(57)【要約】本開示は、有効量のコラゲナーゼを投与することにより、ヒト対象の大腿部または臀部のセルライトを治療し、次いで、セルライトの重症度の低減を１つ以上の尺度で評価する方法に関する。【選択図】図２６
2022502478.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト患者の両臀部におけるセルライトの重症度を低減する方法であって、前記方法は、
ａ．以下の特徴：
ｉ．約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）；
ｉｉ．約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ；
ｉｉｉ．約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）；
ｉｖ．約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒；
ｖ．約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１；
ｖｉ．約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量；
ｖｉｉ．逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度が少なくとも８０％であること；
ｖｉｉｉ．約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価；
ｉｘ．約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価；
ｘ．約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価；
ｘｉ．クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下；
ｘｉｉ．１ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン；
のうち少なくとも２つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程と、
ｂ．治療有効量の前記コラゲナーゼ組成物を両臀部の陥凹部に注射する工程であって、前記セルライトの外観における改善が、ヘクセルセルライト重症度尺度（ヘクセルＣＳＳ）、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度、陥凹部分析、臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度（ＣＲ−ＰＣＳＳ）、患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度（ＰＲ−ＰＣＳＳ）、調査員グローバル美的改善尺度（Ｉ−ＧＡＩＳ）、被験者グローバル美的改善尺度（Ｓ−ＧＡＩＳ）、患者報告式セルライトインパクト尺度（ＰＲ−ＣＩＳ）、ＰＲ−ＣＩＳ省略形、被験者自己評価尺度（ＳＳＲＳ）、セルライト治療に対する被験者の満足度（ＳＳＣＴ）、セルライトの重症度の臨床医アセスメント（写真またはその他の画像）、Ｂｏｄｙ−Ｑ、セルライトの重症度、改善度、および／または患者の満足度を評価するために臨床医および／または患者が使用する検証済みのフォト数値またはその他の尺度、からなる群から選択される尺度または他の測定ツールによって確立されるものである、注射する工程と、
を有する、方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、治療される前記陥凹部は、サイズまたは相互の距離に依存しないものである、方法。
【請求項３】
請求項１記載の方法において、治療される前記陥凹部は、皮膚のたるみ、弛緩、または垂れがない、方法。
【請求項４】
請求項１記載の方法において、前記患者が複数回の治療訪問を受け、異なる陥凹部は異なる治療訪問で治療される、方法。
【請求項５】
請求項１記載の方法において、前記注射は１／２インチの針で行われる、方法。
【請求項６】
請求項１記載の方法において、前記注射は、前記注射の位置を制限するスペーサー、定規、紙などの装置に頼らない臨床医によって行われるものである、方法。
【請求項７】
請求項１記載の方法において、少なくとも１回の注射は、前記陥凹部の直下に行われる、方法。
【請求項８】
請求項１記載の方法において、複数回の注射が互いに２ｃｍ以内で行われる、方法。
【請求項９】
請求項１記載の方法において、治療される前記陥凹部の長さが１ｃｍ未満または２ｃｍ以上である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１記載の方法において、前記患者が治療に対して迅速な応答速度を経験する、方法。
【請求項１１】
請求項１記載の方法において、全員が中等度または重度のＣＲ−ＰＣＳＳベースライン評価を有する患者集団に治療を行うと、前記治療は、以下からなる群：
ａ．少なくとも５０％の患者が、２２、４３、または７１日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善していること；
ｂ．少なくとも５０％の患者が、２２、４３、または７１日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善していること；
ｃ．患者の少なくとも５％が、２２、４３、または７１日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善していること；
ｄ．患者の少なくとも５％が、２２、４３、または７１日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善していること；および
ｅ．少なくとも５％の患者が、陥凹部サイズの減少を経験すること；
からなる群から選択される結果をもたらす、方法。
【請求項１２】
請求項１１記載の方法において、前記陥凹部サイズのパラメータが、体積、長さ、幅、および深さからなる群から選択される、方法。
【請求項１３】
請求項１１記載の方法において、前記陥凹部サイズの減少が、ベースラインから２２、４３、または７１日目において少なくとも１０％減少である、方法。
【請求項１４】
請求項１記載の方法において、注射された累積コラゲナーゼが約５．０４ｍｇである、方法。
【請求項１５】
請求項１記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴：
ａ．ＡＵＸ−Ｉ（ＳＲＣアッセイ）：
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
ｉｉ．ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
ｂ．ＡＵＸ−ＩＩ（ＧＰＡアッセイ）
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
を有するＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩを有する、方法。
【請求項１６】
請求項１記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴：
ａ．ＡＵＸ−Ｉ（ＳＲＣアッセイ）：
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約３．８
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約２．０７×１０−４
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約５３
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約１８，７９９
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約２５６，９７７
ｂ．ＡＵＸ−ＩＩ（ＧＰＡアッセイ）
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約１５．４
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約１．６
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約４，６３６
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約２１６
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約２，９９７
を有するＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩを有する、方法。
【請求項１７】
請求項１記載の方法において、前記組成物は少なくとも３つの前記特徴を有する、方法。
【請求項１８】
請求項１記載の方法において、前記組成物は少なくとも４つの前記特徴を有する、方法。
【請求項１９】
請求項１記載の方法において、前記組成物は少なくとも５つの前記特徴を有する、方法。
【請求項２０】
請求項１記載の方法において、前記組成物は約１ｍｇ〜２０ｍｇの１つまたは複数のコラゲナーゼを有する、方法。
【請求項２１】
請求項１記載の方法において、前記組成物はＣＣＨを有する、方法。
【請求項２２】
請求項１記載の方法において、前記組成物は約１０，０００ＡＢＣ単位／０．５８ｍｇの力価を有し、前記治療有効量は約１ｍｇ〜２０ｍｇである、方法。
【請求項２３】
請求項１記載の方法において、前記組成物は約１５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ〜２０，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価を有し、前記治療有効量は約１ｍｇ〜２０ｍｇである、方法。
【請求項２４】
請求項１記載の方法において、前記治療有効量は約１ｍｇ〜１０ｍｇであり、前記組成物は約２０，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇ、または、約１７５，０００〜約３００，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有する、方法。
【請求項２５】
請求項１記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも５％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項２６】
請求項２５記載の方法において、前記患者の少なくとも１０％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項２７】
請求項２５記載の方法において、前記患者の少なくとも２０％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項２８】
請求項１記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも５％が治療前のベースラインに対して改善を示し、および、時間とともに改善のさらなる増加を示す、方法。
【請求項２９】
請求項１記載の方法において、治療が、ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳによって測定される以下の有効性評価項目：
ａ．２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースライン（治療前の「１日目」）から少なくとも２レベル改善していること；
ｂ．２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら患者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも２レベル改善していること；
ｃ．前記ＣＲ−ＰＣＳＳにおいてベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善があり、および、前記ＰＲ−ＰＣＳＳにおいてベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善がある患者と定義される、２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、２レベルの複合応答によって示された改善；
ｄ．２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも１レベル改善していること；
ｅ．２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら患者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも１レベル改善していること；
ｆ．前記ＣＲ−ＰＣＳＳにおいてベースラインから少なくとも１レベルの重症度の改善があり、および、前記ＰＲ−ＰＣＳＳにおいてベースラインから少なくとも１レベルの重症度の改善がある患者と定義される、２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、１レベルの複合応答によって示される改善；および
ｇ．ベースライン時に全員のＣＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度であった患者集団において、少なくとも１つの治療領域における改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記ａ．からｆ．の１つ以上であること；
のうち少なくとも１つの結果をもたらす、方法。
【請求項３０】
請求項１記載の方法において、前記治療が、陥凹部分析によって測定される以下の有効性評価項目：
ａ．深さが少なくとも５％減少する；
ｂ．幅が少なくとも５％減少する；
ｃ．長さが少なくとも５％減少する；
ｄ．全体の体積が少なくとも５％減少する；
ｅ．表面積が少なくとも５％減少する；
のうち少なくとも１つをもたらす、方法。
【請求項３１】
ヒト患者の両臀部におけるセルライトの重症度を低減する方法であって、前記方法は、
ａ．以下の特徴：
ｉ．約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）；
ｉｉ．約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ；
ｉｉｉ．約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）；
ｉｖ．約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒；
ｖ．約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１；
ｖｉ．約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量；
ｖｉｉ．逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度が少なくとも８０％であること；
ｖｉｉｉ．約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価；
ｉｘ．約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価；
ｘ．約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価；
ｘｉ．クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下；
ｘｉｉ．１ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン；
のうち少なくとも２つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程と、
ｂ．治療有効量の前記コラゲナーゼ組成物を、治療Ｉに従って両臀部の陥凹部に注射する工程であって、治療訪問後約３日〜２０日の間にあざが有意に減少するか、または色の濃さが解消される、注射する工程と、
を有する、方法。
【請求項３２】
請求項３１記載の方法において、注射された累積コラゲナーゼが約５．０４ｍｇである、方法。
【請求項３３】
請求項３１記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴：
ａ．ＡＵＸ−Ｉ（ＳＲＣアッセイ）：
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
ｉｉ．ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
ｂ．ＡＵＸ−ＩＩ（ＧＰＡアッセイ）
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
を有するＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩを有する、方法。
【請求項３４】
請求項３１記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴：
ａ．ＡＵＸ−Ｉ（ＳＲＣアッセイ）：
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約３．８
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約２．０７×１０−４
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約５３
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約１８，７９９
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約２５６，９７７
ｂ．ＡＵＸ−ＩＩ（ＧＰＡアッセイ）
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約１５．４
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約１．６
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約４，６３６
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約２１６
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約２，９９７
を有するＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩを有する、方法。
【請求項３５】
請求項３１記載の方法において、前記組成物は少なくとも３つの前記特徴を有する、方法。
【請求項３６】
請求項３１記載の方法において、前記組成物は少なくとも４つの前記特徴を有する、方法。
【請求項３７】
請求項３１記載の方法において、前記組成物は少なくとも５つの前記特徴を有する、方法。
【請求項３８】
請求項３１記載の方法において、前記組成物は約１ｍｇ〜２０ｍｇの１つまたは複数のコラゲナーゼを有する、方法。
【請求項３９】
請求項３１記載の方法において、前記組成物はＣＣＨを有する、方法。
【請求項４０】
請求項３１記載の方法において、前記組成物は約１０，０００ＡＢＣ単位／０．５８ｍｇの力価を有し、前記治療有効量は約１ｍｇ〜２０ｍｇである、方法。
【請求項４１】
請求項３１記載の方法において、前記組成物は約１５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ〜２０，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価を有し、前記治療有効量は約１ｍｇ〜２０ｍｇである、方法。
【請求項４２】
請求項３１記載の方法において、前記治療有効量は約１ｍｇ〜１０ｍｇであり、前記組成物は約２０，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇ、または、約１７５，０００〜約３００，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有する、方法。
【請求項４３】
請求項３１記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも５％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項４４】
請求項４３記載の方法において、前記患者の少なくとも１０％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項４５】
請求項４３記載の方法において、前記患者の少なくとも２０％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項４６】
請求項３１記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも５％が治療前のベースラインに対して改善を示し、および、時間とともに改善のさらなる増加を示す、方法。
【請求項４７】
ヒト患者の両臀部におけるセルライトの重症度を低減する方法であって、前記方法は、
ａ．以下の特徴：
ｉ．約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）；
ｉｉ．約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ；
ｉｉｉ．約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）；
ｉｖ．約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒；
ｖ．約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１；
ｖｉ．約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量；
ｖｉｉ．逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度が少なくとも８０％であること；
ｖｉｉｉ．約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価；
ｉｘ．約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価；
ｘ．約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価；
ｘｉ．クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下；
ｘｉｉ．１ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン；
のうち少なくとも２つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程と、
ｂ．治療有効量の前記コラゲナーゼ組成物を、治療Ｉに従って両臀部の陥凹部に注射する工程であって、前記セルライトの外観における改善が、ＣＲ−ＰＣＳＳによって確立されるものである、注射する工程と、
を有する、方法。
【請求項４８】
請求項４７記載の方法において、注射された累積コラゲナーゼが約５．０４ｍｇである、方法。
【請求項４９】
請求項４７記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴：
ａ．ＡＵＸ−Ｉ（ＳＲＣアッセイ）：
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
ｉｉ．ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
ｂ．ＡＵＸ−ＩＩ（ＧＰＡアッセイ）
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
を有するＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩを有する、方法。
【請求項５０】
請求項４７記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴：
ａ．ＡＵＸ−Ｉ（ＳＲＣアッセイ）：
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約３．８
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約２．０７×１０−４
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約５３
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約１８，７９９
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約２５６，９７７
ｂ．ＡＵＸ−ＩＩ（ＧＰＡアッセイ）
ｉ．Ｖｍａｘ、分−１：約１５．４
ｉｉ．ＫＭ、ｍＭ：約１．６
ｉｉｉ．Ｋｃａｔ、秒−１：約４，６３６
ｉｖ．１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約２１６
ｖ．ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約２，９９７
を有するＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩを有する、方法。
【請求項５１】
請求項４７記載の方法において、前記組成物は少なくとも３つの前記特徴を有する、方法。
【請求項５２】
請求項４７記載の方法において、前記組成物は少なくとも４つの前記特徴を有する、方法。
【請求項５３】
請求項４７記載の方法において、前記組成物は少なくとも５つの前記特徴を有する、方法。
【請求項５４】
請求項４７記載の方法において、前記組成物は約１ｍｇ〜２０ｍｇの１つまたは複数のコラゲナーゼを有する、方法。
【請求項５５】
請求項４７記載の方法において、前記組成物はＣＣＨを有する、方法。
【請求項５６】
請求項４７記載の方法において、前記組成物は約１０，０００ＡＢＣ単位／０．５８ｍｇの力価を有し、前記治療有効量は約１ｍｇ〜２０ｍｇである、方法。
【請求項５７】
請求項４７記載の方法において、前記組成物は約１５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ〜２０，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価を有し、前記治療有効量は約１ｍｇ〜２０ｍｇである、方法。
【請求項５８】
請求項４７記載の方法において、前記治療有効量は約１ｍｇ〜１０ｍｇであり、前記組成物は約２０，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇ、または、約１７５，０００〜約３００，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有する、方法。
【請求項５９】
請求項４７記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも５％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項６０】
請求項５９記載の方法において、前記患者の少なくとも１０％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項６１】
請求項５９記載の方法において、前記患者の少なくとも２０％が、初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
【請求項６２】
請求項４７記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも５％が治療前のベースラインに対して改善を示し、および、時間とともに改善のさらなる増加を示す、方法。
【請求項６３】
請求項４７記載の方法において、治療が、ＣＲ−ＰＣＳＳによって測定される以下の有効性評価項目：
ａ．２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースライン（治療前の「１日目」）から少なくとも２レベル改善していること；
ｂ．２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら患者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも２レベル改善していること；
ｃ．前記ＣＲ−ＰＣＳＳにおいてベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善があり、および、前記ＰＲ−ＰＣＳＳにおいてベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善がある患者と定義される、２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、２レベルの複合応答によって示された改善；
ｄ．２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも１レベル改善していること；
ｅ．２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら患者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも１レベル改善していること；
ｆ．前記ＣＲ−ＰＣＳＳにおいてベースラインから少なくとも１レベルの重症度の改善があり、および、前記ＰＲ−ＰＣＳＳにおいてベースラインから少なくとも１レベルの重症度の改善がある患者と定義される、２２、４３、７１、９０、１８０、または３６５日目に、１レベルの複合応答によって示される改善；および
ｇ．ベースライン時に全員のＣＲ−ＰＣＳＳまたはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度であった患者集団において、少なくとも１つの治療領域における改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記ａ．からｆ．の１つ以上であること；
のうち少なくとも１つの結果をもたらす、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１８年９月１８日に出願された米国仮出願シリアル番号第６２／７３３，０４６号、２０１９年１月６日に出願された米国仮出願シリアル番号第６２／７８８，９１６号、２０１９年２月２８日に出願された米国仮出願シリアル番号第６２／８１２，０３６号、２０１９年３月２５日に出願された米国仮出願シリアル番号第６２／８２３，５９６号、２０１９年７月１１日に出願された国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４１４９４号、および２０１９年７月１２日に出願された国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／４１７１８号は、法律で認められる最大限の範囲で、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、セルライトの評価と治療の分野に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
セルライト（浮腫性線維硬化性皮下組織症（ＥＦＰ）としても知られる）は、皮下接合部の構造的特性と生物力学的特性（すなわち、繊細な封じ込め力と押し出し力）の間の不均衡として理解できる美的状態である（Rudolphら、"Structural Gender Dimorphism and the Biomechanics of the Gluteal Subcutaneous Tissue:Implications for the Pathophysiology of Cellulite," Plast.Reconstr.Surg.2019;143(4):1077-1086）を参照)。したがって、セルライト治療の目標は、様々な種類の切除を介して、皮下の界面を強化すること、および／または、繊維性隔膜を解放することである（Rudolphら、上述）。線維性隔膜は、解剖学的および画像解析学的研究により、セルライトの貢献的な基礎原因として、またセルライトの治療対象として認識されてきた（Hexselら、"Side-by-side comparison of areas with and without cellulite depressions using magnetic resonance imaging"、Dermatol Surg.2009;35(10):1471-1477;Hexselら、"Magnetic Resance Imaging of Cellulite"。"Magnetic Resonance Imaging of Cellulite Depressed Lesions Successfully Treated by Subcision,"Dermatol Surg. 2016;42(5):693-696; Mirrashed F, Sharp JC, Krause V, Morgan J, Tomanek B. "Pilot study of dermal subcutaneous fat structures by MRI in individuals who differ in gender, BMI, and cellulite grading, "Skin Res Technol.2004;10(3):161-168; Nurnberger and Muller, "So-called cellulite: an invented disease, "J Dermatol Surg Oncol.1978;4(3):221-229; Pierardら、, "Cellulite: from standing fat herniation to hypodermal stretch marks," Am J Dermatopath.2000;22(1):34-37; Querleux ら、"Anatomy and physiology of subcutaneous adipose tissue by in vivo magnetic resonance imaging and spectroscopy: relationships with sex and presence of cellulite," Skin Res Technol.2002;8(2):118-124)。セルライトを効果的に治療するためには、多くの女性にとって悩みの種である皮膚のくぼみの原因となっている、コラーゲンで構成された真皮隔膜（図１）を溶解するなどして破壊する治療法が必要である。
【０００４】
セルライトを治療するために利用されてきた治療法があるが、承認された薬理学的治療法はない。複数の治療法があるにもかかわらず、現在の非薬理学的治療が有益であるという科学的根拠はほとんどない。実際、多くの根拠は逸話的、主観的、または患者の自己評価のみに基づいている。ＥＦＰの歴史的な治療法には、減量、外用剤、マッサージ、脂肪吸引、メソセラピー、高周波、切除、動力切除、レーザー治療などがある。これらの治療法の多くは望ましくない副作用がある（Avram MM, "Cellulite: a review of its physiology and treatment,"J Cosmet Laser Ther.2004;6(4):181-185; Collisら, "Cellulite treatment: a myth or reality: a prospective randomized, controlled trial of two therapies, endermologie and aminophylline cream, " Plast Reconstr Surg. 1999;104(4):1110-1114; Khan MH, Victor F, Rao B, Sadick NS. "Treatment of cellulite:Part I. Pathophysiology."J Am Acad Dermatol.2010;62(3):361-370; Hexsel DM, Mazzuco R. "Subcision: a treatment for cellulite. ".Int J Dermatol.2000;39(7):539-544; Boyce ら、, "Clinical evaluation of a device for the treatment of cellulite:Triactive." Am J Cosmet Surg. 2005;22:233-237; DiBernardo BE. "Treatment of cellulite using a 1440-nm pulsed laser with one year follow-up."Aesthet Surg J. 2011;31(3):328-341)。このように、多くの医師は美的状態の改善は簡単には得られないという見解を持っている。そのため、セルライトを持つ女性の審美的な結果を改善するための安全で効果的な非外科的治療法は、依然として満たされていない需要である。
【発明の概要】
【０００５】
本開示は、上記の必要性を満たし、治療上有効な量のコラゲナーゼ（詳細な説明で定義される）の皮下注射によってヒト患者のセルライトを治療する方法に関する。そのような方法は、セルライトの重症度の患者のベースラインを確立するために、様々な尺度や評価技術を用いて患者のセルライトの重症度を治療前に評価することに関する。その後、コラゲナーゼの皮下注射によるセルライトの治療が行われる。コラゲナーゼの投与量は様々であり、コラゲナーゼは、コラゲナーゼと１つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物の形態であってもよい。このような賦形剤としては、注射用の滅菌水、ｐＨ調整剤、緊張度調整剤、安定剤などが挙げられる。治療後の評価は、ベースラインと比較して、治療の有効性を確認するために行われる。本開示の治療の方法は、セルライトの外観の著しい減少をもたらす。
【０００６】
詳細な説明で説明するように、治療には４つの段階があるが、それらは任意であり、その順序は厳密に限定することを意図したものではない。
１．  最初の段階では、臨床医が治療すべきセルライトのくぼみの選択を行う。次に、注射前に、評価が行われる。例えば、臨床医および／または患者は、以下の尺度または他の評価方法（詳細な説明に定義されている）の１つ以上を使用して、セルライトの治療前の重症度を独立して評価する。
〇  ヘクセルセルライト重症度尺度（ＣＳＳ）（ヘクセルＣＳＳ）
〇  ヘクセルくぼみ深さスコア
〇  リッカート尺度
〇  陥凹部分析
〇  ＣＲ−ＰＣＳＳ（臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度）
〇  ＰＲ−ＰＣＳＳ（患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度）
〇  調査員グローバル美的改善尺度（Ｉ−ＧＡＩＳ）
〇  被験者グローバル美的改善尺度（Ｓ−ＧＡＩＳ）
〇  患者報告式セルライトインパクト尺度（ＰＲ−ＣＩＳ）
〇  ＰＲ−ＣＩＳ省略形
〇  被験者自己評価尺度（ＳＳＲＳ）
〇  セルライト治療に対する被験者の満足度（ＳＳＣＴ）
〇  セルライトの重症度の臨床医アセスメント（写真またはその他の画像）
〇  Ｂｏｄｙ−Ｑ
〇  フィッツパトリック尺度
〇  大腿部セルライト重症度−患者（ＴＣＳ−Ｐ）、大腿部セルライト重症度−臨床医（ＴＣＳ−Ｃ）
〇  セルライトの重症度、改善度、および／または患者の満足度を評価するために臨床医および／または患者が使用する検証済みのフォト数値またはその他の尺度（例えば、ヘクセル−Ｍｅｒｚ尺度（Ｈｅｘｓｅｌら、"Validated Assessment Scales for Cellulite Dimples on the Buttocks and Thighs in Female Patients," Dermatologic Surgery: August 2019 (Volume 45) Issue p S2?S11および米国皮膚科学会総会２０１９でのポスター発表）
【０００７】
さらに、臨床医や患者による前処理評価は、それぞれが異なるセルライトの重症度評価またはレベルを有する１〜１５枚の写真、イラスト、図面、コンピュータ画像、３Ｄモデル、ＭＲＩ画像、サーモグラム、超音波、患者の口頭でのフィードバックなどを分析することによって行うことができる。
【０００８】
２．  治療の第２段階では、治療すべきくぼみに臨床医がドットまたはその他のマーキングを行う（図６）。これは、くぼみの直下がある場合には、その直下に付けるのが一般的である。さらに写真を撮り、その他の評価を行うこともある。
【０００９】
３．  第３段階の治療では、治療有効量のコラゲナーゼを、１つ以上の治療部位（詳細な説明で定義されている）に単回投与または分割投与でくぼみに皮下注射する。投与量および注射技術は様々である。例えば、本方法は、以下の手順による注射を含んでいてもよい。
●  コラゲナーゼ組成物（ＣＣＨなど）を、３０ゲージの１／２インチ針付き注射器を用いて、被験者がうつ伏せになった状態で皮下に注射する。図７に示すように（以下、「治療Ｉ」）、各注射部位には、位置Ａ、Ｂ、Ｃに０．１ｍＬのアリコートを３回、合計０．３ｍＬのコラゲナーゼ組成物を皮膚に１回注射する。注射の深さは、針の先端から根元までの治療針の長さに相当する１／２インチで、下向きの圧力がかかっていない状態である。各注射部位において、針を皮膚表面に対して垂直に９０°の位置に配置して挿入し、コラゲナーゼ組成物を０．１ｍＬのアリコートで注射する（位置Ａ）。針をわずかに引き抜き（ただし、皮膚からは離さない）、垂直から４５°ずれた位置でくぼみの長軸の上に再配置し、０．１ｍＬアリコートのコラゲナーゼ組成物を注射する（位置Ｂ、頭部の方向）。再び針をわずかに引き抜き、くぼみの長軸の下、垂直から約４５°の位置に戻し、コラゲナーゼ組成物０．１ｍＬアリコートを注射する（位置Ｃ、足の方向）。注射後、被験者は５分間伏せたままとする。
【００１０】
一例として、治療Ｉは、０．８４ｍｇのコラゲナーゼ組成物を、それぞれが少なくとも２１日（＋／−３日のウィンドウ）の間隔で行われる３回の治療セッションの間に、治療部位あたり１２回の皮下注射として投与するために採用されてもよい。例えば、５．０４ｍｇの累積用量を投与することができる（すなわち、３回の治療訪問×治療領域あたり０．８４ｍｇ×２つの治療領域）。その他の手法については、詳細な説明で説明している。
【００１１】
４．  治療の第４段階では、上述の尺度やその他の評価方法（例えば、あざ分析）を用いて、注射後の評価が行われる。特定のコラゲナーゼ治療の有効性は、単一の臨床医の評価または患者の評価に基づいてもよいし、臨床医の評価と患者の評価からなる複合評価項目に基づいてもよい。ここでは、同一の対象について両方の尺度で改善が示される場合、すなわち、臨床医の尺度と患者の尺度の両方であらかじめ指定されたレベルの改善が示される場合がある。
【００１２】
コラゲナーゼは、約０．０１ｍｇ〜約２０ｍｇの量を単回投与または分割投与で注射され、以下の１つ以上の特徴を有している。
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜１２０ｋＤａ、または約９０〜１２０ｋＤａ、または約１００〜１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
本明細書で使用する場合、関連する速度論的パラメータは、本明細書に記載されているキュベットアッセイまたはマイクロプレートアッセイ（例えば、ＳＲＣキュベットアッセイ、ＳＲＣマイクロプレートアッセイ、ＧＰＡキュベットアッセイ、およびＧＰＡマイクロプレートアッセイ）を使用して測定することができる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、組成物中に存在するコラゲナーゼは、コラゲナーゼＩとコラゲナーゼＩＩを約１：１の比率で含んでいる。コラゲナーゼＩとコラゲナーゼＩＩの他の比率は、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０、または０：１のように採用されてもよい。コラゲナーゼＩおよびコラゲナーゼＩＩのそれぞれは、逆相ＨＰＬＣで測定した面積による純度が、少なくとも８０％、または８５％、または９０％、または９１％、または９２％、または９３％、または９４％、または９５％、または９６％、または９７％、または９８％、または９９％、または１００％であってもよい。
【００１４】
別の実施形態では、コラゲナーゼ組成物は、約１：１のＡＵＸ  ＩおよびＡＵＸ  ＩＩの比率を有するＣＣＨ（詳細な説明で定義される）を有する。ＡＵＸ  ＩおよびＡＵＸ  ＩＩの他の比は、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０、または０：１のように採用されてもよい。ＡＵＸ  ＩおよびＡＵＸ  ＩＩのそれぞれは、逆相ＨＰＬＣで測定した面積による純度が、少なくとも８０％、または８５％、または９０％、または９１％、または９２％、または９３％、または９４％、または９５％、または９６％、または９７％、または９８％、または９９％、または１００％であってもよい。
【００１５】
他の例では、コラゲナーゼ組成物は、液体であってもよいし、凍結乾燥した固体形態から希釈剤で再構成されていてもよい。混合物の投与量は、希釈剤を考慮せずに存在するコラゲナーゼの量によって測定され、１回以上の注射で約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇを有していてもよい。別の実施形態では、投与される用量は、１回以上の注射で約０．０６ｍｇ、０．４８ｍｇ、０．８４ｍｇ、１．６８ｍｇ、２．５２ｍｇ、３．３６ｍｇ、４．２ｍｇ、５．０４ｍｇ、５．８８ｍｇ、６．７２ｍｇ、７．５６ｍｇ、または８．４ｍｇである。例えば、約０．０６ｍｇ、０．４８ｍｇ、０．８４ｍｇ、または１．６８ｍｇを約１２回に分けて注射する。注射されるコラゲナーゼ組成物の量は、１回の注射につき０．０１ｍＬから３ｍＬの範囲、または１回の治療訪問（詳細な説明で定義されている）につき合計約０．２ｍＬから１５０ｍＬの範囲であってもよい。特定の実施形態では、上記の投与量は、ＣＣＨを含むコラゲナーゼ組成物に対するものである。別の実施形態では、上記の投与量は、以下の特徴の１つ以上を有するコラゲナーゼ組成物に対するものである。
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【００１６】
別の実施形態では、約０．８４ｍｇのＣＣＨを、治療部位ごとに約１２回に分けて均等に注射する（約０．０７ｍｇ×１２回＝約０．８４ｍｇ）。いくつかのケースでは、０．８４ｍｇによるこのような治療は、１回の治療訪問で行われるか、または２、３、４、または５回の治療訪問で１０〜４０日ごとに行われる。他のケースでは、２、３、４、または５回の治療訪問のために、１０〜４０日ごとに０．８４ｍｇを用いて複数の治療領域が注射される。このような注射は、５回以上の治療訪問で投与することができる。
【００１７】
さらに、詳細な説明に記載されているように、コラゲナーゼ注射はセルライトの治療に有効である。例えば、セルライトの外観の著しい改善は、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度スコア、および陥凹部分析によって実証される。
【００１８】
ＣＣＨ注射の最も一般的な副作用は、あざ、痛み、結節、かゆみ、腫れ、硬さ、変色、赤みなどの注射部位反応である。注射部位のあざは、一般的に治療回数を重ねるごとに減少する。
【００１９】
本発明の組成物、尺度、方法などの追加の実施形態は、以下の説明、図面、例、および請求項から明らかになるであろう。前述および以下の説明から理解されるように、本明細書に記載された各およびすべての特徴、ならびにそのような特徴の２つ以上の各およびすべての組み合わせは、そのような組み合わせに含まれる特徴が相互に矛盾しないことを条件として、本開示の範囲に含まれる。さらに、任意の特徴または特徴の組み合わせを、任意の実施形態または態様から明確に除外することができる。追加の態様および実施形態は、特に添付の例および図面と併せて考慮される場合、以下の説明および特許請求の範囲に記載される。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
特許又は出願ファイルは、カラーで描かれた少なくとも１つの図面を含む。カラーの図面を含むこの特許又は特許出願公報の写しは、請求及び必要な手数料の支払に応じて、国内で提供される。
【００２１】
前述の実施形態の特徴は、添付の図面を参照した以下の詳細な説明を参照することにより、より容易に理解されるであろう。
【００２２】
【図１】図１は、コラーゲン隔壁を描写する皮膚および皮下組織の断面図である。
【図２】図２は、ＡＵＸ−Ｉ（配列ＩＤ番号５）のアミノ酸配列リストである。
【図３】図３は、ＡＵＸ−ＩＩ（配列ＩＤ番号６）のアミノ酸配列リストである。
【図４】図４は、ヘクセルセルライト重症度尺度（ＣＳＳ）（Ｂ）くぼみの深さを示している。
【図５】図５は、大腿部セルライト重症度−患者（ＴＣＳ−Ｐ）；大腿部セルライト重症度−臨床医（ＴＣＳ−Ｃ）尺度の一例を示したものである。
【図６】図６は、臀部の被験者のくぼみと注射部位のマーキングの例を示したものである。
【図７】図７は、治療Ｉで使用された注射技術を示している。
【図８】図８は、ＲＥＬＥＡＳＥ−１研究およびＲＥＬＥＡＳＥ−２研究における複合応答者の主要評価項目および主要副次評価項目の棒グラフである。複合応答者とは、７１日目に対象となる臀部のＣＲ−ＰＣＳＳ評価およびＰＲ−ＰＣＳＳ評価の両方において、ベースラインから２レベル以上または１レベル以上の重症度改善が認められた患者と定義される。
【図９】図９は、７１日目のＣＣＨ  ０．８４ｍｇによる複合応答をベースラインと比較した一連の写真である。図９Ａは、ＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方で２レベルの改善を示している。図９Ｂは、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの両方において、１レベルの改善を示している。
【図１０】図１０は、（データ解析のための）非標的臀部における７１日目の複合応答者の主要評価項目および主要副次評価項目である棒グラフである。複合応答とは、７１日目において、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの両評価において、ベースラインから２レベル以上または１レベル以上の重症度改善が認められた患者と定義した。
【図１１】図１１は、治療意図（ＩＴＴ）集団における７１日目のＰＲ−ＰＣＳＳおよびＳ−ＧＡＩＳの応答者の頻度を示す棒グラフである。
【図１２】図１２は、修正治療意図（ｍＩＴＴ）集団における７１日目のＰＲ−ＣＩＳ総合スコアのベースラインからの平均改善度を示す棒グラフである。７１日目のＰＲ−ＣＩＳ評価を受けていない女性にはベースライン値を用いた。
【図１３】図１３は、グリッドへの３Ｄレジストレーションでのプレマーキング画像レジストレーションを示している（１日目  プレマーキング）。画像は、３Ｄ空間のグリッドに対してセンタリングされている。グリッドを基準にして、画像解析技術者（ＩＡＴ）がベースライン画像を配置し、画像のおおよその中心がグリッドの原点に置かれるようにする。大腿部／臀部が＋ｚ方向に正面を向き、大腿部／臀部の上部が＋ｙ方向を向き、大腿部／臀部の下部が−ｙ方向を向く。
【図１４】図１４は、画像レジストレーションのための距離ごとの色マップ（ａ  ｃｏｌｏｒ−ｂｙ−ｄｉｓｔａｎｃｅ  ｍａｐ）である。
【図１５】図１５は、関心領域（１）の主要な陥凹部を示している。１日目のポストマーキング画像を参考にして、１日目のプレマーキング画像上で標的の陥凹部を探す。その後、技術者はトラッキングされたプレマーキング画像上で、主な陥凹部の境界をトレースする。
【図１６】図１６は、関心領域の主要なくぼみを転置した一連の写真である。トラッキングされたプレマーキング画像上のくぼみのトレースは、各フォローアップ画像のベースラインに対する独自の表面トラッキング関係に基づいて、２２日目、４３日目、７１日目のフォローアップ画像上に転記される。
【図１７】図１７は、被験者の左臀部に注射してから４日目、８日目、１５日目の正常組織とあざのある組織の輪郭を示したものである。
【図１８】図１８（Ａ）は、左臀部に注射してから４日目、８日目、１５日目の正常組織とあざのある組織の輪郭を示し、それらの組織のＬ＊、ａ＊、ｂ＊の色の測定値を示している。  図１８（Ｂ）は、左臀部に注射してから４日目、８日目、１５日目の正常組織とあざのある組織の輪郭を描いたものである。Ｌ＊ａ＊ｂ＊の色の値から、正常組織とあざのある組織の平均色とΔＥを算出した。
【図１９】図１９（Ａ）〜図１９（Ｃ）は、例示的な陥凹部分析を示している。図１９（Ａ）は、陥凹部分析パラメータの観察結果と１日目のプレマーキング画像からの変化を示している。図１９（Ｂ）は、陥凹部の最大長と最大幅を示している。図１９（Ｃ）は、陥凹部の底面と補間された表面の間の表面積と体積を示す図である。
【図２０】図２０は、実施例３の標的臀部（ｍＩＴＴ集団）のＰＲ−ＰＣＳＳ評価の平均値の経時変化の折れ線グラフである。下の線は、実施例２および３に記載されているように、ＣＣＨ治療対プラセボ（上の線）である。
【図２１】図２１は、実施例３の非標的臀部（ｍＩＴＴ集団）のＰＲ−ＰＣＳＳ評価の平均値の経時変化の折れ線グラフである。下の線は、実施例２および３に記載されているように、ＣＣＨ治療対プラセボ（上の線）である。
【図２２】図２２は、実施例２の標的臀部（ｍＩＴＴ集団）のＣＲ−ＰＣＳＳ評価スコアの平均値の経時変化の折れ線グラフである。下の線は、実施例２および３に記載されているように、ＣＣＨ治療対プラセボ（上の線）である。
【図２３】図２３は、実施例２の非標的臀部（ｍＩＴＴ集団）のＣＲ−ＰＣＳＳ評価スコアの平均値の経時変化の折れ線グラフである。下の線は、実施例２および３に記載されているように、ＣＣＨ治療対プラセボ（上の線）である。
【図２４】図２４は、７１日目における標的および非標的臀部の２レベルの複合応答者を表す（ＩＴＴ集団）。
【図２５】図２５は、実施例５の研究デザインを表している。
【図２６】図２６は、段階３（３０２／−３０３）の１日目から７１日目まで、および実施例５（研究３０４）の７１日目から１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳ項目スコアの平均値を表す。
【図２７】図２７は、段階３の７１日目と比較した、１８０日目のＣＣＨ治療対プラセボ治療のＳＳＣＴＡ応答者の割合を表す。
【図２８】図２８は、研究２０２における被験者の傾向を表す。注ａ．：提供者により研究２０１の薬剤ブラインドが解除されるまで、被験者は二重盲検研究（２０１）の１日目から９０日後（すなわち、二重盲検研究終了から２０日±４日以内）に開始される３ヶ月の期間に最大４回の観察のみの訪問を受けた。観察期は、各治療領域内で定義され、スクリーニングＡから研究２０２の最初の治療日まで、または研究２０２で治療を受けていない場合は研究２０２の終了日までとした。注ｂ：「その他」のカテゴリーには、スクリーニング失敗、治療段階への参加を拒否した被験者、被験者登録の研究日２７２日目にサイトが閉鎖された被験者、または研究の受診を遵守しなかった被験者のいずれかが含まれる。注ｃ．：治療完了後（治療期７１日目）、被験者は３ヶ月間隔で観察評価を行い、３６０日目まで追跡された。研究２０１でＣＣＨを投与された被験者については、投与された治療部位について、７２０日目までの長期耐久性を評価した。
【図２９】図２９は、研究２０２におけるＣＣＨ治療領域における経時的な平均ＰＲ−ＰＣＳＳ評価を表す。
【図３０】図３０は、研究２０２における再曝露された（臀部および大腿部で治療された）対象の経時的な平均ＰＲ−ＰＣＳＳ評価を表す。
【図３１】図３１は、研究２０２における第１および第２の治療コース中の再曝露された臀部治療対象の経時的な平均ＰＲ−ＰＣＳＳ評価を表す。
【図３２】図３２は、研究２０２におけるＣＣＨ治療領域における経時的な平均ＣＲ−ＰＣＳＳ評価を表す。
【図３３】図３３は、研究２０２における再曝露された（臀部および大腿部で治療された）対象の経時的な平均ＣＲ−ＰＣＳＳ評価を表す。
【図３４】図３４は、研究２０２における第１および第２の治療コース中の再曝露された臀部治療対象の経時的な平均ＣＲ−ＰＣＳＳ評価を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
ここで、様々な態様および実施形態を本明細書で完全に説明する。しかしながら、これらの態様および実施形態は、多くの異なる形態で具体化することができ、限定的であると解釈されるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、開示が徹底的かつ完全であり、本主題の範囲を当業者に完全に伝えるように提供される。本明細書で引用されたすべての刊行物、特許および特許出願は、上記または下記を問わず、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００２４】
Ａ．定義
他に定義されていない限り、本明細書で使用されているすべての用語および語句は、反対のことが明確に示されているか、またはその用語または語句が使用されている文脈から明らかでない限り、その用語および語句が当技術分野で達成した意味を含む。本明細書に記載されているものと類似または同等の任意の方法および材料を本発明の実施または研究に使用することができるが、ここでは特定の方法および材料について説明する。
【００２５】
特に明記しない限り、個々の数値の使用は、その数値の前に「約」または「およそ」という言葉が付いているように、近似値として記載されている。同様に、本願で指定された様々な範囲の数値は、特に明示されていない限り、その範囲内の最小値と最大値の両方に「約」または「およそ」という言葉が付いているように、近似値として記載されている。このようにして、範囲内の値と実質的に同じ結果を得るために、記載された範囲の上下の変動を使用することができる。本明細書では、数値に言及する際の「約」および「およそ」という用語は、開示された主題が最も密接に関連する技術、または問題となっている範囲もしくは要素に関連する技術の通常の知識を有する者にとって、それらの明白かつ通常の意味を持つものとする。厳密な数値による境界からどれだけ広げるかは、多くの要素に依存する。例えば、要素の重要性、および/または、所定の変動量がクレーム対象物の性能に与える影響、ならびに、当業者に知られている他の考慮事項などが考慮される。本明細書では、異なる数値に異なる量の有効数字を使用することは、「約」または「およそ」という言葉の使用が特定の数値または範囲を広げるのに役立つことを制限することを意味しない。一般的には、「約」または「およそ」という言葉は、数値を広げる効果がある。また、範囲の開示は、最小値と最大値の間のすべての値を含む連続した範囲と、「約」または「およそ」という言葉の使用によって得られる範囲の拡大を意図している。従って、本明細書での数値の範囲の記載は、単に範囲内にある各個別の値を個別に参照するための略記法としての役割を果たすことを意図しており、各個別の値は、本明細書で個別に記載されているかのように本明細書に組み込まれている。
【００２６】
本明細書で使用される「患部」または「治療領域」は、コラゲナーゼ（以下に定義される）で治療される、または治療されたヒト患者のセルライトの領域を意味する。これには、四分円（つまり、左臀部、右臀部、左後外側大腿、右後外側大腿）が含まれる場合がある。患部や治療領域は臀部や大腿部に限定されない。むしろ、セルライトのある体のどの部分も治療領域として扱うことができる。
【００２７】
本明細書で使用する「有害事象」または「ＡＥ」とは、身体構造（徴候）、身体機能（症状）、検査結果（化学検査、心電図、Ｘ線検査など）の好ましくないまたは意図しない変化、または治験薬の使用に一時的に関連した既往症の悪化を意味し、治験薬との関連性があると考えられるか否かを問わない。
【００２８】
「Ｂｏｄｙ−Ｑ」は、Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒのライセンスに基づいて市販されている患者報告型の成果指標である。Ｂｏｄｙ−Ｑは、体の輪郭を整えることや体重を減らすことに対する患者の認識に基づいている。１８の独立した機能を持つ尺度を用いて、外観、健康関連の生活の質（ＨＲＱＬ）、患者の医療体験の３つの領域を測定する。患者報告式アウトカム機器については、ＢＯＤＹ−Ｑ：取り扱い説明書ＢＯＤＹ−Ｑ：取り扱い説明書、バージョン１．０、２０１５年７月、Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ、ＭｃＭａｓｔｅｒ  ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙおよびＳｔｅｆａｎ  Ｃａｎｏに記載されている。ＢＯＤＹ−Ｑには、セルライトを測定するための尺度が搭載されている。https://www.mskcc.org/sites/default/files/node/174457/documents/body-q-users-guide.pdf（２０１９年７月３日アクセス）を参照。セルライトについては、過去１週間の時間枠で「まったくない」から「非常に気になる」までの範囲の応答選択肢を有する１６の尺度項目があり、フレッシュ・キンケイド級の読解レベルを想定している。患者は次のように質問される：「セルライトのことを考えて、この１週間で、どれくらい気になったか」：［１６の質問が続き、患者は回答を、１−非常に気になる、２−中程度に気になる、３−少し気になる、４−全く気にならない、とランク付けする］。スコアの範囲は、１６（非常に気になる）から６４（全く気にならない）である。
【００２９】
従来、あざの臨床検査は、あざ部分とその周辺の視覚的検査に加えて、被験者の内科的、外科的、および併用薬の履歴を評価することで行われてきた。この解釈の結果は主観的なものであり、見る角度、周囲の照明、露出していない周囲の皮膚の色、観察者の経験や視力など、いくつかの無関係な要因に影響される。本明細書で使用される「あざ分析」とは、米国特許公開第２０１９／００３５０８０号に開示されている客観的な画像捕捉およびトラッキング方法をすべての対象画像に一様に適用して、被験者のコラゲナーゼ処理領域の画像から評価される皮膚の色の目に見える変化を検出することを意味する。この客観的分析は、被験者内（異なる時点での同じ被験者内）および被験者間（異なる被験者間）の両方のレベルであざを定量化し、区別し、評価する能力を提供することにより、医療提供者によるあざの視覚的および臨床的な検査を支援し、あるいは代替する可能性がある。この解析では、「赤と緑、黄と青の２色を同時に表現することはできない」という色反論理論に基づいて国際照明委員会（ＣＩＥ）が定義したＬ＊ａ＊ｂ＊色空間を使用している。下図のように、Ｌ＊は明暗を、ａ＊は赤／緑の座標を、ｂ＊は黄／青の座標を表している。Ｌ＊のデルタ（ΔＬ＊）、ａ＊のデルタ（Δａ＊）、ｂ＊のデルタ（Δｂ＊）は正（＋）でも負（−）でもよい。しかし、差の合計であるデルタＥ（ΔＥ＊）は常に正である。
●  ΔＬ＊（Ｌ＊サンプルからＬ＊スタンダードを引く）＝明暗の差（＋＝明るい、−＝暗い）、数字が小さい（０〜５０）と暗く、数字が大きい（５１〜１００）と明るい。
●  Δａ＊（ａ＊サンプルからａ＊スタンダードを引く）＝赤と緑の差（＋＝より赤、−＝より緑）
●  Δｂ＊（ｂ＊サンプルからｂ＊スタンダードを引く）＝黄色と青の差（＋＝より黄色、−＝より青）
物体の色（ここでは被験者の治療領域の画像に写っているあざ）を完全に表現するためには、この３つの値が必要である。Ｌ＊ａ＊ｂ＊値でデータを出力する、コラゲナーゼ治療領域（プロトコルで指定された時点での治療前および治療後の画像）の画像解析の客観的な方法論は、肌の色とその変化を、迅速、容易、正確、反復可能、かつ偏りなく定量化することを可能にする。この方法では、従来の主観的な目視による画像の推定に伴う固有の変動が排除される。ΔＥは以下のように計算される。
ΔＥ（あざのある組織と正常組織間の色の違い）＝ＳＱＲＴ［（Ｌ＊Ｂ−Ｌ＊Ｎ）２＋（Ａ＊Ｂ−Ａ＊Ｎ）２＋（Ｂ＊Ｂ−Ｂ＊Ｎ）２］、ここにおいて、
Ｌ＊Ｂ＝あざのある組織Ｌ＊
Ｌ＊Ｎ＝正常組織Ｌ＊
Ａ＊Ｂ＝あざのある組織Ａ＊．
Ａ＊Ｎ＝正常組織Ａ＊
Ｂ＊Ｂ＝あざのある組織Ｂ＊
Ｂ＊Ｎ＝正常組織Ｂ＊
図１８（Ｂ）は、治療領域のあざの分析結果を示したものである。
【００３０】
本明細書で使用する「ＣＣＨ」とは、ＡＵＸ−Ｉ（配列ＩＤ番号５（図２））とＡＵＸ−ＩＩ（配列ＩＤ番号６（図３））の混合コラゲナーゼを、クロストリジウムヒストリチカム（Ｈａｔｈｅｗａｙａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａとしても知られる）の発酵によって得られた約１：１の比率で混合したものである。ＣＣＨはＸＩＡＦＬＥＸ（登録商標）という商標で凍結乾燥粉末として市販されており、ＡＵＸ−ＩとＡＵＸ−ＩＩの混合物に特定の賦形剤を加えたものであるが、ＣＣＨは他の適切な賦形剤と併用してもよい。
【００３１】
本明細書で使用する「臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度（ＣＲ−ＰＣＳＳ）」は、医師／臨床医が使用するＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２０５５１（２０１８年９月７日にＷＯ２０１８／１６０９０５として公開）に記載されているフォト数値尺度であり、セルライトの重症度を５段階に評価するように設計されている。
【００３２】
本明細書に別段の定めがある場合を除き、「コラゲナーゼ」とは、以下のいずれかを意味する。ａ）ＥＣ  ３．４．２４．３で定義された活性を有するコラゲナーゼ（変異体を含む）（https://www.brenda-enzymes.org/enzyme.phpecno=3.4.24.3（２０１９年７月３日アクセス）；（ｂ）クロストリジウムヒストリチカム（Ｈａｔｈｅｗａｙａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａとしても知られている）の発酵によって産生されたコラゲナーゼ；（ｃ）ＣＣＨ（上記で定義されている）；（ｄ）ＢＬＡＳＴによって決定されたＡＵＸ−Ｉと少なくとも５０％の配列整合性を有するコラゲナーゼ；（ｅ）ＢＬＡＳＴによって決定されたＡＵＸ−ＩＩと少なくとも５０％の配列整合性を有するコラゲナーゼ；（ｆ）他の源の生物の発酵によって産生されたコラゲナーゼ（すなわち、非クロストリジウムヒストリチカム）、例えば、哺乳類、甲殻類、真菌、細菌または微生物のコラゲナーゼ；（ｇ）組換え技術によって得られたコラゲナーゼ；（ｈ）約６５ｋＤａ〜約１３０ｋＤａの分子量を有するコラゲナーゼ；（ｉ）クラスＩまたはクラスＩＩとして指定されたコラゲナーゼ（コラゲナーゼＩ（または１）、コラゲナーゼＩＩ（または２）、Ｉ型コラゲナーゼ、２型コラゲナーゼとも呼ばれる）；ｊ）コラゲナーゼＩおよびＩＩの混合物；（ｋ）ＪＣＭ１４０３株（ＡＴＣＣ１９４０１）由来のコラゲナーゼまたはその誘導体；（ｌ）ＡＴＣＣ２１０００株由来のコラゲナーゼまたはその誘導体；（ｍ）ＡＴＣＣ６９３３４株由来のコラゲナーゼまたはその誘導体；（ｎ）Ｃ．パーフリンジェンス由来のコラゲナーゼ；（ｏ）ビブリオ・アルギノリチカス由来のコラゲナーゼ；（ｐ）ストレプトマイセス由来のコラゲナーゼ；（ｑ）シュードモナス由来のコラゲナーゼ；（ｒ）Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｉｏｐｈａｇｕｓ由来のコラゲナーゼ（ｓ）Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．に記載のコラゲナーゼ（www.Worthington-biochem.com；「製品ハイライト」）；（ｔ）Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（www.sigma-aldrich.com）に記載されたコラゲナーゼ；（ｕ）以下の特徴の１つ以上を有するコラゲナーゼ：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１；
ｖ）Ｎｏｒｄｍａｒｋ  Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ  ＧｍｂＨ&Ｃｏ．ＫＧによって記載されたコラゲナーゼ；（ｗ）株００４からのコラゲナーゼ；または（ｘ）前記のいずれかの等価物もしくは混合物である。本明細書の開示に使用することができるコラゲナーゼの非限定的な例は、米国特許第７，８１１，５６０号、第９，７５７，４３５号、第９，７４４，１３８号、およびＷＯ２０１２／１２５９４８に記載されている。
【００３３】
本明細書で使用する「陥凹部分析」とは、陥凹部の体積、長さ、幅、および表面積などのパラメータが測定される、１つ以上の選択された陥凹部の分析を意味する。測定は、Ｅｃｋｈｏｕｓｅら、ＷＯ２０１８／１１６３０４およびＷＯ２０１８／１１６３０５に記載されているものや、Ｃｈｅｒｒｙ  Ｉｍａｇｉｎｇ（www.cherryimaging.com）およびＣａｎｆｉｅｌｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｉｎｃ．また、Ｓａｌａｍｅｈら、"Novel Stereoscopic Optical System for Objectively Measuring Above-Surface Scar VolumeFirst-Time Quantification of Responses to Various Treatment Modalities," Dermatol. Surg. 00:1-7 (2017); および米国特許第９，９９６，９２３号に記載されている。体積、長さ、幅、および表面積のそのような測定値は、デジタル３Ｄグレースケール画像（ＸおよびＹ軸回転機能付き）およびデジタル３Ｄテクスチャおよび照明付き画像（ＸおよびＹ軸回転機能付き）を、そのような画像を分析するコンピュータプログラムとともに使用して計算されてもよい。一例として、臀部の治療領域では、治療前と治療後の各患者について、左の治療された臀部および／または右の治療された臀部の画像を撮影することができる。大腿部の治療部位については、治療前と治療後に、０度、４５度、９０度の各大腿部の治療部位の画像を撮影してもよい。大腿部の治療領域について、Ｃａｎｆｉｅｌｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃの方法を用いて撮影した画像を、治療前と治療後の０度、４５度、９０度における大腿部の治療部位のそれぞれについて撮影してもよい。
【００３４】
