【手続補正書】
【提出日】平成22年3月26日(2010.3.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１−１】
2009531449.tif 000001
（式中、Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している炭素と一緒になった４〜５個の炭素原子を有するシクロアルキル基であり、
Ｒ３は、ジメチルカルバモイルアルキル、およびシアノアルキルからなる群より選択され、
Ｒ４は、水素またはフッ素である）
を有する化合物。
【請求項２】
式
【化１−２】
2009531449.tif 000002
（式中、Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している炭素と一緒になった４〜５個の炭素原子を有するシクロアルキルであり、
Ｒ３は、ジメチルブタンアミド、およびシアノプロピルからなる群より選択され、
Ｒ４は、水素またはフッ素である）
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式
【化１−３】
2009531449.tif 000003
（式中、Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している炭素と一緒になった４個の炭素原子を有するシクロアルキルであり、
Ｒ３は、ジメチルカルバモイルアルキル、およびシアノアルキルからなる群より選択され、
Ｒ４は、水素である）
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式
【化１−４】
2009531449.tif 000004
（式中、Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している炭素と一緒になった４個の炭素原子を有するシクロアルキルであり、
Ｒ３は、ジメチルブタンアミド、およびシアノプロピルからなる群より選択され、
Ｒ４は、水素である）
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式
【化５】
2009531449.tif 000005
または
【化６】
2009531449.tif 000006
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
治療有効量の請求項１-〜５のいずれか一項に記載の化合物または医薬として許容可能なその塩と、医薬として許容可能な担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
【請求項７】
過剰増殖性障害を治療するための方法、または前立腺癌を治療するための方法において使用するための請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
（ａ）前記組成物が、溶液、分散液、懸濁液、粉末、カプセル、錠剤、丸剤、徐放性カプセル、徐放性錠剤、および徐放性丸剤からなる群より選択される形態を有する、あるいは、
（ｂ）前記組成物が、カプセル、錠剤、および丸剤からなる群より選択される形態を有する、あるいは、
（ｃ）前記組成物が、静脈内注射により投与されるか、組織中への注射により投与されるか、腹腔内投与されるか、経口投与されるか、または経鼻投与される、あるいは、
（ｄ）前記組成物が、一日あたり約０．００１ｍｇ／体重ｋｇ〜一日あたり約１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲内にある前記化合物の投与量で投与される、あるいは、
（ｅ）前記組成物が、一日あたり約０．０１ｍｇ／体重ｋｇ〜一日あたり約１００ｍｇ／体重ｋｇの範囲内にある前記化合物の投与量で投与される、あるいは、
（ｆ）前記組成物が、一日あたり約０．１ｍｇ／体重ｋｇ〜一日あたり約１０ｍｇ／体重ｋｇの範囲内にある前記化合物の投与量で投与される、あるいは、
（ｇ）前記組成物が、一日あたり約１ｍｇ／体重ｋｇの前記化合物の投与量で投与される、あるいは、
（ｈ）前記組成物が前立腺特異抗原ｍＲＮＡの転写を妨げる、あるいは、
（ｉ）前記組成物がアンドロゲン受容体タンパク質の核移行を防止する、あるいは、
（ｊ）前記組成物がアンドロゲン受容体タンパク質を不安定化する、
請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
式
【化７】
2009531449.tif 000007
のジアリール化合物の合成方法であって、
化合物Ｉ
【化８】
2009531449.tif 000008
と化合物ＩＩ
【化９】
2009531449.tif 000009
とを第１の極性溶媒中で混合して、混合物を形成する工程と、
該混合物を加熱する工程と、
