【手続補正書】
【提出日】平成22年6月10日(2010.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下を含む改変クロストリジウム毒素:
a)クロストリジウム毒素中毒プロセスの酵素による標的改変工程を実行することが出来るクロストリジウム毒素酵素ドメイン;
b)クロストリジウム毒素中毒プロセスの転位置工程を実行することが出来るクロストリジウム毒素転位置ドメイン; 
c)クロストリジウム毒素中毒プロセスの転位置工程を促進することが出来る転位置促進ドメイン; 
d)クロストリジウム毒素中毒プロセスの細胞結合工程を実行することが出来る改変クロストリジウム HCC ターゲティングドメインを含む増強したターゲティングドメイン;および、
e)プロテアーゼ切断部位;
ここで、プロテアーゼ切断部位の切断は改変クロストリジウム毒素の一本鎖形態を二本鎖形態へと変換する; および、
ここで、改変クロストリジウム HCC ターゲティングドメインは改変クロストリジウム HCC ターゲティングドメインが由来する天然クロストリジウム HCC ターゲティングドメインの結合活性と比較して内因性クロストリジウム毒素受容体に対して増強した結合活性を示す。
【請求項２】
改変クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメインが、クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメイン α-フォールドの、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 1α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 1α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 1α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 1α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 2α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 2α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 2α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 2α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-17 α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-17 α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-17 α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-17 α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A NTNH α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B NTNH α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 NTNH α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D NTNH α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 E NTNH α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 F NTNH α-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 G NTNH α-フォールド、FGF-1 α-フォールド、FGF-2 α-フォールド、FGF-4 α-フォールド、FGF-8 α-フォールド、FGF-9 α-フォールド、FGF-17 α-フォールドおよびFGF-18 α-フォールドからなる群から選択されるα-フォールドによる置換を含む請求項1の改変クロストリジウム毒素。
【請求項３】
改変クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメインが、クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメイン β-フォールドの、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 1β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 1β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 1β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 1β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 2β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 2β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 2β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 2β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-17 β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-17 β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-17 β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-17 β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A NTNH β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B NTNH β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 NTNH β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D NTNH β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 E NTNH β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 F NTNH β-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 G NTNH β-フォールド、FGF-1 β-フォールド、FGF-2 β-フォールド、FGF-4 β-フォールド、FGF-8 β-フォールド、FGF-9 β-フォールド、FGF-17 β-フォールドおよびFGF-18 β-フォールドからなる群から選択されるβ-フォールドによる置換を含む請求項1の改変クロストリジウム毒素。
【請求項４】
改変クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメインが、クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメイン γ-フォールドの、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 1γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 1γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 1γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 1γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 2γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 2γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 2γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 2γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-17 γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-17 γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-17 γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-17 γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A NTNH γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B NTNH γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 NTNH γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D NTNH γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 E NTNH γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 F NTNH γ-フォールド、クロストリジウム ボツリヌス血清型 G NTNH γ-フォールド、FGF-1 γ-フォールド、FGF-2 γ-フォールド、FGF-4 γ-フォールド、FGF-8 γ-フォールド、FGF-9 γ-フォールド、FGF-17 γ-フォールドおよびFGF-18 γ-フォールドからなる群から選択されるγ-フォールドによる置換を含む請求項1の改変クロストリジウム毒素。
【請求項５】
