【手続補正書】
【提出日】平成22年5月28日(2010.5.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）の２つ以上の化合物：
Ｚ−Ｒ１  （Ｉ）
、あるいはそれらの塩形態または水和物形態を含む標識のセットであって、該標識のセット中の該化合物の１つ以上が、１つ以上の重原子同位体を含有し、
式中、
Ｚが、置換または非置換の直鎖、分枝鎖または環状アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アミノ、あるいは置換または非置換チオを表し；
Ｒ１が、置換または非置換の
【化２６】
2010506140.tif 000001
を表し；
Ｘが、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたはアセチルを表し；そして
Ｒ２が、置換または非置換アルキル、置換または非置換ハロゲン化アルキル、あるいは置換または非置換アリール基を表す、
標識のセット。
【請求項２】
前記標識のセットの一般式（Ｉ）の化合物の１つ以上が、２個以上の重原子で同位体濃縮される、請求項１に記載の標識のセット。
【請求項３】
前記標識のセットの一般式（Ｉ）の化合物の１つ以上が、３個以上の重原子で同位体濃縮される、請求項１に記載の標識のセット。
【請求項４】
前記標識のセットの一般式（Ｉ）の化合物の１つ以上が、４個以上の重原子で同位体濃縮される、請求項１に記載の標識のセット。
【請求項５】
前記重原子同位体がそれぞれ独立して１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３３Ｓまたは３４Ｓである、請求項１に記載の標識のセット。
【請求項６】
前記標識が非塩形態または非水和形態の同重体であり、そして同重体標識のそれぞれが１つ以上の重原子同位体を含有する、請求項１４に記載の標識のセット。
【請求項７】
前記標識の質量が非塩形態または非水和形態で約０．０５ａｍｕ未満異なる、請求項１に記載の標識のセット。
【請求項８】
前記２つ以上の化合物が、以下の一般式（ＩＶ）：
【化２７】
2010506140.tif 000002
の化合物、あるいはその塩形態または水和物形態である、請求項１に記載の標識のセット。
【請求項９】
Ｒ１が
【化２８】
2010506140.tif 000003
を表す、請求項８に記載の標識のセット。
【請求項１０】
前記２つ以上の化合物が、以下の一般式（Ｖ）：
【化２９】
2010506140.tif 000004
の化合物、あるいはその塩形態または水和物形態であり、
式中、
Ｒ３がＣ、Ｎ、ＯまたはＳを表し；
Ｒ４が、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、あるいは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基を表し；
各Ｒ５が独立して、水素、重水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アミノ酸側鎖、あるいは場合により置換または非置換アリール基を含有し得る直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基を表し、該アルキル基およびアリール基の炭素原子がそれぞれ独立して、１個以上の水素原子、重水素原子またはフッ素原子に結合する、
請求項１に記載の標識のセット。
【請求項１１】
Ｒ１が
【化３０】
2010506140.tif 000005
を表す、請求項１０に記載の標識のセット。
【請求項１２】
前記標識のセット中の各標識が、該セット中の別の標識と、約１ａｍｕを超える質量差で区別される、請求項１０に記載の標識のセット。
【請求項１３】
Ｒ１が
【化３１】
2010506140.tif 000006
を表す、請求項１２に記載の標識のセット。
【請求項１４】
Ｒ１が
【化３２】
2010506140.tif 000007
を表す、請求項１０に記載の標識のセット。
【請求項１５】
前記標識が非塩形態または非水和形態の同重体であり、そして同重体標識のそれぞれが１つ以上の重原子同位体を含有する、請求項１４に記載の標識のセット。
【請求項１６】
前記標識の質量が非塩形態または非水和形態で約０．０５ａｍｕ未満異なる、請求項１４に記載の標識のセット。
【請求項１７】
一般式（Ｉ）の前記２つ以上の化合物が、モノ−ＴＦＡ塩、モノＨＣｌ塩、ビス−ＨＣｌ塩またはビス−ＴＦＡ塩、あるいはそれらの水和物の形態である、請求項１に記載の標識のセット。
【請求項１８】
ヒドロキシル化化合物を標識するためのキットであって、請求項１に記載の標識のセットと、１つ以上の試薬、容器、緩衝液および使用説明書とを含む、キット。
【請求項１９】
本明細書中に記載の発明。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
要旨
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
以下の一般式（Ｉ）の２つ以上の化合物：
Ｚ−Ｒ１  （Ｉ）
、あるいはそれらの塩形態または水和物形態を含む標識のセットであって、該標識のセット中の該化合物の１つ以上が、１つ以上の重原子同位体を含有し、
式中、
Ｚが、置換または非置換の直鎖、分枝鎖または環状アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アミノ、あるいは置換または非置換チオを表し；
Ｒ１が、置換または非置換の
【化２６】
2010506140.tif 000008
を表し；
Ｘが、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたはアセチルを表し；そして
