(57)【要約】本開示は、ホスファターゼおよび受容体チロシンキナーゼアゴニストを標的にする化合物を含む、多特異性化合物を含む組成物を提供する。また、血管新生に関連する状態の処置のための方法であって、ホスファターゼおよび受容体チロシンキナーゼアゴニストを標的にする多特異性化合物を投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、（ａ）ホスファターゼをモジュレートする第１のドメインであって、ホスファターゼが、Ｔｉｅ２をモジュレートする、第１のドメイン；および（ｂ）受容体チロシンキナーゼアゴニストと特異的に結合する第２のドメインを含む化合物を提供する。
2022502367.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ホスファターゼをモジュレートする第１のドメインであって、前記ホスファターゼが、Ｔｉｅ２をモジュレートする、第１のドメイン；および
（ｂ）受容体チロシンキナーゼアゴニストと特異的に結合する第２のドメイン
を含む化合物。
【請求項２】
抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
多特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
四価抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
六価抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
二特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
四価二特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
六価二特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｔｉｅ２をモジュレートする前記ホスファターゼを阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
ＨＰＴＰ−βを阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
ＶＥ−ＰＴＰを阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｔｉｅ２を活性化する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
前記受容体チロシンキナーゼアゴニストを阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
ＶＥＧＦを阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
ＶＥＧＦ−Ａを阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｔｉｅ２をモジュレートする前記ホスファターゼを阻害し、かつ前記受容体チロシンキナーゼアゴニストを阻害する、請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
前記ホスファターゼが、ＨＰＴＰ−βであり、前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
前記ホスファターゼが、ＨＰＴＰ−βであり、前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ−Ａである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｔｉｅ２を活性化し、前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｔｉｅ２を活性化し、前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ−Ａである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートする前記ホスファターゼが、タンパク質チロシンホスファターゼである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートする前記ホスファターゼが、受容体様タンパク質チロシンホスファターゼである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートする前記ホスファターゼが、ＨＰＴＰ−βである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートする前記ホスファターゼが、ＶＥ−ＰＴＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、増殖因子である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２７】
前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、システインノット増殖因子スーパーファミリーメンバーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２８】
前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＰＤＧＦファミリーメンバーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項２９】
前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、血管新生促進因子である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３０】
前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ受容体アゴニストである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３１】
前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３２】
前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ−Ａである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３３】
前記第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βに結合する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３４】
前記第１のドメインが、ＶＥ−ＰＴＰに結合する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３５】
前記第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βの細胞外ドメインに結合する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３６】
前記第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βの細胞外ドメインの第１のＦＮ３リピートに結合する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３７】
前記第２のドメインが、ＶＥＧＦに結合する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３８】
前記第２のドメインが、ＶＥＧＦ−Ａに結合する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３９】
前記第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βに結合し、前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４０】
前記第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βに結合し、前記受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ−Ａである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４１】
前記第１のドメインが、配列番号７６〜９８のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４２】
前記第１のドメインが、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４３】
前記第１のドメインが、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４４】
前記第１のドメインが、配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４５】
前記第１のドメインが、配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４６】
前記第１のドメインが、配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４７】
前記第１のドメインが、配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４８】
前記第１のドメインが、
（ａ）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列；
（ｂ）配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列；
（ｃ）配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列；
（ｄ）配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列；
（ｅ）配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列；および
（ｆ）配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列
を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項４９】
前記第２のドメインが、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５０】
前記第２のドメインが、配列番号９９〜１４６のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５１】
前記第２のドメインが、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２または配列番号１１３と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５２】
前記第２のドメインが、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５３】
前記第２のドメインが、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０または配列番号１３１と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５４】
前記第２のドメインが、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６または配列番号１３７と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５５】
前記第２のドメインが、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５６】
前記第２のドメインが、配列番号１４４、配列番号１４５または配列番号１４６と少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５７】
