【手続補正書】
【提出日】平成22年3月16日(2010.3.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
光スイッチング可能な蛍光物体を含むサンプルを画像化する方法であって、
（ａ）前記サンプルを複数の光スイッチング可能な蛍光物体で標識する工程であって、該複数の光スイッチング可能な蛍光物体は、第１の光スイッチング可能な蛍光物体および第２の光スイッチング可能な蛍光物体が約１０００ｎｍ未満の距離で隔てられて該サンプル内に存在するように、少なくとも第１の光スイッチング可能な蛍光物体および第２の光スイッチング可能な蛍光物体を含み、ここで該第１の光スイッチング可能な蛍光物体および該第２の光スイッチング可能な蛍光物体は、実質的に同じである、工程；
（ｂ）該第１の光スイッチング可能な蛍光物体および該第２の光スイッチング可能な蛍光物体の両方を実質的に同じ活性化光に同時にさらし、第１の波長で光を放射することが可能でない状態から、第１の波長で光を放射することが可能な状態へ、該第１の物体を活性化するが、該第２の物体を活性化しない、工程；
（ｃ）励起光で該活性化された第１の物体を励起し、該第１の物体に該第１の波長での光の放射を引き起こす工程；
（ｄ）該第１の物体により放射される光を測定する工程；
（ｅ）該第１の物体を不活性化する工程；
（ｆ）該第１の光スイッチング可能な蛍光物体および該第２の光スイッチング可能な蛍光物体の両方を実質的に同じ活性化光に同時にさらして、該第１の波長で光を放射することが可能でない状態から、該第１の波長で光を放射することが可能な状態へ、該第２の物体を活性化するが、該第１の物体を活性化しない、工程；
（ｇ）励起光で該第２の物体を励起し、該第２の物体に該第１の波長での光の放射を引き起こす工程；
（ｈ）該第２の物体により放射される光を測定する工程；ならびに
（ｉ）該第１の物体から放射された光および該第２の物体から放射された光を用いることにより、該サンプル内の該第１の物体の位置および該第２の物体の位置を決定する工程、
を含む、方法。
【請求項２】
前記第１の物体より放射される光を測定する工程および前記第２の物体より放射される光を測定する工程が、該第１の物体より放射される光および該第２の物体より放射される光の画像を得る工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、前記放射光のＧａｕｓｓｉａｎフィッティングを用いて、該第１の物体の位置および該第２の物体の位置を決定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置が、前記第１の物体および／または前記第２の物体から放射される光の波長未満の精度で決定される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
半値全幅（ＦＷＨＭ）により規定される前記精度は、約２０ｎｍ未満である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、ドリフト補正を用いて、該第１の物体の位置および該第２の物体の位置を決定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ドリフト補正を用いる工程が、基準マーカーをドリフトの決定に用いる工程を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
時間の関数として前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記第１の物体および／または前記第２の物体が、第１部分である光放射部分と、光にさらされると該第１部分を活性化する第２部分である活性化部分とを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１部分がＣｙ５、Ｃｙ５．５、またはＣｙ７であり、そして前記第２の部分がＣｙ２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、またはＣｙ５である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記（ｃ）および／または（ｇ）において、前記活性化光が、確率的に、前記第１の光スイッチング可能な蛍光物体および前記第２の光スイッチング可能な蛍光物体の両方ではなく１つを活性化するのに十分な強度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１１の前記活性化光が、該活性化光が入射する光スイッチング可能な蛍光物体の平均で約５０％以下を活性化するのに十分な強度を有する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記（ｆ）は、前記第１の物体を不活性化光にさらすことにより、該第１の物体を不活性化する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
（１）活性化されると光を放射可能な複数の光スイッチング可能な蛍光物体を提供する工程であって、該複数の光スイッチング可能な蛍光物体の少なくともいくつかは、放射光の波長未満の隔離距離により隔てられている、工程；
（２）活性化光を用いて、該複数の物体の一部を光放射可能な状態に活性化する工程；
（３）励起光を用いて、該活性化された複数の物体の一部より光の放射を引き起こす工程；
（４）該活性化された複数の物体の一部より放射される光を測定する工程；
（５）該活性化された複数の物体の一部を不活性化する工程；
（６）（２）から（５）を繰り返して、約１００ｎｍ未満の解像度に対して該複数の物体の少なくともいくつかの位置を決定する工程；
を含む方法。
【請求項１５】
