【手続補正書】
【提出日】平成21年12月11日(2009.12.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１５０〜４２０アミノ酸残基からなり、式ＲＥＰ−ＣＴ
［式中、
ＲＥＰは、８０〜３００アミノ酸残基を有するタンパク質フラグメントであり、ここで、該フラグメントは、Ｌ（ＡＧ）nＬ、Ｌ（ＡＧ）nＡＬ、Ｌ（ＧＡ）nＬ、Ｌ（ＧＡ）nＧＬ
（ここで、
ｎは４〜８の整数であり；
各個々のＡセグメントは、８〜１８アミノ酸残基のアミノ酸配列であり、アミノ酸残基の０〜３個がＡｌａではなく、残りのアミノ酸残基がＡｌａであり；
各個々のＧセグメントは、１２〜３０アミノ酸残基のアミノ酸配列であり、アミノ酸残基の少なくとも４０％がＧｌｙであり；かつ
各個々のＬセグメントは、０〜２０アミノ酸残基のリンカーアミノ酸配列である）
の群から選択され；そして
ＣＴは、７０〜１２０アミノ酸残基を有するタンパク質フラグメントであり、このフラグメントは大瓶状腺スピドロインタンパク質由来のＣ末端フラグメントである］
により定義されることを特徴とする、単離された大瓶状腺スピドロインタンパク質。
【請求項２】
各個々のＡセグメントが、配列番号３のアミノ酸残基７〜１９、４３〜５６、７１〜８３、１０７〜１２０、１３５〜１４７、１７１〜１８３、１９８〜２１１、２３５〜２４８、２６６〜２７９、２９４〜３０６、３３０〜３４２、３５７〜３７０、３９４〜４０６、４２１〜４３４、４５８〜４７０、４８９〜５０２、５１７〜５２９、５５３〜５６６、５８１〜５９４、６１８〜６３０、６４８〜６６１、６７６〜６８８、７１２〜７２５、７４０〜７５２、７７６〜７８９、８０４〜８１６、８４０〜８５３、８６８〜８８０、９０４〜９１７、９３２〜９４５、９６９〜９８１、９９９〜１０１３、１０２８〜１０４２、および１０６０〜１０７３；配列番号９のアミノ酸残基３１〜４２、６１〜７５、９０〜１０４、１２２〜１３５、および１５３〜１７１；配列番号１３のアミノ酸残基１２〜２５、４６〜６０、７５〜８８、１１２〜１１９、１５０〜１５８、および１７３〜１８０；配列番号１４のアミノ酸残基３１〜４２；ならびに配列番号１５のアミノ酸残基１２２〜１３５の群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の同一性
を有し、
各個々のＧセグメントが、配列番号３のアミノ酸残基２０〜４２、５７〜７０、８４〜１０６、１２１〜１３４、１４８〜１７０、１８４〜１９７、２１２〜２３４、２４９〜２６５、２８０〜２９３、３０７〜３２９、３４３〜３５６、３７１〜３９３、４０７〜４２０、４３５〜４５７、４７１〜４８８、５０３〜５１６、５３０〜５５２、５６７〜５８０、５９５〜６１７、６３１〜６４７、６６２〜６７５、６８９〜７１１、７２６〜７３９、７５３〜７７５、７９０〜８０３、８１７〜８３９、８５４〜８６７、８８１〜９０３、９１８〜９３１、９４６〜９６８、９８２〜９９８、１０１４〜１０２７、１０４３〜１０５９、および１０７４〜１０９２；配列番号５〜７；配列番号９のアミノ酸残基１１〜３０、４３〜６０、７６〜８９、１０５〜１２１、および１３６〜１５２；ならびに配列番号１３のアミノ酸残基１〜１１、２６〜４５、６１〜７４、８９〜１１１、１２０〜１４９、および１５９〜１７２の群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の同一性を有し、そして
ＣＴフラグメントが、配列番号８に対して少なくとも５０％の同一性、または配列番号４、配列番号９のアミノ酸残基１７２〜２６９、配列番号１３のアミノ酸残基１８１〜２７６、および配列番号１６のアミノ酸残基１７２〜２６９からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する、請求項１に記載の単離されたタンパク質。
【請求項３】
配列番号９および配列番号１２〜１６からなる群より選択される、請求項１または２に記載の単離されたタンパク質。
