【手続補正書】
【提出日】平成22年5月20日(2010.5.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
（発明の要旨）
本発明は野生型及び変異体のＨ−ＮＯＸ蛋白がヘモグロビンよりも遥かに低値のＮＯ反応性を有し、そしてこのため望ましいＯ２担体であることを意外にも発見したことに部分的には基づいている。所望により、Ｈ−ＮＯＸ蛋白内に変異を導入してそのＯ２及びＮＯリガンド結合を改変することによりＯ２担体としてのＨ−ＮＯＸ蛋白の使用を更に最適することができる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
（ｉ）製薬上許容しうる量のＨ−ＮＯＸ蛋白であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数はヘモグロビンのものの２桁内であり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値である、Ｈ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物。
（項目２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約２５５ｎＭである項目１記載の医薬組成物。
（項目３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約８０ｎＭ未満である項目１および２の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約７５ｎＭである項目３記載の医薬組成物。
（項目５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目１〜４の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目５記載の医薬組成物。
（項目７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目１〜６の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目７記載の医薬組成物。
（項目９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．３５ｓ−１〜約２．９ｓ−１である項目１〜６の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目１０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が空気中４℃で安定である項目１〜９の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目１１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目１〜１０の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目１２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目１〜１１の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目１３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目１〜１２の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目１４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、及び／又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目１〜１３の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目１５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数１】
2009538134.tif 000001
【数２】
2009538134.tif 000002
よりなる群から選択される項目１〜１４の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目１６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目１〜１５の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目１７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目１６記載の医薬組成物。
（項目１８）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目１７記載の医薬組成物。
（項目１９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目１〜１５の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目２０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目１９記載の医薬組成物。
（項目２１）
酸素がＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目１〜２０の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目２２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白を含む１つ以上のリポソーム又はナノ粒子を含む項目１〜２１の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目２３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目１〜２２の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目２４）
（ｉ）製薬上許容しうる量のＨ−ＮＯＸ蛋白であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である、Ｈ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物。
（項目２５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである項目２４記載の医薬組成物。
（項目２６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである項目２５記載の医薬組成物。
（項目２７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭである項目２５記載の医薬組成物。
（項目２８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０倍低値である項目２４〜２７の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目２９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目２８記載の医薬組成物。
（項目３０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目２９記載の医薬組成物。
（項目３１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が約１．０ｓ−１未満である項目２４〜３０の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目３２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目２４〜３２の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目３３）
蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目２４〜３１の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目３４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目３３記載の医薬組成物。
（項目３５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２４〜３４の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目３６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目２４〜３５の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目３７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２４〜３６の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目３８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２４〜３７の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目３９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２４〜３８の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２４〜３９の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２４〜４０の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４２）
ヘムがＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目２４〜４１の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目２４〜４２の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目４３記載の医薬組成物。
（項目４５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目４３及び４４の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、及び／又はＮＯ安定性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目２４〜４５の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、ＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目２４〜４６の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数３】
2009538134.tif 000003
【数４】
2009538134.tif 000004
よりなる群から選択される項目２４〜４７の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目４９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目２４〜４８の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目５０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目４９記載の医薬組成物。
（項目５１）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目５０記載の医薬組成物。
（項目５２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目２４〜４８の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目５３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目５２記載の医薬組成物。
（項目５４）
酸素がＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目２４〜５３の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目５５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白を含む１つ以上のリポソーム又はナノ粒子を含む項目２４〜５４の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目５６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目２４〜５５の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目５７）
（ｉ）製薬上許容しうる量のＨ−ＮＯＸ蛋白であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満であり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｈではない、Ｈ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物。
（項目５８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｉ１４０Ｙではない項目５７記載の医薬組成物。
（項目５９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである項目５７及び５８記載の医薬組成物。
（項目６０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである項目５９記載の医薬組成物。
（項目６１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭである項目５９記載の医薬組成物。
（項目６２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０倍低値である項目５７〜６１の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目６３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目６２記載の医薬組成物。
（項目６４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目６３記載の医薬組成物。