３０分以下の画像化時間中に得られる前記複数の物体の位置を用いて画像を構築する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記（４）が、カメラを用いて放射光を得る工程を含み、ここで活性化光およびカメラのフレームのタイミングは同期化される工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記（６）が、ドリフト補正を用いて１００ｎｍ未満の解像度に対して前記複数の物体の少なくともいくつかの位置を決定する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記（６）が、１００ｎｍ未満の解像度に対して前記複数の物体の少なくともいくつかの位置を決定し、活性化光および／または放射光の波長に基づく少なくとも３色を含む画像を構築する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記（２）が、前記複数の物体の一部を第１の波長の活性化光により活性化する工程を含み、そして前記（５）が、前記活性化された複数の物体の一部を第１の波長の不活性化光により不活性化する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記複数の物体の位置を用いて、画像を構築する工程をさらに含み、ここで該画像は、放射光の回折限界解像度よりも良好な解像度を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記複数の物体の位置が、１つより多くの時間点でおよび／または時間の関数として決定する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記複数の物体の一部を活性化する工程は、光を用いて複数の物体の一部を活性化する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
前記複数の物体の少なくともいくつかは、異なる波長の光により活性化され、および／または異なる波長で光を放射する、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
前記複数の物体の少なくともいくつかは、光活性化可能なプローブまたは光スイッチング可能なプローブである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
前記複数の物体の位置を決定する工程が、複数の物体の少なくともいくつかからの放射光の画像の中心を決定する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】
請求項１４に記載の方法を機械に実行させるために、媒体に組み込まれたプログラムを備える機械可読媒体を含む、物品。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
約１０００ｎｍ未満の距離で隔てられた第１の物体と第２の物体とを提供することと；
前記第１の物体から放射される光を決定することと；
前記第２の物体から放射される光を決定することと；
前記第１の物体から放射される光と、前記第２の物体から放射される光とを用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することとを含む、方法。
（項目２）
前記第１の物体から放射される光の波長と、前記第２の物体から放射される光の波長とが異なる、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記第１の物体から放射される光の波長と、前記第２の物体から放射される光の波長とが実質的に同じである、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記第１の物体および前記第２の物体が、異なる波長によって活性化される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記第１の物体および前記第２の物体が、実質的に同じ波長によって活性化される、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記第１の物体を活性化させ、前記第１の物体から放射される光を発生することを含む、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記第１の物体を第１の波長を有する入射光にさらすことによって、前記第１の物体が活性化する、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記第１の物体から放射される光を発生させないように、前記第１の物体を不活性化することを含む、項目６に記載の方法。
（項目９）
前記第２の物体を第１の波長を有する入射光にさらすことによって、前記第１の物体が不活性化する、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記第１の物体を第１の波長を有する入射光にさらすことによって、前記第１の物体が不活性化する、項目８に記載の方法。
（項目１１）
前記第２の物体を活性化させずに、前記第１の物体を活性化し、光を発生させることをさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記第２の物体を活性化し、光を発生させることをさらに含む、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記第１の物体を不活性化することをさらに含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記第１の物体を不活性化させる工程の後に、前記第２の物体を活性化し、光を発生させる工程が行われる、項目１３に記載の方法。
（項目１５）
前記第１の物体が、前記第２の物体とは化学的に異なっている、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記第１の物体が、前記第２の物体と化学的に実質的に同じである、項目１に記載の
方法。
（項目１７）
