(57)【要約】  本開示は、葉酸受容体アルファ（FOLR1）ならびにそのアイソフォームおよびホモログに対して結合特異性を有する抗体コンジュゲートによる併用療法、ならびに医薬組成物を含む、抗体コンジュゲートとの組合わせを含む組成物に関する。また、治療法および診断法などにおいて、抗体コンジュゲートおよびその組成物との組合わせを使用するための方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）少なくとも１つのペイロード部分に部位特異的に連結されている、葉酸受容体アルファ（FOLR1）と特異的に結合する抗体含む抗体コンジュゲートであって、前記抗体は、Ｋａｂａｔ付番スキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキーム、またはＥＵ付番スキームによるＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｋ１２１、ＨＣ−Ｙ１８０、ＨＣ−Ｆ２４１、ＨＣ−２２１、ＬＣ−Ｔ２２、ＬＣ−Ｓ７、ＬＣ−Ｎ１５２、ＬＣ−Ｋ４２、ＬＣ−Ｅ１６１、ＬＣ−Ｄ１７０、ＨＣ−Ｓ１３６、ＨＣ−Ｓ２５、ＨＣ−Ａ４０、ＨＣ−Ｓ１１９、ＨＣ−Ｓ１９０、ＨＣ−Ｋ２２２、ＨＣ−Ｒ１９、ＨＣ−Ｙ５２、またはＨＣ−Ｓ７０からなる群から選択される部位に１つまたは複数の非天然アミノ酸を含む、抗体コンジュゲート；および
（ｂ）１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤
を含む組成物。
【請求項２】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１経路の小分子遮断剤を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性を阻害する抗体を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＣＡ−１７０、ＢＭＳ−８、ＢＭＳ−２０２、ＢＭＳ−９３６５５８、ＣＫ−３０１、ＡＵＮＰ１２、アベルマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＡＭＰ−２２４、ＭＥＤＩ０６８０／ＡＭＰ−５１４、ＰＤＲ００１、セミプリマブ、ＴＳＲ−０４２、チズレリズマブ／ＢＧＢ−Ａ３１７、ＣＫ−３０１、ＢＭＳ−９３６５５９、カムレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ゲノリムズマブ、Ａ１６７、ＭＧＡ０１２、ＰＦ−０６８０１５９１、ＬＹ３３０００５４、ＦＡＺ０５３、ＰＤ−１１、ＣＸ−０７２、ＢＧＢ−Ａ３３３、ＢＩ７５４０９１、ＪＮＪ−６３７２３２８３、ＡＧＥＮ２０３４、ＣＡ−３２７、ＣＸ−１８８、ＳＴＩ−Ａ１１１０、ＪＴＸ−４０１４、（ＬＬＹ）ＡＭ０００１、ＣＢＴ−５０２、ＦＳ１１８、ＸｍＡｂ２０７１７、ＸｍＡｂ２３１０４、ＡＢ１２２、ＫＹ１００３、ＲＸＩ−７６２、ＰＲＳ−３３、ＡＬＰＮ−２０２、ＴＳＲ−０７５、ＭＣＬＡ−１４５、ＭＧＤ０１３、およびＭＧＤ０１９からなる群から選択される、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、アベルマブを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ペムブロリズマブを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性を阻害する抗体が、ＷＯ２０１６／０７７３９７、ＷＯ２０１８／１５６７７７、および２０１８年５月２３日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３４２１３号に開示されている抗体から選択される、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記１つまたは複数の非天然アミノ酸が、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−メチル−Ｌ−フェニルアラニン、化合物５６、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−プロパルギルオキシ−フェニルアラニンからなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記１つまたは複数の非天然アミノ酸の残基が、加水分解的に安定であるリンカーを介して前記ペイロード部分に連結されている、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記１つまたは複数の非天然アミノ酸の残基が、切断可能であるリンカーを介して前記ペイロード部分に連結されている、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記非天然アミノ酸の残基が、化合物（３０）または化合物（５６）の残基である、請求項８から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ペイロード部分が、マイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、およびオーリスタチンからなる群から選択される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ペイロード部分が、ＤＭ１、ヘミアステリン、アマニチン、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥからなる群から選択される、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抗体が、
（i）配列番号５８および１１７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７６および２３５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ii）配列番号１９および７８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３７および１９６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（iii）配列番号４および６３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２２および１８１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（iv）配列番号５および６４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２３および１８２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（v）配列番号６および６５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２４および１８３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（vi）配列番号７および６６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２５および１８４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（vii）配列番号８および６７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２６および１８５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（viii）配列番号９および６８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７および１８６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ix）配列番号１０および６９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２８および１８７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（x）配列番号１１および７０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２９および１８８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xi）配列番号１２および７１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０および１８９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xii）配列番号１３および７２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３１および１９０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xiii）配列番号１４および７３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３２および１９１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xiv）配列番号１５および７４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３および１９２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xv）配列番号１６および７５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３４および１９３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xvi）配列番号１７および７６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３５および１９４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xvii）配列番号１８および７７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６および１９５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xviii）配列番号２０および７９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３８および１９７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xix）配列番号２１および８０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３９および１９８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xx）配列番号２２および８１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４０および１９９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxi）配列番号２３および８２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４１および２００の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxii）配列番号２４および８３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２および２０１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxiii）配列番号２５および８４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４３および２０２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxiv）配列番号２６および８５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４４および２０３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxv）配列番号２７および８６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４５および２０４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxvi）配列番号２８および８７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４６および２０５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxvii）配列番号２９および８８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４７および２０６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxviii）配列番号３０および８９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４８および２０７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxix）配列番号３１および９０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４９および２０８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxx）配列番号３２および９１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５０および２０９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxi）配列番号３３および９２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５１および２１０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxii）配列番号３４および９３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５２および２１１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxiii）配列番号３５および９４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５３および２１２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxiv）配列番号３６および９５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５４および２１３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxv）配列番号３７および９６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５５および２１４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxvi）配列番号３８および９７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６および２１５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxvii）配列番号３９および９８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５７および２１６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxviii）配列番号４０および９９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５８および２１７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxix）配列番号４１および１００の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５９および２１８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xl）配列番号４２および１０１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６０および２１９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xli）配列番号４３および１０２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６１および２２０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlii）配列番号４４および１０３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６２および２２１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xliii）配列番号４５および１０４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６３および２２２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xliv）配列番号４６および１０５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６４および２２３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlv）配列番号４７および１０６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６５および２２４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlvi）配列番号４８および１０７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６６および２２５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlvii）配列番号４９および１０８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６７および２２６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlviii）配列番号５０および１０９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６８および２２７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlix）配列番号５１および１１０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６９および２２８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（l）配列番号５２および１１１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０および２２９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（li）配列番号５３および１１２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７１および２３０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lii）配列番号５４および１１３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７２および２３１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（liii）配列番号５５および１１４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７３および２３２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（liv）配列番号５６および１１５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７４および２３３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lv）配列番号５７および１１６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７５および２３４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lvi）配列番号５９および１１８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７７および２３６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lvii）配列番号６０および１１９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７８および２３７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lviii）配列番号６１および１２０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７９および２３８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；または
（lix）配列番号６２および１２１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１８０および２３９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ
を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記抗体が、
（a）配列番号３００を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０３を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号３０６を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬ；または
（b）配列番号３０１を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０４を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号３０７を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬ
を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記抗体が、
（i）前記ＶＨ領域が、配列番号３６２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（ii）前記ＶＨ領域は、配列番号３２３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（iii）前記ＶＨ領域は、配列番号３０８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（iv）前記ＶＨ領域は、配列番号３０９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（v）前記ＶＨ領域は、配列番号３１０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（vi）前記ＶＨ領域は、配列番号３１１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（vii）前記ＶＨ領域は、配列番号３１２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（viii）前記ＶＨ領域は、配列番号３１３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（ix）前記ＶＨ領域は、配列番号３１４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（x）前記ＶＨ領域は、配列番号３１５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xi）前記ＶＨ領域は、配列番号３１６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xii）前記ＶＨ領域は、配列番号３１７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xiii）前記ＶＨ領域は、配列番号３１８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xiv）前記ＶＨ領域は、配列番号３１９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xv）前記ＶＨ領域は、配列番号３２０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xvi）前記ＶＨ領域は、配列番号３２１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xvii）前記ＶＨ領域は、配列番号３２２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xviii）前記ＶＨ領域は、配列番号３２４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xix）前記ＶＨ領域は、配列番号３２５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xx）前記ＶＨ領域は、配列番号３２６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること； または
（xxi）前記ＶＨ領域は、配列番号３２７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxii）前記ＶＨ領域は、配列番号３２８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxiii）前記ＶＨ領域は、配列番号３２９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxiv）前記ＶＨ領域は、配列番号３３０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxv）前記ＶＨ領域は、配列番号３３１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxvi）前記ＶＨ領域は、配列番号３３２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxvii）前記ＶＨ領域は、配列番号３３３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxviii）前記ＶＨ領域は、配列番号３３４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxix）前記ＶＨ領域は、配列番号３３５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxx）前記ＶＨ領域は、配列番号３３６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxi）前記ＶＨ領域は、配列番号３３７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxii）前記ＶＨ領域は、配列番号３３８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxiii）前記ＶＨ領域は、配列番号３３９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxiv）前記ＶＨ領域は、配列番号３４０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxv）前記ＶＨ領域は、配列番号３４１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxvi）前記ＶＨ領域は、配列番号３４２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxvii）前記ＶＨ領域は、配列番号３４３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxviii）前記ＶＨ領域は、配列番号３４４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxix）前記ＶＨ領域は、配列番号３４５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xl）前記ＶＨ領域は、配列番号３４６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xli）前記ＶＨ領域は、配列番号３４７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlii）前記ＶＨ領域は、配列番号３４８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xliii）前記ＶＨ領域は、配列番号３４９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xliv）前記ＶＨ領域は、配列番号３５０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlv）前記ＶＨ領域は、配列番号３５１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlvi）前記ＶＨ領域は、配列番号３５２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlvii）前記ＶＨ領域は、配列番号３５３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlviii）前記ＶＨ領域は、配列番号３５４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlix）前記ＶＨ領域は、配列番号３５５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（l）前記ＶＨ領域は、配列番号３５６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（li）前記ＶＨ領域は、配列番号３５７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（lii）前記ＶＨ領域は、配列番号３５８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（liii）前記ＶＨ領域は、配列番号３５９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（liv）前記ＶＨ領域は、配列番号３６０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（lv）前記ＶＨ領域は、配列番号３６１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（lvi）前記ＶＨ領域は、配列番号３６３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６８もしくはその変異体であること；
（lvii）前記ＶＨ領域は、配列番号３６４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域は、配列番号３６８もしくはその変異体であること；
（lviii）前記ＶＨ領域が、配列番号３６５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６９もしくはその変異体であること；または
（lix）前記ＶＨ領域が、配列番号３６６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６９もしくはその変異体であること
を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記抗体が、Ｋａｂａｔ付番スキームまたはＫａｂａｔのＥＵ付番スキームによるＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｙ１８０、およびＬＣ−Ｋ４２の群から選択される部位に１つまたは複数の非天然アミノ酸を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記抗体が、部位ＨＣ−Ｆ４０４に非天然アミノ酸を含む、請求項１６記載の組成物。
【請求項１９】
前記抗体が、部位ＨＣ−Ｆ４０４およびＨＣ−Ｙ１８０に非天然アミノ酸を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２０】
前記抗体が、部位ＨＣ−Ｆ４０４およびＬＣ−Ｋ４２に非天然アミノ酸を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２１】
前記抗体が、部位ＨＣ−Ｙ１８０およびＬＣ−Ｋ４２に非天然アミノ酸を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２２】
一方または両方の非天然アミノ酸が、パラ−アジドメチルフェニルアラニンおよびｐ−アジド−メチル−Ｌ−フェニルアラニンからなる群からが選択される、請求項１８から２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記抗体コンジュゲートが、コンジュゲートＰ：
【化１】
2022500454.tif 000204
の構造を有し、式中、ｎは１〜６の整数である、請求項１から２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記抗体コンジュゲートが、コンジュゲートＭ：
【化２】
2022500454.tif 000205
の構造を有し、式中、ｎは１〜６の整数である、請求項１から２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記抗体コンジュゲートが、コンジュゲートＱ：
【化３】
2022500454.tif 000206
の構造を有し、式中、ｎは１〜６の整数である、請求項１から２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記抗体が、配列番号３６２のＶＨ領域または７つもしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有するその変異体、および配列番号３６７のＶＬ領域または７つもしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有するその変異体を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記抗体が、配列番号３２３のＶＨ領域または７つもしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有するその変異体、および配列番号３６７のＶＬ領域または７つもしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有するその変異体を含む、請求項１から２５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記アミノ酸置換が、保存的アミノ酸置換である、請求項２６または２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記抗体が、少なくとも１つの定常領域ドメインをさらに含む、請求項１から２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記定常領域が、配列番号３７０、３７１、および３７２から選択される配列を含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１から３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記抗体が、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭである、請求項１から３１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３３】
前記抗体が、ヒト化またはヒトである、請求項１から３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記抗体が、非グリコシル化されている、請求項１から３３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記抗体が、抗体断片である、請求項１から３４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記抗体断片が、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ab'）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（sFv）断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ断片から選択される、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記抗体断片が、ｓｃＦｖ断片である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記抗体断片が、ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
前記抗体が、２５℃の温度でヒト葉酸受容体に結合する場合、約２．２６×１０−１１Ｍ〜約７．２０×１０−９ＭのＫＤを有する、請求項１から３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記抗体が、カニクイザル葉酸受容体と特異的に結合する、請求項１から３９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記抗体が、２５℃の温度でカニクイザル葉酸受容体に結合する場合、約０．１９×１０−９Ｍ〜約２．８４×１０−９ＭのＫＤを有する、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記抗体が、マウス葉酸受容体と特異的に結合する、請求項１から４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
前記抗体が、２５℃の温度でマウス葉酸受容体に結合する場合、約０．５×１０−９Ｍ〜約９．０７×１０−８ＭのＫＤを有する、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
請求項１から４３のいずれか一項に記載の組成物および前記組成物の使用説明書を含むキット。
【請求項４５】
請求項１から４３のいずれか一項に記載の組成物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項４６】
それを必要とする対象の疾患または状態を治療または予防するための方法であって、前記対象に、
（a）少なくとも１つのペイロード部分に部位特異的に連結されている、葉酸受容体アルファ（FOLR1）と特異的に結合する抗体を含む有効量の抗体コンジュゲートであって、前記抗体は、Ｋａｂａｔ付番スキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキーム、またはＥＵ付番スキームによるＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｋ１２１、ＨＣ−Ｙ１８０、ＨＣ−Ｆ２４１、ＨＣ−２２１、ＬＣ−Ｔ２２、ＬＣ−Ｓ７、ＬＣ−Ｎ１５２、ＬＣ−Ｋ４２、ＬＣ−Ｅ１６１、ＬＣ−Ｄ１７０、ＨＣ−Ｓ１３６、ＨＣ−Ｓ２５、ＨＣ−Ａ４０、ＨＣ−Ｓ１１９、ＨＣ−Ｓ１９０、ＨＣ−Ｋ２２２、ＨＣ−Ｒ１９、ＨＣ−Ｙ５２、またはＨＣ−Ｓ７０からなる群から選択される部位に１つまたは複数の非天然アミノ酸を含む、抗体コンジュゲート；および
（b）１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤
を投与することを含む方法。
【請求項４７】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１経路の小分子遮断剤を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性を阻害する抗体を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ＣＡ−１７０、ＢＭＳ−８、ＢＭＳ−２０２、ＢＭＳ−９３６５５８、ＣＫ−３０１、ＡＵＮＰ１２、アベルマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＡＭＰ−２２４、ＭＥＤＩ０６８０／ＡＭＰ−５１４、ＰＤＲ００１、セミプリマブ、ＴＳＲ−０４２、チズレリズマブ／ＢＧＢ−Ａ３１７、ＣＫ−３０１、ＢＭＳ−９３６５５９、カムレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ゲノリムズマブ、Ａ１６７、ＭＧＡ０１２、ＰＦ−０６８０１５９１、ＬＹ３３０００５４、ＦＡＺ０５３、ＰＤ−１１、ＣＸ−０７２、ＢＧＢ−Ａ３３３、ＢＩ７５４０９１、ＪＮＪ−６３７２３２８３、ＡＧＥＮ２０３４、ＣＡ−３２７、ＣＸ−１８８、ＳＴＩ−Ａ１１１０、ＪＴＸ−４０１４、（ＬＬＹ）ＡＭ０００１、ＣＢＴ−５０２、ＦＳ１１８、ＸｍＡｂ２０７１７、ＸｍＡｂ２３１０４、ＡＢ１２２、ＫＹ１００３、ＲＸＩ−７６２、ＰＲＳ−３３、ＡＬＰＮ−２０２、ＴＳＲ−０７５、ＭＣＬＡ−１４５、ＭＧＤ０１３、およびＭＧＤ０１９からなる群から選択される、請求項４６から４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、アベルマブを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤が、ペムブロリズマブを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性を阻害する抗体が、ＷＯ２０１６／０７７３９７、ＷＯ２０１８／１５６７７７、および２０１８年５月２３日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３４２１３に開示されている抗体から選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
前記１つまたは複数の非天然アミノ酸が、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−メチル−Ｌ−フェニルアラニン、化合物５６、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−プロパルギルオキシ−フェニルアラニンからなる群から選択される、請求項４６から５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記１つまたは複数の非天然アミノ酸の残基が、加水分解的に安定であるリンカーを介して前記ペイロード部分に連結されている、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記１つまたは複数の非天然アミノ酸の残基が、切断可能であるリンカーを介して前記ペイロード部分に連結されている、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記非天然アミノ酸の残基が、化合物（３０）または化合物（５６）の残基である、請求項５３から５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記ペイロード部分が、マイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、およびオーリスタチンからなる群から選択される、請求項４６から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記ペイロード部分が、ＤＭ１、ヘミアステリン、アマニチン、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥからなる群から選択される、請求項４６から５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗体が、
（i）配列番号５８および１１７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７６および２３５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ii)配列番号１９および７８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３７および１９６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ； 
（iii)配列番号４および６３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２２および１８１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（iv)配列番号５および６４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２３および１８２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（v)配列番号６および６５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２４および１８３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（vi)配列番号７および６６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２５および１８４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（vii)配列番号８および６７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２６および１８５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（viii)配列番号９および６８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２７および１８６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（ix)配列番号１０および６９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２８および１８７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（x)配列番号１１および７０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１２９および１８８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xi)配列番号１２および７１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３０および１８９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xii)配列番号１３および７２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３１および１９０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２４９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xiii)配列番号１４および７３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３２および１９１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xiv)配列番号１５および７４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３３および１９２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xv)配列番号１６および７５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３４および１９３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xvi)配列番号１７および７６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３５および１９４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xvii)配列番号１８および７７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３６および１９５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xviii)配列番号２０および７９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３８および１９７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xix)配列番号２１および８０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１３９および１９８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xx)配列番号２２および８１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４０および１９９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxi)配列番号２３および８２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４１および２００の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２５９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxii)配列番号２４および８３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４２および２０１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxiii)配列番号２５および８４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４３および２０２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxiv)配列番号２６および８５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４４および２０３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxv)配列番号２７および８６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４５および２０４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxvi)配列番号２８および８７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４６および２０５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxvii)配列番号２９および８８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４７および２０６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxviii)配列番号３０および８９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４８および２０７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxix)配列番号３１および９０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１４９および２０８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxx)配列番号３２および９１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５０および２０９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxi)配列番号３３および９２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５１および２１０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２６９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxii)配列番号３４および９３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５２および２１１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxiii)配列番号３５および９４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５３および２１２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxiv)配列番号３６および９５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５４および２１３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxv)配列番号３７および９６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５５および２１４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxvi)配列番号３８および９７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５６および２１５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxvii)配列番号３９および９８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５７および２１６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxviii)配列番号４０および９９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５８および２１７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xxxix)配列番号４１および１００の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１５９および２１８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xl)配列番号４２および１０１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６０および２１９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xli)配列番号４３および１０２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６１および２２０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlii)配列番号４４および１０３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６２および２２１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xliii)配列番号４５および１０４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６３および２２２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xliv)配列番号４６および１０５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６４および２２３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlv)配列番号４７および１０６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６５および２２４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlvi)配列番号４８および１０７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６６および２２５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８４を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlvii)配列番号４９および１０８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６７および２２６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlviii)配列番号５０および１０９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６８および２２７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（xlix)配列番号５１および１１０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１６９および２２８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（l)配列番号５２および１１１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７０および２２９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（li)配列番号５３および１１２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７１および２３０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２８９を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lii)配列番号５４および１１３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７２および２３１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９０を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（liii)配列番号５５および１１４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７３および２３２の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９１を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（liv)配列番号５６および１１５の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７４および２３３の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９２を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lv)配列番号５７および１１６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７５および２３４の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９３を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lvi)配列番号５９および１１８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７７および２３６の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９５を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lvii)配列番号６０および１１９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７８および２３７の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９６を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；
（lviii）配列番号６１および１２０の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１７９および２３８の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９７を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ；または
（lix）配列番号６２および１２１の１つを含むＣＤＲ−Ｈ１、配列番号１８０および２３９の１つを含むＣＤＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２９８を含むＣＤＲ−Ｈ３を含むＶＨ
を含む、請求項４６から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗体が、
（a）配列番号３００を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０３を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号３０６を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬ；または
（b）配列番号３０１を含むＣＤＲ−Ｌ１、配列番号３０４を含むＣＤＲ−Ｌ２、および配列番号３０７を含むＣＤＲ−Ｌ３を含むＶＬ
を含む、請求項４６から５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗体が、
（i）前記ＶＨ領域が、配列番号３６２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（ii）前記ＶＨ領域が、配列番号３２３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（iii）前記ＶＨ領域が、配列番号３０８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（iv）前記ＶＨ領域が、配列番号３０９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（v）前記ＶＨ領域が、配列番号３１０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（vi）前記ＶＨ領域が、配列番号３１１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（vii）前記ＶＨ領域が、配列番号３１２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（viii）前記ＶＨ領域が、配列番号３１３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（ix）前記ＶＨ領域が、配列番号３１４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（x）前記ＶＨ領域が、配列番号３１５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xi）前記ＶＨ領域が、配列番号３１６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xii）前記ＶＨ領域が、配列番号３１７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xiii）前記ＶＨ領域が、配列番号３１８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xiv）前記ＶＨ領域が、配列番号３１９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xv）前記ＶＨ領域が、配列番号３２０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xvi）前記ＶＨ領域が、配列番号３２１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xvii）前記ＶＨ領域が、配列番号３２２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xviii）前記ＶＨ領域が、配列番号３２４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xix）前記ＶＨ領域が、配列番号３２５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xx）前記ＶＨ領域が、配列番号３２６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；または
（xxi）前記ＶＨ領域が、配列番号３２７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxii）前記ＶＨ領域が、配列番号３２８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxiii）前記ＶＨ領域が、配列番号３２９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxiv）前記ＶＨ領域が、配列番号３３０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxv）前記ＶＨ領域が、配列番号３３１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxvi）前記ＶＨ領域が、配列番号３３２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxvii）前記ＶＨ領域が、配列番号３３３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxviii）前記ＶＨ領域が、配列番号３３４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxix）前記ＶＨ領域が、配列番号３３５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxx）前記ＶＨ領域が、配列番号３３６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxi）前記ＶＨ領域が、配列番号３３７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxii）前記ＶＨ領域が、配列番号３３８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxiii）前記ＶＨ領域が、配列番号３３９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxiv）前記ＶＨ領域が、配列番号３４０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxv）前記ＶＨ領域が、配列番号３４１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxvi）前記ＶＨ領域が、配列番号３４２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxvii）前記ＶＨ領域が、配列番号３４３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxviii）前記ＶＨ領域が、配列番号３４４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xxxix）前記ＶＨ領域が、配列番号３４５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xl）前記ＶＨ領域が、配列番号３４６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xli）前記ＶＨ領域が、配列番号３４７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlii）前記ＶＨ領域が、配列番号３４８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xliii）前記ＶＨ領域が、配列番号３４９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xliv）前記ＶＨ領域が、配列番号３５０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlv）前記ＶＨ領域が、配列番号３５１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlvi）前記ＶＨ領域が、配列番号３５２もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlvii）前記ＶＨ領域が、配列番号３５３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlviii）前記ＶＨ領域が、配列番号３５４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（xlix）前記ＶＨ領域が、配列番号３５５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（l）前記ＶＨ領域が、配列番号３５６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（li）前記ＶＨ領域が、配列番号３５７もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（lii）前記ＶＨ領域が、配列番号３５８もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（liii）前記ＶＨ領域が、配列番号３５９もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（liv）前記ＶＨ領域が、配列番号３６０もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（lv）前記ＶＨ領域が、配列番号３６１もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６７もしくはその変異体であること；
（lvi）前記ＶＨ領域が、配列番号３６３もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６８もしくはその変異体であること；
（lvii）前記ＶＨ領域が、配列番号３６４もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６８もしくはその変異体であること；
（lviii）前記ＶＨ領域が、配列番号３６５もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６９もしくはその変異体であること；または
（lix）前記ＶＨ領域が、配列番号３６６もしくはその変異体であり、前記ＶＬ領域が、配列番号３６９もしくはその変異体であること
を含む、請求項４６から６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗体が、Ｋａｂａｔ付番スキームまたはＫａｂａｔのＥＵ付番スキームによるＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｙ１８０、およびＬＣ−Ｋ４２の群から選択される部位に１つまたは複数の非天然アミノ酸を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗体が、部位ＨＣ−Ｆ４０４に非天然アミノ酸を含む、請求項６１記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体が、部位ＨＣ−Ｆ４０４およびＨＣ−Ｙ１８０に非天然アミノ酸を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗体が、部位ＨＣ−Ｆ４０４およびＬＣ−Ｋ４２に非天然アミノ酸を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記抗体が、部位ＨＣ−Ｙ１８０およびＬＣ−Ｋ４２に非天然アミノ酸を含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６７】