【請求項４】
Ｘ−ＲＥＰ−ＣＴおよびＲＥＰ−ＣＴ−Ｘ
（式中、
ＲＥＰおよびＣＴは請求項１〜３のいずれか一項に記載のタンパク質フラグメントであり；そして
Ｘは融合パートナーおよび切断剤認識部位を含むタンパク質フラグメントであり；
ここで、タンパク質フラグメント結合体ＲＥＰ−ＣＴは切断剤認識部位を介して融合パートナーに結合される）
の群から選択される、単離された融合タンパク質。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の大瓶状腺スピドロインタンパク質のポリマー。
【請求項６】
ＬＰＳおよび他の発熱物質の含量が１ＥＵ／ｍｇ単離されたタンパク質またはそれ未満である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離されたタンパク質を含む組成物。
【請求項７】
配列番号１、配列番号２〜１６をコードする核酸配列、およびそれらの相補的核酸配列、請求項４に記載の融合タンパク質をコードする核酸配列およびそれらの相補的核酸配列からなる群より選択される核酸配列を含む、単離されたポリ核酸分子。
【請求項８】
（ｉ）請求項４に記載の融合タンパク質をコードするポリ核酸分子を適する宿主において発現させる工程；および
（ii）工程（ｉ）で得られた可溶性融合タンパク質を単離し、場合により、ＬＰＳおよび他の発熱物質の除去を含む工程、
を含む、請求項４に規定された可溶性融合タンパク質の生産方法。
【請求項９】
（ｉ）請求項４に記載の融合タンパク質の液体媒体中溶液を供給する工程、
（ii）融合タンパク質の切断剤認識部位での切断を達成するのに適した切断剤を上記液体媒体に加え、それによって大瓶状腺スピドロインタンパク質を得る工程；
（iii）工程（ii）において得られた大瓶状腺スピドロインタンパク質を液体媒体中で
重合させる工程；および、場合により
（iv）工程（iii）において得られたポリマーを上記液体媒体から単離し、場合により、ＬＰＳおよび他の発熱物質の除去を含む工程、
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に規定された大瓶状腺スピドロインタンパク質のポリマーの生産方法。
【請求項１０】
請求項４に記載の融合タンパク質の溶液を供給する工程（ｉ）が、
（ａ）請求項４に記載の融合タンパク質をコードするポリ核酸分子を適する宿主において発現させる工程；
（ｂ）工程（ａ）において得られた可溶性融合タンパク質を単離し、場合により、ＬＰＳおよび他の発熱物質の除去を含む工程；および
（ｃ）工程（ｂ）において得られた上記可溶性融合タンパク質の液体媒体中溶液を供給する工程、
からなる、請求項１〜３に規定した大瓶状腺スピドロインタンパク質のポリマーを生産する請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ii）において得られた大瓶状腺スピドロインタンパク質を液体媒体中で重合させる工程（iii）がさらに、該液体媒体と、気相、液相、および固相からなる群より選択される別の相との間の界面を提供することを含み、該重合が該界面または界面付近の領域で開始される、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
液体媒体が水性媒体であり、別の相が空気および水不混和性の有機溶媒からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
クモ糸タンパク質をコードする非天然型遺伝子を生産するための、請求項７に記載の単離されたポリ核酸分子の使用。
【請求項１４】
ヒト組織工学または誘導細胞再生用の製品の製造のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の大瓶状腺スピドロインタンパク質、融合タンパク質、ポリマーまたは組成物の使用。