(57)【要約】本発明は、有効量のジアンフェネチドを有効量のクロルスロンと併用して投与することを含む、肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症の治療方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のジアンフェネチドを有効量のクロルスロンと併用して投与することを含む、肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症の治療方法。
【請求項２】
前記哺乳動物は、ヒツジ及び畜牛からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記哺乳動物はヒツジである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記哺乳動物は畜牛である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ジアンフェネチドの前記有効量は20〜80mg/kgである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ジアンフェネチドの前記有効量は、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kgである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
クロルスロンの前記有効量は3〜10mg/kgである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
クロルスロンの前記有効量は、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kgである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記肝臓吸虫は肝蛭である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記肝臓吸虫は巨大肝蛭である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症を治療するための、有効量のジアンフェネチド及び有効量のクロルスロンを併用した使用。
【請求項１２】
前記哺乳動物は、ヒツジ及び畜牛からなる群より選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記哺乳動物はヒツジである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
前記哺乳動物は畜牛である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１５】
ジアンフェネチドの前記有効量は20〜80mg/kgである、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
ジアンフェネチドの前記有効量は、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kgである、請求項１１〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
クロルスロンの前記有効量は3〜10mg/kgである、請求項１１〜１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
クロルスロンの前記有効量は、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kgである、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
前記肝臓吸虫は肝蛭である、請求項１１〜１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
前記肝臓吸虫は巨大肝蛭である、請求項１１〜１８のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
肝臓吸虫は蠕虫類寄生虫であり、畜産業においては、主に肝蛭又はその熱帯性巨大肝蛭の感染症により、大きな経済的損失を引き起こす。肝蛭に対して有効な全ての公知の薬剤は巨大肝蛭に対しても有効であるため、以下の議論では、これらを集合的に肝蛭と称する。
【０００２】
肝蛭感染症は主に農場反芻動物に対して影響を及ぼすが、最終宿主に関しては選択的ではなく、ヒトを含む広範囲の哺乳類に首尾よく感染する。農場反芻動物の間で、肝蛭は、世界中で数十億ドルの年間経済的損失を引き起こす可能性がある。McVeigh et al, Trends in Parasitology, March 2018, Vol. 34, No. 3 184-196。
【０００３】
肝臓吸虫は複雑なライフサイクルを持つ。その最終宿主内で、肝蛭は、初期未成熟、未成熟、及び成熟（一般に成虫期と呼ばれる）の三段階に分類できる。ヒツジ内では、1〜3週齢の肝蛭で初期未成熟型が生じ、4〜7週齢の肝蛭で未成熟型が生じ、8週齢以上の肝蛭で成熟型が生じる。畜牛内では、1〜5週齢の肝蛭で初期未成熟型が生じ、6〜9週齢の肝蛭で未成熟型が生じ、10週齢以上の肝蛭で成熟型が生じる。
【０００４】
駆虫薬の中には、より頻繁な適用を多くの場合必要として成体寄生虫に対してのみ有効なものもあるが、現在では多くのものが、薬剤耐性の発現により肝蛭症の化学的予防における優位性を失っている。
【０００５】
オーストラリアでは、いくつかの駆虫薬に対する肝蛭の薬剤耐性が、牧草地及び実験室で実証されている（(1990) Drug resistance in Fasciola hepatica. In:Boray JC, Martin PJ, Roush RT (eds) Resistance of parasites to antiparasitic drugs MSD AGVET, Rahway, N.J., pp 51-60、及びD. Boray J.C., De Bono Drug resistance in Fasciola hepatica, Outteridge PM, Richards RB (eds) Australian advances in veterinary science (1989). The Australian Veterinary Association, pp166-169）。ヒツジにおいて、サリチルアニリド化合物、特にラフォキサニド及びクロサンテルを長期的かつ定期的に使用してきたことによって、ニューサウスウェールズ州の流行地域における肝蛭の耐性株が選択されたことが示されている。これらの耐性株は、畜牛内で、またヒツジにおいて何代か経て、耐性状態を維持することが示されている。地理的に異なる地域から分離された17株のうち、10株（58.8%）は肝蛭における推奨用量のラフォキサニドに対する耐性を示し、クロサンテルに対する付帯的耐性(side resistance)は明白であった。薬剤に対する耐性は特に未成熟肝蛭により発現したが、成熟吸虫により発現することはまれであった。有効性が向上した肝臓吸虫感染症の治療が望まれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、有効量のジアンフェネチドを有効量のクロルスロンと併用して投与することを含む、肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症の治療方法を提供する。