(57)【要約】  非限定的にイムノアッセイを含む、１つまたはそれ以上の診断アッセイの実行中に、目的とするアナライトと関連するフック効果を検出するためのデバイスおよび方法。【選択図】図１
2022501604.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度測定の正確性を判定するために、患者の液体テストサンプルにおけるフック効果の存在を決定する方法であって：
診断アッセイシステムの診断アッセイ反応槽内の患者の液体テストサンプルにおいて、少なくとも１つの診断アッセイを実行して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度を決定する工程であって、少なくとも１つの診断アッセイの実行中に、患者の液体テストサンプルの少なくとも第１の吸収測定値（ＭＲ１）、患者の液体テストサンプルの第２の吸収測定値（ＭＲ２）、および患者の液体テストサンプルの最終吸収測定値（ＭＲＣ）が、患者の液体テストサンプルの光学的検査により記録される、工程と；
患者の液体テストサンプルのＭＲＣと関連する少なくとも１つの標的アナライトの最終濃度結果を決定する工程と；
少なくとも１つの標的アナライトの最終濃度結果が事前に決定された濃度値を上回るかどうか確かめる工程と；
少なくとも１つの標的アナライトの最終濃度結果が事前に決定された濃度値を上回る場合、検出式においてＭＲ１、ＭＲ２、およびＭＲＣを利用することにより、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトと関連するフック効果の存在を決定する工程であって、検出式が、
（少なくとも１つの標的アナライトの濃度結果≧Ｃ）且つ（（ＭＣＲ−ＭＲ２）／（ＭＲ２−ＭＲ１）＞Ｒ）のとき、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトはフック効果の影響を受けている
という式を含み、式中、Ｃは事前に決定された濃度値であり、Ｒは少なくとも１つの診断アッセイの反応動態を評価するための比の値に対する事前に決定された限界値であり、
さらに、検出式の少なくとも１つの結果はユーザに対する出力である、工程と
を含む前記方法。
【請求項２】
患者の液体テストサンプルは尿である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも１つの目的とする標的アナライトは、ペプチド、タンパク質、およびその組合せから選択される群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも１つの目的とする標的アナライトはマイクロアルブミンである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
光学的検査は、分光光度計、蛍光光度計、およびネフェロメーターからなる群から選択される光デバイスにより実行される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも１つの診断アッセイはイムノアッセイである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
事前に決定された濃度値は、約０ミリグラム／リットル〜約５００ミリグラム／リットルの範囲から選択される数値である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
事前に決定された濃度値は、約０ミリグラム／リットル〜約３００ミリグラム／リットルの範囲から選択される数値である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
診断アッセイ反応槽は、診断アナライザ内で使用するための反応カセットを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
反応カセットは、少なくとも２つのコンパートメントを含み、該少なくとも２つのコンパートメントのそれぞれは、少なくとも１つの診断アッセイ試薬を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１つの診断アッセイ試薬は抗体を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１つの抗体はマイクロアルブミンの抗体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
反応槽は少なくとも１つの光学的読み取りウィンドウを含み、さらに光学的検査を少なくとも１つの光学的読み取りウィンドウ内で行う、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ユーザは、診断アッセイシステムと機能的に接続した少なくとも１つのコンピュータであり、さらに検出式は、該少なくとも１つのコンピュータの非一時的メモリに記憶される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ユーザに対する出力は、検出式の少なくとも１つの結果は、少なくとも１つの目的とする標的アナライトはフック効果の影響を受けていることを示唆する通知であり、これにより、ユーザは、患者の液体テストサンプルにおいて後続する分析を実行して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの正確な濃度を決定できるようにする、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度測定の正確性を判定するために、患者の液体テストサンプルにおけるフック効果の存在を決定する方法であって：
診断アッセイシステムの診断アッセイ反応槽内の患者の液体テストサンプルにおいて、少なくとも１つの診断アッセイを実行して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度を決定する工程であって、少なくとも１つの診断アッセイの実行中に、患者の液体テストサンプルの少なくとも第１の吸収測定値（ＭＲ１）、患者の液体テストサンプルの第２の吸収測定値（ＭＲ２）が、患者の液体テストサンプルの光学的検査により記録される、工程と；
患者の液体テストサンプルのＭＲＣと関連する少なくとも１つの標的アナライトの濃度結果を決定する工程と；
少なくとも１つの標的アナライトの濃度結果が事前に決定された濃度値を上回るかどうか確かめる工程と；
少なくとも１つの標的アナライトの濃度結果が事前に決定された濃度値を上回る場合、検出式においてＭＲ１およびＭＲ２を利用することにより、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトと関連するフック効果の存在を決定する工程であって、検出式が、
（標的アナライトの濃度≧Ｃ）且つ（ＭＲ１／ＭＲ２）＞Ｒのとき、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトはフック効果の影響を受けている
という式を含み、式中、Ｃは事前に決定された濃度値であり、Ｒは少なくとも１つの診断アッセイの反応動態を評価するための比の値に対する事前に決定された限界値であり、
さらに、検出式の少なくとも１つの結果はユーザに対する出力である、工程と
を含む前記方法。
【請求項１７】
患者の液体テストサンプルは尿である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも１つの目的とする標的アナライトは、ペプチド、タンパク質、およびその組合せから選択される群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
少なくとも１つの目的とする標的アナライトはマイクロアルブミンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも１つの診断アッセイはイムノアッセイである、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１８年９月２８日出願の米国仮特許出願第６２／７３８，４０１号の米国特許法１１９条（ｅ）項に基づく利益を主張する。上記引用の特許出願の全内容を、本明細書により参照によって本明細書に明示的に組み入れる。
【０００２】
連邦政府資金による研究または開発に関する記載
該当無し。
【０００３】
技術分野
