【事件の表示】
　特願２０１５−１０７２２６「複数置換プロテアーゼ変異体」拒絶査定不服審判事件〔平成２７年１１月１２日出願公開、特開２０１５−１９８６６０〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　本願は、平成１５年１月１６日（パリ条約による優先権主張　２００２年１月１６日　米国）を国際出願日とする特許出願である特願２００３−５６２２４８号の一部を、平成２５年１月８日に新たな特許出願としたものである特願２０１３−１１８０号の一部を、平成２７年５月２７日に新たな特許出願としたものであって、その手続の経緯は以下のとおりである。
　平成２８年　５月１９日付け：拒絶理由通知書
　平成２８年１１月２４日　　：意見書、手続補正書の提出
　平成２９年　３月１０日付け：拒絶査定
　平成２９年　７月１３日　　：審判請求書、手続補正書の提出
　平成２９年　７月２７日　　：審判請求書を対象とする手続補正書の提出　
第２　平成２９年７月１３日にされた手続補正についての補正の却下の決定
［補正の却下の決定の結論］
　平成２９年７月１３日にされた手続補正（以下「本件補正」という。）を却下する。
［理由］
１　本件補正について
（１） 本件補正後の特許請求の範囲の記載
　本件補正により、特許請求の範囲の請求項１−４の記載は、次のとおり補正された。（下線部は、補正箇所である。）
「【請求項１】
配列番号６と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体が、７Ｎ、２３Ａ、２６Ｓ、２６Ｔ、２８Ｃ
、２
、２
、６
、７
、８
、８
、８
、１
、１
、２
前記アミノ酸置換の位置番号が、配列番号２に示すバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンの位置番号に基づき、かつ
前記変異体が、ａ）洗浄能力及びｂ）熱安定性から選択される少なくとも１の改善された性質を有する、
プロテアーゼ変異体。
【請求項２】
請求項１のプロテアーゼ変異体であって、
前記置換が、位置７Ｎ、２３Ａ、２６Ｓ、２６Ｔ、２８Ｃ
、２
、２
Ｉ
、８
、８
、８
、１
、２
前記変異体が、親ズブチリシンに対して改善された熱安定性を有する、
プロテアーゼ変異体。
　【請求項３】
請求項１のプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体が、２０℃で、濃度０．５〜１．０ｐｐｍプロテアーゼ及び水の硬度条件が３グレイン／ガロン（ｇｒａｉｎｓ　ｐｅｒ　ｇａｌｌｏｎ）合計Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋硬度で改善された洗浄能力を有し、かつ
前記置換が、３１
Ｉ
、４
、１
プロテアーゼ変異体。
　【請求項４】
請求項１のプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体が、４０℃で、プロテアーゼ濃度０．３〜０．５ｐｐｍプロテアーゼ及び水の硬度条件が１５グレイン／ガロン合計Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋硬度で改善された洗浄能力を有し、かつ
前記置換が、３１
Ｉ
、８
プロテアーゼ変異体。」
（２）本件補正前の特許請求の範囲
　本件補正前の、平成２８年１１月２４日にされた手続補正により補正された特許請求の範囲の請求項１−４の記載は次のとおりである。
「【請求項１】
配列番号６と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体が、７Ｎ、２３Ａ、２６Ｓ、２６Ｔ、２８Ｃ、２８Ｇ、２８Ｓ、２８Ｔ、２９Ｇ、３０Ａ、３１Ａ、３１Ｉ、３１Ｔ、３１Ｖ、４７Ｄ、４７Ｓ、６１Ｅ、６５Ｍ、６６Ｄ、６６Ｅ、６９Ｇ、７３Ｇ、７３Ｔ、８２Ｒ、８５Ｄ、８５Ｇ、８５Ｓ、８５Ｌ、８５Ｖ、８５Ｙ、８８Ｓ、９０Ａ、９０Ｉ、９０Ｍ、９０Ｖ、９２Ｅ、９２Ｒ、９３Ａ、９３Ｇ、９３Ｓ、９３Ｔ、１０５Ｄ、１０５Ｅ、１０５Ｇ、１０５Ｒ、１１３Ｄ、１３９Ａ、１４８Ｇ、１４８Ｗ、１４９Ａ、１４９Ｆ、１４９Ｇ、１４９Ｈ、１４９Ｓ、１４９Ｗ、１５０Ａ、１５０Ｃ、１５０Ｆ、１５０Ｌ、１５１Ｖ、１７４Ｇ、１７４Ｓ、１７８Ｓ、１７８Ｃ、１７８Ｌ、２００Ｓ、２０１Ｃ、２０１Ｓ、２０３Ｄ、２０３Ｅ、２１６Ｅ、２３１Ｇ、２３１Ｓ、２３３Ｇ、２３３Ｖ、２６７Ｒ、２６７Ｉ、２７３Ｓ、２３１Ｖ、及び２５８Ｅからなる群より選択される１以上の置換を有し、
前記アミノ酸置換の位置番号が、配列番号２に示すバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンの位置番号に基づき、かつ
前記変異体が、ａ）洗浄能力及びｂ）熱安定性から選択される少なくとも１の改善された性質を有する、
プロテアーゼ変異体。
　【請求項２】
請求項１のプロテアーゼ変異体であって、
前記置換が、位置７Ｎ、２３Ａ、２６Ｓ、２６Ｔ、２８Ｃ、２８Ｇ、２８Ｓ、２８Ｔ、２９Ｇ、３０Ａ、３１Ａ、３１１、３１Ｔ、３１Ｖ、４７Ｄ、６５Ｍ、６６Ｄ、６６Ｅ、７３Ｇ、７３Ｔ、８２Ｒ、８５Ｄ、８５Ｇ、８５Ｓ、８５Ｌ、８５Ｖ、８５Ｙ、８８Ｓ、９０Ａ、９０Ｉ、９０Ｍ、９２Ｅ、９２Ｒ、９３Ａ、９３Ｇ、９３Ｓ、９３Ｔ、１０５Ｄ、１０５Ｅ、１０５Ｇ、１０５Ｒ、１１３Ｄ、１３９Ａ、１４８Ｇ、１４９Ａ、１４９Ｆ、１４９Ｇ、１４９Ｈ、１４９Ｓ、１４９Ｗ、１５０Ａ、１５０Ｃ、１５０Ｆ、１５０Ｌ、１５１Ｖ、１７８Ｓ、１７８Ｃ、１７８Ｌ、２０１Ｃ、２３１Ｇ、２３１Ｓ、２３３Ｇ、２３３Ｖ、２６７Ｒ、２６７Ｉ、及び２７３Ｓからなる群より選択され、かつ前記変異体が、親ズブチリシンに対して改善された熱安定性を有する、
