【誤訳訂正書】
【提出日】平成22年3月12日(2010.3.12)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【書類名】明細書
【発明の名称】スキンケア組成物
【特許請求の範囲】
【請求項１】  フェノール系化合物が日焼け止めではないという条件で、
（ａ）共役リノール酸および／またはその誘導体、
（ｂ）フェノール系化合物またはその混合物、
（ｃ）皮膚用に許容できる賦形剤、
を含む局所組成物であって、
前記共役リノール酸および／またはその誘導体の共役リノール部分の少なくとも５０％重量％が、シス９，トランス１１異性体および／またはトランス１０，シス１２異性体として存在し、および
前記フェノール系化合物が、エピガロカテキンガレート、ナリンゲニン、クエルセチン、カテキン、ダイゼイン、ゲニステイン、没食子酸または緑茶ポリフェノールである、前記局所組成物。
【請求項２】  共役リノール酸および／またはその誘導体の共役リノール部分の少なくとも９０重量％が、シス９，トランス１１異性体および／またはトランス１０，シス１２異性体として存在する、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項３】  フェノール系化合物が、組成物の０．０１〜１０重量％の濃度で存在する、請求項１または２に記載の局所組成物。
【請求項４】  組成物が、リーブオン（ｌｅａｖｅ  ｏｎ）組成物である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の局所組成物。
【請求項５】  皮膚のコラーゲン濃度の増大／維持、皮膚のデコリン濃度の増大／維持、組織補修の改善；炎症皮膚、赤色および／または敏感皮膚の軽減；皮膚のきめ、滑らかさおよび／または引き締まりの改善；皮膚美白；油／皮脂分泌の調節から選択される少なくとも１つの化粧スキンケア効果を提供する化粧方法であって、請求項１〜４のいずれか一項に記載の局所組成物を皮膚に塗布することを含む方法。
【請求項６】  しわ、たるみ、老化、乾燥、および／または光損傷皮膚の治療／予防；皮膚のコラーゲン濃度の増大／維持、皮膚のデコリン濃度の増大／維持、組織補修の改善；炎症皮膚、赤色および／または敏感皮膚の軽減；皮膚のきめ、滑らかさおよび／または引き締まりの改善；皮膚美白；油／皮脂分泌の調節から選択される少なくとも１つのスキンケア効果を提供するための薬剤の製造における、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化粧組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ヒトの皮膚に塗布する局所組成物及び皮膚の状態および外観の改善におけるその使用法に関する。
【０００２】
発明の背景
皮膚は、皮膚疾患、環境的酷使（風、エアーコンディショニング、およびセントラルヒーティング）、または通常の老化プロセス（経時老化）によって荒れやすく、これは皮膚を太陽にさらすことによって加速される（光老化）。近年、皮膚の外観および状態を改善するための化粧組成物および化粧方法への要求が非常に大きくなった。
【０００３】
消費者は、しわ、筋、たるみ、色素沈着過剰、および老化によるシミなど、時間老化および光老化した皮膚の目に見えるサインを治療または遅延させる老化防止用化粧料を求めるようになってきた。
【０００４】
消費者はまた、化粧料から、老化防止以外の改善効果も頻繁に求めている。敏感皮膚の概念もまた、敏感、乾燥および／またはうろこ状皮膚の外観および状態を改善し、赤色および／または炎症皮膚を軽減する化粧料への消費者の要求を高めている。消費者はまた、油／皮脂の調節効果を有する化粧料を望んでいる。
【０００５】
多くの人々が、皮膚の色素沈着の程度に関心がある。例えば、老化によるシミやソバカスがある人々は、こうした着色したシミが目立たなくなることを願うものである。他の人々は、日光にさらされて日焼けした皮膚を白くすることを願い、または自然の皮膚の色を白くすることを願う。この要求に応えるために、メラニン細胞での色素の生成を抑える製品を開発する多くの試みがなされてきた。しかし、これまでに確認された物質は、望ましくない副作用、例えば皮膚炎症などを起こす傾向がある。
【０００６】
したがって、こうした物質は化粧用には適当でないか、皮膚美白効果が所望に達しないような濃度でしか適用することができない。異なる皮膚美白物質を併用すると、悪い副作用を軽減すると思われるかもしれないが、競争効果のために、こうした併用が皮膚美白もまた低減させてしまう本質的なリスクがある。したがって、特に皮膚に炎症を起こさないように、皮膚美白化粧料を改善することへのニーズがある。
【０００７】
