(57)【要約】本開示は、ＯＸ４０Ｌポリペプチド、ＩＬ−１２ポリペプチド、ＩＬ−１５ポリペプチド、及びこれらの組み合わせをコードする１種または複数種のｍＲＮＡを使用して、固形腫瘍及び播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを含むがんを治療するための方法を特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者におけるがんを治療するための方法であって、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡであって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ、
を前記患者に投与することを含み、
前記第１のｍＲＮＡ及び前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている、
前記方法。
【請求項２】
前記がんは播種性がんであり、前記第１のｍＲＮＡ及び前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは全身投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記播種性がんは血液がんである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記骨髄性悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記がんは固形腫瘍であり、前記第１のｍＲＮＡ及び前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは腫瘍内投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、
（ｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｉｉｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及び膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
である、請求項１から請求項６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記トランス提示ヒトＩＬ−１５は、（ｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドである、または（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡによってコードされている、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１から請求項８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、請求項１から請求項９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、任意選択的にペプチドリンカーを介して、ＩＬ−１２  ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２  ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む、請求項７から請求項１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（ｉ）前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインはＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む、または（ｉｉ）前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される、請求項７から請求項１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは細胞内ドメインを含み、（ｉ）前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している、または前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している、または（ｉｉ）前記細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される、請求項７から請求項１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞内ドメインは、（ｉ）配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、（ｉｉ）Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、または（ｉｉｉ）配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む、請求項７から請求項１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、または、前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している、請求項７から請求項１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドはｓｕｓｈｉドメインを含む、請求項７から請求項１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを更に含み、前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに由来しているまたは非相同ポリペプチドに由来している、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項７から請求項２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされており、前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記固形腫瘍は免疫抑制性腫瘍微小環境を含む、または、前記固形腫瘍は免疫チェックポイント阻害剤療法に対して反応を示さない、請求項６から請求項２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
（ｉ）前記第１のｍＲＮＡ及び前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡを含む第１の分割用量の医薬組成物、及び、
（ｉｉ）少なくとも１回の第２の分割用量の前記医薬組成物、
を含み、
前記第１の分割用量及び前記第２の分割用量は、同一投与期間中の単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して、前記患者における前記ｍＲＮＡコードポリペプチドへの曝露を増加させることにより、前記患者における前記播種性がんを治療する、
請求項１から請求項２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１の分割用量及び前記第２の分割用量は、（ｉ）単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して前記治療の抗腫瘍効果を向上させる、（ｉｉ）毒性を抑制して忍容性をより良好にしつつ抗腫瘍効果を向上させる、または、（ｉ）及び（ｉｉ）をもたらす、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
それぞれのｍＲＮＡは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記３’ＵＴＲは少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含み、前記少なくとも１つのｍｉＲ結合部位はｍｉＲ−１２２結合部位であり、前記ｍｉＲ−１２２結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は配列番号：８３に記載のヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位は配列番号：７４に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：７７または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項１から請求項２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
それぞれのｍＲＮＡは５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記５’ＵＴＲは配列番号：１２または配列番号：１３３に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
それぞれのｍＲＮＡは少なくとも１つの化学修飾を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
（ｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９５％はＮ１−メチルシュードウリジンである、（ｉｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９９％はＮ１−メチルシュードウリジンである、または（ｉｉｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの１００％はＮ１−メチルシュードウリジンである、請求項１から請求項３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
前記脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記脂質ナノ粒子は５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される、請求項３６から請求項３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記イオン性脂質は化合物Ｘを含む、請求項３６から請求項３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記脂質ナノ粒子は、約２０〜６０％のモル比率の化合物Ｘ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率の化合物Ｘ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｐ−４２８である、請求項３６から請求項４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
前記脂質ナノ粒子はフィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む、請求項３６から請求項４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
前記フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記フィトステロールは、（ｉ）シトステロールまたはその塩もしくはエステル、または（ｉｉ）スティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記フィトステロールはβ−シトステロール
2022501336.tif 001168
またはその塩もしくはエステルである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記脂質ナノ粒子は、（ｉ）５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８、または（ｉｉ）４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は１８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、請求項４４から請求項４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は２８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、請求項４４から請求項４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記脂質ナノ粒子は、
（ｉ）約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質であって、前記イオン性脂質は化合物Ｘである、前記イオン性脂質、
（ｉｉ）約１０ｍｏｌ％のリン脂質であって、前記リン脂質はＤＳＰＣである、前記リン脂質、
（ｉｉｉ）約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質であって、前記構造脂質はβ−シトステロール及びコレステロールから選択される、前記構造脂質、及び、
（ｉｖ）約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質であって、前記ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧである、前記ＰＥＧ脂質、
を含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】
前記脂質ナノ粒子は、５０：１０：１０：２８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む、請求項１から請求項３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５３】
チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを含み、前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する、先行請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
前記チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または前記抗体をコードするｍＲＮＡである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブであり、前記抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブであり、前記抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡであって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ、
を含む脂質ナノ粒子。
【請求項５８】
（ｉ）イオン性脂質、
（ｉｉ）ステロールまたはその他の構造脂質、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０をコードする第１のｍＲＮＡ、
（ｉｖ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡであって、前記免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである、前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ、
（ｖ）任意選択的に、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及び、
（ｖｉ）任意選択的に、ＰＥＧ脂質、
を含む脂質ナノ粒子。
【請求項５９】
前記少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、
（ｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｉｉｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及び膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
である、請求項５７から請求項５８のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６０】
前記トランス提示ヒトＩＬ−１５は、（ｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドである、または（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡによってコードされている、請求項５９に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６１】
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５７から請求項６０のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６２】
前記ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、請求項５７から請求項６１のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６３】
前記ＩＬ−１２ポリペプチドは、任意選択的にペプチドリンカーを介して、ＩＬ−１２  ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２  ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む、請求項５９から請求項６２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６４】
前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドは前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端または前記ペプチドリンカーの５’末端に位置している、請求項６３に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６５】
（ｉ）前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインはＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む、または（ｉｉ）前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される、請求項５９から請求項６４のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６６】
前記ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６７】
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは細胞内ドメインを含み、（ｉ）前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している、または前記細胞内ドメインは前記膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している、または（ｉｉ）前記細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される、請求項５９から請求項６６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６８】
前記細胞内ドメインは、（ｉ）配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、（ｉｉ）Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである、または（ｉｉｉ）配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである、請求項６７に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項６９】
前記Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含み、前記Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７０】
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む、請求項５９から請求項６９のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７１】
前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している、または、前記ＩＬ−１２ポリペプチド膜ドメインはペプチドリンカーにより前記ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している、請求項５９から請求項７０のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７２】
前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドはｓｕｓｈｉドメインを含む、請求項５９から請求項７１のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７３】
前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインを更に含み、前記細胞内ドメイン及び前記膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに由来しているまたは非相同ポリペプチドに由来している、請求項７３に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７４】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５９から請求項７３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７５】
前記ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされており、前記ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている、請求項７４に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７６】
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡであって、前記ｍＲＮＡは配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含む、前記第１のｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡであって、前記ｍＲＮＡは配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含む、前記第２のｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第３のｍＲＮＡであって、前記ｍＲＮＡは配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列を含む、前記第３のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第４のｍＲＮＡであって、前記ｍＲＮＡは配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列を含む、前記第４のｍＲＮＡ、
を含む脂質ナノ粒子。
【請求項７７】
それぞれのｍＲＮＡは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、請求項５７から請求項７６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７８】
前記３’ＵＴＲは少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含み、前記少なくとも１つのｍｉＲ結合部位はｍｉＲ−１２２結合部位であり、前記ｍｉＲ−１２２結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である、請求項７７に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項７９】
前記ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は配列番号：８３に記載のヌクレオチド配列を含み、前記ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位は配列番号：７４に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項７８に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８０】
それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：７７または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む、請求項５７から請求項７６のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８１】
それぞれのｍＲＮＡは５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、請求項５７から請求項８０のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８２】
前記５’ＵＴＲは配列番号：１２または配列番号：１３３に記載のヌクレオチド配列を含む、請求項８１に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８３】
それぞれのｍＲＮＡは少なくとも１つの化学修飾を含む、請求項５７から請求項８２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８４】
前記化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される、請求項８３に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８５】
（ｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９５％はＮ１−メチルシュードウリジンである、（ｉｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９９％はＮ１−メチルシュードウリジンである、または（ｉｉｉ）それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの１００％はＮ１−メチルシュードウリジンである、、請求項５７から請求項８２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８６】
約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項５７から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８７】
約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項５７から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８８】
５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項５７から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項８９】
前記イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される、請求項８６から請求項８８のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９０】
前記イオン性脂質は化合物Ｘを含む、請求項８６から請求項８９のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９１】
約２０〜６０％のモル比率の化合物Ｘ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項５７から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９２】
約５０％のモル比率の化合物Ｘ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む、請求項９１に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９３】
前記ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｐ−４２８である、請求項８６から請求項９２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９４】
フィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む、請求項８６から請求項９３のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９５】
前記フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９４に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９６】
前記フィトステロールは、（ｉ）シトステロールまたはその塩もしくはエステル、または（ｉｉ）スティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む、請求項９４に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９７】
前記フィトステロールはβ−シトステロール
2022501336.tif 001169
またはその塩もしくはエステルである、請求項９４に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９８】
（ｉ）５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８、または（ｉｉ）４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む、請求項５３から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項９９】
前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は１８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、請求項９４から請求項９７のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１００】
前記ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は２８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である、請求項９４から請求項９７のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１０１】
（ｉ）約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質であって、前記イオン性脂質は化合物Ｘである、前記イオン性脂質、
（ｉｉ）約１０ｍｏｌ％のリン脂質であって、前記リン脂質はＤＳＰＣである、前記リン脂質、
（ｉｉｉ）約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質であって、前記構造脂質はβ−シトステロール及びコレステロールから選択される、前記構造脂質、及び、
（ｉｖ）約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質であって、前記ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧである、前記ＰＥＧ脂質、
を含む、請求項５３から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１０２】
５０：１０：１０：２８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む、請求項５３から請求項８５のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１０３】
腫瘍内送達用に製剤化される、請求項５３から請求項１０２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１０４】
静脈内送達用に製剤化される、請求項５３から請求項１０２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１０５】
前記ｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子内に共配合されており、前記ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、前記テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び前記細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されている、請求項５３から請求項１０２のいずれか１項に記載の脂質ナノ粒子。
【請求項１０６】
前記細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、前記２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている、請求項１０５に記載の脂質ナノ粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１８年９月１４日出願の米国仮出願連番第６２／７３１，３３５号、２０１８年１１月２０日出願の米国仮出願連番第６２／７７０，０２４号、及び２０１９年７月３１日出願の米国仮出願第６２／８８１，３２２号の利益を主張する。上で参照した出願の全ての内容はこの参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
がんは体内における無秩序な細胞分裂及び増殖を特徴とする疾患である。米国では、全女性のおおよそ３分の１及び全男性のおおよそ半数が自身の一生中にがんを経験する。がんは一般的に、２つのカテゴリー、固形腫瘍及び播種性がんに分類することができる。それぞれのタイプは、有効な治療アプローチを開発するための異なる検討を必要とする。
【０００３】
播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などは、かなりの集団のがんに相当し、米国内だけで毎年３０，０００件を超える新たな症例が診断されており、その５年生存率はわずか約２０％である。骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の症例は約６０，０００〜１７０，０００件あり、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）へと進行する場合がある。播種性がん、例えば、ＡＭＬを含む骨髄性悪性腫瘍などのための治療選択肢は限られており、従来のアプローチ、例えば、化学療法剤及び／または免疫調節サイトカインまたは免疫調節抗体などはＡＭＬに対してあまり有効ではない。例えば、インターロイキン−２治療薬単独では、ＡＭＬ患者の寛解維持療法において有効ではないことが判明している（Ｂｕｙｓｅ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｂｌｏｏｄ  １１７：２６）。同様に、薬剤リノミドは自家骨髄移植後のＡＭＬ患者においてプラセボを超える効果を示さないことが判明している（Ｓｉｍｏｎｓｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌ．２５：１１２１）。様々な治療選択肢があるにもかかわらず、再発性または難治性のＡＭＬを有する患者の予後は概ね不良である。
【０００４】
固形腫瘍の治療としては、外科手術、化学療法及び／または放射線療法が挙げられる。外科手術では、腫瘍の大部分または更に浸潤器官を切除する。化学療法は、がん細胞を破壊する薬剤の使用を含む。化学療法で治療可能ながんもあれば、そうではないがんもある。化学療法剤は、がん細胞だけでなくその他の急速に分裂している正常細胞、例えば、胃腸管、骨髄、毛嚢、及び生殖系における正常細胞などにも影響を及ぼす場合があり、それにより数種類の副作用がもたらされる場合がある。放射線療法は、がんを治療するＸ線の使用を含む。放射線療法で治療可能なものもあれば、そうではないものもある。現在用いられている標準治療、例えば、化学療法及び放射線療法などがもたらす多くの望ましくない結果に対し、遺伝子療法及び免疫療法のアプローチは、疾患を診断、治療、及び管理するためのより的を絞ったアプローチを提供する。それゆえ、固形腫瘍及び播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍、例えば、ＡＭＬなどを含むがんを治療するための優れた治療アプローチが求められている。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、対象におけるがんを治療するための方法及び組成物に関する。本開示は少なくとも部分的に、Ｔ細胞活性化、ＮＫ細胞活性化、またはＴ細胞活性化とＮＫ細胞活性化の両方を誘導する１種または複数種の細胞結合サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２及びＩＬ−１５）をコードするｍＲＮＡ及び１種または複数種の細胞結合共刺激分子（例えば、ＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせを投与することにより、固形腫瘍及び播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍（例えば、ＡＭＬ）などにおける抗腫瘍効果がもたらされるという発見に基づいている。２種の細胞結合サイトカイン（例えば、ＩＬ−１２及びＩＬ−１５）をコードするｍＲＮＡ及び共刺激分子（例えば、ＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせを投与することにより抗腫瘍効果が向上することもまた発見された。ｍＲＮＡの組み合わせは、Ｔ細胞活性化、ＮＫ細胞活性化、またはＴ細胞活性化とＮＫ細胞活性化の両方を効果的に誘導するための様々なシグナルをもたらす。
【０００６】
更に、本開示は、トランス提示ＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを提供する。ＩＬ−１５は、その高親和性受容体であるＩＬ−１５Ｒαに結合した状態で存在する独特なサイトカインである。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、細胞表面を往復し、β／γＣ受容体複合体を介して相対する細胞を刺激する。それゆえ、理論に束縛されるものではないが、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡ（共に、例えば、ＩＬ−１５Ｒαに機能的に連結したＩＬ−１５のポリペプチド融合物をコードする単一のｍＲＮＡとして、または別々に、例えば、ＩＬ−１５及びＩＬ−１５Ｒαをそれぞれがコードする２種の独立したｍＲＮＡとして）は、トランス提示をもたらすことにより、β／γＣ受容体複合体を有する相対する細胞を刺激する。
【０００７】
理論に束縛されるものではないが、１種または複数種の細胞結合サイトカイン及び共刺激分子をコードするｍＲＮＡの組み合わせは、それら細胞結合サイトカイン及び共刺激分子がより強力ながん細胞：免疫細胞接合部を形成して、それらが相互作用する細胞（例えば、Ｔ細胞及びＮＫ細胞）の高い長期的または持続的な活性化をもたらす能力により、可溶性サイトカイン（複数可）または同一サイトカインの分泌形態と比較して、固形腫瘍及び、骨髄性悪性腫瘍を含む播種性がんに対する高い抗腫瘍効果をもたらす。Ｔ細胞の活性化には、３つのシグナル：ＭＨＣのペプチドとの相互作用がもたらすシグナル１、共刺激分子、例えば、ＯＸ４０Ｌなどがもたらすシグナル２、及び、サイトカイン、例えば、ＩＬ−１２及びＩＬ−１５などを含む免疫増強分子がもたらすシグナル３が必要となる。Ｔ細胞が促進する抗腫瘍免疫を確立するためには、３つ全てのシグナルが必要となる。しかしながら、腫瘍微小環境では、Ｔ細胞を活性化して抗腫瘍免疫応答を増強するために必要なシグナルがもたらされない場合が多い。細胞（例えば、白血病細胞または抗原提示細胞、例えば、樹状細胞など）によるｍＲＮＡの発現によって、共刺激分子、例えば、ヒトＯＸ４０ＬなどをコードするｍＲＮＡを、１種または複数種の細胞結合免疫増強分子をコードするｍＲＮＡ、例えば、シグナル３をもたらす１種または複数種の細胞結合サイトカイン（例えば、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡと組み合わせて、腫瘍微小環境中のＴ細胞に供給することにより、Ｔ細胞を活性化させて抗腫瘍免疫応答を誘導する。更に、ｍＲＮＡを発現する細胞へのサイトカイン及び共刺激分子の曝露を制限することにより、全身曝露、及び潜在的に望ましくない毒性が回避される。
【０００８】
ＡＭＬについては、白血病細胞が共刺激分子ＣＤ８０及びＣＤ８６の発現を抑制及び／または下方制御していることが知られている（Ｙａｈｏ，Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，Ｌ．，Ｅｕｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３，４３（３）：５７６−５７９；及びＨｉｒａｎｏ  Ｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ．１９９６，１０：１１６８−１１７６）。ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを投与することにより、例えば、共刺激シグナルが存在していないまたは存在していても下方制御されていることがある樹状細胞などに強力な共刺激シグナルをもたらし、既存の共刺激シグナルを増強または向上させて、Ｔ細胞とＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを発現する白血病細胞及び／または樹状細胞の間のより強力な接合部をもたらして、Ｔ細胞による抗腫瘍免疫応答を誘導することができる。本明細書に記載するとおり、共刺激分子をコードするｍＲＮＡ（例えば、ＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ）の量を１０分の１に低下させているにもかかわらず、共刺激分子を用いない治療と比較して強力な抗腫瘍効果がもたらされ、その結果、本明細書に記載の理論が証明された。
【０００９】
重要なことに、１種または複数種の細胞結合サイトカイン（例えば、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡ及び共刺激分子（例えば、ヒトＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせを全身投与することにより、造血組織を移植した播種性がんモデルにおいて、ＡＭＬ患者において認められるのと類似した様式で持続的な抗がんメモリー応答が誘導された。このモデルでは、抗がん免疫応答により疾患の再燃及び再発が予防された。この作用は、播種性がんモデルにおいて初めて実証された、ｍＲＮＡ治療薬の投与による抗がんメモリー応答であると考えられる。
【００１０】
本明細書において更に実証されたのは、分割投与レジメンの予想外な効果である。複数回の用量、すなわち、３回以上の用量に分割され、同一の治療期間中に毎週の単回用量で投与された同一用量のｍＲＮＡが、播種性がんモデルにおいて、単回用量と比較して、持続的な抗がんメモリー応答の誘導を含む高い抗がん効果をもたらすことが発見された。理論に束縛されるものではないが、このような分割投与により、対象におけるｍＲＮＡコードポリペプチドへのより多いまたは高い曝露がもたらされ、その結果として、毒性を抑制して忍容性をより良好にしつつ抗腫瘍効果が向上し得る。
【００１１】
本明細書に記載するとおり、体内分布試験により、ｍＲＮＡ封入脂質ナノ粒子が白血病細胞だけでなく樹状細胞を含む様々な免疫細胞に取り込まれていることが示された。これらの試験は、細胞結合サイトカインをコードする１種または複数種のｍＲＮＡ及びヒトＯＸ４０Ｌなどの共刺激分子をコードするｍＲＮＡの組み合わせ療法が、かなりの骨髄集団を有するがん、例えば、ＡＭＬなどに加えて多発性骨髄腫及びＢ細胞性白血病を含む様々な播種性がんを治療するのに有用となり得ることを示唆している。
【００１２】
本明細書に記載の組み合わせ療法はまた、様々な腫瘍微小環境を有する動物モデルの固形腫瘍における抗腫瘍免疫を確立するのに効果的であることが示された。理論に束縛されるものではないが、免疫チェックポイント抵抗性腫瘍モデル及び免疫抑制性腫瘍モデルにおいて認められた抗腫瘍効果が、細胞結合サイトカインをコードする１種または複数種のｍＲＮＡ及びヒトＯＸ４０Ｌなどの共刺激分子をコードするｍＲＮＡの投与後におけるＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、及び樹状細胞活性化の効果を証明しているものと考えられる。本明細書で開示するとおり、１種または複数種の細胞結合サイトカイン（例えば、ヒトＩＬ−１２、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡ及び共刺激分子（例えば、ヒトＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡの投与により、マウス及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ）における自然免疫及び適応免疫の細胞集団が活性化及び増加することに加え、ＮＨＰにおける免疫活性化サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−γ及びＣＸＣＬ）の発現が誘導される。本明細書で開示するとおり、ｍＲＮＡの組み合わせを投与した際にＤＣ細胞集団が活性化及び増殖したが、異常ＤＣ機能を有するＡＭＬの動物モデルにおける抗腫瘍効果にとって機能性ＤＣは必要ではなかった。ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＩＦＮ−γを枯渇させた動物を用いた実験が疾患負荷量の増加及び生存率の低下をもたらしたことから、細胞結合サイトカインをコードする１種または複数種のｍＲＮＡ及びヒトＯＸ４０Ｌなどの共刺激分子をコードするｍＲＮＡの投与が関与する抗腫瘍効果には、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞に加えてＩＦＮ−γが必要である。
【００１３】
更に、組み合わせ療法薬の固形腫瘍への腫瘍内投与により、遠い未治療腫瘍に対して効果的な抗腫瘍免疫応答を示すアブスコパル効果が誘導されることが判明した。
【００１４】
それゆえ、本明細書では、細胞結合サイトカインをコードする２種またはそれ以上のｍＲＮＡ（複数可）及び特定の免疫細胞を活性化させることによりがんに対する免疫応答を増強させる共刺激分子をコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供することによる、がん（例えば、固形腫瘍及び／または播種性がん）を治療するための組成物及び方法を提供する。骨髄性悪性腫瘍、例えば、ＡＭＬなどを含むがんは、様々なメカニズムにより免疫応答を回避することが知られている。本開示の組成物及び方法は、がん、例えば、固形腫瘍及び／または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍、例えば、ＡＭＬなどに対する自然免疫を活性化させる、適応免疫を活性化させる、及び／またはメモリー応答を活性化させるのに有用である。一部の態様では、ｍＲＮＡは修飾ｍＲＮＡである。
【００１５】
それゆえ、一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を患者に投与することを含む、ヒト患者におけるがんを治療するための方法を提供する。
【００１６】
一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を患者に投与することを含む、ヒト患者におけるがんを治療するための方法を提供し、
第１のｍＲＮＡ及び少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。
【００１７】
上記または関連する態様のいずれかでは、少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは、
（ｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｉｉｉ）トランス提示ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及び膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
である。
【００１８】
一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のｍＲＮＡを投与することを含む、がんの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供する。
【００１９】
上記または関連する態様のいずれかでは、がんは播種性がんであり、第１のｍＲＮＡ及び少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは全身投与される。一部の態様では、播種性がんは血液がんである。一部の態様では、播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である。一部の態様では、骨髄性悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される。その他の態様では、がんは固形腫瘍であり、第１のｍＲＮＡ及び少なくとも１種の第２のｍＲＮＡは腫瘍内投与される。
【００２０】
その他の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のｍＲＮＡを投与する（例えば、腫瘍内で）ことを含む、固形腫瘍の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供する。
【００２１】
一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のｍＲＮＡを投与する（例えば、静脈内注射により、例えば、全身的に）ことを含む、播種性がんの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供する。
【００２２】
一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される少なくとも２種のｍＲＮＡを投与する（例えば、静脈内注射により、例えば、全身的に）ことを含む、骨髄性悪性腫瘍の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供する。
【００２３】
上記または関連する態様のいずれかでは、少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｖｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される。
【００２４】
一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を患者に全身投与することを含む、ヒト患者における播種性がんを治療するための方法を提供し、
第１のｍＲＮＡ及び第２のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の態様では、方法は、第２の免疫増強因子をコードする第３のｍＲＮＡを投与することを含み、免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである。一部の態様では、第２のｍＲＮＡは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードし、第３のｍＲＮＡはトランス提示ヒトＩＬ−１５をコードする。
【００２５】
その他の態様では、本開示は、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を患者に全身投与することを含む、ヒト患者における播種性がんを治療するための方法を提供し、ＬＮＰは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を含む。一部の態様では、方法は、第２の免疫増強因子をコードする第３のｍＲＮＡを投与することを含み、免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである。一部の態様では、第２のｍＲＮＡは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードし、第３のｍＲＮＡはトランス提示ヒトＩＬ−１５をコードする。
【００２６】
更なる態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ及び免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡを含む第１の分割用量の医薬組成物（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、及び、
（ｉｉ）少なくとも１回の第２の分割用量の医薬組成物、
を含む投与レジメンを患者に実施することを含む、ヒト患者における播種性がんを治療するための方法を提供し、
第１の分割用量及び第２の分割用量は、同一投与期間中の単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して、患者におけるｍＲＮＡコードポリペプチドへの曝露を増加させることにより、患者における播種性がんを治療する。一部の態様では、第１の分割用量及び第２の分割用量は、単回用量の同量のｍＲＮＡと比較して治療の抗腫瘍効果を向上させる。一部の態様では、第１の分割用量及び第２の分割用量は、毒性を抑制して忍容性をより良好にしつつ抗腫瘍効果を向上させる。一部の態様では、方法は、第２の免疫増強因子をコードする第３のｍＲＮＡを投与することを含み、免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである。一部の態様では、第２のｍＲＮＡは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードし、第３のｍＲＮＡはトランス提示ヒトＩＬ−１５をコードする。
【００２７】
上記または関連する態様のいずれかでは、細胞結合サイトカインは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドである。その他の態様では、細胞結合サイトカインはトランス提示ヒトＩＬ−１５である。一部の態様では、トランス提示ヒトＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドである。その他の態様では、トランス提示ヒトＩＬ−１５は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡによってコードされている。
【００２８】
上記または関連する態様のいずれかでは、ｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）内に配合される。上記または関連する態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは同一ＬＮＰ内に配合される。その他の態様では、それぞれのｍＲＮＡは別々のＬＮＰ内に配合される。
【００２９】
一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは、同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。更にその他の態様では、ＬＮＰは、約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。更なる態様では、ＬＮＰは、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む。
【００３０】
一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のステロールまたはその他の構造脂質、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。その他の態様では、ＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロールまたはその他の構造脂質、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【００３１】
上記または関連する態様のいずれかでは、イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される。一部の態様では、イオン性脂質は化合物Ｘを含む。
【００３２】
上記または関連する態様のいずれかでは、ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率の化合物Ｘ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、ＬＮＰは、約５０％のモル比率の化合物Ｘ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。
【００３３】
上記または関連する態様のいずれかでは、ＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｐ−４２８である。一部の態様では、ＬＮＰは、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む。その他の態様では、ＬＮＰは、４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む。
【００３４】
上記または関連する態様のいずれかでは、ＬＮＰは、フィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む。一部の態様では、フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。一部の態様では、フィトステロールは、（ｉ）シトステロールまたはその塩もしくはエステル、または（ｉｉ）スティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む。一部の態様では、フィトステロールは、β−シトステロール
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またはその塩もしくはエステルである。
【００３５】
その他の態様では、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β−シトステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１５１、化合物Ｓ−１５６、化合物Ｓ−１５７、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、化合物Ｓ−１７５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００３６】
一部の態様では、ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は１８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である。その他の態様では、ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は２８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である。
【００３７】
一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは、同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、５０：１０：１０：２８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む。一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは、同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、５０：１０：２０：１８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む。上記または関連する態様のいずれかでは、がんは播種性がんである。一部の態様では、播種性がんは血液がんである。一部の態様では、播種性がんは骨髄性悪性腫瘍である。
【００３８】
上記または関連する態様のいずれかでは、骨髄性悪性腫瘍は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）からなる群から選択される。一部の態様では、骨髄性悪性腫瘍はＡＭＬである。
【００３９】
上記または関連する態様のいずれかでは、がんは固形腫瘍である。一部の態様では、固形腫瘍はチェックポイント阻害剤療法に対して反応を示さない。一部の態様では、固形腫瘍は免疫抑制性腫瘍微小環境を含む。
【００４０】
上記または関連する態様のいずれかでは、少なくとも２種のｍＲＮＡは腫瘍内投与される。一部の態様では、少なくとも２種のｍＲＮＡは静脈内投与される。一部の態様では、ｍＲＮＡは同一ＬＮＰ内に封入されており、腫瘍内注射に好適な液剤中に配合される。一部の態様では、ｍＲＮＡは同一ＬＮＰ内に封入されており、静脈内注射に好適な液剤中に配合される。その他の態様では、それぞれのｍＲＮＡは１種または複数種の別々のＬＮＰ内に封入されており、腫瘍内注射に好適な液剤中に配合される。その他の態様では、それぞれのｍＲＮＡは１種または複数種の別々のＬＮＰ内に封入されており、静脈内注射に好適な液剤中に配合される。
【００４１】
上記または関連する態様のいずれかでは、がん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するための方法は、チェックポイント阻害剤ポリペプチドを投与することを更に含む。一部の態様では、チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する。一部の態様では、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または抗体をコードするｍＲＮＡである。一部の態様では、抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである。一部の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである。一部の態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブである。一部の態様では、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである。
【００４２】
その他の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０Ｌをコードする第１のｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
を含むＬＮＰを提供する。
【００４３】
その他の態様では、本開示は、
（ｉ）イオン性脂質、
（ｉｉ）ステロールまたはその他の構造脂質、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０をコードする第１のｍＲＮＡ、
（ｉｖ）免疫増強因子をコードする少なくとも１種の第２のｍＲＮＡ（免疫増強因子はＴ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる細胞結合サイトカインである）、
（ｖ）任意選択的に、非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、及び、
（ｖｉ）任意選択的に、ＰＥＧ脂質、
を含むＬＮＰを提供する。
【００４４】
一部の態様では、本開示は、少なくとも２種の封入メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含むＬＮＰを提供し、少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される。
【００４５】
一部の実施形態では、本開示は脂質ナノ粒子を提供し、ｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子内に共配合されており、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されている。
【００４６】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは同一脂質ナノ粒子内に共配合されており、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されており、細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている。
【００４７】
一部の態様では、少なくとも２種のｍＲＮＡは、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｖｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
からなる群から選択される。
【００４８】
一部の態様では、本開示は、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、を含む脂質ナノ粒子を提供する。
【００４９】
一部の態様では、本開示は、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第１の脂質ナノ粒子、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第２の脂質ナノ粒子、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第３の脂質ナノ粒子、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第４の脂質ナノ粒子、を含む組成物を提供する。
【００５０】
一部の態様では、本開示は、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第１の脂質ナノ粒子、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第２の脂質ナノ粒子、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを封入した第３の脂質ナノ粒子、を含む組成物を提供する。
【００５１】
上記または関連する態様のいずれかでは、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１に記載のアミノ酸配列または配列番号：１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。
【００５２】
上記または関連する態様のいずれかでは、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、ＩＬ−１２  ｐ３５サブユニット（ＩＬ−１２Ａ）ポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１２  ｐ４０サブユニット（ＩＬ−１２Ｂ）ポリペプチドを含む。一部の態様では、ＩＬ−１２Ｂポリペプチドは、ペプチドリンカーにより、ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している。一部の態様では、ＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：３９または配列番号：４０に記載のアミノ酸配列または配列番号：３９または配列番号：４０に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：４６に記載のヌクレオチド配列または配列番号：４６に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。一部の態様では、ＩＬ−１２ＢポリペプチドはＩＬ−１２Ａポリペプチドの５’末端またはペプチドリンカーの５’末端に位置している、または、ＩＬ−１２ＡポリペプチドはＩＬ−１２Ｂポリペプチドの５’末端またはペプチドリンカーの５’末端に位置している。
【００５３】
一部の態様では、膜ドメインは、ペプチドリンカーにより、ＩＬ−１２Ａポリペプチドに機能的に連結している。その他の態様では、膜ドメインは、ペプチドリンカーにより、ＩＬ−１２Ｂポリペプチドに機能的に連結している。一部の態様では、膜貫通ドメインはＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通ドメインは、分化抗原群８（ＣＤ８）膜貫通ドメイン、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）膜貫通ドメイン、及び分化抗原群８０（ＣＤ８０）膜貫通ドメインからなる群から選択される。
【００５４】
一部の態様では、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインは配列番号：４２に記載のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＣＤ８膜貫通ドメインは配列番号：４１に記載のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＣＤ８０膜貫通ドメインは配列番号：４３に記載のアミノ酸配列を含む。
【００５５】
その他の態様では、膜ドメインは細胞内ドメインを含む。一部の態様では、細胞内ドメインは、膜貫通ドメインと同一のポリペプチドに由来している。その他の態様では、細胞内ドメインは、膜貫通ドメインが由来するポリペプチドとは異なるポリペプチドに由来している。一部の態様では、細胞内ドメインは、ＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、トランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメイン、及びＣＤ８０細胞内ドメインからなる群から選択される。
【００５６】
一部の態様では、細胞内ドメインは、配列番号：４８に記載のアミノ酸配列を含むＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである。一部の態様では、細胞内ドメインは、Ｅ５７０またはＧ７３９においてトランケートされたＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むトランケートＰＤＧＦＲ細胞内ドメインである。一部の態様では、Ｅ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインは、配列番号：４９に記載のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、Ｇ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ膜貫通は、配列番号：５０に記載のアミノ酸配列を含む。その他の態様では、細胞内ドメインは、配列番号：４７に記載のアミノ酸配列を含むＣＤ８０細胞内ドメインである。
【００５７】
一部の態様では、膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドは、
（ｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＥ５７０においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、
（ｉｉｉ）ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＧ７３９においてトランケートされたトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、または、
（ｉｖ）ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、
を含む膜ドメインを含む。
【００５８】
上記または関連する態様のいずれかでは、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡはｓｕｓｈｉドメインを含む。一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、ｓｕｓｈｉドメイン、細胞内ドメイン、及び膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインはＩＬ−１５Ｒαに由来している。その他の態様では、細胞内ドメイン及び膜貫通ドメインは非相同ポリペプチドに由来している。
【００５９】
一部の態様では、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。
【００６０】
一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１３に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。
【００６１】
一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列または配列番号：２３、２７、及び１２３のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列または配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列によってコードされている。
【００６２】
その他の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは配列番号：１７に記載のアミノ酸配列を含む）、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、
を含むＬＮＰを提供し、
ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率でＬＮＰ内に共配合されている。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されており、細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている。
【００６３】
一部の態様では、本開示は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む）、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む）、
（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列または配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む）、及び、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列または配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む）、
を含むＬＮＰを提供し、
ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率でＬＮＰ内に共配合されている。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されており、細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている。
【００６４】
一実施形態では、ＬＮＰは、０．１〜１：０．１〜１：０．１〜１の範囲の重量（質量）比率のＯＸ４０Ｌ：ＩＬ−１５＋ＩＬ−１５Ｒａ：ＩＬ−１２を含む。一実施形態では、ＬＮＰは、１：１：１の重量（質量）比率のＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５＋ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡを含む。一部の態様では、ＬＮＰは、１：１：１の重量（質量）比率のＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡ：ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡを含む。一部の態様では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡの量は、ＬＮＰ内における残りのｍＲＮＡの量の１０分の１である。
【００６５】
上記または関連する態様のいずれかでは、ＬＮＰは腫瘍内送達用に製剤化される。その他の態様では、ＬＮＰは静脈内送達用に製剤化される。
【００６６】
一部の態様では、ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率のイオン性アミノ脂質、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率の構造脂質、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率のイオン性脂質、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率のイオン性脂質：コレステロール：ＤＳＰＣ：ＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、イオン性脂質は、例えば、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノエチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、ジリノレイル−メチル−４−ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、及びジ（（Ｚ）−ノン−２−エン−１−イル）９−（（４−（ジメチルアミノ）ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）からなる群から選択される。一部の態様では、イオン性脂質は化合物Ｘを含む。
【００６７】
一部の態様では、ＬＮＰは、約２０〜６０％のモル比率の化合物Ｘ、５〜２５％のモル比率のリン脂質、２５〜５５％のモル比率のコレステロール、及び０．５〜１５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、約５０％のモル比率の化合物Ｘ、約１０％のモル比率のリン脂質、約３８．５％のモル比率のコレステロール、及び約１．５％のモル比率のＰＥＧ修飾脂質を含む。
【００６８】
一部の態様では、脂質ナノ粒子内のＰＥＧ修飾脂質はＰＥＧ−ＤＭＧまたは化合物Ｐ−４２８である。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、５０：３８．５：１０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む。一部の態様では、脂質ナノ粒子は、４０：３８．５：２０：１．５のモル比率の化合物Ｘ：コレステロール：リン脂質：化合物Ｐ−４２８または化合物Ｘ：コレステロール：ＤＳＰＣ：化合物Ｐ−４２８を含む。
【００６９】
一部の態様では、ＬＮＰは、フィトステロールまたはフィトステロール及びコレステロールの組み合わせを含む。一部の態様では、フィトステロールは、β−シトステロール、スティグマステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。一部の態様では、フィトステロールは、（ｉ）シトステロールまたはその塩もしくはエステル、または（ｉｉ）スティグマステロールまたはその塩もしくはエステルを含む。一部の態様では、フィトステロールは、β−シトステロール
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またはその塩もしくはエステルである。
【００７０】
その他の態様では、フィトステロールまたはその塩もしくはエステルは、β−シトステロール、β−シトスタノール、カンペステロール、ブラシカステロール、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１５１、化合物Ｓ−１５６、化合物Ｓ−１５７、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、化合物Ｓ−１７５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００７１】
一部の態様では、ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は１８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である。その他の態様では、ステロールまたはその他の構造脂質のｍｏｌ％は２８．５％のフィトステロールであり、構造脂質の総ｍｏｌ％は３８．５％である。
【００７２】
一部の態様では、ＬＮＰは、５０：１０：１０：２８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む。一部の態様では、本開示のｍＲＮＡは、同一のまたは異なるＬＮＰ（複数可）内に配合されており、ＬＮＰは、５０：１０：２０：１８．５：１．５のモル比率の化合物Ｘ：ＤＳＰＣ：コレステロール：β−シトステロール：ＰＥＧ−ＤＭＧを含む。
【００７３】
