(57)【要約】式（Ｉ）に基づく化合物、及び関連する医薬組成物を開示する。式（Ｉ）の化合物を用いて例えば腎疾患を治療する治療方法も開示される。【化１】2022500359.tif 000091【選択図】なし
2022500359.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉの化合物：
【化１】
2022500359.tif 000076
（Ｉ）
［式中、
「−−−」は、単結合または二重結合であり、
Ｘ１は、ＣＨまたはＮであり、
「−−−」が二重結合である場合、Ｘ２  は、ＣＨまたはＮであり、
「−−−」が単結合である場合、Ｘ２は、Ｎ（ＣＨ３）、
Ｘ１がＣＨである場合、Ｘ２は、ＮまたはＮ（ＣＨ３）であり、
Ｙは、−Ｏ−、−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）−、シクロプロパン−１，１−ジイル、または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、
Ｑは、２−トリフルオロメチル−４−フルオロフェニル、２−ジフルオロメチル−４−フルオロフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、２−メチル−４−フルオロフェニル、２−クロロ−４−フルオロフェニル、２−クロロフェニル、１−（ベンジル）−４−メチルピペリジン−３−イル、４−トリフルオロメチルピリジン−３−イル、２−トリフルオロメチル−６−フルオロフェニル、２−トリフルオロメチル−３−シアノフェニル、２−エチル−３−フルオロフェニル、２−クロロ−３−シアノフェニル、２−トリフルオロメチル−５−フルオロフェニル、または２−ジフルオロメチルフェニルであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＯＣＨ３、または−ＮＨ−（ＣＨ２）２ＯＨであり、「−−−」が二重結合である場合、Ｒ４は存在せず、
「−−−」が単結合である場合、Ｒ３とＲ４とは共に＝Ｏを形成し、
Ｒ５及びＲ６のそれぞれは、独立して水素または−ＣＨ３であり、
ただし、Ｘ１がＮ、Ｘ２がＮ、Ｙが−Ｏ−または−Ｎ（ＣＨ３）であり、かつＱが２−トリフルオロメチルフェニルである場合、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６のうちの少なくとも１つは水素ではないことを条件とする］、
またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
構造式ＩＩ：
【化２】
2022500359.tif 000077
（ＩＩ）
［式中、
Ｒ１は、クロロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、または−ＣＨ３であり、
Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
Ｒ３は、水素、−ＮＨ２、−ＣＨ２ＯＨ、またはＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨである］、によって表される請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１が−ＣＨＦ２である場合、Ｒ２が水素ではない、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
以下の化合物のうちのいずれか１つから選択される、請求項１に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩：
【化３−１】
2022500359.tif 000078
【化３−２】
2022500359.tif 000079
【化３−３】
2022500359.tif 000080
【化３−４】
2022500359.tif 000081
【化３−５】
2022500359.tif 000082
【化３−６】
2022500359.tif 000083
【化３−７】
2022500359.tif 000084
【化３−８】
2022500359.tif 000085
【請求項５】
以下の化合物のうちのいずれか１つから選択される、請求項４に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩：
【化４−１】
2022500359.tif 000086
【化４−２】
2022500359.tif 000087
【請求項６】
以下の化合物のうちのいずれか１つから選択される、請求項５に記載の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩：
【化５−１】
2022500359.tif 000088
【化５−２】
2022500359.tif 000089
【化５−３】
2022500359.tif 000090
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項８】
腎疾患、肺動脈高血圧症、不安、うつ病、がん、糖尿病性網膜症、または疼痛から選択される疾患もしくは状態を治療するかまたはそれらの発症のリスクを低減する方法であって、必要とする対象に治療有効量の請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、または請求項７に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項９】
前記疾患または状態が、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糖尿病性腎症、アルポート症候群、高血圧性腎疾患、ネフローゼ症候群、ステロイド耐性腎症、微小変化群、膜性腎症、突発性膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、免疫複合体媒介性ＭＰＧＮ、補体媒介性ＭＰＧＮ、ループス腎炎、感染後糸球体腎炎、菲薄基底膜病、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、アミロイドーシス（原発性）、ｃ１ｑ腎炎、急速進行性ＧＮ、抗ＧＢＭ疾患、Ｃ３糸球体腎炎、高血圧性腎硬化症、またはＩｇＡ腎症から選択される腎疾患である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記腎疾患が、タンパク尿腎疾患である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記腎疾患が、微量アルブミンまたは顕性アルブミン尿症腎疾患である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記治療される疾患または状態が、肺動脈性高血圧症である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記治療される疾患または状態が、神経因性疼痛、及び内臓性疼痛から選択される疼痛である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患または状態が、化学療法抵抗性乳癌、アドリアマイシン抵抗性乳癌、化学療法抵抗性大腸癌、髄芽腫、及び腫瘍血管新生から選択されるがんである、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患または状態が、移植関連ＦＳＧＳ、移植関連ネフローゼ症候群、移植関連タンパク尿、胆汁うっ滞性肝疾患、多発性嚢胞腎、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、肥満、インスリン抵抗性、ＩＩ型糖尿病、前糖尿病、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記対象が、ヒトである、請求項８〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その全容をそれぞれ本明細書に援用するところの２０１８年９月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／７３２，７２８号、及び２０１８年１２月１７日に出願された米国仮特許出願第６２／７８０，５５３号に対する優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク尿は、血液中のタンパク質の過剰量が尿中に漏れる状態である。タンパク尿は、２４時間で尿中への３０ｍｇのタンパク質喪失（微量アルブミン尿症と呼ばれる）から３００ｍｇ／日超（顕性アルブミン尿症と呼ばれる）にまで進行した後、２４時間で３．５グラム以上のタンパク質、または正常量の２５倍のレベルの喪失に達し得る。タンパク尿は、腎臓の糸球体に機能不全がある場合に生じ、体内への体液の蓄積を引き起こす（浮腫）。長期のタンパク質漏出は腎不全をもたらすことが示されている。ネフローゼ症候群（ＮＳ）疾患は、広く認められる末期腎疾患症例の約１２％を占め、米国における年間費用は３０億ドルを超える。毎年１０万人の子供のうち約５人がＮＳと診断され、今日、１０万人の子供のうち１５人がＮＳを有している。治療に積極的に反応する患者では、再発頻度は極めて高い。ネフローゼ症候群の小児の９０％が治療に反応するが、推定７５％は再発する。腎疾患、例えばタンパク尿をより効果的に治療する、または発症のリスクを低減する方法が求められている。
【０００３】
哺乳類のＴＲＰチャネルタンパク質は、アミノ酸配列の相同性に基づいて６つのサブファミリー（ＴＲＰＣ、ＴＲＰＶ、ＴＲＰＭ、ＴＲＰＡ、ＴＲＰＰ、及びＴＲＰＭＬ）に分類することができる６回膜貫通カチオン透過性チャンネルを形成する。ＴＲＰチャネルの最近の研究は、ＴＲＰチャネルが多くの基本的な細胞機能に関与しており、多くの疾患の病態生理学において重要な役割を果たしていると考えられていることを示している。多くのＴＲＰは、腎臓でネフロンの異なる部分に沿って発現し、これらのチャネルが遺伝性だけでなく後天性の腎臓障害に関与していることを示唆する証拠が増えている。ＴＲＰＣ６、ＴＲＰＭ６、及びＴＲＰＰ２は、それぞれ遺伝性巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、二次低カルシウム血症を伴う低マグネシウム血症（ＨＳＨ）、及び多嚢胞腎疾患（ＰＫＤ）に関与すると考えられている。
【０００４】
ＴＲＰＣ５は、自然の恐怖応答の制御の基礎となるメカニズムに寄与していることも報告されている（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２０１４  Ｍａｒ  ５；３４（１０）：３６５３−３６６７）。
【０００５】
したがって、ＴＲＰＣ５またはＴＲＰＣ４またはその両方の更なる阻害剤が求められている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーＣメンバー５（ＴＲＰＣ５）の活性が、アクチンストレスファイバーを消失させ、接着斑形成を減少させ、運動性、遊走性のポドサイト表現型をもたらすという発見に少なくともその一部において基づいたものである。
【０００７】
本発明の一態様は、ＴＲＰＣ５またはＴＲＰＣ４またはその両方のアンタゴニストである化合物である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、構造式Ｉの化合物：
【０００８】
【化１】
2022500359.tif 000003
【０００９】
（Ｉ）
またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
「−−−」は、単結合または二重結合であり、
Ｘ１は、ＣＨまたはＮであり、
「−−−」が二重結合である場合、Ｘ２は、ＣＨまたはＮであり、
「−−−」が単結合である場合、Ｘ２は、Ｎ（ＣＨ３）であり、
Ｘ１がＣＨである場合、Ｘ２は、ＮまたはＮ（ＣＨ３）であり、
Ｙは、−Ｏ−、−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）−、シクロプロパン−１，１−ジイル、または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、
Ｑは、２−トリフルオロメチル−４−フルオロフェニル、２−ジフルオロメチル−４−フルオロフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、２−メチル−４−フルオロフェニル、２−クロロ−４−フルオロフェニル、２−クロロフェニル、１−（ベンジル）−４−メチルピペリジン−３−イル、４−トリフルオロメチルピリジン−３−イル、２−トリフルオロメチル−６−フルオロフェニル、２−トリフルオロメチル−３−シアノフェニル、２−エチル−３−フルオロフェニル、２−クロロ−３−シアノフェニル、２−トリフルオロメチル−５−フルオロフェニル、または２−ジフルオロメチルフェニルであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＯＣＨ３、または−ＮＨ−（ＣＨ２）２ＯＨであり、「−−−」が二重結合である場合、Ｒ４は存在せず、
「−−−」が単結合である場合、Ｒ３とＲ４とは共に＝Ｏを形成し、
Ｒ５及びＲ６のそれぞれは、独立して水素または−ＣＨ３であり、
ただし、Ｘ１がＮ、Ｘ２がＮ、Ｙが−Ｏ−または−Ｎ（ＣＨ３）であり、かつＱが２−トリフルオロメチルフェニルである場合、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６のうちの少なくとも１つは水素ではないことを条件とする。
【００１０】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、構造式ＩＩ：
【００１１】
【化２】
2022500359.tif 000004
【００１２】
（ＩＩ）
で表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ１は、クロロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、または−ＣＨ３であり、
Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
Ｒ３は、水素、−ＮＨ２、−ＣＨ２ＯＨ、またはＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨである。
【００１３】
一態様において、本発明は、本発明の化合物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００１４】
一態様において、本発明は、腎疾患、肺動脈高血圧症、不安、うつ病、がん、糖尿病性網膜症、または疼痛から選択される疾患または状態を治療するか、またはそれらの発症のリスクを低減する方法に関し、当該方法は、治療有効量の化合物または組成物を必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、疾患は、腎疾患、不安、うつ病、がん、または糖尿病性網膜症である。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糖尿病性腎症、アルポート症候群、高血圧性腎疾患、ネフローゼ症候群、ステロイド耐性腎症、微小変化群、膜性腎症、突発性膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、免疫複合体媒介性ＭＰＧＮ、補体媒介性ＭＰＧＮ、ループス腎炎、感染後糸球体腎炎、菲薄基底膜病、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、アミロイドーシス（原発性）、ｃ１ｑ腎炎、急速進行性ＧＮ、抗ＧＢＭ疾患、Ｃ３糸球体腎炎、高血圧性腎硬化症、またはＩｇＡ腎症から選択される腎疾患である。いくつかの実施形態では、腎疾患は、タンパク尿腎疾患である。いくつかの実施形態では、腎疾患は、微量アルブミン尿または顕性アルブミン尿腎疾患である。いくつかの実施形態では、治療される疾患または状態は、肺動脈性高血圧症である。いくつかの実施形態では、治療される疾患または状態は、神経因性疼痛及び内臓性疼痛から選択される疼痛である。
【００１５】
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、化学療法抵抗性乳癌、アドリアマイシン抵抗性乳癌、化学療法抵抗性大腸癌、髄芽腫、及び腫瘍血管新生から選択されるがんである。
【００１６】
いくつかの実施形態では、治療される疾患または状態は、移植関連ＦＳＧＳ、移植関連ネフローゼ症候群、移植関連タンパク尿、胆汁うっ滞性肝疾患、多発性嚢胞腎、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、肥満、インスリン抵抗性、ＩＩ型糖尿病、前糖尿病、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。
【００１７】
方法は、哺乳動物、例えば、ヒト及び他の動物、例えば、実験動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、もしくはサル、またはペット及び家畜、例えば、ネコ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、もしくはウマなどの様々な対象において有効である。
【００１８】
本発明は、いくつかの利点を提供する。本明細書に記載される予防及び治療方法は、例えば、タンパク尿などの腎疾患の治療に有効であり、副作用はあったとしても最小である。さらに、本明細書に記載される方法は、腎疾患、不安、うつ病、またはがんを治療するか、またはそれらを発症するリスクを低減する化合物を同定するうえで有効である。
【００１９】
別段の定義がなされない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものとする。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な方法及び材料について以下に記載する。本明細書で触れるすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参照文献はそれらの全容を参照により援用するものとする。矛盾が生じる場合、定義を含む本明細書が優先するものとする。更に、材料、方法、及び実施例はあくまで説明を目的としたものであって、限定することを目的としない。
【００２０】
本発明の他の特徴、目的、及び利点は、詳細な説明及び特許請求の範囲から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】化合物１００またはミゾリビンで処置したＰＡＮ障害ラットにおけるアルブミン排泄を示す。
【図２】化合物１００で処置したＡＴ１Ｒトランスジェニックラットにおける尿タンパク質クレアチニン比データを、ＡｎｇＩＩ注入及び溶媒と比較して示す。
【図３】ベースラインの割合（％）として表した、図２に示した尿タンパク質クレアチニン比データを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
定義
「アシル」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、一般式：ヒドロカルビルＣ（Ｏ）−、好ましくはアルキルＣ（Ｏ）−により表される基を指す。
【００２３】
「アシルアミノ」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、アシル基で置換されたアミノ基を指し、例えば式：ヒドロカルビルＣ（Ｏ）ＮＨ−により表すことができる。
【００２４】
「アシルオキシ」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、一般式：ヒドロカルビルＣ（Ｏ）Ｏ−、好ましくはアルキルＣ（Ｏ）Ｏ−により表される基を指す。
【００２５】
「アルコキシ」なる用語は、酸素が結合したアルキル基、好ましくは低級アルキル基を指す。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、トリフルオロメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシなどが挙げられる。
【００２６】
「アルコキシアルキル」なる用語は、アルコキシ基で置換されたアルキル基を指し、一般式：アルキル−Ｏ−アルキルにより表すことができる。
【００２７】
本明細書で使用するところの「アルケニル」なる用語は、少なくとも１個の二重結合を含む脂肪族基を指し、「非置換アルケニル」及び「置換アルケニル」の両方を含むものとし、後者はアルケニル基の１つ以上の炭素原子上の水素を置換した置換基を有するアルケニル部分を指す。かかる置換基は、１個以上の二重結合に含まれるかまたは含まれない１個以上の炭素上にあってよい。更に、かかる置換基には、安定性により使用不可の場合を除いて、以下に述べるようなアルキル基について企図されるすべてのものが含まれる。例えば、１個以上のアルキル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリール基によるアルケニル基の置換が企図される。
【００２８】
「アルキル」基または「アルカン」は、完全に飽和した直鎖または分枝鎖の非芳香族炭化水素である。一般的に、直鎖または分枝鎖アルキルは、特に定義されないかぎり、１個〜約２０個の炭素原子、好ましくは１個〜約１０個を有する。直鎖及び分枝鎖アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ペンチル、及びオクチルが挙げられる。Ｃ１〜Ｃ６の直鎖または分枝鎖アルキル基は、「低級アルキル」基とも呼ばれる。
【００２９】
更に、本明細書、実施例及び請求の範囲の全体を通じて使用するところの「アルキル」（または「低級アルキル」）」なる用語は、「非置換アルキル」及び「置換アルキル」の両方を含むものとし、後者は炭化水素主鎖の１個以上の炭素上の水素を置換した置換基を有するアルキル部分を指す。かかる置換基としては、別段の定めがない限り、例えば、ハロゲン（例えば、フルオロ）、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、またはチオフォーメート）、アルコキシル、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を挙げることができる。好ましい実施形態では、置換アルキルの置換基は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ハロゲン、カルボニル、シアノ、またはヒドロキシルから選択される。さらに好ましい実施形態では、置換アルキルの置換基は、フルオロ、カルボニル、シアノ、またはヒドロキシルから選択される。当業者には、適切であれば、炭化水素鎖上に置換された部分は、それ自体が置換され得る点は理解されよう。例えば、置換アルキルの置換基としては、アミノ、アジド、イミノ、アミド、ホスホリル（ホスホネート及びホスフィネートを含む）、スルホニル（サルフェート、スルホンアミド、スルファモイル及びスルホネートを含む）、及びシリル基、ならびにエーテル、アルキルチオ、カルボニル（ケトン、アルデヒド、カルボキシレート及びエステルを含む）、−ＣＦ３、及び−ＣＮなどの置換及び非置換の形態を挙げることができる。例示的な置換アルキルは下記に述べる。シクロアルキルは、さらにアルキル、アルケニル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノアルキル、カルボニル置換アルキル、−ＣＦ３、−ＣＮ等で置換され得る。
【００３０】
特に断らない限り、「アルキレン」とは、それ自体で、または別の置換基の一部として、記載された数の炭素原子を有し、対応するアルカンから２個の水素原子を除去することで誘導される、飽和直鎖状または分枝状二価基を指す。直鎖及び分岐鎖アルキレン基の例としては、−ＣＨ２−（メチレン）、−ＣＨ２−ＣＨ２−（エチレン）、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−（プロピレン）、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−（ペンチレン）、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、及び−ＣＨ２−Ｃ（ＣＨ３）２−ＣＨ２−が挙げられる。
【００３１】
「Ｃｘ〜ｙ」なる用語は、アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシなどの化学部分とともに使用される場合、鎖中にｘ〜ｙ個の炭素を含む基を含むことを意味する。例えば、「Ｃｘ〜ｙアルキル」という用語は、ハロアルキル基を含め、鎖中にｘ〜ｙ個の炭素を含む直鎖アルキル及び分岐鎖アルキル基を含めた置換または非置換飽和炭化水素基を指す。好ましいハロアルキル基としては、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、及びペンタフルオロエチルが挙げられる。Ｃ０アルキルは、その基が末端位置にある場合は水素を示し、内部の場合は結合を示す。「Ｃ２〜ｙアルケニル」及び「Ｃ２〜ｙアルキニル」という用語は、上記のアルキルに長さ及び可能な置換が類似しているが、それぞれ、少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む、置換または非置換不飽和脂肪族基を指す。
【００３２】
本明細書で使用するところの「アルキルアミノ」なる用語は、少なくとも１個のアルキル基で置換されたアミノ基を指す。
【００３３】
本明細書で使用するところの「アルキルチオ」なる用語は、アルキル基で置換されたチオール基を指し、一般式：アルキルＳ−で表すことができる。
【００３４】
本明細書で使用するところの「アルキニル」なる用語は、少なくとも１個の三重結合を含む脂肪族基を指し、「非置換アルキニル」及び「置換アルキニル」の両方を含むものとし、後者はアルキニル基の１個以上の炭素原子上の水素を置換した置換基を有するアルキニル部分を指す。かかる置換基は、１個以上の三重結合に含まれるかまたは含まれない１個以上の炭素上にあってよい。更に、かかる置換基には、安定性により使用不可の場合を除いて、上記に述べたようなアルキル基について企図されるすべてのものが含まれる。例えば、１個以上のアルキル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル、またはヘテロアリール基によるアルキニル基の置換が企図される。
【００３５】
本明細書で使用するところの「アミド」なる用語は、基：
【００３６】
【化３】
2022500359.tif 000005
【００３７】
を指し、各ＲＡは、独立して水素もしくはヒドロカルビル基を表すか、または２個のＲＡは、それらが結合したＮ原子と共に環構造中に４〜８個の原子を有するヘテロ環を形成する。
【００３８】
「アミン」及び「アミノ」なる用語は、当該技術分野では認識されているものであり、非置換及び置換アミンならびにそれらの塩、例えば、
【００３９】
【化４】
2022500359.tif 000006
【００４０】
で表すことができる部分を指し、ここで、各ＲＡは、独立して、水素またはヒドロカルビル基を表すか、または２個のＲＡが、それらが結合するＮ原子と共に環構造中に４〜８個の原子を有するヘテロ環を形成する。
【００４１】
本明細書で使用するところの「アミノアルキル」なる用語は、アミノ基で置換されたアルキル基を指す。
【００４２】
本明細書で使用するところの「アラルキル」なる用語は、アリール基で置換されたアルキル基を指す。
【００４３】
本明細書で使用するところの「アリール」なる用語には、環の各原子が炭素である置換または非置換の単環式芳香族基が含まれる。好ましくは、該環は、６または１０員環であり、より好ましくは６員環である。「アリール」なる用語には、２個の隣接した環で２個以上の炭素が共通している２個以上の環を有する多環式環系も含まれ、環の少なくとも１つは芳香族であり、例えば他の環はシクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び／またはヘテロシクリルであってよい。アリール基としては、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、フェノール、及びアニリンなどが挙げられる。
【００４４】
「カルバメート」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、基
【００４５】
【化５】
2022500359.tif 000007
【００４６】
を指し、各ＲＡは、独立して水素またはアルキル基等のヒドロカルビル基を表すか、またはＲＡ同士は、介在する原子（複数可）と共に環構造中に４個〜８個の原子を有する複素環を形成する。
【００４７】
本明細書で使用するところの「炭素環」及び「炭素環式」なる用語は、環の各原子が炭素である飽和または不飽和環を指す。炭素環なる用語には、芳香族炭素環及び非芳香族炭素環の両方が含まれる。非芳香族炭素環には、すべての炭素原子が飽和したシクロアルカン環、及び少なくとも１個の二重結合を有するシクロアルケン環の両方が含まれる。「炭素環」には、５〜７員の単環式及び８〜１２員の二環式環が含まれる。二環式炭素環のそれぞれの環は、飽和環、不飽和環、及び芳香族環から選択することができる。炭素環には、１個、２個、または３個以上の原子が２個の環で共有された二環式分子が含まれる。「縮合炭素環」なる用語は、環のそれぞれが他方の環と２個の隣接原子を共有する二環式炭素環を指す。縮合炭素環のそれぞれの環は、飽和環、不飽和環、及び芳香族環から選択することができる。例示的な一実施形態では、芳香族環、例えばフェニルが、飽和または不飽和環、例えばシクロヘキサン、シクロペンタン、またはシクロヘキサンと縮合されてよい。価数的に可能であるかぎり、飽和、不飽和、及び芳香族二環式環の任意の組み合わせが炭素環の定義に含まれる。例示的な「炭素環」としては、シクロペンタン、シクロヘキサン、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，５−シクロオクタジエン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクト−３−エン、ナフタレン、及びアダマンタンが挙げられる。例示的な縮合炭素環としては、デカリン、ナフタレン、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン、ビシクロ［４．２．０］オクタン、４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−インデン、及びビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エンが挙げられる。「炭素環」は、水素原子を有することができる任意の１つ以上の位置で置換されてよい。
【００４８】
「シクロアルキル」基は、完全に飽和した環状炭化水素である。「シクロアルキル」には、単環式及び二環式環が含まれる。一般的に、単環式シクロアルキル基は、特に定義されないかぎり、３個〜約１０個の炭素原子、より一般的には３個〜８個の炭素原子を有する。二環式シクロアルキルの第２の環は、飽和環、不飽和環、及び芳香族環から選択することができる。シクロアルキルには、１個、２個、または３個以上の原子が２個の環で共有された二環式分子が含まれる。「縮合シクロアルキル」なる用語は、環のそれぞれが他方の環と２個の隣接原子を共有する二環式シクロアルキルを指す。縮合二環式シクロアルキルの第２の環は、飽和環、不飽和環、及び芳香族環から選択することができる。「シクロアルケニル」基は、１個以上の二重結合を有する環状炭化水素である。
【００４９】
本明細書で使用するところの「カルボシクリルアルキル」なる用語は、カルボシクリル基で置換されたアルキル基を指す。
【００５０】
「カーボネート」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、基：−ＯＣＯ２−ＲＡ（式中、ＲＡはヒドロカルビル基を表す）を指す。
【００５１】
本明細書で使用するところの「カルボキシ」なる用語は、式：−ＣＯ２Ｈにより表される基を指す。
【００５２】
本明細書で使用するところの「エステル」なる用語は、基：−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ（式中、ＲＡはヒドロカルビル基を表す）を指す。
【００５３】
本明細書で使用するところの「エーテル」なる用語は、酸素を介して別のヒドロカルビル基に結合されたヒドロカルビル基を指す。したがって、ヒドロカルビル基のエーテル置換基は、ヒドロカルビル−Ｏ−であり得る。エーテルは、対称的または非対称的であってよい。エーテルの例としては、これらに限定されるものではないが、複素環−Ｏ−複素環、及びアリール−Ｏ−複素環が挙げられる。エーテルには、一般式：アルキル−Ｏ−アルキルにより表すことができる「アルコキシアルキル」基が含まれる。
【００５４】
本明細書で使用するところの「ハロ」及び「ハロゲン」なる用語はハロゲンを意味し、クロロ、フルオロ、ブロモ、及びヨードが含まれる。
【００５５】
本明細書で使用するところの「ヘトアラルキル」及び「ヘテロアラルキル」なる用語は、ヘトアリール基で置換されたアルキル基を指す。
【００５６】
本明細書で使用するところの「ヘテロアルキル」なる用語は、２個のヘテロ原子が隣接しない、炭素原子と少なくとも１個のヘテロ原子の飽和または不飽和鎖を指す。
【００５７】
「ヘテロアリール」及び「ヘトアリール」なる用語には、その環構造が少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは１個〜４個のヘテロ原子、より好ましくは１個または２個のヘテロ原子を含む、置換または非置換の芳香族単環式構造、好ましくは５〜７員環、より好ましくは５〜６員環が含まれる。「ヘテロアリール」及び「ヘトアリール」なる用語には、２個の隣接した環で２個以上の炭素が共通している２個以上の環を有する多環式環系も含まれ、環の少なくとも１つはヘテロ芳香族であり、例えば他の環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び／またはヘテロシクリルであってよい。ヘテロアリール基としては、例えば、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、及びピリミジンなどが挙げられる。
【００５８】