特開平０７−２７７９３９号は、（Ａ）フローデマニータ（Ｆｌｏｒ  ｄｅ  Ｍａｎｉｔａ）、および（Ｂ）活性酸素除去剤、抗酸化剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、チロシナーゼ活性阻害剤および保湿剤から選択される少なくとも１つの薬効剤を含む、皮膚老化および皮膚炎症を改善するスキンケア組成物を開示している。Ｂ成分として記載された多くの任意選択成分には、クエルセチン、クエルシトリン、カテキン、没食子酸、γ−リノレン酸、およびエイコサペンタエン酸がある。
【０００８】
特開平０５−２７１０４６号は、リノール酸、アラキドン酸、ポリフェノールなど、炭素数１８〜２２で、かつ不飽和結合の数が２以上の不飽和脂肪酸を含有する皮膚美白組成物を開示している。
【０００９】
国際特許９９／２６５８８号は、共役リノール酸を含み、かつ任意選択でベンゾフェノンなど通常の日焼け止めを含有することができる老化防止スキンケア処方を開示している。
【００１０】
上記の技術は、相乗作用を引き起こす共役リノール酸と（日焼け止めではない）フェノール系化合物との具体的な組合せを開示しておらず、こうした特定の組合せをしわ、敏感皮膚、乾燥皮膚、油／皮脂分泌の調節、または皮膚美白の治療へ使用することも開示していない。日焼け止めとして作用するフェノール系化合物は、本発明の範囲から明確に除外される。
【００１１】
本明細書では、日焼け止めを、Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈ  Ｓｕｎｓｃｒｅｅｎ  Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｖｅｒ−Ｔｈｅ−Ｃｏｕｎｔｅｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｕｓｅ；Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｉｓｔｅｒ  ６４巻、Ｎｏ  ９８、１９９９年５月２１日、２７６６６〜２７６９１頁に公表のＦｉｎａｌ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈに記載の標準プロトコルを用いたヒト皮膚の化粧料処方で試験したときに、日焼け防止指数（ＳＰＦ）が少なくとも２を有する成分と定義する。
【００１２】
本発明者等は、正常ではあるが時間老化および光老化のために美容上望ましくないしわ、筋、たるみ、色素沈着過剰、老化によるシミなどの皮膚の状態を、フェノール系化合物が日焼け止めではないという条件でフェノール系化合物と組み合わせた、共役リノール酸および／またはその誘導体を含む化粧料組成物を皮膚に塗布することによって効果的に治療し防止することができることを見出した。本発明者等はまた、こうした化粧組成物の使用が、老化防止だけでなくさらに敏感および／または炎症皮膚の軽減、油／皮脂分泌の調節、皮膚美白用などの皮膚改善効果を有利に提供することを見出した。
【００１３】
発明の概要
本発明の第１の態様によれば、
フェノール系化合物が日焼け止めではないという条件で、
（ａ）  共役リノール酸および／またはその誘導体、
（ｂ）  フェノール系化合物またはその混合物、および
（ｃ）  皮膚用に許容できる賦形剤、
を含む局所組成物が提供される。
【００１４】
本発明の第２の態様によれば、しわ、たるみ、乾燥皮膚、老化および／または光損傷皮膚の治療／予防；皮膚へのコラーゲン沈着の増大、皮膚でのデコリン生成の増大、組織補修の改善；炎症皮膚、赤色および／または敏感皮膚の軽減；皮膚のきめ、滑らかさおよび／または引き締まりの改善；皮膚美白；および油／皮脂分泌の調節から選択される少なくとも１つのスキンケア効果を提供する化粧方法が提供される。この方法は、上記の化粧組成物を皮膚へ塗布することを含む。
【００１５】
本発明はまた、しわ、たるみ、老化および／または光損傷皮膚の治療／防止；皮膚へのコラーゲン沈着の増大、皮膚でのデコリン生成の増大、組織補修の改善；炎症皮膚、赤色および／または敏感皮膚の軽減；皮膚のきめ、滑らかさおよび／または引き締まりの改善；皮膚美白；または油／皮脂分泌の調節から選択される少なくとも１つのスキンケア効果を提供する本発明の組成物の使用を包含する。
【００１６】
本発明の更なる態様によれば、しわ、たるみ、老化および／または光損傷皮膚の治療／防止；皮膚へのコラーゲン沈着の増大、皮膚でのデコリン生成の増大、組織補修の改善；炎症皮膚、赤色および／または敏感皮膚の軽減；皮膚のきめ、滑らかさおよび／または引き締まりの改善；皮膚美白；および油／皮脂分泌の調節から選択される少なくとも１つのスキンケア効果を提供する化粧局所組成物への、フェノール系化合物が日焼け止めではないという条件でフェノール系化合物またはその混合物と組合せた共役リノール酸および／またはその誘導体の使用が提供される。
【００１７】
