(57)【要約】  改善されたミュラー管抑制因子貯蔵緩衝液組成物の非限定的な実施形態および改善された貯蔵緩衝液組成物中のミュラー管抑制因子を安定化させる方法。【選択図】図１Ａ
2022501398.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミュラー管抑制因子貯蔵緩衝液組成物であって：
脱イオン水；
少なくとも１つの緩衝剤；
少なくとも１つの塩；
少なくとも１つの糖アルコール；
ゼラチン；
少なくとも１つの界面活性剤；
プロテアーゼ非含有のウシ血清アルブミン；および
少なくとも１つの殺生物剤を含む前記ミュラー管抑制因子貯蔵緩衝液組成物。
【請求項２】
少なくとも１つの緩衝剤は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液、［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパンスルホン酸緩衝液、２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）酢酸（ビシン）緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸緩衝液、２−［［１，３−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−２−イル］アミノ］エタンスルホン酸緩衝液、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸緩衝液、ピペラジン−Ｎ−Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）緩衝液、ジメチルヒ酸、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸緩衝液、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸一カリウム緩衝液、ホウ酸塩緩衝液およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項３】
少なくとも１つの緩衝剤は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液である、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項４】
４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液は、約５０ｍＭの濃度を含む、請求項３に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項５】
少なくとも１つの塩は、塩化ナトリウムである、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項６】
塩化ナトリウムは、約１５０ｍＭの濃度を含む、請求項５に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項７】
ゼラチンは、液体ゼラチンである、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項８】
液体ゼラチンは、約６グラム／リットルの濃度を含む、請求項７に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項９】
少なくとも１つの糖アルコールは、エチレングリコール、グリセリン、エリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール、マルトテトライトール、ポリグリシトール、加水分解水添デンプンおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１０】
少なくとも１つの糖アルコールは、マンニトールである、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１１】
マンニトールは、約５０グラム／リットルの濃度を含む、請求項１０に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１２】
少なくとも１つの界面活性剤は、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つの界面活性剤は、ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートである、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１４】
ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートは、約１．１グラム／リットルの濃度を含む、請求項１３に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１５】
