(57)【要約】  本発明は、抗体および断片などの骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニスト、ならびに方法、使用および組み合わせに関する。
2022502040.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、前記結合部位がＶＨドメインを含み、前記ＶＨドメインが、配列番号１１４を含むＶＨドメインのＣＤＲＨ３配列を含む、抗体または断片。
【請求項２】
前記ＣＤＲＨ３が配列番号１１０または１１３を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記ＶＨドメインが、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ＤＨ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされ、
（ａ）前記ＶＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＶ３−１１およびＩＧＨＶ１−３から選択され、
（ｂ）前記ＤＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＤ３−１０、ＩＧＨＤ６−１９、ＩＧＨＤ７−２７、ＩＧＨＤ４−２３、ＩＧＨＤ５−１８、ＩＧＨＤ３−２２およびＩＧＨＤ３−１６から選択されるヒト遺伝子セグメントであり、かつ／または
（ｃ）前記ＪＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＪ３、ＩＧＨＪ４およびＩＧＨＪ５から選択されるヒト遺伝子セグメントである、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記結合部位が、（ｉ）配列番号１１９を含むＶＬドメインと対形成する配列番号１１０を含むＶＨドメイン、または（ｉｉ）配列番号１２２を含むＶＬドメインと対形成する配列番号１１３を含むＶＨドメインを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項５】
前記結合部位が、配列番号１２３を含むＶＬドメインと対形成する配列番号１１４を含むＶＨドメインを含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項６】
前記ＶＨドメインが、
（ａ）配列番号１１０を含むＣＤＲＨ３、ならびに配列番号１０８を含むＣＤＲＨ１および／もしくは配列番号１０９を含むＣＤＲＨ２、または
（ｂ）配列番号１１３を含むＣＤＲＨ３、ならびに配列番号１１１を含むＣＤＲＨ１および／もしくは配列番号１１２を含むＣＤＲＨ２を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項７】
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む（任意選択で請求項１〜６のいずれか一項に記載の）抗体または断片であって、前記結合部位が、配列番号１１４を含むＶＨドメイン、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む、抗体または断片。
【請求項８】
前記ＶＨドメインの第１および第２のコピーを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項９】
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む（任意選択で請求項１〜８のいずれか一項に記載の）抗体または断片であって、前記結合部位がＶＬドメインを含み、前記ＶＬドメインが配列番号１２３を含むＶＬドメインのＣＤＲＬ３配列を含む、抗体または断片。
【請求項１０】
前記ＣＤＲＬ３が配列番号１１９または１２２を含む、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
前記ＶＬドメインが、ヒトＶＬ遺伝子セグメントおよびＪＬ遺伝子セグメントの組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされ、
（ａ）前記ＶＬ遺伝子セグメントがＩＧＫＶ３−２０、ＩＧＫＶ１−５およびＩＧＫＶ３−１５から選択され、かつ／または
（ｂ）前記ＪＬ遺伝子セグメントがＩＧＫＪ１およびＩＧＫＪ３から選択される、請求項９または１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記ＶＬドメインが、
（ａ）配列番号１１９を含むＣＤＲＬ３、ならびに配列番号１１７を含むＣＤＲＬ１および／もしくは配列番号１１８を含むＣＤＲＬ２、または
（ｂ）配列番号１２２を含むＣＤＲＬ３、ならびに配列番号１２０を含むＣＤＲＬ１および／もしくは配列番号１２１を含むＣＤＲＬ２を含む、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項１３】
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む（任意選択で請求項１〜１２のいずれか一項に記載の）抗体または断片であって、前記結合部位が、配列番号１２３を含むＶＬドメイン、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む、抗体または断片。
【請求項１４】
前記ＶＬドメインの第１および第２のコピーを含む、請求項９〜１３のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項１５】
骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、（ｉ）配列番号１１６を含む重鎖アミノ酸配列、もしくはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸、および／または（ｉｉ）配列番号１２５を含む軽鎖配列、もしくはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む、（任意選択で請求項１〜１４のいずれか一項に記載の）抗体または断片。
【請求項１６】
（ｉ）請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体が結合するエピトープと同一であるヒトＢＭＰ６エピトープに特異的に結合し、かつ／または（ｉｉ）ヒトＢＭＰ６への結合について請求項１〜１５のいずれか一項に記載の抗体と競合する、（任意選択で請求項１〜１５のいずれか一項に記載の）抗体または断片。
【請求項１７】
配列番号５６２を含むヒトＢＭＰ６、および／または配列番号５６４を含むカニクイザルＢＭＰ６、および／または配列番号５６３を含むラットＢＭＰ６に特異的に結合する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項１８】
前記抗体または断片が、ヒト定常領域、任意選択でＩｇＧ４定常領域またはＩｇＧ１定常領域を含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項１９】
前記定常領域がＩｇＧ４−ＰＥ定常領域であり、任意選択で、前記定常領域が配列番号４５４のアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の抗体または断片。
【請求項２０】
別の標的抗原（任意選択でヒトヘモジュベリン、トランスフェリン受容体またはＢＭＰ受容体）に特異的に結合するか、またはＢＭＰ６および別のＢＭＰ（任意選択でＢＭＰ２、４、７または９）に結合する抗原結合部位をさらに含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体または断片。
【請求項２１】
対象におけるＢＭＰ６媒介性疾患または状態（任意選択で貧血）を治療または予防するための、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗ＢＭＰ６抗体または断片。
【請求項２２】
前記疾患または状態が、貧血、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）（任意選択で原発性ＰＡＨまたは二次性ＰＡＨ）、脳海綿状血管腫（ＣＣＭ）（任意選択で家族性ＣＣＭまたは孤発性ＣＣＭ）、レストレスレッグス症候群（ＲＬＳ）、癌、癌転移、全身性硬化症、シェーグレン症候群、内皮間葉転換（ＥｎｄｏＭＴ）、心血管疾患、アテローム硬化症、全身性硬化症関連肺線維症および心臓線維症から選択される、請求項２１に記載の抗ＢＭＰ６抗体または断片。
【請求項２３】
前記抗体または断片が、エリスロポエチン促進剤（ＥＳＡ）と同時にまたは順次前記対象に投与される、請求項２１または２２に記載の抗体または断片。
【請求項２４】
ある量の抗ＢＭＰ６抗体または断片と、ある量のＥＳＡとの組み合わせ（任意選択で複数回用量の前記抗体および／またはＥＳＡを含む）であって、前記抗体または断片が請求項１〜２３のいずれか一項に記載されるものである、組み合わせ。
【請求項２５】
（ａ）対象の血液ヘモグロビンレベルの１０ｇ／ｄＬ未満への減少を予防する方法であって、前記抗体または断片および赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を前記対象に投与することを含む、方法、
（ｂ）貧血に罹患している対象において血液ヘモグロビンを少なくとも１０ｇ／ｄＬのレベルまで上昇させる方法であって、前記抗体または断片および赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を前記対象に投与することを含み、前記貧血が治療される、方法、
（ｃ）炎症性疾患または状態に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法であって、前記抗体または断片および赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を前記対象に投与することを含み、前記貧血が治療または予防される、方法、
（ｄ）貧血に罹患している対象に対して鉄の投与または輸血の必要性を排除または低減する方法であって、前記抗体または断片および赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を前記対象に投与することを含み、前記必要性が排除または低減される、方法、
（ｅ）微生物感染症に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を前記対象に投与することを含む、方法、
（ｆ）貧血に罹患している対象に対する貧血を治療するための赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）の投与を低減する方法であって、前記抗体または断片および前記ＥＳＡを投与することを含み、貧血が前記対象において治療される、方法、または
（ｇ）貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性がある対象において貧血の危険性を治療または低減する方法であって、前記抗体または断片および低用量の赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を前記対象に投与することを含み、前記対象において貧血が治療されるかまたは貧血の危険性が低減される、方法における使用のための、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体、断片または組み合わせ。
【請求項２６】
前記ＥＳＡは、
ａ．エポエチンアルファであり、１０００、１５００、２５００、５０００、１１０００、１８０００、３４０００または９００００単位未満の週用量で投与され、任意選択で、前記対象は、それぞれ＜１５００、１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けたことがあるか、
ｂ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、前記対象は、それぞれ６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００もしくは２００ｍｃｇの週当たりのダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）治療を以前に受けたことがあるか、または
ｃ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、２０、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、前記対象は、それぞれ１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けたことがある、請求項２４または２５に記載の組み合わせ。
【請求項２７】
前記対象が前記抗ＢＭＰ６抗体または断片およびＥＳＡを受けた後少なくとも１３日または１４日目に、前記対象において血液ヘモグロビンレベルを少なくとも１０ｇ／ｄＬに維持または上昇させるための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体、断片または組み合わせ。
【請求項２８】
ＢＭＰ６媒介性疾患または状態、任意選択で貧血を治療または予防するために、対象に投与するための医薬品の製造における、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体、断片または組み合わせの使用。
【請求項２９】
対象におけるＢＭＰ６媒介性疾患または状態（任意選択で貧血）を治療または予防する方法であって、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の治療有効量の抗体、断片または組み合わせを前記対象に投与することを含み、前記ＢＭＰ６媒介性疾患または状態が、それによって治療または予防される、方法。
【請求項３０】
前記ＢＭＰ６媒介性疾患または状態が貧血である、請求項２８に記載の使用または請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
さらなる療法、例えばさらなる治療剤を前記対象に投与することをさらに含み、任意選択で、前記さらなる治療剤は、
（ａ）静脈内の鉄、
（ｂ）ＥＳＡ（任意選択でＥＰＯ）、
（ｃ）ＡｃｔＲＩＩａ阻害剤、
（ｄ）ＡｃｔＲＩＩｂ阻害剤、
（ｅ）ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体阻害剤（任意選択で抗ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体抗体）、
（ｆ）ＴＮＦアルファまたはＴＮＦアルファ受容体阻害剤（任意選択で抗ＴＮＦアルファまたはＴＮＦアルファ受容体抗体）、
（ｇ）ＨＪＶ阻害剤（任意選択で抗ＨＪＶ抗体）、
（ｈ）ＢＭＰアンタゴニスト（任意選択でさらなる抗ＢＭＰ抗体または断片）（任意選択で前記ＢＭＰはＢＭＰ２、４、５、６、７または９である）、
（ｉ）マトリプターゼ−２（ＭＴＰ２）アゴニスト（任意選択でマトリプターゼ−２（ＭＴＰ２）アゴニスト抗体）、
（ｊ）ＨＩＦ−ＰＨ阻害剤、
（ｋ）トランスフェリン受容体２（ＴＦＲ２）阻害剤、
（ｌ）ＨＦＥ阻害剤、
（ｍ）ＮＲｆ２阻害剤、
（ｎ）トランスフォーミング成長因子ベータスーパーファミリー１型アクチビン受容体様キナーゼ（ＡＬＫ）受容体阻害剤、
（ｏ）アクチビン受容体阻害剤（任意選択でアクチビン受容体Ｆｃ融合）、
（ｐ）ＧＤＦ１１阻害剤、および
（ｑ）ミオスタチン阻害剤、からなる群から選択される、請求項２１〜３０のいずれか一項に記載の抗体、断片、組み合わせ、使用または方法。
【請求項３２】
請求項１〜２７および３１のいずれか一項に記載の抗体、断片または組み合わせ、ならびに薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含み、任意選択で、請求項４４に挙げた薬剤から選択されるさらなる治療剤と組み合わされる、薬学的組成物。
【請求項３３】
ＢＭＰ６媒介性状態または疾患、任意選択で貧血を治療および／または予防するための、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
ヒトにおける前記疾患または状態を治療および／または予防するのに使用するためのラベルまたは説明書と組み合わされた請求項３２または請求項３３に記載の薬学的組成物であって、任意選択で、前記ラベルまたは説明書が、販売承認番号（任意選択で、ＦＤＡまたはＥＭＡ承認番号）を含み、任意選択で、キットが、前記抗体もしくは断片を含むＩＶまたは注射装置を含む、薬学的組成物。
【請求項３５】
（ａ）請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは断片のＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードし、
（ｂ）（ｉ）配列番号１１４を含むＶＨドメインまたはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列、および／または（ｉｉ）配列番号１２３を含むＶＬドメインまたはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列をコードし、
（ｃ）（ｉ）配列番号１１５の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または（ｉｉ）配列番号１２４の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含み、
（ｄ）請求項１〜２０のいずれか一項に記載の抗体もしくは断片の重鎖および／または軽鎖をコードし、あるいは
（ｅ）（ｉｉ）配列番号１１６と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、および／または（ｉｉｉ）配列番号１２５と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖をコードする、核酸。
【請求項３６】
請求項３５に記載の核酸を含むベクターであって、任意選択で、前記ベクターはＣＨＯまたはＨＥＫ２９３ベクターである、ベクター。
【請求項３７】
請求項３５に記載の核酸または請求項３６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３８】
本明細書に記載の抗体、断片、組み合わせ、ベクター、宿主細胞、使用または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体および断片などの骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニスト、ならびに方法、使用および組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００２】
骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）は、哺乳動物における鉄代謝の主要な調節因子である肝臓から分泌される小さなペプチドであるヘプシジンの重要な調節因子である。抗体などの抗ＢＭＰ６アンタゴニストは、貧血を治療または予防する方法における使用のために開発されている（例えば、ＷＯ２０１６／０９８０７９、ＵＳ２０１６／０１７６９５６Ａ１を参照）。エリスロポエチン促進剤（ＥＳＡ）との抗ＢＭＰ６アンタゴニストの組み合わせを開示しているＷＯ２０１７／１９１４３７も参照されたい。
【０００３】
貧血は、世界人口の２５％、または１７億人を超える人、特に妊婦、新生児、および小児に影響を与える主要な疾患である。４０％を超える貧血が鉄の摂取、貯蔵、および再利用の恒常性制御における機能不全を反映する。この調節不全は、感染（例えば、ＨＩＶ、肝炎）、炎症（例えば関節リウマチ）、癌、および腎臓疾患を含む様々な慢性疾患の結果である。鉄の恒常性の調節不全を引き起こす疾患の甚大な影響は、６５歳を超える成人の４０００万人のうち１０％が貧血に罹患し、これらの１／３が慢性障害によって引き起こされる米国に見ることができる。
【０００４】
標準治療は、輸血、およびＥＰＯまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ）などのＥＳＡによる治療に重点を置いている。
【０００５】
ハンプ遺伝子は、肝臓によって産生される２５アミノ酸のペプチドホルモンであるヘプシジンをコードする。ヘプシジンは主に、鉄の輸送に関与する細胞の細胞表面に存在する鉄輸送体フェロポーチンの量を調節することにより、細胞からの鉄の流れを制御することによって機能する。ヘプシジンは、主にマクロファージおよび十二指腸腸細胞に発現するフェロポーチンと相互作用し、フェロポーチンの内在化および分解を引き起こす（Ｇａｎｚ  ａｎｄ  Ｎｅｍｅｔｈ，２０１１；Ｒａｍｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）。ＢＭＰ６は、いくつかの受容体および補因子を含む機序におけるヘプシジン発現を誘発する。これらには、ハンプ発現を誘発するのに不可欠であり、ＲＧＭｃ（ヘモジュベリン、ＨＪＶ）およびＲＧＭｂ（ＤＲＡＧＯＮ）などの反発ガイダンス分子ファミリーＲＧＭのメンバーであるＢＭＰクラスＩおよびＩＩ受容体、マトリプターゼ−２、ネオゲニン、ＨＦＥならびにトランスフェリン受容体１および２が含まれる。ＳＭＡＤ経路は、おそらくＨＪＶも関与する、ＢＭＰ６とクラスＩＢＭＰ受容体との最初の相互作用によって誘発されると考えられる。これにより、自己リン酸化されたＢＭＰＲＩＩとの会合およびＢＭＰＲＩのリン酸化の活性を引き起こし、ＳＭＡＤカスケードが誘発される。リン酸化されたＳＭＡＤ１、５および８、最終的にはＳＭＡＤ４は、核に移行し、ハンプ遺伝子制御領域におけるＢＭＰ応答要素と相互作用し、ヘプシジンの発現を誘発する。マウスにおいて、ＳＭＡＤ４シグナル伝達分子またはＩ型受容体Ａｌｋ２およびＡＬｋ３の肝臓特異的破壊により、ＢＭＰ６ノックアウトと同様にヘプシジン発現が減少し、これらの因子も関連経路の一部であることを確認している（Ｓｔｅｉｎｂｉｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。
・Ｇａｎｚ，Ｔ．，Ｎｅｍｅｔｈ，Ｅ．，２０１１．Ｔｈｅ  Ｈｅｐｃｉｄｉｎ−Ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ａｓ  ａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  Ａｎｅｍｉａｓ  ａｎｄ  Ｉｒｏｎ  Ｏｖｅｒｌｏａｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２０１１，５３８−５４２。
・Ｒａｍｅｙ，Ｇ．，Ｄｅｓｃｈｅｍｉｎ，Ｊ．Ｃ．，Ｄｕｒｅｌ，Ｂ．，Ｃａｎｏｎｎｅ−Ｈｅｒｇａｕｘ，Ｆ．，Ｎｉｃｏｌａｓ，Ｇ．，Ｖａｕｌｏｎｔ，Ｓ．，２０１０．Ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｅｒｒｏｐｏｒｔｉｎ  ｆｏｒ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ  ９５，５０１−５０４。
・Ｓｔｅｉｎｂｉｃｋｅｒ，Ａ．Ｕ．，Ｂａｒｔｎｉｋａｓ，Ｔ．Ｂ．，Ｌｏｈｍｅｙｅｒ，Ｌ．Ｋ．，Ｌｅｙｔｏｎ，Ｐ．，Ｍａｙｅｕｒ，Ｃ．，Ｋａｏ，Ｓ．Ｍ．，Ｐａｐｐａｓ，Ａ．Ｅ．，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｒ．Ｔ．，Ｂｌｏｃｈ，Ｄ．Ｂ．，Ｙｕ，Ｐ．Ｂ．，Ｆｌｅｍｉｎｇ，Ｍ．Ｄ．，Ｂｌｏｃｈ，Ｋ．Ｄ．，２０１１．Ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ＢＭＰ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｉｒｏｎ  ｏｖｅｒｌｏａｄ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｂｌｏｏｄ  １１８，４２２４−４２３０。
・Ｗａｎｇ，Ｒ．−Ｈ．，Ｌｉ，Ｃ．，Ｘｕ，Ｘ．，Ｚｈｅｎｇ，Ｙ．，Ｘｉａｏ，Ｃ．，Ｚｅｒｆａｓ，Ｐ．，Ｃｏｏｐｅｒｍａｎ，Ｓ．，Ｅｃｋｈａｕｓ，Ｍ．，Ｒｏｕａｕｌｔ，Ｔ．，Ｍｉｓｈｒａ，Ｌ．，２００５．Ａ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＳＭＡＤ４  ｉｎ  ｉｒｏｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．２，３９９−４０９。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下を提供する。
骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、結合部位がＶＨドメインを含み、ＶＨドメインが、配列番号１１４を含むＶＨドメインのＣＤＲＨ３配列を含む、抗体または断片。
【０００７】
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、結合部位が配列番号１１４を含むＶＨドメイン、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む、抗体または断片。
【０００８】
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、結合部位がＶＬドメインを含み、ＶＬドメインが配列番号１２３を含むＶＬドメインのＣＤＲＬ３配列を含む、抗体または断片。
【０００９】
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、結合部位が配列番号１２３を含むＶＬドメイン、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む、抗体または断片。
【００１０】
骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、（ｉ）配列番号１１６を含む重鎖アミノ酸配列、もしくはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸、および／または（ｉｉ）配列番号１２５を含む軽鎖配列、もしくはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む、抗体または断片。
【００１１】
（ｉ）本発明の抗体が結合するエピトープと同一であるヒトＢＭＰ６エピトープに特異的に結合し、かつ／または（ｉｉ）ヒトＢＭＰ６への結合について本発明の抗体と競合する、抗体または断片。
【００１２】
本発明はまた、以下の構成を提供する。
第１の構成では、本発明は、
骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片を提供し、結合部位は、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ＤＨ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされるＶＨドメインを含み、ＶＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＶ３−１１およびＩＧＨＶ１−３から選択される。
【００１３】
第２の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合し、本発明に記載の抗ＢＭＰ６抗体のＣＤＲＨ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ３配列を含む抗体または断片を提供する。
【００１４】
第３の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合し、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメイン、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該配列を含む抗体または断片を提供する。
【００１５】
第４の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片を提供し、結合部位は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む。
【００１６】
第５の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片を提供し、結合部位は、ヒトＶＬ遺伝子セグメントおよびＪＬ遺伝子セグメントの組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされるＶＬドメインを含み、ＶＬ遺伝子セグメントが、ＩＧＫＶ３−２０、ＩＧＫＶ１−５およびＩＧＫＶ３−１５から選択される。
【００１７】
第６の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合し、本発明の抗ＢＭＰ６抗体のＣＤＲＬ３配列、３、２または１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＬ３配列を含む抗体または断片を提供する。
【００１８】
第７の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合し、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＣＤＲＬ３（および任意選択でＣＤＲＨ３）配列を含むＶＬドメイン、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む各該配列（複数可）を含む抗体または断片を提供する。
【００１９】
第８の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片を提供し、結合部位は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む。
【００２０】
第９の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合し、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体の重鎖アミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む抗体または断片を提供する。
【００２１】
第１０の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６に特異的に結合し、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体の軽鎖アミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸を含む抗体または断片を提供する。
【００２２】
第１１の構成では、本発明は、
本発明の抗体（例えばＣＬ−５８８３８）が結合するエピトープと同一であるヒトＢＭＰ６エピトープに特異的に結合する抗体または断片を提供する。
【００２３】
第１２の構成では、本発明は、
ヒトＢＭＰ６への結合について本発明の抗体と競合する抗体または断片を提供する。
【００２４】
第１３の構成では、本発明は、
対象におけるＢＭＰ６媒介性疾患または状態（任意選択で貧血）を治療または予防するための、本発明の抗ＢＭＰ６抗体または断片を提供する。
【００２５】
第１４の構成では、本発明は、
ある量の抗ＢＭＰ６抗体または断片と、ある量のＥＳＡとの組み合わせ（任意選択で複数回用量の該抗体および／またはＥＳＡを含む）を提供し、抗体または断片が本発明に記載のものである。
【００２６】
第１５の構成では、本発明は、
ＢＭＰ６媒介性疾患または状態、任意選択で貧血を治療または予防するために、対象に投与するための医薬品の製造における、本発明の抗体、断片または組み合わせの使用を提供する。
【００２７】
第１６の構成では、本発明は、
対象におけるＢＭＰ６媒介性疾患または状態（任意選択で貧血）を治療または予防する方法を提供し、方法は、本発明の治療有効量の抗体、断片または組み合わせを該対象に投与することを含み、ＢＭＰ６媒介性疾患または状態は、それによって治療または予防される。
【００２８】
第１７の構成では、本発明は、
本発明の抗体、断片または組み合わせ、ならびに薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含む薬学的組成物を提供する。
【００２９】
第１８の構成では、本発明は、
本発明の抗体または断片のＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードする核酸を提供する。
【００３０】
第１９の構成では、本発明は、
ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、またはそれと少なくとも７０％同一であるアミノ酸をコードする核酸を提供する。
【００３１】
第２０の構成では、本発明は、以下を提供する。
（ａ）配列番号１１５、５２０もしくは５２１の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１２４、５２２もしくは５２３の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００３２】
（ａ）配列番号１１５の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１２４の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００３３】
（ａ）配列番号５２０の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５２２の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００３４】
（ａ）配列番号５２１の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５２３の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００３５】
第２１の構成では、本発明は、以下を提供する。
（ａ）配列番号１１５、５２０もしくは５２１の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１２４、５２２もしくは５２３の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列をそれぞれ含む、第１および第２の核酸の組み合わせ（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００３６】
（ａ）配列番号１１５の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１２４の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列をそれぞれ含む、第１および第２の核酸の組み合わせ（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００３７】
（ａ）配列番号５２０の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５２２の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列をそれぞれ含む、第１および第２の核酸の組み合わせ（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００３８】
（ａ）配列番号５２１の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５２３の配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列をそれぞれ含む、第１および第２の核酸の組み合わせ（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００３９】
第２２の構成では、本発明は、
本発明の抗体または断片の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸を提供する。
【００４０】
第２３の構成では、本発明は、
配列番号１１６と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖をコードする核酸を提供する。
【００４１】
第２４の構成では、本発明は、
配列番号１２５と少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖をコードする核酸を提供する。
【００４２】
第２５の構成では、本発明は、以下を提供する。
（ａ）ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体の選択された重鎖配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、ならびに／または
（ｂ）ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体の選択された配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００４３】
（ａ）配列番号５１２、５１４、５１６、５１８および５１９から選択される配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列、ならびに／または
（ｂ）配列番号５１３、５１５および５１７から選択される配列と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００４４】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１２であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１３と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００４５】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１６であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１７と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００４６】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１８であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１３と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００４７】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１９であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１３と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００４８】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１８であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１７と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００４９】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１９であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１７と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００５０】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１４であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１５と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００５１】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１６であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１７と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００５２】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１８であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１３、５１５もしくは５１７と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００５３】
（ａ）少なくとも７０％同一の配列番号５１９であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１３、５１５もしくは５１７と少なくとも７０％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【００５４】
第２６の構成では、本発明は、
核酸（複数可）を含むベクターを提供し、任意選択で、ベクターはＣＨＯまたはＨＥＫ２９３ベクターである。
【００５５】
第２７の構成では、本発明は、
核酸（複数可）またはベクターを含む宿主細胞を提供する。
【００５６】
第２８の構成では、本発明は、
本明細書に記載の抗体、断片、組み合わせ、ベクター、宿主細胞、使用または方法を提供する。
【００５７】
第２９の構成では、本発明は、以下を提供する。
ヒトまたは動物の対象において、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）欠損ＢＭＰ−ＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲ）複合体によって引き起こされる疾患または状態を治療または予防する方法における使用のための、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）に特異的に結合する抗体または断片であって、この方法は、該複合体の形成を阻害し、かつ／または対象におけるかかる複合体による細胞内シグナル伝達の誘発を阻害するために、抗体または断片を対象に投与することを含み、それによって、ＨＪＶ非依存性ＢＭＰ−ＢＭＰＲ媒介性疾患または状態が、治療または予防される、抗体または断片。
【００５８】
ヒトまたは動物の対象において、ヘモジュベリン非依存性貧血または骨粗しょう症を治療または予防する方法における使用のための、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）に特異的に結合する抗体または断片であって、この方法は、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）欠損ＢＭＰ−ＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲ）複合体の形成を阻害し、かつ／または対象におけるかかる複合体による細胞内シグナル伝達の誘発を阻害するために、抗体または断片を対象に投与することを含み、それによって、ＨＪＶ非依存性貧血または骨粗しょう症が、治療または予防される、抗体または断片。
【００５９】
ヒトまたは動物の対象において、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）非依存性貧血または骨粗しょう症を治療または予防する方法における使用のための、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）に特異的に結合する抗体または断片であって、この方法は、抗体を対象に投与することを含み、それによって、ＨＪＶ非依存性貧血または骨粗しょう症が、治療または予防される、抗体または断片。
【００６０】
本発明はまた、貧血または骨粗しょう症などの疾患または状態を治療するためのかかる方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】ＨｅｐＧ２ハンプルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株および様々なヒトＢＭＰリガンドを促進剤として使用したアッセイウィンドウの確立。濃度を高めて添加された様々なヒトＢＭＰタンパク質（Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍｓまたはＰｅｐｒｏｔｅｃｈ）で細胞を刺激することによって、ＨｅｐＧ２細胞のヒトヘプシジンプロモーター調節要素の制御下にあるＲｅｄ  Ｆｉｒｅｆｌｙルシフェラーゼ遺伝子の機能を試験した。１％ＦＢＳを含有するＭＥＭ（Ａ）および２５％ＭＥＭを含有するハイブリドーマ培地（Ｂ、詳細は実施例１を参照）の２つの異なる培地設定で、アッセイの性能を試験した。
【図２】濃度を高めて添加された様々なヒトまたはマウスＢＭＰ６リガンドを促進剤（Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍｓまたはＰｅｐｒｏｔｅｃｈ）として使用して、ＨｅｐＧ２ハンプルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞アッセイウィンドウを評価した。１％ＦＢＳを含有するＭＥＭにＢＭＰ６を希釈させた。全アッセイ体積は、２５％ＨＭＭ（さらなる詳細および使用した試薬については、実施例１を参照）を使用して６０μｌであった。
【図３】ハイブリドーマ維持培地（ＨＭＭ）（さらなる詳細および試薬については実施例１を参照）で希釈された、１％ＦＢＳを含有するＭＥＭならびにＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから市販のマウス抗ＢＭＰ６モノクローナル抗体ＭＡＢ５０７（Ａ）およびＭＡＢ２３６５（Ｂ）中に１ｎＭで固定濃度のヒト（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）またはマウスＢＭＰ６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、ＨｅｐＧ２ハンプルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞アッセイウィンドウを評価した。
【図４】５匹のｂｍｐ６−／−Ｋｙｍｉｃｅを使用した、ＩｇＧ抗体が様々な段階希釈で添加される血清中に含有される逆ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）アッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）による免疫付与レジームＫＭ０８９の血清力価判定を、Ｆｃドメインを介して、抗マウスＩｇＧ（ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １０３０−０１）で捕捉し、次いで、ビチオン化ＢＭＰ６とインキュベートし、ＤＥＬＦＩＡ  Ｅｕ−Ｎ１ユーロピウム標識ストレプトアビジン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して検出した。カットオフ（この値を下回るシグナルは陰性と判断された）をすべての複製の陰性対照平均＋３ｘ標準偏差として定義した。凡例中のＫＭＢＭコードは、Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）ｂｍｐ６−／−動物を指す。
【図５】２μｇ／レーンの精製されたヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、還元（Ｒ）または非還元（ＮＲ）条件下でクマシーブルー（Ａ）で染色し、かかるゲルからのウェスタンブロットをメンブレンにブロットし、次いで、精製されたヒト抗ＢＭＰ６抗体で標識としてプローブした。抗ヒトカッパ軽鎖−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）および強化化学発光によるペルオキシダーゼ（ＣＬ−５８８３８および抗体Ａ）、または抗ヒトＦｃ−アルカリホスファターゼ（ＡＰ）およびホスファターゼ５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−ホスフェート（ＢＣＩＰ）およびニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）比色基質変換（抗体Ｂ）で、結合した抗体を検出した。
【図６−１】ＢＭＰＲＩＡ（ＡＬＫ３、ＣＤ２９２）およびＢＭＰＲＩＩ（Ｔ−ＡＬＫ、図Ａ）またはＢＭＰＲＩＡ（ＡＬＫ６）およびＢＭＰＲＩＩ（Ｔ−ＡＬＫ、図Ｂ）のいずれかでトランスフェクトしたＵ２ＯＳ細胞に基づく受容体二量体化アッセイ。ＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６  配列番号２）によるリガンド駆動性二量体化は、化学発光シグナルを生成した。ヒト抗ＢＭＰ６  ＩｇＧ４抗体ＣＬ−５８８３８および抗ＢＭＰ６抗体Ａ、Ｂ（Ａ）、ヒト抗ＢＭＰ６  ＩｇＧ４抗体１〜８（Ｂ）、ならびにマウスモノクローナル抗体ＭＡＢ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＡおよびＢ）を濃度を高めて添加した（１１ポイント希釈）。それぞれの場合の２つの実験の代表的なデータ。両方の実験において適切なアイソタイプ対照ＩｇＧを使用した。
【図６−２】図６−１参照。
【図７−１】ヒトＢＭＰ２（Ａ）、ＢＭＰ４（Ｂ）、ＢＭＰ５（Ｃ）、ＢＭＰ７（Ｄ）およびＢＭＰ９（Ｅ、詳細は実施例７に記載）で精製したＣＬ−５８８３８  ＩｇＧ４（配列番号１１６および配列番号１２５）の交差反応性プロファイル。抗ＢＭＰ６抗体ＣＬ−５８８３８がＨｅｐＧ２細胞のハンプルシフェラーゼレポーター遺伝子のＢＭＰ駆動性活性化に及ぼす影響を、ＣＬ−５８８３８の量を増やしながら添加することにより調べた。陽性対照として、関連するＢＭＰ特異的抗体（すべてのＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を添加して、関連するＢＭＰの活性化を抑制した。
【図７−２】図７−１参照。
【図７−３】図７−１参照。
【図８−１】抗ＢＭＰ−６またはアイソタイプＩｇＧ対照抗体の単回静脈内注射後、表１２（図８Ａ〜Ｄの場合）、表１３（図８Ｅ〜Ｇの場合）および表１４（図８ＨおよびＩの場合）からプロットされた正常ラットにおけるプロットされたトランスフェリン飽和度％（ＴＳＡＴ）。
【図８−２】図８−１参照。
【図８−３】図８−１参照。
【図８−４】図８−１参照。
【図８−５】図８−１参照。
【図９】様々な用量のＣＬ−５８８３８（Ａ）または１ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８および抗体Ａ（Ｂ、表１５）の単回静脈内注射後の正常ラットにおけるトランスフェリン飽和度％（ＴＳＡＴ）の結果。
【図１０】様々な用量のＣＬ−５８８３８（Ａ）または１ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８ならびに抗体ＡおよびＢ（Ｂ、表１６）の単回皮下注射後の正常ラットにおけるトランスフェリン飽和度％（ＴＳＡＴ）の結果。
【図１１−１】様々な用量（Ａ）または１ｍｇ／ｋｇ用量での抗体Ａとの比較（Ｂ）の単回静脈内注射後のヒト抗ＢＭＰ６  ＩｇＧ４抗体ＣＬ−５８８３８の薬物動態（ＰＫ）プロファイル。様々な用量でのＣＬ−５８８３８（Ｃ）または１ｍｇ／ｋｇ用量での抗体ＡおよびＢ（Ｄ）の皮下（ｓｃ）注射後のＰＫプロファイル。経時的［ｈ］にＩｇＧをＩｇＧ［ｎｇ／ｍｌ］としてプロットされた結果。
【図１１−２】図１１−１参照。
【図１２−１】ＡＣＤのラットＰＧ−ＰＳモデルの結果。治療開始後（＊ρ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）のトランスフェリン飽和度ＴＳＡＴ（Ａ）、ヘモグロビン［ｇ／ｄＬ］（Ｂ）、ＭＣＨ［ｐｇ］（Ｃ）、ならびに０週目（Ｄ）、１週目（Ｅ）および２週目（Ｆ）の血清ヘプシジンレベル［ｎｇ／ｍＬ］。
【図１２−２】図１２−１参照。
【図１２−３】図１２−１参照。
【図１２−４】図１２−１参照。
【図１３−１】カニクイザルにおける３ｍｇ／ｋｇでのＣＬ−５８８３８と抗体ＡおよびＢ（Ａ）、および様々な用量でのＣＬ−５８８３８（Ｂ）の単回静脈内投与後のトランスフェリン飽和度％（ＴＳＡＴ）、ならびにカニクイザルにおける３ｍｇ／ｋｇでのＣＬ−５８８３８と抗体ＡおよびＢ（Ｃ）、および様々な用量でのＣＬ−５８８３８（Ｄ）の単回静脈内投与後の血漿ヘプシジンレベル。
【図１３−２】図１３−１参照。
【図１４】様々な用量でのカニクイザルにおける単回静脈内注射後のＣＬ−５８８３８のＰＫプロファイル（Ａ）、ならびに３ｍｇ／ｋｇでのＣＬ−５８８３８と抗体ＡおよびＢとのＰＫプロファイル比較（Ｂ）。
【図１５】Ｖ領域使用およびＣＤＲＨ３（表６）に基づくＣＬ−５８８３８に高度に関連する抗体ＶｈおよびＶｋ配列のアミノ酸配列アラインメント。最上行は、本発明で使用されるｂｍｐ６−／−ＫｙｍｏｕｓｅでコードされるＩＭＧＴ  Ｖ領域遺伝子ＩＧＨＶ３−１１およびＩＧＫＶ３−２０の生殖細胞系配列を示す。以下の選択された抗体配列の生殖細胞系Ｖ領域配列とは異なるアミノ酸位置は枠で囲まれている。インビボ評価のために選択された抗体は太字で示されている（表６）。
【図１６】均一性時間分解ＦＲＥＴ（ＨＴＲＦ）アッセイは、Ｖ領域使用およびＮＧＳ配列（表６）により同定されたＣＤＲＨ抗体に基づいて、ＣＬ−５８８３８に高度に関連し、３２ｎＭで存在するヒトＢＭＰ６に結合するために標識されたＣＬ−５８８３８（１０ｎＭ）と競合する、抗体の能力を示す。３μＭの最終濃度から始まる１１ポイントの希釈範囲の濃度範囲として、競合する抗体を添加した。
【図１７−１】実験構成および実施例１７から得られた結果。実験時間経過のグラフ図（Ａ）ラットの組み入れおよびＥＰＯの適用のための決定図（Ｂ）、ヘモグロビン［ｇ／ｄＬ］（Ｃ）、ＭＣＶ［ｆＬ］（Ｄ）、ＭＣＨ［ｐｇ］（Ｅ）ならびに適用したＥＰＯ用量［％］（Ｆ）。ベースラインを共変量（Ｃ〜Ｅ）として、フィッシャー直接確率法（Ｆ）を使用した４週目のベースラインからの変化に関するＡＮＣＯＶＡ分析を使用した。平均±ＳＥＭ（＊ρ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）としてデータを示す。
【図１７−２】図１７−１参照。
【図１７−３】図１７−１参照。
【図１７−４】図１７−１参照。
【図１８−１】実験構成および実施例１８の結果。実験時間経過のグラフ図（Ａ）、ヘモグロビン［ｇ／ｄＬ］（Ｂ）、ＭＣＶ［ｆＬ］（Ｃ）、ＭＣＨ［ｐｇ］（Ｄ）、肝ハンプｍＲＮＡレベル［倍数発現］、血漿鉄レベル［μｇ／ｄＬ］（Ｆ）およびＴＳＡＴ値［％］。多重比較対ＥＰＯのダネット補正による分散分析を適用した。ＥＰＯ対ＥＰＯ＋ＣＬ−５８８３８の比較結果を示す。平均±ＳＥＭ（＊ρ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）としてデータを示す。
【図１８−２】図１８−１参照。
【図１８−３】図１８−１参照。
【図１８−４】図１８−１参照。
【図１９−１】実施例１９から得られた結果。異なるＣＬ−５８８３８濃度と組み合わせた１μｇ／ｋｇのＥＰＯ投与後の治療群を比較したヘモグロビン値［ｇ／ｄＬ］（Ａ）、異なるＥＰＯ用量と組み合わせた１０ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８投与後のヘモグロビン値［ｇ／ｄＬ］（Ｂ）、異なるＣＬ−５８８３８濃度と組み合わせた１μｇ／ｋｇのＥＰＯ投与後のマウスのＭＣＶ値［ｆＬ］（Ｃ）およびＴＳＡＴ［％］（Ｄ）、異なるＥＰＯ用量と組み合わせた１ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８投与後のマウスのＭＣＶ値［ｆＬ］（Ｅ）、すべての治療群間での肝ハンプｍＲＮＡレベル［倍数発現］（Ｆ）。多重比較対群ＩＩのダネット補正による分散分析を適用した。平均±ＳＥＭ（＊ρ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１）としてデータを示す。
【図１９−２】図１９−１参照。
【図１９−３】図１９−１参照。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
定義
本明細書で別段の定義がない限り、科学的および技術的用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈によって別途要求されない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。
単数形の用語「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。同様に、「または」という語は、文脈が別途明確に示さない限り、「および」を含むことが意図される。本明細書に記載されるものと同様または等価である方法および材料が本開示の実践または試験において使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。略語「例えば（ｅ．ｇ．）」は、ラテン語のｅｘｅｍｐｌｉ  ｇｒａｔｉａに由来し、本明細書において非限定的な例を示すために使用される。したがって、略語「ｅ．ｇ．」は、「例えば（ｆｏｒ  ｅｘａｍｐｌｅ）」という用語と同義である。
明細書および特許請求の範囲において、「約」という用語は、例えば、本開示の実施形態を記載する際に使用される組成物中の成分の量、濃度、体積、処理温度、処理時間、収率、流速、圧力、および同様の値、ならびにそれらの範囲を修飾するために使用される。「約」という用語は、例えば、化合物、組成物、濃縮物、または使用製剤を作製するための典型的な測定および取り扱い手順を通して、これらの手順における偶発的なエラーを通して、製造、供給源、または当該方法を実施するために使用される開始材料または成分中の純度の違い、および同様の直接的な検討事項を通して生じ得る数量の変化を指す。「約」という用語はまた、特定の初期濃度または混合物を有する製剤の老化によって異なる量、および特定の初期濃度または混合物を有する製剤を混合または処理することによって異なる量も包含する。「約」という用語によって修飾されている場合、添付の特許請求の範囲は、これらの量と等価のものを含む。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「投与する」または「投与」は、粘膜送達、皮内送達、静脈内送達、筋肉内送達、および／または本明細書に記載されるかもしくは当該技術分野で既知である任意の他の方法によって、体外に存在する物質（例えば、本明細書に提供される抗ｈＢＭＰ６抗体）を患者に注射するか、または別様に物理的に送達する行為を指す。疾患またはその症状が治療される場合、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の発症後に起こる。疾患またはその症状が予防される場合、物質の投与は、典型的には、疾患またはその症状の発症前に起こる。
【００６４】
