またはヌクレオシド単位の隣接対が３’−５’〜５’−３’もしくは２’−５’〜５’−２’結合された逆位極性を有するボラノリン酸が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合または主鎖は、リン原子を欠く。リン原子を欠く修飾ヌクレオシド間結合としては、短鎖アルキルもしくはシクロアルキル糖間結合、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキル糖間結合、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式糖間結合が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間主鎖としては、シロキサン主鎖、スルフィド主鎖、スルホキシド主鎖、スルホン主鎖、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖、アルケン含有主鎖、スルファメート主鎖、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ主鎖、スルホネートおよびスルホンアミド主鎖、アミド主鎖、ならびに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２成分を有する他の主鎖が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含むことができ、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含むことができ、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖両方は独立して１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個のホスホロチオエート結合を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は１個、２個、３個、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含むことができ、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は１個、２個、３個、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含むことができ、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖両方は独立して１個、２個、３個、もしくは４個のホスホロチオエート結合を含むことができる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖は、少なくとも２個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の３’末端から１〜３位におけるヌクレオチド間である。いくつかの実施形態では、１個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖ヌクレオチド配列の５’末端にあり、別のホスホロチオエート結合は、センス鎖ヌクレオチド配列の３’末端にある。いくつかの実施形態では、２個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の５’末端に位置し、別のホスホロチオエート結合は、センス鎖の３’末端にある。いくつかの実施形態では、センス鎖は、ヌクレオチド間にホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含まないが、５’および３’末端両方および必要に応じて存在する逆位脱塩基残基末端キャップの末端ヌクレオチド間に１個、２個、または３個のホスホロチオエート結合を含む。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、ホスホロチオエート結合によりセンス鎖と連結している。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、該４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から１〜３位におけるヌクレオチド間および５’末端から１９〜２１、２０〜２２、２１〜２３、２２〜２４、２３〜２５、または２４〜２６位におけるヌクレオチド間である。いくつかの実施形態では、３個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合はアンチセンス鎖の５’末端から１〜４位間に位置し、４番目のホスホロチオエートヌクレオシド間結合はアンチセンス鎖の５’末端から２０〜２１位間に位置する。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖中に少なくとも３個または４個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。
【０１１９】
キャッピング残基または部分
いくつかの実施形態では、センス鎖は、「キャップ」、「末端キャップ」、または「キャッピング残基」と呼ばれることがある、１つ以上のキャッピング残基または部分を含んでよい。本明細書で使用されるとき、「キャッピング残基」は、本明細書に開示されているＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列の１つ以上の末端において組み込まれ得る非ヌクレオチド化合物または他の部分である。キャッピング残基は、場合によっては、例えば、エキソヌクレアーゼ分解に対する保護など特定の有利な特性を有するＲＮＡｉ剤を提供することができる。いくつかの実施形態では、逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）（当技術分野では「逆位脱塩基部位」とも呼ばれる）を、キャッピング残基として付加する（表Ａ参照）。（例えば、Ｆ．Ｃｚａｕｄｅｒｎａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２００３，３１（１１），２７０５−１６参照）。キャッピング残基は、当技術分野において一般に知られており、例えば、逆位脱塩基残基ならびに末端Ｃ３Ｈ７（プロピル）、Ｃ６Ｈ１３（ヘキシル）、またはＣ１２Ｈ２５（ドドデシル）基などの炭素鎖が挙げられる。いくつかの実施形態では、キャッピング残基は、センス鎖の５’末端、３’末端、または５’末端および３’末端両方のいずれかにおいて存在する。いくつかの実施形態では、センス鎖の５’末端および／または３’末端は、キャッピング残基として２個以上の逆位脱塩基デオキシリボース部分を含んでよい。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）を、センス鎖の３’末端に付加する。いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）を、センス鎖の５’末端に付加する。いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基または逆位脱塩基部位を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の標的化リガンドおよびヌクレオチド配列間に挿入する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端または両末端においてまたはその近傍への１つ以上の逆位脱塩基残基または逆位脱塩基部位の導入は、ＲＮＡｉ剤の増大された活性または他の所望の特性を可能とする。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）を、センス鎖の５’末端に付加する。いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の標的化リガンドおよびヌクレオチド配列間に挿入することができる。逆位脱塩基残基は、ホスフェート、ホスホロチオエート（例えば、本明細書において（ｉｎｖＡｂ）ｓと示される）、または他のヌクレオシド間結合により結合していてよい。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端または両末端においてまたはその近傍への１つ以上の逆位脱塩基残基の導入は、ＲＮＡｉ剤の増大された活性または他の所望の特性を可能とし得る。いくつかの実施形態では、逆位脱塩基（デオキシリボース）残基を、逆位リビトール（脱塩基リボース）残基で置換することができる。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の３’末端、またはアンチセンス鎖配列の３’末端は、逆位脱塩基残基を含んでよい。逆位脱塩基デオキシリボース残基の化学構造を下表６、ならびに図１Ａ〜１０Ｄに示された化学構造中に示す。
【０１２２】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子（配列番号１）の特定の位置を標的とするように設計する。本明細書で定義されているように、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基が、遺伝子への塩基対形成する場合の遺伝子の位置から２１ヌクレオチド下流（３’末端の方向）である位置に一致させる場合、遺伝子の所与の位置におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子を標的とするように、アンチセンス鎖配列を設計する。例えば、本明細書の表１および２に例証されているように、位置４９９におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子を標的とするように設計されたアンチセンス鎖配列は、遺伝子への塩基対形成する場合、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基をＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の５１９位に一致させることを要する。
【０１２３】
本明細書で提供されているように、アンチセンス鎖および少なくとも１６連続ヌクレオチドのコアストレッチ配列の全域での遺伝子の少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％相補性）があるという条件で、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の１位（５’→３’）における核酸塩基が遺伝子と相補的であることを必要としない。例えば、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の４９９位を標的とするように設計された本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤に関して、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の５’末端核酸塩基を、遺伝子の５１９位に一致させなければならない；しかしながら、アンチセンス鎖および少なくとも１６連続ヌクレオチドのコアストレッチ配列の全域での遺伝子の少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％相補性）があるという条件で、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基は、そうである必要はないが、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の５１９位と相補的であってよい。とりわけ、本明細書に開示されている実施例に示されているように、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖による遺伝子の結合の特定部位（例えば、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤が４９９位、７９１位、５１３位、またはいくつかの他の位置においてＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子を標的とするように設計されていてもいなくても）は、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤によって達成される阻害レベルにとって重要である。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表１に示されているＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子配列の位置においてまたはその近傍のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表１に開示されている標的ＨＳＤ１７Ｂ１３  １９量体配列と完全、実質的に、または部分的に相補的であるコアストレッチ配列を含む。
【表１】
2022501040.tif 000003
【０１２５】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の１９位（５’→３’）は、表１に開示されている１９量体標的配列の１位と塩基対形成することができるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の１位（５’→３’）は、表１に開示されている１９量体標的配列の１９位と塩基対形成することができるアンチセンス鎖を含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の２位（５’→３’）は、表１に開示されている１９量体標的配列の１８位と塩基対形成することができるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖の２〜１８位（５’→３’）が表１に開示されている１９量体標的配列の１８〜２位に位置するそれぞれの相補塩基の各々と塩基対形成することができるアンチセンス鎖を含む。
【０１２７】
本明細書に開示されているＲＮＡｉ剤に関して、アンチセンス鎖の１位（５’末端→３’末端）におけるヌクレオチドは、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子と完全に相補的であってもよく、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子と相補的でなくてもよい。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の１位（５’末端→３’末端）におけるヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、またはｄＴである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の１位（５’末端→３’末端）におけるヌクレオチドは、センス鎖とＡ：ＵまたはＵ：Ａ塩基対形成する。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２または表３のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）２〜１８、２〜１９、２〜２０、または２〜２１を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２または表４のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）３〜２１、２〜２１、１〜２１、３〜２０、２〜２０、１〜２０、３〜１９、２〜１９、２〜１９、２〜１８、または１〜１８を含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）表２または表３のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）２〜１８または２〜１９を含むアンチセンス鎖、および（ｉｉ）表２または表４のアンチセンス鎖配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）３〜２１、２〜２１、１〜２１、３〜２０、２〜２０、１〜２０、３〜１９、２〜１９、２〜１９、２〜１８、または１〜１８を含むセンス鎖から成る。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、次表２に示されているコア１９量体ヌクレオチド配列を含む。
【表２−１】
2022501040.tif 000004
【表２−２】
2022501040.tif 000005
【０１３１】