前記第２のドメインが、
（ａ）配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２または配列番号１１３と少なくとも８０％同一である配列；
（ｂ）配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３と少なくとも８０％同一である配列；
（ｃ）配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０または配列番号１３１と少なくとも８０％同一である配列；
（ｄ）配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６または配列番号１３７と少なくとも８０％同一である配列；
（ｅ）配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３と少なくとも８０％同一である配列；および
（ｆ）配列番号１４４、配列番号１４５または配列番号１４６と少なくとも８０％同一である配列
を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５８】
前記第２のドメインが、配列番号１４７、配列番号１４８、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項５９】
（ａ）前記第１のドメインが、配列番号７６〜９８のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、配列番号９９〜１４８のいずれか１つまたは配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６０】
（ａ）前記第１のドメインが、
（ｉ）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｉ）配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｉｉ）配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｖ）配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列；
（ｖ）配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列；および
（ｖｉ）配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列
を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、
（ｉ）配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２または配列番号１１３と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｉ）配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｉｉ）配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０または配列番号１３１と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｖ）配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６または配列番号１３７と少なくとも８０％同一である配列；
（ｖ）配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３と少なくとも８０％同一である配列；および
（ｖｉ）配列番号１４４、配列番号１４５または配列番号１４６と少なくとも８０％同一である配列
を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６１】
（ａ）前記第１のドメインが、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６２】
（ａ）前記第１のドメインが、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６３】
（ａ）前記第１のドメインが、配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６４】
（ａ）前記第１のドメインが、配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６５】
（ａ）前記第１のドメインが、配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６６】
（ａ）前記第１のドメインが、配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６７】
（ａ）前記第１のドメインが、
（ｉ）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｉ）配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｉｉ）配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列；
（ｉｖ）配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列；
（ｖ）配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列；および
（ｖｉ）配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列
を含み；
（ｂ）前記第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６８】
（ａ）配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６または配列番号２５７と少なくとも８０％同一である重鎖配列；および
（ｂ）配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である軽鎖配列
を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項６９】
（ａ）配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列；
（ｂ）配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列；
（ｃ）配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列；および
（ｄ）配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列
を含む四価二特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７０】
（ａ）リンカーを含む第１の鎖であって、前記リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、前記リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、前記リンカーの前記Ｎ末端が、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、前記リンカーの前記Ｃ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第１の鎖；および
（ｂ）配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列を含む第２の鎖
を含む四価二特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７１】
（ａ）配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列を含む第１の鎖；および
（ｂ）リンカーを含む第２の鎖であって、前記リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、前記リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、前記リンカーの前記Ｎ末端が、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、前記リンカーの前記Ｃ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第２の鎖
を含む四価二特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７２】
（ａ）配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列；
（ｂ）配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列；
（ｃ）配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列；および
（ｄ）配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列
を含む六価二特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７３】
（ａ）リンカーを含む第１の鎖であって、前記リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、前記リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、前記リンカーの前記Ｎ末端が、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、前記リンカーの前記Ｃ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第１の鎖；および
（ｂ）リンカーを含む第２の鎖であって、前記リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、前記リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、前記リンカーの前記Ｎ末端が、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、前記リンカーの前記Ｃ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第２の鎖
を含む六価二特異性抗体である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７４】
（ａ）配列番号２６２、または配列番号２４６〜２４９のいずれか１つと少なくとも８０％同一である重鎖配列；および
（ｂ）配列番号２５８、配列番号２５９、配列番号２６１または配列番号２６０と少なくとも８０％同一である軽鎖配列
を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項７５】
（ａ）配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６または配列番号２５７と少なくとも８０％同一である重鎖配列；および
（ｂ）配列番号２５８、配列番号２５９、配列番号２６１または配列番号２６０と少なくとも８０％同一である軽鎖配列
を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項７６】
前記化合物のＨＰＴＰ−βに対する結合親和性（ＫＤ）が、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭである、請求項４０に記載の化合物。
【請求項７７】
前記化合物の前記ＶＥＧＦに対する結合親和性（ＫＤ）が、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭである、請求項４０に記載の化合物。
【請求項７８】
