【手続補正書】
【提出日】平成22年4月16日(2010.4.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
修飾された完全長プロテアーゼをコードする単離された修飾ポリヌクレオチドであって、
前記完全長プロテアーゼのプロ領域をコードしている修飾ポリヌクレオチドの一部分が配列番号（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：）５、１３、又は２４４の２８乃至１０８及び１０９のアミノ酸位置に等しい位置から選択される少なくとも１つのアミノ酸の位置における置換をコードしている変異を含むことを特徴とする、ポリヌクレオチド。
【請求項２】
前記修飾された完全長プロテアーゼがセリンプロテアーゼである、請求項１の単離された修飾ポリヌクレオチド。
【請求項３】
前記修飾された完全長プロテアーゼが野生型又は変異プレカーサーアルカリセリンプロテアーゼである、請求項１の単離された修飾ポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記プレカーサーアルカリセリンプロテアーゼがバチルスクラウシ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）又はバチルスレンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）アルカリセリンプロテアーゼである、請求項３の単離された修飾されたポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記単離された修飾ポリヌクレオチドがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１、９、又は２４０で定義されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１の単離された修飾ポリヌクレオチド。
【請求項６】
前記プロ領域をコードする前記修飾ポリヌクレオチドの一部がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、１３、又は２４４のＥ３３、Ｅ４３、Ａ４４、Ｅ４７、Ｖ４９、Ｅ５７、Ａ５９、Ｅ６３、Ｅ７０、Ｅ７４、Ｅ８４、及びＥ８８から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置における置換をコードしている変異を含む、請求項１の単離された修飾ポリヌクレオチド。
