【手続補正書】
【提出日】平成21年11月30日(2009.11.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラトリインフルエンザウイルスであって：
（a）ノイラミニダーゼ融合タンパク質をコードする、パッケージされたインフルエンザウイルスNAセグメントであって、該NAオープンリーディングフレームが、該NA外部ドメインをコードするヌクレオチドがN末端によってアンカーされているインフルエンザ以外の感染因子のノイラミニダーゼ抗原の外部ドメインをコードするヌクレオチドによって置換されるように修飾されており、その結果、該ノイラミニダーゼ融合タンパク質がキメラトリインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記パッケージされたインフルエンザウイルスNAセグメント；又は、
（b）ノイラミニダーゼ融合タンパク質をコードする、パッケージされたインフルエンザウイルスNAセグメントであって、該NAオープンリーディングフレームは、該NA外部ドメインをコードするヌクレオチドが、ニューカッスル病ウイルス（NDV）のHN抗原の外部ドメインをコードするヌクレオチドによって置換されるように修飾されており、その結果、該ノイラミニダーゼ融合タンパク質がキメラトリインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記パッケージされたインフルエンザウイルスNAセグメント；
を含む、前記キメラトリインフルエンザウイルス。
【請求項２】
赤血球凝集素融合タンパク質をコードする、パッケージされたインフルエンザウイルスHAセグメントを含むキメラトリインフルエンザウイルスであって、該HAオープンリーディングフレームは、該HA外部ドメインをコードするヌクレオチドがC末端によってアンカーされているインフルエンザ以外の感染因子の受容体結合／融合抗原の外部ドメインをコードするヌクレオチドによって置換されるように修飾されており、その結果、該赤血球凝集素融合タンパク質がキメラトリインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記キメラトリインフルエンザウイルス。
【請求項３】
パッケージされたバイシストロニックインフルエンザウイルスHAセグメントを含むキメラトリインフルエンザウイルスであって、
（a）トリインフルエンザ赤血球凝集素タンパク質をコードする第1のオープンリーディングフレーム、及び、
（b）赤血球凝集素外部ドメインをコードするヌクレオチドが、C末端によってアンカーされているインフルエンザ以外の感染因子の感染防御抗原の外部ドメインをコードするヌクレオチドによって置換されている、赤血球凝集素融合タンパク質をコードする第2のオープンリーディングフレーム、
を含み、
その結果、該インフルエンザ赤血球凝集素及び該融合タンパク質の両方がキメラトリインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記キメラトリインフルエンザウイルス。
【請求項４】
パッケージされたバイシストロニックインフルエンザウイルスNAセグメントを含むキメラトリインフルエンザウイルスであって、
（a）トリインフルエンザノイラミニダーゼタンパク質をコードする第1のオープンリーディングフレーム、及び、
（b）ノイラミニダーゼ外部ドメインをコードするヌクレオチドが、N末端によってアンカーされているインフルエンザ以外の感染因子の感染防御抗原の外部ドメインをコードするヌクレオチドによって置換されている、ノイラミニダーゼ融合タンパク質をコードする第2のオープンリーディングフレーム、
を含み、
その結果、該インフルエンザノイラミニダーゼ及び該融合タンパク質の両方がキメラトリインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記キメラトリインフルエンザウイルス。
【請求項５】
ウイルスの細胞インターフェロンアンタゴニスト活性を減少させる修飾されているNS1タンパク質をコードする、パッケージされたNS1遺伝子セグメントを含む、請求項1〜4のいずれか1項記載のキメラトリインフルエンザウイルス。
【請求項６】
赤血球凝集素多塩基切断部位を除去するように修飾されたオープンリーディングフレームを有するHAセグメントを含む、請求項1又は4記載のキメラトリインフルエンザウイルス。
【請求項７】
前記第1のオープンリーディングフレームが、前記赤血球凝集素多塩基切断部位を除去するように修飾されている、請求項3記載のキメラトリインフルエンザウイルス。
【請求項８】
弱毒化されている、請求項1〜7のいずれか1項記載のキメラトリインフルエンザウイルス。
【請求項９】
請求項1又は4のNAセグメントをコードする組換えDNA分子。
【請求項１０】
請求項2又は3のHAセグメントをコードする組換えDNA分子。
【請求項１１】
免疫原性製剤を製造するための方法であって、該方法は：
（a）孵化鶏卵、又はトリインフルエンザウイルス感染に感受性である株化細胞において請求項1〜8のいずれか1項記載のキメラトリインフルエンザウイルスを増殖させること；及び、
（b）子孫ウイルスを収集すること、
を含み、
該ウイルスは、該子孫ウイルスが免疫原性製剤に使用するために適するように、十分な量で、かつ該ウイルスが汚染されない十分な条件下で培養される、前記方法。
【請求項１２】
弱毒キメラインフルエンザウイルスであって：