前記化合物のＨＰＴＰ−βに対する結合親和性（ＫＤ）が、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭであり、前記化合物のＶＥＧＦに対する結合親和性（ＫＤ）が、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭである、請求項４０に記載の化合物。
【請求項７９】
それを必要とする対象における状態を処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜７８のいずれか一項に記載の化合物を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項８０】
前記状態が、眼の状態である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記状態が、糖尿病性網膜症である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記状態が、新血管形成である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記状態が、血管漏出である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
前記状態が、増加した眼圧である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８５】
前記状態が、眼球浮腫である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８６】
前記状態が、糖尿病性黄斑浮腫である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８７】
前記状態が、高眼圧症である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８８】
前記状態が、眼の炎症である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８９】
前記状態が、緑内障である、請求項７９に記載の方法。
【請求項９０】
前記投与が、前記対象の目に対してである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９１】
前記投与が、硝子体内である、請求項７９に記載の方法。
【請求項９２】
前記投与が、皮下である、請求項７９に記載の方法。
【請求項９３】
前記投与が、局所である、請求項７９に記載の方法。
【請求項９４】
前記対象が、ヒトである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９５】
前記治療有効量が、約０．２５ｍｇ〜約２００ｍｇである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９６】
前記治療有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９７】
前記治療有効量が、約１ｍｇ〜約５０ｍｇである、請求項７９に記載の方法。
【請求項９８】
前記治療有効量が、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇである、請求項７９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１８年９月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／７３５，３３１号および２０１９年４月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／８３２，４６１号の利益を主張し、これらのそれぞれは、その全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
別個の標的をモジュレートする能力を有する個々の化合物を組み合わせて、多特異性化合物を生じさせることができる。このような多特異性化合物は、個々に投与される親化合物に優る利点を有し得る。これらの利点としては、例えば、より簡単な投薬レジメン、対象内でのより長い半減期、または近傍の標的に結合する能力が挙げられ得る。
参照による組込み
【０００３】
本出願において引用される、それぞれの特許、公開および非特許文献は、それぞれが個々に参照によって組み込まれるかのように、その全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一部の実施形態では、本開示は、（ａ）ホスファターゼをモジュレートする第１のドメインであって、ホスファターゼが、Ｔｉｅ２をモジュレートする、第１のドメイン；および（ｂ）受容体チロシンキナーゼアゴニストと特異的に結合する第２のドメインを含む化合物を提供する。
【０００５】
一部の実施形態では、本開示は、それを必要とする対象における状態を処置する方法であって、治療有効量の本明細書に開示の化合物を対象に投与することを含む、方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、基本の４つの鎖の抗体ユニットの概略図である。軽鎖配列は「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。重鎖配列は「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【０００７】
【図２】図２は、重鎖Ｃ末端に付加された配列を有する四価の二特異性抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【０００８】
【図３】図３は、軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する四価の二特異性抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【０００９】
【図４】図４は、重鎖および軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する六価の二特異性抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｃ」および「ＳＥＱ  Ｅ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１０】
【図５】図５は、重鎖および軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する六価の三特異性抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｃ」および「ＳＥＱ  Ｅ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｄ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１１】
【図６】図６は、２つの異なる重鎖配列および２つの異なる軽鎖配列を有する二価の二特異性抗体の概略図である。軽鎖配列は「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。重鎖配列は「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１２】
【図７】図７は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、および１つの軽鎖のＣ末端に付加された配列を有する三価の三特異性抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１３】
【図８】図８は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、および１つの重鎖のＣ末端に付加された配列を有する三価の三特異性抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１４】
【図９】図９は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、および両方の軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する四価抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１５】
【図１０】図１０は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、および両方の重鎖Ｃ末端に付加された配列を有する四価抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１６】
【図１１】図１１は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに１つの重鎖Ｃ末端および１つの軽鎖Ｃ末端にシスで付加された配列を有する四価抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１７】
【図１２】図１２は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに１つの重鎖Ｃ末端および１つの軽鎖Ｃ末端にトランスで付加された配列を有する四価抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１８】
【図１３】図１３は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに両方の重鎖Ｃ末端および１つの軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する五価抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」、「ＳＥＱ  Ｆ」および「ＳＥＱ  Ｇ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｈ」、「ＳＥＱ  Ｉ」および「ＳＥＱ  Ｊ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００１９】
【図１４】図１４は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに１つの重鎖Ｃ末端および両方の軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する五価抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」、「ＳＥＱ  Ｆ」および「ＳＥＱ  Ｇ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｈ」、「ＳＥＱ  Ｉ」および「ＳＥＱ  Ｊ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００２０】
【図１５】図１５は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに重鎖および軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する六価抗体の概略図である。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」、「ＳＥＱ  Ｆ」、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｉ」、「ＳＥＱ  Ｊ」、「ＳＥＱ  Ｋ」および「ＳＥＱ  Ｌ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００２１】
【図１６】図１６は、四価二特異性抗体ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１のＨＰＴＰ−β（上パネル）およびＶＥＧＦ（下パネル）への結合を実証するＥＬＩＳＡデータである。
【００２２】
【図１７】図１７は、四価二特異性抗体ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１のＨＰＴＰ−β（上パネル）およびＶＥＧＦ（下パネル）への結合を実証するＥＬＩＳＡデータである。