（項目６５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が約１．０ｓ−１未満である項目５７〜６４の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目６６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目５７〜６５の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目６７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目５７〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目６８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目６７記載の医薬組成物。
（項目６９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目５７〜６８の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目５７〜６９の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目５７〜７０の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目５７〜７１の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目５７〜７２の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目５７〜７３の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目５７〜７４の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７６）
ヘムがＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目５７〜７５の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目５７〜７６の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目７８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目７７記載の医薬組成物。
（項目７９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目７７及び７８の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目８０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、及び／又はＮＯ安定性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目５７〜７９の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目８１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、ＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目５７〜８０の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目８２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数５】
2009538134.tif 000005
【数６】
2009538134.tif 000006
よりなる群から選択される項目５７〜８１の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目８３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目５７〜８２の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目８４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目８３記載の医薬組成物。
（項目８５）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目８４記載の医薬組成物。
（項目８６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目５７〜８２の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目８７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目８６記載の医薬組成物。
（項目８８）
酸素がＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目５７〜８７の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目８９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白を含む１つ以上のリポソーム又はナノ粒子を含む項目５７〜８８の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目９０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目５７〜８９の何れか１項に記載の医薬組成物。
（項目９１）
個体に酸素の有効量を送達するために十分な量で、Ｈ−ＮＯＸ蛋白を酸素送達の必要な個体に投与することを含む個体に酸素を送達する方法であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数はヘモグロビンのものの２桁内であり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値である、方法。
（項目９２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約２５５ｎＭである項目９１記載の方法。
（項目９３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約８０ｎＭ未満である項目９１記載の方法。
（項目９４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約７５ｎＭである項目９３記載の方法。
（項目９５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目９１〜９４の何れか１項に記載の方法。
（項目９６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目９５記載の方法。
（項目９７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目９１〜９６の何れか１項に記載の方法。
（項目９８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目９７記載の方法。
（項目９９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．３５ｓ−１〜約２．９ｓ−１である項目９１〜９６の何れか１項に記載の方法。
（項目１００）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が空気中４℃で安定である項目９１〜９９の何れか１項に記載の方法。
（項目１０１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目９１〜１００の何れか１項に記載の方法。
（項目１０２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目９１〜１００の何れか１項に記載の方法。
（項目１０３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目１０２記載の方法。
（項目１０４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目１０２及び１０３の何れか１項に記載の方法。
（項目１０５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、及び／又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目９１〜１０４の何れか１項に記載の方法。
（項目１０６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数７】
2009538134.tif 000007
【数８】
2009538134.tif 000008
よりなる群から選択される項目９１〜１０５の何れか１項に記載の方法。
（項目１０７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目９１〜１０６の何れか１項に記載の方法。
（項目１０８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目１０７記載の方法。
（項目１０９）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目１０８記載の方法。
（項目１１０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目９１〜１０６の何れか１項に記載の方法。
（項目１１１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目１１０記載の方法。
（項目１１２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が個体の血液に投与される項目９１〜１１１の何れか１項に記載の方法。
（項目１１３）
個体がヒトである項目９１〜１１２の何れか１項に記載の方法。
（項目１１４）
個体が失血に罹患している、又はその危険性がある項目９１〜１１３の何れか１項に記載の方法。
（項目１１５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも２回個体に投与される項目９１〜１１４の何れか１項に記載の方法。
（項目１１６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目９１〜１１５の何れか１項に記載の方法。
（項目１１７）
個体に酸素の有効量を送達するために十分な量でＨ−ＮＯＸ蛋白を酸素送達の必要な個体に投与することを含む個体に酸素を送達する方法であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である、方法。
（項目１１８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである項目１１７記載の方法。
（項目１１９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである項目１１８記載の方法。
（項目１２０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約２μＭである項目１１８記載の方法。
（項目１２１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０倍低値である項目１１７〜１２０の何れか１項に記載の方法。
（項目１２２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目１２１記載の方法。
（項目１２３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目１２２記載の方法。
（項目１２４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が約１．０ｓ−１未満である項目１１７〜１２３の何れか１項に記載の方法。
（項目１２５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目１１７〜１２３の何れか１項に記載の方法。
（項目１２６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目１１７〜１２５の何れか１項に記載の方法。
（項目１２７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目１２６記載の方法。
（項目１２８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目１１７〜１２７の何れか１項に記載の方法。
（項目１２９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目１１７〜１２８の何れか１項に記載の方法。
（項目１３０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目１１７〜１２９の何れか１項に記載の方法。
（項目１３１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目１１７〜１３０の何れか１項に記載の方法。
（項目１３２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目１１７〜１３１の何れか１項に記載の方法。
（項目１３３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目１１７〜１３２の何れか１項に記載の方法。
（項目１３４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目１１７〜１３３の何れか１項に記載の方法。
（項目１３５）
ヘムがＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目１１７〜１３４の何れか１項に記載の方法。
（項目１３６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目１１７〜１３５の何れか１項に記載の方法。
（項目１３７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目１３６記載の方法。
（項目１３８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目１３５及び１３６の何れか１項に記載の方法。
（項目１３９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、ＮＯ反応性、及び／又はＮＯ安定性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目１１７〜１３８の何れか１項に記載の方法。