【請求項７】
前記Ｅ３３の置換が、Ｅ３３Ｄ、Ｅ３３Ｉ、Ｅ３３Ｓ、Ｅ３３Ｎ、Ｅ３３Ｋ、Ｅ３３Ｈ、Ｅ３３Ｑ、及びＥ３３Ｒから選択される、請求項６の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８】
前記Ｅ５７の置換がＥ５７Ｆ、Ｅ５７Ｗ、Ｅ５７Ｋ、Ｅ５７Ｒ、Ｅ５７Ｄ、Ｅ５７Ｍ、Ｅ５７Ｃ、Ｅ５７Ｑ、Ｅ５７Ｓ、Ｅ５７Ｈ、Ｅ５７Ｎ、及びＥ５７Ｇから選択される請求項６の単離ポリヌクレオチド。
【請求項９】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、１３、又は２２４の２８乃至１０８及び１０９のアミノ酸位置に等しい位置から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置における変異をコードするために変異されたプレカーサープロ配列を含む、単離された修飾ポリヌクレオチド。
【請求項１０】
成熟領域を含む完全長プロテアーゼをコードしているポリヌクレオチドを更に含み、
成熟領域をコードしているポリヌクレオチド配列がＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、１６、又は２４７に少なくとも７０％の配列同一性を有することを特徴とする、請求項９の単離された修飾ポリヌクレオチド。
【請求項１１】
請求項１又は９の修飾されたポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１２】
請求項１１のベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項１３】
前記宿主細胞が微生物である、請求項１２の宿主細胞。
【請求項１４】
前記宿主細胞がバチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．）、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、及びアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）から選択される微生物である、請求項１２の宿主細胞。
【請求項１５】
