(57)【要約】  ＫＺＲ−６１６またはその塩、および糖を含む医薬製剤であって、凍結乾燥される製剤、該製剤を調製する方法、免疫関連疾患を治療する方法、および炎症を治療する方法が、本明細書に提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＫＺＲ−６１６またはその塩、および糖を含む医薬製剤であって、ＫＺＲ−６１６が構造
【化１】
2022501404.tif 000041
を有し、前記製剤が、凍結乾燥製剤である、医薬製剤。
【請求項２】
ＫＺＲ−６１６が、マレイン酸塩として存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
凍結乾燥の前に測定されるとき、３．０〜４．５のｐＨを有する、請求項１または２に記載の製剤。
【請求項４】
３．８〜４．３のｐＨを有する、請求項３に記載の製剤。
【請求項５】
４．２のｐＨを有する、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
追加の緩衝液を含まない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項７】
コハク酸緩衝液をさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項８】
前記ＫＺＲ−６１６またはその塩が、凍結乾燥の前に測定されるとき、５０〜３００ｍｇ／ｍＬの量で存在する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項９】
前記ＫＺＲ−６１６またはその塩が、１００ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの量で存在する、請求項８に記載の製剤。
【請求項１０】
前記ＫＺＲ−６１６またはその塩が、前記ＫＺＲ−６１６遊離塩基の重量に基づいて、１２５ｍｇ／ｍＬの量で存在する、請求項９に記載の製剤。
【請求項１１】
前記糖が、前記製剤の総重量に基づいて、０．１重量％〜５重量％の量で存在する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１２】
前記糖が、約１．５重量％〜３重量％の量で存在する、請求項１１に記載の製剤。
【請求項１３】
前記糖が、２重量％の量で存在する、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
前記糖が、マンニトール、トレハロース、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１５】
前記糖が、トレハロースを含む、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１６】
前記凍結乾燥製剤が、１％未満の含水率を有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１７】
５℃、２５℃または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、４．１〜４．３のｐＨを有する（再構成時に測定）、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１８】
５℃、２５℃または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、１４０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬのＫＺＲ−６１６またはその塩の濃度を有する（再構成時に測定）、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項１９】
５℃、２５℃または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、４．５分未満の再構成時間を有する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２０】
凍結乾燥製剤が、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、１％未満の含水率を有する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２１】
前記ＫＺＲ−６１６またはその塩が、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、少なくとも９３％純粋である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の製剤。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の製剤および再構成用の溶媒を含む再構成製剤。
【請求項２３】
再構成用の溶媒が、注射用水（ＷＦＩ）または５％含水デキストロースを含む、請求項２２に記載の再構成製剤。
【請求項２４】
２７５〜３２５ｍＯｓｍの浸透圧を有する、請求項２２または２３に記載の再構成製剤。
【請求項２５】
皮下注射用である、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の再構成製剤。
【請求項２６】
Ｔ１／２によって測定されるとき、ＫＺＲ−６１６またはその塩およびポリソルベート−８０を含む製剤のものよりも少なくとも５０％速い吸収速度を有する、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の再構成製剤。
【請求項２７】
ＫＺＲ−６１６またはその塩およびポリソルベート−８０を含む製剤（「ＰＳ−８０製剤」）のものの少なくとも１５０％のＣｍａｘを有する、請求項２２〜２６のいずれか一項に記載の再構成製剤。
【請求項２８】
ＫＺＲ−６１６またはその塩と前記糖とを混合して水溶液を形成することと、前記水溶液を凍結乾燥して前記凍結乾燥製剤を形成することと、を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の前記製剤を調製する方法。
【請求項２９】
前記凍結乾燥製剤を溶媒で再構成して再構成製剤を形成することをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記溶媒が、注射用水または５％含水デキストロースである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
対象における免疫関連疾患を治療する方法であって、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の再構成製剤を投与することを含む、方法。
【請求項３２】
前記対象が、ループス腎炎または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）に罹患している、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
対象における炎症を治療する方法であって、請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の再構成製剤を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
化合物、（２Ｓ，３Ｒ）−Ｎ−［（２Ｓ）−３−（シクロペンタ−１−エン−１−イル）−１−［（２Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル］−１−オキソプロパン−２−イル］−３−ヒドロキシ−３−（４−メトキシフェニル）−２−［（２Ｓ）−２−［２−（モルホリン−４−イル）アセトアミド］プロパンアミド］プロパンアミド（「ＫＺＲ−６１６」）は、免疫プロテアソーム阻害剤として有用である。
【化１】
2022501404.tif 000002
【０００２】
真核生物において、タンパク質分解は、ユビキチン経路を介して主に媒介され、そこで、破壊の標的となるタンパク質が７６アミノ酸のポリペプチドユビキチンに連結される。ひとたび標的化されると、ユビキチン化されたタンパク質は、次いで、多触媒性プロテアーゼである２６Ｓプロテアソームの基質として機能し、その３つの主要なタンパク質分解活性の作用によりタンパク質を短いペプチドに切断する。細胞内タンパク質代謝回転における一般的な機能を有する一方で、プロテアソーム媒介性分解は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩ抗原提示、アポトーシス、細胞増殖調節、ＮＦ−κＢ活性化、抗原プロセシング、および炎症促進性シグナルの伝達などの多くのプロセスにおいても重要な役割を果たす。