プロテアーゼ変異体。
　【請求項３】
請求項１のプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体が、２０℃で、濃度０．５〜１．０ｐｐｍプロテアーゼ及び水の硬度条件が３グレイン／ガロン（ｇｒａｉｎｓ ｐｅｒ ｇａｌｌｏｎ）合計Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋硬度で改善された洗浄能力を有し、かつ
前記置換が、３１１、３１Ｖ、４７Ｓ、４７Ｄ、８５Ｇ、９０Ｖ、９２Ｅ、１０５Ｄ、１０５Ｅ、１１３Ｄ、１４８Ｗ、１５１Ｖ、１７４Ｇ、１７４Ｓ、２００Ｓ、及び２０１Ｃからなる群より選択される、
プロテアーゼ変異体。
　【請求項４】
請求項１のプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体が、４０℃で、プロテアーゼ濃度０．３〜０．５ｐｐｍプロテアーゼ及び水の硬度条件が１５グレイン／ガロン合計Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋硬度で改善された洗浄能力を有し、かつ
前記置換が、３１１、３１Ｖ、６９Ｇ、８２Ｒ、１４８Ｇ、２０１Ｓ、２３１Ｖ、２３３Ｇ、及び２６７Ｒからなる群より選択される、
プロテアーゼ変異体。」
２　補正の適否
　本件補正のうち、本件補正前の請求項２−４に記載された「３１１」を「３１Ｉ」にする補正は誤記の訂正を目的とするものに該当する。
　また、本件補正前の請求項１−４に並列的に記載された変異体の一部を削除する補正は、限定的減縮を目的とするものに該当する。
　そこで、本件補正後の請求項１−４に記載される発明（以下、「本件補正発明１」、「本件補正発明２」等という。）が特許出願の際独立して特許を受けることができるものであるかについて、以下、検討する。
（１）本件補正発明１−４
　本件補正後の請求項１の「配列番号２」なる記載は、以下のとおり本願明細書の記載と矛盾しているので、この点について検討する。
　本願明細書、図面には、以下のとおり記載されている。
「【００２３】
１以上の残基位置におけるアミノ酸の具体的な置換は、バチルス・レンタス（ＢＰＮ’の番号を用いて）中のＡ１Ｅ、Ａ１Ｄ、Ａ１Ｒ、Ａ１Ｋ、Ｗ６Ｒ、Ｇ７Ｎ、Ｑ１２Ｈ、Ｇ２３Ａ、Ｆ２４Ｓ、Ｖ２６Ｓ、Ｖ２６Ｔ、Ｖ２８Ｃ、Ｖ２８Ｓ、Ｖ２８Ｔ、Ａ２９Ｇ、Ｖ３０Ａ、Ｌ３１Ａ、Ｌ３１Ｉ、Ｌ３１Ｔ、Ｌ３１Ｖ、Ｔ３８Ｓ、Ｎ４３Ｄ、Ｇ４７Ｄ、Ｇ４７Ｓ、Ｌ５０Ｆ、Ｇ５２Ｅ、Ｔ５７Ａ、Ｇ６５Ｍ、Ｔ６６Ｄ、Ｔ６６Ｅ、Ｇ６９＿、１７２Ｃ、１７２Ｌ、１７２Ｖ、Ａ７３Ｌ、Ａ７３Ｇ、Ａ７３Ｔ、Ａ７３Ｖ、Ｌ８２Ｒ、Ａ８５Ｄ、Ａ８５Ｇ、Ａ８５Ｌ、Ａ８５Ｓ、Ａ８５Ｖ、Ａ８５Ｙ、Ｐ８６Ｄ、Ａ８８Ｓ、Ｅ８９Ｇ、Ｌ９０Ａ、Ｌ９０Ｉ、Ｌ９０Ｍ、Ｌ９０Ｖ、Ａ９２Ｅ、Ａ９２Ｒ、Ｖ９３Ａ、Ｖ９３Ｇ、Ｖ９３Ｉ、Ｖ９３Ｓ、Ｖ９３Ｔ、Ｓ９９Ｇ、Ｓ１０３Ｃ、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ｅ、Ｓ１０５Ｇ、Ｓ１０５Ｒ、Ｗ１１３Ｄ、Ａ１１４Ｃ、Ａ１１４Ｇ、Ａ１１４Ｓ、Ａ１１４Ｔ、Ｎ１１６Ｄ、Ｎ１１７Ｓ、Ｍ１１９Ａ、Ｍ１１９Ｃ、Ｍ１１９Ｆ、Ｍ１１９Ｇ、Ｍ１１９Ｓ、Ｍ１１９Ｔ、Ｍ１１９Ｖ、Ｈ１２０Ｒ、Ｑ１２１Ｉ、Ｇ１２７Ａ、Ｓ１２８Ｄ、Ｓ１２８Ｌ、Ｅ１３６Ｒ、Ｖ１３９Ａ、Ａ１４２Ｅ、Ｒ１４５Ｇ、Ｖ１４７Ｃ、Ｖ１４７Ｇ、Ｖ１４７Ｌ、Ｖ１４７Ｓ、Ｌ１４８Ｇ、Ｌ１４８Ｗ、Ｖ１４９Ａ、Ｖ１４９Ｆ、Ｖ１４９Ｇ、Ｖ１４９Ｈ、Ｖ１４９Ｓ、Ｖ１４９Ｗ、Ｖ１５０Ａ、Ｖ１５０Ｃ、Ｖ１５０Ｆ、Ｖ１５０Ｌ、Ａ１５１Ｖ、Ｓ１５６Ｅ、Ｓ１５６Ｄ、Ａ１６９Ｇ、Ｒ１７０Ｍ、Ａ１７２Ｔ、Ａ１７４Ｇ、Ａ１７４Ｓ、Ａ１７４Ｔ、Ｇ１７８Ｃ、Ｇ１７８Ｌ、Ｇ１７８Ｓ、Ｉ１９８Ａ、Ｉ１９８Ｌ、Ｉ１９８Ｍ、Ｉ１９８Ｖ、Ｉ１９８Ｔ、Ｍ１９９Ｖ、Ａ２００Ｓ、Ｐ２０１Ｃ、Ｐ２０１Ｓ、Ｖ２０３Ｒ、Ｖ２０３Ｄ、Ｖ２０３Ｅ、Ｖ２０３Ｌ、Ｖ２０３Ｓ、Ｎ２０４Ｄ、Ｑ２０６Ｒ、Ｓ２１６Ｄ、Ｎ２１８Ｓ、Ｓ２１６Ｅ、Ｓ２１６Ｒ、Ａ２３１Ｇ、Ａ２３１Ｓ、Ａ２３２Ｃ、Ａ２３２Ｇ、Ａ２３２Ｉ、Ａ２３２Ｌ、Ａ２３２Ｍ、Ａ２３２Ｎ、Ａ２３１Ｖ、Ａ２３２Ｔ、Ａ２３２Ｖ、Ａ２３２Ｓ、Ｌ２３３Ｇ、Ｌ２３３Ｖ、Ｉ２４６Ｍ、Ｉ２４６Ｖ、Ｒ２４７Ｃ、Ｎ２５２Ｓ、Ｓ２５６Ｇ、Ｔ２５３Ｄ、Ｔ２５３Ｅ、Ｔ２５３Ｋ、Ｔ２５３Ｒ、Ｇ２５８Ｄ、Ｇ２５８Ｅ、Ｇ２５８Ｋ、Ｇ２５８Ｒ、Ｙ２６３Ｈ、Ｇ２６４Ｓ、Ｌ２６７Ｉ、Ｌ２６７Ｒ、Ａ２７０Ｌ、Ａ２７０Ｖ、Ａ２７３Ｓ、Ｔ２６０Ａに等しい。」
「【０１１４】
【図１Ａ】バチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンのＤＮＡ配列（配列番号１）及びアミノ酸配列（配列番号２）並びにこの遺伝子の制限地図の一部を示す。
・・・
【図３Ａ】図３Ａと３Ｂは、４つのズブチリシンのアミノ酸配列を表す。一番上の行はバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシン（ズブチリシンＢＰＮ’と呼ぶ時もある）から得たズブチリシンのアミノ酸配列を表す（配列番号３）。
・・・
４行目はバチルス・レンタス（ＰＣＴ ＷＯ８９／０６２７６でズブチリシン３０９とも呼ばれている）から得たズブチリシンのアミノ酸配列を表す（配列番号６）。」
　また、本願配列番号２、３、６で示されるアミノ酸配列は以下のとおりである。
配列番号２
配列番号３
配列番号６