ジアンフェネチド及びクロルスロンの相乗的併用は、感受性を有する肝蛭及び耐性を有する肝蛭に対する有効性に関して利点を有する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ジアンフェネチドは、N-[4-[2-[2-(4-アセトアミドフェノキシ)エトキシ]エトキシ]フェニル]アセトアミドという化学名によっても知られている。ジアンフェネチドの調製は、当技術分野では周知である。例えば、米国特許番号3896235。ジアンフェネチドは肝臓吸虫に対して使用されており、脱アシル化によってDAMDとして知られる化合物に急速に代謝される。ジアンフェネチドは6週齢までの初期未成熟吸虫に対して非常に効果的であることがわかっているが、吸虫の成長に伴って活性が徐々に低下することを示す。Fairweather et al., The Veterinary Journal 1999, 158, 81-112。ジアンフェネチドは、ヒツジにおける肝臓吸虫感染症の治療のためにCoriban（登録商標）という商品名で市販され、1980年代初頭に市場から除去された。ヒツジへの推奨経口投与量は80〜120mg/kgであった。
【０００８】
クロルスロンは、4-アミノ-6-(1,2,2-トリクロロエテニル)ベンゼン-1,3-ジスルホンアミドという化学名によっても知られている。クロルスロンの調製は、当技術分野では周知である。例えば、米国特許番号4064239。クロルスロンは成熟吸虫に対して効果があると考えられており、ヒツジよりも畜牛に効果がある。イベルメクチンを併用したクロルスロンは、畜牛における成熟肝臓吸虫の処置のために、Ivomec Plus（登録商標）などの商品名で市販されている。
【０００９】
「肝臓吸虫感染症」という用語は、肝蛭又は巨大肝蛭の感染症を指す。別段の指示がない限り、この用語は、任意の成熟段階及び混在する成熟段階における吸虫による感染症を含む。
【００１０】
「哺乳動物」という用語は、毛髪又は毛皮を有し、子の栄養のために雌が乳を分泌する温血脊椎動物を指し、ヒトを含む。特定の哺乳動物は反芻動物であり、例えば、畜牛、ヒツジ、ヤギ、バイソン、アフリカ水牛、水牛、アンテロープ、シカ、ムース、ヘラジカ、及びキリンである。また、哺乳動物という用語には、いわゆる偽反芻動物、例えば、ラマ及びアルパカも含まれる。また、馬及びロバも哺乳動物という用語に含まれる。より具体的には、哺乳動物はヒツジ、ヤギ、バイソン、アフリカ水牛、水牛、及び畜牛であると理解される。さらに具体的には、哺乳動物はヒツジ及び畜牛である。
【００１１】
熟練した臨床医であれば、本治療を必要とする哺乳動物を容易に判定することができる。例えば、症状には発熱、倦怠感、腹痛、好酸球増加症、肝腫大、及び肝臓検査異常などが含まれる。また、特に血液及び乳汁に対するELISA検査を含む抗体試験によっても感染症を検出することができる。この感染症は、ELISA検査によるものを含む糞便検体の検査によっても診断できる。さらに、季節、降雨量、気温、及び他の地域状況に基づくモデル化を使用して、肝臓吸虫感染症がより起こりやすい時期を予測することができる。
【００１２】
本明細書で用いる「併用して」、「併用」及び「相乗的併用」という用語は、クロルスロンの投与前、投与中、又は投与後に、ジアンフェネチドが投与されることを意味するものとされる。すなわち、本併用において、ジアンフェネチド及びクロルスロンは、順次に又は同時に哺乳動物に投与される。典型的には、順次投与とはジアンフェネチド又はクロルスロンのいずれかが3日間の他方の投与と共に投与されることを意味する。より典型的には、ジアンフェネチド及びクロルスロンは互いに1日以内に、さらにより典型的には同日に投与される。順次投与はまた、ジアンフェネチド又はクロルスロンのいずれかの投与から1時間以内、又は数分間以内に他方が投与されることを意味する。便宜上、ジアンフェネチド及びクロルスロンは同時投与される。
【００１３】
有効量のジアンフェネチドを有効量のクロルスロンと併用して、哺乳動物に経口投与又は非経口投与する。一実施形態において、有効量のジアンフェネチドを有効量のクロルスロンと併用して、哺乳動物に経口投与する。一実施形態において、有効量のジアンフェネチドを有効量のクロルスロンと併用して、哺乳動物に非経口投与する。
【００１４】
経口投与は製剤の技術分野で従来使用されているアジュバントを含むことができ、したがって、公知の方法で処理することで、例えば、溶液、乳状液、可溶性粉末、粉末混合物、顆粒又は高分子物質のマイクロカプセル化を得ることができる。
【００１５】
このようなジアンフェネチド及びクロルスロンを含む製剤、調製物、又は組成物は別々に又は共に、任意には固体又は液体のアジュバントを含んで、例えば、有効成分を例えば、溶媒、固体担体などのアジュバントと密接に混合及び／又は粉砕するという、当技術分野で周知の方法によって製造される。経口投与はまた、ドレンチ、強制経口投与、錠剤、カプセル又は飼料中により達成することができる。
【００１６】
「ジアンフェネチドの有効量」及び「クロルスロンの有効量」という用語は、本併用で投与された場合に、肝臓吸虫感染症の進行を排除、ほぼ排除、緩徐化又は停止させるために必要なジアンフェネチド及びクロルスロンの量を意味するものとされる。
【００１７】
特定の実施形態において、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は、20〜120mg/kg（例えば、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、35mg/kg、40mg/kg、45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg、60mg/kg、65mg/kg、70mg/kg、75mg/kg、80mg/kg、85mg/kg、90mg/kg、95mg/kg、100mg/kg、105mg/kg、110mg/kg、115mg/kg又は120mg/kg）であり、本併用におけるクロルスルロンの有効量は、1〜10mg/kg（例えば、1mg/kg、1.5mg/kg、2mg/kg、2.5mg/kg、3mg/kg、3.5mg/kg、4mg/kg、4.5mg/kg、5mg/kg、5.5mg/kg、6mg/kg、6.5mg/kg、7mg/kg、7.5mg/kg、8mg/kg、8.5mg/kg、9mg/kg、9.5mg/kg又は10mg/kg）である。特定の実施形態において、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は、20〜80mg/kg（例えば、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kg）であり、本併用におけるクロルスロンの有効量は、1〜10mg/kg（例えば、1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kg）である。特定の実施形態において、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は、30〜80mg/kg、40〜80mg/kg、50〜80mg/kg、60〜80mg/kg又は70〜80mg/kgである。特定の実施形態において、本併用におけるクロルスロンの有効量は、1.5〜10mg/kg、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである。特定の実施形態において、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は、30〜60mg/kg、40〜60mg/kg又は40〜50mg/kgである。特定の実施形態において、本併用におけるクロルスロンの有効量は、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg、6〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである。
