【手続補正書】
【提出日】平成22年2月15日(2010.2.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中の標的核酸の存在を検出するための方法であって、
（ａ）細胞または細胞性粒子を提供するステップと、
（ｂ）細胞または細胞性粒子を固定および透過化するステップと、
（ｃ）細胞または細胞性粒子を標的核酸に特異的なプローブと一緒にハイブリダイゼーション溶液中でインキュベートするステップであって、前記プローブは特有の遷移元素タグで標識され、一つの遷移元素で標識された前記プローブの１種が、異なる種類の遷移元素で標識された他の任意の種類の前記プローブと、誘導結合プラズマ元素分析または誘導結合プラズマ原子発光スペクトルのうちの一つを用いる元素分析によって識別可能であるステップと、
（ｄ）ストリンジェントな洗浄条件によって、ハイブリダイズしなかったプローブを、前記標的核酸にハイブリダイズしたプローブから分離するステップと、
（ｅ）細胞または細胞性粒子を誘導結合プラズマ元素分析または誘導結合プラズマ原子発光スペクトルのうちの一つを用いる元素分析によって分析して、プローブを特定し、遷移元素を検出および／または測定することによって前記標的核酸に結合したプローブを定量するステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
特異的な元素タグで標識した２つ以上の特異的なプローブを、２つ以上の標的核酸とハイブリダイズさせることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記標的核酸は、細胞内核酸分子、マトリックスＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、遺伝子転写物前駆体ＲＮＡ、メッセンジャーＲＮＡ、トランスポートＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、染色体ＤＮＡ、ミトコンドリアＤＮＡ、葉緑体ＤＮＡ、ウイルスＤＮＡ、ウイルスＲＮＡ、細菌ＤＮＡ、細菌ＲＮＡおよびプラスミドＤＮＡからなる群から選択されることを特徴とする請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
表面および／または細胞内タンパク質分子の同時分析をさらに含むことを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
表面および／または細胞内脂質分子の同時分析をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
表面および／または細胞内多糖類分子の同時分析をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ビタミン、ホルモン、ハプテンおよびヌクレオシドからなる群から選択される表面および／または細胞内の小分子の同時分析をさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ヌクレオシドは、ＡＴＰ、ＡＤＰ、環状ＡＭＰおよびＮＡＤＨからなる群から選択されることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ステップ（ｂ）の後、細胞または細胞性粒子を表面または／および細胞内タンパク質に特異的な親和性試薬と反応させ、前記親和性試薬は、遷移元素タグの１種で標識された前記親和性試薬の１種が他の任意の種類の前記遷移元素タグと元素分析によって識別可能であるように支持体分子構造に結合した異なる遷移元素タグで標識されており、
その後、結合した親和性試薬を未結合の親和性試薬から分離することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記親和性試薬は、抗体、アプタマー、レクチンおよび小分子からなる群から選択されることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｂ）の後、細胞または細胞性粒子を表面または／および細胞内分子に特異的な親和性試薬と反応させ、前記親和性試薬は前記タグの１種で標識された前記親和性試薬の１種が他の任意の種類の前記タグと元素分析によって識別可能であるように、元素タグで標識されており、
その後、未結合の親和性試薬を結合した親和性試薬から分離することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記表面または／および細胞内分子は脂質であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記表面または／および細胞内分子は多糖類であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記表面または／および細胞内分子はビタミン、ホルモン、ハプテン、およびヌクレオシドからなる群から選択された小分子であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記親和性試薬は、抗体、アプタマー、およびレクチンからなる群から選択されることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞は、動物、植物、細菌または真菌の全細胞であることを特徴とする請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞性粒子は、単離染色体、単離核、単離ミトコンドリア、単離葉緑体、単離ウイルスおよび単離細菌からなる群から選択されることを特徴とする請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記プローブは、オリゴヌクレオチドプローブ、ロックド核酸（ＬＮＡ）分子、ペプチド核酸（ＰＮＡ）分子、プラスミドＤＮＡ、増幅ＤＮＡもしくはその断片、増幅ＲＮＡもしくはその断片、ＲＮＡ断片およびゲノムＤＮＡ断片からなる群から選択されることを特徴とする請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