本明細書で使用する「耐久性」とは、治療効果の持続性がある期間を意味する。この期間は、約３ヶ月〜約２０年、または約１年〜１９年、または約２年〜１８年、または約３年〜１７年、または約４年〜１６年、または約５年〜１５年、または約６年〜１４年、または約７年〜１３年、または約８年〜１２年、または約９年〜１１年の範囲とすることができる。その期間は、約６ヶ月、約１年、約２年、約３年、約４年、約５年、約１０年、約１５年、または約２０年であってもよい。
【００３５】
本明細書で使用する「早期終了訪問」とは、研究を終了した被験者の最終訪問を早期終了訪問とみなし、研究を終了した被験者に対して７１日目に通常行われる評価を早期終了訪問で行うことを意味する。
【００３６】
本明細書で使用する「フィッツパトリック尺度」とは、表１に示すように、被験者の皮膚タイプを評価するために用いられる尺度を意味する。
【表１】
2022502478.tif 000003
【００３７】
本明細書で使用する「ヘクセルセルライト重症度尺度」または「ヘクセルＣＳＳ」または「セルライト重症度尺度（ＣＳＳ）」とは、セルライトの５つの主要な形態的特徴を評価する以下のフォト数値尺度を意味する（表２）。
【表２】
2022502478.tif 000004
ポイントの合計で以下のように分類される。
2022502478.tif 000005
【００３８】
本明細書で使用する「ヘクセルくぼみ深さスコア」とは、へクセルＣＳＳ（図４）からくぼみの深さ（Ｂ）のみを評価することを意味する。
０＝くぼみなし
１＝表面的なくぼみ
２＝中程度の深さのくぼみ
３＝深いくぼみ
【００３９】
本明細書で使用する「画像」または「イメージ」とは、写真、イラスト、図面、モデル、３Ｄモデル、コンピュータで作成された画像、ＭＲＩ画像などを意味する。
【００４０】
本明細書で使用する「リッカート尺度スコア」とは、独立した盲検評価者（または患者）が、治療後の各訪問時に、１日目の前処置（ベースライン）のセルライトの写真（２Ｄカラー、３Ｄカラー、３Ｄグレースケール）と治療後の訪問時の写真を比較して、治療領域（臀部または大腿部）の変化を識別したスコアを意味する。スコアは、以下の５段階のリッカート尺度で捉えられる。
2022502478.tif 000006
【００４１】
本明細書で使用する「非標的大腿部」または「非標的臀部」とは、主要な有効性評価項目の評価に選択されていない大腿部または臀部を意味する。このような非標的領域は、依然として治療を受け、二次的な有効性の評価に使用することができる。
【００４２】
「任意」または「任意に」は、その後に記述される要素、構成要素、または状況が発生してもしなくてもよいことを意味し、記述には要素、構成要素、または状況が発生する場合と発生しない場合が含まれる。
【００４３】
本明細書で使用する「患者報告式セルライトインパクト尺度（ＰＲ−ＣＩＳ）」とは、セルライトの視覚的および感情的インパクト（セルライトの見た目に満足している、気になる、自覚、恥ずかしい、老けて見える、太って見える、体型が崩れて見える）を６項目の質問で評価するもので、各質問は０（全くない）から１０（非常にある）までの数値評価尺度で行われる。より具体的には、ＰＲ−ＣＩＳは、セルライトの視覚的および感情的なインパクト（セルライトの見た目に満足している、気になる、自覚、恥ずかしい、老けて見える、太って見える、体型が崩れて見える）を評価する６項目の静的な質問で、各項目は、被験者が自分の臀部または大腿部のデジタル画像を見ながら、０（全くない）から１０（非常にある）までの１１段階の数値評価（または間隔）で回答する。この評価は、各部位を個別に評価するのではなく、すべての大腿部および／または臀部をまとめて評価する場合もある。ＰＲ−ＣＩＳのトータルスコアは、６つの個別の質問から得られる。
質問１：治療のために選択された領域について考えると、セルライトの外観にどの程度満足しているか？
質問２：治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観にどのように悩まされているか？
質問３：治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観についてどのくらい自覚があるか？
質問４：治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観についてどのくらい恥ずかしいか？
質問５：治療のために選択された領域について考えると、あなたのセルライトのせいでどれくらい老けて見えるか？
質問６：治療のために選択された領域について考えると、セルライトのために太って見えたり、体型が崩れて見えたりすることはあるか？
【００４４】
本明細書で使用する「患者報告式セルライトインパクト尺度（省略形）」（ＰＲ−ＣＩＳ省略形）とは、セルライトの視覚的および感情的なインパクト（セルライトの見た目に満足している、気になる、自覚、恥ずかしい、太って見える、体型が崩れて見える）を、５つの質問項目を用いて評価するもので、各質問は０（全くない）から１０（非常にある）までの数値評価尺度で行われる。より具体的には、ＰＲ−ＣＩＳ省略形は、セルライトの視覚的および感情的な影響（セルライトの見た目に満足している、気になる、自覚、恥ずかしい、太って見える、体型が崩れて見える）を評価する５項目の静的な質問であり、各項目は、被験者が臀部または大腿部のデジタル画像を見ながら、０（全くない）から１０（非常にある）までの１１段階の数値評価（または間隔）で回答する。この評価は、個々の部位を個別に評価するのではなく、すべての大腿部および／または臀部をまとめて評価してもよい。限定的ではない例として、ＰＲ−ＣＩＳ省略形のトータルスコアは、５つの個別の質問から導き出すことができる。
質問１：治療のために選択された領域について考えると、セルライトの外観にどの程度満足しているか？
質問２：治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観にどのように悩まされているか？
質問３：治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観についてどのくらい自覚があるか？
質問４：治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観についてどのくらい恥ずかしいか？
質問５：治療のために選択された領域について考えると、セルライトのために太って見えたり、体型が崩れて見えたりすることはあるか？
ＰＲ−ＣＩＳ省略形トータルスコアは、ＰＲ−ＣＩＳ本編の他の５つの質問セットから導き出すことができる。
【００４５】
本明細書で使用する「患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度（ＰＲ−ＰＣＳＳ）」は、患者が使用するＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２０５５１（２０１８年９月７日にＷＯ２０１８／１６０９０５として公開）に記載されているフォト数値尺度であり、セルライトの重症度を５段階に評価するように設計されている。
【００４６】
本明細書で使用する「フォト数値」とは、一連の写真、イラスト、図面、モデル、３Ｄモデル、コンピュータで生成された画像、ＭＲＩ画像、画像などを使用することを意味し、それぞれにセルライトの重症度の異なるレベルが尺度で割り当てられている。
【００４７】
本明細書で使用する「順次訪問」とは、セルライトの変化が尺度によって評価される２回以上の臨床医の訪問または回数を意味する。訪問間の時間は、約２週間、３週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約１年、約１８ヶ月、約２年、約３年、約４年、または約５年以上であってもよい。
【００４８】
本明細書で使用する「重篤な有害事象」とは、死亡に至る有害事象、直ちに生命を脅かす有害事象、入院を余儀なくされるもしくは長期化させる有害事象、永久的もしくは実質的な障害をもたらす有害事象、先天的な異常／出生時の欠損をもたらす有害事象、または重要な医療上の事象とみなされる有害事象を意味する。
【００４９】
本明細書で使用する「統計的に有意」とは、一般的に０．０５未満の「Ｐ」値を有する統計データを意味する。本開示に関連して、臨床研究は、一般的に、対照と比較して介入（例えば、この場合、治療）の優位性を検証するように設計されている。臨床研究には、生理学的に互いに異なる人々が参加するため、結果にばらつきが生じるのは当然のことである。そこで、観察された差が偶然によるものなのか、治療法自体によるものなのかを判断するために、統計学が用いられる。統計的有意性の測定は、研究結果が偶然によるものである確率を定量化するものである。統計的有意性の測定によく用いられる「Ｐ」値は、研究結果が実際の治療効果ではなく偶然によるものである確率を表する。一般的に、統計的に有意とみなされる「Ｐ」値の従来のカットオフ値は０．０５（５％）であるが、研究デザインや結果によって変わる場合がある。「Ｐ」値が０．０５未満であれば、その研究結果が偶然によるものである可能性が５％未満であることを意味する。「Ｐ」値が０．０５（５％）より大きい場合、治療群と対照群の間の差は統計的に有意ではなく、その差が治療に起因する可能性は低く、代わりに偶然に起因する可能性があることを意味する。
【００５０】
「被験者」または「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒトまたは他の哺乳類を意味する。
【００５１】
本明細書で使用する「被験者グローバル美的改善尺度（Ｓ−ＧＡＩＳ）」および「調査員グローバル美的改善尺度（Ｉ−ＧＡＩＳ）」とは、セルライトの重症度および／または改善度を評価するための以下の尺度を意味する。被験者に次のような導入質問：「治療後のセルライトの外観をどう評価するか？」をする。評価は、表３に示すように、被験者の回答に応じて−３（非常に悪化）から＋３（非常に改善）の範囲で行われる。
【表３】
2022502478.tif 000007
【００５２】
本明細書で使用する「セルライト治療に対する被験者の満足度」（ＳＳＣＴ）とは、−２から＋２の範囲の被験者満足度評価を意味する。一例として、以下の表４は、臀部のセルライト治療に対するそのような評価を提供する。患者に「今日、あなたが受けたセルライト治療の結果にどの程度満足しているか？」と質問し、表４に示すような回答・評価を選択してもらう。
【表４】
2022502478.tif 000008
【００５３】
表５は、大腿部のセルライト治療に対するそのような評価を示している。患者に「今日、あなたが治療を受けた大腿部の特定の領域または領域のセルライト治療の結果にどのくらい満足しているか？」と質問し、表５のような回答／評価を選択してもらう。
【表５】
2022502478.tif 000009
【００５４】
本明細書で使用する「被験者自己評価尺度（ＳＳＲＳ）」とは、表６に示すように、被験者がセルライトに関連した外観の満足度を、０（極めて不満）から６（極めて満足）までの７段階の整数で評価するための尺度である。
【表６】
2022502478.tif 000010
【００５５】
本明細書で使用する「標的大腿部」または「標的臀部」とは、主要な有効性の評価項目を評価するために選択された大腿部または臀部を意味する。
【００５６】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、患者または統計的に有意な患者集団のセルライトの重症度を軽減するために必要なコラゲナーゼの量を意味する。採用するコラゲナーゼ組成物の量は、所望の結果を得るために必要な量のコラゲナーゼを提供するために必要な量となる。実際には、注射されるコラゲナーゼ、注射技術、および治療領域での酵素活性に応じて変化する。
【００５７】
本明細書で使用する「治療コース」とは、３回の治療セッション（すなわち、それぞれが治療を受けるために臨床医のもとを訪れること）を意味する。
【００５８】
本明細書で使用する「治療上の有害事象」または「ＴＥＡＥ」という用語は、治験薬による治療前には存在しなかったが治療後に現れた状態、治療開始時には存在したが治療中に悪化した状態、または治療開始時には存在したが治療中に解決して再び現れた状態（治療開始時のＡＥの強さに関係なく）を意味する。
【００５９】
本明細書で使用する「大腿部セルライト重症度−患者」（「ＴＣＳ−Ｐ」）および「大腿部セルライト重症度−臨床医」（「ＴＣＳ−Ｃ」）という用語は、患者（ＴＣＳ−Ｐ）または臨床医（ＴＣＳ−Ｃ）が大腿部セルライトの重症度、改善度、および／または患者の満足度を評価し、コラゲナーゼの有効性の評価を支援するために使用する図５に示すフォト数値尺度（または実質的に類似した尺度）を意味する。患者が報告する尺度の使用方法をＴＣＳ−Ｐと呼び、臨床医が報告する尺度の使用方法をＴＣＳ−Ｃと呼ぶ。
【００６０】
本明細書で使用する「治療訪問」または「治療」または「治療セッション」という用語は、１回のオフィス訪問で、セルライトの治療に有用な少なくとも１つの活性剤の治療有効量を患部に１回以上注射または治療を行うことを意味する。
【００６１】
本明細書で使用する「検証された」、「有効性」、「検証」という用語は、特定の尺度が正確で信頼できることを実証するプロセスを意味し、同じ結果が一貫して得られることを保証するための視覚的評価の再現性も含まれる。さらに検証では、尺度の精度、正確性、感度を検証し、尺度によって行われる測定値が信頼性、再現性、堅牢性に優れていることを確認する。
【００６２】
Ｂ．導入
本開示は、以下に説明する特定の注射技術を用いて、セルライトの外観を有する対象者に治療有効量の１つ以上のコラゲナーゼを投与することを有する、セルライトの治療方法に関するものである。
【００６３】
一般的に、治療には４つの段階がある。（１）臨床医と患者が治療前の評価を行い、治療前のベースラインを決定し、治療する陥凹部を選択する；（２）底がある場合は、臨床医は陥凹部を底で治療するようにマークする；（３）臨床医は患者をコラゲナーゼで治療する；（４）臨床医と患者が治療後の評価を行う。これらの段階を以下に詳述する。各段階およびその中の工程は任意であり、工程の順序は制限することを意図したものではない。
【００６４】
Ｃ．段階１−予備的な評価
本明細書に記載されているセルライトを治療する方法の第１段階では、臨床医は、以下の基準に基づいて、治療すべきセルライト陥凹部の選択を行う。
●  陥凹部は、写真で確認できるように、患者がリラックスしたポーズ（臀部の筋肉をリラックスさせた状態での立位）をとったときに、自然にはっきりと現れるものでなければならない
●  選ばれる陥凹部は、臀部や大腿部などの患部全体の美観を改善する可能性が最も高いと臨床医が判断したものでなければならない
●  治療前に患者がリラックスした状態で患部を撮影する
●  注射前に評価が行われる。すなわち、臨床医および／または患者が独立して写真を評価し、以下の尺度または評価方法の１つ以上を用いて結果を採点する
〇  ヘクセルセルライト重症度尺度（ＣＳＳ）（ヘクセルＣＳＳ）
〇  ヘクセルくぼみ深さスコア
〇  リッカート尺度
〇  陥凹部分析
〇  臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度（ＣＲ−ＰＣＳＳ）
〇  患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度（ＰＲ−ＰＣＳＳ）
〇  調査員グローバル美的改善尺度（Ｉ−ＧＡＩＳ）
〇  被験者グローバル美的改善尺度（Ｓ−ＧＡＩＳ）
〇  患者報告式セルライトインパクト尺度（ＰＲ−ＣＩＳ）
〇  被験者自己評価尺度（ＳＳＲＳ）
〇  セルライト治療に対する被験者の満足度（ＳＳＣＴ）
〇  大腿部セルライト重症度−患者（ＴＣＳ−Ｐ）、大腿部セルライト重症度−臨床医（ＴＣＳ−Ｃ）
〇  Ｂｏｄｙ−Ｑ
〇  フィッツパトリック尺度
〇  セルライトの重症度、改善度、および／または患者の満足度を評価するために臨床医および／または患者が使用する検証済みのフォト数値またはその他の尺度（例えば、ヘクセル−Ｍｅｒｚ尺度）
【００６５】
Ｄ．段階２−治療する陥凹部のマーキング
本明細書に記載された治療の第２段階では、治療すべきくぼみを臨床医がドット（複数）でマークすることができる。さらに写真を撮影してもよい。例えば、図６および１５を参照のこと。
【００６６】
Ｅ．段階３−コラゲナーゼ注射
第３段階の治療では、臨床医がコラゲナーゼ注射を行う。
【００６７】
１．コラゲナーゼの種類
本開示で有用なコラゲナーゼは、上記で定義されたコラゲナーゼのいずれかを含む。さらなる背景として、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）は、本明細書の定義に該当するコラゲナーゼで構成され得る。例えば、ＭＭＰ−１は、コラゲナーゼ１を有し、ＭＭＰ−８は、コラゲナーゼ２／好中球コラゲナーゼを有し、ＭＭＰ−１３は、コラゲナーゼ３を有し、ＭＭＰ−１８は、コラゲナーゼ４を有する。さらに、カテプシンもコラゲナーゼに分類することができる。
【００６８】
２．コラゲナーゼ酵素の速度論
本開示で有用なコラゲナーゼは、その酵素動態によっても特徴付けられ得る。ここで、セルライトを治療するのに有効な１つ以上のコラゲナーゼのおおよその速度論的値は以下が含まれる：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
Ｖｍａｘ＝最大の速度
ＫＭ＝Ｖｍａｘの５０％での［基質］
Ｋｃａｔ＝１秒間に切断される基質の分子数
１／Ｋｃａｔ＝１分子の基質を切断するのに必要なマイクロ秒
これらの値は、後述のマイクロプレートアッセイを用いて、基質や時間を変えて実験的に決定してもよい。また、他のアッセイやパラメータを採用してもよい。
【００６９】
この値は、ミカエリス・メンテン方程式に基づいて酵素の挙動を定量的に表したものである：
2022502478.tif 000011
【００７０】
ここで、Ｖ０は基質濃度［Ｓ］での反応速度（速度）、Ｖｍａｘは観測できる最大速度、ＫＭはＶｍａｘの５０％が得られる基質濃度に相関するミカエリス定数である。
2022502478.tif 000012
【００７１】
ここで、ｋ１、ｋ−１、ｋ２は次の工程の速度定数である。
2022502478.tif 000013
【００７２】
ここで、Ｅは酵素、Ｓは基質、ＥＳは酵素−基質複合体、Ｐは生成物である。
【００７３】
触媒定数Ｋｃａｔは、ターンオーバー数、すなわちＥＳ複合体がＥ＋Ｐに至るまでの速さを意味する。これは、各活性部位が単位時間当たりに行う触媒サイクルの数を反映している。
【００７４】
特定の実施形態では、ＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩは以下の特徴を有する。
●  ＡＵＸＩ
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＡＵＸＩＩ
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
前提条件
Ｋｃａｔ＝Ｖｍａｘ／［ＡＵＸ］＝（ｎモル  基質／ｎＧ  ＡＵＸ＊分−１）／ｎＧ  ＡＵＸ
触媒効率（Ｋｃａｔ／ＫＭ）は一般的に、基質を生成物に変換する酵素の総合的な能力を表し、結合イベントと触媒イベントの両方を反映している。別の実施形態では、ＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩは、以下の特徴を有する。
2022502478.tif 000014
【００７５】
３．コラゲナーゼの力価（比活性）について
コラゲナーゼの比活性（力価）を決定するためのアッセイが開発され、使用されている。そのようなアッセイは、サブセクションａ．からｃ．に記載されており、事前に決定された酵素濃度で所定の時間内に基質を生成物に変換する能力によってコラゲナーゼを特徴付ける。特定の非限定的な実施形態において、これらのアッセイは、ＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩのそれぞれ、ならびに複合ＣＣＨ製剤（ＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩの１：１の比）の力価を決定するために使用される。後述のＳＲＣアッセイでは、反応の基質としてコラーゲンを使用する。ＳＲＣアッセイは、基質として可溶性ラット（尾）コラーゲン（ＳＲＣ）を使用し、Ｉ型コラゲナーゼ活性を測定するために使用され、ＩＩ型コラゲナーゼはコラゲナーゼ混合物の観察された活性の約２０％に寄与する。ＳＲＣアッセイは、フルオレスカミンを利用して、ＳＲＣのＩ型消化によって生成されたペプチドを検出する。反応は、１５ｍＭの２価のカルシウムイオンを含む４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液を用いて、ｐＨ７．２、２５℃で２．５時間行われる。
【００７６】
ウシ腱コラーゲン（ＢＴＣ）アッセイ（後述）は、Ｍａｎｄｌら、Arch.Biochem.Biophys.74: 465-475 (1958)、ＫｅｌｌｅｒおよびＭａｎｄｌによって改訂されたArch.Biochem.Biophys.101: 81-88 (1963)の手順に基づいている。また、Rosen, Arch.Biochem.Biophys.67: 10-15 (1957)を参照。ＢＴＣアッセイは、基質として不溶性のウシ腱コラーゲンを用い、Ｉ型およびＩＩ型の両方の活性（ＡＵＸ−ＩおよびＩＩコラゲナーゼなど）を測定する。ＢＴＣアッセイは、ニンヒドリンを利用した比色法で、ＢＴＣのＩ型およびＩＩ型の分解によって生成されたペプチドを検出する。この反応はｐＨ７．２でも行われるが、１０ｍＭの２価のカルシウムイオンを含むトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（ＴＲＩＳ）緩衝液中において３７℃で２２時間行われる。
【００７７】
ＧＰＡアッセイ（後述）は、可溶性の誘導体化されたヘキサペプチド（カルボベンゾキシ−ＧＰＧＧＰＡ）を基質として使用するコラゲナーゼアッセイである。ＧＰＡアッセイは、主にＩＩ型の活性を測定するために使用され、Ｉ型の活性は観察された活性の約１０％である。ＩＩ型コラゲナーゼはヘキサペプチドを２つのトリペプチドに切断するが、そのうちの１つ（ＧＰＡ）は遊離のアミノ末端を持ち、これがフルオレスカミンと反応して蛍光生成物を与える。ＧＰＡアッセイは、１００ｍＭの２価のカルシウムイオンを含むＨＥＰＥＳ緩衝液を用いて、ｐＨ７．２、２５℃で１０分間行う。
【００７８】
ＳＲＣおよびＢＴＣアッセイは、ともに天然の基質（コラーゲン）を分解するもので、コラゲナーゼの注射による治療効果に近いものとなっている。ＧＰＡアッセイは、基質として明確に定義された低分子量のヘキサペプチドを使用し、明確に定義された２つのトリペプチドが生成されるという利点がある。また、ＧＰＡ法は蛍光シグナルを発し、感度も高い。ＧＰＡ法は、単一の基質と、酵素の初期速度に近似した反応条件（１０分間のインキュベーション）を用いるため、ミカエリス・メンテン速度論的解析に適している。ＳＲＣ法は、コラーゲン結合ドメインを持つコラーゲン分解酵素に適しており、ＧＰＡ法は、ゼラチナーゼと呼ばれるコラーゲン結合ドメインを持たないコラーゲン分解酵素に適している。
【００７９】
ａ．ＧＰＡ単位のアッセイ方法と比活性単位
ｉ．ＧＰＡアッセイ（キュベット）で測定したコラゲナーゼ力価
ＧＰＡアッセイは、主にクラスＩＩコラゲナーゼの力価を測定するために用いられる。アッセイの最初の工程では、基質であるカルボベンゾキシ−グリシル−Ｌ−プロリル−グリシル−グリシル−プロリル−Ｌ−アラニン（ｚＧＰＧＧＰＡ）をコラゲナーゼサンプルによる２つのペプチド：カルボベンゾキシ−グリシル−Ｌ−プロリル−グリシン（ｚＧＰＧ）およびグリシル−プロリル−Ｌ−アラニン（ＧＰＡ）への消化を含む酵素反応を含む酵素反応を含む。第２工程では、続いて蛍光誘導体のフルオレスカミンを用いて遊離したＧＰＡを測定する。アッセイは以下の方法に従っているが、当業者であれば、アッセイの目的を達成するために特定の変更（例えば、希釈濃度や希釈時間）を行ってもよいことを理解できるだろう。
【００８０】
一般的な方法は以下の通りである。ロイシン標準品を用意する。コラゲナーゼサンプルを入手し、コラゲナーゼによるｚＧＰＧＧＰＡ（以下、「基質」）の酵素的切断の第１工程で使用する溶液を調製する。続いて、コラゲナーゼ処理した試料（遊離したＧＰＡを含む）とロイシン標準試料を、それぞれ生成したＧＰＡとロイシン分子の遊離アミノ基を蛍光標識するために、室温で一定時間、フルオレスカミンで処理する。３９２ｎｍで励起した後、各溶液の４８０ｎｍでの蛍光発光を測定する。得られたロイシンとコラゲナーゼのサンプル曲線の傾きを用いて、以下のように力価単位を算出する：
力価（ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇ）＝（Ｍサンプル／Ｍロイシン）×（ＤＦ／Ｔ）
ここで、
Ｍサンプル＝コラゲナーゼサンプル力価曲線の傾き
Ｍロイシン＝ロイシン標準曲線の傾き
ＤＦ＝希釈率
Ｔ＝反応時間
【００８１】
ＧＰＡのアッセイ方法に関する追加の非限定的な詳細は、以下のとおりである。
緩衝液および試薬
１．ｆ−アッペルの緩衝液、ｐＨ７．２（５５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  酢酸カルシウム）
２．１ｍＭ  ロイシンワーキングストック溶液
３．２００ｍＭ  ホウ酸塩、ｐＨ９．０
４．アセトン中の０．５ｍＭ  フルオレスカミン溶液
５．ｆ−アッペルの緩衝液中の２ｍｇ／ｍＬ  ｚＧＰＧＧＰＡ基質
【００８２】
溶液調製
溶液は以下のように調製される。
ｆ−アッペルの緩衝液：１３．０ｇのＨＥＰＥＳと１７．６ｇの酢酸カルシウムを約８００ｍＬの水に溶かす。水酸化ナトリウムでｐＨを７．２に調整し、水で１ＬになるようにＱＳする。２〜８℃で保存する。
１０ｍＭ  ロイシンストック溶液：ロイシン６５．５ｍｇを５０ｍＬの水に溶かす。ロイシンは、１００ｍＬ（または同等量）のガラスビーカーに直接秤をかけて量る必要がある。ロイシン約６５ｍｇ（目標重量）をビーカーに計量する。秤量したロイシンの重量をもとに、ビーカーに加える水の量を以下の式で計算する。算出した量の水をビーカーに加え、ロイシンが完全に溶解していることを確認して十分に混合する。１ｍＬのアリコートに分注する。２０℃以下で保存する。
2022502478.tif 000015
ここで、
Ｃ２＝計量したロイシンの質量（ｍｇ）
Ｖ１＝５０（ｍＬの水）
Ｃ１＝６５．５（ｍｇのロイシン）
Ｖ２＝１０ｍＭストック溶液を生成するために必要な水の量（ｍＬ）
１ｍＭ  ロイシンワーキングストック溶液：１０ｍＭロイシンストック溶液のバイアルを解凍し、１５０μＬと１３５０μＬの水を合わせて１ｍＭに希釈する。使用前によく混合する。
０．５Ｎ  ＨＣｌ：ＨＣｌを水で０．５Ｎに希釈し、よく混ぜる。室温で保存する。市販の０．５Ｎ塩酸を使用することもできる。
２００ｎＭ  ホウ酸塩：ｐＨ９．０：２．４ｇのホウ酸を約１５０ＭＬの水に溶かす。水酸化ナトリウムを用いてｐＨを９．０に調製する。水で２００ｍＬに希釈し、よく混ぜる。２〜８℃で保存する。
０．５ｍＭ  フルオレスカミン溶液：１５ｍｇのフルオレカミンを１００ｍＬのアセトンと混合し、振り混ぜて溶解させる。遮光して２〜８℃で保存。
基質溶液（２ｍｇ／ｍＬ  ｚＧＰＧＧＰＡ）：２ｍｇ／ｍＬの基質をｆ−アッペルの緩衝液で調製する。機械的シェーカー／ローテーターで、完全に溶解するまで十分な時間をかけて溶解する（約１５分）。
【００８３】
ロイシン標準曲線
ロイシンの標準曲線は、表７に従って作成される。
【表７】
2022502478.tif 000016
その後、各ロイシンスタンダードの１００μＬを別々のチューブに移し、フルオレスカミンを検出する。
【００８４】
コラゲナーゼサンプル調製
コラゲナーゼ試料をｆ−アッペルの緩衝液で０．０１ｍｇ／ｍＬに２段階希釈し、穏やかにボルテックスして混合する。希釈方法の一例を以下に示す。
１．１００μＬ×１．０ｍｇ／ｍＬ−→１０００μＬ＝０．１ｍｇ／ｍＬ
２．１００μＬ×０．１ｍｇ／ｍＬ−→１０００μＬ＝０．０１ｍｇ／ｍＬ
【００８５】
ブランク調製
ブランクは、希釈した調製液４５μＬを５００μＬの０．５Ｎ塩酸と組み合わせて酵素を不活性化して調製する。４５５μＬのｚＧＰＧＧＰＡ基質溶液を加え、ボルテックスで十分に混合する。各ブランクの１００μＬを別のチューブに移し、フルオレスカミンと反応する可能性のある不純物を検出する。
【００８６】
力価曲線
各コラゲナーゼサンプルについて、以下のように１セットの力価曲線を作成する。
2022502478.tif 000017
基質と緩衝液の入ったチューブを２５℃のウォーターバスで１５分以上温める。２セット目のチューブにラベルを貼り、それぞれに５０μＬの０．５Ｎ塩酸を加える。希釈したコラゲナーゼサンプル製剤（０．０１ｍｇ／ｍＬ）を表８に従ってチューブに加え、１０分間インキュベートし、混合して２５℃のウォーターバスに戻す。予め温めておいた基質に最初の調製物を加えた時点で、インキュベーション期間を開始する。
【表８】
2022502478.tif 000018
１０分間のインキュベーションの残り時間が１〜２分になったところで調製物をウォーターバスから取り出し、静かにボルテックスして混合する。最初の試薬を基質に添加してから１０分後、各チューブから５０μＬを、５０μＬの０．５Ｎ塩酸を入れたチューブに移す。消化を急がせるために、調製物を直接酸に加えるべきである。すべての調製物をクエンチした後、各チューブをボルテックスしてよく混合する。
【００８７】
検出
各調製液（ブランク、コラゲナーゼサンプル力価曲線、ロイシン標準液）１００μＬが入ったすべての検出チューブに、４００μＬの２００ｍＭホウ酸緩衝液と５００μＬの０．５ｍＭ  フルオレスカミン溶液を加える。十分にボルテックスして混合する。チューブを室温で最低１０分間インキュベートする。
【００８８】
蛍光光度計の設定
以下の機器パラメータを使用して蛍光光度計を設定し、１時間の誘導体化で各調製物の蛍光を読み取る。
2022502478.tif 000019
【００８９】
計算
各ロイシン標準物質の濃度（Ｘ軸）を４８０ｎｍでの蛍光応答（Ｙ軸）に対してプロットする。傾き（ｍ）と決定係数（Ｒ２）を決定する。各力価曲線の調製物の平均蛍光を決定する。各調製物の濃度（Ｘ軸）を４８０ｎｍでの平均蛍光応答（Ｙ軸）に対してプロットすることにより、コラゲナーゼサンプルおよびロイシンの力価曲線を作成する。得られた直線曲線の傾き（ｍ）と決定係数（Ｒ２）を決定する。
【００９０】
コラゲナーゼサンプルの力価の測定
力価（ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇ）＝（Ｍサンプル／Ｍロイシン）×（ＤＦ／Ｔ）
ここで、
Ｍサンプル＝コラゲナーゼサンプル力価曲線の傾き
Ｍロイシン＝ロイシン標準曲線の傾き
ＤＦ＝希釈率（１１００μＬ／５０μＬ＝２２）
Ｔ＝反応時間（１０分）
【００９１】
ｉｉ．コラゲナーゼ試料中のクラスＩＩコラゲナーゼ活性を測定するためのＧＰＡマイクロプレートアッセイ
この方法は、マイクロプレートで行われる以外は、上記のＧＰＡアッセイと同様である。上記のアッセイと同様に、マイクロプレートアッセイは、基質であるカルボベンゾキシ−グリシル−Ｌ−プロリル−グリシル−グリシル−プロリル−Ｌ−アラニン（ｚＧＰＧＧＰＡ）（以下、「基質」という）の酵素的切断におけるコラゲナーゼサンプルのタンパク質分解活性を測定する。このアッセイは、以下の方法論に従っているが、当業者であれば、特定の変更（例えば、希釈濃度および時間）を行っても、アッセイの目的を遂行することができることを理解するであろう。
【００９２】
試薬
１．ペプチド基質（ｚＧＰＧＧＰＡ）（Ｂａｃｈｅｍ  Ｍ１２６０または同等品）
２．トリペプチドＧＰＡ（Ｂａｃｈｅｍ  Ｈ３６１５または同等品）
３．フルオレスカミン（Ａｃｒｏｓ  １９１６７５０００または同等品）
４．精製水（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ−Ｐｌｕｓ  １８．２ＭΩシステムまたは同等品）
５．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ  １５６３０−０８０または同等品
６．Ｓｕｒｆａｃｔ−Ａｍｐｓ２０（商標）（１０％  Ｔｗｅｅｎ溶液）（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔ．＃２８３２０または同等品）
７．１Ｍ  酢酸カルシウム（Ｃａ（Ｃ２Ｈ３Ｏ２）２）（Ｅｍｅｒａｌｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｃａｔ．＃ＥＢＳ−１００−ＣＡＡＣまたは同等品）
８．ホウ酸（Ｓｉｇｍａ  Ｂ７６６０または同等品）
９．２．５Ｎ  ＮａＯＨ  （Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ  ５６６６−０２または同等品）
１０．０．５Ｎ  塩酸（ＶＷＲ  １０１２２３−１３４または同等品）
１１．アセトン（Ｓｉｇｍａ  ２７０７２５または同等品）
【００９３】
溶液の調製
（ｉ）アッセイ緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．１／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０／５ｍＭ（Ｃａ（Ｃ２Ｈ３Ｏ２）２）の調製：５０ｍＬの１Ｍ  ＨＥＰＥＳをピペットで８００ｍＬの純水に混ぜる。５ｍＬの１Ｍ  （Ｃａ（Ｃ２Ｈ３Ｏ２）２）と５ｍＬのＳｕｒｆａｃｔ−Ａｍｐｓ（１０％  Ｔｗｅｅｎ２０）を加える。ｐＨを確認し、必要に応じて７．１±０．０５に調整する。十分な量の水を加えて体積を１Ｌに調整し、０．２２ミクロンのフィルターで溶液をろ過する。このアッセイ緩衝液は、室温で最大３ヶ月間保存することができる。
（ｉｉ）０．１Ｎ  ＮａＯＨの調製：４８ｍＬの純水に２．５Ｎ  ＮａＯＨを２ｍＬ添加する。この溶液は、室温で３ヶ月間まで保存することができる。
（ｉｉｉ）４ｍｇ／ｍＬ  トリペプチド  ＧＰＡストック溶液の調製：４００ｍｇ（±１ｍｇ）のトリペプチドＧＰＡを１０ｍＬの０．１Ｎ  ＮａＯＨに溶解し、完全に溶解するまでボルテックスをかける。十分な量のアッセイ緩衝液を加えて１００ｍＬとし、０．５ｍＬのアリコートに分注して−７０℃で保存する。４ｍｇ／ｍＬのトリペプチドＧＰＡストックは、−７０℃で１年間保存可能である。
（ｉｖ）４ｍｇ／ｍＬ（６．８ｍＭ）のペプチド基質ｚＧＰＧＧＰＡの調製：４００ｍｇ（＋１ｍｇ）のペプチド基質ｚＧＰＧＧＰＡを１０ｍＬの０．１Ｎ  ＮａＯＨに溶かし、完全に溶けるまでボルテックスする。十分な量のアッセイ緩衝液を加えて１００  ｍＬとする。この溶液は、４℃で３ヶ月間保存できる。
（ｖ）１２０ｍＭ  ホウ酸  ｐＨ９．０の調製：７．４ｇ（±０．５ｇ）のホウ酸を８００ｍＬの純水に溶かす。この溶液をＮａＯＨで滴定してｐＨ９．０とし、十分な量の純水を加えて体積を１リットルに調整する。この溶液は、室温で最大３ヶ月間保存することができる。
（ｖｉ）アセトン中の１ｍＭ  フルオレスカミンの調製：２８±２ｍｇのフルオレスカミンを１００ｍＬのアセトンに溶解させる。この溶液は、新たに調製し、光と湿気から保護する必要があった。
【００９４】
トリペプチドＧＰＡ標準品の調製と段階希釈
０．０８ｍｇ／ｍＬ（３２９μＭ）のトリペプチドＧＰＡ標準品は、４ｍｇ／ｍＬのトリペプチドＧＰＡストックをアッセイ緩衝液で５０倍に希釈して調製する（例えば、２０μＬの４ｍｇ／ｍＬのトリペプチドＧＰＡを９８０μＬのアッセイ緩衝液に入れる）。アッセイプレートのＡ列では、２００μＬの３２９μＭトリペプチドＧＰＡ標準品をＡｌおよびＡ７にピペットで移す。１００μＬの量のアッセイ緩衝液をＡ２−Ａ６およびＡ８−Ａｌ２にピペットで移す。
トリペプチドＧＰＡ標準品の段階希釈では、ＡｌからＡ２に１００μＬを移して混合し、Ａ２からＡ３に１００μＬを移して、Ａ５まで繰り返す。Ａ５のウェルから１００μＬを取り出し、最終容量が１００μＬになるようにする。Ａ６ウェルには緩衝液のみが入っている。
２つ目のトリペプチドＧＰＡ標準液の段階希釈では、Ａ７からＡ８に１００μＬを移して混合し、Ａ８からＡ９に１００μＬを移して、これをウェルＡ１１まで繰り返す。Ａ１１のウェルから１００μＬが取り出され、最終的な体積が１００μＬになる。Ａ１２ウェルには緩衝液のみが入っている。
【００９５】
コラゲナーゼサンプルの調製
コラゲナーゼサンプル（例えば、凍結乾燥したコラゲナーゼ製剤）の場合、サンプルを少なくとも１０分間室温に戻し、再構成して５００ｎｇ／ｍＬのストック溶液を形成する。異なる濃度のものを使用してもよい。ストック液をアッセイ緩衝液で希釈し、テスト用コラゲナーゼサンプル（Ｔ１Ａ）を調製する。この手順を繰り返し、３連のテストサンプル（Ｔ１Ａ、Ｔ１Ｂ、Ｔ１Ｃ）を調製する。
【００９６】
議論
この方法では、９６ウェルプレートにおいて、濃度を増加させたコラゲナーゼテストサンプル５０μＬと過剰な基質５０μＬ（最終濃度２．０ｍｇ／ｍＬ）を混合する。５０μＬのアッセイ緩衝液の量を、Ｕボトムの９６ウェルポリプロピレン反応プレートのＣ−Ｇ列に加える。次に、マルチチャンネルピペットを用いて、１／１．５の段階希釈を行い、Ｂ列からＣ列に１００μＬのコラゲナーゼサンプルを移し、混合し、Ｇ列に到達するまで繰り返す。表９は、５０μＬの基質をＢ列からＨ列に加えた後の最終的なコラゲナーゼ濃度を示している。
ブランクは、５０μＬのアッセイ緩衝液をピペットで移してＨ列に調製し、この行には酵素を含まない。例示的な濃度を表９に示す。
【表９】
2022502478.tif 000020
【００９７】
コラゲナーゼ反応
ｚＧＰＧＧＰＡ基質は、室温で１５分間のインキュベーション時間中にクラスＩＩコラゲナーゼによってｚＧＰＧとＧＰＡに切断される。インキュベーターと温度プローブをオンにする（プレートに基質を添加する前の温度は２２±１℃）。Ｂ−Ｈ列のカラム１−１２に、５０μＬ  ４ｍｇ／ｍＬ（６．８ｍＭ）ｚＧＰＧＧＰＡ基質をカラムごとに添加し、混合する。反応開始時間は、最初のカラムに基質が添加された後に始まる。プレートに蓋をして２２±１℃のインキュベーターに入れ、総反応時間を１５±１分とする。
インキュベーション後、塩酸を加えて反応をクエンチし、ペプチドの遊離アミノ末端を発色試薬のフルオレカミンと反応させて、放出されたＧＰＡペプチドの量を定量する。反応を鎮めるために、Ａ行からＨ行までの各ウェルに０．５Ｎの塩酸を１００μＬずつ、列ごとに加えて混合する。最初の列にＨＣｌが加えられた時点で反応時間が終了する。
【００９８】
検出
１９５μＬの量の１２０ｍＭホウ酸塩ｐＨ９．０をマイクロプレートＧｒｅｉｎｅｒのポリプロピレン製ブラックリーディングプレートの各ウェルに加える。クエンチした反応混合物３０μＬを反応プレートからリーディングプレートの対応するウェルに移し、よく混合する。次に、７５μＬの１ｍＭ  フルオレスカミンをリーディングプレートの各ウェルに添加し（フルオレスカミン／アセトンを分注するポリプロピレン製のトレイを使用）、添加するたびに直ちに混合する。フルオレスカミン添加後１５分以内に、モレキュラーデバイスＭ２蛍光プレートリーダーを用いて以下の設定でプレートを読み取る。プレートはフルオレスカミン添加後１５分以内にモレキュラーデバイスＭ２蛍光プレートリーダーで以下の設定で読み取る：励起３８０ｎｍ、発光４７３ｎｍ、カットオフ４５５ｎｍ、６リード／ウェル、ＰＭＴ培地。
ＧＰＡの濃度（μＭ）対４７３ｎｍでの発光、コラゲナーゼの濃度（ｎｇ／ｍＬ）対４７３ｎｍでの発光をプロットした。各プロットについて、固定パラメータを用いずに線形回帰をフィッティングした。コラゲナーゼテストサンプルでは、ゼロ点データを線形フィットから除外し、各サンプルの３連データセット全体を用いてプロットを作成した。トリペプチドＧＰＡ標準サンプルとコラゲナーゼサンプルの傾きを求める。
【００９９】
力価の決定
コラゲナーゼサンプルの比活性は以下のように計算できる：
ＧＰＡマイクロプレートアッセイ単位＝（（コラゲナーゼサンプルの傾き）／（トリペプチドＧＰＡの傾き×インキュベーション時間））×１０６
コラゲナーゼテストサンプルの比活性は、トリペプチドＧＰＡ標準品の傾きから決定し、カーブフィッティングプログラムで算出する。マイクロプレート法を用いて、異なる濃度の基質と異なる時間を用いて、ミカエリス・メンテンによる酵素反応速度を算出することができる。
【０１００】
ｉｉｉ．ＧＰＡアッセイで測定したコラゲナーゼ力価
本開示で有用なコラゲナーゼは、約１００，０００〜約３００，０００  ＧＰＡ単位／ｍｇ、または約１７５，０００〜約３００，０００  ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有していてもよい。他の実施形態では、力価は、約７０，０００〜約４００，０００  ＧＰＡ単位／ｍｇ、または約１００，０００〜約３７５，０００  ＧＰＡ単位／ｍｇ、または約１２５，０００〜約３５０，０００  ＧＰＡ単位／ｍｇ、または約１５０，０００〜約３２５，０００  ＧＰＡ単位／ｍｇ、または約１７５，０００〜約３００，０００  ＧＰＡ単位／ｍｇ、または約２００，０００〜約２７５，０００  ＧＰＡ単位／ｍｇであってもよい。あるいは、力価は、約７０，０００〜約４００，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇ、約１００，０００〜約３７５，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇ、約１２５，０００〜約３５０，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇ、約１５０，０００〜約３２５，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇ、約１７５，０００〜約３００，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇ、約２３０，０００〜約４３０，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇ、または約２００，０００〜約２７５，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇであってもよい。また、コラゲナーゼは、約３０，１００〜約８７，１００、または約４３，０００〜約６７，０００ＧＰＡマイクロプレートアッセイ単位の力価を有していてもよい。上記のＧＰＡアッセイは、任意のコラゲナーゼの比活性を分析するために採用されてもよい。
【０１０１】
ｂ．ＳＲＣ単位のアッセイ方法と比活性単位
ｉ．ＳＲＣアッセイ（キュベット）で測定したコラゲナーゼ力価
ＳＲＣアッセイは、主にクラスＩコラゲナーゼの力価を測定するために使用される。一般的な方法は以下の通りである。ロイシン標準液とコラゲナーゼサンプル液を用意する。アッセイの第１工程は、コラゲナーゼによる可溶性ラット尾腱コラーゲン（ＳＲＣ）の消化を含む酵素反応を含む。第２工程では、遊離したペプチドフラグメント／アミノ酸を蛍光発生誘導体であるフルオレスカミンで測定する。アッセイは以下の方法論に従うが、当業者は、特定の変更（例えば、希釈濃度および時間）がなされても、アッセイの目的を実行できることを理解するであろう。
【０１０２】
このようなコラゲナーゼとロイシン標準サンプルを，生成したＧＰＡに蛍光標識をつけるための試薬で処理する。ロイシン標準サンプルおよびコラゲナーゼサンプルは，室温で１０分間インキュベートした後，各溶液の蛍光を３９２ｎｍおよび４８０ｎｍの励起波長および発光波長でそれぞれ測定する。次に、得られたロイシンおよびコラゲナーゼサンプルの曲線の傾きを用いて、以下のように力価単位を算出する：
力価（ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇ）＝（Ｍサンプル／Ｍロイシン）×（ＤＦ／Ｔ）×ＣＦ
ここで、
Ｍサンプル＝コラゲナーゼサンプル力価曲線の傾き
Ｍロイシン＝ロイシン標準曲線の傾き
ＤＦ＝希釈率（１５００μＬ／１００ｍＬ＝１５）
Ｔ＝反応時間（２．５時間×６０分／１時間＝１５０分）
ＣＦ＝換算係数（１０００μｇ／１ｍｇ＝１０００）
【０１０３】
以下に、ＳＲＣアッセイ方法に関する非限定的な詳細を示す。
【０１０４】
緩衝液と試薬
１．Ｆ−ＴＣアッセイ緩衝液、ｐＨ７．２（２２ｇ  ＨＥＰＥＳ  ［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸］、４．４ｇ  酢酸カルシウム）
２．Ｆ−酵素緩衝液、ｐＨ７．２
３．２００ｍＭ  ホウ酸塩、ｐＨ９．０
４．１０ｍＭ  ロイシンストック溶液
５．１ｍＭ  ロイシンワーキングストック溶液
６．アセトン中の１ｍＭ  フルオレスカミン溶液
７．０．０２Ｎ  酢酸中の２ｍｇ／ｍＬ  ラット尾腱コラーゲン
【０１０５】
溶液調製
溶液は以下のように調製される：
【０１０６】
Ｆ−ＴＣアッセイ緩衝液：２２ｇのＨＥＰＥＳと４．４ｇの酢酸カルシウムを約９００ｍＬの水に溶かす。水酸化ナトリウムでｐＨを７．２に調整し、水で１ＬになるようにＱＳする。２〜８℃で保存する。
【０１０７】
Ｆ−酵素緩衝液：４ｍＬを１６ｍＬの水と組み合わせることにより、Ｆ−ＴＣアッセイ緩衝液を希釈する。２〜８℃で保存する。
【０１０８】
１０ｍＭ  ロイシンストック溶液：６５．５ｍｇのロイシンを５０ｍＬの水に溶かす。ロイシンは、１００ｍＬ（または同等量）のガラスビーカーに直接秤をかけて量る必要がある。ロイシン約６５ｍｇ（目標重量）をビーカーに計量する。秤量したロイシンの重量をもとに、ビーカーに加える水の量を以下の式で計算する。算出した量の水をビーカーに加え、ロイシンが完全に溶解していることを確認して十分に混合する。１ｍＬのアリコートに分注する。−２０℃以下で保存する。
2022502478.tif 000021
ここで、
Ｃ２＝計量したロイシンの質量（ｍｇ）
Ｖ１＝５０（ｍＬの水）
Ｃ１＝６５．５（ｍｇのロイシン）
Ｖ２＝１０ｍＭストック溶液を生成するために必要な水の量（ｍＬ）
【０１０９】
１ｍＭ  ロイシンワーキングストック溶液：１０ｍＭロイシンストック溶液のバイアルを解凍し、１５０μＬと１３５０μＬの水を合わせて１ｍＭに希釈する。使用前によく混合する。
【０１１０】
０．５Ｎ  ＨＣｌ：ＨＣｌを水で０．５Ｎに希釈し、よく混ぜる。室温で保存する。市販の０．５Ｎ塩酸を使用することもできる。
【０１１１】
０．０２Ｎ  酢酸：１Ｎ  酢酸  １ｍＬと水４９ｍＬを混合し、よく混ぜる。室温で保存する。
【０１１２】
２００  ｍＭ  ホウ酸塩、ｐＨ９．０：２．４ｇのホウ酸を約１５０ｍＬの水に溶かす。水酸化ナトリウムを用いてｐＨを９．０に調整する。水で２００ｍＬに希釈し、よく混ぜる。２〜８℃で保存する。
【０１１３】
１ｍＭ  フルオレスカミン溶液：フルオレスカミン１５ｍｇを５０ｍＬのアセトンに溶解し、振り混ぜて溶かす。遮光して２〜８℃で保存する。
【０１１４】
基質溶液（２ｍｇ／ｍＬ  ラット尾腱コラーゲン）：ストックラットテールコラーゲンを０．０２Ｎ酢酸で２ｍｇ／ｍＬに希釈する。２〜８℃で保存する。
【０１１５】
ロイシン標準曲線
【０１１６】
ロイシンの標準曲線は、表１０に従って作成される。
【表１０】
2022502478.tif 000022
【０１１７】
その後、各ロイシン標準品の１００μＬを別々の遠心分離チューブに移し、フルオレスカミンを検出する。
【０１１８】
コラゲナーゼのサンプルとブランクの準備
【０１１９】
サンプルは、Ｆ−酵素緩衝液で０．０１ｍｇ／ｍＬに２段階で希釈され、穏やかにボルテックスして混合される。希釈方法の例を以下に示す。
１．１００μＬ×１．０ｍｇ／ｍＬ→１０００μＬ＝０．１ｍｇ／ｍＬ
２．１００μＬ×０．１ｍｇ／ｍＬ→１０００μＬ＝０．０１ｍｇ／ｍＬ
希釈したサンプルは、使用するまで室温で保存する。
【０１２０】
ブランクは、表１１に従って、まずサンプルと０．５Ｎ塩酸を組み合わせて酵素を不活性化した後、緩衝液と基質を加えて調製する。
【０１２１】
表１１にしたがってラベルを貼ったチューブにコラゲナーゼサンプルを入れる。チューブ１、２、４、６は１回の調製で、チューブ３、５、７は２回目の調製で調製したものである。
【表１１】
2022502478.tif 000023
【０１２２】
チューブにキャップをし、軽くボルテックスして混合する。力価曲線を２５℃±３℃のウォーターバスで２．５時間インキュベートする。培養終了後、力価測定用チューブをウォーターバスから取り出す。７５０μＬの０．５Ｎ塩酸を各調製液に加え、十分にボルテックスして混合する。調製したものは、検出する前に２〜８℃で２２時間まで保存することができる。
【０１２３】
検出器・蛍光光度計の設定
【０１２４】
ロイシン標準サンプルは、上記のように調製される。
【０１２５】
以下の装置パラメータで発光分光計を設定し、１時間の誘導体化を行った各製剤の蛍光を読み取る。
2022502478.tif 000024
【０１２６】
計算
各ロイシン標準物質の濃度（Ｘ軸）を４８０ｎｍでの蛍光反応（Ｙ軸）に対してプロットする。傾き（ｍ）と決定係数（Ｒ２）を決定する。強制的にゼロにしてはならない。各重複した調製物の平均蛍光を決定する。各コラゲナーゼサンプルの純蛍光を算出する。
Ｆ（ネット）＝平均コラゲナーゼサンプル（ＥＭ４８０）−ブランク（ＥＭ４８０）
【０１２７】
各調製物中のコラゲナーゼサンプルの量（Ｘ軸）を正味の蛍光（Ｙ軸）に対してプロットする。傾き（ｍ）と決定係数（Ｒ２）を決定する。強制的にゼロにしてはならない。
コラゲナーゼサンプルの力価の測定
力価（ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇ）＝（Ｍサンプル／Ｍロイシン）×（ＤＦ／Ｔ）×ＣＦ
ここで、
Ｍサンプル＝コラゲナーゼサンプル力価曲線の傾き
Ｍロイシン＝ロイシン標準曲線の傾き
ＤＦ＝希釈率（１５００μＬ／１００ｍＬ＝１５）
Ｔ＝反応時間（２．５時間×６０分／１時間＝１５０分）
ＣＦ＝換算係数（１０００μｇ／１ｍｇ＝１０００）
【０１２８】
上記のＳＲＣアッセイは、任意のコラゲナーゼの比活性を分析するために採用することができる。
【０１２９】
ｉｉ．コラゲナーゼサンプル中のクラスＩコラゲナーゼ活性を測定するためのＳＲＣマイクロプレートアッセイ
この方法は、マイクロプレートで行われる以外は、上記ＳＲＣアッセイと同様である。上記のＳＲＣアッセイと同様に、マイクロプレートアッセイは、可溶性ラット尾腱コラーゲン（ＳＲＣ）基質（以下、「基質」と称する）に対するコラゲナーゼ活性を測定する。このアッセイは、以下の方法論に従っているが、当業者であれば、特定の変更を加えても、アッセイの目的を遂行できることを理解できるであろう。
【０１３０】
試薬
１．可溶性ラットコラーゲン基質（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３５４２３６）
２．トリペプチドＧＰＡ（Ｂａｃｈｅｍ  Ｈ３６１５または同等品）
３．フルオレスカミン（Ａｃｒｏｓ  １９１６７５０００または同等品）
４．精製水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ−Ｐｌｕｓ  １８．２ＭΩシステムまたは同等品）
５．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（Ｇｉｂｃｏ  １５６３０−０８０または同等品）
６．１Ｍ  酢酸カルシウム（Ｃａ（Ｃ２Ｈ３Ｏ２）２）（Ｅｍｅｒａｌｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＥＢＳ−１００−ＣＡＡＣまたは同等品）
７．Ｓｕｒｆａｃｔ−Ａｍｐｓ  ２０（商標）（１０％  Ｔｗｅｅｎ溶液）（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃａｔ．＃２８３２０または同等品）
８．１．０Ｎ  酢酸（Ｓｉｇｍａ  ３１８５９０または同等品）
９．０．５Ｎ塩酸（ＶＷＲ  １０１２２３−１３４または同等品）
１０．ホウ酸（Ｓｉｇｍａ  Ｂ７６６０または同等品）
１１．２．５Ｎ水酸化ナトリウム（Ｊ．Ｔ  Ｂａｋｅｒ  ５６６６−０２または同等品）
１２．アセトン（Ｓｉｇｍａ  ２７０７２５または同等品）
【０１３１】
溶液の調製
（ｉ）アッセイ緩衝液（５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．１／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ２０／５ｍＭ（Ｃａ（Ｃ２Ｈ３Ｏ２）２）の調製：５０ｍＬの１Ｍ  ＨＥＰＥＳをピペットで８００ｍＬの純水に混ぜる。５  ｍＬの１  Ｍ  （Ｃａ（Ｃ２Ｈ３Ｏ２）２）と５  ｍＬのＳｕｒｆａｃｔ−Ａｍｐｓ（１０％  Ｔｗｅｅｎ２０）を加える。ｐＨを確認し、必要に応じて７．１±０．１に調整する。十分な量の水を加えて体積を１Ｌに調整し、溶液を０．２２ミクロンのフィルターでろ過する。このアッセイ緩衝液は、室温で最大３ヶ月間保存することができる。
（ｉｉ）０．１Ｎ  ＮａＯＨの調製：４８ｍＬの純水に２．５Ｎ  ＮａＯＨを２ｍＬ添加する。この溶液は、室温で３ヶ月間まで保存することができる。
（ｉｉｉ）４ｍｇ／ｍＬ  トリペプチド  ＧＰＡストック溶液の調製：４００ｍｇ（±１ｍｇ）のトリペプチドＧＰＡを１０ｍＬの０．１Ｎ  ＮａＯＨに溶解し、完全に溶解するまでボルテックスをかける。十分な量のアッセイ緩衝液を加えて１００ｍＬとし、０．５ｍＬのアリコートに分注して−７０℃で保存する。４ｍｇ／ｍＬのトリペプチドＧＰＡストックは、−７０℃で１年間保存可能である。
（ｉｖ）０．０２Ｎ  酢酸の調製：４０ｍＬの精製水に１．０  Ｎの酢酸１ｍＬを加える。十分な量の精製水を加えて５０ｍＬに調整する。この溶液は、室温で１年まで保存できる。
（ｖ）２  ｍｇ／ｍＬ  ＳＲＣ基質ストック溶液の調製：２３．３  ｍＬ  ０．０２Ｎの酢酸を、基質が供給されているバイアルに直接加える（非限定的な一例では、３．７５  ｍｇ／ｍＬのＳＲＣ  １００  ｍｇとして供給）。他の濃度のＳＲＣ基質を使用してもよい。計算は以下の通りである：
【０１３２】
１００ｍｇ÷３．７５ｍｇ／ｍＬ＝２６．７ｍＬ；
【０１３３】
総量（ｍＬ）＝（３．７５ｍｇ／ｍＬ×２６．７ｍＬ）／２ｍｇ／ｍＬ；
【０１３４】
総量（５０．０ｍＬ）−２６．７ｍＬ＝２３．３ｍＬ
【０１３５】
この溶液は、反転させることで十分に混合され、２〜８℃で３ヶ月間まで保存することができる。
（ｖｉ）０．６ｍｇ／ｍＬ  ＳＲＣ基質ワーキング溶液の調製：１５ｍＬ  コニカルチューブにアッセイ緩衝液を４．２ｍＬ加える。１５ｍＬ  コニカルチューブにアッセイ緩衝液を４．２ｍＬ加え、２ｍｇ／ｍＬ  ＳＲＣ基質ストック液を１．８ｍＬ加えて転倒混和する。この溶液は、プレートに添加する直前に調製する必要がある。
（ｖｉｉ）１２０ｍＭ  ホウ酸  ｐＨ９．０の調製：７．４ｇ（±０．５ｇ）のホウ酸を８００ｍＬの純水に溶かす。この溶液をＮａＯＨでｐＨ９．０まで滴定し、十分な量のＤＩ水を加えて１Ｌに調整する。この溶液は、室温で最大３ヶ月間保存することができる。
（ｖｉｉｉ）アセトン中の１ｍＭ  フルオレスカミンの調製：２８±２ｍｇのフルオレスカミンを１００ｍＬのアセトンに溶解させる。この溶液は、新たに調製し、光と湿気から保護する必要があった。
【０１３６】
トリペプチドＧＰＡ標準品の調製と段階希釈
０．０８ｍｇ／ｍＬ（３２９μＭ）のトリペプチドＧＰＡ標準品は、４ｍｇ／ｍＬのトリペプチドＧＰＡストックをアッセイ緩衝液で５０倍に希釈して調製する（例えば、２０μＬの４ｍｇ／ｍＬ  ＧＰＡを９８０μＬのアッセイ緩衝液に入れる）。アッセイプレートのＡ列では、２００μＬの３２９μＭトリペプチドＧＰＡ標準品をＡｌおよびＡ７にピペッティングする。Ａ２−Ａ６およびＡ８−Ａｌ２には、１００μＬのアッセイ緩衝液がピペットで移される。
【０１３７】
トリペプチドＧＰＡ標準液の段階希釈では、ＡｌからＡ２に１００μＬを移して混合し、Ａ２からＡ３に１００μＬを移してＡ５まで繰り返す。Ａ５のウェルから１００μＬを取り出し、最終容量が１００μＬになるようにする。Ａ６ウェルには緩衝液のみが入っている。
【０１３８】
２回目のトリペプチド  ＧＰＡ標準段階希釈では、Ａ７からＡ８に１００μＬを移して混合し、Ａ８からＡ９に１００μＬを移してＡｌｌまで繰り返す。Ａ１１ウェルから１００μＬが取り出され、最終的に１００μＬとなる。Ａ１２ウェルには緩衝液のみが入っている。
【０１３９】
コラゲナーゼテストサンプルの調製
【０１４０】
コラゲナーゼサンプル（例えば、凍結乾燥したコラゲナーゼ製剤）の場合、サンプルを少なくとも１０分間室温に戻し、再構成して３．０μｇ／ｍＬのストック溶液を形成する。異なる濃度のものを使用してもよい。ストック液をアッセイ緩衝液で希釈し，コラゲナーゼテスト片（Ｔ１Ａ）を調製する。この手順を繰り返し、３連のテストサンプル（Ｔ１Ａ、Ｔ１Ｂ、Ｔ１Ｃ）を調製する。
【０１４１】
議論
【０１４２】
この方法では、９６ウェルプレートにおいて、濃度を増加させたテスト用コラゲナーゼサンプル５０μＬと過剰な基質５０μＬ（最終濃度０．２ｍｇ／ｍＬ）を混合する。５０μＬのアッセイ緩衝液の量を、Ｕボトムの９６ウェルポリプロピレン反応プレートのＣ−Ｇ列に加える。次に、マルチチャンネルピペットを用いて、１／１．５の段階希釈を行い、Ｂ列からＣ列に１００μＬのコラゲナーゼサンプルを移し、混合し、Ｇ列に到達するまで繰り返す。１００μＬの量がＧ列から取り除かれて廃棄され、５０μＬのアッセイ緩衝液をＨ列にピペッティングすることにより、ブランクがＨ列に準備される。この列には酵素が含まれていない。表１２は、５０μＬの基質をＢ列からＨ列に添加した後の最終的なコラゲナーゼ濃度を含む。
【表１２】
2022502478.tif 000025
【０１４３】
コラゲナーゼ反応
インキュベーターと温度プローブをオンにする（プレートに基質を添加する前の温度は２２±１℃）。Ｂ列からＨ列までの各ウェルに、５０μＬ  ０．６ｍｇ．ｍＬのＳＲＣ基質をカラムごとに添加し、混合する。反応開始時間は、最初のカラムに基質が添加された後に始まる。プレートに蓋をして２２±１℃のインキュベーターに入れ、４５±５分の総反応時間をかける。反応をクエンチするために、１００μＬの０．５ＮのＨＣｌを希釈プレートの各ウェルにカラムごとに加え、混合する。最初のカラムにＨＣｌを加えた時点で反応時間は終了する。
【０１４４】
検出
【０１４５】
１９５μＬの量の１２０ｍＭホウ酸塩ｐＨ９．０をマイクロプレートＧｒｅｉｎｅｒのポリプロピレン製ブラックリーディングプレートの各ウェルに加える。クエンチした反応混合物３０μＬを反応プレートからリーディングプレートの対応するウェルに移し、よく混合する。次に、７５μＬの１ｍＭ  フルオレスカミンをリーディングプレートの各ウェルに加え（フルオレスカミン／アセトンを分注するポリプロピレン製のトレイを使用）、加えるたびに直ちに混合する。フルオレスカミン添加後１５分以内に、モレキュラーデバイスＭ２蛍光プレートリーダーを用いて以下の設定でプレートを読み取る。プレートはフルオレスカミン添加後１５分以内にモレキュラーデバイスＭ２蛍光プレートリーダーで以下の設定で読み取る：励起３８０ｎｍ、発光４７３ｎｍ、カットオフ４５５ｎｍ、６リード／ウェル、ＰＭＴ培地。
【０１４６】
ＧＰＡの濃度（μＭ）対４７３ｎｍでの発光、コラゲナーゼの濃度（ｎｇ／ｍＬ）対４７３ｎｍでの発光をプロットした。各プロットについて、固定パラメータを用いずに線形回帰をフィッティングした。コラゲナーゼサンプルでは，ゼロ点のデータを線形フィットから除外し，各サンプルの３連データセット全体を用いてプロットを作成した。トリペプチドＧＰＡ標準サンプルとコラゲナーゼサンプルの傾きを求める。
【０１４７】
比活性と相対的力価の決定
コラゲナーゼサンプルの比活性は以下のように計算できる：
ＳＲＣマイクロプレートアッセイ単位＝（（コラゲナーゼサンプルの傾き）／（トリペプチドＧＰＡの傾き×インキュベーション時間））×１０６
【０１４８】
コラゲナーゼテストサンプルの比活性は、トリペプチドＧＰＡ標準品の傾きから決定し、カーブフィッティングプログラムで算出する。マイクロプレート法を用いて、異なる濃度の基質と異なる時間を用いて、ミカエリス・メンテンによる酵素反応速度を算出することができる。
【０１４９】
ｉｉｉ．ＳＲＣアッセイで測定したコラゲナーゼ力価
本開示で有用なコラゲナーゼは、約５００〜約１５，０００ＳＲＣ単位／ｍｇの力価を有していてもよい。特定の実施形態では、力価は、約５００〜約１２，５００ＳＲＣ単位／ｍｇ、または約７００〜約１０，０００ＳＲＣ単位／ｍｇ、または約１，０００〜約７，５００ＳＲＣ単位／ｍｇ、または１，５００〜約６，０００ＳＲＣ単位／ｍｇ、または約２，５００〜約５，０００ＳＲＣ単位／ｍｇである。あるいは、力価は、約５，０００〜約３５，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇ、または約１０，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇ、または約１３，０００〜約２３，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇ、または約１５，０００〜約２５，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇであってもよい。また、コラゲナーゼは、約９８０〜約３，５１０、または約１，４００〜約２，７００のＳＲＣマイクロプレートアッセイ単位の力価を有していてもよい。
【０１５０】
ｃ．ＢＴＣ単位アッセイにおけるコラゲナーゼ力価
コラゲナーゼのためのＢｏｖｉｎｅ  Ｔｅｎｄｏｎ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ａｓｓａｙは、Ｍａｎｄｌら（１９５８年）の手順に基づいており、ＫｅｌｌｅｒとＭａｎｄｌ（１９６３年）によって修正されている。牛の腱のコラーゲンは不溶性の基質であるため、細かく分割することが重要である。変性したコラーゲンやその他のタンパク質不純物の存在を考慮して、コントロールとしてトリプシンを使用する。このアッセイは、コラゲナーゼ活性に必要なカルシウムイオンの存在下で行われる。可溶化されたペプチドの数は、ペプチドのＮ−末端アミノ基をニンヒドリンと反応させ、形成された付加物の量を比色的に測定することによって決定される（Ｒｏｓｅｎ  １９５７）。
【０１５１】
この手順の目的は、コラーゲン基質を用いてコラゲナーゼ酵素の比活性をテストすることである。
【０１５２】
試薬と溶液
１．コラーゲン基質（コラーゲン）
２．脱イオン水（水）
３．トリスアッセイ緩衝液
４．トリプシンストック溶液
５．０．５Ｍ  ＨＣｌ
６．ロイシン標準アッセイ溶液（１ｍＭ  ロイシン）
７．ローゼン緩衝液
８．３％  ニンヒドリン
９．５０％  イソプロパノール
【０１５３】
インキュベーション
以下のように反応チューブを設定し、ラベルを貼る：トリプシン対照用のチューブ３本、基準液用のチューブ６本、各被検サンプル用のチューブ６本。各チューブにラベルを貼り、キャップを外す。表１３の順序で１０±１ｍｇのコラーゲンを秤量し、秤量したコラーゲンを各反応チューブに入れる。
【表１３】
2022502478.tif 000026
【０１５４】
被験サンプルの酵素量は、反応チューブ（ＡＣＴ）あたり１．６〜５．７ｎｍｏｌ  ｌｅｕ  ｅｑ／ｍｉｎの活性を含んでいる必要がある。未溶解のサンプルは、アッセイに使用する前にまずトリスアッセイ緩衝液に溶解する。濃度（反応チューブに加える前）は０．００６５ｍｇ／ｍＬ以上とする必要がある。
【０１５５】
マトリックスパターンになるように、表１４に従って反応チューブを設定する。以下の表は、２アンダーのテストサンプルを想定している。サンプル数が多い場合や少ない場合は、反応チューブの数を調整するが、パターンは維持する。容量が一定の場合は、表１４に記載されている。
【表１４】
2022502478.tif 000027
【０１５６】
反応チューブにキャップをする。内容物を静かに、しかし十分に混合する。反応チューブを３７℃のウォーターバスに入れる。２２±０．５時間インキュベートする。インキュベーションを開始した実際の時間（３７℃）、使用したウォーターバスの番号、コラーゲンＬｉｐｉｄのロット番号、使用したロットのコラーゲン補正係数、使用したすべての溶液のロット番号を記録する。
【０１５７】
クエンチングおよびろ過
インキュベートした各反応チューブに対応する濾液チューブにラベルを貼る。ラベルを貼った各濾液チューブに、濾紙を入れた漏斗と折り畳んだ濾紙を置く。培養期間が終了したら、ウォーターバスから反応チューブを取り出す。培養が終了した実際の時間を記録する。
【０１５８】
反応チューブのキャップを外し、キャップを破棄する。各反応チューブに２ｍＬの０．５Ｍ  ＨＣｌを分注し、反応を停止させる。各チューブの内容物を十分に混合する。各反応チューブの内容物を適切な濾液チューブにろ過する。
【０１５９】
消化されていないコラーゲンは短時間で塩酸に溶ける可能性があるため、前の２つの工程はできるだけ早く終わらせる必要がある。濾液は、蓋付きの濾液チューブに入れて冷蔵保存し、発色前に９５．５時間まで保存することができる。冷蔵保存と保存時間を記録する。
【０１６０】
カラー展開
沸騰したチューブを以下のように設定し、ラベルを貼る：水およびロイシン対照用のチューブ６本（工程１）、各濾液チューブ用のチューブ２本（工程１）。６本のロイシンコントロール用チューブに、以下の量の水とロイシン標準アッセイ液を入れる。
2022502478.tif 000028
【０１６１】
０．８ｍＬの水を各沸騰チューブに入れる（工程２）。各サンプルの濾液０．２ｍＬを、適切なラベルが貼られたブリングチューブに注入する。０．５ｍＬのローゼン緩衝液を各ブリングチューブに注入する。フードの下で、０．５ｍＬの３％ニンヒドリンを各ブリングチューブに入れる。ボルテックスミキサーで各チューブの内容物を完全に混合する。沸騰チューブをヒュームフード内の沸騰したウォーターバスに入れる。１５±１分間沸騰させる。沸騰時間が終了したら、ウォーターバスから沸騰チューブを取り出す。封じ込めフードの下で、各沸騰チューブに５．０ｍＬの５０％イソプロパノールを分注し、内容物を完全に混合する。吸光度を読み取る前に、沸騰チューブを常温に戻する（少なくとも１０分）。
【０１６２】
吸光度の読み取り
封じ込めフードの下で作業している間、チューブの吸光度を読み取る。分光光度計の電源を入れ、ウォームアップする。分光光度計の波長を５７０ｎｍに設定する。５０％イソプロパノールで分光光度計をゼロにする。水、ロイシン、トリプシンのコントロールとテスト中のサンプルの吸光度（Ａ５７０）を読み取る。最初のサンプルを読み取った時間を時間単位で記録する。読み取り値を１０００×Ａ５７０として記録し、最後のサンプルを読み取った時間を時間単位で記録する。すべての読み取りは１時間以内に行う必要がある。
【０１６３】
計算原理
総読み取り時間と総培養時間を分単位で計算する。総読み取り時間は６０分未満、インキュベーションの総時間は１２９０〜１３５０分であることが望ましい。線形最小二乗法を用いて、ロイシン標準サンプル（ｘ＝ｎｍｏｌ  ロイシン  ｖｓ  ｙ＝Ａ５７０読み取り）の傾き「ｂ」と相関係数「ｒ」を算出する。「ｂ」値の単位はＡ５７０／ｎｍｏｌ  ロイシンである。ロイシンのｂ値は２．８８〜３．３３の間である必要がある。トリプシン対照（Ｔ）の平均値を算出する。トリプシン対照（Ｔ）の平均読み取り値は２２１〜３３８とする。この平均値を小数点以下の数字で記録する（工程Ａ）。各反応チューブの重複したサンプルＡ５７０の読み取り値を平均する。この数値を小数点以下の単位で記録する。平均サンプルＡ５７０の読み取り値から平均トリプシン（工程Ａ）を差し引いて、正味のサンプル読み取り値を取得する。
【０１６４】
次のようにして、チューブあたりの活性（ＡＣＴ）をｎｍｏｌ  ｌｅｕ  ｅｑ／ｍｉｎで算出する。
2022502478.tif 000029
ここで、２０は展開された反応混合物の量に対する希釈係数であり、「ｂ」はロイシン標準曲線の傾きである。この数値を小数点以下１桁まで記録する。テスト中のサンプルのチューブあたりの活性は、１．６〜５．７ｎｍｏｌ  ｌｅｕ  ｅｑ／分である必要がある。
【０１６５】
次のように、ＢＴＣ単位で活動量を計算する：
ＢＴＣ単位＝活性（ｎｍｏｌ  ｌｅｕ  ｅｑ／分）×コラーゲン補正係数
【０１６６】
以下のように、サンプルのＢＴＣ単位／ｍＬの活性を算出する：
2022502478.tif 000030
【０１６７】
以下のように、サンプルの比活性をＢＴＣ単位／ｍｍで算出する：
2022502478.tif 000031
【０１６８】
ＢＴＣ単位からＡＢＣ単位への換算は：
ＡＢＣ単位＝ＢＴＣ単位×１．０９
【０１６９】
ｉ．ＢＴＣ単位とＡＢＣ単位
様々なコラゲナーゼ組成物を採用することができ、ここでコラゲナーゼは、約５，０００ＢＴＣ単位／ｍｇ〜約２５，０００ＢＴＣ単位／ｍｇ、または約１０，０００ＢＴＣ単位／ｍｇ〜約２５，０００ＢＴＣ単位／ｍｇ、または約１５，０００ＢＴＣ単位／ｍｇ、または約１７，５００ＢＴＣ単位／ｍｇ、または約２０，０００ＢＴＣ単位／ｍｇ、または約２２，５００ＢＴＣ単位／ｍｇ、または約９，１７５ＢＴＣ単位／０．５８ｍｇ、または１５，８１７ＢＴＣ単位／ｍｇの比活性を有する、ここで、「ｍｇ」とは、組成物中に存在するコラゲナーゼ（単数または複数）の量を意味する（賦形剤および他の構成要素とは異なる）。
【０１７０】
さらに、様々なコラゲナーゼ組成物を採用することができ、ここでコラゲナーゼは、約５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ、または約１０，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ、または約１５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ、または約１７，５００ＡＢＣ単位／ｍｇ、または約２０，０００ＡＢＣ単位／ｍｇ、または約２２，５００ＡＢＣ単位／ｍｇ、または約１０，０００ＡＢＣ単位／０．５８ｍｇ、または１７，２４１ＡＢＣ単位／ｍｇの比活性を有する、ここで、「ｍｇ」とは、組成物中に存在するコラゲナーゼ（単数または複数）の量を意味する（賦形剤およびその他の構成要素とは異なる）。
【０１７１】
ｄ．その他のアッセイ
標識したコラーゲンを用いたアッセイ法は、Ｇｉｓｓｌｏｗら、Anal.Biochem., 68: 70-78 (1975); Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎら, Clinica Chimica Acta, 42:43-45 (1972); Ｓａｋａｍｏｔｏら, A New Method for the Assay of Tissue Collagenase (36297) (1972)により報告されている。他の1つのアッセイは、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．Ａｓｓａｙ（http://www.worthington-biochem.com/CLS/assay.html）である（２０１９年７月３日アクセス）。
【０１７２】
４．コラゲナーゼの投与量
本明細書で採用されるコラゲナーゼの用量に関しては、本開示では、皮下注射時に隔膜を結合して溶解するのに十分な治療有効量のコラゲナーゼが提供され、その結果、治療前のベースラインと比較してセルライトの外観が減少する。
【０１７３】
