【手続補正書】
【提出日】平成22年2月26日(2010.2.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コポリマー-1またはコポリマー-1合成の中間体の試料を分類する方法であって：
(a)コポリマー-1またはコポリマー-1合成の中間体の試料を提供する工程；
(b)そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するコポリマー-1またはコポリマー-1合成の中間体の試料中のポリペプチドの量を決定する工程；
(c)そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するコポリマー-1またはコポリマー-1合成の中間体の試料中のポリペプチドの量を予め決められた参照値と比較する工程；および
(d)工程(c)の比較を基に、コポリマー-1またはコポリマー-1合成の中間体の試料を分類する工程
を含む、方法。
【請求項２】
コポリマー-1またはコポリマー-1合成の中間体の試料が、コポリマー-1、中間体-I、中間体-II、および中間体-IIIからなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項３】
参照値が、基準値、対照値、ならびにコポリマー-1の参照試料、中間体-Iの参照試料、中間体-IIの参照試料、および中間体-IIIの参照試料の直接測定から得られる値からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
【請求項４】
基準値が、酢酸グラチラマーの薬学的基準値を含む、請求項3記載の方法。
【請求項５】
酢酸グラチラマーの基準値が、約7モル％〜約20モル％の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル％範囲を有する、請求項4記載の方法。
【請求項６】
酢酸グラチラマーの基準値が、約8モル％〜約18モル％の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル％範囲を有する、請求項5記載の方法。
【請求項７】
酢酸グラチラマーの基準値が、約10モル％〜約15モル％の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル％範囲を有する、請求項6記載の方法。
【請求項８】
酢酸グラチラマーの基準値が、約12モル％〜約14モル％の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル％範囲を有する、請求項7記載の方法。
【請求項９】
酢酸グラチラマーの基準値が、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの約13モル％である、請求項8記載の方法。
【請求項１０】
参照値が、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの約60モル％〜約100モル％である、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
分類工程が、コポリマー-1が薬学的使用に適しているかどうかを決定すること、コポリマー-1試料の合成の中間体が更なる加工工程に供されるのに適しているかどうかを決定すること、および薬学的使用のためにコポリマー-1を放出することを含む、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの試料中の存在または量の決定が、液体クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法、質量分析、液体クロマトグラフィー/質量分析、NMR分光法、抗体検出法、ラマン分光法、赤外分光法、蛍光分光法、UV-可視分光法、ゲル電気泳動法、およびそれらの組合せからなる群より選択される方法を含む、請求項1記載の方法。
【請求項１３】
試料中の1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、ポリペプチド鎖、およびそれらの組合せのC末端に結合したジエチルアミド部分を定量する方法であって：
(a)1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、ポリペプチド鎖、およびそれらの組合せを含有する試料を提供する工程；ならびに
(b)1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、ポリペプチド鎖、およびそれらの組合せのC末端に結合したジエチルアミド部分を定量するために、試料をNMRにより分析する工程
を含む、方法。
【請求項１４】
1つまたは複数のアミノ酸が、アラニン、グルタミン酸、リシン、およびチロシンからなる群より選択される、請求項13記載の方法。
【請求項１５】
試料が、コポリマー-13、誘導体化されたコポリマー-1、断片化されたコポリマー-1、分画されたコポリマー-1、およびそれらの組合せからなる群より選択されるポリペプチド混合物を含有する、請求項13記載の方法。
【請求項１６】
NMR法が、一次元(1D)NMR、二次元(2D)NMR、および三次元(3D)NMR、1H NMR、13C NMR、15N NMR、ならびにそれらの組合せからなる群より選択される、請求項13記載の方法。