（項目１４０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数９】
2009538134.tif 000009
【数１０】
2009538134.tif 000010
よりなる群から選択される項目１１７〜１３９の何れか１項に記載の方法。
（項目１４１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目１１７〜１４０の何れか１項に記載の方法。
（項目１４２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目１４１記載の方法。
（項目１４３）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目１４２記載の方法。
（項目１４４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目１１７〜１４３の何れか１項に記載の方法。
（項目１４５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目１４４記載の方法。
（項目１４６）
個体にＨ−ＮＯＸ蛋白を投与する前にＨ−ＮＯＸ蛋白に酸素が結合する項目１１７〜１４５の何れか１項に記載の方法。
（項目１４７）
個体にＨ−ＮＯＸ蛋白を投与する前にＨ−ＮＯＸ蛋白に酸素が結合せず、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白が個体内の１つの箇所から個体内の別の箇所に酸素を輸送する項目１１７〜１４５の何れか１項に記載の方法。
（項目１４８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が個体の血液、低酸素組織又は低酸素臓器に投与される項目１１７〜１４７の何れか１項に記載の方法。
（項目１４９）
個体がヒトである項目１１７〜１４８の何れか１項に記載の方法。
（項目１５０）
個体が心臓血管疾患、出血性ショック、血液希釈又は失血に罹患しているかその危険性のある項目１１７〜１４９の何れか１項に記載の方法。
（項目１５１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも２回個体に投与される項目１１７〜１５０の何れか１項に記載の方法。
（項目１５２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目１１７〜１５１の何れか１項に記載の方法。
（項目１５３）
個体に酸素の有効量を送達するために十分な量でＨ−ＮＯＸ蛋白を酸素送達の必要な個体に投与することを含む個体に酸素を送達する方法であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｈではない、方法。
（項目１５４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｉ１４０Ｙではない項目１５３記載の方法。
（項目１５５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである項目１５３及び１５４記載の方法。
（項目１５６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである項目１５５記載の方法。
（項目１５７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約２μＭである項目１５５記載の方法。
（項目１５８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０倍低値である項目１５３〜１５７の何れか１項に記載の方法。
（項目１５９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目１５８記載の方法。
（項目１６０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目１５９記載の方法。
（項目１６１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が約１．０ｓ−１未満である項目１５３〜１６０の何れか１項に記載の方法。
（項目１６２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目１５３〜１６１の何れか１項に記載の方法。
（項目１６３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目１５３〜１６１の何れか１項に記載の方法。
（項目１６４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目１６３記載の方法。
（項目１６５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目１５３〜１６４の何れか１項に記載の方法。
（項目１６６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目１５３〜１６５の何れか１項に記載の方法。
（項目１６７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目１５３〜１６６の何れか１項に記載の方法。
（項目１６８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目１５３〜１６７の何れか１項に記載の方法。
（項目１６９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目１５３〜１６８の何れか１項に記載の方法。
（項目１７０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目１５３〜１６９の何れか１項に記載の方法。
（項目１７１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目１５３〜１７０の何れか１項に記載の方法。
（項目１７２）
ヘムがＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目１５３〜１７１の何れか１項に記載の方法。
（項目１７３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目１５３〜１７２の何れか１項に記載の方法。
（項目１７４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目１７３記載の方法。
（項目１７５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目１７３及び１７４の何れか１項に記載の方法。
（項目１７６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、及び／又はＮＯ安定性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目１５３〜１７５の何れか１項に記載の方法。
（項目１７７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型蛋白と比較してＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目１５３〜１７６の何れか１項に記載の方法。
（項目１７８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数１１】
2009538134.tif 000011
【数１２】
2009538134.tif 000012
よりなる群から選択される項目１５３〜１７７の何れか１項に記載の方法。
（項目１７９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目１５３〜１７８の何れか１項に記載の方法。
（項目１８０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目１７９記載の方法。
（項目１８１）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目１８０記載の方法。
（項目１８２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目１５３〜１７８の何れか１項に記載の方法。
（項目１８３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目１８２記載の方法。
（項目１８４）
個体にＨ−ＮＯＸ蛋白を投与する前にＨ−ＮＯＸ蛋白に酸素が結合する項目１５３〜１８３の何れか１項に記載の方法。
（項目１８５）
個体にＨ−ＮＯＸ蛋白を投与する前にＨ−ＮＯＸ蛋白に酸素が結合せず、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白が個体内の１つの箇所から個体内の別の箇所に酸素を輸送する項目１５３〜１８３の何れか１項に記載の方法。
（項目１８６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が個体の血液、低酸素組織又は低酸素臓器に投与される項目１５３〜
１８５の何れか１項に記載の方法。
（項目１８７）
個体がヒトである項目１５３〜１８６の何れか１項に記載の方法。
（項目１８８）
個体が心臓血管疾患、出血性ショック、血液希釈又は失血に罹患しているかその危険性のある項目１５３〜１８７の何れか１項に記載の方法。
（項目１８９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも２回個体に投与される項目１５３〜１８８の何れか１項に記載の方法。
（項目１９０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目１５３〜１８９の何れか１項に記載の方法。
（項目１９１）
（ｉ）製薬上許容しうる量のＨ−ＮＯＸ蛋白であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数はヘモグロビンのものの２桁内であり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値である、Ｈ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）製薬上許容しうる担体を含むキット。
（項目１９２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約２５５ｎＭである項目１９１記載のキット。
（項目１９３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約８０ｎＭ未満である項目１９１記載のキット。
（項目１９４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約７５ｎＭである項目１９３記載のキット。
（項目１９５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目１９１〜１９５記載の何れか１項に記載のキット。
（項目１９６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目１９５記載のキット。
（項目１９７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目１９３〜１９６の何れか１項に記載のキット。
（項目１９８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目１９７記載のキット。
（項目１９９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．３５ｓ−１〜約２．９ｓ−１である項目１９１〜１９６の何れか１項に記載のキット。
（項目２００）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が空気中４℃で安定である項目１９１〜１９９の何れか１項に記載のキット。
（項目２０１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目１９１〜２００の何れか１項に記載のキット。
（項目２０２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目１９１〜２００の何れか１項に記載のキット。（項目２０３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目２０２記載のキット。
（項目２０４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目２０２及び２０３の何れか１項に記載のキット。
（項目２０５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、及び／又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目１９１〜２０４の何れか１項に記載のキット。
（項目２０６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数１３】
2009538134.tif 000013
【数１４】
2009538134.tif 000014
よりなる群から選択される項目１９１〜２０５の何れか１項に記載のキット。
（項目２０７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目１９１〜２０６の何れか１項に記載のキット。
（項目２０８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目２０７記載のキット。
（項目２０９）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目２０８記載のキット。
（項目２１０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目１９１〜２０６の何れか１項に記載のキット。
（項目２１１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目２１０記載のキット。
（項目２１２）
酸素がＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目１９１〜２１１の何れか１項に記載のキット。
（項目２１３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目１９１〜２１２の何れか１項に記載のキット。
（項目２１４）
（ｉ）Ｈ−ＮＯＸ蛋白であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満であるＨ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）個体に酸素を送達するためのキットを使用するための説明書を含むキット。
（項目２１５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである項目２１４記載のキット。