本明細書で使用するところの「ヘテロ原子」なる用語は、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、及び硫黄である。
【００５９】
「ヘテロシクリル」、「複素環」及び「複素環式」なる用語は、その環構造が少なくとも１個のヘテロ原子、好ましくは１個〜４個のヘテロ原子、より好ましくは１個または２個のヘテロ原子を含む、置換または非置換の非芳香族環構造、好ましくは３〜１０員環、より好ましくは３〜７員環を指す。「ヘテロシクリル」及び「複素環式」なる用語には、２個の隣接した環で２個以上の炭素が共通している２個以上の環を有する多環式環系も含まれ、環の少なくとも１つは複素環式であり、例えば他の環はシクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール及び／またはヘテロシクリルであってよい。ヘテロシクリル基としては、例えば、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、テトラヒドロピラン、テトラヒドロフラン、モルホリン、ラクトン、ラクタム等が挙げられる。
【００６０】
本明細書で使用するところの「ヘテロシクリルアルキル」または「ヘテロシクロアルキル」なる用語は、ヘテロシクリル基で置換されたアルキル基を指す。
【００６１】
本明細書中で使用される「ヒドロカルビル」なる用語は、置換基＝Ｏも置換基＝Ｓも有さず、一般的には少なくとも１個の炭素−水素結合と主として炭素の主鎖を有するがヘテロ原子を含んでもよい、炭素原子を介して結合した基を指す。従って、メチル、エトキシエチル、２−ピリジル、及びトリフルオロメチルなどの基は本発明の目的においてヒドロカルビルとみなされるが、アセチル（結合炭素上に置換基＝Ｏを有する）及びエトキシ（炭素ではなく、酸素を介して結合している）などの基はヒドロカルビルとみなされない。ヒドロカルビル基としては、限定されるものではないが、アリール、ヘテロアリール、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アルキル、アルケニル、アルキニル、及びその組み合わせが挙げられる。
【００６２】
本明細書で使用するところの「ヒドロキシアルキル」なる用語は、ヒドロキシ基で置換されたアルキル基を指す。
【００６３】
アシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシなどの化学部分とともに使用される場合、「低級」なる用語は、置換基に１０個以下、好ましくは６個以下の非水素原子が含まれる基を含むものとする。「低級アルキル」とは例えば、１０個以下、好ましくは６個以下の炭素原子を含むアルキル基を指す。ある特定の実施形態では、単独で示されるかまたは例えばヒドロキシアルキル及びアラルキル（その場合、例えばアルキル置換基中の炭素原子を数える際にアリール基中の原子は数えない）といった記載におけるような、他の置換基と組み合わせて示されるかによらず、本明細書で定義されるアシル、アシルオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはアルコキシ置換基は、それぞれ低級アシル、低級アシルオキシ、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、または低級アルコキシである。
【００６４】
「ポリシクリル」、「多環」、及び「多環式」なる用語は、２個の隣接した環で２個以上の原子が共通している（例えば環が「縮合環」である）２個以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、及び／またはヘテロシクリル）を指す。多環の環のそれぞれは、置換されても非置換でもよい。ある特定の実施形態では、多環のそれぞれの環は、環内に３個〜１０個、好ましくは５個〜７個の原子を含む。
【００６５】
「シリル」なる用語は、３個のヒドロカルビル部分が結合したケイ素部分を指す。
【００６６】
「置換された」なる用語は、主鎖の１個以上の炭素上の水素を置換している基を有する部分を指す。「置換」または「〜で置換された」とは、かかる置換が置換された原子と置換基の可能な価数に基づいたものであり、置換が安定した化合物（例えば、転位、環化、脱離などによって自然に変化しない）を生じるという、暗黙の条件を含むことが理解されよう。本明細書で使用するところの「置換された」なる用語は、有機化合物のすべての可能なる置換基を含むことを企図している。広義の一態様において、可能な置換基には、有機化合物の非環式及び環式、分枝及び非分枝、炭素環式及び複素環式、芳香族及び非芳香族の置換基が含まれる。可能な置換基は、適切な有機化合物について１つ以上であってよく、同じであっても異なっていてもよい。本発明の目的において、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基、及び／またはヘテロ原子の価数を満たす本明細書に述べられる有機化合物のあらゆる可能な置換基を有することができる。置換基としては、本明細書に記載の任意の置換基、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、カルボニル（例えば、カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、もしくはアシル）、チオカルボニル（例えば、チオエステル、チオアセテート、もしくはチオフォーメート）、アルコキシ、ホスホリル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、アミノ、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、スルホニル、ヘテロシクリル、アラルキル、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を挙げることができる。好ましい実施形態では、置換アルキルの置換基は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ハロゲン、カルボニル、シアノ、またはヒドロキシルから選択される。さらに好ましい実施形態では、置換アルキルの置換基は、フルオロ、カルボニル、シアノ、またはヒドロキシルから選択される。当業者には、適切であれば、置換基はそれ自体が置換され得る点は理解されよう。特に「非置換」であると断らないかぎり、本明細書において化学部分という場合には置換物が含まれるものと理解される。例えば「アリール」基または部分には、置換物及び非置換物の両方が暗黙のうちに含まれる。
【００６７】
「サルフェート」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、基：−ＯＳＯ３Ｈ、または薬学的に許容されるその塩を指す。
【００６８】
「スルホンアミド」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、一般式：
【００６９】
【化６】
2022500359.tif 000008
【００７０】
によって表される基を指し、各ＲＡは、独立して、水素またはアルキル等のヒドロカルビルを表すか、またはＲＡ同士は、介在する原子（複数可）と共に環構造中に４個〜８個の原子を有する複素環を形成する。
【００７１】
「スルホキシド」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、基：−Ｓ（Ｏ）−ＲＡ（式中、ＲＡはヒドロカルビルを表す）を指す。
【００７２】
「スルホネート」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、基：ＳＯ３Ｈ、または薬学的に許容されるその塩を指す。
【００７３】
「スルホン」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、基：−Ｓ（Ｏ）２−ＲＡ（式中、ＲＡはヒドロカルビルを表す）を指す。
【００７４】
本明細書で使用するところの「チオアルキル」なる用語は、チオール基で置換されたアルキル基を指す。
【００７５】
本明細書で使用するところの「チオエステル」なる用語は、基：−Ｃ（Ｏ）ＳＲＡまたは−ＳＣ（Ｏ）ＲＡ（式中、ＲＡはヒドロカルビルを表す）を指す。
【００７６】
本明細書で使用するところの「チオエーテル」なる用語はエーテルと等価であるが、ただし酸素が硫黄で置換されたものである。
【００７７】
「尿素」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、一般式：
【００７８】
【化７】
2022500359.tif 000009
【００７９】
によって表すことができ、各ＲＡは、独立して水素またはアルキル等のヒドロカルビルを表すか、または存在するいずれかのＲＡは、別のＲＡ及び介在する原子（複数可）と共に環構造中に４個〜８個の原子を有する複素環を形成する。
【００８０】
「保護基」は、分子内の反応性官能基に結合した場合、該官能基の反応性を遮断する、低減する、または抑える原子団を指す。一般的に、保護基は、合成過程において必要に応じて選択的に除去することができる。保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３ｒｄ  Ｅｄ．，１９９９，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ、及びＨａｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｖｏｌｓ．  １−８，１９７１−１９９６，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹにみることができる。代表的な窒素保護基としては、限定されるものではないが、ホルミル、アセチル、トリフルオロアセチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル（「ＣＢＺ」）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（「Ｂｏｃ」）、トリメチルシリル（「ＴＭＳ」）、２−トリメチルシリル−エタンスルホニル（「ＴＥＳ」）、トリチル及び置換トリチル基、アリルオキシカルボニル、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（「ＦＭＯＣ」）、及びニトロ−ベラトリルオキシカルボニル（「ＮＶＯＣ」）などが挙げられる。代表的なヒドロキシル保護基としては、ベンジル及びトリチルエーテル等のヒドロキシル基がアシル化（エステル化）またはアルキル化されるもの、ならびにアルキルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、トリアルキルシリルエーテル（例えば、ＴＭＳまたはＴＩＰＳ基）、グリコールエーテル、例えば、エチレングリコール及びプロピレングリコール誘導体、ならびにアリルエーテルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８１】
本明細書中で使用するところの、疾患、障害または状態を「予防する」、または「それらの発症のリスクを低減する」治療薬は、統計学的標本において、処置標本における疾患もしくは病態の発生を処置のコントロール標本と比較して低減するか、または疾患、障害または状態の１つ以上の症状の発症を非処理のコントロール標本と比較して遅らせるかもしくはその重症度を低減させる化合物のことを指す。
【００８２】
「治療する」なる用語には、予防的及び／または治療的処置が含まれる。「予防的または治療的処置」なる用語は当該技術分野では認識されているものであり、主題組成物の１つ以上をホストに投与することを含む。治療薬が望ましくない状態（例えば疾患またはホスト動物の他の望ましくない状態）の臨床症状が出現する前に投与される場合にはその治療薬は予防的（すなわち、ホストを望ましくない状態の発現から保護する）であるのに対して、望ましくない状態の出現後に投与される場合には治療薬は治療的（すなわち、既存の望ましくない状態またはその副作用を低減、改善、もしくは安定させることを目的とする）である。
【００８３】
「共同投与」及び「共同投与される」なる表現は、先に投与された治療化合物が体内で依然有効である間に第２の化合物が投与されるような、複数の異なる治療化合物のあらゆる投与の形態のことを指す（例えば、２つの化合物は患者の体内で同時に有効であり、２つの化合物の相乗効果が含まれ得る）。例えば、それらの異なる治療化合物を、同じ製剤中または別々の製剤中で、同時または順次に投与することができる。ある特定の実施形態では、異なる治療化合物を、互いの１時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、または１週間以内に投与することができる。したがって、かかる治療を受ける個体は、異なる治療化合物の組み合わされた効果から恩恵を受けることができる。
【００８４】
「プロドラッグ」なる用語は、生理的条件下で本発明の治療活性を有する化合物に変換される化合物を包含することが意図される。プロドラッグの一般的な製造方法の１つは、生理条件下で加水分解されて所望の分子を生じる１つ以上の選択された部分を含めることである。他の実施形態では、プロドラッグはホスト動物の酵素活性により変換される。例えば、エステルまたは炭酸塩（例えば、アルコールまたはカルボン酸のエステルまたは炭酸塩）は、本発明の好ましいプロドラッグである。ある特定の実施形態では、上記に示した製剤中の本発明の化合物の一部またはすべてのものを、対応する適当なプロドラッグに置き換えることができる（例えば、親化合物中のヒドロキシルをエステルまたはカルボン酸塩として与えるか、または親化合物中に存在するカルボン酸をエステルとして与えるような場合）。
【００８５】
本明細書において「小分子」は、分子量約３０００ダルトンより小さな有機分子または無機分子のことを指す。一般に、本発明で有用な小分子は、３０００ダルトン（Ｄａ）未満の分子量を有する。この小分子は、例えば、少なくとも約１００Ｄａ〜約３０００Ｄａ（例えば、約１００〜約３０００Ｄａ、約１００〜約２５００Ｄａ、約１００〜約２０００Ｄａ、約１００〜約１７５０Ｄａ、約１００〜約１５００Ｄａ、約１００〜約１２５０Ｄａ、約１００〜約１０００Ｄａ、約１００〜約７５０Ｄａ、約１００〜約５００Ｄａ、約２００〜約１５００、約５００〜約１０００、約３００〜約１０００Ｄａ、または約１００〜約２５０Ｄａ）であってよい。
【００８６】
いくつかの実施形態では、「小分子」とは、一般的に約１０００未満の分子量を有する有機、無機、または有機金属化合物のことを指す。いくつかの実施形態では、小分子は、１ｎｍ台の大きさを有する有機化合物である。いくつかの実施形態では、本発明の小分子薬物は、約１０００未満の分子量を有するオリゴペプチド及び他の生体分子を包含する。
【００８７】
「有効量」とは、有益なまたは所望の結果をもたらすのに充分な量である。例えば、治療量は所望の治療効果を得る量である。この量は、疾患の発症または疾患症状を予防するために必要な量である予防有効量と同じであっても異なってもよい。有効量は、１回以上の投与、塗布、または用量で投与することができる。ある組成物の治療有効量は、選択される組成物によって決まる。組成物は、１日１回以上〜週１回以上投与することができ、１日おきに１回を含む。当業者であれば、限定されるものではないが、疾患または障害の重症度、以前の治療、対象の一般的な健康状態及び／または年齢、ならびに存在する他の疾患を含むある特定の要因が、対象を効果的に治療するうえで必要とされる投与量及びタイミングに影響しうる可能性がある点は認識されよう。更に、治療有効量の本明細書に記載される組成物による対象の治療は、１回の治療または一連の治療を含み得る。
【００８８】
本発明の化合物
本発明の一態様は、ＴＲＰＣ５の小分子阻害剤を提供する。
【００８９】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、構造式Ｉの化合物：
【００９０】
【化８】
2022500359.tif 000010
【００９１】
（Ｉ）
またはその薬学的に許容される塩であり、
式中、
「−−−」は、単結合または二重結合であり、
Ｘ１は、ＣＨまたはＮであり、
「−−−」が二重結合である場合、Ｘ２  は、ＣＨまたはＮであり、
「−−−」が単結合である場合、Ｘ２は、Ｎ（ＣＨ３）であり、
Ｘ１がＣＨである場合、Ｘ２は、ＮまたはＮ（ＣＨ３）であり、
Ｙは、−Ｏ−、−Ｎ（ＣＨ３）−、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）−、シクロプロパン−１，１−ジイル、または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、
Ｑは、２−トリフルオロメチル−４−フルオロフェニル、２−ジフルオロメチル−４−フルオロフェニル、２−トリフルオロメチルフェニル、２−メチル−４−フルオロフェニル、２−クロロ−４−フルオロフェニル、２−クロロフェニル、１−（ベンジル）−４−メチルピペリジン−３−イル、４−トリフルオロメチルピリジン−３−イル、２−トリフルオロメチル−６−フルオロフェニル、２−トリフルオロメチル−３−シアノフェニル、２−エチル−３−フルオロフェニル、２−クロロ−３−シアノフェニル、２−トリフルオロメチル−５−フルオロフェニル、または２−ジフルオロメチルフェニルであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨ２、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＯＣＨ３、または−ＮＨ−（ＣＨ２）２ＯＨであり、「−−−」が二重結合である場合、Ｒ４は存在せず、
「−−−」が単結合である場合、Ｒ３とＲ４とは共に＝Ｏを形成し、
Ｒ５及びＲ６のそれぞれは、独立して水素または−ＣＨ３であり、
ただし、Ｘ１がＮ、Ｘ２がＮ、Ｙが−Ｏ−または−Ｎ（ＣＨ３）であり、かつＱが２−トリフルオロメチルフェニルである場合、Ｒ３、Ｒ５、及びＲ６のうちの少なくとも１つは水素ではないことを条件とする。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、構造式ＩＩ：
【００９３】
【化９】
2022500359.tif 000011
【００９４】
（ＩＩ）
により表される化合物であるか、またはそれらの薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ１は、クロロ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ２、または−ＣＨ３であり、
Ｒ２は、水素またはフルオロであり、
Ｒ３は、水素、−ＮＨ２、−ＣＨ２ＯＨ、またはＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨである。
【００９５】
いくつかの実施形態では、Ｒ１が−ＣＨＦ２である場合、Ｒ２は水素ではない。
【００９６】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、以下の化合物のいずれか１つ、またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【００９７】
【化１０−１】
2022500359.tif 000012
【００９８】
【化１０−２】
2022500359.tif 000013
【００９９】
【化１０−３】
2022500359.tif 000014
【０１００】
【化１０−４】
2022500359.tif 000015
【０１０１】
【化１０−５】
2022500359.tif 000016
【０１０２】
【化１０−６】
2022500359.tif 000017
【０１０３】
【化１０−７】
2022500359.tif 000018
【０１０４】
【化１０−８】
2022500359.tif 000019
【０１０５】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、以下の化合物のいずれか１つ、またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【０１０６】
【化１１−１】
2022500359.tif 000020
【０１０７】
【化１１−２】
2022500359.tif 000021
【０１０８】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、以下の化合物のいずれか１つ、またはそれらの薬学的に許容される塩から選択される。
【０１０９】
【化１２−１】
2022500359.tif 000022
【０１１０】
【化１２−２】
2022500359.tif 000023
【０１１１】
【化１２−３】
2022500359.tif 000024
【０１１２】
特定の実施形態では、本発明の化合物はラセミ体であってよい。ある特定の実施形態では、本発明の化合物は一方のエナンチオマーが濃縮されたものとすることができる。例えば、本発明の化合物は、３０％超のｅｅ（エナンチオマー過剰率）、４０％超のｅｅ、５０％超のｅｅ、６０％超のｅｅ、７０％超のｅｅ、８０％超のｅｅ、９０％超のｅｅであってよく、または更には９５％以上のｅｅを有することができる。
【０１１３】
本発明の化合物は、複数の立体中心を有することができる。したがって、本発明の化合物は、１つ以上のジアステレオマーが濃縮されたものとすることができる。例えば、本発明の化合物は、３０％超のｄｅ（ジアステレオマー過剰率）、４０％超のｄｅ、５０％超のｄｅ、６０％超のｄｅ、７０％超のｄｅ、８０％超のｄｅ、９０％超のｄｅであってよく、または更には９５％以上のｄｅを有することができる。ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、１つ以上の不斉中心において実質的に１つの異性体配置を有し、残りの不斉中心において複数の異性体配置を有する。
【０１１４】
ある特定の実施形態において、不斉中心のエナンチオマー過剰率は、少なくとも４０％ｅｅ、５０％ｅｅ、６０％ｅｅ、７０％ｅｅ、８０％ｅｅ、９０％ｅｅ、９２％ｅｅ、９４％ｅｅ、９５％ｅｅ、９６％ｅｅ、９８％ｅｅ、またはそれ以上のｅｅである。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、立体化学を用いずに描かれた単結合は、化合物の立体化学を示さない。
【０１１６】
本明細書で使用される場合、ハッシュ線または太線の非ウェッジ結合は、相対的であり、絶対的ではない、立体化学的配置を示す（例えば、特定のジアステレオマーのエナンチオマー同士を区別しない）。
【０１１７】
本明細書において使用される場合、ハッシュ線または太線のウェッジ結合は、絶対立体化学配置を示す。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の化合物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。ある特定の実施形態において、本発明の治療用製剤または医薬組成物は、主に化合物の一方のエナンチオマーが濃縮されていてよい。エナンチオマー濃縮された混合物は、例えば少なくとも６０ｍｏｌ％、またはより好ましくは少なくとも７５、９０、９５、または更には９９ｍｏｌ％の一方のエナンチオマーを含むことができる。ある特定の実施形態では、一方のエナンチオマーを濃縮した化合物は他方のエナンチオマーを実質的に含まず、ここで実質的に含まないとは、例えば組成物または化合物の混合物中の他方のエナンチオマーと比較して、対象とされる物質が、１０％未満、または５％未満、または４％未満、または３％未満、または２％未満、または１％未満を構成することを意味する。例えば、組成物または化合物混合物が、９８グラムの第１のエナンチオマーと２グラムの第２のエナンチオマーを含有する場合、９８モルパーセントの第１のエナンチオマーとわずか２％の第２のエナンチオマーを含有すると言われる。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、治療用製剤または医薬組成物は、本発明の化合物の一方のジアステレオマーを主として与えるように濃縮することができる。ジアステレオマー濃縮された混合物は、例えば少なくとも６０ｍｏｌ％、またはより好ましくは少なくとも７５、９０、９５、または更には９９ｍｏｌ％の一方のジアステレオマーを含むことができる。
【０１２０】
治療方法
非選択的Ｃａ２＋透過性一過性受容体電位（ＴＲＰ）チャネルは、アクチンリモデリング及び細胞遊走をはじめとする多様な細胞プロセスにおいて細胞内環境に細胞外キューを伝達するセンサーとして機能する（Ｇｒｅｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ６，８３７−８４５，２００３、Ｒａｍｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ６８，６１９−６４７，２００６、Ｍｏｎｔｅｌｌ，Ｐｆｌｕｇｅｒｓ  Ａｒｃｈ  ４５１，１９−２８，２００５、Ｃｌａｐｈａｍ，Ｎａｔｕｒｅ  ４２６，５１７−５２４，２００３）。アクチン細胞骨格の動的再構成は、時間空間的に調節されたＣａ２＋の流入に依存し（Ｚｈｅｎｇ  ａｎｄ  Ｐｏｏ，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２３，３７５−４０４，２００７、Ｂｒａｎｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｍｅｙｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３２２，３９０−３９５，２００８、Ｃｏｌｌｉｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｙｅｒ，Ｄｅｖ  Ｃｅｌｌ  １６，１６０−１６１，２００９）、低分子量ＧＴＰアーゼであるＲｈｏＡ及びＲａｃ１がこれらの変化の主要なモジュレーターとして機能している（Ｅｔｉｅｎｎｅ−Ｍａｎｎｅｖｉｌｌｅ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，６２９−６３５，２００２、Ｒａｆｔｏｐｏｕｌｏｕ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２６５，２３−３２，２００４）。ＲｈｏＡは、ストレスファイバー及び接着斑形成を誘導し、Ｒａｃ１はラメリポディア形成を媒介する（Ｅｔｉｅｎｎｅ−Ｍａｎｎｅｖｉｌｌｅ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，６２９−６３５，２００２）。一過性受容体電位カチオンチャネルサブファミリーＣのメンバー５（ＴＲＰＣ５）は、ＴＲＰＣ６と協調してＣａ２＋流入、アクチンリモデリング、及び腎臓ポドサイト及び線維芽細胞の細胞運動性を調節するように作用する。ＴＲＰＣ５媒介性のＣａ２＋流入がＲａｃ１活性を増大させるのに対して、ＴＲＰＣ６媒介性のＣａ２＋流入はＲｈｏＡ活性を促進する。ＴＲＰＣ６チャネルの遺伝子サイレンシングは、ストレスファイバーを消失させ、斑紋接触を減少させ、運動性、遊走性の細胞表現型をもたらす。これに対して、ＴＲＰＣ５チャネルの遺伝子サイレンシングはストレスファイバー形成を回復させ、収縮性の細胞表現型をもたらす。本明細書に記載される結果は、ＴＲＰＣ５及びＴＲＰＣ６チャネルがＲａｃ１及びＲｈｏＡへの結合差異を通じて細胞骨格ダイナミクスの厳密に調節されたバランスを制御する、保存されたシグナル伝達機構を明らかにするものである。
【０１２１】
Ｃａ２＋依存性のアクチン細胞骨格のリモデリングは、細胞の遊走を促進する動的プロセスである（Ｗｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４５７，９０１−９０５，２００９）。ＲｈｏＡ及びＲａｃ１は、遊走細胞における細胞骨格再構成に関与するスイッチとして機能する（Ｅｔｉｅｎｎｅ−Ｍａｎｎｅｖｉｌｌｅ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，６２９−６３５，２００２）、Ｒａｆｔｏｐｏｕｌｏｕ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  ２６５，２３−３２，２００４）。Ｒａｃ１の活性化は、運動性細胞表現型を媒介する一方で、ＲｈｏＡ活性は収縮型表現型を促進する（Ｅｔｉｅｎｎｅ−Ｍａｎｎｅｖｉｌｌｅ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ４２０，６２９−６３５，２００２）。Ｃａ２＋は、低分子ＧＴＰアーゼの制御に中心的な役割を果たしている（Ａｓｐｅｎｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ３７７，３２７−３３７，２００４）。Ｃａ２＋の空間的及び時間的に制限されたフリッカーは、細胞の移動の前端付近で濃縮される（Ｗｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４５７，９０１−９０５，２００９）。したがって、Ｃａ２＋マイクロドメインは、前端での重要な事象としてＲａｃ１活性のローカルバーストを加え合わせている（Ｇａｒｄｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  １２，２０２９−２０３４，２００２、Ｍａｃｈａｃｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４６１，９９−１０３，２００９）。現在までに、ＧＴＰアーゼ制御に関与するＣａ２＋流入源は、大部分は未解明である。ＴＲＰ（一過性受容体電位）チャネルは、線維芽細胞及び神経細胞の成長円錐０における細胞遊走にリンクされた時間的及び空間的に限定されたＣａ２＋シグナルを発生する。詳細には、ＴＲＰＣ５チャネルは、ニューロンの成長円錐ガイダンス１の既知の調節因子であり、ニューロンにおけるそれらの活性は、ＰＩ３Ｋ及びＲａｃ１活性に依存している（Ｂｅｚｚｅｒｉｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ６，７０９−７２０，２００４）。
【０１２２】
ポドサイトは、腎臓糸球体の後腎間葉系に由来するニューロン様細胞であり、腎臓濾過装置の形成に不可欠である（Ｓｏｍｌｏ  ａｎｄ  Ｍｕｎｄｅｌ，  Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．２４，３３３−３３５，２０００、Ｆｕｋａｓａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ２０，１４９１−１５０３，２００９）。ポドサイトは、環境キューに細胞骨格適応の巧妙に洗練されたレパートリーを有している（Ｓｏｍｌｏ  ａｎｄ  Ｍｕｎｄｅｌ，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ２４，３３３−３３５，２０００、Ｇａｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２７，８６９８−８７１２，２００７、Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１６，１３４６−１３５９，２００６、Ｖｅｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８，２０７１６−２０７２３，２００３、Ｂａｒｌｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８，１９２６６−１９２７１，２００３、Ｈｏｌｚｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ５６，１４８１−１４９１，１９９９、Ａｈｏｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １５５，９０７−９１３，１９９９；Ｔｒｙｇｇｖａｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗａｒｔｉｏｖａａｒａ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５４，１３８７−１４０１，２００６、Ｓｃｈｎａｂｅｌ  ａｎｄ  Ｆａｒｑｕｈａｒ，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １１１，１２５５−１２６３，１９９０、Ｋｕｒｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９，７０７５−７０７９，１９９２）。ポドサイト傷害の初期の事象は、アクチン細胞骨格の制御不能（Ｆａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １７，４２８−４３７，２００７、Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １０８，２８９−３０１，２００１、Ａｓａｎｕｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ８，４８５−４９１，２００６）及びＣａ２＋ホメオスタシス（Ｈｕｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １６，１５９３−１６０２，２００５、Ｆａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  １４，９３１−９３８，２００８）によって特徴付けられる。これらの変化は、タンパク尿の発症、尿空間へのアルブミンの喪失、及び最終的には腎不全と関連している（Ｔｒｙｇｇｖａｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗａｒｔｉｏｖａａｒａ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５４，１３８７−１４０１，２００６）。血管活性ホルモンであるアンジオテンシンＩＩは、ポドサイトのＣａ２＋流入を誘導し、長期治療はストレスファイバーの喪失をもたらす（Ｈｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ８６，１３７９−１３９４，２００８）。Ｃａ２＋流入と細胞骨格再構成との関連は認識されているが、細胞の形状と運動性を調節する細胞外キューをポドサイトが感知して伝達する機序は依然、未解明である。ＴＲＰカノニカル６（ＴＲＰＣ６）チャネルの変異は、ポドサイト傷害との関連が示されている（Ｗｉｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０８，１８０１−１８０４，２００５、Ｒｅｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ３７，７３９−７４４，２００５、Ｍｏｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １８，２９−３６，２００７、��ｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １７７２，９２８−９３６，２００７）が、このプロセスを制御する特定の経路についてはほとんど知られていない。さらに、ＴＲＰＣ６は、ＴＲＰＣチャンネルファミリーの他の６つのメンバーと近い相同性を共有している（Ｒａｍｓｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ６８，６１９−６４７，２００６、Ｃｌａｐｈａｍ，Ｎａｔｕｒｅ  ４２６，５１７−５２４，２００３）。ＴＲＰＣ５チャネルはＴＲＰＣ６チャネル活性に拮抗し、異なる低分子ＧＴＰアーゼへの結合差異を通じて細胞骨格ダイナミクスの厳密に調節されたバランスを制御する。