一実施形態では、コラゲナーゼは、約０．０１ｍｇ〜約２０ｍｇの量で、単回または分割して注射することができる。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約０．０５ｍｇ〜約１５ｍｇの量で注射されてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約０．１０ｍｇ〜約１０ｍｇの量で注射されてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約０．１５ｍｇ〜約５ｍｇの量で注射されてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約０．２０ｍｇ〜約３ｍｇの量で注射されてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約０．２５ｍｇ〜約２ｍｇの量で注射されてもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約０．０５ｍｇ、約０．１０ｍｇ、約０．１５ｍｇ、約０．２０ｍｇ、約０．２５ｍｇ、約０．３０ｍｇ、約０．３５ｍｇ、約０．４０ｍｇ、約０．４５ｍｇ、約０．５０ｍｇ、約０．５５ｍｇ、約０．６０ｍｇ、約０．６５ｍｇ、約０．７０ｍｇ、約０．７５ｍｇ、約０．８０ｍｇ、約０．８５ｍｇ、約０．９０ｍｇ、約０．９５ｍｇ、約１．００ｍｇ、約１．０５ｍｇ、約１．１０ｍｇ、約１．１５ｍｇ、約１．２０ｍｇ、約１．２５ｍｇ、約１．３０ｍｇ、約１．３５ｍｇ、約１．４０ｍｇ、約１．４５ｍｇ、約１．５０ｍｇ、約１．５５ｍｇ、約１．６０ｍｇ、約１．６５ｍｇ、約１．７０ｍｇ、約１．７５ｍｇ、約１．８０ｍｇ、約１．８５ｍｇ、約１．９０ｍｇ、約１．９５ｍｇ、約２．００ｍｇ、約２．０５ｍｇ、約２．１０ｍｇ、約２．１５ｍｇ、約２．２０ｍｇ、約２．２５ｍｇ、約２．３０ｍｇ、約２．３５ｍｇ、約２．４０ｍｇ、約２．４５ｍｇ、約２．５０ｍｇ、約２．５５ｍｇ、約２．６０ｍｇ、約２．６５ｍｇ、約２．７０ｍｇ、約２．７５ｍｇ、約２．８０ｍｇ、約２．８５ｍｇ、約２．９０ｍｇ、約２．９５ｍｇ、約３．００ｍｇ、約３．０５ｍｇ、約３．１０ｍｇ、約３．１５ｍｇ、約３．２０ｍｇ、約３．２５ｍｇ、約３．３０ｍｇ、約３．３５ｍｇ、約３．４０ｍｇ、約３．４５ｍｇ、約３．５０ｍｇ、約３．５５ｍｇ、約３．６０ｍｇ、約３．６５ｍｇ、約３．７０ｍｇ、約３．７５ｍｇ、約３．８０ｍｇ、約３．８５ｍｇ、約３．９０ｍｇ、約３．９５ｍｇ、約４．００ｍｇ、約４．０５ｍｇ、約４．１０ｍｇ、約４．１５ｍｇ、約４．２０ｍｇ、約４．２５ｍｇ、約４．３０ｍｇ、約４．３５ｍｇ、約４．４０ｍｇ、約４．４５ｍｇ、約４．５０ｍｇ、約４．５５ｍｇ、約４．６０ｍｇ、約４．６５ｍｇ、約４．７０ｍｇ、約４．７５ｍｇ、約４．８０ｍｇ、約４．８５ｍｇ、約４．９０ｍｇ、約４．９５ｍｇ、約５．００ｍｇ、約５．０５ｍｇ、約５．１０ｍｇ、約５．１５ｍｇ、約５．２０ｍｇ、約５．２５ｍｇ、約５．３０ｍｇ、約５．３５ｍｇ、約５．４０ｍｇ、約５．４５ｍｇ、約５．５０ｍｇ、約５．５５ｍｇ、約５．６０ｍｇ、約５．６５ｍｇ、約５．７０ｍｇ、約５．７５ｍｇ、約５．８０ｍｇ、約５．８５ｍｇ、約５．９０ｍｇ、約５．９５ｍｇ、または約６．００ｍｇの量で注射することができる。
【０１７４】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約２．６分−１〜５．２分−１のＶｍａｘを有することがある。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約３．０分−１〜５．０分−１のＶｍａｘを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約３．４分−１〜４．８分−１のＶｍａｘを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約３．５分−１〜４．５分−１のＶｍａｘを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、Ｖｍａｘが、約２．０分−１、約２．１分−１、約２．２分−１、約２．３分−１、約２．４分−１、約２．５分−１、約２．６分−１、約２．７分−１、約２．８分−１、約２．９分−１、約３．０分−１、約３．１分−１、約３．２分−１、約３．３分−１、約３．４分−１、約３．５分−１、約３．６分−１、約３．７分−１、約３．８分−１、約３．９分−１、約４．０分−１、約４．１分−１、約４．２分−１、約４．３分−１、約４．４分−１、約４．５分−１、約４．６分−１、約４．７分−１、約４．８分−１、約４．９分−１、約５．０分−１、約５．１分−１、約５．２分−１、約５．３分−１、約５．４分−１、約５．５分−１、約５．６分−１、約５．７分−１、約５．８分−１、約５．９分−１、または約６．０分−１を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約０．７分−１〜７．６分−１、または約１〜６、または約２〜５、または約３〜４分−１のＶｍａｘを有することができる。
【０１７５】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約１３５分−１〜２６８分−１のＶｍａｘを有することがある。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定される場合、約１５０分−１〜２５０分−１のＶｍａｘを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定される場合、約１７５分−１〜２２５分−１のＶｍａｘを有することができる。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定される場合、約１３０分−１、約１３５分−１、約１４０分−１、約１４５分−１、約１５０分−１、約１５５分−１、約１６０分−１、約１６５分−１、約１７０分−１、約１７５分−１、約１８０分−１、約１８５分−１、約１９０分−１、約１９５分−１、約２００分−１，約２０５分−１、約２１０分−１、約２１５分−１、約２２０分−１、約２２５分−１、約２３０分−１、約２３５分−１、約２４０分−１、約２４５分−１、約２５０分−１、約２５５分−１、約２６０分−１、約２６５分−１、約２７０分−１、約２７５分−１、または約２８０分−１のＶｍａｘを有することができる。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約４分−１〜４００分−１、または約０．３〜３０．５、または約１０〜３７５、または約２０〜３５０、または約５０〜３００、または約１００〜２７５分−１のＶｍａｘを有していてもよい。
【０１７６】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定される場合、約７５ｍＭ〜１４７ｍＭのＫｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定される場合、約８０ｍＭ〜１４０ｍＭのＫｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定される場合、約８５ｍＭ〜１３０ｍＭのＫｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定されるように、約９０ｍＭ〜１２０ｍＭのＫｍを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定される場合、約７０ｍＭ、約７２ｍＭ、約７５ｍＭ、約７７ｍＭ、約８０ｍＭ、約８２ｍＭ、約８５ｍＭ、約８７ｍＭ、約９０ｍＭ、約９２ｍＭ、約９５ｍＭ、約９７ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０２ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１０７ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１２ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１１７ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２２ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１２７ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３２ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１３７ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４２ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４７ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１５２ｍＭ、約１５５ｍＭ、または約１５７ｍＭのＫｍを有していてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約４．４ｍＭ〜４３７ｍＭ、または約５〜４００、または約２０〜３７５、または約５０〜３２５、または約１００〜２７５、または約１５０〜２５０ｍＭ、または約４．１〜４１０ナノモルのＫｍを有していてもよい。
【０１７７】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約０．０３ｍＭ〜３．１ｍＭのＫｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約１．００ｍＭ〜１．６０ｍＭのＫｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約１．１０ｍＭ〜１．５０ｍＭのＫｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約１．１５ｍＭ〜１．４０ｍＭのＫｍを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約０．８０ｍＭ、約０．８２ｍＭ、約０．８５ｍＭ、約０．８７ｍＭ、約０．９０ｍＭ、約０．９２ｍＭ、約０．９５ｍＭ、約０．９７ｍＭ、約１．００ｍＭ、約１．０２ｍＭ、約１．０５ｍＭ、約１．０７ｍＭ、約１．１０ｍＭ、約１．１２ｍＭ、約１．１５ｍＭ、約１．１７ｍＭ、約１．２０ｍＭ、約１．２２ｍＭ、約１．２５ｍＭ、約１．２７ｍＭ、約１．３０ｍＭ、約１．３２ｍＭ、約１．３５ｍＭ、約１．３７ｍＭ、約１．４０ｍＭ、約１．４２ｍＭ、約１．４５ｍＭ、約１．４７ｍＭ、約１．５０ｍＭ、約１．５２ｍＭ、約１．５５ｍＭ、約１．５７ｍＭ、約１．６０ｍＭ、約１．６２ｍＭ、約１．６５ｍＭ、または約１．６７ｍＭのＫｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約０．０２７ｍＭ〜２．７ｍＭ、または約０．１〜２、または約０．５〜１．５、または約１〜１．３５ｍＭのＫｍを有していてもよい。
【０１７８】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定された、約３６秒−１〜６７１秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定されるように、約５０秒−１〜６００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定されるように、約６０秒−１〜５００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定されるように、約７０秒−１〜４００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定される場合、約１００秒−１〜３５０秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定される場合、約３０秒−１、約４０秒−１、約５０秒−１、約６０秒−１、約７０秒−１、約８０秒−１、約９０秒−１、約１００秒−１、約１１０秒−１、約１２０秒−１、約１３０秒−１、約１４０秒−１、約１５０秒−１、約１６０秒−１、約１７０秒−１、約１８０秒−１、約１９０秒−１、約２００秒−１、約２１０秒−１、約２２０秒−１、約２３０秒−１、約２４０秒−１、約２５０秒−１、約２６０秒−１、約２７０秒−１、約２８０秒−１、約２９０秒−１、約３００秒−１、約３１０秒−１、約３２０秒−１、約３３０秒−１、約３４０秒−１、約３５０秒−１、約３６０秒−１、約３７０秒−１、約３８０秒−１、約３９０秒−１、約４００秒−１、約４１０秒−１、約４２０秒−１、約４３０秒−１、約４４０秒−１、約４５０秒−１、約４６０秒−１、約４７０秒−１、約４８０秒−１、約４９０秒−１、約５００秒−１、約５１０秒−１、約５２０秒−１、約５３０秒−１、約５４０秒−１、約５５０秒−１、約５６０秒−１、約５７０秒−１、約５８０秒−１、約５９０秒−１、約６００秒−１、約６１０秒−１、約６２０秒−１、約６３０秒−１、約６４０秒−１、約６５０秒−１、約６６０秒−１、約６７０秒−１、約６８０秒−１、約６９０秒−１、約７００秒−１、約７１０秒−１、約７２０秒−１、約７３０秒−１、約７４０秒−１、約７５０秒−１、または約７６０秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約１秒−１〜１０７秒−１、または約１０〜１００、または約２０〜８０、または約３０〜７０、または約４０〜６０秒−１のＫｃａｔを有してもよい。
【０１７９】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約９０〜１０，０００、または約４１，０００秒−１〜約８１，０００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約４５，０００秒−１〜約７５，０００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約５０，０００秒−１〜約７０，０００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約５５，０００秒−１〜約６５，０００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約３５，０００秒−１、約３７，５００秒−１、約４０，０００秒−１、約４２，５００秒−１、約４５，０００秒−１、約４７，５００秒−１、約５０，０００秒−１、約５２，５００秒−１、約５５，０００秒−１、約５７，５００秒−１、約６０，０００秒−１、約６２，５００秒−１、約６５，０００秒−１、約６７，５００秒−１、約７０，０００秒−１、約７２，５００秒−１、約７５，０００秒−１、約７７，５００秒−１、約８０，０００秒−１、約８２，５００秒−１、または約８５，０００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約１２１５秒−１〜約１２０，０００秒−１、または約２，０００〜１００，０００、または約１０，０００〜９０，０００、または約２０，０００〜８０，０００、または約３０，０００〜７０，０００、または約４０，０００〜６０，０００秒−１のＫｃａｔを有してもよい。
【０１８０】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約３７６〜３８，０００μ秒、または約１４，０００μ秒〜約２８，０００μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約１６，０００μ秒〜約２６，０００μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。一実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約１８，０００μ秒〜約２４，０００μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。一実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約２０，０００μ秒〜約２２，０００μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約１２，５００μ秒、約１２，７５０μ秒、約１３，０００μ秒、約１３，２５０μ秒、約１３，５００μ秒、約１３，７５０μ秒、約１４，０００μ秒、約１４，２５０μ秒、約１４，７５０μ秒、約１５，０００μ秒、約１５，２５０μ秒、約１５，５００μ秒、約１５，７５０μ秒、約１６，０００μ秒、約１６，２５０μ秒、約１６，５００μ秒、約１６，７５０μ秒、約１７，０００μ秒、約１７，２５０μ秒、約１７，５００μ秒、約１７，７５０μ秒、約１８，０００μ秒、約１８，２５０μ秒、約１８，５００μ秒、約１８，７５０μ秒、約１９，０００μ秒、約１９，２５０μ秒、約１９，５００μ秒、約１９，７５０μ秒、約２０，０００μ秒、約２０，２５０μ秒、約２０，５００μ秒、約２０，７５０μ秒、約２１，０００μ秒、約２１，２５０μ秒、約２１，５００μ秒、約２１，７５０μ秒、約２２，０００μ秒、約２２，２５０μ秒、約２２，５００μ秒、約２２，７５０μ秒、約２３，０００μ秒、約２３，２５０μ秒、約２３，５００μ秒、約２３，７５０μ秒、約２４，０００μ秒、約２４，２５０μ秒、約２４，５００μ秒、約２４，７５０μ秒、約２５，０００μ秒、約２５，２５０μ秒、約２５，５００μ秒、約２５，７５０μ秒、約２６，０００μ秒、約２６，２５０μ秒、約２６，５００μ秒、約２６，７５０μ秒、約２７，０００μ秒、約２７，２５０μ秒、約２７，５００μ秒、約２７，７５０μ秒、約２８，０００μ秒、約２８，２５０μ秒、約２８，５００μ秒、約２８，７５０μ秒、約２９，０００μ秒、または約２９，２５０μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約３７０μ秒〜約３６，７００μ秒、または約７５０〜３０，０００、または約２，５００〜２５，０００、または約５，０００〜２０，０００、または約１０，０００〜１８，０００、または約１５，０００μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。
【０１８１】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約４μ秒〜約４３０μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約１４μ秒〜約２３μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約１６μ秒〜約２１μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約１０．０μ秒、約１０．２μ秒、約１０．４μ秒、約１０．６μ秒、約１０．８μ秒、約１１．０μ秒、約１１．２μ秒、約１１．４μ秒、約１１．６μ秒、約１１．８μ秒、約１２．０μ秒、約１２．２μ秒、約１２．４μ秒、約１２．６μ秒、約１２．８μ秒、約１３．０μ秒、約１３．２μ秒、約１３．４μ秒、約１３．６μ秒、約１３．８μ秒、約１４．０μ秒、約１４．２μ秒、約１４．４μ秒、約１４．６μ秒、約１４．８μ秒、約１５．０μ秒、約１５．２μ秒、約１５．４μ秒、約１５．６μ秒、約１５．８μ秒、約１６．０μ秒、約１６．２μ秒、約１６．４μ秒、約１６．６μ秒、約１６．８μ秒、約１７．０μ秒、約１７．２μ秒、約１７．４μ秒、約１７．６μ秒、約１７．８μ秒、約１８．０μ秒、約１８．２μ秒、約１８．４μ秒、約１８．６μ秒、約１８．８μ秒、約１９．０μ秒、約１９．２μ秒、約１９．４μ秒、約１９．６μ秒、約１９．８μ秒、約２０．０μ秒、約２０．２μ秒、約２０．４μ秒、約２０．６μ秒、約２０．８μ秒、約２１．０μ秒、約２１．２μ秒、約２１．４μ秒、約２１．６μ秒、約２１．８μ秒、約２２．０μ秒、約２２．２μ秒、約２２．４μ秒、約２２．６μ秒、約２２．８μ秒、約２３．０μ秒、約２３．２μ秒、約２３．４μ秒、約２３．６μ秒、約２３．８μ秒、約２４．０μ秒、約２４．２μ秒、約２４．４μ秒、約２４．６μ秒、約２４．８μ秒、約２５．０μ秒、約２５．２μ秒、約２５．４μ秒、約２５．６μ秒、約２５．８μ秒、約２６．０μ秒、約２６．２μ秒、約２６．４μ秒、約２６．８μ秒、約２７．０μ秒、約２７．２μ秒、または約２７．４μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定した場合、約０．３μ秒〜約３２μ秒、または約１〜３０、または約５〜２５、または約１０〜２０、または約１５μ秒の１／Ｋｃａｔを有してもよい。
【０１８２】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定された場合、約５，１４０ｍＭ−１秒−１〜約５０８，８１４ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定された場合、約０．５０ｍＭ−１秒−１〜約７．７５ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定された場合、約０．７５ｍＭ−１秒−１〜約７．００ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約１．００ｍＭ−１秒−１〜約６．００ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定された場合、約０．１０ｍＭ−１秒−１、約０．２０ｍＭ−１秒−１、約０．３０ｍＭ−１秒−１、約０．４０ｍＭ−１秒−１、約０．５０ｍＭ−１秒−１、約０．６０ｍＭ−１秒−１、約０．７０ｍＭ−１秒−１、約０．８０ｍＭ−１秒−１、約０．９０ｍＭ−１秒−１、約１．００ｍＭ−１秒−１、約１．１０ｍＭ−１秒−１、約１．２０ｍＭ−１秒−１、約１．３０ｍＭ−１秒−１、約１．４０ｍＭ−１秒−１、約１．５０ｍＭ−１秒−１、約１．６０ｍＭ−１秒−１、約１．７０ｍＭ−１秒−１、約１．８０ｍＭ−１秒−１、約１．９０ｍＭ−１秒−１、約２．００ｍＭ−１秒−１、約２．１０ｍＭ−１秒−１、約２．２０ｍＭ−１秒−１、約２．３０ｍＭ−１秒−１、約２．４０ｍＭ−１秒−１、約２．５０ｍＭ−１秒−１、約２．６０ｍＭ−１秒−１、約２．７０ｍＭ−１秒−１、約２．８０ｍＭ−１秒−１、約２．９０ｍＭ−１秒−１、約３．００ｍＭ−１秒−１、約３．１０ｍＭ−１秒−１、約３．２０ｍＭ−１秒−１、約３．３０ｍＭ−１秒−１、約３．４０ｍＭ−１秒−１、約３．５０ｍＭ−１秒−１、約３．６０ｍＭ−１秒−１、約３．７０ｍＭ−１秒−１、約３．８０ｍＭ−１秒−１、約３．９０ｍＭ−１秒−１、約４．００ｍＭ−１秒−１、約４．１０ｍＭ−１秒−１、約４．２０ｍＭ−１秒−１、約４．３０ｍＭ−１秒−１、約４．４０ｍＭ−１秒−１、約４．５０ｍＭ−１秒−１、約４．６０ｍＭ−１秒−１、約４．７０ｍＭ−１秒−１、約４．８０ｍＭ−１秒−１、約４．９０ｍＭ−１秒−１、約５．００ｍＭ−１秒−１、約５．１０ｍＭ−１秒−１、約５．２０ｍＭ−１秒−１、約５．３０ｍＭ−１秒−１、約５．４０ｍＭ−１秒−１、約５．５０ｍＭ−１秒−１、約５．６０ｍＭ−１秒−１、約５．７０ｍＭ−１秒−１、約５．８０ｍＭ−１秒−１、約５．９０ｍＭ−１秒−１、約６．００ｍＭ−１秒−１、約６．１０ｍＭ−１秒−１、約６．２０ｍＭ−１秒−１、約６．３０ｍＭ−１秒−１、約６．４０ｍＭ−１秒−１、約６．５０ｍＭ−１秒−１、約６．６０ｍＭ−１ｓｅｃ−１、約６．７０ｍＭ−１秒−１、約６．８０ｍＭ−１秒−１、約６．９０ｍＭ−１秒−１、約７．００ｍＭ−１秒−１、約７．１０ｍＭ−１秒−１、約７．２０ｍＭ−１秒−１、約７．３０ｍＭ−１秒−１、または約７．４０ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＳＲＣアッセイを用いて測定した場合、約０．００４８ｍＭ−１秒−１〜約０．４７ｍＭ−１秒−１、または約０．００９〜約０．３、または約０．０１〜約０．２５、または約０．１〜０．２５ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。
【０１８３】
一実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定された場合、約６０ｍＭ−１秒−１〜約６，０００ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定された場合、約３０，０００ｍＭ−１秒−１〜約８５，０００ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定された場合、約３６，０００ｍＭ−１秒−１〜約７７，０００ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定された場合、約４０，０００ｍＭ−１秒−１〜約７０，０００ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定された場合、約４０，０００ｍＭ−１秒−１、約４２，０００ｍＭ−１秒−１、約４４，０００ｍＭ−１秒−１、約４６，０００ｍＭ−１秒−１、約４８，０００ｍＭ−１秒−１、約５０，０００ｍＭ−１秒−１、約５２，０００ｍＭ−１秒−１、約５４，０００ｍＭ−１秒−１、約５６，０００ｍＭ−１秒−１、約５８，０００ｍＭ−１秒−１、約６０，０００ｍＭ−１秒−１、約６２，０００ｍＭ−１秒−１、約６４，０００ｍＭ−１秒−１、約６６，０００ｍＭ−１秒−１、約６８，０００ｍＭ−１秒−１、約７０，０００ｍＭ−１秒−１、約７２，０００ｍＭ−１秒−１、約７４，０００ｍＭ−１秒−１、約７６，０００ｍＭ−１秒−１、約７８，０００ｍＭ−１秒−１、約８０，０００ｍＭ−１秒−１、約８２，０００ｍＭ−１秒−１、約８４，０００ｍＭ−１秒−１、約７６，０００ｍＭ−１秒−１、約８６，０００ｍＭ−１秒−１、約８８，０００ｍＭ−１秒−１、約９０，０００ｍＭ−１秒−１、約９２，０００ｍＭ−１秒−１、約９４，０００ｍＭ−１秒−１、または約９６，０００ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、ＧＰＡアッセイを用いて測定された場合、約９００ｍＭ−１秒−１〜約９０，０００ｍＭ−１秒−１、または約２，０００〜８０，０００、または約１０，０００〜７０，０００、または約２０，０００〜６０，０００、または約３０，０００〜５０，０００、または約４０，０００〜４５，０００ｍＭ−１秒−１のＫｃａｔ／Ｋｍを有してもよい。
【０１８４】
一実施形態では、コラゲナーゼは、約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａの分子量を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約７０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａの分子量を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約８０ｋＤａ〜約１２０ｋＤａの分子量を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約９０ｋＤａ〜約１２０ｋＤａの分子量を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約１００ｋＤａ〜約１１０ｋＤａの分子量を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約５５ｋＤａ、約５７ｋＤａ、約６０ｋＤａ、約６２ｋＤａ、約６５ｋＤａ、約６７ｋＤａ、約７０ｋＤａ、約７２ｋＤａ、約７５ｋＤａ、約７７ｋＤａ、約８０ｋＤａ、約８２ｋＤａ、約８５ｋＤａ、約８７ｋＤａ、約９０ｋＤａ、約９２ｋＤａ、約９５ｋＤａ、約９７ｋＤａ、約１００ｋＤａ、約１０２ｋＤａ、約１０５ｋＤａ、約１０７ｋＤａ、約１１０ｋＤａ、約１１２ｋＤａ、約１１５ｋＤａ、約１１７ｋＤａ、約１２０ｋＤａ、約１２２ｋＤａ、約１２５ｋＤａ、約１２７ｋＤａ、約１３０ｋＤａ、約１３２ｋＤａ、約１３５ｋＤａ、または約１３７ｋＤａの分子量を有してもよい。
【０１８５】
一実施形態では、コラゲナーゼは、逆相ＨＰＬＣによって測定される、少なくとも８０％の純度を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、逆相ＨＰＬＣで測定して、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％の純度を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、面積比で１％以下のクロストリパインを含んでもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、面積比で１％以下のゼラチナーゼを含んでもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、面積比で１％以下のロイペプチンを含んでもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、１ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデンを含んでもよい。
【０１８６】
一実施形態では、コラゲナーゼは、約５００〜約３０，０００ＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約２，５００〜約２５，０００ＳＲＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約５，０００〜約２０，０００ＳＲＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約５００、約１，０００、約１，５００、約２，０００、約２，５００、約３，０００、約３，５００、約４，０００、約４，５００、約５，０００、約５，５００、約６，０００、約６，５００、約７，０００、約７，５００、約８，０００、約８，５００、約９，０００、約９，５００、約１０，０００、約１０，５００、約１１，０００、約１１，５００、約１２，０００、約１２，５００、約１３，０００、約１３，５００、約１４，０００、約１４，５００、約１５，０００、約１５，５００、約１６，０００、約１６，５００、約１７，０００、約１７，５００、約１８，０００、約１８，５００、約１９，０００、約１９，５００、約２０，０００、約２０，５００、約２１，０００、約２１，５００、約２２，０００、約２２，５００、約２３，０００、約２３，５００、約２４，０００、約２４，５００、約２５，０００、約２５，５００、約２６，０００、約２６，５００、約２７，０００、約２７，５００、約２８，０００、約２８，５００、約２９，０００、約２９，５００、または約３０，０００ＳＲＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。
【０１８７】
一実施形態では、コラゲナーゼは、約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約７，５００〜約２５，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約１０，０００〜約２０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約２，５００、約３，０００、約３，５００、約４，０００、約４，５００、約５，０００、約５，５００、約６，０００、約６，５００、約７，０００、約７，５００、約８，０００、約８，５００、約９，０００、約９，５００、約１０，０００、約１０，５００、約１１，０００、約１１，５００、約１２，０００、約１２，５００、約１３，０００、約１３，５００、約１４，０００、約１４，５００、約１５，０００、約１５，５００、約１６，０００、約１６，５００、約１７，０００、約１７，５００、約１８，０００、約１８，５００、約１９，０００、約１９，５００、約２０，０００、約２０，５００、約２１，０００、約２１，５００、約２２，０００、約２２，５００、約２３，０００，約２３，５００、約２４，０００、約２４，５００、約２５，０００、約２５，５００、約２６，０００、約２６，５００、約２７，０００、約２７，５００、約２８，０００、約２８，５００、約２９，０００、約２９，５００、または約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。
【０１８８】
一実施形態では、コラゲナーゼは、約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約１５０，０００〜約３５０，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約２００，０００〜約３００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約１００，０００、約１１０，０００、約１２０，０００、約１３０，０００、約１４０，０００、約１５０，０００、約１６０，０００、約１７０，０００、約１８０，０００、約１９０，０００、約２００，０００、約２１０，０００、約２２０，０００、約２３０，０００、約２５０，０００、約２６０，０００、約２７０，０００、約２８０，０００、約２９０，０００、約３００，０００、約３１０，０００、約３２０，０００、約３３０，０００、約３４０，０００、約３５０，０００、約３６０，０００、約３７０，０００、約３８０，０００、約３９０，０００、または約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有してもよい。
【０１８９】
一実施形態では、コラゲナーゼは、約１７５，０００〜約５００，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約２５０，０００〜約４５０，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約３００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約１７５，０００、約１８５，０００、約１９５，０００、約２０５，０００、約２１５，０００、約２２５，０００、約２３５，０００、約２４５，０００、約２５５，０００、約２６５，０００、約２７５，０００、約２８５，０００、約２９５，０００、約３０５，０００、約３１５，０００、約３２５，０００、約３３５，０００、約３４５，０００、約３５５，０００、約３６５，０００、約３７５，０００、約３８５，０００、約３９５，０００、約４０５，０００、約４１５，０００、約４２５，０００、約４３５，０００、約４４５，０００、約４５５，０００、約４６５，０００、約４７５，０００、約４８５，０００、または約４９５，０００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価を有してもよい。
【０１９０】
一実施形態では、コラゲナーゼは、約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。一実施形態では、コラゲナーゼは、約７，５００〜約２０，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。一実施形態では、コラゲナーゼは、約１０，０００〜約１７，５００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約５，０００、約５，５００、約６，０００、約６，５００、約７，０００、約７，５００、約８，０００、約８，５００、約９，０００、約９，５００、約１０，０００、約１０，５００、約１１，０００、約１１，５００、約１２，０００、約１２，５００、約１３，０００、約１３，５００、約１４，０００、約１４，５００、約１５，０００、約１５，５００、約１６，０００、約１６，５００、約１７，０００、約１７，５００、約１８，０００、約１８，５００、約１９，０００、約１９，５００、約２０，０００、約２０，５００、約２１，０００、約２１，５００、約２２，０００、約２２，５００、約２３，０００、約２３，５００、約２４，０００、約２４，５００、または約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価を有してもよい。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、組成物中に存在するコラゲナーゼは、コラゲナーゼＩとコラゲナーゼＩＩを約１：１の比率で含んでいる。コラゲナーゼＩとコラゲナーゼＩＩの他の比率は、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０、または０：１のように採用されてもよい。コラゲナーゼＩおよびコラゲナーゼＩＩのそれぞれは、逆相ＨＰＬＣで測定した面積による純度が、少なくとも８０％、または８５％、または９０％、または９１％、または９２％、または９３％、または９４％、または９５％、または９６％、または９７％、または９８％、または９９％、または１００％であってもよい。
【０１９２】
別の実施形態では、コラゲナーゼ組成物は、約１：１のＡＵＸＩおよびＡＵＸＩＩの比率を有するＣＣＨを有する。ＡＵＸＩとＡＵＸＩＩの他の比率は、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０、または０：１のように採用されてもよい。ＡＵＸＩおよびＡＵＸＩＩのそれぞれは、逆相ＨＰＬＣで測定した面積による純度が、少なくとも８０％、または８５％、または９０％、または９１％、または９２％、または９３％、または９４％、または９５％、または９６％、または９７％、または９８％、または９９％、または１００％であってもよい。
【０１９３】
他の例では、コラゲナーゼ組成物は、液体であってもよいし、凍結乾燥した固体形態から希釈剤で再構成されていてもよい。混合物の投与量は、希釈剤を考慮せずに存在するコラゲナーゼの量によって測定され、１回または複数回の注射で約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇを含んでいてもよい。別の実施形態では、投与される用量は、１回以上の注射で約０．０６ｍｇ、０．４８ｍｇ、０．８４ｍｇ、１．６８ｍｇ、２．５２ｍｇ、３．３６ｍｇ、４．２ｍｇ、５．０４ｍｇ、５．８８ｍｇ、６．７２ｍｇ、７．５６ｍｇ、または８．４ｍｇである。
【０１９４】
例えば、約０．０６ｍｇ、０．４８ｍｇ、０．８４ｍｇ、または１．６８ｍｇを約１２回に分けて注射する。注射されるコラゲナーゼ組成物の量は、１回の注射につき０．０１ｍＬ〜３ｍＬの範囲、または１回の治療訪問につき合計約０．２ｍＬ〜１５０ｍＬの範囲であってもよい。特定の実施形態では、上記の投与量は、ＣＣＨを有するコラゲナーゼ組成物に対するものである。別の実施形態では、上記の投与量は、以下の特徴の１つ以上を有するコラゲナーゼ組成物に対するものである：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０１９５】
別の実施形態では、約０．８４ｍｇのＣＣＨを、治療部位ごとに約１２回に分けて均等に注射する（約０．０７ｍｇ×１２回＝約０．８４ｍｇ）。いくつかのケースでは、０．８４ｍｇによるこのような治療は、２、３、４、または５回の治療訪問において、１０〜４０日ごとに行われる。他のケースでは、複数の治療領域に、１回の治療訪問で０．８４ｍｇが注射されるか、２、３、４、または５回の治療訪問で１０〜４０日ごとに注射される。他の実施形態では、５回を超える治療訪問がある。
【０１９６】
別の態様では、治療領域に注射され得るコラゲナーゼの量は、１回以上の注射における治療訪問あたり約０．００１ｍｇ〜２０ｍｇのコラゲナーゼであり、例えば、約３回〜約１００回の注射に等分して投与することができる。コラゲナーゼは液状であるか、または凍結乾燥した固体から希釈剤で再構成される。コラゲナーゼの投与量は、希釈剤を含まないコラゲナーゼの量で測定され、約０．１ｍｇ〜１ｍｇ、０．２５ｍｇ〜０．７５ｍｇ、０．１ｍｇ〜２ｍｇ、０．２５ｍｇ〜１．７５ｍｇ、または０．５ｍｇ〜１ｍｇ、０．１ｍｇ〜３ｍｇ、または０．２５ｍｇ〜２．７５ｍｇ、または０．５ｍｇ〜２．５ｍｇ、または０．７５ｍｇ〜２．２５ｍｇ、または１ｍｇ〜２ｍｇ、または０．１ｍｇ〜４ｍｇ、または０．２５ｍｇ〜３．７５ｍｇ、または０．５ｍｇ〜３．５ｍｇ、または０．７５ｍｇ〜３ｍｇ、または１ｍｇ〜３ｍｇを有し得る。他の実施形態では、投与量は、約０．００１ｍｇ、０．０１ｍｇ、０．０４ｍｇ、０．０５ｍｇ、０．０７ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２ｍｇ、２．２５ｍｇ、２．５ｍｇ、２．７５ｍｇ、３ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇ、４．０ｍｇ、４．２５ｍｇ、４．５ｍｇ、４．７５ｍｇ、５．０ｍｇ、５．２５ｍｇ、５．５ｍｇ、５．７５ｍｇ、６ｍｇ、６．２５ｍｇ、６．５ｍｇ、６．７５ｍｇ、７ｍｇ、７．２５ｍｇ、７．５ｍｇ、７．７５ｍｇ、８ｍｇ、８．２５ｍｇ、８．５ｍｇ、８．７５ｍｇ、９ｍｇ、９．２５ｍｇ、９．５ｍｇ、９．７５ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、または２０ｍｇを１回または複数回に分けて注射する。
【０１９７】
別の実施形態では、投与量は約０．０６ｍｇ、０．４８ｍｇ、０．８４ｍｇ、１．６８ｍｇ、２．５２ｍｇ、３．３６ｍｇ、４．２ｍｇ、または５．０４ｍｇを１回または複数回の注射で投与する。別の例では、約０．０６ｍｇ、０．４８ｍｇ、０．８４ｍｇ、１．６８ｍｇ、２．５２ｍｇ、３．３６ｍｇ、４．２ｍｇ、または５．０４ｍｇを約１２回に分けて治療領域に注射する。他の例では、コラゲナーゼの投与量を３回以上に分けて注射する。注射されるコラゲナーゼ組成物の量は、１回の注射につき０．０１ｍＬから３ｍＬの範囲、または１回の治療訪問につき合計約１ｍＬから１５０ｍＬの範囲でよい。
【０１９８】
一態様では、上述のＡＵＸ  ＩおよびＩＩの混合物（「ＣＣＨ」）を、１回の治療訪問あたり約０．０１ｍｇ〜１０ｍｇのコラゲナーゼを１回以上の注射で注射してもよく、例えば、投与量を約３〜約５０回の注射に等分して注射する。コラゲナーゼは、液体であってもよいし、凍結乾燥した形から希釈剤で再構成してもよい。混合物の投与量は、希釈剤を考慮せずにコラゲナーゼの量で測定され、約０．１ｍｇ〜１ｍｇ、または０．２５ｍｇ〜０．７５ｍｇ、または０．１ｍｇ〜２ｍｇ、または０．２５ｍｇ〜１．７５ｍｇ、または０．１ｍｇ〜３ｍｇ、または０．２５ｍｇ〜２．７５ｍｇ、または０．５ｍｇ〜２．５ｍｇ、または０．７５ｍｇ〜２．２５ｍｇ、または１ｍｇ〜２ｍｇ、または０．１ｍｇ〜４ｍｇ、または０．２５ｍｇ〜３．７５ｍｇ、または０．５ｍｇ〜３．５ｍｇ、または０．７５ｍｇ〜３ｍｇ、または１ｍｇ〜３ｍｇ、または約０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、１．１ｍｇ、１．２ｍｇ、１．３ｍｇ、１．４ｍｇ、１．５ｍｇ、１．６ｍｇ、１．７ｍｇ、１．８ｍｇ、１．９ｍｇ、２ｍｇ、２．２５ｍｇ、２．５ｍｇ、２．７５ｍｇ、３ｍｇ、３．２５ｍｇ、３．５ｍｇ、３．７５ｍｇ、４．０ｍｇ、４．２５ｍｇ、４．５ｍｇ、４．７５ｍｇ、５．０ｍｇ、５．２５ｍｇ、５．５ｍｇ、５．７５ｍｇ、６ｍｇ、６．２５ｍｇ、６．５ｍｇ、６．７５ｍｇ、７ｍｇ、７．２５ｍｇ、７．５ｍｇ、７．７５ｍｇ、８ｍｇ、８．２５ｍｇ、８．５ｍｇ、８．７５ｍｇ、９ｍｇ、９．２５ｍｇ、９．５ｍｇ、９．７５ｍｇ、または１０ｍｇを１回または複数回の注射で投与する。別の実施形態では、投与されるＣＣＨの用量は、１回以上の注射で約０．０６ｍｇ、０．４８ｍｇ、０．８４ｍｇ、または１．６８ｍｇ、２．５２ｍｇ、３．３６ｍｇ、４．２ｍｇ、または５．０４ｍｇである。例えば、約０．０６ｍｇ、０．４８ｍｇ、０．８４ｍｇ、または１．６８ｍｇ、２．５２ｍｇ、３．３６ｍｇ、４．２ｍｇ、または５．０４ｍｇが１２回の注射で投与される。注射されるコラゲナーゼ組成物の量は、１回の注射につき０．０１ｍＬから３ｍＬの範囲、または治療訪問あたり合計約１ｍＬから８０ｍＬの範囲であり得る。
【０１９９】
コラゲナーゼの投与量は、１回の注射につき約０．００１ｍｇ〜０．５ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約５ｍｇ、約０．００５ｍｇ〜約０．１ｍｇ、または約０．００５ｍｇ、０．０４ｍｇ、または０．０７ｍｇのように、（やはり希釈剤を考慮せずに）１回の注射につきｍｇで表すこともできる。
【０２００】
特定の態様では、本開示は、治療訪問ごとに約５００ＡＢＣ単位〜約５０，０００ＡＢＣ単位、または治療訪問ごとに約１０，０００ＡＢＣ単位〜約２５，０００ＡＢＣ単位を注射することを企図している。別の実施形態では、注射１回あたりのコラゲナーゼの用量は、約５０ＡＢＣ単位〜約２，５００ＡＢＣ単位、または約８５ＡＢＣ単位〜約２，０００ＡＢＣ単位、または約１５０ＡＢＣ単位〜約１，７５０ＡＢＣ単位、または約２００ＡＢＣ単位〜約１，５００ＡＢＣ単位、または約３００ＡＢＣ単位〜約１，２５０ＡＢＣ単位、または約５００ＡＢＣ単位〜約１，０００ＡＢＣ単位である。
【０２０１】
特定の実施形態では、様々な比活性に基づく投与量は以下の通りである：
2022502478.tif 000032
【０２０２】
特定の態様では、本開示は、約５，０００ＢＴＣ単位〜約２５，０００ＢＴＣ単位、または約１０，０００ＢＴＣ単位〜約２５，０００ＢＴＣ単位、または約１５，０００ＢＴＣ単位、または約１７，５００ＢＴＣ単位、または約２０，０００ＢＴＣ単位、または約２２，５００ＢＴＣ単位、または約９，１７５ＢＴＣ単位、または約１５，８１７ＢＴＣ単位の量でコラゲナーゼを注射することを企図している。
【０２０３】
５．製剤
ＣＣＨまたは他のコラゲナーゼは、ＣＣＨまたはコラゲナーゼと、薬学的に許容される賦形剤とを有する医薬製剤の形態であってもよい。このような賦形剤としては、注射用の滅菌水や塩化ナトリウム／塩化カルシウム、ｐＨ調整剤、安定剤などが挙げられる。
【０２０４】
ＸＩＡＦＬＥＸ（登録商標）は、０．９ｍｇのＣＣＨを再構成用の無菌凍結乾燥粉末として含む単回使用のガラスバイアルとして、申請者から商業的に提供されている。再構成用の無菌希釈剤も単回使用のガラスバイアルで提供される。非活性成分として、塩酸、スクロース、トロメタミンが含まれている。希釈剤には、０．９％塩化ナトリウム中の塩化カルシウム二水和物が含まれている。ＸＩＡＦＬＥＸ（登録商標）処方箋情報（２０１８年）。
【０２０５】
別の実施形態では、セルライト用ＣＣＨは、０．９２ｍｇのＣＣＨ、スクロース、トリス、マンニトール、および塩酸を含む無菌凍結乾燥粉末であり、５ｍＬバイアルに入っている。再構成のための滅菌希釈剤は、注射用水、通常の生理食塩水、または０．６％の塩化ナトリウムと０．０３％の塩化カルシウムの注射用水による脱水物を個々の５ｍＬバイアルに充填して構成することができる。
【０２０６】
コラゲナーゼまたはＣＣＨは、１０ｍＬ、１５ｍＬ、２０ｍＬ、または３０ｍＬなど、他のサイズのバイアルに充填してもよい。その他のｐＨ調整剤、糖類、ポリオール、安定化剤については、ＲｏｗｅらのＨａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（５ｔｈＥｄ）。
【０２０７】
６．治療の方法：注射技術と投与レジメン
前述のコラゲナーゼ組成物は、ヒト対象のセルライトの重症度を治療または軽減する方法に有用である。本開示は、ヒト患者におけるセルライトの重症度を軽減する方法であって、少なくとも１つのコラゲナーゼを有する組成物を提供する工程と、治療有効量の前記組成物を１つ以上のくぼみに注射する工程と、を有し、前記患者が、治療前のベースラインレベルと比較してセルライトの重症度の軽減を示す方法に関するものである。以下にさらに詳述するように、本組成物は、様々な注射技術によって投与され、多数の尺度および他の測定ツールによって有効性を測定することができる。
【０２０８】
本明細書に記載されたコラゲナーゼ組成物の投与は、治療訪問時に、単一の被験者において、両側（２つの大腿部または２つの臀部）または４つの象限すべて（両方の臀部および両方の大腿部）に行ってもよい。このような治療訪問は、１年間で２回、３回、４回、５回または６回の治療訪問を１０〜４０日ごとに行ってもよい。また、コラゲナーゼを高累積投与量で４象限すべてに注射した場合でも、３．３６ｍｇまでのＣＣＨ皮下投与後の血漿中のＡＵＸ−ＩまたはＡＵＸ−ＩＩ濃度を検出する生体分析では、全身循環中に定量可能なレベルのＣＣＨが存在しなかった（すなわち、アッセイの下限定量レベル以下）ことから、全身吸収がないことが示され、さらに全体的な安全性が示された。例えば、ヒトには３．３６ｍｇ、ラットにはヒト換算用量（ＨＥＤ）の４３倍の量を投与したところ、これらの量は十分に許容されることがわかった。コラゲナーゼ療法の薬物動態に関する出願人の研究は、２０１８年９月１８日に出願された米国仮出願番号第６２／７３３，０４６号、２０１９年１月６日に出願された米国仮出願番号第６２／７８８，９１６号、米国仮出願番号第６２／８１２，０３６号、２０１９年２月２８日に出願された米国仮出願番号第６２／８１２，０３６号、２０１９年３月２５日に出願された米国仮出願番号第６２／８２３，５９６号、２０１９年７月１１日に出願された国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４１４９４号、２０１９年７月１２日に出願された国際出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／４１７１８号に記載され、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０９】
コラゲナーゼのさまざまな注射パラメータと、患者の治療に関連する技術の一般的な概要を表１５に示す。
【表１５】
2022502478.tif 000033
2022502478.tif 000034
2022502478.tif 000035
【０２１０】
特定の実施形態では、約０．８４ｍｇのＣＣＨを約１２回に等分割して４つの象限（すなわち、右または左の臀部または右または左の大腿部）などの患部に注射する（約０．０７ｍｇ×１２回の注射＝約０．８４ｍｇのＣＣＨ）。いくつかのケースでは、０．８４ｍｇのこのような治療は、２、３、４、５、または６回の治療のために１０〜４０日ごとに行われる。他のケースでは、２、３、４、５、または６回の治療のために、１０〜４０日ごとに０．８４ｍｇを用いて複数の患部または象限を注射する。
【０２１１】
一実施形態では、外科用マーカーを使用して、治療のために選択されたくぼみのそれぞれを円で囲む。別の実施形態では、選択された治療領域の円は、重ならない。さらに別の実施形態では、選択された治療領域の円が重なっている。
【０２１２】
特定の実施形態では、患者は、治療Ｉ（図７）による手順を用いて、表１６に示すようなコラゲナーゼを投与される。
【表１６】
2022502478.tif 000036
【０２１３】
この例では、臨床医は、被験者が立っているときに明確で、治療に適した各臀部のくぼみを選択することができる。なお、治療するくぼみの選択には制限はない。治療は、１回の治療訪問で片方の臀部につき１２回（２つの臀部で合計２４回）の注射を行う。治療の目的は、臀部全体の美観を向上させることであるため、医師は臀部全体の美観を最も向上させると思われるくぼみを選択するように指示される。１つの臀部で同じくぼみを治療することも、以前に治療したくぼみと異なるくぼみを治療することもできるが、３回の治療では臀部内に注射することが望ましいである（１つの臀部につき１２回の注射）。臀部に治療可能なＥＦＰ陥凹部がなく、臨床医がその臀部をＣＲ−ＰＣＳＳで０点と評価した場合を除き、各臀部は３回すべての治療を受ける。治療訪問２で特定の臀部（右または左）に注射が行われなかった場合でも、被験者は治療訪問２で対側の臀部の治療について評価され、治療訪問３に戻ってきて、被験者（ＰＲ  ＰＣＳＳ）と治験責任医師（ＣＲ−ＰＣＳＳ）がそれぞれの臀部を再度評価する。治験責任医師がＣＲ−ＰＣＳＳで臀部のいずれかまたは両方を０より大きく評価した場合、治療訪問３で注射を行う。さらに、コラゲナーゼ治療は、以下の１つ以上を含むことができる：
●１つ以上の象限を治療する；
●くぼみの大きさに関係なく治療する；
●４５歳以上の女性を治療する；
●皮膚のたるみや弛緩、垂れがない陥凹部を治療する；
●異なる陥凹部を、異なる治療訪問で治療する；
●１／２インチ以上の針を使用する；
●注射する陥凹部の距離を制限しない；
●スペーサー、定規、紙などの器具に頼って注射の位置を制限しない；
●陥凹部の直下に少なくとも１回の注射が行われるようにする；
●長さが約１ｃｍ未満または約２ｃｍ以上の陥凹部を治療する；
●互いに約２ｃｍ以内で注射を使用する；
●互いに約２ｃｍ未満の範囲内で注射を使用する、および／または
●ここに記載されている１つ以上の尺度と方法を用いて、効果を測定する。
特定の実施形態では、治療が上記の態様を遵守する場合、患者は治療に対する迅速な反応率を経験する。図２０〜２３を参照。
【０２１４】
さらに、特定の具体的な実施形態において、治療患者のパラメータを表１７および１８に示す。
【表１７】
2022502478.tif 000037
【表１８】
2022502478.tif 000038
【０２１５】
一実施形態では、再構成製品の浸透圧濃度は、約５０〜約１，０００、約１００〜約９００、約２００〜約８００、約３００〜約７００、約４００〜約６００、約５０、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００、約６５０、約７００、約７５０、約８００、約８５０、約９００、約９５０、または約１，０００ｍＯｓｍ／ｋｇである。さらに別の実施形態では、再構成製品の浸透圧濃度は、約５１２ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２７５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２８１ｍＯｓｍ／ｋｇ、または約２２７ｍＯｓｍ／ｋｇである。
【０２１６】
上記の方法に加えて、本開示は、それを必要とする対象においてＥＦＰを治療または低減する方法を提供し、この方法は、ＥＦＰの一般的な手順および治療に対して以下の利点の少なくとも１つを提供する：
ａ．医師が使いやすい；
ｂ．治療にかかる時間の短縮；
ｃ．審美的な症状を改善することは難しいという医師の一般的な見解に照らし合わせても、予想外の効果が得られる；
ｄ．ヒアルロニダーゼを使用する必要がない；
ｅ．熱を加える必要がない；
ｆ．レーザーを使う必要がない；
ｇ．サブシジョンなし；
ｈ．麻酔の必要がない（あざにかかわらず）；
ｉ．着圧服の必要がない；
ｊ．バキュームを使用しない。
【０２１７】
別の実施形態では、セルライトを治療または減少させる方法は、治療するセルライトの重症度に上限を設けず、例えば、コラゲナーゼによる治療は、セルライトの有病率または重症度に関係なく、安全かつ効果的である。
【０２１８】
Ｆ．段階４−治療評価項目と有効性の測定
本明細書に記載されている治療法は、以下に記載されているいくつかの尺度によってセルライトを治療するのに有効である。一般的に本明細書で使用されるように、用語「日」は、先行研究の７１日目から日を順次測定する下記の実施例５に別段の定めがある場合を除き、治療コースにおける最初の治療から特定の治療領域におけるコラゲナーゼ治療の最初の日から日ごとに順次測定される研究日を意味する。例えば、実施例５で説明するように、「１８０日目」は、実施例２および３で報告された７１日目から１８０日後を意味する。したがって、実施例５の文脈以外では、１日目は治療の最初の日であり、７１日目は１日目から７０日後であり、１８０日目は１日目から１７９日後である（「１８０日目」が実施例５のように、７１日目から１８０日後、または治療初日から２５１日後であることを意味するように使用される場合を除く）。
【０２１９】
特定の実施形態では、すべてが中等度または重度のＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価を有する患者の集団において：
●対象治療領域の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳにおいて、少なくとも５０％の患者が、２２日目、４３日目、または７１日目に重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善している。
●対象治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳにおいて、少なくとも５０％の患者が、２２日目、４３日目、または７１日目に重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善している。
●対象治療領域の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳにおいて、少なくとも５％の患者が、２２日目、４３日目、または７１日目に重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善している。
●対象治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳにおいて、少なくとも５％の患者が、２２日目、４３日目、または７１日目に重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善している。
●少なくとも５％の患者が、陥凹部のサイズ（体積、長さ、幅、深さ）の有意な減少、例えば、ベースラインから２２日目、４３日目、または７１日目に少なくとも５％の減少、または少なくとも１０％の減少、または少なくとも２０％の減少を経験する。
これらおよびその他の有効性パラメータとベンチマークは以下に詳述する。さらに、以下の実施例に示されているように、コラゲナーゼ注射はセルライトの外観を著しく改善し、持続性を示し、一般的に良好な忍容性を示した。
【０２２０】
１．ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳで測定された有効性
個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアやレーティングから少なくとも１レベルまたは１レーティングの改善を意味する。患者群の改善とは、ベースラインまたはそれ以前の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約０．１向上したことをいう。応答者とは、ベースラインから最大合計スコアまたは評価の少なくとも２５％の改善を示す任意の患者である。特定の実施形態では、本明細書に詳述されている治療方法は、ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳによって測定される以下の有効性評価項目の１つ以上をもたらす：
１．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価がベースラインと比べて少なくとも０．１改善していること。
２．治療領域の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳにおける重症度が、ベースライン（治療前の「１日目」）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、少なくとも２レベル改善していること。
３．治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳにおける重症度が、ベースライン（１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、少なくとも２レベル改善していること。
４．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に２レベルの複合応答で示される改善とは、ＣＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善し、ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善した被験者と定義される。
５．治療領域の臨床医がライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳにおける重症度が、２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、ベースラインから少なくとも１レベル改善していること。
６．治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳの重症度が、ベースラインから２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、少なくとも１レベル改善していること。
７．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、１レベルの複合応答で示された改善とは、ＣＲ−ＰＣＳＳでベースラインから少なくとも１レベルの重症度の改善が見られ、ＰＲ−ＰＣＳＳでベースラインから少なくとも１レベルの重症度の改善が見られた被験者と定義される。
８．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度であった患者集団において、少なくとも１つの治療領域の改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記のＮｏ．１からＮｏ．７の１つ以上である。
９．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも７１日間維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、または２回目の治療、または３回目の治療から１ヶ月、または３ヶ月、または６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２４ヶ月に、さらなる改善が見られた。
１０．１８０日目において、ベースラインに対するＣＲ−ＰＣＳＳ評価における改善は、治療領域の左右で一貫して見られた。
１１．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの改善が得られるまでの時間の中央値は、約５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１２．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者の集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ改善までの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１３．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、被験者のＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳスコアの平均値が、初回治療の２１日後にプラセボから分離し、その後の治療で継続的かつ有意な改善を示した。
１４．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者の集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳによって測定される２レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％よりも大きい。
１５．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者の集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳによって測定される１レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％よりも大きい。
１６．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者の集団において、３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上の患者が、治療後７１日目までに少なくとも１つの治療領域で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／または少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を有し、ＣＲ−ＰＣＳＳの結果が年齢、ＢＭＩまたは肌の色に依存しない。
１７．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
１８．ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度の患者集団において、ベースライン（スクリーニング訪問）からのＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価の最大の低下が９０日目で初めて観察された。
１９．ＣＲ−ＰＣＳＳ及び／又はＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度又は重度である患者集団において、１８０日目前の所定の時点でのセルライト重症度の改善（すなわち、マイナスの変化）が１８０日目の訪問時にも維持される。
２０．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、９０日目に、左臀部および左大腿部のＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価のベースラインからの平均（ＳＤ）変化は、それぞれ約−０．８（０．５８）および約−０．６（０．６２）であり、右臀部および右大腿部のＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価のベースラインからの平均（ＳＤ）変化は、それぞれ約−０．７（０．７３）および約−０．５（０．７０）である。
２１．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、１８０日目で、ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価のベースライン（スクリーニング訪問）からの減少が左右で一貫している。
２２．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも１つの領域でＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が２レベル改善することが、９０日目には被験者の少なくとも１０％、１８０日目には被験者の少なくとも１５％で観察された。
２２．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも１つの領域でＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が２レベル改善することが、９０日目に少なくとも１０％、１８０日目に少なくとも１５％の被験者で観察され、その反応は臀部と大腿部の領域、および左右の側面で同様であった。
２３．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも１つの治療領域でＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が１レベル改善することが、９０日目の被験者の少なくとも６０％および１８０日目の被験者の少なくとも６５％で観察された。
２４．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも１つの治療領域におけるＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価の１レベルの改善が、９０日目の被験者の少なくとも６０％および１８０日目の被験者の少なくとも６５％で観察され、その反応は臀部および大腿部の領域および左右の側面で同様である。
２５．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ応答が得られるまでの時間の中央値は約８０日と観察された。
２６．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ応答が得られるまでの時間の中央値は約４０日である。
２７．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも５０％の患者が７１日目に標的臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ応答者である。
２８．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも２０％の患者が７１日目に標的臀部で２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ応答者である。
２９．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、７１日目で標的臀部において、少なくとも３５％の患者が１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者である。
３０．全ての患者がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、７１日目に非標的臀部で少なくとも５％の患者が２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者である。
３１．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目のＰＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの平均変化量は、コラゲナーゼを投与した被験者の方が、プラセボを投与した被験者よりも、標的臀部（それぞれ約０．９対約０．５）および非標的臀部（それぞれ約０．９対約０．５）で大きかった。
３２．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合は、７１日目において、コラゲナーゼを投与した被験者の方が、プラセボを投与した被験者よりも、標的臀部（それぞれ約６２％対約４０％）および非標的臀部（それぞれ約６５％対約４０％）で多かった。
３３．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度の患者集団において、ＣＣＨを投与した被験者のＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの平均変化量は、７１日目の標的臀部（それぞれ約０．７対約０．４［０．７２］）および非標的臀部（それぞれ約０．８対約０．３）において、プラセボを投与した被験者よりも大きかった。
３４．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合は、コラゲナーゼで治療した被験者の方が、プラセボで治療した被験者よりも、７１日目の標的臀部（それぞれ約５８％対約３２％）および非標的臀部（それぞれ約６０％対約２７％）で多かった。
３５．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合は、コラゲナーゼで治療した被験者の方が、プラセボで治療した被験者よりも、７１日目の標的臀部（それぞれ約４２％対約２０％）および非標的臀部（それぞれ約４４％対約１３％）で多かった。
３６．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者の集団において、本明細書に記載のコラゲナーゼ治療により、プラセボよりも少なくとも５％高い、またはプラセボよりも少なくとも７．５％高い、またはプラセボよりも少なくとも１０％高い、またはプラセボよりも少なくとも１２．５％高い、またはプラセボよりも少なくとも１５％高い、またはプラセボよりも少なくとも２０％高い、２レベル以上の複合型応答者が得られる。