【０００３】
国際公開第２０１４／１５２１３４号は、トリペプチドエポキシケトンプロテアソーム阻害剤、および異常な免疫プロテアソーム活性に関連する疾患および病態を治療するためにこれらの化合物を使用する方法を記載している。ＫＺＲ−６１６などのトリペプチドエポキシケトンプロテアソーム阻害剤は、患者の疾患および病態の治療に有用であるため、ＫＺＲ−６１６の可溶性で安定した製剤が必要である。
【特許文献１】国際公開第２０１４／１５２１３４号公報
【発明の概要】
【０００４】
ＫＺＲ−６１６またはその塩、および糖を含む医薬製剤が本明細書に提供され、ＫＺＲ−６１６は、下記の構造を有し、
【化２】
2022501404.tif 000003
、製剤は凍結乾燥製剤である。いくつかの実施形態では、ＫＺＲ−６１６はマレイン酸塩である。場合によっては、製剤は、凍結乾燥前に測定したとき、３．０〜４．５のｐＨを有する。場合によっては、製剤は、３．８〜４．３のｐＨを有する。場合によっては、製剤は、４．２のｐＨを有する。実施形態では、製剤は緩衝液を含まない。実施形態では、ＫＺＲ−６１６またはその塩は、凍結乾燥の前に測定したとき、５０〜３００ｍｇ／ｍＬの量で存在する。実施形態では、ＫＺＲ−６１６またはその塩は、１００ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの量で存在する。場合によっては、ＫＺＲ−６１６またはその塩は、ＫＺＲ−６１６遊離塩基の重量に基づいて、１２５ｍｇ／ｍＬの量で存在する。
【０００５】
場合によっては、糖は、製剤の総重量に基づいて、０．１重量％〜５重量％の量で存在する。実施形態では、糖は、１．５重量％〜３重量％の量で存在する。実施形態では、糖は、２重量％の量で存在する。実施形態では、糖は、マンニトール、トレハロース、またはこれらの組み合わせを含む。場合によっては、糖は、トレハロースを含む。
【０００６】
実施形態では、凍結乾燥製剤は、１％未満の含水率を有する。場合によっては、製剤は、５℃、２５℃または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、４．１〜４．３のｐＨを有する（再構成時に測定）。実施形態では、製剤は、５℃、２５℃または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、１４０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬのＫＺＲ−６１６またはその塩の濃度を有する（再構成時に測定）。場合によっては、製剤は、５℃、２５℃または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、４．５分未満の再構成時間を有する。実施形態では、凍結乾燥製剤は、５℃、２５℃または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、１％未満の分未満の再構成時間を有する。場合によっては、ＫＺＲ−６１６またはその塩は、５℃、２５℃または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管した後に、少なくとも９３％純粋である。
【０００７】
本明細書に開示される製剤および再構成用の溶媒を含む再構成製剤も本明細書に提供される。実施形態では、再構成用の溶媒は、注射用水（ＷＦＩ）または５％含水デキストロースを含む。実施形態では、再構成製剤は、２７５〜３２５ｍＯｓｍの浸透圧を有する。実施形態では、再構成製剤は、皮下注射用である。
【０００８】
場合によっては、再構成製剤は、Ｔ１／２によって測定されるとき、ＫＺＲ−６１６またはその塩およびポリソルベート−８０を含む製剤（「ＰＳ−８０製剤」）のものよりも少なくとも５０％速い吸収速度を有する。実施形態では、再構成製剤は、ＫＺＲ−６１６またはその塩およびポリソルベート−８０を含む製剤のものの少なくとも１５０％のＣｍａｘを有する。
【０００９】
ＫＺＲ−６１６またはその塩と糖とを混合して水溶液を形成することと、水溶液を凍結乾燥して凍結乾燥製剤を形成することと、を含む、本明細書に記載の製剤を調製するための方法も本明細書に提供される。場合によっては、この方法は、凍結乾燥製剤を溶媒で再構成して、再構成製剤を形成することをさらに含む。実施形態では、溶媒は、注射用水または５％含水デキストロースである。本明細書の再構成製剤を投与することを含む、対象における免疫関連疾患を治療する方法が、本明細書にさらに提供される。場合によっては、対象はループス腎炎または全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）に罹患している。本明細書に記載の再構成製剤を投与することにより、対象の炎症を治療する方法も本明細書に提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１Ａ】５℃で６ヶ月間保管した後の、様々な製剤についてのＲＰ−ＨＰＬＣ分析を示す。
【図１Ｂ】２５℃で６ヶ月間保管した後の、様々な製剤についてのＲＰ−ＨＰＬＣ分析を示す。
【図１Ｃ】４０℃で６ヶ月間保管した後の、様々な製剤についてのＲＰ−ＨＰＬＣ分析を示す。
【図２Ａ】５℃で６ヶ月間保管した後の、様々な製剤についてのＲＰ−ＨＰＬＣ分析の傾向を示す。
【図２Ｂ】２５℃で６ヶ月間保管した後の、様々な製剤についてのＲＰ−ＨＰＬＣ分析の傾向を示す
【図２Ｃ】４０℃で６ヶ月間保管した後の、様々な製剤についてのＲＰ−ＨＰＬＣ分析の傾向を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
凍結乾燥されて安定であるＫＺＲ−６１６またはその塩の製剤が、本明細書に提供される。凍結乾燥された製剤は、より長い貯蔵寿命、冷蔵温度での容易な保管、および輸送ならびに取り扱いのための製剤の重量および／または体積の減少のうちの１つ以上を含む利点を提供する。凍結乾燥製剤の再構成製剤、製剤を調製する方法、および開示された製剤を使用して免疫関連疾患ならびに／または炎症を治療する方法も開示される。
【００１２】
以下でさらに説明するように、本明細書のＫＺＲ−６１６またはその塩の医薬製剤は、いくつかの利点を有することができ、例えば、本明細書に開示される製剤は、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間の保管後などの、様々な温度および／または時間での保管後に、ｐＨ、濃度、再構成時間、含水率、および／または純度の変化に耐性があり得る。
【００１３】
製剤、投与料表示、および方法は、特に明記しない限り、以下にさらに記載される（表に示されるものを含む）追加の任意の要素、特徴、および工程のいずれかの組み合わせのうちの１つ以上を含む、実施形態を含むことが企図される。
【００１４】
本明細書で使用される場合、用語「治療すること」または「治療」は、患者の状態を改善または安定化する様式で、症状、臨床徴候、および状態の基礎病理を逆転、軽減、または阻止することを含む。
【００１５】
本明細書の本開示の文脈における（特に特許請求の範囲の文脈における）「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」との用語、および類似の指示対象の使用は、別段記載のない限り、単数形および複数形の両方を包含すると解釈されるべきである。本明細書中の値の範囲の列挙は、本明細書中に別段の指示がない限り、単に、その範囲内に含まれる各個別の値を個々に指す簡潔な方法として役立つことを意図しており、各個別の値は、あたかも本明細書中で個々に列挙されているかのように本明細書中に組み込まれる。本明細書に提供される任意およびすべての例、または例証的な言語（例えば、「など」）の使用は、本発明をより良好に例解することを意図しており、別途記載のない限り、本発明の範囲の限定ではない。本明細書中の言語は、特許請求の範囲に記載されていない任意の要素を、本開示の実施に必須であることを示すとして解釈されるべきではない。
【００１６】
本明細書で使用する場合、「約」および「およそ」という用語は、一般に、記載された値のプラスマイナス１０％を意味する。例えば、約０．５には０．４５および０．５５が含まれ、約１０には９〜１１が含まれ、約１０００には９００〜１１００が含まれる。
【００１７】