Ｒ２が、置換または非置換アルキル、置換または非置換ハロゲン化アルキル、あるいは置換または非置換アリール基を表す、
標識のセット。
（項目２）
前記標識のセットの一般式（Ｉ）の化合物の１つ以上が、２個以上の重原子で同位体濃縮される、項目１に記載の標識のセット。
（項目３）
前記標識のセットの一般式（Ｉ）の化合物の１つ以上が、３個以上の重原子で同位体濃縮される、項目１に記載の標識のセット。
（項目４）
前記標識のセットの一般式（Ｉ）の化合物の１つ以上が、４個以上の重原子で同位体濃縮される、項目１に記載の標識のセット。
（項目５）
前記重原子同位体がそれぞれ独立して１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３３Ｓまたは３４Ｓである、項目１に記載の標識のセット。
（項目６）
前記標識が非塩形態または非水和形態の同重体であり、そして同重体標識のそれぞれが１つ以上の重原子同位体を含有する、項目１４に記載の標識のセット。
（項目７）
前記標識の質量が非塩形態または非水和形態で約０．０５ａｍｕ未満異なる、項目１に記載の標識のセット。
（項目８）
前記２つ以上の化合物が、以下の一般式（ＩＶ）：
【化２７】
2010506140.tif 000009
の化合物、あるいはその塩形態または水和物形態である、項目１に記載の標識のセット。
（項目９）
Ｒ１が
【化２８】
2010506140.tif 000010
を表す、項目８に記載の標識のセット。
（項目１０）
前記２つ以上の化合物が、以下の一般式（Ｖ）：
【化２９】
2010506140.tif 000011
の化合物、あるいはその塩形態または水和物形態であり、
式中、
Ｒ３がＣ、Ｎ、ＯまたはＳを表し；
Ｒ４が、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、あるいは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基を表し；
各Ｒ５が独立して、水素、重水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アミノ酸側鎖、あるいは場合により置換または非置換アリール基を含有し得る直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基を表し、該アルキル基およびアリール基の炭素原子がそれぞれ独立して、１個以上の水素原子、重水素原子またはフッ素原子に結合する、
項目１に記載の標識のセット。
（項目１１）
Ｒ１が
【化３０】
2010506140.tif 000012
を表す、項目１０に記載の標識のセット。
（項目１２）
前記標識のセット中の各標識が、該セット中の別の標識と、約１ａｍｕを超える質量差で区別される、項目１０に記載の標識のセット。
（項目１３）
Ｒ１が
【化３１】
2010506140.tif 000013
を表す、項目１２に記載の標識のセット。
（項目１４）
Ｒ１が
【化３２】
2010506140.tif 000014
を表す、項目１０に記載の標識のセット。
（項目１５）
前記標識が非塩形態または非水和形態の同重体であり、そして同重体標識のそれぞれが１つ以上の重原子同位体を含有する、項目１４に記載の標識のセット。
（項目１６）
前記標識の質量が非塩形態または非水和形態で約０．０５ａｍｕ未満異なる、項目１４に記載の標識のセット。
（項目１７）
一般式（Ｉ）の前記２つ以上の化合物が、モノ−ＴＦＡ塩、モノＨＣｌ塩、ビス−ＨＣｌ塩またはビス−ＴＦＡ塩、あるいはそれらの水和物の形態である、項目１に記載の標識のセット。
（項目１８）
ヒドロキシル化化合物を標識するためのキットであって、項目１に記載の標識のセットと、１つ以上の試薬、容器、緩衝液および使用説明書とを含む、キット。
（項目１９）
以下の一般式（ＩＩ）の標識化合物であって：
【化３３】
2010506140.tif 000015
式中、
Ａが、該標識化合物の形成前に１個以上のヒドロキシル基を含有する化合物を表し；
Ｚが、置換または非置換の直鎖、分枝鎖または環状アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アミノ、あるいは置換または非置換チオを表し；
ｎが、１から、該標識化合物の形成前におけるＡ中のヒドロキシル基の数までの整数を表し；
ＲＸが、置換または非置換の
【化３４】
2010506140.tif 000016
を表し；そして
ＲＹが、該標識化合物の形成前にヒドロキシル基を含有したＡの炭素原子への結合を形成する酸素原子を表す、
化合物、あるいはその塩形態または水和物形態。
（項目２０）
前記標識化合物のＺ−ＲＸ部分が、２個以上の重原子で同位体濃縮される、項目１９に記載の標識化合物。
（項目２１）
前記標識化合物のＺ−ＲＸ部分が、３個以上の重原子で同位体濃縮される、項目２０に記載の標識化合物。
（項目２２）
前記標識化合物のＺ−ＲＸ部分が、４個以上の重原子で同位体濃縮される、項目２１に記載の標識化合物。
（項目２３）
前記重原子同位体がそれぞれ独立して１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３３Ｓまたは３４Ｓである、項目２０に記載の標識化合物。
（項目２４）
Ａが多環式環含有化合物を含む、項目１９に記載の標識化合物。
（項目２５）
Ａが四環式環含有化合物を含む、項目２４に記載の標識化合物。
（項目２６）
Ａが、以下の一般式（ＩＩＩ）の四環式環を含み：
【化３５】
2010506140.tif 000017
ここでＲＹとの結合を形成しない四環式環上の位置の１つ以上がそれぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカル
ボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アルコキシル、シアノ、アルキルアリール、芳香族基または複素芳香族基で置換される、項目２５に記載の標識化合物。
（項目２７）
ＲＹが３位で炭素との結合を形成する、項目２６に記載の標識化合物。
（項目２８）
ＲＹが１７位で炭素との結合を形成する、項目２６に記載の標識化合物。
（項目２９）
Ｚ−ＲＸが以下の一般式（ＩＩａ）：
【化３６】
2010506140.tif 000018
のものである、項目１９に記載の標識化合物。
（項目３０）
ＲＸが
【化３７】
2010506140.tif 000019
を表す、項目２９に記載の標識化合物。
（項目３１）
Ｚ−ＲＸが、以下の一般式（ＩＩｂ）のものであり：
【化３８】
2010506140.tif 000020
式中、
Ｒ３がＣ、Ｎ、ＯまたはＳを表し；
Ｒ４が、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、あるいは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基を表し；そして
各Ｒ５が独立して、水素、重水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アミノ酸側鎖、あるいは場合により置換または非置換アリール基を含有し得る直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基を表し、ここで該アルキル基およびアリール基の炭素原子がそれぞれ独立して、１個以上の水素原子、重水素原子またはフッ素原子に結合する、
項目１９に記載の標識化合物。
（項目３２）
ＲＸが
【化３９】
2010506140.tif 000021
を表す、項目３１に記載の標識化合物。
（項目３３）
ＲＸが
【化４０】
2010506140.tif 000022
を表す、項目３１に記載の標識化合物。
（項目３４）
標識でヒドロキシル化化合物を標識する方法であって、
以下の一般式（ＸＩＩａ）の化合物：
Ｌ−Ｒ１  （ＸＩＩａ）
、あるいはその塩形態または水和物形態をヒドロキシル化化合物と反応させて、以下の一般式（ＸＩＩＩａ）の標識化合物前駆体：
Ｌ−ＲＸ−ＲＹ−Ａ  （ＸＩＩＩａ）
を形成する工程と；
以下の一般式（ＸＩＶｂ）の化合物：
ＺＲ８  （ＸＩＶｂ）
、あるいはその塩形態または水和物形態を該標識化合物前駆体と反応させて、以下の一般式（ＩＩ）の標識化合物：
【化４１】
2010506140.tif 000023
、あるいはその塩形態または水和物形態を形成する工程と、
を含み、
式中、
Ｌが脱離基を表し；
Ｒ８が脱離基、対イオンまたは水素を表し；
Ａが、前記標識化合物の形成前に１個以上のヒドロキシル基を含有する化合物を表し；
Ｚが、置換または非置換の直鎖、分枝鎖または環状アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アミノ、あるいは置換または非置換チオを表し；
ｎが、１から、該標識化合物の形成前におけるＡ中のヒドロキシル基の数までの整数を表し；
ＲＸが、置換または非置換の
【化４２】
2010506140.tif 000024
を表し；
ＲＹが、該標識化合物の形成前にヒドロキシル基を含有したＡの炭素原子への結合を形成する酸素原子を表し；
Ｒ１が、置換または非置換の
【化４３】
2010506140.tif 000025
を表し；
Ｘが、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたはアセチルを表し；
Ｒ２が、置換または非置換アルキル、置換または非置換ハロゲン化アルキル、あるいは置換または非置換アリールを表す、
方法。
（項目３５）
標識でヒドロキシル化化合物を標識する方法であって、
以下の一般式（Ｉ）の化合物：
Ｚ−Ｒ１  （Ｉ）
あるいはその塩形態または水和物形態をヒドロキシル化化合物と反応させて、以下の一般式（ＩＩ）の標識化合物：
【化４４】
2010506140.tif 000026
、あるいはその塩形態または水和物形態を形成する工程を含み、
式中、
Ａが、該標識化合物の形成前に１個以上のヒドロキシル基を含有する化合物を表し；
Ｚが、置換または非置換の直鎖、分枝鎖または環状アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アミノ、あるいは置換または非置換チオを表し；
ｎが、１から、該標識化合物の形成前におけるＡ中のヒドロキシル基の数までの整数を表し；
ＲＸが、置換または非置換の
【化４５】
2010506140.tif 000027
を表し；
ＲＹが、該標識化合物の形成前にヒドロキシル基を含有したＡの炭素原子への結合を形成する酸素原子を表し；
Ｒ１が、置換または非置換の
【化４６】
2010506140.tif 000028
を表し；
Ｘが、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたはアセチルを表し；
Ｒ２が、置換または非置換アルキル、置換または非置換ハロゲン化アルキル、あるいは置換または非置換アリール基を表す、
方法。
（項目３６）
脱離基がＣｌ、Ｂｒ、Ｉまたはアセチルである、項目３４および３５の１項以上に記載の方法。
（項目３７）
前記Ｚ部分およびＲＸ部分がともに、２個以上の重原子で同位体濃縮される、項目３４および３５の１項以上に記載の方法。
（項目３８）
前記Ｚ部分およびＲＸ部分がともに、３個以上の重原子で同位体濃縮される、項目３８に記載の方法。
（項目３９）
前記Ｚ部分およびＲＸ部分がともに、４個以上の重原子で同位体濃縮される、項目３９に記載の方法。
（項目４０）