３７．全員がＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者の集団において、本明細書に記載されているコラゲナーゼ治療により、１レベル以上の複合応答者が、プラセボよりも少なくとも５％高い、または少なくとも７．５％プラセボより高い、または少なくとも１０％プラセボより高い、または少なくとも１２．５％プラセボより高い、または少なくとも１５％プラセボより高い、または少なくとも２０％プラセボより高い、または少なくとも２５％プラセボより高い、または少なくとも３０％プラセボより高い、または少なくとも３５％プラセボより高い、または少なくとも４０％プラセボより高い。
３８．ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価のベースライン（スクリーニング）からの最大の減少が、２２日目、７１日目、またはそれ以前に初めて観察された。
３９．ベースライン（治療前）において、ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者の集団において、ベースライン（スクリーニング訪問）からのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価の低下が左右で一貫している。
【０２２１】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜３９のうち１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有するものである：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２２２】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜３９のうちの１つ以上が得られる。
【０２２３】
別の例では、処理Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜３９のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２２４】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜３９のうち１つ以上の結果が得られる。
【０２２５】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域に注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜３９のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有するものである：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２２６】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜３９のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０２２７】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２２８】
他の実施形態では、上記の治療に応答して、患者は、評価時点でＣＲ−ＰＣＳＳ評価がベースラインから少なくとも２レベルの改善（−２、−３、または−４の変化）を示す２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者である。１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者は、評価時点でＣＲ−ＰＣＳＳ評価の改善がベースラインから少なくとも１レベル（変化量が−１、−２、−３、または−４）を示す患者である。評価時点でＰＲ−ＰＣＳＳ評価がベースラインから少なくとも２レベルの改善（−２、−３、または−４の変化）を示す患者が２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者である。１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者とは、評価時点でＰＲ−ＰＣＳＳ評価の改善がベースラインから少なくとも１レベル（−１、−２、−３、または−４の変化）であることを示す患者である。他の態様では、２レベルの複合応答者とは、評価時点で２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者と２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者の両方を有する患者をいう。１レベルの複合応答者とは、評価時点で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者と１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者の両方を有する患者である。
【０２２９】
２．ヘクセルセルライト重症度尺度（へクセルＣＳＳ）で測定される有効性
【０２３０】
へクセルＣＳＳでは、任意の訪問時における個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも１レベルまたは１評価の改善を指す。訪問時の患者群の改善は、ベースラインからの平均へクセルＣＳＳスコアまたは評価または以前の平均へクセルＣＳＳスコアまたは評価の約０．１の改善である。応答者とは、ベースラインから最大合計スコアまたは評価の少なくとも２５％の改善を示す任意の患者である。特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、へクセルＣＳＳで測定した以下の有効性評価項目の１つ以上が得られる：
１．ベースラインの１日目  へクセルＣＳＳ評価を有する患者集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たす結果となった：
●  重度から中等度（スコア１１〜１５から６〜１０）への移行
●  重度から軽度（スコア１１〜１５から１〜５）への移行
●  重度からゼロ（スコア１１〜１５から０）への移行
●  中程度から軽度（スコア６〜１０から１〜５）への移行
●  中程度からゼロ（スコア６〜１０から０）への移行
●  軽度からゼロ（スコア１〜５から０）への移行
２．治療領域の臨床医がライブで評価したヘクセルＣＳＳにおいて、ベースライン（治療前の「１日目」）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、少なくとも２レベルの重症度の変化。
３．治療領域のデジタル画像を見ながら臨床医が評価したヘクセルＣＳＳにおいて、ベースライン（１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、少なくとも２レベルの重症度の変化。
４．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目における２レベルの応答によって示された変化とは、臨床医による評価でヘクセルＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善した被験者と定義される。
５．治療領域の臨床医がライブで評価したヘクセルＣＳＳの重症度がベースライン（１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目のいずれかで少なくとも１レベルの重症度の変化があること。
６．治療領域のデジタル画像を見ながら臨床医が評価したヘクセルＣＳＳの重症度が、ベースライン（１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目のいずれかにおいて、少なくとも１レベルの重症度の変化があること。
７．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、５年目に１レベルの反応が示された変化とは、臨床医による評価でヘクセルＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善した被験者と定義されるものである。
８．へクセルＣＳＳ評価が中等度または重度であった患者集団において、少なくとも１つの治療領域の改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その変化が上記のＮｏ．２からＮｏ．７のうち１つ以上であること。
９．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも７１日間維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
１０．１８０日目には、ベースラインからのへクセルＣＳＳ評価の改善が、治療領域の左右で一貫して見られた。
１１．へクセルＣＳＳ評価が中等度または重度である患者の集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く２レベルのへクセルＣＳＳ改善が得られるまでの時間の中央値は、約５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１２．へクセルＣＳＳ評価が中等度または重度である患者の集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く１レベルのへクセルＣＳＳ改善が得られるまでの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１３．へクセルＣＳＳの評価が中等度または重度の患者集団において、初回治療の２１日後に被験者のへクセルＣＳＳスコアの平均値がプラセボから分離し、その後の治療でも継続して有意な改善を示した。
１４．全員が中等度または重度のへクセルＣＳＳ評価を有する患者の集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でヘクセルＣＳＳにより測定された２レベルの応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１５．全員が中等度または重度のへクセルＣＳＳ評価を有する患者の集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でヘクセルＣＳＳにより測定された１レベルの応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１６．中等度または重度のへクセルＣＳＳ評価を有する患者の集団において、治療後７１日目までに少なくとも１つの治療領域で少なくとも１レベルのへクセルＣＳＳ応答があり、へクセルＣＳＳの結果が年齢、ＢＭＩ、または肌の色に依存しない患者の３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上である。
１７．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
【０２３１】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうちの１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうちの１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２３２】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうちの１つ以上が得られる。
【０２３３】
別の例では、処理Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２３４】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうち１つ以上の結果が得られる。
【０２３５】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２３６】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２３７】
３．ヘクセルくぼみ深さスコアで測定した有効性
【０２３８】
ヘクセルくぼみ深さスコアにおいて、任意の訪問時における個々の患者の改善は、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも１レベルまたは１評価の改善を意味する。また、患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均ヘクセルくぼみ深さスコアまたは評価から約０．１の改善を意味する。応答者とは、ベースラインから最大合計スコアまたは評価の少なくとも２５％の改善を示す任意の患者である。特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、ヘクセルくぼみ深さスコアで測定される以下の有効性評価項目の１つ以上が得られる：
１．ベースラインの１日目ヘクセルくぼみ深さスコア評価を全員が有した患者集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射した結果、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たした：
●深いくぼみ（３）から中程度の深さ（２）への移行
●深いくぼみ（３）から表面的なくぼみ（１）への移行
●深いくぼみ（３）からくぼみなし（０）への移行
●中程度の深さ（２）から表面的なくぼみ（１）への移行
●中程度の深さ（２）からくぼみなし（０）への移行
●表面的なくぼみ（１）からくぼみなし（０）への移行
２．治療領域の臨床医がライブで評価したヘクセルくぼみ深さスコアの重症度がベースライン（治療前の「１日目」）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において少なくとも２レベルでの変化。
３．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において２レベル応答によって示された変化は、臨床医による評価でヘクセルくぼみ深さスコアの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善した被験者として定義される。
４．治療領域の臨床医がライブで評価したヘクセルくぼみ深さスコアの重症度がベースライン（１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において少なくとも１レベル変化したこと。
５．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に１レベル応答によって示された変化とは、臨床医による評価でヘクセルくぼみ深さスコアの重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善した被験者と定義される。
６．へクセルＣＳＳ評価で中程度または深いくぼみを有した患者集団において、少なくとも１つの治療領域での改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その変化が上記のＮｏ．２からＮｏ．７の１つ以上であること。
７．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも７１日間維持するという結果が得られ た。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
８．１８０日目に、ヘクセルくぼみ深さスコア評価のベースラインからの 改善が、治療領域の左右で一貫して見られた。
９．ヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深いくぼみを有した患者集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く２レベルのヘクセルくぼみ深さスコアの改善が得られるまでの時間の中央値は、約５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１０．ヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深い深さである患者集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く１レベルのヘクセルくぼみ深さスコアの改善が得られるまでの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１１．ヘクセルくぼみ深さスコアが中程度または深い深さである患者集団において、初回治療の２１日後に被験者の平均ヘクセルくぼみ深さスコアがプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示した。
１２．全員がヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深い深さである患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でヘクセルくぼみ深さスコアによって測定される２レベルの反応があった被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１３．全員がヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深い深さである患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でヘクセルくぼみ深さスコアによって測定された１レベルの応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％よりも大きい。
１４．ヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深い深さである患者集団において、治療後７１日目までに、患者の３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上が、少なくとも１つの治療領域で１レベルのヘクセルくぼみ深さスコアの応答を示し、ヘクセルくぼみ深さスコアの結果は、年齢、ＢＭＩ、または肌の色とは無関係である。
１５．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
１６．ベースラインから７１日目までのスコアの変化が約−０．１〜約−２．０の１つ以上の治療領域。
１７．統計的に有意な患者集団において、１つ以上の治療領域で最小二乗（ＬＳ）平均値が約−０．１〜約−１．５（９５％信頼区間（ＣＩ））であること。
【０２３９】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜１９のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２４０】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１９のうちの１つ以上が得られる。
【０２４１】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１９のうち１つ以上の結果が得られ、ここで、コラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２４２】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１９のうち１つ以上の結果が得られる。
【０２４３】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１９のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２４４】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜１９のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０２４５】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２４６】
４．美的外観のためのリッカート尺度によって測定された有効性
【０２４７】
リッカート尺度では、任意の訪問時における個々の患者の改善は、治療前または前回のスコアから少なくとも１レベルまたは１評価の改善である。任意の訪問時における患者群の改善とは、治療前または任意の以前の平均リッカートスコアまたは評価から、平均リッカートスコアまたは評価が約０．１向上することである。特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、リッカート尺度スコアで測定される以下の有効性評価項目の１つ以上が得られる：
１．セルライトを有する患者の集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たすことができた：
●リッカート尺度スコアが「改善された」（１）
●リッカート尺度スコアが「大幅に改善された」（２）
●リッカート尺度スコアが「非常に改善された」（３）
２．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目における治療領域の外観が、治療前と比較して、臨床医がライブで評価したリッカート尺度スコアで少なくとも２レベル改善されていること。
３．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目における治療領域の外観が、治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したリッカート尺度スコアで、治療前から少なくとも２レベル改善されていること。
４．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目における治療領域の外観が、治療前と比較して、臨床医がライブで評価したリッカート尺度スコアで少なくとも１レベル改善されていること。
５．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目における治療領域の外観が、治療前と比較して、治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したリッカート尺度スコアで少なくとも１レベル改善されていること。
６．セルライトを有する患者の集団において、少なくとも１つの治療領域におけるリッカート尺度スコアの改善が統計的に有意であり、その改善が上記のＮｏ．２からＮｏ．７のうちの１つ以上であること。
７．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも７１日間維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、または２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
８．１８０日目に、ベースラインからのリッカート尺度スコア評価で見られた改善は、右と左の治療領域で一貫していた。
９．セルライトを有する患者の集団において、少なくとも１つの治療領域における最も早い２レベルのリッカート尺度スコアの改善までの時間の中央値は、約５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１０．セルライトを有する患者の集団では、少なくとも１つの治療領域における最も早い１レベルのリッカート尺度スコアの改善までの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１１．セルライトを有する患者集団において、被験者のリッカート尺度スコアの平均値は、初回治療の２１日後にプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示した。
１２．セルライトを有する患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でリッカート尺度スコアによって測定される２レベルの反応を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１３．セルライトを有する患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でリッカート尺度スコアによって測定される１レベルの応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１４．セルライトを有する患者集団において、３分の１以上、または２分の１、または３分の２、または４分の３の患者が、治療後７１日目までに少なくとも１つの治療領域で少なくとも１レベルのリッカート尺度スコアの反応を有し、リッカート尺度スコアの結果は、年齢、ＢＭＩ、または肌の色とは無関係である。
１５．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
【０２４８】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜１５のうちの１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうちの１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２４９】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１５のうちの１つ以上が得られる。
【０２５０】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１５のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２５１】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１５のうち１つ以上の結果が得られる。
【０２５２】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１５のうちの１つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２５３】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜１５のうちの１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２５４】
５．陥凹部分析
【０２５５】
特定の実施形態では、コラゲナーゼによるセルライトの治療は、以下のように陥凹部サイズのパラメータを減少させる：
●深さ：約１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２５％、または２０％、または１５％、または１０％、または５％、または２．５％、または２％、または１％
●幅：約１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２５％、または２０％、または１５％、または１０％、または５％、または２．５％、または２％、または１％
●長さ：約１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２５％、または２０％、または１５％、または１０％、または５％、または２．５％、または２％、または１％
●全体の体積：約１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２５％、または２０％、または１５％、または１０％、または５％、または２．５％、または２％、または１％
●表面積：約１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２５％、または２０％、または１５％、または１０％、または５％、または２．５％、または２％、または１％
【０２５６】
いくつかの実施形態では、治療の結果、少なくとも５％の患者が初回投与後少なくとも７１日間、治療前のベースラインに対する改善レベルを維持した。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。他の実施形態では、治療により、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対して改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の増加を示した。一部の治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
【０２５７】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問時に約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、陥凹部サイズパラメータの少なくとも１つが少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％減少し、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２５８】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、陥凹部サイズパラメータの少なくとも１つが、少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％減少する。
【０２５９】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、陥凹部サイズパラメータの少なくとも１つが少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％減少し、ここでコラゲナーゼは以下の特性の１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２６０】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、陥凹部サイズのパラメータの少なくとも１つが、少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％減少する。
【０２６１】
特定の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問時に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼとＩＩ型コラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注入し、陥凹部サイズパラメータの少なくとも１つを少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％減少させる結果となり、Ｉ型コラゲナーゼおよびＩＩ型は以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２６２】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、陥凹部サイズパラメータの少なくとも１つを少なくとも５％、または少なくとも１０％、または少なくとも２０％減少させる結果となり、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２６３】
６．被験者グローバル美的改善尺度（Ｓ−ＧＡＩＳ）および調査員グローバル美的改善尺度（Ｉ−ＧＡＩＳ）で測定される有効性
上記で詳述した治療方法により、Ｓ−ＧＡＩＳおよびＩ−ＧＡＩＳで測定される応答が改善される。２レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者とは、評価時点でＳ−ＧＡＩＳ評価が少なくとも２（＋２または＋３）の被験者である。１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者は、評価時点でＳ−ＧＡＩＳ評価が少なくとも１（＋１、＋２、＋３）の被験者である。２レベルのＩ−ＧＡＩＳ応答者は、評価時点でＩ−ＧＡＩＳ評価が少なくとも２（＋２または＋３）の被験者である。１レベルのＩ−ＧＡＩＳ応答者とは、評価時点でＩ−ＧＡＩＳ評価が少なくとも１（＋１、＋２、または＋３）の被験者である。任意の訪問時における個々の患者の改善とは、ベースラインまたはそれ以前のスコアから少なくとも１レベルまたは１評価の改善をいう。患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約０．１向上することをいう。
【０２６４】
特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、Ｓ−ＧＡＩＳおよび／またはＩ−ＧＡＩＳで測定される以下の有効性評価項目の１つ以上が得られる：
１．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たす：
●Ｓ−ＧＡＩＳおよび／またはＩ−ＧＡＩＳのスコアが「改善された」（＋１）
●Ｓ−ＧＡＩＳおよび／またはＩ−ＧＡＩＳのスコアが「大幅に改善された」（＋２）
●Ｓ−ＧＡＩＳおよび／またはＩ−ＧＡＩＳのスコアが「非常に改善された」（＋３）
２．治療領域の臨床医がライブで評価したＩ−ＧＡＩＳにおいて、２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、３６５日目、または７３０日目に少なくとも２レベルの改善が見られたこと。
３．治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＳ−ＧＡＩＳにおいて、２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、３６５日目、または７３０日目に少なくとも２レベルの改善が見られたこと。
４．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、３６５日目、または７３０日目に２レベルの複合応答で示される改善とは、臨床医の評価でＩ−ＧＡＩＳが少なくとも２レベル改善し、患者の評価でＳ−ＧＡＩＳが少なくとも２レベル改善した被験者と定義される。
５．治療領域の臨床医がライブで評価したＩ−ＧＡＩＳにおいて、２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、３６５日目、または７３０日目に、少なくとも１レベルの改善が見られたこと。
６．治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＳ−ＧＡＩＳにおいて、２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、３６５日目、または７３０日目に、少なくとも１レベルの改善が見られたこと。
７．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、３６５日目、または７３０日目に１レベルの複合応答で示される改善とは、臨床医による評価でＩ−ＧＡＩＳが少なくとも１レベル改善し、患者による評価でＳ−ＧＡＩＳが少なくとも１レベル改善した被験者と定義される。
８．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域におけるＩ−ＧＡＩＳおよび／またはＳ−ＧＡＩＳの改善が、プラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記のＮｏ．２からＮｏ．７の１つ以上である。
９．この治療により、少なくとも５％の患者が初回投与後７１日間、その改善レベルを維持した。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。他のケースでは、少なくとも５％の患者が改善を示し、時間の経過とともに改善の度合いがさらに高まった。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
１０．１８０日目において、Ｉ−ＧＡＩＳおよびＳ−ＧＡＩＳ評価に見られる改善は、治療領域の左右で一貫していた。
１１．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域における最も早い２レベルのＩ−ＧＡＩＳおよび／またはＳ−ＧＡＩＳの改善までの時間の中央値は、約５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１２．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域における最も早い１レベルのＩ−ＧＡＩＳおよび／またはＳ−ＧＡＩＳの改善までの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１３．セルライトを有する患者集団において、被験者のＩ−ＧＡＩＳおよび／またはＳ−ＧＡＩＳの平均値は、初回治療の２１日後にプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示した。
１４．セルライトを有する患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＩ−ＧＡＩＳおよび／またはＳ−ＧＡＩＳによって測定される２レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％よりも大きい。
１５．セルライトを有する患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＩ−ＧＡＩＳおよび／またはＳ−ＧＡＩＳによって測定される１レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％よりも大きい。
１６．セルライトを有する患者集団において、患者の３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上が、治療後７１日目までに少なくとも１つの治療領域で少なくとも１レベルのＩ−ＧＡＩＳおよび／またはＳ−ＧＡＩＳ応答を有し、ＧＡＩＳ結果は年齢、ＢＭＩ、または肌の色に依存しない。
１７．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
１８．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも６０％の患者が７１日目に標的臀部で１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。
１９．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも２０％の患者が７１日目に標的臀部で２レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。
２０．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目では、プラセボで治療した被験者と比較して、標的臀部にコラゲナーゼで治療した被験者で平均Ｓ−ＧＡＩＳが大きくなった（それぞれ約１．０対約０．５）。非標的臀部についても同様の結果が得られた（コラゲナーゼ治療を受けた被験者では約１．０、プラセボ治療を受けた被験者では約０．５）。
２１．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目で、１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者の割合は、標的臀部（それぞれ約７０％対約４０％）および非標的臀部（それぞれ約７０％対約４０％）において、コラゲナーゼで治療した被験者がプラセボで治療した被験者よりも多くなった。
２２．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目では、標的臀部にコラゲナーゼを投与した被験者の平均Ｉ−ＧＡＩＳは、プラセボを投与した被験者と比較して、統計的に有意に大きかった（それぞれ約１．０対０．３）。非標的臀部についても同様の結果が得られた（コラゲナーゼ治療を受けた被験者では約０．６、プラセボ治療を受けた被験者では約０．１）。
２３．ＣＲ−ＰＣＳＳ及び／又はＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度又は重度の患者集団において、７１日目で、１レベルのＩ−ＧＡＩＳ応答者の割合は、標的臀部（それぞれ約７０％対２５％）及び非標的臀部（それぞれ７０％対２５％）において、コラゲナーゼで治療された被験者がプラセボで治療された被験者よりも多くなった。
２４．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者の集団において、一連のクロス集計により、ＰＲ−ＰＣＳＳとＳ−ＧＡＩＳの間に一貫性があることが示された。ＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの変化は、Ｓ−ＧＡＩＳの同様の変化と関連していた。
【０２６５】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜２４のうち１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２６６】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜２４のうちの１つ以上が得られる。
【０２６７】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜２４のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２６８】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜２４のうち１つ以上の結果が得られる。
【０２６９】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜２４のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０２７０】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２７１】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜２４のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２７２】
実施例２および３でさらに説明したように、患者は、標的および非標的臀部においてＳ−ＧＡＩＳを用いてベースラインと比較して治療後の改善度を評価した。図１１に示すように、ＣＣＨによる治療は、Ｓ−ＧＡＩＳによって測定された≧２レベルおよび≧１レベルの応答によって示されるように、プラセボよりも有意に良好であった。
【０２７３】
７．ＰＲ−ＣＩＳで測定された有効性
以上のような治療方法により、ＰＲ−ＣＩＳで測定される応答が改善される。ＰＲ−ＣＩＳのトータルスコアは、尺度の６つの項目の合計である。ＰＲ−ＣＩＳのトータルスコアは０〜６０の範囲で、数値が高いほどセルライトの影響が大きいことを示している。ＰＲ−ＣＩＳの項目１は、セルライトの出現にどの程度満足しているかを問うもので、被験者が報告した評価を１０から引くことで逆転する。ＰＲ−ＣＩＳトータルスコアでは、評価時点でＰＲ−ＣＩＳトータルスコアがベースラインから１２以上減少した被験者を応答者とした。個々のＰＲ−ＣＩＳインパクトスコアについては、各時点でベースラインから少なくとも２つのスコア間隔で改善した場合を応答とする。さらに、応答者とは、最大トータルスコアがベースラインから少なくとも２０％の改善を示した患者を指す。また、個々の患者の各訪問時における改善とは、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも１レベルまたは１評価の改善を意味する。また、患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約０．１向上することである。さらに、改善とは、ベースラインからの変化が６０のうち少なくとも１レベルであることをいう。
【０２７４】
特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、ＰＲ−ＣＩＳで測定した以下の有効性評価項目の１つ以上が得られる：
１．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たす：
●ＰＲ−ＣＩＳは、セルライトの見た目に対する満足度、気になること、自覚、恥ずかしさ、老けて見えること、太って見えること／体型が崩れて見えることからなる群から選択された少なくとも１つの分野において改善を示すこと。
●１つ以上の評価時点で、ＰＲ−ＣＩＳトータルスコアがベースラインから１２以上低下すること。
●ＰＲ−ＣＩＳインパクトスコアが、１つ以上の評価時点において、ベースラインから少なくとも２スコア間隔の改善を示すこと。
●改善とは、ベースラインからの変化が６０のうち少なくとも１レベルであること。
２．治療領域のＰＲ−ＣＩＳにおいて、２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または、５年目に、ベースライン（治療前の「１日目」）から少なくとも１２ポイントの重症度の改善が認められること。
３．セルライトを有する患者集団において、治療領域のＰＲ−ＣＩＳで、ベースライン（治療前の第１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に、重症度がプラセボに対して統計的に有意に少なくとも１２ポイント改善すること。
４．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを７１日以上維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
５．１８０日目に、ベースラインからのＰＲ−ＣＩＳ評価の改善が、治療領域の左右で一貫して見られた。
６．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域について、１つ以上の評価時点でＰＲ−ＣＩＳトータルスコアがベースラインから少なくとも１２減少するまでの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
７．セルライトを有する患者集団において、初回治療の２１日後に被験者のＰＲ−ＣＩＳスコアの平均値がプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示す。８．セルライトを有する患者集団において、３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上の患者が、治療後７１日目までに、少なくとも１つの治療領域において、１つ以上の評価時点でベースラインから少なくとも１２のＰＲ−ＣＩＳトータルスコアの減少を有し、ＰＲ−ＣＩＳの結果は、年齢、ＢＭＩまたは肌の色に依存しない。
９．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
１０．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目のＰＲ−ＣＩＳトータルスコアのベースラインからの平均変化量は、コラゲナーゼ治療を受けた被験者では約−１０、プラセボ治療を受けた被験者では約−５であった。
１１．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目のベースラインからのＰＲ−ＣＩＳ変化量の平均値は、トータルスコア（それぞれ約−１２対−６）および短縮スコア（それぞれ約−１０対５）、ならびに個人のインパクトスコア（セルライトの外観に対する満足度、煩わしさ、自意識、恥ずかしさ、老けた外観、体型への懸念）において、コラゲナーゼ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者で統計的に有意に良好であった。
１２．７１日目にＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、ＰＲ−ＣＩＳの奏効者の割合は、コラゲナーゼを投与された被験者の方が、プラセボを投与された被験者よりも、トータルスコア（それぞれ約４５％対約２０％）および短縮スコア（それぞれ約５０％対約２５％）で大きくなった。さらに、個々のインパクトスコアについても、プラセボ投与群よりもコラゲナーゼ投与群の方が、回答者の割合が多かった。これらの差も統計的に有意であった。
【０２７５】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうち１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有するものである：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２７６】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうちの１つ以上が得られる。
【０２７７】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２７８】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうち１つ以上の結果が得られる。
【０２７９】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうちの１つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０２８０】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２８１】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうちの１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２８２】
実施例２および３でさらに説明したように、ＣＣＨ対プラセボのＰＲ−ＣＩＳを用いて、治療後の患者の改善度をベースラインと比較して評価した。図１１に示すように、ＣＣＨによる治療は、プラセボよりも有意に良好であった。
【０２８３】
８．ＰＲ−ＣＩＳ省略形で測定された有効性
上記の治療方法により、ＰＲ−ＣＩＳ省略形で測定される応答が改善される。ＰＲ−ＣＩＳ省略形のトータルスコアは、尺度の５つの項目の合計になる。ＰＲ−ＣＩＳ省略形のトータルスコアは０〜５０の範囲で、数値が高いほどセルライトによる悪影響が大きいことを示している。ＰＲ−ＣＩＳの項目１は、セルライトの出現について被験者がどの程度満足しているかを問うものであり、被験者が報告した評価を１０から引くことで逆転する。ＰＲ−ＣＩＳ省略形トータルスコアでは、評価時点でＰＲ−ＣＩＳトータルスコアがベースラインから１０以上減少した被験者を応答者とする。個々のＰＲ−ＣＩＳ省略形インパクトスコアについては、各時点でベースラインから少なくとも２つのスコア間隔で改善した場合を応答とする。さらに、応答者とは、最大トータルスコアがベースラインから少なくとも２０％の改善を示した患者を指す。また、個々の患者については、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも１レベルまたは１評価の改善が見られた場合をいう。また、患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約０．１向上することである。さらに、改善とは、ベースラインからの変化が５０のうち少なくとも１レベルであることをいう。
【０２８４】
特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、ＰＲ−ＣＩＳ省略形で測定した以下の有効性評価項目の１つ以上が得られる：
１．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たす：
●ＰＲ−ＣＩＳ省略形では、セルライトの見た目に対する満足度、気になること、自覚、恥ずかしさ、老けて見えること、太って見えること／体型が崩れて見えることからなる群から選択された少なくとも１つの分野において改善を示すこと。
●１つ以上の評価時点で、ＰＲ−ＣＩＳ省略形の合計スコアがベースラインから１０以上低下すること。
●ＰＲ−ＣＩＳ省略形インパクトスコアが、１つ以上の評価時点において、ベースラインから少なくとも２スコア間隔の改善を示すこと。
●さらに、改善とは、ベースラインからの変化が５０のうち少なくとも１レベルであること。
２．治療領域のＰＲ−ＣＩＳ省略形において、２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に、ベースライン（治療前の「１日目」）から少なくとも１２ポイントの重症度の改善が認められること。
３．セルライトを有する患者集団において、治療領域のＰＲ−ＣＩＳ省略形において、ベースライン（治療前の第１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に、重症度がプラセボに対して統計的に有意に少なくとも１０ポイント改善すること。
４．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを７１日以上維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらなる改善が見られた。
５．１８０日目において、ＰＲ−ＣＩＳ省略形評価のベースラインからの改善は、治療領域の左右で一貫して見られた。
６．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域について、１つ以上の評価時点でＰＲ−ＣＩＳ省略形のトータルスコアがベースラインから少なくとも１０減少するまでの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
７．セルライトを有する患者集団において、初回治療の２１日後に被験者のＰＲ−ＣＩＳ省略形スコアの平均値がプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示す。
８．セルライトを有する患者集団において、３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上の患者が、治療後７１日目までに、少なくとも１つの治療領域において、１つ以上の評価時点でベースラインから少なくとも１０のＰＲ−ＣＩＳ略式トータルスコアの減少を有し、ＰＲ−ＣＩＳの結果は、年齢、ＢＭＩまたは肌の色に依存しない。
９．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
１０．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目のＰＲ−ＣＩＳ省略形トータルスコアのベースラインからの平均変化量は、コラゲナーゼ治療を受けた被験者では約−１０、プラセボ治療を受けた被験者では約−５であった。
１１．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目のベースラインからのＰＲ−ＣＩＳ省略形の変化の平均値は、コラゲナーゼ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者とでは、トータルスコア（それぞれ約−１２対約−６）および略式スコア（それぞれ約−１０対約５）において統計的に有意に良好であった。また、個々のインパクトスコア（セルライトの外観に対する満足度、煩わしさ、自覚、恥ずかしさ、老けた外観、体型への懸念）においても、コラゲナーゼ投与群とプラセボ投与群の間で統計的に有意な変化が認められた。
１２．７１日目にＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、ＰＲ−ＣＩＳ略式化反応者の割合は、コラゲナーゼを投与された被験者の方が、プラセボを投与された被験者よりも、トータルスコア（それぞれ約４５％対２０％）および略式スコア（それぞれ約５０％対２５％）で大きくなりた。さらに、個々のインパクトスコアについても、プラセボ投与群よりもコラゲナーゼ投与群の方が、回答者の割合が多かった。これらの差も統計的に有意であった。
【０２８５】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうち１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有するものである：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２８６】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜９のうちの１つ以上が得られる。
【０２８７】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２８８】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうち１つ以上の結果が得られる。
【０２８９】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうちの１つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０２９０】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２９１】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜１２のうちの１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０２９２】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２９３】
９．被験者自己評価尺度（ＳＳＲＳ）で測定された有効性
以上のような治療方法により、ＳＳＲＳで測定される改善効果が得られた。ＳＳＲＳ応答者とは、評価時点で患部のセルライトの外観に少なくともやや満足（やや満足［４］、非常に満足［５］、または極めて満足［６］）している被験者のことである。さらに、ベースラインから最大トータルスコアが１７％以上改善した患者を応答者とする。任意の訪問時における個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも１レベルまたは１評価の改善を意味する。任意の訪問時の患者群の改善は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約０．１の改善である。特定の実施形態では、治療方法は、ＳＳＲＳ評価によって測定される以下の有効性評価項目の１つ以上をもたらす：
１．セルライトを有する患者の集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たすことができる：
●「やや満足」のＳＳＲＳ評価
●「満足」のＳＳＲＳ評価
●「極めて満足」のＳＳＲＳ評価
２．ベースライン（治療前の「１日目」）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に、治療領域のＳＳＲＳ評価が少なくとも２レベル改善すること。
３．ベースライン（１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に、治療領域のＳＳＲＳ評価が少なくとも１レベル改善すること。
４．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域におけるＳＳＲＳ評価の改善が、プラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記のＮｏ．２〜Ｎｏ．３のうちの１つ以上であること。
５．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも７１日間維持するという治療結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
６．初回注射後１８０日目に、ＳＳＲＳ評価のベースラインからの改善は、治療領域の左右で一貫して見られた。
７．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早い２レベルのＳＳＲＳ評価の改善までの時間の中央値は、約５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
８．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域における最も早い１レベルのＳＳＲＳ評価の改善までの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
９．セルライトを有する患者集団において、初回治療の２１日後に被験者のＳＳＲＳ評価の平均値がプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示す。
１０．セルライトを有する患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＳＳＲＳ評価によって測定される２レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１１．セルライトを有する患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＳＳＲＳ評価により測定される１レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１２．セルライトを有する患者集団において、３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上の患者が、治療後７１日目までに少なくとも１つの治療領域で少なくとも１レベルのＳＳＲＳ評価応答を有し、ＳＳＲＳ評価結果は、年齢、ＢＭＩ、または肌の色とは無関係である。
１３．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
１４．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、７１日目に少なくとも４０％の患者が１レベルのＳＳＲＳ応答者となった。
１５．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度である患者集団において、７１日目で、ＳＳＲＳスコアの平均値は、コラゲナーゼを投与した被験者がプラセボを投与した被験者よりも統計的に有意に大きい。
１６．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも５０％の患者が１レベルのＳＳＲＳ応答者である。
【０２９４】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜１６のうち１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有するものである：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２９５】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１６のうちの１つ以上が得られる。
【０２９６】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１６のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０２９７】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１６のうち１つ以上の結果が得られる。
【０２９８】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１６のうちの１つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０２９９】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１６のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０３００】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０３０１】
１０．セルライト治療に対する被験者の満足度（ＳＳＣＴ）で測定される有効性
上記に詳述された治療方法により、ＳＳＣＴで測定された改善が得られる。７１日目のＳＳＣＴ評価で「満足」または「非常に満足」の回答を得た被験者は、有効性を示す応答者とみなされる。個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアや評価から少なくとも１レベルまたは１評価の改善を意味する。また、患者群の改善とは、ベースラインまたはそれ以前の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約０．１ポイント改善したことをいう。さらに、ＳＳＣＴでは、プラセボと比較して少なくとも０．１の改善がある。特定の実施形態では、治療方法は、ＳＳＣＴ評価によって測定される以下の有効性評価項目の１つ以上をもたらす：
１．セルライトを有する患者の集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たすことができた：
●「満足」のＳＳＣＴ評価
●「非常に満足」のＳＳＣＴ評価
２．治療領域の２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目におけるＳＳＣＴ評価の上昇（例えば、１から２など）。
３．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域におけるＳＳＣＴ評価の増加が、プラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、５年目のいずれかの時点であったことが確認された。
４．この治療法により、少なくとも５％の患者が初回投与後７１日間、その改善レベルを維持した。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。他のケースでは、少なくとも５％の患者が改善を示し、時間の経過とともに改善の度合いがさらに高まった。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらなる改善が見られた。
５．１８０日目の時点で、ＳＳＣＴ評価で見られた改善は治療領域の左右で一貫している。
６．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域における最も早いＳＳＣＴ評価の改善までの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
７．セルライトを有する患者集団において、平均的な被験者のＳＳＣＴ評価は、最初の治療の２１日後にプラセボと分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示す。
８．セルライトを有する患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＳＳＣＴ評価が改善された被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％よりも大きい。
９．セルライトを有する患者集団において、治療後７１日目までに、患者の３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上が、少なくとも１つの治療領域において改善されたＳＳＣＴ評価を有し、ＳＳＣＴ評価の結果は、年齢、ＢＭＩ、または肌の色とは無関係である。
１０．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
１１．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度である患者集団において、１８０日目に半数以上の患者が治療に満足または非常に満足している。
１２．ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、１８０日目に持続したＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ評価の低下と被験者満足度調査のスコアは、０．８４ｍｇ  ＣＣＨを１治療あたり１２回（×２治療領域）、両側の臀部または両側の大腿部に皮下注射する３つの治療セッションがセルライトの減少に有効であることを示している。
１３．ＣＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中等度または重度の患者集団において、コラゲナーゼによる治療を受けた患者の少なくとも５０％が、セルライト治療に満足または非常に満足している。
１４．ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目の被験者満足度の平均値に、コラゲナーゼ治療群とプラセボ治療群の間に統計的に有意な差が認められた。
【０３０２】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜１４のうち１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有するものである：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０３０３】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１４のうちの１つ以上が得られる。
【０３０４】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注入により、上記の結果Ｎｏ．１〜１４のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０３０５】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１４のうち１つ以上の結果が得られる。
【０３０６】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注入され、上記の結果Ｎｏ．１〜１４のうちの１つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０３０７】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０３０８】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜１４のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０３０９】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０３１０】