前記第１の物体が、光活性化可能なプローブまたは光スイッチング可能なプローブであり、前記第２の物体が、光活性化可能なプローブまたは光スイッチング可能なプローブである、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記第１の物体が、光活性化可能な染料または光スイッチング可能な染料である、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記第１の物体が、光活性化可能な蛍光タンパク質または光スイッチング可能な蛍光タンパク質である、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記第２の物体が、光活性化可能な染料または光スイッチング可能な染料である、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記第２の物体が、光活性化可能な蛍光タンパク質または光スイッチング可能な蛍光タンパク質である、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記第１の物体が、第１部分である光放射部分と、外的刺激にさらされると前記第１部分を活性化する第２部分である活性化部分とを含む、項目１に記載の方法。
（項目２３）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ５である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ５．５である、項目２２に記載の方法。
（項目２５）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ７である、項目２２に記載の方法。
（項目２６）
前記第１部分である光放射部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７である、項目２２に記載の方法。
（項目２７）
前記第２部分である活性化部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４０５である、項目２２に記載の方法。
（項目２８）
前記第２部分である活性化部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８である、項目２２に記載の方法。
（項目２９）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ２である、項目２２に記載の方法。
（項目３０）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ３である、項目２２に記載の方法。
（項目３１）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ３．５である、項目２２に記載の方法。
（項目３２）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ５である、項目２２に記載の方法。
（項目３３）
前記第２の物体が、第１部分である光放射部分と、外的刺激にさらされると前記第１部分を活性化する第２部分である活性化部分とを含む、項目２２に記載の方法。
（項目３４）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ５である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ５．５である、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ７である、項目３３に記載の方法。
（項目３７）
前記第１部分である光放射部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７である、項目３３に記載の方法。
（項目３８）
前記第２部分である活性化部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４０５である、項目３３に記載の方法。
（項目３９）
前記第２部分である活性化部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８である、項目３３に記載の方法。
（項目４０）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ２である、項目３３に記載の方法。
（項目４１）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ３である、項目３３に記載の方法。
（項目４２）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ３．５である、項目３３に記載の方法。
（項目４３）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ５である、項目３３に記載の方法。
（項目４４）
前記第１の物体の第１部分と、前記第２の物体の第１部分とが、化学的に実質的に同じであり、前記第１の物体の第２部分と、前記第２の物体の第２部分とが、化学的に同じではない、項目３３に記載の方法。
（項目４５）
前記第１の物体の第１部分と、前記第２の物体の第１部分とが、化学的に同じではなく、前記第１の物体の第２部分と、前記第２の物体の第２部分とが、化学的に実質的に同じである、項目３３に記載の方法。
（項目４６）
前記第１の物体の第１部分と、前記第２の物体の第１部分とが、化学的に同じではなく、前記第１の物体の第２部分と、前記第２の物体の第２部分とが、化学的に同じではない、項目３３に記載の方法。
（項目４７）
前記第１の物体の第１部分と、前記第２の物体の第１部分とが、化学的に実質的に同じであり、前記第１の物体の第２部分と、前記第２の物体の第２部分とが、化学的に実質的に同じである、項目３３に記載の方法。
（項目４８）
前記第１の物体および前記第２の物体がスイッチング可能である、項目１に記載の方法。
（項目４９）
前記第１の物体から放射される光が可視光である、項目１に記載の方法。
（項目５０）
前記第１の物体および前記第２の物体が、共通の物体に固定される、項目１に記載の方法。
（項目５１）
前記共通の物体が生体分子複合体を含む、項目５０に記載の方法。
（項目５２）
前記共通の物体が生体分子を含む、項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記生体分子が核酸である、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
