(57)【要約】本明細書に記載されているのは、がんまたは他のヒトの疾患を治療するためのＦＬ１１８プラットフォームの位置７および／または９由来の類似体の化学合成、組成物、製剤、機能、方法および使用の問題である。  ＦＬ１１８プラットフォームの化学修飾に由来する化合物は、単独で、または他の抗がん剤と組み合わせて使用され、がんの表現型を阻害、排除、または逆転させる。  本発明は、複数の細胞性ヒト疾患関連タンパク質およびそれらのシグナル伝達経路を標的とする一連の構造関連の個々のＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体の適用を通じて、独自の個別化がん治療（個別化精密医療）を実現することを意図している。
2022501432.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む組成物：
【化１６】
2022501432.tif 000018
ここで、置換基は、以下からなる群から選択される：
ここで、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１は、以下のグループＩ−ａ(Group  I-a)、グループＩＩ−ａ(Group  II-a)、グループＩＩＩ−ａ(Group  III-a)、およびグループＩＶ−ａ(Group  IV-a)からなる群から独立して選択される：
【化１７】
2022501432.tif 000019
【化１８】
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【化１９】
2022501432.tif 000021
または、Ｒ１がＨである場合、Ｒ２は、以下のグループＩ−ｂ(Group  I-b)、グループＩＩ−ｂ(Group  II-b)、グループＩＩＩ−ｂ(Group  III-b)、およびグループＩＶ−ｂ(Group  IV-b)からなる群から独立して選択される：
【化２０】
2022501432.tif 000022
【化２１】
2022501432.tif 000023
または、R2が次の化学基のいずれかである場合：F-、F2CH-、F3C-、Cl2CH-、Cl3C-、Br2CH-、Br3C-、I2CH-、I3C-、FCH2O-、F2CHO-、ClCH2O-、Cl2CHO  -、NH2-、FCH2NH-、F2CHNH-、ClCH2NH-、Cl2CHNH-、（FCH2）2N-、（F2CH）2N-、（ClCH2）2N-、（Cl2CH）2N-、-C（O）CH2F、-C  （O）CHF2、-C（O）CH2Cl、-C（O）CHCl2、-CO2CH3、-CO2CH2F、-CO2CHF2、CO2CH2Cl、または-CO2CHCl2の場合、R1はグループIa  (Group  I-a)、II-a  (Group  II-a)、グループIII-a  (Group  III-a)、およびグループIV-a  (Group  IV-a)からなる群から独立して選択される,
または、R1が次の化学基のいずれかである場合：F-、F2CH-、F3C-、Cl2CH-、Cl3C-、Br2CH-、Br3C-、I2CH-、I3C-、FCH2O-、F2CHO-、ClCH2O-、Cl2CHO-  、NH2-、FCH2NH-、F2CHNH-、ClCH2NH-、Cl2CHNH-、（FCH2）2N-、（F2CH）2N-、（ClCH2）2N-、（Cl2CH）2N-、-C（O）CH2F、-C（  O）CHF2、-C（O）CH2Cl、-C（O）CHCl2、-CO2CH3、-CO2CH2F、-CO2CHF2、CO2CH2Cl、または-CO2CHCl2の場合、R2はグループIb  (Group  I-b)、II  -b  (Group  II-b)、グループIII-b(Group  III-b)、およびグループIV-b  (Group  IB-b)からなる群から独立して選択される,
ここで、位置20のエステル対応化合物は、さまざまなエステル化化学基に由来する。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物、ここでは製剤中のあるタイプの式１の化合物は、経口、静脈内、皮下、経皮、腹腔内、または吸入によって投与される。
【請求項３】
請求項１に記載の組成物、ここでは疾患は、腫瘍性疾患、自己免疫疾患、再狭窄、結節性硬化症複合体（ＴＳＣ）、および細胞増殖に関連する他の任意のヒトの疾患からなる群から選択される。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物、ここでは疾患は、固形腫瘍、血液癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨形成肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、偽粘液腫腹膜、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、頭頸部癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝腫、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、多形性神経膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、音響神経腫、脂肪膠腫、神経鞘腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、急性白血病、急性白血病、網膜芽細胞腫、白血病、急性白血病、急性リンパ性白血病前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫および胸腺腫、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のがんである。
【請求項５】
請求項4に記載の組成物、ここではがん分子表現型が、サバイビン、Mcl-1、XIAP、cIAP2、ABCトランスポータータンパク質、低酸素誘導因子1α（HIF-1α）、Hdm2、HdmX、p53（野生型、ヌルまたは変異体）、変異体APC、変異体Kras、ABCトランスポータータンパク質、熱ショックタンパク質60（HSP60）、ストレス70タンパク質（GRP75）、ATP依存性RNAヘリカーゼDDX5（  p68）、核RNAヘリカーゼ2（DDX21）、伸長因子2（EF2）、プレmRNAスプライシング因子ATP依存性RNAヘリカーゼ（DHX15）、移行性小胞体ATPase（TERA）、トランスフェリン受容体タンパク質（TFR1）、MAPキナーゼ活性化プロテインキナーゼ2（MAPK2）、カテニンベータ-1（CTNB1）、初期エンドソーム抗原1（EEA1）、グアニンヌクレオチド結合タンパク質サブユニットベータ2様1（GBLP）、電子伝達フラボタンパク質サブユニットアルファ（ETFA）、プロテアソーム活性化因子複合体サブユニット3（PSME3）、UPF0368タンパク質Cxorf26（CX026）、ペルオキシレドキシン-2（PRDX2）、ペルオキシレドキシン-1（PRDX1）、チオレドキシン依存性過酸化物レダクターゼ（PRDX3）、セリン/アルギニンリッチスプライシングファクター3（SRSF3）、プロテアソームサブユニットベータタイプ-2（PSB2）、グルタチオンS-トランスフェラーゼP（GSTP1）、MAP  /微小管親和性-調節キナーゼ3（MARK3）、DNA損傷誘導性1（DDI1）、腫瘍タンパク質D52様2（TPD52L2）、カルシウムチャネル、電位依存性、ベータ1サブユニット（CACNB1）、Gタンパク質結合受容体1（PGPCR1  ）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ2a（USP2a）、メラノコルチン2受容体（MC2R）、線維芽細胞成長因子18（FGF18）、腫瘍タンパク質p53誘導性タンパク質3（TP53I3）、CCHC型亜鉛フィンガー、核酸結合タンパク質（CNBP）、WDリピートドメイン22（WDR22）、カリウム電圧ゲートチャネルサブファミリーEメンバー1（PVGCSE-M1）、ユビキチン結合酵素E2T（推定）（UBE2T）、ユビキチン様タンパク質7（ULP7）、RNA結合モチーフ、一本鎖相互作用タンパク質2（RBMS2）、細胞質チロシンタンパク質キナーゼ（BMX）、およびサイクリンB1相互作用タンパク質1（CCNB1IP1）からなる群から選択される1つまたは複数のバイオマーカーまたは標的の発現を含む。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物、ここでは急性および慢性の後天性および／または固有の治療抵抗性を克服するための式１の化合物および式１の化合物の薬学的に許容される塩は、化学療法剤、化学予防剤、天然植物由来の薬剤、非植物由来の薬剤、クルクミン、レスベラトロール、ビタミンD3、ビンテンA、ビタミンE、ビタミンC、イソチオシアネート（ITC）、アリルイソチオシアネート（AITC）、シリビニン（シリビン）、スリンダク、セレン含有化合物、メチルセレニン酸、Amoora  rohituka由来のAMR類似体、AMR-Me、AMR-MeOAc、テラメプロコール、セレコキシブ、イマチニブ、ケルセチン、エピガロカテキン-3-ガレート（EGCG）  、デグエリン、3,3'-ジインドリルメタン（DIM）、エモジン、ゲニスタイン、トルフェナム酸、シンバスタチン、ガンボギン酸、ドコサヘキサエン酸、ウルソール酸、オレアノール酸、ブファリン、スルフォラファン、ノスカピン、インドメタシン（インドメタシン）、ルペオール、デクルシン、アビシンD、シグリタゾン、ベバシズマブ（アバスチン）、クロリブリン、バイカレイン、パキシリン、プルバラノールA、NU6140、アルジシアノン、NVP-BGT226、HDAC阻害剤、MS-275  /エンチノスタット、SAHA、アナカルド酸ジテルペン、ブフォタリン、ウィザフェリンA、プランバギン、フラボカワインA、フラボカワインB、ポニシジン、エスシン、クグアシンJ、LQB-118、クロテポキシド、クグアグリコシドC、デストルキシンB、エボディアミン、セサミン、プロスタノイド、エンドセリン拮抗薬、細胞質キナーゼ阻害剤、エンドセリン受容体拮抗薬、アンブリセンタン、ボセンタン、およびシタクスセンタン、PDE5（PDE-V）阻害剤、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、カルシウムチャネル遮断薬、アムロジピン、フェロジピン、バレパミル、ジルチアゼム、メントール、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、イロプロスト、酸素、ヘパリン、ワルファリン、利尿薬、ジゴキシン、シクロスポリン、シクロスポリンA、CTLA4-Ig、抗体、CD154、CD40融合タンパク質、gp39融合タンパク質、CD401g、CD8gp39、NF-カッパBの核移行阻害剤機能、デオキシスペルグアリン（DSG）、コレステロール生合成阻害剤、HMG  CoAレダクターゼ阻害剤、ロバスタチン、シンバスタチン、非ステロイド性抗炎症薬（NSAID）、イブプロフェン、アスピリン、アセトアミノフェン、レフルノミド、デオキシスペルグアリン、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、セレコキシブ、ステロイド、プレドンデキサメタゾン、金化合物、ベータアゴニスト、サルブタモール、LABA、サルメテロール、ロイコトリエンアンタゴニスト、モンテルカスト、抗増殖剤、メトトレキサート、FK506、タクロリムス、プログラフ、ミコフェノラートモフェチル、細胞毒性薬、アザチオプリン、VP-16、エトポシド、フルダラビン、ドキソルビシン、アムサクリン、カンプトテシン、シタラビン、ゲムシタビン、フルオロデオキシウリジン、メルファラン、シクロホスファミド、代謝代謝物、メトトレキサート、トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン、DNAアルキル化剤、シスプラチン、キナーゼ阻害剤、ソラフェニブ、微小管毒、パクリタキセル、TNF-α阻害剤、可溶性TNF受容体、ヒドロキシ尿素、ラパマイシン、シロリムス、ラパミューン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から１つまたは複数の薬剤と別々に、連続してまたは同時に対象に投与される。
【請求項７】
請求項１に記載の組成物、ここでは式１の化合物またはFL118は、シクロデキストリン系-薬物複合体懸濁液に配合されるシクロデキストリン系を含む有機溶媒のマスター溶液に配合される。ここで、無有機溶媒系のシクロデキストリン薬物は、経口（per  oral,  po/p.o.）、腹腔内（ip/IP/i.p.）または静脈内（iv/IV/i.v.）投与用の複合体粉末、あるいは以下のステップを含む経口投与用の固形錠剤としてさらに合成される:
1）20％濃度の有機溶媒-シクロデキストリンマスター溶液を調整するために、シクロデキストリン系をエタノール;ジメチルスルホキシド（DMSO）;  ジメチルアセトアミド（DMA）;  ジメチルホルムアミド（DMF）;  N-メチル-2-ピロリドン（NMP）;  またはヘプタフルオロ酪酸/パーフルオロ酪酸（HFBA  /  PFBA）ですが、ジクロルメタンには含まれません。  クロロホルム;  アセトン;  テトラリドロフラン;  1,4-ジオキソン;  トリクロロエチレン;  1,1、ジクロロ-1-フルオロエタン;  パーフルオロポリエーテル;  ペルフルオロヘキサン;  トリフルオロ酢酸;  ペンタフルオロプロピオン酸無水物;  パークロロエチレン;  ビス（トリフルオロメタン）-スルホンアミド;  またはパーフルオロオクタンに溶解する。
2）100％濃度の薬物/APIをシクロデキストリン系に配合し、ポリマー状態の懸濁液にするため、式1の化合物またはFL118を、化合物1分子に対しシクロデキストリン1.5-2.0分子の比率で、1時間以上激しく攪拌するか、磁気撹拌子を用いて1,000  rpmなどの高速で24時間以上攪拌することにより、有機溶媒-シクロデキストリン溶液に溶解する。
３）得られたポリマー状態の懸濁液を処理して、凍結乾燥、ドラム乾燥機、流下膜蒸発器、薄膜蒸発器、およびリトルフォード反応器からなる群から選択されるプロセスを通じて有機溶媒を除去する。ここでは、これは結果としてシクロデキストリン系-薬物複合体粉末となる。
4）調製したシクロデキストリン系-薬物複合体粉末を30℃で一晩真空乾燥する。
５）ジェットミリングシステム／装置を使用して、乾燥したシクロデキストリン系-薬物複合粉末を約３７ミクロン未満の微粒子に製粉する。
６）患者への経口、静脈内または腹腔内投与のために、粉砕されたシクロデキストリン系-薬物複合体粉末を最大５％濃度のPG  (propylene  glycol/ポリエチレングリコール)を含む水溶液で再懸濁する。
【請求項８】
請求項７に記載の組成物、ここでは製粉されたシクロデキストリン系-薬物（すなわち、FL118または式１の化合物）複合粉末は、2-5％濃度のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、４０-６０ｃｐｓの粘度）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００またはＰＥＧ４００を０-４％濃度で含む生理食塩水（０．８５％濃度ＮａＣｌ）に溶解した１-５％濃度のプロピレングリコール（ＰＧ）を含む水性懸濁液に調整される。FL118または式１の化合物の最終濃度での配合物は、経口投与のために0.1から約５mg/mLの範囲になり得る。
【請求項９】
請求項７に記載の組成物、ここでは製粉されたシクロデキストリン系-薬物複合体粉末は、充填剤、結合剤または希釈剤、崩壊剤、流動剤、潤滑剤または抗菌剤、または保存剤と均一に混合され、次いで得られたものをプレスすることによって錠剤形態となる。そして錠剤機で乾式圧縮することにより、滑らかな均一な粉末を錠剤にする。
【請求項１０】
請求項９に記載の組成物、ここでは充填剤、結合剤または希釈剤は、セルロースまたはセルロース誘導体、デンプンまたはデンプン誘導体、およびラクトースからなる群から選択される。崩壊剤は、コロイド状二酸化炭素、クロスカルメロースナトリウム、およびクロスポビドンからなる群から選択される。グリダントは、二塩基性リン酸カルシウムとコロイド状二酸化炭素からなる群から選択される。潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ポリエチレングリコール、およびタルクからなる群から選択される。抗菌剤または防腐剤は、プロピレングリコール、プロピレンパラベン、メチルパラベン、およびグリセリンからなる群から選択される。
【請求項１１】
請求項９に記載の組成物、ここでは粉末形態に含まれる原材料は、10-50％濃度の製粉されたシクロデキストリン系-薬物複合体粉末、30%-80%濃度の微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、０％〜４０％濃度のコーンスターチ、10％〜約25％濃度のラクトース、0％〜3％濃度のコロイド状二酸化シリコーン、1％〜10％濃度の二塩基性リン酸カルシウム、および0.2％〜3％濃度のステアリン酸マグネシウム（錠剤形態）である。
【請求項１２】
請求項１に記載の組成物、ここでは式１の化合物またはFL118は、以下のステップを含む経口、静脈内、または腹腔内投与用の水性懸濁液製剤として処方される:
1）シクロデキストリン系を非水性100％濃度エタノールに溶解して、エタノール-シクロデキストリンマスター溶液を調整する。
2）式1の化合物またはFL118をエタノール-シクロデキストリンマスター溶液に溶解して、エタノール-シクロデキストリン-薬物複合体懸濁液を調整する。
３）エタノール−シクロデキストリン−薬物（式1の化合物またはFL118）複合懸濁液の噴霧乾燥は、噴霧乾燥プロセス中の不活性雰囲気を作るため、溶媒回収および不活性ガス（例えば、窒素）を備えた閉ループ噴霧乾燥システムを使用することによって行われる。このプロセスによって、シクロデキストリン系-薬物複合体粉末となる。
4）調製したシクロデキストリン系-薬物複合体粉末を30℃で一晩真空乾燥する。
５）ジェットミリングシステム／装置を使用して、乾燥したシクロデキストリン系-薬物複合粉末を約３７ミクロン未満の微粒子に製粉する。
6）患者への経口、静脈内、または腹腔内投与のために、製粉されたシクロデキストリン系-薬物複合体粉末を最大5％濃度のPG水溶液で再懸濁する。
【請求項１３】
請求項7記載の組成物、ここではシクロデキストリン系は、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（HPβCD）、βシクロデキストリン（βCD）またはスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン（SBβCD）である。
【請求項１４】
請求項8記載の組成物、ここではシクロデキストリン系は、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（HPβCD）、βシクロデキストリン（βCD）またはスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン（SBβCD）である。
【請求項１５】
請求項9記載の組成物、ここではシクロデキストリン系は、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（HPβCD）、βシクロデキストリン（βCD）またはスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン（SBβCD）である。
【請求項１６】
請求項12記載の組成物、ここではシクロデキストリン系は、ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリン（HPβCD）、βシクロデキストリン（βCD）またはスルホブチルエーテル-β-シクロデキストリン（SBβCD）である。
【請求項１７】
請求項１２に記載の組成物  、ここでは代表的な例としてエタノール−ＨＰβＣＤマスター溶液を調整するステップは、20％濃度HPβCD-エタノールマスター溶液を調整するために、２０ｇのＨＰβＣＤを非水性１００％濃度エタノールに溶解して総量１００ｍＬにする工程を含む。
【請求項１８】
請求項１７に記載の組成物、ここではエタノール-ＨＰβＣＤ-薬物複合体懸濁液を調整する工程は、エタノール-HPβCD-薬物複合懸濁液を調整するために、２ｇのＦＬ１１８または式１の化合物を１００ｍＬの２０％濃度のエタノール−ＨＰβＣＤマスター溶液に溶解する工程を含む。
【請求項１９】
請求項１７に記載の組成物、ここでは経口、腹腔内または静脈内投与のための水性懸濁液を調整するステップは以下のステップを含む。
1）式1の化合物またはFL118複合懸濁液の化合物を含むエタノール-HPβCD-薬剤の噴霧乾燥は、噴霧乾燥プロセス中の不活性雰囲気を作るため、溶媒回収と不活性ガスを備えた閉ループ噴霧乾燥システムを使用することによって行われる。このプロセスによって、HPβCD系-薬物複合体粉末となる。
2）調製したHPβCD-薬物複合体粉末を30℃で一晩真空乾燥する。
3）ジェットミリングシステム／装置を使用して、乾燥したHPβCD系-薬物複合粉末を約３７ミクロン未満の微粒子に製粉する。
4）患者への経口投与、静脈内投与、または腹腔内投与のために、患者への投与直前に、製粉したHPβCD-薬剤複合体粉末を最大5％濃度PGの生理食塩水で再懸濁する。  ここで、薬物/APIの濃度は、激しく振とうすることにより、0〜5％濃度PGの生理食塩水を使用して0.1〜10mg  /  mLの範囲とする。腹腔内または静脈内投与の場合、API（式1の化合物またはFL118）濃度は0.1〜1  mg  /  mLであり、経口投与の場合は1〜10  mg  /  mLである。
【請求項２０】
請求項１に記載の組成物、ここでは式１の化合物またはＦＬ１１８は、塩化物、リン酸塩、メシレート、ビスメシレート、トシレート、乳酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、ビス酢酸塩、およびクエン酸塩からなる群から選択される塩を含む様々な形態の水性懸濁液、ナノ粒子または固体状態錠剤、またはカプセルとして処方され、週に1〜5回経口投与される。
【請求項２１】
請求項１に記載の組成物、ここでは様々な製剤形態の式１の化合物またはＦＬ１１８は、本明細書に記載の実施形態のいずれかの化合物であり、経口、静脈内、皮下、経皮、腹腔内、または吸入によって投与される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連するアプリケーションへの相互参照
このＰＣＴ国際特許出願は、２０１８年９月１７日に出願された米国仮特許出願シリアル番号６２／７３２，５５３に優先権を主張し、これは、前述の米国仮特許出願およびＰＣＴ「ヒト疾患の治療のためのＦＬ１１８誘導体を生成するためのＦＬ１１８コア化学構造プラットフォームの使用」と題され、２０１５年３月２４日に出願された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２２０９５の主題全体を参照により組み込んでいる。
政府が後援する研究の声明
【０００２】
本発明は、国立がん研究所（ＮＣＩ）によってＣａｎｇｅｔ  ＢｉｏＴｅｋｐｈａｒｍａ  ＬＬＣ．に授与された助成金番号Ｒ４４ＣＡ１７６９３７の下、米国政府の支援によって部分的になされた。  米国政府は、本発明において一定の権利を有している。
発明の属する技術分野
【０００３】
本開示は、治療耐性および生存経路、がん標的およびがんバイオマーカーに関連するヒトのがんおよび新生物を含むヒトの疾患の治療および／または予防のためのＦＬ１１８位置７および９由来の類似体の組成、合成、処方、実証および保護の問題に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
ＦＬ１１８化合物の化学構造は、がんを含む様々なヒトの疾患の治療に有効であることが示されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の概要
本発明者らは、以前に出願されたＰＣＴ国際特許出願（ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２２０９５）において、ＦＬ１１８化合物の化学構造が、がんを含むさまざまなヒトの病気の治療のためのＦＬ１１８類似体シリーズの化学生成のための優れたプラットフォームであるという多くの証拠を提供した。本発明者らの追跡研究によって、ＦＬ１１８プラットフォームのさらなる新規性が示された。たとえば、ＦＬ１１８の化学構造は、カンプトテシン（ＣＰＴ）およびＦＤＡ承認のＣＰＴアナログであるイリノテカン、ＳＮ−３８（イリノテカンの活性代謝物）およびトポテカンに類似しているが、これらは治療標的としてトポイソメラーゼＩ（Ｔｏｐ１）を標的とすることが知られている。しかし、ＦＬ１１８の抗腫瘍活性および有効性は、Ｔｏｐ１の発現とは無関係である（Ｌｉ  Ｆ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｏｐ１：  ａ  ｍａｊｏｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ＦＬ１１８  ｆｏｒ  ｉｔｓ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｒ  ｍａｉｎｌｙ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｉｔｓ  ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ？  Ａｍ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１７；  ７：  ３７０−８２）。具体的には、ヒト結腸直腸がん動物モデルにおいて、ＦＬ１１８はＴｏｐ１発現がないか非常に低い腫瘍に対して高い抗腫瘍効果を示し、Ｔｏｐ１発現が高い腫瘍は高い耐性を示すかＦＬ１１８治療に対する感受性がはるかに低いことを示した。
【０００６】
本発明者らが過去６０年以上の臨床試験に移行されたすべてのＣＰＴ類似体を徹底的に検討したところ、学術および産業分野全体が、ＣＰＴ類似体の抗腫瘍の可能性を予測するために主にＴｏｐ１阻害強度を使用していることがわかった。ただし、蓄積された証拠は、特定のＣＰＴ類似体がＴｏｐ１を介さない重要な抗腫瘍活性を発揮できるという本発明者らの考えを裏付けている。実際、正常な組織および細胞の再生にはＤＮＡ複製にＴｏｐ１が必要であるため、このような類似体によるＴｏｐ１活性阻害は、薬物の副作用（造血毒性など）に関与しているようだ。実際に、臨床開発中のＣＰＴ類似体のほとんど（すべてではないにしても）が、イリノテカンおよび／またはトポテカンよりもＴｏｐ１活性の強い阻害を示した。それでも、これらの類似体を用いた大規模な臨床試験では、抗腫瘍活性および／または高い副作用毒性においてイリノテカンまたはトポテカンよりも有意な利点は示されなかった（Ｌｉ  Ｆ，  Ｊｉａｎｇ  Ｔ，  Ｌｉ  Ｑ，  Ｌｉｎｇ  Ｘ：  ＣＰＴ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ａｒｅ  ｋｎｏｗｎ  ｔｏ  ｔａｒｇｅｔ  Ｔｏｐ１  ａｓ  ｔｈｅｉｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ：  ｄｉｄ  ｗｅ  ｍｉｓｓ  ｓｏｍｅｔｈｉｎｇ  ｉｎ  ＣＰＴ  ａｎａｌｏｇｕｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｕｃｈ  ａｓ  ｃａｎｃｅｒ？  Ａｍ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２０１７，  ７：２３５０−９４）。  ＣＰＴアナログの前臨床および臨床開発の主要な基準として、Ｔｏｐ１の機能／活性を強く阻害するＣＰＴアナログを見つけることにさらに焦点を当てると、ヒトの病気（例えばがん）の治療に対して高い有効性と低い毒性を有する次世代の新規ＣＰＴアナログの開発にブレークスルーをもたらすことができる可能性があると予測する。
【０００７】
Ｗｅ  ｐｒｏｐｏｓｅ  ｔｏ  ｄｅｖｅｌｏｐ  ＣＰＴ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｔｈａｔ  ｅｘｈｉｂｉｔｓ  ｌｏｗ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  Ｔｏｐ１  ｆｕｎｃｔｉｏｎ／ａｃｔｉｖｉｔｙ，  ｗｈｉｌｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｋｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ／ｏｒ  ｇｅｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ．  Ｓｕｃｈ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｓｈｏｕｌｄ  ｐｏｓｓｅｓｓ  ｈｉｇｈ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｌｏｗ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｆｏｒ  ｆｉｇｈｔｉｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．  本発明者らは、複数の主要な疾患関連遺伝子および／または遺伝子産物を標的としつつ、Ｔｏｐ１機能／活性に対して低い阻害効果を示すＣＰＴ誘導体を開発することを提案する。  そのような分子は、がんや他のヒトの病気と戦うための高い効力と低い毒性を持っていると提案する。
【０００８】
本発明において、本発明者らは、ＦＬ１１８プラットフォーム由来化合物が、様々なタイプのがんを治療するための低毒性で高い抗がん効果を示す優れた化合物を発見するための豊富な資源であることを実証するために、本発明者ら研究チームによって合成された様々なＦＬ１１８プラットフォーム由来化合物の例を提供する。
【０００９】
本開示は、以下の式を有する式１を含む組成物を提供する：
【００１０】
【化１】
2022501432.tif 000003
【００１１】
ある状況において、式１の位置９上の「Ｒ２」は「Ｈ」であり、式１の位置７上の「Ｒ１」は、以下のグループＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  Ｉ−ａ）、グループＩＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ−ａ）、グループＩＩＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩＩ−ａ）、およびグループＩＶ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＶ−ａ）  から独立して選択されるが、これらに限定されない。：
【００１２】
【化２】
2022501432.tif 000004
【００１３】
【化３】
2022501432.tif 000005
【００１４】
【化４】
2022501432.tif 000006
【００１５】
【化５】
2022501432.tif 000007
【００１６】
別の状況では、式１の位置７の「Ｒ１」は「Ｈ」であり、式１の位置９の「Ｒ２」は、以下のグループＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  Ｉ−ｂ）、グループＩＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ−ｂ）、グループＩＩＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩＩ−ｂ）、およびグループＩＶ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＶ−ｂ）から独立して選択されるが、これらに限定されない。：
【００１７】
【化６】
2022501432.tif 000008
【００１８】
【化７】
2022501432.tif 000009
【００１９】
【化８】
2022501432.tif 000010
【００２０】
【化９】
2022501432.tif 000011
【００２１】
第３の状況において、式１の位置９上の「Ｒ２」が以下の化学基のうちの１つである：Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−、ＦＣＨ２−、Ｆ２ＣＨ−、Ｆ３Ｃ−、ＣｌＣＨ２−。  Ｃｌ２ＣＨ−、Ｃｌ３Ｃ−、ＢｒＣＨ２−、Ｂｒ２ＣＨ−、Ｂｒ３Ｃ−、ＩＣＨ２−、Ｉ２ＣＨ−、Ｉ３Ｃ−、ＨＯ−、ＨＯＮＨ−、ＣＨ３Ｏ−、ＦＣＨ２Ｏ−、Ｆ２ＣＨＯ−、ＣｌＣＨ２Ｏ−、Ｃｌ２ＣＨＯ−、ＮＨ２−、ＮＨ２ＣＨ２  −、ＮＨ２ＣＦＨ−、ＣＨ３ＮＨ−、ＦＣＨ２ＮＨ−、Ｆ２ＣＨＮＨ−、ＣｌＣＨ２ＮＨ−、Ｃｌ２ＣＨＮＨ−、（ＣＨ３）２Ｎ−、（ＦＣＨ２）２Ｎ−、（Ｆ２ＣＨ）２Ｎ−、（ＣｌＣＨ２）２Ｎ−、（Ｃｌ２ＣＨ）２Ｎ−、  −ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｆ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＦ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃｌ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＣｌ２、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＯ２ＣＨＦ２  、ＣＯ２ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＯ２ＣＨＣｌ２、および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ２）２、および式１の位置７の「Ｒ１」は、グループＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  Ｉ−ａ）、グループＩＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ−ａ）、グループＩＩＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩＩ−ａ）、およびグループＩＶ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＶ−ａ）  から独立して選択されるが、これらに限定されない。
【００２２】
第４の状況において、式１の位置７の「Ｒ１」が以下の化学基のうちの１つである：Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−、ＦＣＨ２−、Ｆ２ＣＨ−、Ｆ３Ｃ−、ＣｌＣＨ２−。  Ｃｌ２ＣＨ−、Ｃｌ３Ｃ−、ＢｒＣＨ２−、Ｂｒ２ＣＨ−、Ｂｒ３Ｃ−、ＩＣＨ２−、Ｉ２ＣＨ−、Ｉ３Ｃ−、ＨＯ−、ＨＯＮＨ−、ＣＨ３Ｏ−、ＦＣＨ２Ｏ−、Ｆ２ＣＨＯ−、ＣｌＣＨ２Ｏ−、Ｃｌ２ＣＨＯ−、ＮＨ２−、ＮＨ２ＣＨ２  −、ＮＨ２ＣＦＨ−、ＣＨ３ＮＨ−、ＦＣＨ２ＮＨ−、Ｆ２ＣＨＮＨ−、ＣｌＣＨ２ＮＨ−、Ｃｌ２ＣＨＮＨ−、（ＣＨ３）２Ｎ−、（ＦＣＨ２）２Ｎ−、（Ｆ２ＣＨ）２Ｎ−、（ＣｌＣＨ２）２Ｎ−、（Ｃｌ２ＣＨ）２Ｎ−、  −ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｆ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＦ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃｌ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＣｌ２、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＯ２ＣＨＦ２  、ＣＯ２ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＯ２ＣＨＣｌ２、および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ２）２、および式１の位置９の「Ｒ２」は、グループＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  Ｉ−ｂ）、グループＩＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ−ｂ）、グループＩＩＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩＩ−ｂ）、およびグループＩＶ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＶ−ｂ）から独立して選択されるが、これらに限定されない。
【００２３】
具体例として、式１の化合物はまた、様々なエステル化化学基に由来する位置２０のエステル対応化合物を含み、式１のすべての化合物は、経口、静脈内、皮下、経皮、腹腔内、または吸入によって投与される。具体例として、疾患は、腫瘍性疾患、自己免疫疾患、再狭窄、および結節性硬化症複合体（ＴＳＣ）およびがんなどの異常な細胞増殖に関連する他の任意のヒト疾患からなる群から選択される。
【００２４】
いくつかの実施形態において、疾患は、固形腫瘍、血液がん、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨形成性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、偽粘液腫腹膜、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮がん、基底細胞がん、腺がん、頭頸部がん、汗腺がん、脂腺がん、乳頭状がん腫、乳頭状腺がん、嚢胞腺がん、髄質がん、気管支原性がん、腎細胞がん、肝腫、胆管がん、絨毛がん、セミノーマ、胚性がん、ウィルムス腫瘍、頸部がん、子宮がん、精巣腫瘍、肺がん、小細胞肺がん、膀胱がん、上皮がん、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、多形性神経膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、脂肪膠腫、神経鞘腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄性単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫および胸腺腫またはそれらの組み合わせからなるがん、から選択される１つ以上のがんである。
【００２５】
適切な実施形態では、１つまたは複数のがんは、１つまたは複数の転移性がん、原発性腫瘍、難治性がん、進行性がん、浸潤性がん、固形腫瘍、播種性腫瘍または血液がんである。例示的な実施形態では、１つまたは複数のがんは、１つまたは複数の治療適応症に対して難治性である。例示的な実施形態において、難治性がん表現型は、ｓｕｒｖｉｖｉｎ、Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２、ＡＢＣトランスポータータンパク質、低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ−１α）、Ｈｄｍ２、ＨｄｍＸ、ｐ５３、変異型ＡＰＣ、および／または変異型Ｋｒａｓからなるがこれらに限定されない本発明（ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０２２０９５）で報告された群から選択される１つ以上の耐性マーカーの発現を含む。例示的な実施形態では、ＡＢＣトランスポータータンパク質は、ＡＢＣＧ２、ＡＢＣＣ４、ＭＤＲ１、ＭＲＰ１、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）、ストレス７０タンパク質（ＧＲＰ７５）、ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５（ｐ６８）、ヌクレオラー、ＲＮＡヘリカーゼ２（ＤＤＸ２１）、伸長因子２（ＥＦ２）、プレｍＲＮＡスプライシング因子ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼ（ＤＨＸ１５）、移行性小胞体ＡＴＰａｓｅ（ＴＥＲＡ）、トランスフェリン受容体タンパク質（ＴＦＲ１）、ＭＡＰキナーゼ活性化プロテインキナーゼ２（ＭＡＰＫ２）、カテニンベータ−１（ＣＴＮＢ１）、初期エンドソーム抗原１（ＥＥＡ１）、グアニンヌクレオチド結合タンパク質サブユニットベータ２様１（ＧＢＬＰ）、電子伝達フラボタンパク質サブユニットアルファ（ＥＴＦＡ）、プロテアソーム活性化因子複合体サブユニット３（ＰＳＭＥ３）、ＵＰＦ０３６８タンパク質Ｃｘｏｒｆ２６（ＣＸ０２６）、ペルオキシレドキシン−２（ＰＲＤＸ２）、ペルオキシレドキシン−１（ＰＲＤＸ１）、チオレドキシン依存性過酸化還元酵素（ＰＲＤＸ３）、セリン／アルギニンリッチスプライシングファクター３（ＳＲＳＦ３）、プロテアソームサブユニットベータタイプ２（ＰＳＢ２）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼＰ（ＧＳＴＰ１）、ＭＡＰ  ／微小管親和性調節キナーゼ３（ＭＡＲＫ３）、ＤＮＡ損傷誘導性１（ＤＤＩ１）、腫瘍タンパク質Ｄ５２様２（ＴＰＤ５２Ｌ２）、カルシウムチャネル、電位依存性、ベータ１サブユニット（ＣＡＣＮＢ１）、推定Ｇタンパク質結合受容体１（ＰＧＰＣＲ１）、ユビキチン特定のペプチダーゼ２（ＵＳＰ２）、メラノコルチン２受容体（ＭＣ２Ｒ）、線維芽細胞成長因子１８（ＦＧＦ１８）、腫瘍タンパク質ｐ５３誘導性タンパク質３（ＴＰ５３Ｉ３）、ＣＣＨＣ型亜鉛フィンガー、核酸結合タンパク質（ＣＮＢＰ）、ＷＤリピートドメイン２２  （ＷＤＲ２２）、カリウム電圧ゲートチャネルサブファミリーＥメンバー１（ＰＶＧＣＳＥ−Ｍ１）、ユビキチン結合酵素Ｅ２Ｔ（推定）（ＵＢＥ２Ｔ）、ユビキチン様タンパク質７（ＵＬＰ７）、ＲＮＡ結合モチーフ、一本鎖相互作用タンパク質２（  ＲＢＭＳ２）、細胞質チロシンタンパク質キナーゼ（ＢＭＸ）、およびサイクリンＢ１相互作用タンパク質１（ＣＣＮＢ１ＩＰ１）からなる群から選択される。例示的な実施形態において、ｐ５３は、野生型、ヌルまたはｐ５３変異体であるか、または標準的なｐ５３経��、またはそれらの任意の組み合わせに異常がある。
【００２６】