１１．大腿部セルライト重症度−患者（ＴＣＳ−Ｐ）、大腿部セルライト重症度−臨床医（ＴＣＳ−Ｃ）で測定される有効性
任意の訪問時における個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアもしくは評価から少なくとも１レベルまたは１等級の改善を意味する。患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約０．１向上したことをいう。応答者とは、ベースラインから最大合計スコアまたは評価の少なくとも２０％の改善を示す任意の患者である。特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、ＴＣＳ−Ｃおよび／またはＴＣＳ−Ｐによって測定される以下の有効性評価項目の１つ以上が得られる：
１．ＴＣＳ−Ｃおよび／またはＴＣＳ−Ｐの評価がベースラインと比較して０．１以上改善していること。
２．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、標的大腿部の臨床医がライブで評価したＴＣＳ−Ｃの重症度が少なくとも２レベル改善すること。
３．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、標的大腿部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＴＣＳ−Ｐの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも２レベル改善すること。
４．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に２レベルの複合応答で示された改善とは、ＴＣＳ−Ｃでベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善があり、ＴＣＳ−Ｐでベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善があった被験者と定義される。
５．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、標的大腿部の臨床医がライブで評価したＴＣＳ−Ｃの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも１レベル改善すること。
６．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目において、対象の大腿部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＴＣＳ−Ｐの重症度が、ベースライン（１日目）から少なくとも１レベル改善すること。
７．２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に１レベルの複合応答で示された改善とは、ＴＣＳ−Ｃでベースラインから少なくとも１レベルの重症度の改善があり、ＴＣＳ−Ｐでベースラインから少なくとも１レベルの重症度の改善があった被験者と定義される。
８．ＴＣＳ−Ｃ評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも１つの治療領域での改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記のＮｏ．１〜７の１つ以上であること。
９．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも７１日間維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
１０．１８０日目に、ベースラインからのＴＣＳ−Ｃおよび／またはＴＣＳ−Ｐ評価の改善が、左右の大腿部で一貫して見られた。
１１．ＴＣＳ−Ｃ評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも１つの治療領域で最も早く２レベルのＴＣＳ−Ｃおよび／またはＴＣＳ−Ｐの改善が得られるまでの時間の中央値は、約５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１２．ＴＣＳ−Ｃ評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも１つの治療領域において、最も早い１レベルのＴＣＳ−Ｃおよび／またはＴＣＳ−Ｐの改善までの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
１３．ＴＣＳ−Ｃ評価が中等度または重度の患者集団において、初回治療の２１日後に被験者のＴＣＳ−Ｃおよび／またはＴＣＳ−Ｐスコアの平均値がプラセボと比較して分離し、その後の治療で継続的かつ有意な改善を示した。
１４．ＴＣＳ−Ｃ評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＴＣＳ−Ｃおよび／またはＴＣＳ−Ｐによって測定される２レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１５．ＴＣＳ−Ｃ評価が中等度または重度の患者集団において、７１日目に少なくとも１つの治療領域でＴＣＳ−Ｃおよび／またはＴＣＳ−Ｐによって測定される１レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約１％〜１０％、１０％〜２０％、２０％〜３０％、３０％〜４０％、４０％〜５０％、または５０％より大きい。
１６．全員が中等度または重度のＴＣＳ−Ｃ評価を有する患者の集団において、治療後７１日目までに少なくとも１つの治療領域で少なくとも１レベルのＴＣＳ−Ｃおよび／または少なくとも１レベルのＴＣＳ−Ｐ応答を有する患者の３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上が、ＴＣＳ−Ｃの結果が年齢、ＢＭＩ、または肌の色とは無関係である。
１７．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
【０３１１】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうちの１つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうちの１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０３１２】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうちの１つ以上が得られる。
【０３１３】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち１つ以上を有する：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０３１４】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうち１つ以上の結果が得られる。
【０３１５】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０３１６】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０３１７】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜１７のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
【０３１８】
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０３１９】
１２．Ｂｏｄｙ−Ｑで測定された有効性
上記の治療法により、Ｂｏｄｙ−Ｑで測定される応答が改善される。セルライトについては、過去１週間の間に「全く気にならない」から「非常に気になる」までの範囲で患者が回答できる１６の尺度の項目があり、フレッシュ・キンケイド級の読解力を想定している。スコアの範囲は、１６（非常に気になる）から６４（全く気にならない）までである。Ｂｏｄｙ−Ｑトータルスコアでは、評価時点でＢｏｄｙ−Ｑトータルスコアがベースラインから１６以上増加した被験者を応答者とする。個々のＢｏｄｙ−Ｑインパクトスコアについては、各時点でベースラインから少なくとも１つのスコア間隔の改善があることが応答である。代替的な実施形態では、尺度項目は１６より多くても少なくてもよく、応答者は、ベースラインから最大トータルスコアの少なくとも２５％の改善を示す任意の患者である。
【０３２０】
特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、Ｂｏｄｙ−Ｑで測定した以下の１つ以上の有効性評価項目が得られる：
１．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１回の治療訪問時に少なくとも１つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の１つ以上を満たす：
●  Ｂｏｄｙ−Ｑは、以下からなる群から選択された少なくとも１つの分野で改善を示す：
〇  １つ以上の評価時点で、Ｂｏｄｙ−Ｑのトータルスコアがベースラインから１６以上増加すること
〇  個々のＢｏｄｙ−Ｑインパクトスコアについて、各時点でベースラインから少なくとも１つのスコア間隔の改善があること、および
〇  最大トータルスコアがベースラインから少なくとも２５％改善すること。
●  １つ以上の評価時点において、Ｂｏｄｙ−Ｑのトータルスコアがベースラインから１６以上増加する。
●  １つ以上の評価時点で、Ｂｏｄｙ−Ｑインパクトスコアがベースラインから少なくとも１スコア間隔の改善を示す。
●  ９０日目および／または１８０日目のセルライトに関するＢｏｄｙ−Ｑ評価のベースラインからの平均変化
２．ベースライン（治療前の「１日目」）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に、標的臀部のＢｏｄｙ−Ｑにおいて少なくとも１６ポイント増加という重症度の改善。
３．セルライトを有する患者集団において、ベースライン（治療前の１日目）から２２日目、４３日目、７１日目、９０日目、１８０日目、２５１日目、３６０日目、４３１日目、７２０日目、３年目、４年目、または５年目に、標的臀部のＢｏｄｙ−Ｑにおいて少なくとも１６ポイント増加することによって示される、プラセボに対する重症度の統計学的に有意な改善。
４．初回投与後、少なくとも５％の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを７１日以上維持するという結果が得られ た。特定のケースでは、少なくとも１０％、または２０％、または３０％、または、４０％、または５０％の患者が、初回投与後、少なくとも６ヶ月、または９ヶ月、または１２ヶ月、または１８ヶ月、または２年、または３年、または４年、または５年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも５％の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％の患者が改善を示し、初回治療、２回目の治療、３回目の治療の１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後、９ヶ月後、１２ヶ月後、１８ヶ月後、２４ヶ月後に、さらに改善が見られた。
５．最初の注射から１８０日目に、ベースラインからのＢｏｄｙ−Ｑ評価の 改善は、左右の臀部で一貫して見られた。
６．セルライトを有する患者集団において、少なくとも１つの治療領域について、１つ以上の評価時点でベースラインからＢｏｄｙ−Ｑトータルスコアが少なくとも１６増加するまでの時間の中央値は、約１５日、または２０日、または３０日、または４０日、または５０日、または６０日、または７０日、または８０日、または９０日である。
７．セルライトを有する患者集団において、初回治療の２１日後に被験者の平均Ｂｏｄｙ−Ｑスコアがプラセボから分離し、その後の治療でも継続して有意な改善を示す。
８．セルライトを有する患者集団において、３分の１以上、または２分の１以上、または３分の２以上、または４分の３以上の患者が、治療後７１日目までに、少なくとも１つの治療領域において、１つ以上の評価時点でベースラインから少なくとも１６のＢｏｄｙ−Ｑトータルスコアの増加を有し、Ｂｏｄｙ−Ｑの結果は、年齢、ＢＭＩ、または肌の色とは無関係である。
９．セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約７、または１４、または２１、または３０、または３５、または４０、または４５、または５０日以内に急速に起こる。
【０３２１】
別の実施形態では、少なくとも１回の治療訪問中に、約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼを少なくとも１つの治療領域に注射することにより、上記の結果Ｎｏ．１〜９のうち１つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼは以下の特性のうち１つ以上を有するものである：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０３２２】
他のケースでは、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜９のうちの１つ以上が得られる。
【０３２３】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのコラゲナーゼの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜９のうちの１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうちの１つ以上を有している：
●  約０．０８〜７．７０（ＳＲＣアッセイ）、または約０．３〜３０．５（ＧＰＡアッセイ）のＶｍａｘ（分−１）
●  約４．１〜４１０ナノモル（ＳＲＣアッセイ）、または約０．０３〜３．１ｍＭ（ＧＰＡアッセイ）のＫＭ
●  約１．１〜１０７（ＳＲＣアッセイ）、または約９３〜９，１７９（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ（秒−１）
●  約３７６〜３７，２２２（ＳＲＣアッセイ）、または約４〜４２８（ＧＰＡアッセイ）の１／Ｋｃａｔ、マイクロ秒
●  約５，１４０〜５０８，８１４（ＳＲＣアッセイ）、または約６０〜５，９３４（ＧＰＡアッセイ）のＫｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１
●  約６０ｋＤａ〜約１３０ｋＤａ、または約７０〜約１３０ｋＤａ、または約８０〜約１２０ｋＤａ、または約９０〜約１２０ｋＤａ、または約１００〜約１１０ｋＤａの分子量
●  逆相ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）で測定した面積比の純度は少なくとも８０％
●  約５００〜３０，０００個のＳＲＣ単位／ｍｇの力価（すなわち、比活性）
●  約５，０００〜約３０，０００ｆ−ＳＲＣ単位／ｍｇの力価
●  約１００，０００〜約４００，０００ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約１７５，０００〜約５００，００ｆ−ＧＰＡ単位／ｍｇの力価
●  約５，０００〜約２５，０００ＡＢＣ単位／ｍｇの力価
●  クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で１％以下
●  １ｃｆｕ／ｍＬ以下のバイオバーデン
【０３２４】
別の例では、治療Ｉによる約１ｍｇ〜約２０ｍｇのＣＣＨの注射により、上記の結果Ｎｏ．１〜９のうち１つ以上の結果が得られる。
【０３２５】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが、少なくとも１回の治療訪問中に少なくとも１つの治療領域に注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜９のうちの１つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０３２６】
特定の実施形態では、約１ｍｇ〜約２０ｍｇの約１：１の比率のＩ型コラゲナーゼおよびＩＩ型コラゲナーゼが治療Ｉを採用して注射され、上記の結果Ｎｏ．１〜９のうち１つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼＩおよびＩＩは以下の特徴を有する：
●  Ｉ型
〇  アッセイ：ＳＲＣマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．０８〜７．７０
〇  ＫＭ：約４．１〜４１０ナノモル
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約１．１〜１０７
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約３７６〜３７，２２２
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約５，１４０〜５０８，８１４
●  ＩＩ型
〇  アッセイ：ＧＰＡマイクロプレート
〇  Ｖｍａｘ、分−１：約０．３〜３０．５
〇  ＫＭ、ｍＭ：約０．０３〜３．１
〇  Ｋｃａｔ、秒−１：約９３〜９，１７９
〇  １／Ｋｃａｔ、マイクロ秒：約４〜４２８
〇  Ｋｃａｔ／ＫＭ、ｍＭ−１秒−１：約６０〜５，９３４
他の比率を採用してもよい（例えば、０．１〜２：１、または０．２５〜２：１、または０．５〜２：１、または０．７５〜２：１、または１：０．１〜２、または１：０．２５〜２、または１：０．５〜２、または１：０．７５〜２、または１：０、または０：１）。さらに、Ｉ型およびＩＩ型コラゲナーゼは、それぞれＡＵＸ−ＩおよびＡＵＸ−ＩＩであってもよい。
【０３２７】
１３．３Ｄ写真／画像で測定される治療効果の評価
導入  ３Ｄ写真やその他の画像は、治療効果の評価、特に陥凹部分析やあざの分析に使用することができる。３Ｄ画像を用いたくぼみ分析（上記で定義）は、くぼみの体積、長さ、幅、および面積の計算を含むことができる。計算は、ＥｃｋｈｏｕｓｅらのＷＯ２０１８／１１６３０４およびＷＯ２０１８／１１６３０５、Ｃｈｅｒｒｙ  Ｉｍａｇｉｎｇに記載されているものや、Ｃａｎｆｉｅｌｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．から入手可能なものなど、様々な既知の方法によって行うことができる。体積、長さ、幅、および面積のそのような測定値は、デジタル３Ｄグレー尺度画像（ＸおよびＹ軸回転機能付き）およびデジタル３Ｄテクスチャおよび照明付き画像（ＸおよびＹ軸回転機能付き）を、そのような画像を分析するコンピュータプログラムとともに使用して計算されてもよい。一実施形態では、臀部の治療領域について、治療前および治療後の各患者について、左の治療された臀部および／または右の治療された臀部の画像を撮影してもよい。別の実施形態では、大腿部の治療領域について、治療の前後に、被験者の後面、斜面、および側面の大腿部の治療領域のそれぞれについて、例えば０度、４５度、および９０度で画像を撮影してもよい。
【０３２８】
臨床医および患者は、本明細書に記載されている尺度および他のツールを使用してもしなくても、写真および画像ツールを使用してセルライトの重症度を評価することができる。一実施形態では、臨床医／調査員または資格のある被指名人が、供給された標準化された３Ｄカメラを用いて、標準化された方法で各治療領域（例えば、各臀部または各大腿部）を撮影する。被験者は、撮影セッションごとに立ち、標準化された撮影用衣服を着用する。臨床医／調査員または資格のある被指名人は、被験者が一貫した標準化されたリラックスしたポーズで立っている間に、２つの治療領域（例えば、２つの臀部または２つの大腿部）のそれぞれを撮影する。これらの写真および上述の画像は、後述の有効性分析に使用することができる。方法論に関する追加の非限定的かつ任意の詳細は、以下に記載されている。
【０３２９】
３Ｄ写真による画像解析  ３Ｄ写真による画像解析。治療効果の評価は３Ｄ写真によって行われる。治験責任医師または資格のある被指名人が、標準化されたデジタルカメラを用いて、注射前の各治療領域（両臀部または両大腿部）を標準化された方法で撮影し、治療日１日目、２２日目、および４３日目に陥凹部と注射部位をマーキングする前と後に撮影する。スクリーニングおよびその他の非投与時には、各治療領域の写真を１セット撮影する。４日目、８日目、１５日目、２２日目、４３日目、および７１日目（研究終了／ＥＴ）に撮影された写真は、治療群と研究訪問日が知らされていない中央評価者によってレビューされる。
【０３３０】
あざ、体積、表面積、最大の長さ／幅を評価するために使用される標準的な画像解析（ＩＡ）の手順を以下に説明する。カメラシステムは、カスタム照明、Ｖｅｃｔｒａ  Ｍ１カメラ、およびＣａｎｆｉｅｌｄ  Ｃａｐｔｕｒｅソフトウェア（ｖ．３．５）を備えたＣａｎｆｉｅｌｄ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手可能なＩｎｔｅｌｌｉＳｔｕｄｉｏである場合がある。画像タイプ、属性、ビュー、および訪問ウィンドウは、デジタルモニタリングシステム（ＤＭＳ）に直接定義され、入力される。ＤＭＳで設定した研究内容は以下の通りである。
2022502478.tif 000039
画像はＤＭＳに取り込まれてステージングされ、レビューに利用できる。写真の訪問には以下が含まれる：スクリーニング、１日目／プレマーキング、１日目／ポストマーキング、４日目、８日目、１５日目、２２日目／プレマーキング、２２日目／ポストマーキング、４３日目／プレマーキング、４３日目ポストマーキング、７１日目／ＥＴ。
【０３３１】
陥凹部分析：画像を確認し、各象限で指示された通りに主な陥凹部に「Ｘ」マークが付けられていることを確認する。主な陥凹部がマークされていない場合は、次の手順を実行する：
１．画像と配置画像をパワーポイントに書き出す。
２．サイトに連絡し、サイトの調査員にパワーポイント内の画像にＸで主な陥凹部をマークするように依頼する。
３．通信文が保存され、画像解析（ＩＡ）チームと共有される。
【０３３２】
陥凹部分析は、１日目（プレマーキング）、２２日目、４３日目、および７１日目に実施される。２２日目、４３日目、および７１日目に、陥凹部分析パラメータ、最大長、最大幅、表面積、および陥凹部ベースと補間表面との間の体積について、観察されたものと１日目のプレマーキング画像からの変化を、記述統計学を用いて治療領域および注入タイプ別にまとめる（例示的な陥凹部分析が図１９（Ａ）〜図１９（Ｃ）に描かれている）。また、体積は、線形モデルを用いて解析される。
【０３３３】
画像解析技術者（ＩＡＴ）は、１日目のポストマーキング画像を参考にして、１日目のプレマーキング画像上で標的陥凹部の位置を決定する。１日目のプレマーキング画像上の陥凹部の凹みの境界をトレースする。この陥凹部のトレースを２２日目のプレマーキング、４３日目のプレマーキング、７１日目のＥＴの各画像に転写する。このトレースは、（ｉ）最大長（すなわち、陥凹部を横切る最長の直線距離）、（ｉｉ）最大幅（すなわち、最大長の測定値に垂直な最長の直線距離）、（ｉｉｉ）陥凹部の表面積、および（ｉｖ）陥凹部の底面と補間表面との間の体積を測定するために使用される。
【０３３４】
あざ分析：画像を確認して、各画像に白い参照ラベルが存在し、あざの領域の外側にあることを確認する。参照ラベルが存在しない場合や、あざの部分を妨げている場合は、その訪問時に該当する場合は再撮影が要求される。あざ分析は、１日目（プレマーキング）、４日目、８日目、および１５日目に行われる。
【０３３５】
サイトマーキング分析：１日目のマーキング後の訪問時に陥凹部がマークされているかどうかを画像で確認する。陥凹部がマークされていない場合は、その訪問時に必要に応じて再撮影を依頼する。
【０３３６】
画像解析（ＩＡ）のワークフロー：解析対象として選択されたすべての画像には、ランダムなトラッキング番号が割り当てられ、これにより画像解析技術者（ＩＡＴ）は、治験施設、被験者の第二識別子、治療群などの情報を把握することができる。特定の訪問時に実行される分析手順は、訪問時の名前に基づいて事前に決定される。陥凹部分析は、事前に特定された主要な陥凹部に対して行われ、体積、表面積、最大長／幅の測定が行われる。あざ分析には、あざと思われる部分のＬ＊ａ＊ｂ＊色の測定値と、あざと思われる部分の外側の影響を受けていない皮膚の測定値が含まれる。サイトマーキング分析では、トレースの表面積測定に加えて、最大長／幅の測定を行う。
【０３３７】
画像登録：ＩＡＴは、第１日目のプレマーキング（ベースライン）検査を受けると、Ｖｅｃｔｒａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｍｏｄｕｌｅ（ＶＡＭ）ソフトウェアでプレマーキング画像を開き、３Ｄ空間のグリッドに合わせて画像の中心を決める。ＩＡＴは、グリッドを基準にして、ベースライン画像を配置し、画像のほぼ中央がグリッドの原点にくるようにする。大腿部／臀部は＋ｚ方向に正面を向き、大腿部／臀部の上部は＋ｙ方向に、大腿部／臀部の下部は−ｙ方向に向いている（図１３）。１日目のマーキング後の画像を含め、それ以降のすべての時点は、アルゴリズムによる登録機能を使ってグリッド内のベースライン画像の位置に登録される。
【０３３８】
ＶＡＭでは、ＩＡＴがレジストレーションを確認するために使用する距離ごとの色マップが作成される。距離ごとの色マップは、２つの画像モデル間の距離を、＋５〜−５ｍｍの色尺度で表している（図１４）。ＩＡＴは、画像の大部分が緑色に着色されていることを確認し、２つの画像間の距離がごくわずかであること、および２つの画像が適切に配置されていることを示す。
2022502478.tif 000040
【０３３９】
表面トラッキング処理：画像登録後、１日目（プレマーキング）、４日目、８日目、１５日目、２２日目、４３日目、および７１日目の各画像に表面トラッキング処理を施す。ＩＡＴはまず、スクリプトを使用して、１日目のベースライン画像の高密度メッシュテンプレートを作成する。フォローアップ画像を１枚ずつ、ベースライン画像とメッシュテンプレートとともにＶＡＭソフトウェアで開く。トラッキングシードランドマークを、基準となる識別可能な皮膚の特徴に配置する。トラッキングスクリプトを実行し、３つの新しい３Ｄ画像、トラッキングされたベースライン画像、トラッキングされたフォローアップ画像、およびトラッキングされたフォローアップ画像の形状でありトラッキングの質に関する情報を伝える品質管理（ＱＣ）画像をプログラムで作成および保存する。
【０３４０】
品質チェックＩＡＴは、トラッキングされたフォローアップ画像とＱＣ画像の品質を確認し、トラッキングが成功したことを検証する。陥凹部分析を行った場合、ＩＡＴはトラッキングされたフォローアップ画像の上にＱＣ画像を重ね合わせ、主な陥凹部の領域にＱＣ画像上の大きな穴がないことを確認する。ＱＣ画像のメッシュに穴が開いていると、ドロップアウトの領域でトラッキング情報が失われていることになる。ＩＡＴは、解析対象領域内で情報が失われたことによりトラッキングが受け入れられないと判断した場合、トラッキングシードランドマークを調整し、トラッキングスクリプトを再度実行する。ＩＡＴは、まぶしさ、深い影、衣服による皮膚の跡、被写体の位置の大きな変化、皮膚の色素の大きな変化などに起因する、表面のトラッキング品質の低下が避けられない場合を指摘している。ＱＣ画像のメッシュに穴が開くのは、強いあざがある場合である。
【０３４１】
主要な陥凹部関心領域（ＡＯＩ）の描写：表面トラッキングが成功した後、ＩＡＴはトラッキングしたベースライン画像を開き、ＶＡＭに１日目−ポストマーキング画像を登録する。１日目−ポストマーキング画像上で、ＩＡＴは主要な陥凹部サイトマーキングの外側の境界をトレースする。このトレースは、陥凹部サイトの表面積、陥凹部サイトを横切る最大軸（最大陥凹部長さ）、およびその最大垂直軸の長さ（最大陥凹部幅）を測定するために使用される。このトレースは、陥凹部やあざ分析においてＡＯＩを描写するためには使用されない。主な陥凹部がサイトによって特定されない場合、ＩＡＴは彼／彼女が最大であると認識した陥凹部をトレースする。
【０３４２】
ＩＡＴは、１日目−ポストマーキング画像を参考にして、１日目−プレマーキング画像上で標的陥凹部の位置を確認する。次にＩＡＴは、トラッキングされたプレマーキング画像上で、主要な陥凹部の境界をトレースする。必要に応じてトレースを調整し、陥凹部が凹んだ隆起部のすぐ外側になるようにして、陥凹部分析のための主要な陥凹部のＡＯＩを画定する。（図１５）。トラッキングされたプレマーキングの画像上の陥凹部のトレースは、ベースラインに対する各フォローアップ画像の固有の表面トラッキング関係に基づいて、２２日目、４３日目、および７１日目のフォローアップ画像上に転記される（図１６）。ＩＡＴは、転置されたＡＯＩに影響を与える画質の低下のインスタンスを記録する。
【０３４３】
あざの関心領域（ＡＯＩ）の描出：ＩＡＴは、４日目の画像上で最も大きく知覚できるあざの周囲を連続的にトレースして、「あざのある組織」のＡＯＩを作成する（図１７）。ＩＡＴは、あざのある皮膚とない皮膚との間で皮膚の色素沈着に違いがあると判断できる部分の周囲をトレースする。周囲の肌色と区別できる青色／紫色、緑色、または黄色／茶色の色素沈着が見られる場合、皮膚は打撲されたとみなされる。４日目の画像であざが確認できない場合、その被験者はあざの分析のために不合格となる。
【０３４４】
さらに、ＩＡＴは２つ目のトレースである「正常組織」ＡＯＩを作成する。正常組織ＡＯＩは、衣服の圧縮線による肌の質感の歪み、異常な赤み、ニキビや瘢痕組織などの肌の特徴の影響を受けていない肌の領域に作成される。正常組織ＡＯＩは、可能であれば、１日目のプレマーキングのあざのある組織ＡＯＩの曲面に存在する影、てかり、グレアとの一致を試みる。正常組織ＡＯＩのサイズと形状は、自然に見える皮膚の量に応じて被験者ごとに異なる。トレース後、ＩＡＴは、４日目の画像に対する表面トラッキング関係に基づいて、４日目の画像から１日目−プレマーキング、８日目および１５日目の画像に、あざのある組織と正常な組織のＡＯＩの両方を移す。あざのある組織のＡＯＩまたは正常組織のＡＯＩが、特定の被験者または被験者の側部について、他のあざ分析を行った際のエッジを超えている場合、ＡＯＩはすべての訪問で一貫するまで調整される。
【０３４５】
ＩＡＴは、１日目−プレマーキング、４日目、８日目、および１５日目の画像上で白い参照ラベルを手動でトレースし、そのトレースを「白」と表示した。白の参照ラベルがあざ領域内に配置されている場合、ＩＡＴはラベルの境界線をトレースし、患部の各訪問時に打撲のＡＯＩから差し引く。白の参照ラベルが画像上に存在しない場合、その画像はあざの分析のためには不合格となる。
【０３４６】
品質管理（ＱＣ）チェック：ＱＣチェックは、画像の分析を行うＩＡＴとは別のＩＡＴが行う。ある訪問先での分析手順に応じて、個別にＱＣチェックが行われる。ＱＣチェック中にＱＣ  ＩＡＴが行った調整はすべて記録され、分析に移る前に別のＩＡＴによって再ＱＣされる。ＱＣを開始する前に、ＱＣ  ＩＡＴは最初のＩＡＴが行った画質の問題に関するメモを確認する。
【０３４７】
分析測定：画像がＱＣに合格した後、分析ＩＡＴがＱＣ  ＩＡＴのメモを確認する。その後、分析ＩＡＴは、スクリプト化された分析手順を実行する。分析手順と分析の終了点は、訪問時の画像によって異なる。くぼみの体積分析では、主要な陥凹部のＡＯＩの上部に補間表面が作成される。体積測定は、補間表面と陥凹部の底部の間の空間を表す。
【０３４８】
表面積は、主要な陥凹部ＡＯＩ、または１日目−ポストマーキング画像の場合はサイトトレースＡＯＩの総表面積として測定される。最大陥凹部長さは、主要な陥凹部ＡＯＩを横切る最大の点から点への軸として測定される。最大陥凹部幅は、最大陥凹部長軸に垂直な最大の点間距離として測定される。
【０３４９】
あざ分析は、２つのＬ＊ａ＊ｂ＊色測定で構成される。Ｌ＊ａ＊ｂ＊色彩値は、「あざのある組織」と「正常な組織」のＡＯＩ内で測定される（図１８（Ａ））。以下の表は、実行可能な分析をまとめたものである（表１９）。
【表１９】
2022502478.tif 000041
【０３５０】
データの受け入れ：画像分析が完了すると、分析を行うＩＡＴは、その画像を受け入れるか、またはその画像を分析対象外とするかを決定する。画像は部分的に不合格になることがある。例えば、１日目のプレマーキングの訪問では、第４日目に目に見えるあざがないためにあざ分析が不合格になることがあるが、陥凹部の分析では合格となる。すべての不合格には、画像モデルが分析に受け入れられない理由を詳述した不合格ノートが必要である。画像の不合格は、画質の低下、トラッキングの質の低下、ＡＯＩ内の障害物などが原因となる。画像は、ＱＣ  ＩＡＴによって不合格が推奨され、分析ＩＡＴによってレビューされる。分析ＩＡＴが不合格勧告に同意した場合、その画像は不合格となる。
あざ分析．１日目、４日目、８日目、および１５日目に、２つのＬ＊Ａ＊Ｂ＊色の測定値を用いて、あざのある組織と正常組織を３Ｄ写真で評価した（図１８（Ｂ））。Ｌ＊Ａ＊Ｂ＊の色の強さの測定値が大きいほど、あざの状態が悪い。治療領域と注射の種類ごとに、あざのある組織と正常な組織の２色の間の視覚的な変化を測定する。
【０３５１】
Ｇ．効果の持続性
本明細書に記載されているコラゲナーゼ治療法は、本明細書に開示されている尺度または評価方法のいずれかによって測定される効果の耐久性を有する。そのような耐久性は、約３ヶ月から５年またはそれ以上の範囲であり得る。単一の注射または一連の注射により、長期間、例えば、約６ヶ月、１年、２年、３年、４年、または５年、またはそれ以上の期間、セルライトの改善を維持したり、セルライトの外観を改善し続けたり、セルライトの外観の重症度を軽減したりすることができる。
【０３５２】
特定の実施形態では、コラゲナーゼ注射を受けている患者は、治療後約６ヶ月の時点でＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアのいずれかまたは両方について、ベースラインから≧１ポイントの改善を継続して示しているか、または治療後約１２ヶ月の時点でＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアのいずれかまたは両方について、ベースラインから≧１ポイントの改善を示している。さらに、そのような患者は、治療後約２２日、４３日、９０日、または１８０日の時点で、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアのいずれかまたは両方について、ベースラインからの≧１ポイントの改善を有する。例えば、少なくとも約１０％、または１５％、または２０％、または２５％、または３０％、または３５％、または４０％、または４５％、または５０％、または５５％、または６０％、または６５％、または７０％、または７５％、または８０％、または８５％、または９０％、または９５％、または１００％の患者がこのような持続性を示している。
【０３５３】
別の態様では、治療方法は、２レベルの複合応答者（ＰＲ−ＰＣＳＳとＣＲ−ＰＣＳＳの両方でセルライト重症度が少なくとも２レベル改善した患者）の効果の持続性を評価し、その結果、統計的に有意な数が治療後６ヶ月および１２ヶ月で効果の持続性を示している。特定の実施形態では、少なくとも約１０％、または１５％、または２０％、または２５％、または３０％、または３５％、または４０％、または４５％、または５０％、または５５％、または６０％、または６５％、または７０％、または７５％、または８０％、または８５％、または９０％、または９５％、または１００％の患者がこのような持続性を示している。
【０３５４】
持続性の非限定的な例としては以下を含む：
ａ．ＣＲ−ＰＣＳＳ評価の低下は１８０日目まで維持され、被験者のセルライト治療に対する満足度評価のスコアと相まって、ＣＣＨ  ０．８４ｍｇを治療領域ごとに１２回（×２治療領域）、両側の臀部または両側の大腿部に皮下注射した３回の治療セッションの有効性が裏付けられた。
ｂ．１８０日目において、ＣＲ−ＰＣＳＳ評価のベースライン（スクリーニング訪問）からの低下が左右で一致していること。
ｃ．１８０日目に、少なくとも１つの治療領域において、ＣＲ−ＰＣＳＳ評価の２レベルの改善が認められる。応答は、臀部と大腿部、および左右で同様である。
ｄ．１８０日目に少なくとも１つの領域でＣＲ−ＰＣＳＳ評価が１レベル改善されていること。応答は、臀部と大腿部、および左右で同様である。
ｅ．少なくとも１つの領域で最も早く２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答が得られるまでの期間の中央値は８３日と観察される。
ｆ．最も早い１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答が得られるまでの期間の中央値が４１日である。
ｇ．１８０日目には半数以上の患者が治療に満足または非常に満足していた。
ｈ．へクセルＣＳＳのスコアが初めて中等度（６〜１０）または軽度（１〜５）に分類され、ベースラインの重度（１１〜１５）と比較して中等度（６〜１０）または軽度（１〜５）に分類され続けていた期間。
ｉ．ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＰＣＳＳ、へクセルＣＳＳ、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度、陥凹部分析、Ｉ−ＧＡＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、ＰＲ−ＣＩＳ、ＰＲ−ＣＩＳ省略形、ＳＳＲＳ、ＳＳＣＴ、ＴＣＳ−Ｃ、ＴＣＳ−Ｐ、Ｂｏｄｙ−Ｑ、写真またはその他の画像による評価、または臨床医および／もしくは患者がセルライトの重症度、改善度、および／もしくは患者の満足度を評価するために使用するその他の有効なフォト数値もしくはその他の尺度のうちの１つ以上によって測定される改善を実証した後に、改善が測定された日からベースラインまたはそれよりも悪い状態に戻った日までの期間。
ｊ．改善が測定された日から、ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＰＣＳＳ、へクセルＣＳＳ、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度、陥凹部分析、Ｉ−ＧＡＩＳ，Ｓ−ＧＡＩＳ、ＰＲ−ＣＩＳ、ＰＲ−ＣＩＳ省略形、ＳＳＲＳ、ＳＳＣＴ、ＴＣＳ−Ｃ、ＴＣＳ−Ｐ、Ｂｏｄｙ−Ｑ、写真またはその他の画像による評価、または臨床医および／もしくは患者がセルライトの重症度、改善度、および／もしくは患者の満足度を評価するために使用するその他の有効なフォト数値もしくはその他の尺度のうちの１つ以上によって測定された、被験者が治療に対する応答の観察可能な喪失を有する日までに測定された期間。
ｋ．治療に対する応答の基準時点から、被験者が応答の変化（治療に対する初期の反応に対する改善を含む）を有するときまでの測定期間。応答の変化および／または改善は、ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＰＣＳＳ、へクセルＣＳＳ、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度、陥凹部分析、Ｉ−ＧＡＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、ＰＲ−ＣＩＳ、ＰＲ−ＣＩＳ省略形、ＳＳＲＳ、ＳＳＣＴ、ＴＣＳ−Ｃ、ＴＣＳ−Ｐ、Ｂｏｄｙ−Ｑ、写真または他の画像による評価、またはセルライトの重症度、改善、および／または患者の満足度を評価するために臨床医および／または患者によって使用される他の検証されたフォト数値または他の尺度のうちの１つ以上によって測定することができる。いくつかの実施形態では、基準時点は、ベースライン（投与前、１日目）または治療後７１日目である。
ｌ．被験者がＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳに基づく２レベルの複合型応答者となった訪問日から、評価値がベースライン評価に戻り、および持続する２回の連続した訪問日の最初の日までの期間。
ｍ．被験者がＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳに基づき１レベルの複合型応答者となった訪問日から、評価値がベースライン評価に戻り、および持続する２回の連続した訪問日の最初の日までの期間。
【０３５５】
Ｈ．コラゲナーゼ注射の安全性
現在までに行われた研究、そのいくつかは以下の実施例に詳述されているが、それらにより本明細書に記載された治療法の安全性が立証されている。例えば、これらの研究では、４つの治療領域に３．３６ｍｇのＣＣＨを同時に皮下投与しても、コラゲナーゼの全身への曝露がないことが確認された。実際、４つの治療領域に同時投与しても、コラゲナーゼの安全性特性に新たな懸念は見られなかった。一般的に報告されている事象は、現在知られているコラゲナーゼの有害事象特性と一致していた。
【０３５６】
ＣＣＨで治療を受けた被験者の大半が、軽度から中等度のＴＥＡＥを１回以上経験した。大腿部および臀部の治療領域によるＴＥＡＥの顕著な違いはなかった。最も多かったＴＥＡＥは注射部位応答、特に注射部位のあざであり、治療領域（臀部、大腿部）による違いはなかった。ほとんどのＴＥＡＥは２１日以内に消失した。臨床検査値、血液検査値、尿検査値、バイタルサイン、併用薬などに臨床的に意味のある変化はなかった。抗薬物抗体または中和抗体を有する被験者において、臨床的に意味のある所見はなかった。
【０３５７】
本明細書に記載し、図１６〜１８に示すように、あざの程度を経時的に測定するために、あざ分析を行うことができる。特定の実施形態では、コラゲナーゼ治療によって引き起こされたあざは、治療訪問後、約３日、または４日、または５日、または６日、または７日、または８日、または９日、または１０日、または１１日、または１２日、または１３日、または１４日、または１５日、または２０日で解消するか、または色の濃さが著しく減少する可能性がある。
【０３５８】
Ｉ．実施例
以下の例は、本開示の特定の実施形態を示すために含まれている。しかしながら、当業者であれば、本開示に照らして、開示されている特定の実施形態に変更を加えても、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、同様のまたは類似の結果を得ることができることを理解すべきである。したがって、記載されているすべての事項は例示として解釈されるべきであり、限定的な意味で解釈されるべきではない。例えば、ＣＣＨを用いた研究では、他のコラゲナーゼを、ＣＣＨと同等の活性と反応をもたらすのに十分な量（治療有効量）で使用することができる。後述の臨床研究結果において、報告された各数値は厳密な限定を意図したものではないことが理解されるべきである。本開示の範囲には、本明細書に記載された発明の事実と原理に合致する各数値の周囲の範囲が含まれる。したがって、各値は、約１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％、上下に変化してもよい。いくつかの例では、特定の値の文脈や状況に合わせて、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％、または３００％程度、上下に変化することがある。
【０３５９】
実施例１−ＥＦＰの治療のためのＣＣＨの臨床研究（研究２０５）
非盲検の段階２研究が実施され、少なくとも両側の治療領域（両側の臀部または両側の大腿部）に軽度、中等度、または重度のセルライトがある被験者に対して、１日目、２２日目、４３日目に、指定された治療領域にＣＣＨが投与された。すべての被験者に対しては９０日目と１８０日目に、一部の被験者に対しては各治療セッションの１日後、３日後、６日後、１３日後に追跡調査が行われた。治療効果を評価するために、９０日目と１８０日目（すなわち、それぞれ１日目から８９日目と１７９日目）に追跡調査を行った（写真下位研究）。本実施例では、特に明記しない限り、本研究２０５で用いた「日数」は、研究２０５の初回投与（１日目）に対するものである。
【０３６０】
使用したＣＣＨは、凍結乾燥ケーキ中に０．９ｍｇのコラゲナーゼクロストリジウムヒストリチカム、０．５ｍｇの塩酸、１８．５ｍｇのスクロース、および１．１ｍｇのトロメタミンを含む滅菌凍結乾燥粉末であった。再構成用のＣＣＨ無菌希釈剤は、０．６％塩化ナトリウム溶液に０．０３％塩化カルシウム二水和物を溶解したもので、１バイアルあたり２．０ｍＬであった。
【０３６１】
被験者は、スクリーニング訪問時に、臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度スコア（ＣＲ−ＰＣＳＳ）が２（軽度）以上、およびヘクセルセルライト重症度尺度（ＣＳＳ）スコアが１３以下の２つの両側治療領域（すなわち、両方の臀部または両方の大腿部）を有する１８歳以上の健康な非妊娠女性であった。以下の条件のいずれかを示した被験者は除外された：凝固障害；５年以上再発していない悪性腫瘍（基底細胞癌を除く）の兆候または病歴；ケロイド瘢痕または異常な創傷治癒の病歴；または、研究の実施を妨害したり、研究結果の解釈を混乱させたり、被験者の健康を脅かしたりする可能性のある併発疾患または状態。
【０３６２】
被験者には，１回の治療で最大１．６８ｍｇのＣＣＨを投与した。０．８４ｍｇのＣＣＨを、治療領域（すなわち，各臀部または各大腿部）ごとに１２回皮下注射した。ＣＣＨの投与は、２１日以上の間隔をおいて３回実施した。ＣＣＨの累積投与量は５．０４ｍｇ（すなわち、３回の治療セッション×治療領域あたり０．８４ｍｇ×２治療領域）であった。
【０３６３】
治療のために選択された各陥凹部に対して、注射部位が選ばれた。それぞれの注射部位には、サージカルマーカーを使ってドットを付けた。丸い陥凹部の場合、ドットは陥凹部の中心に配置した。細長い陥凹部の場合、ドットは陥凹部の長軸に沿って約２ｃｍの間隔で配置した。１つの陥凹部に複数の注射が必要な場合は、陥凹部内の注射部位を約２ｃｍの間隔で配置し、陥凹部の直下に少なくとも１つの注射部位がある場合は、その位置に配置した。その後、外科用マーカーを用いて、治療のために選択された各陥凹部に円を描いた。選択した治療領域の円は重ならないようにした。例えば、図６を参照。
【０３６４】
ＣＣＨは，被験者がうつ伏せになった状態で，３０ゲージの１／２インチ針付き注射器を用いて皮下に注射した。図７に示すように，各注射部位には，位置Ａ，Ｂ，Ｃに０．１ｍＬずつ３回に分けてＣＣＨを皮下注射し，合計０．３ｍＬの注射量とした。注射の深さは，下向きの圧力をかけずに治療針の先端から針の根元までの長さに相当する１／２インチとした。各注射部位において，針を皮膚表面に対して垂直に９０°の位置に配置して挿入し、０．１ｍＬのＣＣＨのアリコートを注入した（位置Ａ）。注射針をわずかに引き抜き（皮膚からは離さない）、頭部に向かって垂直から４５°の位置に戻し、陥凹部の長軸の上に０．１ｍＬのＣＣＨを注射した（位置Ｂ）。再度、針をわずかに引き抜き，足元に向かって垂直から約４５°、陥凹部の長軸の下に位置を変え、ＣＣＨを０．１ｍＬずつ注入した（位置Ｃ）。注射後、被験者は５分間うつ伏せになったままであった。
【０３６５】
有効性．  有効性についてセルライト治療に対するＣＣＨの有効性は、臨床医がＣＲ−ＰＣＳＳ評価を用いて分析した。ＣＲ−ＰＣＳＳ評価のベースライン訪問（スクリーニング訪問）からの最大の減少は、まず９０日目に観察された。このセルライト重症度の改善（すなわち、マイナスの変化）は、１８０日目の訪問時にも維持された。研究開始時のＣＲ−ＰＣＳＳ評価スコアは、被験者の大半が軽度から中等度であった。９０日目のベースラインからのＣＲ−ＰＣＳＳ評価値の変化の平均（ＳＤ）は、左臀部と左大腿部でそれぞれ−０．８（０．５８）と−０．６（０．６２）、右臀部と右大腿部でそれぞれ−０．７（０．７３）と−０．５（０．７０）であった。領域別、訪問別のＣＲ−ＰＣＳＳスコアを表２０に示す。
【０３６６】
【表２０】
2022502478.tif 000042
2022502478.tif 000043
2022502478.tif 000044
【０３６７】
両側の臀部に６９名、両側の大腿部に８９名の被験者が治療を受けた。９０日目に評価対象者の１７名（１３．４％）、１８０日目に評価対象者の２０名（１５．３％）（臀部に治療を受けた６２名、大腿部に治療を受けた８２名）の少なくとも１つの治療領域で、ＣＲ−ＰＣＳＳスコアにおけるセルライトの重症度がベースラインから２レベル改善されたことが確認された。少なくとも１つの治療領域で最も早く２レベルの応答が得られるまでの期間の中央値は８３日であった。２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答が得られた被験者の割合と２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答が得られるまでの時間の中央値は、左側と右側の治療を受けた被験者で同様であり、大腿部と臀部の治療領域でも同様であった。これらの結果を表２１に示す。
【０３６８】
【表２１】
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【０３６９】
約４分の３の被験者が、９０日目までに少なくとも１つの治療領域で少なくとも１レベルの応答を示した。９０日目に９６名（７５．６％）、１８０日目に９０名（６８．７％）の評価対象者が、少なくとも１つの治療領域において、ＣＲ−ＰＣＳＳのセルライトの重症度がベースラインから１レベル改善したことが確認された。また、少なくとも１つの治療領域で最も早く１レベルの応答が得られるまでの期間の中央値は４１日であった。治療を受けた被験者の１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合は、左右で同程度であり、大腿部と臀部の治療領域でも同程度であった。また、最も早く１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ反応が得られるまでの期間の中央値は、左右で同じ４３日であった。これらの結果は表２２にまとめられている。
【０３７０】
【表２２】
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【０３７１】
セルライト治療におけるＣＣＨの有効性は、被験者による満足度スコア（セルライト治療に対する被験者の満足度）を用いて分析された。１８０日目の時点で、評価可能な１３０名の応答者のうち、半数以上（５６．１％）が治療に満足または非常に満足していた。治療を受けた被験者のうち、臀部の治療に満足または非常に満足した被験者の割合は７１．５％であった。また、大腿部の治療に満足または非常に満足した被験者の割合は４４．６％であった。これらの結果は表２３にまとめられている。
【０３７２】
【表２３】
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【０３７３】
その他、有効性に関する結論としては以下のようなものがある：
【０３７４】
１．１８０日目には、ＣＲ−ＰＣＳＳ評価におけるベースライン（スクリーニング訪問）からの低下は、左右で一貫していた。また、左臀部および大腿部のＣＲ−ＰＣＳＳ評価の平均（ＳＤ）のベースラインからの変化（−０．８［０．６５］および−０．６［０．６９］）は、右臀部および大腿部（−０．７［０．７３］および−０．５［０．７０］）に対して、同程度であった。
【０３７５】
２．９０日目に１７名（１３．４％）、１８０日目に２０名（１５．３％）の評価対象者が、少なくとも１つの領域でＣＲ−ＰＣＳＳ評価の２レベルの改善を確認した。また、臀部と大腿部、左右の部位で同様の効果が得られた。
【０３７６】
３．９０日目に９６名（７５．６％）、１８０日目に９０名（６８．７％）の評価対象者が、少なくとも１つの治療領域でＣＲ−ＰＣＳＳ評価の１レベルの改善を確認した。また、臀部と大腿部、左右の部位で同様の効果が得られた。
【０３７７】
４．少なくとも１つの治療領域において、最も早く２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答が得られるまでの期間の中央値は８３日（範囲：２１、１９１）であった。少なくとも１つの治療領域において、最も早く１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答が得られるまでの期間の中央値は４１日（範囲：２０、２０５）であった。
【０３７８】
５．１８０日目（研究終了／治療終了）では、評価可能な応答者の半数以上（５６．１％）が治療に満足または非常に満足していた（満足：４８［３６．９％］、または非常に満足：２５［１９．２％］）。
【０３７９】
６．１８０日目にもＣＲ−ＰＣＳＳ評価の低下が持続し、被験者満足度調査のスコアと合わせて、０．８４ｍｇのＣＣＨを両側の臀部または両側の大腿部に治療領域あたり１２回（×２治療領域）皮下注射する３回の治療が有効であったことを示している。
【０３８０】
安全性．ＣＣＨを投与した被験者の大多数が、軽度から中等度の治療上の有害事象を少なくとも１つ経験した。大腿部や臀部の治療領域によって、治療上の有害事象が発生した被験者に顕著な差はなかった。最も多かった有害事象は注射部位反応、特に注射部位のあざで、治療領域による違いはなかった。
【０３８１】
また、本研究には写真下位研究も含まれており、被験者は各治療コースの１日後、３日後、６日後、および１３日後にクリニックを訪れ，追跡調査のための写真撮影を行った。写真下位研究に参加した３７名の大腿部および臀部の写真は，２つの研究施設において、施設ごと、被験者ごと、研究訪問ごとに時系列に並べられ，それぞれの治療領域（左臀部、右臀部、左大腿部、右大腿部）のコラージュとして累積された。調査員は、画像および写真のコラージュを見た後、注射部位のあざの外観についての全体的な観察結果を把握するための質問票に記入した。調査員は、注射部位のあざは治療セッションの３日後と６日後に重症化し、次の治療セッションの前に解消し、一般に各治療セッションでそれほど重篤ではなくなったことを観察した。持続した変色は、ヘモジデリン染色に起因した。
【０３８２】
治療セッションによる治療関連注射部位応答の分析は、その後の治療セッションで注射部位応答の発生率および持続時間が減少する傾向を示し、ほとんどが２１日以内に解消した。治療セッション１、２、３では、治療に起因する有害事象が２１日以内に解消した被験者の割合は、それぞれ７６．７％、８５．２％、７１％であった。
【０３８３】
実施例２−ＥＦＰの治療のためのＣＣＨの段階３臨床研究（研究３０２）
【０３８４】
段階３の無作為化二重盲検プラセボ対照研究が行われ、各臀部に中程度または重度のレベルのセルライトがある被験者が、１日目、２２日目、および４３日目に割り当てられた治療領域にＣＣＨを投与された。本実施例で特に明記しない限り、本研究３０２で用いた「日数」は、研究３０２の初回投与（１日目）に対するものであった。セルライト組成物におけるＣＣＨは、０．９２ｍｇのコラゲナーゼクロストリジウムヒストリチカム、スクロース、トリス、マンニトール、および塩酸を有する、ｐＨ８．５までの滅菌凍結乾燥粉末であった。０．６％塩化ナトリウムおよび０．０３％塩化カルシウムが水中で脱水するように再構成するためのＣＣＨ滅菌希釈剤。被験者は、１日目、２２日目、４３日目、および７１日目に評価された。被験者は、スクリーニング訪問時および治療前の最初の治療セッションで、患者が報告したフォト数値セルライト重症度スコア（ＰＣ−ＰＣＳＳ）および臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度スコア（ＣＲ−ＰＣＳＳ）の両方のスコアが３または４（中等度または重度）を有する１８歳以上の健康な非妊娠女性であった。
【０３８５】
被験者には、１回の治療で最大１．６８ｍｇのＣＣＨまたはプラセボを投与した。０．８４ｍｇのＣＣＨは、臀部あたり１２回の皮下注射として投与された。ＣＣＨは、約２１日間隔で行われた３回の治療セッションで各被験者に投与された。ＣＣＨの累積投与量は５．０４ｍｇ（すなわち、３回の治療訪問×治療領域あたり０．８４ｍｇ×２治療領域）であった。ＣＣＨは、実施例１に記載され、図７に示されたのと同じ方法で注射された。被験者の両臀部は、無作為に割り当てられた治療群に応じて、ＣＣＨ治療またはプラセボ治療のいずれかを受けた。
【０３８６】
分析対象となった集団には、以下のようなものがあった：
【０３８７】
治療意図（ＩＴＴ）集団には、無作為化された被験者のうち、少なくとも１回の研究薬の注射を行った者が含まれる。すべての人口統計学的特性およびベースライン特性の概要は、この集団に基づいている。主要および主要な副次的有効性パラメータは、この集団に基づいていた。
【０３８８】
修正治療意図（ｍＩＴＴ）集団とは、標的および非標的臀部について、ベースラインおよび少なくとも１回の注射後のＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの両方の評価を受けたＩＴＴ被験者を含む。すべての副次的評価および支持的評価は、ｍＩＴＴ集団に基づいて行われた。
【０３８９】
臨床医は、それぞれの臀部にある陥凹部のうち、はっきりとしていて、被験者が立っているときに明らかで、治療に適したものを選んだ。治療の目的は臀部全体の美観を向上させることであるため、臨床医は臀部全体の美観を向上させる可能性の高い陥凹部を選択するように指示された。臀部の中にある同じ陥凹部、または臀部の中にある異なる陥凹部を各治療セッションで治療することができたが、注射は臀部の中で行われなければならなかった。各臀部に治療可能なセルライトの陥凹部がなく、臨床医がＣＲ−ＰＣＳＳで０点と評価した場合を除き、各臀部には３回の治療が行われた。２回目の治療セッションで特定の臀部に注射が行われなかった場合でも、被験者は対向する臀部の治療について評価され、３回目の治療セッションに戻り、被験者と臨床医によってそれぞれの臀部が再び評価された。臨床医がＣＲ−ＰＣＳＳで臀部のいずれかまたは両方を０より大きく評価した場合、３回目の治療セッションで注射を行った。
【０３９０】
治療セッション１では、すべての被験者が両臀部に１２回の注射をすべて受けた。治療セッション２では、ＣＣＨ投与群の８８．１％、プラセボ投与群の９４．８％の被験者が、それぞれの臀部に１２回の注射を受けた。治療セッション３では、ＣＣＨ投与群の８９．０％、プラセボ投与群の９０．６％の被験者が両臀部に１２回の注射を受けた。治療した陥凹部の数と、陥凹部１つあたりの平均注射回数は、２つの治療グループ間および治療セッション間で同様であった。有効性は、以下のセルライト重症度評価システムを用いて分析した：（ｉ）ＰＲ−ＰＣＳＳ、（ｉｉ）ＣＲ−ＰＣＳＳ、（ｉｉｉ）Ｓ−ＧＡＩＳ、（ｉｖ）Ｉ−ＧＡＩＳ、（ｖ）ＰＲ−ＣＩＳ、（ｖｉ）ＳＳＲＳ、および（ｖｉｉ）セルライト治療に対する被験者のグローバル満足度（ＳＳＣＴ）。被験者、調査員、スタッフは、標的臀部と治療法の両方について盲検化された。評価は被験者と調査員がそれぞれ独立して行い、互いのスコアについては盲検化された。有効性の主要変数は、７１日目に２レベルの複合応答が得られた被験者の割合で、以下のように定義された。有効性の主要変数は、７１日目に２レベルの複合応答が得られた被験者の割合であり、次のように定義された：（１）調査員が標的臀部をライブで評価したＣＲ−ＰＣＳＳにおいて、ベースライン（１日目）から少なくとも２レベルの重症度の改善が認められた、（２）標的臀部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したＰＲ−ＰＣＳＳにおいて、ベースライン（１日目）から少なくとも２レベルの重症度の改善が認められた。無作為化された標的臀部でこれらの基準が満たされた場合、被験者は応答者とみなされた。
【０３９１】
本研究で用いた応答者の定義は以下の通りである。
【０３９２】
ＰＲ−ＰＣＳＳ応答者．  ２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者は、評価時点でＰＲ−ＰＣＳＳ評価がベースラインから少なくとも２レベル改善（−２、−３、または−４の変化）した被験者と定義した。１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者は、評価時点でＰＲ−ＰＣＳＳ評価がベースラインから少なくとも１レベル改善（−１、−２、−３、または−４の変化）した被験者と定義した。
【０３９３】
ＣＲ−ＰＣＳＳ  応答者．  ２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者とは、評価時点でＣＲ−ＰＣＳＳ評価がベースラインから少なくとも２レベル改善（−２、−３、または−４の変化）した被験者と定義した。１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者は、評価時点でＣＲ−ＰＣＳＳ評価がベースラインから少なくとも１レベル改善（−１、−２、−３、または−４の変化）した被験者と定義した。
【０３９４】
複合  ＰＲ−ＰＣＳＳ／ＣＲ−ＰＣＳＳ  応答者．  各臀部のＰＲ  ＰＣＳＳ応答者分類とＣＲ  ＰＣＳＳ応答者分類を用いて、その臀部の複合応答者分類を算出した。１つまたは両方の構成要素（すなわち、ＰＲ  ＰＣＳＳ構成要素またはＣＲ  ＰＣＳＳ構成要素）について分類が欠けていた場合、その訪問日の複合応答者分類は欠けていた。２レベルの複合応答者は、評価時点でＰＲ−ＰＣＳＳの２レベルの応答者とＣＲ−ＰＣＳＳの２レベルの応答者の両方を満たす被験者と定義した。１レベルの複合応答者とは、評価時点で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者と１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者の両方に該当する被験者と定義した。
【０３９５】
Ｓ−ＧＡＩＳ応答者．  ２レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者とは、評価時点でＳ−ＧＡＩＳ評価が少なくとも２（２または３）の被験者と定義した。１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者とは、評価時点でＳ−ＧＡＩＳ評価が少なくとも１（１、２または３）であった被験者と定義した。
【０３９６】
Ｉ−ＧＡＩＳ応答者．  ２レベルのＩ−ＧＡＩＳ応答者とは、評価時点でＩ−ＧＡＩＳ評価が少なくとも２（２または３）の被験者と定義した。１レベルのＩ−ＧＡＩＳ応答者とは、評価時点でＩ−ＧＡＩＳ評価が少なくとも１（１、２または３）であった被験者と定義した。
【０３９７】
ＰＲ−ＣＩＳ応答者．  ＰＲ−ＣＩＳトータルスコアでは、評価時点でＰＲ−ＣＩＳトータルスコアがベースラインから少なくとも１２減少した被験者を応答者と定義した。ＰＲ−ＣＩＳ省略形スコアでは、評価時点でＰＲ−ＣＩＳ省略形スコアがベースラインから少なくとも１０減少した被験者を応答者と定義した。個々のＰＲ−ＣＩＳインパクトスコアについて、応答は、各時点で少なくとも２スコア間隔のベースラインからの改善として定義された。
【０３９８】
ＳＳＲＳ応答者．  １レベルのＳＳＲＳ応答者は、７１日目／早期終了訪問時に臀部のセルライトの外観に少なくともわずかに満足している（わずかに満足［４］、非常に満足［５］、または極めて満足［６］）被験者と定義された。
【０３９９】
セルライト治療に対する被験者のグローバル満足度（ＳＳＣＴ）．  ７１日目／早期終了時に、セルライト治療に対する被験者の満足度評価で「満足」または「非常に満足」という回答を得た被験者を応答者とした。
【０４００】
主要評価項目は、治療意図を持った集団（ＩＴＴ）において、７１日目に標的臀部で２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答が得られた割合であった。２レベルの複合応答者とは、ＣＲ−ＰＣＳＳでベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善が見られ、ＰＲ−ＰＣＳＳでベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善が見られた被験者と定義した。
【０４０１】
本研究では、ＣＣＨ治療を受けた被験者の２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合（１６［７．６％］）が、プラセボ治療を受けた被験者の割合（４［１．９％］）と比較して、統計的に有意な差（ｐ＝０．００６）が見られた、表２４および図２４。
【表２４】
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【０４０２】
本研究では、８つの主要な副次的評価項目を含む評価項目の３つのファミリーがあった。ＣＣＨとプラセボで治療された被験者の違いは、８つの評価項目すべてでＣＣＨを支持し、すべての違いは統計的に有意であった。これらは、以下の表２５にまとめられている。
【表２５】
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【０４０３】
各訪問時にＰＲ−ＰＣＳＳ評価を得て、ベースラインからの変化を調べた。ベースラインからの変化がマイナスであれば、セルライトの重症度が改善されたことを示す。ベースラインでは、すべての被験者のＰＲ−ＰＣＳＳ評価が中程度または重度であった。２２日目の時点で、ＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化量の平均（ＳＤ）は、標的臀部にＣＣＨを投与した被験者（−０．４［０．６７］）が、プラセボを投与した被験者（−０．１［０．４５］）に比べて大きかった。この差は統計的に有意であった（ｐ<０．００１）。非標的臀部についても同様の結果が得られた。ＣＣＨ対プラセボで治療された被験者で観察された改善は継続し、７１日目を含むすべての研究訪問で標的および非標的臀部で統計的に有意なままであった。これらの結果は表２６にまとめられている。
【０４０４】
標的および非標的臀部におけるＰＲ−ＰＣＳＳ１レベルおよび２レベル応答者の分析は、ＣＣＨ対プラセボで治療された対象の改善において統計的に有意な差を示した。２２日目の１レベルＰＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合は、標的臀部（それぞれ３４．８％対１６．８％）および非標的臀部（それぞれ３４．８％対１８．８％）において、プラセボ治療を受けた被験者よりもＣＣＨで治療された被験者の方が大きかった。これらの差は統計的に有意であり（ｐ<０．００１）、研究全体を通して継続し、各評価で統計的に有意なままであった。これらの結果は表２７にまとめられ、図２２〜２３に示されている。
【０４０５】
【表２６】
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【０４０６】
【表２７】
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【０４０７】
また、訪問時のＣＲ−ＰＣＳＳ評価とベースラインからの変化についても分析した。ＣＲ−ＰＣＳＳ評価は、ＰＲ−ＰＣＳＳ評価と同様に、ＣＣＨとプラセボで治療された患者のセルライト重症度の統計的に有意な改善を示している。７１日目におけるＣＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの平均変化は、プラセボと比較してＣＣＨで治療された被験者の方が大きかった。治療に対する応答は、早くも２２日目で明らかであった。２２日目に１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合は、標的臀部（それぞれ３３．２％対１６．８％）、非標的臀部（３６．４％対１６．８％）ともに、プラセボ治療を受けた被験者よりもＣＣＨで治療された被験者の方が大きかった。これらの差は統計的に有意であり、ｐ<０．００１であった。７１日目の時点で、１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合は、プラセボと比較してＣＣＨで治療された被験者の方が大きかった。これらの結果は、表２８〜２９および図２２〜２３にまとめられている。
【０４０８】
【表２８】
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【０４０９】
【表２９】
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【０４１０】
Ｓ−ＧＡＩＳの評価を分析した。２２日目には、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間で、Ｓ−ＧＡＩＳの平均値が大きくなった。この改善は、統計的に有意であった（ｐ<０．００１）。この改善は７１日目にも観察された。対象臀部と非対象臀部のＳ−ＧＡＩＳ１レベルと２レベルの応答者を分析したところ、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者では、研究期間中に統計的に有意な改善が見られた。これらの結果は表３０〜３１にまとめる。また、Ｉ−ＧＡＩＳ評価でも同様の結果が得られ、表３２〜３３にまとめた。
【０４１１】
【表３０】
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【０４１２】
【表３１】
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【０４１３】
【表３２】
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【０４１４】
【表３３】
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表３４に示すように、７１日目におけるＰＲ−ＣＩＳのベースラインからの変化の平均値は、総合スコア（−１０．９対−５．７）、略式スコア（−１０．９対−５．７）、および個々の影響スコアにおいて、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べて統計的に有意に良好であった。
【０４１５】
【表３４】
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【０４１６】
ベースライン時のＳＳＲＳの平均値には、治療群間で統計的に有意な差はなかった。７１日目には、ＣＣＨ治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者と比較して、平均スコアが大きくなった。この差は、統計的に有意であった（ｐ<０．００１）。その結果を表３５に示す。
【０４１７】
【表３５】
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【０４１８】
ＳＳＣＴスコアに関しては、ＣＣＨ治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、セルライト治療に「満足」または「非常に満足」と答えた割合が高かった（それぞれ５４．３％対２５．８％、ｐ<０．００１）。７１日目の被験者の満足度スコアの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者（０．４［１．１２］）とプラセボ治療を受けた被験者（−０．４［１．１７］）の間で、統計的に有意な差（ｐ<０．００１）があった。これを以下の表３６に示す。