少なくとも１つの殺生物剤は、防腐剤、抗菌剤、殺菌剤、抗生物質、抗菌薬、殺細菌剤、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗原虫薬、抗寄生虫薬、防汚剤、消毒剤、農薬、殺真菌剤、除草剤、殺虫剤、殺藻剤、軟体動物駆除剤、殺ダニ剤、殺鼠剤およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１６】
少なくとも１つの殺生物剤は、ブロモ−ニトロ−ジオキサンおよびメチルイソチアゾロンのエタノール性溶液である、請求項１に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１７】
ブロモ−ニトロ−ジオキサンおよびメチルイソチアゾロンのエタノール性溶液は、約２ミリリットル／リットルの濃度を含む、請求項１６に記載の貯蔵緩衝液組成物。
【請求項１８】
ミュラー管抑制因子貯蔵緩衝液組成物内の精製ミュラー管抑制因子を安定化させる方法であって、該方法は：
ミュラー管抑制因子を哺乳動物源から抽出し、それにより抽出ミュラー管抑制因子を形成する工程と；
抽出ミュラー管抑制因子を精製し、それにより精製ミュラー管抑制因子を形成する工程と；
精製ミュラー管抑制因子を貯蔵緩衝液中で保存する工程とを含み、該貯蔵緩衝液は：
脱イオン水；
少なくとも１つの緩衝剤；
少なくとも１つの塩；
少なくとも１つの糖アルコール；
ゼラチン；
少なくとも１つの界面活性剤；
プロテアーゼ非含有のウシ血清アルブミン；および
少なくとも１つの殺生物剤を含み、
該貯蔵緩衝液は、所定の温度範囲で維持され、そこに含まれる精製ミュラー管抑制因子を安定化させる、前記方法。
【請求項１９】
所定の温度範囲は、約２℃〜約８℃である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも１つの糖アルコールは、マンニトールである、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
該当なし。
【０００２】
連邦政府による資金提供を受けた研究または開発に関する記述
該当なし。
【０００３】
ここに開示され特許請求される本発明の概念は、少なくとも１つの診断アッセイの実行のために利用される成分および／または試薬の安定性および／または貯蔵寿命を増加させる組成物、キット、および方法に関する。より詳細には、ここに開示され特許請求される本発明の概念は、精製ミュラー管抑制因子（ＭＩＳ）の貯蔵寿命を安定化しかつ増加させる貯蔵緩衝溶液の非限定的な実施形態、同様にそれに関連するキットならびに使用方法および製造方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
ミュラー管抑制因子（ＭＩＳ）／抗ミュラー管ホルモン（ＡＭＨ）は不安定な二量体糖タンパク質であり、そのカルボキシ末端アミノ酸相同性に起因して、ＭＩＳは、例えば、卵母細胞減数分裂および肺表面活性物質の阻害を含む、成長および分化の調節に関与する糖タンパク質の形質転換増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−β）スーパーファミリーの一員である。ＭＩＳは、男性胚形成中に、胎児の泌尿生殖隆線中の女性生殖器の原基である、中腎傍管／ミュラー管の退縮の役割を担う性腺ホルモンである。ＭＩＳはまた、全般的妊孕性評価、体外受精手順に関する成功の予測的可能性、特定のがんの診断（一例として、卵巣がんおよび子宮がんなど）、多嚢胞性卵巣症候群の検出、避妊、ならびに／または子宮内膜症および／もしくは子宮腺筋症の処置を限定されることなく含む、特定の生物学的な疾患および／または状態のための、臨床薬および／または診断薬および／またはバイオマーカーとして利用されてきた。
【０００５】
多くのＴＧＦ−βタンパク質によく見られることであるが、ＭＩＳは、二量体前駆物質として生成され、活性化のために翻訳後プロセシングを受け、生理活性のＣ−末端フラグメントを放出するために切断および解離を必要とする。アフィニティー精製および／またはイオン交換方法を限定されることなく含む、当技術分野で一般的に公知の方法を介して精製されると、精製ＭＩＳは、タンパク質分解酵素により切断および分解され、それにより精製ＭＩＳの貯蔵寿命の低下および生物活性の損失をもたらす傾向が高く、そうなり易い。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、単に一例として、改善された貯蔵緩衝液のような改善された組成物、および精製ＭＩＳの貯蔵寿命を増加させ、安定化し、生物活性の損失を実質的に軽減する方法が必要とされている。ここに開示され特許請求される本発明の概念は、そのような組成物および方法、同様にそれに関連するキットに関する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１−１】図１Ａ〜１Ｅは、ここに開示および／または特許請求される本発明の概念に基づき、約０．１５ｎｇ／ｍＬ〜約３３．５０ｎｇ／ｍＬの範囲の初濃度のＭＩＳ（０日目）に対する、６０日の期間にわたるＭＩＳの生物活性を示すグラフプロットである。