前記第１の物体と前記第２の物体とを隔てている塩基の数を決定することをさらに含む、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記生体分子がＤＮＡである、項目５３に記載の方法。
（項目５６）
前記生体分子がＲＮＡである、項目５３に記載の方法。
（項目５７）
前記生体分子がＰＮＡである、項目５３に記載の方法。
（項目５８）
前記生体分子がタンパク質である、項目５２に記載の方法。
（項目５９）
前記共通の物体が細胞である、項目５０に記載の方法。
（項目６０）
前記共通の物体が組織である、項目５０に記載の方法。
（項目６１）
前記共通の物体が生体物質ではない、項目５０に記載の方法。
（項目６２）
前記第１の物体から放射される光を決定する工程と、前記第２の物体から放射される光を決定する工程とを繰り返す、項目１に記載の方法。
（項目６３）
前記第１の物体から放射される光を決定する工程が、前記第１の物体から放射される光の画像を得ることを含む、項目１に記載の方法。
（項目６４）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、前記放射光のＧａｕｓｓｉａｎフィッティングを用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することを含む、項目１に記載の方法。
（項目６５）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、ドリフト補正を用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することをさらに含む、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
前記ドリフト補正が、基準マーカーを用いて行われる、項目６５に記載の方法。
（項目６７）
前記ドリフト補正が、画像相関を用いて行われる、項目６５に記載の方法。
（項目６８）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置が、少なくとも約３００ｎｍの精度で決定される、項目１に記載の方法。
（項目６９）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置が、少なくとも約１００ｎｍの精度で決定される、項目１に記載の方法。
（項目７０）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置が、少なくとも約５０ｎｍの精度で決定される、項目１に記載の方法。
（項目７１）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置が、少なくとも約２０ｎｍの精度で決定される、項目１に記載の方法。
（項目７２）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置が、前記第１の物体および／または前記第２の物体から放射される光の波長未満の精度で決定される、項目１に記載の方法。
（項目７３）
前記第１の物体と前記第２の物体とが、約７００ｎｍ未満の距離によって隔てられている、項目１に記載の方法。
（項目７４）
前記第１の物体と前記第２の物体とが、前記第１の物体から放射される光の波長または前記第２の物体から放射される光の波長未満の距離によって隔てられている、項目１に記載の方法。
（項目７５）
第１の時間点で前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することと、第２の時間点で前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することとを含む、項目１に記載の方法。
（項目７６）
２つ以上の時間点で前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することおよび／または時間の関数として前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することを含む、項目１に記載の方法。
（項目７７）
前記工程が、列挙した順に行われる、項目１に記載の方法。
（項目７８）
約１０００ｎｍ未満の距離で隔てられた第１の物体と第２の物体とを提供することと；
前記第１の物体を活性化し、前記第２の物体を活性化しないことと；
前記第１の物体から放射される光を決定することと；
前記第２の物体を活性化することと；
前記第２の物体から放射される光を決定することと；
前記第１の物体から放射される光と、前記第２の物体から放射される光とを用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することとを含む、方法。
（項目７９）
ある距離で隔てられた第１の物体と第２の物体とを提供することと；
前記隔てられた距離よりも大きな波長を有する、前記第１の物体から放射される光を決定することと；
前記第２の物体から放射される光を決定することと；
前記第１の物体から放射される光と、前記第２の物体から放射される光とを用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することとを含む、方法。
（項目８０）
前記第１の物体から放射される光の波長と、前記第２の物体から放射される光の波長とが異なる、項目７９に記載の方法。
（項目８１）
前記第１の物体から放射される光の波長と、前記第２の物体から放射される光の波長とが実質的に同じである、項目７９に記載の方法。
（項目８２）
前記第１の物体を活性化するのに使用する光の波長と、前記第２の物体を活性化するのに使用する光の波長とが異なる、項目７９に記載の方法。
（項目８３）
前記第１の物体を活性化するのに使用する光の波長と、前記第２の物体を活性化するのに使用する光の波長とが実質的に同じである、項目７９に記載の方法。
（項目８４）
前記第１の物体を活性化させ、前記第１の物体から放射される光を発生することを含む、項目７９に記載の方法。
（項目８５）
前記第１の物体を第１の波長を有する入射光にさらすことによって、前記第１の物体が活性化する、項目８４に記載の方法。
