【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年11月16日(2009.11.16)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬的に許容し得る担体および有効量のプラミペキソールを含む、ＡＬＳの処置が必要な患者におけるＡＬＳ処置用医薬組成物であって、該プラミペキソールの９０％以上が、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールである組成物。
【請求項２】
該プラミペキソールの９５％以上が、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールである、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
該プラミペキソールの９９％以上が、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールである、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
神経保護剤として有効量のプラミペキソールを投与するための請求項１記載の組成物。
【請求項５】
１日投与量として３mgから５００mgのプラミペキソールが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
該プラミペキソールが、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールである、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
１日投与量として３mgから６mgのプラミペキソールが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
１日投与量として３０mg/kgから１００mg/kgのプラミペキソールが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
経皮、局所、経口、静脈内、筋内、動脈内、髄内、くも膜下腔内、心室内、皮下、腹膜内、鼻腔内、腸、舌下および直腸を含む群から選択される経路による投与のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
プラミペキソールの用量漸増レジメのための、請求項１に記載の組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
図面の簡単な説明
図１Ａは、ＭＰＰ＋で誘導されるシトクロームＣの放出のタイムコースを示し、図１Ｂは、ＭＰＰ＋で誘導されるカスパーゼ３の活性化のタイムコースを示す。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、時間を変えて５ｍＭ ＭＰＰ＋と共にインキュベートし、回収した。図１Ａにおいて、細胞を等張スクロース中で均質化し、遠心分離にかけ、上清タンパク質（１００μｇ）を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを用いる電気泳動に供し、ナイロン膜に移し、強い化学発光検出によりシトクロームＣについて免疫染色をした。一番左側のバンド(ｘ軸上の「０時間」を明示する)が、「０」時点のミトコンドリアのシトクロームＣに対応し、その他のバンドは、シトクロームＣについて免疫染色された電気泳動細胞質タンパク質を示す。ＭＷマーカーの位置をｙ軸上に示す。他の細胞バッチを、製造業者の指示書に従って(Biomol)、市販システムを用いるカスパーゼ３についてアッセイした。図１Ｂに示されるカスパーゼアッセイは、３−４の独立した実験の結果である。
*ｐ＜０.０５、０.２５時間での活性との比較。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
図３は、ＰＰＸ、ボンクレキン酸およびアリストロキア酸による、ＭＰＰ＋で誘導されるカスパーゼ９活性化の阻害を示すデータを表す。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞を、５ｍＭ ＭＰＰ＋で４時間または８時間、１ｍＭ Ｓ(−)ＰＰＸ、１ｍＭ Ｒ(＋)ＰＰＸ、２５０μＭ ボンクレキン酸(ＢＫＡ)または２５μＭ アリストロキア酸(ＡＲＡ)の存在下もしくは非存在下でインキュベートした。次いで、細胞をカスパーゼ９活性についてアッセイした。図３に示したものは、３−４の独立した実験に対する平均＋／−ＳＥＭである。レーンＡ−Ｉは、下記化合物とインキュベートした細胞によるカスパーゼ９の活性化を示す：Ａ、対照(化合物を添加しない)；Ｂ、１５分間、ＭＰＰ+；Ｃ、４時間、ＭＰＰ＋；Ｄ、４時間、ＭＰＰ+/ＰＰＸ；Ｅ、８時間、ＭＰＰ＋；Ｆ、８時間、ＭＰＰ＋／ＢＫＡ；Ｇ、８時間、ＭＰＰ＋／Ｓ(−)ＰＰＸ；Ｈ、８時間、ＭＰＰ＋／Ｒ(＋)ＰＰＸ；Ｉ、８時間、ＭＰＰ＋／ＡＲＡ。レーンＣおよびＥについて、ｐ＜０.０１、対照との比較；および／またはレーンＦ、Ｇ、ＨおよびＩについて、ｐ＜０.０５、対照との比較。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２０】