本開示および請求に係る発明の概念は、少なくとも１つの診断アッセイの実行中に、患者の液体テストサンプル中に存在し得る様々な目的とするアナライトの濃度を検出するためのデバイス、キット、および方法に関する。より具体的には、本開示および請求に係る発明の概念は、非限定的に、腎疾患、糖尿病、および／または高血圧症を含む、様々な健康関連の状態を診断するために、患者の尿テストサンプルにおいて、マイクロアルブミン対クレアチニン比診断アッセイの実行中に、マイクロアルブミンフック効果の存在を検出するための改善した方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
患者の液体テストサンプル中に存在し得るアナライトを検出するアッセイを実行するための、非常に多くのデバイス、キット、および方法が存在する。そのようなデバイスおよび方法は、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）、マイクロアルブミン、ならびにクレアチニン、ならびに脂質に基づくアナライト、例えばコレステロール、トリグリセリド、および／または高密度リポタンパク質等を含むが、これらに限定されない、患者の健康を示唆する、特定の目的とするアナライトの存在、量、および／または濃度を検出する診断アッセイにおいて有効であることが証明されている。そのようなデバイスは、患者の液体テストサンプル（例えば、例示目的に限定して、患者の尿サンプル）中に存在する少なくとも１つの目的とするアナライトの濃度を検出および／または測定するために、非限定的にイムノアッセイを含む診断アッセイを実行するのが一般的である。
【０００５】
イムノアッセイ技術は、医療診断の分野において、特に吸収に基づく測定に立脚するポイントオブケアアナライザ、例えば、例示目的に限定して、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ＵＳＡ，  Ｉｎｃ．社、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＰＡにより販売用として商業的に提供されるＤＣＡ  ＶＡＮＴＡＧＥ（登録商標）アナライザ等を用いて幅広く使用されている。特に、これらのアッセイは、患者の液体テストサンプル中に存在する様々なタンパク質アナライトの検出において有用である。この分野において、その使用は幅広く受け入れられているにもかかわらず、このようなアッセイを使用するとき、様々な種類の妨害がなおも観測される。例えば、イムノアッセイアナライザの検出範囲における制限は、「フック効果」として知られている現象に起因する。フック効果は、患者の液体テストサンプル中の標的アナライトの濃度が高く、標的アナライトにおいてアッセイ応答シグナルの減少を実際に引き起こしたときに観察され、その結果、偽陰性または誤った低値濃度結果を報告することとなる（例えば、図１を参照）。
【０００６】
フック効果は、抗原による抗体の飽和曲線に基づき（やはり、例えば図１を参照）、また患者の液体テストサンプル中の標的アナライトの濃度がアッセイ試薬において使用される抗体の結合容量を上回り、その結果、応答シグナルの生成に必要とされる免疫複合体の形成が不完全となるときに生じる。例えば、標的アナライト（例えば、例示目的に限定して、マイクロアルブミンおよび／またはクレアチニン）の濃度が過剰に高いと、イムノアッセイで使用される捕捉抗体および検出抗体の両方が同時に飽和するおそれがあり、これにより図１に示す「フック」または濃度測定の誤った減少を引き起こす。これらの事例では、アナライザの正確性に悪影響を及ぼし、また患者ケアに対して極めて有害な結果を有するおそれのある偽陰性または誤った低値結果が報告される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
フック効果を補うために、医療提供者およびユーザは、患者の液体テストサンプルを捕捉抗体と共にインキュベーションし、それに続いて検出抗体を添加する間に、二次機構、例えば、例示目的として、反応試験ストリップまたは洗浄工程の追加等を利用して、目的とする標的アナライト（例えば、例示目的として、標的ペプチドおよび／またはタンパク質）の含有濃度が極めて高いことが疑われるサンプル中の目的とするアナライトの正しい濃度を決定するように助言を受ける。しかしながら、これらの二次機構は、実現するための追加の時間、金、および機器を必要とする。したがって、１つまたはそれ以上のアッセイの実行中に、フック効果により持ち込まれる不正確を緩和し、および／または取り除く改善されたアッセイ法が必要とされる。本開示および／または請求に係る発明の概念が関連するのは、そのようなデバイスおよび方法である。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】高濃度の標的アナライトが存在するときに、イムノアッセイにおいて観察された高用量フック効果型の妨害を実証するグラフ表示を示す図である。
【図２】フック効果を呈するマイクロアルブミンサンプルについて取得された３つの吸収測定値、およびフック効果を呈さないマイクロアルブミンサンプルについて同時に取得された３つの吸収測定値におけるグラフ表示を示す図である。
【図３】様々な濃度のいくつかのマイクロアルブミンサンプルについて、本開示および／または請求に係る発明の概念の検出式／アルゴリズムを利用して実施し、それから生成された統計情報を表す表を示す図である。
【図４】いくつかのマイクロアルブミンサンプルについて取得されたマイクロアルブミン結果（５００ミリグラム／リットルのマイクロアルブミン結果をマイクロアルブミンサンプル濃度結果に対してプロットした）のグラフ表示を示す図である。
【図５】１，０００ミリグラム／リットルまたは２，０００ミリグラム／リットルのマイクロアルブミン濃度を有するサンプルに対して、本開示および／または請求に係る発明の概念の検出式／アルゴリズムを利用したときの、フック効果を呈するサンプルの結果を表す表を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
例示的な図面、実験、結果、および研究室手順によって、本発明の概念の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明するのに先立ち、本発明の概念は、その適用において、下記の説明に記載され、または図面、実験、および／もしくは結果において例証されるコンポーネントの構造および配置の詳細に限定されないものと理解される。本発明の概念は、他の実施形態を実施する能力、または様々な方式で実践もしくは実行される能力を有する。したがって、本明細書で使用される言語には、可能な限り最も広い範囲および意味が付与されるように意図されており；ならびに実施形態は、網羅的ではなく例示的であるように意図されている。また、本明細書で採用される表現法および専門用語は、説明を目的とするものであり、そして限定とみなすべきでないと、やはり理解される。
【００１０】
本明細書において別途規定されなければ、本開示および請求に係る発明の概念と結びつけて使用される科学的用語および技術的用語は、当業者により一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈により別途必要とされる場合を除き、単数形の用語は複数形を含むものとし、また複数形の用語は単数形も含むものとする。上記技術および手順は、当技術分野において周知の従来法に基づき一般的に実行され、また本明細書全体を通じて引用および議論される様々な一般的且つより具体的な参考資料に記載される通りである。本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、および医薬製薬化学の研究室手順および技術と結びつけて利用される命名法は周知であり、また当技術分野で一般的に使用される。
【００１１】
本明細書に記載される特許、公開特許出願、および非特許公開資料はすべて、本開示および請求に係る発明の概念が関係する当業者の技能のレベルを示唆する。本出願の任意の部分で引用された特許、公開特許出願、および非特許公開資料はすべて、個別の特許または公開資料のそれぞれが参照によって組み入れられるものと具体的におよび個別に指摘するかのように、それと同程度に参照によって本明細書にその全体が明示的に組み入れられる。
【００１２】
本明細書において開示および請求に係るデバイス、キット、および／または方法はすべて、本開示を踏まえれば、過度の実験を行うことなく作成および実行することができる。本開示および請求に係る発明の概念の組成物および方法は、好ましい実施形態に関して記載されているが、本開示および請求に係る発明の概念の概念、趣旨および範囲から逸脱せずに、本明細書に記載される組成物および／または方法に対して、ならびに方法の工程または一連の工程において、変更を適用することができることは当業者にとって明白である。当業者にとって明白なそのような類似した代替および修正はすべて、添付の特許請求の範囲により定義されるような本発明の概念の趣旨、範囲および概念に含まれるものとみなされる。
