(57)【要約】本発明は、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の予防的または治療的治療のための式（Ｉ）：2022500453.tif 000017の化合物、または、医薬として許容可能なその塩を提供する。
2022500453.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の予防的または治療的治療のための式（Ｉ）：
【化１３】
2022500453.tif 000015
の化合物であって、式中：
Ｒは、Ｈ、または、（ＣＲ１Ｒ２Ｏ）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２である；
それぞれのＲ１は、独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、または、アリールである；それぞれのＲ２は、独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、または、アリールである；または、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している原子と共に互いに結合して、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキルを形成する；式中、Ｒ１またはＲ２のあらゆるアルキルまたはシクロアルキルは、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、及び、ＮＲａＲｂから選択する１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または、５つ）の基で任意に置換し得るものであり、及び、Ｒ１またはＲ２のあらゆるアリールは、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ＮＲａＲｂ、ニトロ、及び、シアノから選択する１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または、５つ）の基で任意に置換し得る；
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、及び、アリールから選択する；または、Ｒａ及びＲｂは、それらが結合している窒素と共に互いに結合して、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、アゼチジノ、モルホリノ、または、チオモルホリノを形成する；及び
ｎは、１、２、または、３である；
前記化合物、または、医薬として許容可能なその塩。
【請求項２】
非アルコール性脂肪肝疾患を治療する方法である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
非アルコール性脂肪性肝炎を治療する方法である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
肝線維症を治療する方法である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記線維症が、ウイルス性Ｂ型肝炎に関連している、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記線維症が、ウイルス性Ｃ型肝炎に関連している、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
前記線維症が、代謝性、胆汁性、または、自己免疫性肝疾患に関連している、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
肺線維症を治療する方法である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記式Ｉの化合物の医薬として許容可能な塩が、式Ｉａ：
【化１４】
2022500453.tif 000016
の塩であり、式中、それぞれのＸ＋は、独立して、医薬として許容可能な有機カチオン、または、医薬として許容可能な無機カチオンである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、Ｈ、または、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が、Ｈである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１が、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１が、メチル、または、エチルである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２が、Ｈ、または、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである、請求項１〜８及び１０〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ２が、Ｈである、請求項１〜８及び１０〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
それぞれのＸ＋が、Ｈである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１７】
それぞれのＸ＋が、独立して、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム、亜鉛、または、アルミニウムである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１８】
それぞれのＸ＋が、式ＨＹ＋から独立しており、式中、Ｙが、アンモニア、トリエチルアミン、トロメタミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、グリシン、リジン、オルニチン、アルギニン、エタノールアミン、または、コリンである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１９】
それぞれのＸ＋を、独立して、Ｌｉ＋、Ｋ＋、及び、Ｎａ＋から選択する、請求項９に記載の化合物。
【請求項２０】
それぞれのＸ＋が、Ｎａ＋である、請求項９に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒが、（ＣＲ１Ｒ２Ｏ）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２である、請求項１〜８及び１０〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
前記医薬として許容可能な塩が、１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩、１４−Ｏ−ホスホノオキシエチルトリプトリド二ナトリウム塩、または、１４−Ｏ−ホスホノオキシプロピルトリプトリド二ナトリウム塩である、請求項９に記載の化合物。
【請求項２３】
前記医薬として許容可能な塩が、１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩である、請求項９記載の化合物。
【請求項２４】
治療薬と併用する請求項１〜２３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
前記治療薬を、インスリン感作物質、チアゾリジネオン、ビタミンＥ、ウルソデオキシコール酸、オメガ−３脂肪酸、ガレクチン−３阻害剤、及び、スタチンからなる群から選択する、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
前記治療薬が、ＧＬＰ−１アゴニストである、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２７】
前記治療薬が、リラグルチドである、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２８】
前記治療薬が、ＰＰＡＲアゴニストである、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２９】
前記治療薬が、エラフィブラノール、または、その塩である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項３０】
ａ）請求項１及び９〜２３のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、または、医薬として許容可能なその塩、ｂ）治療薬、及び、ｃ）医薬として許容可能な希釈剤または担体を含む医薬組成物。
【請求項３１】
前記治療薬を、インスリン感作物質、チアゾリジネオン、ビタミンＥ、ウルソデオキシコール酸、オメガ−３脂肪酸、ガレクチン−３阻害剤、及び、スタチンからなる群から選択する、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記治療薬が、ＧＬＰ−１アゴニストである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３３】
前記治療薬が、リラグルチドである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３４】
前記治療薬が、ＰＰＡＲアゴニストである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３５】
前記治療薬が、エラフィブラノール、または、その塩である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３６】
哺乳動物（例えば、ヒト）での線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療のための医薬品の製造のための請求項１及び９〜２３のいずれか１項に記載の化合物または塩の使用。
【請求項３７】
キットであって、ａ）請求項１及び９〜２３のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、または、医薬として許容可能なその塩、ｂ）治療薬、ｃ）梱包材料、及び、ｄ）前記化合物、または、医薬として許容可能なその塩、及び、前記治療薬を、動物（例えば、哺乳動物）に投与して、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療するための指示書面を含む、前記キット。
【請求項３８】
前記治療薬を、インスリン感作物質、チアゾリジネオン、ビタミンＥ、ウルソデオキシコール酸、オメガ−３脂肪酸、ガレクチン−３阻害剤、及び、スタチンからなる群から選択する、請求項３７に記載のキット。
【請求項３９】
前記治療薬が、ＧＬＰ−１アゴニストである、請求項３７に記載のキット。
【請求項４０】
前記治療薬が、リラグルチドである、請求項３７に記載のキット。
【請求項４１】
前記治療薬が、ＰＰＡＲアゴニストである、請求項３７に記載のキット。
【請求項４２】
前記治療薬が、エラフィブラノール、または、その塩である、請求項３７に記載のキット。
【請求項４３】
動物の線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法であって、請求項１及び９〜２３のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、または、医薬として許容可能なその塩を、前記動物に対して投与することを含む、前記方法。
【請求項４４】
前記動物に対して治療薬を投与することをさらに含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記治療薬を、インスリン感作物質、チアゾリジネオン、ビタミンＥ、ウルソデオキシコール酸、オメガ−３脂肪酸、ガレクチン−３阻害剤、及び、スタチンからなる群から選択する、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記治療薬が、ＧＬＰ−１アゴニストである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記治療薬が、リラグルチドである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記治療薬が、ＰＰＡＲアゴニストである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４９】
前記治療薬が、エラフィブラノール、または、その塩である、請求項４４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