【００２３】
【図１８】図１８は、四価二特異性抗体ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１のＨＰＴＰ−β（上パネル）およびＶＥＧＦ（下パネル）への結合を試験するＥＬＩＳＡデータである。
【００２４】
【図１９】図１９は、ブロルシズマブ由来もしくはアフリベルセプト由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体または六価二特異性抗体で処理されたＨＵＶＥＣにおけるＴｉｅ２の活性化を示す。免疫沈降およびウエスタンブロットによって実証されるように、試験された二特異性抗体はすべて、基礎Ｔｉｅ２活性化（外因性Ａｎｇ１またはＡｎｇ２の非存在下）を増加させたが、基礎ＶＥＧＦＲ２リン酸化（外因性ＶＥＧＦの非存在下）は、影響を受けなかった。
【００２５】
【図２０】図２０は、ブロルシズマブ由来またはアフリベルセプト由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体および六価二特異性抗体が、免疫沈降およびウエスタンブロットによって実証されるように、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。
【００２６】
【図２１−１】図２１Ａ、図２１Ｂおよび図２１Ｃは、アビシパル由来またはアフリベルセプト由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体および六価二特異性抗体が、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣを含むＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２１Ａは、ウエスタンブロットを提供する。図２１Ｂは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２１Ｃは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【図２１−２】図２１Ａ、図２１Ｂおよび図２１Ｃは、アビシパル由来またはアフリベルセプト由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体および六価二特異性抗体が、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣを含むＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２１Ａは、ウエスタンブロットを提供する。図２１Ｂは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２１Ｃは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【００２７】
【図２２−１】図２２Ａ、図２２Ｂおよび図２２Ｃは、ブロルシズマブ由来、アフリベルセプト由来またはアビシパル由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体が、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣを含むＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２２Ａは、ウエスタンブロットを提供する。図２２Ｂは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２２Ｃは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【図２２−２】図２２Ａ、図２２Ｂおよび図２２Ｃは、ブロルシズマブ由来、アフリベルセプト由来またはアビシパル由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体が、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣを含むＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２２Ａは、ウエスタンブロットを提供する。図２２Ｂは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２２Ｃは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【００２８】
【図２３】図２３Ａおよび図２３Ｂは、ブロルシズマブ由来、アフリベルセプト由来またはアビシパル由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体および六価二特異性抗体が、電気化学発光シグナルの定量化によって実証されるように、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２３Ａは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２３Ｂは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【００２９】
【図２４】図２４Ａおよび図２４Ｂは、ブロルシズマブ由来、アフリベルセプト由来またはアビシパル由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体が、電気化学発光シグナルの定量化によって実証されるように、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２４Ａは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２４Ｂは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【００３０】
【図２５】図２５Ａおよび図２５Ｂは、ブロルシズマブ由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体および六価二特異性抗体が、電気化学発光シグナルの定量化によって実証されるように、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２５Ａは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２５Ｂは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【００３１】
【図２６】図２６Ａおよび図２６Ｂは、アビシパル由来またはアフリベルセプト由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体および六価二特異性抗体が、電気化学発光シグナルの定量化によって実証されるように、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２６Ａは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２６Ｂは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【００３２】
【図２７】図２７Ａおよび図２７Ｂは、アビシパル由来またはアフリベルセプト由来のＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体および六価二特異性抗体が、電気化学発光シグナルの定量化によって実証されるように、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理されたＨＵＶＥＣにおいて、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害することを示す。図２７Ａは、Ｔｉｅ２活性化の定量化を提供する。図２７Ｂは、ＶＥＧＦＲ２リン酸化の定量化を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本開示は、ホスファターゼ、およびキナーゼ、例えば、受容体チロシンキナーゼをモジュレートするための組成物ならびに方法を提供する。組成物および方法は、Ｔｉｅ２をモジュレートするため、例えば、Ｔｉｅ２のリン酸化、シグナル伝達および／または活性化を促進するために提供される。一部の実施形態では、本開示は、Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートするホスファターゼを標的にするための組成物および方法を提供する。一部の実施形態では、Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートするホスファターゼは、ヒトタンパク質チロシンホスファターゼ−ベータ（ＨＰＴＰ−β）である。
【００３４】
組成物および方法は、受容体チロシンキナーゼをモジュレートするため、例えば、受容体チロシンキナーゼのリン酸化、シグナル伝達および／または活性化を低減するために提供される。一部の実施形態では、本開示は、受容体チロシンキナーゼアゴニスト、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を標的にするための組成物および方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、受容体チロシンキナーゼ、例えば、ＶＥＧＦ受容体を標的にするための組成物および方法を提供する。
【００３５】
一部の実施形態では、本開示は、ヒトタンパク質チロシンホスファターゼ−ベータ（ＨＰＴＰ−β）または血管内皮タンパク質チロシンホスファターゼ（ＶＥ−ＰＴＰまたはＶＥＰＴＰ）、および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を標的にするための組成物および方法を提供する。一部の実施形態では、本開示は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする、多特異性の化合物、薬剤、抗体、断片またはそれらの誘導体を提供する。
【００３６】
本明細書に開示される薬剤は、例えば、血管不安定性、血管新生、新血管形成、血管漏出および／または浮腫によって特徴付けられる障害の処置のために使用することができる。本明細書に開示される薬剤は、例えば、血管障害、眼障害、がん、腎臓障害および糖尿病の合併症の処置のために使用することができる。
ＨＰＴＰ−β／ＶＥ−ＰＴＰ、Ｔｉｅ２および血管安定性
【００３７】
ＨＰＴＰ−βは、タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰアーゼ）の受容体様ファミリーのメンバーである。ＨＰＴＰ−βは、細胞接着分子に対する構造および機能の類似性を示す血管内皮細胞において主に見出される膜貫通タンパク質である。ＨＰＴＰ−βのオルソログは、例えば、ゼブラフィッシュ、ニワトリ、イヌ、マウス、マーモセットおよびサルを含むさまざまな種において見出される。オルソログは、一般に、血管内皮タンパク質チロシンホスファターゼ（ＶＥ−ＰＴＰ）と称される。ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）は、Ｔｉｅ２媒介シグナル伝達に対する効果により血管安定性に影響を与え得る。
【００３８】
Ｔｉｅ２（免疫グロブリンおよび上皮増殖因子相同性ドメイン２を有するチロシンキナーゼ）は、血管内皮細胞において主に発現する膜受容体チロシンキナーゼである。上流因子は、Ｔｉｅ２リン酸化を制御することができ、下流のシグナル伝達および血管安定化に影響を与える。このような因子の非限定的な例としては、アンジオポエチン１（Ａｎｇ１／Ａｎｇｐｔ１）、アンジオポエチン２（Ａｎｇ２／Ａｎｇｐｔ２）およびＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）が挙げられる。
【００３９】
Ａｎｇ１は、Ｔｉｅ２のアゴニストである。Ａｎｇ１のＴｉｅ２への結合は、受容体のリン酸化および下流のシグナル伝達を促進して、高度に組織化された血管新生、内皮細胞間結合の密接化、内皮の生存率の増強、内皮の炎症の低減、および内皮の機能の改善により血管安定化を誘導する。
【００４０】