有機化学の当業者は、多くの有機化合物が、それらが反応するか、またはそれらが沈殿または結晶化される溶媒と複合体を形成することができることを理解するであろう。これらの複合体は「溶媒和物」として知られている。例えば、水との複合体は「水和物」として知られている。本明細書の製剤で使用されるＫＺＲ−６１６の溶媒和物は、本発明の範囲内である。
【００１８】
凍結乾燥製剤
ＫＺＲ−６１６またはその塩、および糖を含む医薬製剤が本明細書に提供され、ＫＺＲ−６１６は、下記の構造を有し、
【化３】
2022501404.tif 000004
ここで、製剤は凍結乾燥製剤である。
【００１９】
本明細書に開示される医薬製剤は、任意の好適な形態のＫＺＲ−６１６を含むことができる。実施形態では、ＫＺＲ−６１６は、遊離塩基として存在する。実施形態では、ＫＺＲ−６１６は、塩として存在する。場合によっては、ＫＺＲ−６１６は、マレイン酸塩、フマル酸塩、シュウ酸塩、リンゴ酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、リン酸塩、ハロゲン化物、酒石酸塩、クエン酸塩、トシル酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、およびこれらの組み合わせから選択される塩形態として存在する。場合によっては、ＫＺＲ−６１６は、水和物などの溶媒和物として存在する。実施形態では、ＫＺＲ−６１６は、マレイン酸塩、例えば、モノマレイン酸塩として存在する。いくつかの実施形態では、ＫＺＲ−６１６は、二量体塩、例えば、ビス（ＫＺＲ−６１６）モノマレエートとして存在する。
【００２０】
本明細書に記載の製剤は、凍結乾燥の前に測定されるとき、任意の濃度のＫＺＲ−６１６またはその塩を含むことができる。ＫＺＲ−６１６またはその塩の具体的に企図される濃度としては、１０ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬ、または約２５ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、または約６０ｍｇ／ｍＬ〜約２７５ｍｇ／ｍＬ、または約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約８０ｍｇ／ｍＬ〜約２２５ｍｇ／ｍＬ、または約９０ｍｇ／ｍＬ〜約２２５ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、または約１１０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約２２０ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約１９０ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約１８０ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約１７０ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約１６０ｍｇ／ｍＬ、または約１２０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１３０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１４０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１４０ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１３０ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、または約６０ｍｇ／ｍＬ〜約９０ｍｇ／ｍＬ、または約９０ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬ、例えば、ＫＺＲ−６１６マレイン酸塩の重量に基づいて約１５０ｍｇ／ｍＬまたはＫＺＲ−６１６遊離塩基の重量に基づいて約１２５ｍｇ／ｍＬが挙げられる。実施形態では、ＫＺＲ−６１６の濃度は、凍結乾燥製剤が、例えば、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後、凍結乾燥製剤の再構成時に測定される。
【００２１】
本明細書に開示される医薬製剤は、糖、例えば、還元糖もしくは非還元糖、または糖アルコールを含むことができる。糖を有するＫＺＲ−６１６またはその塩の製剤は５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された場合に安定である。実施形態では、糖は、マンニトール、トレハロース、デキストロース、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、キシロース、スクロース、ラクトース、ソルビトール、デキストラン、エリスリトール、またはこれらの組み合わせを含み得る。実施形態では、糖は、マンニトールおよび／またはトレハロースを含み得る。実施形態では、糖はトレハロースを含む。
【００２２】
実施形態では、製剤は、糖成分を、製剤の総重量に基づいて、例えば、約０．０１重量％〜約１０重量％、または約０．１重量％〜約１０重量％、または約０．１重量％〜約９重量％、または約０．１重量％〜約８重量％、または約０．１重量％〜約７重量％、または約０．１重量％〜約６重量％、または約０．１重量％〜約５重量％、または０．１重量％〜約４重量％、または約０．５重量％〜約５重量％、または約０．５重量％〜約４重量％、または約０．５重量％〜約３重量％、または約０．５重量％〜約２重量％、または約１重量％〜約５重量％、または約１重量％〜約４重量％、または約１重量％〜約３重量％、または約１重量％〜約２重量％、または約１．５重量％〜約５重量％、または約１．５重量％〜約４重量％、または約１．５重量％〜約３重量％、または約１．５重量％〜約２重量％、または約２重量％〜約５重量％、または約３重量％〜約５重量％の量で、例えば、製剤の総重量に基づいて約２重量％の量で含む。実施形態では、含水率は、凍結乾燥製剤が、例えば、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後に測定される。実施形態では、本明細書に記載の製剤は、最大５重量％、例えば最大４％、３％、２％、１．５％、１％、または０．５％の含水率を有することができる。実施形態では、本明細書に記載の製剤は、５℃、２５℃、または４０℃で、所定の時間、例えば、少なくとも６ヶ月間保管された後に、最大５％、最大４％、３％、２％、１．５％、１％、または０．５％の含水率を有することができ、例えば、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後に、１％未満の含水率を有することができる。
【００２３】
場合によっては、本明細書に記載の製剤は、任意に、緩衝液を含むことができる。場合によっては、製剤は、緩衝液を含まない。本明細書で使用される場合、「緩衝液」という用語は、ＫＺＲ−６１６の任意の塩形態に追加される緩衝液を指す。実施形態では、二次緩衝液は、コハク酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、ヒスチジン、酢酸塩、マレイン酸塩、グルコン酸塩、またはこれらの組み合わせを含むことができる。実施形態では、緩衝液は、コハク酸緩衝液を含む。実施形態では、コハク酸緩衝液などの緩衝液は、凍結乾燥前に測定されるとき、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約４０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約３０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約２５ｍＭ、または約１ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約１５ｍＭ、または約１ｍＭ〜約１０ｍＭ、または約２ｍＭ、または約３ｍＭ、または約４ｍＭ、または約５ｍＭ、または約６ｍＭ、または約７ｍＭ、または約８ｍＭ、または約９ｍＭ、または約１０ｍＭ、または約１１ｍＭ、または約１２ｍＭ、または約１３ｍＭ、または約１４ｍＭ、または約１５ｍＭ、例えば、１０ｍＭの濃度を有することができる。
【００２４】
本明細書に記載の製剤は、任意に、糖に加えて、または糖の代わりに、増量剤をさらに含むことができる。増量剤などの企図される添加剤としては、グリシン、セリン、システイン、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【００２５】
