【手続補正書】
【提出日】平成22年1月25日(2010.1.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病のアミロイドβペプチド（Ａβ）と終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）との間の特異的な受容体−リガンド相互作用、もしくはＲＡＧＥの活性化を阻害する方法であって、少なくともいくらかのＡβ／ＲＡＧＥの相互作用が阻害されるように一つもしくはそれ以上の式Ｒ１（ＣＯ）ＮＲ２Ｒ３の第３級アミドの有効量を投与することを含有し、ここでＲ１が電子欠損のアリール部分で、Ｒ２が疎水性の炭化水素部分で、そしてＲ３が電子豊富なアリール部分で直接にもしくは任意選択のリンカーによって結合されている、方法。
【請求項２】
Ｒ１がアリール部分であり、一つもしくはそれ以上の電子吸引基によって置換されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒ２が、直鎖もしくは分岐状の脂肪族の、脂環式の、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のオレフィンの、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のアセチレンの、アリール含有の、ならびに／またはアミン含有のＣ４からＣ１８の炭化水素部分であり、任意選択で置換される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ３が、フラニル、ピロリル、ベンジル、フェニル、アルキルフェニル、アルコキシフェニル、ナフチル、ベンゾフリル、インジル、もしくはキノリル部分であり、任意選択で置換される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
Ｒ３が、Ｃ１からＣ４のアルキルの、もしくは複素環式芳香族のリンカーによって結合されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記一つもしくはそれ以上の第３級アミドが図１と図９とに図示される化合物を含む群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記一つもしくはそれ以上の第３級アミドが、治療の必要に応じて被治療者にｉｎ  ｖｉｖｏで医薬組成物として投与される、請求項１から６のいずれか一つに記載の方法。
【請求項８】
ＲＡＧＥによって媒介されるＡβの被治療者の脳への輸送の少なくともいくらかが、治療によって阻害される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
被治療者の血液脳関門におけるＡβによるＲＡＧＥの活性化の少なくともいくらかが、治療によって阻害される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
少なくともＡβの被治療者の脳におけるその量や濃度が治療によって減少する、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも被治療者の脳におけるアルツハイマー病に関連した神経病変が治療によって軽減する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも被治療者における脳血流が治療によって増加する、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも被治療者における記憶および／もしくは学習が治療によって改善する、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
アルツハイマー病、または血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥ相互作用、ＲＡＧＥによって媒介されるＡβの脳への輸送および脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥの活性化からなる群の少なくとも一つを含む他の病態を、治療するための薬剤を製造するための一つもしくはそれ以上の第３級アミドの使用。
【請求項１５】
図１と図９とに図示される化合物からなる群から選択される化合物。
【請求項１６】
（ｉ）一つもしくはそれ以上の請求項１５に記載される化合物および（ｉｉ）少なくとも一つのビヒクルもしくは担体を含有する組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
Ａβ／ＲＡＧＥの相互作用を阻害するための化合物、一つもしくはそれ以上のそれら化合物を含有している組成物、ならびに治療方法は、アルツハイマー病と、血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥの相互作用、ＲＡＧＥの媒介するＡβの脳への輸送ならびに／または脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥ活性化を含む他の疾患とに適用可能なように、本明細書に示される。本発明の他の利点は、以下に説明されるか、その説明から当業者にとって明らかであろう。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本発明はＡβとＲＡＧＥの間の特異的な受容体−リガンドの相互作用を阻害するために用いられる。これは、アルツハイマー病、または血液脳関門におけるＡβ−ＲＡＧＥの相互作用、ＲＡＧＥの媒介するＡβの脳への輸送ならびに／または脳血管系もしくは脳実質におけるＲＡＧＥ活性化を含む他の疾患を、治療するための薬剤（たとえば治療用および／もしくは予防用組成物）を製造するために用いることが出来る。