【手続補正書】
【提出日】平成22年7月22日(2010.7.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
天然に存在するかもしくは組換えのヒトＨｕＴｕ−８０腸内分泌細胞またはそれに由来する細胞に由来するモデル味覚細胞であって、前記モデル味覚細胞は、甘味味覚シグナル伝達に有用な１種または複数のシグナル伝達タンパク質を組換えにより発現し、前記シグナル伝達タンパク質は、Ｔ１Ｒ２、Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ２ホモ−オリゴマー、Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３ヘテロ−オリゴマーまたはそれらの組合せからなる群から選択される甘味物質受容体である、モデル味覚細胞。
【請求項２】
前記甘味物質受容体が、ヘテロ−オリゴマー性Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３甘味物質受容体である、請求項１に記載のモデル味覚細胞。
【請求項３】
前記甘味物質受容体が、ホモ−オリゴマー性Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ２甘味物質受容体である、請求項１に記載のモデル味覚細胞。
【請求項４】
前記甘味物質受容体が、Ｔ１Ｒ２甘味物質受容体である、請求項１に記載のモデル味覚細胞。
【請求項５】
Ｔ１Ｒ２、Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ２ホモ−オリゴマー、Ｔ１Ｒ２／Ｔ１Ｒ３ヘテロ−オリゴマーまたはそれらの組合せからなる群から選択される甘味物質受容体を介した甘味味覚シグナル伝達に必要なＧタンパク質、Ｇタンパク質シグナル伝達調節因子（ＲＧＳ）タンパク質およびエフェクターからなる群から選択されるタンパク質をさらに含む、請求項１に記載のモデル味覚細胞。
【請求項６】
前記モデル味覚細胞が、天然に存在するＨｕＴｕ−８０細胞に由来する、請求項１に記載のモデル味覚細胞。
【請求項７】
請求項１に記載のモデル味覚細胞を使用して、味覚シグナル伝達を調節する化合物についてスクリーニングするための方法であって、
ａ）請求項１に記載のモデル味覚細胞から、味覚シグナル伝達に有用な１種または複数の対象とするタンパク質を単離および精製するステップと、
ｂ）細胞に基づいた多様なアッセイを使用して、対象とする精製したタンパク質に対するか、または味覚シグナル伝達経路中のその他のタンパク質と対象とする精製したタンパク質の相互作用に対する試験化合物の効果を決定するステップと、
ｃ）前記細胞に基づいたアッセイに基づいて、対象とする精製したタンパク質を、または味覚シグナル伝達経路中のその他のタンパク質と対象とする精製したタンパク質の相互作用を調節する試験化合物を同定するステップと、
ｄ）前記モデル味覚細胞中での味覚シグナル伝達の調節において、化合物を検証するステップと
を含む方法。
【請求項８】
前記タンパク質が、味覚受容体、Ｇタンパク質、ＲＧＳタンパク質、エフェクターおよび味覚に関する任意の細胞機構からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記タンパク質が、Ｔ１Ｒ受容体ファミリー、そのホモ−またはヘテロ−オリゴマーを含む甘味物質受容体である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記タンパク質が、Ｇαｉタンパク質、α−ガストデューシン、Ｇαｉ２およびその他からなる群から選択されるＧαタンパク質を含むＧタンパク質である、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記タンパク質が、ＧＡＩＰ、ＲＧＳｚ１、ＲＧＳ１、ＲＧＳ２、ＲＧＳ３、ＲＧＳ４、ＲＧＳ５、ＲＧＳ６、ＲＧＳ７、ＲＧＳ８、ＲＧＳ９、ＲＧＳ１０、ＲＧＳ１１、ＲＧＳ１２、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ１４、ＲＧＳ１６、ＲＧＳ１７、ＲＧＳ２１、Ｄ−ＡＫＡＰ２、ｐ１１５ＲｈｏＧＥＦ、ＰＤＺ−ＲｈｏＧＥＦ、ｂＲＥＴ−ＲＧＳ、ＡｘｉｎまたはｍＣＯＮＤＵＣＴＩＮを含むＲＧＳタンパク質である、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