（a）ノイラミニダーゼ融合タンパク質をコードする、パッケージされたインフルエンザウイルスNAセグメントであって、該NAオープンリーディングフレームが、該NA外部ドメインをコードするヌクレオチドが、N末端によってアンカーされているインフルエンザ以外の感染因子のノイラミニダーゼ抗原の外部ドメインをコードするヌクレオチドによって置換されるように修飾されており、その結果、該ノイラミニダーゼ融合タンパク質が該弱毒キメラインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記パッケージされたインフルエンザウイルスNAセグメント；又は、
（b）赤血球凝集素融合タンパク質をコードする、パッケージされたインフルエンザウイルスHAセグメントであって、該HAオープンリーディングフレームが、該HA外部ドメインをコードするヌクレオチドがC末端によってアンカーされているインフルエンザ以外の感染因子の受容体結合／融合抗原の外部ドメインをコードするヌクレオチドによって置換されるように修飾されており、その結果、該赤血球凝集素融合タンパク質が該弱毒キメラインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記パッケージされたインフルエンザウイルスHAセグメント；
を含む、前記弱毒キメラインフルエンザウイルス。
【請求項１３】
弱毒キメラインフルエンザウイルスであって：
（i）パッケージされたバイシストロニックインフルエンザウイルスHAセグメントであって、
（a）インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質をコードする第1のオープンリーディングフレーム、及び、
（b）赤血球凝集素融合タンパク質をコードする第2のオープンリーディングフレームであって、該赤血球凝集素外部ドメインをコードするヌクレオチドが、C末端によってアンカーされている、インフルエンザ以外の感染因子の感染防御抗原の外部ドメインの、又は疾患と関連する抗原の少なくとも１つのエピトープを含むタンパク質をコードするヌクレオチドによって置換されている、前記第2のオープンリーディングフレーム、を含み、
その結果、該インフルエンザ赤血球凝集素及び該融合タンパク質の両方が該弱毒キメラインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記パッケージされたバイシストロニックインフルエンザウイルスHAセグメント；又は、
（ii）パッケージされたバイシストロニックインフルエンザウイルスNAセグメントであって、
（a）インフルエンザノイラミニダーゼタンパク質をコードする第1のオープンリーディングフレーム、及び、
（b）ノイラミニダーゼ融合タンパク質をコードする第2のオープンリーディングフレームであって、該ノイラミニダーゼ外部ドメインをコードするヌクレオチドが、N末端によってアンカーされている、インフルエンザ以外の感染因子の感染防御抗原の外部ドメインの、又は疾患と関連する抗原の少なくとも１つのエピトープを含むタンパク質をコードするヌクレオチドによって置換されている、前記第2のオープンリーディングフレーム、を含み、
その結果、該インフルエンザノイラミニダーゼ及び該融合タンパク質の両方が該弱毒キメラインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記パッケージされたバイシストロニックインフルエンザウイルスNAセグメント；
を含む、前記弱毒キメラインフルエンザウイルス。
【請求項１４】
前記ウイルスの細胞インターフェロンアンタゴニスト活性を減少させる修飾されたNS1タンパク質をコードする、パッケージされたNS1遺伝子セグメントを含む、請求項12又は13の弱毒キメラインフルエンザウイルス。
【請求項１５】
前記赤血球凝集素多塩基切断部位を除去するように修飾されたオープンリーディングフレームを有するHAセグメントを含む、請求項12又は13の弱毒キメラインフルエンザウイルス。
【請求項１６】
前記インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質をコードする第1のオープンリーディングフレームが、前記赤血球凝集素多塩基切断部位を除去するように修飾されている、請求項13の弱毒キメラインフルエンザウイルス。
【請求項１７】
請求項12若しくは13記載のNAセグメント又はHAセグメントをコードする組換えDNA分子。
【請求項１８】
免疫原性製剤を製造するための方法であって、該方法は：
（a）孵化鶏卵、又は弱毒インフルエンザウイルス感染に感受性である株化細胞において請求項12〜16のいずれか1項記載の弱毒キメラインフルエンザウイルスを増殖させること；及び、
（b）子孫ウイルスを収集すること、
を含み、
該ウイルスは、該子孫ウイルスが免疫原性製剤に使用するために適するように、十分な量で、かつ該ウイルスが汚染されない十分な条件下で培養される、前記方法。
【請求項１９】
キメラNDV であって、Fタンパク質の膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインと、C末端によってアンカーされているNDV以外の感染因子の感染防御抗原の外部ドメインの、又は疾患と関連する抗原の少なくとも1つのエピトープとを有するF-融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むパッケージされたゲノムを含み、その結果該F-融合タンパク質が該キメラNDV内に発現され、かつ組み込まれる、前記キメラNDV。
【請求項２０】
Fタンパク質がキメラNDV内に発現され、かつ組み込まれるように、前記ゲノムがFタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項19のキメラNDV。
【請求項２１】