表２の配列を含むまたはそれから成るＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖およびアンチセンス鎖は、修飾ヌクレオチドまたは未修飾ヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態では、表２の配列を含むまたはそれから成るセンス鎖およびアンチセンス鎖配列を有するＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、全てまたは実質的に全て修飾ヌクレオチドである。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２のアンチセンス鎖のいずれかと、０個、１個、２個、または３個のヌクレオチドが異なる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２のセンス鎖のいずれかと、０個、１個、２個、または３個のヌクレオチドが異なる。
【０１３３】
本明細書で使用されるとき、表２に開示されている配列中に記載されている各Ｎは、いずれかおよび全ての核酸塩基（修飾および未修飾ヌクレオチド両方で見られるものを含む）から独立して選択され得る。いくつかの実施形態では、表２に開示されている配列中に記載されているＮヌクレオチドは、他の鎖の対応する位置におけるＮヌクレオチドと相補的である核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、表２に開示されている配列中に記載されているＮヌクレオチドは、他の鎖の対応する位置におけるＮヌクレオチドと相補的でない核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、表２に開示されている配列中に記載されているＮヌクレオチドは、他の鎖の対応する位置におけるＮヌクレオチドと同じである核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、表２に開示されている配列中に記載されているＮヌクレオチドは、他の鎖の対応する位置におけるＮヌクレオチドと異なる核酸塩基を有する。
【０１３４】
特定の修飾ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖、ならびにその基礎の未修飾核酸塩基配列を、表３に示す。特定の修飾ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖、ならびにその基礎の未修飾核酸塩基配列を、表４に示す。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を生成する際、上記表３および４、ならびに表２に記載されている基礎の塩基配列の各々におけるヌクレオチドの各々は、修飾ヌクレオチドであり得る。
【０１３５】
本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、センス鎖と共にアンチセンス鎖をアニールすることによって生成する。表２または表４に記載されている配列を含むセンス鎖を、２つの配列が連続１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチド配列にわたって少なくとも８５％相補性の領域を有する条件で、表２または表３に記載されている配列を含むアンチセンス鎖にハイブリダイズすることができる。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２または表３の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表２、表３または表４の配列のうちのいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖の核酸塩基配列を有する二本鎖を含むまたはそれから成る。
【０１３８】
修飾ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖の例を、表３に示す。修飾ヌクレオチドを含むセンス鎖の例を、表４に示す。
【０１３９】
表３および４で使用されるとき、次の記号を使用して修飾ヌクレオチドおよび結合基を示す：
Ａ＝アデノシン−３’−ホスフェート；
Ｃ＝シチジン−３’−ホスフェート；
Ｇ＝グアノシン−３’−ホスフェート；
Ｕ＝ウリジン−３’−ホスフェート
Ｉ＝イノシン−３’−ホスフェート
ａ＝２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−ホスフェート
ａｓ＝２’−Ｏ−メチルアデノシン−３’−ホスホロチオエート
ｃ＝２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−ホスフェート
ｃｓ＝２’−Ｏ−メチルシチジン−３’−ホスホロチオエート
ｇ＝２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−ホスフェート
ｇｓ＝２’−Ｏ−メチルグアノシン−３’−ホスホロチオエート
ｔ＝２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３’−ホスフェート
ｔｓ＝２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｕ＝２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−ホスフェート
ｕｓ＝２’−Ｏ−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
ｉ＝２’−Ｏ−メチルイノシン−３’−ホスフェート
ｉｓ＝２’−Ｏ−メチルイノシン−３’−ホスホロチオエート
Ａｆ＝２’−フルオロアデノシン−３’−ホスフェート
Ａｆｓ＝２’−フルオロアデノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｃｆ＝２’−フルオロシチジン−３’−ホスフェート
Ｃｆｓ＝２’−フルオロシチジン−３’−ホスホロチオエート
Ｇｆ＝２’−フルオログアノシン−３’−ホスフェート
Ｇｆｓ＝２’−フルオログアノシン−３’−ホスホロチオエート
Ｔｆ＝２’−フルオロ−５’−メチルウリジン−３’−ホスフェート
Ｔｆｓ＝２’−フルオロ−５’−メチルウリジン−３’−ホスホロチオエート
Ｕｆ＝２’−フルオロウリジン−３’−ホスフェート
Ｕｆｓ＝２’−フルオロウリジン−３’−ホスホロチオエート
ＡＵＮＡ＝２’，３’−セコ−アデノシン−３’−ホスフェート
ＡＵＮＡｓ＝２’，３’−セコ−シチジン−３’−ホスホロチオエート
ＣＵＮＡ＝２’，３’−セコ−シチジン−３’−ホスフェート
ＣＵＮＡｓ＝２’，３’−セコ−シチジン−３’−ホスホロチオエート
ＧＵＮＡ＝２’，３’−セコ−グアノシン−３’−ホスフェート
ＧＵＮＡｓ＝２’，３’−セコ−グアノシン−３’−ホスホロチオエート
ＵＵＮＡ＝２’，３’−セコ−ウリジン−３’−ホスフェート
ＵＵＮＡｓ＝２’，３’−セコ−ウリジン−３’−ホスホロチオエート
ａ＿２Ｎ＝表６参照
ａ＿２Ｎｓ＝表６参照
（ｉｎｖＡｂ）＝逆位脱塩基デオキシリボヌクレオチド、表６参照
（ｉｎｖＡｂ）ｓ＝逆位脱塩基デオキシリボヌクレオチド−５’−ホスホロチオエート、表６参照
【０１４０】
当業者が容易に理解するように、別の意味に配列が示さない限り（例えば、ホスホロチオエート結合「ｓ」によるなど）、オリゴヌクレオチド中に存在する場合、ヌクレオチド単量体は、５’−３’−ホスホジエステル結合により相互に結合する。当業者が明白に理解するように、本明細書に開示されている修飾ヌクレオチド配列中に見られるホスホロチオエート結合の含有は、オリゴヌクレオチド中に通常存在するホスホジエステル結合を置き換える（例えば、化学構造を示す図１Ａ〜１０Ｄおよび特定のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤における全てのヌクレオシド間結合の概略を示す図１１Ａ〜１１Ｅ参照）。さらに、当業者は、所与のオリゴヌクレオチド配列の３’末端における末端ヌクレオチドが、通常、生体外のホスフェート部分の代わりに所与の単量体のそれぞれの３’位におけるヒドロキシル（−ＯＨ）基を有すると容易に理解するだろう。加えて、本明細書に開示されている実施形態に関して、それぞれの鎖５’→３’を見る場合、デオキシリボースの３’位がそれぞれの鎖の前述の単量体の３’末端において連結するように、逆位脱塩基残基を挿入する（例えば、図１Ａ〜１０Ｄおよび表６参照）。さらに、当業者が容易に理解し認識するように、本明細書に図示されているホスホロチオエート化学構造は通常硫黄原子のアニオンを示すが、本明細書に開示されている本発明は全てのホスホロチオエート互変異性体を包含する（例えば、硫黄原子は二重結合を有し、アニオンは酸素原子上にある）。本明細書において別段の明示がない限り、当業者のかかる理解は、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤およびＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の組成物を説明する場合に使用される。
【０１４１】
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤と共に使用される標的化リガンド、標的化基、および結合基の特定の例を下表６に示す。より詳細には、標的化基および結合基（共に標的化リガンドを生成することができる）としては、これらの化学構造が下表６に示されている次のもの：（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、（ＮＡＧ３９）ｓが挙げられる。各センス鎖および／またはアンチセンス鎖は、本明細書に記載されているいずれかの標的化リガンド、標的化基、または結合基、ならびに配列の５’および／または３’末端と結合された他の基を有することができる。
【表３−１】
2022501040.tif 000006
【表３−２】
2022501040.tif 000007
【表３−３】
2022501040.tif 000008
【表４−１】
2022501040.tif 000009
【表４−２】
2022501040.tif 000010
【表４−３】
2022501040.tif 000011
（Ａ２Ｎ）＝２−アミノアデニンヌクレオチド
【０１４２】
本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、センス鎖と共にアンチセンス鎖をアニールすることによって生成する。表２または表４に記載されている配列を含むセンス鎖を、２つの配列が連続１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチド配列にわたって少なくとも８５％相補性の領域を有する条件で、表２または表３に記載されている配列を含むアンチセンス鎖にハイブリダイズすることができる。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３のアンチセンス鎖のいずれかと、０個、１個、２個、または３個のヌクレオチドが異なる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４のセンス鎖のいずれかと、０個、１個、２個、または３個のヌクレオチドが異なる。
【０１４４】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２または表３の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表２または表３の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列（５’末端から３’末端）１〜１７、２〜１７、１〜１８、２〜１８、１〜１９、２〜１９、１〜２０、２〜２０、１〜２１、または２〜２１を含む。特定の実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、表３の修飾配列のうちのいずれか１つの修飾配列を含むまたはこれから成る。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２または表４の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表２または表４の配列のうちのいずれかのヌクレオチド配列（５’末端から３’末端）１〜１７、２〜１７、３〜１７、４〜１７、１〜１８、２〜１８、３〜１８、４〜１８、１〜１９、２〜１９、３〜１９、４〜１９、１〜２０、２〜２０、３〜２０、４〜２０、１〜２１、２〜２１、３〜２１、または４〜２１を含む。特定の実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖は、表４の修飾配列のうちのいずれか１つの修飾配列を含むまたはこれから成る。
【０１４６】
本明細書に開示されているＲＮＡｉ剤に関して、アンチセンス鎖の１位（５’末端→３’末端）におけるヌクレオチドは、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子と完全に相補的であってもよく、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子と相補的でなくてもよい。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の１位（５’末端→３’末端）におけるヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、またはｄＴ（またはその修飾バージョン）である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の１位（５’末端→３’末端）におけるヌクレオチドは、センス鎖とＡ：ＵまたはＵ：Ａ塩基対形成する。
【０１４７】
表２または表４に記載されている配列を含むセンス鎖を、２つの配列が連続１６、１７、１８、１９、２０、または２１ヌクレオチド配列にわたって少なくとも８５％相補性の領域を有する条件で、表２または表３に記載されている配列を含むアンチセンス鎖にハイブリダイズすることができる。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表４の修飾配列のうちのいずれかの修飾配列から成るセンス鎖、および表３の修飾配列のうちのいずれかの修飾配列から成るアンチセンス鎖を有する。特定の代表的配列対形成は、表５に示されている二本鎖ＩＤ番号により例示されている。
【０１４８】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示されている二本鎖ＩＤ番号により表されている二本鎖を含む、それから成る、またはそれから本質的に成る。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示されている二本鎖ＩＤ番号のいずれかにより表されている二本鎖のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示されている二本鎖ＩＤ番号のいずれかにより表されている二本鎖のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖ヌクレオチド配列ならびに標的化基および／または結合基がセンス鎖またはアンチセンス鎖と共有結合で連結（すなわち、結合）している標的化基および／または結合基を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示されている二本鎖ＩＤ番号のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖修飾ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示されている二本鎖ＩＤ番号のいずれかのセンス鎖およびアンチセンス鎖修飾ヌクレオチド配列ならびに標的化基および／または結合基がセンス鎖またはアンチセンス鎖と共有結合で連結している標的化基および／または結合基を含む。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二本鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、標的化基または標的化リガンドをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二本鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基をさらに含む。
【０１５０】
リンカーがあるかないかに関わらず、標的化基は、表２、３、および４に開示されているセンスおよび／またはアンチセンス鎖のいずれかの５’または３’末端と連結することができる。標的化基があるかないかに関わらず、リンカーは、表２、３、および４に開示されているセンスおよび／またはアンチセンス鎖のいずれかの５’または３’末端と結合することができる。