【請求項１７】
NMR法が、C末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチド鎖の量を決定するために、NMRシグナルを定量する工程をさらに含む、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
(a)C末端に結合したジエチルアミド部分に割当てられた1つまたは複数のNMRピークを積分すること；
(b)C末端に結合したジエチルアミド部分に割当てられた1つまたは複数のNMRピークを逆重畳積分すること；および
(c)C末端に結合したジエチルアミド部分に割当てられたNMRシグナルの積分された面積を、ポリペプチド混合物、試料にドープされた参照分子、外部試料、較正された高周波シグナル、およびそれらの組合せに割り当てられたNMRシグナルのものに対し較正すること
からなる群より選択される方法によりNMRシグナルを定量する工程を含む、
請求項17記載の方法。
【請求項１９】
試料がコポリマー-1を含有する、請求項13記載の方法。
【請求項２０】
試料が遊離のアミノ酸を実質的に含まない、請求項19記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
上記に言及される本明細書で開示された主題のある局面は、本明細書で開示された主題により全体的または部分的に対処されており、他の局面は、以下に説明される最良のものとして添付された実施例および図面と組合せて考慮する場合に、その説明が進むにつれ、明らかになると考えられる。
[請求項101]
試料中の1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、ポリペプチド鎖、およびそれらの組合せの少なくとも1つのC末端の修飾を検出する方法であって:
(a)少なくとも1つの修飾されたC末端を有する、1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、ポリペプチド鎖、およびそれらの組合せを含むことが疑われる試料を提供する工程;ならびに
(b)試料中のアミノ酸、ペプチド、ポリペプチド鎖、およびそれらの組合せの少なくとも1つのC末端の修飾を検出することが可能である方法により、試料を分析する工程
を含む、方法。
[請求項102]
少なくとも1つのC末端の修飾が、結合したジエチルアミド部分を有する試料中の1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、ポリペプチド鎖、およびそれらの組合せの少なくとも1つのC末端を含む、請求項101記載の方法。
[請求項103]
1つまたは複数のアミノ酸が、アラニン、グルタミン酸、リシン、およびチロシンからなる群より選択される、請求項101記載の方法。
[請求項104]
アミノ酸アラニン、グルタミン酸、リシン、およびチロシンの1つまたは複数が、それに結合したジエチルアミド部分を有するC末端を含む、請求項103記載の方法。
[請求項105]
1つまたは複数のアミノ酸が、1つまたは複数の保護されたアミノ酸を含む、請求項101記載の方法。
[請求項106]
1つまたは複数の保護されたアミノ酸が、O-ベンジルグルタミン酸およびNε-トリフルオロアセチルリシンからなる群より選択される、請求項105記載の方法。
[請求項107]
保護されたアミノ酸O-ベンジルグルタミン酸およびNε-トリフルオロアセチルリシンの1つまたは複数が、それに結合したジエチルアミド部分を有するC末端を含む、請求項106記載の方法。
[請求項108]
試料が、コポリマー-1、誘導体化されたコポリマー-1、断片化されたコポリマー-1、分画されたコポリマー-1、およびそれらの組合せからなる群より選択されるポリペプチド混合物を含有する、請求項101記載の方法。
[請求項109]
試料が、1つまたは複数のコポリマー-1の中間体、コポリマー-1の誘導体化された中間体、コポリマー-1の断片化された中間体、コポリマー-1の分画された中間体、およびそれらの組合せからなる群より選択されるポリペプチド混合物を含有し、
該中間体が、図1に示された中間体-I、中間体-II、および中間体-IIIからなる群より選択される、
請求項101記載の方法。
[請求項110]
試料中の1つまたは複数のポリペプチド鎖の少なくとも1つのC末端の修飾を検出することが可能であり、
液体クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法、質量分析、液体クロマトグラフィー/質量分析、NMR分光法、抗体検出法、ラマン分光法、赤外分光法、蛍光分光法、UV-可視分光法、ゲル電気泳動法、およびそれらの組合せからなる群より選択される、
請求項101記載の方法。
[請求項111]
ガスクロマトグラフィー法が、直接注入およびヘッドスペース注入からなる群より選択される注入技術を含む、請求項110記載の方法。
[請求項112]
NMR法が、一次元(1D)NMR、二次元(2D)NMR、および三次元(3D)NMR、1H NMR、13C NMR、15N NMR、ならびにそれらの組合せからなる群より選択される、請求項110記載の方法。
[請求項113]
NMR法が、少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の量を決定するために、NMRシグナルを定量する工程をさらに含む、請求項112記載の方法。