トリプトリドは、植物Ｔｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍ  ｗｉｌｆｏｒｄｉｉから得られる天然化合物である。トリプトリドは、自己免疫疾患、移植拒絶反応（免疫抑制）の治療において有用であり、かつ、抗がん作用、それに、避妊作用、ならびに、その他の生物学的効果を奏することが知られている（Ｑｕｉ  ａｎｄ  Ｋａｏ，  ２００３，  Ｄｒｕｇｓ  Ｒ．Ｄ．  ４，  １−１８）。トリプトリドは、異種移植腫瘍に対して強力な抗腫瘍効果を奏する（例えば、Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ，  ２００３，  ２，  ６５−７２）。トリプトリドは、がんの増殖と転移に関与する複数の細胞標的を有する抗アポトーシス剤である。トリプトリドは、ＮＦ−κＢの活性化を阻害し、ｂｉｄ開裂を誘導して、生存遺伝子ｐ２１  ＷＡＦ１／Ｃｉｐ１の誘導をブロックし（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００６，  ８４，  ４０５−４１５）、そして、熱ショック転写因子１（ＨＳＦ１）の機能を阻害し、それにより、内因性ＨＳＰ７０遺伝子の発現を抑制する（Ｗｅｓｔｅｒｈｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００６，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２８１，  ９６１６−９６２２）。トリプトリドは、強力な腫瘍血管新生阻害剤としても機能する（Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０，  Ｉｎｔ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，  １２６，  ２６６−２７８）。
【０００２】
国際特許出願公開番号ＷＯ２０１０／１２９９１８は、がんの治療に有用であるとの報告がある、トリプトリドプロドラッグを報告している。これらの化合物の１つであるＭｉｎｎｅｌｉｄｅ（登録商標）（１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩）は、様々ながんの治療に関して、臨床的に開発が進められている。線維形成は、複雑な創傷治癒プロセスであり、広範囲のサイトカイン、ケモカイン、それに、非ペプチドメディエーター、例えば、活性酸素種、脂質メディエーター、及び、ホルモンなどに起因する幾つかの細胞タイプとの相互作用を必要とする。進行性線維症は、門脈圧亢進症を助長するに足りる剛性を有する肝臓での構造変化に関連しており、末期肝硬変に進行し得るものであり、また、肝癌の素因となる微小環境を提供する。その結果、生検試料での肝線維症の存在は、非アルコール性脂肪性肝患者での肝関連合併症と死亡率に関する確たる予測因子である。
【０００３】
線維性肝疾患は、死亡率が高く、かつ、肝不全の素因でもあるので、肝線維症は、依然として、重大な健康問題である。線維症の発症、進行、及び、軽快に関連するメカニズムの理解をさらに深めることが絶対に必要である。
【０００４】
重度アルコール性脂肪性肝炎（ＡＳＨ）、及び、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、ウイルス性Ｂ型及びＣ型肝炎−非常に効果的な抗ウイルス療法の出現の有無に関係なく−、それに、（小児）代謝性、胆汁性、及び、自己免疫性肝疾患の進行の予防、及び、拮抗の誘発を招く上で、抗線維化剤は、とりわけ必要である。
【０００５】
線維性肝疾患は、死亡率が高く、かつ、肝不全の素因でもあるので、肝線維症は、依然として、重大な健康問題である。これまでの２０年間での集中的な研究によって、肝線維症の病因のおおよその解明は進んではいるが、効果的な抗線維化療法は未だ実現していない。今日まで、一般的な抗線維化療法は、現在のところ臨床診療では利用可能ではないので、基礎疾患の治療を進めるしかなく、結局のところ、進行性肝線維症の治療選択肢としては、肝移植しかない。さらに、線維性疾患の治療のための現状での選択肢は非常に限られており、今日まで、確立した線維症を首尾よく標的とする効果的な薬剤も登場していない。現在のところ、大半の抗線維化剤を、非アルコール性脂肪肝疾患の患者が参加した試験に供しており、さらなる代謝効果が認められている。したがって、進行中の試験で期待される結果を、肝硬変などのその他の慢性肝疾患、または、肝線維症の初期段階に外挿できるか否かは不明である。
非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、現代社会において、健康面での負担を大きくしており、西欧諸国のみならず、世界規模で発生率が高まっている。ＮＡＦＬＤは、慢性肝疾患（ＣＬＤ）の最も一般的な原因の１つであると考えられている。ＮＡＦＬＤの主な危険因子として、過剰体重、インスリン抵抗性、２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）、高血圧、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の減少、及び、高トリグリセリド血症などがある。ＮＡＦＬＤは、可逆的である比較的に良性の脂肪症から始まり、そして、主に肝脂肪沈着を特徴としている。ＮＡＦＬＤは、単純な脂肪症から非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、線維症、及び、肝硬変に至るまで、様々な肝障害に関係している。脂肪症からＮＡＳＨへの進行は、生命を脅かす重大な疾患である。ＮＡＳＨが、肝硬変または肝細胞癌にまで進行すると、深刻な健康問題を引き起こす。興味深いことに、代謝性疾患、（肥満、２型糖尿病）と同じ危険因子に曝されている患者は、常にＮＡＳＨを発症するとは限らず、その理由は、未だ不明である。研究によると、ＮＡＦＬＤは、慢性肝疾患の最も一般的な形態であり、米国では１０〜２４％の発生率であり、そして、おそらくは、欧州とアジアでも同様の統計値となる。また、ＮＡＳＨの発生率は、痩身の方で人口の約３〜５％、肥満の方で人口の１９％である。ＮＡＳＨは、非アルコール性脂肪肝疾患のサブグループを定義しており、このサブグループでは、肝脂肪症と、炎症を伴うアポトーシス、及び、肝細胞の肥大化を伴う肝細胞傷害とが一致している。目下のところ、ＮＡＦＬＤ／ＮＡＳＨの薬理学的治療は承認されていない。
目下のところ、線維症（例えば、肝臓または肺の線維症）を治療するための改善した治療法、ならびに、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療するための改善した治療法が待望されている。とりわけ、線維症の初期段階での軽快を可能ならしめる上で有効な新規かつ効果的な抗線維化剤が必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１０／１２９９１８号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｑｕｉ  ａｎｄ  Ｋａｏ，  ２００３，  Ｄｒｕｇｓ  Ｒ．Ｄ．  ４，  １−１８
【非特許文献２】Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ，  ２００３，  ２，  ６５−７２
【非特許文献３】Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ２００６，  ８４，  ４０５−４１５
【非特許文献４】Ｗｅｓｔｅｒｈｅｉｄｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２００６，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  ２８１，  ９６１６−９６２２
【非特許文献５】Ｈｅ  ｅｔ  ａｌ．  ２０１０，  Ｉｎｔ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，  １２６，  ２６６−２７８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本出願人は、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（商標）（１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩）が、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、及び、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療に有用である、ことを知見するに至った。したがって、ある実施形態では、本発明は、動物の線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療する方法を提供しており、当該動物に対して、式（Ｉ）：
【化１】
2022500453.tif 000003
の化合物、式中：
Ｒは、Ｈ、または、（ＣＲ１Ｒ２Ｏ）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２である；
それぞれのＲ１は、独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、または、アリールである；それぞれのＲ２は、独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、または、アリールである；または、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している原子と共に互いに結合して、（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキルを形成する；式中、Ｒ１またはＲ２のあらゆるアルキルまたはシクロアルキルは、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、及び、ＮＲａＲｂから選択する１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または、５つ）の基で任意に置換し得るものであり、及び、Ｒ１またはＲ２のあらゆるアリールは、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ＮＲａＲｂ、ニトロ、及び、シアノから選択する１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、または、５つ）の基で任意に置換し得る；
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、及び、アリールから選択する；または、Ｒａ及びＲｂは、それらが結合している窒素と共に互いに結合して、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、アゼチジノ、モルホリノ、または、チオモルホリノを形成する；及び
ｎは、１、２、または、３である；
当該化合物、または、医薬として許容可能なその塩を投与する、ことを含む。
【０００９】
また、本発明は、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の予防的または治療的処置に使用するための式Ｉの化合物、または、医薬として許容可能なその塩を提供する。
【００１０】
また、本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）の線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療薬の製造のための式Ｉの化合物、または、医薬として許容可能なその塩の使用も提供する。
【発明の効果】
【００１１】
以下の実施例に示したように、式Ｉの代表的な化合物であるＭｉｎｎｅｌｉｄｅ（商標）（１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩）は、肝線維症の２つのモデルにおいて有望な結果をもたらす、ことが示されている。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ＤＩＯ−ＮＡＳＨマウスモデルでのＭｉｎｎｅｌｉｄｅ単独での有効性、及び、エラフィブラノール、または、リラグルチドを併用した場合での有効性；及び、図１の文献研究の箇所は、ＤＩＯ−ＮＡＳＨマウスモデルでのエラフィブラノール単独での有効性、または、リラグルチド単独での有効性に関する従前の文献研究（Ｔｏｌｂｏｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｊａｎ  １４，  ２０１８；２４（２）：  １７９−１９４として公開されたもの）を引用している。
【図２Ａ】肝臓ガレクチン−３の組織学的定量的評価。まず、スキャンしたスライドを、低倍率で組織を粗検出するために分析した。