例示的な実施形態では、式１の化合物は、急性治療抵抗性を含む。いくつかの実施形態において、急性および慢性の後天性および／または固有の治療抵抗性を克服するための式１の化合物および式１の化合物の薬学的に許容される塩は、化学療法剤、化学予防剤、天然植物由来の薬剤、非植物由来の薬剤、クルクミン、レスベラトロール、ビタミンＤ３、ビンテンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、イソチオシアネート（ＩＴＣ）、アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、シリビニン（シリビン）、スリンダク、セレン含有化合物、メチルセレニン酸、Ａｍｏｏｒａ  ｒｏｈｉｔｕｋａ由来のＡＭＲ類似体、ＡＭＲ−Ｍｅ、ＡＭＲ−ＭｅＯＡｃ、テラメプロコール、セレコキシブ、イマチニブ、ケルセチン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）、デグエリン、３  、３’−ジインドリルメタン（ＤＩＭ）、エモジン、ゲニスタイン、トルフェナム酸、シンバスタチン、ガンボギン酸、ドコサヘキサエン酸、ウルソール酸、オレアノール酸、ブファリン、スルホラファン、ノスカピン、インドメタシン（インドメタシンｃｉｎ）、ルペオール、デクルシン、アビシンＤ、シグリタゾン、ベバシズマブ（アバスチン）、クロリブリン、バイカレイン、パキシリン、プルバラノールＡ、ＮＵ６１４０、アルジシアノン、ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６、ＨＤＡＣ阻害剤、ＭＳ−２７５  ／エンチノスタット、ＳＡＨＡ、アナカルド酸、ジテルペンブフォタリン、ウィザフェリンＡ、プランバギン、フラボカワインＡ、フラボカワインＢ、ポニシジン、エッシン、クグアシンＪ、ＬＱＢ−１１８、クロテポキシド、クグアグリコシドＣ、デストルキシンＢ、エボジアミン、セサミン、プロスタノイド、エンドセリン拮抗薬、細胞質キナーゼ阻害剤、受容体キナーゼ阻害剤受容体拮抗薬、アンブリセンタン、ボセンタン、およびシタクスセンタン、ＰＤＥ５（ＰＤＥ−Ｖ）阻害薬、シルデナフィル、タダラフィル、およびバルデナフィル、カルシウムチャネル遮断薬、アムロジピン、フェロジピン、バレパミル、ジルチアゼム、メントール、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、イロプロスト、ベラプロスト酸素、ヘパリン、ワルファリン、利尿薬、ジゴキシン、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、ＩＣＡＭ−３などの抗体、抗ＩＬ−２受容体（抗Ｔａｃ）、抗ＣＤ４５ＲＢ、抗ＣＤ２、抗ＣＤ３（  ＯＫＴ−３）、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８０、抗ＣＤ８６、薬剤遮断ＣＤ４０とｇｐ３９の相互作用、ＣＤ４０に対する抗体、ｇｐ３９に対する抗体、ＣＤ１５４、ＣＤ４０融合タンパク質、ｇｐ３９融合タンパク質、ＣＤ４０１ｇ、ＣＤ８ｇｐ３９、ＮＦ−カッパＢ機能の核移行阻害剤、デオキシスペルグアリン（ＤＳＧ）、コレステロール生合成阻害剤、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ロバスタチン、シンバスタチン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、イブプロフェン、アスピリン、アセトアミノフェン、レフルノミド、デオキシスペルグアリン、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、セレコキシブ、ステロイド、プレドニゾロン、デキサメタゾン、金化合物、ベータアゴニスト、サルブタモールサルメテロール、ロイコトリエン拮抗薬、モンテルカスト、抗増殖剤、メトトレキサート、ＦＫ５０６、タクロリムス��プログラフ、ミコフェノラートモフェチル、細胞毒性薬、アザチオプリン、ＶＰ−１６、エトポシド、フルダラビン、ドキソルビシン、アドリアマイシン、アムサクリン、カンプトテシン、シタラビンシクロホスファミド、代謝代謝物、メトトレキサート、トポイソメラーゼ阻害剤、カンプトテシン、ＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、キナーゼ阻害剤、ソラフェニブ、微小管毒、パクリタキセル、ＴＮＦ−α阻害剤、テニダップ、抗ＴＮＦ抗体、可溶性ＴＮＦ受容体、ヒドロキシ尿素、ラパマイシン、シロリムス、およびラパミューン、またはそれらの任意の組み合わせからなるグループから１つまたは複数の薬剤と別々に、連続してまたは同時に対象に投与される。
【００２７】
例示的な実施形態では、式１の化合物は、様々な形態の水性懸濁液、ナノ粒子、または錠剤、カプセルなどの固体状態に処方される。例示的な実施形態では、塩は、塩化物、リン酸塩、メシレート、ビスメシレート、トシレート、乳酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、ビス酢酸塩、またはクエン酸塩である。例示的な実施形態において、式１の化合物、式１の化合物の薬学的に許容される塩、互変異性体の薬学的に許容される塩は、約０．０１  ｍｇ／ｋｇから約１０  ｍｇ／ｋｇの総１日投与量で投与される。例示的な実施形態において、式１の化合物、式１の化合物の薬学的に許容される塩は、週に１回から５回投与される。
【００２８】
例示的な実施形態では、式１の化合物、式１の化合物の薬学的に許容される塩は、単位投与形態で投与され、ここでは、単位用量は、対象の体重に基づき約０．０１  ｍｇ／ｋｇから約１０  ｍｇ／ｋｇの化合物、互変異性体、および／または塩、または約０．０１  ｍｇ／ｋｇから約２０  ｍｇ／ｋｇの化合物、互変異性体、および／または塩である。
【００２９】
例示的な実施形態において、単位用量は、以下を提供するのに十分である：（ａ）対象の血漿中の化合物の約１０から４００ｎｇ  ／  ｍＬのＣ  ｍａｘ、または  対象に投与されたときの対象の血液、および／または（ｂ）投与の１２時間後の対象の血漿中の約１から５０ｎｇ  ／  ｍＬの化合物、または対象への投与の１２時間後の対象の血液中の約１から５０ｎｇ  ／  ｍＬの化合物、および／または（ｃ）投与の２４時間後の対象の血漿中の約０から５ｎｇ  ／  ｍＬの化合物、または対象への投与の２４時間後の対象の血液中の約０から５ｎｇ  ／  ｍＬの化合物、および／または（ｄ）式１の活性勾配は、対象への投与後４８時間以内に腫瘍において１〜２５ｎｇ  ／  ｍＬ（グラム）を維持する。  例示的な実施形態では、対象はヒトである。
【００３０】
例示的な実施形態では、式１の化合物は、本明細書に記載している実施形態のいずれかの化合物である。
【００３１】
例示的な実施形態では、医薬組成物は、本明細書で提供され、これには、式１の化合物、薬学的に許容される担体をさらに含むこの化合物の薬学的に許容される塩、から構成される。例示的な実施形態において、本開示は、対象における腫瘍性疾患または対象における腫瘍性疾患に関連する生物学的状態を治療するための医薬組成物の調製のための有効成分の使用を提供する。ここでは、有効成分は式１の化合物である。
【００３２】
例示的な実施形態では、式１の化合物は、本明細書に記載の実施形態のいずれかの化合物である。
【００３３】
一態様では、本発明は、式１の個々の化合物を化学的に合成するための方法を伴う。
【００３４】
一態様では、本発明は、式１の前述の化合物の水性懸濁液製剤を提示し、ここで、製剤は、生理食塩水および約０．１から約１０重量体積％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンといったシクロデキストリン系を含む生理食塩水に含まれる。いくつかの実施形態において、製剤は、いくつかの実施形態においては生理食塩水希釈前に、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンといった４０重量体積％のシクロデキストリン系を含有する式１の化合物を最大４０ｍｇ  ／  ｍＬ含むエタノール含有懸濁液の状態となる。いくつかの例示的な実施形態において、製剤は、最終的に有機溶媒を含まない状態となる。例示的な実施形態において、製剤は、生理食塩水中に０．１から１０重量体積％のヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンおよび０から４重量体積％のポリエチレングリコール４００を含むあるいは含まない１から５重量体積または重量％のＰＧを伴う。ここで、プロピレングリコールとポリエチレングリコールの組み合わせは、合計で１から５重量体積％である。
【００３５】
一態様では、本発明は、式１の化合物、または式１の化合物の薬学的に許容される塩を含むエタノール含有または無有機溶媒配合物を製造する方法を伴う。
【００３６】
例示的な実施形態において、シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである。例示的な実施形態では、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）は、生理食塩水中で約０．１から約１０重量体積％の最終濃度で水性懸濁液製剤中に存在する。例示的な実施形態では、他の溶媒は、プロピレングリコール（ＰＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００、およびＰＥＧ４００のうちの１つまたは複数から選択される。例示的な実施形態では、１つまたは複数のＰＧ、ＰＥＧ３００およびＰＥＧ４００は、懸濁状態の生理食塩水中に全体の約１から約５重量体積％、または粉末／錠剤の状態（重量％）で存在する。例示的な実施形態では、乳化剤はヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。いくつかの実施形態において、４０〜６０ｃｐｓの粘度を有するＨＰＭＣは、約２％から約５量体積％の最終濃度で製剤中に存在する。例示的な実施形態において、希釈後の最終濃度としての式１化合物は０．１から１０ｍｇ  ／  ｍＬの最終濃度で製剤中に存在する。
【００３７】
一態様では、本発明は、式１の化合物、または式１の化合物の薬学的に許容される塩を含む有機溶媒を含まない粉末／錠剤製剤を製造する方法を伴う。
【００３８】
別の態様において、本発明は、前述の式１の化合物の有機溶媒を含まない粉末カプセル／錠剤製剤を提供する。ここでは、製剤は、充填剤／結合剤／希釈剤（セルロース／セルロース誘導体、デンプン／デンプン誘導体、ラクトース）、崩壊剤（コロイド状二酸化シリコーン、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン）、流動促進剤（二塩基性リン酸カルシウム、コロイド状二酸化シリコーン）、潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ポリエチレングリコール、タルク）、抗菌剤／保存剤（プロピレングリコール／  ＰＧ、プロピレンパラベン、メチルパラベン、グリセリン）を含む。
【００３９】
次の態様では、本発明は、式１から選択される前述の化合物の無有機溶媒粉末カプセル／錠剤配合物を提供する。ここで、配合物は、微結晶性セルロース（ＭＣＣ、３０％〜８０％）、コーンスターチ（  ０％−４０％）、乳糖（１０％−２５％）、コロイド状二酸化シリコーン（１％−３％）、二塩基性リン酸カルシウム（１％−１０％）、ステアリン酸マグネシウム（０．２％−３％）、プロピレングリコール  （１％−５％）を含む。
【００４０】
別の態様では、本発明は、がんの治療のための腹腔内（ｉｐ  ／  ＩＰ  ／  ｉｐ）、静脈内（ｉｖ  ／  ｉｖ  ／  ＩＶ）または経口（ｐｏ  ／  ｐｏ）投与のための懸濁液にするための粉末を調整するため、０〜５％プロピレングリコール（ＰＧ）を含む生理食塩水といった水溶液に直接溶解したＨＰβＣＤ製剤化ＦＬ１１８複合粉末の無有機溶媒粉末を提供する。
【００４１】
前述の要約は、例示にすぎず、決して限定することを意図するものではない。  上記の例示的な態様、実施形態、および特徴に加えて、さらなる態様、実施形態、および特徴は、以下の図面および詳細な説明を参照することによって明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】図１は、ＦＬ１１８プラットフォームが、膵臓がん細胞における複数の抗アポトーシスタンパク質の発現を下方制御し、特定のアポトーシス促進タンパク質を上方制御することを示す：サブコンフルエントな膵臓がん細胞を、示されるようにＦＬ１１８で処理し、抗アポトーシスタンパク質ｓｕｒｖｉｖｉｎ、Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ  、およびｃＩＡＰ２ならびにアポトーシス促進タンパク質Ｂａｄ、Ｂｉｍ、およびＢａｘを、各タンパク質に対応する抗体を使用したウエスタンブロットによって検出した。ＧＡＰＤＨは、タンパク質ローディングの内部コントロールである。  ＰＡＮＣ１膵臓がん細胞株からの結果をＡに示し、ＭＩＡ  ＰａＣａ２（Ｍｉａ２）膵臓がん細胞株からの結果をＢに示す。
【００４３】
【図２】図２は、ＦＬ１１８プラットフォームによるアポトーシス、膵臓がん細胞死滅および細胞生存率阻害の誘導を示す：ＡおよびＢ、ＦＬ１１８処理は、カスパーゼ−３の活性化およびＰＡＲＰの切断をもたらす。サブコンフルエントな膵臓がん細胞（Ａ、ＰＡＮＣ１；  Ｂ、ＭＩＡ  ＰａＣａ２）は、示されているようにＦＬ１１８で処理され、カスパーゼ−３の活性化とＰＡＲＰの切断をウエスタンブロットによって検出した。ＧＡＰＤＨは、総タンパク質ローディングの内部コントロールである。Ｃ、ＦＬ１１８は膵臓がん細胞死を誘発する。サブコンフルエントなＰＡＮＣ１およびＭｉａ２膵臓がん細胞を、溶媒またはＦＬ１１８で１０、１００、および５００ｎＭで４８時間処理した。次に、サブＧ１  ＤＮＡ含有量（後期アポトーシス死細胞）をフローサイトメトリーで測定した。相対的なサブＧ１  ＤＮＡ産生レベルを分析し、データを３つの独立した試験から導き出し、平均値±ＳＤとしてヒストグラムとして示した。Ｄ、ＦＬ１１８は膵臓がん細胞の生存率を阻害する。サブコンフルエントなＭｉａ２、ＰＡＮＣ１、ＢｘＰＣ３膵臓がん細胞、および正常なヒト皮膚線維芽細胞を、７２時間示された溶媒（ＦＬ１１８なし）または一連のＦＬ１１８濃度で処理した。次に、ＭＴＴアッセイを用いて細胞生存率を決定した。データは、３つの独立した試験から得られた平均±ＳＤのヒストグラムとして示した。
【００４４】
【図３】図３は、膵臓がん細胞のＤＮＡ損傷および修復に関与するタンパク質の発現に対するＦＬ１１８プラットフォームの効果を示す：Ａ、サブコンフルエントなＰＡＮＣ１膵臓がん細胞は、示されたＦＬ１１８で処理され、ＥＲＣＣ１、ＥＲＣＣ６、  γ−Ｈ２ＡＸ、ＣｈＫ１、ＣｈＫ２、ＡＴＭ、ＡＴＲ、ＲＡＤ５１、およびＤＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩを、各タンパク質に対応する抗体を使用したウエスタンブロットによって検出した。ＧＡＰＤＨは、タンパク質ローディングの内部コントロールである。Ｂ、ＥＲＣＣ６発現の減少は、プロテアソーム阻害剤ＭＧ１３２で救出することができる。サブコンフルエントなＳＫＯＶ３細胞を、ＦＬ１１８とＭＧ１３２を単独で、または組み合わせて８時間処理した後、ＥＲＣＣ６抗体を用いたウエスタンブロット分析を行った。チューブリンは、タンパク質ローディングの内部コントロールである。Ｃ、ＥＲＣＣ６発現に対するＦＬ１１８とトポテカン（ＴＯＰ）の効果の比較。  サブコンフルエントなＳＫＯＶ３細胞をＦＬ１１８またはＴＯＰで８時間処理した後、ＥＲＣＣ６抗体でウエスタンブロット分析を行った。  チューブリンは、タンパク質ローディングの内部コントロールである。
【００４５】
【図４】図４は、ＦＬ１１８プラットフォームは、薬剤耐性ＧＦＰｃＯＤＣ陽性Ａ２７８０ＣＰ細胞を排除することができるが、シスプラチンはできない。：ＡおよびＢ、サブコンフルエントな細胞をシスプラチン（Ｃｉｓ）の存在下、非存在下で７２時間処理した。細胞の位相差およびＧＦＰイメージングをデジタルで撮影した。  ＣおよびＤ、薬剤耐性ＧＦＰｃＯＤＣ陽性Ａ２７８０ＣＰ細胞の変化率に対するシスプラチン（Ｃ）およびＦＬ１１８（Ｄ）処理のそれぞれの定量的効果。  図４は、ＦＬ１１８プラットフォームは薬剤耐性ＧＦＰｃＯＤＣ陽性Ａ２７８０ＣＰ細胞を排除できるが、シスプラチンはできない。ＡおよびＢ、サブコンフルエントな細胞をシスプラチン（Ｃｉｓ）の存在下、非存在下で７２時間処理した。  細胞の位相差およびＧＦＰイメージングをデジタルで撮影した。  ＣおよびＤ、薬剤耐性ＧＦＰｃＯＤＣ陽性Ａ２７８０ＣＰ細胞の変化率に対するシスプラチン（Ｃ）およびＦＬ１１８（Ｄ）処理のそれぞれの定量的効果。
【００４６】
【図５】図５は、ＦＬ１１８プラットフォームが増殖性がん細胞および潜在性幹細胞様がん細胞の両方を標的とすることを示している：Ａ、ＦＬ１１８−シスプラチンの組み合わせは、ＰＡＮＣ１細胞の死滅を増強する。死細胞はトリパンブルー排除によって決定された。  Ｂ、ＧＦＰｃＯＤＣ陽性細胞は、トリパンブルー排除アッセイで評価され、５０μＭシスプラチンで４日間生存する。  Ｃ、ＦＬ１１８−シスプラチンはＧＦＰｃＯＤＣ陽性（薬剤耐性）細胞を死滅させる（矢印）。細胞の位相差およびＧＦＰイメージングをデジタルで撮影した。  Ｄ、ＦＬ１１８−シスプラチンの組み合わせは、ＰＡＮＣ１スフェロイド細胞数を減少させる。  ＊、Ｐ  ＜０．００１。  ＦＬ、ＦＬ１１８；  Ｔ、時間。  Ｅ、膵臓がん幹細胞球形成に対するＦＬ１１８の効果。  詳細については、メソッドのセクションを参照のこと。  Ｆ、ＣＤ４４幹細胞マーカー陽性膵臓がん細胞のコロニー形成。  Ｇ、図５Ｆに示されているデータから得られた定量的データ。
【００４７】
【図６】図６は、シスプラチンと組み合わせたＦＬ１１８プラットフォームの存在下、非存在下で同所移植ＬｕｃＰＡＮＣ１モデルを用いて膵臓腫瘍の増殖および転移をモニターするためのｉｎ  ｖｉｖｏイメージングを示す：モデルの設定は方法に記載した。  ＬｕｃＰＡＮＡ１細胞の同所移植の数日後、ｑｗ  ｘ  ４スケジュールで示されるように、マウスをＦＬ１１８とシスプラチンの存在下、非存在下で処理した。  Ａ、ＦＬ１１８およびシスプラチンの存在下、非存在下で処理されたマウス全身の生物発光画像（７、６０、７０および９０日目を表示）。  Ｂ、生物発光画像（ＢＬＩ）の腫瘍増殖曲線は、経時的な総フラックスとして示された。  ｄ、日／日数。
【００４８】
【図７】図７は、ＦＬ１１８プラットフォーム単独またはゲムシタビンとの組み合わせによる膵臓がんＰＤＸ阻害の高い有効性を示す：ＰＤＸ腫瘍は、もともと、クリニックの疾患の転移部位から得られた膵臓がん患者の腫瘍組織から確立された。ヒト膵臓がんＰＤＸ腫瘍のマウスモデルは、ＳＣＩＤマウスの脇腹に３０〜４０ｍｇの腫瘍組織を皮下接種することによって設定された。  ＦＬ１１８プラットフォーム薬は、経口投与用として生理食塩水（濃厚水溶液）中に２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）および１％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む薬物担体としてＨＰβＣＤ（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）を含む無有機溶媒で調整された。膵臓がんＰＤＸ腫瘍は、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスで維持された。実験的ＳＣＩＤマウスに、マウスの脇腹に個々の膵臓がんＰＤＸ腫瘍を皮下移植した。移植された腫瘍が１００〜３００ｍｍ３に成長してから７〜１４日後（０日目として指定）、示されているように（矢印）毎週４回（ｑｗ  ｘ  ４）、ＦＬ１１８を最大耐量の約半分の用量（１  ／  ２ＭＴＤ、５ｍｇ  ／  ｋｇ）（Ａ、Ｂ、Ｃ）、または６０  ｍｇ  ／  ｋｇ（〜１  ／  ２ＭＴＤ）ゲムシタビンと組み合わせた０．７５  ｍｇ  ／  ｋｇの用量（Ｄ）で腹腔内注射（ｉｐ  ／  ＩＰ）により投与した。Ａ、膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍。  Ｂ、膵臓がんＰＤＸ１７６２４腫瘍の結果。  ＣおよびＤ、膵臓がんＰＤＸ１０９７８腫瘍の結果。各曲線は、５匹のマウス（グループあたり５匹のマウス）から得られた平均±ＳＤを表す。  Ｅ、図７Ｄに示されているのと同じデータが、実験中の腫瘍の実際のサイズを示すために腫瘍体積形式で提示された。
【００４９】
【図８】図８は、マウスおよびイヌの両方の動物における治療中の動物の体重変化に対するＦＬ１１８プラットフォームの好ましい効果を示している：モデルの設定は、方法に記載されている。  Ａ、ＢＡＬＢ  ／  ｃｊマウスの体重変化に対するＦＬ１１８の効果。  溶媒およびＦＬ１１８ＭＴＤ投与レベル（１０ｍｇ  ／  ｋｇ）の結果は、ｑｗ  ｘ  ４（矢印）を介した経口経路で示された。  体重曲線は、６匹の独立したＢＡＬＢ  ／  ｃｊマウスから得られた平均値±ＳＤから得られた。  ＢおよびＣ、ビーグル犬の体重変化に対するＦＬ１１８の影響。  ０．５５ｍｇ  ／  ｋｇ（１  ／  ４ＭＴＤ）、１．１ｍｇ  ／  ｋｇ（１  ／  ２ＭＴＤ）および２．２ｍｇ  ／  ｋｇ（ＭＴＤ）の投与レベルでの溶媒およびＦＬ１１８の結果は、１日目および８日目のＦＬ１１８の経口投与で示された。  体重のヒストグラムは、２匹のオスまたは２匹のメスのビーグル犬から得られた平均±ＳＤから得られた。
【００５０】
【図９】図９は、ＦＬ１１８プラットフォームの経口投与の薬物動態（ＰＫ）の結果を示している。  ＳＣＩＤマウスにヒト結腸ＳＷ６２０およびＨＴ−２９腫瘍を皮下移植した。  移植された腫瘍が６００−１０００ｍｍ３に成長した後、ＦＬ１１８は１．５ｍｇ  ／  ｋｇで経口投与された。  次に、血液および腫瘍組織を３０分、１時間、４時間、８時間、１２時間、および２４時間で収集した。  各時点で３匹のＳＣＩＤマウスを使用した。  サンプル分析については、メソッドで説明した。  各曲線は、Ｅｘｃｅｌソフトウェアを使用して分析された３匹のマウスからの平均薬物濃度±ＳＤである。
【００５１】
【図１０】図１０は、ＨＴ−３網膜芽細胞腫異種移植腫瘍におけるＦＬ７ｓ−３、ＦＬ７ｓ−４およびＦＬ７ｓ−７のＦＬ１１８類似体の抗腫瘍効果および毒性の確認的再試験を示している。ヒトＨＴ−３網膜芽細胞腫異種移植腫瘍は、１００〜２００  μＬの培地に２〜５  ｘ  １０６個のＨＴ−３細胞を皮下注射することにより、最初に確立された。  ＨＴ−３異種移植片のマウスモデルは、ＳＣＩＤマウスの脇腹に３０〜４０ｍｇの腫瘍組織を皮下接種することによって設定された。個々の化合物による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後に開始された（０日目と指定）。治療スケジュールは、矢印のように経口薬投与（ｑ７ｄ  ｘ  ４）による４回の毎週とした。個々の化合物は、経口投与用として生理食塩水（濃厚水溶液）中に２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）および１％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む薬物担体としてＨＰβＣＤを含む無有機溶媒で調整された。溶媒は、薬物を含まない同じ濃厚な水性懸濁液である。  Ａ．実験期間中のＦＬ７ｓ−３処理異種移植腫瘍曲線プロファイル（左パネル）および体重プロファイル（右パネル）。  Ｂ．実験期間中のＦＬ７ｓ−４処理異種移植腫瘍曲線プロファイル（左パネル）および体重プロファイル（右パネル）。  Ｃ．実験期間にわたるＦＬ７ｓ−７で処理された異種移植片腫瘍曲線プロファイル（左パネル）および体重プロファイル（右パネル）。注釈として、溶媒で治療されたＨＴ−３網膜芽細胞腫腫瘍を有するＳＣＩＤマウスは、腫瘍のサイズが大きすぎるため、３週間で安楽死させられた。
【００５２】
【図１１】図１１は、ＨＴ−３網膜芽細胞腫異種移植腫瘍におけるＦＬ７−５およびＦＬ７−１５のＦＬ１１８類似体の抗腫瘍効果および毒性の確認試験を示す。  ヒトＨＴ−３網膜芽細胞腫腫瘍のマウスモデルは、図１０に示すように確立された。個々の化合物による治療は、移植された腫瘍が１００〜１５０  ｍｍ３に達してから７〜１４日後に開始された（０日目と指定）。  治療スケジュールは、溶媒としての生理食塩水中に２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシルプロピルメチルセルラーゼ）および１％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む無有機溶媒ＨＰβＣＤ濃厚水溶液を使用して、矢印で示すように、週４回の経口投与（ｑ７ｄ  ｘ  ４）である。  Ａ．実験期間中のＦＬ７−５で処理された異種移植腫瘍曲線プロファイル（左パネル）および体重プロファイル（右パネル）。  Ｂ．実験期間中のＦＬ７−１４処理異種移植腫瘍曲線プロファイル（左パネル）および体重プロファイル（右パネル）。注釈、ｓａｃ：犠牲にする。
【００５３】
【図１２】図１２は、ＨＴ−３網膜芽細胞腫異種移植腫瘍モデルにおける、ＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体、ＦＬ７Ｎ−１、ＦＬ７Ｎ−２およびＦＬ７Ｎ−３の抗腫瘍効果および毒性を示す。ヒトＨＴ−３網膜芽細胞腫腫瘍のマウスモデルと製剤は図１０に記載されているものと同様である。個々の化合物による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７日後（０日目と指定）に開始された。ヒトＨＴ−３網膜芽細胞腫異種移植腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されるように、一回の経口投与により治療された。Ａ．実験期間全体（左パネル）および治療後の最初の２０日間（中央パネル）のＦＬ７Ｎ−１異種移植腫瘍曲線プロファイル。動物の体重プロファイルは、実験期間中の右側のパネルに示された。  Ｂ．実験期間全体（左パネル）および治療後の最初の１５日間（中央パネル）のＦＬ７Ｎ−２異種移植腫瘍曲線プロファイル。動物の体重プロファイルは、実験期間中の右側のパネルに示された。  Ｃ．実験期間全体（左パネル）および治療後の最初の８日間（中央パネル）のＦＬ７Ｎ−３異種移植腫瘍曲線プロファイル。動物の体重プロファイルは、実験期間中の右側のパネルに示された。注釈として、腫瘍が１５００ｍｍ３に達したときにすべてのマウスを安楽死させた。したがって、個々のマウスは、治療が行われた時点で腫瘍サイズが異なっていたため、腫瘍サイズの異なるパーセンテージで異なる日に安楽死させられた。
【００５４】
【図１３】図１３は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体ＦＬ７Ｎ−１の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍はもともと、クリニックの転移部位から得られた膵臓がんおよび結腸直腸がん患者の腫瘍組織からの重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスで確立された。  ＦＬ１１８プラットフォーム薬は、経口投与用として生理食塩水（濃厚水溶液）中に２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）および１％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む薬物担体としてＨＰβＣＤを含む無有機溶媒で調整された。溶媒は、薬物を含まない同じ濃厚な水性懸濁液である。実験用ＳＣＩＤマウスには、ＳＣＩＤマウスの側面領域（ＰＤＸ１４２４４の場合は左側、ＰＤＸ２７４５４の場合は右側）に３０〜４０  ｍｇの個別のＰＤＸ腫瘍（メンテナンスマウスから分離）を皮下移植した。溶媒または薬物による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００ｍｍ３に達してから７〜１４日後に開始された（０日目と指定）。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、毎週３回経口投与により治療された。  Ａ．溶媒またはＦＬ７Ｎ１治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒またはＦＬ７Ｎ１治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒またはＦＬ７Ｎ−１処置後の動物の体重変化プロファイルが実験期間にわたって示された。
【００５５】
【図１４】図１４は、ＳＷ６２０結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、ＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体、Ｗ−ｂ１、Ｗ−ｂ２およびＷ−ｂ３の抗腫瘍効果および毒性を示す。ヒトＳＷ６２０異種移植腫瘍のマウスモデルと製剤は、図１０に記載されているものと同様である。個々の化合物による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７日後（０日目と指定）に開始された。ヒトＳＷ６２０異種移植腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されるように、毎週２回経口投与により治療された。  Ａ．実験期間中のＷ−ｂ１異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。  Ｂ．実験期間中のＷ−ｂ２異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。  Ｃ．実験期間中のＷ−ｂ３異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。
【００５６】
【図１５】図１５は、ＳＷ６２０結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおける、ＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体、Ｗ−ｂ４、Ｗ−ｂ５およびＷ−ｂ６の抗腫瘍効果および毒性を示す。ヒトＳＷ６２０異種移植腫瘍のマウスモデルと製剤は、図１０に記載されているものと同様である。個々の化合物による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７日後（０日目と指定）に開始された。ヒトＳＷ６２０異種移植腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されるように、週２回経口投与により治療された。  Ａ．実験期間中のＷ−ｂ４異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。  Ｂ．実験期間中のＷ−ｂ５異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。  Ｃ．実験期間中のＷ−ｂ６異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。
【００５７】
【図１６】図１６は、ＳＷ６２０結腸直腸がん異種移植腫瘍モデルにおけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体、Ｗ−ｂ７、Ｗ−ｂ９およびＷ−ｂ１０の抗腫瘍効果および毒性を示す。ヒトＳＷ６２０異種移植腫瘍のマウスモデルと製剤は、図１０に記載されているものと同様である。個々の化合物による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７日後（０日目と指定）に開始された。ヒトＳＷ６２０異種移植腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、週１〜２回経口投与により治療された。  Ａ．実験期間中のＷ−ｂ１異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。  Ｂ．実験期間中のＷ−ｂ２異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。  Ｃ．実験期間中のＷ−ｂ３異種移植腫瘍曲線プロファイル（上のパネル）。動物の体重変化プロファイルは、実験期間中の下のパネルに示された。
【００５８】
【図１７】図１７は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体Ｈｘ−４の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されたものと同様である。溶媒およびＨｘ−４によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍は１００〜２００  ｍｍ３に達した７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、週３回経口投与により治療された。  Ａ．溶媒またはＨｘ−４治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒またはＨｘ−４治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒またはＨｘ−４処理後の動物の体重変化プロファイルが実験期間にわたって示された。
【００５９】
【図１８】図１８は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体Ｈｘ−５の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成物、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されたものと同様である。溶媒およびＨｘ−５によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した後の日数（０日目と指定）に開始された。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、週３回経口投与により治療された。  Ａ．溶媒またはＨｘ−５治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒またはＨｘ−５治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒またはＨｘ−５処置後の動物の体重変化プロファイルが実験期間にわたって示された。
【００６０】
【図１９】図１９は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体Ｈｘ−６の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成物、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されたものと同様である。溶媒およびＨｘ−６によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、毎週３回経口投与により治療された。  Ａ．溶媒またはＨｘ−６治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒またはＨｘ−６治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒またはＨｘ−６処置後の動物の体重変化プロファイルが実験期間にわたって示された。
【００６１】
【図２０】図２０は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体Ｈｘ−６の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成物、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されたものと同様である。溶媒およびＨｘ−７によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、週３回経口投与により治療された。  Ａ．溶媒またはＨｘ−７治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒またはＨｘ−７治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒またはＨｘ−７処置後の動物の体重変化プロファイルが実験期間にわたって示された。
【００６２】
【図２１−１】図２１−１は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体７Ｑ６の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ６によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は移植された腫瘍は１００〜２００  ｍｍ３に達した７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、週４回経口投与により治療された（１コース／サイクル）。  Ａ．溶媒または７Ｑ６治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ６治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒または７Ｑ６処置後の動物の体重変化プロファイルが、実験期間にわたって示された。
【００６３】
【図２１−２】図２１−２は、動物モデルにおける結腸直腸がん（２７４５４）患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体７Ｑ６の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ６によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７〜１４日後（０日目と指定）に、示されているように（矢印）、それぞれ１回だけ腹腔内投与により開始された。  Ａ．溶媒または７Ｑ６治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ６処理後の動物の体重変化プロファイルが示された。
【００６４】
【図２２】図２２は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体７Ｑ９の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ９によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、週４回経口により治療された（１コース／サイクル）。  Ａ．溶媒または７Ｑ９治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ９治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒または７Ｑ９処置後の動物の体重変化プロファイルが、実験期間にわたって示された。
【００６５】
【図２３】図２３は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体７Ｑ２４の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ２４によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍は１００〜２００  ｍｍ３に達した７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、週４回経口投与により治療された（１コース／サイクル）。  Ａ．溶媒または７Ｑ２４治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ２４治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒または７Ｑ２４処置後の動物の体重変化プロファイルが実験期間にわたって示された。
【００６６】
【図２４】図２４は、動物モデルにおける結腸直腸がん（２７４５４）患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体７Ｑ２８の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ２８によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、矢印で示されているように、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後（０日目と指定）にそれぞれ１回だけ腹腔内投与により開始された。  Ａ．溶媒または７Ｑ２８治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ２８処理後の動物の体重変化プロファイルが示された。注釈として、７Ｑ２８の経口投与は７Ｑ２８の抗腫瘍効果を低下させる（データは示されていない）。
【００６７】
【図２５】図２５は、動物モデルにおける結腸直腸がん（２７４５４）患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体７Ｑ３１の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ３１によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、矢印で示されているように、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後（０日目と指定）にそれぞれ１回だけ腹腔内投与により開始された。  Ａ．溶媒または７Ｑ３１治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ３１処置後の動物の体重変化プロファイルが示された。注釈として、７Ｑ３１の経口投与は７Ｑ２８の抗腫瘍効果を低下させる（データは示されていない）。
【００６８】
【図２６】図２６は、動物モデルにおける結腸直腸がん（２７４５４）患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体７Ｑ３２の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、経口（ｐ．ｏ．）投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ３２によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、矢印で示されているように、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後（０日目と指定）に毎週ｘ  ４（１サイクル／コース）経口投与により開始された。  Ａ．溶媒または７Ｑ３２治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ３２処理後の動物の体重変化プロファイルが示された。注釈として、７Ｑ３２の腹腔内投与は、７Ｑ３２の経口投与と比較して、動物に対する７Ｑ３２の毒性を増加させる（データは示されていない）。
【００６９】
【図２７】図２７は、動物モデルにおける結腸直腸がん（２７４５４）患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体７Ｑ３５の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ３５によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、矢印で示されているように、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後（０日目と指定）にそれぞれ１回だけ腹腔内投与により開始された。  Ａ．溶媒または７Ｑ３５治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ３５処置後の動物の体重変化プロファイルが示された。  注釈として、７Ｑ３５の経口投与は７Ｑ３５の抗腫瘍効果を低下させる（データは示されていない）。
【００７０】
【図２８】図２８は、動物モデルにおける結腸直腸がん（２７４５４）患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体７Ｑ３６の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。  ＰＤＸ腫瘍の確立、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および７Ｑ３６によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、矢印で示されているように、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後（０日目と指定）にそれぞれ１回だけ腹腔内投与により開始された。  Ａ．溶媒または７Ｑ３６治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または７Ｑ３６処置後の動物の体重変化プロファイルが示された。  注釈として、７Ｑ３６の経口投与は、８０％以上の７Ｑ３５抗腫瘍効果を失う（データは示されていない）。