[請求項114]
(a)修飾されたC末端に割当てられた1つまたは複数のNMRピークを積分すること;
(b)修飾されたC末端に割当てられた1つまたは複数のNMRピークを逆重畳積分すること;および
(c)修飾されたC末端に割当てられたNMRシグナルの積分された面積を、ポリペプチド混合物、試料にドープされた参照分子、外部試料、較正された高周波シグナル、およびそれらの組合せに割当てられたNMRシグナルのものに対し較正すること
からなる群より選択される方法により、NMRシグナルを定量する工程を含む、
請求項113記載の方法。
[請求項115]
NMR法が、試料を化学変性剤と接触させる工程をさらに含む、請求項112記載の方法。
[請求項116]
化学変性剤が、尿素およびグアニジンからなる群より選択される、請求項115記載の方法。
[請求項117]
抗体検出法が、ウェスタンブロット、アフィニティクロマトグラフィー、および酵素結合免疫吸着アッセイ法(ELISA)からなる群より選択される、請求項110記載の方法。
[請求項118]
工程(b)において試料を分析する前に、試料を分画する工程をさらに含む、請求項101記載の方法。
[請求項119]
液体クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法、およびそれらの組合せからなる群より選択される方法により試料を分画する工程を含む、請求項118記載の方法。
[請求項120]
工程(b)において試料を分析する前に、試料を精製する工程をさらに含む、請求項101記載の方法。
[請求項121]
ゲル電気泳動法、サイズ排除クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法、イオン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー、溶媒抽出、沈殿、アフィニティクロマトグラフィー、ホスホペプチドの選択、低い存在量のアミノ酸の選択、1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、およびポリペプチドの親和性タグへの連結、1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、およびポリペプチドの1つまたは複数のカルボキシル基のエステル交換、EDC/アミン化学による試料の処理、ならびに1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、およびポリペプチドの1つまたは複数のカルボキシル基に結合するタンパク質による試料の処理からなる群より選択される方法により試料を精製する工程を含む、請求項120記載の方法。
[請求項122]
試料を断片化する工程をさらに含む、請求項101記載の方法。
[請求項123]
化学的解重合による試料の断片化を含む、請求項122記載の方法。
[請求項124]
試料の化学的解重合が、試料を強酸または強塩基と接触させる工程を含む、請求項123記載の方法。
[請求項125]
酵素消化により試料を断片化する工程を含む、請求項122記載の方法。
[請求項126]
酵素消化による試料の断片化が、試料をトリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、Glu-C、カルボキシペプチダーゼ、およびそれらの組合せからなる群より選択されるプロテアーゼと接触させる工程を含む、請求項125記載の方法。
[請求項127]
試料を複数のプロテアーゼと同時に接触させることにより、試料を断片化する工程を含む、請求項125記載の方法。
[請求項128]
試料を複数のプロテアーゼと連続して接触させることにより、試料を断片化する工程を含む、請求項125記載の方法。
[請求項129]
少なくとも1つのその修飾されたC末端を有する1つまたは複数のポリペプチド鎖を試料から除去する工程を含む、請求項101記載の方法。
[請求項130]
少なくとも1つの修飾されたC末端が、それに結合したジエチルアミド部分を有する、請求項101記載の方法。
[請求項131]
結合したジエチルアミド部分を有するC末端を含む1つまたは複数のポリペプチド鎖からアミンを遊離させる工程を含む、請求項102記載の方法。
[請求項132]
1つまたは複数のポリペプチド鎖からアミンを遊離させるために、1つまたは複数のポリペプチド鎖を解重合する工程を含む、請求項131記載の方法。
[請求項133]
アミンがジエチルアミンである、請求項131記載の方法。
[請求項134]
アミンが、ガスクロマトグラフィー(GC)、GC-MS、HPLC、LC-MS、NMR、抗体検出法、ラマン分光法、キャピラリー電気泳動法、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、およびイオンクロマトグラフィーからなる群より選択される方法により検出される、請求項131記載の方法。
[請求項135]
誘導体化されたアミンを形成するためにアミンを発色団で誘導体化する工程、およびHPLCにより誘導体化されたアミンを検出する工程をさらに含む、請求項131記載の方法。
[請求項136]
少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の試料中の量が、約7モル%〜約20モル%の範囲である、請求項101記載の方法。
[請求項137]