【図２Ｂ】肝臓ガレクチン−３の組織学的定量的評価。抗ガレクチン−３で染色した肝臓の代表的な高倍率の画像（上部挿入図）；及び、脂肪症（白色）、ガレクチン−３（灰色）、及び、組織（黒色）の検出（下部挿入図；肝臓ガレクチン−３画分を、全組織の％として推定した。
【図２Ｃ】肝臓ガレクチン−３の組織学的定量的評価。終末期に抗ガレクチン−３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ１２５４０２）で染色した肝臓の代表的な画像（倍率２０倍、スケールバー＝１００μｍ）。
【図２Ｄ】肝臓ガレクチン−３の組織学的定量的評価。形態計測で定量した終末期の相対的肝臓ガレクチン−３（Ｇａｌ−３）（％分画面積）。数値を、ｎ＝１２〜１４＋ＳＥＭの平均として表した。ダネットの検定１要因線形モデル。＊＊：Ｐ＜０．０１、＊＊＊：ビヒクル＋ビヒクルと比較して、Ｐ＜０．００１。
【図３】形態計測で定量した終末期の相対的肝臓ヒドロキシプロリン（ＨＰ）（％分画面積）。数値を、ｎ＝１２〜１４＋ＳＥＭの平均として表した。ダネットの検定１要因線形モデル。＊＊：Ｐ＜０．０１、＊＊＊：ビヒクル＋ビヒクルと比較して、Ｐ＜０．００１。
【図４】形態計測で定量した終末期の相対的肝臓α−ＳＭＡ（％分画面積）。数値を、ｎ＝１２〜１４＋ＳＥＭの平均として表した。ダネットの検定１要因線形モデル。＊＊：Ｐ＜０．０１、＊＊＊：ビヒクル＋ビヒクルと比較して、Ｐ＜０．００１。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
本明細書で使用する用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルキル」とは、直鎖または分岐基である、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基のことを指す。この用語の例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、及び、ｎ−ヘキシルなどの基がある。
【００１４】
本明細書で使用する用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ」とは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルＯ−基のことを指しており、式中、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルとは、本明細書で定義した通りである。この用語の例として、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ペントキシ、３−ペントキシ、または、ヘキシルオキシなどの基がある。
【００１５】
本明細書で使用する用語「（Ｃ３−Ｃ７）シクロアルキル」とは、３〜７個の炭素原子を含む、飽和または部分的に不飽和の環状炭化水素環系のことを指す。この用語の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセン、または、シクロヘプタンなどの基がある。
【００１６】
本明細書で使用する用語「アリール」とは、少なくとも１つの環が芳香族である約９〜１０個の炭素環原子を有するフェニルラジカル、または、オルト縮合二環式炭素環式ラジカルのことを指す。この用語の例として、フェニル、インダニル、インデニル、ナフチル、１，２−ジヒドロナフチル、及び、１，２，３，４−テトラヒドロナフチルなどの基がある。
【００１７】
本明細書で使用する用語「アリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−」とは、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−基のことを指し、式中、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、及び、アリールとは、本明細書で定義した通りである。この用語の例として、ベンジル、及び、フェネチルなどの基がある。
【００１８】
本明細書で使用する用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、本明細書に記載した要素、または、構造または機能における等価要素、ならびに、付加する未記載のその他の要素（複数可）のことを意味する。用語「含む（ｈａｖｉｎｇ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」も、特に断りが無い限り、オープンエンドのものとして解釈する。用語「約」、「一般的に」、「実質的に」などは、絶対ではないが、先行技術に該当しないように、用語または数値を変更するものとして解釈する。そのような用語は、状況に応じて定義するものであり、そして、当業者であれば、修正を受ける用語を理解する。この用語は、少なくとも、数値を測定するために使用する所定の技術で予測される程度の実験誤差、手法誤差、及び、機器誤差を含む。
【００１９】
句「治療有効量」及び「薬学的有効量」は、本明細書では、例えば、生存している哺乳動物に対して投与する時に、インビボでの癌性細胞増殖を抑制または阻害するのに十分な量を意味するために使用する。これらの句は、所与の投与経路について、確立した薬物動態学的方法と技術に従って測定した、所与の有効成分に対して意図及び関連する生理学的効果を生み出すために必要であると決定した量を指し示す、ことを意味する。
【００２０】
活性化合物、及び、組成物の量に関連して使用する「阻害有効量」という句は、例えば、標準的な細胞培養アッセイ技術を使用して実証された、出現した抗腫瘍特性を指し示す、ことを意味する。
【００２１】
本明細書で使用する用語「プロドラッグ」とは、生物学的に活性になる前に、さらなる代謝（肝臓での代謝があるが、これに限定されない）を必要とする医薬化合物のことを指し示す、ことを意味する。
【００２２】
当業者であれば、キラル中心を有する化合物が、光学活性体、及び、ラセミ体で存在し、かつ、単離し得ることを理解する。一部の化合物は、多形を示し得る。化合物は、本明細書に記載した有用な特性を有する化合物のあらゆるラセミ体、光学活性体、多形体、または、立体異性体、または、それらの混合物を含んでおり、光学活性体を調製する方法は、例えば、再結晶技術、光学活性出発物質からの合成、キラル合成、または、キラル固定相を使用したクロマトグラフィー分離などによる、ラセミ体の分割など、当該技術分野で周知である、ことを理解されたい。
【００２３】
式Ｉの化合物の塩は、式Ｉの化合物を単離または精製するための中間体として有用である。加えて、医薬として許容可能な酸または塩基塩として、式Ｉの化合物を投与することが適切となり得る。医薬として許容可能な塩の例として、有機酸付加塩と、無機塩がある。
【００２４】
用語「有機カチオン、または、無機カチオン」または「カチオン性有機塩、または、無機塩」として、当該技術分野で周知の有機カチオン、または、無機カチオン（例えば、金属塩、または、アミン塩）があり、そして、化合物のＯ部分とイオン会合を形成することができ、かつ、本発明の目的のためのプロドラッグの所望の特性に有意な悪影響を及ぼさないカチオン部分を含む。用語「医薬として許容可能な有機カチオンまたは無機カチオン」または「医薬として許容可能なカチオン性有機塩または無機塩」として、哺乳動物での使用に関して医薬として許容可能であり、かつ、当該技術分野で周知の「有機カチオンまたは無機カチオン」がある。
【００２５】
有機カチオン、または、無機カチオンとして、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム、亜鉛、アルミニウム、及び、アミンカチオンがあるが、これらに限定されない。アミンカチオンとして、アンモニア、トリエチルアミン、トロメタミン（ＴＲＩＳ）、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、グリシン、リジン、オルニチン、アルギニン、エタノールアミン、コリンなどに由来するカチオンがあるが、これらに限定されない。ある実施形態では、アミンカチオンは、Ｘ＋が、式ＹＨ＋のカチオンであり、式中、Ｙが、アンモニア、トリエチルアミン、トロメタミン（ＴＲＩＳ）、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、グリシン、リジン、オルニチン、アルギニン、エタノールアミン、コリンなどである。
【００２６】
ある実施形態では、使用可能な適切なカチオン性有機塩または無機塩として、化合物のＯ部分とイオン会合を形成することができ、かつ、本発明の目的、例えば、活性化合物形態の溶解性、安定性を高め、そして、迅速な加水分解放出を実現するために、プロドラッグの所望の特性に対して有意な悪影響を及ぼさないカチオン部分を含むことができる、ものがある。好ましくは、Ｘを、Ｌｉ＋、Ｋ＋、または、Ｎａ＋から選択する。より好ましくは、Ｘは、Ｎａ＋であり、したがって、二ナトリウム塩を形成する。
【００２７】
また、医薬として許容可能な塩は、生理学的に許容可能な陰イオンを形成する酸、例えば、トシレート、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、α−ケトグルタル酸塩、及び、α−グリセロリン酸を形成する塩を含むことができる。塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、重炭酸塩、及び、炭酸塩などの適切な無機塩も形成し得る。医薬として許容可能な塩などの塩は、当該技術分野で周知の標準的な手順を使用して、例えば、アミンなどの十分に塩基性の化合物を、適切な酸と反応させて生理学的に許容可能な陰イオンを与えることで、得ることができる。
【００２８】
式Ｉの化合物として、遊離酸（例えば、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）、モノ塩（例えば、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（Ｏ−Ｘ＋））、及び、ジ塩（例えば、−ＯＰ（Ｏ）（Ｏ−Ｘ＋）２）がある。酸及び塩は、クロマトグラフィーなどの当該技術分野で周知の様々な技術で精製し、その後、凍結乾燥、または、再結晶し得る。
【００２９】
当業者であれば、Ｘ＋が有機カチオンまたは無機カチオンである式Ｉの化合物が、１つ以上の異なる有機カチオンまたは無機カチオンを含む式Ｉの化合物に変換できることを理解する。このような変換は、イオン交換樹脂、イオン交換クロマトグラフィー、及び、選択的結晶化など、これらに限定されない様々な周知の技術と材料を使用して、達成することができる。
【００３０】
実施形態
Ｒ１の特定値は、Ｈ、または、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００３１】
Ｒ１の別の特定値は、Ｈである。
【００３２】
Ｒ１の別の特定値は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００３３】
Ｒ１の別の特定値は、メチル、または、エチルである。
【００３４】
Ｒ２の特定値は、Ｈ、または、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルである。
【００３５】
別の特定値Ｒ２は、Ｈである。
【００３６】
Ｘ＋の特定値は、Ｈである。
【００３７】
別の特定値Ｘ＋は、独立して、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム、亜鉛、または、アルミニウムである。
【００３８】
式Ｉの化合物の別の特定の群は、Ｘ＋が、式ＨＹ＋の化合物であり、式中、Ｙは、独立して、アンモニア、トリエチルアミン、トロメタミン、トリエタノールアミン、エチレンジアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、グリシン、リジン、オルニチン、アルギニン、エタノールアミン、または、コリンである。
【００３９】
Ｘ＋の別の特定値は、独立して、Ｌｉ＋、Ｋ＋、または、Ｎａ＋である。
【００４０】
Ｘ＋の別の特定値は、Ｎａ＋である。
【００４１】
式Ｉの特定の化合物は、４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩、１４−Ｏ−ホスホノオキシエチルトリプトリド二ナトリウム塩、または、１４−Ｏ−ホスホノオキシプロピルトリプトリド二ナトリウム塩、または、それらの塩である。
【００４２】
特定のグループの塩は、式Ｉａ：
【化２】
2022500453.tif 000004
の塩であり、式中、それぞれのＸ＋は、独立して、医薬として許容可能なカチオン性有機塩または無機塩である。
【００４３】
式Ｉの化合物、及び、式Ｉの化合物を調製する上で有用な中間体を調製するために使用することができるプロセスを、スキーム１と、スキーム２に示す。また、化合物及び塩は、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１０／１２９９１８号に記載されているようにして調製することができる。