図６は、血清２,３-ＤＨＢＡ濃度に対するプラミペキソールの効果の図である。
図６Ａは、プラミペキソール処置前および後の両方において、個々の患者におけるＤＨＢＡ濃度を示す。患者２、３、７および１２は歩行できなかった。患者３および７は、人工呼吸器に依存性であった。図６Ｂは、プラミペキソール処置前および後の２,３-ＤＨＢＡの平均＋／−ＳＥＭ血清レベルを示す。図６Ｃは、プラミペキソール処置前および後の平均＋／−ＳＥＭ血清レベルの２,３-ＤＨＢＡ濃度/サリチレートを示す。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
本明細書で使用される用語「ハロゲン」は、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＩを意味する。特に、Ｃｌ、ＢｒおよびＦを包含するハロゲンが好まれる。本明細書で使用される用語「ハロアルキル」は、少なくとも１つのハロゲン置換基を持つＣ１−Ｃ４アルキル基、例えば、クロロメチル、フルオロエチルまたはトリフルオロメチルなどを指す。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２８】
本明細書で使用される用語「Ｃ２-Ｃｎアルケニル」（ここでｎは整数である）は、２個〜特定された炭素原子数および少なくとも１つの二重結合を有する、オレフィン不飽和の分枝または直鎖基を示す。かかる基の例には、１-プロペニル、２-プロペニル、１，３-ブタジエニル、１-ブテニル、ヘキセニル、ペンテニルおよび類似物が含まれるが、これに限定するものではない。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
本明細書で使用される用語「ヘテロアリール」は、１〜３個のヘテロ原子を含有する１または２個の芳香環を持つ、単環または二環式炭素環式環系を指し、これに限定するものではないが、フリル、チエニル、ピリジルおよび類似物を包含する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
用語「二環式」は、不飽和または飽和のいずれかの安定な７員〜１２員架橋または縮合二環式炭素環を指す。該二環式環は、安定な構造を与える全ての炭素原子で結合し得る。該用語には、ナフチル、ジシクロヘキシル、ジシクロヘキセニルおよび類似物を含むが、これに限定するものではない。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
ある実施態様において、組成物を提供するが、該組成物は、本質的に、Ｒ(＋)-２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールジヒドロクロリドまたは薬理学的に許容し得るそれらの塩、および医薬的に許容し得る担体からなる活性な薬剤を含む。この組成物は、ＮＤＤにおける神経細胞損失を防止する(より具体的には、ＡＬＳ患者の酸化ストレスを低下させる)ために長期的に経口投与し得るか、急性脳損傷における神経細胞損失の防止のために処方され、静脈投与され得る。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
ある実施態様に従って、ＡＬＳ患者における酸化ストレスを低下させる方法を提供する。本発明の目的のための酸化ストレスにおいての低下は、患者に存在する活性酸素種のレベルのいかなる低下も包含し、例えば、サリチレートの２,３ＤＨＢＡへの変換によって検出される血清ＲＯＳレベルの低下も包含することを意図するものである。該方法は、一般式:
【化４】
2005516911.tif 000001
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４はＨであり、Ｒ３はＣｌ−Ｃ３アルキルである）を持つ、テトラヒドロベンゾチアゾールの有効量を投与することを含む。ある実施態様において、テトラヒドロベンゾチアゾールは、Ｒ(＋)-２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールまたはＳ(−)-２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールまたはＲ(＋)およびＳ(−)ステレオアイソマーのラセミ混合物である。ＡＬＳ処置のために投与されるテトラヒドロベンゾチアゾールの量は、投与経路、さらに、年齢、体重、健康に関する一般状態、重症度、処置頻度、そして追加の医薬をその処置に加えるかどうかを含む、追加的ファクターに基づいて変化するものである。投与されるべき活性な化合物の用量は、当業者には既知の定法で容易に決定される。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
