【手続補正書】
【提出日】平成21年12月9日(2009.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
固定化細胞性微生物の増殖または代謝を迅速に検出する方法であって：
少なくとも１種の微生物の細胞の固体群を、前記微生物に無毒性である溶解された酸素消光性リン光化合物を含む水性ゲル化培地中に固定化すること；これにより、
前記リン光化合物が前記培地における酸素圧力に応答性であるよう、各細胞と周囲の前記培地における前記酸素感受性リン光化合物との間の伝達可能な接触を維持すること；
前記溶解されたリン光化合物をリン光を発するまで励起すること；および
前記ゲル化培地における前記リン光を検出することを含み、
リン光の増加が、前記微生物の増殖または代謝の指標である方法。
【請求項２】
固定化嫌気性微生物の増殖または代謝を迅速に検出する方法であって：
少なくとも１種の嫌気性微生物の細胞の固体群を、前記微生物に無毒性である溶解された酸素消光性蛍光ｐＨ指示化合物を含む水性ゲル化培地中に固定化すること；これにより、
前記消光性蛍光ｐＨ指示薬が前記培地における水素イオン変化に応答性であるよう、各細胞と周囲の前記培地における前記酸素消光性蛍光ｐＨ指示薬との間の伝達可能な接触を維持すること；
溶解された前記蛍光指示薬が蛍光を発するまで励起すること、および
前記ゲル化培地における、前記蛍光ｐＨ指示薬による蛍光発光の変化を検出することを含み、
蛍光発光における変化が、前記微生物の増殖または代謝からもたらされる水素イオン変化の指標である方法。
【請求項３】
前記固定化するステップが：
無菌の液体状の水性ゲル化培地と前記少なくとも１種の微生物の細胞の固体群を一緒に混合して、接種混合物を形成すること；
前記接種混合物を中空型枠グロースチャンバ内の空間に挿入すること；および
前記接種混合物のゲル形成を許容し、これにより、その中に含有されている細胞を固定化すること
をさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
増殖または代謝の指標である前記リン光の増加又は前記蛍光発光の変化により検出された前記少なくとも１種の微生物の少なくとも１つのコロニーを前記ゲルから選択して取り出すことをさらに含む、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記選択して取り出した微生物を個別の無菌培地において繁殖させることをさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記個別の培地が抗生物質をさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記無毒性、可溶性、酸素消光性リン光化合物が、式：
【化１】
2009523447.tif 000001
を有するポルフィリン化合物であって、
式中：
Ｒ１は水素原子または置換もしくは非置換のアリールであり；
Ｒ２およびＲ３は、独立して水素であるか、または一緒に結合されて置換もしくは非置換のアリールを形成し；および
ＭはＨ２または金属である、
請求項１及び３乃至６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ポルフィリンが、ポルフィリン、テトラベンゾポルフィリン、テトラナフトポルフィリン、テトラアントラポルフィリンおよびこれらの誘導体からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｍが、Ｚｎ、Ａｌ、Ｓｎ、Ｙ、Ｌａ、Ｌｕ、ＰｄおよびＰｔからなる群から選択される金属である、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
前記化合物が第１、第２、第３、第４または第５世代デンドリマーである、請求項７乃至９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記微生物が、バチルス属（Bacillus）と、結核病原体ヒト結核菌（Mycobacterium