改変クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメインが、クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメイン β4/β5 β-ヘアピンターンの、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 1β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 1β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 1β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 1β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 2β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 2β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 2β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 2β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-17 β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-17 β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-17 β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-17 β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A NTNH β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B NTNH β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 NTNH β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D NTNH β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 E NTNH β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 F NTNH β4/β5 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 G NTNH β4/β5 β-ヘアピンターン、FGF-1 β4/β5 β-ヘアピンターン、FGF-2 β4/β5 β-ヘアピンターン、FGF-4 β4/β5 β-ヘアピンターン、FGF-8 β4/β5 β-ヘアピンターン、FGF-9 β4/β5 β-ヘアピンターン、FGF-17 β4/β5 β-ヘアピンターンおよびFGF-18 β4/β5 β-ヘアピンターンからなる群から選択されるβ4/β5 β-ヘアピンターンによる置換を含む請求項1の改変クロストリジウム毒素。
【請求項６】
改変クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメインが、クロストリジウム毒素 HCC ターゲティングドメイン β8/β9 β-ヘアピンターンの、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 1β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 1β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 1β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 1β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-33 2β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-33 2β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-33 2β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-33 2β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A HA-17 β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B HA-17 β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 HA-17 β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D HA-17 β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 A NTNH β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 B NTNH β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 C1 NTNH β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 D NTNH β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 E NTNH β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 F NTNH β8/β9 β-ヘアピンターン、クロストリジウム ボツリヌス血清型 G NTNH β8/β9 β-ヘアピンターン、FGF-1 β8/β9 β-ヘアピンターン、FGF-2 β8/β9 β-ヘアピンターン、FGF-4 β8/β9 β-ヘアピンターン、FGF-8 β8/β9 β-ヘアピンターン、FGF-9 β8/β9 β-ヘアピンターン、FGF-17 β8/β9 β-ヘアピンターンおよびFGF-18 β8/β9 β-ヘアピンターンからなる群から選択されるβ8/β9 β-ヘアピンターンによる置換を含む請求項1の改変クロストリジウム毒素。
【請求項７】
以下を含む改変クロストリジウム毒素:
a)クロストリジウム毒素中毒プロセスの酵素による標的改変工程を実行することが出来るクロストリジウム毒素酵素ドメイン;
b)クロストリジウム毒素中毒プロセスの転位置工程を実行することが出来るクロストリジウム毒素転位置ドメイン; 
c)クロストリジウム毒素中毒プロセスの転位置工程を促進することが出来る転位置促進ドメイン; 
d)クロストリジウム毒素中毒プロセスの細胞結合工程を実行することが出来るクロストリジウム 非毒素関連タンパク質 β-三葉型ドメインを含む増強したターゲティングドメイン;および、
e)プロテアーゼ切断部位;
ここで、プロテアーゼ切断部位の切断は改変クロストリジウム毒素の一本鎖形態を二本鎖形態へと変換する。
【請求項８】
以下を含む改変クロストリジウム毒素:
a)クロストリジウム毒素中毒プロセスの酵素による標的改変工程を実行することが出来るクロストリジウム毒素酵素ドメイン;
b)クロストリジウム毒素中毒プロセスの転位置工程を実行することが出来るクロストリジウム毒素転位置ドメイン; 
c)クロストリジウム毒素中毒プロセスの転位置工程を促進することが出来る転位置促進ドメイン; 
d) FGFR3に選択的に結合することができるFGF β-三葉型ドメインを含む増強したターゲティングドメイン;および、
e)プロテアーゼ切断部位;
ここで、プロテアーゼ切断部位の切断は改変クロストリジウム毒素の一本鎖形態を二本鎖形態へと変換する。
【請求項９】
改変クロストリジウム毒素が、一本のポリペプチドのアミノからカルボキシルへの直線状の順序で、1)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、転位置促進ドメインおよび増強したターゲティングドメイン、2)クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、増強したターゲティングドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよび転位置促進ドメイン、3)増強したターゲティングドメイン、クロストリジウム毒素転位置ドメイン、転位置促進ドメイン、プロテアーゼ切断部位およびクロストリジウム毒素酵素ドメイン、4)増強したターゲティングドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素転位置ドメインおよび転位置促進ドメイン、5)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、転位置促進ドメイン、プロテアーゼ切断部位、クロストリジウム毒素酵素ドメインおよび増強したターゲティングドメイン、または6)クロストリジウム毒素転位置ドメイン、転位置促進ドメイン、プロテアーゼ切断部位、増強したターゲティングドメインおよびクロストリジウム毒素酵素ドメインを含む、請求項1、請求項7、または請求項8のいずれかの改変クロストリジウム毒素。
【請求項１０】
転位置促進ドメインがクロストリジウム毒素転位置促進ドメインまたはエンベロープを持ったウイルスの融合ペプチドドメインである請求項9の改変クロストリジウム毒素。
【請求項１１】
プロテアーゼ切断部位が内因性クロストリジウム毒素二本鎖ループプロテアーゼ切断部位または外来性切断部位である請求項1、請求項7、または請求項8のいずれかの改変クロストリジウム毒素。
【請求項１２】
請求項1、請求項7、または請求項8のいずれかの改変クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子。
【請求項１３】
ポリヌクレオチド分子が発現ベクターを含む、請求項12のポリヌクレオチド分子。
【請求項１４】
細胞において改変クロストリジウム毒素をコードする請求項12のポリヌクレオチド分子を発現させる工程を含む、改変クロストリジウム毒素を生産する方法。
【請求項１５】
a)細胞に改変クロストリジウム毒素をコードする請求項12のポリヌクレオチド分子を導入する工程、および、
b) ポリヌクレオチド分子によってコードされる改変クロストリジウム毒素を発現させる工程、
を含む改変クロストリジウム毒素を生産する方法。