一方、本発明は、ミトコンドリアのエネルギー産生が損なわれている細胞のミトコンドリア膜内外の生体電位差(ΔΨ)を増強するための方法を提供する。該方法は、ミトコンドリアのエネルギー産生が損なわれている細胞を、プラミペキソール活性薬物および薬学的に許容し得る担体を含む組成物と接触させる過程を含む。ある実施態様において、プラミペキソール活性薬物は、本質的にＲ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールステレオアイソマーおよび薬理学的に許容し得るその塩からなる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
多数の中枢神経系疾患および症状は神経損傷を引き起こし、これらの各症状は、本発明のテトラヒドロベンゾチアゾール組成物で処置され得る。神経損傷を起こし得る症状には下記が含まれる：原発性神経変性疾患；ハンチントン舞踏病；卒中および他の低酸素症または虚血状態；神経外傷;代謝性神経損傷;脳性発作後遺症; 出血性卒中；続発性神経変性疾患(代謝性または中毒性)；パーキンソン病、アルツハイマー病、アルツハイマー型老人性痴呆(ＳＤＡＴ)；加齢関連認知機能不全;または血管性痴呆、多発梗塞性痴呆、Lewy小体型痴呆または神経変性性痴呆。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
また、本発明はヒトに投与するのに安全である。ＰＤ症候の処置に対して承認された強いドーパミンアゴニストであるＳ(−)プラミペキソールは、Ｒ(＋)プラミペキソールのエナンチオマーである。しかし、Ｒ(＋)プラミペキソールは、薬理学的ドーパミン活性を欠いている。従って、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールおよび薬理学的に許容し得るそれらの塩は、Ｓ(−)プラミペキソールよりもかなり多くの用量を投与でき、神経保護を提供し得る脳のレベルを達成しうる。ある実施態様に従って、ＡＬＳは、Ｒ(＋)またはＳ(−)プラミペキソールのいずれかを投与することによって処置されるが、しかしながら、Ｓ(−)よりかなり高い用量を与えることが可能であるため、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールの投与が好ましい。実施例１に記載したように、Ｓ(−)およびＲ(＋)アイソマーは、酸化ストレスの低下においてはほぼ等力である。しかし、Ｒ(＋)アイソマーの使用により、より高用量を投与することが可能となり、その結果、毒性酸素フリーラジカルのより大きな低下を達成する。従って、ある実施態様において、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）に罹った患者での神経細胞死を低下させる方法を提供し、その方法において、該患者は、一般構造式:
【化５】
2005516911.tif 000002
の化合物を含む医薬組成物を投与される。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
ある実施態様において、プラミペキソール、より好ましくはＲ(＋)-２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールは、経口投与のための錠剤を得るための結合剤と、または連続送達のための経皮パッチ(「スキンパッチ」)を得るための当業者に既知の物質と混合される。あるいは、プラミペキソールは、非経腸的(すなわち、静脈内、筋肉内、皮下)投与され得る溶液を生成するのに必要な安定化剤と共に製剤化され得る。本発明の経口および／または経皮製剤は、ＮＤＤ(すなわち、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症である)に罹った患者の神経細胞死を低下させるのに用いられる。本発明の非経腸製剤は、急性脳損傷(すなわち、卒中、くも膜下出血、低酸素性虚血性脳損傷、痙攣重積状態、外傷性脳損傷、低血糖脳損傷)を持つ患者における神経細胞死を低下させるのに使用される。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
ＮＤＤを処置するためのＲ(＋)プラミペキソールの使用は、ドーパミンアゴニストのＳ(−)プラミペキソール(Mirapex,Pharmacia and Upjohn)に関する比較的不活性なステレオアイソマーであるために、ドーパミンアゴニストとしてのＳ(−)プラミペキソールの使用に関連する重要な問題を解決する。Mirapexの用量は、血圧および精神作用に対するドーパミン作用性の副作用により制限される。Ｒ(＋)-２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールは、Ｓ(−)プラミペキソールの使用から起こる副作用を生じる効力が１％以下である。そのため、本発明は、一般的に、少量のドーパミンアゴニスト薬物療法でさえ不耐容であるＡＤ患者に対して、より安全に投与され得る。また、本発明は、Ｓ(−)プラミペキソールよりかなり多くの用量で静脈投与され得る。すなわち、血圧の低下が有害であり得る卒中のような症状において安全に用いることができる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