一方または両方の非天然アミノ酸が、パラ−アジドメチルフェニルアラニンおよびｐ−アジド−メチル−Ｌ−フェニルアラニンからなる群からが選択される、請求項６３から６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記抗体コンジュゲートが、コンジュゲートＰ：
【化４】
2022500454.tif 000207
の構造を有し、式中、ｎは１〜６の整数である、請求項４６から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
前記抗体コンジュゲートが、コンジュゲートＭ：
【化５】
2022500454.tif 000208
の構造を有し、式中、ｎは１〜６の整数である、請求項４６から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記抗体コンジュゲートが、コンジュゲートＱ：
【化６】
2022500454.tif 000209
の構造を有し、式中、ｎは１〜６の整数である、請求項４６から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
前記抗体が、配列番号３６２のＶＨ領域または７つもしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有するその変異体、および配列番号３６７のＶＬ領域または７つもしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有するその変異体を含む、請求項４６から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
前記抗体が、配列番号３２３のＶＨ領域または７つもしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有するその変異体、および配列番号３６７のＶＬ領域または７つもしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有するその変異体を含む、請求項４６から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記アミノ酸置換が、保存的アミノ酸置換である、請求項７１または７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記抗体が、少なくとも１つの定常領域ドメインをさらに含む、請求項４６から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記定常領域が、配列番号３７０、３７１、および３７２から選択される配列を含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項４６から７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記抗体が、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭである、請求項４６から７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記抗体が、ヒト化またはヒトである、請求項４６から７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
前記抗体が、非グリコシル化されている、請求項４６から７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
前記抗体が、抗体断片である、請求項４６から７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
前記抗体断片が、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ab'）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（sFv）断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ断片から選択される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記抗体断片が、ｓｃＦｖ断片である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
前記抗体断片が、ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
前記疾患または状態が、がんである、請求項４６から８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記疾患または状態が、乳がんである、請求項４６から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記疾患または状態が、トリプルネガティブ乳がん（TNBC）である、請求項４６から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記疾患または状態が、卵巣がんである、請求項４６から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記疾患または状態が、肺がんである、請求項４６から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記疾患または状態が、非小細胞肺がん（NSCLC）である、請求項４６から８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記疾患または状態が、子宮内膜がんである、請求項４６から８４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]  本明細書では、葉酸受容体アルファ（FolRαまたはFOLR1）に対する結合特異性を有する抗体コンジュゲートによる併用療法、および医薬組成物を含む、それを投与するための組成物が提供される。組成物は、細胞増殖およびがんを治療および予防するための方法、細胞増殖およびがんを検出するための方法、ならびに細胞増殖およびがんを診断するための方法に有用である。組成物は、自己免疫疾患、感染症、および炎症状態を治療、予防、検出、および診断するための方法にも有用である。
【背景技術】
【０００２】
[0002]  葉酸受容体または葉酸結合タンパク質（FBP）は、ｉｎ  ｖｉｖｏで葉酸および他の化合物に結合し、それらのアップデートに寄与する単鎖糖タンパク質を含む。Ｅｌｗｏｏｄ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４８９３−１４９０１。ある特定の葉酸受容体は、葉酸およびメトトレキサートなどの他の化合物に対する高親和性結合部位を有する単鎖糖タンパク質である。Ｅｌｗｏｏｄ，ｐ．１４８９３。ヒトＦＯＬＲ１遺伝子は、３つの潜在的なＮ連結型グリコシル化部位を有する約２５７個アミノ酸の３０ｋＤａポリペプチドである成体葉酸受容体をコードする。Ｅｌｗｏｏｄ，ｐ．１４８９３；Ｌａｃｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：７１５−７２０。数十の種において相同性の染色体およびポリペプチドが特定されている。
【０００３】
[0003]  成熟葉酸受容体糖タンパク質は、約４２ｋＤａのサイズを有し、細胞内への葉酸および葉酸代謝拮抗剤の内部移行に関与することが観察されている。Ｅｌｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３６：１４６７−１４７８。ヒトにおける発現は、ヒトがん細胞株と共に、小脳および腎臓細胞にて観察されている。Ｅｌｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，ｐ．１４６７。葉酸の内部移行に加えて、葉酸受容体は、ウイルス、特にマールブルグウイルスおよびエボラウイルスの細胞内進入の重要な補因子であることが示されている。Ｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｃｅｌｌ  １０６：１１７−１２６。こうした内部移行特性のために、葉酸受容体は、診断剤および療法剤の標的として提案されている。例えば、診断剤および療法剤は、葉酸受容体を発現する細胞内へと内部移行させるために葉酸と連結されている。例えば、Ｌｅａｍｏｎ，２００８，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ９：１２７７−１２８６；Ｐａｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．５６：１２０５−１２１７を参照。
【０００４】
[0004]  葉酸受容体アルファ（FolRαまたはFOLR1）は、葉酸に対して高親和性を有するグリコシルホスファチジルイノシトール連結細胞表面糖タンパク質である。腎臓および肺では低レベルであることを除き、ほとんどの正常組織は、ＦＯＬＲ１を発現しないが、漿液性および類内膜上皮性卵巣がん、子宮内膜腺癌、腺癌サブタイプの非小細胞肺癌（NSCLC）、およびトリプルネガティブ乳がん（TNBC）では、高レベルのＦＯＬＲ１が見出されている。ＦＯＬＲ１発現は、卵巣がん患者の転移性病巣および再発癌では維持され、ＦＯＬＲ１発現は、上皮性卵巣がんおよび子宮内膜がんの化学療法後に観察されている。こうした特性があるため、正常組織ではＦＯＬＲ１の発現が高度に制限されること相まって、ＦＯＬＲ１は、がん療法の非常に有望な標的である。このように、葉酸受容体は、がんおよび炎症状態の診断薬および療法薬の潜在的な標的を提供する。こうした葉酸受容体と特異的に結合し、標的とするための新しい抗体の必要性に加えて、他の抗がん剤または細胞分裂および／もしくは細胞分化を標的とする作用剤との併用療法は、ＦＯＬＲ１の過剰発現および／またはＦＯＬＲ１シグナル伝達の活性過剰に関連付けられる疾患および障害を治療するための探究の別の道筋を提供する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
[0005]  葉酸受容体アルファ（FOLR1）の免疫調節、および葉酸受容体アルファ（FOLR1）により活性化される下流シグナル伝達プロセスをモジュレートするための向上された方法であって、抗がん剤または細胞分裂および／もしくは細胞分化をモジュレートする療法剤の投与と組み合わせると増強または向上させることができる方法に対する必要性が存在する。そのような療法剤は、葉酸受容体アルファを発現する標的細胞に、療法用ペイロード部分または診断用ペイロード部分を送達する抗ＦＯＬＲ１抗体コンジュゲートと組み合わせると、ＦＯＬＲ１が過剰発現される疾患の治療または診断に有用であり得る。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
[0006]  本明細書では、細胞分裂活性または細胞分化活性をモジュレートする第２の療法剤と組み合わせて投与される、葉酸受容体アルファ（FOLR1）と選択的に結合する抗体コンジュゲートが提供される。抗体コンジュゲートは、１つまたは複数のペイロード部分に連結された葉酸受容体アルファ（FOLR1）に結合する抗体を含む。抗体は、共有結合により直接的に、またはリンカーを介して間接的にペイロードに連結されていてもよい。葉酸受容体アルファ（FOLR1）抗体は、有用なペイロード部分、および有用なリンカーと共に、本明細書に詳細に記載されている。特定の実施形態では、第２の療法剤は、プログラム細胞死タンパク質（PD-1）の阻害剤である。
【０００７】
[0007]  別の態様では、抗体コンジュゲート、および細胞分裂活性または細胞分化活性をモジュレートする第２の療法剤を含む組成物が提供される。一部の実施形態では、組成物は、医薬組成物である。任意の好適な医薬組成物を使用することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、非経口投与用の組成物である。さらなる態様では、本明細書には、抗体コンジュゲートまたは医薬組成物を含むキットが提供される。特定の実施形態では、第２の療法剤は、プログラム細胞死タンパク質（PD-1）の阻害剤である。
【０００８】
[0008]  別の態様では、本明細書には、抗ＦＯＬＲ１抗体コンジュゲートを、細胞分裂活性または細胞分化活性をモジュレートする第２の療法剤と組み合わせて使用するための方法が提供される。一部の実施形態では、本方法は、葉酸受容体アルファを発現する標的細胞または標的組織にこの組合せを送達するための方法である。一部の実施形態では、本方法は、治療方法である。一部の実施形態では、本方法は、診断方法である。一部の実施形態では、本方法は、分析方法である。一部の実施形態では、この組合せは、疾患または状態を治療するために使用される。一部の態様では、疾患または状態は、がん、自己免疫疾患、および感染症から選択される。
【０００９】
[0009]  一部の実施形態では、抗体コンジュゲートは、ヒト葉酸受容体アルファに結合する。一部の実施形態では、抗体コンジュゲートは、ヒト葉酸受容体アルファのホモログにも結合する。一部の態様では、抗体コンジュゲートは、カニクイザルおよび／またはマウス葉酸受容体アルファのホモログにも結合する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】[0010]ＣＤＲ−Ｈ１のＫａｂａｔ付番方式およびＣｈｏｔｈｉａ付番方式の比較を提供する図である。出典は、Ｍａｒｔｉｎ  Ａ．Ｃ．Ｒ．（２０１０）．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ  Ｒ．Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｓ．Ｄｕｂｅｌ（Ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｖｏｌ．２（ｐｐ．３３−５１）．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇである。
【図２】[0011]本明細書で提供される変異体抗体のＶＨ配列（配列番号３０８〜３６６）のアラインメントを提供する図である。ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲは強調されており、ＫａｂａｔによるＣＤＲは四角で囲まれている。
【図３】[0011]本明細書で提供される変異体抗体のＶＨ配列（配列番号３０８〜３６６）のアラインメントを提供する図である。ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲは強調されており、ＫａｂａｔによるＣＤＲは四角で囲まれている。
【図４】[0011]本明細書で提供される変異体抗体のＶＨ配列（配列番号３０８〜３６６）のアラインメントを提供する図である。ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲは強調されており、ＫａｂａｔによるＣＤＲは四角で囲まれている。
【図５】[0012]トラスツズマブおよび本明細書で提供される変異体抗体のＶＬ配列（配列番号３６７〜３６９）のアラインメントを提供する図である。ＣｈｏｔｈｉａによるＣＤＲは強調されており、ＫａｂａｔによるＣＤＲには下線が引かれている。
【図６】[0013]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、ＫＢ子宮頸癌細胞が移植されたマウスの体重変化を示すグラフである。
【図７Ａ】[0014]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、ＫＢ子宮頸癌細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２５日目の腫瘍サイズを示すグラフである。
【図７Ｂ】[0014]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、ＫＢ子宮頸癌細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２５日目の腫瘍サイズを示すグラフである。
【図８】[0015]本明細書で開示されている２つの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートによる単一用量処置後の、ＫＢ子宮頸癌細胞が移植されたマウスの３１日目の最終腫瘍サイズを示す散布図である。
【図９】[0016]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、ＫＢ子宮頸癌細胞が移植されたマウスの体重変化を示すグラフである。
【図１０Ａ】[0017]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、ＫＢ子宮頸癌細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２１日目の腫瘍サイズを示すグラフである。
【図１０Ｂ】[0017]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、ＫＢ子宮頸癌細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２１日目の腫瘍サイズを示すグラフである。
【図１１】[0018]本明細書で開示されている３つの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートによる単一用量処置後の、ＫＢ子宮頸癌細胞が移植されたマウスの３６日目の最終腫瘍サイズを示す散布図である。
【図１２】[0019]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの体重変化を示すグラフである。
【図１３Ａ】[0020]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２４日目の腫瘍サイズを示すグラフである。
【図１３Ｂ】[0020]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２４日目の腫瘍サイズを示すグラフである。
【図１４Ａ】[0021]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線を示すグラフである。
【図１４Ｂ】[0022]本明細書で開示されている異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートによる単一用量処置後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの２１日目の腫瘍サイズを示す散布図である。
【図１５】[0023]異なる葉酸受容体アイソフォーム（hFOLR1、hFOLR2）を安定的に発現する２９３Ｔ形質転換細胞に対する、異なるＦＯＬＲ１抗体の結合を示すプロットを含む図である。
【図１６】[0024]異なる葉酸受容体アイソフォーム（hFOLR1、hFOLR2）を安定的に発現する２９３Ｔ形質転換細胞に対する、異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの細胞傷害活性を示すプロットを含む図である。
【図１７】[0025]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの体重変化を示すグラフである。
【図１８Ａ】[0026]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２１日目の腫瘍サイズの散布図を含む図である。
【図１８Ｂ】[0026]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２１日目の腫瘍サイズの散布図を含む図である。
【図１８Ｃ】[0026]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍成長曲線および２１日目の腫瘍サイズの散布図を含む図である。
【図１９Ａ】[0027]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍サイズを示すグラフを含む図である。
【図１９Ｂ】[0027]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍サイズを示すグラフを含む図である。
【図１９Ｃ】[0027]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍サイズを示すグラフを含む図である。
【図１９Ｄ】[0027]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍サイズを示すグラフを含む図である。
【図２０】[0028]本明細書で開示されている通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの種々の用量を投与した後の、Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞が移植されたマウスの腫瘍成長の遅延を示すチャートである。
【図２１Ａ】[0029]腫瘍成長チャート、２９日目の腫瘍サイズを示す散布図、およびカルボプラチンを用いてまたは用いずに、代表的なＦＯＬＲ−１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量で処置した確立Ｉｇｒｏｖ１腫瘍を保持する動物における２９日目の腫瘍成長阻害を示すチャートを含む図である。
【図２１Ｂ】[0029]腫瘍成長チャート、２９日目の腫瘍サイズを示す散布図、およびカルボプラチンを用いてまたは用いずに、代表的なＦＯＬＲ−１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量で処置した確立Ｉｇｒｏｖ１腫瘍を保持する動物における２９日目の腫瘍成長阻害を示すチャートを含む図である。
【図２１Ｃ】[0029]腫瘍成長チャート、２９日目の腫瘍サイズを示す散布図、およびカルボプラチンを用いてまたは用いずに、代表的なＦＯＬＲ−１抗体−薬物コンジュゲートの単一用量で処置した確立Ｉｇｒｏｖ１腫瘍を保持する動物における２９日目の腫瘍成長阻害を示すチャートを含む図である。
【図２２Ａ】[0030]腫瘍成長チャート、および確立ＯＶＣＡＲ３腫瘍を保持する動物における３１日目の腫瘍サイズを示す散布図を含む図である。
【図２２Ｂ】[0030]腫瘍成長チャート、および確立ＯＶＣＡＲ３腫瘍を保持する動物における３１日目の腫瘍サイズを示す散布図を含む図である。
【図２３Ａ】[0031]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートを投与した種々の子宮内膜患者由来異種移植モデルの腫瘍成長曲線を含む図である。
【図２３Ｂ】[0031]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートを投与した種々の子宮内膜患者由来異種移植モデルの腫瘍成長曲線を含む図である。
【図２３Ｃ】[0031]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートを投与した種々の子宮内膜患者由来異種移植モデルの腫瘍成長曲線を含む図である。
【図２３Ｄ】[0031]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートを投与した種々の子宮内膜患者由来異種移植モデルの腫瘍成長曲線を含む図である。
【図２３Ｅ】[0031]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートを投与した種々の子宮内膜患者由来異種移植モデルの腫瘍成長曲線を含む図である。
【図２３Ｆ】[0031]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートを投与した種々の子宮内膜患者由来異種移植モデルの腫瘍成長曲線を含む図である。
【図２３Ｇ】[0031]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートを投与した種々の子宮内膜患者由来異種移植モデルの腫瘍成長曲線を含む図である。
【図２４Ａ】[0032]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート、アベルマブ、または両方の組合せによる処置に応答した、ＭＣ３８−ｈＦＯＬＲ１腫瘍を有する動物の腫瘍成長曲線および腫瘍サイズ散布図を含む図である。
【図２４Ｂ】[0032]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート、アベルマブ、または両方の組合せによる処置に応答した、ＭＣ３８−ｈＦＯＬＲ１腫瘍を有する動物の腫瘍成長曲線および腫瘍サイズ散布図を含む図である。
【図２５Ａ】[0033]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート、アベルマブ、または両方の組合せによる処置に応答した、ＭＣ３８−ｈＦＯＬＲ１腫瘍を有する動物の腫瘍成長曲線およびカプラン−マイヤー生存プロットを含む図である。
【図２５Ｂ】[0033]代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート、アベルマブ、または両方の組合せによる処置に応答した、ＭＣ３８−ｈＦＯＬＲ１腫瘍を有する動物の腫瘍成長曲線およびカプラン−マイヤー生存プロットを含む図である。
【図２６】[0034]ＳＣＩＤベージュマウスにおける異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの薬物動態血漿プロファイルを示すグラフである。
【図２７】[0035]ビヒクルまたはＡＤＣ分子１もしくはＡＤＣ分子１７で処置したマウスの血漿中で検出された低分子のＬＣ／ＭＳトレースを示す図である。
【図２８】[0036]ＳＣＩＤベージュマウスに投与した代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの血漿安定性（薬物−抗体比、すなわちDARにより測定したもの）を示すグラフを含む図である。
【図２９】[0037]ＰＢＳ、カニクイザル血漿、またはヒト血漿で試験した種々のＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの血漿安定性（薬物−抗体比、すなわちDARにより測定したもの）を示すグラフを含む図である。
【図３０】[0038]競合物質としての対応するネイキッド抗体の存在下における種々の細胞に対するＡＤＣ分子４およびＡＤＣ分子２１の細胞傷害活性を示すグラフを含む図である。
【図３１】[0039]本明細書で開示されているＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの異化代謝産物の種々の用量を投与したラットの体重変化を示すグラフである。
【図３２】[0040]カニクイザル血漿、ヒト血漿、およびＰＢＳで試験した比較用ＡＤＣと比較した、代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート（ADC）の安定性を示すグラフである。
【図３３】[0041]様々なレベルのＰｇＰを有する細胞における、および特異的ＰｇＰ阻害剤の存在下における比較用ＡＤＣの細胞傷害活性と比較した、本明細書で開示される代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート（ADC）の異化代謝産物の細胞傷害活性を示すグラフを含む図である。
【図３４】[0042]確立Ｉｇｒｏｖ１腫瘍を有するマウスで測定した比較用ＡＤＣの血漿レベルと比較して、本明細書で開示される代表的なＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート（ADC）の異化代謝産物の腫瘍および血漿レベルを示すチャートである。
【図３５Ａ】[0043]本明細書で開示される通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート（ADC）の腫瘍成長曲線および２１日目の腫瘍サイズを示す散布図を含む図である。
【図３５Ｂ】[0043]本明細書で開示される通りの異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲート（ADC）の腫瘍成長曲線および２１日目の腫瘍サイズを示す散布図を含む図である。
【図３６】[0044]ＳＣＩＤベージュマウスにおける異なるＦＯＬＲ１抗体−薬物コンジュゲートの薬物動態血漿プロファイルを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
１．  定義
[0045]  別様に定義されていない限り、本明細書で使用される技術、表記、および他の科学技術の用語はすべて、本発明が関する当業者により一般的に理解される意味を有することが意図されている。一部の場合では、一般的に理解されている意味を有する用語は、本明細書では明瞭性のためにおよび／または参照を容易にするために定義されており、そのような定義を本明細書に含むことは、当技術分野で一般に理解されているものとの違いを表わすとは必ずしも解釈されるべきでない。本明細書に記載または参照されている技法および手順は、一般に十分に理解されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  ｅｄ．（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹに記載の広く使用されている分子クローニング方法論などの従来の方法論を使用して、当業者により広く使用されている。必要に応じて、市販のキットおよび試薬の使用を含む手順は、特に別様の注記がない限り、一般に、製造業者が規定するプロトコールおよび条件に従って実施される。
【００１２】
[0046]  本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、状況が明らかに別様に指示しない限り、複数の参照対象を含む。
【００１３】
[0047]  「約」という用語は、表示値およびその値の上下の範囲を示し、それらを包含する。ある特定の実施形態では、「約」という用語は、指定値±１０％、±５％、または±１％を示す。ある特定の実施形態では、「約」という用語は、指定値±その値の１標準偏差を示す。
【００１４】
[0048]  「それらの組合せ」という用語は、その用語が参照する要素のあらゆる考え得る組合せを含む。例えば、「α２がＡの場合、α３はＤではないか、α５はＳではないか、もしくはα６はＳではないか、またはそれらの組合せである」という文章は、α２がＡの場合、以下の組合せ：（１）α３はＤではない；（２）α５はＳではない；（３）α６はＳではない；（４）α３はＤではなく、α５はＳではなく、かつα６はＳではない；（５）α３はＤではなく、かつα５はＳではなく；（６）α３はＤではなく、かつα６はＳではない；ならびに（７）α５はＳではなく、かつα６はＳではない、ことを含む。
【００１５】
[0049]  「葉酸受容体アルファ」および「葉酸受容体１」という用語は、本明細書では同義的に使用される。葉酸受容体アルファは、中でも、ＦＯＬＲ１、ＦｏｌＲα、葉酸結合タンパク質、ＦＢＰ、成体葉酸結合タンパク質、Ｆｏｌｂｐ１、ＦＲ−アルファ、ＦＲα、ＫＢ細胞ＦＢＰ、および卵巣腫瘍関連抗原ＭＯｖ１８を含む同義語によっても知られている。別様の指定がない限り、こうした用語は、細胞により天然で発現されるか、または葉酸受容体アルファまたはＦＯＬＲ１遺伝子がトランスフェクトされた細胞により発現されるヒト葉酸受容体アルファの任意の変異体、アイソフォーム、および種ホモログを含む。葉酸受容体アルファタンパク質としては、例えば、ヒト葉酸受容体アルファ（配列番号１）が挙げられる。一部の実施形態では、葉酸受容体アルファタンパク質としては、カニクイザル葉酸受容体アルファ（配列番号２）が挙げられる。一部の実施形態では、葉酸受容体アルファタンパク質としては、マウス葉酸受容体アルファ（配列番号３）が挙げられる。
【００１６】
[0050]  「免疫グロブリン」という用語は、一般に２対のポリペプチド鎖：１対の軽（L）鎖および１対の重（H）鎖を含む構造的に関連したタンパク質のクラスを指す。「インタクト免疫グロブリン」では、これら4つの鎖すべてがジスルフィド結合により相互接続されている。免疫グロブリンの構造は十分に特徴付けられている。例えば、Ｐａｕｌ，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７ｔｈ  ｅｄ．，Ｃｈ．５（２０１３）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡを参照。手短に言えば、各重鎖は、典型的には、重鎖可変領域（VH）および重鎖定常領域（CH）を含む。重鎖定常領域は、典型的には、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と略称される３つのドメインを含む。各軽鎖は、典型的には、軽鎖可変領域（VL）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、典型的には、ＣＬと略称される１つのドメインを含む。
【００１７】
[0051]  「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のタイプを記述し、本明細書ではその最も広い意味で使用される。具体的には、抗体は、インタクト抗体（例えば、インタクト免疫グロブリン）および抗体断片を含む。抗体は、少なくとも１つの抗原結合性ドメインを含む。抗原結合性ドメインの一例は、ＶＨ−ＶＬ二量体により形成される抗原結合性ドメインである。「葉酸受容体アルファ抗体」、「抗葉酸受容体アルファ抗体」、「葉酸受容体アルファＡｂ」、「葉酸受容体アルファ特異的抗体」、「抗葉酸受容体アルファＡｂ」、「ＦＯＬＲ１抗体」、「ＦｏｌＲα抗体」、「抗ＦＯＬＲ１抗体」、「抗ＦｏｌＲα抗体」、「ＦＯＬＲ１  Ａｂ」、「ＦｏｌＲα  Ａｂ」、「ＦＯＬＲ１特異的抗体」、「ＦｏｌＲα特異的抗体」、「抗ＦｏｌＲα  Ａｂ」、または「抗−ＦＯＬＲ１  Ａｂ」は、葉酸受容体アルファまたはＦＯＬＲ１に特異的に結合する、本明細書に記載の通りの抗体である。一部の実施形態では、抗体は、葉酸受容体アルファ（FOLR1）の細胞外ドメインに結合する。
【００１８】
[0052]  ＶＨ領域およびＶＬ領域は、より保存されている領域で分散されている超可変性の領域（「超可変領域（HVR）」；「相補性決定領域」（CDR）とも呼ばれる）にさらに細分化することができる。より保存されている領域は、フレームワーク領域（FR）と呼ばれる。各ＶＨおよびＶＬは、一般に、以下の順序で配置されている（N末端からC末端へと）３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。ＣＤＲは、抗原結合に関与し、抗体の抗原特異性および結合親和性に影響を及ぼす。Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ５ｔｈ  ｅｄ．（１９９１）Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【００１９】
[0053]  あらゆる脊椎動物種由来の軽鎖は、定常ドメインの配列に基づきカッパおよびラムダと呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【００２０】
[0054]  あらゆる脊椎動物種由来の重鎖は、５つの異なるクラス（またはアイソタイプ）ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのうちの１つに割り当てることができる。こうしたクラスは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμとも表記される。ＩｇＧクラスおよびＩｇＡクラスは、配列および機能の違いに基づきサブクラスへとさらに細分化される。ヒトは、以下のサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２を発現する。
【００２１】
[0055]  ＣＤＲのアミノ酸配列境界は、当業者であれば、Ｋａｂａｔら、上記（「Ｋａｂａｔ」付番スキーム）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７−９４８（「Chothia」付番スキーム）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５（「接触（Ｃｏｎｔａｃｔ）」付番スキーム）；Ｌｅｆｒａｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７：５５−７７（「IMGT」付番スキーム）；およびＨｏｎｅｇｇｅ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７−７０（「AHo」付番スキーム）により記載されているものを含む、幾つかの公知の付番スキームのいずれかを使用して決定することができる。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
【００２２】
[0056]  表１には、ＫａｂａｔスキームおよびＣｈｏｔｈｉａスキームにより特定される通りの、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、およびＣＤＲ−Ｈ３の位置が提供されている。ＣＤＲ−Ｈ１の場合、残基付番は、Ｋａｂａｔ付番スキームおよびＣｈｏｔｈｉａ付番スキームの両方を使用して提供されている。
【００２３】
【表１】
2022500454.tif 000002
【００２４】
[0057]  別様の指定がない限り、特定のＣＤＲを特定するために本明細書で使用される付番スキームは、Ｋａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキームである。これら２つの付番スキームにより包含される残基が異なる場合（例えば、CDR-H1および／またはCDR-H2）、付番スキームは、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａのいずれかに指定される。便宜上、ＣＤＲ−Ｈ３は、本明細書ではＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａのいずれかとして参照されることがある。しかしながら、これは、違いが存在しない配列に違いがあることを示唆することを意図するものでなく、当業者であれば、配列を調査することにより配列が同じであるか異なるかを容易に確認することができる。
【００２５】
[0058]  ＣＤＲは、例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ａｂｎｕｍ／から入手可能であり、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ  ａｎｄ  Ｍａｒｔｉｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００８，４５：３８３２−３８３９に記載されているＡｂｎｕｍなどの抗体付番ソフトウェアを使用して割り当てることができる。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【００２６】
[0059]  「ＥＵ付番スキーム」は、一般に、抗体重鎖定常領域の残基（例えば、Kabatら、上記で報告されている通りの）を参照する場合に使用される。別様の記載がない限り、ＥＵ付番スキームは、本明細書に記載の抗体重鎖定常領域の残基を参照するために使用される。
【００２７】
[0060]  「抗体断片」は、インタクト抗体の抗原結合性領域または可変領域など、インタクト抗体の部分を含む。抗体断片としては、例えば、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ab'）２断片、Ｆａｂ’断片、ｓｃＦｖ（sFv）断片、およびｓｃＦｖ−Ｆｃ断片が挙げられる。
【００２８】
[0061]  「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの非共有結合で連結されている二量体を含む。
【００２９】
[0062]  「Ｆａｂ」断片は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（CH1）を含む。Ｆａｂ断片は、例えば、組換え法により、または完全長抗体のパパイン消化により生成することができる。
【００３０】
[0063]  「Ｆ（ab'）２」断片は、ヒンジ領域付近にてジスルフィド結合により接合されている２つのＦａｂ’断片を含む。Ｆ（ab'）２断片は、例えば、組換え法により、またはインタクト抗体のペプシン消化により生成することができる。F（ab'）断片は、例えば、β-メルカプトエタノールで処理することにより解離させることができる。
【００３１】
[0064]  「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖にＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。ＶＨおよびＶＬは、一般に、ペプチドリンカーにより連結されている。ＰｌｕｃｋｔｈｕｎＡ．（１９９４）を参照。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号３７７である。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号３７８である。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）由来の抗体。Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ  Ｍ．＆Ｍｏｏｒｅ  Ｇ．Ｐ．（Ｅｄｓ．），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｖｏｌ．１１３（ｐｐ．２６９−３１５）．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋは、その全体が参照により組み込まれる。
【００３２】
[0065]  「ｓｃＦｖ−Ｆｃ」断片は、Ｆｃドメインに付着されたｓｃＦｖを含む。例えば、Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖのＣ末端に付着されていてもよい。Ｆｃドメインは、ｓｃＦｖの可変ドメインの方向性（つまり、VH-VLまたはVL-VH）に応じて、ＶＨまたはＶＬに続いて存在してもよい。当技術分野で公知のまたは本明細書に記載の任意の好適なＦｃドメインを使用することができる。一部の場合では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインは、配列番号３７０またはその部分を含む。配列番号３７０は、ヒトＩｇＧ１定常領域のＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の配列を提供する。
【００３３】
[0066]  「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団に由来する抗体を指す。実質的に均質な抗体の集団は、モノクローナル抗体の産生中に通常生じ得る変異体を除き、実質的に類似しており、同じエピトープに結合する抗体を含む。そのような変異体は、一般に、わずかな量しか存在しない。モノクローナル抗体は、典型的には、複数の抗体からの単一の抗体を選択することを含むプロセスにより得られる。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組換えＤＮＡクローンのプールなど、複数のクローンからの固有のクローンを選択することであってもよい。選択された抗体は、例えば、標的に対する親和性を向上させるために（「親和性成熟」）、抗体をヒト化するために、細胞培養でのその産生を向上させるために、および／または対象におけるその免疫原性を低減させるために、さらに変更することができる。
【００３４】
[0067]  「キメラ抗体」という用語は、重鎖および／または軽鎖の部分は特定の供給源または種に由来するが、重鎖および／または軽鎖の残りは異なる供給源または種に由来する抗体を指す。
【００３５】
[0068]  非ヒト抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ヒト化抗体は、一般に、１つまたは複数のＣＤＲの残基が、非ヒト抗体（ドナー抗体）の１つまたは複数のＣＤＲの残基により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ドナー抗体は、所望の特異性、親和性、または生物学的効果を有するマウス、ラット、ウサギ、ニワトリ、または非ヒト霊長類抗体など、任意の好適な非ヒト抗体であってもよい。一部の場合では、レシピエント抗体の選択されたフレームワーク領域残基は、ドナー抗体の対応するフレームワーク領域残基により置き換えられている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体のいずれにも見られない残基を含んでいてもよい。そのような修飾をなして、抗体機能をさらに洗練させることができる。さらなる詳細は、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８６，３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２：５９３−５９６を参照。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
【００３６】
[0069]  「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞により産生される抗体のアミノ酸配列に対応するか、またはヒト抗体レパートリーもしくはヒト抗体コード配列（例えば、ヒト供給源から得られるかまたはde novoで設計される）が使用される非ヒト供給源に由来するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体は、ヒト化抗体を明確に除外する。
【００３７】
[0070]  「単離された抗体」は、その天然環境の成分から分離および／または回収されたものである。天然環境の成分としては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性物質を挙げることができる。一部の実施形態では、単離された抗体は、例えば、スピニングカップ配列決定装置（spinning cup sequenator）を使用することにより、Ｎ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な度合いにまで精製されている。一部の実施形態では、単離された抗体は、還元条件下または非還元条件下でのゲル電気泳動（例えば、SDS-PAGE）より均質に精製され、クーマシーブルー染色または銀染色で検出される。単離された抗体は、抗体の天然環境の少なくとも1つの成分が存在しないため、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕ抗体を含む。一部の態様では、単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程により調製される。
【００３８】
[0071]  一部の実施形態では、単離された抗体は、少なくとも８０重量％、８５重量％、９０重量％、９５重量％、または９９重量％まで精製される。一部の実施形態では、単離された抗体は、少なくとも８０容積％、８５容積％、９０容積％、９５容積％、または９９容積％まで精製される。一部の実施形態では、単離された抗体は、少なくとも８５重量％、９０重量％、９５重量％、９８重量％、９９重量％〜１００重量％を含む溶液として提供される。一部の実施形態では、単離された抗体は、少なくとも８５容積％、９０容積％、９５容積％、９８容積％、９９容積％〜１００容積％を含む溶液として提供される。
【００３９】
[0072]  「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間にある非共有結合相互作用の総計の強さを指す。別様の指示がない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）間の１：１相互作用を反映する元来の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、解離定数（KD）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載されているものを含む、当技術分野で公知の一般的な方法により測定することができる。親和性は、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）機器など、表面プラズモン共鳴（SPR）技術を使用して決定することができる。一部の実施形態では、親和性は、２５℃で決定される。
【００４０】
[0073]  標的分子に対する抗体の結合に関して、特定の抗原（例えば、ポリペプチド標的）または特定の抗原にあるエピトープに対する「特異的結合」、それに「特異的に結合する」、それに「対して特異的」、それに「選択的に結合する」、およびそれに「対して選択的」という用語は、非特異的相互作用または非選択的相互作用とは異なることが測定可能な結合であることを意味する。特異的結合は、例えば、対照分子の結合と比較して分子の結合を決定することにより測定することができる。特異的結合は、標的にある抗体結合部位を模倣する対照分子との競合により決定することもできる。その場合、標的に対する抗体の結合が対照分子により競合的に阻害される場合、特異的結合であることが示される。
【００４１】
[0074]  「ｋｄ」（秒-1）という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数を指す。この値は、ｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
【００４２】
[0075]  「ｋａ」（M-1×秒-1）という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の結合速度定数を指す。この値は、ｋｏｎ値とも呼ばれる。
【００４３】
[0076]  「ＫＤ」（M）という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指す。ＫＤ＝ｋｄ／ｋａである。
【００４４】
[0077]  「ｋＡ」（M-1）という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の結合平衡定数を指す。ＫＡ＝ｋａ／ｋｄである。
【００４５】
[0078]  「親和性成熟」抗体は、変更を保有していない親抗体と比較して、その抗原に対する抗体の親和性の向上をもたらす１つまたは複数の変更を１つまたは複数のＣＤＲまたはＦＲに有するものである。１つの実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはピコモルの親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の様々な方法を使用して産生することができる。例えば、Ｍａｒｋｓら（Bio/Technology, 1992, 10:779-783。この文献はその全体が参照により組み込まれる）には、ＶＨおよびＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟が記載されている。ＣＤＲ残基および／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば、Ｂａｒｂａｓら（Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A., 1994, 91:3809-3813）；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１９９５，１６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９５，１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９５，１５４：３３１０−３３１９９；およびＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９２，２２６：８８９−８９６に記載されている。これらの文献の各々はその全体が参照により組み込まれる。
【００４６】
[0079]  ２つまたはそれよりも多くの抗体の状況において本明細書で使用される場合、「競合する」または「交差競合する」という用語は、２つまたはそれよりも多くの抗体が、抗原（例えば、葉酸受容体アルファまたはFOLR1）に対する結合を競合することを示す。１つの代表的なアッセイでは、ＦＯＬＲ１をプレートにコーティングし、一次抗体との結合を可能にさせ、その後二次標識抗体を添加する。一次抗体の存在が二次抗体の結合を低減させる場合、抗体は競合する。別の代表的なアッセイでは、一次抗体をプレートにコーティングし、抗原との結合を可能にさせ、次いで二次抗体を添加する。また、「と競合する」という用語は、１つの抗体は別の抗体の結合を低減させるが、抗体を逆の順序で添加した場合に競合が観察されない抗体の組合せを含む。しかしながら、一部の実施形態では、第１および第２の抗体は、それらが添加される順序に関わりなく、互いの結合を阻害する。一部の実施形態では、１つの抗体は、その抗原に対する別の抗体の結合を、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％低減させる。
【００４７】
[0080]  「エピトープ」という用語は、抗体と特異的に結合することが可能な抗原の部分を意味する。エピトープは、表面の接近可能なアミノ酸残基および／または糖側鎖で構成されることが多く、特定の三次元構造特色ならびに特定の電荷特色を有する場合がある。立体構造エピトープおよび非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在下において前者に対する結合は失われるが、後者に対する結合は失われないという点で区別される。エピトープは、結合に直接的に関与するアミノ酸残基、および結合に直接的には関与しない他のアミノ酸残基を含んでいてもよい。抗体が結合するエピトープは、例えば、異なる点突然変異を有する葉酸受容体アルファ（FOLR1）の変異体に対する抗体結合を試験することなど、エピトープを決定するための公知技法を使用して決定することができる。
【００４８】
[0081]  ポリペプチド配列と参照配列との「同一性」パーセントは、配列をアラインし、必要に応じて最大の配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後で、参照配列のアミノ酸残基と同一であるポリペプチド配列のアミノ酸残基のパーセンテージであると規定される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的でのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（DNASTAR）、ＣＬＵＳＴＡＬＷ、ＣＬＵＳＴＡＬ  ＯＭＥＧＡ、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野の技術の範囲内にある種々の様式で達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメーターを決定することができる。
【００４９】
[0082]  「保存的置換」または「保存的アミノ酸置換」は、化学的または機能的に類似するアミノ酸によるアミノ酸の置換を指す。類似のアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野で周知である。そのような置換を有するポリペプチド配列は、「保存的に修飾された変異体」として知られている。そのような保守的に修飾された変異体は、多型変異体、種間ホモログ、および対立遺伝子に加えてのものであり、それらを除外しない。例として、表２〜４に提供されているアミノ酸の群は、一部の実施形態では、互いに保存的置換とみなされる。
【００５０】
【表２】
2022500454.tif 000003
【００５１】
【表３】
2022500454.tif 000004
【００５２】
【表４】
2022500454.tif 000005
【００５３】
[0083]  追加の保存的置換は、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ２ｎｄ  ｅｄ．（１９９３）Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹに見出すことができる。親抗体のアミノ酸残基の1つまたは複数の保存的置換を行うことにより生成される抗体は、「保存的に修飾された変異体」と呼ばれる。
【００５４】
[0084]  「アミノ酸」という用語は、２０種の通常の天然に存在するアミノ酸を指す。天然に存在するアミノ酸としては、アラニン（Ala; A）、アルギニン（Arg; R）、アスパラギン（Asn; N）、アスパラギン酸（Asp; D）、システイン（Cys; C）、グルタミン酸（Glu; E）、グルタミン（Gln; Q）、グリシン（Gly; G）；ヒスチジン（His; H）、イソロイシン（Ile; I）、ロイシン（Leu; L）、リジン（Lys; K）、メチオニン（Met; M）、フェニルアラニン（Phe; F）、プロリン（Pro; P）、セリン（Ser; S）、スレオニン（Thr; T）、トリプトファン（Trp; W）、チロシン（Tyr; Y）、およびバリン（Val; V）が挙げられる。
【００５５】
[0085]  天然コードアミノ酸は、当業者に公知のタンパク新生アミノ酸である。天然コードアミノ酸としては、２０種の通常アミノ酸（アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）ならびにあまり一般的ではないピロリジンおよびセレノシステインが挙げられる。天然コードアミノ酸としては、プレニル化アミノ酸、イソプレニル化アミノ酸、ミリストイル化（myrisoylated）アミノ酸、パルミトイル化アミノ酸、Ｎ連結型グリコシル化アミノ酸、Ｏ連結型グリコシル化アミノ酸、リン酸化アミノ酸、およびアシル化アミノ酸など、２２種の天然に存在するアミノ酸の翻訳後変異体が挙げられる。
【００５６】
[0086]  「非天然アミノ酸」という用語は、タンパク新生アミノ酸ではないアミノ酸、またはその翻訳後修飾変異体を指す。特に、この用語は、２０種の通常アミノ酸またはピロリジンまたはセレノシステインの１つではないアミノ酸、またはその翻訳後修飾変異体を指す。
【００５７】
[0087]  「コンジュゲート」または「抗体コンジュゲート」という用語は、１つまたは複数のペイロード部分に連結された抗体を指す。抗体は、本明細書に記載の任意の抗体であってもよい。ペイロードは、本明細書に記載の任意のペイロードであってもよい。抗体は、共有結合を介してペイロードに直接的に連結されていてもよく、または抗体は、リンカーを介してペイロードに間接的に連結されていてもよい。典型的には、リンカーは、抗体と共有結合で結合されており、ペイロードにも共有結合で結合されている。「抗体薬物コンジュゲート」または「ＡＤＣ」という用語は、少なくとも１つのペイロードが、薬物などの療法部分であるコンジュゲートを指す。
【００５８】
[0088]  「ペイロード」という用語は、抗体にコンジュゲートすることができる分子部分を指す。特定の実施形態では、ペイロードは、療法部分および標識部分からなる群から選択される。
【００５９】
[0089]  「リンカー」という用語は、少なくとも２つの共有結合を形成することが可能な分子部分を指す。典型的には、リンカーは、抗体に対して少なくとも１つの共有結合を形成し、ペイロードに対して少なくとも別の共有結合を形成することが可能である。ある特定の実施形態では、リンカーは、抗体に対して１つよりも多くの共有結合を形成することができる。ある特定の実施形態では、リンカーは、ペイロードに対して１つよりも多くの共有結合を形成してもよく、または１つよりも多くのペイロードと共有結合を形成してもよい。リンカーが、抗体またはペイロードまたはその両方との結合を形成した後の残りの構造、つまり１つまたは複数の共有結合が形成された後のリンカーの残基は、本明細書では依然として「リンカー」と呼ばれる場合がある。「リンカー前駆体」という用語は、抗体またはペイロードまたはその両方と共有結合を形成することが可能な１つまたは複数の反応性基を有するリンカーを指す。一部の実施形態では、リンカーは、切断可能なリンカーである。例えば、切断可能なリンカーは、遺伝子操作されてもよくまたはされていなくてもよい、生体不安定化機能により放出されるリンカーであってもよい。一部の実施形態では、リンカーは、切断不能なリンカーである。例えば、切断不能なリンカーは、抗体の分解時に放出されるリンカーであってもよい。
【００６０】
[0090]  任意の疾患または障害を「治療すること」または「治療」は、ある特定の実施形態では、対象に存在する疾患または障害を改善することを指す。別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、対象が感知しにくい場合がある少なくとも１つの身体的パラメーターを改善することを含む。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、身体的（例えば、感知可能な症状の安定化）もしくは生理学的（例えば、身体的パラメータの安定化）のいずれかまたはその両方で、疾患または障害をモジュレートすることを含む。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害の発症を遅延または予防することを含む。
【００６１】
[0091]  本明細書で使用される場合、「治療有効量」または「有効量」という用語は、対象に投与されると疾患または障害の治療に有効である抗体または組成物の量を指す。一部の実施形態では、治療有効量または有効量は、対象に投与されると、疾患もしくは疾患の進行の予防もしくは改善に有効であるか、または症状の改善をもたらす抗体または組成物の量を指す。
【００６２】
[0092]  本明細書で使用される場合、「成長を阻害する」（例えば、腫瘍細胞などの細胞を参照する）という用語は、葉酸受容体アルファ（FOLR1）抗体と接触すると、ＦＯＬＲ１抗体と接触していない同じ細胞の成長と比較して、細胞成長（例えば、腫瘍細胞成長）を測定可能に減少させることを含むことが意図されている。一部の実施形態では、成長を、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％阻害することができる。細胞成長の減少は、これらに限定されないが、抗体内部移行、アポトーシス、壊死、および／またはエフェクター機能媒介性活性を含む、様々な機序により生じ得る。
【００６３】
[0093]  本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物対象を意味する。代表的な対象としては、これらに限定されないが、ヒト、サル、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ラクダ、トリ、ヤギ、およびヒツジが挙げられる。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象は、本明細書で提供される抗体で治療または診断することができる疾患を有する。一部の実施形態では、疾患は、胃癌、結腸直腸癌、腎細胞癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌、卵巣がん、乳がん、トリプルネガティブ乳がん、子宮内膜がん、前立腺がん、および／または上皮起源のがんである。
【００６４】
[0094]  本明細書に示されている一部の化学構造では、ある特定の置換基、化学基、および原子は、１つまたは複数の結合と交差して、置換基、化学基、および原子がそれを介して結合されている原子を示す曲線／波線（例えば、
【００６５】
【化１】
2022500454.tif 000006
）と共に示されている。例えば、これらに限定されないが、
【００６６】
【化２】
2022500454.tif 000007
などの一部の構造では、この曲線／波線は、図示されている化学的実体が結合しているコンジュゲートまたはリンカー−ペイロード構造の骨格にある原子を示す。これらに限定されないが、
【００６７】
【化３】
2022500454.tif 000008
などの一部の構造では、この曲線／波線は、図示されている化学的実体が結合している抗体または抗体断片にある原子ならびにコンジュゲートまたはリンカー−ペイロード構造の骨格にある原子を示す。
【００６８】
[0095]  「部位特異的」という用語は、ポリペプチドの所定の配列位置でのポリペプチドの修飾を指す。修飾は、変異がほとんどまたは全くないポリペプチドの単一の予測可能な残基におけるものである。特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、例えば組換え的にまたは合成的に、その配列位置に導入される。同様に、部分は、ポリペプチドの特定の配列位置での残基に「部位特異的に」連結されていてもよい。ある特定の実施形態では、ポリペプチドは、１つよりも多くの部位特異的修飾を含んでいてもよい。
【００６９】
２．  コンジュゲート
[0096]  本明細書では、葉酸受容体アルファ（FOLR1またはFolRα）に対する抗体のコンジュゲートが提供される。コンジュゲートは、共有結合で直接的にまたはリンカーを介して間接的にペイロードに連結されている、ＦＯＬＲ１に対する抗体を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、１つのペイロードに連結されている。さらなる実施形態では、抗体は、１つよりも多くのペイロードに連結されている。ある特定の実施形態では、抗体は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、またはそれよりも多くのペイロードに連結されている。
【００７０】
[0097]  ペイロードは、当業者が有用であるとみなす任意のペイロードであってもよい。ある特定の実施形態では、ペイロードは療法部分である。ある特定の実施形態では、ペイロードは、診断部分、例えば標識である。有用なペイロードは、下記のセクションおよび例に記載されている。
【００７１】
[0098]  リンカーは、抗体との少なくとも１つの結合およびペイロードとの少なくとも１つの結合を形成することが可能な任意のリンカーであってもよい。有用なリンカーは、下記のセクションおよび例に記載されている。
【００７２】
[0099]  本明細書で提供されるコンジュゲートでは、抗体は、葉酸受容体アルファ（FOLR1またはFolRα）に対して結合特異性を有する任意の抗体であってもよい。ＦＯＬＲ１は、任意の種に由来するものであってもよい。ある特定の実施形態では、ＦＯＬＲ１は、脊椎動物ＦＯＬＲ１である。ある特定の実施形態では、ＦＯＬＲ１は哺乳動物ＦＯＬＲ１である。ある特定の実施形態では、ＦＯＬＲ１はヒトＦＯＬＲ１である。ある特定の実施形態では、ＦＯＬＲ１はマウスＦＯＬＲ１である。ある特定の実施形態では、ＦＯＬＲ１はカニクイザルＦＯＬＲ１である。
【００７３】
[00100]  ある特定の実施形態では、葉酸受容体アルファ（FOLR1またはFolRα）に対する抗体は、本明細書に記載の抗体と結合を競合する。ある特定の実施形態では、ＦＯＬＲ１に対する抗体は、本明細書に記載の抗体と同じエピトープに結合する。
【００７４】
[00101]  抗体は、典型的には、複数のポリペプチド鎖を含むタンパク質である。ある特定の実施形態では、抗体は、２つの同一の軽（L）鎖および２つの同一の重（H）鎖を含むヘテロ四量体である。各軽鎖は、1つの共有結合のジスルフィド結合により重鎖と連結されていてもよい。各重鎖は、1つまたは複数の共有結合のジスルフィド結合により他方の重鎖に連結されていてもよい。また、各重鎖および各軽鎖は、１つまたは複数の鎖内ジスルフィド結合を有していてもよい。当業者に公知である通り、各重鎖は、典型的には、可変ドメイン（VH）およびそれに続く幾つかの定常ドメインを含む。各軽鎖は、典型的には、一方の末端にある可変ドメイン（VL）および定常ドメインを含む。当業者に公知である通り、抗体は、典型的には、それらの標的分子、つまり抗原に対して選択的な親和性を有する。
【００７５】
[00102]  本明細書で提供される抗体は、当業者に公知の任意の抗体形態を有していてもよい。本明細書で提供される抗体は、完全長であってもよくまたは断片であってもよい。代表的な完全長抗体としては、ＩｇＡ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭなどが挙げられる。代表的な断片としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆｃ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃなどが挙げられる。
【００７６】
[00103]  ある特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の１つの、２つの、３つの、４つの、５つの、または６つのＣＤＲ配列を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の重鎖可変ドメイン（VH）を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の軽鎖可変ドメイン（VL）を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の重鎖可変ドメイン（VH）および本明細書に記載の軽鎖可変ドメイン（VL）を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、本明細書に記載の１対の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメイン（VH-VL対）を含む。
【００７７】
[00104]  ある特定の実施形態では、コンジュゲートの抗体は、上記に記載の抗体のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で１０個のアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で９個のアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で８個のアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で７個のアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で６個のアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で５個のアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で４つのアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で３つのアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で２つのアミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で１つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。一部の実施形態では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。例えば、ある特定の実施形態では、抗体は、最大で１０個の保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で９つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で８つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で７つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で６つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で５つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で４つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で３つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で２つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、最大で１つの保存的アミノ酸置換を有する上記のアミノ酸配列のいずれかを含む。
【００７８】
[00105]  ある特定の実施形態では、抗体コンジュゲートは、１つまたは複数の反応性基を含む抗体から形成されていてもよい。ある特定の実施形態では、抗体コンジュゲートは、すべて天然コードアミノ酸で構成される抗体から形成されていてもよい。当業者であれば、幾つかの天然コードアミノ酸は、ペイロードまたはリンカーにコンジュゲーションすることが可能な反応性基を含むことを認識するであろう。こうした反応性基としては、システイン側鎖、リジン側鎖、およびアミノ末端基が挙げられる。こうした実施形態では、抗体コンジュゲートは、抗体反応性基の残基に連結されたペイロードまたはリンカーを含んでいてもよい。こうした実施形態では、ペイロード前駆体またはリンカー前駆体は、抗体反応性基との結合を形成することが可能な反応性基を含む。典型的な反応性基としては、マレイミド基、活性化カルボネート（p-ニトロフェニルエステルを含むがそれに限定されない）、活性化エステル（N-ヒドロキシスクシンイミド、p-ニトロフェニルエステル、およびアルデヒドを含むがこれらに限定されない）が挙げられる。特に有用な反応性基としては、システイン側鎖およびリジン側鎖との結合を形成するための、マレイミドおよびスクシンイミド、例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドが挙げられる。さらなる反応性基は、下記のセクションおよび例に記載されている。
【００７９】
[00106]  さらなる実施形態では、抗体は、本明細書に記載の通り、反応性基を有する１つまたは複数の修飾アミノ酸を含む。典型的には、修飾アミノ酸は、天然コードアミノ酸ではない。こうした修飾アミノ酸は、リンカー前駆体またはペイロード前駆体と共有結合を形成するのに有用な反応性基を含んでいてもよい。当業者であれば、反応性基を使用して、ポリペプチドを、修飾アミノ酸と共有結合を形成することが可能な任意の分子実体に連結することができる。したがって、本明細書では、直接的にまたはリンカーを介して間接的にペイロードに連結されている修飾アミノ酸残基を含む抗体を含むコンジュゲートが提供される。代表的な修飾アミノ酸は、下記のセクションに記載されている。一般に、修飾アミノ酸は、相補的な反応性基を有するリンカーまたはペイロードとの結合を形成することが可能な反応性基を有する。
【００８０】
[00107]  非天然アミノ酸は、抗体のポリペプチド鎖の選択された位置に配置される。こうした位置は、非天然アミノ酸との置換に最適な部位を提供するものとして特定された。各部位は、抗体を産生するための最適な構造、機能、および／または方法により非天然アミノ酸を保持することが可能である。