【００１８】
特定の実施形態において、ヒツジを治療するための、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は20〜80mg/kgであり、本併用におけるクロルスロンの有効量は3.5〜10mg/kgである。特定の実施形態において、ヒツジを治療するための、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は20〜60mg/kgであり、本併用におけるクロルスロンの有効量は5〜10mg/kgである。特定の実施形態において、ヒツジを治療するための、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は35mg/kgであり、本併用におけるクロルスロンの有効量は5mg/kgである。
【００１９】
特定の実施形態において、畜牛を治療するための、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は40〜120mg/kgであり、本併用におけるクロルスロンの有効量は3.5〜10mg/kgである。特定の実施形態において、畜牛を治療するための、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は40〜80mg/kgであり、本併用におけるクロルスロンの有効量は5〜10mg/kgである。特定の実施形態において、畜牛を治療するための、本併用におけるジアンフェネチドの有効量は70mg/kgであり、本併用におけるクロルスロンの有効量は10mg/kgである。
【００２０】
本発明は、有効量のジアンフェネチドを有効量のクロルスロンと併用して投与することを含む、肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症の治療方法を提供する。別の実施形態において、前記哺乳動物は反芻動物である。別の実施形態において、前記哺乳動物は、ヒツジ及び畜牛からなる群より選択される。別の実施形態において、前記哺乳動物はヒツジである。別の実施形態において、前記哺乳動物は畜牛である。別の実施形態において、前記併用におけるジアンフェネチドの有効量は、20〜80mg/kg（例えば、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kg）である。別の実施形態において、前記併用におけるクロルスロンの有効量は、1〜10mg/kg（例えば、1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kg）である。特定の実施形態において、ジアンフェネチドの有効量は、30〜80mg/kg、40〜80mg/kg、50〜80mg/kg、60〜80mg/kg又は70〜80mg/kgである。特定の実施形態において、クロルスロンの有効量は、1.5〜10mg/kg、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである。
【００２１】
本発明はまた、肝臓吸虫感染症を治療のための薬剤の製造におけるジアンフェネチド及びクロルスロンを併用した使用に関する。別の実施形態において、前記併用におけるジアンフェネチドの使用は20〜80mg/kg（例えば、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kg）である。別の実施形態において、前記併用におけるクロルスロンの使用は1〜10mg/kg（例えば、1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kg）である。特定の実施形態において、ジアンフェネチドの有効量は、30〜80mg/kg、40〜80mg/kg、50〜80mg/kg、60〜80mg/kg又は70〜80mg/kgである。特定の実施形態において、クロルスロンの有効量は、1.5〜10mg/kg、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである。
【００２２】
本開示の様々な態様は、以下の番号付けされた条項に提示される。
条項１：有効量のジアンフェネチドを有効量のクロルスロンと併用して投与することを含む、肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症の治療方法。
条項２：前記哺乳動物がヒツジ及び畜牛からなる群より選択される、条項１に記載の方法。
条項３：前記哺乳動物がヒツジである、条項１に記載の方法。
条項４：前記哺乳動物が畜牛である、条項１に記載の方法。
条項５：ジアンフェネチドの前記有効量が、20〜80mg/kg、30〜80mg/kg、40〜80mg/kg、50〜80mg/kg、60〜80mg/kg又は70〜80mg/kgである、条項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
条項６：ジアンフェネチドの前記有効量が、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kgである、条項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
条項７：クロルスロンの前記有効量が、1〜10mg/kg、1.5〜10mg/kg、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである、条項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
条項８：クロルスロンの前記有効量が、1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kgである、条項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
条項９：前記肝臓吸虫は肝蛭である、条項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
条項１０：前記肝臓吸虫は巨大肝蛭である、条項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
条項１１：前記肝臓吸虫感染症が初期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
条項１２：前記肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
条項１３：前記肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