【００４４】
スキーム１
【化３】
2022500453.tif 000005
式中、Ｑは、ベンジル、または、ｔｅｒｔ−ブチルなどの保護基である。
【００４５】
スキーム２
【化４】
2022500453.tif 000006
【００４６】
式Ｉの化合物を、式ＩＡの化合物から１つ以上の保護基を除去して調製して、式Ｉの対応する化合物を提供することができる。したがって、式ＩＡの中間体は、式Ｉの化合物を調製する上で有用である。
【化５】
2022500453.tif 000007
Ｑは、保護基（例えば、ベンジル、または、ｔｅｒｔ−ブチル）である
【００４７】
式Ｉの化合物を、式ＩＢの化合物の−ＳＭｅ基を、−ＯＰ（Ｏ）（Ｏ−Ｘ＋）２基に変換して調製して、式Ｉの対応する化合物を提供することもできる。したがって、式ＩＢの中間体は、式Ｉの化合物を調製する上で有用である。
【化６】
2022500453.tif 000008
【００４８】
式Ｉの化合物を、式ＩＣの化合物から１つ以上の保護基を除去して調製して、式Ｉの対応する化合物を提供することもできる。したがって、式ＩＣの中間体は、式Ｉの化合物を調製する上で有用である。
【化７】
2022500453.tif 000009
Ｑは、保護基（例えば、ベンジル、または、ｔｅｒｔ−ブチル）である
【００４９】
式Ｉの化合物を、式ＩＤの化合物の−ＳＭｅ基を、−ＯＰ（Ｏ）（Ｏ−Ｘ＋）２基に変換して調製して、式Ｉの対応する化合物を提供することもできる。したがって、式ＩＤの中間体は、式Ｉの化合物を調製する上で有用である。
【化８】
2022500453.tif 000010
【００５０】
式Ｉの化合物、または、その塩は、医薬として許容可能な担体と共に組み合わせることで、医薬組成物に製剤することができる。医薬組成物は、医薬分野の当業者が容易に入手できる周知の化合物及び技術に従って調製することができる。本発明の目的のために、医薬として許容可能な担体は、活性医薬成分と化学的に適合可能であり、かつ、製剤または送達の際に、それらが意図している治療効果を著しく落とさない、従来の容易に入手可能なあらゆる生物学的に適合可能な物質、または、不活性物質とすることができる。医薬として許容可能な塩は、当該技術分野で周知の標準的な手順及び技術を使用して調製することができる。
【００５１】
式Ｉの化合物、または、その塩の固形物を、ナノ粒子とすることができるので、ナノ粒子として製剤することができる。式Ｉの化合物、または、その塩は、様々な賦形剤製剤を使用して製剤することができ、また、後述するように、様々な剤形で調製することができる。化合物に関連する化学的性質、及び、属性は、経口固形剤形の調製を可能ならしめる。
【００５２】
式Ｉの化合物、または、その塩は、医薬組成物として製剤することができ、そして、所望の特定の投与経路または系に適した様々な形態で、レシピエントに対して投与することができる。投与経路として、経口経路、非経口経路、静脈内経路（ポンプ注射による静脈内経路を含む）、筋肉内経路、点眼薬を含む局所経路、皮下経路、及び、粘膜経路があるが、これらに限定されない。化合物は、例えば、経口的に、不活性希釈剤、または、吸収可能な可食性担体などの医薬として許容可能な担体を併用して、全身投与することができる。したがって、化合物を有効成分として含む医薬組成物は、様々な剤形で調製することができる。例えば、組成物は、ハードまたはソフトカプセル（例えば、ゼラチン、または、植物由来のカプセル材料）にカプセル化することができる。組成物は、摂取可能な形態、または、経粘膜錠剤形態、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウエハー、坐剤などに加工することができる。有効成分の量は、特定の所望の医薬として有効な投与量に応じて変化させることができる。
【００５３】
錠剤、トローチ、ピル、カプセルなどは、結合剤（トラガカントガム、アカシア、コムスターチ、または、ゼラチンなど）；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモ澱粉、アルギン酸などの崩壊剤；例えば、錠剤圧縮技術に使用することができる潤滑剤（ステアリン酸マグネシウムなど）；ショ糖、果糖、乳糖、アスパルテームなどの甘味料；及び、ペパーミント、ウィンターグリーン、チェリーなどの香料などのさらなる成分を含むことができる。組成物に含み得るさらなる成分は、マンニトール、尿素、デキストラン、及び、ラクトース非還元糖である。
【００５４】
カプセル剤形の場合、ポリエチレングリコール、植物油などの液状担体を含むことができる。特定の剤形で使用することができるその他の材料として、ゼラチン、ワックス、シェラック、砂糖などがある。シロップまたはエリキシル形態は、甘味料としてのスクロース、フルクトース、防腐剤としてのメチル及びプロピルパラベン、染料、及び、着色剤、それに、香味料を含むことができる。
【００５５】
注入または注射で静脈内または腹腔内に投与する場合、有効成分、または、その塩の溶液は、例えば、無毒の界面活性剤を任意に含有する水または生理食塩水で調製することができる。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、及び、それらの混合物において、そして、油において、分散液を調製することができる。保管条件に応じて、防腐剤も必要となり得る。
【００５６】
注射または注入に適した医薬剤形は、任意にリポソームに封じ込める滅菌した注射可能な、または、注入可能な溶液または分散液の即時調製に適している有効成分を含む、滅菌水溶液または分散液、または、滅菌粉末を含むことができる。すべての事例では、最終的な剤形は、製造及び保管の条件下で、滅菌が行われ、流動性があり、安定している必要がある。液状担体、または、ビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、無毒のグリセリルエステル、及び、これらの適切な混合物を含む溶媒、または、液状分散媒体とすることができる。例えば、リポソームを形成することで、分散液の事例で必要とする粒子サイズを維持することで、または、界面活性剤を使用することで、適切な流動性を維持することができる。様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどで、微生物の作用を防止することができる。数多くの事例では、等張剤、例えば、糖類、緩衝剤、または、塩化ナトリウムを使うことが好ましい。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウム、及び、ゼラチンの組成物を使用することで実現可能である。
【００５７】
適切な溶媒に対して、必要に応じて、前掲のその他の様々な成分と共に、必要量の活性化合物を入れた後に、フィルターを滅菌して、滅菌注射液を調製する。注射可能な滅菌溶液を調製するための滅菌粉末の事例では、好ましい調製方法は、真空乾燥技術、及び、凍結乾燥技術であり、これにより、予め滅菌濾過した溶液に存在する有効成分と、あらゆるさらなる所望の成分との粉末が生成される。
【００５８】
注射可能または注入可能な医薬剤形は、即時製剤のために調製した活性化合物を含む、滅菌水溶液または分散液、または、滅菌粉末を含むことができる。液状担体は、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）などを含む溶媒または液体分散媒体を含むことができる。パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどの様々な作用物質を加えて、抗菌活性を阻害または防止することができる。
【００５９】
化合物及び組成物を、単回投与で、または、複数回の投与間隔で、投与することができる。投与量、剤形、投与経路、及び、特定の製剤成分は、所望の血漿濃度、及び、関与する薬物動態に応じて変化させることができる。
【００６０】
化合物の有用な投与量は、それらのインビトロ活性と、動物モデルでのインビボ活性を比較して決定することができる。マウス、及び、その他の動物での有効な投与量を、ヒトに外挿させる方法は、当該技術分野で公知である；例えば、米国特許第４，９３８，９４９号を参照されたい。
【００６１】
治療での使用に必要な化合物、または、その活性塩または誘導体の量は、選択した特定の塩のみならず、投与経路、治療する病態の性質、それに、年齢及び患者の状態によっても変化するものであり、そして、最終的には、主治医または臨床医の裁量に委ねられる。
【００６２】
所望の用量は、便宜上、単回用量として、または、適切な間隔で投与する分割用量として、例えば、１日あたり２回、３回、４回、または、それ以上の分割用量として提示し得る。分割用量それ自体を、例えば、大まかな間隔で何度か個別に投与するために；吸入器からの複数回の吸入、または、眼への複数滴の点眼などのために、分割することができる。
【００６３】
また、化合物は、その他の治療薬、例えば、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の治療に有用なその他の治療薬と組み合わせて投与することができる。このような治療薬の例として：インスリン感作薬（例えば、メトホルミン）、チアゾリジネオン（例えば、ピオグリタゾン、または、ロシグリタゾン）、ビタミンＥ、ウルソデオキシコール酸、オメガ−３脂肪酸、ガレクチン−３阻害剤（例えば、ＧＲ−ＭＤ−０２）、及び、スタチンがある。Ｎ．  Ｃｈａｌａｓａｎｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，  ２０１２，  ５５，  ９，  ２００５−２０２３を参照されたい。
【００６４】
したがって、ある実施形態では、本発明は、式Ｉの化合物、または、医薬として許容可能なその塩、治療薬、及び、医薬として許容可能な希釈剤または担体を含む組成物も提供する。本発明は、式Ｉの化合物、または、医薬として許容可能なその塩、治療薬、梱包材料、それに、式Ｉの化合物、または、医薬として許容可能なその塩、及び、治療薬を、動物（例えば、哺乳動物）に対して投与して、線維症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、または、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を治療するための指示書面を含む、キットも提供する。ある実施形態では、治療薬を、インスリン感作薬（例えば、メトホルミン）、チアゾリジノン（例えば、ピオグリタゾン、及び、ロシグリタゾン）、ビタミンＥ、ウルソデオキシコール酸、オメガ−３脂肪酸、ガレクチン−３阻害剤（例えば、ＧＲ−ＭＤ−０２）、及び、スタチンからなる群から選択する。
【００６５】
ある実施形態では、治療薬は、ＧＬＰ−１アゴニストである。ＧＬＰ−１アゴニストは、グルカゴン様ペプチドの作用を模倣する。ＧＬＰ−１受容体を活性化すると、ＧＬＰ−１アゴニストと内因性ＧＬＰ−１は、血糖値を抑制し、そして、２型糖尿病患者での血糖コントロールの実現に向けて作用する。ある実施形態では、治療薬を、アルビグルチド（Ｔａｎｚｅｕｍ）、デュラグルチド（Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ）、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ）、徐放性エクセナチド（Ｂｙｄｕｒｅｏｎ）、リラグルチド（Ｖｉｃｔｏｚａ）、リキシセナチド（Ａｄｌｙｘｉｎ）、及び、セマグルチド（Ｏｚｅｍｐｉｃ）からなる群から選択する。ある実施形態では、治療薬は、リラグルチドである。
【００６６】
ある実施形態では、治療薬は、ＰＰＡＲアゴニストである。ＰＰＡＲアゴニストは、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体に作用する。ある実施形態では、治療薬は、汎ＰＰＡＲアゴニストである。ある実施形態では、治療薬は、ＰＰＡＲα／δアゴニストである。ある実施形態では、治療薬は、ＰＰＡＲγ／δアゴニストである。ある実施形態では、治療薬は、ＰＰＡＲαアゴニストである。ある実施形態では、治療薬は、ＰＰＡＲδアゴニストである。ある実施形態では、治療薬は、ＰＰＡＲγアゴニストである。ある実施形態では、治療薬を、アルビグルチド（Ｔａｎｚｅｕｍ）、デュラグルチド（Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ）、エラフィブラノール、エクセナチド（Ｂｙｅｔｔａ）、徐放性エクセナチド（Ｂｙｄｕｒｅｏｎ）、リラグルチド（Ｖｉｃｔｏｚａ）、リキシセナチド（Ａｄｌｙｘｉｎ）、エラフィブラノール（ＧＦＴ５０５）、及び、セマグルチド（Ｏｚｅｍｐｉｃ）からなる群から選択する。ある実施形態では、治療薬は、エラフィブラノール、または、その塩である。
【実施例】
【００６７】
本発明を、以下の実施例で例示的に説明するが、これらに限定されない。
【００６８】
実施例１  線維症のマウスモデル