前記重原子同位体がそれぞれ独立して１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３３Ｓまたは３４Ｓである、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
Ａが多環式環含有化合物を含む、項目３４および３５の１項以上に記載の方法。
（項目４２）
Ａが四環式環含有化合物を含む、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
Ａが、以下の一般式（ＩＩＩ）の四環式環を含み：
【化４７】
2010506140.tif 000029
ここで、ＲＹとの結合を形成しない四環式環上の位置の１つ以上がそれぞれ独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アルコキシル、シアノ、アルキルアリール、芳香族基または複素芳香族基で置換される、
項目４２に記載の方法。
（項目４４）
ＲＹが３位で炭素との結合を形成する、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
ＲＹが１７位で炭素との結合を形成する、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
Ｚ−ＲＸが以下の一般式（ＩＩａ）
【化４８】
2010506140.tif 000030
のものである、項目３４および３５の１項以上に記載の方法。
（項目４７）
ＲＸが
【化４９】
2010506140.tif 000031
を表す、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
Ｚ−ＲＸが、以下の一般式（ＩＩｂ）のものであり：
【化５０】
2010506140.tif 000032
式中、
Ｒ３がＣ、Ｎ、ＯまたはＳを表し；
Ｒ４が、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、あるいは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基を表し；そして
各Ｒ５が独立して、水素、重水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アミノ酸側鎖、あるいは場合により置換または非置換アリール基を含有し得る直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基を表し、ここで、該アルキル基およびアリール基の炭素原子がそれぞれ独立して、１個以上の水素原子、重水素原子またはフッ素原子に結合する、
項目３４および３５の１項以上に記載の方法。
（項目４９）
ＲＸが
【化５１】
2010506140.tif 000033
を表す、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
ＲＸが
【化５２】
2010506140.tif 000034
を表す、項目４８に記載の方法。
（項目５１）
反応工程が、カップリング剤の存在下における反応を含む、項目３４および３５の１項以上に記載の方法。
（項目５２）
前記カップリング剤が、ヘキサフルオロリン酸塩化合物、テトラフルオロホウ酸塩化合物およびエチルジエチルアミノプロピルカルボジイミド化合物の１つ以上を含む、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
１つ以上の試料中のヒドロキシル化化合物の１つ以上を分析する方法であって、
標準化合物を提供する工程と；
以下の一般式（Ｉ）：
Ｚ−Ｒ１  （Ｉ）
あるいはその塩形態または水和物形態の標識のセットの標識で該標準化合物を標識する工程であって、該標識のセットの１つ以上の標識が、１つ以上の重原子同位体を含有する、工程と；
１つ以上のヒドロキシル化化合物をそれぞれ、該標識のセットとは異なる標識で標識して、標識検体化合物を形成する工程と；
標識標準化合物の少なくとも一部を該標識検体化合物のそれぞれの少なくとも一部と組み合わせて、混合試料を作製する工程と；
クロマトグラフィカラムに該混合試料の少なくとも一部を充填する工程と；
該クロマトグラフィカラムからの溶離液の少なくとも一部を親−娘イオン遷移モニタリングに供する工程であって、
第１の遷移した親イオンのｍ／ｚ範囲が、該標識検体化合物の１つ以上のｍ／ｚ値を含み、そして第１の遷移した娘イオンのｍ／ｚ範囲が、該標識検体化合物の標識の少なくとも１つに対応する少なくとも１つのレポーターイオンのｍ／ｚ値を含み、
第２の遷移した親イオンのｍ／ｚ範囲が、該標識標準化合物のｍ／ｚ値を含み、そして第２の遷移した娘イオンのｍ／ｚ範囲が、該標識標準化合物の標識に対応するレポーターイオンのｍ／ｚ値を含む、工程と；
遷移したレポーターイオンのイオン信号を測定する工程と；
対応するレポーターイオンの測定したイオン信号と、該標識標準化合物に対応するレポーターイオンの測定したイオン信号との比較に少なくとも基づいて、前記標識検体化合物の１つ以上の濃度を測定する工程と、
を含み；
式中、
Ｚが、置換または非置換の直鎖、分枝鎖または環状アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アミノ、あるいは置換または非置換チオを表し；
Ｒ１が、置換または非置換の
【化５３】
2010506140.tif 000035
を表し；
Ｘが、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたはアセチルを表し；
Ｒ２が、置換または非置換アルキル、置換または非置換ハロゲン化アルキル、あるいは置換または非置換アリール基を表す、
方法。
（項目５４）
１つ以上の試料中の１つ以上のヒドロキシル化化合物を分析する方法であって、