脳におけるＡβの量および濃度が減少させられ、アルツハイマー病に関連した神経病変が緩和され、脳血流が増加させられ、記憶および／もしくは学習が改善され、またはそれらが組合わされる。特に、第３級アミンＲ１（ＣＯ）ＮＲ２Ｒ３のような化合物、ならびに一つもしくはそれ以上の化合物を含有する組成物は本発明の実施形態とみなされる。Ｒ１は電子欠損のアリール部分（たとえば、モノ−もしくはジ−ハライドならびにモノ−もしくはヂ−ニトロのような一つもしくはそれ以上の電子吸引基によって置換されているアリール部分）であることができる。Ｒ２は疎水性の炭化水素部分（たとえば、直鎖もしくは分岐状の脂肪族の、シクロヘキシルのような脂環式の、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のオレフィンの、直鎖のもしくは分岐状の非環式または環式のアセチレンの、アリール含有の、ならびに／またはアミン含有のＣ４−Ｃ１８の炭化水素部分であり、任意選択で置換される）であることができる。Ｒ３は電子豊富なアリール部分（たとえば、フラニル、ピロリル、ベンジル、フェニル、アルキルフェニル、アルコキシフェニル、ナフチル、ベンゾフリル、インジル、もしくはキノリル部分であり、任意選択で置換される）であることができ、Ｃ１−Ｃ４アルキルの（たとえば、直鎖もしくは分岐の）または複素環式芳香族化合物のリンカーを有しているかあるいは有していない。たとえば、一つもしくはそれ以上の化合物は、薬剤としてもしくは医薬組成物中に、製造される。
本発明の更なる様態は、以下の詳細な記述および請求項から当業者には明らかであり、これを一般化できるであろう。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
アッセイ（すなわち、ＴＵＮＥＬ、ヘキスト染色、ＬＤＨ遊離、陰性ＷＳＴ−８）において、化合物の毒性は観察されなかったが、一つもしくは全ての化合物がｉｎ  ｖｉｖｏで毒性であるという可能性はある。化合物がｉｎ  ｖｉｖｏ毒性であるか判定するために、血球計算、ヘモグロビンレベル、電解質、グルコース、血圧、心拍数、呼吸、血液ガス、およびｐＨが測定されるであろう。腎機能（尿素、クレアチン）、肝酵素、一般活動性、空間パターニング、運動、運動失調、ふるえ、注意、および記憶と学習における空間変更などもまた、調べられても良い。化合物がＡβ／ＲＡＧＥ結合の特異的な阻害剤でない可能性がある。この問題に当たり、化合物が特異的にＡβ−ＲＡＧＥの結合をさまたげるか、または破壊することを確認するために、固定したＬＲＰ、アポリポプロテインＥ、およびＪ，α２マクログロブリン、そして、Ａβに対する推定される受容体、Ａβに対する結合タンパク質を伴うセルフリーシステムを用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析を行うことが可能である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
長期治療されたマウスにおいて、ビヒクルに比べて、ＦＰＳ２治療されたマウスでは、海馬でのＡβ４０とＡβ４２のレベルはそれぞれ、約８５％と約９０％減少した（図６Ａ）。同様に、脳皮質でのＡβ４０とＡβ４２のレベルはそれぞれ、約７０％と約８０％減少した(図６Ｂ)。海馬および大脳皮質におけるチオフラビンＳ陽性領域(アミロイド負荷)はビヒクルと比較してＦＰＳ２治療マウスにおいて、有意に約８５％減少した(図７)。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
【図１】図１はＦＰＳ１（３−クロロ−Ｎ−[２−[シクロヘキシル[[１−[（４−フルオロフェニル）メチル]−１Ｈ−ピロール−２−イル]メチル]アミノ]−２−オキソエチル]−Ｎ−（３−エトキシプロピル）−２，２−ジメチル−（９Ｃｌ）−プロパンアミド）；  ＦＰＳ２（３，５−ジニトロ−Ｎ−フェニル−Ｎ−[３−[（３，５，５−トリメチル−１−オキソヘキシル）アミノ]プロピル]−（９Ｃｌ）−ベンズアミド）；  およびＦＰＳ３（４−クロロ−Ｎ−[２−（１Ｈ−インド−３−イル）−エチル]−３−ニトロ−Ｎ−（２−ペンチル−３−フェニル−アリル）−ベンズアミド）の化学構造を示す。
【図２】図２はＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３の化合物がＡβ４０／ＲＡＧＥの相互作用を妨げていることを示す。（Ａ）ＲＡＧＥがトランスフェクトされたＣＨＯ細胞（四角）もしくは偽トランスフェクトされたＣＨＯ細胞（三角）への１２５Ｉ−Ａβ４０の４℃での特異的な結合。化合物ＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３は、ＲＡＧＥをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞上でのＡβ−ＲＡＧＥ結合の高親和性の競合阻害剤であり、これはそれらの阻害定数（Ｋｉ）（Ｂ）の低いｎＭ値およびそれぞれのＫｉ／Ｋｄ比（Ｃ）（Ｋｄは図２Ａから得たＡβのＲＡＧＥに対する結合定数である）によって示されるとおりである。１μＭのＡβ４０によるチオバルビツール酸反応物質（ＴＢＡＲＳ）生成（Ｄ）およびＮＦ−κＢ活性化（Ｅ）は５０ｎＭもしくは５００ｎＭのＦＰＳ２の存在によって阻害された。（Ｆ）ＦＰＳ２はｉｎ  ｖｉｔｒｏのセルフリーシステムにおけるＡβ４０／可溶性ＲＡＧＥの相互作用を妨げたが、これはＥＬＩＳＡによって測定された。差の統計的有意性は図２Ｂ−Ｄおよび２Ｆに示される。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３／群である。