２つの動物モデルを使用した：四塩化炭素（ＣＣｌ４）のマウスモデル。このモデルでは、Ｃ５７Ｂ１６／Ｊマウス（８週齢；約２５ｇ）に、４週間の間に、週に２回、腹腔内に、オリーブ油、または、オリーブ油で希釈した３．５ｍｌ／ｋｇの用量のＣＣｌ４のいずれかを、２５０μＬで与えた。ＣＣｌ４を４週間与えた後に、動物を、０．２ｍｇ／ｋｇのＭｉｎｎｅｌｉｄｅで治療した。
【００６９】
ＣＣｌ４＋ジエチルニトロサミン（ＤＥＮ）誘発性肝障害のマウスモデル。Ｃ５７Ｂ１６／Ｊマウス（３週齢；約１５ｇ）に、ＤＥＮ（２５ｍｇ／ｋｇ）を、１回、単回投与した。８週齢から；（約２５ｇ）４週間の間に、週に２回、腹腔内に、オリーブ油、または、オリーブ油で希釈した０．２ｍｌ／ｋｇの用量のＣＣｌ４のいずれかを、２５０μＬで与えた。ＣＣｌ４を４週間与えた後に、動物を、０．２ｍｇ／ｋｇのＭｉｎｎｅｌｉｄｅで治療した。
【００７０】
両方のモデルに関して、損傷具合と線維症を、Ｈ＆Ｅ染色、ならびに、ピクロシリウスレッド染色して、組織学的標本の検査を行って決定した。
【００７１】
結果
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、ＣＣｌ４、及び、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４マウスモデルで、肝線維症を予防及び改善した。
０．２ｍｇ／ｋｇのＭｉｎｎｅｌｉｄｅは、Ｍａｓｓｏｎｓ  ＴｒｉｃｈｒｏｍｅとＳｉｒｉｕｓレッド染色で認められたように、ビヒクルと比較して、ＣＣｌ４、及び、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４が誘発するコラーゲン沈着を阻害した。肝臓のＨ＆Ｅ染色の組織学的検査は、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅが、８週間の時点で、ＣＣｌ４、及び、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４を投与して誘発した脂肪症、肥大化、及び、炎症性病巣を抑制したことを示した。また、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、免疫蛍光染色で評価したところ、α−ＳＭＡ発現も抑制していた。
【００７２】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、ＣＣｌ４、及び、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４マウスモデルで、線維性遺伝子の発現を阻害した。
０．２ｍｇ／ｋｇのＭｉｎｎｅｌｉｄｅは、ＣＣｌ４、及び、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４が誘発したα−ＳＭＡ、コラーゲン１、及び、フィブロネクチナログなどの主要な線維性遺伝子の過剰発現を、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３（図１４）；ＴＧＦ−β受容体、ＴＧＦ−βＲ１、及び、ＴＧＦ−βＲ２で阻害した。
【００７３】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４マウスモデルで、炎症関連遺伝子の発現を阻害した。
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、８週間の時点で、Ｔｎｆ−α、ＩＬ６、ＩＬ−１β、及び、ｉＮＯＳの発現を抑制した。Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４マウスモデルで、インフラマソーム関連遺伝子の発現を阻害した。Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、８週間の時点で、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４マウスモデルで、インフラマソーム遺伝子ＮＯＤ様受容体ファミリーピリンドメイン含有３（ＮＬＲＰ３）、アポトーシス関連スペック様タンパク質含有ＣＡＲＤ、カスパーゼ１、インターロイキン（ＩＬ）−１β、及び、ＩＬ１８の発現を抑制した。
【００７４】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４マウスモデルで、肝線維症を予防及び改善した。
０．２ｍｇ／ｋｇのＭｉｎｎｅｌｉｄｅは、Ｍａｓｓｏｎｓ  ＴｒｉｃｈｒｏｍｅとＳｉｒｉｕｓレッド染色で認められたように、ビヒクルと比較して、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４が誘発するコラーゲン沈着を阻害した。肝臓のＨ＆Ｅ染色の組織学的検査は、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅが、１２週間の時点で、ＣＣｌ４、及び、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４を投与して誘発した脂肪症、肥大化、及び、炎症性病巣を抑制した、ことを示した。
【００７５】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、肝線維症の２つのモデルで有望な結果を示した。治療的介入では、血漿生化学的マーカーの減少、ならびに、ＣＣｌ４が誘発した肝線維症、及び、ＤＥＮ＋ＣＣｌ４が誘発した肝線維症での線維症の抑制を認めた。さらなるフォローアップは、周知のモデルを使用して、ｍＲＮＡ発現、ウエスタンブロット、コラーゲン定量、炎症プロファイリング、及び、酸化損傷パラメーターなどの分子マーカーを利用して実行することができる。
【００７６】
式Ｉの化合物の抗線維化活性は、例えば、非アルコール性脂肪肝疾患、及び、肝細胞癌の食餌誘発性マウスモデル、または、高脂肪のコリン欠乏食、及び、ジエチルニトロサミン（ＤＥＮ）の腹腔内注射を使用する、非アルコール性脂肪性肝炎を有する肝細胞癌のマウスモデルなどのその他の公知のモデルを使用して評価することもできる。
【００７７】
実施例２  非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の食餌誘発性肥満（ＤＩＯ）マウスモデル
ＤＩＯ−ＮＡＳＨマウスモデルにおいて、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ単独で、及び、エラフィブラノールまたはリラグルチドを併用して、８週間の治療の効果を調査するために、代謝パラメーター、肝病理学、及び、線維症ステージデータを含むＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）を収集した。
【００７８】
方法
動物
オスのＣ５６ＢＬ／６ＪＲｊマウスを、Ｊａｎｖｉｅｒ  Ｌａｂｓ（Ｌｅ  Ｇｅｎｅｓｔ  Ｓａｉｎｔ  Ｉｓｌｅ，Ｆｒａｎｃｅ）から入手した。マウスには、水道水と、通常の齧歯動物用飼料（Ａｌｔｒｏｍｉｎ  １３２４、Ｂｒｏｇａａｒｄｅｎ，Ｈｏｅｒｓｈｏｌｍ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、または、高脂肪（４０％、１８％トランス脂肪を含む）、４０％炭水化物（２０％フルクトース）、及び、２％コレステロール（ＡＭＬＮ  食餌；Ｄ０９１００３０１，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ）の食餌のいずれかを、自由に摂取させた。Ｃ５７ＢＬ／６ＪＲｊマウスには、治療開始の３５週間前から、低脂肪食餌ビヒクルコントロール群として通常の食餌を与え、あるいは、ＤＩＯ−ＮＡＳＨマウスにはＡＭＬＮ食餌を与えた。
【００７９】
ベースライン肝生検
薬物治療実験で使用したすべての動物に対して、肝パラメーターのベースラインを特徴決定するために、かつ、治療群への層別ランダム化のために肝生検を行った。マウスを、イソフルラン（２〜３％）を用いた吸入麻酔で麻酔する。正中線に小さな腹部切開を入れ、そして、肝臓の左側葉を露出させる。肝臓組織の円錐形の楔（約５０ｍｇ）を、葉の遠位部分から切除し、そして、組織学のために、１０％中性緩衝ホルマリン（１０％ＮＢＦ）で固定する。肝臓の切断面を、双極凝固（ＥＲＢＥ  ＶＩＯ  １００電気外科ユニット）を使用して、即座に電気凝固する。肝臓を腹腔に戻し、腹壁を縫合し、そして、ホッチキスで皮膚を閉じる。術後の回復に向けて、手術当日、及び、術後１日目、及び、術後２日目に、マウスに対して、カルプロフェン（５ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与する。治療を開始する３〜４週間前に動物を回復させた。先述したように、線維症ステージ≧１で、かつ、脂肪症スコア≧２であるマウスだけを、無作為化の研究で使用した（Ｔｏｌｂｏｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｊａｎ  １４，  ２０１８；２４（２）：  １７９−１９４）。治療群への層別ランダム化は、肝臓コラーゲン１ａ１の定量に従って行う。
【００８０】
薬物治療
ビヒクルは、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−８０を含む０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）（ＰＯ投与）、または、０．１％ウシ血清アルブミンを含むリン酸緩衝生理食塩水（ＳＣ投与）であり、５ｍＬ／ｋｇの投与量で投与した。動物を、層別化し（ｎ＝１２〜１４／群）、そして、（１）ビヒクル（０．５％ＣＭＣ、ＰＯ、ＱＤ）、及び、ビヒクル（生理食塩水、ＳＣ、ＱＤ）；（２）Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（０．１ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）、及び、ビヒクル（生理食塩水、ＳＣ、ＱＤ）、（３）Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（０．１ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）、及び、リラグルチド（０．４ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ、ＱＤ）；または、（４）Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（０．１ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）、及び、エラフィブラノール（３０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、ＱＤ）で、治療を８週間行った。絶食させていないマウスの尾静脈から終末血液試料を採取し、そして、血漿生化学に使用した。イソフルラン麻酔下で、心臓穿刺をして動物を屠殺した。肝臓試料は、以下のようにして処理した。
【００８１】
生化学的、及び、組織学的分析
生化学的、及び、組織学的分析は、先述したようにして実施した（Ｔｏｌｂｏｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｊａｎ  １４，  ２０１８；２４（２）：  １７９−１９４）。血漿分析は、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、トリグリセリド（ＴＧ）、及び、総コレステロール（ＴＣ）について行った。肝臓ホモジネートを、ＴＧ及びＴＣの分析のために使用した。パラホルムアルデヒドで固定した生検前後の肝臓を、パラフィンで包埋し、切片化し、そして、ヘマトキシリネオシン（Ｄａｋｏ，Ｇｌｏｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、Ｐｉｃｒｏ−Ｓｉｒｉｕｓレッド（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｂｒｏｅｎｄｂｙ，Ｄｅｎｍａｒｋ）、抗Ｉ型コラーゲン（Ｃｏｌ１ａ１；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）、または、抗ガレクチン−３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ）で染色した。ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）と、線維症の病期分類システムを、脂肪肝、小葉の炎症、肝細胞の肥大化、及び、線維症をスコアリングするために、生検前の肝臓と終末期試料（薬物治療実験）、または、終末期試料だけ（疾患進行実験）に使用した。すべての組織学的評価は、治療の報告を受けていない病理医が行った。治療は、肝臓の総重量に影響を及ぼすので、肝臓総脂質、ガレクチン−３、Ｃｏｌ１ａ１含有量の定量データは、個々の終末期肝臓重量に対して、対応する肝臓脂質濃度（生化学データ）、または、パーセント分画面積（組織学データ）のそれぞれを掛けて、全肝臓量として表した。