【０１５１】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表２または表５のアンチセンス鎖／センス鎖二本鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、各々表６に定義されている（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓから成る群から選択される標的化リガンドをさらに含む。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、表６に定義されている（ＮＡＧ２５）または（ＮＡＧ２５）ｓである。他の実施形態では、標的化リガンドは、表６に定義されている（ＮＡＧ３７）または（ＮＡＧ３７）ｓである。
【０１５２】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表３または表４のアンチセンス鎖および／またはセンス鎖ヌクレオチド配列のうちのいずれかの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含む。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表５の二本鎖のいずれかの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖およびセンス鎖を含み、アシアロ糖タンパク質受容体リガンド標的化基をさらに含む。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表５の二本鎖のいずれかを含む、それから成る、またはそれから本質的に成る。
【表５−１】
2022501040.tif 000012
【表５−２】
2022501040.tif 000013
【０１５５】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、塩、混合塩、または遊離酸として製造または提供する。本明細書に記載されているＲＮＡｉ剤は、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子を発現する細胞への送達次第、インビボおよび／またはインビトロで１つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害またはノックダウンする。
【０１５６】
標的化リガンドまたは基、結合基、および送達媒体
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、これらに限定されないが、標的化基、結合基、標的化リガンド、送達ポリマー、または送達媒体を含む１つ以上の非ヌクレオチド基と結合する。非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤の標的化、送達または結合を促進することができる。標的化基および結合基の例を、表６に示す。非ヌクレオチド基は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のいずれかの３’および／または５’末端と共有結合で連結することができる。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’および／または５’末端と結合された非ヌクレオチド基を含む。いくつかの実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖の５’末端と連結している。非ヌクレオチド基は、リンカー／結合基によりＲＮＡｉ剤と直接的に連結してもよく、間接的に連結してもよい。いくつかの実施形態では、非ヌクレオチド基は、反応活性、切断可能、または可逆的結合またはリンカーによりＲＮＡｉ剤と連結している。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤または、ＲＮＡｉ剤もしくはコンジュゲートの細胞特異的もしくは組織特異的分布および細胞特異的吸収を向上するように結合されているコンジュゲートの薬物動態もしくは体内分布特性を増強する。いくつかの実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤のエンドサイトーシスを増強する。
【０１５８】
標的化基または標的化部分は、これらが結合しているコンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の薬物動態もしくは体内分布特性を増強して、コンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の細胞特異的（場合によっては、臓器特異的を含む）分布および細胞特異的（または臓器特異的）吸収を向上する。標的化基は、対象とする標的に対して、一価、二価、三価、四価であり得、またはより高い結合価を有する。代表的な標的化基としては、細胞表面分子と親和性を有する化合物、細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント、および細胞表面分子と親和性を有する抗体模倣物が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、標的化基は、場合によってはリンカーとしての役割を果たすことができるＰＥＧリンカーまたは１つ、２つ、もしくは３つの脱塩基および／もしくはリビトール（脱塩基リボース）残基などのリンカーを使用して、ＲＮＡｉ剤と連結する。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、ガラクトース誘導体クラスターを含む。
【０１６０】
５’末端および／または３’末端においてアミノ基（本明細書において、アミンとも呼ぶ）などの反応性基を有する本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を合成することができる。次いで、当技術分野の常法を用いて、反応性基を使用して標的化部分を結合することができる。
【０１６１】
いくつかの実施形態では、標的化基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。本明細書で使用されるとき、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有する化合物を含むリガンドである。本明細書で述べられたように、アシアロ糖タンパク質受容体は、肝実質細胞で高発現される。いくつかの実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、１つ以上のガラクトース誘導体を含むかまたはそれから成る。本明細書で使用されるとき、用語ガラクトース誘導体は、ガラクトースおよびガラクトース同等以上のアシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性を有するガラクトース誘導体の両方を含む。ガラクトース誘導体としては、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイル−ガラクトサミン、およびＮ−ｉｓｏ−ブタノイルガラクトースアミンが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｓ．Ｔ．Ｉｏｂｓｔ  ａｎｄ  Ｋ．Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ，Ｊ．Ｂ．Ｃ．，１９９６，２７１，６６８６参照）。オリゴヌクレオチドおよび他の分子が肝臓をインビボ標的とするのに有用なガラクトース誘導体、およびガラクトース誘導体のクラスターは、当技術分野において公知である（例えば、Ｂａｅｎｚｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｔｅ，１９８０，Ｃｅｌｌ，２２，６１１−６２０；Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７，９３９−９４５参照）。
【０１６２】
ガラクトース誘導体を使用して、肝実質細胞表面で発現されたアシアロ糖タンパク質受容体と結合することにより、分子を肝実質細胞に対してインビボ標的化した。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドとアシアロ糖タンパク質受容体との結合は、肝実質細胞に対する細胞特異的標的化および肝実質細胞への分子のエンドサイトーシスを促進する。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、単量体（例えば、単一ガラクトース誘導体を有し、一価または単座とも呼ぶ）または多量体（例えば、複数のガラクトース誘導体を有する）であり得る。ガラクトース誘導体またはガラクトース誘導体クラスターを、当技術分野において公知の方法を使用して、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’または５’末端と結合することができる。ガラクトース誘導体クラスターなどの標的化リガンドの製造は、例えば、国際公開第２０１８／０４４３５０号（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）および国際公開第２０１７／１５６０１２号（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）に記載されており、これら両方の内容はこれらの全文を参照することにより本明細書に組み入れられるものとする。
【０１６３】
本明細書で使用されるとき、ガラクトース誘導体クラスターは、２つ〜４つの末端ガラクトース誘導体を有する分子を含む。末端ガラクトース誘導体は、そのＣ−１炭素により分子と結合している。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体三量体（三本触角性ガラクトース誘導体または三価ガラクトース誘導体とも呼ぶ）である。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、３つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、ガラクトース誘導体四量体（四本触角性ガラクトース誘導体または四価ガラクトース誘導体とも呼ぶ）である。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、４つのＮ−アセチル−ガラクトサミンを含む。
【０１６４】
本明細書で使用されるとき、ガラクトース誘導体三量体は、各々が中心分岐点と連結している３つのガラクトース誘導体を含む。本明細書で使用されるとき、ガラクトース誘導体四量体は、各々が中心分岐点と連結している４つのガラクトース誘導体を含む。ガラクトース誘導体は、糖類のＣ−１炭素により中心分岐点と結合することができる。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体は、リンカーまたはスペーサーにより分岐点と結合している。いくつかの実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、ＰＥＧ基などの可動性親水性スペーサーである（例えば、米国特許第５，８８５，９６８号；Ｂｉｅｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９５  Ｖｏｌ．３９  ｐ．１５３８−１５４６参照）。いくつかの実施形態では、ＰＥＧスペーサーは、ＰＥＧ３スペーサーである。分岐点は、３つのガラクトース誘導体の結合を可能とし、分岐点とＲＮＡｉ剤との結合をさらに可能とするいずれかの小分子であり得る。分岐点基の例は、ジリジンまたはジグルタメートである。分岐点とＲＮＡｉ剤との結合は、リンカーまたはスペーサーにより生じ得る。いくつかの実施形態では、リンカーまたはスペーサーは、これに限定されないが、ＰＥＧスペーサーなどの可動性親水性スペーサーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、環式基などの剛性リンカーを含む。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体は、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンを含むかまたはそれから成る。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、例えば、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンであり得るガラクトース誘導体四量体から成る。
【０１６５】
本開示の実施形態は、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を肝細胞にインビボ送達するための医薬組成物を含む。かかる医薬組成物は、例えば、ガラクトース誘導体クラスターと結合されたＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含むことができる。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体クラスターは、例えば、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン三量体であり得るガラクトース誘導体三量体、またはＮ−アセチル−ガラクトサミン四量体であり得るガラクトース誘導体四量体から成る。
【０１６６】
標的化リガンドまたは標的化基は、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’末端または５’末端と連結することができる。
【０１６７】
標的化リガンドとしては、表６に定義されている（ＮＡＧ１３）、（ＮＡＧ１３）ｓ、（ＮＡＧ１８）、（ＮＡＧ１８）ｓ、（ＮＡＧ２４）、（ＮＡＧ２４）ｓ、（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２６）、（ＮＡＧ２６）ｓ、（ＮＡＧ２７）、（ＮＡＧ２７）ｓ、（ＮＡＧ２８）、（ＮＡＧ２８）ｓ、（ＮＡＧ２９）、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）、（ＮＡＧ３１）ｓ、（ＮＡＧ３２）、（ＮＡＧ３２）ｓ、（ＮＡＧ３３）、（ＮＡＧ３３）ｓ、（ＮＡＧ３４）、（ＮＡＧ３４）ｓ、（ＮＡＧ３５）、（ＮＡＧ３５）ｓ、（ＮＡＧ３６）、（ＮＡＧ３６）ｓ、（ＮＡＧ３７）、（ＮＡＧ３７）ｓ、（ＮＡＧ３８）、（ＮＡＧ３８）ｓ、（ＮＡＧ３９）、および（ＮＡＧ３９）ｓが挙げられるが、これらに限定されない。ガラクトースクラスター標的化リガンドを含む他の標的化基および標的化リガンドは、当技術分野において公知である。
【０１６８】
いくつかの実施形態では、結合基は、ＲＮＡｉ剤と結合している。結合基は、薬剤と、標的化基、送達ポリマー、または送達媒体との共有結合の連結を促進する。結合基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖またはアンチセンス鎖の３’末端および／または５’末端と連結することができる。いくつかの実施形態では、結合基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖と連結している。いくつかの実施形態では、結合基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖の５’末端または３’末端と結合している。いくつかの実施形態では、結合基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖の５’末端と結合している。結合基の例としては、第一級アミンおよびアルキン、アルキル基、脱塩基ヌクレオチド、リビトール（脱塩基リボース）、および／またはＰＥＧ基などの反応性基を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０１６９】
いくつかの実施形態では、標的化基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖および／またはアンチセンス鎖のヌクレオチドと内部的に連結している。いくつかの実施形態では、標的化基は、リンカーによりＲＮＡｉ剤と連結している。
【０１７０】
リンカーまたは結合基は、１つ以上の共有結合により、１つの化学基（ＲＮＡｉ剤など）または対象のセグメントを別の化学基（標的化基または送達ポリマーなど）または対象のセグメントと連結する二原子間の繋がりである。反応活性な連結は反応活性結合を含む。連結部は、２つの結合原子間の距離を増長するスペーサーを必要に応じて含むことができる。スペーサーは、連結部に可動性および／または長さをさらに付加することができる。スペーサーとしては、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、アラルケニル基、およびアラルキニル基を挙げられるが、これらに限定されず；これらの各々は１つ以上のヘテロ原子、複素環、アミノ酸、ヌクレオチド、および糖類を含むことができる。スペーサー基は当技術分野において周知であり、前述のリストは本明細の範囲を限定する意味はない。
【０１７１】