　本件補正後の請求項１の記載からみて、例えば、同項に記載の「２５８Ｅ」は、配列番号２に示すバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンの位置番号２５８位に対応する配列番号６（バチルス・レンタス・ズブチリシン）のアミノ酸を「Ｅ」に置換することを意味しているものと認められる。そして、配列番号２、６と図３Ａ、Ｂの記載からみて、配列番号２に示すバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンの位置番号２５８位のアミノ酸は「Ａｌａ」（一文字表記では「Ａ」）であり、これに対応する配列番号６（バチルス・レンタス・ズブチリシン）のアミノ酸は１４９位の「Ａ」である。したがって、本件補正後の請求項１の記載からみると、本件補正後の請求項１に記載の「２５８Ｅ」は、配列番号６のアミノ酸配列の１４９位の「Ａ」を「Ｅ」に置換することを意味しているものと解することができる。
　他方、バチルス・アミロリケファシエンスの位置番号２５８位に対応する位置での置換について、本願明細書【００２３】段落には「Ｇ２５８Ｄ」、「Ｇ２５８Ｅ」、「Ｇ２５８Ｋ」、「Ｇ２５８Ｒ」と記載されており、いずれも置換される前のアミノ酸が「Ｇ」であることから、上記本件補正後の請求項１の記載から理解できる「２５８Ｅ」の意味と矛盾する。
　ここで、配列番号３は配列番号２のアミノ酸配列のＮ末端側１０７アミノ酸が欠失したアミノ酸配列を示すものであり、両者はいずれもバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンのアミノ酸配列である。そこで、本件補正後の請求項１に記載の「配列番号２」が「配列番号３」の誤記であるとすると、配列番号３に示すバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンの位置番号２５８位のアミノ酸は「Ｇｌｙ」（一文字表記では「Ｇ」）であり、これに対応する配列番号６（バチルス・レンタス・ズブチリシン）のアミノ酸は２５２位の「Ｇ」であることから、本願明細書【００２３】段落に記載された置換と矛盾しない。
　同様に、本件補正後の請求項１に記載された他の置換についても、配列番号２の位置番号での置換は本願明細書【００２３】段落に記載された置換と矛盾するが、本件補正後の請求項１に記載の「配列番号２」が「配列番号３」の誤記であるとすればそのような矛盾を生じず、また、本願明細書全体をみてもこれと矛盾する記載はない。
　よって、本件補正後の請求項１に記載の「配列番号２」は「配列番号３」の誤記と認め、本件補正発明１は以下のとおりのものと認め、本件補正発明２−４は上記１（１）に記載したとおりのものと認める。
「【請求項１】
配列番号６と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体が、７Ｎ、２３Ａ、２６Ｓ、２６Ｔ、２８Ｃ、２８Ｓ、２９Ｇ、３０Ａ、３１Ａ、３１Ｉ、３１Ｔ、３１Ｖ、４７Ｄ、６１Ｅ、６５Ｍ、６６Ｄ、６６Ｅ、７３Ｇ、７３Ｔ、８２Ｒ、８５Ｇ、８５Ｓ、８５Ｖ、８８Ｓ、９０Ａ、９０Ｉ、９０Ｍ、９０Ｖ、９２Ｅ、９２Ｒ、９３Ａ、９３Ｇ、９３Ｓ、９３Ｔ、１０５Ｄ、１０５Ｅ、１０５Ｒ、１１３Ｄ、１３９Ａ、１４８Ｇ、１４９Ａ、１４９Ｆ、１４９Ｇ、１４９Ｈ、１４９Ｓ、１４９Ｗ、１５０Ａ、１５０Ｃ、１５０Ｆ、１５０Ｌ、１５１Ｖ、１７４Ｇ、１７４Ｓ、１７８Ｓ、１７８Ｃ、１７８Ｌ、２００Ｓ、２０１Ｃ、２０１Ｓ、２０３Ｄ、２０３Ｅ、２１６Ｅ、２３１Ｇ、２３１Ｓ、２３３Ｇ、２６７Ｒ、２６７Ｉ、２７３Ｓ、２３１Ｖ、及び２５８Ｅからなる群より選択される１以上の置換を有し、
前記アミノ酸置換の位置番号が、配列番号３に示すバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンの位置番号に基づき、かつ
前記変異体が、ａ）洗浄能力及びｂ）熱安定性から選択される少なくとも１の改善された性質を有する、
プロテアーゼ変異体。」
（２）引用文献の記載事項（下線は当審で付した。）
ア　引用文献１
　原査定で引用された本願の優先日前に頒布された刊行物である、特表２００１−５２００４６号公報（以下、「引用文献１」という。）には、以下の事項が記載されている。
（ア−１）
「【特許請求の範囲】
    【請求項１】  １以上の残基位置においてアミノ酸の置換を含むプロテアーゼ変異体であって、該置換が、その位置における電荷を、前駆体プロテアーゼと比較して、より負にまたはより正でないように改変し、かつ当該プロテアーゼ変異体は前駆体プロテアーゼより低い洗剤濃度系でより効果的であることを特徴とするプロテアーゼ変異体。
    【請求項２】  前記プロテアーゼがスブチリシンであることを特徴とする請求項１記載のプロテアーゼ変異体。
    【請求項３】  バチラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）スブチリシンに由来することを特徴とする請求項１記載のプロテアーゼ変異体。
    【請求項４】  バチラス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）スブチリシンに由来する請求項３記載のプロテアーゼ変異体。
・・・
    【請求項１１】  １以上の残基位置でアミノ酸残基の置換を含むプロテアーゼ変異体であって、該置換が、その位置における電荷を、前駆体プロテアーゼと比較して、より正にまたはより負でないように改変し、かつ当該プロテアーゼ変異体は前駆体プロテアーゼよりも高い洗剤濃度系でより効果的であることを特徴とするプロテアーゼ変異体。
    【請求項１２】  前記プロテアーゼがスブチリシンであることを特徴とする請求項１１記載のプロテアーゼ変異体。