（項目２１６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである項目２１５記載のキット。
（項目２１７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約２μＭである項目２１４記載のキット。
（項目２１８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０倍低値である項目２１４〜２１７の何れか１項に記載のキット。
（項目２１９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目２１８記載のキット。
（項目２２０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目２１９記載のキット。
（項目２２１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が約１．０ｓ−１未満である項目２１４〜２２０の何れか１項に記載のキット。
（項目２２２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目２１４〜２２１の何れか１項に記載のキット。
（項目２２３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目２１４〜２２２の何れか１項に記載のキット。
（項目２２４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目２２３記載のキット。
（項目２２５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２１４〜２２４の何れか１項に記載のキット。
（項目２２６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目２１４〜２２５の何れか１項に記載のキット。
（項目２２７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２１４〜２２６の何れか１項に記載のキット。
（項目２２８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２１４〜２２７の何れか１項に記載のキット。
（項目２２９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２１４〜２２８の何れか１項に記載のキット。
（項目２３０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２１４〜２２９の何れか１項に記載のキット。
（項目２３１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２１４〜２３０の何れか１項に記載のキット。
（項目２３２）
ヘムがＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目２１４〜２３１の何れか１項に記載のキット。
（項目２３３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目２１４〜２３２の何れか１項に記載のキット。
（項目２３４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目２３３記載のキット。
（項目２３５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目２３３及び２３４の何れか１項に記載のキット。
（項目２３６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、ＮＯ反応性、及び／又はＮＯ安定性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目２１４〜２３５の何れか１項に記載のキット。
（項目２３７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較してＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目２１４〜２３６の何れか１項に記載のキット。
（項目２３８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数１５】
2009538134.tif 000015
【数１６】
2009538134.tif 000016
りなる群から選択される項目２１４〜２３７の何れか１項に記載のキット。
（項目２３９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目２１４〜２３８の何れか１項に記載のキット。
（項目２４０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目２３９記載のキット。
（項目２４１）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目２４０記載のキット。
（項目２４２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目２１４〜２３８の何れか１項に記載のキット。
（項目２４３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目２４２記載のキット。
（項目２４４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白に酸素が結合する項目２１４〜２４３の何れか１項に記載のキット。
（項目２４５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目２１４〜２４４の何れか１項に記載のキット。
（項目２４６）
（ｉ）Ｈ−ＮＯＸ蛋白であって、ここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここでＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０ＨではないＨ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）個体に酸素を送達するためのキットを使用するための説明書を含むキット。
（項目２４７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｉ１４０Ｙではない項目２４６記載のキット。
（項目２４８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである項目２４６及び２４７記載のキット。
（項目２４９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである項目２４８記載のキット。
（項目２５０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約２μＭである項目２４８記載のキット。
（項目２５１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０倍低値である項目２４６〜２５０の何れか１項に記載のキット。
（項目２５２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目２５１記載のキット。
（項目２５３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目２５２記載のキット。
（項目２５４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が約１．０ｓ−１未満である項目２４６〜２５３の何れか１項に記載のキット。
（項目２５５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目２４６〜２５４の何れか１項に記載のキット。
（項目２５６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目２４６〜２５４の何れか１項に記載のキット。
（項目２５７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目２５６記載のキット。
（項目２５８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２４６〜２５７の何れか１項に記載のキット。
（項目２５９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である項目２４６〜２５８の何れか１項に記載のキット。
（項目２６０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２４６〜２５９の何れか１項に記載のキット。
（項目２６１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭであり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２４６〜２６０の何れか１項に記載のキット。
（項目２６２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２４６〜２６１の何れか１項に記載のキット。
（項目２６３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２４６〜２６２の何れか１項に記載のキット。
（項目２６４）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約１．８ｓ−１未満である項目２４６〜２６３の何れか１項に記載のキット。
（項目２６５）
ヘムがＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目２４６〜２６４の何れか１項に記載のキット。
（項目２６６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が変異体蛋白である項目２４６〜２６５の何れか１項に記載のキット。
（項目２６７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目２６６記載のキット。
（項目２６８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目２６６及び２６７の何れか１項に記載のキット。
（項目２６９）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、及び／又はＮＯ安定性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目２４６〜２６８の何れか１項に記載のキット。
（項目２７０）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型蛋白と比較してＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む項目２４６〜２６９の何れか１項に記載のキット。
（項目２７１）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数１７】
2009538134.tif 000017
【数１８】
2009538134.tif 000018
よりなる群から選択される項目２４６〜２７０の何れか１項に記載のキット。
（項目２７２）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である項目２４６〜２７１の何れか１項に記載のキット。
（項目２７３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白であるか、又はヒト蛋白由来である項目２７２記載のキット。
（項目２７４）
ヒト蛋白がβ１又はβ１由来である項目２７３記載のキット。
（項目２７５）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白又は細菌蛋白由来である項目２４６〜２７１の何れか１項に記載のキット。
（項目２７６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白又はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白由来である項目２７５記載のキット。
（項目２７７）
酸素がＨ−ＮＯＸ蛋白に結合する項目２４６〜２７６の何れか１項に記載のキット。
（項目２７８）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白が項目２７９〜３９７の何れか１項に記載の変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白である項目２４６〜２７７の何れか１項に記載のキット。