上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の態様では、３’ＵＴＲは少なくとも１つのマイクロＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位を含む。一部の態様では、少なくとも１つのｍｉＲ結合部位はｍｉＲ−１２２結合部位である。一部の態様では、ｍｉＲ−１２２結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位またはｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位である。一部の態様では、ｍｉＲ−１２２−５ｐ結合部位は配列番号：８３に記載のヌクレオチド配列を含む。一部の態様では、ｍｉＲ−１２２−３ｐ結合部位は配列番号：７４に記載のヌクレオチド配列を含む。上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは、配列番号：７７または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む３’ＵＴＲを含む。
【００７４】
上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の態様では、５’ＵＴＲは配列番号：１２または配列番号：１３３に記載のヌクレオチド配列を含む。
【００７５】
上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡは少なくとも１つの化学修飾を含む。一部の態様では、化学修飾は、シュードウリジン、Ｎ１−メチルシュードウリジン、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メチルウリジン、５−メチルウリジン、５−メトキシウリジン、及び２’−Ｏ−メチルウリジンからなる群から選択される。
【００７６】
上記の態様のいずれかでは、それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９５％はＮ１−メチルシュードウリジンである。一部の態様では、それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの少なくとも９９％はＮ１−メチルシュードウリジンである。一部の態様では、それぞれのｍＲＮＡ内のウリジンのうちの１００％はＮ１−メチルシュードウリジンである。
【００７７】
一部の態様では、本開示は、がんの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、方法は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を対象に投与することを含む。一部の態様では、本開示は、播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、方法は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を対象に投与することを含む。一部の態様では、本開示は、固形腫瘍の治療を必要とする対象においてそれを実施するための方法を提供し、方法は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を対象に投与することを含む。一部の態様では、方法は、チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを投与することを更に含む。一部の態様では、チェックポイント阻害剤ポリペプチドはＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、またはこれらの組み合わせを阻害する。一部の態様では、チェックポイント阻害剤ポリペプチドは抗体または抗体をコードするｍＲＮＡである。一部の態様では、抗体は、ＣＴＬＡ−４に特異的に結合する抗ＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−１に特異的に結合する抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメント、ＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体またはその抗原結合フラグメント、及びこれらの組み合わせである。一部の態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体はアテゾリズマブ、アベルマブ、またはデュルバルマブである。一部の態様では、抗ＣＴＬＡ−４抗体はトレメリムマブまたはイピリムマブである。一部の態様では、抗ＰＤ−１抗体はニボルマブまたはペンブロリズマブである。
【００７８】
その他の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は脂質ナノ粒子の投与を含む。その他の態様では、本開示は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は脂質ナノ粒子の投与を含む。更にその他の態様では、本開示は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は脂質ナノ粒子の投与を含む。
【００７９】
一部の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた脂質ナノ粒子の投与を含む。一部の態様では、本開示は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた脂質ナノ粒子の投与を含む。一部の態様では、本開示は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるのに使用する、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を提供し、治療は、免疫チェックポイント阻害性ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた脂質ナノ粒子の投与を含む。
【００８０】
更なる態様では、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は薬剤の投与を含む。更なる態様では、本開示は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は薬剤の投与を含む。更なる態様では、本開示は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は薬剤の投与を含む。
【００８１】
一部の態様では、本開示は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたは免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与を含む。一部の態様では、本開示は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたは免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与を含む。一部の態様では、本開示は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための薬剤の製造における、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体の使用を提供し、薬剤は脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたは免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与を含む。
【００８２】
その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、添付文書は、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドまたは免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を更に含む。
【００８３】
その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、添付文書は、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を更に含む。
【００８４】
その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、添付文書は、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための、免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた、脂質ナノ粒子の投与のための取扱説明書を更に含む。
【００８５】
一部の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び、個体におけるがんを治療するまたはがんの進行を遅らせるための、薬剤単独または免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び、個体における播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などを治療するまたは播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍などの進行を遅らせるための、薬剤単独または免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。一部の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む容器、及び、個体における固形腫瘍を治療するまたは固形腫瘍の進行を遅らせるための、薬剤単独または免疫チェックポイント阻害剤ポリペプチド及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた薬剤の投与のための取扱説明書を含む添付文書、を含むキットを提供する。
【００８６】
その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子またはｍＲＮＡの組み合わせを対象に投与することを含む、対象における免疫応答を向上させるための方法を提供する。
【００８７】
その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子またはｍＲＮＡの組み合わせを対象に投与することを含む、対象における免疫細胞活性化を向上させるための方法を提供する。一部の態様では、免疫細胞活性化は、Ｔ細胞活性化、ＮＫ細胞活性化、またはＴ細胞活性化とＮＫ細胞活性化の両方を含む。
【００８８】
その他の態様では、本開示は、本明細書に記載の脂質ナノ粒子またはｍＲＮＡの組み合わせを対象に投与することを含む、対象におけるＮＫ細胞活性化を向上させるための方法を提供する。
【００８９】
上記の方法のいずれかでは、対象は骨髄性悪性腫瘍を有する。一部の態様では、骨髄性悪性腫瘍はＡＭＬである。上記の方法のいずれかでは、対象は固形腫瘍を有する。
【００９０】
上記の態様のいずれかでは、方法は、本明細書に記載のチェックポイント阻害剤ポリペプチドまたはチェックポイント阻害剤ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを投与することを更に含む。
【００９１】
上記の態様のいずれかでは、本明細書に記載のｍＲＮＡ、医薬組成物、またはＬＮＰは、（ａ）ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／または樹状細胞（ＤＣ）の集団を増加させること、（ｂ）ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／またはＤＣの増殖を増強させること、（ｃ）ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び／または樹状細胞の活性化を向上させること、（ｄ）ＤＣの成熟を促進させること、（ｅ）治療対象における疾患負荷量を低下させること、（ｆ）治療対象の生存率を高めること、（ｇ）ＩＦＮγまたはＩＰ１０の発現を増加させること、及び（ｈ）（ａ）〜（ｇ）の任意の組み合わせ、からなる群から選択される１つまたは複数の活性を有する。
【００９２】
上記の態様のいずれかでは、本明細書に記載のｍＲＮＡ、医薬組成物、またはＬＮＰが影響を及ぼすＤＣ集団は、ＣＤ８＋ｃＤＣ１集団、ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１集団、ｃＤＣ２集団、またはｉＤＣ集団である。
【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】ヒト血清の不在下または存在下における、異なるＰＥＧ修飾脂質（ＰＥＧ  ＤＭＧまたは化合物４２８）を含有する脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）のＡＭＬ細胞株（Ｋａｓｕｍｉ−１）へのｉｎ  ｖｉｔｒｏトランスフェクション効果を示すグラフを提供する。
【図２】ヒト血清の存在下における、異なるＰＥＧ修飾脂質（ＰＥＧ  ＤＭＧまたは化合物４２８）を含有するＬＮＰの原発性ＡＭＬ試料へのｉｎ  ｖｉｔｒｏトランスフェクション効果を示すグラフを提供する。
【図３】Ａは、Ｐ３８８Ｄ１  ＡＭＬ細胞を移植して、ＬＮＰ内に配合されたマウスＯＸ４０Ｌ（ｍＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡで治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。ＬＮＰは腫瘍内投与した。Ｂは、Ｐ３８８Ｄ１  ＡＭＬ細胞を移植して、ＬＮＰ内に配合されたｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５（ｈＩＬ−１５）をコードするｍＲＮＡで治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。ＬＮＰは腫瘍内投与した。Ｃは、Ｐ３８８Ｄ１  ＡＭＬ細胞を移植して、ＬＮＰ内に配合されたｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びマウスＩＬ−１２（ｍＩＬ−１２）をコードするｍＲＮＡで治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。ＬＮＰは腫瘍内投与した。
【図４】Ａは、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物の概略図を提供する。ＩＬ−１５ポリペプチド（左）及び、ｓｕｓｈｉドメイン及び膜貫通ドメインを含むＩＬ−１５Ｒαポリペプチド（右）を示し、ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒα  ｓｕｓｈｉドメインに高親和性で結合することにより、ＩＬ−１５をＩＬ−１５Ｒα発現細胞に限定する。Ｂは、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物の概略図を提供する。テザー型ＩＬ−１５構築物を示し、ＩＬ−１５ポリペプチドは、全長ＩＬ−１５Ｒαに連結することにより、ＩＬ−１５を細胞膜にテザーする。Ｃは、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物の概略図を提供する。分泌型ＩＬ−１５構築物を示し、ＩＬ−１５ポリペプチドは、ＩＬ−１５Ｒαのｓｕｓｈｉドメインに連結する。Ｄは、ヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物の概略図を提供する。テザー型ＩＬ−１５構築物を示し、ＩＬ−１５ポリペプチドは、非相同ポリペプチド（例えば、ＣＤ８０）の膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインに連結したＩＬ−１５Ｒａのｓｕｓｈｉドメインに連結する。
【図５Ａ】図４Ａ〜図４Ｃに記載のヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物間のタンパク質発現及びＴ細胞増殖を比較するグラフを提供する。示すＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物をコードするｍＲＮＡをリポフェクタミン２０００を用いてＨｅＬａ細胞にトランスフェクションした際の、上清中または溶解物中におけるＩＬ−１５のタンパク質発現を示す。
【図５Ｂ】図４Ａ〜図４Ｃに記載のヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物間のタンパク質発現及びＴ細胞増殖を比較するグラフを提供する。示すＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物をコードするｍＲＮＡをリポフェクタミン２０００を用いてトランスフェクションしたＨｅＬａ細胞と共培養した際の、Ｔ細胞の増殖を示す。
【図５Ｃ】図４Ａ〜図４Ｃに記載のヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物間のタンパク質発現及びＴ細胞増殖を比較するグラフを提供する。示すＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物をコードする異なるｍＲＮＡ型をＨｅＬａ細胞にトランスフェクションした際の、上清中または溶解物中におけるＩＬ−１５のタンパク質発現を示す。
【図５Ｄ】図４Ａ〜図４Ｃに記載のヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα構築物間のタンパク質発現及びＴ細胞増殖を比較するグラフを提供する。上清中に分断したタンパク質のパーセント（上清発現／溶解物発現＋上清発現）を示す。
【図６】Ａは、Ｃ１４９８  ＡＭＬ細胞を移植して、ＮＳＴ−ｍＯＸ４０Ｌ（ＮＳＴ）をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｂは、Ｃ１４９８  ＡＭＬ細胞を移植して、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｃは、Ｃ１４９８  ＡＭＬ細胞を移植して、ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｄは、Ｃ１４９８  ＡＭＬ細胞を移植して、膜テザー型ｍＩＬ−１２（ｍＩＬ−１２ＴＭ）をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｅは、Ｃ１４９８  ＡＭＬ細胞を移植して、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。Ｆは、Ｃ１４９８  ＡＭＬ細胞を移植して、ｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したマウスにおける腫瘍容積を示すグラフである。
【図７】Ａは、様々な単一薬剤（ｍＯＸ４０Ｌ  ｍＲＮＡまたはｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα  ｍＲＮＡまたはｍＩＬ−１２ＴＭ  ｍＲＮＡ）をコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したＡＭＬ腫瘍を有するマウスの生存率を示すグラフである。Ｂは、様々なｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα二重ｍＲＮＡをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したＡＭＬ腫瘍を有するマウスの生存率を示すグラフである。Ｃは、様々なｍＯＸ４０Ｌ＋ｈＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα＋ｍＩＬ−１２ＴＭ三重ｍＲＮＡをコードするｍＲＮＡを封入したＬＮＰで腫瘍内治療したＡＭＬ腫瘍を有するマウスの生存率を示すグラフである。
【図８】Ａは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内に配合された、マウスＯＸ４０Ｌ（すなわち、ｍＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ、細胞結合ヒトＩＬ−１５（すなわち、ｈＩＬ−１５＋ｈＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型マウスＩＬ−１２（ＰＤＧＦＲ膜貫通ドメインに連結したｍＩＬ−１２、すなわち、ｍＩＬ−１２ＴＭ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせ（２ｍｇ／ｋｇの総ｍＲＮＡ）で静脈内治療されたマウスにおける疾患負荷量を示す。生物発光イメージング（ＢＬＩ）を示す。Ｂは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内に配合された、マウスＯＸ４０Ｌ（すなわち、ｍＯＸ４０Ｌ）をコードするｍＲＮＡ、細胞結合ヒトＩＬ−１５（すなわち、ｈＩＬ−１５＋ｈＩＬ−１５Ｒα）をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型マウスＩＬ−１２（ＰＤＧＦＲ膜貫通ドメインに連結したｍＩＬ−１２、すなわち、ｍＩＬ−１２ＴＭ）をコードするｍＲＮＡの組み合わせ（２ｍｇ／ｋｇの総ｍＲＮＡ）で静脈内治療されたマウスにおける疾患負荷量を示す。フローサイトメトリーで測定した血液中のＧＦＰ＋細胞の数を示す。
【図９】ＡＭＬ細胞の移植の２１日後に、化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内に配合された、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡの組み合わせで静脈内治療したマウスの血液中における白血病負荷量の低下を示すグラフを提供する。フローサイトメトリーを用いて、血液中のＧＦＰ＋細胞の数（左）に加えてＣＤ４５＋細胞のＧＦＰ＋の％（右）を測定した。
【図１０】様々な投与レジメン（すなわち、１回（ＱＤ×１）の２ｍｇ／ｋｇ、３週間にわたる週に１回（Ｑ７Ｄ×３）の２ｍｇ／ｋｇ、３週間にわたる週に１回（Ｑ７Ｄ×３）の０．６７ｍｇ／ｋｇ、３週間にわたる週に３回（ＴＩＷ×３）の０．２２ｍｇ／ｋｇ）の、図９のマウス、及び、化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内に配合された、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡの組み合わせで治療したマウスを示すカプランマイヤー生存率グラフを提供する。
【図１１】様々な投与レジメンのｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡの組み合わせ療法に対して完全に応答し、ＡＭＬ細胞で再誘発された図９のマウスにおける、生物発光イメージング（ＢＬＩ）で測定した防御免疫を示すグラフを提供する。
【図１２】図１１に記載のＡＭＬ細胞で再誘発したマウスのカプランマイヤー生存率グラフを提供する。
【図１３】フローサイトメトリーで測定した、図１１に記載のＡＭＬ細胞で再誘発したマウスの血液中におけるＧＦＰ＋細胞の数を示すグラフを提供する。
【図１４】３回目の０．２２ｍｇ／ｋｇのＴＩＷ用量の、化合物Ｘ及び化合物４２８を含むＬＮＰ（ＬＮＰ１）または化合物Ｘ／ＤＳＰＣ／コレステロール／β−シトステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧを含むＬＮＰ（ＬＮＰ２）内に配合されたｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡの静脈内投与の２４時間後に、ＡＭＬ細胞を有するマウスの末梢血、脾臓、または骨髄から単離した示す細胞型におけるｍＯＸ４０Ｌ＋細胞のパーセンテージを示すグラフを提供する。
【図１５】第１の静脈内用量の６、２４、４８、及び５４時間後における、別々のＬＮＰ内に配合された、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、及びテザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡの組み合わせを週に３回（ＴＩＷ）の０．２２ｍｇ／ｋｇまたは２ｍｇ／ｋｇの単回用量のいずれかの用量で投与されたマウスの、マウスＩＦＮγ（左）、内在性マウスＩＬ−１５／１５Ｒ（中央）、及びマウスＩＰ−１０（右）の血清サイトカインレベルを示すグラフを提供する。
【図１６】第１及び第２の静脈内ＴＩＷ用量の６及び２４時間後における、ＬＮＰ１またはＬＮＰ２内に配合された、ｍＯＸ４０Ｌ、細胞結合ｈＩＬ−１５、テザー型ｍＩＬ−１２、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５、ｍＯＸ４０Ｌ＋テザー型ｍＩＬ−１２、細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２、またはｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２のいずれかをコードするｍＲＮＡを投与されたマウスの、マウスＩＦＮγ（左）及び内在性マウスＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ（右）の血清サイトカインレベルを示すグラフを提供する。
【図１７】Ａは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡで静脈内治療されたマウスにおける体重変化のパーセンテージを示すグラフを提供する。化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合してから、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。Ｂは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、ｍＯＸ４０Ｌ＋テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡで静脈内治療されたマウスにおける体重変化のパーセンテージを示すグラフを提供する。化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合してから、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。Ｃは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡで静脈内治療されたマウスにおける体重変化のパーセンテージを示すグラフを提供する。化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合してから、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。Ｄは、ＡＭＬの播種性モデルを有し、ｍＯＸ４０Ｌ＋細胞結合ｈＩＬ−１５＋テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡで静脈内治療されたマウスにおける体重変化のパーセンテージを示すグラフを提供する。化合物Ｘ及び化合物４２８を含む別々のＬＮＰ内にｍＲＮＡを配合してから、３週間にわたり週に３回０．２２ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。
【図１８】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの単回腫瘍内用量を投与されたＭＣ３８−Ｒ腫瘍を有するマウスの腫瘍容積を示すグラフを提供する。Ｂは、免疫チェックポイント阻害剤、すなわち、抗ｍＣＴＬＡ−４抗体と組み合わせて、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの単回腫瘍内用量を投与されたＭＣ３８−Ｒ腫瘍を有するマウスの腫瘍容積を示すグラフを提供する。
【図１９】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。末梢血（ＰＢ）におけるＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）におけるＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）におけるＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）におけるＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。
【図２０】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。（ＰＢ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫ細胞のパーセンテージを提供する。
【図２１】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫＴ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。末梢血（ＰＢ）におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫＴ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫＴ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＮＫＴ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）におけるＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。
【図２２】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。（ＰＢ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）における、ＣＤ６９を発現するＮＫＴ細胞のパーセンテージを提供する。
【図２３】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ８＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。末梢血（ＰＢ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ８＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ８＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ８＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。
【図２４】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。（ＰＢ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。
【図２５】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ４＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。末梢血（ＰＢ）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ４＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ４＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとしてＣＤ４＋Ｔ細胞を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）におけるＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。
【図２６】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。（ＰＢ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓（ＳＰ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。骨髄（ＢＭ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、活性化マーカーＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節（ＬＮ）における、ＣＤ６９を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを提供する。
【図２７】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして脾臓ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞数を提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして脾臓ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞数を提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして脾臓ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ｃＤＣ２細胞数を提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして脾臓ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ｉＤＣ細胞数を提供する。
【図２８】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして鼠径リンパ節ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞数を提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして鼠径リンパ節ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞数を提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして鼠径リンパ節ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ｃＤＣ２細胞数を提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして鼠径リンパ節ＤＣ細胞集団を示すフローサイトメトリープロットを提供する。ｉＤＣ細胞数を提供する。
【図２９】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞集団及びＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓ＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞のＣＤ８６  ＭＦＩを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞集団及びＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞のＣＤ８６  ＭＦＩを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞集団及びＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節ＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞のＣＤ８６  ＭＦＩを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のＣＤ８＋ｃＤＣ１細胞集団及びＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節ＣＤ１０３＋ｃＤＣ１細胞のＣＤ８６  ＭＦＩを提供する。
【図３０】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のｃＤＣ２細胞集団及びｉＤＣ細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓ｃＤＣ２細胞のＣＤ８６  ＭＦＩを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のｃＤＣ２細胞集団及びｉＤＣ細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。脾臓ｉＤＣ細胞のＣＤ８６  ＭＦＩを提供する。Ｃは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のｃＤＣ２細胞集団及びｉＤＣ細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節ｃＤＣ２細胞のＣＤ８６  ＭＦＩを提供する。Ｄは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡ、または対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与されたマウスにおける、１回目の用量の２４時間後（２４時間）、３回目の用量の２４時間後（６日目）、及び６回目の用量の２４時間後（１３日目）における、脾臓及び鼠径リンパ節のｃＤＣ２細胞集団及びｉＤＣ細胞集団上における成熟マーカーＣＤ８６の発現を示すフローサイトメトリープロットを提供する。鼠径リンパ節ｉＤＣ細胞のＣＤ８６  ＭＦＩを提供する。
【図３１】ＡＭＬを有するＣ５７ＢＬ／６マウスまたはＢａｔｆ３  ＫＯマウスの生存率を示すグラフを提供する。腫瘍保有Ｃ５７ＢＬ／６は、未治療とする、対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）を投与する、または、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与した。腫瘍保有Ｂａｔｆ３  ＫＯマウスには、０．２２ｍｇ／ｋｇの対照ｍＲＮＡ（ＮＳＴ）、またはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを２週間にわたり週に３回（ＴＩＷ×３）投与した。
【図３２】対照ｍＲＮＡまたはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与してから、未治療としたマウス、アイソタイプｍＡｂで治療したマウス、または抗ＣＤ４＋ｍＡｂで治療したマウスの生存率を示すグラフを提供する。
【図３３】対照ｍＲＮＡまたはｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与してから、未治療としたマウス、アイソタイプｍＡｂで治療したマウス、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療したマウスの生存率を示すグラフを提供する。
【図３４】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療した後における、単球上のＭＨＣ  ＩＩ発現を単球のパーセントとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療した後における、単球上のＭＨＣ  ＩＩ発現をＭＦＩとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。
【図３５】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療した後における、骨髄細胞上のＰＤ−Ｌ１発現を骨髄細胞のパーセントとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療した後における、骨髄細胞上のＰＤ−Ｌ１発現をＭＦＩとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。
【図３６】Ａは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療した後における、顆粒球上のＰＤ−Ｌ１発現を顆粒球のパーセントとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｍＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｍＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療した後における、顆粒球上のＰＤ−Ｌ１発現をＭＦＩとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。
【図３７】Ａは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療した後における、単球上のＰＤ−Ｌ１発現を単球のパーセントとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡまたは対照ｍＲＮＡを腫瘍保有マウスに投与してから、更に、未治療とした後、アイソタイプｍＡｂで治療した後、または抗ＩＦＮγ  ｍＡｂで治療した後における、単球上のＰＤ−Ｌ１発現をＭＦＩとして示すフローサイトメトリープロットを提供する。
【図３８】Ａは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＦＮγの発現を示すグラフを提供する。Ｂは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＦＮγの発現を示すグラフを提供する。Ｃは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＦＮγの発現を示すグラフを提供する。Ｄは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）の発現を示すグラフを提供する。Ｅは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）の発現を示すグラフを提供する。Ｆは、ＬＮＰ内に配合されたｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡの投与後の、カニクイザルにおけるＩＰ−１０（ＣＸＣＬ１０）の発現を示すグラフを提供する。
【図３９】Ａは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料におけるＮＫ細胞数（生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして）を示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料におけるＮＫＴ細胞数（生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして）を示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｃは、ｈＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ｈＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ｈＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡを投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料におけるＣＤ８＋Ｔ細胞数（生ＣＤ４５＋細胞のパーセンテージとして）を示すフローサイトメトリープロットを提供する。
【図４０】Ａは、ｈＯＸ４０Ｌ、テザー型ｈＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５を投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料における、活性化マーカーＣＤ６９を有するＣＤ８＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｂは、ｈＯＸ４０Ｌ、テザー型ｈＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５を投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料における、活性化マーカーＣＤ６９を有するＮＫ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｃは、ｈＯＸ４０Ｌ、テザー型ｈＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５を投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料における、活性化マーカーＣＤ６９を有するＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。Ｄは、ｈＯＸ４０Ｌ、テザー型ｈＩＬ−１２、及び細胞結合ｈＩＬ−１５を投与されたまたはトリス／スクロース対照注射を打たれたカニクイザルの脾臓試料及び骨髄試料における、活性化マーカーＣＤ６９を有するＮＫＴ細胞のパーセンテージを示すフローサイトメトリープロットを提供する。
【発明を実施するための形態】
【００９４】
がんを治療するための特にエキサイティングなアプローチは、免疫療法として知られている、免疫応答を刺激する物質を用いた疾患の予防または治療を含む。当該技術分野においてはがん免疫学とも呼ばれる免疫療法は、腫瘍ではなく宿主免疫系を標的とする療法を導入することによってがん治療を根本から変え始めている。これらの療法は独特な薬理学的応答プロファイルを有しており、その結果、多くの異なるタイプのがんを治癒し得る療法となっている。その中でも肺、腎臓、膀胱、及び皮膚のがんでは、生存率または腫瘍応答の点でがん免疫学を用いた治療からかなりの効果を得ており、おそらくは黒色腫において最も優れた効果が示されている。
【００９５】
播種性がんは重大な健康問題であり、従来の療法では効果的に治療されていない。詳細には、転移性がん及び、通常は固形腫瘍を形成しない血液のがん、例えば、骨髄性悪性腫瘍（例えば、ＡＭＬ）などを含む播種性がんは、様々なメカニズムにより免疫応答を回避することが知られており、その結果、効果的な免疫応答の発現が妨げられている。例えば、ＡＭＬは、ＮＫ阻害剤タンパク質を上方制御する、ＮＫ活性化リガンドを抑制する、及び／またはＮＫ細胞のアネルギーを誘導することによって、ＮＫ細胞の溶解を回避することが知られている。加えて、ＡＭＬにおいては体細胞変異の発生率が低く、狭い新生抗原スペクトルにつながることから、結果として、ＡＭＬ特異的Ｔ細胞応答が低下して抗腫瘍免疫が低下する（例えば、Ｇｒｏｖｅ  ａｎｄ  Ｖａｓｓｉｌｏｕ（２０１４）Ｄｉｓ．Ｍｏｄｅｌｓ  Ｍｅｃｈ．７：９４を参照のこと）。
【００９６】
固形腫瘍を従来の療法（例えば、外科手術）を用いて治療できるとはいえ、数多くのがんはこのような療法に対して反応を示さないまたは再発する。更に、腫瘍微小環境は複雑であり、治療処置のアウトカムに影響を及ぼすことが多い。
【００９７】
それゆえ、がんを治療するのに有用な方法及び組成物、及びとりわけ、がんに対する免疫応答を増強する（例えば、ＮＫ細胞及び／またはＴ細胞により）方法及び組成物は、大いに注目されている。
【００９８】
本明細書では、特定の免疫細胞集団の刺激を必要とする対象においてそれを実施するための１種または複数種のポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ、例えば、修飾ｍＲＮＡ）を含む、がん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するのに使用する組成物を提供する。
【００９９】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも２種のｍＲＮＡ（例えば、修飾ｍＲＮＡ）を含む、がん（例えば、固形腫瘍または播種性がん、例えば、骨髄性悪性腫瘍など）を治療するのに使用する組成物を提供し、少なくとも２種のｍＲＮＡは、ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチド、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチド、ヒトＩＬ−１５ポリペプチド、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチド、及びこれらの組み合わせをコードしている。一部の実施形態では、組成物は、
（ａ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｂ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｃ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｄ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｅ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｆ）ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｇ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
を含む。
【０１００】
一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率でＬＮＰ内に共配合されている。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡ、及び細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、１：１：１の重量（質量）比率で共配合されており、細胞結合ヒトＩＬ−１５をコードするｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５及びヒトＩＬ−１５Ｒαをコードする２種のｍＲＮＡによってコードされており、２種のｍＲＮＡは１：１のモル比率で共配合されている。
【０１０１】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインを含むヒトＯＸ４０ＬポリペプチドであるヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの膜貫通ドメインを含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの膜貫通を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインを含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン、ＯＸ４０Ｌの膜貫通、及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインを含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。
【０１０２】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、膜テザー形態のヒトＩＬ−１２ポリペプチドであるヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードしている。例えば、一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードしており、膜ドメインは膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜ドメインは膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは同一のポリペプチドに由来している。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは異なるポリペプチドに由来している。
【０１０３】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、可溶性ヒトＩＬ−１５ポリペプチドであるヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡはヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードしており、その結果、細胞内におけるｍＲＮＡの発現時に膜テザー形態（例えば、複合体）のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαを形成する。一部の実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードする第１のｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードする第２のｍＲＮＡを提供し、その結果、別々のｍＲＮＡによってコードされた膜テザー形態（例えば、複合体）のＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαを提供する。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ＩＬ−１５に対する高い親和性を有する、ｓｕｓｈｉドメインを含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドをコードしている。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ｓｕｓｈｉドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含むヒトＩＬ−１５Ｒαをコードしている。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインはヒトＩＬ−１５Ｒαの膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインである。一部の実施形態では、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインはＩＬ−１５Ｒαに対して非相同である。
【０１０４】
ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ
ヒトＯＸ４０Ｌは、Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．によって、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ−Ｉ）に感染させたヒトリンパ球の表面上において初めて同定された（Ｔａｎａｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（１９８５），３６（５）：５４９−５５）。ＯＸ４０ＬはＯＸ４０（ＣＤ１３４）のリガンドである。ＯＸ４０Ｌはまた、ＣＤ２５２（分化抗原群２５２）、腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーメンバー４、ｔａｘ転写活性化糖タンパク質１、ＴＸＧＰ１、またはｇｐ３４と呼ばれている。ヒトＯＸ４０Ｌは、１８３アミノ酸長であり、３つのドメイン：アミノ酸１〜２３の細胞質ドメイン、アミノ酸２４〜５０の膜貫通ドメイン、及びアミノ酸５１〜１８３の細胞外ドメインを含有している。
【０１０５】
一部の実施形態では、本開示の組成物または方法は、哺乳動物ＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、哺乳動物ＯＸ４０ＬポリペプチドはマウスＯＸ４０Ｌポリペプチドである。一部の実施形態では、哺乳動物ＯＸ４０ＬポリペプチドはヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドである。一部の実施形態では、ＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１〜３に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１０６】
一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１〜３に記載のアミノ酸配列または配列番号：４〜１１に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしており、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドはＯＸ４０受容体に結合することができる。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしており、ＯＸ４０受容体に結合することができる。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１から本質的になるヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしており、ＯＸ４０受容体に結合することができる。
【０１０７】
特定の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、任意選択的に１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：１〜３に記載のアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしており、保存的置換は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドのその受容体への結合活性に有意に影響を及ぼさない、すなわち、置換後にＯＸ４０ＬポリペプチドはＯＸ４０受容体に結合する。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１〜３に記載のアミノ酸配列のうちのいずれか１つに対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドをコードしている。
【０１０８】
その他の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：４〜１１に記載の核酸配列のうちのいずれか１つに対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：９〜１１のうちのいずれか１つから選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：９〜１１のうちのいずれか１つから選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：９に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：９に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１０９】
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物に有用なｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。その他の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの膜貫通ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。特定の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの膜貫通ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。その他の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。更にその他の実施形態では、ｍＲＮＡは、ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメイン、ＯＸ４０Ｌの膜貫通、及びＯＸ４０Ｌの細胞質ドメインをコードするオープンリーディングフレームを含む。
【０１１０】
天然のシグナル配列及び配列番号：１〜１１に暗に開示されているプロペプチド配列（前駆体形態中に存在しその対応する成熟形態中に存在しない配列）ならびに非天然のシグナルペプチドに加えて、その他のシグナル配列を使用してもよいということを当業者は理解するであろう。それゆえ、ＯＸ４０Ｌポリペプチドまたは配列番号：１〜１１に記載のｍＲＮＡへの言及は、当該技術分野において周知の代替シグナルペプチド（またはコード配列）が上記ＯＸ４０Ｌポリペプチド（またはｍＲＮＡ）に結合したバリアントを包含する。本出願にわたる配列番号：１〜１１に開示されている配列への言及は、一様に使用可能であり、本出願提出時点における当該技術分野において周知のオルソログ及び機能的バリアント（例えば、多型バリアント）ならびにそれらの配列のアイソフォームを包含するということもまた理解されたい。
【０１１１】
細胞結合サイトカインをコードするｍＲＮＡ
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、細胞結合サイトカインをコードするｍＲＮＡを利用している。サイトカインは、細胞間の相互作用及びコミュニケーションに特定の影響を及ぼす、細胞が放出する小さな分泌型タンパク質である。可溶性サイトカインの望ましくない／オフターゲット効果及び潜在的な全身毒性を最小限とするために、本開示は、細胞結合サイトカインをコードする少なくとも１種のｍＲＮＡを利用している。細胞結合サイトカインは、天然または設計によるのいずれかで細胞表面に結合した細胞結合サイトカインである。例えば、一部の実施形態では、可溶性／分泌型サイトカインは膜貫通ドメインを含むように改変されており、その結果、可溶性／分泌型サイトカインは細胞表面に結合する。一部の実施形態では、サイトカインを細胞表面へと「アンカーすること」または「テザーすること」により、可溶性サイトカインの投与で一般的に認められる全身効果が抑制される。
【０１１２】
一部の実施形態では、細胞結合サイトカインは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＴ細胞とＮＫ細胞の両方を活性化させる。Ｔ細胞の活性化及びＮＫ細胞の活性化を測定するための方法は当業者に周知である。例えば、ＮＫ細胞の活性化及びＴ細胞の活性化は、例えば、フローサイトメトリーを用いて、ＮＫ細胞またはＴ細胞上の活性化マーカー（例えば、ＣＤ２５及びＣＤ６９）の表面発現を解析することによって測定することができる。
【０１１３】
一部の実施形態では、細胞結合サイトカインとして好適なサイトカインは、ＩＬ−１２ファミリーメンバーである。一部の実施形態では、ＩＬ−１２ファミリーメンバーは、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＩＬ−１２ｐ４０サブユニット、ＩＬ−２３ｐ１９サブユニット、ＩＬ−２７、ＩＬ−３５、及びこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドである。
【０１１４】
一部の実施形態では、細胞結合サイトカインとして好適なサイトカインは本明細書に記載のＩＬ−１５である。
【０１１５】
テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを利用している。
【０１１６】
インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）は、自然免疫及び適応免疫において重要な役割を果たす炎症性サイトカインである（Ｇａｔｅｌｙ，ＭＫ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：４９５−５２１（１９９８））。ＩＬ−１２は主に、２つのジスルフィド結合したｐ３５（ＩＬ−１２Ａ）及びｐ４０（ＩＬ−１２Ｂ）サブユニットで構成される７０ｋＤａのヘテロ二量体タンパク質として機能する。ＮＫ細胞と細胞傷害性Ｔ細胞の両方を活性化させるその能力により、ＩＬ−１２タンパク質は、１９９４年から有望な抗がん治療薬として研究されている。Ｎａｓｔａｌａ，Ｃ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５３：１６９７−１７０６（１９９４）を参照されたい。
【０１１７】
ＩＬ−１２に対する治療薬としての高い期待にもかかわらず、初期の臨床試験においては良好な結果がもたらされなかった（Ｌａｓｅｋ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ６３：４１９−４３５，４２４（２０１４））。ＩＬ−１２の反復投与により、ほとんどの患者において、適応応答及び血中ＩＬ−１２誘導インターフェロンγ（ＩＦＮγ）レベルの漸減がもたらされた（同上）。更に、ＩＬ−１２誘導抗がん活性の大部分にＩＦＮγの二次分泌が関与しているものと認識された一方で、その他のサイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α）またはケモカイン（ＩＰ−１０またはＭＩＧ）と同調したＩＬ−１２によるＩＦＮγの付随誘導が重度の毒性を引き起こした（同上）。
【０１１８】
ＩＬ−１２は通常、可溶性であるが、毒性を抑制するために、膜アンカー型のＩＬ−１２が作製されている。ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３３４３６号はテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡについて記載しており、その全体は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１９】
それゆえ、一部の実施形態では、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードしており、ヒトＩＬ−１２は膜ドメインに機能的に連結している。
【０１２０】
一部の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドはマウスＩＬ−１２ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドはヒトＩＬ−１２ポリペプチドである。一部の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：３３、３５、３９、または４０に記載のアミノ酸配列を含む。
【０１２１】
一部の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドは、直接またはリンカーにより融合したＩＬ−１２Ｂポリペプチド及びＩＬ−１２Ａポリペプチドを含む単一のポリペプチド鎖を含む。その他の実施形態では、ＩＬ−１２ポリペプチドは、２種のポリペプチド、ＩＬ−１２Ｂを含む第１のポリペプチド及びＩＬ−１２Ａを含む第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、本開示はＩＬ−１２Ａポリペプチド及びＩＬ−１２Ｂポリペプチドを提供し、ＩＬ−１２Ａポリペプチド及びＩＬ−１２Ｂポリペプチドは、同一の鎖上にあるまたは異なる鎖上にある。
【０１２２】
本開示で使用する場合、用語「ＩＬ−１２ポリペプチド」とは、例えば、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結した、ＩＬ−１２のＩＬ−１２ｐ４０サブユニット（すなわち、ＩＬ−１２Ｂ）、ＩＬ−１２のＩＬ−１２ｐ３５サブユニット（すなわち、ＩＬ−１２Ａ）、またはＩＬ−１２ｐ４０サブユニットポリペプチド及びＩＬ−１２ｐ３５サブユニットポリペプチドを含む融合タンパク質のことを意味する。一部の態様では、融合タンパク質は、
（ｉ）全長ＩＬ−１２Ｂポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ−１２Ｂと同一または本質的に同一の長さを有する）、
（ｉｉ）全長ＩＬ−１２Ｂポリペプチドの機能性フラグメント（例えば、ＩＬ−１２Ｂ野生型よりも短いがＩＬ−１２Ｂ機能活性をなおも保持しているトランケート（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つまたは複数のアミノ酸が置換された全長またはトランケートＩＬ−１２Ｂタンパク質、例えば、野生型ＩＬ−１２Ｂポリペプチドを基準として、ポリペプチドのＩＬ−１２Ｂ活性の全てまたは大部分を保持するバリアント（例えば、Ｖ３３Ｉ、Ｖ２９８Ｆ、または当該技術分野において周知の任意のその他の天然バリアントもしくは合成バリアントなど））、または、
（ｉｖ）（ｉ）全長ＩＬ−１２Ｂ野生型、その機能性フラグメントまたはバリアント、及び（ｉｉ）非相同タンパク質、を含む融合タンパク質、
から選択されるＩＬ−１２Ｂポリペプチド、
及び／または、
（ｉ）全長ＩＬ−１２Ａポリペプチド（例えば、野生型ＩＬ−１２Ａと同一または本質的に同一の長さを有する）、
（ｉｉ）全長ＩＬ−１２Ａポリペプチドの機能性フラグメント（例えば、ＩＬ−１２Ａ野生型よりも短いがＩＬ−１２Ａ機能活性をなおも保持しているトランケート（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つまたは複数のアミノ酸が置換された全長またはトランケートＩＬ−１２Ａタンパク質、例えば、野生型ＩＬ−１２Ａポリペプチドを基準として、ポリペプチドのＩＬ−１２Ａ活性の全てまたは大部分を保持するバリアント（例えば、当該技術分野において周知の天然バリアントまたは合成バリアントなど））、または、
（ｉｖ）（ｉ）全長ＩＬ−１２Ａ野生型、その機能性フラグメントまたはバリアント、及び（ｉｉ）非相同タンパク質、を含む融合タンパク質、
から選択されるＩＬ−１２Ａポリペプチド、
を含む。
【０１２３】
一部の実施形態では、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：３３、３５、３９、または４０に記載のアミノ酸配列または配列番号：３４、３６、または４６に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードしており、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドはＩＬ−１２受容体に結合することができる。
【０１２４】
特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするＩＬ−１２ポリペプチドは、１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：３３、３５、３９、または４０に記載のアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＩＬ−１２ポリペプチドのその受容体への結合活性に有意に影響を及ぼさない、すなわち、置換後にＩＬ−１２ポリペプチドはＩＬ−１２受容体に結合する。
【０１２５】
その他の実施形態では、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：３４、３６、または４６に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。
【０１２６】
天然のシグナル配列及び配列番号：３３〜４０及び４６に暗に開示されているプロペプチド配列（前駆体形態中に存在しその対応する成熟形態中に存在しない配列）ならびに非天然のシグナルペプチドに加えて、その他のシグナル配列を使用してもよいということを当業者は理解するであろう。それゆえ、ＩＬ−１２ポリペプチドまたは配列番号：３３〜４０及び４６に記載のｍＲＮＡへの言及は、当該技術分野において周知の代替シグナルペプチド（またはコード配列）が上記ＩＬ−１２ポリペプチド（またはｍＲＮＡ）に結合したバリアントを包含する。本出願にわたる配列番号：３３〜４０及び４６に開示されている配列への言及は、一様に使用可能であり、本出願提出時点における当該技術分野において周知のオルソログ及び機能的バリアント（例えば、多型バリアント）ならびにそれらの配列のアイソフォームを包含するということもまた理解されたい。
【０１２７】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＩＬ−１２ポリペプチドを細胞膜にテザーする（すなわち、アンカーする）膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン）を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、膜貫通ドメイン、及び任意選択的に細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む。
【０１２８】
一部の実施形態では、膜ドメインは内在性膜タンパク質に由来している。
【０１２９】
内在性膜タンパク質としては、例えば、疎水性のαヘリックス構造またはβバレル（すなわち、βシート）構造を有するドメインを含む、タンパク質を細胞表面にテザーする１回貫通型または複数回貫通型の膜貫通ドメインを含有する内在性ポリトピック型タンパク質を挙げることができる。Ｉ型内在性膜タンパク質のアミノ末端（すなわち、Ｎ末端）が細胞外空間に位置する一方で、ＩＩ型内在性膜タンパク質のカルボキシ末端（すなわち、Ｃ末端）は細胞外空間に位置している。
【０１３０】
一部の実施形態では、本開示のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、内在性ポリトピック型タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、本開示のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、Ｉ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＩＩ型内在性膜タンパク質に由来する膜貫通ドメインを含む。
【０１３１】
一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内ドメイン（すなわち、細胞の細胞内空間に局在するドメイン、例えば、細胞の細胞質に局在するドメイン）を含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは膜貫通ドメインから切り離されている。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、細胞内ドメインを含まない膜ドメインを含む。
【０１３２】
内在性膜タンパク質としてはまた、例えば、細胞膜全体には及んでいないがタンパク質を細胞表面にテザーしている膜ドメインを含有する内在性モノトピック型タンパク質を挙げることができる。一部の実施形態では、本開示のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、内在性モノトピック型タンパク質に由来する膜ドメインを含む。
【０１３３】
一部の実施形態では、膜ドメインは、分化抗原群（ＣＤ）タンパク質、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ４、受容体、血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）、トランスフェリン受容体、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体、エリスロポエチン（ＥＰＯ）受容体、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、ＴＣＲβ鎖、Ｆｃ受容体、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃεＲＩ、インターフェロン受容体、Ｉ型インターフェロン受容体、増殖因子、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＴＮＦ−α、Ｂ７−１、アシアロ糖タンパク質、ｃ−ｅｒｂＢ−２、ＩＣＡＭ−１、免疫グロブリン、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ウイルス糖タンパク質、狂犬病ウイルス糖タンパク質、呼吸器合胞体ウイルス糖タンパク質Ｇ（ＲＳＶＧ）、水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質（ＶＳＶＧ）、ウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）、インフルエンザＨＡ、ワクシニアウイルスＨＡ、またはこれらの任意の組み合わせに由来している。
【０１３４】
一部の実施形態では、膜ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＰＤＧＦ−Ｒ膜貫通ドメイン、ＣＤ８０膜貫通ドメイン、及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０１３５】
例示的な膜貫通ドメインのアミノ酸配列は配列番号：４１〜４３に記載されている。
【０１３６】
一部の実施形態では、膜ドメインは、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８α鎖（ＣＤ８ＡまたはＴリンパ球分化抗原Ｔ８／Ｌｅｕ−２としても周知）の膜貫通ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０１７３２の膜貫通を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＣＤ８膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４１に記載のＣＤ８膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６９に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６９に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１３７】
一部の実施形態では、膜ドメインは、血小板由来増殖因子受容体β（ＥＣ：２．７．１０．１）（ＰＤＧＦ−Ｒβ、ＰＤＧＦＲβ、β血小板由来増殖因子受容体、β型血小板由来増殖因子受容体、ＣＤ１４０抗原様ファミリーメンバーＢ、血小板由来増殖因子受容体１、ＰＤＧＦＲ−１、またはＣＤ１４０ｂとしても周知）の膜貫通ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０９６１９の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４２に記載のＰＤＧＦＲβ膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１３８】
一部の実施形態では、膜ドメインは、Ｔリンパ球活性化抗原ＣＤ８０（活性化Ｂ７−１抗原、ＢＢ１、ＣＴＬＡ−４カウンター受容体Ｂ７．１、またはＢ７としても周知）の膜貫通ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ３３６８１の膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＣＤ８０膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４３に記載のＣＤ８０膜貫通ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ８０膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：７０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８０膜貫通ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：７０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１３９】
一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメインは、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、またはこれらの任意の組み合わせに対して少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％、または約１００％同一なアミノ酸配列を含む。
【０１４０】
一部の実施形態では、膜ドメインは膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、細胞内において伝播シグナルとして機能することが知られている任意のオリゴペプチドまたはポリペプチドである。一部の実施形態では、膜ドメインは、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドを安定させるための細胞内ドメインを含む。
【０１４１】
本開示の方法及び組成物に有用な細胞内ドメインとしては、少なくとも、上記の、膜貫通ドメインが由来するポリペプチドのいずれかに由来する細胞内ドメインが挙げられる。例えば、好適な細胞内ドメインとしては、ＣＤ８０、ＰＤＧＦＲ、またはこれらの任意の組み合わせに由来する細胞内ドメインが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１４２】
一部の実施形態では、膜ドメインは、血小板由来増殖因子受容体β（ＥＣ：２．７．１０．１）（ＰＤＧＦ−Ｒβ、ＰＤＧＦＲβ、β血小板由来増殖因子受容体、β型血小板由来増殖因子受容体、ＣＤ１４０抗原様ファミリーメンバーＢ、血小板由来増殖因子受容体１、ＰＤＧＦＲ−１、またはＣＤ１４０ｂとしても周知）の細胞内ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ０９６１９の細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４８に記載のＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０１４３】
一部の実施形態では、膜ドメインはＰＤＧＦＲβのトランケート細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＤＧＦＲβのトランケート細胞内ドメインは、野生型ＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインと比較して、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドを安定させる。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４９に記載のトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：５０に記載のトランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６３に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６３に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６４に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、トランケートＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：６４に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１４４】