【図１−２】図１−１の続き。
【図１−３】図１−２の続き。
【図２】ここに開示および／または特許請求される本発明の概念に基づいて構成された貯蔵緩衝液中の精製ＭＩＳの、非限定的な実施形態、抽出、精製、貯蔵および安定化のためのプロセスのボックスチャート図である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の概念の少なくとも１つの実施形態を、例示的な図表、実験方法、結果および検査手順により詳細に説明する前に、本発明の概念は、その適用において、以下の記載に明示されるかまたは図表、実験方法および／もしくは結果に示された要素の構成および配置の詳細に限定されるものではないことを理解されたい。本発明の概念は、他の実施形態が可能であり、またはさまざまな手段で実践するかもしくは実行することが可能である。したがって、本明細書で使用される言語は、最も広い可能な範囲および意味を付与されることを意図し；実施形態は、例示的であり網羅するものではないことを意味する。また、本明細書で利用される表現および用語は、説明を目的とし、限定するものと考えられるべきではないことも理解されたい。
【０００９】
本明細書で別段に定義されない限り、ここに開示され特許請求される本発明の概念と関連して使用される科学用語および技術用語は、当業者により一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈より別段の必要がない限り、単数の用語は複数を含み、かつ複数の用語は単数を含むものとする。前述の技術および手順は、一般に、当技術分野で周知の従来的方法に基づいて、本明細書全体に引用され論じられるさまざまな一般参照およびより特別な参照に記載されるように実行される。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学ならびに医薬品および製薬化学と関連して利用される命名法、ならびに検査手順および技術は、当技術分野で周知であり一般に使用されるものである。
【００１０】
本明細書で言及される全ての特許、特許出願公開および非特許刊行物は、ここに開示され特許請求される本発明の概念が関連する当業者の技能レベルを示す。本出願の任意の箇所で参照される全ての特許、特許出願公開および非特許刊行物は、それぞれ個々の特許または刊行物が参照により組み込まれると詳細に且つ個別的に明記されている場合と同程度に、その全容を参照によって本明細書に明示的に組み入れる。
【００１１】
本明細書に開示され特許請求される全ての装置、キット、および／または方法は、本開示を考慮して、過度の実験をすることなく作製し、かつ実行することができる。ここに開示され特許請求される本発明の概念の組成物および方法が、好ましい実施形態の点から記載されるが、ここに開示され特許請求される本発明の概念の概念、趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書に記載される組成物および／または方法ならびに方法の工程もしくは連続する工程に、変形が適用されることが当業者には明白であろう。当業者に明白な全てのそのような同様の置換および修正は、添付の特許請求の範囲により定義されるように、本発明の概念の趣旨、範囲および概念の範囲内であると考えられる。
【００１２】
本開示に基づいて利用される場合、以下の用語は、別段の指示がない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする：
【００１３】
「ａ」または「ａｎ」という語の使用は、特許請求の範囲および／または本明細書中で「含む」という用語と共に使用される時、「１つ」を意味し得るが、「１つまたはそれ以上の」、「少なくとも１つの」、および「１つまたは２つ以上の」の意味とも一致している。単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈により明確に別段の指示がされない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」に対する言及は、１つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上またはより多くの数の化合物を指し得る。用語「複数の」は、「２つ以上」を指す。特許請求の範囲における用語「または」の使用は、代替物のみを指すことが明示的に示されていない限り、または代替物が相互排他的でない限り、たとえ本開示が、代替物のみ、ならびに「および／または」を指すという定義を支持していても、「および／または」を意味するために使用される。本出願全体を通して、用語「約」は、ある値が、その値を決定するために利用される装置、方法に関する誤差の固有の変動、または研究対象の間に存在する変動を含むことを示すために使用される。限定するためではなく例として、用語「約」が使用される時、示された値は、特定された値から±２０％または±１０％、または±５％、または±１％、または±０．１％変動し得て、そのような変動は本開示の方法を実行するのに適切であり、当業者に理解されているとおりである。