(57)【要約】  ヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３分子及びその治療的使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者におけるＢ細胞性免疫応答を抑制するための方法であって、
５００ｍｇ〜３０００ｍｇのＶＩＢ４９２０の用量を、それを必要とする被験者に投与することと、
前記Ｂ細胞性免疫応答を抑制することと、を含む方法。
【請求項２】
前記用量が、１０００ｍｇ〜１５００ｍｇのＶＩＢ４９２０である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記用量が、１０００ｍｇのＶＩＢ４９２０である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記用量が、１５００ｍｇのＶＩＢ４９２０である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記用量が、１４日毎に投与されるか、又は１ヵ月につき２回投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記用量が、静脈内投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｂ細胞性免疫応答を前記抑制することが、抗体のクラススイッチを減少させることである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｂ細胞性免疫応答を前記抑制することが、循環Ｂ細胞を減少させることである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｂ細胞性免疫応答を前記抑制することが、形質細胞の活性を減少させることである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
形質細胞の活性の前記減少が、形質細胞シグネチャーの減少であることを特徴とする、請求項９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
形質細胞シグネチャーの前記減少が、遺伝子ＩＧＨＡ１、ＩＧＪ、ＩＧＫＣ、ＩＧＫＶ４−１、及びＴＮＦＲＳＦ１７の発現の減少であることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
自己免疫疾患又は障害を治療するための方法であって、
５００ｍｇ〜３０００ｍｇのＶＩＢ４９２０の用量を、それを必要とする患者に投与することと、
前記自己免疫疾患又は障害を治療することと、を含む方法。
【請求項１３】
前記用量が、１０００ｍｇ〜１５００ｍｇのＶＩＢ４９２０である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記用量が、１０００ｍｇのＶＩＢ４９２０である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記用量が、１５００ｍｇのＶＩＢ４９２０である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記用量が、１４日毎に投与されるか、又は１ヵ月につき２回投与される、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記用量が、静脈内投与される、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記自己免疫疾患又は傷害を前記治療することが、炎症マーカーの減少であることを特徴とする、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記炎症マーカーが、自己抗体レベル、形質細胞（ＰＣ）シグネチャー、循環Ｂ細胞、及び抗体クラススイッチのうちの１つ以上を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記治療することが、臨床症状を減少させることである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記自己免疫疾患又は障害が、関節リウマチである、請求項１２に記載の方法。
【請求項２２】
前記治療することが、リウマトイド因子（ＲＦ）自己抗体、Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡバイオマーカースコア、形質細胞（ＰＣ）シグネチャー、血清反応性Ｃタンパク質（ＣＲＰ）、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ、腫脹関節数、圧痛関節数、又は臨床疾患活動性指標（ＣＤＡＩ）のうちの１つ以上を減少させることである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記治療することが、リウマトイド因子自己抗体を減少させることである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＲＦ自己抗体の前記減少とは、治療開始後８５日以内までに少なくとも５０％までとなることである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記治療することが、ＤＡＳ２８−ＣＲＰを減少させることである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
ＤＡＳ２８−ＣＲＰの前記減少とは、調整済み平均差が少なくとも−１．２となることである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＤＡＳ２８−ＣＲＰの前記減少が、ＶＩＢ４９２０の単回用量を投与した後に検出可能である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記治療することが、Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡバイオマーカースコアを減少させることである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡバイオマーカースコアの前記減少とは、調整済み平均差が少なくとも−１０．３となることである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記自己免疫疾患又は障害が、全身性硬化症、筋炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、ループス腎炎、特発性血小板減少症紫斑病、血管炎、皮膚ループス、自己免疫性溶血性貧血、シェーグレン病、ＩｇＧ４関連疾患、又は全身性エリテマトーデスのうちの１つである、請求項１２に記載の方法。
【請求項３１】
前記治療することが、前記自己免疫疾患又は障害の臨床症状を減少させることである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記治療することが、ＰＣシグネチャーを減少させることである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
ＰＣシグネチャーの前記減少が、遺伝子ＩＧＨＡ１、ＩＧＪ、ＩＧＫＣ、ＩＧＫＶ４−１、及びＴＮＦＲＳＦ１７の発現の減少であることを特徴とする、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記治療することが、前記自己免疫疾患又は障害の１つ以上のバイオマーカーを減少させることである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
関節リウマチ（ＲＡ）を治療中の患者において、関節リウマチ疾患活動性の指標を減少させるための方法であって、
前記患者にＶＩＢ４９２０を投与することであって、
ＲＡ疾患活動性の前記指標は、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ、臨床疾患活動性指標（ＣＤＡＩ）、患者による全般評価、又は医師による全般評価の１つ以上を含み、
前記ＶＩＢ４９２０が、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与されることと、
前記患者のＲＡ疾患活動性の前記指標を減少させることと、を含む方法。
【請求項３６】
前記ＶＩＢ４９２０が、約１０００ｍｇ〜２０００ｍｇの用量で投与される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＶＩＢ４９２０が、約１０００ｍｇ〜１５００ｍｇの用量で投与される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ＶＩＢ４９２０が、約１０００ｍｇの用量で投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＶＩＢ４９２０が、約１５００ｍｇの用量で投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＶＩＢ４９２０が、１４日毎に投与されるか、又は１ヵ月につき２回投与される、請求項３５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＶＩＢ４９２０が、静脈内投与される、請求項３５〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記指標がＤＡＳ２８−ＣＲＰであり、前記減少させることとは、調整済み平均変化が少なくとも−１．２となることである、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記減少させることとは、調整済み平均変化が少なくとも−２．２となることである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記指標がＤＡＳ２８−ＣＲＰであり、前記減少がＶＩＢ４９２０の初回用量後に観察される、請求項３５〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
関節リウマチの治療中の患者において、リウマトイド因子（ＲＦ）自己抗体を減少させるための方法であって、
約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量のＶＩＢ４９２０を前記患者に投与することと、
前記患者のＲＦ自己抗体を減少させることと、を含む方法。
【請求項４６】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約２０００ｍｇである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約１５００ｍｇである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記用量が、約１０００ｍｇである、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記用量が、約１５００ｍｇである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記用量が、１４日毎に投与されるか、又は１ヵ月につき２回投与される、請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記用量が、静脈内投与される、請求項４５〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＲＦ自己抗体が、少なくとも４０％まで減少する、請求項４５〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＲＦ自己抗体が、少なくとも５０％まで減少する、請求項４６〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＲＦ自己抗体が、治療開始後８５日以内までに減少する、請求項４６〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
関節リウマチを治療中の患者におけるバイオマーカースコアを減少させるための方法であって、
約５００ｍｇ〜３０００ｍｇのＶＩＢ４９２０を前記患者に投与することであって、
前記バイオマーカースコアは、形質細胞（ＰＣ）遺伝子シグネチャー、Ｖｅｃｔｒａ−ＤＡスコア、又は血清Ｃ反応性タンパク質レベル（ＣＲＰ）のうちの１つ以上であることと、
前記患者における前記バイオマーカースコアを減少させることと、を含む方法。
【請求項５６】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約２０００ｍｇである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約１５００ｍｇである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記用量が、約１０００ｍｇである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記用量が、約１５００ｍｇである、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記用量が、１４日毎に投与されるか、又は１ヵ月につき２回投与される、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記用量が、静脈内投与される、請求項５５〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記バイオマーカースコアがＶｅｃｔｒａ  ＤＡであり、前記減少させることとは、調整済み平均差が少なくとも−１０．３となることである、請求項５５〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記バイオマーカースコアが、血清ＣＲＰである、請求項５７〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
それを必要とする患者の形質細胞（ＰＣ）遺伝子シグネチャースコアを減少させるための方法であって、
ＶＩＢ４９２０を、それを必要とする患者に投与することであって、
前記患者は、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、又はシェーグレン病を治療中であり、
前記ＶＩＢ４９２０が、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与されることと、
前記患者の前記ＰＣ遺伝子シグネチャースコアを減少させることと、を含む方法。
【請求項６５】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約２０００ｍｇである、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約１５００ｍｇである、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記用量が、約１０００ｍｇである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記用量が、約１５００ｍｇである、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記用量が、１４日毎に投与されるか、又は１ヵ月につき２回投与される、請求項６４〜６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
前記用量が、静脈内投与される、請求項６４〜６９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７１】
自己免疫性障害を治療中の患者の自己抗体を減少させる方法であって、
ＶＩＢ４９２０を、それを必要とする患者に投与することであって、
前記患者は、自己抗体の存在を特徴とする自己免疫疾患を治療中であり、
前記ＶＩＢ４９２０が、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与されることと、
前記患者の前記自己抗体を減少させることと、を含む方法。
【請求項７２】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約２０００ｍｇである、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約１５００ｍｇである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記用量が、約１０００ｍｇである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
前記用量が、約１５００ｍｇである、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
前記用量が、１４日毎に投与されるか、又は１ヵ月につき２回投与される、請求項７１〜７５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
前記用量が、静脈内投与される、請求項７１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７８】
前記自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、又はシェーグレン病である、請求項７１〜７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
患者の炎症を減少させる方法であって、
ＶＩＢ４９２０を、それを必要とする患者に投与することであって、
前記患者は、炎症性疾患又は障害を治療中であるか、又は、器官若しくは組織移植に反応して予測される炎症に対して、予防的に治療を受けており、
前記ＶＩＢ４９２０が、約１０００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与されることと、
前記患者の炎症を減少させることと、を含む方法。
【請求項８０】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約２０００ｍｇである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記用量が、約１０００ｍｇ〜約１５００ｍｇである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記用量が、約１０００ｍｇである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記用量が、約１５００ｍｇである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記用量が、約３０００ｍｇである、請求項７９に記載の方法。
【請求項８５】
前記用量が、１４日毎に投与されるか、又は１ヵ月につき２回投与される、請求項７９〜８４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８６】
前記用量が、静脈内投与される、請求項７９〜８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
前記用量が、１ヵ月につき１回投与される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８８】
前記患者が、器官又は組織移植の拒絶反応を防止するために、併用して治療されるか、又は予防的に治療される、請求項７９〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記炎症性疾患又は障害が、炎症性筋疾患、又はループス腎炎、皮膚ループス、ＲＡ、ＳＬＥ、ＩＴＰ、筋炎、シェーグレン症候群、血管炎、全身性硬化症、自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症又は巣状分節性糸球体硬化症である、請求項７９〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
