【手続補正書】
【提出日】平成22年3月15日(2010.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式(I)、
A-(B1-B2-B3)                  (I)
で表される酵素を質量分析するための基質。
ここで、Aは、単糖又は二糖であり、またB1は、C1-C20アルキル基、置換C6-C20アリール基を持つC1-C20、ヘテロ原子N、O又はSを含有するC6-C20ヘテロ環式基であり、B2は、
以下の式、
【化１】
2009530310.tif 000001
で示される基であって、
該一般式において、R1は、C1-C20アルキル基；C4-C20エーテル基；N、O又はSの置換基を持つC1-C20アルキル基；ヘテロ原子C6-C20アリール基、C1-C20カルボニル基、C1-C20アミジル基、C1-C20エーテル基、C6-C20アリール基、ヘテロ原子N、O又はSを含有するC6-C20ヘテロ環式基であり、R2は、出現する各場合において独立に、H、C1-C20アルキル基、C1-C20アルキル置換基を有するC2-C20アルキル基であり、Xは、出現する各場合において独立に、何も表さないか、酸素、硫黄又は窒素原子であり、R3は、出現する各場合において独立に、何も表さないか、C1-C20アルキル基、置換C6-C20アリール基を持つC1-C20、ヘテロ原子N、O又はSを含有するC6-C20ヘテロ環式基であり、nは、0〜30なる範囲の整数であり、R4は、出現する各場合において独立に、何も表さないか、C1-C20アルキル基、置換C6-C20アリール基を持つC1-C20、C1-C20カルボニル基、C1-C20アミジル基、C1-C20エーテル基、C6-C20アリール基、ヘテロ原子N、O又はSを含むC6-C20ヘテロ環式基であり、またB3は何も表さないか、又はC1-C20アルキル基、C4-C20エーテル基；N、O又はSの置換基を持つC1-C20アルキル基；C1-C20エステル基；C1-C20アルコール基；C1-C20アルケニル基；ヘテロ原子C6-C20アリール基、ヘテロ原子N、O又はSを含有するC6-C20ヘテロ環式基である。
【請求項２】
前記A及び(B1-B2-B3)が、前記酵素の作用により分離される、請求項1記載の基質。
【請求項３】
前記Aが、アルドヘキソース又はケトヘキソースである、請求項1記載の基質。
【請求項４】
前記Aが、D-グルコース又はD-ガラクトースである、請求項1記載の基質。
【請求項５】
前記B1が、C6アリール基であり、該アリール基はそのリングから伸びた置換基を持つ、請求項1記載の基質。
【請求項６】
前記B1が、フェニル、ニトロフェニル、又はフェニルエステル基である、請求項1記載の基質。
【請求項７】
前記B2が、カルニチニル基である、請求項6記載の基質。
【請求項８】
前記B3が、カルボニル基として存在するOを含む置換基を持つ、C2-C20アルキル基である、請求項7記載の基質。
【請求項９】
前記A及び(B1-B2-B3)部分が、各々、一元素の安定な第二の広く用いられている同位体を含む、請求項1記載の基質。
【請求項１０】
前記安定な第二の広く用いられている同位体が、出現する各場合において、2D、13C、15N、17O、18O、31P及び34Sからなる群から選択される、請求項9記載の基質。
【請求項１１】
酵素の質量分析法であって、
（１）該酵素と、請求項1記載の、式I: A-(B1-B2-B3)で表される基質とを接触させて、酵素反応の際に開裂生成物の分子量を持つ、式：(B1-B2-B3)で表される開裂生成物を製造する工程、
（２）該基質に、式：(B1-B2-B3)'で表される内部標準を供給する工程であって、該(B1-B2-B3)'は、前記開裂生成物の分子量とは異なる分子量をもつ、少なくとも一つの安定な第二の広く用いられている同位体を有し、かつ該(B1-B2-B3)'のB1、B2及びB3が、請求項1に記載の式Iにおいて説明した通りである工程、及び
（３）前記開裂生成物と前記内部標準との間の質量対電荷比を、質量分析を利用して定量する工程、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１２】