（項目２７９）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白と比較してＯ２解離定数又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白であって、変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数はヘモグロビンのものの２桁内であり、そしてここで変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ４０Ｌ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＦ７８Ｙ／Ｙ１４０Ｌ、野生型Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ、又はＬ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸＦ１４２Ｙではない、単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８０）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白が野生型Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｄ．ｍｅｌａｎｇａｓｔｅｒβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｄ．ｍｅｌａｎｇａｓｔｅｒＣＧ１４８８５−ＰＡＨ−ＮＯＸ、野生型Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓＧＣＹ−３５Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｎ．ｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｅＨ−ＮＯＸ、野生型Ｃ．ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓＨ−ＮＯＸ、野生型Ｓ．ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ又は野生型Ｃ．ａｃｅｔｏｂｕｔｙｌｉｃｕｍＨ−ＮＯＸではない項目２７９記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８１）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである項目２７９及び２８０の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８２）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである項目２８１記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８３）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約１．９μＭである項目２８２記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８４）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１５０ｎＭ〜約１μＭである項目２８３記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８５）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約２５５ｎμＭである項目２７９〜２８３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８６）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約８０ｎＭ未満である項目２７９〜２８３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８７）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約７５ｎＭである項目２８６記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８８）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目２７９〜２８７の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２８９）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目２８８記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９０）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２７９〜２８９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９１）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．０１〜約２００ｓ−１である項目２７９〜２９０の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９２）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約１．９μＭであり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．３５ｓ−１〜約１４．５ｓ−１である項目２７９〜２９１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９３）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２７９〜２９２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９４）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．３５ｓ−１〜約１４．５ｓ−１であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目２７９〜２９３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９５）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．３５ｓ−１〜約１４．５ｓ−１であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２７９〜２９４の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９６）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目２７９〜２９５の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９７）
少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目２７９〜２９６の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９８）
遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目２７９〜２９７の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目２９９）
Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩｌｅ５、Ｔｒｐ９、Ａｓｎ７４、Ｐｒｏ１１５、又はＡｒｇ１３５に対応する残基が何れかの他のアミノ酸で置き換えられている少なくとも１つの変異を含む項目２７９〜２９８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３００）
少なくとも１つの変異はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩｌｅ５、Ｔｒｐ９、Ａｓｎ７４、Ｐｒｏ１１５、又はＡｒｇ１３５に対応する残基の何れかの他のアミノ酸による置き換えである、少なくとも２つの変異を含む項目２７９〜２９９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０１）
変異がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓのＩ５Ａ変異、Ｉ５Ｌ変異、Ｗ９Ｆ変異、Ｙ１４０Ｈ変異、又はＦ７８ＹＹ１４０Ｆ二重変異に対応する項目２７９〜３００の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０２）
変異がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓのＷ９Ｙ変異、Ｗ９Ｈ変異、Ｗ９Ｎ変異、Ｎ７４Ｈ変異、Ｎ７４Ａ変異、Ｐ１１５Ａ変異、Ｒ１３５Ｑ然変異、Ｉ５ＬＰ１１５Ａ二重変異、又はＷ９ＦＮ７４Ａ二重変異に対応する項目２７９〜３０１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０３）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白である項目２７９〜３０２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０４）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白である項目３０３記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０５）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がβ１である項目３０４記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０６）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白である項目２７９〜３０２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０７）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白である項目３０６記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０８）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＷ９Ｆ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｆ、又はＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｈ−ＮＯＸ（１−３８５）Ｉ１４５Ｙではない項目２７９〜３０７の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３０９）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｈ又はＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｉ１４０Ｙではない項目２７９〜３０８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１０）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白が別の分子又は部分に共有結合している項目２７９〜３０９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１１）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がポリエチレングリコールに共有結合している項目３１０記載の単離されたＨ−ＮＯＸ。
（項目３１２）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白と比較してＯ２解離定数又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白であって、変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数はヘモグロビンのものの２桁内であり、そしてここで変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ４０Ｌ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＦ７８Ｙ／Ｙ１４０Ｌ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＷ９Ｆ、野生型Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ、又はＬ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸＦ１４２Ｙではない、単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１３）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｆ、野生型Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸ、Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｈ−ＮＯＸＩ１４０Ｙ、野生型Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｈ−ＮＯＸ、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸ（１−３８５）、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸ（１−３８５）Ｉ１４５Ｙ、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸＨ１０５Ｇ、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸＨ１０５Ｆ、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸＩ１４５Ｙ、野生型Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｄ．ｍｅｌａｎｇａｓｔｅｒβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｄ．ｍｅｌａｎｇａｓｔｅｒＣＧ１４８８５−ＰＡＨ−ＮＯＸ、野生型Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓＧＣＹ−３５Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｎ．ｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｅＨ−ＮＯＸ、野生型Ｃ．ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓＨ−ＮＯＸ、野生型Ｓ．ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ又は野生型Ｃ．ａｃｅｔｏｂｕｔｙｌｉｃｕｍＨ−ＮＯＸではない項目３１２記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１４）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約２５５ｎμＭである項目３１２及び３１３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１５）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約８０ｎＭ未満である項目３１２及び３１３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１６）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜約７５ｎＭである項目３１５記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１７）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目３１２〜３１６の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１８）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目３１７記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３１９）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目３１２〜３１８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２０）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目３１９記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２１）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．３５ｓ−１〜約２．９ｓ−１である項目３１２〜３１８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２２）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約５．８ｓ−１〜約１９ｓ−１である項目３１２〜３１８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２３）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白が空気中４℃で安定である項目３１２〜３２２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２４）