一態様では、本明細書に記載の製剤は、以下の利点を有することができる：（１）凍結乾燥物が、再構成時に、視覚的に透明なおよび／または粒子を含まないケーキを表すこと、（２）凍結乾燥物の含水率が１％（重量％またはモル％）以下であること、（３）凍結乾燥ケーキの凍結乾燥時間および／または再構成時間が、以下の実施例に詳述されるように、他の医薬製剤と比べて速いこと、および／または（４）製剤が、望ましい安定性を有し、例えば、５℃で少なくとも６ヶ月間で測定されるとき、０．５％未満（重量％またはモル％）の分解、２５℃で少なくとも６ヶ月間で測定されるとき、７％未満（重量％またはモル％）の分解、４０℃で少なくとも６ヶ月間で測定されるとき、２０％未満（重量％またはモル％）の分解を有する。
【００２６】
本明細書に開示される製剤は、凍結乾燥の前に測定されるとき、３．０〜４．５、例えば３．８〜４．３のｐＨを有することができる。場合によっては、凍結乾燥前のｐＨは、４．２である。実施形態では、本明細書に記載の製剤は、再構成時に測定されるとき、約２５℃の温度で約２〜約８または約３〜約５のｐＨを有することができる。実施形態では、製剤は、再構成時に測定されるとき、約２５℃の温度で、約３．１〜約４．９、または約３．２〜約４．８、または約３．３〜約４．７、または約３．４〜約４．６、または約３．５〜約４．５、または約３．６〜約４．４、または約３．７〜約４．３、または約３．７〜約４．３、または約３．８〜約４．３、または約３．９〜約４．２のｐＨを有することができ、例えば、約２５℃の温度で約４．２のｐＨを有することができる。実施形態では、ｐＨは、凍結乾燥製剤が、例えば、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後、凍結乾燥製剤の再構成時に測定される。
【００２７】
実施形態では、製剤は、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後に、７０％超のＡＰＩ（ＫＺＲ−６１６またはその塩）の純度を有することができ、例えば、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後に、７５％超、８０％超、８５％超、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７％超、９８％超、または９９％超の純度を有することができ、例えば、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後に、９３％超の純度を有することができる。７０％超の純度とは、示された保管時間および温度の後の製剤中のＡＰＩの量が、保管前の製剤中のＡＰＩの量の７０％（重量％またはモル％）を超えることを意味する。
【００２８】
実施形態では、本明細書に開示される製剤は、１０分以下、例えば、９分以下、８分以下、７分以下、または６分以下、５分以下、４．５分以下、４分以下、３．５分以下、または３分以下の再構成時間を有することができる。実施形態では、本明細書に開示される製剤は、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後に、１０分以下の再構成時間を有することができ、例えば、９分以下、８分以下、７分以下、または６分以下、５分以下、４．５分以下、４分以下、３．５分以下、または３分以下の再構成時間を有することができ、例えば、本明細書の製剤は、５℃、２５℃、または４０℃で少なくとも６ヶ月間保管された後に、４．５分以下の再構成時間を有することができる。本明細書で使用される場合、「再構成時間」という用語は、以下に詳述される再構成法に従って凍結乾燥製剤を完全に溶解するのに要する時間を指す。
【００２９】
再構成製剤
本明細書に開示される製剤は、凍結乾燥してケーキ形態、粉末形態にすることができ、またはケーキおよび／または粉末は、ゲル、フォーム、エアロゾル、フィルム、または他の製剤にさらに加工することができる。実施形態では、製剤は、それを必要とする対象に投与するための溶媒で再構成することができる。したがって、凍結乾燥組成物などの製剤と、再構成溶液とを含むキットが、本明細書に提供される。
【００３０】
本明細書に記載の凍結乾燥医薬製剤および再構成用の溶媒を含むＫＺＲ−６１６またはその塩の再構成製剤が、本明細書に提供される。再構成用の溶媒は、当業者に好適な任意の１つまたは複数の溶媒を含むことができる。実施形態では、再構成用の溶媒は、注射用水（ＷＦＩ）、生理食塩水、または５％含水デキストロースを含むことができる。いくつかの特定の実施形態では、再構成用の溶媒は、注射用水を含む。実施形態では、再構成用の溶媒は、塩化物イオンを含まない（例えば、生理食塩水ではない）。実施形態では、再構成製剤は、皮下注射に使用することができる。
【００３１】
実施形態では、再構成された製剤の浸透圧は、２００ｍＯｓｍ〜４００ｍＯｓｍ、例えば、２５０ｍＯｓｍ〜４００ｍＯｓｍ、または２７５ｍＯｓｍ〜３５０ｍＯｓｍ、または２７５ｍＯｓｍ〜３２５ｍＯｓｍ、例えば、ほぼ等張の浸透圧である約３００ｍＯｓｍであり得る。
【００３２】
実施形態では、本明細書の再構成製剤は、Ｔ１／２で測定されるとき、ＫＺＲ−６１６またはその塩およびポリソルベート−８０（「ＰＳ−８０」）を含む製剤（「ＰＳ−８０製剤」）よりも少なくとも１０％速い吸収速度を有することができき、例えば、ＰＳ−８０製剤のものよりも、少なくとも２０％速い、少なくとも３０％速い、少なくとも４０％速い、少なくとも５０％速い、または少なくとも６０％速い、例えば、少なくとも５０％速い吸収速度を有することができる。
【００３３】
実施形態では、本明細書に記載の再構成製剤は、ＰＳ−８０製剤のものの、少なくとも５０％のＣｍａｘを有することができ、例えば、ＰＳ−８０製剤のものの少なくとも１００％、少なくとも１１０％、少なくとも１２０％、少なくとも１３０％、少なくとも１４０％、少なくとも１５０％、少なくとも１６０％、少なくとも１７０％、または少なくとも１８０％、例えば、少なくとも１５０％のＣｍａｘを有することができる。
【００３４】
調製法
本明細書に開示される医薬製剤は、例えば、ＫＺＲ−６１６またはその塩と糖とを混合して溶液を形成することによって調製することができる。実施形態では、溶液は、水溶液である。実施形態では、溶液は、凍結乾燥されて、凍結乾燥医薬製剤を形成することができる。医薬製剤を調製する方法は、凍結乾燥製剤を溶媒で再構成して、本明細書に記載の再構成製剤を形成することをさらに含むことができる。再構成製剤を形成するために使用される溶媒は、凍結乾燥製剤を再構成すために当業者に好適な任意の溶媒であり得、例えば、溶媒は、水または５％含水デキストロースを含み得る。
【００３５】
治療法
本開示の別の態様は、本明細書に記載される再構成製剤を投与することによって、対象の免疫関連疾患を治療する方法を提供する。場合によっては、疾患は、乾癬、皮膚炎、全身性強皮症、硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎；呼吸困難症候群、髄膜炎；脳炎；ぶどう膜炎；大腸炎；糸球体腎炎；湿疹、喘息、慢性炎症；アテローム性動脈硬化症；白血球接着不全；関節リウマチ；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；真性糖尿病；多発性硬化症；レイノー症候群；自己免疫性甲状腺炎；アレルギー性脳脊髄炎；シェーグレン症候群；若年発症糖尿病；結核、サルコイドーシス、多発性筋炎、肉芽腫症、血管炎；悪性貧血（アジソン病）；白血球減少症を伴う疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患；多臓器損傷症候群；溶血性貧血；重症筋無力症；抗原−抗体複合体媒介疾患；抗糸球体基底膜疾患；抗リン脂質症候群；アレルギー性神経炎；グレーブス病；ランバート・イートン筋無力症候群；類天疱瘡；天疱瘡；自己免疫性多腺性内分泌障害；ライター病；全身硬直症候群；ベーチェット病；病巨細胞性動脈炎；免疫複合腎炎；ＩｇＡ腎症；ＩｇＭポリニューロパチー；免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）または自己免疫性血小板減少症である。種々の場合において、障害は、狼瘡、ループス腎炎、関節リウマチ、糖尿病、強皮症、強直性脊椎炎、乾癬、多発性硬化症、橋本病、髄膜炎、または炎症性腸疾患である。実施形態では、疾患は、ループス腎炎またはＳＬＥである。
【００３６】
本開示の別の態様は、本明細書に記載される再構成製剤を投与することによって、対象の炎症を治療する方法を提供する。
【００３７】
再構成法