少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の試料中の量が、約8モル%〜約18モル%の範囲である、請求項136記載の方法。
[請求項138]
少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の試料中の量が、約10モル%〜約15モル%の範囲である、請求項137記載の方法。
[請求項139]
少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の試料中の量が、約12モル%〜約14モル%の範囲である、請求項138記載の方法。
[請求項140]
少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の試料中の量が、約13モル%である、請求項139記載の方法。
[請求項141]
少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の試料中の量が、約60モル%〜約100モル%の範囲である、請求項109記載の方法。
[請求項142]
少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の試料中の量が、約75モル%〜約100モル%の範囲である、請求項141記載の方法。
[請求項143]
ポリペプチド混合物を含有する試料を評価する方法であって:
(a)ポリペプチドの1つまたは複数が、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有することが疑われる、ポリペプチドの混合物を含有する試料を提供する工程;
(b)C末端に結合したジエチルアミド部分を有する1つまたは複数のポリペプチドが試料中に存在する場合に、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有する1つまたは複数のポリペプチドからジエチルアミンを遊離させるために、試料を解重合する工程;ならびに
(c)その中の遊離されたジエチルアミンの存在または量を決定するために、解重合された試料を分析する工程
を含む、方法。
[請求項144]
試料が、コポリマー-1、誘導体化されたコポリマー-1、断片化されたコポリマー-1、分画されたコポリマー-1、およびそれらの組合せからなる群より選択されるポリペプチド混合物を含有する、請求項143記載の方法。
[請求項145]
試料が、1つまたは複数のコポリマー-1の中間体、コポリマー-1の誘導体化された中間体、コポリマー-1の断片化された中間体、コポリマー-1の分画された中間体、およびそれらの組合せからなる群より選択されるポリペプチド混合物を含有し、
該中間体が、図1に示された中間体-I、中間体-II、および中間体-IIIからなる群より選択される、
請求項143記載の方法。
[請求項146]
化学的解重合により試料を解重合する工程を含む、請求項143記載の方法。
[請求項147]
試料の化学的解重合が、試料を強酸または強塩基と接触させる工程を含む、請求項146記載の方法。
[請求項148]
酵素消化により試料を解重合する工程を含む、請求項143記載の方法。
[請求項149]
酵素消化による試料の解重合が、試料をトリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、Glu-C、カルボキシペプチダーゼ、およびそれらの組合せからなる群より選択されるプロテアーゼと接触させる工程を含む、請求項145記載の方法。
[請求項150]
試料を複数のプロテアーゼと同時に接触させることにより、試料を解重合する工程を含む、請求項149記載の方法。
[請求項151]
試料を複数のプロテアーゼと連続して接触させることにより、試料を解重合する工程を含む、請求項149記載の方法。
[請求項152]
ジエチルアミンが、ガスクロマトグラフィー(GC)、GC-MS、HPLC、LC-MS、NMR、抗体検出法、ラマン分光法、キャピラリー電気泳動法、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、およびイオンクロマトグラフィーからなる群より選択される方法により検出される、請求項143記載の方法。
[請求項153]
誘導体化されたジエチルアミンを形成するために遊離されたジエチルアミンを発色団で誘導体化する工程、および誘導体化されたジエチルアミンをHPLCにより検出する工程をさらに含む、請求項143記載の方法。
[請求項154]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの試料中の量が、約7モル%〜約20モル%の範囲である、請求項143記載の方法。
[請求項155]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの試料中の量が、約8モル%〜約18モル%の範囲である、請求項154記載の方法。
[請求項156]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの試料中の量が、約10モル%〜約15モル%の範囲である、請求項155記載の方法。
[請求項157]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの試料中の量が、約12モル%〜約14モル%の範囲である、請求項156記載の方法。