「抗体」、「免疫グロブリン」、または「Ｉｇ」という用語は、本明細書において交換可能に使用されてもよく、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述のものの組み合わせなどの標的を認識し、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位でそれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片など）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）変異体、二重特異性抗体（二重結合抗体を含む）などの多重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、ならびに所望の生物活性を呈する限り、抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。「抗体」という用語はまた、４つのポリペプチド鎖（２つの軽（Ｌ）鎖および２つの重（Ｈ）鎖）からなる約１５０ｋＤａの分子量を有するＹ字形の糖タンパク質も指すことができる。アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）のギリシャ文字で表される、５種類の哺乳動物Ｉｇ重鎖アイソタイプが存在する。重鎖の種類は、抗体のクラス、すなわち、それぞれＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭを定義する。γおよびαクラスは、定常ドメイン配列および機能の違いに基づき、サブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、ｍＩｇＧ２Ａ、ｍＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けられる。哺乳動物では、λおよびκの２種類の免疫グロブリン軽鎖が存在する。抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」と表すことができる。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の部分であり（同じクラスの他の抗体と比較して）、抗原結合部位を含有する。抗体の例は、重鎖の二量体（５’−ＶＨ−（任意選択のヒンジ）−ＣＨ２−ＣＨ３−３’）を含み、軽鎖を欠く重鎖のみの（すなわち、Ｈ２）抗体である。
【００６５】
本明細書に記載される抗体は、オリゴクローナル抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｓｅｄ）抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体（二重結合抗体を含む）、触媒抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、抗イディオタイプ抗体であり得、これらには、可溶性形態もしくは結合形態で標識され得る抗体、ならびにそれらの断片、バリアント、または誘導体が、単独かまたは既知の技術によって提供される他のアミノ酸配列と組み合わせるかのいずれかで含まれ得る。抗体は、任意の種由来であってもよい。本明細書に記載される抗体は、裸であってもよく、または毒素、放射性同位体などの他の分子にコンジュゲートされてもよい。
【００６６】
「抗原結合部位」、「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」という用語、および同様の用語は、抗原と相互作用し、抗原に対するその特異性および親和性を結合剤に付与するアミノ酸残基を含む抗体の部分（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を指す。抗原結合領域は、げっ歯類（例えば、ウサギ、ラット、またはハムスター）およびヒトなどの任意の動物種に由来し得る。好ましくは、抗原結合領域は、ヒト起源のものである。
【００６７】
本明細書に記載される抗原結合断片には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、一本鎖ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、所望の生物活性を呈する抗体断片、ジスルフィド安定化可変領域（ｄｓＦｖ）、二量体可変領域（ダイアボディ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗体に対する抗Ｉｄ抗体）、細胞内抗体、直鎖抗体、一本鎖抗体分子、ならびに上記のいずれかの抗体断片およびエピトープ結合断片から形成された多重特異性抗体が含まれ得る。特に、本明細書に記載される抗体および抗体断片には、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち抗原結合部位を含有する分子が含まれ得る。酵素パパインによる抗体の消化は、抗原結合活性を有さないが結晶化する能力を有する、「Ｆａｂ」断片、および「Ｆｃ」断片としても知られる２つの同一の抗原結合断片をもたらす。「Ｆａｂ」は、本明細書で使用される場合、重鎖および軽鎖の各々の１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメインを含む抗体の断片を指す。本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用され、天然配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む。「Ｆｃ断片」は、ジスルフィドによって共に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を指す。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域中の配列によって判定され、この領域はまた、特定の種類の細胞上に見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される。酵素ペプシンによる抗体の消化は、抗体分子の２つのアームが結合したままであり、２つの抗原結合部位を含む、Ｆ（ａｂ’）２断片をもたらす。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗原を架橋する能力を有する。
【００６８】
遺伝子セグメントに関連する「の組換えに由来する」という用語は、Ｂ細胞がそれらの可変領域遺伝子セグメントを組換え、可変ドメインのコード配列を産生することを理解する当業者には容易に明らかである。例えば、「ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ＤＨ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来する」という用語は、１つのＤＨ遺伝子セグメントおよび１つのＪＨ遺伝子セグメントが共に、重鎖抗体可変ドメインをコードする再配列ＶＤＪ配列を形成する１つのヒトＶＨ遺伝子セグメントの組換えに関する。接合部および体細胞超変異はまたプロセスの特徴であってもよく、それによって得られた組換えられたＶＤＪ配列は、生殖細胞系Ｖ、ＤおよびＪ配列によって構成されない１つ以上のヌクレオチドの付加、置換または欠失（例えば、ｐ−付加および／またはｎ−付加）を含む。同等のものは、カッパ軽鎖可変ドメインの場合はＶκおよびＪκ遺伝子セグメント、ラムダ軽鎖可変ドメインの場合はＶλおよびＪλの当該のものである。任意の翻訳後修飾は、可変ドメインにさらに包含され得ることを意図する。
【００６９】
「Ｆｖ」は、本明細書で使用される場合、抗原認識部位および抗原結合部位の両方を保持する抗体の最小断片を指す。この領域は、強い非共有結合または共有結合によって会合した１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。この構成において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を定義する。集合的に、６つのＣＤＲは、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性ではあるものの、抗原を認識し、結合する能力を有する。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然型の変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原決定基またはエピトープに向けられている。対照的に、ポリクローナル抗体調製物は、典型的に、異なる抗原決定基（またはエピトープ）に向けられた異なる抗体を含む。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、無傷のおよび全長のモノクローナル抗体の両方、ならびに抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、およびトランスジェニック動物を含むがこれらに限定されない任意の数の方法で作製されたかかる抗体を指す。
【００７１】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する特定の種に由来する抗体中の対応する配列と同一または相同である一方で、残りの鎖（複数可）は、別の抗体クラスまたはサブクラスに属する別の種に由来する抗体中の対応する配列と同一または相同である、「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびに所望の生物活性を呈するかかる抗体の断片が含まれ得る。
【００７２】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリン（ドナー抗体）由来の「超可変領域」が、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）における超可変領域由来の残基に取って代わる、キメラ抗体のサブセットを指す。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのうちの実質的にすべてを含み、超可変ループのうちのすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、但し、フレームワーク領域は、抗体性能、例えば結合親和性、異性化、免疫原性などを改善する１つ以上の置換を含み得る。
【００７３】
「二重特異性抗体」という用語は、２つの標的分子に対する特異性を含む抗体を意味し、ＤＶＤ−Ｉｇ（ＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｆｏｒ  ｄｕａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ」，Ｍｅｔｈ．Ｍｏ．Ｂｉｏｌ．，２０１２，８８９，１４５−１５６を参照）、ｍＡｂ２（ＷＯ２００８／００３１０３を参照、ｍＡｂ２型の記載が本明細書に参照により組み込まれる）、ＦＩＴ−Ｉｇ（ＷＯ２０１５／１０３０７２、ＦＩＴ−Ｉｇ骨格の記載が本明細書に参照により組み込まれる）、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ボディ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ（Ｔｒｉｐｌｅ  ｂｏｄｙ）、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎ−ｈｏｌｅｓ）、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙなどのフォーマットが含まれるが、これらに限定されない。二重特異性のフォーマットの概説については、Ｓｐｉｅｓｓ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）を参照されたい。別の実施形態では、二重特異性分子は、別の非Ｉｇフォーマット、例えば、Ｔ細胞受容体結合ドメイン、免疫グロブリンスーパーファミリードメイン、無顎類可変リンパ球受容体、フィブロネクチンドメイン（例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（商標））、抗体定常ドメイン（例えば、ＣＨ３ドメイン、例えば、Ｆｃａｂ（商標）のＣＨ２および／またはＣＨ３）（当該定常ドメインは、機能的ＣＨ１ドメインではない）、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｓｃ−ダイアボディ、ｓｃＦａｂ、ＣＴＬＡ−４から選択される骨格に由来するセンチリン（ｃｅｎｔｙｒｉｎ）およびエピトープ結合ドメイン（Ｅｖｉｂｏｄｙ（商標））、リポカリンドメイン、タンパク質ＡのＺドメインなどのタンパク質Ａ（例えば、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（商標）またはＳｐＡ）、Ａドメイン（例えば、Ａｖｉｍｅｒ（商標）またはＭａｘｉｂｏｄｙ（商標））、熱ショックタンパク質（ＧｒｏＥＩおよびＧｒｏＥＳに由来するエピトープ結合ドメインなど）、トランスフェリンドメイン（例えば、トランスボディ）、アンキリンリピートタンパク質（例えば、ＤＡＲＰｉｎ（商標））、ペプチドアプタマー、Ｃ型レクチンドメイン（例えば、Ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ（商標））、ヒトγ−クリスタリンまたはヒトユビキチン（アフィリン）、ＰＤＺドメイン、サソリ毒、ならびにヒトプロテアーゼ阻害剤のクーニッツ型ドメインに融合した抗体を含む。
【００７４】
一実施形態では、二重特異性抗体は、ｍＡｂ２である。ｍＡｂ２は、修飾された定常領域に融合した、無傷抗体由来のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これは、「Ｆｃａｂ」として知られる抗原結合部位を形成するように操作されている。Ｆｃａｂ／ｍＡｂ２フォーマットの背景にある技術は、ＷＯ２００８／００３１０３により詳細に記載され、ｍＡｂ２フォーマットの記載は、本明細書に参照により組み込まれている。
【００７５】
別の実施形態では、二重特異性抗体は、「二重結合抗体」である。本明細書で使用される場合、「二重結合抗体」とは、両方の抗原結合ドメインがＶＨ／ＶＬ対によって形成されている二重特異性抗体であり、これには、ＦＩＴ−Ｉｇ（本明細書に参照により組み込まれるＷＯ２０１５／１０３０７２を参照）、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ボディ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ならびにｓｃＦｖ４−Ｉｇなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００７６】
「超可変領域」、「ＣＤＲ領域」、または「ＣＤＲ」という用語は、配列が超可変性であり、および／または構造的に画定されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体の抗原結合部位は、６つの超可変領域（ＶＨにおいて３つ（ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３）およびＶＬにおいて３つ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３））を含む。抗体の重鎖および軽鎖のこれらの領域は、抗原結合特異性を抗体に付与する。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステムに従って定義され得る（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．，１９９１，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ  ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓを参照）。Ｃｈｏｔｈｉａらによって考案されたシステム（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．＆Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，１９８７，“Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１−９１７を参照）およびＩＭＧＴシステム（Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．，１９９７，“Ｕｎｉｑｕｅ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ，１８，５０を参照）などの他のシステムを使用して、ＣＤＲを定義することができる。抗体は、典型的には、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含有する。ＣＤＲ（複数可）という用語は、これらの領域の１つまたはいくつかを示すためにここで使用される。当業者は、命名法の異なるシステムを容易に比較し、特定の配列がＣＤＲとして定義され得るかどうかを判定することができる。
【００７７】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生された抗体のそれに対応するアミノ酸配列を保有し、および／またはヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製された抗体であり、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。「特異的に結合する」という用語は、生物学的分子を含む分子の均質な集団の存在下で標的の存在を判定する、標的と抗体との間の結合などの測定可能および再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）に特異的に結合する抗体は、それが他の標的に結合するよりも大きい親和性、結合力で、より容易に、かつ／またはより長くこの標的に結合する抗体である。一実施形態では、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定した場合、無関係の標的に対する抗体の結合の程度は、標的に対する抗体の結合の約１０％未満である。
【００７８】
ｈＢＭＰ６抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、関連する抗原と交差反応性であり得る。好ましくは、ｈＢＭＰ６抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、他の抗原と交差反応しない（しかし、任意選択で、異なる種、例えばアカゲザルまたはマウスのＢＭＰ６と交差反応し得る）。ｈＢＭＰ６抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、または当業者に既知の他の技術によって同定され得る。抗体またはその断片は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）および酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を使用して判定した場合、それが任意の交差反応性抗原に対するよりも高い親和性でｈＢＭＰ６抗原に結合する場合に、ＢＭＰ６抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的または選択的反応は、少なくとも２倍のバックグラウンドシグナルまたはノイズ、より典型的には１０倍超（例えば、１５倍超、２０倍超、５０倍超、または１００倍超）のバックグラウンドである。抗体特異性に関する考察については、例えば、Ｐａｕｌ，ｅｄ．，１９８９，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの３３２〜３３６頁を参照されたい。
【００７９】
「脂肪族アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が非極性および疎水性であることを意味する。疎水性は、炭化水素鎖中のＣ原子の数が増加するにつれて増加する。グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシンは、脂肪族アミノ酸である。
【００８０】
「芳香族アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が芳香族環系を含有することを意味する。フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファンは、芳香族アミノ酸である。
「ヒドロキシル含有アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基がヒドロキシル基を含有し、親水性であることを意味する。セリン、システイン、トレオニン、およびメチオニンは、ヒドロキシル含有アミノ酸である。
【００８１】
「塩基性アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が窒素を含有し、中性ｐＨで塩基性であることを意味する。ヒスチジン、リジン、およびアルギニンは、塩基性アミノ酸である。
【００８２】
「環状アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が脂肪族環状構造を有することを意味する。プロリンは、唯一の環状脂肪族アミノ酸である。
【００８３】
「酸性アミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基が極性であり、生理学的ｐＨで負に荷電されていることを意味する。アスパラギン酸およびグルタミン酸は、酸性アミノ酸である。
【００８４】
「アミドアミノ酸」という用語は、アミノ酸Ｒ基がアミド基を含有することを意味する。アスパラギンおよびグルタミンは、アミドアミノ酸である。
【００８５】
本明細書で使用される場合、「承認番号」および「販売承認番号」とは、特定の医療用製品および／または組成物が機関の管轄エリアにおいて販売および／または発売されてもよいとその機関が判定した際に、規制機関によって発行された番号を指す。本明細書で使用される場合、「規制機関」とは、例えば、医療用製品および／または組成物の安全性および有効性の評価、ならびに所与のエリアにおけるかかる製品および／または組成物の発売／販売の制御を担う機関のうちの１つを指す。米国における食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州における欧州医薬品庁（ＥＰＡ）は、かかる規制機関のほんの２つの例に過ぎない。他の非限定的な例としては、ＳＤＡ、ＭＰＡ、ＭＨＰＲＡ、ＩＭＡ、ＡＮＭＡＴ、香港保健薬物省（Ｈｏｎｇ  Ｋｏｎｇ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ−Ｄｒｕｇ  Ｏｆｆｉｃｅ）、ＣＤＳＣＯ、Ｍｅｄｓａｆｅ、およびＫＦＤＡを挙げることができる。
【００８６】
本明細書で使用される場合、「緩衝液」とは、ｐＨの強い変動を経ることなく、ある特定の量の酸または塩基を吸収することができる化学薬剤を指す。
【００８７】
本明細書で使用される場合、「担体」という用語は、治療剤と共に投与される、希釈剤、アジュバント（例えば、フロイントアジュバント（完全および不完全））、賦形剤、またはビヒクルを指す。かかる薬学的担体は、滅菌液、例えば、水、および石油、動物、植物、または合成起源のものを含む油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、胡麻油などであり得る。水は、薬学的組成物が静脈内投与される場合に好ましい担体である。生理食塩水、ならびにデキストロースおよびグリセロール水溶液も、特に注射液用の液体担体として使用することができる。
【００８８】
「化学療法剤」または「化学療法」という用語は、典型的には、腫瘍細胞が成長または増殖する能力を妨げることによって、癌細胞を破壊することを主な目的とする治療剤を指す。多くの異なる種類の化学療法剤が存在し、５０種類を超える承認された化学療法剤が利用可能である。化学療法薬は、それらがどのように作用するかに基づいて分類され得る。アルキル化剤は、遺伝子の遺伝物質であるＤＮＡを直接攻撃することによって癌細胞を殺滅する。シクロホスファミドは、アルキル化剤である。代謝拮抗剤は、ＤＮＡの産生を妨げ、細胞の成長および増殖を抑制する。代謝拮抗物質の例は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）である。抗腫瘍抗生物質は、土壌中の真菌などの天然物質から作製される。それらは、ＤＮＡおよび細胞タンパク質の産生を含む重要な細胞機能を妨げる。ドキソルビシンおよびブレオマイシンは、化学療法剤のこの群に属する。植物アルカロイドは、細胞が正常に分裂することを防ぐ。ビンブラスチンおよびビンクリスチンは、ツルニチニチソウの植物から得られる植物アルカロイドである。ステロイドホルモンは、ホルモンに依存するいくつかの癌の成長を遅らせる。例えば、タモキシフェンは、成長のためにホルモンエストロゲンに依存する乳癌を治療するために使用される。ＰＡＲＰ阻害剤などのＤＮＡ損傷応答（ＤＤＲ）阻害剤は、一本鎖または二本鎖切断後のＤＮＡ修復機構を遮断する。
【００８９】
化学療法剤の例としては、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、シトキシン（Ｃｙｔｏｘｉｎ）、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクレイスチン（Ｖｉｎｃｒｅｉｓｔｉｎｅ）、ビノレルビンカルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号を参照）、メルファラン、および他の関連するナイトロジェンマスタードが挙げられる。好適な毒素および化学療法剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９９５）およびＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，７ｔｈ  Ｅｄ．（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．１９８５）に記載されている。化学療法剤の別の例は、抗体とコンジュゲートされた毒素のクラスであり、ピロロベンゾジアゼピン、マイタンサノイド（ｍａｙｔａｎｓａｎｏｉｄ）、カリケアマイシンなどが含まれるがこれらに限定されない。他の好適な毒素および／または化学療法剤は、当業者に既知である。
【００９０】
本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、任意選択で指定の量で指定の成分（例えば、本発明の抗体）を含有する産物、および任意選択で指定の量で指定の成分の組み合わせから直接または間接的にもたらされる任意の産物を包含することが意図される。
【００９１】
本明細書中で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という用語は、方法または組成物に不可欠である抗体、断片、使用、組成物、方法、およびそのそれぞれの構成要素（複数可）に関して使用されるが、不可欠であるかどうかを問わず未指定の要素を含む余地がある。
【００９２】
「からなる」という用語は、本明細書に記載される抗体、断片、使用、組成物、方法、およびそのそれぞれの構成要素を指し、その実施形態の記載において挙げられていないいずれの要素も含まない。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「から本質的になる」という用語は、所与の実施形態に必要とされる要素を指す。この用語は、その実施形態の基本的、かつ新規または機能的な特徴（複数可）に重大な影響を与えない要素の存在を許容する。
【００９４】
本明細書で使用される場合、ポリペプチドの文脈において、「誘導体」という用語は、ｈＢＭＰ６ポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチド、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの断片、またはアミノ酸残基の置換、欠失、もしくは付加の導入によって改変された、ｈＢＭＰ６ポリペプチドに特異的に結合する抗体または断片を含む。本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語はまた、ｈＢＭＰ６ポリペプチド、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの断片、または例えば、ポリペプチドへの任意の種類の分子の共有結合によって化学修飾された、ｈＢＭＰ６ポリペプチドに特異的に結合する抗体を含む。例えば、限定的ではなく、ｈＢＭＰ６ポリペプチド、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの断片、またはｈＢＭＰ６抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などによって化学的に修飾されてもよい。誘導体は、結合した分子の種類または場所のいずれかにおいて天然型または出発ペプチドまたはポリペプチドとは異なる様式で修飾される。誘導体は、ペプチドまたはポリペプチド上に天然に存在する１つ以上の化学基の欠失をさらに含む。ｈＢＭＰ６ポリペプチド、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの断片、またはｈＢＭＰ６抗体の誘導体は、特異的化学切断、アセチル化、製剤化、ツニカマイシンの代謝合成等などを含むがこれらに限定されない、当業者に既知の技術を使用した化学修飾によって化学修飾されてもよい。さらに、ｈＢＭＰ６ポリペプチド、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの断片、またはｈＢＭＰ６抗体の誘導体は、１つ以上の非古典的アミノ酸を含有してもよい。ポリペプチド誘導体は、本明細書に記載されるｈＢＭＰ６ポリペプチド、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの断片、またはｈＢＭＰ６抗体と同様または同一の機能を保有する。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「エフェクター機能」（または「エフェクター可能化」）という用語は、抗体依存性細胞傷害活性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害活性（ＣＤＣ）媒介性応答、Ｆｃ媒介性食作用または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびＦｃＲｎ受容体を介して再循環する抗体のうちの１つ以上を指す。
【００９６】
「有効量」は、治療的または予防的結果を含む、所望の効果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。「治療有効量」とは、特定の障害の測定可能な改善または予防を達成するために必要な最小濃度を指す。本明細書における治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに抗体が個体において所望の応答を引き出す能力などの要因に応じて変動し得る。治療有効量はまた、治療に有益な効果が抗体の毒作用または有害作用に勝るものである。「予防有効量」とは、所望の予防効果を達成するために必要な投与量および期間で有効な量を指す。いくつかの実施形態では、本発明の抗体の有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ（対象の体重１ｋｇ当たりの抗体のｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体の有効量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、または約１００ｍｇ／ｋｇ（またはこの中の範囲）である。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される場合、「有効量」はまた、指定の結果（例えば、細胞のｈＢＭＰ６生物活性の阻害）を達成するための、本発明の抗体の量を指す。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗体の１つ以上の抗原結合領域に結合することができ、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトにおいて抗原性または免疫原性活性を有し、かつ免疫応答を引き出すことができる、ｈＢＭＰ６ポリペプチドまたはｈＢＭＰ６ポリペプチド断片などの抗原の表面上の局在化した領域を指す。免疫原性活性を有するエピトープは、動物において抗体応答を引き出すポリペプチドの一部である。抗原性活性を有するエピトープは、当該技術分野で周知の任意の方法によって、例えば本明細書に記載される免疫測定法によって判定されるように、抗体が特異的に結合するポリペプチドの一部である。抗原性エピトープは、必ずしも免疫原性でなくてもよい。エピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面基からなり、特異的な三次元構造特性、および特定の電荷特性を有する。エピトープに寄与するポリペプチドの領域は、ポリペプチドの連続したアミノ酸であってもよく、またはエピトープは、ポリペプチドの２つ以上の連続していない領域から集合してもよい。エピトープは、抗原の三次元表面特徴であってもなくてもよい。ある特定の実施形態では、ｈＢＭＰ６エピトープは、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの三次元表面特徴である（例えば、三量体形態のｈＢＭＰ６ポリペプチドにおいて）。他の実施形態では、ｈＢＭＰ６エピトープは、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの線状特徴である（例えば、三量体形態または単量体形態のｈＢＭＰ６ポリペプチドにおいて）。本明細書に提供される抗体は、単量体（変性）形態のｈＢＭＰ６のエピトープ、三量体（天然）形態のｈＢＭＰ６のエピトープ、または単量体（変性）形態および三量体（天然）形態の両方のｈＢＭＰ６のエピトープに特異的に結合してもよい。特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、三量体形態のｈＢＭＰ６のエピトープに特異的に結合するが、単量体形態のｈＢＭＰ６には特異的に結合しない。
【００９８】
本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、一般に、薬物のための希釈剤、ビヒクル、防腐剤、結合剤、または安定剤として使用される不活性物質を指し、これには、タンパク質（例えば、血清アルブミンなど）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、グリシン、ヒスチジンなど）、脂肪酸およびリン脂質（例えば、アルキルスルホン酸塩、カプリル酸塩など）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤など）、糖類（例えば、スクロース、マルトース、トレハロースなど）、ならびにポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトールなど）が含まれるが、これらに限定されない。また、全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．を参照されたい。
【００９９】
本明細書で使用される場合、ペプチドまたはポリペプチドの文脈において、「断片」という用語は、全長未満のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。かかる断片は、例えば、アミノ末端でのトランケーション、カルボキシ末端でのトランケーション、および／またはアミノ酸配列からの残基（複数可）の内部欠失から生じ得る。断片は、例えば、代替的なＲＮＡスプライシングから、またはインビボプロテアーゼ活性からもたらされ得る。ある特定の実施形態では、ＢＭＰ６断片は、ｈＢＭＰ６ポリペプチドまたはｈＢＭＰ６ポリペプチドに特異的に結合する抗体のアミノ酸配列の、少なくとも５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも７０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続したアミノ酸残基、連続した少なくとも１００個のアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続したアミノ酸残基、または少なくとも２５０個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。特定の実施形態では、ｈＢＭＰ６ポリペプチドの断片、またはｈＢＭＰ６抗原に特異的に結合する抗体は、ポリペプチドまたは抗体の少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つの機能を保持する。
【０１００】
「遊離」という用語は、緩衝液と組み合わされる、ポリペプチド、例えばＢＭＰ６、またはその断片およびバリアントを指すことができ、ポリペプチドは、細胞表面または細胞膜に結合していない。したがって、「遊離」という用語は、表面発現が可能である（すなわち、１つ以上の膜貫通ドメインまたは膜結合ドメインを含む）が、その現在の状態では細胞の表面上に発現されていないか、または細胞の表面上に発現されたタンパク質に結合していない、ポリペプチドを指すことができる。遊離ポリペプチドはまた、遊離の組換えまたは天然または非結合ポリペプチドを指すことができる。ファージディスプレイの文脈において、遊離抗原は、溶液中で選択され得る（本明細書では「可溶性選択」と呼ばれる）か、または表面に吸着され得、例えば、９６ウェルプレートの表面に吸着され得る（本明細書では「バイオパニング選択」と呼ばれる）。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「融合タンパク質」という用語は、抗体のアミノ酸配列および異種ポリペプチドまたはタンパク質（すなわち、通常は抗体の一部ではないポリペプチドまたはタンパク質（例えば、非抗ＢＭＰ６抗原抗体））のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「融合」という用語は、ＢＭＰ６または抗ＢＭＰ６抗体に関連して使用される場合、ペプチドもしくはポリペプチド、またはその断片、バリアント、および／もしくは誘導体の、異種ペプチドまたはポリペプチドとの接合を指す。好ましくは、融合タンパク質は、ＢＭＰ６または抗ＢＭＰ６抗体の生物活性を保持する。ある特定の実施形態では、融合タンパク質は、ＢＭＰ６抗体のＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ（１つ、２つ、または３つのＶＨ  ＣＤＲ）、および／またはＶＬ  ＣＤＲ（１つ、２つ、または３つのＶＬ  ＣＤＲ）を含み、融合タンパク質は、ＢＭＰ６エピトープに特異的に結合する。
【０１０２】
「重鎖」という用語は、抗体に関連して使用される場合、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）と呼ばれる、５つの異なる種類を指す。これらの異なる種類の重鎖は周知であり、そこから５つのクラスの抗体、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがそれぞれ生じ、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわちＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む。好ましくは、重鎖は、ヒト重鎖である。ヒト集団において、各免疫グロブリンまたは免疫グロブリンサブクラスの複数の重鎖定常領域対立遺伝子が存在する。これらの対立遺伝子バリアントのヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ、ＥＮＳＥＭＢＬ  Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、およびＵｎｉｐｒｏｔなどの公的に利用可能なデータベース上でアクセス可能である。対立遺伝子バリアントはまた、様々なゲノム配列決定プロジェクトにおいて同定され得る。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ヒトＩＧＨＧ１＊０１（配列番号３４０、３４１、および５３７）、ＩＧＨＧ１＊０２（配列番号３４０、３４１、および５３７）、ＩＧＨＧ１＊０３（配列番号５２３および５２４）、ＩＧＨＧ１＊０４（配列番号５２５および５２６）、およびＩＧＨＧ１＊０５（配列番号３４０、３４１、および５３７）を含むがこれらに限定されないＩｇＧ１定常領域対立遺伝子によってコードされる重鎖を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ヒトＩＧＨＧ２＊０１（配列番号５２７および５２８）、ＩＧＨＧ２＊０２（配列番号５２９および５３０）、ＩＧＨＧ２＊０３（配列番号５２７および５２８）、ＩＧＨＧ２＊０４（配列番号５３１および５３２）、ＩＧＨＧ２＊０５（配列番号５２７および５２８）、およびＩＧＨＧ２＊０６（配列番号５３３および５３４）を含むがこれらに限定されないＩｇＧ２定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ヒトＩＧＨＧ３＊０１、ＩＧＨＧ３＊０２、ＩＧＨＧ３＊０３、ＩＧＨＧ３＊０４、ＩＧＨＧ３＊０５、ＩＧＨＧ３＊０６、ＩＧＨＧ３＊０７、ＩＧＨＧ３＊０８、ＩＧＨＧ３＊０９、ＩＧＨＧ３＊１０、ＩＧＨＧ３＊１１、ＩＧＨＧ３＊１２、ＩＧＨＧ３＊１３、ＩＧＨＧ３＊１４、ＩＧＨＧ３＊１５、ＩＧＨＧ３＊１６、ＩＧＨＧ３＊１７、ＩＧＨＧ３＊１８、およびＩＧＨＧ３＊１９を含むがこれらに限定されないＩｇＧ３定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、ヒトＩＧＨＧ４＊０１（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＨＧ４＊０２（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＨＧ４＊０３（例えば、本明細書の配列表を参照）、およびＩＧＨＧ４＊０４（例えば、本明細書の配列表を参照）を含むがこれに限定されないＩｇＧ４定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。別の例では、重鎖は、欠損ＩｇＧアイソタイプ、例えば、欠損ＩｇＧ４である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトガンマ４定常領域を含む。別の実施形態では、重鎖定常領域は、Ｆｃ−γ受容体に結合せず、例えば、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ変異を含む。別の実施形態では、重鎖定常領域は、安定性を増加させるために、Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ変異を含む。別の実施形態では、重鎖定常領域は、ＩｇＧ４−ＰＥである（例えば、本明細書の配列表を参照）。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、マウスＩＧＨＧ１＊０１またはＩＧＨＧ１＊０２を含むがこれらに限定されないマウスＩｇＧ１定常領域対立遺伝子によってコードされる重鎖定常領域を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、マウスＩＧＨＧ２Ａ＊０１、ＩＧＨＧ２Ａ＊０２、ＩＧＨＧ２Ｂ＊０１、ＩＧＨＧ２Ｂ＊０２、ＩＧＨＧ２Ｃ＊０１、ＩＧＨＧ２Ｃ＊０２、またはＩＧＨＧ２Ｃ＊０３を含むがこれらに限定されないマウスＩｇＧ２定常領域対立遺伝子によってコードされる重鎖定常領域を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、マウスＩＧＨＧ３＊０１を含むがこれに限定されないマウスＩｇＧ３定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「宿主」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトした特定の対象細胞、およびかかる細胞の子孫または潜在的な子孫を指す。かかる細胞の子孫は、その後の世代で生じ得る変異もしくは環境的影響、または宿主細胞ゲノムへの核酸分子の組み込みに起因して、核酸分子でトランスフェクトした親細胞と同一ではない場合がある。
他の療法の投与の文脈における「組み合わせて」という用語は、２つ以上の療法の使用を指す。「組み合わせて」という用語の使用は、疾患を有する対象に療法が投与される順序を制限しない。第１の療法は、ＢＭＰ６媒介性疾患を有したか、有するか、またはそれに罹患しやすい対象への第２の療法の投与前（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間）、それと同時に、またはその後（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間）に投与され得る。任意の追加の療法は、他の追加の療法と共に任意の順序で投与され得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、１つ以上の療法（例えば、ＢＭＰ６媒介性疾患を予防、治療、管理、および／または改善するために現在投与されている本発明の抗体ではない療法）と組み合わせて投与され得る。本発明の抗体と組み合わせて投与され得る療法の非限定的な例としては、鎮痛剤、麻酔剤、抗生物質、もしくは免疫調節剤、または米国薬局方および／もしくは医師用添付文書集に列挙される任意の他の薬剤が挙げられる。
【０１０５】
本明細書で使用する場合、「注射装置」は、注射を実施するために設計される装置を指し、注射は、注射装置を人の組織、典型的には皮下組織に一時的に流体的に繋ぐステップを含む。注射は、ある量の液体薬物を組織内に投与し、注射装置を組織から分離させるかまたは取り外すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、注射装置は、標的組織が循環系内の血液、例えば、静脈の血管であるときに使用される注射装置の種類である、静脈内装置またはＩＶ装置であり得る。注射装置の一般的であるが非限定的な例は、針および注射器である。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「説明書」とは、物品の直接容器上の文書、印刷物、または図形物、例えば、薬学的活性剤を含有するバイアル上に表示された文書、または目的の組成物を含有するキットに含まれる目的の製品の組成および使用についての詳細の表示を指す。説明書は、投与または実施されることが企図される治療の方法を記載する。
【０１０７】
「単離された」または「精製された」抗体またはタンパク質は、その産生環境の構成要素（例えば、天然または組換え）から同定、分離、および／または回収されたものである。例えば、抗体またはタンパク質は、抗体が由来する細胞もしくは組織源からの細胞物質もしくは他の汚染タンパク質を実質的に含まないか、または化学的に合成されている場合には化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という用語は、抗体が、単離または組換え産生された細胞の細胞構成要素とは分離されている、抗体の調製物を含む。したがって、細胞物質を実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量％）未満の異種タンパク質（本明細書では「汚染タンパク質」とも呼ばれる）を有する抗体の調製物を含む。抗体が組換え産生される場合、抗体は、培地も実質的に含まない、すなわち、培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、または５％未満を占めることが好ましい。抗体が化学合成によって産生される場合、抗体は、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、抗体は、タンパク質の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離されることが好ましい。したがって、抗体のかかる調製物は、約３０％、２０％、１０％、５％（乾燥重量％）未満の化学的前駆体または目的の抗体以外の化合物を有する。好ましい実施形態では、本発明の抗体は、単離または精製されている。
【０１０８】
「Ｋａｂａｔ付番」という用語および同様の用語は、当該技術分野で認識されており、抗体の重鎖可変領域またはその抗原結合部分において他のアミノ酸残基よりも可変である（すなわち、超可変）アミノ酸残基を付番するシステムを指す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７１）Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９０：３８２−３９１およびＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１についてはアミノ酸位置３１〜３５、ＣＤＲ２についてはアミノ酸位置５０〜６５、およびＣＤＲ３についてはアミノ酸位置９５〜１０２の範囲である。
【０１０９】
本明細書で使用される場合、「標識」または「標識された」とは、ポリペプチドへの検出可能な部分、例えば、放射標識、蛍光標識、酵素標識、化学発光標識、またはビオチニル基もしくは金の付加を指す。放射性同位体または放射性核種には、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１５Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉが含まれ得、蛍光標識には、ローダミン、ランタニド蛍光体、またはＦＩＴＣが含まれ得、酵素標識には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼが含まれ得る。さらなる標識には、制限的ではなく例示目的で、グルコース−６−リン酸脱水酵素（「Ｇ６ＰＤＨ」）、アルファ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースアミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、およびペルオキシダーゼなどの酵素；染料（例えば、シアニン染料、例えば、Ｃｙ５（商標）、Ｃｙ５．５（商標）、またはＣｙ７（商標））；フルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ＧＦＰ（「緑色蛍光タンパク質」のためのＧＦＰ）、他の蛍光タンパク質（例えば、ｍＣｈｅｒｒｙ、ｍＴｏｍａｔｏ）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルアルデヒド（ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）、およびフルオレスカミンなどの追加の蛍光標識または蛍光剤；ランタニドクリプテートおよびキレートなどのフルオロフォア、例えば、ユーロピウムなど（Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒおよびＣｉｓｂｉｏアッセイ）；イソルミノール、ルミノール、およびジオキセタンなどの化学蛍光標識または化学蛍光体；増感剤；補酵素；酵素基質；ラテックスまたは炭素粒子などの粒子；金属ゾル；微結晶；リポソーム；細胞などが含まれ、これらは色素、触媒、または他の検出可能な基；ビオチン、ジゴキシゲニン、または５−ブロムデキシウリジンなどの分子；例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ菌外毒素（ＰＥまたはその細胞毒性断片もしくは変異体）、ジフテリア毒素またはその細胞毒性断片もしくは変異体、ボツリヌス毒素Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥまたはＦ、リシンまたはその細胞毒性断片、例えばリシンＡ、アブリンまたはその細胞毒性断片、サポリンまたはその細胞毒性断片、ヤマゴボウ抗ウイルス毒素またはその細胞毒性断片、およびブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）１またはその細胞毒性断片からなる群から選択される毒素部分などの毒素部分でさらに標識され得る。
【０１１０】
抗体に関連して使用される場合、「軽鎖」という用語は、免疫グロブリン軽鎖を指し、これには、哺乳動物においてラムダ（λ）およびカッパ（κ）の２種類が存在する。好ましくは、軽鎖は、ヒト軽鎖である。好ましくは、軽鎖定常領域は、ヒト定常領域である。ヒト集団において、複数の軽鎖定常領域対立遺伝子が存在する。これらの対立遺伝子バリアントのヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、ＩＭＧＴ、ＥＮＳＥＭＢＬ  Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ、およびＵｎｉｐｒｏｔなどの公的に利用可能なデータベース上でアクセス可能である。一実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、ＩＧＫＣ＊０１（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＫＣ＊０２（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＫＣ＊０３（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＫＣ＊０４（例えば、本明細書の配列表を参照）、およびＩＧＫＣ＊０５（例えば、本明細書の配列表を参照）を含むがこれに限定されないヒトκ定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。一実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、ＩＧＬＣ１＊０１（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ１＊０２（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ２＊０１（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ２＊０２（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ２＊０３（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ３＊０１（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ３＊０２（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ３＊０３（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ３＊０４（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ６＊０１（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ７＊０１（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ７＊０２（例えば、本明細書の配列表を参照）、ＩＧＬＣ７＊０３（例えば、本明細書の配列表を参照）を含むがこれに限定されないヒトλ定常領域対立遺伝子によってコードされるタンパク質を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ＩＧＫＣ＊０１、ＩＧＫＣ＊０３、またはＩＧＫＣ＊０３を含むがこれらに限定されないマウスκ定常領域対立遺伝子によってコードされる軽鎖定常領域を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および抗体断片は、ＩＧＬＣ１＊０１、ＩＧＬＣ２＊０１、またはＩＧＬＣ３＊０１を含むがこれらに限定されないマウスλ定常領域対立遺伝子によってコードされる軽鎖定常領域を含む。
【０１１１】
ペプチド、ポリペプチド、または抗体配列に関連する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」および「相同性」は、最大の配列同一パーセントを達成するために配列を整列させ、必要であればギャップを導入した後に、かついかなる保存的置換も配列同一性の一部と見なさずに、特定のペプチドまたはポリペプチド配列と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを判定する目的のための整列は、当該技術分野の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧ  ＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。一実施形態では、相同性％は、約７０％である。一実施形態では、相同性％は、約７５％である。一実施形態では、相同性％は、約８０％である。一実施形態では、相同性％は、約８５％である。一実施形態では、相同性％は、約９０％である。一実施形態では、相同性％は、約９２％である。一実施形態では、相同性％は、約９５％である。一実施形態では、相同性％は、約９７％である。一実施形態では、相同性％は、約９８％である。一実施形態では、相同性％は、約９９％である。一実施形態では、相同性％は、１００％である。
【０１１２】
生体物質、例えば核酸分子、ポリペプチド、宿主細胞に関連して使用される場合、「天然型の」または「天然」という用語は、天然に見出され、人間によって操作されていないものを指す。
【０１１３】
本明細書で使用される場合、「包装」とは、構成要素が分配および／または使用のために適したユニット内にまとめられ、および／または抑制される方法を指す。包装には、例えば、滅菌、ラベル付けなどを維持するための、箱、袋、注射器、アンプル、バイアル、チューブ、クラムシェル包装、バリア、および／または容器が含まれ得る。
【０１１４】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、動物、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府もしくは州政府の規制機関によって承認されているか、または米国薬局方、欧州薬局方、もしくは他の一般的に認識された薬局方に列挙されていることを意味する。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「核酸」、「核酸分子」という用語および他の同様の用語は交換可能に使用され、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡなどを含む。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、「予防する」、「予防すること」、および「予防」という用語は、本明細書に提供される療法または療法の組み合わせ（例えば、本発明の抗体などの予防剤または治療剤の組み合わせ）の投与によってもたらされる、ｈＢＭＰ６媒介性疾患および／またはそれに関連する症状の発現、再発、発症または転移の完全または部分的な阻害を指す。
【０１１７】
「可溶性」という用語は、ＢＭＰ６およびそのバリアントまたは断片などのポリペプチドを指し、それは天然形態または膜結合性形態において見出される１つ以上の膜貫通ドメインまたは細胞質ドメインを欠いている。一実施形態では、ＢＭＰ６の「可溶性」形態は、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインの両方を欠いている。