本明細書に記載されるように、凍結乾燥医薬製剤は、バイアルに入れられる。ミリリットルなどの一定量の濾過されたＭｉｌｌｉ−Ｑ（登録商標）（「ＭＱ」）水を、該バイアルに添加する。ＭＱ水を添加すると、タイマーが開始し、凍結乾燥医薬製剤が再構成および／または完全に溶解するまでの時間を測定する。３０秒ごとに、ＭＱ水および凍結乾燥製剤が入ったバイアルを、再構成が完了するまで穏やかに旋回させる。
【実施例１】
【００３８】
実施例１
様々な製剤条件におけるＫＺＲ−６１６の安定性を、この凍結乾燥製剤開発試験において調査した。この試験で調査した条件には、様々なｐＨ値（３．９〜４．２）で、様々な賦形剤（Ｌ−グリシン、マンニトール、およびトレハロース）を含む緩衝化製剤（１０ｍＭのコハク酸塩）および非緩衝化製剤が含まれていた。様々な製剤中の１５０ｍｇ／ｍＬでのＫＺＲ−６１６の安定性を、冷蔵温度（５℃）、周囲温度（２５℃）、および加速温度（４０℃）で最大６ヶ月間の静的保管条件下で調べた。この６ヶ月の試験の過程で、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）分析は、ＫＺＲ−６１６の安定性を監視するために使用された主な分析法であった。
【００３９】
凍結乾燥ケーキは、すべての保管温度で６ヶ月間の保管にわたって一貫した外観を示した。凍結乾燥物の黄色の着色のいくらかの増加が、特に２５℃および４０℃で時間の経過とともに観察された。この黄色の着色は、再構成後により顕著になった。再構成後、すべての製剤には目に見える粒子が含まれていなかった。６ヶ月間にわたる保管期間中に、製剤のｐＨおよびＫＺＲ−６１６の濃度値は、時間ゼロで観察された値と同等のままであった。再構成時間も、４分３０秒未満で、６ヶ月間の保管期間にわたって一貫性を保っていた。
【００４０】
ＫＺＲ−６１６の安定性は、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析を使用して評価した。５℃で６ヶ月間保管した後、すべての製剤は、時間ゼロで観察されたものよりもメインピークの比率のわずかな減少を示した。２５℃で保管した後、製剤はメインピークの比率の減少を示し、非緩衝化トレハロース含有製剤は、他の製剤よりも高いメインピークの比率を示した。４０℃で６ヶ月間保管した後、すべての製剤は、ほとんどは、未知のＲＲＴ＝０．１、ＫＺＲ−５９５８７、未知のＲＲＴ＝０．５、ＫＺＲ−０２１４１４３および未知のＲＲＴ＝２．２の分解物ピークの増加のために、メインピークの比率の大幅な減少を示した。マンニトールを含むか、または含まない非緩衝化トレハロース含有製剤は、試験された製剤の中で最も高いメインピークの比率を示した。
【００４１】
５℃では分解が予想されなかったため、凍結乾燥サイクルの最適化により残留水分含量をさらに減らすことで製剤の安定性を改善することが可能であるかどうかを判断するために、凍結乾燥サイクルの最適化試験を実施した。この水分最適化試験は、主要な製剤を、１０℃、２５℃、３５℃および５０℃の様々な二次棚温度で凍結乾燥することによって実施した。しかしながら、４０℃で４週間保管した後、二次乾燥棚温度に関係なく、視覚的外観、ｐＨ、濃度、再構成時間、およびＲＰ−ＨＰＬＣによるピークパーセンテージに違いは観察されなかった。
【００４２】
この研究の結果に基づいて、凍結乾燥された１５０ｍｇ／ｍＬのＫＺＲ−６１６の主要な製剤は、ｐＨ４．２で２％のトレハロースを含有し、追加の緩衝液を含まない製剤として特定された。
【００４３】
材料
この試験で調べた医薬品有効成分（ＡＰＩ）、はＫＺＲ−６１６であった。この試験に使用された材料は、以下から構成されていた：
（１）原薬（ＤＳ）：ＫＺＲ−６１６マレイン酸塩（ロットＡ）
（２）原薬（ＤＳ）：ＫＺＲ−６１６マレイン酸塩（ロットＢ）
（３）参照標準（ＲＳ）：ＫＺＲ−６１６マレイン酸塩材料
【００４４】
原薬は、使用前に２〜８℃で保管した。製剤パラメーター
【００４５】
加速安定性試験では、次のパラメーターが一定に保たれた：
（１）充填量：１．０ｍＬ
（２）緩衝液濃度：１０ｍＭまたは０ｍＭ
以下の製剤（Ｆ１〜Ｆ９）パラメーターを調べた。
（１）ＡＰＩ濃度：１５０ｍｇ／ｍＬ
（２）緩衝液：コハク酸塩
（３）ｐＨ：３．９〜４．２
（４）張性調整剤：０．２％グリシン、１％トレハロース、０．４％マンニトール、０．４％グリシン、１％マンニトール、２％トレハロース、０．３％グリシン、０．８％マンニトール
【表１】
2022501404.tif 000005
【００４６】
製剤の調製
凍結乾燥サイクルの開発＃１
保存サイクルのパラメーターを決定するために、亜大気圧（Ｓｕｂ−ａｍｂｉｅｎｔ）示差走査熱量測定（ＤＳＣ）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｐｙｒｉｓ  Ｄｉａｍｏｎｄ）を、それぞれグリシン、マンニトール、またはトレハロースを含有する３つの代表的な製剤Ｆ３、Ｆ４、およびＦ５で実施した。使用したメソッドプログラムは次のとおりである：−６０℃で１分間等温保持し、５℃／分で−６０℃から２５℃まで加熱する。Ｆ３、Ｆ４、およびＦ５は、それぞれ−１６℃、−１５℃、および−３３℃のガラス転移温度（Ｔｇ）を示した（表１）。Ｆ４については、−１０℃で失透温度（Ｔｄ）で結晶化が発生したため、一次乾燥の前に、より完全な結晶化を得るためにアニーリング工程を追加した。このデータは、最初の凍結乾燥サイクルで実装された（表３）。
【００４７】
亜大気圧ＤＳＣの結果に基づいて、保存的凍結乾燥サイクルを設計し、＜１％の残留水分濃度のサンプルを生成した。表３に、最初の保守的なサイクルのパラメーターを表示する。
【００４８】
マレイン酸ＫＺＲ−６１６を濾過したＭｉｌｌｉ−Ｑ（登録商標）（ＭＱ）水に目標濃度１７０ｍｇ／ｍＬで溶解し、ＭＱ中のＫＺＲ−６１６を６０℃で約２分間加熱して、原薬を溶液に溶解した。製剤は１０倍のストックとして調製し、ＤＳ／ＭＱ溶液のアリコートに１：９（緩衝液：ＤＳ）の比率で添加した。各製剤のｐＨは、ＮａＯＨで目標ｐＨに滴定された。ＢＳＣの無菌条件下で、すべてのサンプルを０．２μｍフィルターで滅菌濾過し、１．０ｍＬの充填量で３ｃｃバイアルに充填した。サンプルは滅菌ストッパーで部分的に栓をして、凍結乾燥機に入れて、空のバイアルで囲んだ。表３に詳述されているパラメーターを使用して、サンプルを凍結乾燥した。最初の凍結乾燥サイクルに続いて、サンプルを１ｍＬの濾過したＭＱ水で再構成して分析した。凍結乾燥サイクル開発製剤を、表２に関して調製した。
【表２】
2022501404.tif 000006
【表３】
2022501404.tif 000007
【００４９】
凍結乾燥サイクルの開発＃２
ＫＺＲ−６１６を、濾過したＭＱ水に１７０ｍｇ／ｍＬの目標濃度で溶解した。次に、ＭＱ中のＫＺＲ−６１６を６０℃で約２分間加熱して、原薬を溶液に溶解した。製剤は１０倍のストックとして調製し、ＤＳ／ＭＱ溶液のアリコートに１：９（緩衝液：ＤＳ）の比率で添加した。各製剤のｐＨを、ＮａＯＨで目標ｐＨに滴定した。ＢＳＣの無菌条件下で、すべてのサンプルを０．２μｍフィルターで滅菌濾過し、１．０ｍＬの充填量で３ｃｃバイアルに充填した。製剤マトリックス（緩衝液、増量剤濃度、ｐＨ）の概要を表１に示す。サンプルは滅菌ストッパーで部分的に栓をして、凍結乾燥機に入れて、空のバイアルで囲んだ。表４に詳述されているパラメーターを使用して、サンプルを凍結乾燥した。凍結乾燥後、サンプルを１ｍＬの濾過したＭＱ水で再構成し、表８に概説されている方法に従って分析した。
【表４】
2022501404.tif 000008
【００５０】
加速安定性試験
ＩＢＩが、１％未満の含水率を有するエレガントなケーキを生成する凍結乾燥サイクルを特定したら、この細工エウを繰り返して、サイクルの結果を確認し、加速安定性研究用のサンプルを調製した。
【００５１】
ＫＺＲ−６１６を、濾過したＭＱ水に原液として１７０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した。ＫＺＲ−６１６原液を６０℃で約２分間加熱し、原薬を完全に溶解させた。製剤緩衝液を、１０倍の原液として調製した。各製剤を、１０倍の緩衝液原液、ＤＳストック（１７０ｍｇ／ｍＬ）、およびＭＱを使用して調製し、最終濃度１５０ｍｇ／ｍＬを目標とした。各製剤のｐＨを、ＮａＯＨを使用して目標ｐＨに調整した。ＢＳＣの無菌条件下で、すべてのサンプルを０．２μｍフィルターで滅菌濾過し、１．０ｍＬの充填量で３ｃｃバイアルに充填した。サンプルは滅菌ストッパーで部分的に栓をして、凍結乾燥機に入れて、空のバイアルで囲んだ。表４に詳述されているパラメーターを使用して、サンプルを凍結乾燥した。
【００５２】