【００８２】
結果
ビヒクル処置したＤＩＯ−ＮＡＳＨマウスの代謝的、生化学的、及び、組織学的変化
研究終了時に、ＤＩＯ−ＮＡＳＨビヒクルで処置した動物は、肝臓トリグリセリド（ＴＧ）、及び、総コレステロール（ＴＣ）含有量の相対レベル（ｍｇ／ｇ）、及び、総レベルの増大、ならびに、血漿ＴＣ及び肝臓酵素ＡＬＴ／ＡＳＴのレベルの高まりと共に、肥満と肝腫大を示した（図１）。脂肪性肝炎は、脂肪肝（脂質）、及び、マクロファージマーカーであるガレクチン−３（Ｇａｌ−３）の相対レベル（％）と、総レベルの増大によって組織学的に確認した（画像分析）。さらに、線維性表現型は、肝臓ヒドロキシプロリン（ＨＰ）、コラーゲン１ａ１（Ｃｏｌ１ａ１）、及び、アルファ−ＳＭＡ（α−ＳＭＡ）の相対的増大、及び、総レベルの増大によって確認した。組織学的スコアリングに関しては、ビヒクルで治療したＤＩＯ−ＮＡＳＨ動物の１２匹のうちの９匹が、５〜７ポイントの範囲で、複合ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳ）（治療前から治療後）の持続または増加を示しており、そして、１２匹のうちの３匹が、小葉での炎症スコアの低下から明らかなように、ベースラインからの退行を示した。最後に、１２匹のうちの１１匹のＤＩＯ−ＮＡＳＨビヒクル処置動物は、持続的な線維症ステージ（治療前から治療後）を示しており、全動物が、Ｆ２−Ｆ３であり、１２匹のうちの１匹が、ベースラインからの退行を示した。これらをまとめると、ここで認められた代謝的、生化学的、及び、組織学的表現型は、ＤＩＯ−ＮＡＳＨマウスモデルでの従前の知見と一致している。
【００８３】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅは、ＤＩＯ−ＮＡＳＨマウスの肝臓において、ガレクチン−３レベルを低下させた
ガレクチン−３は、脂肪肝疾患、及び、線維症の病因における重要なタンパク質である。ガレクチン−３の阻害は、前臨床、及び、初期の臨床研究において、食餌誘発性ＮＡＳＨからの保護に関して有望な効果を示している。肝臓のガレクチン−３は、組織の総面積のパーセンテージでの陽性ガレクチン−３染色面積の割合として推定した（図２Ａ〜Ｂ）。ビヒクル処置コントロールＤＩＯ−ＮＡＳＨマウスと比較して、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ処置群は、肝臓ガレクチン−３（％分画面積）において、１８．４１％の減少を示した（図１、及び、図２Ｃ〜Ｄ）。
【００８４】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとエラフィブラノールとの併用療法
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとエラフィブラノールとの併用療法で、８週間の治療を行ったところ、ＤＩＯ−ＮＡＳＨビヒクルで処置した動物と比較して、体重がベースライン（ビヒクル補正）から約１２％減少しており、同時に肝腫大を抑制した。加えて、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとエラフィブラノールとで治療をしたところ、ＡＬＴ／ＡＳＴ／ＴＣ／ＴＧの血漿レベルを低下させ、また、肝臓ＴＧ／ＴＣ含有量の相対レベルと、総レベルを抑制した（図１）。さらに、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとエラフィブラノールとで治療を行ったところ、肝臓脂質とＧａｌ−３の相対レベルと、総レベルを抑制した。線維症について、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとエラフィブラノールとで治療を行ったところ、肝臓ヒドロキシプロリン（ＨＰ）含有量の相対レベルと総レベル、肝臓Ｃｏｌ１ａ１の相対レベル、それに、α−ＳＭＡの相対レベルと総レベルを抑制した。組織学的スコアリングに関しては、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとエラフィブラノールとで治療した全動物において、主に脂肪症と小葉の炎症スコアの低下に起因する複合ＮＡＳ（治療前から治療後）の抑制を示した。さらに、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとエラフィブラノールとの併用療法は、Ｔｏｌｂｏｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｊａｎ  １４，  ２０１８；２４（２）：  １７９−１９４（図１の文献研究）で発表されているエラフィブラノール単剤療法に関する従前の文献研究と比較して、有効性が改善するとの全体的な傾向を示した。
【００８５】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとリラグルチドとの併用療法
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとリラグルチドとの併用療法で、８週間の治療を行ったところ、ＤＩＯ−ＮＡＳＨビヒクルで処置した動物と比較して、体重がベースライン（ビヒクル補正）から約１３％減少しており、同時に肝腫大を抑制した。加えて、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとリラグルチドとで治療をしたところ、ＡＬＴ／ＡＳＴ／ＴＣの血漿レベルを低下させ、また、肝臓ＴＧ／ＴＣ含有量の相対レベルと、総レベルを抑制した（図１）。さらに、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとリラグルチドとで治療を行ったところ、肝臓の脂質とＧａｌ−３の相対レベルと、総レベルを抑制した。線維症について、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとリラグルチドとで治療を行ったところ、肝臓ＨＰ含有量の相対レベルと総レベル、肝臓Ｃｏｌ１ａ１の相対レベル、それに、α−ＳＭＡの相対レベルと総レベルを抑制した。組織学的スコアリングに関しては、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとリラグルチドとで治療した１３匹のうちの１０匹では、主に小葉の炎症スコアと肝細胞肥大化スコアの低下に起因する複合ＮＡＳ（治療前から治療後）の抑制を示した。さらに、Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅとリラグルチドとの併用療法は、Ｔｏｌｂｏｌ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  Ｊａｎ  １４，  ２０１８；２４（２）：  １７９−１９４（図１の文献研究）で発表されているリラグルチド単剤療法に関する従前の文献研究と比較して、有効性が改善するとの全体的な傾向を示した。
【００８６】
実施例３  式Ｉの代表的な化合物の調製
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（商標）（１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩）は、次のスキームに例示したようにして調製することができる。
【化９】
2022500453.tif 000011
【００８７】
１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩の合成。
１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリドジベンジルエステル（５０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン（５ｍＬ）の溶液に対して、パラジウム炭素（１０％、１０ｍｇ）を加えた。混合物を、水素（１気圧）下で、室温で、３時間撹拌した。ＣＥＬＩＴＥ（商標）で濾過して触媒を除去し、そして、濾過物を、炭酸ナトリウム水和物の溶液（３ｍＬの水に８．９ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）で処理した。テトラヒドロフランを減圧下で蒸発させ、そして、残留水溶液を、エーテル（３×３ｍＬ）で抽出した。水層を蒸発乾固し、そして、得られた固形物を真空中で一晩乾燥させ、エーテルで洗浄し、そして、再び真空中で乾燥させて、１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩（３５ｍｇ、収率９０％）を、白色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ０．８１  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．００  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．０３  （ｓ，  ３Ｈ），  １．３５  （ｍ，  １Ｈ），  １．５０  （ｍ，  １Ｈ），  ２．００  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１  ＝  １４．７  及び  Ｊ２  ＝  １３．４  Ｈｚ），  ２．０８−２．６１  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．８５  （ｍ，  １Ｈ），  ３．６３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ３．８１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．８６  （ｓ，  １Ｈ），  ４．１２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ４．９２  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．０７  （ｍ，  ２Ｈ）  ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  １２．９，  １６．０，  １６．３，  １６．５，  ２２．３，  ２５．５，  ２８．９，  ３５．２，  ３９．８，  ５５．４，  ５６．１，  ６１．０，  ６１．５，  ６５．１，  ６５．５，  ７１．９，  ７７．６，  ９１．７，  １２３．８，  １６４．２，  １７７．３  ｐｐｍ；ＨＲＭＳ（Ｃ２１Ｈ２６Ｏ１０Ｐ）に対して求められる計算値：ｍ／ｚ  ［Ｍ＋１］＋  ４６９．１２６４，  実測値：ｍ／ｚ  ４６９．１２６７．
【００８８】
中間体１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリドジベンジルエステルは、以下のようにして、調製することができる。
【００８９】
ａ．トリプトリド（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を含む酢酸（５ｍＬ、８７．５ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１ｍＬ、１０．５ｍｍｏｌ）とを含むＤＭＳＯ（１．５ｍＬ、２１．４ｍｍｏｌ）の溶液を調製し、そして、室温で、５日間撹拌して、１４−Ｏ−メチルチオメチルトリプトリド中間体を生成した。次いで、反応混合物を、水（１００ｍＬ）に注ぎ、そして、固体のＮａＨＣＯ３を少しずつ加えて中和した。混合物を、酢酸エチル（５０ｍＬ×３）で抽出し、そして、合わせた有機抽出物を、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで、濃縮して、生成物を油状物として得た。フラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３：２ヘキサン／酢酸エチル）により、１４−Ｏ−メチルチオメチルトリプトリドを、５２％（６０ｍｇ）で、白色の泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．８２  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．００  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．０９  （ｓ，  ３Ｈ），  １．２０  （ｍ，  １Ｈ），  １．５９  （ｍ，  １Ｈ），  １．９３  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１  ＝  １４．７  及び  Ｊ２  ＝  １３．４  Ｈｚ），  ２．１９  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．１０−２．４２  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．６８  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ３．５１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．６７  （ｓ，  １Ｈ），  ３．７９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ４．６８  （ｍ，  ２Ｈ），  ４．９３  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．８  Ｈｚ），  ５．０７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  １１．８  Ｈｚ）  ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １３．６，  １４．８，  １６．８，  １７．０，  １７．１，  ２３．４，  ２６．３，  ２９．５，  ３５．８，  ４０．４，  ５４．５，  ５５．０，  ５８．０，  ６１．５，  ６３．９，  ６４．４，  ６９．９，  ７５．８，  ７６．７，  １２５．５，  １６０．２，  １７３．２  ｐｐｍ；ＨＲＭＳ（Ｃ２２Ｈ２８Ｏ６ＳＮａ）に対して求められる計算値：ｍ／ｚ  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  ４４３．１５０５，  実測値：ｍ／ｚ  ４４３．１５０７．