以下の一般式（Ｉ）
Ｚ−Ｒ１  （Ｉ）
あるいはその塩形態または水和物形態の標識のセットとは異なる標識で１つ以上のヒドロキシル化化合物をそれぞれ標識して、標識検体化合物を形成する工程であって、該標識のセットの１つ以上の標識が、１つ以上の重原子同位体を含有する、工程と；
該標識検体化合物のそれぞれの少なくとも一部を組み合わせて、混合試料を作製する工程と；
クロマトグラフィカラムに該混合試料の少なくとも一部を充填する工程と；
該クロマトグラフィカラムからの溶離液の少なくとも一部を親−娘イオン遷移モニタリングに供する工程であって、該遷移した親イオンのｍ／ｚ範囲が、該標識検体化合物の１つ以上のｍ／ｚ値を含み、該遷移した娘イオンのｍ／ｚ範囲が、該標識検体化合物の標識の少なくとも１つに対応する少なくとも１つのレポーターイオンのｍ／ｚ値を含む、工程と；
該遷移したレポーターイオンの１つ以上のイオン信号を測定する工程と；そして
該対応するレポーターイオンの測定したイオン信号と標準化合物の濃度曲線との比較に少なくとも基づいて、該標識検体化合物の１つ以上の濃度を測定する工程と、
を含み；
式中、
Ｚが、置換または非置換の直鎖、分枝鎖または環状アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換アミノ、あるいは置換または非置換チオを表し；
Ｒ１が、置換または非置換の
【化５４】
2010506140.tif 000036
を表し；
Ｘが、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉまたはアセチルを表し；
Ｒ２が、置換または非置換アルキル、置換または非置換ハロゲン化アルキル、あるいは置換または非置換アリール基を表す、
方法。
（項目５５）
前記標識のセットの各標識がそれらの非塩形態または非水和形態の同重体であり、そして該標識のそれぞれが１つ以上の重原子同位体を含有する、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目５６）
前記標識のセットの各標識の質量が、非塩形態または非水和形態で約０．０５ａｍｕ未
満異なる、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目５７）
前記標識のセットの標識の１つ以上が、２個以上の重原子で同位体濃縮される、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目５８）
前記標識のセットの標識の１つ以上が、３個以上の重原子で同位体濃縮される、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目５９）
前記標識のセットの標識の１つ以上が、４個以上の重原子で同位体濃縮される、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目６０）
前記重原子同位体がそれぞれ独立して１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３３Ｓまたは３４Ｓである、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目６１）
前記試料の１つ以上が生理液を含む、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目６２）
前記標準化合物が非同位体濃縮化合物である、項目５３に記載の方法。
（項目６３）
前記１つ以上のヒドロキシル化化合物が、１つ以上のステロイドを含む、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目６４）
１つ以上のステロイドが、コルチゾール、１１−デオキシコルチゾール（化合物Ｓ）、コルチコステロン、ＤＨＴ、テストステロン、エピテストステロン、デオキシメチルテストステロン（ＤＭＴ）、テトラヒドロゲストリノン（ＴＨＧ）、エストラジオール、エストロン、４−ヒドロキシエストロン、２−メトキシエストロン、２−ヒドロキシエストロン、１６−ケトエストラジオール、１６アルファ−ヒドロキシエストロン、２−ヒドロキシエストロン−３−メチルエーテル、プレドニゾン、プレドニゾロン、プレグネノロン、プロゲステロン、ＤＨＥＡ（デヒドロエピアンドロステロン）、１７  ＯＨプレグネノロン、１７  ＯＨプロゲステロン、１７  ＯＨプロゲステロン、アンドロステロン、エピアンドロステロン、Ｄ４Ａ（デルタ４  アンドロステンジオン）、スチグマステロール、およびコレステロールの１つ以上を含む、項目６３に記載の方法。
（項目６５）
前記１つ以上のヒドロキシル化化合物が、１つ以上の形態のビタミンＤまたはその代謝産物を含む、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目６６）
前記１つ以上の形態のビタミンＤが、エルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール、代謝産物およびそれらの類似体の１つ以上を含む、項目６５の方法。
（項目６７）
前記クロマトグラフィカラムからの溶離液の少なくとも一部を親−娘イオン遷移モニタリングに供する工程が、三重四重極型質量分析計、四重極／飛行時間型質量分析計、線形イオントラップ型質量分析計、またはタンデム飛行時間型質量分析計の１つ以上を使用する工程を含む、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目６８）
前記クロマトグラフィカラムからの溶離液の少なくとも一部を親−娘イオン遷移モニタリングに供する工程が、マトリックスに前記混合試料を混合する工程と、マトリックス支援レーザー脱離イオン化を使用して、該親−娘イオン遷移モニタリングのためのイオンを生成する工程とを含む、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目６９）