（項目８６）
前記第１の物体から放射される光を発生させないように、前記第１の物体を不活性化することを含む、項目８４に記載の方法。
（項目８７）
前記第２の物体を第１の波長を有する入射光にさらすことによって、前記第１の物体が不活性化する、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記第１の物体を第１の波長を有する入射光にさらすことによって、前記第１の物体が不活性化する、項目８６に記載の方法。
（項目８９）
前記第２の物体を活性化させずに、前記第１の物体を活性化し、光を発生させることをさらに含む、項目７９に記載の方法。
（項目９０）
前記第２の物体を活性化し、光を発生させることをさらに含む、項目８９に記載の方法。
（項目９１）
前記第１の物体を不活性化することをさらに含む、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
前記第１の物体を不活性化させる工程の後に、前記第２の物体を活性化し、光を発生させる工程が行われる、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
前記第１の物体が、前記第２の物体とは化学的に異なっている、項目７９に記載の方法。
（項目９４）
前記第１の物体が、前記第２の物体と化学的に実質的に同じである、項目７９に記載の方法。
（項目９５）
前記第１の物体が、光活性化可能なプローブまたは光スイッチング可能なプローブであり、前記第２の物体が、光活性化可能なプローブまたは光スイッチング可能なプローブである、項目７９に記載の方法。
（項目９６）
前記第１の物体が、第１部分である光放射部分と、外的刺激にさらされると前記第１部分を活性化する第２部分である活性化部分とを含む、項目７９に記載の方法。
（項目９７）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ５である、項目９６に記載の方法。
（項目９８）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ５．５である、項目９６に記載の方法。
（項目９９）
前記第１部分である光放射部分がＣｙ７である、項目９６に記載の方法。
（項目１００）
前記第１部分である光放射部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７である、項目９６に記載の方法。
（項目１０１）
前記第２部分である活性化部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４０５である、項目９６に記載の方法。
（項目１０２）
前記第２部分である活性化部分がＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８である、項目９６に記載の方法。
（項目１０３）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ２である、項目９６に記載の方法。
（項目１０４）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ３である、項目９６に記載の方法。
（項目１０５）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ３．５である、項目９６に記載の方法。
（項目１０６）
前記第２部分である活性化部分がＣｙ５である、項目９６に記載の方法。
（項目１０７）
前記第２の物体が、第１部分である光放射部分と、外的刺激にさらされると前記第１部分を活性化する第２部分である活性化部分とを含む、項目７９に記載の方法。
（項目１０８）
前記第１の物体の第１部分と、前記第２の物体の第１部分とが、化学的に実質的に同じであり、前記第１の物体の第２部分と、前記第２の物体の第２部分とが、化学的に同じではない、項目１０７に記載の方法。
（項目１０９）
前記第１の物体の第１部分と、前記第２の物体の第１部分とが、化学的に同じではなく、前記第１の物体の第２部分と、前記第２の物体の第２部分とが、化学的に実質的に同じである、項目１０７に記載の方法。
（項目１１０）
前記第１の物体の第１部分と、前記第２の物体の第１部分とが、化学的に同じではなく、前記第１の物体の第２部分と、前記第２の物体の第２部分とが、化学的に同じではない、項目１０７に記載の方法。
（項目１１１）
前記第１の物体の第１部分と、前記第２の物体の第１部分とが、化学的に実質的に同じであり、前記第１の物体の第２部分と、前記第２の物体の第２部分とが、化学的に実質的に同じである、項目１０７に記載の方法。
（項目１１２）
前記第１の物体から放射される光が可視光である、項目７９に記載の方法。
（項目１１３）
前記第１の物体および前記第２の物体が、共通の物体に固定される、項目７９に記載の方法。
（項目１１４）
前記第１の物体から放射される光を決定する工程と、前記第２の物体から放射される光を決定する工程とを繰り返す、項目７９に記載の方法。
（項目１１５）
前記第１の物体から放射される光を決定する工程が、前記第１の物体から放射される光の画像を得ることを含む、項目７９に記載の方法。
（項目１１６）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、前記放射光のＧａｕｓｓｉａｎフィッティングを用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することを含む、項目７９に記載の方法。
（項目１１７）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、ドリフト補正を用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することをさらに含む、項目１１６に記載の方法。
（項目１１８）
前記ドリフト補正が、基準マーカーを用いて行われる、項目１１７に記載の方法。
（項目１１９）
前記ドリフト補正が、画像相関を用いて行われる、項目１１７に記載の方法。
（項目１２０）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置が、少なくとも約３００ｎｍの精度