その他の実施形態では、膜ドメインは、Ｔリンパ球活性化抗原ＣＤ８０（活性化Ｂ７−１抗原、ＢＢ１、ＣＴＬＡ−４カウンター受容体Ｂ７．１、またはＢ７としても周知）の細胞内ドメイン、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｐ３３６８１の細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、ＣＤ８０細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：４７に記載のＣＤ８０細胞内ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ８０細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：７１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８０細胞内ドメインを含むテザー型ＩＬ−１２をコードするｍＲＮＡは、配列番号：７１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１４５】
一部の実施形態では、本明細書に記載のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、同一のポリペプチドに由来する（すなわち、相同の）、膜貫通ドメインを含む膜ドメイン及び細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＣＤ８０膜貫通ドメインを含む膜ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、ＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメインを含む膜ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは、異なるポリペプチドに由来する（すなわち、非相同の）、膜貫通ドメインを含む膜ドメイン及び細胞内ドメイン（例えば、ＣＤ８０膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ細胞内ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン、ＣＤ８膜貫通ドメイン及びＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン、またはＰＤＧＦＲβ膜貫通ドメイン及びＣＤ８０細胞内ドメイン）を含む。
【０１４６】
一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン、及び任意選択的な細胞内ドメイン）は、任意のＩＬ−１２アミノ酸配列（すなわち、ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ−１２Ｂ、またはＩＬ−１２ＡとＩＬ−１２Ｂの両方（テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内にその両方が含まれる場合）の任意のアミノ酸配列）のＣ末端側に位置している。語句「のＣ末端側に位置する」は、ポリペプチドのＣ末端に対する、ポリペプチド内のその他の配列を基準としたポリペプチド内における位置を示す。任意のＩＬ−１２アミノ酸配列「のＣ末端側」にある膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン、及び任意選択的な細胞内ドメイン）とは、膜ドメインが、任意のＩＬ−１２アミノ酸配列と比較して、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドのＣ末端に近いところに位置していることを意味する。
【０１４７】
一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン、及び任意選択的な細胞内ドメイン）は、ＩＬ−１２ポリペプチドのＮ末端側に位置している。任意のＩＬ−１２アミノ酸配列「のＮ末端側」にある膜ドメインとは、膜ドメインが、任意のＩＬ−１２アミノ酸配列と比較して、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチドのＮ末端に近いところに位置していることを意味する。
【０１４８】
一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメイン（例えば、膜貫通ドメイン、及び任意選択的な細胞内ドメイン）は、リンカーによってＩＬ−１２ポリペプチドに連結されており、そのリンカーは、本明細書において、「膜ドメインリンカー」または「膜貫通ドメインリンカー」（膜ドメインが膜貫通ドメイン及び任意選択的に細胞内ドメインである場合）と呼ばれる。リンカーの非限定例については本明細書の他の箇所に開示されている。一部の実施形態では、テザー型ＩＬ−１２ポリペプチド内の膜ドメインは、ＩＬ−１２ポリペプチドに直接融合している。
【０１４９】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡがコードするヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１５０】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡがコードするヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５５に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５４に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５４に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１５１】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡがコードするヒトＣＤ８０膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８０膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５６〜６０のうちのいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８膜貫通ドメインを含むテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：５６〜６０のうちのいずれか１つから選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む。
【０１５２】
細胞結合ＩＬ−１５／ＩＬ−１５ＲαをコードするｍＲＮＡ
ＩＬ−１５は、４αヘリックスバンドルファミリーのサイトカインのメンバーであり、効果的な免疫応答の発現において重要な役割を果たしている（Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．３：２１９−２２７（２０１５））。ＩＬ−１５は、ＮＫ細胞の適切な発現及びメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の長期的な維持に不可欠である。ＩＬ−１５遺伝子は、４８アミノ酸のシグナルペプチドを有する１６２アミノ酸前駆体タンパク質（成熟タンパク質は１１４アミノ酸長である）をコードしている（Ｂａｍｆｏｒｄ，Ｒ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：２８９７−２９０２（１９９６））。例えば、ホモサピエンスＩＬ−１５転写バリアント３  ｍＲＮＡ配列についてはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿０００５８５、及び対応するＩＬ−１５アイソフォーム１プロタンパク質前駆体についてはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿０００５７６もまた参照されたい。
【０１５３】
ＩＬ−１５は、インターロイキン−２（ＩＬ２）に対するある一定の構造類似性を共有している。ＩＬ−２と同様に、ＩＬ−１５は、ＩＬ−２受容体のβ鎖（ＣＤ１２２）及び共通γ鎖（ＣＤ１３２）を介してシグナルを伝達する。しかし、ＩＬ−２とは異なり、ＩＬ−１５は、ＣＤ１２２及びＣＤ１３２に単独で効果的に結合することができない。ＩＬ−１５は先ずＩＬ−１５α受容体サブユニット（ＩＬ−１５Ｒα）に結合する必要がある。ＩＬ−１５Ｒα遺伝子は、３０アミノ酸のシグナルペプチドを有する２６７アミノ酸前駆体タンパク質（成熟タンパク質は２３７アミノ酸長である）をコードしている。例えば、ホモサピエンスＩＬ−１５Ｒα転写バリアント１  ｍＲＮＡについてはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００２１８９、及びホモサピエンスＩＬ−１５Ｒαアイソフォーム１前駆体アミノ酸配列についてはＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＰ＿００２１８０を参照されたい。
【０１５４】
ヒトＩＬ−１５Ｒαは主に、細胞、例えば、活性化樹状細胞及び活性化単球などの表面上のＩＬ−１５に結合する膜貫通タンパク質である（Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｔ．Ａ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．３：２１９−２２７（２０１５））。次に、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαの膜結合複合体は、ＣＤ１２２サブユニット及びＣＤ１３２サブユニットにＩＬ−１５をトランスで提示する。それゆえ、ＩＬ−１５Ｒαは、ＩＬ−１５活性の不可欠な構成要素であり、その結果、ＩＬ−１５は通常、細胞結合サイトカインである。
【０１５５】
それゆえ、一部の実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを提供する。一部の実施形態では、本開示は、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを提供する。
【０１５６】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチド及び／またはＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、野生型ＩＬ−１５及び／またはＩＬ−１５Ｒα配列を基準とした置換、及び挿入及び／または付加、欠失、及び／または共有結合修飾を含有するバリアント、ペプチド、またはポリペプチドである。本明細書で言及する場合、用語「ＩＬ−１５ポリペプチド」とは成熟ＩＬ−１５ポリペプチド（すなわち、シグナルペプチド及びプロペプチドを含まない）のことを意味する。一実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドはシグナルペプチド及び／またはプロペプチドを含む。
【０１５７】
用語「ＩＬ−１５Ｒαポリペプチド」は、本明細書で使用する場合、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドのうちの少なくともｓｕｓｈｉドメイン及びヒンジ領域を含む。一部の実施形態では、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドのｓｕｓｈｉドメインは、配列番号：１２９に記載のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの細胞外ドメインは、配列番号：１３０に記載のアミノ酸配列を含む。その他の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの膜貫通領域及び／または細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの膜貫通領域及び／または細胞内ドメインは、配列番号：１３１に記載のアミノ酸配列を含む。その他の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、非相同ポリペプチドの膜貫通領域及び／または細胞内ドメインを含む。例えば、本明細書に記載の膜貫通ドメイン及び／または細胞内ドメインのいずれかを、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの非相同膜貫通ドメイン及び／または細胞内ドメインとして利用してもよい。
【０１５８】
一部の実施形態では、例えば、局在化のために、配列タグまたはアミノ酸を、本発明のポリヌクレオチドがコードする配列に付加してもよい（例えば、Ｎ末端またはＣ末端に）。一部の実施形態では、本発明のポリペプチドのカルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域に位置するアミノ酸残基を任意選択的に欠失させてもよい。
【０１５９】
一部の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを提供する。その他の態様では、本開示は、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを提供する。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ヒトＩＬ−１５ポリペプチド及び少なくともｓｕｓｈｉドメインを含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドを含む融合タンパク質をコードしており、ヒトＩＬ−１５ポリペプチド及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは機能的に連結している。その他の実施形態では、ｍＲＮＡは、２種のポリペプチド鎖、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドを含む第１の鎖、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドを含む第２の鎖をコードしている。
【０１６０】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５ポリペプチドは、
（ｉ）シグナルペプチドを含むまたは含まない成熟ヒトＩＬ−１５ポリペプチド（例えば、野生型ヒトＩＬ−１５と同一または本質的に同一の長さを有する）、
（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドの機能性フラグメント（例えば、ＩＬ−１５野生型よりも短いがＩＬ−１５活性をなおも保持しているトランケート（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つまたは複数のアミノ酸が置換された全長、成熟、またはトランケートＩＬ−１５タンパク質、例えば、野生型ＩＬ−１５ポリペプチドを基準として、ポリペプチドのＩＬ−１５活性の全てまたは大部分を保持するバリアント）、及び、
（ｉｖ）（ａ）シグナルペプチドを含むまたは含まない、成熟ヒトＩＬ−１５野生型、その機能性フラグメントまたはバリアント、及び（ｂ）非相同タンパク質、を含む融合タンパク質、
から選択される。
【０１６１】
一部の実施形態では、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、
（ｉ）全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチド（例えば、野生型ヒトＩＬ−１５Ｒαと同一または本質的に同一の長さを有する）、
（ｉｉ）全長ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドの機能性フラグメント（例えば、ＩＬ−１５Ｒα野生型よりも短いがＩＬ−１５Ｒα活性をなおも保持しているトランケート（例えば、カルボキシ末端領域、アミノ末端領域、または内部領域の欠失）配列）、
（ｉｉｉ）そのバリアント（例えば、１つまたは複数のアミノ酸が置換された全長またはトランケートＩＬ−１５Ｒαタンパク質、例えば、野生型ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドを基準として、ポリペプチドのＩＬ−１５Ｒα活性の全てまたは大部分を保持するバリアント（例えば、当該技術分野において周知の天然バリアントまたは合成バリアントなど））、及び、
（ｉｖ）（ａ）全長ヒトＩＬ−１５Ｒα野生型、その機能性フラグメントまたはバリアント、及び（ｂ）非相同タンパク質、を含む融合タンパク質、
から選択される。
【０１６２】
特定の実施形態では、ｍＲＮＡは、哺乳動物ＩＬ−１５及び／またはＩＬ−１５Ｒαポリペプチド、例えば、非ヒト（例えば、霊長類）ＩＬ−１５及び／またはＩＬ−１５Ｒαポリペプチド、その機能性フラグメントまたはバリアントなどをコードしている。
【０１６３】
一部の実施形態では、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１５及び１７に記載のアミノ酸配列または配列番号：１６、１９、２０、及び１２２に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含み、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドはヒトＩＬ−１５受容体に結合することができる。
【０１６４】
特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：１５及び１７に記載のアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＩＬ−１５ポリペプチドのその受容体への結合活性に有意に影響を及ぼさない、すなわち、置換後にＩＬ−１５ポリペプチドはＩＬ−１５受容体に結合する。
【０１６５】
その他の実施形態では、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。
【０１６６】
一部の実施形態では、ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１４、２１、及び２２に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含み、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドはヒトＩＬ−１５ポリペプチドに結合することができる。
【０１６７】
特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：１４、２１、及び２２に記載のアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＩＬ−１５Ｒαポリペプチドのそのリガンドへの結合活性に有意に影響を及ぼさない、すなわち、置換後にＩＬ−１５ＲαポリペプチドはＩＬ−１５に結合する。
【０１６８】
その他の実施形態では、ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。
【０１６９】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列または配列番号：１４、２１、及び２２に記載のヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合ポリペプチドをコードしている。
【０１７０】
特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡがコードするＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合ポリペプチドは、１つまたは複数の保存的置換を有する、配列番号：２３、２７、及び１２３に記載のアミノ酸配列を含み、保存的置換は、ＩＬ−１５ポリペプチドのその受容体への結合活性に有意に影響を及ぼさない。
【０１７１】
その他の実施形態では、ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα融合ポリペプチドをコードするｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６に記載の核酸配列に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含む。
【０１７２】
サイトカイン及び共刺激分子の組成物
一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の少なくとも２種のｍＲＮＡを含む組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の２種のｍＲＮＡを含む組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の３種のｍＲＮＡを含む組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の４種のｍＲＮＡを含む組成物（例えば、脂質ナノ粒子）を提供する。
【０１７３】
一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ及びテザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、２種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、２種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。
【０１７４】
一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１５及び１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸を含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディ���グフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、３種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、３種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。
【０１７５】
一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、２種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、２種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。
【０１７６】
一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１５及び１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸を含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒト���Ｌ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、３種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、３種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。
【０１７７】
一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトテザー型ＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、２種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、２種のｍＲＮＡは、２種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。
【０１７８】
一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１５及び１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５ポリペプチドは、配列番号：１７に記載のアミノ酸を含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドは、配列番号：１３に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１６、１９、２０、及び１２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１４、２１、及び２２からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｖ）ヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択される配列番号：２２に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ���組み合わせを提供し、４種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、４種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、４種のｍＲＮＡは、３種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。
【０１７９】
一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは、配列番号：５３、５５、６１、及び６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＯＸ４０Ｌポリペプチドは配列番号：１に記載のアミノ酸配列を含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ヒトＩＬ−１２ポリペプチドは配列番号：６１に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉｉ）配列番号：１８、２３、２７、及び１２３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：４、６、及び９〜１１からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：５２、５４、５６〜６０、及び６７からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からな��群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、組成物は、（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：１１に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、（ｉｉ）テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：６０に記載のヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）、及び（ｉｉｉ）ヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ（ｍＲＮＡは、配列番号：２４〜２６、２８〜３０、及び１２４〜１２６からなる群から選択されるヌクレオチド配列に対する少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むオープンリーディングフレームを含む）を含む。一部の実施形態では、本開示は、本明細書に記載の、ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、テザー型ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの組み合わせを提供し、３種のｍＲＮＡは、同一のまたは異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、同一の脂質ナノ粒子内に封入されている。一部の実施形態では、３種のｍＲＮＡは、２種の異なる脂質ナノ粒子内に封入されている。
【０１８０】
ｍＲＮＡ構築物構成要素
ｍＲＮＡは、天然または非天然のｍＲＮＡであってもよい。ｍＲＮＡは、以下で説明する１種または複数種の修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含んでいてもよく、その場合、「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれることもある。本明細書に記載するとおり、「ヌクレオシド」は、有機塩基（例えば、プリンまたはピリミジン）またはその誘導体（本明細書ではまた、「核酸塩基」と呼ぶ）と組み合わせた、糖分子（例えば、ペントースまたはリボース）またはその誘導体を含有する化合物と定義される。本明細書に記載するとおり、「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドと定義される。
【０１８１】
ｍＲＮＡは、５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）、３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）、及び／またはコード領域（例えば、オープンリーディングフレーム）を含んでいてもよい。構築物に用いる例示的な５’ＵＴＲを配列番号：７５に示す。構築物に用いる別の例示的な５’ＵＴＲを配列番号：７６に示す。構築物に用いる別の例示的な５’ＵＴＲを配列番号：１３３に示す。構築物に用いる別の例示的な５’ＵＴＲを配列番号：１２に示す。構築物に用いる例示的な３’ＵＴＲを配列番号：７７に示す。構築物に用いるｍｉＲ−１２２結合部位及びｍｉＲ−１４２．３ｐ結合部位を含む例示的な３’ＵＴＲを配列番号：７８に示す。ｍＲＮＡは、数十（例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００）、数百（例えば、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、または９００）または数千（例えば、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、１０，０００）の塩基対を含む、任意の好適な数の塩基対を含んでいてもよい。任意の数（例えば、全て、一部、またはなし）の核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドは、置換された、修飾された、または別様に非天然の、標準的な種の類似体であってもよい。特定の実施形態では、特定の核酸塩基型の全てを修飾してもよい。
【０１８２】
一部の実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡは、５’キャップ構造、鎖停止ヌクレオチド、任意選択的にコザック配列（コザックコンセンサス配列としても周知）、ステムループ、ポリＡ配列、及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。
【０１８３】
５’キャップ構造またはキャップ種は、リンカーによって連結した２つのヌクレオシド部分を含む化合物であり、天然キャップ、非天然キャップもしくはキャップアナログ、またはアンチリバースキャップアナログ（ＡＲＣＡ）から選択してもよい。キャップ種は、１つまたは複数の修飾ヌクレオシド及び／またはリンカー部分を含んでいてもよい。例えば、天然ｍＲＮＡキャップは、５’位のトリホスフェート連結部によって連結した、グアニンヌクレオチド及び７位がメチル化したグアニン（Ｇ）ヌクレオチド、例えば、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（一般的にはｍ７ＧｐｐｐＧと表記する）を含んでいてもよい。キャップ種はまた、アンチリバースキャップアナログであってもよい。考えられるキャップ種の非限定的なリストとしては、ｍ７ＧｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧ、ｍ７Ｇｐｐｐｍ７Ｇ、ｍ７３’ｄＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐＧ、ｍ２７，Ｏ３’ＧｐｐｐｐＧ、及びｍ２７，Ｏ２’ＧｐｐｐｐＧが挙げられる。
【０１８４】
ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加で、鎖停止ヌクレオシドを含んでいてもよい。例えば、鎖停止ヌクレオシドとしては、その糖基の２’位及び／または３’位が脱酸素化した鎖停止ヌクレオシドを挙げてもよい。このような種としては、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−デオキシウリジン、３’−デオキシシトシン、３’−デオキシグアノシン、３’−デオキシチミン、ならびに２’，３’−ジデオキシヌクレオシド、例えば、２’，３’−ジデオキシアデノシン、２’，３’−ジデオキシウリジン、２’，３’−ジデオキシシトシン、２’，３’−ジデオキシグアノシン、及び２’，３’−ジデオキシチミンなどを挙げてもよい。一部の実施形態では、例えば、国際特許公開第ＷＯ２０１３／１０３６５９号に記載されているように、例えば、３’末端における、鎖停止ヌクレオチドのｍＲＮＡへの導入により、ｍＲＮＡの安定化がもたらされ得る。
【０１８５】
ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加で、ステムループ、例えば、ヒストンステムループなどを含んでいてもよい。ステムループは、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ以上のヌクレオチド塩基対を含んでいてもよい。例えば、ステムループは、４、５、６、７、または８のヌクレオチド塩基対を含んでいてもよい。ステムループは、ｍＲＮＡの任意の領域に位置していてもよい。例えば、ステムループは、非翻訳領域の前もしくは後（５’非翻訳領域または３’非翻訳領域）、コード領域、またはポリＡ配列もしくはポリＡ尾部に位置していてもよい。一部の実施形態では、ステムループは、ｍＲＮＡの１種または複数種の機能（複数可）、例えば、翻訳の開始、翻訳効率、及び／または転写停止などに影響を及ぼし得る。
【０１８６】
ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加で、ポリＡ配列及び／またはポリアデニル化シグナルを含んでいてもよい。ポリＡ配列は、完全にまたは主に、アデニンヌクレオチドまたはその類似体もしくは誘導体で構成されていてもよい。ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの３’非翻訳領域に隣接して位置する尾部であってもよい。一部の実施形態では、ポリＡ配列は、ｍＲＮＡの核外移行、翻訳、及び／または安定性に影響を及ぼし得る。
【０１８７】
ｍＲＮＡは、代わりにまたは追加で、マイクロＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。
【０１８８】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、第１のコード領域と第２のコード領域の間の内部翻訳開始を可能とする配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列を含む介在配列を有する、または２Ａペプチドなどの自己開裂ペプチドをコードする介在配列を有する、第１のコード領域及び第２のコード領域を含むバイシストロン性ｍＲＮＡである。ＩＲＥＳ配列及び２Ａペプチドは一般的に、同一のベクターに由来する複数種のタンパク質の発現を増強するために使用される。様々なＩＲＥＳ配列が当該技術分野において周知かつ入手可能であり、それらを使用してもよく、それらとしては、例えば、脳心筋炎ウイルスＩＲＥＳが挙げられる。
【０１８９】
一実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、自己開裂ペプチドをコードする配列を含んでいてもよい。自己開裂ペプチドは、限定するわけではないが、２Ａペプチドであってもよい。様々な２Ａペプチドが当該技術分野において周知かつ入手可能であり、それらを使用してもよく、それらとしては、例えば、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａペプチド、ウマ鼻炎Ａウイルス２Ａペプチド、Ｔｈｏｓｅａ  ａｓｉｇｎａウイルス２Ａペプチド、及びブタテシオウイルス−１  ２Ａペプチドが挙げられる。２Ａペプチドは、２Ａペプチド配列において正常なペプチド結合が阻害されて、１つの翻訳イベントから２種の不連続なタンパク質が生じることになるように、リボソームスキッピングにより１つの転写物から２種のタンパク質を生成するために、数種類のウイルスが使用している。非限定例として、２Ａペプチドは、タンパク質配列：ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号：７９）、そのフラグメントまたはバリアントを有していてもよい。一実施形態では、２Ａペプチドは、最後のグリシンと最後のプロリンの間を開裂する。別の非限定例として、本開示のポリヌクレオチドは、タンパク質配列ＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号：７９）、そのフラグメントまたはバリアントを有する２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含んでいてもよい。２Ａペプチドをコードするポリヌクレオチド配列の１つの例は、ＧＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＡＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＣＴＧＧＡＣＣＴ（配列番号：８０）である。１つの例示的な実施形態では、２Ａペプチドは、以下の配列：５’−ＴＣＣＧＧＡＣＴＣＡＧＡＴＣＣＧＧＧＧＡＴＣＴＣＡＡＡＡＴＴＧＴＣＧＣＴＣＣＴＧＴＣＡＡＡＣＡＡＡＣＴＣＴＴＡＡＣＴＴＴＧＡＴＴＴＡＣＴＣＡＡＡＣＴＧＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＴＡＧＡＡＡＧＣＡＡＴＣＣＡＧＧＴＣＣＡＣＴＣ−３’（配列番号：８１）がコードしている。本明細書に記載及び／または当該技術分野において周知の方法を用いて、２Ａペプチドのポリヌクレオチド配列を修飾またはコドン最適化してもよい。
【０１９０】
一実施形態では、この配列を使用して、２種またはそれ以上の目的のポリペプチドのコード領域を分離してもよい。非限定例として、Ｆ２Ａペプチドをコードする配列は、第１のコード領域Ａと第２のコード領域Ｂの間にあってもよい（Ａ−Ｆ２Ａｐｅｐ−Ｂ）。Ｆ２Ａペプチドが存在することにより、Ｆ２Ａペプチド配列の末端におけるグリシンとプロリンの間で１つの長いタンパク質の開裂が生じ（ＮＰＧＰが開裂してＮＰＧ及びＰとなる）、その結果、独立したタンパク質Ａ（Ｆ２Ａペプチドの２１アミノ酸が結合しＮＰＧで終了している）及び独立したタンパク質Ｂ（Ｆ２Ａペプチドの１アミノ酸Ｐが結合している）が生成される。同様に、その他の２Ａペプチド（Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、及びＥ２Ａ）では、長いタンパク質内におけるそのペプチドの存在により、２Ａペプチド配列の末端におけるグリシンとプロリンの間で開裂が生じる（ＮＰＧＰが開裂してＮＰＧ及びＰとなる）。タンパク質Ａ及びタンパク質Ｂは、同一の目的のペプチドまたはポリペプチドであってもよく、または異なる目的のペプチドまたはポリペプチドであってもよい。特定の実施形態では、タンパク質Ａは、免疫原性細胞死を誘導するポリペプチドであり、タンパク質Ｂは、炎症反応及び／または免疫応答を刺激する及び／または免疫応答性を制御する別のポリペプチドである（以下で更に説明する）。
【０１９１】
一部の実施形態では、本明細書に記載のｍＲＮＡ構築物はリンカーを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１アミノ酸〜約２００アミノ酸を含むペプチドリンカーである。一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも２６、少なくとも２７、少なくとも２８、少なくとも２９、少なくとも３０、少なくとも３１、少なくとも３２、少なくとも３３、少なくとも３４、少なくとも３５、少なくとも３６、少なくとも３７、少なくとも３８、少なくとも３９、または少なくとも４０アミノ酸を含む。
【０１９２】
一部の実施形態では、リンカーは、例えば、（ＧｎＳ）ｍを含むＧＳ（Ｇｌｙ／Ｓｅｒ）リンカーであってもよく、式中、ｎは１〜２０の整数であり、ｍは１〜２０の整数である。一部の実施形態では、ＧＳリンカーは（ＧＧＧＧＳ）ｏ（配列番号：８６）を含んでいてもよく、式中、ｏは１〜５の整数である。一部の実施形態では、ＧＳリンカーは、ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧ（配列番号：８７）、ＧＧＳＧＧＧＧＧ（配列番号：８８）、またはＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号：８９）を含んでいてもよい。特定の実施形態では、リンカーはＧ６Ｓ（ＧＧＧＧＧＧＳ）（配列番号：９０）である。
【０１９３】
一部の実施形態では、リンカーは、例えば、（Ｇｌｙ）ｐを含むＧｌｙリッチリンカーであってもよく、式中、ｐは１〜４０の整数である。一部の実施形態では、Ｇｌｙリッチリンカーは、ＧＧＧＧＧ（配列番号：９１）、ＧＧＧＧＧＧ（配列番号：９２）、ＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号：９３）、またはＧＧＧＧＧＧＧＧ（配列番号：９４）を含んでいてもよい。
【０１９４】
一部の実施形態では、リンカーは、（ＥＡＡＡＫ）ｑ（配列番号：９５）を含んでいてもよく、式中、ｑは１〜５の整数である。一実施形態では、リンカーは、（ＥＡＡＡＫ）３、すなわち、ＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫ（配列番号：９６）を含んでいてもよい。
【０１９５】
更なる例示的なリンカーとしては、ＧＧＧＧＳＬＶＰＲＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号：９７）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号：９８）、ＧＧＧＧＳＬＶＰＲＧＳＧＧＧＧ（配列番号：９９）、ＧＧＳＧＧＨＭＧＳＧＧ（配列番号：１００）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧ（配列番号：１０１）、ＧＧＳＧＧ（配列番号：１０２）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号：１０３）、ＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧ（配列番号：１０４）、ＡＡＧＡＡＴＡＡ（配列番号：１０５）、ＧＧＳＳＧ（配列番号：１０６）、ＧＳＧＧＧＴＧＧＧＳＧ（配列番号：１０７）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＧＳＧ（配列番号：１０８）、ＧＳＧＧＳＧＳＧＧＳＧＧＳＧ（配列番号：１０９）、及びＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号：１１０）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１９６】
本明細書で開示するリンカーをコードするヌクレオチドを構築して、本明細書で開示するＯＲＦまたはポリヌクレオチドのＯＲＦを融合してもよい。
【０１９７】
修飾ｍＲＮＡ
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１種または複数種の修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む（「修飾ｍＲＮＡ」または「ｍｍＲＮＡ」と呼ばれる）。一部の実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、参照未修飾ｍＲＮＡと比較した、高い安定性、細胞内維持、向上した翻訳、及び／または、ｍＲＮＡを導入する細胞の自然免疫応答の実質的な誘導の欠如を含む有用な特性を有していてもよい。それゆえ、修飾ｍＲＮＡの使用は、タンパク質産生の効率、核酸の細胞内維持を向上させることに加えて、低い免疫原性を維持することを可能とする。
【０１９８】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１種または複数種（例えば、１、２、３、または４種）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１種または複数種（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００種、またはそれ以上）の異なる修飾核酸塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、修飾ｍＲＮＡは、対応する未修飾ｍＲＮＡと比較した、ｍＲＮＡを導入する細胞内における低い分解性を示していてもよい。
【０１９９】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、シュードウリジン（ψ）、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ウリジン（ｓ２Ｕ）、４−チオ−ウリジン（ｓ４Ｕ）、４−チオ−シュードウリジン、２−チオ−シュードウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５−アミノアリル−ウリジン、５−ハロ−ウリジン（例えば、５−ヨード−ウリジンまたは５−ブロモ−ウリジン）、３−メチル−ウリジン（ｍ３Ｕ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５−カルボキシメチル−ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１−カルボキシメチル−シュードウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５−アミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５−カルバモイルメチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−ウリジン（τｍ５Ｕ）、１−タウリノメチル−シュードウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン（τｍ５ｓ２Ｕ）、１−タウリノメチル−４−チオ−シュードウリジン、５−メチル−ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１−メチル−４−チオ−シュードウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、３−メチル−シュードウリジン（ｍ３ψ）、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、５−メチル−ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−メトキシ−ウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、Ｎ１−メチル−シュードウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ３ψ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウリジン（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、α−チオ−ウリジン、２��−Ｏ−メチル−ウリジン（Ｕｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’−Ｏ−メチル−シュードウリジン（ψｍ）、２−チオ−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、及び、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１−チオ−ウリジン、デオキシチミジン、２’−Ｆ−アラ−ウリジン、２’−Ｆ−ウリジン、２’−ＯＨ−アラ−ウリジン、５−（２−カルボメトキシビニル）ウリジン、ならびに、５−［３−（１−Ｅ−プロペニルアミノ）］ウリジンが挙げられる。
【０２００】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、５−アザ−シチジン、６−アザ−シチジン、シュードイソシチジン、３−メチル−シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−ホルミル−シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４−メチル−シチジン（ｍ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−シュードイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−シュードイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−シュードイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α−チオ−シチジン、２’−Ｏ−メチル−シチジン（Ｃｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１−チオ−シチジン、２’−Ｆ−アラ−シチジン、２’−Ｆ−シチジン、及び２’−ＯＨ−アラ−シチジンが挙げられる。
【０２０１】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、α−チオ−アデノシン、２−アミノ−プリン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノ−６−ハロ−プリン（例えば、２−アミノ−６−クロロ−プリン）、６−ハロ−プリン（例えば、６−クロロ−プリン）、２−アミノ−６−メチル−プリン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｉ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６−グリシニルカルバモイル−アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６−メチル−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−スレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６−ジメチル−アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６−アセチル−アデノシン（ａｃ６Ａ）、７−メチル−アデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、α−チオ−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチル−アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（ホスフェート）（Ａｒ（ｐ））、２−アミノ−Ｎ６−メチル−プリン、１−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、２’−Ｆ−アラ−アデノシン、２’−Ｆ−アデノシン、２’−ＯＨ−アラ−アデノシン、及びＮ６−（１９−アミノ−ペンタオキサノナデシル）−アデノシンが挙げられる。
【０２０２】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、α−チオ−グアノシン、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４−脱メチル−ワイオシン（ｉｍＧ−１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、未修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７−デアザ−グアノシン、クエウオシン（Ｑ）、エポキシクエウオシン（ｏＱ）、ガラクトシル−クエウオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル−クエウオシン（ｍａｎＱ）、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチル−イノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、α−チオ−グアノシン、２’−Ｏ−メチル−グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’−Ｏ−メチル−イノシン（Ｉｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（ホスフェート）（Ｇｒ（ｐ））、１−チオ−グアノシン、Ｏ６−メチル−グアノシン、２’−Ｆ−アラ−グアノシン、及び２’−Ｆ−グアノシンが挙げられる。
【０２０３】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。
【０２０４】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、シュードウリジン（ψ）、Ｎ１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）、２−チオウリジン、４’−チオウリジン、５−メチルシトシン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−シュードウリジン、２−チオ−１−メチル−シュードウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ジヒドロシュードウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−２−チオ−シュードウリジン、４−メトキシ−シュードウリジン、４−チオ−１−メチル−シュードウリジン、４−チオ−シュードウリジン、５−アザ−ウリジン、ジヒドロシュードウリジン、５−メトキシウリジン、または２’−Ｏ−メチルウリジンである。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。
【０２０５】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−シュードイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジンが挙げられる。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。
【０２０６】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、７−デアザ−アデニン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）が挙げられる。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。
【０２０７】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的な核酸塩基及びヌクレオシドとしては、イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、７−デアザ−グアノシン、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシンが挙げられる。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。
【０２０８】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、シュードウリジン（ψ）、α−チオ−グアノシン、またはα−チオ−アデノシンである。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡとしては、上記修飾核酸塩基のうちの１種または複数種の組み合わせ（例えば、上記修飾核酸塩基のうちの２、３、または４種の組み合わせ）が挙げられる。
【０２０９】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡはシュードウリジン（ψ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはシュードウリジン（ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは１−メチル−シュードウリジン（ｍ１ψ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは２−チオウリジン（ｓ２Ｕ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは２−チオウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは２’−Ｏ−メチルウリジンを含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは２’−Ｏ−メチルウリジン及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはＮ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡはＮ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）及び５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）を含む。
【０２１０】
特定の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、特定の修飾で均一に修飾（すなわち、完全に修飾、全配列にわたり修飾）されている。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは修飾されており、特定のヌクレオチドまたは核酸塩基のうちの少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％は、修飾されている。例えば、ｍＲＮＡは５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾することができ、それは、ｍＲＮＡ配列中の全てのシトシン残基が５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）で置換されることを意味する。同様に、本開示のｍＲＮＡは、上記したような修飾残基で置換することにより、配列中に存在する任意の型のヌクレオシド残基で均一に修飾することができる。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）で均一に修飾されており、それは、ｍＲＮＡ配列中の全てのウリジン残基が１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）で置換されることを意味する。一部の実施形態では、ウリジンのうちの少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％は、１−メチルシュードウリジン（ｍ１ψ）である。
【０２１１】
一部の実施形態では、コード領域（例えば、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム）において、本開示のｍＲＮＡを修飾してもよい。その他の実施形態では、コード領域を除く領域において、ｍＲＮＡを修飾してもよい。例えば、一部の実施形態では、５’−ＵＴＲ及び／または３’−ＵＴＲを提供し、それらの一方または両方は独立して、１つまたは複数の異なるヌクレオシド修飾を含有していてもよい。このような実施形態では、ヌクレオシド修飾はまた、コード領域内に存在し得る。
【０２１２】
本開示のｍｍＲＮＡ内に存在し得るヌクレオシド修飾及びその組み合わせの例としては、ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１２０４５０７５、ＷＯ２０１４０８１５０７、ＷＯ２０１４０９３９２４、ＷＯ２０１４１６４２５３、及びＷＯ２０１４１５９８１３に記載されているヌクレオシド修飾及びその組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２１３】
本開示のｍｍＲＮＡは、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間連結部に対する修飾の組み合わせを含んでいてもよい。これらの組み合わせとしては、本明細書に記載の任意の１つまたは複数の修飾を挙げることができる。
【０２１４】
特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、本開示のｍＲＮＡの天然ヌクレオチドで部分的または完全に置換されていてもよい。非限定例として、天然ヌクレオチドウリジンは、本明細書に記載の修飾ヌクレオシドで置換されていてもよい。別の非限定例では、天然ヌクレオシドウリジンは、本明細書で開示する修飾ヌクレオシドのうちの少なくとも１つで部分的（例えば、天然ウリジンのうちの約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９．９％）に置換されていてもよい。
【０２１５】
本開示のｍＲＮＡまたはその領域はコドン最適化されていてもよい。コドン最適化法は当該技術分野において周知であり、様々な目的、宿主生物のコドン頻度を揃えて適切なフォールディングを確保すること、ＧＣ含有量にバイアスをかけてｍＲＮＡ安定性を高めるまたは二次構造を縮小すること、遺伝子合成または遺伝子発現を低下させ得るタンデムリピートコドンまたは塩基配列を最小限とすること、転写制御領域及び翻訳制御領域をカスタマイズすること、タンパク質輸送配列を挿入または除去すること、コードされたタンパク質内の翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加すること、タンパク質ドメインを付加、除去または再編成させること、制限部位を挿入または欠失させること、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾すること、タンパク質の様々なドメインが適切に折り畳まれるように、または、ポリヌクレオチドの二次構造の課題が減少または解消するように翻訳速度を調節することに有用であり得る。コドン最適化用のツール、アルゴリズム及びサービスは、当技術分野において周知であり、非限定例としては、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＤＮＡ２．０（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ  ＣＡ）が提供するサービス、及び／または、所有権のある方法が挙げられる。一実施形態では、ｍＲＮＡ配列は、例えば、哺乳動物細胞内における発現を最適化するまたはｍＲＮＡ安定性を向上させるための最適化アルゴリズムを用いて最適化されている。
【０２１６】
特定の実施形態では、本開示は、本明細書に記載のポリヌクレオチド配列のいずれかに対する少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するポリヌクレオチドを含む。
【０２１７】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）及び合成法を含むがこれらに限定されない当該技術分野において利用可能な方法を用いて、本開示のｍＲＮＡを作製してもよい。酵素（ＩＶＴ）合成法、固相合成法、液相合成法、複合合成法、小領域合成法、及びライゲーション法を利用してもよい。一実施形態では、ＩＶＴ酵素合成法を用いてｍＲＮＡを作製する。ＩＶＴを用いてポリヌクレオチドを作製するための方法は当技術分野において周知であり、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／３００６２（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。それゆえ、本開示はまた、本明細書に記載のｍＲＮＡをｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写するのに使用可能なポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡ、構築物、及びベクターを含む。
【０２１８】
合成中または合成後に、非天然修飾核酸塩基をポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡに導入してもよい。特定の実施形態では、修飾は、ヌクレオシド間連結部上、プリン塩基もしくはピリミジン塩基上、または糖上にあってもよい。特定の実施形態では、化学合成を用いてまたはポリメラーゼ酵素を用いて、ポリヌクレオチド鎖の末端またはポリヌクレオチド鎖内の他の任意の場所に修飾を導入してもよい。修飾核酸及びその合成の例は、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０５８５１９号に開示されている。修飾ポリヌクレオチドの合成はまた、Ｖｅｒｍａ  ａｎｄ  Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．７６，９９−１３４（１９９８）に記載されている。
【０２１９】
酵素ライゲーション法または化学ライゲーション法のいずれかを使用して、ポリヌクレオチドまたはその領域を、異なる機能性部分、例えば、標的化用物質または送達用物質、蛍光標識、液剤、ナノ粒子などにコンジュゲートしてもよい。ポリヌクレオチドのコンジュゲート及び修飾ポリヌクレオチドについては、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１（３），１６５−１８７（１９９０）において考察されている。
【０２２０】
非翻訳領域（ＵＴＲ）
ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチドの翻訳は、様々なシス作用性核酸構造がもたらす様々なメカニズムにより制御及び調節することができる。例えば、ヘアピンまたはその他の高次（例えば、シュードノット）分子内ｍＲＮＡ二次構造を形成する天然のシス作用性ＲＮＡエレメントは、ポリヌクレオチドに翻訳調節活性をもたらし得、とりわけ、ＲＮＡエレメントが、５’キャップ構造に近接した５’ＵＴＲ内に位置している場合、ＲＮＡエレメントはポリヌクレオチド翻訳の開始に影響を及ぼすまたはポリヌクレオチド翻訳の開始を調節する（Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ  ａｎｄ  Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ（１９８５）Ｃｅｌｌ  ４０（３）：５１５−５２６；Ｋｏｚａｋ（１９８６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８３：２８５０−２８５４）。
【０２２１】
非翻訳領域（ＵＴＲ）は、開始コドンの前の翻訳されないポリヌクレオチドの核酸区画（５’ＵＴＲ）、及び終止コドンの後の翻訳されないポリヌクレオチドの核酸区画（３’ＵＴＲ）である。一部の実施形態では、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む本発明のポリヌクレオチド（例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ））は、ＵＴＲ（例えば、５’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、３’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、またはこれらの組み合わせ）を更に含む。
【０２２２】
シス作用性ＲＮＡエレメントはまた、多数のフレームシフトイベントに関与する翻訳伸長に影響を及ぼし得る（Ｎａｍｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  １３（２）：１５７−１６８）。内部リボソーム進入配列（ＩＲＥＳ）は、一般的には５’ＵＴＲ内に位置しているが天然ｍＲＮＡのコード領域内において発見されたこともまた報告されている別のタイプのシス作用性ＲＮＡエレメントである（Ｈｏｌｃｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ  １６（１０）：４６９−４７３）。細胞性ｍＲＮＡ内において、ＩＲＥＳは、５’キャップ構造と共存していることが多く、キャップ依存性翻訳が妨げられた条件下で翻訳される機能的能力をｍＲＮＡにもたらす（Ｇｅｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ  Ｂｉｏｌ  ４（７）：ａ０１２２４５）。別のタイプの天然シス作用性ＲＮＡエレメントは上流オープンリーディングフレーム（ｕＯＲＦ）を含む。天然ｕＯＲＦは多数のｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内に単数または多数存在しており、下流主要ＯＲＦの翻訳に、一般的には悪い方に、影響を及ぼす（とりわけ、酵母菌におけるＧＣＮ４  ｍＲＮＡ及び哺乳動物におけるＡＴＦ４  ｍＲＮＡを除くが、それらにおいては、ｕＯＲＦが、高いｅＩＦ２リン酸化の条件下で下流主要ＯＲＦの翻訳を促進するように機能している（Ｈｉｎｎｅｂｕｓｃｈ（２００５）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ５９：４０７−４５０））。ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）を含む構成要素、構造、エレメント、モチーフ、及び／または特定の配列がもたらす別の例示的な翻訳調節活性としては、ｍＲＮＡの安定化または不安定化（Ｂａｋｅｒ  ＆  Ｐａｒｋｅｒ（２００４）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １６（３）：２９３−２９９）、翻訳の活性化（Ｖｉｌｌａｌｂａ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｇｅｎｅｔ  Ｄｅｖ  ２１（４）：４５２−４５７）、及び翻訳の抑制（Ｂｌｕｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｍｅｃｈ  Ｄｅｖ  １１０（１−２）：９７−１１２）が挙げられるがこれらに限定されない。導入することで非相同ポリヌクレオチドを修飾するために天然シス作用性ＲＮＡエレメントを使用する場合、天然シス作用性ＲＮＡエレメントがそれらの対応する機能を付与し得るということを研究が示している（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ−Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（１６）：１３６３５−１３６４０）。
【０２２３】
機能性ＲＮＡエレメント
一部の実施形態では、本開示は、修飾を含むポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡエレメント）を提供し、修飾は所望の翻訳調節活性をもたらす。このような修飾については、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３３５１９号（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２２４】
一部の実施形態では、本開示は、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、開始コドン、ポリペプチドをコードする完全オープンリーディングフレーム、３’ＵＴＲ、及び少なくとも１つの修飾を含むポリヌクレオチドを提供し、少なくとも１つの修飾、例えば、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を増強及び／または向上させる修飾は、所望の翻訳調節活性をもたらす。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性はシス作用性調節活性である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、開始コドンにおけるまたは開始コドンに隣接したところにおける、４３Ｓ開始前複合体（ＰＩＣ）またはリボソームの滞留時間の延長である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、開始コドンにおけるまたは開始コドンからの、ポリペプチド合成の開始の増加である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、完全オープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の増加である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドン解読の忠実度の向上である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる読み漏らしの抑制または低下である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ＰＩＣまたはリボソームによる開始コドン解読速度の低下である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ｍＲＮＡ内の開始コドン以外の任意のコドンにおけるポリペプチド合成の開始の阻害または抑制である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、ｍＲＮＡ内の完全オープンリーディングフレーム以外の任意のオープンリーディングフレームから翻訳されるポリペプチドの量の抑制または低下である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、異常翻訳産物の生成の阻害または低下である。一部の実施形態では、所望の翻訳調節活性は、上記の翻訳調節活性のうちの１つまたは複数の組み合わせである。
【０２２５】
それゆえ、本開示は、本明細書に記載の所望の翻訳調節活性をもたらす配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む、ポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡを提供する。一部の態様では、ｍＲＮＡは、ｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を増強及び／または向上させる配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む。一部の態様では、ｍＲＮＡは、所望の翻訳調節活性、例えば、読み漏らしを抑制及び／または低下させることなどをもたらす配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含む。一部の態様では、本開示は、読み漏らしを抑制及び／または低下させることによってｍＲＮＡの翻訳忠実度を増強する配列及び／またはＲＮＡ二次構造（複数可）を含むＲＮＡエレメントを含むｍＲＮＡを提供する。
【０２２６】
一部の実施形態では、ＲＮＡエレメントは天然ヌクレオチド及び／または修飾ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ＲＮＡエレメントは、本明細書に記載の所望の翻訳調節活性をもたらす、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含む。一部の実施形態では、ＲＮＡエレメントは、安定したＲＮＡ二次構造を形成するまたは安定したＲＮＡ二次構造へと折り畳まれる、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、ＲＮＡ二次構造は本明細書に記載の所望の翻訳調節活性をもたらす。ＲＮＡエレメントは、エレメント（例えば、ＧＣリッチエレメント）の一次配列に基づいて、エレメントが形成するＲＮＡ二次構造（例えば、ステムループ）により、ＲＮＡ分子内におけるエレメントの位置（例えば、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内に位置している）により、エレメント（例えば、「翻訳エンハンサーエレメント」）の生物学的機能及び／または生物学的活性により、及びこれらの任意の組み合わせにより、同定及び／または特性決定することができる。
【０２２７】
一部の実施形態では、本開示は、読み漏らしを抑制する及び／またはｍＲＮＡ翻訳の翻訳忠実度を増強する１つまたは複数の構造的修飾を有するｍＲＮＡを提供し、構造的修飾のうちの少なくとも１つはＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置している。別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の１５〜３０、１５〜２０、１５〜２５、１０〜１５、または５〜１０ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置している。
【０２２８】
一部の実施形態では、本開示は、任意の順番で連結した３〜３０、５〜２５、１０〜２０、１５〜２０、約２０、約１５、約１２、約１０、約７、約６、または約３ヌクレオチドの配列、その誘導体または類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントを提供し、配列組成は、７０〜８０％シトシン塩基、６０〜７０％シトシン塩基、５０％〜６０％シトシン塩基、４０〜５０％シトシン塩基、３０〜４０％シトシン塩基である。一部の実施形態では、本開示は、任意の順番で連結した３〜３０、５〜２５、１０〜２０、１５〜２０、約２０、約１５、約１２、約１０、約７、約６、または約３ヌクレオチドの配列、その誘導体または類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントを提供し、配列組成は、約８０％シトシン、約７０％シトシン、約６０％シトシン、約５０％シトシン、約４０％シトシン、または約３０％シトシンである。
【０２２９】
一部の実施形態では、本開示は、任意の順番で連結した２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントを提供し、配列組成は、７０〜８０％シトシン、６０〜７０％シトシン、５０％〜６０％シトシン、４０〜５０％シトシン、または３０〜４０％シトシンである。一部の実施形態では、本開示は、任意の順番で連結した２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントを提供し、配列組成は、約８０％シトシン、約７０％シトシン、約６０％シトシン、約５０％シトシン、約４０％シトシン、または約３０％シトシンである。
【０２３０】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントであり、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置しており、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、任意の順番で連結した３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、配列組成は＞５０％シトシンである。一部の実施形態では、配列組成は、＞５５％シトシン、＞６０％シトシン、＞６５％シトシン、＞７０％シトシン、＞７５％シトシン、＞８０％シトシン、＞８５％シトシン、または＞９０％シトシンである。
【０２３１】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントであり、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置しており、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、約３〜３０、５〜２５、１０〜２０、１５〜２０、または約２０、約１５、約１２、約１０、約６、もしくは約３ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含み、配列は繰り返しＧＣモチーフを含み、繰り返しＧＣモチーフは［ＣＣＧ］ｎであり、式中、ｎ＝１〜１０、ｎ＝２〜８、ｎ＝３〜６、またはｎ＝４〜５である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１、２、３、４、または５である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１、２、または３である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝１である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝２である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝３である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝４（配列番号：１１１）である。一部の実施形態では、配列は繰り返しＧＣモチーフ［ＣＣＧ］ｎを含み、式中、ｎ＝５（配列番号：１１２）である。
【０２３２】
一部の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置している。別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の約１５〜３０、１５〜２０、１５〜２５、１０〜１５、または５〜１０ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置している。