少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目３１２〜３２３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２５）
遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目３１２〜３２４の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２６）
Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩｌｅ５、Ａｓｎ７４、Ｐｒｏ１１５、又はＡｒｇ１３５に対応する残基が何れかの他のアミノ酸で置き換えられている少なくとも１つの変異を含む項目３１２〜３２５の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２７）
少なくとも１つの変異はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩｌｅ５、Ｔｒｐ９、Ａｓｎ７４、Ｐｈｅ７８、Ｐｒｏ１１５、又はＡｒｇ１３５に対応する残基の何れかの他のアミノ酸による置き換えである、少なくとも２つの変異を含む項目３１２〜３２６の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２８）
変異がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓのＩ５Ａ変異、Ｉ５Ｌ変異、Ｙ１４０Ｈ変異、又はＦ７８ＹＹ１４０Ｆ二重変異に対応する項目３１２〜３２７の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３２９）
変異がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓのＷ９Ｙ変異、Ｗ９Ｈ変異、Ｗ９Ｎ変異、Ｎ７４Ｈ変異、Ｎ７４Ａ変異、Ｐ１１５Ａ変異、Ｒ１３５Ｑ然変異、Ｉ５ＬＰ１１５Ａ二重変異、又はＷ９ＦＮ７４Ａ二重変異に対応する項目３１２〜３２８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３０）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白である項目３１２〜３２９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３１）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白である項目３３０記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３２）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がβ１である項目３３１記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３３）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白である項目３１２〜３３２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３４）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白である項目３３３記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３５）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｈ又はＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｉ１４０Ｙではない項目３１２〜３３４の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３６）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白が別の分子又は部分に共有結合している項目３１２〜３３５の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３７）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がポリエチレングリコールに共有結合している項目３３６記載の単離されたＨ−ＮＯＸ。
（項目３３８）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白と比較して酸素に関するｋｏｆｆ又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白であって、変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．０１〜約２００ｓ−１であり、そしてここで変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ４０Ｌ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＦ７８Ｙ／Ｙ１４０Ｌ、野生型Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ、又はＬ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸＦ１４２Ｙではない、単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３３９）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白が野生型Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｄ．ｍｅｌａｎｇａｓｔｅｒβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｄ．ｍｅｌａｎｇａｓｔｅｒＣＧ１４８８５−ＰＡＨ−ＮＯＸ、野生型Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓＧＣＹ−３５Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｎ．ｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｅＨ−ＮＯＸ、野生型Ｃ．ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓＨ−ＮＯＸ、野生型Ｓ．ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ又は野生型Ｃ．ａｃｅｔｏｂｕｔｙｌｉｃｕｍＨ−ＮＯＸではない項目３３８記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４０）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下である項目３３８及び３３９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４１）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目３４０記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４２）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭである項目３３８〜３４１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４３）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃において約２ｎＭ〜約５０μＭである項目３３８〜３４２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４４）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃において約５０ｎＭ〜約１０μＭである項目３３８〜３４３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４５）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃において約１００ｎＭ〜約１．９μＭである項目３３８〜３４４の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４６）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目３３８〜３４５の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４７）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目３４６記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４８）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目３３８〜３４７の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３４９）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目３３８〜３４８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５０）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約１．９μＭであり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目３３８〜３４９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５１）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約１．９μＭであり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目３３８〜３５０の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５２）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目３３８〜３５１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５３）
少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目３３８〜３５２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５４）
遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目３３８〜３５３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５５）
Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩｌｅ５、Ｔｒｐ９、Ａｓｎ７４、Ｐｒｏ１１５、又はＡｒｇ１３５又はβ１（１−３８５）のＩ１４５に対応する残基が何れかの他のアミノ酸で置き換えられている少なくとも１つの変異を含む項目３３８〜３５４の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５６）
少なくとも１つの変異がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩｌｅ５、Ｔｒｐ９、Ａｓｎ７４、Ｐｒｏ１１５、又はＡｒｇ１３５又はβ１（１−３８５）のＩ１４５に対応する残基の何れかの他のアミノ酸による置き換えである、少なくとも２つの変異を含む項目３３８〜３５５の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５７）
Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓのＩ５Ａ変異、Ｉ５Ｌ変異、Ｗ９Ｆ変異、Ｙ１４０−Ｆ変異、Ｙ１４０Ｈ変異、Ｗ９ＦＷ１４０Ｈ二重変異、又はＦ７８ＹＹ１４０Ｆ二重変異又はβ１のＩ１４５Ｙ変異に対応する変異を含む項目３３８〜３５６の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５８）
Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓのＷ９Ｙ変異、Ｗ９Ｈ変異、Ｗ９Ｎ変異、Ｎ７４Ｈ変異、Ｎ７４Ｅ変異、Ｎ７４Ａ変異、Ｐ１１５Ａ変異、Ｒ１３５Ｑ変異、Ｉ５ＬＰ１１５Ａ二重変異、Ｎ７４ＡＹ１４０Ｈ二重変異、又はＷ９ＦＮ７４Ａ二重変異に対応する変異を含む項目３３８〜３５７の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３５９）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白である項目３３８〜３５８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６０）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白である項目３５９記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６１）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がβ１である項目３６０記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６２）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白である項目３３８〜３６１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６３）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白である項目３６２記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６４）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．３５ｓ−１〜約１８ｓ−１である項目３３８〜３６３記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６５）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＷ９Ｆ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｆ、又はＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｈ−ＮＯＸ（１−３８５）Ｉ１４５Ｙではない項目３３８〜３６４記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６６）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｈ又はＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｉ１４０Ｙではない項目３３８〜３６５記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６７）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白が別の分子又は部分に共有結合している項目３３８〜３６６記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６８）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がポリエチレングリコールに共有結合している項目３６７記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３６９）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白と比較して酸素に関するｋｏｆｆ又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白であって、変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．６５ｓ−１以下であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値である、単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７０）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ４０Ｌ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＦ７８Ｙ／Ｙ１４０Ｌ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＷ９Ｆ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｆ、野生型Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ、Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸＦ１４２Ｙ、野生型Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸ、Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｈ−ＮＯＸＩ１４０Ｙ、野生型Ｈ．ｓａｐｉｅｎｓＨ−ＮＯＸ、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸ（１−３８５）、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸ（１−３８５）Ｉ１４５Ｙ、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸＨ１０５Ｇ、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸＨ１０５Ｆ、Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓｓＧＣβ１Ｈ−ＮＯＸＩ１４５Ｙ、野生型Ｒ．ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｄ．ｍｅｌａｎｇａｓｔｅｒβ１Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｄ．ｍｅｌａｎｇａｓｔｅｒＣＧ１４８８５−ＰＡＨ−ＮＯＸ、野生型Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓＧＣＹ−３５Ｈ−ＮＯＸ、野生型Ｎ．ｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｅＨ−ＮＯＸ、野生型Ｃ．ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓＨ−ＮＯＸ、野生型Ｓ．ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ又は野生型Ｃ．ａｃｅｔｏｂｕｔｙｌｉｃｕｍＨ−ＮＯＸではない項目３６９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７１）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．２１ｓ−１〜約０．６５ｓ−１である項目３６９及び３７０の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７２）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃において約１００ｎＭ〜約１．９μＭである項目３６９〜３７１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７３）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である項目３６９〜３７２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７４）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１０００倍低値である項目３７３記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７５）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目３６９〜３７４の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７６）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目３６９〜３７５の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７７）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約１．９μＭであり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満である項目３６９〜３７６の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７８）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約１００ｎＭ〜約１．９μＭであり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が０．７ｓ−１未満である項目３６９〜３７７の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３７９）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そして変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が２０℃で約７００ｓ−１未満である項目３６９〜３７８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８０）
少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む項目３６９〜３７９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８１）
遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む項目３６９〜３８０の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８２）
Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩｌｅ５、Ａｓｎ７４、Ｐｒｏ１１５、又はＡｒｇ１３５に対応する残基が何れかの他のアミノ酸で置き換えられている少なくとも１つの変異を含む項目３６９〜３８１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８３）
少なくとも１つの変異はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩｌｅ５、Ｔｒｐ９、Ａｓｎ７４、Ｐｈｅ７８、Ｐｒｏ１１５、又はＡｒｇ１３５に対応する残基の何れかの他のアミノ酸による置き換えである、少なくとも２つの変異を含む項目３６９〜３８２の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８４）
Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＩ５Ａ変異に対応する変異を含む項目３６９〜３８３の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８５）
Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸのＮ７４Ｈ変異、Ｍ７４Ｅ変異、Ｎ７４Ａ変異、Ｐ１１５Ａ変異、又はＩ５Ｌ変異に対応する変異を含む項目３６９〜３８４の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８６）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白である項目３６９〜３８５の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８７）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がヒト蛋白である項目３８６記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８８）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がβ１である項目３８７記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３８９）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白が細菌蛋白である項目３６９〜３８８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３９０）
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓ蛋白である項目３８９記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３９１）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ１４０Ｈ又はＨ．ｓａｐｉｅｎｓβ１Ｉ１４０Ｙではない項目３６９〜３９０の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３９２）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白が別の分子又は部分に共有結合している項目３６９〜３９１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３９３）
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白がポリエチレングリコールに共有結合している項目３９２記載の単離されたＨ−ＮＯＸ。
（項目３９４）
【数１９】
2009538134.tif 000019
よりなる群から選択される単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３９５）
【数２０】
2009538134.tif 000020
よりなる群から選択される単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３９６）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数がＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓヘモグロビンアルファのものの２桁内である項目２７９〜３９５の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３９７）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓヘモグロビンアルファのものより少なくとも１０倍低値である項目２７９〜３９６の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
（項目３９８）
項目２７９〜３９７の何れか１項に記載のＨ−ＮＯＸ蛋白をコードする組み換え核酸。
（項目３９９）
項目３９８の核酸を含むベクター。
（項目４００）
項目３９８の核酸を含む細胞。
（項目４０１）