凍結乾燥後、表９に列記されている分析法を使用して、凍結乾燥前の液体サンプル、凍結乾燥ケーキ、および再構成サンプルを比較することにより、生成物の品質および一体性を評価した。
【００５３】
水分最適化
ＫＺＲ−６１６の２つの異なる原薬ロット（ＫＺＲ−０２１４１４２およびＣ１５０７２３６９−ＦＦ１６００）を個別にＭＱに１７０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解し、６０℃で約２分間加熱して、原薬を完全に溶解させた。次に、両方の１７０ｍｇ／ｍＬ調製物を、１０倍の目標の緩衝液（Ｆ５、ｐＨ４．２の２％トレハロース）で１５０ｍｇ／ｍＬに希釈した。各製剤のｐＨを、ＮａＯＨを使用して目標ｐＨに滴定した。ＢＳＣの無菌条件下で、すべてのサンプルを０．２μｍフィルターで滅菌濾過し、１．０ｍＬの充填量で３ｃｃバイアルに充填した。サンプルは滅菌ストッパーで部分的に栓をして、凍結乾燥機に入れて、移動を防止するために空のバイアルで囲んだ。表５に詳述されているパラメーターを使用して、サンプルを凍結乾燥した。
【００５４】
凍結乾燥サイクルは、最初の二次乾燥温度（１０℃）で事前にプログラムされていた。最初の二次乾燥温度に続いて、凍結乾燥機のその後のすべての操作は、すべての棚温度に対応するために手動で実施した。二次乾燥温度のそれぞれは、最低でも少なくとも８時間実行した。各二次乾燥温度の終わりに、その温度のバイアルに栓をし、凍結乾燥機を手動で停止し、真空をパージした。その後、栓をしたトレイを取り外し、凍結乾燥機を手動で再起動させて、次の二次乾燥温度にした。最後の工程を、各二次乾燥温度について繰り返した。凍結乾燥後、サンプルを安定保管条件に置き、Ｔ＝０サンプルを１ｍＬの濾過したＭＱ水で再構成して分析した。分析法の概要を表８に示す。
【表５】
2022501404.tif 000009
【００５５】
ストレス条件
加速安定性
凍結乾燥製剤の安定性を、表６に記載されている以下の条件下で試験した。
【表６】
2022501404.tif 000010
【００５６】
水分の最適化
凍結乾燥製剤の安定性を、表７に記載されている以下の条件下で試験した。
【表７】
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【００５７】
分析法
凍結乾燥サイクルの開発（１＆２）
凍結乾燥サイクル１および２に続いて、サンプルに対して様々な分析を実施した。表８は、安定性試験のためのこれらの分析をまとめている。
【表８】
2022501404.tif 000012
【００５８】
安定性試験を加速する
各温度および時点でのインキュベーション後、凍結乾燥サンプルに対して様々な分析を実施した。以下の各時間で、サンプルの外観、ｐＨ、濃度、再構成時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、および含水率を分析した。表９は、加速安定性試験の様々な分析をまとめている。
【表９】
2022501404.tif 000013
【表１０】
2022501404.tif 000014
【００５９】
前述のすべての試験の分析法を以下に詳説する。
（１）目視検査：目視検査は、白黒の背景に対して白色光源（１３Ｗの蛍光灯）の下で実施した。デジタル写真は、凍結乾燥前、凍結乾燥後、および再構成製剤について撮影した。
（２）浸透圧：浸透圧は、各客観的試験の時間ゼロで測定した。
（３）ｐＨ：ｐＨ分析は、ＳｙｍｐＨｏｎｙ（登録商標）ｐＨメーター（ＶＷＲ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号ＳＢ７０Ｐ）を使用して実施し、９５％以上のキャリブレーションスロープを有する３つのｐＨ標準溶液（ｐＨ４、７、および１０）で較正した。測定前にサンプルを周囲温度に平衡化させた。
（４）吸光度分光光度法：ＫＺＲ−６１６の濃度を、ベックマン・コールター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）分光光度計を介して決定した。標準曲線（１ｍｇ／ｍＬ、０．７５ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、および０．２５ｍｇ／ｍＬ、ＭＱで段階希釈）を作成することにより、１．８４９５（ｍｇ／ｍＬ）−１ｃｍ−１の吸光係数を決定した。ＫＺＲ−６１６を、全波長スキャンで分析し、２７２ｎｍで最大の吸光度を示した。この波長を使用して、濃度を測定した。
（５）ＦＴＩＲ：凍結乾燥前および凍結乾燥後の製剤を分析して、増量剤を含有する製剤のフィンガープリントを決定した。（凍結乾燥後の開発サイクル＃１および＃２を実施）
（６）再構成時間：凍結乾燥製剤は、１ミリリットルの濾過水で再構成される。水を添加すると、タイマーが開始し、ＫＺＲ−６１６薬物製剤が再構成するまでの時間を測定する。３０秒ごとに、再構成バイアルを穏やかに旋回させた。再構成が完了するまで、この手順を繰り返した。
（７）カールフィッシャー滴定：凍結乾燥後の製剤を分析して、凍結乾燥生成物の含水率を決定した。
（８）ＤＳＣ：各製剤について−６０℃から２５℃で５℃／分で亜大気圧ＤＳＣ分析を実施し、凍結状態での増量剤の再結晶化、Ｔｇ、およびその他の重要な熱遷移データを決定した。
【００６０】
（９）ＲＰ−ＨＰＬＣ：
この試験に使用されたＲＰ−ＨＰＬＣ法は、Ｋｅｚａｒから移管されたものであり、パラメーターは以下のとおりである：
移動相Ａ：７５％の５ｍＭ酢酸アンモニウム、２５％アセトニトリル
移動相Ｂ：６５％の５ｍＭ酢酸アンモニウム、３５％アセトニトリル
移動相Ｃ：１５％の５ｍＭ酢酸アンモニウム、８５％アセトニトリル
カラム：Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ  １２０  ＥＣ−Ｃ１８、４．６×７５ｍｍ、２．７μｍ
（Ｐ／Ｎ：６９７９７５−９０２）
機器：Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣ
カラム温度：４０℃
オートサンプラ温度：５℃
流量：１．５ｍＬ／分
時間：３８分
検出：２１０ｎｍ
サンプル調製：７０％ＡＣＮで１．８ｍｇ／ｍＬに希釈
充填量：１８μｇ（１．８ｍｇ／ｍＬで１０μＬ）
【００６１】
水分最適化試験
各温度および時点でのインキュベーション後、凍結乾燥サンプルに対して様々な分析を実施した。以下の各時間で、サンプルの外観、ｐＨ、濃度、再構成時間、ＲＰ−ＨＰＬＣ、および含水率を分析した。表１１は、安定性試験のためのこれらの分析をまとめている。
【表１１】
2022501404.tif 000015
【００６２】
結果および考察
凍結乾燥サイクル開発試験
以下の属性を備えたケーキを生成する凍結乾燥サイクルを開発するために、複数の凍結乾燥サイクルを実施した：
・エレガントなケーキ
・仕様範囲内の含水率（＜１．０％）
・凍結乾燥ケーキの凍結乾燥時間および再構成時間の短縮
・良好な生成物安定性
【００６３】
ＦＴ−ＩＲ（フーリエ変換赤外分光法）を、凍結乾燥の開発サイクル＃１および＃２の前後に実施した。ＦＴ−ＩＲは、凍結乾燥前、凍結乾燥時、および再構成時の良好な構造安定性を示した。凍結乾燥に起因するストレス（圧力および温度）は、様々な製剤におけるＫＺＲ−６１６の構造的一体性を破壊しなかった。
【００６４】
視覚分析
時間ゼロでは、両方の開発サイクルでエレガントなケーキを示した。開発サイクル＃１および＃２は、視覚的に透明で、粒子を含まず、色がわずかに黄色のサンプルを示した。
【００６５】
製剤浸透圧
９つの製剤の浸透圧は、サンプル調製後、いずれかのストレス曝露の前に測定した。凍結乾燥サイクル＃１の製剤および特定の試薬の概要を表２に示す。サイクル＃１製剤の浸透圧を確認した後（表１２）、等張浸透圧（約３００Ｏｓｍｏ）を目標とするために、サイクル＃２の増量剤濃度を低下させた。凍結乾燥サイクル＃２は、凍結乾燥前および再構成後に等張浸透圧測定値を示した（表１２）。
【表１２】
2022501404.tif 000016
【００６６】
ｐＨ測定値
凍結乾燥サイクル１および２は、凍結乾燥前および再構成後に同等のｐＨ値を示した（表１３）。しかしながら、再構成後、凍結乾燥サイクル＃２は目標により近いｐＨ値を示した。
【表１３】
2022501404.tif 000017
【００６７】
再構成時間の測定値
凍結乾燥サイクル１および２に続いて、製剤を１ミリリットルの濾過したＭＱで再構成した。ＭＱを添加すると、タイマーを開始して、各製剤が均質化するのに必要な時間を測定した。凍結乾燥サイクル＃１は、４：３１分以下の再構成時間を示したが、サイクル＃２は、４：１２分以下の再構成時間を示した（表１４）。
【表１４】
2022501404.tif 000018