このように、本発明の組成物、方法、および使用は、老化防止効果を提供する。これによって、柔軟性が改善され、しわおよび老化皮膚の外観が軽減または遅延し、皮膚の色が改善されて、滑らかでしなやかな皮膚が増える結果になる。皮膚の外観、きめ、および状態の全体的改善、特に皮膚の輝き、透明感についての改善、および全体として若々しい皮膚の外観が得られる。本発明の組成物、方法、および使用はまた、敏感および／または炎症皮膚の軽減および沈静、皮膚美白、および油／皮脂分泌の調節に効果がある。このように、本発明は、有利に、広い範囲のスキンケア効果を提供する。
【００１８】
本明細書で用いる治療という用語は、その範囲内に、しわのある、老化した、および／または光損傷した、および／または炎症のある皮膚など、上記の正常だが美容上望ましくない皮膚の状態を軽減すること、遅延させることおよび／または予防すること、ならびに皮膚の炎症、しわを予防または軽減し、柔軟性、引き締まり、滑らかさ、しなやかさ、および弾力性を増大することによって、皮膚の質を全体として高めその外観およびきめを改善することを含むものである。本発明の組成物、方法、および使用は、すでにしわがあり、老化し、光で損傷し、炎症の状態にある皮膚の改善に有用であり、または若々しい皮膚を治療して、通常の老化／光老化プロセスによる上記の望ましくない変化を防止または軽減するのに有用である。
【００１９】
発明の詳細な説明
共役リノール酸
共役リノール酸（以下ＣＬＡと呼ぶ）は、２個の不飽和結合を有する長鎖（Ｃ１８）脂肪酸である。ＣＬＡは、リノール酸の位置異性体および幾何異性体のグループを含み、その中には、（６、８）、（７、９）、（８、１０）、（９、１１）、（１０、１２）、または（１１、１３）位にシスおよびトランス二重結合の様々な立体配置が可能である。こうして、２４個のＣＬＭの異なる異性体が存在する。
【００２０】
本発明はまた、共役リノール酸の部分を含むフリーの酸の誘導体も含む。好ましい誘導体には、エステル（例えば、トリグリセリドエステル、モノグリセリドエステル、ジグリセリドエステル、リン酸エステル）、アミド（例えば、セラミド誘導体）、塩（例えば、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩）など、酸のカルボキシル基の置換から誘導されるもの、および／または、α−ヒドロキシおよび／またはβ−ヒドロキシ誘導体など、Ｃ１８炭素鎖の置換から誘導されるものが含まれる。
【００２１】
トリグリセリドエステル誘導体の場合には、グリセロール骨格上のＣＬＡ置換基のすべての位置異性体が含まれる。トリグリセリドは、少なくとも１個のＣＬＡ部分を含有しなければならない。例えば、グリセロール骨格上の３個のエステル化可能位置の内、１位および２位はＣＬＡで、３位は他の脂質でエステル化することができる。または別法として、グリセロール骨格の１位および３位をＣＬＡで、２位を他の脂質でエステル化することもできる。
【００２２】
本発明で用いられる最も好ましいＣＬＡ異性体は、シス９トランス１１（ｃ９  ｔ１１）異性体、またはトランス１０シス１２（ｔ１０  ｃ１２）異性体である。組成物中に存在する全ＣＬＡ（および／またはＣＬＡ部分）の少なくとも１重量％が、ｃ９、ｔ１１異性体および／またはｔ１０、ｃ１２異性体の形であることが好ましい。ｃ９、ｔ１１異性体および／またはｔ１０、ｃ１２異性体の形が、組成物中に存在する全ＣＬＡおよび／またはＣＬＡ部分の、少なくとも２０重量％であることがより好ましく、少なくとも４０重量％であることが最も好ましい。特に好ましい実施形態では、共役リノール酸は、ｃ９  ｔ１１異性体またはｔ１０、ｃ１２異性体が濃縮されている。濃縮されているとは、組成物中に存在する全ＣＬＡおよび／またはＣＬＡ部分の少なくとも５０重量％が、シス９、トランス１１異性体またはトランス１０シス１２異性体の形であり、組成物中に存在する全ＣＬＡおよび／またはＣＬＡ部分の、好ましくは少なくとも７０重量％、より好ましくは少なくとも８０重量％、最も好ましくは少なくとも９０重量％が、ｃ９、ｔ１１異性体またはｔ１０  ｃ１２異性体の形であることを意味する。
【００２３】
本発明によるＣＬＡおよび／またはＣＬＡ部分を含むその誘導体は、きり油、または脱水ひまし油（Ｕｎｉｃｈｅｍａ）など共役リノール酸トリグリセリドに富んだ油脂として市販されている。混合異性体製品は、Ｓｉｇｍａが市販しており、ｃ９  ｔ１１異性体濃縮ＣＬＡは、Ｍａｔｒｅｙａ  ｉｎｃ．が市販している。別法として、本発明の好ましい実施形態によるＣＬＡは、国際特許９７／１８３２０号に開示された方法に従って調製することができる。その内容を本明細書中で参考として援用する。好ましい調製方法は下記の実施例１および２に開示されている。
【００２４】
本明細書中で共役リノール酸またはＣＬＡの用語が使用される場合は、ＣＬＡ部分を含むその誘導体もまた含まれることを理解されたい。ＣＬＡ部分とは、ＣＬＡ誘導体のＣＬＡ脂肪酸アシル部分を指す。
【００２５】
本発明で用いられるＣＬＡは、薬効量で局所組成物中に存在する。通常、薬効剤の全量は、組成物の０．０００１重量％〜５０重量％の量で存在する。最小のコストで最大の効果を得るために、この量は、より好ましくは０．０１％〜１０％であり、最も好ましくは０．１％〜５％である。