【００８１】
[00108]  ある特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、安定した抗体を提供する。安定性は、当業者に明白な任意の技法により測定することができる。
【００８２】
[00109]  ある特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、最適な機能的特性を有する抗体を提供する。例えば、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、その標的抗原に対する結合親和性の喪失をほとんどまたは全く示さない場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、結合の増強を示すことができる。
【００８３】
[00110]  ある特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利に製作することができる抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態では、抗体は、下記で考察されているその合成方法において有利な特性を示す。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、産生時に収量の喪失をほとんどまたは全く示さない場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、産生時に収量の増強を示すことができる。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、ｔＲＮＡ抑制の喪失をほとんどまたは全く示さない場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、産生時にｔＲＮＡ抑制の増強を示すことができる。
【００８４】
[00111]  ある特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利な溶解性を有する抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、溶解度の喪失をほとんどまたは全く示さない場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、溶解度の増強を示すことができる。
【００８５】
[00112]  ある特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利な発現を有する抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、発現の喪失をほとんどまたは全く示さない場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、発現の増強を示すことができる。
【００８６】
[00113]  ある特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利なフォールディングを有する抗体を提供する。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、正しいフォールディングの喪失をほとんどまたは全く示さない場合がある。ある特定の実施形態では、抗体は、部位特異的非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、フォールディングの増強を示すことができる。
【００８７】
[00114]  ある特定の実施形態では、置換のための部位特異的位置は、有利なコンジュゲーションが可能な抗体を提供する。下記に記載のように、幾つかの非天然アミノ酸は、直接的にまたはリンカーを介してのいずれかにより、抗体と第２の作用剤とのコンジュゲーションを容易にする側鎖または官能基を有する。ある特定の実施形態では、抗体は、他の位置に同じまたは他の非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、コンジュゲーション効率の増強を示すことができる。ある特定の実施形態では、抗体は、他の位置に同じまたは他の非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、コンジュゲーション収率の増強を示すことができる。ある特定の実施形態では、抗体は、他の位置に同じまたは他の非天然アミノ酸を有していない抗体と比較して、コンジュゲーション特異性の増強を示すことができる。
【００８８】
[00115]  １つまたは複数の非天然アミノ酸は、抗体の少なくとも１つのポリペプチド鎖において選択された部位特異的位置に位置する。ポリペプチド鎖は、限定ではないが、いずれかの軽鎖またはいずれかの重鎖を含む、抗体の任意のポリペプチド鎖であってもよい。部位特異的位置は、任意の可変ドメインおよび任意の定常ドメインを含む、抗体の任意のドメインに存在してもよい。
【００８９】
[00116]  ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、部位特異的位置に１つの非天然アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、部位特異的位置に２つの非天然アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、部位特異的位置に３つの非天然アミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、部位特異的位置に３つよりも多くの非天然アミノ酸を含む。
【００９０】
[00117]  ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、Ｋａｂａｔ付番スキームまたはＣｈｏｔｈｉａ付番スキームまたはＥＵ付番スキームによる重鎖残基または軽鎖残基ＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｋ１２１、ＨＣ−Ｙ１８０、ＨＣ−Ｆ２４１、ＨＣ−２２１、ＬＣ−Ｔ２２、ＬＣ−Ｓ７、ＬＣ−Ｎ１５２、ＬＣ−Ｋ４２、ＬＣ−Ｅ１６１、ＬＣ−Ｄ１７０、ＨＣ−Ｓ１３６、ＨＣ−Ｓ２５、ＨＣ−Ａ４０、ＨＣ−Ｓ１１９、ＨＣ−Ｓ１９０、ＨＣ−Ｋ２２２、ＨＣ−Ｒ１９、ＨＣ−Ｙ５２、またはＨＣ−Ｓ７０からなる群から選択される位置に各々、１つもしくは複数の非天然アミノ酸またはそれらの翻訳後修飾変異体を含む。こうした呼称では、ＨＣは重鎖残基を示し、ＬＣは軽鎖残基を示す。
【００９１】
[00118]  ある特定の実施形態では、本明細書では、式（C1）または（C2）：
【００９２】
【化４】
2022500454.tif 000009
によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、位置異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、
ＣＯＭＰは、抗ＦＯＬＲ１抗体の残基であり、
ＰＡＹは、ペイロード部分であり、
Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、Ｗ４、およびＷ５は、各々独立して、単結合であるか、存在しないか、または二価の付着基であり、
ＥＧは、存在しないか、またはエリミネーター基（eliminator group）であり、
各ＲＴは、式（C1）もしくは（C2）の骨格にあるかまたはＥＧに結合されている放出誘発基であり、各ＲＴは任意選択であり、
ＨＰは、単結合であるか、存在しないか、または二価の親水性基であり、
ＳＧは、単結合であるか、存在しないか、または二価のスペーサー基であり、
Ｒは、水素であるか、末端コンジュゲート基であるか、または末端コンジュゲート基の二価残基である。
【００９３】
[00119]  一部の実施形態では、式（C1）または（C2）によるコンジュゲートは、ｎ個のＰＡＹ部分を含み、ｎは１〜８の整数である。一部の実施形態では、ｎは２である。一部の実施形態では、ｎは３である。一部の実施形態では、ｎは４である。一部の実施形態では、ｎは５である。一部の実施形態では、ｎは６である。一部の実施形態では、ｎは７である。一部の実施形態では、ｎは８である。
【００９４】
付着基
[00120]  付着基は、エリミネーター基、放出誘発基、疎水性基、スペーサー基、および／またはコンジュゲート基の化合物への組込みを容易にする。有用な付着基は、当業者にとって公知であり、明白である。有用な付着基の例は、本明細書に提供されている。ある特定の実施形態では、付着基は、Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、Ｗ４、またはＷ５と称される。ある特定の実施形態では、付着基は、二価ケトン、二価エステル、二価エーテル、二価アミド、二価アミン、アルキレン、アリーレン、スルフィド、ジスルフィド、カルボニレン、またはそれらの組合せを含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、付着基は、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−アルキル−、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、またはそれらの逆（例えば、−ＮＨＣ（Ｏ）−）、またはそれらの組合せを含んでいてもよい。
【００９５】
エリミネーター基
[00121]  エリミネーター基は、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物学的活性部分を、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、化合物またはコンジュゲートの残りの部分から分離することを容易にする。また、エリミネーター基は、放出誘発基と併せて、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物学的活性部分の分離を容易にすることができる。例えば、エリミネーター基および放出誘発基は、放出反応において反応して、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物学的活性部分を、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、化合物またはコンジュゲートから放出させることができる。放出誘発剤により放出反応が開始されると、エリミネーター基は、生物学的活性部分、または生物学的活性部分のプロドラッグ形態を切断し、生物学的活性部分の活性にさらなる影響を及ぼさない安定で非毒性の実体を形成する。
【００９６】
[00122]  ある特定の実施形態では、エリミネーター基は、本明細書ではＥＧと称される。有用なエリミネーター基としては、本明細書に記載されているものが挙げられる。ある特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【００９７】
【化５】
2022500454.tif 000010
であり、式中、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、クロロ、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−、およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。各構造において、フェニル環には、１つ、２つ、３つ、または一部の場合では、４つのＲＥＧ基が結合していてもよい。第２および第３の構造では、当業者であれば、ＥＧは、式（C1）の上記の説明に示されている通り、式（C1）の骨格内にはないＲＴに結合されていることを認識するであろう。一部の実施形態では、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−、およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＲＥＧは、水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、およびクロロからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【００９８】
【化６】
2022500454.tif 000011
である。ある特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【００９９】
【化７】
2022500454.tif 000012
である。ある特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【０１００】
【化８】
2022500454.tif 000013
である。
【０１０１】
[00123]  一部の実施形態では、エリミネーター基は、
【０１０２】
【化９】
2022500454.tif 000014
であり、式中、Ｚは、ＣＨまたはＮであってもよく、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、クロロ、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−、およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。各構造において、フェニル環には、１つ、２つ、３つ、または一部の場合では、４つのＲＥＧ基が結合していてもよい。第１および第２の構造では、当業者であれば、ＥＧは、式（C1）の上記の説明に示されている通り、式（C1）の骨格内にはないＲＴに結合されていることを認識するであろう。一部の実施形態では、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−、およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＲＥＧは、水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、およびクロロからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＥＧの各ＲＥＧは、水素である。ある特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【０１０３】
【化１０】
2022500454.tif 000015
である。ある特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【０１０４】
【化１１】
2022500454.tif 000016
である。ある特定の実施形態では、エリミネーター基は、
【０１０５】
【化１２】
2022500454.tif 000017
である。
【０１０６】
放出誘発基
[00124]  放出誘発基は、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物学的活性部分を、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、化合物またはコンジュゲートの残りの部分から分離することを容易にする。また、放出誘発基は、エリミネーター基と併せて、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物学的活性部分の分離を容易にすることができる。例えば、エリミネーター基および放出誘発基は、放出反応において反応して、本明細書に記載の化合物またはコンジュゲートの生物学的活性部分を、ｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで、化合物またはコンジュゲートから放出させることができる。ある特定の実施形態では、放出誘発剤は、腫瘍環境において過剰発現される酵素のタンパク質分解作用などの、高い腫瘍：非腫瘍特異性を有する生物学的に推進される反応により作用することができる。
【０１０７】
[00125]  ある特定の実施形態では、放出誘発基は、本明細書ではＲＴと称される。ある特定の実施形態では、ＲＴは二価であり、式（C1）の骨格内に結合されている。他の実施形態では、ＲＴは一価であり、上記に示されている通り、ＥＧに結合されている。有用な放出誘発基には、本明細書に記載されているものが挙げられる。ある特定の実施形態では、放出誘発基は、天然または非天然アミノ酸残基または糖環の残基を含む。ある特定の実施形態では、放出誘発基は、
【０１０８】
【化１３】
2022500454.tif 000018
である。当業者であれば、第１の構造は、二価であり、式（C1）の骨格内にまたは式（C2）に示される通りに結合されていてもよく、第２の構造は、一価であり、上記の式（C1）に示されている通り、ＥＧに結合されていてもよいことを認識するであろう。ある特定の実施形態では、放出誘発基は、
【０１０９】
【化１４】
2022500454.tif 000019
である。ある特定の実施形態では、放出誘発基は、
【０１１０】
【化１５】
2022500454.tif 000020
である。
【０１１１】
[00126]  一部の実施形態では、放出誘発基は、以下の構造：
【０１１２】
【化１６】
2022500454.tif 000021
を有するプロテアーゼ切断可能なＲ１−Ｖａｌ−Ｘペプチドであり、式中、Ｒ１は、Ｈであるか、または
【０１１３】
【化１７】
2022500454.tif 000022
であり、Ｒ２は、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、もしくは（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２；以下の構造：
【０１１４】
【化１８】
2022500454.tif 000023
を有するレグマイン切断可能なＡｌａ−Ａｌａ−ＡｓｎもしくはＡｌａ−Ａｌａ−Ａｓｐペプチド（式中、Ｚは、ＯＨまたはＮＨ２である）；または以下の構造：
【０１１５】
【化１９】
2022500454.tif 000024
を有するβ−グルクロニダーゼ切断可能なβ−グルクロニドである。当業者であれば、
【０１１６】
【化２０】
2022500454.tif 000025
は二価構造であり、式（C1）の骨格内にまたは式（C2）に示されている通りに結合されていてもよいことを認識するであろう。構造：
【０１１７】
【化２１】
2022500454.tif 000026
は一価であり、上記の式（C1）に示されている通りにＥＧに結合されていてもよい。
【０１１８】
親水性基
[00127]  親水性基は、本明細書に記載されている化合物の親水性の増加を促進する。親水性の増加は、生物学的な系に見出される水性溶液などの水性溶液へのより大きな溶解性を可能にすると考えられる。また、親水性基は、本明細書でさらに詳細に記載されているスペーサー基として機能することができる。
【０１１９】
[00128]  ある特定の実施形態では、親水性基は、本明細書ではＨＰと称される。有用な親水性基としては、本明細書に記載されているものが挙げられる。ある特定の実施形態では、親水性基は、二価ポリ（エチレングリコール）である。ある特定の実施形態では、親水性基は、式：
【０１２０】
【化２２】
2022500454.tif 000027
による二価ポリ（エチレングリコール）であり、式中、ｍは、１〜１３、任意選択により１〜４、任意選択により２〜４、または任意選択により４〜８の整数である。
【０１２１】
[00129]  一部の実施形態では、親水性基は、以下の式：
【０１２２】
【化２３】
2022500454.tif 000028
を有する二価ポリ（エチレングリコール）である。
【０１２３】
[00130]  一部の他の実施形態では、親水性基は、以下の式：
【０１２４】
【化２４】
2022500454.tif 000029
を有する二価ポリ（エチレングリコール）である。
【０１２５】
[00131]  他の実施形態では、親水性基は、以下の式：
【０１２６】
【化２５】
2022500454.tif 000030
を有する二価ポリ（エチレングリコール）である。
【０１２７】
[00132]  他の実施形態では、親水性基は、以下の式：
【０１２８】
【化２６】
2022500454.tif 000031
を有する二価ポリ（エチレングリコール）である。
【０１２９】
[00133]  一部の実施形態では、親水性基は、式：
【０１３０】
【化２７】
2022500454.tif 000032
を有する、鎖に提示されたスルホン酸を保持することができる。
【０１３１】
スペーサー基
[00134]  スペーサー基は、コンジュゲート基と、本明細書に記載されている化合物の他の基との離間を容易にする。この離間は、本明細書に記載の化合物と第２の化合物とのより効率的なコンジュゲーション、ならびに活性異化代謝産物のより効率的な切断をもたらすことができる。また、スペーサー基は、コンジュゲート基を安定化し、全体的な抗体−薬物コンジュゲート特性の向上をもたらすことができる。
【０１３２】
[00135]  ある特定の実施形態では、スペーサー基は、本明細書ではＳＰと称される。有用なスペーサー基としては、本明細書に記載されているものが挙げられる。ある特定の実施形態では、スペーサー基は、
【０１３３】
【化２８】
2022500454.tif 000033
である。ある特定の実施形態では、スペーサー基、Ｗ４、および親水性基は一緒になって、式：
【０１３４】
【化２９】
2022500454.tif 000034
による二価ポリ（エチレングリコール）を形成し、式中、ｍは、１〜１３の、任意選択により１〜４の、任意選択により２〜４の、または任意選択により４〜８の整数である。
【０１３５】
[00136]  一部の実施形態では、ＳＰは、
【０１３６】
【化３０】
2022500454.tif 000035
である。
【０１３７】
[00137]  一部の実施形態では、二価ポリ（エチレングリコール）は、以下の式：
【０１３８】
【化３１】
2022500454.tif 000036
を有する。
【０１３９】
[00138]  一部の他の実施形態では、二価ポリ（エチレングリコール）は、以下の式：
【０１４０】
【化３２】
2022500454.tif 000037
を有する。
【０１４１】
[00139]  他の実施形態では、二価ポリ（エチレングリコール）は、以下の式：
【０１４２】
【化３３】
2022500454.tif 000038
を有する。
【０１４３】
[00140]  他の実施形態では、二価ポリ（エチレングリコール）は、以下の式：
【０１４４】
【化３４】
2022500454.tif 000039
を有する。
【０１４５】
[00141]  一部の実施形態では、親水性基は、式：
【０１４６】
【化３５】
2022500454.tif 000040
を有する、鎖に提示されたスルホン酸を保持することができる。
【０１４７】
コンジュゲート基およびその残基
[00142]  コンジュゲート基は、本明細書に記載のペイロードと、本明細書に記載の抗体などの第２の化合物とコンジュゲーションを容易にする。ある特定の実施形態では、コンジュゲート基は、本明細書ではＲと称される。コンジュゲート基は、当業者に公知の任意の好適な反応機序により反応することができる。ある特定の実施形態では、コンジュゲート基は、本明細書に詳細に記載の通りの、［３＋２］アルキン−アジド環化付加反応、逆電子要求型Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒライゲーション反応、チオール−求電子反応、またはカルボニル−オキシアミン反応により反応する。ある特定の実施形態では、コンジュゲート基は、アルキン、歪みアルキン、テトラジン、チオール、パラ−アセチル−フェニルアラニン残基、オキシアミン、マレイミド、またはアジドを含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲート基は、
【０１４８】
【化３６】
2022500454.tif 000041
、−Ｎ３、または−ＳＨであり、式中、Ｒ２０１は低級アルキルである。一実施形態では、Ｒ２０１は、メチル、エチル、またはプロピルである。一実施形態では、Ｒ２０１はメチルである。追加のコンジュゲート基は、例えば、米国特許出願公開第２０１４／０３５６３８５号、米国特許出願公開第２０１３／０１８９２８７号、米国特許出願公開第２０１３／０２５１７８３号、米国特許第８，７０３，９３６号、米国特許第９，１４５，３６１号、米国特許第９，２２２，９４０号、および米国特許第８，４３１，５５８号に記載されている。
【０１４９】
[00143]  コンジュゲーション後、コンジュゲート基の二価残基が形成され、第２の化合物の残基に結合する。二価残基の構造は、コンジュゲートを形成するために使用されるコンジュゲーション反応のタイプにより決定される。
【０１５０】
[00144]  ある特定の実施形態では、コンジュゲートは、［３＋２］アルキン−アジド環化付加反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、トリアゾール環またはトリアゾール環を含む縮合環式基を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートが、歪み促進型［３＋２］アルキン−アジド環化付加（SPAAC）反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、
【０１５１】
【化３７】
2022500454.tif 000042
である。
【０１５２】
[00145]  ある特定の実施形態では、コンジュゲートが、テトラジン逆電子要求型Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒライゲーション反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、環に少なくとも２つの隣接する窒素原子を有する縮合二環式環を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートが、テトラジン逆電子要求型Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒライゲーション反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、
【０１５３】
【化３８】
2022500454.tif 000043
である。
【０１５４】
[00146]  ある特定の実施形態では、コンジュゲートがチオール−マレイミド反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、スクシンイミジレン（succinimidylene）および硫黄連結を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートがチオール−マレイミド反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、
【０１５５】
【化３９】
2022500454.tif 000044
である。
【０１５６】
[00147]  ある特定の実施形態では、コンジュゲートは、以下の基：
【０１５７】
【化４０】
2022500454.tif 000045
を使用したチオール−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド反応により形成される。コンジュゲートの形成に関与する反応は、以下の工程：
【０１５８】
【化４１】
2022500454.tif 000046
を含み、得られるコンジュゲート基の二価残基は、
【０１５９】
【化４２】
2022500454.tif 000047
である。
【０１６０】
[00148]  ある特定の実施形態では、コンジュゲートが、カルボニル−オキシアミン反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、非天然アミノ酸の二価残基を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートがカルボニル−オキシアミン反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、
【０１６１】
【化４３】
2022500454.tif 000048
である。
【０１６２】
[00149]  ある特定の実施形態では、コンジュゲートがカルボニル−オキシアミン反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、オキシム連結を含む。ある特定の実施形態では、コンジュゲートがカルボニル−オキシアミン反応により形成される場合、コンジュゲート基の二価残基は、
【０１６３】
【化４４】
2022500454.tif 000049
である。
【０１６４】
[00150]  一部の実施形態では、本明細書には、式（C1）または（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＥＧは、フェニレン、カルボキシレン、アミン、またはそれらの組合せを含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）または（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＥＧは、
【０１６５】
【化４５】
2022500454.tif 000050
であり、式中、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、クロロ、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−、およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。各構造において、フェニル環には、１つ、２つ、３つ、または一部の場合では、４つのＲＥＧ基が結合していてもよい。第２および第３の構造では、当業者であれば、ＥＧは、式Ｃ１の上記の説明に示されている通り、式Ｃ１の骨格内にはないＲＴに結合していることを認識するであろう。一部の実施形態では、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−、およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＲＥＧは、水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、およびクロロからなる群から選択される。
【０１６６】
[00151]  一部の実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＥＧは、フェニレン、カルボキシレン、アミン、またはそれらの組合せを含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＥＧは、
【０１６７】
【化４６】
2022500454.tif 000051
であり、式中、ＺはＣＨまたはＮであってもよく、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、クロロ、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−、およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。各構造において、フェニル環には、１つ、２つ、３つ、または一部の場合では、４つのＲＥＧ基が結合していてもよい。第２および第３の構造では、当業者であれば、ＥＧは、式Ｃ１の上記の説明に示されている通り、式Ｃ１の骨格内にはないＲＴに結合していることを認識するであろう。一部の実施形態では、ＲＥＧは、水素、アルキル、ビフェニル、−ＣＦ３、アルコキシル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アルキルアミノ−Ｃ（Ｏ）−、およびジアルキルアミノＣ（Ｏ）−からなる群から選択される。さらなる実施形態では、ＲＥＧは、水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、フルオロ、ブロモ、およびクロロからなる群から選択される。一部の実施形態では、ＥＧの各ＲＥＧは、水素である。
【０１６８】
[00152]  一部の実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＲＴは、天然もしくは非天然アミノ酸の残基または糖の残基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＲＴは、
【０１６９】
【化４７】
2022500454.tif 000052
である。当業者であれば、第１の構造は、二価であり、式（C2）に示されている通り骨格内に結合されていてもよく、第２の構造は、一価であり、上記の式（C1）に示されている通りＥＧに結合されていてもよいことを認識するであろう。
【０１７０】
[00153]  一部の実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＲＴは、天然もしくは非天然アミノ酸の残基または糖の残基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＲＴは、
【０１７１】
【化４８】
2022500454.tif 000053
であり、式中、Ｒ１は、Ｈまたは
【０１７２】
【化４９】
2022500454.tif 000054
であり、Ｒ２は、ＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、または（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２；
【０１７３】
【化５０】
2022500454.tif 000055
の構造を有するレグマイン切断可能なＡｌａ−Ａｌａ−ＡｓｎもしくはＡｌａ−Ａｌａ−Ａｓｐペプチド（式中、ＺはＯＨまたはＮＨ２である）；または
【０１７４】
【化５１】
2022500454.tif 000056
の構造を有するβ−グルクロニダーゼ切断可能なβ−グルクロニドである。当業者であれば、
【０１７５】
【化５２】
2022500454.tif 000057
は、二価構造であり、式（C1）の骨格内にまたは式（C2）に示されている通りに結合していてもよいことを認識するであろう。構造
【０１７６】
【化５３】
2022500454.tif 000058
は、一価であり、上記の式（C1）に示されている通り、ＥＧに結合していてもよい。
【０１７７】
[00154]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＨＰは、ポリ（エチレングリコール）を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＨＰは、
【０１７８】
【化５４】
2022500454.tif 000059
であり、式中、ｍは１〜１３の整数である。
【０１７９】
[00155]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＳＧは、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン、Ｃ４〜Ｃ６アルキレン、カルボニレン、またはそれらの組合せを含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＳＧは、
【０１８０】
【化５５】
2022500454.tif 000060
である。
【０１８１】
[00156]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2)によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、Ｗ４、およびＷ５は、各々独立して、単結合であるか、存在しないか、または二価ケトン、二価エステル、二価エーテル、二価アミド、二価アミン、アルキレン、アリーレン、スルフィド、ジスルフィド、カルボニレン、もしくはそれらの組合せを含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３、Ｗ４、およびＷ５は、各々独立して、単結合であるか、存在しないか、または−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−アルキル−、−Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、もしくはそれらの組合せを含む。
【０１８２】
[00157]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒはトリアゾール環を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、トリアゾール環またはトリアゾール環を含む縮合環式基である。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、
【０１８３】
【化５６】
2022500454.tif 000061
である。
【０１８４】
[00158]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、環に少なくとも２つの隣接する窒素原子を有する縮合二環式環を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、
【０１８５】
【化５７】
2022500454.tif 000062
である。
【０１８６】
[00159]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは硫黄連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、
【０１８７】
【化５８】
2022500454.tif 000063
である。
【０１８８】
[00160]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、非天然アミノ酸の二価残基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、
【０１８９】
【化５９】
2022500454.tif 000064
である。
【０１９０】
[00161]  一実施形態では、本明細書には、オキシム連結を含む、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供される。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、
【０１９１】
【化６０】
2022500454.tif 000065
である。
【０１９２】
[00162]  一実施形態では、本明細書には、オキシム連結を含む、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供される。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、
【０１９３】
【化６１】
2022500454.tif 000066
である。
【０１９４】
[00163]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）によるコンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、Ｒは、
【０１９５】
【化６２】
2022500454.tif 000067
である。
【０１９６】
[00164]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、本明細書に記載のペイロードとのコンジュゲーションに有用であることが知られている任意の化合物の残基、および本明細書に記載の任意選択によるリンカーである。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基である。
【０１９７】
[00165]  一態様では、本明細書には、本明細書に記載のペイロード、および抗ＦＯＬＲ１抗体に連結された本明細書に記載の任意選択によるリンカーを含む抗体コンジュゲートであり、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基である。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、トリアゾール環またはトリアゾール環を含む縮合環式基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、
【０１９８】
【化６３】
2022500454.tif 000068
である。
【０１９９】
[00166]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、縮合二環式環を含み、縮合二環式環は、環に少なくとも２つの隣接する窒素原子を有する。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、
【０２００】
【化６４】
2022500454.tif 000069
である。
【０２０１】
[00167]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、ポリペプチドの残基であり、Ｒは、硫黄連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、ポリペプチドの残基であり、Ｒは、
【０２０２】
【化６５】
2022500454.tif 000070
である。
【０２０３】
[00168]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、ポリペプチドの残基であり、Ｒは、非天然アミノ酸の二価残基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、ポリペプチドの残基であり、Ｒは、
【０２０４】
【化６６】
2022500454.tif 000071
である。
【０２０５】
[00169]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、ポリペプチドの残基であり、Ｒは、オキシム連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、ポリペプチドの残基であり、Ｒは、
【０２０６】
【化６７】
2022500454.tif 000072
である。
【０２０７】
[00170]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、ポリペプチドの残基であり、Ｒは、オキシム連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、ポリペプチドの残基であり、Ｒは、
【０２０８】
【化６８】
2022500454.tif 000073
である。
【０２０９】
[00171]  一態様では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による、抗体に連結された本明細書に記載のペイロードおよび本明細書に記載の任意選択によるリンカーを含む抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは抗体の残基である。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、トリアゾール環またはトリアゾール環を含む縮合環式基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、
【０２１０】
【化６９】
2022500454.tif 000074
である。
【０２１１】
[00172]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、縮合二環式環を含み、縮合二環式環は、環に少なくとも２つの隣接する窒素原子を有する。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、
【０２１２】
【化７０】
2022500454.tif 000075
である。
【０２１３】
[00173]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、硫黄連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、
【０２１４】
【化７１】
2022500454.tif 000076
である。
【０２１５】
[00174]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、非天然アミノ酸の二価残基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、
【０２１６】
【化７２】
2022500454.tif 000077
である。
【０２１７】
[00175]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、オキシム連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、
【０２１８】
【化７３】
2022500454.tif 000078
である。
【０２１９】
[00176]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、オキシム連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、
【０２２０】
【化７４】
2022500454.tif 000079
である。
【０２２１】
[00177]  一態様では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による、抗体鎖に連結された本明細書に記載のペイロードおよび本明細書に記載の任意選択によるリンカーを含む抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは抗体鎖の残基である。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体の残基であり、Ｒは、トリアゾール環またはトリアゾール環を含む縮合環式基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、
【０２２２】
【化７５】
2022500454.tif 000080
である。
【０２２３】
[00178]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、縮合二環式環を含み、縮合二環式環は、環に少なくとも２つの隣接する窒素原子を有する。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、
【０２２４】
【化７６】
2022500454.tif 000081
である。
【０２２５】
[00179]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、硫黄連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、
【０２２６】
【化７７】
2022500454.tif 000082
である。
【０２２７】
[00180]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、非天然アミノ酸の二価残基を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、
【０２２８】
【化７８】
2022500454.tif 000083
である。
【０２２９】
[00181]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、オキシム連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、
【０２３０】
【化７９】
2022500454.tif 000084
である。
【０２３１】
[00182]  一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、オキシム連結を含む。一実施形態では、本明細書には、式（C1）もしくは（C2）による抗体コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、立体異性体、もしくは互変異性体が提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗体鎖の残基であり、Ｒは、
【０２３２】
【化８０】
2022500454.tif 000085
である。
【０２３３】
[00183]  一実施形態では、本明細書には、以下の式：
【０２３４】
【化８１−１】
2022500454.tif 000086
【０２３５】
【化８１−２】
2022500454.tif 000087
のいずれかによるコンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗ＦＯＬＲ１抗体の残基を示し、ＰＡＹはペイロード部分を示す。
【０２３６】
[00184]  一実施形態では、本明細書には、以下の式：
【０２３７】
【化８２−１】
2022500454.tif 000088
【０２３８】
【化８２−２】
2022500454.tif 000089
のいずれかによるコンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗ＦＯＬＲ１抗体の残基を示し、ＰＡＹはペイロード部分を示す。
【０２３９】
[00185]  一実施形態では、本明細書には、以下の式：
【０２４０】
【化８３】
2022500454.tif 000090
のいずれかによるコンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗ＦＯＬＲ１抗体の残基を示し、ＰＡＹはペイロード部分を示す。
【０２４１】
[00186]  一実施形態では、本明細書には、以下の式：
【０２４２】
【化８４】
2022500454.tif 000091
のいずれかによるコンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗ＦＯＬＲ１抗体の残基を示し、ＰＡＹはペイロード部分を示す。
【０２４３】
[00187]  一実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂ：
【０２４４】
【化８５−１】
2022500454.tif 000092
【０２４５】
【化８５−２】
2022500454.tif 000093
のいずれかによるコンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、抗ＦＯＬＲ１抗体の残基を示し、ＰＡＹはペイロード部分を示す。
【０２４６】
[00188]  上述の実施形態のいずれにおいても、コンジュゲートは、ｎ個のＰＡＹ部分を含み、ｎは、１〜８の整数である。一部の実施形態では、ｎは２である。一部の実施形態では、ｎは３である。一部の実施形態では、ｎは４である。一部の実施形態では、ｎは５である。一部の実施形態では、ｎは６である。一部の実施形態では、ｎは７である。一部の実施形態では、ｎは８である。
【０２４７】
[00189]  特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、下記の式（３０）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖４０４位における、下記の式（３０）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖１８０位における、下記の式（３０）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖２４１位における、下記の式（３０）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖２２２位における、下記の式（３０）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、Ｋａｂａｔ付番方式またはＣｈｏｔｈｉａ付番方式による軽鎖７位における、下記の式（３０）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、Ｋａｂａｔ付番方式またはＣｈｏｔｈｉａ付番方式による軽鎖４２位における、下記の式（３０）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、ＰＡＹは、マイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、モノメチルオーリスタチンＦ（MMAF）、およびモノメチルオーリスタチンＥ（MMAE）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはマイタンシンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはヘミアステリンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはアマニチンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＦである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＥである。
【０２４８】
【化８６】
2022500454.tif 000094
【０２４９】
[00190]  特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、下記の式（５６）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖４０４位における、下記の式（５６）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖１８０位における、下記の式（５６）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖２４１位における、下記の式（５６）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖２２２位における、下記の式（５６）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、Ｋａｂａｔ付番方式またはＣｈｏｔｈｉａ付番方式による軽鎖７位における、下記の式（５６）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、Ｋａｂａｔ付番方式またはＣｈｏｔｈｉａ付番方式による軽鎖４２位における、下記の式（５６）による非天然アミノ酸の残基を示す。特定の実施形態では、ＰＡＹは、マイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはマイタンシンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはヘミアステリンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはアマニチンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＦである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＥである。
【０２５０】
【化８７】
2022500454.tif 000095
【０２５１】
[00191]  特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンの非天然アミノ酸残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖４０４位における非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖１８０位におけるパラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンの非天然アミノ酸残基を示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖２４１位における非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、ＥＵ付番方式による重鎖２２２位における非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、Ｋａｂａｔ付番方式またはＣｈｏｔｈｉａ付番方式による軽鎖７位における非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す。特定の実施形態では、本明細書には、式１０１ａ〜１０４ｂのいずれかによる抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ＣＯＭＰは、Ｋａｂａｔ付番方式またはＣｈｏｔｈｉａ付番方式による軽鎖４２位における非天然アミノ酸残基パラ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを示す。ある特定の実施形態では、ＰＡＹは、マイタンシン、ヘミアステリン、アマニチン、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはマイタンシンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはヘミアステリンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはアマニチンである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＦである。ある特定の実施形態では、ＰＡＹはＭＭＡＥである。
【０２５２】
[00192]  一部の実施形態では、本明細書には、例えば、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１６／１２３５８２に記載の通りの修飾ヘミアステリンおよびリンカーを含む抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供される。例えば、コンジュゲートは、ＰＣＴ公報ＷＯ２０１６／２０１６／１２３５８２に記載の通りの、式１０００〜１０００ｂ、１００１〜１００１ｂ、１００２〜１００２ｂ、およびＩ〜ＸＩＸｂ−２、１０１〜１１１ｂ、または１〜８ｂのいずれかを含む構造を有してもよい。修飾ヘミアステリンおよびリンカーを含むコンジュゲートの例は、下記に提供されている。
【０２５３】
[00193]  一部の実施形態では、本明細書には、コンジュゲートＭの構造：
【０２５４】
【化８８】
2022500454.tif 000096
を有する抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ｎは１〜６の整数である。一部の実施形態では、ｎは１〜４の整数である。一部の実施形態では、ｎは２である。例えば、一部の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートは、構造：
【０２５５】
【化８９】
2022500454.tif 000097
を有する。一部の実施形態では、ｎは４である。例えば、一部の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートは、構造：
【０２５６】
【化９０】
2022500454.tif 000098
を有する。
【０２５７】
[00194]  一部の実施形態では、本明細書には、コンジュゲートＰの構造：
【０２５８】
【化９１】
2022500454.tif 000099
を有する抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ｎは１〜６の整数である。一部の実施形態では、ｎは１〜４の整数である。一部の実施形態では、ｎは２である。例えば、一部の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートは構造：
【０２５９】
【化９２】
2022500454.tif 000100
を有する。一部の実施形態では、ｎは４である。例えば、一部の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートは構造：
【０２６０】
【化９３】
2022500454.tif 000101
を有する。
【０２６１】
[00195]  一部の実施形態では、本明細書には、コンジュゲートＱの構造：
【０２６２】
【化９４】
2022500454.tif 000102
を有する抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが提供され、式中、ｎは１〜６の整数である。一部の実施形態では、ｎは１〜４の整数である。一部の実施形態では、ｎは２である。例えば、一部の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートは、構造：
【０２６３】
【化９５】
2022500454.tif 000103
を有する。一部の実施形態では、ｎは４である。例えば、一部の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートは、構造：
【０２６４】
【化９６】
2022500454.tif 000104
を有する。
【０２６５】
[00196]  抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートが、コンジュゲートＭ、コンジュゲートＰ、またはコンジュゲートＱによる構造を有する上述の実施形態ではいずれも、角括弧で囲まれた構造は、抗体の１つまたは複数の非天然アミノ酸に共有結合されていてもよく、１つまたは複数の非天然アミノ酸は、Ｋａｂａｔ付番スキームまたはＫａｂａｔのＥＵ付番スキームによるＨＣ−Ｆ４０４、ＨＣ−Ｙ１８０、およびＬＣ−Ｋ４２からなる群から選択される部位に位置する。一部の実施形態では、角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＨＣ−Ｆ４０４における１つまたは複数の非天然アミノ酸に共有結合されている。一部の実施形態では、角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＨＣ−Ｙ１８０における１つまたは複数の非天然アミノ酸に共有結合されている。一部の実施形態では、角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＬＣ−Ｋ４２における１つまたは複数の非天然アミノ酸に共有結合されている。一部の実施形態では、角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＨＣ−Ｆ４０４およびＨＣ−Ｙ１８０における１つまたは複数の非天然アミノ酸に共有結合1されている。一部の実施形態では、少なくとも１つの角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＨＣ−Ｆ４０４における非天然アミノ酸に共有結合されており、少なくとも１つの角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＨＣ−Ｙ１８０における非天然アミノ酸に共有結合されている。一部の実施形態では、角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＨＣ−Ｙ１８０およびＬＣ−Ｋ４２における１つまたは複数の非天然アミノ酸に共有結合されている。一部の実施形態では、少なくとも１つの角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＨＣ−Ｙ１８０における非天然アミノ酸に共有結合されており、少なくとも１つの角括弧で囲まれた構造は、抗体の部位ＬＣ−Ｋ３２における非天然アミノ酸に共有結合されている。
【０２６６】
３．  ペイロード
[00197]  上記に記載のペイロードに加えて、分子ペイロードは、当業者がポリペプチドにコンジュゲートすることを望むことが考えられる任意の分子実体であってもよい。ある特定の実施形態では、ペイロードは療法部分である。そのような実施形態では、抗体コンジュゲートを使用して、療法部分をその分子標的へと標的化することができる。ある特定の実施形態では、ペイロードは標識部分である。そのような実施形態では、抗体コンジュゲートを使用して、その標的に対するポリペプチドの結合を検出することができる。ある特定の実施形態では、ペイロードは細胞傷害性部分である。そのような実施形態では、抗体コンジュゲートを使用して、細胞傷害性部分を疾患細胞、例えばがん細胞へと標的化して、細胞の破壊または排除を開始させることができる。当業者にとって明白である他の分子ペイロードを含むコンジュゲートは、本明細書に記載のコンジュゲートの範囲内である。
【０２６７】
[00198]  ある特定の実施形態では、抗体コンジュゲートは、以下のものからなる群から選択されるペイロードを有することができる：標識、色素、ポリマー、水溶性ポリマー、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールの誘導体、光架橋剤、細胞傷害性化合物、放射性核種、薬物、親和性標識、光親和性標識、反応性化合物、レジン、第２のタンパク質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチドアナログ、抗体もしくは抗体断片、金属キレート剤、補因子、脂肪酸、炭水化物、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンスポリヌクレオチド、ペプチド、水溶性デンドリマー、シクロデキストリン、阻害性リボ核酸、生体材料、ナノ粒子、スピン標識、フルオロフォア、金属含有部分、放射性部分、新規官能基、他の分子と共有結合でもしくは非共有結合で相互作用する基、光ケージ化部分、光異性化可能な部分、ビオチン、ビオチンの誘導体、ビオチンアナログ、重原子が組み込まれた部分、化学的に切断可能な基、光切断可能な基、伸長側鎖、炭素連結糖、酸化還元活性作用剤、アミノチオ酸、毒性部分、同位体標識部分、生物物理学的プローブ、リン光基、化学発光基、高電子密度基、磁性基、挿入基、発色団、エネルギー移動作用剤、生物学的活性作用剤、検出可能な標識、小分子、またはそれらの任意の組合せ。一実施形態では、ペイロードは、標識、色素、ポリマー、細胞傷害性化合物、放射性核種、薬物、親和性標識、レジン、タンパク質、ポリペプチド、ポリペプチドアナログ、抗体、抗体断片、金属キレート剤、補因子、脂肪酸、炭水化物、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド、フルオロフォア、または炭素連結糖である。別の実施形態では、ペイロードは、標識、色素、ポリマー、薬物、抗体、抗体断片、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはペプチドである。
【０２６８】
[00199]  有用な薬物ペイロードとしては、細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤、または免疫調節剤が挙げられる。細胞傷害剤または免疫調節剤の有用なクラスとしては、以下のものが挙げられる：例えば、抗チューブリン剤、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤（例えば、シス−プラチン、モノ（白金）錯体、ビス（白金）錯体、および三核白金錯体（tri-nuclear platinum complex）、ならびにカルボプラチンなどの白金錯体）、アントラサイクリン、抗生物質、葉酸代謝拮抗剤、代謝拮抗剤、カルモジュリン阻害剤、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ素化ピリミジン、イオノフォア、レキシトロプシン、メイタンシノイド、ニトロソウレア、プラチノール、孔形成化合物、プリン代謝拮抗剤、ピューロマイシン、放射線増感剤、ラパマイシン、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、またはビンカアルカロイドなど。
【０２６９】
[00200]  個々の細胞傷害剤または免疫調節剤としては、以下のものが挙げられる：例えば、アンドロゲン、アントラマイシン（AMC）、アスパラギナーゼ、５−アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシイミン、カリチアマイシン、カリチアマイシン誘導体、カンプトテシン、カルボプラチン、カルムスチン（BSNU）、ＣＣ−１０６５、クロラムブシル、シスプラチン、コルヒチン、シクロホスファミド、シタラビン、シチジンアラビノシド、サイトカラシンＢ、ダカルバジン、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシン）、ダウノルビシン、ダカルバジン（decarbazine）、ＤＭ１、ＤＭ４、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、エストロゲン、５−フルオロデオキシウリジン（5-fluordeoxyuridine）、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、グラミシジンＤ、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン（CCNU）、マイタンシン、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ミトラマイシン、ミトマイシンＣ、ミトキサントロン、ニトロイミダゾール、パクリタキセル、パリトキシン、プリカマイシン、プロカルバジン（procarbizine）、リゾキシン、ストレプトゾトシン、テニポシド（tenoposide）、６−チオグアニン、チオテパ（thioTEPA）、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ＶＰ−１６、およびＶＭ−２６。
【０２７０】
[00201]  一部の実施形態では、好適な細胞傷害剤としては、例えば、ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、エンジインおよびレキシトロプシン、CBI化合物；米国特許第６，１３０，２３７号も参照）、デュオカルマイシン、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、ピューロマイシン、ビンカアルカロイド、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エポチロンＡおよびＢ、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、ディスコデルモリド、エリュテロビン、ならびにミトキサントロンが挙げられる。
【０２７１】
[00202]  一部の実施形態では、ペイロードは、抗チューブリン剤である。抗チューブリン剤の例としては、これらに限定されないが、タキサン（例えば、Taxol（登録商標）（パクリタキセル）、Taxotere（登録商標）（ドセタキセル））、T67（Tularik）、およびビンカアルカロイド（vinca alkyloid）（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビン）が挙げられる。他の抗チューブリン剤としては、例えば、バッカチン誘導体、タキサンアナログ、エポチロン（例えば、エポチロンAおよびB）、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルセミド（colcimid）、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、マイタンシノイド、コンブレタスタチン、ディスコデルモリド、ならびにエリュテロビンが挙げられる。
【０２７２】
[00203]  ある特定の実施形態では、細胞傷害剤は、抗チューブリン剤の別のグループであるマイタンシノイドである。例えば、具体的な実施形態では、マイタンシノイドは、マイタンシンまたはＤＭ−１（ImmunoGen, Inc.; Chari et al., 1992, Cancer Res. 52:127-131も参照）であってもよい。
【０２７３】
[00204]  一部の実施形態では、ペイロードは、オーリスタチンＥまたはその誘導体などのオーリスタチンである。例えば、オーリスタチンＥ誘導体は、オーリスタチンＥとケト酸との間で形成されるエステルであってもよい。例えば、オーリスタチンＥは、パラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応して、それぞれＡＥＢおよびＡＥＶＢを産生することができる。他の典型的なオーリスタチン誘導体としては、ＡＦＰ（オーリスタチンフェニルアラニンフェニレンジアミン）、ＭＭＡＦ（モノメチルオーリスタチンF）、およびＭＭＡＥ（モノメチルオーリスタチンE）が挙げられる。オーリスタチン誘導体の合成および構造は、米国特許出願公開第２００３−００８３２６３号、第２００５−０２３８６４９号、および第２００５−０００９７５１号；ＷＯ０４／０１０９５７、ＷＯ０２／０８８１７２、および米国特許第６，３２３，３１５号；第６，２３９，１０４号；第６，０３４，０６５号；第５，７８０，５８８号；第５，６６５，８６０号；第５，６６３，１４９号；第５，６３５，４８３号；第５，５９９，９０２号；第５，５５４，７２５号；第５，５３０，０９７号；第５，５２１，２８４号；第５，５０４，１９１号；第５，４１０，０２４号；第５，１３８，０３６号；第５，０７６，９７３号；第４，９８６，９８８号；第４，９７８，７４４号；第４，８７９，２７８号；第４，８１６，４４４号；および第４，４８６，４１４号に記載されている。
【０２７４】
[00205]  一部の実施形態では、ペイロードはヘミアステリンである。本明細書に記載の抗体−薬物コンジュゲートでの使用に好適なヘミアステリンは、例えば、ＷＯ２０１６／２０１６／１２３５８２に記載されている。この文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２７５】
[00206]  一部の実施形態では、ペイロードは、放射性同位体ではない。一部の実施形態では、ペイロードは、放射性ではない。
【０２７６】
[00207]  一部の実施形態では、ペイロードは、代謝拮抗剤である。代謝拮抗剤は、例えば、プリンアンタゴニスト（例えば、アゾチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル）、ジヒドロ葉酸還元酵素阻害剤（例えば、メトトレキサート）、アシクロビル、ガンジシクロビル、ジドブジン、ビダラビン、リババリン、アジドチミジン、シチジンアラビノシド、アマンタジン、ジデオキシウリジン、ヨードデオキシウリジン、ホスカルネット（poscarnet）、またはトリフルリジンであってもよい。
【０２７７】