Ａｎｇ２は、Ｔｉｅ２の状況依存性アンタゴニストまたはアゴニストにおいて作用する。血管新生の間に、Ａｎｇ２は、Ａｎｇ１−Ｔｉｅ２シグナル伝達の負の制御因子として作用する。
【００４１】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）は、Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートすることができるホスファターゼである。ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）は、Ｔｉｅ２受容体を脱リン酸化することができる。生理学的条件下で、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）は、Ｔｉｅ２リン酸化の期間を制御する。したがって、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害は、増加されたＴｉｅ２リン酸化、増加されたＴｉｅ２媒介シグナル伝達および増強された血管安定性をもたらすことができる。ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤は、Ｔｉｅ２活性化剤である。例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合する、化合物、阻害剤、抗体、抗体断片、バリアントまたはそれらの誘導体は、Ｔｉｅ２リン酸化を促進することができ、それによって、Ｔｉｅ２の下流のシグナル伝達を活性化し、血管安定性を促進する。
【００４２】
上記に記載のプロセスによって、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）活性は、例えば、血管不安定性、血管新生、新血管形成、血管漏出および／または浮腫によって特徴付けられる障害の一因であり得る。例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）活性は、血管障害、眼障害、がん、腎臓障害、糖尿病の合併症、および他の障害の一因であり得る。ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）活性の阻害は、このような障害を低減することができる。
ＶＥＧＦおよび血管安定性
【００４３】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、内皮細胞において主に見出され、いくつかの疾患における病的な新血管形成に関わる。ＶＥＧＦは、シスチンノット増殖因子スーパーファミリー、ＰＤＧＦファミリーおよびＶＥＧＦファミリーのメンバーである。ＶＥＧＦは、血管新生促進因子として作用し得る。ＶＥＧＦファミリーは、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄおよび胎盤増殖因子（ＰＧＦ）からなる。９つのＶＥＧＦ−Ａアイソフォームが存在する：ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１４８、ＶＥＧＦ１６２、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１８９およびＶＥＧＦ２０６。
【００４４】
ＶＥＧＦは、低酸素制御遺伝子であり、ＶＥＧＦレベルは、低酸素状態または虚血状態において増加する。ＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）のアゴニストである。ＶＥＧＦＲは、受容体チロシンキナーゼであり、ＶＥＧＦのＶＥＧＦＲへの結合は、受容体のリン酸化、およびその後の下流のシグナル伝達物質をもたらし得る。ＶＥＧＦＲ媒介シグナル伝達は、異常な脈管形成、血管新生および血管の透過性上昇をもたらし得、病的な血管不安定性の一因となる。したがって、ＶＥＧＦの阻害は、減少されたＶＥＧＦＲ媒介シグナル伝達および増強された血管安定性をもたらし得る。例えば、ＶＥＧＦに結合する、阻害剤、抗体、抗体断片、バリアントまたはそれらの誘導体は、ＶＥＧＦＲのライゲーションを低減させることができ、それによって、ＶＥＧＦＲ媒介シグナル伝達を低減し、血管安定性を促進する。ＶＥＧＦに結合する薬剤の非限定的な例としては、アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））、ヒトＩｇＧ１のＦｃタンパク質と融合されたヒトＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分を含む組換えタンパク質；ブロルシズマブ、ヒト化単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）；ＲＴＨ２５８、ヒト化単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）；ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ヒト化モノクローナル抗体断片（Ｆａｂ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、ヒト化モノクローナル抗体；コンバセプト、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分と融合されたＶＥＧＦ受容体１および２由来の細胞外ドメインを含む組換え融合タンパク質；アビシパル、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）；ＭＰ０１１２、ＤＡＲＰｉｎ；ＭＰ０２５０、ＤＡＲＰｉｎ；ＣＴ−３２２、アドネクチン；ならびにＰＲＳ−０５０、アンチカリンが挙げられる。
【００４５】
上記に記載のプロセスによって、ＶＥＧＦは、例えば、血管不安定性、血管新生、新血管形成、血管漏出および／または浮腫によって特徴付けられる障害の一因であり得る。例えば、ＶＥＧＦは、血管障害、眼障害、がん、腎臓障害、糖尿病の合併症、および他の障害の一因であり得る。例えば、目における虚血は、増加されたＶＥＧＦ産生をもたらし得、網膜における血管漏出および病的な新血管形成をもたらす。ＶＥＧＦＲ媒介シグナル伝達の阻害は、このような障害を低減することができる。
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）および受容体チロシンキナーゼアゴニスト
【００４６】
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、細胞の増殖、分化および生存の制御に関与する細胞表面受容体である。アゴニストのＲＴＫへの結合は、互いに関連する隣接するＲＴＫを引き起こし得、二量体を形成する。二量化は、交差リン酸化を引き起こし得る−二量体中のそれぞれのＲＴＫは、他のＲＴＫ上の多数のチロシン残基をリン酸化する。交差リン酸化されると、ＲＴＫの細胞質尾部は、例えば、さまざまな細胞内タンパク質についてのドッキングプラットフォームとしての機能を果たすことによって、シグナル変換経路を開始することができる。ＲＴＫシグナル伝達は、細胞における遺伝子の転写および発現の変化をもたらすことができる。
【００４７】
ＲＴＫの非限定的な例としては、ＡＡＴＫ、ＡＡＴＹＫ、ＡＡＴＹＫ１、ＡＡＴＹＫ２、ＡＣＨ、ＡＬＫ、ＡＲＫ、ＡＸＬ、ＢＤＢ、ＢＤＢ１、ＢＥＫ、ＢＦＧＦＲ、ＢＲＥＫ、Ｂｒｔ、ＣＡＫ、ＣＣＫ４、ＣＤ１１５、ＣＤ１１７、ＣＤ１３５、ＣＤ１３６、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１６７、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ２２０、ＣＤ２２１、ＣＤ２４６、ＣＤ３０９、ＣＤ３３１、ＣＤ３３２、ＣＤ３３３、ＣＤ３３４、ＣＤＨＦ１２、ＣＤＨＲ１６、ＣＤｗ１３６、ＣＥＫ、ＣＥＫ２、ＣＥＫ３、ｃ−Ｅｙｋ、ＣＦＤ１、Ｃ−ＦＭＳ、Ｃ−Ｋｉｔ、ｃｐｒｋ、ｃ−ｒｏｓ−１、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦＲ、Ｄ３Ｓ３１９５、ＤＤＲ１、ＤＤＲ２、ＤＦＮＢ９７、ＤＫＦＺｐ７６１Ｐ１０１０、Ｄｔｋ、ＥＣＴ１、ＥＤＤＲ１、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＡ１０、ＥｐｈＡ１〜８、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ３、ＥｐｈＢ４、ＥｐｈＢ６、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、Ｅｔｋ−２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＬＧ、ＦＬＫ１、ＦＬＫ２、ＦＬＴ、ＦＬＴ１、ＦＬＴ２、ＦＬＴ３、ＦＬＴ４、ＦＭＳ、ＧＡＳ９、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、ＨＧＦＲ、ＨＳＣＲ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＧＦＩＲ、ＩＧＦＲ、ＩＮＳＲ、ＩＮＳＲＲ、ＩＲＲ、ＪＫＴ５Ａ、ＪＴＫ１１、ＪＴＫ１２、ＪＴＫ１３、ＪＴＫ１４、ＪＴＫ２、ＪＴＫ４、ＪＴＫ５、ＪＷＳ、ＫＡＬ２、ＫＤＲ、ＫＧＦＲ、ＫＩＡＡ０６４１、ＫＩＡＡ１０７９、ＫＩＡＡ１８８３、ＫＩＴ、ＫＰＩ２、Ｋ−ＳＡＭ、ＬＭＲ１、ＬＭＲ２、ＬＭＲ３、ＬＭＴＫ１、ＬＭＴＫ２、ＬＭＴＫ３、ＬＴＫ、ＭＣＦ３、ＭＥＮ２Ａ、ＭＥＮ２Ｂ、Ｍｅｒ、ＭＥＲＴＫ、ＭＥＴ、ＭＧＣ１８２１６、ＭＳＴ１Ｒ、ＭＴＣ、ＭＴＣ１、ＭＴＲＫ１、ＭｕＳＫ、ＮＥＰ、ＮＯＫ、Ｎ−ＳＡＭ、ＮＴＲＫ２、ＮＴＲＫ３、ＮＴＲＫ４、ＮＴＲＫＲ１、ＮＴＲＫＲ２、ＰＢＴ、ＰＣＬ、ＰＤＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ１、ＰＤＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲ−アルファ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＰＰＰ１Ｒ１００、ＰＰＰ１Ｒ１０１、ＰＰＰ１Ｒ７７、ＰＴＣ、ＰＴＫ３Ａ、ＰＴＫ７、ＰＴＫ８、ＲＣＣＰ２、Ｒｅｋ、ＲＥＴ、ＲＥＴ５１、ＲＯＮ、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＲＯＳ、ＲＯＳ１、ＲＰ３８、ＲＳＥ、ＲＴＫ６、ＲＹＫ、Ｒｙｋ、ＲＹＫ１、ＳＣＦＲ、Ｓｋｙ、ＳＴＫ、ＳＴＹＫ１、ＳｕＲＴＫ１０６、ＴＥＫ、ＴＩＥ１、ＴＩＥ２、Ｔｉｆ、ＴＫ１４、ＴＫ２５、ＴＫＴ、ＴＲＫ、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣ、ＴＹＫ１、ＴＹＫＬＭ３、ＴＹＲＯ１０、Ｔｙｒｏ１２、Ｔｙｒｏ３、Ｔｙｒｏ７、ＵＦＯ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、ＶＭＣＭおよびＶＭＣＭ１が挙げられる。
【００４８】
ＲＴＫアゴニストの非限定的な例としては、ＶＥＧＦ、Ａｎｇ１、Ａｎｇ２、ＢＤＮＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ、インスリン、ＭＳＰ、ＮＧＦ、ＮＴ−３およびＰＤＧＦが挙げられる。
抗体および抗原結合性化合物
【００４９】
基本の４つの鎖の抗体ユニットは、２つの同一の重鎖（Ｈ）ポリペプチド配列および２つの同一の軽鎖（Ｌ）ポリペプチド配列を含む。それぞれの重鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域および３つまたは４つのＣ末端定常（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４）領域を含み得る。それぞれの軽鎖は、１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域および１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域を含み得る。軽鎖可変領域は、重鎖可変領域と整列され、軽鎖定常領域は、重鎖定常領域ＣＨ１と整列される。重鎖可変領域および軽鎖可変領域の対形成は、単一の抗原結合性部位を一緒に形成する。それぞれの軽鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によって、重鎖に連結される。２つの重鎖は、重鎖のアイソタイプに応じて、１つまたは複数のジスルフィド結合によって、互いに連結される。それぞれの重鎖および軽鎖は、規則的間隔の鎖内のジスルフィド架橋も含む。重鎖のＣ末端定常領域は、抗体のＦｃ領域を含み、これは、例えば、Ｆｃ受容体または補体タンパク質との相互作用によって、エフェクター機能を媒介する。図１は、単純な代表的な概略の基本の４つの鎖の抗体ユニットを提供し；軽鎖配列は「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。重鎖配列は「ＳＥＱ  Ｂ」によって表され、−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示し、ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。
【００５０】
軽鎖は、定常領域のアミノ酸配列に基づいて、カッパまたはラムダと指定することができる。重鎖は、定常領域のアミノ酸配列に基づいて、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマまたはミューと指定することができる。抗体は、重鎖に基づいて、５つの免疫グロブリンのクラスまたはアイソタイプに分類される。ＩｇＡは、アルファ重鎖を含み、ＩｇＤは、デルタ重鎖を含み、ＩｇＥは、イプシロン重鎖を含み、ＩｇＧは、ガンマ重鎖を含み、ＩｇＭは、ミュー重鎖を含む。ＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＥクラスの抗体は、上記に記載の４つの鎖ユニットのモノマー（２つの重鎖および２つの軽鎖）を含むが、ＩｇＭおよびＩｇＡクラスは、４つの鎖ユニットの多量体を含むことができる。アルファおよびガンマクラスは、重鎖定常領域の配列および機能における相違に基づいて、サブクラスにさらに分けられる。ヒトによって発現されるＩｇＡおよびＩｇＧのサブクラスとしては、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２が挙げられる。
【００５１】
定常領域は、抗原結合に最小限、関与する。むしろ、定常領域は、さまざまなエフェクター機能を媒介することができる。ＩｇＧのアイソタイプまたはサブクラスの相違は、例えば、異なるＦｃ受容体および／または補体タンパク質との相互作用のために、異なるエフェクター機能または治療特性に関連し得る。活性化Ｆｃ受容体に会合するＦｃ領域を含む抗体は、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフによるシグナル伝達の誘導（ＩＴＡＭ）およびサイトカイン分泌の誘導に関与し得る。阻害性Ｆｃ受容体に会合するＦｃ領域を含む抗体は、例えば、免疫受容体チロシンベース阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）によるシグナル伝達を誘導することができる。
【００５２】
異なる抗体サブクラスは、免疫エフェクター機能を誘発する異なる能力を含む。例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、ＣＤＣを活性化する補体を効果的に動員することができ、ＩｇＧ２は、最小限のＡＤＣＣを誘発する。ＩｇＧ４は、免疫エフェクター機能を引き起こす、より低い能力を有する。定常領域に対する改変はまた、抗体の特性、例えば、Ｆｃ受容体のライゲーションの増強もしくは低減、ＡＤＣＣの増強もしくは低減、ＡＤＣＰの増強もしくは低減、ＣＤＣの増強もしくは低減、ＩＴＡＭによるシグナル伝達の増強もしくは低減、サイトカイン誘導の増強もしくは低減、ＩＴＩＭによるシグナル伝達の増強もしくは低減、半減期の増強もしくは低減、または抗原のＦｃ受容体との共会合の増強もしくは低減に影響を与え得る。改変としては、例えば、アミノ酸突然変異、翻訳後改変（例えば、グリコシル化）の変更、異なるアイソタイプもしくはサブクラス由来のドメインの結合、またはそれらの組合せが挙げられ得る。
【００５３】
本開示の化合物または抗体は、適切な抗体の特性、例えば、本明細書に開示の疾患もしくは状態を処置するための適切な特性を提供するように選択または改変される定常領域あるいはＦｃ領域を含むことができる。一部の実施形態では、ＩｇＧ１は、例えば、免疫活性化エフェクター機能（例えば、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、ＣＤＣ、ＩＴＡＭシグナル伝達、サイトカイン誘導またはがんの処置のためのそれらの組合せ）を促進するために使用することができる。一部の実施形態では、ＩｇＧ４は、例えば、免疫エフェクター機能の非存在下での抗体の拮抗性が望ましい場合（例えば、眼障害の処置のため）、使用することができる。
【００５４】
抗体の改変およびそれらの効果の非限定的な例を表１に提供する。
【表１−１】
2022502367.tif 000003
【表１−２】
2022502367.tif 000004
【００５５】
可変（Ｖ）領域は、抗原結合を媒介し、抗原に対する特定の抗体の特異性を定義する。可変領域は、フレームワーク領域と呼ばれる比較的不変の配列、および異なる結合特異性の抗体の間で配列中で大きく異なる超可変領域を含む。それぞれの抗体の重鎖または軽鎖の可変領域は、３つの超可変領域によって分離された４つのフレームワーク領域を含む。重鎖および軽鎖の可変領域は、超可変領域同士を近接させて抗原結合性部位を作り出すような様式で折り畳まれる。４つのフレームワーク領域は、大部分は、ｆ３−シート立体構造を取るが、３つの超可変領域は、ｆ３−シート構造を連結し、一部の場合では、その部分を形成する、ループを形成する。
【００５６】
超可変領域の内部には、抗体の結合特異性を主に決定するアミノ酸残基がある。これらの残基を含む配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）として公知である。抗体の１つの抗原結合性部位は、軽鎖の超可変領域中に３つ、および重鎖の超可変領域中に３つの６つのＣＤＲを含む。軽鎖中のＣＤＲは、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３と指定される一方、重鎖中のＣＤＲは、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３と指定される。ＣＤＲはまた、それぞれ、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３と指定され得る。それぞれのＣＤＲの抗原結合に対する寄与は、抗体の間で変わる。ＣＤＲは、長さが変わり得る。例えば、ＣＤＲは、多くの場合、５〜１４残基長であるが、０残基の、短いＣＤＲ、または２５残基またはそれよりも長い、長いＣＤＲも存在する。
【００５７】
いくつかの方法を使用して、ＣＤＲ配列が予測または指定される。これらの方法は、例えば、配列の挿入および欠失が異なって番号付けされるので、異なる番号付け方式を使用することができる。
【００５８】
Ｋａｂａｔ法は、限定された数の抗体配列を整列させること、および最も変化しやすい残基の位置を決定することによって、開発された。整列に基づいて、番号付けスキームが、可変領域中の残基について導入された。この番号付けスキームは、それぞれのＣＤＲの開始および末端をマークする位置を決定するために使用することができる。Ｋａｂａｔ番号付け方式の一反復は、以下の残基の位置：残基２４〜３４の周囲のＬＣＤＲ１；残基５０〜５６の周囲のＬＣＤＲ２；および残基８９〜９７の周囲のＬＣＤＲ３を使用して、軽鎖可変領域中のＣＤＲを特定する。Ｋａｂａｔ番号付け方式の一反復は、以下の残基の位置：残基３１〜３５の周囲のＨＣＤＲ１；残基５０〜６５の周囲のＨＣＤＲ２；および残基９５〜１０２の周囲のＨＣＤＲ３を使用して、重鎖可変領域中のＣＤＲを特定する。
【００５９】
Ｃｈｏｔｈｉａ法は、三次元抗体構造の分析に基づいて開発された。この分析は、超可変ループが、ＣＤＲおよび隣接するフレームワーク領域における重要な位置でのある特定の残基の存在に基づいて、制限された立体構造のセットに適合することを決定した。この方法は、Ｋａｂａｔ法と類似の番号付けスキームを使用するが、番号の挿入および欠失は異なる。Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け方式の一反復は、以下の残基の位置：残基２４〜３４の周囲のＬＣＤＲ１；残基５０〜５６の周囲のＬＣＤＲ２；および残基８９〜９７の周囲のＬＣＤＲ３を使用して、軽鎖可変領域中のＣＤＲを特定する。Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け方式の一反復は、以下の残基の位置：残基２６〜３４の周囲のＨＣＤＲ１；残基５２〜５６の周囲のＨＣＤＲ２；および残基９５〜１０２の周囲のＨＣＤＲ３を使用して、重鎖可変領域中のＣＤＲを特定する。
【００６０】
ＩＭＧＴ法（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓデータベース）は、フレームワーク領域およびＣＤＲの既存の定義、構造データ、ならびに抗体可変領域配列の整列からのデータを統合することによって開発された。この統合は、ＣＤＲを特定するための基準点として使用することができるフレームワーク領域中の保存された残基の特定をもたらした。可変領域中の保存された残基の例としては、およそ残基２３のシステイン（フレームワーク領域１中）、およそ残基４１のトリプトファン（フレームワーク領域２中）、およそ残基８９の疎水性アミノ酸（フレームワーク領域３中）、およそ残基１０４のシステイン（フレームワーク領域３中）、およびおよそ残基１１８のフェニルアラニンまたはトリプトファン（フレームワーク領域４中）が挙げられる。ＣＤＲは、コンピューターによる整列に基づくアルゴリズムを使用することによって、目的の抗体可変領域をコードする配列において特定することができる。
【００６１】
ＩＭＧＴ法の番号付けは、保存されたアミノ酸に常に同じ番号を割り当てるが、ＣＤＲおよびフレームワーク領域の長さは、変更が許される。したがって、残基のＩＭＧＴ番号付けは、必ずしも連続的ではない。ＩＭＧＴ法によって特定されるＣＤＲの長さは、変わり得る。例えば、ＬＣＤＲ１またはＨＣＤＲ１は、約５〜約１２アミノ酸であり得、ＬＣＤＲ２またはＨＣＤＲ２は、約０〜約１０アミノ酸であり得、ＬＣＤＲ３またはＨＣＤＲ３は、約５〜約９１アミノ酸であり得る。
【００６２】
Ｐａｒａｔｏｍｅ法は、利用可能な抗体−抗原複合体の多重構造整列に基づいて、開発された。抗原に結合する構造的位置は、調べられた抗体の間で類似であることが見出され、データセットからの抗体配列は、抗原結合性領域（ＡＢＲ、ＣＤＲと類似）で注釈を付けられた。クエリ配列中のＡＢＲは、最初に、解決された抗体−抗原構造を有する抗体に対してクエリ配列を整列させ、次いで、整列に基づいてＡＢＲの位置を推測する、コンピューターツールを使用して特定することができる。解決された構造を有する抗体は、配列に基づくのではなくむしろ構造的な整列法を使用して、特定されたＡＢＲを有することもできる。
【００６３】
ＣＤＲ内の残基のサブセットは、抗原と接触する。抗原と接触するこれらの残基は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と称され得る。しかしながら、ＳＤＲ以外の残基は、結合性部位の立体構造を維持するのを助けることによって、結合活性に寄与し得る。抗体中のＳＤＲの数は、認識される抗原のサイズおよび種類に基づいて変わり得、例えば、０〜１４の間のＳＤＲを、ＣＤＲ内に見出すことができる。ＳＤＲは、チロシン、セリン、トリプトファンおよびアスパラギンなどの一部の残基において豊富であり得る。
【００６４】
モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得ることができ、すなわち、集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する可能な突然変異を除いて同一である。異なるエピトープに対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体の調製と対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は単一のエピトープに対するものである。
【００６５】