【０２３３】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含む修飾ｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、連結ヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントであり、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは本明細書で提供する配列のうちのいずれか１つを含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、約５、約４、約３、約２、または約１ヌクレオチド（複数可）上流に位置している。一部の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、コザックコンセンサス配列の約１５〜３０、１５〜２０、１５〜２５、１０〜１５、または５〜１０ヌクレオチド上流に位置している。一部の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置している。
【０２３４】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、配列番号：１１３に記載の配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置しかつその上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含む。その他の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、９〜１２、または１２〜１５塩基上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含む。
【０２３５】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、配列番号：１１４に記載の配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置しかつその上流に位置する、配列番号：１１４に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、配列番号：１１４に記載の配列を含む。その他の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、９〜１２、または１２〜１５塩基上流に位置する、配列番号：１１４に記載の配列を含む。
【０２３６】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、配列番号：１１５に記載の配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置しかつその上流に位置する、配列番号：１１５に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、配列番号：１１５に記載の配列を含む。その他の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、９〜１２、または１２〜１５塩基上流に位置する、配列番号：１１５に記載の配列を含む。
【０２３７】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列に先行する、配列番号：１１３に記載の配列またはその誘導体もしくは類似体を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントであり、５’ＵＴＲは配列番号：１１６に記載の配列を含む。
【０２３８】
一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、本明細書に記載の５’ＵＴＲ配列内のコザックコンセンサス配列に直接隣接して位置しかつその上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０塩基上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含み、５’ＵＴＲは配列番号：１１６に示す配列を含む。
【０２３９】
その他の実施形態では、ＧＣリッチエレメントは、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ内のコザックコンセンサス配列の１〜３、３〜５、５〜７、７〜９、９〜１２、または１２〜１５塩基上流に位置する、配列番号：１１３に記載の配列を含み、５’ＵＴＲは配列番号：１１６に記載の配列を含む。
【０２４０】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲは配列番号：１１７に記載の配列を含む。
【０２４１】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲは配列番号：１１８に記載の配列を含む。
【０２４２】
一部の実施形態では、本開示は、少なくとも１つの修飾を含むｍＲＮＡを提供し、少なくとも１つの修飾は、ヘアピンまたはステムループを形成する順番に連結したヌクレオチドの配列またはその誘導体もしくは類似体を含む、安定したＲＮＡ二次構造を含むＧＣリッチＲＮＡエレメントである。一実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造はコザックコンセンサス配列の上流にある。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約３０、約２５、約２０、約１５、約１０、または約５ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約２０、約１５、約１０、または約５ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約５、約４、約３、約２、約１ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の約１５〜３０、約１５〜２０、約１５〜２５、約１０〜１５、または約５〜１０ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、コザックコンセンサス配列の１２〜１５ヌクレオチド上流に位置している。別の実施形態では、安定したＲＮＡ二次構造は、約−３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−２０〜−３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−１０〜−２０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、約−５〜−１０ｋｃａｌ／ｍｏｌのΔＧを有している。
【０２４３】
別の実施形態では、修飾は、ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームに機能的に連結しており、修飾及びオープンリーディングフレームは非相同である。
【０２４４】
別の実施形態では、ＧＣリッチＲＮＡエレメントの配列は、グアニン（Ｇ）核酸塩基及びシトシン（Ｃ）核酸塩基のみで構成されている。
【０２４５】
本明細書に記載の所望の翻訳調節活性をもたらすＲＮＡエレメントは、周知の技術、例えば、リボソームプロファイリングなどを使用して同定及び特性決定することができる。リボソームプロファイリングは、ｍＲＮＡに結合したＰＩＣ及び／またはリボソームの位置の同定を可能とする技術である（例えば、Ｉｎｇｏｌｉａ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２４（５９２４）：２１８−２３（参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。この技術は、ＰＩＣ及び／またはリボソームでｍＲＮＡの領域またはセグメントをヌクレアーゼ消化から保護することをベースとしている。保護により、「フットプリント」と呼ばれる、ＲＮＡの３０ｂｐフラグメントの生成がもたらされる。ＲＮＡフットプリントの配列及び頻度は、当該技術分野において周知の方法（例えば、ＲＮＡ−ｓｅｑ）を用いて解析することができる。フットプリントはリボソームのＡ部位のほぼ中央にある。ＰＩＣまたはリボソームがｍＲＮＡに沿った特定の位置または場所に滞留している場合、これらの位置で生成されるフットプリントは比較的一般的なものとなり得る。ＰＩＣ及び／またはリボソームが低いプロセッシビティを示す位置においてより多くのフットプリントが生成され、ＰＩＣ及び／またはリボソームが高いプロセッシビティを示す位置においてより少ないフットプリントが生成されることを研究が示している（Ｇａｒｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１４）ｅＬｉｆｅ  ３：ｅ０３７３５）。一部の実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡエレメントのうちのいずれか１つまたは複数を含むポリヌクレオチドに沿った不連続な位置または場所におけるＰＩＣまたはリボソームの滞留時間または占有時間をリボソームプロファイリングで測定する。
【０２４６】
ＵＴＲは、ポリヌクレオチド内のコード領域に対して相同または非相同であってもよい。一部の実施形態では、ＵＴＲは、ポリペプチドをコードするＯＲＦに対して相同である。一部の実施形態では、ＵＴＲは、ポリペプチドをコードするＯＲＦに対して非相同である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つまたはそれ以上の５’ＵＴＲまたはその機能性フラグメントを含み、そのそれぞれは同一のまたは異なるヌクレオチド配列を有している。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、２つまたはそれ以上の３’ＵＴＲまたはその機能性フラグメントを含み、そのそれぞれは同一のまたは異なるヌクレオチド配列を有している。
【０２４７】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、３’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、またはこれらの任意の組み合わせは、配列最適化されている。
【０２４８】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、３’ＵＴＲもしくはその機能性フラグメント、またはこれらの任意の組み合わせは、少なくとも１つの化学修飾核酸塩基、例えば、Ｎ１−メチルシュードウラシルまたは５−メトキシウラシルを含む。
【０２４９】
ＵＴＲは、調節する役割、例えば、高いまたは低い安定性、局在化、及び／または翻訳効率をもたらす機能を有していてもよい。ＵＴＲを含むポリヌクレオチドを細胞、組織、または生物に投与してもよく、通常の方法を用いて１種または複数種の調節機能を測定してもよい。一部の実施形態では、５’ＵＴＲの機能性フラグメントまたは３’ＵＴＲの機能性フラグメントはそれぞれ、全長５’ＵＴＲまたは全長３’ＵＴＲの１種または複数種の調節機能を含む。
【０２５０】
天然５’ＵＴＲは、翻訳開始において役割を果たす機能を有している。それら天然５’ＵＴＲは、一般的に、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することが知られているコザック配列と同様の特徴を有している。コザック配列はコンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧ（配列番号：１３５）を有しており、式中、Ｒは、開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（アデニンまたはグアニン）であり、開始コドン（ＡＵＧ）に別の「Ｇ」が続く。５’ＵＴＲはまた、伸長因子結合に関与する二次構造を形成することが知られている。
【０２５１】
特定の標的器官に豊富に発現している遺伝子において一般的に存在している機能を改変することにより、ポリヌクレオチドの安定性及びタンパク質産生を向上させることができる。例えば、肝臓発現ｍＲＮＡ、例えば、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、αフェトプロテイン、エリスロポエチン、または第ＶＩＩＩ因子などの５’ＵＴＲを導入することにより、肝細胞株または肝臓におけるポリヌクレオチドの発現を増強させることができる。同様に、その他の組織特異的ｍＲＮＡに由来する５’ＵＴＲを使用して、それらの組織、筋肉（例えば、ＭｙｏＤ、ミオシン、ミオグロビン、ミオゲニン、ハーキュリン）、内皮細胞（例えば、Ｔｉｅ−１、ＣＤ３６）、骨髄細胞（例えば、Ｃ／ＥＢＰ、ＡＭＬ１、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＤ１１ｂ、ＭＳＲ、Ｆｒ−１、ｉ−ＮＯＳ）、白血球（例えば、ＣＤ４５、ＣＤ１８）、脂肪組織（例えば、ＣＤ３６、ＧＬＵＴ４、ＡＣＲＰ３０、アディポネクチン）、及び肺上皮細胞（例えば、ＳＰ−Ａ／Ｂ／Ｃ／Ｄ）における発現を向上させることが可能である。
【０２５２】
一部の実施形態では、ＵＴＲは、それらのタンパク質が共通の機能、構造、特徴、または特性を共有する転写産物のファミリーから選択される。例えば、コードポリペプチドは、特定の細胞、組織において、または発達中の一定の期間において発現するタンパク質のファミリーに属していてもよい（すなわち、少なくとも１つの機能、構造、特徴、局在化、起源、または発現パターンを共有する）。遺伝子またはｍＲＮＡのいずれかに由来するＵＴＲを、同一のまたは異なるファミリーのタンパク質の任意のその他のＵＴＲと交換して、新しいポリヌクレオチドを作製してもよい。
【０２５３】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲは非相同であってもよい。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、３’ＵＴＲとは異なる種に由来していてもよい。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、５’ＵＴＲとは異なる種に由来していてもよい。
【０２５４】
共同所有する国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２１５２２号（公開番号ＷＯ／２０１４／１６４２５３、その全体は参照により本明細書に組み込まれる）は、本発明のポリヌクレオチドにおいて、ＯＲＦに隣接する領域として利用可能な例示的なＵＴＲのリストを提供している。
【０２５５】
本出願の例示的なＵＴＲとしては、グロビン、例えば、αグロビンまたはβグロビン（例えば、Ｘｅｎｏｐｕｓ、マウス、ウサギ、またはヒトのグロビン）など、強力なコザック翻訳開始シグナル、ＣＹＢＡ（例えば、ヒトシトクロムｂ−２４５αポリペプチド）、アルブミン（例えば、ヒトアルブミン７）、ＨＳＤ１７Ｂ４（ヒドロキシステロイド（１７−β）デヒドロゲナーゼ）、ウイルス（例えば、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）、デング熱ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、ＣＭＶ前初期１（ＩＥ１））、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、シンドビスウイルス、またはＰＡＶオオムギ黄萎ウイルス）、熱ショックタンパク質（例えば、ｈｓｐ７０）、翻訳開始因子（例えば、ｅｌＦ４Ｇ）、グルコース輸送体（例えば、ｈＧＬＵＴ１（ヒトグルコース輸送体１））、アクチン（例えば、ヒトαアクチンまたはβアクチン）、ＧＡＰＤＨ、チューブリン、ヒストン、クエン酸回路酵素、トポイソメラーゼ（例えば、５’ＴＯＰモチーフを欠くＴＯＰ遺伝子の５’ＵＴＲ（オリゴピリミジントラクト））、リボソームタンパク質大３２（Ｌ３２）、リボソームタンパク質（例えば、ヒトまたはマウスのリボソームタンパク質、例えば、ｒｐｓ９など）、ＡＴＰ合成酵素（例えば、ＡＴＰ５Ａ１、またはミトコンドリアＨ＋−ＡＴＰ合成酵素のβサブユニット）、成長ホルモンｅ（例えば、ウシ（ｂＧＨ）またはヒト（ｈＧＨ））、伸長因子（例えば、伸長因子１  α１（ＥＥＦ１Ａ１））、マンガンスーパーオキシドジスムターゼ（ＭｎＳＯＤ）、筋細胞増強因子２Ａ（ＭＥＦ２Ａ）、β−Ｆ１−ＡＴＰアーゼ、クレアチンキナーゼ、ミオグロビン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、コラーゲン（例えば、コラーゲンＩ型α２（Ｃｏｌ１Ａ２）、コラーゲンＩ型α１（Ｃｏｌ１Ａ１）、コラーゲンＶＩ型α２（Ｃｏｌ６Ａ２）、コラーゲンＶＩ型α１（Ｃｏｌ６Ａ１））、リボフォリン（例えば、リボフォリンＩ（ＲＰＮＩ））、低比重リポタンパク質受容体関連タンパク質（例えば、ＬＲＰ１）、カルジオトロフィン様サイトカイン因子（例えば、Ｎｎｔ１）、カルレティキュリン（Ｃａｌｒ）、プロコラーゲン−リジン２−オキソグルタレート５−ジオキシゲナーゼ１（Ｐｌｏｄ１）、及びヌクレオビンジン（例えば、Ｎｕｃｂ１）の核酸配列に由来する１つまたは複数の５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２５６】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、βグロビン５’ＵＴＲ、強力なコザック翻訳開始シグナルを含有する５’ＵＴＲ、シトクロムｂ−２４５αポリペプチド（ＣＹＢＡ）５’ＵＴＲ、ヒドロキシステロイド（１７−β）デヒドロゲナーゼ（ＨＳＤ１７Ｂ４）５’ＵＴＲ、タバコエッチウイルス（ＴＥＶ）５’ＵＴＲ、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）５’ＵＴＲ、非構造タンパク質をコードする風疹ウイルス（ＲＶ）ＲＮＡの５’隣接オープンリーディングフレーム、デング熱ウイルス（ＤＥＮ）５’ＵＴＲ、熱ショックタンパク質７０（Ｈｓｐ７０）５’ＵＴＲ、ｅＩＦ４Ｇ  ５’ＵＴＲ、ＧＬＵＴ１  ５’ＵＴＲ、その機能性フラグメント及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。
【０２５７】
一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、βグロビン３’ＵＴＲ、ＣＹＢＡ  ３’ＵＴＲ、アルブミン３’ＵＴＲ、成長ホルモン（ＧＨ）３’ＵＴＲ、ＶＥＥＶ  ３’ＵＴＲ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）３’ＵＴＲ、αグロビン３’ＵＴＲ、ＤＥＮ  ３’ＵＴＲ、ＰＡＶオオムギ黄萎ウイルス（ＢＹＤＶ−ＰＡＶ）３’ＵＴＲ、伸長因子１  α１（ＥＥＦ１Ａ１）３’ＵＴＲ、マンガンスーパーオキシドジスムターゼ（ＭｎＳＯＤ）３’ＵＴＲ、ミトコンドリアＨ（＋）−ＡＴＰ合成酵素のβサブユニット（β−ｍＲＮＡ）３’ＵＴＲ、ＧＬＵＴ１  ３’ＵＴＲ、ＭＥＦ２Ａ  ３’ＵＴＲ、β−Ｆ１−ＡＴＰアーゼ３’ＵＴＲ、その機能性フラグメント及びこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０２５８】
任意の遺伝子またはｍＲＮＡに由来する野生型ＵＴＲを本発明のポリヌクレオチドに導入してもよい。一部の実施形態では、例えば、ＯＲＦに対するＵＴＲの方向または位置を変化させることにより、または、別のヌクレオチドを付加する、ヌクレオチドを欠失させる、ヌクレオチドを交換または転移することにより、野生型ＵＴＲまたは天然ＵＴＲに対してＵＴＲを変化させてバリアントＵＴＲを作製してもよい。一部の実施形態では、５’ＵＴＲのバリアントまたは３’ＵＴＲのバリアント、例えば、野生型ＵＴＲの変異体、または、１つまたは複数のヌクレオチドをＵＴＲの末端に付加したまたはＵＴＲの末端から除去したバリアントを利用してもよい。
【０２５９】
加えて、１つまたは複数の合成ＵＴＲを１つまたは複数の非合成ＵＴＲと組み合わせて使用してもよい。例えば、Ｍａｎｄａｌ  ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉ，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２０１３  ８（３）：５６８−８２（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【０２６０】
ＵＴＲまたはその一部を、それらが選択された転写産物と同一の方向に配置してもよく、または、ＵＴＲまたはその一部の方向または位置を変化させてもよい。それゆえ、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを反転、短縮、延長してもよく、または、１つまたは複数のその他の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲと組み合わせてもよい。
【０２６１】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、多重ＵＴＲ、例えば、二重、三重、または四重の５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲを含む。例えば、二重ＵＴＲは、直列または実質的に直列のいずれかの、同一ＵＴＲの２つのコピーを含む。例えば、二重βグロビン３’ＵＴＲを使用してもよい（ＵＳ２０１０／０１２９８７７（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０２６２】
特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、本明細書で開示するＵＴＲのいずれかから選択される５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲを含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、
５’ＵＴＲ−００１（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：７６）、
５’ＵＴＲ−００２（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＧＡＵＣＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１３６）、
５’ＵＴＲ−００３（上流ＵＴＲ）（ＷＯ２０１６／１００８１２を参照のこと）、
５’ＵＴＲ−００４（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＧＡＣＡＡＧＣＵＵＧＧＣＡＵＵＣＣＧＧＵＡＣＵＧＵＵＧＧＵＡＡＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１３７）、
５’ＵＴＲ−００６（上流ＵＴＲ）（ＷＯ２０１６／１００８１２を参照のこと）、
５’ＵＴＲ−００８（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＵＵＡＡＣＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１３８）、
５’ＵＴＲ−００９（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＵＡＧＡＣＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１３９）、
５’ＵＴＲ−０１０、上流（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＵＡＡＡＧＡＡＣＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４０）、
５’ＵＴＲ−０１１（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＡＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＣＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４１）、
５’ＵＴＲ−０１２（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＵＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４２）、
５’ＵＴＲ−０１３（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＣＡＡＡＡＣＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４３）、
５’ＵＴＲ−０１４（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＵＡＧＡＧＡＧＵＡＡＡＧＡＡＣＡＧＵＡＡＧＵＡＧＡＡＵＵＡＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４４）、
５’ＵＴＲ−０１５（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＵＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４５）、
５’ＵＴＲ−０１６（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＡＵＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４６）、
５’ＵＴＲ−０１７（上流ＵＴＲ）（ＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＵＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：１４７）、または、
５’ＵＴＲ−０１８（上流ＵＴＲ）５’ＵＴＲ（ＵＣＡＡＧＣＵＵＵＵＧＧＡＣＣＣＵＣＧＵＡＣＡＧＡＡＧＣＵＡＡＵＡＣＧＡＣＵＣＡＣＵＡＵＡＧＧＧＡＡＡＵＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＧＵＡＡＧＡＡＧＡＡＡＵＡＵＡＡＧＡＧＣＣＡＣＣ）（配列番号：７５）、
を含む。
【０２６３】
特定の実施形態では、本発明の５’ＵＴＲ配列及び／または３’ＵＴＲ配列は、配列番号：７５〜７６、１１６〜１１８、１３２〜１３４、または１３６〜１４７のいずれかを含む５’ＵＴＲ配列及び／または配列番号：４、７７〜７８、または１２１のいずれかを含む３’ＵＴＲ配列及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一なヌクレオチド配列を含む。
【０２６４】
特定の実施形態では、本発明の５’ＵＴＲ配列及び／または３’ＵＴＲ配列は、配列番号：７５、配列番号：７６、配列番号：１１６、配列番号：１１７、配列番号：１１８、配列番号：１３２、または配列番号：１３４のいずれかを含む５’ＵＴＲ配列及び／または配列番号：７７、配列番号：７８、または配列番号：１２１のいずれかを含む３’ＵＴＲ配列及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される配列に対して少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％同一なヌクレオチド配列を含む。
【０２６５】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号：７５、配列番号：７６、配列番号：１１６、配列番号：１１７、配列番号：１１８、配列番号：１３２、または配列番号：１３４に記載のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲは、配列番号：７７、配列番号：７８、または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲは、配列番号：７５、配列番号：７６、配列番号：１１６、配列番号：１１７、配列番号：１１８、配列番号：１３２、または配列番号：１３４に記載のヌクレオチド配列を含み、３’ＵＴＲは、配列番号：７７、配列番号：７８、または配列番号：１２１に記載のヌクレオチド配列を含む。
【０２６６】
本発明のポリヌクレオチドは、特徴部の組み合わせを含んでいてもよい。例えば、ＯＲＦは、強力なコザック翻訳開始シグナルを含む５’ＵＴＲ及び／またはポリＡ尾部の鋳型付加用のオリゴ（ｄＴ）配列を含む３’ＵＴＲに隣接していてもよい。５’ＵＴＲは、同一の及び／または異なるＵＴＲに由来する第１のポリヌクレオチドフラグメント及び第２のポリヌクレオチドフラグメントを含んでいてもよい（例えば、ＵＳ２０１０／０２９３６２５（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
【０２６７】
その他の非ＵＴＲ配列を本発明のポリヌクレオチド内の領域またはサブ領域として使用してもよい。例えば、イントロンまたはイントロン配列の一部を本発明のポリヌクレオチドに導入してもよい。イントロン配列の導入により、タンパク質産生の増加に加えて、ポリヌクレオチド発現レベルの上昇が可能となる。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ＵＴＲの代わりにまたはＵＴＲに加えて配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含む（例えば、Ｙａｋｕｂｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０  ３９４（１）：１８９−１９３（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは５’ＵＴＲ配列の代わりにＩＲＥＳを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドはＯＲＦ及びウイルスキャプシド配列を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、非合成３’ＵＴＲと組み合わせた合成５’ＵＴＲを含む。
【０２６８】
一部の実施形態では、ＵＴＲはまた、少なくとも１つの翻訳エンハンサーポリヌクレオチド、翻訳エンハンサーエレメント（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｅｌｅｍｅｎｔ）、または翻訳エンハンサーエレメント（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ）（ひとまとめに「ＴＥＥ」と呼び、ポリペプチドの量またはポリヌクレオチドから生成されるタンパク質の量を増加させる核酸配列のことを意味する）を含んでいてもよい。非限定例として、ＴＥＥは転写プロモーターと開始コドンの間に位置していてもよい。一部の実施形態では、５’ＵＴＲはＴＥＥを含む。
【０２６９】
一態様では、ＴＥＥは、核酸の翻訳、限定するわけではないが例えば、キャップ依存性翻訳またはキャップ非依存性翻訳などの活性を促進させることができる、ＵＴＲ内の保存エレメントである。
【０２７０】
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位
本開示のｍＲＮＡは、調節エレメント、例えば、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）結合部位、転写因子結合部位、構造化されたｍＲＮＡ配列及び／またはモチーフ、内在核酸結合分子用の擬似受容体として機能するように改変された人工結合部位、及びこれらの組み合わせを含んでいてもよい。一部の実施形態では、このような調節エレメントを含むｍＲＮＡは、「センサー配列」を含むものと呼ばれる。センサー配列の非限定例については、米国公開２０１４／０２００２６１（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２７１】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含み、１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を更に含む。ｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）の組み込みまたは導入により、天然ｍｉＲＮＡの組織特異的及び／または細胞型特異的発現を基準とした、本開示のポリヌクレオチドの調節がもたらされ、それにより、それからコードされるポリペプチドの調節がもたらされる。
【０２７２】
ｍｉＲＮＡ、例えば、天然ｍｉＲＮＡは、ｍＲＮＡに結合して、安定性を低下させることまたはポリヌクレオチドの翻訳を阻害することのいずれかにより遺伝子発現を下方制御する、１９〜２５ヌクレオチド長の非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち、成熟ｍｉＲＮＡの２〜８位の領域内の配列を含む。ｍｉＲＮＡシードは成熟ｍｉＲＮＡの２〜８位または２〜７位を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは７ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２〜８）を含んでいてもよく、対応するｍｉＲＮＡ結合部位内のシード相補性部位は、ｍｉＲＮＡの１位に向かい合うアデノシン（Ａ）に隣接している。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡシードは６ヌクレオチド（例えば、成熟ｍｉＲＮＡのヌクレオチド２〜７）を含んでいてもよく、対応するｍｉＲＮＡ結合部位内のシード相補性部位は、ｍｉＲＮＡの１位に向かい合うアデノシン（Ａ）に隣接している。例えば、Ｇｒｉｍｓｏｎ  Ａ，Ｆａｒｈ  ＫＫ，Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ＷＫ，Ｇａｒｒｅｔｔ−Ｅｎｇｅｌｅ  Ｐ，Ｌｉｍ  ＬＰ，Ｂａｒｔｅｌ  ＤＰ；Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．２００７  Ｊｕｌ  ６；２７（１）：９１−１０５を参照されたい。標的細胞または組織のｍｉＲＮＡプロファイリングを実施して、細胞または組織内におけるｍｉＲＮＡの有無を確認してもよい。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、１つまたは複数のマイクロＲＮＡ結合部位、マイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ相補配列、またはマイクロＲＮＡシード相補配列を含む。このような配列は、米国公開ＵＳ２００５／０２６１２１８及び米国公開ＵＳ２００５／００５９００５（そのそれぞれの内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）において教示されているマイクロＲＮＡなどの任意の周知のマイクロＲＮＡに相当し得る、例えば、それらに対する相補性を有し得る。
【０２７３】
本明細書で使用する場合、用語「マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）結合部位」とは、ｍｉＲＮＡと相互作用する、それと会合する、またはそれに結合する上で、ｍｉＲＮＡの全てまたは領域に対する十分な相補性を有し、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ内に含まれる、ｍＲＮＡ内の配列のことを意味する。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、目的のポリペプチドをコードするＯＲＦを含み、１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を更に含む。例示的な実施形態では、ｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲは、１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位（複数可）を含む。
【０２７４】
ｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位とは、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡ介在性調節、例えば、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡ介在性翻訳抑制または分解を促進するのに十分な相補性の度合いのことを意味する。本開示の例示的な態様では、ｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有するｍｉＲＮＡ結合部位とは、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡ介在性分解、例えば、ｍＲＮＡのｍｉＲＮＡガイドＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）介在性開裂を促進するのに十分な相補性の度合いのことを意味する。ｍｉＲＮＡ結合部位は、例えば、１９〜２５ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列、１９〜２３ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列、または２２ヌクレオチドのｍｉＲＮＡ配列に対する相補性を有していてもよい。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡの一部のみ、例えば、天然ｍｉＲＮＡ配列の全長のうちの１ヌクレオチド未満、２ヌクレオチド未満、３ヌクレオチド未満、または４ヌクレオチド未満の部分に対して相補的であってもよい。所望の調節がｍＲＮＡ分解である場合、完全または完璧な相補性（例えば、天然ｍｉＲＮＡの全長の全てまたはかなりの部分に対する完全な相補性または完璧な相補性）が好ましい。
【０２７５】
一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列との相補性（例えば、部分的または完璧な相補性）を有する配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡシード配列との完璧な相補性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列との相補性（例えば、部分的または完璧な相補性）を有する配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ配列との完璧な相補性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、１、２、または３ヌクレオチドの置換、末端付加、及び／またはトランケートを別にすれば、ｍｉＲＮＡ配列との完璧な相補性を有する。
【０２７６】
一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡと同一の長さである。その他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するｍｉＲＮＡよりも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２ヌクレオチド（複数可）短い。更にその他の実施形態では、マイクロＲＮＡ結合部位は、５’末端、３’末端、またはその両方において、対応するマイクロＲＮＡよりも２ヌクレオチド短い。対応するｍｉＲＮＡよりも短いｍｉＲＮＡ結合部位は、それでもなお、ｍｉＲＮＡ結合部位のうちの１つまたは複数を導入したｍＲＮＡを分解することができる、または、ｍＲＮＡが翻訳されるのを防止することができる。
【０２７７】
一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ダイサーを含有する活性ＲＩＳＣの一部である対応する成熟ｍｉＲＮＡに結合する。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位がＲＩＳＣ内の対応するｍｉＲＮＡに結合すると、ｍｉＲＮＡ結合部位を含有するｍＲＮＡが分解される、または、ｍＲＮＡが翻訳されることが防止される。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲＮＡに対する十分な相補性を有し、その結果、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチドを開裂させる。その他の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は不完全な相補性を有し、その結果、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチド内における不安定性を生じさせる。別の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は不完全な相補性を有し、その結果、ｍｉＲＮＡを含むＲＩＳＣ複合体が、ｍｉＲＮＡ結合部位を含むポリヌクレオチドの転写を抑制する。
【０２７８】
一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡからの１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２のミスマッチ（複数可）を有する。
【０２７９】
一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、対応するｍｉＲＮＡの少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１連続ヌクレオチドに対してそれぞれ相補的な、少なくとも約１０、少なくとも約１１、少なくとも約１２、少なくとも約１３、少なくとも約１４、少なくとも約１５、少なくとも約１６、少なくとも約１７、少なくとも約１８、少なくとも約１９、少なくとも約２０、または少なくとも約２１連続ヌクレオチドを有している。
【０２８０】
本開示のｍＲＮＡに１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位を導入することにより、問題のｍｉＲＮＡが利用可能である場合、ｍＲＮＡを分解または翻訳抑制用に標的化することができる。これにより、ｍＲＮＡの送達時におけるオフターゲット効果を抑制することができる。例えば、本開示のｍＲＮＡが組織または細胞への送達を意図したものではないがその最終到達地点が上記組織または細胞である場合、組織または細胞内に豊富に存在するｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡの１つまたは複数の結合部位がｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに導入された場合に、目的の遺伝子の発現を阻害し得る。
【０２８１】
逆の言い方をすれば、特定の組織内におけるタンパク質発現を増強させるために、通常は存在するｍｉＲＮＡ結合部位をｍＲＮＡ配列から除去してもよい。例えば、特定のｍｉＲＮＡ用の結合部位をｍＲＮＡから除去して、ｍｉＲＮＡを含有する組織または細胞内におけるタンパク質発現を向上させてもよい。
【０２８２】
一実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、特定の細胞、限定するわけではないが例えば、正常細胞及び／またはがん性細胞などに対する細胞傷害性または細胞保護的なｍＲＮＡ治療薬を調節するために、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ内に少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。別の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、特定の細胞、限定するわけではないが例えば、正常細胞及び／またはがん性細胞などに対する細胞傷害性または細胞保護的なｍＲＮＡ治療薬を調節するために、５’−ＵＴＲ及び／または３’−ＵＴＲ内に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。
【０２８３】
複数の組織内における発現の調節は、１つまたは複数のｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、１つまたは複数の異なるｍｉＲＮＡ結合部位の導入または除去により実施することができる。ｍｉＲＮＡ結合部位を除去するかまたは挿入するかの決定は、発達中の組織及び／または細胞内及び／または疾患部内におけるｍｉＲＮＡ発現パターン及び／またはそのプロファイリングに基づいて行うことができる。ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ結合部位、ならびにその発現パターン及び生物学における役割の同定については報告されている（例えば、Ｂｏｎａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ２０１０  １１：９４３−９４９；Ａｎａｎｄ  ａｎｄ  Ｃｈｅｒｅｓｈ  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ２０１１  １８：１７１−１７６；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ  ａｎｄ  Ｒａｏ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２０１２  ２６：４０４−４１３（２０１１  Ｄｅｃ  ２０．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３５６）；Ｂａｒｔｅｌ  Ｃｅｌｌ  ２００９  １３６：２１５−２３３；Ｌａｎｄｇｒａｆ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ，２００７  １２９：１４０１−１４１４；Ｇｅｎｔｎｅｒ  ａｎｄ  Ｎａｌｄｉｎｉ，Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ．２０１２  ８０：３９３−４０３、及びこれらの中の全ての参照文献（そのそれぞれの全体は参照により本明細書に組み込まれる））。
【０２８４】
ｍｉＲＮＡ及びｍｉＲＮＡ結合部位は、米国公開第２０１４／０２００２６１号、第２００５／０２６１２１８号、及び第２００５／００５９００５号（そのそれぞれの全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている非限定例を含む任意の周知の配列に対応していてもよい。
【０２８５】
ｍｉＲＮＡがｍＲＮＡを調節することによりタンパク質発現を調節することが知られている組織の例としては、肝臓（ｍｉＲ−１２２）、筋肉（ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ−１７−９２、ｍｉＲ−１２６）、骨髄細胞（ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２７）、脂肪組織（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ−１ｄ、ｍｉＲ−１４９）、腎臓（ｍｉＲ−１９２、ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−１２６）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０２８６】
とりわけ、ｍｉＲＮＡは、免疫細胞（造血細胞とも呼ばれる）、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞及びマクロファージ）、マクロファージ、単球、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒球、ナチュラルキラー細胞などにおいて他と異なるように発現していることが知られている。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡは、免疫原性、自己免疫、感染症に対する免疫応答、炎症に加えて、遺伝子療法及び組織／臓器移植後における望ましくない免疫応答に関与している。免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡはまた、造血細胞（免疫細胞）の発生、増殖、分化、及びアポトーシスにおける多くの局面を調節している。例えば、ｍｉＲ−１４２及びｍｉＲ−１４６は免疫細胞においてのみ発現しており、骨髄系樹状細胞においてとりわけ豊富に存在している。ポリヌクレオチドの３’−ＵＴＲにｍｉＲ−１４２結合部位を付加することにより、ポリヌクレオチドに対する免疫応答を遮断することができ、組織及び細胞におけるより安定した遺伝子導入が可能となるということが実証されている。ｍｉＲ−１４２は抗原提示細胞において外来ポリヌクレオチドを効率的に分解し、導入細胞の細胞傷害性除去を抑制する（例えば、Ａｎｎｏｎｉ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，ｂｌｏｏｄ，２００９，１１４，５１５２−５１６１；Ｂｒｏｗｎ  ＢＤ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  ｍｅｄ．２００６，１２（５），５８５−５９１；Ｂｒｏｗｎ  ＢＤ，ｅｔ  ａｌ．，ｂｌｏｏｄ，２００７，１１０（１３）：４１４４−４１５２（そのそれぞれの全体は参照により本明細書に組み込まれる））。
【０２８７】
抗原介在性免疫応答とは外来抗原が引き起こす免疫応答のことを意味し得、外来抗原は、生体に侵入すると、抗原提示細胞によって処理されて抗原提示細胞の表面上に提示される。Ｔ細胞は提示抗原を認識して、その抗原を発現する細胞の細胞傷害性除去を引き起こすことができる。
【０２８８】
本開示のｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲにｍｉＲ−１４２結合部位を導入することによって、ｍｉＲ−１４２介在性分解を介して、抗原提示細胞における遺伝子発現を選択的に抑制し、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）における抗原提示を制限することにより、ｍＲＮＡの送達後における抗原介在性免疫応答を予防することができる。そのため、ｍＲＮＡは、細胞傷害性除去を引き起こすことなく、標的組織または細胞において安定的に発現する。
【０２８９】
一実施形態では、免疫細胞、とりわけ、抗原提示細胞において発現することが知られているｍｉＲＮＡ用の結合部位を本開示のｍＲＮＡに導入し、ｍｉＲＮＡ介在性ＲＮＡ分解を介して、抗原提示細胞におけるポリヌクレオチドの発現を抑制し、抗原介在性免疫応答を抑制することができる。ｍＲＮＡの発現は、免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡが発現していない非免疫細胞において維持される。例えば、一部の実施形態では、肝臓特異的タンパク質に対する免疫原性反応を予防するために、任意のｍｉＲ−１２２結合部位を除去してもよく、ｍｉＲ−１４２（及び／またはｍｉＲ−１４６）結合部位を本開示のｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに導入してもよい。
【０２９０】
ＡＰＣ及びマクロファージにおける選択的な分解及び抑制を更に促進させるために、本開示のｍＲＮＡは、単独、または、ｍｉＲ−１４２結合部位及び／またはｍｉＲ−１４６結合部位との組み合わせのいずれかで、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ内に更なる負の調節エレメントを含んでいてもよい。非限定例として、更なる負の調節エレメントは構成的崩壊エレメント（Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ  Ｄｅｃａｙ  Ｅｌｅｍｅｎｔ）（ＣＤＥ）である。
【０２９１】
免疫細胞特異的ｍｉＲＮＡとしては、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−３ｐ、ｈｓａ−７ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｃ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｅ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｅ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｍｉＲ−１０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１１８４、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−１−−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−２−−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２７９、ｍｉＲ−１３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３２−３ｐ、ｍｉＲ−１３２−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１４７ａ、ｍｉＲ−１４７ｂ、ｍｉＲ−１４８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５０−３ｐ、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５１ｂ、ｍｉＲ−１５５−３ｐ、ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｍｉＲ−１５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１６−１−３ｐ、ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｍｉＲ−１６−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１８２−３ｐ、ｍｉＲ−１８２−５ｐ、ｍｉＲ−１９７−３ｐ、ｍｉＲ−１９７−５ｐ、ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−２２１−３ｐ、ｍｉＲ−２２１−５ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２４−１−５ｐ、ｍｉＲ−２４−２−５ｐ、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−１−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２８−３ｐ、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−２９０９、ｍｉＲ−２９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ−１−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ−２−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ−５ｐ、、ｍｉＲ−３０ｅ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３３１−５ｐ、ｍｉＲ−３３９−３ｐ、ｍｉＲ−３３９−５ｐ、ｍｉＲ−３４５−３ｐ、ｍｉＲ−３４５−５ｐ、ｍｉＲ−３４６、ｍｉＲ−３４ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、、ｍｉＲ−３６３−３ｐ、ｍｉＲ−３６３−５ｐ、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｍｉＲ−３７７−５ｐ、ｍｉＲ−４９３−３ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ、ｍｉＲ−５４２、ｍｉＲ−５４８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ５４８ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｉ、ｍｉＲ−５４８ｊ、ｍｉＲ−５４８ｎ、ｍｉＲ−５７４−３ｐ、ｍｉＲ−５９８、ｍｉＲ−７１８、ｍｉＲ−９３５、ｍｉＲ−９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ−３ｐ、及びｍｉＲ−９９ｂ−５ｐが挙げられるがこれらに限定されない。更に、マイクロアレイハイブリダイゼーション及びミクロトーム解析により、免疫細胞における新規のｍｉＲＮＡを同定してもよい（例えば、Ｊｉｍａ  ＤＤ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０１０，１１６：ｅ１１８−ｅ１２７；Ｖａｚ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２０１０，１１，２８８（それぞれの内容全体は参照により本明細書に組み込まれる））。
【０２９２】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡはｍｉＲＮＡ結合部位を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位は、７２〜７４及び８２〜８３（ｍｉＲＮＡ結合部位配列のうちのいずれか１種または複数種の１つまたは複数のコピーを含む）から選択される１種または複数種のヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、配列番号：７２〜７４及び８２〜８３（これらの任意の組み合わせを含む）から選択される少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の同一のまたは異なるｍｉＲＮＡ結合部位を更に含む。
【０２９３】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも２つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも３つのｍｉＲ−１２２結合部位、少なくとも４つのｍｉＲ−１２２結合部位、または少なくとも５つのｍｉＲ−１２２結合部位を含む。一態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲ−１２２に結合するまたはｍｉＲ−１２２に対して相補的である。別の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２−３ｐまたはｍｉＲ−１２２−５ｐに結合する。特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号：７４に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２に結合する。別の特定の態様では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、配列番号：８３に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％同一なヌクレオチド配列を含み、ｍｉＲＮＡ結合部位はｍｉＲ−１２２に結合する。
【０２９４】
一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ポリヌクレオチドの任意の位置（例えば、５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲ）において、本開示のｍＲＮＡに挿入されている。一部の実施形態では、５’ＵＴＲはｍｉＲＮＡ結合部位を含む。一部の実施形態では、３’ＵＴＲはｍｉＲＮＡ結合部位を含む。一部の実施形態では、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲはｍｉＲＮＡ結合部位を含む。ｍＲＮＡ内の挿入部位は、ｍＲＮＡ内へのｍｉＲＮＡ結合部位の挿入が対応するｍｉＲＮＡの不在下における機能性ポリペプチドの翻訳を妨げない限り、またｍｉＲＮＡの存在下において、ｍＲＮＡ内へのｍｉＲＮＡ結合部位の挿入及び対応するｍｉＲＮＡへのｍｉＲＮＡ結合部位の結合が、ｍＲＮＡの分解またはｍＲＮＡの翻訳の防止を可能とする限りにおいて、ｍＲＮＡ内の任意の場所であってもよい。
【０２９５】
一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、ＯＲＦを含む本開示のｍＲＮＡ内のＯＲＦの終止コドンから少なくとも約３０ヌクレオチド下流に挿入されている。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示のｍＲＮＡ内のＯＲＦの終止コドンから少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約１５ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約２５ヌクレオチド、少なくとも約３０ヌクレオチド、少なくとも約３５ヌクレオチド、少なくとも約４０ヌクレオチド、少なくとも約４５ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約５５ヌクレオチド、少なくとも約６０ヌクレオチド、少なくとも約６５ヌクレオチド、少なくとも約７０ヌクレオチド、少なくとも約７５ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、または少なくとも約１００ヌクレオチド下流に挿入されている。一部の実施形態では、ｍｉＲＮＡ結合部位は、本開示のｍＲＮＡ内のＯＲＦの終止コドンから約１０ヌクレオチド〜約１００ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド〜約９０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド〜約８０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド〜約７０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド〜約６０ヌクレオチド、約４５ヌクレオチド〜約６５ヌクレオチド下流に挿入されている。
【０２９６】
ｍｉＲＮＡ遺伝子調節は、ｍｉＲＮＡの周囲の配列、限定するわけではないが例えば、周囲の配列の種類、配列のタイプ（例えば、非相同、相同、外来、内在性、または人工）、周囲の配列内の調節エレメント及び／または周囲の配列内の構造エレメントなどに影響され得る。ｍｉＲＮＡは５’ＵＴＲ及び／または３’ＵＴＲに影響され得る。非限定例として、非ヒト３’ＵＴＲは、同一配列タイプのヒト３’ＵＴＲと比較して、目的のポリペプチドの発現時にｍｉＲＮＡ配列の調節作用を増強し得る。
【０２９７】
一実施形態では、５’ＵＴＲのその他の調節エレメント及び／または構造エレメントは、ｍｉＲＮＡ介在性遺伝子調節に影響を及ぼし得る。調節エレメント及び／または構造エレメントの１つの例は、タンパク質翻訳を開始するための翻訳伸長因子の結合に必要な、５’ＵＴＲ内の構造化ＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）である。５’−ＵＴＲ内のこの二次構造化エレメントに結合したＥＩＦ４Ａ２は、ｍｉＲＮＡ介在性遺伝子発現に必要である（Ｍｅｉｊｅｒ  ＨＡ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，３４０，８２−８５（その全体は参照により本明細書に組み込まれる））。本開示のｍＲＮＡは、マイクロＲＮＡ介在性遺伝子調節を増強するために、この構造化５’ＵＴＲを更に含んでいてもよい。
【０２９８】
少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示のｍＲＮＡの３’ＵＴＲに導入してもよい。この文脈では、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、またはそれ以上のｍｉＲＮＡ結合部位を本開示のｍＲＮＡの３’ＵＴＲに導入してもよい。例えば、１〜１０、１〜９、１〜８、１〜７、１〜６、１〜５、１〜４、１〜３、２、または１つのｍｉＲＮＡ結合部位を本開示のｍＲＮＡの３’ＵＴＲに導入してもよい。一実施形態では、本開示のｍＲＮＡに導入されたｍｉＲＮＡ結合部位は、同一のｍｉＲＮＡ部位であってもよく、または異なるｍｉＲＮＡ部位であってもよい。本開示のｍＲＮＡに導入された異なるｍｉＲＮＡ結合部位の組み合わせとしては、異なるｍｉＲＮＡ部位のいずれかの２つ以上のコピーが導入された組み合わせを挙げることができる。別の実施形態では、本開示のｍＲＮＡに導入されたｍｉＲＮＡ結合部位は、体内の同一のまたは異なる組織を標的とし得る。非限定例として、本開示のｍＲＮＡの３’−ＵＴＲへの組織特異的、細胞型特異的、または疾患特異的ｍｉＲＮＡ結合部位の導入により、特定の細胞型（例えば、肝細胞、骨髄細胞、内皮細胞、がん細胞など）における発現の度合いが低下し得る。
【０２９９】
一実施形態では、本開示のｍＲＮＡの３’ＵＴＲの５’末端近傍、３’ＵＴＲの５’末端と３’末端の間のほぼ中間、及び／または３’ＵＴＲの３’末端近傍に、ｍｉＲＮＡ結合部位を導入してもよい。非限定例として、３’ＵＴＲの５’末端近傍及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端のほぼ中間に、ｍｉＲＮＡ結合部位を導入してもよい。別の非限定例として、３’ＵＴＲの３’末端近傍及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端のほぼ中間に、ｍｉＲＮＡ結合部位を導入してもよい。更に別の非限定例として、３’ＵＴＲの５’末端近傍及び３’ＵＴＲの３’末端近傍に、ｍｉＲＮＡ結合部位を導入してもよい。
【０３００】
別の実施形態では、３’ＵＴＲは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０のｍｉＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。ｍｉＲＮＡ結合部位は、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡシード配列、及び／またはシード配列前後のｍｉＲＮＡ配列に対して相補的であってもよい。
【０３０１】
異なる組織、細胞型、または生物学的条件におけるｍｉＲＮＡの発現パターンに基づいて、特定の組織、細胞型、または生物学的条件により的を絞って発現させるために、本開示のｍＲＮＡを改変してもよい。組織特異的ｍｉＲＮＡ結合部位の導入により、組織もしくは細胞における、または生物学的条件に関するタンパク質発現を最適化するために、本開示のｍＲＮＡを設計してもよい。
【０３０２】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、目的の組織または細胞内におけるコードポリペプチドの発現を抑制するために、少なくとも１つのｍｉＲＮＡを含んでいてもよい。非限定例として、本開示のｍＲＮＡは、肝臓内における目的のコードポリペプチドの発現を抑制するために、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２結合部位を含んでいてもよい。別の非限定例として、本開示のｍＲＮＡは、少なくとも１つの、ｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−３ｐシード配列、シードを含まないｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−５ｐシード配列、シードを含まないｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４６結合部位、ｍｉＲ−１４６シード配列、及び／またはシード配列を含まないｍｉＲ−１４６結合部位を含んでいてもよい。
【０３０３】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、免疫細胞におけるｍＲＮＡ治療薬を選択的に分解して、治療薬送達により引き起こされる望ましくない免疫原性反応を抑制するために、３’ＵＴＲ内に少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含んでいてもよい。非限定例として、ｍｉＲＮＡ結合部位は、抗原提示細胞において、本開示のｍＲＮＡをより不安定にし得る。これらのｍｉＲＮＡの非限定例としては、ｍｉｒ−１４２−５ｐ、ｍｉｒ−１４２−３ｐ、ｍｉｒ−１４６ａ−５ｐ、及びｍｉｒ−１４６−３ｐが挙げられる。
【０３０４】
一実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、ＲＮＡ結合タンパク質と相互作用し得るｍＲＮＡの領域内に少なくとも１つのｍｉＲＮＡ配列を含む。
【０３０５】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡ（例えば、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）は、（ｉ）配列最適化ヌクレオチド配列（例えば、ＯＲＦ）及び（ｉｉ）ｍｉＲＮＡ結合部位（例えば、ｍｉＲ−１４２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位）を含む。
【０３０６】
一部の実施形態では、本開示のｍＲＮＡは、本明細書で開示するポリペプチドをコードするウラシル修飾配列及び、本明細書で開示するｍｉＲＮＡ結合部位、例えば、ｍｉＲ−１４２に結合するｍｉＲＮＡ結合部位を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドをコードするウラシル修飾配列は、少なくとも１つの化学修飾核酸塩基、例えば、５−メトキシウラシルを含む。一部の実施形態では、本開示のポリペプチドをコードするウラシル修飾配列内の核酸塩基のタイプ（例えば、ウラシル）のうちの少なくとも９５％は、修飾核酸塩基である。一部の実施形態では、ポリペプチドをコードするウラシル修飾配列内のウラシルのうちの少なくとも９５％は、５−メトキシウリジンである。一部の実施形態では、本明細書で開示するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列及びｍｉＲＮＡ結合部位を含むｍＲＮＡは、送達用物質、例えば、式（Ｉ）を有する化合物、例えば、化合物Ｘと配合されている。
【０３０７】
脂質ナノ粒子
本開示は、有利な特性を有する医薬組成物を提供する。本明細書に記載の脂質組成物を、治療薬及び／または予防薬、例えば、ｍＲＮＡを哺乳動物の細胞または器官に送達するための脂質ナノ粒子組成物に有利に使用してもよい。例えば、本明細書に記載の脂質は免疫原性をほとんど有していないまたは有していない。例えば、本明細書で開示する脂質化合物は、参照脂質（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）と比較してより低い免疫原性を有している。例えば、本明細書で開示する脂質及び治療薬または予防薬、例えば、ｍＲＮＡを含む製剤は、参照脂質（例えば、ＭＣ３、ＫＣ２、またはＤＬｉｎＤＭＡ）及び同一の治療薬または予防薬を含む対応する製剤と比較して、高い治療指数を有している。
【０３０８】
特定の実施形態では、本出願は、
（ａ）ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むｍＲＮＡ、及び、
（ｂ）送達用物質、
を含む医薬組成物を提供する。
【０３０９】
特定の実施形態では、本出願は、
（ｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖ）膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｖｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、ヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、または、
（ｖｉｉ）ヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
及び送達用物質、
を含む医薬組成物を提供する。
【０３１０】
一部の実施形態では、本出願は、
（ｉ）第１の送達用物質、及びヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）第２の送達用物質、及びヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉｉ）第３の送達用物質、及びヒトＩＬ−１５ＲαポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｖ）第４の送達用物質、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
を含む医薬組成物を提供する。
【０３１１】
一部の実施形態では、本出願は、
（ｉ）第１の送達用物質、及びヒトＯＸ４０ＬポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
（ｉｉ）第２の送達用物質、及びヒトＩＬ−１５Ｒαポリペプチドに機能的に連結したヒトＩＬ−１５ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、及び、
（ｉｉｉ）第３の送達用物質、及び膜貫通ドメインを含む膜ドメインに機能的に連結したヒトＩＬ−１２ポリペプチドをコードするｍＲＮＡ、
を含む医薬組成物を提供する。
【０３１２】
ＬＮＰの脂質成分
一部の実施形態では、ＬＮＰは、（ｉ）イオン性脂質、（ｉｉ）ステロールまたはその他の構造脂質、（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質またはリン脂質、（ｉｖ）ＰＥＧ脂質を含む。これらのカテゴリーの脂質については以下でより詳細に記載している。
【０３１３】
（ｉ）イオン性脂質
本開示の脂質ナノ粒子は１種または複数種のイオン性脂質を含む。特定の実施形態では、本開示のイオン性脂質は、中心アミン部分及び少なくとも１つの生分解性基を含む。本明細書に記載のイオン性脂質を、核酸分子を哺乳動物の細胞または器官へと送達するための本開示の脂質ナノ粒子に有利に使用してもよい。以下に記載するイオン性脂質の構造は、それらを本発明のその他の脂質と区別するための接頭辞Ｉを含む。
【０３１４】
本発明の第１の態様では、本明細書に記載の化合物は、式（Ｉ  Ｉ）の化合物、
2022501336.tif 000004
（Ｉ  Ｉ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、式中、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４及び５から独立して選択され、
それぞれのＲ５は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ６は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、式中、Ｍ’’は、結合、Ｃ１−１３アルキル、またはＣ２−１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、及びＣ２−３アルケニルからなる群から選択され、
それぞれのＲは、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのｑは、１、２、及び３から独立して選択され、
それぞれのＲ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’’は、Ｃ３−１５アルキル及びＣ３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
それぞれのＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、Ｒ４が−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、または−ＣＱ（Ｒ）２であるとき、（ｉ）ｎが１、２、３、４、または５の場合、Ｑは−Ｎ（Ｒ）２ではない、または、（ｉｉ）ｎが１または２の場合、Ｑは５、６、または７員環ヘテロシクロアルキルではない。
【０３１５】
別の態様では、本開示は、式（ＩＩＩ）の化合物、
2022501336.tif 000005
（Ｉ  ＩＩＩ）もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体に関し、
式中、
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成し、
Ｒ４は、水素、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、−ＣＱ（Ｒ）２、及び非置換Ｃ１−６アルキルからなる群から選択され、式中、Ｑは、炭素環、複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４及び５から独立して選択され、
Ｒｘは、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、−（ＣＨ２）ｖＯＨ、及び−（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２からなる群から選択され、
式中、ｖは、１、２、３、４、５、及び６から選択され、
それぞれのＲ５は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ６は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、式中、Ｍ’’は、結合、Ｃ１−１３アルキル、またはＣ２−１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ３−６炭素環及び複素環からなる群から選択され、
Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、及びＣ２−３アルケニルからなる群から選択され、
それぞれのＲは、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、（ＣＨ２）ｑＯＲ＊、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのｑは、１、２、及び３から独立して選択され、
それぞれのＲ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’’は、Ｃ３−１５アルキル及びＣ３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
それぞれのＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択される。
【０３１６】
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＡ）の化合物、
2022501336.tif 000006
（Ｉ  ＩＡ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１−３アルキル、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。例えば、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、または−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒまたは−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
【０３１７】
特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＢ）の化合物、
2022501336.tif 000007
（Ｉ  ＩＢ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、全ての可変因子は本明細書において定義したとおりである。例えば、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、ｍは、５、７、または９である。特定の実施形態では、式（Ｉ）の化合物のサブセットは、式（ＩＩ）の化合物、
2022501336.tif 000008
（Ｉ  ＩＩ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、Ｍ１は結合またはＭ’であり、Ｒ４は、水素、非置換Ｃ１−３アルキル、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、または−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中、ｎは、２、３、または４であり、Ｑは、ＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、ヘテロアリール、またはヘテロシクロアルキルであり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
【０３１８】
本開示の別の態様は、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物、
2022501336.tif 000009
（Ｉ  ＶＩ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体に関し、
式中、
Ｒ１は、Ｃ５−３０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成し、
それぞれのＲ５は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ６は、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、式中、Ｍ’’は、結合、Ｃ１−１３アルキル、またはＣ２−１３アルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１−３アルキル、Ｃ２−３アルケニル、及びＨからなる群から選択され、
それぞれのＲは、Ｈ、Ｃ１−３アルキル、及びＣ２−３アルケニルからなる群から独立して選択され、
ＲＮはＨまたはＣ１−３アルキルであり、
それぞれのＲ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’’は、Ｃ３−１５アルキル及びＣ３−１５アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
それぞれのＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、及びＩからなる群から独立して選択され、
Ｘａ及びＸｂはそれぞれ独立して、ＯまたはＳであり、
Ｒ１０は、Ｈ、ハロ、−ＯＨ、Ｒ、−Ｎ（Ｒ）２、−ＣＮ、−Ｎ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−Ｓ（Ｏ）ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、炭素環、複素環、アリール、及びヘテロアリールからなる群から選択され、
ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及び１３から選択され、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択され、