[00208]  他の実施形態では、ペイロードは、タクロリムス、シクロスポリン、ＦＵ５０６、またはラパマイシンである。さらなる実施形態では、薬物は、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、ベキサロテン、ベキサロテン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、クラドリビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピルビシン、エポエチンアルファ、エストラムスチン、エキセメスタン、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビン、フルベストラント、ゲムシタビン、ゲムツズマブオゾガミシン（MYLOTARG）、ゴセレリン、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブメシル酸塩、インターフェロンアルファ−２ａ、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、レバミソール、メクロレタミンまたはナイトロジェンマスタード、メゲストロール、メスナ、メトトレキサート、メトキサレン、ミトマイシンＣ、ミトタン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、オプレルベキン、オキサリプラチン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペントスタチン、ピポブロマン、プラジエノリド、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、リツキシマブ、サルグラモスチム、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ（HERCEPTIN）、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、またはゾレドロネート。
【０２７８】
[00209]  一部の実施形態では、ペイロードは、免疫調節剤である。免疫調節剤は、例えば、ガングシクロビル（gangcyclovir）、エタネルセプト、タクロリムス、シクロスポリン、ラパマイシン、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、またはメトトレキサートであってもよい。その代わりに、免疫調節剤は、例えば、グルココルチコイド（例えば、コルチゾールまたはアルドステロン）またはグルココルチコイドアナログ（例えば、プレドニゾンまたはデキサメタゾン）であってもよい。
【０２７９】
[00210]  一部の実施形態では、免疫調節剤は、コンジュゲートの抗腫瘍活性を増強することになるように、免疫系の成分をモジュレートする作用剤である。そのような作用剤としては、これらに限定されないが、トール様受容体のアゴニスト（例えば、ポリ−ICLC（Hiltonol）、GLA、MEDI9197、VTX-2337（Motolimid）、CpG（SD-101）、およびIMO-2125）；ＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子の刺激因子）経路のアゴニスト（例えば、MK-1454、ADU-S100、およびSB11285）；ＲＩＧ−Ｉ様受容体（RLR）シグナル伝達の活性化因子（例えば、RGT100）；ＩＤＯ−１（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ１）の阻害剤（例えば、GDC-0919（navoximod）、BMS-986205、およびエパカドスタット）；およびＰＤ−１経路の小分子遮断剤（例えば、CA-170、BMS-8、BMS-202、およびAUNP12）が挙げられるであろう。
【０２８０】
[00211]  一部の実施形態では、免疫調節剤は、アリールカルボン酸誘導体、ピラゾール含有誘導体、オキシカム誘導体、およびニコチン酸誘導体などの抗炎症剤である。抗炎症剤のクラスとしては、例えば、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、およびロイコトリエン受容体アンタゴニストが挙げられる。一部の実施形態では、免疫調節剤は、例えばＩＬ−１２などのサイトカインである。
【０２８１】
[00212]  好適なシクロオキシゲナーゼ阻害剤としては、メクロフェナム酸、メフェナム酸、カプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニサル、フェンブフェン、フェノプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ナブメトン、スリンダク、テノキシカム、およびトルメチンが挙げられる。
【０２８２】
[00213]  好適なリポキシゲナーゼ阻害剤としては、酸化還元阻害剤（例えば、カテコールブタン誘導体、ノルジヒドログアイアレチン酸（NDGA）、マソプロコール、フェニドン、イアノパレン（Ianopalen）、インダゾリノン、ナファザトロム（naphazatrom）、ベンゾフラノール、アルキルヒドロキシルアミン）、および非酸化還元阻害剤（例えば、ヒドロキシチアゾール、メトキシアルキルチアゾール、ベンゾピランおよびそれらの誘導体、メトキシテトラヒドロピラン、ボスウェル酸およびボスウェル酸のアセチル化誘導体、ならびにシクロアルキルラジカルで置換されたキノリンメトキシフェニル酢酸）、および酸化還元阻害剤の前駆体が挙げられる。
【０２８３】
[00214]  他の好適なリポキシゲナーゼ阻害剤としては、抗酸化剤（例えば、フェノール、没食子酸プロピル、フラボノイド、および／またはフラボノイドを含む天然に存在する基質、フラボンのヒドロキシル化誘導体、フラボノール、ジヒドロケルセチン、ルテオリン、ガランギン、オロボール、カルコンの誘導体、４，２’，４’−トリヒドロキシカルコン、オルト−アミノフェノール、Ｎ−ヒドロキシ尿素、ベンゾフラノール、エブセレン、および還元性セレン含有酵素の活性を増加される種）、鉄キレート剤（例えば、ヒドロキサム酸およびその誘導体、Ｎ−ヒドロキシ尿素、２−ベンジル−１−ナフトール、カテコール、ヒドロキシルアミン、カルノソール  トロロクスＣ、カテコール、ナフトール、スルファサラジン、ジルオイトン（zyleuton）、５−ヒドロキシアントラニル酸、および４−（オメガ−アリールアルキル）フェニルアルカン酸）、イミダゾール含有化合物（例えば、ケトコナゾールおよびイトラコナゾール）、フェノチアジン、およびベンゾピラン誘導体が挙げられる。
【０２８４】
[00215]  さらに他の好適なリポキシゲナーゼ阻害剤としては、エイコサノイドの阻害剤（例えば、オクタデカテトラエン酸、エイコサテトラエン酸、ドコサペンタエン酸、エイコサヘキサエン酸、およびドコサヘキサエン酸、およびそれらのエステル、PGE1（プロスタグランジンE1）、PGA2（プロスタグランジンA2）、ビプロストール、１５−モノヒドロキシエイコサテトラエン酸、１５−モノヒドロキシ−エイコサトリエン酸、および１５−モノヒドロキシエイコサペンタエン酸、ならびにロイコトリエンB5、C5、およびD5）、カルシウムの流れを妨害する化合物、フェノチアジン、ジフェニルブチルアミン、ベラパミル、フスコシド、クルクミン、クロロゲン酸、コーヒー酸、５，８，１１，１４−エイコサテトライエン酸（eicosatetrayenoic acid）（ETYA）、ヒドロキシフェニルレチナミド、イオナパレン（Ionapalen）、エスクリン、ジエチルカルバマジン、フェナントロリン、バイカレイン、プロキシクロミル（proxicromil）、チオエーテル、硫化ジアリル、およびジ−（１−プロペニル）スルフィドが挙げられる。
【０２８５】
[00216]  ロイコトリエン受容体アンタゴニストとしては、以下のものが挙げられる：カルシトリオール、オンタゾラスト、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｘ−１００５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２５０１９Ｃ、エブセレン、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−２９３１１１、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−４０５７、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−６８８、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ  ＢＩ−ＲＭ−２７０、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ２１３０２４、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ２６４０８６、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ２９２７２８、Ｏｎｏ  ＯＮＯ  ＬＢ４５７、Ｐｆｉｚｅｒ  １０５６９６、Ｐｅｒｄｕｅ  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  ＰＦ１００４２、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＰ６６１５３、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＢ−２０１１４６、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＢ−２０１９９３、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＢ−２０９２４７、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−５３２２８、Ｓｕｍｉｔａｍｏ  ＳＭ１５１７８、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ１２１００６、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｏ−８２７６、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ−９８７、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ−９８７ＢＰＣ−１５ＬＹ２２３９８２、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ２３３５６９、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−２５５２８３、ＭａｃｒｏＮｅｘ  ＭＮＸ−１６０、Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．  ＭＫ−５９１、Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏ．ＭＫ−８８６、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−ＬＢ−４４８、Ｐｕｒｄｕｅ  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  ＰＦ−５９０１、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＧ１４８９３、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＰ６６３６４、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＰ６９６９８、Ｓｈｉｏｎｏｏｇｉ  Ｓ−２４７４、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−４１９３０、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−５０５０５、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−５１１４６、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−５２７９８、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０４４９３、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＳＲ−２５６６、Ｔａｎａｂｅ  Ｔ−７５７、およびＴｅｉｊｉｎ  ＴＥＩ−１３３８。
【０２８６】
[00217]  他の有用な薬物ペイロードとしては、がんの治療に有用な化学化合物が挙げられる。化学療法剤の例としては、以下のものが挙げられる：エルロチニブ（TARCEVA（登録商標）、Genentech/OSI Pharm.）、ボルテゾミブ（VELCADE（登録商標）、Millennium Pharm.）、フルベストラント（FASLODEX（登録商標）、AstraZeneca）、スーテント（SU11248、Pfizer）、レトロゾール（FEMARA（登録商標）、Novartis）、イマチニブメシル酸塩（GLEEVEC（登録商標）、Novartis）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（Novartis）、オキサリプラチン（Eloxatin（登録商標）、Sanofi）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、RAPAMUNE（登録商標）、Wyeth）、ラパチニブ（TYKERB（登録商標）、GSK572016、Glaxo Smith Kline）、ロナファーニブ（SCH 66336）、ソラフェニブ（BAY43-9006、Bayer Labs）、およびゲフィチニブ（IRESSA（登録商標）、AstraZeneca）、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（SU5271; Sugen）、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロスホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドーパ（meturedopa）、およびウレドーパ（uredopa）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン（methylamelamine）；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビセレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログであるKW-2189およびCB1-TM1を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロマファジン（chlomaphazine）、クロロホスファミド（chlorophosphamide）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ranimnustine）などのニトロソウレア（nitrosurea）；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特に、ウンシアラマイシン、カリチアマイシンガンマll、およびカリチアマイシンオメガll（Angew Chem. Intl. Ed. Engl.（1994）33:183-186）などの抗生物質；ジネミシンAを含むジネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン（aclacinomysin）、アクチノマイシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（carabicin）、カミノマイシン（caminomycin）、カルジノフィリン、クロモマイシン（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ��ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ドキソルビシン）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミトマイシンＣなどのミトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン（rodorubicin）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（5-FU）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プラジエノリドＢ、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアムニプリン（thiamniprine）、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗アドレナリン剤；フォリン酸（frolinic acid）などの葉酸補給物質；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート（edatraxate）；デホファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジクオン；エルホルミチン（elformithine）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（lonidainine）；マイタンシンおよびアンサミトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（mopidanmol）；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）ポリサッカリド複合体（JHS Natural Products、ユージーン、オレゴン州）； ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン（sizofuran）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、T-2毒素、ベラクリンA、ロリジンA、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）（パクリタキセル；Bristol-Myers Squibb Oncology、プリンストン、ニュージャージー州）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（クレモフォールフリー）、パクリタキセルのアルブミン加工ナノ粒子製剤（American Pharmaceutical Partners、シャウムベルク、イリノイ州）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル（doxetaxel）；Rhone-Poulenc Rorer、アントニー、フランス）；クロラムブシル（chloranmbucil）；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メ��トレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；エトポシド（VP-16）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（XELODA（登録商標））；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（DMFO）；レチノイン酸などのレチノイド；ならびに上記のもののいずれかの薬学的に許容される塩、酸、および誘導体。
【０２８７】
[00218]  他の有用なペイロードとしては、以下のものが挙げられる：（i）例えば、タモキシフェン（NOLVADEX（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（クエン酸トレミフェン（toremifine citrate））を含む、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体修飾因子（SERM）などの、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤；（ii）例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；Pfizer）、ホルメスタン（formestanie）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；Novartis）、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール；AstraZeneca）など、副腎でのエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；（iii）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン剤；ならびにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；（iv）プロテインキナーゼ阻害剤；（v）脂質キナーゼ阻害剤；（vi）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｌｆ、およびＨ−Ｒａｓなどの異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するもの；（vii）ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ANGIOZYME（登録商標））およびＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；（viii）遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨなどのワクチン；（ix）ベバシズマブ（AVASTIN（登録商標）、Genentech）などの抗血管新生剤；（x）腫瘍におけるポリ（ADPリボース）ポリメラーゼ（PARP）ファミリーのメンバーの活性を調節または阻害するように作用する作用剤（例えば、タラゾパリブ（BMN-673）、イニパリブ（BSI201）、ベリパリブ（ABT-888）、オラパリブ（AZD-2281、商品名LYNPARZA（商標））、ルカパリブ（AG014699）、BGB-290、E7016、E7449、およびCEP-9722）；（xi）腫瘍におけるヒストンデアセチラーゼ（HDAC）ファミリーのメンバーの活性を調節または阻害するように作用する作用剤（例えば、アベキノスタット、エンチノスタット、ギビノスタット（gavinostat）、4SC-202、ACY-241、AR-42、CG200745、CHR-2845、CHR-3996、CXD101、MPT0E028、OBP-801、SHP-141、CUDC-101、KA2507、パノビノスタット、プラシノスタット、キシノスタット、レスミノスタット、リコリノスタット）；（xii）腫瘍におけるミトコンドリア酵素イソクエン酸デヒドロゲナーゼ２型（IDH2）の活性を調節または阻害するように作用する作用剤（例えば、エナシデニブメシル酸塩（CC-90007およびAG-221メシル酸塩）；ならびに（xiii）上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、および誘導体。他の有用なペイロードとしては、例えば、Ｍ���Ｐ−２（マトリックスメタロプロテアーゼ2）阻害剤、ＭＭＰ−９（マトリックス−メタロプロテアーゼ9）阻害剤、ＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼII）阻害剤、およびＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤を含む、抗血管新生剤が挙げられる。本化合物／組成物と組み合わせて使用することができる有用なマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の例としては、ＷＯ９６／３３１７２、ＷＯ９６／２７５８３、ＥＰ８１８４４２、１００４５７８、ＷＯ９８／０７６９７、ＷＯ９８／０３５１６、ＷＯ９８／３４９１８、ＷＯ９８／３４９１５、ＷＯ９８／３３７６８、ＷＯ９８／３０５６６、ＥＰ６０６，０４６、ＥＰ９３１，７８８、ＷＯ９０／０５７１９、ＷＯ９９／５２９１０、ＷＯ９９／５２８８９、ＷＯ９９／２９６６７、ＷＯ９９／０７６７５、ＥＰ９４５８６４、米国特許第５，８６３，９４９号、米国特許第５，８６１，５１０号、およびＥＰ７８０，３８６に記載されている。これらの文献はすべて、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤の例としては、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ZD6474；ＷＯ０１／３２６５１内の実施例2）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（AZD2171；ＷＯ００／４７２１２内の実施例240）、バタラニブ（PTK787；ＷＯ９８／３５９８５）、およびＳＵ１１２４８（スニチニブ；ＷＯ０１／６０８１４）、ならびにＰＣＴ公報ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６、およびＷＯ９８／１３３５４に記載のものなどの化合物）が挙げられる。
【０２８８】
[00219]  ある特定の実施形態では、ペイロードは、抗体または抗体断片である。ある特定の実施形態では、ペイロード抗体または断片は、当業者により認識される免疫グロブリン遺伝子のいずれかによりコードされていてもよい。免疫グロブリン遺伝子としては、これらに限定されないが、κ、λ、α、γ（IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4）、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。この用語は、当業者により認識される完全長抗体および抗体断片ならびにそれらの変異体を含む。代表的な断片としては、これらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆａｂ、および（Fab'）２、単鎖Ｆｖ（scFv）、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、二官能性ハイブリッドポリペプチド、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３、ＣＤＲの組合せ、可変領域、フレームワーク領域、および定常領域などが挙げられる。
【０２８９】
[00220]  ある特定の実施形態では、ペイロードは、１つまたは複数の水溶性ポリマーである。幅広く様々な巨大分子ポリマーおよび他の分子を、本明細書に記載のポリペプチドに連結して、ポリペプチドの生物学的特性をモジュレートし、および／または新しい生物学的特性をポリペプチドに提供することができる。こうした巨大分子ポリマーは、天然コードアミノ酸を介して、非天然コードアミノ酸を介して、または天然もしくは修飾アミノ酸の任意の官能性置換基を介して、または天然もしくは修飾アミノ酸に付加された任意の置換基もしくは官能基を介してポリペプチドに連結されていてもよい。ポリマーの分子量は、これらに限定されないが、約１００Ｄａ〜約１００，０００Ｄａまたはそれよりも大きな幅広い範囲であってもよい。
【０２９０】
[00221]  選択されたポリマーは、それが付着しているタンパク質が、生理学的環境などの水性環境において沈殿しないように水溶性であってもよい。ポリマーは、分岐であってもよくまたは非分岐であってもよい。好ましくは、最終産物調製物の療法使用の場合、ポリマーは、薬学的に許容されることになる。
【０２９１】
[00222]  ある特定の実施形態では、ポリエチレングリコール分子のポリペプチド分子に対する比は様々であろう。同様に、反応混合物中のそれらの濃度も様々であろう。一般に、最適な比（過剰な未反応タンパク質またはポリマーが最小限であるという反応効率の観点で）は、選択されたポリエチレングリコールの分子量および利用可能な反応基の利用可能な数により決定することができる。分子量に関しては、典型的には、ポリマーの分子量が高いほど、タンパク質に付着することができるポリマー分子の数は少なくなる。同様に、こうしたパラメーターを最適化する際には、ポリマーの分岐を考慮に入れるべきである。一般に、分子量が高いほど（または分岐が多いほど）、ポリマー：タンパク質比は高くなる。
【０２９２】
[00223]  水溶性ポリマーは、これらに限定されないが、線状、さ状、または分岐状を含む、任意の構造形態であってもよい。典型的には、水溶性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（PEG）などのポリ（アルキレングリコール）であるが、他の水溶性ポリマーも使用することができる。例として、ＰＥＧを使用して、ある特定の実施形態を説明する。
【０２９３】
[00224]  ＰＥＧは、市販されているか、または当技術分野で周知の方法（Sandler and Karo, Polymer Synthesis, Academic Press, New York, Vol. 3, pages 138-161）に従ってエチレングリコールを開環重合することにより調製することができる周知の水溶性ポリマーである。「ＰＥＧ」という用語は、ＰＥＧのサイズまたは末端修飾に関わりなく、任意のポリエチレングリコール分子を包含するように広義に使用され、式：ＸＯ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｙによりポリペプチドに連結されたものとして表すことができ、式中、ｎは、２〜１０，０００であり、Ｘは、ＨまたはＣ１〜４アルキルを含むがそれらに限定されない末端修飾であり、Ｙは、ポリペプチドとの付着点である。
【０２９４】
[00225]  一部の場合では、ＰＥＧは、一方の末端がヒドロキシまたはメトキシで終端し、すなわち、Ｘは、ＨまたはＣＨ３である（「メトキシPEG」）。その代わりに、ＰＥＧは反応性基で終端し、それにより二官能性ポリマーを形成してもよい。典型的な反応性基としては、２０種の通常アミノ酸に見出される官能基と反応するために一般的に使用される反応性基（マレイミド基、活性化カルボネート（ｐ−ニトロフェニルエステルを含むがこれに限定されない）、活性化エステル（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ｐ−ニトロフェニルエステル、およびアルデヒドを含むがこれらに限定されない）、ならびに２０種の通常アミノ酸に対して不活性であるが、非天然コードアミノ酸に存在する相補的官能基と特異的に反応する官能基（アジド基、アルキン基を含むがこれらに限定されない）を挙げることができる。なお、上記式のＹにより示されているＰＥＧの他方の末端は、天然に存在するアミノ酸または非天然コードアミノ酸を介して、直接的または間接的のいずれかでポリペプチドに付着されることになる。例えば、Ｙは、ポリペプチドのアミン基（リジンのイプシロンアミンまたはN末端を含むがこれらに限定されない）とのアミド連結、カルバメート連結、または尿素連結であってもよい。その代わりに、Ｙは、チオール基（システインのチオール基を含むがそれに限定されない）とのマレイミド結合であってもよい。その代わりに、Ｙは、２０種の通常アミノ酸を介しては一般的に接近可能でない残基との連結であってもよい。例えば、ＰＥＧにあるアジド基を、ポリペプチドのアルキン基と反応させて、ヒュスゲン［３＋２］環化付加産物を形成してもよい。その代わりに、ＰＥＧにあるアルキン基を、本明細書に記載の修飾アミノ酸など、非天然コードアミノ酸に存在するアジド基と反応させて、類似の産物を形成してもよい。一部の実施形態では、強力な求核剤（ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、セミカルバジドを含むがこれらに限定されないが）を、非天然コードアミノ酸に存在するアルデヒド基またはケトン基と反応させて、ヒドラゾン、オキシム、またはセミカルバゾンを形成することができ、必要に応じて、それらを一部の場合では適切な還元剤で処理することによりさらに還元することができる。その代わりに、強力な求核剤を、非天然コードアミノ酸を介してポリペプチドに組み込み、水溶性ポリマーに存在するケトン基またはアルデヒド基と優先的に反応させるために使用することができる。
【０２９５】
[00226]  これらに限定されないが、約１００ダルトン（Da）〜１００，０００Ｄａ、または所望の場合はそれよりも大きな分子量を含む（場合によっては０．１〜５０ｋＤａまたは１０〜４０ｋＤａを含むがこれらに限定されない）、任意の分子量のＰＥＧを、実際に所望の通りに使用することができる。各鎖が１〜１００ｋＤａの範囲（１〜５０ｋＤａまたは５〜２０ｋＤａを含むがこれらに限定されない）のＭＷを有するＰＥＧ分子を含むがそれらに限定されない分岐鎖ＰＥＧも使用することができる。これらに限定されないが、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．のカタログおよびＮｅｋｔａｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓのカタログに、広範囲のＰＥＧ分子が記載されている。これらカタログは参照により本明細書に組み込まれる。
【０２９６】
[00227]  一般に、ＰＥＧ分子の少なくとも１つの末端は、抗体との反応に使用可能である。例えば、アミノ酸側鎖と反応させるためのアルキン部分およびアジド部分を保持するＰＥＧ誘導体を使用して、本明細書に記載の通りにＰＥＧを非天然コードアミノ酸に付着させることができる。非天然コードアミノ酸がアジドを含む場合、ＰＥＧは、典型的には、［３＋２］環化付加産物の形成をもたらすためのアルキン部分、またはアミド連結の形成をもたらすためのホスフィン基を含む活性化ＰＥＧ種（つまり、エステル、カルボネート）のいずれかを含むことになる。その代わりに、非天然コードアミノ酸がアルキンを含む場合、ＰＥＧは、典型的には、［３＋２］ヒュスゲン環化付加産物の形成をもたらすためのアジド部分を含むことになる。非天然コードアミノ酸がカルボニル基を含む場合、ＰＥＧは、典型的には、それぞれヒドラゾン連結、オキシム連結、およびセミカルバゾン連結の形成をもたらすために、強力な求核剤（ヒドラジド、ヒドラジン、ヒドロキシルアミン、またはセミカルバジド官能性を含むがこれらに限定されない）を含むことになる。他の代替法では、本明細書に記載の反応性基の逆の方向性を使用することができる。つまり、非天然コードアミノ酸のアジド部分を、アルキンを含むＰＥＧ誘導体と反応させてもよい。
【０２９７】
[00228]  一部の実施形態では、ＰＥＧ誘導体を有するポリペプチド変異体は、非天然コードアミノ酸の側鎖に存在する化学的官能性と反応性である化学的官能性を含む。
【０２９８】
[00229]  ある特定の実施形態では、ペイロードは、約８００Ｄａ〜約１００，０００Ｄａの平均分子量を有する水溶性ポリマー骨格を含むアジド含有またはアセチレン含有ポリマーである。水溶性ポリマーのポリマー骨格は、ポリ（エチレングリコール）であってもよい。しかしながら、これらに限定されないが、ポリ（エチレン）グリコールならびにポリ（デキストラン）およびポリ（プロピレングリコール）を含む他の関連ポリマーを含む、幅広く様々な水溶性ポリマーも使用に好適であり、ＰＥＧまたはポリ（エチレングリコール）という用語の使用は、すべてのそのような分子を包含および含むことが意図されていることが理解されるべきである。ＰＥＧという用語は、これらに限定されないが、二官能性ＰＥＧ、マルチアームＰＥＧ、誘導体化ＰＥＧ、さ状ＰＥＧ、分岐ＰＥＧ、懸垂ＰＥＧ（つまり、ポリマー骨格に懸垂されている１つまたは複数の官能基を有するＰＥＧまたは関連ポリマー）、またはその中に分解可能な連結を有するＰＥＧを含む、そのあらゆる形態のポリ（エチレングリコール）を含む。
【０２９９】
[00230]  ポリマー骨格は、線状であってもよくまたは分枝状であってもよい。分岐ポリマー骨格は、当技術分野で一般に公知である。典型的には、分岐ポリマーは、中央分岐コア部分、および中央分岐コアに連結された複数の線状ポリマー鎖を有する。ＰＥＧは、一般的に、グリセロール、グリセロールオリゴマー、ペンタエリスリトール、およびソルビトールなどの種々のポリオールにエチレンオキシドを付加することにより調製することができる分岐形態で使用される。また、中央分岐部分は、リジンなどの幾つかのアミノ酸に由来してもよい。分岐ポリ（エチレングリコール）は、基本形態が、Ｒ（−ＰＥＧ−ＯＨ）ｍとして表すことができ、式中、Ｒは、グリセロール、グリセロールオリゴマー、またはペンタエリスリトールなどのコア部分に由来し、ｍはアームの数を表す。また、米国特許第５，９３２，４６２号、第５，６４３，５７５号；第５，２２９，４９０号；第４，２８９，８７２号；米国特許出願公開第２００３／０１４３５９６号；ＷＯ９６／２１４６９；およびＷＯ９３／２１２５９に記載されているものなどのマルチアームＰＥＧ分子をポリマー骨格として使用することができる。これらの文献の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３００】
[00231]  また、分岐ＰＥＧは、ＰＥＧ（−ＹＣＨＺ２）ｎにより表されるさ状ＰＥＧの形態であってもよく、式中、Ｙは連結基であり、Ｚは、規定の長さの原子の鎖によりＣＨに連結された活性化末端基である。
【０３０１】
[00232]  さらに別の分岐形態である懸垂ＰＥＧは、ＰＥＧ鎖の末端ではなくＰＥＧ骨格に沿って、カルボキシルなどの反応性基を有する。
【０３０２】
[00233]  こうした形態のＰＥＧに加えて、ポリマーは、弱い連結または分解可能な連結を骨格に有するように調製することもできる。例えば、加水分解を受け易いポリマー骨格にエステル連結を有するＰＥＧを調製することができる。本明細書に示されているように、この加水分解は、ポリマーがより低い分子量の断片へと切断されることをもたらす：−ＰＥＧ−ＣＯ２−ＰＥＧ−＋Ｈ２Ｏ→ＰＥＧ−ＣＯ２Ｈ＋ＨＯ−ＰＥＧ−。当業者であれば、ポリ（エチレングリコール）またはＰＥＧという用語は、本明細書に開示されているものを含むがそれらに限定されない当技術分野で公知のすべての形態を表すかまたは含むことが理解される。
【０３０３】
[00234]  多くの他のポリマーも使用に好適である。一部の実施形態では、２〜約３００個の末端を有する水溶性ポリマーのポリマー骨格が特に好適である。好適なポリマーの例としては、これらに限定されないが、ポリ（プロピレングリコール）（「PPG」）などの他のポリ（アルキレングリコール）、それらのコポリマー（エチレングリコールおよびプロピレングリコールのコポリマーを含むがこれらに限定されない）、それらのターポリマー、およびそれらの混合物などが挙げられる。ポリマー骨格の各鎖の分子量は様々であってもよいが、典型的には約８００Ｄａ〜約１００，０００Ｄａの、多くの場合は約６，０００Ｄａ〜約８０，０００Ｄａの範囲である。
【０３０４】
[00235]  当業者であれば、実質的に水溶性である骨格の上述のリストは、決して網羅的なものではなく例示に過ぎないこと、および本明細書に記載の品質を有するすべてのポリマー材料が使用に好適であると企図されることを認識するであろう。
【０３０５】
[00236]  一部の実施形態では、ポリマー誘導体は「多官能性」であり、これは、ポリマー骨格が、官能基で官能化または活性化された少なくとも２つの末端、おそらくは約３００個もの末端を有することを意味する。多官能性ポリマー誘導体としては、これらに限定されないが、各末端が、同じであってよくまたは異なっていてもよい官能基に結合されている２つの末端を有する線状ポリマーが挙げられる。
【０３０６】
４．  リンカー
[00237]  ある特定の実施形態では、抗体は、抗体アミノ酸とおよびペイロード基と反応することが可能な１つまたは複数のリンカーによりペイロードに連結されていてもよい。１つまたは複数のリンカーは、当業者にとって明白な任意のリンカーであってもよい。
【０３０７】
[00238]  「リンカー」という用語は、本明細書では、通常は化学反応の結果として形成され、典型的には共有結合連結である基または結合を指すために使用される。
【０３０８】
[00239]  有用なリンカーとしては、本明細書に記載されているものが挙げられる。ある特定の実施形態では、リンカーは、当業者に公知である任意の二価または多価リンカーである。有用な二価リンカーとしては、アルキレン、置換アルキレン、ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン（heteroarlyene）、および置換ヘテロアリーレンが挙げられる。ある特定の実施形態では、リンカーは、Ｃ１〜１０アルキレンまたはＣ１〜１０ヘテロアルキレンである。一部の実施形態では、Ｃ１〜１０ヘテロアルキレンは、ＰＥＧである。
【０３０９】
[00240]  ある特定の実施形態では、リンカーは、加水分解的に安定である。加水分解的に安定な連結とは、連結が水中で実質的に安定であり、長期間にわたって、おそらくは無期限でさえある期間にわたって、生理学的条件下を含むがこれに限定されない条件下における有用なｐＨ値で水と反応しないことを意味する。ある特定の実施形態では、リンカーは、加水分解的に不安定である。加水分解的に不安定なまたは分解可能な連結は、連結が、水中、または例えば血液を含む水性溶液中で分解可能であることを意味する。酵素的に不安定なまたは分解可能な連結は、連結が、1つまたは複数の酵素により分解され得ることを意味する。
【０３１０】
[00241]  当技術分野で理解されているように、ＰＥＧおよび関連ポリマーは、ポリマー骨格に、またはポリマー骨格とポリマー分子の末端官能基の１つもしくは複数との間のリンカー基に分解可能な連結を含んでいてもよい。例えば、ＰＥＧカルボン酸または活性化ＰＥＧカルボン酸と、生物学的活性作用剤にあるアルコール基との反応により形成されるエステル連結は、一般に、生理学的条件下で加水分解して、作用剤を放出する。
【０３１１】
[00242]  他の加水分解的に分解可能な連結としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：カルボネート連結；アミンおよびアルデヒドの反応に起因するイミン結合；アルコールをリン酸基と反応させることにより形成されるリン酸エステル連結；ヒドラジドおよびアルデヒドの反応産物であるヒドラゾン連結；アルデヒドおよびアルコールの反応産物であるアセタール連結；ホルメートおよびアルコールの反応産物であるオルトエステル連結；ＰＥＧなどのポリマーの末端にあるものを含むがこれに限定されないアミン基、およびペプチドのカルボキシル基により形成されるペプチド連結；ならびにポリマーの末端にあるものを含むがこれらに限定されないホスホルアミダイト基、およびオリゴヌクレオチドの５’ヒドロキシル基により形成されるオリゴヌクレオチド連結。
【０３１２】
[00243]  多くの異なる切断可能なリンカーが当業者に公知である。米国特許第４，６１８，４９２号、第４，５４２，２２５号、および第４，６２５，０１４号を参照。こうしたリンカー基から作用剤を放出させる機序としては、例えば、光不安定性結合の照射、および酸触媒加水分解が挙げられる。例えば、米国特許第４，６７１，９５８号は、患者の補体系のタンパク質分解酵素によりｉｎ  ｖｉｖｏで標的部位が切断されるリンカーを含む免疫コンジュゲートの記載を含む。リンカーの長さは、ポリペプチドとそれに連結されている分子との間の所望の空間的関係性に応じて、事前に決定または選択することができる。当業者であれば、様々な放射線診断化合物、放射線療法化合物、薬物、毒素、および他の作用剤をポリペプチドに付着させるための報告されている多数の方法に照らして、所与の作用剤をポリペプチドに付着させるための好適な方法を決定できると予想される。
【０３１３】
[00244]  リンカーは、広範囲の分子量または分子長を有してもよい。より大きなまたはより小さな分子量のリンカーを使用して、ポリペプチドと連結実体との間の所望の空間的関係性または立体構造を提供することができる。より長いまたはより短い分子長を有するリンカーを使用して、ポリペプチドと連結実体との間に所望の空間または可撓性を提供することもできる。同様に、特定の形状または立体構造を有するリンカーを使用して、ポリペプチドがその標的に到達する前または後のいずれかで、ポリペプチドまたは連結実体に特定の形状または立体構造を付与することができる。リンカーの各末端に存在する官能基は、所望の条件下でポリペプチドまたはペイロードの放出をモジュレートするように選択することができる。ポリペプチドと連結実体との間の空間的関係性のこうした最適化は、新しいか、モジュレートされるか、または所望である特性を分子に提供することができる。
【０３１４】
[00245]  一部の実施形態では、本明細書には、ａ）ポリマー骨格の少なくとも第１の末端にあるアジド、アルキン、ヒドラジン、ヒドラジド、ヒドロキシルアミン、またはカルボニル含有部分；およびｂ）ポリマー骨格の第２の末端にある少なくとも第２の官能基を含むダンベル構造を有する水溶性二官能性リンカーが提供される。第２の官能基は、第１の官能基と同じであってもよくまたは異なっていてもよい。一部の実施形態では、第２の官能基は、第１の官能基と反応性ではない。一部の実施形態では、分岐分子構造の少なくとも１つのアームを含む水溶性化合物が提供される。例えば、分岐分子構造は樹状構造であってもよい。
【０３１５】
[00246]  一部の実施形態では、リンカーは、以下ものからなる群から選択されるリンカー前駆体に由来する：Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（SPDP）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（SPP）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（SPDB）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）−２−スルホ−ブタノエート（スルホ-SPDB）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（SIA）、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（SIAB）、マレイミドＰＥＧ  ＮＨＳ、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（SMCC）、Ｎ−スルホスクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（スルホ-SMCC）、または２，５−ジオキソピロリジン−１−イル１７−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）−５，８，１１，１４−テトラオキソ−４，７，１０，１３−テトラアザヘプタデカン−１−オエート（CX1-1）。ある特定の実施形態では、リンカーは、リンカー前駆体Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（SMCC）に由来する。
【０３１６】
[00247]  一部の実施形態では、リンカーは、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、およびペンタペプチドからなる群から選択されるリンカー前駆体に由来する。そのような実施形態では、リンカーは、プロテアーゼにより切断することができる。代表的なジペプチドとしては、これらに限定されないが、バリン−シトルリン（vcまたはval-cit）、アラニン−フェニルアラニン（afまたはala-phe）、フェニルアラニン−リジン（fkまたはphe-lys）、フェニルアラニン−ホモリジン（phe-homolys）、およびＮ−メチル−バリン−シトルリン（Me-val-cit）が挙げられる。代表的なトリペプチドとしては、これらに限定されないが、グリシン−バリン−シトルリン（gly-val-cit）、グリシン−グリシン−グリシン（gly-gly-gly）、およびグリシン−メトキシエトキシエチル）セリン−バリン（gly-val−citalanine OMESerValAla）が挙げられる。
【０３１７】
[00248]  一部の実施形態では、リンカーは、自壊性スペーサーを含む。ある特定の実施形態では、自壊性スペーサーは、ｐ−アミノベンジルを含む。一部の実施形態では、ｐ−アミノベンジルアルコールを、アミド結合を介してアミノ酸単位に付着させ、ベンジルアルコールとペイロードとの間にカルバメート、メチルカルバメート、またはカルボネートを製作する（Hamann et al.（2005）Expert Opin. Ther. Patents（2005）15:1087-1103）。一部の実施形態では、リンカーは、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（PAB）を含む。自壊性スペーサーの他の例としては、これらに限定されないが、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（米国特許第７，３７５，０７８号；Hay et al.（1999）Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237）、およびオルト−またはパラ−アミノベンジルアセタールなどの、ＰＡＢ基と電子的に類似する芳香族化合物が挙げられる。一部の実施形態では、置換および非置換４−アミノ酪酸アミド（Rodrigues et al.（1995）Chemistry Biology 2:223）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Storm et al.（1972）J. Amer. Chem. Soc. 94:5815）、ならびに２−アミノフェニルプルピオン酸アミド（Amsberry, et al.（1990）J. Org. Chem. 55:5867）など、アミド結合加水分解時に環化を起こすスペーサーを使用することができる。薬物とグリシン残基のα−炭素との連結は、コンジュゲートに有用であり得る自壊性スペーサーの別の例である（Kingsbury et al.（1984）J. Med. Chem. 27:1447）。
【０３１８】
[00249]  ある特定の実施形態では、リンカー前駆体を組み合わせて、より大きなリンカーを形成することができる。例えば、ある特定の実施形態では、リンカーは、ジペプチドであるバリン−シトルリンおよびｐ−アミノベンジルオキシカルボニルを含む。これらは、ｃｉｔＶａｌＣｉｔ−−ＰＡＢリンカーとしても参照される。
【０３１９】
[00250]  ある特定の実施形態では、ペイロードは、リンカーに連結されていてもよく、本明細書ではリンカー−ペイロードとして参照される場合があり、１つまたは複数のリンカー基は、抗体アミノ酸基と反応することが可能である。１つまたは複数のリンカーは、当業者にとって明白である任意のリンカーであってもよくまたは本明細書に示されているものであってもよい。
【０３２０】
[00251]  例えば、下記に記載のリンカー前駆体（A）〜（L）など、追加のリンカーが本明細書に開示されている。
【０３２１】
５．  抗体特異性
[00252]  コンジュゲートは、ヒト葉酸受容体アルファと選択的に結合する抗体を含む。一部の態様では、抗体は、ヒト葉酸受容体アルファ（ヒトFOLR1）の細胞外ドメインと選択的に結合する。
【０３２２】
[00253]  一部の実施形態では、抗体は、ヒトＦＯＬＲ１のホモログに結合する。一部の態様では、抗体は、サル、マウス、イヌ、ネコ、ラット、ウシ、ウマ、ヤギ、およびヒツジから選択される種に由来する、ヒトＦＯＬＲ１のホモログに結合する。一部の態様では、ホモログは、カニクイザルホモログである。一部の態様では、ホモログは、マウスまたはマウスアナログである。
【０３２３】
[00254]  一部の実施形態では、抗体は、本開示で提供されるコンセンサス配列により規定される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ配列、ＶＨ配列、またはＶＬ配列、またはそれらの変異体を含む。一部の態様では、変異体は、保存的アミノ酸置換を有する変異体である。
【０３２４】
[00255]  一部の実施形態では、抗体は、アミノ酸残基の数に換算して、特定の長さを有する１つまたは複数のＣＤＲを有する。一部の実施形態では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１は、６、７、または８残基長である。一部の実施形態では、抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１は、４、５、または６残基長である。一部の実施形態では、抗体のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２は、５、６、または７残基長である。一部の実施形態では、抗体のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２は、１６、１７、または１８残基長である。一部の実施形態では、抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３は、１３、１４、１５、１６、または１７残基長である。
【０３２５】
[00256]  一部の態様では、抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ１は、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８残基長である。一部の態様では、抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ２は、６、７、または８残基長である。一部の態様では、抗体のＫａｂａｔ／Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ３は、８、９、または１０残基長である。
【０３２６】
[00257]  一部の実施形態では、抗体は軽鎖を含む。一部の態様では、軽鎖はカッパ軽鎖である。一部の態様では、軽鎖はラムダ軽鎖である。
【０３２７】
[00258]  一部の実施形態では、抗体は重鎖を含む。一部の態様では、重鎖はＩｇＡである。一部の態様では、重鎖はＩｇＤである。一部の態様では、重鎖はＩｇＥである。一部の態様では、重鎖はＩｇＧである。一部の態様では、重鎖はＩｇＭである。一部の態様では、重鎖はＩｇＧ１である。一部の態様では、重鎖はＩｇＧ２である。一部の態様では、重鎖はＩｇＧ３である。一部の態様では、重鎖はＩｇＧ４である。一部の態様では、重鎖はＩｇＡ１である。一部の態様では、重鎖はＩｇＡ２である。
【０３２８】
[00259]  一部の実施形態では、抗体は、抗体断片である。一部の態様では、抗体断片はＦｖ断片である。一部の態様では、抗体断片はＦａｂ断片である。一部の態様では、抗体断片はＦ（ab'）２断片である。一部の態様では、抗体断片はＦａｂ’断片である。一部の態様では、抗体断片は、ｓｃＦｖ（sFv）断片である。一部の態様では、抗体断片はｓｃＦｖ−Ｆｃ断片である。
【０３２９】
[0260]  一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ポリクローナル抗体である。
【０３３０】
[0261]  一部の実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。
【０３３１】
[0262]  一部の実施形態では、抗体は、親和性成熟抗体である。一部の態様では、抗体は、本開示で提供される例示的な配列に由来する親和性成熟抗体である。
【０３３２】
[00263]  本明細書で提供される抗体は、がんを含む様々な疾患および状態の治療に有用であってもよい。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、固形腫瘍のがんの治療に有用であってもよい。例えば、本明細書で提供される抗体は、結腸直腸がんの治療に有用であってもよい。
【０３３３】
５．１  ＣＤＲ−Ｈ３配列
[00264]  一部の実施形態では、抗体は、本明細書で提供される例示的な抗体またはＶＨ配列のＣＤＲ−Ｈ３配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号３０８〜３６６に提供されているＶＨ配列のＣＤＲ−Ｈ３配列である。
【０３３４】
[00265]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列を含む。
【０３３５】
[00266]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３３６】
５．２  例示的なＣＤＲを含むＶＨ配列
[00267]  一部の実施形態では、抗体は、本開示で提供される１つまたは複数の例示的なＣＤＲ−Ｈ配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる１つまたは複数のＣＤＲ−Ｈ配列を含むＶＨ配列、およびその変異体を含む。一部の実施形態では、ＣＤＲ−Ｈ配列は、配列番号３０８〜３６６から選択されるＶＨ配列に提供されている１つまたは複数のＣＤＲ−Ｈ配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０３３７】
５．２．１．  例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲを含むＶＨ配列
[00268]  一部の実施形態では、抗体は、本開示で提供される１つまたは複数の例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる１つまたは複数のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ配列を含むＶＨ配列、およびその変異体を含む。
【０３３８】
５．２．１．１．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３
[00269]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本明細書に提供される例示的な抗体またはＶＨ配列のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号３０８〜３６６に提供されているＶＨ配列のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列である。
【０３３９】
[00270]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５９を含むか、からなるか、または��質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８０��含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。
【０３４０】
５．２．１．２．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２
[00271]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、本明細書に提供される例示的な抗体またはＶＨ配列のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号３０８〜３６６に提供されているＶＨ配列のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列である。
【０３４１】
[00272]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号１８１〜２３９から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２００を含むか、からなるか、または��質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２１��含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。
【０３４２】
５．２．１．３．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１
[00273]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、本明細書に提供される例示的な抗体またはＶＨ配列のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号３０８〜３６６に提供されているＶＨ配列のＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列である。
【０３４３】
[00274]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号６３〜１２１から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１００を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。
【０３４４】
５．２．１．４．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２
[00275]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列、および配列番号１８１〜２３９から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２は両方とも、配列番号３０８〜３６６から選択される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。
【０３４５】
５．２．１．５．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１
[00276]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列、および配列番号６３〜１２１から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１は両方とも、配列番号３０８〜３６６から選択される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。
【０３４６】
５．２．１．６．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２
[00277]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号６３〜１２１から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列、および配列番号１８１〜２３９から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２は両方とも、配列番号３０８〜３６６から選択される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。
【０３４７】
５．２．１．７．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２＋Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３
[00278]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号６３〜１２１から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列、配列番号１８１〜２３９から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列、および配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列、およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列はすべて、本開示で提供される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２、およびＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３はすべて、配列番号３０８〜３６６から選択される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。
【０３４８】
５．２．１．８．  例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲを含むＶＨ配列の変異体
[00279]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＶＨ配列は、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、および／またはＣＤＲ−Ｈ１配列の変異体を含む。
【０３４９】
[00280]  一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３５０】
[00281]  一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３５１】
[00282]  一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３５２】
５．２．２．  例示的なＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲを含むＶＨ配列
[00283]  一部の実施形態では、抗体は、本開示で提供される１つまたは複数の例示的なＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる１つまたは複数のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ配列を含むＶＨ配列、およびその変異体を含む。
【０３５３】
５．２．２．１．  Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３
[00284]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本明細書で提供される例示的な抗体またはＶＨ配列のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号３０８〜３６６に提供されているＶＨ配列のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列である。
【０３５４】
[00285]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶ��配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様���は、抗体は、配列番号２７９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。
【０３５５】
５．２．２．２．  Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２
[00286]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、本明細書で提供される例示的な抗体またはＶＨ配列のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号３０８〜３６６に提供されているＶＨ配列のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列である。
【０３５６】
[00287]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号１２２〜１８０から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶ��配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様���は、抗体は、配列番号１６１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。
【０３５７】
５．２．２．３．  Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１
[00288]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含み、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、本明細書で提供される例示的な抗体またはＶＨ配列のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号３０８〜３６６に提供されているＶＨ配列のＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列である。
【０３５８】
[00289]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号４〜６２から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号１９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２３を含む��、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ��配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号４９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号５９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号６２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。
【０３５９】
５．２．２．４．  ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３＋ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２
[00290]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列、および配列番号１２２〜１８０から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列およびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３およびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２は両方とも、配列番号３０８〜３６６から選択される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。
【０３６０】
５．２．２．５．  ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３＋ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１
[00291]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列、および配列番号４〜６２から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列およびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３およびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１は両方とも、配列番号３０８〜３６６から選択される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。
【０３６１】
５．２．２．６．  ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１＋ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２
[00292]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号４〜６２から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列、および配列番号１２２〜１８０から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列およびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１およびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２は両方とも、配列番号３０８〜３６６から選択される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。
【０３６２】
５．２．２．７．  ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１＋ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２＋ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３
[00293]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号４〜６２から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列、配列番号１２２〜１８０から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列、および配列番号２４０〜２９８から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列を含むＶＨ配列を含む。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列、およびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列はすべて、本開示で提供される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２、およびＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３はすべて、配列番号３０８〜３６６から選択される単一の例示的なＶＨ配列に由来する。
【０３６３】
５．２．２．８．  例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲを含むＶＨ配列の変異体
[00294]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＶＨ配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、および／またはＣＤＲ−Ｈ１配列の変異体を含む。
【０３６４】
[00295]  一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３６５】
[00296]  一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ２配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３６６】
[00297]  一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ−Ｈ１配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３６７】
５．３．  ＶＨ配列