【００１３】
本開示に基づき利用される場合、下記の用語は、別途表示されない限り、下記の意味を有するものと理解されなければならない。
【００１４】
単語「ａ」または「ａｎ」の使用は、特許請求の範囲および／または本明細書内の用語「〜を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と関連して使用されるとき、「１つ」を意味し得るが、しかし「１つまたはそれ以上」、「少なくとも１つ」、および「１つまたは１より多く」の意味ともやはり整合する。単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別途明示しない限り複数形の指示物を含む。したがって、例えば「ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ（化合物）」という場合、それは、１つもしくはそれより多く、２つもしくはそれより多く、３つもしくはそれより多く、４つもしくはそれより多く、またはより大きな数の化合物を指し得る。用語「複数」とは、「２つまたはそれより多く」を指す。特許請求の範囲における用語「または（ｏｒ）」の使用は、代替物のみを指す、または代替物は相互排他的であると明示的に示されない限り、「および／または」を意味するのに使用されるが、ただし本開示は代替物のみ、および「および／または」を指す定義を支持する。本出願全体を通じて、用語「約」が、数値は、該数値を決定するために採用されたデバイス、方法における固有の誤差変動、または被験者間に存在する変動を含むことを示唆するのに使用される。例えば、ただし制限としてではなく、用語「約」が利用されるとき、指定値は、所定の数値から±２０％、または±１０％、または±５％、または±１％、または±０．１％変化する可能性があり、したがって変動は開示される方法を実行するのに適切であり、また当業者により理解される通りである。用語「少なくとも１つ」の使用は、１、ならびに２、３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、１００等を含むが、これらに限定されない、１つより多くの任意の量を含むものと理解される。用語「少なくとも１つ」は、それに続く用語に応じて、最大１００もしくは１０００、またはそれ以上に及ぶ可能性がある；それに加えて、より高値の限界値も満足の行く結果をもたらし得るので、１００／１０００という量は限定とみなすべきではない。それに加えて、用語「Ｘ、Ｙ、およびＺのうちの少なくとも１つ」の使用は、Ｘ単独、Ｙ単独、およびＺ単独、ならびにＸ、Ｙ、およびＺの任意の組合せを含むものと理解される。序数用語（すなわち、「第１」、「第２」、「第３」、「第４」等）の使用は、２つまたはそれより多くの事項間を区別することをもっぱら目的としており、また何らかの順番もしくは順序、または別の事項に対するある１事項の重要性、または例えば何らかの添加の順序を意味する意図はない。
【００１５】
本明細書および特許請求の範囲で使用する場合、用語「〜を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（および、〜を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）の任意の形態、例えば「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」や「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」等）、「〜を有すること（ｈａｖｉｎｇ）」（および、〜を有すること（ｈａｖｉｎｇ）の任意の形態、例えば「〜を有する（ｈａｖｅ）」や「〜を有する（ｈａｓ）」等）、「〜を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（および、〜を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）の任意の形態、例えば「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」や「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」等）、または「〜を含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（および〜を含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）の任意の形態、例えば「〜を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」や「〜を含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」等）は、包含的またはオープンエンドであり、また追加の列挙されない要素または方法工程を除外しない。
【００１６】
用語「またはその組合せ」とは、本明細書で使用する場合、該用語に先行する列挙された事項のあらゆる置換および組合せを指す。例えば、「Ａ、Ｂ、Ｃ、またはその組合せ」は、Ａ、Ｂ、Ｃ、ＡＢ、ＡＣ、ＢＣ、またはＡＢＣのうちの少なくとも１つを含み、そして特定の文脈において順序が重要である場合には、ＢＡ、ＣＡ、ＣＢ、ＣＢＡ、ＢＣＡ、ＡＣＢ、ＢＡＣ、またはＣＡＢもまた含むように意図される。この例を続けると、１つまたはそれ以上の事項または項目の反復、例えばＢＢ、ＡＡＡ、ＡＡＢ、ＢＢＣ、ＡＡＡＢＣＣＣＣ、ＣＢＢＡＡＡ、ＣＡＢＡＢＢ、以下同様等を含有する組合せが明示的に含まれる。当業者は、一般的に、任意の組合せにおいて、文脈から別途明らかな場合を除き、事項または項目の数に制限はないことを理解する。
【００１７】
本明細書で使用する場合、用語「実質的に」とは、その後に記載される事象もしくは状況が完全に生じる、またはその後に記載される事象もしくは状況がかなりの範囲または程度で生じることを意味する。例えば、用語「実質的に」とは、その後に記載される事象または状況が、少なくとも９０％の時間、または少なくとも９５％の時間、または少なくとも９８％の時間生じることを意味する。
【００１８】
本明細書で使用する場合、慣用句「〜と関連する」は、２つの部分を互いに直接関連付けること、ならびに２つの部分を互いに間接的に関連付けることの両方を含む。関連付けの非限定的な例として、１つの部分と別の部分との直接的な結合による、またはスペーサー基を介する共有結合、１つの部分と別の部分との直接的、または該部分に結合した特異的結合ペアメンバーによる非共有結合、１つの部分を別の部分に、例えば１つの部分を別の部分の中で溶解させることにより、または合成により組み込むこと、および１つの部分を別の部分にコーティングすることが挙げられる。
【００１９】
用語「液体テストサンプル」は、本明細書で使用する場合、本開示および請求に係る発明の概念に基づき利用することができる任意の種類の生物学的流体サンプルを含むものと理解される。利用できる生物学的サンプルの例として、全血またはその任意の部分（すなわち、血漿または血清）、唾液、喀痰、脳脊髄液（ＣＳＦ）、腸液、腹腔内液、嚢胞液、汗、間質液、涙液、粘液、尿、膀胱洗浄液、精液、これらの組合せ等が挙げられるが、これらに限定されない。本開示および請求に係る発明の概念に基づき利用されるサンプルの容積は、約０．１〜約１００マイクロリットルである。本明細書で使用する場合、用語「容積」は、本開示および請求に係る発明の概念に基づき利用される液体テストサンプルに関するとき、約０．１マイクロリットル〜約１００マイクロリットル、または約１マイクロリットル〜約７５マイクロリットル、または約２マイクロリットル〜約６０マイクロリットル、または約５０マイクロリットル以下、または約４０マイクロリットル以下を意味する。本開示および／または請求に係る発明の概念の１つの非限定的な実施形態では、液体テストサンプルは、約４０マイクロリットルの尿である。
【００２０】
用語「患者」には、ヒトおよび獣医学的対象が含まれる。特定の実施形態では、患者は哺乳動物である。特定の他の実施形態では、患者はヒトである。治療を目的とする「哺乳動物」とは、ヒト、飼育動物および家畜、非ヒト霊長類、および動物園、スポーツ、またはペット動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシ等を含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。
【００２１】
