【手続補正書】
【提出日】平成22年5月12日(2010.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）正常酸素圧条件下で不安定であり、低酸素条件下で安定であり、特定のＤＮＡ配列を結合する遺伝子産物のための第１のオープンリーディングフレームに操作可能に連結された、臓器特異的、組織特異的、または細胞特異的な、あるいはエネルギー調節された、転写調節エレメントを含む、転写調節領域を備える第１のベクターと、
ｂ）治療用遺伝子産物、心臓保護遺伝子産物、またはバイオマーカーのための第２のオープンリーディングフレームに操作可能に連結された、該特定のＤＮＡ配列を含む、転写調節領域を備える第２のベクターと、
を含む、ベクター系。
【請求項２】
前記第１のベクターにおける前記転写調節領域は、心臓特異的転写調節エレメントを含む、請求項１に記載のベクター系。
【請求項３】
前記第１のオープンリーディングフレームは、低酸素誘導性遺伝子産物をコードする、請求項１および２のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
【請求項４】
前記第２のオープンリーディングフレームは、受容体、内皮一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）、ヘムオキシゲナーゼ（ＨＯ）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）、アンカータンパク質、サイトカイン、Ａｋｔ、増殖因子または分泌タンパク質をコードする、請求項１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
【請求項５】
前記分泌タンパク質が分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）であるか、前記受容体がアセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）であるか、前記増殖因子が血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）であるか、または前記アンカータンパク質がヨウ化ナトリウム共輸送体（ＮＩＳ）である、請求項４に記載のベクター系。
【請求項６】
前記第２のオープンリーディングフレームは、非脊椎動物細胞関連バイオマーカーをコードする、請求項１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
【請求項７】
請求項１から６のうちのいずれか１項に記載のベクター系を有する哺乳動物細胞。
【請求項８】
少なくとも２つのベクターを含む組成物であって、第１のベクターは、正常酸素圧条件下で不安定であり、低酸素条件下で安定であり、特定のＤＮＡ配列を結合する、遺伝子産物のための第１のオープンリーディングフレームに操作可能に連結された、臓器、組織、または細胞特異的な、あるいはエネルギー調節された、転写調節エレメントを含む、転写調節領域を備え、第２のベクターは、治療用遺伝子産物または心臓保護遺伝子産物のための第２のオープンリーディングフレームに連結された、該特定のＤＮＡ配列を含む、転写調節領域を備える、組成物と、
該治療用または心臓保護遺伝子産物の効能を強化する、電気、生物学、または薬物療法のうち１つ以上を送達するように適合された埋込型デバイスと、
を備える、システム。
【請求項９】
前記組織特異的転写調節エレメントは、心臓特異的である、請求項８に記載のシステム。
【請求項１０】
前記第１のオープンリーディングフレームは、低酸素誘導因子またはｃＡＭＰ調節エレメント結合タンパク質をコードする、請求項８または９のうちのいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１１】
前記埋込型デバイスは、虚血事象を検出する虚血検出器を備える、請求項８から１０のうちのいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１２】
前記埋込型デバイスは、分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レベルを感知するセンサーを備え、前記虚血検出器は、該ＳＥＡＰレベルを使用して前記虚血事象を検出するように適合されている、請求項１１に記載のシステム。
【請求項１３】
前記埋込型デバイスは、神経刺激器、心臓ペースメーカ、遺伝子調節シグナル送達デバイスまたは薬物送達デバイスを備える、請求項８から１２のうちのいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１４】
前記第１および第２のベクターは、ドナー哺乳動物細胞の中にある、請求項８から１３のうちのいずれか１項に記載のシステム。
【請求項１５】
前記第１および第２のベクターは、哺乳動物の心臓細胞または哺乳動物の幹細胞の中にある、請求項１４に記載のシステム。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