【０１１８】
「対象」または「患者」という用語は、哺乳動物を含むがこれに限定されない任意の動物を指す。本明細書で使用される場合、「哺乳動物」という用語は、それらの子に授乳し、かつ生きた子を産むか（真獣類または有胎盤哺乳動物）、産卵するか（後獣類または非胎盤哺乳動物）のいずれかである、任意の脊椎動物を指す。哺乳動物種の例としては、ヒトおよび他の霊長類（チンパンジーおよび他の類人猿およびサル種などの非ヒト霊長類を含む）；ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、およびウマなどの家畜動物；イヌおよびネコなどの飼育哺乳動物；マウス、ラット（コットンラットを含む）、およびモルモットなどの齧歯類を含む実験動物；家禽、野禽、および猟鳥を含む、ニワトリ、シチメンチョウおよび他のキジ類のトリ、カモ、ガチョウなどのトリが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、「実質的にすべて」は、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％を指す。
【０１２０】
本明細書で使用される場合、「治療剤」という用語は、ＢＭＰ６媒介性疾患および／またはそれに関連する症状の治療、管理、または改善に使用され得る任意の薬剤を指す。ある特定の実施形態では、「治療剤」という用語は、本発明の抗体を指す。ある特定の他の実施形態では、「治療剤」という用語は、本発明の抗体以外の薬剤を指す。好ましくは、治療剤は、ＢＭＰ６媒介性疾患もしくはそれに関する１つ以上の症状の治療、管理または改善に有用であることが知られているか、またはそれらのために使用されてきたか、もしくは現在使用されている薬剤である。特定の実施形態では、治療剤は、完全ヒト抗ＢＭＰ６モノクローナル抗体などの完全ヒト抗ＢＭＰ６抗体である。
【０１２１】
本明細書で使用される場合、「療法」という用語は、ＢＭＰ６媒介性疾患（例えば、癌）の予防、管理、治療、および／または改善に使用され得る任意のプロトコル、方法、および／または薬剤を指す。ある特定の実施形態では、「療法（複数可）」という用語は、医療関係者などの当業者に知られている、ＢＭＰ６媒介性疾患の予防、管理、治療、および／または改善に有用な生物学的療法、支持療法、および／または他の療法を指す。
「治療する」、「治療」、および「治療すること」という用語は、１つ以上の療法剤の投与（本発明の抗体などの１つ以上の予防剤または治療剤の投与を含むがこれに限定されない）によってもたらされる、ｈＢＭＰ６媒介性疾患（例えば、癌）の進行、重度、および／または期間の低減または改善を指す。特定の実施形態では、かかる用語は、ＢＭＰ受容体もしくはＨＪＶに対するｈＢＭＰ６の結合の低減もしくは阻害、および／または貧血などのＢＭＰ６媒介性疾患に関連する１つ以上の症状の阻害または低減を指す。
【０１２２】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、軽鎖および重鎖の部分、典型的には、重鎖におけるアミノ末端側の約１２０〜１３０個のアミノ酸、および軽鎖における約１００〜１１０個のアミノ酸を指し、これらは、抗体間で配列が広く異なり、各特定の抗体のそれらの特定の抗原に対する結合性および特異性において使用される。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中し、可変ドメイン中のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ＢＭＰ６および重鎖のＣＤＲは、抗体と抗原との相互作用を主に担う。本明細書で使用されるアミノ酸位置の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ．（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）５ｔｈ  ｅｄ．（「Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．」）にあるようにＥＵインデックスに従う。好ましい実施形態では、可変領域は、ヒト可変領域である。
【０１２３】
細胞生物学および分子生物学における一般用語の定義は、“Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｅｒｃｋ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにより出版），２００６（ＩＳＢＮ  ０−９１１９１０−１９−０）、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｓ．Ｐｏｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｔｈｅ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｔｄ．により出版），１９９４（ＩＳＢＮ  ０−６３２−０２１８２−９）、Ｂｅｎｊａｍｉｎ  Ｌｅｗｉｎ，Ｇｅｎｅｓ  Ｘ（Ｊｏｎｅｓ＆Ｂａｒｔｌｅｔｔ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇにより出版），２００９（ＩＳＢＮ−１０：０７６３７６６３２１）、Ｋｅｎｄｒｅｗ  ｅｔ  ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．により出版），１９９５（ＩＳＢＮ  １−５６０８１−５６９−８）、およびＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２００９，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓに見出すことができる。
【０１２４】
別途記述がない限り、本発明は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（４ｅｄ．），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ（２０１２）、Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ（１９９５）、またはＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｖｏｌ．１５２，Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ａ．Ｒ．Ｋｉｍｍｅｌ  Ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＵＳＡ（１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＣＰＰＳ）（Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＣＰＣＢ）（Ｊｕａｎ  Ｓ．Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）、およびＣｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｂｙ  Ｒ．Ｉａｎ  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５），Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．５７，Ｊｅｎｎｉｅ  Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｂａｒｎｅｓ  ｅｄｉｔｏｒｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９８）に記載されるように、標準的な手順を使用して実施され、これらはすべてそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
他の用語は、本発明の様々な態様の説明の中で本明細書において定義される。
【０１２５】
ＢＭＰ６および鉄
鉄はあらゆる形態の生命にとって必須のものであり、環境から供給されなければならないため、身体における利用可能性と使用は厳重に制御されている。鉄の恒常性の重要な調節因子は、ヘプシジンと呼ばれる２５アミノ酸のペプチドホルモンである。ヘプシジンは肝臓によって産生され、鉄輸送体分子フェロポーチンの発現を制御することにより、主要な鉄摂取および保存区画であるところの十二指腸腸細胞およびマクロファージに鉄を保持させる。ヘプシジン自体は、感染および／または炎症の際の免疫系の活性化ならびに赤血球生成の後に、恒常性制御機序を通じて鉄のレベルによって調節される。重要なことに、ヘプシジンレベルは、慢性炎症状態、感染、および特定の癌において上昇する。上昇したヘプシジンレベルは、腸細胞、マクロファージ、および肝細胞において鉄を隔離し、それによって、ヘモグロビン合成および赤血球生成を抑制する。これは、鉄貯蔵レベルが正常であるにもかかわらず、貧血をもたらす。ヘプシジン遺伝子発現は、ＢＭＰ６（骨形成タンパク質６）と呼ばれる可溶性因子によって制御される。ＢＭＰ６が存在しない場合、サイトカイン単独（または他のＢＭＰ）はＢＭＰ６シグナルの欠損を克服することができないため、ＢＭＰ６はマスター調節因子と考えられている。したがって、本発明者らは、ＢＭＰ６が、例えば慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）におけるような貧血における鉄の恒常性の異常な調節不全を制御するための重要な薬物標的であることに注目した。
【０１２６】
ＢＭＰ６は、マウスおよびヒトにおけるヘプシジン産生の「マスター」調節因子と考えられる高度に保存された可溶性タンパク質因子である。したがって、ＢＭＰ６のマウスへの投与は、ヘプシジンレベルを増加させ、血液および血清の鉄を減少させるが、ＢＭＰ６の阻害剤は逆のことをする。加えて、マウスＢＭＰ６遺伝子のノックアウトまたはＢＭＰ６経路内のヒト突然変異は、ヘプシジンならびに血液および血清の鉄レベルの制御におけるＢＭＰ６の中心的役割を裏付ける。さらに、ＢＭＰ６を標的とする前臨床および臨床評価は、それぞれ、抗ＢＭＰ６抗体をげっ歯類もしくはカニクイザルに投与することによる、またはフェーズＩ試験においてＨＪＶ−Ｆｃ（ＦＭＸ−８、Ｆｅｒｒｕｍａｘ  Ｉｎｃ）を使用してＢＭＰ６中和を行うことによる、利用可能な鉄のレベルの増加に由来する。Ａｎｄｒｉｏｐｏｕｌｏｓ  Ｊｒ．Ｂ，Ｃｏｒｒａｄｉｎｉ  Ｅ，Ｘｉａ  Ｙ，Ｆａａｓｓｅ  ＳＡ，Ｃｈｅｎ  Ｓ，Ｇｒｇｕｒｅｖｉｃ  Ｌ，Ｋｎｕｔｓｏｎ  ＭＤ，Ｐｉｅｔｒａｎｇｅｌｏ  Ａ，Ｖｕｋｉｃｅｖｉｃ  Ｓ，Ｌｉｎ  ＨＹ  ａｎｄ  Ｂａｂｉｔｔ．２００９．ＢＭＰ−６  ｉｓ  ａ  ｋｅｙ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｒｏｎ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４１（４），４８２−４８７、ＷＯ２０１６／０９８０７９およびＵＳ８９８０５８２が参照される。
【０１２７】
抗ＢＭＰ６抗体および断片
本発明は、様々な抗ＢＭＰ６抗体および断片（ＦａｂまたはｓｃＦｖ断片など）、使用、方法および組み合わせ（例えば、ＥＳＡとの）を提供する。例は、以下の付番された条項に記載される。
【０１２８】
１．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、結合部位が、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ＤＨ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされるＶＨドメインを含み、ＶＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＶ３−１１およびＩＧＨＶ１−３から選択される、抗体または断片。
【０１２９】
例えば、ＶＨ遺伝子セグメントはＩＧＨＶ３−１１であり、ＤＨ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントはヒト遺伝子セグメントである。例えば、ＶＨ遺伝子セグメントはＩＧＨＶ１−３であり、ＤＨ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントはヒト遺伝子セグメントである。任意選択で、ＶＨセグメントは、ヒトＩＧＨＶ３−１１＊０１遺伝子セグメントである。あるいは、任意選択で、ＶＨセグメントは、ヒトＩＧＨＶ１−３＊０１遺伝子セグメントである。
【０１３０】
一例では、特異的結合は、以下でさらに記載されるように、ＫＤ、Ｋｏｆｆおよび／またはＫｏｎを伴うものである。一例では、特異的結合は、１ｐＭ〜５ｎＭのＫＤを伴うものである。
【０１３１】
当業者は、ヒトおよび他の種の抗体遺伝子セグメントに関するデータベースおよび他の情報源に精通している。例えば、２０１８年９月１日でのバージョンである、ＩＭＧＴデータベース（ｗｗｗ．ＩＭＧＴ．ｏｒｇ）は、好適な供給源である。
【０１３２】
ＩＧＨＶ１−３に基づく抗体を示す表７および８を参照する。驚くべきことに、このヒトＶＨ遺伝子セグメントは、例えば、実施例に記載されているもののような、望ましい抗ＢＭＰ６特性を有する抗ＢＭＰ６抗体を産生する。
【０１３３】
ＩＧＨＶ３−１１に基づく抗体を示す表９を参照する。驚くべきことに、このヒトＶＨ遺伝子セグメントは、例えば、実施例に記載されているもののような、望ましい抗ＢＭＰ６特性を有する抗ＢＭＰ６抗体を産生する。したがって、例えば、抗体または断片は、配列番号１１０、１１３、２９０、２９３、３０８、３１１、２７２および２７５から選択されるＣＤＲＨ３配列を含む。例えば、抗体または断片は、配列番号１１９、１２２、２９９、３０２、３１７、３２０、２８１および２８４から選択されるＣＤＲＬ３配列を含む。例えば、抗体または断片は、配列番号１１０、１１３、２９０、２９３、３０８、３１１、２７２および２７５から選択されるＣＤＲＨ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１１９、１２２、２９９、３０２、３１７、３２０、２８１および２８４から選択されるＣＤＲＬ３配列を含む。
【０１３４】
例えば、抗体または断片は、配列番号１１０および１１３から選択されるＣＤＲＨ３配列、ならびに配列番号１１９および１２２から選択されるＣＤＲＬ３配列を含む。例えば、抗体または断片は、抗ＢＭＰ６結合部位を含み、結合部位が、配列番号１１９を含むＶＬドメインと対形成する配列番号１１０を含むＶＨドメインを含む。例えば、抗体または断片は、抗ＢＭＰ６結合部位を含み、結合部位が、配列番号１２２を含むＶＬドメインと対形成する配列番号１１３を含むＶＨドメインを含む。
【０１３５】
例えば、抗体または断片は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６およびＣＬ−５８７２２から選択される抗体のＣＤＲＨ３配列、ならびに任意選択でかかる選択された抗体のＣＤＲＬ３を含む。例えば、抗体または断片は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６およびＣＬ−５８７２２から選択される抗体のＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ３配列、ならびに任意選択でかかる選択された抗体のＣＤＲＬ２を含む。例えば、抗体または断片は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６およびＣＬ−５８７２２から選択される抗体のＣＤＲＨ１およびＣＤＲＨ２配列を含む。例えば、抗体または断片は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６およびＣＬ−５８７２２から選択される抗体のＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３配列を含む。例えば、抗体または断片は、抗ＢＭＰ６結合部位を含み、結合部位が、ＣＬ−５８８３８のＶＬドメインと対形成するＣＬ−５８８３８のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む。
【０１３６】
例えば、抗体または断片は、抗ＢＭＰ６結合部位を含み、結合部位が、それぞれ配列番号１２３、３０３、３２１または２８５を含むＶＬドメインと任意選択で対形成する配列番号１１４、２９４、３１２または２７６を含むＶＨドメインを含む。例えば、抗体または断片は、抗ＢＭＰ６結合部位を含み、結合部位が、配列番号１２３を含むＶＬドメインと対形成する配列番号１１４を含むＶＨドメインを含む。
【０１３７】
例えば、抗体または断片は、抗ＢＭＰ６結合部位を含み、結合部位が、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６およびＣＬ−５８７２２から選択される抗体のＶＨドメインを含み、任意選択でかかる選択された抗体のＶＬドメインと対形成する。例えば、抗体または断片は、抗ＢＭＰ６結合部位を含み、結合部位が、ＣＬ−５８８３８のＶＬドメインと対形成するＣＬ−５８８３８のＶＨドメインを含む。
【０１３８】
２．ＤＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＤ３−１０、ＩＧＨＤ６−１９、ＩＧＨＤ７−２７、ＩＧＨＤ４−２３、ＩＧＨＤ５−１８、ＩＧＨＤ３−２２およびＩＧＨＤ３−１６から選択されるヒト遺伝子セグメントである、条項１に記載の抗体または断片。
【０１３９】
任意選択で、ＤＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＤ３−１０＊０１、ＩＧＨＤ６−１９＊０１、ＩＧＨＤ７−２７＊０２、ＩＧＨＤ４−２３＊０１、ＩＧＨＤ５−１８＊０１、ＩＧＨＤ３−２２＊０１およびＩＧＨＤ３−１６＊０２から選択される。
【０１４０】
３．ＪＨ遺伝子セグメントが、ＩＧＨＪ３、ＩＧＨＪ４およびＩＧＨＪ５から選択されるヒト遺伝子セグメントである、条項１または２に記載の抗体または断片。
【０１４１】
任意選択で、ＪＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＪ３＊０２、ＩＧＨＪ４＊０２およびＩＧＨＪ５＊０２から選択される。
【０１４２】
４．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、条項１〜３のいずれかに記載の抗ＢＭＰ６抗体のＣＤＲＨ３配列を含む抗体または断片。
【０１４３】
５．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、本明細書に開示される任意の抗ＢＭＰ６抗体のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメイン（例えば、本明細書の表４〜１１のいずれかに列挙される抗体または断片から選択される任意の抗体）、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ３を含む抗体または断片。
【０１４４】
６．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメイン、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該配列を含む（任意選択で条項１〜５のいずれかに記載の）抗体または断片。 
【０１４５】
任意選択で、ＶＨドメインは、配列番号１１０または１１３から選択されるＣＤＲＨ３配列を含み、または該選択された配列は３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む。
【０１４６】
７．ＶＨドメインは、（ｉ）ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＣＤＲＨ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ３配列、ならびに（ｉｉ）該選択される抗体のＣＤＲＨ１配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ１配列を含む、条項６に記載の抗体または断片。
【０１４７】
任意選択で、抗体または断片のＶＨドメインは、（ａ）配列番号１１０もしくは１１３のＣＤＲＨ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ３配列、および（ｂ）配列番号１０８もしくは１１１のＣＤＲＨ１配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ１配列を含む。
【０１４８】
８．ＶＨドメインは、（ｉｉｉ）ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＣＤＲＨ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ３配列、および（ｉｖ）該選択される抗体のＣＤＲＨ２配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ２配列を含む、条項６または７に記載の抗体または断片。
【０１４９】
任意選択で、抗体または断片のＶＨドメインは、（ｃ）配列番号１１０もしくは１１３のＣＤＲＨ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ３配列、および（ｄ）配列番号１０９もしくは１１２のＣＤＲＨ２配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ２配列を含む。
【０１５０】
任意選択で、抗体または断片のＶＨドメインは、（ｅ）配列番号１１０もしくは１１３のＣＤＲＨ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ３配列、（ｆ）配列番号１０８もしくは１１１のＣＤＲＨ１配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ１配列、および（ｇ）配列番号１０９もしくは１１２のＣＤＲＨ２配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＨ２配列を含む。
【０１５１】
９．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、結合部位が、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸を含む、（任意選択で条項１〜８のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１５２】
例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０１５３】
任意選択で、抗体または断片のＶＨドメインは、配列番号１１４のアミノ酸配列、または配列番号１１４と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む。例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０１５４】
１０．該ＶＨドメインの第１および第２のコピーを含む、条項１〜９のいずれかに記載の抗体または断片。
【０１５５】
一例では、抗体または断片は、本発明のＶＬドメインと対形成する本発明のＶＨドメインを含む結合部位を含み、結合部位は、ＢＭＰ６に特異的に結合することができる（例えば、成熟ＢＭＰ６、例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＢＭＰ６）。例えば、抗体または断片は、かかる結合部位のうちの２つを含む。
【０１５６】
１１．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、結合部位が、ヒトＶＬ遺伝子セグメントおよびＪＬ遺伝子セグメントの組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされるＶＬドメインを含み、ＶＬ遺伝子セグメントが、ＩＧＫＶ３−２０、ＩＧＫＶ１−５およびＩＧＫＶ３−１５から選択される、（任意選択で条項１〜１０のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１５７】
例えば、ＶＬ遺伝子セグメントは、ＩＧＫＶ３−２０、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１である。例えば、ＶＬ遺伝子セグメントは、ＩＧＫＶ１−５、例えば、ＩＧＫＶ１−５＊０３である。例えば、ＶＬ遺伝子セグメントは、ＩＧＫＶ３−１５、例えば、ＩＧＫＶ３−１５＊０１である。
【０１５８】
１２．ＶＬはＶκであり、ＪＬ遺伝子セグメントは、ＩＧＫＪ１およびＩＧＫＪ３から選択されるヒト遺伝子セグメントである、条項１１に記載の抗体または断片。
【０１５９】
任意選択で、ＪＬ遺伝子セグメントは、ＩＧＫＪ１＊０１およびＩＧＫＪ３＊０１から選択される。
【０１６０】
１３．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、条項１１または１２に記載の抗ＢＭＰ６抗体のＣＤＲＬ３配列を含む抗体または断片。
【０１６１】
１４．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、本明細書に開示される任意の抗ＢＭＰ６抗体のＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメイン（例えば、本明細書の表４〜１１のいずれかに列挙される抗体または断片から選択される任意の抗体）、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該選択されたＣＤＲＬ３を含む、（任意選択で条項１〜１３のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１６２】
１５．該選択された抗体のＣＤＲＨ３配列を含むＶＨドメインを含む、条項１４の抗体または断片。
【０１６３】
１６．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、配列番号１１９もしくは１２２から選択されるＣＤＲＬ３配列を含むＶＬドメイン、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該選択されたＣＤＲＬ３配列を含む、（任意選択で条項１〜１５のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１６４】
１７．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＣＤＲＬ３（および任意選択でＣＤＲＨ３）配列を含むＶＬドメイン、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む各該配列を含む、（任意選択で条項１〜１６のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１６５】
任意選択で、ＶＬドメインは、配列番号１１９もしくは１２２から選択されるＣＤＲＬ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該選択された配列を含み、かつ／または任意選択で、ＶＨドメインは、配列番号１１９もしくは１２２から選択されるＣＤＲＨ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該選択された配列を含む。
【０１６６】
１８．ＶＬドメインは、（ｉ）ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＣＤＲＬ３配列（および任意選択でＣＤＲＨ３）、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む各該ＣＤＲ３配列（複数可）、および（ｉｉ）該選択された抗体のＣＤＲＬ１（および任意選択でＣＤＲＨ１）配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む各該ＣＤＲ１配列（複数可）を含む、条項１７に記載の抗体または断片。
【０１６７】
任意選択で、抗体または断片のＶＬドメインは、（ａ）配列番号１１９もしくは１２２のＣＤＲＬ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＬ３配列、および（ｂ）配列番号１１７もしくは１２０のＣＤＲＬ１配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＬ１配列を含む。
【０１６８】
１９．ＶＬドメインは、（ｉｉｉ）ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＣＤＲＬ３（および任意選択でＣＤＲＨ３）配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む各該ＣＤＲ３配列（複数可）、および（ｉｖ）該選択された抗体のＣＤＲＬ２（および任意選択でＣＤＲＨ２）配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む各該ＣＤＲ２配列（複数可）を含む、条項１７または１８に記載の抗体または断片。
【０１６９】
任意選択で、抗体または断片のＶＬドメインは、（ｃ）配列番号１１９もしくは１２２のＣＤＲＬ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＬ３配列、および（ｄ）配列番号１１８もしくは１２１のＣＤＲＬ２配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＬ２配列を含む。
【０１７０】
任意選択で、抗体または断片のＶＬドメインは、（ｅ）配列番号１１９もしくは１２２のＣＤＲＬ３配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＬ３配列、（ｆ）配列番号１１７もしくは１２０のＣＤＲＬ１配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＬ１配列、および（ｇ）配列番号１１８もしくは１２１のＣＤＲＬ２配列、または３、２もしくは１個のアミノ酸置換（複数可）を含む該ＣＤＲＬ２配列を含む。
【０１７１】
２０．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合する結合部位を含む抗体または断片であって、結合部位が、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸を含む、（任意選択で条項１〜１９のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１７２】
例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０１７３】
任意選択で、抗体または断片のＶＬドメインは、配列番号１２３のアミノ酸配列、または配列番号１２３と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一である重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む。例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０１７４】
２１．該ＶＬドメインの第１および第２のコピーを含む、条項１〜２０のいずれかに記載の抗体または断片。
【０１７５】
一例では、抗体または断片は、ＶＨドメインと対形成する本発明のＶＬドメインを含む結合部位を含み、結合部位は、ＢＭＰ６に特異的に結合することができる（例えば、成熟ＢＭＰ６、例えば、ヒトおよび／またはカニクイザルＢＭＰ６）。例えば、抗体または断片は、かかる結合部位のうちの２つを含む。
【０１７６】
２２．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体の重鎖アミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸を含む、（任意選択で条項１〜２１のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１７７】
例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０１７８】
２３．骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）に特異的に結合し、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体の軽鎖アミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸を含む、（任意選択で条項１〜２２のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１７９】
例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０１８０】
２４．該選択された抗体の軽鎖アミノ酸配列、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸を含む、条項２３の抗体または断片。
【０１８１】
例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０１８２】
２５．条項１〜２４のいずれかに記載の抗体が結合するエピトープと同一であるヒトＢＭＰ６エピトープに特異的に結合する、（任意選択で条項１〜２４のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１８３】
２６．エピトープが、無関係のアミノ酸スキャン、またはＸ線結晶構造解析によって同定される、条項２５に記載の抗体または断片。
【０１８４】
抗体と抗原との相互作用に関与する接触アミノ酸残基は、当業者に既知の様々な方法によって判定され得る。
【０１８５】
一実施形態では、抗原配列のアミノ酸の連続的置換（抗原のコード配列のＤＮＡを変異させるために標準的な分子生物学技術を使用する）、この場合、アラニン（別名、アラニンスキャン）または別の無関係のアミノ酸によるＢＭＰ６の置換は、その変異により抗体が目的の抗原を認識する能力を低減させるか、または取り除かれることになる残基を提供し得る。結合は、限定されるものではないが、ＳＰＲ、ＨＴＲＦ、ＥＬＩＳＡ（本明細書の他の箇所に記載されている）などの標準的な技術を使用して評価され得る。抗原配列アミノ酸の側鎖の電荷を変える（例えば、リジンをグルタミン酸に変える）、極性および非極性残基を交換する（例えば、セリンをロイシンに変える）などのように、結合の途絶を高めるために他の置換を行ってもよい。アラニンスキャンまたは他のアミノ置換法は、組換え可溶性抗原を用いてか、または標的が細胞膜標的である場合には、変異したバージョンの一過性もしくは安定性発現を使用して細胞上に直接的にかのいずれかで実行することができる。
【０１８６】
一実施形態では、抗体と抗原との間の接触残基を判定する（すなわち、抗体が結合するエピトープを判定する）ために、タンパク質結晶構造解析が使用され得、結晶構造解析は、抗体−抗原相互作用に関与する接触残基の直接視覚化を可能にする。標準的なＸ線結晶構造解析と並んで、抗体とＨＩＶカプシドタンパク質との間の接触残基を判定するために低温電子顕微鏡法が使用されてきた（Ｌｅｅ，Ｊｅｏｎｇ  Ｈｙｕｎ，ｅｔ  ａｌ．”Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  ａ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｏｎ  ｇｐ４１  ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ  ＨＩＶ−１  ｂｙ  ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｅｎｖ  ｓｐｉｋｅ．”，Ｎａｔｕｒｅ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，６，（２０１５）を参照）。
【０１８７】
一実施形態では、抗体が線状エピトープを認識した場合、抗原配列に基づいて短鎖ペプチドが産生され得、これらのペプチドに対する抗体の結合は、これらに限定されないが、ＳＰＲ、ＨＴＲＦ、ＥＬＩＳＡ（これらは本明細書の他の箇所に記載されている）などの標準的な技術を使用して評価され得る。エピトープのさらなる調査は、結合を示す任意のペプチド上でアラニンスキャンを実施することによって提供され得る。直鎖状ペプチドの代わりに、骨格上へのペプチドの化学結合を使用するＰｅｐｓｃａｎ技術（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｅｐｓｃａｎ．ｃｏｍ／）を使用して構造的スキャンが実行され得、これは、ＣＤ２０標的化抗体上の非連続性エピトープを判定するために使用されている（Ｎｉｅｄｅｒｆｅｌｌｎｅｒ，Ｇｅｒｈａｒｄ，ｅｔ  ａｌ．”Ｅｐｉｔｏｐｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ＧＡ１０１  ｐｒｏｖｉｄｅ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｔｙｐｅ  Ｉ／ＩＩ  ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ２０  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．”，Ｂｌｏｏｄ，１１８．２，（２０１１），３５８−３６７）。
【０１８８】
一実施形態では、限定タンパク質消化および質量分光光度測定を使用して、結合エピトープを同定することができる。抗体−抗原複合体は、トリプシンなどであるがこれに限定されないプロテアーゼによって消化される。消化された複合体ペプチドを抗体単独および抗原単独の消化質量分光光度測定と比較して、特定のエピトープが複合体形成によって保護されているかどうかを判定する。相互作用に関与する個々のアミノ酸残基を絞るために、アミノ酸置換を伴うさらなる作用である競合結合が用いられ得る（例えば、Ｓｕｃｋａｕ，Ｄｅｔｌｅｖ，ｅｔ  ａｌ．”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａｎ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ａｎｄ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍａｐｐｉｎｇ．”，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，８７．２４，（１９９０），９８４８−９８５２を参照）。
【０１８９】
したがって、一実施形態では、エピトープの接触残基は、無関係のアミノ酸スキャン（例えば、アラニンスキャン）を用いて同定される。別の実施形態では、無関係のアミノ酸スキャン（例えば、アラニンスキャン）は、ＳＰＲ、ＨＴＲＦ、ＥＬＩＳＡ、Ｘ線結晶構造解析、低温電子顕微鏡法、および限定タンパク質消化と質量分析法との組み合わせから選択される技術を使用して実行される。一実施形態では、無関係のアミノ酸スキャン（例えば、アラニンスキャン）は、ＨＴＲＦを使用して実行される。一実施形態では、無関係のアミノ酸スキャン（例えば、アラニンスキャン）は、ＥＬＩＳＡを使用して実行される。
アラニンスキャンがＥＬＩＳＡまたはＨＴＲＦのいずれかを用いて実行されるとき、シグナルの低減が少なくとも２５％である場合に、アミノ酸残基はエピトープに寄与するものとして同定される。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも３０％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも３５％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも４０％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも４５％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも５０％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも５５％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも６０％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも７０％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも７５％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも８０％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも８５％である。一実施形態では、シグナルの低減は、少なくとも９０％である。
アラニンスキャンがＳＰＲを用いて実行されるとき、親和性の少なくとも１０倍の低減が存在する場合に、アミノ酸残基はエピトープに寄与するものとして同定される。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも１５倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも２０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも３０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも４０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも５０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも１００倍である。
【０１９０】
一実施形態では、エピトープの接触残基は、Ｘ線結晶構造解析によって同定される。一実施形態では、エピトープの接触残基は、低温電子顕微鏡法によって同定される。一実施形態では、エピトープの接触残基は、限定タンパク質消化と質量分析法との組み合わせによって同定される。
【０１９１】
２７．エピトープの接触残基が、ＳＰＲによって判定される、無関係のアミノ酸スキャン、例えばアラニンスキャンにおける親和性の少なくとも１０倍の低減によって定義される、条項２６に記載の抗体または断片。
【０１９２】
一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも１５倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも２０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも３０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも４０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも５０倍である。一実施形態では、親和性の低減は、少なくとも１００倍である。
ＳＰＲは、本明細書に記載されるように実行され得る。
【０１９３】
２８．ヒトＢＭＰ６への結合について、条項１〜２７のいずれかの抗体と競合する、（任意選択で条項１〜２７のいずれかに記載の）抗体または断片。
【０１９４】
任意選択で、競合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）またはＥＬＩＳＡによって判定される。当業者は、例えば、これらの技術および標準条件に精通しているであろう。
【０１９５】
一実施形態では、抗体または断片は、細胞表面発現ｈＢＭＰ６への結合についてｈＢＭＰ６（またはその融合タンパク質）と競合する（例えば、用量依存的様式で）。一実施形態では、抗体または断片は、可溶性ｈＢＭＰ６への結合についてｈＢＭＰ６（またはその融合タンパク質）と競合する（例えば、用量依存的様式で）。
【０１９６】
任意選択で、ｈＢＭＰ６への結合についての競合はＳＰＲを使用して実施される。ＳＰＲは、本明細書に記載されるように実行され得る。
【０１９７】
２９．配列番号５６２を含むヒトＢＭＰ６、および／または配列番号５６４を含むカニクイザルＢＭＰ６、および／または配列番号５６３を含むラットＢＭＰ６に特異的に結合する、条項１〜２８のいずれかに記載の抗体または断片。
【０１９８】
任意選択で、本発明の抗体または断片は、配列番号５６２のアミノ酸配列に特異的に結合する。任意選択で、本発明の抗体または断片は、配列番号５６３のアミノ酸配列に特異的に結合する。任意選択で、本発明の抗体または断片は、配列番号５６４のアミノ酸配列に特異的に結合する。
【０１９９】
一例では、本明細書のＢＭＰ６は、ヒト、マウス、またはカニクイザルのＢＭＰ６である。
【０２００】
一実施形態では、抗体または断片は、１ｎＭ未満（例えば、１ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または１ｎＭ〜０．１ｐＭ、または１ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、１０ｎＭ未満（例えば、１０ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または１０ｎＭ〜０．１ｐＭ、または１０ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、０．１ｎＭ未満（例えば、０．１ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または０．１ｎＭ〜０．１ｐＭ、または０．１ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、０．０１ｎＭ未満（例えば、０．０１１ｎＭ〜０．０１ｐＭまたは０．０１ｎＭ〜０．１ｐＭ）の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。
【０２０１】
一実施形態では、抗体または断片は、ｈＢＭＰ６に対する親和性の２倍以内の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＢＭＰ６に対する親和性の４倍以内の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＢＭＰ６に対する親和性の５倍以内の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＢＭＰ６に対する親和性の６倍以内の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＢＭＰ６に対する親和性の８倍以内の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、ｈＢＭＰ６に対する親和性の１０倍以内の親和性でカニクイザルＢＭＰ６に結合する。
本明細書の「ｈＢＭＰ６」は、ヒトＢＭＰ６、例えば、配列番号５６２を含む、例えば、本明細書に開示されるヒトＢＭＰ６である。
【０２０２】
一実施形態では、抗体または断片は、カニクイザルＢＭＰ６に検出可能に結合しない。一実施形態では、抗体または断片は、マウス（ｍｕｒｉｎｅ）（例えば、マウス（ｍｏｕｓｅ）および／またはラット）ＢＭＰ６に検出可能に結合しない。
【０２０３】
一実施形態では、抗体または断片は、１ｎＭ未満（例えば、１ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または１ｎＭ〜０．１ｐＭ、または１ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でマウス（例えば、マウスおよび／またはラット）ＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、１０ｎＭ未満（例えば、１０ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または１０ｎＭ〜０．１ｐＭ、または１０ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でマウスＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、０．１ｎＭ未満（例えば、０．１ｎＭ〜０．０１ｐＭ、または０．１ｎＭ〜０．１ｐＭ、または０．１ｎＭ〜１ｐＭ）の親和性でマウスＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、抗体または断片は、０．０１ｎＭ未満（例えば、０．０１１ｎＭ〜０．０１ｐＭまたは０．０１ｎＭ〜０．１ｐＭ）の親和性でマウスＢＭＰ６に結合する。
【０２０４】
任意選択で、抗体または断片が、ヒト定常領域などのエフェクター可能化またはエフェクター無効定常領域、例えばエフェクターヌルヒト定常領域、例えばＩｇＧ４定常領域またはＩｇＧ１定常領域を含み、任意選択で、定常領域がＩｇＧ４−ＰＥ、または欠損したＩｇＧ１（ｄｉｓａｂｌｅｄ  ＩｇＧ１）である。任意選択で、抗体または断片は、マウス（例えば、マウスおよび／またはラット）定常領域を含む。任意選択で、抗体または断片は、本明細書に記載される重鎖定常領域配列のいずれかを含む。
【０２０５】
任意選択で、定常領域は、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性を有する。
【０２０６】
３０．抗体または断片が、ヒト定常領域、例えば、ＩｇＧ４定常領域またはＩｇＧ１定常領域を含む、条項１〜２９のいずれかに記載の抗体または断片。
【０２０７】
例えば、定常領域は、重鎖定常領域を含み、この重鎖定常領域は配列番号４２９、４３１、４３３、４３５、４３７、４３９、４４０、４４２、４４４、４４６、４４８、４５０、４５４または４５６のアミノ酸配列を含む。任意選択で、重鎖Ｃ領域は、配列番号４２９、４３１、４３３、４３５または４３７のアミノ酸配列を含むＩＧＨＧ１  Ｃ領域である。任意選択で、重鎖Ｃ領域は、配列番号４３９、４４０、４４２または４４４のアミノ酸配列を含むＩＧＨＧ２  Ｃ領域である。任意選択で、重鎖Ｃ領域は、配列番号４４６、４４８、４５０、４５４または４５６、好ましくは配列番号４５４、好ましくは配列番号４５６のアミノ酸配列を含むＩＧＨＧ４  Ｃ領域である。一例では、重鎖Ｃ領域は、配列番号４５１、４５２または４５３を含む核酸によってコードされる。
【０２０８】
一例では（任意選択で、直前の段落のような重鎖領域に加えて）、定常領域は、軽鎖定常領域を含み、この軽鎖定常領域は配列番号４５８、４６０、４６２、４６４、４６６、４６８、４７０、４７３、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８または４９０のアミノ酸配列を含む。任意選択で、軽鎖Ｃ領域は、配列番号４５８、４６０、４６２、４６４または４６６、好ましくは配列番号４５８のアミノ酸配列を含むＩＧＫＣ  Ｃ領域である。任意選択で、軽鎖Ｃ領域は、配列番号４６８、４７０、４７３、４７６、４７８、４８０、４８２、４８４、４８６、４８８または４９０のアミノ酸配列を含むＩＧＬＣ  Ｃ領域である。
【０２０９】
３１．定常領域がＩｇＧ４−ＰＥ定常領域である、条項３０に記載の抗体または断片。
【０２１０】
任意選択で、抗体または断片は、重鎖定常領域を含み、定常領域は、配列番号４５４のアミノ酸配列を含む。
【０２１１】
本発明に記載の抗ＢＭＰ６抗体または断片が、ヒト定常領域などの定常領域、例えばエフェクターヌルヒト定常領域、例えばＩｇＧ４定常領域またはＩｇＧ１定常領域を含み、任意選択で、定常領域がＩｇＧ４−ＰＥ、または本発明の配列表に定義されるような欠損したＩｇＧ１である。
【０２１２】
他の実施形態では、抗体または断片は、本明細書に記載のアイソタイプまたは定常領域のいずれかである。一実施形態では、定常領域は野生型ヒトＩｇＧ１である。例えば、定常領域は、エフェクター可能化ＩｇＧ１定常領域であり、任意選択で、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を有する。一実施形態では、定常領域は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣおよび／またはＡＤＣＰの増強のために操作されている。別の実施形態では、定常領域は、エフェクター機能の増強のために操作されている。
【０２１３】
ＩｇＧ４定常領域は、ＩｇＧ４定常領域アミノ酸配列のいずれかであり得るか、または本明細書の配列表の核酸配列のいずれかによってコードされ得る。重鎖定常領域は、Ｌｅｕ２３５Ｇｌｕ変異およびＳｅｒ２２８Ｐｒｏ変異の両方を含むＩｇＧ４であってもよい。この「ＩｇＧ４−ＰＥ」重鎖定常領域（例については配列表を参照）はエフェクターヌルである。
【０２１４】
代替的なエフェクターヌルヒト定常領域は、Ｌ２３５Ａおよび／またはＧ２３７Ａ変異（例えば、ＬＡＧＡ、配列表を参照）を含むＩｇＧ１＊０１対立遺伝子である、欠損したＩｇＧ１である。一実施形態では、本明細書に開示される抗体または抗体断片は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含み、配列は、２３５位および／または２３７位でアラニンを含有する（ＥＵインデックス付番）。
【０２１５】
Ｆｃ媒介性効果の効力は、当業者には明らかとなるような技術のいずれかによってＦｃドメインを操作することによって増強され得る。別の実施形態では、本明細書に開示される抗体および断片は、ＦｃＲｎへの結合を増強させる三重変異（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）を含み得る。
【０２１６】
３２．別の標的抗原（任意選択でヒトヘモジュベリン、トランスフェリン受容体（例えば、ＴＦＲ２）またはＢＭＰ受容体（例えば、ＢＭＰＲＩまたはＢＭＰＲＩＩ）に特異的に結合するか、またはＢＭＰ６および別のＢＭＰ（例えば、ＢＭＰ２、４、７または９）に結合する抗原結合部位をさらに含む、条項１〜３１のいずれかに記載の抗体または断片（例えば、二重特異性抗体）。
【０２１７】
例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６およびＢＭＰ２に特異的に結合する。例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６およびＨＪＶに特異的に結合する。例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６およびＢＭＰＲＩ（すなわち、ＢＭＰＲ１、例えば、ＢＭＰＲ１ＡまたはＢＭＰＲ１Ｂ）に特異的に結合する。例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６およびＢＭＰＲＩＩに特異的に結合する。例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６および２に特異的に結合する。例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６および４に特異的に結合する。例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６および９に特異的に結合する。例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６および７に特異的に結合する。例えば、二重特異性抗体は、ＢＭＰ６およびＴＦＲ２に特異的に結合する。
【０２１８】
一例では、さらなる結合部位は、該別の抗原のアゴニスト結合部位である。一例では、さらなる結合部位は、該別の抗原のアンタゴニスト結合部位である。
【０２１９】
一例では、さらなる結合部位は、ＶＨおよびＶＬを含む抗体結合部位、抗体の定常ドメイン（Ｆｃａｂ結合部位）または非免疫グロブリン結合部位（例えば、フィブロネクチンドメイン）によって構成される結合部位である。任意選択で、抗原結合部位は、本明細書に開示される任意の抗原結合部位である。
【０２２０】
例えば、抗体または断片は、二重特異性抗体または断片である。例えば、抗体または断片は、二重結合抗体または断片、または条項１〜３１に記載の抗体またはその断片を含む融合タンパク質である。二重結合抗体は、上記の記載の意味を有する。
【０２２１】
一例では、条項２４または２４ａの抗体、断片または融合タンパク質は、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、特にｍＡｂ２、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対およびＦＩＴ−Ｉｇ、例えばｍＡｂ２およびＦＩＴ−Ｉｇを有するノブ・イン・ホールから選択される二重特異性フォーマットを含む。
【０２２２】
一実施形態では、二重特異性フォーマットは、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ボディ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙから選択される。
【０２２３】
一実施形態では、二重特異性フォーマットは、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ボディ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙ、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ＦＩＴ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、とりわけ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、ならびにＦＩＴ−Ｉｇ、例えばＦＩＴ−Ｉｇから選択される。
【０２２４】
一実施形態では、二重特異性フォーマットは、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ボディ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙ、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ２、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、とりわけ、ｍＡｂ２、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、ならびに共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、例えばｍＡｂ２から選択される。
【０２２５】