用語「反応槽」には、診断アッセイを実行するデバイス（非限定的にイムノアッセイを含む）を含む、本明細書に記載される少なくとも１つの診断アッセイを実行する能力を有する任意のデバイスが含まれる。反応槽は、診断アッセイを手動により実行することができるが、しかし大半の事例では、反応槽は、診断アッセイの実行を自動化するシステムに差し込まれている。１つの非限定的な実施形態では、反応槽は、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社から市販されているＤＣＡ  Ｖａｎｔａｇｅ（登録商標）アナライザにより実行される自動診断アッセイで使用される反応カセットを含む。ＤＣＡ  Ｖａｎｔａｇｅ（登録商標）アナライザと組み合わせて使用される反応槽、およびそれに関連する使用方法（本開示および／または請求に係る発明の概念を実現する能力を有する）の実施形態は、例示目的に限定して、１９８８年４月１１日に発行され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する米国特許第４，９９０，０７５号；１９９２年１月２８日の午後に発行され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する米国特許第５，０８４，３９７号；１９９２年１１月１０日に発行され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する米国特許第５，１６２，２３７号；１９９３年１２月２１日に発行され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する米国特許第５，２７２，０９３号；１９９７年３月１１日に発行され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する米国特許第５，６１０，０７３号；２０１７年７月６日に出願され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／−４０９０９号；２０１８年５月３日に出願され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する米国特許出願第１５／９７０，２７２号；２０１８年９月１３日に出願され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０５０８３９号；および２０１８年７月１３日に出願され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する米国仮特許出願第６２／６９７，６７２号に記載されている。上記引用された特許および特許出願のそれぞれの全内容を、参照によって本明細書に全体として明示的に組み入れる。上記引用された特許はすべて、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する反応槽およびシステムの実施形態を記載するが、当業者は、本開示および／または請求に係る発明の概念は、患者の液体テストサンプルにおいて少なくとも１つの診断アッセイを実行する任意の診断アッセイシステムにおいて利用可能であることを容易に認識するはずである。
【００２２】
本明細書に記載される方法工程のいずれも、それだけには限らないがユーザによることを含めて実行することができる。しかしながら、本明細書で使用する場合、用語「ユーザ」はヒトによる使用に限定されない。むしろ、用語「ユーザ」は、例示目的に限定して、および制限としてではなく、コンピュータ、サーバ、ウェブサイト、プロセッサ、ネットワークインターフェース、ヒト、ユーザ端末、仮想コンピュータ、その組合せ等を含み得る。
【００２３】
本開示および／または請求に係る発明の概念の様々な実施形態が、本明細書に記載する方法に基づき機能することができる（またはできるように改変された）任意の反射率式および／または反射率式に基づく分光診断装置と共に利用することができる。特定の非限定的な実施形態では、装置はポイントオブケア装置であり得る。反射率分光診断装置は、本明細書に記載される方法／プロセスのロジックを具体化しおよび／または実行することができるシステムまたはシステムであり得る。ソフトウェア命令および／またはファームウェアの形態で具体化されるロジックは、任意の適するハードウェアにおいて実行できる。例えば、ソフトウェア命令および／またはファームウェアの形態で具体化されるロジックは、パーソナルコンピュータシステム、分散型のプロセシングコンピュータシステム上、および／または同様のものの、専用のシステムまたはシステムの１つまたはそれ以上のコンポーネントにより実行できる。一部の実施形態では、ロジック全体は装置（例えば、例示目的に限定して、ポイントオブケア装置等）上で作動するスタンドアローン環境において実行することができる。他の実施形態では、ロジックは、ネットワーク環境、例えば複数の装置がデータを収集し、そのデータを分析し、そして分析結果を装置に供給するための集中型コンピュータシステムに該データを伝送する分散型システム等において実行することができる。装置の各要素は、部分的もしくは完全にネットワークに基づき、またはクラウドに基づくことができ、また１つの物理的な場所に位置してもよく、またしなくてもよい。
【００２４】
本明細書で使用される回路機構として、アナログおよび／もしくはデジタルコンポーネント、または１つもしくはそれ以上の好適にプログラムされたプロセッサ（例えば、マイクロプロセッサ）ならびに関連するハードウェアおよびソフトウェア、または実配線のロジックが挙げられるが、これらに限定されない。また、「コンポーネント」は、１つまたはそれ以上の機能を実行することもできる。用語「コンポーネント」は、ハードウェア、例えば、例示目的に限定して、プロセッサ（例えば、マイクロプロセッサ）、特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）、フィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）、ハードウェアとソフトウェアの組合せ、および／または同様のものを含み得る。
【００２５】
本明細書で利用されるソフトウェアは、１つまたはそれ以上のコンポーネントにより実行されたときに、コンポーネントに所定の機能を実行させる１つまたはそれ以上のコンピュータ読み取り可能メディア（すなわち、コンピュータ読み取り可能命令）を含み得る。本明細書に記載される検出式／アルゴリズムは、１つまたはそれ以上の非一時的メモリに記憶できると理解すべきである。非限定的で例示的な非一時的メモリとして、ランダムアクセスメモリ、リードオンリメモリ、フラッシュメモリ、その組合せ、および／または同様のものを挙げることができる。そのような非一時的メモリは、電気に基づく、光学に基づくメモリ、および／または同様のものであり得る。
【００２６】
用語「フック効果検出式」および／または「フック効果検出アルゴリズム」とは、本明細書で使用する場合、数学的方程式および／または条件文、ならびに／あるいは一連の数学的方程式および／または条件文を意味し、それが満たされるとき、フック効果を呈する患者の液体テストサンプルが存在することを示唆する。そのようなフック検出式は、例えば、例示目的に限定して、診断アッセイアナライザの非一時的メモリ、あるいは分散型システムが利用される場合には、コンピュータおよび／またはコンピュータシステムが、アナライザから生データおよび測定値を処理後分析のために受け取れるように、診断アッセイアナライザと機能的に連絡を取り合うように構成されているコンピュータおよび／またはコンピュータシステムの非一時的メモリに記憶することができる。本開示および／または請求に係る発明の概念の１つの非限定的な実施形態では、フック効果検出式／アルゴリズムは、診断アッセイアナライザの非一時的メモリ内に記憶される。アナライザの様々なハードウェアコンポーネント（非限定的に、カメラ、イメージャ、バイオセンサ等を含む）から、生データ（例えば、例示目的に限定して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトと関連する生の吸収および／または濃度等）を受け取ると、生データは、少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度を示唆する少なくとも１つの濃度結果に処理される（例えば、例示目的に限定して、マイクロプロセッサにより）。少なくとも１つの濃度結果を処理および計算した後、少なくとも１つのフック効果検出式／アルゴリズム（非一時的メモリに記憶されている）が、処理後の結果を利用して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトと関連するフック効果による妨害の存在を判定するように、結果は診断アッセイアナライザの非一時的メモリによりアクセスされる。この情報ならびに患者の液体テストサンプルと関連する任意の他の分析的詳細情報は、次に追加の分析、テスト、診断等のために出力され、伝送され、および／または例えば、例示目的に限定して、医療提供者の少なくとも１つのコンピュータモニタに表示される。