【００２６】
フェノール系化合物
フェノール系化合物は、その基本的な化学構造に応じて少なくとも１０のクラスに分類することができる。この化合物には、単純フェノール（Ｃ６）、ベンゾキノン（Ｃ６）、フェノール酸（Ｃ６−Ｃ１）、アセトフェノン（Ｃ６−Ｃ２）、フェニル酢酸（Ｃ６−Ｃ２）、ヒドロキシケイヒ酸（Ｃ６−Ｃ３）、フェニルプロペン（Ｃ６−Ｃ３）、クマリン、イソクマリン（Ｃ６−Ｃ３）、クロモン（Ｃ６−Ｃ３）、ナフトキノン（Ｃ６−Ｃ４）、キサントン（Ｃ６−Ｃ１−Ｃ６）、スチルベン（Ｃ６−Ｃ２−Ｃ６）、フラボノイド（Ｃ６−Ｃ３−Ｃ６）、リグナン、ネオリグナン（Ｃ６−Ｃ３）２、およびリグニン（Ｃ６−Ｃ３）ｎが含まれる。
【００２７】
フラボノイドという用語は、３個の炭素ユニットによって結合した２個の芳香族環、例えばＣ６−Ｃ３−Ｃ６からなる化合物の非常に大きなグループを表す。フラボノイド族には、イソフラボノイド、フラボノール単量体、ジヒドロフラボノイド、カテキン、エピカテキン（例えば、ラウロン）、ロイコアントシアニジン、プロアントシアニジン、アントシアニジン、フラボン、フラボノン、カルコン、ジヒドロカルコン、イソフラボン、ネオフラボン、オーロン、フラバン−３−オール、フラバン−３−オール、およびアントシアニンが含まれる。イソフラボノイドという用語には、イソフラボン、プテロカルパン、イソフラボノン、ロテノイド、イソフラバン、およびイソフラバノールも含まれる。
【００２８】
本発明の組成物に用いられる好ましいフェノール系化合物は、ナリンゲリンなどのフラボノン、クエルセチン、カテキン（例えば、エピガロカテキンガレート、ＥＧＣＧ）などのフラボノールを含むフラボノイド、ダイゼイン、ゲニステイン、リセチン（ｌｙｃｅｔｉｎ）などのイソフラボノイド、さらに没食子酸などのフェノール酸、および緑茶ポリフェノールである。
【００２９】
クエルセチン、ナリンゲニン、ダイゼイン、ゲニステイン、ＥＧＣＧおよび緑茶ポリフェノールは、Ｓｉｇｍａから入手することができる。フェノール系化合物を含有する植物抽出物もまた本発明での使用に好適である。例えば、ルチン、マツヨイグサ、タマネギ、カンキツ類はクエルセチンおよびナリンゲニンを含有し、大豆はダイゼインおよびゲニステインを含有し、中国種（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）およびアッサム種（ａｓｓａｍｉｃａ）などの緑茶品種はＥＧＣＧおよび緑茶ポリフェノールを含有する。
【００３０】
本発明から明確に除外されるフェノール系化合物は、パラアミノ安息香酸およびベンゾフェノンなど、日焼け止めとして通常用いられるものである。
【００３１】
フェノール系化合物またはその混合物は、約０．０１％〜約１０％の量で、好ましくは約１０％〜１％の量で、最も好ましくは約０．１％〜約５％の量で本発明の組成物に使用される。
【００３２】
皮膚用に許容できる賦形剤
本発明に用いられる組成物はまた、薬効剤の希釈剤、分散剤または担体として作用する、皮膚用に／美容上許容できる賦形剤も含む。この賦形剤は、水、液体または固体の皮膚軟化剤、シリコーンオイル、乳化剤、溶媒、湿潤剤、増粘剤、粉末剤、噴射剤など、スキンケア製品に通常用いられる材料を含んでよい。
【００３３】
賦形剤は、通常、組成物重量の５％〜９９．９％、好ましくは２５％〜８０％を形成し、他の化粧添加物のない状態で、組成物の残余部分を形成することができる。
【００３４】
任意選択の皮膚改善効果材料および化粧添加剤
薬効剤以外に、日焼け止め、皮膚美白剤、皮膚日焼け剤など、他の特定の皮膚改善効果活性剤を含めてもよい。賦形剤はさらに、酸化防止剤、香料、乳白剤、防腐剤、着色剤、および緩衝剤などの添加剤を含むことができる。
【００３５】
製品調製、形状、使用、および包装
本発明の方法で用いられる局所組成物を調製するためには、スキンケア製品を調製する通常のやり方を用いることができる。薬効成分は、一般に、皮膚用に／化粧上許容できる担体に通常の方法で混ぜる。薬効成分は、組成物に組み込まれる水あるいは他の溶媒または液の一部に溶解または分散させておくことが望ましい。好ましい組成物は、水中油型、または油中水型、または水中油中水型乳剤である。
【００３６】
組成物は、クリーム、ゲルまたは化粧水、カプセルなど、通常のスキンケア製品の形態とすることができる。組成物はまた、すすぎ洗い時に皮膚への付着を促進する薬効剤の送達システムを含むような、いわゆる洗い落とし用（ｗａｓｈ−ｏｆｆ）製品、例えばバスまたはシャワーゲル、の形態とすることができる。この製品は、リーブオン（ｌｅａｖｅ−ｏｎ）製品であることが最も好ましい。皮膚への塗布直後の計画的なすすぎ洗いのステップなしに、皮膚に塗布される製品である。
【００３７】
この組成物は、通常のやり方で、ジャー、ビン、チューブ、ロールボール（ｒｏｌｌ−ｂａｌｌ）など、任意の適当なやり方で包装することができる。本発明の組成物は、一方が共役リノール酸を他方がフェノール系化合物を含み、皮膚に同時にまたは連続して塗布する、２つの別々の組成物のキットとして包装することもできるであろう。