前記治療することが、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０、又はＡＣＲ７０を達成することである、請求項２１に記載の方法。
【請求項９１】
前記Ｂ細胞性免疫応答の前記抑制が、長期間持続する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記自己免疫疾患又は傷害の前記治療が、長時間持続する、請求項１２〜３４又は９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記患者のＲＡ疾患活動性の前記指標の前記減少が、長時間持続する、請求項３５〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記患者のＲＦ自己抗体の前記減少が、長時間持続する、請求項４５〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９５】
前記患者の前記バイオマーカーの前記減少が、長時間持続する、請求項５５〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
前記患者の前記ＰＣ遺伝子シグネチャースコアの前記減少が、長時間持続する、請求項６４〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
前記患者の前記自己抗体の前記減少が、長時間持続する、請求項７１〜７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
前記患者の炎症の前記減少が、長時間持続する、請求項７９〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
患者において補充療法に対する免疫寛容を誘導する方法であって、
ＶＩＢ４９２０を、補充療法を必要とする患者に投与することであって、
前記ＶＩＢ４９２０が、約１０００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与されることと、
前記患者における前記補充療法に対する免疫寛容を減少させることと、を含む方法。
【請求項１００】
前記ＶＩＢ４９２０が、約１５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記ＶＩＢ４９２０が、約２５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ＶＩＢ４９２０が、約３０００ｍｇの用量で投与される、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記用量が、約２〜４週毎に１回投与される、請求項９９〜１０２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
前記用量が、約４週毎に１回投与される、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記用量が、１ヵ月につき１回投与される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０６】
前記補充療法が、タンパク質又はペプチドである、請求項９９、１０２又は１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
免疫寛容を前記誘導することが、前記患者による前記タンパク質又はペプチドに対する中和抗体の産生を減少させることを含む、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記タンパク質が第ＶＩＩＩ因子であり、前記患者が血友病患者である、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
前記タンパク質が第ＩＸ因子であり、前記患者が血友病患者である、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１１０】
免疫寛容を前記誘導することが、前記患者における抗第ＶＩＩＩ因子抗体の中和を減少させることである、請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１１】
前記タンパク質又はペプチドが、酵素である、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１１２】
前記酵素がアガルシダーゼアルファ又はアガルシダーゼベータであり、前記患者がファブリー病患者である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記酵素がイデュルスルファーゼであり、前記患者がムコ多糖症ＩＩ型患者又はハンター症候群患者である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１４】
前記酵素がイアロニダーゼであり、前記患者がムコ多糖症Ｉ型患者である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１５】
前記酵素がアルグルコシダーゼアルファであり、前記患者がポンぺ病患者である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１６】
前記補充療法が、治療用ペプチド又はタンパク質をコードする核酸を含むウイルスベクターである、請求項９９、１０２又は１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
前記補充療法に対する免疫寛容を前記誘導することが、前記患者の前記ウイルスベクターに対する免疫応答を減少させること、前記治療用タンパク質に対する中和抗体を減少させること、又はその両方を含む、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
免疫寛容を前記誘導することが、前記ＡＡＶに対する免疫応答を減少させることを含む、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記ＡＡＶに対する免疫応答を前記減少させることとは、前記ＡＡＶに対するＴ細胞応答を減少させること、又は前記ＡＡＶに対する抗体を減少させることである、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
Ｔ細胞応答を前記減少させることとは、ＡＡＶカプシドタンパク質に対するＴ細胞応答を減少させることである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記補充療法に対する免疫寛容を前記誘導することが、前記治療用タンパク質に対する中和抗体を前記減少させることを含む、請求項１１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ経路は、体液性免疫応答を引き起こす際に重要な役割を果たし、いくつかの自己免疫疾患の病因に関与する。ＣＤ４０は、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ及びＢ細胞を含む、様々な抗原提示細胞上に恒常的に発現し（１）、非造血細胞上に発現することもある。
【０００２】
ＣＤ４０リガンドであるＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４としても知られている）の発現は高度に調節されており、大部分が活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞上で見られる（２）。Ｂ細胞と活性化Ｔ細胞との間のＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用は、Ｔ細胞依存性抗原に対して有効な体液性応答を開始するのに不可欠である（３〜５）。ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ系は、インビトロでＢ細胞の増殖、分化、及びアイソタイプスイッチを引き起こす（６〜９）。インビボでは、胚中心（ＧＣ）の形成、体細胞高頻度突然変異、及び記憶Ｂ細胞並びに長期生存形質細胞の産生のためにＣＤ４０のシグナル伝達が必要となる（１０〜１３）。ヒトにおけるＣＤ４０又はＣＤ４０Ｌの欠損は、アイソタイプクラススイッチの障害を特徴とする疾患であるＸ連鎖高免疫グロブリン症候群をもたらすが、これは、検出可能性が低い乃至全くないＩｇＧ、ＩｇＡ又はＩｇＥを伴い、感染症に対する感受性が増大した高レベルの血清ＩｇＭとして現れる（１４〜１６）。
【０００３】
ＣＤ４０Ｌに対して指向された化合物による臨床試験では、自己免疫疾患においてＣＤ４０経路を標的化する潜在的な効果が証明されている。第２相試験において、ヒト化５ｃ８抗ＣＤ４０Ｌ抗体であるＢＧ９５８８は、増殖性ループス腎炎患者のタンパク尿及び抗ｄｓＤＮＡ抗体価を有意に減少させた（１７）。抗ＣＤ４０Ｌによる治療により、活動性ＳＬＥ患者に存在する循環ＣＤ３８ｈｉＩｇ分泌細胞、並びに末梢のＧＣ  Ｂ細胞が減少するということが、更なる研究により明らかとなった（１８、１９）。また、抗ＣＤ４０Ｌモノクローナル抗体（ｍＡｂ）による治療により、免疫性血小板減少症（ＩＴＰ）患者のサブセットにおいて顕著な反応が誘導されることが示された（２０）。
【０００４】
臨床試験において抗ＣＤ４０Ｌ  ｍＡｂによる治療に可能性があることが示されているにもかかわらず、有害な血栓塞栓性事象のためにそれらのプログラムは中止されている。正確に定義されてはいないが、これらの予期しない安全性の問題に関する１つの考えられる説明としては、ヒトに発現しているがマウスには発現していない、血小板上のＦｃγＲＩＩａ（又はＣＤ３２ａ）の発現である（２１）。ＣＤ４０Ｌは、活性化した血小板上にも高度に発現しており（２２）、隣接する細胞上のＣＤ４０ＬとＦｃγＲＩＩａとの両方に同時に抗体媒介性結合をすることで、血小板凝集を引き起こす可能性がある。マウスモデルによって、抗ＣＤ４０Ｌの誘導する血小板減少症におけるＦｃγＲＩＩａの役割が裏付けられる。ヒトＦｃγＲＩＩａを導入したトランスジェニックマウスでは、抗ＣＤ４０ＬｍＡｂによってショック及び血小板減少症が引き起こされた（２３）。この効果は、ＦｃγＲに会合することが不可能な野生型マウス、又は抗体をアグリコシル化したバージョンが注射されたトランスジェニックマウスのいずれにも観察されなかった。
【０００５】
ＣＤ４０Ｌを標的とするものの、ｍＡｂと関連する潜在的な合併症を伴わないようにするために、ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３足場タンパク質（２４、２５）が生成された。Ｔｎ３タンパク質は、ヒトテネイシン−Ｃの第３フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインに由来するものであり、標的特異的結合特性を付与するように改変することができる（２６、２７）。二価ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質をヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に融合させると、ヒトＣＤ４０Ｌと結合してＣＤ４０受容体との相互作用を阻止することができる分子、すなわちＶＩＢ４９２０が得られた。このＣＤ４０Ｌ／ＣＤ４０相互作用の阻害と一致して、ＶＩＢ４９２０は、ＣＤ４０シグナル伝達イベントを遮断することにより、インビトロでヒトＢ細胞の活性化と分化とを強力に阻害することができた。
【０００６】
体液性免疫応答に大きな影響を与え、自己免疫及び／又は炎症状態を治療するための新しい治療法が、当該技術分野において求められている。また、当該技術分野において、免疫寛容を、それを必要とする患者の補充療法に誘導することも求められている。
【０００７】
現在、ＶＩＢ４９２０は、自己免疫／炎症性疾患又は障害に罹患した患者に投与すると、臨床症状及び他の疾患マーカーを減少させるということが分かってきている。特に、関節リウマチ（ＲＡ）の被験者に特定の用量でＶＩＢ４９２０を投与すると、リウマトイド因子（ＲＦ）自己抗体の力価、Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡバイオマーカースコア、ＤＡＳ２８−ＣＲＰによって測定される疾患活動性が、プラセボと比較すると統計的に有意に減少する結果となる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本明細書は、被験者におけるＢ細胞及びＴ細胞媒介免疫応答を抑制するための方法を提供する。方法は、５００ｍｇ〜３０００ｍｇのＶＩＢ４９２０の用量を、それを必要とする被験者に投与し、Ｂ細胞及びＴ細胞性免疫応答を抑制する工程を含む。
【０００９】
本明細書はまた、自己免疫疾患又は障害を治療するための方法を提供する。方法は、５００ｍｇ〜３０００ｍｇのＶＩＢ４９２０の用量を、それを必要とする被験者に投与し、それによって自己免疫疾患又は障害を治療する工程を含む。
【００１０】
本明細書は、ＲＡ治療中の患者において、ＲＡ疾患活動性の指標を低下させるための方法を更に提供する。方法は、ＶＩＢ４９２０を患者に投与し、患者のＲＡ疾患活動性の指標を減少させる工程を含む。減少したＲＡ疾患活動性の指標としては、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ、臨床疾患活動性指標（ＣＤＡＩ）、圧痛関節数、腫脹関節数、患者による全般評価、又は医師による全般評価のうちの１つ以上を挙げることができる。ＶＩＢ４９２０は、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与され得る。
【００１１】
本明細書はまた、ＲＡ治療中の患者において、ＲＦ自己抗体を減少させるための方法を提供する。方法は、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で患者にＶＩＢ４９２０を投与し、患者のＲＦ自己抗体を減少させる工程を含む。
【００１２】
本明細書は、加えてＲＡ治療中の患者におけるバイオマーカースコアを減少させるための方法を提供する。方法は、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇのＶＩＢ４９２０を患者に投与し、患者におけるバイオマーカースコアを減少させる工程を含む。そのような方法において、バイオマーカースコアとは、形質細胞（ＰＣ）遺伝子シグネチャー、Ｖｅｃｔｒａ−ＤＡスコア、又は血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルのうちの１つ以上であってよい。
【００１３】
本明細書はまた、それを必要とする患者のＰＣ遺伝子シグネチャースコアを減少させるための方法を提供する。方法は、ＶＩＢ４９２０を、それを必要とする患者に投与し、患者のＰＣ遺伝子シグネチャースコアを減少させる工程を含む。それを必要とする患者とは、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、シェーグレン病、又は他の自己免疫性又は炎症状態、並びに移植手術及び移植片対宿主病を治療中の患者であってよい。それを必要とする患者に投与されるＶＩＢ４９２０は、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量であり得る。
【００１４】
本明細書は、自己免疫性障害を治療中の患者の自己抗体、又は移植の場合にはアロ抗体を減少させるための方法を更に提供する。方法は、ＶＩＢ４９２０を、それを必要とする患者に投与し、患者の自己抗体、又はアロ抗体を減少させる工程を含む。そのような方法において、患者とは、自己抗体が存在することを特徴とする自己免疫疾患を治療中の患者であり、又は、患者とは、移植拒絶反応を防止するために治療を受けている患者である。患者は、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量でＶＩＢ４９２０を投与される。
【００１５】
本明細書はまた、患者の炎症を減少させるための方法を提供する。方法は、ＶＩＢ４９２０を、それを必要とする患者に投与し、患者の炎症を減少させる工程を含む。患者とは、炎症性疾患又は障害を治療中の患者であってよいか、又は、器官若しくは組織移植に反応した予測される炎症に対して、予防的に治療を受けている患者であってよい。ＶＩＢ４９２０は、約５００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与され得る。
【００１６】
本明細書は、患者において補充療法に対する免疫寛容を誘導する方法を更に提供する。方法は、補充療法を必要とする患者にＶＩＢ４９２０を投与し、患者における補充療法に対する免疫寛容を減少させる工程を含む。ＶＩＢ４９２０は、約１０００ｍｇ〜３０００ｍｇの用量で投与され得る。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１Ａ−１Ｇ】ＨＳＡに融合した二価３４２クローンであるＶＩＢ４９２０の生物化学的性質を含む、ヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３クローンの生物化学的性質を提供するものである。図１Ａは、Ｐｒｏｔｅｏｎによって測定された、一連のヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３クローンのＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用を阻害する能力を示す。Ｔｎ３濃度の範囲にわたって阻害率が示される。デュプリケイトウェルの平均を示す。図１Ｂは、抗ＣＤ４０Ｌ  Ｔｎ３タンパク質のＮＦｋＢを介したＣＤ４０Ｌ媒介シグナル伝達を阻害する能力を示す。ＣＤ４０Ｒ及びＮＦｋＢ−ルシフェラーゼレポーターを発現しているＨＥＫ２９３細胞を、抗ＣＤ４０Ｌ  Ｔｎ３タンパク質の存在下で一晩、組換えＣＤ４０Ｌで刺激した。ルシフェラーゼ活性の阻害率を示す。データは、デュプリケイトウェルの平均を表している。図１Ｃは、様々な濃度における、Ｔｎ３構築物によるＣＤ８６の発現上昇の阻害を示す。ヒトＰＢＭＣを組換えＣＤ４０Ｌで刺激し、ＣＤ４０Ｌ  Ｔｎ３タンパク質とプレインキュベートした後、フローサイトメトリーによってＣＤ８６の発現を評価した。デュプリケイトウェルの平均を示す。図１Ｄは、Ｔｎ３分子のＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用を阻害する能力について、示されたＴｎ３分子をＥＬＩＳＡアッセイで調査した。データは、デュプリケイトウェルの平均を表している。図１Ｅは、Ｆａｓ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、及びＯＸ４０Ｌを含む、関連ＴＮＦファミリーメンバーのパネルへの結合についての、クローン３４２のスクリーニングからのデータを提供するものである。クローン３４２がＣＤ４０Ｌに選択的に結合することが見出された。図１Ｆは、３４２  Ｔｎ３の結晶化、及び公開されているＨＳＡの結晶構造（１）に基づいて、ＶＩＢ４９２０の構造を提唱するものである。図１Ｇは、共通のＣＤ４０Ｌ分子を介して配置された、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ及び３４２／ＣＤ４０Ｌ構造体を模式的に示したものである。ＣＤ４０Ｌは緑、Ｔｎ３はマゼンタで示され、ＣＤ４０受容体はシアンで示されている。
【図２Ａ−２Ｄ】ヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３クローン３４２の構造的特徴を提供するものである。図２Ａは、三量体３４２／ＣＤ４０Ｌ構造体を模式的に示したものである。ＣＤ４０Ｌの細胞外ドメインは緑、３４２はマゼンタで示されている。図２Ｂは、３４２とＣＤ４０Ｌとの間の界面を示す。ＣＤ４０Ｌ及び３４２のフラグメントはそれぞれ、緑及びマゼンタのチューブで示されている。水素結合に関与するアミノ酸は、棒で示される。水素結合は、関連する距離（Å）を伴った黒い破線で示されている。最大３．５Åの距離の結合が示されている。図２Ｃ及び図２Ｄは、（図２Ｃの）ＣＤ４０Ｌと（図２Ｄの）３４２  ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３との表面の相互作用の静電表面ポテンシャルを図示する。界面を示すため、分子をおよそ９０度回転させ、水素結合に関与するアミノ酸を視覚化できるように半透明にしている。赤色は負に荷電した表面を示し、青色は正電荷を示している。