用語「少なくとも１つの」の使用は、１つと同様に２つ以上の任意の量を含むことが理解され、２、３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、１００、などを含むが、これらに限定されない。用語「少なくとも１つの」は、それが付随している用語に応じて１００または１０００以上まで範囲を広げ；加えて、１００／１０００という量は、より高い限度もまた満足される結果をもたらし得るため、限定するものと考えられるべきではない。加えて、用語「少なくとも１つのＸ、ＹおよびＺ」の使用は、Ｘのみ、ＹのみおよびＺのみ、同様にＸ、ＹおよびＺの任意の組み合わせを含むことが理解されるであろう。序数の用語（すなわち、「第１の」、「第２の」、「第３の」、「第４の」など）の使用は、２つ以上の項目を単に区別するためのものに過ぎず、任意の連続もしくは順序、または１つの項目が別の項目より重要であること、または例えば添加の任意の順序を含むことを意味するものではない。
【００１４】
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」のような、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）の任意の形態）、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」（ならびに「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」のような、有する（ｈａｖｉｎｇ）の任意の形態）、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」のような、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）の任意の形態）または「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」および「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」のような、含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）の任意の形態）は、包括的または非制限的であり、付加的な、未記載の要素または方法工程を除外しない。
【００１５】
用語「またはそれらの組み合わせ」は、本明細書で使用される場合、該用語の前に列挙された項目の全ての配列および組み合わせを指す。例えば、「Ａ、Ｂ、Ｃ、またはそれらの組み合わせ」は、少なくとも１つの：Ａ、Ｂ、Ｃ、ＡＢ、ＡＣ、ＢＣ、またはＡＢＣ、および特定の文脈において順序が重要な場合は、ＢＡ、ＣＡ、ＣＢ、ＣＢＡ、ＢＣＡ、ＡＣＢ、ＢＡＣ、またはＣＡＢも含むことを意図する。この例に続いて、ＢＢ、ＡＡＡ、ＡＡＢ、ＢＢＣ、ＡＡＡＢＣＣＣＣ、ＣＢＢＡＡＡ、ＣＡＢＡＢＢなどのような、１つまたはそれ以上の項目または用語の繰り返しを含む組み合わせを明示的に含む。当業者は、文脈から別段に明らかでない限り、典型的には、任意の組み合わせにおいて項目または用語の数に制限がないことを理解するであろう。
【００１６】
本明細書で使用される場合、用語「実質的に」とは、それに続いて記載される事象もしくは状況が完全に起きるか、またはそれに続いて記載される事象もしくは状況がかなりの範囲もしくは程度で起きることを意味する。例えば、用語「実質的に」とは、それに続いて記載される事象もしくは状況が、少なくとも９０％の割合で、または少なくとも９５％の割合で、または少なくとも９８％の割合で起きることを意味する。
【００１７】
本明細書で使用される場合、語句「関連する」は、２つの部分が互いに直接的に関連することと、同様に２つの部分が互いに間接的に関連することの両方を含む。関連の非限定的な例には、直接結合によるかまたはスペーサー基を通すことによるいずれかの、１つの部分と別の部分との共有結合、直接的にまたは該部分に結合している特異的結合対要素によるいずれかの、１つの部分と別の部分との非共有結合、１つの部分を別の部分に溶解することによるか、または合成によるような、１つの部分の別の部分への組込み、かつ１つの部分を別の部分上にコーティングすることが含まれる。
【００１８】
用語「患者」には、ヒトおよび獣医学的対象が含まれる。特定の実施形態では、患者は哺乳動物である。特定の他の実施形態では、患者はヒトである。処置目的のための「哺乳動物」は、ヒト、飼育動物および家畜、非ヒト霊長類、およびイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどのような動物園動物、競技用動物、またはペット動物を含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。
【００１９】