条項１４：肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症を治療するための、有効量のジアンフェネチド及び有効量のクロルスロンを併用した使用。
条項１５：前記哺乳動物がヒツジ及び畜牛からなる群より選択される、条項１４に記載の使用。
条項１６：前記哺乳動物がヒツジである、条項１４に記載の使用。
条項１７：前記哺乳動物が畜牛である、条項１４に記載の使用。
条項１８：ジアンフェネチドの前記有効量が、20〜80mg/kg、30〜80mg/kg、40〜80mg/kg、50〜80mg/kg、60〜80mg/kg又は70〜80mg/kgである、条項１４〜１７のいずれか一項に記載の使用。
条項１９：ジアンフェネチドの前記有効量が、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kgである、条項１４〜１８のいずれか一項に記載の使用。
条項２０：クロルスロンの前記有効量が、1〜10mg/kg、1.5〜10mg/kg、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである、条項１４〜１９のいずれか一項に記載の使用。
条項２１：クロルスロンの前記有効量が、1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kgである、条項１４〜２０のいずれか一項に記載の使用。
条項２２：前記肝臓吸虫が肝蛭である、条項１４〜２１のいずれか一項に記載の使用。
条項２３：前記肝臓吸虫が巨大肝蛭である、条項１４〜２１のいずれか一項に記載の使用。
条項２４：前記肝臓吸虫感染症が初期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１４〜２３のいずれか一項に記載の使用。
条項２５：前記肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１４〜２３のいずれか一項に記載の使用。
条項２６：前記肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１４〜２３のいずれか一項に記載の使用。
条項２７：肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症を治療するのための薬剤の製造における、有効量のジアンフェネチド及び有効量のクロルスロンを併用した使用。
条項２８：前記哺乳動物がヒツジ及び畜牛からなる群より選択される、条項２７に記載の使用。
条項２９：前記哺乳動物がヒツジである、条項２７に記載の使用。
条項３０：前記哺乳動物が畜牛である、条項２７に記載の使用。
条項３１：ジアンフェネチドの前記有効量が、20〜80mg/kg、30〜80mg/kg、40〜80mg/kg、50〜80mg/kg、60〜80mg/kg又は70〜80mg/kgである、条項２７〜３０のいずれか一項に記載の使用。
条項３２：ジアンフェネチドの前記有効量が、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kgである、条項２７〜３１のいずれか一項に記載の使用。
条項３３：クロルスロンの前記有効量が、1〜10mg/kg、1.5〜10mg/kg、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである、条項２７〜３２のいずれか一項に記載の使用。
条項３４：クロルスロンの前記有効量が、1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kgである、条項２７〜３３のいずれか一項に記載の使用。
条項３５：前記肝臓吸虫が肝蛭である、条項２７〜３４のいずれか一項に記載の使用。
条項３６：前記肝臓吸虫が巨大肝蛭である、条項２７〜３４のいずれか一項に記載の使用。
条項３７：前記肝臓吸虫感染症が初期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項２７〜３６のいずれか一項に記載の使用。
条項３８：前記肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項２７〜３６のいずれか一項に記載の使用。
条項３９：前記肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項２７〜３６のいずれか一項に記載の使用。
条項４０：肝臓吸虫感染症の治療を必要とする哺乳動物における肝臓吸虫感染症を治療するための、ジアンフェネチド及びクロルスロンの相乗的併用。
条項４１：前記哺乳動物がヒツジ及び畜牛からなる群より選択される、条項４０に記載の併用。
条項４２：前記哺乳動物がヒツジである、条項４０に記載の併用。
条項４３：前記哺乳動物が畜牛である、条項４０に記載の併用。
条項４４：20〜80mg/kg、30〜80mg/kg、40〜80mg/kg、50〜80mg/kg、60〜80mg/kg又は70〜80mg/kgのジアンフェネチドを含む、条項４０〜４３のいずれか一項に記載の併用。
条項４５：20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg、70mg/kg又は80mg/kgのジアンフェネチドを含む、条項４０〜４４のいずれか一項に記載の併用。
条項４６：1〜10mg/kg、1.5〜10mg/kg、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg又は7〜10mg/kgのクロルスロンを含む、条項４０〜４５のいずれか一項に記載の併用。
条項４７：1.5mg/kg、3.5mg/kg、5mg/kg、7mg/kg又は10mg/kgのクロルスロンを含む、条項４０〜４６のいずれか一項に記載の併用。
条項４８：前記肝臓吸虫が肝蛭である、条項４０〜４７のいずれか一項に記載の併用。
条項４９：前記肝臓吸虫が巨大肝蛭である、条項４０〜４７のいずれか一項に記載の併用。
条項５０：前記肝臓吸虫感染症が初期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項４０〜４９のいずれか一項に記載の併用。
条項５１：前記肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項４０〜４９のいずれか一項に記載の併用。
条項５２：前記肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項４０〜４９のいずれか一項に記載の併用。
条項５３：前記ジアンフェネチド及び前記クロルスロンが順次投与される、条項１〜１３のいずれか一項に記載の方法、条項１４〜３９のいずれか一項に記載の使用、又は条項４０〜５２のいずれか一項に記載の併用。
条項５４：前記ジアンフェネチド及び前記クロルスロンが同時投与される、条項１〜１３のいずれか一項に記載の方法、条項１４〜３９のいずれか一項に記載の使用、又は条項４０〜５２のいずれか一項に記載の併用。
条項５５：ジアンフェネチドの前記有効量が、30〜60mg/kg、40〜60mg/kg又は40〜50mg/kgである、条項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
条項５６：ジアンフェネチドの前記有効量が、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg又は60mg/kgである、条項５５に記載の方法。