【図３Ａ−３Ｇ】ＶＩＢ４９２０によりＣＤ４０シグナル伝達及びヒトＢ細胞の活性化が阻害されるが、エクスビボ調査では血小板凝集を誘導しない様子を示す。図３Ａは、ＣＤ４０Ｌによって一晩刺激した改変ＨＥＫ２９細胞における、ＶＩＢ４９２０によるＮＦｋＢルシフェラーゼシグナルの阻害率を示す。データは、デュプリケイトウェルの平均を表している。２つの独立した試験うちの１つが示されている。図３Ｂは、ＶＩＢ４９２０及び抗ＣＤ４０Ｌ  ｍＡｂが、刺激されたヒトＰＢＭＣのＣＤ８６の発現上昇を阻害することができた様子を示す。ヒトＰＢＭＣを組換えヒトｍｅｇａＣＤ４０Ｌで２４時間刺激し、フローサイトメトリーによってＣＤ１９＋／ＣＤ８６＋細胞の割合を測定した。データは、デュプリケイトウェルの平均を表している。図３Ｃは、対照又は抗ＣＤ４０Ｌ（ｍＡｂ又はＶＩＢ４９２０  Ｔｎ３）の存在下で、ヒトＢ細胞をＩＬ−２１及びｍｅｇａＣＤ４０Ｌで刺激した。３日目にＢ細胞増殖を定量化した。点線は非刺激細胞におけるＡＴＰレベルを表す。示されるデータはトリプリケートウェルの平均及びＳＤであり、２つの独立した実験を代表するものである。図３Ｄ及び図３Ｅは、非刺激のままにした場合（無し）、又はＩＬ−２１、抗ＩｇＭ及びｍｅｇａＣＤ４０Ｌで刺激した場合のヒトＢ細胞に対する抗ＣＤ４０Ｌ（ｍＡｂ又はＶＩＢ４９２０  Ｔｎ３）の効果を示す。７日目にＰＣの数を定量化した。図３Ｄは、７日目のＩｇＤ−ＣＤ３８ｈｉ  ＰＣの割合に対する７日目に示された分子の効果を具体的に示す。図３Ｅは、示された濃度での示された分子による７日目のＰＣの数に対する効果を示す。示されるデータはトリプリケートウェルの平均及びＳＤであり、２つの独立した実験を代表するものである。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、両側独立スチューデントｔ検定による。図３Ｆ及び図３Ｇは、予め形成された免疫複合体とインキュベートした洗浄ヒト血小板に対する抗ＣＤ４０Ｌ（ｍＡｂ又はＶＩＢ４９２０  Ｔｎ３）分子の効果を示すものであり、血小板凝集又はその欠如を１２〜１４分間測定した。図３Ｆは、凝集率を示す。ここで示されているのは、免疫複合体を添加する前に、血小板を抗ＣＤ３２ａ抗体と５分間プレインキュベートしたものである。凝集の陽性対照として、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）を使用した。図３Ｇは、示された濃度における、ＶＩＢ４９２０（Ｔｎ３）又は抗ＣＤ４０Ｌ  ｍＡｂ（５ｃ８）による免疫複合体と血小板をインキュベートした後の凝集率を提供するものである。データは２つの独立した実験を代表するものである。
【図４Ａ−４Ｂ】マウス代替ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３は免疫に応答し、インビボにおいて強力な中和活性を示す。図４Ａ及び図４Ｂの両方において、０日目にヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）によってマウスを免疫し、対照又は抗ＣＤ４０Ｌ  Ｔｎ３（Ｍ３１−ＭＳＡ）を９〜１３日目の間毎日投与した。図４Ａは、１４日目にフローサイトメトリーによって定量化された、脾臓及びリンパ節における胚中心Ｂ細胞の割合を提供するものである。点は個々の動物を示し、データは２つの独立した実験を代表するものである。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、両側独立スチューデントｔ検定による。図４Ｂは、１４日目に血清から定量化された、抗ヒツジ赤血球ＩｇＧの産生を提供するものである。データは、群当たり４匹の動物の平均及びＳＥＭを示す（ｎ＝１試験）。
【図５Ａ−５Ｂ】健康なボランティアにおけるＶＩＢ４９２０の安全性を評価するための、第１ａ相臨床試験の試験デザインである。図５Ａは、第１ａ相試験の試験コホートを示す。図５Ｂは、第１ａ相試験の投与及び免疫方式を提供するものである。
【図６Ａ−６Ｂ】健康なボランティアの第１ａ相試験において、ＶＩＢ４９２０は好ましいＰＫプロファイルを示した。図６Ａは、示された時点でＥＬＩＳＡによって測定された、ＶＩＢ４９２０の血中濃度を示す。点線は、アッセイの感度下限値を表す。エラーバーは平均値の標準偏差を表すが、Ｎ＝２被験者の群については算出しなかった。図６Ｂは、示された時点でのすべての用量コホートにおける、ＥＬＩＳＡによって評価された可溶性ＣＤ４０Ｌの濃度を示す。点線は、アッセイの検出下限値を表す。
【図７】ＶＩＢ４９２０により、健康なボランティアの第１ａ相試験において、高用量で抗薬物抗体（ＡＤＡ）が阻害される。ＥＬＩＳＡによってＡＤＡの存在を測定した。各コホート内のそれぞれの被験者は、個別の線で表されている。高いＡＤＡ（＞力価の中央値４８０）を有する被験者はマゼンタの線で示され、低いＡＤＡ（＜力価の中央値４８０）を有する被験者は紺青色の線によって示され、ＡＤＡが検出不可能な被験者は明るい青色で強調されている。
【図８Ａ−８Ｃ】ＶＩＢ４９２０により、健康なヒトボランティアにおいて用量依存的にＢ細胞増殖及びＴＤＡＲが阻害される。健康なボランティアを、プラセボ又はＶＩＢ４９２０による処置の１４日前にＫＬＨで免疫し、投与後１５日目に再チャレンジした。図８Ａは、健康なボランティアにおける抗ＫＬＨ  ＩｇＧ力価を、異なるＶＩＢ４９２０の用量で、複数の時点にわたって提供するものである。図８Ｂは、健康なボランティアにおける抗ＫＬＨ  ＩｇＭ力価を、異なるＶＩＢ４９２０の用量で、複数の時点にわたって提供するものである。ＩｇＧ及びＩｇＭ力価は、ＥＬＩＳＡによって測定した。図８Ｃは、４３日目における抗ＫＬＨ  ＩｇＧの阻害についての用量反応モデルである。
【図９Ａ−９Ｃ】ＶＩＢ４９２０により、健康なヒト被験者において、ＴＤＡＲの減少の際にＢ細胞増殖及び形質細胞反応が阻害される。図９Ａは、ＴＤＡＲ検証試験でプラセボ又は高用量のＶＩＢ４９２０のいずれかを受けたボランティアにおいて、様々な時点でフローサイトメトリーによって定量化された、血液循環中の増殖Ｂ細胞（Ｋｉ６７＋  ＣＤ１９＋）の検出された発現頻度を提供するものである。図９Ｂは、ＴＤＡＲ検証試験でプラセボ又は高用量のＶＩＢ４９２０のいずれかを受けたボランティアにおいて、様々な時点でフローサイトメトリーによって定量化された、血液循環中のクラススイッチされた記憶Ｂ細胞（Ｋｉ６７＋  ＣＤ１９＋  ＩｇＤ−ＣＤ２７＋）の検出された発現頻度を提供するものである。図９Ｃは、Ｔａｑｍａｎ  ＰＣＲによって評価された、全血中のＰＣシグネチャースコアを提供するものである。プラセボ及び高用量のＶＩＢ４９２０群の平均及び標準誤差の発現値を示す。プラセボと比較して＊＝Ｐ＜０．０５、＊＊＝Ｐ＜０．０１、マン・ホイットニーＵ検定による。
【図１０】ＲＡ患者においてＶＩＢ４９２０を評価するための第１ｂ相試験デザインである。矢印はＶＩＢ４９２０又はプラセボの投与を示している。
【図１１】ＶＩＢ４９２０第１ｂ相臨床試験のＲＡ患者の、コホートの人口統計学的及び臨床的特徴。
【図１２】ＶＩＢ４９２０による、ＲＡ患者における容認可能な安全性プロファイルを示す。ＲＡ被験者の第１ｂ相試験において、少なくとも２例の被験者で発生した最も多く見られるＴＥＡＥを示す。
【図１３Ａ−１３Ｃ】ＶＩＢ４９２０による、ＲＡ患者の第１ｂ相試験における線形ＰＫ、及びＡＤＡの用量依存的な減少を示す。図１３Ａは、示された時点でＥＬＩＳＡによって測定された、循環血液中のＶＩＢ４９２０の濃度を提供するものである。点線は、アッセイの感度下限値を表す。平均及び平均の標準誤差が示される。図１３Ｂは、試験中の任意の時点で投与された各投与量に対する、ＥＬＩＳＡによって測定された陽性ＡＤＡ力価を有する被験者の割合を提供するものである。図１３Ｃは、検出可能なＡＤＡを有する被験者における、ＥＬＩＳＡによって測定されたＡＤＡ力価を経時的に提供するものである。
【図１４Ａ−１４Ｆ】ＶＩＢ４９２０により、ＲＡ患者の疾患指数スコアと自己抗体とが減少する。図１４Ａは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからのＤＡＳ２８−ＣＲＰの変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図１４Ｂは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからのＣＤＡＩの変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図１４Ｃは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからの患者による全般評価の変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図１４Ｄは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからの医師による全般評価の変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図１４Ｅは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからのＶｅｃｔｒａ  ＤＡスコアの変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図１４Ｆは、それぞれ示された用量のＶＩＢ４９２０又はプラセボに対して、示された時点でＥＬＩＳＡによって測定された、ＲＦ抗体価の減少率の測定値を示す。
【図１５Ａ−１５Ｂ】ＶＩＢ４９２０により、ＲＡ患者のＤＡＳ２８−ＣＲＰスコア及びＲＦ自己抗体が用量依存的に減少する。図１５Ａは、プラセボと示されたＶＩＢ４９２０の用量との間の８５日目のＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアの差異を示す。線形用量反応が示されており、ＶＩＢ４９２０の用量と疾患活動性の減少との間の関係を評価するために最適なモデルとして同定された。図１５Ｂは、ＶＩＢ４９２０の示された用量における、プラセボと比較した８５日目のＲＦ自己抗体の減少率を示す。Ｅｍａｘモデルが示されており、ＲＦ力価に対するＶＩＢ４９２０の用量の関係を評価するために最適なものであると判断された。
【図１６】ＶＩＢ４９２０により、処置を受けたＲＡ患者のＤＡＳ２８カテゴリーが向上する。８５日目におけるＤＡＳ２８カテゴリーを示す。８５日目に、それぞれ１０００ｍｇ及び１５００ｍｇ群で処置したＲＡ患者の５０％及び７５％が低疾患活動性となったか、又は寛解した。
【図１７Ａ−１７Ｃ】ＲＡ被験者の第１ｂ相試験における圧痛／腫脹関節数、及びＣＲＰに対するＶＩＢ４９２０の影響。図１７Ａは、示された用量及び示された時点での、ＲＡ被験者の圧痛関節数のベースラインからの変化を示す。図１７Ｂは、示された用量及び示された時点での、ＲＡ被験者の腫脹関節数のベースラインからの変化を示す。図１７Ｃは、示された用量及び示された時点での、ＲＡ被験者のＣＲＰレベルのベースラインに対する比率の変化を示す。平均及び標準誤差をそれぞれ示す。
【図１８】ＶＩＢ４９２０分子のアミノ酸配列。
【図１９Ａ−１９Ｂ】クローン３４２  ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３分子のアミノ酸配列。
【図２０】二価クローン３４２  ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３分子のアミノ酸配列。
【図２１Ａ−２１Ｂ】クローン３０９  ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３分子のアミノ酸配列。
【図２２Ａ−２２Ｆ】ＶＩＢ４９２０により、１２週間のＶＩＢ４９２０の投与期間、及びＶＩＢ４９２０の用量を最後に投与した後の１２週間の観察期間の両方において、ＲＡ患者の疾患指数スコア及び自己抗体が減少する。図２２Ａは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからのＤＡＳ２８−ＣＲＰの変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図２２Ｂは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからのＣＤＡＩの変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図２２Ｃは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからの患者による全般評価の変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図２２Ｄは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからの医師による全般評価の変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図２２Ｅは、ＶＩＢ４９２０の特定の用量又はプラセボに対して、示された時点で評価された、ベースラインからのＶｅｃｔｒａ  ＤＡスコアの変化（平均及び標準誤差が示される）を示す。図２２Ｆは、それぞれ示された用量のＶＩＢ４９２０又はプラセボに対して、示された時点でＥＬＩＳＡによって測定された、ＲＦ抗体価の減少率の測定値を示す。
【図２３Ａ−２３Ｃ】ＶＩＢ４９２０により、ＲＡ患者の圧痛／腫脹関節数及びＣＲＰが影響を受ける。投与段階と投与後１２週間の観察期間との両方で、ＲＡ患者を対象とした第１ｂ相臨床試験においてＶＩＢ４９２０の影響を検出することができた。図２３Ａは、示された用量及び示された時点での、ＲＡ被験者の圧痛関節数のベースラインからの変化を示す。図２３Ｂは、示された用量及び示された時点での、ＲＡ被験者の腫脹関節数のベースラインからの変化を示す。図２３Ｃは、示された用量及び示された時点での、ＲＡ被験者のＣＲＰレベルのベースラインに対する比率の変化を示す。平均及び標準誤差をそれぞれ示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
Ｂ細胞性免疫応答を抑制する方法、自己免疫疾患又は障害を治療するための方法、炎症を減少させる方法、患者の自己抗体を減少させるための方法、患者のＲＡ疾患活動性の指標を減少させる方法、患者のＲＦ自己抗体を減少させる方法、患者の形質細胞の遺伝子シグネチャースコアを減少させる方法、及び患者において補充療法に対する免疫寛容を誘導する方法における、ＶＩＢ４９２０及びその有用性が本明細書に記載される。
【００１９】
ＶＩＢ４９２０が自己免疫疾患又は障害を治療するために使用される場合、ＶＩＢ４９２０は、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎及び精巣炎、シェーグレン症候群、乾癬、アテローム性動脈硬化、糖尿病網膜症及び他の網膜症、後水晶体線維増殖症、加齢黄斑変性、血管新生緑内障、血管腫、甲状腺過形成（グレーブス病を含む）、角膜及び他の組織移植、及び慢性炎症、敗血症、関節リウマチ、腹膜炎、クローン病、再灌流傷害、敗血症、内毒素ショック、嚢胞性線維症、心内膜炎、乾癬、関節炎（例えば、乾癬性関節炎）、アナフィラキシーショック、臓器虚血、再灌流傷害、脊髄損傷及び同種移植片拒絶反応、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫性機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、チャーグストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、クローン病、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー、移植片対宿主病、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、ＩｇＧ４介在性疾患、多発性硬化症、１型又は免疫介在性糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎及び皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、ＡＮＣＡ関連血管炎、疱疹状皮膚炎血管炎などの他の血管炎、白斑、固形臓器移植の拒絶反応、移植片対宿主病、腎移植レシピエントにおけるパネル反応性抗体の脱感作、膵島細胞移植及び同種造血幹細胞移植、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糸球体腎炎を治療するために使用してもよい。
【００２０】
ＶＩＢ４９２０は、より詳しくは、ＲＡ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、筋炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性肝炎、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、ループス腎炎、炎症性筋疾患、特発性血小板減少症紫斑病（ＩＴＰ）、全身性硬化症、血管炎、皮膚ループス、自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症、ＩｇＧ４関連疾患、又はシェーグレン症候群を治療するために使用してもよい。更に、ＶＩＢ４９２０は、移植片対宿主病を治療する、及び／又は器官若しくは組織移植の拒絶反応を減少若しくは防止するために使用することができる。
【００２１】
自己免疫疾患又は障害の治療とは、Ｂ細胞又はＴ細胞性免疫応答を抑制するという形態であってもよく、これは、クラススイッチされた抗体を減少させること、循環Ｂ細胞サブセットを減少させること、血漿活性を減少させること、又は形質細胞及び形質細胞遺伝子シグネチャーを減少させることであってよい。自己免疫疾患又は障害の治療とは、炎症マーカーを減少させることであってもよい。炎症マーカーは、自己抗体レベル、形質細胞（ＰＣ）又はＰＣ遺伝子シグネチャー（遺伝子ＩＧＨＡ１、ＩＧＪ、ＩＧＫＣ、ＩＧＫＶ４−１及びＴＮＦＲＳＦ１７の発現を特徴とするシグネチャー）、循環Ｂ細胞サブセット及びクラススイッチされた抗体のうちの１つ以上であってもよい。自己免疫疾患又は障害の治療とは、患者又は医師による全般評価によって測定されるような臨床徴候及び症状を減少させることであってもよい。臨床徴候及び症状としては、関節炎、疼痛、疲労、発熱、倦怠感、発疹、脱力感、又はタンパク尿若しくは腎臓機能の喪失などの臓器不全の徴候のうちの１つ以上を挙げることができる。
【００２２】
方法が、自己免疫性障害の治療中の患者の自己抗体を減少させるものである場合、自己抗体は、例えば、ＳＬＥ、シェーグレン症候群、炎症性筋疾患、又は全身性硬化症の治療中の患者の抗核抗体であってよい。抗核抗体は、抗ＳＳＡ／Ｒｏ自己抗体又は抗ＳＳＢ−Ｌａ自己抗体（ＳＬＥ又はシェーグレン症候群）、抗ｄｓＤＮＡ抗体（ＳＬＥ）、抗スミス抗体（ＳＬＥ）、抗トポイソメラーゼ抗体（全身性硬化症）、又は抗ヒストン抗体（ＳＬＥ）のうちの１つ以上であってもよい。方法が、自己免疫性障害を治療中の患者の自己抗体を減少させるものである場合、自己抗体は、例えば、自己免疫性肝炎を治療中の患者の肝腎ミクロソーム１型抗体であってよい。方法が、自己免疫性障害を治療中の患者の自己抗体を減少させるものである場合、自己抗体は、例えば、重症筋無力症を治療中の患者の抗ニコチン性アセチルコリン受容体抗体、又は抗筋特異的キナーゼ抗体であってよい。方法が移植手術の治療中の患者の抗体を減少させるものである場合、抗体はアロ抗体であってよい。
【００２３】
自己免疫性障害を治療中の患者の自己抗体を減少させることとは、ＶＩＢ４９２０の投与前より少なくとも２０％少ないレベルまで自己抗体の割合を減少させることであってもよい。このことは、ＶＩＢ４９２０による治療前の自己抗体のレベルと比較して、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、又は少なくとも８０％のレベルまで自己抗体の割合を減少させることであってよい。自己抗体の減少は、ＶＩＢ４９２０の投与開始から１ヵ月〜３ヵ月以内に達成され得る。
【００２４】