本明細書において、化合物は、モノクローナル抗体、例えば、重鎖および／または軽鎖の部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一または相同であるが、鎖の残部は、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列、あるいはそのような抗体の抗原結合性断片と同一または相同である、キメラ抗体であり得る。
【００６６】
抗体断片または抗原結合性断片は、抗体の部分、例えば、無傷抗体の抗原結合性領域または可変領域を含み得る。抗体断片の非限定的な例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂコンジュゲートの二量体および三量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ミニボディ、ディアボディ、トリアボディおよびテトラボディ、ならびに線状抗体が挙げられる。ＦａｂおよびＦａｂ’は、軽鎖のＶＬおよびＣＬドメインにジスルフィド結合を介して連結された重鎖のＶＨおよびＣＨ１ドメインを含み得る抗原結合性断片である。Ｆ（ａｂ’）２は、ジスルフィド結合によって接合された２つのＦａｂおよびＦａｂ’を含み得る。Ｆｖは、非共有結合性の相互作用によって一緒に保持されたＶＨおよびＶＬドメインを含み得る。ｓｃＦｖ（単鎖可変断片）は、ペプチドリンカーによって連結されたＶＨおよびＶＬドメインを含み得る融合タンパク質である。ＶＨおよびＶＬドメインの配向ならびにリンカーの長さの操作を使用して、単量体、二量体（ディアボディ）、三量体（トリアボディ）または四量体（テトラボディ）であり得る異なる形態の分子を作出することができる。ミニボディは、アセンブリして二価二量体になったｓｃＦｖ−ＣＨ３融合タンパク質である。
【００６７】
エピトープの非限定的な例としては、アミノ酸、糖、脂質、ホスホリル基およびスルホニル基が挙げられる。エピトープは、特異的な三次元構造特性および／または特異的な電荷特性を有し得る。エピトープは、立体構造的または線状であり得る。
【００６８】
ヒトの投与のために、非ヒト種から生じさせたモノクローナル抗体は、標的特異性を保ちながら免疫原性の可能性を低減するヒト化プロセスによって、さらに最適化することができる。ヒト化プロセスは、単離抗体を生成する遺伝子の遺伝子配列へのヒトＤＮＡの組込みを含む。組換えＤＮＡは、クローニングされ、新たなヒト化抗体の大規模生成のために、細胞中で発現される。
【００６９】
ヒト化抗体の例は、改変キメラ抗体である。キメラ抗体は、上記に記載の通り生じさせることができる。キメラ抗体は、可変領域中の非ヒト配列を相同なヒト配列で置換するように、ＣＤＲの外側でさらに突然変異される。ヒト化抗体の別の例は、ＣＤＲグラフト抗体であり、ここで、非ヒトＣＤＲ配列は、対応するヒトＣＤＲ配列を置き換えるために、ヒト抗体スキャフォールドのヒト重鎖および軽鎖可変配列に組み込まれる。
【００７０】
ヒト化抗体は、哺乳動物細胞、バイオリアクター、またはマウス、ニワトリ、ヒツジ、ヤギ、ブタもしくはマーモセットなどのトランスジェニック動物において、産生させることができる。トランスジェニック動物は、動物のゲノムに挿入されたヒト抗体を産生するゲノムの相当の部分を有し得る。
【００７１】
抗体および抗体断片に加えて、他の抗原結合性化合物も標的分子に結合することができる。非抗体由来の抗原結合性化合物の非限定的な例としては、アンキリンタンパク質、アンキリンリピートタンパク質、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、アフィボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、ならびにそれらの受容体および誘導体、例えば、ＶＥＧＦ受容体、またはヒトＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分が挙げられる。
【００７２】
設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）は、アンキリンリピートタンパク質に基づくタンパク質スキャフォールドであり得る。ＤＡＲＰｉｎは、共有配列および／または構造モチーフを含む１つまたは複数のアンキリンリピートを含み得る。個々のアンキリンリピートは、他のものと比較した場合に、突然変異、置換、付加および／もしくは欠失を含むにもかかわらず、共有配列ならびに／または構造モチーフを含み得る。ＤＡＲＰｉｎは、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０、またはそれよりも多くのアンキリンリピートを含み得る。ＤＡＲＰｉｎは、Ｎ末端キャッピングリピート、１つまたは複数の内部アンキリンリピート、およびＣ末端キャッピングリピートを含み得る。それぞれのアンキリンリピートは、フレームワーク残基およびタンパク質−相互作用残基を含み得る。フレームワーク残基は、構造またはフォールディングの形態、例えば、アンキリンリピートの構造または隣接するアンキリンリピートとの相互作用に寄与し得る。タンパク質−相互作用残基は、例えば、標的分子との直接相互作用を介するか、または結合を可能にする立体構造において直接相互作用する残基を安定化することによって、標的分子の結合に寄与し得る。
【００７３】
本開示において標的分子に結合する、化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、例えば、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約９００ｐＭ未満、約８００ｐＭ未満、約７００ｐＭ未満、約６００ｐＭ未満、約５００ｐＭ未満、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約９ｐＭ未満、約８ｐＭ未満、約７ｐＭ未満、約６ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約３ｐＭ未満、約２ｐＭ未満、約１ｐＭ未満、約９００ｆＭ未満、約８００ｆＭ未満、約７００ｆＭ未満、約６００ｆＭ未満、約５００ｆＭ未満、約４００ｆＭ未満、約３００ｆＭ未満、約２００ｆＭ未満、約１００ｆＭ未満、約９０ｆＭ未満、約８０ｆＭ未満、約７０ｆＭ未満、約６０ｆＭ未満、約５０ｆＭ未満、約４０ｆＭ未満、約３０ｆＭ未満、約２０ｆＭ未満、または約１０ｆＭ未満のＫＤで標的に結合することができる。
【００７４】
一部の実施形態では、本開示において標的分子に結合する化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、例えば、約１０ｆＭ〜約５００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約５００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約４００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約３００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約２００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約１００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約９０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約８０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約６０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約５０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約４０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約３０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約２０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約１０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約９ｎＭ、約３０ｆＭ〜約８ｎＭ、約３０ｆＭ〜約７ｎＭ、約３０ｆＭ〜約６ｎＭ、約３０ｆＭ〜約５ｎＭ、約３０ｆＭ〜約４ｎＭ、約３０ｆＭ〜約３ｎＭ、約３０ｆＭ〜約２ｎＭ、約３０ｆＭ〜約１ｎＭ、約３０ｆＭ〜約９００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約８００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約７００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約６００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約５００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約４００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約３００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約２００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約１００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約９０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約８０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約７０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約６０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約５０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約４０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約３０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約２０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約１０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約１ｐＭ、約３０ｆＭ〜約９００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約８００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約７００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約６００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約５００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約４００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約３００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約２００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約１００ｆＭ、約３０ｆＭ〜約５００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約４００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約３００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