【表３６】
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【０４１９】
有効性の結論
一次エンドポイントは、ＩＴＴ集団において、７１日目に対象となる臀部で２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答が得られた割合であった。２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者とは、ＣＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善し、ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善した被験者と定義した。
【０４２０】
本研究では、ＣＣＨ治療を受けた被験者（１６名［７．６％］）の２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ／ＣＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合が、プラセボ治療を受けた被験者（４名［１．９％］）と比較して、統計的に有意な差（ｐ＝０．００６）が認められた。
【０４２１】
直線的な尺度で薬効を確認するために、一連の二次エンドポイント項目を評価した。その結果、８つの鍵となる二次エンドポイント項目すべてにおいて、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも有利となる、統計的に有意な差が認められた。
・７１日目に対象となる臀部でＰＲ−ＰＣＳＳが１レベル応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者１１４名（５４．３％）対プラセボ治療を受けた被験者７７名（３６．２％）、ｐ<０．００１）。
・７１日目に対象となる臀部で２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者５１［２４．３％］対プラセボ治療を受けた被験者２６［１２．２％］、ｐ＝０．００１）。
・７１日目に対象となる臀部で１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者７８名（３７．１％）対プラセボ治療を受けた被験者３８名（１７．８％）、ｐ＝<０．００１）。
・７１日目に非対象の臀部で２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者では１６（７．６％）対プラセボ治療を受けた被験者では２（０．９％）、ｐ＝<０．００１）。
・７１日目に１レベルのＳＳＲＳ応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者１０２名（４８．６％）対プラセボ治療を受けた被験者２８名（２２．５％）、ｐ＝<０．００１）。
・７１日目におけるＰＲ−ＣＩＳ総合スコアのベースラインからの変化の平均（ＳＤ）（ＣＣＨ投与群：−１０．９［１２．５１］対プラセボ治療を受けた被験者：−５．９［１１．６２］、ｐ＝<０．００１）。
・７１日目に対象となる臀部でＳ−ＧＡＩＳの１レベルの応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者１３５名（６４．３％）対プラセボ治療を受けた被験者８２名（３８．５％）、ｐ＝<０．００１）。
・７１日目に対象となる臀部で２レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者４９名（２３．３％）対プラセボ治療を受けた被験者１３名（６．１％）、ｐ＝<０．００１）。
【０４２２】
すべての感度分析は、一次および二次エンドポイントの結果を支持した。また、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間では、研究開始後７１日目までにすべての支持的評価項目で統計的に有意な差が認められた（多くの場合、ＣＣＨによる１回の治療後という早い段階で統計的に有意な差が認められた）。重症度評価では、ベースラインからの変化がマイナスであれば、セルライトの改善を示す。対象となる臀部と対象外の臀部の結果の概要は以下の通りである。
・７１日目のＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化量の平均（ＳＤ）は、対象の臀部（それぞれ０．９［０．９３］対０．５［０．８８］、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ０．９［０．９０］対０．５［０．８３］、ｐ<０．００１）において、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べて大きかった。
・７１日目の時点で、ＰＲ−ＰＣＳＳの１レベル応答者の割合は、ＣＣＨ治療を受けた被験者の方が、プラセボ治療を受けた被験者よりも、対象の臀部（それぞれ６２．０％対４０．７％、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ６５．２％対４１．６％、ｐ<０．００１）で大きかった。
・７１日目のＣＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化量の平均（ＳＤ）は、対象の臀部（それぞれ０．７［０．８７］対０．４［０．７２］、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ０．８［０．８３］対０．３［０．６７］、ｐ<０．００１）において、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも大きかった。
・７１日目の時点で、１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合は、ＣＣＨ治療を受けた被験者の方が、プラセボ治療を受けた被験者よりも、対象の臀部（それぞれ５８．５％対３２．５％、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ６０．７％対２７．７％、ｐ<０．００１）で大きかった。
・７１日目の時点で、１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合は、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べ、対象臀部（それぞれ４２．９％対２０．１％、ｐ<０．００１）および非対象臀部（それぞれ４４．５％対１３．７％、ｐ<０．００１）で高かった。
・７１日目のＳ−ＧＡＩＳの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べ、対象の臀部で大きかった（それぞれ１．０［０．９９］対０．５［０．７９］、ｐ<０．００１）。非対象の臀部でも同様の結果が得られた（ＣＣＨ治療を受けた被験者１．０［０．９４］対プラセボ治療を受けた被験者０．５［０．７６］、ｐ<０．００１）。
・７１日目の時点で、１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者の割合は、対象の臀部（それぞれ７３．４％対４３．２％、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ７３．９％対４２．６％、ｐ<０．００１）において、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べて多かった。
・７１日目のＩ−ＧＡＩＳの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者と比較して、対象の臀部で統計的に有意（ｐ<０．００１）に大きかった（それぞれ１．０［０．８１］対０．３［０．６６］）。この結果は、非対象の臀部でも同様であった（ＣＣＨ治療を受けた被験者０．６［０．６３］対プラセボ治療を受けた被験者０．１［０．４８］）。
・７１日目の時点で、１レベルのＩ−ＧＡＩＳ応答者の割合は、対象の臀部（６９．９％対２８．３％、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（７４．９％対２７．２％、ｐ<０．００１）において、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも多かった。
・７１日目のＰＲ−ＣＩＳのベースラインからの変化の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者では、総合スコア（１２．５（［２．６３］対−６．７［１２．１１］、それぞれｐ<０．００１）と略式スコア（１０．９［１０．７２］対５．７［１０．２３］）、および個人の影響スコア（セルライトの外観に対する満足度［ｐ<０．００１］）において、統計的に有意に良好であった。２３］、ｐ<０．００１）、および個人の影響スコア（セルライトの外観に対する満足度［ｐ<０．００１］、気になる［ｐ＝０．００９］、自覚［ｐ<０．００１］、恥ずかしい［ｐ＝０．００４］、老いに対する懸念［ｐ＝０．０２４］、体型に対する懸念［ｐ＝０．００５］）があった。
・７１日目の時点で、ＰＲ−ＣＩＳ応答者の割合は、総合スコアではＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも多く（それぞれ４８．４％対２４．２％、ｐ<０．００１）、略式スコアでは（それぞれ５２．７％対２９．５％、ｐ<０．００１）、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも多かった。さらに、個々の影響スコアごとの応答者の割合は、ＣＣＨ治療を受けた被験者の方がプラセボ治療を受けた被験者よりも多かった。これらの差も統計的に有意であった。
【０４２３】
その他の補足結果は以下の通りである。
・７１日目のＳＳＲＳスコアの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者（３．３［１．８０］）の方がプラセボ治療を受けた被験者（２．１［１．７５］）よりも大きかった。この差は統計的に有意であった（ｐ<０．００１）。ＣＣＨ治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、ＳＳＲＳの１レベルの応答を示した割合が高く、それぞれ５４．９％対２５．１％であった。この差も統計的に有意であった（ｐ<０．００１）。
・ＣＣＨ治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、セルライト治療に「満足」または「非常に満足」と答えた割合が高かった（それぞれ５４．３％対２５．８％、ｐ<０．００１）。７１日目の被験者の満足度スコアの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ投与群（０．４［１．１２］）とプラセボ治療を受けた被験者（０．４［１．１７］）の間で、統計的に有意な差（ｐ<０．００１）があった。
・一連のクロス集計では、ＰＲ−ＰＣＳＳとＳ−ＧＡＩＳの間に一貫性があることを示す。ＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの変化は、Ｓ−ＧＡＩＳの同様の変化と関連した。
・一次および二次エンドポイントのサイト別解析では、複数のサイトで応答が認められ、どの有効性解析においても、１つのサイトが結果に大きく影響することはなかった。
【０４２４】
結論
これらの臨床結果は、ＣＣＨ治療が対象者の臀部のセルライトに有効であることを示す。本研究では、両側臀部のＥＦＰを有する成人女性を対象に、両臀部に０．８４ｍｇずつ（合計１．６８ｍｇ）を２１日間隔で最大３回投与した結果、ＣＣＨ治療を受けた被験者ではプラセボ治療を受けた被験者と比較して、ＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳの２レベルの複合応答者の割合が統計的に有意に増加し、一次エンドポイント項目を達成した。８つの鍵となる二次エンドポイントおよびすべての支持的評価項目において、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間に統計学的に有意な差が認められた。ＣＣＨ投与後の安全性については、重大または予期せぬ問題はなかった。ＡＥの大部分は注射部位に発生し、１４日以内に消失した。血液学的、化学的検査項目、バイタルサインについては、臨床的に意味のある、あるいは気になる傾向は認められなかった。免疫原性の結果は、本剤の他の臨床研究で認められたものと異なる可能性は認められなかった。本研究の結果から、ＣＣＨは成人女性の臀部におけるＥＦＰに対して、１臀部あたり０．８４ｍｇ（総投与量１．６８ｍｇ）を２１日以上の間隔をおいて３回投与することにより、安全かつ有効な治療法であると考えられる。
【０４２５】
実施例３−段階３  ＥＦＰ治療におけるＣＣＨの臨床研究（研究３０３）
２回目の臨床研究は、実施例２に記載された臨床研究と同じデザイン、無作為化、二重盲検、プラセボ対照で行われた。ＣＣＨ治療を受けた被験者では、プラセボ治療を受けた被験者（１名）と比較して、対象となる臀部において２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合が統計的に有意な差（ｐ＝０．００２）を示し、ＣＣＨ治療を受けた被験者でセルライトの重症度が改善されたことを示すなど、有効性が多数の解析によって裏付けられた。
【０４２６】
分析対象となった集団には、以下のようなものがあった。
【０４２７】
治療意図（Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）（ＩＴＴ）集団には、無作為化された被験者のうち、研究薬の注射を１回以上行った者が含まれる。すべての人口統計学的特性およびベースライン特性の概要は、この集団に基づく。一次および鍵となる二次有効性パラメータは、この集団に基づく。
【０４２８】
修正治療意図（Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）（ｍＩＴＴ）集団は、ＩＴＴ集団のうち、対象および非対象の臀部について、ベースラインおよび注射後に少なくとも１回、調査員によるＣＲＰＣＳＳと被験者によるＰＲＰＣＳＳの両方の評価を受けたすべての被験者を対象とした。すべての二次的効果および支持的効果の評価は、ｍＩＴＴ集団に基づいて行われた。
【０４２９】
直線的な尺度で薬効を確認するために、一連の二次的臨床エンドポイント項目を評価した。ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者との間には、（ｉ）７１日目に対象となる臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合、（ｉｉ）７１日目に対象となる臀部で２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合、（ｉｉｉ）対象となる臀部で１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合、（ｉｖ）７１日目の１レベルのＳＳＲＳ応答者の割合、（ｖ）７１日目のＰＲ−ＣＩＳ総スコアのベースラインからの平均変化量、（ｖｉ）７１日目の対象臀部における１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者の割合、および（ｖｉｉ）７１日目の対象臀部における２レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者の割合を含む、ＣＣＨを投与した被験者とプラセボを投与した被験者との間に統計的に有意な差が認められた。本実施例で特に明記しない限り、本研究３０３で使用した「日数」は、本研究３０３の初回投与（１日目）に対するものである。
【０４３０】
実施例２と同様に、本研究では８つの重要な副次評価項目を含む３つのファミリーが存在した。ＣＣＨとプラセボ治療を受けた被験者の差が統計的に有意であった８項目のうち７項目でＣＣＨ治療の被験者が有利であった。非対象臀部における２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者については、プラセボと比較してＣＣＨ治療の被験者で応答者の割合が多かったが、ファミリーのタイプＩエラー率を５％とした多重度検定により、その差は統計的有意性に達しなかった。しかし、この結果は、非対象臀部の副次評価項目の分析結果と合わせて、非対象臀部の応答の差がＣＣＨ治療の被験者でプラセボ治療の被験者よりも有利であるという傾向を強く支持するものであった。これらの結果は、以下の表３７にまとめた。
【０４３１】
【表３７】
2022502478.tif 000075
【０４３２】
関連する臨床データを以下の表３８〜４８に、また図２０〜２１に示す。
【０４３３】
【表３８】
2022502478.tif 000076
2022502478.tif 000077
2022502478.tif 000078
【０４３４】
【表３９】
2022502478.tif 000079
2022502478.tif 000080
【０４３５】
【表４０】
2022502478.tif 000081
2022502478.tif 000082
2022502478.tif 000083
【０４３６】
【表４１】
2022502478.tif 000084
2022502478.tif 000085
【０４３７】
【表４２】
2022502478.tif 000086
2022502478.tif 000087
【０４３８】
【表４３】
2022502478.tif 000088
2022502478.tif 000089
【０４３９】
【表４４】
2022502478.tif 000090
2022502478.tif 000091
【０４４０】
【表４５】
2022502478.tif 000092
2022502478.tif 000093
【０４４１】
【表４６】
2022502478.tif 000094
2022502478.tif 000095
【０４４２】
【表４７】
2022502478.tif 000096
2022502478.tif 000097
2022502478.tif 000098
【０４４３】
【表４８】
2022502478.tif 000099
【０４４４】
セルライト治療の被験者の満足度に関して、ＣＣＨ治療の被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、セルライト治療に「満足している」または「非常に満足している」と答えた割合が高かった（それぞれ４６．８％対１３．６％、ｐ<０．００１）。７１日目の被験者の満足度スコアの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療の被験者（０．３［１．０５］）とプラセボ治療の被験者（−０．６［１．０４］）との間で、統計的に有意な差（ｐ<０．００１）があった。これを以下の表４９にまとめた。
【０４４５】
【表４９】
2022502478.tif 000100
【０４４６】
有効性の結論
一次エンドポイントは、ＩＴＴ集団において、７１日目に対象となる臀部で２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答が得られた患者の割合であった。２レベルのＣＲ  ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者とは、ＣＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善し、ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル改善した被験者と定義した。
【０４４７】
本研究では、ＣＣＨ治療を受けた被験者（１２名［５．６％］）の２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合が、プラセボ治療を受けた被験者（１名［０．５％］）と比較して、統計的に有意な差（ｐ＝０．００２）が認められた。
【０４４８】
薬効を確認するために、一連の二次エンドポイント項目を評価した。ＩＴＴ集団を対象とした８つの鍵となる二次エンドポイント項目のうち７項目において、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べて、統計的に有意な応答の差が認められた。重症度評価では、ベースラインからの変化がマイナスであれば、セルライトの改善を示す。対象となる臀部と非対象となる臀部の結果の概要は以下のとおりである。
・７１日目での対象の臀部の１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合（ＣＣＨ投与群１２４名［５７．９％］対プラセボ治療を受けた被験者６１名［２９．６％］、ｐ<０．００１）。
・７１日目での対象の臀部で２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者４５［２１．０％］対プラセボ治療を受けた被験者１２［５．８％］、ｐ<０．００１）。
・７１日目での対象の臀部で１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者８９名（４１．６％）対プラセボ治療を受けた被験者２３名（１１．２％）、ｐ<０．００１）。
・７１日目での１レベルのＳＳＲＳ応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者９０名（４２．１％）対プラセボ治療を受けた被験者３１名（１５．０％）、ｐ<０．００１）。
・７１日目でのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアのベースラインからの変化の平均（ＳＤ）（ＣＣＨ治療を受けた被験者：−１１．５［１２．７４］対プラセボ治療を受けた被験者：−６．５［１１．７４］、ｐ<０．００１）。
・７１日目での対象の臀部で１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者１２６名（５８．９％）対プラセボ治療を受けた被験者４６名（２２．３％）、ｐ<０．００１）。
・７１日目での対象の臀部で２レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者の割合（ＣＣＨ治療を受けた被験者の３８［１７．８％］対プラセボ治療を受けた被験者９［４．４％］、ｐ<０．００１）を示した。
【０４４９】
非対象臀部の２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者については、ＣＣＨ治療を受けた被験者の方がプラセボ治療を受けた被験者よりも応答者の割合が多かったが（それぞれ１３［６．１％］対４［１．９％］、ｐ＝０．０３３）、この差はファミリーのタイプＩエラー率を５％とした多重度検定では統計的有意性に達しなかった。しかし、この結果は、非対象臀部の副次評価項目の分析結果と合わせて、非対象臀部の応答がＣＣＨ治療を受けた被験者でプラセボ治療を受けた被験者に比べて有利になる傾向を強く支持するものであった。すべての感度分析は、一次および鍵となる二次エンドポイントの結果を支持するものであった。
【０４５０】
また、ｍＩＴＴ集団では、研究開始７１日目までに、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者との間で、すべての支持的エンドポイントに統計的に有意な差が認められた（多くの場合、ＣＣＨによる１回の治療後という早い段階で統計的に有意な差が認められた）。重症度評価では、ベースラインからの変化がマイナスであれば、セルライトが改善されたことになる。対象となる臀部と非対象となる臀部の結果の概要は以下の通りである。
・７１日目のＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化量の平均（ＳＤ）は、対象の臀部（それぞれ０．９［０．８９］対０．４［０．６４］、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ０．９［０．８４］対０．４［０．６７］、ｐ<０．００１）において、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも大きかった。
・７１日目の時点で、ＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答者の割合は、ＣＣＨ治療を受けた被験者の方が、プラセボ治療を受けた被験者よりも、対象の臀部（それぞれ６６．７％対３１．９％、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ６４．５％対３５．６％、ｐ<０．００１）で大きかった。
・７１日目のＣＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化量の平均（ＳＤ）は、対象の臀部（それぞれ０．８［０．７２］対０．２［０．５５］、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ０．８［０．８９］対０．２［０．６１］、ｐ<０．００１）において、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも大きかった。
・７１日目の１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者の割合は、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも、対象の臀部で（それぞれ６５．４％対２７．４％、ｐ<０．００１）、非対象の臀部で（それぞれ６７．６％対２８．４％、ｐ<０．００１）、それぞれ大きかった。
・７１日目の１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合は、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べ、対象臀部（それぞれ４８．１％対１２．１％、ｐ<０．００１）および非対象臀部（それぞれ４９．７％対１５．３％、ｐ<０．００１）で大きかった。
・７１日目のＳ−ＧＡＩＳの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べ、対象の臀部で大きかった（それぞれ０．９［０．９２］対０．２［０．６８］、ｐ<０．００１）。非対象の臀部でも同様の結果が得られた（ＣＣＨ治療を受けた被験者の０．９［０．９４］対プラセボ治療を受けた被験者の０．２［０．６７］、ｐ<０．００１）。
・７１日目の１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者の割合は、対象の臀部（それぞれ６７．７％対２４．１％、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（それぞれ６６．７％対２６．２％、ｐ<０．００１）において、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも大きかった。
・７１日目のＩ−ＧＡＩＳの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者と比較して、対象の臀部において統計的に有意（ｐ<０．００１）に大きかった（それぞれ０．９［０．８１］対０．３［０．５２］）。非対象の臀部についても同様の結果が得られた（ＣＣＨ治療を受けた被験者の０．９［０．７９］対プラセボ治療を受けた被験者の０．３［０．５４］、ｐ<０．００１）。
・７１日目のＣＣＨ治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、対象の臀部（７０．８％対２４．２％、ｐ<０．００１）および非対象の臀部（７０．３％対２１．６％、ｐ<０．００１）において、１レベルのＩ−ＧＡＩＳ応答者の割合が統計的に有意に増加した。
・７１日目のＰＲ−ＣＩＳのベースラインからの変化の平均（ＳＤ）は、総合スコア（１３．２［１２．８０］ｖｓ−７．０［１２．０５］、ｐ<０．００１）と略式スコア（１２．８［１２．６２］ｖｓ６．１［１１０．２５］、ｐ<０．００１）において、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者で統計的に有意に良好であった。また、すべての項目で７１日目に統計的に有意な差が見られた（セルライトの外観に対する満足度［ｐ<０．００１］、自覚［ｐ＝０．０１２］、恥ずかしい［ｐ<０．００１］、老いの外観［ｐ＝０．００９］、体型への懸念［ｐ<０．００１］）。ただし、気になる点については、ＣＣＨ治療を受けた被験者に有利な傾向が見られたが、統計的有意差には至らなかった（ｐ＝０．０５２）。
・７１日目のＰＲ−ＣＩＳが応答者の割合は、総合スコアではＣＣＨ治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも多く（それぞれ５０．０％対２６．２％）、略式スコアでは（それぞれ５２．２％対２９．３％）、これらの差は統計的に有意であった（ｐ<０．００１）。さらに、個々の影響スコアにおいて、ＣＣＨ治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者よりも応答者の割合が多かった。これらの差も統計的に有意であった。
【０４５１】
その他の補足結果は以下の通りである。
・７１日目のＳＳＲＳスコアの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者（３．１［１．６８］）の方が、プラセボ治療を受けた被験者（１．９［１．５５］）よりも大きかった。この差は統計的に有意であった（ｐ<０．００１）。さらに、ＣＣＨ治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、ＳＳＲＳの１レベルの応答を示した割合が高く、それぞれ４８．４％対１６．２％であった。この差も統計的に有意であった（ｐ<０．００１）。
・ＣＣＨ治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、セルライト治療に「満足」または「非常に満足」と答えた割合が高かった（それぞれ４６．８％対１３．６％、ｐ<０．００１）。７１日目の被験者の満足度スコアの平均値（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者（０．３［１．０５］）とプラセボ治療を受けた被験者（０．６［１．０４］）の間で、統計的に有意な差（ｐ<０．００１）があった。
・一連のクロス集計は、ＰＲ−ＰＣＳＳとＳ−ＧＡＩＳの間に一貫性があることを示す。ＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの変化は、Ｓ−ＧＡＩＳの同様の変化と関連した。
・一次および二次エンドポイントのサイト別解析では、複数のサイトで応答が認められ、どの有効性解析においても、１つのサイトが結果に大きく影響することはなかった。
【０４５２】
結論
本研究では、両側臀部のＥＦＰを有する成人女性を対象に、両臀部に０．８４ｍｇ（合計１．６８ｍｇ）を２１日間隔で最大３回投与したところ、ＣＣＨ投与群の２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合応答者の割合が、プラセボ治療を受けた被験者と比較して統計的に有意な差を示し、一次エンドポイント項目を達成した。８つの鍵となる二次エンドポイントのうち７項目およびすべての補足的評価項目において、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間に統計学的に有意な差が認められた。
【０４５３】
ＣＣＨの投与後、重大な、あるいは予期せぬ安全性の問題はなかった。ＡＥの大部分は注射部位に発生し、１４日以内に消失した。血液学的、化学的検査項目、バイタルサインについては、臨床的に意味のある、あるいは気になる傾向は認められなかった。免疫原性については、本剤の他の臨床研究で認められたものと異なる可能性は認められなかった。
【０４５４】
本研究の結果から、ＣＣＨは成人女性の臀部におけるＥＦＰに対して、１臀部あたり０．８４ｍｇ（総投与量１．６８ｍｇ／回）を２１日以上の間隔をおいて３回投与することで、安全かつ有効な治療法であることがわかった。
【０４５５】
実施例４−リリース１（ＲＥＬＥＡＳＥ−１）／リリース２（ＲＥＬＥＡＳＥ−２）
上記実施例２および３は、両臀部に中等度から重度のセルライト（ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳで評価３−４）を有する成人女性を対象に、治療部位ごとにＣＣＨ０．８４ｍｇまたはプラセボの皮下投与を最大３回行った、同一のデザインの多施設共同二重盲検無作為化プラセボ対照段階３研究（リリース−１およびリリース−２）について報告する。
【０４５６】
段階３研究では、ＢＭＩやヘクセル重症度尺度のキャップ（登録基準）はなかった。ヘクセルの登録基準を設けなかったことは、段階２研究デザインとの違いである。この違いにもかかわらず、本研究は厳格な一次エンドポイントを達成し、１６の二次エンドポイントのうち１５項目に合格した。セルライトの重症度におけるヘクセルのキャップがなくなったことで、ＢＭＩの高い被験者が登録され、段階３研究の平均ＢＭＩが上昇したと考えられる。段階３では４２３人中２１０人が肥満であったのに対し、段階２ｂでは９４人中３２人が肥満であった。薬剤の効果はすべてのＢＭＩ群で認められ、患者中心の結果指標はいずれもＢＭＩやその他の要因に影響されなかった。従って、コラゲナーゼはセルライトに対する安全で効果的な治療法であると言える。
【０４５７】
完成した段階２ｂ研究の応答者は、現在、５年間の安全性と耐久性を検討するロールオーバー延長研究で追跡される。また、リリース−１およびリリース−２の被験者は、現在、ロールオーバー延長研究で追跡される。その他のデータの解析では、以下の結果が得られた。
【０４５８】
８４３人の女性が１回以上の注射を受けた（ＣＣＨとプラセボの比較。リリース−１、ｎ＝２１０対ｎ＝２１３、リリース−２、ｎ＝２１４対ｎ＝２０６）。）ＣＣＨ治療を受けた被験者では、プラセボ治療を受けた被験者と比較し、リリース−１（約７．６％対約１．９％、ｐ＝０．００６）、リリース−２（約５．６％ｖｓ．約０．５％、ｐ＝０．００２）において、２レベル以上の複合応答が得られた女性の割合が統計的に有意に高かった。また、リリース−１（約３７．１％対約１７．８％、ｐ＝<０．００１）およびリリース−２（約４１．６％対約１１．２％、ｐ<０．００１）では、プラセボに対して２レベル以上の複合応答が得られた。ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳによる有効性を示す結果を図８および図９に示す。
【０４５９】
分析対象となった集団には、以下のようなものがあった。
【０４６０】
治療意図（Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）（ＩＴＴ）集団には、無作為化された被験者のうち、少なくとも１回の研究薬の注射を受けた者が含まれる。すべての人口統計学的特性およびベースライン特性の概要は、この集団に基づく。一次および二次的有効性パラメータは、この集団に基づく。
【０４６１】
修正治療意図（Ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）（ｍＩＴＴ）集団は、ＩＴＴ集団のうち、対象および非対象の臀部について、ベースラインおよび注射後に少なくとも１回、調査員によるＣＲ−ＰＣＳＳと被験者によるＰＲ−ＰＣＳＳの両方の評価を受けたすべての被験者を対象とした。すべての二次的効果および支持的効果の評価は、ｍＩＴＴ集団に基づいて行われた。
【０４６２】
同じデザインの各研究では、対象となる臀部で２レベル以上の複合応答者の割合が、ＣＣＨ群で１２％以上、プラセボ群で３％以下（オッズ比≧４．４）、参加者の中止率が１０％程度であるという仮定に基づいて、サンプルサイズを推定した。以上の仮定により、各研究では、４２０人の女性を２つの治療群に１：１の割合で無作為に割り付ける必要があった。このサンプル数は、一次および鍵となる二次エンドポイントにおける統計的に有意な変化を検出するために、０．０５のタイプ１エラーで９０％以上の検出力を提供することを目的とした。治療に無作為に割り付けられ、研究薬の注射を１回以上受けた女性は、ＩＴＴおよび安全性集団に含まれた。一次および鍵となる二次エンドポイントのデータは、Ｃｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ検定を用いて分析し、研究実施施設の調整を行った。ＰＲ−ＣＩＳ総合スコアのベースラインから７１日目までの変化は、ベースライン値を調整した後、治療群と分析センターを要因とする共分散分析により評価した。７１日目の有効性データが欠落している女性は、非応答者とした。人口統計、安全性、免疫原性に関するデータは、記述統計を用いてまとめた。統計解析には、ＳＡＳ（商標登録）統計ソフトウェアパッケージＶｅｒｓｉｏｎ９．３以上（ノースカロライナ州、カリー、ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．）を用いた．
【０４６３】
臨床的に意味のある変化は、米国食品医薬品局のガイダンスに基づき、アンカーベースの手法を用いて推定した（ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：Ｐａｔｉｅｎｔ−ｒｅｐｏｒｔｅｄ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｍｅａｓｕｒｅｓ：  ｕｓｅ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｔｏ  ｓｕｐｐｏｒｔ  ｌａｂｅｌｉｎｇ  ｃｌａｉｍｓ．２００９年１２月発行．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｄｏｗｎｌｏａｄｓ／ｄｒｕｇｓ／ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／ｕｃｍ１９３２８２．ｐｄｆ．Ａｐｒｉｌ  ２３、２０１９付でアクセス可能）に記載される。）Ｓ−ＧＡＩＳはＰＲ−ＰＣＳＳのアンカーの役割を果たした。セルライトの重症度の変化を検出するＰＲ−ＰＣＳＳの能力を、２つの研究のプールデータを用いて分析した。結果は、ＰＲ−ＰＣＳＳ（従属変数）とＳ−ＧＡＩＳ（独立変数）のデータをＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ  １−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡモデルで分析し、臨床的に意味のある変化のしきい値を決定した。
【０４６４】
セルライト治療を目的としたＣＣＨの初期の研究と同様に、ＣＣＨは段階３研究において、すべての投与量グループで良好な忍容性を示し、ほとんどの有害事象は軽度から中等度で、主に注射部位に限定された。本研究で最も多く見られた有害事象は、注射部位のあざ、注射部位の痛み、注射部位の変色、注射部位の結節、注射部位のそう痒だった。さらに、ＣＣＨ投与群の有害事象による中止率は、リリース１、リリース２ともに、それぞれ約４．３％、約３．７％と非常に低かった。
【０４６５】
リリース−１／リリース−２では、１回目の治療で平均して１０人中７人以上の被験者がＰＲ−ＰＣＳＳスコアを１レベル以上改善した。また、これらの被験者は、ＰＲ−ＣＩＳ幸福度スコア（セルライトの見た目に対する満足度）の大幅な上昇（プラセボと比較して統計的に有意な改善、ｐ<０．０１）を経験した。本臨床研究の他の側面では、５０％以上の被験者がＰＲ−ＰＣＳＳスコアが１レベル上昇し、６５％以上の被験者がＳ−ＧＡＩＳ（被験者グローバル日的改善尺度（Ｓｕｂｊｅｃｔ  Ｇｌｏｂａｌ  Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅ））を用いて「改善した」、「かなり改善した」または「非常に改善した」と評価した。また、ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＰＣＳＳ、Ｉ−ＧＡＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、ＰＲ−ＣＩＳの結果は、年齢、ＢＭＩ、肌の色に関係なく得られた。そして、有意に、正常体重／ＢＭＩの女性のサブ集団内で、セルライトの外観の改善率が研究集団全体よりも高かった。例えば、約１１％の正常体重の患者、約８％の過体重の患者、約２．５％の肥満の患者が、ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳによる２レベルの複合応答を示した。
【０４６６】
図１０は、一次および鍵となる二次エンドポイントである非対象臀部の複合応答者（データ解析のため）を示す棒グラフで、７１日目にＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの両方でベースラインから２レベル以上または１レベル以上の重症度改善が見られた患者と定義される。
【０４６７】
両研究において、有効性の一次エンドポイントである７１日目に、対象となる臀部のＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの両方で２レベル以上の複合応答者となった女性の割合は、プラセボと比較して有意に高かった（リリース−１、ｐ＝０．００６、リリース−２、ｐ＝０．００２、図８）。さらに、７１日目に対象となる臀部で１レベル以上の複合応答が得られた女性の割合は、プラセボと比較して有意に高かった（リリース−１および−２、いずれもｐ<０．００１、図８）。非対象臀部における７１日目の≧２レベルおよび≧１レベルの複合応答者の割合（図１０）は、両研究とも対象臀部の割合と同様であった。２レベル（図９Ａ）と１レベル（図９Ｂ）の複合応答の写真画像は、ＣＣＨによる治療後７１日目の皮膚表面の形状がベースラインと比較して改善していることを示す。さらに、両研究ともに、ＣＣＨ治療を受けた女性は、ＰＲ−ＰＣＳＳ（１レベル以上の改善）およびＳ−ＧＡＩＳ評価（１レベル以上および２レベル以上の改善、図１１）、ＰＲ−ＣＩＳ総合スコア（図１２）について、プラセボ治療を受けた女性と比較して、ベースラインから７１日目までに有意な改善（すべてｐ<０．００１）を示した。ＰＲ−ＰＣＳＳの変化を検出する能力は、このレベルの変化が外部アンカー変数であるＳ−ＧＡＩＳの改善評価と関連したことから、１レベルの改善変化の閾値が女性にとって臨床的に意味のある変化を示すことを表示した。本実施例では、特に明記しない限り、研究３０２および３０３で使用した「日数」は、研究３０２および３０３の初回投与（１日目）に対するものである。
【０４６８】
両研究とも、ＰＲ−ＰＣＳＳ（１レベル以上の改善）およびＳ−ＧＡＩＳ評価（１レベル以上および２レベル以上の改善、図１１）、ＰＲ−ＣＩＳ総合スコア（図１２）において、ＣＣＨ治療を受けた女性は、プラセボ治療を受けた女性と比較して、ベースラインから７１日目まで有意な改善（すべてｐ<０．００１）を示した。ＰＲ−ＰＣＳＳの変化を検出する能力は、このレベルの変化が外部アンカー変数であるＳ−ＧＡＩＳの改善評価と関連していたことから、１レベルの改善変化の閾値が女性にとって臨床的に意味のある変化を示すことがわかった。
【０４６９】
コラゲナーゼ注射は、迅速な効果を発揮した。初回治療の２１日後には、被験者のＰＲ−ＰＣＳＳスコアの平均値がプラセボとは異なり、その後の治療で継続的かつ有意な改善が見られた。同様に、初回治療の２１日後には、被験者のＣＲ−ＰＣＳＳスコアの平均値がプラセボとは異なり、その後の治療でも継続して有意な改善が見られた。
【０４７０】
段階３研究では、１１％以上の患者が、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスケールで測定した２レベルの複合応答を少なくとも片方の臀部で示した。
【０４７１】
患者と医師の両方が、以下のようなフォト数値尺度で応答を示した。
・初回治療から７１日目までに、３分の２以上の患者がどちらかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した
・３分の２以上の医師が、初回治療から７１日目までに、どちらかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した
・初回治療から７１日目までに、４分の３以上の患者がいずれかの臀部で１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／または１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳの応答を得た
【０４７２】
患者と医師の双方が、以下のようなグローバルな改善を目の当たりにした。
・初回治療から７１日目までに、４分の３以上の患者がＳ−ＧＡＩＳを用いてどちらかの臀部の改善を確認した
・初回治療から７１日目までに、４分の３以上の医師がＩ−ＧＡＩＳを用いてどちらかの臀部の改善を確認した
【０４７３】
フォト数値とその他の患者中心の尺度における患者の応答は以下の通りである。
・３分の２以上の患者が、初回治療から７１日目までに、どちらかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳが１レベル、および／またはＳＳＲＳが１レベルの応答を示した
・初回治療から７１日目までに、３分の２以上の患者がいずれかの臀部においてＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＣＴの１レベルの応答を示した
・初回治療から７１日目までに、４分の３以上の患者がどちらかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳ−ＧＡＩＳの１レベルの応答を示した
・初回治療から７１日目までに、４分の３以上の患者がいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの満足を示す応答および／またはＰＲ−ＣＩＳの１レベルの満足と示す応答となった
・初回治療から７１日目までに、４分の３以上の患者が、どちらかの臀部において、１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答、および／または、１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になる応答を示した
・初回治療から７１日目までに、４分の３以上の患者がどちらかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＰＲ−ＣＩＳ：自覚の１レベルの応答を示した
【０４７４】
Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｅｄ  Ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ  Ｉｍｐａｃｔ  Ｓｃａｌｅ（ＰＲ−ＣＩＳ）では、すべてのドメインで統計的な改善が見られた。
・セルライトの見た目への不満
・気になる
・自覚
・恥ずかしい
・老けて見える
・太り過ぎ／体型の崩れの外観
【０４７５】
ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＰＣＳＳ、Ｉ−ＧＡＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、および／またはＰＲ−ＣＩＳの結果は、年齢、ＢＭＩ、肌の色とは無関係であった。また、体重／ＢＭＩが正常な女性の部分集団では、セルライトの外観の改善度が全体の研究集団よりも高かったことが特徴である。
【０４７６】
ＰＲ−ＰＣＳＳで１レベルの改善が見られた被験者（ＣＣＨ）は、ＰＲ−ＣＩＳ満足スコアが大幅に増加（プラセボに対して統計的に有意）した。さらに、本研究の応答者は、１回目の注射後にプラセボとの有意な差が見られた。
【０４７７】
ＣＣＨ  を投与された被験者は、本研究の一次エンドポイント（リリース−１、ｐ＝０．００６&リリース−２、ｐ＝０．００２）で測定されたとおり、治療によりセルライトの外観が統計的に有意なレベルで改善し、７１日目にはプラセボ治療を受けた被験者と比較して対象となる臀部のセルライトの重症度が少なくとも２レベル複合で改善された（図８）。さらに、リリース−１は８つの鍵となる二次エンドポイントのうち８つを、リリース−２は８つの鍵となる二次エンドポイントのうち７つをクリアした。ＣＣＨは、積極的に治療を受けた被験者の忍容性が高く、ほとんどの有害事象は軽度から中等度で、主に注射部位に限られた。
【０４７８】
対象の臀部または非対象の臀部、あるいはその両方において、少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者であった被験者のＰＲ−ＣＩＳ幸福スコアを表５０に示す。このように、ＣＣＨ治療は、セルライトの出現に対する被験者の幸福度を改善するために、即効性があった。
【表５０】
2022502478.tif 000101
【０４７９】
リリース−１の一次エンドポイント
ＣＣＨを投与された被験者の７．６％が、７１日目に対象となる臀部のセルライトの外観について、調査員および患者による複合評価で非常に有意な改善（ｐ＝０．００６）を示した（ＣＲ−ＰＣＳＳ（臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度）（Ｃｌｉｎｉｃｉａｎ  Ｒｅｐｏｒｔｅｄ−Ｐｈｏｔｏｎｕｍｅｒｉｃ  Ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃａｌｅ）およびＰＲ−ＰＣＳＳ（患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度）（Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｅｄ−Ｐｈｏｔｏｎｕｍｅｒｉｃ  Ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃａｌｅ）の両スコアで２レベルの応答が見られた）。
【０４８０】
リリース−２の一次エンドポイント
ＣＣＨを投与された被験者の５．６％が、７１日目に対象となる臀部のセルライトの外観に関する調査員と患者の複合評価において、ＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両スコアが２レベルで改善したのに対し、プラセボ被験者では０．５％しか改善しなかった。
【０４８１】
両リリース−１、リリース−２の二次エンドポイント
・ＣＣＨを投与されたリリース−１の被験者の３７．１％、リリース−２の被験者の４１．６％が、７１日目に対象となる臀部のＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両スコアで測定されるセルライトの外観について、調査員と患者の複合評価で１レベルの非常に有意な応答を示したのに対し、プラセボ被験者ではそれぞれ１７．８％と１１．２％にとどまった。
・ＣＣＨを投与したリリース−１の被験者の２４．３％、リリース−２の被験者の２１．０％が、ＰＲ−ＰＣＳＳスコアで測定した７１日目の対象臀部のセルライトの出現に関する患者の評価において、プラセボ被験者の１２．２％、５．８％と比較して、統計的に非常に有意な２レベルの改善を示した。
・ＣＣＨを投与したリリース−１では５４．３％、リリース−２では５７．９％の被験者が、ＰＲ−ＰＣＳＳスコアで測定した７１日目の対象臀部のセルライトの出現に関する患者の評価において、プラセボ被験者の３６．２％と２９．６％に比べて、統計的に有意に１レベルの改善を示した。
・ＣＣＨを投与されたリリース−１の被験者の４８．６％、リリース−２の被験者の４２．１％が、ＳＳＲＳ（被験者自己評価尺度）（Ｓｕｂｊｅｃｔ  Ｓｅｌｆ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）で測定された７１日目の対象臀部のセルライトの外観に関する患者の評価において、プラセボ被験者の２２．５％、１５．０％と比較して、統計的に有意に１レベルの改善を示した。
・ＣＣＨを投与されたリリース−１の被験者の５４．３％、リリース−２の被験者の４６．８％が、７１日目のセルライト治療に対する被験者満足度評価で「満足」または「非常に満足」と答えたのに対し、プラセボ被験者ではそれぞれ２５．８％、１３．６％にとどまった。
・ＣＣＨを投与したリリース−１では被験者の７３．３％、リリース−２では被験者の６７．８％が、７１日目に対象となる臀部のセルライト部位の見た目が「改善した」、「非常に改善した」、「非常に改善した」と報告されたのに対し、プラセボ被験者ではそれぞれ４３．２％、２４．１％にとどまった。
・ＣＣＨを投与された被験者は、リリース−１研究では７１日目に非対象の臀部において、ＣＲ−ＰＣＳＳスコアとＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方が２レベル改善したことで評価される、調査員と患者によるセルライトの外観の複合評価において、統計的に有意な改善を示したが、リリース−２研究では統計的に有意な結果は得られなかった。
【０４８２】
コラゲナーゼ治療を受けた患者は、治療後約７１日目にＣＲ−ＰＣＳＳスコアとＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方でベースラインから２点以上の改善が見られたか、または治療後約７１日目にＣＲ−ＰＣＳＳスコアとＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方でベースラインから１点以上の改善が見られた。また、そのような患者は、治療後約６ヶ月の時点でＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方についてベースラインから≧２点の改善があったか、治療後約６ヶ月の時点でＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方についてベースラインから≧１点の改善があったか、治療後約１２ヶ月の時点でＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方についてベースラインから≧２点の改善があったか、治療後約１２ヶ月の時点でＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方についてベースラインから≧１点の改善があった。さらに、そのような患者は、治療後約２２日目、４３日目、９０日目、または１８０日目に、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方について、ベースラインから≧２ポイントまたは≧１ポイントの改善を有した。
【０４８３】
患者は、治療後約６ヶ月の時点で、ＣＲ−ＰＣＳＳスコアとＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方について、ベースラインから≧３ポイントの改善を示したか、治療後約１２ヶ月の時点で、ＣＲ−ＰＣＳＳスコアとＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方について、ベースラインから≧３ポイントの改善を示したか、治療後約１２ヶ月の時点で、ＣＲ−ＰＣＳＳスコアとＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方について、ベースラインから≧３ポイントの改善を示した。さらに、そのような患者は、治療後約２２日、４３日、９０日、または１８０日の時点で、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳスコアの両方について、ベースラインからの≧３ポイントの改善を有した。別の態様では、コラゲナーゼ治療は、耐久性（本明細書で定義される）を示した。
【０４８４】
ＰＲ−ＣＩＳ（患者報告式セルライトインパクト尺度：Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｅｄ  Ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ  Ｉｍｐａｃｔ  Ｓｃａｌｅ）では、セルライトの外観に対する不満、気になる、自覚、恥ずかしい、老いへの懸念、太って見える／体型への懸念からなるグループから選択された少なくとも１つの領域において、統計的な改善が認められた。非プラセボ群のうち、治療後７１日目に対象となる臀部の２レベルの複合改善で「有」と応答した人の割合は約１５．４％であった。
【０４８５】
その他の結論は以下の通りである。
１．３分の１以上の患者が、いずれかの臀部において少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を示した。患者の３分の２以上が、いずれかの臀部において少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を認めた。全患者のいずれかの臀部において、少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答が見られた。
２．３分の１以上の患者が、２２日目までにどちらかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を示した。３分の２以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。すべての患者が、２２日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を示した。
３．３分の１以上の患者が、４３日目までにどちらかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を示した。３分の２以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。すべての患者が、４３日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を示した。
４．３分の１以上の患者が、７１日目までにどちらかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を示した。３分の２以上の患者が、７１日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。すべての患者が、７１日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答を示した。
５．３分の１以上の医師がいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を見た３分の２以上の医師がいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を見たすべての医師が、いずれかの臀部において少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を見た。
６．３分の１以上の医師が、２２日目までにどちらかの臀部に少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。３分の２以上の医師が、２２日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。すべての医師が、２２日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。
７．３分の１以上の医師が、４３日目までにどちらかの臀部に少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。３分の２以上の医師が、４３日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。すべての医師が、４３日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。
８．３分の１以上の医師が、７１日目までにどちらかの臀部に少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。３分の２以上の医師が、７１日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。すべての医師が、７１日目までにいずれかの臀部で少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答を確認した。
９．７１日目までに４分の３以上の患者がどちらかの臀部で１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳおよび／または１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳの応答を得た。
１０．４３日目には、４分の３以上の医師がＩ−ＧＡＩＳを用いてどちらかの臀部の改善を確認した。
１１．３分の１以上の患者が、いずれかの臀部においてＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＲＳの１レベルの応答を示した。３分の２以上の患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者および／または１レベルのＳＳＲＳ応答者であった。３分の２以上の患者がどちらかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルおよび／またはＳＳＲＳの１レベルの応答者であった。
１２．３分の１以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＲＳの１レベルの応答を示した。３分の２以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者および／または１レベルのＳＳＲＳ応答者となった。患者の３分の２以上が、２２日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＲＳ応答を示した。
１３．３分の１以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＲＳの１レベルの応答を示した。３分の２以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＲＳ応答を示した。患者の３分の２以上が、４３日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＲＳ応答を示した。
１４．３分の１以上の患者が、７１日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＲＳの１レベルの応答を示した。３分の２以上の患者が、７１日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＲＳ応答を示した。患者の３分の２以上が、７１日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＲＳ応答を示した。
１５．３分の１以上の患者が、どちらかの臀部においてＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＣＴの１レベルの応答を示した。３分の２以上の患者が、いずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＣＴ応答を示した。３分の２以上の患者がどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＣＴ応答を示した。
１６．３分の１以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＣＴの１レベルの応答を示した。３分の２以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＣＴ応答を示した。患者の３分の２以上が、２２日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＣＴ応答を示した。
１７．３分の１以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＣＴの１レベルの応答を示した。３分の２以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＣＴ応答を示した。４３日目までに全患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＣＴ応答を示した。
１８．３分の１以上の患者が、７１日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳＳＣＴの１レベルの応答を示した。３分の２以上の患者が、７１日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＣＴ応答を示した。７１日目までに全患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳＳＣＴ応答を示した。
１９．４分の１以上の患者が、いずれかの臀部においてＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳ−ＧＡＩＳの１レベルの応答を示した。患者の２分の１以上が、いずれかの臀部においてＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳ−ＧＡＩＳの１レベルの応答を示した。４分の３以上の患者が、どちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。全例がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。
２０．４分の１以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳ−ＧＡＩＳの１レベルの応答を示した。患者の２分の１以上が、２２日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。４分の３以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。２２日目までに全患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。
２１．４分の１以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＳ−ＧＡＩＳの１レベルの応答を示した。２分の１以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。４分の３以上の患者が、４３日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。４３日目までに全患者がどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。
２２．患者の４分の１以上が、７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。患者の２分の１以上が、７１日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。４分の３以上の患者が、７１日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。７１日目までに全患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答を示した。
２３．４分の１以上の患者が、どちらかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＰＲ−ＣＩＳの１レベルの応答を示した。２分の１以上の患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答であった。４分の３以上の患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答であった。全例がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答であった。
２４．４分の１以上の患者が、２２日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。患者の２分の１以上が、２２日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。４分の３以上の患者が、２２日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。全患者が２２日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答を示した。
２５．４分の１以上の患者が、４３日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。２分の１以上の患者が、４３日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。４分の３以上の患者が、４３日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。全ての患者が４３日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。
２６．４分の１以上の患者が、７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。２分の１以上の患者が、７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。４分の３以上の患者が、７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答となった。全ての患者が７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：満足を示す応答であった。
２７．４分の１以上の患者が、どちらかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答および／またはＰＲ−ＣＩＳの１レベルの「気になるとの応答」であった。２分の１以上の患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答であった。４分の３以上の患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答であった。患者の４分の３以上がどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答であった。