【図３】図３は１．５ｎＭの濃度（ＡＰＰｓｗ＋／−マウスの血しょう濃度に相当する）における、１２５Ｉ−Ａβ４０のＢＢＢを通り抜ける輸送を示し、５−６月齢のＡＰＰｓｗ＋／−マウス（塗りつぶされたバー）および齢の釣り合ったコントロール(中空のバー)においてｉｎ  ｖｉｖｏで動脈脳潅流法によってＲＡＧＥ特異的ＩｇＧ（α−ＲＡＧＥ、２０μｇ／ｍｌ）もしくはＦＰＳ２（４．８μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下において測定された。差の統計的有意性が示される。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３〜４／群である。
【図４】図４はＦＰＳ２による治療によってＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて機能転帰が好転した事を示す。（Ａ）ビヒクル（中空のバー）もしくはＦＰＳ２(塗りつぶされたバー)によって治療されたマウスの脳活性化に対する反応での脳血流（ＣＢＦ）の増加パーセント。（Ｂ−Ｃ）ビヒクル(中空のバー)もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされたバー）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスによる探索嗜好パーセントによって表された新規物体配置（Ｂ）および新規物体認識（Ｃ）。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図５】図５はＦＰＳ２投与後のＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおける安静時脳血流の変化を示す。脳血流の変化はＦＰＳ２（塗りつぶされた三角）もしくはビヒクル（塗りつぶされた四角）を投与されたマウスで９０分以上記録された基準値のパーセントによって表される。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ）は７〜９月齢のマウスで静脈内ボーラス投与（矢印）された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝３／群である。
【図６】図６はＡＰＰｓｗ＋／−マウスにおいて、ＦＰＳ２が脳からＡβを除去する事を示す。Ａ−Ｂ、ビヒクル(塗りつぶされた四角)もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされた三角）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスの海馬（Ａ）大脳皮質（Ｂ）でのＡβ４０およびＡβ４２のレベル。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図７】図７はＦＰＳ２がＡＰＰｓｗ＋／−マウスの脳におけるアミロイド負荷を低減させきれいにする事を示す。ビヒクル（中空のバー）もしくはＦＰＳ２（塗りつぶされたバー）によって治療されたＡＰＰｓｗ＋／−マウスのアミロイド負荷された海馬および大脳皮質。ＦＰＳ２（１ｍｇ／ｋｇ／日）は８月齢のマウスから開始して２ヶ月間にわたり腹腔内に投与された。データは平均値±平均値の標準誤差で、ｎ＝５〜６／群である。
【図８】図８は、ＦＰＳ１、ＦＰＳ２、およびＦＰＳ３に基いた構造−活性の関連性を検定するために策定されたコンビナトリアルなライブラリの構築を図示する。
【図９】図９はＮ１Ａ２Ｂ１（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−シクロヘキシル−ベンズアミド）；  Ｎ１Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−シクロヘキシル−ベンズアミド）；  Ｎ２Ａ１Ｂ１（４−クロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−Ｎ−フェネチル−ベンズアミド）；  Ｎ２Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−ベンズアミド）；  Ｎ２Ａ２Ｂ３（Ｎ−ベンジル−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３，５−ジニトロ−ベンズアミド）；  Ｎ２Ａ２Ｂ４（Ｎ−ベンジル−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３−ニトロ−ベンズアミド）；  Ｎ２Ａ２Ｂ５（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−（３−メチル−ブチル）−３−ニトロ−ベンズアミド）；  Ｎ３Ａ２Ｂ２（Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−ベンズアミド）；  Ｎ３Ａ２Ｂ３  （Ｎ−ベンジル−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−３，５−ジニトロ−ベンズアミド）；Ｎ３Ａ２Ｂ５  （Ｎ−ベンジル−４−クロロ−Ｎ−（１−エチル−プロピル）−３−ニトロ−ベンズアミド）；Ｎ４Ａ２Ｂ２  （Ｎ−ベンジル−２，４−ジクロロ−Ｎ−（３−フェニル−プロピル）−ベンズアミド）；およびＮ４Ａ２Ｂ５（Ｎ−ベンジル−４−クロロ−３−ニトロ−Ｎ−（３−フェニル−プロピル）−ベンズアミド）の化学構造を示す。それぞれの化合物の質量は構造に続けて示される。