前記エフェクターが、ホスホリパーゼＣ（ＰＬＣ）、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、ＩＰ３、カルシウム（Ｃａ２＋）およびその他のセカンドメッセンジャーからなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記効果が、前記モデル味覚細胞中での、カルシウム（Ｃａ２＋）の放出を測定するためのアッセイ、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、ＰＩＰ２／ＩＰ３またはその他のセカンドメッセンジャーに関するアッセイ、ＧＩペプチドの分泌を測定するためのアッセイおよび神経伝達物質の分泌を測定するためのアッセイからなる群から選択される細胞に基づいたアッセイの観察を通して決定される、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記試験化合物が、前記モデル味覚細胞中で、味の官能試験を使用してさらに検証される、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
甘味を増強するための複数の化合物についてスクリーニングする方法であって、
ａ）請求項１に記載のモデル味覚細胞を提供するステップであって、モデル味覚細胞が、甘味物質受容体および甘味物質シグナル伝達に必要な１種もしくは複数のその他のタンパク質または関連の細胞分子を、天然に発現するステップと、
ｂ）前記モデル味覚細胞を、甘味物質と、単独でまたは試験化合物と組み合わせて接触させるステップと、
ｃ）ｉ）細胞内セカンドメッセンジャー（例えば、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、カルシウム、ホスホイノシチド）の変化、
ｉｉ）タンパク質キナーゼ活性（例えば、ＥＲＫ、ＰＫＣ、Ｓｒｃ、ＥＧＦＲ等）の変化、
ｉｉｉ）モデル味覚細胞のＧＩペプチドの分泌の変化、および
ｉｖ）モデル味覚細胞による神経伝達物質の分泌の変化
のうちの１種または複数をモニターするための細胞に基づいたアッセイを使用して、前記モデル味覚細胞に対する試験化合物の効果を決定するステップと、
ｄ）細胞内セカンドメッセンジャーの変化、タンパク質キナーゼ活性の変化、モデル味覚細胞のＧＩペプチドの分泌の変化、またはモデル味覚細胞による神経伝達物質の分泌の変化をもたらす化合物を同定するステップと、
ｅ）前記モデル味覚細胞中での甘味物質による甘味の増強について、ヒトによる味の官能試験において、同定した化合物の効力を検証するステップと
を含む方法。
【請求項１６】
前記甘味物質が、炭水化物の甘味物質、合成の強力な甘味物質、天然の強力な甘味物質、ポリオールおよびアミノ酸を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
甘味を増強するための複数の化合物についてスクリーニングする方法であって、
ａ）請求項１に記載のモデル味覚細胞を提供するステップであって、前記モデル味覚細胞が、ＲＧＳタンパク質および甘味物質シグナル伝達に必要な１種または複数のその他のタンパク質を天然に発現するステップと、
ｂ）ＲＧＳタンパク質活性を阻害する化合物（ＲＧＳタンパク質阻害剤）を同定するステップと、
ｃ）甘味物質単独でおよび化合物（ＲＧＳタンパク質の阻害剤）と組み合わせての、甘味物質受容体によって活性化された甘味シグナル伝達を決定するステップと、
ｄ）前記甘味物質の甘味シグナル伝達を増加させる化合物（ＲＧＳタンパク質阻害剤）を同定するステップと
を含む方法。
【請求項１８】
前記ＲＧＳタンパク質が、ＲＧＳ２１タンパク質である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
味覚を調節するための複数の化合物についてスクリーニングする方法であって、
ａ）請求項１に記載のモデル味覚細胞を提供するステップであって、モデル味覚細胞が、対象とする味覚受容体および味覚シグナル伝達に必要な１種もしくは複数のその他のタンパク質または関連の細胞分子を天然に発現するステップと、
ｂ）前記モデル味覚細胞を、味物質と、単独でまたは試験化合物と組み合わせて接触させるステップと、
ｃ）ｉ）細胞内セカンドメッセンジャー（例えば、ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ、カルシウム、ホスホイノシチド）の変化、
ｉｉ）タンパク質キナーゼ活性（例えば、ＥＲＫ、ＰＫＣ、Ｓｒｃ、ＥＧＦＲ等）の変化、
ｉｉｉ）モデル味覚細胞のＧＩペプチドの分泌の変化、または
ｉｖ）前記モデル味覚細胞による神経伝達物質の分泌の変化
のうちの１種または複数をモニターするための細胞に基づいたアッセイを使用して、前記モデル味覚細胞に対する試験化合物の効果を決定するステップと、
ｄ）細胞内セカンドメッセンジャーの変化、タンパク質キナーゼ活性の変化、モデル味覚細胞のＧＩペプチドの分泌の変化、または前記モデル味覚細胞による神経伝達物質の分泌の変化をもたらす化合物を同定するステップと、
ｅ）前記モデル味覚細胞中での前記味物質による味覚の調節について、ヒトによる味の官能試験において、同定した化合物の効力を検証するステップと
を含む方法。
【請求項２０】
前記モデル味覚細胞が、組換えＨｕＴｕ−８０細胞に由来する、請求項１に記載のモデル味覚細胞。
【請求項２１】
ＲＧＳタンパク質が、ＲＧＳ２１タンパク質である、請求項５に記載のモデル味覚細胞。
【請求項２２】
Ｇタンパク質が、Ｇαｇｕｓｔである、請求項５に記載のモデル味覚細胞。