２８．４分の１以上の患者が、２２日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答となった。２分の１以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答であった。さらに別の実施形態では、患者の４分の３以上が、２２日目までにいずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答であった。すべての患者が、２２日目までにいずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答であった。
２９．４分の１以上の患者が、４３日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答となった。２分の１以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答となった。４分の３以上の患者が、４３日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答となった。４３日目までに全患者がどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答を示した。
３０．４分の１以上の患者が、７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答となった。２分の１以上の患者が、７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答となった。４分の３以上の患者が、７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答となった。７１日目までに全患者がどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：気になるとの応答を示した。
３１．患者の４分の１以上が、いずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。別の実施形態では、患者の２分の１以上が、いずれかの臀部において、１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。４分の３以上の患者が、どちらかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。全患者がいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。
３２．４分の１以上の患者が、２２日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答となった。患者の２分の１以上が、２２日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答となった。４分の３以上の患者が、２２日目までにいずれかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答となった。すべての患者が２２日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答となった。
３３．４分の１以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部でＰＲ−ＰＣＳＳの１レベルの応答者および／またはＰＲ−ＣＩＳの１レベルの「自覚の」応答となった。２分の１以上の患者が、４３日目までにいずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。さらに別の実施形態では、４３日目までに患者の４分の３以上がどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。全ての患者が、４３日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。
３４．患者の４分の１以上が、７１日目までにいずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。別の実施形態では、患者の２分の１以上が、７１日目までにいずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。４分の３以上の患者が、７１日目までにいずれかの臀部において１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。全ての患者が７１日目までにどちらかの臀部で１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答および／または１レベルのＰＲ−ＣＩＳ：自覚の応答であった。
３５．今回の研究では、アンカーベースの分析により、ＰＲ−ＰＣＳＳスコアの変化が１以上であれば臨床的に意味があるとされた。両研究において、ＣＣＨ治療を受けた女性の半数以上が、ＰＲ−ＰＣＳＳスコアの変化が１以上であった（５４．３％および５７．９％）。ＰＲ−ＰＣＳＳとＣＲ−ＰＣＳＳの両方で１レベル以上の複合応答が３５％以上の女性に認められ、Ｓ−ＧＡＩＳで１レベル以上の応答が５５％以上の女性に認められた。
３６．ＰＲＣＩＳ総合スコアのベースラインからの変化に基づき、ＣＣＨで治療を受けた女性は、プラセボで治療を受けた女性と比較して、治療後にセルライトの視覚的および感情的な影響を総合的に軽減したと報告した。つまり、生活の質と自尊心が向上した。
３７．ＡＥは速やかに消失し、強度は軽度から中等度であり、研究中止の原因となる頻度は低かった（いずれの研究でも女性の５％未満）。
３８．今回の研究では、これまでのセルライト研究の中で最大の合計患者数（Ｎ＝８４３）を含み、それぞれ多施設、無作為化、二重盲検、プラセボ対照の研究デザインを採用する。
３９．重度のセルライトを持つ女性を含む広範な研究参加基準を設定した。ベースラインで重度のセルライトを有する女性のうち、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳで評価したＣＣＨ治療を受けた女性の１５％以上および３５％以上が、７１日目に対象となる臀部に改善を認めた。前述のように、一次エンドポイントであるベースラインからの２レベル以上の複合的な改善は、厳しい基準と考えられる。しかし、この厳しい基準にもかかわらず、ＣＣＨを投与された女性は、プラセボと比較して、一次エンドポイントを満たす割合が有意に高かった。
４０．２つの段階３無作為化プラセボ対照研究によると、ＣＣＨは中度から重度の臀部のセルライトを持つ女性に対して、安全で効果的な治療法である。
【０４８６】
実施例２および３（研究３０２および３０３）の項目毎の結果。
【０４８７】
実施例２および３で実施した分析は同一であったため、実施例２および３の一次および鍵となる二次エンドポイントの結果を並べた表を表５１に示す。
【０４８８】
【表５１】
2022502478.tif 000102
2022502478.tif 000103
【０４８９】
ピボタル段階３研究（研究３０２および研究３０３、以下「プール１」）および無作為化二重盲検プラセボ対照研究（研究２０１、研究３０１および研究３０２、以下「プール２」）のプール解析結果は、各研究の結果を比較する。研究−２０２、−２０５、−３０４の結果は、効果の持続性を裏付け、研究−２０２の結果は、ＣＣＨを再投与しても耐性がないことを裏付ける。また、各研究（研究２０１、研究３０２、研究３０３）の一次エンドポイントの解析結果、およびプール１、２での統合結果では、臨床医（治験担当者）と患者（被験者）の尺度の複合で測定した結果、ＣＣＨ治療群ではプラセボ治療群に比べてセルライトの重症度の低下がより頻繁に認められたことが示された。
【０４９０】
一次評価項目および鍵となる二次評価項目の比較結果（プール１−ＩＴＴ集団）を表５２に示す。
【０４９１】
【表５２】
2022502478.tif 000104
【０４９２】
関連する臨床データを以下の表５３−６１に示す。
【０４９３】
【表５３】
2022502478.tif 000105
【０４９４】
【表５４】
2022502478.tif 000106
【０４９５】
【表５５】
2022502478.tif 000107
【０４９６】
【表５６】
2022502478.tif 000108
【０４９７】
【表５７】
2022502478.tif 000109
【０４９８】
【表５８】
2022502478.tif 000110
【０４９９】
【表５９】
2022502478.tif 000111
【０５００】
【表６０】
2022502478.tif 000112
【０５０１】
【表６１】
2022502478.tif 000113
【０５０２】
２つの多施設共同無作為化二重盲検プラセボ対照研究の結果、ＣＣＨは、プラセボと比較して、７１日目に２レベルの複合応答の割合で評価されるセルライトの重症度を有意に減少させることが実証された。また、段階３研究では、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価において、ＣＣＨ治療群とプラセボ治療群の明確な差が、最初の治療セッションから２１日後という早い段階で認められた。
【０５０３】
サブグループ解析の結果、年齢、人種、民族、ＢＭＩ、フィッツパトリック・スキンタイプ、セルライトの家族歴、ベースラインのセルライトの重症度、免疫原性の有無は、有効性に明らかな影響を及ぼさないことが示された。６５歳以上の年齢層およびＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２以上のカテゴリーにおけるＣＣＨの効果をさらに評価するために、補足的な事後解析を行った。選択された事後解析は、主要な研究の鍵となる二次エンドポイントであり、対象臀部における１レベルの複合応答、非対象臀部における２レベルの複合応答、２レベルおよび１レベルのＰＲ  ＰＣＳＳ応答解析を含む。この分析結果に基づき、すべてのサブの群において、ＣＣＨはプラセボと比較して有効性が高い傾向にあることが示された。
【０５０４】
また、すべての鍵となる二次エンドポイントにおいて、ＣＣＨ治療群とプラセボ治療群の間に統計的に有意な差が認められた。これらの副次評価項目には、対象臀部のＰＲ−ＰＣＳＳ１レベルの応答者の割合、対象臀部のＰＲ−ＰＣＳＳ２レベルの応答者の割合、対象臀部の１レベルの複合応答者の割合、非対象臀部の２レベルの複合応答者の割合、ＳＳＲＳ１レベルの応答者の割合、ＰＲ−ＣＩＳ総合スコアのベースライン（１日目）からの変化、対象臀部のＳ−ＧＡＩＳ１レベルの応答者、対象臀部のＳ−ＧＡＩＳ２レベルの応答者が含まれた。
【０５０５】
これらの重要な副次評価項目には、被験者にとって適切で臨床的に意味のある、患者が報告する治療効果の影響度を評価する尺度が含まれる。ＰＲ−ＣＩＳはセルライトの視覚的および感情的な影響を評価し、ＳＳＲＳはセルライトの見た目に対する満足度を評価し、Ｓ−ＧＡＩＳは外観を評価した。全体的に、患者が報告した満足度と感情的影響の指標は、プラセボ治療群と比較して、ＣＣＨ治療群でより大きく、統計的に有意な改善が見られた。セルライトの重症度の減少は、ＣＣＨ０．８４ｍｇ／治療部位の最初の治療セッションの投与後２１日目という早い時期に明らかになり、７１日間の二重盲検研究期間を通して持続した。また、−３０４研究の１８０日目までの結果では、親研究終了後６カ月までＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳでの耐久性（効果の持続性）が示された。
【０５０６】
実施例５−セルライト治療におけるＣＣＨの安全性と一時的な応答パターンを評価する段階３Ｂ、非盲検、長期研究（研究３０４）
本研究は、上記実施例２および３の多施設、非盲検、長期研究である。本研究では、７１日間の二重盲検プラセボ対照研究（実施例２（研究３０２）または実施例３（研究３０３）、以下「親研究」（"parent studies"）または「親研究」（"parent study"））において、成人女性のＥＦＰを有する両側臀部２箇所の同時治療（総投与量は最大１．６８ｍｇ×３回）において、以前にＣＣＨを臀部１箇所あたり０．８４ｍｇ投与された被験者を評価した。前述のいずれかの研究で終了した後、親研究の７１日目（すなわち、初回治療後７０日目）から最大５年間、被験者を追跡調査した（今後も追跡調査する予定）。この期間は、これらの研究でＣＣＨに最後にさらされてから約２８日後である。
【０５０７】
本実施例で特に明記しない限り、研究３０４で使用した「日数」は、研究３０２または３０３のいずれかにおける初回投与（１日目）から７１日目を基準とした。セルライト評価は、本研究の１８０日目に行われたが、これは実施例２および３で報告された７１日目から約１８０日後であり、被験者のＣＣＨによる最初の治療から約２５１日後であった。したがって、本実施例５における「１８０日目」とは、実施例２および３の７１日目の約１８０日後を意味する。本実施例５の１８０日目の評価は、評価が完了するまで、被験者、調査員、および施設の担当者が、段階３研究で受けた治療について盲検化されているという点で、盲検化方式で実施された。
【０５０８】
本研究の一次目的は、（ａ）成人女性のＥＦＰ治療におけるセルライトに対するＣＣＨの長期安全性、（ｂ）成人女性のＥＦＰ治療の再治療に使用した場合のＣＣＨの安全性、（ｃ）成人女性のＥＦＰ治療後のＣＣＨの長期免疫原性プロファイルを評価することであった。本研究の二次的目的は、ＣＣＨで治療したＥＦＰの成人女性における応答率低下までの期間（ＴＲＲ）、すなわち治療の持続性を評価することであった。この研究は現在進行中である。本実施例は、２０１９年４月１日までに収集されたデータを示す。その日までに少なくとも１８０日目の評価来院を完了した４７９人の被験者が含まれる。
【０５０９】
実施例２および３の研究を完了した７５５人の被験者（ＣＣＨ治療を受けた被験者およびプラセボ治療を受けた被験者）のうち、６１７人の被験者（ＣＣＨ治療を受けた被験者およびプラセボ治療を受けた被験者）がこの非盲検延長研究に参加した。本研究の１８０日目にこれらの被験者の盲検化が解除されると、その後ＣＣＨ治療を受けた被験者のみが本研究に残った。
【０５１０】
研究デザインの概要を図２５に示す。１８０日目の評価が完了した後（すなわち、実施例２および３の７１日目から１８０日後）、親研究における各被験者の研究治療についてサイトの盲検化を解除し（親研究の７１日目から約６ヶ月後、親研究のＣＣＨの初回投与から約２５１日後）、それらの研究中にプラセボを投与された被験者は、研究を中止し、研究を継続しなかった。ＣＣＨ治療を受けた被験者は、その後、以下の３つのカテゴリーのいずれかに分類された。
・カテゴリーＩ（１レベルの複合応答）には、親研究でＣＣＨの投与を受け、親研究の７１日目にどちらか（または両方）の臀部で最大の複合応答が得られ、ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳで評価したセルライトの重症度が最大で１レベル改善された被験者が含まれる。両臀部で改善が見られた場合、複合的な１レベルの改善が同じ臀部で見られたことが対象となる（すなわち、ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの改善が同じ臀部で見られたことが必要）。また、１つの尺度で２レベルの改善が見られたものの、もう１つの尺度では１レベルの改善しか見られなかった被験者も、複合的な改善が同じ臀部内で起こっていれば、カテゴリーＩの被験者とみなされた。カテゴリーＩの被験者は、本非盲検研究において、最大２つの臀部に対して１回の追加再治療コース（すなわち、約２１日間隔で３回の治療セッション）を受けることができる。再治療は、１８０日目の評価後、親研究での被験者の治療の盲検化が解除された後に開始できる。親研究からの研究薬の盲検化が解除されていれば、再治療のためのスクリーニングは１８０日目の来院時に開始しても良い。カテゴリーＩの被験者では、複合的な改善度が１レベル以下の臀部のみが再治療の対象となる。再治療開始後（治療開始日１）の非盲検有効性の評価は、本非盲検研究の治療開始日４（７１日目＋５日目）までとし、その後は、再治療を受けた５年間の時期に応じて、２年間は６ヵ月ごとに、その後は親研究３０２および３０３の７１日目から最長５年間（１８００日目）まで毎年観察する。カテゴリーＩに該当する被験者で、追加の再治療を受けないことを選択した場合は、観察期間（第２〜７回、すなわち１２、１８、２４、３６、４８、６０カ月目）が設けられる。
・カテゴリーＩＩ（２レベルの複合応答者）には、親研究でＣＣＨの投与を受け、親研究の７１日目にＰＲ−ＰＣＳＳとＣＲ−ＰＣＳＳの両方で少なくとも１つの臀部のセルライトの重症度が２レベル以上改善した被験者が含まれる（すなわち、２レベルの複合応答者）。これらの被験者は、親研究の７１日目から２年間は約６カ月ごとに、その後は最大５年間（１８００日目）毎年、ＴＲＲ（以下に定義）と安全性について観察される。カテゴリーＩＩの被験者は、親研究の７１日目と比較して複合応答が少なくとも１レベル低下し、かつ親研究の１日目と比較してどちらか一方または両方の臀部で複合応答が２レベルを維持しなくなった場合、再治療の対象となり、その後は観察に参加することになる。
・カテゴリーＩＩＩ（非複合型応答）には、親研究で積極的にＣＣＨを投与されたものの、カテゴリーＩまたはＩＩに含まれる基準を満たさなかったその他のすべての被験者が含まれる。これらの被験者は、２年間は６カ月ごとに、最大５年間は１年ごとに安全性を観察され（１８００日目）、研究中に再治療を受けることはできない。
【０５１１】
ただし、治療可能なＥＦＰ陥凹部がない臀部を対象とし、調査員が治療来院１、治療来院２、または治療来院３でＣＲ−ＰＣＳＳのスコアが０であると評価した場合を除く。各再診時には、治療対象となる臀部を、本明細書に記載されているような一貫した標準化されたリラックスしたポーズで被験者が立っている状態で、陥凹部と注射部位をマーキングする前と後に写真撮影を行う。
【０５１２】
治療領域は、対象となる臀部と定義される。被験者は、１８０日目以降、どちらか一方または両臀部（すなわち、左または右の臀部）に治療を受ける資格がある。すべてのセルライト評価は、個々の治療部位に対して行われる。治療部位は別々に評価される。各臀部の陥凹部は、被験者が一定のリラックスしたポーズをとって立っている時に明らかで、はっきりとしたもので、治療に適したものでなければならない。同じ臀部の陥凹部、または異なる臀部の陥凹部は、指定された治療回数で再治療することができるが、すべての治療回数において、臀部内のすべての場所に注射を行う必要がある（例：臀部１つにつき１２回）。
【０５１３】
特定の臀部（右／左）への注射が治療来院時（例えば、治療来院２）に行われなかった場合でも、治療来院１で臀部が治療されていれば、被験者はその来院時（治療来院２）に対側の臀部の再治療の評価を受ける。被験者が治療来院３に戻ってきたとき、それぞれの臀部が被験者（ＰＲ−ＰＣＳＳを使用）と調査員（ＣＲ−ＰＣＳＳを使用）によって再び評価される。調査員が対象となる臀部のセルライトの重症度をＣＲ−ＰＣＳＳを用いて０以上と評価した場合、注射が行われることになる。
【０５１４】
本研究の観察段階に参加するカテゴリーＩおよびカテゴリーＩＩの被験者は、１２ヶ月目、１８ヶ月目、２４ヶ月目、３６ヶ月目、４８ヶ月目、６０ヶ月目の観察来院時にセルライト評価を行う。これらの観察時に、評価の結果、臀部が再治療に適していると判断され、対象者が本研究３０４で以前にＣＣＨを受けていない場合（実施例５）、対象者は対象となる臀部に対して１コースの再治療を受けることになる。
【０５１５】
カテゴリーＩおよびカテゴリーＩＩの対象者の再治療コースは、治療来院１、２、および治療来院３において、臀部に治療可能なＥＦＰの陥凹部がない場合、すなわち調査員がＣＲ−ＰＣＳＳで０点と評価した場合を除き、２１日間の間隔をおいて３回の再治療セッションを行う。１回の再治療は、対象となる臀部ごとにＣＣＨを１２回（１回あたり０．０７ｍｇ／０．３ｍＬ）、０．８４ｍｇ、３．６ｍＬ（二重盲検研究で実施された治療コースと同じ）注入し、最大２臀部まで同時に治療を行うものとする。本研究では、カテゴリーＩおよびカテゴリーＩＩの対象者に対して、１回限り、対象となる臀部２ヵ所までの再治療を同時に実施する。再治療開始後（治療来院１回目；治療１日目）、被験者は再治療中の各注入日に安全性を評価し、治療来院２回目（２２日目）、治療来院３回目（４３日目）、治療来院４回目（７１日目）に安全性とセルライトの重症度を評価する。再治療後、これらの被験者は、５年間のうちいつ再治療を受けたかに応じて、２年間は６カ月ごとに、その後は親研究（実施例２および３）の７１日目から最大５年間（１８００日目）まで毎年観察される。
【０５１６】
研究の目的上、応答の減少（すなわち、応答の低下または消失）は、親研究の７１日目にＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの両方で観察されたセルライトの重症度改善の複合的な１レベルの悪化と定義される。ＴＲＲは、有効性を評価した日（親研究の７１日目）から、本研究においてＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの両方で複合的に１レベルの応答消失が観察された研究来院日までの期間と定義した。応答の減少および／または完全な消失の確認は、複合的な応答の減少が最初に検出されてから約２週間後のフォローアップ研究で行われる。
【０５１７】
デジタル写真は直接的な効果測定ではないが、デジタル写真は特定の効果測定の評価に利用される。各臀部は、上述のように標準化された方法でデジタルカメラを用いて、２つの臀部のそれぞれについて以下の時点で写真撮影される。
・全被験者のスクリーニング、１８０日目、および確認のための来院（陥凹部や注射部位のマーキングはなし
・カテゴリーＩおよび／または対象となるカテゴリーＩＩの被験者の治療受診日（１日目、２２日目、４３日目）における陥凹部および注射部位のマーキング前とマーキング後（注射前）
・７１日目の来院（治療終了／早期終了）、観察評価来院（３６０日目、５４０日目、７２０日目、１０８０日目、１４４０日目、１８００日目／研究終了（以下、「ＥＯＳ」））、確認来院（陥凹部や注射部位の痕跡がないこと）
【０５１８】
１８０日目の受診と二重盲検親研究の盲検解除後は、写真撮影はカテゴリーＩとカテゴリーＩＩの被験者に限定される。
【０５１９】
親研究で治験薬を投与された被験者のうち、本研究に参加できたのは最大８４３名であった。合計６１７名の被験者が親研究を完了し、本研究への参加に同意した。そのうち、１３０名が参加基準を満たさず、同意を撤回したか、１８０日目の来院前に追跡調査ができなくなった。また、４名の被験者が１８０日目来院に参加したが、盲検化解除前に研究を辞退し、中間データカットオフ（２０１９年４月１日）の時点で４名の被験者が盲検化解除されていなかった。したがって、合計４７９名の被験者が１８０日目の来院を完了し、データカットオフの時点で盲検化が解除された。
【０５２０】
これらの４７９名の被験者のうち、２３８名は親研究でプラセボを投与され、１８０日目の来院を完了した後、本研究へのさらなる参加を取りやめた。したがって、親研究でＣＣＨを投与され、本研究で１８０日目の来院を完了した２４１名の被験者が継続の対象となった。２４１名の適格被験者のうち、データカットオフ時（２０１９年４月１日）に１９８名が本研究の非盲検相への参加に同意した。そのうち３０名の被験者は、データカットオフ前にＣＣＨ再治療を受ける資格があり、受けることを選択した（表６２および６３）。
【表６２】
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【表６３】
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【０５２１】
投与量と投与方法
セルライト用ＣＣＨは、上述のように、０．９２ｍｇのコラゲナーゼクロストリジウムヒストリチウムからなる無菌の凍結乾燥粉末である。研究に参加する資格を得た被験者には、１回の治療につき臀部あたり最大０．８４ｍｇのＣＣＨまたはプラセボが投与され（１回の治療での総投与量は１．６８ｍｇ）、２１日間隔の３回の治療で臀部あたり１２回の皮下注射が行われた（表６４）。
【表６４】
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【０５２２】
被験者がうつ伏せになった状態で、３０ゲージの１／２インチ針付き注射器を用いて、研究薬を皮下に注射する。各注射部位には、図７に示すように、位置Ａ、Ｂ、Ｃに０．１ｍＬのアリコートを３回（総注射量０．３ｍＬ）投与して、１回の皮下注射を行う。注射の深さは、下向きの圧力をかけずに、針の先端から針のハブまたは根元までの治療針の長さ（０．５インチ）に対応する。
【０５２３】
各再診時に、臀部あたり４本の注射器が用意され、投与される。各シリンジには０．９ｍＬの治験薬が入っている（すなわち、各シリンジに３回の注射ができる）。各治療期間中に、再治療の対象となる臀部に、１本あたり０．３ｍＬの皮膚注射を１２本行う。本研究で再治療の対象となった被験者には、１回の治療日に臀部あたり最大０．８４ｍｇのＣＣＨが投与され、２１日間隔の３回の治療時に臀部あたり最大１２回の皮下注射が行われる。
【０５２４】
評価基準
有効性は、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ、患者が報告したセルライトの影響尺度（Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｅｄ  Ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ  Ｉｍｐａｃｔ  Ｓｃａｌｅ（ＰＲ−ＣＩＳ））、被験者グローバル美的改善尺度（Ｓｕｂｊｅｃｔ  Ｇｌｏｂａｌ  Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  Ｓｃａｌｅ（Ｓ−ＧＡＩＳ））、被験者自己評価尺度（Ｓｕｂｊｅｃｔ  Ｓｅｌｆ−Ｒａｔｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ（ＳＳＲＳ））、セルライト治療に対する被験者の満足度評価（Ｓｕｂｊｅｃｔ  Ｓａｔｉｓｆａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ）を用いて評価した。
【０５２５】
安全性の評価項目は、有害事象（ＡＥ）、バイタルサイン、身体検査、臨床検査、免疫原性であった。
【０５２６】
統計手法
以下の分析集団を使用した。
・１８０日目の観察集団には、親研究からのロールオーバー被験者がすべて含まれる。
・非盲検観察集団には、非盲検研究に参加し、親研究でＣＣＨを投与されたすべての被験者が含まれる。この集団には、カテゴリーＩ、ＩＩ、ＩＩＩのすべての被験者が含まれる。
・再治療前のＴＲＲ集団には、治療を受けた臀部のいずれか／両方について、親研究の７１日目にＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方の評価で少なくとも１レベルまたは２レベルの改善が見られたすべての被験者が含まれる。この集団にはカテゴリーＩおよびＩＩの被験者が含まれる。応答の軽減は、治療を受けた臀部のいずれか／両方について、親研究においてＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価の両方で少なくとも１レベルおよび２レベルの改善が見られた被験者について、個別に評価される。再治療前の応答率の低下は、この集団を用いて解析される。
・非盲検再投与（ＯＬＲ）集団には、この非盲検研究で再投与されたＴＲＲ集団のすべての被験者が含まれる。
・再治療後のＴＲＲ対象者には、ＯＬＲ対象者のうち、非盲検治療期の７１日目／治療終了日の診療所来院時にＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの両評価で少なくとも１レベルまたは２レベルの複合的な改善が見られた被験者が含まれる。応答の軽減は、非盲検治療期において、治療した各臀部のＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ評価の両方で少なくとも１レベルおよび２レベルの複合的な改善が見られた被験者について、個別に評価される。再治療後の応答率の低下は、この集団を用いて解析する。
【０５２７】
効能分析
本調査で使用した応答の定義は以下の通りである。
【０５２８】
セルライト重症度尺度（Ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃａｌｅ）（ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳ）における応答の低下：応答の低下は、再治療前と再治療後に分けて評価した。本研究における応答の低下の定義の概要を表６５に示す。
【表６５】
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【０５２９】
応答の低下までの時間  表６６に、ＴＲＲの算出方法の概要を示す。
【表６６】
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【０５３０】
セルライト重症度評価尺度（ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳ）における応答の改善：本研究で再治療を受けた被験者について、再治療期（２２日目、４３日目、７１日目）におけるセルライト重症度の応答の改善を、再治療期の初日と比較して評価する。
・２レベルの改善：本研究の治療コース１日目（治療セッション１）の対応する評価と比較して、再治療を受けた後にＰＲ−ＰＣＳＳまたはＣＲ−ＰＣＳＳの評価でセルライトの重症度が２レベル以上改善したと定義した（すなわち、ベースラインのＰＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＣＲ−ＰＣＳＳの評価からの変化が−２、または−３）。
・１レベルの改善：本研究の治療コース１日目（治療セッション１）の対応する評価と比較して、再治療を受けた後にＰＲ−ＰＣＳＳまたはＣＲ−ＰＣＳＳの評価でセルライトの重症度が１レベル以上改善したと定義した（すなわち、ベースラインのＰＲ−ＰＣＳＳおよび／またはＣＲ−ＰＣＳＳ評価からの変化が−１、−２、または−３）。
・２レベル応答者：本研究の治療コース１日目（治療セッション１）の評価と比較して、ＰＲ−ＰＣＳＳまたはＣＲ−ＰＣＳＳの評価が２レベル以上改善した被験者と定義した。
・１レベル応答者：本研究の治療コース１日目（治療セッション１）の評価と比較して、ＰＲ−ＰＣＳＳまたはＣＲ−ＰＣＳＳの評価が１レベル以上改善した被験者と定義した。
・１または２レベルの複合改善は、ＰＲ−ＰＣＳＳとＣＲ−ＰＣＳＳの両方を用いて評価される（例：１レベルの複合改善の場合−同じ臀部のＰＲ−ＰＣＳＳとＣＲ−ＰＣＳＳの両方で、少なくとも１レベルの応答の改善が観察される。２レベルの複合的な改善の場合−同じ臀部のＰＲ−ＰＣＳＳとＣＲ−ＰＣＳＳの両方で少なくとも２レベルの改善が観察される）。）１つまたは両方の構成要素（すなわち、ＰＲ−ＰＣＳＳ構成要素またはＣＲ−ＰＣＳＳ構成要素）について分類が欠落する場合、その来院では複合応答者の分類が欠落する。
・２レベルの複合応答者：ＰＲ−ＰＣＳＳの２レベル以上の応答者およびＣＲ−ＰＣＳＳの２レベル以上の応答者と定義した。
・１レベルの複合応答者：少なくとも１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳ応答者および少なくとも１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ応答者である被験者と定義した。
【０５３１】
ＰＲ−ＣＩＳの応答者
・ＰＲ−ＣＩＳ総合スコアについては、評価時点でＰＲ−ＣＩＳ総合スコアがベースラインから１２以上（すなわち、各項目の平均値が２以上）低下した被験者をＰＲ−ＣＩＳ応答者と定義した。
・ＰＲ−ＣＩＳの略式総合スコアについては、評価時点でＰＲ−ＣＩＳの総合スコアがベースラインから１０以上（すなわち、各項目の平均値が２以上）低下した被験者をＰＲ−ＣＩＳ応答者と定義した。
・各項目のＰＲ−ＣＩＳ応答者とは、評価時点において、非盲検期の７１日目のスコアからＰＲ−ＣＩＳ項目のスコアが２以上減少した被験者と定義した。
・ＰＲ−ＣＩＳの項目１「セルライトが見えることに対して被験者がどの程度満足しているか」は、被験者が報告した評価を１０から引くことで反転させる（つまり、複合の目的のために、「満足している」という質問のスコアを反転させ（反映させ）、他の質問と方向性を一致させる）。このように、ＰＲ−ＣＩＳの質問のうち、６つの質問の数値が高ければ、よりネガティブな影響を反映していることになる。
【０５３２】
被験者グローバル美的改善尺度：２レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者とは、評価時点でＳ−ＧＡＩＳ評価が２以上（すなわち、２または３）の被験者と定義される。１レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答者とは、評価時点でＳ−ＧＡＩＳ評価が１以上（すなわち、１、２、または３）である被験者と定義される。
【０５３３】
セルライト治療に対する被験者の満足度評価：セルライト治療に対する被験者の満足度評価において、「満足」または「非常に満足」と応答した被験者を「応答者」と定義する。
【０５３４】
被験者自己評価尺度：ＳＳＲＳの１レベルの応答者は、評価中に臀部のセルライトの見た目に少なくともわずかに満足している（すなわち、やや満足［４］、非常に満足［５］、または非常に満足［６］）被験者と定義される。２レベルのＳＳＲＳ応答者は、評価時に臀部のセルライトの見た目に少なくとも非常に満足する（すなわち、非常に満足［５］または非常に満足［６］）被験者と定義される。
【０５３５】
Ａ．有効性の分析−１８０日目の観察集団
１．セルライトの重症度
ａ．ＰＲ−ＰＣＳＳとＣＲ−ＰＣＳＳ
【０５３６】
表６７は、１８０日目観察集団における、親研究の１日目から７１日目まで、および本研究の１８０日目（親研究の７１日目から１８０日後、親研究では研究薬の初回投与から約２５１日後）までのＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの変化をまとめたものである。
【表６７】
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【０５３７】
親研究でＣＣＨによる治療を受け、本研究で１８０日目のセルライト重症度評価を完了した２４１名の被験者において、親研究の１日目から７１日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの平均（ＳＤ）変化量は、左臀部で−０．８（０．８５）、右臀部で−０．９（０．９２）であった。また、同じ被験者において、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの平均（ＳＤ）変化は、左臀部で−０．７（０．８７）、右臀部で−０．７（０．９２）であった。
【０５３８】
親研究の１日目から７１日目までのＣＲ−ＰＣＳＳ変化量の平均（ＳＤ）は、左臀部で−０．８（０．７９）、右臀部で−０．７（０．７６）であった。また、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳ変化量の平均（ＳＤ）は、左臀部で−０．６（０．８３）、右臀部で−０．６（０．８３）であった。
【０５３９】
親研究でプラセボを投与された２３８名の被験者では、ＰＲ−ＰＣＳＳの１日目から７１日目までの変化量の平均（ＳＤ）は、左臀部で−０．５（０．７５）、右臀部で−０．５（０．７９）であった。また、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均は、左臀部で−０．３（０．７１）、右臀部で−０．４（０．８０）であった。
【０５４０】
プラセボ投与群では、初日から７１日目までのＣＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均（ＳＤ）は、左臀部で−０．３（０．６４）、右臀部で−０．３（０．７０）であった。また、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均は、左臀部で−０．４（０．７２）、右臀部で−０．４（０．７２）であった。
【０５４１】
親研究では１日目から７１日目まで、本研究では１日目から１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの平均変化量から、１８０日目観察集団の被験者は親研究の集団を代表していることが示された。また、１８０日目におけるＣＣＨ投与群とプラセボ投与群の差は、親研究で得られた結果と一致する。
【０５４２】
ｂ．ＰＲ−ＣＩＳ
表６８は、親研究の１日目から親研究の７１日目まで、および１８０日目観察集団における本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳの変化の概要を示す。
【表６８】
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【０５４３】
親研究でＣＣＨを投与され、本研究でＰＲ−ＣＩＳの１８０日目の評価を完了した被験者では、親研究の１日目から７１日目までのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアの変化量の平均（ＳＤ）は−１１．８（１１．７７）であった。これらの同じ被験者において、親研究の初日から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアの変化の平均（ＳＤ）は−１０．５（１１．７６）であった。
【０５４４】
親研究でプラセボを投与された被験者では、親研究の初日から７１日目までのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアの変化の平均（ＳＤ）は−６．５（１２．１２）であった。この被験者において、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアの変化量の平均（ＳＤ）は−５．４（１１．３０）であった。
【０５４５】
ＣＣＨ投与群では、親研究の１日目から７１日目までの変化量の平均（ＳＤ）は−１０．３（９．９５）であり、親研究の１日目から本研究の１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は−９．３（９．８８）であった。プラセボ投与群では、親研究の１日目から７１日目までの変化量の平均（ＳＤ）は−５．７（１０．３０）であり、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳ省略スコアの変化量の平均（ＳＤ）は−５．２（９．９０）であった。
【０５４６】
ＰＲ−ＣＩＳの項目ごとに応答の変化を見ても、同様の結果が得られた。
【０５４７】
親研究の１日目から７１日目まで、および本研究の１日目から１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳの総得点、略式得点、項目得点の平均変化も、１８０観察集団の被験者が親研究の集団を代表していることを示す。１８０日目におけるＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の差は、親研究で得られた結果と一致する。
【０５４８】
２．治療効果の持続性
ａ．ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの１８０日目の観察集団
【０５４９】
表６９は、１８０日目の観察集団におけるＰＲＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化をまとめたものである。
【表６９】
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【０５５０】
ＰＲ−ＰＣＳＳでは、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者では、左臀部で０．２（０．８１）、右臀部で０．２（０．８６）であった。プラセボ治療を受けた被験者では、ＰＲ−ＰＣＳＳの平均（ＳＤ）変化量は、左臀部で０．１（０．７６）、右臀部で０．０（０．８４）であった。
【０５５１】
ＣＲ−ＰＣＳＳでは、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者では、左臀部で０．２（０．７８）、右臀部で０．１（０．７６）であった。プラセボ治療を受けた被験者では、ＣＲ−ＰＣＳＳの平均（ＳＤ）変化量は、左臀部で−０．１（０．７４）、右臀部で−０．１（０．７６）であった。
【０５５２】
７１日目と１８０日目のＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの差が小さいことから、ＣＣＨで治療を受けた被験者の親研究では、７１日目から６カ月後まで治療効果が持続していることが示された。また、これらの結果は、平均治療効果が左右の臀部でほぼ同じであったことを示す。
【０５５３】
ｂ．ＰＲ−ＣＩＳの１８０日目の観察集団
表７０は、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの、１８０日目の観察集団におけるＰＲＣＩＳの総合スコア、略式スコア、および項目スコアの変化をまとめたものである。
【表７０】
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2022502478.tif 000127
【０５５４】
１８０日目の観察集団において、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳスコア合計の変化の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者で１．２（１１．３２）、プラセボ投与群で１．０（１０．１４）であった。ＰＲ−ＣＩＳ略式スコアでは、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの平均変化量は、ＣＣＨ治療を受けた被験者で１．０（９．４５）、プラセボ治療を受けた被験者で０．４（８．９８）であった。また、各項目のスコアにも同様の小さな平均値（ＳＤ）の変化が見られた（セルライトの外観に満足している。ＣＣＨ０．５［２．６８］、プラセボ０．１［２．８８］；気になる：ＣＣＨ０．０［３．５５］、プラセボ０．０［３．７８］、自覚：ＣＣＨ０．１［２．６３］、プラセボ−０．１［２．９２］；恥ずかしい：ＣＣＨ０．１［２．６２］、プラセボ０．１［２．２７］；老けて見える：ＣＣＨ０．３［２．９２］、プラセボ０．６［２．４２］；体型への懸念：ＣＣＨ０．３［２．５９］、プラセボ０．４［２．５６］）。
【０５５５】
ＰＲ−ＣＩＳの総合スコア、略式スコア、項目別スコアの７１日目と１８０日目の差が小さいことから、ＣＣＨ治療を受けた被験者の親研究では７１日目から６ヵ月後まで治療効果が持続していることが示された。さらに、ＰＲ−ＣＩＳ応答者の割合は、７１日目から１８０日目まで一貫した。
【０５５６】
ｃ．被験者の自己評価尺度  １８０日目の観察集団
親研究の７１日目において、親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者の２４．７％が２レベルのＳＳＲＳ応答を示したのに対し、１８０日目の観察集団ではプラセボ治療を受けた被験者の１１．４％が２レベルのＳＳＲＳ応答を示した。１８０日目には、親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者の１４．９％が２レベルのＳＳＲＳ応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では８．９％だった。
【０５５７】
親研究の７１日目では、親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者の５１．５％がＳＳＲＳの１レベルの応答を示したのに対し、１８０日目の観察集団ではプラセボ−の２１．２％がＳＳＲＳの２レベルの応答を示した。１８０日目には、親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者の３６．９％が２レベルのＳＳＲＳ応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では１７．３％であった（表７１）。
【０５５８】
これらの結果は、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の両方において、ＳＳＲＳ応答者の割合が時間の経過とともに減少したことを示す。しかし、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間のＳＳＲＳ応答者の差は、１８０日目には親研究の７１日目に観察された差と同様であった。
【表７１】
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【０５５９】
Ｂ．有効性の分析−再治療前のＴＲＲ集団
再治療前のＴＲＲ集団は、親研究でＣＣＨによる治療を受け、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳで１レベルまたは２レベルの複合応答を示し、本研究の非盲検相での継続に同意した被験者１０３名で構成される。そのうち１９人がカテゴリーＩＩに、８４人がカテゴリーＩに分類された。
【０５６０】
１．２レベルの低下応答−ＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳ
本研究では、親研究で少なくとも１つの臀部においてセルライトの重症度が２レベル以上複合的に改善された被験者が１９名いた（カテゴリーＩＩ）。これらの被験者のうち、１８０日目にセルライトの重症度が２レベル合成で低下した者はいなかった。カテゴリーＩＩの被験者において、ＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳを個別に検討したところ、本研究３０４で定義したように、１８０日目にＣＲ−ＰＣＳＳで２レベル以上の応答低下が見られた被験者が１名（５．３％）、ＰＲ−ＰＣＳＳで２レベル以上の応答低下が見られた被験者が４名（２１．１％）いた（表７２）。
【表７２】
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【０５６１】
臀部を個別に検討しても同様の結果が得られた。前述のカテゴリーＩＩの被験者１９名のうち、親研究でセルライトが２レベル以上複合的に改善された臀部は合計２６名であった。１８０日目には１名（３．８％）の臀部で２レベル以上の複合的な減少が認められた。また、１８０日目にＣＲ−ＰＣＳＳが２レベル以上低下した臀部が４個（１５．４％）、ＰＲ−ＰＣＳＳが２レベル以上低下した臀部が５個（１９．２％）あった。
【０５６２】
２．１レベル低下の応答−ＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳ
再治療前のＴＲＲ集団には、カテゴリーＩＩの被験者が１９人いた。このうち３名（１５．８％）は、再治療前の応答が１レベル低下した。再治療前のＴＲＲ集団に含まれるカテゴリーＩの被験者８４人のうち、１０人（１１．９％）が再治療前に１レベルの複合的な応答低下を示した。全体（カテゴリーＩとカテゴリーＩＩを合わせた１０３人）では、１３人（１２．６％）の被験者が１８０日目に１レベルの複合的な応答の低下を示した（表７３）。
【０５６３】
表７４は、再治療前にセルライト重症度評価の応答が１レベル低下した臀部の数を示す（再治療前の集団ＴＲＲ）。
【表７３】
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【表７４】
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【０５６４】
臀部を個別に検討しても同様の結果が得られた。前述のカテゴリーＩＩの被験者１９名のうち、親研究で少なくとも２レベルの複合応答を示した臀部は合計２６箇所であった。このうち、６箇所（２３．１％）の臀部で１レベルの複合応答の低下が見られた。カテゴリーＩの被験者では、１３２箇所の臀部のうち１９箇所（１４．４％）で１レベルの応答の低下が見られた。全体（カテゴリーＩおよびカテゴリーＩＩ、１５８箇所の臀部）では、１５．８％の臀部で１８０日目に１レベルの複合的な応答の低下が認められた。
【０５６５】
３．応答低下までの期間−ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ
ＴＲＲは、親研究の７１日目／ＥＯＳから、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの複合的な応答の悪化が初めて観察された今回の研究の受診日までの日数として定義された。応答が２レベルで低下した被験者はいなかったため、応答が２レベルで低下するまでの期間を算出することはできなかった。応答性が１レベル低下するまでの期間の平均（ＳＤ）は、カテゴリーＩの被験者では１８７．５（１０．８７）日、カテゴリーＩＩの被験者では１８２．７（１７．４７）日であった。
【０５６６】
４．応答の完全消失−ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ
応答の完全消失は、ＣＲＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価の両方が（親研究の）ベースラインに戻ったことと定義した。カテゴリーＩＩの被験者（親研究で少なくとも２レベルの複合応答が得られた被験者）では、１８０日目に完全に応答が消失した者はいなかった。カテゴリーＩの被験者８４名のうち、４名（４．８％）が完全に応答を失った（表７５）。
【表７５】
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【０５６７】
５．再治療前の完全な応答消失までの期間−ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ
応答の完全消失までの期間は、親研究の７１日目／ＥＯＳから、今回の研究で初めて応答の完全消失が観察された日までの日数と定義した。カテゴリーＩＩの被験者では、応答の完全消失はなかった。カテゴリーＩの完全な応答消失までの平均（ＳＤ）日数は１８３．０（２．８３）日であった。
【０５６８】
６．セルライトの重症度−再治療前のＴＲＲ集団
ａ．ＰＲ−ＰＣＳＳとＣＲ−ＰＣＳＳ
カテゴリーＩとカテゴリーＩＩの被験者を合わせた全体では、親研究の１日目から７１日目／ＥＯＳまでのＰＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均（ＳＤ）は、左臀部で−１．３（０．６４）、右臀部で−１．４（０．８３）であった。また、親研究の１日目から１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳ変化量の全体平均（ＳＤ）は、再治療前のＴＲＲ集団において、左臀部で−１．０（０．８０）、右臀部で−１．１（０．９３）であった。
【０５６９】
カテゴリーＩの被験者では、親研究の１日目から７１日目までのＰＲ−ＰＣＳＳ変化量の平均値（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−１．２（０．６０）および−１．２（０．８０）であった。親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳ変化の平均値（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−１．０（０．７７）および−１．１（０．９６）であった。
【０５７０】
カテゴリーＩＩの被験者では、親研究の１日目から７１日目までのＰＲ−ＰＣＳＳ変化量の平均（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−１．７（０．６５）、−２．１（０．６２）であった。親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳ変化の平均値（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−１．１（０．９４）、−１．２（０．７９）であった。
【０５７１】
親研究の１日目から７１日目／ＥＯＳまでの全体（カテゴリーＩとカテゴリーＩＩの被験者を含む）のＣＲ−ＰＣＳＳの平均（ＳＤ）変化量は、左臀部で−１．２（０．５７）、右臀部で−１．１（０．６３）であった。また、親研究の１日目から１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳの変化量の全体平均（ＳＤ）は、左臀部で−０．８（０．７８）、右臀部で−０．９（０．７８）であった。
【０５７２】
カテゴリーＩの被験者では、親研究の１日目から７１日目までのＣＲ−ＰＣＳＳ変化の平均値（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−１．１（０．４６）、−０．９（０．５４）であった。親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳ変化の平均値（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−０．７（０．７４）、−０．９（０．７８）であった。
【０５７３】
カテゴリーＩＩの被験者では、親研究の１日目から７１日目までのＰＲ−ＰＣＳＳ変化量の平均値（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−１．８（０．６３）および−１．８（０．３７）であった。親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化の平均値（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−１．２（０．８５）および−１．２（０．７６）であった。
【０５７４】
これらの結果は、この集団における応答の持続性を支持するものである。
ｂ．ＰＲ−ＣＩＳ
ＰＲ−ＣＩＳの総合スコア、略式スコア、項目別スコアについても同様の結果が得られ、この集団における応答の持続性が支持された。
【０５７５】
７．治療効果の持続性
ａ．治療効果の持続性−再治療前のＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ−ＴＲＲ集団
表７６は、親研究（研究３０２／３０３）の７１日目から本研究の１８０日目までの、再治療前のＴＲＲ集団のＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの変化を示したものである。
【表７６】
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【０５７６】
カテゴリーＩの被験者において、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均（ＳＤ）は、左臀部で０．２（０．６８）、右臀部で０．２（０．８４）であった。ＣＲ−ＰＣＳＳについては、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化の平均値（ＳＤ）は、左臀部で０．４（０．７２）、右臀部で０．１（０．７７）であった。
【０５７７】
カテゴリーの被験者において、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化の平均（ＳＤ）は、左臀部で０．６（０．８３）、右臀部で０．８（０．７６）であった。ＣＲ−ＰＣＳＳについては、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者では、左臀部で０．６（１．０２）、右臀部で０．７（０．７５）であった。
【０５７８】
ＴＲＲ集団全体では、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化の平均（ＳＤ）は、左臀部で０．３（０．７２）、右臀部で０．３（０．８７）であった。ＣＲ−ＰＣＳＳでは、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化の平均（ＳＤ）は、左臀部で０．４（０．７９）、右臀部で０．２（０．８０）であった。
【０５７９】
７１日目と１８０日目の全体的なＴＲＲ集団ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳスコアの差が小さいことから、ＣＣＨ治療を受けた被験者の親研究では、７１日目から６か月後まで治療効果が持続していることが示された。また、これらの結果は、平均治療効果が左右の臀部でほぼ同じであったことを示す。
【０５８０】
ｂ．治療効果の持続性−再治療前のＰＲ−ＣＩＳ−ＴＲＲ集団
表７７は、再治療前のＴＲＲ集団における、研究３０２／３０３の７１日目／ＥＯＳから本研究の１８０日目／早期終了までのＰＲ−ＣＩＳの総合スコア、略式スコア、項目スコアの変化を示したものである。
【表７７】
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【０５８１】
再治療前のＴＲＲ集団全体（カテゴリーＩとカテゴリーＩＩの合計）において、ＰＲ−ＣＩＳスコア合計の親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は０．０（１２．２１）であった。カテゴリーＩの被験者の７１日目から１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は−０．６（１１．２０）、カテゴリーＩＩの被験者の７１日目から１８０日目までの変化量の平均は２．５（１６．０４）であった。
【０５８２】
親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの省略ＰＲ−ＣＩＳスコアの変化量の平均（ＳＤ）は０．１（９．８０）であった。カテゴリーＩの被験者の７１日目から１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は−０．５（９．１２）であり、カテゴリーＩＩの被験者の７１日目から１８０日目までの変化量の平均は２．８（１２．３２）であった。
【０５８３】
同様の小さな平均値（ＳＤ）の変化が、個々の項目のスコア全体にも見られた（セルライトの外観に満足：０．７、気になる：−０．２、自覚：−０．２、恥ずかしい：−０．１、老いへの懸念：−０．１、体型への懸念：−０．１）。）
【０５８４】
７１日目と１８０日目のＴＲＲ集団ＰＲ−ＣＩＳスコア全体の差が小さいことは、ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの結果を裏付けるものであり、ＣＣＨ治療を受けた被験者において、親研究の７１日目から６カ月後まで治療効果が持続していることを示す。
【０５８５】
ＰＲ−ＣＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、被験者のセルライト治療に対する満足度、およびＳＳＲＳ応答者−再治療前のＴＲＲ集団
【０５８６】
１８０日目に、再治療前のＴＲＲ集団のカテゴリーＩおよびカテゴリーＩＩの被験者は、ＰＲ−ＣＩＳ（総合スコア、略式スコア、項目別スコア）、Ｓ−ＧＡＩＳ、セルライト治療に対する被験者の満足度、およびＳＳＲＳの応答を示した。カテゴリーＩＩの被験者はカテゴリーＩの被験者よりも応答者の割合が多かった。
【０５８７】
有効性の結論
Ａ．１８０日目の観察集団
１８０日目観察集団は、１８０日目の来院（セルライト評価を含む）を完了し、データカットオフ時（２０１９年４月１日）に盲検化されていなかった４７９名の被験者で構成された。１８０日目の来院は、親研究の終了から約１８０日後、親研究における研究薬の初回投与から約２５１日後に実施された。
【０５８８】
親研究では１日目から７１日目まで、本研究では１日目から１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＣＩＳの平均変化量は、１８０日目観察集団の被験者が親研究の集団を代表していることを示す。また、１８０日目におけるＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の差は、親研究で得られた結果と一致する。
・親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者２４１名の被験者では、親研究の１日目から７１日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−０．８（０．８５）および−０．９（０．９２）であり、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−０．７（０．８７）および−０．７（０．９２）であった。親研究でプラセボ治療を受けた被験者では、１日目から７１日目までのＰＲ−ＰＣＳＳ変化量の平均（ＳＤ）は、左右の臀部でそれぞれ−０．５（０．７５）および−０．５（０．７９）であった。また、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均は、左右の臀部でそれぞれ−０．３（０．７１）、−０．４（０．８０）であった。
・親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者では、親研究の１日目から７１日目までのＣＲ−ＰＣＳＳ変化量の平均（ＳＤ）は、左臀部で−０．８（０．７９）、右臀部で−０．７（０．７６）であった。親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳの変化量（ＳＤ）の平均値は、左臀部で−０．６（０．８２）、右臀部で−０．６（０．８３）であった。プラセボ治療を受けた被験者では、初日から７１日目までのＣＲ−ＰＣＳＳ変化量の平均値（ＳＤ）は、左臀部で−０．３（０．６４）、右臀部で−０．３（０．７０）であった。親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳの変化の平均は、左右の臀部でそれぞれ−０．４（０．７２）および−０．４（０．７２）であった。
・親研究でＣＣＨ治療を受け、本研究でＰＲ−ＣＩＳの１８０日目の評価を完了した被験者では、親研究の１日目から７１日目までのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアの変化量の平均（ＳＤ）は−１１．８（１１．７７）であった。同じ被験者において、親研究の初日から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアの変化量の平均（ＳＤ）は−１０．５（１１．７６）であった。親研究でプラセボ治療を受けた被験者では、親研究の初日から７１日目までのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアの変化量の平均（ＳＤ）は−６．５（１２．１２）であった。同じ被験者において、親研究の１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳ総合スコアの変化の平均（ＳＤ）は−５．４（１１．３０）であった。ＰＲ−ＣＩＳの略式スコアおよび項目別スコアでも同様の変化が見られた。
【０５８９】
親研究の７１日目と本研究の１８０日目の間のＰＲ−ＰＣＳＳ、ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＣＩＳの差が小さいことから、ＣＣＨ治療を受けた被験者では、親研究の７１日目から６ヵ月後まで治療効果が持続していることがわかった。また、ＰＲ−ＣＩＳ応答者の割合は、７１日目から１８０日目まで一貫した。また、ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの結果から、平均治療効果は左右の臀部でほぼ同じであることが示された。
・ＰＲ−ＰＣＳＳでは、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者では、左右の臀部でそれぞれ０．２（０．８１）および０．２（０．８６）であった。プラセボ治療を受けた被験者では、ＰＲ−ＰＣＳＳの平均（ＳＤ）変化量は、左右の臀部でそれぞれ０．１（０．７６）および０．０（０．８４）であった。
・ＣＲ−ＰＣＳＳでは、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者では、左右の臀部でそれぞれ０．２（０．７８）および０．１（０．７６）であった。プラセボ治療を受けた被験者では、ＣＲ−ＰＣＳＳの平均（ＳＤ）変化量は、左右の臀部でそれぞれ−０．１（０．７４）および−０．１（０．７６）であった。
・１８０日目の観察集団において、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳスコア合計の変化の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者で１．２（１１．３２）、プラセボ治療を受けた被験者で１．０（１０．１４）であった。ＰＲ−ＣＩＳ略式スコアでは、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの平均変化量は、ＣＣＨ治療を受けた被験者で１．０（９．４５）、プラセボ治療を受けた被験者で０．４（８．９８）であった。また、各項目別スコアにも同様の小さな平均（ＳＤ）変化が見られた。
【０５９０】
親研究では、１８０日目にＳ−ＧＡＩＳ、セルライト治療に対する満足度、およびＳＳＲＳの応答者の割合は、ＣＣＨ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の両方で減少した。しかし、本研究では、１８０日目の時点で、ＣＣＨ治療を受けた被験者の応答率は、プラセボ治療を受けた被験者の応答率よりも高いままであった。
・親研究では、７１日目にＣＣＨ治療を受けた被験者の１９．１％が左臀部でＳ−ＧＡＩＳ２レベルの応答を示し、２１．６％が右臀部で２レベルの応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では６．３％（左臀部）、７．１％（右臀部）であった。本研究３０４日目の１８０日目には、ＣＣＨ治療を受けた被験者の１２．４％および１１．６％の被験者が、左臀部および右臀部においてＳ−ＧＡＩＳの２レベルの応答を示した。プラセボ治療を受けた被験者では、１８０日目に２レベルのＳ−ＧＡＩＳ応答があった被験者の割合は、左右の臀部でそれぞれ３．８％であった。
・親研究では、７１日目に、ＣＣＨ治療を受けた被験者の７０．５％が左右の臀部でＳ−ＧＡＩＳ１レベルの応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では３７．４％（左臀部）および３７．０％（右臀部）であった。１８０日目には、ＣＣＨ治療を受けた被験者の５３．５％と５１．０％が、左右の臀部でそれぞれＳ−ＧＡＩＳの１レベルの応答を示した。プラセボ治療を受けた被験者では、１８０日目にＳ−ＧＡＩＳが１レベルであった被験者の割合は、左臀部で２７．８％、右臀部で２８．３％であった。
・７１日目において、親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者の５０．６％がセルライト治療に「満足」または「非常に満足」と応答したのに対し、１８０日目観察集団ではプラセボ治療を受けた被験者の２２．５％が「満足」または「非常に満足」と応答した。１８０日目の観察集団では、親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者の３４．４％がセルライト治療に「満足」または「非常に満足」と答えたのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では１６．５％であった（図２７）。
・親研究では、７１日目に、ＣＣＨ治療を受けた被験者の２４．７％がＳＳＲＳ２レベルの応答を示したのに対し、１８０日目の観察集団では、プラセボ治療を受けた被験者の１１．４％がＳＳＲＳ２レベルの応答を示した。１８０日目において、親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者の１４．９％が２レベルのＳＳＲＳ応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では８．９％であった。
・親研究では、７１日目に、ＣＣＨ治療を受けた被験者の５１．５％がＳＳＲＳの１レベルの応答を示したのに対し、１８０日目の観察集団では、プラセボ治療を受けた被験者の２１．２％であった。１８０日目において、親研究でＣＣＨ治療を受けた被験者の３６．９％がＳＳＲＳ２レベルの応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では１７．３％であった。
【０５９１】
Ｂ．再治療前のＴＲＲ集団
再治療前のＴＲＲ集団は、親研究でＣＣＨ治療を受け、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳで１レベルまたは２レベルの複合応答を示し、本研究の非盲検段階での継続に同意した被験者１０３名で構成される。これらの被験者のうち１９人がカテゴリーＩＩに、８４人がカテゴリーＩに分類された。
【０５９２】
ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳで測定された複合応答が低下した被験者はカテゴリーＩＩにはおらず、カテゴリーＩには少数の被験者しかいなかった。応答の減少までの時間および応答の完全な減少までの時間は、データカットオフ時点での研究期間を反映する。応答低下までの期間および応答低下完了までの期間は以下のとおりであるが、これらのデータから応答の持続期間に関する結論を導き出すには、さらに長期のデータが必要である。
・本研究では、親研究で少なくとも１つの臀部においてセルライトの重症度が２レベル以上複合的に改善された被験者が１９名いた（カテゴリーＩＩ）。本研究では、１８０日目にセルライトの重症度が２レベル合成で低下した被験者はいなかった。カテゴリーＩＩの被験者のＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳを個別に検討したところ、１８０日目にＣＲ−ＰＣＳＳで２レベル以上の応答低下が見られた被験者が１名（５．３％）、ＰＲ−ＰＣＳＳで２レベル以上の応答低下が見られた被験者が４名（２１．１％）いた。また、臀部についても同様の結果が得られた。
・再治療前のＴＲＲ集団には、カテゴリーＩＩの被験者が１９人いた。このうち３名（１５．８％）は、再治療前の応答が１レベル低下した。再治療前のＴＲＲ集団に含まれるカテゴリーＩの被験者８４人のうち、１０人（１１．９％）が再治療前に１レベルの複合的な応答低下を示した。全体（カテゴリーＩとカテゴリーＩＩを合わせた１０３人）では、１３人（１２．６％）の被験者が１８０日目に１レベルの複合的な応答の低下を示した。
・応答の完全消失は、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価の両方がベースライン（親研究）に戻ったことと定義した。カテゴリーＩＩの被験者（親研究で２レベル以上の複合応答を示した被験者）では、１８０日目に応答が完全に消失した者はいなかった。カテゴリーＩの被験者８４名のうち、４名（４．８％）が完全に応答を消失した。