一実施形態では、二重特異性フォーマットは、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、Ｆａｂ−アーム交換、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ−Ｙ、Ｆｃａｂ、κλ−ボディ、直交Ｆａｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ−ＣＨ３  ＫＩＨ、ｓｃＦｖ−ＣＨ−ＣＬ−ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＫＩＨ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、４価のＨＣａｂ、ＩｍｍＴＡＣ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、ＤＴ−ＩｇＧ、ＤｕｔａＭａｂ、ＩｇＧ（Ｈ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−（Ｌ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ，Ｈ）−Ｆｖ、ＩｇＧ（Ｈ）−Ｖ、Ｖ（Ｈ）−ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）−Ｖ、Ｖ（Ｌ）−ＩｇＧ、ＫＩＨ  ＩｇＧ−ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ−ＩｇＧ、ＩｇＧ−２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４−Ｉｇ、ならびにｚｙｂｏｄｙ、例えば、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｍＡｂ−ｄＡｂ、ドック・ロック、ＳＥＥＤｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−Ｆｃ、ダイアボディ−Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆａｂ−ｓｃＦｖ、細胞内抗体、ＢｉＴＥ、ダイアボディ、ＤＡＲＴ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ、ｓｃＤｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、Ｄｉａｂｏｄｙ−ＣＨ３、ミニボディ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、電荷対、共通の軽鎖を有する電荷対、とりわけ、ノブ・イン・ホール、共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホール、共通の軽鎖および電荷対を有するノブ・イン・ホール、ならびに共通の軽鎖を有するノブ・イン・ホールから選択される。
【０２２６】
３３．対象におけるＢＭＰ６媒介性疾患または状態（例えば、貧血）を治療または予防するための、条項１〜３２のいずれかに記載の抗ＢＭＰ６抗体または断片。
【０２２７】
一例では、対象は、ヒトである。代替手段では、対象は、非ヒト動物である。一例では、対象は、成人である。一例では、対象は、乳幼児である。一例では、対象は、透析治療を受けているヒトＣＫＤ患者である。一例では、対象は、末期腎疾患を有するヒトである。
【０２２８】
一例では、本発明の抗体または断片は、貧血、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）（例えば、原発性ＰＡＨまたは二次性ＰＡＨ）、脳海綿状血管腫（ＣＣＭ）（例えば、家族性ＣＣＭまたは孤発性ＣＣＭ）、レストレスレッグス症候群（ＲＬＳ）、癌（例えば、乳癌、膵癌、結腸直腸癌、唾液腺癌、食道癌または黒色腫）、癌転移、全身性硬化症、シェーグレン症候群、内皮間葉転換（ＥｎｄｏＭＴ）、心血管疾患、アテローム硬化症、全身性硬化症関連肺線維症および心臓線維症から選択される対象（例えば、ヒト）における疾患または状態を治療または予防するためのものである。
【０２２９】
ＥｎｄｏＭＴによって媒介される疾患または状態の例は、心血管疾患、アテローム硬化症、全身性硬化症関連肺線維症、心臓線維症、ＰＡＨ、腫瘍形成、腫瘍浸潤、腫瘍転移、線維性疾患、および癌関連線維芽細胞の生成である（例えば、膵臓癌）。
【０２３０】
一例では、疾患または状態は、ヒトにおいてである。一例では、疾患または状態は、動物においてである。
【０２３１】
一例では、本発明の抗体または断片は、例えば、腫瘍性もしくは非腫瘍性疾患、慢性ウイルス感染症、および悪性腫瘍、例えば黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、中皮腫、ウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）、軟部肉腫、血液系腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキン病、およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、黒色腫、メルケル細胞癌、非小細胞肺癌（扁平上皮および非扁平上皮）、腎細胞癌、膀胱癌、頭頚部扁平上皮癌、および中皮腫、または例えばウイルス誘導性癌（例えば子宮頸癌および上咽頭癌）および軟部肉腫）から選択される、ヒトにおいてＴＩＧＩＴ媒介性疾患または状態を治療または予防するためのものである。
【０２３２】
一例では、ＢＭＰ６媒介性疾患または状態は、例えば、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、一次性進行型多発性硬化症、二次性進行型多発性硬化症、大脳皮質基底核変性症、レット症候群、加齢黄斑変性および網膜色素変性症から選択される網膜変性障害、前部虚血性視神経症、緑内障、ブドウ膜炎、うつ病、外傷関連ストレスまたは心的外傷後ストレス障害、前頭側頭型認知症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、後皮質萎縮、原発性進行性失語および進行性核上性麻痺または加齢認知症から選択される、神経変性疾患、障害、または状態であり、特に、神経変性疾患、障害、または状態は、アルツハイマー病、筋委縮性側索硬化症、パーキンソン病、およびハンチントン病から選択され、例えば、アルツハイマー病である。
【０２３３】
一例では、本発明の抗体、断片、組み合わせは、対象に静脈内投与されるか、または対象への静脈内投与用である。一例では、本発明の抗体、断片、組み合わせは、対象に皮下投与されるか、または対象への皮下投与用である。
【０２３４】
３４．抗体または断片が、エリスロポエチン促進剤（ＥＳＡ）と同時にまたは順次対象に投与される、条項３３に記載の抗体または断片。
【０２３５】
３５．ある量の抗ＢＭＰ６抗体または断片と、ある量のＥＳＡとの組み合わせ（例えば、複数回用量の該抗体および／またはＥＳＡを含む）であって、抗体または断片が条項１〜３４のいずれか一項に記載されるものである、組み合わせ。
【０２３６】
組み合わせ、該量の抗体または断片を含む第１の減菌容器、および該量のＥＳＡを含む第２の減菌容器、任意選択で対象の貧血を治療するための組み合わせの使用のための説明書を含む医療キットもまた提供される。
【０２３７】
一例では、組み合わせは、対象の貧血を治療または予防するためのものであり、連続４週間にわたって、抗体の総用量およびＥＳＡの総用量が、Ｘ：Ｙの比率で該対象に投与され、Ｘは１０〜２ｘ１０６およびＹ＝４であり、例えば、Ｘは１０〜２ｘ１０６マイクログラムおよびＹ＝４マイクログラムである。
【０２３８】
一例では、治療は、対象において、１つ、それ以上、またはすべてのＨｂ濃度、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）およびトランスフェリン飽和度を増加させる（または増加するためのものである）。当業者は、例えば、対象の１つ以上の血清試料を使用して、これらのパラメータおよびそれらを判定する方法に精通しているであろう。例えば、百分率として測定されるトランスフェリン飽和度は、全鉄結合能で割った血清鉄の値である。
【０２３９】
一例では、治療開始時の該対象は、慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）に罹患し、任意選択で、貧血は、慢性炎症（例えば、対象は関節炎に罹患している）または細菌感染（例えば、ストレプトコッカス感染）に関連するか、あるいは対象は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）患者である。
【０２４０】
３６．
（ａ）対象の血液ヘモグロビンレベルの１０ｇ／ｄＬ未満への減少を予防する方法であって、抗体または断片および赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、方法、
（ｂ）貧血に罹患している対象において血液ヘモグロビンを少なくとも１０ｇ／ｄＬのレベルまで上昇させる方法であって、抗体または断片および赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、貧血が治療される、方法、
（ｃ）炎症性疾患または状態に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法であって、抗体または断片および赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、貧血が治療または予防される、方法、
（ｄ）貧血に罹患している対象に対して鉄の投与または輸血の必要性を排除または低減する方法であって、抗体または断片および赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、必要性が排除または低減される、方法、
（ｅ）微生物感染症に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、方法、
（ｆ）貧血に罹患している対象に対する貧血を治療するための赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）の投与を低減する方法であって、抗体または断片およびＥＳＡを投与することを含み、貧血が対象において治療される、方法、または
（ｇ）貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性がある対象において貧血の危険性を治療または低減する方法であって、抗体または断片および低用量の赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、対象において貧血が治療されるかまたは貧血の危険性が低減される、方法における使用のための、条項１〜３４のいずれか一項に記載の抗体、断片または組み合わせ。
【０２４１】
３７．
ＥＳＡは、
ａ．エポエチンアルファであり、１０００、１５００、２５００、５０００、１１０００、１８０００、３４０００または９００００単位未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ＜１５００、１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けことがあるか、
ｂ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００もしくは２００ｍｃｇの週当たりのダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）治療を以前に受けたことがあるか、または
ｃ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、２０、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けたことがある、条項１〜３４および３６のいずれか一項に記載の抗体、断片または組み合わせ。
【０２４２】
３８．対象が抗ＢＭＰ６抗体または断片およびＥＳＡを受けた後少なくとも１３日または１４日目に、対象において血液ヘモグロビンレベルを少なくとも１０ｇ／ｄＬに維持または上昇させるための、条項１〜３４、３６および３７のいずれか一項に記載の抗体、断片または組み合わせ。
【０２４３】
３９．ＢＭＰ６媒介性疾患または状態、例えば貧血を治療または予防するために、対象に投与するための医薬品の製造における、条項１〜３８のいずれかに記載の抗体、断片または組み合わせの使用。
【０２４４】
４０．対象におけるＢＭＰ６媒介性疾患または状態（例えば貧血）を治療または予防する方法であって、条項１〜３８のいずれか一項に記載の治療有効量の抗体、断片または組み合わせを該対象に投与することを含み、ＢＭＰ６媒介性疾患または状態は、それによって治療または予防される、方法。
【０２４５】
疾患または状態は、本明細書に開示される任意のものであり得る。
【０２４６】
４１．ＢＭＰ６媒介性疾患または状態が貧血である、条項３９に記載の使用または条項４０に記載の方法。
【０２４７】
４２．さらなる療法、例えばさらなる治療剤を対象に投与することをさらに含み、任意選択で、さらなる治療剤が、
（ａ）静脈内の鉄、
（ｂ）ＥＳＡ（例えば、ＥＰＯ）、
（ｃ）ＡｃｔＲＩＩａ阻害剤、
（ｄ）ＡｃｔＲＩＩｂ阻害剤、
（ｅ）ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体阻害剤（例えば、抗ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体抗体）、
（ｆ）ＴＮＦアルファまたはＴＮＦアルファ受容体阻害剤（例えば、抗ＴＮＦアルファまたはＴＮＦアルファ受容体抗体）、
（ｇ）ＨＪＶ阻害剤（例えば、抗ＨＪＶ抗体）、
（ｈ）ＢＭＰ阻害剤（例えば、さらなる抗ＢＭＰ抗体または断片）（例えば、ＢＭＰはＢＭＰ２、４、５、６、７または９である）、
（ｉ）マトリプターゼ−２（ＭＴＰ２）アゴニスト（例えば、マトリプターゼ−２（ＭＴＰ２）アゴニスト抗体）、
（ｊ）ＨＩＦ−ＰＨ阻害剤、
（ｋ）トランスフェリン受容体２（ＴＦＲ２）阻害剤、
（ｌ）ＨＦＥ阻害剤、
（ｍ）ＮＲｆ２阻害剤、
（ｎ）トランスフォーミング成長因子ベータスーパーファミリー１型アクチビン受容体様キナーゼ（ＡＬＫ）受容体阻害剤、
（ｏ）アクチビン受容体阻害剤（例えば、アクチビン受容体Ｆｃ融合）、
（ｐ）ＧＤＦ１１阻害剤、および
（ｑ）ミオスタチン阻害剤、からなる群から選択される、条項３３〜４１のいずれか一項に記載の抗体、断片、組み合わせ、使用または方法。
【０２４８】
任意選択で、さらなる薬剤は、Ｌｕｓｐａｔｅｒｃｅｐｔ（商標）またはＳｏｔａｔｅｒｃｅｐｔ（商標）である。任意選択で、さらなる薬剤は、ＴＧＦ−βスーパーファミリー阻害剤である。一例では、さらなる薬剤は、トランスフォーミング成長因子ベータスーパーファミリー１型アクチビン受容体様キナーゼ（ＡＬＫ）受容体阻害剤、ＡＬＫ２阻害剤、ＡＬＫ３阻害剤、ＡＬＫ４阻害剤、ＡＬＫ５阻害剤、またはＡＬＫ７阻害剤である。
【０２４９】
一例では、さらなる薬剤は、ＩＬ−６またはＩＬ−６Ｒ阻害剤、例えば、サリルマブ、ボバリリズマブまたはトシリズマブ（例えば、ケブザラ（登録商標）またはアクテムラ（登録商標））である。
【０２５０】
一例では、さらなる薬剤は、ＴＮＦアルファまたはＴＮＦアルファ受容体阻害剤、例えば、アダリムマブ、ヒュミラ（登録商標）、レミケード（登録商標）またはエンブレル（登録商標）、シンポニー（登録商標）である。
一実施形態では、ＮＲｆ２阻害剤は、治療される対象においてより多くのＢＭＰ６発現を誘導するより多くの鉄のフィードバックループを破壊することによって、抗ＢＭＰ６抗体または断片の有効性を改善する。
【０２５１】
本開示は、代わりにブランド薬のジェネリック版を含み、これらのジェネリック薬の開示は、例えば、組み合わせの一部として、本発明における可能性のある使用のために、参照により本明細書に含まれる。
【０２５２】
一例では、組み合わせは、ＢＭＰ６およびＨＪＶ、またはＢＭＰ６およびＨＦＥ、またはＢＭＰ６およびＴＦＲ２、またはＢＭＰ６およびＢＭＰ２、またはＢＭＰ６およびＢＭＰ４、またはＢＭＰ６およびＡＬＫ２の阻害剤を含み、ＢＭＰ６阻害剤は、本発明の抗体または断片を含む。
【０２５３】
４３．条項１〜３８および４２のいずれか一項に記載の抗体、断片または組み合わせ、ならびに薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体を含み、任意選択で、上記のもの（例えば条項４２）から選択されるさらなる治療剤と組み合わされる、薬学的組成物。
【０２５４】
４４．ＢＭＰ６媒介性状態または疾患、例えば貧血を治療および／または予防するための、条項４３に記載の薬学的組成物。
【０２５５】
好適な疾患および状態としては、貧血、肺動脈性肺高血圧症（ＰＡＨ）（例えば、原発性ＰＡＨまたは二次性ＰＡＨ）、脳海綿状血管腫（ＣＣＭ）（例えば、家族性ＣＣＭまたは孤発性ＣＣＭ）、レストレスレッグス症候群（ＲＬＳ）、癌（例えば、乳癌、膵癌、結腸直腸癌、唾液腺癌、食道癌または黒色腫）、癌転移、全身性硬化症、シェーグレン症候群、内皮間葉転換（ＥｎｄｏＭＴ）、心血管疾患、アテローム硬化症、全身性硬化症関連肺線維症および心臓線維症が挙げられる。
【０２５６】
ＥｎｄｏＭＴによって媒介される疾患または状態の例は、心血管疾患、アテローム硬化症、全身性硬化症関連肺線維症、心臓線維症、ＰＡＨ、腫瘍形成、腫瘍浸潤、腫瘍転移、線維性疾患、および癌関連線維芽細胞の生成である（例えば、膵臓癌）。
【０２５７】
４５．ヒトにおける該疾患または状態を治療および／または予防するのに使用するためのラベルまたは説明書と組み合わされた条項４３または４４に記載の薬学的組成物であって、任意選択で、ラベルまたは説明書が、販売承認番号（例えば、ＦＤＡまたはＥＭＡ承認番号）を含み、任意選択で、キットが、抗体もしくは断片を含むＩＶまたは注射装置を含む、薬学的組成物。
【０２５８】
４６．条項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体または断片のＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードする核酸。
【０２５９】
４７．ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸をコードする核酸。
【０２６０】
例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２６１】
任意選択で、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸をコードする核酸が提供される。例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２６２】
４８．ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸をコードする核酸。
【０２６３】
任意選択で、核酸はまた、選択された抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸をコードする。例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２６４】
任意選択で、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、またはそれと少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるアミノ酸をコードする核酸が提供される。例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２６５】
４９．
（ａ）配列番号１１５、５２０もしくは５２１の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１２４、５２２もしくは５２３の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２６６】
代替手段では、以下が提供される。
（ａ）配列番号１１５の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１２４の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２６７】
（ａ）配列番号５２０の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５２２の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２６８】
（ａ）配列番号５２１の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５２３の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２６９】
（ａ）配列番号１１５、５２０もしくは５２１の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１２４、５２２もしくは５２３の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列をそれぞれ含む、第１および第２の核酸の組み合わせ（例えば、宿主細胞、例えば、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２７０】
（ａ）配列番号１１５の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号１２４の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列をそれぞれ含む、第１および第２の核酸の組み合わせ（例えば、宿主細胞、例えば、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２７１】
（ａ）配列番号５２０の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５２２の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列をそれぞれ含む、第１および第２の核酸の組み合わせ（例えば、宿主細胞、例えば、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２７２】
（ａ）配列番号５２１の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５２３の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列をそれぞれ含む、第１および第２の核酸の組み合わせ（例えば、宿主細胞、例えば、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２７３】
例えば、（ａ）について、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２７４】
例えば、（ｂ）について、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２７５】
本明細書で、％同一性が言及されている任意の例では、一例では、１００％同一性がある。
【０２７６】
５０．条項１〜３２のいずれか一項に記載の抗体または断片の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸。
【０２７７】
５１．配列番号１１６の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖をコードする核酸。
【０２７８】
例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２７９】
５２．配列番号１２５の配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖をコードする核酸。
【０２８０】
例えば、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２８１】
５３．
（ａ）ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体の選択された重鎖配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、ならびに／または
（ｂ）ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される抗体の選択された配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２８２】
好ましくは、（ａ）および（ｂ）において選択された抗体は、同じ抗体、例えば、ＣＬ−５８８３８である。代替手段では、例えば、宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において、第１の核酸は（ａ）を含み、第２の核酸は（ｂ）を含む。
【０２８３】
本明細書の本発明のすべての核酸は、本発明の抗体または断片の可変ドメインまたは鎖を発現するためなど、宿主細胞、例えば、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において発現可能である。
【０２８４】
例えば、以下が提供される。
（ａ）配列番号５１２、５１４、５１６、５１８および５１９から選択される配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列、ならびに／または
（ｂ）配列番号５１３、５１５および５１７から選択される配列と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば、宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２８５】
（ａ）少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一の配列番号５１２であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１３と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば、宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２８６】
（ａ）少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一の配列番号５１４であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１５と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば、宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２８７】
（ａ）少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一の配列番号５１６であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１７と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば、宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２８８】
（ａ）少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一の配列番号５１８であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１３、５１５もしくは５１７と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば、宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２８９】
（ａ）少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一の配列番号５１９であるヌクレオチド配列、および／または
（ｂ）配列番号５１３、５１５もしくは５１７と少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸（例えば、宿主細胞、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３またはＣｏｓ細胞において）。
【０２９０】
例えば、（ａ）について、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２９１】
例えば、（ｂ）について、同一性は少なくとも８５％である。例えば、同一性は少なくとも９０％である。例えば、同一性は少なくとも９５％である。
【０２９２】
５４．核酸（複数可）（例えば、条項４６〜５３のいずれか一項に記載の核酸（複数可））を含むベクターであって、任意選択で、ベクターが、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３ベクターである、ベクター。
【０２９３】
５５．核酸（複数可）（例えば、条項４６〜５３のいずれか一項に記載の核酸（複数可））または条項５４のベクターを含む宿主細胞。
【０２９４】
任意選択で、ＶＨ遺伝子セグメントは、ＩＧＨＶ１−３＊０１およびＩＧＨＶ３−１１＊０１から選択される。任意選択で、ＶＬ遺伝子セグメントは、ＩＧＫＶ１−５＊０３、ＩＧＫＶ３−２０＊０１およびＩＧＫＶ３−１５＊０１から選択される。
【０２９５】
一例では、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨは、ＩＧＨＶ１−３、ＩＧＨＤ３−１０およびＩＧＨＪ４（例えば、ＩＧＨＶ１−３＊０１、ＩＧＨＤ３−１０＊０１およびＩＧＨＪ４＊０２）である。
【０２９６】
一例では、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨは、ＩＧＨＶ１−３、ＩＧＨＤ３−１０およびＩＧＨＪ３、例えば、ＩＧＨＶ１−３＊０１、ＩＧＨＤ３−１０＊０１およびＩＧＨＪ３＊０２である。
【０２９７】
一例では、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨは、ＩＧＨＶ３−１１、ＩＧＨＤ６−１９およびＩＧＨＪ４、例えば、ＩＧＨＶ３−１１＊０１、ＩＧＨＤ６−１９＊０１およびＩＧＨＪ４＊０２である。
【０２９８】
一例では、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨは、ＩＧＨＶ１−３、ＩＧＨＤ７−２７およびＩＧＨＪ４、例えば、ＩＧＨＶ１−３＊０１、ＩＧＨＤ７−２７＊０２およびＩＧＨＪ４＊０２である。
【０２９９】
一例では、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨは、ＩＧＨＶ１−３、ＩＧＨＤ４−２３およびＩＧＨＪ４、例えば、ＩＧＨＶ１−３＊０１、ＩＧＨＤ４−２３＊０１およびＩＧＨＪ４＊０２である。
【０３００】
一例では、ＶＨ、ＤＨおよびＪＨは、ＩＧＨＶ１−３、ＩＧＨＤ５−１８およびＩＧＨＪ４、例えば、ＩＧＨＶ１−３＊０１、ＩＧＨＤ５−１８＊０１およびＩＧＨＪ４＊０２である。
【０３０１】
一例では、ＶＬおよびＪＬは、ＩＧＫＶ１−５およびＩＧＫＪ１、例えば、ＩＧＫＶ１−５＊０３およびＩＧＫＪ１＊０１である。
【０３０２】
一例では、ＶＬおよびＪＬは、ＩＧＫＶ３−２０およびＩＧＫＪ１、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１およびＩＧＫＪ１＊０１である。
【０３０３】
一例では、ＶＬおよびＪＬは、ＩＧＫＶ３−１５およびＩＧＫＪ３、例えば、ＩＧＫＶ３−１５＊０１およびＩＧＫＪ３＊０１である。
【０３０４】
一例では、ＶＬおよびＪＬは、ＩＧＫＶ３−２０およびＩＧＫＪ３、例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１およびＩＧＫＪ３＊０１である。
【０３０５】
一例では、抗体または断片は、９、１０、１１または１２残基、例えば１０残基、例えば１１残基のＨＣＤＲ３の長さを含む。一例では、抗体または断片は、７、８または９残基、例えば８残基、例えば９残基のＬＣＤＲ３の長さを含む。一例では、抗体または断片の各ＶＨドメインは、１〜１１の非生殖細胞系残基、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１の非生殖細胞系残基を含む。一例では、抗体または断片の各ＶＬドメインは、３〜８の非生殖細胞系残基、例えば、３、４、５、６、７または８の非生殖細胞系残基を含む。
【０３０６】
一実施形態では、本明細書のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔに従って決定される。代替手段では、ＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴに従って決定される。
【０３０７】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０またはＣＬ−５８７１３である。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８である。
【０３０８】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０またはＣＬ−５８７１３の重鎖を含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８の重鎖を含む。
【０３０９】
一例では、本発明の抗体または断片の重鎖は、ヒトガンマ−１、ガンマ−２、ガンマ−３、ガンマ−４、ミュー、デルタ、イプシロンまたはアルファアイソタイプ、好ましくはガンマアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ４アイソタイプ）である。一例では、本発明の抗体または断片の軽鎖は、ヒトカッパ定常領域を含む。あるいは、一例では、本発明の抗体または断片の軽鎖は、ヒトラムダ定常領域を含む。
【０３１０】
任意選択で、抗体は、軽鎖の二量体と結合した重鎖の二量体を含む４鎖抗体である。一例では、重鎖は、本明細書に開示される１つもしくは重鎖ＣＤＲもしくはＣＤＲの組み合わせを含み、かつ／または軽鎖は、同じ選択された抗体に由来するなど、本明細書に開示される１つもしくは重鎖のＣＤＲもしくはＣＤＲの組み合わせを含む。一例では、重鎖は、本明細書に開示されるＶＨドメインを含み、かつ／または軽鎖は、同じ選択された抗体に由来するなど、本明細書に開示されるＶＬを含む。一例では、重鎖および軽鎖は、同じ選択された抗体、例えば、本明細書の配列表または本明細書の実施例の表に開示されている任意の抗体に由来する。
【０３１１】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０またはＣＬ−５８７１３の軽鎖を含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８の軽鎖を含む。
【０３１２】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０またはＣＬ−５８７１３の可変ドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８の可変ドメインを含む。
【０３１３】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０またはＣＬ−５８７１３のＶＨドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８のＶＨドメインを含む。
【０３１４】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０またはＣＬ−５８７１３のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８のＶＨおよびＶＬドメインを含む。
【０３１５】
任意選択で、ＶＨセグメントは、ヒトＩＧＨＶ３−１１遺伝子セグメントであり、例えば、ＶＨは、ヒトＩＧＨＶ３−１１およびＩＧＨＪ４の組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされる（例えば、ヒト遺伝子セグメントＩＧＨＶ３−１１＊０１およびＩＧＨＪ４＊０２、ＩＧＨＶ３−１１、ＩＧＨＤ６−１９、ＩＧＨＪ４、またはＩＧＨＶ３−１１＊０１、ＩＧＨＤ６−１９＊０１およびＩＧＨＪ４＊０２）。任意選択で、ＪＨは、ＩＧＨＪ４＊０２である。任意選択で、ＶＬは、ヒトＶＬ遺伝子セグメントおよびＪＬ遺伝子セグメントの組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされ、ＶＬ遺伝子セグメントは、ＩＧＫＶ１−５、ＩＧＫＶ３−２０およびＩＧＫＶ３−１５から選択される。任意選択で、ＶＬは、ヒトＩＧＫＶ３−２０（例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）である。任意選択で、ＪＬは、ＩＧＫＪ１（例えば、ＩＧＫＪ１＊０１）である。例えば、ＶＬは、ヒトＩＧＫＶ３−２０（例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１）およびヒトＩＧＫＪ１（例えば、ＩＧＫＪ１＊０１）の組換えに由来するヌクレオチド配列によってコードされる。
【０３１６】
一例では、結合部位は、ヒトＢＭＰ６（例えば、本明細書の配列表中の配列番号１の太字の配列を含むか、またはそれからなるヒトＢＭＰ６）に特異的に結合するＶＨ／ＶＬ対を含む。一例では、抗体または断片は、結合部位の２つ（例えば、２つおよび２つ以下）のコピーを含む。
【０３１７】
一例では、抗体または断片は、９〜１２残基のＨＣＤＲ３の長さを含み、かつ／または抗体または断片は、７〜９残基のＬＣＤＲ３の長さを含む。一例では、抗体または断片は、９、１０、１１または１２残基、例えば１０残基、例えば１１残基のＨＣＤＲ３の長さを含む。一例では、抗体または断片は、７、８または９残基、例えば８残基、例えば９残基のＬＣＤＲ３の長さを含む。一例では、抗体または断片の各ＶＨドメインは、１〜１１の非生殖細胞系残基、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０または１１の非生殖細胞系残基を含む。一例では、抗体または断片の各ＶＬドメインは、３〜８の非生殖細胞系残基、例えば、３、４、５、６、７または８の非生殖細胞系残基を含む。
【０３１８】
任意選択で、抗体または断片は、ＳＰＲによって判定されるように、ＢＭＰ６（例えば、ヒトＢＭＰ６、例えば、成熟ヒトＢＭＰ６、例えば、本明細書の配列表に開示される成熟ＢＭＰ６の配列を含むか、またはそれからなるＢＭＰ６、すなわち、配列番号１の太字の配列）への結合についてＣＬ−５８８３８（例えば、ＩｇＧフォーマットのＣＬ−５８８３８、例えば、ＩｇＧ−ＰＥ）と競合する。
【０３１９】
任意選択で、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換であり、任意選択で、各保存的置換は（１）〜（６）のグループ、
１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、
２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、
３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、
４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）、
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、および
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）である。
【０３２０】
本明細書の任意のＳＰＲは、例えば、３７℃およびｐＨ７．６での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）である。
【０３２１】
任意選択で、本明細書の任意のＢＭＰ６は、（例えば、インビトロ試験において）ヒトＢＭＰ６、例えば、ｈＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ  １２０−０６）である。
【０３２２】
一例では、本発明の抗体または断片は、例えば、５ｘ１０６Ｍ−１×ｓ−１、または約５ｘ１０６Ｍ−１×ｓ−１のＫａでヒトＢＭＰ６に結合する。一例では、本発明の抗体または断片は、例えば、４もしくは５ｓ−１、または約４もしくは５ｓ−１のＫｄでヒトＢＭＰ６に結合する。一例では、本発明の抗体または断片は、例えば、０．０７もしくは０．１４ｎＭ、または約０．０７もしくは０．１４ｎＭのＫＤでヒトＢＭＰ６に結合する。一実施形態では、断片はＦａｂ断片である。一実施形態では、断片はｓｃＦｖである。
【０３２３】
一例では、抗体は重鎖を含み、各重鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、各軽鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０３２４】
一例では、抗体または断片は重鎖ＶＨドメインを含み、各ＶＨは、配列番号４１８のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、各軽鎖ＶＬドメインは、配列番号４２６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０３２５】
代替抗体または断片：
本発明は、その構成のいずれにおいても、以下のように抗体または断片（代替抗体または断片）に関し得る。
【０３２６】
任意選択で（オプション１）、抗体または断片は、
ａ．配列番号４０３もしくは５６６のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各重鎖、および配列番号４１１のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各軽鎖、または
ｂ．配列番号４１９のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各重鎖、および配列番号４２７のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各軽鎖を含む。
【０３２７】
任意選択で（オプション２）、抗体または断片は、
ａ．配列番号４０２もしくは５６５のＶＨドメインアミノ酸配列を含む各重鎖、および配列番号４１０のＶＬドメインアミノ酸配列を含む各軽鎖、または
ｂ．配列番号４１８のＶＨドメインアミノ酸配列を含む各重鎖、および配列番号４２６のＶＨドメインアミノ酸配列を含む各軽鎖を含み、かつ
ｃ．任意選択で、重鎖は、ヒトガンマ−１（例えば、ＩＧＨＧ１＊０１）、ガンマ−４（例えば、ＩＧＨＧ４＊０１またはＩＧＨＧ４＊０１−ＰＥ）定常領域、または配列番号４２９、４３７、４４６、４５４もしくは４５６のアミノ酸配列を含む。
【０３２８】
任意選択で、抗体または断片は、ＢＭＰ６を結合するために参照抗体と競合し、参照抗体は、ｍＡｂ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）または代替抗体（例えば、本明細書で定義されるようなオプション１またはオプション２抗体）である。競合は、例えば、ＳＰＲまたはＥＬＩＳＡによって、あるいは本明細書に記載されるアッセイ（例えば、実施例において）などの機能的アッセイにおいてであり得る。ＢＭＰ６は、ヒトＢＭＰ６（例えば、配列番号５６２の配列を含む成熟ＢＭＰ６）、ラットＢＭＰ６（例えば、配列番号５６の配列を含む成熟ＢＭＰ６、またはカニクイザルＢＭＰ６（例えば、配列番号５６４の配列を含む成熟ＢＭＰ６）であり得る。
【０３２９】
ヒトＩｇＧ重鎖遺伝子は、Ｃ末端のリジンを天然にコードする。この残基は、血清から単離された抗体にはほとんど見られず、哺乳動物細胞培養システムで発現された治療用抗体上に、低いが、可変性レベルで存在する。Ｃ末端リジンクリッピングは血清中で天然で起こり、抗体機能全体に影響を与えることは知られていないため、重鎖コード配列から除去され、均一な「リジンクリップ」重鎖、したがって均一な製剤を提供することができる。したがって、本明細書でＧを有するＣ末端で終結することが示されるＩｇＧ抗体、定常領域または重鎖は、代替的に、ＧＫ（すなわち、示されるＧのＣ末端側で結合されたレジン）で終わる形態で提供され得る。
【０３３０】
オプション１および２の例は、以下の通りである。
オプション１ａ：一例では、抗体は重鎖を含み、各重鎖は、配列番号４０３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、各軽鎖は、配列番号４１１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０３３１】
オプション１ｂ：一例では、抗体は重鎖を含み、各重鎖は、配列番号５６６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、各軽鎖は、配列番号４１１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０３３２】
オプション１ｃ：一例では、抗体は重鎖を含み、各重鎖は、配列番号４１９のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、各軽鎖は、配列番号４２７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０３３３】
オプション２ａ：一例では、抗体または断片は重鎖ＶＨドメインを含み、各ＶＨは、配列番号４０２のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、各軽鎖ＶＬドメインは、配列番号４１０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０３３４】
オプション２ｂ：一例では、抗体または断片は重鎖ＶＨドメインを含み、各ＶＨは、配列番号５６５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、各軽鎖ＶＬドメインは、配列番号４１０のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０３３５】
一例では、抗体または断片は重鎖ＶＨドメインを含み、各ＶＨは、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、各軽鎖ＶＬドメインは、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【０３３６】
任意選択で、抗体または断片は、配列番号１のアミノ酸配列への結合について該参照抗体と競合する。追加的または代替的に、任意選択で、抗体または断片は、配列番号４９２のアミノ酸配列への結合について該参照抗体と競合する。追加的または代替的に、任意選択で、抗体または断片は、配列番号４９１のアミノ酸配列への結合について該参照抗体と競合する。追加的または代替的に、任意選択で、抗体または断片は、配列番号４のアミノ酸配列を結合するために該参照抗体と競合する。追加的または代替的に、抗体または断片は、これらのいずれか１つ以上の成熟バージョンへの結合について該参照抗体と競合する。
【０３３７】
任意選択で、抗体または断片は、ＢＭＰ６への可溶性ヘモジュベリン（ＨＪＶ）の結合を競合的に阻害する。任意選択で、本明細書のＨＪＶはヒトＨＪＶである。
【０３３８】
任意選択で、抗体または断片は、ＢＭＰ６への可溶性ヘモジュベリン（ＨＪＶ）の結合を競合的に阻害しない。
【０３３９】
本明細書で使用される場合、「阻害する」、「阻害」、「阻害すること」などは、本明細書で使用される場合、部分的または完全に別の抗原の結合を妨げるエピトープ（例えば、ｈＢＭＰ６の）に結合するアンタゴニスト（例えば、抗体またはその断片）の能力を指す。アンタゴニストが結合するエピトープが、リガンドの結合部位を完全に遮断すると、リガンド結合は完全に妨げられ（これは、重複エピトープの場合には物理的遮断、またはアンタゴニストがその固有のエピトープへのリガンド結合を妨げる程大きい場合には立体遮断であり得る）、リガンドは、循環から除去されない。したがって、循環するリガンドの濃度が増加したように見える場合がある。アンタゴニストが結合するエピトープが、リガンドの結合部位を部分的に遮断する場合、リガンドは、結合することができる場合があるが、弱く結合するのみである（部分的阻害の場合）か、または天然結合相互作用とは異なる配向で結合する。この場合、リガンドのうちのいくつかは、循環から除去され得るが、リガンド結合部位が完全に遊離し、結合に利用可能である場合ほど多くは除去されない。したがって、阻害とは、リガンドと受容体との物理的相互作用を指す。阻害は、ＨＴＲＦによって測定することができ、これは、本明細書における他の箇所、およびＭａｔｈｉｓ（１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４１（９），１３９１−１３９７においてより詳細に記載される。阻害はまた、受容体が細胞上で発現されるフローサイトメトリー、または受容体がプレートに吸着されるＥＬＩＳＡによって測定され得る。
【０３４０】
任意選択で、抗体は、ＶＤＪ領域配列によってコードされるＶＨドメインを含み、ＶＤＪは、ＶＨ遺伝子セグメント、Ｄ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来し、ＶＨは、ヒト生殖細胞系（ｉ）ＶＨ１−３、（ｉｉ）ＶＨ２−５または（ｉｉｉ）ＶＨ３−１５遺伝子セグメントである。追加的または代替的に、任意選択で、抗体は、ＶＪ領域配列によってコードされるＶＬドメインを含み、ＶＪは、ＶＬ遺伝子セグメントおよびＪＬ遺伝子セグメントの組換えに由来し、ＶＬは、ヒト生殖細胞系（ｉｖ）Ｖκ３−２０、（ｖ）Ｖλ３−１、（ｖｉ）Ｖκ１−１７または（ｖｉｉ）Ｖλ１−４０である。
【０３４１】
任意選択で、抗体または断片は、ＢＭＰ７に結合するよりも強い親和性（ＳＰＲによって判定されるより低いＫＤ）でＢＭＰ６に結合し、かつ／または任意選択で、ＢＭＰ５よりも強い親和性でＢＭＰ６に結合する。
【０３４２】
例えば、
（ａ）抗体または断片は、ＢＭＰ７に結合するよりも強い親和性（ＳＰＲによって判定されるより低いＫＤ）でＢＭＰ６に結合し、任意選択で、ＢＭＰ５よりも強い親和性でＢＭＰ６に結合し、
（ｂ）抗体または断片は、ＢＭＰ６を結合するために参照抗体と競合し、参照抗体は、ｍＡｂ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）または代替抗体（例えば、オプション１またはオプション２抗体）である。
【０３４３】
任意選択で、本発明の抗体は、１ｐＭ〜５ｎＭのＢＭＰ６を結合するための親和性（ＫＤ）を有し、任意選択で、結合は、３７℃、ｐＨ７．６で該抗体のＦａｂを使用するＳＰＲによって判定される。
【０３４４】
任意選択で、抗体は１ｘ１０−５〜１×１０−３Ｓ−１のＢＭＰ６を結合するためのオフ速度（Ｋｏｆｆ）を有し、任意選択で、結合は、３７℃、ｐＨ７．６で該抗体のＦａｂを使用するＳＰＲによって判定される。
【０３４５】
任意選択で、抗体は１ｘ１０５〜１×１０７Ｍ−１Ｓ−１のＢＭＰ６を結合するためのオン速度（Ｋｏｎ）を有し、任意選択で、結合は、３７℃、ｐＨ７．６で該抗体のＦａｂを使用するＳＰＲによって判定される。
【０３４６】
一例では、抗体（例えば、Ｆａｂとして）または断片は、
（ａ）２、３、４、５または１０ｐＭ〜３、４または５ｎＭ、
（ｂ）１〜１０ｐＭ〜５ｎＭ、
（ｃ）１０ｐＭ〜３、４または５ｎＭ、
（ｄ）５０または８０ｐＭ〜２００ｎＭ、
（ｅ）５０または８０ｐＭ〜１５０ｎＭ、または
（ｆ）５０または８０ｐＭ〜１００ｎＭのＢＭＰ６（例えば、ヒトＢＭＰ６）を結合するための親和性（ＫＤ）を有する。
【０３４７】
一例では、ＫＤは５〜１５ｐＭ（例えば、１０ｐＭ）である（またはその程度である）。一例では、ＫＤは２〜５ｎＭ（例えば、３ｎＭ）である（またその程度である）。一例では、ＫＤは１００〜４００ｐＭ（例えば、１４０または３９０ｐＭ）である（またはその程度である）。
【０３４８】
一例では、抗体（例えば、Ｆａｂとして）または断片は、
（ａ）１ｘ１０−５〜５×１０−４Ｓ−１、
（ｂ）１ｘ１０−５〜６×１０−４Ｓ−１、
（ｃ）１ｘ１０−５〜７×１０−４Ｓ−１、
（ｄ）１ｘ１０−５〜８×１０−４Ｓ−１、
（ｅ）２ｘ１０−５〜１×１０−３Ｓ−１、
（ｆ）２ｘ１０−５〜５×１０−４Ｓ−１、
（ｇ）２ｘ１０−５〜６×１０−４Ｓ−１、
（ｈ）２ｘ１０−５〜７×１０−４Ｓ−１、または
（ｉ）２ｘ１０−５〜８×１０−４Ｓ−１のＢＭＰ６（例えば、ヒトＢＭＰ６）を結合するためのオフ速度（Ｋｏｆｆ）を有する。
【０３４９】
一例では、Ｋｏｆｆは、５ｘ１０−４Ｓ−１である（またはその程度である）（例えば、ＫＤが２ｎＭ〜４００ｐＭである（またはその程度である）場合、ＫＤが２〜５ｎＭ（例えば、３ｎＭ）である（またはその程度である）場合、またはＫＤが１００〜４００ｐＭ（例えば、１４０または３９０ｐＭ）である（またはその程度である）場合）。一例では、Ｋｏｆｆは、３ｘ１０−５Ｓ−１である（またはその程度である）（例えば、ＫＤが５〜１５ｐＭ（例えば、１０ｐＭ）である（またはその程度である）場合）。
【０３５０】
一例では、抗体（例えば、Ｆａｂとして）または断片は、
（ａ）１ｘ１０５〜１ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｂ）１ｘ１０５〜２ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｃ）１ｘ１０５〜３ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｄ）１ｘ１０５〜４ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｅ）１ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｆ）２ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｇ）３ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｈ）４ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｉ）５ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、または
（ｊ）６ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１のＢＭＰ６（例えば、ヒトＢＭＰ６）を結合するためのオン速度（Ｋｏｎ）を有する。
【０３５１】
一例では、Ｋｏｎは、１または２ｘ１０−５Ｍ−１Ｓ−１である（またはその程度である）（例えば、ＫＤが２〜５ｎＭ（例えば、３ｎＭ）である場合）。一例では、Ｋｏｎは、１〜４、１、２、３または４ｘ１０−６Ｍ−１Ｓ−１である（またはその程度である）（例えば、ＫＤが５〜４００ｐＭ（例えば、１４０または３９０ｐＭ）または５〜１５ｐＭ（例えば、１０ｐＭ）である（またはその程度である）場合）。
【０３５２】
本明細書における条項または他の態様に提供されるように、抗ＢＭＰ６抗体または断片は、表面プラズモン共鳴によって判定されるように５０ｎＭ未満、４０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満のＫＤを有するＢＭＰ６、例えば、ヒトＢＭＰ６に結合し得る。別の実施形態、抗ＢＭＰ６抗体または断片は、表面プラズモン共鳴によって判定されるように２０ｎＭ未満、１５ｎＭ未満、１０ｎＭ未満のＫＤを有するＢＭＰ６、例えば、ヒトＢＭＰ６に結合し得る。抗ＢＭＰ６抗体または断片は、表面プラズモン共鳴によって判定されるように８ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満または１ｎＭ未満のＫＤを有するＢＭＰ６、例えば、ヒトＢＭＰ６に結合し得る。ＫＤは、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下であり得る。
【０３５３】
別の実施形態では、ＫＤは、０．０１〜１ｎＭの範囲内、または０．０５〜２ｎＭの範囲内、または０．０５〜１ｎＭの範囲内である。ＫＤは、ｈＢＭＰ６、ｃｙｎｏｍｏｌｕｇｕｓサル（すなわち、「ｃｙｎｏ」）ＢＭＰ６および／またはマウスＢＭＰ６に関するものであり得る。
【０３５４】
別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＢＭＰ６抗体は、約０．５〜１０μＭ、例えば、約１〜８μＭまたは約１〜７μＭのＫＯＮ速度（例えば、２５℃または３７℃でＳＰＲによって測定される）を有する。別の実施形態では、ＫＯＮ速度は、約１〜５μＭ、例えば、約１μＭ、約１．５μＭ、約２μＭ、約２．５μＭまたは約３μＭである。別の実施形態では、ＫＯＮ速度は、約３．５μＭ、約４μＭ、約４．５μＭ、約５μＭまたは約５．５μＭである。
【０３５５】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＭＰ６抗体は、約０．０１〜１００ｍＭ、例えば約０．１〜５０ｍＭまたは約０．５〜５０ｍＭのＫＯＦＦ速度（例えば２５℃または３７℃で、ＳＰＲによって測定される）を有する。別の実施形態では、ＫＯＦＦ速度は、約０．５〜１０ｍＭ、または約０．５〜１０ｍＭ、例えば、約１ｍＭ、約２ｍＭ、約３ｍＭ、約４ｍＭまたは約５ｍＭである。別の実施形態では、ＫＯＦＦ速度は、約０．６ｍＭ、約０．７ｍＭ、約０．８ｍＭまたは約０．９ｍＭである。
【０３５６】
本発明はまた、以下の方法（またはかかる方法で使用するための本発明の抗体または断片）を提供する。
対象における貧血を治療する方法であって、方法が、
（ａ）初日（Ｄ０）に抗ＢＭＰ６抗体または断片を対象に投与し、
（ｂ）少なくとも連続３週間にわたって、Ｄ０から開始する該期間、複数回の用量のエリスロポエチン促進剤（ＥＳＡ）を投与することを含み、該対象の血液ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度は、該期間の全期間にわたってＤ０のベースライン濃度から上昇し、
（ｃ）該期間の全期間にわたってであるように、
（ｉ）Ｈｂ濃度は、１００％のベースラインＨｂ濃度以上であり、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインの少なくとも１２０％に達し、かつ／または
（ｉｉ）Ｈｂ濃度は、ベースラインを超えて少なくとも１ｇ／ｄｌ増加する、方法。
【０３５７】
任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、例えば、インビトロアッセイまたはヒトにおいて、ヒト肝細胞による鉄放出を阻害する。当業者は、本明細書の実施例に言及されるもののような標準的なアッセイを認識しているであろう。
【０３５８】
任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトのヒト肝細胞による鉄放出を阻害することにより、ヒトにおいて本明細書に開示されるようなＢＭＰ６媒介性疾患または状態を治療または予防するためのものである。任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトのヒト肝細胞による鉄放出を阻害することにより、ヒトの貧血、ＰＡＨもしくは線維症を治療または予防するためのものである。
【０３５９】
任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトのヒト肝細胞におけるハンプ遺伝子発現を阻害することにより、ヒトにおいて本明細書に開示されるようなＢＭＰ６媒介性疾患または状態を治療または予防するためのものである。任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトのヒト肝細胞におけるハンプ遺伝子発現を阻害することにより、ヒトの貧血、ＰＡＨもしくは線維症を治療または予防するためのものである。
【０３６０】
任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトのヒト肝細胞におけるヘプシジンまたはその発現を阻害することにより、ヒトにおいて本明細書に開示されるようなＢＭＰ６媒介性疾患または状態を治療または予防するためのものである。任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトのヒト肝細胞におけるヘプシジンまたはその発現を阻害することにより、ヒトの貧血、ＰＡＨもしくは線維症を治療または予防するためのものである。
【０３６１】