ｒは０または１であり、
ｔ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｐ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｑ１は、１、２、３、４、及び５から選択され、
ｓ１は、１、２、３、４、及び５から選択される。
【０３１９】
一実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩ−ａ）の化合物、
2022501336.tif 000010
（Ｉ  ＶＩ−ａ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、
Ｒ１ａ及びＲ１ｂは、Ｃ１−１４アルキル及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｃ１−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成する。
【０３２０】
別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩ）の化合物、
2022501336.tif 000011
（Ｉ  ＶＩＩ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は結合またはＭ’であり、
Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
【０３２１】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩＩ）の化合物、
2022501336.tif 000012
（Ｉ  ＶＩＩＩ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含み、
式中、
ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、
Ｍ１は結合またはＭ’であり、
Ｒａ’及びＲｂ’は、Ｃ１−１４アルキル及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、
Ｒ２及びＲ３は、Ｃ１−１４アルキル及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
【０３２２】
式（Ｉ  Ｉ）、（Ｉ  ＩＡ）、（Ｉ  ＶＩ）、（Ｉ  ＶＩ−ａ）、（Ｉ  ＶＩＩ）、または（Ｉ  ＶＩＩＩ）のうちのいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴のうちの１つまたは複数を含む。
【０３２３】
一部の実施形態では、Ｍ１はＭ’である。
【０３２４】
一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−である。
【０３２５】
一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−である。
【０３２６】
特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは−ＯＣ（Ｏ）−である。
【０３２７】
特定の実施形態では、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−である。特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
【０３２８】
特定の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
【０３２９】
一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’は独立して、−Ｓ−Ｓ−である。
【０３３０】
一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの少なくとも１つは−Ｓ−Ｓ−である。
【０３３１】
一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの１つは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、もう一方は−Ｓ−Ｓ−である。例えば、Ｍが−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’が−Ｓ−Ｓ−である、または、Ｍ’が−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍが−Ｓ−Ｓ−である。
【０３３２】
一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’のうちの１つは−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、式中、Ｍ’’は、結合、Ｃ１−１３アルキル、またはＣ２−１３アルケニルである。その他の実施形態では、Ｍ’’はＣ１−６アルキルまたはＣ２−６アルケニルである。特定の実施形態では、Ｍ’’はＣ１−４アルキルまたはＣ２−４アルケニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ４アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ２アルケニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ３アルケニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ４アルケニルである。
【０３３３】
一部の実施形態では、ｌは、１、３、または５である。
【０３３４】
一部の実施形態では、Ｒ４は水素である。
【０３３５】
一部の実施形態では、Ｒ４は水素ではない。
【０３３６】
一部の実施形態では、Ｒ４は非置換メチルまたは−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中、ＱはＯＨ、−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、または−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
【０３３７】
一部の実施形態では、ＱはＯＨである。
【０３３８】
一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２である。
【０３３９】
一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
【０３４０】
一部の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒである。
【０３４１】
一部の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒである。
【０３４２】
一部の実施形態では、Ｑは−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２である。
【０３４３】
一部の実施形態では、Ｑは−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲである。
【０３４４】
一部の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｒ８である。
【０３４５】
一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
【０３４６】
一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
【０３４７】
一部の実施形態では、Ｑは−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２である。
【０３４８】
一部の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
【０３４９】
一部の実施形態では、ｎは２である。
【０３５０】
一部の実施形態では、ｎは３である。
【０３５１】
一部の実施形態では、ｎは４である。
【０３５２】
一部の実施形態では、Ｍ１は不在である。
【０３５３】
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ５はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５はヒドロキシルである。
【０３５４】
一部の実施形態では、少なくとも１つのＲ６はヒドロキシルである。例えば、１つのＲ６はヒドロキシルである。
【０３５５】
一部の実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの１つはヒドロキシルである。例えば、１つのＲ５はヒドロキシルであり、それぞれのＲ６は水素である。例えば、１つのＲ６はヒドロキシルであり、それぞれのＲ５は水素である。
【０３５６】
一部の実施形態では、ＲｘはＣ１−６アルキルである。一部の実施形態では、ＲｘはＣ１−３アルキルである。例えば、Ｒｘはメチルである。例えば、Ｒｘはエチルである。例えば、Ｒｘはプロピルである。
【０３５７】
一部の実施形態では、Ｒｘは−（ＣＨ２）ｖＯＨであり、ｖは、１、２、または３である。例えば、Ｒｘはメタノイルである。例えば、Ｒｘはエタノイルである。例えば、Ｒｘはプロパノイルである。
【０３５８】
一部の実施形態では、Ｒｘは−（ＣＨ２）ｖＮ（Ｒ）２であり、ｖは、１、２、または３であり、それぞれのＲはＨまたはメチルである。例えば、Ｒｘは、メタンアミノ、メチルメタンアミノ、またはジメチルメタンアミノである。例えば、Ｒｘは、アミノメタニル、メチルアミノメタニル、またはジメチルアミノメタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノエタニル、メチルアミノエタニル、またはジメチルアミノエタニルである。例えば、Ｒｘは、アミノプロパニル、メチルアミノプロパニル、またはジメチルアミノプロパニルである。
【０３５９】
一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１−１８アルキル、Ｃ２−１８アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、または−ＹＲ’’である。
【０３６０】
一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｃ３−１４アルキルまたはＣ３−１４アルケニルである。
【０３６１】
一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ２−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ３−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１−８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１−５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１−３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１ｂは、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ４アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＣ５アルキルである。
【０３６２】
一部の実施形態では、Ｒ１は−（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ−Ｍ−ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
【０３６３】
一部の実施形態では、−ＣＨＲ１ａＲ１ｂ−は−（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ−Ｍ−ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
【０３６４】
一部の実施形態では、Ｒ７はＨである。一部の実施形態では、Ｒ７はＣ１−３アルキルから選択される。例えば、一部の実施形態では、Ｒ７はＣ１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ７はＣ２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ７はＣ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ７は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。
【０３６５】
一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ１−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ２−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ３−１４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ１−８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ１−５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ１−３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒｂ’は、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、及びＣ５アルキルから選択される。例えば、一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒｂ’はＣ４アルキルである。
【０３６６】
一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩａ）の化合物、
2022501336.tif 000013
（Ｉ  ＩＩａ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載のとおりである。
【０３６７】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｂ）の化合物、
2022501336.tif 000014
（Ｉ  ＩＩｂ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載のとおりである。
【０３６８】
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｃ）または式（ＩＩｅ）の化合物、
2022501336.tif 000015
（Ｉ  ＩＩｃ）または
2022501336.tif 000016
（Ｉ  ＩＩｅ）
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、Ｒ４は、本明細書に記載のとおりである。
【０３６９】
別の実施形態では、式（Ｉ  Ｉ）の化合物は、式（Ｉ  ＩＩｆ）の化合物、
2022501336.tif 000017
（Ｉ  ＩＩｆ）もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’’はＣ１−６アルキルまたはＣ２−６アルケニルであり、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から独立して選択され、ｎは、２、３、及び４から選択される。
【０３７０】
更なる実施形態では、式（Ｉ  Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｄ）の化合物、
2022501336.tif 000018
（Ｉ  ＩＩｄ）、
もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｎは、２、３、または４であり、ｍ、Ｒ’、Ｒ’’、及びＲ２〜Ｒ６は、本明細書に記載のとおりである。例えば、Ｒ２及びＲ３のそれぞれは、Ｃ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から独立して選択されてもよい。
【０３７１】
更なる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＩｇ）の化合物、
2022501336.tif 000019
（Ｉ  ＩＩｇ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｌは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｍは、５、６、７、８、及び９から選択され、Ｍ１は結合またはＭ’であり、Ｍ及びＭ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、アリール基、及びヘテロアリール基から独立して選択され、Ｒ２及びＲ３は、Ｈ、Ｃ１−１４アルキル、及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。例えば、Ｍ’’は、Ｃ１−６アルキル（例えば、Ｃ１−４アルキル）またはＣ２−６アルケニル（例えば、Ｃ２−４アルケニル）である。例えば、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ５−１４アルキル及びＣ５−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。
【０３７２】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩａ）の化合物、
2022501336.tif 000020
（Ｉ  ＶＩＩａ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。
【０３７３】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩＩａ）の化合物、
2022501336.tif 000021
（Ｉ  ＶＩＩＩａ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。
【０３７４】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩＩｂ）の化合物、
2022501336.tif 000022
（Ｉ  ＶＩＩＩｂ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。
【０３７５】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩｂ−１）の化合物、
2022501336.tif 000023
（Ｉ  ＶＩＩｂ−１）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。
【０３７６】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩｂ−２）の化合物、
2022501336.tif 000024
（Ｉ  ＶＩＩｂ−２）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。
【０３７７】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩｂ−３）の化合物、
2022501336.tif 000025
（Ｉ  ＶＩＩｂ−３）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩｃ）の化合物、
2022501336.tif 000026
（Ｉ  ＶＩＩｃ）
を含む。
【０３７８】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（ＶＩＩｄ）の化合物、
2022501336.tif 000027
（Ｉ  ＶＩＩｄ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。
【０３７９】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩＩｃ）の化合物、
2022501336.tif 000028
（Ｉ  ＶＩＩＩｃ）
を含む。
【０３８０】
別の実施形態では、式（Ｉ  ＶＩ）の化合物のサブセットは、式（Ｉ  ＶＩＩＩｄ）の化合物、
2022501336.tif 000029
（Ｉ  ＶＩＩＩｄ）、もしくはそのＮ−酸化物、またはその塩もしくは異性体を含む。
【０３８１】
式（Ｉ  Ｉ）、（Ｉ  ＩＡ）、（Ｉ  ＩＢ）、（Ｉ  ＩＩ）、（Ｉ  ＩＩａ）、（Ｉ  ＩＩｂ）、（Ｉ  ＩＩｃ）、（Ｉ  ＩＩｄ）、（Ｉ  ＩＩｅ）、（Ｉ  ＩＩｆ）、（Ｉ  ＩＩｇ）、Ｉ  （ＩＩＩ）、（Ｉ  ＶＩ）、（Ｉ  ＶＩ−ａ）、（Ｉ  ＶＩＩ）、（Ｉ  ＶＩＩＩ）、（Ｉ  ＶＩＩａ）、（Ｉ  ＶＩＩＩａ）、（Ｉ  ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−１）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−２）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−３）、（Ｉ  ＶＩＩｃ）、（Ｉ  ＶＩＩｄ）、（Ｉ  ＶＩＩＩｃ）、または（Ｉ  ＶＩＩＩｄ）のうちのいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴のうちの１つまたは複数を含む。
【０３８２】
一部の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、式中、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環の芳香族または非芳香族複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、及び−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。
【０３８３】
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、式中、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環ヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、及び、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、及びＣ１−３アルキルから選択される１つまたは複数の置換基で置換された、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環ヘテロシクロアルキルから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。
【０３８４】
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、式中、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環複素環、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択され、Ｑが５〜１４員環複素環、また（ｉ）Ｒ４が、ｎは１または２である−（ＣＨ２）ｎＱ、（ｉｉ）Ｒ４が、ｎは１である−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、または（ｉｉｉ）Ｒ４が−ＣＨＱＲ及び−ＣＱ（Ｒ）２であるとき、Ｑは、５〜１４員環ヘテロアリールまたは８〜１４員環ヘテロシクロアルキルのいずれかである。
【０３８５】
別の実施形態では、Ｒ４は、Ｃ３−６炭素環、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、式中、Ｑは、Ｃ３−６炭素環、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環ヘテロアリール、−ＯＲ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＸ２Ｈ、−ＣＸＨ２、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲから選択され、それぞれのｏは、１、２、３、及び４から独立して選択され、それぞれのｎは、１、２、３、４、及び５から独立して選択される。
【０３８６】
別の実施形態では、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。更なる実施形態では、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｎＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８であり、式中、Ｒ８は、Ｃ３−６炭素環、例えば、Ｃ３−６シクロアルキルなどであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。例えば、Ｒ４は−（ＣＨ２）３ＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ８であり、Ｒ８はシクロプロピルである。
【０３８７】
別の実施形態では、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択され、ｏは、１、２、３、及び４から選択される。更なる実施形態では、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、ＲはＣ１−Ｃ３アルキルであり、ｎは、１、２、３、４及び５から選択され、ｏは、１、２、３、及び４から選択される。別の実施形態では、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｏＣ（Ｒ１０）２（ＣＨ２）ｎ−ｏＱであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、ＲはＣ１−Ｃ３アルキルであり、ｎは３であり、ｏは１である。一部の実施形態では、Ｒ１０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−３アルキル、またはＣ２−３アルケニルである。例えば、Ｒ４は３−アセトアミド−２，２−ジメチルプロピルである。
【０３８８】
一部の実施形態では、１つのＲ１０はＨであり、１つのＲ１０はＣ１−３アルキルまたはＣ２−３アルケニルである。別の実施形態では、それぞれのＲ１０はＣ１−３アルキルまたはＣ２−３アルケニルである。別の実施形態では、それぞれのＲ１０はＣ１−３アルキル（例えば、メチル、エチル、またはプロピル）である。例えば、１つのＲ１０はメチルであり、１つのＲ１０はエチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ１０はエチルであり、１つのＲ１０はメチルまたはプロピルである。例えば、１つのＲ１０はプロピルであり、１つのＲ１０はメチルまたはエチルである。例えば、それぞれのＲ１０はメチルである。例えば、それぞれのＲ１０はエチルである。例えば、それぞれのＲ１０はプロピルである。
【０３８９】
一部の実施形態では、１つのＲ１０はＨであり、１つのＲ１０はＯＨである。別の実施形態では、それぞれのＲ１０はＯＨである。
【０３９０】
別の実施形態では、Ｒ４は、非置換Ｃ１−４アルキル、例えば、非置換メチルである。
【０３９１】
別の実施形態では、Ｒ４は水素である。
【０３９２】
特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｎＱまたは−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、３、４、及び５から選択される。
【０３９３】
特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ４は、−（ＣＨ２）ｎＱ、−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、−ＣＨＱＲ、及び−ＣＱ（Ｒ）２からなる群から選択され、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、１、２、３、４、及び５から選択される。
【０３９４】
特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）を有する化合物を提供し、式中、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成し、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｎＱまたは−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲであり、式中、Ｑは−Ｎ（Ｒ）２であり、ｎは、３、４、及び５から選択される。
【０３９５】
特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２−１４アルキル、Ｃ２−１４アルケニル、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される、または、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に複素環または炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、Ｃ２−１４アルキル及びＣ２−１４アルケニルからなる群から独立して選択される。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択される。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、複素環または炭素環を形成する。
【０３９６】
一部の実施形態では、Ｒ１は、Ｃ５−２０アルキル及びＣ５−２０アルケニルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシルで置換されたＣ５−２０アルキルである。
【０３９７】
その他の実施形態では、Ｒ１は、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’からなる群から選択される。
【０３９８】
特定の実施形態では、Ｒ１は、−Ｒ＊ＹＲ’’及び−ＹＲ’’から選択される。一部の実施形態では、Ｙはシクロプロピル基である。一部の実施形態では、Ｒ＊はＣ８アルキルまたはＣ８アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ’’はＣ３−１２アルキルである。例えば、Ｒ’’はＣ３アルキルであってもよい。例えば、Ｒ’’はＣ４−８アルキル（例えば、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、またはＣ８アルキル）であってもよい。
【０３９９】
一部の実施形態では、Ｒは（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、アミノ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、及びＣ１−Ｃ６ジアルキルアミノからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されたＣ１−１２アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノで置換されたＣ１−１２アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、Ｃ１−Ｃ６ジアルキルアミノで置換されたＣ１−３アルキルである。例えば、Ｒは（ＣＨ２）ｑＯＲ＊であり、ｑは、１、２、及び３から選択され、Ｒ＊は、ジメチルアミノで置換されたＣ１−３アルキル（例えば、ジメチルアミノエタニル）である。
【０４００】
一部の実施形態では、Ｒ１はＣ５−２０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１はＣ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１はＣ８アルキルである。その他の実施形態では、Ｒ１はＣ９アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１はＣ１４アルキルである。その他の実施形態では、Ｒ１はＣ１８アルキルである。
【０４０１】
一部の実施形態では、Ｒ１はＣ２１−３０アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１はＣ２６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１はＣ２８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１は
2022501336.tif 000030
である。
【０４０２】
一部の実施形態では、Ｒ１はＣ５−２０アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ１はＣ１８アルケニルである。一部の実施形態では、Ｒ１はリノレイルである。
【０４０３】
特定の実施形態では、Ｒ１は分枝鎖（例えば、デカン−２−イル、ウンデカン−３−イル、ドデカン−４−イル、トリデカン−５−イル、テトラデカン−６−イル、２−メチルウンデカン−３−イル、２−メチルデカン−２−イル、３−メチルウンデカン−３−イル、４−メチルドデカン−４−イル、またはヘプタデカ−９−イル）である。特定の実施形態では、Ｒ１は
2022501336.tif 000031
である。
【０４０４】
特定の実施形態では、Ｒ１は非置換Ｃ５−２０アルキルまたはＣ５−２０アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ’は置換Ｃ５−２０アルキルまたはＣ５−２０アルケニル（例えば、１−シクロプロピルノニルなどのＣ３−６炭素環で置換された、または、ＯＨまたはアルコキシで置換された）である。例えば、Ｒ１は
2022501336.tif 000032
である。
【０４０５】
その他の実施形態では、Ｒ１は−Ｒ’’Ｍ’Ｒ’である。特定の実施形態では、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。例えば、Ｒ１は
2022501336.tif 000033
であり、式中、ｘ１は、１〜１３の整数（例えば、３、４、５、及び６から選択される）であり、ｘ２は、１〜１３の整数（例えば、１、２、及び３から選択される）であり、ｘ３は、２〜１４の整数（例えば、４、５、及び６から選択される）である。例えば、ｘ１は、３、４、５、及び６から選択され、ｘ２は、１、２、及び３から選択され、ｘ３は、４、５、及び６から選択される。
【０４０６】
その他の実施形態では、Ｒ１は−（ＣＨＲ５Ｒ６）ｍ−Ｍ−ＣＲ２Ｒ３Ｒ７とは異なる。
【０４０７】
一部の実施形態では、Ｒ’は−Ｒ＊ＹＲ’’及び−ＹＲ’’から選択される。一部の実施形態では、ＹはＣ３−８シクロアルキルである。一部の実施形態では、ＹはＣ６−１０アリールである。一部の実施形態では、Ｙはシクロプロピル基である。一部の実施形態では、Ｙはシクロヘキシル基である。特定の実施形態では、Ｒ＊はＣ１アルキルである。
【０４０８】
一部の実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ３−１２アルキル及びＣ３−１２アルケニルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ’’はＣ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｙに隣接したＲ’’はＣ１アルキルである。一部の実施形態では、Ｙに隣接したＲ’’はＣ４−９アルキル（例えば、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、もしくはＣ８、またはＣ９アルキル）である。
【０４０９】
一部の実施形態では、Ｒ’’は置換Ｃ３−１２（例えば、例えば、ヒドロキシルで置換されたＣ３−１２アルキル）である。例えば、Ｒ’’は
2022501336.tif 000034
である。
【０４１０】
一部の実施形態では、Ｒ’はＣ４アルキル及びＣ４アルケニルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ’はＣ５アルキル及びＣ５アルケニルから選択される。一部の実施形態では、Ｒ’はＣ６アルキル及びＣ６アルケニルから選択される。一部の実施形態では、Ｒ’はＣ７アルキル及びＣ７アルケニルから選択される。一部の実施形態では、Ｒ’はＣ９アルキル及びＣ９アルケニルから選択される。
【０４１１】
一部の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ４アルキル、Ｃ４アルケニル、Ｃ５アルキル、Ｃ５アルケニル、Ｃ６アルキル、Ｃ６アルケニル、Ｃ７アルキル、Ｃ７アルケニル、Ｃ９アルキル、Ｃ９アルケニル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１１アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択され、そのそれぞれは直鎖または分枝鎖のいずれかである。
【０４１２】
一部の実施形態では、Ｒ’は直鎖である。一部の実施形態では、Ｒ’は分枝鎖である。
【０４１３】
一部の実施形態では、Ｒ’は
2022501336.tif 000035
または
2022501336.tif 000036
である。一部の実施形態では、Ｒ’は
2022501336.tif 000037
または
2022501336.tif 000038
であり、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−である。その他の実施形態では、Ｒ’は
2022501336.tif 000039
または
2022501336.tif 000040
であり、Ｍ’は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
【０４１４】
その他の実施形態では、Ｒ’はＣ１１アルキル及びＣ１１アルケニルから選択される。その他の実施形態では、Ｒ’は、Ｃ１２アルキル、Ｃ１２アルケニル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１３アルケニル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１４アルケニル、Ｃ１５アルキル、Ｃ１５アルケニル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１６アルケニル、Ｃ１７アルキル、Ｃ１７アルケニル、Ｃ１８アルキル、及びＣ１８アルケニルから選択される。特定の実施形態では、Ｒ’は直鎖Ｃ４−１８アルキルまたはＣ４−１８アルケニルである。特定の実施形態では、Ｒ’は分枝鎖（例えば、デカン−２−イル、ウンデカン−３−イル、ドデカン−４−イル、トリデカン−５−イル、テトラデカン−６−イル、２−メチルウンデカン−３−イル、２−メチルデカン−２−イル、３−メチルウンデカン−３−イル、４−メチルドデカン−４−イル、またはヘプタデカ−９−イル）である。特定の実施形態では、Ｒ’は
2022501336.tif 000041
である。
【０４１５】
特定の実施形態では、Ｒ’は非置換Ｃ１−１８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ’は置換Ｃ１−１８アルキル（例えば、例えば、メトキシなどのアルコキシもしくは１−シクロプロピルノニルなどのＣ３−６炭素環、またはＣ（Ｏ）ＯＣＨ３もしくはＯＣ（Ｏ）ＣＨ３などのＣ（Ｏ）Ｏ−アルキルもしくはＯＣ（Ｏ）−アルキルで置換された、Ｃ１−１５アルキル）である。例えば、Ｒ’は、
2022501336.tif 000042
、
2022501336.tif 000043
、
2022501336.tif 000044
、
2022501336.tif 000045
、
2022501336.tif 000046
、または
2022501336.tif 000047
である。
【０４１６】
特定の実施形態では、Ｒ’は分枝鎖Ｃ１−１８アルキルである。例えば、Ｒ’は、
2022501336.tif 000048
、
2022501336.tif 000049
、または
2022501336.tif 000050
である。
【０４１７】
一部の実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ３−１５アルキル及びＣ３−１５アルケニルからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ６アルキル、Ｃ７アルキル、またはＣ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ９アルキル、Ｃ１０アルキル、Ｃ１１アルキル、Ｃ１２アルキル、Ｃ１３アルキル、Ｃ１４アルキル、またはＣ１５アルキルである。
【０４１８】
一部の実施形態では、Ｍ’は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
【０４１９】
一部の実施形態では、Ｍ’は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、または−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、式中、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ’’はＣ１−４アルキルまたはＣ２−４アルケニルである。
【０４２０】
その他の実施形態では、Ｍ’はアリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍ’は、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択されてもよい。
【０４２１】
一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−である。一部の実施形態では、Ｍは−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−Ｍ’’−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
【０４２２】
一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）である。一部の実施形態では、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｍ’は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。一部の実施形態では、Ｍは−Ｃ（Ｏ）Ｏ−であり、Ｍ’は−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ−ＯＣ（Ｏ）−である。一部の実施形態では、Ｍ及びＭ’はそれぞれ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
【０４２３】
その他の実施形態では、Ｍはアリール基またはヘテロアリール基である。例えば、Ｍは、フェニル、オキサゾール、及びチアゾールからなる群から選択されてもよい。
【０４２４】
一部の実施形態では、ＭはＭ’と同一である。その他の実施形態では、ＭはＭ’とは異なる。
【０４２５】
一部の実施形態では、Ｍ’’は結合である。一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ１−１３アルキルまたはＣ２−１３アルケニルである。一部の実施形態では、Ｍ’’はＣ１−６アルキルまたはＣ２−６アルケニルである。特定の実施形態では、Ｍ’’は直鎖アルキルまたはアルケニルである。特定の実施形態では、Ｍ’’は、分枝鎖、例えば、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−である。
【０４２６】
一部の実施形態では、それぞれのＲ５はＨである。一部の実施形態では、それぞれのＲ６はＨである。特定のこのような実施形態では、それぞれのＲ５及びそれぞれのＲ６はＨである。
【０４２７】
一部の実施形態では、Ｒ７はＨである。その他の実施形態では、Ｒ７はＣ１−３アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、またはｉ−プロピル）である。
【０４２８】
一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は独立して、Ｃ５−１４アルキルまたはＣ５−１４アルケニルである。
【０４２９】
一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は同一である。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３はＣ８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３はＣ２アルキルである。その他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３はＣ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３はＣ４アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３はＣ５アルキルである。その他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３はＣ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３はＣ７アルキルである。
【０４３０】
その他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は異なる。特定の実施形態では、Ｒ２はＣ８アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ１−７（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、またはＣ７アルキル）またはＣ９アルキルである。
【０４３１】
一部の実施形態では、Ｒ３はＣ１アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ２アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ３アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ５アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ７アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ３はＣ９アルキルである。
【０４３２】
一部の実施形態では、Ｒ７及びＲ３はＨである。
【０４３３】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨである。
【０４３４】
一部の実施形態では、ｍは、５、６、７、８、または９である。一部の実施形態では、ｍは、５、７、または９である。例えば、一部の実施形態では、ｍは５である。例えば、一部の実施形態では、ｍは７である。例えば、一部の実施形態では、ｍは９である。
【０４３５】
一部の実施形態では、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。
【０４３６】
一部の実施形態では、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、炭素環、及び複素環からなる群から選択される。
【０４３７】
特定の実施形態では、Ｑは、−Ｎ（Ｒ）Ｒ８、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＲ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、または−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲである。
【０４３８】
特定の実施形態では、Ｑは、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、または−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
【０４３９】
特定の実施形態では、Ｑは、チオ尿素またはその等価体、例えば、
2022501336.tif 000051
または−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。
【０４４０】
特定の実施形態では、Ｑは−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である。例えば、Ｑが−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２である場合、ｎは４または５である。例えば、Ｒ９は−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２である。
【０４４１】
特定の実施形態では、Ｑは、−Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒまたは−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）ＯＲ、例えば、−ＣＨ（＝Ｎ−ＯＣＨ３）、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）−ＯＨ、または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）−ＯＣＨ３である。
【０４４２】
特定の実施形態では、Ｑは−ＯＨである。
【０４４３】
特定の実施形態では、Ｑは、置換または非置換の５〜１０員環ヘテロアリールであり、例えば、Ｑは、トリアゾール、イミダゾール、ピリミジン、プリン、２−アミノ−１，９−ジヒドロ−６Ｈ−プリン−６−オン−９−イル（またはグアニン−９−イル）、アデニン−９−イル、シトシン−１−イル、またはウラシル−１−イルであり、そのそれぞれは、アルキル、ＯＨ、アルコキシ、−アルキル−ＯＨ、−アルキル−Ｏ−アルキルから選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されており、置換基は更に置換されていてもよい。特定の実施形態では、Ｑは、例えば、オキソ（＝Ｏ）、ＯＨ、アミノ、モノまたはジアルキルアミノ、及びＣ１−３アルキルから選択される１つまたは複数の置換基で置換された置換５〜１４員環ヘテロシクロアルキルである。例えば、Ｑは、４−メチルピペラジニル、４−（４−メトキシベンジル）ピペラジニル、イソインドリン−２−イル−１，３−ジオン、ピロリジン−１−イル−２，５−ジオン、またはイミダゾリジン−３−イル−２，４−ジオンである。
【０４４４】
特定の実施形態では、Ｑは−ＮＨＲ８であり、式中、Ｒ８は、オキソ（＝Ｏ）、アミノ（ＮＨ２）、モノまたはジアルキルアミノ、Ｃ１−３アルキル、及びハロから選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ３−６シクロアルキルである。例えば、Ｒ８は、シクロブテニル、例えば、３−（ジメチルアミノ）−シクロブタ−３−エン−４−イル−１，２−ジオンである。更なる実施形態では、Ｒ８は、オキソ（＝Ｏ）、チオ（＝Ｓ）、アミノ（ＮＨ２）、モノまたはジアルキルアミノ、Ｃ１−３アルキル、ヘテロシクロアルキル、及びハロから選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ３−６シクロアルキルであり、モノまたはジアルキルアミノ、Ｃ１−３アルキル、及びヘテロシクロアルキルは更に置換されている。例えば、Ｒ８は、オキソ、アミノ、及びアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルであり、アルキルアミノは、例えば、Ｃ１−３アルコキシ、アミノ、モノまたはジアルキルアミノ、及びハロのうちの１つまたは複数で更に置換されている。例えば、Ｒ８は３−（（（ジメチルアミノ）エチル）アミノ）シクロブタ−３−エニル−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は３−（エチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、チオ、及びアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は３−（エチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンまたは２−（エチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンである。例えば、Ｒ８は、チオ及びアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は３−（エチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジチオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びジアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は３−（ジエチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ、チオ、及びジアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は２−（ジエチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンまたは３−（ジエチルアミノ）−４−チオキソシクロブタ−２−エン−１−オンである。例えば、Ｒ８は、チオ及びジアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は３−（ジエチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジチオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びアルキルアミノまたはジアルキルアミノのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルであり、アルキルアミノまたはジアルキルアミノは、例えば、１つまたは複数のアルコキシで更に置換されている。例えば、Ｒ８は３−（ビス（２−メトキシエチル）アミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオンである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、オキソ及び、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニルのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルである。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルであり、ヘテロシクロアルキルは、例えば、１つまたは複数のＣ１−３アルキルで更に置換されている。例えば、Ｒ８は、オキソ及びヘテロシクロアルキルのうちの１つまたは複数で置換されたシクロブテニルであり、ヘテロシクロアルキル（例えば、ピペリジニル、ピペラジニル、またはモルホリニル）はメチルで更に置換されている。
【０４４５】
特定の実施形態では、Ｑは−ＮＨＲ８であり、式中、Ｒ８は、アミノ（ＮＨ２）、モノまたはジアルキルアミノ、Ｃ１−３アルキル、及びハロから選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたヘテロアリールである。例えば、Ｒ８はチアゾールまたはイミダゾールである。
【０４４６】
特定の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、式中、Ｒ９は、ＣＮ、Ｃ１−６アルキル、ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）ＮＨ２である。一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、式中、Ｒ９はＣＮであり、Ｒは、モノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ１−３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。一部の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、式中、Ｒ９は、Ｃ１−６アルキル、ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨであり、Ｒは、モノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ１−３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。
【０４４７】
特定の実施形態では、Ｑは−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２であり、式中、Ｒ９は、ＮＯ２、ＣＮ、Ｃ１−６アルキル、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ）２、−ＯＲ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ、またはＨである。例えば、Ｑは、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（ＣＨ３）２、−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）ＮＨＣＨ３、または−ＮＨＣ（＝ＣＨＲ９）ＮＨ２である。
【０４４８】
特定の実施形態では、Ｑは、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ、例えば、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、−Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｎ（ＯＨ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＯＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｎ（ＯＣＨ３）Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｎ（ＯＨ）Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＣＨ３などである。
【０４４９】
特定の実施形態では、Ｑは−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒであり、式中、Ｒは、Ｃ１−３アルコキシルまたはＳ（Ｏ）ｚＣ１−３アルキルで任意選択的に置換されたアルキルであり、式中、ｚは、０、１、または２である。
【０４５０】
特定の実施形態では、Ｑは、非置換または置換のＣ６−１０アリール（例えば、フェニルなど）またはＣ３−６シクロアルキルである。
【０４５１】
一部の実施形態では、ｎは１である。その他の実施形態では、ｎは２である。更なる実施形態では、ｎは３である。特定のその他の実施形態では、ｎは４である。例えば、Ｒ４は−（ＣＨ２）２ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４は−（ＣＨ２）３ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４は−（ＣＨ２）４ＯＨであってもよい。例えば、Ｒ４はベンジルであってもよい。例えば、Ｒ４は４−メトキシベンジルであってもよい。
【０４５２】
一部の実施形態では、Ｒ４はＣ３−６炭素環である。一部の実施形態では、Ｒ４はＣ３−６シクロアルキルである。例えば、Ｒ４は、例えば、ＯＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキルなどで任意選択的に置換されたシクロヘキシルであってもよい。例えば、Ｒ４は２−ヒドロキシシクロヘキシルであってもよい。
【０４５３】
一部の実施形態では、ＲはＨである。
【０４５４】
一部の実施形態では、Ｒは、モノまたはジアルキルアミノで置換されたＣ１−３アルキルであり、例えば、Ｒは（（ジメチルアミノ）エチル）アミノである。
【０４５５】
一部の実施形態では、Ｒは、Ｃ１−３アルコキシル、アミノ、及びＣ１−Ｃ３ジアルキルアミノからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で置換されたＣ１−６アルキルである。
【０４５６】
一部の実施形態では、Ｒは非置換Ｃ１−３アルキルまたは非置換Ｃ２−３アルケニルである。例えば、Ｒ４は、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨ、または−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＣＨ３であってもよい。
【０４５７】
一部の実施形態では、Ｒは、置換Ｃ１−３アルキル、例えば、ＣＨ２ＯＨである。例えば、Ｒ４は、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２ＯＢｎ、−（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、ＣＨ２ＳＣＨ３、ＣＨ２Ｓ（Ｏ）ＣＨ３、ＣＨ２Ｓ（Ｏ）２ＣＨ３、または−ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）２であってもよい。
【０４５８】
一部の実施形態では、Ｒ４は、以下の基、
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2022501336.tif 000109
2022501336.tif 000110
のいずれかから選択される。
【０４５９】
一部の実施形態では、
2022501336.tif 000111
は、以下の基、
2022501336.tif 000112
2022501336.tif 000113
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2022501336.tif 000229
2022501336.tif 000230
のいずれかから選択される。
【０４６０】
一部の実施形態では、Ｒ４は、以下の基、
2022501336.tif 000231
2022501336.tif 000232
2022501336.tif 000233
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2022501336.tif 000253
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のいずれかから選択される。
【０４６１】
一部の実施形態では、
2022501336.tif 000255
は、以下の基、
2022501336.tif 000256
、
2022501336.tif 000257
2022501336.tif 000258
2022501336.tif 000259
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2022501336.tif 000261
2022501336.tif 000262
のいずれかから選択される。
【０４６２】
一部の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物はアニオンを更に含む。本明細書に記載するとおり、アニオンは、アミンと反応してアンモニウム塩を形成することができる任意のアニオンであってもよい。例としては、塩化物、臭化物、ヨウ化物、フッ化物、酢酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ジフルオロ酢酸塩、トリクロロ酢酸塩、及びリン酸塩が挙げられるがこれらに限定されない。
【０４６３】
一部の実施形態では、本明細書に記載の式のいずれかの化合物は、筋肉内投与用のナノ粒子組成物を作製するのに好適である。
【０４６４】
一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、複素環または炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＰから選択される１つまたは複数のヘテロ原子を有する５〜１４員環の芳香族または非芳香族複素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、芳香族または非芳香族のいずれかの、任意選択的に置換されたＣ３−２０炭素環（例えば、Ｃ３−１８炭素環、Ｃ３−１５炭素環、Ｃ３−１２炭素環、またはＣ３−１０炭素環）を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ３−６炭素環を形成する。その他の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ６炭素環、例えば、シクロヘキシル基またはフェニル基などを形成する。特定の実施形態では、複素環またはＣ３−６炭素環は、１つまたは複数のアルキル基で置換されている（例えば、同一の環原子または隣接もしくは非隣接環原子において）。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、１つまたは複数のＣ５アルキル置換を有するシクロヘキシル基またはフェニル基を形成していてもよい。特定の実施形態では、Ｒ２及びＲ３が形成する複素環またはＣ３−６炭素環は、炭素環基で置換されている。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、シクロヘキシルで置換されたシクロヘキシル基またはフェニル基を形成していてもよい。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ７−１５炭素環、例えば、シクロヘプチル基、シクロペンタデカニル基、またはシクロナフチル基などを形成する。
【０４６５】
一部の実施形態では、Ｒ４は−（ＣＨ２）ｎＱ及び−（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲから選択される。一部の実施形態では、Ｑは、−ＯＲ、−ＯＨ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｈ）（Ｒ）、及び複素環からなる群から選択される。その他の実施形態では、Ｑは、イミダゾール、ピリミジン、及びプリンからなる群から選択される。
【０４６６】
一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、複素環または炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ３−６炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、Ｃ６炭素環を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、フェニル基を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、シクロヘキシル基を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、複素環を形成する。特定の実施形態では、複素環またはＣ３−６炭素環は、１つまたは複数のアルキル基で置換されている（例えば、同一の環原子または隣接もしくは非隣接環原子において）。例えば、Ｒ２及びＲ３は、それらが結合している原子と共に、１つまたは複数のＣ５アルキル置換を有するフェニル基を形成していてもよい。
【０４６７】
一部の実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの少なくとも１つの存在は、Ｃ１−３アルキル、例えば、メチルである。一部の実施形態では、Ｍに隣接したＲ５及びＲ６のうちの１つは、Ｃ１−３アルキル、例えば、メチルであり、もう一方はＨである。一部の実施形態では、Ｍに隣接したＲ５及びＲ６のうちの１つは、Ｃ１−３アルキル、例えば、メチルであり、もう一方はＨであり、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
【０４６８】
一部の実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの多くて１つの存在は、Ｃ１−３アルキル、例えば、メチルである。一部の実施形態では、Ｍに隣接したＲ５及びＲ６のうちの１つは、Ｃ１−３アルキル、例えば、メチルであり、もう一方はＨである。一部の実施形態では、Ｍに隣接したＲ５及びＲ６のうちの１つは、Ｃ１−３アルキル、例えば、メチルであり、もう一方はＨであり、Ｍは−ＯＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−である。
【０４６９】
一部の実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちの少なくとも１つの存在はメチルである。
【０４７０】
式（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩＩｃ）、または（ＶＩＩＩｄ）のうちのいずれか１つの化合物は、適用可能な場合、以下の特徴のうちの１つまたは複数を含む。
【０４７１】
一部の実施形態では、ｒは０である。一部の実施形態では、ｒは１である。
【０４７２】
一部の実施形態では、ｎは、２、３、または４である。一部の実施形態では、ｎは２である。一部の実施形態では、ｎは４である。一部の実施形態では、ｎは３ではない。
【０４７３】
一部の実施形態では、ＲＮはＨである。一部の実施形態では、ＲＮはＣ１−３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲＮはＣ１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲＮはＣ２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲＮはＣ２アルキルである。
【０４７４】
一部の実施形態では、ＸａはＯである。一部の実施形態では、ＸａはＳである。一部の実施形態では、ＸｂはＯである。一部の実施形態では、ＸｂはＳである。
【０４７５】
一部の実施形態では、Ｒ１０は、Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、及び複素環からなる群から選択される。
【０４７６】
一部の実施形態では、Ｒ１０は、−ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２、及び複素環からなる群から選択される。
【０４７７】
一部の実施形態では、式中、Ｒ１０は−ＮＨ（ＣＨ２）ｏＮ（Ｒ）２であり、ｏは、２、３、または４である。
【０４７８】
一部の実施形態では、式中、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２であり、ｐ１は２である。一部の実施形態では、式中、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２であり、ｑ１は２である。
【０４７９】
一部の実施形態では、式中、Ｒ１０は−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２であり、ｓ１は２である。
【０４８０】
一部の実施形態では、式中、Ｒ１０は、−ＮＨ（ＣＨ２）ｏＮ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｑＮ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓＯＲ、または−Ｎ（（ＣＨ２）ｓＯＲ）２であり、ＲはＨまたはＣ１−Ｃ３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＣ１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＣ２アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＨである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ１−Ｃ３アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ１アルキルである。例えば、一部の実施形態では、ＲはＨであり、１つのＲはＣ２アルキルである。一部の実施形態では、式中、Ｒ１０は、−ＮＨ（ＣＨ２）ｔ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｐ１Ｏ（ＣＨ２）ｑ１Ｎ（Ｒ）２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ、または−Ｎ（（ＣＨ２）ｓ１ＯＲ）２であり、それぞれのＲはＣ２−Ｃ４アルキルである。
【０４８１】
例えば、一部の実施形態では、１つのＲはＨであり、１つのＲはＣ２−Ｃ４アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１０は複素環である。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１０はモルホリニルである。例えば、一部の実施形態では、Ｒ１０はメチルピペラジニルである。
【０４８２】
一部の実施形態では、Ｒ５及びＲ６のうちのそれぞれの存在はＨである。
【０４８３】
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
2022501336.tif 000263
2022501336.tif 000264
2022501336.tif 000265
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2022501336.tif 000267
からなる群から選択される。
【０４８４】
更なる実施形態では、式（Ｉ  Ｉ）の化合物は、
2022501336.tif 000268
からなる群から選択される。
【０４８５】
一部の実施形態では、式（Ｉ  Ｉ）または式（Ｉ  ＩＶ）の化合物は、
2022501336.tif 000269
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からなる群から選択される。
【０４８６】
一部の実施形態では、本開示の脂質は、化合物Ｉ−３４０Ａ、
2022501336.tif 000294
（化合物Ｉ−３４０Ａ）を含む。
【０４８７】
式（Ｉ  Ｉ）、（Ｉ  ＩＡ）、Ｉ  （ＩＢ）、Ｉ  （ＩＩ）、（Ｉ  ＩＩａ）、（Ｉ  ＩＩｂ）、（Ｉ  ＩＩｃ）、（Ｉ  ＩＩｄ）、（Ｉ  ＩＩｅ）、（Ｉ  ＩＩｆ）、（Ｉ  ＩＩｇ）、（Ｉ  ＩＩＩ）、（Ｉ  ＶＩ）、（Ｉ  ＶＩ−ａ）、（Ｉ  ＶＩＩ）、（Ｉ  ＶＩＩＩ）、（Ｉ  ＶＩＩａ）、（Ｉ  ＶＩＩＩａ）、（Ｉ  ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−１）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−２）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−３）、（Ｉ  ＶＩＩｃ）、（Ｉ  ＶＩＩｄ）、（Ｉ  ＶＩＩＩｃ）、または（Ｉ  ＶＩＩＩｄ）の脂質の中心アミン部分は、生理学的ｐＨにおいて、プロトン化されていてもよい。それゆえ、脂質は、生理学的ｐＨにおいて、正電荷または部分的な正電荷を有していてもよい。このような脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と呼ばれることもある。脂質はまた、両性イオン性、すなわち、正電荷と負電荷の両方を有する中性分子であってもよい。
【０４８８】
一部の態様では、本開示のイオン性脂質は、式Ｉ（Ｉ  ＩＸ）の化合物、
2022501336.tif 000295
（Ｉ  ＩＸ）、
またはその塩もしくは異性体のうちの１つまたは複数であってもよく、
式中、
Ｗは
2022501336.tif 000296
または
2022501336.tif 000297
であり、
環Ａは
2022501336.tif 000298
または
2022501336.tif 000299
であり、
ｔは１または２であり、
Ａ１及びＡ２はそれぞれ、ＣＨまたはＮから独立して選択され、
ＺはＣＨ２または不在であり、式中、ＺがＣＨ２である場合、破線（１）及び（２）はそれぞれ単結合を表し、Ｚが不在である場合、破線（１）及び（２）は両方とも不在であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、Ｃ５−２０アルキル、Ｃ５−２０アルケニル、−Ｒ’’ＭＲ’、−Ｒ＊ＹＲ’’、−ＹＲ’’、及び−Ｒ＊ＯＲ’’からなる群から独立して選択され、
ＲＸ１及びＲＸ２はそれぞれ独立して、ＨまたはＣ１−３アルキルであり、
それぞれのＭは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｓ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、アリール基、及びヘテロアリール基からなる群から独立して選択され、
Ｍ＊はＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｗ１及びＷ２はそれぞれ、−Ｏ−及び−Ｎ（Ｒ６）−からなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ６は、Ｈ及びＣ１−５アルキルからなる群から独立して選択され、
Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３は、結合、−ＣＨ２−、−（ＣＨ２）２−、−ＣＨＲ−、−ＣＨＹ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｓ）−、及び−ＣＨ（ＳＨ）−からなる群から独立して選択され、
それぞれのＹは独立して、Ｃ３−６炭素環であり、
それぞれのＲ＊は、Ｃ１−１２アルキル及びＣ２−１２アルケニルからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲは、Ｃ１−３アルキル及びＣ３−６炭素環からなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’は、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ２−１２アルケニル、及びＨからなる群から独立して選択され、
それぞれのＲ’’は、Ｃ３−１２アルキル、Ｃ３−１２アルケニル、及び−Ｒ＊ＭＲ’からなる群から独立して選択され、
ｎは、１〜６の整数であり、
式中、環Ａが
2022501336.tif 000300
である場合、
ｉ）Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３のうちの少なくとも１つは−ＣＨ２−ではない、及び／または、
ｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５のうちの少なくとも１つは−Ｒ’’ＭＲ’である。
【０４８９】
一部の実施形態では、化合物は、式（Ｉ  ＩＸａ１）〜（  Ｉ  ＩＸａ８）のいずれかの化合物、
2022501336.tif 000301
（  Ｉ  ＩＸａ１）、
2022501336.tif 000302
（Ｉ  ＩＸａ２）、
2022501336.tif 000303
（Ｉ  ＩＸａ３）、
2022501336.tif 000304
（  Ｉ  ＩＸａ４）、
2022501336.tif 000305
（  Ｉ  ＩＸａ５’）、
2022501336.tif 000306
（Ｉ  ＩＸａ６）、
2022501336.tif 000307
（  Ｉ  ＩＸａ７）、または、
2022501336.tif 000308
（Ｉ  ＩＸａ８）
である。
【０４９０】
一部の実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／２７１，１４６号、第６２／３３８，４７４号、第６２／４１３，３４５号、及び第６２／５１９，８２６号、ならびにＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６８３００号に記載されている化合物のうちの１つまたは複数である。
【０４９１】
一部の実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載されている化合物１〜１５６から選択される。
【０４９２】
一部の実施形態では、イオン性脂質は、米国出願第６２／５１９，８２６号に記載されている化合物１〜１６、４２〜６６、６８〜７６、及び７８〜１５６から選択される。
【０４９３】
一部の実施形態では、イオン性脂質は、
2022501336.tif 000309
（化合物Ｉ−３５６（本明細書ではまた、化合物Ｍと呼ぶ））またはその塩である。
【０４９４】
一部の実施形態では、イオン性脂質は、
2022501336.tif 000310
［化合物Ｉ−Ｎ］またはその塩である。
【０４９５】
一部の実施形態では、イオン性脂質は、
2022501336.tif 000311
［化合物Ｉ−Ｏ］またはその塩である。
【０４９６】
一部の実施形態では、イオン性脂質は、
2022501336.tif 000312
［化合物Ｉ−Ｐ］またはその塩である。
【０４９７】
一部の実施形態では、イオン性脂質は、
2022501336.tif 000313
［化合物Ｉ−Ｑ］またはその塩である。
【０４９８】
本明細書の式のいずれかの脂質、例えば、式（Ｉ  Ｉ）、（Ｉ  ＩＡ）、（Ｉ  ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の中心アミン部分は、生理学的ｐＨにおいて、プロトン化されていてもよい。それゆえ、脂質は、生理学的ｐＨにおいて、正電荷または部分的な正電荷を有していてもよい。このような脂質は、カチオン性またはイオン性（アミノ）脂質と呼ばれることもある。脂質はまた、両性イオン性、すなわち、正電荷と負電荷の両方を有する中性分子であってもよい。
【０４９９】
一部の実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約１ｍｏｌ％〜９９ｍｏｌ％の範囲である。
【０５００】
一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９ｍｏｌ％である。
【０５０１】