    【請求項１３】  バチラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）スブチリシンに由来することを特徴とする請求項１１記載のプロテアーゼ変異体。
    【請求項１４】  バチラス・レンタス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ）スブチリシンに由来する請求項１３記載のプロテアーゼ変異体。」
（ア−２）
「　　【００１９】
  我々は、低い洗剤濃度系でより効果的なプロテアーゼ変異体を生産するには、正に荷電した残基を負に荷電した残渣または中性残基でおよび／または中性残渣を負に荷電した残基で置き換える必要があることを見いだした。対照的に、我々は、高い洗剤濃度系でより効果的なプロテアーゼ変異体を生産するには、負に荷電した残基を正に荷電したまたは中性の残基でおよび／または中性残基を正に荷電した残基で置き換える必要があることを見いだした。さらに、我々は、低い洗剤濃度系および／または高い洗剤濃度系で有用なプロテアーゼ変異体の多くが中程度の洗剤濃度系で効果的であることを見いだした。これらの効果をバランスすることによって、低い洗剤濃度系、低いおよび中程度の洗剤濃度系、中程度のおよび高い洗剤濃度系、高い洗剤濃度系、または全ての３つの洗剤濃度系でよく働くプロテアーゼ変異体を生産することが可能である。」
（ア−３）
「　　【００２９】
  本発明は、変異体のアミノ酸配列がそれに由来する前駆体カルボニルヒドロラーゼと比較して、異なる蛋白質分解活性、安定性、基質特異性、ｐＨプロフィールおよび／または効率特徴を有する天然に生じるカルボニルヒドロラーゼ（プロテアーゼ変異体）であるプロテアーゼ酵素を含む。具体的には、かかるプロテアーゼ変異体は、前駆体プロテアーゼの複数のアミノ酸残基の異なるアミノ酸での置換によつて由来する、天然では見いだされないアミノ酸配列を有する。前駆体プロテアーゼは
天然に生じるプロテアーゼ
（ア−４）
「　　【００５８】
  本発明の１つの態様において、当該目的は、前駆体プロテアーゼと比較して、改変された蛋白質分解活性を有する変異体プロテアーゼを確保することである。というのは、かかる活性を増大させることは（数字的に大）、酵素が標的基質により効果的に作用するように使用することを可能とするからである。また、興味あることは、前駆体と比較して、改変された熱安定性および／または改変された基質特異性を有する変異体酵素である。」
（ア−５）
「　　【００６４】
  ・・・本発明の変異体は、（前駆体と比較して）
洗剤組成物における増強された性能
酵素感受性汚染の清浄の増大
（ア−６）
「　　【００７２】
【実施例】
    （実施例１）
  当該分野でよく知られた方法を用い、非常に多数のプロテアーゼ変異体を生産し、精製した。全ての突然変異は
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｎｔｕｓ  ＧＧ３６スブチリシン
      【００７３】
  「Ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｓｓａｙｉｎｇ ｆｏｒ ａ ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ ｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ／ｏｒ ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ」、米国特許第８０／０６６，７９６号に記載されているミクロスウォッチアッセイを用い、生産されたプロテアーゼ変異体を、２つのタイプの洗剤および洗浄条件における性能につきテストした。
      【００７４】
  表１−１３はアッセイした変異体プロテアーゼおよび２つの異なる性能におけるテスト結果をリストする。全ての値は表に目下最初のプロテアーゼに対する比較として与える（すなわち、１．３２の値は、表中の最初の変異体の１００％に対して、当該株の１３２％を放出する能力を示す）。
      【００７５】
  Ａ欄は変異体の電荷の差異を示す。Ｂ欄については、洗剤は、ガロン当たり３グレインの混合されたＣａ２＋／Ｍｇ２＋硬度を含有する溶液中の０．６７ｇ／ｌの濾過されたＡｒｉｅｌ Ｕｌｔｒａ （Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ， Ｃｉｎｃｉｃａｔｉ， オハイオ州， 米国）であり、０．３ｐｐｍの酵素を２５℃の各ウェルで用いた（低濃度洗剤系）。Ｃ欄については、洗剤は、ガロン当たり１５グレインの混合されたＣａ２＋／Ｍｇ２＋硬度を含有する溶液中の３．３８ｇ／ｌの濾過されたＡｒｉｅｌ Ｕｌｔｒａ （Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ， Ｃｉｎｃｉｃａｔｉ， オハイオ州， 米国）であり、０．３ｐｐｍの酵素を４０℃の各ウェルで用いた（高濃度洗剤系）。
      【００７６】
（実施例２）
  実施例１に記載したごとく、以下のプロテアーゼ変異体を作成し、テストした。
      【００７７】