ある実施態様において、神経変性疾患を持つ患者を処置するための方法が提供される、と同時にドーパミン作用性の副作用のリスクを低下させる。該方法は、プラミペキソール活性薬物および医薬的に許容し得る担体を含む組成物を投与する過程を含み、ここで、プラミペキソール活性薬物は、本質的にＲ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールステレオアイソマーおよび薬理学的に許容し得るその塩からなる。ある実施態様において、処置される神経変性疾患は、ＡＬＳ、アルツハイマー病およびパーキンソン病からなる群から選択され、該組成物は、１日あたり約１０mgから約５００mgの用量で、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールまたは薬理学的に許容し得るその塩を投与される。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
使用される用量は、もちろん処置されるべき特定の異常によるが、加えて年齢、体重、健康の一般的状態、重症度、処置頻度、そして追加の医薬が該処置に加わるかどうかを含む追加的ファクターによる。個々の活性な化合物の量は、当業者には既知の定法によって容易に決定される。例えば、本発明のテトラヒドロベンゾチアゾールは、１０mg〜５００mgの１日全用量で、ＮＤＤに罹ったヒトに経口的に投与され得る。あるいは、テトラヒドロベンゾチアゾールは、１０mgから１００mgの単回用量で、および／または１０mg/日〜５００mg/日の連続静脈点滴によって、急性脳損傷に罹ったヒトに非経腸投与され得る。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
ある好ましい態様において、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾール(または薬理学的に許容し得るその塩)を、神経変性病疾患、例えばＡＬＳに罹った患者に投与して、該疾患を処置する。本明細書で使用される用語「処置する」には、特定の異常または症状と関連のある症候の緩和、および／または該症状の防止または除去を包含する。より具体的には、プラミペキソール活性薬物および医薬的に許容し得る担体を含む組成物は、患者に投与され、神経細胞死を防止、または実質的に低下させ、ここで、プラミペキソール活性薬物は、本質的に、Ｒ(＋)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾール(および薬理学的に許容し得るその塩)である、プラミペキソールのステレオアイソマーを含む。プラミペキソールの合成、製剤および投与は、ＵＳ特許番号４,８４３,０８６;４,８８６,８１２;および５,１１２,８４２に記載されている；出典明示により本明細書の一部とする。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
さらに、図７に示したように、追加の研究を、マウスに対して行い、イン・ビボでの酸化ストレスの低下におけるプラミペキソールの有効性を証明している。この研究において、マウスは、８週間、３つの異なる１日用量で、マウス飲料水中のＲ(＋)ＰＰＸを投与され、次いで、脳中の酸化ストレスを増加させる神経毒（Ｎ−メチル-４-フェニル-１,２,３,６-テトラヒドロピリジン、ＭＰＴＰ)が投与された。次いで、脳組織は、酸素フリーラジカル産生について分析した。該データは、３０mg/kg/日および１００mg/kg/日用量が、脳中のフリーラジカルレベルの顕著な低下を生じることを示す。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
また、毒性学的研究がなされ、有害な作用の証拠は検出されなかった。特に、８週間の毒性学研究を、マウスの飲料水中にＲ(＋)ＰＰＸを与えたマウスで行った。マウスの主な臓器の全ては、病理学的に試験され、病変はみられなかった。これは、神経保護剤としてＲ(＋)ＰＰＸの有効性の問題を提示しない一方で、その薬物を、非常に高用量で長期的にヒトに投与する際の潜在的な安全性(すなわち、実用性)を示している。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
本発明は、本発明のテトラヒドロベンゾチアゾール化合物を含む医薬組成物を指向する。より具体的には、テトラヒドロベンゾチアゾール化合物は、当業者には既知の標準的な医薬的に許容し得る担体、増量剤、可溶化剤および安定化剤を用いる医薬組成物として処方され得る。テトラヒドロベンゾチアゾールを含む医薬組成物は、以下に限定するものではないが、局所、経口、静脈内、筋内、動脈内、髄内、くも膜下腔内、心室内、経皮、皮下、腹膜内、鼻腔内、腸、局所、舌下または直腸手段を含む全ての経路によって、それを必要とする個人に投与される。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
実施例１：Ｒ(＋)およびＳ(−)ＰＰＸは、細胞死カスケードの活性化に関する有効な阻害剤である。
材料および方法
細胞培養