ここで特定の実施形態に戻ると、ここに開示され特許請求される本発明の概念は、ＭＩＳ貯蔵緩衝液を含む組成物および／またはＭＩＳ貯蔵緩衝液からなる組成物、同様にそれに関連するＭＩＳ安定化の方法に関する。より詳細には、ここに開示され特許請求される本発明の概念は、精製ＭＩＳの貯蔵寿命を増加させるＭＩＳ貯蔵緩衝液組成物の非限定的な実施形態、同様に貯蔵緩衝液内に含まれる精製ＭＩＳを安定化し、その生物活性の損失を軽減する方法に関する。
【００２０】
生物学、化学、または生化学的な分析およびアッセイの分野で使用されるあらゆる試薬は、事実上、ここに特許請求および開示される本発明の概念の装置、キットおよび方法において使用することができると考えられる。これらの試薬は、目的の分析種と結合した時に物理的および／または化学的な変化を受け得て、それにより試薬−分析種複合体により生み出されたシグナルの強度、性質、頻度、または種類が、液体試料内に存在する分析種の濃度に正比例するか、または反比例すると考えられる。これらの試薬は、目的の分析種と反応させた時に色変化を呈する、指標の染料、金属、酵素、ポリマー、抗体ならびに電気化学的に反応性の原料および／または化学物質を含有し得る。
【００２１】
分析種を検出および測定するあらゆる方法を、ここに特許請求される本発明の概念の装置、キットおよび方法において使用することができる。分析種を検出する多様なアッセイが当技術分野で公知であり、化学的アッセイ、酵素阻害アッセイ、抗体染色法、ラテックス凝集、ラテックス凝集阻害法および放射免疫アッセイのような免疫アッセイを含むが、これらに限定されない。用語「抗体」は、本明細書で最も広範な意味で使用され、例えば、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）および所望の生物活性（例えば、抗原／分析種−結合性）を示す抗体フラグメントを指す。抗体は、任意の種類またはクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＡ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）であり得る。
【００２２】
免疫アッセイ、核酸捕捉アッセイ、脂質ベースアッセイおよび血清学ベースアッセイを含むが、これらに限定されないアッセイは、液体試験試料内に含まれるタンパク質、ペプチドおよび核酸の多重集団用に開発され、そのようなタンパク質およびペプチドには、限定するためではなく例として、アルブミン、ミクロアルブミン、コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質、低密度リポタンパク質、ヘモグロビン、ミオグロビン、α−１−ミクログロビン、免疫グロビン、酵素、タンパク質、糖タンパク質、プロテアーゼ阻害薬、薬物、サイトカイン、クレアチニンおよびグルコースが含まれる。
【００２３】
生物学的および／または化学的な精製のあらゆる方法は、ここに開示および／または特許請求される本発明の概念において使用することができる。例えば、単に一例として、精製される化合物が少なくとも１つのタンパク質である時、その少なくとも１つのタンパク質は、抽出後に、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、フリーフロー電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、免疫アフィニティークロマトグラフィー、金属結合技術、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）およびこれらの組み合わせを介して精製される。
【００２４】
非限定的な一実施形態では、ここに開示および／または特許請求される本発明の概念は、ＭＩＳの生物活性を保持する、新しくかつ改善された貯蔵緩衝液組成物に関する。
【００２５】
非限定的な一実施形態では、改善された貯蔵緩衝液は、プロテアーゼ非含有のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、少なくとも１つの糖アルコール、ゼラチンおよび少なくとも１つの界面活性剤を含み、かつ／またはこれらからなる。
【００２６】
別の非限定的な実施形態では、改善された貯蔵緩衝液は、多量および／または濃縮の脱イオン水、少なくとも１つの緩衝剤、少なくとも１つの塩、少なくとも１つの糖アルコール、ゼラチン、少なくとも１つの界面活性剤、プロテアーゼ非含有のＢＳＡおよび少なくとも１つの殺生物剤を含み、かつ／またはこれらからなる。
【００２７】