【００９０】
ｂ．１４−Ｏ−メチルチオメチルトリプトリド（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を含む乾燥塩化メチレン（２ｍＬ）の溶液を、Ｎ２雰囲気下で、粉末状の活性化４Å分子篩（５０ｍｇ）と混合し、続いて、ジベンジルホスフェート（４０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）と、Ｎ−ヨードスクシンイミド（３２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）との混合物を含むテトラヒドロフラン（２ｍＬ）を加えた。反応混合物を、室温で、５時間撹拌し、濾過し、そして、塩化メチレン（２０ｍＬ）で希釈した。得られた溶液を、チオ硫酸ナトリウムの溶液（２ｍＬ、１Ｍ溶液）、重炭酸ナトリウムの飽和溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして、真空中で濃縮した。油状の残留物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１：２ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリドジベンジルエステル（６２ｍｇ、収率８０％）を、白色の泡状物として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．７２  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ０．８９  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．０５  （ｓ，  ３Ｈ），  １．２７  （ｍ，  １Ｈ），  １．４８  （ｍ，  １Ｈ），  １．８２  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１  ＝  １４．７  及び  Ｊ２  ＝  １３．４  Ｈｚ），  ２．０３−２．３５  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．６４  （ｍ，  １Ｈ），  ３．１４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ３．４６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．６５  （ｓ，  １Ｈ），  ３．７６  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ４．６５  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．０２  （ｍ，  ４Ｈ），  ５．２７  （ｍ，  １Ｈ），  ５．４７  （ｍ，  １Ｈ），  ７．３４  （ｍ，  １０Ｈ）  ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １３．６，  １６．８，  １７．０，  ２３．３，  ２６．２，  ２９．６２，  ２９．６７，  ３５．７，  ４０．３，  ５４．７，  ５５．２，  ５９．３，  ６１．１，  ６３．６，  ６４．０，  ６９．３６，  ６９．３９，  ６９．４２，  ６９．４５，  ６９．９，  ７８．２，  ９２．９，  ９３．０，  １２５．５，  １２７．９，  １２８．０，  １２８．６，  １３５．５，  １３５．６，  １６０．１，  １７３．２  ｐｐｍ；ＨＲＭＳ（Ｃ３５Ｈ３９Ｏ１０ＰＮａ）に対して求められる計算値：ｍ／ｚ  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  ６７３．２１７９，  実測値：ｍ／ｚ  ６７３．２１７６．
【００９１】
実施例４  Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（商標）（１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩）の調製
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（商標）（１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩）は、次のスキームに例示したようにして調製することもできる。
【化１０】
2022500453.tif 000012
【００９２】
１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩の合成。
１４−Ｏ−メチルチオメチルトリプトリド（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、リン酸（８２ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）、及び、分子篩（４Å、０．４５ｇ）を含むＴＨＦ（１０ｍＬ）の溶液に対して、０℃で、Ｎ−ヨードスクシンイミド（４１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加え、そして、混合物を、室温で、１時間撹拌した。反応混合物を、セライトで濾過し、そして、固形物をＴＨＦで洗浄した。濾過物を、１Ｍ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で、無色になるまで処理し、そして、濾過物を、炭酸ナトリウムの溶液（３ｍＬの水に１３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）で処理した。濾過物を減圧下で蒸発させ、そして、残留水溶液を、エーテル（３×３ｍＬ）で抽出した。水層を蒸発乾固し、そして、得られた残留物を、クロマトグラフィー（Ｃ１８）で精製し、０〜１００％メタノールを含む水の勾配で溶出して、１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩（４３ｍｇ、７０％収率）を、無色の粉末として得た。
【００９３】
中間体１４−Ｏ−メチルチオメチルトリプトリドは、以下のようにして調製することができる。
【００９４】
ａ．トリプトリド（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）と、硫化メチル（０．１６ｍＬ、２．２４ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（１０ｍＬ）の溶液に対して、０℃で、過酸化ベンゾイル（０．２７ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を、４回に等分して、２０分かけて加え、次いで、混合物を、０℃で、１時間撹拌し、その後、室温で、１時間撹拌した。混合物を、酢酸エチルで希釈し、１０％Ｎａ２ＣＯ３で洗浄し、次いで、飽和食塩水で洗浄した。有機相を、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして、蒸発させた。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、１４−Ｏ−メチルチオメチルトリプトリド（６３ｍｇ、収率５４％）を、無色粉末として得た。
【００９５】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（商標）（１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩）は、次のスキームに例示したようにして調製することもできる。
【化１１】
2022500453.tif 000013
【００９６】
１４−Ｏ−ホスホノオキシエチルトリプトリド二ナトリウム塩の合成。
１４−Ｏ−メチルチオエチルトリプトリド（５２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、リン酸（８２ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）、及び、分子篩（４Å、０．４５ｇ）を含むＴＨＦ（１０ｍＬ）の溶液に対して、０℃で、Ｎ−ヨードスクシンイミド（４１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加え、次いで、混合物を、室温で、１時間撹拌した。反応混合物を、セライトで濾過し、固形物を、ＴＨＦで洗浄した。濾過物を、１Ｍ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で、無色になるまで処理し、そして、濾過物を、炭酸ナトリウムの溶液（３ｍＬの水に１３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）で処理した。濾過物を、減圧下で蒸発させ、そして、残留水溶液をエーテル（３×３ｍＬ）で抽出した。水層を、蒸発乾固し、得られた残留物を、クロマトグラフィー（Ｃ１８）で精製し、０〜１００％のメタノールを含む水の勾配で溶出して、１４−Ｏ−ホスホノオキシエチルトリプトリド二ナトリウム塩（４６ｍｇ、７２％収率）を、無色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ０．６８  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ０．７０  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．０３  （ｓ，  ３Ｈ），  １．２１  （ｍ，  １Ｈ），  １．５７  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ），  １．５８  （ｍ，  １Ｈ），  １．９４  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１  ＝  １４．７  及び  Ｊ２  ＝  １３．４  Ｈｚ），  ２．０８−２．６１  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．６２  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ３．４５  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．７２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．７９  （ｓ，  １Ｈ），  ４．６３  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．４３  （ｑ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ）  ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  １３．５，  １６．９，  １７．０，  １７．１，  ２１．４，  ２３．５，  ２６．８，  ２９．５，  ３５．９，  ４０．３，  ５４．０，  ５５．１，  ５９．４，  ６１．２，  ６３．６，  ６４．２，  ６９．８，  ７５．８，  ７６．５，  ９１．６，  １２５．６，  １６４．２，  １７７．２  ｐｐｍ；ＨＲＭＳ（Ｃ２２Ｈ２８Ｏ１０Ｐ）に対して求められる計算値：ｍ／ｚ  ［Ｍ＋１］＋  ４８３．１１３７，  実測値：ｍ／ｚ  ４８３．１１３４．