【００３８】
本発明の組成物はまた、カプセル、錠剤など経口摂取に適した形態に配合することもできる。
【００３９】
本発明の方法は、治療を必要とする皮膚に毎日１回以上行うことができる。皮膚外観の改善は、皮膚の状態、本発明の方法に用いられる薬効成分の濃度、組成物の使用量、および塗布頻度などに応じて、通常３〜６ヶ月後に目に見えるようになる。一般に、組成物の少量、例えば０．１〜５ｍｌを適当な容器または塗薬用具から皮膚に塗布し、手または指または適当な道具を使って皮膚に広げおよび／または皮膚に擦り込む。組成物をリーブオン製品、または洗い落とし用製品のどちらに配合したかによって、任意選択で次にすすぎ洗いのステップを続ける。
【００４０】
本発明がさらに容易に理解されるように、例示の目的のみで以下の実施例を提供する。
【００４１】
実施例
実施例１
この実施例は、ｃ９  ｔ１１異性体およびｔ１０  ｃ１２異性体を含む共役リノール酸の合成を例示する。
【００４２】
ＣＬＡ混合異性体の製造
混合して８０〜８５℃に加熱することによって、「Ａｎａｌａｒ試薬」（ＡＲ）の水酸化ナトリウム（０．６ｋｇ）を医薬級プロピレングリコール６ｋｇに溶解した。試料を冷却し、サフラワー油２ｋｇを加えた。標準のパイロット規模の装置を用いて、混合物を１７０℃で急速撹拌しながら３時間還流した。反応混合物を約９５℃に冷却し、撹拌機を中程度の速度に下げ、温度を約９０℃に保ちながら、脱イオン水（８リットル）に溶解した３５．５％塩酸１．２８０リットルを用いて、混合物を中和した。反応混合物を静置し、水相を排出した。９０℃で、２×１リットルの５％ＡＲ食塩水、および２×１リットルの脱イオン水で油相を洗い、どのようなせっけん状物質も廃棄した。ＣＬＡ濃縮油を、真空下１００℃で乾燥し、約５０℃で排液し、ワットマンろ紙およびセライト−ハイフロ（ｃｅｌｉｔｅ−ｈｙｆｌｏ）ろ過助剤の薄層を含むブフナーシステムでろ過した。この混合異性体ＣＬＡ油は、所要まで窒素下−２５℃で保存した。この方法によって生成した油の組成を下記の表１に示す。
【００４３】
【表１】
2003505492.tif 000001
【００４４】
２．ｃ９ｔ１１異性体濃縮ＣＬＡの製造
（Ｉ）ラウリルエステルの調製
サフラワー油から調製したＣＬＡ（２．０ｋｇ）を、脱イオン水５．９６ｋｇとともに、２×モル当量のラウリルアルコール（１−ドデカノール、９８％、Ａｌｄｒｉｃｈ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ販売）に加えた。温度を２５℃に合わせ、少量の水と予め混ぜたゲオトリクム  カンジドウム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  Ｃａｎｄｉｄｕｍ（日本のＡｍａｎｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ販売））１％（ｗ／ｗ）を加えて激しく混ぜた。４４時間で反応を停止させた。容器を８０〜９０℃に加熱し、水層を排出し、油を脱イオン水で洗い、１００℃で真空下３０分間乾燥した。油を５０℃に冷却し、ワットマンろ紙およびセライト−ハイフロ（ｃｅｌｉｔｅ−ｈｙｆｌｏ）ろ過助剤の薄層を含むブフナーシステムでろ過した。
【００４５】
（ＩＩ）ｃ９、ｔ１１濃縮ＣＬＡエステルの分離
残存ラウリルアルコールを、分子蒸留によって１３０℃、２５〜３５ｍｌ／分で除去した。残渣を、１５８℃、流速２５〜３５ｍｌ／分で蒸発させてラウリルエステル（ｃ９、ｔ１１濃縮ＣＬＡ）と遊離酸（ｔ１０、ｃ１２濃縮ＣＬＡ）に粗く分離した。ラウリルエステル残渣中の残存遊離酸を、１７１℃、流速３０〜４０ｍｌ／分でさらに蒸留して低減させた。ラウリルエステル残渣２７９０ｇを、９０℃で、４ＭのＡＲ水酸化ナトリウム３３０ｍｌを用いて中和し、次いで水相から油を分離し、脱イオン温水で油を３回洗い、さらに０．１Ｍのアルカリで洗い、温水で２回洗った。濃縮ラウリルエステル油試料を前と同じように乾燥した。
【００４６】
（ＩＩＩ）ｃ９、ｔ１１濃縮ＣＬＡラウリルエステルの鹸化
ｃ９、ｔ１１濃縮ＣＬＡのラウリルエステルを、ＡＲ水酸化ナトリウム／９６％食品級エタノールを用いて鹸化し、ＡＲ濃塩酸を用いて再び酸にした。濃縮ＣＬＡ遊離脂肪酸を含有する反応混合物を１００℃で乾燥し、約５０℃で前のようにろ過した。ラウリルアルコールを１３２℃、２５〜３０ｍｌ／分で留去した。残存ラウリルアルコールがあればこれを除くために、ＳＰ３９２ムコール・ミーハイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉリパーゼ（５％、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ販売のｂａｔｃｈ  ｌｕｘ  ０１１０）を用いて、遊離アルコールを反応混合物中の脂肪酸でエステル化した。このラウリル酸エステルから、ｃ９ｔ１１濃縮ＣＬＡ含有脂肪酸を、分子蒸留を用いて真空下１５５℃、１５〜２０ｍｌ／分で分離した。上記の方法で生成したｃ９ｔ１１濃縮ＣＬＡの組成を下記の表２に示す。