少なくとも１つの緩衝剤は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液、［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）緩衝液、２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）酢酸（ビシン）緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）緩衝液、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（トリシン）緩衝液、２−［［１，３−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−２−イル］アミノ］エタンスルホン酸（ＴＥＳ）緩衝液、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）緩衝液、ピペラジン−Ｎ−Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）緩衝液、ジメチルヒ酸（カコジル酸塩）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）緩衝液、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（ＣＨＥＳ）緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸一カリウム緩衝液、ホウ酸塩緩衝液およびこれらの組み合わせを含むか、これらからなるか、またはこれらからなる群から選択される。ここに開示される本発明の概念の非限定的な一実施形態では、少なくとも１つの緩衝剤は、約５０ｍＭの濃度を有するＨＥＰＥＳ緩衝液である。
【００２８】
少なくとも１つの塩は、当技術分野で一般的に公知の任意の塩であってよく、塩基と酸、金属と酸、金属と非金属、塩基と酸無水物、酸と塩基無水物の化学反応、２つ以上の塩の可溶化および再結合ならびにこれらの組み合わせから形成される任意の塩を限定されることなく含む。ここに開示される本発明の概念の非限定的な一実施形態では、少なくとも１つの塩は、約１５０ｍＭの濃度を有する塩化ナトリウムである。
【００２９】
ここに開示および／または特許請求される本発明の概念の非限定的な一実施形態では、ゼラチンは精製された、例えば、単に一例として、Ｎｏｒｌａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ．により市販されている、約６グラム／リットルの濃度を有するＨｉＰｕｒｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｇｅｌａｔｉｎのような液体ゼラチンである。
【００３０】
少なくとも１つの糖アルコールは、エチレングリコール、グリセリン、エリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール、マルトテトライトール、ポリグリシトール、水添デンプンヒドロシレートおよびこれらの組み合わせを含むか、これらからなるか、またはこれらからなる群から選択される。ここに開示および／または特許請求される本発明の概念の非限定的な一実施形態では、少なくとも１つの糖アルコールは、約５０グラム／リットルの濃度を有するマンニトールである。
【００３１】
少なくとも１つの界面活性剤は、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤およびこれらの組み合わせを含むか、これらからなるか、またはこれらからなる群から選択される。ここに開示および／または特許請求される本発明の概念の非限定的な一実施形態では、少なくとも１つの界面活性剤は、約１．１グラム／リットルの濃度を有するポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＳｉｇｍａよりＴｗｅｅｎ（登録商標）２０として市販されている）である。
【００３２】
少なくとも１つの殺生物剤は、ヒトおよび／もしくは動物の健康に有害な生物体ならびに／または天然物もしくは製造物に損傷を与える生物体の防除に使用される、防腐剤、抗菌剤（殺菌剤（ｇｅｒｍｉｃｉｄｅ）、抗生物質、抗菌薬（殺細菌剤（ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅ）を含む）、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗原虫薬、および／または抗寄生虫薬を含むが、これらに限定されない）、防汚剤、消毒剤、および／または農薬（殺真菌剤（ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ）、除草剤、殺虫剤、殺藻剤、軟体動物駆除剤、殺ダニ剤、および／または殺鼠剤を含むが、これらに限定されない）を限定されることなく含む任意の物質または該物質の組み合わせを含むか、これらからなるか、またはこれらからなる群から選択される。殺生物剤は、本明細書で使用される場合、水性（すなわち、液体）または固体（すなわち、粉末）を限定されることなく含む任意の形態であり得る。ここに開示および／または特許請求される本発明の概念の非限定的な一実施形態では、少なくとも１つの殺生物剤は、約２ミリリットル／リットルの濃度を有する、ブロモ−ニトロ−ジオキサン（ｂｒｏｍ−ｎｉｔｒｏ−ｄｉｏｘａｎｅ）およびメチルイソチアゾロン（ＭＩＴ）（Ｒｏｃｈｅ  ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓによりＭｉｃｒ−Ｏ−ｐｒｏｔｅｃｔとして市販されている）のエタノール性溶液である。