【００２７】
本開示および／または請求に係る発明の概念は、フック検出式／アルゴリズムを構成する変数、定数、式、および／または条件文が無効でないこと、ならびに非限定的に、患者の液体テストサンプルがフック効果による妨害を呈するか判定することを含め、本開示および／または請求に係る発明の概念を実現するために、それ／それらを改変することができる（その任意および／またはすべてのコンポーネントを含む）ことを企図している。１つの非限定的な実施形態では、フック検出式／アルゴリズムの事前に決定された変数、例えば、例示目的に限定して（および本明細書の下記においてさらに詳細に記載されている）、最大の標的アナライトの濃度および反応動態限界値と関連する閾値等は、較正中にユーザにより設定することができる。
【００２８】
本開示および／または請求に係る発明の概念の１つの非限定的な実施形態では、フック検出式／アルゴリズムは、下記の式、変数、および条件文により表される：
（標的アナライトの濃度≧Ｃ）且つ（（ＭＣＲ−ＭＲ２）／（ＭＲ２−ＭＲ１）＞Ｒ）のとき、フック効果      ［１］
式中、Ｃは、実行される特定のアッセイに対する事前に決定された標的アナライトの濃度閾値を表す；ＭＲ１は、第１回目（Ｔ１）に取得された標的アナライトの第１の吸収読み取りである；ＭＲ２は、第２回目（Ｔ２）に取得された標的アナライトの第２の吸収読み取りである；ＭＣＲは、診断アッセイの結論を下す際の標的アナライトの最終的な測定吸収値である；Ｒは、アッセイの反応動態を評価するための比の値に対する事前に決定された限界値である。
代替的（または付加的）に、フック検出式／アルゴリズムは、下記の式、変数、および条件文を含み得る：
（標的アナライトの濃度≧Ｃ）且つ（ＭＲ１／ＭＲ２）＞Ｒのとき、フック効果      ［２］
式中、Ｃは、実行される特定のアッセイに対する事前に決定された標的アナライトの濃度閾値を表す；ＭＲ１は、第１回目（Ｔ１）に取得された標的アナライトの第１の吸収読み取りである；ＭＲ２は、第２回目（Ｔ２）に取得された標的アナライトの第２の吸収読み取りである；Ｒは、アッセイの反応動態を評価するための比の値に対する事前に決定された限界値である。
【００２９】
事前に決定された標的アナライトの濃度閾値／結果（フック検出式／アルゴリズム［１］および［２］において、定数Ｃとして本明細書においてこれまでに表された）は、非限定的に、約５０ミリグラム／リットル〜約７００ミリグラム／リットル、または約１００ミリグラム／リットル〜約６００ミリグラム／リットル、または約２００ミリグラム／リットル〜約５００ミリグラム／リットル、または約３００ミリグラム／リットル〜約４００ミリグラム／リットルの範囲内の任意の濃度の標的アナライトを含む、本開示および／または請求に係る発明の概念を実現することができる任意の濃度であり得る。本開示および／または請求に係る発明の概念の１つの非限定的な実施形態では、事前に決定された標的アナライトの濃度閾値／結果は、約２００ミリグラム／リットルである。本開示および／または請求に係る発明の概念の１つの非限定的な実施形態では、事前に決定された標的アナライトの濃度閾値／結果は、約３００ミリグラム／リットルである。本開示および／または請求に係る発明の概念の１つの非限定的な実施形態では、事前に決定された標的アナライトの濃度閾値／結果は、約５００ミリグラム／リットルである。
【００３０】
診断アッセイは「報告範囲」を含み、該報告範囲（目的とする標的アナライトの濃度に関する）は、報告／検出下限（例えば、例示目的として、約５ミリグラム／リットル等）および報告／検出上限（例えば、例示目的として、約３００ミリグラム／リットル等）の両方を有するというのが、そのような診断アッセイ（例えば、例示目的として、イムノアッセイ等）の分野において一般的である。診断アッセイの報告範囲の下限および上限は、例えば、特定の診断アッセイと関連する化学および検出方法に応じて幅広く変化し得る。診断アッセイの報告範囲の上限では、誤った濃度測定の可能性を示唆する（報告された濃度は診断アッセイの報告範囲外であるので）「フラッグ」の生成を利用することができる。本開示および／または請求に係る発明の概念の１つの非限定的な実施形態では、サンプルおよび／または結果について、診断アッセイアナライザにより「フラッグ表示」することができ、該フラッグ表示は、患者の液体テストサンプル（例えば、尿サンプル）が、目的とする標的アナライト（例えば、マイクロアルブミン）について、診断アッセイの報告範囲の上限を上回る濃度を含有することを示唆し、これによりフック効果による妨害の存在を確認し、または少なくとも示唆する。
【００３１】
その後、誤った濃度結果について、説明および修正を後続することができる。例えば、出力をユーザに送信して、少なくとも１つの目的とする標的アナライトがフック効果の影響を受けていることを、検出式の少なくとも１つの結果が示唆することをユーザに通知できる。したがって、ユーザは、その後、患者の液体テストサンプルにおいて後続する分析を実行して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの正確な濃度を決定することができる（例えば、例示目的に限定して、少なくとも１つの目的とする標的アナライトの正確な濃度を確認するために、反応ストリップを利用する二次分析を実行することにより）。
【００３２】
ここで具体的な実施形態に戻ると、本開示および請求に係る発明の概念は、患者の液体テストサンプル中に存在する目的とする標的アナライトがフック効果を呈し、または呈しているかを判定するためのデバイス、キット、および方法と関連する。より具体的には、本開示および請求に係る発明の概念は、患者の液体テストサンプル（例えば、患者の尿サンプル）中に存在する目的とする標的アナライト（例えば、例示目的に限定して、マイクロアルブミンタンパク質等）の濃度が正確であるか、またはフック効果に起因して不正確であるかを計算するための検出式／アルゴリズムを利用する改善した方法と関連する。
【００３３】
生物学、化学、または生化学の分析およびアッセイの分野で使用される事実上任意の試薬が、本請求および開示に係る発明の概念のデバイス、キット、および方法において使用できるものと企図される。そのような試薬は、目的とするアナライトに結合したとき、物理的および／または化学的変化を受ける可能性があり、それによって試薬−アナライト複合体により生成されたシグナルの強度、性質、頻度、または種類が、流体サンプル中に存在するアナライトの濃度と直接比例または逆比例するものと企図される。そのような試薬は、目的とするアナライトと反応したときに色の変化を呈し得る指示染料、金属、酵素、ポリマー、抗体、ならびに電気化学的に反応性の成分および／または化学物質を含有し得る。
【００３４】
流体サンプル中のアナライトを検出および測定する任意の方法が、本請求および開示に係る発明の概念のデバイス、キット、および方法において使用できる。アナライトを検出するための様々なアッセイは、当技術分野において周知であり、また化学アッセイ、酵素阻害アッセイ、抗体染色、ラテックス凝集、ラテックス凝集阻害およびイムノアッセイ、例えばラジオイムノアッセイが含まれるが、これらに限定されない。本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味合いで使用され、そして例えば、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および所望の生物学的活性（例えば、抗原／アナライト結合）を示す抗体断片を指す。抗体は、任意の種類もしくはクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＡ）、またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）の抗体であり得る。
【００３５】