【００４７】
【表２】
2003505492.tif 000002
【００４８】
（ＩＩ）ｔ１０、ｃ１２濃縮ＣＬＡの分離
残存ラウリルアルコールを、分子蒸留によって１３０℃、２５〜３０ｍｌ／分で除去した。残渣を、１５８℃、流速２５〜３０ｍｌ／分で蒸発させて、ラウリル酸エステル（ｃ９、ｔ１１濃縮ＣＬＡ）と遊離酸（ｔ１０、ｃ１２濃縮ＣＬＡ）に粗く分離した。
【００４９】
ｔ１０、ｃ１２濃縮ＣＬＡの単離
上記ステップ（ＩＩ）からのＣＬＡ遊離酸を、１６０〜１６５℃、２０〜３０ｍｌ／分で再蒸留してエステル含有量を減少させた。残存ラウリルアルコールを、１３１℃、流速２５〜３０ｍｌ／分で蒸留してさらに低減させた。残存ラウリルアルコールがあれば除去するために、ＳＰ３９２ムコール・ミーハイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉリパーゼ（５％、Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ販売のｂａｔｃｈ  ｌｕｘ  ０１１０）を用いて、遊離アルコールを反応混合物中の脂肪酸でエステル化した。このラウリル酸エステルから、ｔ１０、ｃ１２濃縮ＣＬＡ含有脂肪酸を、分子蒸留を用いて真空下１５５℃、１５〜２０ｍｌ／分で分離した。この方法で生成したｔ１０、ｃ１２濃縮ＣＬＡの組成を下記の表３に示す。
【００５０】
【表３】
2003505492.tif 000003
【００５１】
実施例２−ｔ１０、ｃ１２ＣＬＡトリグリセリドの調製
実施例１で調製したｔ１０、ｃ１２濃縮ＣＬＡ（１０ｇ）を、グリセロール（Ｅｌｌｉｓ  ａｎｄ  Ｅｖｅｒａｒｄｓ販売のＰｒｉｃｅｒｉｎｅ９０８３グリセリンＣＰ）１．０１ｇ（１０．１％）と混ぜ、ＳＰ３９２ムコール・ミーハイ（Ｍｕｃｏｒ  ｍｉｅｈｅｉ非特異的リパーゼ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ販売のムコール・ミーハイＢａｔｃｈ  Ｌｕｘ  ０１１０）０．５ｇ（約５％）を加えた。混合した材料を、ロータリーエバポレータ中でわずかの窒素ブリードを行いつつ真空下６０℃で撹拌した。９６時間後反応を停止させ、混合物をブフナーフィルタ上のセライトスーパーセル（ｃｅｌｉｔｅ  ｓｕｐｅｒ−ｃｅｌ）ろ過助剤の薄層を通してろ過し、ＣＬＡトリグリセリドの油相を集めた。この組成を下記の表４に示す。
【００５２】
【表４】
2003505492.tif 000004
【００５３】
実施例３
ヒト皮膚線維芽細胞内のプロコラーゲン−Ｉおよびデコリン合成の測定手順
皮膚線維芽細胞培地の調製
継代第２代（Ｐ２）のプライマリヒト包皮線維芽細胞を、１２−ウエルプレートに１００００細胞／ｃｍ２で接種し、二酸化炭素５％と酸素４％の雰囲気で、ウシ胎児血清１０％を添加したダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）に２４時間保った。この後は、細胞を血清フリーのＤＭＥＭで洗い、次いで新鮮な血清フリーのＤＭＥＭ中でさらに６０時間インキュベートした。次いで線維芽細胞の単層を、血清フリーのＤＭＥＭで再度洗った。３セットの試験試薬および賦形剤コントロールを細胞に加え、新鮮な血清フリーのＤＭＥＭで最終容積０．４ｍｌ／ウエルとして、さらに２４時間インキュベートした。線維芽細胞培地は、直ちに分析するか、後で分析するために液体窒素で素早く冷凍して−７０℃で保存した。次いで細胞を計数し、ドットブロット（ｄｏｔ−ｂｌｏｔ）分析からのデータを引き続き細胞数に標準化した。
【００５４】
実施例４
皮膚線維芽細胞培地中のプロコラーゲン−Ｉおよびデコリン蛋白質のドットブロット分析法
賦形剤（コントロール）または試験試薬で処理した皮膚線維芽細胞からの培地のサンプルに、ジチオトレイトール（２００ｍＭ原液の１：１０希釈溶液）２０ｍＭおよびドデシル硫酸ナトリウム（１０％原液の１：１００希釈溶液）０．１％を添加し、十分混ぜ、次いで７５℃で２分間インキュベートした。上記のように、１７５ｃｍ２のフラスコ中、１００００細胞／ｃｍ２で接種し血清フリーのＤＭＥＭ中に保存した線維芽細胞からの純線維芽細胞培地を順次希釈することによって分析用標準を作成した。
【００５５】
引き続き、分析サンプル３セットを、Ｂｉｏ−Ｒａｄ製の９６−ウエルＢｉｏ−Ｄｏｔ装置を用いて、製造業者のマニュアル記載に準じて、イモビロン−Ｐ（Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ）トランスファーメンブレンのプレウェットシートに塗布した。約２００μｌの培地をウエルごとに塗布した。培地を、重力でメンブレン中に染み込ませ（３０分）、その後メンブレンをＰＢＳ（２００μｌ）で２回洗った。このＰＢＳ洗浄液を重力でメンブレン中に染み込ませた（２×１５分）。次いでＢｉｏ−Ｄｏｔ装置を真空マニホールドに取り付け、吸引下で３回目および最終のＰＢＳ洗浄を行った。装置を分解してメンブレンを取り出し、必要分を素早く切断し、ブロッキングバッファ中に４℃で一晩放置した。