条項５７：クロルスロンの前記有効量が、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg、6〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである、条項５５又は条項５６に記載の方法。
条項５８：クロルスロンの前記有効量が、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg又は10mg/kgである、条項５５〜５７のいずれか一項に記載の方法。
条項５９：ジアンフェネチドの前記有効量が20〜60mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が5〜10mg/kgである、条項３に記載の方法。
条項６０：ジアンフェネチドの前記有効量が40〜80mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が5〜10mg/kgである、条項４に記載の方法。
条項６１：前記肝臓吸虫が肝蛭である、条項５５〜６０のいずれか一項に記載の方法。
条項６２：前記肝臓吸虫が巨大肝蛭である、条項５５〜６０のいずれか一項に記載の方法。
条項６３：前記肝臓吸虫感染症が早期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項５５〜６０のいずれか一項に記載の方法。
条項６４：前記肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項５５〜６０のいずれか一項に記載の方法。
条項６５：前記肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項５５〜６０のいずれか一項に記載の方法。
条項６６：ジアンフェネチドの前記有効量が、30〜60mg/kg、40〜60mg/kg又は40〜50mg/kgである、条項１４〜１７のいずれか一項に記載の使用。
条項６７：ジアンフェネチドの前記有効量が、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg又は60mg/kgである、条項６６に記載の使用。
条項６８：クロルスロンの前記有効量が、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg、6〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである、条項６６又は条項６７に記載の使用。
条項６９：クロルスロンの前記有効量が、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg又は10mg/kgである、条項６６〜６８のいずれか一項に記載の使用。
条項７０：ジアンフェネチドの前記有効量が20〜60mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が5〜10mg/kgである、条項１６に記載の使用。
条項７１：ジアンフェネチドの前記有効量が40〜80mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が5〜10mg/kgである、条項１７に記載の使用。
条項７２：前記肝臓吸虫が肝蛭である、条項６６〜７１のいずれか一項に記載の使用。
条項７３：前記肝臓吸虫が巨大肝蛭である、条項６６〜７１のいずれか一項に記載の使用。
条項７４：前記肝臓吸虫感染症が初期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項６６〜７１のいずれか一項に記載の使用。
条項７５：前記肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項６６〜７１のいずれか一項に記載の使用。
条項７６：前記肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項６６〜７１のいずれか一項に記載の使用。
条項７７：ジアンフェネチドの前記有効量が、30〜60mg/kg、40〜60mg/kg又は40〜50mg/kgである、条項２７〜３０のいずれか一項に記載の使用。
条項７８：ジアンフェネチドの前記有効量が、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg又は60mg/kgである、条項７７に記載の使用。
条項７９：クロルスロンの前記有効量が、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg、6〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである、条項７７又は条項７８に記載の使用。
条項８０：クロルスロンの前記有効量が、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg又は10mg/kgである、条項７７〜７９のいずれか一項に記載の使用。
条項８１：ジアンフェネチドの前記有効量が20〜60mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が5〜10mg/kgである、条項２９に記載の使用。
条項８２：ジアンフェネチドの前記有効量が40〜80mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が5〜10mg/kgである、条項３０に記載の使用。
条項８３：前記肝臓吸虫が肝蛭である、条項７７〜８２のいずれか一項に記載の使用。
条項８４：前記肝臓吸虫が巨大肝蛭である、条項７７〜８２のいずれか一項に記載の使用。
条項８５：前記肝臓吸虫感染症が初期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項７７〜８２のいずれか一項に記載の使用。
条項８６：前記肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項７７〜８２のいずれか一項に記載の使用。
条項８７：前記肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項７７〜８２のいずれか一項に記載の使用。
条項８８：ジアンフェネチドの前記有効量が、30〜60mg/kg、40〜60mg/kg又は40〜50mg/kgである、条項４０〜４３のいずれか一項に記載の併用。
条項８９：ジアンフェネチドの前記有効量が、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg又は60mg/kgである、条項８８に記載の併用。
条項９０：クロルスロンの前記有効量が、3〜10mg/kg、5〜10mg/kg、6〜10mg/kg又は7〜10mg/kgである、条項８８又は条項８９に記載の併用。
条項９１：クロルスロンの前記有効量が、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、7mg/kg、8mg/kg、9mg/kg又は10mg/kgである、条項８８〜９０のいずれか一項に記載の併用。
条項９２：ジアンフェネチドの前記有効量が20〜60mg/kg（例えば、35mg/kg）であり、クロルスロンの前記有効量が5〜10mg/kg（例えば、5mg/kg）である、条項４２に記載の併用。