ＳＨ−ＳＹ５Ｙヒト神経芽(細胞)腫細胞を、American Tissue Culture Collection (www. atcc. org)から得、複製状態の培養物中で維持した。カスパーゼアッセイおよびシトクロームＣ放出研究のために、細胞を１０％胎児ウシ血清、抗生物質/抗真菌剤(micotic)［ペニシリン(100 IU/ml)、ストレプトマイシン硫酸塩(100μg/ml)、アンフォテリシンＢ（0.25μg/ml）］およびウリジン(50μg/ml）およびピルビン酸塩(100μg/ml)を含有するＤＭＥＭ／高グルコースを用いて、５％ＣＯ２雰囲気、３７℃で、Ｔ７５フラスコ内でほぼ最大コンフルエンス（２×１０７細胞／フラスコ）まで増殖させた。次いで、５ｍＭ メチルピリジニウムヨウ化物(ＭＰＰ＋；Sigma;www.sigma-aldrich.com)または１００μＭ ２５−３５または３５−２５βアミロイドペプチド(Bachem;www.bachem.com)と共に、時間を変えて、インキュベートし、その後回収した。細胞死の研究のために、該細胞を、９６ウェルの黒底プレートに播種し、２４時間、ＤＭＥＭ培地で増殖させ、次いで毒素に暴露した。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５７】
カスパーゼアッセイ
ＭＰＰ＋またはβアミロイドペプチドに暴露した後、細胞をＰＢＳ中に回収し、450xg、６分間、４℃で遠心分離した。細胞ペレットを、２x１０７細胞/１００μlの分解緩衝液の濃度で、低張細胞分解用緩衝液[２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ ＭｇＣｌ2、５ｍＭ ＥＤＴＡ、１Ｍ ＤＴＴおよびプロテアーゼ阻害剤カクテル(Sigma Chemical)]に再懸濁した。分解物を、凍結および溶解の４サイクルに供した。次いで、細胞分解物を、16,000 xg、３０分間、４℃で遠心分離にかけた。上清分画を回収し、タンパク質含量をLowryアッセイ(BioRad)により測定した。タンパク質（100μg）を用いて、９６ウェルプレートでカスパーゼ活性を測定し、４回アッセイした。該活性を、アッセイ緩衝液および製造者によって提供されるプロトコール(Biomol, カスパーゼ３；Promega, カスパーゼ３および９)を用いて測定した。カスパーゼ活性は、染色（ｐ−ニトロアニリン(ｐ-ＮＡ),Biomol)または蛍光(アミノメチルクマリン（ＡＭＣ), Promega)クロモゲンの遊離を生じる合成ペプチド基質の開裂に基づく。活性化したカスパーゼのみが、これらの基質を開裂でき、各アッセイキットで提供されるカスパーゼ阻害剤をアッセイに含む場合、クロモゲン生成を完全に阻害する。記載のアッセイ条件下、クロモゲン生成の線形速度が、２時間にわたって観察された。０時および３７℃でのインキュベーション３０分後に、クロモゲン吸光度(ｐ-ＮＡ)をOpti Maxプレート・リーダー上で、またはクロモゲン蛍光(ＡＭＣ)をSpectraMax Gemini プレート・リーダー上で測定し、カスパーゼ比活性を概算した。０時でのクロモゲンシグナルを３０分時の測定値から引いた。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
細胞死
細胞死を、製造指示書に従って、９６ウェル・プレートで増殖し、カルセインＡＭとインキュベートした細胞において、“Live-Dead”アッセイ(分子プローブ;www.molecularprobes.com)でカルセイン保持の減少を測定することによって概算した。カルセインシグナルを、SpectraMax Gemini adjustable fluorescent plate reader (Molecular Devices)でアッセイした。メタノールとプレインキュベートした細胞からのカルセイン蛍光をバックグラウンドとして、全ての測定値から引いた。各アッセイを、８ウェル/条件で行い、これを平均した。３−８回の独立した実験を行い、このパラダイムにおいて、広範囲な濃度のＳ(−)およびＲ(＋)ＰＰＸを評価した。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
薬物
Ｒ(＋)およびＳ(−)ＰＰＸ(Pharmacia Corporationからの供与)を、それらの二塩酸塩として得、培養培地に直接溶解した。アデニン・ヌクレオチド・トランスロケーターに対するＡＴＰ結合部位のアンタゴニストであるボンクレキン酸は、１Ｍ ＮＨ４ＯＨ中の溶液として提供された。ホスホリパーゼＡ２阻害剤であるアリストロキア酸(ナトリウム塩)は、Sigma Chemical Co.から得た。カスパーゼ実験において、薬物を、ＭＰＰ＋またはβアミロイドペプチドの１時間前に添加した。カルセイン/細胞死実験において、薬物をＭＰＰ＋の４時間前に添加した。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
結果
ＭＰＰ＋およびＢＡ２５-３５によるカスパーゼ活性化