イムノアッセイ（逐次的、分析的、化学的、およびイムノアッセイを含むが、これらに限定されない）は、液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とするアナライトの検出に関して本明細書で主に議論されるが、当業者は、本開示および請求に係る発明の概念は、イムノアッセイに厳密に限定されないこと、ならびに、例示目的として、および制限ではなく、化学／化学に基づくアッセイ、核酸アッセイ、脂質に基づくアッセイ、および血清学に基づくアッセイを含み得ることを容易に理解するはずである。ラジオイムノアッセイおよび酵素結合型イムノアッセイを含むイムノアッセイは、本請求および開示に係る発明の概念と共に使用される有用な方法である。例えば、競合的および非競合的イムノアッセイフォーマット、抗原／アナライト捕捉アッセイ、および２抗体サンドイッチアッセイを含む様々なイムノアッセイフォーマットが、本発明の方法において使用できる。酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）も、本請求および開示に係る発明の概念においてやはり使用できる。酵素免疫測定法の場合、酵素は、一般的にグルタルアルデヒド、過ヨウ素酸塩、ヘテロ二官能性架橋剤、またはビオチン−ストレプトアビジン複合体によって、一般的に第２の抗体にコンジュゲートしている。しかしながら、容易に認識されるように、本開示および請求に係る発明の概念と共に使用するために当業者にとって容易に利用可能である、多種多様な異なるコンジュゲーション技術が存在する。
【００３６】
イムノアッセイ、核酸捕捉アッセイ、脂質に基づくアッセイ、および血清学に基づくアッセイを含むが、これらに限定されないアッセイが、液体テストサンプル中に含有される可能性のあるタンパク質、ペプチド、および核酸の多重化パネル用として開発可能であり、そのようなタンパク質およびペプチドとして、例えば、ただし制限としてではなく、アルブミン、マイクロアルブミン、コレステロール、トリグリセリド、高密度リポタンパク質、低密度リポタンパク質、ヘモグロビン、ミオグロビン、α−１−ミクログロブリン（ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｉｎ）、免疫グロブリン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）、酵素、タンパク質、糖タンパク質、プロテアーゼ阻害剤、薬物、サイトカイン、クレアチニン、およびグルコースが挙げられる。本明細書において開示および／または請求に係るデバイス、キット、および方法は、非限定的に、全血、血漿、血清、または尿を含む任意の液体テストサンプルを分析するのに使用できる。１つの非限定的な実施形態では、液体テストサンプルは、約４０マイクロリットルの尿である。
【００３７】
本開示および／または請求に係る発明の概念に基づき利用される試薬は、試薬が本開示および／または請求に係る発明の概念に基づき機能するのを可能にする任意の形態および／または処方で提供することができる。例えば、制限としてではなく、単回使用試薬の形態で試薬を配置するのが望ましい場合もある。それに加えて、試薬のうちの１つまたはそれ以上を凍結乾燥するのが望ましい場合もある。反応槽での乾燥試薬の使用（例えば、例示目的として、イムノアッセイデバイス等）は、２０１３年５月３０日に公開され、現在Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社が保有する国際特許出願公開ＷＯ２０１３／０７８１３０号に詳細に記載されている（その内容を、本明細書により参照によって本明細書に全体として明示的に組み入れる）。また、所望の場合には、複数のコンポーネントを、単一製剤中に共に配置することができ、および／または単一粒子中で凍結乾燥することができる。
【００３８】
反応槽内の様々なコンポーネント／試薬の相対的な量は、アッセイ法中に生じる必要がある反応を実質的に最適化するコンポーネント／試薬の濃度を実現し、またさらにアッセイ感度を実質的に最適化するために幅広く変化し得る。適切な状況下では、槽内のコンポーネント／試薬のうちの１つまたはそれ以上が、乾燥形態、例えば、非限定的に、球体、マイクロタブレット、粉末、マイクロスポット、その組合せ、および／または同様のものを含む凍結乾燥された粒子等の状態で提供可能である。
【００３９】
反応槽は、それと関連する１つまたはそれ以上の手動機能（非限定的に、１つもしくはそれ以上の試薬もしくはサンプルを添加し、および／またはデバイスの２つもしくはそれより多くのコンパートメント間で混合物を移動させるためのピペット操作を含む）を有し得る。代替的または付加的に、反応槽は、槽を構築する際に、必要な試薬／コンポーネントが様々なコンパートメント内に配置される完全に自動化された閉鎖系であり得るが、その場合、様々なコンパートメントは、連続的に流体連通した状態にあり（または連続的に流体連通することができ）、したがってサンプルが反応槽に添加された後、１つまたはそれ以上のアッセイを実行するために、サンプルおよび／または試薬を手動操作することは不要である。
【００４０】
非限定的な実施形態では、本開示および／または請求に係る発明の概念に基づき利用される反応槽は、本明細書において上記したコンポーネントを収容する１つまたはそれ以上のコンパートメントを含む；本開示および／または請求に係る発明の概念に基づき、槽が機能することが可能な限り、反応槽には、任意の数のコンパートメント、任意に配置されたコンパートメント、およびその間で任意に分散されたコンポーネントを設けることができる。複数のコンパートメントが設けられるとき、コンパートメントは互いに完全に分離し得る、または１つもしくはそれ以上のコンパートメントは、互いに流体連通することができる。本開示および／または請求に係る発明の概念に基づき使用可能な反応槽の様々な構造は、当技術分野において周知であり（本明細書でこれまでに開示したように）、したがってそのさらなる説明は不要であろう。
【００４１】
特定の非限定的な実施形態では、反応槽は、互いに流体連通することができる少なくとも２つのコンパートメントを含むことができ、そして少なくとも１つの診断アッセイ試薬（例えば、例示目的として、少なくとも１つのイムノアッセイ試薬）を、同一または異なるコンパートメント内に配置することができる。
【００４２】
反応槽は、患者の液体テストサンプル（例えば、例示目的として、患者の尿サンプル）を適用し、またはその中に配置することができるサンプルアプリケーションチャンバーおよび／またはインレットチャンネルをさらに含むことができる。サンプルアプリケーションチャンバー／インレットチャンネルは、反応槽の１つまたはそれ以上のコンパートメントと流体連通することができる。それに加えて、反応槽にサンプルアプリケーションチャンバーとインレットチャンネルの両方が設けられるとき、サンプルアプリケーションチャンバーは、インレットチャンネルと流体連通することができるが、またインレットチャンネルは、診断アッセイ（例えば、イムノアッセイ）試薬が配置される１つまたはそれ以上のコンパートメントと流体連通することができる。
【００４３】
特定の実施形態では、反応槽は、少なくとも第１のコンパートメントおよび第２のコンパートメントを含むことができる。第１のコンパートメントは、生物学的サンプル、ならびに、所望の場合には、少なくとも診断アッセイの実行中に光学的ブランクを提供するため、および／または患者の液体テストサンプルと混合するため、および第１と第２のコンパートメント間のサンプルの輸送を円滑化するための少なくとも１つのバッファーを受け取ることができる。第２のコンパートメントは、第１のコンパートメントと流体連通することができ、また少なくとも１つの診断アッセイ試薬（例えば、例示目的として、少なくとも１つのイムノアッセイ試薬等）を含む。代替的に、反応槽は第３のコンパートメントを含むことができ、その場合、第３のコンパートメントは、第１のコンパートメント、第２のコンパートメント、または両方と流体連通し、ならびに第３のコンパートメントは、少なくとも１つの診断アッセイ、ならびに／または少なくとも１つの診断アッセイの読み取りおよび／もしくは測定を実行するための少なくとも１つの診断アッセイ試薬を含み得る。
【００４４】
反応槽は、光源、例えば、例示目的に限定して、分光光度計、蛍光光度計、および／またはネフェロメーターによって光学的に検査し、これにより患者の液体テストサンプルと関連する特定の特徴を測定することができる（患者の液体テストサンプルが少なくとも１つの診断アッセイ試薬と反応する前およびその後の両方において）、少なくとも１つの光学的読み取りウィンドウをさらに含み得る。少なくとも１つの光学的読み取りウィンドウは、本明細書において上記したコンパートメントのいずれかに位置し得る、または光学的読み取りウィンドウは、本明細書において上記したコンパートメントに由来する分離型コンパートメント内に位置し得る。
【００４５】
反応槽のコンパートメントのいずれも、その中に配置された診断試薬を、それを使用するまで実質的に気密な環境内に維持するために密閉にすることができる。例えば、凍結乾燥された試薬を収容するコンパートメント（例えば、そのようなコンパートメントに位置する反応ゾーン内に）は、試薬の意図しない再構成を防止するために密閉することができる。インレットチャンネルおよび少なくとも１つのコンパートメント、ならびに本明細書において上記した２つおよび／または３つのコンパートメントは、互いに「流体連通することができる」として記載することができるが、そのような記載は、コンパートメントは密閉することができるが、しかし２つ（または３つ）のコンパートメントは、患者の液体テストサンプル、診断アッセイバッファー、および／または少なくとも１つの液体診断アッセイ試薬が導入されると、それらの間に流体流を有することができることを意味する。