条項９３：ジアンフェネチドの前記有効量が40〜80mg/kg（例えば、70mg/kg）であり、クロルスロンの前記有効量が5〜10mg/kg（例えば、10mg/kg）である、条項４３に記載の併用。
条項９４：前記肝臓吸虫が肝蛭である、条項８８〜９３のいずれか一項に記載の併用。
条項９５：前記肝臓吸虫が巨大肝蛭である、条項８８〜９３のいずれか一項に記載の併用。
条項９６：前記肝臓吸虫感染症が早期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項８８〜９３のいずれか一項に記載の併用。
条項９７：肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項８８〜９３のいずれか一項に記載の併用。
条項９８：肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項８８〜９３のいずれか一項に記載の併用。
条項９９：ジアンフェネチド及びクロルスロンが順次投与される、条項５５〜６０のいずれか一項に記載の方法、条項６６〜７１若しくは７７〜８２のいずれか一項に記載の使用、又は条項８８〜９３のいずれか一項に記載の併用。
条項１００：ジアンフェネチド及びクロルスロンが同時投与される、条項５５〜６０のいずれか一項に記載の方法、条項１４〜３９のいずれか一項に記載の使用、又は条項８８〜９３のいずれか一項に記載の併用。
条項１０１：ジアンフェネチドの前記有効量が、20mg/kg以上、30mg/kg以上、40mg/kg以上、50mg/kg以上、60mg/kg以上、70mg/kg以上、80mg/kg以上、90mg/kg以上、100mg/kg以上、110mg/kg以上、又は120mg/kg以上である、条項１に記載の方法、条項１４若しくは条項２７に記載の使用、又は条項４０に記載の併用。
条項１０２：ジアンフェネチドの前記有効量が、120mg/kg以下、110mg/kg以下、90mg/kg以下、80mg/kg以下、70mg/kg以下、60mg/kg以下、50mg/kg以下、40mg/kg以下、30mg/kg以下、20mg/kg以下である、条項１に記載の方法、条項１４若しくは条項２７に記載の使用、又は条項４０に記載の併用。
条項１０３：クロルスロンの前記有効量が、1mg/kg以上、1.5mg/kg以上、2mg/kg以上、2.5mg/kg以上、3mg/kg以上、3.5mg/kg以上、4mg/kg以上、4.5mg/kg以上、5mg/kg以上、5.5mg/kg以上、6mg/kg以上、6.5mg/kg以上、7mg/kg以上、7.5mg/kg以上、8mg/kg以上、8.5mg/kg以上、9mg/kg以上、9.5mg/kg以上、又は10mg/kg以上である、条項１、１０１若しくは１０２に記載の方法、条項１４、２７、１０１若しくは１０２に記載の使用、又は条項４０、１０１若しくは１０２に記載の併用。
条項１０４：クロルスロンの前記有効量が、10mg/kg以下、9.5mg/kg以下、9mg/kg以下、8.5mg/kg以下、8mg/kg以下、7.5mg/kg以下、7mg/kg以下、6.5mg/kg以下、6mg/kg以下、5.5mg/kg以下、5mg/kg以下、4.5mg/kg以下、4mg/kg以下、3.5mg/kg以下、3mg/kg以下、2.5mg/kg以下、2mg/kg以下、1.5mg/kg以下、又は1mg/kg以下である、条項１、１０１若しくは１０２に記載の方法、条項１４、２７、１０１若しくは１０２に記載の使用、又は条項４０、１０１若しくは１０２に記載の併用。
条項１０５：ジアンフェネチドの前記有効量が20〜80mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が3.5〜10mg/kgである、条項１に記載の方法、条項１４若しくは条項２７に記載の使用、又は条項４０に記載の併用。
条項１０６：前記哺乳動物がヒツジである、条項１０１〜１０５のいずれか一項に記載の方法、条項１０１〜１０５のいずれか一項に記載の使用、又は条項１０１〜１０５のいずれか一項に記載の併用。
条項１０７：前記哺乳動物が畜牛である、条項１０１〜１０５のいずれか一項に記載の方法、条項１０１〜１０５のいずれか一項に記載の使用、又は条項１０１〜１０５のいずれか一項に記載の併用。
条項１０８：ジアンフェネチドの前記有効量が35mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が5mg/kgである、条項１０６に記載の方法、使用又は併用。
条項１０９：ジアンフェネチドの前記有効量が70mg/kgであり、クロルスロンの前記有効量が10mg/kgである、条項１０７に記載の方法、使用又は併用。
条項１１０：前記肝臓吸虫が肝蛭である、条項１０１〜１０９のいずれか一項に記載の方法、条項１０１〜１０９のいずれか一項に記載の使用、又は条項１０１〜１０９のいずれか一項に記載の併用。
条項１１１：前記肝臓吸虫が巨大肝蛭である、条項１０１〜１０９のいずれか一項に記載の方法、条項１０１〜１０９のいずれか一項に記載の使用、又は条項１０１〜１０９のいずれか一項に記載の併用。
条項１１２：前記肝臓吸虫感染症が早期未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の方法、条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の使用、又は条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の併用。
条項１１３：前記肝臓吸虫感染症が未成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の方法、条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の使用、又は条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の併用。
条項１１４：前記肝臓吸虫感染症が成熟段階肝臓吸虫感染症である、条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の方法、条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の使用、又は条項１０１〜１１１のいずれか一項に記載の併用。
条項１１５：前記方法、使用又は併用が、肝臓吸虫感染症の治療に対して、80%以上、85%以上、86%以上、87%以上、88%以上、89%以上、90%以上、91%以上、92%以上、93%以上、94%以上、95%以上、96%以上、97%以上、98%以上、又は99%以上の有効性を示す、いずれかの前項に記載の方法、使用又は併用。
条項１１６：前記方法、使用又は併用が85〜99%の有効性を示す、いずれかの前項に記載の方法、使用又は併用。
条項１１７：前記方法、使用又は併用が85〜96%の有効性を示す、いずれかの前項に記載の方法、使用又は併用。
条項１１８：有効性の評価が、未治療の対照と比較した、哺乳動物の肝臓から摘出された生存する吸虫の数に基づく、条項１１５〜１１７のいずれか一項に記載の方法、使用又は併用。