溶液中の生体分子の存在を均質検出するための方法であって、
（ａ）遷移元素タグで標識された親和性試薬及び特有のタグ付き支持体とともに生体分子をインキュベートするステップであって、親和性試薬と生体分子との結合を可能にする条件下、１種の前記遷移元素タグで標識された１種の前記支持体が、異なる種類の前記遷移元素タグで標識された他の任意の種類の前記支持体と誘導結合プラズマ元素分析または誘導結合プラズマ原子発光スペクトルのうちの一つを用いる元素分析によって識別可能であるステップと、
（ｂ）結合した生体分子を未結合の生体分子から分離するステップと、
（ｃ）結合した支持体を前記遷移元素を検出および／または測定することにより誘導結合プラズマ元素分析または誘導結合プラズマ原子発光スペクトルのうちの一つを用いる粒子元素分析によって測定するステップであって、支持体を液体中に分散させて個別の支持体の原子および同位体の組成を定量的に測定し、それによって前記支持体に結合した生体分子の種類および数が検出されるステップと
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２０】
前記支持体は、マイクロスフェアおよびビーズからなる群から選択されることを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記生体分子は、組織試料または細胞試料からのものであることを特徴とする請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記試料は、動物試料、植物試料、細菌試料および真菌試料からなる群から選択されることを特徴とする請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記生体分子は、ｍＲＮＡ、タンパク質、脂質、多糖類、ならびにビタミン、ホルモン、ハプテンおよびヌクレオシドからなる群から選択される小分子からなる群から選択されることを特徴とする請求項１９から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記生体分子と親和性試薬との結合は、特有のタグ付きマイクロスフェアに結合したオリゴヌクレオチドとｍＲＮＡ分子とのハイブリダイゼーションを含むことを特徴とする請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記オリゴヌクレオチドは、いくつかのデオキシチミジン三リン酸ヌクレオシドと、特有のタグ付きマイクロスフェアに結合した相補的核酸プローブとを含むことを特徴とする請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記相補的核酸プローブは、オリゴヌクレオチド、ＬＮＡ、ＰＮＡおよびプラスミドＤＮＡからなる群から選択されることを特徴とする請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
生体分子を特異的小分子と結合させ、その後、元素分析により前記生体分子と前記小分子との反応を特定することをさらに含み、前記小分子は、生体分子のための親和性試薬でコーティングされた特有のタグ付き支持体に結合する元素タグで標識されることを特徴とする請求項１９から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記親和性試薬は、抗体、アプタマーおよびレクチン、核酸、結合ペプチド、タンパク質受容体、リン脂質からなる群から選択されることを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
試料中の元素の検出および測定のためのキットであって、測定される元素は、対象の核酸に相補的な特異的プローブに結合した遷移元素タグであり、
（ａ）相補的プローブを直接的にタグ付けするための元素タグと、
（ｂ）相補的プローブと、
（ｃ）請求項１に一致した使用のための説明書と
を含むことを特徴とするキット。
【請求項３０】
試料中の元素の検出および測定のためのキットであって、測定される元素は、対象の核酸に相補的な特異的プローブに結合した元素タグであり、
（ａ）元素タグでタグ付けされた相補的プローブと、
（ｂ）請求項１に一致した使用のための説明書と
を含むことを特徴とするキット。
【請求項３１】
前記検出および測定は溶液元素分析によって行われることを特徴とする請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】
前記検出および測定は粒子元素分析によって行われることを特徴とする請求項３０に記載のキット。
【請求項３３】
多数の核酸と相補的な多数の特異的プローブと、各種類のプローブを特有に標識するための多数の特有の遷移元素タグとをさらに含むことを特徴とする請求項２９から３２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３４】
（ｉ）タンパク質、脂質、多糖類および小分子からなる群から選択される、細胞内または細胞外の生体分子のための親和性試薬と、
（ｉｉ）生体分子のための親和性試薬を標識するための遷移元素タグと