自己免疫疾患又は障害がＲＡである場合、関節リウマチの治療とは、ＲＦ自己抗体、抗シトルリン化ペプチド抗体、Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡバイオマーカースコア（インターロイキン−６、腫瘍壊死因子受容体Ｉ型、血管細胞接着分子１、上皮細胞成長因子、血管内皮増殖因子Ａ、ＹＫＬ−４０、マトリックスメタロプロテアーゼ１、ＭＭＰ−３、ＣＲＰ、血清アミロイドＡ、レプチン、及びレジスチンの発現レベルの総合スコアであるＶｅｃｔｒａ  ＤＡバイオマーカースコア）、形質細胞（ＰＣ）シグネチャー、血清反応性Ｃタンパク質（ＣＲＰ）、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ、若しくは臨床疾患活動性指標（ＣＤＡＩ）の１つ以上を減少させることであってよく、又は圧痛関節数、腫脹関節の激しさ、腫脹関節数、若しくは腫脹関節の激しさを減少させることであってもよい。自己免疫疾患又は障害がＲＡである場合、治療とは、ＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０又はＡＣＲ７０を達成することであってもよい。
【００２５】
自己免疫疾患又は障害の治療とは、ＶＩＢ４９２０による治療前のレベルと比較して、疾患若しくは障害の臨床症状を少なくとも２０％減少させること、又は炎症を減少させること、又は疾患若しくは障害のバイオマーカーを減少させることを特徴とするものであってよい。これらの症状、又は炎症、又はバイオマーカーのいずれかの減少とは、ＶＩＢ４９２０による治療を開始する前のレベルと比較して、少なくとも５０％の症状又は炎症又はバイオマーカーを減少させることであってよい。減少とは、自己免疫疾患又は障害が寛解期にあることを特徴とするようなものであってよい。
【００２６】
更に、自己免疫疾患又は障害が関節リウマチである場合、自己免疫疾患又は障害を治療することとは、ＶＩＢ４９２０による治療前のＲＦ自己抗体レベルと比較して、患者のＲＦ自己抗体を、約少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、又は少なくとも８０％のレベルまで減少させることであってよい。自己免疫疾患又は障害が関節リウマチである場合、自己免疫疾患又は障害を治療することとは、ＤＡＳ２８−ＣＲＰを減少させることであってよく、ＤＡＳ２８−ＣＲＰを減少させることとは、少なくとも−１．２、又は少なくとも−１．５、又は少なくとも−２．０又は少なくとも−２．２の調整済み平均差があるようなものであってよい。加えて、自己免疫疾患又は障害が関節リウマチである場合、自己免疫疾患又は障害を治療することとは、Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡバイオマーカースコアを減少させることであってよく、この減少とは、調整済み平均差が少なくとも−１０．３、又は少なくとも−１０．５、又は少なくとも−１０．８となることであってよい。
【００２７】
炎症を減少させる方法においてＶＩＢ４９２０が使用される場合、炎症とは、炎症性疾患若しくは障害の結果として生じるものであってよく、又は、器官若しくは組織移植処置に起因するような損傷に起因するものであっても、若しくはそのような損傷を予期したものであってもよい。炎症性疾患又は障害の炎症を減少させる方法においてＶＩＢ４９２０が使用される場合、炎症性疾患又は障害とは、炎症性筋疾患、又はループス腎炎、皮膚ループス、ＲＡ、ＳＬＥ、ＩＴＰ、筋炎、シェーグレン症候群、血管炎、全身性硬化症、自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症又は巣状分節性糸球体硬化症であってよい。炎症を減少させる方法においてＶＩＢ４９２０が使用される場合、炎症とは、器官若しくは組織移植処置に起因するような損傷に起因するものであっても、又はそのような損傷を予期したものであってもよい。
【００２８】
患者において補充療法に対する免疫寛容を誘導する方法にＶＩＢ４９２０が使用される場合、ＶＩＢ４９２０は、患者の補充療法に対する中和抗体の産生を減少させることによって、免疫寛容を誘導することができる。患者が補充療法に未感作である場合、又はそうでなければ、まだ補充療法に対する中和抗体を産生していない場合、まず最初に、免疫寛容を誘導することによって、患者が補充療法に対する中和抗体を産生することを阻止することができる。しかしながら、患者が補充療法に対する中和抗体を産生する場合、ＶＩＢ４９２０は、患者によって産生された補充療法に対する中和抗体のレベルを減少させることによって、免疫寛容を誘導することができる。補充療法に対して産生される患者の中和抗体のレベルは、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は検出不可能なレベルまで低下させることができる。患者の補充療法に対する中和抗体の産生レベルの減少率は、初回のＶＩＢ４９２０の用量の投与前に補充療法に応答して産生された中和抗体の第１のレベルを、初回又は２回目又は３回目又は４回目又は５回目のＶＩＢ４９２０の用量を投与した後の補充療法に応答して産生された中和抗体の第２のレベルと比較したものであってよく、又はこれらを比較することにより決定してもよい。或いは、患者の補充療法に対する中和抗体の産生レベルの減少率は、初回のＶＩＢ４９２０の用量の投与前に補充療法に応答して産生されたピークの中和抗体レベルを、初回又は２回目又は３回目又は４回目又は５回目のＶＩＢ４９２０用量を投与した後の補充療法に応答して産生されたピークの中和抗体レベルと比較したものであってよく、又はこれらを比較することにより決定してもよい。
【００２９】
或いは、又は更に、患者において補充療法に対する免疫寛容を誘導することとは、補充療法に対するＴ細胞応答を減少させることであってよい。患者が補充療法に未感作である場合、又は補充療法を受けたが、まだ補充療法に対するＴ細胞性免疫応答がない場合、ＶＩＢ４９２０は、補充療法に対する初期のＴ細胞応答の形成を阻止することによって、患者のＴ細胞応答を減少させることができる。しかしながら、患者が補充療法に対する既存のＴ細胞応答を有する場合、ＶＩＢ４９２０は、補充療法に対する既存のＴ細胞応答を減少させることによって、免疫寛容を誘導することができる。補充療法に対するＴ細胞応答は、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は検出不可能なレベルまで低下させることができる。患者の補充療法に対するＴ細胞応答の減少率は、初回のＶＩＢ４９２０の用量の投与前の補充療法に対するＴ細胞応答の第１のレベルを、初回又は２回目又は３回目又は４回目又は５回目のＶＩＢ４９２０の用量を投与した後の補充療法に対するＴ細胞応答の第２のレベルと比較したものであってよく、又はこれらを比較することにより決定してもよい。或いは、患者の補充療法に対するＴ細胞応答の減少率は、初回のＶＩＢ４９２０の用量の投与前の補充療法に対するピークのＴ細胞応答レベルを、初回又は２回目又は３回目又は４回目又は５回目のＶＩＢ４９２０の用量を投与した後の補充療法に対するピークのＴ細胞応答レベルと比較したものであってよく、又はこれらを比較することにより決定してもよい。Ｔ細胞応答の減少とは、補充療法によって刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞の増殖の減少、及び／又は刺激の減少を特徴とするものであってよい。また、Ｔ細胞応答の減少とは、補充療法に対するＣＤ４依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の減少を特徴とするものであってよい。
【００３０】
免疫寛容が誘導される補充療法は、ペプチド又はタンパク質補充療法であってもよい。補充療法がペプチド又はタンパク質療法である場合、第ＶＩＩＩ因子又は第ＩＸ因子療法であってよく、血友病に罹患している患者を治療するために投与してもよい。補充療法がペプチド又はタンパク質療法である場合、酵素補充療法（ＥＲＴ）であってよい。補充療法がＥＲＴである場合、補充療法とはアガルシダーゼアルファ又はアガルシダーゼベータであってよく、これによってα−ガラクトシダーゼＡを置換することが可能であり、ファブリー病を罹患している患者を治療することができる。補充療法がＥＲＴである場合、補充療法とはイアロニダーゼであってよく、これによってα−Ｌ−イズロニダーゼを置換することが可能であり、ムコ多糖症（ＭＰＳ）１型（その重症度に応じてハーラー症候群、ハーラー−シャイエ症候群又はシャイエ症候群として知られている）を罹患している患者を治療することができる。補充療法がＥＲＴである場合、補充療法とはアルグルコシダーゼであってよく、これによってα−グルコシダーゼを置換することが可能であり、ポンぺ病を罹患している患者を治療することができる。補充療法がＥＲＴである場合、補充療法とはイデュルスルファーゼであってよく、これによってイズロン酸−２−スルファターゼを置換することが可能であり、ＭＰＳ  ＩＩ型を罹患している患者を治療することができる。補充療法がＥＲＴである場合、補充療法とはイミグルセラーゼ又はベラグルセラーゼアルファ又はタリグルセラーゼアルファであってよく、これによってβ−グルコセレブロシダーゼを置換することが可能であり、ゴーシェ病を罹患している患者を治療することができる。補充療法がＥＲＴである場合、補充療法とはナグラザイム  アリルスルファターゼＢであってよく、これによってＮ−アセチルガラクトサミン−４−スルファターゼを置換することが可能であり、ＭＰＳ  ＶＩ型を罹患している患者を治療することができる。ペプチド又はタンパク質補充療法がペプチド又はタンパク質である場合、免疫寛容誘導により、このペプチド又はタンパク質に対する中和抗体の産生を減少させることができるか、及び／又は患者によるペプチド又はタンパク質に対するＴ細胞応答を減少させることができる。
【００３１】
更に、免疫寛容が誘導される補充療法は、治療用ペプチド又はタンパク質をコードする核酸を含むウイルスベクターであってよい。補充療法が治療用ペプチド又はタンパク質をコードする核酸を含むウイルスベクターである場合、ウイルスベクターは、アデノウィルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ポックスウイルス、アルファウイルス、単純ヘルペスウイルスベクター、又は治療用ペプチド若しくはタンパク質をコードする核酸を患者の細胞に送達することが可能なその他のウイルスベクターであってもよい。ウイルスベクターは、例えば、シュードタイプ化することによって、及び／又はその野生型遺伝子を欠失させるように、及び／又は治療用ペプチド若しくはタンパク質をコードする核酸を含むように改質してもよい。
【００３２】
ウイルスベクターの核酸によってコードされる治療用ペプチド又はタンパク質は、第ＶＩＩＩ因子若しくは第ＩＸ因子の治療用ペプチド若しくはタンパク質であってよく、又はアガルシダーゼアルファ、アガルシダーゼベータ、イデュルスルファーゼ、イアロニダーゼ、アルグルコシダーゼアルファ、イミグルセラーゼ、ベラグルセラーゼアルファ、タリグルセラーゼアルファ、若しくはナグラザイム  アリルスルファターゼＢなどのＥＲＴであってもよい。
【００３３】
更に、補充療法が治療用ペプチド又はタンパク質をコードする核酸を含むウイルスベクターである場合、ＶＩＢ４９２０は、ウイルスベクターに対する免疫応答を減少させることによって、又はウイルスベクターによってコードされる治療用ペプチド又はタンパク質に対する免疫応答を減少させることによって、又はその両方によって、免疫寛容を誘導することができる。ＶＩＢ４９２０は、ベクター自体、又はウイルスベクターに感染した細胞のいずれかのウイルスベクターに対する中和抗体及び／又はＴ細胞応答を減少させることによって、ウイルスベクターに対する免疫寛容を誘導することができる。加えて、又はその代わりに、ＶＩＢ４９２０は、ウイルスベクターの核酸によってコードされる治療用ペプチド又はタンパク質に対する中和抗体又はＴ細胞応答を減少させることによって、ウイルスベクターからなる補充療法に対する免疫寛容を誘導することができる。
【００３４】
各種方法において使用されるＶＩＢ４９２０は、図１８に示されるようなアミノ酸配列を含み得る。ＶＩＢ４９２０は、図１８に示されるようなアミノ酸配列を有してもよいか、又は、図１８に示されるようなアミノ酸配列に対して、１つ以上のアミノ酸残基の改変を有してもよい。ＶＩＢ４９２０が図１８に示されるようなアミノ酸配列に対してアミノ酸配列の改変を有する場合、改変は、リンカーのうちの１つに対するものであってもよい。ＶＩＢ４９２０は、２つのＣＤ４０Ｌ特異的モノマーを隔てているＧｌｙ１５リンカーと、ＨＳＡ配列からＣＤ４０Ｌ特異的モノマーを隔てているＧｌｙ１０リンカーを含んでいる。これらのリンカーの両方又は一方を変化させてもよく、アミノ酸配列（ＧｍＸ）ｎ［式中、Ｘはセリン（Ｓ）、アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）又はバリン（Ｖ）であり、ｍ及びｎは整数値であり、ｍは１、２、３又は４であり、並びにｎは１、２、３、４、５、６又は７である］と置換してもよい。例えば、一方又は両方のリンカーを、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ、ＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧ又はＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧのうちの１つを含むアミノ酸配列を有するように変化させてもよい。ＶＩＢ４９２０が図１８に示されるようなアミノ酸配列に関連するアミノ酸配列を有する場合、２つのＣＤ４０Ｌ特異的モノマーに融合したＨＳＡのアミノ酸配列の改変又は改変によるものであってよい。２つのＣＤ４０Ｌ特異的モノマーに融合したＨＳＡを、少なくとも１つのアミノ酸置換を除き、全長成熟ＨＳＡの位置に対して番号が付けられた、４０７、４１５、４６３、５００、５０６、５０８、５０９、５１１、５１２、５１５、５１６、５２１、５２３、５２４、５２６、５３５、５５０、５５７、５７３、５７４、及び５８０からなる群から選択される位置で、２つのＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３モノマーに融合したＨＳＡに対して変化させてもよいが、ここで、少なくとも１つのアミノ酸置換とは、５７３位におけるリジン（Ｋ）のグルタミン酸（Ｅ）への置換を含まない。ＶＩＢ４９２０が図１８に示されるアミノ酸配列に対してアミノ酸配列の改変を有する場合、改変は、インビボでのＶＩＢ４９２０の有効性に悪影響を与えない限りにおいて、一方又は両方のＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３モノマーのアミノ酸配列に対するものであってよく、例えば、一方又は両方のＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３モノマーが、図１９Ａに示されるようなアミノ酸配列を有するようなアミノ酸配列の改変であってよい。
【００３５】
本方法において投与されるＶＩＢ４９２０の用量は、約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇの用量であってよい。用量は、約７５０ｍｇ〜約３０００ｍｇ、又は約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、又は約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、又は約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、又は約７５０ｍｇ〜約２０００ｍｇ、又は約１０００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、又は約１０００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、又は約１０００ｍｇ〜約１５００ｍｇであってよい。用量は、５００ｍｇ、７５０ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１２５０ｍｇ、１５００ｍｇ、１７５０ｍｇ、２０００ｍｇ、２２５０ｍｇ、２５００ｍｇ、又は３０００ｍｇであってよい。
【００３６】
ＶＩＢ４９２０の用量を、およそ隔週で投与してもよく、又は１ヵ月につき２回投与してもよい。また、ＶＩＢ４９２０の用量を、およそ毎週、又はおよそ１ヵ月に１回投与してもよい。ＶＩＢ４９２０の用量を、７日毎、１０日毎、１４日毎、１５日毎、１６日毎、１４〜１０日毎、１４〜１６日毎、又は３０日毎に投与してもよい。ＶＩＢ４９２０の用量を、静脈注射又は皮下注射によって投与してもよい。
【００３７】
投与されるＶＩＢ４９２０の用量が１０００ｍｇ、１５００ｍｇ、又は約１０００ｍｇ〜約１５００ｍｇのうちの１つである場合、用量を隔週で投与してもよいか、又は１ヵ月につき２回投与してもよい。ＶＩＢ４９２０の用量が３０００ｍｇである場合、ＶＩＢ４９２０の用量を、１ヵ月につき１回投与してもよい。ＶＩＢ４９２０の用量が５００ｍｇ又は７５０ｍｇである場合、ＶＩＢ４９２０の用量を、隔週で１回投与してもよく、又は代わりに１ヵ月につき２回投与してもよい。これらの用量のいずれかを静脈内投与してもよい。
【００３８】
ＶＩＢ４９２０の用量及び投与計画は、任意の自己免疫性／炎症性疾患又は障害を治療するために、ＶＩＢ４９２０を投与することにより達成される任意の治療効果、例えば、自己抗体の減少、Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡスコアの減少、形質細胞シグネチャーの減少、ＣＲＰの減少、ＤＡＳ２８−ＣＲＰの減少、腫脹関節数の減少、圧痛関節数の減少、ＣＤＡＩの減少、患者による全般評価の向上、医師による全般評価の向上、ＡＣＲ２０の達成、ＡＣＲ５０の達成、又はＡＣＲ７０の達成を、「長期間持続する」と見なすことができるようなものであってよい。自己免疫性／炎症性疾患又は障害の治療におけるＶＩＢ４９２０の「長期間持続する」効果とは、ＶＩＢ４９２０によって達成される治療効果が、ＶＩＢ４９２０の１コースの用量を最後に投与した後、（ＶＩＢ４９２０がもはや投与されないにもかかわらず）少なくとも４週、少なくとも６週、少なくとも８週、少なくとも１０週、少なくとも１２週、少なくとも１６週、少なくとも２０週、又は少なくとも２４週にわたって維持されるものである。ＶＩＢ４９２０のコースは、７〜３１日毎（例えば、７日毎、１０日毎、１４日毎、１５日毎、１６日毎、１４〜１０日毎、１４〜１６日毎、又は３０日毎）に１回の投与間隔で、約８週〜２４週（例えば、８週、又は１０週、又は１２週、又は１４週、又は１６週、又は１８週、又は２０週、又は２２週、又は２４週、又は２ヵ月、又は４ヵ月、又は６ヵ月）の期間にわたって、５００ｍｇ〜３０００ｍｇ（例えば、５００ｍｇ、７５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１２５０ｍｇｍ、１５００ｍｇ、１７５０ｍｇ、２０００ｍｇ、２２５０ｍｇ、２５００ｍｇ、２７５０ｍｇ、又は３０００ｍｇ）のＶＩＢ４９２０の用量を投与することであってよい。
【００３９】
当業者であれば、通常の実験を行うだけで、本明細書に記載される特定の実施形態との多数の等価物を認識し、又は確認することができよう。このような等価物は下記の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
【００４０】
本明細書に言及されるすべての出版物、特許及び特許出願が、それぞれの個々の出版物、特許又は特許出願が具体的且つ個々に参照により本明細書に組み込まれると指示されたかのように同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【００４１】
実施例１−ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質の単離及び最適化
Ｔｎ３は約９０アミノ酸の長さの小さなタンパク質の足場であって、ランダム化して特異的な結合特性を選択することができる抗体の相補性決定領域に構造的に類似したループを含む、免疫グロブリン様の折り畳みを備えている（２４）。
【００４２】