一実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約３０ｍｏｌ％〜約７０ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％〜約６５ｍｏｌ％、約４０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、及び約４５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％の範囲である。
【０５０２】
１つの特定の実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約４５ｍｏｌ％である。
【０５０３】
１つの特定の実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約４０ｍｏｌ％である。
【０５０４】
１つの特定の実施形態では、本発明のイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物の量は、脂質組成物中約５０ｍｏｌ％である。
【０５０５】
本明細書で開示するイオン性アミノ脂質、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物に加えて、本明細書で開示する脂質性組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、別の構成成分、例えば、コレステロール及び／またはコレステロール類似体、非カチオン性ヘルパー脂質、構造脂質、ＰＥＧ脂質、及びこれらの任意の組み合わせなどを含んでいてもよい。
【０５０６】
本発明の別のイオン性脂質は、３−（ジドデシルアミノ）−Ｎ１，Ｎ１，４−トリドデシル−１−ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１−［２−（ジドデシルアミノ）エチル］−Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４−トリドデシル−１，４−ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５−ジトリデシル−１５，１８，２１，２４−テトラアザ−オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２−ジリノレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−ジメチルアミノメチル−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−Ｋ−ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ−６，９，２８，３１−テトラエン−１９−イル  ４−（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ−ＭＣ３−ＤＭＡ）、２，２−ジリノレイル−４−（２−ジメチルアミノエチル）−［１，３］−ジオキソラン（ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡ）、１，２−ジオレイルオキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、（１３Ｚ，１６５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニドコサ−１３−１６−ジエン−１−アミン（Ｌ６０８）、２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、及び（２Ｓ）−２−（｛８−［（３β）−コレスト−５−エン−３−イルオキシ］オクチル｝オキシ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−［（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエン−１−イルオキシ］プロパン−１−アミン（オクチル−ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））からなる非限定群から選択してもよい。これらに加えて、イオン性アミノ脂質はまた、環状アミン基を含む脂質であってもよい。
【０５０７】
本発明のイオン性脂質はまた、国際公開第ＷＯ２０１７／０７５５３１Ａ１号（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物であってもよい。例えば、イオン性アミノ脂質としては、
2022501336.tif 000314
、
2022501336.tif 000315
、
2022501336.tif 000316
、
及びこれらの任意の組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５０８】
本発明のイオン性脂質はまた、国際公開第ＷＯ２０１５／１９９９５２Ａ１号（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物であってもよい。例えば、イオン性アミノ脂質としては、
2022501336.tif 000317
2022501336.tif 000318
、
2022501336.tif 000319
2022501336.tif 000320
2022501336.tif 000321
2022501336.tif 000322
2022501336.tif 000323
2022501336.tif 000324
2022501336.tif 000325
2022501336.tif 000326
及びこれらの任意の組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。
【０５０９】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、任意の化合物、例えば、式（Ｉ）、（ＩＡ）、（ＩＢ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）、（ＩＩｅ）、（ＩＩｆ）、（ＩＩｇ）、（ＩＩＩ）、（ＶＩ）、（ＶＩ−ａ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）、（ＶＩＩｂ−１）、（ＶＩＩｂ−２）、（ＶＩＩｂ−３）、（ＶＩＩｃ）、（ＶＩＩｄ）、（ＶＩＩＩｃ）、（ＶＩＩＩｄ）、（ＩＸ）、（ＩＸａ１）、（ＩＸａ２）、（ＩＸａ３）、（ＩＸａ４）、（ＩＸａ５）、（ＩＸａ６）、（ＩＸａ７）、または（ＩＸａ８）（これらの式のそれぞれの先頭には明確性のために文字Ｉを付している）のいずれかを有する化合物中に含まれている化合物を含む。
【０５１０】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ  １〜３５６のいずれかを含む化合物を含む。
【０５１１】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ  １８（化合物Ｘまたは化合物ＩＩとも呼ばれる）、Ｉ  ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ  ４８、Ｉ  ５０、Ｉ  １０９、Ｉ  １１１、Ｉ  １１３、Ｉ  １８１、Ｉ  １８２、Ｉ  ２４４、Ｉ  ２９２、Ｉ  ３０１、Ｉ  ３２１、Ｉ  ３２２、Ｉ  ３２６、Ｉ  ３２８、Ｉ  ３３０、Ｉ  ３３１、及びＩ  ３３２からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ  １８（化合物Ｘまたは化合物ＩＩとも呼ばれる）、Ｉ  ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ  ４８、Ｉ  ５０、Ｉ  １０９、Ｉ  １１１、Ｉ  １８１、Ｉ  １８２、Ｉ  ２９２、Ｉ  ３０１、Ｉ  ３２１、Ｉ  ３２６、Ｉ  ３２８、及びＩ  ３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ  １８２、Ｉ  ３０１、Ｉ  ３２１、及びＩ  ３２６からなる群から選択される化合物を含む。
【０５１２】
上記または関連する態様のいずれかでは、本発明の化合物、例えば、化合物番号１〜３５６のいずれかを含む化合物の合成は、２０１８年９月１９日出願の米国仮特許出願第６２／７３３，３１５号の合成の記述に従う。
【０５１３】
代表的な合成経路：
化合物Ｉ−１８２：ヘプタデカン−９−イル  ８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン
2022501336.tif 000327
１００ｍＬのジエチルエーテル中の３，４−ジメトキシ−３−シクロブテン−１，２−ジオン（１ｇ、７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中の２Ｍメチルアミン溶液（３．８ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ）を加えると、ほぼ直ちに沈澱物が形成された。混合物を室温で２４時間攪拌してから、濾過し、濾過固体をジエチルエーテルで洗浄し、空気乾燥した。濾過固体を高温ＥｔＯＡｃ中に溶解し、濾過してから、濾液を室温まで冷まし、その後、０℃まで冷却して沈澱物を得た。この沈殿物を濾過で単離し、冷却ＥｔＯＡｃで洗浄してから空気乾燥し、その後、減圧下で乾燥させて、３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン（０．７０ｇ、５ｍｍｏｌ、７３％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ： ｐｐｍ ８．５０ （ｂｒ． ｄ， １Ｈ， Ｊ ＝ ６９ Ｈｚ）；４．２７ （ｓ， ３Ｈ）；３．０２ （ｓｄｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ４２ Ｈｚ， ４．５ Ｈｚ）．
【０５１４】
ヘプタデカン−９−イル  ８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート
2022501336.tif 000328
１０ｍＬのエタノール中のヘプタデカン−９−イル  ８−（（３−アミノプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（２００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、３−メトキシ−４−（メチルアミノ）シクロブタ−３−エン−１，２−ジオン（３９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を加え、得られた無色溶液を室温で２０時間攪拌したが、その後、ＬＣ／ＭＳによると、出発アミンは残っていなかった。その溶液を減圧下で濃縮してから、残分をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の０〜１００％（ジクロロメタン中の１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨの混合液））で精製して、ヘプタデカン−９−イル  ８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエート（１３８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、６０％）をゴム状の白色固体として得た。ＵＰＬＣ／ＥＬＳＤ：ＲＴ＝３分間。Ｃ５１Ｈ９５Ｎ３Ｏ６のＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ（ＭＨ＋）８３３．４。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３） δ： ｐｐｍ ７．８６ （ｂｒ．  ｓ．， １Ｈ）；４．８６ （五重項， １Ｈ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ）；４．０５ （ｔ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ６ Ｈｚ）；３．９２ （ｄ， ２Ｈ， Ｊ ＝ ３ Ｈｚ）；３．２０ （ｓ， ６Ｈ）；２．６３ （ｂｒ．  ｓ， ２Ｈ）；２．４２ （ｂｒ．  ｓ， ３Ｈ）；２．２８ （ｍ， ４Ｈ）；１．７４ （ｂｒ．  ｓ， ２Ｈ）；１．６１ （ｍ， ８Ｈ）；１．５０ （ｍ， ５Ｈ）；１．４１ （ｍ， ３Ｈ）；１．２５ （ｂｒ．  ｍ， ４７Ｈ）；０．８８ （ｔ， ９Ｈ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ）．
【０５１５】
化合物Ｉ−３０１：ヘプタデカン−９−イル  ８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート
2022501336.tif 000329
ヘプタデカン−９−イル  ８−（（３−アミノプロピル）（８−（ノニルオキシ）−８−オキソオクチル）アミノ）オクタノエートの代わりにヘプタデカン−９−イル  ８−（（３−アミノプロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（５００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を使用した以外は化合物１８２と同様に、化合物Ｉ−３０１を調製した。水溶液の精密検査後、残分をシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の０〜５０％（ジクロロメタン中の１％ＮＨ４ＯＨ、２０％ＭｅＯＨの混合液））で精製して、ヘプタデカン−９−イル  ８−（（３−（（２−（メチルアミノ）−３，４−ジオキソシクロブタ−１−エン−１−イル）アミノ）プロピル）（８−オキソ−８−（ウンデカン−３−イルオキシ）オクチル）アミノ）オクタノエート（１８０ｍｇ、３２％）を白色ろう状固体として得た。ＨＰＬＣ／ＵＶ（２５４ｎｍ）：ＲＴ＝６．７７分間。Ｃ５２Ｈ９７Ｎ３Ｏ６のＭＳ（ＣＩ）：ｍ／ｚ（ＭＨ＋）８６０．７。１Ｈ ＮＭＲ （３００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ｐｐｍ ４．８６−４．７９ （ｍ， ２Ｈ）；３．６６ （ｂｓ， ２Ｈ）；３．２５ （ｄ， ３Ｈ， Ｊ ＝ ４．９ Ｈｚ）；２．５６−２．５２ （ｍ， ２Ｈ）；２．４２−２．３７ （ｍ， ４Ｈ）；２．２８ （ｄｄ， ４Ｈ， Ｊ ＝ ２．７ Ｈｚ， ７．４ Ｈｚ）；１．７８−１．６８ （ｍ， ３Ｈ）；１．６４−１．５０ （ｍ， １６Ｈ）；１．４８−１．３８ （ｍ， ６Ｈ）；１．３２−１．１８ （ｍ， ４３Ｈ）；０．８８−０．８４ （ｍ， １２Ｈ）．
【０５１６】
（ｉｉ）コレステロール／構造脂質
一部の実施形態では、本明細書に記載のＬＮＰは、１種または複数種の構造脂質を含む。本明細書で使用する場合、用語「構造脂質」は、ステロール及び、ステロール部分を含有する脂質をも意味する。脂質ナノ粒子中に構造脂質を組み込むことは、粒子中におけるその他の脂質の凝集を軽減させるのに役立ち得る。構造脂質としては、コレステロール、フェコステロール、エルゴステロール、ブラシカステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、αトコフェロール、及びこれらの混合物を挙げることができるがこれらに限定されない。特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールである。特定の実施形態では、構造脂質としては、コレステロール、及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【０５１７】
一部の実施形態では、構造脂質はステロールである。本明細書で定義するとおり、「ステロール」は、ステロイドアルコールで構成される、ステロイドのサブグループである。特定の実施形態では、構造脂質はステロイドである。特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールである。特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールの類似体である。特定の実施形態では、構造脂質はαトコフェロールである。構造脂質の例としては、以下、
2022501336.tif 000330
、
2022501336.tif 000331
、及び
2022501336.tif 000332
が挙げられるがこれらに限定されない。
【０５１８】
本明細書に記載のＬＮＰは、１種または複数種の構造脂質を含む。
【０５１９】
本明細書で使用する場合、用語「構造脂質」は、ステロール及び、ステロール部分を含有する脂質をも意味する。脂質ナノ粒子中に構造脂質を組み込むことは、粒子中におけるその他の脂質の凝集を軽減させるのに役立ち得る。特定の実施形態では、構造脂質としては、コレステロール、及びコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、デキサメタゾン、プレドニゾン、及びヒドロコルチゾンなど）、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【０５２０】
一部の実施形態では、構造脂質はステロールである。本明細書で定義するとおり、「ステロール」は、ステロイドアルコールで構成される、ステロイドのサブグループである。構造脂質としては、ステロール（例えば、フィトステロールまたはズーステロール）を挙げることができるがこれらに限定されない。
【０５２１】
特定の実施形態では、構造脂質はステロイドである。例えば、ステロールとしては、コレステロール、β−シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、αトコフェロール、または、本明細書の表１〜表１６中の化合物Ｓ１〜１４８のうちのいずれか１つを挙げることができるがこれらに限定されない。
【０５２２】
特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールである。特定の実施形態では、構造脂質はコレステロールの類似体である。
【０５２３】
特定の実施形態では、構造脂質はαトコフェロールである。
【０５２４】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000333
式ＳＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、または
2022501336.tif 000334
であり、
Ｒｂ１、Ｒｂ２、及びＲｂ３のそれぞれは独立して、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ６−Ｃ１０アリールであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000335
であり、
それぞれの
2022501336.tif 000336
は独立して、単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000337
を形成し、
Ｌ１ａは、不在、
2022501336.tif 000338
、または
2022501336.tif 000339
であり、
Ｌ１ｂは、不在、
2022501336.tif 000340
、または
2022501336.tif 000341
であり、
ｍは１、２、または３であり、
Ｌ１ｃは、不在、
2022501336.tif 000342
、または
2022501336.tif 000343
であり、
Ｒ６は、任意選択的に置換されたＣ３−Ｃ１０シクロアルキル、任意選択的に置換されたＣ３−Ｃ１０シクロアルケニル、任意選択的に置換されたＣ６−Ｃ１０アリール、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ９ヘテロシクリル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ９ヘテロアリールである。
【０５２５】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩａの構造、
2022501336.tif 000344
式ＳＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５２６】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩｂの構造、
2022501336.tif 000345
式ＳＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５２７】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩｃの構造、
2022501336.tif 000346
式ＳＩｃ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５２８】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩｄの構造、
2022501336.tif 000347
式ＳＩｄ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５２９】
一部の実施形態では、Ｌ１ａは不在である。一部の実施形態では、Ｌ１ａは
2022501336.tif 000348
である。一部の実施形態では、Ｌ１ａは
2022501336.tif 000349
である。
【０５３０】
一部の実施形態では、Ｌ１ｂは不在である。一部の実施形態では、Ｌ１ｂは
2022501336.tif 000350
である。一部の実施形態では、Ｌ１ｂは
2022501336.tif 000351
である。
【０５３１】
一部の実施形態では、ｍは１または２である。一部の実施形態では、ｍは１である。一部の実施形態では、ｍは２である。
【０５３２】
一部の実施形態では、Ｌ１ｃは不在である。一部の実施形態では、Ｌ１ｃは
2022501336.tif 000352
である。一部の実施形態では、Ｌ１ｃは
2022501336.tif 000353
である。
【０５３３】
一部の実施形態では、Ｒ６は任意選択的に置換されたＣ６−Ｃ１０アリールである。
【０５３４】
一部の実施形態では、Ｒ６は
2022501336.tif 000354
であり、式中、
ｎ１は、０、１、２、３、４、または５であり、
それぞれのＲ７は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５３５】
一部の実施形態では、それぞれのＲ７は独立して、
2022501336.tif 000355
、
2022501336.tif 000356
、
2022501336.tif 000357
、
2022501336.tif 000358
、
2022501336.tif 000359
、
2022501336.tif 000360
、
2022501336.tif 000361
、
2022501336.tif 000362
、
2022501336.tif 000363
、
2022501336.tif 000364
、
2022501336.tif 000365
、
2022501336.tif 000366
、
2022501336.tif 000367
、
2022501336.tif 000368
、または
2022501336.tif 000369
である。
【０５３６】
一部の実施形態では、ｎ１は、０、１、または２である。一部の実施形態では、ｎ１は０である。一部の実施形態では、ｎ１は１である。一部の実施形態では、ｎ１は２である。
【０５３７】
一部の実施形態では、Ｒ６は任意選択的に置換されたＣ３−Ｃ１０シクロアルキルである。
【０５３８】
一部の実施形態では、Ｒ６は任意選択的に置換されたＣ３−Ｃ１０モノシクロアルキルである。
【０５３９】
一部の実施形態では、Ｒ６は、
2022501336.tif 000370
、
2022501336.tif 000371
、
2022501336.tif 000372
、
2022501336.tif 000373
、または
2022501336.tif 000374
であり、式中、
ｎ２は０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ３は０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ４は０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ５は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
ｎ６は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、または１３であり、
それぞれのＲ８は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５４０】
一部の実施形態では、それぞれのＲ８は独立して、
2022501336.tif 000375
、
2022501336.tif 000376
、
2022501336.tif 000377
、
2022501336.tif 000378
、
2022501336.tif 000379
、
2022501336.tif 000380
、
2022501336.tif 000381
、
2022501336.tif 000382
、
2022501336.tif 000383
、
2022501336.tif 000384
、
2022501336.tif 000385
、
2022501336.tif 000386
、
2022501336.tif 000387
、
2022501336.tif 000388
、または
2022501336.tif 000389
である。
【０５４１】
一部の実施形態では、Ｒ６は任意選択的に置換されたＣ３−Ｃ１０ポリシクロアルキルである。
【０５４２】
一部の実施形態では、Ｒ６は、
2022501336.tif 000390
、
2022501336.tif 000391
、または
2022501336.tif 000392
である。
【０５４３】
一部の実施形態では、Ｒ６は任意選択的に置換されたＣ３−Ｃ１０シクロアルケニルである。
【０５４４】
一部の実施形態では、Ｒ６は、
2022501336.tif 000393
、
2022501336.tif 000394
、または
2022501336.tif 000395
であり、式中、
ｎ７は０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ８は０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
ｎ９は０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１であり、
それぞれのＲ９は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５４５】
一部の実施形態では、Ｒ６は、
2022501336.tif 000396
、
2022501336.tif 000397
、または
2022501336.tif 000398
である。
【０５４６】
一部の実施形態では、それぞれのＲ９は独立して、
2022501336.tif 000399
、
2022501336.tif 000400
、
2022501336.tif 000401
、
2022501336.tif 000402
、
2022501336.tif 000403
、
2022501336.tif 000404
、
2022501336.tif 000405
、
2022501336.tif 000406
、
2022501336.tif 000407
、
2022501336.tif 000408
、
2022501336.tif 000409
、
2022501336.tif 000410
、
2022501336.tif 000411
、
2022501336.tif 000412
、または
2022501336.tif 000413
である。
【０５４７】
一部の実施形態では、Ｒ６は任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ９ヘテロシクリルである。
【０５４８】
一部の実施形態では、Ｒ６は、
2022501336.tif 000414
、
2022501336.tif 000415
、
2022501336.tif 000416
、または
2022501336.tif 000417
であり、式中、
ｎ１０は０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１１は０、１、２、３、４、または５であり、
ｎ１２は０、１、２、３、４、５、６、または７であり、
ｎ１３は０、１、２、３、４、５、６、７、８、または９であり、
それぞれのＲ１０は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｙ１及びＹ２のそれぞれは独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲＢ、またはＣＲ１１ａＲ１１ｂであり、
式中、ＲＢはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１１ａ及びＲ１１ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｙ２がＣＲ１１ａＲ１１ｂである場合、Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＢである。
【０５４９】
一部の実施形態では、Ｙ１はＯである。
【０５５０】
一部の実施形態では、Ｙ２はＯである。一部の実施形態では、Ｙ２はＣＲ１１ａＲ１１ｂである。
【０５５１】
一部の実施形態では、それぞれのＲ１０は独立して、
2022501336.tif 000418
、
2022501336.tif 000419
、
2022501336.tif 000420
、
2022501336.tif 000421
、
2022501336.tif 000422
、
2022501336.tif 000423
、
2022501336.tif 000424
、
2022501336.tif 000425
、
2022501336.tif 000426
、
2022501336.tif 000427
、
2022501336.tif 000428
、
2022501336.tif 000429
、
2022501336.tif 000430
、
2022501336.tif 000431
、または
2022501336.tif 000432
である。
【０５５２】
一部の実施形態では、Ｒ６は任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ９ヘテロアリールである。
【０５５３】
一部の実施形態では、Ｒ６は
2022501336.tif 000433
であり、式中、
Ｙ３は、ＮＲＣ、Ｏ、またはＳであり、
ｎ１４は０、１、２、３、または４であり、
ＲＣはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
それぞれのＲ１２は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５５４】
一部の実施形態では、Ｒ６は
2022501336.tif 000434
である。一部の実施形態では、Ｒ６は
2022501336.tif 000435
である。
【０５５５】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＩの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000436
式ＳＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000437
であり、
2022501336.tif 000438
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000439
を形成し、
Ｌ１は任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキレンであり、
Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、及びＲ１３ｃのそれぞれは独立して、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ６−Ｃ１０アリールである。
【０５５６】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＩａの構造、
2022501336.tif 000440
式ＳＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５５７】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＩｂの構造、
2022501336.tif 000441
式ＳＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５５８】
一部の実施形態では、Ｌ１は、
2022501336.tif 000442
、
2022501336.tif 000443
、
2022501336.tif 000444
、または
2022501336.tif 000445
である。
【０５５９】
一部の実施形態では、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、及びＲ１３ｃのそれぞれは独立して、
2022501336.tif 000446
、
2022501336.tif 000447
、
2022501336.tif 000448
、
2022501336.tif 000449
、
2022501336.tif 000450
、
2022501336.tif 000451
、
2022501336.tif 000452
、
2022501336.tif 000453
、
2022501336.tif 000454
、
2022501336.tif 000455
、
2022501336.tif 000456
、
2022501336.tif 000457
、
2022501336.tif 000458
、
2022501336.tif 000459
、または
2022501336.tif 000460
である。
【０５６０】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＩＩの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000461
式ＳＩＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000462
であり、
それぞれの
2022501336.tif 000463
は独立して、単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ４ｃであり、式中、Ｒ４ｃは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ６−Ｃ１０アリールであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000464
を形成し、
Ｒ１４はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１５は、
2022501336.tif 000465
、
2022501336.tif 000466
、または
2022501336.tif 000467
であり、式中、
Ｒ１６はＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１７ｂは、Ｈ、ＯＲ１７ｃ、任意選択的に置換されたＣ６−Ｃ１０アリール、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ１７ｃはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
ｏ１は０、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、
ｐ１は０、１、または２であり、
ｐ２は０、１、または２であり、
Ｚは、ＣＨ２、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＤであり、式中、ＲＤはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
それぞれのＲ１８は独立して、ハロまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５６１】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩａの構造、
2022501336.tif 000468
式ＳＩＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５６２】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＩＩｂの構造、
2022501336.tif 000469
式ＳＩＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５６３】
一部の実施形態では、Ｒ１４は、Ｈ、
2022501336.tif 000470
、
2022501336.tif 000471
、
2022501336.tif 000472
、
2022501336.tif 000473
、
2022501336.tif 000474
、
2022501336.tif 000475
、
2022501336.tif 000476
、
2022501336.tif 000477
、
2022501336.tif 000478
、
2022501336.tif 000479
、
2022501336.tif 000480
、
2022501336.tif 000481
、
2022501336.tif 000482
、
2022501336.tif 000483
、または
2022501336.tif 000484
である。
【０５６４】
一部の実施形態では、Ｒ１４は
2022501336.tif 000485
である。
【０５６５】
一部の実施形態では、Ｒ１５は
2022501336.tif 000486
である。一部の実施形態では、Ｒ１５は
2022501336.tif 000487
である。
【０５６６】
一部の実施形態では、Ｒ１６はＨである。一部の実施形態では、Ｒ１６は、
2022501336.tif 000488
、
2022501336.tif 000489
、
2022501336.tif 000490
、
2022501336.tif 000491
、
2022501336.tif 000492
、
2022501336.tif 000493
、
2022501336.tif 000494
、
2022501336.tif 000495
、
2022501336.tif 000496
、
2022501336.tif 000497
、
2022501336.tif 000498
、
2022501336.tif 000499
、
2022501336.tif 000500
、
2022501336.tif 000501
、または
2022501336.tif 000502
である。
【０５６７】
一部の実施形態では、Ｒ１７ａはＨである。一部の実施形態では、Ｒ１７ａは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５６８】
一部の実施形態では、Ｒ１７ｂはＨである。一部の実施形態では、Ｒ１７ｂは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１７ｂはＯＲ１７ｃである。
【０５６９】
一部の実施形態では、Ｒ１７ｃは、Ｈ、
2022501336.tif 000503
、または
2022501336.tif 000504
である。一部の実施形態では、Ｒ１７ｃはＨである。一部の実施形態では、Ｒ１７ｃは
2022501336.tif 000505
である。
【０５７０】
一部の実施形態では、Ｒ１５は
2022501336.tif 000506
である。
【０５７１】
一部の実施形態では、それぞれのＲ１８は独立して、
2022501336.tif 000507
、
2022501336.tif 000508
、
2022501336.tif 000509
、
2022501336.tif 000510
、
2022501336.tif 000511
、
2022501336.tif 000512
、
2022501336.tif 000513
、
2022501336.tif 000514
、
2022501336.tif 000515
、
2022501336.tif 000516
、
2022501336.tif 000517
、
2022501336.tif 000518
、
2022501336.tif 000519
、
2022501336.tif 000520
、または
2022501336.tif 000521
である。
【０５７２】
一部の実施形態では、ＺはＣＨ２である。一部の実施形態では、ＺはＯである。一部の実施形態では、ＺはＮＲＤである。
【０５７３】
一部の実施形態では、ｏ１は、０、１、２、３、４、５、または６である。
【０５７４】
一部の実施形態では、ｏ１は０である。一部の実施形態では、ｏ１は１である。一部の実施形態では、ｏ１は２である。一部の実施形態では、ｏ１は３である。一部の実施形態では、ｏ１は４である。一部の実施形態では、ｏ１は５である。一部の実施形態では、ｏ１は６である。
【０５７５】
一部の実施形態では、ｐ１は０または１である。一部の実施形態では、ｐ１は０である。一部の実施形態では、ｐ１は１である。
【０５７６】
一部の実施形態では、ｐ２は０または１である。一部の実施形態では、ｐ２は０である。一部の実施形態では、ｐ２は１である。
【０５７７】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＶの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000522
式ＳＩＶ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000523
であり、
2022501336.tif 000524
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000525
を形成し、
ｓは０または１であり、
Ｒ１９はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２０はＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２１はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５７８】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＶａの構造、
2022501336.tif 000526
式ＳＩＶａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５７９】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＶｂの構造、
2022501336.tif 000527
式ＳＩＶｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５８０】
一部の実施形態では、Ｒ１９は、Ｈ、
2022501336.tif 000528
、
2022501336.tif 000529
、
2022501336.tif 000530
、
2022501336.tif 000531
、
2022501336.tif 000532
、
2022501336.tif 000533
、
2022501336.tif 000534
、
2022501336.tif 000535
、
2022501336.tif 000536
、
2022501336.tif 000537
、
2022501336.tif 000538
、
2022501336.tif 000539
、
2022501336.tif 000540
、
2022501336.tif 000541
、または
2022501336.tif 000542
である。
【０５８１】
一部の実施形態では、Ｒ１９は
2022501336.tif 000543
である。
【０５８２】
一部の実施形態では、Ｒ２０は、
2022501336.tif 000544
、
2022501336.tif 000545
、
2022501336.tif 000546
、
2022501336.tif 000547
、
2022501336.tif 000548
、
2022501336.tif 000549
、
2022501336.tif 000550
、
2022501336.tif 000551
、
2022501336.tif 000552
、
2022501336.tif 000553
、
2022501336.tif 000554
、
2022501336.tif 000555
、
2022501336.tif 000556
、
2022501336.tif 000557
、または
2022501336.tif 000558
である。
【０５８３】
一部の実施形態では、Ｒ２１は、Ｈ、
2022501336.tif 000559
、
2022501336.tif 000560
、
2022501336.tif 000561
、
2022501336.tif 000562
、
2022501336.tif 000563
、
2022501336.tif 000564
、
2022501336.tif 000565
、
2022501336.tif 000566
、
2022501336.tif 000567
、
2022501336.tif 000568
、
2022501336.tif 000569
、
2022501336.tif 000570
、
2022501336.tif 000571
、
2022501336.tif 000572
、または
2022501336.tif 000573
である。
【０５８４】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000574
式ＳＶ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000575
であり、
2022501336.tif 000576
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000577
を形成し、
Ｒ２２はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２３は、ハロ、ヒドロキシル、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキルである。
【０５８５】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶａの構造、
2022501336.tif 000578
式ＳＶａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５８６】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶｂの構造、
2022501336.tif 000579
式ＳＶｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５８７】
一部の実施形態では、Ｒ２２は、Ｈ、
2022501336.tif 000580
、
2022501336.tif 000581
、
2022501336.tif 000582
、
2022501336.tif 000583
、
2022501336.tif 000584
、
2022501336.tif 000585
、
2022501336.tif 000586
、
2022501336.tif 000587
、
2022501336.tif 000588
、
2022501336.tif 000589
、
2022501336.tif 000590
、
2022501336.tif 000591
、
2022501336.tif 000592
、
2022501336.tif 000593
、または
2022501336.tif 000594
である。
【０５８８】
一部の実施形態では、Ｒ２２は
2022501336.tif 000595
である。
【０５８９】
一部の実施形態では、Ｒ２３は、
2022501336.tif 000596
、
2022501336.tif 000597
、
2022501336.tif 000598
、
2022501336.tif 000599
、
2022501336.tif 000600
、
2022501336.tif 000601
、
2022501336.tif 000602
、
2022501336.tif 000603
、
2022501336.tif 000604
、
2022501336.tif 000605
、
2022501336.tif 000606
、
2022501336.tif 000607
、
2022501336.tif 000608
、
2022501336.tif 000609
、または
2022501336.tif 000610
である。
【０５９０】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000611
式ＳＶＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000612
であり、
2022501336.tif 000613
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000614
を形成し、
Ｒ２４はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂのそれぞれはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５９１】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩａの構造、
2022501336.tif 000615
式ＳＶＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５９２】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩｂの構造、
2022501336.tif 000616
式ＳＶＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５９３】
一部の実施形態では、Ｒ２４は、Ｈ、
2022501336.tif 000617
、
2022501336.tif 000618
、
2022501336.tif 000619
、
2022501336.tif 000620
、
2022501336.tif 000621
、
2022501336.tif 000622
、
2022501336.tif 000623
、
2022501336.tif 000624
、
2022501336.tif 000625
、
2022501336.tif 000626
、
2022501336.tif 000627
、
2022501336.tif 000628
、
2022501336.tif 000629
、
2022501336.tif 000630
、または
2022501336.tif 000631
である。
【０５９４】
一部の実施形態では、Ｒ２４は
2022501336.tif 000632
である。
【０５９５】
一部の実施形態では、Ｒ２５ａ及びＲ２５ｂのそれぞれは独立して、
2022501336.tif 000633
、
2022501336.tif 000634
、
2022501336.tif 000635
、
2022501336.tif 000636
、
2022501336.tif 000637
、
2022501336.tif 000638
、
2022501336.tif 000639
、
2022501336.tif 000640
、
2022501336.tif 000641
、
2022501336.tif 000642
、
2022501336.tif 000643
、
2022501336.tif 000644
、
2022501336.tif 000645
、
2022501336.tif 000646
、または
2022501336.tif 000647
である。
【０５９６】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩＩの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000648
式ＳＶＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、または
2022501336.tif 000649
であり、式中、Ｒ１ｃ、Ｒ１ｄ、及びＲ１ｅのそれぞれは独立して、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ６−Ｃ１０アリールであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000650
であり、
2022501336.tif 000651
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000652
を形成し、
ｑは０または１であり、
Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂのそれぞれは独立して、Ｈまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、または、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000653
または
2022501336.tif 000654
を形成し、式中、Ｒ２６ｃ及びＲ２６のそれぞれは独立して、Ｈまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂのそれぞれは、Ｈ、ヒドロキシル、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０５９７】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩａの構造、
2022501336.tif 000655
式ＳＶＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５９８】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩｂの構造、
2022501336.tif 000656
式ＳＶＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０５９９】
一部の実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは独立して、Ｈ、
2022501336.tif 000657
、
2022501336.tif 000658
、
2022501336.tif 000659
、
2022501336.tif 000660
、
2022501336.tif 000661
、
2022501336.tif 000662
、
2022501336.tif 000663
、
2022501336.tif 000664
、
2022501336.tif 000665
、
2022501336.tif 000666
、
2022501336.tif 000667
、
2022501336.tif 000668
、
2022501336.tif 000669
、
2022501336.tif 000670
、または
2022501336.tif 000671
である。
【０６００】
一部の実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000672
または
2022501336.tif 000673
を形成する。
【０６０１】
一部の実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000674
を形成する。一部の実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000675
を形成する。
【０６０２】
一部の実施形態では、式中、Ｒ２６ｃ及びＲ２６のそれぞれは独立して、Ｈ、
2022501336.tif 000676
、
2022501336.tif 000677
、
2022501336.tif 000678
、
2022501336.tif 000679
、
2022501336.tif 000680
、
2022501336.tif 000681
、
2022501336.tif 000682
、
2022501336.tif 000683
、
2022501336.tif 000684
、
2022501336.tif 000685
、
2022501336.tif 000686
、
2022501336.tif 000687
、
2022501336.tif 000688
、
2022501336.tif 000689
、または
2022501336.tif 000690
である。
【０６０３】
一部の実施形態では、Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂのそれぞれは、Ｈ、ヒドロキシル、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ３アルキルである。
【０６０４】
一部の実施形態では、Ｒ２７ａ及びＲ２７ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ヒドロキシル、
2022501336.tif 000691
、
2022501336.tif 000692
、
2022501336.tif 000693
、
2022501336.tif 000694
である。
【０６０５】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＶＩＩＩの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000695
式ＳＶＩＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000696
であり、
2022501336.tif 000697
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000698
を形成し、
Ｒ２８はＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
ｒは１、２、または３であり、
それぞれのＲ２９は独立して、Ｈまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３０ａ、Ｒ３０ｂ、及びＲ３０ｃのそれぞれはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０６０６】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩａの構造、
2022501336.tif 000699
式ＳＶＩＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６０７】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＶＩＩＩｂの構造、
2022501336.tif 000700
式ＳＶＩＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６０８】
一部の実施形態では、Ｒ２８は、Ｈ、
2022501336.tif 000701
、
2022501336.tif 000702
、
2022501336.tif 000703
、
2022501336.tif 000704
、
2022501336.tif 000705
、
2022501336.tif 000706
、
2022501336.tif 000707
、
2022501336.tif 000708
、
2022501336.tif 000709
、
2022501336.tif 000710
、
2022501336.tif 000711
、
2022501336.tif 000712
、
2022501336.tif 000713
、
2022501336.tif 000714
、または
2022501336.tif 000715
である。
【０６０９】
一部の実施形態では、Ｒ２８は
2022501336.tif 000716
である。
【０６１０】
一部の実施形態では、Ｒ３０ａ、Ｒ３０ｂ、及びＲ３０ｃのそれぞれは独立して、
2022501336.tif 000717
、
2022501336.tif 000718
、
2022501336.tif 000719
、
2022501336.tif 000720
、
2022501336.tif 000721
、
2022501336.tif 000722
、
2022501336.tif 000723
、
2022501336.tif 000724
、
2022501336.tif 000725
、
2022501336.tif 000726
、
2022501336.tif 000727
、
2022501336.tif 000728
、
2022501336.tif 000729
、
2022501336.tif 000730
、または
2022501336.tif 000731
である。
【０６１１】
一部の実施形態では、ｒは１である。一部の実施形態では、ｒは２である。一部の実施形態では、ｒは３である。
【０６１２】
一部の実施形態では、それぞれのＲ２９は独立して、Ｈ、
2022501336.tif 000732
、
2022501336.tif 000733
、
2022501336.tif 000734
、
2022501336.tif 000735
、
2022501336.tif 000736
、
2022501336.tif 000737
、
2022501336.tif 000738
、
2022501336.tif 000739
、
2022501336.tif 000740
、
2022501336.tif 000741
、
2022501336.tif 000742
、
2022501336.tif 000743
、
2022501336.tif 000744
、
2022501336.tif 000745
、または
2022501336.tif 000746
である。
【０６１３】
一部の実施形態では、それぞれのＲ２９は独立して、Ｈまたは
2022501336.tif 000747
である。
【０６１４】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＩＸの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000748
式ＳＩＸ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000749
であり、
2022501336.tif 000750
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000751
を形成し、
Ｒ３１はＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３２ａ及びＲ３２ｂのそれぞれはＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０６１５】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＸａの構造、
2022501336.tif 000752
式ＳＩＸａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６１６】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＩＸｂの構造、
2022501336.tif 000753
式ＳＩＸｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６１７】
一部の実施形態では、Ｒ３１は、Ｈ、
2022501336.tif 000754
、
2022501336.tif 000755
、
2022501336.tif 000756
、
2022501336.tif 000757
、
2022501336.tif 000758
、
2022501336.tif 000759
、
2022501336.tif 000760
、
2022501336.tif 000761
、
2022501336.tif 000762
、
2022501336.tif 000763
、
2022501336.tif 000764
、
2022501336.tif 000765
、
2022501336.tif 000766
、
2022501336.tif 000767
、または
2022501336.tif 000768
である。
【０６１８】
一部の実施形態では、Ｒ３１は
2022501336.tif 000769
である。
【０６１９】
一部の実施形態では、Ｒ３２ａ及びＲ３２ｂのそれぞれは独立して、
2022501336.tif 000770
、
2022501336.tif 000771
、
2022501336.tif 000772
、
2022501336.tif 000773
、
2022501336.tif 000774
、
2022501336.tif 000775
、
2022501336.tif 000776
、
2022501336.tif 000777
、
2022501336.tif 000778
、
2022501336.tif 000779
、
2022501336.tif 000780
、
2022501336.tif 000781
、
2022501336.tif 000782
、
2022501336.tif 000783
、または
2022501336.tif 000784
である。
【０６２０】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000785
式ＳＸ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000786
であり、
2022501336.tif 000787
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000788
を形成し、
Ｒ３３ａは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは
2022501336.tif 000789
であり、式中、Ｒ３５は任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ６−Ｃ１０アリールであり、
Ｒ３３ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、または、
Ｒ３５及びＲ３３ｂは、それぞれが結合している原子と共に、任意選択的に置換されたＣ３−Ｃ９ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ３４は、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキルである。
【０６２１】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸａの構造、
2022501336.tif 000790
式ＳＸａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６２２】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸｂの構造、
2022501336.tif 000791
式ＳＸｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６２３】
一部の実施形態では、Ｒ３３ａは
2022501336.tif 000792
である。
【０６２４】
一部の実施形態では、Ｒ３５は、
2022501336.tif 000793
、
2022501336.tif 000794
、または
2022501336.tif 000795
である。
【０６２５】
一部の実施形態では、Ｒ３５は
2022501336.tif 000796
であり、式中、
ｔは０、１、２、３、４、または５であり、
それぞれのＲ３６は独立して、ハロ、ヒドロキシル、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキルである。
【０６２６】
一部の実施形態では、Ｒ３４は
2022501336.tif 000797
であり、式中、ｕは、０、１、２、３、または４である。
【０６２７】
一部の実施形態では、ｕは３または４である。
【０６２８】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸＩの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000798
式ＳＸＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000799
であり、
2022501336.tif 000800
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000801
を形成し、
Ｒ３７ａ及びＲ３７ｂのそれぞれは独立して、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６ヘテロアルキル、ハロ、またはヒドロキシルである。
【０６２９】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸＩａの構造、
2022501336.tif 000802
式ＳＸＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６３０】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸＩｂの構造、
2022501336.tif 000803
式ＳＸＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６３１】
一部の実施形態では、Ｒ３７ａはヒドロキシルである。
【０６３２】
一部の実施形態では、Ｒ３７ｂは、
2022501336.tif 000804
、
2022501336.tif 000805
、
2022501336.tif 000806
、
2022501336.tif 000807
、
2022501336.tif 000808
、
2022501336.tif 000809
、
2022501336.tif 000810
、
2022501336.tif 000811
、
2022501336.tif 000812
、
2022501336.tif 000813
、
2022501336.tif 000814
、
2022501336.tif 000815
、
2022501336.tif 000816
、
2022501336.tif 000817
、または
2022501336.tif 000818
である。
【０６３３】
一態様では、本発明の構造脂質は、式ＳＸＩＩの構造を有する化合物、
2022501336.tif 000819
式ＳＸＩＩ、
またはその薬学的に許容される塩を特徴とし、
式中、
Ｒ１ａは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり、
ＸはＯまたはＳであり、
Ｒ２はＨまたはＯＲＡであり、式中、ＲＡはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３はＨまたは
2022501336.tif 000820
であり、
2022501336.tif 000821
は単結合または二重結合を表し、
ＷはＣＲ４ａまたはＣＲ４ａＲ４ｂであり、式中、Ｗと隣接炭素の間に二重結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａであり、Ｗと隣接炭素の間に単結合が存在する場合、ＷはＣＲ４ａＲ４ｂであり、
Ｒ４ａ及びＲ４ｂのそれぞれは独立して、Ｈ、ハロ、または任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ５ａ及びＲ５ｂのそれぞれは独立して、ＨまたはＯＲＡであり、または、Ｒ５ａ及びＲ５ｂは、それぞれが結合している原子と共に結合して、
2022501336.tif 000822
を形成し、
Ｑは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲＥであり、式中、ＲＥはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３８は任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０６３４】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩａの構造、
2022501336.tif 000823
式ＳＸＩＩａ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６３５】
一部の実施形態では、化合物は、式ＳＸＩＩｂの構造、
2022501336.tif 000824
式ＳＸＩＩｂ、
またはその薬学的に許容される塩を有する。
【０６３６】
一部の実施形態では、ＱはＮＲＥである。
【０６３７】
一部の実施形態では、ＲＥはＨまたは
2022501336.tif 000825
である。
【０６３８】
一部の実施形態では、ＲＥはＨである。一部の実施形態では、ＲＥは
2022501336.tif 000826
である。
【０６３９】
一部の実施形態では、Ｒ３８は
2022501336.tif 000827
であり、式中、ｕは、０、１、２、３、または４である。
【０６４０】
一部の実施形態では、ＸはＯである。
【０６４１】
一部の実施形態では、Ｒ１ａはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０６４２】
一部の実施形態では、Ｒ１ａはＨである。
【０６４３】
一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＨまたは任意選択的に置換されたＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０６４４】
一部の実施形態では、Ｒ１ｂはＨである。
【０６４５】
一部の実施形態では、Ｒ２はＨである。
【０６４６】
一部の実施形態では、Ｒ４ａはＨである。
【０６４７】
一部の実施形態では、Ｒ４ｂはＨである。
【０６４８】
一部の実施形態では、
2022501336.tif 000828
は二重結合を表す。
【０６４９】
一部の実施形態では、Ｒ３はＨである。一部の実施形態では、Ｒ３は
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である。
【０６５０】
一部の実施形態では、Ｒ５ａはＨである。
【０６５１】
一部の実施形態では、Ｒ５ｂはＨである。
【０６５２】
一態様では、本発明は、表１中の化合物Ｓ−１〜４２、Ｓ−１５０、Ｓ−１５４、Ｓ−１６２〜１６５、Ｓ−１６９〜１７２、及びＳ−１８４のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。本明細書で使用する場合、「ＣＭＰＤ」とは「化合物」のことを意味する。
表１．式ＳＩの化合物
2022501336.tif 000830
2022501336.tif 000831
2022501336.tif 000832
2022501336.tif 000833
【０６５３】
一態様では、本発明は、表２中の化合物Ｓ−４３〜５０及びＳ−１７５〜１７８のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表２．式ＳＩＩの化合物
2022501336.tif 000834
【０６５４】
一態様では、本発明は、表３中の化合物Ｓ−５１〜６７、Ｓ−１４９、及びＳ−１５３のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表３．式ＳＩＩＩの化合物
2022501336.tif 000835
2022501336.tif 000836
【０６５５】
一態様では、本発明は、表４中の化合物Ｓ−６８〜７３のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表４．式ＳＩＶの化合物
2022501336.tif 000837
【０６５６】
一態様では、本発明は、表５中の化合物Ｓ−７４〜７８のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表５．式ＳＶの化合物
2022501336.tif 000838
【０６５７】
一態様では、本発明は、表６中の化合物Ｓ−７９またはＳ−８０のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表６．式ＳＶＩの化合物
2022501336.tif 000839
【０６５８】
一態様では、本発明は、表７中の化合物Ｓ−８１〜８７、Ｓ−１５２、及びＳ−１５７のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表７．式Ｓ−ＶＩＩの化合物
2022501336.tif 000840
【０６５９】
一態様では、本発明は、表８中の化合物Ｓ−８８〜９７のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表８．式ＳＶＩＩＩの化合物
2022501336.tif 000841
【０６６０】
一態様では、本発明は、表９中の化合物Ｓ−９８〜１０５及びＳ−１８０〜１８２のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表９．式ＳＩＸの化合物
2022501336.tif 000842
【０６６１】
一態様では、本発明は、表１０中の化合物Ｓ−１０６の構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１０．式ＳＸの化合物
2022501336.tif 000843
【０６６２】
一態様では、本発明は、表１１中の化合物Ｓ−１０７またはＳ−１０８の構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１１．式ＳＸＩの化合物
2022501336.tif 000844
【０６６３】
一態様では、本発明は、表１２中の化合物Ｓ−１０９の構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１２．式ＳＸＩＩの化合物
2022501336.tif 000845
【０６６４】
一態様では、本発明は、表１３中の化合物Ｓ−１１０〜１３０、Ｓ−１５５、Ｓ−１５６、Ｓ−１５８、Ｓ−１６０、Ｓ−１６１、Ｓ−１６６〜１６８、Ｓ−１７３、Ｓ−１７４、及びＳ−１７９のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１３．本発明の化合物
2022501336.tif 000846
2022501336.tif 000847
2022501336.tif 000848
【０６６５】
一態様では、本発明は、表１４中の化合物Ｓ−１３１〜１３３のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１４．本発明の化合物
2022501336.tif 000849
【０６６６】
一態様では、本発明は、表１５中の化合物Ｓ−１３４〜１４８、Ｓ−１５１、及びＳ−１５９のうちのいずれか１つの構造を有する化合物または任意のその薬学的に許容される塩を特徴とする。
表１５．本発明の化合物
2022501336.tif 000850
2022501336.tif 000851
【０６６７】
本発明の脂質ナノ粒子の１種または複数種の構造脂質は、構造脂質の組成物（例えば、２種またはそれ以上の構造脂質の混合物、３種またはそれ以上の構造脂質の混合物、４種またはそれ以上の構造脂質の混合物、または５種またはそれ以上の構造脂質の混合物）であってもよい。構造脂質の組成物としては、ステロール（例えば、コレステロール、β−シトステロール、フェコステロール、エルゴステロール、シトステロール、カンペステロール、スティグマステロール、ブラシカステロール、エルゴステロール、トマチジン、トマチン、ウルソール酸、αトコフェロール、または、表１５中の化合物１３４〜１４８、１５１、及び１５９のうちのいずれか１つ）の任意の組み合わせを挙げることができるがこれらに限定されない。例えば、本発明の脂質ナノ粒子の１種または複数種の構造脂質は、表１６中の組成物１８３であってもよい。
表１６．構造脂質組成物
2022501336.tif 000852
【０６６８】
組成物Ｓ−１８３は、化合物Ｓ−１４１、Ｓ−１４０、Ｓ−１４３、及びＳ−１４８の混合物である。一部の実施形態では、組成物Ｓ−１８３は、約３５％〜約４５％の化合物Ｓ−１４１、約２０％〜約３０％の化合物Ｓ−１４０、約２０％〜約３０％の化合物Ｓ−１４３、及び約５％〜約１５％の化合物Ｓ−１４８を含む。一部の実施形態では、組成物１８３は、約４０％の化合物Ｓ−１４１、約２５％の化合物Ｓ−１４０、約２５％の化合物Ｓ−１４３、及び約１０％の化合物Ｓ−１４８を含む。
【０６６９】
一部の実施形態では、構造脂質はフィトステロールである。一部の実施形態では、フィトステロールは、単独または組み合わせの、シトステロール、スティグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、β−シトステロール、スティグマスタノール、β−シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５−アベナステロール、Δ７−アベナステロール、またはΔ７−スティグマステロール（その類似体、塩、またはエステルを含む）である。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、単一のフィトステロールである。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、異なるフィトステロール（例えば、２、３、４、５、または６種の異なるフィトステロール）の混合物である。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、１種または複数種のフィトステロール及び１種または複数種のズーステロールのブレンド、例えば、フィトステロール（例えば、シトステロール、例えば、β−シトステロールなど）及びコレステロールのブレンドなどである。
【０６７０】
化合物の比率
本発明の脂質ナノ粒子は本明細書に記載の構造構成成分を含んでいてもよい。脂質ナノ粒子の構造構成成分は、化合物Ｓ−１〜１４８のうちのいずれか１つ、本発明の１種または複数種の構造化合物の混合物、及び／または、コレステロール及び／またはフィトステロールと組み合わせた化合物Ｓ−１〜１４８のうちのいずれか１つであってもよい。