一実施形態において、ベクターは、虚血の危険性がある哺乳動物に導入（投与）される。他の実施形態において、ベクターは、心不全を有すか、または危険性がある哺乳動物に導入される。他の実施形態において、ベクターは、冠動脈疾患、不安定プラーク、または発作を有するか、または危険性がある哺乳動物に導入される。一実施形態において、哺乳動物に導入されるベクターは、同じ分子、例えば、プラスミド等のＤＮＡ分子上にある。一実施形態において、ベクターは、哺乳動物への導入の前に、外因性ドナー細胞、例えば、自己ドナー幹細胞に導入される。一実施形態において、ベクターは、心内または静脈内投与を介して哺乳動物に導入される。一実施形態において、ベクターは、組織または臓器、例えば、心臓に導入される。例えば、ベクターは、組織または臓器に注入されてもよい。他の実施形態において、ベクターを有する哺乳動物は、電気刺激、例えば、神経刺激またはペーシングパルスを受けるか、薬剤を投与されるか、またはその組み合わせも受けてよい。一実施形態において、埋込型デバイスは、ベクターを有する哺乳動物に電気刺激または１つ以上の薬剤、またはその組み合わせを送達する。
本発明の好ましい実施形態によれば、例えば以下のベクター系などが提供される：
（項目１）
ａ）正常酸素圧条件下で不安定であり、低酸素条件下で安定であり、特定のＤＮＡ配列を結合する、遺伝子産物のための第１のオープンリーディングフレームに操作可能に連結された、臓器特異的、組織特異的、または細胞特異的な、あるいはエネルギー調節された、転写調節エレメントを含む、転写調節領域を備える第１のベクターと、
ｂ）治療用遺伝子産物、心臓保護遺伝子産物、またはバイオマーカーのための第２のオープンリーディングフレームに操作可能に連結された、該特定のＤＮＡ配列を含む、転写調節領域を備える第２のベクターと、
を含む、ベクター系。
（項目２）
前記第１のベクターにおける前記転写調節領域は、心臓特異的転写調節エレメントを含む、項目１に記載のベクター系。
（項目３）
前記第１のオープンリーディングフレームは、低酸素誘導性遺伝子産物をコードする、項目１および２のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目４）
前記第２のオープンリーディングフレームは、受容体をコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目５）
前記第２のオープンリーディングフレームは、アセチルコリン受容体（ＡＣｈＲ）をコードする、項目４に記載のベクター系。
（項目６）
前記第２のオープンリーディングフレームは、内皮一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）をコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目７）
前記第２のオープンリーディングフレームは、ヘムオキシゲナーゼ（ＨＯ）をコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目８）
前記第２のオープンリーディングフレームは、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）をコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目９）
前記第２のオープンリーディングフレームは、Ａｋｔをコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目１０）
前記第２のオープンリーディングフレームは、分泌タンパク質をコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目１１）
前記第２のオープンリーディングフレームは、分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）をコードする、項目１０に記載のベクター系。
（項目１２）
前記第２のオープンリーディングフレームは、非脊椎動物細胞関連バイオマーカーをコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目１３）
前記第２のオープンリーディングフレームは、増殖因子をコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目１４）
前記第２のオープンリーディングフレームは、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）をコードする、項目１３に記載のベクター系。
（項目１５）
前記第２のオープンリーディングフレームは、サイトカインをコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目１６）
前記第２のオープンリーディングフレームは、アンカータンパク質をコードする、項目１から３のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目１７）