国際公開第２０１３／０５５７４５号パンフレットにおいて詳細に記載されているように、ヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３クローンが単離された（２４、２７、５０も参照のこと）。手短に言えば、ヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３の選択は、組換えヒトＣＤ４０Ｌタンパク質及びヒトＣＤ４０Ｌ発現ＣＨＯ細胞株の選択を交互に行う５ラウンドのパニングを含むものであった。組換えマウスＣＤ４０Ｌタンパク質のみを使用して、マウスＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質を選択した。選択されたアウトプットからのＴｎ３遺伝子を発現ベクターにプールクローニングし、個々のＨｉｓタグ付きバリアントを、抗Ｈｉｓ抗体でコートされたＭａｘｉｓｏｒｐプレート（ＰＢＳ中２μｇ／ｍｌ）に捕捉することによってＣＤ４０Ｌ結合について評価した。ビオチン化ＭｅｇａＣＤ４０Ｌ（Ｅｎｚｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、０．５μｇ／ｍＬ）を添加し、１．５時間インキュベートした。ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで一回洗浄した後に、ＳＡ−ＨＲＰ（１：１０００希釈）を使用して、捕捉されたＴｎ３バリアントとＣＤ４０Ｌとの間の相互作用をモニターした。２０分後、プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで２回洗浄してＴＭＢ基質によって現像し、２．５ＭのＨ３ＰＯ４によって停止させた。吸光度は４５０ｎｍにて測定した。ＣＤＲ様ループがランダムに変異した、ファージディスプレイされたライブラリから、改良された候補を選択することによって、ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質の親和性成熟を行った（２４）。この方式により、ヒトＣＤ４０Ｌ特異的３０９（図２１Ａ）の改良されたバリアントであるクローン３４２（図１９）、及びマウスＣＤ４０Ｌ特異的Ｍ１３の改良されたバリアントであるクローンＭ３１が結果として生成された。更なるヒトＣＤ４０Ｌ−Ｔｎ３クローン、例えば、クローン３０４、３１１、３２０、３１０、３２１及び３２２も調製した。参考として本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１３／０５５７４５号パンフレットを参照されたい。
【００４３】
このヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３クローンのセットを、ＣＤ４０Ｌがその受容体（ＣＤ４０）に結合するのを生化学的に阻害するその能力について特性決定した。このセットの７つすべてでＣＤ４０ＬのＣＤ４０への結合が阻害され、ＩＣ５０値は１μＭ未満であった（図１Ａ）。生化学的なＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０阻害アッセイにおける２つの最も強力な阻害剤を、セルベースのレポーターアッセイにおいて、ＣＤ４０Ｌ媒介シグナル伝達の阻害について更に評価した。ヒトＣＤ４０及びＮＦ−ｋＢ−ルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現するＨＥＫ−２９３細胞を、組換えヒトＣＤ４０Ｌタンパク質で刺激した。ヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質３０９及び３１１は、ＣＤ４０Ｌに誘導されたＮＦ−ｋＢレポーター遺伝子の発現をマイクロモル濃度で用量依存的に阻害し（図１Ｂ）、これらのタンパク質のＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌシグナル伝達を機能的に阻害する能力を際立たせた。
【００４４】
二価抗体の場合に生じるように、複数の標的に同時に結合することは、著しく増大されたアビディティーをもたらし得る。ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質の効力に対する二価性の影響を調査するために、同一のＴｎ３モジュール（３０９−３０９、例えば、図２１Ｂ）の２つのコピーを、スペーサーを含むフレキシブルＧｌｙ４Ｓｅｒを介して連結し、タンデム二価融合タンパク質を形成した。ヒト一次Ｂ細胞は、ＣＤ４０による刺激に応答して活性化マーカーＣＤ８６の発現を上昇させる。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を一価ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３  ３０９とプレインキュベートすると、ヒトＣＤ１９＋Ｂ細胞上のＣＤ８６の発現上昇が用量依存的な様式で阻害された（図１Ｃ）。際立ったことに、二価構築物を使用した初代細胞アッセイでは、一価のＴｎ３と比較して、ほぼ１０００倍の効力の向上が見られた（図１Ｃ）。加えて、クローン３４２をもたらす、クローン３０９の（可変ＣＤＲ様ループ領域におけるランダム突然変異誘発による）親和性成熟により、ＣＤ４０Ｌに対する結合親和性が著しく向上し（３０９：１９０ｎＭ、３４２：１．４ｎＭ）、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用の阻害における効力が約３００倍向上したことが証明された（図１Ｄ）。また、親和性成熟したクローン３４２を、Ｆａｓ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ及びＯＸ４０Ｌを含む関連ＴＮＦファミリーメンバーのパネルへの結合についてスクリーニングして、ＣＤ４０Ｌが選択的に結合することを見出した。図１Ｅを参照されたい。
【００４５】
最終的に、他の代替的な足場技術と同様に、裸のＴｎ３分子は、それらのサイズが小さいため、全身投与されたときに血液循環からの非常に迅速なクリアランスを示すことが予期される。このタンパク質の薬動動態特性を向上させるため、ＣＤ４０特異的Ｔｎ３タンパク質を血清アルブミンに融合させた（２８、２９）。二価マウス代替ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質であるＭ１３−Ｍ１３は、マウスにおいて全身送達される際に＜３０分の半減期を有していた。マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）をＭ１３−Ｍ１３  Ｔｎ３タンパク質に融合させることにより、血清半減期が６５倍増加し、クリアランスが３４５倍減少する結果となった（表１）。
【００４６】
【表１】
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【００４７】
５〜７週齢ＣＤ−１マウスに、ＭＳＡと共に、又はそれ無しで、二価ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３分子を単回注射した（ｎ＝１２／群、１０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．）。１５分〜７２時間の様々な時点でｎ＝３マウス／群から血液を採取し、ＥＬＩＳＡによってＴｎ３タンパク質の血中濃度を測定した。
【００４８】
これらの観察結果に基づいて、二価ヒトＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３分子であるＶＩＢ４９２０は、効力を最適化するためにタンデム３４２  ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質から構成され、半減期を改善するためにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に融合される（図１Ｆ、図１８）。
【００４９】
ＣＤ４０ＬとＶＩＢ４９２０との間の相互作用における分子的性状をより良く理解するために、結晶学調査を行った。ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３（３４２）及び可溶性ＣＤ４０Ｌタンパク質を発現させ、精製して共結晶化し、この構造体を２．８Åの解像度で測定した。Ｔｎ３と複合体化した三量体可溶性ＣＤ４０Ｌの分子構造を図２Ａに示す。ＣＤ４０Ｌとの界面は、分子間（３．５Åの距離内、図２Ｂ）で形成される１０個の水素結合のうちの８個を含む、Ｔｎ３の第２の修飾されたループに由来するアミノ酸から主に構成されている。分子の初期特性評価では、３４２  Ｔｎ３がＣＤ４０ＬとＣＤ４０との間の相互作用を遮断することが可能であることを示していた。その作用の詳細を視覚化するために、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ複合体の構造を、３４２／ＣＤ４０Ｌのそれと重ね合わせた（図１Ｇ）。重ね合わせることにより、３４２及びＣＤ４０は、ＣＤ４０Ｌ上に共通した結合部位を共有していることが分かる。従って、ＶＩＢ４９２０はＣＤ４０と競合して、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの会合を阻止する。
【００５０】
実施例２−ＶＩＢ４９２０はヒトＢ細胞の活性化及び分化を遮断する
ＣＤ４０シグナル伝達は、広範囲に特性決定され、様々な異なる経路及びＮＦ−ｋＢを含む転写因子の活性化に関与しており（３０）、これによりＢ細胞の活性化、増殖及び分化を促進することができる（３１）。従って、ヒトＣＤ４０及びＮＦ−ｋＢルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現する細胞株を使用して、ＮＦ−ｋＢのＣＤ４０Ｌ媒介性活性化を阻害するＶＩＢ４９２０の能力を調査した。この細胞株を組換えヒトＣＤ４０Ｌ又はＣＤ４０Ｌ発現細胞で刺激することによって、ＮＦ−ｋＢの活性化が誘導される。ＮＦ−ｋＢの活性化の用量依存的な阻害によって明示されるように（ＩＣ５０：０．８９９ｎＭ、図３Ａ）、ＶＩＢ４９２０は、この細胞株を使用したＣＤ４０シグナル伝達を強力に遮断することができた。
【００５１】
休止Ｂ細胞は、低レベルの共刺激分子ＣＤ８６を恒常的に発現しており、このＣＤ８６は、ＣＤ４０による活性化を含む活性化の後に迅速に発現上昇する（３２）。初代ヒトＰＢＭＣを組換えヒトＣＤ４０Ｌで刺激し、１６時間後にフローサイトメトリーによってＢ細胞上のＣＤ８６の発現を評価した。ＶＩＢ４９２０は、一次ヒトＢ細胞によるＣＤ８６のＣＤ４０Ｌ媒介性の発現上昇を完全に阻止した（図３Ｂ）。
【００５２】
実施例３−ＶＩＢ４９２０はインビトロで血小板凝集を誘導しない
抗ＣＤ４０Ｌ指向ｍＡｂは、安全性上の懸念のため、主に血小板の細胞表面上でのＣＤ４０Ｌの架橋に関連する血栓塞栓性の合併症のために臨床試験に失敗してきた。Ｆｃドメインが欠如したＶＩＢ４９２０では血小板凝集を誘導しないことを確認するために、本発明者らは、洗浄ヒト血小板に対するその影響をインビトロで評価した。前述したように、抗ＣＤ４０Ｌ  ｍＡｂ（ヒトＩｇＧ１）は、ｓＣＤ４０Ｌと予め複合化したときに、血小板凝集を誘導する著しい能力を示した（図３Ｆ）。反応は迅速であり、ｍＡｂ−ｓＣＤ４０Ｌ免疫複合体は、血小板の８０％を８分以内に凝集するように誘導した。重要なことに、ＦｃγＲＩＩａを遮断する抗体（ｍＡｂ  ＩＶ．３）と血小板をプレインキュベートすることによってｍＡｂ−免疫複合体媒介性の凝集が阻止されるが、このことは、この反応におけるＦｃ受容体の必要不可欠な役割と一致する（図３Ｆ）。対照的に、試験されたいくつかの濃度では、ＶＩＢ４９２０はこのアッセイにおいて血小板凝集を誘導する傾向を示さなかった（図３Ｇ）。これらのデータは、Ｔｎ３構築物にＦｃ領域がないことにより、臨床時に治療用抗ＣＤ４０Ｌ抗体で観察された血小板凝集及び血栓塞栓性事象のリスクを減少させることができたということを示唆している。この結果を確認して、最高３００ｍｇ／ｋｇのＶＩＢ４９２０を投与された非ヒト霊長類における慢性（７ヵ月）試験からのデータ（図示せず）では、血小板機能の有害な所見は確認されず、例えば、Ｄ−ダイマー検査（血栓についてモニターする）、ＰＦＡ１００検査（血小板機能を評価する）、又はＴＡＴ複合体（トロンビン・アンチトロンビン複合体）検査において有害な所見は確認されなかった。
【００５３】
実施例４−ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３タンパク質はインビボで免疫応答を調節する
Ｔ依存性免疫応答を促進する際のＣＤ４０Ｌの中心的役割は、十分特性決定されている（９、３５）。従って、Ｔ依存性免疫モデルを使用して、インビボにおいて体液性免疫応答を遮断するＴｎ３−ＭＳＡ融合タンパク質の能力を評価した。ヒトＣＤ４０ＬとマウスＣＤ４０Ｌとの間の配列相同性が不十分であるため、これらの調査にＣＤ４０Ｌ特異的マウス代替Ｔｎ３であるＭ３１を使用した。
【００５４】
Ｔｎ３−ＭＳＡ融合タンパクがインビボで免疫応答を遮断することができるかどうかを検証するために、マウスにヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）を接種し、次いで接種後９〜１３日目に抗ＣＤ４０Ｌ  Ｔｎ３タンパク質で毎日処置した。フローサイトメトリーにより脾臓及びリンパ節の胚中心Ｂ細胞を定量化することによって、処置された動物の免疫応答を１４日目に評価した。予想通り、対照処置マウスのＳＲＢＣによる免疫により、胚中心の発現頻度の顕著な増殖がもたらされた（図４Ａ）。ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３−ＭＳＡ融合タンパクで処置したマウスでは、胚中心Ｂ細胞の発現頻度が用量依存的に減少することが観察された（図４Ａ）。ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３−ＭＳＡ融合タンパク質は、３０ｍｇ／ｋｇの用量で対照の非免疫マウスと同等の、脾臓及びリンパ節の胚中心Ｂ細胞がほぼ存在しないことによって評価されたように、胚中心形成の完全な抑制を誘導した。薬物投与によって特定のＴ細胞集団を含む細胞の他の亜集団が混乱することはなく、観察される効果がＴ細胞の枯渇に対して副次的なものではないということが確実になった（データは示さず）。加えて、抗ＳＲＢＣ  ＩｇＧレベルは胚Ｂ細胞反応のレベルを反映しており、ＳＲＢＣ特異的Ｉｇ力価は、より高用量の抗ＣＤ４０Ｌ  Ｔｎ３で顕著に減少した（図４Ｂ）。
【００５５】
実施例５−ＶＩＢ４９２０は健康なボランティアにおいて忍容性が良好である
１８〜４９歳の健康成人を対象として実施される第１ａ相（Ｐｈ１ａ）試験で、ＶＩＢ４９２０の安全性特性をヒトにおいて評価した。被験者を、最高３０００ｍｇのＶＩＢ４９２０の用量による７つの単回漸増投与コホートに組み入れ、ＶＩＢ４９２０又はプラセボにランダム化した（図５Ａ及び５Ｂ）。治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）及び治療下で発現した重篤な有害事象（ＴＥＳＡＥ）の発生頻度によって、主要評価項目、安全性及び忍容性を測定した。すべての用量コホートにおいて、ＴＥＡＥは一般に臨床的重大性が軽度であり、最も頻度の高い事象は鼻咽腔炎（感冒）及び頭痛を含むものであった（表２）。
【００５６】
【表２】
2022502412.tif 000003
【００５７】
健康なボランティアのＰｈ１ａ試験において少なくとも２例の被験者に起こった最も多く見られるＴＥＡＥ
【００５８】
重要なことに、１つ以上の治験薬に関連するＴＥＡＥがある被験者の全体的な割合は、全体のＶＩＢ４９２０群（４０．９％）とプラセボ（３３．３％）群との間で同等であった。加えて、輸注反応、重症感染又は死亡例は存在せず、プラセボ群において唯一のＴＥＳＡＥである脛骨骨折のみが報告された。注目すべきことに、このＰｈ１ａ試験では、ＶＩＢ４９２０による処置後に臨床的に重大な凝固又は血小板機能異常は観察されなかった。
【００５９】
実施例６−ＶＩＢ４９２０は健康なボランティアにおいて好ましいＰＫ／ＰＤプロファイルを示す
ＶＩＢ４９２０の安全性プロファイルを評価することに加えて、Ｐｈ１ａ試験において薬物動態（ＰＫ）及び薬力学的（ＰＤ）評価項目も評価した。３〜３０００ｍｇを単回静脈内投与した後のＶＩＢ４９２０のＰＫプロファイルは、曝露が増加すると共に用量に比例して直線状となった（図６Ａ）。分子の平均終末相半減期は８日であり、最高用量では半減期が最高１０．１＋／−１．８７日であった。
【００６０】
ＣＤ４０Ｌは膜貫通タンパク質であるが、活性化Ｔ細胞及び血小板の両方によって開裂し、脱離する可能性がある。可溶性ＣＤ４０Ｌ（ｓＣＤ４０Ｌ）は、１８ＫＤａの三量体であり、健康なドナーにおいて低レベルで検出され、自己免疫疾患患者の血液循環中で増加する（３６、３７）。ＶＩＢ４９２０投与後のｓＣＤ４０Ｌレベルの測定値は、ＶＩＢ４９２０に結合したｓＣＤ４０Ｌが血液循環中に保持されて蓄積され得るような、潜在的な標的結合の測定値を表す。予想通り、ＶＩＢ４９２０投与後に血漿中の全ｓＣＤ４０Ｌにおいて用量依存的な増加があり（図６Ｂ）、標的結合が示唆された。血漿中の全ｓＣＤ４０Ｌが最大値に到達するまでの時間は、用量が３ｍｇから３０００ｍｇに増加するにつれて１１．５日から８４日に増加し、最高用量群では、標的結合がより長い持続時間で維持されたことが示された。
【００６１】
実施例７−より高用量のＶＩＢ４９２０を受けた健康な被験者において減少したＡＤＡが観察された
生物学的製剤は、本来、極めて特異的／選択的なものであるが、それらは免疫応答を誘発することができる複合分子である。抗薬物抗体（ＡＤＡ）は、治療剤の免疫原性の指標である。健康なボランティアにおいて、低用量のＶＩＢ４９２０を受けた過半数の患者でＡＤＡが検出された（図７）。より具体的には、３〜１００ｍｇの用量範囲において、被験者２０例のうちの１８例が検出可能なＡＤＡを有し、それらの個体のうち１０例が高いＡＤＡ力価を示した（力価の中央値の４８０より大きい）。対照的に、ＡＤＡの発現頻度は、より高用量のレベルのＶＩＢ４９２０で著しく減少し（図７）、３０００ｍｇ用量群における被験者８例のうちわずか１例で検出可能な抗薬物力価が生じた。高用量のＶＩＢ４９２０で観察されたＡＤＡ発現頻度の減少は、分子の免疫調節性機能を裏付けるものである。加えて、ＡＤＡの割合及び力価の低さは、忍溶性がより良好で、より有効な治療剤への転換が可能である。
【００６２】
実施例８−ＶＩＢ４９２０により健康なボランティアにおけるＴ細胞依存性抗体応答が阻害される
健康な被験者の体液性免疫応答に影響を与えるその能力について、ＶＩＢ４９２０を更に評価した。この評価は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）による免疫によって誘導されたＴ細胞依存性抗体応答（ＴＤＡＲ）に対するＶＩＢ４９２０の効果を測定することによって行った。すべての処置群の健康な被験者は、ＫＬＨ皮下免疫を２回受けた：（１回目）ＶＩＢ４９２０又はプラセボのいずれかを投与する１４日前、及び（２回目）投与後１５日目（図５Ｂ）。ＫＬＨに対して産生されるＩｇＭ及びＩｇＧ抗体の両方を、１１３日目までモニターした。
【００６３】
ＴＤＡＲは、プラセボ処置被験者において予想される傾向、すなわち２２日目（２回目の免疫の１週間後）に抗ＫＬＨ  ＩｇＧ力価が激増し、２９日目にＩｇＧのピークレベルが観察され、次いでモニター期間の終了までＫＬＨ特異的ＩｇＧ抗体が減少することを含む傾向をたどった（図８Ａ）。更に、前述の報告と一致して、プラセボ処置群における２回目の抗ＫＬＨ応答はＩｇＧが優勢であり、再チャレンジ後に検出されたＫＬＨ特異的ＩｇＭの上昇は、全体としてはるかに控えめなものであった（図８Ｂ）（３８〜４１）。
【００６４】
予想通り、低用量のＶＩＢ４９２０で処置した健康なボランティアは、プラセボ処置群に近い抗ＫＬＨ力価を有していた。対照的に、より高用量のＶＩＢ４９２０で処置した健康なボランティアは、３００ｍｇ（ｐ＝０．０３５）の用量から開始して１，０００ｍｇ（ｐ＝０．００２）及び３，０００ｍｇ（ｐ＜０．００１）の用量に増加させた抗ＫＬＨ  ＩｇＧで４３日目に統計的に有意に減少したように、ＫＬＨに対する二次応答を有意に減少させることを示した。注目すべきことに、１０００ｍｇ及び３０００ｍｇのコホートでは、ＫＬＨに対するＩｇＧが４３日目のプラセボと比較してそれぞれ７８％及び８６％減少した（図８Ｃ）。最高用量群では、被験者８例のうちの７例は、抗ＫＬＨ−ＩｇＧ力価を４３日目に検出できず、ＶＩＢ４９２０による体液性免疫応答をほぼ完全に抑制したことが示唆された。
【００６５】