【００７１】
【図２９】図２９は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体９Ｑ１０（９−１０）の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および９Ｑ１０（９−１０）によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、毎週３回経口投与により治療された。Ａ．溶媒または９Ｑ１０（９−１０）治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または９Ｑ１０（９−１０）治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒または９Ｑ１０（９−１０）処置後の動物の体重変化プロファイルが実験期間にわたって示された。注釈として、溶媒マウスの体重変化は１０％以内だった。
【００７２】
【図３０】図３０は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体９Ｑ１７（９−１７）の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および９Ｑ１７（９−１７）によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、毎週３回経口投与により治療された。  Ａ．溶媒または９Ｑ１７（９−１７）治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または９Ｑ１７（９−１７）治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒または９Ｑ１７（９−１７）処置後の動物の体重変化プロファイルが実験期間にわたって示された。注釈として、溶媒マウスの体重変化は１０％以内だった。
【００７３】
【図３１】図３１は、動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来の類似体９Ｑ１８（９−１８）の抗腫瘍効果および毒性（体重変化）を示す。ＰＤＸ腫瘍の確立、経口投与用の製剤、溶媒組成、およびＰＤＸ腫瘍調製物の実験的ＳＣＩＤマウスは、図７および１３に記載されているものと同様である。溶媒および９Ｑ１８（９−１８）によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、毎週３回経口投与により治療された。  Ａ．溶媒または９Ｑ１８（９−１８）治療後に得られた膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒または９Ｑ１８（９−１８）治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｃ．溶媒または９Ｑ１８（９−１８）処置後の動物の体重変化プロファイルが、実験期間にわたって示された。注釈として、溶媒マウスの体重変化は１０％以内だった。
【００７４】
【図３２】図３２は、ヒトにおける２つの異なる製剤レシピ（レシピ１：有機溶媒を含まない水性懸濁液対レシピ２：エタノール−水性懸濁液）における例としてのＦＬ１１８の抗腫瘍効果および毒性（体重減少）の比較を示す。  ＳＣＩＤマウスモデルのＵＭＵＣ３膀胱がん異種移植腫瘍：ＵＭＵＣ３異種移植腫瘍は、１００〜２００  μＬの培地に２〜５  ｘ１０６個のＵＭＵＣ３細胞を皮下注射することによって最初に確立された。  ＵＭＵＣ３異種移植片のマウスモデルは、ＳＣＩＤマウスの脇腹に３０〜４０ｍｇの腫瘍組織を皮下接種することによって設定された。有機溶媒を含まないＦＬ１１８水溶液とエタノール−ＦＬ１１８水溶液の懸濁液による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達した７〜１４日後（０日目と指定）に開始された。治療スケジュールは、矢印のように週４回の経口薬投与（ｑ７ｄ  ｘ  ４）である。  Ａ．有機溶媒を含まないＦＬ１１８水溶液（レシピ１）とエタノール−ＦＬ１１８水溶液（レシピ２）の抗腫瘍活性の比較。  Ｂ．有機溶媒を含まないＦＬ１１８水溶液（レシピ１）とエタノール−ＦＬ１１８水溶液（レシピ２）の毒性（体重減少）の比較。
【００７５】
【図３３】図３３は、動物モデルにおいてヒト結腸直腸がん（２７４５４）患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍で試験された噴霧乾燥プロセスを伴う利便的かつ臨床的に適合性のある製剤におけるＦＬ１１８の抗腫瘍効果および毒性（体重減少）を示す。  ＦＬ１１８は、ＨＰβＣＤ（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）を使用してエタノール溶液に配合し、噴霧乾燥プロセスを使用してＦＬ１１８−ＨＰβＣＤ配合の複合粉末を得た。  ＦＬ１１８−ＨＰβＣＤ複合粉末を４００メッシュ（３７ミクロン）以下の粒子サイズに粉砕し、続いて５％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む生理食塩水に溶解して懸濁液を作成してから経口投与した。溶媒は、ＦＬ１１８を含まない同等のＨＰβＣＤを含む５％ＰＧの生理食塩水である。実験的ＳＣＩＤマウスにおけるＰＤＸ腫瘍の確立は、図７および１３に記載されたものと同様である。溶媒およびＦＬ１１８によるＰＤＸ腫瘍ＳＣＩＤマウス治療は、移植された腫瘍が７〜１４日で１００〜２００  ｍｍ３（０日目と指定）に達した後、矢印で示されているように週４回経口投与により治療された。Ａ．溶媒またはＦＬ１１８治療後に得られた結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍曲線プロファイル。  Ｂ．溶媒またはＦＬ１１８処置後の動物の体重変化プロファイルが示された。
【発明を実施するための形態】
【００７６】
表１：ＢＡＬＢ／ｃｊマウスの血液学的パラメーターに対するＦＬ１１８の効果。
【００７７】
表２：ＢＡＬＢ／ｃｊマウス血清生化学的パラメーターに対するＦＬ１１８の効果。
【００７８】
表３：ビーグル犬の血液学的パラメータに対するＦＬ１１８の効果。
【００７９】
表４：ビーグル犬の血清生化学的パラメーターに対するＦＬ１１８の効果。
【００８０】
表５：ＦＬ１１８  ７Ｑシリーズ誘導体のＩｎ  ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性（μＭ濃度でのＩＣ５０／ＥＣ５０）。
【００８１】
表６：ＦＬ１１８  ９Ｑシリーズ誘導体のＩｎ  ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性（μＭ濃度でのＩＣ５０／ＥＣ５０）。
【００８２】
表７：ｎＭ濃度でのがん細胞におけるＦＬ７ｓおよびＦＬ７シリーズＩＣ５０／ＥＣ５０。
【００８３】
表８：ｎＭ濃度でのがん細胞におけるＦＬ７ＮシリーズＩＣ５０／ＥＣ５０。
【００８４】
表９：ｎＭ濃度でのがん細胞におけるＷｂシリーズＩＣ５０／ＥＣ５０。
【００８５】
表１０：ｎＭ濃度でのがん細胞におけるＨｘシリーズＩＣ５０／ＥＣ５０。
【００８６】
表１１：ＦＬ１１８毒性およびＭＴＤ研究のためのビーグル犬の実験計画。
【００８７】
表１２：リガンドアフィニティー精製およびタンパク質プロトアレイのトリチウム（３Ｈ）標識リガンドスクリーニングを通じてリガンド（ＦＬ１１８およびＦＬ１１８類似体）を使用して同定された潜在的な生化学的バイオマーカーおよび標的。
発明の詳細な説明
【００８８】
本開示は、とりわけ、抗がん剤として機能する新規のクラスの化合物に関する。  同様に、ヒトの疾患の治療および／または予防におけるそのような化合物の合成および有用性のための方法が本明細書に開示されている。  本開示はさらに、治療を必要とする対象のための治療的および／または予防的適応症を有する化合物の医薬製剤に関係する。
【００８９】
本明細書で使用される特定の用語の定義を以下に提供する。  別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、一般に、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。  本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、内容が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象を含む。  例えば、「化合物」への言及は、２つ以上の化合物の組み合わせなどを含む。
用語
【００９０】
本明細書で使用される場合、「約」は当業者によって理解され、それが使用される状況に応じてある程度変化する。  当業者には明らかでない用語の使用がある場合、それが使用される文脈を考えると、「約」は、列挙された値の±１０％までを意味する。    
【００９１】
本明細書で使用される場合、薬剤または薬物、例えば、１つまたは複数の抗アポトーシスタンパク質および／またはシグナル伝達阻害剤化合物、の対象または複数の対象への「投与」は、化合物が意図された機能を発揮するため、対象に導入または送達する任意の経路を含む。投与は、経口、鼻腔内、吸入、非経口（静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下）、直腸、または局所を含む任意の適切な経路によって実施することができる。投与は、自己投与と他者による投与が含まれる。  記載されるような病状の治療または予防の様々な方法は、「実質的」を意味することを意図し、これは、全体的であるが全体的ではない治療／予防を含み、生物学的または医学的に関連する結果が達成されることも考慮されたい。
【００９２】
本明細書で使用される場合、「評価する」、「評価する」、「決定する」、および「測定する」という用語は交換可能に使用され、定量的および定性的決定の両方を含む。  これらの用語は、あらゆる形式の測定を指し、特性、特性、または特徴が存在するかどうかの判断を含む。  評価は相対的または絶対的である可能性がある。  「存在の評価」には、存在および／または存在しないものの量を決定することが含まれる。
【００９３】
本明細書で使用される場合、「臨床的要因」という用語は、１つまたは複数の疾患を治療または予防するための診断、予後、または治療レジメンを決定する際に開業医が考慮し得る任意のデータを指す。  このような要因には、患者の病歴、患者の身体検査、全血球計算、血球または骨髄細胞の検査、細胞遺伝学、肺の健康、疾患の血管の兆候、および細胞の免疫表現型が含まれるが、これらに限定されない。
【００９４】
本明細書で使用される場合、２つ以上のサンプル、治療に対する応答、または薬物を比較する文脈における「比較可能」または「対応する」という用語は、それぞれで使用される同じタイプのサンプル、応答、治療、および薬物を比較して用いられる。いくつかの実施形態では、同等のサンプルが、同じ個体から異なる時間に得られ得る。  他の実施形態では、比較可能なサンプルは、異なる個人、例えば、患者および健康な個人から取得することができる。  一般に、比較可能なサンプルは、制御目的で共通因子によって正規化される。
【００９５】
本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、特定の量の特定の成分を含む製品、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接的または間接的に生じる任意の製品を指す。
【００９６】
本明細書で使用される場合、「診断」という用語は、疾患または障害を検出すること、または疾患または障害の段階または程度を決定することを意味する。典型的には、疾患または障害の診断は、疾患を示す１つまたは複数の要因および／または症状の評価に基づく。すなわち、疾患または状態の存在または不在を示す因子の存在、不在または量に基づいて診断を行うことができる。特定の疾患の診断を示すと考えられる各要因または症状は、特定の疾患に排他的に関連している必要はない。つまり、診断要因または症状から推測できる鑑別診断が存在する場合がある。同様に、特定の疾患を示す要因または症状が、特定の疾患を持たない個人に存在する場合がある。「診断」という用語はまた、薬物療法の治療効果を決定すること、または薬物療法に対する反応のパターンを予測することを包含する。診断方法は、独立して、または特定の疾患または障害について医学技術で知られている他の診断および／または病期分類方法と組み合わせて個々に使用することができる。
【００９７】
本明細書で使用される場合、「薬物」、「化合物」、「活性剤」、「薬剤」、「活性剤」、「医薬組成物」、「医薬製剤」、および「薬理学的に活性な薬剤」という用語は、互換的に使用され、投与に適しており、有益な生物学的効果、適切には疾患または異常な生理学的状態の治療における治療効果を有する、荷電または非荷電の任意の化学的化合物、複合体または組成物を指すが、効果は本質的に予防的であり得る。これらの用語はまた、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝物、類似体などを含むがこれらに限定されない、本明細書で具体的に言及されるそれらの活性剤の薬学的に許容される薬理学的に活性な誘導体を包含する。  「活性剤」、「薬理学的活性剤」、および「ＡＰＩ」（医薬品有効成分）という用語が使用される場合、または特定の活性剤が具体的に特定される場合、出願人は、薬剤自体、ならびに薬学的に許容される薬理学的に活性な塩、エステル、アミド、プロドラッグ、コンジュゲート、代謝物、類似体などの活性剤を含めることを意図することを考慮されたい。
【００９８】
本明細書で使用される場合、組成物の「有効量」または「薬学的に有効な量」または「治療的に有効な量」という用語は、所望の治療的および／または予防的効果を達成するのに十分な量、例えば、結果として生じる量、治療中の病気に関連する症状の予防または減少する量である。対象に投与される本発明の組成物の量は、疾患のタイプおよび重症度、ならびに一般的な健康、年齢、性別、体重および薬物に対する耐性などの個体の特徴に依存し得る。また、病気の程度、重症度、種類によっても異なる。  当業者は、これらおよび他の要因に応じて適切な投与量を決定することができるであろう。  本発明の組成物はまた、１つ以上の追加の治療用化合物と組み合わせて投与することができる。  
【００９９】
本明細書で使用される場合、「腫瘍性疾患」という用語は、任意の種類および起源のがん、ならびにその前駆体段階を指す。  したがって、「腫瘍性疾患」という用語は、「新生物」、「新生物」、「がん」、「前がん」または「腫瘍」という用語によって識別される主題を含む。  腫瘍性疾患は一般に、特定の細胞集団の異常なレベルをもたらす異常な細胞分裂によって明らかになる。  同様に、内皮細胞のモノクローナル増殖は、肺細動脈内皮細胞の「新生物」を指す場合がある。  さらに、腫瘍性疾患の根底にある異常な細胞分裂は、通常、細胞に固有のものであり、感染または炎症に対する正常な生理学的反応ではない。  いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法を使用して診断するための腫瘍性疾患には、がん腫が含まれる。  「がん腫」とは、良性または悪性の上皮性腫瘍を意味する。
【０１００】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、無機塩基、有機塩基、無機酸、有機酸、または塩基性または酸性アミノ酸を有する塩を含む。無機塩基の塩として、本発明は、例えば、ナトリウムまたはカリウムなどのアルカリ金属、カルシウムやマグネシウム、アルミニウムなどのアルカリ土類金属。とアンモニアを含む。有機塩基の塩として、本発明は、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミンを含む。無機酸の塩として、本発明は、例えば、塩酸、ヒドロホウ酸、硝酸、硫酸、およびリン酸を含む。有機酸の塩として、本発明は、例えば、ホルミン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、乳酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸を含む。ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸。塩基性アミノ酸の塩として、本発明は、例えば、アルギニン、リシンおよびオルニチンを含む。酸性アミノ酸には、例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸が含まれる。
【０１０１】
本明細書で使用される場合、「予後」という用語は、臨床状態または疾患の予想される経過および結果の予測を指す。予後は通常、疾患の好ましいまたは好ましくない経過または結果を示す疾患の要因または症状を評価することによって行われる。本明細書で使用される「予後を決定する」という句は、当業者が患者の状態の経過または結果を予測することができるプロセスを指す。「予後」という用語は、状態の経過または結果を１００％の精度で予測する能力を指すものではない。代わりに、当業者は、「予後」という用語が、特定の経過または結果が生じる可能性の増加を指すことを理解するであろう。つまり、特定の状態を示している患者では、その状態を示していない個人と比較して、経過または結果が発生する可能性が高くなる。本明細書で使用される「好ましい予後」および「陽性の予後」、または「好ましくない予後」および「陰性の予後」という用語は、状態または疾患の予想される経過および／または予想される結果を予測するための相対的な用語である。良好または陽性の予後は、好ましくないまたは陰性の予後よりも状態のより良い結果を予測する。一般的な意味で、「好ましい予後」は、特定の状態に関連する可能性のある他の多くの可能な予後よりも比較的良好な結果であり、一方、好ましくない予後は、特定の状態に関連付けられた可能性のある他の多くの可能な予後よりも比較的悪い結果を予測する。良好または陽性の予後の典型的な例には、平均よりも良好な治癒率、転移のより低い傾向、予想よりも長い平均余命、良性プロセスとがん性プロセスとの分化などが含まれる。たとえば、陽性の予後とは、患者が治療後に特定のがんが治癒する確率が５０％であるのに対し、同じがんの平均的な患者が治癒する確率は２５％しかない場合である。
【０１０２】
本明細書で使用される場合、「参照レベル」という用語は、比較の目的で関心があり得る物質のレベルを指す。  いくつかの実施形態では、参照レベルは、対照対象から採取されたサンプルからの用量レベルの平均としての特定の組成物用量であり得る。  他の実施形態では、参照レベルは、異なる時間での同じ対象におけるレベル、例えば、２、４、６、８、および１０分などで決定されるレベルなどの組成物を投与する時間経過であり得る。
【０１０３】
本明細書で使用される場合、「サンプル」または「試験サンプル」という用語は、対象から収集された液体または固体を含む任意の材料を指す。  適切な実施形態では、試験サンプルは、生物学的供給源、すなわち、培養中の細胞または動物、最も好ましくはマウス対象、哺乳動物またはヒト対象からの組織サンプルなどの「生物学的サンプル」から得られる。
【０１０４】
本明細書で使用される場合、「対象」または「個体」という用語は、マウス、ラット、またはヒトなどの哺乳動物を指すが、例えば、犬、猫などの飼育動物、牛、羊、豚、馬などの家畜、あるいはサル、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、などの実験動物、といった別の動物であってもよい。「患者」という用語は、疾患に罹患している、または罹患している疑いのある「対象」を指す。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、「治療する」または「治療」または「緩和」という用語は、治療的治療および予防的または予防的手段の両方を指し、その目的は、標的とされる病的状態または障害を予防または減速（軽減）することである。本発明の方法に従って治療薬を投与された後、対象が特定の疾患の１つまたは複数の徴候および症状の観察可能および／または測定可能な減少を示す場合、対象は、障害について首尾よく「治療」される。
【０１０６】
本明細書で使用される場合、「水素」または「Ｈ」などの特定の元素への言及は、その元素のすべての同位体を含むことを意味する。  たとえば、Ｒ基が水素またはＨを含むように定義されている場合、重水素とトリチウムも含まれる。
【０１０７】
概要
【０１０８】
寿命および生活の質を延長するためのヒトの疾患の制御は、臨床診療における目標である。ヒトのがん制御の分野では、課題は治療（例えば、化学療法および放射線）耐性であり、これは、治療不可能な疾患または治療後の高率の転移および／または再発をもたらす。したがって、がん治療抵抗性、転移および再発はがん死の主な原因であり、分野全体に挑戦し続けている。
【０１０９】
ピアレビューされた文献の批判的分析は、治療抵抗性を克服するための課題は、治療に対する固有のまたは獲得された（誘導された）抵抗性が多様なメカニズムを介することであり、しばしばがん細胞が通常多様な遺伝的および後成的な変化およびがん関連タンパク質の異常な発現を有するという事実に起因することを示す。治療抵抗性の課題に対処するには、治療抵抗性が多様なメカニズムに起因するという事実に対処する必要がある。  先行技術は、この目的のための効果的な戦略を欠いている。
【０１１０】
併用療法として１つまたは２つの従来の細胞毒性薬と組み合わせて１つの分子標的薬剤を使用することは、以前に採用されてきた。しかし、このアプローチは、特定のがんの種類および／または好ましい遺伝的背景を持つ一部のがん患者の毒性および有効性に関連する治療抵抗性を軽減することしかできない。治療抵抗性のもう１つの困難な問題は、がんが非常に不均一な疾患であるということだ（Ｓｗａｎｔｏｎ  Ｃ：  Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ：  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｓｐａｃｅ  ａｎｄ  ｔｉｍｅ，  Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１２，  ７２：４８７５−４８８２）。予後が良好か不良かという遺伝子発現の兆候は、同じ腫瘍の異なる領域で検出でき、体細胞変異のかなりの割合が同じ腫瘍のすべての腫瘍領域で検出されるとは限らない（Ｇｅｒｌｉｎｇｅｒ  Ｍ、ｅｔ  ａｌ  ．：腫瘍内不均一性とマルチリージョンシーケンシングによって明らかにされた分岐進化、ニューイングランドジャーナルオブメディシン２０１２、３６６：８８３−８９２）。この広範な腫瘍内の不均一性は、個別化されたがん治療（個別化医療）およびバイオマーカー開発に関して困難な課題を提示する。したがって、そのような課題を解決するための新しい戦略が必要である。
【０１１１】
本発明の一態様は、本発明者によって作成された、実施例に示される特定のスペクトルの活性を有するが、それにもかかわらず、そのような化合物が、がん細胞治療抵抗性と戦うために定量的および／または定性的に定義された複数の標的化メカニズムを有する、いくつかの特定の抗がん化合物の発明を含む。本明細書に開示される新規化合物の中で、各化合物は複数の耐性因子を標的化またはバイパスすることができるが、個々の化合物は、広いスペクトルの重複を伴う別個の選択性（定量的および／または定性的）を示す。そのような化合物のグループは、多様な遺伝的および／または後成的変化および異常ながん関連遺伝子発現に起因する治療抵抗性を克服する治療適応症を与える。したがって、個々の化合物は、特定のがんの種類、または重複しているが異なる遺伝的背景を持つ同じ種類のがんを標的とする。次に、これは、治療抵抗性の課題を解決するための個別化された精密医療の新しい戦略をもたらす。同様に、費用対効果の観点から、各抗がん化合物は定義された特定のターゲットセット（定量的または定性的）を持っているため、診断および／または予後の適応症のための一部のがん患者のバイオマーカーテストコストを節約するために、これらの個々の薬剤はまた、一般的に、バイオマーカー前の検査手順なしでがん治療に使用される。これらの患者の場合、特定の薬剤の選択は、がんと薬剤に関連する一般的な知識に基づいているが、バイオマーカーや遺伝的決定には基づいていない（すべてではないにしてもほとんどの場合、関係は通常それほど明確に定義されていないため）、これはこれらのタイプの薬の最大の価値を損なうであろう。個別化された精密医療の方法で治療抵抗を克服するためのこの前例のない戦略は、最近得られた予期しない結果から生まれた。例を参照のこと。
【０１１２】
抗がん剤であるカンプトテシン（ＣＰＴ）は、米国国立がん研究所（ＮＣＩ）と協力して、マンスフワニ博士およびモンローウォール博士によって植物抽出物から最初に同定および単離された。さまざまなカンプトテシン構造ベースの化合物（カンプトテシン誘導体）が合成されているが、がん治療の臨床診療では、イリノテカンとトポテカン（どちらもカンプトテシン構造ベースの誘導体）の２つのカンプトテシン類似体のみが商品化されている。現在、イリノテカンとトポテカンは、カンプトテシン構造に基づく類似体の中で、抗腫瘍活性と毒性の観点から特定された最良の２つの化合物である。しかし、イリノテカンまたはトポテカン治療に対するがんの耐性は、臨床診療における一般的な問題であり、それらの適用範囲に深刻な挑戦をしている。以前の特許（ＰＣＴ  ／  ＵＳ１５  ／  ２２０９５）で、以前の発明で保護された独自の化合物のいくつかが、イリノテカンおよびトポテカン耐性腫瘍を効果的に克服することを実証した（詳細については、特許出願後の最近の出版物を参照のこと：Ｌｉｎｇ  Ｘ，  ｅｔ  ａｌ：  ＦＬ１１８，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  ａｎａｌｏｇｕｅ，  ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ  ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  ａｎｄ  ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌｓ，  Ａｍ  Ｊ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｒｅｓ  ２０１５，  ７：１７６５−１７８１）。
【０１１３】
他に類を見ないカンプトテシン類似体、ＦＬ１１８は、複数の治療抵抗性因子を標的とし、およびバイパスし、動物モデルにおける多くのタイプのヒト腫瘍異種移植片を排除するように機能する。  Ｌｉｎｇ  Ｘ，  ｅｔ  ａｌ．：  Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ＦＬ１１８  Ｔｈａｔ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ｓｕｒｖｉｖｉｎ，  Ｍｃｌ−１，  ＸＩＡＰ  ａｎｄ  ｃＩＡＰ２  ｉｎ  ａ  ｐ５３−Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｍａｎｎｅｒ，  Ｓｈｏｗｓ  Ｓｕｐｅｒｉｏｒ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ，  ＰＬＯＳ  ＯＮＥ  ２０１２，  ７：ｅ４５５７１を参照のこと。研究はまた、ＦＬ１１８の抗腫瘍活性がその一次構造と立体構成に大きく依存していることを明らかにした（Ｚｈａｏ  Ｊ，  ｅｔ  ａｌ．：  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ＦＬ１１８，  ａ  ｓｕｒｖｉｖｉｎ，  Ｍｃｌ−１，  ＸＩＡＰ，  ｃＩＡＰ２  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，    ｉｓ  ｈｉｇｈｌｙ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｎ  ｉｔｓ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｓｔｅｒｉｃ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ２０１４；  １１：  ４５７−４６７）。以前の特許（ＰＣＴ  ／  ＵＳ１５  ／  ２２０９５）の結果は、ＦＬ１１８がイリノテカンおよびトポテカンによって誘発される治療抵抗性を効果的に克服することを明らかにしている（Ｌｉｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ  Ｊ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｒｅｓ  ２０１５，  ７：１７６５−１７８１）。ＦＬ１１８は、ＡＢＣＧ２などのＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターから発せられる難治性の表現型を効果的にバイパスするが、ＳＮ−３８（イリノテカンの活性代謝物）とトポテカンはＡＢＣＧ２の基質であり、ＡＢＣＧ２による治療抵抗性をバイパスできない。現在、前発明（ＰＣＴ  ／  ＵＳ１５  ／  ２２０９５）からのこれらの発見は、Ｗｅｓｔｏｖｅｒ  Ｄ，  ｅｔ  ａｌ：  ＦＬ１１８，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ，  ｉｓ  ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｔｏ  ＡＢＣＧ２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｈｏｗｓ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｉｎ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ  ａｎｄ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  ｍｏｄｅｌｓ  ｗｉｔｈ  ＡＢＣＧ２−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１５，  １４：９２に掲載されている。さらに、最近の研究では、カンプトテシン、イリノテカン／  ＳＮ−３８（イリノテカンの活性代謝物）およびトポテカンの既知の治療標的はトポイソメラーゼＩ（Ｔｏｐ１）であり、抗腫瘍活性を示すにはＴｏｐ１の発現が必要であることが示された。対照的に、ＦＬ１１８プラットフォームの抗腫瘍効果は、Ｔｏｐ１の発現とは無関係であり、Ｔｏｐ１を発現しないヒト腫瘍は、ＦＬ１１８治療に対して高い感受性を示した（Ｌｉ  Ｆ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  （Ｔｏｐ１）：  ａ  ｍａｊｏｒ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ＦＬ１１８  ｆｏｒ  ｉｔｓ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｒ  ｍａｉｎｌｙ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｉｔｓ  ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ？  Ａｍ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２０１７；  ７：  ３７０−８２）。
【０１１４】
本発明において、本発明者らは、ＦＬ１１８プラットフォームに由来する個々の化合物が、異なるがんタイプ間で、または異なる個々の薬物を有する同じがんタイプにおいて、別個の抗がん活性および毒性を示すことを実証した。本発明はまた、経口投与用  （ｐｅｒ  ｏｒａｌ，  ｐｏ／ｐ．ｏ．）、腹腔内投与用（ｉｐ／ＩＰ／ｉ．ｐ．）、または静脈内投与用（ｉｖ／ＩＶ／ｉ．ｖ．）の水性懸濁液フォーマット、粉末カプセルフォーマットまたは錠剤フォーマットにおける水不溶性ＦＬ１１８および／またはＦＬ１１８類似体のエタノール含有製剤および無有機溶媒製剤のさらなる開発の様々な実施形態において記載されている。
【０１１５】
例示的な実施形態では、本発明は、がん治療などのヒトの病気を治療するための、ＦＬ１１８プラットフォームの位置７または位置９に由来する化合物の群の組成および化学合成の問題、ならびに式１のこれらの新規化合物の使用を提供する。個々のＦＬ１１８コア構造プラットフォーム由来の類似体の詳細な合成の例を以下に説明する。
【０１１６】
例示的なＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）プラットフォームの合成位置７由来の化合物。
【０１１７】
シンナメニルを用いた７番目の位置でのＦＬ１１８プラットフォーム誘導体の調製（例示的）：
【０１１８】
ステップ１：６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシカルコンの調製：
【０１１９】
３，４−メチレンジオキシアセトフェノンをニトロメタン（８０ｍＬ）に溶解し、それに濃硝酸（２０．７ｍＬ）を滴下して加えた。混合物を２時間反応させ、飽和重炭酸ナトリウム溶液をそれに滴下して加えて、ｐＨを約７にした。混合物をジクロロメタンで３回抽出した。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ  ４で乾燥し、濃縮した。  得られた黄色の油をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝  １：８）によって精製し、７．８ｇの淡黄色の固体（７６％）を得た。  ｍｐ（ｍｅｌｔｉｎｇ  ｐｏｉｎｔ／融点）１１０−１１２℃。
【０１２０】
６−ニトロ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノン（７．８ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（７０ｍＬ）に溶解し、触媒量のＰｄ  ／  Ｃを加えた。  混合物を水素雰囲気下で１２時間反応させた。  触媒を濾別し、濾液を濃縮した。  得られたのは５．５ｇの淡黄色の固体（８３％）であった。  ｍｐ１２３−１２４℃。
【０１２１】
６−アミノ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノン（０．２ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を無水アルコール（１０ｍｌ）に溶解し、水酸化ナトリウム（０．４ｇ、１１ｍｍｏｌ）およびベンズアルデヒド（０．１４ｇ、１．３ｍｍｏｌ）を順番に加えた。混合物を１２時間反応させ、溶液を濃縮した。混合物をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝  １：４）によって精製し、０．２１ｇの黄色の固体（７１％）を得た。  ｍｐ１３０−１３２℃。
【０１２２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、６００  ＭＨｚ）δ：８．０８（ｓ、１  Ｈ、ＡｒＨ）、７．８１（ｄ、Ｊ  ＝  １５．２  Ｈｚ、１  Ｈ、＝  ＣＨＡｒ）、７．５３（ｄ、Ｊ  ＝  １５．２  Ｈｚ、１  Ｈ  、ＡｒＣＯＣＨ  ＝）、６．７９（ｄ、Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ、２  Ｈ、ＡｒＨ）、６．６７（ｄ、Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ、２  Ｈ、ＡｒＨ）、６．６０（ｔ、Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ、１  Ｈ、ＡｒＨ）、  ６．５４（ｓ、１  Ｈ、ＡｒＨ）、６．２０（ｂｒｓ、２  Ｈ、ＮＨ２）、６．０２（ｓ、２  Ｈ、ＯＣＨ２Ｏ）。
【０１２３】
６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−４−ブロモ−カルコンの調製プロセスは、試薬が６−アミノ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノンおよび４−ブロモ−ベンズアルデヒドであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−３，４−ジメトキシ−カルコンの調製プロセスは、試薬が６−アミノ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノンおよび３，４−ジメトキシ−ベンズアルデヒドであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−２−クロロ−カルコンの調製プロセスは、試薬が６−アミノ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノンおよび２−クロロベンズアルデヒドアミノであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−３，４−メチレンジオキシ−カルコンの調製プロセスは、試薬が６−アミノ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノンおよび３，４−メチレンジオキシベンズアルデヒドであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−３，４，５−トリメトキシ−カルコンの調製プロセスは、試薬が６−アミノ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノンと３，４，５−トリメトキシ−ベンズアルデヒドであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６−アミノ−３，４’−メチレンジオキシ−４−メトキシ−カルコンの調製プロセスは、試薬が６−アミノ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノンおよび４−メトキシベンズアルデヒドであったことを除いて、６−アミノ−３，４−メチレンジオキシカルコンの調製プロセスと同様であった。；
【０１２４】
ステップ２：シンナメニルを用いて７番目の位置にＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）誘導体を調製する：
【０１２５】
ＦＬ７−５：２０（Ｓ）−７−シンナメニル−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ）  ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオン（２００ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を無水トルエン（７０ｍＬ）に溶解した。  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシカルコン（０．３７ｇ、１．３７ミリモル）およびパラ−トルエンスルホン酸（２６．２ｍｇ、０．１５ミリモル）を加えた。  混合物をニトロン下１１０℃で２４時間反応させた。  混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。  化合物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝  ９７：３）で精製し、２７０ｍｇの淡黄色固体（７２％）を得た。  ｍｐ２２０−２２２℃。
【０１２６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、６００  ＭＨｚ）δ：８．１９（ｓ、１  Ｈ）、７．９８（ｓ、１  Ｈ）、７．９１（ｓ、１  Ｈ）、７．８７（ｄ、Ｊ  ＝  ４．４  Ｈｚ、２  Ｈ）、  ７．８１（ｄ、Ｊ  ＝  １６．５  Ｈｚ、１  Ｈ）、７．６９（ｓ、１  Ｈ）、７．６０（ｓ、３  Ｈ）、６．４８（ｓ、２  Ｈ）、６．００（ｄ、Ｊ  ＝  １６．５  Ｈｚ、１  Ｈ）、  ５．９５（ｓ、２  Ｈ）、５．６６（ｄ、Ｊ  ＝  １７．０４  Ｈｚ、１  Ｈ）、２．２１（ｍ、２  Ｈ）、１．２０（ｔ、Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、１５０  ＭＨｚ）δ：１７８．６、１６０．４、１５９．７、１５４．９、１５３．７、１５１．４、１４８．８、１４２．４、１４２．２、１４１．２、１３６．５、１３３．９、１３１．３、１３０．２、１２８．５、１２８．４、１２３．９、１２０．１、１０７．３、１０５．７、  １０３．５、９９．６、７６．２、６８．６、５４．８、３３．４、８．１。
【０１２７】
ＦＬ７−６：２０（Ｓ）−７−（４−ブロモ−シンナメニル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−６は、（  ４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび６’−アミノ−３  ’、４’  −メチレンジオキシ−４−ブロモ−カルコン。  得られたものは、３００ｍｇの淡黄色の固体（７０％）であった。  ｍｐ２３８℃。
【０１２８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、６００  ＭＨｚ）δ：７．４６（ｓ、１  Ｈ）、７．３１（ｓ、１  Ｈ）、７．０７（ｄ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２  Ｈ）、６．８１（ｄ、Ｊ  ＝  ６．３  Ｈｚ  、１  Ｈ）、６．６９（ｓ、１  Ｈ）、６．４１（ｓ、３  Ｈ）、６．１８（ｓ、２  Ｈ）、５．６５（ｓ、２  Ｈ）、５．２３（ｄ、Ｊ  ＝  ７．０４  Ｈｚ、２  Ｈ）、  ２．１１（ｍ、２  Ｈ）、０．９２（ｔ、Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、１５０  ＭＨｚ）δ：１７７．２、１６１．３、１５９．７、１５３．９、１５２．７、１５１．４、１４８．９、１４２．６、１４２．２、１４１．２、１３６．６、１３２．９、１３１．８、１３０．１、１２９．４、１２８．２、１２６．４、１２４．９、１２３．９、１２０．５、  １０７．７、１０５．５、１０３．９、９９．６、７６．３、６８．７、５４．３、３３．２、８．５。
【０１２９】
ＦＬ７−７：２０（Ｓ）−７−（３，４−ジメトキシシンナメニル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−７は、７−５の  （４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’、４  ’−メチレンジオキシ−３，４−ジメトキシ−カルコン。  得られたのは、２３０ｍｇの淡黄色の固体（５３％）であった。  ｍｐ１９２℃。
【０１３０】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．５０（ｄ、Ｊ  ＝  ７．６８  Ｈｚ、２  Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ  ＝  １３．２  Ｈｚ、２  Ｈ）、７．２８（ｓ、１  Ｈ）、７．１４  （ｄ、Ｊ  ＝  ８．２２  Ｈｚ、２  Ｈ）、６．３７（ｓ、１  Ｈ）、６．１５（ｓ、２  Ｈ）、５．３９（ｓ、２  Ｈ）、４．７６（ｓ、２  Ｈ）、３．８８（ｓ、３  Ｈ  ）、３．８４（ｓ、３  Ｈ）、２．２９（ｍ、２  Ｈ）、１．２３（ｔ、Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１７５．２、１６２．９、１５９．３、１５７．７、１５２．４、１５０．８、１５０．２、１４８．６、１４５．１、１４４．９、１３７．５、１３５．３、１３４．９、１３０．９、１２７．８、１２５．２、１２２．８、１２１．４、１１９．６、  １１１．５、１１０．３、１０６．５、１０１．７、９７．３、７７．４、６８．２、５５．４、５５．２、５４．８、２０．５、１０．６。