図１Ｂは、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞と５ｍＭ  ＭＰＰ＋とのインキュベーション中の、カスパーゼ３活性に関するタイムコースを示す。活性の増加が４時間まで検出でき、２４時間までに約２倍増加していた。図１Ａは、細胞質中に放出されたシトクロームＣタンパク質に対するウェスタンブロッドの結果を示す。生物化学的活性曲線と同様に、細胞質シトクロームＣは、４時間まで少量で検出可能で、１２時間まで実質的に増加した。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
図２は、Ｒ(＋)およびＳ(−)ＰＰＸエナンチオマーの両方が、ＭＰＰ＋暴露中、カスパーゼ３活性化を抑制することを示す。ＭＰＰ＋誘導によるカスパーゼ３活性の増加は、アデニン・ヌクレオチド・トランスロケーターの内部膜部位上のＡＴＰ結合部位の特異的アンタゴニストであるボンクレキン酸により遮断された。ホスホリパーゼＡ２阻害剤であるアリストロキア酸は、以前、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞のＭＰＰ＋誘導されたアポトーシスを遮断することが示され(Fall and Bennett, 1998)、カスパーゼ３活性の増加を阻害することも示された。ＭＰＰ＋およびＢＡ２５-３５ペプチドによるカスパーゼの活性化は、ＰＰＸエナンチオマーとミトコンドリアの遷移孔で活性な薬物により遮断された。Ｓ(−)ＰＰＸは、ＢＡ２５-３５ペプチドとのインキュベーション後のカスパーゼ３活性の増加を約７０％まで低下させ、それ自身による抑制効果を示さなかった。また、ＭＰＰ＋暴露は、カスパーゼ３の活性化と同様に、時間経過とともにカスパーゼ９の活性を増加させた(図３参照)。カスパーゼ９の活性の増加は、Ｓ(−)およびＲ(＋)ＰＰＸ、ボンクレキン酸およびアリストロキア酸によっても遮断された。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
図４は、２４時間、５ｍＭ ＭＰＰ＋に暴露する前に濃度を変化させたＲ(＋)またはＳ(−)ＰＰＸと共にＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞をインキュベートした細胞のカルセイン保持に対する効果を示す。カルセインは、血漿膜の電位を維持する能力の機能として細胞内に保持される蛍光色素である。ＭＰＰ＋単独は、約６０％までカルセインの取込みを低下させた。両方のＰＰＸエナンチオマーは、実質的に３０ｎＭレベルでカルセインの取込みを回復させ、この保護効果は３０μＭ  ＰＰＸまで保持された。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
検討
この研究は、パーキンソン病およびアルツハイマー病の各々に有用な可能性のある神経保護作用の化合物を研究するための細胞培養モデルとして自己複製ＳＨ−ＳＹ５Ｙ神経芽(細胞)腫細胞に添加した神経毒のＭＰＰ＋および２５-３５βアミロイドペプチドの使用を対象としている。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、新生物の神経外胚葉起源の分裂中の細胞で、一次ニューロンではない。それらは、Ras変異の結果としての有糸分裂であり、ＭＡＰＫ／ＥＲＫシグナリングの慢性的な活性化を導く。ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞は、一次ニューロンと比較すると、ＭＰＰ＋との短時間のインキュベーションでは、比較的非感受性である。我々は、１ｍＭではなく、２.５および５ｍＭのＭＰＰ＋が、１８-２４時間以内でアポトーシス形態およびＤＮＡ核濃縮フラグメントを生成することを見出した。しかし、ＭＰＰ＋低濃度での長時間のインキュベーションは、動物でのＰＤのイン・ビボ ＭＰＴＰモデルとより密接に近似しており、比較的低いＭＰＰ+レベルへの長時間の暴露は、ミトコンドリア細胞死カスケードを依然活性化し得ると報告されている。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
本実験の焦点は、ＰＰＸエナンチオマーが、カスパーゼの活性化を阻止できるのか、また急性の毒素暴露したＡＤおよびＰＤの細胞培養モデルにおいて、細胞生存に関するマーカーとして、カルセイン保持を促進することが可能かどうかを決定することであった。「イニシエーター（開始者）」である「カスパーゼ９」および「エグゼクチオナー（執行者）」である「カスパーゼ３」の両方の活性化は、ＰＤのためのＭＰＰ＋モデルにおいて両方のＰＰＸエナンチオマーによって遮断され、カスパーゼ３の活性化は、ＡＤのためのＢＡ２５−３ＳモデルにおいてＳ(−)ＰＰＸによって遮断された。ナノモルレベルでの両ＰＰＸエナンチオマーは、ＰＤのためのＭＰＰ＋モデルにおいて細胞生存性を促進することができた。従って、本発明の発見は、ＰＰＸの神経保護作用を説明する増大しつつある研究成果に加え、神経変性疾患におけるこのファミリー化合物の臨床的有用性の可能性を示唆するものであった。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