任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトにおける（例えば、その肝細胞における）ハンプ遺伝子発現のＢＭＰ６活性化を阻害することにより、ヒトにおいて本明細書に開示されるようなＢＭＰ６媒介性疾患または状態を治療または予防するためのものである。任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトにおける（例えば、その肝細胞における）ハンプ遺伝子発現のＢＭＰ６活性化を阻害することにより、ヒトにおいて貧血、ＰＡＨもしくは繊維症を治療または予防するためのものである。
【０３６２】
任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトにおける（例えば、その肝細胞における）ハンプ遺伝子発現のＨＪＶ媒介性活性化を阻害することにより、ヒトにおいて本明細書に開示されるようなＢＭＰ６媒介性疾患または状態を治療または予防するためのものである。任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトにおける（例えば、その肝細胞における）ハンプ遺伝子発現のＨＪＶ媒介性活性化を阻害することにより、ヒトにおいて貧血、ＰＡＨもしくは繊維症を治療または予防するためのものである。一例では、抗体または断片は、インビトロおよび／またはヒトにおいて、ＢＭＰ６へのＨＪＶの結合を競合的に阻害する。インビトロ競合は、例えば、標準的なＳＰＲまたはＥＬＩＳＡによって判定され得る。
【０３６３】
一例では、抗体または断片は、インビトロでのハンプ調節領域の制御下で、ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＢＭＰ６誘導ルシフェラーゼ発現を阻害する。
【０３６４】
任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトにおける（例えば、その肝細胞における）ＢＭＰ結合を阻害することにより、ヒトにおいて本明細書に開示されるようなＢＭＰ６媒介性疾患または状態を治療または予防するためのものである。任意選択で、抗体、断片または組み合わせは、ヒトにおける（例えば、その肝細胞における）ＢＭＰ結合を阻害することにより、ヒトにおいて貧血、ＰＡＨもしくは繊維症を治療または予防するためのものである。一例では、抗体または断片は、ＨＪＶがＢＭＰ６と接触するエピトープに結合して、ヒト肝細胞におけるハンプ遺伝子発現を活性化することができるＨＪＶ−ＢＭＰ６複合体を形成する。
【０３６５】
一例では、ヒト細胞は、インビトロでのＨｅｐＧ２細胞である。さらなる詳細は、本明細書の実施例において提供される。一例では、阻害は、インビトロでのＨｅｐＧ２細胞アッセイにおける阻害であり、例えば、インビトロでの１つ以上のヒトハンプ調節要素の制御下でのレポーター遺伝子の阻害によって判定される。例えば、調節要素は、ｐＳＭＡＤ（ＢＭＰ）およびｐＳＴＡＴ（ＩＬ６）に対する応答要素を含む。一例では、アッセイは、ヒトＢＭＰ６、カニクイザルＢＭＰ６、ラットＢＭＰ６またはマウスＢＭＰ６を使用して実行され、かつ／またはアッセイは、ヒトＨＪＶ、カニクイザルＨＪＶ、ラットＨＪＶまたはマウスＨＪＶを使用して実行される。一例では、レポーターは、ルシフェラーゼ遺伝子である。一例では、抗体または断片は、アッセイにおけるレポーター遺伝子発現のＢＭＰの活性化を中和し、例えば、中和は、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または９５％であるか、または完全な中和である。
【０３６６】
一例では、抗体または断片は、例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡによって、またはＨｅｐＧ２アッセイ（例えば、本明細書に記載のＨｅｐＧ２アッセイ）において、例えば、標識された参照抗体を使用してインビトロで判定されるように、ＢＭＰ６への結合について参照抗体と競合する。一例では、競合は、該結合を少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０もしくは９５％減少させるか、または結合の完全な阻害である。例えば、参照抗体は、ＭＡｂ５０７またはＭＡｂ２３６５であり、例えば、参照抗体は、代替抗体（例えば、オプション１またはオプション２抗体）である。
【０３６７】
一例では、本明細書の１つのまたはそのＢＭＰ６は、ヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ＃１２０−０６）（配列番号２）である。一例では、本明細書の１つのまたはそのＢＭＰ６は、本明細書に開示される任意の他のヒトＢＭＰ６である。
【０３６８】
一例では、抗体または断片は、例えば室温またはｒｔｐで、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって判定されるように、１ｘ１０−４Ｓ−１以下のオフ速度で、ヒトＢＭＰ６に結合する。実施例を参照されたい。
【０３６９】
一例では、抗体は、ヒトＢＭＰ６への結合について、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される、例えば、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２およびＣＬ−５７９４５から選択される、例えば、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される参照抗体と競合する。
【０３７０】
代替手段では、本明細書の参照抗体は、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８７５６、ＣＬ−５８６５０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８６８０およびＣＬ−５８７１３から選択される。任意選択で、参照抗体は、ＣＬ−５８８３８である。
【０３７１】
一例では、抗体は、ヒトＢＭＰ６への結合について参照抗体と競合し、参照抗体は、配列番号２４、４２、１１４、１３２、９６、７８、６０、２５８、２４０、２２２、２０４、１８６、１６８、１５０、２７６、３８４、３６６、３４８、２９４、３３０および３１２Ｃから選択される、例えば、配列番号２４、４２、１１４、１３２、９６、７８および６０から選択される、例えば、配列番号２７６、３８４、３６６、３４８、２９４、３３０および３１２から選択されるＶＨアミノ酸配列を含み、かつ／または参照抗体は、配列番号３３、５１、１２３、１４１、１０５、８７、６９、２６７、２４９、２３１、２１３  １９５、１７７、１５９、２８５、３９３、３７５、３５７、３０３、３３９および３２１から選択される、例えば、配列番号３３、５１、１２３、１４１、１０５、８７および６９から選択される、例えば、配列番号２８５、３９３、３７５、３５７、３０３、３３９および３２１から選択されるＶＬアミノ酸配列を含む（例えば、それぞれ含む）。一例では、参照抗体は、ＩｇＧ４（例えば、ＩｇＧ４−ＰＥ）抗体である。一例では、参照抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一例では、本発明の抗体は、ＩｇＧ４（例えば、ＩｇＧ４−ＰＥ）抗体である。一例では、本発明の抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一例では、本発明の抗体は、ヒトＢＭＰ５および／またはヒトＢＭＰ７よりもヒトＢＭＰ６に優先的に結合する。結合または競合は、当業者に知られるように、例えば、ＳＰＲまたはＥＬＩＳＡによって判定され得る。
【０３７２】
一例では、抗体は、ヒトＢＭＰ６への結合について参照抗体と競合し、参照抗体は、本明細書の配列表から選択されるか、または実施例の表から選択されるか、またはＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、４２  ＣＬ−５７９３１、１１４  ＣＬ−５８８３８、１３２  ＣＬ−５８８５１、９６  ＣＬ−５８２５２、７８  ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、６０  ＣＬ−５７９４５、２５８  ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、２４０  ＣＬ−７５５６５、２２２  ＣＬ−７５５３９、２０４  ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、１８６  ＣＬ−７５５０６、１６８  ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、１５０  ＣＬ−７５１８３、２７６  ＣＬ−５８７２２、３８４  ＣＬ−５８７１３、３６６  ＣＬ−５８６８０、３４８  ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、２９４  ＣＬ−５８８３５、３３０  ＣＬ−５８６５０および３１２  ＣＬ−５８７５６から選択される抗体のＶＨのＶＨアミノ酸配列を含み、かつ／または参照抗体は、選択された抗体のＶＨのＶＬアミノ酸配列を含む。一例では、参照抗体は、ＩｇＧ４（例えば、ＩｇＧ４−ＰＥ）抗体である。一例では、参照抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一例では、本発明の抗体は、ＩｇＧ４（例えば、ＩｇＧ４−ＰＥ）抗体である。一例では、本発明の抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一例では、本発明の抗体は、ヒトＢＭＰ５および／またはヒトＢＭＰ７よりもヒトＢＭＰ６に優先的に結合する。結合または競合は、当業者に知られるように、例えば、ＳＰＲまたはＥＬＩＳＡによって判定され得る。
【０３７３】
一例では、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０またはＣＬ−５８７５６のＶＨおよびＶＬドメインを含む。
【０３７４】
一例では、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−５７９３１のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−５８８３８のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−５８８５１のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−５８２５２のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−５８１０２のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−５７９４５のＶＨおよびＶＬドメインを含む。
【０３７５】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２またはＣＬ−５８１０２である。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−６６８３３である。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８である。
【０３７６】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２またはＣＬ−５８１０２の可変ドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−６６８３３の可変ドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８の可変ドメインを含む。
【０３７７】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２またはＣＬ−５８１０２のＶＨドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−６６８３３のＶＨドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８のＶＨドメインを含む。
【０３７８】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２またはＣＬ−５８１０２のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−６６８３３のＶＨおよびＶＬドメインを含む。一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３８のＶＨおよびＶＬドメインを含む。
【０３７９】
一例では、本発明の抗体または断片は、ヒト遺伝子セグメントＩＧＨＶ３−１１およびＩＧＨＪ４（例えば、ヒト遺伝子セグメントＩＧＨＶ３−１１＊０１およびＩＧＨＪ４＊０２、ＩＧＨＶ３−１１、ＩＧＨＤ６−１９、ＩＧＨＪ４、またはＩＧＨＶ３−１１＊０１、ＩＧＨＤ６−１９＊０１およびＩＧＨＪ４＊０２）の組換えであるヌクレオチド配列によってコードされるＶＨドメインを含む。追加的または代替的に、任意選択で、本発明の抗体または断片は、ヒト遺伝子セグメントＩＧＫＶ３−２０およびＩＧＫＪ１（例えば、ＩＧＫＶ３−２０＊０１およびＩＧＫＪ１＊０１）の組換えであるヌクレオチド配列によってコードされるＶＬドメインを含む。追加的または代替的に、任意選択で、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−５８８３５のＨＣＤＲ３を含む。
【０３８０】
任意選択で、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される、例えば、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２およびＣＬ−５７９４５から選択される抗体のＨＣＤＲ３を含む。任意選択で、本発明の抗体または断片は、該選択された抗体のＨＣＤＲ１および／またはＨＣＤＲ２を含む。
【０３８１】
任意選択で、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される、例えば、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２およびＣＬ−５７９４５から選択される抗体のＨＣＤＲ１を含む。任意選択で、本発明の抗体または断片は、該選択された抗体のＨＣＤＲ２および／またはＨＣＤＲ３を含む。
【０３８２】
任意選択で、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される、例えば、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２およびＣＬ−５７９４５から選択される抗体のＨＣＤＲ２を含む。任意選択で、本発明の抗体または断片は、該選択された抗体のＨＣＤＲ１および／またはＨＣＤＲ３を含む。
【０３８３】
任意選択で、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される、例えば、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２およびＣＬ−５７９４５から選択される、例えば、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される抗体のＶＨを含む。任意選択で、本発明の抗体または断片は、該選択された抗体のＶＬを含む。
【０３８４】
任意選択で、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される、例えば、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２およびＣＬ−５７９４５から選択される、例えば、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される抗体のＶＬを含む。任意選択で、本発明の抗体または断片は、該選択された抗体のＶＨを含む。
【０３８５】
任意選択で、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される、例えば、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２およびＣＬ−５７９４５から選択される、例えば、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される抗体の重鎖を含む。任意選択で、本発明の抗体または断片は、該選択された抗体の軽鎖を含む。
【０３８６】
任意選択で、本発明の抗体または断片は、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７８９０、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２、ＣＬ−５７８５９、ＣＬ−５８８３２、ＣＬ−５７９４５、ＣＬ−７５７１４、ＣＬ−７５６０５、ＣＬ−７５５６５、ＣＬ−７５５３９、ＣＬ−７５５２０、ＣＬ−７５５１９、ＣＬ−７５５１１、ＣＬ−７５５０６、ＣＬ−７５５００、ＣＬ−７５４９６、ＣＬ−７５１９４、ＣＬ−７５１８３、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される、例えば、ＣＬ−６６８３３、ＣＬ−５７９３１、ＣＬ−５８８３８、ＣＬ−５８８５１、ＣＬ−５８２５２、ＣＬ−５８１０２およびＣＬ−５７９４５から選択される、例えば、ＣＬ−５８７２２、ＣＬ−５８７１３、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９、ＣＬ−５８９２１、ＣＬ−５８６７６、ＣＬ−５８８３５、ＣＬ−５８６５０およびＣＬ−５８７５６から選択される抗体の軽鎖を含む。任意選択で、本発明の抗体または断片は、該選択された抗体の重鎖を含む。
【０３８７】
一例では、選択された抗体は、ＣＬ−５８８３５である。
【０３８８】
任意選択で、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。
【０３８９】
好ましくは、ｈＢＭＰ６に特異的に結合する抗体またはその断片は、他の抗原と交差反応しない（しかし、任意選択で、異なる種、例えばアカゲザル、カニクイザル、もしくはマウスのＢＭＰ６と交差反応し得るか、かつ／または任意選択で、異なるＢＭＰ、例えばＢＭＰ２、４もしくは９と交差反応し得る）。ＢＭＰ６抗原に特異的に結合する抗体またはその断片は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、または当業者に既知の他の技術によって同定され得る。抗体またはその断片は、放射免疫測定法（ＲＩＡ）および酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）などの実験技術を使用して判定した場合、それが任意の交差反応性抗原に対するよりも高い親和性でｈＢＭＰ６抗原に結合するときに、ｈＢＭＰ６抗原に特異的に結合する。典型的には、特異的または選択的反応は、少なくとも２倍のバックグラウンドシグナルまたはノイズ、より典型的には１０倍超のバックグラウンドである。抗体特異性に関する考察については、例えば、Ｐａｕｌ，ｅｄ．，１９８９，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの３３２〜３３６頁を参照されたい。
【０３９０】
ＢＭＰ６などの、抗体と抗原との相互作用に関与する接触アミノ酸残基は、当業者に既知の様々な方法によって判定され得る。
【０３９１】
一実施形態では、抗体が線状エピトープを認識した場合、抗原配列に基づいて短鎖ペプチドが産生され得、これらのペプチドに対する抗体の結合は、標準的な技術を使用して評価され得る。
【０３９２】
一実施形態では、限定タンパク質消化および質量分光光度測定を使用して、結合エピトープを同定することができる。
【０３９３】
一実施形態では、エピトープの接触残基は、Ｘ線結晶構造解析によって同定される。一実施形態では、エピトープの接触残基は、低温電子顕微鏡法によって同定される。一実施形態では、エピトープの接触残基は、限定タンパク質消化と質量分析法との組み合わせによって同定される。
【０３９４】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＢＭＰ６抗体（および断片）は、他の抗ＢＭＰ６抗体および断片よりも改善された一過性発現レベルを提供する。したがって、一実施形態では、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、ＨＥＫ２９３細胞、例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞において、約１００μｇ／ｍＬの発現レベルで、または約１００〜３５０μｇ／ｍＬの範囲で発現される。別の実施形態では、発現レベルは、約３５０μｇ／ｍＬを超える。
【０３９５】
別の実施形態では、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、ＣＨＯ細胞、例えば、Ｅｘｐｉ−ＣＨＯ細胞において、約１００μｇ／ｍＬの発現レベルで、または約１００〜３５０μｇ／ｍＬの範囲で発現される。別の実施形態では、発現レベルは、約３５０μｇ／ｍＬを超える。
【０３９６】
別の実施形態では、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、ＣＨＯ細胞、例えば、Ｅｘｐｉ−ＣＨＯ細胞またはＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞において、約１００μｇ／ｍＬの発現レベルで、または約１００〜３５０μｇ／ｍＬの範囲で発現される。別の実施形態では、発現レベルは、約３５０μｇ／ｍＬを超える。例えば、抗体は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４（例えば、ＩｇＧ４−ＰＥ）としてフォーマット化された、ＣＬ−５８８３８のいずれか１つのＶＨおよびＶＬドメインを含む。
【０３９７】
これらの発現系のいずれにおいても、発現は、約０．５ｍＬ〜３ｍＬ、例えば約０．５ｍＬ〜２ｍＬの程度で実行される。これらの発現系のいずれにおいても、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、ｐＴＴ５ベクターから発現され得る。これらの発現系のいずれにおいても、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、脂質トランスフェクション試薬と組み合わせて発現され得、そして任意選択で、ＣＨＯ細胞、例えば、Ｅｘｐｉ−ＣＨＯ細胞において発現され得る。これらの発現系のいずれにおいても、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、ＰＥＩトランスフェクション試薬と組み合わせて発現され得、かつ任意選択で、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞において発現され得る。これらの発現系のいずれにおいても、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、ヘルパープラスミド（例えば、ＡＫＴヘルパープラスミド）と組み合わせて発現され得、かつ任意選択で、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ−Ｅ７  ＥＢＮＡ細胞において発現され得る。
【０３９８】
これらの発現系のいずれにおいても、発現レベルは、約１００μｇ／ｍＬ〜約１５００μｇ／ｍＬ、例えば、約１００μｇ／ｍＬ〜約１０００μｇ／ｍＬ、または約２００μｇ／ｍＬ〜約１０００μｇ／ｍＬ、または約３５０μｇ／ｍＬ〜約１０００μｇ／ｍＬである。これらの発現系のいずれにおいても、発現の下限は、約１００μｇ／ｍＬ、約２００μｇ／ｍＬ、約３００μｇ／ｍＬ、または約４００μｇ／ｍＬであり得る。別の実施形態では、発現の下限は、約５００μｇ／ｍＬ、約６００μｇ／ｍＬ、約７００μｇ／ｍＬ、または約８００μｇ／ｍＬであり得る。これらの発現系のいずれにおいても、発現の上限は、約２０００μｇ／ｍＬ、約１８００μｇ／ｍＬ、約１６００μｇ／ｍＬ、または約１５００μｇ／ｍＬであり得る。別の実施形態では、発現の上限は、約１２５０μｇ／ｍＬ、約１０００μｇ／ｍＬ、約９００μｇ／ｍＬ、または約８００μｇ／ｍＬであり得る。
【０３９９】
別の実施形態では、発現系は、Ｌｏｎｚａ発現系、例えばＬｏｎｚａ  Ｘ−Ｃｅｅｄ（登録商標）系である。Ｌｏｎｚａ発現系では、発現は約３０ｍＬ〜２Ｌ、例えば５０ｍＬ〜１Ｌ、または１Ｌ〜２Ｌの程度で実行され得る。Ｌｏｎｚａ発現系では、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、電気穿孔と組み合わせて、かつ任意選択でいかなるヘルパープラスミドも伴わずに発現され得る。Ｌｏｎｚａ発現系では、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、約１ｇ／Ｌ、または約９００ｍｇ／Ｌ、または約８００ｍｇ／Ｌ、または約７００ｍｇ／Ｌのレベルで発現され得る。別の実施形態では、Ｌｏｎｚａ発現系では、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、約６００ｍｇ／Ｌまたは約５００ｍｇ／Ｌまたは約４００ｍｇ／Ｌのレベルで発現され得る。Ｌｏｎｚａ発現系では、抗ＢＭＰ６抗体（または断片）は、約４００ｍｇ／Ｌ〜約２ｇ／Ｌ、例えば約５００ｍｇ／Ｌ〜約１．５ｇ／Ｌ、または約５００ｍｇ／Ｌ〜約１ｇ／Ｌのレベルで発現され得る。別の実施形態では、発現レベルは、１ｇ／Ｌを超える。別の実施形態では、抗ＢＭＰ６抗体は、他の抗ＢＭＰ６抗体より改善された半減期を提供する。
【０４００】
一実施形態では、抗体または断片は、ヒト抗体または断片である。一実施形態では、抗体または断片は、完全ヒト抗体または断片である。一実施形態では、抗体または断片は、完全ヒトモノクローナル抗体または断片である。
【０４０１】
一実施形態では、抗体または断片は、ヒト化抗体または断片である。一実施形態では、抗体または断片は、ヒト化モノクローナル抗体または断片である。
【０４０２】
抗体と抗原との相互作用に関与する接触アミノ酸残基は、アラニンスキャニング、タンパク質結晶構造解析、質量分光光度測定または当業者には明らかとなるような他の任意の技術など、当業者に既知の様々な方法によって判定され得る。
【０４０３】
一実施形態では、列挙されたＣＤＲは、１つのアミノ酸置換を含み、これは、保存的アミノ酸置換であり得る。一実施形態では、列挙されたＣＤＲは、２つのアミノ酸置換を含み、これは、保存的アミノ酸置換であり得る。一実施形態では、列挙されたＣＤＲは、３つのアミノ酸置換を含み、これは、保存的アミノ酸置換であり得る。一実施形態では、列挙されたＣＤＲは、４つのアミノ酸置換を含み、これは、保存的アミノ酸置換であり得る。一実施形態では、列挙されたＣＤＲは、５つのアミノ酸置換を含み、これは、保存的アミノ酸置換であり得る。一実施形態では、列挙されたＣＤＲは、６つのアミノ酸置換を含み、これは、保存的アミノ酸置換であり得る。
【０４０４】
アミノ酸置換には、アミノ酸が異なる天然型アミノ酸残基で置き換えられる改変が含まれる。かかる置換は、「保存的」として分類され得、この場合、ポリペプチド中に含有されるアミノ酸残基は、極性、側鎖官能性、またはサイズのいずれかについて同様の特徴を有する別の天然型アミノ酸で置き換えられる。かかる保存的置換は、当該技術分野で周知である。本発明によって包含される置換はまた、「非保存的」であってもよく、ここでは、ペプチド中に存在するアミノ酸残基は、異なる基由来の天然型アミノ酸などの異なる特性を有するアミノ酸で置換（例えば、荷電または疎水性のアミノ酸をアラニンで置換）されるか、あるいは、天然型アミノ酸は、非在来型アミノ酸で置換される。
【０４０５】
一実施形態では、保存的アミノ酸置換は、本明細書に記載される通りである。例えば、置換は、ＹのＦによる置換、ＴのＳまたはＫによる置換、ＰのＡによる置換、ＥのＤまたはＱによる置換、ＮのＤまたはＧによる置換、ＲのＫによる置換、ＧのＮまたはＡによる置換、ＴのＳまたはＫによる置換、ＤのＮまたはＥによる置換、ＩのＬまたはＶによる置換、ＦのＹによる置換、ＳのＴまたはＡによる置換、ＲのＫによる置換、ＧのＮまたはＡによる置換、ＫのＲによる置換、ＡのＳ、Ｋ、またはＰによる置換であってもよい。別の実施形態では、保存的アミノ酸置換は、ＹがＦによって置換され、ＴのＡまたはＳによる置換、ＩのＬまたはＶによる置換、ＷのＹによる置換、ＭのＬによる置換、ＮのＤによる置換、ＧのＡによる置換、ＴのＡまたはＳによる置換、ＤのＮによる置換、ＩのＬまたはＶによる置換、ＦのＹまたはＬによる置換、ＳのＡまたはＴによる置換、およびＡのＳ、Ｇ、Ｔ、またはＶによる置換であってもよい。
【０４０６】
組み合わせ
本発明の抗体または断片は、貧血、特に中程度から重度の貧血（すなわち、９．５ｇ／ｄＬ未満の血液ヘモグロビンによって示される）を治療または予防するためのＥＳＡとの併用療法によって構成され得る。かかる組み合わせは、ＡＣＤ（慢性疾患の貧血）、炎症、または感染のような貧血の治療に有効であり得、この併用療法は、抗ＢＭＰ６抗体単独の使用に対して統計学的に有意である血液ヘモグロビン濃度の維持および上昇を生じさせ得る。さらに、かかる効果は数週間にわたって耐久性があり得る（単回用量の投与された抗ＢＭＰ６抗体の後であっても）。さらに、本発明の併用療法は、ＥＳＡを節約する貧血の療法に有用であり、すなわち、ＥＳＡの標準用量より低いＥＳＡによる治療を可能にする。これは、ＥＳＡの潜在的に有害な副作用の観点から有用である。本発明はまた、ＥＳＡに対して難治性であるか、または標準的なＥＳＡ療法に対する応答が低い対象における貧血の療法に有用であり得る。本発明は、中程度から重度の貧血の範囲外に血液ヘモグロビンを有効に維持することができ、かつ／または血液ヘモグロビンのこのような範囲への減少を予防することができる。したがって、本発明は、鉄または輸血療法に対する必要性を低減するのに有用である。
【０４０７】
本発明は、炎症性疾患の設定および微生物感染の設定における貧血の療法に有用である。
【０４０８】
この目的のために、本発明は、以下の構成１〜１３を提供する。
１．対象において少なくとも１０ｇ／ｄＬの血液ヘモグロビンレベルを維持する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、方法。
【０４０９】
２．対象の血液ヘモグロビンレベルの１０ｇ／ｄＬ未満への減少を予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、方法。
【０４１０】
３．貧血に罹患している対象において血液ヘモグロビンを少なくとも１０ｇ／ｄＬのレベルまで上昇させる方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療される、方法。
【０４１１】
４．対象における中程度または重度の貧血を治療または予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、方法。
【０４１２】
５．炎症性疾患または状態に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、方法。
【０４１３】
６．貧血に罹患している対象に対して鉄の投与または輸血の必要性を排除または低減する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該必要性が排除または低減される、方法。
【０４１４】
一例では、不安定な血漿鉄（ＬＰＩ）、強化ＬＰＩ（ｅＬＰＩ）および非トランスフェリン結合鉄（ＮＴＢＩ）のうちの１つ、より多くまたはすべてが対象において低減する。一例では、不安定な血漿鉄（ＬＰＩ）、強化ＬＰＩ（ｅＬＰＩ）および非トランスフェリン結合鉄（ＮＴＢＩ）のうちの１つ、より多くまたはすべてが対象において低減する。
【０４１５】
７．微生物感染に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、方法。
【０４１６】
８．貧血に罹患している対象に対する貧血を治療するための赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）の投与を低減する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび該ＥＳＡを投与することを含み、貧血が対象において治療される、方法。
【０４１７】
９．貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象において貧血を治療するかまたは貧血の危険性を低減する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび低用量の赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、対象において貧血が治療されるかまたは貧血の危険性が低減する、方法。
【０４１８】
１０．貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象において貧血を治療または予防するための治療レジメンであって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡを同時にまたは順次対象に投与することを含み、
ａ．０日目に、アンタゴニストを対象に投与し、７日目まで（例えば、１日目）にＥＳＡを対象に投与するか、または
ｂ．０日目に、ＥＳＡを対象に投与し、７日目まで（例えば、１日目）にアンタゴニストを対象に投与するか、または
ｃ．０日目に、アンタゴニストおよびＥＳＡを対象に同時に投与するか、または
ｄ．０日目に、対象はすでにＥＳＡを受けており、かつ０日目に、アンタゴニストを対象に投与するか、または
ｅ．０日目に、対象はすでにアンタゴニストを受けており、かつ０日目に、ＥＳＡを対象に投与し、
それによって、１４日目またはそれ以降、対象において血液ヘモグロビンレベルが少なくとも１０ｇ／ｄＬであり、該貧血が治療または予防される、治療レジメン。
【０４１９】
１１．対象における貧血を治療または予防するための、請求項１〜１０のいずれかの方法またはレジメンで使用するための併用療法であって、組み合わせが
ａ．抗ＢＭＰ６アンタゴニスト、
ｂ．ＥＳＡ、および
ｃ．任意選択で、方法またはレジメンにおける使用のための説明書を含む、併用療法。
【０４２０】
１２．対象における貧血を治療または予防するための、構成１〜１１のいずれかの方法またはレジメンにおいて使用するための抗ＢＭＰ６アンタゴニスト。
【０４２１】
１３．対象における貧血を治療または予防する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法は該抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、アンタゴニスト。
【０４２２】
「抗ＢＭＰ６アンタゴニスト」が本明細書で言及される場合、アンタゴニストは、代替抗体もしくは断片（本明細書の他の箇所に記載される）、または特許請求される、もしくは本発明の概要における、もしくは表４〜１１などの実施例に言及されるような抗体もしくは断片などの、本明細書に開示される任意の抗ＢＭＰ６抗体または断片であり得る。
【０４２３】
一態様では、アンタゴニストは、抗ＢＭＰ６抗体または断片を含むか、またはそれらからなり、方法は、
（ａ）初日（Ｄ０）に抗ＢＭＰ６抗体または断片を対象に投与し、
（ｂ）少なくとも連続３週間にわたって、Ｄ０から開始する該期間、複数回の用量のＥＳＡを投与することを含み、該対象の血液Ｈｂ濃度は、該期間の全期間にわたってＤ０のベースライン濃度から上昇し、
それによって、
（ｉ）該期間の全期間にわたって、Ｈｂ濃度は、１００％のベースラインＨｂ濃度以上であり、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインの少なくとも１２０％に達し、かつ／または
（ｉｉ）該期間の全期間にわたってＨｂ濃度は、ベースラインを超えて少なくとも１ｇ／ｄｌ増加する。
【０４２４】
本発明の態様は以下の通りであり、これらの態様（および番号が付されていないすべての段落）は、任意の他の本明細書に記載される本発明の構成、実施例、特徴、態様、または条項と組み合わせることができ、本発明のアンタゴニスト（例えば、抗ＢＭＰ６抗体もしくは断片）またはＥＳＡは、以下の態様における方法において使用するために提供することができる（または方法において使用することができる）。
１．対象において少なくとも１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、または１３ｇ／ｄＬの血液ヘモグロビンレベルを維持する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、方法。
【０４２５】
一例では、対象におけるＨｂレベルは、１１、１１．５または１２ｇ／ｄｌ以下である。
【０４２６】
２．対象の血液ヘモグロビンレベルの１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、または１３／ｄＬ未満への減少を予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、方法。
【０４２７】
３．貧血に罹患している対象において血液ヘモグロビンを少なくとも１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、または１３ｇ／ｄＬのレベルまで上昇させる方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療される、方法。
【０４２８】
任意の態様の一例では、対象は、ＢＭＰ６アンタゴニストの投与前に、中程度または重度の貧血に罹患している。一実施形態では、方法の結果は対象が貧血を有していないか、または軽度（および中程度または重度でない）の貧血を有することである。
【０４２９】
４．対象における中程度または重度の貧血を治療または予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、方法。
【０４３０】
５．炎症性疾患または状態に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、方法。
【０４３１】
一例では、炎症性疾患または状態は、微生物感染（例えば、細菌感染）または関節リウマチの炎症からなる群から選択される。一例では、貧血は炎症の貧血（慢性疾患の貧血、ＡＣＤとしても知られている）である。
【０４３２】
６．貧血に罹患している対象に対して鉄の投与または輸血の必要性を排除または低減する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該必要性が排除または低減される、方法。
【０４３３】
一実施形態では、方法は、鉄の用量（例えば、毎週、隔週、または毎月の用量）または投薬頻度を低減する。
【０４３４】
７．微生物（例えば細菌）感染に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、方法。
【０４３５】
８．貧血に罹患している対象に対する貧血を治療するための赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）の投与を低減する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび該ＥＳＡを投与することを含み、貧血が対象において治療される、方法。
【０４３６】
９．貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象において貧血を治療するかまたは貧血の危険性を低減する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび低用量の赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、対象において貧血が治療されるかまたは貧血の危険性が低減する、方法。
【０４３７】
用量は、対象、例えば、男性または女性のようなヒトまたは成人における貧血を治療または低減するために典型的に使用される標準用量よりも低い。治療または予防のための典型的な用量は、当業者には容易に明らかであろう。例えば、態様１０を参照されたい。
【０４３８】
Ｅｐｏｇｅｎは、典型的には複数の製剤でバイアル中に処方される。等張性塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム緩衝液で製剤化された単回用量バイアルは、複数の強度で供給される。各１ｍＬのバイアルは、注射用水であるＵＳＰ（ｐＨ６．９±０．３）中に、２０００、３０００、４０００、または１０，０００単位のエポエチンアルファ、アルブミン（ヒト）（２．５ｍｇ）、クエン酸（０．０６ｍｇ）、塩化ナトリウム（５．９ｍｇ）、およびクエン酸ナトリウム（５．８ｍｇ）を含有する。等張性塩化ナトリウム／リン酸ナトリウム緩衝液で製剤化された単回用量の１ｍＬのバイアルは、注射用水であるＵＳＰ（ｐＨ６．９±０．３）中に、４０，０００単位のエポエチンアルファ  アルブミン（ヒト）（２．５ｍｇ）、クエン酸（０．００６８ｍｇ）、塩化ナトリウム（５．８ｍｇ）、クエン酸ナトリウム（０．７ｍｇ）、リン酸二水素ナトリウム（１．８ｍｇ）、およびリン酸一塩基一水和物（１．２ｍｇ）を含有する。複数回投与である２ｍＬのバイアルは、１ｍＬの注射用水であるＵＳＰ（ｐＨ６．１±０．３）当たり、１０，０００単位のエポエチンアルファ、アルブミン（ヒト）（２．５ｍｇ）、ベンジルアルコール（１％）、塩化ナトリウム（８．２ｍｇ）、およびクエン酸ナトリウム（１．３ｍｇ）を含有する。複数回投与である１ｍＬのバイアルは、１ｍＬの注射用水であるＵＳＰ（ｐＨ６．１±０．３）中に、１ｍＬ当たり、２０，０００単位のエポエチンアルファ、アルブミン（ヒト）（２．５ｍｇ）、ベンジルアルコール（１％）、塩化ナトリウム（８．２ｍｇ）、クエン酸（０．１１ｍｇ）、およびクエン酸ナトリウム（１．３ｍｇ）を含有する。本発明の一例では、ＥＳＡはこれらの製剤の１つとして投与される。
【０４３９】
１０．ＥＳＡが
ａ．エポエチンアルファであり、１０００、１５００、２５００、５０００、１１０００、１８０００、３４０００または９００００単位未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ＜１５００、１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けことがあるか、
ｂ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００もしくは２００ｍｃｇの週当たりのダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）治療を以前に受けたことがあるか、または
ｃ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、２０、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けたことがある、態様１〜９のいずれかの方法。
【０４４０】
１１．抗ＢＭＰ６アンタゴニストが抗体であり、１、２、もしくは３週毎、または毎月、２か月毎、もしくは３か月毎などで３０ｍｇ／ｋｇ以下（例えば、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ）の総用量で投与される、態様１〜１０のいずれかの方法。投与は、例えば、静脈内または皮下であり得、対象は成人などのヒトである。
【０４４１】
１２．貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象において貧血を治療または予防するための治療レジメンであって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡを同時にまたは順次対象に投与することを含み、
ａ．０日目に、アンタゴニストを対象に投与し、５６、２８、１４、または７日目まで（例えば、１、６、または７日目）にＥＳＡを対象に投与するか、または
ｂ．０日目に、ＥＳＡを対象に投与し、５６、２８、１４、または７日目まで（例えば、１、６、または７日目）にアンタゴニストを対象に投与するか、または
ｃ．０日目に、アンタゴニストおよびＥＳＡを対象に同時に投与するか、または
ｄ．０日目に、対象はすでにＥＳＡを受けており、かつ０日目に、アンタゴニストを対象に投与するか、または
ｅ．０日目に、対象はすでにアンタゴニストを受けており、かつ０日目に、ＥＳＡを対象に投与し、
それによって、１４日目またはそれ以降（例えば２８、５６、または７０日目）に、血液ヘモグロビンレベルが対象において少なくとも１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、または１３ｇ／ｄＬであり、該貧血が治療または予防される、治療レジメン。
【０４４２】
任意選択で、アンタゴニストは、７日目までに２回目が投与される（例えば、アンタゴニストが６日目に投与される）。
【０４４３】
１３．抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡが７日を超えない間隔で対象に投与される、態様１〜１２のいずれかの方法またはレジメン。
【０４４４】
１４．方法またはレジメンが、対象における血液ヘモグロビンレベルを対象において１０ｇ／ｄＬを超えて維持する、態様１〜１３のいずれか１つの方法またはレジメン。
【０４４５】
１５．方法またはレジメンが、対象が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡを受けた後少なくとも１３日または１４日目に対象において血液ヘモグロビンレベルを少なくとも１０ｇ／ｄＬに維持または上昇させる、態様１〜１４のいずれかの方法またはレジメン。
【０４４６】
１６．抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡが１日を超えない間隔で対象に投与される、態様１４または１５の方法またはレジメン。
【０４４７】
１７．抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡが同時に対象に投与される、態様１〜１６のいずれかの方法またはレジメン。
【０４４８】
１８．対象の血液ヘモグロビンレベルが、（例えば、１４日目において）１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、または１３ｇ／ｄＬ未満まで低下することが予防される、態様１〜１７のいずれかの方法またはレジメン。
【０４４９】
１９．対象の血液ヘモグロビンが、（例えば、１４日目において）少なくとも１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、または１３ｇ／ｄＬのレベルまで上昇する、態様１〜１８のいずれかの方法またはレジメン。
【０４５０】
２０．対象において（例えば、１４日目において）中程度または重度の貧血が予防される、態様１〜１９のいずれかの方法またはレジメン。
【０４５１】
２１．対象が、
ａ．炎症性疾患もしくは状態に罹患しているか、または
ｂ．感染症に罹患しているか、
ｃ．腎臓病に罹患しているか、
ｄ．ＨＩＶに罹患しているか、もしくはＨＩＶ治療を受けているか、または
ｅ．癌に罹患しており、
対象において中程度または重度の貧血が治療または予防される、態様１〜２０のいずれかの方法またはレジメン。
【０４５２】
一例では、対象は、ＨＩＶ感染症に罹患している、はＨＩＶ、肝炎、関節リウマチ、慢性腎臓病、または末期腎臓病である。例えば、感染症は、グラム陰性細菌感染症である。例えば、感染症は、グラム陽性細菌感染症である。
【０４５３】
抗ＨＩＶ療法で治療されたＨＩＶ感染したヒトは、貧血を発症する可能性がある。したがって、本発明は、かかる患者の貧血を治療または予防するために有用であり得る。一例では、方法またはレジメンは、例えば、ジドブジンが４２００ｍｇ／週未満で投与される、抗ＨＩＶ療法を投与されたＨＩＶ感染したヒトにおける貧血を治療または予防する。
【０４５４】
抗癌化学療法（例えば、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＴＩＧＩＴ、抗ＩＣＯＳ、または抗ＰＤ１抗体などの対象に免疫チェックポイント阻害剤を投与することなどによる免疫療法）で治療された癌患者は、貧血を発症する可能性がある。したがって、本発明は、かかる患者の貧血を治療または予防するために有用であり得る。一例では、方法またはレジメンは、癌に罹患しているヒトにおける貧血を治療または予防する。当技術分野では、エリスロポエチンなどのＥＳＡは、典型的には、初めに週に３回、１５０単位／ｋｇの用量の静脈内または皮下でかかる患者に投与され、代替的に化学療法の過程が終了するまで週に１回、４０，０００単位の皮下で投与される。一例では、本発明は、ＥＳＡを週に３回、静脈内または皮下に１５０単位／ｋｇ未満で、もしくは４５０単位／ｋｇ未満の１週間の総週用量で、または毎週、皮下に４０，０００単位未満で、ヒトに投与して、ヒト癌患者における貧血を治療または予防する。
【０４５５】
ＥＳＡ治療は、当該技術分野において、患者、例えば手術を受けている患者における赤血球（ＲＢＣ）輸血の必要性の低減のために使用されている。したがって、ＥＳＡ治療は、例えば、待機的手術、非心臓手術、非血管手術などの手術による手術前後の失血の危険性が高い、１０ｇ／ｄＬを超えるが１３ｇ／ｄＬ以下の手術前ヘモグロビンを有するヒト患者において使用される。ＥＳＡは、３００単位／ｋｇを皮下で１５日間連続して１日１回投与される（手術前の１０日間、手術の日、手術後４日間）、代替的に６００単位／ｋｇを皮下で、手術の２１、１４、および７日前、ならびに手術日の４回投与される。一例では、本発明は、ヒトの手術患者における貧血を治療または予防し、ＥＳＡは、３００単位／ｋｇ未満で連続１５日間（手術前１０日間、手術の日、手術後４日間）に１日１回、もしくは４５００単位／ｋｇ未満の合計１５日用量、または３〜５回もしくは４回用量で６００単位／ｋｇ未満、例えば、手術の２１日前、１４日、前および７日前および手術当日に、ヒトに投与される。
【０４５６】
２２．対象において中程度または重度の貧血が治療または予防される、態様２１の方法。
【０４５７】
２３．対象が哺乳動物である、態様１〜２２のいずれかの方法またはレジメン。
【０４５８】
２４．対象における貧血を治療または予防するための、態様１〜２３のいずれかの方法またはレジメンで使用するための併用療法であって、組み合わせが
ａ．抗ＢＭＰ６アンタゴニスト、
ｂ．ＥＳＡ、および
ｃ．任意選択で、方法またはレジメンにおける使用のための説明書を含む、併用療法。
【０４５９】
２５．対象における貧血を治療または予防するための、態様１〜２４のいずれかの方法またはレジメンにおいて使用するための抗ＢＭＰ６アンタゴニスト。
【０４６０】
２６．中程度または重度の貧血を治療または予防するための、態様２４の組み合わせまたは態様２５のアンタゴニスト。
【０４６１】
２７．抗炎症剤と組み合わされる、態様２４〜２６のいずれか１つのアンタゴニストの組み合わせ。
【０４６２】
２８．アンタゴニストが抗ＢＭＰ６抗体結合部位を含み、例えば、アンタゴニストが抗体または抗ＢＭＰ６トラップである、態様１〜２７のいずれかの方法、レジメン、組み合わせ、またはアンタゴニスト。
【０４６３】
一例では、トラップは、ヒト抗体Ｆｃ領域に融合したヒトＢＭＰ６受容体ドメインを含む。一実施形態では、Ｆｃは、ヒトガンマ−１または−４重鎖定常領域を含む。
【０４６４】
２９．ＥＳＡがエリスロポエチンである、態様１〜２８のいずれかの方法、レジメン、組み合わせ、またはアンタゴニスト。
【０４６５】
３０．抗炎症剤が対象に投与される、態様１〜２３、２８および２９のいずれか１つの方法またはレジメン。
【０４６６】
一例では、本発明は、内在性の鉄貯蔵を動員し、ヘモグロビン合成を増加させ、任意選択で赤血球生成をも増加させるために抗ＢＭＰ６モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用する。本発明は、一態様では、ＡＣＤ患者における静脈内の鉄または輸血の同時かつ一般的な使用の必要性を低減し得る。追加的または代替的に、本発明は、ＥＳＡ（例えばＥＰＯ）による標準治療の基礎をなす用量を低減することができるか、またはＥＳＡ（例えばＥＰＯ）に非応答性患者（もしくは低応答性のもの）を、抗ＢＭＰ６アンタゴニストとのＥＳＡの共投与に応答性にすることができる。追加的または代替的に、本発明は、貧血がＥＳＡ標準治療に対して難治性または非応答性である患者における貧血を治療または予防することができる。ＥＳＡは、制御不能の高血圧を有するか、またはＥＳＡ（例えば、Ａｒｅｎｅｓｐ（登録商標）のようなダルベポエチンアルファ、または例えばＥｐｏｇｅｎ（登録商標）にもしくはＰｒｏｃｒｉｔ（登録商標）のようなエポエチンアルファ）を投与されることに起因する赤芽球癆（ＰＲＣＡ、貧血の一種）を有する患者において普及している。
【０４６７】
したがって、本発明の一実施形態では、対象（例えば、ヒト）は、
ｉ．ＥＳＡ（例えば、ダルベポエチンアルファまたはエポエチンアルファ）に対して難治性または非応答性であるか、
ｉｉ．高血圧（例えば、制御不能の高血圧）に罹患するか、罹患しているか、または
ｉｉｉ．赤芽球癆（例えば、ダルベポエチンアルファまたはエポエチンアルファなどのＥＳＡを投与されて引き起こされる）に罹患するか、罹患している。
【０４６８】
ＥＳＡ治療などの薬物治療に関連する「難治性」は、当業者には容易に明らかであり、例えば、対象がＥＳＡ抵抗性であるか、またはＥＳＡに対する低い応答性（すなわち、平均応答未満）であり、ＥＳＡを用いる標準治療によって貧血が効果的に治療されていないことを意味する。
【０４６９】
ＥＳＡは、典型的にはヘモグロビンを最低レベルに維持するために使用され、それは輸血を最小限に抑えることと、患者のニーズを最も満たすこととの両方をもたらす。上に説明したように、本発明は、その様々な構成、態様、例、および実施形態では、ＥＳＡを節約する貧血の療法に有用であり、すなわち、ＥＳＡの標準用量より低いＥＳＡによる治療を可能にする。これは、ＥＳＡの潜在的に有害な副作用の観点から有用である。表Ａ〜Ｄは、この点に関する関連情報を提供する。
【表１】
2022502040.tif 000003
【０４７０】
一例では、対象は、透析を受けていない慢性腎臓病（ＣＫＤ）患者である。一例では、対象は、透析を受けている慢性腎臓病（ＣＫＤ）患者である。一例では、対象は、化学療法患者である（例えば、癌の化学療法を受けるか、または受けている）。
［表Ｂが続く］
【表２−１】
2022502040.tif 000004
【表２−２】
2022502040.tif 000005
【表２−３】
2022502040.tif 000006
【表２−４】
2022502040.tif 000007
【表２−５】
2022502040.tif 000008
【０４７１】
一実施形態では、本発明の治療または予防は、表Ｂに列挙された１つ以上の副作用、例えば、「一般的」な、「より一般的」な、または「非常に一般的」な副作用の１つ以上の発生または危険性を、対象において低減させる。
【０４７２】
一態様では、本発明は、貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象の副作用を低減したＥＳＡ療法の方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、方法を提供する。任意選択で、表Ｂに列挙された１つ以上のＥＳＡの副作用（例えば、「一般的」な、「より一般的」な、または「非常に一般的」な副作用の１つ以上）の発生または危険性が低減する。一例では、療法は、貧血治療である。一例では、療法は、貧血予防である。一例では、貧血は、中程度または重度の貧血である。
【表３】
2022502040.tif 000009
【０４７３】
一実施形態では、本発明の治療または予防は、対象において、表Ｃに列挙される１つ以上の副作用の発生または危険性、例えば、短縮した全生存期間および／または腫瘍進行または再発の増加した危険性であって、対象は、乳癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、リンパ性癌、および子宮頸癌患者であるか、または脳卒中のような心臓血管または血栓塞栓反応を有する危険性を低減する。
【０４７４】
一態様では、本発明は、貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象の副作用を低減したＥＳＡ療法の方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、方法を提供する。任意選択で、表Ｃに列挙される１つ以上のＥＳＡの副作用の発生または危険性（例えば、短縮した全生存期間および／または腫瘍進行または再発の増加した危険性であって、対象は、乳癌、非小細胞肺癌、頭頸部癌、リンパ性癌、および子宮頸癌患者であるか、または脳卒中のような心臓血管または血栓塞栓反応を有する危険性）が低減される。一例では、療法は、貧血治療である。一例では、療法は、貧血予防である。一例では、貧血は、中程度の貧血である。一例では、貧血は、中程度から重度の貧血である。一例では、貧血は、重度の貧血である。一例では、本発明の貧血は、骨髄抑制化学療法による貧血である。
【表４】
2022502040.tif 000010
【０４７５】
本発明の態様は、（ｉ）および（ｉｉ）を提供する。
（ｉ）貧血に罹患している対象に対する貧血を治療するための赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）の投与を低減する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび該ＥＳＡを投与することを含み、貧血が対象において治療される、方法。
【０４７６】
（ｉｉ）貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象において貧血を治療するかまたは貧血の危険性を低減する方法であって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび低用量の赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、対象において貧血が治療されるかまたは貧血の危険性が低減する、方法。
【０４７７】
これらの態様の例では、ＥＳＡは
ａ．エポエチンアルファであり、１０００、１５００、２５００、５０００、１１０００、１８０００、３４０００または９００００単位未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ＜１５００、１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けことがあるか、
ｂ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００もしくは２００ｍｃｇの週当たりのダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）治療を以前に受けたことがあるか、または
ｃ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、２０、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けたことがある。
【０４７８】
一例では、ＥＳＡは
（ｉ）エポエチンアルファであり、３０００〜３００００単位の範囲の週用量で投与されるか、または
（ｉｉ）ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、１５〜１００ｍｃｇの範囲の週用量で投与され、かつ
対象はヒト、例えば成人である。
【０４７９】
一例では、血液ヘモグロビンは、１０ｇ／ｄＬを超えるレベルまで上昇するか、または維持される。
【０４８０】