【００５６】
デコリン分析用に調製したメンブレンは、ＰＢＳ中で、３％（ｗ／Ｖ）ＢＳＡ／０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０でブロックした。一方、プロコラーゲン−Ｉ分析用に調製したメンブレンは、ＰＢＣ中、５％（ｗ／ｖ）乾燥脱脂粉乳／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０でブロックした。翌日、ヒトのプロコラーゲン−Ｉへの１次抗体（ＭＡＢ１９１２；ラットモノクローナル抗体；米国カリフォルニア州、Ｔｅｍｅｃｕｌａ、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔ．Ｉｎｃ．）またはヒトのデコリンへの１次抗体（ウサギポリクローナル抗体；Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）の１：１００００希釈溶液で、メンブレンを室温で２時間プローブした。引き続いて、メンブレンを、ＴＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄（３×５分）し、次いで１２５Ｉ結合抗ラットまたは抗ウサギＦ（ａｂ’）２断片（Ａｍｅｒｓｈａｍ）の１：１０００希釈溶液で、必要に応じ室温で１時間インキュベートした。これに続いて、イモビロン（Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ）のストリップを、ＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０で再度洗浄（３×５分）し、空気中室温で乾燥した。乾燥したメンブレンをセロファンでラップし、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓの貯蔵蛍光体スクリーン（ｓｔｏｒａｇｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒ  ｓｃｒｅｅｎ）に１６〜１８時間暴露した。最後に、暴露したスクリーンを、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ（商標）ソフトウエアを用いて、蛍光体撮像装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｙｎａｍｉｃｓ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ  ＳＦ）でスキャンした。ドット強度を、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ（商標）の数量化ツールを用いて、コンピュータ支援画像分析によって評価し、細胞数に標準化し、デコリンおよびプロコラーゲン−Ｉ合成への様々な試験試薬の効果を、任意単位１００の賦形剤処理コントロール値と比較して求めた。
【００５７】
実施例５
試験
下記の表５は、共役リノール酸とフェノール系化合物エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）との併用が、ヒトの皮膚線維芽細胞のプロコラーゲン−Ｉおよび／またはデコリン合成に与える相乗効果および薬効剤の使用量を表す。結果を標準化するために、試験物質の効果は、任意単位１００の賦形剤処理コントロール値と比較して求めた。試験に用いた試薬の濃度は、細胞の生存度には影響しなかった。
【００５８】
【表５】
2003505492.tif 000005
【００５９】
表５の結果は、共役リノール酸とフェノール化合物との組み合わせが、ヒトの皮膚線維芽細胞中のプロコラーゲン−Ｉおよび／またはデコリンの合成を相乗的に増加させていることを示唆する。皮膚中のデコリンの濃度は、皮膚の改善された状態および外観と関連している。皮膚のデコリン濃度の増加は、皮膚内にコラーゲンが制御されて、正常に沈着する際に重要である。これは、しわを目立たなくすること、および光で損傷した皮膚の修復など多くの皮膚改善効果に関連している。
【００６０】
実施例６
この実施例は、共役リノール酸とフェノール化合物との特定の組み合わせが、皮膚線維芽細胞の炎症反応を低減させる相乗効果を例証するものである。
【００６１】
線維芽細胞ＰＧＥ２およびＩＣＡＭ分析
ヒトの皮膚線維芽細胞による細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）およびＰＥＧ２の生成は、炎症性刺激ＰＭＡ（ホルボールミリステートアセテート）によって誘発することができる。ＰＭＡは、細胞内に酸化的ストレスおよび炎症反応を誘発する外部ストレッサーの１つである。このモデルは、ｉｎ  ｖｉｖｏで炎症を作るために用いられる。