いくつかの実施形態では、２つ以上のＲＮＡｉ剤が単一組成物に含まれる場合、ＲＮＡｉ剤の各々は同じ標的化基と連結していてもよく、２つの異なる標的化基（すなわち、異なる化学構造を有する標的化基）と結合していてもよい。いくつかの実施形態では、標的化基は、追加のリンカーを使用することなく、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤と連結している。いくつかの実施形態では、標的化基それ自体は、容易に存在する結合を促進するようにリンカーまたは他の部位を有して設計される。いくつかの実施形態では、２つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤が単一物に含まれる場合、ＲＮＡｉ剤の各々は同じリンカーを利用してもよく、異なるリンカー（すなわち、異なる化学構造を有するリンカー）を利用してもよい。
【０１７２】
表２、３、または４に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ヌクレオチド配列のうちのいずれかは、修飾か未修飾かに関わらず、３’および／もしくは５’標的化基または結合基を含むことができる。３’もしくは５’標的化基もしくは結合基を含む、表３もしくは４に記載されている、さもなければ本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤配列のうちのいずれかは、代わりに、３’もしくは５’標的化基も結合基も含むことができないか、またはこれに限定されないが表６に図示されているものを含む異なる３’もしくは５’標的化基もしくは結合基を含むことができる。表５に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤二本鎖のいずれかは、修飾か未修飾かに関わらず、これに限定されないが表６に図示されているものを含む標的化基または結合基を含むことができ、標的化基もしくは結合基は、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤二本鎖のセンス鎖あるいはアンチセンス鎖のいずれかの３’または５’末端と結合することができる。
【０１７３】
標的化基および結合基の例（結合される場合に標的化リガンドを生成することができる）を表６に示す。表４は、５’または３’末端と結合された標的化基または結合基を有するＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤センス鎖のいくつかの実施形態を示す。
【表６−１】
2022501040.tif 000014
【表６−２】
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【表６−３】
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【表６−４】
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【表６−５】
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【表６−６】
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【表６−７】
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【表６−８】
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【表６−９】
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【表６−１０】
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【表６−１１】
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【表６−１２】
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【表６−１３】
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【表６−１４】
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【表６−１５】
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【０１７４】
本明細書に提供されている上記構造および説明を考慮して添付されていると、当業者が理解するように、表６の上記構造の各々では、ＮＡＧは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンまたは別のガラクトース誘導体を含む。例えば、いくつかの実施形態では、提供されている構造中のＮＡＧは、Ｎ−アセチル−ガラクトサミンである。
【０１７５】
各（ＮＡＧｘ）は、ホスフェート基（（ＮＡＧ２５）、（ＮＡＧ３０）、および（ＮＡＧ３１）であるとき）、またはホスホロチオエート基（（ＮＡＧ２５）ｓ、（ＮＡＧ２９）ｓ、（ＮＡＧ３０）ｓ、（ＮＡＧ３１）ｓ、もしくは（ＮＡＧ３７）ｓであるとき）、または別の結合基によりＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤と結合していてよい。
【化２】
2022501040.tif 000029
【０１７６】
当技術分野において公知の他の結合基を使用してよい。
いくつかの実施形態では、送達媒体を使用して、ＲＮＡｉ剤を細胞または組織に送達することができる。送達媒体は、細胞または組織へのＲＮＡｉ剤の送達を向上する化合物である。送達媒体としては、両親媒性ポリマー、膜作用性ポリマー、ペプチド、メリチンペプチド、メリチン様ペプチド（ＭＬＰ）、脂質、可逆修飾ポリマーもしくはペプチド、または可逆修飾膜作用性ポリアミンなどのポリマーを挙げることができるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤を、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣまたは当技術分野で利用可能な他の送達系と組み合わせることができる。ＲＮＡｉ剤は、標的化基、脂質（これに限定されないが、コレステロールおよびコレステリル誘導体を含む）、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ（例えば、国際公開第２０００／０５３７２２号、国際公開第２００８／００２２３０９号、国際公開第２０１１／１０４１６９号、および国際公開第２０１２／０８３１８５号、国際公開第２０１３／０３２８２９号、国際公開第２０１３／１５８１４１号、これらの各々は参照することにより本明細書に組み入れられる）、ハイドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、および生体接着マイクロスフェア、タンパク質性ベクター、または当技術分野で公知および利用可能な核酸もしくはオリゴヌクレオチド送達と化学結合することもできる。
【０１７７】
医薬組成物および製剤
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、医薬組成物または製剤（本明細書では「薬物」とも呼ぶ）として製剤することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む。これらの医薬組成物は、標的細胞、細胞群、組織、または生物における標的ｍＲＮＡの発現の阻害に特に有用である。
【０１７８】
医薬組成物を使用して、標的ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡのレベルの低減、もしくは標的遺伝子の発現の阻害から利益を受ける疾病、障害、または病態を有する対象を治療することができる。医薬組成物を使用して、標的ｍＲＮＡのレベルの低減、もしくは標的遺伝子の発現の阻害から利益を受ける疾病、障害、または病態を発症するリスクのある対象を治療することができる。１つの実施形態では、方法は、本明細書に記載されている標的化リガンドと連結されたＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、治療しようとする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の薬剤的に許容可能な賦形剤（媒体、担体、希釈剤、および／または送達ポリマーを含む）を、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物に添加し、それにより、ヒトを含む対象にインビボ送達するのに適した医薬製剤または薬物を製造する。
【０１７９】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物および本明細書に開示されている方法は、本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の治療有効量を対象に投与し、それにより、対象におけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの発現を阻害することにより、細胞、細胞群、細胞群、組織、臓器、または対象の標的ｍＲＮＡのレベルを低下させる。いくつかの実施形態では、対象は、標的細胞または組織における標的遺伝子の病原性上方制御を有すると以前に特定または診断された。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症などのアルコール性もしくは非アルコール性脂肪肝疾患と以前に特定または診断された。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症などのアルコール性もしくは非アルコール性脂肪肝疾患と関連する症状に罹患している。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む記載されている医薬組成物を、対象における、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、硬変症を含むアルコール性もしくは非アルコール性脂肪肝疾患、およびＨＳＤ１７Ｂ１３の過剰発現と関連する臨床症状を治療または管理のために使用する。いくつかの実施形態では、１つ以上の医薬組成物の治療（予防を含む）有効量を、かかる治療を必要とする対象に投与する。いくつかの実施形態では、開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のいずれかの投与を使用して、対象における疾病の症状の数、重症度、および／または頻度を減少させることができる。
【０１８１】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む記載されている医薬組成物を使用して、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの発現の低減または阻害から利益を受ける疾病または障害を有する対象における少なくとも１つの症状を治療することができる。いくつかの実施形態では、対象に、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む１つ以上の医薬組成物の治療有効量を投与し、それにより、症状を治療する。他の実施形態では、１つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の予防有効量を投与し、それにより、少なくとも１つの症状を予防または阻害する。
【０１８２】
投与経路は、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を身体と接触させる経路である。概して、哺乳類を治療するための薬剤ならびにオリゴヌクレオチドおよび核酸の投与方法は当技術分野において周知であり、本明細書に記載されている組成物の投与に適用することができる。本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、特定の経路に適切に合わせた製剤のいずれかの適切な経路により投与することができる。したがって、本明細書に記載されている医薬組成物を、注射、例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、関節内、または腹腔内注射により投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物を、皮下注射により投与する。
【０１８３】
本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物を、当技術分野において公知のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、細胞、細胞群、蘇生器、または対象に送達することができる。概して、核酸分子を送達（インビトロまたはインビボ）するための当技術分野において認識されているいずれもの適切な方法を、本明細書に記載されている組成物の使用に適合させることができる。例えば、送達は、局所投与（例えば、直接注射、移植、または局所投与）、全身投与、または皮下、静脈内、腹腔内、もしくは頭蓋内（脳室内、実質内およびくも膜下腔内）を含む非経口経路、筋肉内、経皮、気道（エアロゾル）、鼻腔内、経口、直腸内、または局所（口腔内および舌下を含む）投与による送達であり得る。特定の実施形態では、組成物を、皮下または静脈内注入または注射により投与する。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されている医薬組成物は、１つ以上の薬剤的に許容可能な賦形剤を含む。本明細書に記載されている医薬組成物を、対象への投与のために製剤する。
【０１８５】
本明細書で使用されるとき、医薬組成物または薬剤としては、記載されている治療用化合物の少なくとも１つの薬理学的に有効な量、および１つ以上の薬剤的に許容可能な賦形剤を含む。薬剤的に許容可能な賦形剤（賦形剤）は、薬剤送達系に意図的に含まれる原薬（ＡＰＩ、治療薬、例えば、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤）以外の物質である。賦形剤は、目的の投与において治療効果を発揮しないか、または発揮する目的はない。賦形剤は、ａ）製造中の薬剤送達系の加工に役立つ、ｂ）ＡＰＩの安定性、バイオアベイラビリティもしくは患者忍容性を保護、支持もしくは増強する、ｃ）製品識別を支援する、および／またはｄ）貯蔵もしくは使用中のＡＰＩの送達の全体的安全性、有効性の他の特質を増強するように作用することができる。薬剤的に許容可能な賦形剤は不活性物質であってもよく、なくてもよい。
【０１８６】
賦形剤としては：吸収促進剤、粘着防止剤、消泡剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色料、送達促進剤、送達ポリマー、洗浄剤、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香料、流動促進剤、保水剤、潤滑剤、油類、ポリマー、防腐剤、食塩水、塩類、溶媒、糖類、界面活性剤、懸濁剤、徐放マトリックス、甘味料、増粘剤、等張化剤、媒体、撥水剤、および湿潤剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８７】
注射可能な使用に適した医薬組成物としては、滅菌水性液剤（水可溶性）または分散剤および滅菌注射液剤または分散剤の即時製剤用滅菌散剤が挙げられる。静脈内投与のため、適した担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、ニュージャージー州パーシッパニー）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。適切な担体は、製造および貯蔵条件下安定であるべきであり、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されるべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、およびその適切な混合物を含む溶媒または分散媒体であり得る。例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散剤の場合に必要な粒度の維持、および界面活性剤の使用によって適切な流動性を維持することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖類、マンニトールなどのポリアルコール類、ソルビトール、および塩化ナトリウムを含むことが好ましいだろう。注射可能な組成物の持続的吸収を、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含有させることによってもたらすことができる。
【０１８８】