【０１３１】
ＦＬ７−８：２０（Ｓ）−７−（２−クロロ−シンナメニル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−８を使用して７−５の合成および精製について記載したように調製および精製した。  ４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’、４’  −メチレンジオキシ−２−クロロ−カルコン。  得られたのは２５０ｍｇの淡黄色の固体（６２％）であった。  ｍｐ  ２０９−２１２°Ｃ。
【０１３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、６００  ＭＨｚ）δ：７．５８（ｓ、１  Ｈ）、７．５１（ｓ、１  Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ、２  Ｈ）、７．１１（ｄ、Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ  、１  Ｈ）、７．０２（ｓ、１  Ｈ）、６．７３（ｓ、３  Ｈ）、６．２７（ｓ、２  Ｈ）、５．９５（ｓ、２  Ｈ）、５．６６（ｄ、Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ、２  Ｈ）、  ２．０１（ｍ、２  Ｈ）、０．９０（ｔ、Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、１５０  ＭＨｚ）δ：１７６．６、１６１．４、１５９．７、１５４．３、１５３．５、１５１．４、１４８．９、１４４．４、１４２．７、１４１．２、１３６．５、１３３．１、１３１．３、１３０．２、１２８．６、１２８．４、１２３．９、１２０．１、１０７．５、１０６．７、  １０４．５、９９．２、７７．２、６８．１、５４．８、３３．４、８．４。
【０１３３】
ＦＬ７−９：２０（Ｓ）−７−（３，４−メチレンジオキシ−シンナメニル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−９は、７−５の合成および精製について記載されたように調製および精製された。  （４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’を使用して、  ４’−メチレンジオキシ−３，４−メチレンジオキシ−カルコン。  得られたのは１５０ｍｇの淡黄色の固体（３６％）であった。  ｍｐ１７７℃。
【０１３４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．５３（ｄ、Ｊ  ＝  ４．３８  Ｈｚ、２  Ｈ）、７．５０（ｄ、Ｊ  ＝  ７，６８  Ｈｚ、３  Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ  ＝  ２．７６  Ｈｚ、１  Ｈ）、７．１３（ｄ、Ｊ  ＝  ７．６８  Ｈｚ、２  Ｈ）、６．３６（ｔ、Ｊ  ＝  ８．２８  Ｈｚ、２  Ｈ）、６．２１（ｓ、２  Ｈ）、５．３９（ｓ、２  Ｈ）、４．７６（  ｓ、２  Ｈ）、２．２９（ｍ、２  Ｈ）、１．０８（ｔ、Ｊ  ＝  ７．３８  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１６７．７、１５４．６、１５２．２、１５１．１、１４９．０、１４８．８、１４５．７、１３９．０、１３８．６、１２８．７、１２６．０、１２５．８、１２４．１、１１５．９、１０９．６、１０８．６、１０４．２、１０３．７、１０２．９、  ９９．１、９８．１、７６．２、６８．６、５４．８、２１．３、８．３。
【０１３５】
ＦＬ７−１０：２０（Ｓ）−７−（３，４，５−トリメトキシ−シンナメニル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−１０を、７−の合成および精製について記載したように調製および精製した。  ５（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’を使用  、４’−メチレンジオキシ−３，４，５−トリメトキシ−カルコン。  得られたものは、２００ｍｇの淡黄色の固体（４５％）であった。  ｍｐ１６７℃。
【０１３６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．４４（ｓ、１  Ｈ）、７．４０（ｓ、１  Ｈ）、７．１５（ｓ、２  Ｈ）、６．６４（ｓ、１  Ｈ）、６．３７（ｔ  、Ｊ  ＝  ８．２１  Ｈｚ、２  Ｈ）、６．２１（ｓ、２  Ｈ）、５．３９（ｓ、２  Ｈ）、４．７６（ｓ、２  Ｈ）、３．９１（ｓ、６  Ｈ）、３．７４（ｓ、３  Ｈ）、  １．８５（ｍ、２  Ｈ）、０．８９（ｔ、Ｊ  ＝  ７．３８  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１７２．３、１５９．３、１５８．９、１５８．４、１５６．２、１５２．９、１５１．５、１４９．５、１４５．８、１４１．３、１４０．６、１３９．１、１３５．９、１３３．１、１２８．８、１２２．３、１２１．６、１１８．６、１０５．９、  １０５．３、１０４．９、１０２．１、１００．１、９７．４、７７．３、６８．６、５９．９、５６．２、５６．０、５０．３、３０．４、７．５。
【０１３７】
ＦＬ７−１２：２０（Ｓ）−７−（４−メトキシ−シンナメニル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−１２は、（４Ｓ  ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’、４’−  メチレンジオキシ−４−メトキシ−カルコン。  得られたのは２５０ｍｇの淡黄色の固体（６２％）であった。  ｍｐ２０３−２０５°Ｃ。
【０１３８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．８８（ｄ、Ｊ  ＝  ８．８２  Ｈｚ、２  Ｈ）、７．５２（ｓ、１  Ｈ）、７．４９（ｓ、１  Ｈ）、７．２１（ｄ、Ｊ  ＝  ８．２２  Ｈｚ、２  Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ、２  Ｈ）、７．０８（ｓ、１  Ｈ）、６．３３（ｓ、２  Ｈ）、５．３９（ｓ、２  Ｈ）、４．７６（ｓ、２  Ｈ  ）、３．８８（ｓ、３  Ｈ）、２．２８（ｍ、２  Ｈ）、０．９３（ｔ、Ｊ  ＝  ７．６８  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１７４．５、１６２．７、１６０．５、１５９．３、１５４．２、１５１．９、１４８．５、１３９．０、１３８．３、１３５．８、１３１．２、１３０．９、１３０．４、１２８．７、１２６．０、１２４．４、１１６．５、１１５．４、１０３．９、  １０３．７、９９．５、９８．１、７６．８、６７．７、５６．２、５４．３、２１．３、７．９。
【０１３９】
フェネチルを用いた７番目の位置でのＦＬ１１８プラットフォーム誘導体の調製（例示的）：
【０１４０】
ステップ１：６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシジヒドロカルコンの調製：  
【０１４１】
６−アミノ−３，４−メチレンジオキシカルコン（０．３０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２５ｍＬ）に溶解し、触媒量のＰｄ  ／  Ｃを加えた。  混合物を水素バルーン下で１０時間反応させた。  触媒を濾別し、濾液を濃縮した。  得られたものは、０．２６ｇの淡黄色の固体（８７％）であった。  ｍｐ１０３−１０４℃。
【０１４２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、６００  ＭＨｚ）δ：７．４５（ｓ、１  Ｈ、ＡｒＨ）、６．６２（ｄ、Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ、２  Ｈ、ＡｒＨ）、６．３５（ｄ、Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ、２  Ｈ、  ＡｒＨ）、６．３１（ｓ、１  Ｈ、ＡｒＨ）、６．２８（ｓ、１  Ｈ、ＡｒＨ）、６．２０（ｂｒｓ、２  Ｈ、ＮＨ２）、６．０７（ｓ、２  Ｈ、ＯＣＨ２Ｏ）、２．６９（ｔ、Ｊ  ＝  ４．７  Ｈｚ、２  Ｈ、ＡｒＣＯＣＨ２）、２．６７（ｔ、Ｊ  ＝  ４．７  Ｈｚ、２  Ｈ、ＣＨ２Ａｒ）。
【０１４３】
６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−４−ブロモジヒドロカルコンの調製プロセスは、試薬が６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシ−４−ブロモ−カルコンであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシジヒドロカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−３，４−ジメトキシ−ジヒドロカルコンの調製プロセスは、試薬が６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシ−３，４−ジメトキシ−カルコンであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシジヒドロカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−２−クロロ−ジヒドロカルコンの調製プロセスは、試薬が６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−２−クロロ−カルコンであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシジヒドロカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−３，４−メチレンジオキシ−ジヒドロカルコンの調製プロセスは、試薬が６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−３，４−メチレンジオキシ−カルコンであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシジヒドロカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−３，４，５−トリメトキシジヒドロカルコンの調製プロセスは、試薬が６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−３，４，５−トリメトキシカルコンであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシジヒドロカルコンの調製プロセスと同様であった。；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−４−メトキシジヒドロカルコンの調製プロセスは、試薬が６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−４−メトキシカルコンであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシジヒドロカルコンの調製プロセスと同様であった。
【０１４４】
ステップ２：フェネチルを用いて７番目の位置にＦＬ１１８プラットフォーム誘導体を調製する：
【０１４５】
ＦＬ７−１４：２０（Ｓ）−７−フェネチル−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−  ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオン（２００  ｍｇ、０．７６  ｍｍｏｌ）を無水トルエン（７０  ｍＬ）に溶解した。  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシジヒドロカルコン（０．３７ｇ、１．３７ミリモル）およびパラ−トルエンスルホン酸（２６．２ｍｇ、０．１５ミリモル）を加えた。  混合物をニトロン下１１０℃で２４時間反応させた。  混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。  化合物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝  ９７：３）で精製し、２８０  ｍｇの淡黄色固体（７５％）を得た。ｍｐ２２０−２２３℃。
【０１４６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、６００  ＭＨｚ）δ：７．９３（ｓ、１  Ｈ）、７．５８（ｓ、１  Ｈ）、７．５３（ｓ、１  Ｈ）、７．０９（ｓ、３  Ｈ）、６．８９（ｓ、２  Ｈ）、６．３１（ｓ、２  Ｈ）、５．７６（ｄ、Ｊ  ＝  １７．１  Ｈｚ、１  Ｈ）、５．４２（ｄ、Ｊ  ＝  １７．０４  Ｈｚ、１  Ｈ）、４．７５（ｄｄ、Ｊ  ＝  １９．２  Ｈｚ、Ｊ  ＝  １８．６６  Ｈｚ  、２  Ｈ）、３．５８（ｄ、Ｊ  ＝  ２０．３４  Ｈｚ、２  Ｈ）、３．１８（ｓ、２  Ｈ）、１．９９（ｍ、２  Ｈ）、０．９９（ｔ、Ｊ  ＝  ７．６８  Ｈｚ、３  Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、１５０  ＭＨｚ）δ：１７６．２、１５７．８、１５７．６、１５４．９、１５２．９、１５１．３、１４９．７、１３９．６、１３９．３、１３８．６、１２９．７、１２８．８、１２８．５、１２８．１、１２７．７、１２７．２、１２１．７、１０５．１、１０３．８、１００．２、  ９７．５、７３．８、６６．２、５１．２、３５．１、３３．７、３１．０、５．８。
【０１４７】
ＦＬ７−１７：２０（Ｓ）−７−（４−ブロモ−フェネチル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−１７を、（４Ｓ  ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’、４’−  メチレンジオキシ−４−ブロモ−ジヒドロカルコン。  得られたのは３００ｍｇの淡黄色の固体（６８％）であった。  ｍｐ２４０−２４３℃。
【０１４８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．５９（ｓ、１  Ｈ）、７．４６（ｓ、２  Ｈ）、７．２３（ｍ、３  Ｈ）、７．１２（ｓ、１  Ｈ）、６．２８（ｓ  、２  Ｈ）、５．３９（ｓ、２  Ｈ）、４．８２（ｄｄ、Ｊ  ＝  １８．６６  Ｈｚ、Ｊ  ＝  １０．９８  Ｈｚ、２  Ｈ）、２．９４（ｓ、２  Ｈ）、２．２８（ｓ、２  Ｈ）、１．８６（ｍ  、２  Ｈ）、０．８７（ｔ、Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１７３．１、１５７．２、１５１．５、１５０．６、１４９．６、１４７．４、１４６．６、１４６．１、１４２．５、１４１．４、１３８．３、１２９．２、１２８．８、１２８．７、１２６．８、１２６．１、１２４．７、１１８．６、１０５．８、  １０３．２、１００．０、９６．６、７２．９、６５．７、４９．９、３５．２、３０．８、２１．４、８．３。
【０１４９】
ＦＬ７−１６：２０（Ｓ）−７−（３，４−ジメトキシフェネチル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−１６は、７〜１４の合成および精製について記載したように、  （４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’、４  ’−メチレンジオキシ−３，４−ジメトキシ−ジヒドロカルコン。  得られたのは、２７０ｍｇの淡黄色の固体（６４％）であった。  ｍｐ１６５−１６８℃。
【０１５０】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．６６（ｓ、１  Ｈ）、７．５３（ｓ、１  Ｈ）、７．２６（ｓ、１  Ｈ）、６．７７（ｓ、２  Ｈ）、６．５５（ｓ  、１  Ｈ）、６．４８（ｓ、１  Ｈ）、６．１２（ｓ、２  Ｈ）、５．４４（ｓ、２  Ｈ）、４．９５（ｓ、２  Ｈ）、３．６８（ｓ、６  Ｈ）、３．５８（ｔ、Ｊ  ＝  ７．１４  Ｈｚ、２  Ｈ）、２．９３（ｔ、Ｊ  ＝  ７．１４  Ｈｚ、２  Ｈ）、１．９１（ｍ、２  Ｈ）、０．９３（ｔ、Ｊ  ＝  ７．６８  Ｈｚ、３  Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１７３．１、１５７．３、１５３．２、１５３．１、１５１．４、１５０．６、１４９．７、１４９．４、１４７．７、１４６．８、１４２．２、１３６．９、１３６．６、１２８．４、１２４．９、１１８．５、１０６．７、１０５．９、１０５．５、  １０３．１、１００．２、９６．４、７２．９、６５．７、５６．３、５６．１、５０．１、３５．６、３１．８、３０．８、８．３。
【０１５１】
ＦＬ７−１５：２０（Ｓ）−７−（２−クロロ−フェネチル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−１５は、（  ４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’、４’  −メチレンジオキシ−２−クロロ−ジヒドロカルコン。  得られたのは、２７０ｍｇの淡黄色の固体（６７％）であった。  ｍｐ１８３−１８６℃。
【０１５２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．４８（ｄ、Ｊ  ＝  ８．２８  Ｈｚ、３  Ｈ）、７．２８（ｓ、１  Ｈ）、７．２２（ｓ、１  Ｈ）、７．１２（ｄ、Ｊ  ＝  ７．６８  Ｈｚ、２  Ｈ）、６．３９（ｓ、１  Ｈ）、６．２９（ｓ、１  Ｈ）、５．４０（ｓ、２  Ｈ）、４．９８（ｄ、Ｊ  ＝  １０．９８  Ｈｚ、２  Ｈ）、２．２８（ｓ、４  Ｈ  ）、１．８２（ｍ、２  Ｈ）、０．８６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．１４  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１７５．２、１５７．２、１５１．５、１５０．３、１４８．２、１４７．１、１４６．６、１４６．４、１４２．５、１４０．７、１３８．３、１２９．３、１２８．８、１２８．６、１２６．８、１２６．２、１２４．７、１１８．６、１０５．８、  １０２．５、１００．１、９７．６、７２．９、６５．７、４９．９、３５．２、３０．７、２２．４、８．３。
【０１５３】
ＦＬ７−１１：２０（Ｓ）−７−（３，４−メチレンジオキシ−フェネチル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−１１は、７〜１４の合成および精製について記載したように調製および精製した。  （４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’を使用して、  ４’−メチレンジオキシ−３，４−メチレンジオキシ−ジヒドロカルコン。  得られたものは、１４０ｍｇの淡黄色の固体（３１％）であった。  ｍｐ１５５−１５７℃。
【０１５４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．６６（ｓ、１  Ｈ）、７．５３（ｓ、１  Ｈ）、７．２６（ｓ、１  Ｈ）、６．５５（ｓ、１  Ｈ）、６．４８（ｓ  、１  Ｈ）、６．３２（ｓ、２  Ｈ）、５．４４（ｓ、２  Ｈ）、４．９５（ｓ、２  Ｈ）、３．６８（ｓ、９  Ｈ）、３．５８（ｔ、Ｊ  ＝  ７．１４  Ｈｚ、２  Ｈ）、  ２．９３（ｔ、Ｊ  ＝  ７．１４  Ｈｚ、２  Ｈ）、１．９１（ｍ、２  Ｈ）、０．９３（ｔ、Ｊ  ＝  ７．６８  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１７３．１、１５７．３、１５３．２、１５３．１、１５１．４、１５０．６、１４９．７、１４９．４、１４７．７、１４６．８、１４２．２、１３６．９、１３６．６、１２８．４、１２４．９、１１８．５、１０６．７、１０５．９、１０５．５、  １０３．１、１００．２、９６．４、７２．９、６５．７、６０．５、５６．３、５６．１、５０．１、３５．６、３１．８、３０．８、８．３。
【０１５５】
ＦＬ７−１３：２０（Ｓ）−７−（４−メトキシ−フェネチル）−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７−１３は、（  ４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’、４’  −メチレンジオキシ−４−メトキシ−ジヒドロカルコン。  得られたものは、１６０ｍｇの淡黄色の固体（４１％）であった。  ｍｐ１７２−１７５℃。
【０１５６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、６００  ＭＨｚ）δ：７．４９（ｄ、Ｊ  ＝  ７．７４  Ｈｚ、２  Ｈ）、７．４１（ｓ、１  Ｈ）、７．２１（ｓ、１  Ｈ）、７．１３（ｄ、Ｊ  ＝  ７．１４  Ｈｚ、２  Ｈ）、６．８１（ｄ、Ｊ  ＝  ７．６８  Ｈｚ、１  Ｈ）、６．２７（ｓ、２  Ｈ）、５．３９（ｓ、２  Ｈ）、４．７６（ｓ、２  Ｈ）、３．６８（ｓ、３  Ｈ  ）、２．８３（ｓ、２  Ｈ）、２．２８（ｓ、２  Ｈ）、１．８６（ｍ、２  Ｈ）、０．８９（ｔ、Ｊ  ＝  ６．０６  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、１５０  ＭＨｚ）δ：１７３．０、１５８．３、１５７．２、１５１．６、１５０．５、１４９．１、１４６．９、１４５．８、１４２．８、１３８．４、１３３．２、１３０．１、１２８．６、１２８．０、１２６．０、１２４．６、１１８．７、１１４．２、１０５．４、  １０３．３、９９．９、９６．８、７２．９、６５．８、５５．５、４９．９、３４．３、３０．８、２１．３、８．３。
【０１５７】
複素環式エチル基を有する７番目の位置でのＦＬ１１８プラットフォーム誘導体の調製（例示）：
【０１５８】
ステップ１：６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−モルホリニルエチルベンゾフェノンの調製３，４−メチレンジオキシアセトフェノン（８．１ｇ、４９．３ｍｍｏｌ）をニトロメタン（８０ｍＬ、および濃硝酸（２０．７ｍＬ）に溶解した。  ）を滴下した。混合物を２時間反応させ、飽和重炭酸ナトリウム溶液を滴下して、ｐＨを約７にした。混合物をジクロロメタンで３回抽出した。有機層を合わせ、塩水で洗浄し、  得られた黄色油をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝  １：８）で精製し、淡黄色固体７．８ｇ（７６％）を得た。ｍｐ１１０−１１２℃。
【０１５９】
６−ニトロ−３，４−メチレンジオキシアセトフェノン（７．８ｇ、３７．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ−ＤＭＡに溶解し、混合物を１１０℃で２時間反応させた後、室温に冷却した。  ヘキサンを加え、黄色の固体を沈殿させた。  ろ過して９．４ｇのろ過ケーク（９５％）を得た。
【０１６０】
得られた固体（９．４ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）をジオキサン（６０ｍＬ）およびモルホリン（３．６ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）に溶解した。  混合物を６時間加熱還流した。  溶媒を減圧下で除去すると、黄色の油が得られた。  化合物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝  １：２）で精製し、８．７ｇの淡黄色の固体（８０％）を得た。
【０１６１】
得られた化合物（８．０ｇ、２６．１ｍｍｏｌ）を酢酸（２０ｍＬ）に溶解し、混合物を０℃に冷却した。  水素化ホウ素ナトリウム（４９３．１ｍｇ、１３．１ｍｍｏｌ）を加えた。  溶媒を減圧下で除去し、化合物をカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝  １：２）によって精製した。  結果は、５．６ｇの淡黄色の固体（７０％）であった。
【０１６２】
得られた化合物（５．６ｇ、１８．１９ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（７０ｍＬ）に溶解し、触媒量のＰｄ  ／  Ｃを加えた。  混合物を水素雰囲気下で１２時間反応させた。  触媒を濾別し、濾液を濃縮した。  結果は４．３ｇの薄黄色の固体（９０％）であった。
【０１６３】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ７．３４（ｓ、２Ｈ）、７．２４（ｓ、１Ｈ）、６．２９（ｓ、１Ｈ）、５．９２（ｓ、２Ｈ）、３．５７  −  ３．５０（ｍ、２Ｈ）、２．９４  （ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ）、２．５７（ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、２Ｈ）、２．３７（ｓ、４Ｈ）。
【０１６４】
６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−チオモルホリニルエチルベンゾフェノンの調製は、試薬がチオモルホリンであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシ−モルホリニルエチルベンゾフェノンの調製の調製と同様であった。  ；  ６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−（２−メチル）ピペリジルエチルベンゾフェノンの調製は、試薬が２−メチルピペリジンであったことを除いて、６’−アミノ−３’、４’−メチレンジオキシ−モルホリニルエチルベンゾフェノンの調製と同様であった。
【０１６５】
ステップ２：複素環式エチル基を有する７番目の位置でのＦＬ１１８プラットフォーム誘導体の調製：
【０１６６】
ＦＬ７Ｎ−１：２０（Ｓ）−７−モルホリニルエチル−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−  ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオン（２００ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）を無水トルエン（７０ｍＬ）、６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−モルホリニルエチルベンゾフェノン（０．３８ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）に溶解した。  ）およびパラトルエンスルホン酸（２６．２  ｍｇ、０．１５  ｍｍｏｌ）を加えた。  混合物をニトロン下１１０℃で２４時間反応させた。  混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。  化合物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝  ９７：３）で精製し、１５０ｍｇの淡黄色固体（４０％）を得た。  ｍｐ＞  ２５０°Ｃ。  
【０１６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、６００  ＭＨｚ）δ：７．２６（ｓ、１  Ｈ）、６．９８（ｓ、１  Ｈ）、６．７４（ｓ、１  Ｈ）、５．９（ｓ、２  Ｈ）、４．７６（ｄ、１  Ｈ）、４．７４（ｄ、１  Ｈ）、４．２２（ｓ、２  Ｈ）、３．６７（ｍ、４  Ｈ）、２．６９（ｄ、２  Ｈ）、２．６５（ｄ、２  Ｈ）、２．３７（ｄ、４  Ｈ）  、１．８７（ｍ、２  Ｈ）、０．９６（ｔ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、１５０  ＭＨｚ）δ：１７８．６、１５９．４、１５７．７、１５６．９、１５１．７、１４９．４、１４５．８、１４１．４、１３９．２、１２６．２、１２３．５、１２０．９、１０８．３、１０２．２、１０１．５、１０１．４、７３．０、６６．８、５８．１、５５．５、  ５３．７、４５．６、３０．２、２８．５、２８．４、２６．２、５．６。
【０１６８】
ＦＬ７Ｎ−３：２０（Ｓ）−７−チオモルホリニルエチル−１，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン：７Ｎ−３は、（４Ｓ）−４−エチルを使用する７−２８の合成および精製について記載されたように調製および精製された。  −７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオンおよび６’−アミノ−３  ’、４’−メチレンジオキシ−チオモルホリニルエチルベンゾフェノン、  １７０ｍｇの淡黄色の固体（４５％）ｍｐ＞  ２５０°Ｃを得た。
【０１６９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、６００  ＭＨｚ）δ：７．２６（ｓ、１  Ｈ）、６．９８（ｓ、１  Ｈ）、６．７４（ｓ、１  Ｈ）、５．９（ｓ、２  Ｈ）、４．７６（ｄ、１  Ｈ）、４．７４（ｄ、１  Ｈ）、４．２２（ｓ、２  Ｈ）、２．７３（ｍ、４  Ｈ）、２．６９（ｄ、２  Ｈ）、２．６５（ｄ、２  Ｈ）、２．５４（ｄ、４  Ｈ）  、１．８７（ｍ、２  Ｈ）、０．９６（ｔ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、１５０  ＭＨｚ）δ：１７２．６、１５９．４、１５７．７、１５６．９、１５１．７、１４９．４、１４５．８、１４１．４、１３９．２、１２６．２、１２３．５、１２０．９、１０８．３、１０２．２、１０１．５、１０１．４、７３．０、６５．１、５８．３、５８．１、  ５５．５、４５．６、３０．２、２８．５、２８．４、２６．２、５．６。
【０１７０】
アリールまたはヘテロアリールを用いた７番目の位置でのＦＬ１１８プラットフォーム誘導体の調製（例示的）：
【０１７１】
ステップ１：２０（Ｓ）−Ｏ−アセチル−ＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）：１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン（０．２３ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を無水酢酸（６ｍＬ）およびピリジンに加えた。  （４ｍＬ）、および混合物を４８時間反応させた。  混合物を２５ｍＬのヘキサンに注ぎ、固体を沈殿させた。  混合物を濾過し、フィルターケーキをヘキサンで洗浄した。  結果は２４０ｍｇの黄色の固体（９５％）であった。  ｍｐ＞  ２５０℃。
【０１７２】
ステップ２：２０（Ｓ）−Ｏ−アセチル−７−クロロ−ＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）：
【０１７３】
２０（Ｓ）−Ｏ−アセチル−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン（０．２４ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）と酢酸（２０ｍＬ）の混合物に、３０％過酸化水素溶液（３．２ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を加えた。  混合物を７５℃で３時間反応させた。  混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。  結果として２１０ｍｇの黄色の固体（８５％）が得られた。  塩化オキサリル（０．１ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）を化合物の混合物に添加して、０℃でＤＭＦ（２０ｍＬ）中に（０．２１ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を得た。  混合物を１５℃で３時間反応させた。  混合物を氷水（５０ｍｌ）に注ぎ、ジクロロメタンで３回抽出した。  有機層を合わせ、無水ＭｇＳＯ  ４で乾燥し、濃縮した。  次に、それをカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝  １００：１）によって精製し、０．１６ｇの黄色の固体（７５％）ｍｐ＞  ２５０℃を得た。
【０１７４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、６００  ＭＨｚ）δ：７．４２（ｓ、１  Ｈ）、７．３６（ｓ、１  Ｈ）、６．７４（ｓ、１  Ｈ）、５．９（ｓ、２  Ｈ）、４．７６（ｄ、１Ｈ  ）、４．７４（ｄ、１  Ｈ）、４．２２（ｓ、２  Ｈ）、２．０１（ｓ、３  Ｈ）、１．９６（ｍ、２  Ｈ）、０．９６（ｔ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、１５０  ＭＨｚ）δ：１７２．５、１７０．６、１６２．８、１５８．１、１５７．０、１５０．９、１４９．９、１４５．５、１４２．４、１３６．９、１２５．７、１２２．７、１０８．３、１０２．７、１０１．６、１０１．２、７６．０、６５．５、４２．１、２７．０、  ２１．１、２１．１。
【０１７５】
ステップ３：２０（Ｓ）−Ｏ−アセチル−７−（ピリジル−４  −）−  ＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）：  
【０１７６】
１０ｍＬのマイクロ波反応管において、２０（Ｓ）−Ｏ−アセチル−７−クロロ−１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン（０．４７ｇ、１ｍｍｏｌ）、ピリジル−４−ホウ酸（０．１８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）、フッ化セシウム（０．３０ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．１１ｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびジオキサン（５ｍＬ）を順番に加えた。  混合物をマイクロ波下、１２０℃で３０分間反応させた。混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。  次に、それをカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン＝  ３０：１）によって精製し、０．４３ｇの黄色の固体（８５％）を得た。  ｍｐ＞  ２５０℃。
【０１７７】
Ｗ−ｂ１：２０（Ｓ）−７−（ピリジル−４  −）−  ＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）：２０（Ｓ）−Ｏ−アセチル−７−（ピリジル−４  −）−  １０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン（０．４３ｇ、０．８４ｍｏｌをメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（０．０９ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１２時間反応させた。ｐＨをｐＨ  ＝に調整した。  ７．０、減圧下で溶媒を除去した後、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：アセトン＝  ３０：１）で精製し、０．３９ｇの黄色の固体（８３％）ｍｐ＞  ２５０℃を得た。
【０１７８】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、６００  ＭＨｚ）δ：８．９１（ｄ、Ｊ  ＝  ５．８  Ｈｚ、２Ｈ）、８．３２（ｄ、Ｊ  ＝  ８．６  Ｈｚ、１Ｈ）、７．８７（ｔ、Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９  −  ７．７０（ｍ、２Ｈ）、７．６３（ｔ、Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１（ｄ、Ｊ  ＝  ５．７  Ｈｚ、２Ｈ）、６．１１（ｓ、２Ｈ）、５．７３（ｄ、Ｊ  ＝  １６．４  Ｈｚ、１Ｈ）  、５．３０（ｄ、Ｊ  ＝  １６．４  Ｈｚ、１Ｈ）、５．１１（ｓ、２Ｈ）、３．７２（ｓ、１Ｈ）、２．０２  −  １．８０（ｍ、２Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＦ３ＣＯＯＤ、１５０  ＭＨｚ）δ：１７２．５、１５９．７、１５７．３、１５７．０、１５１．６、１４９．９、１４９．８、１４９．６、１４５．５、１４４．５、１４２．７、１４１．９、１２３．９、１２１．６、１２１．２、１２０．０、１０８．１、１０６．３、１０１．６、１０１．２、  ７３．０、６５．８、４４．６、３０．３、５．６。
【０１７９】
フェニルを用いた７番目の位置でのＦＬ１１８プラットフォーム誘導体の調製（例示的）：
【０１８０】
ステップ１：１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンの調製：
【０１８１】
６−ニトロ−ピペロナール（１９４．３ｍｇ、１ミリモル）、塩化パラジウム（８．８７ｍｇ、０．０５ミリモル）、トリ（１−ナフチル）ホスフィン（２０．６ｍｇ、０．０５ミリモル）、（３，５−ジメチルフェニル）の混合物。  ）ボロン酸（２．０ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（４１４  ｍｇ、３  ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（５  ｍｌ）を６５℃で２４時間加熱還流した。  反応後、混合物を濃縮乾燥し、ジクロロメタンを加え、次に濾過した。  ピリジニウムジクロメート（５６４．３  ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を室温（２５℃）で濾液に加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。  濾過し、濾液を濃縮して乾燥させた。  得られた黒色固体をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝  １：９）により精製し、２７８ｍｇの黄色固体（７５％）を得た。
【０１８２】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．７０（ｓ、１Ｈ）、７．５９（ｍ、２Ｈ）、７．５０（ｓ、１Ｈ）、７．０５（ｓ、１Ｈ）、６．２６（ｓ、２Ｈ）、２．４５（  ｓ、６Ｈ）。
【０１８３】
１−（４−イソプロピルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンの調製プロセスは、１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンの調製プロセスと同様であった。  ただし、試薬は２−臭素−６−ニトロ−ピペロナと４−イソプロピルフェニルボロン酸であった。  １−（４−ブチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンの調製プロセスは、１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンの調製プロセスと同様であったが、  試薬は２−臭素−６−ニトロ−ピペロナと４−ブチルフェニルボロン酸であった。  １−（４−エトキシルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンの調製プロセスは、１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンの調製プロセスと同様であったが、  試薬は２−臭素−６−ニトロ−ピペロナと４−エトキシルフェニルボロン酸であった。
【０１８４】
ステップ２：１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−アミノベンゼンの調製：
【０１８５】
１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼン（２２４ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）に溶解し、触媒量のＰｄ  ／  Ｃを加えた。  混合物を水素雰囲気下で２４時間反応させた。  触媒を濾別し、濾液を濃縮した。  結果は１９０ｍｇの淡黄色の固体（８５％）であった。
【０１８６】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：７．４１（ｍ、２Ｈ）、７．３８（ｍ、１Ｈ）、６．９４（ｍ、１Ｈ）、６．４９（ｓ、２Ｈ）、６．２４（ｓ、１Ｈ）、５．９３（  ｓ、２Ｈ）、２．４４（ｓ、６Ｈ）。
【０１８７】
１−（４−イソプロピルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−アミノベンゼンの調製プロセスは、１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−アミノベンゼンの調製プロセスと同様であったが、試薬は１−（４−イソプロピルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンであった。  １−（４−ブチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−アミノベンゼンの調製プロセスは、１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−アミノベンゼンの調製プロセスと同様であったが、  試薬は１−（４−ブチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンであった。  １−（４−エトキシルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−アミノベンゼンの調製プロセスは、１−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−アミノベンゼンの調製プロセスと同様であったが、  試薬は１−（４−エトキシルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼンであった。
【０１８８】
ステップ３：７番目の位置がフェニルであるＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）誘導体を調製する：
【０１８９】