[00298]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０８〜３６６に提供されているＶＨ配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０３６８】
[00299]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０８〜３６６から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３１９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３２９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３３９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３４９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３５９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列を含む。
【０３６９】
５．３．１．  ＶＨ配列の変異体
[00300]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＶＨ配列は、本開示で提供される例示的なＶＨ配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０３７０】
[00301]  一部の態様では、ＶＨ配列は、本開示で提供される例示的なＶＨ配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＶＨ配列は、本開示で提供される例示的なＶＨ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０３７１】
[00302]  一部の実施形態では、ＶＨ配列は、２０個もしくはそれよりも少数の、１９個もしくはそれよりも少数の、１８個もしくはそれよりも少数の、１７個もしくはそれよりも少数の、１６個もしくはそれよりも少数の、1５個もしくはそれよりも少数の、１４個もしくはそれよりも少数の、１３個もしくはそれよりも少数の、１２個もしくはそれよりも少数の、１１個もしくはそれよりも少数の、１０個もしくはそれよりも少数の、９個もしくはそれよりも少数の、８個もしくはそれよりも少数の、７個もしくはそれよりも少数の、６個もしくはそれよりも少数の、５個もしくはそれよりも少数の、４個もしくはそれよりも少数の、３個もしくはそれよりも少数の、２個もしくはそれよりも少数の、または１個もしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＶＨ配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３７２】
５．４．  ＣＤＲ−Ｌ３配列
[00303]  一部の実施形態では、抗体は、本明細書で提供される例示的な抗体またはＶＬ配列のＣＤＲ−Ｌ３配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３６７〜３６９に提供されているＶＬ配列のＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０３７３】
[00304]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０５〜３０７から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。
【０３７４】
[00305]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３７５】
５．５．  例示的なＣＤＲを含むＶＬ配列
[00306]  一部の実施形態では、抗体は、本開示で提供される１つまたは複数の例示的なＣＤＲ−Ｌ配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる１つまたは複数のＣＤＲ−Ｌ配列を含むＶＬ配列、およびその変異体を含む。
【０３７６】
５．５．１．  ＣＤＲ−Ｌ３
[00307]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｌ３配列を含むＶＬ配列を含み、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本明細書で提供される例示的な抗体またはＶＬ配列のＣＤＲ−Ｌ３配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３６７〜３６９に提供されているＶＬ配列のＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０３７７】
[00308]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０５〜３０７から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含むＶＬ配列を含む。
【０３７８】
５．５．２．  ＣＤＲ−Ｌ２
[00309]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含み、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、本明細書で提供される例示的な抗体またはＶＬ配列のＣＤＲ−Ｌ２配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３６７〜３６９に提供されているＶＬ配列のＣＤＲ−Ｌ２配列である。
【０３７９】
[00310]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０２〜３０４から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０３を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。
【０３８０】
５．５．３．  ＣＤＲ−Ｌ１
[00311]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１配列を含むＶＬ配列を含み、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、本明細書で提供される例示的な抗体またはＶＬ配列のＣＤＲ−Ｌ１配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号３６７〜３６９に提供されているＶＬ配列のＣＤＲ−Ｌ１配列である。
【０３８１】
[00312]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２９９〜３０１から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号２９９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３００を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列を含むＶＬ配列を含む。
【０３８２】
５．５．４．  ＣＤＲ−Ｌ３＋ＣＤＲ−Ｌ２
[00313]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０５〜３０７から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列、および配列番号３０２〜３０４から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列およびＣＤＲ−Ｌ２配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＬ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３およびＣＤＲ−Ｌ２は両方とも、配列番号３６７〜３６９から選択される単一の例示的なＶＬ配列に由来する。
【０３８３】
５．５．５．  ＣＤＲ−Ｌ３＋ＣＤＲ−Ｌ１
[00314]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０５〜３０７から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列、および配列番号２９９〜３０１から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列およびＣＤＲ−Ｌ１配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＬ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３およびＣＤＲ−Ｌ１は両方とも、配列番号３６７〜３６９から選択される単一の例示的なＶＬ配列に由来する。
【０３８４】
５．５．６．  ＣＤＲ−Ｌ１＋ＣＤＲ−Ｌ２
[00315]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２９９〜３０１から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列、および配列番号３０２〜３０４から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列およびＣＤＲ−Ｌ２配列は両方とも、本開示で提供される単一の例示的なＶＬ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１およびＣＤＲ−Ｌ２は両方とも、配列番号３６７〜３６９から選択される単一の例示的なＶＬ配列に由来する。
【０３８５】
５．５．７．  ＣＤＲ−Ｌ１＋ＣＤＲ−Ｌ２＋ＣＤＲ−Ｌ３
[00316]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号２９９〜３０１から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列、配列番号３０２〜３０４から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列、および配列番号３０５〜３０７から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列を含むＶＬ配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、およびＣＤＲ−Ｌ３配列はすべて、本開示で提供される単一の例示的なＶＬ配列に由来する。例えば、一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３はすべて、配列番号３６７〜３６９から選択される単一の例示的なＶＬ配列に由来する。
【０３８６】
５．５．８．  例示的なＣＤＲ−Ｌを含むＶＬ配列の変異体
[00317]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＶＬ配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、および／またはＣＤＲ−Ｌ１配列の変異体を含む。
【０３８７】
[00318]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３８８】
[00319]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３８９】
[00320]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３９０】
５．６．  ＶＬ配列
[00321]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３６７〜３６９に提供されているＶＬ配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０３９１】
[00322]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３６７〜３６９から選択される配列を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＬ配列を含む。一部の態様では、抗体は、配列番号３６９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＬ配列を含む。
【０３９２】
５．６．１．  ＶＬ配列の変異体
[00323]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＶＬ配列は、本開示で提供される例示的なＶＬ配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０３９３】
[00324]  一部の態様では、ＶＬ配列は、本開示で提供される例示的なＶＬ配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＶＬ配列は、本開示で提供される例示的なＶＬ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０３９４】
[00325]  一部の実施形態では、ＶＬ配列は、２０個もしくはそれよりも少数の、１９個もしくはそれよりも少数の、１８個もしくはそれよりも少数の、１７個もしくはそれよりも少数の、１６個もしくはそれよりも少数の、1５個もしくはそれよりも少数の、１４個もしくはそれよりも少数の、１３個もしくはそれよりも少数の、１２個もしくはそれよりも少数の、１１個もしくはそれよりも少数の、１０個もしくはそれよりも少数の、９個もしくはそれよりも少数の、８個もしくはそれよりも少数の、７個もしくはそれよりも少数の、６個もしくはそれよりも少数の、５個もしくはそれよりも少数の、４個もしくはそれよりも少数の、３個もしくはそれよりも少数の、２個もしくはそれよりも少数の、または１個もしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＶＬ配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０３９５】
５．７．  対
５．７．１．  ＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対
[00326]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ３配列およびＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列はＶＨの一部であり、ＣＤＲ−Ｌ３配列はＶＬの一部である。
【０３９６】
[00327]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号２４０〜２９８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列であり、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３０５〜３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０３９７】
[00328]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対は、配列番号３０５および配列番号２４０；配列番号３０５および配列番号２４１；配列番号３０５および配列番号２４２；配列番号３０５および配列番号２４３；配列番号３０５および配列番号２４４；配列番号３０５および配列番号２４５；配列番号３０５および配列番号２４６；配列番号３０５および配列番号２４７；配列番号３０５および配列番号２４８；配列番号３０５および配列番号２４９；配列番号３０５および配列番号２５０；配列番号３０５および配列番号２５１；配列番号３０５および配列番号２５２；配列番号３０５および配列番号２５３；配列番号３０５および配列番号２５４；配列番号３０５および配列番号２５５；配列番号３０５および配列番号２５６；配列番号３０５および配列番号２５７；配列番号３０５および配列番号２５８；配列番号３０５および配列番号２５９；配列番号３０５および配列番号２６０；配列番号３０５および配列番号２６１；配列番号３０５および配列番号２６２；配列番号３０５および配列番号２６３；配列番号３０５および配列番号２６４；配列番号３０５および配列番号２６５；配列番号３０５および配列番号２６６；配列番号３０５および配列番号２６７；配列番号３０５および配列番号２６８；配列番号３０５および配列番号２６９；配列番号３０５および配列番号２７０；配列番号３０５および配列番号２７１；配列番号３０５および配列番号２７２；配列番号３０５および配列番号２７３；配列番号３０５および配列番号２７４；配列番号３０５および配列番号２７５；配列番号３０５および配列番号２７６；配列番号３０５および配列番号２７７；配列番号３０５および配列番号２７８；配列番号３０５および配列番号２７９；配列番号３０５および配列番号２８０；配列番号３０５および配列番号２８１；配列番号３０５および配列番号２８２；配列番号３０５および配列番号２８３；配列番号３０５および配列番号２８４；配列番号３０５および配列番号２８５；配列番号３０５および配列番号２８６；配列番号３０５および配列番号２８７；配列番号３０５および配列番号２８８；配列番号３０５および配列番号２８９；配列番号３０５および配列番号２９０；配列番号３０５および配列番号２９１；配列番号３０５および配列番号２９２；配列番号３０５および配列番号２９３；配列番号３０５および配列番号２９４；配列番号３０５および配列番号２９５；配列番号３０５および配列番号２９６；配列番号３０５および配列番号２９７；および配列番号３０５および配列番号２９８から選択される。
【０３９８】
[00329]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対は、配列番号３０６および配列番号２４０；配列番号３０６および配列番号２４１；配列番号３０６および配列番号２４２；配列番号３０６および配列番号２４３；配列番号３０６および配列番号２４４；配列番号３０６および配列番号２４５；配列番号３０６および配列番号２４６；配列番号３０６および配列番号２４７；配列番号３０６および配列番号２４８；配列番号３０６および配列番号２４９；配列番号３０６および配列番号２５０；配列番号３０６および配列番号２５１；配列番号３０６および配列番号２５２；配列番号３０６および配列番号２５３；配列番号３０６および配列番号２５４；配列番号３０６および配列番号２５５；配列番号３０６および配列番号２５６；配列番号３０６および配列番号２５７；配列番号３０６および配列番号２５８；配列番号３０６および配列番号２５９；配列番号３０６および配列番号２６０；配列番号３０６および配列番号２６１；配列番号３０６および配列番号２６２；配列番号３０６および配列番号２６３；配列番号３０６および配列番号２６４；配列番号３０６および配列番号２６５；配列番号３０６および配列番号２６６；配列番号３０６および配列番号２６７；配列番号３０６および配列番号２６８；配列番号３０６および配列番号２６９；配列番号３０６および配列番号２７０；配列番号３０６および配列番号２７１；配列番号３０６および配列番号２７２；配列番号３０６および配列番号２７３；配列番号３０６および配列番号２７４；配列番号３０６および配列番号２７５；配列番号３０６および配列番号２７６；配列番号３０６および配列番号２７７；配列番号３０６および配列番号２７８；配列番号３０６および配列番号２７９；配列番号３０６および配列番号２８０；配列番号３０６および配列番号２８１；配列番号３０６および配列番号２８２；配列番号３０６および配列番号２８３；配列番号３０６および配列番号２８４；配列番号３０６および配列番号２８５；配列番号３０６および配列番号２８６；配列番号３０６および配列番号２８７；配列番号３０６および配列番号２８８；配列番号３０６および配列番号２８９；配列番号３０６および配列番号２９０；配列番号３０６および配列番号２９１；配列番号３０６および配列番号２９２；配列番号３０６および配列番号２９３；配列番号３０６および配列番号２９４；配列番号３０６および配列番号２９５；配列番号３０６および配列番号２９６；配列番号３０６および配列番号２９７；および配列番号３０６および配列番号２９８から選択される。
【０３９９】
[00330]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対は、配列番号３０７および配列番号２４０；配列番号３０７および配列番号２４１；配列番号３０７および配列番号２４２；配列番号３０７および配列番号２４３；配列番号３０７および配列番号２４４；配列番号３０７および配列番号２４５；配列番号３０７および配列番号２４６；配列番号３０７および配列番号２４７；配列番号３０７および配列番号２４８；配列番号３０７および配列番号２４９；配列番号３０７および配列番号２５０；配列番号３０７および配列番号２５１；配列番号３０７および配列番号２５２；配列番号３０７および配列番号２５３；配列番号３０７および配列番号２５４；配列番号３０７および配列番号２５５；配列番号３０７および配列番号２５６；配列番号３０７および配列番号２５７；配列番号３０７および配列番号２５８；配列番号３０７および配列番号２５９；配列番号３０７および配列番号２６０；配列番号３０７および配列番号２６１；配列番号３０７および配列番号２６２；配列番号３０７および配列番号２６３；配列番号３０７および配列番号２６４；配列番号３０７および配列番号２６５；配列番号３０７および配列番号２６６；配列番号３０７および配列番号２６７；配列番号３０７および配列番号２６８；配列番号３０７および配列番号２６９；配列番号３０７および配列番号２７０；配列番号３０７および配列番号２７１；配列番号３０７および配列番号２７２；配列番号３０７および配列番号２７３；配列番号３０７および配列番号２７４；配列番号３０７および配列番号２７５；配列番号３０７および配列番号２７６；配列番号３０７および配列番号２７７；配列番号３０７および配列番号２７８；配列番号３０７および配列番号２７９；配列番号３０７および配列番号２８０；配列番号３０７および配列番号２８１；配列番号３０７および配列番号２８２；配列番号３０７および配列番号２８３；配列番号３０７および配列番号２８４；配列番号３０７および配列番号２８５；配列番号３０７および配列番号２８６；配列番号３０７および配列番号２８７；配列番号３０７および配列番号２８８；配列番号３０７および配列番号２８９；配列番号３０７および配列番号２９０；配列番号３０７および配列番号２９１；配列番号３０７および配列番号２９２；配列番号３０７および配列番号２９３；配列番号３０７および配列番号２９４；配列番号３０７および配列番号２９５；配列番号３０７および配列番号２９６；配列番号３０７および配列番号２９７；および配列番号３０７および配列番号２９８から選択される。
【０４００】
５．７．１．１．  ＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対の変異体
[00331]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤＲ−Ｈ３−ＣＤＲ−Ｌ３対は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列および／またはＣＤＲ−Ｌ１配列の変異体を含む。
【０４０１】
[00332]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４０２】
[00333]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４０３】
５．７．２．  ＣＤＲ−Ｈ１−ＣＤＲ−Ｌ１対
[00334]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１配列およびＣＤＲ−Ｌ１配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列はＶＨの一部であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列はＶＬの一部である。
【０４０４】
[00335]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号４〜６２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２９９〜３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列である。
【０４０５】
[00336]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号６３〜１２１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２９９〜３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列である。
【０４０６】
５．７．２．１．  ＣＤＲ−Ｈ１−ＣＤＲ−Ｌ１対の変異体
[00337]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤＲ−Ｈ１−ＣＤＲ−Ｌ１対は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ１配列および／またはＣＤＲ−Ｌ１配列の変異体を含む。
【０４０７】
[00338]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ１配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ１配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ１配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４０８】
[00339]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４０９】
５．７．３．  ＣＤＲ−Ｈ２−ＣＤＲ−Ｌ２対
[00340]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ２配列およびＣＤＲ−Ｌ２配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ２配列はＶＨの一部であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列はＶＬの一部である。
【０４１０】
[00341]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１２２〜１８０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３０２〜３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列である。
【０４１１】
[00342]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号１８１〜２３９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３０２〜３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列である。
【０４１２】
５．７．３．１．  ＣＤＲ−Ｈ２−ＣＤＲ−Ｌ２対の変異体
[00343]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤＲ−Ｈ２−ＣＤＲ−Ｌ２対は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ２配列および／またはＣＤＲ−Ｌ２配列の変異体を含む。
【０４１３】
[00344]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ２配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ２配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ２配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４１４】
[00345]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４１５】
５．７．４．  ＶＨ−ＶＬ対
[00346]  一部の実施形態では、抗体は、ＶＨ配列およびＶＬ配列を含む。
【０４１６】
[00347]  一部の態様では、ＶＨ配列は、配列番号３０８〜３６６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＨ配列であり、ＶＬ配列は、配列番号３６７〜３６９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＶＬ配列である。
【０４１７】
[00348]  一部の態様では、ＶＨ−ＶＬ対は、配列番号３６７および配列番号３０８；配列番号３６７および配列番号３０９；配列番号３６７および配列番号３１０；配列番号３６７および配列番号３１１；配列番号３６７および配列番号３１２；配列番号３６７および配列番号３１３；配列番号３６７および配列番号３１４；配列番号３６７および配列番号３１５；配列番号３６７および配列番号３１６；配列番号３６７および配列番号３１７；配列番号３６７および配列番号３１８；配列番号３６７および配列番号３１９；配列番号３６７および配列番号３２０；配列番号３６７および配列番号３２１；配列番号３６７および配列番号３２２；配列番号３６７および配列番号３２３；配列番号３６７および配列番号３２４；配列番号３６７および配列番号３２５；配列番号３６７および配列番号３２６；配列番号３６７および配列番号３２７；配列番号３６７および配列番号３２８；配列番号３６７および配列番号３２９；配列番号３６７および配列番号３３０；配列番号３６７および配列番号３３１；配列番号３６７および配列番号３３２；配列番号３６７および配列番号３３３；配列番号３６７および配列番号３３４；配列番号３６７および配列番号３３５；配列番号３６７および配列番号３３６；配列番号３６７および配列番号３３７；配列番号３６７および配列番号３３８；配列番号３６７および配列番号３３９；配列番号３６７および配列番号３４０；配列番号３６７および配列番号３４１；配列番号３６７および配列番号３４２；配列番号３６７および配列番号３４３；配列番号３６７および配列番号３４４；配列番号３６７および配列番号３４５；配列番号３６７および配列番号３４６；配列番号３６７および配列番号３４７；配列番号３６７および配列番号３４８；配列番号３６７および配列番号３４９；配列番号３６７および配列番号３５０；配列番号３６７および配列番号３５１；配列番号３６７および配列番号３５２；配列番号３６７および配列番号３５３；配列番号３６７および配列番号３５４；配列番号３６７および配列番号３５５；配列番号３６７および配列番号３５６；配列番号３６７および配列番号３５７；配列番号３６７および配列番号３５８；配列番号３６７および配列番号３５９；配列番号３６７および配列番号３６０；配列番号３６７および配列番号３６１；配列番号３６７および配列番号３６２；配列番号３６７および配列番号３６３；配列番号３６７および配列番号３６４；配列番号３６７および配列番号３６５；および配列番号３６７および配列番号３６６から選択される。
【０４１８】
[00349]  一部の態様では、ＶＨ−ＶＬ対は、配列番号３６８および配列番号３０８；配列番号３６８および配列番号３０９；配列番号３６８および配列番号３１０；配列番号３６８および配列番号３１１；配列番号３６８および配列番号３１２；配列番号３６８および配列番号３１３；配列番号３６８および配列番号３１４；配列番号３６８および配列番号３１５；配列番号３６８および配列番号３１６；配列番号３６８および配列番号３１７；配列番号３６８および配列番号３１８；配列番号３６８および配列番号３１９；配列番号３６８および配列番号３２０；配列番号３６８および配列番号３２１；配列番号３６８および配列番号３２２；配列番号３６８および配列番号３２３；配列番号３６８および配列番号３２４；配列番号３６８および配列番号３２５；配列番号３６８および配列番号３２６；配列番号３６８および配列番号３２７；配列番号３６８および配列番号３２８；配列番号３６８および配列番号３２９；配列番号３６８および配列番号３３０；配列番号３６８および配列番号３３１；配列番号３６８および配列番号３３２；配列番号３６８および配列番号３３３；配列番号３６８および配列番号３３４；配列番号３６８および配列番号３３５；配列番号３６８および配列番号３３６；配列番号３６８および配列番号３３７；配列番号３６８および配列番号３３８；配列番号３６８および配列番号３３９；配列番号３６８および配列番号３４０；配列番号３６８および配列番号３４１；配列番号３６８および配列番号３４２；配列番号３６８および配列番号３４３；配列番号３６８および配列番号３４４；配列番号３６８および配列番号３４５；配列番号３６８および配列番号３４６；配列番号３６８および配列番号３４７；配列番号３６８および配列番号３４８；配列番号３６８および配列番号３４９；配列番号３６８および配列番号３５０；配列番号３６８および配列番号３５１；配列番号３６８および配列番号３５２；配列番号３６８および配列番号３５３；配列番号３６８および配列番号３５４；配列番号３６８および配列番号３５５；配列番号３６８および配列番号３５６；配列番号３６８および配列番号３５７；配列番号３６８および配列番号３５８；配列番号３６８および配列番号３５９；配列番号３６８および配列番号３６０；配列番号３６８および配列番号３６１；配列番号３６８および配列番号３６２；配列番号３６８および配列番号３６３；配列番号３６８および配列番号３６４；配列番号３６８および配列番号３６５；および配列番号３６８および配列番号３６６から選択される。
【０４１９】
[00350]  一部の態様では、ＶＨ−ＶＬ対は、配列番号３６９および配列番号３０８；配列番号３６９および配列番号３０９；配列番号３６９および配列番号３１０；配列番号３６９および配列番号３１１；配列番号３６９および配列番号３１２；配列番号３６９および配列番号３１３；配列番号３６９および配列番号３１４；配列番号３６９および配列番号３１５；配列番号３６９および配列番号３１６；配列番号３６９および配列番号３１７；配列番号３６９および配列番号３１８；配列番号３６９および配列番号３１９；配列番号３６９および配列番号３２０；配列番号３６９および配列番号３２１；配列番号３６９および配列番号３２２；配列番号３６９および配列番号３２３；配列番号３６９および配列番号３２４；配列番号３６９および配列番号３２５；配列番号３６９および配列番号３２６；配列番号３６９および配列番号３２７；配列番号３６９および配列番号３２８；配列番号３６９および配列番号３２９；配列番号３６９および配列番号３３０；配列番号３６９および配列番号３３１；配列番号３６９および配列番号３３２；配列番号３６９および配列番号３３３；配列番号３６９および配列番号３３４；配列番号３６９および配列番号３３５；配列番号３６９および配列番号３３６；配列番号３６９および配列番号３３７；配列番号３６９および配列番号３３８；配列番号３６９および配列番号３３９；配列番号３６９および配列番号３４０；配列番号３６９および配列番号３４１；配列番号３６９および配列番号３４２；配列番号３６９および配列番号３４３；配列番号３６９および配列番号３４４；配列番号３６９および配列番号３４５；配列番号３６９および配列番号３４６；配列番号３６９および配列番号３４７；配列番号３６９および配列番号３４８；配列番号３６９および配列番号３４９；配列番号３６９および配列番号３５０；配列番号３６９および配列番号３５１；配列番号３６９および配列番号３５２；配列番号３６９および配列番号３５３；配列番号３６９および配列番号３５４；配列番号３６９および配列番号３５５；配列番号３６９および配列番号３５６；配列番号３６９および配列番号３５７；配列番号３６９および配列番号３５８；配列番号３６９および配列番号３５９；配列番号３６９および配列番号３６０；配列番号３６９および配列番号３６１；配列番号３６９および配列番号３６２；配列番号３６９および配列番号３６３；配列番号３６９および配列番号３６４；配列番号３６９および配列番号３６５；および配列番号３６９および配列番号３６６から選択される。
【０４２０】
５．７．４．１．  ＶＨ−ＶＬ対の変異体
[00351]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＶＨ−ＶＬ対は、本開示で提供される例示的なＶＨ配列および／またはＶＬ配列の変異体を含む。
【０４２１】
[00352]  一部の態様では、ＶＨ配列は、本開示で提供される例示的なＶＨ配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＶＨ配列は、本開示で提供される例示的なＶＨ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．１％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０４２２】
[00353]  一部の実施形態では、ＶＨ配列は、２０個もしくはそれよりも少数の、１９個もしくはそれよりも少数の、１８個もしくはそれよりも少数の、１７個もしくはそれよりも少数の、１６個もしくはそれよりも少数の、１５個もしくはそれよりも少数の、１４個もしくはそれよりも少数の、１３個もしくはそれよりも少数の、１２個もしくはそれよりも少数の、１１個もしくはそれよりも少数の、１０個もしくはそれよりも少数の、９個もしくはそれよりも少数の、８個もしくはそれよりも少数の、７個もしくはそれよりも少数の、６個もしくはそれよりも少数の、５個もしくはそれよりも少数の、４個もしくはそれよりも少数の、３個もしくはそれよりも少数の、２個もしくはそれよりも少数の、または１個もしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＶＨ配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４２３】
[00354]  一部の態様では、ＶＬ配列は、本開示で提供される例示的なＶＬ配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＶＬ配列は、本開示で提供される例示的なＶＬ配列のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。
【０４２４】
[00355]  一部の実施形態では、ＶＬ配列は、２０個もしくはそれよりも少数の、１９個もしくはそれよりも少数の、１８個もしくはそれよりも少数の、１７個もしくはそれよりも少数の、１６個もしくはそれよりも少数の、１５個もしくはそれよりも少数の、１４個もしくはそれよりも少数の、１３個もしくはそれよりも少数の、１２個もしくはそれよりも少数の、１１個もしくはそれよりも少数の、１０個もしくはそれよりも少数の、９個もしくはそれよりも少数の、８個もしくはそれよりも少数の、７個もしくはそれよりも少数の、６個もしくはそれよりも少数の、５個もしくはそれよりも少数の、４個もしくはそれよりも少数の、３個もしくはそれよりも少数の、２個もしくはそれよりも少数の、または１個もしくはそれよりも少数のアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＶＬ配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４２５】
５．８．  ６つすべてのＣＤＲを含む抗体
[00356]  一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、およびＣＤＲ−Ｌ３配列を含む。一部の態様では、ＣＤＲ配列は、ＶＨ（ＣＤＲ−Ｈの場合）またはＶＬ（ＣＤＲ−Ｌの場合）の一部である。
【０４２６】
[00357]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号４〜６２を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列であり、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１２２〜１８０を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列であり、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号２４０〜２９８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２９９〜３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３０２〜３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列であり、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３０５〜３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０４２７】
[00358]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号１９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列であり、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１３７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列であり、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号２５５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２９９〜３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３０２〜３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列であり、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３０５〜３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０４２８】
[00359]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号５８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列であり、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１７６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列であり、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号２９４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２９９〜３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３０２〜３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列であり、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３０５〜３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０４２９】
[00360]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号６３〜１２１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列であり、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１８１〜２３９を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列であり、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号２４０〜２９８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２９９〜３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３０２〜３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列であり、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３０５〜３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０４３０】
[00361]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号７８を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列であり、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号１９６を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列であり、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号２５５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２９９〜３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３０２〜３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列であり、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３０５〜３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０４３１】
[00362]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、配列番号１１７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列であり、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、配列番号２３５を含むか、からなるか、または本質的にからなるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列であり、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、配列番号２９４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｈ３配列であり、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、配列番号２９９〜３０１を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ１配列であり、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、配列番号３０２〜３０４を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ２配列であり、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、配列番号３０５〜３０７を含むか、からなるか、または本質的にからなるＣＤＲ−Ｌ３配列である。
【０４３２】
５．８．１．  ６つすべてのＣＤＲを含む抗体の変異体
[00363]  一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、およびＣＤＲ−Ｌ３は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ１配列、ＣＤＲ−Ｈ２配列、ＣＤＲ−Ｈ３配列、ＣＤＲ−Ｌ１配列、ＣＤＲ−Ｌ２配列、および／またはＣＤＲ−Ｌ３配列の変異体を含む。
【０４３３】
[00364]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ１配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４３４】
[00365]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ２配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣｈｏｔｈｉａまたはＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４３５】
[00366]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｈ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｈ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４３６】
[00367]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ１配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ１配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４３７】
[00368]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ２配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ２配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４３８】
[00369]  一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列の変異体を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列のいずれかと少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％同一性を有する配列を含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、ＣＤＲ−Ｌ３配列は、１、２、または３つのアミノ酸置換を有する、本開示で提供される例示的なＣＤＲ−Ｌ３配列のいずれかを含むか、からなるか、または本質的にからなる。一部の態様では、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
【０４３９】
５．９．  コンセンサス配列
[00370]  一部の実施形態では、本明細書には、コンセンサス配列により規定される１つまたは複数の配列を含む抗ＦＯＬＲ１抗体が提供される。各コンセンサス配列は、少なくとも部分的には、本開示で提供される２つまたはそれよりも多くの有用な抗ＦＯＬＲ１  ＣＤＲ配列の１つまたは複数のアラインメントに基づく。そのようなアラインメントに基づくと、当業者であれば、ＣＤＲのある特定の位置では異なるアミノ酸残基が有用であり得ることを認識するであろう。したがって、各コンセンサス配列は、２つまたはそれよりも多くの有用な抗ＦＯＬＲ１  ＣＤＲ配列を包含する。
【０４４０】
[00371]  一部の実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるコンセンサスＣＤＲ配列のうちの１つ〜６つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるコンセンサスＣＤＲ配列のうちの２つ〜６つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるコンセンサスＣＤＲ配列のうちの３つ〜６つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるコンセンサスＣＤＲ配列のうちの４つ〜６つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるコンセンサスＣＤＲ配列のうちの５つ〜６つを含む。一部の実施形態では、抗体は、本明細書で提供されるコンセンサスＣＤＲ配列のうちの６つを含む。一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｌコンセンサス配列を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈコンセンサス配列を含むＶＨを含む。一部の実施形態では、抗体は、ＣＤＲ−Ｈコンセンサス配列を含むＶＨおよびＣＤＲ−Ｌコンセンサス配列を含むＶＬを含む。
【０４４１】
５．９．１．  ＣＤＲ−Ｈ３コンセンサス配列
[00372]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列Ｇ−α２−α３−α４−Ｗ−α６−α７−Ｇ−α９−α１０−Ｙ−α１２−α１３−α１４−Ｙにより規定されるＣＤＲ−Ｈ３配列を含み、式中、α２は、Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｒ、Ｔ、またはＹであり、α３は、Ｗ、Ｌ、またはＹであり、α４は、Ｓ、Ａ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、またはＤであり、α６は、Ｒ、Ｐ、Ｑ、またはＫであり、α７は、Ｓ、Ａ、またはＨであり、α９は、Ｙ、Ｈ、またはＭであり、α１０は、Ｇ、Ｓ、Ｄ、またはＷであり、α１２は、ＹまたはＦであり、α１３は、Ｌ、Ｉ、Ｑ、またはＭであり、α１４は、ＤまたはＥである。
【０４４２】
[00373]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列Ｇ−α２−α３−α４−Ｗ−α６−α７−Ｇ−α９−α１０−Ｙ−α１２−α１３−α１４−Ｙにより規定されるＣＤＲ−Ｈ３配列を含み、式中、α２はＧまたはＳであり、α３はＷであり、α４はＳまたはＨであり、α６はＲまたはＰであり、α７はＳであり、α９はＹまたはＭであり、α１０は、Ｇ、Ｓ、またはＤであり、α１２はＹであり、α１３はＬであり、α１４はＤである。
【０４４３】
５．９．２．  Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列
[00374]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列γ１−γ２−γ３−γ４−γ５−γ６−γ７により規定されるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含み、式中、γ１はＧまたはＳであり、γ２はＦまたはＳであり、γ３はＮであり、γ４はＩまたはＴであり、γ５は、Ｓ、Ｒ、Ｇ、Ｔ、Ｎ、またはＤであり、γ６は、Ｎ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｈ、Ｙ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、またはＶであり、γ７は、Ｙ、Ｈ、Ｓ、Ｎ、Ｋ、Ｆ、またはＱである。
【０４４４】
[00375]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列γ1−γ2−γ3−γ4−γ5−γ6−γ7により規定されるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含み、式中、γ１はＧであり、γ２はＦであり、γ３はＮであり、γ４はＩまたはＴであり、γ５は、Ｓ、Ｒ、またはＴであり、γ６はＮまたはＴであり、γ７は、Ｙ、Ｋ、またはＱである。
【０４４５】
５．９．３．  Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２コンセンサス配列
[00376]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列ε１−ε２−ε３−ε４−ε５−ε６により規定されるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含み、式中、ε１は、Ｙ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、またはＡであり、ε２はＰであり、ε３は、Ｎ、Ｉ、Ｖ、Ｒ、Ｙ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｑ、またはＳであり、ε４はＤまたはＰであり、ε５はＧまたはＤであり、ε６は、Ｙ、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｆ、Ｓ、またはＭである。
【０４４６】
[00377]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列ε１−ε２−ε３−ε４−ε５−ε６により規定されるＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含み、式中、ε１はＹまたはＦであり、ε２はＰであり、ε３は、Ｎ、Ｉ、またはＲであり、ε４はＤであり、ε５はＧであり、ε６はＹまたはＩである。
【０４４７】
５．９．４．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１コンセンサス配列
[00378]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列ζ１−ζ２−ζ３−ζ４−ζ５により規定されるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含み、式中、ζ１は、Ｎ、Ｋ、Ｔ、Ｒ、Ｈ、Ｙ、Ｌ、Ｍ、Ｑ、またはＶであり、ζ２は、Ｙ、Ｈ、Ｓ、Ｎ、Ｋ、Ｆ、またはＱであり、ζ３はＳまたはＹであり、ζ４はＩであり、ζ５はＨである。
【０４４８】
[00379]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列ζ１−ζ２−ζ３−ζ４−ζ５により規定されるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ１配列を含み、式中、ζ１はＮまたはＴであり、ζ２は、Ｙ、Ｋ、またはＱであり、ζ３はＳであり、ζ４はＩであり、ζ５はＨである。
【０４４９】
５．９．５．  Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２コンセンサス配列
[00380]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列θ１−θ２−θ３−θ４−θ５−θ６−θ７−θ８−θ９−Ｄ−Ｙ−Ａ−Ｄ−θ１４−θ１５−θ１６−Ｇにより規定されるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含み、式中、θ１は、Ｇ、Ｅ、Ｄ、Ｗ、Ｓ、またはＶであり、θ２はＩまたはＶであり、θ３は、Ｙ、Ｔ、Ｆ、Ｓ、またはＡであり、θ４はＰであり、θ５は、Ｎ、Ｉ、Ｖ、Ｒ、Ｙ、Ｆ、Ｇ、Ｌ、Ｑ、またはＳであり、θ６はＤまたはＰであり、θ７はＧまたはＤであり、θ８は、Ｙ、Ｉ、Ｔ、Ｎ、Ｆ、Ｓ、またはＭであり、θ９はＴまたはＮであり、θ１４は、Ｓ、Ｒ、またはＮであり、θ１５はＶまたはＭであり、θ１６はＫまたはＥである。
【０４５０】
[00381]  一部の実施形態では、抗体は、コンセンサス配列θ１−θ２−θ３−θ４−θ５−θ６−θ７−θ８−θ９−Ｄ−Ｙ−Ａ−Ｄ−θ１４−θ１５−θ１６−Ｇにより規定されるＫａｂａｔ  ＣＤＲ−Ｈ２配列を含み、式中、θ１は、Ｇ、Ｅ、またはＤであり、θ２はＩであり、θ３はＹまたはＦであり、θ４はＰであり、θ５は、Ｎ、Ｉ、またはＲであり、θ６はＤであり、θ７はＧであり、θ８はＹまたはＩであり、θ９はＴであり、θ１４はＳであり、θ１５はＶであり、θ１６はＫである。
【０４５１】
６．  生殖系列
[00382]  一部の実施形態では、葉酸受容体アルファと特異的に結合する抗体は、特定の生殖系列遺伝子またはその変異体によりコードされる可変領域を含む抗体である。本明細書で提供される例示的な抗体は、重鎖可変領域生殖系列遺伝子ＶＨ１−１８、ＶＨ３−３３、ＶＨ２−５、ＶＨ２−７０、およびＶＨ４−３０−４またはそれらの変異体；ならびに軽鎖可変領域生殖系列遺伝子Ｖκ１−５、Ｖκ３−１１、Ｖκ２−２０、Ｖκ１−３３、およびＶκ１−１６、またはそれらの変異体によりコードされる可変領域を含む。
【０４５２】
[00383]  当業者であれば、本明細書で提供されるＣＤＲ配列は、他の可変領域生殖系列遺伝子またはその変異体によりコードされる可変領域と組み合わせた場合にも有用であり得ることを認識するであろう。特に、本明細書で提供されるＣＤＲ配列は、上記に挙げられている可変領域生殖系列遺伝子と構造的に類似する可変領域生殖系列遺伝子またはそれらの変異体によりコードされる可変領域と組み合わせた場合に有用であってもよい。例えば、一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤＲ−Ｈ配列は、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３、またはＶＨ４ファミリー、またはそれらの変異体から選択される可変領域生殖系列遺伝子によりコードされる可変領域と組み合わせてもよい。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤＲ−Ｌ配列は、Ｖκ１、Ｖκ２、またはＶκ３、またはそれらの変異体から選択される可変領域生殖系列遺伝子によりコードされる可変領域と組み合わせてもよい。
【０４５３】
７．  親和性
[00384]  一部の実施形態では、ＫＤにより示される通り、葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、約１０−５Ｍ未満、約１０−６Ｍ未満、約１０−７Ｍ未満、約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、約１０−１１Ｍ未満、または約１０−１２Ｍ未満である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−７Ｍから１０−１１Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−７Ｍから１０−１０Ｍの間である。抗体の親和性は、約１０−７Ｍから１０−９Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−７Ｍから１０−８Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、１０−８Ｍから１０−１１Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−８Ｍから１０−１０Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−９Ｍから１０−１１Ｍの間である。一部の実施形態では、抗体の親和性は、約１０−９Ｍから１０−１０Ｍの間である。
【０４５４】
[00385]  一部の実施形態では、表面プラズモン共鳴法により２５℃で決定され、ＫＤにより示される、ヒト葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、約０．３６×１０−９Ｍ〜約２．２１×１０−９Ｍである。一部の実施形態では、表面プラズモン共鳴法により２５℃で決定され、ＫＤにより示される、ヒト葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、約８．５５×１０−１０Ｍ〜約１．７０×１０−８Ｍである。一部の実施形態では、表面プラズモン共鳴法により２５℃で決定され、ＫＤにより示される、ヒト葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、約５．７１×１０−１０Ｍ〜約２．５８×１０−８Ｍである。一部の実施形態では、ヒト葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、下記の例においてヒト葉酸受容体アルファに対して報告されているＫＤ値のいずれかの近似値である。
【０４５５】
[00386]  一部の実施形態では、抗体は、少なくとも約１０４Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、少なくとも約１０５Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、少なくとも約１０６Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、少なくとも約１０７Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、少なくとも約１０８Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、少なくとも約１０９Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０４Ｍ−１×秒−１〜約１０１０Ｍ−１×秒−１の間のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０５Ｍ−１×秒−１から約１０１０Ｍ−１×秒−１の間のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０６Ｍ−１×秒−１から約１０１０Ｍ−１×秒−１の間のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０７Ｍ−１×秒−１から約１０１０Ｍ−１×秒−１の間のｋａを有する。
【０４５６】
[00387]  一部の実施形態では、抗体は、ヒト葉酸受容体アルファに付随する場合、表面プラズモン共鳴法により２５℃で決定して、約４．４４×１０５Ｍ−１×秒−１〜約１．６１×１０５Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒト葉酸受容体アルファに付随する場合、表面プラズモン共鳴法により２５℃で決定して、約２．９０×１０５Ｍ−１×秒−１〜約９．６４×１０９Ｍ−１×秒−１のｋａを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒト葉酸受容体アルファに付随する場合、下記の例においてヒト葉酸受容体アルファに対して報告されているｋａ値のいずれかと近似するｋａを有する。
【０４５７】
[00388]  一部の実施形態では、抗体は、約１０−５秒−１またはそれよりも低いｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０−４秒−１またはそれよりも低いｋdを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０−３秒−１またはそれよりも低いｋdを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０−２秒−１から約１０−５秒−１の間のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０−２秒−１から約１０−４秒−１の間のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、約１０−３秒−１から約１０−５秒−１の間のｋｄを有する。 
【０４５８】
[00389]  一部の実施形態では、抗体は、ヒト葉酸受容体アルファから解離する場合、表面プラズモン共鳴法により２５℃で決定して、約８．６６×１０−４秒−１〜約１．０８×１０−２秒−１のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒト葉酸受容体アルファから解離する場合、表面プラズモン共鳴法により２５℃で決定して、約２．２８×１０−４秒−１〜約４．８２×１０１秒−１のｋｄを有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒト葉酸受容体アルファから解離する場合、下記の例においてヒト葉酸受容体アルファに対して報告されているｋｄ値のいずれかに近似するｋｄを有する。
【０４５９】
[00390]  一部の実施形態では、表面プラズモン共鳴法により２５℃で決定され、ＫＤにより示される、カニクイザル葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、約０．１９×１０−９Ｍ〜約２．８４×１０−９Ｍである。一部の実施形態では、カニクイザル葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、下記の例においてカニクイザル葉酸受容体アルファに対して報告されているＫＤ値のいずれかの近似値である。
【０４６０】
[00391]  一部の実施形態では、表面プラズモン共鳴により２５℃で決定され、ＫＤにより示される、マウス葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、約０．５×１０−９Ｍ〜約９．０７×１０−８Ｍである。一部の実施形態では、マウス葉酸受容体アルファに対する抗体の親和性は、下記の例においてマウス葉酸受容体アルファに対して報告されているＫＤ値のいずれかの近似値である。
【０４６１】
[00392]  一部の態様では、ＫＤ、ｋａ、およびｋｄは、２５℃で決定される。一部の実施形態では、ＫＤ、ｋａ、およびｋｄは、表面プラズモン共鳴法により決定される。一部の実施形態では、ＫＤ、ｋａ、およびｋｄは、本明細書で提供される実施例に記載の方法に従って決定される。
【０４６２】
８．  エピトープビン
[00393]  一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０８〜３６６のいずれかを包含する抗体と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、上記のＶＨ−ＶＬ対のいずれかを含む抗体と同じエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号３０８〜３６６のいずれかを包含する抗体とエピトープ結合を競合する。一部の実施形態では、抗体は、上記のＶＨ−ＶＬ対のいずれかを含む抗体とエピトープ結合を競合する。
【０４６３】
９．  グリコシル化変異体
[00394]  ある特定の実施形態では、抗体は、グリコシル化の程度を増加、減少、または排除するように変更されていてもよい。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、「Ｎ−連結型」または「Ｏ−連結型」のいずれかである。 
【０４６４】
[00395]  「Ｎ−連結型」グリコシル化は、アスパラギン残基の側鎖に対する炭水化物部分の付着を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（式中、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖に対する炭水化物部分の酵素的付着の認識配列である。したがって、ポリペプチドにこうしたトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が作出される。 
【０４６５】
[00396]  「Ｏ−連結型」グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースの１つの、ヒドロキシアミノ酸に対する、最も一般的にはセリンまたはスレオニンに対する付着を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用することができる。 
【０４６６】
[00397]  抗体に対するＮ−連結型グリコシル化部位の付加または欠失は、上記に記載のトリペプチド配列の１つまたは複数が作出または除去されるようにアミノ酸配列を変更することにより達成することができる。Ｏ−連結型グリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のセリン残基またはスレオニン残基を、抗体の配列内でまたは配列に対して（該当する場合）付加、欠失、または置換することにより達成することができる。
【０４６７】
１０．  Ｆｃ変異体
[00398]  ある特定の実施形態では、アミノ酸修飾を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域へと導入して、Ｆｃ領域変異体を生成してもよい。ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域変異体は、すべてではないが一部のエフェクター機能を保有する。そのような抗体は、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体の半減期は重要であるが、ある特定のエフェクター機能が不必要であるかまたは有害である応用において有用であり得る。エフェクター機能の例としては、補体依存性細胞傷害性（CDC）および抗体介在性補体媒介性細胞傷害（antibody-directed complement-mediated cytotoxicity）（ADCC）が挙げられる。エフェクター機能が変更された数多くの置換または置換または欠失は、当技術分野で公知である。 
【０４６８】
[00399]  一部の実施形態では、Ｆｃは、ＣＨ３配列の少なくとも１つに１つまたは複数の修飾を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、ＣＨ２配列の少なくとも１つに１つまたは複数の修飾を含む。例えば、Ｆｃは、Ｖ２６２Ｅ、Ｖ２６２Ｄ、Ｖ２６２Ｋ、Ｖ２６２Ｒ、Ｖ２６２Ｓ、Ｖ２６４Ｓ、Ｖ３０３Ｒ、およびＶ３０５Ｒからなる群から選択される１つまたは変更を含んでいてもよい。一部の実施形態では、Ｆｃは、単一のポリペプチドである。一部の実施形態では、Ｆｃは、複数のペプチド、例えば、２つのポリペプチドである。Ｆｃ領域における代表的な修飾は、例えば、２０１７年６月１４日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０３７５４５に記載されている。
【０４６９】
[00400]  ＣＤＣ活性および／またはＡＤＣＣ活性の変更は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを使用して確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（FcR）結合アッセイを実施して、ＦｃγＲ結合を測定することができる。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，９：４５７−４９２に要約されている。この文献はその全体が参照により組み込まれる。
【０４７０】
[00401]  目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例としては、米国特許第５，５００，３６２号および第５，８２１，３３７号；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８６，８３：７０５９−７０６３；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９８５，８２：１４９９−１５０２；ならびにＢｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９８７，１６６：１３５１−１３６１に提供されている。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（PBMC）およびナチュラルキラー（NK）細胞が挙げられる。その代わりにまたはそれに加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９８，９５：６５２−６５６に開示されているものなどの動物モデルを使用してｉｎ  ｖｉｖｏで評価することができる。この文献はその全体が参照により組み込まれる。
【０４７１】
[00402]  また、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、抗体がＣ１ｑに結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠如することを確認してもよい。Ｃ１ｑ結合アッセイの例としては、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２に記載されているものが挙げられる。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
【０４７２】
[00403]  補体活性化アッセイとしては、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９６，２０２：１６３−１７１；Ｃｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，２００３，１０１：１０４５−１０５２；およびＣｒａｇｇ  ａｎｄ  Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ，２００４，１０３：２７３８−２７４３に記載されているものが挙げられる。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
【０４７３】
[00404]  また、ＦｃＲｎ結合およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス（半減期決定）は、例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００６，１８：１７５９−１７６９に記載の方法を使用して測定することができる。この文献はその全体が参照により組み込まれる。
【０４７４】
１１．  修飾アミノ酸
[00405]  抗体コンジュゲートが修飾アミノ酸を含む場合、修飾アミノ酸は、従事者が好適であるとみなす任意の修飾アミノ酸であってもよい。特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、リンカー前駆体またはペイロード前駆体と共有結合を形成するのに有用な反応性基を含む。ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は非天然アミノ酸である。ある特定の実施形態では、反応性基は、アミノ、カルボキシ、アセチル、ヒドラジノ、ヒドラジド、セミカルバジド、スルファニル、アジド、およびアルキニルからなる群から選択される。修飾アミノ酸は、例えば、ＷＯ２０１３／１８５１１５およびＷＯ２０１５／００６５５５にも記載されている。これらの文献の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０４７５】
[00406]  ある特定の実施形態では、アミノ酸残基は、以下の式：
【０４７６】
【化９７】
2022500454.tif 000105
のいずれかによる。
当業者であれば、抗体は、一般に、Ｌ−アミノ酸で構成されることを認識するであろう。しかしながら、非天然アミノ酸の場合、本方法および組成物は、部位特異的位置においてＬ−、Ｄ−、またはラセミ非天然アミノ酸を使用する能力を従事者に提供する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の非天然アミノ酸としては、天然アミノ酸のＤ型および天然アミノ酸のラセミ型が挙げられる。
【０４７７】
[00407]  上記の式では、波線は、抗体のポリペプチド鎖の残りに接続する結合を示す。こうした非天然アミノ酸は、天然アミノ酸が同じポリペプチド鎖に組み込まれる場合と全く同様に、ポリペプチド鎖に組み込むことができる。ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、式に示されている通り、アミド結合を介してポリペプチド鎖に組み込まれる。
【０４７８】
[00408]  上記の式では、Ｒは、そのアミノ酸残基が天然アミノ酸残基と同一でない限り、任意の官能基を示し、限定されない。ある特定の実施形態では、Ｒは、疎水性基、親水性基、極性基、酸性基、塩基性基、キレート基、反応性基、療法部分、または標識部分であってもよい。ある特定の実施形態では、Ｒは、Ｒ１ＮＲ２Ｒ３、Ｒ１Ｃ（＝Ｏ）Ｒ２、Ｒ１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ２、Ｒ１Ｎ３、Ｒ１Ｃ（≡ＣＨ）からなる群から選択される。こうした実施形態では、Ｒ１は、結合、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレンからなる群から選択される。Ｒ２およびＲ３は、各々独立して、水素、アルキル、およびヘテロアルキルからなる群から選択される。
【０４７９】
[00409]  一部の実施形態では、非天然コードアミノ酸は、２０種の通常アミノ酸には見出されない官能基（アジド基、ケトン基、アルデヒド基、およびアミノオキシ基を含むがこれらに限定されない）と効率的におよび選択的に反応して、安定なコンジュゲートを形成する側鎖官能基を含む。例えば、アジド官能基を含む非天然コードアミノ酸を含む抗原結合性ポリペプチドを、ポリマー（ポリ（エチレングリコール）を含むがこれに限定されない）と、またはその代わりにアルキン部分を含む第２のポリペプチドと、安定なコンジュゲートを形成するように反応させて、アジド官能基およびアルキン官能基の選択的反応をもたらし、ヒュスゲン［３＋２］環化付加産物を形成することができる。
【０４８０】
[00410]  本発明での使用に好適であり得、水溶性ポリマーとの反応に有用である代表的な非天然コードアミノ酸としては、これらに限定されないが、カルボニル、アミノオキシ、ヒドラジン、ヒドラジド、セミカルバジド、アジド、およびアルキン反応性基を有するものが挙げられる。一部の実施形態では、非天然コードアミノ酸は、サッカリド部分を含む。そのようなアミノ酸の例としては、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ガラクトサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−スレオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−アスパラギン、およびＯ−マンノサミニル−Ｌ−セリンが挙げられる。そのようなアミノ酸の例としては、アミノ酸とサッカリドとの間の天然に存在するＮ−連結またはＯ−連結が、これらに限定されないが、アルケン、オキシム、チオエーテル、およびアミドなどを含む、天然では通常は見出されない共有結合連結により置き換えられている例も挙げられる。また、そのようなアミノ酸の例としては、２−デオキシ−グルコースおよび２−デオキシガラクトースなど、天然に存在するタンパク質には通常は見出されないサッカリドが挙げられる。
【０４８１】
[00411]  本明細書で提供される非天然コードアミノ酸の多くは、例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（セントルイス、米国ミズーリ州）、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（EMD Biosciencesの一部門、ダルムシュタット、ドイツ）、またはＰｅｐｔｅｃｈ（バーリントン、米国マサチューセッツ州）から市販されている。市販されていないものは、任意選択により、本明細書で提供されている通りに、または当業者に公知の標準的な方法を使用して合成される。有機合成技法については、例えば、ＦｅｓｓｅｎｄｏｎおよびＦｅｓｓｅｎｄｏｎによるＯｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（1982, Second Edition, Willard Grant Press, Boston Mass.）；ＭａｒｃｈによるＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Third Edition, 1985, Wiley and Sons, New York）；ならびにＣａｒｅｙおよびＳｕｎｄｂｅｒｇによるＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Third Edition, Parts A and B, 1990, Plenum Press, New York）を参照。また、米国特許出願公開第２００３／００８２５７５号および第２００３／０１０８８８５号も参照。これらの文献は参照により組み込まれる。非天然側鎖を含む非天然アミノ酸に加えて、本発明での使用に好適であり得る非天然アミノ酸は、任意選択により、これらに限定されないが、式ＩＩおよびＩＩＩの構造：
【０４８２】
【化９８】
2022500454.tif 000106
により示されている通りのものを含む修飾骨格構造も含み、式中、Ｚは、典型的には、ＯＨ、ＮＨ２、ＳＨ、ＮＨ−Ｒ’、またはＳ−Ｒ’を含み、ＸおよびＹは、同じであってもよくまたは異なっていてもよく、典型的にはＳまたはＯを含み、ＲおよびＲ’は、任意選択により同じであるかまたは異なり、典型的には、式Ｉを有する非天然アミノ酸に関して上記で説明されているＲ基の成分と同じリストならびに水素から選択される。例えば、本発明の非天然アミノ酸は、任意選択により、式ＩＩおよびＩＩＩにより示されている通り、アミノ基またはカルボキシル基に置換を含む。このタイプの非天然アミノ酸としては、これらに限定されないが、通常の２０種の天然アミノ酸に対応する側鎖または非天然側鎖を有するα-ヒドロキシ酸、α-チオ酸、α-アミノチオカルボキシレートが挙げられるが、これらに限定されない。加えて、α炭素の置換としては、任意選択により、これらに限定されないが、Ｄ−グルタメート、Ｄ−アラニン、Ｄ−メチル−Ｏ−チロシン、およびアミノ酪酸などの、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、またはα−α−二置換アミノ酸が挙げられる。他の構造的代替物としては、プロリンアナログ、ならびに３員、４員、６員、７員、８員、および９員環プロリンアナログなどの環式アミノ酸；置換β−アラニンおよびγ−アミノ酪酸などのＰおよびｙアミノ酸が挙げられる。
【０４８３】
[00412]  多くの非天然アミノ酸は、チロシン、グルタミン、およびフェニルアラニンなどの天然アミノ酸に基づいており、本発明での使用に好適である。チロシンアナログとしては、これらに限定されないが、パラ置換チロシン、オルト置換チロシン、およびメタ置換チロシンが挙げられ、置換チロシンは、これらに限定されないが、ケト基（アセチル基を含むがこれに限定されない）、ベンゾイル基、アミノ基、ヒドラジン、ヒドロキシアミン、チオール基、カルボキシ基、イソプロピル基、メチル基、Ｃ６〜Ｃ２０直鎖もしくは分岐炭化水素、飽和もしくは不飽和炭化水素、Ｏ−メチル基、ポリエーテル基、ニトロ基、またはアルキニル基などを含む。加えて、多置換アリール環も企図される。本発明での使用に好適であり得るグルタミンアナログとしては、これらに限定されないが、α−ヒドロキシ誘導体、γ-置換誘導体、環式誘導体、およびアミド置換グルタミン誘導体が挙げられる。本発明での使用に好適であり得る例示的なフェニルアラニンアナログとしては、これらに限定されないが、パラ置換フェニルアラニン、オルト置換フェニルアラニン（phenyalanine）、およびメタ置換フェニルアラニンが挙げられ、置換基は、これらに限定されないが、ヒドロキシ基、メトキシ基、メチル基、アリル基、アルデヒド、アジド、ヨード、ブロモ、ケト基（アセチル基を含むがこれに限定されないない）、ベンゾイル、またはアルキニル基などを含む。本発明での使用に好適であり得る非天然アミノ酸の具体的な例としては、これらに限定されないが、ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃβ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−メチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−プロパルギルオキシ−フェニルアラニンなどが挙げられる。本発明での使用に好適であり得る様々な非天然アミノ酸の構造の例は、例えば、「Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｎｎａｔｕｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ」と題するＷＯ２００２／０８５９２３に提供されている。追加のメチオニンアナログについては、Ｋｉｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｚｉｄｅｓ  ｉｎｔｏ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ  ｌｉｇａｔｉｏｎ，ＰＮＡＳ  ９９：１９−２４も参照。
【０４８４】
[00413]  本発明での使用に好適な非天然アミノ酸の多くは、例えば、Ｓｉｇｍａ（米国）またはＡｌｄｒｉｃｈ（ミルウォーキー、米国ウィスコンシン州）から市販されている。市販されていないものは、本明細書で提供されている通りに、または種々の刊行物で提供されている通りに、または当業者に公知の標準的な方法を使用して、任意選択により合成される。有機合成技法については、例えば、ＦｅｓｓｅｎｄｏｎおよびＦｅｓｓｅｎｄｏｎによるＯｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（1982, Second Edition, Willard Grant Press, Boston Mass.）；ＭａｒｃｈによるＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Third Edition, 1985, Wiley and Sons, New York）；ならびにＣａｒｅｙおよびＳｕｎｄｂｅｒｇによるＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Third Edition, Parts A and B, 1990, Plenum Press, New York）を参照。非天然アミノ酸の合成が記載されている追加の刊行物としては、以下のものが挙げられる：例えば、「Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｎｎａｔｕｒａｌ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ」と題するＷＯ２００２／０８５９２３；Ｍａｔｓｏｕｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３８，４６６０−４６６９；Ｋｉｎｇ，Ｆ．Ｅ．＆Ｋｉｄｄ，Ｄ．Ａ．Ａ．（１９４９）Ａ  Ｎｅｗ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ａｎｄ  ｏｆ  γ−Ｄｉｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｃ  Ａｃｉｄ  ｆｒｏｍ  Ｐｈｔｈｙｌａｔｅｄ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，３３１５−３３１９；Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｏ．Ｍ．＆Ｃｈａｔｔｅｒｒｊｉ，Ｒ．（１９５９）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ａｓ  Ｍｏｄｅｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉ−Ｔｕｍｏｒ  Ａｇｅｎｔｓ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８１，３７５０−３７５２；Ｃｒａｉｇ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ａｂｓｏｌｕｔｅ  Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ  ｏｆ  ７−Ｃｈｌｏｒｏ−４［［４−（ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）−１−ｍｅｔｈｙｌｂｕｔｙｌ］ａｍｉｎｏ］ｑｕｉｎｏｌｉｎｅ（Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５３，１１６７−１１７０；Ａｚｏｕｌａｙ，Ｍ．，Ｖｉｌｍｏｎｔ，Ｍ．＆Ｆｒａｐｐｉｅｒ，Ｆ．（１９９１）Ｇｌｕｔａｍｉｎｅ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ａｓ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌｓ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６，２０１−５；Ｋｏｓｋｉｎｅｎ，Ａ．Ｍ．Ｐ．＆Ｒａｐｏｐｏｒｔ，Ｈ．（１９８９）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ４−Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｐｒｏｌｉｎｅｓ  ａｓ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｌｙ  Ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４，１８５９−１８６６；Ｃｈｒｉｓｔｉｅ，Ｂ．Ｄ．＆Ｒａｐｏｐｏｒｔ，Ｈ．（１９８５）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｏｐｔｉｃａｌｌｙ  Ｐｕｒｅ  Ｐｉｐｅｃｏｌａｔｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｌ−Ａｓｐａｒａｇｉｎｅ．  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  （＋）−Ａｐｏｖｉｎｃａｍｉｎｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｄｅｃａｒｂｏｎｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｉｎｉｕｍ  Ｉｏｎ  Ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８９：１８５９−１８６６；Ｂａｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｏｖｅｌ  ａ−Ａｍｉｎｏ−Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｌ−  ａｎｄ  Ｄ−ａ−Ａｍｉｎｏ−Ａｄｉｐｉｃ  Ａｃｉｄｓ，Ｌ−ａ−ａｍｉｎｏｐｉｍｅｌｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｎｄ  Ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ  Ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．４３：４２９７−４３０８；およびＳｕｂａｓｉｎｇｈｅ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｑｕｉｓｑｕａｌｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ：  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｂｅｔａ−ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  ２−ａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｔ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｑｕｉｓｑｕａｌａｔｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ  ｓｉｔｅ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３５：４６０２−７。また、２００３年１２月２２日に出願された「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｒｒａｙｓ」と題する米国特許出願第１０／７４４，８９９号および２００２年１２月２２日に出願された第６０／４３５，８２１号を参照。
【０４８５】
[00414]  カルボニル反応性基を有するアミノ酸は、中でも求核付加またはアルドール縮合反応により分子（ＰＥＧまたは他の水溶性分子を含むがこれらに限定されない）を連結するための様々な反応を可能にする。
【０４８６】
[00415]  代表的なカルボニル含有アミノ酸は、
【０４８７】
【化９９】
2022500454.tif 000107
として表すことができ、式中、ｎは０〜１０であり、Ｒ１は、アルキル、アリール、置換アルキル、または置換アリールであり、Ｒ２は、Ｈ、アルキル、アリール、置換アルキル、および置換アリールであり、Ｒ３は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはアミノ末端修飾基であり、Ｒ４は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはカルボキシ末端修飾基である。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１はフェニルであり、Ｒ2は、単純なアルキル（つまり、メチル、エチル、またはプロピル）であり、ケトン部分は、アルキル側鎖に対してパラ位に配置されている。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１はフェニルであり、Ｒ２は、単純なアルキル（つまり、メチル、エチル、またはプロピル）であり、ケトン部分は、アルキル側鎖に対してメタ位に配置されている。
【０４８８】
[00416]  一部の例では、隣接するヒドロキシル基およびアミノ基を保持する非天然コードアミノ酸を、「遮蔽」アルデヒド官能性としてポリペプチドに組み込むことができる。例えば、５−ヒドロキシリジンは、イプシロンアミンに隣接するヒドロキシル基を保持する。アルデヒドを生成するための反応条件は、典型的には、ポリペプチド内の他の部位での酸化を回避するために穏やかな条件下で、モル過剰量のメタ過ヨウ素酸ナトリウムを添加することを含む。酸化反応のｐＨは、典型的には約７．０である。典型的な反応は、ポリペプチドの緩衝溶液に約１．５モル過剰量のメタ過ヨウ素酸ナトリウムを添加し、続いて暗所で約１０分間インキュベートすることを含む。例えば、米国特許第６，４２３，６８５号を参照。この文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４８９】
[00417]  カルボニル官能性は、水性溶液中の穏やかな条件下で、ヒドラジン含有試薬、ヒドラジド含有試薬、ヒドロキシルアミン含有試薬、またはセミカルバジド含有試薬と選択的に反応して、それぞれ、生理学的条件下で安定である対応するヒドラゾン連結、オキシム連結、またはセミカルバゾン連結を形成することができる。例えば、Ｊｅｎｃｋｓ，Ｗ．Ｐ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８１，４７５−４８１（１９５９）；Ｓｈａｏ，Ｊ．ａｎｄ  Ｔａｍ，Ｊ．Ｐ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：３８９３−３８９９（１９９５）を参照。さらに、カルボニル基の独特な反応性は、他のアミノ酸側鎖の存在下での選択的修飾を可能にする。例えば、Ｃｏｒｎｉｓｈ，Ｖ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１８：８１５０−８１５１（１９９６）；Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ，Ｋ．Ｆ．＆Ｓｔｒｏｈ，Ｊ．Ｇ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．３：１３８−１４６（１９９２）；Ｍａｈａｌ，Ｌ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：１１２５−１１２８（１９９７）を参照。
【０４９０】
[00418]  ヒドラジン、ヒドラジド、またはセミカルバジドなどの求核基を含む非天然コードアミノ酸は、様々な求電子基と反応して、コンジュゲートの形成を可能にする（PEGまたは他の水溶性ポリマーを含むがこれらに限定されない）。
【０４９１】
[00419]  代表的なヒドラジン含有アミノ酸、ヒドラジド含有アミノ酸、またはセミカルバジド含有アミノ酸は、
【０４９２】
【化１００】
2022500454.tif 000108
として表すことができ、式中、ｎは０〜１０であり、Ｒ１は、アルキル、アリール、置換アルキル、もしくは置換アリールであるか、または存在せず、Ｘは、Ｏ、Ｎ、Ｓ、または存在せず、Ｒ２は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはアミノ末端修飾基であり、Ｒ３は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはカルボキシ末端修飾基である。
【０４９３】
[00420]  一部の実施形態では、ｎは４であり、Ｒ１は存在せず、ＸはＮである。一部の実施形態では、ｎは２であり、Ｒ１は存在せず、Ｘは存在しない。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１はフェニルであり、ＸはＯであり、酸素原子は、アリール環にある脂肪族基に対してパラ位に配置されている。
【０４９４】
[00421]  ヒドラジド含有アミノ酸、ヒドラジン含有アミノ酸、およびセミカルバジド含有アミノ酸は、商業的供給元から入手可能である。例えば、Ｌ−グルタメート−γ−ヒドラジドは、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（セントルイス、ミズーリ州）から入手可能である。市販されていない他のアミノ酸は、当業者により調製することができる。例えば、米国特許第６，２８１，２１１号を参照。この文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０４９５】
[00422]  ヒドラジド官能性、ヒドラジン官能性、またはセミカルバジド官能性を保持する非天然コードアミノ酸を含むポリペプチドは、アルデヒドまたは同様の化学反応性を有する他の官能基を含む様々な分子と効率的におよび選択的に反応することができる。例えば、Ｓｈａｏ，Ｊ．ａｎｄ  Ｔａｍ，Ｊ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：３８９３−３８９９（１９９５）を参照。ヒドラジド官能基、ヒドラジン官能基、およびセミカルバジド官能基は、その独特な反応性のため、２０種の通常アミノ酸に存在する求核基（セリンもしくはスレオニンのヒドロキシル基、またはリジンおよびＮ末端のアミノ基を含むがこれらに限定されない）と比較して、アルデヒド、ケトン、および他の求電子基に対して著しくより反応的である。
【０４９６】
[00423]  アミノオキシ（ヒドロキシルアミンとも呼ばれる）基を含む非天然コードアミノ酸は、様々な求電子基と反応して、コンジュゲート（PEGまたは他の水溶性ポリマーを含むがこれらに限定されない）を形成することが可能である。ヒドラジン、ヒドラジド、およびセミカルバジドと同様に、アミノオキシ基の増強された求核性は、アルデヒドまたは同様の化学反応性を有する他の官能基を含む様々な分子との効率的および選択的な反応を可能にする。例えば、Ｓｈａｏ，Ｊ．ａｎｄ  Ｔａｍ，Ｊ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７：３８９３−３８９９（１９９５）；Ｈ．Ｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｃ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．３４：７２７−７３６（２００１）を参照。しかしながら、ヒドラジン基との反応の結果は、対応するヒドラゾンであるが、アミノオキシ基と、ケトンなどのカルボニル含有基との反応からは、一般に、オキシムが生じる。
【０４９７】
[00424]  アミノオキシ基を含む代表的なアミノ酸は、
【０４９８】
【化１０１】
2022500454.tif 000109
として表すことができ、式中、ｎは０〜１０であり、Ｒ１は、アルキル、アリール、置換アルキル、もしくは置換アリールであるか、または存在せず、Ｘは、Ｏ、Ｎ、Ｓ、または存在せず、ｍは、０〜１０であり、Ｙ＝Ｃ（Ｏ）または存在せず、Ｒ２は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはアミノ末端修飾基であり、Ｒ３は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはカルボキシ末端修飾基である。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１はフェニルであり、ＸはＯであり、ｍは１であり、Ｙは存在する。一部の実施形態では、ｎは２であり、Ｒ１およびＸは存在せず、ｍは０であり、Ｙは存在しない。
【０４９９】
[00425]  アミノオキシ含有アミノ酸は、容易に入手可能なアミノ酸前駆体（ホモセリン、セリン、およびスレオニン）から調製することができる。例えば、Ｍ．  Ｃａｒｒａｓｃｏ  ａｎｄ  Ｒ．Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８：８８５３−８８５８（２００３）を参照。Ｌ−２−アミノ−４−（アミノオキシ）酪酸などの、ある特定のアミノオキシ含有アミノ酸は、天然源から単離されている（Rosenthal, G. et al., Life Sci. 60: 1635-1641（1997））。当業者であれば、他のアミノオキシ含有アミノ酸を調製することができる。
【０５００】
[00426]  アジド官能基およびアルキン官能基は、それらの独特な反応性のため、ポリペプチドおよび他の生物学的分子の選択的修飾に極めて有用である。有機アジド、特に脂肪族アジド、およびアルキンは、一般的な反応性化学条件に対して一般に安定である。特に、アジド官能基およびアルキン官能基は両方とも、天然に存在するポリペプチドに見出される２０種の通常アミノ酸の側鎖（つまり、Ｒ基）に対して不活性である。しかしながら、近傍に接近すると、アジド基およびアルキン基の「バネ仕掛け」性質が発揮され、ヒュスゲン［３＋２］環化付加反応により選択的におよび効率的に反応して、対応するトリアゾールが生成される。例えば、Ｃｈｉｎ  Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０１：９６４−７（２００３）；Ｗａｎｇ，Ｑ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５，３１９２−３１９３（２００３）；Ｃｈｉｎ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２４：９０２６−９０２７（２００２）を参照。
【０５０１】
[00427]  ヒュスゲン環化付加反応は、求核置換ではなく選択的環化付加反応を伴うため（例えば、Padwa, A., in COMPREHENSIVE ORGANIC SYNTHESIS, Vol. 4,（ed. Trost, B. M., 1991）, p. 1069-1109; Huisgen, R. in 1,3-DIPOLAR CYCLOADDITION CHEMISTRY, （ed. Padwa, A., 1984）, p. 1-176を参照）、アジド含有側鎖およびアルキン含有側鎖を保持する非天然コードアミノ酸を組み込むことにより、得られるポリペプチドを、非天然コードアミノ酸の位置で選択的に修飾することが可能になる。アジド含有抗体またはアルキン含有抗体が関与する環化付加反応は、ｉｎ  ｓｉｔｕにてＣｕ（II）をＣｕ（I）へと還元するための還元剤の存在下でＣｕ（II）（触媒量のＣｕＳＯ４の形態を含むがそれに限定されない）を触媒量で添加することにより、水性条件下で室温にて実施することができる。例えば、Ｗａｎｇ，Ｑ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５，３１９２−３１９３（２００３）；Ｔｏｒｎｏｅ，Ｃ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：３０５７−３０６４（２００２）；Ｒｏｓｔｏｖｔｓｅｖ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４１：２５９６−２５９９（２００２）を参照。代表的な還元剤としては、これらに限定されないが、アスコルビン酸塩、金属銅、キニーネ、ヒドロキノン、ビタミンＫ、グルタチオン、システイン、Ｆｅ２＋、Ｃｏ２＋、および印加電位が挙げられる。
【０５０２】
[00428]  一部の場合では、アジドとアルキンとの間にあるヒュスゲン［３＋２］環化付加反応が所望である場合、抗原結合性ポリペプチドは、アルキン部分を含む非天然コードアミノ酸を含み、アミノ酸に付着させようとする水溶性ポリマーは、アジド部分を含む。その代わりに、逆の反応（つまり、アミノ酸にあるアジド部分と、水溶性ポリマーに存在するアルキン部分との）も実施することができる。
【０５０３】
[00429]  また、アジド官能基は、アリールエステルを含み、アリールホスフィン部分で適切に官能化されている水溶性ポリマーと選択的に反応して、アミド連結を生成することができる。アリールホスフィン基は、アジドをｉｎ  ｓｉｔｕで還元し、得られたアミンは、次いで近傍のエステル連結と効率的に反応して、対応するアミドを生成する。例えば、Ｅ．Ｓａｘｏｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７、２００７−２０１０（２０００）を参照。アジド含有アミノ酸は、アルキルアジド（２−アミノ−６−アジド−１−ヘキサン酸を含むがこれに限定されない）またはアリールアジド（ｐ−アジド−フェニルアラニン）のいずれであってもよい。
【０５０４】
[00430]  アリールエステルおよびホスフィン部分を含む代表的な水溶性ポリマーは、
【０５０５】
【化１０２】
2022500454.tif 000110
として表すことができ、式中、Ｘは、Ｏ、Ｎ、Ｓ、または存在しなくともよく、Ｐｈはフェニルであり、Ｗは水溶性ポリマーであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール、置換アルキル、および置換アリール基であってもよい。代表なＲ基としては、これらに限定されないが、−ＣＨ２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’、−ＣＮ、および−ＮＯ２が挙げられる。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’は、各々独立して、水素、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、これらに限定されないが、１〜３つのハロゲンで置換されたアリールを含む置換または非置換アリール、置換もしくは非置換アルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基を指す。本発明の化合物が１つよりも多くのＲ基を含む場合、例えば、Ｒ基の各々は、こうした基の１つよりも多くが存在する場合、各Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’基と同様に、独立して選択される。Ｒ’およびＲ’’は、同じ窒素原子に付着している場合、窒素原子と一緒になって、５員、６員、または７員環を形成することができる。例えば、−ＮＲ’Ｒ’’としては、これらに限定されないが、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルが挙げられることが意図される。置換基に関する上記の考察から、当業者であれば、「アルキル」という用語は、ハロアルキル（−ＣＦ３および−ＣＨ２ＣＦ３を含むがこれらに限定されない）およびアシル（−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３などを含むがこれらに限定されない）など、水素基以外の基に結合している炭素原子を含む基を含むことが意図されていることを理解するであろう。
【０５０６】
[00431]  また、アジド官能基は、チオエステルを含み、アリールホスフィン部分で適切に官能化されている水溶性ポリマーと選択的に反応して、アミド連結を生成することができる。アリールホスフィン基は、アジドをｉｎ  ｓｉｔｕで還元し、得られたアミンは、次いでチオエステル連結と効率的に反応して、対応するアミドを生成する。チオエステルおよびホスフィン部分を含む代表的な水溶性ポリマーは、
【０５０７】
【化１０３】
2022500454.tif 000111
として表すことができ、式中、ｎは１〜１０であり、Ｘは、Ｏ、Ｎ、Ｓ、または存在しなくてもよく、Ｐｈはフェニルであり、Ｗは水溶性ポリマーである。
【０５０８】
[00432]  代表的なアルキン含有アミノ酸は、
【０５０９】
【化１０４】
2022500454.tif 000112
として表すことができ、式中、ｎは０〜１０であり、Ｒ１は、アルキル、アリール、置換アルキル、もしくは置換アリールであるか、または存在せず、Ｘは、Ｏ、Ｎ、Ｓ、または存在せず、ｍは、０〜１０であり、Ｒ２は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはアミノ末端修飾基であり、Ｒ３は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはカルボキシ末端修飾基である。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１はフェニルであり、Ｘは存在せず、ｍは０であり、アセチレン部分は、アルキル側鎖に対してパラ位に配置されている。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１はフェニルであり、ＸはＯであり、ｍは１であり、プロパルギルオキシ基は、アルキル側鎖に対してパラ位に配置されている（つまり、Ｏ−プロパルギル−チロシン）。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１およびＸは存在せず、ｍは０である（つまり、プロパリルグリシン（proparylglycine））。
【０５１０】
[00433]  アルキン含有アミノ酸は市販されている。例えば、プロパルギルグリシンは、Ｐｅｐｔｅｃｈ（バーリントン、マサチューセッツ州）から市販されている。その代わりに、アルキン含有アミノ酸は、標準的な方法に従って調製することができる。例えば、例えば、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニンは、Ｄｅｉｔｅｒｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２５：１１７８２−１１７８３（２００３）に記載の通りに合成することができ、４−アルキニル−Ｌ−フェニルアラニンは、Ｋａｙｓｅｒ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ５３（７）：２４７５−２４８４（１９９７）に記載の通りに合成することができる。当業者であれば、他のアルキン含有アミノ酸を調製することができる。
【０５１１】
[00434]  代表的なアジド含有アミノ酸は、
【０５１２】
【化１０５】
2022500454.tif 000113
として表すことができ、式中、ｎは０から１０であり、Ｒ１は、アルキル、アリール、置換アルキル、置換アリール、または存在せず；Ｘは、Ｏ、Ｎ、Ｓ、または存在せず、ｍは０〜１０であり、Ｒ２は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはアミノ末端修飾基であり、Ｒ３は、Ｈ、アミノ酸、ポリペプチド、またはカルボキシ末端修飾基である。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１はフェニルであり、Ｘは存在せず、ｍは０であり、アジド部分は、アルキル側鎖に対してパラ位に配置されている。一部の実施形態では、ｎは０〜４であり、Ｒ１およびＸは存在せず、ｍ＝０である。一部の実施形態では、ｎは１であり、Ｒ１はフェニルであり、ＸはＯであり、ｍは２であり、Ｐ−アジドエトキシ部分は、アルキル側鎖に対してパラ位に配置されている。
【０５１３】
[00435]  アジド含有アミノ酸は、商業的供給元から入手可能である。例えば、４−アジドフェニルアラニンは、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（ウッドデール、イリノイ州）から得ることができる。市販されていないアジド含有アミノ酸の場合、アジド基は、これらに限定されないが、好適な脱離基（ハロゲン化物、メシレート、トシレートを含むがこれらに限定されない）を置き換えることまたは好適に保護されたラクトンを開環することを含む、当業者に公知の標準的な方法を使用して比較的容易に調製することができる。例えば、ＭａｒｃｈによるＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Third Edition, 1985, Wiley and Sons, New York）を参照。
【０５１４】
[00436]  ベータ置換アミノチオール官能基は、その独特な反応性のため、アルデヒド基を含むポリペプチドおよび他の生物学的分子の、チアゾリジンの形成による選択的修飾に極めて有用である。例えば、Ｊ．  Ｓｈａｏ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔａｍ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９５，１１７（１４）３８９３−３８９９を参照。一部の実施形態では、ベータ置換アミノチオールアミノ酸を抗体に組み込み、次いでアルデヒド官能性を含む水溶性ポリマーと反応させることができる。一部の実施形態では、水溶性ポリマー、薬物コンジュゲート、または他のペイロードを、ベータ置換アミノチオールアミノ酸を含む抗体ポリペプチドと、チアゾリジンの形成によりカップリングすることができる。
【０５１５】
[00437]  有用な非天然アミノ酸の特定の例としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：ｐ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｏ−メチル−Ｌ−チロシン、Ｌ−３−（２−ナフチル）アラニン、３−メチル−フェニルアラニン、Ｏ−４−アリル−Ｌ−チロシン、４−プロピル−Ｌ−チロシン、トリ−Ｏ−アセチル−ＧｌｃＮＡｃ  ｂ−セリン、Ｌ−Ｄｏｐａ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−メチル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−アシル−Ｌ−フェニルアラニン、ｐ−ベンゾイル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−ホスホセリン、ホスホノセリン、ホスホノチロシン、ｐ−ヨード−フェニルアラニン、ｐ−ブロモフェニルアラニン、ｐ−アミノ−Ｌ−フェニルアラニン、イソプロピル−Ｌ−フェニルアラニン、およびｐ−プロパルギルオキシ−フェニルアラニン。さらなる有用な例としては、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ガラクトサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−スレオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−アスパラギン、およびＯ−マンノサミニル−Ｌ−セリンが挙げられる。
【０５１６】
[00438]  特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、ｐ−アセチル−フェニルアラニン、ｐ−エチニル−フェニルアラニン、ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ−アジド−メチル−フェニルアラニン、およびｐ−アジド−フェニルアラニンから選択される。１つの特に有用な非天然アミノ酸は、ｐ−アジドフェニルアラニンである。このアミノ酸残基は、例えばアルキニル基を保持する化合物とのヒュスゲン［３＋２］環化付加（cyloaddition）反応（いわゆる「クリック」化学反応）を容易にすることが当業者に公知である。この反応により、当業者であれば、非天然アミノ酸の部位特異的位置で抗体と容易におよび迅速にコンジュゲートさせることができる。
【０５１７】
[00439]  ある特定の実施形態では、第１の反応性基は、アルキニル部分（これに限定されないが、非天然アミノ酸ｐ−プロパルギルオキシフェニルアラニンを含み、プロパルギル基は、アセチレン部分とも呼ばれることがある）であり、第２の反応性基は、アジド部分であり、［３＋２］環化付加化学を使用することができる。ある特定の実施形態では、第１の反応性基は、アジド部分（非天然アミノ酸ｐ−アジド−Ｌ−フェニルアラニンを含むがこれに限定されない）であり、第２の反応性基はアルキニル部分である。
【０５１８】
[00440]  上記の式では、各Ｌは、二価リンカーを表わす。二価リンカーは、当業者に公知の任意の二価リンカーであってもよい。一般に、二価リンカーは、官能性部分Ｒおよび非天然アミノ酸の類似反応性基（例えば、アルファ炭素）と共有結合を形成することが可能である。有用な二価リンカー  結合、アルキレン、置換アルキレン、ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、および置換ヘテロアリーレン。ある特定の実施形態では、Ｌは、Ｃ１〜１０アルキレンまたはＣ１〜１０ヘテロアルキレンである。
【０５１９】
[00441]  本明細書に記載の方法および組成物に使用される非天然アミノ酸は、以下の４つの特性のうちの少なくとも１つを有する：（１）非天然アミノ酸の側鎖にある少なくとも１つの官能基は、２０種の通常の遺伝的にコードされるアミノ酸（つまり、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリン）の化学反応性に対して直交性であるか、または非天然アミノ酸を含むポリペプチドに存在する天然に存在するアミノ酸の化学反応性に対して少なくとも直交性である少なくとも１つの特色および／または活性および／または反応性を有すること；（２）導入される非天然アミノ酸は、２０種の通常の遺伝的にコードされるアミノ酸に対して化学的に実質的に不活性であること；（３）非天然アミノ酸は、好ましくは、天然に存在するアミノ酸と同等の安定性でまたは典型的な生理学的条件下で、ポリペプチドに安定して組み込むことができ、さらに好ましくは、そのような組込みは、ｉｎ  ｖｉｖｏ系により生じさせることができること；（４）非天然アミノ酸は、オキシム官能基、もしくは好ましくは非天然アミノ酸を含むポリペプチドの生物学的特性を破壊しない条件下で（無論、そのような生物学的特性の破壊が修飾／変換の目的でない限り）試薬と反応させることによりオキシム基に変換することができる官能基を含むか、または変換は約４から約８の間のｐＨの水性条件下で生じさせることができるか、または非天然アミノ酸にある反応性部位は求電子性部位であること。任意の数の非天然アミノ酸をポリペプチドに導入することができる。また、非天然アミノ酸は、保護もしくは遮蔽オキシム、または保護基の脱保護もしくは遮蔽基の脱遮蔽後にオキシム基へと変換することができる保護基もしくは遮蔽基を含んでいてもよい。また、非天然アミノ酸は、保護または遮蔽カルボニル基またはジカルボニル基を含んでいてもよく、これらは、保護基の脱保護または遮蔽基の脱遮蔽後にカルボニル基またはジカルボニル基に変換することができ、それによりヒドロキシルアミンまたはオキシムと反応してオキシム基を形成するために利用可能である。
【０５２０】
[00442]  さらなる実施形態では、本明細書に記載の方法および組成物に使用することができる非天然アミノ酸としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：光活性化可能な架橋剤を含むアミノ酸、スピン標識アミノ酸、蛍光アミノ酸、金属結合アミノ酸、金属含有アミノ酸、放射性アミノ酸、新規の官能基を有するアミノ酸、他の分子と共有結合でまたは非共有結合で相互作用するアミノ酸、光ケージ化および／または光異性化性アミノ酸、ビオチンまたはビオチンアナログを含むアミノ酸、糖置換セリンなどのグリコシル化アミノ酸、他の炭水化物修飾アミノ酸、ケト含有アミノ酸、アルデヒド含有アミノ酸、ポリエチレングリコールまたは他のポリエーテルを含むアミノ酸、重原子置換アミノ酸、化学的に切断可能なおよび／または光切断可能なアミノ酸、これらに限定されないが、ポリエーテル、または約５個よりも多くのもしくは約１０個よりも多くの炭素を含むがそれらに限定されない長鎖炭化水素を含む、天然アミノ酸と比較して伸長した側鎖を有するアミノ酸、炭素連結糖含有アミノ酸、酸化還元活性アミノ酸、アミノ酸を含むアミノチオ酸、ならびに1つまたは複数の毒性部分を含むアミノ酸。
【０５２１】
[00443]  一部の実施形態では、非天然アミノ酸は、サッカリド部分を含む。そのようなアミノ酸の例としては、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ガラクトサミニル−Ｌ−セリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−スレオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−グルコサミニル−Ｌ−アスパラギン、およびＯ−マンノサミニル−Ｌ−セリンが挙げられる。そのようなアミノ酸の例としては、アミノ酸とサッカリドとの間の天然に存在するＮ−連結またはＯ−連結が、これらに限定されないが、アルケン、オキシム、チオエーテル、およびアミドなどを含む、天然では通常見出されない共有結合連結により置き換えられている例も挙げられる。また、そのようなアミノ酸の例は、２−デオキシ−グルコースおよび２−デオキシガラクトースなど、天然に存在するタンパク質では通常見出されないサッカリドを含む。
【０５２２】
[00444]  非天然アミノ酸の組込みにより抗体に組み込まれる化学部分は、様々な利点およびポリペプチドの操作を提供する。例えば、カルボニル官能基またはジカルボニル官能基（ケト官能基またはアルデヒド官能基を含む）は、その独特な反応性のため、幾つかのヒドラジン含有試薬またはヒドロキシルアミン含有試薬のいずれかを有する抗体をｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏで選択的に修飾することを可能にする。重原子非天然アミノ酸は、例えば、Ｘ線構造データのフェージングに有用であり得る。非天然アミノ酸を使用した重原子の部位特異的導入は、重原子の位置を選択する際の選択性と柔軟性も提供する。光反応性非天然アミノ酸（ベンゾフェノンおよびアリールアジド（フェニルアジドを含むがそれに限定されない）側鎖を有するアミノ酸を含むがこれらに限定されない）は、例えば、ポリペプチドの効率的なｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ光架橋を可能にする。光反応性非天然アミノ酸の例としては、これらに限定されないが、ｐ−アジド−フェニルアラニンおよびｐ−ベンゾイル−フェニルアラニンが挙げられる。次いで、光反応性非天然アミノ酸を有する抗体を、光反応性基の励起により自由自在に架橋して、時間的制御を提供することができる。非限定的な例では、非天然アミノのメチル基を、これに限定されないが同位体で標識されたメチル基で置換して、これらに限定されないが核磁気共鳴法および振動分光法を使用した局所構造およびダイナミクスのプローブとして用いることができる。
【０５２３】
[00445]  求電子反応性基を有するアミノ酸は、求核付加反応を含むがこれに限定されない種々の化学反応により分子を連結するための様々な反応を可能にする。そのような求電子反応基としては、カルボニル基もしくはジカルボニル基（ケト基もしくはアルデヒド基を含む）、カルボニル様基もしくはジカルボニル様基（カルボニル基もしくはジカルボニル基と同様の反応性を有し、構造的にカルボニル基もしくはジカルボニル基に類似する）、遮蔽カルボニル基もしくは遮蔽ジカルボニル基（カルボニル基もしくはジカルボニル基に容易に変換することができる）、または保護カルボニル基もしくは保護ジカルボニル基（脱保護時にカルボニル基もしくはジカルボニル基と同様の反応性を有する）が挙げられる。そのようなアミノ酸としては、式（I）の構造：
【０５２４】
【化１０６】
2022500454.tif 000114
を有するアミノ酸が挙げられ、式中、Ａは、任意選択であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級シクロアルキレン、置換低級シクロアルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、アルキニレン、低級ヘテロアルキレン、置換ヘテロアルキレン、低級ヘテロシクロアルキレン、置換低級ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン(alkarylene)、置換アルカリレン、アラルキレン（aralkylene）、または置換アラルキレンであり、Ｂは任意選択であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、低級ヘテロアルキレン、置換低級ヘテロアルキレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）ｋ−であり、式中、ｋは、１、２、または３であり、−Ｓ（Ｏ）ｋ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｓ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−ＮＲ’−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）ｋＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群から選択されるリンカーであり、
式中、各Ｒ’は、独立してＨ、アルキル、または置換アルキルであり、Ｊは、
【０５２５】
【化１０７】
2022500454.tif 000115
であり、Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルであり、各Ｒ’’は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、もしくは保護基であり、または１つよりも多くのＲ’’基が存在する場合は、２つのＲ’’は任意選択によりヘテロシクロアルキルを形成し、Ｒ１は、Ｈ、アミノ保護基、レジン、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、Ｒ２は、ＯＨ、エステル保護基、レジン、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、Ｒ３およびＲ４の各々は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、もしくは置換低級アルキルであるか、またはＲ３およびＲ４もしくは２つのＲ３基は、任意選択によりシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルを形成し、または−Ａ−Ｂ−Ｊ−Ｒ基は一緒になって、ジカルボニル基を含む少なくとも１つのカルボニル基、保護ジカルボニル基を含む保護カルボニル基、もしくは遮蔽ジカルボニル基を含む遮蔽カルボニル基を含む二環式もしくは三環式のシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルを形成し、または−Ｊ−Ｒ基は一緒になって、ジカルボニル基を含む少なくとも１つのカルボニル基、保護ジカルボニル基を含む保護カルボニル基、もしくは遮蔽ジカルボニル基を含む遮蔽カルボニル基を含む単環式もしくは二環式のシクロアルキルもしくはヘテロシクロアルキルを形成し、ただし、Ａがフェニレンであり、各Ｒ３がＨである場合、Ｂは存在し、Ａが−（ＣＨ２）４−であり、各Ｒ３がＨである場合、Ｂは、−ＮＨＣ（Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２）−ではなく、ＡおよびＢが存在せず、各Ｒ３がＨの場合、Ｒはメチルではない。そのような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、ポリサッカリド、もしくはポリヌクレオチドに組み込まれていてもよく、任意選択により翻訳後修飾されていてもよい。
【０５２６】
[00446]  ある特定の実施形態では、式（I）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも１か月間にわたって水性溶液中で安定である。ある特定の実施形態では、式（I）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも２週間にわたって安定である。ある特定の実施形態では、式（I）の化合物は、弱酸性条件下で少なくとも５日間にわたって安定である。ある特定の実施形態では、そのような酸性条件は、ｐＨ２〜８である。
【０５２７】
[00447]  式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｂは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ（Ｏ）（アルキレンまたは置換アルキレン）−、または−Ｓ（Ｏ）２（アルキレンまたは置換アルキレン）−である。式（Ｉ）の化合物のある特定の実施形態では、Ｂは、−Ｏ（ＣＨ２）−、−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−、−ＮＨＣＨ２−、−ＮＨＣＯ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）−、−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）−、−ＳＣＨ２−、−Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ２−、または−Ｓ（Ｏ）２ＣＨ２−である。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒは、Ｃ１〜６アルキルまたはシクロアルキルである。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒは、−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、またはシクロプロピルである。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒ１は、Ｈ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Boc）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）、Ｎ−アセチル、テトラフルオロアセチル（TFA）、またはベンジルオキシカルボニル（Cbz）である。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒ１は、レジン、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドである。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒ２は、ＯＨ、Ｏ−メチル、Ｏ−エチル、またはＯ−ｔ−ブチルである。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒ２は、レジン、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドである。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒ２は、ポリヌクレオチドである。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒ２は、リボ核酸（RNA）である。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒ２は、ｔＲＮＡである。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、ｔＲＮＡは、セレクターコドン（selector codon）を特異的に認識する。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、セレクターコドンは、アンバーコドン、オーカーコドン、オパールコドン、ユニークコドン、希少コドン、非天然コドン、５塩基コドン、および４塩基コドンからなる群から選択される。式（I）の化合物のある特定の実施形態では、Ｒ２は、抑制性ｔＲＮＡである。
【０５２８】
[00448]  式（I）の化合物のある特定の実施形態では、
【０５２９】
【化１０８】
2022500454.tif 000116
は、（i）Ａは、置換低級アルキレン、Ｃ４−アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、Ｂは、任意選択であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群から選択される二価リンカーであること、（ii）Ａは、任意選択であり、存在する場合は、置換低級アルキレン、Ｃ４−アリーレン、置換アリーレン、ヘテロアリーレン、置換ヘテロアリーレン、アルカリレン、置換アルカリレン、アラルキレン、または置換アラルキレンであり、Ｂは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群から選択される二価リンカーであること、（iii）Ａは、低級アルキレンであり、Ｂは、任意選択であり、存在する場合は、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群から選択される二価リンカーであること、（iv）Ａはフェニレンであり、Ｂは、低級アルキレン、置換低級アルキレン、低級アルケニレン、置換低級アルケニレン、−Ｏ−、−Ｏ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＮＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−ＣＯＮ（Ｒ’）−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−ＣＳＮ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）ＣＯ−（アルキレンまたは置換アルキレン）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）−、−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）’Ｎ−Ｎ（Ｒ’）−、−Ｃ（Ｒ’）＝Ｎ−Ｎ＝、−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ＝Ｎ−、および−Ｃ（Ｒ’）２−Ｎ（Ｒ’）−Ｎ（Ｒ’）−からなる群から選択される二価リンカーであること、からなる群から選択され、Ｊは、
【０５３０】
【化１０９】
2022500454.tif 000117
であり、各Ｒ’は、独立して、Ｈ、アルキル、または置換アルキルであり、Ｒ１は、任意選択であり、存在する場合は、Ｈ、アミノ保護基、レジン、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、Ｒ２は、任意選択であり、存在する場合は、ＯＨ、エステル保護基、レジン、アミノ酸、ポリペプチド、またはポリヌクレオチドであり、各Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、ハロゲン、低級アルキル、または置換低級アルキルであり、Ｒは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、または置換シクロアルキルである。
【０５３１】
[00449]  ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、式ＸＩＸ：
【０５３２】
【化１１０】
2022500454.tif 000118
によるものまたはその塩であってもよく、式中、Ｄは、−Ａｒ−Ｗ３−または−Ｗ１−Ｙ１−Ｃ（Ｏ）−Ｙ２−Ｗ２−であり、Ａｒは、
【０５３３】
【化１１１】
2022500454.tif 000119
であり、Ｗ１、Ｗ２、およびＷ３の各々は、独立して、単結合または低級アルキレンであり、各Ｘ１は、独立して、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり、各Ｙ１は、独立して、単結合、−ＮＨ−、または−Ｏ−であり、各Ｙ２は、独立して、単結合、−ＮＨ−、−Ｏ−、またはＮ−連結型もしくはＣ−連結型ピロリジニレンであり、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の１つは−Ｎ−であり、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の他のものは、独立して−ＣＨ−である。ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、式ＸＩＸａ：
【０５３４】
【化１１２】
2022500454.tif 000120
によりものであり、式中、Ｄは、式ＸＩＸの状況で規定されている通りである。ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、式ＸＩＸｂ：
【０５３５】
【化１１３】
2022500454.tif 000121
によるものまたはその塩であり、式中、Ｗ４は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンである。さらなる実施形態では、Ｗ４は、Ｃ１〜Ｃ５アルキレンである。一実施形態では、Ｗ４は、Ｃ１〜Ｃ３アルキレンである。一実施形態では、Ｗ４は、Ｃ１アルキレンである。特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、
【０５３６】
【化１１４−１】
2022500454.tif 000122
【０５３７】
【化１１４−２】
2022500454.tif 000123
またはそれらの塩からなる群から選択される。そのような非天然アミノ酸は、塩の形態であってもよく、または非天然アミノ酸ポリペプチド、ポリマー、ポリサッカリド、もしくはポリヌクレオチドに組み込まれていてもよく、任意選択により翻訳後修飾されていてもよい。
【０５３８】
[00450]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式Ｉ：
【０５３９】
【化１１５】
2022500454.tif 000124
によるものまたはその塩であり、式中、Ａｒは、
【０５４０】
【化１１６】
2022500454.tif 000125
であり、Ｖは、単結合、低級アルキレン、または−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは低級アルキレンであり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり、各Ｘ１は、独立して、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−であり、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の１つは−ＣＨ−または−Ｎ−であり、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の他のものは、各々独立して−ＣＨ−であり、Ｒは低級アルキルである。ある特定の実施形態では、Ａｒは、
【０５４１】
【化１１７】
2022500454.tif 000126
であり、Ｖは−ＮＨ−であり、その場合、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３の１つは−Ｎ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。
【０５４２】
[00451]  ある特定の実施形態では、Ａｒは、
【０５４３】
【化１１８】
2022500454.tif 000127
であり、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３、およびＸ１は、式Ｉの状況で規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ１はＮである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ２はＮである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ３はＮである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ１はＣＨであり、Ｚ３はＣＨであり、Ｘ１はＳである。
【０５４４】
[00452]  ある特定の実施形態では、Ａｒは、
【０５４５】
【化１１９】
2022500454.tif 000128
であり、Ｚ１、Ｚ２、およびＺ３は、式Ｉの状況で規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ１はＮである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ２はＮである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ３はＮである。
【０５４６】
[00453]  ある特定の実施形態では、Ａｒは、
【０５４７】
【化１２０】
2022500454.tif 000129
であり、Ｚ１、Ｚ３、およびＸ１は、式Ｉの状況で規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ１はＮある。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ３はＮである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｚ１はＣＨであり、Ｚ３はＣＨであり、Ｘ１はＳである。
【０５４８】
[00454]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式Ｉａ：
【０５４９】
【化１２１】
2022500454.tif 000130
によるものであり、式中、Ａｒ、Ｖ、およびＲは、式Ｉの状況にて規定されている。
【０５５０】
[00455]  一実施形態では、式ＩおよびＩａのいずれかの化合物が提供され、式中、Ｖは単結合である。別の実施形態では、式ＩおよびＩａのいずれかの化合物が提供され、式中、Ｖは−ＮＨ−である。別の実施形態では、式ＩおよびＩａのいずれかの化合物が提供され、式中、Ｖは−ＣＨ２ＮＨ−である。
【０５５１】
[00456]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式ＩＩ：
【０５５２】
【化１２２】
2022500454.tif 000131
によるものまたはその塩であり、式中、ＶおよびＲは、式Ｉで規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは単結合または−ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｒはメチルである。
【０５５３】
[00457]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式ＩＩＩ：
【０５５４】
【化１２３】
2022500454.tif 000132
によるものまたはその塩であり、式中、ＶおよびＲは、式Ｉに規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｒはメチルである。
【０５５５】
[00458]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式ＩＶ：
【０５５６】
【化１２４】
2022500454.tif 000133
によるものまたはその塩であり、式中、ＶおよびＲは、式Ｉに規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｒはメチルである。
【０５５７】
[00459]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式Ｖ：
【０５５８】
【化１２５】
2022500454.tif 000134
によるものまたはその塩であり、式中、ＶおよびＲは、式Ｉに規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｒはメチルである。
【０５５９】
[00460]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式ＶＩ：
【０５６０】
【化１２６】
2022500454.tif 000135
によるものまたはその塩であり、式中、ＶおよびＲは、式Ｉに規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｒはメチルである。
【０５６１】
[00461]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式ＶＩＩ：
【０５６２】
【化１２７】
2022500454.tif 000136
によるものまたはその塩であり、式中、ＶおよびＲは、式Ｉに規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｒはメチルである。
【０５６３】
[00462]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式ＶＩＩＩ：
【０５６４】