前記宿主細胞がバチルススブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞である、請求項１２の宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１２の宿主細胞により生成されたプロテアーゼ。
【請求項１７】
微生物中で異種プロテアーゼを生成する方法であって、
（Ａ）好適な条件でＢａｃｉｌｌｕｓ細胞を培養する工程であって、前記バチルス宿主細胞が修飾プロテアーゼをコードしている修飾ポリヌクレオチドを含む、工程及び
（ｂ）微生物に前記プロテアーゼの生産をおこなわせる工程、を含む方法。
【請求項１８】
前記バチルス宿主細胞により生成された異種プロテアーゼを回収する、請求項１７の方法。
【請求項１９】
前記プロテアーゼがアルカリセリンプロテアーである、請求項１７の方法。
【請求項２０】
前記修飾されたポリヌクレオチドがＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８、１６、又は２４７に少なくとも７０％同一である、変異領域を含んでいるプロテアーゼをコードしている、請求項１７の方法。
【請求項２１】
修飾されたプロテアーゼをコードしているポリヌクレオチドが、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５、１３、又は２４０の２８乃至１０８及び１０９の位置のアミノ酸に等しい位置からなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸の位置において置換をコードしている変異を含んでいるプロ領域を含む、請求項１７の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つのアミノ酸置換がＥ３３Ｄ、Ｅ３３Ｉ、Ｅ３３Ｓ、Ｅ３３Ｎ、Ｅ３３Ｋ、Ｅ３３Ｈ、Ｅ３３Ｑ、Ｅ３３Ｒ、Ｅ５７Ｆ、Ｅ５７Ｗ、Ｅ５７Ｋ、Ｅ５７Ｒ、Ｅ５７Ｄ、Ｅ５７Ｍ、Ｅ５７Ｃ、Ｅ５７Ｑ、Ｅ５７Ｓ、Ｅ５７Ｈ、Ｅ５７Ｎ、及びＥ５７Ｇから選択される、請求項２１の方法。
【請求項２３】
前記宿主細胞が、バチルスリケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、バチルスレンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）、バチルススブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、バチルスアミロリケファシエンス（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）、バチルスブレビス（Ｂ．