【０６７１】
例えば、脂質ナノ粒子の構造構成成分は、コレステロールを含む本発明の１種または複数種の構造化合物（例えば、化合物Ｓ−１〜１４８のいずれか）の混合物であってもよい。コレステロールに対する、脂質ナノ粒子中に含まれる構造化合物のｍｏｌ％は、０〜９９ｍｏｌ％であってもよい。コレステロールに対する、脂質ナノ粒子中に含まれる構造化合物のｍｏｌ％は、約１０ｍｏｌ％、２０ｍｏｌ％、３０ｍｏｌ％、４０ｍｏｌ％、５０ｍｏｌ％、６０ｍｏｌ％、７０ｍｏｌ％、８０ｍｏｌ％、または９０ｍｏｌ％であってもよい。
【０６７２】
一態様では、本発明は、２種またはそれ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２種またはそれ以上のステロールは、β−シトステロール、シトスタノール、カンペステロール、スティグマステロール、及びブラシカステロールのうち少なくとも２種を含む。組成物はコレステロールを追加的に含んでいてもよい。一実施形態では、β−シトステロールは、組成物中における非コレステロールステロールのうちの約３５〜９９％、例えば、約４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上を含む。
【０６７３】
別の態様では、本発明は、２種またはそれ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２種またはそれ以上のステロールはβ−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールは、組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは、組成物中におけるステロールのうちの０．１〜５％を含む。
【０６７４】
一部の実施形態では、組成物はシトスタノールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含む。
【０６７５】
別の態様では、本発明は、２種またはそれ以上のステロールを含む組成物を特徴とし、２種またはそれ以上のステロールはβ−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールは、組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、シトスタノールは、組成物中におけるステロールのうちの０．１〜５％を含む。
【０６７６】
一部の実施形態では、組成物はカンペステロールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含む。
【０６７７】
一部の実施形態では、組成物はカンペステロールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの７５〜８０％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの５〜１０％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの１０〜１５％を含む。
【０６７８】
一部の実施形態では、組成物は別のステロールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの３５〜４５％を含み、スティグマステロールは組成物中におけるステロールのうちの２０〜３０％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの２０〜３０％を含み、ブラシカステロールは組成物中におけるステロールのうちの１〜５％を含む。
【０６７９】
別の態様では、本発明は、複数種の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数種の脂質ナノ粒子はイオン性脂質及び２種またはそれ以上のステロールを含み、２種またはそれ以上のステロールはβ−シトステロール及びカンペステロールを含み、β−シトステロールは、組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは、組成物中におけるステロールのうちの０．１〜５％を含む。
【０６８０】
一部の実施形態では、２種またはそれ以上のステロールはシトスタノールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含む。
【０６８１】
別の態様では、本発明は、複数種の脂質ナノ粒子を含む組成物を特徴とし、複数種の脂質ナノ粒子はイオン性脂質及び２種またはそれ以上のステロールを含み、２種またはそれ以上のステロールはβ−シトステロール及びシトスタノールを含み、β−シトステロールは、組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、シトスタノールは、組成物中におけるステロールのうちの０．１〜５％を含む。
【０６８２】
一部の実施形態では、２種またはそれ以上のステロールはカンペステロールを更に含む。一部の実施形態では、β−シトステロールは組成物中におけるステロールのうちの９５〜９９．９％を含み、カンペステロールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含み、シトスタノールは組成物中におけるステロールのうちの０．０５〜４．９５％を含む。
【０６８３】
（ｉｉｉ）非カチオン性ヘルパー脂質／リン脂質
一部の実施形態では、本明細書に記載の脂質性組成物（例えば、ＬＮＰ）は、１種または複数種の非カチオン性ヘルパー脂質を含む。一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質はリン脂質である。一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質代用品または代替品である。
【０６８４】
本明細書で使用する場合、用語「非カチオン性ヘルパー脂質」とは、少なくとも８炭素長の少なくとも１つの脂肪酸鎖及び少なくとも１つの極性先端基部分を含む脂質のことを意味する。一実施形態では、ヘルパー脂質はホスファチジルコリン（ＰＣ）ではない。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質またはリン脂質代用品である。一部の実施形態では、リン脂質またはリン脂質代用品は、例えば、１つまたは複数の飽和もしくは（ポリ）不飽和リン脂質もしくはリン脂質代用品、またはこれらの組み合わせであってもよい。一般的に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つまたは複数の脂肪酸部分を含む。
【０６８５】
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定群から選択することができる。
【０６８６】
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノレン酸、αリノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定群から選択することができる。
【０６８７】
リン脂質としては、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸などが挙げられるがこれらに限定されない。リン脂質としてはまた、スフィンゴリン脂質、例えば、スフィンゴミエリンなどが挙げられる。
【０６８８】
一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ類似体、ＤＳＰＣ代用品、オレイン酸、またはオレイン酸類似体である。
【０６８９】
一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、非ホスファチジルコリン（ＰＣ）両性イオン脂質、ＤＳＰＣ類似体、オレイン酸、オレイン酸類似体、または１，２−ジステアロイル−ｉ７７−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）代用品である。
【０６９０】
リン脂質
本明細書で開示する医薬組成物の脂質組成物は、１種または複数種の非カチオン性ヘルパー脂質を含んでいてもよい。一部の実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質は、リン脂質、例えば、１種または複数種の飽和もしくは（ポリ）不飽和リン脂質またはこれらの組み合わせである。一般的に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つまたは複数の脂肪酸部分を含む。本明細書で使用する場合、「リン脂質」は、リン酸エステル部分及び１つまたは複数の炭素鎖、例えば、不飽和脂肪酸鎖などを含む脂質である。リン脂質は、１つまたは複数の多重（例えば、二重または三重）結合（例えば、１つまたは複数の不飽和結合）を含んでいてもよい。リン脂質またはその類似体もしくは誘導体はコリンを含んでいてもよい。リン脂質またはその類似体もしくは誘導体はコリンを含んでいなくてもよい。特定のリン脂質は膜への融合を促進し得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つまたは複数の負に荷電したリン脂質と相互作用し得る。リン脂質が膜に融合することにより、脂質含有組成物の１種または複数種の要素が膜を通過することが可能となり得、それにより、例えば、１種または複数種の要素の細胞への送達が可能となる。
【０６９１】
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定群から選択することができる。
【０６９２】
脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノレン酸、αリノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定群から選択することができる。
【０６９３】
特定のリン脂質は膜への融合を促進し得る。例えば、カチオン性リン脂質は、膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つまたは複数の負に荷電したリン脂質と相互作用し得る。リン脂質が膜に融合することにより、脂質含有組成物（例えば、ＬＮＰ）の１種または複数種の要素（例えば、治療薬）が膜を通過することが可能となり得、それにより、例えば、１種または複数種の要素の標的組織への送達が可能となる。
【０６９４】
本開示の脂質ナノ粒子の脂質構成成分は、１種または複数種のリン脂質、例えば、１種または複数種の（ポリ）不飽和脂質などを含んでいてもよい。リン脂質は１つまたは複数の脂質二重層へと自己組織化し得る。一般的に、リン脂質は、リン脂質部分及び１つまたは複数の脂肪酸部分を含んでいてもよい。例えば、リン脂質は、式（Ｈ  ＩＩＩ）の脂質、
2022501336.tif 000853
（Ｈ  ＩＩＩ）、
であってもよく、
式中、Ｒｐはリン脂質部分を表し、Ｒ１及びＲ２は、同一でも異なっていてもよい不飽和結合を含有するまたは含有しない脂肪酸部分を表す。リン脂質部分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２−リゾホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンからなる非限定群から選択してもよい。脂肪酸部分は、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノレン酸、αリノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、及びドコサヘキサエン酸からなる非限定群から選択してもよい。分枝化、酸化、環化、及びアルキンを含む修飾及び置換を有する天然化学種を含む非天然化学種もまた検討される。例えば、リン脂質を、１つまたは複数のアルキン（例えば、１つまたは複数の二重結合が三重結合で置換されたアルケニル基）で官能化してもよく、または、１つまたは複数のアルキン（例えば、１つまたは複数の二重結合が三重結合で置換されたアルケニル基）に架橋してもよい。適切な反応条件下、アルキン基は、アジドに曝露されると、銅触媒付加環化を受け得る。このような反応は、ＬＮＰの脂質二重層を官能化して膜浸透または細胞認識を促進するのに、または、有用な構成成分、例えば、標的化部分またはイメージング部分（例えば、染料）などにＬＮＰをコンジュゲートするのに有用であり得る。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【０６９５】
本明細書に記載の組成物及び方法に有用なリン脂質は、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジウンデカノイル−ｓｎ−グリセロ−ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２−ジ−Ｏ−オクタデセニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１−オレオイル−２−コレステリルヘミサクシノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１−ヘキサデシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｃ１６  Ｌｙｓｏ  ＰＣ）、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（１８：３（シス）ＰＣ）、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（２２：６（シス）ＰＣ）、１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（４ＭＥ  １６．０  ＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＥ（１８：２／１８：２））、１，２−ジリノレノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＥ  １８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ））、１，２−ジアラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＡＰＥ  １８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ））、１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（２２：６（シス）ＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、及びスフィンゴミエリンからなる非限定群から選択してもよい。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【０６９６】
一部の実施形態では、ＬＮＰはＤＳＰＣを含む。特定の実施形態では、ＬＮＰはＤＯＰＥを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰはＤＭＰＥを含む。一部の実施形態では、ＬＮＰはＤＳＰＣとＤＯＰＥの両方を含む。
【０６９７】
一実施形態では、ＬＮＰに用いる非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、及びＤＯＰＣ、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される。
【０６９８】
リン脂質としては、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジン酸などが挙げられるがこれらに限定されない。リン脂質としてはまた、スフィンゴリン脂質、例えば、スフィンゴミエリンなどが挙げられる。
【０６９９】
リン脂質の例としては、以下、
2022501336.tif 000854
、
（ＤＳＰＣ）、
2022501336.tif 000855
、
（ＤＯＰＣ）、
2022501336.tif 000856
、
（ＰＣ（１８：２（９２，１２２）／１８：２（９２，１２２））、
2022501336.tif 000857
、
（ＤＡＰＣ）、
2022501336.tif 000858
、
（２２：６（シス）ＰＣ）、
2022501336.tif 000859
、
（ＤＳＰＥ）、
2022501336.tif 000860
、
（ＤＯＰＥ）、
2022501336.tif 000861
、
ＰＥ１８：２／１８：２、
2022501336.tif 000862
、
ＰＥ（１８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ／１８：３（９Ｚ，１２Ｚ，１５Ｚ））、
2022501336.tif 000863
、
ＤＡＰＥ、
2022501336.tif 000864
、
２２：６ＰＥ、
2022501336.tif 000865
、
（Ｌｙｓｏ  ＰＣ１８：１）、
2022501336.tif 000866
、
Ｃｍｐｄ  Ｈ  ４１６
2022501336.tif 000867
、
ＭＡＰＣＨＯ−１６、
2022501336.tif 000868
、
エデルトシン、及び
2022501336.tif 000869
Ｃｍｐｄ  Ｈ  ４１７
2022501336.tif 000870
ＤＰＰＣ
2022501336.tif 000871
ＤＭＰＣ
2022501336.tif 000872
Ｃｍｐｄ  Ｈ  ４１８
2022501336.tif 000873
Ｃｍｐｄ  Ｈ  ４１９
2022501336.tif 000874
Ｃｍｐｄ  Ｈ  ４２０
2022501336.tif 000875
Ｃｍｐｄ  Ｈ  ４２１
2022501336.tif 000876
Ｃｍｐｄ  Ｈ  ４２２
が挙げられるがこれらに限定されない。
【０７００】
特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、ＤＳＰＣ（１，２−ジオクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）の類似体またはバリアントである。特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、式（Ｈ  ＩＸ）の化合物
2022501336.tif 000877
（Ｈ  ＩＸ）、
またはその塩であり、
式中、
それぞれのＲ１は独立して、任意選択的に置換されたアルキルであり、または任意選択的に、２つのＲ１は、介在原子と共に連結して、任意選択的に置換された単環式カルボシクリルまたは任意選択的に置換された単環式ヘテロシクリルを形成し、または任意選択的に、３つのＲ１は、介在原子と共に連結して、任意選択的に置換された二環式カルボシクリルまたは任意選択的に置換された二環式ヘテロシクリルを形成し、
ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは式
2022501336.tif 000878
または
2022501336.tif 000879
であり、
Ｌ２のそれぞれの例は独立して、結合または任意選択的に置換されたＣ１−６アルキレンであり、式中、任意選択的に置換されたＣ１−６アルキレンの１つのメチレンユニットは、−Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、または−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−で任意選択的に置換されており、
Ｒ２のそれぞれの例は独立して、任意選択的に置換されたＣ１−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１−３０アルキニルであり、任意選択的に、式中、Ｒ２の１つまたは複数のメチレンユニットは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で置換されており、
ＲＮのそれぞれの例は独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールであり、
化合物が式の化合物、
2022501336.tif 000880
、
ではない場合、
ｐは１または２であり、
式中、Ｒ２のそれぞれの例は独立して、非置換アルキル、非置換アルケニル、または非置換アルキニルである。
【０７０１】
ｉ）リン脂質先端部の修飾
特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾リン脂質先端部（例えば、修飾コリン基）を含む。特定の実施形態では、修飾先端部を有するリン脂質は、修飾第四級アミンを有するＤＳＰＣまたはその類似体である。例えば、式（ＩＸ）の実施形態では、Ｒ１のうちの少なくとも１つはメチルではない。特定の実施形態では、Ｒ１のうちの少なくとも１つは水素またはメチルではない。特定の実施形態では、式（ＩＸ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000881
、
2022501336.tif 000882
、
2022501336.tif 000883
、
2022501336.tif 000884
、
2022501336.tif 000885
、
のうちの１つの化合物またはその塩であり、
式中、
それぞれのｔは独立して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
それぞれのｕは独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
それぞれのｖは独立して、１、２、または３である。
【０７０２】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000886
、
2022501336.tif 000887
、
2022501336.tif 000888
、
2022501336.tif 000889
、
2022501336.tif 000890
、
2022501336.tif 000891
、
2022501336.tif 000892
、
2022501336.tif 000893
、
2022501336.tif 000894
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７０３】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ）の化合物は、以下、
2022501336.tif 000895
（化合物Ｈ−４００）、
2022501336.tif 000896
（化合物Ｈ−４０１）、
2022501336.tif 000897
（化合物Ｈ−４０２）、
2022501336.tif 000898
（化合物Ｈ−４０３）、
2022501336.tif 000899
（化合物Ｈ−４０４）、
2022501336.tif 000900
（化合物Ｈ−４０５）、
2022501336.tif 000901
（化合物Ｈ−４０６）、
2022501336.tif 000902
（化合物Ｈ−４０７）、
2022501336.tif 000903
（化合物Ｈ−４０８）、
2022501336.tif 000904
（化合物Ｈ−４０９）、
のうちの１つまたはその塩である。
【０７０４】
一実施形態では、ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質として化合物Ｈ−４０９を含む。
【０７０５】
（ｉｉ）リン脂質尾部の修飾
特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾尾部を含む。特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾尾部を有するＤＳＰＣ（１，２−ジオクタデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）またはその類似体である。本明細書に記載するとおり、「修飾尾部」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖、分枝が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つまたは複数のメチレンが環式基またはヘテロ原子基で置換された脂肪族鎖、またはこれらの任意の組み合わせを有する尾部であってもよい。例えば、特定の実施形態では、（Ｈ  ＩＸ）の化合物は、式（Ｈ  ＩＸ−ａ）の化合物またはその塩であり、式中、Ｒ２の少なくとも１つの例、Ｒ２のそれぞれの例は、任意選択的に置換されたＣ１−３０アルキルであり、式中、Ｒ２の１つまたは複数のメチレンユニットは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で置換されている。
【０７０６】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ）の化合物は、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ）の化合物、
2022501336.tif 000905
（Ｈ  ＩＸ−ｃ）、
またはその塩であり、
式中、
それぞれのｘは独立して、０〜３０の整数（０及び３０を含む）であり、
Ｇのそれぞれの例は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−からなる群から独立して選択される。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【０７０７】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ−１）の化合物、
2022501336.tif 000906
（Ｈ  ＩＸ−ｃ−１）、
またはその塩であり、
式中、
ｖのそれぞれの例は独立して、１、２、または３である。
【０７０８】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ−２）の化合物、
2022501336.tif 000907
（Ｈ  ＩＸ−ｃ−２）、
またはその塩である。
【０７０９】
特定の実施形態では、式（ＩＸ−ｃ）の化合物は、以下の式の化合物、
2022501336.tif 000908
、
またはその塩である。
【０７１０】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ）の化合物は、以下、
2022501336.tif 000909
、
またはその塩である。
【０７１１】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ−３）の化合物、
2022501336.tif 000910
（Ｈ  ＩＸ−ｃ−３）、
またはその塩である。
【０７１２】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ）の化合物は、以下の式の化合物、
2022501336.tif 000911
、
またはその塩である。
【０７１３】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ−ｃ）の化合物は、以下、
2022501336.tif 000912
、
またはその塩である。
【０７１４】
特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、式中、第四級アミンをホスホリル基に連結させているアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。それゆえ、特定の実施形態では、本発明において有用または潜在的に有用なリン脂質は、式（Ｈ  ＩＸ）の化合物であり、式中、ｎは１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000913
、
2022501336.tif 000914
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７１５】
特定の実施形態では、式（Ｈ  ＩＸ）の化合物は、以下、
2022501336.tif 000915
2022501336.tif 000916
2022501336.tif 000917
2022501336.tif 000918
（化合物Ｈ−４１１）
2022501336.tif 000919
2022501336.tif 000920
（化合物Ｈ−４１２）、
2022501336.tif 000921
（化合物Ｈ−４１３）、
2022501336.tif 000922
（化合物Ｈ−４１４）、
のうちの１つまたはその塩である。
【０７１６】
特定の実施形態では、本発明のリン脂質の代わりに代替脂質を使用する。このような代替脂質の非限定例としては、以下、
2022501336.tif 000923
、
2022501336.tif 000924
、
2022501336.tif 000925
、
2022501336.tif 000926
、
2022501336.tif 000927
、
2022501336.tif 000928
、及び、
2022501336.tif 000929
が挙げられる。
【０７１７】
リン脂質尾部の修飾
特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は修飾尾部を含む。特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、修飾尾部を有するＤＳＰＣまたはその類似体である。本明細書に記載するとおり、「修飾尾部」は、より短いまたはより長い脂肪族鎖、分枝が導入された脂肪族鎖、置換基が導入された脂肪族鎖、１つまたは複数のメチレンが環式基またはヘテロ原子基で置換された脂肪族鎖、またはこれらの任意の組み合わせを有する尾部であってもよい。例えば、特定の実施形態では、（Ｈ  Ｉ）の化合物は、式（Ｈ  Ｉ−ａ）の化合物またはその塩であり、式中、Ｒ２の少なくとも１つの例、Ｒ２のそれぞれの例は、任意選択的に置換されたＣ１−３０アルキルであり、式中、Ｒ２の１つまたは複数のメチレンユニットは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で置換されている。
【０７１８】
特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ−ａ）の化合物は、式（Ｈ  Ｉ−ｃ）の化合物、
2022501336.tif 000930
（Ｈ  Ｉ−ｃ）、
またはその塩であり、
式中、
それぞれのｘは独立して、０〜３０の整数（０及び３０を含む）であり、
Ｇのそれぞれの例は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−からなる群から独立して選択される。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【０７１９】
特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ  Ｉ−ｃ−１）の化合物、
2022501336.tif 000931
（Ｈ  Ｉ−ｃ−１）、
またはその塩であり、
式中、
ｖのそれぞれの例は独立して、１、２、または３である。
【０７２０】
特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ  Ｉ−ｃ−２）の化合物、
2022501336.tif 000932
（Ｈ  Ｉ−ｃ−２）、
またはその塩である。
【０７２１】
特定の実施形態では、式（Ｉ−ｃ）の化合物は、以下の式の化合物、
2022501336.tif 000933
、
またはその塩である。
【０７２２】
特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ−ｃ）の化合物は、以下、
2022501336.tif 000934
、
またはその塩である。
【０７２３】
特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ−ｃ）の化合物は、式（Ｈ  Ｉ−ｃ−３）の化合物、
2022501336.tif 000935
（Ｈ  Ｉ−ｃ−３）、
またはその塩である。
【０７２４】
特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ−ｃ）の化合物は、以下の式の化合物、
2022501336.tif 000936
、
またはその塩である。
【０７２５】
特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ−ｃ）の化合物は、以下、
2022501336.tif 000937
、
またはその塩である。
【０７２６】
ホスホコリンリンカーの修飾
特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、修飾ホスホコリン部分を含み、式中、第四級アミンをホスホリル基に連結させているアルキル鎖はエチレンではない（例えば、ｎは２ではない）。それゆえ、特定の実施形態では、本発明において有用なリン脂質は、式（Ｈ  Ｉ）の化合物であり、式中、ｎは１、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。例えば、特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000938
、
2022501336.tif 000939
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７２７】
特定の実施形態では、式（Ｈ  Ｉ）の化合物は、以下、
2022501336.tif 000940
2022501336.tif 000941
2022501336.tif 000942
2022501336.tif 000943
（Ｃｍｐｄ  Ｈ  １６２）
2022501336.tif 000944
2022501336.tif 000945
（Ｃｍｐｄ  Ｈ  １５４）
2022501336.tif 000946
（Ｃｍｐｄ  Ｈ  １５６）
2022501336.tif 000947
（Ｃｍｐｄ  Ｈ  １６３）、
のうちの１つまたはその塩である。
【０７２８】
以下の実施例において示すとおり、ＤＳＰＣ以外のリン脂質を有する多数のＬＮＰ製剤を調製し、活性についての試験を行った。
【０７２９】
リン脂質代用品または代替品
一部の実施形態では、脂質性組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりにオレイン酸またはオレイン酸類似体を含む。一部の実施形態では、オレイン酸類似体は、修飾オレイン酸尾部、修飾カルボン酸部分、またはその両方を含む。一部の実施形態では、オレイン酸類似体は、オレイン酸のカルボン酸部分が異なる基で置換された化合物である。
【０７３０】
一部の実施形態では、脂質性組成物（例えば、脂質ナノ粒子）は、リン脂質の代わりに異なる両性イオン基を含む。
【０７３１】
例示的なリン脂質代用品及び／または代替品は、公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０１７／０９９８２３（参照により本明細書に組み込まれる）において提供されている。
【０７３２】
例示的なリン脂質代用品及び／または代替品は、公開ＰＣＴ出願ＷＯ２０１７／０９９８２３（参照により本明細書に組み込まれる）において提供されている。
【０７３３】
（ｉｖ）ＰＥＧ脂質
ＰＥＧ脂質の非限定例としては、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸、ＰＥＧ−セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ−ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ−ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ならびにＰＥＧ修飾１，２−ジアシルオキシプロパン−３−アミンが挙げられる。このような脂質はまた、ＰＥＧ化脂質とも呼ばれる。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質であってもよい。
【０７３４】
一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質としては、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール  メトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＭＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［アミノ（ポリエチレングリコール）］（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）、ＰＥＧ−ジステリルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＳＧ）、ＰＥＧ−ジパルメトレイル、ＰＥＧ−ジオレイル、ＰＥＧ−ジステアリル、ＰＥＧ−ジアシルグリカミド（ＰＥＧ−ＤＡＧ）、ＰＥＧ−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＰＰＥ）、またはＰＥＧ−１，２−ジミリスチルオキソプロピル−３−アミン（ＰＥＧ−ｃ−ＤＭＡ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０７３５】
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【０７３６】
一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質の脂質部分は、約Ｃ１４〜約Ｃ２２、好ましくは約Ｃ１４〜約Ｃ１６の長さを有する脂質部分を含む。一部の実施形態では、ＰＥＧ部分、例えば、ｍＰＥＧ−ＮＨ２は、約１０００、２０００、５０００、１０，０００、１５，０００、または２０，０００ダルトンのサイズを有する。一実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ２ｋ−ＤＭＧである。
【０７３７】
一実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子は、非拡散性ＰＥＧであるＰＥＧ脂質を含んでいてもよい。非拡散性ＰＥＧの非限定例としてはＰＥＧ−ＤＳＧ及びＰＥＧ−ＤＳＰＥが挙げられる。
【０７３８】
ＰＥＧ脂質は当該技術分野において周知であり、例えば、米国特許第８１５８６０１号及び国際公開第ＷＯ２０１５／１３０５８４Ａ２号（その全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているＰＥＧ脂質などである。
【０７３９】
一般的に、本明細書に記載の、様々な式のその他の脂質構成成分（例えば、ＰＥＧ脂質）の一部は、２０１６年１２月１０日出願、表題「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ」の国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０００１２９号（その全体は参照により組み込まれる）に記載されているとおりに合成することができる。
【０７４０】
脂質ナノ粒子組成物の脂質構成成分は、ポリエチレングリコールを含む１種または複数種の分子、例えば、ＰＥＧ脂質またはＰＥＧ修飾脂質などを含んでいてもよい。このような化学種を、代替的に、ＰＥＧ化脂質と呼んでもよい。ＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物を含む非限定群から選択してもよい。例えば、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、またはＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質であってもよい。
【０７４１】
一部の実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ  ＤＭＧの修飾形態である。ＰＥＧ−ＤＭＧは、以下の構造、
2022501336.tif 000948
を有する。
【０７４２】
一実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は、国際公開第ＷＯ２０１２０９９７５５号（その内容全体は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているＰＥＧ化脂質であってもよい。本明細書に記載のこれらの例示的なＰＥＧ脂質のいずれかを修飾して、ＰＥＧ鎖上にヒドロキシル基を含ませてもよい。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＯＨ脂質である。本明細書において一般的に定義しているとおり、「ＰＥＧ−ＯＨ脂質」（本明細書ではまた、「ヒドロキシ−ＰＥＧ化脂質」と呼ぶ）は、脂質上に１つまたは複数のヒドロキシル（−ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＯＨ脂質は、ＰＥＧ鎖上に１つまたは複数のヒドロキシル基を含む。特定の実施形態では、ＰＥＧ−ＯＨ脂質またはヒドロキシ−ＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ鎖の末端に−ＯＨ基を含む。それぞれの可能性は本発明の別の実施形態を表す。
【０７４３】
一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ）の化合物、
2022501336.tif 000949
（ＰＩ）、
またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
ｒは、１〜１００の整数であり、
Ｒ５ＰＥＧは、Ｃ１０−４０アルキル、Ｃ１０−４０アルケニル、またはＣ１０−４０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ５ＰＥＧの１つまたは複数のメチレン基は独立して、Ｃ３−１０カルボシクリレン、４〜１０員環ヘテロシクリレン、Ｃ６−１０アリーレン、４〜１０員環ヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で置換されており、
ＲＮのそれぞれの例は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、または窒素保護基である。
【０７４４】
例えば、Ｒ５ＰＥＧはＣ１７アルキルである。例えば、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩ−ａ）の化合物、
2022501336.tif 000950
（ＰＩ−ａ）、
またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｒは、１〜１００の整数である。
【０７４５】
例えば、ＰＥＧ脂質は、以下の式の化合物
2022501336.tif 000951
（ＰＥＧ  １、以下の化合物４２８または化合物Ｉとも呼ばれる）、
またはその塩もしくは異性体である。
【０７４６】
ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ）の化合物
2022501336.tif 000952
（ＰＩＩ）、
またはその塩もしくは異性体であってもよく、
式中、
ｓは、１〜１００の整数であり、
Ｒ’’は、水素、Ｃ１−１０アルキル、または酸素保護基であり、
Ｒ７ＰＥＧは、Ｃ１０−４０アルキル、Ｃ１０−４０アルケニル、またはＣ１０−４０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ５ＰＥＧの１つまたは複数のメチレン基は独立して、Ｃ３−１０カルボシクリレン、４〜１０員環ヘテロシクリレン、Ｃ６−１０アリーレン、４〜１０員環ヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で置換されており、
ＲＮのそれぞれの例は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、または窒素保護基である。
【０７４７】
一部の実施形態では、Ｒ７ＰＥＧはＣ１０−６０アルキルであり、Ｒ７ＰＥＧのメチレン基のうちの１つまたは複数は−Ｃ（Ｏ）−で置換されている。例えば、Ｒ７ＰＥＧはＣ３１アルキルであり、Ｒ７ＰＥＧのメチレン基のうちの２つは−Ｃ（Ｏ）−で置換されている。
【０７４８】
一部の実施形態では、Ｒ’’はメチルである。
【０７４９】
一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、式（ＰＩＩ−ａ）の化合物、
2022501336.tif 000953
（ＰＩＩ−ａ）、
またはその塩もしくは異性体であり、式中、ｓは、１〜１００の整数である。
【０７５０】
例えば、ＰＥＧ脂質は、以下の式の化合物
2022501336.tif 000954
（ＰＥＧ−２）、
またはその塩もしくは異性体である。
【０７５１】
特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は式（ＰＩＩＩ）の化合物である。本明細書では、式（ＰＩＩＩ）の化合物
2022501336.tif 000955
（ＰＩＩＩ）、
またはその塩を提供し、
式中、
Ｒ３は−ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１〜１００の整数（１及び１００を含む）であり、
Ｌ１は任意選択的に置換されたＣ１−１０アルキレンであり、式中、任意選択的に置換されたＣ１−１０アルキレンの少なくとも１つのメチレンは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）で置換されており、
Ｄは、クリックケミストリーにより得られた部分または生理学的条件下で開裂可能な部分であり、
ｍは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり、
Ａは式
2022501336.tif 000956
または
2022501336.tif 000957
であり、
Ｌ２のそれぞれの例は独立して、結合または任意選択的に置換されたＣ１−６アルキレンであり、式中、任意選択的に置換されたＣ１−６アルキレンの１つのメチレンユニットは、Ｏ、Ｎ（ＲＮ）、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、またはＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）で任意選択的に置換されており、
Ｒ２のそれぞれの例は独立して、任意選択的に置換されたＣ１−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１−３０アルキニルであり、任意選択的に、式中、Ｒ２の１つまたは複数のメチレンユニットは独立して、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置換されており、
ＲＮのそれぞれの例は独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基であり、
環Ｂは、任意選択的に置換されたカルボシクリル、任意選択的に置換されたヘテロシクリル、任意選択的に置換されたアリール、または任意選択的に置換されたヘテロアリールであり、
ｐは１または２である。
【０７５２】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物はＰＥＧ−ＯＨ脂質（すなわち、Ｒ３は−ＯＲＯであり、ＲＯは水素である）である。特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ＯＨ）の化合物
2022501336.tif 000958
（ＰＩＩＩ−ＯＨ）、
またはその塩である。
【０７５３】
特定の実施形態では、Ｄはクリックケミストリーにより得られた部分（例えば、トリアゾール）である。特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ａ−１）または（ＰＩＩＩ−ａ−２）の化合物
2022501336.tif 000959
または
2022501336.tif 000960
（ＰＩＩＩ−ａ−１）  （ＰＩＩＩ−ａ−２）、
またはその塩である。
【０７５４】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000961
、
2022501336.tif 000962
、
2022501336.tif 000963
、
2022501336.tif 000964
、
のうちの１つの化合物またはその塩であり、
式中、
ｓは０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０７５５】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000965
、
2022501336.tif 000966
、
2022501336.tif 000967
、
2022501336.tif 000968
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７５６】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000969
、
2022501336.tif 000970
、
2022501336.tif 000971
、
2022501336.tif 000972
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７５７】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000973
（化合物Ｐ−４１５Ａ）、
2022501336.tif 000974
（化合物Ｐ−４１５）
2022501336.tif 000975
（化合物Ｐ−４１６Ａ）、
2022501336.tif 000976
（化合物Ｐ−４１６）
2022501336.tif 000977
（化合物Ｐ−４１７）、
2022501336.tif 000978
（化合物Ｐ−４１８）、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７５８】
特定の実施形態では、Ｄは生理学的条件下で開裂可能な部分（例えば、エステル、アミド、カーボネート、カルバメート、ウレア）である。特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ｂ−１）または（ＰＩＩＩ−ｂ−２）の化合物
2022501336.tif 000979
2022501336.tif 000980
（ＰＩＩＩ−ｂ−１）  （ＰＩＩＩ−ｂ−２）、
またはその塩である。
【０７５９】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、式（ＰＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ）または（ＰＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ）の化合物
2022501336.tif 000981
2022501336.tif 000982
（ＰＩＩＩ−ｂ−１−ＯＨ）  （ＰＩＩＩ−ｂ−２−ＯＨ）、
またはその塩である。
【０７６０】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000983
、
2022501336.tif 000984
、
2022501336.tif 000985
、
2022501336.tif 000986
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７６１】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000987
、
2022501336.tif 000988
、
2022501336.tif 000989
、
2022501336.tif 000990
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７６２】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000991
、
2022501336.tif 000992
、
2022501336.tif 000993
、
2022501336.tif 000994
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７６３】
特定の実施形態では、式（ＰＩＩＩ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000995
、
2022501336.tif 000996
、
のうちの１つの化合物またはその塩である。
【０７６４】
特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質はＰＥＧ化脂肪酸である。特定の実施形態では、本発明において有用なＰＥＧ脂質は式（ＰＩＶ）の化合物である。本明細書では、式（ＰＩＶ）の化合物
2022501336.tif 000997
（ＰＩＶ）、
またはその塩を提供し、
式中、
Ｒ３は−ＯＲＯであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または酸素保護基であり、
ｒは、１〜１００の整数（１及び１００を含む）であり、
Ｒ５は、任意選択的に置換されたＣ１０−４０アルキル、任意選択的に置換されたＣ１０−４０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ１０−４０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ５の１つまたは複数のメチレン基は、任意選択的に置換されたカルボシクリレン、任意選択的に置換されたヘテロシクリレン、任意選択的に置換されたアリーレン、任意選択的に置換されたヘテロアリーレン、Ｎ（ＲＮ）、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｓ、ＳＣ（Ｏ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）、Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）、ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｓ）、Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）、ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｏ、ＯＳ（Ｏ）２Ｏ、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）２、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２、Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）、またはＮ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏで置換されており、
ＲＮのそれぞれの例は独立して、水素、任意選択的に置換されたアルキル、または窒素保護基である。
【０７６５】
特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、式（ＰＩＶ−ＯＨ）の化合物、
2022501336.tif 000998
（ＰＩＶ−ＯＨ）、
またはその塩である。一部の実施形態では、ｒは４０〜５０である。一部の実施形態では、ｒは４５である。
【０７６６】
特定の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、以下の式、
2022501336.tif 000999
（化合物Ｐ−４１９）、
2022501336.tif 001000
（化合物Ｐ−４２０）、
2022501336.tif 001001
（化合物Ｐ−４２１）、
2022501336.tif 001002
（化合物Ｐ−４２２）、
2022501336.tif 001003
（化合物Ｐ−４２３）、
2022501336.tif 001004
（化合物Ｐ−４２４）、
2022501336.tif 001005
（化合物Ｐ−４２５）、
2022501336.tif 001006
（化合物Ｐ−４２６）、
のうちの１つの化合物またはその塩である。一部の実施形態では、ｒは４０〜５０である。一部の実施形態では、ｒは４５である。
【０７６７】
更にその他の実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、
2022501336.tif 001007
（化合物Ｐ−４２７）、
またはその塩である。
【０７６８】
一実施形態では、式（ＰＩＶ）の化合物は、
2022501336.tif 001008
（化合物Ｐ−４２８）
である。
【０７６９】
一態様において、本明細書では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質、
2022501336.tif 001009
（ＰＶ）、
またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
式中、
Ｌ１は、結合、任意選択的に置換されたＣ１−３アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１−３ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２−３アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２−３アルキニレンであり、
Ｒ１は、任意選択的に置換されたＣ５−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ５−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ５−３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（２及び１００を含む）である。
【０７７０】
特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式のＰＥＧ脂質、
2022501336.tif 001010
、
またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｙ１は、結合、−ＣＲ２−、−Ｏ−、−ＮＲＮ−、または−Ｓ−であり、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルであり、
ＲＮは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または窒素保護基である。
【０７７１】
特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001011
、
2022501336.tif 001012
、
2022501336.tif 001013
、
2022501336.tif 001014
、
2022501336.tif 001015
、
2022501336.tif 001016
、
2022501336.tif 001017
、または、
2022501336.tif 001018
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルである。
【０７７２】
特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001019
、
2022501336.tif 001020
、
2022501336.tif 001021
、
2022501336.tif 001022
、
2022501336.tif 001023
、
2022501336.tif 001024
、
2022501336.tif 001025
、または、
2022501336.tif 001026
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
ｓは、５〜２５の整数（５及び２５を含む）である。
【０７７３】
特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001027
、
2022501336.tif 001028
、
2022501336.tif 001029
、
2022501336.tif 001030
、
2022501336.tif 001031
、
2022501336.tif 001032
、
2022501336.tif 001033
、または、
2022501336.tif 001034
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩である。
【０７７４】
特定の実施形態では、式（ＰＶ）のＰＥＧ脂質は、
2022501336.tif 001035
（Ｐ  Ｌ１）、
2022501336.tif 001036
（Ｐ  Ｌ２）、
2022501336.tif 001037
（Ｐ  Ｌ３）、
2022501336.tif 001038
（Ｐ  Ｌ４）、
2022501336.tif 001039
（Ｐ  Ｌ５）、
2022501336.tif 001040
（Ｐ  Ｌ６）、
2022501336.tif 001041
（Ｐ  Ｌ７）、
2022501336.tif 001042
（Ｐ  Ｌ８）、
2022501336.tif 001043
（Ｐ  Ｌ９）、
2022501336.tif 001044
（Ｐ  Ｌ１０）、
2022501336.tif 001045
（Ｐ  Ｌ１１）、
2022501336.tif 001046
（Ｐ  Ｌ１２）、
2022501336.tif 001047
（Ｐ  Ｌ１３）、
2022501336.tif 001048
（Ｐ  Ｌ１４）、及び、
2022501336.tif 001049
（Ｐ  Ｌ１５）、
及びその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。
【０７７５】
別の態様において、本明細書では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質、
2022501336.tif 001050
（ＰＶＩ）、
またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
式中、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（２及び１００を含む）であり、
ｍは、５〜１５の整数（５及び１５を含む）、または１９〜３０の整数（１９及び３０を含む）である。
【０７７６】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001051
、
2022501336.tif 001052
、
2022501336.tif 001053
、または、
2022501336.tif 001054
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩である。
【０７７７】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001055
（Ｐ  Ｌ１６）、
2022501336.tif 001056
（Ｐ  Ｌ１７）、
2022501336.tif 001057
（Ｐ  Ｌ１８）、または、
2022501336.tif 001058
（Ｐ  Ｌ１９）、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩である。
【０７７８】
別の態様において、本明細書では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質、
2022501336.tif 001059
（ＰＶＩＩ）、
またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
式中、
Ｙ２は、−Ｏ−、−ＮＲＮ−、または−Ｓ−であり、
Ｒ１のそれぞれの例は独立して、任意選択的に置換されたＣ５−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ５−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ５−３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ＲＮは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または窒素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（２及び１００を含む）である。
【０７７９】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001060
、または、
2022501336.tif 001061
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩である。
【０７８０】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001062
、または、
2022501336.tif 001063
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
ｓのそれぞれの例は独立して、５〜２５の整数（５及び２５を含む）である。
【０７８１】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001064
、または、
2022501336.tif 001065
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩である。
【０７８２】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩ）のＰＥＧ脂質は、
2022501336.tif 001066
（Ｐ  Ｌ２０）、
2022501336.tif 001067
（Ｐ  Ｌ２１）、
2022501336.tif 001068
（Ｐ  Ｌ２２Ａ）、及び、
2022501336.tif 001069
（Ｐ  Ｌ２２）
2022501336.tif 001070
（Ｐ  Ｌ２３Ａ）、
2022501336.tif 001071
（Ｐ  Ｌ２３）
ならびにその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。
【０７８３】
別の態様において、本明細書では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質、
2022501336.tif 001072
（ＰＶＩＩＩ）、
またはその薬学的に許容される塩を含む脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を提供し、
式中、
Ｌ１は、結合、任意選択的に置換されたＣ１−３アルキレン、任意選択的に置換されたＣ１−３ヘテロアルキレン、任意選択的に置換されたＣ２−３アルケニレン、任意選択的に置換されたＣ２−３アルキニレンであり、
Ｒ１のそれぞれの例は独立して、任意選択的に置換されたＣ５−３０アルキル、任意選択的に置換されたＣ３−３０アルケニル、または任意選択的に置換されたＣ５−３０アルキニルであり、
ＲＯは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または酸素保護基であり、
ｒは、２〜１００の整数（２及び１００を含む）であり、
Ｌ１が−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である場合、ＲＯはメチルではない。
【０７８４】
特定の実施形態では、Ｌ１が任意選択的に置換されたＣ２またはＣ３アルキレンである場合、ＲＯは任意選択的に置換されたアルキルではない。特定の実施形態では、Ｌ１が任意選択的に置換されたＣ２またはＣ３アルキレンである場合、ＲＯは水素である。特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である場合、ＲＯは任意選択的に置換されたアルキルではない。特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＨ２ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である場合、ＲＯは水素である。
【０７８５】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、式、
2022501336.tif 001073
、
のＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｙ１は、結合、−ＣＲ２−、−Ｏ−、−ＮＲＮ−、または−Ｓ−であり、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルであり、
ＲＮは、水素、任意選択的に置換されたアルキル、任意選択的に置換されたアシル、または窒素保護基であり、
Ｙ１が結合または−ＣＨ２−である場合、ＲＯはメチルではない。
【０７８６】
特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＲ２−である場合、ＲＯは任意選択的に置換されたアルキルではない。特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＲ２−である場合、ＲＯは水素である。特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＨ２−である場合、ＲＯは任意選択的に置換されたアルキルではない。特定の実施形態では、Ｌ１が−ＣＨ２−である場合、ＲＯは水素である。
【０７８７】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001074
、
2022501336.tif 001075
、
2022501336.tif 001076
、
2022501336.tif 001077
、
2022501336.tif 001078
、
2022501336.tif 001079
、
2022501336.tif 001080
、
2022501336.tif 001081
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルである。
【０７８８】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001082
、
2022501336.tif 001083
、
2022501336.tif 001084
、
2022501336.tif 001085
、
2022501336.tif 001086
、
2022501336.tif 001087
、
2022501336.tif 001088
、
2022501336.tif 001089
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
Ｒのそれぞれの例は独立して、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されたアルキルであり、
それぞれのｓは独立して、５〜２５の整数（５及び２５を含む）である。
【０７８９】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、以下の式、
2022501336.tif 001090
、
2022501336.tif 001091
、
2022501336.tif 001092
、
2022501336.tif 001093
、
2022501336.tif 001094
、
2022501336.tif 001095
、
2022501336.tif 001096
、
2022501336.tif 001097
、
のうちの１つのＰＥＧ脂質、またはその薬学的に許容される塩である。
【０７９０】
特定の実施形態では、式（ＰＶＩＩＩ）のＰＥＧ脂質は、
2022501336.tif 001098
（Ｐ  Ｌ２４）、
2022501336.tif 001099
（Ｐ  Ｌ２５）、
2022501336.tif 001100
（Ｐ  Ｌ２６）、
2022501336.tif 001101
（Ｐ  Ｌ２７）、
2022501336.tif 001102
（Ｐ  Ｌ２８）、
2022501336.tif 001103
（Ｐ  Ｌ２９）、
2022501336.tif 001104
（Ｐ  Ｌ３０）、
2022501336.tif 001105
（Ｐ  Ｌ３１）、
2022501336.tif 001106
（Ｐ  Ｌ３２）、
2022501336.tif 001107
（Ｐ  Ｌ３３）、
2022501336.tif 001108
（Ｐ  Ｌ３４）、
及びその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される。
【０７９１】
上記または関連する態様のいずれかでは、本発明のＰＥＧ脂質は主要部分であり、式中、ｒは４０〜５０である。
【０７９２】
本明細書で提供するＬＮＰは、特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質を含む既存ＬＮＰ製剤と比較して、高いＰＥＧ分断を示す。「ＰＥＧ分断」とは、本明細書で使用する場合、ＰＥＧ脂質からのＰＥＧ基の開裂のことを意味する。多くの場合、ＰＥＧ脂質からのＰＥＧ基の開裂は、血清が促進するエステラーゼ開裂または加水分解によって生じる。特定の実施形態では、本明細書で提供するＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ分断の比率を制御するように設計されている。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、５％超、１０％超、１５％超、２０％超、２５％超、３０％超、３５％超、４０％超、４５％超、５０％超、５５％超、６０％超、６５％超、７０％超、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、または９８％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、５０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、６０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、７０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、ＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、８０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、ＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、９０％超のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、９０％超のＰＥＧ分断を示す。
【０７９３】
その他の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満、８０％未満、８５％未満、９０％未満、９５％未満、または９８％未満のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、６０％未満のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、７０％未満のＰＥＧ分断を示す。特定の実施形態では、本明細書で提供するＬＮＰは、ヒト血清中において、約６時間後、８０％未満のＰＥＧ分断を示す。
【０７９４】
本明細書で提供するＰＥＧ脂質に加えて、ＬＮＰは、１種または複数種の別の脂質構成成分を含んでいてもよい。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して０．１５〜１５％のモル比率でＬＮＰ中に含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して０．１５〜５％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して１〜５％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して０．１５〜２％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して１〜２％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して約１％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、または２％のモル比率で含まれる。特定の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、その他の脂質に対して約１．５％のモル比率で含まれる。
【０７９５】
一実施形態では、本明細書で開示する医薬組成物の脂質組成物中におけるＰＥＧ脂質の量は、約０．１ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約５ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約４ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％〜約３ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約１．５ｍｏｌ％〜約２ｍｏｌ％、約０．１ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％、約０．５ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％、または約１ｍｏｌ％〜約１．５ｍｏｌ％の範囲である。
【０７９６】
一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるＰＥＧ脂質の量は約２ｍｏｌ％である。一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるＰＥＧ脂質の量は約１．５ｍｏｌ％である。
【０７９７】
一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるＰＥＧ脂質の量は、少なくとも約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、または５ｍｏｌ％である。
【０７９８】
例示的な合成：
化合物：ＨＯ−ＰＥＧ２０００−エステル−Ｃ１８
2022501336.tif 001109
パラジウム炭素（１０重量％、７４ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を入れた窒素充填フラスコに、ベンジル−ＰＥＧ２０００−エステル−Ｃ１８（８２２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を加えた。そのフラスコにおいて真空引き及びＨ２充填を３回行い、室温及び１気圧  Ｈ２で１２時間攪拌した。混合液をセライトに通して濾過し、ＤＣＭですすいでから、濾液を減圧下で濃縮して所望の生成物（６９２ｍｇ、８８％）を得た。この方法を使用すると、ｎ＝４０〜５０である。一実施形態では、得られる多分散混合物のｎは平均４５を示す。
【０７９９】
例えば、ｒの値は、ＰＥＧ脂質内のＰＥＧ部分の分子量に基づいて決定することができる。例えば、２，０００の分子量（例えば、ＰＥＧ２０００）は、約４５のｎの値に対応している。ポリマーが多くの場合異なるポリマー鎖長の分布で存在していることから、任意の組成物におけるｎの値は、技術分野において許容される範囲内における値の分布を含み得る。例えば、このようなポリマー組成物の多分散性を了解している当業者は、実際のＰＥＧ含有組成物、例えば、ＤＭＧ  ＰＥＧ２００  ｐｅｇ脂質組成物における４５のｎ値（例えば、構造式中の）が４０〜５０の間の値の分布を示し得るということを理解するであろう。
【０８００】
一部の態様では、本明細書で開示する医薬組成物のＬＮＰは、ＰＥＧ脂質を含まない。
【０８０１】
一実施形態では、本開示のＬＮＰはＰＥＧ脂質を含む。一実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ  ＤＭＧではない。一部の態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物からなる群から選択される。一部の態様では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−ｃ−ＤＯＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＧ脂質、ＰＥＧ−ＤＬＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＭＰＥ脂質、ＰＥＧ−ＤＰＰＣ脂質、及びＰＥＧ−ＤＳＰＥ脂質からなる群から選択される。その他の態様では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧである。
【０８０２】
一実施形態では、本開示のＬＮＰは、分枝鎖である場合、約１４よりも長いまたは約１０よりも長い鎖長を有するＰＥＧ脂質を含む。
【０８０３】
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ  ４１９、Ｐ  ４２０、Ｐ  ４２３、Ｐ  ４２４、Ｐ  ４２８、Ｐ  Ｌ１、Ｐ  Ｌ２、Ｐ  Ｌ１６、Ｐ  Ｌ１７、Ｐ  Ｌ１８、Ｐ  Ｌ１９、Ｐ  Ｌ２２、及びＰ  Ｌ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１７、Ｐ  ４２０、Ｐ  ４２３、Ｐ  ４２４、Ｐ  ４２８、Ｐ  Ｌ１、Ｐ  Ｌ２、Ｐ  Ｌ１６、Ｐ  Ｌ１７、Ｐ  Ｌ１８、Ｐ  Ｌ１９、Ｐ  Ｌ２２、及びＰ  Ｌ２３のいずれかからなる群から選択される化合物である。
【０８０４】
一実施形態では、ＰＥＧ脂質は、Ｃｍｐｄ  ４２８、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ  １８、ＰＬ１９、ＰＬ  １、及びＰＬ  ２からなる群から選択される。
【０８０５】
例示的なＬＮＰ脂質
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質（Ｉで示す）は、任意の化合物、例えば、式（Ｉ  Ｉ）、（Ｉ  ＩＡ）、（Ｉ  ＩＢ）、（Ｉ  ＩＩ）、（Ｉ  ＩＩａ）、（Ｉ  ＩＩｂ）、（Ｉ  ＩＩｃ）、（Ｉ  ＩＩｄ）、（Ｉ  ＩＩｅ）、（Ｉ  ＩＩｆ）、（Ｉ  ＩＩｇ）、（Ｉ  ＩＩＩ）、（Ｉ  ＶＩ）、（Ｉ  ＶＩ−ａ）、（Ｉ  ＶＩＩ）、（Ｉ  ＶＩＩＩ）、（Ｉ  ＶＩＩａ）、（Ｉ  ＶＩＩＩａ）、（Ｉ  ＶＩＩＩｂ）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−１）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−２）、（Ｉ  ＶＩＩｂ−３）、（Ｉ  ＶＩＩｃ）、（Ｉ  ＶＩＩｄ）、（Ｉ  ＶＩＩＩｃ）、（Ｉ  ＶＩＩＩｄ）、（Ｉ  ＩＸ）、（Ｉ  ＩＸａ１）、（Ｉ  ＩＸａ２）、（Ｉ  ＩＸａ３）、（Ｉ  ＩＸａ４）、（Ｉ  ＩＸａ５）、（Ｉ  ＩＸａ６）、（Ｉ  ＩＸａ７）、または（Ｉ  ＩＸａ８）のいずれかを有する化合物中、及び／または、化合物Ｘ、Ｙ、Ｉ  ４８、Ｉ  ５０、Ｉ  １０９、Ｉ  １１１、Ｉ  １１３、Ｉ  １８１、Ｉ  １８２、Ｉ  ２４４、Ｉ  ２９２、Ｉ  ３０１、Ｉ  ３２１、Ｉ  ３２２、Ｉ  ３２６、Ｉ  ３２８、Ｉ  ３３０、Ｉ  ３３１、Ｉ  ３３２、またはＩ  Ｍのいずれかの中に含まれている化合物を含む。