【０１２３】
タンパク尿
タンパク尿は、尿中にタンパク質が存在する病的状態である。アルブミン尿症はタンパク尿の一種である。微量アルブミン尿は、腎臓が少量のアルブミンを尿中に漏出する場合に生じる。適切に機能している身体では、アルブミンは腎臓によって血流中に保持されているため、通常尿中に存在しない。微量アルブミン尿は、２４時間の尿採取（２０〜２００μｇ／分）から、またはより一般的には、少なくとも２回の濃度上昇（３０〜３００ｍｇ／Ｌ）から診断される。微量アルブミンは糖尿病性腎症の前兆となり得る。これらの値よりも高いアルブミンレベルは顕性アルブミン尿と呼ばれる。例えば、糖尿病性腎症などのある特定の疾患を有する対象は、微量アルブミン尿から顕性アルブミン尿へと進行し、腎疾患が進行期に達すると腎症の範囲（３．５ｇ超／２４時間）に達する。
【０１２４】
タンパク尿の原因
タンパク尿は、巣状分節性糸球体硬化症、ＩｇＡ腎症、糖尿病性腎症、ループス腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎、進行性（半月体形成性）糸球体腎炎、及び膜性糸球体腎炎をはじめとするいくつかの状態を伴い得る。
【０１２５】
Ａ．巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）
巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）は、腎臓の濾過システム（糸球体）を攻撃する疾患であり、重篤な瘢痕病変を引き起こす。ＦＳＧＳは、血液中のタンパク質が尿中に漏出する場合に生じるネフローゼ症候群（タンパク尿）として知られる疾患の多くの原因の１つである。
【０１２６】
ＦＳＧＳ患者に対して使用できる治療法はほとんどない。多くの患者はステロイドレジメンで治療されているが、その多くが極めて深刻な副作用を有している。一部の患者は、尿中のタンパク質のレベルを下げることが示されている血圧薬だけでなく、免疫抑制剤に積極的に応答することが示されている。これまでのところ、一般的に受け入れられている効果的な治療薬または治療薬はなく、ＦＳＧＳを治療するためのＦＤＡ承認薬は存在していない。したがって、タンパク尿を低減または阻止するより効果的な方法が望ましい。
【０１２７】
Ｂ．ＩｇＡ腎症
ＩｇＡ腎症（ＩｇＡ腎炎、ＩｇＡＮ、ベルガー病、または咽頭炎併発性糸球体腎炎とも呼ばれる）は、糸球体腎炎（腎臓の糸球体の炎症）の１つの形態である。ＩｇＡ腎症は、世界で最も一般的な糸球体腎炎である。原発性ＩｇＡ腎症は、糸球体中のＩｇＡ抗体の沈着を特徴とする。糸球体のＩｇＡ沈着を伴う他の疾患もあり、最も一般的なものは、ＩｇＡ腎症の全身的な形態であると考えられている、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病（ＨＳＰ）である。ヘノッホ・シェーンライン紫斑病は特徴的な紫斑性皮膚発疹、関節炎、及び腹痛を呈し、若年成人（１６〜３５歳）でより一般的に起こる。ＨＳＰはＩｇＡ腎症よりも良性の予後を伴う。ＩｇＡ腎症では、２０年の期間で症例の２５〜３０％で慢性腎不全への緩慢な進行が見られる。
【０１２８】
Ｃ．  糖尿病性腎症
キンメルスチール・ウィルソン症候群及び係蹄間糸球体腎炎としても知られる糖尿病性腎症は、腎臓糸球体の係蹄の血管障害によって引き起こされる進行性の腎疾患である。糖尿病性腎症は、ネフローゼ症候群及びびまん性糸球体硬化症によって特徴付けられる。糖尿病性腎症は長年の糖尿病によるもので、透析の主な原因である。糖尿病性腎症の経過における最も早期の検出可能な変化は、糸球体の肥厚である。この段階では、腎臓は尿中に通常よりも多くの血清アルブミンを漏出し始める可能性がある。糖尿病性腎症が進行するにつれて、結節性糸球体硬化症によって破壊される糸球体の数が増え、尿中に排出されるアルブミンの量が増加する。
【０１２９】
Ｄ．ループス腎炎
ループス腎炎は、全身性エリテマトーデスの合併症である腎臓障害である。ループス腎炎は、抗体及び補体が腎臓に蓄積する際に生じ、炎症を引き起こす。ループス腎炎はしばしばタンパク尿を引き起こし、急速に腎不全に進行する場合がある。窒素老廃物が血流中に蓄積する。全身性エリテマトーデスは、間質性腎炎をはじめとする、腎臓の内部構造の様々な障害を引き起こす。ループス腎炎は、１０，０００人中、約３人が罹患する。
【０１３０】
Ｅ．膜性増殖性糸球体腎炎  Ｉ／ＩＩ／ＩＩＩ
膜性増殖性糸球体腎炎は、腎糸球体メサンギウムの沈着及び基底膜の肥厚によって引き起こされる糸球体腎炎の一種であり、補体を活性化し、糸球体を損傷する。膜性増殖性糸球体腎炎には３つの種類がある。Ｉ型は、腎臓に沈着する免疫複合体によって引き起こされ、古典的補体経路に関連していると考えられている。ＩＩ型はＩ型と似ているが、補体代替経路と関連していると考えられている。ＩＩＩ型は極めて稀であり、上皮下沈着物とＩ型疾患の典型的病理所見の組み合わせによって特徴付けられる。
【０１３１】
Ｆ．進行性（半月体形成性）糸球体腎炎
進行性（半月体形成性）糸球体腎炎（ＰＧ）は、腎臓の症候群であり、治療を行わずに放置すると、急性腎不全及び数ヶ月以内に死亡に急速に進行する。５０％の症例において、ＰＧは、グッドパスチャー症候群、全身性エリテマトーシス、またはウェゲナー肉芽腫症などの基礎疾患を伴っており、残りの症例は特発性である。基礎となる原因にかかわらず、ＰＧは腎臓の糸球体への重大な傷害を伴い、糸球体の多くが特徴的な三日月形の瘢痕を含む。ＰＧ患者は、血尿、タンパク尿、場合により高血圧及び浮腫を有する。臨床像はネフローゼ症候群と一致しているものの、タンパク尿の程度はネフローゼ症候群に関連する範囲である３ｇ／２４時間を超える場合もある。未治療の疾患は、腎機能の低下に伴う尿量減少（乏尿）に進行する場合がある。
【０１３２】
Ｇ．膜性糸球体腎炎
膜性糸球体腎炎（ＭＧＮ）は、主に３０歳〜５０歳までの患者、通常は白人が罹患する腎臓の緩徐進行性疾患である。膜性糸球体腎炎はネフローゼ症候群に発展しうる。ＭＧＮは循環性免疫複合体によって引き起こされる。現在の研究は、免疫複合体の大部分が糸球体の基底膜に対するインサイチューでの抗原への抗体の結合によって形成されることを示している。上記の抗原は、基底膜に内在するものであるか、または全身循環から沈着するものでありうる。
【０１３３】
尿タンパク質レベルの測定
尿中のタンパク質レベルは、当該技術分野では周知の方法を用いて測定することができる。最近まで、正確なタンパク質測定には２４時間の尿の採取を必要とした。２４時間の採取では、患者に容器に排尿してもらい、トイレに行く都度、冷蔵保管する。患者に朝の最初のトイレの後に尿の採取を開始してもらう。その日の残りの尿をすべて容器に採取する。翌朝、患者に起床後の最初の尿を追加してもらい、採取を終了する。
【０１３４】
最近では、研究者は、単一の尿試料から必要な情報が得られることを見出している。より新しい方法では、尿試料中のアルブミンの量を、正常な筋肉の分解の老廃物であるクレアチニンの量と比較する。この測定値は、尿中アルブミン／クレアチニン比（ＵＡＣＲ）と呼ばれる。クレアチニン１グラム当たり３０ミリグラム（３０ｍｇ／ｇ）超のアルブミンを含む尿試料は、問題がある可能性があるという警告である。検査機関での検査が３０ｍｇ／ｇ超である場合、１〜２週間後に別のＵＡＣＲ試験を行う必要がある。２番目の検査でも高レベルのタンパク質が示される場合、被験者は腎機能の低下の徴候である持続的なタンパク尿を有しているため、腎臓機能を評価するための更なる検査が必要となる。
【０１３５】
血中のクレアチニンの量を測定する検査はまた、被験者の腎臓が効率的に老廃物を除去しているかどうかも示す。血中の過剰なクレアチニンは、被験者が腎障害を有している徴候である。医師はクレアチニン測定値を用いて腎臓が血液をどれだけ効率的に濾過しているかを推定することができる。この計算は、推算糸球体濾過量、またはｅＧＦＲと呼ばれる。ｅＧＦＲが毎分６０ミリリットル（ｍＬ／分）未満である場合、慢性腎疾患である。
【０１３６】
ＴＲＰＣ５
ＴＲＰＣは、動物の一過性受容体電位カチオンチャネルの１ファミリーである。ＴＲＰＣ５は、哺乳動物の一過性受容体電位イオンチャネルのＴＲＰＣファミリーのサブタイプである。ＴＲＰＣ５の３つの例を下記表１に示す。
【０１３７】
【表１】
2022500359.tif 000025
【０１３８】
Ａしたがって、ある特定の実施形態では、本発明は、腎疾患、肺動脈高血圧症、不安、うつ病、がん、糖尿病性網膜症、または疼痛から選択される疾患もしくは状態を治療するかまたはそれらの発症のリスクを低減するための方法を提供し、当該方法は、必要とする対象に治療有効量の本発明の化合物（例えば、構造式Ｉの化合物）または前記化合物を含む医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、疾患は、腎疾患、不安、うつ病、がん、または糖尿病性網膜症である。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、糖尿病性腎症、アルポート症候群、高血圧性腎疾患、ネフローゼ症候群、ステロイド耐性腎症、微小変化群、膜性腎症、突発性膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、免疫複合体媒介性ＭＰＧＮ、補体媒介性ＭＰＧＮ、ループス腎炎、感染後糸球体腎炎、菲薄基底膜病、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、アミロイドーシス（原発性）、ｃ１ｑ腎炎、急速進行性ＧＮ、抗ＧＢＭ疾患、Ｃ３糸球体腎炎、高血圧性腎硬化症、またはＩｇＡ腎症から選択される腎疾患である。いくつかの実施形態では、腎疾患は、タンパク尿腎疾患である。いくつかの実施形態では、腎疾患は、微量アルブミン尿または顕性アルブミン尿腎疾患である。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、治療される疾患または状態は、肺動脈性高血圧症である。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、治療される疾患または状態は、神経因性疼痛及び内臓性疼痛から選択される疼痛である。
【０１４３】
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、化学療法抵抗性乳癌、アドリアマイシン抵抗性乳癌、化学療法抵抗性大腸癌、髄芽腫、及び腫瘍血管新生から選択されるがんである。
【０１４４】
本発明はまた、不安、またはうつ病、またはがんを治療するかまたはそれらの発症のリスクを低減する方法であって、必要とする対象に本発明の化合物  （例えば、式Ｉの化合物）または前記化合物を含む医薬組成物を投与することを含む方法も提供する。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、治療される疾患または状態は、移植関連ＦＳＧＳ、移植関連ネフローゼ症候群、移植関連タンパク尿、胆汁うっ滞性肝疾患、多発性嚢胞腎、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、肥満、インスリン抵抗性、ＩＩ型糖尿病、前糖尿病、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。
【０１４６】
治療対象
本発明の一態様では、対象は、腎疾患、肺動脈性高血圧、不安、うつ病、がん、糖尿病性網膜症、または疼痛を有するかまたはそれらの発症のリスクを有することに基づいて選択される。別の態様では、対象は、腎疾患、不安、うつ病、がん、または糖尿病性網膜症を有するかまたはそれらの発症のリスクを有することに基づいて選択される。本発明の別の態様では、対象は、疼痛、神経因性疼痛、内臓性疼痛、移植関連ＦＳＧＳ、移植関連ネフローゼ症候群、移植関連タンパク尿、胆汁うっ滞性肝疾患、多発性嚢胞腎、常染色体優性多発性嚢胞腎（ＡＤＰＫＤ）、肥満、インスリン抵抗性、ＩＩ型糖尿病、前糖尿病、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を有するかまたはそれらの発症のリスクを有することに基づいて選択される。
【０１４７】
タンパク尿を有する、または発症するリスクを有する、またはそれらの発症のリスクを有する対象としては、糖尿病、高血圧、またはある特定の家族的背景を有する者が含まれる。米国では、糖尿病は末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の主な原因である。１型と２型糖尿病の両方において、尿中のアルブミンは腎機能低下の最初の徴候の１つである。腎機能が低下するにつれて、尿中のアルブミンの量は増加する。タンパク尿を発症するもう一つの危険因子は高血圧である。高血圧の患者のタンパク尿は、腎機能の低下の指標である。高血圧が制御されていない場合には患者は完全な腎不全に進行する場合がある。アフリカ系アメリカ人は、白人よりも高血圧を生じやすく、血圧が軽度に上昇しただけでも、そこから腎障害を発症しやすい。タンパク尿のリスクを有する他のグループは、アメリカ先住民、ヒスパニック／ラテン系、太平洋諸島系アメリカ人、高齢者、及び過体重の対象である。
【０１４８】
本発明の一態様では、対象は、タンパク尿を有するかまたは発症するリスクを有することに基づいて選択される。タンパク尿を有するかまたは発症するリスクを有する対象とは、その状態の１つ以上の症状を有する者である。タンパク尿の症状は当該技術分野では周知のものであり、限定されないが尿中の大量のタンパク質を含み、これはトイレで尿が泡立って見える原因となりうる。大量のタンパク質が失われると浮腫が起こり、手、足、腹部、または顔のむくみを生じ得る。これらは、大量のタンパク質損失の徴候であり、腎疾患が進行していることを示す。検査機関での検査が、広範な腎臓障害が生じる前に対象の尿中にタンパク質があるか否かを調べる唯一の方法である。
【０１４９】
方法は、哺乳動物、例えば、ヒト及び他の動物、例えば、実験動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、もしくはサル、またはペット及び家畜、例えば、ネコ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、もしくはウマなどの様々な対象において有効である。いくつかの実施形態では、対象は哺乳動物である。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
【実施例】
【０１５０】
本発明を、下記実施例で更に説明するが、実施例は、特許請求の範囲に記載される発明の範囲を限定するものではない。
【０１５１】
実施例１  化合物１００の合成
【０１５２】
【化１３】
2022500359.tif 000026
【０１５３】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４００ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ、１当量）及び４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノール（４００．６ｍｇ、２．２２ｍｍｏｌ，１．５当量）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＢＵ（４５１．５ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ、２．００当量）を室温で加えた。得られた混合物を８０℃で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。得られた混合物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２：１）で精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキレート（１１０ｍｇ，１７．９４％）を褐色の固体として得た。
【０１５４】
４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１１０ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ，１当量）をＤＣＭ（４  ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ，１３．４６ｍｍｏｌ，５０．５９当量）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１２：１）で精製して４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（５０ｍｇ，５９．９８％）を褐色固体として得た。
【０１５５】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（５０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ，１当量）をＤＩＥＡ（２  ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（４７．５ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ，１．１９当量）を室温で加えた。得られた混合物を１００℃で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２：１）で精製して４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（４０ｍｇ，４７．６５％）を褐色固体として得た。
【０１５６】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ、１３．４６ｍｍｏｌ、１７７．００当量）を室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（４０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣで以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍｍｏｌ／ＬのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝７分間で１８％Ｂから４７％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝６．２２分）で精製して、４−クロロ−５−［４−４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（８．６ｍｇ、２５．５９％）を白色固体として得た。
【０１５７】
実施例２  化合物１４０の合成
【０１５８】
【化１４】
2022500359.tif 000027
【０１５９】
Ｔｅｒｔ−ブチル  ４−ブロモ−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリデン−７−カルボキシレート
４−ブロモ−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン（２５０ｍｇ、１．１７３ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１０ｍＬ、１２３．４３０ｍｍｏｌ、１０５．２０当量）溶液に、Ｂｏｃ２Ｏ（５１２．１３ｍｇ、２．３４７ｍｍｏｌ、２．００当量）及びＴＥＡ（４７４．９０ｍｇ、４．６９３ｍｍｏｌ、４当量）を２５℃で加えた。溶液を２５℃で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ  ５／１）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−ブロモ−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−カルボキシレート（２１０ｍｇ、５７．１５％）を淡黄色油状物として得た。
【０１６０】
Ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリデン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−ブロモ−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−カルボキシレート（２１０ｍｇ、０．６７１ｍｍｏｌ、１当量）及び４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノール（２４１．５２ｍｇ、１．３４１ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＳＯ溶液（１０ｍＬ）に、Ｃｓ２ＣＯ３（８７３．８６ｍｇ、２．６８２ｍｍｏｌ、４当量）、２−（ジメチルアミノ）酢酸（４１．４６ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ、０．６当量）及びＣｕＩ（７６．６２ｍｇ、０．４０２ｍｍｏｌ、０．６０当量）を加えた。窒素雰囲気下、１２０℃で４時間攪拌した後、得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣで精製し、ＰＥ／ＥＡ（５／１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−カルボキレート（１００ｍｇ、３６．１７％）を淡黄色固体として得た。
【０１６１】
４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリデン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ溶液（１０ｍＬ、１５７．３００ｍｍｏｌ、４３２．４６当量）に、ＴＦＡ（４１４．７５ｍｇ、３．６３７ｍｍｏｌ、１０当量）を２５℃で加えた。溶液を２５℃で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を次のステップで使用した。
【０１６２】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン（６０ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（４７．８６ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ、１．００当量）をＤＩＥＡ（４９．６７ｍｇ、０．３８４ｍｍｏｌ、２当量）に加えた混合物を、Ｎ２雰囲気下、１００℃で２時間攪拌した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１／１）で精製して４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１００ｍｇ、９９．１５％）を淡黄色固体として得た。
【０１６３】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１００ｍｇ、０．１９１ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ、１５７．３００ｍｍｏｌ、８２５．６７当量）溶液に、ＴＦＡ（２１７．２３ｍｇ、１．９０５ｍｍｏｌ、１０．００当量）を２５℃で加えた。溶液を２５℃で２時間撹拌した。粗生成物（１５０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣにより以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＯＢＤ  カラム３０×１５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝７分間で２０％Ｂから４０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝６．６３分）で精製して、４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５，６，７，８−テトラヒドロ−１，７−ナフチリジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（４２．９ｍｇ，５１．０９％）を白色固体として得た。
【０１６４】
実施例３  化合物１２０の合成
【０１６５】
【化１５】
2022500359.tif 000028
【０１６６】
２−ベンジル−５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリデン
２−ベンジル−５−ブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン（２５０ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ、１当量）及び２−（ジメチルアミノ）酢酸（１７０．０５ｍｇ、１．６４９ｍｍｏｌ、２．００当量）をＤＭＳＯ（５ｍＬ）に加えた攪拌混合物に、４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノール（８９．１０ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ、０．６当量）及びＣｕＩ（９４．２２ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ、０．６当量）を室温で加えた。次いで、Ｃｓ２ＣＯ３（１０７４．５９ｍｇ、３．２９８ｍｍｏｌ、４当量）を室温で加えた。最終反応混合物に１２０℃で１時間マイクロ波を照射した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。粗生成物を以下の条件（カラム＝ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ；移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で１８％Ｂから３５％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．１２分）で逆相フラッシュにより精製して２−ベンジル−５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン（１８０ｍｇ、５４．２５％）を褐色固体として得た。
【０１６７】
５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリデン
２−ベンジル−５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシオキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン（１８０ｍｇ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、窒素雰囲気下、室温でＰｄ／Ｃ（２０ｍｇ）を加えた。得られた混合物を水素雰囲気下、室温で５時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １２：１）で精製して５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン（１００ｍｇ）を褐色固体として得た。
【０１６８】
４−クロロ−５−［５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン−２−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン（１００ｍｇ、０．３２０ｍｍｏｌ、１当量）をＤＩＥＡ（０．１ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６３．８１ｍｇ、０．２５６ｍｍｏｌ、０．８当量）を室温で加えた。得られた混合物を９０℃で１時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １２：１）で精製して４−クロロ−５−［５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン−２−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１３０ｍｇ、７７．３４％）を白色固体として得た。
【０１６９】
４−クロロ−５−［５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン−２−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン−２−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１０７ｍｇ、０．２０４ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ７に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（５０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣにより以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で３０％Ｂから５０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．５５分）で精製して、４−クロロ−５−［５−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，６−ナフチリジン−２−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６０ｍｇ、６６．７８％）を白色固体として得た。
【０１７０】
実施例４  化合物１１８の合成
【０１７１】
【化１６】
2022500359.tif 000029
【０１７２】
エチル  ２−（ベンジルアミノ）プロパノエート
ベンズアルデヒド（８ｇ、７５．３８４ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＥＡ（７．６３ｇ、７５．３８４ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＥ（１００ｍＬ、１２６３．１４９ｍｍｏｌ、１６．７６当量）に溶かした攪拌溶液に、ＴＥＡ（７．６３ｇ、７５．３８４ｍｍｏｌ、１当量）及びＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（３１．９５ｇ、１５０．７６７ｍｍｏｌ、２当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。所望の生成物をＬＣＭＳによって検出することができた。得られた混合物をＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（１×９０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮し、エチル  ２−（ベンジルアミノ）プロパノエート（１２ｇ、７６．８０％）を無色油状物として得た。
【０１７３】
メチル  ４−［ベンジル（１−エトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ］ブタノエート
エチル  ２−（ベンジルアミノ）プロパノエート（８ｇ、３８．５９６ｍｍｏｌ、１当量）及びメチル  ４−オキソブタノエート（４．４８ｇ、３８．５９６ｍｍｏｌ、１．００当量）をＤＣＥ（１２０ｍＬ、１５１５．７７９ｍｍｏｌ、３９．２７当量）に溶かした攪拌溶液に、ＴＥＡ（３．９１ｇ、３８．５９６ｍｍｏｌ、１当量）及びＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１６．３６ｇ、７７．１９３ｍｍｏｌ、２当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。所望の生成物をＬＣＭＳによって検出することができた。得られた混合物をＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×９０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮してメチル  ４−［ベンジル（１−エトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ］ブタノエート（１０ｇ、８４．２９％）を無色油状物として得た。
【０１７４】
メチル  １−ベンジル−２−メチル−３−オキソピペリジン−４−カルボキシレート
メチル  ４−［ベンジル（１−エトキシ−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ］ブタノエート（８ｇ、２６．０２６ｍｍｏｌ、１当量）をトルエン（１００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ｔ−ＢｕＯＫ（５．００ｇ、５２．０５１ｍｍｏｌ、２当量）を室温で加えた。混合物を８０℃で２時間撹拌した。所望の生成物をＬＣＭＳにより検出した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５：１から２：１）で溶出してメチル  １−ベンジル−２−メチル−３−オキソピペリジン−４−カルボキシレート（６．５ｇ、９５．５７％）を白色固体として得た。