  表１４における変異体は、両タイプの置換；Ｂ． ｌｅｎｔｕｓ  ＧＧ３６と比較して、電荷をより負にまたはより正ではなくする位置における電荷を変化させる置換および電荷をより正にまたはより負ではないようにする位置における電荷を変化させる置換、ならびに所与の残基位置における電荷に影響しない中性置換を有するプロテアーゼ変異体である。これは、低い洗剤濃度系（Ａ欄；０．６７ｇ／ｌの濾過されたＡｒｉｅｌ Ｕｌｔｒａ （Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ， Ｃｉｎｃｉｃａｔｉ， オハイオ州， 米国）、ガロン当たり３グレインの混合されたＣａ２＋／Ｍｇ２＋硬度を含有する溶液中、０．３ｐｐｍの酵素を２５℃の各ウェルで用いた）および低い洗剤濃度系（Ｂ欄；３．３８ｇ／ｌの濾過されたＡｒｉｅｌ Ｆｕｔｕｒ （Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ， Ｃｉｎｃｉｃａｔｉ， オハイオ州， 米国）、ガロン当たり１５グレインの混合されたＣａ２＋／Ｍｇ２＋硬度を含有する溶液中、０．３ｐｐｍの酵素を４０℃の各ウェルで用いた）の双方における標準よりも良好な性能のプロテアーゼ変異体を生じさせる。
      【００７８】
」
（ア−７）
「【図６】
【図７】
」
イ　引用文献２
　同じく原査定で引用された本願の優先日前に頒布された刊行物である、特表２００１−５２０３０５号公報（以下、「引用文献２」という。）には、以下の事項が記載されている。
（イ−１）
「      【００５３】
  本発明のクリーニング組成物で有用な更に一層好ましいプロテアーゼ変種は、下記からなる群より選択される置換組合せを包含している（下記表VIIで横一列につき１つの置換組合せ）：
                                  表VII
【表７】
・・・
・・・
」
（イ−２）
「     【００８３】
  本発明の一面において、前駆プロテアーゼと比較して
改変されたタンパク質分解活性
（イ−３）
「     【００８６】
  これらの置換は好ましくは
Bacillus lentus（組換えまたは天然タイプ）ズブチリシン
  変種プロテアーゼで得られたスクリーニング結果に基づくと、Bacillus amyloliquefaciensズブチリシンにおける前記変異は、これら酵素のタンパク質分解活性、性能および／または安定性、およびこのような変種酵素のクリーニングまたは
洗浄性能
ウ　引用文献３
　同じく原査定で引用された本願の優先日前に頒布された刊行物である、特開平１０−１１３１７９号公報（以下、「引用文献３」という。）には、以下の事項が記載されている。
（ウ−１）
「【００１３】
　【発明の概要】本発明は、ズブチリシン遺伝子の変異に関し、これらの変異の中にはズブチリシン酵素の化学的特性を変更させるものもある。変異は、ズブチリシン遺伝子の特異的核酸で生じ、そして種々の具体的実施態様では、変異酵素の化学的性質が変化して、酸化安定性が増加し、タンパク質分解活性が増加し、
洗浄性が向上
（ウ−２）
「【０１０５】６．２．２．
ズブチリシン３０９遺伝子
【表１０】
【表１１】
」
（ウ−３）
「【０１１９】６．２．６．変異ズブチリシンの
洗浄性
前記方法に従い、ホウレンソウジュースに対し種々の突然変異体の洗浄性をテストした。結果を第VI表に示す。この表より、テストした突然変異体はすべて親酵素と比較して
改良された洗浄能
【０１２０】
【表１４】
」
エ　引用文献４
　同じく原査定で引用された本願の優先日前に頒布された刊行物である、特開平１１−２４６８９５号公報（以下、「引用文献４」という。）には、以下の事項が記載されている。
（エ−１）
「【０００４】プロテアーゼ酵素のアミノ酸配列がプロテアーゼの特徴を決定している。プロテアーゼのアミノ酸配列の変化は、酵素の性質を様々な程度に変えたり、あるいはアミノ酸配列における変化の位置、性質および／または大きさに応じて酵素を不活化させることさえある。
洗浄環境下のようなクリーニング用途でプロテアーゼの効力を増加させる
　【０００５】
　【発明が解決しようとする課題】当業界で記載された様々な試みにもかかわらず、様々な表面をクリーニングする上で有用なプロテアーゼの新たに有効な変種に関する必要性が依然として存在している。したがって、
改善されたタンパク質分解活性、基質特異性、安定性および／または高性能特徴
（エ−２）
「【０１５１】例６８
洗浄性能
本発明組成物で有用な変種の洗浄性能は、ＥＭＰＡ１１６（コットン上に血液／ミルク／カーボンブラック）衣切れ（Testfabrics,Inc.,Middlesex,NJ 07030）から汚れの除去を調べることにより評価する。
・・・
【０１５６】
・・・
性能はB.Lentus（ＧＧ３６）プロテアーゼの性能の％として報告し、同様の汚れ除去性能を示すために必要な変種プロテアーゼの量でB.Lentus（ＧＧ３６）プロテアーゼの量を割り１００を掛けることにより計算する。データは表VII で示されている。
【０１５７】
                                  表VII 
酵素                                                
洗浄性能
B.Lentusズブチリシン                                  100 
N76D                                                  310 
N76D/S103A                                            230 
N76D/V104I                                            130 
N76D/I107V                                            160 
N76D/S99D/S101R                                       370 
N76D/S99D/S103A                                       290 