この試験は、ＰＰＸの最も近い作用部位を試験しなかったが、いくつかの知見は、これらの細胞モデルにおけるミトコンドリア膜透過性遷移孔複合体(ＭＴＰＣ)を含んでいた。まず、選択的アデニン・ヌクレオチド・トランスロケーター・アンタゴニストおよびＭＴＰ開口の阻害剤であるボンクレキン酸は、カスパーゼ９および３の両方のＭＰＰ＋で誘導される活性化を阻害した。これは、直接的かまたは酸化ストレスを包含するメカニズムを通じてかのいずれかの、ＭＰＰ＋がもたらすＭＴＰ開口と一致するであろう。単離された肝臓ミトコンドリアにおいて、ＭＰＰ＋は、フリーラジカルスカベンジャー酵素によって不完全に遮断され、Ｓ(−)ＰＰＸによってより完全に遮断されている、古典的なＭＴＰ開口をもたらし得る。神経毒性２５-３５ＢＡペプチドはまた、単離したミトコンドリアにおいてＭＴＰ開口を刺激し得る。ＭＰＰ＋および２Ｓ-３５ＢＡペプチドの両方は、インビボでの脳ミクロ透析研究、およびイン・ビトロでの神経細胞培養において酸化ストレスを増加させ、一方、Ｓ(−)ＰＰＸは、イン・ビトロおよびイン・ビボでのＭＰＰ＋で誘導される酸化ストレスを低下させることを示した。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
第２フェーズにおいて、ＳＡＬＳに確実に罹患した１７人の患者を、臨床集団からランダムに選択した。その患者に、アスピリン（１.３g）を経口的に与え、血液を３時間後に採取した。これらのベースライン用の試料を取得後、ＳＡＬＳ試験者は、プラミペキソール治療を開始した。用量漸増（増加）は、最終用量として１.５mg t.i.d.−q.i.d.に達するようにしたＰＤ患者と同様に行い、その後７週間タイトレーションを行った。各被験者が、各被験者の最も高いプラミペキソール用量で３週間続けた後、アスピリン負荷試験をもう一度行った。元々の１７人のＳＡＬＳ患者のうち１２人は、プラミペキソール漸増フェーズを完了できた。２人を除くこれらすべての者は、６mg／日のプラミペキソール用量を達することができ、全ての患者は少なくとも３mg／日の用量を得た。次いで、各試験者に、プラミペキソール処置を続ける機会を与えた。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７５】
追加比較として、２,３-ＤＨＢＡ/サリチレートの割合を、２群について時間に対して比較した。ＡＬＳ群は、アスピリン投与後３時間で２,３-ＤＨＢＡ産生のこの標準的マーカーにおいて、約１.５倍の増加を示した。２ウェイＡＮＯＶＡは、ｐ＝０.０６レベルで有意差を示した(図５Ｂ)。血清サリチレートレベルは、ＡＬＳとＣＴＬ集団との間に時間に対して有意差はなかった(図５Ｃ)。この試験の第２フェーズに入れた元々の１７人の患者のうち、５人は疾患の合併症または薬物療法に耐えられないために省いた。残りの試験者は、８人の男性および４人の女性からなる。平均年齢は６３.２歳であった。プラミペキソール治療は、これらＡＬＳ患者に十分耐えられた。これら試験者は、臨床的痴呆の症候を全く示さず、また、明白な心血管症状の不安定性を持たなかった。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７６】
この試験に登録された患者は、疾患進行の様々な臨床試験段階を提示した。４人の試験者は歩行できず、そのうちの２人は人工呼吸器に依存していた。残りの８人は、試験開始時は歩行できた。試験に入ってから最終の血液採取までは、４９-１０５日の範囲で平均時間７６.６日であった。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
ほぼ等しいプラミペキソールの神経保護作用が、Ｒ（＋）およびＳ（−）エナンチオンマーにおいて観察されることから、ドーパミンアゴニスト作用が主にＳ（−）エナンチオマーに存在するので、ＲＯＳスカベンジャー作用は、ドーパミンアゴニスト特性には関係がないようである。これが事実であれば、プラミペキソールのＲ（＋）エナンチオマーは、イン・ビボでの抗酸化活性に対する可能性を持ち、本試験で用いられるＳ（−）エナンチオマーよりもかなり高い用量にも耐性があるはずである。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８１】
酸化ストレッサーは、散発性ＡＬＳにおいて十分に確立されているが、しかし、増加した酸化ストレスの原因論は曖昧なままである。ＡＬＳにおけるＣＮＳ酸化ストレス損傷のマーカーには、脂質過酸化生成物についての腰部脊髄における免疫組織化学染色の増加、およびニトロチロシンおよびニトロシル化マンガンスーパーオキシドジスムターゼの髄液レベルの増加が含まれる。これらの結果は、一酸化窒素誘導体を包含するＲＯＳによるＡＬＳ組織への損傷増加と一致する。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８２】
ＡＬＳの動物および細胞モデルもまた、酸化ストレスおよびモーターニューロンの脆弱性についての洞察を提供する。ＡＬＳ脊髄モーターニューロンは、シトクロームＣオキシダーゼの活性を低下させ（組織化学的に考察した）、このように低下した電子伝達系機能は、酸素のフリーラジカル生成を増加させるように働き得る。変異ヒトＳＯＤ１ＦＡＬＳ遺伝子を担持するマウスの脊髄ミクロ透析は、ＲＯＳの生成増加およびマロンジアルデヒドのレベルを明らかにし、そのコンセプトとも一致する。さらに、ＣｕＺｎ−ＳＯＤ ＦＡＬＳ変異は、興奮毒性により死に導く脊髄モーターニューロンの脆弱性を増加させ、関与する該メカニズムが酸化ストレス増加させることが報告されている。最終的に、ＡＬＳで増加した酸化ストレスは、ＡＬＳ脊髄で観察されるアポトーシスの細胞死過程のマーカー増加に関与し、ＦＡＬＳマウスモデルでのモーターニューロンの死におけるカスパーゼの関連性の原因である。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８３】