ｂｒｅｖｉｓ）、バチルスステアロセレモフィリス（Ｂ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、バチルスクラウシ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）、バチルスアルカロフィリス（Ｂ．ａｌｋａｌｏｈｉｌｕｓ）、バチルスハロデュランス（Ｂ．ｈａｌｏｄｕｒａｎｓ）、バチルスコアギュランス（Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ）、バチルスサーキュランス（Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓ）、バチルスプミラス（Ｂ．ｐｕｍｉｌｕｓ）、バチルスツリンジェンシス（Ｂ．ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）からなる群より選択される、請求項１７の方法。
【請求項２４】
前記異種プロテアーゼがバチルスクラウシ（Ｂ．ｃｌａｕｓｉｉ）又はバチルスレンタス（Ｂ．ｌｅｎｔｕｓ）プロテアーゼである、請求項１７の方法。
【請求項２５】
前記宿主細胞がバチルススブチリス（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）宿主細胞である、請求項１７の方法。
【請求項２６】
前記異種プロテアーゼが少なくとも１の生成比を示す、請求項１７の方法。
【請求項２７】
配列番号５、１３、又は２４４のアミノ酸位置２８乃至１０８及び１０９に等しい位置か選択される少なくとも１つのアミノ酸位置における置換をコードしている前記変異が、Ａ２８Ｑ、Ａ２８Ｔ、Ｅ２９Ｔ、Ｅ２９Ｙ、Ｅ２９Ｖ、Ｅ２９Ｑ、Ｅ２９Ｋ、Ｅ２９Ｍ、Ｅ２９Ｐ、Ｅ２９Ｎ、Ｅ２９Ｓ、Ｅ２９Ｇ、Ｅ２９Ａ、Ｅ３０Ｑ、Ｅ３０Ｋ、Ｅ３０Ｍ、Ｅ３０Ａ、Ｅ３０Ｇ、Ｅ３０Ｒ、Ｅ３０Ｓ、Ｅ３０Ｈ、Ｅ３０Ｎ、Ｅ３０Ｔ、Ａ３１Ｒ、Ａ３１Ｇ、Ａ３１Ｓ、Ａ３１Ｋ、Ａ３１Ｐ、Ｅ３３Ｒ、Ｅ３３Ｑ、Ｅ３３Ｇ、Ｅ３３Ｈ、Ｅ３３Ｎ、Ｅ３３Ｓ、Ｅ３３Ｄ、Ｅ３３Ｉ、Ｅ３３Ｋ、Ｅ３３Ｍ、Ｋ３４Ｒ、Ｎ４０Ｖ、Ｎ４０Ｋ、Ｎ４０Ｅ、Ｎ４０Ｑ、Ｎ４０Ｈ、Ｎ４０Ｙ、Ｎ４０Ｔ、Ｎ４０Ａ、Ｎ４０Ｌ、Ｎ４０Ｗ、Ｎ４０Ｆ、Ｎ４０Ｒ、Ｅ４１Ａ、Ｅ４１Ｓ、Ｅ４１Ｎ、Ｅ４１Ｔ、Ｅ４１Ｈ、Ｅ４１Ｒ、Ｑ４２Ｍ、Ｑ４２Ｒ、Ｑ４２Ｐ、Ｑ４２Ｗ、Ｅ４３Ｓ、Ｅ４３Ｒ、Ｅ４３Ｄ、Ｅ４３Ｈ、Ｅ４３Ａ、Ａ４４Ｄ、Ａ４４Ｑ、Ａ４４Ｅ、Ａ４４Ｓ、Ｖ４５Ｌ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｃ、Ｓ４６Ｈ、Ｓ４６Ｒ、Ｓ４６Ｔ、Ｓ４６Ａ、Ｓ４６Ｑ、Ｓ４６Ｙ、Ｓ４６Ｗ、Ｅ４７Ｄ、Ｅ４７Ｒ、Ｅ４７Ｋ、Ｅ４７Ｑ、Ｅ４７Ｈ、Ｆ４８Ｗ、Ｖ４９Ｇ、Ｅ５０Ｈ、Ｑ５１Ｍ、Ｑ５１Ｒ、Ｖ５２Ｌ、Ｖ５２Ｗ、Ｅ５３Ａ、Ｅ５３Ｋ、Ｅ５３Ｒ、Ｅ５３Ｈ、Ａ５４Ｌ、Ａ５４Ｓ、Ｄ５６Ｇ、Ｄ５６Ｓ、Ｄ５６Ｋ、Ｄ５６Ｒ、Ｅ５７Ｎ、Ｅ５７Ｈ、Ｅ５７Ｓ、Ｅ５７Ｇ、Ｅ５７Ｑ、Ｅ５７Ｃ、Ｅ５７Ｍ、Ｅ５７Ｄ、Ｅ５７Ｒ、Ｅ５７Ｋ、Ｅ５７Ｗ、Ｅ５７Ｆ、Ｖ５８Ｒ、Ｖ５８Ｙ、Ｖ５８Ｈ、Ｖ５８Ｍ、Ｖ５８Ｋ、Ｖ５８Ｃ、Ｖ５８Ｌ、Ｖ５８Ａ、Ｖ５８Ｆ、Ａ５９Ｒ、Ａ５９Ｙ、Ａ５９Ｖ、Ａ５９Ｉ、Ａ５９Ｆ、Ａ５９Ｗ、Ａ５９Ｍ、Ａ５９Ｌ、Ａ５９Ｈ、Ｉ６０Ｌ、Ｌ６１Ｍ、Ｌ６１Ｔ、Ｌ６１Ａ、Ｌ６１Ｉ、Ｌ６１Ｖ、Ｌ６１Ｇ、Ｌ６１Ｐ、Ｌ６１Ｄ、Ｓ６２Ｖ、Ｓ６２Ｗ、Ｓ６２Ｍ、Ｓ６２Ｐ、Ｓ６２Ｎ、Ｓ６２Ｈ、Ｓ６２Ｑ、Ｓ６２Ｄ、Ｓ６２Ｇ、Ｓ６２Ｉ、Ｓ６２Ａ、  Ｓ６２Ｌ、Ｓ６２Ｃ、Ｓ６２Ｒ、Ｓ６２Ｔ、Ｅ６３Ａ、Ｅ６３Ｇ、Ｅ６３Ｄ、Ｅ６３Ｒ、Ｅ６３Ｔ、Ｅ６３Ｑ、Ｅ６３Ｃ、Ｅ６３Ｋ、Ｅ６３Ｈ、Ｅ６３Ｉ、Ｅ６３Ｓ、Ｅ６４Ｔ、Ｅ６４Ｒ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６５Ｍ、Ｅ６５Ｒ、Ｅ６５Ｑ、Ｅ６５Ａ、Ｅ６５Ｖ、Ｅ６５Ｙ、Ｅ６６Ｓ、Ｅ６６Ａ、Ｅ６６Ｔ、Ｅ６６Ｐ、Ｅ６６Ｒ、Ｅ６６Ｙ、Ｅ６６Ｋ、Ｅ６６Ｇ、Ｅ６６Ｖ、Ｅ６６Ｍ、Ｅ６６Ｑ、Ｖ６７Ｉ、Ｅ６８Ｋ、Ｅ６８Ｑ、Ｉ６９Ｖ、Ｅ７０Ｔ、Ｅ７０Ｒ、Ｅ７０Ｎ、Ｅ７０Ｓ、Ｅ７０Ｖ、Ｌ７１Ｖ、Ｌ７１Ｉ、Ｅ７４Ｑ、Ｅ７４Ｒ、Ｅ７４Ｖ、Ｅ７４Ｋ、Ｅ７４Ａ、Ｅ７４Ｉ、Ｆ７５Ｙ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６Ｓ、  Ｅ７６Ｔ、Ｅ７６Ｈ、Ｅ７６Ｎ、Ｅ７６Ｄ、Ｔ７７Ｎ、Ｔ７７Ｈ、Ｉ７８Ｔ、Ｓ８２Ｌ、Ｓ８２Ｑ、Ｓ８２Ｖ、Ｓ８２Ｎ、Ｖ８３Ｙ、Ｅ８４Ｌ、Ｅ８４Ｋ、Ｅ８４Ｖ、Ｅ８４Ｍ、Ｅ８４Ｓ、Ｅ８４Ａ、Ｅ８４Ｇ、Ｅ８４Ｔ、Ｅ８４Ｒ、Ｅ８４Ｆ、Ｅ８４Ｑ、Ｌ８５Ｆ、Ｓ８６Ｒ、Ｓ８６Ｄ、Ｓ８６Ｋ、Ｓ８６Ｎ、Ｓ８６Ａ、Ｅ８８Ｐ、Ｅ８８Ｄ、Ｄ８９Ｋ、Ｄ８９Ｈ、Ｄ９１Ｅ、Ｄ９１Ｐ、Ｄ９１Ａ、Ｄ９１Ｔ、Ｄ９１Ｎ、Ｄ９１Ｋ、Ｄ９１Ｗ、Ｄ９１Ｒ、Ｄ９１Ｆ、Ａ９２Ｒ、Ａ９２Ｋ、Ａ９２Ｔ、Ａ９２Ｍ、Ａ９２Ｖ、Ａ９２Ｑ、Ａ９２Ｉ��Ａ９２Ｌ、Ａ９２Ｓ、Ｅ９４Ａ、Ｅ９４Ｍ、Ｅ９４Ｔ、Ｅ９４Ｒ、Ｅ９４Ｓ、  