【手続補正書】
【提出日】平成22年8月13日(2010.8.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トランスジェニック単子葉植物を作製する方法であって、
（ａ）少なくとも第１の選択されたＤＮＡで外植体を形質転換し；
（ｂ）根および／または苗条の形成ができる再生可能構造体の発育を促進するために、有効な比率でサイトカイニンおよびオーキシンを含む第１の培養培地中で、前記外植体を培養し；次いで、
（ｃ）少なくとも、根および苗条組織の同時成長を支持する第２および／または第３の培養培地中で前記外植体を培養して、再生トランスジェニック単子葉植物を作製することを特徴とし、
ここに、前記再生形質転換単子葉植物は、前記外植体を形質転換する４〜８週間以内で作製される、方法。
【請求項２】
前記再生トランスジェニック単子葉植物を植物生育培地へ移すことを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記生育培地は非滅菌マトリクスである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記非滅菌マトリクスはプラグに含まれる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
再生可能構造体は、前記外植体を形質転換する６〜１４日間以内で作製される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ｂ）は、前記外植体を形質転換する６〜１４日以内に完了する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ａ）および（ｂ）は、カルスを増殖させることなく、１０日間から２週間行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
第１の培養培地は殺菌性化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
第２および／または第３の培養培地は、第１の培養培地に見出されるよりも高い濃度にて、スクロースを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
第１の培養培地はLynx 1947を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｃ）は、根および苗条組織の同時成長を支持する植物成長調節物質フリーの液体培養培地中で前記外植体を培養して、再生トランスジェニック単子葉植物を作製する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
根および苗条組織の同時成長を支持する前記培養培地はLynx 2067を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ステップ（ｂ）は、６から１２日間の長さで行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ステップ（ｃ）は、前記外植体を形質転換する４〜８週間以内に開始される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
第１の培養培地中のオーキシンに対するサイトカイニンの比は、０．００５から０．０３（ｗ／ｗ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
第１の培養培地中のオーキシンに対するサイトカイニンの比は、モル換算で０．００５から０．０３である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記サイトカイニンは、BAP、ゼアチン (zeatin)、カイネチン (kinetin)、およびTDZよりなる群から選択され；オーキシンは、IAA、2,4-D、NAA、IBA、およびジカンバ (dicamba)よりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
ステップ（ｃ）は、第１の培地と比較して、オーキシンに対する比が増大した苗条形成成長調節物質を含む第２の培養培地中で前記外植体を培養して、根および苗条の発育を同時に促進することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ（ｃ）の培地はLynx 2068および／または Lynx 2202である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
添加植物成長調節物質を欠如する第２および／または第３の培養培地中で前記外植体を培養することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
第２の培地中のオーキシンに対する苗条形成成長調節物質の比は、０．０２から０．０６（ｗ／ｗ）である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
第２の培地はLynx 2202またはLynx 2068である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ｃ）の開始後、新鮮な生育培地は添加されない、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
第１の培養培地は、０．００１ｍｇ／Ｌから１０ｍｇ／Ｌのサイトカイニンおよび０．１ｍｇから１５ｍｇ／Ｌのオーキシンを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
前記外植体は、第１および第２の培地上での培養の間に第４の培地上でさらに培養され、ここに、前記第４の培地は、有効量のオーキシンおよびサイトカイニンを含み、カルス増殖を促進する、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
第４の培地はLynx 2063である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記外植体は、第２および第３の培地上での培養の間に第５の培地上でさらに培養され、ここに、前記第５の培地は、苗条生長を促進するのに有効な量のサイトカイニンを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
第５の培地はLynx 2066である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記外植体を形質転換することが細菌媒介形質転換を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記バクテリア媒介形質転換は、アグロバクテリウム種 (Agrobacterium sp.)、リゾビウム種 (Rhizobium sp.)、シノリゾビウム種 (Sinorhizobium sp.)、メゾリゾビウム種 (Mesorhizobium sp.)、およびブラディリゾビウム種 (Bradyrhizobium sp.)よりなる群から選択されるバクテリアを用いて行われる、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
第２および／または第３の培養培地は、第１の培地中の量と比較して低減された量のオーキシン、サイトカイニン、アブシジン酸、またはその組合せを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項３２】
第２および／または第３の培養培地は、第１の培地の半分未満のオーキシンまたはオーキシン様植物成長調節物質活性を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
第１の培養培地ならびに、根および苗条組織の同時成長を支持する培養培地は、液体培地である、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
第１の培養培地は半固体培地である、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
第１の培養培地の後に用いる各培地は液体培地である、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
ステップ（ｂ）および（ｃ）は、単一の容器の中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
前記単子葉植物は、トウモロコシ、コメ、ソルガム (sorghum)、コムギ、ライムギ、アワ、サトウキビ、オーツムギ、ライコムギ (triticale)、スイッチグラス (switchgrass)、またはシバ (turfgrass) 植物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
前記単子葉はトウモロコシ植物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
トランスジェニック植物を作製するための優先開発ウィンドウを拡張するシステムであって、
（ａ）少なくともある程度、第１のフィールドテストで収集されたデータに基づいて、トランスジェニック植物を作製するための対象の候補ＤＮＡセグメントを選択し；
（ｂ）請求項１に記載の方法によって、前記ＤＮＡセグメントを含むトランスジェニック単子葉植物を調製し；ついで、
（ｃ）少なくとも、第１のフィールドテストが実行される時期に引き続く生育時期に実行される第２のフィールドテストにおける所望の発現型および／または遺伝子型について、前記トランスジェニック植物をアッセイすることを特徴とする、システム。
【請求項４０】
第１のフィールドテストまたは第２のフィールドテストのうち一方または双方をアメリカ合衆国中西部で行う、請求項３９に記載のシステム。
【請求項４１】
前記トランスジェニック植物のアッセイは農業形質の測定を含む、請求項３９に記載のシステム。
【請求項４２】
第２のフィールドテストはハイブリッド収率テストであるである、請求項３９に記載のシステム。
【請求項４３】
第２のフィールドテストは第１のフィールドテスト後の２つの生育時期に行われる、請求項３９に記載のシステム。
【請求項４４】
形質転換可能性について穀物植物系統の細胞をスクリーニングする方法であって、
（ａ）苗条始原体の作製を支持する生育培地上で、穀物植物の外植体を１〜２週間以内培養し；
（ｂ）苗条伸張を支持する条件下、少なくともさらに１週間、暗闇中で前記苗条始原体を培養して、生育中の苗条組織および／または小植物を獲得し；ついで、
（ｃ）少なくともさらに１週間、植物育生倍地上で、ステップ（ｂ）の組織または小植物を培養して、苗条芽および／または植物を得、
ここに、ステップ（ｃ）の後に、苗条始原体が苗条芽および／または植物を作製する能力によって、前記細胞の形質転換可能性を測定する、方法。