N76D/S101R/S103A                                      130 
N76D/S101R/V104I                                      300 
N76D/S103A/V104I                                      320 
N76D/S103G/V104I                                      160 
N76D/S103A/V104F                                      210 
N76D/S103A/V104N                                      110 
N76D/S103A/V104T                                      170 
N76D/V104I/I107V                                      210 
N76D/S99D/S101R/S103A                                 220 
N76D/S99D/S101R/V104I                                 140 
N76D/S101G/S103A/V104I                                170 
N76D/S101R/S103A/V104I                                150 
N76D/S103A/V104I/S105A                                170 
N76D/S103A/V104T/I107A                                120 
N76D/S103A/V104T/I107L                                110 
N76D/S103A/V104I/L126F                                110 
N76D/S103A/V104I/L128G                                280 
N76D/S103A/V104I/L135V                                160 
N76D/S103A/V104I/D197E                                160 
N76D/S103A/V104I/N204A                                170 
N76D/S103A/V104I/N204G                                160 
N76D/S103A/V104I/N204C                                150 
N76D/S103A/V104I/P210I                                470 
N76D/S103A/V104I/M222A                                100 
N76D/S103A/V104I/T260P                                280 
N76D/S103A/V104I/S265N                                190」
（３）引用発明
　上記（２）ア（ア−１）、（ア−３）の記載から、引用文献１には以下の発明（以下、「引用発明」という。）が記載されていると認められる。
　
　「１以上の残基位置においてアミノ酸の置換を含むバチラス・レンタス・スブチリシンプロテアーゼの変異体であって、該置換が、その位置における電荷を、天然に生じるプロテアーゼと比較して、より負にまたはより正でないように改変し、かつ当該プロテアーゼ変異体は天然に生じるプロテアーゼより低い洗剤濃度系でより効果的であるか、あるいは、該置換が、その位置における電荷を、天然に生じるプロテアーゼと比較して、より正にまたはより負でないように改変し、かつ当該プロテアーゼ変異体は天然に生じるプロテアーゼよりも高い洗剤濃度系でより効果的であるプロテアーゼ変異体。」
（４）引用発明との対比
　引用文献１の図６、７の４列目に記載されたバチラス・レンタス・ズブチリシンのアミノ酸配列と本願配列番号６に示されるアミノ酸配列は同一である。
　また、本件補正発明１に係るプロテーゼ変異体は「ａ）洗浄能力及びｂ）熱安定性から選択される少なくとも１の改善された性質」を有することが特定されており、このうち、ａ）の性質とは、本願明細書の記載（段落【０００４】、【０１０２】など）からみてアミノ酸配列に変異が導入されていない野生型プロテアーゼに対する改善された洗浄能力であると認められる。
　他方、引用発明の「天然に生じるプロテアーゼ」は、そのアミノ酸配列に変異は生じていないことから、本願明細書における野生型プロテアーゼに相当する。また、引用発明の「より効果的」なる発明特定事項は、上記（２）ア（ア−５）の記載から、酵素感受性汚染の清浄の増大を意味しているといえる。
　したがって、引用発明における「天然に生じるプロテアーゼより低い洗剤濃度系でより効果的である」プロテアーゼ変異体、及び、「天然に生じるプロテアーゼよりも高い洗剤濃度系でより効果的である」プロテアーゼ変異体は、本件補正発明１における「ａ）洗浄能力及びｂ）熱安定性から選択される少なくとも１の改善された性質」を有するプロテアーゼ変異体に相当する。