【化１２８】
2022500454.tif 000137
によるものまたはその塩であり、式中、ＶおよびＲは、式Ｉに規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｒはメチルである。
【０５６５】
[00463]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式ＩＸ：
【０５６６】
【化１２９】
2022500454.tif 000138
によるものまたはその塩であり、式中、ＶおよびＲは、式Ｉに規定されている通りである。この段落によるある特定の実施形態では、Ｖは−Ｗ１−Ｗ２−であり、Ｗ１およびＷ２の一方は存在しないかまたは−ＣＨ２−であり、他方は、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−である。ある特定の実施形態では、Ｖは、単結合、−ＮＨ−、または−ＣＨ２ＮＨ−であり、Ｒはメチルである。
【０５６７】
[00464]  ある特定の実施形態では、修飾アミノ酸は、式５１〜６２：
【０５６８】
【化１３０】
2022500454.tif 000139
のいずれかによるものまたはそれらの塩である。
【０５６９】
[00465]  ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、上記の化合物３０、５３、５６、５９、６０、６１、および６２からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は化合物３０である。ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は化合物５６である。一部の実施形態では、非天然アミノ酸は化合物６１である。一部の実施形態では、非天然アミノ酸は化合物６２である。
【０５７０】
１２．  抗体コンジュゲートの調製
１２．１．  抗原調製
[00466]  抗体の単離に使用されるＦＯＬＲ１タンパク質は、インタクトＦＯＬＲ１であってもよくまたはＦＯＬＲ１の断片であってもよい。インタクトＦＯＬＲ１タンパク質またはＦＯＬＲ１の断片は、単離されたタンパク質の形態であってもよく、または細胞により発現されたタンパク質の形態であってもよい。抗体を生成するために有用なＦＯＬＲ１の他の形態は、当業者であれば明らかであろう。
【０５７１】
１２．２．  モノクローナル抗体
[00467]  モノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６：４９５−４９７（その全体が参照により組み込まれる）により最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して、および／または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照。この文献は、その全体が参照により組み込まれる）により得ることができる。また、モノクローナル抗体は、例えば、ファージまたは酵母に基づくライブラリーを使用して得ることができる。例えば、米国特許第８，２５８，０８２号および第８，６９１，７３０号を参照。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
【０５７２】
[00468]  ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物を免疫して、免疫化に使用されるタンパク質と特異的に結合することになる抗体を産生するかまたは産生することが可能なリンパ球を誘発させる。その代わりに、リンパ球をｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫してもよい。次いで、リンパ球を、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ  Ｊ．Ｗ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ３ｒｄ  ｅｄ．（１９８６）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡを参照。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【０５７３】
[00469]  ハイブリドーマ細胞を、未融合の親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つまたは複数の物質を含む好適な培養培地に播種して成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（HGPRTまたはHPRT）を欠如する場合、ハイブリドーマの培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含むことになり（HAT培地）、こうした物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を防止する。
【０５７４】
[00470]  有用な骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベルの産生を支援し、ＨＡＴ培地の有無などの培地条件に感受性であるものである。これらの中で、好ましい骨髄腫細胞株は、ＭＯＰ−２１およびＭＣ−１１マウス腫瘍（Salk Institute Cell Distribution Center、サンディエゴ、カリフォルニア州から入手可能）、ならびにＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞（アメリカ培養細胞系統保存機関、ロックビル、メリーランド州から入手可能）に由来するものなどのマウス骨髄腫株である。ヒトモノクローナル抗体の産生には、ヒト骨髄腫細胞株およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株も記載されている。例えば、Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８４，１３３：３００１を参照。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【０５７５】
[00471]  所望の特異性、親和性、および／または生物学的活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を特定したら、選択されたクローンを、限界希釈手順によりサブクローニングし、標準的な方法により成長させてもよい。上記のＧｏｄｉｎｇを参照。この目的に好適な培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞を、動物の腹水腫瘍としてｉｎ  ｖｉｖｏで成長させてもよい。
【０５７６】
[00472]  モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離および配列決定することができる。したがって、ハイブリドーマ細胞は、所望の特性を有する抗体をコードするＤＮＡの有用な供給源としての役目を果たすことができる。単離したら、ＤＮＡを発現ベクターに配置し、次いでそれを、細菌（例えば大腸菌（E. coli））、酵母（例えば、サッカロミセス（Saccharomyces）またはピキア種（Pichia sp.））、ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞、またはトランスフェクトしなければ抗体を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞へとトランスフェクトして、モノクローナル抗体を産生させる。
【０５７７】
１２．３．  ヒト化抗体
[00473]  ヒト化抗体は、非ヒトモノクローナル抗体の構造部分のほとんどまたはすべてを、対応するヒト抗体配列で置き換えることにより生成することができる。その結果、抗原特異的可変性部分、すなわちＣＤＲのみが非ヒト配列で構成されているハイブリッド分子が生成される。ヒト化抗体を得るための方法としては、例えば、以下の文献に記載されているものが挙げられる：Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，１９９１，３４９：２９３−２９９；Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９８，９５：８９１０−８９１５；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０００，２７５：３６０７３−３６０７８；Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１９８９，８６：１００２９−１００３３；ならびに米国特許第５，５８５，０８９号、第５，６９３，７６１号、第５，６９３，７６２号、および第６，１８０，３７０号。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
【０５７８】
１２．４．  ヒト抗体
[00474]  ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術により、例えば、トランスジェニック動物（例えば、ヒト化マウス）を使用することにより生成することができる。例えば、Jａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９３，９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９３，３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ，１９９３，７：３３；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、第５，５８９，３６９号、および第５，５４５，８０７号を参照。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。また、ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーから導出することができる（例えば、Hoogenboom et al., J. Mol. Biol., 1991, 227: 381-388；Marks et al., J. Mol. Biol., 1991, 222: 581-597；ならびに米国特許第５，５６５，３３２号および第５，５７３，９０５号を参照。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる）。また、ヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性化Ｂ細胞により生成することができる（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号および第５，２２９，２７５号を参照。これらの文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる）。また、ヒト抗体は、酵母に基づくライブラリーから導出することができる（例えば、米国特許第８，６９１，７３０号を参照。この文献は、その全体が参照により組み込まれる）。
【０５７９】
１２．５．  コンジュゲーション
[00475]  抗体コンジュゲートは、標準的技術により調製することができる。ある特定の実施形態では、抗体とペイロードとの結合を形成するのに好適な条件下で、抗体をペイロード前駆体と接触させて、抗体−ペイロードコンジュゲートを形成する。ある特定の実施形態では、抗体とリンカーとの結合を形成するのに好適な条件下で、抗体をリンカー前駆体と接触させる。得られた抗体−リンカーを、抗体−リンカーとペイロードとの結合を形成するのに好適な条件下でペイロード前駆体と接触させて、抗体−リンカー−ペイロードコンジュゲートを形成する。ある特定の実施形態では、ペイロードとリンカーとの結合を形成するのに好適な条件下で、ペイロード前駆体をリンカー前駆体と接触させる。得られたペイロード−リンカーを、ペイロード−リンカーと抗体との結合を形成するのに好適な条件下で抗体と接触させて、抗体−リンカー−ペイロードコンジュゲートを形成する。抗体コンジュゲートを調製するための好適なリンカーは、本明細書に開示されており、コンジュゲーションの代表的な条件は、下記の実施例に記載されている。
【０５８０】
[00476]  一部の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１コンジュゲートは、本明細書に開示されている通りの抗ＦＯＬＲ１抗体を、（Ａ）〜（Ｌ）：
【０５８１】
【化１３１−１】
2022500454.tif 000140
【０５８２】
【化１３１−２】
2022500454.tif 000141
【０５８３】
【化１３１−３】
2022500454.tif 000142
のいずれかの構造を有するリンカー前駆体と接触させることにより調製される。
【０５８４】
[00477]  一部の実施形態では、（Ａ）〜（Ｌ）として特定されているリンカー前駆体の立体化学は、下記に示されている式（Ａ１）〜（Ｌ１）および（Ａ２）〜（Ｌ２）に示されている通り、各キラル中心が左から右へとＲおよびＳ表記で特定されている。
【０５８５】
【化１３２−１】
2022500454.tif 000143
【０５８６】
【化１３２−２】
2022500454.tif 000144
【０５８７】
【化１３２−３】
2022500454.tif 000145
【０５８８】
【化１３２−４】
2022500454.tif 000146
【０５８９】
【化１３２−５】
2022500454.tif 000147
【０５９０】
【化１３２−６】
2022500454.tif 000148
【０５９１】
【化１３２−７】
2022500454.tif 000149
【０５９２】
１３．  ベクター、宿主細胞、および組換え法
[00478]  また、実施形態は、抗ＦＯＬＲ１抗体をコードする単離された核酸、核酸を含むベクターおよび宿主細胞、ならびに抗体を産生するための組換え技法の提供に関する。
【０５９３】
[00479]  抗体を組換え産生するためには、抗体をコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（つまり、ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入してもよい。一部の態様では、核酸は、例えば、米国特許第５，２０４，２４４号に記載の通り相同組換えにより産生することができる。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【０５９４】
[00480]  多くの異なるベクターが当技術分野で公知である。ベクター成分は、一般に、これらに限定されないが、例えば、米国特許第５，５３４，６１５号に記載のような、シグナル配列、複製起点、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、および転写終結配列の１つまたは複数を含む。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【０５９５】
[00481]  好適な宿主細胞の例示的な例が下記に提供されている。こうした宿主細胞は、限定を意図したものではない。
【０５９６】
[00482]  好適な宿主細胞としては、任意の原核生物（例えば、細菌）細胞、下等真核生物（例えば、酵母）細胞、または高等真核生物（例えば、哺乳動物）細胞が挙げられる。好適な原核生物としては、グラム陰性生物またはグラム陽性生物などの真性細菌、例えば、エシェリヒア属（Escherichia）（大腸菌（E. coli））、エンテロバクター属（Enterobacter）、エルウィニア属（Erwinia）、クレブシェラ属（Klebsiella）、プロテウス属（Proteus）、サルモネラ属（Salmonella）（Ｓ．チフィムリウム（S.typhimurium））、セラチア属（Serratia）（Ｓ．マルセスカンス（S. marcescans））、シゲラ属（Shigella）、バチルス属（Bacilli）（Ｂ．スブチリス（B. subtilis）およびＢ．リケニフォルミス（B. licheniformis））、シュードモナス属（Pseudomonas）（Ｐ．エルギノーザ（P. aeruginosa））、およびストレプトミセス属（Streptomyces）などの腸内細菌科が挙げられる。１つの有用な大腸菌クローニング宿主は、大腸菌２９４であるが、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６、および大腸菌Ｗ３１１０などの他の菌株も好適である。
【０５９７】
[00483]  原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、抗ＦＯＬＲ１抗体をコードするベクターの好適なクローニング宿主または発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、すなわち一般的なパン酵母は、広く使用されている下等真核生物宿主微生物である。しかしながら、スポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）（例えば、SF9）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、クリベロミセス属（Kluyveromyces）（K.ラクティス（K. lactis）、K.フラジリス（K. fragilis）、K.ブルガリカス（K. bulgaricus）  K.ウィッカラミイ（K.wickeramii）、K.ワルチイ（K.waltii）、K.ドロソフィラルム（K.drosophilarum）、K.テルモトレランス（K.thermotolerans）、およびK.マルキシアヌス（K. marxianus））、ヤロウイア属（Yarrowia）、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、カンジダ属（Candida）（C.アルビカンス（C. albicans））、トリコデルマ・リーシア（Trichoderma reesia）、アカパンカビ（Neurospora crassa）、スクワンニオミセス属（Schwanniomyces）（S.オクシデンタリス（S.occidentalis））、ならびに例えばペニシリウム属（Penicillium）、トリポクラジウム属（Tolypocladium）、およびアスペルギルス属（Aspergillus）（A.ニデュランス（A. nidulans）およびA.ニガー（A. niger））などの糸状菌などの、多くの他の属、種、および菌株が、利用可能であり、有用である。
【０５９８】
[00484]  有用な哺乳動物宿主細胞としては、ＣＯＳ−７細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ベビーハムスター腎臓（BHK）細胞、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）、マウスセルトリ細胞、およびアフリカミドリザル腎臓細胞（VERO-76）などが挙げられる。
【０５９９】
[00485]  本発明の抗ＦＯＬＲ１抗体を産生するために使用される宿主細胞は、様々な培地で培養することができる。例えば、ハムＦ１０、最小必須培地（MEM）、ＲＰＭＩ−１６４０、およびダルベッコ変法イーグル培地（DMEM）などの市販培地が、宿主細胞の培養に好適である。加えて、Ｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１９７９，５８：４４；Ｂａｒｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８０，１０２：２５５；ならびに米国特許第４，７６７，７０４号、第４，６５７，８６６号、第４，９２７，７６２号、第４，５６０，６５５号、および第５，１２２，４６９号、またはＷＯ９０／０３４３０およびＷＯ８７／００１９５に記載の培地のいずれかを使用することができる。上述の文献の各々は、その全体が参照により組み込まれる。
【０６００】
[00486]  こうした培地はいずれも、ホルモンおよび／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩など）、緩衝液（HEPESなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生物質、微量元素（通常は、マイクロモル範囲の終濃度で存在する無機化合物であると規定される）、およびグルコースまたは等価なエネルギー源で、必要に応じて補完されていてもよい。また、任意の他の必要な補完剤が適切な濃度で含まれていてもよく、適切な濃度は、当業者に公知であろう。
【０６０１】
[00487]  温度およびｐＨなどの培養条件は、発現のために選択した宿主細胞で以前に使用されているものであり、当業者であれば明白であろう。
【０６０２】
[00488]  組換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内で、ペリプラズム空間で、産生させてもよく、または培地へと直接分泌させてもよい。抗体を細胞内で産生させる場合、最初の工程として、粒子状残屑を、宿主細胞または溶解断片のいずれかに関わらず、例えば遠心分離または限外濾過により除去する。例えば、Ｃａｒｔｅｒら（Bio/Technology, 1992, 10:163-167）には、大腸菌のペリプラズム空間へと分泌される抗体を単離するための手順が記載されている。手短に言えば、細胞ペーストを、酢酸ナトリウム（pH 3.5）、ＥＤＴＡ、およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（PMSF）の存在下で約３０分間にわたって解凍する。細胞残屑は、遠心分離により除去することができる。
【０６０３】
[00489]  一部の実施形態では、抗体は、無細胞系で産生される。一部の態様では、無細胞系は、Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１２，４：２１７−２２５に記載のような、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写および翻訳系である。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。一部の態様では、無細胞系では、真核細胞からまたは原核細胞からの無細胞抽出物が使用される。一部の態様では、原核細胞は大腸菌である。抗体の無細胞発現は、例えば、抗体が不溶性凝集体として細胞内に蓄積する場合、またはペリプラズム発現からの収量が低い場合に有用であり得る。無細胞系で産生される抗体は、細胞の供給源に応じて非グリコシル化されている場合がある。
【０６０４】
[00490]  抗体が培地へと分泌される場合、そのような発現系に由来する上清は、一般にまず、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）またはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ（登録商標）Ｐｅｌｌｃｏｎ（登録商標）限外濾過ユニットを使用して濃縮される。上述の工程のいずれかには、タンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が含まれていてもよく、偶発的な夾雑物の成長を防止するために抗生物質が含まれていてもよい。
【０６０５】
[00491]  細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、および親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーは、特に有用な精製技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２、またはγ４重鎖に基づく抗体の精製に使用することができる（Lindmark et al., J. Immunol. Meth., 1983, 62:1-13。この文献は、その全体が参照により組み込まれる）。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプおよびヒトγ３に有用である（Guss et al., EMBO J., 1986, 5:1567-1575。この文献は、その全体が参照により組み込まれる）。
【０６０６】
[00492]  親和性リガンドが付着されているマトリックスは、ほとんどの場合でアガロースであるが、他のマトリックスも利用可能である。細孔制御ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスは、アガロースで達成することができるものよりも速い流量および短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、ＢａｋｅｒＢｏｎｄ  ＡＢＸ（登録商標）レジンが精製に有用である。
【０６０７】
[00493]  イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈殿など、タンパク質精製の他の技法も利用可能であり、当業者であれば適用することができる。
【０６０８】
[00494]  任意の予備精製工程に続いて、目的の抗体および夾雑物を含む混合物を、一般には低塩濃度（例えば、約０〜約０．２５Ｍの塩）で実施され、ｐＨが約２．５から約４．５の間の溶出緩衝液が使用される低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供してもよい。
【０６０９】
１４．  医薬組成物および投与の方法
[00495]  本明細書で提供される抗体コンジュゲートは、当技術分野で利用可能な方法および本明細書で開示される方法を使用して医薬組成物へと製剤化することができる。本明細書で提供される抗体コンジュゲートはいずれも、適切な医薬組成物で提供することができ、好適な投与の経路で投与することができる。
【０６１０】
[00496]  本明細書で提供される方法は、本明細書で提供される少なくとも１つの抗体コンジュゲートおよび１つまたは複数の適合性で薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを包含する。この状況では、「薬学的に許容される」という用語は、連邦政府もしくは州政府の規制当局により承認されているか、または動物、より具体的にはヒトでの使用が米国薬局方もしくは他の一般に認識されている薬局方のリストにあることを意味する。「担体」という用語は、療法剤がそれらと共に投与される希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全および不完全）、賦形剤、またはビヒクルを含む。そのような医薬担体は、落花生油、大豆油、鉱物油、およびゴマ油などの、石油、動物、植物、または合成由来のものを含む、水および油などの無菌液体であってもよい。医薬組成物を静脈内投与する場合、担体として水を使用することができる。特に注射用溶液の場合、生理食塩溶液ならびに水性デキストロースおよびグリセロール溶液も、液体担体として使用することができる。適切な医薬担体の例は、Ｍａｒｔｉｎ，Ｅ．Ｗ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。
【０６１１】
[00497]  臨床業務では、本明細書で提供される医薬組成物または抗体コンジュゲートは、当技術分野で公知の任意の経路で投与することができる。代表的な投与の経路としては、これらに限定されないが、吸入、動脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、経鼻、非経口、肺内、および皮下経路が挙げられる。一部の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物または抗体コンジュゲートは、非経口投与される。
【０６１２】
[00498]  非経口投与用の組成物は、乳濁液であってもよくまたは無菌溶液であってもよい。非経口組成物は、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、および注射用有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）を含んでいてもよい。また、こうした組成物は、湿潤剤、等張剤、乳化剤、分散剤、および安定化剤を含んでいてもよい。滅菌は、幾つかの様式で、例えば、細菌学的フィルターを使用して、放射線により、または加熱により実施することができる。また、非経口組成物は、使用時に無菌水または任意の他の注射用無菌媒体に溶解することができる無菌固形組成物の形態に調製することができる。
【０６１３】
[00499]  一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、医薬組成物または単一単位剤形である。本明細書で提供される医薬組成物および単一単位剤形は、予防または治療有効量の１つまたは複数の予防用または治療用抗体コンジュゲートを含む。
【０６１４】
[00500]  医薬組成物は、１つまたは複数の医薬賦形剤を含んでいてもよい。任意の好適な医薬賦形剤を使用することができ、当業者であれば、好適な医薬賦形剤を選択することが可能である。好適な賦形剤の非限定的な例としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、麦芽、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、およびエタノールなどが挙げられる。特定の賦形剤が医薬組成物または剤形への組込みに好適であるか否かは、剤形が対象に投与されることになる様式および剤形中にある特定の抗体を含むがこれらに限定されない、当技術分野で周知の様々な要因に依存する。また、組成物または単一単位剤形は、必要に応じて、少量の湿潤剤または乳化剤またはｐＨ緩衝剤を含んでいてもよい。したがって、下記で提供される医薬賦形剤は、例示のためであり、限定ではない。追加の医薬賦形剤としては、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）６ｔｈ  Ｅｄ．（２００９）に記載のものが挙げられる。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【０６１５】
[00501]  一部の実施形態では、医薬組成物は消泡剤を含む。任意の好適な消泡剤を使用することができる。一部の態様では、消泡剤は、アルコール、エーテル、油、ワックス、シリコーン、界面活性剤、およびそれらの組合せから選択される。一部の態様では、消泡剤は、鉱物油、植物油、エチレンビスステアラミド、パラフィンワックス、エステルワックス、脂肪アルコールワックス、長鎖脂肪アルコール、脂肪酸石鹸、脂肪酸エステル、ケイ素グリコール（silicon glycol）、フルオロシリコーン、ポリエチレングリコール−ポリプロピレングリコールコポリマー、ポリジメチルシロキサン−二酸化ケイ素、エーテル、オクチルアルコール、カプリルアルコール、トリオレイン酸ソルビタン、エチルアルコール、２−エチルヘキサノール、ジメチコーン、オレイルアルコール、シメチコン、およびそれらの組合せから選択される。
【０６１６】
[00502]  一部の実施形態では、医薬組成物は共溶媒を含む。共溶媒の例示的な例としては、エタノール、ポリ（エチレングリコール）グリコール、ブチレングリコール、ジメチルアセトアミド、グリセリン、およびプロピレングリコールが挙げられる。
【０６１７】
[00503]  一部の実施形態では、医薬組成物は緩衝剤を含む。緩衝液剤の例示的な例としては、酢酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、水酸化物、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、グリシン、メチオニン、グアーガム、およびグルタミン酸一ナトリウムが挙げられる。
【０６１８】
[00504]  一部の実施形態では、医薬組成物は担体または充填剤を含む。担体または充填剤の例示的な例としては、ラクトース、マルトデキストリン、マンニトール、ソルビトール、キトサン、ステアリン酸、キサンタンガム、およびグアーガムが挙げられる。
【０６１９】
[00505]  一部の実施形態では、医薬組成物は界面活性剤を含む。界面活性剤の例示的な例としては、ｄ−アルファトコフェロール、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、ドキュセートナトリウム、ベヘン酸グリセリル、モノオレイン酸グリセリル、ラウリン酸、マクロゴール１５ヒドロキシステアレート、ミリスチルアルコール、リン脂質、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ステアリン酸ポリオキシエチレン、ポリオキシルグリセリド、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンエステル、およびビタミンＥポリエチレン（グリコール）スクシネートが挙げられる。
【０６２０】
[00506]  一部の実施形態では、医薬組成物は固結防止剤を含む。固結防止剤の例示的な例としては、リン酸カルシウム（三塩基性）、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、および酸化マグネシウムが挙げられる。
【０６２１】
[00507]  医薬組成物と共に使用することができる他の賦形剤としては、例えば、アルブミン、抗酸化剤、抗細菌剤、抗真菌剤、生体吸収性高分子、キレート剤、放出制御剤、希釈剤、分散剤、溶解促進剤、乳化剤、ゲル化剤、軟膏基剤、浸透促進剤、保存剤、可溶化剤、溶媒、安定化剤、および糖が挙げられる。こうした薬剤の各々の具体的な例は、例えば、ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．）６ｔｈ  Ｅｄ．（２００９），Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓに記載されている。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。
【０６２２】
[00508]  一部の実施形態では、医薬組成物は溶媒を含む。一部の態様では、溶媒は、無菌等張性生理食塩溶液またはデキストロース溶液などの生理食塩溶液である。一部の態様では、溶媒は、注射用の水である。
【０６２３】
[00509]  一部の実施形態では、医薬組成物は、マイクロ粒子またはナノ粒子などの粒子形態である。マイクロ粒子およびナノ粒子は、ポリマーまたは脂質などの任意の好適な材料で形成されていてもよい。一部の態様では、マイクロ粒子またはナノ粒子は、ミセル、リポソーム、またはポリマーソームである。
【０６２４】
[00510]  一部の実施形態では、一部の抗体は水により分解が促進される場合があるため、本明細書では、抗体コンジュゲートを含む無水医薬組成物および剤形がさらに提供される。
【０６２５】
[00511]  本明細書で提供される無水医薬組成物および剤形は、無水または低水分含有成分および低水分または低湿度条件を使用して調製することができる。製造、包装、および／または保管中に水分および／または湿気との実質的な接触が予想される場合、ラクトース、および一級または二級アミンを含む少なくとも１つの活性成分を含む医薬組成物および剤形は、無水であり得る。
【０６２６】
[00512]  無水医薬組成物は、その無水性が維持されるように調製および保管することができる。したがって、無水組成物は、好適な製剤キットに含めることができるように、水への曝露を防止することが知られている材料を使用して包装することができる。好適な包装の例としては、これらに限定されないが、気密封止ホイル、プラスチック、単位用量容器（例えば、バイアル）、ブリスター包装、およびストリップ包装が挙げられる。
【０６２７】
[00513]  本明細書で提供される無ラクトース組成物は、当技術分野で周知であり、例えば、米国薬局方（USP）ＳＰ（XXI）／ＮＦ（XVI）にリストされている賦形剤を含んでいてもよい。一般に、無ラクトース組成物は、活性成分、結合剤／充填剤、および潤滑剤を、薬学的に適合性であり薬学的に許容される量で含む。代表的な無ラクトース剤形は、有効成分、微結晶性セルロース、アルファ化デンプン、およびステアリン酸マグネシウムを含む。
【０６２８】
[00514]  抗体または抗体−コンジュゲートが分解することになる速度を低減させる１つまたは複数の賦形剤を含む医薬組成物および剤形も提供される。本明細書では「安定剤」と呼ばれるそのような賦形剤としては、これらに限定されないが、アスコルビン酸などの抗酸化剤、ｐＨ緩衝剤、または塩緩衝剤が挙げられる。
【０６２９】
１４．１．  非経口剤形
[00515]  ある特定の実施形態では、非経口剤形が提供される。非経口剤形は、これらに限定されないが、皮下、静脈内（ボーラス注射を含む）、筋肉内、および動脈内を含む種々の経路により対象に投与することができる。それらの投与は、典型的には夾雑物に対する対象の自然防御を迂回するため、非経口剤形は、典型的には、滅菌されているか、または対象に投与する前に滅菌することが可能である。非経口剤形の例としては、これらに限定されないが、そのまま注射できる溶液、注射用の薬学的に許容されるビヒクルにそのまま溶解または懸濁できる乾燥製品、そのまま注射できる懸濁液、および乳濁液が挙げられる。
【０６３０】
[00516]  非経口剤形を提供するために使用することができる好適なビヒクルは、当業者に周知である。例としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：ＵＳＰの注射用水；塩化ナトリウム注射剤、リンゲル注射剤、デキストロース注射剤、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射剤、および乳酸化リンゲル注射剤などの水性ビヒクル；エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコールなどであるがこれらに限定されない水混和性ビヒクル；コーン油、綿実油、落花生油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンジルなどであるがこれらに限定されない非水性ビヒクル。
【０６３１】
[00517]  また、本明細書で開示される抗体の１つまたは複数の溶解度を増加させる賦形剤を、非経口剤形に組み込むことができる。
【０６３２】
１４．２．  投薬量および単位剤形
[00518]  ヒト療法剤では、予防的治療であるかまたは治癒的治療であるかに応じて、ならびに治療しようとする対象の年齢、体重、状態、および対象に特有の他の要因に応じて、最も適切であると考える薬量を医師が決定することになる。
【０６３３】
[00519]  ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、医薬組成物または単一単位剤形である。本明細書で提供される医薬組成物および単一単位剤形は、予防または治療有効量の１つまたは複数の予防用または治療用抗体を含む。
【０６３４】
[00520]  障害またはその１つもしくは複数の症状の予防または治療に有効となると予想される抗体コンジュゲートまたは組成物の量は、疾患または状態の性質および重症度、ならびに抗体が投与される経路により様々と予想される。また、頻度および投薬量は、施される具体的な療法（例えば、療法剤または予防剤）、障害、疾患、または状態の重症度、投与の経路、ならびに対象の年齢、体重、応答、および過去の病歴に応じて、各対象に特有の要因により様々であろう。有効用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたは動物モデル試験系から導かれる用量反応曲線から外挿することができる。
【０６３５】
[00521]  ある特定の実施形態では、組成物の代表的な用量としては、対象または試料重量の１キログラム当たりミリグラム量またはマイクログラム量の抗体が挙げられる（例えば、１キログラム当たり約１０マイクログラム〜１キログラム当たり約５０ミリグラム、１キログラム当たり約１００マイクログラム〜１キログラム当たり約２５ミリグラム、または１キログラム当たり約１００マイクログラム〜１キログラム当たり約１０ミリグラム）。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体コンジュゲートの投薬量は、対象における障害またはその１つもしくは複数の症状を予防、治療、管理、または改善するために投与される抗体の重量に基づき、対象の体重の０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇであるか、またはそれよりも多い。別の実施形態では、対象における障害またはその１つもしくは複数の症状を予防、治療、管理、または改善するために投与される、本組成物または本明細書で提供される組成物の投薬量は、０．１ｍｇ〜２００ｍｇ、０．１ｍｇ〜１００ｍｇ、０．１ｍｇ〜５０ｍｇ、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ、０．１ｍｇ〜２０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ、０．１ｍｇ〜７．５ｍｇ、０．１ｍｇ〜５ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜２０ｍｇ、０．２５〜１５ｍｇ、０．２５〜１２ｍｇ、０．２５〜１０ｍｇ、０．２５ｍｇ〜７．５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜２．５ｍｇ、０．５ｍｇ〜２０ｍｇ、０．５〜１５ｍｇ、０．５〜１２ｍｇ、０．５〜１０ｍｇ、０．５ｍｇ〜７．５ｍｇ、０．５ｍｇ〜５ｍｇ、０．５ｍｇ〜２．５ｍｇ、１ｍｇ〜２０ｍｇ、１ｍｇ〜１５ｍｇ、１ｍｇ〜１２ｍｇ、１ｍｇ〜１０ｍｇ、１ｍｇ〜７．５ｍｇ、１ｍｇ〜５ｍｇ、または１ｍｇ〜２．５ｍｇである。
【０６３６】
[00522]  用量は、好適なスケジュールに従って、例えば、週に１回、２回、３回、または数回投与することができる。当業者であれば自明のことになるが、一部の場合では、本明細書で開示される範囲の外側にある抗体コンジュゲートの投薬量を使用する必要があり得る。さらに、臨床医または治療を行う医師は、対象の応答に連動して、療法を中断、調整、または終了するための方法および時期を知ることになることに留意されたい。
【０６３７】
[00523]  当業者であれば直ちに知ることになるが、異なる疾患および状態には、異なる治療有効量が適用可能であってもよい。同様に、そのような障害を予防、管理、治療、または改善するには十分であるが、本明細書で提供される抗体に関連付けられる有害効果を引き起こすには不十分であるかまたはそれらを低減するのに十分である量も、本明細書に記載の投薬量および投与頻度スケジュールに包含される。さらに、本明細書で提供される組成物の複数投薬量が対象に投与される場合、すべての投薬量が同じである必要はない。例えば、対象に投与される投薬量は、組成物の予防的または療法的効果を向上させるために増加させてもよく、または特定の対象が経験している１つまたは複数の副作用を低減するために減少させてもよい。
【０６３８】
[00524]  ある特定の実施形態では、治療または予防は、本明細書で提供される抗体コンジュゲートまたは組成物の１つまたは複数の負荷用量で開始し、１つまたは複数の維持用量がそれに続いてもよい。
【０６３９】
[00525]  ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体コンジュゲートまたは組成物の用量を投与して、対象の血液中または血清中の抗体の定常状態濃度を達成することができる。定常状態濃度は、当業者に利用可能な技法に従って測定することにより決定してもよく、または身長、体重、および年齢など、対象の身体的特色に基づいていてもよい。
【０６４０】
[00526]  ある特定の実施形態では、同じ組成物の投与を繰り返してもよく、投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２か月、７５日、３か月、または６か月間の間隔があけられていてもよい。他の実施形態では、同じ予防剤または療法剤の投与を繰り返してもよく、投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、１０日、１５日、３０日、４５日、２か月、７５日、３か月、または６か月間の間隔があけられていてもよい。
【０６４１】
１４．３．  併用療法および製剤
[00527]  ある特定の実施形態では、本明細書で開示される１つまたは複数の化学療法剤と組み合わせて、本明細書で提供される抗体コンジュゲートのいずれかを含む組成物および療法剤製剤、ならびにそれを必要とする対象にそのような組合せを投与することを含む治療方法が提供される。化学療法剤の例としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：エルロチニブ（TARCEVA（登録商標）、Genentech/OSI Pharm.）、ボルテゾミブ（VELCADE（登録商標）、Millennium Pharm.）、フルベストラント（FASLODEX（登録商標）、AstraZeneca）、スーテント（SU11248、Pfizer）、レトロゾール（FEMARA（登録商標）、Novartis）、イマチニブメシル酸塩（GLEEVEC（登録商標）、Novartis）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（Novartis）、オキサリプラチン（Eloxatin（登録商標）、Sanofi）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、RAPAMUNE（登録商標）、Wyeth）、ラパチニブ（TYKERB（登録商標）、GSK572016、Glaxo Smith Kline）、ロナファーニブ（SCH 66336）、ソラフェニブ（BAY43-9006、Bayer Labs）、およびゲフィチニブ（IRESSA（登録商標）、AstraZeneca）、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（SU5271; Sugen）、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロスホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビセレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログであるKW-2189およびCB1-TM1を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロマファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなどのニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特に、ウンシアラマイシン、カリチアマイシンガンマll、およびカリチアマイシンオメガll（Angew Chem. Intl. Ed. Engl.（1994）33:183-186）などの抗生物質；ジネミシンAを含むジネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびにネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノル��シン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ドキソルビシン）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミトマイシンＣなどのミトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサートおよび５−フルオロウラシル（5-FU）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プラジエノリドＢ、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアムニプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗アドレナリン剤；フォリン酸などの葉酸補給物質；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート；デホファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシンおよびアンサミトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）ポリサッカリド複合体（JHS Natural Products、ユージーン、オレゴン州）； ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、T-2毒素、ベラクリンA、ロリジンA、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ara-C」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）（パクリタキセル；Bristol-Myers Squibb Oncology、プリンストン、ニュージャージー州）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（クレモフォールフリー）、パクリタキセルのアルブミン加工ナノ粒子製剤（American Pharmaceutical Partners、シャウムベルク、イリノイ州）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル；Rhone-Poulenc Rorer、アントニー、フランス）；クロラムブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；エトポシド（VP-16）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（XELODA（登録商標））；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（DMFO）；レチノイン酸などのレチノイド；ならびに上記のもののいずれかの薬学的に許容される塩、酸、および誘導体。
【０６４２】
[00528]  ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と組み合わせて、本明細書で提供される抗体コンジュゲートのいずれかを含む組成物および療法製剤、ならびにそれを必要とする対象にそのような組合せを投与することを含む治療方法が提供される。一部の実施形態では、１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１経路の小分子遮断剤を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１活性を阻害する抗体を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＣＡ−１７０、ＢＭＳ−８、ＢＭＳ−２０２、ＢＭＳ−９３６５５８、ＣＫ−３０１、およびＡＵＮＰ１２からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、アベルマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＡＭＰ−２２４（GlaxoSmithKline）、ＭＥＤＩ０６８０／ＡＭＰ−５１４（AstraZeneca）、ＰＤＲ００１（Novartis）、セミプリマブ、ＴＳＲ−０４２（Tesaro）、チズレリズマブ／ＢＧＢ−Ａ３１７（Beigene）、ＣＫ−３０１（Checkpoint Therapeutics）、ＢＭＳ−９３６５５９（Bristol-Meyers Squibb）、カムレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ゲノリムズマブ（genolimzumab）、およびＡ１６７（Sichuan Kelun-Biotech Biopharmaceutical）からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＭＧＡ０１２（Incyte/MacroGenics）、ＰＦ−０６８０１５９１（Pfizer/Merck KGaA）、ＬＹ３３０００５４（Eli Lilly）、ＦＡＺ０５３（Novartis）、ＰＤ−１１（Novartis）、ＣＸ−０７２（CytomX）、ＢＧＢ−Ａ３３３（Beigene）、ＢＩ  ７５４０９１（Boehringer Ingelheim）、ＪＮＪ−６３７２３２８３（Johnson and Johnson/Jannsen）、ＡＧＥＮ２０３４（Agenus）、ＣＡ−３２７（Curis）、ＣＸ−１８８（CytomX）、ＳＴＩ−Ａ１１１０（Servier）、ＪＴＸ−４０１４（Jounce）、（LLY）ＡＭ０００１（Armo Biosciences）、ＣＢＴ−５０２（CBT Pharmaceuticals）、ＦＳ１１８（F-Star/Merck KGaA）、ＸｍＡｂ２０７１７（Xencor）、ＸｍＡｂ２３１０４（Xencor）、ＡＢ１２２（Arcus Biosciences）、ＫＹ１００３（Kymab）、ＲＸＩ−７６２（RXi）からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、ＰＲＳ−３３２（Pieris Pharmaceuticals）、ＡＬＰＮ−２０２（Alpine Immune Science）、ＴＳＲ−０７５（Tesaro/Anaptys Bio）、ＭＣＬＡ−１４５（Merus）、ＭＧＤ０１３（Macrogenics）、ＭＧＤ０１９（Macrogenics）からなる群から選択される。一部の実施形態では、１つまたは複数のＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤は、例えば、ＷＯ２０１６／０７７３９７、ＷＯ２０１８／１５６７７７、および２０１８年５月２３日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３４２１３号に記載の抗ＰＤ１単一特異性または二重特異性抗体から選択される。
【０６４３】
[00529]  本明細書で開示される抗体コンジュゲートと組み合わせて投与される作用剤は、抗体コンジュゲートの投与の直前に、投与と同時に、または投与の直後に投与することができる。本開示の目的では、そのような投与レジメンは、追加の療法的に活性な成分と「組み合わせた」抗体コンジュゲートの投与とみなされる。実施形態としては、本明細書で開示される抗体コンジュゲートが、本明細書で開示される化学療法剤、ＰＤ−１阻害剤、またはＰＤ−Ｌ１阻害剤の１つまたは複数と共に共製剤化されている医薬組成物が挙げられる。
【０６４４】
１５．  療法応用
[00530]  療法応用の場合、本明細書で提供される抗体コンジュゲートは、当技術分野で公知であるものおよび上記で考察されているものなどの薬学的に許容される剤形で、哺乳動物、一般にはヒトに投与することができる。例えば、抗体コンジュゲートは、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内、または腫瘍内経路により、ボーラスとしてまたは一定期間にわたる持続注入によりヒトに静脈内投与することができる。また、抗体コンジュゲートは、局所的ならびに全身的な療法効果を発揮するように、腫瘍周囲、病変内、または病変周囲経路により好適に投与される。腹腔内経路は、例えば、卵巣腫瘍の治療に特に有用であり得る。
【０６４５】
[00531]  本明細書で提供される抗体コンジュゲートは、葉酸受容体アルファ（FOLR1）が関与する任意の疾患または状態の治療に有用であり得る。一部の実施形態では、疾患または状態は、葉酸受容体アルファの過剰発現により診断することができる疾患または状態である。一部の実施形態では、疾患または状態は、抗葉酸受容体アルファ抗体による治療から利益を得ることができる疾患または状態である。一部の実施形態では、疾患または状態はがんである。
【０６４６】
[00532]  任意の好適ながんを、本明細書で提供される抗体コンジュゲートで治療することができる。例示的で好適ながんとしては、以下のものが挙げられる：例えば、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、急性骨髄性白血病（AML）、副腎皮質癌、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、脳腫瘍、胆管がん、膀胱がん、骨がん、乳がん（トリプルネガティブ乳がん、すなわちTNBCを含む）、気管支腫瘍、原発不明の癌腫、心臓腫瘍、子宮頸がん、脊索腫、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、腺管癌、胚芽腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ファロピウス管癌、線維性組織球腫、ユーイング肉腫、眼がん、胚細胞腫瘍、胆嚢がん、胃がん、消化管カルチノイド腫瘍、胃腸間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、頭頸部がん、肝細胞がん、組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼内黒色腫、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓がん、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭がん、唇口腔がん、肝臓がん、上皮内小葉癌、肺がん、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、ＮＵＴ遺伝子が関与する原発不明正中線管癌（occult primary, midline tract carcinoma）を伴う転移性扁平上皮がん、口腔がん、多発性内分泌腺腫症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性新生物、鼻腔傍鼻洞がん、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非小細胞肺がん（NSCLC）、中咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、乳頭腫、傍神経節腫、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺がん、直腸がん、腎細胞がん、腎盂尿管がん、網膜芽細胞腫、ラブドイド腫瘍、唾液腺がん、セザリー症候群、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟組織肉腫、脊髄腫瘍、胃がん、Ｔ細胞リンパ腫、奇形腫、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫および胸腺癌、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、膣がん、外陰部がん、ならびにウィルムス腫瘍。
【０６４７】
[00533]  一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体コンジュゲートで治療される疾患は、胃がん、結腸直腸がん、腎細胞癌、子宮頸部がん、非小細胞肺癌、卵巣がん、子宮がん、ファロピウス管癌、原発性腹膜癌、子宮体癌、子宮内膜癌、前立腺がん、乳がん、頭頸部がん、脳癌、肝臓がん、膵臓がん、中皮腫、および／または上皮由来のがんである。ある特定の実施形態では、疾患は結腸直腸がんである。一部の実施形態では、疾患は卵巣がんである。一部の実施形態では、疾患は乳がんである。一部の実施形態では、疾患は、トリプルネガティブ乳がん（TNBC）である。一部の実施形態では、疾患は肺がんである。一部の実施形態では、疾患は、非小細胞肺がん（NSCLC）である。一部の実施形態では、疾患は頭頸部がんである。一部の実施形態では、疾患は腎細胞癌である。一部の実施形態では、疾患は脳癌である。一部の実施形態では、疾患は子宮内膜がんである。
【０６４８】
１６．  診断応用
[00534]  一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体コンジュゲートは、診断応用に使用される。例えば、抗ＦＯＬＲ１抗体コンジュゲートは、ＦＯＬＲ１タンパク質のアッセイに有用であり得る。一部の態様では、抗体コンジュゲートは、種々の細胞および組織におけるＦＯＬＲ１の発現を検出するために使用することができる。こうしたアッセイは、例えば、がんなどの疾患の診断および／または予後の実施に有用であり得る。
【０６４９】
[00535]  一部の診断応用および予後応用では、抗体コンジュゲートは、検出可能な部分で標識されていてもよい。好適な検出可能な部分としては、これらに限定されないが、放射性同位体、蛍光標識、および酵素基質標識が挙げられる。別の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１抗体コンジュゲートは標識されている必要はなく、抗体コンジュゲートの存在は、抗ＦＯＬＲ１抗体コンジュゲートに特異的に結合する標識抗体を使用して検出することができる。
【０６５０】
１７．  親和性精製試薬
[00536]  本明細書で提供される抗体コンジュゲートは、親和性精製剤として使用することができる。このプロセスでは、抗体コンジュゲートは、当技術分野で周知の方法を使用して、レジンまたは濾紙などの固相に固定化することができる。固定化された抗体コンジュゲートを、精製しようとする葉酸受容体アルファタンパク質（またはその断片）を含む試料と接触させ、その後、支持体を、固定化された抗体に結合している葉酸受容体アルファタンパク質を除く、試料中の実質的にすべての物質を除去することになる好適な溶媒で洗浄する。最後に、支持体を、グリシン緩衝液、ｐＨ５．０などの別の好適な溶媒で洗浄し、それにより葉酸受容体アルファタンパク質が抗体から放出されることになる。
【０６５１】
[00537]  １８．  キット
一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＦＯＬＲ１抗体コンジュゲートは、キットの形態で、つまり、所定量の試薬と手順を実施するための使用説明書とのパッケージ化された組合せで提供される。一部の実施形態では、手順は、診断アッセイである。他の実施形態では、手順は、療法手順である。
【０６５２】
[00538]  一部の実施形態では、キットは、抗ＦＯＬＲ１抗体コンジュゲートを再構成するための溶媒をさらに含む。一部の実施形態では、抗ＦＯＬＲ１抗体コンジュゲートは、医薬組成物の形態で提供される。
【実施例】
【０６５３】
実施例１
抗ＦＯＬＲ１抗体の生成および一次スクリーニング
[00539]  相補性決定領域（CDR）を標的とする突然変異誘発性プライマーを用いた標準的オーバーラップ伸長ＰＣＲプロトコールを使用して、抗体Ｆａｂライブラリーを構築した。Ｈｅｃｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｐｅａｓｅ，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．，２００７，２：９２４−９３２；Ｓｔａｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２７：９７−１０９を参照。これらの文献は両方とも、それらの全体が参照により組み込まれる。新規抗体の選択は、標準的リボソームディスプレイプロトコールを使用して実施した。Ｄｒｅｉｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，２０１１，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ６８７：２８３−３０６を参照。この文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０６５４】
[00540]  トラスツズマブＨＣを基本鋳型として使用したオーバーラップＰＣＲにより構築されたナイーブヒトライブラリーから、リボソームディスプレイに由来する初期抗体リードを導出した。ＣＤＲ  Ｈ１およびＨ２を、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入したオリゴヌクレオチドを使用して、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００４，３４０：１０７３−１０９３の記載と同じ設計でランダム化した。この設計では、ＣＤＲ  Ｈ１およびＨ２は、天然ヒト抗体で観察されるアミノ酸分布と緊密に一致する。ＣＤＲ  Ｈ３は、アミノ酸ランダム化のために三量体ホスホルアミダイト混合物（TRIM）を組み込んだオリゴヌクレオチドを使用して多様化した。ＴＲＩＭオリゴを、Ｙａｇｏｄｋｉｎ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ２００７，２６：４７３−９７に記載の通りに合成した。具体的には、ＴＲＩＭを含む6つの別々のオリゴヌクレオチドを使用して、6つの別々のＨ３ループ長（13〜18；Zemlin et al.により規定されている）を製作し、ヒトレパートリーで観察される最も一般的なループ長と一致させた。併せると、こうしたループ長は、Ｚｅｍｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００３，３３４：７３３−７４９により報告されている通り、ヒトＩｇＧにおいて天然に生じるループ長変異のおよそ５４．５％を構成する。各アミノ酸の頻度分布は、Ｚｅｍｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．により報告されている通りの、ヒトＩｇＧのＣＤＲ  Ｈ３で観察されるアミノ酸の分布と緊密に一致するように設計した。すべてまとめると、このライブラリーは、Ｚｈａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２０１１，４１２：５５−７１により記載の通りの、抗体安定性および抗体のフォールディングを向上させることが当分野で公知である天然ヒト抗体変異と緊密に一致する。この重鎖（HC）ライブラリーを、Ｓｔａｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ  ２０１４，２７：９７−１０９に記載の通り、選択プロセス全体にわたって定常未修飾トラスツズマブ軽鎖（LC）と対にした。
【０６５５】
[00541]  Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  ＭＷＧ  Ｏｐｅｒｏｎから購入した「ソフトランダム化」オリゴヌクレオチドを使用したオーバーラップＰＣＲにより構築した、２つのリードに対してバイアスされたフォーカスドライブラリー（focused library）から、親和性成熟抗体リード（例えば、下記のＳＲＰ１８４８抗体）を導出した。ソフトランダム化とは、親アミノ酸配列が他のアミノ酸よりも約３０％の確率でより頻繁にコードされるように、各ソフトランダム化コドンにヌクレオチドのバイアス分布が使用されるプロセスである。他のアミノ酸が各位置でコードされるが、パーセンテージはより低い。各ソフトランダム化位置では、親ヌクレオチドの７０％は、他の３つのヌクレオチド１０％と混合される。このライブラリーでは、ＣＤＲ  Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３を同時にソフトランダム化し、標準的リボソームディスプレイプロトコールで選択した。初期リードの選択と同様に、親和性成熟抗体を、Ｓｔａｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ  ２０１４，２７：９７−１０９に記載の通り選択プロセス全体にわたって、定常未修飾トラスツズマブＬＣと対にした。
【０６５６】
[00542]  新規抗体の選択は、標準的リボソームディスプレイプロトコールを使用して実施した。Ｄｒｅｉｅｒ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００３，６８７：２８３−３０６，Ｃｌｉｆｔｏｎ，ＮＪを参照。この文献は、その全体が参照により組み込まれる。公開されているプロトコールに従ってＦａｂリボソームディスプレイ選択を実施した。Ｓｔａｆｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２７：９７−１０９；Ｈａｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１９９７，９４：４９３７−４９４２を参照。これらの文献は両方とも、それらの全体が参照により組み込まれる。複数回の選択ラウンド後、標準的分子生物学技法を使用して、無細胞発現用に最適化されたベクターに、ＲＴ−ＰＣＲ出力に由来するＤＮＡをクローニングした。Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１２，４：２１７−２２５を参照。この文献は、その全体が参照より組み込まれる。構築物はすべて、ＨＩＳタグ化およびＦＬＡＧタグ化して、スクリーニング中の精製および試験を効率化した。
【０６５７】
[00543]  選択ワークフローにより生成された抗体変異体のライブラリーを大腸菌に形質転換し、抗生物質（カナマイシン）を有する寒天プレートで成長させた。個々のコロニーを液体ブロス（TB+カナマイシン）で成長させ、ローリングサークル増幅（RCA）によるＤＮＡ増幅の鋳型として使用した。次いで、変異体を、Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＡｂｓ，２０１２，４：２１７−２２５に記載の通りに無細胞タンパク質合成反応で発現させた。
【０６５８】
[00544]  手短に言えば、無細胞抽出物を、室温（２０℃）にて３０分間、５０μＭヨードアセトアミドで処理し、無細胞成分（Cai et al., Biotechnol Prg, 2015, 3:823-831を参照。この文献は、その全体が参照により組み込まれる）、およびＨＣ変異体の１０％（容積／容積）ＲＣＡ  ＤＮＡ鋳型（約１０μｇ／ｍＬのDNA）を、抗体アセンブリには存在するが、ライブラリーでは変更されていない２．５ｕｇ／ｍＬのトラスツズマブＬＣに加えて含むプレミックスに添加した。９６ウェルプレート中の６０マイクロリットルの無細胞反応物を、６５０ｒｐｍの振盪器で１２時間にわたって３０℃でインキュベートした。様々な選択キャンペーンの予測される多様性に応じて、４００〜１５００（四百〜千五百）個のコロニーをスクリーニングした。
【０６５９】
[00545]  合成後、各反応物を、３％ウシ胎仔血清（FBS）を有するＰＢＳ（pH 7.4）で１：５０に希釈し、発現された変異体の機能的活性を、ＣＨＯ−ｈＦＯＬＲ１細胞（チャイニーズハムスター卵巣細胞で組換え的に発現されたヒトFOLR1）に対する、細胞に基づくＥＬＩＳＡ結合により試験した。手短に言えば、アッセイの前日に、ＣＨＯ対照細胞またはＣＨＯ−ｈＦＯＬＲ１細胞を３８４ウェルプレートに播種した。アッセイ当日に、細胞を、ＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド２０μＬにより暗所で１５分間固定し、ＰＢＳで洗浄し、次いでＰＢＳ中３０％ＦＢＳを用いて３０分間室温でブロッキングした。目的の抗体変異体（1:50希釈無細胞反応物）と、固定したＣＨＯ−ｈＦＯＬＲ１細胞との結合を可能にし、二次抗体（例えば、HRPコンジュゲート抗ヒトFcまたは抗FLAG）で検出し、次いで化学発光基質（Pierce ELISA SuperSignal（商標）基質）で検出した。化学発光は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）Ｍ５プレートリーダーで定量化した。上位ヒットを、細胞に基づくＥＬＩＳＡのシグナル／ノイズ比に基づいて選択し、それらのヌクレオチドを配列決定した。結合活性および配列分析に基づき、変異体のサブセットを、さらなる大規模化および特徴付けのために選択した。
【０６６０】
[00546]  ＥＬＩＳＡに基づくスクリーニングの上位リードを培養し、ＱＩＡｐｒｅｐ（登録商標）９６  Ｔｕｒｂｏミニプレップキット（Qiagen）を製造業者の使用説明書に従って使用して、プラスミドミニプレップを実施した。１０μｇ／ｍＬのミニプレップＤＮＡを、無細胞反応物４ｍＬに添加し、３０℃、６５０ｒｐｍで１２時間にわたって一晩インキュベートした。通常トラスツズマブＬＣを有するＩｇＧ変異体の場合、７．５ｕｇ／ｍＬのＨＣ変異体ＤＮＡおよび２５ｕｇ／ｍＬの通常トラスツズマブＬＣを反応物に添加した。
【０６６１】
[00547]  清澄化した無細胞反応物から発現された変異体を、半自動化ハイスループットバッチ精製法を使用して、固定化金属イオン親和性クロマトグラフィー（IMAC）精製により精製した。手短に言えば、精製は、９６ウェルプレート形式で実施し、ＩＭＡＣレジン５０μＬ／ウェル（Ni Sepharose High Performance、GE Healthcare）をＩＭＡＣ結合緩衝液（５０ｍＭ  Tris  pH8.0、３００ｍＭ  NaCl、１０ｍＭイミダゾール）で平衡化し、無細胞反応物１ｍＬと共に１５分間インキュベートし、続いてＩＭＡＣ結合緩衝液で２回洗浄した。次いで、ＩＭＡＣ溶出緩衝液２００μＬ（５０ｍＭ  Tris  pH 8.0、３００ｍＭ  NaCl、５００ｍＭイミダゾール）を使用して、Ｈｉｓタグ抗体変異体を溶出し、９６ウェルＺｅｂａプレート（７ｋＤ  MWCO、Thermo Fisher）を使用して、緩衝液をＰＢＳに交換した。精製した抗体の量は、製造業者の使用説明書に従ってＬａｂＣｈｉｐ  ＧＸＩＩ（Perkin Elmer）をハーセプチン標準曲線に対して使用して、ハイスループットキャピラリー電気泳動により定量化した。
【０６６２】
[00548]  代表的な親和性成熟抗体は、下記の表５に報告されている。
【０６６３】
【表５−１】
2022500454.tif 000150
【０６６４】
【表５−２】
2022500454.tif 000151
【０６６５】
実施例２
ｓｃＦｖの調製
[00549]  単鎖抗体は、ＶＨＶＬ方向またはＶＬＶＨ方向のいずれかで製作され、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にはリンカー配列がある。ｓｃＦｖリンカーは、典型的には（ＧＧＧＧＳ）nリピートで構成され、式中、１５、２０、２５、または３０残基のリンカーの場合、それぞれ、ｎ＝３、４、５、または６である。無細胞発現の場合、Ｎ末端Ｍｅｔが付加されるが、哺乳動物発現の場合は、リーダーペプチドが付加される。ｓｃＦｖのＣ末端にＦｃ配列を追加してｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を延長してもよく、またはｓｃＦｖをそのまま使用してもよい。任意選択によるリンカー配列を、ｓｃＦｖとＦｃとの間に組み込んでもよい。代表的なｓｃＦｖ−Ｆｃリンカー配列は、ＡＡＧＳＤＱＥＰＫＳＳ（配列番号３７８）である。任意選択により、精製およびアッセイ開発を容易にするためにＣ末端親和性タグを付加してもよい。代表的な親和性タグは、Ｃ末端ＦｌａｇＨｉｓタグＧＳＧＤＹＫＤＤＤＤＫＧＳＧＨＨＨＨＨＨ（配列番号３７６）である。典型的には、配列の最後に終止コドンが挿入される。代表的なｓｃＦｖは、Ｎ末端Ｍｅｔ残基、ＶＨドメイン、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３７７）リンカー、ＶＬドメイン、ＡＡＧＳＤＱＥＰＫＳＳ（配列番号３７８）リンカー、Ｆｃドメイン、ＦｌａｇＨｉｓタグ、および終止コドンを含んでいてもよい。
【０６６６】
実施例３