【００９７】
中間体１４−Ｏ−メチルチオエチルトリプトリドは、以下のようにして調製することができる。
【００９８】
ａ．トリプトリド（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）と、硫化エチル（０．２４ｍＬ、２．２４ｍｍｏｌ）とを含むアセトニトリル（１０ｍＬ）の溶液に対して、０℃で、過酸化ベンゾイル（０．２７ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を、４回に等分して、２０分かけて加え、次いで、混合物を、０℃で、１時間撹拌し、そして、室温で、１時間撹拌した。混合物を、酢酸エチルで希釈し、そして、１０％Ｎａ２ＣＯ３で洗浄し、次いで、飽和食塩水で洗浄した。有機相を、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして、蒸発させた。残留物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、１４−Ｏ−メチルチオエチルトリプトリド（６０ｍｇ、収率５０％）を、無色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．６８  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ０．７０  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  １．０４  （ｓ，  ３Ｈ），  １．２０  （ｍ，  １Ｈ），  １．５７  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ），  １．５９  （ｍ，  １Ｈ），  １．８８  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１  ＝  １４．７  及び  Ｊ２  ＝  １３．４  Ｈｚ），  ２．１９  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．０６−２．２７  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．６２  （ｍ，  １Ｈ），  ３．２４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ３．４２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．７０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．７３  （ｓ，  １Ｈ），  ４．６１  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．０２  （ｑ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ）  ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １３．６，  １４．８，  １６．９，  １７．０，  １７．１，  ２１．０，  ２３．５，  ２６．４，  ２９．６，  ３５．８，  ４０．５，  ５４．０，  ５５．２，  ５９．４，  ６１．３，  ６３．７，  ６４．２，  ６９．９，  ７５．８，  ７６．７，  １２５．６，  １６０．２，  １７３．２  ｐｐｍ；ＨＲＭＳ（Ｃ２３Ｈ３０Ｏ６ＳＮａ）に対して求められる計算値：ｍ／ｚ  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  ４５７．１７６３，  実測値：ｍ／ｚ  ４５７．１７６５．
【００９９】
Ｍｉｎｎｅｌｉｄｅ（商標）（１４−Ｏ−ホスホノオキシメチルトリプトリド二ナトリウム塩）は、次のスキームに例示したようにして調製することもできる。
【化１２】
2022500453.tif 000014
【０１００】
１４−Ｏ−ホスホノオキシプロピルトリプトリド二ナトリウム塩の合成。
１４−Ｏ−メチルチオプロピルトリプトリド（５４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、リン酸（８２ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）、及び、分子篩（４Å、０．４５ｇ）を含むＴＨＦ（１０ｍＬ）の溶液に対して、０℃で、Ｎ−ヨードスクシンイミド（４１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加え、そして、混合物を、室温で、１時間撹拌した。反応混合物を、セライトで濾過し、そして、固形物をＴＨＦで洗浄した。濾過物を、１Ｍ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３で、無色になるまで処理し、そして、濾過物を、炭酸ナトリウムの溶液（３ｍＬの水に１３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）で処理した。濾過物を、減圧下で蒸発させ、そして、残留水溶液を、エーテル（３×３ｍＬ）で抽出した。水層を蒸発乾固し、そして、得られた残留物を、クロマトグラフィー（Ｃ１８）で精製し、０〜１００％メタノールを含む水の勾配で溶出して、１４−Ｏ−ホスホノオキシプロピルトリプトリド二ナトリウム塩（４３ｍｇ、６５％収率）を、無色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ０．６６  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ０．６８  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ０．９９  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ），  １．０３  （ｓ，  ３Ｈ），  １．２０  （ｍ，  １Ｈ），  １．５３  （ｍ，  １Ｈ），  １．９０  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１  ＝  １４．７  及び  Ｊ２  ＝  １３．４  Ｈｚ），  ２．０４−２．６６  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．６５  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．２７  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ３．４９  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．７１  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．７８  （ｓ，  １Ｈ），  ４．６９  （ｍ，  ２Ｈ），  ６．３１  （ｑ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ）  ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  Ｄ２Ｏ）  δ  ７．５５，  １３．５，  １６．２，  １６．９，  １７．２，  ２０．８，  ２３．２，  ２６．１，  ２８．４，  ３４．７，  ３８．５，  ５４．１，  ５５．０，  ５９．０，  ６１．３，  ６２．５，  ６３．９，  ６８．５，  ７５．４，  ７６．４，  ９１．９，  １２５．７，  １６０．１，  １７４．５  ｐｐｍ；ＨＲＭＳ（Ｃ２３Ｈ２９Ｏ１０Ｐ）に対して求められる計算値：ｍ／ｚ  ［Ｍ＋１］＋  ４９７．１２９４，  実測値：ｍ／ｚ  ４９７．１２９２．
【０１０１】
中間体１４−Ｏ−メチルチオプロピルトリプトリドは、以下のようにして調製することができる。
【０１０２】
ａ．トリプトリド（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、及び、硫化プロピル（０．３２ｍＬ、２．２４ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（１０ｍＬ）の溶液に対して、０℃で、過酸化ベンゾイル（０．２７ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を、４回に等分して、２０分かけて加え、そして、混合物を、０℃で、１時間撹拌し、次いで、室温で、１時間撹拌した。混合物を、酢酸エチルで希釈し、そして、１０％Ｎａ２ＣＯ３で洗浄し、次いで、飽和食塩水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして、蒸発させた。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、１４−Ｏ−メチルチオプロピルトリプトリド（６０ｍｇ、収率４８％）を、無色の粉末として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．６５  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ０．６７  （ｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ），  ０．９９  （ｔ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ），  １．０１  （ｓ，  ３Ｈ），  １．２０  （ｍ，  １Ｈ），  １．５９  （ｍ，  １Ｈ），  １．８８  （ｄｄ，  １Ｈ，  Ｊ１  ＝  １４．７  及び  Ｊ２  ＝  １３．４  Ｈｚ），  ２．１８  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．０１−２．２６  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．６２  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．２４  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．５  Ｈｚ），  ３．４２  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．７０  （ｄ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ３．１  Ｈｚ），  ３．７３  （ｓ，  １Ｈ），  ４．６１  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．０３  （ｑ，  １Ｈ，  Ｊ  ＝  ５．３  Ｈｚ）  ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ  （１００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．６８，  １３．５，  １４．６，  １６．２，  １７．０，  １７．２，  ２１．４，  ２３．２，  ２６．１，  ２８．９，  ３４．７，  ３９．５，  ５４．１，  ５５．６，  ５９．０，  ６１．３，  ６３．５，  ６４．０，  ６９．５，  ７５．１，  ７６．４，  １２５．１，  １６０．９，  １７３．５  ｐｐｍ；ＨＲＭＳ（Ｃ２４Ｈ３２Ｏ６ＳＮａ）に対して求められる計算値：ｍ／ｚ  ［Ｍ＋Ｎａ］＋  ４７１．１９２０，  実測値：ｍ／ｚ  ４７１．１９１８．
【０１０３】
すべての刊行物、特許、及び、特許文献は、参照によりあたかも個別に援用するがごとく、参照により本明細書で援用する。本発明を、様々な特定の、かつ、好ましい実施形態及び技術を参照して説明してきた。しかしながら、本発明の技術思想、及び、範囲内になおも属する数多くの変更及び修正を行い得る、ことを理解されたい。
【図１】
2022500453.tif 000018
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
2022500453.tif 000021
【図２Ｄ】
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【図３】
2022500453.tif 000023
【図４】
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【国際調査報告】
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