ＦＬ７Ｑ−１２：（２０Ｓ）−７−（３，５−ジメチルフェニル）−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［  ３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオン（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を無水トルエン（４０ｍＬ）に溶解した。  １−（３，５−ジメチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−６−ニトロベンゼン（１３５  ｍｇ、０．５  ｍｍｏｌ）およびパラトルエンスルホン酸（１３  ｍｇ、０．０７５  ｍｍｏｌ）を加えた。  混合物をニトロン下１１０℃で２４時間反応させた。  混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。  化合物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝  ９７：３）で精製し、３８ｍｇの淡黄色固体（２５％）を得た。
【０１９０】
１Ｈ  ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ）δ：７．６５（ｓ、１Ｈ）、７．５７（ｓ、１Ｈ）、７．２０（ｓ、１Ｈ）、７．０９（ｓ、１Ｈ）、７．０４（ｓ、１Ｈ）、７．０１（ｓ  、１Ｈ）、６．１７（ｑ、Ｊ  ＝  １．２  Ｈｚ、２Ｈ）、５．７３（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．０３（ｍ、２Ｈ）、３．７９（ｓ  、１Ｈ）、２．４５（ｄ、Ｊ  ＝  １．４  Ｈｚ、６Ｈ）、１．９０（ｍ、２Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７４．０１、１５７．５９、１５１．３５、１５０．１２、１４９．５１、１４９．１４、１４８．１７、１４７．２６、１４３．３５、１３８．９２、１３４．７７、１３０．８０、１２６．３７、１２６．２６、１２４．８１、１１７．６１、１０５．８３、１０２．２９、１０１．４４、９７．３０、  ７２．７９、６６．３８、５０．２３、３１．５４、２１．４５、７．８５。
【０１９１】
ＦＬ７Ｑ−１：（２０Ｓ）−７−（４−イソプロピルフェニル）−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび１−（４−イソプロピルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−  ６−アミノベンゼンを使用する７Ｑ−１２の合成および精製について記載したように、７Ｑ−１を調製および精製した。  結果は５８ｍｇの淡黄色の固体（３０％）であった。
【０１９２】
１Ｈ  ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ）δ：７．６４（ｓ、１Ｈ）、７．５６（ｓ、１Ｈ）、７．４５（ｍ、２Ｈ）、７．４０（ｓ、１Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ、１Ｈ  ）、７．０９（ｓ、１Ｈ）、６．１６（ｄ、Ｊ  ＝  ２．２  Ｈｚ、２Ｈ）、５．７２（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．２９（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．０４（ｍ、２Ｈ  ）、３．８１（ｓ、１Ｈ）、２．８２（ｑ、Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ、２Ｈ）、１．９０（ｍ、２Ｈ）、１．３９（ｔ、Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ、３Ｈ）、１．０５（ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、３Ｈ  ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７３．９１、１５７．５２、１５１．３３、１５０．１３、１４９．４９、１４９．１６、１４８．１５、１４７．１７、１４５．５０、１４３．０７、１３２．０６、１２８．８９、１２８．７５、１２６．５１、１２４．７９、１１７．６７、１０５．８３、１０２．３４、１０１．３３、９７．３０  ７２．７６、６６．３５、５０．２６、３１．５６、２８．７８、１５．４７、７．８７。
【０１９３】
ＦＬ７Ｑ−２：（２０Ｓ）−７−（４−ブチルフェニル）−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび１−（４−ブチルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ−  ６−アミノベンゼンを使用する７Ｑ−１２の合成および精製について記載したように、７Ｑ−２を調製および精製した。結果は７０ｍｇの淡黄色の固体（３５％）であった。
【０１９４】
１Ｈ  ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ）δ：７．５８（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｓ、１Ｈ）、７．４１（ｍ、３Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ、１Ｈ）、７．０７（ｓ、  １Ｈ）、６．１５（ｓ、２Ｈ）、５．７２（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．２８（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．０２（ｍ、２Ｈ）、３．８３（ｓ、１Ｈ）、２．７７（２．７７（  ｔ、Ｊ  ＝  ７．８  Ｈｚ、２Ｈ）、１．８８（ｍ、２Ｈ）、１．７４（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｍ、２Ｈ）、１．０４（ｍ、６Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７３．９１、１５７．５２、１５１．３０、１５０．１２、１４９．４９、１４９．１４、１４８．１７、１４７．１９、１４４．２４、１４３．０５、１３２．０２、１２９．４１、１２８．６０、１２６．４７、１２４．７７、１１７．６４、１０５．８３、１０２．３０、１０１．３３、９７．２５  ７２．７６、６６．３４、５０．２１、３５．５５、３３．５２、３１．５５、２２．４７、１４．０１、７．８６。
【０１９５】
ＦＬ７Ｑ−４：（２０Ｓ）−７−（４−エトキシフェニル）−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび１−（４−エトキシルベンゾイル）−３，４−メチレンジオキシ  −６−アミノベンゼンを使用する７Ｑ−１２の合成および精製について記載したように、７Ｑ−４を調製および精製した。  結果は、６７ｍｇの淡黄色の固体（３４％）であった。
【０１９６】
１Ｈ  ＮＭＲ（６００  ＭＨｚ）δ：７．６５（ｓ、１Ｈ）、７．５７（ｓ、１Ｈ）、７．３７（ｍ、２Ｈ）、７．１３（ｄ、Ｊ  ＝  ７．７Ｈｚ、３Ｈ）、６．１７（ｄ、Ｊ  ＝  １．６  Ｈｚ、２Ｈ）、５．７３（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．０５（ｍ、２Ｈ）、４．１８（ｑ、Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ、２Ｈ）、  ３．７９（ｓ、１Ｈ）、２．１２（ｓ、２Ｈ）、１．９０（ｍ、２Ｈ）、１．５３（ｔ、Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ、３Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７３．８５、１５９．６６、１５７．４９、１５１．２４、１５０．２２、１４９．３６、１４９．０８、１４８．１１、１４７．１２、１４２．７４、１３０．０９、１２６．６４、１２６．４９、１２４．８３、１１７．５９、１１５．２８、１０５．７３、１０２．３１、１０１．２４、９７．３１  ７２．７５、６６．２９、６３．７５、５０．２３、３１．５２、１４．８７、７．８３。
【０１９７】
例示的なＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）プラットフォームの合成位置９由来の化合物。
【０１９８】
フェニルを用いた９番目の位置でのＦＬ１１８プラットフォーム誘導体の調製（例示的）：  
【０１９９】
ステップ１：２−臭素−６−ニトロ−ピペロナの調製：
【０２００】
濃硫酸（８ｍＬ）中の６−ニトロピペロナール（５ｍｍｏｌ、１．０３ｇ）の攪拌溶液にＮＢＳ（８ｍｍｏｌ、１．４２ｇ）を加え、次に得られた混合物を４５℃で４５分間加熱した。  次に氷（１００ｇ）を入れた。混合物を酢酸エチルで３回抽出した。  有機層を合わせ、塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ  ４で乾燥し、濃縮した。  得られた黄色の固体をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝  １：９）により精製し、１．２３ｇの黄色の固体（９０％）を得た。  
【０２０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１０．１３（ｓ、１Ｈ）、６．３６（ｓ、１Ｈ）、６．３０（ｓ、２Ｈ）。
【０２０２】
ステップ２：２−（４−エチルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製：
【０２０３】
２−臭素−６−ニトロ−ピペロナ（１ｍｍｏｌ、２７４ｍｇ）、４−エチルフェニルボロン酸（１．２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．１ｍｍｏｌ、４０ｍｇ）、Ｋ２ＣＯ３（２ｍｍｏｌ、  ２７６  ｍｇ）、トルエン（５  ｍｌ）を１２０℃で８時間加熱還流した。  次に水（２５ｍｌ）を加えた。  混合物をジクロロメタンで３回抽出した。  有機層を合わせ、塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ  ４で乾燥し、濃縮した。  得られた黄色の固体をカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝  １：９）によって精製し、１９５ｍｇの黄色の固体（６５％）を得た。
【０２０４】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ：１０．１１（ｓ、１Ｈ）、７．４６（ｓ、１Ｈ）、７．２９（ｍ、３Ｈ）、６．１９（ｓ、２Ｈ）、２．７３（ｍ、２Ｈ）、  １．２８（ｍ、３Ｈ）。
【０２０５】
２−（４−イソプロピルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−臭素−６−ニトロ−ピペロナおよび４−イソプロピルフェニルボロン酸であったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスと同様であった。；  ２−（４−ブチルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−臭素−６−ニトロ−ピペロナおよび４−ブチルフェニルボロン酸であったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスと同様であった。；  ２−（４−エトキシルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−臭素−６−ニトロ−ピペロナおよび４−エトキシルフェニルボロン酸であったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスと同様であった。；  ２−（４−プロピルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−臭素−６−ニトロ−ピペロナおよび４−プロピルフェニルボロン酸であったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスと同様であった。；  ２−（３−エトキシルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−臭素−６−ニトロ−ピペロナおよび３−エトキシルフェニルボロン酸であったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−ニトロピペロナールの調製プロセスと同様であった。；  
【０２０６】
ステップ３：２−（４−エチルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製：
【０２０７】
２−（４−エチルフェニル）−６−ニトロピペロナール（１９５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）をメタノール（７０ｍＬ）に溶解し、触媒量のＰｄ  ／  Ｃを加えた。  混合物を水素雰囲気下で２４時間反応させた。  触媒を濾別し、濾液を濃縮した。  得られたのは１４６ｍｇの淡黄色の固体（８３％）であった。  
【０２０８】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ：９．３８（ｓ、１Ｈ）、７．６２（ｓ、２Ｈ）、７．３０（ｓ、４Ｈ）、６．３６（ｓ、１Ｈ）、５．９４（ｓ、２Ｈ  ）、２．６６（ｍ、２Ｈ）、１．２２（ｍ、３Ｈ）。
【０２０９】
２−（４−イソプロピルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−（４−イソプロピルフェニル）−６−ニトロピペロナールであったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスと同様であった。；  ２−（４−ブチルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−（４−ブチルフェニル）−６−ニトロピペロナールであったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−アミノピペロナールのそれと同様であった。；  ２−（４−エトキシルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−（４−エトキシルフェニル）−６−ニトロピペロナールであったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスと同様であった。；  ２−（４−プロピルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−（４−プロピルフェニル）−６−ニトロピペロナールであったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスと同様であった。；  ２−（３−エトキシルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスは、試薬が２−（３−エトキシルフェニル）−６−ニトロピペロナールであったことを除いて、２−（４−エチルフェニル）−６−アミノピペロナールの調製プロセスと同様であった。
【０２１０】
ステップ４：９番目の位置がフェニルであるＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシ−カンプトテシン）誘導体を調製する：
【０２１１】
ＦＬ９Ｑ６：（２０Ｓ）−９−（４−エチルフェニル）−ＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン）：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３  、４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオン（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を無水トルエン（４０ｍＬ）に溶解した。  ２−（４−エチルフェニル）−６−アミノピペロナール（１４６  ｍｇ、０．５４ミリモル）およびパラトルエンスルホン酸（１３．１  ｍｇ、０．０７５ミリモル）を加えた。  混合物をニトロン下１１０℃で２４時間反応させた。  混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。  化合物をカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：メタノール＝  ９７：３）で精製し、４２ｍｇの淡黄色固体（２１％）を得た。  
【０２１２】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ：８．２７（ｓ、１Ｈ）、７．７５（ｓ、１Ｈ）、７．６５（ｓ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、Ｊ  ＝  ２．７  Ｈｚ、４Ｈ）、６．２０（  ｓ、２Ｈ）、５．７４（ｄ、Ｊ  ＝  １６．２  Ｈｚ、１Ｈ）、５．３１（ｄ、Ｊ  ＝  １６．３  Ｈｚ、１Ｈ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、３．７６（ｓ、１Ｈ）、２．８０（ｑ、Ｊ  ＝  ７．７  Ｈｚ、２Ｈ）、１．９１（ｍ、２Ｈ）、１．３６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ、３Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７３．９９、１５７．６９、１５０．９９、１５０．１７、１４９．９９、１４７．９８、１４６．８８、１４６．３１、１４４．８５、１３０．３０、１２９．４９、１２８．５２、１２７．８４、１２７．３３、１２５．４５、１１７．７８、１１６．９０、１０５．２０、１０２．１５、９７．３６  ７２．８１、６６．３６、５０．２０、３１．６１、２８．７５、１５．４０、７．８６。
【０２１３】
ＦＬ９Ｑ１：（２０Ｓ）−９−（４−イソプロピルフェニル）−ＦＬ１１８：（  ４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび２−（４−イソプロピルフェニル）−６−アミノピペロナールを使用する９Ｑ６の合成および精製について記載したように、９Ｑ１を調製および精製した。  結果は５８ｍｇの淡黄色の固体（３０％）であった。
【０２１４】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ：８．２４（ｓ、１Ｈ）、７．６１（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｓ、１Ｈ）、７．４５（ｍ、４Ｈ）、６．１８（ｓ、２Ｈ）、  ５．７４（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、３．７９（ｓ、１Ｈ）、３．０６（ｐ、Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ、１Ｈ）、  １．８９（ｍ、２Ｈ）、１．３７（ｄ、Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ、６Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７３．９０、１５７．６５、１５０．９３、１５０．１９、１４９．９３、１４９．３９、１４７．９３、１４６．８２、１４６．２５、１３０．２９、１２９．５８、１２７．８６、１２７．３１、１２７．０８、１２５．４２、１１７．７９、１１６．９０、１０５．１８、１０２．１１、９７．３６  ７２．８１、６６．３０、５０．２０、３４．０３、３１．６３、２３．９６、７．８４。
【０２１５】
ＦＬ９Ｑ２：（２０Ｓ）−９−（４−ブチルフェニル）−ＦＬ１１８：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび２−（４−ブチルフェニル）−６−アミノピペロナールを使用する９Ｑ６の合成および精製について記載されたように、９Ｑ２を調製および精製した。  結果は、４０ｍｇの淡黄色の固体（２０％）であった。
【０２１６】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ：８．２３（ｓ、１Ｈ）、７．６５（ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｓ、１Ｈ）、７．４２（ｓ、４Ｈ）、６．１８（ｓ、２Ｈ）、  ５．７４（ｄ、Ｊ  ＝  １６．３  Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ  ＝  １６．２  Ｈｚ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、３．７９（ｓ、１Ｈ）、２．７５（ｍ、２Ｈ）、１．９１（ｍ、２Ｈ  ）、１．７１（ｍ、２Ｈ）、１．４６（ｑ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、２Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、３Ｈ）、１．００（ｔ、Ｊ  ＝  ７．３  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７３．９９、１５７．６８、１５０．９８、１５０．１６、１４９．９８、１４７．９７、１４６．８７、１４６．２９、１４３．５９、１３０．２３、１２９．４４、１２９．０４、１２７．８６、１２７．３２、１２５．４３、１１７．７８、１１６．９２、１０５．２０、１０２．１５、９７  ７２．８１、６６．３６、５０．２２、３５．５６、３３．５４、３１．６１、２２．５２、１４．０２、７．８７。
【０２１７】
ＦＬ９Ｑ４：（２０ｓ）−９−（４−エトキシフェニル）−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび２−（４−エトキシルフェニル）−６−ニトロピペロナールを使用する９Ｑ６の合成および精製について記載したように、９Ｑ４を調製および精製した。  結果は、４９ｍｇの淡黄色の固体（２５％）であった。
【０２１８】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ：８．２４（ｓ、１Ｈ）、７．６９（ｓ、１Ｈ）、７．５８（ｓ、１Ｈ）、７．４２（ｄ、Ｊ  ＝  ８．２  Ｈｚ、２Ｈ）、７．１２（  ｄ、Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ、２Ｈ）、６．１９（ｓ、２Ｈ）、５．７５（ｄ、Ｊ  ＝  １６．２  Ｈｚ、１Ｈ）、５．３１（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．１７（ｓ、２Ｈ）、４．１５（  ｍ、２Ｈ）、３．７５（ｓ、１Ｈ）、１．９１（ｍ、２Ｈ）、１．５０（ｔ、Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ、３Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７３．９９、１５９．２０、１５７．６８、１５０．９７、１５０．１５、１４９．９６、１４７．９９、１４６．８８、１４６．３４、１３１．５６、１２７．８０、１２７．３０、１２５．５８、１２４．１０、１１７．７８、１１６．６６、１１４．９５、１０５．０９、１０２．１１、９７．３４  ７２．８１、６６．３６、６３．６５、５０．２０、３１．６１、１４．８９、７．８６。
【０２１９】
ＦＬ９Ｑ５：（２０ｓ）−９−（４−プロピルフェニル）−ＦＬ１１８（１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン）：（（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび２−（４−プロピルフェニル）−６−アミノピペロナールを使用する９Ｑ６の合成および精製について記載されたように、９Ｑ５を調製および精製した。  得られたものは、４１ｍｇの淡黄色の固体（２１％）であった。
【０２２０】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ：８．２２（ｓ、１Ｈ）、７．６２（ｓ、１Ｈ）、７．５３（ｓ、１Ｈ）、７．４２（ｓ、４Ｈ）、６．１８（ｓ、２Ｈ）、  ５．７４（ｄ、Ｊ  ＝  １６．２  Ｈｚ、１Ｈ）、５．３０（ｄ、Ｊ  ＝  １６．２  Ｈｚ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、３．７９（ｓ、１Ｈ）、２．７３（ｍ、２Ｈ）、１．９１（ｍ、２Ｈ  ）、１．７７（ｍ、２Ｈ）、１．０５（ｔ、Ｊ  ＝  ７．４Ｈｚ、６Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ：１７４．０１、１５７．６８、１５１．０２、１５０．１４、１４９．９９、１４７．９８、１４６．８８、１４６．３２、１４３．３７、１３０．２２、１２９．５０、１２９．０８、１２７．８７、１２７．３３、１２５．４５、１１７．８０、１１６．９３、１０５．１９、１０２．１４、９７．３５  ７２．８０、６６．３８、５０．２１、３７．９５、３１．６１、２４．４６、１４．０２、７．８６。
【０２２１】
ＦＬ９Ｑ７：（２０ｓ）−９−（３−エトキシフェニル）−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン：（４Ｓ）−４−エチル−７，８−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−１Ｈ−ピラノ［３，４−ｆ］インドリジン−３，６，１０（４Ｈ）−トリオネアナおよび２−（３−エトキシルフェニル）−６−アミノピペロナールを使用する９Ｑ６の合成および精製について記載したように、９Ｑ７を調製および精製した。  結果は５８ｍｇの淡黄色の固体（３０％）であった。
【０２２２】
１Ｈ  ＮＭＲ（５００  ＭＨｚ、クロロホルム−ｄ）δ：８．２１（ｓ、１Ｈ）、７．６１（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｍ、２Ｈ）、７．０５（ｍ、３Ｈ）、６．１８（ｓ、２Ｈ）、  ５．７５（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．３１（ｄ、Ｊ  ＝  １６．１  Ｈｚ、１Ｈ）、５．１６（ｓ、２Ｈ）、４．１２（ｑ、Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ、２Ｈ）、３．７７（ｓ、１Ｈ）、  １．９０（ｍ、２Ｈ）、１．４７（ｔ、Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ、３Ｈ）、１．０６（ｔ、Ｊ  ＝  ７．４  Ｈｚ、３Ｈ）。  １３Ｃ  ＮＭＲ（１５１  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１７４．０４、１５９．３４、１５７．７０、１５１．０２、１５０．１３、１５０．０８、１４７．９２、１４６．８９、１４６．２７、１３３．６１、１３０．０３、１２７．８５、１２７．３９、１２５．３３、１２２．５３、１１７．８１、１１６．８４、１１６．７３、１１４．３７、１０５．３８、１０２  、９７．３４、７２．８０、６６．４０、６３．６５、５０．２１、３１．６０、１４．８５、７．８６。
医薬組成物
【０２２３】
医薬組成物は、本発明（ＰＣＴ  ／  ＵＳ１５  ／  ２２０９５）によって包含された。ここでは、新しい発明を追加した。一態様では、本開示は、少なくとも１つの式１の化合物および１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本発明の組成物は、上記の組み合わせのための他の治療薬を含み得、例えば、従来のまたは特殊な固体または液体溶媒または希釈剤、ならびに以下の様式に望ましい投与に適切なタイプの医薬添加物を使用することによって処方され得る。具体的には、懸濁液医薬品フォーマットでは、（ｉ）式１の化合物の懸濁液は、経口投与前に希釈するために、最大５％のプロピレングリコール（  ＰＧ）の存在下または非存在下で、生理食塩水とのエタノール−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）−化合物複合体を含む（ｉｉ）エタノール−ＨＰβＣＤ溶液で処方された式１の化合物複合体は、直接噴霧乾燥プロセスに入り、式１の化合物−ＨＰβＣＤ粉末複合体を得ることができる。次に、この粉末をジェットミリングし、ジェットミリングした式１−ＨＰβＣＤ粉末を、経口投与前に最大５％のＰＧを含む生理食塩水で直接希釈することができる。（ｉｉｉ）錠剤フォーマット製剤、医薬組成物中の式１の化合物−ＨＰβＣＤ複合粉末は、我々の技術に加えて医薬製剤の分野でよく知られている他のものにより、充填剤／結合剤／希釈剤（例えば、セルロース／セルロース誘導体、デンプン／デンプン誘導体、ラクトース）、崩壊剤（例えば、コロイド状シリコーン二酸化物、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン）、流動促進剤（例：二塩基性リン酸カルシウム、コロイド状二酸化シリコーン）、潤滑剤（例：ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ポリエチレングリコール、タルク）、抗菌剤／防腐剤（プロピレングリコール、プロピレンパラベン、メチルパラベン、グリセリン）  、等を含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２１ｓｔ  Ｅｄ．、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）を参照のこと。
【０２２４】
医薬組成物は、典型的には、その意図された投与経路と適合性があるように処方される。  本発明は、水性懸濁液中のＦＬ１１８およびＦＬ１１８コア構造プラットフォーム由来の類似体の経口投与に焦点を合わせているが、そのような製剤は、腹腔内および静脈内投与にも使用することができる。  タブレットフォーマットは経口投与にのみ使用する必要がある。
【０２２５】
経口投与用の水性懸濁液形態は、異なる製剤を含む。  １つの製剤では、水性懸濁液は、エタノール−ＨＰβＣＤ−式１化合物製剤の化合物の化合物形態を含み、これは、最大５％ＰＧの存在下または非存在下で生理食塩水でさらに希釈され、次いで経口摂取される。  別の配合物では、エタノール−ＨＰβＣＤ−式１化合物複合体の化合物は、噴霧乾燥プロセスに入り、ＨＰβＣＤ−式１化合物複合体の化合物粉末配合物を得て、次に噴霧粉砕して粉末粒子サイズを３７ミクロン以下にする。  次に、投与前に、ジェットミリングされたＨＰβＣＤ−式１化合物複合粉末を最大５％ＰＧ含有生理食塩水に溶解することができる。  ３番目の製剤では、ジェットミリングされたＨＰβＣＤ−式１化合物複合粉末製剤は、シクロデキストリン系（例えば、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ただしこれらに限定されない）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００（またはＰＥＧ４００）（０−５％）を含むあるいは含まないプロピレングリコール（ＰＧ、１〜５％）、および経口使用のための通常の生理食塩水中のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、２−５％）に希釈できる。
【０２２６】
経口投与用の粉末または錠剤形態は、シクロデキストリン系（例えば、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ただしこれに限定されない）で製剤化された式１の前述の化合物の無溶媒粉末錠剤製剤を含み、その製剤はさらに、微結晶セルロース（ＭＣＣ  、３０％−８０％）、コーンスターチ（０％−４０％）、ラクトース（１０％−２５％）、コロイド状二酸化ケイ素（１％−３％）、リン酸水素カルシウム（１％−１０％）、マグネシウムステアリン酸塩（０．２％−３％）、プロピレングリコール（１％−１０％）を含む。
【０２２７】
網膜芽細胞腫または他のヒト疾患の治療のための眼への適用のために、活性化合物は、βシクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンなどの低いパーセンテージ（１〜５％）の存在下で、適切な滅菌水性または非水性溶媒中の溶液または懸濁液の形態であり得る。これらは、ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）などの増粘剤の有無にかかわらず溶媒製剤に組み込まれる。  添加剤、例えば緩衝液、プロピレングリコール（ＰＧ）、酢酸フェニル水銀または硝酸フェニル、塩化ベンザルコニウム、またはクロルヘキシジンなどの殺菌剤および殺菌剤を含む防腐剤、ならびにヒプロメロースなどの増粘剤も含まれ得る。
【０２２８】
本開示の医薬組成物および方法は、本明細書に記載され、および／または当技術分野で知られているように、追加の治療活性化合物（第２の薬剤）をさらに含み得、これらは、典型的には、１つまたは複数の病的状態を治療するために使用される。本開示の式１の化合物を含む組成物。治療薬の組み合わせは、相乗的に作用して、本明細書に記載の様々な疾患、障害、および／または状態の治療または予防をもたらす。そのような第２の薬剤には、植物または非植物由来の化学療法剤および／または化学予防剤、例えば、クルクミン、レスベラトロール、ビタミンＤ３、イソチオシアネート（ＩＴＣ）、例えば、アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、プロスタノイド、エンドセリンアンタゴニスト、細胞質キナーゼ阻害剤、受容体キナーゼ阻害剤、エンドセリン受容体拮抗薬、例えば、アンブリセンタン、ボセンタン、およびシタクスセンタン、ＰＤＥ５（ＰＤＥ−Ｖ）阻害剤、例えば、シルデナフィル、タダラフィル、およびバルデナフィル、カルシウムチャネル遮断薬、例えば、アムロジピン、フェロジピン、バレパミル、ジルチアゼム、およびメントール、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、イロプロスト、ベラプロスト、一酸化窒素、酸素、ヘパリン、ワルファリン、利尿薬、ジゴキシン、シクロスポリン、例えば、シクロスポリンＡ、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、ＩＣＡＭ−３などの抗体、抗ＩＬ−２受容体（抗Ｔａｃ）、抗ＣＤ４５ＲＢ、抗ＣＤ２、抗ＣＤ３（ＯＫＴ−３）、抗ＣＤ４、抗ＣＤ８０、抗ＣＤ８６、ＣＤ４０とｇｐ３９の間の相互作用をブロックする薬剤（特異的な抗体など）  ＣＤ４０および／またはｇｐ３９、すなわちＣＤ  １５４、あちこちに構築された融合タンパク質ｍ  ＣＤ４０およびｇｐ３９（ＣＤ４０１ｇおよびＣＤ８ｇｐ３９）、核移行阻害剤などのＮＦ−カッパＢ機能の阻害剤（デオキシスペルグアリン（ＤＳＧ）など）、コレステロール生合成阻害剤（ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（ロバスタチンおよびシンバスタチン）など）、非ステロイド性イブプロフェン、アスピリン、アセトアミノフェン、レフルノミド、デオキシスペルグアリンなどの抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、セレコキシブなどのシクロオキシゲナーゼ阻害剤、プレドニゾロンまたはデキサメタゾンなどのステロイド、金化合物、サルブタモールなどのベータアゴニスト、サルメテロールなどのＬＡＢＡ、ロイコトリエンアンタゴニストモンテルカストとして、メトトレキサート、ＦＫ５０６（タクロリムス、プログラフ）、ミコフェノラートモフェチルなどの抗増殖剤、アザチオプリン、ＶＰ−１６、エトポシド、フルダラビン、ドキソルビシン、アドリアマイシン、アムサクリン、カンプトテシン、シタラビン、ゲムシタビンなどの細胞毒性薬、メトトレキサートなどの代謝産物、カンプトテシンなどのトポイソメラーゼ阻害剤、シスプラチンなどのＤＮＡアルキル化剤、キナソラフェニブなどの阻害剤、パクリタキセルなどの微小管毒、テニダップなどのＴＮＦ−α阻害剤、抗ＴＮＦ抗体または可溶性ＴＮＦ受容体、ヒドロキシ尿素およびラパマイシン（シロリムスまたはラパミューン）またはそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２９】
本発明の式１からの化合物はまた、薬学的に許容される塩として調製され得るが、非薬学的に許容される塩もまた、少なくともそのような塩の範囲において、本開示の範囲内にあることが理解される。薬学的に許容される塩の調製における中間体として有用である。薬学的に許容される塩の例には、硫酸塩、リン酸塩、メシル酸塩、ビスメシル酸塩、トシレート、乳酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、ビス酢酸塩、クエン酸塩、重塩酸塩、ナトリウム、カリウム、リチウムなどの薬学的に許容されるカチオンの塩、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびアルキルアンモニウム；塩酸、オルトリン酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸および臭化水素酸などの薬学的に許容される無機酸の酸付加塩。または酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、クエン酸、乳酸、粘液、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トリハロメタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、イソチオニック酸、サリチル酸などの薬学的に許容される有機酸の塩、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデティック酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリック酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸、吉草酸、およびオロチン酸が含まれるが、これらに限定されない。アミン基の塩はまた、アミノ窒素原子がアルキル、アルケニル、アルキニルまたはアラルキル部分などの適切な有機基を有する第四級アンモニウム塩を含み得る。塩は、化合物の遊離塩基形態を、塩が不溶性である溶媒または媒体中、または水などの溶媒中で１当量以上の適切な酸と反応させることなどによって、従来の手段によって形成することができる。真空中、凍結乾燥、または既存の塩の陰イオンを適切なイオン交換樹脂上の別の陰イオンと交換することによって除去される。いくつかの実施形態において、塩は、塩化物、硫酸塩、リン酸塩、メシレート、ビスメシレート、トシレート、乳酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、ビス酢酸塩、クエン酸塩、または二塩酸塩である。
【０２３０】
いくつかの実施形態において、本開示の式１の化合物は、治療上有効な量で投与される。  そのような投与は、式１の化合物が、例えば、臨床医によって求められている対象の細胞、組織、体液に関連する応答を誘発することを与える。  いくつかの実施形態において、週１日あたり、約０．０１から５ｍｇ  ／  ｋｇの対象体重が投与される。  適切な用量には、例えば、週１日あたり０．０１〜５ｍｇ  ／  ｋｇ、週１日あたり０．０５〜１ｍｇ  ／  ｋｇ、または週１日あたり０．１〜０．５ｍｇ  ／  ｋｇまたは２週ごとが含まれる。この範囲内で、いくつかの実施形態において、投薬量は、０．０５から０．２、０．２から１、または１から５ｍｇ  ／  ｋｇ  ／日または毎週または２週間ごとである。  投薬量は、例えば、治療効果および／または治療される対象への投薬量の症候性調整のために、これらの範囲のいずれか内の任意の用量に選択され得る。
【０２３１】
特定の対象に対する特定の用量レベルおよび投与頻度は変動し得、使用される特定の式１の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食事、投与形態と時間、排泄率、薬物の組み合わせ、特定の状態の重症度、および治療中のホストを含む様々な要因に依存することが理解されるであろう。
Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ
方法と使用法     
【０２３２】
本発明は、がん制御のための治療抵抗性因子の定義されたセットの２つ以上を標的化またはバイパスするために、式１の化合物を使用することによってがん耐性を克服することを標的とする治療（化学療法、放射線）耐性因子に関して独自の治療適応症を特定した。この一連の治療抵抗性因子には、ｓｕｒｖｉｖｉｎ、Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２、ＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポータータンパク質（ＡＢＣＧ２、ＡＢＣＣ４、ＭＤＲ１、ＭＲＰ１など）、低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ−１）α）、Ｈｄｍ２  ／  ＨｄｍＸ複合体のＨｄｍＸおよびＨｄｍＸ、ＥＲＣＣ６、ｐ５３の野生型、ヌルまたは変異、およびｐ５３関連経路の異常な発現が含まれる。薬物アフィニティーカラム精製およびＦ１プローブタンパク質マイクロアレイのトリチウム標識化合物を含む代替研究アプローチの使用により、薬物−タンパク質相互作用のグローバル検索が行われ、追加のバイオマーカーが明らかになった。これには、ｓｕｒｖｉｖｉｎ、Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２、ＡＢＣトランスポータータンパク質、低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ−１α）、Ｈｄｍ２、ＨｄｍＸ、ｐ５３、変異ＡＰＣ、および／または変異Ｋｒａｓが含まれるが、これらに限定されない。例示的な実施形態では、ＡＢＣトランスポータータンパク質は、ＡＢＣＧ２、ＡＢＣＣ４、ＭＤＲ１、ＭＲＰ１、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）、ストレス７０タンパク質（ＧＲＰ７５）、ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５（ｐ６８）、ヌクレオラーＲＮＡヘリカーゼ２（ＤＤＸ２１）、伸長因子２（ＥＦ２）、プレｍＲＮＡスプライシング因子ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼ（ＤＨＸ１５）、移行性小胞体ＡＴＰａｓｅ（ＴＥＲＡ）、トランスフェリン受容体タンパク質（ＴＦＲ１）、ＭＡＰキナーゼ活性化プロテインキナーゼ２（ＭＡＰＫ２）、カテニンベータ−１（ＣＴＮＢ１）、初期エンドソーム抗原１（ＥＥＡ１）、グアニンヌクレオチド結合タンパク質サブユニットベータ２様１（ＧＢＬＰ）、電子伝達フラボタンパク質サブユニットアルファ（ＥＴＦＡ）、プロテアソーム活性化因子複合体サブユニット３（ＰＳＭＥ３）、ＵＰＦ０３６８タンパク質Ｃｘｏｒｆ２６（ＣＸ０２６）、ペルオキシレドキシン−２（ＰＲＤＸ２）、ペルオキシレドキシン−１（ＰＲＤＸ１）、チオレドキシン依存性過酸化還元酵素（ＰＲＤＸ３）、セリン／アルギニンリッチスプライシングファクター３（ＳＲＳＦ３）、プロテアソームサブユニットベータタイプ２（ＰＳＢ２）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼＰ（ＧＳＴＰ１）、ＭＡＰ  ／微小管親和性調節キナーゼ３（ＭＡＲＫ３）、ＤＮＡ損傷誘導性１（ＤＤＩ１）、腫瘍タンパク質Ｄ５２様２（ＴＰＤ５２Ｌ２）、カルシウムチャネル、電位依存性、ベータ１サブユニット（ＣＡＣＮＢ１）、推定Ｇタンパク質結合受容体１（ＰＧＰＣＲ１）、ユビキチン特定のペプチダーゼ２（ＵＳＰ２）、メラノコルチン２受容体（ＭＣ２Ｒ）、線維芽細胞成長因子１８（ＦＧＦ１８）、腫瘍タンパク質ｐ５３誘導性タンパク質３（ＴＰ５３Ｉ３）、ＣＣＨＣ型亜鉛フィンガー、核酸結合タンパク質（ＣＮＢＰ）、ＷＤリピートドメイン２２  （ＷＤＲ２２）、カリウム電圧ゲートチャネルサブフ��ミリーＥメンバー１（ＰＶＧＣＳＥ−Ｍ１）、ユビキチン結合酵素Ｅ２Ｔ（推定）（ＵＢＥ２Ｔ）、ユビキチン様タンパク質７（ＵＬＰ７）、ＲＮＡ結合モチーフ、一本鎖相互作用タンパク質２（  ＲＢＭＳ２）、細胞質チロシンタンパク質キナーゼ（ＢＭＸ）、およびサイクリンＢ１相互作用タンパク質１（ＣＣＮＢ１ＩＰ１）。例示的な実施形態において、ｐ５３は、野生型、ヌルまたはｐ５３変異体であるか、または標準的なｐ５３経路、またはそれらの任意の組み合わせに異常があるｐ５３経路からなる群から選択される。