で決定される、項目７９に記載の方法。
（項目１２１）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置が、前記第１の物体または前記第２の物体から放射される光の波長よりもおおきな精度で決定される、項目７９に記載の方法。
（項目１２２）
第１の時間点で前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することと、第２の時間点で前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することとを含む、項目７９に記載の方法。
（項目１２３）
２つ以上の時間点で前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することおよび／または時間の関数として前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することを含む、項目７９に記載の方法。
（項目１２４）
ある距離で隔てられた第１の物体と第２の物体とを提供することと；
前記第１の物体を活性化し、前記第２の物体を活性化しないことと；
前記隔てられた距離よりも大きな波長を有する、前記第１の物体から放射される光を決定することと；
前記第２の物体を活性化することと；
前記第２の物体から放射される光を決定することと；
前記第１の物体から放射される光と、前記第２の物体から放射される光とを用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することとを含む、方法。
（項目１２５）
光を放射することが可能で、そのうちのいくつかは、放射される光の波長未満の距離で隔てられている、複数の物体を提供することと；
前記複数の物体の一部分を活性化し、光を放射させることと；
前記放射される光を決定することと；
前記複数の物体のうち、前記活性化した部分を不活性化することと；
前記複数の物体を活性化し、不活性化する工程を繰り返して、前記複数の物体の位置を決定することとを含む、方法。
（項目１２６）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、異なる波長で光を放射する、項目１２５に記載の方法。
（項目１２７）
前記複数の物体が、各々実質的に同じ波長で光を放射する、項目１２５に記載の方法。
（項目１２８）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、異なる波長の光によって活性化される、項目１２５に記載の方法。
（項目１２９）
前記複数の物体が、実質的に同じ波長の光によって活性化される、項目１２５に記載の方法。
（項目１３０）
第１の波長を有する入射光を前記複数の物体に照射することによって、前記複数の物体の一部分が活性化する、項目１２５に記載の方法。
（項目１３１）
第２の波長を有する入射光を前記複数の物体の一部分に照射することによって、前記複数の物体の一部分を不活性化する、項目１２５に記載の方法。
（項目１３２）
第１の波長を有する入射光を前記複数の物体に照射することによって、前記複数の物体
の一部分を不活性化する、項目１２５に記載の方法。
（項目１３３）
前記複数の物体の少なくともいくつかが化学的に異なっている、項目１２５に記載の方法。
（項目１３４）
前記複数の物体が化学的に実質的に同じである、項目１２５に記載の方法。
（項目１３５）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、光活性化可能なプローブまたは光スイッチング可能なプローブである、項目１２５に記載の方法。
（項目１３６）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、第１部分である光放射部分と、外的刺激にさらされると前記第１部分を活性化する第２部分である活性化部分とを含む、項目１２５に記載の方法。
（項目１３７）
前記複数の物体の第１部分が化学的に同じであり、前記複数の物体の第２部分が化学的に同じではない、項目１３６に記載の方法。
（項目１３８）
前記複数の物体の第１部分が化学的に同じではなく、前記複数の物体の第２部分が化学的に実質的に同じである、項目１３６に記載の方法。
（項目１３９）
前記複数の物体の第１部分が化学的に同じではなく、前記複数の物体の第２部分が化学的に同じではない、項目１３６に記載の方法。
（項目１４０）
前記複数の物体の第１部分が化学的に実質的に同じであり、前記複数の物体の第２部分が化学的に実質的に同じである、項目１３６に記載の方法。
（項目１４１）
前記放射光が可視光である、項目１２５に記載の方法。
（項目１４２）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、共通の物体に固定される、項目１２５に記載の方法。
（項目１４３）
前記放射光を決定する工程が、前記放射光の画像を得ることを含む、項目１２５に記載の方法。
（項目１４４）
前記複数の物体の位置を決定する工程が、前記放射光のＧａｕｓｓｉａｎフィッティングを用いて、前記複数の物体の位置を決定することを含む、項目１２５に記載の方法。
（項目１４５）
前記複数の物体の位置を決定する工程が、ドリフト補正を用いて、前記複数の物体の位置を決定することを含む、項目１４４に記載の方法。
（項目１４６）
前記ドリフト補正が、基準マーカーを用いて行われる、項目１４５に記載の方法。
（項目１４７）
前記ドリフト補正が、画像相関を用いて行われる、項目１４５に記載の方法。
（項目１４８）
前記複数の物体の位置が、少なくとも約３００ｎｍの精度で決定される、項目１２５に記載の方法。
（項目１４９）
前記複数の物体の位置が、前記複数の物体から放射される光の波長よりも大きな精度で決定される、項目１２５に記載の方法。
（項目１５０）
第１の時間点で前記複数の物体の位置を決定することと、第２の時間点で前記複数の物体の位置を決定することとを含む、項目１２５に記載の方法。
（項目１５１）
２つ以上の時間点で前記複数の物体の位置を決定することおよび／または時間の関数として前記複数の物体の位置を決定することを含む、項目１２５に記載の方法。