【０１７５】
７−ベンジル−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オール
メチル  １−ベンジル−２−メチル−３−オキソピペリジン−４−カルボキシレート（６ｇ、２２．９６０ｍｍｏｌ、１当量）をＥｔＯＨ（８０ｍＬ、１３７７．０８３ｍｍｏｌ、５９．９８当量）に溶かした攪拌溶液に、ｔ−ＢｕＯＮａ（４．４１ｇ、４５．９２１ｍｍｏｌ、２当量）及びメタンイミドアミド塩酸塩  （３．７０ｇ、４５．９２１ｍｍｏｌ，２．００当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。混合物を８０℃で２時間撹拌した。所望の生成物をＬＣＭＳによって検出することができた。得られた混合物を真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（３：１から２：１）で溶出して７−ベンジル−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オール（５ｇ、８５．２９％）を白色固体として得た。
【０１７６】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−ヒドロキシ−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
７−ベンジル−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オール（５ｇ、１９．５８３ｍｍｏｌ、１当量）のＥｔＯＨ（６０ｍＬ、１０３２．８１２ｍｍｏｌ、５２．７４当量）溶液に、Ｂｏｃ２Ｏ（８．５５ｇ、３９．１６６ｍｍｏｌ、２当量）、ＣＨ３ＣＯＯＮａ（１．８１ｇ、２３．５００ｍｍｏｌ、１．２当量）、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（２７５．０１ｍｇ、１．９５８ｍｍｏｌ、０．１当量）を窒素雰囲気下で加えた。混合物を水素雰囲気下で２時間、室温で水素化し、セライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル  ４−ヒドロキシ−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４．５ｇ、８６．６１％）を白色固体として得た。
【０１７７】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−ヒドロキシ−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４．５ｇ、１６．９６１ｍｍｏｌ、１当量）及びＰＰｈ３（６．６７ｇ、２５．４４２ｍｍｏｌ、１．５当量）をＤＣＥ（６０ｍＬ、０．６０６ｍｍｏｌ、０．０４当量）に溶かした攪拌溶液に、ＣＣｌ４（５．２２ｇ、３３．９２２ｍｍｏｌ、２当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。混合物を７０℃で２時間撹拌した。所望の生成物をＬＣＭＳによって検出することができた。得られた混合物を真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（７：１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４ｇ、８３．１１％）を白色固体として得た。
【０１７８】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４ｇ、１４．０９６ｍｍｏｌ、１当量）及び２−クロロ−４−フルオロフェノール（２．０７ｇ、１４．０９６ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３．９０ｇ、２８．１９３ｍｍｏｌ、２当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。混合物を７０℃で１時間撹拌した。所望の生成物をＬＣＭＳによって検出することができた。得られた混合物を真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４ｇ、７２．０５％）を白色固体として得た。
【０１７９】
４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４ｇ、１当量）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に加えた攪拌溶液に、ＴＦＡ（４ｍＬ）を窒素雰囲気下、室温で滴下して／少量ずつ加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。所望の生成物をＬＣＭＳによって検出することができた。得られた混合物を減圧下で濃縮して、４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（２．７  ｇ，９０．５１％）を灰白色固体として得た。
【０１８０】
４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（１ｇ、３．４０４ｍｍｏｌ、１当量）をＤＩＥＡ（１ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（０．８５ｇ、３．４０４ｍｍｏｌ、１当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。混合物を１００℃で一晩攪拌した。所望の生成物をＬＣＭＳによって検出することができた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（１：１から１：２）で溶出して４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１ｇ、５８．０１％）を白色固体として得た。
【０１８１】
４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１ｇ、１当量）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、窒素雰囲気下、室温でＴＦＡ（２ｍＬ）を滴下して加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。所望の生成物をＬＣＭＳによって検出することができた。得られた混合物を減圧下で濃縮して４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６００ｍｇ、７１．９５％）を白色固体として得た。
【０１８２】
４−クロロ−５−［（８Ｒ）−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２５０ｍｇ、１当量）を、分取キラルＨＰＬＣ（カラム＝ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＧ、２０×２５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝Ｈｅｘ：ＤＣＭ＝３：１（０．１％ＦＡ）−ＨＰＬＣ、移動相Ｂ＝ＥｔＯＨ−ＨＰＬＣ、流量＝２０ｍＬ／分、勾配＝１９分間で１５Ｂから１５Ｂ、２２０／２５４ｎｍ、ＲＴ１＝１３．０１６、ＲＴ２＝１６．００４）により分離して４−クロロ−５−［（８Ｒ）−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−８−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１４４ｍｇ、５７．６０％）を白色固体として得た。
【０１８３】
実施例５  化合物１０３の合成
【０１８４】
【化１７】
2022500359.tif 000030
【０１８５】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（８００ｍｇ、２．９６６ｍｍｏｌ、１当量）及び２−（ジフルオロメチル）フェニル酢酸（１１０４．２６ｍｇ、５．９３２ｍｍｏｌ、２．００当量）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１２２９．７２ｍｇ、８．８９８ｍｍｏｌ、３当量）を窒素雰囲気下、８０℃で少量ずつ加えた。混合物を２時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。反応を室温の水で停止させた。混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（３×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８シリカゲル、移動相＝ＭｅＯＨ水溶液、１０分間で１０％から５０％の勾配、検出器＝ＵＶ２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（９００ｍｇ、８０．４１％）を灰白色固体として得た。
【０１８６】
４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（９００ｍｇ、２．３８５ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭに溶かした攪拌溶液に、３，３，３−トリフルオロプロパン酸（３ｍＬ、６．００当量）を室温で滴下して加えた。混合物を１．５時間撹拌した。反応をＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により監視した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（１００ｍｇ）を以下の条件で分取ＨＰＬＣにより精製して４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（３２９ｍｇ，４９．７５％）を灰白色固体として得た。
【０１８７】
４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（３２８ｍｇ、１．１８３ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１６９．０５ｍｇ、０．６７９ｍｍｏｌ、１．００当量）の攪拌溶液に、ＤＩＥＡ（１７５．４３ｍｇ、１．３５７ｍｍｏｌ、２．００当量）を７０℃で少量ずつ加えた。混合物を７０℃で２時間撹拌した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８シリカゲル、移動相＝ＭｅＯＨ水溶液、１０分間で１０％から５０％の勾配、検出器＝ＵＶ２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３２８ｍｇ、５６．６０％）を灰白色固体として得た。
【０１８８】
４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３２８ｍｇ、０．６７０ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を室温で滴下して加えた。混合物を真空下で濃縮した。生成物を分取ＨＰＬＣで精製して４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２５６．４ｍｇ、９４．３８％）を灰白色固体として得た。
【０１８９】
実施例６  化合物１１７及び１１７ａの合成
【０１９０】
【化１８】
2022500359.tif 000031
【０１９１】
エチル  ４−［１−フェニルエチル］アミノ］ペンタノエート
１−フェニルエタン−１−アミン（２５ｇ、２０６．３００ｍｍｏｌ、１当量）及びエチル  ４−オキソペンタノエート（２９．７４  ｇ、２０６．３００ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＥ（４００ｍＬ、５０５２．５９８ｍｍｏｌ、２４．４９当量）に溶かした攪拌溶液に、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（６５．５９ｇ、３０９．４４９ｍｍｏｌ、１．５当量）を窒素雰囲気下、２５℃で少量ずつ加えた。溶液を２５℃で２時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（４００ｍＬ）を０℃で加えて反応を停止した。得られた混合物をＤＣＭ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（３×２００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物を次のステップで使用した。
【０１９２】
エチル  ４−［（２−エトキシ−２−オキソエチル）（１−フェニルエチル）アミノ］ペンタノエート
エチル  ４−［（１−フェニルエチル）］ペンタノエート（４９ｇ、１９６．５０８ｍｍｏｌ、１当量）及び２−オキソ酢酸エチル（４０．１２ｇ、３９２．９９０ｍｍｏｌ、２．００当量）をＤＣＥ（５００ｍＬ、６３１５．７４７ｍｍｏｌ、３２．１４当量）に溶かした攪拌溶液に、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（６２．４７ｇ、２９４．７６２ｍｍｏｌ、１．５当量）を窒素雰囲気下、２５℃で少量ずつ加えた。溶液を２５℃で２時間撹拌した。Ｈ２Ｏ（４００ｍＬ）を０℃で加えて反応を停止した。得られた混合物をＤＣＭ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（３×２００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。粗生成物のエチル  ４−（２−エトキシ−２−オキソエチル）（１−フェニルエチル）アミノ］ペンタノエート（５７ｇ，８６．４７％）を次のステップで使用した。
【０１９３】
エチル  ２−メチル−５−オキソ−１−（１−フェニルエチル）ピペリジン−４−カルボキシレート
エチル  ４−（２−エトキシ−２−オキソエチル）（１−フェニルエチル）アミノ］ペンタノエート（５７ｇ、１６９．９２４ｍｍｏｌ、１当量）のトルエン（５００ｍＬ、４６９９．４５２ｍｍｏｌ、２７．６６当量）溶液に、０℃のポート内でｔ−ＢｕＯＫ（４７．６７ｇ、４２４．８１０ｍｍｏｌ、２．５当量）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥＡ（５０／１から１０／１）で溶出してエチル  ２−メチル−５−オキソ−１−（１−フェニルエチル）ピペリジン−４−カルボキシレート（２９ｇ、５８．９８％）を黄色油状物として得た。
【０１９４】
７−（１−シクロヘキシルエチル）−６−メチル−デカヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オール
エチル  ２−メチル−５−オキソ−１−（１−フェニルエチル）ピペリジン−４−カルボキシレート（１０ｇ、３４．５５７ｍｍｏｌ、１当量）及びメタンイミダミド塩酸塩（４．１７ｇ、５１．８３６ｍｍｏｌ、１．５０当量）をＥｔＯＨ（１００ｍＬ、１７２１．３５３ｍｍｏｌ、４９．８１当量）に溶かした溶液に、２５℃のポート内でＥｔＯＮａ（５．８８ｇ、８６．３９３ｍｍｏｌ、２．５０当量）を加えた。混合物を９０℃で２時間撹拌した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０／１から１０／１）で溶出して７−（１−シクロヘキシルエチル）−６−メチル−デカヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オール（３．４ｇ、３４．９６％）を黄色固体として得た。
【０１９５】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−ヒドロキシ−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
６−メチル−７−（１−フェニルエチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オール（３．５ｇ、１２．９９４ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＣＯＯＮＨ４（４．１０ｇ、６５．０２２ｍｍｏｌ、５．００当量）及びＢｏｃ２Ｏ（８．５１ｇ、３８．９８３ｍｍｏｌ、３当量）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ、８６０．６７７ｍｍｏｌ、６６．２３当量）溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（０．３６ｇ、２．５９９ｍｍｏｌ、０．２当量）を窒素雰囲気下で加えた。混合物を、水素バルーンを用いて水素雰囲気下、７０℃で２時間水素化し、セライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮した。ｔｅｒｔ−ブチル４−ヒドロキシ−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１．８ｇ、５２．２１％）を黄色固体として得た。
【０１９６】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−ヒドロキシ−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１．８ｇ、６．７８４ｍｍｏｌ、１当量）及び  ＰＰｈ３（３．５６ｇ、１３．５６９ｍｍｏｌ、２当量）のＤＣＥ（２０ｍＬ、２５２．６３０ｍｍｏｌ、３７．２４当量）溶液に、ＣＣｌ４（３．１３ｇ、２０．３５３ｍｍｏｌ、３当量）を２５℃で加えた。混合物を７０℃で３時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥＡ（１０／１から１／１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１．１ｇ、５７．１４％）を黄色固体として得た。
【０１９７】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１．１ｇ、３．８７７ｍｍｏｌ、１当量）及び２−クロロ−４−フルオロフェノール（０．８５ｇ、５．８００ｍｍｏｌ、１．５０当量）をＤＭＦ（１５ｍＬ、１９３．８２６ｍｍｏｌ、５０．００当量）に加えた溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．０７ｇ、７．７５３ｍｍｏｌ、２当量）を２５℃で加えた。混合物を７０℃で１時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥＡ（１０／１から５／１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１．２ｇ、７８．６０％）を黄色固体として得た。
【０１９８】
４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（８００ｍｇ、２．７２４  ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６７８．４２ｍｇ、２．７２４ｍｍｏｌ、１．００当量））をＤＩＥＡ（７０４．０１ｍｇ、５．４４７ｍｍｏｌ、２当量）に加えた混合物を窒素雰囲気下、１００℃で１６時間撹拌した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ  １／１）で精製して、４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（５３０ｍｇ、３８．４３％）を淡黄色固体として得た。
【０１９９】
４−クロロ−５−［（６Ｒ）−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（５３０ｍｇ、１．０４７ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（２０ｍＬ、３１４．６０１ｍｍｏｌ、３００．５７当量）溶液に、ＴＦＡ（１１９３．４７ｍｇ、１０．４６７ｍｍｏｌ、１０当量）を２５℃で加えた。溶液を２５℃で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（６００ｍｇ）を分取ＨＰＬＣで以下の条件（カラム＝ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＯＢＤカラム３０×１５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝７分間で２０％Ｂから４０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝６．６３分）で精製してラセミ体（２００ｍｇ）を得た。残渣（２００ｍｇ）を以下の条件（カラム＝ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＥ、２×２５ｃｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝ＭＴＢＥ（０．１％ＦＡ）−ＨＰＬＣ、移動相Ｂ＝ＩＰＡ−ＨＰＬＣ、流量＝１８ｍＬ／分；勾配＝１５分間で２０Ｂから２０Ｂ、２２０／２５４ｎｍ）で、キラル分取ＨＰＬＣで精製した。この方法により２つの異性体同士が分離されたが、絶対配向は決定されなかった。４−クロロ−５−［（６Ｓ）−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６０．９ｍｇ、１３．７８％）をとして指定された化合物を、９．６８８分に白色固体として得た。４−クロロ−５−［（６Ｒ）−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−６−メチル−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６１．５ｍｇ、１３．９２％）として指定された化合物を、１１．８１３分に白色固体として得た。
【０２００】
実施例７  化合物１３４の合成
【０２０１】
【化１９】
2022500359.tif 000032
【０２０２】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリミド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノール（５．３３ｇ、３２．８７９ｍｍｏｌ、２．００当量）及びｔｅｒｔ−ブチル  ２，４−ジクロロ−５Ｈ、６Ｈ、７Ｈ、８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５ｇ、１６．４３８ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＮａＨＣＯ３（４．１４ｇ、４９．２８２ｍｍｏｌ、３．００当量）を室温で加えた。溶液を７０℃で０．５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、１００分間で７０％Ｂから９５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を９２％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリミド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレートの固形分（２．１００ｇ）を灰白色固体として得た。
【０２０３】
７−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２，７−ジカルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４００ｍｇ、０．９３１ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＥＡ（１８８．３４ｍｇ、１．８６１ｍｍｏｌ、２当量）のＭｅＯＨ（１５ｍＬ、３７０．４８４ｍｍｏｌ、３９８．１０当量）溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１０７．５４ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ、０．１当量）を圧力槽内で加えた。混合物を窒素で１時間パージしてから１００℃の一酸化炭素で１６時間、１０気圧に加圧した。反応混合物を室温に冷却し、濾過して不溶性固体を除去した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で３５％Ｂから６５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を６２％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して７−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２，７−ジカルボキシレート（１００ｍｇ、２３．７０％）を無色油状物として得た。
【０２０４】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−２−（ヒドロキシメチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
７−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２，７−ジカルボキシレート（１００ｍｇ、０．２２１ｍｍｏｌ、１当量）をｔ−ＢｕＯＨ（６ｍＬ、６３．１３９ｍｍｏｌ、２８６．２９当量）に溶かした攪拌溶液に、ＮａＢＨ４（１６．６９ｍｇ、０．４４１ｍｍｏｌ、２当量）を室温で加えた。溶液を７０℃で３時間撹拌した。混合物に水（３ｍＬ）を加えた。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で４５％Ｂから８０％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を７４％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−２−（ヒドロキシメチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（３５ｍｇ、３７．３０％）を無色油状物として得た。
【０２０５】
［４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］メタノール
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−２−（ヒドロキシメチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（３５ｍｇ）をＤＣＭ（６ｍｇ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍｇ）を室温で加えた。溶液を室温で２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で２５％Ｂから５５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を４１％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して［４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］メタノール（２０ｍｇ）を無色油状物として得た。
【０２０６】
４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−２−（ヒドロキシメチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
２５ｍＬ丸底フラスコに［４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］メタノール（２０ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１５．３１ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ、１当量）を室温で加えた。混合物にＤＩＥＡ（１５．８９ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ、２当量）を室温で加えた。混合物を９０℃で２時間撹拌した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で３５％Ｂから７０％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を６５％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−２−（ヒドロキシメチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３０ｍｇ、９０．７１％）を無色油状物として得た。
【０２０７】
４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−２−（ヒドロキシメチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−２−（ヒドロキシメチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３０ｍｇ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で加えた。溶液を室温で２時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（３０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣで以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝規定せず、移動相Ｂ＝規定せず、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で２０％Ｂから４０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．２２分）で精製して、４−クロロ−５−［４−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノキシ］−２−（ヒドロキシメチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（８．７ｍｇ）を白色固体として得た。
【０２０８】
化合物１２８、１２５、１１４は、合成の最初のステップで２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノールの代わりに、２−トリフルオロメチルフェノール、４−フルオロ−２−トリフルオロメチルフェノール及び４−フルオロ−２−クロロフェノールをそれぞれ用いて、本実施例に記載の方法及びスキームにより調製した。
【０２０９】
実施例８  化合物１１２の合成
【０２１０】
【化２０】
2022500359.tif 000033
【０２１１】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２，４−ジクロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（８００ｍｇ、２．６３０ｍｍｏｌ、１当量）及び２−クロロ−４−フルオロフェノール（５７８．１６ｍｇ、３．９４５ｍｍｏｌ、１．５０当量）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶かした攪拌混合物に、Ｋ２ＣＯ３（７２６．９９ｍｇ、５．２６０ｍｍｏｌ、２．００当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、７０℃で０．５時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（３０／１から１０／１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１ｇ、９１．７８％）を黄色油状物として得た。
【０２１２】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−２−［［（４−メトキシフェニル）メチル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（７００ｍｇ、１．６９０ｍｍｏｌ、１当量）をＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶かした攪拌混合物に、１−（４−メトキシフェニル）メタンアミン（１１５９．０２ｍｇ、８．４４９ｍｍｏｌ、５．００当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、６０℃で１６時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８シリカゲル、移動相＝アセトニトリル水溶液、２０分間で６０％から９５％の勾配、検出器＝ＵＶ２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−２−［［（４−メトキシフェニル）メチル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（３５０ｍｇ、４０．２２％）を黄色固体として得た。
【０２１３】
４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−アミン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−２−［［（４−メトキシフェニル）メチル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（３５０ｍｇ、１当量）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＯＢＤカラム、５ｕｍ、１９×１５０ｍｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝２５ｍＬ／分、勾配＝１分間で２％Ｂから３２％Ｂ、２２０／２５４ｎｍ、Ｒｔ＝７．０８分）で分取ＨＰＬＣにより精製して４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−アミン（２６０ｍｇ）を黄色固体として得た。