前記標識検体化合物の１つ以上の濃度を測定する工程が、前記標識検体化合物の１つ以上の絶対濃度を測定する工程を含む、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目７０）
前記標識のセットの標識が、以下の一般式（ＩＶ）：
【化５５】
2010506140.tif 000037
の化合物、あるいはその塩形態または水和物形態である、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目７１）
Ｒ１が
【化５６】
2010506140.tif 000038
を表す、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
前記標識のセットの標識が、以下の一般式（ＶＩ）：
【化５７】
2010506140.tif 000039
の化合物、あるいはその塩形態または水和物形態であり、
式中、
Ｒ３がＣ、Ｎ、ＯまたはＳを表し；
Ｒ４が、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、あるいは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基を表し；そして
各Ｒ５が独立して、水素、重水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アミノ酸側鎖、あるいは場合により置換または非置換アリール基を含有し得る直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基を表し、ここで、該０アルキル基およびアリール基の炭素原子がそれぞれ独立して、１個以上の水素原子、重水素原子またはフッ素原子に結合する、
項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目７３）
Ｒ１が
【化５８】
2010506140.tif 000040
を表す、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
前記標識のセット中の各標識が、前記セット中の前記別の標識と、約１ａｍｕを超える質量差で区別される、項目７２に記載の方法。
（項目７５）
Ｒ１が
【化５９】
2010506140.tif 000041
を表す、項目７４に記載の方法。
（項目７６）
Ｒ１が
【化６０】
2010506140.tif 000042
を表す、項目７２に記載の方法。
（項目７７）
前記標識のセットの前記１つ以上の標識が、モノ−ＴＦＡ塩、モノＨＣｌ塩、ビス−ＨＣｌ塩またはビス−ＴＦＡ塩、あるいはそれらの水和物の形態である、項目５３および５４の１項以上に記載の方法。
（項目７８）
前記標準化合物の前記濃度曲線が、
（ａ）第１の濃度を有する標準化合物を提供する工程と；
（ｂ）前記標識のセットの標識で該標準化合物を標識する工程と；
（ｃ）クロマトグラフィカラムに標識標準化合物の少なくとも一部を充填する工程と；
（ｄ）前記クロマトグラフィカラムからの溶離液の少なくとも一部を親−娘イオン遷移モニタリングに供する工程であって、前記遷移した親イオンのｍ／ｚ範囲が、前記標識検体化合物の１つ以上のｍ／ｚ値を含み、前記遷移した娘イオンのｍ／ｚ範囲が、前記標識検体化合物の標識に対応するレポーターイオンのｍ／ｚ値を含む、工程と；
（ｅ）前記遷移したレポーターイオンのイオン信号を測定する工程と；
（ｆ）１つ以上の異なる標準化合物濃度で工程（ａ）〜（ｅ）を繰り返す工程と；
（ｇ）複数の標準化合物濃度における前記遷移したレポーターイオンの測定イオン信号に少なくとも基づいて、前記標準化合物の濃度曲線を作成する工程と、
によって作成される、
項目５４に記載の方法。
（項目７９）
前記標準化合物が非同位体濃縮化合物である、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
以下の一般式（ＸＩＶ）の２つ以上の化合物：
【化６１】
2010506140.tif 000043
、あるいはそれらの塩形態または水和物形態を含む同重体標識のセットであって、該移動重体標識のセットの該同重体標識のそれぞれが、１つ以上の重原子同位体を含有する、標識のセット。
（項目８１）
前記標識のセットの各標識が、２個以上の重原子で同位体濃縮される、項目８０に記載の標識のセット。
（項目８２）
前記標識のセットの各標識が、３個以上の重原子で同位体濃縮される、項目８０に記載の標識のセット。
（項目８３）
前記標識のセットの各標識が、４個以上の重原子で同位体濃縮される、項目８０に記載の標識のセット。
（項目８５）
前記重原子同位体がそれぞれ独立して１３Ｃ、１５Ｎまたは１８Ｏである、項目８０に記載の方法。
（項目８６）
一般式（Ｉ）の前記２つ以上の化合物が、モノ−ＴＦＡ塩、モノＨＣｌ塩、ビス−ＨＣｌ塩またはビス−ＴＦＡ塩、あるいはそれらの水和物の形態である、項目８０に記載の標識のセット。
（項目８７）
以下の一般式（ＸＶ）の２つ以上のＮ置換ピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン化合物：
【化６２】
2010506140.tif 000044
、あるいはそれらの塩形態または水和物形態を含む、標識のセットであって、
式中、
Ｒ９がハロゲン化物、−ＯＨ、または−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ１１（式中、Ｒ１１は水素あるいは直鎖または分枝鎖アルキル基である）を表し；
Ｒ１０がＣ、ＮまたはＯを表し；