【００６８】
含水率測定値（カールフィッシャー）
凍結乾燥サイクル１および２に続いて、製剤は互いに同等の含水率の値を示した（表１５）。すべての凍結乾燥製剤は、１％未満の含水率の値を示した。凍結乾燥サイクル＃１は、０．２８％〜０．６０％の含水率の値を示した。凍結乾燥サイクル＃２は、０．２１％〜０．３９％の含水率の値を示した。
【表１５】
2022501404.tif 000019
【００６９】
ＲＰ−ＨＰＬＣ分析
４０℃での４週間のインキュベーション後、すべての再構成製剤は、時間ゼロで観察されたもの（９７．７％〜９８．６％）と比べて、メインピークの比率の減少（９０．３％〜９１．７％）を示した。ＲＰ−ＨＰＬＣは、ＫＺＲ−６１６分子の主な分解物種を特定した。ピークＲＲＴ＝０．１は、ＫＺＲ−５９５８７、ＫＺＲ−０２１４１４３を表示し、およびＲＲＴ＝２．２は、ストレスがかかったときのピークパーセンテージの最大の増加を示した。二次乾燥温度の変動は、時間ゼロでのメインピークの安定性にわずかな差異を示した。４０℃で４週間後、すべての製剤化サンプルは、同等の安定性を示した（表１６〜１９）。
【表１６】
2022501404.tif 000020
【表１７】
2022501404.tif 000021
【表１８】
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【表１９】
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【００７０】
加速安定性試験
加速安定性試験では、ｐＨ３．９およびｐＨ４．２の様々な濃度の増量剤を含有する９つの緩衝化（コハク酸塩）および非緩衝化製剤を１５０ｍｇ／ｍＬで調製した。
【００７１】
視覚分析
６ヶ月間の温度関連ストレスに続いて、凍結乾燥製剤の外観はエレガントなケーキを示した。凍結乾燥ケーキは、わずかに黄色がかった色合いを示し、温度が上がると色が増した。再構成後、製剤は透明で、粒子を含まず、黄色がかった色も示した。６ヶ月間のインキュベーション後、製剤は、５℃および２５℃において、時間ゼロと同等の着色を示した。４０℃では、製剤は、時間ゼロと比べてより暗い黄色がかった色合いを示した。
【００７２】
製剤浸透圧
表２０に示すように、９つの製剤の浸透圧は、サンプル調製後、いずれかのストレス曝露の前に測定した。増量剤の濃度は、凍結乾燥サイクルの開発＃２の結果に基づいており、約３００ｍＯｓｍでの等張製剤を目標にする。６ヶ月後、製剤Ｆ５は、時間ゼロで観察されたものと同等の浸透圧値を示した。
【表２０】
2022501404.tif 000024
【００７３】
ｐＨ測定値
９つの製剤のｐＨを、温度に関連するストレスに続くすべての時点で測定した。６ヶ月後、製剤は、表２１に示すように、時間ゼロと同等のｐＨ値を示した。
【表２１】
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【００７４】
濃度測定値
６ヶ月後、製剤は、時間ゼロで観察されたものと同等の濃度測定値を示した（表２２）。
【表２２】
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【００７５】
再構成時間の測定値
凍結乾燥後の各時点において、製剤を１ミリリットルの濾過したＭＱで再構成した。ＭＱを添加すると、タイマーが、各製剤が均質化するのに必要な時間の測定を開始した。６ヶ月後、製剤は、時間ゼロと同等の再構成時間を示した。６ヶ月後、すべての製剤は３分３０秒未満の再構成時間を示した（表２３）。
【表２３】
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【００７６】
含水率測定値（カールフィッシャー）
６ヶ月間のインキュベーション後、製剤は、時間ゼロと同等の含水率値を示した（表２４）。すべての凍結乾燥製剤は、１％未満の含水率の値を示し続けた。
【表２４】
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【００７７】
ＲＰ−ＨＰＬＣ分析
５℃での６ヶ月間のインキュベーション後、すべての再構成製剤は、時間ゼロで観察されたもの（９８．２％〜９８．４％）と比べて、図１Ａで見られる、メインピークの比率の減少（９７．９％〜９８．１％）を示した。２５℃での６ヶ月間のインキュベーション後、すべての再構成された製剤は、５℃で保管されたものと比べて分解物ピークの増加を示した。製剤Ｆ２およびＦ５は、図１Ｂに見られるＫＺＲ−６１６の最高のパーセンテージ（それぞれ、９３．４％および９３．１％）を示した。４０℃での６ヶ月間のインキュベーション後、すべての再構成製剤は、５℃で保管したものと比べて、図１Ｃに見られる、未知のＲＲＴ＝０．１（≦１２．５％）、ＫＺＲ−５９５８７（≦１６．１％）、未知のＲＲＴ＝０．５（≦１．４％）、ＫＺＲ−０２１４１４３（≦１．９％）、および未知のＲＲＴ＝２．２（≦２．４％）の増加を示した。２５℃および４０℃での保管後、製剤Ｆ２（ｐＨ４．２で０．４％マンニトールおよび１％トレハロースを含有する非緩衝化製剤）およびＦ５（ｐＨ４．２で２％トレハロースを含有する非緩衝化製剤）は、すべての候補製剤の中で最も高いメインピークの比率を呈した。このデータは、ＫＺＲ−６１６が糖の存在下でｐＨ４．２の非緩衝化製剤で最も安定していることを示唆した（表２７）。これは、最も不良な安定性の結果を示している、糖を含有しないＦ３、Ｆ６、およびＦ８の製剤の傾向によってさらに裏付けられる。ＲＰ−ＨＰＬＣデータの結果は、製剤Ｆ５を、ＫＺＲ−６１６のための主要な製剤および最良の候補製剤として裏付けている。
【表２５】
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【表２６】
2022501404.tif 000030
【表２７】
2022501404.tif 000031
【００７８】
５℃での６ヶ月間のインキュベーション後、すべての製剤は、メインピークのパーセンテージにおけるわずかな変化を示した。しかしながら、すべての製剤は依然として、≧９７．９％のメインピークの比率を保持した。２５℃での６ヶ月間インキュベーション後、すべての製剤は、９０．７％以上のメインピークの比率を保持した。製剤Ｆ２およびＦ５は、最も高いメインピークの比率および最も遅い分解速度を示した。４０℃での６ヶ月間インキュベーション後、Ｆ８を除くすべての製剤は、≧７０．０％のメインピークの比率を保持した。製剤Ｆ５は、最も高いメインピークの比率および最も遅い分解率（８０．３％）を示した。
【００７９】
水分最適化
この試験の目的は、変更された凍結乾燥サイクルが冷蔵中のＫＺＲ−６１６の安定性をさらに改善できるかどうかを判定することであった。この凍結乾燥サイクル最適化試験は、前の試験からの主要な製剤（２％トレハロース、ｐＨ４．２）に焦点を合わせた。主要製剤Ｆ５は、ロットＡ（Ｃ１５０７２３６９−ＦＦ１６００１）およびロットＢ（１６０５Ｒ１１０）の原薬を使用して調製した。最適な含水率を達成するために、様々な原薬ロットを、異なる二次乾燥温度を使用して凍結乾燥した（表５）。
【００８０】
視覚分析
時間ゼロでは、すべての凍結乾燥前のサンプルは視覚的に透明で、粒子がなく、黄色がかった色を示した。より新鮮な原薬（ロットＢ）は、原薬（ロットＡ）と比べて明るい色を示した。凍結乾燥後、すべてのサンプルがエレガントなケーキを示した。４０℃で４週間後、サンプルは時間ゼロと同等の透明度および着色を示しました。
【００８１】
ｐＨ測定値
Ｔ＝４週目で再構成されたすべてのサンプルは、同等のｐＨ値を示した（表２８）。時間ゼロと比べて、わずかな増加が観察された（≦±０．１９）。
【表２８】
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【００８２】
濃度測定値
４０℃で４週間のインキュベーション後、すべてのサンプルは時間ゼロと比べて同様な濃度を示した（Ｔａ
【表２９】
2022501404.tif 000033
【００８３】
再構成時間の測定値
様々な二次乾燥温度での凍結乾燥に続いて、製剤を１ミリリットルの濾過されたＭＱで再構成した。ＭＱを添加すると、タイマーを開始して、各製剤が均質化するのに必要な時間を測定した。４０℃での４週間のインキュベーション後、すべてのサンプルは、＜４分の再構成時間を示し、３５Ａは、２分１５秒という最短の再構成時間を示し、サンプル１０Ａは、３分３５秒という最長の再構成時間を示した（表３０）。
【表３０】
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【００８４】
含水率測定値（カールフィッシャー）