Ｅ９４Ｌ、Ｌ９５Ｅ、Ｌ９５Ｒ、Ｌ９５Ｋ、Ｌ９５Ｓ、Ｌ９５Ｃ、Ｌ９５Ａ、Ｌ９５Ｔ、  Ｌ９５Ｄ、Ｌ９５Ｇ、Ｌ９５Ｖ、Ｌ９５Ｈ、Ｄ９６Ｙ、Ｄ９６Ｈ、Ｄ９６Ｃ、Ｄ９６Ｓ、Ｄ９６Ｌ、Ｄ９６Ｅ、Ｄ９６Ｉ、Ｄ９６Ｗ、Ｄ９６Ｖ、Ａ９８Ｒ、Ａ９８Ｋ、Ａ９８Ｄ、Ａ９８Ｌ、Ｓ１００Ａ、Ｅ１０３Ｔ、Ｅ１０３Ｐ、Ｅ１０４Ｐ、Ａ１０６Ｆ、Ａ１０６Ｋ、Ａ１０６Ｖ、Ａ１０６Ｌ、Ａ１０６Ｍ、Ｅ１０７Ｑ、Ｅ１０７Ｐ、Ｔ１０９Ｙ、Ｔ１０９Ｅ、Ｔ１０９Ｇ、Ｔ１０９Ｎ、Ｔ１０９Ｍ、Ｔ１０９Ｒ、Ｔ１０９Ｑ、及びＴ１０９Ｗからなる群より選択される１つの置換をコードする、請求項１の単離ポリヌクレオチド。
【請求項２８】
前記変異が配列番号１３の前記位置の少なくとも１つの置換をコードする、請求項２７の単離ポリヌクレオチド。
【請求項２９】
修飾されたプロテアーゼをコードする前記ポリヌクレオチドが配列番号５、１３、又は２４０のアミノ酸位置２８乃至１０８及び１０９に等しい位置から選択される少なくとも１つのアミノ酸位置での置換をコードしている変異を含むプロ領域を含み、前記置換がＡ２８Ｑ、Ａ２８Ｔ、Ｅ２９Ｔ、Ｅ２９Ｙ、Ｅ２９Ｖ、Ｅ２９Ｑ、Ｅ２９Ｋ、Ｅ２９Ｍ、Ｅ２９Ｐ、Ｅ２９Ｎ、Ｅ２９Ｓ、Ｅ２９Ｇ、Ｅ２９Ａ、Ｅ３０Ｑ、Ｅ３０Ｋ、Ｅ３０Ｍ、Ｅ３０Ａ、Ｅ３０Ｇ、Ｅ３０Ｒ、Ｅ３０Ｓ、Ｅ３０Ｈ、Ｅ３０Ｎ、Ｅ３０Ｔ、Ａ３１Ｒ、Ａ３１Ｇ、Ａ３１Ｓ、Ａ３１Ｋ、Ａ３１Ｐ、Ｅ３３Ｒ、Ｅ３３Ｑ、Ｅ３３Ｇ、Ｅ３３Ｈ、Ｅ３３Ｎ、Ｅ３３Ｓ、Ｅ３３Ｄ、Ｅ３３Ｉ、Ｅ３３Ｋ、Ｅ３３Ｍ、Ｋ３４Ｒ、Ｎ４０Ｖ、Ｎ４０Ｋ、Ｎ４０Ｅ、Ｎ４０Ｑ、Ｎ４０Ｈ、Ｎ４０Ｙ、Ｎ４０Ｔ、Ｎ４０Ａ、Ｎ４０Ｌ、Ｎ４０Ｗ、Ｎ４０Ｆ、Ｎ４０Ｒ、Ｅ４１Ａ、Ｅ４１Ｓ、Ｅ４１Ｎ、Ｅ４１Ｔ、Ｅ４１Ｈ、Ｅ４１Ｒ、Ｑ４２Ｍ、Ｑ４２Ｒ、Ｑ４２Ｐ、Ｑ４２Ｗ、Ｅ４３Ｓ、Ｅ４３Ｒ、Ｅ４３Ｄ、Ｅ４３Ｈ、Ｅ４３Ａ、Ａ４４Ｄ、Ａ４４Ｑ、Ａ４４Ｅ、Ａ４４Ｓ、Ｖ４５Ｌ、Ｖ４５Ａ、Ｖ４５Ｃ、Ｓ４６Ｈ、Ｓ４６Ｒ、Ｓ４６Ｔ、Ｓ４６Ａ、Ｓ４６Ｑ、Ｓ４６Ｙ、Ｓ４６Ｗ、Ｅ４７Ｄ、Ｅ４７Ｒ、Ｅ４７Ｋ、Ｅ４７Ｑ、Ｅ４７Ｈ、Ｆ４８Ｗ、Ｖ４９Ｇ、Ｅ５０Ｈ、Ｑ５１Ｍ、Ｑ５１Ｒ、Ｖ５２Ｌ、Ｖ５２Ｗ、Ｅ５３Ａ、Ｅ５３Ｋ、Ｅ５３Ｒ、Ｅ５３Ｈ、Ａ５４Ｌ、Ａ５４Ｓ、Ｄ５６Ｇ、Ｄ５６Ｓ、Ｄ５６Ｋ、Ｄ５６Ｒ、Ｅ５７Ｎ、Ｅ５７Ｈ、Ｅ５７Ｓ、Ｅ５７Ｇ、Ｅ５７Ｑ、Ｅ５７Ｃ、Ｅ５７Ｍ、Ｅ５７Ｄ、Ｅ５７Ｒ、Ｅ５７Ｋ、Ｅ５７Ｗ、Ｅ５７Ｆ、Ｖ５８Ｒ、Ｖ５８Ｙ、Ｖ５８Ｈ、Ｖ５８Ｍ、Ｖ５８Ｋ、Ｖ５８Ｃ、Ｖ５８Ｌ、Ｖ５８Ａ、Ｖ５８Ｆ、Ａ５９Ｒ、Ａ５９Ｙ、Ａ５９Ｖ、Ａ５９Ｉ、Ａ５９Ｆ、Ａ５９Ｗ、Ａ５９Ｍ、Ａ５９Ｌ、Ａ５９Ｈ、Ｉ６０Ｌ、Ｌ６１Ｍ、Ｌ６１Ｔ、Ｌ６１Ａ、Ｌ６１Ｉ、Ｌ６１Ｖ、Ｌ６１Ｇ、Ｌ６１Ｐ、Ｌ６１Ｄ、Ｓ６２Ｖ、Ｓ６２Ｗ、Ｓ６２Ｍ、Ｓ６２Ｐ、Ｓ６２Ｎ、Ｓ６２Ｈ、Ｓ６２Ｑ、Ｓ６２Ｄ、Ｓ６２Ｇ、Ｓ６２Ｉ、Ｓ６２Ａ、Ｓ６２Ｌ、Ｓ６２Ｃ、Ｓ６２Ｒ、Ｓ６２Ｔ、Ｅ６３Ａ、Ｅ６３Ｇ、Ｅ６３Ｄ、Ｅ６３Ｒ、Ｅ６３Ｔ、Ｅ６３Ｑ、Ｅ６３Ｃ、Ｅ６３Ｋ、Ｅ６３Ｈ、Ｅ６３Ｉ、Ｅ６３Ｓ、Ｅ６４Ｔ、Ｅ６４Ｒ、Ｅ６４Ｓ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６５Ｍ、Ｅ６５Ｒ、Ｅ６５Ｑ、Ｅ６５Ａ、Ｅ６５Ｖ、Ｅ６５Ｙ、Ｅ６６Ｓ、Ｅ６６Ａ、Ｅ６６Ｔ、Ｅ６６Ｐ、Ｅ６６Ｒ、Ｅ６６Ｙ、Ｅ６６Ｋ、Ｅ６６Ｇ、Ｅ６６Ｖ、Ｅ６６Ｍ、Ｅ６６Ｑ、Ｖ６７Ｉ、Ｅ６８Ｋ、Ｅ６８Ｑ、Ｉ６９Ｖ、Ｅ７０Ｔ、Ｅ７０Ｒ、Ｅ７０Ｎ、Ｅ７０Ｓ、Ｅ７０Ｖ、Ｌ７１Ｖ、Ｌ７１Ｉ、Ｅ７４Ｑ、Ｅ７４Ｒ、Ｅ７４Ｖ、Ｅ７４Ｋ、Ｅ７４Ａ、Ｅ７４Ｉ、Ｆ７５Ｙ、Ｅ７６Ｋ、Ｅ７６Ｓ、Ｅ７６Ｔ、Ｅ７６Ｈ、Ｅ７６Ｎ、Ｅ７６Ｄ、Ｔ７７Ｎ、Ｔ７７Ｈ、Ｉ７８Ｔ、Ｓ８２Ｌ、Ｓ８２Ｑ、Ｓ８２Ｖ、Ｓ８２Ｎ、Ｖ８３Ｙ、Ｅ８４Ｌ、Ｅ８４Ｋ、Ｅ８４Ｖ、Ｅ８４Ｍ、  Ｅ８４Ｓ、Ｅ８４Ａ、Ｅ８４Ｇ、Ｅ８４Ｔ、Ｅ８４Ｒ、Ｅ８４Ｆ、Ｅ８４Ｑ、Ｌ８５Ｆ、Ｓ８６Ｒ、Ｓ８６Ｄ、Ｓ８６Ｋ、Ｓ８６Ｎ、Ｓ８６Ａ、Ｅ８８Ｐ、Ｅ８８Ｄ、Ｄ８９Ｋ、Ｄ８９Ｈ、Ｄ９１Ｅ、Ｄ９１Ｐ、Ｄ９１Ａ、Ｄ９１Ｔ、Ｄ９１Ｎ、Ｄ９１Ｋ、Ｄ９１Ｗ、Ｄ９１Ｒ、Ｄ���１Ｆ、Ａ９２Ｒ、Ａ９２Ｋ、Ａ９２Ｔ、Ａ９２Ｍ、Ａ９２Ｖ、Ａ９２Ｑ、Ａ９２Ｉ、Ａ９２Ｌ、Ａ９２Ｓ、Ｅ９４Ａ、Ｅ９４Ｍ、Ｅ９４Ｔ、Ｅ９４Ｒ、Ｅ９４Ｓ、Ｅ９４Ｌ、Ｌ９５Ｅ、Ｌ９５Ｒ、Ｌ９５Ｋ、Ｌ９５Ｓ、Ｌ９５Ｃ、Ｌ９５Ａ、Ｌ９５Ｔ、Ｌ９５Ｄ、Ｌ９５Ｇ、Ｌ９５Ｖ、Ｌ９５Ｈ、Ｄ９６Ｙ、Ｄ９６Ｈ、Ｄ９６Ｃ、Ｄ９６Ｓ、Ｄ９６Ｌ、Ｄ９６Ｅ、Ｄ９６Ｉ、Ｄ９６Ｗ、Ｄ９６Ｖ、Ａ９８Ｒ、Ａ９８Ｋ、Ａ９８Ｄ、Ａ９８Ｌ、Ｓ１００Ａ、Ｅ１０３Ｔ、Ｅ１０３Ｐ、Ｅ１０４Ｐ、Ａ１０６Ｆ、Ａ１０６Ｋ、Ａ１０６Ｖ、Ａ１０６Ｌ、Ａ１０６Ｍ、Ｅ１０７Ｑ、Ｅ１０７Ｐ、Ｔ１０９Ｙ、Ｔ１０９Ｅ、Ｔ１０９Ｇ、Ｔ１０９Ｎ、Ｔ１０９Ｍ、Ｔ１０９Ｒ、Ｔ１０９Ｑ、及びＴ１０９Ｗからなる群より選択される、請求項１２の方法。
【請求項３０】
前記変異が配列番号１の前記位置の少なくとも１つの置換をコードする、請求項２９の方法。