前記第２のオープンリーディングフレームは、ヨウ化ナトリウム共輸送体（ＮＩＳ）をコードする、項目１６に記載のベクター系。
（項目１８）
哺乳動物の細胞における有効量での前記第２のオープンリーディングフレームの発現は、該哺乳動物における心虚血を予防、抑制、または治療する、項目１から１７のうちのいずれか１項に記載のベクター系。
（項目１９）
項目１から１８のうちのいずれか１項に記載のベクター系を有する哺乳動物細胞。
（項目２０）
幹細胞である、項目１９に記載の哺乳動物細胞。
（項目２１）
少なくとも２つのベクターを含む組成物であって、第１のベクターは、正常酸素圧条件下で不安定であり、低酸素条件下で安定であり、特定のＤＮＡ配列を結合する、遺伝子産物のための第１のオープンリーディングフレームに操作可能に連結された、臓器、組織、または細胞特異的な、あるいはエネルギー調節された、転写調節エレメントを含む、転写調節領域を備え、第２のベクターは、治療用遺伝子産物または心臓保護遺伝子産物のための第２のオープンリーディングフレームに連結された、該特定のＤＮＡ配列を含む、転写調節領域を備える、組成物と、
該治療用または心臓保護遺伝子産物の効能を強化する、電気、生物学、または薬物療法のうち１つ以上を送達するように適合された埋込型デバイスと、
を備える、システム。
（項目２２）
前記組織特異的転写調節エレメントは、心臓特異的である、項目２１に記載のシステム。
（項目２３）
前記第１のオープンリーディングフレームは、低酸素誘導因子をコードする、項目２１および２２のうちのいずれか１項に記載のシステム。
（項目２４）
前記第１のオープンリーディングフレームは、ｃＡＭＰ調節エレメント結合タンパク質をコードする、項目２１および２２のうちのいずれか１項に記載のシステム。
（項目２５）
前記埋込型デバイスは、虚血事象を検出する虚血検出器を備える、項目２１から２４のうちのいずれか１項に記載のシステム。
（項目２６）
前記埋込型デバイスは、分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レベルを感知するセンサーを備え、前記虚血検出器は、該ＳＥＡＰレベルを使用して前記虚血事象を検出するように適合されている、項目２５に記載のシステム。
（項目２７）
前記埋込型デバイスは、神経刺激器を備える、項目２１から２６のうちのいずれか１項に記載のシステム。
（項目２８）
前記埋込型デバイスは、心臓ペースメーカを備える、項目２１から２７のうちのいずれか１項に記載のシステム。
（項目２９）
前記埋込型デバイスは、遺伝子調節シグナル送達デバイスを備える、項目２１から２８のうちのいずれか１項に記載のシステム。
（項目３０）
前記埋込型デバイスは、薬物送達デバイスを備える、項目２１から２９のうちのいずれか１項に記載のシステム。
（項目３１）
前記第１および第２のベクターは、ドナー哺乳動物細胞の中にある、項目２１から３０のうちのいずれか１項に記載のシステム。
（項目３２）
前記第１および第２のベクターは、哺乳動物の心臓細胞の中にある、項目３１に記載のシステム。
（項目３３）
前記第１および第２のベクターは、哺乳動物の幹細胞の中にある、項目３１に記載のシステム。
（項目３４）
虚血を検出する方法であって、該方法は：
ａ）項目１から３、１０から１１、または１３から１７のいずれかに記載のベクター系を備える細胞を有する哺乳動物を提供するステップであって、第２のオープンリーディングフレームは、ナトリウム、リン、ヨウ素、炭素、またはガドリニウム、あるいはそれらの類似体を結合する、分泌型バイオマーカーまたは遺伝子産物をコードする、ステップと、
ｂ）該哺乳動物において、ナトリウム、リン、ヨウ素、炭素、またはガドリニウム、あるいはそれらの類似体を結合する、該分泌型バイオマーカーまたはタンパク質を検出するステップと、
を含む、方法。
（項目３５）
前記分泌型バイオマーカーの検出に応じて電気療法を前記哺乳動物に送達するステップをさらに含む、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記分泌型バイオマーカーは、ＳＥＡＰを含む、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
埋込型デバイスは、前記分泌型バイオマーカーを検出する、項目３４から３６のうちのいずれか１項に記載の方法。
（項目３８）
ナトリウム、リン、ヨウ素、炭素もしくはガドリニウムまたはそれらの類似体を結合する前記タンパク質の位置または存在は、放射性ナトリウム、リン、ヨウ素、炭素もしくはガドリニウムまたはそれらの類似体、あるいは放射性ナトリウム、リン、ヨウ素、炭素、またはガドリニウム、あるいはそれらの類似体を含有する分子、あるいはガドリニウムを投与することによって検出される、項目３４に記載の方法。
（項目３９）
項目１から１０、１３から１５または１８のうちのいずれか１項に記載のベクター系を哺乳動物に導入するステップを含み、第２のオープンリーディングフレームは、治療用または心臓保護遺伝子産物をコードする、虚血を治療するための方法。