【手続補正書】
【提出日】平成22年7月2日(2010.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Iのセコジオン誘導体のエナンチオ選択的な酵素的還元の方法であって、
【化４】
2010511394.tif 000001
一般式Iにおいて、環構造は、一またはいくつかのヘテロ原子を含み、または含まず、
R1は、水素またはC1−C4アルキル基であり、
R2は、水素、C1−C8アルキル基、またはエステル等のような先行技術において知られているOHのための保護基であり、
R3は水素、メチル基、またはハロゲンであり、
構造要素
【化５】
2010511394.tif 000002
は、ベンゼン環、または０、１もしくは２のC-C二重結合を有するC6環を表し、
二重結合は、６／７または７／８位において任意に含まれ、
１、２、４、５、６、７、８、９、１１、１２、および１６位の炭素は、それぞれ、水素、C1−C4アルキル基、ハロゲン、またはフェニル基で置換される、
セコジオン誘導体は、コファクターとしてNADHまたはNADPHの存在下、酸化還元酵素／脱水素酵素を用いて還元され、
セコジオン誘導体が、反応バッチ中で、≧１０g／lの濃度で使用されること、および酸化還元酵素／脱水素酵素により形成される、酸化されたコファクターNADまたはNADPが連続的に再生されることを特徴とする該方法。
【請求項２】
セコジオン誘導体が、コファクターとしてNADHまたはNADPHの存在下、酸化還元酵素／脱水素酵素を用いて還元される、一般式Iのセコジオン誘導体のエナンチオ選択的な酵素的還元の方法であって、酸化還元酵素／脱水素酵素が、
ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも５０％のアミノ酸が一致するアミノ酸配列を含む、
ｂ）配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０の核酸配列によりコードされる、または
ｃ）ストリンジェントな条件下、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０にハイブリダイズする核酸配列によってコードされる
ことを特徴とする該方法。
【請求項３】
セコジオン誘導体が、コファクターとしてNADHまたはNADPHの存在下、酸化還元酵素／脱水素酵素を用いて還元される、一般式Iのセコジオン誘導体のエナンチオ選択的な酵素的還元の方法であって、酸化還元酵素／脱水素酵素が、２３０から２６０アミノ酸長を有し、［配列番号１８から配列番号４２］
nalvtgasrgig、nalvtggsrgig、nalitggsrgig、nalitgasrgig、nalitggsrgmg、halvtgasrgig、
gysvtla、gynvtla、gysvtlv、gynvtlv、
fkgaplpa、fkaaplpa、
fvsnag、ffsnag、fvcnag、fvanag、
spialtkal、spvaltkti、spialtktl、spvamtkal、sqialtkal、
avysask、avysatk、
pikgwiおよびpisgwi
からなる群から選択される一またはいくつかの部分配列を含むことを特徴とする該方法。
【請求項４】
酸化還元酵素／脱水素酵素が
ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４または配列番号５のアミノ酸配列に対して、少なくとも５０％のアミノ酸が一致するアミノ酸配列を含む、
ｂ）配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０の核酸配列によりコードされる、または
ｃ）ストリンジェントな条件下、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、または配列番号１０にハイブリダイズする核酸配列によってコードされる
ことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
酸化還元酵素／脱水素酵素が、２３０から２６０アミノ酸長を有し、［配列番号１８から配列番号４２］
nalvtgasrgig、nalvtggsrgig、nalitggsrgig、nalitgasrgig、nalitggsrgmg、halvtgasrgig、
gysvtla、gynvtla、gysvtlv、gynvtlv、
fkgaplpa、fkaaplpa、
fvsnag、ffsnag、fvcnag、fvanag、
spialtkal、spvaltkti、spialtktl、spvamtkal、sqialtkal、
avysask、avysatk、
pikgwiおよびpisgwi
からなる群から選択される一またはいくつかの部分配列を含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
酸化還元酵素／脱水素酵素によって形成される酸化されたコファクターNADまたはNADPが、連続的に再生されることを特徴とする、請求項２または３記載の方法。
【請求項７】
酸化されたコファクターNADまたはNADPが、アルコールの酸化によって再生されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
一般式RXRYCHOHを有する二級アルコールがコファクターの再生のために使用され、ここでRXおよびRYは、それぞれ、水素、分岐したまたは分岐していないC1−C8アルキル基、およびCtotal≧３であることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項９】
２−プロパノール、２−ブタノール、２−ペンタノール、４−メチル−２−ペンタノール、２−ヘキサノール、２−ヘプタノール、５−メチル−２−ヘキサノール、シクロヘキサノール、または２−オクタノールからなる群のアルコールが、コファクターの再生のために使用されることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
酸化還元酵素／脱水素酵素が、コファクターの再生のためにさらに加えられることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
TTN（全変換率＝還元されたセコジオン誘導体のモル／使用されたコファクターのモル）が≧１０3であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
水有機二相系で実施されることを特徴とする、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
ジエチルエーテル、三級ブチルメチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、酢酸エチル、酢酸ブチル、ヘプタン、ヘキサン、トルエン、ジクロロメタン、シクロヘキサン、およびそれらの混合物からなる群から選択される有機溶媒がさらに使用されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
セコジオン誘導体が、反応バッチ中で、全容量に基づいて、１０ｇ／ｌから５００ｇ／ｌの量で使用されることを特徴とする、請求項１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
セコジオン誘導体が、反応バッチ中で、全容量に基づいて、２５ｇ／ｌから３００ｇ／ｌの量で使用されることを特徴とする、請求項１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
セコジオン誘導体が、反応バッチ中で、全容量に基づいて、５０ｇ／ｌから２００ｇ／ｌの量で使用されることを特徴とする、請求項１から１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
セコジオン誘導体として、１３−エチル−３−メトキシ−８，１４−セコ−ゴナ−１，３，５（１０），９（１１）−テトラエン−１４，１７−ジオン（エチルセコジオン−式III）が使用されることを特徴とする、請求項１から１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
セコジオン誘導体として、１３−メチル−３−メトキシ−８，１４−セコ−ゴナ−１，３，５（１０），９（１１）−テトラエン−１４，１７−ジオン（メチルセコジオン−式II）が使用されることを特徴とする、請求項１から１６のいずれか１項に記載の方法。