（項目１５２）
前記工程が、列挙した順に行われる、項目１２５に記載の方法。
（項目１５３）
光を放射することが可能で、そのうちのいくつかは、約１０００ｎｍ未満の距離で隔てられている、複数の物体を提供することと；
前記複数の物体の一部分を活性化し、光を放射させることと；
前記放射される光を決定することと；
前記複数の物体の前記活性化した部分を不活性化することと；
前記複数の物体を活性化し、不活性化する工程を繰り返し、前記複数の物体の位置を決定することとを含む、方法。
（項目１５４）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、異なる波長で光を放射する、項目１５３に記載の方法。
（項目１５５）
前記複数の物体が、各々実質的に同じ波長で光を放射する、項目１５３に記載の方法。
（項目１５６）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、異なる波長の光によって活性化される、項目１５３に記載の方法。
（項目１５７）
前記複数の物体が、実質的に同じ波長の光によって活性化される、項目１５３に記載の方法。
（項目１５８）
第１の波長を有する入射光を前記複数の物体の一部分に照射することによって、前記複数の物体の一部分を活性化する、項目１５３に記載の方法。
（項目１５９）
第２の波長を有する入射光を前記複数の物体の一部分に照射することによって、前記複数の物体の一部分を不活性化する、項目１５３に記載の方法。
（項目１６０）
第１の波長を有する入射光を前記複数の物体の一部分に照射することによって、前記複数の物体の一部分を不活性化する、項目１５３に記載の方法。
（項目１６１）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、光活性化可能なプローブまたは光スイッチング可能なプローブである、項目１５３に記載の方法。
（項目１６２）
前記プローブの少なくともいくつかが、光活性化可能な染料または光スイッチング可能な染料である、項目１６１に記載の方法。
（項目１６３）
前記プローブの少なくともいくつかが、光活性化可能な蛍光タンパク質または光スイッチング可能な蛍光タンパク質である、項目１６１に記載の方法。
（項目１６４）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、第１部分である光放射部分と、外的刺激にさらされると前記第１部分を活性化する第２部分である活性化部分とを含む、項目１５３に記載の方法。
（項目１６５）
前記複数の物体の第１部分が化学的に同じであり、前記複数の物体の第２部分が化学的に同じではない、項目１６４に記載の方法。
（項目１６６）
前記複数の物体の第１部分が化学的に同じではなく、前記複数の物体の第２部分が化学的に実質的に同じである、項目１６４に記載の方法。
（項目１６７）
前記複数の物体の第１部分が化学的に同じではなく、前記複数の物体の第２部分が化学的に同じではない、項目１６４に記載の方法。
（項目１６８）
前記複数の物体の少なくともいくつかが、共通の物体に固定される、項目１５３に記載の方法。
（項目１６９）
前記放射光を決定する工程が、前記放射光の画像を得ることを含む、項目１５３に記載の方法。
（項目１７０）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、前記放射光のＧａｕｓｓｉａｎフィッティングを用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することを含む、項目１５３に記載の方法。
（項目１７１）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、ドリフト補正を用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することをさらに含む、項目１７０に記載の方法。
（項目１７２）
前記ドリフト補正が、基準マーカーを用いて行われる、項目１７１に記載の方法。
（項目１７３）
前記ドリフト補正が、画像相関を用いて行われる、項目１７１に記載の方法。
（項目１７４）
前記複数の物体の位置が、少なくとも約３００ｎｍの精度で決定される、項目１５３に記載の方法。
（項目１７５）
前記複数の物体の位置が、前記第１の物体から放射される光の波長未満の精度で決定される、項目１５３に記載の方法。
（項目１７６）
第１の時間点で前記複数の物体の位置を決定することと、第２の時間点で前記複数の物体の位置を決定することとを含む、項目１５３に記載の方法。
（項目１７７）
約１０００ｎｍ未満の距離で隔てられ、各々共通の物体に固定されている第１の物体と第２の物体とを提供することと；
第１の時間点で前記第１の物体および前記第２の物体の位置を決定することと；
第２の時間点で前記第１の物体および前記第２の物体の位置を決定することと；
前記第１の時間点および前記第２の時間点での前記第１の物体および前記第２の物体の位置を用いて、前記共通の物体の移動を決定することとを含む、方法。
（項目１７８）
ある距離で隔てられ、共通の物体に固定されている第１の物体と第２の物体とを提供することと；
前記隔てられたある距離より大きな波長を有する前記第１の物体から放射される光と、前記第２の物体から放射される光とを用いて、第１の時間点で前記第１の物体および前記第２の物体の位置を決定することと；
第２の時間点で前記第１の物体および前記第２の物体の位置を決定することと；
前記第１の時間点および前記第２の時間点での前記第１の物体および前記第２の物体の
位置を用いて、前記共通の物体の移動を決定することとを含む、方法。
（項目１７９）
時間内の一連の画像の中で、１つの物体によって各々作成される１つ以上の光放射領域を同定することと；
各光放射領域について、その光放射領域の中心を同定することと；
各光放射領域について、前記光放射領域を作成する前記１つの物体の位置を、前記１つの物体から放射される光の波長よりも大きな解像度で再構築することとを含む、方法。
（項目１８０）
前記光放射領域の中心を同定する工程が、Ｇａｕｓｓｉａｎ関数に対する最少二乗法を用いることを含む、項目１７９に記載の方法。
（項目１８１）