[請求項158]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの試料中の量が、約13モル%である、請求項157記載の方法。
[請求項159]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの試料中の量が、約60モル%〜約100モル%の範囲である、請求項145記載の方法。
[請求項160]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドの試料中の量が、約75モル%〜約100モル%の範囲である、請求項159記載の方法。
[請求項161]
コポリマー-1の試料をアッセイする方法であって:
(a)そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有する1つまたは複数のポリペプチドを含有することが疑われる、コポリマー-1の試料を提供する工程;
(b)そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのコポリマー-1試料中の存在または量を決定する工程
を含む、方法。
[請求項162]
コポリマー-1試料が、コポリマー-1またはその中間体、断片化されたコポリマー-1またはその中間体、分画されたコポリマー-1またはその中間体、および誘導体化されたコポリマー-1またはその中間体からなる群より選択され、
該中間体が、図1に示された中間体-I、中間体-II、および中間体-IIIからなる群より選択される、
請求項161記載の方法。
[請求項163]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのコポリマー-1試料中の量を、予め決定された参照値と比較する工程をさらに含む、請求項161記載の方法。
[請求項164]
参照値が、基準値、対照値、およびコポリマー-1またはその中間体の参照試料の直接測定から得られた値からなる群より選択され、
該中間体が、図1に示された中間体-I、中間体-II、および中間体-IIIからなる群より選択される、
請求項163記載の方法。
[請求項165]
基準値が、酢酸グラチラマーに関する薬学的基準値を含む、請求項164記載の方法。
[請求項166]
酢酸グラチラマーの基準値が、約7モル%〜約20モル%の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル%範囲を有する、請求項165記載の方法。
[請求項167]
酢酸グラチラマーの基準値が、約8モル%〜約18モル%の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル%範囲を有する、請求項166記載の方法。
[請求項168]
酢酸グラチラマーの基準値が、約10モル%〜約15モル%の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル%範囲を有する、請求項167記載の方法。
[請求項169]
酢酸グラチラマーの基準値が、約12モル%〜約14モル%の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル%範囲を有する、請求項168記載の方法。
[請求項170]
酢酸グラチラマーの基準値が、約13モル%の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドモル%を有する、請求項169記載の方法。
[請求項171]
参照値が、コポリマー-1の中間体の参照試料から得られた値を含み、
該中間体が、図1に示された中間体-I、中間体-II、および中間体-IIIからなる群より選択される、
請求項164記載の方法。
[請求項172]
コポリマー-1の中間体の参照試料から得られた参照値が、約60モル%〜約100モル%の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル%範囲を有する、請求項171記載の方法。
[請求項173]
コポリマー-1の中間体の参照試料から得られた参照値が、約75モル%〜約100モル%の、そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのモル%範囲を有する、請求項172記載の方法。
[請求項174]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのコポリマー-1試料中の存在または量を基に、コポリマー-1試料を分類する工程をさらに含む、請求項161記載の方法。
[請求項175]
コポリマー-1試料の分類が、試料が薬学的使用に適しているかを決定する工程、試料が更なる加工工程に供するのに適しているかどうかを決定する工程、および薬学的使用のために試料を放出する工程からなる群より選択される工程を含む、請求項174記載の方法。
[請求項176]
そのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのコポリマー-1試料中の存在または量の決定が、液体クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法、質量分析、液体クロマトグラフィー/質量分析、NMR分光法、抗体検出法、ラマン分光法、赤外分光法、蛍光分光法、UV-可視分光法、ゲル電気泳動法、およびそれらの組合せからなる群より選択される方法を含む、請求項161記載の方法。