ミトコンドリアの病理は、実験用モーターニューロン疾患の初期の経過で生じる。これらの構造は、酸化的損傷に対して感受性であるだけでなく、その機能不全は、加速されたフリーラジカル産生を導き、ミトコンドリアＤＮＡへの起こりうる損傷を導く。ＡＬＳ筋肉生検におけるミトコンドリア機能の視覚化により、複合体Ｉの低い活性を明らかにし、ＡＬＳ前角細胞樹状体の超構造分析により凝集した暗いミトコンドリアが明らかとなった。ＡＬＳにおいて、変性した前角細胞周辺のグリア刺激アミノ酸トランスポーター−２（ＥＡＡＴ２）の選択的な損失は、増加した興奮毒性を与え得るさらなるタンパク質損傷を反映し得る。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８４】
そのため、ＡＬＳにおける酸化的損傷は、原発性神経変性過程、モーターニューロンミトコンドリア病理学の続発性付帯徴候または両方の組合せを示す。ＳＡＬＳミトコンドリア遺伝子の増幅に関するＣybrid研究は、ＳＡＬＳにおける酸化ストレスの増加が、原発性ミトコンドリア遺伝学的原因論の点から、理解し得ることを示す。どのようなミトコンドリアのＤＮＡがＳＡＬＳにおいて欠陥となるかは知られていない；母方から受継いだメカニズムと散発的に獲得したメカニズムの両方がありうる。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８５】
サリチレート負荷の使用および相対的なイン・ビボ酸化ストレスレベルの概算値としての２,３-ＤＨＢＡ測定を、成人性糖尿病、アルコール依存症における肝不全および関節炎に適用した。ヒドロキシルラジカルおよびペルオキシ亜硝酸アニオンを含む多くの酸化種は、２,３-ＤＨＢＡの生成に寄与し得る。従って、観察された２,３-ＤＨＢＡレベルについて、特定のＲＯＳ源を指定することはし得ないし、また増加したサリチレートヒドロキシル化の組織源を限定することもできない。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８６】
要するに、酸化ストレスのマーカーである２,３-ＤＨＢＡの血清レベルベースラインは、ＳＡＬＳ患者のコホートでは増加することが明らかとなり、このレベルはプラミペキソールによる処置後に低下した。図６に示したように、２,３-ＤＨＢＡの個々の血清レベルは、Ｓ(−)２−アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾールによる処置後のＡＬＳ患者で低下した。特に、患者に、１日用量のＳ(-)２-アミノ-４,５,６,７-テトラヒドロ-６-プロピルアミノベンゾチアゾール（３〜６mg）を、７週間、経口投与した。７週間の最後に血清試料を採取し、２,３-ＤＨＢＡ濃度を測定し、処置前に採取した血清試料における２,３ＤＨＢＡレベルと比較した。これらのデータは、プラミペキソールによる処置が、ＡＬＳ患者におけるイン・ビボでの酸化ストレスを低下させることを示した。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８８】
図７に示したように、該結果は、Ｒ(＋)プラミペキソールによる３０および１００mg/kg/day処置が、ＭＰＴＰによって生成した前脳の酸化ストレスを有意に低下させた。毒性学試験も行い、副作用の症候を検出しなかった。特に、８週間の毒性学試験を、その飲料水中のＲ(＋)ＰＰＸを与えたマウスで行った。彼らの全主要臓器を病理学的に試験し、病変は見られなかった。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８９】
【図１】図１Ａは、ＭＰＰ＋で誘導されるシトクロームＣの放出のタイムコースを示し、図１Ｂは、ＭＰＰ＋で誘導されるカスパーゼ３の活性化のタイムコースを示す。
【図２】図２は、ＰＰＸ、ボンクレキン酸およびアリストロキア酸により、ＭＰＰ＋で誘導されるカスパーゼ３活性化の阻害を示すデータを表す。
【図３】図３は、ＰＰＸ、ボンクレキン酸およびアリストロキア酸による、ＭＰＰ＋で誘導されるカスパーゼ９活性化の阻害を示すデータを表す。
【図４】図４Ａと４Ｂは、ＰＰＸエナンチオマーによるＭＰＰ＋で誘導される細胞死の阻害を示す。
【図５】図５は、アスピリン（１.３g）投与後、ＡＬＳおよび対照(ＣＴＬ)患者における血清２,３-ＤＨＢＡレベルの変化のタイムコースを示す。
【図６】図６は、血清２,３-ＤＨＢＡ濃度に対するプラミペキソールの効果を示す。
【図７】図７は、マウスに、Ｒ(＋)ＰＰＸに投与し、次いで、脳および前脳に酸化ストレスを増加させる神経毒(Ｎ−メチル-４-フェニル-１,２,３,６-テトラヒドロピリジン、ＭＰＴＰ)で処置した２,３-ＤＨＢＡレベルである。