一例では、対象は、成人である。一例では、対象は、乳幼児である。一例では、対象は、透析治療を受けているヒトＣＫＤ患者である。一例では、対象は、末期腎疾患を有するヒトである。
【０４８１】
本発明の方法において、治療有効量または予防有効量のアンタゴニストおよびＥＳＡは、対象に投与される。一例では、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡは、１０、１４、２１または２８日以下の間隔で対象に投与される。例えば、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡは、１ヶ月または２ヶ月以下の間隔で対象に投与される。
【０４８２】
赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）の例は、エポエチンアルファ、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｄｙｎｅｐｏ（登録商標）、Ｅｐｒｅｘ（登録商標）、エリスロポエチン、ダルベポエチンアルファ、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標）、エポエチンベータ、ＮｅｏＲｅｃｏｒｍｏｎ（登録商標）、メトキシポリエチレングリコール−エポエチンベータ、Ｍｉｒｃｅｒａ（登録商標）およびＰｒｏｃｒｉｔ（登録商標）である。一実施形態では、本発明のＥＳＡは、これらのいずれか１つまたはこれらの２つ以上の組み合わせである。
【０４８３】
一例では、ＥＳＡは、例えば、以下の表から選択される組換えエリスロポエチンを含むか、またはそれからなる。エリスロポエチンは、様々なグリコシル化パターンを有し、アルファ、ベータ、デルタ、およびオメガの形態を生じる。
【表５】
2022502040.tif 000011
【０４８４】
一例では、本発明のＥＳＡは、アルファ、ベータ、デルタ、ゼータおよびオメガの形態からなる群から選択される。
【０４８５】
一例では、ＥＳＡは、低酸素誘導因子プロリルヒドロキシラーゼ（ＨＩＦ−ＰＨ）阻害剤、例えば、ロキサダスタットまたはＦＧ−４５９２である。ＨＩＦは、体内の赤血球（ＲＢＣ）の産生の主要な調節因子であり、潜在的に新規な貧血治療の機序である。この新規な作用機序は、低酸素誘導因子−プロリルヒドロキシラーゼ（ＨＩＦ−ＰＨ）阻害剤と呼ばれている。ＨＩＦ−ＰＨ阻害剤は、貧血に対する生体の自然な応答を模倣することによって作用する。これにより、体内の赤血球生成系の制御された、適応性のある刺激が可能になる。このシステム全体の活性化は、赤血球（ＲＢＣ）産生の増加と骨髄の鉄供給の安定化の向上の両方をもたらし、このようなＲＢＣ産生に必要な鉄のヘモグロビンへの適切な取り込みを保証する。この適応シミュレーションは、人が高地に上昇するときに誘導される自然の応答と非常によく類似する。より高い高地においては、血流中を循環する低レベルの酸素が、腎臓および肝臓中の関連する細胞における低減したＨＩＦ−ＰＨ活性をもたらす。低減したＨＩＦ−ＰＨ活性は、タンパク質ＨＩＦ１αおよびＨＩＦ２α（まとめてＨＩＦαと呼ばれる）の細胞内レベルを安定化および増加させる。ほとんどの細胞に関して、ＨＩＦ２αの安定化はＨＩＦ１αの安定化よりも大きく、最終的にはエリスロポエチン（ＥＰＯ）分泌の増加およびその後のＲＢＣ産生の増加をもたらす。
【０４８６】
ＨＩＦ−ＰＨ阻害剤は、ＨＩＦαタンパク質の分解を促進するプロリルヒドロキシラーゼ酵素の作用を遮断することによって作用する。分解が阻害されると、これらのＨＩＦαタンパク質のレベルは細胞内で増加する。これらのＨＩＦは、生体およびその個々の細胞のすべてが酸素レベルの変化に適応することを可能にする主要なタンパク質メディエーターである。両方のＨＩＦαタンパク質が定常的に産生され、細胞中のそれらのレベルは、ＨＩＦαタンパク質を分解の標的とするＨＩＦ−ＰＨ酵素の活性によって調節される。ＨＩＦ１αは、細胞が非常に低い酸素条件で生存するのを助けるが、ＨＩＦ２αは海面から７５００フィートまでの高度の変化に伴って起こるような酸素の中程度の変化に細胞や生体が適応するのを助ける。ＨＩＦαが安定化されているとき、それがタンパク質ＨＩＦβに結合し、細胞の核に移動する。共に結合すると、それらはＥＰＯおよび他のいくつかのタンパク質の産生のための遺伝子シグナルを誘導する。ＨＩＦ−ＰＨ阻害剤は、酸素の減少がＨＩＦαレベルを増加させるのと同じように、体内のＨＩＦ−ＰＨ酵素を阻害することによってＨＩＦαレベルを増加させる。ＨＩＦαの持続的な安定化（より高い高度での滞在またはＨＩＦ−ＰＨ阻害剤の毎日の投与による）によって、血液中を循環する酸素の量を増加させるために、ヘモグロビンおよびＲＢＣのレベルが上昇する。
【０４８７】
抗ＢＭＰ６抗体の例は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓより市販されているＭＡＢ５０７である（モノクローナルマウスＩｇＧ２Ｂ、クローン＃７４２１９）。他の好適な抗体は、本発明における可能性のある使用のために、その開示（ならびに明示的にそれらの中の抗体、可変領域、およびＣＤＲの配列）が参照により本明細書に組み入れられる、ＵＳ８９８０５８２、ＷＯ２０１６／０９８０７９、およびＵＳ２０１６／０１７６９５６Ａ１に開示される。
【０４８８】
一実施形態では、アンタゴニストは、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むか、またはそれらからなり、ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲは、ＣＤＲであるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号２のポリペプチドであり、ＬＣＤＲ２は、配列番号３のポリペプチドであり、ＬＣＤＲ３は、配列番号４のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ１は、配列番号５のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ２は、配列番号６または配列番号７のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ３は、配列番号８のポリペプチドである。本パラグラフ中の配列番号は、ＵＳ８９８０５８２に開示されているものであり、これらの配列は、本発明における可能性のある使用のために、および本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に含まれる可能性のために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４８９】
一実施形態では、アンタゴニストは、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むか、またはそれらからなり、ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲは、ＣＤＲであるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号２のポリペプチドであり、ＬＣＤＲ２は、配列番号３のポリペプチドであり、ＬＣＤＲ３は、配列番号４のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ１は、配列番号５のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ２は、配列番号６のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ３は、配列番号８のポリペプチドである。本パラグラフ中の配列番号は、ＵＳ８９８０５８２に開示されているものであり、これらの配列は、本発明における可能性のある使用のために、および本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に含まれる可能性のために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４９０】
一実施形態では、アンタゴニストは、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むか、またはそれらからなり、ＬＣＶＲは、相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含み、ＨＣＶＲは、ＣＤＲであるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号２のポリペプチドであり、ＬＣＤＲ２は、配列番号３のポリペプチドであり、ＬＣＤＲ３は、配列番号４のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ１は、配列番号５のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ２は、配列番号７のポリペプチドであり、ＨＣＤＲ３は、配列番号８のポリペプチドである。本パラグラフ中の配列番号は、ＵＳ８９８０５８２に開示されているものであり、これらの配列は、本発明における可能性のある使用のために、および本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に含まれる可能性のために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４９１】
一実施形態では、アンタゴニストは、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むか、またはそれらからなり、ＬＣＶＲは、配列番号９のポリペプチドであり、ＨＣＶＲは、配列番号１０または配列番号１１のポリペプチドである。さらなる実施形態では、アンタゴニストは、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むか、またはそれらからなり、ＬＣＶＲは、配列番号９のポリペプチドであり、ＨＣＶＲは、配列番号１０のポリペプチドである。別の実施形態では、アンタゴニストは、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体またはその抗原結合断片を含むか、またはそれらからなり、ＬＣＶＲは、配列番号９のポリペプチドであり、ＨＣＶＲは、配列番号１１のポリペプチドである。本パラグラフ中の配列番号は、ＵＳ８９８０５８２に開示されているものであり、これらの配列は、本発明における可能性のある使用のために、および本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に含まれる可能性のために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４９２】
一実施形態では、アンタゴニストは、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体を含むか、またはそれからなり、ＬＣＶＲは、配列番号９のポリペプチドであり、ＨＣＶＲは、配列番号１０または配列番号１１のポリペプチドである。さらなる実施形態では、本発明は、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体を提供し、ＬＣＶＲは、配列番号９のポリペプチドであり、ＨＣＶＲは、配列番号１０のポリペプチドである。別の実施形態では、アンタゴニストは、ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲを含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体を含むか、またはそれからなり、ＬＣＶＲは、配列番号９のポリペプチドであり、ＨＣＶＲは、配列番号１１のポリペプチドである。本パラグラフ中の配列番号は、ＵＳ８９８０５８２に開示されているものであり、これらの配列は、本発明における可能性のある使用のために、および本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に含まれる可能性のために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４９３】
一実施形態では、アンタゴニストは、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体を含むか、またはそれからなり、ＬＣは、配列番号１２のポリペプチドであり、ＨＣは、配列番号１３または配列番号１４のポリペプチドである。さらなる実施形態では、アンタゴニストは、ＬＣおよびＨＣを含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体を含むか、またはそれからなり、ＬＣは、配列番号１２のポリペプチドであり、ＨＣは、配列番号１３のポリペプチドである。別の実施形態では、アンタゴニストは、ＬＣおよびＨＣを含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体を含むか、またはそれからなり、ＬＣは、配列番号１２のポリペプチドであり、ＨＣは、配列番号１４のポリペプチドである。本パラグラフ中の配列番号は、ＵＳ８９８０５８２に開示されているものであり、これらの配列は、本発明における可能性のある使用のために、および本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に含まれる可能性のために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４９４】
一実施形態では、アンタゴニストは、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体を含むか、またはそれからなり、各軽鎖は、配列番号１２のポリペプチドであり、各重鎖は、配列番号１３のポリペプチドである。一実施形態では、アンタゴニストは、２つの軽鎖および２つの重鎖を含む、ヒトＢＭＰ−６（配列番号１）に結合する抗体を含むか、またはそれからなり、各軽鎖は、配列番号１２のポリペプチドであり、各重鎖は、配列番号１４のポリペプチドである。本パラグラフ中の配列番号は、ＵＳ８９８０５８２に開示されているものであり、これらの配列は、本発明における可能性のある使用のために、および本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に含まれる可能性のために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０４９５】
一実施形態では、本発明は、本発明の抗ＢＭＰ６アンタゴニスト（例えば、抗体、またはそのＢＭＰ６結合断片）、および許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。より具体的には、本発明の組成物は、１つ以上の追加の治療剤、例えば、ＥＳＡおよび／または抗炎症剤をさらに含む。好適な抗炎症剤は、抗体または抗体断片、例えば、抗ＴＮＦアルファ抗体（例えば、アダリムマブ、ヒュミラ（登録商標）、インフリキシマブ、レミケード（登録商標）、ゴリムマブ、シンポニー（登録商標））、またはトラップ（例えば、エタネルセプトまたはエンブレル（登録商標））、または抗ＴＮＦＲ抗体または抗体断片、または抗ＩＬ６Ｒ抗体（例えば、サリルマブ、トシリズマブまたはアクテムラ（登録商標））であり得る。
【０４９６】
一例では、抗ＢＭＰ６アンタゴニスト、抗体または断片は、当該技術分野で既知である一般的な方法によって判定されるように、例えば、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）バイオセンサーを使用して、１×１０−８Ｍ未満、好ましくは、１×１０−９Ｍ未満のＫＤを有するＢＭＰ６に結合する。
【０４９７】
「有効量」とは、研究者、医師、または他の臨床医によって求められている対象、哺乳動物またはヒトに対して、生物学的もしくは臨床的応答または所望の治療効果を引き出す本発明のアンタゴニスト（例えば、抗体）もしくはＥＳＡ、または本発明の薬学的組成物の量を意味する。有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに抗体および／またはＥＳＡが個体において所望の応答を引き出す能力などの要因に応じて変動し得る。有効量はまた、治療に有益な効果が任意の毒作用または有害作用に勝るものである。
【０４９８】
「治療」、「治療する」、「治療すること」などの用語は、貧血、中程度の貧血、重度の貧血、または血液ヘモグロビンの減少などの障害の進行を遅らせるか、または回復させることを含むように意図される。これらの用語はまた、障害または状態が実際に完全に排除されていない場合でも、障害または状態の１つ以上の症状（貧血、中程度の貧血、重度の貧血、または血液ヘモグロビンの減少など）を改善、緩和、軽減、排除、または低減することを含む。対象または患者は、ＢＭＰ−６活性の阻害から利益を得る哺乳動物、好ましくは疾患、障害または状態（例えば、貧血または貧血の危険性がある）を有するヒトを指す。「予防すること」という用語は、例えば、貧血などの疾患または状態の危険性を低減することである。
【０４９９】
本発明のＥＳＡ、抗ＢＭＰ６アンタゴニスト抗体、またはそれらの抗原結合断片、組み合わせ、または同様のものを含む薬学的組成物は、非経口経路（例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、または経皮）によって投与され得る。投与は、単独で、または単回または複数回の用量で薬学的に許容される担体および／または希釈剤と組み合わせて対象に行うことができる。本発明の薬学的組成物、組み合わせまたはアンタゴニストは、当技術分野で周知の方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄ．（１９９５），Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）によって調製することができ、１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含むか、またはそれらと組み合わせることができる。
【０５００】
一例では、対象は、ＢＭＰ６アンタゴニストの投与前に、中程度または重度の貧血に罹患しており、中程度または重度の貧血が治療される。一実施形態では、対象は、投与前に中程度の貧血に罹患しており、治療後、対象は軽度の貧血を有するか、または貧血を有していない。一実施形態では、対象は、投与前に重度の貧血に罹患しており、治療後、対象は軽度、中程度の貧血を有するか、または貧血を有していない。一実施形態では、治療後、対象は軽度の貧血を有するか、または貧血を有していない、かつ中程度または重度の貧血ではない。別の実施形態では、治療後、対象は貧血を有していない。一実施形態では、対象は、投与前に９．５ｇ／ｄＬ未満の血液ヘモグロビンレベルを有しており、治療後、対象は少なくとも１０、１１、１２、１３または１４ｇ／ｄＬの血液ヘモグロビンレベルを有する。
【０５０１】
貧血は一般に、ヘモグロビン濃度が、妊婦の場合１１ｇ／ｄＬ、非妊婦の場合１２ｇ／ｄＬ、および男性の場合１３ｇ／ｄＬ未満に低下する場合と考えられる。
【０５０２】
貧血の重症度は、以下のヘモグロビン濃度範囲によって分類される。
・ヘモグロビンが９．５〜１３．０ｇ／ｄＬである場合、軽度の貧血と考えられる
・ヘモグロビンが８．０〜９．５ｇ／ｄＬである場合、中程度の貧血と考えられる
・ヘモグロビン濃度が８．０ｇ／ｄＬ未満の場合、重篤な貧血と考えられる
【０５０３】
一例では、ヘモグロビンのレベルは、海面での測定値または同等である。
【０５０４】
一実施形態では、対象は、ヒト男性、例えば、成人または幼児である。一実施形態では、対象は、ヒト女性、例えば、成人または乳児、例えば、非妊婦または妊婦である。一例では、ヒトは、透析患者である。乳児は、生後１か月を超えるヒトであり得る。
【０５０５】
一例では、方法は、貧血に罹患している対象に対して鉄の投与または輸血の必要性を排除または低減する、例えば、対象に対して鉄の用量または鉄の投薬頻度を低減するための方法である。
【０５０６】
本発明は、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡを同時にまたは順次投与することを含み得る。一例では、アンタゴニストおよびＥＳＡは、１か月、４週、３週、２週、１週、１０日、９日、８日、７日、６日、５日、４日、３日、２日または１日以下の間隔で投与される。本明細書に例示されるように、アンタゴニストおよびＥＳＡの投与は、７日以下（例えば、１日以下）の間隔の場合に有効であり得る。一例では、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡは、１０、１４、２１または２８日以下の間隔で対象に投与される。
【０５０７】
一例では、ＥＳＡは、週に２、３または４回投与される。一例では、ＥＳＡは、月に１、２、３または４回、または８週間の期間内に投与される。一例では、ＥＳＡ（例えば、エポエチンアルファ）は、週に＜３０００、２９００、２８００、２７００、２６００、＜２５００、２５００、２４００、２３００、２２００、２１００、＜２０００、２０００、１９００、１８００、１７００、１６００、１５００、１４００、１３００、１２００、１１００または１０００単位／ｋｇの総用量で投与される。別の例では、ＥＳＡは、月に１、２、３または４回、または８週間の期間内に投与される。一例では、ＥＳＡ（例えば、ダルベポエチンアルファ）は、週に＜１５、＜３０、１２、１１、１０、９、８、７、６または５ｍｃｇ／ｋｇの総用量で投与される。
【０５０８】
一例では、ＥＳＡおよび／またはアンタゴニストは、対象に静脈内または皮下に投与される。
【０５０９】
一例では、貧血は、ジドブジン治療を受けている、または受けた対象におけるものである。
【０５１０】
任意選択で、本発明の任意の構成はまた、
（ａ）例えば、貧血の危険性を治療または低減するために、血中鉄を増加させるかまたは増加を維持すること、
（ｂ）鉄欠乏症を治療すること、
（ｃ）慢性炎症の貧血（ＡＣＩ）の危険性を治療または低減すること、
（ｄ）慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）の危険性を治療または低減すること、
（ｅ）癌、腎臓状態、またはＧｖＨＤに伴う貧血の危険性を治療または低減すること、
（ｆ）血中または血清鉄濃度を増加させること、
（ｇ）網状赤血球数を増加させること、
（ｈ）赤血球数を増加させること、
（ｉ）ヘモグロビンを増加させること、および
（ｊ）対象（例えば、ヒト）のヘマトクリットを増加させることのうちの１つ以上のためのものである。
【０５１１】
一実施形態では、本発明は、対象における赤血球生成を調節する（例えば、増加させる）ためのものである。
【０５１２】
一実施形態では、対象は、ＢＭＰ６遺伝子ＳＮＰ  ｒｓ１１１５８８６９３を含むヒトである。これは貧血の傾向の増加と相関している可能性がある。
【０５１３】
一例では、貧血は、癌の貧血、または慢性腎臓病（ＣＫＤ）の貧血などの慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）ある。癌、腎臓病、自己免疫障害などの特定の慢性疾患は、過剰な炎症性サイトカインが鉄の恒常性の調節不全、赤血球生成の低減、および赤血球の寿命の減少を引き起こす場合、ＡＣＤにつながる可能性がある。ヘプシジンは、鉄の恒常性に関与する重要なホルモンとして同定されており、高レベルのヘプシジンは、ＡＣＤで見られる鉄制限赤血球生成に関連している。ＢＭＰ−６はヘプシジン発現を増加させることが示されている。一例では、本発明は、対象における低減したヘプシジンレベルを低減または維持するためのものである。
【０５１４】
ＣＫＤの貧血は、ＣＫＤに罹患する患者における初期の一般的な合併症である貧血である。癌の貧血は、血液学的悪性腫瘍およびいくつかの固形腫瘍によって引き起こされる貧血であり、その一方で、化学療法誘導性（例えば、免疫療法誘導性）貧血は、化学療法剤による癌患者の治療によって引き起こされる貧血である。ＣＫＤの貧血は、他の状態のうち、糖尿病性ニューロパチー、心血管疾患、および網膜症を悪化させる。癌関連の貧血は、相対的な死亡の危険性の増加と関連している。赤血球生成促進剤は化学療法誘導性貧血にのみ適応されるため、癌関連の貧血の現在の治療選択肢は、輸血に限定されている。
【０５１５】
一例では、対象は、癌（例えば、血液学的悪性腫瘍または固形腫瘍）、腎臓病、自己免疫障害または化学療法誘導性貧血などの慢性疾患に罹患している。一例では、対象（例えば、ヒト）は、ＣＫＤならびに糖尿病性ニューロパチー、心血管疾患、および網膜症のうちの１つ以上に罹患している。
【０５１６】
一例では、貧血は、ヘプシジン関連の鉄制限性貧血である。一例では、貧血は、鉄剤不応性鉄欠乏性貧血（ＩＲＩＤＡ）である。一実施形態では、ＩＲＩＤＡは、対象のＴＭＰＲＳＳ６遺伝子の欠陥によって引き起こされ、例えば、ＩＲＩＤＡは、ＴＭＰＲＳＳ６遺伝子変異（例えば、ｒｓ８５５７９１、ｒｓ２５４３５１９、ｒｓ２２３５３２４、またはｒｓ１４２１３１２などのＳＮＰ）によって引き起こされる。
【０５１７】
一例では、方法は、貧血を治療または予防することに加えて、またはその代わりに、シェーグレン症候群を治療または予防する方法である。
【０５１８】
一例では、本発明は、対象（例えば、ヒト）における血中鉄レベル、血清鉄レベル、網状赤血球数、赤血球数、ヘモグロビン、および／またはヘマトクリットを増加させるためのものである。
【０５１９】
一実施形態では、本発明は、医薬品の製造のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡの使用を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、貧血、例えば、中程度から重度の貧血の治療または予防のための医薬品の製造のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡの使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、慢性疾患の貧血の治療のための医薬品の製造のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡの使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、慢性腎臓病の貧血の治療のための医薬品の製造のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡの使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、癌の貧血の治療のための医薬品の製造のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡの使用を提供する。一実施形態では、本発明は、ＩＲＩＤＡの治療のための医薬品の製造のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡの使用を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、ＩＲＩＤＡの治療のための医薬品の製造のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡの使用を提供し、ＩＲＩＤＡは、ＴＭＰＲＳＳ６遺伝子変異（例えば、ｒｓ８５５７９１、ｒｓ２５４３５１９、ｒｓ２２３５３２４、またはｒｓ１４２１３１２などのＳＮＰ）によって引き起こされる。一実施形態では、本発明は、シェーグレン症候群の治療のための医薬品の製造のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡの使用を提供する。
【０５２０】
実施形態
本発明の実施形態は以下の通りであり、これらの実施形態（および番号が付されていないすべての段落）は、任意の他の本明細書に記載される本発明の構成、条項、パラグラフ、例、特徴、または態様と組み合わせることができ、本発明のアンタゴニスト（例えば、抗ＢＭＰ６抗体または断片）またはＥＳＡは、以下の実施形態における方法において使用するために提供することができる（または方法において使用することができる）。
【０５２１】
１．対象における貧血を治療または予防する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が該抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、アンタゴニスト。
【０５２２】
一実施形態では、方法は、対象の貧血を治療するためのものであり、該貧血が治療される。
【０５２３】
一例では、アンタゴニストは、抗ＢＭＰ６抗体または断片、例えば、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体を含むか、またはそれらからなる。抗体または断片の代替として、異なるＢＭＰ６アンタゴニスト、例えば、抗ＢＭＰ６トラップまたはＨＪＶ−Ｆｃが本発明によって企図される。
【０５２４】
２．アンタゴニストは、抗ＢＭＰ６抗体または断片を含むか、またはそれらからなり、方法は、
（ａ）初日（Ｄ０）に抗ＢＭＰ６抗体または断片を対象に投与し、
（ｂ）少なくとも連続３週間にわたって、Ｄ０から開始する該期間、複数回の用量のＥＳＡを投与することを含み、該対象の血液Ｈｂ濃度は、該期間の全期間にわたってＤ０のベースライン濃度から上昇し、
それによって、
（ｉ）該期間の全期間にわたって、Ｈｂ濃度は、１００％のベースラインＨｂ濃度以上であり、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインの少なくとも１２０％に達し、かつ／または
（ｉｉ）該期間の全期間にわたってＨｂ濃度は、ベースラインを超えて少なくとも１ｇ／ｄｌ増加する、実施形態１に記載のアンタゴニスト。
【０５２５】
本明細書の任意の実施形態では、一例では、該期間の全期間にわたって、Ｈｂ濃度は、ベースラインを超えて少なくとも１ｇ／ｄｌ、例えば、少なくとも１．５、２または２．５ｇ／ｄｌ増加する。一例では、Ｈｂ濃度は、対象、例えば、成人男性または女性のヒトにおいて１１、１１．５または１２ｇ／ｄｌ以下である。
【０５２６】
Ｈｂ濃度およびＭＣＨ（以下を参照）は、対象から得られた１つ以上の血液試料を使用して判定され得る。例えば、該期間の各週の終わり（およびＤ０で採取された試料を使用して判定されたベースライン）に採取された血液試料を使用して判定されるように。
【０５２７】
３．貧血を治療する方法における使用のための、ある量の抗ＢＭＰ６抗体または断片と、ある量のＥＳＡとの組み合わせ（例えば、複数回用量の該ＥＳＡを含む）であって、抗体、断片および方法が実施形態２に記載されるものである、組み合わせ。
【０５２８】
４．方法が、該量の抗体または断片から単回投与を取得することを含み、単回投与が、Ｄ０に対象に投与され、複数回の用量の該ＥＳＡを取得し、少なくとも１用量が、Ｄ０から毎週投与される、実施形態３の組み合わせ。
【０５２９】
本明細書の任意の実施形態では、一例では、ＥＳＡの最初の用量は、Ｄ０に投与される。
【０５３０】
５．抗体または断片は、薬学的組成物によって構成され、抗体または断片は、Ｄ０に該対象に投与するためにＥＳＡの用量と混合される、実施形態３または４の組み合わせ。
【０５３１】
６．実施形態３〜５のいずれか１つの組み合わせ、該量の抗体または断片を含む第１の減菌容器、および該量のＥＳＡを含む第２の減菌容器、および任意選択で該方法を実施するための説明書を含む医療キット。
【０５３２】
７．アンタゴニストは、エリスロポエチン促進剤（ＥＳＡ）（例えば、複数回用量の該ＥＳＡによって構成される）を含むか、またはそれらからなり、方法は、
（ａ）初日（Ｄ０）に抗ＢＭＰ６抗体または断片を対象に投与し、
（ｂ）少なくとも連続３週間にわたって、Ｄ０から開始する該期間、複数回用量の該ＥＳＡを投与することを含み、該対象の血液ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度は、該期間の全期間にわたってＤ０のベースライン濃度から上昇し、
そのような、
（ｉ）該期間の全期間にわたって、Ｈｂ濃度は、１００％のベースラインＨｂ濃度以上であり、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインの少なくとも１２０％に達し、かつ／または
（ｉｉ）該期間の全期間にわたってＨｂ濃度は、ベースラインを超えて少なくとも１ｇ／ｄｌ増加する、実施形態１に記載のアンタゴニスト。
【０５３３】
８．
（ｉｉｉ）該連続週期間の最終日のＨｂ濃度は、該最終日の直前の７日目のＨｂ濃度の少なくとも１２０％である、実施形態２〜７のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５３４】
９．ＥＳＡが抗ＢＭＰ６抗体または断片の投与から２４時間以内に対象に投与される、実施形態２〜８のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５３５】
１０．該連続週期間が３または４の連続週期間からなる、実施形態２〜９のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５３６】
１１．該期間中に、Ｈｂ濃度が、ベースラインを超えて１〜８ｇ／ｄｌの範囲の増加に達する、実施形態２〜１０（例えば、実施形態１０）のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５３７】
本明細書の任意の実施形態では、一例では、該期間中に、Ｈｂ濃度が、ベースラインを超えて１〜３、２．５、２、１．５または１．２５ｇ／ｄｌの範囲の増加に達する。例えば、Ｈｂ濃度は、１〜２ｇ／ｄｌの増加に達する。
【０５３８】
１２．期間が３または４の連続週からなり、該期間の終わりにＨｂ濃度がベースラインの少なくとも１５０％に達する、実施形態２〜１１のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５３９】
１３．期間が３または４の連続週からなり、
（ａ）該期間の全期間にわたって、Ｈｂ濃度は、１１０％のベースラインＨｂ濃度以上であり、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインの少なくとも１５０％に達し、かつ／または
（ｂ）該期間の全期間にわたってＨｂ濃度は、ベースラインを超えて少なくとも１ｇ／ｄｌ増加し、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインを超えて１〜８ｇ／ｄｌの範囲の増加に達する、実施形態２〜１２のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。例えば、Ｈｂ濃度は、１〜２ｇ／ｄｌの増加に達する。
【０５４０】
１４．該期間において、抗体または断片がＤ０に投与される、実施形態２〜１３のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５４１】
１５．抗体または断片が、対象にＤ０に単回投与として投与される、実施形態１４のアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５４２】
本明細書の任意の実施形態では、一例では、抗体または断片は、Ｄ０に単回投与として対象に投与され、単回投与は、１つまたは複数のアリコートで対象に投与される。
【０５４３】
１６．初回ＥＳＡ用量がＤ０にまたはその後２日以下に投与される、実施形態２〜１５のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５４４】
１７．ＥＳＡ用量が、Ｄ０の直後４〜９日目（例えば、７日目）に投与される、実施形態２〜１６のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５４５】
１８．ＥＳＡ用量が、Ｄ０の直後１２〜１６日目（例えば、１４日目）に投与される、実施形態２〜１７のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５４６】
１９．ＥＳＡ用量が、Ｄ０の直後１９〜２３日目（例えば、２１日目）に投与される、実施形態２〜１８のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５４７】
本明細書の任意の実施形態では、一例では、ＥＳＡ用量は、Ｄ０の直後（ｉ）４〜９日目（例えば、７日目）、（ｉｉ）１２〜１６日目（例えば、１４日目）および（ｉｉｉ）１９〜２３日目（例えば、２１日目）に投与される。
【０５４８】
２０．該期間中に、４回のＥＳＡ用量の相当量が投与される、実施形態２〜１９のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５４９】
本明細書において「相当量」とは、ＥＳＡの複数のアリコートを（例えば、同じ日にまたは順次）投与することができることを意図し、アリコートはＥＳＡの総用量に相当する。一例では、ＥＳＡはダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、用量は、１５〜１００ｍｃｇ（マイクログラム）、または３０〜１００ｍｃｇの範囲である。一例では、ＥＳＡは、エポエチンアルファであり、用量は３０００〜３００００単位の範囲である（すなわち、単位は国際単位を指し、様々な言語でＩＵ、ＵＩ、ＩＥ、ＭＥ、ＮＥとしても知られている）。
【０５５０】
一般に、本明細書で、用量（例えば、抗体、断片またはＥＳＡの）は、１つのアリコートまたは複数のアリコートで（例えば、同じ日に、同時に、３０、１または２４時間の時間枠内で）投与することができる。
【０５５１】
２１．ＥＳＡが、初回ＥＳＡ用量後の第１および第２の週のそれぞれの間に、対象に投与される、実施形態２〜２０のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５５２】
２２．ＥＳＡが、初回ＥＳＡ用量後の第１、第２および第３の週のそれぞれの間に、対象に投与される、実施形態２〜２１のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５５３】
２３．ＥＳＡが、各該週の終わりに単回投与として投与され、任意選択で、該期間がＤ０から始まる３または４週間からなる、実施形態２１または２２のアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５５４】
実施形態のいずれかの一例では、該期間がＤ０から始まる４週間からなり、貧血が４週目に治療される。
【０５５５】
２４．該期間中、４用量以下のＥＳＡ、および任意選択で単回用量の該抗体または断片が対象に投与される、実施形態２〜２３のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５５６】
２５．該期間（該期間は連続４週間である）にわたって、抗体の総用量およびＥＳＡの総容量が、Ｘ：Ｙの比率で該対象に投与され、Ｘは１０〜２ｘ１０６およびＹ＝４である、実施形態２〜２４のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５５７】
一例では、ＥＳＡの総週用量（例えば、対象がヒトである）は、１０または１５〜８０、１００、２００または３００ｍｃｇ（マイクログラム）である。例えば、総週用量は、１０〜８０、１５〜８０、または３０〜８０ｍｃｇである。例えば、ＥＳＡは、ダルベポエチンアルファ、エポエチンアルファ、または本明細書に開示される他の任意のＥＳＡを含むか、またはそれらからなる。一例では、ＥＳＡの各用量（または週用量）は、１．５〜２ｍｃｇ／ｋｇのＥＳＡの範囲で対象に投与される。
【０５５８】
ある特定の構成では、方法は、ＥＳＡの投与を低減または節約することに関する。この場合、例えば、ＥＳＡの総週用量（例えば、対象がヒトである）は、１〜２０ｍｃｇ、例えば、１〜１５ｍｃｇである。ＥＳＡの節約または低減がある場合の一例では、ＥＳＡの各用量（または週用量）は、０．０１または０．１〜０．３または１ｍｃｇ／ｋｇのＥＳＡ、例えば、０．０１〜０．３、または０．１〜０．３、または０．０１〜１、または０．１〜１ｍｃｇ／ｋｇの範囲で対象に投与される。
【０５５９】
２６．該期間の終わり（例えば、連続３または４週間）のＨｂ濃度が、該期間中にＥＳＡの投与を受けていない患者を除いて、該対象と同じ投与レジメンで、抗ＢＭＰ６抗体または断片の投与を受けた同じ種の対照貧血患者におけるＨｂ濃度の少なくとも１３０％である、実施形態２〜２５のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５６０】
２７．ｐ＜０．０００１のｐ値によって判定されるように、該期間の終わりのＨｂ濃度が、該期間の終わりの該対照よりも有意に高い、実施形態２６のアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５６１】
２８．該期間の終わりの平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）が、該期間中にＥＳＡの投与を受けていない患者を除いて、該対象と同じ投与レジメンで、抗ＢＭＰ６抗体または断片の投与を受けた同じ種の対照貧血患者におけるＭＣＨの少なくとも１０９％である、実施形態２〜２７のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５６２】
平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）は、血液試料中の赤血球当たりのヘモグロビンの平均質量である。
【０５６３】
２９．該期間の終わり（例えば、連続３または４週間）のＨｂ濃度が、該期間中に抗ＢＭＰ６抗体または断片の投与を受けていない患者を除いて、該対象と同じ投与レジメンで、該ＥＳＡの投与を受けた同じ種の対照貧血患者におけるＨｂ濃度の少なくとも１２０％である、実施形態２〜２８のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。任意選択で、対照患者は、ＢＭＰ６に特異的に結合しない対照ＩｇＧ４抗体を受けた（例えば、ＢＭＰ６抗体および対照抗体は、それぞれ同じ用量で対象および対照患者に投与される）。任意選択で、Ｘは１０〜２ｘ１０５、２ｘ１０４または２ｘ１０３である。
【０５６４】
３０．ｐ＜０．０００１のｐ値によって判定されるように、該期間の終わりのＨｂ濃度が、該期間の終わりの該対照よりも有意に高い、実施形態２９のアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５６５】
３１．該期間の終わり（例えば、連続３または４週間）の平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）が、該期間中に抗ＢＭＰ６抗体または断片の投与を受けていない患者を除いて、該対象と同じ投与レジメンで、該ＥＳＡの投与を受けた同じ種の対照貧血患者におけるＭＣＨの少なくとも１１９％である、実施形態２〜３０のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５６６】
３２．ｐ＜０．０００１のｐ値によって判定されるように、該期間の終わりのＭＣＨが、該期間の終わりの該対照よりも有意に高い、実施形態３１のアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５６７】
３３．Ｄ０での該対象は、慢性疾患の貧血（ＡＣＤ）に罹患し、任意選択で、貧血は、慢性炎症（例えば、対象は関節炎に罹患している）または細菌感染（例えば、ストレプトコッカス感染）に関連し、対象は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）患者である、実施形態２〜３２のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５６８】
３４．該期間の終わりの該対象における貧血は、Ｄ０よりも重度が低い、実施形態２〜３３のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５６９】
３５．アンタゴニストが抗ＢＭＰ６抗体または断片を含むか、またはそれからなる、実施形態１のアンタゴニスト。
【０５７０】
３６．抗体または断片は、ＢＭＰ６を結合するために参照抗体と競合し、参照抗体は、ｍＡｂ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）または
ａ．配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各重鎖、および配列番号３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各軽鎖、または
ｂ．配列番号４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各重鎖、および配列番号５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各軽鎖を含む抗体である、実施形態２〜３４のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５７１】
本明細書の競合は、例えば、ＳＰＲによって（例えば、３７℃、ｐＨ７．６で、任意選択でＦａｂとして）、ＥＬＩＳＡによって、蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）によって、または均一性時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）アッセイにおいて判定することができる。ＳＰＲは、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）、Ｐｒｏｔｅｏｎ（商標）、または別の標準的なＳＰＲ技術を使用して実行され得る。一実施形態では、競合は、当業者に容易に明らかな技術であるＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ（ＢＬＩ）によって判定される。
【０５７２】
代替手段では、参照抗体は、ＷＯ２０１６／０９８０７９に開示されている任意の抗ＢＭＰ６抗体である（本発明での潜在的な使用のために本明細書に組み込まれているかかる抗体に関する配列および開示）。
【０５７３】
３７．抗体または断片が、配列番号６への結合について該参照抗体と競合する、実施形態２〜３６のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。該配列番号６は、ペプチド自体、より大きなペプチドの一部、またはＢＭＰ６タンパク質（例えば、野生型ヒトＢＭＰ６または組換え産生されたＢＭＰ６）の一部として使用することができる。
【０５７４】
追加的または代替的に、抗体または断片は、配列番号７〜１９からなる群から選択されるさらなる配列への結合について該参照抗体と競合する。該さらなる配列は、ペプチド自体、より大きなペプチド（例えば、配列番号６を含む）の一部、またはＢＭＰ６タンパク質（例えば、野生型ヒトＢＭＰ６または組換え産生されたＢＭＰ６、例えば、配列番号６を含む）の一部として使用することができる。例えば、抗体または断片は、配列番号７への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号８への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号９への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１０への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１１への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１２への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１３への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１４への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１５への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１６への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１７への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１８への結合について該参照抗体と競合する。例えば、抗体または断片は、配列番号１９への結合について該参照抗体と競合する。本パラグラフおよび本明細書の実施形態の配列ＩＤ番号は、ＷＯ２０１７／１９１４３７に開示されているものであり、その開示は参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【０５７５】
３８．抗体または断片は、ＢＭＰ６への可溶性ヘモジュベリン（ＨＪＶ）の結合を競合的に阻害する、実施形態２〜３７のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５７６】
３９．抗体または断片は、ＢＭＰ６への可溶性ヘモジュベリン（ＨＪＶ）の結合を競合的に阻害しない（例えば、ＳＰＲ、ＨＴＲＦまたはＥＬＩＳＡによって判定されるように）、実施形態１〜３８のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５７７】
４０．抗体は、ＶＤＪ領域配列によってコードされるＶＨドメインを含み、ＶＤＪは、ＶＨ遺伝子セグメント、Ｄ遺伝子セグメントおよびＪＨ遺伝子セグメントの組換えに由来し、ＶＨは、ヒト生殖細胞系（ｉ）ＶＨ１−３、（ｉｉ）ＶＨ２−５または（ｉｉｉ）ＶＨ３−１５遺伝子セグメントである、実施形態２〜３９のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５７８】
４１．抗体は、ＶＪ領域配列によってコードされるＶＬドメインを含み、ＶＪは、ＶＬ遺伝子セグメントおよびＪＬ遺伝子セグメントの組換えに由来し、ＶＬは、ヒト生殖細胞系（ｉｖ）Ｖκ３−２０、（ｖ）Ｖλ３−１、（ｖｉ）Ｖκ１−１７または（ｖｉｉ）Ｖλ１−４０である、実施形態２〜４０のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５７９】
４２．抗体または断片は、ＢＭＰ７に結合するよりも強い親和性（ＳＰＲによって判定されるより低いＫＤ）でＢＭＰ６に結合し、任意選択で、ＢＭＰ５よりも強い親和性でＢＭＰ６に結合する、実施形態２〜４１のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５８０】
任意選択で、抗体または断片は、ＢＭＰ２、４、５および９のそれぞれに結合するよりも強い親和性でＢＭＰ６に結合する。
【０５８１】
４３．抗体または断片が、配列番号６を含むヒトＢＭＰ６配列に結合する、実施形態２〜４２のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５８２】
４４．抗体は、１ｐＭ〜５ｎＭのＢＭＰ６を結合するための親和性（ＫＤ）を有し、任意選択で、結合は、３７℃、ｐＨ７．６で該抗体のＦａｂを使用するＳＰＲによって判定される、実施形態２〜４３のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５８３】
一例では、抗体（例えば、Ｆａｂとして）または断片は、
（ａ）２、３、４、５または１０ｐＭ〜３、４または５ｎＭ、
（ｂ）１〜１０ｐＭ〜５ｎＭ、
（ｃ）１０ｐＭ〜３、４または５ｎＭ、
（ｄ）５０または８０ｐＭ〜２００ｎＭ、
（ｅ）５０または８０ｐＭ〜１５０ｎＭ、または
（ｆ）５０または８０ｐＭ〜１００ｎＭのＢＭＰ６を結合するための親和性（ＫＤ）を有する。
【０５８４】
一例では、ＫＤは５〜１５ｐＭ（例えば、１０ｐＭ）である（またはその程度である）。一例では、ＫＤは２〜５ｎＭ（例えば、３ｎＭ）である（またその程度である）。一例では、ＫＤは１００〜４００ｐＭ（例えば、１４０または３９０ｐＭ）である（またはその程度である）。
【０５８５】
４５．抗体は、１ｘ１０−５〜１×１０−３Ｓ−１のＢＭＰ６を結合するためのオフ速度（Ｋｏｆｆ）を有し、任意選択で、結合は、３７℃、ｐＨ７．６で該抗体のＦａｂを使用するＳＰＲによって判定される、実施形態２〜４４（例えば、実施形態４４）のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５８６】
一例では、抗体（例えば、Ｆａｂとして）または断片は、
（ａ）１ｘ１０−５〜５×１０−４Ｓ−１、
（ｂ）１ｘ１０−５〜６×１０−４Ｓ−１、
（ｃ）１ｘ１０−５〜７×１０−４Ｓ−１、
（ｄ）１ｘ１０−５〜８×１０−４Ｓ−１、
（ｅ）２ｘ１０−５〜１×１０−３Ｓ−１、
（ｆ）２ｘ１０−５〜５×１０−４Ｓ−１、
（ｇ）２ｘ１０−５〜６×１０−４Ｓ−１、
（ｈ）２ｘ１０−５〜７×１０−４Ｓ−１、または
（ｉ）２ｘ１０−５〜８×１０−４Ｓ−１のＢＭＰ６を結合するためのオフ速度（Ｋｏｆｆ）を有する。
【０５８７】
一例では、Ｋｏｆｆは、５ｘ１０−４Ｓ−１である（またはその程度である）（例えば、ＫＤが２ｎＭ〜４００ｐＭである（またはその程度である）場合、ＫＤが２〜５ｎＭ（例えば、３ｎＭ）である（またはその程度である）場合、またはＫＤが１００〜４００ｐＭ（例えば、１４０または３９０ｐＭ）である（またはその程度である）場合）。一例では、Ｋｏｆｆは、３ｘ１０−５Ｓ−１である（またはその程度である）（例えば、ＫＤが５〜１５ｐＭ（例えば、１０ｐＭ）である（またはその程度である）場合）。
【０５８８】
４６．抗体は、１ｘ１０５〜１×１０７Ｍ−１Ｓ−１のＢＭＰ６を結合するためのオン速度（Ｋｏｎ）を有し、任意選択で、結合は、３７℃、ｐＨ７．６で該抗体のＦａｂを使用するＳＰＲによって判定される、実施形態２〜４５（例えば、実施形態４４および／または４５）のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５８９】
一例では、抗体（例えば、Ｆａｂとして）または断片は、
（ａ）１ｘ１０５〜１ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｂ）１ｘ１０５〜２ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｃ）１ｘ１０５〜３ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｄ）１ｘ１０５〜４ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｅ）１ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｆ）２ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｇ）３ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｈ）４ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、
（ｉ）５ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１、または
（ｊ）６ｘ１０５〜５ｘ１０６Ｍ−１Ｓ−１のＢＭＰ６を結合するためのオン速度（Ｋｏｎ）を有する。
【０５９０】
一例では、Ｋｏｎは、１または２ｘ１０−５Ｍ−１Ｓ−１である（またはその程度である）（例えば、ＫＤが２〜５ｎＭ（例えば、３ｎＭ）である場合）。一例では、Ｋｏｎは、１〜４、１、２、３または４ｘ１０−６Ｍ−１Ｓ−１である（またはその程度である）（例えば、ＫＤが５〜４００ｐＭ（例えば、１４０または３９０ｐＭ）または５〜１５ｐＭ（例えば、１０ｐＭ）である（またはその程度である）場合）。
【０５９１】
４７．
（ａ）期間が連続３または４週間からなり、
（ｉ）該期間の全期間にわたって、Ｈｂ濃度は、１１０％のベースラインＨｂ濃度以上であり、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインの少なくとも１２０％に達し、かつ／または
（ｉｉ）該期間の全期間にわたってＨｂ濃度は、ベースラインを超えて少なくとも１ｇ／ｄｌ増加し、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインを超えて１〜８ｇ／ｄｌの範囲の増加に達し、
（ｂ）ＥＳＡの用量は、該期間の最初の２または３週間の間に少なくとも２回投与され、
（ｃ）抗体または断片は、ＢＭＰ７に結合するよりも強い親和性（ＳＰＲによって判定されるより低いＫＤ）でＢＭＰ６に結合し、任意選択で、ＢＭＰ５よりも強い親和性でＢＭＰ６に結合（任意選択で、ＢＭＰ２、４、５および９のそれぞれに結合するよりも強い親和性でＢＭＰ６に結合）し、
（ｄ）抗体または断片は、ＢＭＰ６を結合するために参照抗体と競合し、参照抗体は、ｍＡｂ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）または
Ｉ．配列番号１もしくは２のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各重鎖、および配列番号３のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各軽鎖、または
ＩＩ．配列番号４のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各重鎖、および配列番号５のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる各軽鎖を含む抗体である、実施形態２〜４６のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０５９２】
任意選択で、パートＩでは、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列からなり、軽鎖は、配列番号３のアミノ酸配列からなる。任意選択で、パートＩでは、重鎖は、配列番号２のアミノ酸配列からなり、軽鎖は、配列番号３のアミノ酸配列からなる。任意選択で、パートＩＩでは、重鎖は、配列番号４のアミノ酸配列からなり、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列からなる。
【０５９３】
一例では（以下の実施例２で使用される抗体による）、パート（ｄ）では、本発明の抗ＢＭＰ６抗体は、ＨＴＲＦアッセイにおいてパートＩまたはパートＩＩの参照抗体と競合する抗体である。例えば、ＨＴＲＦアッセイにおいて、本発明の抗体は、ヒトＢＭＰ６とプレインキュベートされ、続いて非標識参照抗体（パートＩまたはＩＩによる）と組み合わされる標識抗体であり、抗体間の競合は、アッセイにより検出される。一例では、アッセイは、本発明のＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７標識抗体を使用する。代替手段では、ヒトＢＭＰ６は標識される（例えば、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７を使用すると、試験抗体はＥｕ３＋クリプテート−ストレプトアビジンに結合するためにビオチンで標識され、参照抗体は標識されない）。
【０５９４】
任意選択で、本発明の抗ＢＭＰ６抗体（試験抗体）は、ヒトＢＭＰ６に結合するために（または参照抗体と同じヒトＢＭＰ６のエピトープに結合するために）ＨＴＲＦアッセイにおいて参照抗体と競合し、アッセイは、ドナー（Ｅｕ３＋クリプテートなど）またはアクセプターフルオロフォア（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７など）で直接または間接的に標識された試験抗体、およびドナーまたはアクセプターフルオロフォアのいずれかで標識された標的ＢＭＰ６を使用して、ドナーとアクセプターとの間のエネルギー移動を可能にし、それによって蛍光シグナルが産生および検出される。一例では、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７標識が使用される例では、競合は、試験抗体が参照抗体の存在下にある場合と参照抗体が存在しない場合の６６５ｎＭでの蛍光シグナルの少なくとも２０％の低減によって検出される。任意選択で、６６５ｎＭでのシグナルの低減は、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％である。