をさらに含むことを特徴とする、請求項２９から３３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３５】
（ｉ）生体分子のための親和性試薬をタグ付けし；
（ｉｉ）細胞または細胞性粒子を生体分子のための親和性試薬と一緒にインキュベートし；
（ｉｉｉ）結合した生体分子のための親和性試薬を未結合の生体分子のための試薬から分離し；
（ｉｖ）結合した生体分子のための試薬を検出および測定するための説明書をさらに含むことを特徴とする請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
多数の生体分子のための多数の特異的試薬と、各種類の生体分子のための各種類の親和性試薬を特有に標識するための多数の遷移元素タグとを含むことを特徴とする請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
遷移元素の検出および測定のためのキットであって、測定される元素は、オリゴ（ｄＴ）ｎに結合した遷移元素タグおよび相補的プローブに結合した特有に標識された支持体の遷移元素であり、
（ａ）オリゴ（ｄＴ）ｎを直接的にタグ付けするための遷移元素タグと、
（ｂ）オリゴ（ｄＴ）ｎと、
（ｃ）少なくとも１つの特有に標識された支持体と、
（ｄ）多数の相補的プローブと、
（ｅ）ｉ）多数の相補的プローブを特有に標識された支持体に直接的に結合させ；ｉｉ）核酸の精製を実施し；（ｉｉｉ）遷移元素タグをオリゴ（ｄＴ）ｎに結合させ；ｉｖ）特有に標識された支持体に結合した相補的プローブを精製核酸とハイブリダイズさせ；ｉｉｉ）結合した特有に標識された支持体を遷移元素タグ付きオリゴ（ｄＴ）ｎと反応させ；ｉｖ）未結合の核酸を結合した核酸から分離し；ｖ）結合した支持体の遷移元素を元素分析によって検出および測定するための説明書と
を含むことを特徴とするキット。
【請求項３８】
多数の支持体が存在し、当該支持体が粒子またはビーズであることを特徴とする請求項３７に記載のキット。
【請求項３９】
前記多数の相補的プローブは、識別可能な元素タグによって直接的にタグ付けされることを特徴とする請求項３７または３８に記載のキット。
【請求項４０】
遷移元素の検出および測定のためのキットであって、測定される遷移元素は、オリゴ（ｄＴ）ｎに結合した遷移元素タグおよび相補的プローブに結合した特有の標識された支持体の遷移元素であり、
（ａ）オリゴ（ｄＴ）ｎを直接的にタグ付けするための遷移元素タグと、
（ｂ）オリゴ（ｄＴ）ｎと、
（ｃ）少なくとも１つの特有に標識された支持体に結合した多数の相補的プローブと
（ｄ）ｉ）核酸の精製を実施し；（ｉｉ）遷移元素タグをオリゴ（ｄＴ）ｎに結合させ；ｉｉｉ）相補的プローブを遷移元素タグ付きオリゴ（ｄＴ）ｎと反応させ；ｉｖ）特有に標識された支持体に結合した相補的プローブを精製核酸とハイブリダイズさせ；ｉｉｉ）結合した特有に標識された支持体を遷移元素タグ付きオリゴ（ｄＴ）ｎと反応させ；ｉｖ）未結合の核酸を結合した核酸から分離し；ｖ）結合した支持体の遷移元素を元素分析によって検出および測定するための説明書と
を含むことを特徴とするキット。
【請求項４１】
遷移元素の検出および測定のためのキットであって、測定される遷移元素は、オリゴ（ｄＴ）ｎに結合した遷移元素タグおよび相補的プローブに結合した特有に標識された支持体の元素であり、
（ａ）遷移元素タグで標識されたオリゴ（ｄＴ）ｎと
（ｂ）少なくとも１つの特有に標識された支持体に結合した多数の相補的プローブと
（ｃ）ｉ）核酸の精製を実施し；ｉｉ）特有に標識された支持体に結合した相補的プローブを精製核酸とハイブリダイズさせ；ｉｉｉ）結合した特有に標識された支持体を遷移元素タグ付きオリゴ（ｄＴ）ｎと反応させ；ｉｖ）未結合の核酸を結合した核酸から分離し；ｖ）結合した支持体の遷移元素を元素分析によって検出および測定するための説明書と
を含むことを特徴とするキット。
【請求項４２】
前記支持体はビーズであることを特徴とする請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
解離溶液、核酸結合膜を有するスピンカラム、生体試料からの核酸の単離および精製のための精製カラム、精製核酸の増幅のための試薬および溶液、標準、希釈緩衝液、解離緩衝液、洗浄緩衝液、ハイブリダイゼーション緩衝液ならびにアッセイ緩衝液からなる群から選択される試薬および装置をさらに含むことを特徴とする請求項２９または３７に記載のキット。
【請求項４４】
内因性の核酸は、形態学的に無傷の細胞でｉｎ  ｓｉｔｕで増幅されることを特徴とする請求項２９に記載のキット。
【請求項４５】
前記遷移元素は質量分析計を用いて測定されることを特徴とする請求項２９から４４に記載のキット。
【請求項４６】
前記遷移元素は同位体であることを特徴とする請求項２９から４４に記載のキット。
【請求項４７】
前記遷移元素は、貴金属、遷移元素、希土類元素、金、銀、プラチナ、ロジウム、イリジウムおよびパラジウムからなる群から選択されることを特徴とする請求項２９から４４に記載のキット。
【請求項４８】
前記遷移元素は複数の元素を含むことを特徴とする請求項２９から４４に記載のキット。
【請求項４９】
前記遷移元素は複数の同位体を含むことを特徴とする請求項２９から４４に記載のキット。
【請求項５０】
前記遷移元素は同位体の原子を複数含むことを特徴とする請求項２９から４４に記載のキット。
【請求項５１】
前記親和性生成物は、抗体、Ｆａｂ’、アプタマー、抗原、ホルモン、成長因子、受容体、タンパク質および核酸からなる群から選択されることを特徴とする請求項３４から３７に記載のキット。
【請求項５２】
粒子元素分析のための説明書が含まれることを特徴とする請求項２９から４４に記載のキット。