【００４６】
本開示および／または請求に係る発明の概念の反応槽には、当技術分野において公知の、または他の形で本明細書において企図される任意の他の望ましい特性を設けることができる。例えば、ただし制限としてではなく、本開示および／または請求に係る発明の概念の反応槽は、他の溶液、例えば、ただし非限定的に、希釈剤、洗浄溶液、バッファー、溶解剤（赤血球溶解用）、賦形剤（凍結乾燥された試薬の再構成に利用される）、ラベリング剤、干渉溶液、陽性コントロール、陰性コントロール、品質コントロール、および／またはアクチュエーター、ならびにその任意の組合せ等を収容する１つまたはそれ以上の追加のコンパートメントをさらに含み得る。例えば、反応槽は、希釈剤を収容する１つまたはそれ以上の追加のコンパートメントを備え得るが、またこの追加のコンパートメントは、反応槽の任意の他のコンパートメントと流体連通することができる。別の非限定的な例では、反応槽は、１つまたはそれ以上の凍結乾燥された試薬を再構成するための少なくとも１つの賦形剤を収容する１つまたはそれ以上の追加のコンパートメントをさらに含むことができ、そして追加のコンパートメントは、反応槽の任意の他のコンパートメント／チャンネル（例えば、凍結乾燥された試薬を収容する任意のコンパートメント等）と流体連通することができる。それに加えて、反応槽は、洗浄溶液および／またはバッファーを収容する１つまたはそれ以上の追加のコンパートメントを含むことができ、そしてコンパートメントは、反応槽の任意の他のコンパートメント／チャンネルと流体連通することができる。
【００４７】
本明細書において記載され、または他の形で企図される反応槽のいずれも、単一反応槽内で多重化された複数の診断アッセイ（例えば、例示目的に限定して、複数のイムノアッセイ等）を含み得る。複数のアッセイが存在するとき、複数のアッセイは、本明細書の記載に従い構築および機能することができる。代替的に、本明細書に記載されるアッセイは、本開示および／または請求に係る発明の概念の反応槽に含有させることができる、当技術分野において公知の任意の他の種類のアッセイと多重化させることができる。複数のアッセイが単一反応槽中に存在するとき、複数のアッセイは同時および／または逐次的（全体的または部分的に逐次的である場合を含む）に実施することができる。複数のアッセイを同時に実施するとき、異なる質量および／または波長において検出される２つまたはそれより多くの診断アッセイ試薬（例えば、例示目的として、２つまたはそれより多くの検出試薬等）を利用するのが望ましいと考えられる。
【００４８】
実験データ
本開示および／または請求に係る発明の概念から生成される実験データを、本明細書の下記に提示する。しかしながら、本開示および／または請求に係る発明の概念は、その適用において、実行される特定の実験、結果、および研究室手順に限定されないものと理解される。むしろ、実験データおよび／または実施例は様々な実施形態の１つとして提示されるに過ぎず、そして例示的であって網羅的ではないことが意図される。
【００４９】
マイクロアルブミンフック検出方法
最新のイムノアッセイアナライザ、例えば、例示目的に限定して、Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．社により販売用として商業的に提供されるＤＣＡ  Ｖａｎｔａｇｅ（登録商標）アナライザ等は、試薬混合が完了した後、マイクロアルブミン吸収読み取りを収集し、そしてエンドポイント／最終ポイントのマイクロアルブミン吸収のみを使用してマイクロアルブミン濃度を計算する。
【００５０】
本開示および／または請求に係る発明の概念の方法の実行中に、少なくとも２つのさらなるマイクロアルブミンサンプル吸収読み取りが測定および記録されるが、少なくとも２つのさらなるマイクロアルブミンサンプル吸収読み取りは、イムノアッセイ反応の進行をモニタするために、マイクロアルブミン試薬混合サイクル中の早期に取得される。このように早期に読み取ることで、フックサンプルと非フックサンプルとで異なるマイクロアルブミンイムノアッセイ反応について、その反応動態のモニタリングが促進される。フック効果を呈するサンプルは、フック効果を呈さないサンプルと比較して、初期により高い吸収を示し、その後より漸増的に吸収が増加する。
【００５１】
図２に示すように、第１の吸収測定値（ＭＲ１として表す）、第２の吸収測定値（ＭＲ２）、および最終吸収測定値（ＭＣＲまたは最終として表す）を、本開示および／または請求に係る発明の概念に基づき、２つの異なるマイクロアルブミンサンプル、すなわち３００ミリグラム／リットルの既知濃度のマイクロアルブミンを含む非フックマイクロアルブミンサンプル、および５，０００ミリグラム／リットルの既知濃度のマイクロアルブミンを含むフックマイクロアルブミンサンプルについてイムノアッセイを実行して取得した。図２に示すように、フックマイクロアルブミンサンプルは、非フックマイクロアルブミンサンプルのＭＲ１と比較したとき、ＭＲ１吸収の上昇を示し、その後、非フックマイクロアルブミンサンプルと比較したとき、より漸増的に吸収が増加する（ＭＲ２および最終吸収読み取りの両方について）。
【００５２】
図２より生成されたデータを利用して、どのようなときに、マイクロアルブミン濃度に関して、サンプルがフック効果を呈するか判定する（知見を確認するための二次テストを実行する必要もなく）ための式／アルゴリズムを開発した。１つの非限定的な実施形態では、サンプルは、下記の式／アルゴリズムの条件を満たせばマイクロアルブミンに関してフック効果を呈する：
（マイクロアルブミン結果≧２００ミリグラム／リットル）且つ（（ＭＣＲ−ＭＲ２）／（ＭＲ２−ＭＲ１）＞１）のとき      ［３］
上記したように、ＭＣＲはマイクロアルブミンサンプルの最終吸収を表す。フック効果は極端な濃度において横ばいとなり、そしてマイクロアルブミン濃度が最大１０，０００ミリグラム／リットルのマイクロアルブミンサンプルは、２００ミリグラム／リットル未満の結果を生成しなかった（したがって、式／アルゴリズムの信頼性において、２００ミリグラム／リットル以上のマイクロアルブミン濃度を下限閾値として設定することが正当化される）。さらに、２００ミリグラム／リットルの事前に決定された濃度を、事前に決定された標的アナライト（この場合、マイクロアルブミン）濃度閾値として利用したが、当業者は、この事前に決定された閾値濃度は２００ミリグラム／リットルに限定されないこと、ならびに本開示および／または請求に係る発明の概念を実現することができる任意の濃度であり得ることを（また本明細書に別途さらに記載されるが）容易に理解するはずである。
【００５３】
図３は、本明細書でこれまでに詳記した検出式／アルゴリズム［１］をテストすることから得られた結果を表す。図３に示すように、アッセイ範囲（すなわち、約０ミリグラム／リットル〜約３５０ミリグラム／リットル）内またはその近傍にあるマイクロアルブミン濃度を有する４６４例のサンプルにおいて、４６４例のサンプルのいずれも、フック効果を呈するものとして検出式／アルゴリズム［３］によりフラッグ表示されなかった。反対に、非常に高いマイクロアルブミン濃度（すなわち、約２，５００ミリグラム／リットル〜約５，０００ミリグラム／リットル）を有する２１８例のサンプルでは、２１８例のサンプルすべてに、検出式／アルゴリズム［３］によりフック効果を呈するものとしてフラッグ表示された。これらの２１８例のサンプルにおいて検出式／アルゴリズム［３］を実行しなければ、これらのサンプルのうち１６１例は、フック効果に起因して、約３００ミリグラム／リットル未満の誤った最終マイクロアルブミン濃度を示す間違った結果を生成したはずである。
【００５４】
検出式／アルゴリズム［３］は、診断アッセイアナライザのソフトウェア内でハードコード化することができる。代替的（または付加的）に、試薬のロットに変動を認める必要がある場合には、検出式／アルゴリズム［３］と関連する特定の数字を試薬バーコードに含めることができる（例えば、３００ミリグラム／リットルを超える濃度をもたらすサンプルに限り、フック効果を呈するサンプルとして特定するようにプログラムすることができる）。
【００５５】