・ＴＲＲは、親研究の７１日目／ＥＯＳから、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの複合的な応答の悪化が初めて観察された今回の研究の受診日までの日数として定義された。応答が２レベルで低下した被験者はいなかったため、応答が２レベルで低下するまでの期間を算出することはできなかった。応答が１レベル低下するまでの期間の平均（ＳＤ）は、カテゴリーＩの被験者では１８７．５（１０．８７）日、カテゴリーＩＩの被験者では１８２．７（１７．４７）日であった。
・応答の完全消失までの期間は、親研究の７１日目／ＥＯＳから、今回の研究で初めて応答の完全消失が観察された日までの日数と定義した。カテゴリーＩＩの被験者では、応答の完全消失はなかった。カテゴリーＩの完全な応答消失までの平均（ＳＤ）日数は１８３．０（２．８３）日であった。
【０５９３】
再治療前のＴＲＲ集団におけるＰＲ−ＰＣＳＳ、ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＣＩＳの７１日目から１８０日目までの全体的な差が小さいことから、ＣＣＨ治療を受けた被験者の親研究では７１日目から６カ月後まで治療効果が持続していることが示された。また、これらの結果は、平均治療効果が左右の臀部でほぼ同じであったことを示す。
・カテゴリーＩの被験者において、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化量の平均（ＳＤ）は、左臀部で０．２（０．６８）、右臀部で０．２（０．８４）であった。ＣＲ−ＰＣＳＳについては、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの変化量の平均値（ＳＤ）は、左臀部で０．４（０．７２）、右臀部で０．１（０．７７）であった。
・カテゴリーＩＩの被験者において、親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＰＣＳＳの変化の平均（ＳＤ）は、左臀部で０．６（０．８３）、右臀部で０．８（０．７６）であった。ＣＣＨ治療を受けた被験者における親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＣＲ−ＰＣＳＳの変化の平均（ＳＤ）は、左臀部で０．６（１．０２）、右臀部で０．７（０．７５）であった。
・親研究の７１日目から本研究の１８０日目までのＰＲ−ＣＩＳスコア合計の変化量の平均（ＳＤ）は０．０（１２．２１）であった。カテゴリーＩの被験者の７１日目から１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は−０．６（１１．２０）であり、カテゴリーＩＩの被験者の７１日目から１８０日目までの変化量の平均は２．５（１６．０４）であった。
・親研究の７１日目から本研究の１８０日目までの略式ＰＲ−ＣＩＳスコアの変化量の平均（ＳＤ）は０．１（９．８０）であった。カテゴリーＩの被験者の７１日目から１８０日目までの変化量の平均（ＳＤ）は−０．５（９．１２）であり、カテゴリーの被験者の７１日目から１８０日目までの変化量の平均は２．８（１２．３２）であった。
・項目別の総合スコアでも、同様の小さな平均値（ＳＤ）の変化が見られた（「セルライトの外観に満足：０．７、気になる：−０．２、自覚：−０．２、恥ずかしい：−０．１、老いへの懸念：−０．１、体型への懸念：−０．１。）
【０５９４】
１８０日目に、ＰＲ−ＣＩＳ（総合スコア、略式スコア、項目スコア）、Ｓ−ＧＡＩＳ、セルライト治療に対する被験者の満足度、およびＳＳＲＳが応答した、再治療前のＴＲＲ集団のカテゴリーＩおよびカテゴリーＩＩの被験者の割合は、１８０日目の観察集団、および親研究で見られたものと同様であった。
【０５９５】
Ｃ．ＯＬＲ人口
非盲検再治療集団の有効性を評価するためには、データカットオフ時点で再治療を完了した被験者の数が不足した。
【０５９６】
安全性
ＣＣＨの安全性プロファイルは、これまでの研究で得られた安全性の結果と一致した。ＣＣＨ治療を受けた被験者（親研究）の１８０日目の観察期間中のＡＥプロファイルは、親研究でプラセボ治療を受けた被験者と非常に類似しており、データカットオフの時点でＣＣＨの長期的な安全性に関する懸念はないことが示唆された。また、被験者のカテゴリー（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）の違いによるＡＥの頻度や種類の違いはほとんどなかった。免疫原性に関しては、過去の研究と同様に有意な結果は得られなかった。
【０５９７】
結論
データカットオフ（２０１９年４月１日）時点での本研究の結果は、ＰＲ−ＰＣＳＳ、ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＣＩＳで測定した場合、臀部ＥＦＰに対してＣＣＨ治療を受けた被験者の治療効果の持続性が、段階３二重盲検親研究の７１日目以降、１８０日（６カ月）以上であることを示す（図２６）。本研究では、複合応答が２レベル低下した被験者はおらず、親研究で２レベルの複合応答を示した被験者でも、１８０日目までに応答が完全に消失した被験者はいなかった。また、親研究で２レベルの複合応答を示した被験者で、１８０日目までに完全に応答を消失した者はいなかった。親研究では、ＣＣＨ治療を受けた被験者の長期的な安全性に関する懸念は示されなかった。データカットオフ（２０１９年４月１日）時点にて本研究でＣＣＨによる再治療を受けた３０名の被験者について、ＡＥプロファイルはセルライトに対するＣＣＨの他の臨床研究で見られたものと同様であった。
【０５９８】
実施例６：セルライト治療におけるＣＣＨの段階２非盲検延長研究（研究２０２）
今回の実施例（研究２０２）は、成人女性を対象にＣＣＨの安全性と有効性を評価した前回の研究（研究２０１）の段階２非盲検延長研究である。今回の実施例では、研究２０１で治療を受けた対象者を対象に、長期的な安全性を評価した。また、登録した被験者で、２回目の治療コースを受けた被験者を対象に、治療部位ごとにＣＣＨ０．８４ｍｇを再曝露した際の安全性、有効性、免疫原性を評価した。この研究では、ＣＣＨ治療を受けたことのある被験者に対して、既治療部位への再治療（ｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ）または未治療部位への再投与（ｒｅｄｏｓｉｎｇ）の安全性を評価した。最後に、前回の研究（研究２０１、二重盲検／非盲検評価）および今回の研究（研究２０２、非盲検）でＣＣＨを投与された被験者を対象に、効果の持続性を評価した。前回の研究（研究２０１）でＣＣＨを投与した被験者については、治療した部位を最長で約２年間評価し、長期的な効果の持続性を確認した。再曝露された被験者（再治療または再投与）に対しては、治療部位を最長で約１年間評価した。本実施例で特に明記しない限り、本研究２０２で用いた「日数」は、研究２０１の初回投与（１日目）に対するものである。研究２０１では、０．８４ｍｇのＣＣＨまたはプラセボを、１人の患者につき１つの治療部位（１つの臀部または１つの大腿部）に投与した。
【０５９９】
具体的には、本研究では、本研究への登録を選択したすべてのセルライトを有する被験者を対象に、本研究での治療（再治療または再投与）の有無にかかわらず、１年以上の間隔でＣＣＨの長期安全性を評価した（最長２年間）。前回の研究（研究２０１）で被験者が受けた治療の盲検化を解除した後、適格な被験者はＣＣＨ治療を受けることを選択できた。被験者が研究２０１でＣＣＨを受け、治療部位のセルライト重症度評価が研究２０１のベースライン評価に戻ったか、それよりも高かった（セルライト重症度が悪化したことを示す）場合、被験者は１つの治療コースでＣＣＨによる前治療部位の再治療（再治療）を選択することができる。また、研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者は、研究２０１でＣＣＨ治療を受けた部位以外の対象部位を治療することを選択できた（これを再投与と呼ぶ）。研究２０１でプラセボ治療を受けた被験者は、本研究でＣＣＨの２つの治療コース（１コースは２１日間隔の３回の治療セッションからなる）を受けることができた。各治療コースでは、ＣＣＨ０．８４ｍｇを治療部位ごとに１２回皮下注射し、臀部または大腿部の同一または異なる対象治療部位で最大３回の治療を行った。治療コース２は、再治療または再投与を受けた被験者で構成された。
【０６００】
研究２０１で無治療を選択した被験者（観察のみの被験者、観察期）は、研究２０１の１日目から３カ月間隔で安全性およびセルライト重症度の評価を行い、最長２年間追跡調査を行った。研究２０１でＣＣＨの治療を受け、セルライトの重症度がＰＲ−ＰＣＳＳ／ＣＲ−ＰＣＳＳの複合項目で１レベル以上改善した被験者を対象に、応答の持続性を２年間にわたって評価した（二重盲検治療を受けた被験者の長期持続性期）。応答の耐久性は、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの応答者であり、ＣＣＨ治療を受けた部位でこの応答を維持した（すなわち、完全な消失がなく、ベースラインまたはそれ以上に戻らなかった）被験者と定義した。本研究で治療を受けた被験者は、本研究でＣＣＨを初めて照射してから７１日目に、その後３カ月間隔で本研究の各治療領域で１年間観察を続けた。
【０６０１】
再治療または再投与の前に、被験者の４つの治療部位（左臀部、右臀部、左大腿部後側部、右大腿部後側部）のそれぞれについて、ＰＲ−ＰＣＳＳ、ＣＲ−ＰＣＳＳ、ヘクセルＣＳＳを用いて被験者と調査員による独立した評価を行い、スクリーニング時のセルライトの重症度を評価した。
【０６０２】
Ａ．研究全体のデザインと計画
２０１研究の７１日目に安全性とセルライトの評価が完了した後、被験者に二重盲検研究の非盲検延長研究（スクリーニングＡ）を継続するかどうかを尋ねた。本研究に参加する時点で、被験者と調査員は、被験者が研究２０１で投与された試験薬の同一性について盲検化された。研究２０１の試験薬のブラインドが解除されるまで、被験者は３カ月間隔±７日（研究２０１の初回投与量に対して）で観察のみの来院を受け、治療部位の安全性およびセルライトの重症度評価の両方が二重盲検法で実施された（図２８）。
【０６０３】
２０１研究で受けた治療の盲検化を解除した後、対象者はＣＣＨ治療を受けることを選択できた。被験者が治療を受けないことを選択した場合、被験者は観察集団に分類され、最長で２年間観察された。非盲検治療の来院日１日目にＣＣＨの治療を開始する１４日前までに、スクリーニング評価（スクリーニングＢ）が行われ、指定された除外基準が満たされているかどうか、また治療部位がある場合は再治療、再投与、初回治療のいずれかによる治療を受ける資格があるかどうかが判断された。研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者は、資格のある治療部位と同一または異なる治療部位で治療コースを受ける選択肢を持っていた。研究２０１でプラセボ治療を受けた被験者は、本研究でＣＣＨの治療コースを２回受けることができた。各治療コースは、同一または異なる対象となる治療部位において、それぞれ最大３回のセッションから構成された。第１の治療コースの終了後、少なくとも２８日後（例えば、第２の治療コースのスクリーニングＢ来院は、第１の治療領域を治療した後、７１日目に実施され得る）、選択された治療領域は、再治療または再投与され得る。
【０６０４】
さらなるＣＣＨ治療を受けないことを選択した被験者（観察のみの被験者）は、１２カ月目以降も３カ月間隔で安全性とセルライトの重症度を評価するために追跡調査を続けた。治療の持続性は最大２年間評価した。
【０６０５】
スクリーニングＢでは、被験者の４つの治療部位（４分割）（左臀部、右臀部、左大腿部後面、右大腿部後面）の写真が撮影された。被験者は、ＰＲ−ＰＣＳＳの使用説明を受けた後、４つの治療部位（クワドラント）のデジタル画像とＰＲ−ＰＣＳＳ測定器を比較し、セルライトの重症度を評価した。この独自の自己評価は、サイトの担当者による偏見を最小限に抑えるため、プライベートな環境で行われた。次に、調査員が被験者の４つの治療領域（象限）をＣＲ−ＰＣＳＳを用いてリアルタイムでライブ評価した。調査員は、ヘクセルセルライト重症度尺度（Ｈｅｘｓｅｌ  Ｃｅｌｌｕｌｉｔｅ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃａｌｅ）（ＣＳＳ）を用いて、４つの治療部位（象限）を評価した。被験者は、本研究の治療段階に参加するために、以下の基準を満たす象限が１つ以上あることが必要だった。
・被験者が報告したスコアが３または４（中等度または重度）であること（ＰＲ−ＰＣＳＳ）、および
・調査員が報告したスコアが３または４（中等度または重度）であること（ＣＲ−ＰＣＳＳ）、および
・ヘクセルＣＳＳスコアが１３以上でないこと。
【０６０６】
分析のために、被験者は以下の集団としてグループ化された。
・観察集団には、研究２０１から転出してきたすべての被験者が含まれる。盲検化を解除しても、再曝露しないことを選択した人は観察集団に残る。
・安全集団には、本研究でＣＣＨを少なくとも１回投与されたすべての被験者が含まれる。
・効果集団には、本研究で治療対象として選択された治療部位において、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの両方でベースラインおよびベースライン後に少なくとも１回の評価が行われたすべての安全被験者が含まれる。
・全体の耐久性集団は、治療コースの１日目と７１日目、１日目から１８０日後以降にＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方の評価を受けたすべてのアクティブ応答者と定義した。アクティブ応答者とは、ＣＣＨ治療を受けた被験者で、治療コースの７１日目に各尺度（ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ）でベースラインから少なくとも１レベルの改善が見られた者をいう。
−二重盲検法による治療を受けた被験者の耐久性集団は、全体の耐久性集団の中で、二重盲検法による研究（研究２０１）でＣＣＨ治療を受けた治療部位について、７１日目に各尺度（ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ）でベースラインから少なくとも１レベルの改善が見られたすべての被験者と定義した。
−非盲検被験者の耐久性集団は、全体の耐久性集団の中で、今回の非盲検研究（研究２０２）でＣＣＨ治療を受けた治療部位について、７１日目にＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方でベースラインから少なくとも１レベルの改善が見られたすべての被験者と定義した。
【０６０７】
本研究の統計分析では、以下の２つの段階に分けてまとめた。
・観察期：スクリーニングＡから今回の研究（研究２０２）における同一治療領域の最初の治療日までの期間、または研究２０２において同一治療領域で治療を受けていない場合は研究２０２の終了までと定義した。観察期は、サマリーが被験者レベルのみのものであり、治療された治療領域によって区別できない場合（例：処分、ＡＥ）を除き、治療された治療領域ごとに定義した。被験者レベルのサマリーでは、観察期は、スクリーニングＡから研究２０２の最初の治療日まで、または研究２０２で治療を受けていない場合は研究２０２の終了日までと定義した。
・治療期：研究２０２の選択された治療領域の最初の治療日から研究２０２の終了までの期間と定義した。治療段階は、サマリーが被験者レベルのみのもので、治療された治療領域によって区別できない場合（すなわち、位置、ＡＥ）を除き、各治療領域内で定義した。被験者レベルのサマリーでは、治療期は、研究２０２の最初の治療日から研究２０２の終了までの期間と定義した。研究２０２の最初のＣＣＨ治療の１日目以降のデータはすべて含まれる。したがって、観察期のデータは治療期に含まれる。
【０６０８】
被験者は、脚または臀部のＥＦＰの治療のために以下のいずれかを下記に示す期間内に使用した場合、または研究期間中のいずれかの時点で以下のいずれかを使用することを意図していた場合、本研究における治療から除外された（ただし、観察評価からは除外されない）。（ａ）ＣＣＨ注入前の１２か月間に治療対象として選択された側の体の脂肪吸引、（ｂ）注射（例、（ｂ）ＣＣＨ注入前の１２ヶ月間に選択された治療部位での注射（メソセラピーなど）、高周波機器治療、レーザー治療、または手術（切除および／または動力切除を含む）、（ｃ）ＣＣＨ注入前の６ヶ月間に選択された治療部位でのＥｎｄｅｒｍｏｌｏｇｉｅ（商標登録）または同様の治療、（ｄ）ＣＣＨ注入前の３ヶ月間に選択された治療部位でのマッサージ治療、（ｅ）クリーム（例、ＣＣＨを注入する前の２週間の間に、選択した治療部位でＥＦＰを予防または軽減するためのクリーム（例えば、Ｃｅｌｌｕｖｅｒａ（商標登録）、ＴｒｉＬａｓｔｉｎ（商標登録））。
【０６０９】
調査員は、自分の評価と被験者の評価を確認し、治療可能な領域（クワドラント）がある場合は、それを決定した。非盲検研究２０２で治療を受けるために選択された適格な象限は、被験者の裁量で決められた。研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者が、治療部位のセルライト重症度スコアが研究２０１のベースラインスコアに戻ったか、それよりも高かった場合、被験者は以前に治療を受けた象限をＣＣＨで再治療することを選択できた（再治療と呼ぶ）。対象者が研究２０１でＣＣＨ治療受けた場合、対象者は研究２０１でＣＣＨ治療を受けたクワドラントとは別のクワドラントを治療することを選択することができる（これを再投与と呼ぶ）。
【０６１０】
二重盲検研究で割り当てられた治療部位に活性薬剤が投与された被験者の場合、再治療の対象となるには、治療部位のセルライト重症度スコアがＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの２０１ベースラインスコア以上であることが必要である。
【０６１１】
治療終了後（治療期７１日目）、被験者は３カ月間隔で３６０日目まで研究スケジュールに沿って追跡調査を受けた。被験者が２０１研究でプラセボ治療を受けた場合、資格があれば研究２０２で２つの治療部位（臀部または大腿部後面）に分けてＣＣＨを最大２コース治療することができた。研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者は、投与された治療部位について、７２０日目までの長期耐久性を評価した。
【０６１２】
非盲検エクステンションデザインを使用することで、以下のことが可能になった。
・この集団におけるＣＣＨの安全性プロファイルをさらに明確にするために、１２ヶ月間の安全性データを収集する。
・再度の曝露（再治療／再投与）後、１２ヶ月間の安全性データおよび免疫原性を評価するとともに、ＣＣＨでの治療歴のある被験者を１２ヶ月間にわたってモニタリングする。
・以前にプラセボ治療を受けた被験者がＣＣＨに暴露すること。
・ＣＣＨへの応答の持続性の評価（セルライトの重症度評価）。
【０６１３】
本研究の主な目的は、ＥＦＰの被験者のうち、本研究への登録を選択したすべての被験者を対象に、ＣＣＨ０．８４ｍｇを１年（１２カ月）以上にわたって定期的に投与した場合の長期安全性を、ＣＣＨの非盲検投与による治療（再治療または再投与）を受けるか、または無治療を選択するかにかかわらず、評価することだった。
【０６１４】
本研究の二次的な目的は以下の通りである。
・ＣＣＨによる治療を受けたことのある被験者を再治療または再投与する際の安全性および免疫原性を評価する。
・ＣＣＨ−２０１研究でアクティブ治療を受けたことのある被験者を対象に、ＣＣＨの初回投与後１２ヶ月間におけるＥＦＰの重症度に対するＣＣＨの応答の持続性を、ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳを用いて評価する。
・ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳを用いて、研究２０１でアクティブ治療を受けたことのある被験者を対象に、ＣＣＨの初回投与後１２カ月以降のＥＦＰの重症度におけるＣＣＨの応答の持続性を評価する。
・被験者の満足度、調査員グローバル美的改善尺度（Ｉ−ＧＡＩＳ））、被験者グローバル美的改善尺度（Ｓ−ＧＡＩＳ））を含むＥＦＰの評価において、ＣＣＨの長期的な応答を評価する。
・本研究にてＣＣＨで治療した象限でのセルライトの重症度評価を行う。
・ＣＣＨに暴露した後の免疫原性を評価する。
【０６１５】
ＣＣＨ０．８４ｍｇ／治療部位の効果の持続性を最大２年間評価した。これには、研究２０２で治療を受けた被験者の効果の持続性（最大１年）と、研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者が研究２０２にロールオーバーされ、最大２年間観察された場合のより長期の効果の持続性が含まれる。
【０６１６】
１６２名の被験者を対象に、２つの治療コース（各治療コースは３つの治療セッションで構成される）への再曝露の影響を評価した。研究２０１または今回の研究で１回目の治療コースを受けた被験者は、適格であれば今回の研究で２回目の治療コースを受けることができた（その部位が以前にＣＣＨで治療されていたか、ナイーブであったかによって、それぞれ再治療または再投与と呼ぶ）。研究２０１で指定された治療部位にＣＣＨ治療を受けた被験者の場合、再治療を受けるためには、その治療部位のセルライト重症度スコアが２０１研究のベースラインと同等（またはそれ以上）である必要がある。
【０６１７】
表７８は、今回の研究の説明を表す。
【表７８】
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【０６１８】
治療を受ける資格があり、治療を受けることを選択した被験者には、最大量のＣＣＨ０．８４ｍｇを、治療部位ごとに最大１２回皮下注射した（表７９参照）。１人の被験者が受けられるＣＣＨの治療コースは合計で最大２コースまでとした。被験者が研究２０１でＣＣＨの１コース目を受けた場合、今回の研究ではＣＣＨの２コース目が投与された。研究２０１で被験者がプラセボ投与された場合、適格であれば、本研究では２つの治療部位（両臀部または後側大腿部）に分けて、最大２コースのＣＣＨを投与することができた。
【表７９】
2022502478.tif 000138
【０６１９】
注射の前に調査員または資格を有する被指名人は、治療部位の中で、被験者が立っているときにはっきりしていて、治療に適した陥凹部を選択した。治療の目的は治療部位全体の美観を改善することであるため、調査員は治療部位全体の美観を最も改善すると思われる陥凹部を選択するように指示された。治療部位内の同じく陥凹部、または治療部位内の異なる陥凹部を各治療セッションで治療しても良いが、３回のセッションではすべて選択された治療部位内に注射を行う必要がある。
【０６２０】
１つの陥凹部に複数の注射が必要な場合は、陥凹部内の注射部位を約２ｃｍ間隔で配置した。各注入部位には、外科用マーカーで「点」を付けた。丸い陥凹部の場合、「ドット」は陥凹部の中心に配置し、細長い陥凹部の場合、「ドット」は陥凹部の長軸に沿って約２ｃｍの間隔で配置した。次に、調査員またはその代理人が、外科用マーカーを使用して、治療対象となる陥凹部に円を描いた。選択した治療領域の円は重ならないようにした。
【０６２１】
各注射部位には、図７に示すように、上述のセルライト用ＣＣＨの皮膚注射を１回行い、位置Ａ、Ｂ、Ｃに０．１ｍＬのアリコートを３回（総注射量０．３ｍＬ）投与した。注射の深さは、下向きの圧力をかけずに、針の先端から針のハブまたは根元までの治療針の長さ（０．５インチ）に対応した。各治療セッションにおいて、研究者には４本の注射器が提供された。各シリンジには、０．９ｍＬのＣＣＨが入った（すなわち、各シリンジで最大３回の注射が可能）。各治療セッションにおいて、選択した治療部位に１回あたり０．３ｍＬの皮膚注射を最大１２回行った。
【０６２２】
Ｂ．投与量と投与時間
本研究で選択された用量は、親研究である研究２０１で使用された用量と同じである。治療を受ける資格があり、治療を受けることを選択した被験者は、２１日間隔で３回ＣＣＨを投与された（研究日１、２２、４３日目）。研究２０１でプラセボを投与された被験者は、本研究で対象となる治療部位に２コースの治療を受けることを選択できた。本研究（２０２研究）で行われた治療コースＩとＩＩは、本研究の第１コースでＣＣＨを最終投与した後、２８日以上の間隔を置いて行われた。
【０６２３】
本研究は非盲検研究であった。本研究に参加した時点で、被験者と調査員は、研究２０１で投与された研究薬の同一性について盲検状態を維持した。治験依頼者によって研究２０１の研究薬のブラインドが解除されるまで、被験者は３カ月間隔±７日で観察のみの診察を受け、治療部位の安全性およびセルライトの重症度評価の両方が二重盲検法で実施された。
【０６２４】
Ｃ．効果測定の方法
観察のみのグループとＣＣＨの再投与または再治療を選択した被験者を対象に、デジタル写真を用いて特定の時点におけるセルライトの重症度を評価した。再投与または再治療を選択した被験者のスクリーニングＢでは、調査員または適格な被指名人が、スポンサー提供の標準化されたデジタルカメラを用いて各治療部位を撮影した。被験者は撮影時には立った状態で、標準化された衣服を着用して撮影した。
【０６２５】
調査員によるセルライト評価は、被験者による評価とは独立して行われた。そのため、被験者のセルライト評価はすべて、調査員のセルライト評価が行われる前に完了した。スクリーニングＢでは、被験者の評価と調査員の評価の両方が完了した後、被験者の評価と調査員の評価が比較され、治療部位の適格性が判断された。複数の治療部位が適格である場合、被験者は１つの治療部位を選択して治療を受けた。
【０６２６】
二重盲検研究にてもともとＣＣＨで治療された治療部位があり、３６０日目以降の治療継続性を評価された被験者は、特定の時点でＰＲ−ＰＣＳＳを記入した。研究２０１で研究薬のブラインドが解除された後、再治療または再投与を選択した被験者は、投与日１日前の１４日以内に再スクリーニングを受けた（スクリーニングＢ来院［ベースライン］）。
【０６２７】
スクリーニングＢでは、資格取得のために４つの治療部位（クワドラント）すべてのデジタル写真が撮影され、その後、被験者は両臀部と大腿部のＰＲ−ＰＣＳＳを実施した。２２日目、４３日目、７１日目の最初の来院時に、選択した治療部位のデジタル写真を撮影し、選択した治療部位のＰＲ−ＰＣＳＳを完了した。
【０６２８】
観察のみのグループの被験者は、二重盲検研究で割り当てられた治療部位の治療前の１日目画像（ベースライン）を比較対象として、特定の時点でＳ−ＧＡＩＳを完了した。ＣＣＨ治療を受けることを選択した被験者は、特定の時点でＳ−ＧＡＩＳ評価を行い、選択した治療部位の投与前のスクリーニングＢ画像（治療を受ける被験者はベースライン）と比較した。再治療または再投与によってＣＣＨの投与を受けることを選択した被験者は、被験者のセルライト治療に対する満足度評価を行った。観察のみのグループの被験者に対しては、特定の時点でＣＲ−ＰＣＳＳを実施した。
【０６２９】
再治療または再投与としてＣＣＨの投与を選択した被験者については、スクリーニングＢの来院時（ベースライン）に被験者がＰＲ−ＰＣＳＳを用いて自己評価を行った後、調査員が臀部と大腿部のＣＲ−ＰＣＳＳを用いたライブ評価により、４つの治療部位（クワドラント）のセルライトの重症度を決定した。対象となる治療部位の選択は、被験者の判断に委ねられた。治療開始日１日目、２２日目、４３日目、および７１日目の注射前に調査員がＣＲ−ＰＣＳＳを用いたライブ評価により、選択した治療部位を評価した。二重盲検研究でＣＣＨを投与された被験者のうち、３６０日目以降の治療継続性を評価するために、特定の時点でＣＲ−ＰＣＳＳを記入した。
【０６３０】
観察のみの群の被験者については、研究の最終来院時（１２カ月目または早期終了）に二重盲検研究で割り当てられた治療領域の治療前の１日目の画像を用いてＩ−ＧＡＩＳを完成させた。Ｉ−ＧＡＩＳは、ＣＣＨ治療を受けることを選択した被験者について、治療コースの７１日目と１２ヵ月目またはＥＯＳ来院時に完了した。この評価を行うために、治験責任者は、７１日目および１２ヵ月目またはＥＯＳ来院時のライブ評価におけるセルライトを、被験者の選択した治療部位のスクリーニングＢの前処理（ベースライン）画像と比較することにより、選択した治療部位のスクリーニングＢのデジタル画像からの改善度を決定した。
【０６３１】
観察のみのグループの被験者に対しては、特定の時点でヘクセルＣＳＳを実施した。再治療を選択した被験者には、特定の時点でヘクセルＣＳＳを実施した。
【０６３２】
セルライトの重症度に関する複合エンドポイントは、複合応答者の割合であった。複合応答者とは、ＣＲ−ＰＣＳＳで重症度がベースラインから２レベル以上（または１レベル以上）改善し、ＰＲ−ＰＣＳＳで重症度がベースラインから２レベル以上（または１レベル以上）改善した治療部位を有する被験者と定義した。これらの評価項目は、適切な記述統計を用いて、治療部位別、全体（臀部および大腿部）、研究日別にまとめられた。
【０６３３】
治療を受けた治療エリア（クワドラント）のその他のエンドポイントは以下の通りである。
ＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化
・ＰＲ−ＰＣＳＳの各改善レベルにおける割合。
−ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも２レベル以上改善した被験者と定義される応答者の割合（被験者評価）。
−ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善した被験者と定義された応答者の割合（被験者評価）。
・ＣＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化
・ＣＲ−ＰＣＳＳの各レベルの改善度における割合：
−調査員による応答者の割合は、ＣＲ−ＰＣＳＳ（調査員による評価）においてベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善が見られた被験者と定義した。
−調査員による応答者の割合は、ＣＲ−ＰＣＳＳ（調査員による評価）の重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善した被験者と定義した。
・Ｉ−ＧＡＩＳの各レベルにおける応答者の割合：
−７１日目および３６０日目において、Ｉ−ＧＡＩＳの各レベルでの被験者の割合。
・Ｓ−ＧＡＩＳの各レベルにおける応答者の割合：
−７１日目および３６０日目において、Ｓ−ＧＡＩＳの各レベルでの被験者の割合。
・セルライト治療に対する被験者の満足度尺度の各レベルにおける応答者の割合。
・スクリーニング来院時からのヘクセルＣＳＳ総合スコアの変化。
【０６３４】
それぞれの処理されたトリートメントエリアの観察エンドポイントを含む。
・ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳにおいて、ベースラインから少なくとも２（または１）の重症度の改善が見られた被験者と定義される複合応答者の割合。
・ＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化。
・ＰＲ−ＰＣＳＳにおける各レベルの改善の割合。
−ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから２レベル以上改善した被験者と定義される応答者の割合。
−ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善した被験者と定義される応答者の割合。
・ＣＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化。
・ＣＲ−ＰＣＳＳの各レベルの改善度における割合。
−調査員による応答者の割合は、ＣＲ−ＰＣＳＳ（調査員による評価）においてベースラインから少なくとも２レベルの重症度の改善が見られた被験者と定義した。
−調査員による応答者の割合は、ＣＲ−ＰＣＳＳ（調査員による評価）の重症度がベースラインから少なくとも１レベル改善した被験者と定義した。
・３６０日目のセルライト治療に対する被験者の満足度を示す尺度の各レベルにおける応答者の割合。
・研究２０１の７１日目から３６０日目までのヘクセルＣＳＳ総合スコアの変化、または３６０日目以降の長期耐久の視察。
【０６３５】
Ｄ．耐性の方法論
治療持続性の評価には、研究２０１で積極的な治療を受け、ＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方で少なくとも１レベルの改善を示した被験者の２年までの観察が含まれた。また、研究２０１でＣＣＨを投与され、本研究でもＣＣＨを投与された被験者については、研究２０１で治療された当初の治療部位に加え、非盲検研究で治療された治療部位（クワドラント）も本研究の７２０日目まで評価した。また、耐久性集団には、研究２０１でＣＣＨを投与されたが、本研究では追加治療を受けないことを選択した被験者、および研究２０１でプラセボを投与され、本研究でＣＣＨを投与された被験者も含まれた。
【０６３６】
３６０日目以降の耐久性を評価する被験者は、以下の条件を満たす必要がある。ａ）二重盲検研究２０１に参加し、終了した者、（ｂ）二重盲検研究２０１で積極的にＣＣＨを投与された者、（ｃ）二重盲検研究２０１の７１日目以前の同一来院時にＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方で少なくとも１レベルの改善を達成した者、（ｄ）研究参加中、毎回太陽に当たる前にＣＣＨ−２０１で治療した治療部位に日焼け止めを塗布する意思がある者（すなわち、ＥＯＳによるスクリーニングを行う者）。
【０６３７】
治療効果の持続性は、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳのセルライト評価の経時的な応答に基づいていた。ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＰＣＳＳ、およびそれらの組み合わせの各レベル（すなわち、１レベルまたは２レベルの改善）において、治療を受けた治療領域（クワドラント）に関連した応答者の数と割合を研究日ごとにまとめた。
【０６３８】
治療失敗とは、一定のフォローアップ期間中に、ＣＣＨ治療を受けた治療領域でＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳがベースラインまたはそれ以上に戻ってしまったアクティブ・応答者と定義した。その数と割合は、研究日ごとにまとめられた（すなわち、１８０日目、３６０日目、５４０日目、７２０日目）。
【０６３９】
応答者は以下の２つの集団から構成された。
・二重盲検法による治療を受けた被験者の耐久性集団：二重盲検研究（研究２０１）でＣＣＨを投与した治療部位について、７１日目（研究２０１）に各尺度（ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ）でベースラインから少なくとも１レベルの改善を示し、最大２年間追跡調査を行った耐久性集団の全被験者。
・非盲検被験者の耐久性集団：研究２０２でＣＣＨを投与した治療部位において、７１日目（研究２０２）にＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方でベースラインから少なくとも１レベルの改善が見られ、その後１年間追跡調査を行った耐久性集団の全被験者。
【０６４０】
Ｅ．安全性の評価
安全性の変数は以下の通り。安全性の変数には、ＡＥ、注射部位の応答／局所的な忍容性、バイタルサイン、臨床検査項目（血液学、血液化学、尿検査を含む）、および免疫原性が含まれた。
【０６４１】
Ｆ．研究対象
２５０人の被験者が研究２０１から転出し、今回の研究に参加し、観察集団に含まれた（表８０）。観察集団は、研究２０１でＣＣＨによる治療を受けた１２１名の被験者と、プラセボによる治療を受けた１３８名の被験者で構成された。観察集団に含まれる５３人（２０．５％）の被験者が、二重盲検法で治療を受けた被験者の耐久性集団に含まれた。これらの被験者は、研究２０１の７１日目以前に、ＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方で少なくとも１レベルの改善が認められた。
【表８０】
2022502478.tif 000139
【０６４２】
治療段階では、２００名の被験者がＣＣＨを１回以上投与され、安全性集団に含まれた（表８１）。安全性集団に含まれた被験者のうち、本研究で治療対象として選択された治療部位において、ＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方でベースラインおよびベースライン後に少なくとも１回の評価が行われた被験者１９３名が有効性集団に含まれた。治療部位の選択を臀部から大腿部に変更し、研究２０２の治療コースで臀部から大腿部に治療を受けた被験者が３名、研究２０２の治療コースで治療部位を大腿部から臀部に変更した被験者が８名いた。これらの被験者は、両方の治療領域でカウントされた。
【０６４３】
治療段階では、被験者は最大で２つの治療コースを受けた。研究２０１でプラセボ治療を受けた被験者は、本研究で最大２つの治療コースを受けることができた。研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者は、本研究で１つの治療コースを受けた。
【０６４４】
研究期間中、１６３名の被験者が本研究で２回目の治療コースを受け、安全集団に含まれた。この再治療／再投与群は、本研究でＣＣＨの２回目の治療コースを受けた（２０１研究で１回目の治療コースを受けた）被験者８８名と、本研究で１回目と２回目の両方の治療コースを受けた被験者７５名で構成された。
【０６４５】
効果集団には、本研究で２回目の治療コースを受けた被験者１６２名が含まれる。この再治療／再投与群は、研究２０１で１回目の治療コースを受けた後、本研究でＣＣＨの２回目の治療コースを受けた被験者８７名と、本研究で１回目と２回目の両方の治療コースを受けた被験者７５名で構成された。
【０６４６】
耐久性集団のうち４２名が本研究の治療段階に移行し、二重盲検法による治療を受けた被験者の耐久性集団に含まれた（表８１）。
【０６４７】
非盲検治療を受けた被験者の耐久性集団は１２４名であった。７１日目に治療部位のＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方でベースラインから少なくとも１レベルの改善を示した耐久性集団の被験者全員に、非盲検研究（研究２０２）でＣＣＨを投与した。この集団は以下のグループで構成された。
１．ＣＣＨ−研究２０１でＣＣＨを投与された被験者のうち、ＣＣＨ−研究２０１の治療コース１で応答した被験者で、再投与または再治療を行った被験者。
・研究２０１でＣＣＨの投与を受け、治療部位のセルライト重症度スコアが研究２０１のベースラインスコアに戻ったか、それよりも悪化した再治療を受けた被験者。これらの被験者は、前回治療した部位をＣＣＨで再治療することを選択できた。
・研究２０１でＣＣＨを再投与された被験者
２．研究２０１でプラセボ治療を受けた被験者のうち、研究２０２で初期治療を受け、治療コースＩで応答した被験者。
３．研究２０１でプラセボ李朝を受けた被験者で、研究２０２で２つの治療コースを受け、治療コース２に応答した被験者。
【表８１】
2022502478.tif 000140
【０６４８】
Ｇ．被験者の処分
図２８は、被験者がどのように処分されたかをまとめたものである。
（ｉ）被験者の処分（観察期）：観察期には２５９例の被験者が評価され、２２２例（８５．７％）が観察期を終了した（表８２）．その理由は、ＣＣＨに曝露していないのに好酸球が軽度増加したＡＥ（１例；０．４％）、追跡調査不能（１３例；５％）、被験者による離脱（１３例；５％）、その他（１０例；３．９％）であった．その他のカテゴリーには、スクリーニング失敗、治療段階への参加を拒否した被験者、被験者登録の研究日２７２日目にサイトが閉鎖された被験者、または研究の受診を遵守しなかった被験者が含まれた。
【表８２】
2022502478.tif 000141
【０６４９】
被験者の配置（治療段階）：治療段階のために２１６名の被験者がスクリーニングされ、２００名の被験者が登録され、１５６名（７８％）の被験者が治療段階を完了した（表８３）。全体的に、大腿部の治療部位よりも臀部の治療部位の方が多かった。臀部の治療を受けた被験者は１１４名、大腿部の治療を受けた被験者は９６名であった。
【０６５０】
治療段階では、１６３名の被験者がＣＣＨに再曝露された。再曝露された被験者１６３名のグループは、研究２０１で最初の治療コースを受けた後、治療コースＩでＣＣＨに再曝露された被験者８８名と、治療コース２で再曝露された被験者７５名で構成された。
【０６５１】
治療段階では、１１２名の被験者が治療コース１で初期治療を受け、８８名の被験者が治療コース１で再曝露された（再曝露された被験者は８２名、再曝露された被験者は６名のみ）。再投与された８２名の被験者は、研究２０１でＣＣＨを投与されたが、研究２０１で治療した治療部位以外の適格な治療部位での治療を選択した。再治療を受けた６名の被験者は、研究２０１でＣＣＨを受け、治療部位のセルライト重症度スコアがベースラインスコアに戻ったか、研究２０１のベースラインスコアよりも高かった。これらの被験者は、以前に治療した治療部位をＣＣＨで再治療することを選択した。
【０６５２】
７５人の被験者が、研究２０２で治療コース１と治療コース２の両方を受けた。治療コース２では、定義上、すべての被験者がＣＣＨに再曝露された。大多数（７３／７５人、９７．３％）の被験者が再投与され、２人の被験者のみが再投与された。
【０６５３】
１１５人の被験者がこの研究を完了した。ＣＣＨを中止した被験者の分布は、臀部と大腿部で同様であった（２２名［２１．２％］対２２名［２２．９％］）。
【表８３】
2022502478.tif 000142
【０６５４】
Ｈ．有効性の結果
１．臨床エンドポイント
治療段階および観察段階において、研究２０１の有効応答者を対象に、ＣＲ−ＰＣＳＳ／ＰＲ−ＰＣＳＳ複合エンドポイントの応答を評価した。セルライトの重症度に関する複合エンドポイントは、複合応答者の割合として定義した。応答とは、ベースライン（研究２０１）からＣＲ−ＰＣＳＳの重症度が１レベル以上改善し、ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度が１レベル以上改善した被験者と定義した。積極的な応答を示したのは、研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者で、研究２０１の治療領域のベースラインからＣＲ−ＰＣＳＳとＰＲ−ＰＣＳＳの両方で少なくとも１レベルの改善が認められた。
【０６５５】
研究２０２の観察期では、研究２０１からロールオーバーした被験者で、治療した部位に積極的な応答が見られた被験者を最長２年間観察した。また、研究２０２の治療段階で治療を受け、２レベルの複合応答を示した被験者を最大１年間観察した。治療失敗は、ＣＣＨを投与され、ＣＣＨを投与された領域でＣＲＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳがベースラインに戻った能動的な応答者と定義した。治療効果の持続性は、治療失敗の逆数として算出した。解析は、２レベルの複合応答が得られた被験者と、少なくとも１レベルの複合応答が得られた被験者で行った。
【０６５６】
セルライトの重症度に関する複合エンドポイントは、複合応答者の割合として定義した。これは、ベースライン（研究２０１）からＣＲ−ＰＣＳＳの重症度が２レベル以上（または１レベル以上）改善し、ＰＲ−ＰＣＳＳの重症度がベースラインから２レベル以上（または１レベル以上）改善した被験者と定義した。この解析は、観察期および治療期に登録された被験者に対して行われた。観察期における１レベルおよび２レベルの複合応答の持続性に関する調査員の評価は、二重盲検法で行われた。
【０６５７】
評価は治療領域ごと、被験者ごとに行われた。したがって、異なる治療コースの異なる治療領域でＣＣＨ治療を受けた可能性のある被験者については、治療領域ごとに応答を評価した。１つの治療領域で応答した被験者は、他の治療領域で治療を受けた場合、同等または全く応答しなかった可能性があるため、適宜、１レベルまたは２レベルの複合応答者とされた。応答の持続性は、研究２０１の７１日目に少なくとも１レベルまたは２レベルの複合応答を示した被験者で評価した。
【０６５８】
１８０日目以降に２レベルの複合応答が得られた被験者は２６名（臀部の治療を受けた１９名と大腿部の治療を受けた７名を含む）であった。これらの被験者は、研究２０２において１または２の治療コースを受けた。研究２０２において、１８０日目（２６名、１００％）および３６０日目（２１名、１００％）に観察された評価可能な被験者は、すべて２レベルの応答を維持した。また、新たに治療した部位のＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳ評価がベースライン（研究２０２）またはそれ以下に戻った２レベルの複合応答を示した被験者はいなかった。本研究で治療を受けた被験者では、２レベルの複合応答が持続し、１８０日目と３６０日目で同様であり、臀部と大腿部の治療部位で同様であった。
【０６５９】
１８０日目に１レベルの複合応答が得られた被験者は１２４名（臀部治療部位７２名、大腿部治療部位５４名を含む）、研究２０２の３６０日目に１レベルの複合応答が維持された被験者は１１４名であった。治療失敗と評価された被験者のうち、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価がベースライン（研究２０２）の評価またはそれ以上に戻った被験者はいなかった。１８０日目と３６０日目に１レベルの複合応答が持続し、臀部治療部位と大腿部治療部位で同様の結果が得られた。
【０６６０】
２．有効性の持続性
本研究では、登録を希望したセルライトを有するすべての被験者を対象に、２年間（２４カ月）にわたって予定された間隔でＣＣＨの長期安全性を評価した。対象者は、臀部または大腿部のいずれかに治療を受け、適格性に応じて、臀部または大腿部のいずれかに２回目の治療を受けることができた。応答の持続性は、研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者では最長２年間、研究２０２でＣＣＨの初回治療を受けた被験者では最長１２カ月間評価された。研究２０１で治療を受けた研究２０２の７２０日目に評価された被験者で得られたデータは、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの応答が最大２年間持続することを裏付けた。
【０６６１】
本研究の結果は、ＣＣＨ０．８４ｍｇ／治療部位×３回の治療セッションを２１日間隔で実施した場合の長期的な安全性と効果の持続性について、最長２年間の支持データを提供するものである。これには、研究２０２で治療を受けた被験者の効果の持続（最大１年）と、研究２０１でＣＣＨを治療し、研究２０２で延長研究に登録した被験者の効果のより長期的な持続が最大２年にわたって観察されたことが含まれる。
【０６６２】
今回の非盲検研究（研究２０２）では、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳにおけるセルライトの重症度がベースラインから約１レベル低下（改善）した。この減少量は、二重盲検研究で被験者が経験したＣＲＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの減少量と同程度であった。
【０６６３】
（ａ）ＰＲ−ＰＣＳＳ応答の１年後までの持続性：ＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化の持続性は、研究２０１でＣＣＨを投与した群、研究２０２でＣＣＨを投与した群、２０２研究で再投与した群の間で一貫した。研究２０１から研究２０２に登録した被験者２５９名のうち、研究２０１の７１日目のベースラインからの変化量の平均（ＳＤ）は、ＣＣＨ治療を受けた被験者（ｎ＝１２１）で−１．２（０．８９）、プラセボ治療を受けた被験者（ｎ＝１３８）で−０．６（０．７４）であった。１年後まで観察したところ、ＣＣＨ治療を受けた被験者ではＰＲ−ＰＣＳＳ評価の改善が継続して見られた。ＣＣＨ治療を受けた被験者のベースラインからの変化量の平均（ＳＤ）は、１８０日目（ｎ＝１１９）、２７０日目（ｎ＝１０５）、３６０日目（ｎ＝９６）に−０．７（０．８８）、−０．７（０．９６）、−１．０（０．９１）であった。
【０６６４】
研究２０２に登録され治療を受けた被験者のうち、１９３名（臀部１０３名、胸部９０名）が治療コース１で効果を評価された。治療コース１を受けた被験者には、ＣＣＨで最初に治療を受けた被験者と、再治療または再投与を受けた被験者が含まれる。１年後まで観察した結果、ＣＣＨ治療を受けた被験者は、ＰＲ−ＰＣＳＳ評価においてベースラインからの改善を継続して示した。１８０日目、２７０日目、３６０日目のベースラインからの変化は、全体の平均値（ＳＤ）がそれぞれ−１．１（０．８５）、−１．１（０．８７）、−１．０（０．８３）であった。この応答は、臀部（ｎ＝１０３）と大腿部（ｎ＝９０）の両方の治療部位で同様であった（図２９）。
【０６６５】
本研究では、再照射した被験者１６２名を対象に、最長１年間の観察により効果を評価したところ、ＣＣＨ投与群では、１８０日目（−１．０［０．８３］）および３６０日目（−１．０［０．８３］）にＰＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの改善が継続して見られた。また、臀部および大腿部の治療部位では、１回目の治療コース後も２回目の治療コース後も同様の効果が得られた（図３０および図３１）。
【０６６６】
（ｂ）ＣＲ−ＰＣＳＳ応答の１年までの持続性：ＣＲ−ＰＣＳＳのベースラインからの変化の持続性は、研究２０１でＣＣＨ治療を受けた被験者群、研究２０２で治療した被験者群、２０２研究で再曝露した被験者群の間で一貫した。
【０６６７】
ＣＣＨ治療を受けた被験者群のうち、研究２０１から研究２０２に登録された１２１名のベースラインからの変化量の平均（ＳＤ）は、２０１研究の７１日目にＣＣＨ治療を受けた被験者で−０．８（０．８８）、プラセボ治療を受けた被験者で−０．３（０．６）であった。１年後まで観察したところ、ＣＣＨ治療を受けた被験者はＣＲ−ＰＣＳＳ評価の改善を継続して示した。１８０日目、２７０日目、３６０日目におけるベースラインからの変化の全体平均（ＳＤ）は、それぞれ−０．６（０．８０）、−０．６（０．７６）、−０．９（０．８６）であった。
【０６６８】
研究２０２に登録され治療を受けた被験者のうち、１９３名のＣＣＨ治療を受けた被験者（１０３名の臀部治療部位と９０名の大腿部治療部位）が、本研究の治療コース１で効果を評価した。治療コース１を受けた被験者には、初回治療を受けた被験者と、再治療または再投与を受けた被験者が含まれる。１年後まで観察した結果、ＣＣＨ治療を受けた被験者は、ＣＲ−ＰＣＳＳ評価の改善を継続して示した。ベースラインからの変化量の全体平均（ＳＤ）は、１８０日目、２７０日目、３６０日目に、それぞれ−１．０（０．８０）、−１．１（０．８３）、−１．１（０．８２）であった（図３２）。この応答は、臀部（ｎ＝１０３）と大腿部（ｎ＝９０）の両方の治療部位で同様であった。
【０６６９】
研究２０２で再曝露し、１年後まで観察して有効性を評価した１６２名のうち、ＣＣＨ治療を受けた被験者では１８０日目および３６０日目にＣＲ−ＰＣＳＳの改善が継続して見られた。ベースラインからの変化量の全体平均（ＳＤ）は、１８０日目に−１．０（０．８０）、３６０日目に−０．９（０．７７）であった。また、臀部および大腿部の治療部位では、１回目の治療コース後も２回目の治療コース後も同様の効果が得られた（図３３および図３４）。
【０６７０】
ｃ）２レベルの複合応答の最長２年間の持続性：２レベルの複合応答を示した７名の被験者（臀部５名、大腿部２名のＣＣＨ治療部位）について、最長７２０日の評価を行った。７２０日目の時点で、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価がベースラインスコア（研究２０１での評価）またはそれ以上に戻った被験者は７人ともいなかった。
【０６７１】
ｄ）１レベルの複合応答の最長１年間の持続性：１レベル以上の複合応答を示した２３名の被験者（臀部１３名、ＣＣＨ処理した大腿部１０名）について、最長７２０日の評価を行った。７２０日目には、２１名（９１．３％）の被験者において、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳの評価がベースライン（研究２０１）のスコアまたはそれ以上に戻ったものはなかった。
【０６７２】
３．耐性の効果
本研究では、２回目の治療コースに対する耐性（ＣＣＨを再投与したときに、時間の経過とともに治療用量に応答する能力が失われること）を評価した。本研究のデータは、ＣＣＨの再投与による耐性（時間の経過とともに治療用量に応答する能力が失われること）がないことを裏付けた。１６３名の被験者が治療を受けた。このグループは、研究２０１で最初の治療コースを受けた後、治療コース１で再曝露された被験者８８名と、治療コース２で再曝露された被験者７５名で構成された。
【０６７３】
７５人の被験者が、研究２０２で治療コース１と治療コース２の両方を受けた。治療コース２では、定義上、すべての被験者がＣＣＨに再曝露された。大多数の被験者（７３／７５人、９７．３％）が再投与され、２人の被験者のみが再投与された。ＣＣＨ治療の再曝露（再投与および／または再治療）を受けた被験者の安全性に関する懸念を示唆するシグナルはなかった。
【０６７４】
（ａ）ＰＲ−ＰＣＳＳ評価のベースラインからの変化（再治療／再投与）：本研究では、１６２名の被験者（臀部治療領域９１名、大腿部治療領域７１名を含む）が、ＣＣＨの１回目の治療コース終了後と２回目の治療コース終了後に、ＰＲ−ＰＣＳＳで効果を評価した（１名は評価が欠けていたため、効果のある集団に含まれなかった）（表８４）。
【０６７５】
初回治療後７１日目と３６０日目に評価したところ、２回目の治療コース後に観察されたＰＲ−ＰＣＳＳの変化は、１回目の治療コース後の同時期に観察された変化と同様であり、重ね合わせることができた。３６０日目のＰＲ−ＰＣＳＳ評価の変化の全体平均（ＳＤ）は、１回目の治療コース後で−１．０（０．８２）（表８４）、２回目の治療コース後で−１．０（０．８３）（表８５）であった。臀部と大腿部の治療部位で同様の減少が見られた。臀部の治療部位の変化（図３１）は、大腿部と臀部の治療部位を合わせた解析の変化（図３０）と同様であった。２０２研究では、二重盲検研究（研究２０１、研究３０２、研究３０３）の被験者が１回目の治療を受けた後に観察された応答と同様の大きさで、ＰＲＰＣＳＳにおけるセルライトの重症度の減少が見られた。
【表８４】
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【表８５】
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【０６７６】
（ｂ）ＣＲ−ＰＣＳＳ評価のベースラインからの変化（再治療／再投与）：本研究では、１６２名の被験者（臀部治療領域９１名、大腿部治療領域７１名を含む）がＣＣＨの１回目と２回目の治療コースを受け、ＣＲ−ＰＣＳＳで効果を評価した（１名は評価が欠けていたため、効果の集団には含まれなかった）（表８６）。
【０６７７】
初回治療後７１日目と３６０日目に評価したところ、２回目の治療コース後に観察されたＣＲ−ＰＣＳＳの変化は、１回目の治療コース後の同時期に観察された変化と同様であり、重ね合わせることができた。３６０日目のＣＲ−ＰＣＳＳ評価の変化の全体平均（ＳＤ）は、１回目の治療コース後で−１．１（０．８８）（表８６）、２回目の治療コース後で−０．９（０．７７）（表８７）であった。臀部および大腿部の治療部位においても同様の減少が見られた。臀部の治療部位の変化（図３４）は、大腿部と臀部の治療部位を合わせた解析結果（図３３）の変化と同様であった。研究２０２では、二重盲検研究（研究２０１、研究３０２、研究３０３）の被験者が最初の唯一の治療コースを受けた後に観察された応答と同様の大きさで、ＣＲ−ＰＣＳＳのセルライトの重症度が減少した。
【表８６】
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【表８７】
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【０６７８】
再投与時のヘクセルＣＳＳ総合評価、Ｉ−ＧＡＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、ＥＦＰ治療に対する被験者の満足度の変化：再投与時には、セルライトの重症度の低下に対するＣＣＨの有効性がヘクセルＣＳＳで評価され、調査員グローバル美的改善尺度（Ｉ−ＧＡＩＳ）と被験者グローバル美的改善尺度（Ｓ−ＧＡＩＳ）によって評価され、ＥＦＰ治療に対する被験者の満足度が評価された。これらの尺度で評価した治療後の効果は、未治療の被験者と、再治療時または再投与時にＣＣＨに対する耐性または頻脈性がないことを支持して再投与された被験者の治療後に同等であった。
【０６７９】
Ｉ．安全性評価
ＣＣＨの安全性プロファイルは、これまでの研究で得られた安全性の結果と一致していた。研究期間中、併用薬に臨床的に意味のある変化はなかった。研究期間中、血清化学パラメータ、血液学パラメータ、尿検査結果、バイタルサインのベースラインからの平均変化量に臨床的に意味のある傾向は認められなかった。また、抗ＡＵＸ−Ｉ抗体および抗ＡＵＸ−ＩＩ抗体を有する被験者、あるいは中和抗体を有する被験者において、臨床的に重要な知見は得られなかった。
【０６８０】
Ｊ．結果と結論のまとめ
応答の持続性（完全に消失しないこと）は、研究２０１の評価可能な２レベルの複合応答者で観察された。ＣＣＨ治療を受けた地域で、ベースラインのＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳレベル以上に戻った被験者はいなかった。下記の間、持続的な応答が観察された。
・それぞれ１８０日目と３６０日目での二重盲検法で評価可能な被験者１９名（１００％）と１６名（１００％）の観察期。
・それぞれ５４０日目および７２０日目での二重盲検法による評価可能な被験者７名（１００％）の長期耐久期。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での２６名（１００％）および２１名（１００％）の評価可能な非盲検治療を受けた被験者の治療期。
【０６８１】
応答の持続性（完全消失の欠如）は、研究−２０１の評価可能な１レベルの複合応答者で示された。下記の間、持続的な応答が認められた。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での二重盲検法で評価可能な被験者のうち５０名（９４．３％）、４３名（９５．６％）の観察期。
・それぞれ５４０日目および７２０日目での二重盲検法で評価可能な被験者２２名（９５．６％）、２１名（９１．３％）の長期持続期。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での１２４名（１００％）、１１４名（１００％）の評価可能な非盲検治療対象者における治療期。
【０６８２】
研究２０１の２レベルのＣＲ−ＰＣＳＳアクティブ応答者のうち、下記の研究期間中に２レベルの応答が維持された。
・二重盲検法による評価可能な被験者１０名（４７．６％）の３６０日目の観察期。
・それぞれ５４０日目および７２０日目での二重盲検法による評価可能な被験者３名（３０％）と４名（４０％）の長期持続期。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での３２名（６２．７％）、２６名（５６．５％）の評価可能な非盲検治療を受けた被験者の治療期。
【０６８３】
１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳアクティブ応答者のうち、下記の研究期間中に１レベルの応答が維持された。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での二重盲検法で治療を受けた被験者３８名（８４．４％）の観察期。
・それぞれ５４０日目および７２０日目での１９名（８２．６％）、１６名（６９．６％）の二重盲検者の長期持続期。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での評価可能な非盲検治療を受けた１０９名（８７．９％）、９６名（８４．２％）の治療期。
【０６８４】
研究２０１の２レベルのＰＲ−ＰＣＳＳアクティブ応答者のうち、下記の研究期間中に２レベルの応答が維持された。
・二重盲検法による評価可能な被験者のうち、１０名（３１．３％）が１８０日目、１４名（４８．３％）が３６０日目の観察期。
・それぞれ５４０日目および７２０日目での二重盲検法による評価可能な被験者７名（５３．８％）の長期持続期。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での３３名（６６．７％）、２４名（５４．５％）の評価可能な非盲検治療者の治療期。
【０６８５】
研究２０１の１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳアクティブ応答者のうち、下記の研究期間中に１レベルの応答が維持された。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での二重盲検法による評価可能な被験者の４０名（７５．５％）、３５名（７７．８％）の観察期。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での二重盲検法による評価可能な被験者１９名（８２．６％）、２０名（８７．０％）の長期持続期。
・それぞれ１８０日目および３６０日目での１０３名（８３．１％）、９２名（８０．７％）の評価可能な非盲検治療者の治療期。
【０６８６】
また、２レベルおよび１レベルのＣＲ−ＰＣＳＳ、２レベルおよび１レベルのＰＲ−ＰＣＳＳの応答者、および研究２０１の応答者においても、観察期、長期持続期、治療期において応答の持続性が認められた。
【０６８７】
観察期および治療期の二重盲検非盲検研究において、治療コース１および２を受けた被験者は、３６０日目のＣＲ−ＰＣＳＳ評価値が約１レベル低下したことが確認された。再投与および再治療においても同様の効果が認められ、ＣＣＨの２回目の治療を受けた後の治療観察日３６０日目のＣＲ−ＰＣＳＳ評価の変化は、平均（ＳＤ）で−０．９（０．７７）であった（再投与群と未治療群の比較）。
【０６８８】
観察期にはＰＲ−ＰＣＳＳ評価が３６０日目に約１レベル低下し、治療期には治療コース１および治療コース２を受けた二重盲検・非盲検の被験者で観察された。また、観察期３６０日目に再投与された被験者においても同様の効果が認められ、ＣＣＨ、ＣＣＨの２回目の投与後（再投与された被験者と未投与の被験者）のＰＲ−ＰＣＳＳ評価の変化量の平均値（ＳＤ）は−１．０（０．８３）であった。
【０６８９】
ＣＣＨによるセルライトの減少効果は、観察期、長期持続期、治療期（治療コース１および２）において、ヘクセルＣＳＳ、Ｉ−ＧＡＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、およびＥＦＰ治療に対する被験者の満足度の尺度で観察された。ＣＣＨ治療後のこれらの尺度の変化の大きさは、再治療された被験者と再投与された被験者、および治療を受けていない被験者の間で同等であった。
・ヘクセルのＣＳＳ総合スコアでは、
−観察期、ＣＣＨ治療を受けた被験者では、観察来院日３６０日目に、ヘクセルＣＳＳ総合スコアの７１日目のベースラインからの変化が平均（ＳＤ）で−２．２（２．３４）であったのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では平均（ＳＤ）で−１．２（１．４７）であったことを示した。
−長期持続期、ベースライン（研究２０１）からの変化量は、５４０日目で−１．０（０．８３）、７２０日目で−２．９（１．７４）であった。
−治療期では、再治療群と再投与を受けた被験者の３６０日目におけるベースライン（研究２０２）からの変化量は−２．４（２．３７）であった。
・Ｉ−ＧＡＩＳの調査員によると、下記の期間：
−観察期、ＣＣＨ治療を受けた被験者の半数以上（６４．９％）のセルライトが観察され、Ｉ−ＧＡＩＳの調査員による評価では、非常に改善された（４．１％）、かなり改善された（２３．７％）、改善された（３７．１％）とされた。
−治療期、治療コース１の３６０日目に、被験者全体の約４分の３（７３．２％）のセルライトが、改善された（８１名、４９．４％）、かなり改善された（３２名、１９．５％）、非常に改善された（７名、４．３％）と評価された。
−治療期、治療コース２の３６０日目に、被験者全体の半数以上（６４．２％）が、「改善した」（２４名、３５．８％）、「かなり改善した」（１６名、２３．９％）、「非常に改善した」（３名、４．５％）と評価された。
−治療期、３６０日目に、２回目のＣＣＨ治療を受けた被験者において、再治療および再投与を受けた被験者の３分の２以上（７１．８％）のセルライトが、改善された６４（４５．１％）、かなり改善された３３（２３．２％）、非常に改善された５（３．５％）と評価された。
・Ｓ−ＧＡＩＳでの被験者によると、下記の期間：
−観察期、ＣＣＨ治療を受けた被験者の３分の２以上（６９．１％）が、セルライトが改善された（４６名、４７．４％）、かなり改善された（１８名、１８．６％）、非常に改善された（３名、３．１％）と評価した。
−治療期中で、治療コース１の３６０日目に、被験者全体の３分の２以上（６６．２％）が、セルライトが改善された（７３人、４４．８％）、かなり改善された（１８人、１１％）、非常に改善された１７人（１０．４％）と評価した。
−治療期中で、治療コース２の３６０日目に、被験者の約半数（５１．５％）のセルライトが改善された（２４名、３５．３％）、かなり改善された（６名、８．８％）、非常に改善された（５名、７．４％）と評価した。
−治療期中で、３６０日目で、２回目のＣＣＨ治療を受けた被験者の半数以上（６４．４％）が、セルライトが改善された（６４人、４４．８％）、かなり改善された（１４人、９．８％）、非常に改善された１６人（１１．２％）と評価した。
・ＥＦＰ治療に対する被験者の満足度評価で、被験者によって、下記の期間：
−観察期、３６０日目に、ＣＣＨ投与群では４１名（４２．３％）、ＣＣＨ治療を受けた被験者では１４名（１４．４％）の被験者が「治療に満足している」「非常に満足している」と応答した。
−治療段階中で、治療コース１の観察日３６０日目に、５５名（３３．７％）の被験者が治療に満足し、２６名（１６．０％）の被験者が非常に満足した。
−治療段階中で、治療コース２の観察日３６０日目に、２１人（３０．９％）の被験者が治療に満足し、１０人（１４．７％）の被験者が非常に満足した。
−治療段階中で、２回目のＣＣＨ治療を受けた被験者のうち、５０人（３５％）の被験者が治療に満足し、２５人（１７．５％）の被験者が治療に非常に満足したと応答した。
【０６９０】
本研究では、１９３名の被験者を対象に、ＣＣＨを１部位あたり０．８４ｍｇ×３回投与することで、１年後まで効果が持続することが示された。また、２年後の評価のために抽出された被験者においても、ＣＣＨ投与後２年まで効果の持続性が確認された。また、ＣＣＨを１回あたり０．８４ｍｇ、２１日間隔で３回、臀部または大腿部に皮下投与することで、繊細な被験者、再投与・再々投与の被験者のいずれに対しても有効であることが示された。セルライトの重症度の減少は、調査員および被験者の評価尺度を含む複数の尺度で示された。効果の評価結果は、臀部と大腿部の治療部位で同様であった。
【０６９１】
１６２名の被験者にＣＣＨ０．８４ｍｇ／治療部位×３回の２回目の治療コースを再投与し、効果を評価したところ、治療に対する耐性は認められなかった（すなわち、治療効果の低下は認められなかった）。このことは、研究２０２の結果からも裏付けられており、ＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳで観察された低下は、１６２名の被験者の２回目の治療コース後の応答が１回目の治療コースと比較しても、また、重要な段階３研究で観察された応答と同様であった。
【０６９２】
本研究の結果は、ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの評価のベースラインからの変化で証明されたように、効果の持続性が１年まで持続し、ＰＲ−ＰＣＳＳおよびＣＲ−ＰＣＳＳの持続的な応答が１年まで持続した。また、１レベルおよび２レベルの複合応答が２年まで持続することを裏付ける結果が得られた
【０６９３】
研究２０２でＣＣＨを再投与した被験者は、２回目の治療コース後にＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳのセルライトの重症度が、初回治療コース後の被験者や二重盲検研究（研究２０１、３０２、３０３）の被験者で観察された応答と同様の大きさで減少した。
【０６９４】
ＣＣＨに対する応答の持続性は、研究の観察期、長期持続期、治療期において評価可能な被験者で示された。研究２０１の２レベルの複合応答者では、評価可能な被験者全員が応答の持続性を維持し、１８０日目および３６０日目にベースラインのＣＲ−ＰＣＳＳおよびＰＲ−ＰＣＳＳレベルに戻った被験者はいなかった。２０１研究の１レベルの複合応答者では、ほぼすべての被験者が１８０日目および３６０日目に治療効果が持続した。本研究でも同様の結果が得られ、評価対象者全員が１８０日目および３６０日目に応答を持続した。
【０６９５】
評価可能な２レベルおよび１レベルの複合応答者、ＣＲ−ＰＣＳＳ応答者、およびＰＲ−ＰＣＳＳ応答者において、研究２０１のベースラインスコアから最大２年間の長期耐久性が示された。研究２０１のベースラインからのセルライトの重症度に対するＣＣＨの効果は、ヘクセルＣＳＳ総合スコア、Ｉ−ＧＡＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、およびＥＦＰ治療に対する被験者の満足度スコアで測定され、研究２０１のベースラインから少なくとも１年後まで維持された。
【０６９６】
本研究では、ＣＣＨ０．８４ｍｇ／治療部位の有効性を、治療を受けていない被験者と再曝露（再治療／再投与）された被験者の両方で評価した。ＣＲ−ＰＣＳＳ、ＰＲ−ＰＣＳＳ、ヘクセルＣＳＳ総合スコア、Ｉ−ＧＡＩＳ、Ｓ−ＧＡＩＳ、ＥＦＰ治療に対する被験者の満足度スコアで評価した効果測定の結果は、観察集団での結果と一致し、治験責任者と被験者のどちらが評価しても、セルライトの重症度が改善することが示された。また、再治療および再投与を受けた被験者においても同様の結果が得られた。なお、２回目の投与を選択した被験者のうち、ほとんどの被験者が大部分の再投与で治療されていないことに留意する必要がある。
【０６９７】
今回のＣＣＨの段階２長期、非盲検、他施設の研究の全体的な結果は、ＥＦＰの治療におけるＣＣＨの安全性、忍容性、有効性、および長期持続性をさらに証明するものである。
【０６９８】
本明細書に記載されている実施形態は、単に例示的なものであることを意図する。当業者であれば、以下の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲を逸脱することなく、変形や変更を行うことができることを理解するだろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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