　よって、このａ）の性質のみを有する本件補正発明１と引用発明を対比すると、両者は、本願配列番号６にそのアミノ酸配列が示されるバチラス・レンタス・ズブチリシンプロテアーゼ変異体である点で共通し、「ａ）洗浄能力の改善された性質を有する、プロテアーゼ変異体」である点で一致するものの、本件補正発明１は、
「配列番号６と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異体であって、
前記変異体が、７Ｎ、２３Ａ、２６Ｓ、２６Ｔ、２８Ｃ、２８Ｓ、２９Ｇ、３０Ａ、３１Ａ、３１Ｉ、３１Ｔ、３１Ｖ、４７Ｄ、６１Ｅ、６５Ｍ、６６Ｄ、６６Ｅ、７３Ｇ、７３Ｔ、８２Ｒ、８５Ｇ、８５Ｓ、８５Ｖ、８８Ｓ、９０Ａ、９０Ｉ、９０Ｍ、９０Ｖ、９２Ｅ、９２Ｒ、９３Ａ、９３Ｇ、９３Ｓ、９３Ｔ、１０５Ｄ、１０５Ｅ、１０５Ｒ、１１３Ｄ、１３９Ａ、１４８Ｇ、１４９Ａ、１４９Ｆ、１４９Ｇ、１４９Ｈ、１４９Ｓ、１４９Ｗ、１５０Ａ、１５０Ｃ、１５０Ｆ、１５０Ｌ、１５１Ｖ、１７４Ｇ、１７４Ｓ、１７８Ｓ、１７８Ｃ、１７８Ｌ、２００Ｓ、２０１Ｃ、２０１Ｓ、２０３Ｄ、２０３Ｅ、２１６Ｅ、２３１Ｇ、２３１Ｓ、２３３Ｇ、２６７Ｒ、２６７Ｉ、２７３Ｓ、２３１Ｖ、及び２５８Ｅからなる群より選択される１以上の置換を有し、
前記アミノ酸置換の位置番号が、配列番号３に示すバチルス・アミロリケファシエンス・ズブチリシンの位置番号に基づ」くことが特定されているのに対して、
引用発明では、「置換が、その位置における電荷を、天然に生じるプロテアーゼと比較して、より負にまたはより正でないように改変」するものであるか、あるいは、「置換が、その位置における電荷を、天然に生じるプロテアーゼと比較して、より正にまたはより負でないように改変」するものであると特定されている点で相違すると認められる。
（５）判断
　本件補正発明１には、プロテアーゼ変異体の洗浄能力が改善されたことが特定されているが、洗浄能力が改善されたとは定性的な表現であって、本件補正発明１にいう洗浄能力の改善とは具体的にどの程度の改善であるか明らかでない。
　そして、本願明細書の表２、３には、本願補正発明１に該当するプロテアーゼ変異体として、野生型プロテアーゼに対して本件補正発明１に列挙されるアミノ酸置換のうち１つまたは２つのみを有する特定のプロテアーゼ変異体については、その洗浄能力の改善について具体的に示されているが、本件補正発明１に列挙されるアミノ酸配列を多数含む場合については、洗浄能力は具体的に示されていない。また、本件補正発明１は、「配列番号６と少なくとも９０％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む」と特定されており、配列番号６は２６９アミノ酸残基からなる配列であるため、本件補正発明１は、本件補正発明１に列挙されるアミノ酸置換に加えて、他の多数のアミノ酸変異を包含するものである。
　ここで、通常、プロテアーゼのような酵素タンパク質は、わずか１個のアミノ酸を置換するだけでも、その機能が大きく変化する場合があることが技術常識であり、実際、本願明細書の【０１０７】の表３にも、バチルス・レンタス・ズブチリシンにおいて、わずか１個のアミノ酸を置換するだけでも、洗浄条件によっては洗浄性能が大きく低下する変異体が多数存在することが示されている。
　そうすると、
本件補正発明１は、ごくわずかな洗浄能力の改善、例えば「８２Ｒ」のみを有する変異体の洗浄能力の改善である１．２倍よりもさらに少ない改善しかもたらさない置換がなされたプロテアーゼ変異体を包含すると認められる。
　そして、上記（２）ア（ア−１）、（ア−３）、（ア−５）、（ア−６）、イ（イ−２）、（イ−３）、ウ（ウ−１）〜（ウ−３）、エ（エ−１）、（エ−２）の記載からみて、引用文献１−４（引用文献３の「ズブチリシン３０９」は、本願明細書の段落【０１１４】の記載からみて、「バチラス・レンタス・ズブチリシン」と認められる）には、バチラス・レンタス・ズブチリシンプロテアーゼにおいて、野生型プロテアーゼの洗浄能力を向上させる目的で、野生型プロテアーゼに種々のアミノ酸置換を導入することが記載されているのであるから、
野生型プロテアーゼの洗浄能力を向上させる目的で、野生型プロテアーゼに種々のアミノ酸置換を導入することは、本願優先日前の周知技術である。
　そうすると、引用発明は、野生型プロテアーゼの洗浄能力を向上させる目的で、野生型プロテアーゼのアミノ酸を、その位置における電荷を、野生型プロテアーゼと比較して、より負にまたはより正でないように置換するか、その位置における電荷を、野生型プロテアーゼと比較して、より正にまたはより負でないように置換するものであるところ、
引用発明において、同じ目的で、野生型プロテアーゼのアミノ酸を、その位置における電荷を、野生型プロテアーゼと比較して、より負にまたはより正でないように置換するか、その位置における電荷を、野生型プロテアーゼと比較して、より正にまたはより負でないように置換するのみならず、その他の種々のアミノ酸置換を検討することは、当該本願優先日前の周知技術に基づいて、当業者が容易に想到し得ることである。
　また、引用文献３、４には、野生型プロテアーゼに種々のアミノ酸置換を導入することで、実際に洗浄能力を向上できたことが記載されていると認められる。すなわち、引用文献３の第VI表には、バチラス・レンタス・ズブチリシン変異体であって、最小でも１５．４、最大では２２．２の洗浄性能を示すものが記載されており、これは野生型の洗浄性能（１４．４）のそれぞれ約１．０７倍、約１．５４倍である。また、引用文献４の図VIIには、最小でも野生型の１．１倍、最大では野生型の４．７倍の洗浄性能を示す変異体が記載されている。