【００３３】
ここに開示および／または特許請求される本発明の概念に基づいて構成された、改善されたＭＩＳ貯蔵緩衝液組成物の非限定的な実施形態を、以下の表１に示す。
【００３４】
【表１】
2022501398.tif 000003
構成されると、ＭＩＳ貯蔵緩衝液のｐＨは、中性（約７．５）に調節される。加えて、貯蔵緩衝液を濾過して（例えば、単に一例として、０．２マイクロメートルのフィルターを通して）、貯蔵緩衝液からあらゆる微粒子物質を濾別する。次に、緩衝液を使用のために約２℃〜約８℃の範囲の温度で保存する。
【００３５】
ここで図１Ａ〜１Ｅを参照すると、約０．１５ｎｇ／ｍＬ〜約３３．５０ｎｇ／ｍＬの範囲の初濃度のＭＩＳ（０日目）に対する、６０日の期間にわたるＭＩＳの生物活性および貯蔵寿命を示すグラフプロットが示され、ＭＩＳは、ここに開示および／または特許請求される本発明の概念に基づいて構成された改善された貯蔵緩衝液内に、約２℃〜約８℃の範囲の温度で含まれる。これらの図から分かるように、ＭＩＳの初濃度にかかわらず、６０日目の各試料のＭＩＳ濃度は、貯蔵緩衝液中で保存されると、約１０％のみ（またはさらにそれ未満）減少する。貯蔵緩衝液の成分である、少なくとも１つの糖アルコール（一例として、マンニトールなど）が、ＭＩＳの活性化をもたらすタンパク質分解切断を防止／軽減することによりＭＩＳを安定化して、それによりＭＩＳの貯蔵寿命、また診断薬としての使用のためのその生物活性も、両方とも増加する。
【００３６】
ここで図２を参照すると、ここに開示および／または特許請求される本発明の概念に基づいて構成された貯蔵緩衝液中の精製ＭＩＳの、抽出、精製、貯蔵および安定化のためのプロセスのボックスチャート図が示される。工程１０に示されるように、ＭＩＳを、単に一例として、ウシ亜科仔ウシ精巣を含む、哺乳動物の精巣から抽出する（当技術分野で一般的に公知の方法を介する）。抽出に続いて、抽出ＭＩＳを、例えば、セファロースと結合したＭＩＳモノクローナル抗体の利用を介する、ＭＩＳのアフィニティー精製を介することを限定されることなく含む、当技術分野で一般的に公知の任意の方法により精製する（工程２０に示す）。抽出ＭＩＳが特定の精製剤と結合し関連すると、次にＭＩＳを、例えば、一例として（工程３０に示す）ｐＨ中性のジェントル溶離緩衝液を用いて、少なくとも１つの溶離緩衝液により溶離する。溶離に続いて、精製ＭＩＳを、当技術分野で一般的に公知の方法により濃縮し、溶離緩衝液を、ここに開示および／または特許請求される本発明の概念に基づいて構成された貯蔵緩衝液と交換し（工程４０に示す）、緩衝液交換は、セファデックスＧ−２５方法を限定されることなく含む、当技術分野で一般的に公知の方法を介して達成される。工程５０に示されるように、精製されかつ濃縮されたＭＩＳを、次に、貯蔵緩衝液内で約２℃〜約８℃の範囲の温度で保存する。
【００３７】
本発明の概念の非限定的な実施例
ミュラー管抑制因子貯蔵緩衝液組成物であって：脱イオン水；少なくとも１つの緩衝剤；少なくとも１つの塩；少なくとも１つの糖アルコール；ゼラチン；少なくとも１つの界面活性剤；プロテアーゼ非含有のウシ血清アルブミン；および少なくとも１つの殺生物剤を含むミュラー管抑制因子貯蔵緩衝液組成物。
【００３８】
少なくとも１つの緩衝剤は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液、［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパンスルホン酸緩衝液、２−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）酢酸（ビシン）緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液、３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸緩衝液、２−［［１，３−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）プロパン−２−イル］アミノ］エタンスルホン酸緩衝液、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸緩衝液、ピペラジン−Ｎ−Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）緩衝液、ジメチルヒ酸、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸緩衝液、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸一カリウム緩衝液、ホウ酸塩緩衝液およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、貯蔵緩衝液組成物。
【００３９】
少なくとも１つの緩衝剤は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液である、貯蔵緩衝液組成物。
【００４０】