[請求項177]
NMR法が、一次元(1D)NMR、二次元(2D)NMR、および三次元(3D)NMR、1H NMR、13C NMR、15N NMR、ならびにそれらの組合せからなる群より選択される、請求項176記載の方法。
[請求項178]
NMR法が、少なくとも1つの修飾されたC末端を有するポリペプチド鎖の量を決定するために、NMRシグナルを定量する工程をさらに含む、請求項177記載の方法。
[請求項179]
(a)修飾されたC末端に割当てられた1つまたは複数のNMRピークを積分すること;
(b)修飾されたC末端に割当てられた1つまたは複数のNMRピークを逆重畳積分すること;および
(c)ポリペプチド混合物、試料にドープされた参照分子、外部試料、較正された高周波シグナル、およびそれらの組合せを含むコポリマーに割当てられたNMRシグナルの1つに対し、修飾されたC末端に割当てられたNMRシグナルを参照すること
からなる群より選択される方法によりNMRシグナルを定量する工程を含む、
請求項178記載の方法。
[請求項180]
NMR法が、試料を化学変性剤と接触させる工程をさらに含む、請求項177記載の方法。
[請求項181]
化学変性剤が、尿素およびグアニジンからなる群より選択される、請求項180記載の方法。
[請求項182]
抗体検出法が、ウェスタンブロット、アフィニティクロマトグラフィー、および酵素結合免疫吸着アッセイ法(ELISA)からなる群より選択される、請求項176記載の方法。
[請求項183]
工程(b)においてそのC末端に結合したジエチルアミド部分を有するポリペプチドのコポリマー-1試料中の存在または量を決定する前に、試料を分画する工程をさらに含む、請求項161記載の方法。
[請求項184]
液体クロマトグラフィー、イオンクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法、およびそれらの組合せからなる群より選択される方法により試料を分画する工程を含む、請求項183記載の方法。
[請求項185]
工程(b)において試料を分析する前に、試料を精製する工程をさらに含む、請求項161記載の方法。
[請求項186]
ゲル電気泳動法、サイズ排除クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動法、イオン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー、溶媒抽出、沈殿、アフィニティクロマトグラフィー、ホスホペプチドの選択、低い存在量のアミノ酸の選択、1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、およびポリペプチドの親和性タグへの連結、1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、およびポリペプチドの1つまたは複数のカルボキシル基のエステル交換、EDC/アミン化学による試料の処理、ならびに1つまたは複数のアミノ酸、ペプチド、およびポリペプチドの1つまたは複数のカルボキシル基に結合するタンパク質による試料の処理からなる群より選択される方法により、試料を精製する工程を含む、請求項185記載の方法。
[請求項187]
試料の断片化をさらに含む、請求項161記載の方法。
[請求項188]
試料を化学的解重合により断片化する工程を含む、請求項187記載の方法。
[請求項189]
試料の化学的解重合が、試料を強酸または強塩基と接触させる工程を含む、請求項188記載の方法。
[請求項190]
酵素消化により試料を断片化する工程を含む、請求項187記載の方法。
[請求項191]
酵素消化による試料の断片化が、試料をトリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、Glu-C、カルボキシペプチダーゼ、およびそれらの組合せからなる群より選択されるプロテアーゼと接触させる工程を含む、請求項190記載の方法。
[請求項192]
試料を複数のプロテアーゼと同時に接触させることにより、試料を断片化する工程を含む、請求項190記載の方法。
[請求項193]
試料を複数のプロテアーゼと連続して接触させることにより、試料を断片化する工程を含む、請求項190記載の方法。
[請求項194]
結合したジエチルアミド部分を有するC末端を含む1つまたは複数のポリペプチドからアミンを遊離させる工程を含む、請求項161記載の方法。
[請求項195]
1つまたは複数のポリペプチド鎖からアミンを遊離させるために、1つまたは複数のポリペプチド鎖を解重合する工程を含む、請求項194記載の方法。
[請求項196]
アミンがジエチルアミンである、請求項194記載の方法。
[請求項197]
アミンが、ガスクロマトグラフィー(GC)、GC-MS、HPLC、LC-MS、NMR、抗体検出法、ラマン分光法、キャピラリー電気泳動法、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、およびイオンクロマトグラフィーからなる群より選択される方法により検出される、請求項194記載の方法。
[請求項198]
誘導体化されたアミンを形成するためにアミンを発色団で誘導体化する工程、ならびに誘導体化されたアミンをHPLCにより検出する工程をさらに含む、請求項194記載の方法。