条項１１９：治療後40〜80日目（例えば、治療後40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、又は80日目）に回収された、インタクトな胆嚢と総胆管を伴う肝臓で評価が行われる、条項１１８に記載の方法、使用又は併用。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下の実施例は、ヒツジ及び畜牛におけるジアンフェネチド及びクロルスロンの併用の改善された有効性を説明する。これらの実施例は、限定ではなく例示として記載されていることを理解されたい。
【００２４】
以下の実施例では、すべての動物において、肝蛭の感染症がないことが確認され、臨床的に健康であることが、研究への登録前に獣医師によってわかった。用量は、適切なサイズの使い捨てシリンジから経口投与した。
【００２５】
吸虫数及び体重を対数変換し（吸虫数のみに定数1を加えた後）、変換済データの分布を確認して、それらが正規分布の仮定を満たしているかどうかを調べた。対数変換された吸虫数、対数変換された体重、及び（未変換の）吸虫測定について正規分布の仮定が満たされた場合、分散分析法（ANOVA）によって治療グループ間の差異を分析した。
【００２６】
算術平均（Amean）、幾何平均（Gmean）、中央値及び範囲を、吸虫数、吸虫測定及び体重について要約した。吸虫数の幾何平均の算出には、定数1を適用した。
【００２７】
各治療群の有効率は、以下のように計算した。
有効率= 100×(FCC - FCT)/FCC
ここで、FCC は対照群の算術平均吸虫数であり、FCT は治療群の算術平均吸虫数である。本式はまた、平均幾何吸虫数を用いて適用し、平均幾何吸虫数は、各吸虫数に定数として1を加え、次いで変換後に1を差し引いた対数変換データを用いて計算した。
【００２８】
相乗効果は、以下の場合に結論付けられた。
（1−有効性D+C）＜（1−有効性D）×（1−有効性C）
ここで、Dはジアンフェネチドであり、Cはクロルスロンであり、有効性は絶対数として測定される（%ではない）。
【００２９】
なお、予想相乗効果は以下のように定義される。
1−有効性（相乗効果なしを予想）=（1−有効性D）×（1−有効性C）。
【実施例】
【００３０】
（実施例１）
ジアンフェネチド及びクロルスロンの典型的な製剤を実施例1に示す。ジアンフェネチドの懸濁液を次のように調製した。プロピレングリコールをガラスビーカーに入れる。両パラベンを添加し、溶解するまで撹拌する。ポリソルベート80、消泡乳剤及び水を添加し、均一になるまで撹拌する。撹拌しながらAvicel RC591を非常にゆっくりと加える。その後、Ultra-Turrax（登録商標）で数分間均一化し、攪拌しながらジアンフェネチドをゆっくり加え、再度Ultra-Turrax （登録商標）で少なくとも10分間均一化して、以下の成分を有する懸濁液を得た。
1.  ジアンフェネチド  15%（w/v）
2.  プロピレングリコール  5%（w/v）
3.  メチルパラベン  0.11%（w/v）
4.  プロピルパラベン  0.04%（w/v）
5.  ポリソルベート80  0.5%（w/v）
6.  Avicel RC 591  1.2%（w/v）
7.  消泡乳剤  0.6%（w/v）
8.  脱塩水  ad 100。
【００３１】
クロルスロンの懸濁液を次のように調製した。水を加熱し、両パラベンを加え、それらが溶解するまで撹拌する。室温まで冷却し、SDS及び消泡乳剤を添加し、均一になるまで撹拌する。撹拌しながらAvicel RC591を非常にゆっくりと添加する。その後、Ultra-Turrax（登録商標）で数分間均一化する。攪拌しながらクロルスロンをゆっくり添加し、再度Ultra-Turrax（登録商標）で少なくとも10分間均一化して、以下の成分を有する懸濁液を得た。
1.  クロルスロン  3.5%（w/v）
2.  メチルパラベン  0.11%（w/v）
3.  プロピルパラベン  0.04%（w/v）
4.  SDS（ラウリル硫酸ナトリウム）  0.1%（w/v）
5.  Avicel RC 591  1.2%（w/v）
6.  消泡乳剤  0.5%（w/v）
7.  脱塩水  ad 100。
【００３２】
（実施例２）
ヒツジにおける未成熟段階肝蛭感染症に対するクロルスロンと同時に投与したジアンフェネチドの相乗効果の評価
【００３３】
本研究は、ジアンフェネチド（40mg/kg）をクロルスロン（3.5mg/kg）と同時投与、ジアンフェネチド（40mg/kg）単剤投与、及びクロルスロン（3.5mg/kg）単剤投与における、42日目における治療したヒツジ内の肝蛭に対する有効性を評価することであった。本研究は、3〜4か月齢のメリノ子羊を用いた対照盲検無作為化試験とした。
【００３４】
0日目に、ヒツジを200個の「Sunny Corner」（実験室株リファレンスFashep-66）の肝蛭メタセルカリアを目標に実験的に感染させた。必要数のメタセルカリアは、水及び4%カルボキシメチルセルロース溶液中で感染用に調製した。各感染用量に続いて水を経口投与した。感染後に続いて残留メタセルカリアについてシリンジを確認し、目標感染量の93.5%〜100%（平均98.3%）がヒツジに投与されたと判定した。
【００３５】
ヒツジを41日目の体重に基づいて治療群に無作為化し、表2.1に示す群に割り付けた。
【００３６】
【表１】
2022502394.tif 000002
【００３７】
治療の1日前に体重を測定し、これを用量で測定し、0.1ml単位で四捨五入した。42日目において、供餌前に、表2.1の治療のみで個々の動物を1回治療した。動物の治療後、動物を囲いに戻し、1時間以内に給餌した。この時、未治療の対照動物にも給餌した。
【００３８】
インタクトな胆嚢と総胆管を伴う肝臓を各動物から91日目に回収し、肝蛭の計数処理をした。有効性の評価を、肝臓から摘出された生存する吸虫の個数に基づいて行った。
【００３９】
治療群間の吸虫数の比較には、分散分析法モデルを用いた。このモデルを対数変換された数に適用した。1つの固定効果、治療群が存在した。
【００４０】
第1群の対照ヒツジはすべて肝蛭感染陽性であり、幾何平均は87.02であった。下表2.2に示すように、治療したヒツジの有効率を、未治療対照群のヒツジの有効率と比較した。
【００４１】
【表２】
2022502394.tif 000003
1 算術平均; 2 算術平均を使用; 3 幾何平均;4 幾何平均を使用
【００４２】
ペアワイズ比較により、表2.3に示すように、同時治療が未治療群及び単一製剤治療群よりも有意に低い吸虫数を有することが実証された。
【００４３】
【表３】
2022502394.tif 000004
【００４４】
同時治療における肝蛭に対する予想及び観察された有効率を、表2.4に示す。
【００４５】
【表４】
2022502394.tif 000005
【００４６】
ジアンフェネチド及びクロルスロンの同時治療の観察された有効性は、予想相加効果よりも高く、相乗効果を実証する。
【００４７】
（実施例３）
ヒツジにおける早期未成熟段階肝蛭感染症に対するクロルスロンと同時に投与したジアンフェネチドの相乗効果の評価
【００４８】
本研究は、ジアンフェネチド（20mg/kg）をクロルスロン（10mg/kg）と同時投与、ジアンフェネチド（20mg/kg）単剤投与、及びクロルスロン（10mg/kg）単剤投与における、14日目における治療したヒツジ内の肝蛭に対する有効性を評価することであった。本研究はヒツジを用いた対照盲検無作為化試験とした。
【００４９】