【０２３３】
本発明は、以下に提示される多くの例によってさらに説明され、これらは、いかなる方法でも限定的であると解釈されるべきではない。  以下は、例全体で使用されている材料と方法の説明である。
【０２３４】
細胞株、細胞培養物および試薬：ヒト結腸直腸がん細胞株（ＳＷ６２０、ＨＴ２９）、網膜芽細胞腫細胞株ＨＴ−３、ヒト膵管腺がん細胞株、ＰＡＮＣ１、ＭＩＡ  ＰａＣａ２（Ｍｉａ２）、ＢｘＰＣ３および卵巣がん細胞株ＳＫＶＯ３は元々ＡＴＣＣから入手した。ルシフェラーゼ（ｌｕｃＰＡＮＣ１）を発現するＰＡＮＣ１は、この研究で親のＰＡＮＣ１細胞株を用いて生成された。ヒト卵巣がん細胞株Ａ２７８０とそのシスプラチン耐性の対応物Ａ２７８０ＣＰは、スティーブンハウエル博士からの贈与であった［９２］。これらの細胞株はすべて、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ａｔｌａｎｔａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、ジョージア州ローレンスビル）、ペニシリン（１００ユニット／  ｍｌ）およびストレプトマイシン（０．１  μｇ  ／  ｍｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇｒａｎｄニューヨーク州アイランド）。細胞は通常、週に２回継代培養され、３７°Ｃで５％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で維持された。シスプラチン（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ  ＵＳＡ、ＬＬＣ）、ゲムシタビン（ファイザー）、およびアブラキサン（セルジーン）は、ロズウェルパークがん研究所病院薬局から入手した。モノクローナル抗チューブリン抗体、ポリクローナル抗アクチン抗体、およびヤギペルオキシダーゼ結合抗ウサギＩｇＧ抗体は、Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ。Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。ｓｕｒｖｉｖｉｎ抗体（ＦＬ−１４２）、ＥＲＣＣ１、ＥＲＣＣ６、γ−Ｈ２ＡＸ、ＣｈＫ１、ＣｈＫ２、ＡＴＭ、ＡＴＲ、ＲＡＤ５１、ＤＮＡＰｏｌβおよびＧＡＰＤＨの抗体は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）から入手した。  Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２、Ｂａｄ、Ｂｉｍ、Ｂａｘ、切断／活性化カスパーゼ−３、および（切断および全長）ＰＡＲＰの抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ、ＵＳＡ）から入手した。  ＭＴＴ（３−  ［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］  −２，５、−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）およびロイペプチンはＵＳＢ（クリーブランド、オハイオ州）から購入した。  ＭＧ１３２はＭｅｄｃｈｅｍｅｘｐｒｅｓｓ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）から購入した。  Ｄ−ルシフェリンカリウム塩はＧｏｌｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓｔ。Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。  ＦＬ１１８は９５％以上の純度で社内で合成された。ｉｎ  ｖｉｖｏ動物経口投与用に処方された懸濁液中のＦＬ１１８は、１２ヶ月以上にわたって非常に安定しており、ヒト腫瘍動物モデルで試験したときに新たに調製したものと比較して、その抗腫瘍効果に観察可能な変化はない。
【０２３５】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ研究のための式１化合物の処方：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究のために、式１の化合物は、最初に、ストック溶液として１ｍＭでＤＭＳＯに溶解される。  細胞に薬物を添加する前に、ストック溶液をＤＭＳＯでさらに希釈して、実験に使用した最終濃度の１０００倍の濃度にする。  １０００ｘワーキングストック溶液は、実験関連のバッファー／溶液またはがん細胞タイプ関連の培地に直接希釈される。  ｉｎ  ｖｉｖｏ研究のために、式１の化合物は、上記および以下に記載されるノウハウ方法および独自のプロセスを使用して処方される。
【０２３６】
ウエスタンブロッティング／イムノブロッティング：ＦＬ１１８の有無にかかわらず（ＭＧ１３２の存在下でいくつかの実験で）処理されたがん細胞は、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、１．０％ＩＧＥＰＡＬ  ＣＡ−６３０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、０．１％ＳＤＳ、および５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０を含むＲＩＰＡバッファーで溶解された。各サンプルの総タンパク質５０μｇを、等量の２Ｘ  ＳＤＳローディングバッファーと混合した後、９５°Ｃで５分間加熱した。サンプルを１２〜１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）ゲルで分離し、純粋なニトロセルロースメンブレン（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、カリフォルニア州ハーキュリーズ）に電気泳動した。次に、メンブレンをＴＢＳ−Ｔバッファー（２０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ／  ＨＣｌ  ｐＨ  ７．５、０．１３７  Ｍ  ＮａＣｌ、および０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０）中の５％スキムミルクで室温で２〜３時間ブロックした。次に、メンブレンを５％ＢＳＡを含むＴＢＳ−Ｔ中のさまざまな一次抗体とともに、１：５００〜１：２０００の希釈範囲で４°Ｃで一晩インキュベートした。  ＴＢＳ−Ｔで洗浄した後、メンブレンを５％スキムミルクと対応する二次抗体（１：５０００）を含むＴＢＳ−Ｔバッファー中で、室温で４５〜６０分間振とうしながらインキュベートした。  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ  Ｐｌｕｓ  −ＥＣＬ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用して目的のタンパク質を検出し、さまざまな時間（３〜１２０秒）の曝露で視覚化した。アクチンは、各サンプルの総タンパク質ローディングを正規化するための内部コントロールとして検出された。
【０２３７】
ＤＮＡサブＧ１フローサイトメトリー分析：ＰＡＮＣ１およびＭＩＡＰａＣａ−２膵臓がん細胞は、ＦＬ１１８の有無にかかわらず４８時間処理され、トリプシン処理によって回収され、ＰＢＳで洗浄された。  細胞（〜１×１０６）を５ｍｌの７０％エタノールに再懸濁した。  最初の固定後、細胞を２５μｇ／  ｍｌＰＩ、０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００および４０μｇ／  ｍｌＲＮａｓｅＡを含む０．５ｍｌ  ＰＢＳに懸濁した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞をフローサイトメトリーで分析した。  フローサイトメトリーからのデータは、ＷｉｎＬｉｓｔソフトウェア（Ｖｅｒｉｔｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｈｏｕｓｅ  Ｉｎｃ．、メイン州トップシャム）を使用して分析され、溶媒で処理されたコントロールと比較したサブＧ１ＤＮＡ含有量の相対的な増加として示された。  三回の試験を実施した。  実験結果は平均±ＳＤとして表された。  差異の統計的有意性は、２つのグループ間のスチューデントのｔ検定によって決定された。
【０２３８】
ＭＴＴアッセイ：薬物（ＦＬ１１８、ゲムシタビン、アブラキサン、シスプラチン）の単独および組み合わせによる、細胞増殖に対する細胞増殖／生存阻害効果を、ＭＴＴ細胞生存率アッセイによってそれぞれ決定した。生細胞（ウェルあたり２５００細胞）を９６ウェルプレートの各ウェルにプレーティングした。一晩のインキュベーション後、細胞を、関連する薬物の単独および組み合わせなしで、それぞれ、様々な濃度で処理し、７２時間インキュベートした。比色基質であるＭＴＴを各ウェルに０．４ｍｇ  ／  ｍｌの最終濃度で加えた。  ９６ウェルプレートの細胞を５％ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で４時間さらにインキュベートした後、培地を吸引した。  ＭＴＴ代謝産物であるホルマザンは、各ウェルに２００ｕｌのＤＭＳＯを加えることで可溶化された。ウルトラマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、関連するウェルの吸光度を５７０ｎｍで測定した。各実験は少なくとも３回行った。  ＩＣ５０  ／  ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ６（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ．、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）を使用して、分析された各化合物の一連の薬物投与量範囲から計算された。
【０２３９】
幹様および薬剤耐性の緑色細胞を検出するための、Ａ２７８０−ＧＦＰｃＯＤＣ、Ａ２７８０ＣＰ−ＧＦＰｃＯＤＣおよびＰＡＮＣ１ＧＦＰｃＯＤＣ細胞の生成および蛍光顕微鏡法：緑色蛍光マーカーを含むレトロウイルス発現ベクターｐＱＣＸＩＮ−ＺｓＧｒｅｅｎ−ｃＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼ）は、Ｆｒａｎｋ  Ｐａｊｏｎｋ博士（Ｖｌａｓｈｉ  Ｅら、がん幹細胞のｉｎ  ｖｉｖｏイメージング、追跡、およびターゲティング）から提供された。Ｊ  ＮａｔｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ。２００９；  １０１：３５０−９）。  上記のベクターでトランスフェクトされたパッケージング細胞から収集されたレトロウイルス粒子は、それぞれＡ２７８０、Ａ２７８０ＣＰ、およびＰＡＮＣ１細胞に感染させた。  トランスフェクトされた細胞プールを実験に使用した。  トランスフェクトされた細胞は、シスプラチンまたはＦＬ１１８の単独または組み合わせの有無にかかわらず、定義された時間処理された。  細胞画像は、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ７３  Ｉｎｖｅｒｔｅｄ  Ｓｃｏｒｅ  ｓ（Ｏｌｙｍｐｕｓ）を使用してデジタルで取得した。  生細胞のパーセンテージは、１０個の顕微鏡視野からカウントされた全細胞の平均から得られた。
【０２４０】
マトリゲル幹細胞培養アッセイ：球体形成アッセイは、溶媒およびＦＬ１１８の存在下で１、１０および１００ｎＭで処理することによりＰＡＮＣ１細胞を用いて実施された。  球体は、２０  ｎｇ  ／  ｍｌ上皮成長因子、１０  ｎｇ  ／  ｍｌ塩基性線維芽細胞成長因子、５μｇ／  ｍｌインスリンおよび０．４％ウシ血清アルブミンを含む改良型ＭＥＭで維持された。  ＰＡＮＣ１細胞は、２４ウェル超低付着プレート（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）に１０００細胞／ウェルの密度で播種された。  簡単に説明すると、１０００個のＰＡＮＣ１細胞を４０μＬの培地に懸濁し、６０μＬのＢＤＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、米国カリフォルニア州サンノゼ）と完全に混合した。  混合物をウェルの端にプレーティングし、プレートを５％ＣＯ２インキュベーター内で３７℃で４５分間インキュベートして、ＢＤＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）を固化させた。  凝固後、ＦＬ１１８治療を行った。  各ウェルの球体をプレートにセットして２０日間成長させた後、顕微鏡下で１０倍の倍率で視覚的に定量した。
【０２４１】
ＣＤ４４陽性細胞選別およびＣＤ４４陽性細胞コロニー形成：ＣＤ４４陽性（ＣＤ４４  ＋）細胞は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）を使用して精製（選別）された。  ＦＩＴＣ結合マウス抗ヒトＣＤ４４は、ＣＤ４４  ＋  ＰＡＮＣ１細胞のＦＡＣＳ精製に使用された。簡単に説明すると、ＰＡＮＣ１細胞は０．２５％トリプシン／０．０２％ＥＤＴＡを使用して回収された。細胞培養培地に細胞を再懸濁した後、細胞をカウントし、２％ＦＢＳを含むＰＢＳで洗浄し、遠心分離によって収集した。  １０  μＬのＦＩＴＣ−ＣＤ４４抗体を１００万個の細胞と２％のＦＢＳを含む１ｍｌのＰＢＳに氷上で３０分間加えた。抗体標識後、ＰＡＮＣ１細胞を２％ＢＳＡを含むＰＢＳで洗浄した後、ＢＤＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）ＩＩＩセルソーター（ＢＤ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、ＵＳＡ）でフローサイトメトリー分析を行った。  ＰＡＮＣ１  ＣＤ４４  ＋細胞を３００細胞／ウェルの密度で６ウェルプレートにプレーティングし、播種の２４時間後に１、１０、１００ｎＭで細胞を溶媒またはＦＬ１１８で処理した。溶媒およびＦＬ１１８は７２時間の処理後にＰＢＳで洗い流された。細胞は、３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーター内で１０％血清を含む完全培地で１２日間連続培養された。コロニーを固定し、クリスタルバイオレット溶液で染色し、１２日目にコロニーを数える前に画像を撮影した。実験結果は平均±ＳＤとして表した。差異の統計的有意性は、２つのグループ間のスチューデントのｔ検定によって決定された。
【０２４２】
動物モデル研究の承認：すべてのｉｎ  ｖｉｖｏ実験研究は、ロズウェルパーク総合がんセンターの施設内動物管理使用委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認されたＩＡＣＵＣ承認のマウスプロトコルに従って実施された。  使用されるすべてのＳＣＩＤマウスは６〜１２週齢である。
【０２４３】
使用されたヒト異種移植腫瘍：本発明の開示において、ヒトＳＷ６２０（結腸直腸）、ＨＴ２９（結腸直腸）およびＨＴ−３（網膜芽細胞腫）がん細胞株によって確立された異種移植腫瘍が使用された。  ヒト腫瘍細胞株由来の異種移植腫瘍は、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスの側面領域に１００〜１５０  μＬの培地で２〜５ｘ１０６の培養がん細胞を皮下注射することによって最初に確立される。  次に、派生した腫瘍は、実験または維持のためにトロカールを介して３０〜５０  ｍｇの非壊死性腫瘍塊を移植することにより、マウスで数世代にわたって受け継がれる。  本発明の開示において、本発明者らはまた、２つのタイプのがん患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍、すなわち、ヒト結腸直腸がんＰＤＸ（２７４５４）およびヒト膵臓がんＰＤＸ（１４２４４）を使用した。  ＰＤＸ腫瘍はもともと、クリニックの転移部位から得られた膵臓がんおよび結腸直腸がん患者の腫瘍組織からの重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスで確立された。
【０２４４】
ヒト膵管腺がん（ＰＤＡＣ）同所性腫瘍マウスモデルおよび治療：培地で増殖させたＰＡＮＣ１細胞（ＬｕｃＰＡＮＣ１）をトリプシン処理により回収し、氷冷ＰＢＳで２回洗浄し、５  ｘ１０７生細胞／  ｍｌに調整した。  １００万個のＬｕｃＰＡＮＣ１細胞を含む２０μＬの容量をＳＣＩＤマウス膵臓に注入した。具体的には、ＬｕｃＰＡＮＣ１細胞の膵臓内移植では、ＳＣＩＤマウスを、動物センターが提供および保守しているげっ歯類麻酔器を使用してイソフルランで麻酔した。外科的麻酔レベルは、足引き込み反射で監視された。目の軟膏を差した。腹部を剃毛し、ヨウ素スクラブとアルコールを使用して準備した。はさみを使用して最大１ｃｍの切開を行い、脾臓の３分の１を引き出し、２９ゲージの針を使用してＬｕｃＰＡＮＣ１細胞を２０  μＬの容量（１００万細胞）で膵尾部に注入した。膵臓を腹部に戻し、腹壁の筋肉組織と腹膜を５．０吸収性の外科用縫合糸を使用して縫合した。皮膚はウェットボンドで閉じられ、手術の７日後に除去された。術後鎮痛は、必要に応じて術後８〜１２時間ごとに０．０５ｍｇ  ／  ｋｇのブプレノルフィンを皮下投与した。循環する温水加熱パッド上に置かれたケージ内で、マウスを単独で回復させた。これにより、術後のショックが軽減される。マウスが外科的処置から完全に回復し、通常の飲食でケージの周りを自由に動き回ったら、マウスをケージに戻した。研究の過程で瀕死状態の兆候を示したマウスがあれば、安楽死させた。健康な同所性マウスはランダムに２つのグループ（グループあたり３匹のマウス）に分けられた：コントロール／溶媒グループとＦＬ１１８−シスプラチン治療グループ（注釈として、ＬｕｃＰＡＮＣ１細胞は薬剤耐性であり、手術マウスの量を最小限に抑えるためで、薬物単独群は研究に含まれてなかった）。溶媒およびＦＬ１１８−プラスシスプラチンによる治療は、細胞同所移植の７日後に開始された。治療スケジュールは、５  ｍｇ  ／  ｋｇのシスプラチン（最大耐量の半分、〜１  ／  ２ＭＴＤ）および０．７５  ｍｇ  ／  ｋｇのＦＬ１１８（本発明者らの研究ではｉｐを介して〜１  ／  ６ＭＴＤ）が腹腔内経路（ｉｐ）を介して７、１４、２１、２８（ｑ７ｄ  ｘ  ４）日目に投与された。生物発光イメージング（ＢＬＩ）は１〜３週間ごとに撮影された（１週目がベースライン）。
【０２４５】
マウス全身のｉｎ  ｖｉｖｏイメージング：ロズウェルパークキャンサーインスティテュート（ＲＰＣＩ）のトランスレーショナルイメージング共有リソースにあるＸｅｎｏｇｅｎＩＶＩＳ（登録商標）ｉｎｖｉｖｏイメージングシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、マサチューセッツ州ホプキントン）を使用して、ＳＣＩＤマウス全身イメージングを実施してルシフェラーゼレポーター活性を検出した。イメージングの前に、腫瘍を持ったマウスを、別の誘導チャンバー内で酸素と混合した２．５％のイソフルラン（Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ  Ｌｏｇｉｓｔｉｃｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｉｎｃ．、ペンシルベニア州マウントジョイ）で麻酔した。誘導麻酔後、マウスに７５  ｍｇ  ／  ｋｇの用量でＰＢＳに溶解したＤ−ルシフェリンカリウム塩を腹腔内注射し、ｉｎ  ｖｉｖｏイメージングチャンバーに移した。動物は、イメージングチャンバー内で２．５％の維持麻酔を与えられ、Ｄ−ルシフェリン注射の１０分後にルシフェラーゼ活性の検出のためにＢＬＩが行われた。画像化後、動物をケージに戻し、完全に回復するようにモニターした。ＢＬＩ信号強度を表す総フラックスの報告された測定値は、腫瘍全体にわたって関心領域を追跡することによって得られた。すべての測定値と表示された疑似カラー化ＢＬＩ放射輝度画像は、Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、マサチューセッツ州ウォルサム）ソフトウェアを使用して取得された。
【０２４６】
ヒト膵臓がん患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍マウスモデルおよび治療：実験はＩＡＣＵＣ承認のマウスプロトコルに従った。簡単に説明すると、ＳＣＩＤマウスで維持されているヒトＰＤＡＣ  ＰＤＸ腫瘍を分離し、非壊死性腫瘍組織（３０〜４０  ｍｇ）を雌ＳＣＩＤマウスの脇腹に皮下移植した。  ＰＤＡＣ  ＰＤＸ腫瘍が１５０〜２５０  ｍｍ３に成長した腫瘍移植の７〜１４日後（０日目として定義）、マウスをＦＬ１１８単独または組み合わせ試験に必要なグループ（グループあたり５匹のマウス）にランダムに分けた。この研究では、薬物投与に時間節約の腹腔内（ｉｐ）経路を使用した。  ＦＬ１１８とゲムシタビンのスケジュールは、単独または組み合わせて週４回の薬剤投与である。現在の研究のＦＬ１１８は、生理食塩水中にＦＬ１１８（０．１−０．２５  ｍｇ  ／  ｍｌ）、ＤＭＳＯ（５％）、およびヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（０．０５−０．１２５％、ｗ  ／  ｖ）を含む基本的な処方レシピを使用した。配合プロセスは、以前の特許（ＰＣＴ  ／  ＵＳ２０１１  ／  ０５８５５８）に詳細に記載されている。溶媒溶液は、ＦＬ１１８を含まない生理食塩水中のＤＭＳＯ（５％）およびヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（０．０５−０．１２５％、ｗ  ／  ｖ）を含む。腫瘍の長さ（Ｌ）と幅（Ｗ）は、実験研究が終了するまで、週に１〜３回デジタルノギスを使用して測定した。腫瘍体積（ｖ）は、次の式を使用して計算された：ｖ  ＝  ０．５（Ｌ  ｘ  Ｗ２）。次に、腫瘍サイズを、０日目に対する腫瘍サイズのパーセンテージとして０日目の腫瘍サイズで割った。各時点での平均腫瘍体積±標準偏差（ＳＤ）は、各グループの５匹のマウスから導き出された。腫瘍曲線は、ＳｉｇｍａＰｌｏｔソフトウェアを使用して作成した。
【０２４７】
ＦＬ１１８毒性およびＭＴＤ研究のための免疫担当ＢＡＬＢ／ｃｊマウスの使用：６週齢の雌のＢＡＬＢ  ／  ｃｊマウスはジャクソン研究所から購入した。  マウスをランダムに４つのグループに分け、１グループあたり６匹のマウスを使用した。  次に、マウスを溶媒、１０ｍｇ  ／  ｋｇのＦＬ１１８（これはＳＣＩＤマウスのＦＬ１１８ＭＴＤ）、１２．５ｍｇ  ／  ｋｇおよび１５ｍｇ  ／  ｋｇで、スケジュールｑｗｘ４の経口投与により治療した。ＭＴＤを最高用量として定義した。  その結果、薬物関連の瀕死状態や死亡は発生せず、一時的な体重減少は２０％以下であり、血液学や生化学のパラメーターを含む重大な臨床病理学的変化はない。  実験中に記録された他の毒性の兆候には、マウスの行動、毛皮の状態、動き、下痢が含まれていた。  マウスの血液学および化学の研究は、ＰｒｏＣｙｔｅＤｘ（登録商標）血液分析装置（ＩＤＥＸＸ  ＢｉｏＲｅｓｅａｒｃｈ）およびＣａｔａｌｙｓｔＤｘ（登録商標）化学分析装置（ＩＤＥＸＸ  ＢｉｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を使用して、Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  ＡｎｉｍａｌＣｅｎｔｅｒの社内サービスで実施された。
【０２４８】
ＦＬ１１８毒性およびＭＴＤ研究のための免疫能力のあるビーグル犬の使用：コントラスト研究機関（ＣＲＯ）のコーヴァンスが調査を実施した。  簡単な実験方法は以下の通りである：
【０２４９】
ＦＬ１１８  ＭＴＤは、ＳＣＩＤマウスにおける２回の投与について１２ｍｇ  ／  ｋｇ  ／投与であると推定された。  犬のＦＬ１１８ＭＴＤの計算値は２ｍｇ  ／  ｋｇである。  したがって、用量は０．５５、１．１、および２．２  ｍｇ  ／  ｋｇに設定された。  Ｃｏｖａｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ。（Ｃｕｍｂｅｒｌａｎｄ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ）から、体重が７．９〜１０．１  ｋｇ（オス）および７．２〜８．３  ｋｇの５か月齢のオス９匹とメス９匹の純血種ビーグル犬を受け取った。  動物は、開始前に１５日間、試験施設（インディアナ州グリーンフィールド）に順応させた。  動物は性別によって社会的に収容された。  動物は、表１１に示す実験計画で、グループ割り当てに関して体重バランスを達成するように設計されたコンピューター化された手順を使用して研究に割り当てられた。
【０２５０】
この研究におけるＦＬ１１８の製剤は、０．４４％（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）、２％ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）および滅菌生理食塩水（０．８５％ＮａＣｌ）中の１％プロピレングリコール（ＰＧ）中の０．１１、０．２２および０．４４ｍｇ  ／  ｍｌのＦＬ１１８である。ＦＬ１１８を含まないこの経口投与溶液が溶媒対照であった。投与製剤は、投与段階の１日目と８日目に１回、５  ｍＬ  ／  ｋｇの投与量で強制経口投与された。投与量は、直近の記録された予定体重に基づいていた。動物は、死亡率、異常、および痛みや苦痛の兆候について、１日２回（午前と午後）チェックされた。異常所見が記録された。詳細な観察が行われた日を除いて、投与段階の間、各動物についてケージサイド観察が１日１回行われた。異常所見が記録された。詳細な観察は、投与前段階中および投与段階の１、４、および８日目（該当する場合は投与前）に各動物について１回実施された。予定された犠牲の日に、各動物について詳細な観察も収集された。異常所見または正常の兆候が記録された。投与の各日に、投与後約１、４、および２４時間に各動物についてケージサイド観察を行った。異常所見が記録された。投与後の観察開始時間は、各グループ／性別の投与が完了した時間に基づいていた。体重は、投与前段階と投与段階の１、４、および８日目（該当する場合は投与前）に２回記録された。定量的摂餌量は、投与段階の１日目から４日目、４日目から８日目、および８日目から９日目まで記録された。血液学、凝固、および臨床化学のための血液サンプルは、絶食した動物から頸静脈を介して収集された。血液サンプルは、投与前の段階と予定された犠牲の日に一度収集された。抗凝固剤は、凝固試験用のクエン酸ナトリウムと血液学試験用のカリウムＥＤＴＡだった。臨床化学用のサンプルは、抗凝固剤なしで収集された。
【０２５１】
投与段階の１０日目に、一晩絶食させたすべての動物をペントバルビタールナトリウムで麻酔し、放血させ、そして剖検した。  犠牲にした動物の最終体重を記録した。  死骸の外的特徴の肉眼的検査；  外部の体の開口部；  腹部、胸部、および頭蓋腔；  臓器；  そして組織の肉眼的検査が実行された。  剖検中に病理医が相談に応じた。  臓器重量は予定された犠牲で記録された。  対になった臓器を一緒に秤量した。  統計データ分析には、絶対体重、体重変化、定量的食物消費、継続的な臨床病理値、および終末体重と臓器重量のパラメーターを含む平均と標準偏差（ＳＤ）が含まれた。
【０２５２】
腫瘍を有するマウスにおける薬物動態（ＰＫ）研究のための標本調製：薬物ＰＫ研究は以下のように実施された：ＳＣＩＤマウスに最初にヒトＳＷ６２０およびＨＴ２９腫瘍を接種した（ＰＫデータの比較のために、腫瘍サイズが約８００−  １０００  ｍｍ３、ＦＬ１１８の単回経口投与がヒトＳＷ６２０およびＨＴ２９異種移植腫瘍を有するＳＣＩＤマウスの６つのグループ（グループあたり３匹のマウス）に１．５ｍｇ  ／  ｋｇの用量で与えられた。注釈として、ＦＬ１１８の経口投与の１．５  ｍｇ  ／  ｋｇは、毎日５回（ｑ１ｄ  ｘ  ５）および１日おきに５回（ｑ２ｄ  ｘ  ５）のスケジュールで、ＦＬ１１８  ＭＴＤ（最大耐量）に近い。腫瘍組織および血液サンプルは、３０分、１時間、４時間、１２時間、および２４時間の一連の時点で収集された。各腫瘍組織をチューブに集め、すぐに液体窒素で凍結した。各血液サンプルをＬｉ−ＨｅｐａｒｉｎＬＨ  ／  １．３チューブ（ＳＡＲＳＴＥＤＴ）に収集し、遠心分離（１５００ｒｐｍ  ｘ  ２分）によって血漿を回収した。各血液サンプルから収集された血漿は新しいチューブに移され、すぐに液体窒素で凍結された。次に、液体窒素で凍結した検体を分析のために−８０℃の冷凍庫に移した。
【０２５３】
経口投与後の化合物の薬物動態分析：血漿中の薬物は酸性化メタノールで抽出された。氷冷した酸性化メタノールの８００μＬアリコートを２００  μＬの血漿に加え、１５秒間ボルテックスした。並行して、マウス組織またはヒト異種移植腫瘍組織のＦＬ１１８を最初に１ｘ  ＰＢＳ（Ｗ  ／  Ｖ  ＝  １ｇ組織／  ３  ｍｌ  １ｘ  ＰＢＳ）でホモジナイズし、次に酸性化メタノールで抽出した。氷冷した酸性化メタノールの８００μＬ分を２００  μＬのホモジナイズした組織に加え、１分間ボルテックスした。次に、サンプルを１３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清をきれいな１３Ｘ１００ｍｍガラス管に移した。サンプルは真空下で乾燥され、分析まで−２０°Ｃで保存された。次に、乾燥したサンプルを２００  μＬの移動相（８０％３％ＴＥＡおよび２０％アセトニトリルｐＨ  ５．５）で再構成し、１５  μＬを注入した。分析は、Ｅｍｐｏｗｅｒソフトウェアと接続された蛍光検出を備えたＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣシステムを使用して実行された。分離は、Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  １．７μｍ、２．１ｍｍ  Ｘ  １００ｍｍカラム（Ｗａｔｅｒｓ）で行う。蛍光検出器は、次の励起（Ｅｘ）および発光（Ｅｍ）波長に設定されている：Ｅｘ  ３７０ｎｍ  Ｅｍ５１０ｎｍ。キャリブレーション標準は、ＦＬ１１８で血漿をスパイクすることによって準備される。検量線の範囲は５ｎｇ  ／  ｍＬ〜５００ｎｇ  ／  ｍＬである。品質保証を確実にするために、品質管理サンプルは、２５および２５０  ｎｇ  ／  ｍＬの血漿中で分注され、−２０°Ｃで保存される。  ＱＣサンプルは、アッセイの開始時と終了時に２回注入される。アッセイは検証済みである。検証は、５日間にわたって１２の標準曲線を実行することで構成される。  ＱＣサンプルは各曲線で分析される。アッセイキャリブレータの全体的な精度（％ＣＶ  ＝  ６．４）と全体的な精度（１０１％）は優れていることが示されている。  ％ＣＶとして測定されたＱＣ精度は７．５％に等しく、全体的なＱＣ精度は９６％である。
【０２５４】
ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎＰｒｏｔｏＡｒｒａｙ（登録商標）のスクリーニングを通じて生化学的標的／バイオマーカーを検索するためのプローブとしてのトリチウム（３Ｈ）標識ＦＬ１１８またはＦＬ１１８類似体の使用。
【０２５５】
小分子／リガンド（ＦＬ１１８または類似体）の３Ｈ標識：５０ｍｌの丸底フラスコに、０．８〜１ｍｇのＦＬ−２、１２０ｍｇのＰｄＢａＳＯ４  ５％、９０Ｃｉ  Ｔ２ガスを充填し、１８０°Ｃ〜１９０°Ｃで２４時間シリコーンオイルバスに浸漬する。  １ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、５０％ＥＴＯＨで１０回逆交換した。  ＣａｐＣｅＬＬ  Ｐａｋ  Ｃ−１８カラムに直接注入、移動相３０％ＣＨ３ＣＮ１  ０．１％ＴＦＡ、流量６  ｍｌ  ／  ｍｉｎ、Ｕ．Ｖ。  ＝  ２００  ｎｍ、ｒ．ｔ。  ＝  ４０分  精製後、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙで９，０００を超えるヒトタンパク質をスクリーニングするために、１６．５  ｍＣｉ  ／  ｍｍｌの特異性を持つプローブが得られた。
【０２５６】
３Ｈ標識プローブ（ＦＬ−２）を用いたＰｒｏｔｏＡｒｒａｙ（登録商標）スクリーニング：１．  ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙのブロック：ａ）−２０°Ｃでの保管から取り出したら、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｖ５．０を含むメーラーを４°Ｃにすぐに置く。使用前に少なくとも１５分間、メーラーを４℃で平衡化する。  ｂ）マイクロアレイのバーコードの端がインデントされた数字を含むトレイの端の近くになるように、４チャンバーのインキュベーショントレイの底にバーコードを上に向けてＨｕｍａｎＰｒｏｔｅｉｎＭｉｃｒｏａｒｒａｙを配置する。  ｃ）滅菌ピペットを使用して、５ｍＬのＦＬ−２アッセイバッファーを各チャンバーに加える。バッファーをアレイ表面に直接ピペッティングしないようにする。  ｄ）５０  ｒｐｍに設定されたシェーカー上で４．Ｃで１時間トレイをインキュベートする（循環振とう）。  ｅ）インキュベーション後、ＦＬ−２アッセイバッファーからプロテインマイクロアレイを取り出す。  ４チャンバーのインキュベーショントレイからアレイを取り外すには、鉗子の先端をインデントされた数字の端に挿入し、アレイをそっと上向きにこじ開ける。手袋をはめた手を使用して、アレイの端だけを持ってマイクロアレイを持ち上げる。スライド表面から余分な液体を取り除くためにタップする。  ｆ）すぐにアレイのプローブに進む。  ２．  ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙのプロービング：ａ）次の図に示すように、アレイの約３分の１をチューブの外側に伸ばした状態で、各ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙを別々の滅菌５０ｍＬコニカルチューブに水平に配置する。アレイのバーコード付きの端は、チューブから突き出ている必要がある（上向き）。  ｂ）ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙごとに、ＦＬ−２と位置マッピング試薬３Ｈ−エストラジオールを含む１００μＬのプロービング混合物を追加し、混合物をＰｒｏｔｏＡｒｒａｙの表面に静かにピペッティングする。  ｃ）ピンセットを使用してＰｒｏｔｏＡｒｒａｙの表面にカバースリップをそっと置き、気泡が入らないようにする。  ｄ）アレイの印刷面を上に向けて、カバースリップ付きのＰｒｏｔｏＡｒｒａｙをコニカルチューブ内に配置する。チューブにキャップをする。アレイの印刷面が上を向き、チューブができるだけ水平になるように、チューブを平らな面に置く。必要に応じて、偶発的な妨害を避けるために、平らな面にコニカルチューブをテープで固定する。  ｅ）アレイを振とうせずに４℃で９０分間インキュベートする。  ｆ）ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙを含むコニカルチューブをインキュベーターから取り出し、４０ｍＬのトリチウムＳＭＩアッセイバッファーをチューブに加える。  ｇ）アレイをバッファー中で室温で３０秒間インキュベートする。ガラスカバースリップが浮き上がる。カバースリップがアレイから外れていない場合は、ピンセットでカバースリップを取り外さないようにする。  ｈ）鉗子を使用して、アレイの表面に触れずに、外れたカバースリップを慎重に取り外す。カバースリップは放射性廃棄物として適切に廃棄する。  ｉ）トリチウムＳＭＩアッセイバッファーをデカントする。放射性廃棄物は適切に処分する。  ｊ）４０ｍＬの新しいトリチウムＳＭＩアッセイバッファーをチューブに加える。アレイを室温で３０秒間インキュベートする。バッファを捨てる。洗浄ステップをもう一度繰り返す。放射性廃棄物は適切に処分する。  ｋ）ＮａＣｌを含むトリチウムＳＭＩアッセイバッファーを使用する場合は、ＮａＣｌを含まないトリチウムＳＭＩバッファーでさらに１回洗浄する。  ３．  ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙの乾燥と露出：ａ）プロービング手順の最後にチャンバーからアレイを取り外す。アレイの一方の端をラボワイプで数秒間軽くたたいて、バッファーを排出する。  ｂ）各アレイをスライドホルダー（またはスライドホルダーがない場合は滅菌５０  ｍＬコニカルチューブ）に入れる。遠心分離中にアレイが損傷しないように、アレイが適切に配置され、ホルダーに固定されていることを確認する。  ｃ）アレイをスライドホルダーまたは５０  ｍＬコニカルチューブで２００Å〜ｇで１分間、遠心分離機（スライドホルダーを使用している場合はプレートローターを装備）で室温で遠心分離する。アレイが完全に乾いていることを確認する。  ｄ）透明なテープを使用して、スライドを８Ｘ１０  Ｅｘｅｔｅｒ  Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ  Ｂｏａｒｄ（または同様のサイズの厚い濾紙）に接着する。アレイ領域を覆わずに、スライドの上端と下端のみをテープで固定する。接着は、長時間露光中の不要な動きを防ぐのに役立ち、トリチウムが画面に移動するのを防ぐのにも役立つ。  ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙをＸ線フィルムカセットに入れ、トリチウムに敏感な蛍光体スクリーンで直接オーバーレイする。  ｅ）ＰｒｏｔｏＡｒｒａｙを蛍光体スクリーンに１６日間さらす。  ４．画像の取得と分析：ＧｅｎｅＰｉｘ  Ｐｒｏ  ｖ７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）および／またはＳｃａｎＡｒｒａｙ。画像の取得と分析には、取得ソフトウェア（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｉｎｃ。）を使用した。
【０２５７】
生化学的標的／バイオマーカーのＦＬ１１８またはＦＬ１１８アナログアフィニティーカラム精製：１．リガンド（ＦＬ１１８またはアナログ）カップリング：ａ）２カラムのＤＡＤＰＡ  ＵｌｔｒａＬｉｎｋサポート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）とボトルのＷａｓｈＢｕｆｆｅｒを室温に平衡化する。  ｂ）トップキャップを取り外し、カラムからボトムタブをねじる（付属の白いチップを使用してカラムの底を再キャップする）（注：手順全体でカラムのキャップを外すときは、樹脂ベッドに気泡が引き込まれないように、必ずボトムキャップの前にトップキャップを取り外す）ｃ）２つのカラムを自家製のラックに置き、貯蔵溶液をカラムから排出できるようにする。  ｄ）２  ｍｌのカップリングバッファー（ＣＢ）を加え、レジンベッドに流してカラムから排出することにより、カラムを平衡化する。次に、８０％ＤＭＳＯ：２０％ＣＢにＦＬ１１８を加える前に、ＤＭＳＯを１０％から８０％に徐々に増加させながら、以下の各溶液で樹脂を３  ｍｌ（カラム容量は２  ｍｌ）で徐々に平衡化する。ボトムキャップ（付属の白いチップ）を交換する。収集試験管からのフロースルーを廃棄する。  ｅ）５  ｍｌの対照溶液（４．５  ｍｌ  ＤＭＳＯ  ＋  ０．５  ｍｌ  ＣＢ）をカラム１に加える（上記のＡ２を参照）。  ５ｍｌのＦＬ１１８溶液［２．５ｍｌのＦＬ１１８（ＤＭＳＯ中１ｍｇ  ／  ｍｌ）＋  ２ｍｌのＤＭＳＯ  ＋  ０．５ｍｌのＣＢ］をカラム２に加える。ｆ）コントロールまたはＦＬ１１８溶液にレジンを穏やかに上下に逆さにして再懸濁する。  ｇ）レジンスラリーを１および２のラベルが付いた１５  ｍｌコニカルチューブに移する。ｈ）各１５  ｍｌチューブに２００μｌのＰｈａｒｍａＬｉｎｋカップリング試薬（３７％ホルムアルデヒド溶液）を追加する：２〜４  ｍｌのＦＬ１１８結合溶液あたり２００μｌ）。  ｉ）チューブに蓋をして、ＦＬ１１８スラリーを５４°Ｃで約２４時間回転させながらインキュベートする。  ｊ）次に、１０００μｌのＢＣと５０μｌのホルムアルデヒドを５５°Ｃで４８時間旋回する各カラムに加える。  ２．レジンスラリーを新しいカラムに移し、カラムを洗浄し、アフィニティー精製のために保管する：  ａ）４つの室温の空のカラムを準備する。上部のキャップを開き、純粋なｄｄＨ２Ｏで各カラムに下部のキャップを完全に装着してから、下部のキャップを開いて排水するが、乾燥させないようにする。  ｂ）各カラムに１〜２ｍｌのＣＢＤ３  ／  ４（〜５０〜５５％水性）を加え、排出させるが、乾燥させないようにする。  ｃ）溶液がカラムからほとんど流出したら、ボトムキャップにキャップを付ける（カラムを乾燥させないようにする）。  ｄ）２本の１５  ｍｌ反応チューブを回転させて、コントロールスラリーまたはＦＬ１１８  ／レジンスラリーを再懸濁する。次に、１  ｍｌピペットを使用して、１）コントロールスラリーをカラム１（Ｃ１：コントロール−ｃｙｔｏ）および２（Ｃ２：ＦＬ１１８−ｃｙｔｏ）に移し、２）ＦＬ１１８スラリーをカラム３（Ｃ３：ｃｏｎｔｒｏｌ−ｎｕｃｌ）およびカラム４（Ｃ４：ＦＬ１１８−ｎｕｃｌ）に移す。注釈として、ａ）ＤＭＳＯ  ／  ＢＣ  ＝  ４．５ｍｌ  ／  ５．５  ｍｌ；  ｂ）カラム容量は１��ｌである。  ｅ）樹脂が沈殿するのを待ってから、下部キャップを開いて、溶液が直立したカラムから流出し、すべての反応溶液を排出できるようにする。  ｆ）２  ｍｌのＣＢＤ３、次に２  ｍｌのＣＢＤ３、次に２  ｍｌの超純水／  ＤＭＳＯ溶液（７５：２５）でカラムを洗浄して、バッファーの沈殿を防ぐ。次に、１．５  ｍｌの１００％ＤＭＳＯで洗浄して、未反応のＦＬ１１８を除去する。  ｇ）各カラムに対して１  ｍｌのＣＢＤ６でカラムを連続的に洗浄し、次に１  ｍｌのＣＢＤ５、ＣＢＤ４、ＣＢＤ３、ＣＢＤ２、およびＣＢＤ１で、最後に４  ｍｌのトリス洗浄バッファー（０．１  Ｍ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ  ８．０）で洗浄する。次に、９  ｘ  ４  ｍｌのトリス洗浄バッファー（０．１  Ｍ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ  ８．０）を添加して、ＦＬ１１８でシールされていない活性部位をクエンチすることにより、トリス希望バッファーでカラムを洗浄し続ける。  ２  ｍｌに排出されたＷａｓｈ９で、カラムのキャップを付け直し、ＦＬ１１８でシールされていない活性部位のクエンチを容易にするためにカラムを３２〜３７℃のオーブンに４５分間置く。次に、トリス洗浄バッファー（０．１  Ｍ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ  ８．０）でさらに３  ｘ  ４ｍｌ洗浄する。  ０．０４％ＮａＮ３（カラムフル）を含む８  ｍｌトリス洗浄バッファーで最後に追加洗浄した後、下部のカラムキャップを再度キャップして、ウェットディスク全体をトリス洗浄バッファーにマージし、パスツールピペットを使用して１ｍｍのギャップまでディスクを下に押し下げて、ディスクを挿入するためのトリスバッファーを維持する。次に、溶液をレジンの２  ｍｌ上まで排出させ、カラムに蓋をして、カラムを４°Ｃ（冷蔵室）で直立させて保管する。  ３．リガンド（ＦＬ１１８または類似体）結合タンパク質のアフィニティーカラム精製：がん細胞溶解物をアフィニティーカラムとコントロールカラムに並行して通した。洗浄バッファーで十分に希望した後、カラムに結合しているタンパク質を８Ｍ尿素バッファーで溶出した。  ４．タンパク質の同定：溶出したタンパク質溶液の脱尿素と３Ｋ  ＯＭＥＧＡ  Ｎａｎｏｓｅｐ  １．５ｍｌチューブデバイスによる濃縮後。得られたタンパク質混合物と対照カラムで得られた混合物を並行して、以下に説明するプロテオミクスによって分析した。