親和性および動力学的結合分析
[00550]  抗Ｆｃポリクローナル抗体を、アミンカップリング化学（アミンカップリングキット、GE Life Sciences）を使用してＣＭ５チップ（GE Life Sciences）に固定化した。固定化工程は、２５μＬ／分の流速の１×ＨＢＳ−ＥＰ＋緩衝液（GE Life Sciences；使用前に10×ストックを希釈した）で実施した。センサー表面を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（NHS、０．０５Ｍ）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（EDC、０．２Ｍ）の混合物で７分間にわたって活性化した。抗Ｆｃポリクローナル抗体を、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５中２５μｇ／ｍＬの濃度で４つすべてのフローセルに７分間にわたって注入した。エタノールアミン（１Ｍ、pH 8.5）を７分間にわたって注入して、一切の残留活性化基をブロッキングした。平均１２，０００応答単位（RU）の捕捉抗体を、各フローセルに固定化した。
【０６６７】
[00551]  オフ速度および動力学的結合実験を、１×ＨＢＳ−ＥＰ＋緩衝液を使用して２５℃で実施した。５〜１０μｇ／ｍＬの濃度の試験抗体および対照抗体を、１０μＬ／分の流速で１２秒間にわたってフローセル２、３、および４の抗Ｆｃ表面に注入し、続いて同じ流速で３０秒間にわたって緩衝液洗浄を行った。抗体試料の動力学的特徴付けは、単一濃度の抗原（オフ速度順位付けのため）または１：２希釈系列の抗原（動力学的特徴付けのため）および０ｎＭ抗原の１回注入で実施した。リガンド（抗体）を抗Ｆｃ表面に捕捉した後、５０、２５、１２．５、６．２５、および０ｎＭの分析物（ヒトFOLR1-HIS）を１８０秒間にわたって結合させ、続いて５０μＬ／分の流速で６００秒間の解離段階を行った。各リガンド捕捉と分析物結合サイクルとの間に、１０ｍＭグリシンｐＨ２．０を３０μＬ／分で３０秒間にわたって２回注入し、続いて３０秒間の緩衝液洗浄工程を行って再生を実施した。
【０６６８】
[00552]  Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ２００評価ソフトウェアで１：１ラングミュア結合モデルを使用して、データをフィッティングした。ＫＤ（親和性、nM）は、結合段階および解離段階のフィッティングから算出した動力学的速度定数の比として決定した。
【０６６９】
実施例４
フローサイトメトリーに基づく細胞結合アッセイ
[00553]  発現レベルが＞２５０ｎＭである変異体を、蛍光活性化細胞選別（FACS）細胞結合アッセイで試験した。ＣＨＯ細胞をトランスフェクトして、ヒト（CHO-hFOLR1）、カニクイザル（CHO-cFOLR1）、またはマウス（CHO-mFOLR1）標的分子ＦＯＬＲ１を、細胞表面上に安定的に発現させた。親ＣＨＯ細胞を陰性対照として使用し、バックグラウンド結合レベルを決定した。親ＣＨＯおよび安定的にトランスフェクトされたＣＨＯ−ｈＦＯＬＲ１、ＣＨＯ−ｃＦＯＬＲ１、およびＣＨＯ−ｍＦＯＬＲ１細胞を、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（Corning、Cellgro-Mediatech）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Corning、Cellgro-Mediatech）、および２ｍｍｏｌ／Ｌ−ｇｌｕｔａｍａｘ（Life Technology）で補完されたハムＦ−１２：高グルコースＤＭＥＭ（50:50）（Corning、Cellgro-Mediatech）中で培養した。
【０６７０】
[00554]  蛍光標識親ＣＨＯ細胞および未標識ＣＨＯ−ｈＦＯＬＲ１細胞の混合物を、以下のように調製した。親ＣＨＯ細胞をＰＢＳで２回洗浄し、１ｎＭのＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ４８８（登録商標）（Life Technologies）を有するＰＢＳ中で３０分間にわたって３７℃にてインキュベートした。次いで、標識親ＣＨＯ細胞を、ハムＦ−１２培地で２回、およびＦＡＣＳ緩衝液（１％ウシ血清アルブミンを有するPBS）で２回洗浄した。未標識ＣＨＯ−ｈＦＯＬＲ１細胞を同様に洗浄および調製した。標識親ＣＨＯ細胞および未標識ＣＨＯ−ｈＦＯＬＲ１細胞を１：１比で組み合わせ、９６ウェルポリプロピレンプレートに１ウェル当たり５０μＬ（１ウェル当たり２００，０００個の細胞）で播種した。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で系列希釈した試験抗体（つまり、抗FOLR1変異体）５０μＬと混合し、氷上で６０分間にわたってインキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、２．５μｇ／ｍＬのＲ−フィコエリトリンコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（Jackson ImmunoResearch Laboratories、ウェストグローブ、ペンシルベニア州）を含むＦＡＣＳ緩衝液１００μＬと共に氷上で６０分間にわたってインキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＰＢＳ中２％パラホルムアルデヒド（Santa Cruz Biotechnology；ダラス、テキサス州）中で１０分間にわたって暗所の氷上で固定し、ＢＤ  ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（BD Biosciences；サンノゼ、カリフォルニア州）を使用して分析した。ＦｌｏｗＪｏ（登録商標）ソフトウェア（FlowJo、LLC；アッシュランド、オレゴン州）を使用してデータを分析して、平均蛍光強度を決定した。統計ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（GraphPad Software；ラホヤ、カリフォルニア州）を使用し、非線形回帰式であるヒルスロープ（Hill slope）による１部位特異的結合を使用して結合定数を算出した。二次抗体単独を対照として使用し、加えて、ＣＨＯ親細胞に対する非特異的抗体結合を測定した。
【０６７１】
[00555]  この手順を繰り返して、ＣＨＯ−ｃＦＯＬＲ１細胞およびＣＨＯ−ｍＦＯＬＲ１細胞での細胞結合を評価した。
【０６７２】
実施例５
細胞殺傷分析
[00556]  抗体の内部移行を、標的陽性細胞での二次抗体細胞殺傷アッセイにより評価した。ＦＯＬＲ１陽性ＫＢ細胞は、ＡＴＣＣから入手し、ＦＯＬＲ１陽性Ｉｇｒｏｖ１細胞はＮＩＨから得た。細胞を、１０％熱不活化ウシ胎仔血清（Corning、Cellgro-Mediatech、マナッサス、バージニア州）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Corning、Cellgro-Mediatech、マナッサス、バージニア州）、および２ｍｍｏｌ／Ｌ−ｇｌｕｔａｍａｘ（Thermo Fisher Scientific、ウォルサム、マサチューセッツ州）で補完されたハムＦ−１２：高グルコースＤＭＥＭ（50:50）（Corning、Cellgro-Mediatech）で維持した。付着細胞を、カルシウムおよびマグネシウムを含まないハンクス平衡塩類溶液（HBSS）で２回洗浄し、ＨＹＱ（登録商標）ＴＡＳＥＥ（商標）（Hyclone；Thermo Fisher Scientific、ウォルサム、マサチューセッツ州）で回収し、Ｖｉ−ＣＥＬＬ細胞生存率分析機（Beckman Coulter、インディアナポリス、インディアナ州）で計数した。合計６２５個の細胞を、３８４ウェル平底白色ポリスチレンプレートの各ウェルに播種した。４倍の開始濃度のリード抗体を細胞培養培地で製剤化し、ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ  ＨＴＳ  ９６ウェルフィルタープレート（Millipore；ビルリカ、マサチューセッツ州）で濾過した。試験抗体の系列希釈物（２００ｎＭから開始した1:3系列希釈物）を、処置ウェルに添加し、次いで、切断可能なリンカーを介してヘミアステリンにコンジュゲートされた抗ヒトＦｃナノボディを、２０ｎＭの一定終濃度で各ウェルに添加した。アッセイプレートを、アッセイ前にＣＯ２インキュベーター内で１２０時間にわたって３７℃にて培養した。細胞生存率測定のため、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Promega Corp.  マジソン、ウィスコンシン州）３０μＬを各ウェルに添加し、プレートを製品の使用説明書に従って処理した。相対的発光を、ＥＮＶＩＳＩＯＮ（登録商標）プレートリーダー（Perkin-Elmer；ウォルサム、マサチューセッツ州）で測定した。未処置細胞を対照として使用して、相対的発光読取値を生存率に変換した。データを、ｌｏｇ（阻害剤）対応答−可変傾き（log（inhibitor） vs. response-variable slope）、つまりＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（GraphPad v 5.0、ソフトウェア、サンディエゴ、カリフォルニア州）の４パラメーターフィッティングを使用して非線形回帰分析でフィッティングした。データを、相対的細胞生存率（ATP含有量）％対抗体の用量として表した。
【０６７３】
実施例６
ハイブリドーマの生成
[00557]  ヒトＦＯＬＲ１を過剰発現するマウスＭＣ３８細胞で免疫応答性マウス（C57BL/6）を免疫した。血清中のＦＯＬＲ１特異的抗体を検出し、脾臓を回収し、以前の記載されているものと同様に、Ｐ３Ｘ細胞と融合してハイブリドーマを生成した（Aragen Biosciences、モーガンヒル、カリフォルニア州）。Ｃｈｒｏｎｏｐｏｕｌｏｕ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １１３１：４７−７０、およびＫｉｍ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １１３１：３１−４５を参照。これらの文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＱＩＡＧＥＮ  ＲＮｅａｓｙミニキット（カタログ番号７４１０４）を使用して、全ＲＮＡをハイブリドーマ細胞から抽出し、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  ＳＭＡＲＴｅｒ  ＲＡＣＥ  ｃＤＮＡ増幅キット（カタログ番号６３４９２３）（Lake Pharma、ベルモント、カリフォルニア州）を使用してｃＤＮＡへと変換した。陽性クローンを、ゲル電気泳動により特定し、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＴＯＰＯキットを使用してクローン化し、標準的なサンガー法を使用して配列決定した。ｍ６Ｄ１のＣＤＲを、標準的な方法論により、ヒト抗体フレームワークＶＨ１−１８、ＶＨ３−３３、ＶＨ２−５、ＶＨ２−７０、ＶＨ４−３０−４、Ｖｋ１−５、Ｖｋ３−１１、Ｖｋ２−３０、Ｖｋ１−３３、およびＶｋ１−１６に移植して、ヒト化抗体を得た。Ｋｕｒａｍｏｃｈｉ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １０６０：１２３−１３７を参照。この文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。こうした移植片のうち、ｈ６Ｄ１−ＨＣ３／ＬＣ４（VH3-33/Vk3-11移植片）ＩｇＧおよびｈ６Ｄ１−ＨＣ３／ＬＣ５（VH3-33/Vk1-5移植片）ＩｇＧは、無細胞で発現させると、最も良好な収量を示し、最も高い親和性を維持した。ＨＣ３／ＬＣ４ヒト化変異体およびＨＣ３／ＬＣ５ヒト化変異体は両方とも、Ｓｔａｆｆｏｒｄ，ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  Ｄｅｓ  Ｓｅｌ  ４：９７−１０９に記載の通りにソフトランダム化して軽鎖を一定のままにすることにより、重鎖ＣＤＲを標的とするＦａｂに基づくリボソームディスプレイ（上記に記載の通り）により親和性成熟へと進行した。この文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０６７４】
[00558]  ある特定の抗体は、ヒト化マウス抗体の親和性成熟により生成した。代表的な抗体候補は、下記の表６に報告されている。
【０６７５】
【表６】
2022500454.tif 000152
【０６７６】
実施例７
例示的な抗ＦＯＬＲ１抗体の特色
[00559]  表７〜９には、本明細書に記載の例示的な抗体を使用して得られた結果が示されている。
【０６７７】
[00560]  表７には、トラスツズマブ重鎖（HC）フレームワークに構築されたナイーブＦａｂ  ＴＲｉＭリボソームディスプレイライブラリーから得られた初期抗体リードの親和性成熟から単離された抗体で得られた結果が示されている。
【０６７８】
[00561]  表８には、表７に列挙されているものと同じ抗体で得られた動力学的結合結果が示されている。
【０６７９】
[00562]  表９には、ヒト化マウスクローン候補から単離された抗体から得られた結果が示されている。
【０６８０】
【表７−１】
2022500454.tif 000153
【０６８１】
【表７−２】
2022500454.tif 000154
【０６８２】
【表７−３】
2022500454.tif 000155
【０６８３】
【表８−１】
2022500454.tif 000156
【０６８４】
【表８−２】
2022500454.tif 000157
【０６８５】
【表８−３】
2022500454.tif 000158
【０６８６】
【表９】
2022500454.tif 000159
【０６８７】
実施例８
卵巣がん細胞株、子宮内膜がん細胞株、ＮＳＣＬＣ細胞株、およびＴＮＢＣ細胞株でのＦＯＬＲ１発現
[00563]  卵巣がん、および子宮内膜がん、トリプルネガティブ乳がん（TNBC）、および非小細胞肺癌（NSCLC）では、高レベルのＦｏｌＲαが見出されている。報告されたＦｏｌＲα  ｍＲＮＡ発現レベルに基づき、卵巣がん細胞株、子宮内膜がん細胞株、ＴＮＢＣ細胞株、およびＮＳＣＬＣ細胞株のパネルを、ＡＤＣ分子候補のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験に選択した。細胞表面上に発現するＦｏｌＲα受容体の数を測定するため、Ａｌｅｘａ６４７コンジュゲート抗体１８４８−Ｈ０１（Y180/F404）をＦＡＣＳ細胞結合アッセイに使用し、定量ビーズ（Bangs LaboratoriesのSimply Cellular抗ヒトIgGビーズ）で測定したコンジュゲート抗体の抗体結合能（ABC）に基づいて、ＦｏｌＲαコピー数を決定した。表１０に示されているように、卵巣がん細胞、子宮内膜がん細胞、ＴＮＢＣ細胞、およびＮＳＣＬＣ細胞でのＦｏｌＲαコピー数は、１細胞当たり３５，０００〜４，０００，０００個の受容体の範囲だった。
【０６８８】
【表１０】
2022500454.tif 000160
【０６８９】
実施例９
卵巣かん組織、および子宮内膜がん組織、ＴＮＢＣ組織、およびＮＳＣＬＣ組織でのＦＯＬＲ１発現
[00564]  卵巣がん、および子宮内膜がん、ＴＮＢＣ、およびＮＳＣＬＣの代表的な患者試料中のＦｏｌＲα発現の広がりを決定するために、免疫組織化学（IHC）染色を、上記４つの適応症について患者試料を含む市販の組織マイクロアレイ（TMA）で実施した。市販のＦｏｌＲα  ＩＨＣアッセイキット（Biocare；カタログ番号IPI4006K G10）を製造業者の推奨プロトコールに従って使用して、ＴＭＡ（Biomax；Biomax；カタログ番号BC11115b、EMC1021、BR1001、およびBC041115c）を、ＦｏｌＲα発現について染色した。スライドを画像化し、染色した腫瘍コアの染色をスコア化した。卵巣がんの約８０％、子宮内膜がん試料の約６０％、ＴＮＢＣ試料の約３０％、およびＮＳＣＬＣ試料の約５０％で、ＦｏｌＲα陽性染色が観察され、こうした疾患が、ＦｏｌＲαを標的とする療法剤の好適な適応症であり得ることが示唆された。卵巣試料および子宮内膜試料におけるＦｏｌＲαの発現の相対レベルは、表１１に要約されている。
【０６９０】
【表１１】
2022500454.tif 000161
【０６９１】
実施例１０
抗体−薬物コンジュゲート（ADC）評価
[00565]  ＦＯＬＲ１の細胞外ドメイン（または「FolRα-ECD」）に対するｂｉａｃｏｒｅ親和性に基づき、ＨＣ  Ｆ４０４部位にパラ−アジドメチル−Ｌ−フェニルアラニン（pAMF）が組み込まれた９つの抗体を、大規模化のために選択した。試験のために選択した９つの抗体は、１８４８−Ａ０１、１８４８−Ｈ０１、１８４８−Ａ０８、１８４８−Ｂ０４、１８４８−Ｄ０２、１８４８−Ａ０７、１８４８−Ｂ１０、１８４８−Ｇ１０、および１８４８−Ｇ０４だった。抗体１８４８−Ｄ０２は、発現が不良だったため、さらなる調査には使用しなかった。残りの８つの抗体を、切断不能なマイタンシンにコンジュゲートして、下記のコンジュゲートＭ：
【０６９２】
【化１３３】
2022500454.tif 000162
の構造を有する抗体−薬物コンジュゲート（ADC）を形成した。抗体−薬物コンジュゲート候補を、ＫＢ、Ｉｇｒｏｖ１、ＨｅＬａ、およびＪＥＧ３を含むＦｏｌＲα発現細胞での細胞殺傷について試験した。表１２には、コンジュゲート候補のＫＢ細胞およびＪＥＧ３細胞に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性の要約が提供されている。
【０６９３】
【表１２】
2022500454.tif 000163
ＫＢ細胞およびＪＥＧ３細胞に対する細胞殺傷活性にはＡＤＣ間で有意差はなかった（表１２）。したがって、切断不能なマイタンシンとコンジュゲートして、薬物−抗体比が2（DAR2）のコンジュゲートＭの構造を形成する４つのリード（1848-A01、1848-A07、1848-B04、1848-G10）を、Ｂｉａｃｏｒｅ親和性（表８）に基づくｉｎ  ｖｉｖｏ研究および配列多様性の最大化のために選択した。加えて、ＤＡＲ２を有するＡＤＣには、ＪＥＧ３細胞に対する弱い細胞傷害活性があった。
【０６９４】
[00566]  抗ＦｏｌＲαリードの細胞殺傷活性に対する薬物−抗体比（DAR）の効果を研究するため、ＤＡＲ２を有するＡＤＣを、細胞殺傷アッセイでのＤＡＲ４  ＡＤＣに近づけるために、切断不能なマイタンシンにコンジュゲートされた二次ＤＡＲ２抗ヒトＩｇＧナノボディとも組み合わせた。このアッセイでは、二次ナノボディと組み合わせた場合、１８４８−Ｂ１０  ＡＤＣが、ＪＥＧ３細胞およびＩｇｒｏｖ１細胞に対して最も高い細胞殺傷活性を示した（データ非表示）。この結果に基づき、他の４つのリード（1848-A01、1848-A07、1848-B04、1848-G10）に加えて、ＤＡＲ２の１８４８−Ｂ１０  ＡＤＣをｉｎ  ｖｉｖｏ研究に追加して、ＡＤＣ候補を評価した。ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性研究試験の結果は、ＤＡＲ２の１８４８−Ｂ１０  ＡＤＣのみが、ＫＢモデルにおいて弱い腫瘍阻害を示したことを明らかにした（データ非表示）。
【０６９５】
[00567]  結果として、１８４８−Ｂ１０を、さらなるＡＤＣ研究のためのリード抗体の１つとして選択した。
【０６９６】
実施例１１
上位ＦＯＬＲ１抗体リードの有効性スクリーニング
[00568]  ＤＡＲ２のコンジュゲートＭを含むＡＤＣは、高レベルのＦｏｌＲαを発現するＫＢ細胞に対して強力なｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を示した。しかしながら、ＡＤＣは、より穏健なレベルのＦｏｌＲαを発現するＪＥＧ３細胞およびＩｇｒｏｖ１細胞では不良なｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を示し、ＫＢモデルではｉｎ  ｖｉｖｏ活性が低かった。ＪＥＧ３細胞およびＩｇｒｏｖ１細胞におけるＦｏｌＲα発現のパターンおよびレベルは、患者腫瘍での発現をより良好に再現するが、ＫＢ細胞でのＡＤＣリードの評価は、異なるリードの特性を区別しないと考えられる。ＦｏｌＲαは、迅速な内部移行を起こし、リソソームに到達することなく再利用されるため、ＦｏｌＲαを標的とするＡＤＣの活性を向上させるためには、エンドソーム区画で薬物を放出することができるリンカーを有することが有用であると予想される。加えて、原発性卵巣腫瘍およびＩｇｒｏｖ１異種移植片でのＦｏｌＲα発現は、不均質であり（Ab et al. 2015. Molecular Cancer Therapeutics 14（7）: 1605-1613）、バイスタンダー活性を有するＡＤＣは、こうした腫瘍では潜在的により高い活性を示すことができることが示唆されている。ＦｏｌＲαを標的とするＡＤＣの設計を、標的の生物学的特徴ならびに卵巣がんの発現レベルおよびパターンに適応させるため、スクリーニング戦略に幾つかの変化を加えた。ＫＢモデルを一次スクリーニングに使用し、Ｉｇｒｏｖ１細胞に対するリードの活性をｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏで試験して、様々なリードを評価および比較した。
【０６９７】
[00569]  ＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体の初期スクリーニングを、高レベルのＦｏｌＲαを発現するＫＢ腫瘍で実施した。この研究では、同じリンカー−弾頭（下記のコンジュゲートP）およびコンジュゲーション部位（Y180/F404）にコンジュゲートされた４つの異なる抗ＦｏｌＲα抗体の抗腫瘍効果の評価を試みた。ＫＢ子宮頸癌細胞を、胸腺欠損ヌードマウスの皮下に移植し、表１３に列挙されている２．５ｍｇ／ｋｇのＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体の単一用量で処置した。ＡＤＣ変異体は、腫瘍が約１５０ｍｍ３に達した際に投与した。
【０６９８】
【化１３４】
2022500454.tif 000164
【０６９９】
【表１３】
2022500454.tif 000165
【０７００】
[00570]  動物体重の＞２０％減少として規定される有意な体重減少が一切存在しないことにより証明されるように、どの試験物でも毒性は観察されなかった（図６）。図７（A、B）は、ビヒクル対照群が研究エンドポイント（>１０００ｍｍ３）に到達した２５日目における、ＫＢ腫瘍成長および腫瘍サイズに対する処置の効果を示す。結果は、ＡＤＣ分子１（1848-B10 FolRα抗体、Y180/F404、コンジュゲートP）およびＡＤＣ分子４（1848-H01 FolRα抗体、Y180/F404、コンジュゲートP）が、対照と比較してＫＢ腫瘍成長を有意に阻害したが、他の２つのＡＤＣ変異体はいかなる抗腫瘍活性も呈しなかったことを示す。３１日目の研究終了時まで、ＡＤＣ分子１とＡＤＣ分子４との間には有意差がなかった（図８）。したがって、１８４８−Ｂ１０抗ＦｏｌＲα抗体および１８４８−Ｈ０１抗ＦｏｌＲα抗体を含むＡＤＣを、さらなる特徴付けおよび試験のために調査した。
【０７０１】
実施例１２
抗体−薬物コンジュゲートの薬物−抗体比
[00571]  漸増ＤＡＲ（２〜６）および切断可能なリンカーを有するＡＤＣを評価して、こうした特徴を変化させることが分子の活性を向上させることになるかを決定した。ＡＤＣを標的とするＦｏｌＲαのｉｎ  ｖｉｖｏ効力を増加させるため、各抗体に２、４、または６つのパラ−アジドメチル−フェニルアラニン（pAMF）残基が組み込まれている１８４８−Ｂ１０抗体であって、切断不能なマイタンシンにコンジュゲートされている１８４８−Ｂ１０抗体（コンジュゲートM、実施例１０）および切断可能なヘミアステリンにコンジュゲートされている１８４８−Ｂ１０抗体（コンジュゲートP、実施例１１）を発現させて、ＤＡＲ＝２、４、または６のＡＤＣを生成した。
【０７０２】
[00572]  ＦｏｌＲα陽性細胞（KB、Igrov1、およびJEG3）に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞殺傷性は、コンジュゲートＰの抗体１８４８−Ｂ１０コンジュゲートが、中レベルのＦｏｌＲα発現を示すＩｇｒｏｖ１細胞に対してはコンジュゲートＭの１８４８−Ｂ１０コンジュゲートよりも強力であったことを示した（表１４）。加えて、ＤＡＲを４に増加させると、ＤＡＲ２型と比較して効力が大幅に向上したＡＤＣがもたらされたが、ＤＡＲ６  ＡＤＣは、細胞殺傷活性をＤＡＲ４よりもさらにほんのわずかしか向上させなかった。こうしたデータに基づき、ＤＡＲ４の切断可能なヘミアステリンのコンジュゲート（コンジュゲートP）を、ＦｏｌＲα  ＡＤＣの最適なコンジュゲート形式であると決定した。
【０７０３】
【表１４】
2022500454.tif 000166
【０７０４】
実施例１３
ＡＤＣの異なる部位対の活性を比較するための研究
[00573]  この研究では、同じＦｏｌＲα抗体（1848-B10）およびリンカー−弾頭（コンジュゲートP）を使用して、３つの異なるコンジュゲーション部位対（Y180/F404、Y180/K42、およびF404/K42）の抗腫瘍効果の比較を試みた。ＫＢ細胞およびＩｇｒｏｖ１細胞に対する３つのＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞殺傷活性は、非常に類似していた（表１５）。
【０７０５】
【表１５】
2022500454.tif 000167
【０７０６】
[00574]  ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性試験のため、ＫＢ子宮頸癌細胞を胸腺欠損ヌードマウスに皮下移植し、表１５に列挙されている２．５ｍｇ／ｋｇのＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体の単一用量で処置した。ＡＤＣは、腫瘍が約１５０ｍｍ３に達した際に投与した。動物体重の＞２０％減少として規定される有意な体重減少が一切存在しないことにより証明されるように、どの試験物でも毒性は観察されなかった（図９）。図１０（A、B）は、ビヒクル処置腫瘍が研究エンドポイント（>１０００ｍｍ３）に到達し、その後研究を終了した２１日目における、ＫＢ腫瘍成長および腫瘍サイズに対する処置の効果を示す。結果によると、異なるコンジュゲーション部位を有する３つすべてのＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体（ADC分子１、12、および9）は、初期に腫瘍退縮を誘導し、ビヒクル対照と比較して腫瘍成長を有意に遅延させたが、対照抗ＧＦＰ  ＡＤＣ（ADC分子11）の挙動はビヒクルと同様だったことが示された（図１０Ａおよび１０Ｂ）。３６日目の研究終了まで、ＡＤＣ分子１２は最良の奏功期間を呈し、この群のほとんどの腫瘍は成長が阻害されたままだったが、ＡＤＣ分子１および９では腫瘍再成長が観察された（図１０Ａ）。統計分析により、ＡＤＣ分子１２は、ＡＤＣ分子９（p=0.0297）およびＡＤＣ分子１（p=0.0470）と比較して有意により有効だったことが示された（図１１）。結論として、Ｙ１８０／Ｋ４２コンジュゲーション部位は、ＫＢ腫瘍において、最良の効力および奏功期間をもたらした。
【０７０７】
実施例１４
ＡＤＣ設計用のリード抗ＦＯＬＲ１抗体の選択に関する研究
[00575]  抗ＦｏｌＲα  ＡＤＣの潜在的リード抗体を評価するため、ＤＡＲ４を有するコンジュゲートＰを形成するようにコンジュゲートされたＦｏｌＲα上位リードの選択を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでスクリーニングした。ＫＢ細胞およびＩｇｒｏｖ１細胞に対する上位抗体リードのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞殺傷活性は、非常に類似しており、結果は、表１６に要約されている。
【０７０８】
【表１６】
2022500454.tif 000168
【０７０９】
[00576]  ４つの上位リード抗体のＤＡＲ４を有する同じコンジュゲートＰを、ＫＢモデルでのｉｎ  ｖｉｖｏ有効性研究でスクリーニングした（図７、８）。こうした研究の結果に基づき、１８４８−Ｂ１０および１８４８−Ｈ０１を、さらなる特徴付けのための上位抗体リードとして選択した。１８４８−Ｂ１０および１８４８−Ｈ０１の配列ならびに対応するＣＤＲは、表３２に示されている。上位抗体リードの追加の特性は、表１７に要約されている。
【０７１０】
【表１７】
2022500454.tif 000169
【０７１１】
実施例１５
切断可能なヘミアステリンに最適なリンカーの選択
[00577]  異なる切断特性を有する複数のリンカーを有するヘミアステリンを生成した。抗体１８４８−Ｂ１０を、リンカー変異体候補の幾つかにコンジュゲートし、得られたＡＤＣを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害アッセイで試験した（表１８）。リンカー変異体候補の中でも、ＶａｌＣｉｔの代わりにＶａｌＡｌａのタンパク質分解配列を有するコンジュゲートＰの代替物は、良好な細胞殺傷活性を示し（下記のコンジュゲートＱ）、大規模化可能性および合成効率に潜在的利点をもたらした。
【０７１２】
【化１３５】
2022500454.tif 000170
【０７１３】
【表１８】
2022500454.tif 000171
ＡＤＣ変異体候補の複数ロットのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性は、表１９に要約されている。ＡＤＣ分子４は、異なる実験にわたって、０．０３〜０．６６ｎＭの範囲のＥＣ５０および６９〜９６％の範囲のスパンを有する一貫した細胞殺傷性を示した。
【０７１４】
【表１９】
2022500454.tif 000172
【０７１５】
[00578]  加えて、別々の研究では、抗体−薬物コンジュゲートを、抗体１８４８−Ｂ１０  Ｙ１８０／Ｆ４０４およびコンジュゲートＲ（下記）を使用して合成した。
【０７１６】
【化１３６】
2022500454.tif 000173
コンジュゲートＲは、ヘミアステリン弾頭に連結されたＤＢＣＯアジポイルＶａｌＧｌｕを含む。コンジュゲートＲを有する１８４８−Ｈ０１  ＨＣ−Ｙ１８０／Ｆ４０４を含むＡＤＣ（ADC分子22）は、Ｉｇｒｏｖ１モデルにおいて、ＡＤＣ分子４と同等のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞殺傷活性（データ非表示）ならびに同等のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を示した（図１４Ａ、１４Ｂ）。したがって、こうした結果は、代替的リンカー弾頭を有する抗体１８４８−Ｂ１０  ＨＣ−Ｙ１８０／Ｆ４０４を、ＦｏｌＲαを標的とするＡＤＣに使用することができることを示す。
【０７１７】
実施例１６
最適なＡＤＣリードの選択
[00579]  この研究では、抗体、コンジュゲーション部位、およびリンカー弾頭を含むＦｏｌＲα  ＡＤＣ分子の異なる態様の評価を試みた。Ｉｇｒｏｖ１卵巣がん細胞をＳＣＩＤベージュマウスに皮下移植し、表２０に列挙されている２．５ｍｇ／ｋｇのＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体の単一用量で処置した。ＡＤＣは、腫瘍が約１５０ｍｍ３に達した際に投与した。
【０７１８】
【表２０】
2022500454.tif 000174
【０７１９】
[00580]  動物体重の＞２０％減少として規定される有意な体重減少が一切存在しないことにより証明されるように、どの試験物でも毒性は観察されなかった（図１２）。図１３（A、B）は、ビヒクル対照処置腫瘍が研究エンドポイント（約１０００ｍｍ３）に到達した処置後２４日目における、Ｉｇｒｏｖ１腫瘍成長および腫瘍サイズに対する処置の効果を示す。試験した７つのＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体のうち、ＡＤＣ分子４が、ビヒクル対照と比較して腫瘍成長を有意に阻害した（図１３Ａ、１３Ｂ）。この結果により、Ｉｇｒｏｖ−１腫瘍では、１８４８−Ｈ０１、Ｙ１８０／Ｆ４０４、およびＳＣ２３９が、それぞれ抗ＦｏｌＲα抗体、コンジュゲーション部位、およびリンカー弾頭の最適な組合せであると特定される。
【０７２０】
実施例１７
ＦＯＬＲアイソフォームに対するＡＤＣ変異体の交差反応性
[00581]  葉酸受容体は、ヒトでは、ｈＦｏｌＲα、ｈＦｏｌＲβ、およびｈＦｏｌＲγ（また、それぞれFOLR1、FOLR2、およびFOLR3）と称される３つのアイソフォームを有する。ｈＦｏｌＲαおよびｈＦｏｌＲβは、ＧＰＩアンカーを介して原形質膜に発現されるが、ＦｏｌＲγは分泌される。正常組織では、ＦｏｌＲαは、一般に分極上皮細胞の頂端表面に発現され、ｈＦｏｌＲβは、正常な骨髄造血の後期で、胎盤、脾臓、および胸腺で発現される。骨髄単球性系統の正常な発生では、ｈＦｏｌＲβは、ＣＤ１４と共に共発現される分化マーカーとして単球にて比較的低レベルで見出されるが、ＣＤ３４＋正常造血前駆細胞には見出されない。ｈＦｏｌＲγは、脾臓、胸腺、および骨髄においてリンパ球から低レベルで分泌される。３つのＦＲアイソフォームは、ＦｏｌＲαと高度な相同性を有し、ＦｏｌＲβおよびＦｏｌＲγとそれぞれ７２％および７１％の配列同一性を共有する。したがって、ＦｏｌＲαに対するリード抗体１８４８−Ｂ１０および１８４８−Ｈ０１の特異性、ならびにＦｏｌＲβおよびＦｏｌＲγを発現する細胞との交差反応性の程度を決定することは有用である。
【０７２１】
[00582]  ３つの葉酸受容体アイソフォーム（hFolRα、hFolRβ、およびhFolRγ）を安定的に発現する２９３Ｔ細胞を生成し、抗体１８４８−Ｂ１０および１８４８−Ｈ０１に対する結合をＦＡＣＳアッセイで試験した。このアッセイでは、１８４８−Ｂ１０ではなく１８４８−Ｈ０１が、ＦｏｌＲβに対して非常に弱い結合を示したが（図１５）、ＦｏｌＲγに対しては示さなかった（図示せず）。ＦｏｌＲβ発現細胞に対する１８４８−Ｈ０１結合は、１５６ｎＭの親和性を示し、Ｂｍａｘは、ＦｏｌＲαのＢｍａｘと比較して２０％に過ぎなかった。ＦｏｌＲαアイソフォームおよびＦｏｌＲβアイソフォームを発現する２９３Ｔ細胞に対する、対応するＡＤＣ分子４およびＡＤＣ分子１の細胞傷害活性を評価すると、１０ｎＭよりも高い濃度のＡＤＣ分子４が、ＦｏｌＲβを発現する細胞に対して弱いが特異的な細胞傷害効果を示し、ＥＣ５０は約１００ｎＭであり、ＦｏｌＲα発現細胞のＥＣ５０が１０ｎＭ未満で対照的だったことが示された（図１６）。
【０７２２】
実施例１８
造血細胞におけるＡＤＣ変異体の結合および細胞傷害活性
[00583]  ＡＤＣ分子１およびＡＤＣ分子４が造血細胞の生存率に影響を及ぼすかを決定するため、ＦｏｌＲ発現を、単離されたＰＢＭＣ（ｎ＝４ドナー）のＴ細胞、Ｂ細胞、および単球にて決定し、抗体１８４８−Ｈ０１および１８４８−Ｂ１０が免疫細胞上のＦｏｌＲβに結合する程度を評価した。不均質な（ドナー可変性の）ＦｏｌＲα発現は、単球では検出されなかったが、この発現は一過性であり、培養１日後に消失した（データ非表示）。その一方でＦｏｌＲβは、単球の部分集団にて一貫して発現された（データ非表示）。抗体１８４８−Ｂ１０でも抗体１８４８−Ｈ０１でも、単球に対する結合は観察されなかったが、ＦｏｌＲβ発現は、こうした細胞で検出可能だった（データ非表示）。さらに、ＣＤ１４単球を、ＡＤＣ分子１およびＡＤＣ分子４による処置後の生存率についてアッセイして、潜在的な細胞傷害性について調べた。細胞結合が陰性であることに相関して、ＡＤＣ変異体は、単球／マクロファージの生存率に影響を及ぼさず、ヒトのＰＢ単球に臨床的影響がないことが示唆された（データ非表示）。
【０７２３】
[00584]  ＦｏｌＲβは、Ｍ１マクロファージでは発現が弱く、Ｍ２マクロファージおよびそれらのサブセットでは高度に発現される。したがって、抗体１８４８−Ｈ０１および１８４８−Ｂ１０を、単離されたマクロファージに結合する能力について評価した。しかしながら、こうした細胞ではＦｏｌＲβ発現が確認されたにもかかわらず、抗体は、Ｍ１マクロファージにもＭ２マクロファージにも結合を示さなかった。この相互作用の欠如を確認するため、対応するＡＤＣ分子（１、４）を、分極マクロファージに対する細胞殺傷活性について評価した（１０，０００個の細胞、インキュベーション期間=３日）。結合の欠如と一致して、いずれのＡＤＣ変異体も、複数のドナーに由来するマクロファージに対していかなる細胞傷害活性も示さなかった（データ非表示）。
【０７２４】
[00585]  したがって、ＡＤＣ変異体は、ヒトドナーから単離された単球およびマクロファージに対する結合および細胞傷害性影響が最小限であることが実証された。
【０７２５】
実施例１９
抗体−薬物コンジュゲートの追加特徴付け
[00586]  抗ＦｏｌＲα抗体を含むリード抗体−薬物複合体（ADC）を評価し、特徴付けた。測定および分析した特色には、リードＡＤＣの発現および精製プロファイル、コンジュゲーション効率、ならびに臨床関連モデルにおけるＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性およびｉｎ  ｖｉｖｏ活性が含まれていた。抗ＦｏｌＲαリードＡＤＣの特性は、表２１に要約されている。
【０７２６】
【表２１】
2022500454.tif 000175
【０７２７】
実施例２０
用量設定有効性試験
[00587]  ＡＤＣ分子４およびＡＤＣ分子２０の用量応答関係性を、Ｉｇｒｏｖ−１腫瘍で評価した。この研究では、（１）ヘミアステリンに基づくリンカー弾頭にコンジュゲートされたＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体（コンジュゲートP、Q）が優れていたかを評価すること；（２）こうしたＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体の抗腫瘍活性を、比較用分子（ADC分子21）と比較すること、および（３）特定されたより有効なＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体の最小および最大有効用量を決定することを試みた。試験物はすべて表２２に記載されている。
【０７２８】
【表２２】
2022500454.tif 000176
【０７２９】
[00588]  確立Ｉｇｒｏｖ１卵巣腫瘍を有するＳＣＩＤベージュマウスを、４用量のＡＤＣ分子４またはＡＤＣ分子２０で１回処置した。用量は、２．５ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇの範囲だった。比較のため、ベンチマーク群を、５ｍｇ／ｋｇの比較用ＡＤＣ分子（ADC分子21）で1回処置した。有意な体重減少（動物体重の＞２０％減少として規定される）が存在しないことにより証明されるように、どの試験物でも毒性は観察されなかった（図１７）。図１８（A、B、C）は、ビヒクル対照処置腫瘍が研究エンドポイント（>１０００ｍｍ３）に到達した処置後２１日目までのＩｇｒｏｖ１腫瘍成長および個々の腫瘍サイズに対する処置の効果を示す。２１日目の腫瘍サイズを比較すると（ビヒクル対照に対して）、５ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ用量のＡＤＣ分子４は、ｐ値がより低いことに基づき、等価用量のＡＤＣ分子２０または比較用ＡＤＣ分子２１のよりも有効であることが示される（図１８Ｃ）。最も高い用量（１５ｍｇ／ｋｇ）では、ＡＤＣ分子４およびＡＤＣ分子２０は両方とも、ビヒクル対照と比較して同様のｐ値で強力な抗腫瘍活性を示した（図１８Ｃ）。用量毎に分類した腫瘍成長曲線の対照比較は、より低い用量ではＡＤＣ分子４の活性のほうが優れていることに基づき、ＡＤＣ分子４が、ＡＤＣ分子２０よりも強力であることを明らかにした（図１９、Ａ〜Ｄ）。処置後２６日目までの腫瘍停滞が観察されたのは、ＡＤＣ分子２０では１０ｍｇ／ｋｇだったのに対し、ＡＤＣ分子４では５ｍｇ／ｋｇだった（図１９Ｂ、図１９Ｃ）。腫瘍退縮の誘導は、ＡＤＣ分子２０では１５ｍｇ／ｋｇから始まったのに対し、ＡＤＣ分子４では１０ｍｇ／ｋｇから始まった（図１９Ｃ、１９Ｄ）。加えて、ＡＤＣ分子４は、５、１０、および１５ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ分子２０および５ｍｇ／ｋｇの比較用ＡＤＣ分子２１と比較して、３００ｍｍ３に到達するまでの腫瘍成長を有意に遅延させた（図２０）。
【０７３０】
[00589]  まとめると、こうした結果は、ＡＤＣ分子４が、Ｉｇｒｏｖ１腫瘍では、ＡＤＣ分子２０およびＡＤＣ分子２１よりも有意に有効であることを示している。ＡＤＣ分子４の最小有効用量は、５ｍｇ／ｋｇで観察されたが、奏功期間が最も長い最大有効用量は、１５ｍｇ／ｋｇだった。
【０７３１】
実施例２１
カルボプラチンとの併用処置におけるＡＤＣ変異体の有効性
[00590]  卵巣がんの標準的な化学療法剤であるカルボプラチンと組み合わせたＡＤＣ分子４の有効性を、Ｉｇｒｏｖ１腫瘍で評価した。確立Ｉｇｒｏｖ１腫瘍（平均腫瘍サイズ１５０ｍｍ３）を保持する動物を、２回の処置で７日毎に（q7dx2）６０ｍｇ／ｋｇのカルボプラチンと共にまたは伴わずに２．５ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ分子４の単一用量で処置した。図２１Ａは、ビヒクル対照処置腫瘍の平均が研究エンドポイント（約１２００ｍｍ３）に到達した処置後２９日目までのＩｇｒｏｖ１腫瘍成長に対する処置の効果を示す。２９日目の最終腫瘍サイズおよび腫瘍成長阻害（TGI）を分析すると、単剤ＡＤＣ分子４およびカルボプラチンは、ビヒクル対照と比較して中程度の活性を呈し、ＴＧＩは、それぞれ５０％および７０％からの範囲だったことが示された（図２１Ｂおよび図２１Ｃ）。ＡＤＣ分子４とカルボプラチンとの組合せは、カルボプラチン単独と比較して有効性を有意に向上させたが、この組合せは、単剤ＡＤＣ分子４との比較では有意差を示さなかった（図２１Ａ）。併用処置動物の最終平均腫瘍サイズは、単剤カルボプラチン処置動物と比較して有意により小さかった（４１４ｍｍ３対８４２ｍｍ３、p=0.0011）（図２１Ｂ）。加えて、併用処置群のＴＧＩは、単剤カルボプラチン群の４７％に対して７９％とより高かった（p=0.0008）（図２１Ｃ）。
【０７３２】
[00591]  結論として、ＡＤＣ分子４をカルボプラチンと組み合わせると、単剤カルボプラチンと比較して有意な追加の利益が観察された。この観察は、類似用量のＡＤＣ分子４およびカルボプラチンが投与された同じモデルを使用した２つの追加独立研究でも一貫して再現された（データ非表示）。
【０７３３】
実施例２２
卵巣腫瘍モデルにおけるＡＤＣ変異体の有効性
[00592]  ＡＤＣ分子４の有効性を、ヒト卵巣細胞株ＯＶＣＡＲ３腫瘍モデルで評価した。１００〜２００ｍｍ３の範囲の確立ＯＶＣＡＲ３腫瘍を保持する動物を、２．５または５ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ分子４の単一用量で処置した。図２２（A、B）は、ビヒクル対照処置腫瘍の平均が＞１５００ｍｍ３に達した処置後３１日目における、ＯＶＣＡＲ３腫瘍成長および最終腫瘍サイズに対する処置の効果を示す。２．５ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ分子４による処置は、処置のおよそ１２日後までの腫瘍停滞をもたらし、５ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ分子４は、腫瘍退縮を誘発したが、処置後２０日目付近で再成長が観察された（図２２Ａ）。３１日目の最終腫瘍サイズを分析すると、２．５および５ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ分子４による処置は両方とも、ビヒクル対照と比較して有意に有効であり、それぞれ６０％および８９％の腫瘍成長阻害（TGI）を呈することが示された（図２２Ｂ）。
【０７３４】
実施例２３
子宮内膜患者由来の異種移植モデルにおけるＡＤＣ変異体の有効性
[00593]  子宮内膜がん患者由来の異種移植（PDX）モデルでのＦｏｌＲα発現レベルを、ＦｏｌＲαに対するビオチン化マウスモノクローナル抗体を使用した異種移植組織の免疫組織化学分析により評価した。ＡＤＣ分子４の有効性を、こうしたＰＤＸモデルのサブセットで評価した。陰性の、低い（+）、中程度の（++）、および高い（+++）ＦｏｌＲα発現を有するモデルが含まれていた。確立（約１００〜２００ｍｍ３）ＰＤＸ腫瘍を保持する動物は、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ分子４を週１回静脈内（IV）注射で受け取ったか（n=3)、または群平均が＞１，０００ｍｍ３になるまで、もしくは処置後４５日目まで無処置だった（対照、n=2〜3）。処置後１４日目の前に腫瘍が１，０００ｍｍ３に達した場合、エンドポイントを、２，０００ｍｍ３に延長した。
【０７３５】
[00594]  試験したＦｏｌＲα陽性モデルの約５０％において統計的に有意な有効性が観察され、腫瘍成長阻害（TGI）は、およそ５０％から１００％よりも高いパーセント（処置開始時の腫瘍サイズ未満への退縮を示す）までの範囲だった。その一方で、ＦｏｌＲα発現が陰性であるすべてのＰＤＸモデルでは、有意な活性は観察されなかった。ＡＤＣ分子４の抗腫瘍活性の度合いは、ＦｏｌＲα発現レベルと正に相関すると考えられた（例えば、FolRαのレベルがより高いPDX腫瘍は、ADC分子4による処置に応答して、より高いTGIを呈した）。図示されているデータ（図２３）は、有効性を呈したモデルの一部の代表的なものである：（A）ＦｏｌＲα発現が陰性であるＰＤＸモデル；（B）ＦｏｌＲα＋発現を示すＰＤＸモデル；（C、D）ＦｏｌＲα＋＋発現を示すＰＤＸモデル；（E、F）ＦｏｌＲα＋＋＋発現を示すＰＤＸモデル。ＴＧＩパーセント（対照腫瘍の最終日に決定した）および対応するｐ値が、グラフに示されている。ＴＧＩの統計分析は、独立ｔ検定を使用して実施した。５％未満の蓋然性（p<0.05）を、有意であるとみなした。すべてのグラフは、平均±ＳＥＭとして表されている。
【０７３６】
実施例２４
アベルマブとの併用処置におけるＡＤＣ変異体の有効性
[00595]  ＰＤ−Ｌ１阻害剤アベルマブ（臨床等級）と組み合わせたＡＤＣ分子４の有効性を、確立ＭＣ３８−ＦｏｌＲα腫瘍を保持する動物で評価した。結果は、図２４および図２５に示されている。図２４Ａおよび図２５Ａは、ＡＤＣ分子４、アベルマブ、またはその両方の組合せの表示用量に応答したＭＣ３８−ｈＦｏｌＲα腫瘍成長曲線を示す。ＩＡＣＵＣプロトコールに基づく腫瘍サイズ制限に達したために単剤処置群の動物の＞５０％を安楽死させるまでの、成長曲線が示されている。図２４Ｂは、対照腫瘍の平均が＞１２００ｍｍ３になった１２日目における、個々の腫瘍サイズの散布図である。ビヒクル対照と比較するための統計分析は、一元配置ＡＮＯＶＡを使用してダネット多重比較検定で実施した。５％未満の蓋然性（p<0.05）を、有意であるとみなした。図２５Ｂは、表示用量のＡＤＣ分子４、アベルマブ、またはその両方の組合せによる処置に応答して生存する動物の割合を示すカプラン−マイヤー曲線である。すべてのグラフは、平均または個々の値±ＳＥＭとして表されている。
【０７３７】
[00596]  図２４に示されているように、いずれかの用量（IV注射により１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇを１回）の単剤ＡＤＣ分子４またはアベルマブ（q3dx3で腹腔内投与）は、初期にはおよそ７日目までの腫瘍停滞をもたらし、併用処置は、腫瘍退縮を誘導した（図２４Ａ）。１２日目の腫瘍サイズの分析は、ビヒクル対照と比較して、すべての処置群において腫瘍成長の有意な阻害を示した（図２４Ｂ）。継続的にモニタリングすることにより、アベルマブと組み合わせたＡＤＣ分子４は、１５匹中１４匹の動物において完全な退縮（例えば、触知可能な腫瘍がないこと）がもたらされたことにより証明されるように、いずれの単剤単独と比較しても抗腫瘍活性を顕著に増強したことが明らかになった（図２４Ｂ）。
【０７３８】
[00597]  図２５に示されているように、１０ｍｇ／ｋｇのＡＤＣ分子４＋アベルマブ群の１匹の動物では、腫瘍再成長が観察され、最大腫瘍サイズに達したため、５９日目に安楽死させた（図２５Ａ）。さらに、併用処置は、健康な動物の生存が有意に延長され、正常な体重増加を示し、処置の１１２日後までに腫瘍の再成長はなく、単剤よりも生存期間中央値が３〜４倍長いことに基づき、治癒効果または完全寛解を示した（図２５Ｂ）。
【０７３９】
実施例２５
ＳＣＩＤベージュマウスにおけるＡＤＣ変異体の薬物動態特性
[00598]  ＫＢ腫瘍モデルおよびＩｇｒｏｖ１腫瘍モデルにおいて良好な有効性を示したＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体候補の非コンパートメント薬物動態パラメーターを、腫瘍不保持ＳＣＩＤベージュマウスで評価した。単回の５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶボーラスを投与し、試料を採取し、異なるマウスに由来するものをプールして、薬物動態（PK）パラメーターの時点データを得た。ＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体は、マウスＦｏｌＲαに結合しないため、抗原媒介性ＰＫ効果は予想されない。試験物のリストおよび結果の要約は表２３に示されている。
【０７４０】
【表２３】
2022500454.tif 000177
【０７４１】
[00599]  濃度−時間曲線の対数−線形プロットの回帰分析から排出半減期（T1/2）を決定した。具体的には、ＡＤＣ分子４のＴ１／２、ＣＬ、およびＶｓｓは、それぞれ６．３６、９．５７、および７９．７だった。加えて、ＡＤＣ分子４のＣｍａｘは、１１８±５μｇ／ｍＬであると決定された。
【０７４２】
[00600]  概して、試験したすべてのＦｏｌＲα  ＡＤＣ変異体の薬物動態特性は同等であり、同様のＰＫプロファイル値を呈した（図２６）。加えて、すべての試験物のマウス薬物動態プロファイルは、他のＦＤＡ承認モノクローナルＩｇＧ抗体のＰＫプロファイルと同様のＰＫプロファイルを呈した。
【０７４３】
実施例２６
カニクイザルにおけるＡＤＣリード抗体の薬物動態特性
[00601]  Ｋ４２／Ｙ１８０コンジュゲーション部位を有する抗体１８４８−Ｂ１０および１８４８−Ｈ０１の非コンパートメント薬物動態（PK）パラメーターを、カニクイザル（cynomologous monkey）（各抗体用量毎にn=3）における反復投与研究で評価した。２回の１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ用量を１日目および１５日目に投与し、試料を分析してＰＫパラメーターおよび抗薬物抗体（ADA）応答を決定した。この２つの抗体は、ヒト標的と同等の親和性でｃｙｎｏ  ＦｏｌＲαに結合するため、抗原媒介性ＰＫ効果が予想されるであろう。表２４に要約されているように、両抗体のＰＫプロファイルは類似している。
【０７４４】
【表２４】
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【０７４５】
[00602]  抗体１８４８−Ｈ０１（K42/Y180)の平均薬物動態パラメーターは、投与１後および投与２後で類似していた。投与１後および投与２後の平均血漿クリアランスは、それぞれ７．８３ｍＬ／日／ｋｇおよび６．６０ｍＬ／日／ｋｇであり、分布容積は、それぞれ６７ｍＬ／ｋｇおよび７１ｍＬ／ｋｇだった。投与１および投与２の平均終末期半減期は、それぞれ６．５日および８．０日だった。１８４８−Ｂ１０（K42/Y180)の平均薬物動態パラメーターは、投与１後および投与２後で同等だった。投与１後および投与２後の血漿クリアランスは、それぞれ６．０２ｍＬ／日／ｋｇおよび４．７４ｍＬ／日／ｋｇだった。投与１および投与２の平均終末期半減期値は、それぞれ９．７日および１３日だった。分布容積は、およそ８０ｍＬ／ｋｇだった。
【０７４６】
[00603]  また、処置動物の血清試料を、抗薬物抗体の発生について分析した（データ非表示）。ＡＤＡ分析では、両抗体とも１５日目（第１の投与後）には有意な応答はなかったことが示されたが、２８日目および４３日目（１５日目における第２の投与後）では数匹の動物でＡＤＡが検出された。
【０７４７】
実施例２７
カニクイザルにおけるＡＤＣ候補の薬物動態学的評価
[00604]  １日目および２２日目に、ＩＶ緩徐ボーラス用量のビヒクル対照またはＡＤＣ分子４を雌カニクイザルに１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、および３０ｍｇ／ｋｇの用量で投与し（n=3/群）、４３日目まで観察した。毒物動態プロファイル評価（総抗体、ADC、および遊離薬物（I）異化代謝産物）のため、幾つかの時点で血清および血漿をすべての群から収集した。毒物動態分析は、ＡＤＣ、総抗体、および遊離薬物（I）の循環レベルを評価することにより判断したところ、ＡＤＣ分子４の曝露をすべての用量で確認した。ＡＤＣ、総抗体、および遊離薬物（I）の平均ＣｍａｘおよびＡＵＣ値は、ＡＤＣ分子４の用量レベルの増加と共にほぼ用量比例的に増加し、１日目および２２日目で概して同様だった。ＡＤＣの半減期（T1/2）は、１．７日から２日よりも長期までの範囲であり、Ｃｍａｘは、投与した用量に応じて２９〜５６０μｇ／ｍＬの範囲だった。
【０７４８】
実施例２８
ＡＤＣ候補から放出された異化代謝産物の特定
[00605]  ここで説明する抗ＦｏｌＲα  ＡＤＣは、エンドソームまたはリソソーム内でプロセシングされて、代謝産物である遊離薬物（I）の放出がもたらされ、それが周囲の細胞に浸透してバイスタンダー活性を引き起こすことができることが予測される。コンジュゲートＰおよびコンジュゲートＱから放出される遊離薬物は、下記に示されている構造（I）の化合物であると予測される。
【０７４９】
【化１３７】
2022500454.tif 000179
【０７５０】
[00606]  培養細胞での遊離薬物（I）の生成を確認し（図示せず）、Ｉｇｒｏｖ１腫瘍をＡＤＣ分子１およびＡＤＣ分子１７で処置し、投与後の様々な時点で腫瘍を回収した。腫瘍をホモジナイズし、アセトニトリルで抽出し、溶媒抽出画分をＬＣ／ＭＳで分析した。ＡＤＣ分子１およびＡＤＣ分子１７で処置した動物では、異化代謝産物Ｃ１が、腫瘍試料で検出されたが、処置マウスの血漿では検出されなかった（図２７）。Ｃ１のＬＣ／ＭＳプロファイルは、予測される異化代謝産物である遊離薬物（I）のプロファイルと一致し、その構造は質量分析により確認した（図示せず）。遊離薬物（I）は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで細胞傷害活性を有し、ＥＣ５０は、試験した細胞株に応じて０．５〜２０ｎＭの範囲だったことが示された（表２６、細胞株のデータはすべてが示されている訳ではない）。
【０７５１】
実施例２９
ＡＤＣ候補のＩＮ  ＶＩＶＯ安定性
[00607]  ＡＤＣ分子４のｉｎ  ｖｉｖｏ安定性を、５ｍｇ／ｋｇのＡＤＣの単一用量後にヌード系統のマウスで測定した。血漿を種々の時点で収集し、総ＩｇＧをＥＬＩＳＡで分析した。循環ＡＤＣのＤＡＲ分析は、親和性捕捉し、続いてＬＣ−ＭＳを行うことにより測定した。データは、ＤＡＲ値が、研究の過程で変化しないことを示す（図２８）。観察された分解ピークも実行中には変化せず、元のストックに見出される通りの同じ量で存在する。
【０７５２】
実施例３０
血漿中でのＡＤＣ候補の安定性
[00608]  ＡＤＣ分子４およびＡＤＣ分子２０の安定性を、カニクイザルおよびヒトの血漿において試験して、２つのリンカー−薬物、コンジュゲートＰおよびコンジュゲートＱの安定性を比較した。５０μｇ／ｍＬのＡＤＣを、ＰＢＳ、ヒト血漿、およびカニクイザル血漿中で、重複してインキュベートした。試料を、６０分、１日、３日、７日、１４日、および２１日間の時点にわたってインキュベートした。親和性捕捉およびＬＣ−ＭＳを用いたＡＤＣのＥＬＩＳＡおよびＤＡＲ分析による総ＩｇＧを使用して、分子の安定性を評価した。図２９に示されているデータは、ＡＤＣ分子４およびＡＤＣ分子２０のｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性が、ヒト血漿およびｃｙｎｏ血漿の両方において同等であり、ＤＡＲ４は、２１日目まで維持されたことを示す。また、両分子には、おそらくは抗体のＣ末端でクリッピングが生じたことが示され、これはインキュベーション後の１日目で観察された。このクリッピングは、重鎖のＣ末端にある２つのリジン残基の切断である可能性が高く、分子の安定性および活性に影響を及ぼす可能性は低い。同様のクリッピングは、ＩｇＧ分子のＣＨＯ産生中に一般的に観察される。
【０７５３】
実施例３１
ＡＤＣ候補と比較用ＡＤＣとの比較
[00609]  本明細書に記載のＡＤＣ候補の比較用物質はＩＭＧＮ８５３である。ＩＭＧＮ８５３（ミルベツキシマブソラブタンシン（mirvetuximab soravtansine））は、切断可能な（スルホ-SPDB）リンカーを介してチューブリン破壊マイタンシノイドＤＭ４に連結されたＦｏｌＲα結合抗体を含む抗体−薬物コンジュゲートである。その抗体およびリンカー成分の選択を含むＩＭＧＮ８５３の設計は、卵巣がんおよび非小細胞肺がんの患者に由来する腫瘍試料中のレベルを反映するＦｏｌＲα発現のレベルを有する前臨床モデルにおけるその抗腫瘍活性の最適化に基づいていた。ＩＭＧＮ８５３は、その化学的特徴に基づくと臨床的に有望であると考えられるが、分子の安定性、安全性、および活性に影響を及ぼす幾つかの潜在的な不安定性を有する可能性がある。したがって、ＩＭＧＮ８５３サロゲート（ADC分子21）およびＡＤＣ分子４の特性および前臨床効果を評価するアッセイを下記に記載する。
【０７５４】
[00610]  ＡＤＣ分子４の特異性をＩＭＧＮ８５３の特異性と比較して評価するため、ＡＤＣ分子４の細胞傷害活性を、ＩＭＧＮ８５３の緊密に近似するサロゲートと比較した。このサロゲートを、ＣＨＯ細胞で一過性に発現させ、スルホ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４にコンジュゲートしてＡＤＣ分子２１を産生した。ＦｏｌＲα発現が陽性であった細胞（Igrov1およびOVCAR3）およびＦｏｌＲα発現が陰性であった細胞（A549）に対する２つのＡＤＣ分子の細胞傷害活性を、競合物質としての過剰量の非コンジュゲート「ネイキッド」抗体の存在下で比較した。ＡＤＣ分子４の場合、ネイキッド抗体がＦｏｌＲα抗原との結合をＡＤＣと競合するため、Ｉｇｒｏｖ１細胞に対する細胞殺傷活性は、非コンジュゲート抗体の存在下では約８００分の１に低減された（０．０５３ｎＭのEC50から、３３ｎＭよりも高いEC50へと）。これは、ＡＤＣ分子４の細胞殺傷活性が、細胞表面上のＦｏｌＲα抗原の存在に特異的であることを示す。ＡＤＣ分子２１の細胞殺傷活性は、細胞表面上のＦｏｌＲα抗原の存在に完全には依存しない。これは、ネイキッド抗体を添加しても、Ｉｇｒｏｖ１細胞に対するＥＣ５０が約３倍しかシフトしなかったからである。同様の結果がＯＶＣＡＲ３細胞でも観察された（図３０Ａ、図３０Ｂ）。ＡＤＣ分子２１では、ＦｏｌＲα陰性Ａ５４９細胞に対する強力な非特異的細胞殺傷が観察されたが、ＡＤＣ分子４では非特異的細胞殺傷は観察されなかった（図３０Ｃ）。こうしたデータに基づくと、ＡＤＣ分子４は、ＦｏｌＲα陽性細胞に対してのみ強力で特異的な細胞殺傷性を示し、ＡＤＣ分子２１は、ＦｏｌＲα抗原に対するＡＤＣ結合に関わらず、非特異的な細胞殺傷性を示すと結論付けることができる。結果は、表２５に要約されている。
【０７５５】
【表２５】
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【０７５６】
[00611]  ＡＤＣ分子４は、ＦｏｌＲα陽性Ｉｇｒｏｖ１細胞に対して特異的な細胞殺傷活性を示したが、Ａ５４９  ＦｏｌＲα陰性細胞に対してはいかなる活性も示さなかった。対照的に、ＡＤＣ分子２１は、陰性および陽性ＦｏｌＲα細胞株の両方に対して細胞傷害活性を示し、特異性を欠如することが示唆された。特異性の欠如は、培養中のおよびｉｎ  ｖｉｖｏの還元条件下でスルホ−ＳＰＤＢリンカーが潜在的に不安定性であることに起因するものであるか、または細胞内へのＡＤＣの飲作用によるものであり得る。ＡＤＣ分子４およびＡＤＣ分子２１から放出される遊離薬物は、それぞれ下記に示されている構造（I）および（II）の化合物である。
【０７５７】
【化１３８】
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ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性研究では、放出された遊離薬物（I）および（II）は、同等の細胞傷害活性を有していた（表２６）。この研究での１つの重要な観察は、ＡＤＣ分子４が、それにコンジュゲートされている理論上４つの遊離薬物部分（I）よりも１０倍強力であることであり、このコンジュゲートが、遊離薬物（I）よりも高いレベルの標的細胞に対する特異的殺傷を付与することを示す。
【０７５８】
【表２６】
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【０７５９】
[00612]  遊離薬物（I）の薬物動態プロファイルを評価するため、雌Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（平均体重２５０ｇ）に、０．４ｍｇ／ｋｇ用量または１ｍｇ／ｋｇ用量のいずれかを、留置頸静脈カテーテルを介してＩＶボーラス投与により投与した（１用量レベル当たりN=3の動物）。投与の０、０．８３、１、２、８、２４、３２、４８、および７２時間後に、血液試料を収集した。遊離薬物（I）および（II）のレベルをＬＣ−ＭＳ／ＭＳで測定し、Ｐｈｏｅｎｉｘ  ＷｉｎＮｏｎｌｉｎバージョン６．４（Pharsight Corporation）を使用して非コンパートメント薬物動態分析を実施した。表２７には、この研究から収集したＰＫデータが提供されている。遊離薬物（I）のＰＫは、（I）の濃度が２から８時間まで増加し、その後検出不能だったため、推定できなかった。この研究の結果は、遊離薬物（I）が投与２４時間後に検出不能であるため、（I）のクリアランスは、遊離薬物（II）のクリアランスよりも迅速であることを示唆する（データ非表示）。加えて、２用量の遊離薬物（I）の投与は、動物の体重に影響を及ぼさなかったが、０．４ｍｇ／ｋｇの遊離薬物（II）により処置すると進行性の体重減少が観察された（図３１）。
【０７６０】
【表２７】
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【０７６１】
[00613]  表２８は、ＡＤＣ分子４およびその代謝産物である遊離薬物（I）の特性の要約である。
【０７６２】
【表２８】
2022500454.tif 000184
【０７６３】
実施例３２
ＡＤＣ候補対比較用ＡＤＣの薬物連結の安定性の比較
[00614]  ＡＤＣ分子４および比較用ＡＤＣ分子２１の安定性を、カニクイザル血漿およびヒト血漿およびＰＢＳで評価し、続いて放出された異化代謝産物である遊離薬物（I）および（II）をそれぞれ定量化した（実施例２９を参照）。図３２に要約されたデータに基づくと、ＡＤＣ分子４の薬物連結は、ＡＤＣ分子２１の薬物連結よりも安定していると考えられる。ＡＤＣ分子２１は、ヒト血漿およびｃｙｎｏ血漿中で迅速に切断されると考えられ、血漿に添加してから１５〜３０分以内に遊離薬物（II）が検出される。その後、遊離薬物（II）は、時間の経過と共にさらに代謝されると考えられる。対照的に、遊離薬物（I）は、ＡＤＣ分子４を血漿に添加してから１５〜３０分以内では検出されない。遊離薬物（I）のレベルは、血漿中で４日間にわたってインキュベーションするとほんのわずか増加するが、ＰＢＳでは増加しない。これは、薬物連結が血漿中でより安定していることを示唆する。
【０７６４】
実施例３３
排出ポンプ（efflux pump）に関するＡＤＣ異化代謝産物の比較
[00615]  透過性糖タンパク質１（PgP；多剤耐性タンパク質1（MDR1）としても知られている）は、細胞から外来性物質をくみ出し、様々な細胞傷害性薬物の細胞内濃度を低減させる細胞膜タンパク質である。ＰｇＰ活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏにおいて化学療法誘導性細胞傷害性を鈍化させる。がん細胞は、ＰｇＰの上方制御により薬物耐性になることが多く、一部の場合では、この上方制御は、薬物自体により媒介される。遊離薬物（I）および（II）（実施例２９）のＰｇＰ感受性を比較するアッセイを、シスプラチン耐性細胞株モデルで実施した。
【０７６５】
[00616]  遊離薬物（I）が、卵巣がん細胞株の一部においてシスプラチン耐性に関与する（Stordal et al. 2012. PLoS One 7（7））Ｐ糖タンパク質（PgP）の特異的な基質であるかを評価するため、ＰｇＰを過剰発現するＭＥＳ−ＳＡ／ＭＸ２細胞株および親ＭＥＳ−ＳＡ細胞において遊離薬物細胞殺傷活性を調査した。ＰｇＰを過剰発現するＭＥＳ−ＳＡ／ＭＸ２細胞に対する、遊離薬物（I）、遊離薬物（II）、および対照遊離薬物（MMAE、「III」と表記される)の細胞殺傷活性は、親ＭＥＳ−ＳＡ細胞に対するそれらの活性と比較して、異なるレベルで低減された。また、ＭＥＳ−ＳＡ／ＭＸ２細胞をＰｇＰ阻害剤ＧＦ１２０９１８（５μＭ）で処置し、細胞表面上にＰｇＰが存在することが、観察された細胞殺傷性低減に寄与するかをさらに調査した。ＰｇＰ阻害剤の存在下では、遊離薬物の細胞殺傷活性は、親ＭＥＳ−ＳＡ細胞株と同じレベルに戻り、ＭＥＳ−ＳＡ／ＭＸ２細胞でのＰｇＰ過剰発現が、遊離薬物耐性の主な理由であったことが示された。
【０７６６】
[00617]  ＭＥＡ−ＳＡ／ＭＸ２細胞に対する、陽性対照遊離薬物（III）の細胞殺傷ＥＣ５０は、ＰｇＰ阻害剤ＧＦ１２０９１８の存在下および非存在下で１１１倍の変化を示した。これは、遊離薬物（III）がＰｇＰの非常に良好な基質であることを示した。遊離薬物（I）は、ＭＥＡ−ＳＡ／ＭＸ２細胞に対する細胞殺傷ＥＣ５０にＰｇＰ阻害剤の存在下および非存在下で８倍の変化しか観察されなかったという事実に基づくと、ＰｇＰの基質としては不良である。遊離薬物（II）も、ＰｇＰの基質としては比較的不良であるが、細胞殺傷ＥＣ５０には１７倍の変化が観察されたため、遊離薬物（I）と比較して排出ポンプによる輸送の影響をより受け易い（表２９、図３３）。
【０７６７】
【表２９】
2022500454.tif 000185
【０７６８】
[00618]  データは、遊離薬物（I）が、遊離薬物（II）と比較して、排出ポンプによる膜通過能動輸送のより弱い基質であることを示唆する。その結果、遊離薬物（I）は、がん細胞からくみ出される可能性がより低くなり、それにより毒素のより良好な細胞維持に結び付き、したがって比較用ＡＤＣ分子２１と比較してＡＤＣ分子４の細胞傷害性を向上させることができた。ＰｇＰ媒介性薬物排出は、ＡＤＣに対する一般的な耐性機序であり、臨床では、白金剤およびＰＡＲＰ阻害剤に対する耐性の重要な機序の１つである。したがって、遊離薬物（I）は、ＰｇＰに対する基質能力が低いため、白金耐性がんおよび潜在的ＰＡＲＰ耐性がんを標的とする有望な弾頭である。
【０７６９】
実施例３４
腫瘍および血漿中の異化代謝産物の蓄積
[00619]  ＡＤＣ分子４の薬物連結は、比較用ＡＤＣ分子２１の薬物連結よりも安定していると考えられるが、腫瘍細胞内で遊離薬物（I）がＡＤＣ分子４から効率的な放出をされることは、その細胞傷害性にとって重要である。ＡＤＣ分子４およびＡＤＣ分子２１からの弾頭放出を評価するために、遊離薬物（I）および（II）の腫瘍レベルおよび血漿レベルを、この２つのＡＤＣ分子で処置したＩｇｒｏｖ１腫瘍を保持したマウスで測定した。図３４に示されているように、ＡＤＣ分子４からの遊離薬物（I）の放出および腫瘍蓄積は、ＡＤＣ分子２１からの遊離薬物（II）の放出および腫瘍蓄積と同等であるかまたはわずかに良好だった。この２つの弾頭の細胞傷害性が同等であることと併せると、このデータは、ＡＤＣ分子４の細胞傷害活性が、比較用ＡＤＣ分子２１の細胞傷害活性と少なくとも同等であることを示唆する。
【０７７０】
[00620]  要約すると、実施例２９〜３２に記載のデータは、治療指数（TI）の拡大が、放出された弾頭の属性（遊離薬物（I）対遊離薬物（II））およびＡＤＣ分子４の全体としての構造の両方から生じ得ることを示唆する。遊離薬物（I）および（II）は、遊離薬物として投与した場合のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性が同等であるだけでなく、ＡＤＣとして投与した場合の腫瘍における蓄積も同等である。遊離薬物（I）は遊離薬物（II）と比べてＰｇＰ基質能力がはるかにより弱いため、腫瘍が排出に基づく耐性を発生させても、ＡＤＣ分子４は、その元の活性のほとんどを維持することになることが予測される。ＡＤＣ分子４のプロテアーゼ切断可能な放出機序は、比較用ＡＤＣ分子２１のジスルフィド放出機序よりも高い安定性および腫瘍特異性を有する。これは、同時に、ＦｏｌＲαを発現する細胞に対するより高い特異性をもたらす。ＡＤＣ分子４は、異化代謝産物（I）のクリアランスがより速く、耐容性がより高いことに加えて、安定性がより高いため、ＡＤＣ分子４の安全性プロファイルの向上も付与される。これはすべて、ＡＤＣ分子４が、サロゲートＡＤＣ分子２１に対して測定した通り、比較用ＡＤＣ  ＩＭＧＮ８５３よりも高いＴＩを有し得ることを示す。
【０７７１】
実施例３５
抗体候補への突然変異の導入
[00621]  Ｖ２６２Ｅ突然変異を、抗体変異体１８４８−Ｈ０１（Y180/F404）に導入して、この突然変異が変異体の収量を増加させることになるかを調査した。Ｖ２６２Ｅ突然変異の導入は、精製タンパク質の品質を変化させずに、ＰｒｏＡ精製後の収量の約７０％の増加をもたらした（親力価１７０ｍｇ／Ｌと比較して３５０ｍｇ／Ｌ）（データ非表示）。コンジュゲートＰ（実施例１１）およびコンジュゲートＱ（実施例１５）にコンジュゲートされたＶ２６２Ｅ突然変異型タンパク質の特性を、コンジュゲーション効率およびＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性に関して、親コンジュゲートＡＤＣ分子４と比較した。表３０から分かるように、Ｖ２６２Ｅ突然変異の導入により、ＰコンジュゲートのＩｇｒｏｖ１細胞に対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害活性がわずかに低減され、Ｑコンジュゲートの活性がより大きく低減されたが、コンジュゲーション効率およびＤＡＲは同等だった。
【０７７２】
【表３０】
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【０７７３】
[00622]  Ｐコンジュゲートの薬物動態特性ならびにｉｎ  ｖｉｖｏ安定性およびｉｎ  ｖｉｖｏ有効性をＡＤＣ分子４と比較すると、ＡＤＣのＰＫは、２つの変異形態間で同等であったが（表３１、図３６）、突然変異型Ｐコンジュゲート（ADC分子23）のｉｎ  ｖｉｖｏ活性は、ＡＤＣ分子４のｉｎ  ｖｉｖｏ活性よりもわずかに低かった（図３５Ａ）。２１日目の腫瘍サイズの統計分析は、ＡＤＣ分子４による処置のみが、ビヒクルと比較して有意により小さな腫瘍をもたらしたものの、ＡＤＣ分子４群およびＡＤＣ分子２３群の腫瘍サイズは、互いに統計的な差がないことを示した（図３５Ｂ）。これに基づくと、ＡＤＣ分子２３は、ＦｏｌＲαを標的とするための開発およびさらなる調査のための代替ＡＤＣとして好適である。
【０７７４】
【表３１】
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【０７７５】
実施例３６
配列
[00623]  表３２は、本明細書で参照されている配列を提供する。
【０７７６】
【表３２−１】
2022500454.tif 000188
【０７７７】
【表３２−２】
2022500454.tif 000189
【０７７８】
【表３２−３】
2022500454.tif 000190
【０７７９】
【表３２−４】
2022500454.tif 000191
【０７８０】
【表３２−５】
2022500454.tif 000192
【０７８１】
【表３２−６】
2022500454.tif 000193
【０７８２】
【表３２−７】
2022500454.tif 000194
【０７８３】
【表３２−８】
2022500454.tif 000195
【０７８４】
【表３２−９】
2022500454.tif 000196
【０７８５】
【表３２−１０】
2022500454.tif 000197
【０７８６】
【表３２−１１】
2022500454.tif 000198
【０７８７】
【表３２−１２】
2022500454.tif 000199
【０７８８】
【表３２−１３】
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【０７８９】
【表３２−１４】
2022500454.tif 000201
【０７９０】
【表３２−１５】
2022500454.tif 000202
【０７９１】
【表３２−１６】
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【０７９２】
均等物
[00624]  上記に示されている開示は、独立した有用性を有する複数の別個の発明を包含し得る。そうした発明の各々は、その好ましい形態で開示されているが、本明細書で開示および図示されているその具体的な実施形態は、数多くの変異形態が可能であるため、限定的な意味で考慮されるべきではない。本発明の主題は、本明細書で開示される種々の要素、特徴、機能、および／または特性の新規で非自明な組合せおよび部分組合せをすべて含む。以下の特許請求の範囲には、新規で非自明であるとみなされるある特定の組合せおよび部分組合せが指し示されている。特徴、機能、要素、および／または特性の他の組合せおよび部分組合せで実現される発明は、本出願、本出願の優先権を主張する出願、または関連出願において特許請求することができる。そのような特許請求の範囲も、異なる発明に関するかまたは同じ発明に関するかに関わらず、および元の特許請求の範囲と比較して範囲がより広いか、より狭いか、等しいか、または異なるかに関わらず、本開示の発明の主題内に含まれるとみなされる。
【０７９３】
[00625]  本明細書または図面に記載されている任意の実施形態の１つまたは複数の特徴は、本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書または図面に記載されている任意の他の実施形態の１つまたは複数の特徴と組み合わせることができる。
【０７９４】
[00626]  本明細書で引用されている刊行物、特許、および特許出願はすべて、あたかも各々個々の刊行物または特許出願が、参照により組み込まれることが具体的におよび個々に示されているかの如く、参照により本明細書に組み込まれる。上述の発明は、理解を明確にするために図示および例によりある程度詳細に説明されているが、当業者であれば、本発明の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、それにある特定の変更および改変をなすことが可能であることは直ちに明らかであろう。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ−Ｃ】
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【図２３Ｄ−Ｆ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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2022500454.tif 000263
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