実施例９−ＶＩＢ４９２０の免疫抑制はＢ細胞増殖及び形質細胞反応の阻害によって媒介される
ＶＩＢ４９２０が二次免疫応答を抑制する機序は、末梢血を免疫前及び後で被験者から採取し、フローサイトメトリーによって循環血液中のリンパ球サブセットを特性決定することによって、より明確になった。プラセボの処置を受けた健康な被験者において、二次免疫によりＢ細胞増殖が誘導されたが、このことは、来院日２２日目、すなわち再チャレンジ７日後における血液循環中のＫｉ６７＋ＣＤ１９＋Ｂ細胞の発現頻度の増加を検出することによって示された（図９Ａ）。
【００６６】
再チャレンジ前の高用量のＶＩＢ４９２０を受けた被験者では、プラセボ処置群と比較してベースラインのＢ細胞増殖の発現頻度が減少した。このことは、提唱された分子の作用機序と一致する。更に、高用量のＶＩＢ４９２０を受けたコホートでは、免疫後のＢ細胞増殖反応が著しく損なわれたが、このことはＫｉ６７＋Ｂ細胞が増加しないことによって証明された。チャレンジ後１週間の３０００ｍｇコホートを参照されたい（図９Ａ）。更なる表現型検査により、Ｂ細胞増殖に対するＶＩＢ４９２０の最も大きな影響が、ＩｇＤ−ＣＤ２７＋アイソタイプスイッチした記憶集団内に認められるということが明らかとなった（図９Ｂ）。これらのデータは、ＶＩＢ４９２０が２度目のチャレンジに応答してＩｇＧ産生に対する抑制効果を示すＴＤＡＲの結果と一致する。
【００６７】
ＫＬＨによる二次免疫前後における、プラセボ又はＶＩＢ４９２０で処置された被験者の末梢血中の遺伝子発現の変化もモニターした。具体的には、循環血液中のＰＣ発現頻度のわずかな変化であっても検出することが可能な、正確且つロバストなシグネチャーである形質細胞（ＰＣ）遺伝子シグネチャー（４２）を使用して、遺伝子発現における特定の変化を確認した。ＴＤＡＲ結果と一致して、免疫によって、再チャレンジ１週間後のプラセボ処置被験者の全血中のＰＣ遺伝子シグネチャースコアの劇的な増加が誘導されたが、２週間でベースラインに戻った（図９Ｃ）。ＶＩＢ４９２０の最高用量コホート（３０００ｍｇ）では、末梢血中のＰＣ遺伝子シグネチャースコアは、ＫＬＨによる再チャレンジ前のプラセボ処置被験者と比較して著しく減少した（図９Ｃ）。重要なことに、高用量のＶＩＢ４９２０を受けたボランティアでは、再免疫後にＰＣ遺伝子シグネチャースコアが増加しなかった。これらのデータは、ＶＩＢ４９２０の作用機序に光を当て、そのＢ細胞及びＰＣ反応を抑制する強力な能力を証明するものである。
【００６８】
実施例１０−ＲＡ患者におけるＶＩＢ４９２０の反復投与は安全且つ忍容性が良好である
ＶＩＢ４９２０が容認できる安全性プロファイルを有し、健康なボランティアにおける作用機序の検証、反復漸増投与、概念実証を示すことが立証されたため、中等度から重度の活動性ＲＡ成人患者でＰｈ１ｂ臨床試験を実施した。ＲＡ患者をＶＩＢ４９２０（７５ｍｇ、ｎ＝８；５００ｍｇ、ｎ＝１０；１０００ｍｇ、ｎ＝１２；若しくは１５００ｍｇ、ｎ＝１２）、又はプラセボ（ｎ＝１５）で処置し、隔週で１２週間、静脈内（ｉ．ｖ．）注入によって投与した（図１０）。次いで、患者を処置後更に１２週間観察した。１２週目に測定された主要な評価項目は、安全性、忍容性、ＰＫパラメータ、ＡＤＡ、及び疾患活動性の変化（ＤＡＳ２８−ＣＲＰ）、並びにＲＦ自己抗体、血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）及びＶｅｃｔｒａ−ＤＡスコアなどの更なるバイオマーカーを含むものであった。５３例の患者が１２週間の処置を完了し、２例の患者（ＶＩＢ４９２０  ７５ｍｇ群に１例、及びＶＩＢ４９２０  １５００ｍｇ群に１例）が有害事象により治療を中断し、プラセボ群に１例の患者がインフォームドコンセントを撤回し、ＶＩＢ４９２０  ７５ｍｇ群に１例の患者が追跡調査不能であった。ベースラインの試験集団における主な人口統計学的及び臨床的特徴を図１１に示す。
【００６９】
全体として、ＶＩＢ４９２０は、プラセボと４つの有効な用量群との間で観察されるＴＥＡＥの分布が均衡しているため、一般に安全且つ忍溶性良好であった。報告された最も多く見られるＴＥＡＥは下痢、多汗症、上気道感染症、及び尿路感染症であり、それぞれは３例の患者で発生した（７．１％）。図１２を参照されたい。血栓性の有害事象、又は臨床的に重大な凝固異常は認められなかった。重篤且つ生命を脅かすものとして、治験薬の６用量投与後に１５００ｍｇ用量群で発生した１つの有害事象（基本語では「脳炎」）が報告された。病原学的感染因子は特定されず、ＶＩＢ４９２０を中止して数ヶ月後に類似の症状が再発し、その後、患者は脳の転移性黒色腫と診断された。
【００７０】
実施例１１−ＶＩＢ４９２０は線形ＰＫプロファイルを示し、ＲＡ患者のＡＤＡを用量依存的に減少させた
低用量のＶＩＢ４９２０を受けた健康なＰｈ１ａ試験ボランティアと同様に、低用量のＶＩＢ４９２０を受けたＲＡ患者においてＡＤＡが観察された。７５ｍｇのＶＩＢ４９２０を受けたＲＡ患者８例のうち３例（３７．５％）、及び５００ｍｇのＶＩＢ４９２０を受けたＲＡ患者１０例のうち３例（３０％）がＡＤＡを発現した（図１３Ｂ）。７５ｍｇのＶＩＢ４９２０用量群では、被験者８例のうち２例が治療段階の間に検出可能なＡＤＡを発現し、５００ｍｇのＶＩＢ４９２０処置群の３例の被験者全員が、治療後に検出可能なＡＤＡを発現した（図１３Ｃ）。１０００ｍｇ用量群では治療期間の間にＡＤＡは検出されず、被験者１例が治療段階後に検出可能なＡＤＡを有していた。１５００ｍｇ用量群ではＡＤＡが検出されず（図１３Ｂ）、ＶＩＢ４９２０は、より高用量でＡＤＡ応答を効果的に抑制するということが示唆された。
【００７１】
実施例１２−ＶＩＢ４９２０によりＲＡ患者の疾患活動性が減少する
ＶＩＢ４９２０が第１ｂ相臨床試験のＲＡ患者の疾患活動性を減少させるかどうかを確認するため、ＤＡＳ−２８／ＣＲＰスコアを測定した。ＤＡＳ−２８／ＣＲＰスコアは、腫脹関節数、圧痛関節数、ＣＲＰレベル、及び患者による全般評価を考慮に入れた、ＲＡにおいて使用される複合的な臨床疾患活動性スコアである。ＶＩＢ４９２０は、ＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアによって定量化したＲＡ患者の疾患活動性を、より高用量で著しく減少させた（図１４Ａ及び図２２Ａ）。治療開始後１２週間目のＤＡＳ２８−ＣＲＰのベースラインからの調整済み平均変化（ＳＥ）は、ＶＩＢ４９２０  １５００ｍｇ群で−２．３（０．３）、ＶＩＢ４９２０  １０００ｍｇ群で−２．２（０．３）、ＶＩＢ４９２０  ５００ｍｇ群で−１．２（０．３）、ＶＩＢ４９２０  ７５ｍｇ群で０．１（０．４）、及びプラセボ群で−１．０（０．３）であった（図１４Ａ）。驚くべきことに、この観察されたＲＡ患者におけるＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアの減少は、ＶＩＢ４９２０の用量を最後に投与した後、少なくとも更に１２週間維持された（図２２Ａ、特に、来院日１１３日目、１４１日目及び１６９日目を参照されたい）。ＤＡＳ２８−ＣＲＰに対するＶＩＢ４９２０の効果は迅速であり、薬物の単回投与からわずか１５日までにスコアの減少が明白となった。
【００７２】
更に、ＶＩＢ４９２０の２つの最高用量における疾患活動性の減少は、プラセボと比較すると臨床的にも統計学的にも有意性があり、１２週目における調整済み平均差（ＳＥ）は、ＶＩＢ４９２０  １５００ｍｇ群で−１．４（０．４）、ＶＩＢ４９２０  １０００ｍｇ群で−１．２（０．４）であって、それぞれのｐ値は０．００２及び０．００６であった。線形用量反応モデルを使用すると、ＤＡＳ２８ＣＲＰに関する統計的に有意な用量反応が示された（ｐ＜０．００１）。主に１０００ｍｇ及び１５００ｍｇの処置群によって有意な結果がもたらされたが、５００ｍｇ及び７５ｍｇでは、プラセボと比較してほとんど或いは全く効果が示されなかった（図１５Ａ）。個々の臨床反応に関して、１５００ｍｇ群の患者の７５％、及び１０００ｍｇ用量群の患者の５０％が１２週目に３．２以下のＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアを達成し、主要評価項目において低い疾患活動性又は臨床的寛解を示した。図１６を参照されたい。
【００７３】
実施例１３−ＶＩＢ４９２０によりＲＡ患者の免疫学的及び炎症性バイオマーカーが減少する
Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡ血液検査を使用して、免疫学的及び炎症性バイオマーカーに対するＶＩＢ４９２０の効果を測定した。Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡ検査とは、疾患活動性に関する１２個のバイオマーカー（細胞接着因子、増殖因子、サイトカイン、マトリックスメタロプロテアーゼ、骨格タンパク質、ホルモン及び急性期タンパク質）を測定し、ＲＡ疾患活動性を引き起こす主要な機序及び経路を評価するために、それらを単一のスコアに組み合わせた、商業的に入手可能で有効性の確認された検査である。１５００ｍｇ及び１０００ｍｇ用量のＶＩＢ４９２０は、ＶＩＢ４９２０が隔週で投与された１２週間の期間（図１４Ｅ）と、ＶＩＢ４９２０がもはや投与されなくなった１２週間の観察期間（図２２Ｅ）の両方で、Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡマルチバイオマーカースコアを著しく減少させた。１５００ｍｇ用量におけるＶＩＢ４９２０の調整済み平均差（１２週目）は、プラセボと比較して−１４．４（−２１．５、−７．２）、ｐ＝０．００１であり、１０００ｍｇ用量におけるＶＩＢ４９２０の調整済み平均差（１２週目）は、プラセボと比較して−１０．３（−１７．４、−３．３）、ｐ＝０．０１８であった（図１４Ｅ）。
【００７４】
この有効性の結果は、本治験で評価された他の評価項目（臨床疾患活動性指標（ＣＤＡＩ）、圧痛及び腫脹関節数、患者及び医師による全般評価、並びに血清ＣＲＰレベルを含む）の全体にわたって極めて一致したものであり、１０００ｍｇ及び１５００ｍｇが臨床的に有効な用量であることが、本試験において裏付けられた（図１４Ｂ〜１４Ｄ及び図１７Ａ〜１７Ｃ、図２２Ｂ〜２２Ｄ及び図２３Ａ〜２３Ｃも参照されたい）。
【００７５】
実施例１４−ＶＩＢ４９２０によりＲＡ被験者のリウマトイド因子自己抗体が著しく減少する
リウマトイド因子自己抗体（ＲＦ）は、ＩｇＧのＦｃ部分に対して産生される、自己抗体のファミリーである。それらはＲＡにおいて増加し、予後不良に関連する。ＶＩＢ４９２０の作用機序を考慮して、ＲＡ被験者における自己抗体価に対するその影響を評価した。注目すべきことに、ＶＩＢ４９２０は、１２週間の隔週での治療期間の間に、５００、１０００、及び１５００ｍｇ用量レベルにおいてＲＦ力価を著しく減少させた（図１４Ｆ）。更に驚くべきことに、１０００ｍｇ及び１５００ｍｇ用量レベルで減少したＲＦ力価は、ＶＩＢ４９２０の用量を最後に投与した後、１２週間の観察期間全体にわたって維持された（図２２Ｆ）。ベースラインからのＲＦ力価の減少は、早くも２９日目にＶＩＢ４９２０に反応して明らかとなり、高用量のＶＩＢ４９２０では、８５日目までに約５０％のＲＦ力価を減少させた。Ｅｍａｘモデルを使用すると、ベースラインからのＲＦ力価の減少に関して、ＶＩＢ４９２０は統計的に有意な用量反応を示している（ｐ＜０．００１）（図１５Ｂ）。
【００７６】
実施例１５−方法
ＮＦ−ｋＢレポーターアッセイ
ＮＦ−ｋＢルシフェラーゼレポーターを発現するＨＥＫ２９３細胞（Ｐａｎｏｍｉｃｓ）を、ヒト全長ＣＤ４０Ｒを安定的に発現するように改変した。５×１０４細胞／ウェルの密度で９６ウェルのポリ−Ｄ−リジンをコートしたプレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に細胞を播種し、対照又はＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３の存在下又は非存在下で１６〜２４時間、示された濃度で、ｍｅｇａＣＤ４０Ｌ組換えタンパク質（１．５μｇ／ｍｌ、Ｅｎｚｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）又はＣＤ４０Ｌを過剰発現させたＤ１．１  Ｊｕｒｋａｔサブクローン（ＡＴＣＣ）細胞によって刺激した。Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）で発光を検出した。
【００７７】
ＣＤ８６発現上昇アッセイ
ＭｅｄＩｍｍｕｎｅの施設内審査委員会によって承認された通り、インフォームドコンセント後に健康なドナーからヒト血液を採取した。遠心分離後、末梢血単核細胞をＣＰＴチューブ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）から単離した。指示される通り、ＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３又はｍＡｂ（クローン５ｃ８）の存在下で１６〜１８時間、９６ウェル丸底プレートにおいて、組換えｍｅｇａＣＤ４０Ｌ（１００ｎｇ／ｍｌ、Ｅｎｚｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でＰＢＭＣ（２．５〜５．０×１０５細胞／ウェル）を刺激した。フローサイトメトリーを使用して、ＣＤ１９＋Ｂ細胞上のＣＤ８６の発現を評価した。以下の抗体、ＣＤ８６（クローン２３３１、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＣＤ１９（クローンＨＩＢ１９、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用した。
【００７８】
ヒトＢ細胞アッセイ
ＰＢＭＣを単離した。ＭＡＣＳ細胞分離技術（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して全Ｂ細胞をネガティブセレクションし、これにより９５％を上回る純度を定常的に得た。精製された末梢血Ｂ細胞を、最終容量が１５０μｌの完全培地中で、９６ウェル丸底プレートでウェル当たりＢ細胞０．５〜１．０×１０５の密度で培養した。Ｂ細胞実験用の培地は、１０％ＦＣＳ、ペニシリン−ストレプトマイシン（１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン）、２−メルカプトエタノール（５５μＭ）、Ｌグルタミン（２ｍＭ）、及びＨＥＰＥＳ（５ｍＭ）を補充したＲＰＭＩ  １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であった。培養を開始する際、抗ＩｇＭ  Ｆ（ａｂ’）２（５．０μｇ／ｍｌ、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共に、又はそれ無しで、ＩＬ−２１（３３ｎｇ／ｍｌ、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  Ｉｎｃ．）とｍｅｇａＣＤ４０Ｌ（１．５ｎＭ、Ｅｎｚｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）とを組み合わせてＢ細胞を刺激した。培養の３日目又は４日目に、製造業者の指示書に従って、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＡＴＰを測定することにより、Ｂ細胞増殖を定量化した。７日目にＰＣ分化をフローサイトメトリーによって定量化した。細胞を一定時間の間に得て、ＰＣをＣＤ１９＋ＩｇＤ−ＣＤ３８ｈｉ細胞であると定義した。
【００７９】
マウスＳＲＢＣ免疫モデル
ビンから直接引き出した後、腹腔内注射により、０．２ｍｌのＳＲＢＣ（Ｃｏｌｏｒａｄｏ  Ｓｅｒｕｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ）でＢａｌｂ／ｃマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を０日目に免疫した。対照（３０ｍｇ／ｋｇ）又はＣＤ４０Ｌ特異的Ｔｎ３（最高３０ｍｇ／ｋｇ、指示通り）を、９〜１３日目に毎日投与した（静脈内）。１４日目に、脾臓の胚中心Ｂ細胞の発現頻度をフローサイトメトリーによって定量化した。ＧＣ  Ｂ細胞を、ＣＤ１９＋Ｂ２２０＋Ｆａｓ＋ＰＮＡ＋Ｂ細胞であると定義した。
【００８０】
血小板凝集アッセイ
ヒト血液を健康なドナーから採取し、クエン酸、ブドウ糖及びナトリウムを含有するＡＣＤ溶液Ｂチューブに入れた。遠心分離後、多血小板血漿の２／３をポリプロピレンチューブに移し、処理の間に血小板が活性化するのを阻止するため、アピラーゼ（２Ｕ／ｍｌ）と１０分間インキュベートした。血小板をペレット化し、改変タイロードバッファ（１３７ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、５．６ｍＭのブドウ糖、３．３ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％のＢＳＡ、及びｐＨ７．４）中で再懸濁した。
【００８１】
ｍＡｂ（ｈ５ｃ８、若しくは陰性対照抗体）又は抗ＣＤ４０Ｌ  Ｔｎ３を、ｈＣＤ４０Ｌ（２９３  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｕｒｃｅ）と室温で５分間混合することにより、免疫複合体（ＩＣ）を生成した。いくつかの実験では、ＩＣを添加する前に、血小板を抗ＣＤ３２ａ抗体（ＩＶ．３）と５分間プレインキュベートした。４チャンネルの光学血小板アグリゴメーター（モデル７００、Ｃｈｒｏｎｏ−Ｌｏｇ、Ｈａｖｅｒｔｏｗｎ，ＰＡ）において３７℃で撹拌しながら、製造業者の指示書に従って血小板凝集アッセイを実行した。洗浄血小板をアゴニストと混合した後、光透過を１２〜２０分間モニターした。
【００８２】
Ｐｈ１ａ被験者及び試験デザイン
妊娠の可能性のない女性を含む１８〜４９歳の健康な成人を対象に、第Ｉ相ランダム化盲検プラセボ対照試験を実施した（ＮＣＴ０２１５１１１０）。現在の用量コホートからの安全性及び忍容性データだけでなく、これまでの用量コホートから蓄積されたデータを検討した治験実施計画書、及び用量漸増委員会（ＤＥＣ：Ｄｏｓｅ  Ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）からの勧告に基づいて、被験者を７つの用量コホート（３、１０、３０、１００、３００、１０００又は３０００ｍｇ）にランダム化し、順次投与した。１ｍｇのＫＬＨを２回に分けて皮下免疫を施すことにより、被験者にＴＤＡＲを誘導した。ＶＩＢ４９２０又はプラセボのいずれかを投与する１４日前のスクリーニング期間に１回目のＫＬＨの免疫を施し、ＶＩＢ４９２０又はプラセボのいずれかを投与した１５日後に２回目のＫＬＨの免疫を施した。それぞれ、コホート５（３００ｍｇ）、コホート６（１０００ｍｇ）及びコホート７（３０００ｍｇ）のすべての被験者が４３日目に終了したときに、実施計画書に従って中間解析を３回行った。
【００８３】
ＶＩＢ４９２０のＰＫアッセイ
有効性の確認されたサンドイッチＥＬＳＡ法を使用して、ヒトＫ２ＥＤＴＡ血漿中のＶＩＢ４９２０を測定したが、ここで、１×ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）による洗浄工程を各インキュベーションの後に行い、結合しなかった構成成分を除去した。要約すると、Ｎｕｎｃマイクロタイタープレートを２〜８℃で一晩、１μｇ／ｍＬの抗ＶＩＢ４９２０マウスモノクローナル抗体（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）でコートした。スタンダード、クオリティコントロール（ＱＣ）、及びＶＩＢ４９２０を含有する試料を、プレートに添加する前に、０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／ＰＢＳＴ中で１：５０の最小希釈倍率（ＭＲＤ）による方法で希釈した。２時間インキュベートした後、ビオチン標識されている抗ＶＩＢ４９２０ラット抗体（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）１μｇ／ｍＬをプレートに添加し、１時間インキュベートした。ストレプトアビジンに結合した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と、ＳｕｒｅＢｌｕｅ（商標）テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）ペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．）とを連続してインキュベートすることにより、結合複合体を視覚化した。マイクロプレートリーダーの４５０ｎｍにおける分析の前に、０．２Ｍの硫酸によって発色現像を停止した。量的範囲は０．０５〜１．６０μｇ／ｍＬであった；量的範囲を上回る測定値の試料は、プールしたＫ２ＥＤＴＡ血漿によって希釈し、本方法の測定可能な範囲内の濃度とした。