【０２５８】
堅牢なプロテオミクス技術を使用したタンパク質混合物からのタンパク質同定：得られたタンパク質混合物は、ＱｕＬａｂが開発したＩｏｎＳｔａｒ  ／  ＭＳ１ベースのプロテオミクステクノロジー（Ｓｈｅｎ  Ｘ，  Ｓｈｅｎ  Ｓ，  Ｌｉ  Ｊ，  Ｈｕ  Ｑ，  Ｎｉｅ  Ｌ，  Ｔｕ  Ｃ，  Ｗａｎｇ  Ｘ，  Ｏｒｓｂｕｒｎ  Ｂ，  Ｗａｎｇ  Ｊ，  Ｑｕ  Ｊ：  Ａｎ  ＩｏｎＳｔａｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｆｏｒ  ＭＳ１  Ｉｏｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ−Ｂａｓｅｄ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  Ｕｌｔｒａｈｉｇｈ−Ｆｉｅｌｄ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ：  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，  Ｉｎ−Ｄｅｐｔｈ，  ａｎｄ  Ａｃｃｕｒａｔｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｌａｒｇｅ  Ｃｏｈｏｒｔｓ．  Ｊ  Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ  ２０１７，  １６：２４４５−５６）。簡単に説明すると、タンパク質の抽出、還元、アルキル化、有機溶媒の沈殿、および得られたタンパク質ペレットのトリプシンによる消化のプロセスを通じて、４μｌ中の４μｇのペプチドサンプルは、説明したようにＮａｎｏ  ＬＣ  ／  ＵＨＦ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＬＵＭＯＳＭＳ分析のプロセスを経る。次に、厳格な一連の基準がタンパク質の同定に使用される。  ＩｏｎＳｔａｒ処理パイプラインは、サンプルから同定されたタンパク質のＭＳ１定量化に使用される。遺伝子オントロジー（ＧＯ）アノテーション（定量化されたタンパク質）は、ＤＡＶＩＤ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  ｖ６．７（ｈｔｔｐ：／／ｄａｖｉｄ．ａｂｃｃ．ｎｃｉｆｃｒｆ．ｇｏｖ／）およびＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＩＰＡ、Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）のオンラインツールを使用して分析される。  ＧＯ濃縮分析では、定量化されたすべてのタンパク質がバックグラウンドとして使用される。タンパク質機能、上流レギュレーター、および経路分析は、コア分析にＩＰＡを使用して実行された。ソフトウェアによって割り当てられた生物学的および機能的注釈は、手動で調べられ、それぞれのカテゴリに再グループ化される。階層的クラスター分析（中心化されていないピアソン相関距離と重心リンケージ）は、クラスター３．０を使用して分析され、必要に応じて、ツリーベースおよびイメージベースの階層ツリーの参照（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｉｓｅｎｌａｂ．ｏｒｇ）をサポートするＴｒｅｅＶｉｅｗによって表示される。  ＧＳＥＡ分析ツールを使用して、Ｈｘ６処理の有無にかかわらずＵＯＫ２６２細胞のタンパク質ネットワーク経路の変化を分析する。当社のプロテオミクス技術に基づいて、細胞溶解物サンプルからのデータを失うことなく、７０００を超えるタンパク質を定量化できる。
【０２５９】
ＡＰＩ（医薬品有効成分）の分析−Ｘ線粉末回折計（ＸＲＰＤ）を用いたＨＰβＣＤ粉末複合体回折：Ｆｏｒｍｕｌａ  １−ＨＰβＣＤ複合体粉末の各調製化合物の結晶またはアモルファス状態は、ＸＲＰＤを使用して決定される。  具体的には、ＸＲＰＤ試験のために、各粉末の約５ｍｇのサンプルをＳｉ基板の中心に広げる（サンプル領域は直径１ｃｍになる）。  サンプルの実験室ＸＲＰＤパターンは２５°Ｃで収集される。  回折データは、２θ＝  ３°−４０°の角度範囲で収集され、ステップサイズは２θ＝  ０．０２°、アカウンティング時間は０．１２秒／ステップである。
【０２６０】
ＡＰＩ（すなわち、式１の化合物）の混和性の分析−変調示差走査熱量測定（ｍＤＳＣ）を用いたＨＰβＣＤ粉末複合体：ＡＰＩ−ＨＰβＣＤ複合体粉末におけるＡＰＩの混和性状態は、以下を使用して決定される。  ｍＤＳＣ。  具体的には、ｍＤＳＣ分析は、Ｑ２０００示差走査熱量計（ＴＡ、ＵＳＡ）で、動的窒素雰囲気中、室温から３００°Ｃまでの温度範囲で２°Ｃ  ／分の加熱速度で実行される。  各ＡＰＩ−ＨＰβＣＤ複合粉末は、ピンホールの蓋で覆われたＴｚｅｒｏアルミニウムサンプルパンに計量される。  空のパンは、テストの参照コントロールとして機能した。  さらに、フォーミュラ１粉末の各ＡＰＩ化合物からのＡＰＩ−ＨＰβＣＤ複合体のガラス転移温度（Ｔｇ）。
【０２６１】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いたＨＰβＣＤへのＡＰＩ（すなわち、式１の化合物）ローディングの分析：ＨＰβＣＤへのＡＰＩ負荷の重量パーセントは、ＨＰＬＣによって決定される。具体的には、ＨＰＬＣを実行して、ＨＰβＣＤにロードされたＡＰＩ（式１の化合物）の重量パーセントを決定する。これは、テストでＷａｔｅｒｓ  ＸＳｅｌｅｃｔ  ＣＳＨ  Ｃ１８カラム（３．５μｍ、４．６  ｘ  １５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓ、Ｉｒｅｌａｎｄ）を使用する。移動相は、０．０５％トリフルオロ酢酸水溶液（移動相Ａ）と０．０５％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル（移動相Ｂ）のグラジエントプログラムで、総流量１  ｍＬ  ／  ｍｉｎで送液される。グラジエントは次のようになる。初期条件Ａで１０％Ｂ、次に１５分でＡで１０〜６０％Ｂの直線グラジエント、次に１０分でＡで６０〜９０％Ｂの直線グラジエント、Ａで９０％Ｂホールド５分間、０．０１分間初期状態に戻し、１０分間保持する。カラムの温度は３０°Ｃに維持され、溶離液は２２０ｎｍの波長でモニターされる。注入量は５．０μＬとなる。希釈剤はＤＭＳＯになる。
例
【０２６２】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明され、これは、決して限定的であると解釈されるべきではない。  以下は、例の説明である。  
【実施例】
【０２６３】
ＦＬ１１８プラットフォームは、薬剤耐性膵臓がん幹様細胞における複数の抗アポトーシスタンパク質を阻害する：本発明者らの発明は、ＦＬ１１８が新薬（ＰＣＴ  ／  ＵＳ２０１５  ／  ０２２０９５）の生成、および膵臓がんのよく知られた治療（薬剤、放射線）耐性のための優れたプラットフォームであることを示したため、ＦＬ１１８が治療抵抗性膵管腺がん（ＰＤＡＣ）細胞株における複数の抗アポトーシスタンパク質（ｓｕｒｖｉｖｉｎ、Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２）を阻害するかどうかを判断した。膵臓がん細胞株Ｍｉａ−Ｐａｃａ２（Ｍｉａ２）およびＰＡＮＣ１は、非常に侵襲的であり、すべての第一選択薬に耐性があることが報告されている（Ｌｅｇｏｆｆｉｃ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．  、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｕｓｉｎｇ  ａｎ  ｕｌｔｒａ−ｈｉｇｈ−ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ＣＧＨ  ａｒｒａｙ．  Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌｏｇｙ．２００９；  ９：２６７−７２）、このため、これらの細胞株を使用して、ウエスタンブロットを使用してさまざまな抗アポトーシスタンパク質およびいくつかのアポトーシス促進タンパク質の発現に対するＦＬ１１８の効果を決定することを選択した。本発明者らのデータは、１６時間（時間）から４８時間の範囲でのＦＬ１１８処理が、ＰＡＮＣ１細胞とＭｉａ２細胞の両方で抗アポトーシスタンパク質（ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２、Ｍｃｌ−１、またはｓｕｒｖｉｖｉｎ）の発現を用量依存的に特異的に調節することを示し（図１Ａおよび１Ｂ）、そのような処理は、異なる程度でアポトーシス促進タンパク質（Ｂａｄ、Ｂｉｍ、またはＢａｘ）の発現を誘導した（図１Ａおよび１Ｂ）。
【０２６４】
次に、本発明者らは、図１に示されるＦＬ１１８媒介性の抗アポトーシスタンパク質の阻害およびアポトーシス促進性タンパク質の誘導が、アポトーシスの誘導および細胞死滅を伴うかどうかを決定した。本発明者らの研究では、ＦＬ１１８プラットフォーム（１０〜５００  ｎＭ）で２４時間処理すると、ＰＡＮＣ１およびＭｉａ２細胞でカスパーゼ−３の活性化とＰＡＲＰ切断（アポトーシスの特徴、図２ＡＢ）が強く誘導されることが示された。さらに、これらのアポトーシスマーカーの活性化は、ＰＡＮＣ１およびＭｉａ２細胞のサブＧ１  ＤＮＡ含有量の有意な増加を伴い、ＦＬ１１８の細胞殺傷効果を示している（図２Ｃ）。これらの発見と一致して、ＰＡＮＣ１、Ｍｉａ２、およびゲムシタビン感受性ＢｘＰＣ−３膵臓がん細胞株の細胞生存率に対するＦＬ１１８の効果も決定した。本発明者らのデータは、低濃度（ｎＭレベル）のＦＬ１１８が膵臓がん細胞の生存率を効果的に阻害することを明らかにした（図２Ｄ）。ＰＡＮＣ１、Ｍｉａ２およびＢｘＰＣ−３のゲムシタビン耐性および感受性の報告（Ｌｅｇｏｆｆｉｃ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．  、Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌｏｇｙ。２００９；  ９：２６７−７２）に基づいて、ＦＬ１１８はゲムシタビン感受性のＢｘＰＣ−３細胞の生存率に対するＦＬ１１８の効果と比較して、ゲムシタビン耐性のＰＡＮＣ１およびＭｉａ２細胞の生存率を阻害するのにより効果的であるように見えた（図２Ｄ）。この観察は、ＦＬ１１８プラットフォームが薬剤耐性膵臓がん細胞をより積極的に死滅させことを示唆している。
【０２６５】
ＦＬ１１８プラットフォームは、薬剤耐性膵臓がん細胞においてＥＲＣＣ６の持続的阻害およびγ−Ｈ２ＡＸの誘導を示す：薬物／放射線によって誘発されるＤＮＡ損傷がＡＴＭシグナル伝達を活性化し、それが次にｐ５３の蓄積と活性化をもたらし、アポトーシスを誘発する可能性があることはよく知られている。  ＦＬ１１８プラットフォーム治療と潜在的な細胞ＤＮＡ損傷との関係をより深く理解するために、治療抵抗性膵臓がん細胞株ＰＡＮＣ１におけるＤＮＡ損傷および修復遺伝子のパネルの発現に対するＦＬ１１８プラットフォームの効果を決定した。  ＤＮＡ損傷／修復プロセスに関連するテストされたタンパク質（ＥＲＣＣ１、ＥＲＣＣ６、γ−Ｈ２ＡＸ、ＣｈＫ１、ＣｈＫ２、ＡＴＭ、ＡＴＲ、ＲＡＤ５１、ＤＮＡＰｏｌβ）の中で、ＦＬ１１８はＥＲＣＣ６の発現を大幅に減少させ、γ−Ｈ２ＡＸを誘導した（図３Ａ）。ＥＲＣＣ６は、活性遺伝子を優先的に修復するための重要な調節因子である。  ＥＲＣＣ６の発現上昇は、５−Ｆｕ治療への耐性をもたらし、ＣＲＣ患者の生存率の低下に関連していることも報告されている。本発明者らの追加の研究は、ＦＬ１１８プラットフォームを介したＥＲＣＣ６の下方制御がプロテアソーム阻害剤ＭＧ１３２の存在下で救済されたため、ＦＬ１１８プラットフォームによるＥＲＣＣ６発現の阻害がプロテアソーム分解経路によって媒介されるように見えることを示した（図３Ｂ）。さらに、ＦＬ１１８プラットフォームは、ＥＲＣＣ６発現の阻害に対してトポテカンよりもはるかに強い効果があった（図３Ｃ）。
【０２６６】
ＦＬ１１８プラットフォームは、薬剤耐性の卵巣および膵臓がん細胞における幹様がん細胞集団を減少させ、その優れたプラットフォームの性質を示唆している：ＦＬ１１８プラットフォームは多くの場合再発することなく結腸直腸がんを排除できるという事実に基づいて、抗アポトーシスタンパク質ｓｕｒｖｉｖｉｎとＭｃｌ−１がＣＳＣの薬剤耐性における重要な役割を果たすことが知られているため、ＦＬ１１８はがん幹細胞（ＣＳＣ）を含む薬剤耐性がん細胞を効果的に減少させるはずであると仮定した。これをテストするために、薬剤耐性細胞のライブ追跡のためにＰａｊｏｎｋ博士の研究室で開発された新しいアプローチを使用した（Ｖｌａｓｈｉ  Ｅ、ｅｔ  ａｌ。Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｉｍａｇｉｎｇ，  ｔｒａｃｋｉｎｇ，  ａｎｄ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ．  ＪＮａｔｌＣａｎｃｅｒＩｎｓｔ。２００９  ；  １０１：３５０−９）。このアプローチは、薬剤耐性細胞の２６Ｓプロテアソーム活性の低下を利用している。  ２６Ｓ活性レポーター（ＧＦＰｃＯＤＣ融合タンパク質）を安定して発現する細胞株では、２６Ｓ活性が低下しているため、薬剤耐性がん細胞のみがＧＦＰ陽性のままになる。ここでは、多剤耐性卵巣がん細胞株Ａ２７８０ＣＰと薬剤耐性ＰＤＡＣ細胞株ＰＡＮＣ１の両方を使用して、上記の仮説を検証した。確立されたＧＦＰｃＯＤＣ発現細胞では、親の薬剤感受性Ａ２７８０−ＧＦＰｃＯＤＣ細胞よりも薬剤耐性Ａ２７８０ＣＰ７０−ＧＦＰｃＯＤＣ細胞の方がＧＦＰｃＯＤＣ陽性細胞が有意に多いことがわかった（図４Ａ）。示されているように、Ａ２７８０ＣＰ７０−ＧＦＰｃＯＤＣ細胞を１０  μＭで７２時間シスプラチン処理すると、全細胞集団の９０％が死滅したが、ＧＦＰｃＯＤＣ陽性細胞は生存した（図４Ｂ、４Ｃ）。対照的に、１０ｎＭおよび１００ｎＭでのＦＬ１１８プラットフォームによる治療は、ＧＦＰｃＯＤＣ陽性の薬剤耐性Ａ２７８０ＣＰ細胞集団の５０％以上を減少させた（図４Ｄ）。
【０２６７】
次に、我々は、同じシステムを適用して、膵臓がんＰＡＮＣ１−ＧＦＰｃＯＤＣ細胞を作製した。トリパンブルー排除アッセイによって測定された薬剤耐性がん細胞死滅について、ＦＬ１１８−シスプラチン併用療法をテストした。  ２０μＭシスプラチンまたは１０  ｎＭ  ＦＬ１１８による４日間の単剤治療は、同程度の細胞死（〜１８％）を誘発したが、ＦＬ１１８−シスプラチンとの併用治療は６２％の細胞死を誘発した、このことは、単剤治療と比較して３倍高い細胞死を示唆している（図５Ａ）。  ＧＦＰｃＯＤＣ陽性ＰＡＮＣ１細胞はＰＡＮＣ１−ＧＦＰｃＯＤＣ細胞株では低かった（〜０．５％）が、非常に薬剤耐性があり、これは典型的ながん細胞株のＣＳＣ機能と一致している。  ＧＦＰｃＯＤＣ陽性（薬剤耐性）細胞は、４日間の処理で５０  μＭのシスプラチンに耐えることができたが、同じ処理でＧＦＰ陰性（薬剤感受性）ＰＡＮＣ１細胞の９２％が死滅した（図５Ｂ）。興味深いことに、この特定の条件では、２０  μＭのシスプラチンまたは１０  ｎＭのＦＬ１１８による単一処理では、ＧＦＰｃＯＤＣ陽性（薬剤耐性）細胞を殺すことができないようだった（図５Ｃ、Ｃｉｓ、２０  μＭ、ＦＬ、１０ｎＭ）。一方で、ＦＬ１１８−シスプラチンの組み合わせは、薬剤耐性のあるＧＦＰｃＯＤＣ陽性ＰＡＮＣ１細胞をきわめて死滅させた（図５Ｃ、ＦＬ  ＋  Ｃｉｓ、矢印）。しかし、膵臓のＣＳＣスフェロイド形成実験では、生きている薬剤耐性の幹細胞様細胞のほとんどが球体を形成できないことがわかった（図５Ｄ）。具体的には、１０日間の膵臓スフェロイド培養実験のスフェロイド形成において、１０  ｎＭ  ＦＬ１１８、３μＭシスプラチン、またはそれらの組み合わせは、特に薬物対照なしと比較して、組み合わせ状況でスフェロイド形成を有意に阻害することができた（１００、ｐ  ＜  ０．００１、図５Ｄ）。
【０２６８】
これらの発見をさらに確認するために、本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏの状況をより厳密に模倣することが知られている典型的なマトリゲルベースのＣＳＣ球体形成アッセイを代わりに使用した。このアッセイでは、薬剤耐性の幹様がん細胞のみが球体を形成することができる。  ＦＬ１１８プラットフォームは、球体形成の阻害に高い効果を示した（図５Ｅ）。幹細胞様の薬剤耐性がん細胞に対するＦＬ１１８の効果をさらに実証するために、薬剤耐性ＰＡＮＣ１細胞からＣＤ４４幹細胞マーカー陽性膵臓がん細胞集団を分離した。幹細胞培養条件を用いて、ＣＤ４４幹細胞マーカー陽性細胞のコロニー形成を行った。図５Ｅのデータと一致して、ＦＬ１１８プラットフォームは１  ｎＭでもコロニー形成を有意に阻害したが、１０および１００  ｎＭのＦＬ１１８は、ＣＤ４４幹細胞マーカー陽性ＰＡＮＣ１細胞のコロニー形成を完全に排除することができた（図５Ｆ−Ｇ）。これらの結果（図５Ｅ−Ｇ）は、ＣＤ４４幹細胞マーカー陽性ＰＡＮＣ１細胞の薬剤耐性幹様がん細胞が人工的に生成されたＧＦＰｃＯＤＣ陽性ＰＡＮＣ１細胞よりもＦＬ１１８治療に対してはるかに感受性が高いことを示している（図５Ｃ  −Ｄ）。したがって、ＧＦＰｃＯＤＣ陽性細胞モデルは、ＧＦＰｃＯＤＣ発現ベクターのトランスフェクションおよびＣＤ４４幹細胞マーカー陽性の薬剤耐性細胞を完全に模倣していない可能性のあるＧＦＰｃＯＤＣ発現細胞を取得するための選択プロセス後の非常に薬剤耐性のある細胞モデルまたは実際の細胞模倣システムではない可能性がある。あるいは、その不一致は、ＧＦＰｃＯＤＣ発現細胞の選択後の薬剤耐性の高い集団のさらなる濃縮に起因する可能性もある。総じて、本発明者らの共同研究は、ＦＬ１１８プラットフォーム単独および細胞毒性薬と組み合わせたＦＬ１１８が、薬剤耐性の幹様膵臓がん細胞集団を効果的に減らすことができる新しい治療オプションであることを強く示唆している。
【０２６９】
ＦＬ１１８プラットフォームとシスプラチンの組み合わせは、膵臓腫瘍の成長および転移の両方を阻害する：治療に対するＰＤＡＣの耐性は、がん細胞の転移を促す。膵臓がん患者はしばしば転移性疾患を呈するため、転移は課題となる懸念である。  ＦＬ１１８プラットフォームがＰＤＡＣ腫瘍の成長と他の部位への転移の両方を阻害できるかどうかをテストするために、同所性ＰＡＮＣ１モデルを使用した。生物発光ｉｎ  ｖｉｖｏイメージング（ＢＬＩ）を使用して、生きているマウスの腫瘍の成長と転移を監視するために、ルシフェラーゼ発現ＰＡＮＣ１細胞（ＬｕｃＰＡＮＣ１）を生成し、２０マイクロリットルの容量で１００万個のＬｕｃＰＡＮＣ１細胞をＳＣＩＤマウスの膵臓に注入した。これらのマウスは、溶媒（図６Ａ、左パネル、ｎ  ＝  ３）またはＦＬ１１８−シスプラチンの組み合わせ（図６Ａ、右パネル）のいずれかで治療された。これらのマウスは、毎週７日目から週４回（ｑｗ  ｘ  ４）腹腔内（ｉｐ）注射により、シスプラチン（５ｍｇ  ／  ｋｇ、１  ／  ２ＭＴＤ）と組み合わせた０．７５ｍｇ  ／  ｋｇ（１／６最大耐量：１  ／  ６ＭＴＤ）の溶媒またはＦＬ１１８で治療された。  ＢＬＩは、７ｄをベースラインとして１〜３週間ごとに実行された（図６Ａ、上部パネル）。本発明者らの研究は、個々の腫瘍の放射輝度強度が非常に狭い範囲にあることを示しており、本発明者らの手順における腫瘍移植の小さな変動を示唆している（図６Ａ）。  ＦＬ１１８−シスプラチン治療は、ＰＡＮＣ１腫瘍の増殖と、ＬｕｃＰＡＮＣ１同所性モデルの他の部位への転移を比較的低い投与レベルで大幅に抑制する。たとえば、ＬｕｃＰＡＮＣ１細胞移植後６０日目（６０日）に、すべての治療マウスの腫瘍は検出不可能なレベルに退行した（図６Ａ、２行目）。注釈として、９０日目に、２８日目に治療を終えた後、ＢＬＩは対照群の３匹のマウスのうち２匹（それぞれ４つの赤い腫瘍中心と２つの赤い腫瘍中心）で局所転移を検出したが、ＦＬ１１８−シスプラチン治療群では局所転移は検出されなかった（図６、９０ｄ、４列目／下のパネル）。研究終了時の動物の剖検では、膵臓（原発腫瘍）だけでなく、肝臓（１つのマウスに２つの部位があり、もう１つのマウスに１つの部位がある）と小腸（前者のマウスのみ１つの部位）に腫瘍の転移を示す。対照的に、ＦＬ１１８−シスプラチン処置マウスの元の腫瘍部位（膵臓）では、有意に小さい腫瘍のみが成長した。重要なことに、これはたった１サイクル／コースの治療だった。これらの結果は、本発明者らのモデルシステムが他の臓器部位への転移の開始を正確に測定できることを示している。時間の経過とともに各グループの総腫瘍から定量化された全体的なＢＬＩ強度を図６Ｂに示した。これらの観察結果は、ＦＬ１１８プラットフォームがユニークで有望なプラットフォームであり、さまざまな種類のヒトのがんにおいてさらに優れた、および／または異なる抗腫瘍効果を持つ新薬を生成するためのコア構造薬であることを示している。この研究はまた、ＦＬ１１８プラットフォームが増殖性がん細胞と薬剤耐性／潜伏性ＣＳＣ様細胞の両方を死滅させることを示唆しており、これは以下に説明する次の模範的な実験でさらに確認される。
【０２７０】
ＦＬ１１８プラットフォームは、単独で、またはゲムシタビンと組み合わせて、動物モデルにおいてヒトＰＤＡＣ  ＰＤＸを排除する：次に、ＰＤＸモデルは最も臨床的に関連性のある動物モデルであり、患者で見つかった腫瘍の組織学的特徴と不均一な治療感度／応答の多くを提示できるため、ｉｎ  ｖｉｖｏ研究に代わりヒト膵臓がん患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍モデルを使用した。近年、膵臓がんのＰＤＸがアクティブなパラクリン／ヘッジホッグシグナル伝達を保持し、ＰＤＸ腫瘍マウスモデルでデスモプラシアが活性化していることが報告されている。本発明者らの研究は、ＦＬ１１８がＡＢＣＧ２およびＰｇｐの基質ではないこと、および好ましいＰＫを示すことを示した（以下を参照）。  ＦＬ１１８プラットフォームのこれらの特性に基づいて、線維形成を介した薬剤耐性は、ＦＬ１１８ががん細胞の治療レベルに到達するのを妨げる障壁ではない可能性があると推論した。したがって、ＦＬ１１８の有効性を単独で、およびゲムシタビン（典型的な膵臓がん治療薬）と組み合わせて、ヒトＰＤＡＣＰＤＸ腫瘍モデルでテストした。テストされた８つのＰＤＡＣＰＤＸ腫瘍モデルの中で、４つがＦＬ１１８治療に対して高い感度を示すことがわかった。図７Ａおよび７Ｂに示すように、ＰＤＸ１４２４４およびＰＤＸ１７６２４はＦＬ１１８に対して高い感度を示し、ＦＬ１１８は１サイクルの治療（ｑｗ  ｘ  ４、図７Ａ、７Ｂ、１サイクル／コース治療のみ）後にこれらのＰＤＸ腫瘍を排除することができた。ただし、他の４つは、ＦＬ１１８に対してさまざまな程度で感度が低くなった。たとえば、図７Ｃに示すＰＤＸ１０９７８、ＦＬ１１８はＰＤＸ１０９７８腫瘍の成長を遅らせることしかできなかった。次に、ＦＬ１１８をゲムシタビンなどの一般的に使用されている膵臓がん治療薬と組み合わせてＦＬ１１８非感受性の問題を解決できるかどうかをテストした。上記で使用したＦＬ１１８の感度の低いＰＤＡＣＰＤＸ１０９７８に対して、ＦＬ１１８とゲムシタビンの併用療法を実施した。この研究では、ＦＬ１１８を０．７５  ｍｇ  ／  ｋｇ（〜１  ／  ６ＭＴＤ）で、ゲムシタビンを６０  ｍｇ  ／  ｋｇ（〜１  ／  ２ＭＴＤ）で単独で、または週４回のスケジュール（１サイクル／コース治療）と腹腔内投与を介して組み合わせて使用した。ＦＬ１１８またはゲムシタビンのいずれか単独で腫瘍の成長を遅らせるだけであることがわかった。対照的に、ＦＬ１１８とゲムシタビンの組み合わせは、１サイクルの治療のみで２１日間、５匹すべての治療動物のＰＤＸ１０９７８腫瘍を排除することができた（図７Ｄ、１４〜３５日目）。あるいは、腫瘍絶対サイズヒストグラム形式を使用して、併用療法の相乗効果を示した（図７Ｅ）。本発明者らの研究は、ＰＤＡＣ腫瘍の大部分がＦＬ１１８プラットフォームに対して高い感度を示す可能性がある一方で、他のいくつかのＰＤＡＣ腫瘍はＦＬ１１８治療に対して低い感度を示す可能性があることを示唆している。ただし、ＦＬ１１８に対する感受性が低いＰＤＡＣ腫瘍は、このようなＰＤＡＣ腫瘍を排除するためにここで使用されるゲムシタビンなどの膵臓がん細胞毒性薬と組み合わせたＦＬ１１８によって感作される可能性がある。
【０２７１】
ＦＬ１１８プラットフォームは、ネズミおよびイヌの両方の動物において好ましい毒物学プロファイルを示す：本発明者らの研究によると、経口製剤中のＦＬ１１８は、４回投与（ｑｗ  ｘ  ４）で、ヒト腫瘍を有するＳＣＩＤマウスで１０  ｍｇ  ／  ｋｇの最大耐量（ＭＴＤ）を示している。  ＳＣＩＤマウスは免疫系が不足しているため、ＦＬ１１８が同じ経路とスケジュールで免疫能力のあるマウスで同様のＭＴＤを持っているかどうかを判断することが非常に重要である。  １２．５  ｍｇ  ／  ｋｇ以上の経口週４回投与を使用すると、瀕死状態の一部のマウスを含め、体重が２０％以上減少することがわかった。しかし、１０ｍｇ  ／  ｋｇの使用は、ＢＡＬＢ  ／  ｃｊマウスによって十分に許容され、マウスの体重減少は通常の変動範囲内にある（図８Ａ）。一貫して、１７の血液学的パラメーターの評価の結果は、白血球（ＷＢＣ）とリンパ球（ＬＹＭＰＨ）のみが正常範囲の端の低い側に減少したことを示した（表１）。  ＦＬ１１８処理後、他のすべては溶媒処理サンプルと同様であり、正常範囲内の変動である（表１）。同様に、１２の臨床生化学パラメーターの中で、ＦＬ１１８で処理されたサンプルの結果は、溶媒で処理されたサンプルの結果と非常に似ており、通常の変動範囲に近いか、その範囲内にある（表２）。犬の毒物学研究では、すべての動物が実験の終わりまで良好な状態で生き残った。有意なＦＬ１１８関連の臨床的観察は認められなかった。観察された特定の糞便異常はまれであり、一過性であり、投与前の段階で一部の動物に認められた。したがって、それらはＦＬ１１８関連ではなかった。すべてのＦＬ１１８治療群で、正常な動物の体重変化の変動内での体重変化は観察されなかったか、最小限しか観察されなかった（図８Ｂ、Ｃ）。これらの観察結果は、収集されたサンプルの血液学的分析の結果と一致しており、そのほとんどは投与前の変動内で変化がある。溶媒および最高のＦＬ１１８用量で治療された犬からの結果を表３に示す。示されるように、このＦＬ１１８  ＭＴＤ用量レベルでは、ＦＬ１１８は血小板および単球の減少などのいくつかの血液学的パラメーターに対してごくわずかな影響しか示さないが、これらはいずれも深刻と見なされる（表３）。同様に、臨床生化学研究では、対照動物とＦＬ１１８試験品で処理した動物の間、または個々の犬の投与前と投与段階の試験結果の間にほとんど違いはなく、すべて正常な変動と一致し、偶発的と見なされた（表４）。観察された差異は、以下のほとんどまたはすべてによって特徴づけられた：大きさが小さい、用量との関係がない、性別間で一貫性がない、相関所見がない、および／または投与開始前に存在する差異との類似性。したがって、犬のＦＬ１１８プラットフォーム毒性プロファイルは全体的に非常に良好であり、犬の生理機能はマウスよりも人間にはるかに近いため、これは非常に重要である。
【０２７２】
ＦＬ１１８の経口投与のために新たに開発された製剤は、好ましい薬物動態（ＰＫ）プロファイルを得た：本発明者らの以前の研究では、ＦＬ１１８の静脈内（ｉｖ）注射は腫瘍に急速に蓄積され、血流からすぐに除去されるが、ＦＬ１１８は腫瘍内で長い半減期を維持できる（Ｌｉｎｇら：ＦＬ１１８，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  ａｎａｌｏｇｕｅ，  ｏｖｅｒｃｏｍｅｓ  ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  ａｎｄ  ｔｏｐｏｔｅｃａｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌｓ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０１５、７：１７６５−１７８１）。しかし、静脈内注射は簡便ではない、つまり薬の投与には看護師の助けが必要である。したがって、抗がん剤の商品化では、可能であれば経口投与が常に第一選択である。この点で、ＦＬ１１８プラットフォームの経口投与用に新しく開発された製剤を製剤試験品として利用した。次に、経口投与後のＦＬ１１８のＰＫプロファイルを決定した。この方法でのＰＫ研究は、ＦＬ１１８の静脈内投与と同様に、薬物担体の水性／生理食塩水懸濁液としての有機溶媒を含まないＨＰβＣＤ中のＦＬ１１８の経口投与は、良好なＰＫプロファイルが得られたことが明らかとなった。具体的には、経口投与後、ＦＬ１１８は腫瘍に急速に蓄積し、腫瘍中のＦＬ１１８の濃度は血清中の濃度の何倍にもなる（図９）。
【０２７３】
ＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体（ＦＬ７ｓ−３、ＦＬ７ｓ−４、ＦＬ７ｓ−７、ＦＬ７−５、ＦＬ７−１４、ＦＬ７−１５、ＦＬ７−１７）のグループの数回のｉｎ  ｖｉｖｏ試験により、ＦＬ７ｓ−３およびＦＬ７ｓ−７が、次の段階に進む可能性のある上位２つの有望な候補分子となる：ＦＬ７ｓ−３、ＦＬ７ｓ−４、ＦＬ７ｓ−７、ＦＬ７−５、ＦＬ７−１４、ＦＬ７−１５およびＦＬ７−１７のＦＬ１１８類似体の経口投与からの最初の発見に基づいて、ＦＬ７ｓ−３、ＦＬ７ｓ−４、ＦＬ７ｓ−７、ＦＬ７−５、ＦＬ７−１４のＦＬ１１８プラットフォーム由来類似体の複数回の経口投与における抗腫瘍活性および毒性（体重減少）プロファイルを再試験した。毒性プロファイルに対する全体的な抗腫瘍活性に関して、他のｉｎ  ｖｉｖｏデータがＦＬ７−１５およびＦＬ７−１７がＦＬ７−５およびＦＬ７−１４ほど良くないことを示唆したので、ＦＬ７−１５およびＦＬ７−１７を含めなかった。週４回のスケジュールでＦＬ７ｓ−３、ＦＬ７ｓ−４、ＦＬ７ｓ−７、ＦＬ７−５、ＦＬ７−１４の個々の薬剤の複数回の経口投与を使用することにより（図１０、１１）、本発明者らのｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデル  −ヒト網膜芽細胞腫異種移植研究は、ＦＬ７ｓ−３およびＦＬ７ｓ−７が先に進むために考慮し得る上位２つの候補であることを示した。      
【０２７４】
３つのＦＬ１１８プラットフォームベースの類似体の別のグループが合成された：３つの新しい化合物はすべて有望であるが、３つの候補のうちの１つは、使用した３つの用量すべてで試験した毒性を示さずに、並外れた抗網膜芽細胞腫腫瘍活性を示した。これらの３つの新規化合物に対して、ＨＴ−３網膜芽細胞腫異種移植腫瘍モデルを使用してそれらの抗腫瘍活性と毒性を評価するためにｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデル研究を実施した。この実験では、化合物の経口投与用に新しく開発された製剤を引き続き利用した。化合物の量が限られていたため、示されているように、薬剤の入手可能性に基づいて、各薬剤を３〜４回の用量で１回だけ経口投与することができた（図１２）。経口投与によるｉｎ  ｖｉｖｏ動物モデル研究により、３つの新しい化合物、ＦＬ７Ｎ−１、ＦＬ７Ｎ−２、およびＦＬ７Ｎ−３のすべてが、優れた抗腫瘍活性と好ましい毒性プロファイルを示すことが明らかになった（図１２）。さらに、ＦＬ７Ｎ−１は、使用した３つの用量すべて（５  ｍｇ  ／  ｋｇ、１０  ｍｇ  ／  ｋｇ、および１５  ｍｇ  ／  ｋｇ）で例外的な抗腫瘍活性を示し、これら３つの用量のいずれでも毒性（マウスの体重減少）を示さなかった（図１２Ａ）、作用機序（ＭＯＡ）の観点から高度に標的化された特性を示唆している。
【０２７５】
ＦＬ７Ｎ−１は、膵臓がん患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍モデル（１４２４４）および結腸直腸がんＰＤＸモデルにおいて良好な抗腫瘍活性を示すが、ＦＬ７Ｎ−１は、網膜芽細胞腫の小児希少疾患の治療のための優れた薬物であるように思われる（２７４５４）：図１２で１回の薬剤投与により得られたＦＬ７Ｎ−１の抗網膜芽細胞腫腫瘍活性に基づいて、次に動物モデルにおける膵臓がん（１４２４４）および結腸直腸がん（２７４５４）ＰＤＸ腫瘍におけるＦＬ７Ｎ−１抗腫瘍の有効性と毒性（体重変化）をテストした。ＰＤＸ腫瘍はもともと、クリニックの転移部位から得られた膵臓がんおよび結腸直腸がん患者の腫瘍組織からのＳＣＩＤマウスで確立された。  ＦＬ７Ｎ−１は、生理食塩水（濃厚な水性懸濁液）中の２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）および１％ＰＧ（プロピレングリコール）中のＨＰβＣＤ（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）を含む無有機溶媒で経口投与として処方された。溶媒は、ＦＬ７Ｎ−１を含まない同じ水性懸濁液である。実験用ＳＣＩＤマウスには、ＳＣＩＤマウスの側面領域（ＰＤＸ１４２４４の場合は左側、ＰＤＸ２７４５４の場合は右側）に３０〜４０  ｍｇの個別のＰＤＸ腫瘍（メンテナンスマウスから分離）を皮下移植した。溶媒またはＦＬ７Ｎ−１による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後に開始された（０日目と指定）。  ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、黒い矢印で示されているように、毎週３回経口治療された。本発明者らの研究は、ＦＬ７Ｎ−１が非常に優れた抗膵臓がんＰＤＸ１４２４４腫瘍（図１３Ａ）および抗結腸直腸がんＰＤＸ２７４５４腫瘍（図１３Ｂ）を示した一方で、ＦＬ７Ｎ−１は並外れた抗網膜芽細胞腫活性を示したようである（図１２Ａ）。したがって、ＦＬ７Ｎ−１は、小児の希少疾患網膜芽細胞腫の治療のために開発される優先候補となる可能性がある。
【０２７６】
結腸直腸がんＳＷ６２０細胞確立異種移植腫瘍におけるＦＬ１１８プラットフォーム由来のＷｂシリーズの薬物（Ｗ−ｂ１、Ｗ−ｂ２、Ｗ−ｂ３、Ｗ−ｂ４、Ｗ−ｂ５、Ｗ−ｂ６、Ｗ−ｂ７、Ｗ−ｂ９、Ｗ−ｂ１０  ／  Ｈｘ７）の抗腫瘍活性：本発明者らはまた、ＳＣＩＤマウスでＳＷ６２０細胞確立異種移植腫瘍を使用してＦＬ１１８プラットフォーム由来の化合物の新しいグループ（Ｗ−ｂ１、Ｗ−ｂ２、Ｗ−ｂ３、Ｗ−ｂ４、Ｗ−ｂ５、Ｗ−ｂ６、Ｗ−ｂ７、Ｗ−ｂ９、Ｗ−ｂ１０  ／  Ｈｘ７）もテストした。ヒトＳＷ６２０異種移植腫瘍は、最初に１００〜１５０  μＬの培地に２〜５  ｘ  １０６のＳＷ６２０細胞を皮下注射することによって確立された。  ＳＷ６２０異種移植片のマウスモデルは、ＳＣＩＤマウスの脇腹に３０〜４０  ｍｇの腫瘍組織（腫瘍維持ＳＣＩＤマウスから分離）を皮下接種することによって設定された。個々の化合物による治療は、移植された腫瘍が１００〜２００  ｍｍ３に達してから７〜１４日後に開始された（０日目と指定）。治療スケジュールは、その時点で利用可能な薬剤量に基づいて、一連の用量レベルで１〜２回毎週行われる。個々の化合物は、経口投与用に、生理食塩水（濃厚な水性懸濁液）中の２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）および１％ＰＧ（プロピレングリコール）中のＨＰβＣＤを含む無有機溶媒で処方された。溶媒は、薬物を含まない同じ濃厚な水性懸濁液である。これらの個々の薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験により、これらの化合物のほとんどが優れた抗腫瘍活性を示した一方で、Ｗ−ｂ２、Ｗ−ｂ３、およびＷ−ｂ６の化合物は、このＷｂシリーズの他の化合物よりもはるかに高い抗腫瘍活性を有することが明らかになった（図１４  −  １６）。
【０２７７】
膵臓がん患者および結腸直腸がんＰＤＸに由来する異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍モデル（ＰＤＸ１４２４４）におけるＦＬ１１８プラットフォーム薬に由来するＨｘシリーズ薬物（Ｈｘ４、Ｈｘ５、Ｈｘ６およびＨｘ７  ／  Ｗ−ｂ１０）の抗腫瘍活性：膵臓がん（ＰＤＸ１４２４４）および結腸直腸がん（ＰＤＸ２７４５４）の患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍では、新しいＦＬ１１８プラットフォーム由来の化合物（Ｈｘ４、Ｈｘ５、Ｈｘ６およびＨｘ７  ／  Ｗ−ｂ１０）の抗腫瘍効果の別のセットもテストした。  ＰＤＸ腫瘍はもともとＳＣＩＤマウスで確立された。膵臓がんと結腸直腸がんの患者の腫瘍組織は、疾患の転移部位から臨床的に得られた。有機溶媒を含まない溶液では、単一の薬剤が最初にＨＰβＣＤ（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）と複合体を形成し、次に２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）と１％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む通常の生理食塩水で経口投与用に製剤化された。溶媒対照は、薬物を含まない同じ通常の生理食塩水懸濁液である。  ＳＣＩＤマウスの脇腹領域（ＰＤＸ１４２４４の左側、ＰＤＸ２７４５４の右側）に、実験用ＳＣＩＤマウスに３０〜４０  ｍｇの個々のＰＤＸ腫瘍（腫瘍維持マウスから分離）を皮下移植した。移植された腫瘍が７〜１４日後に１００〜２００  ｍｍ３（０日目として指定）に達したときに、溶媒対照またはこれらの薬剤の１つで治療を開始する。黒い矢印で示されているように、ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは週に１回、合計３回経口治療された。これらの薬剤に関するｉｎ  ｖｉｖｏ試験では、各化合物は優れた抗腫瘍活性を示すが、Ｈｘ６およびＨｘ７  ／  Ｗ−ｂ１０化合物は、他の２つの化合物よりも高い抗腫瘍活性を示し、優れた毒性を示す（図１７−２０）。
【０２７８】
ＦＬ１１８プラットフォーム薬（７Ｑ１〜７Ｑ２４）に由来する７Ｑシリーズ薬における抗腫瘍活性７人の腺がん患者（ＰＤＸ１４２４４）および／または結腸直腸がん患者（ＰＤＸ２７４５４）異種移植腫瘍モデル：膵臓がんにおいて（ＰＤＸ１４２４４）および／または結腸直腸がん（ＰＤＸ２７４５４）では、動物モデルで新しいＦＬ１１８プラットフォーム由来の７Ｑシリーズ化合物の別のセットの抗腫瘍効果もテストした。このテストでは、７Ｑ６、７Ｑ９、および７Ｑ２４が、これらの腫瘍モデルのＱシリーズの上位３つの化合物として特定された。具体的には、ＰＤＸ腫瘍は最初にＳＣＩＤマウスで確立され、膵臓がんおよび結腸直腸がんの患者からの腫瘍組織は、疾患の転移部位から臨床的に得られた。有機溶媒を含まない溶液では、単一の薬剤が最初にＨＰβＣＤ（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）と複合体を形成し、次に２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）と１％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む通常の生理食塩水で経口投与用に製剤化された。溶媒対照は、薬物を含まない同じ通常の生理食塩水懸濁液である。  ＳＣＩＤマウスの脇腹領域（ＰＤＸ１４２４４の左側、ＰＤＸ２７４５４の右側）に、実験用ＳＣＩＤマウスに３０〜４０  ｍｇの個々のＰＤＸ腫瘍（腫瘍維持マウスから分離）を皮下移植した。移植された腫瘍が７〜１４日後に１００〜２００  ｍｍ３（０日目として指定）に達したときに、溶媒対照または７Ｑシリーズの薬剤の１つで治療を開始する。黒い矢印で示されているように、ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは週に１回４回経口投与された。これらの薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験では、各化合物が優れた抗腫瘍活性を示したものの、７Ｑ６、７Ｑ９、および７Ｑ２４化合物の抗腫瘍活性は、７Ｑシリーズの他の化合物よりもはるかに高いことが示された（図２１〜２３）。
【０２７９】
結腸直腸がんＰＤＸモデル（ＰＤＸ２７４５４）におけるＦＬ１１８プラットフォーム薬（７Ｑ２５〜７Ｑ４８）に由来する７Ｑシリーズ薬の抗腫瘍活性：結腸直腸がん患者由来の異種移植腫瘍（ＰＤＸ２７４５４）において、７Ｑシリーズの化合物（２：７Ｑ２４−７Ｑ４８）が動物モデルでテストされ、この７Ｑシリーズの化合物の中で、７Ｑ２８、７Ｑ３１、７Ｑ３２、７Ｑ３５、および７Ｑ３６がこの腫瘍モデルで大きな期待を示していることがわかった。具体的には、ＰＤＸ腫瘍は最初にＳＣＩＤマウスで確立され、膵臓癌および結腸直腸癌の患者からの腫瘍組織は、疾患の転移部位から臨床的に得られた。有機溶媒を含まない溶液では、単一の薬剤が最初にＨＰβＣＤ（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）と複合体を形成し、次に２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）と１％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む通常の生理食塩水で経口投与用に製剤化された。溶媒対照は、薬物を含まない同じ通常の生理食塩水懸濁液である。  ＳＣＩＤマウスの脇腹領域（ＰＤＸ１４２４４の左側、ＰＤＸ２７４５４の右側）に、実験用ＳＣＩＤマウスに３０〜４０  ｍｇの個々のＰＤＸ腫瘍（腫瘍維持マウスから分離）を皮下移植した。移植された腫瘍が７〜１４日後に１００〜２００  ｍｍ３（０日目として指定）に達したときに、溶媒対照または７Ｑシリーズの薬剤（７Ｑ２４〜７Ｑ４８）の１つで治療を開始する。黒い矢印で示されているように、ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは、週に１回（７Ｑ２８、７Ｑ３１、７Ｑ３５、または７Ｑ３６）または４回（７Ｑ３２）経口治療される。これらの薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験では、７Ｑシリーズの他の化合物と比較して、７Ｑ２８、７Ｑ３１、７Ｑ３２、７Ｑ３５、および７Ｑ３６の化合物の抗腫瘍活性が高いことが示された（図２４−２８）。  
【０２８０】