　引用発明では、具体的なアミノ酸置換を特定していないが、引用文献１の表１〜１４には、それぞれ特定のアミノ酸置換を有する数々の変異体が記載されている。これらの変異体は、本件補正発明に特定されるアミノ酸置換は有していないが、引用文献３、４の記載からみて、引用文献１に具体的に記載される数々の変異体が有するアミノ酸置換以外でも洗浄能力が改善できるといえるから、
引用発明において種々のアミノ酸置換を検討することによって、本件補正発明１にいう、洗浄能力がごくわずかにでも改善されたプロテアーゼ変異体が得られる蓋然性が高いといえる。
　したがって、引用発明において種々のアミノ酸置換を検討し、洗浄能力がごくわずかにでも改善されたプロテアーゼ変異体を得ることは、当業者が容易になし得ることである。
　その際に、配列番号６に示されるアミノ酸配列は２６９アミノ酸からなるものであるところ、上記（２）ア（ア−６）、イ（イ−１）、ウ（ウ−２）、エ（エ−２）の記載からみて、引用文献１−４に記載されているアミノ酸置換の数はせいぜい１〜１３個であるから、アミノ酸置換を検討する際にその数を引用文献１−４に記載された程度の数とし、配列番号６と少なくとも９０％配列同一性を有する範囲でアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含むプロテアーゼ変異体とすることは当業者が適宜なし得たことである。
　そして、そのようにして得られる洗浄能力がごくわずかにでも改善されたプロテアーゼ変異体の中には、本件補正発明１に特定される種々のアミノ酸置換を含むプロテアーゼ変異体が含まれると認められる。
　したがって、上記の相違点は当業者が容易になし得ることである。
　そして、上述の通り、本件補正発明は、ごくわずかしか洗浄能力の改善のない変異体を包含するから、本件補正発明１が奏する効果が当業者が予測できないほど格別なものとは認められない。
　なお、審判請求人は、審判請求書において、「補正後の請求項１に記載の置換は、いずれも、本願明細書の実施例５（洗浄能力）、実施例６（洗浄能力）、又は実施例７(熱安定性）において、改善された効果を有することが確認されています。・・・補正後の請求項１に記載の置換は、いずれも、表２、３、又は４のいずれかの試験結果において、１．１以上の性能指数を有することが分かります」と主張している。
　しかしながら、本件補正発明１は表２〜４に示された変異体のみに特定されておらず、したがって、性能指数が１．１以上に特定されているともいえない。また、上述したとおり、本件補正発明１は、野生型のバチラス・レンタス・スブチリシンのプロテアーゼと比べて、洗浄性能の点でわずかな改善しかみられない変異体も含んでいる。
　よって、出願人の主張を考慮しても、依然として、本件補正発明１は、引用文献１に記載された事項及び本願優先日前の周知技術に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により、特許出願の際独立して特許を受けることができないものである。
３　本件補正についてのむすび
　したがって、本件補正は、平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる同法による改正前の特許法第１７条の２第５項において準用する同法１２６条第５項の規定に反するので、同法第１５９条第１項において読み替えて準用する同法第５３条第１項の規定により却下すべきものである。
　よって、上記補正却下の決定の結論のとおり決定する。
第３　本願発明
１　本願発明
　平成２９年７月１３日にされた手続補正は、上記のとおり却下されたので、本願の請求項に係る発明は、平成２８年１１月２４日にされた手続補正により補正された特許請求の範囲の請求項１−９に記載された事項により特定されるものであるところ、その請求項１に係る発明（以下「本願発明１」という。）は、その請求項１に記載された事項により特定される、前記第２［理由］１（２）に記載のとおりのものである。
２　原査定の拒絶の理由
　原査定の拒絶の理由は、この出願の請求項１−９に係る発明は、本願の優先日前に頒布された刊行物である下記の引用文献２に記載された事項及び周知技術に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない、というものである。
引用文献２：特表２００１−５２００４６号公報
引用文献３：特表２００１−５２０３０５号公報（周知技術を示す文献）
引用文献４：特開平１０−１１３１７９号公報（周知技術を示す文献）
引用文献５：特開平１１−２４６８９５号公報（周知技術を示す文献）
３　引用文献
　原査定の拒絶の理由で引用された引用文献２−５の記載事項は、前記第２の［理由］２（２）に、それぞれ引用文献１−４として記載したとおりである。
４　対比・判断
　前記第２の［理由］２で検討した本件補正は、誤記の訂正と限定的減縮を目的とするものであるところ、本件補正発明１が、前記第２の［理由］２に記載したとおり、原査定の引用文献２（第２の［理由］２における引用文献１）に記載された事項及び本願優先日前の周知技術に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、本願発明１も原査定の引用文献２に記載された事項及び本願優先日前の周知技術に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものである。
第４　むすび
　以上のとおり、本願発明１は、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないから、他の請求項に係る発明について検討するまでもなく、本願は拒絶されるべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。