【０８０６】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物Ｘ、化合物Ｙ、化合物Ｉ−３２１、化合物Ｉ−２９２、化合物Ｉ−３２６、化合物Ｉ−１８２、化合物Ｉ−３０１、化合物Ｉ−４８、化合物Ｉ−５０、化合物Ｉ−３２８、化合物Ｉ−３３０、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、または化合物Ｉ−１８１として本明細書に記載されている化合物を含む。
【０８０７】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ  １８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ  ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ  ４８、Ｉ  ５０、Ｉ  １０９、Ｉ  １１１、Ｉ  １１３、Ｉ  １８１、Ｉ  １８２、Ｉ  ２４４、Ｉ  ２９２、Ｉ  ３０１、Ｉ  ３０９、Ｉ  ３１７、Ｉ  ３２１、Ｉ  ３２２、Ｉ  ３２６、Ｉ  ３２８、Ｉ  ３３０、Ｉ  ３３１、Ｉ  ３３２、Ｉ  ３４７、Ｉ  ３４８、Ｉ  ３４９、Ｉ  ３５０、Ｉ  ３５１、及びＩ  ３５２からなる群から選択される少なくとも１種の化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ  １８（化合物Ｘとも呼ばれる）、Ｉ  ２５（化合物Ｙとも呼ばれる）、Ｉ  ４８、Ｉ  ５０、Ｉ  １０９、Ｉ  １１１、Ｉ  １８１、Ｉ  １８２、Ｉ  ２９２、Ｉ  ３０１、Ｉ  ３２１、Ｉ  ３２６、Ｉ  ３２８、Ｉ  ３３０からなる群から選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰのイオン性脂質は、化合物番号Ｉ  １８２、Ｉ  ３０１、Ｉ  ３２１、及びＩ  ３２６からなる群から選択される化合物を含む。
【０８０８】
一実施形態では、イオン性脂質のブレンドを採用してもよい。
【０８０９】
一実施形態では、ＬＮＰはステロールを含む。別の実施形態では、ＬＮＰは天然ステロールを含む。別の実施形態では、ＬＮＰは修飾ステロールを含む。一実施形態では、ＬＮＰは１種または複数種のフィトステロールを含む。一実施形態では、ＬＮＰはフィトステロール／コレステロールブレンドを含む。
【０８１０】
用語「フィトステロール」とは、フィトステロイド（その塩またはエステルを含む）である植物性ステロール及びスタノールのグループのことを意味する。
【０８１１】
用語「ステロール」とは、ステロイドアルコールとしても周知のステロイドのサブグループのことを意味する。ステロールは一般的に、２つの部類、（１）「フィトステロール」としても周知の植物ステロール、及び（２）コレステロールなどの「ズーステロール」としても周知の動物ステロールに分類される。用語「スタノール」とは、ステロール環構造中に二重結合を有していない飽和ステロールの部類のことを意味する。
【０８１２】
一部の実施形態では、フィトステロールは、単独または組み合わせの、シトステロール、スティグマステロール、カンペステロール、シトスタノール、カンペスタノール、ブラシカステロール、フコステロール、β−シトステロール、スティグマスタノール、β−シトスタノール、エルゴステロール、ルペオール、シクロアルテノール、Δ５−アベナステロール、Δ７−アベナステロール、またはΔ７−スティグマステロール（その類似体、塩、またはエステルを含む）である。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、単一のフィトステロールである。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、異なるフィトステロール（例えば、２、３、４、５、または６種の異なるフィトステロール）の混合物である。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰのフィトステロール構成成分は、１種または複数種のフィトステロール及び１種または複数種のズーステロールのブレンド、例えば、フィトステロール（例えば、シトステロール、例えば、β−シトステロールなど）及びコレステロールのブレンドなどである。
【０８１３】
一部の実施形態では、シトステロールはβ−シトステロールである。
【０８１４】
一部の実施形態では、β−シトステロールは、式、
2022501336.tif 001110
、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。
【０８１５】
一部の実施形態では、シトステロールはスティグマステロールである。
【０８１６】
一部の実施形態では、スティグマステロールは、式、
2022501336.tif 001111
、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。
【０８１７】
一部の実施形態では、シトステロールはカンペステロールである。
【０８１８】
一部の実施形態では、カンペステロールは、式、
2022501336.tif 001112
、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。
【０８１９】
一部の実施形態では、シトステロールはシトスタノールである。
【０８２０】
一部の実施形態では、シトスタノールは、式、
2022501336.tif 001113
、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。
【０８２１】
一部の実施形態では、シトステロールはカンペスタノールである。
【０８２２】
一部の実施形態では、カンペスタノールは、式、
2022501336.tif 001114
、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。
【０８２３】
一部の実施形態では、シトステロールはブラシカステロールである。
【０８２４】
一部の実施形態では、ブラシカステロールは、式、
2022501336.tif 001115
、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。
【０８２５】
一部の実施形態では、シトステロールはフコステロールである。
【０８２６】
一部の実施形態では、フコステロールは、式、
2022501336.tif 001116
、（その類似体、塩、またはエステルを含む）を有する。
【０８２７】
一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は７０％超の純度を有する。一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は８０％超の純度を有する。一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は９０％超の純度を有する。一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は９５％超の純度を有する。一部の実施形態では、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）は、９７％超、９８％超、または９９％超の純度を有する。
【０８２８】
一実施形態では、ＬＮＰは、２種以上の構造脂質を含む。
【０８２９】
例えば、一実施形態では、ＬＮＰはフィトステロールを含む。一実施形態では、フィトステロールは、ＬＮＰ中に含まれる唯一の構造脂質である。別の実施形態では、ＬＮＰは構造脂質のブレンドを含む。
【０８３０】
一実施形態では、本明細書で開示する医薬組成物の脂質組成物中におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、β−シトステロール及びコレステロール）の総量は、約２０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約５０ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％〜約４５ｍｏｌ％の範囲である。
【０８３１】
一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、β−シトステロール及びコレステロール）の総量は、約２５ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％〜約３５ｍｏｌ％、または約３５ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％の範囲である。
【０８３２】
一実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、β−シトステロール及びコレステロール）の量は、約２４ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、または約３９ｍｏｌ％である。
【０８３３】
一部の実施形態では、本明細書で開示する脂質組成物中におけるフィトステロール及び構造脂質（例えば、β−シトステロール及びコレステロール）の総量は、少なくとも約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０ｍｏｌ％である。
【０８３４】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１種または複数種のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び１種または複数種の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質ナノ粒子中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である。一部の実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質性組成物（例えば、ＬＮＰ）中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である。一部の実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質性組成物（例えば、ＬＮＰ）中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である。一部の実施形態では、構造脂質のｍｏｌ％は、脂質性組成物（例えば、脂質ナノ粒子）中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。
【０８３５】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は１５〜４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３０、または４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）、及び０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール及び構造脂質の総ｍｏｌ％が３０〜４０ｍｏｌ％となるように、２０ｍｏｌ％超のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び２０ｍｏｌ％未満の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子はそれぞれ、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）、及び約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％  約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％、または約０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２８ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び約１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、３８．５％の総ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び２０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。
【０８３６】
特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、１０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、１０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、５０％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、４０％のイオン性脂質、３０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、４０％のイオン性脂質、３０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、２８％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、４５％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３３．５％の構造脂質、及び１．５％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、ＬＮＰは、４５％のイオン性脂質、２０％のヘルパー脂質（例えば、リン脂質）、３３％の構造脂質、及び２％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８３７】
一態様では、ＬＮＰはフィトステロールを含み、ＬＮＰは別の構造脂質を含まない。それゆえ、ＬＮＰの構造脂質（ステロール）構成成分はフィトステロールで構成される。別の態様では、ＬＮＰは、フィトステロール及び別の構造脂質を含む。それゆえ、ＬＮＰのステロール構成成分は、フィトステロール及び１種または複数種の別のステロールまたは構造脂質を含む。
【０８３８】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールブレンドなど）は、コレステロール、β−シトステロール（本明細書ではまた、Ｃｍｐｄ  Ｓ  １４１と呼ぶ）、カンペステロール（本明細書ではまた、Ｃｍｐｄ  Ｓ  １４３と呼ぶ）、β−シトスタノール（本明細書ではまた、Ｃｍｐｄ  Ｓ  １４４と呼ぶ）、ブラシカステロール、もしくはスティグマステロール、またはこれらの組み合わせもしくはブレンドとして、本明細書に記載の化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールブレンドなど）は、コレステロール、β−シトステロール、カンペステロール、β−シトスタノール、ブラシカステロール、スティグマステロール、β−シトステロール−ｄ７、化合物Ｓ−３０、化合物Ｓ−３１、化合物Ｓ−３２、またはこれらの組み合わせもしくはブレンドから選択される化合物を含む。別の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質（例えば、ステロール、例えば、フィトステロールまたはフィトステロール／コレステロールブレンドなど）は、コレステロール、β−シトステロール（本明細書ではまた、Ｃｍｐｄ  Ｓ  １４１と呼ぶ）、カンペステロール（本明細書ではまた、Ｃｍｐｄ  Ｓ  １４３と呼ぶ）、β−シトスタノール（本明細書ではまた、Ｃｍｐｄ  Ｓ  １４４と呼ぶ）、化合物Ｓ−１４０、化合物Ｓ−１４４、ブラシカステロール（本明細書ではまた、Ｃｍｐｄ  Ｓ  １４８と呼ぶ）、または組成物Ｓ−１８３（約４０％の化合物Ｓ−１４１、約２５％の化合物Ｓ−１４０、約２５％の化合物Ｓ−１４３、及び約１０％のブラシカステロール）として、本明細書に記載の化合物を含む。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰの構造脂質は、化合物Ｓ−１５９、化合物Ｓ−１６０、化合物Ｓ−１６４、化合物Ｓ−１６５、化合物Ｓ−１６７、化合物Ｓ−１７０、化合物Ｓ−１７３、または化合物Ｓ−１７５として、本明細書に記載の化合物を含む。
【０８３９】
一実施形態では、ＬＮＰは、非カチオン性ヘルパー脂質、例えば、リン脂質を含む。上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、またはＨ−４０９として、本明細書に記載の化合物を含む。一実施形態では、非カチオン性ヘルパー脂質、例えば、リン脂質は、ＤＳＰＣである。その他の実施形態では、本開示のＬＮＰの非カチオン性ヘルパー脂質（例えば、リン脂質）は、ＤＳＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＯＰＣ、ＤＰＰＣ、ＰＭＰＣ、Ｈ−４０９、Ｈ−４１８、Ｈ−４２０、Ｈ−４２１、またはＨ−４２２として、本明細書に記載の化合物を含む。
【０８４０】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰのＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ−修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ−修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ−修飾セラミド、ＰＥＧ−修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ−修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ−修飾ジアルキルグリセロール、及びこれらの混合物からなる群から選択され得る本明細書に記載の化合物を含む。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、化合物番号Ｐ４１５、Ｐ４１６、Ｐ４１７、Ｐ  ４１９、Ｐ  ４２０、Ｐ  ４２３、Ｐ  ４２４、Ｐ  ４２８、Ｐ  Ｌ５、Ｐ  Ｌ１、Ｐ  Ｌ２、Ｐ  Ｌ１６、Ｐ  Ｌ１７、Ｐ  Ｌ１８、Ｐ  Ｌ１９、Ｐ  Ｌ２２、Ｐ  Ｌ２３、ＤＭＧ、ＤＰＧ、及びＤＳＧからなる群から選択される。別の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、Ｃｍｐｄ  ４２８、ＰＬ１６、ＰＬ１７、ＰＬ  １８、ＰＬ１９、Ｐ  Ｌ５、ＰＬ  １、及びＰＬ  ２からなる群から選択される。
【０８４１】
その他の実施形態では、本開示は、イオン性脂質としての化合物Ｘ、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としてのコレステロールまたはコレステロール／β−シトステロールブレンド、及び、ＰＥＧ脂質としての化合物４２８、を含む脂質ナノ粒子を提供する。これらの化合物Ｘ含有組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、以下のとおり、（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２であってもよい。構造脂質構成成分用に、一実施形態では、構造脂質は専ら、３８％または２８％のコレステロールである。別の実施形態では、構造脂質は、３８％または２８％の総パーセンテージのコレステロール／β−シトステロールであり、ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８％のβ−シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び１８％のβ−シトステロール、または（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び２８％のβ−シトステロールを含んでいてもよい。別の実施形態では、構造脂質は、３８．５％の総パーセンテージのコレステロール／β−シトステロールであり、ブレンドは、例えば、（ｉ）２０％のコレステロール及び１８．５％のβ−シトステロール、または（ｉｉ）１０％のコレステロール及び２８．５％のβ−シトステロールを含んでいてもよい。
【０８４２】
その他の実施形態では、本開示は、イオン性脂質としての、化合物Ｘ、Ｙ、Ｉ−３２１、Ｉ−２９２、Ｉ−３２６、Ｉ−１８２、Ｉ−３０１、Ｉ−４８、Ｉ−５０、Ｉ−３２８、Ｉ−３３０、Ｉ−１０９、Ｉ−１１１、またはＩ−１８１のいずれか、リン脂質としてのＤＳＰＣ、構造脂質としての、コレステロール、コレステロール／β−シトステロールブレンド、β−シトステロール／β−シトスタノールブレンド、β−シトステロール／カンペステロールブレンド、β−シトステロール／β−シトスタノール／カンペステロールブレンド、コレステロール／カンペステロールブレンド、コレステロール／β−シトスタノールブレンド、コレステロール／β−シトスタノール／カンペステロールブレンド、またはコレステロール／β−シトステロール／β−シトスタノール／カンペステロールブレンド、及び、ＰＥＧ脂質としての化合物４２８、を含む脂質ナノ粒子を提供する。これらの組成物の様々な実施形態では、イオン性脂質：リン脂質：構造脂質：ＰＥＧ脂質の比率は、例えば、以下のとおり、（ｉ）５０：１０：３８：２、（ｉｉ）５０：２０：２８：２、（ｉｉｉ）４０：２０：３８：２、（ｉｖ）４０：３０：２８：２、（ｖ）４０：１８．５：４０：１．５、または（ｖｉ）４５：２０：３３．５：１．５であってもよい。一実施形態では、構造脂質構成成分用に、ＬＮＰは、例えば、（ｉ）１０％のコレステロール及び３０％のβ−シトステロール、（ｉｉ）１０％のコレステロール及び３０％のカンペステロール、（ｉｉｉ）１０％のコレステロール及び３０％のβ−シトスタノール、（ｉｖ）１０％のコレステロール、２０％のβ−シトステロール、及び１０％のカンペステロール、（ｖ）１０％のコレステロール、２０％のβ−シトステロール、及び１０％のβ−シトスタノール、（ｖｉ）１０％のコレステロール、１０％のβ−シトステロール、及び２０％のカンペステロール、（ｖｉｉ）１０％のコレステロール、１０％のβ−シトステロール、及び２０％のカンペステロール、（ｖｉｉｉ）１０％のコレステロール、２０％のカンペステロール、及び１０％のβ−シトスタノール、（ｉｘ）１０％のコレステロール、１０％のカンペステロール、及び２０％のβ−シトスタノール、または（ｘ）１０％のコレステロール、１０％のβ−シトステロール、１０％のカンペステロール、及び１０％のβ−シトスタノールで構成される４０％の構造脂質を含んでいてもよい。別の実施形態では、構造脂質構成成分用に、ＬＮＰは、例えば、（ｉ）３３．５％のコレステロール、（ｉｉ）１８．５％のコレステロール、１５％のβ−シトステロール、（ｉｉｉ）１８．５％のコレステロール、１５％のカンペステロール、または（ｉｖ）１８．５％のコレステロール、１５％のカンペステロールで構成される３３．５％の構造脂質を含んでいてもよい。
【０８４３】
その他の実施形態では、本開示は、構造脂質としての、カンペステロール、β−シトスタノール、またはスティグマステロール、を含む脂質ナノ粒子を提供する。ＬＮＰのその他の構成成分は、本明細書で開示する構成成分、例えば、イオン性脂質としての、化合物Ｘ、化合物Ｉ−１０９、化合物Ｉ−１１１、化合物Ｉ−１８１、化合物Ｉ−１８２、または化合物Ｉ−２４４、リン脂質としてのＤＳＰＣ、及び、ＰＥＧ脂質としての化合物４２８から選択してもよい。
【０８４４】
例示的な別のＬＮＰ構成成分
界面活性剤
特定の実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子は、１種または複数種の界面活性剤を任意選択的に含む。
【０８４５】
特定の実施形態では、界面活性剤は両親媒性ポリマーである。本明細書で使用する場合、両親媒性「ポリマー」は、オリゴマーまたはポリマーを含む両親媒性化合物である。例えば、両親媒性ポリマーは、オリゴマーフラグメント、例えば、２つまたはそれ以上のＰＥＧモノマーユニットなどを含んでいてもよい。例えば、本明細書に記載の両親媒性ポリマーはＰＳ  ２０であってもよい。
【０８４６】
例えば、両親媒性ポリマーはブロックコポリマーである。
【０８４７】
例えば、両親媒性ポリマーは凍結乾燥保護剤である。
【０８４８】
例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃及び大気圧の水中において、２×１０−４Ｍ未満の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。
【０８４９】
例えば、両親媒性ポリマーは、約３０℃及び大気圧の水中において、約０．１×１０−４Ｍ〜約１．３×１０−４Ｍの範囲の臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する。
【０８５０】
例えば、製剤中における両親媒性ポリマーの濃度は、例えば、凍結または凍結乾燥の前において、そのＣＭＣあたりからＣＭＣの約３０倍（例えば、そのＣＭＣの最大約２５倍、約２０倍、約１５倍、約１０倍、約５倍、または約３倍）の間の範囲である。
【０８５１】
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサマー（プルロニック（登録商標））、ポロキサミン（テトロニック（登録商標））、ポリオキシエチレングリコールソルビタンアルキルエステル（ポリソルベート）、及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）から選択される。
【０８５２】
例えば、両親媒性ポリマーはポロキサマーである。例えば、両親媒性ポリマーは、以下の構造の両親媒性ポリマー、
2022501336.tif 001117
、
であり、
式中、ａは１０〜１５０の整数であり、ｂは２０〜６０の整数である。例えば、ａは約１２でありｂは約２０である、またはａは約８０でありｂは約２７である、またはａは約６４でありｂは約３７である、またはａは約１４１でありｂは約４４である、またはａは約１０１でありｂは約５６である。
【０８５３】
例えば、両親媒性ポリマーは、Ｐ１２４、Ｐ１８８、Ｐ２３７、Ｐ３３８、またはＰ４０７である。
【０８５４】
例えば、両親媒性ポリマーはＰ１８８（例えば、ポロキサマー１８８、ＣＡＳ番号９００３−１１−６、コリフォールＰ１８８としても周知）である。
【０８５５】
例えば、両親媒性ポリマーは、ポロキサミン、例えば、テトロニック３０４またはテトロニック９０４である。
【０８５６】
例えば、両親媒性ポリマーは、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、例えば、３ｋＤａ、１０ｋＤａ、または２９ｋＤａの分子量を有するＰＶＰなどである。
【０８５７】
例えば、両親媒性ポリマーは、ポリソルベート、例えば、ＰＳ  ２０などである。
【０８５８】
特定の実施形態では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。
【０８５９】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は界面活性剤を含む。一部の実施形態では、界面活性剤は両親媒性ポリマーである。一部の実施形態では、界面活性剤は非イオン性界面活性剤である。
【０８６０】
例えば、非イオン性界面活性剤は、ポリエチレングリコールエーテル（Ｂｒｉｊ）、ポロキサマー、ポリソルベート、ソルビタン、及びその誘導体からなる群から選択される。
【０８６１】
例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ）の化合物、
2022501336.tif 001118
（ＶＩＩＩ）、
またはその塩もしくは異性体であり、
式中、
ｔは、１〜１００の整数であり、
Ｒ１ＢＲＩＪは独立して、Ｃ１０−４０アルキル、Ｃ１０−４０アルケニル、またはＣ１０−４０アルキニルであり、任意選択的に、Ｒ５ＰＥＧの１つまたは複数のメチレン基は独立して、Ｃ３−１０カルボシクリレン、４〜１０員環ヘテロシクリレン、Ｃ６−１０アリーレン、４〜１０員環ヘテロアリーレン、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｓ−、−ＳＣ（Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）−、−Ｃ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（＝ＮＲＮ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）−、−ＮＲＮＣ（Ｓ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｎ（ＲＮ）−、または−Ｎ（ＲＮ）Ｓ（Ｏ）２Ｏ−で置換されており、
ＲＮのそれぞれの例は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、または窒素保護基である。
【０８６２】
一部の実施形態では、Ｒ１ＢＲＩＪはＣ１８アルキルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ−ａ）の化合物、
2022501336.tif 001119
（ＶＩＩＩ−ａ）、
またはその塩もしくは異性体である。
【０８６３】
一部の実施形態では、Ｒ１ＢＲＩＪはＣ１８アルケニルである。例えば、ポリエチレングリコールエーテルは、式（ＶＩＩＩ−ｂ）の化合物、
2022501336.tif 001120
（ＶＩＩＩ−ｂ）、
またはその塩もしくは異性体である。
【０８６４】
一部の実施形態では、ポロキサマーは、ポロキサマー１０１、ポロキサマー１０５、ポロキサマー１０８、ポロキサマー１２２、ポロキサマー１２３、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８３、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８５、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２１２、ポロキサマー２１５、ポロキサマー２１７、ポロキサマー２３１、ポロキサマー２３４、ポロキサマー２３５、ポロキサマー２３７、ポロキサマー２３８、ポロキサマー２８２、ポロキサマー２８４、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３１、ポロキサマー３３３、ポロキサマー３３４、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、ポロキサマー４０１、ポロキサマー４０２、ポロキサマー４０３、及びポロキサマー４０７からなる群から選択される。
【０８６５】
一部の実施形態では、ポリソルベートは、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）４０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０、またはＴｗｅｅｎ（登録商標）８０である。
【０８６６】
一部の実施形態では、ソルビタンの誘導体は、スパン（登録商標）２０、スパン（登録商標）６０、スパン（登録商標）６５、スパン（登録商標）８０、またはスパン（登録商標）８５である。
【０８６７】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中における非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．００００１％（重量／体積）〜約１％（重量／体積）、例えば、約０．００００５％（重量／体積）〜約０．５％（重量／体積）、または約０．０００１％（重量／体積）〜約０．１％（重量／体積）の範囲である。
【０８６８】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中における非イオン性界面活性剤の濃度は、約０．０００００１重量％〜約１重量％、例えば、約０．０００００２重量％〜約０．８重量％、または約０．０００００５重量％〜約０．５重量％の範囲である。
【０８６９】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中におけるＰＥＧ脂質の濃度は、約０．０１モル％〜約５０モル％、例えば、約０．０５モル％〜約２０モル％、約０．０７モル％〜約１０モル％、約０．１モル％〜約８モル％、約０．２モル％〜約５モル％、または約０．２５モル％〜約３モル％の範囲である。
【０８７０】
アジュバント
一部の実施形態では、本発明のＬＮＰは、１種または複数種のアジュバント、例えば、グルコピラノシル脂質アジュバント（ＧＬＡ）、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（例えば、クラスＡまたはＢ）、ポリ（Ｉ：Ｃ）、水酸化アルミニウム、及びＰａｍ３ＣＳＫ４を任意選択的に含む。
【０８７１】
その他の構成成分
本発明のＬＮＰは、上記のセクションに記載の構成成分に加えて、１種または複数種の構成成分を任意選択的に含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１種または複数種の小さな疎水性分子、例えば、ビタミン（例えば、ビタミンＡまたはビタミンＥ）またはステロールなどを含んでいてもよい。
【０８７２】
脂質ナノ粒子はまた、１種または複数種の浸透促進分子、糖質、ポリマー、表面改質剤、またはその他の構成成分を含んでいてもよい。浸透促進分子は、例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２２０６４号に記載されている分子であってもよい。糖質としては、単糖（例えば、グルコース）及び多糖（例えば、グリコーゲンならびにその誘導体及び類似体）を挙げることができる。
【０８７３】
ポリマーは脂質ナノ粒子中に含まれていてもよく、及び／または、脂質ナノ粒子を封入または部分的に封入するのに使用されてもよい。ポリマーは生分解性及び／または生体適合性であってもよい。ポリマーは、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、及びポリアリレートから選択してもよいがこれらに限定されない。例えば、ポリマーとしては、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレンビニルアセテートポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸−グリコール酸コポリマー）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ−乳酸−グリコール酸コポリマー）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−カプロラクトンコポリマー）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−カプロラクトン−グリコリドコポリマー）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ＰＥＯ−Ｄ，Ｌ−ラクチドコポリマー）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ＰＰＯ−Ｄ，Ｌ−ラクチドコポリマー）、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ−Ｌ−グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステルアミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えば、ポリエチレン及びポリプロピレンなど、ポリアルキレングリコール、例えば、ポリ（エチレン）グリコール（ＰＥＧ）など、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリアルキレンテレフタレート、例えば、ポリ（エチレンテレフタレート）など、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、例えば、ポリ（ビニルアセテート）など、ポリビニルハライド、例えば、ポリ（ビニルクロリド）（ＰＶＣ）など、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリシロキサン、ポリスチレン、ポリウレタン、誘導体化セルロース、例えば、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースなど、アクリル酸のポリマー、例えば、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）及びコポリマーならびにこれらの混合物など、ポリジオキサノン及びそのコポリマー、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポロキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−カプロラクトンコポリマー）、トリメチレンカーボネート、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）（ＰＡｃＭ）、ポリ（２−メチル−２−オキサゾリン）（ＰＭＯＸ）、ポリ（２−エチル−２−オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、及びポリグリセロールを挙げることができる。
【０８７４】
表面改質剤としては、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性剤（例えば、カチオン性界面活性剤、例えば、ジメチルジオクタデシル−アンモニウムブロミドなど）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール、及びポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、アセチルシステイン、ヨモギ、ブロメライン、パパイン、クレロデンドルム、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルソリン、チモシンβ４ドルナーゼα、ネルテネキシン、及びエルドステイン）、及びＤＮａｓｅ（例えば、ｒｈＤＮａｓｅ）を挙げることができるがこれらに限定されない。表面改質剤は、ナノ粒子内に配置してもよく、及び／または、ＬＮＰの表面上に配置してもよい（例えば、コーティング、吸着、共有結合、またはその他のプロセスにより）。
【０８７５】
脂質ナノ粒子はまた、１種または複数種の官能化脂質を含んでいてもよい。例えば、脂質は、適切な反応条件下でアジドに曝露すると環化付加反応を受け得るアルキン基で官能化されていてもよい。詳細には、脂質二重層は、膜浸透、細胞認識、またはイメージングを容易とするのに有用な１つまたは複数の基でこのように官能化されていてもよい。ＬＮＰの表面はまた、１種または複数種の有用な抗体とコンジュゲートしていてもよい。標的細胞送達、イメージング、及び膜浸透に有用な官能基及びコンジュゲートは当該技術分野において周知である。
【０８７６】
これらの構成成分に加えて、脂質ナノ粒子は、医薬組成物に有用な任意の物質を含んでいてもよい。例えば、脂質ナノ粒子は、１種または複数種の薬学的に許容される賦形剤または補助成分を含んでいてもよく、限定するわけではないが例えば、１種または複数種の溶媒、分散媒、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、造粒助剤、崩壊剤、充填剤、流動促進剤、液体溶媒、結合剤、界面活性剤、等張化剤、増粘剤または乳化剤、緩衝剤、滑沢剤、油剤、防腐剤、及びその他の種などである。賦形剤、例えば、ワックス、バター、着色剤、コーティング剤、香味剤、及び着香剤などもまた含まれていてもよい。薬学的に許容される賦形剤は当該技術分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６を参照のこと）。
【０８７７】
希釈剤の例としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、コーンスターチ、粉糖、及び／またはこれらの組み合わせを挙げることができるがこれらに限定されない。造粒剤及び分散剤は、ポテトスターチ、コーンスターチ、タピオカスターチ、デンプングリコール酸ナトリウム、クレイ、アルギン酸、グアーガム、柑橘類の果肉、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材、天然スポンジ、陽イオン交換樹脂、炭酸カルシウム、シリケート、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、カルボキシメチルデンプンナトリウム（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファ化デンプン（デンプン１５００）、微結晶デンプン、非水溶性デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ビーガム（登録商標））、ラウリル硫酸ナトリウム、第四級アンモニア化合物、及び／またはこれらの組み合わせからなる非限定リストから選択してもよい。
【０８７８】
界面活性剤及び／または乳化剤としては、天然乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、及びレシチン）、コロイド状のクレイ（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びビーガム（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、グリセリルモノステアレート、及びプロピレングリコールモノステアレート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［スパン（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［スパン（登録商標）６０］、ソルビタントリステアレート［スパン（登録商標）６５］、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート［スパン（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシレート化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、及びソルトール（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、クレモフォア（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、プルロニック（登録商標）Ｆ  ６８、ポロキサマー（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドクサートナトリウム、及び／またはこれらの組み合わせを挙げることができるがこれらに限定されない。
【０８７９】
結合剤は、デンプン（例えば、コーンスターチ及びデンプンペースト）、ゼラチン、糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）、天然ゴム及び合成ゴム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイルランドゴケの抽出物、パンワーゴム、ガティゴム、イサポールハスクの粘液）、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ビーガム（登録商標））、及びカラマツアラボガラクタン、アルギン酸塩、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール、無機カルシウム塩、ケイ酸、ポリメタクリレート、ワックス、水、アルコール、ならびにこれらの組み合わせ、または任意のその他の好適な結合剤であってもよい。
【０８８０】
防腐剤の例としては、酸化防止剤、キレート化剤、抗菌防腐剤、抗真菌防腐剤、アルコール防腐剤、酸性防腐剤、及び／またはその他の防腐剤を挙げることができるがこれらに限定されない。酸化防止剤の例としては、αトコフェロール、アスコルビン酸、アスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び／または亜硫酸ナトリウムが挙げられるがこれらに限定されない。キレート化剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／またはエデト酸三ナトリウムが挙げられる。抗菌防腐剤の例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／またはチメロサールが挙げられるがこれらに限定されない。抗真菌防腐剤の例としては、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／またはソルビン酸が挙げられるがこれらに限定されない。アルコール防腐剤の例としては、エタノール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、フェノール、フェノール系化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート、及び／またはフェニルエチルアルコールが挙げられるがこれらに限定されない。酸性防腐剤の例としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、βカロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／またはフィチン酸が挙げられるがこれらに限定されない。その他の防腐剤としては、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム、セトリミド、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ  ＰＬＵＳ（登録商標）、フェノニップ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、及び／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０８８１】
緩衝剤の例としては、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、ラクトビオン酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、リン酸水酸化カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、第二リン酸カリウム、第一リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、アミノ−スルホネート緩衝剤（例えば、ＨＥＰＥＳ）、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱物質を含まない水、等張生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコール、及び／またはこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、鉱化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの組み合わせからなる非限定群から選択してもよい。
【０８８２】
油剤の例としては、アーモンド、杏仁、アボカド、ババス、ベルガモット、クロフサスグリ種子、ルリヂサ、杜松、カミツレ、キャノーラ、ヒメウイキョウ、カルナバ、トウゴマ、桂皮、カカオバター、ココナッツ、タラ肝臓、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリ、マツヨイグサ、魚、亜麻仁、ゲラニオール、ヒョウタン、ブドウ種子、ヘーゼルナッツ、ヒソップ、イソプロピルミリステート、ホホバ、ククイナッツ、ラバンジン、ラベンダー、レモン、リツエアクベバ、マカデミアナッツ、ゼニアオイ、マンゴー種子、メドウフォーム種子、ミンク、ニクズク、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、ヤシ、パーム核、桃仁、ピーナッツ、けしの実、カボチャ種子、菜種、コメヌカ、ローズマリー、ベニバナ、ビャクダン、サスクアナ、セイボリー、シーバックソーン、ゴマ、シアバター、シリコーン、ダイズ、ヒマワリ、ナガバクコ、アザミ、ツバキ、ベチベル、クルミ、及び小麦粉芽油に加えて、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、シメチコン、イソプロピルミリステート、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーンオイル、及び／またはこれらの組み合わせが挙げられるがこれらに限定されない。
【０８８３】
ＬＮＰ組成物
１つまたは複数の特定の用途または標的用に、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を設計してもよい。脂質ナノ粒子の要素及びその相対量は、特定の用途または標的に基づいて、及び／または、１種または複数種の要素の効果、毒性、費用、使いやすさ、利用能、またはその他の特徴に基づいて、選択してもよい。同様に、例えば、特定の要素の組み合わせの効果及び毒性に応じて、特定の用途または標的用に、脂質ナノ粒子の詳細な配合を選択してもよい。脂質ナノ粒子製剤の安定性は、製剤の効果及び忍容性に影響を及ぼし得る。
【０８８４】
様々な構成要素の要素を特定の分率、例えば、モルパーセント分率で提供してもよい。
【０８８５】
例えば、上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは構造脂質またはその塩を含む。一部の態様では、構造脂質はコレステロールまたはその塩である。更なる態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰ中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約１％〜５０％である。その他の態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰ中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約１０％〜４０％である。一部の態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰ中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約２０％〜３０％である。更なる態様では、コレステロールのｍｏｌ％は、ＬＮＰ中に含まれるフィトステロールのｍｏｌ％の約３０％である。
【０８８６】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％のリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８８７】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％のリン脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８８８】
上記または関連する態様のいずれかでは、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％のリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％のステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８８９】
特定の実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン性脂質構成成分は、総ｍｏｌ％が１００％を超えない場合、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、１種または複数種の構造脂質を任意選択的に含む約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子のイオン性脂質構成成分は、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、１種または複数種の構造脂質を任意選択的に含む約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、脂質構成成分は、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、１種または複数種の構造脂質を任意選択的に含む約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。別の特定の実施形態では、脂質構成成分は、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、１種または複数種の構造脂質を任意選択的に含む約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の実施形態では、フィトステロールはβ−シトステロールであってもよく、非カチオン性ヘルパー脂質は、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣなどのリン脂質、または、オレイン酸などのリン脂質代用品であってもよい。その他の実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ−ＤＭＧであってもよく、及び／または、構造脂質はコレステロールであってもよい。
【０８９０】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３０ｍｏｌ％〜約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％〜約３０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％〜約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９１】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約３５ｍｏｌ％〜約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％〜約２５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％〜約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％〜約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９２】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９３】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９４】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９５】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９６】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９７】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９８】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０８９９】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９００】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０１】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０２】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０３】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０４】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０５】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０６】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０７】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０８】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９０９】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１０】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１１】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４３．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１２】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１３】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１４】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１５】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１６】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約２０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１７】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１８】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９１９】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２０】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２１】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１５ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約２５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２２】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約５０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２３】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約４５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２４】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４８．５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２５】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約４０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２６】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約５５ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３５ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２７】
一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール、及び約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％の フィトステロール及び構造脂質、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の態様では、本開示のＬＮＰは、約６０ｍｏｌ％のイオン性脂質、約１０ｍｏｌ％の非カチオン性ヘルパー脂質、約３０ｍｏｌ％のフィトステロール及びコレステロール、ならびに約０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。
【０９２８】
本明細書の実施形態に関する一部の態様では、本開示のＬＮＰのフィトステロール及び構造脂質構成成分は、約１０：１〜１：１０のフィトステロール：構造脂質、例えば、約１０：１、９：１、８：１、７：１、６：１、５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、及び１：１０のフィトステロール：構造脂質（例えば、β−シトステロール：コレステロール）などを含む。
【０９２９】
一部の実施形態では、ＬＮＰのフィトステロール構成成分は、フィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロールなど）のブレンドであり、フィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び構造脂質（例えば、コレステロール）はそれぞれ、個々のｍｏｌ％で含まれている。例えば、一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は１５〜４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３０、または４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）、及び０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７，１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、フィトステロール及び構造脂質の総ｍｏｌ％が３０〜４０ｍｏｌ％となるように、２０ｍｏｌ％超のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び２０ｍｏｌ％未満の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子はそれぞれ、約２０ｍｏｌ％、約２１ｍｏｌ％、約２２ｍｏｌ％、約２３ｍｏｌ％、約２４ｍｏｌ％、約２５ｍｏｌ％、約２６ｍｏｌ％、約２７ｍｏｌ％、約２８ｍｏｌ％、約２９ｍｏｌ％、約３０ｍｏｌ％、約３１ｍｏｌ％、約３２ｍｏｌ％、約３３ｍｏｌ％、約３４ｍｏｌ％、約３５ｍｏｌ％、約３７ｍｏｌ％、約３８ｍｏｌ％、約３９ｍｏｌ％、または約４０ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）、及び約１９ｍｏｌ％、約１８ｍｏｌ％  約１７ｍｏｌ％、約１６ｍｏｌ％、約１５ｍｏｌ％、約１４ｍｏｌ％、約１３ｍｏｌ％、約１２ｍｏｌ％、約１１ｍｏｌ％、約１０ｍｏｌ％、約９ｍｏｌ％、約８ｍｏｌ％、約７ｍｏｌ％、約６ｍｏｌ％、約５ｍｏｌ％、約４ｍｏｌ％、約３ｍｏｌ％、約２ｍｏｌ％、約１ｍｏｌ％、または約０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、約２８ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び約１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、３８．５％の総ｍｏｌ％のフィトステロール及び構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、２８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び１０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１８．５ｍｏｌ％のフィトステロール（例えば、β−シトステロール）及び２０ｍｏｌ％の構造脂質（例えば、コレステロール）を含む。
【０９３０】
脂質ナノ粒子中における核酸分子の量は、脂質ナノ粒子のサイズ、組成、所望の標的及び／または用途、またはその他の特性に加えて、治療薬及び／または予防薬の特性に依存し得る。例えば、脂質ナノ粒子に有用なＲＮＡの量は、ＲＮＡのサイズ、配列、及びその他の特徴に依存し得る。脂質ナノ粒子中における１種または複数種の核酸分子及びその他の要素（例えば、脂質）の相対量はまた変化し得る。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子中におけるイオン性脂質構成成分：１種または複数種の核酸分子の（重量／重量）比率は、約５：１〜約６０：１、例えば、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、及び６０：１などであってもよい。例えば、イオン性脂質構成成分：１種または複数種の核酸分子の（重量／重量）比率は、約１０：１〜約４０：１であってもよい。特定の実施形態では、（重量／重量）比率は約２０：１である。ＬＮＰ中における１種または複数種の核酸分子の量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外−可視分光法）を用いて測定することができる。
【０９３１】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子は、１種または複数種のＲＮＡ及び１種または複数種のイオン性脂質を含み、それらの量を選択して特定のＮ：Ｐ比率をもたらしてもよい。組成物のＮ：Ｐ比率とは、１種または複数種の脂質中における窒素原子：ＲＮＡ中におけるリン酸基の数のモル比率のことを意味する。一般的に、より低いＮ：Ｐ比率が好ましい。１種または複数種のＲＮＡ、脂質、及びそれらの量を選択して、約２：１〜約３０：１、例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１などのＮ：Ｐ比率をもたらしてもよい。特定の実施形態では、Ｎ：Ｐ比率は約２：１〜約８：１であってもよい。その他の実施形態では、Ｎ：Ｐ比率は約５：１〜約８：１である。例えば、Ｎ：Ｐ比率は、約５．０：１、約５．５：１、約５．６７：１、約５．７：１、約５．８：１、約５．９：１、約６．０：１、約６．５：１、または約７．０：１であってもよい。例えば、Ｎ：Ｐ比率は約５．６７：１であってもよい。別の実施形態では、Ｎ：Ｐ比率は約５．８：１であってもよい。
【０９３２】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、塩、例えば、塩化物塩などを更に含んでいてもよい。
【０９３３】
一部の実施形態では、脂質ナノ粒子を含む製剤は、糖、例えば、二糖などを更に含んでいてもよい。一部の実施形態では、製剤は、塩、例えば、塩化物塩などではなく、糖を更に含む。
【０９３４】
物理的特性
脂質ナノ粒子の特徴はその構成成分に依存し得る。例えば、構造脂質としてコレステロールを含む脂質ナノ粒子は、異なる構造脂質を含む脂質ナノ粒子とは異なる特徴を有し得る。同様に、脂質ナノ粒子の特徴は、その構成成分の絶対量または相対量に依存し得る。例えば、より高いモル分率のリン脂質を含む脂質ナノ粒子は、より低いモル分率のリン脂質を含む脂質ナノ粒子とは異なる特徴を有し得る。特徴はまた、脂質ナノ粒子の調製方法及び調製条件に依存して変化し得る。
【０９３５】
様々な方法を用いて脂質ナノ粒子を特性決定してもよい。例えば、顕微鏡（例えば、透過型電子顕微鏡または走査型電子顕微鏡）を使用して、脂質ナノ粒子の形態及び粒度分布を確認してもよい。動的光散乱法または電位差測定法（例えば、電位差滴定法）を使用して、ゼータ電位を測定してもよい。動的光散乱法をまた使用して、粒径を測定してもよい。Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  Ｎａｎｏ  ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，Ｍａｌｖｅｒｎ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ，ＵＫ）などの機器をまた使用して、脂質ナノ粒子の複数の特徴、例えば、粒径、多分散指数、及びゼータ電位などを測定してもよい。
【０９３６】
脂質ナノ粒子の平均径は、例えば、動的光散乱法（ＤＬＳ）を用いて測定した際に、数十ｎｍ〜数百ｎｍであってもよい。例えば、平均径は、約４０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、例えば、約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍなどであってもよい。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子の平均径は、約５０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約７０ｎｍ、約５０ｎｍ〜約６０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約６０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約６０ｎｍ〜約７０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約７０ｎｍ〜約９０ｎｍ、約７０ｎｍ〜約８０ｎｍ、約８０ｎｍ〜約１００ｎｍ、約８０ｎｍ〜約９０ｎｍ、または約９０ｎｍ〜約１００ｎｍであってもよい。特定の実施形態では、脂質ナノ粒子の平均径は約７０ｎｍ〜約１００ｎｍであってもよい。特定の実施形態では、平均径は約８０ｎｍであってもよい。その他の実施形態では、平均径は約１００ｎｍであってもよい。
【０９３７】
脂質ナノ粒子は比較的均一であってもよい。多分散指数を使用して、ＬＮＰの均一性、例えば、脂質ナノ粒子の粒径分布を示してもよい。本明細書で使用する場合、「多分散指数」は、系の粒径分布の均一性を表す比率である。小さな値、例えば、０．３未満は、狭い粒径分布を表す。小さな（例えば、０．３未満）多分散指数は一般的に、狭い粒径分布を表す。脂質ナノ粒子は、約０〜約０．２５、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５などの多分散指数を有していてもよい。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子の多分散指数は約０．１０〜約０．２０であってもよい。
【０９３８】
脂質ナノ粒子のゼータ電位を使用して、組成物の界面動電位を示してもよい。本明細書で使用する場合、「ゼータ電位」は、例えば、粒子組成物中における、脂質の界面動電位である。
【０９３９】
例えば、ゼータ電位は、脂質ナノ粒子の表面電荷を表し得る。より高荷電種が体内の細胞、組織、及びその他の要素と不所望に相互作铧鞁뻥讂臣ꢁ臣覂胣钯볨蒚뷤蒁鯩랍볯ꎭ臣龁臣ꂲ볯銂鳦馁苣芄돨誃菣銲귥貁룤겈髧ꮁ鳦뺁臣蒁胣肸菩꺁껥붖뷥讅臣꾁胣芄돨誃菣銲귥꺁苣벃苣뮛뷤꾁胣蒴裢醼볯趽볯鲀듧讼볯邼뷯뚼胣蒴裢醼볯趽볯鲀듧讼볯閼뷯뚼胣蒴裢醼볯趽볯鲀듧讼볯邼뷯뚼胣蒴裢醼볯趽볯鲀듧讼볯趽볯膀듧銈볯邼뷯뚼胣蒴볯趽볯膀듧銈볯邼뷯뚼胣蒴裢閼뷯뚼胣蒴裢閼뷯뚼胣蒴볯銼볯趽볯膀듧銈볯趽볯鲀듧讼볯閼뷯뚼胣蒴裢閼뷯뚼胣蒴볯醼볯趽볯膀듧銈볯趽볯鲀듧讼볯趽볯膀듧銈볯趽볯鲀듧邼뷯뚼胣蒴볯趽볯鲀듧讼볯邼뷯뚼胣蒴볯趽볯鲀듧讼볯閼뷯뚼胣蒴볯趽볯鲀듧讼볯邼뷯뚼胣蒴볯趽볯鲀듧讼볯趽볯膀듧讼볯趽볯鲀듧讼볯邼뷯뚼胣蒴볯閼뷯뚼胣蒴볯醼볯趽볯膀臣龁臣蒴볯閼뷯뚼胣蒴볯醼볯趽볯ꞁ臣ꎁ臣节苣蒁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯馼볯邼胣㲑䐯噉ਾ†ꃦ뢅裥邭臣膰藥릊軧꾁胣隺若鞁臣鶈鳦辇苣몟뫦ꢁ臣龁胣뾪ꏨ貾臣芄돨誃菣銲귥薆臣膰藥閁苣ꚁ臣讂臣龁臣ꖈ꟦ꮁ蓨ꪳ菣躃닧邭臣邵郥鞁臣蒁苣뢠藩蚈귥꺁蟩銂ꇨ馁胣膰藥릊軧꾁ꯩ蒁臣ꢁ臣鮜臣鞁臣袼뻤袁臣膀볯邼볯薼臣醿臣覼胣膰藥릊軧꾁胣设臣낁胣醼꣧뺁臣꾁ꓨ낕꣧꺁鳦龩뫦銪臣龁臣貕鷩뮴胦ꒉ臣芄돨誃菣銲귥銂裥ꎧ臣讂觥貾臣誁臣讂胣芄돨誃菣銲귥銂郥覜臣讂뫦늶룤ꮁ臣醁苣뢠藩蚈귥꺁蟩銂꿦莼臣讂臣ꢁ臣袂臣ꚁ룦骮臣讂臣ꢁ臣ꞁ臣讂胣趛藥銂뷤ꢔ臣ꚁ胣뚺뛦궸臣誁臣讂臩ꊛꃦ뢅裥邭볯设臣낁胣늼볯ꆼ볯꺁蟩銂룦骮臣ꚁ苣袂臣芀鳦躘듧뢛臣風볨꺁蓨ꪳ菣躃닧邭臣誁臣讂ꃦ뢅裥邭臣膰藥릊軧꾁胣醰臣辁臣节볯邼볯膀뻤袁臣膀볯邼볯膀볯閼볯膀볯邼볯膀볯閼볯膀볯邼볯膀볯閼볯膀볯邼볯膀볯閼볯膀볯邼볯膀볯醼볯膀볯銼볯膀볯鎼볯膀볯钼볯膀볯閼볯膀볯隼볯膀볯鞼볯膀볯颼볯膀볯馼볯膀臣龁臣醼볯邼볯ꞁ臣ꎁ臣节苣蒁胣肸菩꺁껥붖뷥讅臣꾁胣膰藥릊軧꾁냥ꪁ臣ꢁ苣颼볯薼臣芁臣ꚁ苣袂臣芀觧骮臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀냥ꖅ諥螎臣醰臣辁臣节볯邼볯ꞁ臣ꎁ臣节苣蒁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯馼볯醼胣㲑䐯噉ਾ†蓨ꪳ菣躃닧邭臣膀볯꺨臣龁臣螤闦꺨臣뎂菣蚃苣뎃苣ꒉ苣뮻蓦뢁諦蒚臣ꮐ苣ꞁ臣ꚁ苣袂臣芀뻤袁臣膀蓨ꪳ菣躃닧邭臣膀苣벃菣ꎂ菣낂觥銂鳦馁苣ꮂ菣뮂菣ꒉ胣閃苣ꮃ菣ꒉ胣뺁臣꾁賩ꒉ臣붣觥隌臣貂臣蒁臣节苣蒁胣겜飦내鯦ꮁ꣨覼臣蒵裦ꦉ苣ꮐ苣ꮂ菣뮂菣ꒉ胣閃苣ꮃ菣ꒉ胣뺁臣꾁賩ꒉ臣膀믤辄臣覜铧ꪁ苣ꒂ苣膀볥떼苣랼뫥膀ꇧꚺ胣뺁臣꾁꿥ꚺ苣覜臣ꚁ臣ꚁ苣袂臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯钼볯醀⼼䥄㹖 뮌雨蒵裦ꦉ戼㹲 겜雩몤臣膀볯꺨臣龁臣螤闦꺨臣겖귥蒚臣놨껥閁苣讂돨ꊽ觥膀详鎽胣뺁臣꾁룥袇觥ꢁ뗧뾁郥辂臣龁胣겜飦내鯦ꮁ꣨覼臣趽볯꺼볯뺁臣꾁菣躃닧邭볯设臣낁胣芄돨誃菣銲귥覼苣ꮐ苣뮌雨蒵裦ꦉ苣ꮐ苣芀觧骮臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀뷯늼볯ꆼ臣膀菣躃닧邭胣设臣낁胣芄돨誃菣銲귥궸臣ꮐ臣貂臣蒁苣芀觧骮臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀뷯늼볯ꆼ臣龁臣誃菣銲귥꾁賥겖뗧邈觧궸臣ꮐ臣貂臣蒁苣芀꟦薀臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀賥겖뗧邈觧궸臣ꮐ臣貂苣醼꣧뺁臣꾁ꓨ낕꣧꺁뷯늼볯ꆼ臣膀菣躃닧邭胣设臣낁胣芄돨誃菣銲귥薆臣膰藥閁苣ꚁ臣讂胣릉껥꺁껥붖뷥讅臣꾁胣견볯꺁뷯늼볯ꆼ볯견볯꺁뷯늼볯ꆼ臣ꊃ菣钯軧꾁胣蒴볯骼볯邼胣蒴볯骼볯閼胣蒴볯骼볯邼胣蒴볯骼볯膀듧醼볯钼胣蒴볯骼볯膀듧醼볯銼胣蒴볯骼볯膀듧銼볯醼胣蒴볯骼볯膀듧钼볯醼胣节臣辁臣蒴볯骼볯膀듧醼볯骼볯膀듧銼볯骼볯膀臣龁臣蒴볯邼볯醼臣芁苣芀觧骮臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀곧醼臣趽볯꺼볯骼곧銼臣趽볯꺼볯꺁菣ꮃ꿦螎臣醼볯醼뛨ꞁ臣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯馼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯뢼볯邼볯銂苣벃菣馁苣견볯꺁뷯늼볯ꆼ胣蚃苣벃黥ꦼ볯銈볯銼苣뎂菣覃臣讂곧銼臣趽볯꺼볯膀迥뎁냥ꪁ臣ꢁ苣膀듧麃뗧袐볯겼裢醼볯銂苣벃菣馁苣견볯꺁뷯늼볯ꆼ臣膀꟦薀臣趇蟩钯軧膀뻤袁臣膀뷥辇볯趇蟩覼臣鶁苣麁苣꺁뷯늼볯ꆼ胣뺁臣꾁臣꺁믤꺁뷯늼볯ꆼ臣辇볯趇蟩覼臣銼胣鎼胣钼胣閼胣隼胣鞼胣颼胣馼胣醼볯膀볯醼胣醼볯膀볯鎼胣醼볯膀볯閼胣醼볯膀볯鞼胣醼볯膀볯馼胣銼볯膀볯閼胣鎼볯膀볯閼胣钼볯膀볯閼胣閼볯膀볯閼胣뺁臣꾁볯邼볯趀臣ꮐ臣貂苣趽볯꺼볯꺁臣ꆁ臣蒁臣貂臣醼꣧ꞁ胣놅藩袐臣貂臣蒁苣袼뻤袁臣膀볯꺼볯薆臣覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯馼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯뢼볯邼볯銂苣벃菣馁苣견볯꺁뷯늼볯ꆼ胣蚃苣벃黥ꦼ볯銈볯銼苣뎂菣覃臣讂곧銼臣趽볯꺼볯膀迥뎁냥ꪁ臣ꢁ苣膀듧麃뗧袐볯겼裢醼볯銂苣벃菣馁苣견볯꺁뷯늼볯ꆼ臣膀꟦薀臣ꪳ蟩꺁臣貂臣貂臣趽볯꺼볯膀臣龁臣붣觥궸臣ꮐ臣貂苣趽볯꺼볯꺁臣ꆁ臣蒁臣貂臣醼꣧ꞁ胣놅藩袐臣貂臣蒁苣袼뻤袁臣膀볯꺼볯薆臣覼胣设臣낁胣견볯꺁뷯늼볯ꆼ臣膀ꏨꒉ룤꺁곧銼迥뎁볯뺁臣꾁곧鎼臣趽볯꺼볯銂鿥隺臣鞁臣膀곧醼臣趽볯꺼볯貁胣견볯꺁뷯늼볯ꆼ迥뎁볯뺁臣꾁곧鎼臣趽볯꺼볯꺁蟩꺁볯邼胣醼볯邼볯膀볯邼胣颼볯薼胣鎼볯鲀볯邼볯膀臣龁臣钼볯鲀볯邼볯꺁돨辇臣辇臣ꮐ臣貂苣袂臣ꮁ胣놅藩袐臣貂臣蒁苣袼뻤袁臣膀볯꺼볯薆臣覼胣ꖈ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀곧醼臣趽볯꺼볯誏臣견볯꺁뷯늼볯ꆼ臣膀ꏨꒉ룤꺁곧鎼臣趽볯꺼볯銂鿥隺臣鞁臣膀곧醼臣趽볯꺼볯誏臣견볯꺁뷯늼볯ꆼ臣膀곧鎼臣趽볯꺼볯꺁볯邼胣醼볯邼볯膀볯邼胣颼볯薼胣鎼볯鲀볯邼볯膀臣龁臣钼볯鲀볯邼볯꺁돨辇臣辇臣ꮐ臣貂苣袂臣ꮁ胣놅藩袐臣貂臣蒁苣袼뻤袁臣膀볯꺼볯薆臣覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯馼볯閼胣㲑䐯噉ਾ†룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯뢼볯邼볯€趽볯꺼볯骼菣뚂菣讞볯겼裢醼볯ₒ趽볯꺼볯骼듧麃뗧袐볯겼裢醼볯ₕ趽볯꺼볯꾁胣蚃苣벃黥ꦼ볯銈볯銼†뷯늼볯ꆼ迥뎁듧麃뗧袐볯겼裢醼볯ₕ趽볯꺼볯貁臣벁뷥辇臣芁苣膀볯뢼볯邼볯€趽볯꺼볯貁苣誂냥ꪁ臣趇蟩袼돨辇볯辇胣设臣낁胣醼볯閼胣銼볯邼胣銼볯閼胣鎼볯邼胣鎼볯閼胣钼볯邼胣钼볯閼胣뺁臣꾁볯躼볯趀苣誂냥ꪁ臣趇蟩袼돨辇볯辇臣ꦁ臣ꮐ臣貂苣袂臣ꪁ蟩辇볯ꪳ蟩覼꿦螎臣膀藥超郥閁苣ꚁ臣讂볯设臣낁胣겼볯낼蛥ꮁ볯芀룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯뢼볯邼볯€趽볯꺼볯骼菣뚂菣讞볯겼裢醼볯ₒ趽볯꺼볯骼듧麃뗧袐볯겼裢醼볯ₕ趽볯꺼볯꾁胣醼볯醼볯醼臣趇蟩袼돨辇볯钯軧ꞁ藥超郥閁苣ꚁ臣讂볯设臣낁胣겼볯낼蛥ꮁ볯芀룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯뢼볯邼볯€趽볯꺼볯骼菣뚂菣讞볯겼裢醼볯ₒ趽볯꺼볯骼듧麃뗧袐볯겼裢醼볯ₕ趽볯꺼볯꾁胣邼볯醼볯醼볯醼臣趇蟩袼돨辇볯钯軧ꞁ藥超郥閁苣ꚁ臣讂볯设臣낁胣겼볯낼蛥ꮁ볯芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯钼볯醀⼼䥄㹖 肸菩꺁껥붖뷥讅臣꾁胣꾼볯钼볯겼苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ胣蚃苣벃黥ꦼ볯銈볯銼苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ胣誏臣내菨邵郥ꦼ볯銈볯閼苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ臣蚁臣꺁臣骁苣讁볯꺨臣膀臣꺁믤꺁뷯늼볯ꆼ臣醼볯薼胣醼볯邼볯꺁돨辇臣鶁臣隻臣趽볯꺼볯ꢁ藥超郥閁苣ꚁ臣讂볯设臣낁胣겼볯낼蛥ꮁ볯芀룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯뢼볯邼볯€趽볯꺼볯骼菣뚂菣讞볯겼裢醼볯ₒ趽볯꺼볯骼듧麃뗧袐볯겼裢醼볯ₕ趽볯꺼볯꾁胣邼볯醼胣醼볯邼볯醼胣醼볯邼볯醼胣醼臣趇蟩袼돨辇볯钯軧ꞁ藥超郥閁苣ꚁ臣讂볯设臣낁胣겼볯낼蛥ꮁ볯芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣邼볯钼볯醀⼼䥄㹖 肸菩꺁껥붖뷥讅臣꾁胣내菨邵郥ꦼ볯銈볯閼菣ꪃ菣鞃菣覃苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ볯螤闦꾏볯꾁胣醼볯醼臣ꊃ菣钯軧ꞁ藥超郥閁苣龁볯设臣낁胣겼볯낼蛥ꮁ볯ꦼ볯銈볯閼苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ迥뎁볯겼裢醼볯늼뇎苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ臣芁苣芀룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀듧麃뗧袐볯겼裢醼볯鶃菣骃菣膃菣銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯袼ꓨ낕迥覼臣膀볯骼볯躼볯꺁蟩辇볯ꪳ蟩覼꿦螎臣놅藩袐臣貂臣袼뻤袁臣膀볯꺼볯薆臣覼볯겼裢醼볯銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯誏臣ꦼ볯銈볯閼볯캲銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯ꞁ臣讂胣鶁苣蚂臣膀룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯뢼볯邼볯銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯骼菣뚂菣讞볯겼裢醼볯銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯骼볯겼裢醼볯銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯骼볯겼裢醼볯늼뇎苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ臣趇蟩袼돨辇볯钯軧꾁볯躼볯骼볯躼볯骼볯骼볯躼볯ꞁ臣讂胣肸껥붖뷥讅臣꾁胣겜雩몤臣膀볯뢼볯邼볯銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯骼菣뚂菣讞볯겼裢醼볯銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯骼볯겼裢醼볯銂苣벃菣馁苣趽볯꺼볯骼볯겼裢醼볯늼뇎苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ苣銼볯钼볯銼볯钼볯醼볯醼볯钼臣趇蟩袼돨辇볯钯軧ꞁ郥肂볯꺼볯銂迦鮾臣讂胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯馼볯颼胣㲑䐯噉ਾ†룤ꢃ臣龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀볯뢼볯邼볯銂苣벃菣馁苣견볯꺁뷯늼볯ꆼ볯蚃苣벃黥ꦼ볯銈볯銼苣뎂菣覃臣讂곧銼臣趽볯꺼볯骼볯겼裢醼볯늼뇎臣龩菨蒚臣ꎀ뗧鞁臣ꦼ볯銈볯閼苣뎂菣覃臣讂곧鎼臣趽볯꺼볯꺁蟩辇볯ꪳ蟩覼꿦螎臣醼볯醼볯醼臣芁苣芀룤龮雦ꊽ藦ꞁ臣膀鳦讖ꓧ꾁胣꾼볯钼볯겼苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ볯蚃苣벃黥ꦼ볯銈볯銼苣뎂菣覃臣讂뷯늼볯ꆼ볯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