【００８４】
ｓＣＤ４０Ｌの定量化
スクリーニング期間、並びに１日目、２日目、３日目、５日目、８日目、１５日目、２２日目、２９日目、４３日目、５７日目、８５日目、及び１１３日目にｓＣＤ４０Ｌ濃度を測定するために、血漿試料を採取した。プログラムのニーズに合うように改変され、精度及び精密さを保証するのに適格なヒトｓＣＤ４０Ｌ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ  ＥＬＩＳＡキット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、ヒトＫ２ＥＤＴＡ血漿中の全可溶性ＣＤ４０Ｌ（遊離ｓＣＤ４０Ｌ及びＶＩＢ４９２０と結合したｓＣＤ４０Ｌ）を測定した。要約すると、結果を確実に比較可能で整合的なものとするために、スタンダード、ＱＣ、及びｓＣＤ４０Ｌを含有する試料を、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ及びＶＩＢ４９２０含有アッセイ希釈液中で１：５０のＭＲＤによる方法で希釈した。ＰＢＳＴによる洗浄工程を各インキュベーションの後に行い、結合しなかった構成成分を除去した。希釈した試料を、抗ｓＣＤ４０Ｌ抗体でプレコートしたプレートに添加し、１．５時間インキュベートした。次いで、ＨＲＰ結合抗ヒトｓＣＤ４０Ｌを添加し、コートした抗体によって捕捉されたｓＣＤ４０Ｌと結合させた。マイクロプレートリーダーの４５０ｎｍ及び５４０ｎｍにおける分析の前に、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質及び停止液（リン酸）を連続して添加することにより、結合複合体を視覚化した。量的範囲は６．２５〜４００．００ｎｇ／ｍＬであった；量的範囲を上回る測定値の試料は、プールしたＫ２ＥＤＴＡ血漿によって希釈し、本方法の測定可能な範囲内の濃度とした。
【００８５】
ＡＤＡの測定
有効性の確認されたサンドイッチＥＬＩＳＡ法を使用して、ヒトＫ２ＥＤＴＡ血漿中のＶＩＢ４９２０に対するＡＤＡの存在を測定したが、ここで、ＰＢＳＴによる洗浄工程を各インキュベーションの後に行い、結合しなかった構成成分を除去した。要約すると、ＱＣ及び試料を、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ含有アッセイ希釈液中で１：６０のＭＲＤによる方法で希釈し、洗浄したＰｉｅｒｃｅ（商標）ＰｒｏｔｅｉｎＧコート済みプレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に添加して２時間インキュベートした。アッセイ希釈液中で調製した、ビオチン標識した１μｇ／ｍＬのＶＩＢ４９２０を一晩インキュベートすることにより、ＶＩＢ４９２０に対するＡＤＡが特異的に検出された。ストレプトアビジンに結合したＨＲＰ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）と、ＳｕｒｅＢｌｕｅ（商標）ＴＭＢペルオキシダーゼ基質（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．）とを連続してインキュベートすることにより、結合複合体を視覚化した。マイクロプレートリーダーの４５０ｎｍにおける分析の前に、０．２Ｍの硫酸によって発色現像を停止した。各試料を３段階のプロセスに供したが、この場合、試料反応を統計学的に決定されたカットオフＯＤ値と最初に比較し、それ以上では試料がＡＤＡ陽性である可能性があると見なし、それを下回ると試料がＡＤＡ陰性であると判断する。陽性である可能性のある試料を、良好なＶＩＢ４９２０の存在下で２回目の競合評価に供した。つまり、統計学的に決定された確認カットポイント以上の阻害率を有する試料を、陽性であることが確認されたと定義して、力価の評価を行った。確認カットポイントを下回る試料を、ＶＩＢ４９２０に対するＡＤＡが陰性であると見なした。プールしたヒトＫ２ＥＤＴＡ血漿中の力価試料を、スクリーニングカットオフを下回るまで段階的に希釈し、力価の結果を、陰性と測定する前に試料を陽性と測定した際の最高希釈の逆数として報告した。
【００８６】
抗ＫＬＨ抗体の評価
有効性の確認されたサンドイッチＥＬＩＳＡ法を使用して、ヒト血清中の抗キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）ＩｇＧ抗体を測定したが、ここで、ＰＢＳＴによる洗浄工程を各インキュベーションの後に行い、結合しなかった構成成分を除去した。すべての工程で１００μＬ容量／ウェルを使用した。要約すると、ｎｕｎｃマイクロタイタープレートを、２〜８℃で一晩、１×ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）中で調製した３μｇ／ｍＬのＫＬＨ（Ｉｍｍｕｃｏｔｈｅｌ、ｂｉｏｓｙｎ  Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ  ＧｍｂＨ）でコートした。様々なアイソタイプ及び親和性を有する９つのモノクローナル抗−ＫＬＨ  ＩｇＧ抗体の混合物（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）から構成されるスタンダード及びＱＣと、抗ＫＬＨ抗体を含有する試料とを、プレートに添加する前に、０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ中で１：２５０のＭＲＤによる方法で希釈した。２時間インキュベートした後、ＨＲＰ結合マウス抗ヒトＩｇＧ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をプレートに添加し、１時間インキュベートして抗ＫＬＨ  ＩｇＧ抗体を特異的に検出した。マイクロプレートリーダーの４５０ｎｍにおける分析の前に、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質及び停止液（０．２Ｍ硫酸）を連続して添加することにより、結合複合体を視覚化した。量的範囲は１６３．３０〜１００００．００ｎｇ／ｍＬであった。量的範囲を上回る測定値の試料は、血清によって希釈し、本方法の測定可能な範囲内の濃度とした。
【００８７】
Ｐｈ１ａにおけるフローサイトメトリー
Ｃｙｔｏｃｈｅｘ  ＢＣＴチューブ（Ｓｔｒｅｃｋ）に血液を採取し、Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に発送し、有効性が確認された方法を使用して、フローサイトメトリーにより試験した。要約すると、ＣＤ４５（クローンＨＩ３０）、ＣＤ１９（クローンＨＩＢ１９）、ＩｇＤ（クローンＩＡ６−２）、ＣＤ２７（クローンＭ−Ｔ２７１）、及びＣＤ３８（クローンＨＩＴ２、すべてＢＤ）に対して細胞を蛍光色素標識抗体で染色し、Ｂ細胞集団を同定した。続いて、細胞をＦＡＣＳＰｅｒｍ２（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）で処置し、細胞内のＫｉ６７（クローンＫＩ６７、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の発現を染色して、増殖細胞を測定した。
【００８８】
ＰＣシグネチャー
ＰＣ遺伝子シグネチャーを上述したように測定した（Ｓｔｒｅｉｃｈｅｒ  ２０１４）。要約すると、ＰＡＸｇｅｎｅ  Ｂｌｏｏｄ  ＲＮＡキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、ＰＡＸｇｅｎｅ採血管からトータルＲＮＡを抽出した。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ＳｕｐｅｒＭｉｘキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びランダムプライマーを使用して、ＴａｑＭａｎ  ｑＰＣＲ用のｃＤＮＡを生成した。ＴａｑＭａｎ  Ｐｒｅ−Ａｍｐ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘキットを使用して試料を調製し、ＢｉｏＭａｒｋ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍで分析した。本発明者らは、２つの参照遺伝子（β−アクチン及びＧＡＰＤＨ）、及び対照として各患者のベースラインの発現レベルの平均値を使用して、ΔΔＣｔ値を算出した。２−ΔΔＣｔを算出することによって、倍数変化値を求めた。
【００８９】
Ｐｈ１ａ患者及び試験デザイン
試験に参加する前の少なくとも６ヵ月間、ＥＵＬＡＲ／ＡＣＲ基準（Ａｌｅｔａｈａ  ｅｔ  ａｌ．２０１０）に従ってＲＡと診断された１８〜７０歳の患者を対象とした第Ｉｂ相ランダム化盲検プラセボ対照試験を実施した。被験者は、スクリーニング時点で少なくとも３．２のＤＡＳ２８−ＣＲＰスコアと、スクリーニング及びランダム化時点で少なくとも４つの腫脹関節、及び４つの圧痛関節とによって定義されるような、中等度から重度の活動性を有していた。患者は、スクリーニング時点でリウマトイド因子（ＲＦ−ＩｇＭ≧１４単位／ｍＬ）、又は抗シトルリン化ペプチド抗体（ＡＣＰＡ）のいずれかが陽性であった。患者は、１週当たり７．５〜２５ｍｇの用量でメトトレキサート（ＭＴＸ）を受けるか、又はＭＴＸ不耐性の場合には、スクリーニングの少なくとも１２週間前、及び安定用量で少なくとも６週間前に、異なる従来のＤＭＡＲＤを開始した。本発明者らの試験のランダム化の前に適切なウォッシュアウトを行った場合に、ＲＡに与えられた生物学的製剤によるこれまでの治療（リツキシマブ又は他のＢ細胞除去剤を除く）を許容した。隔週で１２週間、静脈内注入によるプラセボ（ｎ＝１５）又はＶＩＢ４９２０（７５ｍｇ  ｎ＝８；５００ｍｇ  ｎ＝１０；１０００ｍｇ  ｎ＝１２；又は１５００ｍｇ  ｎ＝１２）で患者を処置し、その後、治療後の観察を１２週間行った。ＶＥＣＴＲＡ−ＤＡスコアの測定をＣｒｅｓｃｅｎｄｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）によって実行し、ＲＦ自己抗体の測定をＣｏｖａｎｃｅ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）によって実行した。
【００９０】
統計分析
両側独立スチューデントｔ検定を使用して、ＳＲＢＣモデルにおける一次ヒトＢ細胞増殖、血漿分化、及びＧＣ  Ｂ細胞反応に対する処置の影響を評価した。マン・ホイットニーＵ検定を使用して、遺伝子シグネチャースコアについて複数の時点でＶＩＢ４９２０をプラセボと比較した（図９Ｃ）。統計的検定及びプロットは、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して行った。用量反応に事前に特定した３つの候補モデル（線形、Ｅｍａｘ、及びＨｉｌｌ−Ｅｍａｘモデル）を有し、対応するベースラインを共変量として含むＭＣＰ−Ｍｏｄ手法を用いて、８５日目のＤＡＳ２８−ＣＲＰ及びＲＦのベースラインからの変化に対する用量反応を分析した。用量反応シグナルの検定を多重性について調整し、ファミリーワイズエラー率を０．１０レベルに制御した。赤池情報量規準に基づいて、有意であると示されたモデルの中から最終的なモデルを選択した。対応するベースライン結果が共変量として含まれた反復測定による混合効果モデル（ＭＭＲＭ）分析を使用して、ＤＡＳ２８−ＣＲＰ、ＲＦ、Ｖｅｃｔｒａ  ＤＡ、ＣＤＡＩ、圧痛関節数、腫脹関節数、患者及び医師による全般評価、並びに血清ＣＲＰにおけるベースラインからの変化を分析した。
【００９１】
本開示に記載された参考文献
１．Ｓ．Ｓｕｇｉｏ，Ａ．Ｋａｓｈｉｍａ，Ｓ．Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉ，Ｍ．Ｎｏｄａ，Ｋ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，Ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ  ａｔ  ２．５  Ａ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  １２，４３９−４４６（１９９９）
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３．Ｍ．Ｃｒｏｆｔ，Ｒ．Ｍ．Ｓｉｅｇｅｌ，Ｂｅｙｏｎｄ  ＴＮＦ：ＴＮＦ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｓ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  １３，２１７−２３３（２０１７）．
４．Ｔ．Ｍ．Ｆｏｙ，Ｆ．Ｈ．Ｄｕｒｉｅ，Ｒ．Ｊ．Ｎｏｅｌｌｅ，Ｔｈｅ  ｅｘｐａｎｓｉｖｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＤ４０  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｌｉｇａｎｄ，ｇｐ３９，ｉｎ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６，２５９−２６６（１９９４）．
５．Ｊ．Ｂ．Ｓｐｌａｗｓｋｉ，Ｐ．Ｅ．Ｌｉｐｓｋｙ，ＣＤ４０−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４５，２２６−２３４；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  ２４４−２２９（１９９４）．
６．Ｒ．Ｊ．Ａｒｍｉｔａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ＣＤ４０．Ｎａｔｕｒｅ  ３５７，８０−８２（１９９２）．
７．Ｐ．Ｇａｒｓｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｂ  ａｎｄ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１，９６−９９（１９９８）．
８．Ｄ．Ｈｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｇｐ３９，ａ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＴＮＦ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ，ｉｓ  ａ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ＣＤ４０  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｇｐ３９  ｗｉｔｈ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  ｊｏｕｒｎａｌ  １１，４３１３−４３２１（１９９２）．
９．Ｒ．Ｊ．Ｎｏｅｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ３９−ｋＤａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｈｅｌｐｅｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｂｉｎｄｓ  ＣＤ４０  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｓｉｇｎａｌ  ｆｏｒ  ｃｏｇｎａｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ８９，６５５０−６５５４（１９９２）．
１０．Ｔ．Ｍ．Ｆｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，ｇｐ３９−ＣＤ４０  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｏｒｙ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８０，１５７−１６３（１９９４）．
１１．Ｔ．Ｍ．Ｆｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＣＤ４０−ｇｐ３９  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｙｍｕｓ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｈｕｍｏｒａｌ  ｉｍｍｕｎｉｔｙ．ＩＩ．Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍｏｒａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｂｙ  ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ＣＤ４０，ｇｐ３９．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １７８，１５６７−１５７５（１９９３）．
１２．Ｓ．Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒｓ．Ｒｏｌｅｓ  ｏｆ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ａｎｄ  Ｂ７−２  ｉｎ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５５，５５６−５６７（１９９５）．
１３．Ｔ．Ｋａｗａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ＣＤ４０−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ：ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｃｌａｓｓ  ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ  ａｎｄ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １，１６７−１７８（１９９４）．
１４．Ｒ．Ｃ．Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ｇｅｎｅ  ｄｅｆｅｃｔｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ  ｆｏｒ  Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ  ｈｙｐｅｒ−ＩｇＭ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９，９９０−９９３（１９９３）．
１５．Ａ．Ａｒｕｆｆｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ，ｇｐ３９，ｉｓ  ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ  ｈｙｐｅｒ−ＩｇＭ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ｃｅｌｌ  ７２，２９１−３００（１９９３）．
１６．Ｊ．Ｐ．ＤｉＳａｎｔｏ，Ｊ．Ｙ．Ｂｏｎｎｅｆｏｙ，Ｊ．Ｆ．Ｇａｕｃｈａｔ，Ａ．Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｇ．ｄｅ  Ｓａｉｎｔ  Ｂａｓｉｌｅ，ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｘ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｗｉｔｈ  ｈｙｐｅｒ−ＩｇＭ．Ｎａｔｕｒｅ  ３６１，５４１−５４３（１９９３）．