【０５９５】
任意選択で、抗ＢＭＰ６抗体（試験抗体）は、ヒトＢＭＰ６に結合するために（または参照抗体と同じヒトＢＭＰ６のエピトープに結合するために）ＨＴＲＦアッセイにおいて参照抗体と競合するものであり、参照抗体は、配列番号１または２のアミノ酸配列を含む各重鎖、および配列番号３のアミノ酸配列を含む各軽鎖を含み、アッセイは、ドナー標識（例えばＥｕ３＋クリプテートなど）またはアクセプターフルオロフォア標識（例えばＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７など）で直接または間接的に標識された試験抗体、およびアクセプターフルオロフォアまたはドナーのいずれかでそれぞれ標識されたヒトＢＭＰ６を使用して、ドナーとアクセプターとの間のエネルギー移動を可能にし、抗体間の該競合は、試験抗体が参照抗体の存在下にある場合と参照抗体が存在しない場合の蛍光シグナルの少なくとも２０％の低減によって検出される。例えば、試験抗体は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７で直接または間接的に標識され、競合は、試験抗体が参照抗体の存在下にある場合と参照抗体が存在しない場合の６６５ｎＭでの蛍光シグナルの少なくとも２０％の低減によって検出される。任意選択で、６６５ｎＭでのシグナルの低減は、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％である。
【０５９６】
任意選択で、抗ＢＭＰ６抗体（試験抗体）はまた、ヒトＢＭＰ６に結合するために（または参照抗体と同じヒトＢＭＰ６のエピトープに結合するために）ＨＴＲＦアッセイにおいて参照抗体と競合し、参照抗体は、配列番号４のアミノ酸配列を含む各重鎖、および配列番号５のアミノ酸配列を含む各軽鎖を含み、アッセイは例えば、ドナー標識（例えばＥｕ３＋クリプテートなど）またはアクセプターフルオロフォア標識（例えばＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７など）で直接または間接的に標識された試験抗体、およびアクセプターフルオロフォアまたはドナーのいずれかでそれぞれ標識されたヒトＢＭＰ６を使用して、ドナーとアクセプターとの間のエネルギー移動を可能にし、抗体間の該競合は、試験抗体が参照抗体の存在下にある場合と参照抗体が存在しない場合の蛍光シグナルの少なくとも２０％の低減によって検出される。例えば、試験抗体は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ（商標）６４７で直接または間接的に標識され、競合は、試験抗体が参照抗体の存在下にある場合と参照抗体が存在しない場合の６６５ｎＭでの蛍光シグナルの少なくとも２０％の低減によって検出される。任意選択で、６６５ｎＭでのシグナルの低減は、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０または９０％である。
【０５９７】
例えば、パート（ｂ）では、ＥＳＡの用量は、該期間の最初の３週間、または該期間の間、２、３または４回投与される。
【０５９８】
代替手段では、参照抗体は、ＷＯ２０１６／０９８０７９に開示されている任意の抗ＢＭＰ６抗体である（本発明での潜在的な使用のために本明細書に組み込まれているかかる抗体に関する配列および開示）。
【０５９９】
４８．
ａ．対象におけるＡＣＤを治療し、
ｂ．対象における中程度または重度の貧血を治療または予防し、
ｃ．対象における貧血を治療または予防し、対象は、炎症性疾患または状態に罹患しており、
ｄ．対象に対して鉄の投与または輸血の必要性を排除または低減し、
ｅ．対象における貧血を治療または予防し、対象は、微生物感染に罹患しており、
ｆ．対象へのＥＳＡの投与を低減するための、実施形態１〜４７のいずれか１つのアンタゴニスト、組み合わせまたはキット。
【０６００】
４９．対象における貧血を治療する方法であって、方法が、
（ａ）初日（Ｄ０）に抗ＢＭＰ６抗体または断片を対象に投与し、
（ｂ）少なくとも連続３週間にわたって、Ｄ０から開始する該期間、複数回の用量のエリスロポエチン促進剤（ＥＳＡ）を投与することを含み、該対象の血液ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度は、該期間の全期間にわたってＤ０のベースライン濃度から上昇し、
該期間の全期間にわたってであるように、
（ｉ）Ｈｂ濃度は、１００％のベースラインＨｂ濃度以上であり、該期間中、Ｈｂ濃度は、ベースラインの少なくとも１２０％に達し、かつ／または
（ｉｉ）Ｈｂ濃度は、ベースラインを超えて少なくとも１ｇ／ｄｌ増加する、方法。
【０６０１】
５０．方法、抗体断片またはＥＳＡが、実施形態２〜４８のいずれか１つに記載されている通りである、実施形態４９の方法。
【０６０２】
５１．貧血が、中程度または重度の貧血である、実施形態１〜５０のいずれかのアンタゴニスト、組み合わせ、キットまたは方法。
【０６０３】
５２．対象において少なくとも１０ｇ／ｄＬの血液ヘモグロビン（Ｈｂ）レベルを維持する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、アンタゴニスト。
【０６０４】
本発明の任意の抗ＢＭＰ６抗体または断片は、抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストとして使用することができる。
【０６０５】
５３．対象の血液ヘモグロビンレベルの１０ｇ／ｄＬ未満への減少を予防する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、アンタゴニスト。
【０６０６】
５４．貧血に罹患している対象において血液ヘモグロビンを少なくとも１０ｇ／ｄＬのレベルまで上昇させる方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療される、アンタゴニスト。
【０６０７】
５５．炎症性疾患または状態に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該貧血が治療または予防される、アンタゴニスト。
【０６０８】
５６．貧血に罹患している対象に対して鉄の投与または輸血の必要性を排除または低減する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、該必要性が排除または低減される、アンタゴニスト。
【０６０９】
５７．微生物感染に罹患している対象において貧血を治療または予防する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含む、アンタゴニスト。
【０６１０】
５８．貧血に罹患している対象に対する貧血を治療するための赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）の投与を低減する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび該ＥＳＡを投与することを含み、貧血が対象において治療される、アンタゴニスト。
【０６１１】
５９．貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象において貧血を治療するかまたは貧血の危険性を低減する方法における使用のための抗骨形成タンパク質６（ＢＭＰ６）アンタゴニストであって、方法が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび低用量の赤血球生成促進剤（ＥＳＡ）を対象に投与することを含み、対象において貧血が治療されるかまたは貧血の危険性が低減する、アンタゴニスト。
【０６１２】
６０．アンタゴニストが、実施形態１〜１、２、７〜４８および５１のいずれか１つに記載のものである、実施形態５２〜５９のいずれか１つのアンタゴニスト。
【０６１３】
６１．アンタゴニストが、実施形態５２〜５９の任意の他に記載のものである、実施形態５２〜５９のいずれか１つのアンタゴニスト。
【０６１４】
６２．ＥＳＡが
ａ．エポエチンアルファであり、１０００、１５００、２５００、５０００、１１０００、１８０００、３４０００または９００００単位未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ＜１５００、１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けことがあるか、
ｂ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ６．２５、１０、１２．５、２０、２５、４０、６０、１００もしくは２００ｍｃｇの週当たりのダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）治療を以前に受けたことがあるか、または
ｃ．ダルベポエチンアルファまたはＡｒａｎｅｓｐ（登録商標）であり、６．２５、１０、２０、４０、６０、１００または２００ｍｃｇ未満の週用量で投与され、任意選択で、対象は、それぞれ１５００〜２４９９、２５００〜４９９９、５０００〜１０９９９、１１０００〜１７９９９、１８０００〜３３９９９、３４０００〜８９９９９または≧９００００単位の週当たりのエポエチンアルファ治療を以前に受けたことがある、実施形態１〜６１のいずれかのアンタゴニスト、組み合わせ、キットまたは方法。
【０６１５】
６３．抗ＢＭＰ６アンタゴニストが抗体であり、各用量が合計３０ｍｇ／ｋｇ以下で投与される、実施形態１〜６２のいずれかのアンタゴニスト、組み合わせ、キットまたは方法。
【０６１６】
６４．貧血に罹患しているかまたは貧血の危険性のある対象において貧血を治療または予防するための治療レジメン方法における使用のための抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび／またはＥＳＡであって、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡを同時にまたは順次対象に投与することを含み、
ａ．０日目に、アンタゴニストを対象に投与し、７日目まで（例えば、１日目）にＥＳＡを対象に投与するか、または
ｂ．０日目に、ＥＳＡを対象に投与し、７日目まで（例えば、１日目）にアンタゴニストを対象に投与するか、または
ｃ．０日目に、アンタゴニストおよびＥＳＡを対象に同時に投与するか、または
ｄ．０日目に、対象はすでにＥＳＡを受けており、かつ０日目に、アンタゴニストを対象に投与するか、または
ｅ．０日目に、対象はすでにアンタゴニストを受けており、かつ０日目に、ＥＳＡを対象に投与し、
それによって、１４日目またはそれ以降、対象において血液ヘモグロビンレベルが少なくとも１０ｇ／ｄＬであり、該貧血は治療または予防される、抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６１７】
６５．実施形態１〜１、２、７〜４８および５１のいずれか１つにさらに記載のものである、実施形態６４に記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６１８】
６６．抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡが７日を超えない間隔で対象に投与される、実施形態６４または６５に記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６１９】
６７．レジメンが対象における血液Ｈｂレベルを対象において１０ｇ／ｄＬを超えて維持する、実施形態６４、６５または６６に記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６２０】
６８．方法が、対象が抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡを受けた後少なくとも１３日または１４日目に対象において血液ヘモグロビンレベルを少なくとも１０ｇ／ｄＬに維持または上昇させる、実施形態６４〜６７のいずれか１つに記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６２１】
６９．抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡが１日を超えない間隔で対象に投与される、実施形態６７または６８に記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６２２】
７０．抗ＢＭＰ６アンタゴニストおよびＥＳＡが同時に対象に投与される、実施形態６４〜６９のいずれか１つに記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６２３】
７１．対象の血液ヘモグロビンレベルが１０ｇ／ｄＬ未満まで低下することが予防される（例えば、１４日目において）、実施形態６４〜７０のいずれか１つに記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６２４】
７２．対象の血液ヘモグロビンが少なくとも１０ｇ／ｄＬのレベルに上昇する（例えば、１４日目において）、実施形態６４〜７１のいずれか１つに記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６２５】
７３．中程度または重度の貧血が対象において予防される（例えば、１４日目において）、実施形態６４〜７２のいずれか１つに記載のアンタゴニストおよび／またはＥＳＡ。
【０６２６】
７４．対象が
ａ．炎症性疾患もしくは状態に罹患しているか、または
ｂ．感染症に罹患しているか、
ｃ．腎臓病に罹患しているか、
ｄ．ＨＩＶに罹患しているか、もしくはＨＩＶ治療を受けているか、または
ｅ．癌に罹患しており、
対象において貧血が治療または予防される、実施形態１〜７３のいずれかのアンタゴニスト、組み合わせ、キット、ＥＳＡまたは方法。
【０６２７】
７５．対象が哺乳動物である、実施形態１〜７４のいずれかのアンタゴニスト、組み合わせ、キット、ＥＳＡまたは方法。
【０６２８】
７６．抗炎症剤と組み合わせて、または抗炎症剤が対象に投与される、実施形態１〜７５のいずれかのアンタゴニスト、組み合わせ、キット、ＥＳＡまたは方法。
【０６２９】
７７．ＥＳＡがエリスロポエチンである、実施形態１〜７６のいずれかのアンタゴニスト、組み合わせ、キット、ＥＳＡまたは方法。
【０６３０】
一例では、対象は、慢性腎臓病（ＣＫＤ）に罹患している。「ＫＤＩＧＯ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ  ｆｏｒ  Ａｎａｅｍｉａ  ｉｎ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ」，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ（２０１２）２，２７９；ｄｏｉ：１０．１０３８／ｋｉｓｕｐ．２０１２．３７を参照されたい。これは、慢性腎臓病のステージ（ステージ１〜５）、診断、ＣＫＤ命名法、様々な年齢のヒトのＨｂレベルおよび範囲、ならびにＥＳＡ反応低下について説明している。本参照は以下を開示する。
貧血の診断
・Ｈｂ濃度が男性で＜１３．０ｇ／ｄｌおよび女性で＜１２．０ｇ／ｄｌのとき、成人および１５歳を超える小児の貧血をＣＫＤと診断する。（グレードなし）
・Ｈｂ濃度が、０．５〜５歳の小児で＜１１．０ｇ／ｄｌ、５〜１２歳の小児で＜１１．５ｇ／ｄｌ、１２〜１５歳の小児で＜１２．０ｇ／ｄｌの場合、小児の貧血をＣＫＤと診断する。（グレードなし）
【０６３１】
したがって、本発明では、任意選択で
（ａ）対象がＣＫＤの成人または１５歳を超える子供であり、該期間中（例えば、Ｄ０から３週目の初めに）Ｈｂ濃度＜１３．０ｇ／ｄｌ（対象が男性の場合）もしくは＜１２．０ｇ／ｄｌ（対象が女性の場合）、または
（ｂ）対象がＣＫＤを有し、該期間中（例えば、Ｄ０から３週目の初めに）Ｈｂ濃度＜１１．０ｇ／ｄｌ（対象が０．５〜５歳である）、＜１１．５ｇ／ｄｌ（対象が５〜１２歳である）、または＜１２．０ｇ／ｄｌ（対象が１２〜１５歳である）である。
【０６３２】
任意選択で、対象は、悪性腫瘍と診断された、１回以上の脳卒中を患った、かつ／または悪性腫瘍を患ったＣＫＤ患者である。ＥＳＡ療法は、通常、かかる患者では（もしあるとしても）注意して進められるべきであり、したがって、本発明（特に、そのＥＳＡ低減または節約の態様）では、かかる対象において有利である。
【０６３３】
任意選択で、対象は、９．０〜１０．０ｇ／ｄｌのＨｂ濃度を有するＣＫＤ  ５Ｄ患者（例えば、成人、例えば、男性または女性）である。
【０６３４】
任意選択で、本発明は、ＣＫＤを有するヒト成人患者において１１．５ｇ／ｄｌを超えるＨｂ濃度を維持するためのものである。
【０６３５】
任意選択で、本発明は、ＣＫＤを有する成人患者において９．０〜１３ｇ／ｄｌ（例えば、９．０〜１１．５ｇ／ｄｌ）のＨｂ濃度を維持するためのものである。
【０６３６】
任意選択で、本発明は、ＣＫＤを有する小児患者において１１．０〜１２ｇ／ｄｌのＨｂ濃度を維持するためのものである。一例では、患者は、１５歳以下、または１５歳未満、または１０歳以下である。
【０６３７】
一例では、ＣＫＤ患者は、成人男性である。別の例では、ＣＫＤ患者は、成人女性である。
【０６３８】
任意選択で、対象（例えば、成人）は、ＣＫＤ  ５ＨＤ患者、血液濾過中の患者、血液濾過透析療法中の患者であり、方法は、
ＥＳＡの静脈内投与または皮下投与を含む。
【０６３９】
任意選択で、対象（例えば、成人）は、ＣＫＤ  ＮＤまたはＣＫＤ  ５ＰＤ患者であり、この方法は、ＥＳＡの皮下投与を含む。
【０６４０】
任意選択で、断片の抗ＢＭＰ６抗体の投与前に、患者は、（本発明の方法を実行する前に）１ヶ月のＥＳＡ治療後のＨｂ濃度の５％未満の増加または増加なしで示されるＥＳＡ低応答性である。
【０６４１】
一般的な方法論および試験については、ＷＯ２０１７／１９１４３７を参照されたい（例えば、その中の実施例を参照）。
【０６４２】
ＨＪＶ非依存性ＢＭＰ受容体の二量体化およびシグナル伝達の阻害
当該技術分野は、ＨＪＶと複合体を形成したＢＭＰ６を含むシグナル伝達を研究している。しかしながら、Ｌａｔｏｕｒらは、ＨＪＶをＢＭＰ６と複合化することなくＢＭＰ６媒介性ＢＭＰ受容体の二量体化が起こる代替経路を提案した（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ．２０１６  Ｊａｎ；６３（１）：１２６−３７．ｄｏｉ：１０．１００２／ｈｅｐ．２８２５４．Ｅｐｕｂ  ２０１５  Ｎｏｖ  １２，「Ｄｉｆｆｅｒｉｎｇ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｍｏｃｈｒｏｍａｔｏｓｉｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ＨＦＥ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−２  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｒｏｎ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｏｆ  ｍｉｃｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ６  ｏｒ  ｈｅｍｏｊｕｖｅｌｉｎ」）。実施例８に示されるように、本発明者らは、驚くべきことに、抗体（例えば、ＩｇＧ４フォーマット）などの抗ＢＭＰ６アンタゴニストを使用して、ＢＭＰ６によるヒト細胞におけるＢＭＰ受容体のＨＪＶ非依存性二量体化を阻害できることを見出した。したがって、１つの構成では、本発明は、ヒトまたは動物対象におけるヘプシジン媒介性疾患または状態の治療または予防のために、ＨＪＶを欠くＢＭＰ−ＢＭＰＲ複合体の形成、またはかかる複合体によって誘発される細胞内シグナル伝達を阻害することに関する。
【０６４３】
例えば、以下の概念が提供される。
１．ヒトまたは動物の対象において、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）欠損ＢＭＰ−ＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲ）複合体によって引き起こされる疾患または状態を治療または予防する方法における使用のために、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）に特異的に結合する抗体または断片であって、この方法は、該複合体の形成を阻害し、かつ／または対象における該複合体による細胞内シグナル伝達の誘発を阻害するために、抗体または断片を対象に投与することを含み、それによって、ＨＪＶ非依存性ＢＭＰ−ＢＭＰＲ媒介性疾患または状態が、治療または予防される、抗体または断片。
【０６４４】
２．ヒトまたは動物の対象において、ヘモジュベリン非依存性貧血または骨粗しょう症を治療または予防する方法における使用のために、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）に特異的に結合する抗体または断片であって、この方法は、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）欠損ＢＭＰ−ＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲ）複合体の形成を阻害し、かつ／または対象における該複合体による細胞内シグナル伝達の誘発を阻害するために、抗体または断片を対象に投与することを含み、それによって、ＨＪＶ非依存性貧血または骨粗しょう症が、治療または予防される、抗体または断片。
【０６４５】
３．ヒトまたは動物の対象において、ヘモジュベリン（ＨＪＶ）非依存性貧血または骨粗しょう症を治療または予防する方法における使用のために、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）に特異的に結合する抗体または断片であって、この方法は、抗体を対象に投与することを含み、それによって、ＨＪＶ非依存性貧血または骨粗しょう症が、治療または予防される、抗体または断片。
【０６４６】
４．ヒトまたは非ヒト動物対象における疾患または状態を治療または予防するための抗体または断片であって、
ａ．疾患または状態は、対象の肝細胞または骨細胞における骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体多量体化によって媒介され、
ｂ．抗体または断片は、該受容体多量体化を阻害するために、該対象に投与され、それによって、疾患または状態が治療または予防される、抗体または断片。
【０６４７】
５．ＢＭＰがＢＭＰ２、４、５、６、７または９である、概念１〜４のいずれかの抗体または断片。
【０６４８】
６．ＢＭＰがＢＭＰ６である、概念１〜５のいずれかの抗体または断片。
【０６４９】
７．ＢＭＰおよび受容体がヒトＢＭＰおよびＢＭＰＲである、概念１〜６のいずれかの抗体または断片。
【０６５０】
８．抗体が、（ｉ）ｍＡｂ５０７、（ｉｉ）各ドメインが配列番号４０２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および各ドメインが配列番号４１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体、（ｉｉｉ）各ドメインが配列番号４１８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および各ドメインが配列番号４２６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体、ならびに（ｉｖ）各ドメインが配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および各ドメインが配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体から選択される抗ＢＭＰ６であり、または抗体または断片が、ヒトＢＭＰ６への結合について（ｉ）〜（ｉｖ）から選択される抗体と競合する（ＳＰＲによって判定されるように）、概念１〜７のいずれかの抗体または断片。
【０６５１】
９．抗体または断片がＩｇＧ４（例えば、ＩｇＧ４ＰＥ）フォーマットである、概念１〜８のいずれかの抗体または断片。
【０６５２】
１０．該多量体化または複合体形成が、（ｉ）Ｉ型ＢＭＰ受容体と（ｉｉ）ＩＩ型ＢＭＰ受容体との多量体化である、概念１〜９のいずれかの抗体または断片。
【０６５３】
１１．該Ｉ型ＢＭＰ受容体がＳＫＲ１、ＣＤ２９２またはＣＤｗ２９３である、概念１０の抗体または断片。
【０６５４】
１２．該対象がヒトであり、そのゲノムが、ＳＮＰ  ｒｓ１３４０６３３６および／もしくはｒｓ１８８５４７４７７を含むＳＫＲ１ヌクレオチド配列を含むか、またはヒトが１５位のアラニンおよび／もしくは１６０位のアルギニンを有するＳＫＲ１を発現し、該多量体化が、（ｉｉｉ）該ＳＫＲ１または（ｉｖ）ＢＭＰ受容体を有する該ヌクレオチド配列によってコードされるＳＫＲ１の多量体化である、概念１〜１１のいずれかの抗体または断片。
【０６５５】
１３．該対象がヒトであり、そのゲノムが、ｒｓ１１５２８０１０、ｒｓ１４２４５４４９０およびｒｓ３５６１９４９７から選択される１つ、２つもしくは３つのＳＮＰを含むＣＤ２９２ヌクレオチド配列を含むか、またはヒトが２位のプロリン、３３位のスレオニンおよび４４３位のアルギニンから選択される１つ、２つもしくは３つのアミノ酸を含むＣＤ２９２を発現し、該多量体化が、（ｖ）該ＣＤ２９２または（ｖｉ）ＢＭＰ受容体を有する該ヌクレオチド配列によってコードされるＣＤ２９２の多量体化である、概念１〜１２のいずれかの抗体または断片。
【０６５６】
１４．該対象がヒトであり、そのゲノムが、ｒｓ３４２３１４６４、ｒｓ１３８８０１８２１、ｒｓ２０００３５８０２、ｒｓ１４３５５４４８８、ｒｓ３５９７３１３３およびｒｓ１１２１１１８６０から選択される１つ、２つもしくは３つのＳＮＰを含むＣＤｗ２９３ヌクレオチド配列を含むか、またはヒトが１４９位のアルギニン、１４０位のバリン、３１位のアルギニン、１７５位のセリン、２２４位のアルギニンおよび２９７位のアスパラギン酸から選択される１つ、２つもしくは３つのアミノ酸を含むＣＤｗ２９３を発現し、該多量体化が、（ｖｉｉ）該ＣＤｗ２９３または（ｖｉｉｉ）ＢＭＰ受容体を有する該ヌクレオチド配列によってコードされるＣＤｗ２９３の多量体化である、概念１〜１３のいずれかの抗体または断片。
【０６５７】
１５．該ＩＩ型ＢＭＰ受容体または（ｉｖ）、（ｖｉ）または（ｖｉｉｉ）の受容体が、ＢＲＫ−３、ＡＣＶＲ２ＡまたはＡＣＶＲ２Ｂである、概念１０〜１４のいずれか１つの抗体または断片。
【０６５８】
１６．該対象がヒトであり、そのゲノムが、ｒｓ２２２８５４５、ｒｓ１１２８６２８２０、ｒｓ１４０６８３３８７およびｒｓ２０１０６７８４９から選択される１つ、２つもしくは３つのＳＮＰを含むＢＲＫ−３ヌクレオチド配列を含むか、または７７５位のセリン、２９位のアスパラギン、３１位のグルタミンおよび３４８位のバリンから選択される１つ、２つもしくは３つのアミノ酸を含むＢＲＫ−３を発現し、該多量体化が、（ｉｘ）該ＢＲＫ−３または（ｘ）ＢＭＰ受容体を有する該ヌクレオチド配列によってコードされるＢＲＫ−３の多量体化である、概念１〜１５のいずれかの抗体または断片。
該対象がヒトであり、そのゲノムが、ＳＮＰＢ  ｒｓ１２１４３４４３７を含むＡＣＶＲ２Ｂヌクレオチド配列を含むか、またはヒトが４０位のアルギニンを有するＡＣＶＲ２Ｂを発現し、該多量体化が、（ｘｉ）該ＡＣＶＲ２Ｂまたは（ｘｉｉ）ＢＭＰ受容体を有する該ヌクレオチド配列によってコードされるＡＣＶＲ２Ｂの多量体化である、概念１〜１５のいずれかの抗体または断片。
【０６５９】
１７．受容体または各受容体が、ＢＭＰ６受容体、ＢＭＰ７受容体、ＢＭＰ２受容体またはＢＭＰ９受容体である、概念１〜１６のいずれかの抗体または断片。
【０６６０】
１８．該対象の肝細胞または骨細胞におけるシグナル伝達を阻害するための、シグナル伝達が該受容体多量体化によって媒介される、概念１〜１７のいずれかの抗体または断片。
【０６６１】
１９．シグナル伝達がＳｍａｄシグナル伝達である、概念１〜１８のいずれかの抗体または断片。
【０６６２】
２０．該対象の肝細胞におけるＳｍａｄ  ｍＲＮＡの上昇を阻害するための、それによって疾患または状態が治療または予防される、概念１〜１９のいずれかの抗体または断片。
【０６６３】
２１．ヒトまたは非ヒト動物対象における疾患または状態を治療または予防するための方法であって、
ａ．疾患または状態は、対象の肝細胞または骨細胞におけるＨＪＶ非依存性骨形成タンパク質（ＢＭＰ）受容体多量体化によって媒介され、
ｂ．方法は、該受容体多量体化を阻害するために、抗ＢＭＰ抗体または断片が該対象に投与されることを含み、それによって、疾患または状態が治療または予防される、方法。
【０６６４】
２２．抗体、断片および／または受容体が概念１〜２１のいずれか１つに記載される、概念２２の方法。
【０６６５】
ＥＳＡの節約の態様およびＥＳＡの治療−難治性または低い応答性の対象
一例では、抗体または断片は、ヒトまたは動物対象における血漿ヘモグロビンを増加させるためのものである。
【０６６６】
一例では、抗体または断片は、ヒトまたは動物対象における平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）を増加させるためのものである。
【０６６７】
一例では、抗体または断片は、ヒトまたは動物対象における赤血球容積（ＭＣＶ）（および任意選択で平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ））を増加させるためのものである。
【０６６８】
一例では、抗体または断片は、ヒトまたは動物対象における鉄の利用可能性を増加させるためのものである。
【０６６９】
一例では、抗体または断片は、ヒトまたは動物対象におけるトランスフェリン飽和度を増加させるためのものである。
【０６７０】
一例では、抗体または断片は、ヒトまたは動物対象における鉄へのトランスフェリン結合を増加させるためのものである。
【０６７１】
一例では、抗体または断片は、貧血、骨粗しょう症、または本明細書に開示される任意の他の疾患または状態を治療または予防するために、ヒトまたは動物対象に４週間にわたって投与されるＥＳＡ（例えば、ＥＰＯ、ダルベポエチンアルファ）の総用量を低減するためのものである。
【０６７２】
一例では、抗体または断片は、貧血、骨粗しょう症、または本明細書に開示される任意の他の疾患または状態を治療または予防するために、抗ＢＭＰ６アンタゴニストを投与せずにＥＳＡを投与することを除いて、ヒトまたは動物対象に４週間にわたって同一の治療を受けている対照対象に必要な総用量を１／２〜１／３に低減するためのものである。
【０６７３】
一例では、抗体または断片は、貧血、骨粗しょう症、または本明細書に開示される任意の他の疾患または状態を治療または予防するために、治療期間、例えば４週間にわたって、ヒトまたは動物対象に投与されるＥＳＡの投与を１／２〜１／３に節約するためのものである。
【０６７４】
任意選択で、対象は、慢性炎症またはＣＫＤの貧血に罹患している。任意選択で、貧血は、対象における慢性炎症の貧血である。
【０６７５】
任意選択で、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。
【０６７６】
任意選択で、対象に投与されるＥＳＡの用量は、抗ＢＭＰ６アンタゴニストの不在下で投与される場合、有効ではない。
【０６７７】
任意選択で、対象に投与されるＥＳＡの用量は、抗ＢＭＰ６アンタゴニストの不在下で投与される場合、有効ではなく、
（ａ）ヘモグロビンの増加、
（ｂ）平均赤血球容積（ＭＣＶ）の増加、
（ｃ）平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）の増加、
（ｄ）鉄の利用可能性の増加、および／または
（ｅ）鉄によるトランスフェリン飽和度の増加から選択される１つ、より多くまたはすべての効果を対象において生じさせ、
ＥＳＡおよび抗ＢＭＰ６アンタゴニストは、該選択された効果（複数可）を生じさせるために対象に投与される。
【０６７８】
一例では、本発明の抗体または断片は、ヒトまたは動物対象に投与するためのものであり、
（ａ）ヘモグロビンの増加、
（ｂ）平均赤血球容積（ＭＣＶ）の増加、
（ｃ）平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）の増加、
（ｄ）鉄の利用可能性の増加、および／または
（ｅ）鉄によるトランスフェリン飽和度の増加から選択される１つ、より多くまたはすべての効果を対象において生じさせ、
ＥＳＡおよび抗ＢＭＰ６アンタゴニストは、該選択された効果（複数可）を生じさせるために対象に投与される。
【０６７９】
一例では、本明細書の対象は、ＥＳＡの用量に対して難治性であるが、本発明の抗体または断片およびＥＳＡ用量を投与された場合、貧血、骨粗しょう症または他の疾患または状態の治療に応答性である。
【０６８０】
したがって、一例では、本発明の抗体または断片は、対象におけるＢＭＰ６関連の疾患または状態を治療するためにヒトまたは動物対象へのＥＳＡの用量と組み合わせて投与するためのものであり、対象は、組み合わせで治療されるが、該抗体または断片の不在下でＥＳＡの用量の投与による疾患または状態の治療は不可能である。
【０６８１】
疾患または状態は、貧血または本明細書に開示される任意の他の疾患または状態であり得る。
【実施例】
【０６８２】
実施例１
ハンプ発現への影響を研究するためのＨｅｐＧ２ルシフェラーゼレポーター細胞株の生成
目的は、ハンプ調節要素の制御下でレポーター遺伝子を発現するヒト肝細胞株を生成し、ヘプシジンをコードする（ハンプ）遺伝子のＢＭＰ６誘導発現の試験を可能にすることであった。ｐＳＭＡＤ（ＢＭＰ）およびｐＳＴＡＴ（ＩＬ６）に対する応答要素を備えた約３ｋｂの完全な調節領域は、文献（Ｃａｓａｎｏｖａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）で特徴付けられる。ＨｅｐＧ２細胞からのゲノムＤＮＡを単離し、ＰＣＲを実施して、ハンプ調節領域を増幅し、制限部位Ｓｐｅ１およびＸｈｏ１（Ｈｅｐ  Ｐｒｏｍ  ＳＰＥ１  Ｆｏｒｗａｒｄ＝ＡＡＡＡＡＡＡＣＴＡＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＣＡＴＧＴＧＧＣＣＣＣＣＧＣＣＴＴＧＴＣＴＧＣ配列番号６）、Ｈｅｐ  Ｐｒｏｍ  ＸＨＯ１  Ｒｅｖｅｒｓｅ＝ＴＴＴＴＴＴＣＴＣＧＡＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＴＧＴＣＣＣＡＣＴＧＣＴＧＧＧＴＣＴＴＧＡＧＣＴＴ配列番号７）を加えた。ＰＣＲ産物を、標準的な分子生物学的技法を使用して、ｐＭＣＳ−Ｒｅｄ  Ｆｉｒｅｆｌｙ  Ｌｕｃ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）プラスミドベクターにクローニングした。
【０６８３】
ハンプ調節領域、続いてＲｅｄ  Ｆｉｒｅｆｌｙ  ｌｕｃインサートをＰＣＲによって再増幅し、Ｋｐｎ１およびＡｓｉＳ１制限部位を導入し、自家構築されたピューロマイシン選択カセットを含有するＰｉｇｇｙＢａｃ発現ベクターにサブクローニングできるようにした（Ｙｕｓａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。
【０６８４】
ＨｅｐＧ２細胞（ＡＴＣＣ）を、Ｆｒｅｅｓｔｙｌｅ  ｍａｘトランスフェクション剤（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、クローン化されたハンプ調節領域を含有する構築されたＲｅｄ  Ｆｉｒｅｆｌｙ  Ｌｕｃプラスミドでトランスフェクトした。
【０６８５】
ＨｅｐＧ２ハンプレポーター細胞株の活性の確認
上記のように２．８ｋＢヒトヘプシジンプロモーター調節要素の制御下にあるＲｅｄ  Ｆｉｒｅｆｌｙルシフェラーゼ遺伝子を保有する安定した細胞株を、ＳＭＡＤ経路を刺激することが知られている様々な組換えヒトＢＭＰタンパク質を有する細胞を刺激することによって機能を試験した。図１は、ヒトＢＭＰ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ３５５−ＢＭ  配列番号４９３）、ＢＭＰ４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ３１４−ＢＰ、配列番号４９４）、ＢＭＰ５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ６１５−ＢＭＣ、配列番号４９５）、ＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６、配列番号２）およびＢＭＰ７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ３５４−ＢＰ、配列番号４９６）がすべて、同様の程度で、クローン化されたルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を誘導することができたことを示す。ＢＭＰ６およびＢＭＰ７は、異なる培地条件を使用した場合でも、一貫して最も高いレベルの刺激を与えた。一部のＢＭＰでは、２５％ＭＥＭを含むハイブリドーマ増殖培地と比較してＭＥＭ培地でアッセイウィンドウが上昇した（図１Ａ／Ｂを比較）。ＨｅｐＧ２ルシフェラーゼレポーター株も、ヒトおよびマウスＢＭＰ６タンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ５０７−ＢＰ、配列番号３、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−６、配列番号２およびＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ６３２５−ＢＭ、配列番号５）の異なる市販のバッチで試験した（図２）。マウスおよびヒトＢＭＰ６のそれぞれに対する抗ＢＭＰ６モノクローナル抗体ＭＡＢ５０７およびＭＡＢ２３６５（両方ともＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によるＢＭＰ６の活性化効果を中和する交差反応性および能力も、この細胞株を使用して評価した。これにより、市販されている抗体ＭＡＢ５０７およびＭＡＢ２３６５は、それぞれヒトＢＭＰ６およびマウスＢＭＰ６特異的モノクローナルとして、製造業者によって記載されているが、効力はわずかに異なるが、両方とも両方の種のＢＭＰ６と交差反応性であることが明らかとなった（図３）。
【０６８６】
刺激アッセイの材料および方法
ＨｅｐＧ２ハンプルシフェラーゼレポーター細胞株を、２枚の９６ウェルプレート（５０μｌのＭＥＭ培地（最小必須培地−＃３１０９５〜０２９、Ｇｉｂｃｏ）において２ｘ１０４細胞／ウェル、１％ｖ／ｖのＦＢＳ）に播種した。上記の異なるＢＭＰタンパク質を１％ＦＢＳを含有する２５μｌのＭＥＭ中で希釈して、１：３に連続希釈して５０ｎＭの濃度で開始した。次いで、２５μｌのＭＥＭまたは２５μｌのハイブリドーマ培地（ＨＭＭ）を、実験に応じて各ウェルに添加した（最終体積の２５％に相当）。次いで、２５μｌの各希釈物を、細胞を含有する各ウェルに添加して、プレートを３７℃で６時間インキュベートした。２４時間のインキュベーション後、１００μｌのＦｉｒｅｆｌｙルシフェラーゼグロー試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃１６１９７）を各ウェルに添加した。細胞をシェーカーに３分間置き、次いで室温で１０分間、暗所でインキュベートした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）リーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して発光を測定した。場合によっては（図２）、実験は、２５％ＨＭＭ、または１ｎＭ  ＢＭＰ６の固定最終濃度および２５％ＨＭＭの最終濃度用にＨＭＭ中で調製された抗体希釈物を使用して、総体積６０μｌ中で実行された（図３）。
【０６８７】
実施例２
Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）を使用したヒト抗ＢＭＰ６モノクローナル抗体の免疫付与および生成
本実施例は、Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）プラットフォームを使用したヒト抗ＢＭＰ６抗体の生成について記載する（例えば、ＷＯ２０１１／００４１９２、ＷＯ２０１１／１５８００９およびＷＯ２０１３／０６１０９８を参照）。このプロジェクトでは、マウスｂｍｐ６のための遺伝子がノックアウトされた、ヒト可変ドメインを有するカッパ（ＨＫ）抗体を産生するヒト免疫グロブリン遺伝子を含有するＫｙｍｏｕｓｅ（商標）ＨＫ株を生成した。これらのＫｙｍｏｕｓｅ（商標）ＨＫｂｍｐ６−／−マウスを、プライム／ブーストレジーム（表１）を使用して、組換えヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６、配列番号２）で免疫付与した。各レジームの終わりに、最終ブーストを適用し、約６〜７日後に、脾臓およびリンパ節を除去した。場合によっては脾細胞のみを使用し、他の場合には流入領域リンパ節から得られた細胞も使用した（表２）。組織を、Ｂ細胞ＦＡＣＳ選択技術を使用して、Ｂ細胞の抗原駆動性選択のために単一細胞懸濁液に分解した。免疫付与の過程で血清力価が判定される場合、以下に概説されるようにＤＥＬＦＩＡアッセイを使用した。図４に５匹の動物（ＫＭ０８９）について、３回のブースト後の抗ＢＭＰ６ＩｇＧの血清力価の実施例を示す。表１から明らかなように、ＫＭ１５２はＫＭ０８９からのストレートリピートであり、同様の力価を産生した（データは示さず）。
【表６】
2022502040.tif 000012
【０６８８】
ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）による血清力価の判定：
抗ＢＭＰ６抗体の血清力価を、抗体がＦｃドメイン（ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １０３０−０１）を介して捕捉され、ブロッキング緩衝液（１％ｗ／ｖのＢＳＡを含有するＰＢＳ）で遮断された、逆ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）アッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって判定し、次いで、ビチオン化ＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６  配列番号２）をウェルに添加した。結合したＢＭＰ６を、ＤＥＬＦＩＡ  Ｅｕ−Ｎ１ストレプトアビジン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を１：１０００希釈で使用して検出した。Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ溶液を５分間添加し、室温で暗所に置き、次いで６１５ｎｍで読み取った（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ）。プレートを各インキュベーションステップの間に洗浄緩衝液（ＰＢＳ  ０．１％ｖ／ｖのＴｗｅｅｎ）で３回洗浄した。抗ヒトＢＭＰ６抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＡＢ５０７）を陽性対照として使用した。
【０６８９】
マウス組織の単離および調製：
抗ＢＭＰ６力価に基づいて選択された動物に最終ブーストを与え、６〜８日後に脾臓を切除し、１×ＰＢＳで洗浄し、さらなる処理まで氷上で保存した。組織を、１×ＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および３％加熱不活化ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する緩衝液中で調製した。脾細胞を、４０μｍの漉し器（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）を通して組織を潰し、３０ｍＬの３％ＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液ですすいだ後、５００ｇで１０分間４℃で遠心分離させることによって分散させた。赤血球を除去するために、ペレット化した脾細胞を１ｍｌのＡＣＫ溶解緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に再懸濁させた。室温で２分間のインキュベーション後、９ｍｌの３％ＦＢＳ／１×ＰＢＳ緩衝液を添加して融解反応を停止した。細胞集塊を４０μｍの漉し器で濾過して除去した。残りの脾臓細胞を、さらなる手順のためにペレット化した。
【０６９０】
発現のためのＢＣＴ分取および処理
ＫＭ０８９では４匹の動物を使用して１つのＢ細胞ソートを実行し、ＫＭ１５２では合計６匹の動物で２つのソートを実行した（表２）。脾細胞、場合によってはリンパ節も選択した動物から調製し、抗原特異的Ｂ細胞の選択および分取に供した。このために、ビチオン化ＢＭＰ６材料を、組換え産生されたヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６  配列番号２）から生成し、材料を抗ＢＭＰ６  ＭＡＢ５０７との結合活性について試験した（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、データは示さず）。標識された材料のバックグラウンド結合を、無関係の免疫原で免疫付与した動物から単離されたＢ細胞への標識されたＢＭＰ６材料の結合を測定することによって評価した。抗原陽性およびＢ細胞マーカー陽性の単一Ｂ細胞を９６ウェルプレートに分取し、分子生物学処理のために直ちに凍結した。Ｂ細胞技術（一般的な説明についてはＷＯ２０１５／０４０４０１を参照）を使用して、これらの抗原選択されたＢ細胞からＶ領域を増幅した。この一次ＰＣＲ産物から、Ｖ領域をさらなるＰＣＲおよび当該技術分野で使用される標準的な分子生物学的技法によって回収し、９６ウェル培養プレート中で、ＨＥＫ細胞における組換えキメラＩｇＧまたはキメラＦａｂ断片として回収された重鎖および軽鎖のペアリングを有する哺乳動物発現ベクターにクローニングした。培養の６〜８日後、以下に概説されるように上清を結合または中和活性について試験した。場合によっては、抗原選択された単一Ｂ細胞に由来する一次ＰＣＲ産物も、ＮＧＳシーケンシングに供し、合成ＤＮＡから生成されたＶ領域が、哺乳動物発現ベクターにクローニングされ、発現のためにプラスミドＤＮＡが哺乳動物細胞のトランスフェクション用に調製された。
【０６９１】
実施例３
一次スクリーニング
一次スクリーニングを、回収された抗体のヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６  配列番号２）への結合を確立するために均一性時間分解ＦＲＥＴ（ＨＴＲＦ）によって、場合によっては、固定化されたヒトＢＭＰ６に結合するヒトＦａｂ断片を使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によっても実行した。場合によっては、ヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６  配列番号２）を使用した実施例１に記載のＨｅｐＧ２ベースのハンプルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイを一次スクリーニング設定で使用して、中和抗体を直接選択した（表２）。オフ速度順位が選択基準として使用された場合、３７℃で少なくとも１０〜４［１／秒］のオフ速度（ｋｄ）の閾値を使用した。
【表７】
2022502040.tif 000013
【０６９２】
ヒトＢＭＰ６への結合のためのＨＴＲＦアッセイ
ストレプトアビジンＤ２（Ｃｉｓｂｉｏ（カタログ番号６１０ＳＡＤＬＢ）でビチオン化ＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６  配列番号２））を検出し、クリプテートで標識した抗マウスＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ＃１０３０−０１）を使用してＢＭＰ６に結合した抗体を検出した。ＭＡＢ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を陽性対照として使用し、マウスＩｇＧアイソタイプを陰性対照として使用した。プレートをＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取り、ＩＤＢＳソフトウェアを使用してデータを分析した。陽性は一般に、陽性対照の１０％を超えるシグナルとして定義された。
【０６９３】
ハンプ調節領域の制御下でＨｅｐＧ２細胞におけるヒトＢＭＰ６誘導ルシフェラーゼ発現の機能的阻害のスクリーニング
場合によっては、実施例１に記載のＨｅｐＧ２ハンプルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイを回収したＩｇＧの一次評価に使用して、ＢＭＰ６の中和能力を評価した。１５ｕｌの既知のＢＭＰ６シグナル伝達阻害剤を陽性対照として使用し（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＡＢ５０７、（Ａｎｄｒｉｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９））、ヒトまたはマウスＩｇＧを陰性対照として使用した。精製された抗体を、ＨＭＭ２５％Ｅ培地で１５０ｎＭ、１：３希釈曲線、１１ポイントから調製し、ＩｇＧ含有上清試料を１５ｕｌのヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６  配列番号２）にＭＥＭ  １％ＦＢＳ中１０ｎＭ最終で添加し、室温で３０分間インキュベートし、次いで３０ｕｌのＨｅｐＧ２レポーター細胞を１００００細胞／ウェルで添加し、３７℃で一晩インキュベートした。３０ｕｌのルシフェラーゼ基質緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｆｉｒｅｆｌｙ  Ｌｕｃワンステップグローアッセイキット  カタログ番号：１６１９７、Ｐｅｒｂｉｏ）をプレート全体に添加し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して読み取った。
【０６９４】
ＳＰＲオフ速度順位分析
オフ速度スクリーニングを、ＰｒｏｔｅＯｎ（商標）ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）で実施した。ビチオン化ＢＭＰ−６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６  配列番号２）をＮＬＣセンサーチップ表面に捕捉し、２００μｌのＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で希釈した分析物として５０μｌの精製されたＦａｂ材料を使用した。Ｐｒｏｔｅｏｎに固有のソフトウェアを使用してオフ速度分析を実行し、すべてのアッセイを３７℃で実行した。本発明者らは、＜１ｘ１０−４［１／秒］以上の速度を示す抗体が陽性として同定されたという判定基準として設定した。
【０６９５】
実施例４
二次スクリーニングおよびリードパネルの選択
表３は、本発明者らによって考案され、適用され、インビボ分析のためのリードパネルの選択につながる二次スクリーニングおよびさらなる選択基準を要約する。この再試験は、一次スクリーニングでは適用されていないＢＭＰ６刺激および／またはＳＰＲオフ速度順位を使用したＨｅｐＧ２ハンプルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイの使用に関与する。加えて、ＨｅｐＧ２レポーター遺伝子アッセイで関連するＢＭＰ分子を中和する能力を試験することにより、ＢＭＰ６に対する特異性について、選択したすべてのヒットを試験した。最初の例では、ＢＭＰ６とのアミノ酸相同性が高いために、ＢＭＰ５（配列番号４９５）およびＢＭＰ７（配列番号４９６）を試験した（成熟タンパク質において、ヒトＢＭＰ５は８１％を共有し、ヒトＢＭＰ７はヒトＢＭＰ６と７２％のアミノ酸相同性を有する）。実施例１に概説されるように、これらのＢＭＰはすべて、ハンプ調節要素領域の制御下で、ＨｅｐＧ２細胞におけるルシフェラーゼレポーター遺伝子発現を効果的に誘発することができる。ｍＡｂは以前に特にＢＭＰ５およびＢＭＰ７との交差反応性を示したため（Ａｎｄｒｉｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）、ＭＡＢ５０７をこのアッセイで対照として使用した。本発明者らは、ＢＭＰ５（配列番号４９５）およびＢＭＰ７（配列番号４９６）のいずれかまたは両方の一貫した中和を示した抗体を除外することを、決定基準として設定した。ＫＭ０８９−Ｂ１二次スクリーニングの場合、ＨｅｐＧ２レポーター遺伝子アッセイもマウスＢＭＰ６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、配列番号５）を使用して実行し、マウスの交差反応性を試験したが、その後のキャンペーンでは、おそらくヒトＢＭＰ６とマウスＢＭＰ６との間の高い相同性のために、マウスの交差反応性がすべてのヒットで一般的に観察されたため、このスクリーンを二次スクリーニングから除外した。
【表８】
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【０６９６】
インビボ試験用のリードパネルの選択
ＫＭ０８９の二次スクリーニングから２３の合計ヒットが同定された（表３）。ＫＭ１５２−Ｂ１からは、単一Ｂ細胞ＰＣＲからの一次ヒットの二次スクリーニングとすべての分取された抗原特異的Ｂ細胞のＮＧＳ分析を組み合わせて、４個のクローンも同定された（表３）。これらの２７個の抗体を詳細な配列分析に供して、本発明者らの判断において明らかな開発可能性の責任を伴わない固有のクローン配列および配列を同定した。これらのゲーティング基準に従って、本発明者らは１２個の抗体を選択し、完全ヒトＩｇＧ４（配列番号４５４）として再発現および精製した。１２個の抗体のうち２個は、発現または精製後の品質問題の兆候を示したため、それ以上追求されなかった。次いで、残りの１０個の抗体を、ＨｅｐＧ２ハンプルシフェラーゼレポーターアッセイを使用して、ヒトＢＭＰ６に対する特異性およびヒトＢＭＰ６の中和効力について試験した（表４）。
【表９】
2022502040.tif 000015
【０６９７】
これに続いて、ＢＭＰ５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ６１５−ＢＭＣ、配列番号４９５）またはＢＭＰ７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ３５４−ＢＰ、配列番号４９６）（表４に太字で示される）に交差反応性が観察されない７個のクローンをインビボラット研究（実施例１１）に進めたため、スケールアップされたＣＨＯ懸濁細胞に再発現させ、インビボ使用のために精製した。
【０６９８】
ＫＭ１５２−Ｂ２の場合、一次中和スクリーニング（表２）後に選択された１２個の合計ヒットを再発現した。この精製されたリードパネルを、ＨｅｐＧ２ハンプｌｕｃレポーターアッセイの１１希釈点曲線で、ヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６、配列番号２）を中和する効力を、ＫＭ０８９からの最良のリードと比較し、ＢＭＰ５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ６１５−ＢＭＣ、配列番号４９５）およびＢＭＰ７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ３５４−ＢＰ、配列番号４９６）の中和を検討することによってさらに試験した。これにより、ＫＭ０８９からの以前のリードよりも優れた効力を示さなかった５個の抗体が除外され、インビボ試験用に７個つのクローンが残された（データは示さず、表５）。
【表１０】
2022502040.tif 000016
【０６９９】
インビボでの７個の抗体の最初のセットの分析（表４）およびＣＬ−５８８３８の優れた活性の観察（実施例１１を参照）に続いて、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）によって得られたデータを使用し、この抗体のＶｈ（配列番号１１４）およびＶｋ（配列番号１２３）クラスの配列に基づく抗体を同定することによってリードクローンのパネルを潜在的に拡大することが決定された。Ｂ細胞分取後に増幅されたＶ領域上のＮＧＳから得られた対のＶｈおよびＶｋ鎖を、ＣＬ−５８８３８に対してわずかに変異しているが関連性の高い抗体配列を得ることを目的として、ＣＬ−５８８３８と高い相同性を有する配列について分析した。検索は、ヒトのＶ、Ｄ、およびＪ領域（ＩＧＨＶ３−１１＊０１、ＩＧＨＤ６−１９＊０１、ＩＧＨＪ４＊０２／ＩＧＫＶ３−２０＊０１、ＩＧＫＪ１＊０１）および同一のＣＤＲＨ３配列を同一に使用することによって駆動した。この方法により、合計２１個の抗体が、同定され、発現し、精製され、機能、ＢＭＰ６に対する特異性および効力について評価された（表３）。２１個の抗体は、免疫キャンペーンＫＭ０８９およびＫＭ１５２からの５匹の異なる免疫マウスに由来した。最初に１０個の抗体がＢＭＰ６の中和剤として確認されたが、ＢＭＰ５およびＢＭＰ７に対するＢＭＰ６の特異性を評価し、ＨｅｐＧ２  ｌｕｃアッセイでヒトＢＭＰ６を中和する効力をＣＬ−５８８３８と比較した後、表６に示す７個の抗体を選択した。以前のすべてのスクリーニングキャンペーンで試験された抗体との交差配列比較では、インビボ分析用に発現および精製された４個の新しい固有の抗体を残す前に評価された別の３個の抗体を除外した。これら４個のうち、ＣＬ−５８７１３はこのスケールでは十分な量で発現しなかったため、除外された。残りの３個の新しい抗体は、ラットでのインビボ研究に進み（表６に太字で示され、実施例１７に示される）、免疫付与ＫＭ０８９からの２つの異なる免疫付与されたｂｍｐ６−／−マウスに由来した。
【表１１】
2022502040.tif 000017
【０７００】
実施例５
リードクローンの配列分析
インビボでの使用のために選択された抗体を、Ｖ領域遺伝子使用およびＫｙｍｏｕｓｅ（商標）の免疫付与中に自然に発生するインビボ成熟プロセス中に導入された変異の程度について分析した。表７〜９は、表４〜６で選択された抗体に関するこの情報の概要を示す。ここに示されるすべてのＣＤＲ定義は、ＩＭＧＴ定義である。
【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【０７０１】
実施例６
ＳＰＲによって測定された抗体ＣＬ−５８８３８の結合速度論