【００６２】
継代第２代（Ｐ２）のプライマリヒト包皮線維芽細胞を９６−ウエルプレートに１００００細胞／ｃｍ２で接種し、二酸化炭素５％の雰囲気で、ウシ胎児血清１０％を添加したダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）に２４時間保った。下記の表７に示した試験物質３セットを、ジメチルスルホキシドおよびエタノール中の新鮮な細胞培地（ＤＭＥＭ、ウシ胎児血清１０％を添加）に加え（最終濃度＜１％）、さらに２４時間インキュベートした。ＰＭＡ（Ｓｉｇｍａ）１０ｎＭを培地に加え、細胞をさらに２４時間インキュベートした。賦形剤のみを含有したコントロールは、どのような試験化合物も、どのようなＰＭＡも含有していなかった。次いで線維芽細胞／培地は、下記のようにして直ちに分析するか、後で分析するために液体窒素で素早く冷凍して−７０℃で保存した。次いで細胞を計数し、ドットブロット（ｄｏｔ−ｂｌｏｔ）分析からのデータは引き続いて細胞数に標準化した。
【００６３】
プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）分析：
培地５０μｌの量を、培地プレートをゆるやかに振った後ＰＧＥ２分析用に取り分けた。培地中のＰＧＥ２濃度は、Ｂｉｏｔｒａｋ  ＰＧＥ２免疫アッセイキット（英国、Ａｍｅｒｓｈａｍ）で求めた。この分析は、限定量の固定ＰＧＥ２特異性抗体に対する、試料中の標識なしのＰＧＥ２と、固定量のホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたＰＧＥ２との競合に基づくものである。標識なし試料ＰＧＥ２の濃度は、同時に得られる標準曲線に従って求める。
【００６４】
ＩＣＡＭ−１分析
培地を捨て、細胞をダルベッコ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ）ＰＢＳで洗った。洗った細胞に、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ）１５０μｌを３分間で加えて、細胞メンブレンからＩＣＡＭを抽出した。抽出物を、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心分離管に移し、１０００ｇで２分間遠心分離を行って細胞の崩壊物を除去した。上澄み１００μｌの量をＩＣＡＭ分析に用いた。可溶性のＩＣＡＭ−１を、市販の免疫酵素計量アッセイキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で評価した。サンプル中のＩＣＡＭ−１の濃度は、並行して行う標準曲線に基づいて求めた。
【００６５】
ＰＧＥ２およびＩＣＡＭ分析から得られた結果を、下記の表６にまとめて示す。
【００６６】
【表６】
2003505492.tif 000006
【００６７】
上記の結果は、ＰＭＡなどの炎症刺激をチャレンジした細胞は、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）生成で測定した炎症反応を増大させていることを示す。共役リノール酸とフェノール系化合物の特定の組み合わせは、ＰＧＥ２生成で測定した炎症反応を相乗的に低減させている。したがってこの結果は、本発明の範囲内の薬効剤の特定の組み合わせが、驚くべき相乗的抗炎症活性を示すことを例証している。
【００６８】
上記結果はまた、ＰＭＡをチャレンジした細胞は、ＩＣＡＭ生成の増大をもたらすことを例証している。共役リノール酸とフェノール系化合物との組み合わせで細胞を治療すると、炎症のもう１つのマーカーである細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）の生成を相乗的に減少させる。したがって、これらの結果はさらに、本発明の範囲内の薬効剤の特定の組み合わせが、優れたかつ驚くべき相乗的抗炎症活性を示すことを例証している。
【００６９】
実施例７
下記の処方は、本発明の方法および使用に適した水中油滴クリームを記載するものである。示した百分率は、組成物の重量による。
【００７０】
【表７】
2003505492.tif 000007
【００７１】
実施例８
下記の処方は、本発明による乳化クリームを記載するものである。
【００７２】
【表８】
2003505492.tif 000008
【００７３】
実施例７および８の上記局所組成物はどちらも、老化または光老化で荒れた正常な皮膚に塗布したり、こうした荒れの変化を予防または遅延させるために若々しい皮膚に塗布すると、しわ、老化、光損傷および／または炎症皮膚の外観を改善する効果的な化粧治療を提供する。この組成物はまた、炎症皮膚を軽減し、乾燥皮膚を整え、皮膚を美白にし、油および皮脂分泌を低減させるのに効果がある。この組成物は通常の方法で加工することができる。