１つまたは上記成分の組合せを含む適切な溶媒中に必要量で活性化合物を混合し、次いで、必要に応じて、ろ過滅菌することによって、滅菌注射液剤を製剤することができる。概して、塩基性分散媒体および上記のものからの必要な他の成分を含む滅菌媒体に活性化合物を混合することによって、分散剤を製剤する。滅菌注射液剤の製剤用滅菌散剤の場合、製剤方法は、活性成分＋予め滅菌ろ過されたその液剤からのいずれかの追加の所望成分の散剤を得る真空乾燥および凍結乾燥を含む。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、皮下投与に適した本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む医薬製剤を、水性リン酸ナトリウム緩衝液中に製剤することができる（例えば、０．５ｍＭリン酸ナトリウム一塩基水溶液、０．５ｍＭリン酸ナトリウム二塩基水溶液中に製剤されたＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤）。
【０１９０】
関節内投与に適した製剤は、微結晶の形態であり得る薬剤の滅菌水性製剤の形態、例えば、水性微結晶懸濁剤の形態であり得る。リポソーム製剤または生分解性ポリマー系を使用して、関節内および点眼投与の両方のための薬剤を提供することもできる。
【０１９１】
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の経口投与に適した製剤を製剤することもできる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、経口投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を。経口投与用カプセル剤に製剤する。
【０１９２】
活性化合物を、身体からの迅速排除に対して化合物を保護するだろう担体を用いて製造することができ、例えば、移植およびマイクロカプセル化送達系を含む徐放性製剤などである。生分解性、生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などを使用することができる。かかる製剤の製造方法は、当業者には明白であろう。リポソーム懸濁剤を、薬剤的に許容可能な担体として使用することもできる。リポソーム懸濁剤は、当業者に公知の方法、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように製造することができる。
【０１９３】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、投与の容易性および投薬の一様性のための単位剤形の組成物に製剤することができる。単位剤形は、治療しようとする対象に対する単位投薬量として適した物理的に別々の単位を表し；各単位は必要な医薬用担体と共に所望の治療効果を得るように算出された活性化合物の所定量を含む。本開示の単位剤形のための規格は、活性化合物の固有特性および達成しようとする治療効果、ならびに個体の治療のためのかかる活性化合物を調剤する技術分野において固有の制限によって決定され、これらに直接依存する。
【０１９４】
医薬組成物は、医薬組成物に通常見られる他の追加の成分を含むことができる。かかる追加の成分としては：鎮痒薬、収斂薬、局所麻酔薬、鎮痛薬、抗ヒスタミン薬、または抗炎症薬（例えば、アセトアミノフェン、ＮＳＡＩＤ、ジフェンヒドラミン、その他）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に定義されているＲＮＡｉ剤を発現または含む細胞、蘇生器、または単離された臓器を、「医薬組成物」として使用してもよいことも想定される。本明細書で使用されるとき、「の薬理学的に有効な量」、「治療有効量」、または単純に「有効量」は、薬理学的、治療、または予防結果を得るＲＮＡｉ剤の量を表す。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている方法は、本明細書に開示されているＲＮＡｉ剤の投与に加えて、第二治療薬の投与または第二治療を行うステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、第二治療薬は、別のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤（例えば、ＨＳＤ１７Ｂ１３標的内の異なる配列を標的とするＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤）である。他の実施形態では、第二治療薬は、小分子薬剤、抗体、抗体フラグメント、またはアプタマーであり得る。
【０１９６】
いくつかの実施形態では、記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、必要に応じて、１つ以上の追加の治療薬と組み合わせてもよい。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤および追加の治療薬を単一の組成物で投与してもよく、別々に投与してもよい。いくつかの実施形態では、１つ以上の治療薬を、ＲＮＡｉ剤と別の剤形で別々に投与する（例えば、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を皮下注射により投与するが、治療投与レジメンの方法に関する追加治療薬を経口投与する）。いくつかの実施形態では、記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、皮下注射によりそれを必要とする対象に投与し、１つ以上のオプション追加治療薬を経口投与し、これらは共に、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患に関連する疾病および病態のための治療レジメンを提供する。いくつかの実施形態では、記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、皮下注射によりそれを必要とする対象に投与し、１つ以上のオプション追加治療薬を別々の皮下注射により投与する。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤および１つ以上の追加治療薬を単一剤形（例えば、皮下注射のための単一組成物に製剤された「カクテル」）中に組み合わせる。１つ以上の追加治療薬があるかないかに関わらず、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、１つ以上の賦形剤と組み合わせて、医薬組成物を製造することができる。
【０１９７】
概して、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の有効量は、用量当たり、約０．１〜約１００ｍｇ／体重ｋｇ、例えば、用量当たり、約１．０〜約５０ｍｇ／体重ｋｇの範囲であろう。いくつかの実施形態では、活性化合物の有効量は、用量当たり、約０．２５〜約５ｍｇ／体重ｋｇの範囲であろう。いくつかの実施形態では、活性成分の有効量は、用量当たり、約０．５〜約４ｍｇ／体重ｋｇの範囲であろう。投与されるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の用量、特定のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の活性レベル、および特定の対象に対する阻害の所望レベルに応じて、投与は毎週、各週、毎月、または他の間隔で行ってよい。本明細書における実施例は、特定の動物種における阻害に関する適切なレベルを示す。投与される量は、患者の全体的健康状態、送達される化合物の相対的生物有効性、薬剤の製剤、製剤中の賦形剤の存在および種類、ならびに投与経路などの変数に依存するだろう。さらに、投与される初期投与量は所望の血中レベルもしくは組織レベルを迅速に達する上記上限レベルを超えて増加し得るか、または初期投与量は最適値より小さい量であり得ることを理解されるべきである。
【０１９８】
疾病の治療のため、または疾病の治療のための薬物もしくは組成物の製造のため、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載されている医薬組成物を、賦形剤または、これらに限定されないが、第二もしくは他のＲＮＡｉ剤、小分子薬剤、抗体、抗体フラグメント、ペプチドおよび／もしくはアプタマーを含む第二治療薬もしくは治療と組み合わせることができる。
【０１９９】
薬剤的に許容可能な賦形剤またはアジュバントに添加される場合、記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、キット、容器、パック、またはディスペンサー中に包装することができる。本明細書に記載されている医薬組成物を、プレフィルドシリンジまたはバイアル中に包装してよい。
【０２００】
治療方法および発現の阻害
本明細書に開示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を使用して、ＲＮＡｉ剤の投与から利益を受けるだろう疾病または障害を有する対象（例えば、ヒトまたは他の哺乳類）を治療することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されているＲＮＡｉ剤を使用して、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの発現および／またはＨＳＤ１７Ｂ１３（あるいは、本明細書では１７β−ＨＳＤ１３と呼ぶ）タンパク質レベルの減少および／または阻害から利益を受けるだろう対象、例えば、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および硬変症を含むアルコール性もしくは非アルコール性脂肪肝疾患に関連する症状と診断されたかまたは症状に罹患している対象を治療することができる。
【０２０１】
いくつかの実施形態では、対象に、いずれかの１つ以上のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の治療有効量を投与する。対象の治療は、治療および／または予防的治療を含むことができる。対象に、いずれかの１つ以上の本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の治療有効量を投与する。対象は、ヒト、患者、またはヒト患者であり得る。対象は、成人、青年、小児、または幼児であってよい。本明細書に記載されている医薬組成物の投与は、ヒトまたは動物への投与であり得る。
【０２０２】
本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を使用して、ＨＳＤ１７Ｂ１３関連疾病もしくは障害を有する、またはＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現により少なくとも部分的に媒介される疾病もしくは障害を有する対象における少なくとも１つの症状を治療することができる。いくつかの実施形態では、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を使用して、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの減少から利益を受けるかまたはこれにより少なくとも部分的に媒介される疾病もしくは障害を有する対象の臨床症状を治療または管理する。対象に、１つ以上の本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤またはＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤含有組成物の治療有効量を投与する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されている方法は、本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む組成物を治療しようとする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のいずれか１つ以上の予防有効量を対象に投与し、それにより、少なくとも１つの症状を予防または阻害することにより対象を治療する。
【０２０３】
特定の実施形態では、本開示は、それを必要とする患者において、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現により少なくとも部分的に媒介される疾病、障害、病態、または病理学的状態の治療方法であって、該方法は本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のいずれかを患者に投与することを含む、方法を提供する。
【０２０４】
いくつかの実施形態では、記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を投与する対象のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の遺伝子発現レベルおよび／もしくはｍＲＮＡレベルは、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象またはＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９％超低下する。対象における遺伝子発現レベルおよび／またはｍＲＮＡレベルは、対象の細胞、細胞群、および／または組織中で低下してよい。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を投与した対象におけるＨＳＤ１７Ｂ１３タンパク質レベルは、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を投与される前の対象またはＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくは９９％超低下する。対象におけるタンパク質レベルは、対象の細胞、細胞群、組織、血液、および／または他の体液中で低下してよい。
【０２０６】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡレベルおよびＨＳＤ１７Ｂ１３タンパク質レベルの減少を、当技術分野で公知のいずれかの方法によって評価することができる。本明細書で使用されるとき、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡレベルおよび／またはＨＳＤ１７Ｂ１３タンパク質レベルの低下または減少は、本明細書において、ＨＳＤ１７Ｂ１３の低下もしくは減少またはＨＳＤ１７Ｂ１３の発現の阻害もしくは低下とまとめて言う。本明細書に記載されている実施例は、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現の阻害を評価するための公知の方法を例証する。当業者は、インビボおよび／またはインビトロでのＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現の阻害を評価するための適切な方法をさらに知っているだろう。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患を原因とする疾病、障害、または症状の治療方法（予防的（prophylactic）または予防的（preventative）治療を含む）であって、該方法は、表１の配列を有するＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの部分と少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を本明細書に開示する。いくつかの実施形態では、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患を原因とする疾病または症状の治療方法（予防的（prophylactic）または予防的（preventative）治療を含む）であって、該方法は、表２または３の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖、ならびにアンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である表２または４の配列のうちのいずれかを含むセンス鎖を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を本明細書に開示する。いくつかの実施形態では、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症を含むアルコール性または非アルコール性脂肪肝疾患を原因とする疾病または症状の治療方法（予防的（prophylactic）または予防的（preventative）治療を含む）であって、該方法は、表２または４の配列のうちのいずれかを含むセンス鎖、ならびにセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である表２または３の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法を本明細書に開示する。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、細胞中のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現の阻害方法であって、該方法は、表１の配列を有するＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの部分と少なくとも部分的に相補的であるアンチセンス鎖を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、細胞に投与することを含む、方法を本明細書に開示する。いくつかの実施形態では、細胞中のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現の阻害方法であって、該方法は、表２または３の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖、ならびにアンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である表２または４の配列のうちのいずれかを含むセンス鎖を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を、細胞に投与することを含む、方法を本明細書に開示する。いくつかの実施形態では、細胞中のＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子発現の阻害方法であって、該方法は、表２または４の配列のうちのいずれかを含むセンス鎖、ならびにセンス鎖と少なくとも部分的に相補的である表２または３の配列のうちのいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を投与することを含む、方法を本明細書に開示する。