一般的な診断アッセイアナライザの場合、約２，０００ミリグラム／リットルのマイクロアルブミン濃度を含有するサンプルがアッセイ範囲内でフック効果を呈さないように、マイクロアルブミンのアッセイ範囲は約３００ミリグラム／リットルで打ち切られる。図４および図５に示すように、検出式／アルゴリズム［３］は、アッセイ範囲が、例えば、約５００ミリグラム／リットルの最大マイクロアルブミン濃度まで拡張されることを許容し得る。２，０００ミリグラム／リットルのマイクロアルブミン濃度を有するサンプルは、５００ミリグラム／リットル未満の誤った結果（フック効果に起因する）を生成する；しかしながら、フック効果に起因して誤った結果を生成するこのようなサンプルを、検出式／アルゴリズム［３］によって確実に特定することができる。それに加えて、図４および図５に示すように、１，０００ミリグラム／リットルのマイクロアルブミン濃度を有するサンプルは、５００ミリグラム／リットル未満という拡張されたアッセイ範囲に収まる結果を生成しなかった。
【００５６】
本発明の概念の非限定的な例
本開示および／または請求に係る発明の概念の特定の非限定的な実施形態は以下を含むが、これらに限定されない：
【００５７】
患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度測定の正確性を判定するために、患者の液体テストサンプルにおけるフック効果の存在を決定する方法であって：診断アッセイシステムの診断アッセイ反応槽内の患者の液体テストサンプルにおいて、少なくとも１つの診断アッセイを実行して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度を決定する工程であって、少なくとも１つの診断アッセイの実行中に、患者の液体テストサンプルの少なくとも第１の吸収測定値（ＭＲ１）、患者の液体テストサンプルの第２の吸収測定値（ＭＲ２）、および患者の液体テストサンプルの最終吸収測定値（ＭＲＣ）が、患者の液体テストサンプルの光学的検査により記録される、工程と；患者の液体テストサンプルのＭＲＣと関連する少なくとも１つの標的アナライトの最終濃度結果を決定する工程と；少なくとも１つの標的アナライトの最終濃度結果が事前に決定された濃度値を上回るかどうか確かめる工程と；少なくとも１つの標的アナライトの最終濃度結果が事前に決定された濃度値を上回る場合、検出式においてＭＲ１、ＭＲ２、およびＭＲＣを利用することにより、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトと関連するフック効果の存在を決定する工程であって、検出式が、（少なくとも１つの標的アナライトの濃度結果≧Ｃ）且つ（（ＭＣＲ−ＭＲ２）／（ＭＲ２−ＭＲ１）＞Ｒ）のとき、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトはフック効果の影響を受けている、という式を含み、式中、Ｃは事前に決定された濃度値であり、Ｒは少なくとも１つの診断アッセイの反応動態を評価するための比の値に対する事前に決定された限界値であり、さらに、検出式の少なくとも１つの結果はユーザに対する出力である、工程とを含む方法。
【００５８】
患者の液体テストサンプルは尿である、方法。
【００５９】
少なくとも１つの目的とする標的アナライトは、ペプチド、タンパク質、およびその組合せから選択される群から選択される、方法。
【００６０】
少なくとも１つの目的とする標的アナライトはマイクロアルブミンである、方法。
【００６１】
光学的検査は、分光光度計、蛍光光度計、およびネフェロメーターからなる群から選択される光デバイスにより実行される、方法。
【００６２】
少なくとも１つの診断アッセイはイムノアッセイである、方法。
【００６３】
事前に決定された濃度値は、約０ミリグラム／リットル〜約５００ミリグラム／リットルの範囲から選択される数値である、方法。
【００６４】
事前に決定された濃度値は、約０ミリグラム／リットル〜約３００ミリグラム／リットルの範囲から選択される数値である、方法。
【００６５】
診断アッセイ反応槽は、診断アナライザ内で使用するための反応カセットを含む、方法。
【００６６】
反応カセットは、少なくとも２つのコンパートメントを含み、該少なくとも２つのコンパートメントのそれぞれは、少なくとも１つの診断アッセイ試薬を含む、方法。
【００６７】
少なくとも１つの診断アッセイ試薬は抗体を含む、方法。
【００６８】
少なくとも１つの抗体はマイクロアルブミンの抗体である、方法。
【００６９】
反応槽は少なくとも１つの光学的読み取りウィンドウを含み、さらに光学的検査を該少なくとも１つの光学的読み取りウィンドウ内で行う、方法。
【００７０】
ユーザは、診断アッセイシステムと機能的に接続した少なくとも１つのコンピュータであり、さらに検出式は、該少なくとも１つのコンピュータの非一時的メモリに記憶される、方法。
【００７１】
ユーザに対する出力は、検出式の少なくとも１つの結果は、少なくとも１つの目的とする標的アナライトはフック効果の影響を受けていることを示唆する通知であり、これにより、ユーザは、患者の液体テストサンプルにおいて後続する分析を実行して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの正確な濃度を決定できるようにする、方法。
【００７２】
患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度測定の正確性を判定するために、患者の液体テストサンプルにおけるフック効果の存在を決定する方法であって：診断アッセイシステムの診断アッセイ反応槽内の患者の液体テストサンプルにおいて、少なくとも１つの診断アッセイを実行して、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトの濃度を決定する工程であって、少なくとも１つの診断アッセイの実行中に、患者の液体テストサンプルの少なくとも第１の吸収測定値（ＭＲ１）、患者の液体テストサンプルの第２の吸収測定値（ＭＲ２）が、患者の液体テストサンプルの光学的検査により記録される、工程と；患者の液体テストサンプルのＭＲＣと関連する少なくとも１つの標的アナライトの濃度結果を決定する工程と；少なくとも１つの標的アナライトの濃度結果が事前に決定された濃度値を上回るかどうか確かめる工程と；少なくとも１つの標的アナライトの濃度結果が事前に決定された濃度値を上回る場合、検出式においてＭＲ１およびＭＲ２を利用することにより、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトと関連するフック効果の存在を決定する工程であって、検出式が、（標的アナライトの濃度≧Ｃ）且つ（ＭＲ１／ＭＲ２）＞Ｒのとき、患者の液体テストサンプル中に存在する少なくとも１つの目的とする標的アナライトはフック効果の影響を受けている、という式を含み、式中、Ｃは事前に決定された濃度値であり、Ｒは少なくとも１つの診断アッセイの反応動態を評価するための比の値に対する事前に決定された限界値であり、さらに、検出式の少なくとも１つの結果はユーザに対する出力である、工程とを含む方法。
【００７３】
患者の液体テストサンプルは尿である、方法。
【００７４】
少なくとも１つの目的とする標的アナライトは、ペプチド、タンパク質、およびその組合せから選択される群から選択される、方法。
【００７５】
少なくとも１つの目的とする標的アナライトはマイクロアルブミンである、方法。
【００７６】
少なくとも１つの診断アッセイはイムノアッセイである、方法。
【００７７】
したがって、本開示および請求に係る発明の概念に基づき、診断アッセイの実行中のまたはそれに起因する、目的とするアナライトと関連するフック効果の検出を可能にするデバイスおよび方法が提示された。本明細書に記載されるように、本開示および請求に係る発明の概念は、改善した検出法の実施形態と関連し、該検出法は、少なくとも１つの診断アッセイ（少なくとも１つのイムノアッセイを含むが、これに限定されない）の実行中のまたはそれに起因する、目的とするアナライト（例えば、例示目的として、マイクロアルブミン等）と関連するフック効果の存在または非存在を検出する式を利用する。そのような本開示および／または請求に係る発明の概念は、本明細書において上記した目的および長所を完全に満たす。本開示および請求に係る発明の概念は、本明細書において上記した特定の図面、実験、結果、および言語と結びつけて記載されてきたが、多くの代替、修正、および変更は、当業者にとって明らかであることは明白である。したがって、本開示および請求に係る発明の概念の趣旨および幅広い範囲に収まるすべてのそのような代替、修正、および変更を包含するように意図されている。
【図１】
2022501604.tif 000003
【図２】
2022501604.tif 000004
【図３】
2022501604.tif 000005
【図４】
2022501604.tif 000006
【図５】
2022501604.tif 000007
【国際調査報告】
2022501604.tif 000008