Ｒ４が、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、あるいは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基を表し；そして
各Ｒ５が独立して、水素、重水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アミノ酸側鎖、あるいは場合により置換または非置換アリール基を含有し得る直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基を表し、ここで該アルキル基およびアリール基の炭素原子がそれぞれ独立して、１個以上の水素原子、重水素原子またはフッ素原子に結合し、
ここで、タグのセット中の前記化合物の１つ以上が、１つ以上の重原子同位体を含有する、
標識のセット。
（項目８８）
前記重原子同位体がそれぞれ独立して１３Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、３３Ｓまたは３４Ｓである、項目８７に記載の標識のセット。
（項目８９）
Ｒ９が−ＯＨを表す、項目８７に記載の標識のセット。
（項目９０）
Ｒ９が塩素またはフッ素を表す、項目８７に記載の標識のセット。
（項目９１）
Ｒ９が−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ１１（式中、Ｒ１１は水素あるいは直鎖または分枝鎖アルキル基である）を表す、項目８７に記載の標識のセット。
（項目９２）
Ｒ１１がメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである、項目８７に記載の標識のセット。
（項目９３）
Ｒ１０が窒素を表す、項目８７に記載の標識のセット。
（項目９４）
Ｒ４が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルである、項目８７に記載の標識のセット。
（項目９５）
各Ｒ５が独立して、水素、メチルまたはメトキシを表す、項目８７に記載の標識のセット。
（項目９６）
前記２つ以上のＮ置換ピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン化合物が、以下の一般式（ＸＶＩ）：
【化６３】
2010506140.tif 000045
の化合物である、項目８７に記載の標識のセット。
（項目９７）
Ｒ４が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル基またはｔｅｒｔ−ブチル基である、項目９６に記載の標識のセット。
（項目９８）
２つ以上の一般式（ＸＶＩＩ）のＮ置換ピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン化合物、：
【化６４】
2010506140.tif 000046
あるいはそれらの塩形態または水和物形態を含む、同重体標識のセットであって、
該同重体標識のセットの該同重体標識のそれぞれが、１つ以上の重原子同位体を含有し、
式中、
Ｒ１０がＣ、ＮまたはＯを表し；
Ｒ４が、水素、直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、あるいは直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基を表し；そして
各Ｒ５が独立して、水素、重水素、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、アミノ酸側鎖、あるいは場合により置換または非置換アリール基を含有し得る直鎖または分枝鎖Ｃ１〜Ｃ６アルキル基を表し、ここで該アルキル基およびアリール基の炭素原子がそれぞれ独立して、１個以上の水素原子、重水素原子またはフッ素原子に結合する、
標識のセット。
（項目９９）
前記標識のセットの各標識が、４個以上の重原子で同位体濃縮される、項目９８に記載の標識のセット。
（項目１００）
前記重原子同位体がそれぞれ独立して１３Ｃ、１５Ｎまたは１８Ｏである、項目９８に記載の標識のセット。
（項目１０１）
Ｒ１２が＝Ｃ＝Ｏを表す、項目９８に記載の標識のセット。
（項目１０２）
Ｒ１０が窒素を表す、項目９８に記載の標識のセット。
（項目１０３）
Ｒ４が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル基またはｔｅｒｔ−ブチルである、項目９８に記載の標識のセット。
（項目１０４）
各Ｒ５が独立して、水素、メチルまたはメトキシを表す、項目９８に記載の標識のセット。
（項目１０５）
前記２つ以上のＮ置換ピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン化合物が、以下の一般式（ＸＶＩＩＩ）：
【化６５】
2010506140.tif 000047
の化合物である、項目９８に記載の標識のセット。
（項目１０６）
Ｒ４が、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル基またはｔｅｒｔ−ブチルである、項目１０５に記載の標識のセット。
（項目１０７）
２つ以上の試料中の１つ以上のステロイド含有化合物、ステロール含有化合物、またはそれらの類似体を分析する方法であって、
対象の１つ以上の試料のそれぞれに、質量差次タグのセットとは異なる質量差次タグを添加して、標識試料を提供し、タグが、該対象の試料の１つ以上における１つ以上のステロイド含有化合物を標識して、以下の一般式（ＸＩ）の標識ステロイドを生じるようにする工程：
ＲＰ−ＢＸ−ＬＧ−Ｏ−ＢＹ−ＡＲ    （ＸＩ）