項目３９９のベクターを含む細胞。
（項目４０２）
蛋白の産生のために適する条件下において項目２７９〜３９７の何れか１項に記載ののＨ−ＮＯＸ蛋白をコードする核酸を含む細胞を培養することを含むＨ−ＮＯＸ蛋白の産生方法。
（項目４０３）
Ｈ−ＮＯＸ蛋白を精製する工程を更に含む項目４０２の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）製薬上許容しうる量のＨ−ＮＯＸ蛋白であって、ここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白は、最小のＮＯ反応性でＯ２を結合および送達し、そして該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数はヘモグロビンのものの２桁内であり、そしてここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値である、Ｈ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）製薬上許容しうる担体を含む医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項２】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白が少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む請求項１に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項３】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白が遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む請求項１〜２の何れか１項に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項４】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、及び／又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む請求項１〜３の何れか１項に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項５】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白が哺乳類蛋白であるか、又は哺乳類蛋白由来である請求項１〜４の何れか１項に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項６】
（ｉ）製薬上許容しうる量のＨ−ＮＯＸ蛋白であって、ここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白は、最小のＮＯ反応性でＯ２を結合および送達し、そして該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である、Ｈ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）製薬上許容しうる担体を含む医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項７】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである請求項６記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項８】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである請求７記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項９】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２０ｎＭ〜２μＭである請求項７記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項１０】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である請求項６〜９のいずれか一項に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項１１】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性が約１．０ｓ−１未満である請求項６〜１０の何れか１項に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項１２】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である請求項６〜１１の何れか１項に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項１３】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のヘム自動酸化の速度が３７℃で約１ｈ−１未満であり、そしてＨ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である請求項６〜１２の何れか１項に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項１４】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数２１】
2009538134.tif 000021
【数２２】
2009538134.tif 000022
よりなる群から選択される請求項６〜１３の何れか１項に記載の医薬的血液ガスＯ２担体組成物。
【請求項１５】
個体に酸素の有効量を送達するために十分な量のＨ−ＮＯＸ蛋白を含む個体に酸素を送達するための組成物であって、ここで該組成物は、該個体に投与されることを特徴とし、そして該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数はヘモグロビンのものの２桁内であり、そしてここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値である、組成物。
【請求項１６】
個体に酸素の有効量を送達するために十分な量のＨ−ＮＯＸ蛋白を含む個体に酸素を送達するための組成物であって、ここで該組成物は、該個体に投与されることを特徴とし、そして該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満である、組成物。
【請求項１７】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約５０ｎＭ〜約１０μＭである請求項１７記載の組成物。
【請求項１９】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性がヘモグロビンのものよりも少なくとも１００倍低値である請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約１．０ｓ−１〜約１６．０ｓ−１である請求項１６〜１９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白が対応する野生型の蛋白と比較して、Ｏ２解離定数、酸素に関するｋｏｆｆ、ヘム自動酸化の速度、ＮＯ反応性、及び／又はＮＯ安定性を改変する少なくとも１つの変異を含む請求項１６〜２０の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白が
【数２３】
2009538134.tif 000023
【数２４】
2009538134.tif 000024
よりなる群から選択される請求項１６〜２１の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記個体に前記組成物を投与する前に、前記Ｈ−ＮＯＸ蛋白に酸素が結合せず、そして該Ｈ−ＮＯＸ蛋白が該個体内の１つの箇所から該個体内の別の箇所に酸素を輸送する請求項１６〜２２の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物が個体の血液、創傷、低酸素組織又は低酸素臓器に投与されることを特徴とする、請求項１６〜２３の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記個体が心臓血管疾患、出血性ショック、血液希釈又は失血に罹患しているかその危険性のある請求項１６〜２４の何れか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
（ｉ）Ｈ−ＮＯＸ蛋白であって、ここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白は、最小のＮＯ反応性でＯ２を結合および送達し、そして該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数は２０℃において約１ｎＭ〜約１ｍＭであり、そしてここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性は２０℃で約７００ｓ−１未満であるＨ−ＮＯＸ蛋白、及び（ｉｉ）個体に酸素を送達するためのキットを使用するための説明書を含むキット。
【請求項２７】
対応する野生型Ｈ−ＮＯＸ蛋白と比較してＯ２解離定数又はＮＯ反応性を改変する少なくとも１つの変異を含む単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白であって、変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数はヘモグロビンのものの２桁内であり、そしてここで該変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＮＯ反応性はヘモグロビンのものより少なくとも１０倍低値であり、そして該変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白はＴ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＹ４０Ｌ、Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸＦ７８Ｙ／Ｙ１４０Ｌ、野生型Ｔ．ｔｅｎｇｃｏｎｇｅｎｓｉｓＨ−ＮＯＸ、又はＬ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ２Ｈ−ＮＯＸＦ１４２Ｙではない、単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
【請求項２８】
前記変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白のＯ２解離定数が２０℃で約２ｎＭ〜約５０μＭである請求項２７に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
【請求項２９】
前記変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白の酸素に関するｋｏｆｆが２０℃で約０．０１〜約２００ｓ−１である請求項２７〜２８の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
【請求項３０】
少なくとも１つの遠位ポケット変異を含む請求項２７〜２９の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
【請求項３１】
遠位ポケットにはない少なくとも１つの変異を含む請求項２７〜３０の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
【請求項３２】
変異体Ｈ−ＮＯＸ蛋白が別の分子又は部分に共有結合している請求項２７〜３１の何れか１項に記載の単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
【請求項３３】
【数２５】
2009538134.tif 000025
よりなる群から選択される単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白。
【請求項３４】
請求項２７〜３３の何れか１項に記載のＨ−ＮＯＸ蛋白をコードする組み換え核酸。
【請求項３５】
請求項３４の核酸を含む細胞。
【請求項３６】
レファレンス標準物質を必要とする分析用計器類のためのレファレンス標準物質を提供する方法であって、該方法は、少なくとも一つの変異を含む単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白を選択する工程を含み、該Ｈ−ＮＯＸ蛋白は、所望のＯ２会合定数、Ｏ２解離定数、ＮＯ安定性、ＮＯ反応性、自動酸化速度、半減期、蛋白の安定性またはそれらの任意の組み合わせに基づいて選択される、方法。
【請求項３７】
細胞培地中でＯ２レベルを維持または増加させる工程を含む、該培地中で細胞成長を増進させる方法であって、該方法は、単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白を該培地中に添加する工程を含み、ここで、該Ｈ−ＮＯＸ蛋白は、少なくとも一つの変異を含み、そしてＨ−ＮＯＸ変異体蛋白は、所望のＯ２会合定数、Ｏ２解離定数、ＮＯ安定性、ＮＯ反応性、自動酸化速度、半減期、蛋白の安定性またはそれらの任意の組み合わせに基づいて選択される、方法。
【請求項３８】
細胞培地中でＯ２レベルを維持または増加させる工程を含む、該培地中で細胞成長を増進させる方法であって、該方法は、該細胞をＨ−ＮＯＸを発現するように遺伝的に改変する工程を含み、ここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白は、少なくとも一つの変異を含み、そしてＨ−ＮＯＸ変異体蛋白は、所望のＯ２会合定数、Ｏ２解離定数、ＮＯ安定性、ＮＯ反応性、自動酸化速度、半減期、蛋白の安定性またはそれらの任意の組み合わせに基づいて選択される、方法。
【請求項３９】
細胞培地中でＯ２レベルを維持または減少させる工程を含む、該培地中で細胞成長を増進させる方法であって、該方法は、単離されたＨ−ＮＯＸ蛋白を該培地中に添加する工程を含み、ここで、該Ｈ−ＮＯＸ蛋白は、少なくとも一つの変異を含み、そしてＨ−ＮＯＸ変異体蛋白は、所望のＯ２会合定数、Ｏ２解離定数、ＮＯ安定性、ＮＯ反応性、自動酸化速度、半減期、蛋白の安定性またはそれらの任意の組み合わせに基づいて選択される、方法。
【請求項４０】
細胞培地中でＯ２レベルを維持または減少させる工程を含む、該培地中で細胞成長を増進させる方法であって、該方法は、該細胞をＨ−ＮＯＸを発現するように遺伝的に改変する工程を含み、ここで該Ｈ−ＮＯＸ蛋白は、少なくとも一つの変異を含み、そしてＨ−ＮＯＸ変異体蛋白は、所望のＯ２会合定数、Ｏ２解離定数、ＮＯ安定性、ＮＯ反応性、自動酸化速度、半減期、蛋白の安定性またはそれらの任意の組み合わせに基づいて選択される、方法。