【０２１４】
４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−２−［［（４−メトキシフェニル）メチル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５０ｍＬ丸底フラスコに４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−Ｎ−［（４−メトキシフェニル）メチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−アミン（２６０ｍｇ、０．６２７ｍｍｏｌ、１当量）、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１５６．１１ｍｇ、０．６２７ｍｍｏｌ、１．００当量）及びＤＩＥＡ（２４２．９９ｍｇ、１．８８０ｍｍｏｌ、３．００当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で２時間撹拌した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８シリカゲル、移動相＝アセトニトリル水溶液、２５分間で５０％から８５％の勾配、検出器＝ＵＶ２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−２−［［（４−メトキシフェニル）メチル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３５０ｍｇ、８９．００％）を黄色固体として得た。
【０２１５】
５−［２−アミノ−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−４−クロロ−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−２−［［（４−メトキシフェニル）メチル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２００  ｍｇ）をＴＦＡ（８ｍＬ、１０７．７０４  ｍｍｏｌ、３２８．２３当量）に溶かした攪拌溶液に。最終反応混合物に８０℃で２時間マイクロ波を照射した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で２５％Ｂから４０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．３５分）で分取ＨＰＬＣにより精製して、５−［２−アミノ−４−（２−クロロ−４−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−４−クロロ−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（５２．４ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
【０２１６】
化合物１１３、１１６、及び１０２は、合成の最初のステップで２−クロロ−４−フルオロフェノールの代わりに、２−クロロフェノール、４−フルオロ−２−トリフルオロメチルフェノール、２−トリフルオロフェノールをそれぞれ用いて、本実施例に記載の方法及びスキームにより調製した。
【０２１７】
実施例９  化合物１２９及び１３０の合成
【０２１８】
【化２１】
2022500359.tif 000034
【０２１９】
１−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］エタン−１−オン
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（６００ｍｇ、１．３４０ｍｍｏｌ、１当量）及びトリブチル（１−エトキシエテニル）スタンナン（９６７．８０ｇ、２．６８０ｍｍｏｌ、２．００当量）をトルエン（１０ｍＬ）に加えた混合物に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（７７．４１ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ、０．０５当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を１１０℃で４時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（１−エトキシエテニル）−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（７００ｍｇ、１０８．０６％）を黄色油状物として得た。得られた粗混合物を更なる精製を行わずに次のステップで直接使用した。
【０２２０】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（１−エトキシエテニル）−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１ｇ、２．０６８ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（３．３３ｍＬ、２９．２３９ｍｍｏｌ、２１．７０当量）を室温で加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物／残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で４３％Ｂから５５％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を５０％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して１−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］エタン−１−オン（７５０ｍｇ、１０２．０６％）を淡黄色固体として得た。
【０２２１】
５−［２−アセチル−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−４−クロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５０ｍＬ丸底フラスコに１−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］エタン−１−オン（７５０ｍｇ、２．１１１ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（５２５．８１ｍｇ、２．１１１ｍｍｏｌ、１．００当量）を室温で加えた。上記混合物にＤＩＥＡ（８１８．４７ｍｇ、６．３３３ｍｍｏｌ、３．００当量）を加えた。得られた混合物を１００℃で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で６０％Ｂから８５％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を８０％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して５−［２−アセチル−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−４−クロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２３０ｍｇ、１９．１８％）を淡黄色油状物として得た。
【０２２２】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−（１−ヒドロキシエチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５−［２−アセチル−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−４−クロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２３０ｍｇ、０．４０５ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）撹拌溶液に、ＮａＢＨ４（３０．６４ｍｇ、０．８１０ｍｍｏｌ、２．００当量）を窒素雰囲気下、０℃で少量ずつ加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１：１）で精製して４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−（１−ヒドロキシエチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１２０ｍｇ、５１．９９％）を淡黄色油状物として得た。
【０２２３】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシエチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン及び４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−（１−ヒドロキシエチル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１２０ｍｇ、０．２１１ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（２．００ｍＬ、１７．５４１ｍｍｏｌ、１２７．８９当量）を室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２５分間で４０％Ｂから８０％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を５５％Ｂで回収し、減圧下で濃縮した。粗生成物（５０ｍｇ）を以下の条件（カラム＝ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＩＥ、２×２５ｃｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝ヘキサン（０．１％ＦＡ）−ＨＰＬＣ、移動相Ｂ＝ＥｔＯＨ−ＨＰＬＣ、流量＝１６ｍＬ／分、勾配＝３３分間で３０Ｂから３０Ｂ、２２０／２５４  ｎｍ、ＲＴ１＝２６．２１９、ＲＴ２＝２９．５８９）でＣｈｉｒａｌ分取ＨＰＬＣにより精製した。この方法により２つの異性体同士が分離されたが、絶対配向は決定されなかった。４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−［（１Ｓ）−１−ヒドロキシエチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オンとして指定される化合物（２７．１ｍｇ）を２９．５８９分に灰白色固体として得た。４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オンとして指定される化合物（２２．６ｍｇ）を２６．２１９分に灰白色固体として得た。
【０２２４】
化合物１１９は、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［４−フルオロ−２−クロロフェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレートを出発物質として使用し、本実施例に記載される方法及びスキームにより調製した。
【０２２５】
化合物１２２及び１２３は、ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレートを出発物質として使用し、本実施例に記載される方法及びスキームにより調製した。この場合もやはり、これらの分離された異性体の絶対配向は決定されず、（Ｓ）または（Ｒ）の指定は任意である。
【０２２６】
実施例１０  化合物１１５の合成
【０２２７】
【化２２】
2022500359.tif 000035
【０２２８】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２，４−ジクロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２ｇ、６．５８ｍｍｏｌ、１当量）及び  ２−（トリフルオロメチル）フェノール（１．６ｇ、９．８６ｍｍｏｌ、１．５当量）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＢＵ（２．０ｇ、１３．１５ｍｍｏｌ、２当量）を室温で加えた。溶液を室温で４時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で精製してｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（７００ｍｇ，２４．７７％）を無色油状物として得た。
【０２２９】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（［２−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］エチル］アミノ）−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．１６３ｍｍｏｌ、１当量）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に、（２−アミノエトキシ）（ｔｅｒｔ−ブチル）ジメチルシラン（１０１９．８９ｍｇ、５．８１６ｍｍｏｌ、５．００当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を５０℃で１６時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝３／１）により精製してｔｅｒｔ−ブチル  ２−（［２−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］エチル］アミノ）−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４４０ｍｇ、６６．５１％）を淡黄色油状物として得た。
【０２３０】
２−（［４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］アミノ）エタン−１−オール
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（［２−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］エチル］アミノ）−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４４０ｍｇ、０．７７４ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（３ｍＬ、４０．３８９ｍｍｏｌ、５２．２０当量）を室温で加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８シリカゲル、移動相＝ＡＣＮ水溶液、１５分間で４０％から６０％の勾配、検出器＝ＵＶ２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して２−（［４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］アミノ）エタン−１−オール（２２０ｍｇ）を淡黄色油状物として得た。
【０２３１】
４−クロロ−５−［２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５０ｍＬ丸底フラスコに２−（［４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］アミノ）エタン−１−オール（２２０ｍｇ、０．６２１ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１５４．６６ｍｇ、０．６２１ｍｍｏｌ、１．００当量）を室温で加えた。上記混合物にＤＩＥＡ（２４０．７４ｍｇ、１．８６３ｍｍｏｌ、３．００当量）を加えた。得られた混合物を１００℃で２時間撹拌した。反応をＬＣＭＳによって監視した。混合物を室温まで冷却させた。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝ＡＣＮ、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で４５％Ｂから６０％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を５５％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して４−クロロ−５−［２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２１０ｍｇ、５９．６６％）を黄色固体として得た。
【０２３２】
４−クロロ−５−［２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２００ｍｇ、０．３５３ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝規定せず、移動相Ｂ＝規定せず、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で２５％Ｂから５０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．６７分）で分取ＨＰＬＣにより精製して、４−クロロ−５−［２−［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１０６．３ｍｇ）を白色固体として得た。
【０２３３】
実施例１１  化合物１３８及び１３９の合成
【０２３４】
【化２３】
2022500359.tif 000036
【０２３５】
７−ベンジル−２−クロロ−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノール（１４６９．３２  ｍｇ、８．１５８ｍｍｏｌ、１．２０当量）及び７−ベンジル−２，４−ジクロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（２０００ｍｇ、６．７９９ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１８７９．２０ｍｇ、１３．５９７ｍｍｏｌ、２当量）を室温で加えた。溶液を７０℃で０．５時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＴＦＡ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で７０％Ｂから９５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を９５％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して７−ベンジル−２−クロロ−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（２３３１ｍｇ、７８．３１％）を灰白色固体として得た。
【０２３６】
７−ベンジル−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−オン
７−ベンジル−２−クロロ−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（２ｇ、４．５６８ｍｍｏｌ、１当量）をＨＡｃ（１０ｍＬ、１７４．５１５ｍｍｏｌ、３８．２０当量）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ、５５．５０８ｍｍｏｌ、１２．１５当量）に溶かした溶液を、Ｎ２雰囲気下、１４０℃で１０時間攪拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１／１）で精製して７−ベンジル−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−オン（５３０ｍｇ，２７．６７％）を淡黄色固体として得た。
【０２３７】
４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−オン
７−ベンジル−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−オン（５３０ｍｇ、１．２６４ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ、２４６．９８９ｍｍｏｌ、１９５．４４当量）溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２６８．９８ｍｇ、２．５２８ｍｍｏｌ、２当量）を窒素雰囲気下で加えた。混合物を、水素バルーンを用いて水素雰囲気下、室温で４時間水素化し、セライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮した。４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−オン（４３０ｍｇ、１０３．３４％）を淡黄色固体として得た。
【０２３８】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−オキソ−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−オン（４３０ｍｇ、１．３０６ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３５７．８４ｍｇ、１．４３７ｍｍｏｌ、１．１当量））をＤＩＥＡ（３３７．５８ｍｇ、２．６１２ｍｍｏｌ、２．００当量）に加えた混合物を、Ｎ２雰囲気下、１００℃で２時間撹拌した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝１／１）で精製して４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−オキソ−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２１０ｍｇ、２９．６７％）を淡黄色固体として得た。
【０２３９】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１−メチル−２−オキソ−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン及び４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−メトキシ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−オキソ−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（９０ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ、１当量）及びＮａＨＣＯ３（２７．９０ｍｇ、０．３３２  ｍｍｏｌ、２当量）のＤＭＦ（１０ｍＬ、１２９．２１８ｍｍｏｌ、７７８．０２当量）溶液に、ＣＨ３Ｉ（４７．１５ｍｇ、０．３３２ｍｍｏｌ、２．００当量）を窒素雰囲気下、０℃で滴下して加えた。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥＡ＝０／１）により精製して４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１−メチル−２−オキソ−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６０ｍｇ、６４．９９％）及び４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−メトキシ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１５ｍｇ）を淡黄色固体として得た。
【０２４０】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１−メチル−２−オキソ−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１−メチル−２−オキソ−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６０ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ、１５７．３００ｍｍｏｌ、１４５７．４１当量）溶液に、２５℃でＴＦＡ（１２３．０７ｍｇ、１．０７９ｍｍｏｌ、１０当量）を加えた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（１００ｍｇ）を分取ＨＰＬＣにより以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＯＢＤ  カラム３０×１５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝７分間で２０％Ｂから４０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝６．６３分）で精製して、４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−１−メチル−２−オキソ−１Ｈ，２Ｈ，５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２９．３ｍｇ、５７．５４％）を白色固体として得た。
【０２４１】
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−メトキシ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−メトキシ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１５ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（５ｍＬ、７８．６５０ｍｍｏｌ、２９１４．８３当量）溶液に、ＴＦＡ（３０．７７ｍｇ、０．２７０ｍｍｏｌ、１０当量）を  ２５℃で加えた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（２０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣにより以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＯＢＤ  カラム３０×１５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝７分間で２０％Ｂから４０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝６．６３分）で精製して、４−クロロ−５−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−２−メトキシ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（７．５ｍｇ、５８．９１％）を白色固体として得た。
【０２４２】
実施例１２  化合物１１０の合成
【０２４３】
【化２４】
2022500359.tif 000037
【０２４４】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２，４−ジクロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２ｇ、６．５８ｍｍｏｌ、１当量）及び  ２−（トリフルオロメチル）フェノール（１．６ｇ、９．８６ｍｍｏｌ、１．５当量）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＢＵ（２．０ｇ、１３．１５ｍｍｏｌ、２当量）を室温で加えた。溶液を室温で４時間撹拌した。混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０：１）で精製してｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（７００ｍｇ、２４．７７％）を無色油状物として得た。
【０２４５】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１ｇ、２．３２７ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ、４９３．９７８ｍｍｏｌ、２１２．３２当量）溶液にＮａＯＭｅ（０．２５ｇ、０．００５ｍｍｏｌ、２当量）を２５℃で加えた。混合物を２５℃で４時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥＡ（１０／１から１／１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１００ｍｇ、１０．１０％）を淡黄色固体として得た。
【０２４６】
２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（２６８．０３ｍｇ、２．３５１ｍｍｏｌ、１０当量）を２５℃で加えた。溶液を２５℃で４時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（１５０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣにより以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＯＢＤカラム３０×１５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝７分間で２０％Ｂから４０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝６．６３分）で精製して、２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（８０ｍｇ、１０４．６２％）を淡黄色固体として得た。
【０２４７】
４−クロロ−５−［２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（８０ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６１．２６ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ、１当量）のＤＩＥＡ（６３．５７ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ、２．００当量）溶液を窒素雰囲気下、１００℃で２時間攪拌した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥＡ（５／１から１／１）で溶出して４−クロロ−５−［２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１２０ｍｇ、９０．７１％）を淡黄色固体として得た。
【０２４８】
４−クロロ−５−［２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１２０ｍｇ、０．２２３ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（５ｍＬ、７８．６５０ｍｍｏｌ、３５２．５６当量）溶液に、ＴＦＡ（２５４．３６ｍｇ、２．２３１ｍｍｏｌ、１０．００当量）を２５℃で加えた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（１５０ｍｇ）を分取ＨＰＬＣにより以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＯＢＤ  カラム３０×１５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝７分間で２０％Ｂから４０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝６．６３分）で精製して、４−クロロ−５−［２−メトキシ−４−［２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２４．１ｍｇ、２３．８１％）を白色固体として得た。
【０２４９】
実施例１３  化合物１０８の合成
【０２５０】
【化２５】
2022500359.tif 000038
【０２５１】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（３−ブロモ−２−クロロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ、６Ｈ、７Ｈ、８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．８５４ｍｍｏｌ、１当量）及び  ３−ブロモ−２−クロロフェノール（４６１．４６ｍｇ、２．２２４ｍｍｏｌ、１．２０当量）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５１２．３８ｍｇ、３．７０７ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。得られた混合物を７０℃で１時間撹拌した。混合物を以下の条件（球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５５分間で２０％Ｂから６０％Ｂ、２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を４０％Ｂで回収し、減圧下で濃縮した。これにより、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（３−ブロモ−２−クロロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（３００ｍｇ、３６．７２％）を灰白色固体として得た。