１７．Ｄ．Ｔ．Ｂｏｕｍｐａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｓｈｏｒｔ  ｃｏｕｒｓｅ  ｏｆ  ＢＧ９５８８（ａｎｔｉ−ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｓｅｒｏｌｏｇｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ｈｅｍａｔｕｒｉａ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｌｕｐｕｓ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４８，７１９−７２７（２００３）．
１８．Ａ．Ｃ．Ｇｒａｍｍｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｂｎｏｒｍａｌ  ｇｅｒｍｉｎａｌ  ｃｅｎｔｅｒ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ＣＤ１５４−ＣＤ４０  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １１２，１５０６−１５２０（２００３）．
１９．Ｗ．Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｎ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４６，１５５４−１５６２（２００２）．
２０．Ｖ．Ｌ．Ｐａｔｅｌ，Ｊ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｊ．Ｂ．Ｂｕｓｓｅｌ，Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ  １４１，５４５−５４８（２００８）．
２１．Ｓ．Ｅ．ＭｃＫｅｎｚｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  Ｆｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩＩＡ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ：ａ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６２，４３１１−４３１８（１９９９）．
２２．Ｊ．Ｅ．Ｆｒｅｅｄｍａｎ，ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ  ａｎｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：ｂｅｙｏｎｄ  ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ９２，９４４−９４６（２００３）．
２３．Ｌ．Ｒｏｂｌｅｓ−Ｃａｒｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−ＣＤ４０Ｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｐｏｔｅｎｔｌｙ  ａｃｔｉｖａｔｅ  ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｃａｕｓｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ｉｎ  ＦＣＧＲ２Ａ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８５，１５７７−１５８３（２０１０）．
２４．Ｊ．Ｓ．Ｓｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｓ  ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔｓ  ｏｆ  ＴＲＡＩＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １２，１２３５−１２４４（２０１３）．
２５．Ｒ．Ｖａｚｑｕｅｚ−Ｌｏｍｂａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ  ａｎｄ  ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ｎｏｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｄｒｕｇｓ．Ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｔｏｄａｙ  ２０，１２７１−１２８３（２０１５）．
２６．Ｒ．Ｎ．Ｇｉｌｂｒｅｔｈ，Ｂ．Ｍ．Ｃｈａｃｋｏ，Ｌ．Ｇｒｉｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｓ．Ｓｗｅｒｓ，Ｍ．Ｂａｃａ，Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｉｒｄ  ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｔｙｐｅ  ＩＩＩ  ｄｏｍａｉｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｅｎａｓｃｉｎ−Ｃ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｓｉｇｎ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｄｅｓｉｇｎ  ＆  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ：ＰＥＤＳ  ２７，４１１−４１８（２０１４）．
２７．Ｖ．Ｏｇａｎｅｓｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｔｙｐｅ  ＩＩＩ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｔｏ  ｂｉｎｄ  ＣＤ４０Ｌ：ｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｘ−ｒａｙ  ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ａｃｔａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ．Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｆ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ６９，１０４５−１０４８（２０１３）．
２８．Ｄ．Ｍｕｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｂｙ  ｆｕｓｉｏｎ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８２，１２６５０−１２６６０（２００７）．
２９．Ｂ．Ｊ．Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ  ｔｉｍｅｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｌｂｕｍｉｎ．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １２，７５０−７５６（２００１）．
３０．Ｉ．Ｂｅｒｂｅｒｉｃｈ，Ｇ．Ｌ．Ｓｈｕ，Ｅ．Ａ．Ｃｌａｒｋ，Ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｉｎｇ  ＣＤ４０  ｏｎ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｒａｐｉｄｌｙ  ａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａ  Ｂ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５３，４３５７−４３６６（１９９４）．
３１．Ｍ．Ｋａｉｌｅｈ，Ｒ．Ｓｅｎ，ＮＦ−ｋａｐｐａＢ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗｓ  ２４６，２５４−２７１（２０１２）．
３２．Ｍ．Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｇｐ３９  ａｎｄ  Ｂ７  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２５，５９６−６０３（１９９５）．
３３．Ｒ．Ｅｔｔｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＩＬ−２１  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｎａｉｖｅ  ａｎｄ  ｍｅｍｏｒｙ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｔｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １７５，７８６７−７８７９（２００５）．
３４．Ｊ．Ｌ．Ｋａｒｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＣＤ１９  ａｎｄ  ＣＤ３２ｂ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅ  ｈｕｍａｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １９２，１４８０−１４９０（２０１４）．
３５．Ｂ．Ｒ．Ｒｅｎｓｈａｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍｏｒａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８０，１８８９−１９００（１９９４）．
３６．Ｋ．Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ｓＣＤ１５４  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  １０４，９４７−９５５（１９９９）．
３７．Ｒ．Ｋ．Ｖａｋｋａｌａｎｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｌｅｖｅｌｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃａｐａｃｉｔｙ  ｏｆ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｓｅｒａ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４２，８７１−８８１（１９９９）．
３８．Ｐ．Ｂｉｒｄ，Ｊ．Ｅ．Ｃａｌｖｅｒｔ，Ｐ．Ｌ．Ａｍｌｏｔ，Ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ＩｇＧ４  ｓｕｂｃｌａｓｓ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｎｄ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ  ｉｎ  ｍａｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６９，３５５−３６０（１９９０）．
３９．Ｍ．Ｅ．Ｄｅｖｅｙ，Ｋ．Ｍ．Ｂｌｅａｓｄａｌｅ−Ｂａｒｒ，Ｐ．Ｂｉｒｄ，Ｐ．Ｌ．Ａｍｌｏｔ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ｓｕｂｃｌａｓｓｅｓ  ｓｈｏｗ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７０，１６８−１７４（１９９０）．
４０．Ｊ．Ｆｅｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｓｓａｙ  ｔｏ  ｍｅａｓｕｒｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈａｅｍｏｃｙａｎｉｎ  ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ  ａｎｄ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ．Ｂｒｉｔｉｓｈ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ７６，１８８−２０２（２０１３）．
４１．Ｊ．Ｓ．Ｍｉｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ  ｎｅｏ−ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ（ＫＬＨ）ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ａｆｔｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｏｒ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １１７，１４４−１５１（２００５）．
４２．Ｋ．Ｓｔｒｅｉｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｉｎ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ６６，１７３−１８４（２０１４）．
４３．Ｆ．Ｊ．Ｄｕｍｏｎｔ，ＩＤＥＣ−１３１．ＩＤＥＣ／Ｅｉｓａｉ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  ｄｒｕｇｓ  ３，７２５−７３４（２００２）．
４４．Ｗ．Ｓｃｈｕｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ＡＢＩ７９３，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ＣＤ１５４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｉｎ  ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ  ｒｅｎａｌ  ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ７７，７１７−７２６（２００４）．
４５．Ｆ．Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＣＤ４０  ｉｎ  ＣＤ４０Ｌ−  ａｎｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ９３，１１３７−１１４６（２００５）．
４６．Ｃ．Ｈｅｅｓｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｏｌｕｂｌｅ  ＣＤ４０  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ．Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３４８，１１０４−１１１１（２００３）．
４７．Ｆ．Ｍａｃｈ，Ｕ．Ｓｃｈｏｎｂｅｃｋ，Ｇ．Ｋ．Ｓｕｋｈｏｖａ，Ｅ．Ａｔｋｉｎｓｏｎ，Ｐ．Ｌｉｂｂｙ，Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ４０  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ．Ｎａｔｕｒｅ  ３９４，２００−２０３（１９９８）．
４８．Ｔ．Ｏｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｈｅｐａｔｉｃ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ａｃｃｅｐｔａｎｃｅ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ＣＤ４０  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｂｙ  ＡＳＫＰ１２４０  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｓｕｒｇｅｏｎｓ  １２，１７４０−１７５４（２０１２）．
４９．Ｍ．Ｗａｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＳＫＰ１２４０，ａ  ｆｕｌｌｙ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ４０  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｐｒｏｌｏｎｇｓ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｉｓｌｅｔ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｓｕｒｇｅｏｎｓ  １３，１９７６−１９８８（２０１３）．
５０．Ｄ．Ｓｐｅｎｃｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏ−ｘｙｌｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｓ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｔ  ａ  ｃｏｍｍｏｎ  ｍｏｔｉｆ  ｏｎ  ｇｌｙｃｉｎｅ−ｓｅｒｉｎｅ  ｌｉｎｋｅｒｓ．Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  １０２，３９２０−３９２４（２０１３）．
【図１】
2022502412.tif 000004
【図２】
2022502412.tif 000005
【図３】
2022502412.tif 000006
【図４】
2022502412.tif 000007
【図５】
2022502412.tif 000008
【図６】
2022502412.tif 000009
【図７】
2022502412.tif 000010
【図８】
2022502412.tif 000011
【図９】
2022502412.tif 000012
【図１０】
2022502412.tif 000013
【図１１】
2022502412.tif 000014
【図１２】
2022502412.tif 000015
【図１３】
2022502412.tif 000016
【図１４】
2022502412.tif 000017
【図１５】
2022502412.tif 000018
【図１６】
2022502412.tif 000019
【図１７】
2022502412.tif 000020
【図１８】
2022502412.tif 000021
【図１９】
2022502412.tif 000022
【図２０】
2022502412.tif 000023
【図２１】
2022502412.tif 000024
【図２２Ａ−Ｂ】
2022502412.tif 000025
【図２２Ｃ−Ｄ】
2022502412.tif 000026
【図２２Ｅ−Ｆ】
2022502412.tif 000027
【図２３Ａ−Ｂ】
2022502412.tif 000028
【図２３Ｃ】
2022502412.tif 000029
【配列表】
2022502412000001.app
【国際調査報告】
2022502412.tif 000030
2022502412.tif 000031
2022502412.tif 000032
2022502412.tif 000033