前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定する工程が、ドリフト補正を用いて、前記第１の物体の位置および前記第２の物体の位置を決定することをさらに含む、項目１７９に記載の方法。
（項目１８２）
前記ドリフト補正が、基準マーカーを用いて行われる、項目１８１に記載の方法。
（項目１８３）
前記ドリフト補正が、画像相関を用いて行われる、項目１８１に記載の方法。
（項目１８４）
前記１つの物体が、光活性化可能なプローブまたは光スイッチング可能なプローブである、項目１７９に記載の方法。
（項目１８５）
前記１つの物体が、第１部分である光放射部分と、外的刺激にさらされると前記第１部分を活性化する第２部分である活性化部分とを含む、項目１７９に記載の方法。
（項目１８６）
前記１つ以上の光放射領域の位置を再構築したものを用いて、画像を作成することをさらに含む、項目１７９に記載の方法。
（項目１８７）
時間内の一連の画像の中で、１つの物体によって各々作成される１つ以上の光放射領域を同定する工程と；
各光放射領域について、その光放射領域の中心を同定する工程と；
各光放射領域について、前記光放射領域を作成する前記１つの物体の位置を、前記１つの物体から放射される光の波長よりも大きな解像度で再構築する工程とを含む方法を機械に実行させるために、媒体に組み込まれたプログラムを備える機械可読媒体を含む、物品。
（項目１８８）
約１００ｎｍ／分未満のドリフトを有する顕微鏡用の移動ステージを備える、物品。
（項目１８９）
前記移動ステージが、約１０ｎｍ／分未満のドリフトを有する、項目１８８に記載の物品。
（項目１９０）
前記移動ステージの少なくとも一部分に照射するように配置された光源をさらに備え、この光源を、プログラムされた様式で作動させ、停止させることが可能である、項目１８８に記載の物品。
（項目１９１）
前記移動ステージの少なくとも一部分に照射するように配置された光源をさらに備え、この光源を、周期的な様式で作動させ、停止させることが可能である、項目１８８に記載の物品。
（項目１９２）
前記移動ステージの少なくとも一部分に照射するように配置された光源をさらに備え、
この光源をシャッターを用いて調節することが可能である、項目１８９に記載の物品。
（項目１９３）
前記移動ステージの少なくとも一部分に照射するように配置された光源をさらに備え、この光源を音響光学変調器を用いて調節することが可能である、項目１８９に記載の物品。
（項目１９４）
前記移動ステージに光学的に連結した位置に光検出器をさらに備える、項目１８９に記載の物品。
（項目１９５）
前記光検出器が、フォトダイオード、光電子増倍器またはＣＣＤカメラを備える、項目１９４に記載の物品。
（項目１９６）
前記移動ステージの少なくとも一部分に照射するように配置された２つ以上の光源をさらに備える、項目１８９に記載の物品。
（項目１９７）
前記２つ以上の光源のうち少なくとも２つは、異なる波長で光を放射する、項目１９６に記載の物品。
（項目１９８）
光源から前記移動ステージに直接光があたるように配置された二色性ミラーまたは多色性ミラーを備える、項目１８９に記載の物品。
（項目１９９）
前記移動ステージの少なくとも一部分に照射するように配置された光源と、前記移動ステージに照射する前に、前記光源から放射される光の少なくとも一部分を変えるように配置されたカラーフィルタとをさらに備える、項目１８９に記載の物品。
（項目２００）
第１の放射波長で光を放射可能な第１状態と、第１の放射波長では実質的に光を放射しない第２状態とにスイッチング可能な、光を放射する物体を含む、画像化組成物。
（項目２０１）
前記光を放射する物体と区別可能であり、第１の放射波長で光を放射可能な第１状態と、第１の放射波長では実質的に光を放射しない第２状態とにスイッチング可能な、第２の光を放射する物体をさらに含む、項目２００に記載の画像化組成物。
（項目２０２）
前記光を放射する物体が、
前記第１の波長で光を放射可能な第１部分と；
外的刺激にさらされると、前記第１の部分を活性化させ、前記第１の波長で前記第１部分から光を放射させる第２部分とを含む、項目２００に記載の画像化組成物。
（項目２０３）
励起波長を有する光にさらされると、前記第２部分が前記第１部分を活性化させる、項目２０２に記載の画像化組成物。
（項目２０４）
前記第１部分が前記第２部分と共有結合している、項目２０２に記載の画像化組成物。
（項目２０５）
前記第１部分および前記第２部分が、各々共通の物体に結合している、項目２０２に記載の画像化組成物。
（項目２０６）
前記第１部分が、前記第２部分から切り離されると蛍光性である、項目２０２に記載の画像化組成物。
（項目２０７）
前記第２部分が、前記第１部分から切り離されると蛍光性である、項目２０２に記載
の画像化組成物。
（項目２０８）
前記第１部分が、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７またはＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７である、項目２０２に記載の画像化組成物。
（項目２０９）
前記第２部分が、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４０５、Ｃｙ２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ
４８８、Ｃｙ３またはＣｙ３．５である、項目２０２に記載の画像化組成物。
（項目２１０）
前記第１部分および前記第２部分が、約５０ｎｍ以下の距離で隔てられている、項目２０２に記載の画像化組成物。
（項目２１１）
前記光を放射する物体と区別可能な第２の光を放射する物体をさらに含み、この第２の光を放射する物体が、第１の波長で光を放射可能な第１部分と、外的刺激にさらされると前記第１部分を活性化する第２部分とを含み、それにより前記第１部分が前記第１の波長で光を放射する、項目２０２に記載の画像化組成物。
本発明は、一般的に、回折限界以下の画像解像技術および他の画像化技術に関する。本発明の主題は、いくつかの場合には、相互に関連する製品、特定の問題に対する代替的な解決法、および／または１つ以上のシステムおよび／または物品の複数の異なる用途に関する。