第１の極性溶媒と同じかまたはそれとは異なる第２の極性溶媒および水性酸を該混合物に添加する工程と、
該混合物を還流する工程と、
該混合物を冷却し、水と合わせる工程と、
該混合物から該ジアリール化合物を分離する工程と、
を含み、
ここで、Ｒ５１は、１〜２個の炭素原子を有するアルキル鎖を含み、Ｒ５２は、シアノアルキル、およびジメチルカルバモイル置換アルキルからなる群より選択され、Ｒ５３は、ＦおよびＨからなる群より選択される、
方法。
【請求項１０】
Ｒ５１が、１〜２個の炭素原子を有するアルキル鎖を含み、Ｒ５２が、シアノプロピル、およびジメチルブタンアミドからなる群より選択され、Ｒ５３がＦおよびＨからなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
以下の合成方法：
（ａ）化合物［ＮＣ５６］の合成方法であって、
Ｎ，Ｎ−ジメチル４−［４−（１−シアノシクロブチルアミノ）フェニル］ブタンアミド、４−イソチオシアナト−２−トリフルオロメチルベンゾニトリル、およびＤＭＦを混合し、還流下で加熱することにより第１の混合物を形成する工程と、
アルコールおよび酸を該第１の混合物に添加して、第２の混合物を形成する工程と、
該第２の混合物を還流する工程と、
該第２の混合物を冷却する工程と、
該第２の混合物を水と合わせ、有機層を抽出する工程と、
該化合物を該有機層から単離する工程と
を含む、方法、あるいは、
（ｂ）化合物［ＮＣ５７］の合成方法であって、
ＤＭＳＯ、ジクロロメタン、および塩化オキサリルを混合して、第１の混合物を形成する工程と、
４−（４−（７−（４−シアノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）−８−オキソ−６−チオキソ−５，７−ジアザスピロ［３．４］オクタン−５−イル）フェニル）ブタンアミドを該第１の混合物に添加して、第２の混合物を形成する工程と、
トリエチルアミンを該第２の混合物に添加することにより第３の混合物を形成する工程と、
該第３の混合物を温め、ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチすることにより第４の混合物を形成する工程と、
該第４の混合物から有機層を抽出する工程と、
該化合物を該有機層から単離する工程と
を含む、方法。
【請求項１２】
前立腺特異抗原を発現し得る哺乳類細胞と十分な量のジアリールチオヒダントイン化合物とを接触させ、前立腺特異抗原ｍＲＮＡの転写を妨げることを含むインビトロでの方法。
【請求項１３】
（ａ）前記ジアリールチオヒダントイン化合物が、式
【化１２】
2009531449.tif 000010
（式中、Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している炭素と一緒になった４〜５個の炭素原子を有するシクロアルキル基であり、
Ｒ３は、ジメチルカルバモイルアルキル、およびシアノアルキルからなる群より選択され、
Ｒ４は、水素またはフッ素である）
を有する、あるいは、
（ｂ）前記ジアリールチオヒダントイン化合物が、ＮＣ５６、およびＮＣ５７からなる群より選択される、あるいは、
（ｃ）前記ジアリールチオヒダントイン化合物が前立腺特異抗原遺伝子上での転写複合体の形成を防止する、あるいは、
（ｄ）前記ジアリールチオヒダントイン化合物が、アンドロゲン受容体タンパク質が前立腺特異抗原遺伝子と複合体形成するのを防止する、あるいは、
（ｅ）前記ジアリールチオヒダントイン化合物が、ＲＮＡポリメラーゼＩＩが前立腺特異抗原遺伝子と複合体形成するのを防止する、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
哺乳類細胞と十分な量のジアリールチオヒダントイン化合物とを接触させ、アンドロゲン受容体タンパク質の核移行を防止しかつ／またはアンドロゲン受容体タンパク質を不安定化することを含むインビトロでの方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１６】
ＮＣ５３は、ＰＳＡエンハンサーおよびＰＳＡプロモーターへのアンドロゲン受容体（ＡＲ）補充およびＲＮＡポリメラーゼＩＩ（Ｐｏｌ  ＩＩ）補充を防止した。図１１は、この検討の結果を示す。使用される材料は、ＡＲ（Ｕｐｓｔａｔｅ、ｃａｔ＃０６−６８０）およびＰｏｌ  ＩＩ（Ｃｏｖａｎｃｅ、ｃａｔ＃ＭＭＳ−１２６Ｒ）を有するＣｈｒｏｍａｔｉｎ  ＩＰであった。ＬＮＣａＰ（ＡＴＣＣ）細胞を、完全血清中にプレーティングした。実験の日に、このプレートを１×ＰＢＳで１回洗浄し、５％ＣＳＳを３日間添加した。第１組の実験の場合、１０ｕＭのＮＣ５３を添加し、第２組の実験の場合、１０ｕＭのビカルタミドを添加し（Ｃ）、第３組の実験の場合、１ｎＭのＲ１８８１を添加した（＋）。これらの化合物の各々を、６時間添加した。対照の第４組の実験では、添加した追加の化合物はなかった（−）。６時間の時点として、２８周期行った。