４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸緩衝液は、約５０ｍＭの濃度を含む、貯蔵緩衝液組成物。
【００４１】
少なくとも１つの塩は、塩化ナトリウムである、貯蔵緩衝液組成物。
【００４２】
塩化ナトリウムは、約１５０ｍＭの濃度を含む、貯蔵緩衝液組成物。
【００４３】
ゼラチンは、液体ゼラチンである、貯蔵緩衝液組成物。
【００４４】
液体ゼラチンは、約６グラム／リットルの濃度を含む、貯蔵緩衝液組成物。
【００４５】
少なくとも１つの糖アルコールは、エチレングリコール、グリセリン、エリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール、フシトール、イジトール、イノシトール、ボレミトール、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール、マルトテトライトール、ポリグリシトール、加水分解水添デンプンおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される、貯蔵緩衝液組成物。
【００４６】
少なくとも１つの糖アルコールは、マンニトールである、貯蔵緩衝液組成物。
【００４７】
マンニトールは、約５０グラム／リットルの濃度を含む、貯蔵緩衝液組成物。
【００４８】
少なくとも１つの界面活性剤は、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤、双性イオン性界面活性剤およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、貯蔵緩衝液組成物。
【００４９】
少なくとも１つの界面活性剤は、ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートである、貯蔵緩衝液組成物。
【００５０】
ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレートは、約１．１グラム／リットルの濃度を含む、貯蔵緩衝液組成物。
【００５１】
少なくとも１つの殺生物剤は、防腐剤、抗菌剤、殺菌剤、抗生物質、抗菌薬、殺細菌剤、抗ウイルス薬、抗真菌薬、抗原虫薬、抗寄生虫薬、防汚剤、消毒剤、農薬、殺真菌剤、除草剤、殺虫剤、殺藻剤、軟体動物駆除剤、殺ダニ剤、殺鼠剤およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、貯蔵緩衝液組成物。
【００５２】
少なくとも１つの殺生物剤は、ブロモ−ニトロ−ジオキサンおよびメチルイソチアゾロンのエタノール性溶液である、貯蔵緩衝液組成物。
【００５３】
ブロモ−ニトロ−ジオキサンおよびメチルイソチアゾロンのエタノール性溶液は、約２ミリリットル／リットルの濃度を含む、貯蔵緩衝液組成物。
【００５４】
ミュラー管抑制因子貯蔵緩衝液組成物内の精製ミュラー管抑制因子を安定化させる方法であって、方法は：ミュラー管抑制因子を哺乳動物源から抽出し、それにより抽出ミュラー管抑制因子を形成する工程と；抽出ミュラー管抑制因子を精製し、それにより精製ミュラー管抑制因子を形成する工程と；精製ミュラー管抑制因子を貯蔵緩衝液中で保存する工程とを含み、貯蔵緩衝液は：脱イオン水；少なくとも１つの緩衝剤；少なくとも１つの塩；少なくとも１つの糖アルコール；ゼラチン；少なくとも１つの界面活性剤；プロテアーゼ非含有のウシ血清アルブミン；および少なくとも１つの殺生物剤を含み、貯蔵緩衝液は、所定の温度範囲で維持され、そこに含まれる精製ミュラー管抑制因子を安定化させる、方法。
【００５５】
所定の温度範囲は、約２℃〜約８℃である、方法。
【００５６】
少なくとも１つの糖アルコールは、マンニトールである、方法。
【００５７】
したがって、ここに開示され特許請求される本発明の概念に基づいて、ミュラー管抑制因子を安定化させる組成物および方法を提供する。本明細書に記載されるように、ここに開示され特許請求される本発明の概念は、改善されたミュラー管抑制因子貯蔵緩衝液組成物の実施形態、同様に前記改善された緩衝液組成物内のミュラー管抑制因子を安定化させる方法に関する。したがって、ここに開示および／または特許請求される本発明の概念は、本明細書に上記明示される目的および利点を十分に満足する。ここに開示され特許請求される本発明の概念は、本明細書に上記明示される特定の図表、実験方法、結果および言語と関連して記載されているが、多くの代替物、修正形態および変形形態が当業者には明白であることは明らかである。したがって、ここに開示され特許請求される本発明の概念の趣旨および広い範囲内である、全てのそのような代替物、修正形態および変形形態を包含することを意図する。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２】
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【国際調査報告】
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