ヒトＢＭＰ６に結合するＣＬ−５８８３８  ＩｇＧ４（配列番号１１６および配列番号１２５）の速度論は、３７℃、ｐＨ７．６で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって判定された。実施例で使用される他の抗体と同様に、ＣＬ−５８８３８  ＩｇＧ４抗体は、エフェクター機能が不活性化され、ヒンジ安定化されている、配列番号４５４のＩｇＨ定常領域（「ＩｇＧ４−ＰＥ」と呼ぶ）を含んでいた。簡潔には、この測定では、ビオチン化組換えヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６）（配列番号２）をストレプトアビジンコーティングバイオセンサーチップに固定化し、５つの異なるＩｇＧ濃度で実行されるシングルサイクルカイネティクス解析手法を使用して結合を調査した。この設定では、二価のＩｇＧ４抗体が二量体のＢＭＰ６抗原と相互作用し、このことは、１分子当たりに発生する潜在的な複数の相互作用により、結合活性が測定される全体的な結合速度論に関与することを意味する。データ分析に使用された二価モデルは、この効果をデコンボリューションすることを目的としているが、真の１：１相互作用を測定するほど信頼性は高くない。したがって、この設定では、ＫＤ値を「相対」親和性値と呼ぶべきである。ＣＬ−５８８３８に対してこの方法で測定された相対ＫＤ値は、０．０７ｎＭであった（表１０）。
【表１５】
2022502040.tif 000021
【０７０２】
２番目の実験設定では、ＣＬ−５８８３８のＦａｂ断片をＣＨＯ細胞での発現によって生成し、相互作用を測定し、Ｆａｂ断片は、ＮｅｕｔｒａｖｉｄｉｎバイオセンサーチップＮＬＣ（Ｂｉｏｒａｄ）上に固定化されたビオチン化ヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６）（配列番号２）に結合するフローセル内の分析物であった。この実験設定には二価相互作用を回避する単量体Ｆａｂ断片が含まれるため、これは相互作用が非常に限られているか、結合速度論への寄与がないことを表しており、したがって真のＫＤ値を判定することができる（表１１）。ＣＬ−５８８３８は、３７℃および約１４０ｐＭのｐＨ７．６でＦａｂ断片とヒトＢＭＰ６との相互作用の真のＫＤを示した。
【表１６】
2022502040.tif 000022
【０７０３】
方法：
ＩｇＧのＳＰＲ分析
組換えヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６）（配列番号２）をビオチン化し、ＳＡバイオセンサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で固定化し、分析物としてＣＬ−５８８３８の５つの異なる濃度（０．１、０．５、２．５、１２．５および６２．５ｎＭ）でＩｇＧを泳動しながらシングルサイクルカイネティクス解析手法を行った。結合センサーグラムは、抗体の代わりに緩衝液を使用した同一の注射セットを使用して二重に参照された。データを、Ｂｉａｃｏｒｅ８Ｋ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）分析ソフトウェアに固有の二価モデルに適合させた。ＨＢＳ−ＥＰを泳動用緩衝液としてｐＨ７．６で使用し、アッセイを３７℃で行った。
【０７０４】
Ｆａｂ断片のＳＰＲ分析
ヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６）（配列番号２）をビオチン化し、ＮｅｕｔｒａｖｉｄｉｎバイオセンサーチップＮＬＣ（Ｂｉｏｒａｄ１７６５０２１）に固定化した。ＣＬ−５８８３８のＦａｂ断片は、ＨＥＫ細胞での発現により生成され、タンパク質Ｇおよびサイズ排除クロマトグラフィーで精製された。Ｆａｂを、６４、１６、４、１、および０．２５ｎＭの分析物として使用した。緩衝液注射を使用して、結合センサーグラムを二重に参照した。データを、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６分析ソフトウェアに固有の１：１モデルに適合させた。ＨＢＳ−ＥＰを泳動用緩衝液としてｐＨ７．６で使用し、アッセイを３７℃で行った。
【０７０５】
実施例７
その他のＢＭＰとの交差反応性についてのＣＬ−５８８３８の試験
抗体ＣＬ−５８８３８  ＩｇＧ４（配列番号１１６および配列番号１２５）を、他のＢＭＰファミリーメンバーとの交差反応性の欠如に関してより詳細に評価した。スクリーニング戦略は、２つの最も関連するＢＭＰアミノ酸配列（それぞれ８１％と７２％）であるＢＭＰ５とＢＭＰ７への影響をすでに効果的に除外した。実施例４に概説されるように、交差反応性は、ＢＭＰ２（５６％）、ＢＭＰ４（５８％）およびＢＭＰ９（５４％）のようなＢＭＰファミリーより相同性の低いメンバーも含むように拡張パネルを用いて実施例１で開発されたＨｅｐＧ２レポーター遺伝子アッセイを使用して評価された。アッセイは、ハンプ駆動性レポーター遺伝子発現の適切な刺激と、６００ｎＭの最終濃度で始まるＣＬ−５８８３８抗体の１１点希釈範囲を提供する１０ｎＭのすべてのＢＭＰの固定最終濃度で実行された。ＢＭＰ２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ３５５−ＢＭ  配列番号４９３）、ＢＭＰ４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ３１４−ＢＰ、配列番号４９４）およびＢＭＰ９（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−７、配列番号４９７）の場合、交差反応性試験を一度実行し、一方、ＢＭＰ５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ６１５−ＢＭＣ  配列番号４９５）およびＢＭＰ７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ３５４−ＢＰ、配列番号４９６）の場合、ｎ＝２であった。１つの実験は、それぞれの場合で図７に示される。結果は、ここで試験されたＢＭＰのいずれに対してもＣＬ−５８８３８の検出可能な中和がなかったことを示す。各アッセイで試験された関連するＢＭＰに特異的な市販の対照抗体は、予想通り、レポーター遺伝子発現を中和した（抗ＢＭＰ２／４  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＡＢ３５５２、抗ＢＭＰ５  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＡＢ７１５１、抗ＢＭＰ７  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＭＡＢ３５４１、抗ＢＭＰ９  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ３２０９）。
【０７０６】
方法
ヒトＢＭＰを、ＭＥＭ  １％ＦＢＳで４０ｎＭ（１０ｎＭ最終アッセイ濃度）で調製した。対照曲線を、抗ＢＭＰ２／４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、抗ＢＭＰ５（ＭＡＢ７１５１、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、抗ＢＭＰ７（ＭＡＢ３５４１、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照（自家製）を使用して調製した。１１点曲線を作成するための３倍希釈系列を使用して、ＰＢＳ中の２．４μＭ（６００ｎＭ最終アッセイ濃度）から参照抗体を滴定した。１１点曲線を作成するための３倍希釈系列を使用して、ＰＢＳ中の８００ｎＭ（２００ｎＭ最終アッセイ濃度）からＢＭＰ標準曲線を調製した。試験された各分子の滴定は、ＰＢＳでの３倍希釈の１１点曲線によって調製された。次いで、１５μＬを希釈液からアッセイプレート（ＬＵＣ）に移した。１５μＬのＰＢＳを全結合および非特異的結合ウェルに添加し、４０ｎＭでの１５μＬのヒトＢＭＰを試験ウェルおよび全結合対照ウェルに添加し、１５μＬのＭＥＭ  １％ＦＢＳを非特異的結合対照ウェルに移した。ＨｅｐＧ２レポーター細胞を調製する間、プレートを室温に置いた。細胞をフラスコから分離し、ペレット化し、３．３ｘ１０５細胞／ｍｌで１％ＦＢＳを補充したＭＥＭ中に再懸濁した。３０μＬの細胞を１０，０００細胞／ウェルで試験プレート全体に添加した。
プレートを３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートし、翌日、３０μＬのルシフェラーゼ基質（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｆｉｒｅｆｌｙ  Ｌｕｃワンステップグローアッセイキットに含有される）をアッセイプレートに添加した。プレートを室温で１０分間、暗所でインキュベートし、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して読み取った。
【０７０７】
実施例８
受容体の二量体化の干渉について抗ＢＭＰ６抗体を試験する
ＡＬＫ２およびＡＬＫ３は、マウスおよびヒトの肝臓で発現する主要なＩ型ＢＭＰ受容体であり（Ｍａｙｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４；Ｘｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）、肝細胞でのＢＭＰ誘導シグナル伝達を可能にすることが文献で示唆されている。したがって、抗ＢＭＰ６抗体でＢＭＰ６の生物活性を遮断すると、ＢＭＰＲ１のリン酸化およびそれに続くＳＭＡＤ経路を介したシグナル伝達を誘発する必要条件として記載されているＢＭＰＲ１およびＢＭＰＲ２の二量体化にどのように影響するかに関心があった。ＢＭＰＲ２（Ｔ−ＡＬＫ）とＢＭＰＲ１Ｂ（ＡＬＫ６）およびＢＭＰＲ２（Ｔ−ＡＬＫ）の二量体化によるＢＭＰＲ１Ａ（ＡＬＫ３、ＣＤ２９２）への影響を調査した。ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ｅＸｐｒｅｓｓ二量体化アッセイ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ）を使用して二量体化を測定した。このシステムでは、不活性酵素サブユニットＰｒｏＬｉｎｋ（商標）（ＰＫ）またはＥｎｚｙｍｅ  Ａｃｃｅｐｔｏｒ（ＥＡ）でそれぞれ細胞内にタグ付けされた修飾ヒトＡＬＫ３／ＡＬＫ６およびＢＭＰＲ２で、Ｕ２ＯＳ細胞を安定的にトランスフェクトした。リガンドによって誘導される活性化により、２つの受容体は二量体化し、２つの酵素の構成要素を補完して活性酵素を作成し、それが基質を加水分解して化学発光シグナルを生成する。ここでは、両方の場合でＢＭＰ６を使用して二量体化事象を誘発した。
【０７０８】
最初に、５μｇ／ｍｌの最終濃度で開始し、さらに希釈を２倍にするＢＭＰ６濃度の範囲を使用して、ＢＭＰ６応答曲線を確立した。最終的に、２００ｎｇ／ｍｌのＢＭＰ６の固定濃度が、ＢＭＰ６誘導性受容体二量体化に対する抗ＢＭＰ６抗体の効果を分析するために選択された。抗ＢＭＰ６モノクローナルマウス抗体ＭＡＢ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびその他の様々な抗ＢＭＰ６抗体が二量体化に及ぼす影響を、一定の範囲の抗体濃度で調べた。抗体Ａは、各ドメインが配列番号４０２を含むＶＨドメイン、各ドメインが配列番号４１０を含むＶＬドメインを含む抗ＢＭＰ６抗体である。抗体Ｂは、各ドメインが配列番号４１８を含むＶＨドメイン、各ドメインが配列番号４２６を含むＶＬドメインを含む抗ＢＭＰ６抗体である。
【０７０９】
図６Ａは、ＢＭＰＲ１Ａ（ＡＬＫ３）／ＢＭＰＲ２の二量体化のために実行された２つの実験の代表的な結果を示す。試験したすべてのヒト抗ＢＭＰ６抗体は、濃度依存的様式でＡＬＫ３／ＢＭＰＲ２受容体の二量体化を低減させ、１０ｎＭを超える濃度で二量体化を完全に阻害した。この実験のＩＣ５０値は、試験したヒト抗ＢＭＰ６抗体で２ｎＭであった。マウスモノクローナルＭＡＢ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）のＩＣ５０はわずかに低く３ｎＭであった。特定の理論に拘束されることを望まないが、この観察の最も可能性の高い解釈は、ＢＭＰ６への抗ＢＭＰ６抗体の結合がＢＭＰ６が１つまたは両方のＢＭＰ受容体と相互作用するのを妨げ、したがって、Ｉ型およびＩＩ型受容体のＢＭＰ６駆動性二量体化を妨げるということである。しかしながら、いくつかの抗ＢＭＰ６抗体は、ＢＭＰ６抗体複合体とそれらの受容体分子の１つとの相互作用を依然として可能にする方法でＢＭＰ６に結合し、次いで、抗体は、受容体の１つと複合体との相互作用においてＢＭＰ６に結合したままであると考えられる。次いで、この結合した受容体−抗体複合体は、この受容体−抗体複合体と他の対の受容体とのその後の相互作用を立体的に妨げるかまたは抑制し、したがって、このアッセイにおける効果的な二量体化およびシグナル生成を回避する可能性がある。
【０７１０】
図６Ｂは、ＢＭＰＲ１Ｂ（ＡＬＫ６）／ＢＭＰＲ２の二量体化のために実行された２つの実験の代表的な結果を示す。濃度依存的様式でＡＬＫ６／ＢＭＰＲ２受容体の二量体化に影響を与える能力について、ヒト抗ＢＭＰ６抗体１〜８を試験した。試験したすべての抗体は、二量体化の完全な阻害をもたらす。ここで使用した抗ＢＭＰ６抗体のいくつかは、１００ｎＭ以上で完全な中和のみを示した。このアッセイでは、マウスモノクローナルＭＡＢ５０７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）のＩＣ５０は約０．２ｎＭであった。
【０７１１】
Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｔｌａｓ（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｉｎａｔｌａｓ．ｏｒｇ／ＥＮＳＧ０００００１６８５０９−ＨＦＥ２／ｃｅｌｌ＃ｒｎａ）によって示されるように、Ｕ２Ｏ２細胞はＨＪＶ（ヘモジュベリン（ｈａｅｍｏｊｕｖｅｌｉｎ）、ヘモジュベリン（ｈｅｍｏｊｕｖｅｌｉｎ）、ＨＦＥ２Ａ、ＨＪＶ、ＪＨおよびＲＧＭＣとしても知られている）を発現しない。さらに、外因性のヒトＢＭＰ受容体を発現するように細胞株を操作したが、外因性のＨＪＶを発現するように操作は行わなかった。したがって、結果は、驚くべきことに、抗ＢＭＰ６アンタゴニストを使用して、ＢＭＰ６によるＢＭＰ受容体のＨＪＶ非依存性二量体化を阻害できることを示した。
【０７１２】
方法
ヒトＡＬＫ３＋ヒトＢＭＰＲ２発現細胞株を作成し、ヒトＡＬＫ６＋ヒトＢＭＰＲ２発現細胞株を作成した（ＡＬＫは不活性酵素サブユニットＰｒｏＬｉｎｋ（商標）（ＰＫ）で操作されたが、ＢＭＰＲ２はＥｎｚｙｍｅ  Ａｃｃｅｐｔｏｒ（ＥＡ）で操作された）。ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）ｅＸｐｒｅｓｓ  ＢＭＰＲ１Ａ＋ＢＭＰＲ２およびＢＭＰＲ１Ｂ＋ＢＭＰＲ２をトランスフェクトしたＵ２ＯＳ細胞（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ＃９３−１０５３Ｃ３または＃９３−１０６３Ｅ３）を、提供されたセルプレーティング試薬中に再懸濁させ、１００μｌの細胞懸濁液を白壁の透明底の９６ウェル組織培養プレート（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ＃１５−０７３）の各ウェル（１ｘ１０４細胞／ウェル）に添加し、３７℃で２４時間インキュベートした。適切なアッセイウィンドウを確立するために、ヒトＢＭＰ６（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ１２０−０６）（配列番号２）の滴定を５μｇ／ｍｌの最終濃度で開始して調製し、セルプレーティング試薬で３分の１（×１１）に希釈した。この希釈系列の結果から、両方の実験のために２００ｎｇ／ｍｌのＢＭＰ６の固定最終濃度が選択された。次いで、２００ｎｇ／ｍｌのｈＢＭＰ６最終濃度をマイクロタイタープレートのウェルへの抗ＢＭＰ６抗体の段階希釈物に添加し、室温で１時間インキュベートすることによって抗体を試験した。これに続いて、このプレインキュベートされた混合物の１０μｌをウェルごとにＵ２ＯＳ細胞培養プレートに添加し、３７℃でさらに１６時間インキュベートした。検出試薬を、１体積のＦｌａｓｈ  Ｃｅｌｌ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ＃３０−３９０）を４容積のＦｌａｓｈ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ（ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ＃１０−２１９）に添加することによって調製した。この調製した検出ミックス１１０μｌを各ウェルに添加し、室温で１時間、暗所でインキュベートした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）プレートリーダーを使用してプレートを読み取り、分析した。
【０７１３】
実施例９
重複するペプチドアレイを使用した線状エピトープマッピング
線状エピトープマッピングは、成熟ヒトＢＭＰ６の全配列をカバーする直鎖状ペプチドを使用して実行された。ＢＭＰ６ペプチドを、Ｃ末端およびＮ末端でトランケートされたペプチドの生成を回避するために、Ｃ末端およびＮ末端で中性グリシン−セリン（ＧＳＧＳＧＳＧ）リンカーで伸長した。次いで、伸長したＢＭＰ６配列を、１４個のアミノ酸の重複部分で重複する１５個のアミノ酸ペプチドに変換した。マウスＢＭＰ６配列がヒトＢＭＰ６（ＰＥＰｅｒＰＲＩＮＴ  ＧｍｂＨ）と異なるすべての場所のペプチドバリエーションだけでなく、すべての重複ペプチドを含有するマイクロアレイチップが印刷された。得られたＢＭＰ６ペプチドマイクロアレイには、重複して印刷されていた２３２の異なるペプチド  が含有されていた（４６４のペプチドスポット）。ＣＬ−５８８３８、抗体Ａ、抗体Ｂ、ｍａｂ１５５９６３（Ａｂｃａｍ）は直鎖状合成ＢＭＰ６ペプチドで産生され、Ｍｏｒｐｈ６．１（Ａｃｒｉｓ  ＢＭ４１０３）はＢＭＰ６の合成ペプチドで産生された（配列番号１７、Ｓｃｈｌｕｅｓｓｅｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９５）。
【０７１４】
方法
抗体をインキュベーション用緩衝液中で１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌの濃度で使用し、４℃で１６時間インキュベートし、１４０ｒｐｍで振とうした。種特異的な二次抗体を使用した：対照抗体マウスモノクローナル抗ＨＡ（１２ＣＡ５）ＤｙＬｉｇｈｔ８００（１：２０００）での染色を、二次抗体ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＤｙＬｉｇｈｔ６８０（１：５０００）およびヒツジ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＤｙＬｉｇｈｔ６８０（１：５０００）と同時に行った。しかしながら、二次抗体とコントロール抗体との干渉を避けるため、二次抗体ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ＤｙＬｉｇｈｔ６８０で染色した後、マウス対照抗体で染色した。読み取りはＬＩ−ＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを介して行った、スキャンオフセット０．６５ｍｍ、解像度２１μｍ、７／７のスキャン強度（赤＝７００ｎｍ／緑＝８００ｎｍ）。
【０７１５】
コンセンサスモチーフＴＬＶＨＬＭＮＰＥＹＶ（配列番号８）を有する隣接ペプチドによって形成された単一のエピトープ様スポットパターンに対して、抗体Ａで明確な応答が見られた。同様に、隣接ペプチドによって形成された単一のエピトープ様スポットパターンに対する明確な応答が、コンセンサスモチーフＨＬＭＮＰＥＹ（配列番号９）を有する抗体Ｂで見られた。ヒトまたはマウスの隣接ペプチドによって形成された４つのエピトープ様スポットパターンに対する弱いが依然として明確な応答が、コンセンサスモチーフＳＡＳＤＹＮＳＳＥＬＫＴＡ（ヒト、配列番号１０）、ＥＬＫＴＡＣＲＫＨＥＬＹＶ（ヒト、配列番号１１）、ＧＳＳＤＹＮＧＳＥＬＫＴＡ（マウス、配列番号１２）およびＥＬＫＴＡＣＫＫＨＥＬＹＶ（マウス／ラット、配列番号１３）を同定するｍａｂ１５５９６３で見られた。これらのモチーフはすべて、このウサギ抗ＢＭＰ６モノクローナルによって認識されるコアエピトープに対応する可能性が高いコンセンサスコアモチーフＥＬＫＴＡ（配列番号１４）を示し、おそらくペプチドの一部を使用して、このモノクローナルを生成した。隣接ペプチドによって形成された２つのパターンに対する非常に強い応答が、ＢＭＰ６ペプチドのヒトとラット／マウスのセットの間に見られるアミノ酸ＳおよびＡの１つの交換だけが異なるコンセンサスモチーフＱＳＱＤＶＡＲ（ヒト、配列番号１５）およびＱＳＱＤＶＳＲ（マウス／ラット、配列番号１６）を有するＭｏｒｐｈ６．１で見られた。これらの駆動は、このモノクローナルを生成するための免疫原として使用されるＢＭＰ６ペプチド配列内に完全に含有されている（ＱＳＲＮＲＳＴＱＳＱＤＶＡＲＶＳＳＡＳＤＹＮＳＳＥＬＫＴＡＣ配列番号１７、Ｓｃｈｌｕｅｓｓｅｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９５）。これらの結果とは対照的に、ＣＬ−５８８３８  ＩｇＧ４（配列番号１１６および配列番号１２５）では、輝度とコントラストが大幅に増加しても、アッセイのノイズレベルを超える染色は見られなかった。しかしながら、予想通り実施されたアッセイですべての陽性対照線状エピトープを使用した。この結果は、ＣＬ−５８８３８が、上記のマッピングされたすべての抗体とは対照的に、マイクロアレイ内の直鎖状抗原由来ペプチドによって模倣または表現できなかった構造的感受性または非連続性エピトープに結合するという事実によって説明される可能性が最も高い。
【０７１６】
実施例１０
ヒトＢＭＰ６への結合のウェスタンブロット分析
実施例９のペプチドマッピング実験は、ＣＬ−５８８３８がＢＭＰ６一次配列から生成された重複する線状ペプチドに結合できないことを示唆したので、抗体をウェスタンブロッティングに供し、そこでヒトＢＭＰ６を還元および非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥに適用した。ＢＭＰ６はジスルフィド結合した二量体であるため、還元条件により、非還元ゲル上の二量体ではなく、ゲル上に単量体が作成されるべきである。ＳＤＳの存在は、両方の場合でタンパク質構造の一般的なアンフォールディングを引き起こし、潜在的な線状エピトープを明らかにするだけでなく、二次構造を除去するか、少なくとも低減させる。実施例９の結果から、ＣＬ−５８８３８はＳＤＳ−ＰＡＧＥで提示された折り畳まれていないＢＭＰ６を認識しない可能性があるのに対し、ＢＭＰ６配列の線状部分を明確に認識した抗体ＡおよびＢは認識する可能性があることが予想された。図５にこの分析結果を示す。クマシー染色ゲルは、還元レーンで１８ｋＤａのＢＭＰ６単量体を明確に示し、非還元レーンで約３２ｋＤａの二量体を示し、還元条件を適用すると単量体が形成されることを確認している。ＣＬ−５８８３８は、還元されていないジスルフィド結合二量体ではシグナルを生成したが、還元された単量体ではシグナルを生成しなかった。対照的に、抗体Ａは、二量体でシグナルを生成し、ＢＭＰ６単量体で非常に明らかなシグナルを生成し、抗体Ａへの結合に十分なエピトープがＢＭＰ６の特定の折り畳みまたは二量体化を必要としないことを示している。抗体Ｂは、抗体Ａと非常に類似した結果を再び示し、これら２つの抗体のエピトープの類似性を強調している。これらの結果は、ＣＬ−５８８３８がＳＤＳの存在下でもＢＭＰ６を認識できるが、結合するにはジスルフィド結合したＢＭＰ６二量体の構造的界面が必要であることも示している。これは、実施例９に見られる結果と一致し、ＣＬ−５８８３８のエピトープがＢＭＰ６二量体にのみ集められた残基を包含すること、および／または結合活性を媒介する重要な残基がＢＭＰ６単量体間の分子間ジスルフィド結合の近くに位置することを示し得る。
【０７１７】
実施例１１
正常ラットへの単回静脈内注射（ｉｖ）後の抗ＢＭＰ６抗体の評価
オスのＷｉｓｔａｒラット（２５０〜３２５ｇ、ｎ＝６／群）に、１ｍｇ／ｋｇの完全ヒトＩｇＧ４抗ＢＭＰ６抗体の単回静脈内注射をした。１ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与、ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（「アイソタイプ」と表示）、および１つまたは２つの追加のヒトＩｇＧ抗ＢＭＰ６抗体（抗体ＡおよびＢ）を投与された各研究には、２つまたは３つの対照群が含まれていた。
【０７１８】
投与の１時間前（−１）に動物から採血してベースライン測定を行い、次いで５分、６時間および２４時間、３、７、９、１４、２２、２９および３６日目に動物から採血した。血漿トランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ）をすべての時点で判定した。
これらの実験は、本発明によって生成された完全ヒトＩｇＧ４抗ＢＭＰ６抗体の単回静脈内注射後のＴＳＡＴの変化を測定するように設計された。合計１７個の抗体（表４〜６および７〜９）を、上記の実験手順に従って３つの独立した研究で評価した。表１２〜１４は、ＴＳＡＴに対するこれら３つの実験の結果を示す。
【表１７】
2022502040.tif 000023
【表１８】
2022502040.tif 000024
【表１９】
2022502040.tif 000025
【０７１９】
プロットされた結果を、図８Ａ〜Ｄ（表１２の場合）、図８Ｅ〜Ｇ（表１３の場合）、および図８Ｈ〜Ｉ（表１４の場合）に示す。全体として、３つの実験すべてから、ＴＳＡＴのピーク増加および効果の持続時間に関してＴＳＡＴレベルに最も高い効果を示した２つの抗体は、ＣＬ−５８８３８（図８Ａ）とＣＬ−５８８３５（図８Ｈ）であった。
【０７２０】
実施例１２
正常ラットへの単回静脈内注射後のＣＬ−５５８３８の用量反応評価
抗体ＣＬ−５８８３８は実施例１１で好ましいプロファイルを示した抗体の１つであり、したがって、ある範囲の用量にわたるＣＬ−５８８３８の静脈内注射後のトランスフェリン飽和度および効果の持続時間に対する効果を判定することは興味深い。オスのＷｉｓｔａｒラット（２５０〜３２５ｇ、ｎ＝６／群）に、０．３、１または３ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８完全ヒトＩｇＧ４（配列番号１１６および配列番号１２５）の静脈内注射をした。ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照（「アイソタイプ」と表示）および抗体Ａも、１ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与に含まれていた。
【０７２１】
投与の１時間前（−１）に動物から採血してベースライン測定を行い、次いで５分、６時間および２４時間、３、７、９、１４、２２、２９および３６日目に動物から採血した。血漿ＴＳＡＴをすべての時点で判定した（表１５）。
【表２０】
2022502040.tif 000026
【０７２２】
図９にこの実験結果を示す。ＣＬ−５８８３８による治療後のＴＳＡＴの調節の用量依存的なピークレベルおよび用量依存的な持続時間を伴うＴＳＡＴの急速かつ強力な増加があった。３ｍｇ／ｋｇは、少なくとも８６４時間、アイソタイプ対照よりもＴＳＡＴが上昇を伴う、最も高くかつ長い効果の持続時間であった（図９Ａ）。ＣＬ−５８８３８は、１ｍｇ／ｋｇの同じ用量で比較した場合、抗体Ａに匹敵するＴＳＡＴの増加および効果の持続時間を示し、抗体Ａのピークレベルはわずかに高いように見えたが、６９６時間までアイソタイプレベルに戻ったが、ＣＬ−５８８３８はこの時点ではまだアイソタイプを超えて上昇していた（図９Ｂ）。
【０７２３】
図１１は、この実験（図１１Ａ）におけるＣＬ−５８８３８の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示しており、用量を増やすたびにピーク濃度および曝露期間が増加する。このＰＫプロファイルを１ｍｇ／ｋｇ用量の抗体Ａのプロファイルと比較した場合、ＣＬ−５８８３８は同等のピーク濃度を示したが、曝露期間が長くなった（図１１Ｂ）。
【０７２４】
実施例１３
正常ラットへの単回皮下（ｓｃ）注射後のＣＬ−５５８３８の用量反応評価
雄のＷｉｓｔａｒラット（２５０〜３２５ｇ、ｎ＝６／群）に、完全ヒトＩｇＧ４抗ＢＭＰ６抗体（配列番号１１６および配列番号１２５）として０．３、１または３ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８の単回皮下（ｓｃ）注射をした。ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（「アイソタイプ」と表示）ならびに抗ＢＭＰ６抗体ＡおよびＢも、それぞれ１ｍｇ／ｋｇの単回皮下投与に含まれていた。
投与の１時間前（−１）に動物から採血してベースライン測定を行い、次いで５分、６時間および２４時間、３、７、９、１４、２２、２９および３６日目に動物から採血した。血漿ＴＳＡＴをすべての時点で判定した（表１６）。
【表２１】
2022502040.tif 000027
【０７２５】
図１０に結果を示す。ＣＬ−５８８３８による治療後のＴＳＡＴの調節の２４〜７２時間での用量依存的なピークレベルおよび用量依存的な持続時間を伴うすべての用量でＴＳＡＴの急速かつ強力な増加があった。３ｍｇ／ｋｇは、少なくとも８６４時間、アイソタイプ対照よりもＴＳＡＴが上昇を伴う、最も長い持続時間であった（図１０Ａ）。ＣＬ−５８８３８は、１ｍｇ／ｋｇで抗体ＡおよびＢと非常に匹敵するＴＳＡＴの増加を示した（図１０Ｂ）。効果の持続時間は、この実験の抗体Ｂにより類似しており、両方とも５２８時間でアイソタイプ対照よりも上昇した。
【０７２６】
図１１は、単回皮下投与後のＣＬ−５８８３８の薬物動態（ＰＫ）プロファイルを示しており、用量を増やすたびにピーク濃度および曝露期間が増加する（図１１Ｃ）。ＣＬ−５８８３８のＰＫプロファイルを１ｍｇ／ｋｇ用量の抗ＢＭＰ−６抗体ＡおよびＢのプロファイルと比較した場合、ＣＬ−５８８３８は、増加した曝露期間と同等のピーク曝露を示した（図１１Ｄ）。
【０７２７】
実施例１４
慢性炎症の貧血のＰＧ−ＰＳラットモデルにおけるＣＬ−５８８３８の評価
ＰＧ−ＰＳラット疾患モデルは、Ａ群連鎖球菌ペプチドグリカン−多糖類（ＰＧ−ＰＳ）の投与後の持続的かつ長期的な関節炎の疾患モデルである。これらのラットのほとんどは、２〜３週間にわたって重度の貧血も発症するため、このモデルは、多くの慢性炎症性疾患で観察される炎症駆動機能性鉄欠乏性貧血のモデル、すなわち慢性疾患の貧血（ＡＣＤ、（Ｔｈｅｕｒｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１））のモデルでもある。
【０７２８】
６〜８週齢の雌のＬｅｗｉｓラットに、１４日目に１５ｍｇ／ｋｇのＰＧ−ＰＳの単回腹腔内（ｉｐ）注射をした。−１日目（０週目）に、動物を尾静脈から採血し、血漿を収集し、全血を採取して、全血球計算（ＣＢＣ）分析に使用した。貧血（１５ｇ／ｄｌ未満のヘモグロビンレベル）および白血球数の増加を発症した動物を研究に組み入れた。治療歴のない群は、ベースライン測定値の研究に含まれた（ｎ＝５）。０日目に、動物をランダム化して群に分け、すべての治療群で同様の平均ヘモグロビンレベルと白血球数を得た（ｎ＝６〜９）。次いで、ラットを、ＩｇＧ４アイソタイプ対照（ｎ＝８）、ＣＬ−５８８３８  ３ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝９）、ダルベポエチンアルファ（ＥＰＯ）１０μｇ／ｋｇ（ｎ＝８）の単回皮下注射またはＣＬ−５８８３８  ３ｍｇ／ｋｇおよびＥＰＯ  １０μｇ／ｋｇ（ｎ＝７）の両方の組み合わせのいずれかで治療した。ＥＰＯ投与を、ＥＰＯを受けた群で毎週繰り返した。
【０７２９】
尾静脈から、−１日目（０週目）、７日目（１週目）、１４日目（２週目）、２１日目（３週目）および選別した２８日目（４週目）に採血し、鉄の状態および貧血のさらなる分析を可能にした。
【０７３０】
実験は、ＣＬ−５８８３８が未治療の対照と比較してラットの貧血にプラスの影響を与えることができるかどうかを調査するために設計された。ヘモグロビン、ＴＳＡＴ、全血球数、およびヘプシジンレベルに対するこの効果を判定するために、ＣＬ−５８８３８を単独で、または慢性疾患の貧血における一般的な治療オプションであるエリスロポエチン（ＥＰＯ）と組み合わせて単回投与した後に測定した。
【表２２】
2022502040.tif 000028
【０７３１】
表１７および図１２は、ＣＬ−５８８３８で治療すると、アイソタイプ対照で治療した動物と比較して、４つの時点すべてでＴＳＡＴが増加したことを示す（図１２Ａ）。ＣＬ−５８８３８をＥＰＯ投与と組み合わせると、ＴＳＡＴがさらに上昇し、ナイーブ型動物で見られたＴＳＡＴと同様に、実験期間中は５０％を超えて上昇したままだった。ＣＬ−５８８３８は、３週目〜４週目のアイソタイプ治療した動物で見られるヘモグロビンの低下も妨げた（図１２Ｂ）。ＣＬ−５８８３８をＥＰＯ投与と組み合わせると、ナイーブ型動物で見られるレベルをはるかに超えるヘモグロビンの大規模な相乗的増加が引き起こされた（図１２Ｂ）。同様の観察がＭＣＨについても行われ、同時治療によりナイーブ型動物で観察されたＭＣＨレベルが回復した（図１２Ｃ）。図１２Ｄ〜Ｆは、０週目（図１２Ｄ）、１週目（図１２Ｅ）および２週目（図１２Ｆ）での循環ヘプシジンレベルの結果を示す。治療開始時（１２Ｄ）、すべての群は、ナイーブ型動物の炎症の急速な発症によって駆動されたヘプシジンレベルがすでに大幅に上昇した。治療開始後１週目と２週目に、アイソタイプ対照動物は、おそらく進行中の炎症とヘプシジンの過剰産生のために、ヘプシジンレベルをさらに増加させた（図１２Ｅおよび１２Ｆ）。ＥＰＯ単独での治療は、ヘプシジンレベルの増加を低減することができず、それでも時間の経過と共に増加し、アイソタイプ対照の２０〜３０％以内にとどまった。ＣＬ−５８８３８単独での治療は、ヘプシジンレベルに顕著な影響を及ぼし、アイソタイプ対照で治療した動物よりも最初は大幅に減少し、次いで、アイソタイプ対照で治療した動物のヘプシジンレベルの約５０％にとどまった。ＣＬ−５８８３８およびＥＰＯ投与による治療は、最初はＣＬ−５８８３８単独と同程度にヘプシジンレベルを低減させたが、次いで、アイソタイプ、ＣＬ−５８８３８またはＥＰＯ治療動物と比較して、ヘプシジンレベルを維持またはさらに低減させた。ＥＰＯおよびＣＬ−５８８３８を一緒に追加すると、利用可能な鉄のレベルが上昇し、ヘプシジン産生のダウンレギュレーションが生じる可能性がある場合に、赤血球生成を効果的に刺激することで、ヘプシジンレベルに相乗効果があるように見える（Ｎａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【０７３２】
実施例１５
カニクイザルへの単回静脈内注射後のＣＬ−５８８３８の用量反応評価
体重２．５〜４．０ｋｇの１５匹の健康なカニクイザルに、ＣＬ−５８８３８ヒトＩｇＧ４（配列番号１１６および配列番号１２５）を１、３および１０ｍｇ／ｋｇで単回静脈内注射した。抗ＢＭＰ６抗体ＡおよびＢも、３ｍｇ／ｋｇの単回静脈内注射として含まれていた。
【０７３３】
投与前−６、−１日および投与直前（０）に動物から採血してベースライン測定を行い、次いで６／２４時間、ならびに３、７、９、１４、２２、２９、３５および４３日目に動物から採血した。血漿ＴＳＡＴおよびヘプシジンレベルをすべての時点で測定して、鉄代謝の調節におけるＣＬ−５８８３８の有効性を評価した。すべての時点およびすべての群でのＴＳＡＴの値を表１８に示す。
【表２３】
2022502040.tif 000029
【０７３４】
図１３は、同じ用量（Ａ）で抗体ＡおよびＢと同等であった３ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８の単回静脈内投与後のＴＳＡＴの増加および効果の持続期間を示す。異なる用量でのＣＬ−５８８３８による治療後、ＴＳＡＴ、ＴＳＡＴピークレベルおよびＴＳＡＴの調節期間に対する全体的な効果が用量依存的に増加した（図１３Ｂ）。ＣＬ−５８８３８ならびに抗体ＡおよびＢはすべて、血漿ヘプシジンレベルの同様の減少および３ｍｇ／ｋｇで同等の効果の持続時間を示した（図１３Ｃ）。ＣＬ−５８８３８による治療後のヘプシジンの減少は３ｍｇ／ｋｇで最大であり、１０ｍｇ／ｋｇでの治療はヘプシジンレベルのさらなる減少を示さなかった（図１３Ｄ）。
【０７３５】
図１４は、この実験におけるＣＬ−５８８３８（図１４Ａ）のＰＫプロファイルを示しており、用量を増やすたびに曝露およびピーク濃度および曝露期間が増加する。ＣＬ−５８８３８の曝露プロファイルを３ｍｇ／ｋｇの抗体ＡまたはＢと比較すると、すべての抗体が同様のプロファイルを示したが、ＣＬ−５８８３８はおそらく曝露期間が長くなる傾向を示した（図１４Ｂ）。
【０７３６】
実施例１６
ＣＬ−５８８３８およびＣＬ−５８８３８様抗体の配列分析
選択された抗体のインビボ分析の結果（実施例１１）に続いて、機能的活性を参照する抗体の配列を再度分析し、ＣＬ−５８８３８のみが鉄レベルおよびＴＳＡＴの長期上昇の非常に強力な活性を示したという事実に照らして比較した。Ｋｙｍｏｕｓｅ（商標）から回収されたすべての抗体の配列が利用可能であったため、配列プールは、同一のＶＤＪ領域（ＩＧＨＶ３−１１＊０１、ＩＧＨＤ６−１９＊０１、ＩＧＨＪ４＊０２／ＩＧＫＶ３−２０＊０１、ＩＧＫＪ１＊０１）および同一のＣＤＲＨ３配列を有する抗体についてマイニングされた。実施例５（表６）で説明されるように、２つの免疫付与レジームにわたるＮＧＳ配列のプールからいくつかの抗体が同定された。最終的に、３つの新しい抗体がインビボ分析のために選択された（表６および表９に太字で示される）。しかしながら、インビボで試験した後（実施例１１、表１４）、この方法によって同定されたＣＬ−５８７２２もＣＬ−５８７５６もＣＬ−５８８３８と同等の活性を示さず、ＣＬ−５８８３５のみが同等であった。この抗体パネルのアミノ酸配列間の相同性が高レベルであることを考えると、これは驚くべきことだった。図１５は、表６およびＣＬ−５８８３８のすべての固有の抗体のＶｈ（ＩＧＨＶ３−１１）およびＶｋ（ＩＧＫＶ３−２０）領域のアラインメントを示す。最初に留意することは、ＣＬ−５８８３８およびＣＬ−５８８３５は、これら２つの抗体に固有の同一の軽鎖を持っているか、ＣＤＲＨ２の１つのアミノ酸だけが異なることである。インビボで試験されたが、インビボでＣＬ−５８８３８またはＣＬ−５８８３５に匹敵する効力を示さなかった抗体は、ＣＬ−５８８３８またはＣＬ−５８８３５で見られるＭ７５およびＤ７６に対する残基７５および７６（Ｋａｂａｔ）での生殖細胞系列Ｖｈ変化を示さない。試験された他のＶｈには、この違いを説明できるこれらの変異または他の重要な違いはなかった。したがって、これらの２つの変異は、これら２つの抗体で観察される並外れた効力を媒介する主要な配列モチーフである可能性がある。Ｖｈ領域と特にＣＤＲＨ３が抗体の特異性および効力に主に寄与することが当分野で知られているが（Ｘｕ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ，２０００）、固有のＶｋ領域もＣＬ−５８８３８およびＣＬ−５８８３５の特性に寄与していることを排除することはできない。
【０７３７】
ＢＭＰ７との交差反応性を考慮した場合、別の観察が行われた。このパネルでＢＭＰ７とある程度の交差反応性を示した抗体は、ＣＬ−５８６８０、ＣＬ−５８６７９およびＣＬ−５８６８０であった。Ｖｈドメインの配列の違いは、他のクローンでも発生するため、この影響に起因するものではない。しかしながら、Ｖｋドメインでは、ＢＭＰ７と交差反応したクローンの生殖細胞系列ＩＧＫＶ３−２０から位置５２および５３（Ｋａｂａｔ）は変更されないが、ＢＭＰ７と交差反応しなかったすべてのクローンではこれらの残基の１つまたは両方が変更されている。
【０７３８】
ストレプトアビジン−クリプテートで検出されたビオチン化ＣＬ−５８８３８が６４７で標識されたＢＭＰ６に結合する均一性時間分解ＦＲＥＴ（ＨＴＲＦ）アッセイでの直接競合実験で試験した場合、これらの抗体のインビトロ効力は同等だった（図１６）。次いで、標識されたＣＬ−５８８３８と標識されたヒトＢＭＰ６とのこの相互作用は、この実験で試験された標識されていない抗体と競合した。ＣＬ−５８８３８は、予想通り、標識されたＣＬ−５８８３８と完全に競合した。ＣＬ−５８７２２およびＣＬ−５８７５６は、標識されたＣＬ−５８８３８と競合する能力がやや低く、おそらくＢＭＰ６への親和性に対する配列変更の影響も反映している。この分析は、驚くべきことに、このシリーズからインビボ分析用に選択された抗体（同一のＶＤＪ使用および同一のＣＤＲＨ３）が、ヒトＢＭＰ６に結合して中和する非常に同等の能力を示し、すべてがＢＭＰ６への結合についてＣＬ−５８８３８と競合するが、それらのインビボ効力において大幅に異なることを示した。
【０７３９】
実施例１７
慢性炎症の貧血のＰＧ−ＰＳラットモデルにおけるＣＬ−５８８３８のＥＳＡ節約能力の評価
実施例１４に詳述されているように、ＰＧ−ＰＳラット疾患モデルは、慢性炎症の貧血を研究するための十分に確立されたモデルである。
この研究の目的は、抗ＢＭＰ−６  ＩｇＧ４抗体ＣＬ−５８８３８（配列番号１１６および配列番号１２５））をダルベポエチンアルファ（ＥＰＯ）と組み合わせて、ＥＰＯ単剤療法と比較されるこのモデルを使用して血液学的パラメータを効果的に復元するのに必要なＥＰＯ用量を減らすことができるかどうかを試験することであった。
【０７４０】
方法
６〜８週齢の雌のＬｅｗｉｓラットに、時点「Ｗ−２」で１５ｍｇ／ｋｇのＰＧ−ＰＳの単回腹腔内（ｉｐ）注射をし、２週間後（すなわち、時点「Ｗ０」）、動物を尾静脈から採血し、全血球計算分析を実行した。ラットの顆粒球数がＷ０の時点で増加した場合にのみ、ラットをこの実験に含めた（図１７Ａを参照）。未治療のナイーブ型群は、ベースライン測定値の研究に含まれた（群Ｉ、表１９を参照）。加えて、含まれるラットのヘモグロビン（Ｈｇｂ）値を調査した。Ｈｇｂ値が＜１３．５ｇ／ｄＬの場合、ラットを特定の治療群に割り振った（ＩＩ〜ＩＶ、表１９を参照）。Ｈｇｂ値が＞１３．５ｇ／ｄＬの場合、ラットを特定の治療群に割り振らず、翌週に再分析した（図１７Ｂを参照）。すべての時点で、さらなる分析のために血漿を収集した。動物をそれぞれの治療群に割り振った後、群ＩＩのラットをＩｇＧ４対照抗体の単回皮下注射で治療し、群ＩＩＩのラットをダルベポエチンアルファ１０μｇ／ｋｇで治療し、群ＩＶのラットにＣＬ−５８８３８  ３ｍｇ／ｋｇおよびダルベポエチンアルファ１０μｇ／ｋｇの組み合わせを投与した（表１９を参照）。
【表２４】
2022502040.tif 000030
【０７４１】
最初の治療後、ＣＬ−５８８３８（群ＩＶ）またはＩｇＧ４対照（群ＩＩ）の投与を３週間毎に繰り返した。対照的に、それ以上のＥＰＯ投与は、研究全体を通して毎週個々のラットで評価されたＨｇｂ値に依存した。図１７Ｂに示すように、ＥＰＯは、治療群ＩＩＩおよびＩＶのＨｇｂ値がナイーブ型対照ラット（群Ｉ）の平均Ｈｇｂ値を下回った場合にのみ投与された。ＣＫＤ患者は、ある特定の事前定義されたＨｇｂレベルに依存するＥＰＯのみを受けるため、この実験設定を選択して、ヒトの実際の臨床設定を模倣する。
【０７４２】
尾静脈から、毎週（すなわち、時点「Ｗ０〜Ｗ６」）および選別した「Ｗ７」に採血し、鉄の状態および貧血のさらなる分析を可能にした。
【０７４３】
「Ｗ０」以降、ラットを上記の基準に従って治療群の１つに割り振った。３週後、すべてのラットを治療群の１つに割り振って、治療を開始することができた。重要なことに、Ｈｇｂ値が均一に１回目の治療の日に群間に分布した（図１７Ｃ）。ラットの数および治療開始の時点の詳細を表２０に示す。
【表２５】
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【０７４４】
結果
上記で概説されるように、ラットのＨｇｂ値が＜１３．５ｇ／ｄＬの場合、ラットを治療群に割り振った。アイソタイプ対照抗体で治療されたＡＣＤラットは、実験の間ずっと貧血のままであった。ＥＰＯ単独での治療により、Ｈｇｂレベルがほぼ正常値に戻る可能性がある。しかしながら、ＣＬ−５８８３８およびＥＰＯの組み合わせは、Ｈｇｂ値に対して相乗効果を示した。治療開始からすでに１週間後、Ｈｇｂ値は正常化され、時間の経過と共にさらに増加した（図１７Ｃ）。加えて、鉄の利用可能性の感度の高いマーカーとしての平均赤血球容積（ＭＣＶ）および平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）は、ＣＬ−５８８３８およびＥＰＯの組み合わせで治療されたＡＣＤラットで正常化されたが、ＡＣＤ対照ラットおよびＥＰＯ単独で治療されたラットは、実験期間全体を通して小球性および淡色性のままであった（図１７ＤおよびＥ）。
【０７４５】
加えて、併用療法がＥＰＯ節約効果を有するかどうかを評価するために、治療群ＩＩＩおよびＩＶのラットに投与されたＥＰＯの量を監視した。以下の計算は、このように１回目の治療のために投与されたＥＰＯの用量を除く追加のＥＰＯ用量に基づく。
すべてのラットがナイーブ型対照ラットの平均Ｈｇｂ値の定義された閾値を下回った４週間の治療後、合計で、最大４０（ＡＣＤ／ダルベポエチンアルファ）および４４（ＡＣＤ／ダルベポエチンアルファ＋ＣＬ−５８８３８）のＥＰＯ投与が理論的に可能であった。上で説明し、図１７Ｂに概説される基準を守って、４０の可能用量のうち２１を群ＩＩＩのラットに投与しなければならなかった。対照的に、４４の可能なＥＰＯ投与のうち、群ＩＶのラットに適用する必要があったのは８の追加ＥＰＯ用量のみであった。言い換えれば、ＥＰＯ治療ラットはすべての可能なＥＰＯ用量の５３％を「消費」したが、組み合わせ群はカットオフを超えるＨｂ値を維持するために１８％しか必要としなかった（図１７Ｆ）。これは、併用療法がＥＰＯ単独療法よりもはるかに効率的にＨｇｂ値を修正できることを明確に示す。したがって、ＣＬ−５８８３８を追加すると、ＥＰＯ節約効果をもたらすことが可能である。
【０７４６】
実施例１８
慢性腎臓病のマウスモデルにおけるＣＬ−５８８３８の評価
実施例１４および１７に記載されるラットモデルを超えて、ヒトＩｇＧ４抗ＢＭＰ−６抗体ＣＬ−５８８３８（配列番号１１６および配列番号１２５）もまた、マウス慢性腎臓病モデル（ＣＫＤ）で試験された。腎臓の損傷は、０．２％のアデニンを含有する特別食によって誘導された（Ａｋｃｈｕｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１６）。この研究の目的は、この疾患モデルにおいて単剤療法として、またはダルベポエチンアルファ（ＥＰＯ）と組み合わせたＣＬ−５８８３８の効果を試験することであった。
【０７４７】
方法
３週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６Ｎマウスに、０．２％のアデニン、０，９％リン酸塩および３０ｍｇの鉄を含有する特別食（アデニン食と呼ばれる）を給餌した。未治療対照マウス（ｎ＝７）には、アデニンを含有しない３０ｍｇのＦｅを含む食餌を給餌した。
【０７４８】
「０週目」の時点で、ＣＫＤ動物は異なる治療群にランダム化された（詳細は表２１を参照）。したがって、群ＩＩをＩｇＧ４対照［３ｍｇ／ｋｇ］（ｎ＝５）の単回皮下注射で治療し、群ＩＩＩにＣＬ−５８８３８［３ｍｇ／ｋｇ］（ｎ＝６）を投与し、群ＩＶをダルベポエチンアルファ［１０μｇ／ｋｇ］（ｎ＝６）で治療し、群ＶにＣＬ−５８８３８［３ｍｇ／ｋｇ］とダルベポエチンアルファ［１０μｇ／ｋｇ］（ｎ＝６）の両方の組み合わせを投与した。未治療のナイーブ型群は、ベースライン測定値の研究に含まれた（ｎ＝７）。ＥＰＯ治療は毎週繰り返され、すなわちマウスをＥＰＯで４回治療した。ＣＬ−５８８３８投与は、隔週で行われ、すなわちマウスに２回の薬剤注射を行った。実験は４週間の治療後に終了した。
【０７４９】
実験構成を図１８Ａに示す。
【表２６】
2022502040.tif 000032
【０７５０】
結果
１回目の治療の４週間後、マウスを分析した。ＣＬ−５８８３８またはＥＰＯのいずれかによる単剤療法は、Ｈｇｂ値をわずかに改善する可能性があるが、併用療法はＨｇｂ値をベースライン値に正規化した（図１８Ｂ）。さらに、ＣＬ−５８８３８で治療した動物は、未治療またはＥＰＯ単独で治療したマウスよりも、平均赤血球容積（ＭＣＶ）および平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）の値が有意に高かった。重要なことに、ＭＣＶとＭＣＨは二重治療動物で完全に正常化されており、これらの治療動物の赤血球前駆細胞への鉄の供給が改善されていることを示唆してる（図１８Ｃおよび１８Ｄ）。ＣＬ−５８８３８はＢＭＰ６を標的とすることでヘプシジン発現を調節するため、これらの動物の鉄代謝に関連する遺伝子、タンパク質、パラメータを詳細に調べた。図１８Ｅに示すように、肝ハンプ発現レベルは、ＣＬ−５８８３８単剤療法またはダルベポエチンアルファとの併用療法を受けた動物で有意に低減した。血漿鉄レベルおよびその結果としてのトランスフェリン飽和度（ＴＳＡＴ）値は、ＣＫＤ対照動物で減少した。ＥＰＯおよびＣＬ−５８８３８単剤療法は、鉄レベルおよびＴＳＡＴのわずかな増加をもたらした。繰り返しだが、併用療法は血漿鉄レベルの最も強い増加を引き起こした（図１８Ｆ）。それに従って、ＴＳＡＴ値もＥＰＯ単独で治療された動物と比較して二重治療を受けた動物で有意に増加した（図１８Ｇ）。結論として、これらのデータは、鉄が効率的に動員され、Ｔｆに結合し、骨髄の赤血球のヘモグロビンに組み込まれていることを明確に示す。
【０７５１】
実施例１９
慢性腎臓病のマウスモデルにおけるＣＬ−５８８３８のＥＳＡ節約能力の評価
実施例１８に詳述されているように、ＣＫＤはアデニンを含有する食餌を介して雄のマウスに誘導され、腎臓の損傷を引き起こし、８週間後に貧血を引き起こした。この研究の目的は、以下を試験することであった。
１）ＣＬ−５８８３８およびＥＰＯ（ダルベポエチンアルファ）の併用療法が、より良い全体的な反応およびＥＰＯの用量の潜在的な減少をもたらす可能性があること。
【０７５２】
２）ＣＬ−５８８３８と組み合わせると、それ自体ではＨｇｂの結果の改善に影響を及ぼさなかったＥＰＯ用量を有効にする可能性があること。
【０７５３】
方法
３週齢の雄のＣ５７ＢＬ／６Ｎマウスに、０．２％のアデニン、０，９％リン酸塩および３０ｍｇの鉄を含有する特別食（アデニン食と呼ばれる）を給餌した。「０週目」で、ＣＫＤ動物は異なる治療群にランダム化され（詳細は表２２および図１８Ａを参照）、治療を開始した。１回目の治療の４週間後、マウスを分析した。
【表２７】
2022502040.tif 000033
【０７５４】
結果
この研究における最大ＥＰＯ用量（１μｇ／ｋｇ）でのＣＫＤに罹患しているマウスの治療は、貧血を改善することがでなかった。しかしながら、１μｇ／ｋｇのＥＰＯをＣＬ−５８８３８と組み合わせると、ＣＬ−５８８３８の用量［０．１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ］に関係なく、貧血を大幅に改善することができた（図１９Ａ）。効果は、ＣＬ−５８８３８の２つの高用量でより顕著だった。これらの結果は、ＣＬ−５８８３８と組み合わせた場合、それ自体ではＨｇｂレベルに影響を与えないＥＰＯ用量を効果的にすることができることを明確に示す。
【０７５５】
逆に、実験構成では、併用療法が併用治療（すなわちＥＳＡ節約）でより低用量のＥＰＯを使用してもたらすことができるどうかを評価することができた。この点で、１０ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８の用量は、０．１μｇ／ｋｇのＥＰＯと組み合わせると、Ｈｂレベルを大幅に増加させることができ、単独で使用したＥＰＯ用量の１０分の１であり、さらには実施例１８で使用された用量１００分の１である（図１９Ｂ）。 
【０７５６】
さらに、赤血球の鉄の利用可能性の代用である平均赤血球容積（ＭＣＶ）は、用量依存的に増加した（図１９Ｃ）。言い換えれば、投与されたＣＬ−５８８３８の用量が多いほど、赤血球への鉄の供給が良くなり、より高いＭＣＶ値として反映される。飽和トランスフェリン（ＴＳＡＴ）の形態の鉄が赤血球を発達させるための主要な鉄送達経路を表すことは十分に確立されているので、このパラメータも評価した。図１９Ｄに示すように、ＴＳＡＴは、ＥＰＯ単独を投与されたマウスと比較して、１ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８と組み合わせて１μｇ／ｋｇのＥＰＯを投与されたマウスで有意に増加した。
【０７５７】
加えて、１ｍｇ／ｋｇのＣＬ−５８８３８と組み合わせた最低ＥＰＯ用量（０．０１μｇ／ｋｇ）でさえ、Ｈｂの有意な増加をもたらさなかった（図示せず）が、より高いＭＣＶ値をもたらし、より良い赤血球品質を示した（図１９Ｅ）。
【０７５８】
ＣＬ−５８８３８治療を介した抗ＢＭＰ６は、ヘプシジンレベルを低下させることを目標としている。したがって、ヘプシジンレベル（血漿ヘプシジンレベルとよく相関することが知られている肝臓におけるハンプｍＲＮＡ発現レベルを測定することによって）を分析した。一般に、ここで試験された最低のＣＬ−５８８３８用量［０．１ｍｇ／ｋｇ］を投与された群ＩＩＩのマウスを除いて、すべての二重治療動物でハンプ発現レベルが低下するという明らかな傾向があった（図１９Ｆ）。興味深いことに、ＣＬ−５８８３８の投与量は同じであるが、ＥＰＯの投与量が異なる動物（すなわち、治療群ＩＶ〜ＶＩおよびＶＩＩ〜ＩＸ）は、ＥＰＯの投与量が多いほどハンプ発現レベルが高くなる傾向を示した。Ｈｂレベルも用量依存的に増加するため、鉄の恒常性と赤血球生成との間のクロストークを考慮して、より高いハンプ発現レベルを解釈する必要がある。例えば、十分なＨｂレベルの場合、ハンプ発現は、Ｅｒｆｅなどの赤血球の発達によって生成されるシグナルによってそれほど強く抑制されなくなる（Ｋａｕｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
参考文献
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・Ｋａｕｔｚ，Ｌ．，Ｊｕｎｇ，Ｇ．，Ｎｅｍｅｔｈ，Ｅ．，Ｇａｎｚ，Ｔ．，２０１４．Ｅｒｙｔｈｒｏｆｅｒｒｏｎｅ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｆｒｏｍ  ａｎｅｍｉａ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｂｌｏｏｄ  １２４，２５６９−７４。
・Ｍａｙｅｕｒ，Ｃ．，Ｌｏｈｍｅｙｅｒ，Ｌ．Ｋ．，Ｌｅｙｔｏｎ，Ｐ．，Ｋａｏ，Ｓ．Ｍ．，Ｐａｐｐａｓ，Ａ．Ｅ．，Ｋｏｌｏｄｚｉｅｊ，Ｓ．Ａ．，Ｓｐａｇｎｏｌｌｉ，Ｅ．，Ｙｕ，Ｂ．，Ｇａｌｄｏｓ，Ｒ．Ｌ．，Ｙｕ，Ｐ．Ｂ．，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｒ．Ｔ．，Ｂｌｏｃｈ，Ｄ．Ｂ．，Ｂｌｏｃｈ，Ｋ．Ｄ．，Ｓｔｅｉｎｂｉｃｋｅｒ，Ａ．Ｕ．，２０１４Ｔｈｅ  ｔｙｐｅ  Ｉ  ＢＭＰ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｌｋ３  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６．Ｂｌｏｏｄ  １２３，２２６１−２２６８。
・Ｎａｉ，Ａ．，Ｌｉｄｏｎｎｉｃｉ，Ｍ．Ｒ．，Ｒａｕｓａ，Ｍ．，Ｍａｎｄｅｌｌｉ，Ｇ．，Ｐａｇａｎｉ，Ａ．，Ｓｉｌｖｅｓｔｒｉ，Ｌ．，Ｆｅｒｒａｒｉ，Ｇ．，Ｃａｍａｓｃｈｅｌｌａ，Ｃ．，２０１５．Ｔｈｅ  ｓｅｃｏｎｄ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｂｌｏｏｄ  １２５，１１７０−１１７９。
・Ｔｈｅｕｒｌ，Ｉ．，Ｓｃｈｒｏｌｌ，Ａ．，Ｓｏｎｎｗｅｂｅｒ，Ｔ．，Ｎａｉｒｚ，Ｍ．，Ｔｈｅｕｒｌ，Ｍ．，Ｗｉｌｌｅｎｂａｃｈｅｒ，Ｗ．，Ｅｌｌｅｒ，Ｋ．，Ｗｏｌｆ，Ｄ．，Ｓｅｉｆｅｒｔ，Ｍ．，Ｓｕｎ，Ｃ．Ｃ．，Ｂａｂｉｔｔ，Ｊ．Ｌ．，Ｈｏｎｇ，Ｃ．Ｃ．，Ｍｅｎｈａｌｌ，Ｔ．，Ｇｅａｒｉｎｇ，Ｐ．，Ｌｉｎ，Ｈ．Ｙ．，Ｗｅｉｓｓ，Ｇ．，２０１１．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｒｅｖｅｒｓｅｓ  ａｎｅｍｉａ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｂｌｏｏｄ  １１８，４９７７−４９８４。
・Ｘｉａ，Ｙ．，Ｂａｂｉｔｔ，Ｊ．Ｌ．，Ｓｉｄｉｓ，Ｙ．，Ｃｈｕｎｇ，Ｒ．Ｔ．，Ｌｉｎ，Ｈ．Ｙ．，２００８．Ｈｅｍｏｊｕｖｅｌｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｈｅｐｃｉｄｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｉａ  ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｕｂｓｅｔ  ｏｆ  ＢＭＰ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｏｆ  ｎｅｏｇｅｎｉｎ．Ｂｌｏｏｄ  １１１，５１９５−５２０４。
・Ｘｕ，Ｊ．Ｌ．，Ｄａｖｉｓ，Ｍ．Ｍ．，２０００．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＣＤＲ３  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  Ｖ（Ｈ）  ｉｓ  ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｆｏｒ  ｍｏｓｔ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３，３７−４５。
・Ｙｕｓａ，Ｋ．，Ｚｈｏｕ，Ｌ．，Ｌｉ，Ｍ．Ａ．，Ｂｒａｄｌｅｙ，Ａ．，Ｃｒａｉｇ，Ｎ．Ｌ．，２０１１．Ａ  ｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｅ  ｐｉｇｇｙＢａｃ  ｔｒａｎｓｐｏｓａｓｅ  ｆｏｒ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０８，１５３１−６。
【表２８−１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７−１】
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【図８−１】
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【図８−４】
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【図８−５】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１２−３】
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【図１２−４】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１７−３】
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【図１７−４】
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【図１８−１】
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【図１８−３】
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【図１８−４】
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【図１９−１】
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【図１９−２】
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【図１９−３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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