Ｕｐｓｔａｔｅ製ＣｈＩＰキット（ｃａｔ＃１７−２９５）を使用した。エンハンサーおよびプロモータープライマーを、それぞれＬｏｕｉｅ（ＰＮＡＳ  ２００３年、１００巻、２２２６〜２２３０頁）およびＳｈａｎｇ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  ２００２年、９巻、６０１〜６１０頁）から入手した。ＮＣ５３を添加した実験の場合の像がより暗いことから、ＮＣ５３は、アンドロゲン受容体およびＲＮＡポリメラーゼＩＩが前立腺特異抗原（ＰＳＡ）遺伝子上で転写複合体を形成するのを防止したことが示された。それに反して、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ、Ｃ）を添加した実験の場合の像がより明るいことから、ビカルタミドの存在下でのアンドロゲン受容体およびＲＮＡポリメラーゼＩＩは、依然として、ＰＳＡ  ｍＲＮＡを転写するＰＳＡエレメントに補充されることが示された。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１７】
ＮＣ５３は、ＬＮＣａＰ細胞中のアンドロゲン受容体核移行を阻害した。図１２および１３は、この検討の結果を示す。ＬＮＣａＰ細胞を、５％ＣＳＳ中にプレーティングした。第１組の細胞を、１０ｕＭ  ＮＣ５３で処理し、第２組の細胞を、１０ｕＭビカルタミドで処理し（Ｃ）、第３組の細胞を、１ｎＭ  Ｒ１８８１で処理した（＋）。第４組の細胞は、対照の役割をした（−）。ＴＯＰＯ  Ｉ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ｃａｔ＃ｓｃ−３２７３６）を核画分の制御に使用し、ＧＡＰＤＨ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ｃａｔ＃ｓｃ−２０３５７）を細胞質画分の制御に使用した。ＬＮＣａＰ細胞を、細胞下分画用に収集するか、またはアンドロゲン受容体（ＡＲ）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ｃａｔ＃ｓｃ−８１５）に対するＦＩＴＣ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）標識抗体で染色した。この細胞質画分から、図１２に示される像を得た。ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ、Ｃ）で処理した試料の場合の核画分中の像はより暗いことから、ビカルタミドはアンドロゲン受容体核移行を誘導することが示された。ＮＣ５３で処理した試料の場合の像は明るいことから、ＮＣ５３は核移行をなくすことが示された。ＡＲ−ＦＩＴＣアッセイの場合、カバースリップを、ＤＡＰＩ含有培地を使用するガラススライド上に取り付け、細胞を、ＤＡＰＩおよびＦＩＴＣ用フィルターを有するＮｉｋｏｎ蛍光顕微鏡を使用して×６０で２４時間後に画像化した。ＡＲ−ＦＩＴＣアッセイでは、Ｒ１８８１で処理した細胞の核ビカルタミドの核で処理した細胞の核は、図１３に示されるように際立って緑色であったことから、アンドロゲン受容体の核移行が生じたことが示された。それに反して、ＤＭＳＯで処理した細胞の核およびＮＣ５３で処理した細胞の核で処理した細胞は、緑色がより少なかった。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１８】
ＮＣ５３は、ＬＮＣａＰ細胞中のアンドロゲン受容体タンパク質を不安定化した。図１４は、この検討結果を示す。この検討は、５％ＣＳＳ中の１０５  ＬＮＣａＰ（ｆｇｃ）細胞を３日間プレーティングすることによって行った。１００ｐＭのＲ１８８１を、第１組の細胞に添加し（＋）、１０ｕＭのビカルタミドを、第２組の細胞に添加し（Ｂ）、１０ｕＭのＮＣ５３を、第３組の細胞に添加し（ＮＣ５３）、１００ｐＭのＲ１８８１および１０ｕＭのビカルタミドを、第４組の細胞に添加し（Ｂ＋）、１００ｐＭのＲ１８８１および１０ｕＭのＮＣ５３を、第５組の細胞に添加した（Ｒ１８８１＋ＮＣ５３）。Ｒ１８８１、ビカルタミド、ＮＣ５３のいずれも、第６組の細胞に添加しなかった（−）。これらの細胞を、添加したビカルタミド、ＮＣ５３、および／もしくはＲ１８８１と共に２４時間（または（−）組の場合では、これらのいずれも共にせず２４時間）放置した。図１４では、ビカルタミド（Ｂ）を添加した組ならびにビカルタミドおよびＲ１８８１（Ｂ＋）を添加した組の場合の暗い像から、アンドロゲン受容体タンパク質は、化合物のこれらの組合せを添加するときのレベルであることが示された。それに反して、ＮＣ５３（ＮＣ５３）を添加した組ならびにＮＣ５３およびＲ１８８１（Ｒ１８８１＋ＮＣ５３）を添加した組の場合の明るい像から、Ｒ１８８１の有無に関わらずＮＣ５３を添加するとアンドロゲン受容体タンパク質が分解することが示された。