【０２５２】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−３−シアノフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（３−ブロモ−２−クロロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４５０ｍｇ、１．０２１ｍｍｏｌ、１当量）及び亜鉛ジカルボニトリル（１４３．８７ｍｇ、１．２２５ｍｍｏｌ、１．２０当量）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１１７．９９ｍｇ、０．１０２ｍｍｏｌ、０．１当量）を加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、１２０℃で２時間撹拌した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１８０ｇ、移動相Ａ＝水（５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝５５分間で１０％Ｂから６０％Ｂの勾配、＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を４０％Ｂで回収し、減圧下で濃縮した。これにより、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−３−シアノフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２８０ｍｇ、７０．８９％）を淡黄色固体として得た。
【０２５３】
２−クロロ−３−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］ベンゾニトリル
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−３−シアノフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．２５９ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶かした攪拌溶液にＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。得られた混合物を空気雰囲気下、室温で２時間攪拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ７に塩基性化した。混合物を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１８０ｇ、移動相Ａ＝水（５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝３０分間で３０％Ｂから６０％Ｂの勾配、２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を４５％Ｂで回収し、減圧下で濃縮した。これにより２−クロロ−３−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］ベンゾニトリル（６０ｍｇ、８０．９５％）を淡黄色油状物として得た。
【０２５４】
２−クロロ−３−（［７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ）ベンゾニトリル
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−クロロ−３−シアノフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（６０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３８．６３ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ、１．００当量）をＤＩＥＡ（４０．０９ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ、２当量）に溶かした攪拌溶液。得られた混合物を空気雰囲気下、１００℃で何時間も撹拌した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１：１）で精製して２−クロロ−３−（［７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ）ベンゾニトリル（５０ｍｇ、６４．５６％）を淡黄色固体として得た。
【０２５５】
２−クロロ−３−［［７−（５−クロロ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ］ベンゾニトリル
２−クロロ−３−（［７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ）ベンゾニトリル（５０ｍｇ、０．１００ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和ＮＨ４ＣＯ３水溶液でｐＨ７に塩基性化した。粗生成物を以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で２０％Ｂから４２％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．５８分）で分取ＨＰＬＣにより精製して、２−クロロ−３−［［７−（５−クロロ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ］ベンゾニトリル（１４．５ｍｇ、３４．８８％）を灰白色固体として得た。
【０２５６】
実施例１４  化合物１１１の合成
【０２５７】
【化２６】
2022500359.tif 000039
【０２５８】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［３−ブロモ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１８０ｍｇ、０．６６７ｍｍｏｌ、１当量）及び３−ブロモ−２−（トリフルオロメチル）フェノール（２４１．２５ｍｇ、１．００１ｍｍｏｌ、１．５０当量）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に加えた攪拌混合物に、Ｃｓ２ＣＯ３（４３４．８６ｍｇ、１．３３５ｍｍｏｌ、２．００当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、７０℃で０．５時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８シリカゲル、移動相＝アセトニトリル水溶液、３０分間で４０％から８５％の勾配、検出器＝ＵＶ２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［３−ブロモ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１５０ｍｇ、４７．３９％）を黄色油状物として得た。
【０２５９】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［３−シアノ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［３−ブロモ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１５０ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ、１当量）及びＺｎ（ＣＮ）２（１１１．４３ｍｇ、０．９４９ｍｍｏｌ、３．００当量）をＤＭＦ（８ｍＬ）に加えた攪拌混合物に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３６．５５ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、０．１当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。最終反応混合物に１５０℃で３時間マイクロ波を照射した。反応をＬＣＭＳにより監視した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８シリカゲル、移動相＝アセトニトリル水溶液、３０分間で４０％から９５％の勾配、検出器＝ＵＶ２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［３−シアノ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（７０ｍｇ、５２．６５％）を黄色油状物として得た。
【０２６０】
３−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［３−シアノ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（７０ｍｇ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８シリカゲル、移動相＝アセトニトリル水溶液、２０分間で３０％から６０％の勾配、検出器＝ＵＶ２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製して３−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（４０ｍｇ）を黄色油状物として得た。
【０２６１】
３−（［７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
２５ｍＬ丸底フラスコに３−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（４０ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ、１当量）、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２、３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６２．２２ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ、２．００当量）及びＤＩＥＡ（４８．４２ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ、３．００ｍｍｏｌ、３．０００当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で１６時間撹拌した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝５／１）で精製して３−（［７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（５０ｍｇ、７５．１２％）を黄色油状物として得た。
【０２６２】
３−［［７−（５−クロロ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル
３−（［７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ）−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（５０ｍｇ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で２５％Ｂから４５％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．０７分）で分取ＨＰＬＣにより精製して、３−［［７−（５−クロロ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］オキシ］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾニトリル（１０．８ｍｇ）を白色固体として得た。
【０２６３】
実施例１５  化合物１２６及び１２６ａの合成
【０２６４】
【化２７】
2022500359.tif 000040
【０２６５】
Ｎ−［（１Ｅ）−１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン］−４−メチルベンゼン−１−スルホノヒドラジド
１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エタン−１−オン（２ｇ、９．７０２ｍｍｏｌ、１当量）をＥｔＯＨ（４０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、４−メチルベンゼン−１−スルホノヒドラジド（１．８１ｇ、９．７１９ｍｍｏｌ、１．００当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で６時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を真空下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＡｃＯＨ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で４５％Ｂから７０％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を６０％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してＮ−［（１Ｅ）−１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン］−４−メチルベンゼン−１−スルホノヒドラジド（２．５ｇ、６８．８３％）を白色固体として得た。
【０２６６】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ、６Ｈ、７Ｈ、８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（７５０ｍｇ、２．７８１ｍｍｏｌ、１当量）及び  Ｎ−［（１Ｅ）−１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチリデン］−４−メチルベンゼン−１−スルホノヒドラジド（２０８１．８０  ｍｇ、５．５６１ｍｍｏｌ、２．００当量）を１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）に加えた攪拌混合物に、Ｐｄ（アセトニトリル）２Ｃｌ２（７２．１４ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ、０．１０当量）、Ｄｐｐｆ（３０７．１８  ｍｇ、０．５５６ｍｍｏｌ、０．２当量）及びｔ−ＢｕＯＬｉ（４８９．７１ｍｇ、６．１１７ｍｍｏｌ、２．２０当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。最終反応混合物に１００℃で２時間マイクロ波を照射した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を濾過し、濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＡｃＯＨ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、３０分間で５０％Ｂから９０％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を８５％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（８００ｍｇ、６７．９５％）を褐色油状物として得た。
【０２６７】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
１００ｍＬ丸底フラスコ中で、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１５０ｍｇ）のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）溶液に、窒素雰囲気下でＰｄ／Ｃ（１０％、３０ｍｇ）を加えた。混合物を、水素バルーンを用いて水素雰囲気下、室温で４時間水素化し、セライトパッドを通して濾過し、減圧下で濃縮した。これにより、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１５０ｍｇ）を黄色油状物として得た。
【０２６８】
４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１５０ｍｇ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×３０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１２０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＡｃＯＨ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、１５分間で４０％Ｂから５８％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を５３％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（１００ｍｇ）を黄色油状物として得た。
【０２６９】
４−クロロ−５−（４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５０ｍＬ丸底フラスコに４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（１００ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ、１当量）、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（９１．８８ｍｇ、０．３６９ｍｍｏｌ、１．２０当量）及びＤＩＥＡ（１１９．１９ｍｇ、０．９２２ｍｍｏｌ、３．００当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で２時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１２０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＡｃＯＨ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、１５分間で４０％Ｂから６０％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を５３％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して４−クロロ−５−（４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１２０ｍｇ、７２．５７％）を黄色油状物として得た。
【０２７０】
４−クロロ−５−［４−［（１Ｓ）−１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン及び４−クロロ−５−［４−［（１Ｒ）−１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−（４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２００ｍｇ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝ＸＢｒｉｄｇｅ分取フェニルＯＢＤカラム  １９×１５０ｍｍ  ５ｕｍ  １３ｎｍ、移動相Ａ：移動相Ｂ：流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で２０％Ｂから３７％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．９７分）でキラル分取ＨＰＬＣにより精製した。この方法により２つの異性体同士が分離されたが、絶対配向は決定されなかった。４−クロロ−５−［４−［（１Ｓ）−１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オンとして指定される化合物（１１．８ｍｇ）を１．８１９分に灰白色固体として得た。４−クロロ−５−［４−［（１Ｒ）−１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オンとして指定される化合物（１３．５ｍｇ）を、２．４７０分に白色固体として得た。
【０２７１】
実施例１６  化合物１３３の合成
【０２７２】
【化２８】
2022500359.tif 000041
【０２７３】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［メチル［（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチルピペリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
２５ｍＬ丸底フラスコに（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−Ｎ，４−ジメチルピペリジン−３−アミン（２．４３ｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、１．５０当量）及びｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２ｇ、０．００７ｍｍｏｌ、１当量）を室温で加えた。混合物にＤＩＥＡ（１．９２ｇ、０．０１５ｍｍｏｌ、２．００当量）を室温で加えた。混合物を１００℃で２時間撹拌した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１：１）で精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［メチル［（３Ｒ，４Ｒ）−４−メチルピペリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（６７０ｍｇ、２５．００％）を灰白色固体として得た。
【０２７４】
（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−Ｎ，４−ジメチル−Ｎ−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］ピペリジン−３−アミン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチルピペリジン−３−イル］（メチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４１３ｍｇ、０．９１４ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ、０．０２６ｍｍｏｌ、６．００当量）を０℃で滴下して加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。溶液を減圧下で濃縮した。粗生成物（３６２ｍｇ）を以下の条件（カラム＝ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ＯＢＤ  カラム  ５ｕｍ、１９×１５０ｍｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝２５分間で３０％Ｂから８０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝２１．６５分）で分取ＨＰＬＣにより精製して、（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−Ｎ，４−ジメチル−Ｎ−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］ピペリジン−３−アミン（２５０ｍｇ、７７．７７％）で赤色油状物として得た。
【０２７５】
５−（４−［［（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチルピペリジン−３−イル］（メチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−クロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
２５ｍＬ丸底フラスコに（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−Ｎ，４−ジメチル−Ｎ−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］ピペリジン−３−アミン（２６３ｍｇ、０．７４８ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１８６．３８ｍｇ、０．７４８ｍｍｏｌ、１．００当量）を室温で加えた。混合物にＤＩＥＡ（１９３．４１ｍｇ、１．２６１ｍｍｏｌ、２当量）を室温で加えた。混合物を１００℃で２時間撹拌した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、３０分間で４５％Ｂから９５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を８５％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して５−（４−［［（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチルピペリジン−３−イル］（メチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−クロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２４５ｍｇ、５８．０４％）を灰白色固体として得た。
【０２７６】
５−（４−［［（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチルピペリジン−３−イル］（メチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−クロロ−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５−（４−［［（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチルピペリジン−３−イル］（メチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−クロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（８８ｍｇ、１当量）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、トリフルオロ酢酸（３ｍＬ、０．０２６ｍｍｏｌ、６．００当量）を０℃で滴下して加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。溶液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＴＦＡ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、３０分間で３３％Ｂから９５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を９０％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して５−（４−［［（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−４−メチルピペリジン−３−イル］（メチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−４−クロロ−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３３．５ｍｇ、４４．７４％）を灰白色固体として得た。
【０２７７】
化合物１３３ａは、（３Ｒ，４Ｒ）−１−ベンジル−Ｎ，４−ジメチルピペリジン−３−アミンの代わりに（３Ｓ，４Ｓ）−１−ベンジル−Ｎ、４−ジメチルピペリジン−３−アミンを用いて本実施例に記載の方法及びスキームにより調製した。
【０２７８】
実施例１７  化合物１３６の合成
【０２７９】
【化２９】
2022500359.tif 000042
【０２８０】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）アニリン（６．６４ｇ、３７．０７４ｍｍｏｌ、２当量）、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５ｇ、１８．５３７ｍｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ（ＡｃＯ）２（０．８３ｇ、３．７０７ｍｍｏｌ、０．２当量）、キサントホス（４．２９ｇ、７．４１５ｍｍｏｌ、０．４当量）及びＣｓ２ＣＯ３（１２．０８ｇ、３７．０７４ｍｍｏｌ、２当量）を１，４−ジオキサン（８０ｍＬ）に加えた混合物を１１０℃で１６時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して粗生成物を得て、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ：ＥＡ（２０：１から１：２）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５．６ｇ、７３．２６％）を白色固体として得た。
【０２８１】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−メトキシ−２−オキソエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（３ｇ、７．２７５ｍｍｏｌ、１当量）及び２−ブロモ酢酸メチル（２．２３ｍｇ、１４．５７８ｍｍｏｌ、２．００当量）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に加えた攪拌混合物にＣｓ２ＣＯ３（４．７４ｇ、１４．５４８ｍｍｏｌ、２．００当量）を窒素雰囲気下、室温で少量ずつ加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×２００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＴＦＡ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、３０分間で５５％Ｂから８５％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を７９％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−メトキシ−２−オキソエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１４．１９％）を黄色固体として得た。
【０２８２】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−メトキシ−２−オキソエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．０３２ｍｍｏｌ、１当量）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＬｉＡｌＨ４（７８．３４ｍｇ、２．０６４ｍｍｏｌ、２．００当量）を窒素雰囲気下、−３０℃で少量ずつ加えた。反応混合物を室温で１６時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。水（１ｍＬ）を−３０℃で加えて反応を停止した。沈殿した固体を濾過により回収し、ＭｅＯＨ（３×３０ｍＬ）で洗浄した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／１）で精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１００ｍｇ、２１．２３％）を黄色油状物として得た。
【０２８３】
４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１５０ｍｇ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×３０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１２０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、１５分間で４０％Ｂから５８％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を５３％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エチル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（１００ｍｇ）を黄色油状物として得た。
【０２８４】