【０２０９】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の使用は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および硬変症を含むアルコール性もしくは非アルコール性脂肪肝疾患に関連する疾病／障害の治療的（予防的（prophylactic）を含む）処置、および／または促進もしくは上昇されたＨＳＤ１７Ｂ１３発現のための方法を提供する。記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉がＨＳＤ１７Ｂ１３タンパク質の産生に必要な１つ以上の遺伝子の発現を阻害することを媒介する。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を使用して、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、および／または硬変症を含むアルコール性もしくは非アルコール性脂肪肝疾患を含む様々な疾病、障害、または病態を治療または予防することもできる。さらに、肝細胞にＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤をインビボ送達するための組成物を記載する。
【０２１０】
細胞、組織、臓器、および非ヒト生物
本明細書に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つを含む細胞、組織、臓器、および非ヒト生物を考える。細胞、組織、臓器、または非ヒト生物にＲＮＡｉ剤を送達することによって、細胞、組織、臓器、または非ヒト生物を行う。
【０２１１】
ここで、上記提供された実施形態および項目を、次の非限定的実施例と共に例証する。
【実施例】
【０２１２】
実施例１．ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の合成
上表５に示されているＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤二本鎖を、次の一般的手順に従って合成した。
【０２１３】
Ａ．合成。
ＲＮＡｉ剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖を、オリゴヌクレオチド合成で使用される固相上のホスホラミダイト技術に従って合成した。かかる標準的合成は、当技術分野において通常公知である。規模に応じて、ＭｅｒＭａｄｅ９６Ｅ（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、ＭｅｒＭａｄｅ１２（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、またはＯＰ  Ｐｉｌｏｔ１００（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）のいずれかを使用した。コントロールドポアガラス製固体支持体（ＣＰＧ、５００Åまたは６００Å、Ｐｒｉｍｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（米国ペンシルベニア州アストン）から入手）上で合成を行った。それぞれの鎖の３’末端に位置するモノマーを、合成の開始点として固体支持体に結合した。全てのＲＮＡおよび２’−修飾ＲＮＡホスホラミダイトを、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（米国ウィスコンシン州ミルウォーキー）またはＨｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（中国上海）から購入した。２’−Ｏ−メチルホスホラミダイトとしては次のものを含む：（５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ６−（ベンゾイル）−２′−Ｏ−メチル−アデノシン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト、５′−Ｏ−ジメトキシ−トリチル−Ｎ４−（アセチル）−２′−Ｏ−メチル−シチジン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−アミノ）ホスホラミダイト、（５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２−（イソブチリル）−２′−Ｏ−メチル−グアノシン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト、および５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−２′−Ｏ−メチル−ウリジン−３′−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイト。２’−デオキシ−２’−フルオロ−ホスホラミダイトは、２’−Ｏ−メチルアミダイトとして同じ保護基を保有する。５’−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’，３’−セコ−ウリジン、２’−ベンゾイル−３’−［（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル）］−ホスホラミダイトも、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃまたはＨｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。５’−ジメトキシトリチル−２’−Ｏ−メチル−イノシン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイトを、Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（米国バージニア州）またはＨｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。逆位脱塩基（３’−Ｏ−ジメトキシトリチル−２’−デオキシリボース−５’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイトを、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（米国マサチューセッツ州ウィルミントン）またはＳＡＦＣ（米国ミズーリ州セントルイス）から購入した。５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ２，Ｎ６−（フェノキシアセテート）−２’−Ｏ−メチル−ジアミノプリン−３’−Ｏ−（２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）ホスホラミダイトを、ＣｈｅｍＧｅｎｅまたはＨｏｎｇｅｎｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈから購入した。
【０２１４】
標的化リガンド含有ホスホラミダイトを、無水ジクロロメタンまたは無水アセトニトリル（５０ｍＭ）中に溶解し、一方、全ての他のアミダイトを無水アセトニトリル（５０ｍＭ）中に溶解するか、または無水ジメチルホルムアミドおよびモレキュラーシーブ（３Å）を添加した。５−ベンジルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中に２５０ｍＭ）または５−エチルチオ−１Ｈ−テトラゾール（ＥＴＴ、アセトニトリル中に２５０ｍＭ）を、活性化剤溶液として使用した。結合時間は、１２分（ＲＮＡ）、１５分（標的化リガンド）、９０秒（２’ＯＭｅ）、および６０秒（２’Ｆ）であった。ホスホロチオエート結合を導入するために、無水アセトニトリル中の３−フェニル１，２，４−ジチアゾリン−５−オン（ＰＯＳ、ＰｏｌｙＯｒｇ，Ｉｎｃ（米国マサチューセッツ州レミンスター）から入手）を使用した。標的化リガンドを有しない「裸の（naked）」ＲＮＡｉ剤が存在すると特に特定されない限り、以下の実施例における合成および試験されたＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤二本鎖は、表６に示されている標的化リガンド化学構造において「ＮＡＧ」としてＮ−アセチル−ガラクトサミンを利用した。本明細書で報告されている実施例において使用される特定の二本鎖の化学構造は、図１Ａ〜１０Ｄに見られる。
【０２１５】
Ｂ．支持体に結合したオリゴマーの切断および脱保護 
固相合成の仕上げ処理後、乾燥固体支持体を、４０重量％メチルアミン水溶液および２８％水酸化アンモニウム溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ）の１：１体積溶液で３０℃、１．５時間処理した。溶液を蒸発させて、固形残渣を水に再溶解した（下記参照）。
【０２１６】
Ｃ．精製。
粗オリゴマーを、ＴＳＫゲルＳｕｐｅｒＱ−５ＰＷ  １３μｍカラムおよび島津ＬＣ−８システムを使用して、陰イオン交換ＨＰＬＣによって精製した。緩衝液Ａは、２０ｍＭトリス、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ９．０であり、２０％アセトニトリルを含有し、緩衝液Ｂは、緩衝液Ａと同じであるが１．５Ｍ塩化ナトリウムを添加した。２６０ｎｍにおけるＵＶ追跡を記録した。適切なフラクションをプールし、次いで、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５  ｆｉｎｅを充填されたＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＸＫ２６／４０カラムを使用して、ろ過されたＤＩ水の緩衝液または１００ｍＭ重炭酸アンモニウム、ｐＨ６．７および２０％アセトニトリルで溶離したサイズ排除ＨＰＬＣに注入した。
【０２１７】
Ｄ．アニーリング。
相補鎖を、１×リン酸緩衝食塩水（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｅｌｌｇｒｏ）中に等モルＲＮＡ溶液（センスおよびアンチセンス）を組み合わせることにより混合して、ＲＮＡｉ剤を製造した。いくつかのＲＮＡｉ剤を凍結乾燥し、−１５〜−２５℃で貯蔵した。二本鎖濃度を、１×リン酸緩衝食塩水中においてＵＶ可視分光計を用いて溶液の吸光度を測定することによって決定した。次いで、２６０ｎｍにおける溶液吸光度に換算係数および希釈係数を掛けて、二本鎖濃度を決定した。使用された換算係数は、０．０５０ｍｇ／（ｍＬ・ｃｍ）であるか、あるいは実験的に決定された吸光係数から算出した。
【０２１８】
実施例２．ラットにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子上の異なる位置を標的とするように設計されたＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ活性を評価するため、スプラーグドーリーラットを使用した。１日目表７に記載されている投与群に従って、各ラットに、薬剤的に許容可能な生理食塩水緩衝液中に製剤された３．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤、または媒体コントロール（ＲＮＡｉ剤を含まない生理食塩水緩衝液）を含む５００μｌ／動物体重２００ｇの単回皮下注射を投与した。
【表７】
2022501040.tif 000030
【０２１９】
ＲＮＡｉ剤の各々は、修飾配列およびセンス鎖の５’末端に結合された三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んでいた。（修飾配列および標的化リガンド構造については表３〜６参照）。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０７９、ＡＤ０６０８０、およびＡＤ０６０８１（群２、３、および４）は、各々、遺伝子の４８８位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８２およびＡＤ０６０８３（群５および６）は、各々、遺伝子の４９２位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８４およびＡＤ０６０８５（群７および８）は、各々、遺伝子の４９９位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（例えば、参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２２０】
頸部および肩部にわたる弛緩性皮膚中に、皮膚および筋肉間注射（すなわち、皮下注射）を行った。各群における３匹のラットを試験した（ｎ＝３）。１５日目に、ラットの全部を屠殺した。肝臓を収穫し、約１００ｍｇの肝臓サンプルを採取し、ＲＮＡ単離のために液体窒素中に急速凍結した。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々の相対的発現量を、群１（媒体コントロール、ＲＮＡｉ剤なし）の動物に対する各それぞれの治療群からの動物のＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ発現量レベルを正規化することによりｐＲＴ−ＰＣＲによって決定し（ΔΔＣＴ分析）、この結果を次表８に記載している。
【表８】
2022501040.tif 000031
【０２２１】
表８に示されているように、１５日目、群２〜８のＲＮＡｉ剤の各々は、媒体コントロールと比較して、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡレベルの低下を示した。例えば、３．０ｍｇ／ｋｇのＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８５の単回皮下投与は、１５日目にＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの約８７％（０．１３１）の低下を示した。
【０２２２】
実施例３．ラットにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
追加のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ活性を評価するために、スプラーグドーリーラットを使用した。１日目表９に記載されている投与群に従って、各ラットに、薬剤的に許容可能な生理食塩水緩衝液中に製剤された３．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤、または媒体コントロール（ＲＮＡｉ剤を含まない生理食塩水緩衝液を含む５００μｌ／動物体重２００ｇの単回皮下注射を投与した。
【表９】
2022501040.tif 000032
【０２２３】