前記酵素が、酸性α-ガラクトシダーゼA、酸性β-グルコセレブロシダーゼ、ガラクトセレブロシドα-ガラクトシダーゼ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、及び酸性α-グルコシダーゼからなる群から選択される、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
前記(B1-B2-B3)の開裂生成物が、前記(B1-B2-B3)'で表される内部標準と、構造的に同一である、請求項11記載の方法。
【請求項１４】
活性成分としての、請求項1記載の前記式Iの基質：A-(B1-B2-B3)；該(B1-B2-B3)とは異なる分子量の、安定な第二の広く用いられている同位体を持つ、式：(B1-B2-B3)'で表される内部標準；及び質量分析法による分析によって、サンプル中の酵素の活性を検出するための指示を含むことを特徴とする、商用包装体。
【請求項１５】
酵素の質量分析法による分析方法であって、
（１）請求項1記載の前記式Iの基質：A-(B1-B2-B3)を、同位体タグL1で標識して、第一の基質：L1(A)-L1(B1-B2-B3)を生成する工程； 
（２）請求項1記載の前記式Iの試薬：A-(B1-B2-B3)を、同位体タグL2で標識して、第二の基質：L2(A)-L2(B1-B2-B3)を生成する工程であって、該同位体タグL2が、該同位体タグL1とは異なる工程、
（３）該第一の基質：L1(A)-L1(B1-B2-B3)及び該第二の基質：L2(A)-L2(B1-B2-B3)を、ハウジ
ング内で前記酵素と結合する工程であって、該ハウジングにおいて、該第一の基質：L1(A)-
L1(B1-B2-B3)は、該酵素によって開裂されて、L1A及びL1(B1-B2-B3)を生成し、かつ該第二の基質：L2(A)-L2(B1-B2-B3)は、該酵素によって開裂されて、L2A及びL2(B1-B2-B3)を生成する工程、及び
（４）該第一の基質：(L1A)(L1B1-B2-B3)及び該第二の基質：(L2)(AL2B1-B2-B3)の減少量、及び該L1A、L1(B1-B2-B3)、L2A及びL2(B1-B2-B3)の増加量を定量する工程、
を含むことを特徴とする方法。
【請求項１６】
前記ハウジングが、試験管、テストバイアル、又は多重-ウエルマイクロプレートである、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
前記測定が、質量分析法で達成される、請求項15記載の方法。
【請求項１８】
前記酵素が、酸性α-ガラクトシダーゼA、酸性β-グルコセレブロシダーゼ、ガラクトセレブロシドα-ガラクトシダーゼ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、及び酸性α-グルコシダーゼからなる群から選択される、請求項15記載の方法。
【請求項１９】
個体から採取したサンプル中の第一のリソソーム蓄積症を検出するためのアッセイ溶液であって、請求項1記載の第一の基質及び第一の内部標準を含むことを特徴とする溶液。
【請求項２０】
個体から採取したサンプル中の第一及び第二のリソソーム蓄積症を同時に検出するための請求項１９記載のアッセイ溶液であって、更に、請求項１記載の第二の基質及び第二の内部標準を含む溶液。
【請求項２１】
請求項1記載の式：A-(B1-B2-B3)で表される、クラッベ病を質量分析法により検出するための基質であって、該基Aが、β-D-ガラクトースであり、B1がメチル基であり、B2が四級アンモニウムで終端しているアミジル基であり、またB3が12〜20なる範囲の炭素長を持つアルケニルアルコール基であることを特徴とする、前記基質。
【請求項２２】
請求項1記載の式：A-(B1-B2-B3)で表される、ゴーシェ病を質量分析法により検出するための基質であって、該基Aが、β-D-グルコースであり、B1がメチル基であり、B2が四級アンモニウムで終端しているアミジル基であり、またB3が12〜20なる範囲の炭素長を持つアルケニルアルコール基であることを特徴とする、前記基質。