４−クロロ−５−（４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５０ｍＬ丸底フラスコに２−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］）アミノ］エタン−１−オール（４０ｍｇ、０．１１２ｍｍｏｌ、１当量）、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（５５．９２ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ、２．００当量）及びＤＩＥＡ（４３．５３ｍｇ、０．３３７ｍｍｏｌ、３．００当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で２時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１２０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、１５分間で４０％Ｂから６０％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を５５％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して４−クロロ−５−（４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（５０ｍｇ、７８．２８％）を黄色油状物として得た。
【０２８５】
４−クロロ−５−（４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−（４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（５０ｍｇ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝規定せず、移動相Ｂ＝規定せず、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で３０％Ｂから４５％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．６分）で分取ＨＰＬＣにより精製して、４−クロロ−５−（４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（６．２ｍｇ）を白色固体として得た。
【０２８６】
実施例１８  化合物１３２の合成
【０２８７】
【化３０】
2022500359.tif 000043
【０２８８】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔ−ＢｕＯＮａ（２２６．９７ｍｇ、２．３６２ｍｍｏｌ、２．００当量）をＤＭＳＯ（２０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、窒素雰囲気下、４０℃でＭｅ３ＳｉＩ（４７２．５７ｍｇ、２．３６２ｍｍｏｌ、２．００当量）を少量ずつ加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、４０℃で０．５時間撹拌した。次いで、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］エテニル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．１８１ｍｍｏｌ、１当量）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）溶液を窒素雰囲気下、室温で滴下した。得られた混合物を窒素雰囲気下、室温で１時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２５分間で５５％Ｂから８０％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を７３％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２４０ｍｇ、４６．４６％）を黄色油状物として得た。
【０２８９】
４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２４０ｍｇ、０．５４９ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ、１３．４６３ｍｍｏｌ、２４．５４当量）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１２０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＡｃＯＨ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、２０分間で３３％Ｂから４５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を４０％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（１５０ｍｇ、８１．０５％）を黄色油状物として得た。
【０２９０】
４−クロロ−５−（４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
５０ｍＬ丸底フラスコに４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（１５０ｍｇ、０．４４５ｍｍｏｌ、１当量）、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−１，２，３，６−テトラヒドロピリダジン−３−オン（１３４．００ｍｇ、０．５３４ｍｍｏｌ、１．２０当量）及びＤＩＥＡ（１７２．４２ｍｇ、１．３３４ｍｍｏｌ、３．００当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で２時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝５％から５％Ｂを１０分間、１５分間で４０％Ｂから６０％Ｂの勾配、検出器＝２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を５４％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して４−クロロ−５−（４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２００ｍｇ、８１．７８％）を黄色油状物として得た。
【０２９１】
４−クロロ−５−（４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−（４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（２００ｍｇ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を室温で滴下して加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝規定せず、移動相Ｂ＝規定せず、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で３０％Ｂから５５％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．２３２分）で分取ＨＰＬＣにより精製して、４−クロロ−５−（４−［１−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］シクロプロピル］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（３９．２ｍｇ）を灰白色固体として固体として得た。
【０２９２】
実施例１９  化合物１０９の合成
【０２９３】
【化３１】
2022500359.tif 000044
【０２９４】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−ブロモ−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．８５４ｍｍｏｌ、１当量）及び  ２−ブロモ−３−フルオロフェノール（４２４．８７ｍｇ、２．２２４ｍｍｏｌ、１．２０当量）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５１２．３８ｍｇ、３．７０７ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。得られた混合物を７０℃で０．５時間撹拌した。混合物を室温まで冷却させた。反応を室温の水で停止させた。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５：１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−ブロモ−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、６３．５８％）を白色固体として得た。
【０２９５】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−エテニル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−ブロモ−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．１７８ｍｍｏｌ、１当量）及びペンタメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（３３４．７２ｍｇ、２．３５７ｍｍｏｌ、２．００当量）をＨ２Ｏ（２ｍＬ）及び１，４−ジオキサン（１６ｍＬ）に溶かした溶液に、Ｋ２ＣＯ３（３２５．７５ｍｇ、２．３５７ｍｍｏｌ、２当量）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（６８．０９ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加えた。窒素雰囲気下、９０℃で一晩攪拌した後、得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（５：１）で溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−エテニル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２５０ｍｇ、５７．１２％）を黄色油状物として得た。
【０２９６】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−エテニル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２５０ｍｇ、０．６７３ｍｍｏｌ、１当量）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ、０．９４０ｍｍｏｌ、１．４０当量）を加えた。得られた混合物を水素雰囲気下、室温で２時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、濾過ケーキをＭｅＯＨ（２×１０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。これにより、ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２１０ｍｇ、０．０８％）を黒色油状物として得た。
【０２９７】
４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２１０ｍｇ、０．５６２ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。得られた混合物を空気雰囲気下、室温で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。混合物を、以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１８０ｇ、移動相Ａ＝水（５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝４０分間で２５％Ｂから６０％Ｂ、２５４ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を４０％Ｂで回収し、減圧下で濃縮した。これにより、４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（１２０ｍｇ、７８．０７％）を淡黄色油状物として得た。
【０２９８】
４−クロロ−５−［４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン（１２０ｍｇ、０．４３９ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１０９．３７ｍｇ、０．４３９ｍｍｏｌ、１．００当量）をＤＩＥＡ（１１３．４９ｍｇ、０．８７８ｍｍｏｌ、２当量）に溶かした攪拌溶液に。得られた混合物を空気雰囲気下、１００℃で２時間撹拌した。残渣を分取ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１：１）で精製して４−クロロ−５−［４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１００ｍｇ、４６．８７％）を淡黄色固体として得た。
【０２９９】
４−クロロ−５−［４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−［４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１００ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和ＮＨ４ＨＣＯ３水溶液でｐＨ７に塩基性化した。粗生成物を以下の条件（カラム＝ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８カラム３０×１５０ｍｍ  ５ｕｍ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で３０％Ｂから５０％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．２７分）で分取ＨＰＬＣにより精製して４−クロロ−５−［４−（２−エチル−３−フルオロフェノキシ）−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（４１．６ｍｇ、５０．３１％）を白色固体として得た。
【０３００】
実施例２０  化合物１２７の合成
【０３０１】
【化３２】
2022500359.tif 000045
【０３０２】
メチル  ３−（メチルアミノ）ピリジン−４−カルボキシレート
３−（メチルアミノ）ピリジン−４−カルボン酸（１１ｇ、７２．２９６ｍｍｏｌ、１当量）のＭｅＯＨ（５００ｍＬ、１２３４９．４５５ｍｍｏｌ、１７０．８２当量）溶液に、ＳＯＣｌ２（４３．０１ｇ、３６１．４７８ｍｍｏｌ、５当量）を０℃で滴下して加えた。得られた混合物を７０℃で３０時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×３０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮してメチル  ３−（メチルアミノ）ピリジン−４−カルボキシレート（９ｇ、粗生成物）を黄色固体として得た。
【０３０３】
メチル  ３−（Ｎ−メチルアセトアミド）ピリジン−４−カルボキシレート
メチル  ３−（メチルアミノ）ピリジン−４−カルボキシレート（９ｇ、５４．１５８ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ピリジン（２１．４２ｇ、２７０．７９１ｍｍｏｌ、５当量）及び塩化アセチル（６．３８ｇ、８１．２３７ｍｍｏｌ、１．５当量）を室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８カラム  ３３０ｇ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝２５分間で１０％Ｂから３０％Ｂの勾配、２５４／２２０ｎｍ）で逆相フラッシュにより精製してメチル  ３−（Ｎ−メチルアセトアミド）ピリジン−４−カルボキシレート（８ｇ、７０．９４％）を褐色液体として得た。
【０３０４】
４−ヒドロキシ−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン
メチル  ３−（Ｎ−メチルアセトアミド）ピリジン−４−カルボキシレート（６ｇ、２８．８１６ｍｍｏｌ、１当量）を脱水１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、窒素雰囲気下、室温でｔ−ＢｕＯＫ（６．４７ｇ、５７．６３２ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、９０℃で１時間撹拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）で溶出して４−ヒドロキシ−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（４．５ｇ、８８．６４％）を橙色固体として得た。
【０３０５】
４−クロロ−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン
４−ヒドロキシ−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（４．５ｇ、２５．５４３ｍｍｏｌ、１当量）を脱水１，４−ジオキサン（１００ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＰＯＣｌ３（３．９２ｇ、２５．５４３ｍｍｏｌｍｍｏｌ、１当量）を加えた。得られた混合物を９０℃で１６時間攪拌した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）で溶出して４−クロロ−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（２ｇ、４０．２３％）を赤色固体として得た。
【０３０６】
４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン
４−クロロ−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（０．８ｇ、４．１１１ｍｍｏｌ、１当量）を脱水１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（２．６８ｇ、８．２２１ｍｍｏｌ、２当量）、４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１．４７ｇ、８．２２１ｍｍｏｌ、２．００当量）、キサントホス（０．９５ｇ、１．６４４ｍｍｏｌ、０．４当量）、及びＰｄ（ＡｃＯ）２（０．１８ｇ、０．８２２ｍｍｏｌ、０．２当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。最終反応混合物に１１０℃で４時間マイクロ波を照射した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１×１００ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８カラム  ３３０ｇ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＡｃＯＨ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝５０ｍＬ／分、勾配＝４０分間で２０％Ｂから４０％Ｂの勾配、２５４／２２０ｎｍ）で逆相フラッシュにより精製して４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（１．１ｇ、７９．３４％）を灰白色固体として得た。
【０３０７】
４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン
４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２−ジヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（１ｇ、２．９６５ｍｍｏｌ、１当量）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、窒素雰囲気下、室温でＰｔＯ２（６７．３３ｍｇ、０．２９６ｍｍｏｌ、０．１０当量）を加えた。得られた混合物を水素雰囲気下、室温で１６時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を濾過し、濾過ケーキをＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝Ｃ１８カラム  ３３０ｇ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＡｃＯＨ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝４０分間で５％Ｂから２０％Ｂの勾配、２５４／２２０ｎｍ）で逆相フラッシュにより精製した。所望の生成物を含む画分を１６％で回収し、減圧下で濃縮して４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（７５０ｍｇ、７４．１１％）を灰白色固体として得た。
【０３０８】
７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン
４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（７５０ｍｇ、２．１９７ｍｍｏｌ、１当量）及び４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１．０９ｇ、４．３９５ｍｍｏｌ、２当量）の攪拌混合物に、ＤＩＰＥＡ（５６８．００  ｍｇ、４．３９５ｍｍｏｌ、２ｉｖ）を室温で加えた。得られた混合物を１００℃で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。次いで残渣をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解した。溶液を以下の条件（カラム＝Ｃ１８カラム  ３３０ｇ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＦＡ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝４０分間で３０％Ｂから５０％Ｂの勾配、２５４／２２０ｎｍ）で逆相フラッシュにより精製した。所望の生成物を含む画分を４４％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（１ｇ、８２．１５％）を黄色油状物として得た。
【０３０９】
７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（メチル）アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン
７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（８００ｍｇ、１．４４４ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（０．９４ｇ、２．８８８ｍｍｏｌ、２当量）及びＭｅＩ（６１４．９６  ｍｇ、４．３３３ｍｍｏｌ、３当量）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を以下の条件（カラム＝Ｃ１８カラム  １２０ｇ、移動相Ａ＝水（１０ｍＭのＡｃＯＨ）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝４０分間で４０％Ｂから６０％Ｂの勾配、２５４／２２０ｎｍ）で逆相フラッシュにより精製した。所望の生成物を含む画分を４９％Ｂで回収し、減圧下で濃縮して７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（メチル）アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（８０ｍｇ、９．７５％）を黄色油状物として得た。
【０３１０】
７−（５−クロロ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル）−４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（メチル）アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン
７−［５−クロロ−１−（オキサン−２−イル）−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル］−４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（メチル）アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（８０ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（４．５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ、６．７３２ｍｍｏｌ、３１．０７当量）を室温で滴下して加えた。得られた混合物を室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。溶液は逆相フラッシュにより精製して７−（５−クロロ−６−オキソ−１，６−ジヒドロピリダジン−４−イル）−４−［［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェニル］（メチル）アミノ］−１−メチル−１，２，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−１，７−ナフチリジン−２−オン（４０ｍｇ、５８．６９％）を白色固体として得た。
【０３１１】
実施例２１  化合物１３５及び１３７の合成
【０３１２】
【化３３】
2022500359.tif 000046
【０３１３】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２，４−ジクロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５ｇ、１６．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）溶液に、４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノール（４．４４ｇ、２４．６６ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（３．４１ｇ、２４．６６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた混合物を７０℃で１時間攪拌した。室温まで冷却した後、濾過を行い、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、３３０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝８０ｍＬ／分、勾配＝１０分間の５％Ｂ、１０分間で３５％Ｂから４５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ／２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を４４％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（６．２ｇ、８５％）を白色固体として得た。
【０３１４】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−２−ビニル−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−クロロ−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）溶液に、２−エテニル−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（３４４ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）及びＨ２Ｏ（０．５ｍＬ、２７．７５ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（３０９ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）及び  Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１２９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。窒素雰囲気下、９５℃で２時間攪拌した後、得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣで精製し、石油エーテル中、１７％酢酸エチルで溶出してｔｅｒｔ−ブチル  ２−エテニル−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４９０ｍｇ、９９％）を淡黄色固体として得た。
【０３１５】
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−エテニル−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４００ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に、４−ヒドロキシ−４−メチルモルホリン−４−ニウム（３２３ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）及びＫ２ＯｓＯ４．２Ｈ２Ｏ（３４ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。更に１時間攪拌した後、得られた混合物を減圧下で濃縮し、残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１２０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝１０分間の５％Ｂ、１５分間で４５％Ｂから６５％Ｂ、検出器＝２５４ｎｍ及び２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を６４％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してｔｅｒｔ−ブチル  ２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２８０ｍｇ、６５％）を白色固体として得た。
【０３１６】
１−（４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，６，７，８−テトラヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル）エタン−１，２−ジオール
ｔｅｒｔ−ブチル  ２−（１，２−ジヒドロキセチル）−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２８０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、室温でＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。残渣をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮し、残渣をジクロロメタン中、８％メタノールで分取ＴＬＣにより精製して１−［４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−２−イル］エタン−１，２−ジオール（１８０ｍｇ、８２％）を褐色固体として得た。
【０３１７】
４−クロロ−５−（２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）ピリダジン−３（２Ｈ）−オン
２−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イルオキシ］ベンズアルデヒド（１８０ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）をＤＩＥＡ（０．５ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１７６ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた混合物を９０℃で１時間攪拌した。周囲温度まで冷却した後、得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣで精製し、ジクロロメタン中、８％メタノールで溶出して４−クロロ−５−（２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル）−２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）ピリダジン−３（２Ｈ）−オン（１４０ｍｇ、４３％）を褐色固体として得た。
【０３１８】
（Ｓ）−４−クロロ−５−（２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル）ピリダジン−３（２Ｈ）−オン及び（Ｒ）−４−クロロ−５−（２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル）ピリダジン−３（２Ｈ）−オン