ＲＮＡｉ剤の各々は、修飾配列およびセンス鎖の５’末端に結合された三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んでいた。（修飾配列および標的化リガンド構造については表３〜６参照）。試験された全てのＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤（群２〜１０）は、遺伝子の４８８位においてＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（例えば、参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２２４】
頸部および肩部にわたる弛緩性皮膚中に、皮膚および筋肉間注射（すなわち、皮下注射）を行った。各群における４匹のラットを試験した（ｎ＝4）。１５日目に、ラットの全部を屠殺した。肝臓を収穫し、約１００ｍｇの肝臓サンプルを採取し、ＲＮＡ単離のために液体窒素中に急速凍結した。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々の相対的発現量を、群１（媒体コントロール、ＲＮＡｉ剤なし）の動物に対する各それぞれの治療群からの動物のＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ発現量レベルを正規化することによりｐＲＴ−ＰＣＲによって決定し（ΔΔＣＴ分析）、この結果を次表１０に記載している。
【表１０】
2022501040.tif 000033
【０２２５】
表１０に示されているように、群２〜１０のＲＮＡｉ剤の各々は、１５日目において媒体コントロールと比較して、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡレベルの低下を示した。群９（ＡＤ０６１８２）は、１５日目、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの約２０％（０．８００）の低下しか示さなかった。しかしながら、残りの試験されたＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤（すなわち、群２〜８および１０）の各々は、単回皮下投与後１５日目にＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの約６５％（群１０、０．３４８）〜約８１％（群３、０．１９６）の低下を示した。
【０２２６】
実施例４．ラットにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
特定の追加のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ活性を評価するために、スプラーグドーリーラットを使用した。１日目表１１に記載されている投与群に従って、薬剤的に許容可能な生理食塩水緩衝液中に製剤された３．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤、または媒体コントロール（ＲＮＡｉ剤を含まない生理食塩水緩衝液を含む５００μｌ／動物体重２００ｇの単回皮下注射を、各ラットに投与した。
【表１１】
2022501040.tif 000034
【０２２７】
ＲＮＡｉ剤の各々は、修飾配列およびセンス鎖の５’末端に結合された三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンドを含んでいた。（修飾配列および標的化リガンド構造については表３〜６参照）。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８５、ＡＤ０６１８４、ＡＤ０６１８５、ＡＤ０６１８６、ＡＤ０６１８７、ＡＤ０６１８８、ＡＤ０６１８９、およびＡＤ０６１９０（群２〜９）は、各々、遺伝子の４９９位においてＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８２およびＡＤ０６１９１は、遺伝子の４９２位においてＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（例えば、参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２２８】
頸部および肩部にわたる弛緩性皮膚中に、皮膚および筋肉間注射（すなわち、皮下注射）を行った。各群における４匹のラットを試験した（ｎ＝４）。１５日目に、ラットの全部を屠殺した。肝臓を収穫し、約１００ｍｇの肝臓サンプルを採取し、ＲＮＡ単離のために液体窒素中に急速凍結した。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々の相対的発現量を、群１（媒体コントロール、ＲＮＡｉ剤なし）の動物に対する各それぞれの治療群からの動物のＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ発現量レベルを正規化することによりｐＲＴ−ＰＣＲによって決定し（ΔΔＣＴ分析）、この結果を次表１２に記載している。
【表１２】
2022501040.tif 000035
【０２２９】
表１２に示されているように、群２〜１１のＲＮＡｉ剤の各々は、１５日目においてコントロールと比較して、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡレベルの低下を示した。さらに詳細には、１５日目、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６１８７は単回皮下投与後ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの約９０％（０．００９９）低下を示し、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８５はＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの約７９％（０．２１１）低下を示した。
【０２３０】
実施例５．カニクイザルにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
カニクイザルにおいて、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０７８を評価した。１日目および２２日目に、２つのカニクイザル（マカカ・ファシキュラス（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））霊長類（本明細書では「シノ（cynos）」とも呼ぶ）に、生理食塩水中に製剤された４．０ｍｇ／ｋｇのＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０７８を含有する０．４ｍＬ／ｋｇ（約３ｍＬ体積、動物質量に応じて）の皮下注射を投与した。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０７８は、表３〜６に示されている修飾ヌクレオチドおよびセンス鎖の５’末端と結合された三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ）を含んでいた。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０７８は、遺伝子の１５０１位においてＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（例えば、参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２３１】
−８日目（投与前）、１５日目、２９日目、および４３日目に、肝生検を採取した。各生検採取の日に、シノ（cynos）を麻酔し、超音波ガイド下肝生検を行い、約１ｍｍ×２ｍｍのサイズで２つまたは３つの肝組織サンプルを抽出した。次いで、生検サンプルをホモジナイズし、シノ（cyno）肝臓のＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡレベルをＲＴ−ｑＰＣＲにより測定した。次いで、得られた結果を、投与前（この場合、−８日目）ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ測定値に対して正規化した。得られたｍＲＮＡデータを次表１３および１４に反映している。
【表１３】
2022501040.tif 000036
＊＊シノ＃１の２９日目生検サンプルは正常品より小さく、過度に蒼白な外観に基づいて、脂肪組織であって肝組織ではないと思われた。したがって、２９日目の分析は行わなかった。
【表１４】
2022501040.tif 000037
【０２３２】
ＡＤ０６０７８を投与されたシノ（cynos）は両方とも、４３日目までずっと治療前測定値と比較して、肝臓特異的ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡの低下を示した。４３日目、例えば、第二シノ（cyno）では、投与前レベルと比較して、約６７％（０．３３５）のＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡが低下した。
【０２３３】
実施例６．ＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスモデル。
特定の追加ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を評価するため、ＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。６〜８週齢雌Ｃ５７ＢＬ／６アルビノマウスに、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤またはコントロールの投与の少なくとも２９日前に流体力学的尾静脈注射を投与することによって、一過性にプラスミドでインビボトランスフェクトした。プラスミドは、ＳＥＡＰ（分泌されたヒト胎盤アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子の３’ＵＴＲに挿入されたＨＳＤ１７Ｂ１３  ｃＤＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ＮＭ＿１７８１３５．４（配列番号１））を含んでいた。動物体重の１０％の総体積にリンゲル液中のＨＳＤ１７Ｂ１３  ｃＤＮＡ配列を含む５０μｇのプラスミドを、尾静脈によりマウスに注射して、ＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰモデルマウスを作製した。以前に記載されているように５〜７秒に２７ゲージ針により溶液を注射した（Ｚｈａｎｇ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｈｉｇｈ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｆｏｒｅｉｇｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ  ａｆｔｅｒ  ｔａｉｌ  ｖｅｉｎ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎａｋｅｄ  ｐｌａｓｍｉｄ  ＤＮＡ．”Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １９９９  Ｖｏｌ．１０，ｐ１７３５−１７３７．）。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤によるＨＳＤ１７Ｂ１３の発現の阻害は、測定されたＳＥＡＰ発現の同時阻害をもたらす。治療の投与前（−７日目〜投与１日前）、血清中のＳＥＡＰ発現レベルを、Ｐｈｏｓｐｈａ−Ｌｉｇｈｔ（商標）ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により測定し、マウスを平均ＳＥＡＰレベルによりグループ化した。
【０２３４】
マウスを２〜３％イソフルランで麻酔し、血液サンプルを顎下部から血清分離チューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ  ＡＧ＆Ｃｏ．独国ニュームブレヒト）中に採取した。環境温度において２０分間、血液を凝固させた。チューブを８，０００×ｇで３分間遠心分離し、血清を分離して４℃で貯蔵した。血清を採取し、Ｐｈｏｓｐｈａ−Ｌｉｇｈｔ（商標）ＳＥＡＰレポーター遺伝子アッセイシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により製造者説明書に従って測定した。このモデルでＨＳＤ１７Ｂ１３発現の未治療関連低下を説明するために、各動物の血清中ＳＥＡＰレベルを、媒体コントロールを注射されたマウスのコントロール群に対して正規化することができる。そうするため、先ず、「治療前に対して正規化された」発現比を決定するため、ある時点における各動物のＳＥＡＰレベルをその動物の発現の未治療レベル（−１日目）で割った。次いで、個別の動物の「治療前に対して正規化された」比を、正常な媒体コントロール群の全マウスの平均「治療前に対して正規化された」比で割ることによって、特定の時点における発現をコントロール群に対して正規化した。あるいは、単に治療前レベルに対して正規化することによって、各動物の血清中ＳＥＡＰレベルを評価した。
【０２３５】
実施例７．ＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
上記実施例６に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目、次表１５に従って、薬剤的に許容可能な生理食塩水緩衝液中に製剤された３．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤、または媒体コントロール（ＲＮＡｉ剤を含まない生理食塩水緩衝液）のいずれかを含む２００μｌ／動物体重２０ｇの単回皮下投与を、各ラットに与えた。
【表１５】
2022501040.tif 000038
【０２３６】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々は、本明細書の二本鎖構造に記載されている修飾配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基（三座リガンド）を含む標的化リガンドと、センス鎖の５’末端において結合された修飾ヌクレオチドを含んでいた。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤に関連する特定の修飾および構造情報については表３〜６参照）。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０７８（群２）は、遺伝子の１５０１位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８１（群３）は、遺伝子の４８８位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８４およびＡＤ０６０８５は、遺伝子の４９９位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２３７】
頸部および肩部にわたる弛緩性皮膚中に、皮膚および筋肉間注射（すなわち、皮下注射）を行った。各群における４匹のマウスを試験した（ｎ＝４）。−２日目（治療前）、８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上記実施例６に記載されている手順に従って決定した。実験から得たデータを、次表１６および１７に示す。
【表１６】
2022501040.tif 000039
＊上記実施例６に特記されているように、時間とともに媒体コントロール群（群１）におけるＳＥＡＰの緩やかな低下は、動物にける天然細胞複製によるマウス細胞におけるＳＥＡＰレポーター遺伝子の欠損のせいである。
【表１７】
2022501040.tif 000040
【０２３８】
投与群（すなわち、群２〜５）の各々におけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々は、８日目および１５日目において媒体コントロール（群１）と比較してＳＥＡＰの低下を示した。さらに、両方共がＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の４９９位における発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０８４およびＡＤ０６０８５は、２２日目の測定まで特に高レベルのノックダウンを示した。（群１と群４および５の比較）。
【０２３９】