６ヶ月間のインキュベーション後、製剤は、時間ゼロと同等の含水率値を示した（表３１）。すべての凍結乾燥製剤は、１％未満の含水率の値を示し続けた。二次乾燥温度の差異は、含水率のわずかな差異を示し、温度が高いほど、最も低い含水率を示した。
【表３１】
2022501404.tif 000035
【００８５】
ＲＰ−ＨＰＬＣ分析
４０℃での４週間のインキュベーション後、すべての再構成製剤は、時間ゼロで観察されたもの（９７．７％〜９８．６％）と比べて、メインピークの比率の減少（９０．３％〜９１．７％）を示した。ＲＰ−ＨＰＬＣは、ＫＺＲ−６１６分子の主な分解物種を特定した。ピークＲＲＴ＝０．１は、ＫＺＲ−５９５８７、ＫＺＲ−０２１４１４３を表示し、およびＲＲＴ＝２．２は、ストレスがかかったときのピークパーセンテージの最大の増加を示した。二次乾燥温度の差異は、時間ゼロでのメインピークの安定性にわずかな差異を示した。４０℃で４週間後、すべてのサンプルが同等の安定性を示した。
【００８６】
ロットＢのサンプルでは、対応するロットＡのサンプルと比べて、メインピークの比率が大幅に減少し、メインピークの比率は９０．３％であった。これは、ロットＡのサンプルでは観察されなかった分解物ピークに加えて、観察されたＫＺＲ−０２１４１４２の大幅な増加によるものであった。
【表３２】
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【表３３】
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【００８７】
ＲＰ−ＨＰＬＣは、４０℃で４週間後に分解物種の増加を示した。ロットＢは、ロットＡのサンプルには存在しなかった追加のピーク（約１０分）を示した。
【００８８】
様々な製剤条件におけるＫＺＲ−６１６の安定性を、この凍結乾燥製剤開発試験において調査した。この試験で調査した条件には、様々なｐＨ値（３．９〜４．２）で、様々な増量剤（Ｌ−グリシン、マンニトール、およびトレハロース）を含む緩衝化製剤（１０ｍＭのコハク酸塩）および非緩衝化製剤が含まれていた。異なる製剤でのＫＺＲ−６１６の安定性を、冷蔵温度（５℃）、周囲温度（２５℃）、および加速温度（４０℃）で最大６ヶ月間の保管条件下で調べ、逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）で分析して、ＫＺＲ−６１６の安定性を評価した。
【００８９】
加速安定性試験を開始する前に、２ラウンドの凍結乾燥サイクル開発を実施した。両方の開発サイクルとも、視覚的に粒子がなく、色がわずかに黄色であるエレガントなケーキおよび再構成後のサンプルを示した。凍結乾燥サイクル＃１は、ＲＰ−ＨＰＬＣによる良好な安定性を示した。しかしながら、ｐＨおよび浸透圧を測定した後、これらの結果は目標を外れるｐＨおよび浸透圧の値を示した。凍結乾燥サイクル＃２を、最適化された増量剤を含む製剤で実施し、目標のｐＨおよび浸透圧を達成した。さらに、サイクル２は、充填段階を減少させ、一次乾燥棚温度を上昇させ、二次乾燥棚の温度を低下させた。サイクル＃２で生成されたサンプルは、ＲＰ−ＨＰＬＣによって、エレガントなケーキおよび良好な安定性を示した。
【００９０】
６ヶ月以上保管すると、凍結乾燥製剤はすべての保管温度で一貫してエレガントなケーキを示した。しかしながら、凍結乾燥物は、特に２５℃および４０℃で保管した場合に黄色の着色の増加を示し、再構成後にさらに明らかになった。再構成後、すべての製剤には粒子が含まれていなかった。ｐＨまたは濃度の有意な変化は、経時的に観察されなかった。再構成時間は、保管温度に関係なく、６ヶ月間の保管に対してすべての製剤で一貫して４分３０秒未満であった。
【００９１】
すべての保管温度でのすべての製剤の化学的安定性評価は、ＲＰ−ＨＰＬＣを使用して実施した。５℃で６ヶ月間保管した後、製剤は時間ゼロと同等のメインピークの比率（９８．２％〜９８．４％）を示し、≦９７．９％のメインピークの比率を維持した。２５℃で６ヶ月間保管した後、製剤は時間ゼロと比べて減少したメインピークの比率（９８．２％〜９８．４％）を示し、メインピーク（ＫＺＲ−６１６）の比率（９０．７％〜９３．４％）を維持した。トレハロース含有製剤Ｆ１、Ｆ２、およびＦ５は、２５℃で６ヶ月後に、最も高いメインピークの比率（９２．８％、９３．４％、および９３．１％）を示した。４０℃で６ヶ月間保管した後、製剤は時間ゼロと比べて有意に減少したメインピークの比率（９８．２％〜９８．４％）を示し、メインピーク（ＫＺＲ−６１６）の比率（６３．８％〜８０．３％）を維持した。
【００９２】
凍結乾燥サイクルを最適化し、含水率を減少させ、ＫＺＲ−６１６の安定性を大幅に向上させるために、主要な製剤Ｆ５で追加の水分最適化試験を実施した。水分最適化試験は、１０℃、２５℃、３５℃および５０℃の様々な二次棚温度で凍結乾燥サイクルを実施した。
【００９３】
４０℃で４週間保管した後、ロットＣ１５０７２３６９−ＦＦ１６００１からのすべてのサンプルは、二次乾燥棚温度に関係なく、視覚的外観、ｐＨ、濃度、再構成時間、およびＲＰ−ＨＰＬＣによるピークの比率に差異は観察されなかった。４０℃での４週間のインキュベーション後、ロットＣ１５０７２３６９−ＦＦ１６００１からのすべての再構成製剤は、時間ゼロで観察されたもの（９７．７％〜９８．６％）と比べて、メインピークの比率の減少（９１．５％〜９１．７％）を示した。ＲＰ−ＨＰＬＣを利用することで、ＫＺＲ−６１６分子の主な分解物種を特定した。ピークＲＲＴ＝０．１は、ＫＺＲ−５９５８７、ＫＺＲ−０２１４１４３を表示し、およびＲＲＴ＝２．２は、ストレスがかかったときのピークパーセンテージの最大の増加を示した。ロット１６０５Ｒ１１０からのサンプルでは、対応するロットＣ１５０７２３６９−ＦＦ１６００１のサンプルと比べて、メインピークの比率が大幅に減少し、メインピークの比率は９０．３％であった。これは、ロットＣ１５０７２３６９−ＦＦ１６００１からのサンプルで観察された分解物ピークに加えて、観察されたＫＺＲ−０２１４１４２の大幅な増加によるものであった。この試験では、４週間後に同等のＫＺＲ−６１６の安定性が得られ、凍結乾燥サイクル間で有意な水分の差異がなく、低い含水率値を確認した。二次乾燥温度の差異は、時間ゼロでのメインピークの安定性にわずかな差異を示した。４０℃で４週間後、すべての製剤化サンプルは、同等の安定性を示し、これは、ケーキをさらに乾燥しても安定性の向上が達成されなかったことを示している。
【００９４】
結論として、トレハロース含有製剤、Ｆ２、およびＦ５は、４０℃で６ヶ月後に、最も高いメインピークの比率（７８．７％、８０．３％）を示した。このデータは、ＫＺＲ−６１６が糖の存在下でｐＨ４．２の非緩衝化製剤で最も安定していることを示唆している。これは、最も不良な安定性の結果を示している、糖を含有しない製剤Ｆ３、Ｆ６、およびＦ８の傾向によってさらに裏付けられる。
【実施例２】
【００９５】
実施例２
表３４〜３６は、様々な動物において異なるＫＺＲ−６１６製剤で観察された薬物動態（「ＰＫ」）およびトキシコキネティクス（「ＴＫ」）の比較を示している。試験製剤は、注射用水で溶解すると、ｐＨ４．２の２重量％トレハロースに記載されているように、様々な濃度のＫＺＲ−６１６を含む。比較製剤は、１０重量％含水ポリソルベート−８０（「ＰＳ−８０」）に記載されているように、様々な濃度のＫＺＲ−６１６を含む。
【００９６】
表３４は、試験製剤が、比較製剤と比べて、より速い吸収および除去、ならびに２〜３倍高いＣｍａｘを呈したことを示している。同様のＡＵＣが、両方の製剤で観察された。
【表３４】
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【００９７】
表３５は、より速い吸収および除去、ならびに１．２〜３．７倍高いＣｍａｘが試験製剤で観察されたことを示している。２つの製剤で、ＡＵＣの０．７〜１．７倍の差異が観察された。
【表３５】
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【００９８】
表３６の試験製剤は、上記の注射用水（「ＷＦＩ」）製剤として調製され、比較製剤は、水性１０重量％ポリソルベート−８０（「ＰＳ−８０」）製剤として調製された。より速い吸収および除去、ならびに１．１〜２．４倍高いＣｍａｘが試験製剤で観察されたことを示している。２つの製剤で、ＡＵＣの０．６〜１．０倍の差異が観察された。
【表３６】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【国際調査報告】
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