（式中、ＲＰは質量差次タグのレポーター部分であり、ＬＧは連結基であり、Ｏは酸素であり、ＡＲはステロイド含有化合物、ステロール含有化合物またはそれらの類似体の環含有化合物であり、ＢＸはＲＰとＬＧの原子の間の結合を表し、そしてＢＹは、酸素Ｏと、標識化反応前にヒドロキシル化されたＡの炭素との間の結合を表す）と；
該標識試料のそれぞれの少なくとも一部を組み合わせて、混合試料を提供する工程と；
クロマトグラフィカラムに該混合試料の少なくとも一部を充填する工程と；
該クロマトグラフィカラムからの溶離液の少なくとも一部を親−娘イオン遷移モニタリングに供する工程であって、
所定の標識ステロイド含有化合物の遷移した親イオンのｍ／ｚ範囲が、標識環含有化合物の１つ以上のｍ／ｚ値を含み、そして第１の遷移した娘イオンのｍ／ｚ範囲が、標識ステロイド含有化合物のタグの少なくとも１つに対応する少なくとも１つのレポーターイオンのｍ／ｚ値を含む、工程と；
遷移したレポーターイオンの１つ以上のイオン信号を測定する工程と；
前記対応するレポーターイオンの測定したイオン信号と、標準化合物に対応するレポーターイオンの測定したイオン信号との比較に少なくとも基づいて、該標識ステロイド含有化合物の１つ以上の濃度を測定する工程と、
を含む、
方法。
（項目１０８）
前記クロマトグラフィカラムで前記標識ステロイド含有化合物の１つ以上を分離する工程もさらに含む、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
前記標識ステロイド含有化合物の１つ以上の濃度を測定する工程が、１つ以上のステロイドの絶対濃度を測定する工程を含む、項目１０７に記載の方法。
（項目１１０）
前記標識ステロイド含有化合物の１つ以上の濃度を測定する工程が、２つ以上のステロイド間の相対濃度の変化を測定する工程を含む、項目１０７に記載の方法。
（項目１１１）
前記対象の試料の１つ以上が、１つ以上の標準化合物を含有する標準試料を含み、そして標準化合物に対応するレポーターイオンの測定したイオン信号が、該標準試料中の１つ以上の標識標準化合物の測定したレポーターイオン信号に対応する、項目１０７に記載の方法。
（項目１１２）
前記標準試料が、対照試料、基準試料、またはそれらの両方を含む、項目１１１に記載の方法。
（項目１１３）
２つ以上の試料中の１つ以上のステロイド含有化合物、ステロール含有化合物、またはそれらの類似体を分析する方法であって、
対象の１つ以上の試料のそれぞれに、質量差次タグのセットとは異なる質量差次タグを添加して、標識試料を提供し、タグが、該対象の試料の１つ以上における１つ以上のステロイド含有化合物を標識して、以下の一般式（ＸＩ）の標識ステロイドを生じるようにする工程：
ＲＰ−ＢＸ−ＬＧ−Ｏ−ＢＹ−ＡＲ    （ＸＩ）
（式中、ＲＰは同重体タグのレポーター部分であり、ＬＧは連結基であり、Ｏは酸素であり、ＡＲはステロイド含有化合物、ステロール含有化合物またはそれらの類似体の環含有化合物であり、ＢＸはＲＰとＬＧとの原子の間の結合を表し、そしてＢＹは、酸素Ｏと、前記標識化反応前にヒドロキシル化されたＡの炭素との間の結合を表す）と；
該標識試料のそれぞれの少なくとも一部を組み合わせて、混合試料を提供する工程と；
クロマトグラフィカラムに該混合試料の少なくとも一部を充填する工程と；
該クロマトグラフィカラムからの溶離液の少なくとも一部を親−娘イオン遷移モニタリングに供する工程であって、
所定の標識ステロイド含有化合物の遷移した親イオンのｍ／ｚ範囲が、標識環含有化合物の１つ以上のｍ／ｚ値を含み、そして第１の遷移した娘イオンのｍ／ｚ範囲が、該標識ステロイド含有化合物のタグの少なくとも１つに対応する少なくとも１つのレポーターイオンのｍ／ｚ値を含む、工程と；
遷移したレポーターイオンの１つ以上のイオン信号を測定する工程と；
対応するレポーターイオンの測定したイオン信号と、標準化合物に対応するレポーターイオンの測定したイオン信号との比較に少なくとも基づいて、該標識ステロイド含有化合物の１つ以上の濃度を測定する工程と、
を含む、
方法。
（項目１１４）
前記クロマトグラフィカラムで前記標識ステロイド含有化合物の１つ以上を分離する工程もさらに含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１１５）
前記標識ステロイド含有化合物の１つ以上の濃度を測定する工程が、１つ以上のステロイドの絶対濃度を測定する工程を含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１１６）
前記標識ステロイド含有化合物の１つ以上の濃度を測定する工程が、２つ以上のステロイド間の相対濃度の変化を測定する工程を含む、項目１１３に記載の方法。
（項目１１７）
前記対象の試料の１つ以上が、１つ以上の標準化合物を含有する標準試料を含み、そして標準化合物に対応するレポーターイオンの測定したイオン信号が、前記標準試料中の１つ以上の標識標準化合物の測定したレポーターイオン信号に対応する、項目１１３に記載の方法。
（項目１１８）
前記標準試料が、対照試料、基準試料、またはそれらの両方を含む、項目１１７に記載の方法。
本教示内容は、１つ以上のヒドロキシル化化合物を含有する試料を分析するための試薬および方法を提供する。種々の実施形態において、これらの提供される試薬および方法は、１つ以上の試料中の１つ以上のステロイドの相対濃度、絶対濃度、あるいはそれらの両方を測定するのに使用することができる。本教示内容は、同重体標識試薬および同重体標識方法、ならびに質量差次標識試薬およびそれらの試薬の同位体置換の適切な選択による質量差次標識方法に使用することができる。本明細書で使用される「標識」および「タグ」という用語は、交換可能に使用される。同位体濃縮化合物を合成する方法の例については、内容全体が参考として本明細書で援用される、米国特許出願公開第２００５／０１４８７７４号に記載されている。