４−クロロ−５−［２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル］−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１５０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）溶液にＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を以下の条件（カラム＝球状Ｃ１８、２０〜４０ｕｍ、１２０ｇ、移動相Ａ＝水（＋５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３）、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝１０分間の５％Ｂ、１５分間で４５％Ｂから６５％Ｂの勾配、検出器＝２５４ｎｍ及び２２０ｎｍ）で逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。所望の生成物を含む画分を６４％Ｂで回収し、減圧下で濃縮してラセミ生成物（１３０ｍｇ）を得て、これを以下の条件（カラム＝ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  ＯＢＤ  Ｃ１８  カラム３０×１５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝ヘキサン、移動相Ｂ＝ＥｔＯＨ、流量＝２０ｍＬ／分、勾配＝１０分間の３５％Ｂ、検出器＝２５４／２２０ｎｍ）で分取キラルＨＰＬＣにより分離した。この方法により２つの異性体同士が分離されたが、絶対配向は決定されなかった。所望の生成物を含む画分を回収し、減圧下で濃縮して次の生成物、すなわち、（Ｓ）−４−クロロ−５−（２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル）ピリダジン−３（２Ｈ）−オンとして指定される化合物（保持時間（４．９７分）（４９．５ｍｇ、３９％））を白色固体として、（Ｒ）−４−クロロ−５−（２−（１，２−ジヒドロキシエチル）−４−（４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）フェノキシ）−５，８−ジヒドロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７（６Ｈ）−イル）ピリダジン−３（２Ｈ）−オンとして指定される化合物（保持時間（８．０５分）（４５．７ｍｇ、３６％））を白色固体として得た。
【０３１９】
実施例２２  化合物１３１の合成
【０３２０】
【化３４】
2022500359.tif 000047
【０３２１】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−クロロ−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（５００ｍｇ、１．８５４ｍｍｏｌ、１当量）及び  ４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン（６０１．０３ｍｇ、３．７０７ｍｍｏｌ、２．０当量）を１，４−ジオキサン（５ｍＬ）に加えた攪拌混合物に、Ｐｄ（ＡｃＯ）２（８３．２４ｍｇ、０．３７１ｍｍｏｌ、０．２当量）及びＣｓ２ＣＯ３（１２０７．９５  ｍｇ、３．７０７ｍｍｏｌ、２．０当量）及びキサントホス（４２９．０４ｍｇ、０．７４１ｍｍｏｌ、０．４当量）を窒素雰囲気下、室温で加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、１１０℃で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を濾過し、濾過ケーキをＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で濃縮した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物を以下の条件（カラム＝Ｃ１８、１２０ｇ、移動相Ａ＝水／０．０５％  ＮＨ４ＨＣＯ３、移動相Ｂ＝ＡＣＮ、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝１５分間で４５％Ｂから６５％Ｂ、検出器＝２５４ｎｍ及び２２０ｎｍ、所望の生成物を６４％Ｂで回収）で逆相フラッシュにより精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（６００ｍｇ、８１．８６％）を白色固体として得た。
【０３２２】
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［メチル［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（１．３２ｇ、３．３３９ｍｍｏｌ、１当量）及びＣｓ２ＣＯ３（２．１８ｇ、６．６７７ｍｍｏｌ、２．０当量）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に加えた攪拌混合物に、ＣＨ３Ｉ（０．９５ｇ、６．６７７ｍｍｏｌ、２．０当量）を窒素雰囲気下、０℃で加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、室温で２時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。粗生成物を以下の条件（カラム＝Ｃ１８、１２０ｇ、移動相Ａ＝水／０．０５％  ＮＨ４ＨＣＯ３、移動相Ｂ＝ＡＣＮ、流量＝４５ｍＬ／分、勾配＝１５分間で４５％Ｂから６５％Ｂ、検出器＝２５４ｎｍ及び２２０ｎｍ、所望の生成物を６４％Ｂで回収）で逆相フラッシュにより精製してｔｅｒｔ−ブチル  ４−［メチル［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（４００ｍｇ、２９．２６％）を褐色固体として得た。
【０３２３】
Ｎ−メチル−Ｎ−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン
ｔｅｒｔ−ブチル  ４−［メチル［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−カルボキシレート（２２０ｍｇ、０．５３７ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、窒素雰囲気下、室温でＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１２：１）で精製してＮ−メチル−Ｎ−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン（１３０ｍｇ、７８．２２％）を褐色固体として得た。
【０３２４】
４−クロロ−５−（４−［メチル［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
Ｎ−メチル−Ｎ−［５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−イル］−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン（１３０ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ、１当量）をＤＩＥＡ（０．５  ｍｇ）に溶かした攪拌溶液に、４，５−ジクロロ−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１０４．６９ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ、１．０当量）を室温で加えた。得られた混合物を９０℃で１時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。混合物を室温まで冷却させた。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１２：１）で精製して４−クロロ−５−（４−［メチル［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１００ｍｇ、４５．５８％）を褐色固体として得た。
【０３２５】
４−クロロ−５−（４−［メチル［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン
４−クロロ−５−（４−［メチル［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２−（オキサン−２−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（１００ｍｇ、０．１９２ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（４ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を室温で加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。反応をＬＣＭＳにより監視した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ８に塩基性化した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物（１００ｍｇ）を以下の条件（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｐｈｅｎｙｌ  ＯＢＤ  カラム１９×１５０ｍｍ、５ｕｍ、移動相Ａ＝水、５ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３、移動相Ｂ＝アセトニトリル、流量＝６０ｍＬ／分、勾配＝８分間で３５％Ｂから５５％Ｂ、２２０ｎｍ、Ｒｔ＝７．１３分）で分取ＨＰＬＣにより精製して、４−クロロ−５−（４−［メチル［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル］アミノ］−５Ｈ，６Ｈ，７Ｈ，８Ｈ−ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−７−イル）−２，３−ジヒドロピリダジン−３−オン（５２ｍｇ、６１．９９％）を白色固体として得た。
【０３２６】
実施例２３  中間体の合成
Ａ．  酢酸２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェニル
【０３２７】
【化３５】
2022500359.tif 000048
【０３２８】
酢酸４−フルオロ−２−ホルミルフェニル
５−フルオロ−２−ヒドロキシベンズアルデヒド（１０ｇ、７１．３７１ｍｍｏｌ、１当量）のピリジン（１００ｍＬ、１２４２．３５３  ｍｍｏｌ、１７．４１当量）溶液に、酢酸アセチル（１４．５７ｇ、０．１４３ｍｍｏｌ、２当量）を２５℃で加えた。溶液を２５℃で３０分間撹拌した。得られた溶液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥＡ（１００／１から２０／１）で溶出して酢酸４−フルオロ−２−ホルミルフェニル（１２ｇ、９２．３１％）を淡黄色油状物として得た。
【０３２９】
酢酸２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェニル
酢酸４−フルオロ−２−ホルミルフェニル（１２ｇ、６５．８８０ｍｍｏｌ、１当量）のＤＣＭ（２００ｍＬ、３１４６．００９ｍｍｏｌ、４７．７５当量）溶液に、ＤＡＳＴ（２１．２４ｇ、１３１．７６０ｍｍｏｌ、２当量）を０℃で加えた。溶液を２５℃で４時間撹拌した。得られた溶液を水（１００ｍＬ）で反応停止させた。生じた混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＣｌ水溶液（１００ｍＬ×２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥＡ（１０／１から５／１）で溶出して酢酸２−（ジフルオロメチル）−４−ホルミルフェニル（１０ｇ、７４．３５％）を淡黄色油状物として得た。
【０３３０】
Ｂ．  ２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノール
【０３３１】
【化３６】
2022500359.tif 000049
【０３３２】
１−ブロモ−２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロベンゼン
２−ブロモ−５−フルオロベンズアルデヒド（１０ｇ、４９．２６ｍｍｏｌ、１当量）をＤＣＭ（６０ｍＬ）に溶かした攪拌溶液に、ＤＡＳＴ（１５．９ｇ、９８．５２ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。得られた混合物を−１０℃で２時間攪拌した。反応を−１０℃の水で停止させた。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（４×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×４０ｍｌ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥｔＯＡｃ（６：１）で溶出して１−ブロモ−２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロベンゼン（８ｇ、７２．１８％）を淡黄色油状物として得た。
【０３３３】
２−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン
１−ブロモ−２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロベンゼン（３１ｇ、１３７．７７３ｍｍｏｌ、１当量）及びＢＰＤ（５２．４８ｇ、２０６．６６４ｍｍｏｌ、１．５０当量）の１，４−ジオキサン（３００ｍＬ、３５４１．２２５ｍｍｏｌ、２５．７０当量）溶液に、ＡｃＯＫ（２７．０４ｇ、２７５．５４６ｍｍｏｌ、２当量）及びＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２・ＣＨ２Ｃｌ２（５．６３ｇ、６．８８９ｍｍｏｌ、０．０５当量）を窒素雰囲気下、２５℃で加えた。混合物を９０℃で２時間撹拌した。得られた混合物を減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＰＥ／ＥＡ（１０／１）で溶出して２−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（３０ｇ、８０．０３％）を淡黄色油状物として得た。反応をＴＬＣにより監視した。粗渣を次のステップで直接使用した。
【０３３４】
２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノール
２−［２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェニル］−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（５０ｇ、１８３．７７６ｍｍｏｌ、１当量）をＭｅＯＨ（３００ｍＬ、７４０９．６７３ｍｍｏｌ、４０．３２当量）及びＨ２Ｏ（１００ｍＬ、５５５０．８３７ｍｍｏｌ、３０．２０当量）に溶かした溶液に、Ｈ２Ｏ２（３０％）（５０ｍＬ、２１４６．１３１ｍｍｏｌ、１１．６８当量）を０℃で滴下して加えた。溶液を２５℃で３時間撹拌した。得られた溶液を減圧下で濃縮した。残渣をＥＡ（５００ｍＬ）で希釈した。有機層を３×２００ｍＬの飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮して２−（ジフルオロメチル）−４−フルオロフェノール（２５ｇ、８３．９１％）を淡黄色油状物として得た。
【０３３５】
実施例２４  ＴＲＰＣ４活性のアッセイ
ＴＲＰＣ４を発現するＩＣＬＮ−１６９４細胞（ＨＥＫ−ＴＲＥｘ  ｈＴＲＰＣ４）を以下のようにして作製した。抗生物質を含まない２ｍＬの細胞培地（１×ＤＭＥＭ／高グルコース（ｈｙｃｌｏｎｅ＃ＳＨ３００２２．０２）；１０％胎児ウシ血清（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）を使用したトランスフェクションの２４時間前に、市販のＨｅｋＴｒｅｘ−２９３細胞を１×６ウェルプレートに０．７×１０６細胞／ウェルで播種した。ヒトコドン最適化したＴＲＰＣ４コード配列を、耐性遺伝子としてハイグロマイシンを使用してｐｃＤＮＡ５／ＴＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｖ１０３３２０）にクローニングし、製造者の指示に従ってＴ−Ｒｅｘ−２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｒ７１００７）を使用してプラスミド（配列番号１）を増殖させた。２日目に、Ｏｐｔｉｍｅｍ（総容量２００μｌ）中、２μｇのプラスミドＤＮＡに６μｌのＸｔｒｅｍｅ−ＧＥＮＥ  ＨＰ試薬を加えたものを調製し、室温で１５分間インキュベートした。次に、このプラスミド溶液を各ウェル上に静かに滴下して重ね、プレートを静かに回して、約３０秒間、培地と複合体を混合した。トランスフェクトした細胞を、１０％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で２４時間インキュベートした。トランスフェクトした細胞を回収し、３７℃で抗生物質を含まない細胞増殖培地が入った２ｘ１５０ｍｍの皿に移した。
【０３３６】
翌日、１５０μｇ／ｍＬハイグロマイシン及び５μｇ／ｍＬブラストサイジンを含む細胞培地を加えることにより選択を開始して安定したプールを生成し、細胞を増殖させた。選択物質を含む培地は、必要に応じて１〜２日ごとに交換して死細胞を除去した。７日後、ハイグロマイシン濃度を７５μｇ／ｍＬに低下させ、細胞増殖を継続させた。
【０３３７】
単一クローンを以下のように選択した。安定したプールを細胞１０個／ｍＬまで希釈し、２４×９６ウェルプレート（細胞約１個／ウェル）に播種し、細胞培地中で７日間増殖させた。新鮮な培地（１００μｌ）を加え、細胞を更に１〜２週間増殖させた後、凍結保存するかまたは直ちに使用した。
【０３３８】
各化合物は、一般的にＤＭＳＯを溶媒として使用した１０ｍＭストック溶液として構成するかまたは供給された。Ｅｃｈｏ−５５０音響ディスペンサーを用いて１０点用量反応曲線を作成した。各化合物ストックを、Ｅｃｈｏ認定ＬＤＶプレート中に連続希釈してＤＭＳＯ中、１０ｍＭ、１ｍＭ、及び０．１ｍＭ溶液を形成することにより、各化合物ソースプレートを作製した。次いで、Ｅｃｈｏにより、１００％ＤＭＳＯストック溶液をソース用量反応プレートに連続的にスポットすることにより４倍希釈スキームを作製した。スポットした各用量反応プレートに１００％ＤＭＳＯを加えて最終体積を５μｌとした。次いで、３００ｎｌの用量反応プレートをプレインキュベーション及び刺激アッセイプレートにスポットした。次いで、５０μｌのプレインキュベーションバッファー及び１００μｌの刺激バッファーを各プレートに加え、最終ＤＭＳＯ濃度０．３％の３０μＭ〜０．０００１μＭの最終アッセイ試験濃度範囲とした。
【０３３９】
ＩＣＬＮ−１６９４細胞（ＨＥＫ−ＴＲＥｘ  ｈＴＲＰＣ４）を３８４ウェルの黒色ｐｄｌコーティングしたマイクロプレートにプレーティングし、実験に使用する前日に、１μｇ／ｍＬテトラサイクリンを添加した細胞培地中で維持した。プレーティングの時点で１μｇ／ｍＬテトラサイクリンを加えることによってＴＲＰＣ４発現を誘導した。培地をプレートから除去し、ＥＢＳＳ（ＮａＣｌ（１４２ｍＭ）、ＫＣｌ（５．４ｍＭ）、グルコース（１０ｍＭ）、ＣａＣｌ２（１．８ｍＭ）、ＭｇＣｌ２（０．８ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）、ｐＨ７．４）中、４μＭのＦｌｕｏ−４ＡＭ（等量のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７と混合したもの）１０μｌを細胞に加えた。細胞を室温でインキュベートし、光から保護し、６０〜９０分間インキュベートした。インキュベーション期間後、色素を除去し、１０μｌのＥＢＳＳに置換した。細胞、プレインキュベーション及び刺激プレートをＦＬＩＰＲ−ＩＩにロードし、アッセイを開始した。ＦＬＩＰＲで１０秒のベースラインを測定した後、１０μｌの２×化合物（またはコントロール）を加えた。蛍光の変化をさらに５分間監視した。５分間のプレインキュベーションの後、２０μｌの２×ＥｎｇｌｅｒｉｎＡ（１×化合物またはコントロールを含む）を細胞プレートに添加した。アッセイにおける最終的なＥｎｇｌｅｒｉｎＡの刺激濃度は１００ｎＭとした。ＥｎｇｌｅｒｉｎＡの添加後、蛍光の変化を更に５分間監視した。
【０３４０】
ＴＲＰＣ４カルシウム応答の化合物による調節を以下のようにして求めた。ＥｎｇｌｅｒｉｎＡの後、蛍光を５分間モニタリングした。最大相対蛍光応答（ＴＲＰＣ４カルシウム応答を最大に遮断することが知られている内部コントロール化合物１μＭのコントロール応答、下記式中の「ＲＥＦ  ＩＮＨＩＢ」を差し引いたもの）を捕捉し、ＦＬＩＰＲからエクスポートした。
【０３４１】
化合物の効果は、下式を用いて阻害率（％）として計算される。
【０３４２】
【数１】
2022500359.tif 000050
【０３４３】
ここで「ＲＦＵ」は、相対蛍光単位である。
【０３４４】
これらのアッセイの結果を下記表２に示し、表中、「Ａ」は５０ｎＭ以下のＩＣ５０を、「Ｂ」は、５０ｎＭ超かつ５００ｎＭ以下のＩＣ５０を、「Ｃ」は、５００ｎＭ超かつ１μＭ未満のＩＣ５０を、「Ｄ」は、１μＭ以上のＩＣ５０を、「ＮＴ」は、化合物を試験しなかったことを示す。
【０３４５】
実施例２５  ＴＲＰＣ５活性のアッセイ
ＴＲＰＣ５を発現するＩＣＬＮ−１６３３細胞（ＨＥＫ−ＴＲＥｘ  ｈＴＲＰＣ５）を以下のようにして作製した。抗生物質を含まない２ｍＬの細胞培地（１×ＤＭＥＭ／高グルコース（ｈｙｃｌｏｎｅ＃ＳＨ３００２２．０２）；１０％胎児ウシ血清（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）を使用したトランスフェクションの２４時間前に、市販のＨｅｋＴｒｅｘ−２９３細胞を１×６ウェルプレートに０．７×１０６細胞／ウェルで播種した。ヒトＴＲＰＣ５コード配列（サイレントＴ４７８Ｃ変異を有するＮＭ＿０１２４７１）を、耐性遺伝子としてハイグロマイシンを使用してｐｃＤＮＡ５／ＴＯ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号Ｖ１０３３２０）にクローニングし、製造者の指示に従ってＴ−Ｒｅｘ−２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号Ｒ７１００７）を使用してプラスミド（配列番号２）を増殖させた。２日目に、Ｏｐｔｉｍｅｍ（総容量２００μｌ）中、２μｇのプラスミドＤＮＡに６μｌのＸｔｒｅｍｅ−ＧＥＮＥ  ＨＰ試薬を加えたものを調製し、室温で１５分間インキュベートした。次に、このプラスミド溶液を各ウェル上に静かに滴下して重ね、プレートを静かに回して、約３０秒間、培地と複合体を混合した。トランスフェクトした細胞を、１０％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で２４時間インキュベートした。トランスフェクトした細胞を回収し、３７℃で抗生物質を含まない細胞増殖培地が入った２×１５０ｍｍの皿に移した。
【０３４６】
翌日、１５０μｇ／ｍＬハイグロマイシン及び５μｇ／ｍＬブラストサイジンを含む細胞培地を加えることにより選択を開始して安定したプールを生成し、細胞を増殖させた。選択物質を含む培地は、必要に応じて１〜２日ごとに交換して死細胞を除去した。７日後、ハイグロマイシン濃度を７５μｇ／ｍＬに低下させ、細胞増殖を継続させた。
【０３４７】
単一のクローンを以下のように選択した。安定したプールを細胞１０個／ｍＬまで希釈し、２４×９６ウェルプレート（細胞約１個／ウェル）に播種し、細胞培地中で７日間増殖させた。新鮮な培地（１００μｌ）を加え、細胞を更に１〜２週間増殖させた後、凍結保存するかまたは直ちに使用した。
【０３４８】
各化合物は、一般的にＤＭＳＯを溶媒として使用した１０ｍＭストック溶液として構成するかまたは供給された。Ｅｃｈｏ−５５０音響ディスペンサーを用いて１０点用量反応曲線を作成した。各化合物ストックを、Ｅｃｈｏ認定ＬＤＶプレート中に連続希釈してＤＭＳＯ中、１０ｍＭ、１ｍＭ、及び０．１ｍＭ溶液を形成することにより、各化合物ソースプレートを作製した。次いで、Ｅｃｈｏにより、１００％ＤＭＳＯストック溶液をソース用量反応プレートに連続的にスポットすることにより４倍希釈スキームを作製した。スポットした各用量反応プレートに１００％ＤＭＳＯを加えて最終体積を５μｌとした。次いで、３００ｎｌの用量反応プレートをプレインキュベーション及び刺激アッセイプレートにスポットした。次いで、５０μｌのプレインキュベーションバッファー及び１００μｌの刺激バッファーを各プレートに加え、最終ＤＭＳＯ濃度０．３％の３０μＭ〜０．０００１μＭの最終アッセイ試験濃度範囲とした。
【０３４９】
発現ヒトＩＣＬＮ−１６３３細胞を３８４ウェルの黒色ＰＤＬコーティングしたマイクロプレートにプレーティングし、実験に使用する前日にＴＲＰＣ５培地中で維持した。プレーティングの時点で１μｇ／ｍＬテトラサイクリンを加えることによってＴＲＰＣ５発現を誘導した。培地をプレートから除去し、ＥＢＳＳ中、４μＭのＦｌｕｏ−４ＡＭ（等量のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７と混合したもの）１０μｌを細胞に加える。細胞を室温でインキュベートし、光から保護し、６０〜９０分間インキュベートする。インキュベーション期間後、色素を除去し、１０μｌのＥＢＳＳに置換する。細胞、プレインキュベーション及び刺激プレートをＦＬＩＰＲ−ＩＩにロードし、アッセイを開始する。ＦＬＩＰＲで１０秒のベースラインを測定した後、１０μｌの２×化合物（またはコントロール）を加える。蛍光の変化をさらに５分間監視する。５分間のプレインキュベーションの後、２０μｌの２×Ｒｉｌｕｚｏｌｅ（１×化合物またはコントロールを含む）を細胞プレートに添加する。アッセイにおける最終的なＲｉｌｕｚｏｌｅの刺激濃度は３０μＭとする。Ｒｉｌｕｚｏｌｅの添加後、蛍光の変化を更に５分間監視する。
【０３５０】
ＴＲＰＣ５カルシウム応答の化合物による調節を以下のようにして求めた。ＥｎｇｌｅｒｉｎＡの後、蛍光を５分間モニタリングした。最大相対蛍光応答（ＴＲＰＣ５カルシウム応答を最大に遮断することが知られている内部コントロール化合物１μＭのコントロール応答、下記式中の「ＲＥＦ  ＩＮＨＩＢ」を差し引いたもの）を捕捉し、ＦＬＩＰＲからエクスポートした。
【０３５１】
化合物の効果は、下式を用いて阻害率（％）として計算される。
【０３５２】
【数２】
2022500359.tif 000051
【０３５３】
ここで「ＲＦＵ」は、相対蛍光単位である。
【０３５４】
これらのアッセイの結果を下記表２に示し、表中、「Ａ」は、５０ｎＭ以下のＩＣ５０を、「Ｂ」は、５０ｎＭ超かつ５００ｎＭ以下のＩＣ５０を、「Ｃ」は、５００ｎＭ超かつ１μＭ未満のＩＣ５０を、「Ｄ」は、１μＭ以上のＩＣ５０を、「ＮＴ」は、化合物を試験しなかったことを示す。
【０３５５】
【表２】
2022500359.tif 000052
【０３５６】
選択した化合物の１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳデータを下記表に示す。
【０３５７】
【化３７−１】
2022500359.tif 000053
【０３５８】
【化３７−２】
2022500359.tif 000054
【０３５９】
【化３７−３】
2022500359.tif 000055
【０３６０】
【化３７−４】
2022500359.tif 000056
【０３６１】
【化３７−５】
2022500359.tif 000057
【０３６２】
【化３７−６】
2022500359.tif 000058
【０３６３】
【化３７−７】
2022500359.tif 000059
【０３６４】
【化３７−８】
2022500359.tif 000060
【０３６５】
【化３７−９】
2022500359.tif 000061
【０３６６】
【化３７−１０】
2022500359.tif 000062
【０３６７】
【化３７−１１】
2022500359.tif 000063
【０３６８】
【化３７−１２】
2022500359.tif 000064
【０３６９】
実施例２６  ラットにおけるプロマイシンアミノヌクレオシド（ＰＡＮ）誘発性糸球体障害に対する化合物１００の効果
目的：
本実験の目的は、アルブミン尿によって指標化されたＰＡＮ誘発性糸球体腎障害に対する化合物１００の用量依存的効果を評価することにある。
【０３７０】
方法：
８０匹の体重約１２５〜１５０ｇ、約５〜６週齢の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ社より入手した。ラットに標準的な飼料（Ｈａｒｌａｎ  ８６４０）を与え、標準的な条件下でケージに収容し、実験開始前に少なくとも５日間順応させた。
【０３７１】
２日目にラットを、実験のバランスをとるために、体重を一致させた処置群に分け、個別に代謝ケージに収容した。
【０３７２】
２４時間ベースライン（０日目）の尿を採取した後、意識下尾静脈穿刺によりベースライン採血を行った。次いで、ラットに溶媒または試験物を投与した。
【０３７３】
０日目の溶媒または試験剤の投与２時間後、ラットに（５ｍｌ／ｋｇ皮下）溶媒（無菌生理食塩水）または溶媒に溶解したプロマイシンアミノヌクレオシド（ＰＡＮ、負荷剤、７５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。
【０３７４】
間欠的（４日目、７日目、１０日目）に２４時間尿量を測定し、試料（４試料／頭／時点、０．５ｍｌ／試料）を得た。さらに、間欠的（４日目、７日目及び１０日目）血液試料を、ＡＭ投与の２時間±１分後の意識下尾静脈穿刺により採取した。
【０３７５】
最後の採血の直後に、ラットをイソフルランで麻酔し、組織を採取し、動物を屠殺した。エンドポイントの腎臓重量及び指標を得た。
【０３７６】
尿試料を直ちに液体Ｎ２でフラッシュ凍結し、分析を行うまで−８０℃で保存した。
【０３７７】
Ｋ３ＥＤＴＡで採取した全血試料を、ＰＫ測定用の血漿調製用に適宜処理した。
【０３７８】
結果：
図１に示すように、３０ｍｇ／ｋｇの化合物１００による１日１回（ＱＤ）または２回（ＢＩＤ）の処置により、ＰＡＮによる障害後の尿中アルブミン排泄量が減少した。化合物１００のＢＩＤ投与では７日目と１０日目、ＱＤ投与では１０日目に有意な減少が認められた。ミゾリビンは、ポジティブコントロール化合物であり、アルブミン尿症の減少にやはり効果があった。
【０３７９】
結論：
化合物１００は、ラットにおける糸球体損傷のＰＡＮモデルにおけるアルブミン尿の減少に有効である。
【０３８０】
実施例２７  化合物１００は、ＦＳＧＳのＡＴ１Ｒトランスジェニックラットモデルで有効である
ＦＳＧＳのＡＴ１Ｒトランスジェニックラットモデルは、ヒトＡＴ１Ｒのポドサイト特異的発現によって特徴付けられる。雄は雌に比べて大幅に悪い病態を有することが示されている。ＡＴ１ＲモデルにおけるＴＲＰＣ５阻害剤の有効性は、ツール化合物で実証されている。Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２０１７），ｖｏｌ．３５８（６３６８），１３３２−１３３６を参照されたい。
【０３８１】
本実験では、ＡＴ１Ｒトランスジェニックラットにおける病態生理を、片側腎摘出術（ＵｎｉＮＸ）及びミニポンプによるＡｎｇＩＩ注入によって促進した。３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの化合物１００を１日１回経口投与し、尿タンパク質クレアチニン比を処置の−１、０、１、２、及び３週目に測定した。図２は、化合物１００で処置したラットまたは溶媒で処置したラットの実験過程にわたった尿タンパク質クレアチニン比を示す。ＵｎｉＮＸ、ＡｎｇＩＩの開始、及び化合物１００の開始は示された時点で行った。図３は、同じデータをベースラインの割合（％）として示す。
【０３８２】
これらの結果は、化合物１００がＦＳＧＳのＡＴ１Ｒトランスジェニックラットモデルにおいて有効であることを示している。
【０３８３】
参照による援用
本明細書に引用されるすべての米国特許並びに米国特許出願公開及び国際出願公開を、参照により本明細書に援用する。
【０３８４】
均等物
上記の明細書の記載は、当業者による本発明の実施を可能とするうえで充分なものである。各実施例は本発明の１つの態様の単一の例示として意図されるものであり、他の機能的に同等の実施形態も本発明の範囲に含まれることから、本発明の範囲は、記載される実施例によって限定されるべきでない。本明細書に示され説明されるもの以外の本発明の様々な改変が上記の説明から当業者には明らかとなろう。これらの改変は、添付の「特許請求の範囲」の範囲に含まれる。本発明の利点及び目的は、必ずしも本発明の各実施形態に包含されるわけではない。
【０３８５】
配列番号１  ＴＲＰＣ４プラスミド配列
実施例２４で使用したＴＲＰＣ４プラスミドのＤＮＡ配列を以下に示す。下線で示した核酸は、ヒトＴＲＰＣ４をコードする核酸を表す。
【０３８６】
【化３８−１】
2022500359.tif 000065
【０３８７】
【化３８−２】
2022500359.tif 000066
【０３８８】
【化３８−３】
2022500359.tif 000067
【０３８９】
【化３８−４】
2022500359.tif 000068
【０３９０】
【化３８−５】
2022500359.tif 000069
【０３９１】
配列番号２  ＴＲＰＣ５プラスミド配列
実施例２５で使用したＴＲＰＣ５プラスミドのＤＮＡ配列を以下に示す。下線で示した核酸は、ヒトＴＲＰＣ５をコードする核酸を表す。
【０３９２】
【化３９−１】
2022500359.tif 000070
【０３９３】
【化３９−２】
2022500359.tif 000071
【０３９４】
【化３９−３】
2022500359.tif 000072
【０３９５】
【化３９−４】
2022500359.tif 000073
【０３９６】
【化３９−５】
2022500359.tif 000074
【０３９７】
【化３９−６】
2022500359.tif 000075
【図１】
2022500359.tif 000092
【図２】
2022500359.tif 000093
【図３】
2022500359.tif 000094
【配列表】
2022500359000001.app
【国際調査報告】
2022500359.tif 000095
2022500359.tif 000096
2022500359.tif 000097