0日目に、ヒツジを200個の「Sunny Corner」（実験室株リファレンスFashep-66）の肝蛭メタセルカリアの対象に実験的に感染させた。必要数のメタセルカリアは、水及び2%カルボキシメチルセルロース溶液中で感染用に調製した。各感染用量に続いて水を経口投与した。
【００５０】
ヒツジを13日目の体重に基づいて治療群に無作為化し、表3.1に示す群に割り付けた。14日目に、表3.1に記載の単回投与で動物を治療した。
【００５１】
【表５】
2022502394.tif 000006
【００５２】
治療の1日前に体重を測定し、これを用量で測定し、0.1ml単位で四捨五入した。14日目において、供餌前に、表3.1の治療のみで個々の動物を1回治療した。動物の治療後、動物を囲いに戻し、給餌した。この時、未治療の対照動物にも給餌した。
【００５３】
インタクトな胆嚢と総胆管を伴う肝臓を各動物から91日目に回収し、肝蛭の計数処理をした。有効性の評価を、肝臓から摘出された生存する吸虫の個数に基づいて行った。
【００５４】
治療群間の吸虫数の比較には分散分析法モデルを用いた。このモデルを対数変換された数に適用した。1つの固定効果、治療群が存在した。
【００５５】
第1群の対照ヒツジはすべて肝蛭感染陽性であり、幾何平均は137.3であった。下表3.2に示すように、治療したヒツジの有効率を、未治療の対照群のヒツジの有効率と比較した。
【００５６】
【表６】
2022502394.tif 000007
1 算術平均; 2 算術平均を使用; 3 幾何平均;4 幾何平均を使用
【００５７】
ペアワイズ比較により、表3.3に示すように、同時治療は未治療群及び単一製剤治療群よりも有意に低い吸虫数を有することが実証され、単剤治療は、吸虫数に関して互いに有意に異なることはなかった。
【００５８】
【表７】
2022502394.tif 000008
【００５９】
同時治療における肝蛭に対する予想及び観察された有効率を、表3.4に示す。
【００６０】
【表８】
2022502394.tif 000009
【００６１】
ジアンフェネチド及びクロルスロンの同時治療の観察された有効性は、予想相加効果よりも高く、相乗効果を実証する。
【００６２】
（実施例４）
畜牛における未成熟段階肝蛭感染症に対するクロルスロンと同時に投与したジアンフェネチドの相乗効果の評価
【００６３】
本研究は、ジアンフェネチド（60mg/kg）をクロルスロン（5mg/kg）と同時投与、ジアンフェネチド（60mg/kg）単剤投与、及びクロルスロン（5mg/kg）単剤投与における、49日目における治療した畜牛内の肝蛭に対する有効性を評価することであった。本試験は対照盲検無作為化試験とした。
【００６４】
0日目に、子牛を約382個のSunny Corner（Fashep-66）分離株肝蛭メタセルカリアの単一分離株に実験的に感染させた。必要数のメタセリアは2%カルボキシメチルセルロース中で構成した。感染後に、メタセリアの残留についてシリンジを確認した。感染は経口投与され、各感染用量に続いて水が経口投与された。畜牛を、48日目の体重に基づいて治療群に無作為化し、表4.1に示す群に割り付けた。
【００６５】
【表９】
2022502394.tif 000010
【００６６】
治療の1日前に体重を測定した。全ての治療を用量で測定し、0.1mL単位で四捨五入した。49日目において、給餌前に、個々の動物を表4.1の治療のみで1回治療した。動物の治療後、動物を囲いに戻し、1時間以内に給餌した。この時、未治療の対照動物にも給餌した。
【００６７】
インタクトな胆嚢と胆管を伴う肝臓を91日目又は92日目に各動物から回収し、肝蛭の計数処理をした。有効性の評価を、肝臓から摘出された生存する吸虫の個数に基づいて行った。
【００６８】
下表4.2に示すように、治療した畜牛の有効率を、未治療の対照群の畜牛の有効率と比較した。
【００６９】
【表１０】
2022502394.tif 000011
1 算術平均;2 算術平均を使用; 3幾何平均; 4 幾何平均を使用
【００７０】
ペアワイズ比較により、表4.3に示すように、同時治療は未治療群及び単一製剤治療群よりも有意に低い吸虫数を有することが実証され、単剤治療は、吸虫数に関して互いに有意に異なることはなかった。
【００７１】
【表１１】
2022502394.tif 000012
【００７２】
同時治療における肝蛭に対する予想及び観察された有効率を、表4.4に示す。
【００７３】
【表１２】
2022502394.tif 000013
【００７４】
ジアンフェネチド及びクロルスロンの同時治療の観察された有効性は、予想相加効果よりも高く、相乗効果を実証する。
【００７５】
（実施例５）
畜牛における早期未成熟段階肝蛭感染症に対するクロルスロンと同時に投与したジアンフェネチドの相乗効果の評価
【００７６】
本研究は、ジアンフェネチド（40mg/kg）をクロルスロン（7mg/kg）と同時投与、ジアンフェネチド（40mg/kg）単剤投与、及びクロルスロン（7mg/kg）単剤投与における、21日目における治療した畜牛内の肝蛭に対する有効性を評価することであった。本試験は対照盲検無作為化試験とした。
【００７７】
0日目に、子牛を約350個のSunny Corner（Fashep-66）分離株肝蛭メタセルカリアの単一分離株に実験的に感染させた。必要数のメタセリアは2%カルボキシメチルセルロース中で構成した。感染後に、メタセリアの残留についてシリンジを確認した。感染は経口投与され、各感染用量に続いて水が経口投与された。畜牛を、20日目の体重に基づいて治療群に無作為化し、表5.1に示す群に割り付けた。
【００７８】
【表１３】
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【００７９】
治療の1日前に体重を測定した。全ての治療を用量で測定し、0.1mL単位で四捨五入した。21日目において、給餌前に、個々の動物を表4.1の治療のみで1回治療した。動物の治療後、動物を囲いに戻し、1時間以内に給餌した。この時、未治療の対照動物にも給餌した。
【００８０】
インタクトな胆嚢と胆管を伴う肝臓を各動物から91日目又は92日目に回収し、肝蛭の計数処理をした。有効性の評価を、肝臓から摘出された生存する吸虫の個数に基づいて行った。
【００８１】
下表5.2に示すように、治療した畜牛の有効率を、未治療の対照群の畜牛の有効率と比較した。
【００８２】
【表１４】
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1 算術平均; 2 算術平均を使用; 3 幾何平均;4 幾何平均を使用
【００８３】
ペアワイズ比較により、表5.3に示すように、同時治療が未治療群及び単一製剤治療群よりも有意に低い吸虫数を有することが実証され、単剤治療は、吸虫数に関して互いに有意に異なることはなかった。
【００８４】
【表１５】
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【００８５】
同時治療における肝蛭に対する予想及び観察された有効率を、表5.4に示す。
【００８６】
【表１６】
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【００８７】
ジアンフェネチド及びクロルスロンの同時治療の観察された有効性は、予想相加効果よりも高く、相乗効果を実証する。
【国際調査報告】
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