【手続補正書】
【提出日】平成22年2月9日(2010.2.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における痛覚過敏の処置法であって、対象に有効量のＴＲＰＡ１アンタゴニストを含む医薬組成物を投与することを含んで成る方法であって、ここで前記ＴＲＰＡ１アンタゴニストは、ＴＲＰＡ１活性化を選択的に阻害し、それによって対象における有害な化学的感覚、熱感覚および機械的感覚を抑制または阻害するものである、方法。
【請求項２】
ＴＲＰＡ１アンタゴニストが、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４およびＴＲＰＭ８から成る群から選択される１種以上の他の熱ＴＲＰの活性化を阻害しない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＴＲＰＡ１アンタゴニストが（Ｚ）−４−（４−クロロフィニル）−３−メチルブタ−３−エン−２−オキシムである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＴＲＰＡ１アンタゴニストがＮ，Ｎ’−ビス−（２−ヒドロキシベンジル）−２，５−ジアミノ−２，５−ジメチルヘキサンである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＴＲＰＡ１アンタゴニストがＴＲＰＡ１アンタゴニスト抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
対象が炎症性状態または神経因性疼痛を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
対象が機械的または熱痛覚過敏を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
対象がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
さらに対象に第２の疼痛減少薬剤を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
第２の疼痛減少薬剤がアセトアミノフェン、イブプロフェンおよびインドメタシンならびにオピオイドから成る群から選択される鎮痛剤である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
第２の疼痛減少薬剤がモルヒネおよびモキソニジンから成る群から選択される鎮痛剤である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
有害な機械的感覚を阻害または抑制する薬剤を同定するための方法であって、（ａ）試験化合物を一過性受容器電位イオンチャネルＴＲＰＡ１を発現する細胞に接触させ、そして（ｂ）機械的刺激に応答して活性化した細胞のＴＲＰＡ１のシグナル活性を阻害する化合物を同定し；それによって有害な機械的感覚を阻害または抑制する薬剤を同定することを含んで成る方法。
【請求項１３】
さらに、同定した化合物を、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４およびＴＲＰＭ８から成る群から選択される１種以上の他の熱ＴＲＰの活性化またはシグナル活性に対する効果について試験することを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
同定した化合物が、当該化合物の非存在下でのＴＲＰＡ１イオンチャネルのシグナル活性と比較して、活性化ＴＲＰＡ１イオンチャネルのシグナル活性を抑制または減少する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
同定した化合物が、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４およびＴＲＰＭ８から成る群から選択される１種以上の他の熱ＴＲＰの活性の活性を阻害しない、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
活性化ＴＲＰＡ１イオンチャネルが、シンナモアルデヒド、オイゲノール、ジンジェロール、サリチル酸メチルおよびアリシンから成る群から選択されるＴＲＰＡ１アゴニストによって活性化される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
細胞が、ＴＲＰＡ１発現ＣＨＯ細胞、ＴＲＰＡ１発現アフリカツメガエル卵母細胞、または培養ＤＲＧニューロンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
シグナル活性がＴＲＰＡ１誘導性細胞膜通過電流または細胞へのカルシウム流入である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
機械的刺激が吸引圧または超浸透ストレスである、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
対象における熱または機械的痛覚過敏の処置用医薬の製造におけるＴＲＰＡ１特異的阻害剤の使用であって、ＴＲＰＡ１特異的阻害剤が（Ｚ）−４−（４−クロロフィニル）−３−メチルブタ−３−エン−２−オキシムまたはＮ，Ｎ’−ビス−（２−ヒドロキシベンジル）−２，５−ジアミノ−２，５−ジメチルヘキサンである、使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
他の局面において、本発明は、有害な機械的感覚を阻害または抑制する薬剤を同定するための方法を提供する。これらの方法には、（ａ）試験化合物を一過性受容器電位イオンチャネルＴＲＰＡ１を発現する細胞に接触させ、そして（ｂ）機械的刺激に応答して活性化した細胞のＴＲＰＡ１のシグナル活性を阻害する化合物を同定することを含む。これらの方法のいくつかでは、同定した化合物をさらに、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４およびＴＲＰＭ８から成る群から選択される１種以上の他の熱ＴＲＰの活性化またはシグナル活性に対する効果について試験する。いくつかの方法において、同定した化合物は、当該化合物の非存在下でのＴＲＰＡ１イオンチャネルのシグナル活性と比較して、活性化ＴＲＰＡ１イオンチャネルのシグナル活性を抑制または減少する。いくつかの方法において、同定した化合物は、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＶ２、ＴＲＰＶ３、ＴＲＰＶ４およびＴＲＰＭ８から成る群から選択される１種以上の他の熱ＴＲＰの活性の活性を阻害しない。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
図３Ａ−３Ｄは、化合物１８がＴＲＰＡ１活性化を阻害することを示す。（Ａ）化合物１８（上）およびシンナモアルデヒド（下）の化学構造。（Ｂ）５０μＭのシンナモアルデヒドによって誘導されるマウスおよびヒトＴＲＰＡ１発現ＣＨＯ細胞への、化合物１８によるカルシウム流入の阻害についての用量応答相関（左パネル）。カルシウム流入を、標準的なＦＬＩＰＲアッセイを用いて測定した。データ点は４ウェル（〜８，０００細胞／ウェル）の平均であり、エラーバーは標準誤差を示す。値は最大応答（化合物１８の非存在下で観察される）に正規化する。ＩＣ５０値は、ヒトおよびマウスについてそれぞれ、３．１μＭおよび４．５μＭである。化合物１８は、マウスＴＲＰＡ１に対するシンナモアルデヒドのＥＣ５０を、濃度依存的に右側にシフトする（右パネル）。データを、ＦＬＩＰＲカルシウム流入アッセイ、ｎ＝３ウェル（〜８，０００細胞／ウェル）を用いて作成し、最大応答に正規化した。バーは標準誤差を示し、実曲線はＥＣ５０値を導くヒル等式（hill equation）適合である。シンナモアルデヒドのＥＣ５０値は、５０μＭ（対照）、１１１μＭ（１０μＭの化合物１８）、および２２０μＭ（２５μＭの化合物１８）である。最大応答は、全てのケースにおいて同適度であった。（Ｃ）ＴＲＰＡ１の電流−電圧相関。ＴＲＰＡ１発現アフリカツメガエル卵母細胞の裏返しマクロパッチにおいてシンナモアルデヒドによって誘導される外向き整流電流（左パネル）は、化合物１８の共適用によって抑制された（右パネル）。（Ｄ）化合物１８は、シンナモアルデヒドによる急性侵害行動を抑制するが、カプサイシンによるものはしない。シンナモアルデヒド（１６．４ｍＭ）またはカプサイシン（０．３２８ｍＭ）を注射した後肢舐めおよび跳ね時間を５分間測定し、化合物１８（１ｍＭ）と共に注射した他の動物の後肢と比較する。各実験の症例数は、左からそれぞれ、８、８、６および６である（＊＊＊ｐ＜０．００１、＊ｐ＜０．０５、両側Ｓｔｕｄｅｎｔ  Ｔ検定）。