tuberculosis）、ウシ結核菌（M. bovis）及びトリ結核菌（M. avium）を含むマイコバクテリウム属（Mycobacterium）と、アクチノミセス属（Actinomyces）と、ノカルジア属（Nocardia）と、シュードモナス属（Pseudomonas）と、メタノモナス属（Methanomonas）と、プロタミノバクター属（Protaminobacter）と、メチロコッカス属（Methylococcus）と、アンスロバクター属（Arthrobacter）と、メチロモナス属（Methylomonas）と、ブレビバクテリウム属（Brevibacterium）と、アセトバクター属（Acetobacter）と、ミクロコッカス属（Micrococcus）と、ロドシュードモナス属（Rhodopseudomonas）と、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）と、ミクロバクテリウム属（Microbacterium）と、アクロモバクター属（Achromobacter）と、メチロバクテリウム属（Methylobacterium）と、メチロサイナム属（Methylosinum）と、メチロシスティス属（Methylocystis）と、アシネトバクター属（Acinetobacter）と、エシェリキア属（Escherichia）と、これらの混合物と、からなる群から選択される、請求項１乃至１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
微生物の増殖または代謝の迅速な検出に使用される中空型枠グロースチャンバであって：
空間を画定する中空型枠；および
前記中空型枠の前記空間内の水性ゲル化培地、
を含み、
前記ゲル化培地が、少なくとも１種の微生物の細胞の固体群と、溶解された酸素消光性リン光化合物または溶解された蛍光ｐＨ指示化合物の一方をさらに含むチャンバ。
【請求項１３】
前記中空型枠が：前記空間の縦面を画定する２枚の平行なプレートおよびそれらの間に配置された少なくとも２つのスペーサをさらに含み、これにより、矩形として前記空間を画定する、請求項１２に記載のチャンバ。
【請求項１４】
前記中空型枠が、必要な前記空間を画定するため、予め形成または予め成形されている、請求項１２又は１３に記載のチャンバ。
【請求項１５】
前記チャンバが、無菌、使い捨て、耐破壊性プラスチック培養バッグを含む、請求項１２乃至１４のいずれか１項に記載のチャンバ。
【請求項１６】
前記中空型枠が、その中に挿入された無菌、使い捨て、耐破壊性プラスチック培養バッグをさらに含む、請求項１２乃至１４のいずれか１項に記載のチャンバ。
【請求項１７】
グロースチャンバ内のゲルに固定化された１種または複数種の望ましくない微生物を死滅させるためのシステムであって：
励起光源、
光検出器、
平行レーザダイオード、
前記平行レーザダイオードと相対的にグロースチャンバ装置を配置する手段、および
前記励起光源、前記光検出器および前記平行レーザダイオードを操作可能に相互接続する処理手段
を含むシステム。
【請求項１８】
前記励起光源が前記グロースチャンバ内の光輝性分子を励起し、前記光検出器が前記光輝性分子から放射される光を検出し、および前記処理手段が、前記検出された発光に応答して前記平行レーザダイオードの照準を定めると共に前記グロースチャンバ内に固定化された１種または複数種の微生物を死滅させるに十分な強度まで前記レーザダイオードを作動させる請求項１７に記載のシステム。
【請求項１９】
請求項１７に記載のシステムの前記グロースチャンバ内に固定された１種または複数種の望ましくない微生物を、その中に含有される他の所望の微生物を損傷させることなく死滅させる方法であって：
前記励起光源を作動させ、光輝性分子を励起させて前記グロースチャンバ内で発光させること；
前記光輝性分子からの放射光を前記検出器で検出すること；
前記検出された放射光に応答して、前記処理手段によって前記平行レーザダイオードの標準を定めること；
前記グロースチャンバ内に固定化された前記１種または複数種の望ましくない微生物を死滅させるに十分な強度まで前記レーザダイオードを作動させること；次いで
前記１種または複数種の望ましくない微生物を、前記グロースチャンバ内に固定化された所望の微生物に損傷を与えることなく死滅させて、これにより未損傷の前記微生物の継続した増殖および代謝を許容すること
を含む方法。
【請求項２０】
前記死滅されるべき微生物が、選択された微生物の固体群中の望ましくない微生物であり、前記方法が、前記励起光を作動させる前に：
無菌の液体状の水性ゲル化培地を微生物の固体群と一緒に混合して、１種または複数種の望ましくない微生物を含有し得る接種混合物を形成すること；
前記接種混合物を前記中空型枠グロースチャンバ内の空間に挿入すること；
前記接種混合物をゲル化させ、これにより、その中に含有されている前記細胞を固定化すること；
次いで、前記ゲルが形成された後に、前記細胞の固体群が１種または複数種の望ましくない微生物を含有するかを判定すること
をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
溶解後にゲル化する粉末形態の水性ゲル化培地；
無毒性、水溶性、酸素消光性リン光化合物または蛍光ｐＨ指示薬、もしくは両方；
グロースチャンバ；および
説明書
を含む、少なくとも１種の固定化微生物の増殖または代謝の迅速な検出に用いられるキット。