F-融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、NDV Fタンパク質をコードするヌクレオチド配列を置換し、かつF-融合タンパク質が該Fタンパク質の機能を供給する、請求項19のキメラNDV。
【請求項２２】
キメラNDV であって、HNタンパク質の膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインと、N末端によってアンカーされているNDV以外の感染病原体の感染防御抗原の外部ドメインの、又は疾患と関連する抗原の少なくとも１つのエピトープとを有するHN-融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むパッケージされたゲノムを含み、その結果該HN-融合タンパク質が該キメラNDV内に発現され、かつ組み込まれる、前記キメラNDV。
【請求項２３】
キメラNDV であって、HNタンパク質の膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインと、N末端によってアンカーされているNDV以外の感染因子の感染防御抗原の外部ドメインの、又は疾患と関連する抗原の少なくとも１つのエピトープとを有するHN-融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含むパッケージされたゲノムを含み、その結果該HN-融合タンパク質が該キメラNDV内に発現され、かつ組み込まれ、かつ、該抗原がパラミキソウイルス抗原でない、前記キメラNDV。
【請求項２４】
HNタンパク質がキメラNDV内に発現され、かつ組み込まれるように、前記ゲノムがHNタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項22又は23のキメラNDV。
【請求項２５】
HN-融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列が、NDV HNタンパク質をコードするヌクレオチド配列を置換し、かつHN-融合タンパク質が該HNタンパク質の機能を供給する、請求項22又は23のキメラNDV。
【請求項２６】
前記抗原が、インフルエンザウイルスの赤血球凝集素抗原の外部ドメインである、請求項19記載のキメラNDV。
【請求項２７】
前記抗原が、インフルエンザウイルスのノイラミニダーゼ抗原の外部ドメインである、請求項22又は23記載のキメラNDV。
【請求項２８】
前記インフルエンザウイルスが、トリインフルエンザウイルスである、請求項26又は27記載のキメラNDV。
【請求項２９】
弱毒化されている、請求項19〜28のいずれか1項記載のキメラNDV。
【請求項３０】
免疫原性製剤を製造するための方法であって、該方法は：
（a）孵化鶏卵、又はNDV感染に感受性である株化細胞において請求項19〜29のいずれか1項のキメラNDVを増殖させること；及び、
（b）子孫ウイルスを収集すること、
を含み、
該ウイルスは、該子孫ウイルスが免疫原性製剤に使用するために適するように、十分な量で、かつ該ウイルスが汚染されない十分な条件下で培養される、前記方法。
【請求項３１】
前記感染因子が感染性病原体である、請求項1〜8、12〜16、19〜21、又は23〜29のいずれか1項記載のキメラウイルス。
【請求項３２】
前記抗原がパラミキソウイルス抗原でない、請求項1〜8、12〜16、19〜22、24〜29、又は30のいずれか1項記載のキメラウイルス。
【請求項３３】
前記抗原がセンダイウイルス抗原でない、請求項1〜8、12〜16、19〜29、31、又は32のいずれか1項記載のキメラウイルス。
【請求項３４】
トリにおいて1以上の感染因子に対する免疫応答を誘導することにおける使用のための医薬の製造における、請求項1〜8、12〜16、19〜29、又は31〜33のいずれか1項記載のキメラウイルスの使用。
【請求項３５】
前記医薬が、トリにおいて2つの感染因子に対する免疫応答を誘導することにおける使用のためのものである、請求項34記載の使用。
【請求項３６】
ヒトにおいて1以上の感染因子に対する免疫応答を誘導することにおける使用のための医薬の製造における、請求項1〜8、12〜16、19〜29、又は31〜33のいずれか1項記載のキメラウイルスの使用。
【請求項３７】
前記医薬が、ヒトにおいて2つの感染因子に対する免疫応答を誘導することにおける使用のためのものである、請求項36記載の使用。
【請求項３８】
請求項1〜8、12〜16、19〜29、又は31〜33のいずれか1項記載のキメラウイルスを含む免疫原性製剤。
【請求項３９】
請求項19〜29のいずれか1項記載のキメラNDVをコードする組換えDNA分子。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
本発明は、ノイラミニダーゼ融合タンパク質をコードする、パッケージされたインフルエンザウイルスNAセグメントを含む弱毒キメラインフルエンザウイルスであって、NAオープンリーディングフレームは、NA外部ドメインをコードするヌクレオチドがN末端によってアンカーされているインフルエンザ以外の感染因子のノイラミニダーゼ抗原の外部ドメインをコードするヌクレオチドによって置換されるように修飾されており、その結果ノイラミニダーゼ融合タンパク質が弱毒キメラインフルエンザウイルス内に発現され、かつ組み込まれる、前記弱毒キメラインフルエンザウイルスを提供する。特定の実施態様において、本発明の弱毒キメラインフルエンザウイルスは、赤血球凝集素多塩基切断部位を除去するように修飾されたオープンリーディングフレームを有するHAセグメントを含む。