膵臓がん患者（ＰＤＸ１４２４４）および結腸直腸がん患者（ＰＤＸ２７４５４）異種移植腫瘍モデルにおけるＦＬ１１８プラットフォーム薬に由来する９Ｑシリーズ薬の抗腫瘍活性：膵臓癌（ＰＤＸ１４２４４）および結腸直腸癌（ＰＤＸ２７４５４）における患者由来異種移植腫瘍については、動物モデルで新しいＦＬ１１８プラットフォーム由来の９Ｑシリーズ化合物の別のセットの抗腫瘍効果もテストした。このテストでは、９Ｑ１０、９Ｑ１７、および９Ｑ１８が、これらの腫瘍モデルの９Ｑシリーズの化合物の上位３つの化合物として特定された。具体的には、ＰＤＸ腫瘍は最初にＳＣＩＤマウスで確立され、膵臓がんおよび結腸直腸がんの患者からの腫瘍組織は、疾患の転移部位から臨床的に得られた。有機溶媒を含まない溶液では、単一の薬剤が最初にＨＰβＣＤ（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）と複合体を形成し、次に２％ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）と１％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む通常の生理食塩水で経口投与用に製剤化された。溶媒対照は、薬物を含まない同じ通常の生理食塩水懸濁液である。  ＳＣＩＤマウスの脇腹領域（ＰＤＸ１４２４４の左側、ＰＤＸ２７４５４の右側）に、実験用ＳＣＩＤマウスに３０〜４０  ｍｇの個々のＰＤＸ腫瘍（腫瘍維持マウスから分離）を皮下移植した。移植された腫瘍が７〜１４日後に１００〜２００  ｍｍ３（０日目として指定）に達したときに、溶媒対照または９Ｑシリーズの薬剤の１つで治療を開始する。黒い矢印で示されているように、ＰＤＸ腫瘍の動物モデルは週に１回、合計３回経口治療された。これらの薬剤のｉｎ  ｖｉｖｏ試験では、各化合物が抗腫瘍活性を示したものの、９Ｑ１０、９Ｑ１７、および９Ｑ１８化合物は、９Ｑシリーズの他の化合物よりも高い抗腫瘍活性を示した（図２９−３１）。ここで強調したいのは、９Ｑシリーズ化合物の抗腫瘍活性は７Ｑシリーズ化合物よりも低いように見えるが、９Ｑシリーズ化合物の毒性は７Ｑシリーズよりも比較的優れているということである。  
【０２８１】
２つの異なる製剤で製剤化されたＦＬ１１８の経口投与の抗腫瘍活性および毒性の比較：有機溶媒を含まないＦＬ１１８水性懸濁液製剤（製剤１）およびエタノール−ＨＰβＣＤ−ＦＬ１１８複合懸濁液製剤（製剤２）：  ＦＬ１１８を例として、ＦＬ１１８または式１の化合物について、本発明の２つの異なる配合物について比較試験を実施した。式２は、エタノール−ＨＰβＣＤ−ＦＬ１１８複合懸濁液を調製する詳細なプロセスを説明し、式１は、有機溶媒を含まない水性薬物懸濁液を調製する詳細なプロセスを説明する。このテスト例では、エタノール−ＨＰβＣＤ−ＦＬ１１８複合懸濁液（製剤２）には、４０ｍｇ  ／  ｍＬの薬剤（この場合はＦＬ１１８）、１００％非水性エタノールに４０％のＨＰβＣＤが含まれている。この予備状態の剤形を生理食塩水で８０倍に希釈して０．５ｍｇ  ／  ｍＬの薬剤（この場合はＦＬ１１８）にし、マウスに経口投与した。対照的に、有機溶媒を含まない薬物生理食塩水懸濁液（製剤１）は、０．５  ｍｇ  ／  ｍＬの薬物（この場合はＦＬ１１８）、０．５％ＨＰβＣＤ、２％ＨＰＭＣ、および１％ＰＧ（プロピレン）を含むすぐに使用できる懸濁液である。研究には、ヒト膀胱がん細胞株ＵＭＵＣ３によって確立された異種移植腫瘍モデルを使用する。研究によると、２つの異なる製剤のＦＬ１１８は同様の毒性（重量変化）を示すが、エタノール−ＨＰβＣＤ−ＦＬ１１８複合体（製剤２）は有機溶媒を含まないＦＬ１１８水性懸濁液製剤（製剤１）よりも優れた抗腫瘍特性を示すようだ（図３２）  。
【０２８２】
ヒト結腸直腸がん（ＰＤＸ２７４５４）患者由来の異種移植腫瘍の動物モデルにおいて、噴霧乾燥によって生成された臨床的に適合性があり便利なＦＬ１８調製物を、抗腫瘍効果および毒性（体重変化）について試験した：ＦＬ１１８をエタノール−  ＨＰβＣＤ（２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）混合溶液に配合し、噴霧乾燥してＦＬ１１８−  ＨＰβＣＤ複合粉末を調製した。  ＦＬ１１８−  ＨＰβＣＤ複合粉末を４００メッシュ（３７ミクロン）以下の粒子に粉砕し、５％ＰＧ（プロピレングリコール）を含む生理食塩水に溶解して懸濁液を作り、経口摂取する。  溶媒対照は、５％ＰＧと同等のＨＰβＣＤを含むがＦＬ１１８を含まない通常の生理食塩水である。  実験的ＳＣＩＤマウスにおけるＰＤＸ腫瘍の確立は、図７および１３に記載されているものと同じである。  移植された腫瘍が７〜１４日後に１００〜２００ｍｍ３に達した後（０日目として指定）、ＳＣＩＤマウスのＰＤＸ腫瘍にビヒクルおよびＦＬ１１８を矢印で示すように週４回経口投与した。  図３３に示すように、ＦＬ１１８はＭＴＤの半分で毒性なしに優れた抗腫瘍活性を示した（図３３）。  
【０２８３】
様々ながん細胞タイプにおける細胞増殖および生存率の阻害を、参考のためにＭＴＴアッセイを使用して試験した：ＦＬ１１８プラットフォーム由来の７Ｑシリーズ薬のＩＣ５０  ／  ＥＣ５０結果を表５に示す。ＦＬ１１８プラットフォーム由来の９Ｑシリーズ薬のＩＣ５０  ／  ＥＣ５０結果を表６に示す。ＦＬ１１８のＩＣ５０  ／  ＥＣ５０結果  プラットフォーム由来のＦＬ７ｓおよびＦＬ７シリーズの薬剤を表７に示す。ＦＬ１１８プラットフォーム由来のＦＬ７Ｎシリーズの薬剤のＩＣ５０  ／  ＥＣ５０の結果を表８に示す。ＦＬ１１８プラットフォーム由来のＷｂ−のＩＣ５０  ／  ＥＣ５０の結果を示す。  シリーズの薬剤を表９に示す。ＦＬ１１８プラットフォーム由来のＨｘシリーズの薬剤のＩＣ５０  ／  ＥＣ５０の結果を表１０に示す。
【０２８４】
アフィニティー精製用のリガンドとしてＦＬ１１８またはＦＬ１１８類似体を使用すること、および／またはプロトアレイを用いた９，０００を超えるヒトタンパク質のトリチウム（３Ｈ）標識リガンドスクリーニングを使用することにより、潜在的なタンパク質バイオマーカーおよび標的としてＦＬ１１８または類似体結合タンパク質を精製する。  これら２つの方法を用いて、潜在的なタンパク質バイオマーカーおよび標的としてＦＬ１１８などに結合できる多くのタンパク質を発見した。  表１２に、上位候補のタンパク質バイオマーカーとターゲットを示す。
医薬製剤プロセス
【０２８５】
新たに発明された製剤は、関連する発明の開発をさらに進めるものである。  例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１５／２２０９５（ヒトの疾患の治療のためのＦＬ１１８誘導体を生成するためのＦＬ１１８コア化学構造プラットフォームの使用）を参照されたい。これらはすべて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２８６】
経口投与用の式１の化合物の水性懸濁液製剤（場合によっては、静脈内投与または腹腔内投与も適合性がある）は、以下に記載されるように２つの状況で発明された。
【０２８７】
経口投与用の式１の化合物の水性懸濁液製剤（レシピ１）は、以下のステップで調製されるようにさらに発明される：
【０２８８】
ステップ１：有機溶媒−シクロデキストリン主溶液を適切な濃度で作成するために、いくつかの実施形態では、シクロデキストリン系（例えば、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ＨＰβＣＤ）をエタノールに、またはいくつかの実施形態ではジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に、またはいくつかの実施形態ではジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）に、またはいくつかの実施形態ではジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に、またはいくつかの実施形態ではＮ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）に、またはいくつかの実施形態ではヘプタフルオロ酪酸／パーフルオロ酪酸（ＨＦＢＡ  ／  ＰＦＢＡ）に（ただし、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、テトラリドロフラン、１，４−ジオキソン、トリクロロエチレン、１，１、ジクロロ−１−フルオロエタン、パーフルオロポリエーテル、ペルフルオロヘキサン、トリフルオロ酢酸、ペンタフルオロプロピオン酸無水物、パークロロエチレン、ビス（トリフルオロメタン）スルホンアミド、またはパーフルオロオクタンには含まれない。）に溶解する。これは、溶解している式１の化合物の量に依存する。一般的に、式１の各化合物分子は、テストで実証された有機溶媒（すなわち、エタノール、ＤＭＳＯ、ＤＭＡ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、またはＨＦＢＡ  ／  ＰＦＢＡ）中のシクロデキストリン系（例：ＨＰβＣＤ）の１．５〜２．０分子である必要がある。  
【０２８９】
ステップ２：ＦＬ１１８または式１の化合物を、１時間以上の激しいボルテックスまたは２４時間以上の振とうにより、有機溶媒−シクロデキストリン溶液に溶解して、薬物負荷製剤が完了したことを確認する（すなわち、１００％薬物／ＨＰβＣＤ中のＡＰＩ）。  次に、得られた混合ポリマー状態懸濁液は、これらの有機溶媒を取り除くプロセスに入る。  これは、凍結乾燥、ドラム乾燥機、流下膜蒸発器、薄膜蒸発器、および有機溶媒を取り除くためのリトルフォード反応器を含むがこれらに限定されないさまざまなアプローチを経ることができる。  エタノールの場合など、これらの有機溶媒懸濁液複合体混合物の一部では、噴霧乾燥プロセス中の不活性雰囲気を作るため、溶媒回収と不活性ガス（窒素など）を備えた閉ループ噴霧乾燥システムを使用して、噴霧乾燥アプローチを使用することも可能である。
【０２９０】
ステップ３：次に、乾燥状態で残った式１の化合物−シクロデキストリン複合体粉末を、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、例えば、２〜５％で４０〜６０ｃｐｓの粘度を有するＨＰＭＣ）および生理食塩水（ＮａＣｌ、０．８５％、ｐＨ５−６．５）中にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００またはＰＥＧ４００を０−４％の濃度で含むプロピレングリコール（ＰＧ、１−５％）を含む水溶液で再懸濁する。  式１の化合物の最終濃度での配合物は、経口投与のために０．１から約５ｍｇ  ／  ｍｌの範囲であり得る。
【０２９１】
粘度が４０〜６０ｃｐｓであるＨＰＭＣの８％ストック溶液を調製する（例として１００ｍＬを使用）：
【０２９２】
８０ｇのＨＰＭＣを秤量し、それらを１０００ｍＬの厚さのガラス瓶に加え、次に、〜９００ｍＬの８５〜９５℃の温食塩水を加え、瓶を９５℃の水浴に入れる。  １５〜３０分ごとに６時間振とうしてから、１０００  ｍＬに温かい生理食塩水を加える（生理食塩水中の８％ＨＰＭＣ）。
【０２９３】
次に、１０００ｍＬの底部をシェーカー上で水平位置に固定し、２００ｒｐｍで室温で一晩振とうする。  非常に濃い透明な溶液が現れるはずである。
【０２９４】
例として１％ＰＧを含む１０００ｍＬ用の２％ＨＰＭＣの調製：
【０２９５】
２５０ｍＬの８％ＨＰＭＣ  ＋  ７４０ｍＬの生理食塩水＋  １０ｍＬのＰＧ  ＝  １０００ｍＬの２％ＨＰＭＣ。
【０２９６】
本発明はさらに、経口、腹腔内、または静脈内投与のための改良された形態の式１の化合物の水性懸濁液を調製するための方法を提供する。  準備手順は次のとおりである：
【０２９７】
ステップ１：２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）などのシクロデキストリン系を１００％無水エタノールに溶解して、エタノール−ＨＰβＣＤ主溶液を調製する。  ただし、ＤＭＳＯ、ＤＭＡ、ＤＭＦ、ＮＭＰまたはＨＦＢＡ  ／  ＰＦＢＡは使用できない。また、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン、トリクロロエチレン、１，１、ジクロロ−１−フルオロエタン。パーフルオロポリエーテル；パーフルオロヘキサン；トリフルオロ酢酸；ペンタフルオロプロピオン酸無水物；パークロロエチレン；ビス（トリフルオロメタン）スルホンアミド；またはパーフルオロオクタンを使用して、エタノール−ＨＰβＣＤ主溶液を作成する。
【０２９８】
ステップ２：ＦＬ１１８または式１の化合物をエタノール−ＨＰβＣＤ主溶液に溶解して、エタノール−ＨＰβＣＤ−薬物複合体を形成する。
【０２９９】
ステップ３：次に、閉ループ噴霧乾燥システムを使用することによるエタノール−ＨＰβＣＤ−薬物複合体懸濁液の噴霧乾燥する。  噴霧乾燥プロセスでは、不活性ガス（窒素など）を使用して不活性雰囲気を形成する必要がある。  このプロセスにより、ＨＰβＣＤ  −薬剤複合粉末が生成される。  
【０３００】
ステップ４：調製されたＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末は、真空下、３０℃で一晩さらに乾燥され、ＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末が次のステップのジェットミリングのために十分に乾燥される。
【０３０１】
ステップ５：ジェットミリングシステム／機械を使用して、ＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末を微粒子（≦３７ミクロン）に製粉する。
【０３０２】
ステップ６：対象／患者への経口投与の前に、粉砕されたＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末は、患者への経口投与の前に、激しく振とうすることにより、５％以下のＰＧを含む通常の生理食塩水に再懸濁される。
【０３０３】
特定の例を以下に提供する：
【０３０４】
１）確実に溶解が完了させるために１時間以上振とうして２０％ＨＰβＣＤ  −エタノールマスター溶液を作成するために、総量１００ｍＬ（注釈として、この場合、約８７ｍＬの非水性エタノールを必要とする）となるように非水性１００％エタノールに溶解する２０ｇのＨＰβＣＤをはかり取る。
【０３０５】
２）２ｇのＦＬ１１８または式１の化合物を１００ｍＬの２０％ＨＰβＣＤ  −エタノールマスター溶液（すなわち、１ｍＬあたり２０ｍｇの薬物）に、磁気バーを用いて高速（１，０００ｒｐｍなど）で２４時間以上溶解する。
【０３０６】
３）溶媒回収および不活性ガス（例えば、窒素）を備えた閉ループ噴霧乾燥システムを使用することによるエタノール−ＨＰβＣＤ−薬物複合体懸濁液の噴霧乾燥により、噴霧乾燥プロセス中に不活性雰囲気を作る。  このプロセスにより、ＨＰβＣＤ  −薬剤複合粉末が得られる。  注釈として、エタノール−ＨＰβＣＤ−薬物複合体懸濁液は、噴霧乾燥中に攪拌する必要がある。
【０３０７】
４）調製されたＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末は、真空下、３０℃で一晩乾燥され、ＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末が次のステップのジェットミリングのために十分に乾燥されるようになる。
【０３０８】
５）ジェットミリングのプロセス：乾燥するＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末は、ジェットミル機を通して粉砕されて、ＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末を微細なサイズ（≦３７ミクロン／  ４００メッシュ）にする。  
【０３０９】
６）患者への経口投与の前に、粉砕されたＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末を、０〜５％ＰＧの存在下で生理食塩水を使用して０．１−１０ｍｇ  ／  ｍＬの濃度の薬物／  ＡＰＩに溶解する。  激しく振ることによって。腹腔内または静脈内投与の場合、ＡＰＩ濃度は０．１−２  ｍｇ  ／  ｍＬである必要があり、経口投与の場合は１〜１０  ｍｇ  ／  ｍＬにすることができる。
【０３１０】
粉砕されたＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末は、経口投与用の錠剤製品にさらに処方することができる。  これは、次の手順で準備できる：
【０３１１】
ステップ１：粉砕されたＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末（１０〜５０％）は、微結晶性セルロース（ＭＣＣ、３０％〜８０％）、コーンスターチ（０％〜４０％）、ラクトース（１０％−２５％）、コロイド状二酸化シリコーン（０％−３％）、二塩基性リン酸カルシウム（１％−１０％）、およびステアリン酸マグネシウム（０．２％−３％）と混合される。  賦形剤混合物をさらに粉砕して、すべての成分が粉末に均一に分散されるようにする。
【０３１２】
ステップ２：次に、この滑らかな粉末は、乾式圧縮プロセスによって様々なサイズおよび形態の錠剤に圧縮される。
【０３１３】
本開示は、本出願に記載される特定の実施形態に関して限定されるべきではない。当業者には明らかであるように、その精神および範囲から逸脱することなく、多くの修正および変形を行うことができる。本明細書に列挙されたものに加えて、本開示の範囲内の機能的に同等の方法および装置は、前述の説明から当業者には明らかであろう。そのような修正および変形は、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図されている。本開示は、添付の請求項の条件、およびそのような請求項が権利を与えられる同等物の全範囲によってのみ制限されるべきである。この開示は、特定の方法、試薬、化合物組成物、または生物学的システムに限定されず、もちろん変化し得ることが理解されるべきである。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図するものではないことも理解されたい。さらに、開示の特徴または態様がマルクーシュグループに関して説明される場合、当業者は、それによって、開示が、マルクーシュグループの任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関しても説明されることを認識するであろう。    
【０３１４】
当業者によって理解されるように、あらゆる目的のために、特に書面による説明を提供することに関して、本明細書に開示されるすべての範囲はまた、ありとあらゆる可能なサブレンジおよびそのサブレンジの組み合わせを包含する。  リストされた範囲は、同じ範囲を少なくとも等しい半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに十分に記述し、可能にするものとして容易に認識できる。非限定的な例として、本明細書で論じられる各範囲は容易に分解できる。  当業者には、「まで」、「少なくとも」、「より大きい」、「より小さい」、および「より小さい」などのすべての言語も理解されるように、下３分の１、中３分の１、および上３分の１などに。  同様に、列挙された数を含み、上記のように後でサブ範囲に分割できる範囲を参照する。  最後に、当業者によって理解されるように、範囲は個々のメンバーを含む。
【０３１５】
様々な態様および例示的な実施形態が本明細書に開示されているが、他の態様および実施形態は当業者には明らかであろう。  本明細書に開示される様々な態様および実施形態は、例示を目的とするものであり、限定することを意図するものではなく、真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示される。
【０３１６】
本明細書で引用されるすべての参考文献は、個々の刊行物、特許、または特許出願がすべての目的のためにその全体が具体的かつ個別に参照により組み込まれるのと同じ程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０３１７】
前述の要約は、例示のみであり、決して限定することを意図するものではない。  上記の例示的な態様、実施形態、および特徴に加えて、さらなる態様、実施形態、および特徴は、本発明の詳細な説明に提示された図面および例を参照することによって明らかになるであろう。
(項目１)
以下を含む組成物：
【化１０】
2022501432.tif 000012
ここで、置換基は、以下からなる群から選択される：
ここで、Ｒ２がＨである場合、Ｒ１は、以下のグループＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  Ｉ−ａ）、グループＩＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ−ａ）、グループＩＩＩ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩＩ−ａ）、およびグループＩＶ−ａ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＶ−ａ）からなる群から独立して選択される：
【化１１】
2022501432.tif 000013
【化１２】
2022501432.tif 000014
【化１３】
2022501432.tif 000015
または、Ｒ１がＨである場合、Ｒ２は、以下のグループＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  Ｉ−ｂ）、グループＩＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ−ｂ）、グループＩＩＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩＩ−ｂ）、およびグループＩＶ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＶ−ｂ）からなる群から独立して選択される：
【化１４】
2022501432.tif 000016
【化１５】
2022501432.tif 000017
または、Ｒ２が次の化学基のいずれかである場合：Ｆ−、Ｆ２ＣＨ−、Ｆ３Ｃ−、Ｃｌ２ＣＨ−、Ｃｌ３Ｃ−、Ｂｒ２ＣＨ−、Ｂｒ３Ｃ−、Ｉ２ＣＨ−、Ｉ３Ｃ−、ＦＣＨ２Ｏ−、Ｆ２ＣＨＯ−、ＣｌＣＨ２Ｏ−、Ｃｌ２ＣＨＯ  −、ＮＨ２−、ＦＣＨ２ＮＨ−、Ｆ２ＣＨＮＨ−、ＣｌＣＨ２ＮＨ−、Ｃｌ２ＣＨＮＨ−、（ＦＣＨ２）２Ｎ−、（Ｆ２ＣＨ）２Ｎ−、（ＣｌＣＨ２）２Ｎ−、（Ｃｌ２ＣＨ）２Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｆ、−Ｃ  （Ｏ）ＣＨＦ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃｌ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＣｌ２、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＯ２ＣＨＦ２、ＣＯ２ＣＨ２Ｃｌ、または−ＣＯ２ＣＨＣｌ２の場合、Ｒ１はグループＩａ  （Ｇｒｏｕｐ  Ｉ−ａ）、ＩＩ−ａ  （Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ−ａ）、グループＩＩＩ−ａ  （Ｇｒｏｕｐ  ＩＩＩ−ａ）、およびグループＩＶ−ａ  （Ｇｒｏｕｐ  ＩＶ−ａ）からなる群から独立して選択される，
または、Ｒ１が次の化学基のいずれかである場合：Ｆ−、Ｆ２ＣＨ−、Ｆ３Ｃ−、Ｃｌ２ＣＨ−、Ｃｌ３Ｃ−、Ｂｒ２ＣＨ−、Ｂｒ３Ｃ−、Ｉ２ＣＨ−、Ｉ３Ｃ−、ＦＣＨ２Ｏ−、Ｆ２ＣＨＯ−、ＣｌＣＨ２Ｏ−、Ｃｌ２ＣＨＯ−  、ＮＨ２−、ＦＣＨ２ＮＨ−、Ｆ２ＣＨＮＨ−、ＣｌＣＨ２ＮＨ−、Ｃｌ２ＣＨＮＨ−、（ＦＣＨ２）２Ｎ−、（Ｆ２ＣＨ）２Ｎ−、（ＣｌＣＨ２）２Ｎ−、（Ｃｌ２ＣＨ）２Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｆ、−Ｃ（  Ｏ）ＣＨＦ２、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃｌ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＣｌ２、−ＣＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＯ２ＣＨＦ２、ＣＯ２ＣＨ２Ｃｌ、または−ＣＯ２ＣＨＣｌ２の場合、Ｒ２はグループＩｂ  （Ｇｒｏｕｐ  Ｉ−ｂ）、ＩＩ  −ｂ  （Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ−ｂ）、グループＩＩＩ−ｂ（Ｇｒｏｕｐ  ＩＩＩ−ｂ）、およびグループＩＶ−ｂ  （Ｇｒｏｕｐ  ＩＢ−ｂ）からなる群から独立して選択される，
ここで、位置２０のエステル対応化合物は、さまざまなエステル化化学基に由来する。
(項目２)
項目１に記載の組成物、ここでは製剤中のあるタイプの式１の化合物は、経口、静脈内、皮下、経皮、腹腔内、または吸入によって投与される。
(項目３)
項目１に記載の組成物、ここでは疾患は、腫瘍性疾患、自己免疫疾患、再狭窄、結節性硬化症複合体（ＴＳＣ）、および細胞増殖に関連する他の任意のヒトの疾患からなる群から選択される。
(項目４)
項目１に記載の組成物、ここでは疾患は、固形腫瘍、血液癌、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨形成肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、偽粘液腫腹膜、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、頭頸部癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝腫、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、多形性神経膠芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、音響神経腫、脂肪膠腫、神経鞘腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、急性白血病、急性白血病、網膜芽細胞腫、白血病、急性白血病、急性リンパ性白血病前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫および胸腺腫、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される１つ以上のがんである。
(項目５)
項目４に記載の組成物、ここではがん分子表現型が、サバイビン、Ｍｃｌ−１、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２、ＡＢＣトランスポータータンパク質、低酸素誘導因子１α（ＨＩＦ−１α）、Ｈｄｍ２、ＨｄｍＸ、ｐ５３（野生型、ヌルまたは変異体）、変異体ＡＰＣ、変異体Ｋｒａｓ、ＡＢＣトランスポータータンパク質、熱ショックタンパク質６０（ＨＳＰ６０）、ストレス７０タンパク質（ＧＲＰ７５）、ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５（  ｐ６８）、核ＲＮＡヘリカーゼ２（ＤＤＸ２１）、伸長因子２（ＥＦ２）、プレｍＲＮＡスプライシング因子ＡＴＰ依存性ＲＮＡヘリカーゼ（ＤＨＸ１５）、移行性小胞体ＡＴＰａｓｅ（ＴＥＲＡ）、トランスフェリン受容体タンパク質（ＴＦＲ１）、ＭＡＰキナーゼ活性化プロテインキナーゼ２（ＭＡＰＫ２）、カテニンベータ−１（ＣＴＮＢ１）、初期エンドソーム抗原１（ＥＥＡ１）、グアニンヌクレオチド結合タンパク質サブユニットベータ２様１（ＧＢＬＰ）、電子伝達フラボタンパク質サブユニットアルファ（ＥＴＦＡ）、プロテアソーム活性化因子複合体サブユニット３（ＰＳＭＥ３）、ＵＰＦ０３６８タンパク質Ｃｘｏｒｆ２６（ＣＸ０２６）、ペルオキシレドキシン−２（ＰＲＤＸ２）、ペルオキシレドキシン−１（ＰＲＤＸ１）、チオレドキシン依存性過酸化物レダクターゼ（ＰＲＤＸ３）、セリン／アルギニンリッチスプライシングファクター３（ＳＲＳＦ３）、プロテアソームサブユニットベータタイプ−２（ＰＳＢ２）、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼＰ（ＧＳＴＰ１）、ＭＡＰ  ／微小管親和性−調節キナーゼ３（ＭＡＲＫ３）、ＤＮＡ損傷誘導性１（ＤＤＩ１）、腫瘍タンパク質Ｄ５２様２（ＴＰＤ５２Ｌ２）、カルシウムチャネル、電位依存性、ベータ１サブユニット（ＣＡＣＮＢ１）、Ｇタンパク質結合受容体１（ＰＧＰＣＲ１  ）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２ａ（ＵＳＰ２ａ）、メラノコルチン２受容体（ＭＣ２Ｒ）、線維芽細胞成長因子１８（ＦＧＦ１８）、腫瘍タンパク質ｐ５３誘導性タンパク質３（ＴＰ５３Ｉ３）、ＣＣＨＣ型亜鉛フィンガー、核酸結合タンパク質（ＣＮＢＰ）、ＷＤリピートドメイン２２（ＷＤＲ２２）、カリウム電圧ゲートチャネルサブファミリーＥメンバー１（ＰＶＧＣＳＥ−Ｍ１）、ユビキチン結合酵素Ｅ２Ｔ（推定）（ＵＢＥ２Ｔ）、ユビキチン様タンパク質７（ＵＬＰ７）、ＲＮＡ結合モチーフ、一本鎖相互作用タンパク質２（ＲＢＭＳ２）、細胞質チロシンタンパク質キナーゼ（ＢＭＸ）、およびサイクリンＢ１相互作用タンパク質１（ＣＣＮＢ１ＩＰ１）からなる群から選択される１つまたは複数のバイオマーカーまたは標的の発現を含む。
(項目６)
項目１に記載の組成物、ここでは急性および慢性の後天性および／または固有の治療抵抗性を克服するための式１の化合物および式１の化合物の薬学的に許容される塩は、化学療法剤、化学予防剤、天然植物由来の薬剤、非植物由来の薬剤、クルクミン、レスベラトロール、ビタミンＤ３、ビンテンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、イソチオシアネート（ＩＴＣ）、アリルイソチオシアネート（ＡＩＴＣ）、シリビニン（シリビン）、スリンダク、セレン含有化合物、メチルセレニン酸、Ａｍｏｏｒａ  ｒｏｈｉｔｕｋａ由来のＡＭＲ類似体、ＡＭＲ−Ｍｅ、ＡＭＲ−ＭｅＯＡｃ、テラメプロコール、セレコキシブ、イマチニブ、ケルセチン、エピガロカテキン−３−ガレート（ＥＧＣＧ）  、デグエリン、３，３’−ジインドリルメタン（ＤＩＭ）、エモジン、ゲニスタイン、トルフェナム酸、シンバスタチン、ガンボギン酸、ドコサヘキサエン酸、ウルソール酸、オレアノール酸、ブファリン、スルフォラファン、ノスカピン、インドメタシン（インドメタシン）、ルペオール、デクルシン、アビシンＤ、シグリタゾン、ベバシズマブ（アバスチン）、クロリブリン、バイカレイン、パキシリン、プルバラノールＡ、ＮＵ６１４０、アルジシアノン、ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６、ＨＤＡＣ阻害剤、ＭＳ−２７５  ／エンチノスタット、ＳＡＨＡ、アナカルド酸ジテルペン、ブフォタリン、ウィザフェリンＡ、プランバギン、フラボカワインＡ、フラボカワインＢ、ポニシジン、エスシン、クグアシンＪ、ＬＱＢ−１１８、クロテポキシド、クグアグリコシドＣ、デストルキシンＢ、エボディアミン、セサミン、プロスタノイド、エンドセリン拮抗薬、細胞質キナーゼ阻害剤、エンドセリン受容体拮抗薬、アンブリセンタン、ボセンタン、およびシタクスセンタン、ＰＤＥ５（ＰＤＥ−Ｖ）阻害剤、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、カルシウムチャネル遮断薬、アムロジピン、フェロジピン、バレパミル、ジルチアゼム、メントール、プロスタサイクリン、トレプロスチニル、イロプロスト、酸素、ヘパリン、ワルファリン、利尿薬、ジゴキシン、シクロスポリン、シクロスポリンＡ、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗体、ＣＤ１５４、ＣＤ４０融合タンパク質、ｇｐ３９融合タンパク質、ＣＤ４０１ｇ、ＣＤ８ｇｐ３９、ＮＦ−カッパＢの核移行阻害剤機能、デオキシスペルグアリン（ＤＳＧ）、コレステロール生合成阻害剤、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、ロバスタチン、シンバスタチン、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、イブプロフェン、アスピリン、アセトアミノフェン、レフルノミド、デオキシスペルグアリン、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、セレコキシブ、ステロイド、プレドンデキサメタゾン、金化合物、ベータアゴニスト、サルブタモール、ＬＡＢＡ、サルメテロール、ロイコトリエンアンタゴニスト、モンテルカスト、抗増殖剤、メトトレキサート、ＦＫ５０６、タクロリムス、プログラフ、ミコフェノラートモフェチル、細胞毒性薬、アザチオプリン、ＶＰ−１６、エトポシド、フルダラビン、ドキソルビシン、アムサクリン、カンプトテシン、シタラビン、ゲムシタビン、フルオロデオキシウリジン、メルファラン、シクロホスファミド、代謝代謝物、メトトレキサート、トポイソメラーゼ阻害���、カンプトテシン、ＤＮＡアルキル化剤、シスプラチン、キナーゼ阻害剤、ソラフェニブ、微小管毒、パクリタキセル、ＴＮＦ−α阻害剤、可溶性ＴＮＦ受容体、ヒドロキシ尿素、ラパマイシン、シロリムス、ラパミューン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から１つまたは複数の薬剤と別々に、連続してまたは同時に対象に投与される。
(項目７)
項目１に記載の組成物、ここでは式１の化合物またはＦＬ１１８は、シクロデキストリン系−薬物複合体懸濁液に配合されるシクロデキストリン系を含む有機溶媒のマスター溶液に配合される。ここで、無有機溶媒系のシクロデキストリン薬物は、経口（ｐｅｒ  ｏｒａｌ，  ｐｏ／ｐ．ｏ．）、腹腔内（ｉｐ／ＩＰ／ｉ．ｐ．）または静脈内（ｉｖ／ＩＶ／ｉ．ｖ．）投与用の複合体粉末、あるいは以下のステップを含む経口投与用の固形錠剤としてさらに合成される：
１）２０％濃度の有機溶媒−シクロデキストリンマスター溶液を調整するために、シクロデキストリン系をエタノール；ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；  ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）；  ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）；  Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）；  またはヘプタフルオロ酪酸／パーフルオロ酪酸（ＨＦＢＡ  ／  ＰＦＢＡ）ですが、ジクロルメタンには含まれません。  クロロホルム；  アセトン；  テトラリドロフラン；  １，４−ジオキソン；  トリクロロエチレン；  １，１、ジクロロ−１−フルオロエタン；  パーフルオロポリエーテル；  ペルフルオロヘキサン；  トリフルオロ酢酸；  ペンタフルオロプロピオン酸無水物；  パークロロエチレン；  ビス（トリフルオロメタン）−スルホンアミド；  またはパーフルオロオクタンに溶解する。
２）１００％濃度の薬物／ＡＰＩをシクロデキストリン系に配合し、ポリマー状態の懸濁液にするため、式１の化合物またはＦＬ１１８を、化合物１分子に対しシクロデキストリン１．５−２．０分子の比率で、１時間以上激しく攪拌するか、磁気撹拌子を用いて１，０００  ｒｐｍなどの高速で２４時間以上攪拌することにより、有機溶媒−シクロデキストリン溶液に溶解する。
３）得られたポリマー状態の懸濁液を処理して、凍結乾燥、ドラム乾燥機、流下膜蒸発器、薄膜蒸発器、およびリトルフォード反応器からなる群から選択されるプロセスを通じて有機溶媒を除去する。ここでは、これは結果としてシクロデキストリン系−薬物複合体粉末となる。
４）調製したシクロデキストリン系−薬物複合体粉末を３０℃で一晩真空乾燥する。
５）ジェットミリングシステム／装置を使用して、乾燥したシクロデキストリン系−薬物複合粉末を約３７ミクロン未満の微粒子に製粉する。
６）患者への経口、静脈内または腹腔内投与のために、粉砕されたシクロデキストリン系−薬物複合体粉末を最大５％濃度のＰＧ  （ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ／ポリエチレングリコール）を含む水溶液で再懸濁する。
(項目８)
項目７に記載の組成物、ここでは製粉されたシクロデキストリン系−薬物（すなわち、ＦＬ１１８または式１の化合物）複合粉末は、２−５％濃度のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、４０−６０ｃｐｓの粘度）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３００またはＰＥＧ４００を０−４％濃度で含む生理食塩水（０．８５％濃度ＮａＣｌ）に溶解した１−５％濃度のプロピレングリコール（ＰＧ）を含む水性懸濁液に調整される。ＦＬ１１８または式１の化合物の最終濃度での配合物は、経口投与のために０．１から約５ｍｇ／ｍＬの範囲になり得る。
(項目９)
項目７に記載の組成物、ここでは製粉されたシクロデキストリン系−薬物複合体粉末は、充填剤、結合剤または希釈剤、崩壊剤、流動剤、潤滑剤または抗菌剤、または保存剤と均一に混合され、次いで得られたものをプレスすることによって錠剤形態となる。そして錠剤機で乾式圧縮することにより、滑らかな均一な粉末を錠剤にする。  
(項目１０)
項目９に記載の組成物、ここでは充填剤、結合剤または希釈剤は、セルロースまたはセルロース誘導体、デンプンまたはデンプン誘導体、およびラクトースからなる群から選択される。崩壊剤は、コロイド状二酸化炭素、クロスカルメロースナトリウム、およびクロスポビドンからなる群から選択される。グリダントは、二塩基性リン酸カルシウムとコロイド状二酸化炭素からなる群から選択される。潤滑剤は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ポリエチレングリコール、およびタルクからなる群から選択される。抗菌剤または防腐剤は、プロピレングリコール、プロピレンパラベン、メチルパラベン、およびグリセリンからなる群から選択される。
(項目１１)
項目９に記載の組成物、ここでは粉末形態に含まれる原材料は、１０−５０％濃度の製粉されたシクロデキストリン系−薬物複合体粉末、３０％−８０％濃度の微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、０％〜４０％濃度のコーンスターチ、１０％〜約２５％濃度のラクトース、０％〜３％濃度のコロイド状二酸化シリコーン、１％〜１０％濃度の二塩基性リン酸カルシウム、および０．２％〜３％濃度のステアリン酸マグネシウム（錠剤形態）である。
(項目１２)
項目１に記載の組成物、ここでは式１の化合物またはＦＬ１１８は、以下のステップを含む経口、静脈内、または腹腔内投与用の水性懸濁液製剤として処方される：  
１）シクロデキストリン系を非水性１００％濃度エタノールに溶解して、エタノール−シクロデキストリンマスター溶液を調整する。
２）式１の化合物またはＦＬ１１８をエタノール−シクロデキストリンマスター溶液に溶解して、エタノール−シクロデキストリン−薬物複合体懸濁液を調整する。
３）エタノール−シクロデキストリン−薬物（式１の化合物またはＦＬ１１８）複合懸濁液の噴霧乾燥は、噴霧乾燥プロセス中の不活性雰囲気を作るため、溶媒回収および不活性ガス（例えば、窒素）を備えた閉ループ噴霧乾燥システムを使用することによって行われる。このプロセスによって、シクロデキストリン系−薬物複合体粉末となる。
４）調製したシクロデキストリン系−薬物複合体粉末を３０℃で一晩真空乾燥する。
５）ジェットミリングシステム／装置を使用して、乾燥したシクロデキストリン系−薬物複合粉末を約３７ミクロン未満の微粒子に製粉する。
６）患者への経口、静脈内、または腹腔内投与のために、製粉されたシクロデキストリン系−薬物複合体粉末を最大５％濃度のＰＧ水溶液で再懸濁する。
(項目１３)
項目７記載の組成物、ここではシクロデキストリン系は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）、βシクロデキストリン（βＣＤ）またはスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢβＣＤ）である。
(項目１４)
項目８記載の組成物、ここではシクロデキストリン系は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）、βシクロデキストリン（βＣＤ）またはスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢβＣＤ）である。
(項目１５)
項目９記載の組成物、ここではシクロデキストリン系は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）、βシクロデキストリン（βＣＤ）またはスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢβＣＤ）である。
(項目１６)
項目１２記載の組成物、ここではシクロデキストリン系は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）、βシクロデキストリン（βＣＤ）またはスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（ＳＢβＣＤ）である。
(項目１７)
項目１２に記載の組成物  、ここでは代表的な例としてエタノール−ＨＰβＣＤマスター溶液を調整するステップは、２０％濃度ＨＰβＣＤ−エタノールマスター溶液を調整するために、２０ｇのＨＰβＣＤを非水性１００％濃度エタノールに溶解して総量１００ｍＬにする工程を含む。
(項目１８)
項目１７に記載の組成物、ここではエタノール−ＨＰβＣＤ−薬物複合体懸濁液を調整する工程は、エタノール−ＨＰβＣＤ−薬物複合懸濁液を調整するために、２ｇのＦＬ１１８または式１の化合物を１００ｍＬの２０％濃度のエタノール−ＨＰβＣＤマスター溶液に溶解する工程を含む。
(項目１９)
項目１７に記載の組成物、ここでは経口、腹腔内または静脈内投与のための水性懸濁液を調整するステップは以下のステップを含む。
１）式１の化合物またはＦＬ１１８複合懸濁液の化合物を含むエタノール−ＨＰβＣＤ−薬剤の噴霧乾燥は、噴霧乾燥プロセス中の不活性雰囲気を作るため、溶媒回収と不活性ガスを備えた閉ループ噴霧乾燥システムを使用することによって行われる。このプロセスによって、ＨＰβＣＤ系−薬物複合体粉末となる。
２）調製したＨＰβＣＤ−薬物複合体粉末を３０℃で一晩真空乾燥する。
３）ジェットミリングシステム／装置を使用して、乾燥したＨＰβＣＤ系−薬物複合粉末を約３７ミクロン未満の微粒子に製粉する。
４）患者への経口投与、静脈内投与、または腹腔内投与のために、患者への投与直前に、製粉したＨＰβＣＤ−薬剤複合体粉末を最大５％濃度ＰＧの生理食塩水で再懸濁する。  ここで、薬物／ＡＰＩの濃度は、激しく振とうすることにより、０〜５％濃度ＰＧの生理食塩水を使用して０．１〜１０ｍｇ  ／  ｍＬの範囲とする。腹腔内または静脈内投与の場合、ＡＰＩ（式１の化合物またはＦＬ１１８）濃度は０．１〜１  ｍｇ  ／  ｍＬであり、経口投与の場合は１〜１０  ｍｇ  ／  ｍＬである。
(項目２０)
項目１に記載の組成物、ここでは式１の化合物またはＦＬ１１８は、塩化物、リン酸塩、メシレート、ビスメシレート、トシレート、乳酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、ビス酢酸塩、およびクエン酸塩からなる群から選択される塩を含む様々な形態の水性懸濁液、ナノ粒子または固体状態錠剤、またはカプセルとして処方され、週に１〜５回経口投与される。
(項目２１)
項目１に記載の組成物、ここでは様々な製剤形態の式１の化合物またはＦＬ１１８は、本明細書に記載の実施形態のいずれかの化合物であり、経口、静脈内、皮下、経皮、腹腔内、または吸入によって投与される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【国際調査報告】
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