実施例８．カニクイザルにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０７８、ＡＤ０６１８７、ＡＤ０６２７８、およびＡＤ０６２８０を、カニクイザルにおいて評価した。１日目および３０日目に、各群の３シノ（cynos）（ｎ＝３）に、生理食塩水に製剤された３．０ｍｇ／ｋｇのそれぞれのＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤を含む０．３ｍＬ／ｋｇの皮下注射（約３ｍＬ体積、動物質量に応じて）を投与した。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、表３〜６に示されている修飾ヌクレオチドおよびセンス鎖の５’末端と結合された三座Ｎ−アセチル−ガラクトサミン含有標的化リガンド（（ＮＡＧ３７）ｓ）を含んでいた。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６０７８（群1）は、遺伝子の１５０１位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６１８７（群２）は、遺伝子の４９９位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２７８（群３）は、遺伝子の５１３位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２８０（群４）は、遺伝子の７９１位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（例えば、参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２４０】
−７日目（投与前）、１５日目、２９日目、および４３日目に、肝生検を採取した。各生検採取の日に、シノ（cynos）を麻酔し、腹腔鏡検査を使用して、２つの肝組織サンプルを各々約８０ｍｇ〜１２０ｍｇ抽出した。次いで、生検サンプルをホモジナイズし、シノ（cyno）肝臓のＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡレベルをＲＴ−ｑＰＣＲにより測定した。次いで、得られた結果を、投与前（この場合、−７日目）ＨＳＤ１７Ｂ１３  ｍＲＮＡ測定値に対して正規化した。得られたｍＲＮＡデータを次表１８に反映している。
【表１８】
2022501040.tif 000041
【０２４１】
実施例９．ＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
上記実施例６に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目、次表１９に従って、薬剤的に許容可能な生理食塩水緩衝液中に製剤された３．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤、または媒体コントロール（ＲＮＡｉ剤を含まない生理食塩水緩衝液）のいずれかを含む２００μｌ／動物体重２０ｇの単回皮下投与を、各ラットに与えた。
【表１９】
2022501040.tif 000042
【０２４２】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々は、本明細書の二本鎖構造に記載されている修飾配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基（三座リガンド）を含む標的化リガンドと、センス鎖の５’末端において結合された修飾ヌクレオチドを含んでいた。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤に関連する特定の修飾および構造情報については表３〜６参照）。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１０（群２）は、遺伝子の５１３位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１１（群３）は、遺伝子の６４５位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１２（群４）は、遺伝子の６４９位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１３（群５）は、遺伝子の７５９位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１４（群６）は、遺伝子の７９１位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１７（群７）は、遺伝子の１５０５位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１８（群８）は、遺伝子の２１８５位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２４３】
頸部および肩部にわたる弛緩性皮膚中に、皮膚および筋肉間注射（すなわち、皮下注射）を行った。各群における４匹のマウスを試験した（ｎ＝4）。−１日目（治療前）、８日目、１５日目、および２２日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上記実施例６に記載されている手順に従って決定した。実験から得たデータを、次表２０に示す。
【表２０】
2022501040.tif 000043
＊上記実施例６に特記されているように、時間とともに媒体コントロール群（群１）におけるＳＥＡＰの緩やかな低下は、動物にける天然細胞複製によるマウス細胞におけるＳＥＡＰレポーター遺伝子の欠損のせいである。
【０２４４】
投与群（すなわち、群２〜８）の各々におけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々は、１５日目および２２日目において媒体コントロール（群１）と比較してＳＥＡＰの低下を示した。さらに、ＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の５１３位における発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１０（群２）、およびＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の７９１位における発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含むＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１４（群６）は、試験された他のＲＮＡｉ剤と比較して、特に高レベルのノックダウンを示した。例えば、１５日目に、ＡＤ０６２１０（群２）は約８４％（０．１５７）の低下を示したが、ＡＤ０６２１４（群６）は約８５％（０．１５１）の低下を示した。（例えば、コントロール群（群１）よりほんの僅かに大きいノックダウンレベルを示したＡＤ０６２１８（群８）と比較して）。２２日目に、ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１４（群６）も、約８３％のノックダウン（０．１７１）を示した。
【０２４５】
実施例１０．ＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
上記実施例６に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目、次表２１に従って、薬剤的に許容可能な生理食塩水緩衝液中に製剤された３．０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤、または媒体コントロール（ＲＮＡｉ剤を含まない生理食塩水緩衝液）のいずれかを含む２００μｌ／動物体重２０ｇの単回皮下投与を、各ラットに与えた。
【表２１】
2022501040.tif 000044
【０２４６】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々は、本明細書の二本鎖構造に記載されている修飾配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基（三座リガンド）を含む標的化リガンドと、センス鎖の５’末端において結合された修飾ヌクレオチドを含んでいた。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤に関連する特定の修飾および構造情報については表３〜６参照）。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６１８５（群２）およびＡＤ０６１８７（群３）は、遺伝子の４９９位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１０（群４）は、遺伝子の５１３位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１３（群５）は、遺伝子の７５９位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１４（群６）は、遺伝子の７９１位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２４７】
頸部および肩部にわたる弛緩性皮膚中に、皮膚および筋肉間注射（すなわち、皮下注射）を行った。各群における４匹のマウスを試験した（ｎ＝4）。−１日目（治療前）、８日目、１５日目、および２２日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上記実施例６に記載されている手順に従って決定した。実験から得たデータを、次表２２に示す。
【表２２】
2022501040.tif 000045
＊上記実施例６に特記されているように、時間とともに媒体コントロール群（群１）におけるＳＥＡＰの緩やかな低下は、動物にける天然細胞複製によるマウス細胞におけるＳＥＡＰレポーター遺伝子の欠損のせいである。
【０２４８】
投与群（すなわち、群２〜６）の各々におけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の各々は、全ての測定時点において媒体コントロール（群１）と比較してＳＥＡＰの低下を示した。
【０２４９】
実施例１１．ＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
上記実施例６に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目、次表２３に従って、薬剤的に許容可能な生理食塩水緩衝液中に製剤されたあるｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）用量のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤、または媒体コントロール（ＲＮＡｉ剤を含まない生理食塩水緩衝液）のいずれかを含む２００μｌ／動物体重２０ｇの単回皮下投与を、各ラットに与えた。
【表２３】
2022501040.tif 000046
【０２５０】
ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の両方は、本明細書の二本鎖構造に記載されている修飾配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基（三座リガンド）を含む標的化リガンドと、センス鎖の５’末端において結合された修飾ヌクレオチドを含んでいた。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤に関連する特定の修飾および構造情報については表３〜６参照）。
【０２５１】
頸部および肩部にわたる弛緩性皮膚中に、皮膚および筋肉間注射（すなわち、皮下注射）を行った。２匹のマウスのみ有する媒体コントロール群を除いて、各群における４匹のマウスを試験した（ｎ＝４）。−１日目（治療前）、８日目、１５日目、２２日目、および２９日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上記実施例６に記載されている手順に従って決定した。実験から得たデータを、次表２４に示す。
【表２４】
2022501040.tif 000047
【０２５２】
試験されたＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤の両方（すなわち、ＡＤ０６２８０およびＡＤ０６１８７）は、媒体コントロール（群１）と比較してＳＥＡＰの低下を示した。
【０２５３】
実施例１２．ＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスにおけるＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤のインビボ試験。
上記実施例６に記載されているＨＳＤ１７Ｂ１３−ＳＥＡＰマウスモデルを使用した。１日目、次表２５に従って、薬剤的に許容可能な生理食塩水緩衝液中に製剤された３ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）用量のＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤、または媒体コントロール（ＲＮＡｉ剤を含まない生理食塩水緩衝液）のいずれかを含む２００μｌ／動物体重２０ｇの単回皮下投与を、各ラットに与えた。
【表２５】
2022501040.tif 000048
【０２５４】
全てのＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤は、本明細書の二本鎖構造に記載されている修飾配列を有する３つのＮ−アセチル−ガラクトサミン基（三座リガンド）を含む標的化リガンドと、センス鎖の５’末端において結合された修飾ヌクレオチドを含んでいた。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤に関連する特定の修飾および構造情報については表３〜６参照）。ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６１８７（群２）は、遺伝子の４９９位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２０８（群３）は、遺伝子の９２位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２０９（群４）は、遺伝子の４１７位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１５（群５）は、遺伝子の１４１８位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１６（群６）は、遺伝子の１５０２位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含み；ＨＳＤ１７Ｂ１３  ＲＮＡｉ剤ＡＤ０６２１９（群７）は、遺伝子の２１９５位におけるＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子の発現を阻害するように設計されたヌクレオチド配列を含んでいた。（参考にされたＨＳＤ１７Ｂ１３遺伝子については配列番号１および表２参照）。
【０２５５】
頸部および肩部にわたる弛緩性皮膚中に、皮膚および筋肉間注射（すなわち、皮下注射）を行った。各群における４匹のマウスを試験した（ｎ＝4）。−１日目（治療前）、８日目、１５日目、および２２日目に血清を採取し、ＳＥＡＰ発現レベルを、上記実施例６に記載されている手順に従って決定した。実験から得たデータを、次表２６に示す。
【表２６】
2022501040.tif 000049
【０２５６】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と併せて説明したが、前述の説明は、例証であり、本発明の範囲を限定する目的はなく、本発明の範囲は附属されているクレームの範囲によって規定されると理解されるべきである。他の態様、利点、および修正は、以下のクレームの範囲内である。
【図１Ａ】
2022501040.tif 000057
【図１Ｂ】
2022501040.tif 000058
【図１Ｃ】
2022501040.tif 000059
【図１Ｄ】
2022501040.tif 000060
【図２Ａ】
2022501040.tif 000061
【図２Ｂ】
2022501040.tif 000062
【図２Ｃ】
2022501040.tif 000063
【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０Ａ】
2022501040.tif 000093
【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2022501040.tif 000103
2022501040.tif 000104
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