約２００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約１００ｎＭ、約３０ｆＭ〜約９０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約８０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約６０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約５０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約４０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約３０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約２０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約１０ｎＭ、約３０ｆＭ〜約９ｎＭ、約３０ｆＭ〜約８ｎＭ、約３０ｆＭ〜約７ｎＭ、約３０ｆＭ〜約６ｎＭ、約３０ｆＭ〜約５ｎＭ、約３０ｆＭ〜約４ｎＭ、約３０ｆＭ〜約３ｎＭ、約３０ｆＭ〜約２ｎＭ、約３０ｆＭ〜約１ｎＭ、約３０ｆＭ〜約９００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約８００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約７００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約６００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約５００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約４００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約３００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約２００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約１００ｐＭ、約３０ｆＭ〜約９０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約８０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約７０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約６０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約５０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約４０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約３０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約２０ｐＭ、約３０ｆＭ〜約１０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５００ｎＭ、約１ｐＭ〜約４００ｎＭ、約１ｐＭ〜約３００ｎＭ、約１ｐＭ〜約２００ｎＭ、約１ｐＭ〜約１００ｎＭ、約１ｐＭ〜約９０ｎＭ、約１ｐＭ〜約８０ｎＭ、約１ｐＭ〜約７０ｎＭ、約１ｐＭ〜約６０ｎＭ、約１ｐＭ〜約５０ｎＭ、約１ｐＭ〜約４０ｎＭ、約１ｐＭ〜約３０ｎＭ、約１ｐＭ〜約２０ｎＭ、約１ｐＭ〜約１０ｎＭ、約１ｐＭ〜約９ｎＭ、約１ｐＭ〜約８ｎＭ、約１ｐＭ〜約７ｎＭ、約１ｐＭ〜約６ｎＭ、約１ｐＭ〜約５ｎＭ、約１ｐＭ〜約４ｎＭ、約１ｐＭ〜約３ｎＭ、約１ｐＭ〜約２ｎＭ、約１ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｐＭ〜約９００ｐＭ、約１ｐＭ〜約８００ｐＭ、約１ｐＭ〜約７００ｐＭ、約１ｐＭ〜約６００ｐＭ、約１ｐＭ〜約５００ｐＭ、約１ｐＭ〜約４００ｐＭ、約１ｐＭ〜約３００ｐＭ、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、約１００ｐＭ〜約５００ｎＭ、約１００ｐＭ〜約４００ｎＭ、約１００ｐＭ〜約３００ｎＭ、約１００ｐＭ〜約２００ｎＭ、約１００ｐＭ〜約１００ｎＭ、約１００ｐＭ〜約９０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約８０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約７０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約６０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約５０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約４０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約３０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約２０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約１０ｎＭ、約１００ｐＭ〜約９ｎＭ、約１００ｐＭ〜約８ｎＭ、約１００ｐＭ〜約７ｎＭ、約１００ｐＭ〜約６ｎＭ、約１００ｐＭ〜約５ｎＭ、約１００ｐＭ〜約４ｎＭ、約１００ｐＭ〜約３ｎＭ、約１００ｐＭ〜約２ｎＭ、約１００ｐＭ〜約１ｎＭ、約１００ｐＭ〜約９００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約８００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約７００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約６００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約４００ｐＭ、約１００ｐＭ〜約３００ｐＭ、または約１００ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで標的に結合することができる。
【００７５】
一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約５００ｆＭ〜約５００ｐＭのＫＤでＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤでＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約６０ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤでＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤでＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約３００ｐＭのＫＤでＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤでＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約１２０ｐＭのＫＤでＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約７０ｐＭのＫＤでＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。
【００７６】
一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約９００ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約６００ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約２００ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約３０ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約４０ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約１ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約２００ｆＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約９００ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約６００ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約３０ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１ｐＭ〜約４０ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。
【００７７】
一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約２ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３５ｆＭ〜約２００ｆＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約１００ｆＭ〜約２ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。
【００７８】
一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約２０ｐＭ〜約１ｎＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約２０ｐＭ〜約８００ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約２０ｐＭ〜約３５０ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。
【００７９】
一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約３０ｆＭ〜約７００ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。
【００８０】
一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約４０ｆＭ〜約５２０ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。一部の実施形態では、本開示の化合物、抗体、それらの断片もしくは誘導体、または他の化合物は、約４０ｆＭ〜約１１０ｐＭのＫＤでＶＥＧＦに結合することができる。
【００８１】
多価の多特異性化合物
抗原結合性化合物は、多価および／または多特異性の化合物を生じさせるために組み合わせることができる。このような多価および／または多特異性の化合物は、個々に投与される親化合物に優る利点を有し得る。これらの利点としては、例えば、より簡単な投薬レジメン、対象内でのより長い半減期、および近傍の標的抗原に結合する能力が挙げられ得る。
【００８２】
多特異性抗体は、いくつかの方法によって生成され得る。一方法では、単一特異性抗体またはその誘導体は、例えば、２つのＩｇＧ抗体ユニットのコンジュゲートへの化学的カップリングを介して、化学的にカップリングすることができる。
【００８３】
別の方法では、クローニング技術を、追加の抗原結合性ドメインを従来のＩｇＧ抗体またはその誘導体に付加するために使用することができる。追加の抗原結合性ドメインは、例えば、単一可変ドメイン（ｓＶＤ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、単鎖Ｆａｂ、ペプチド、アンキリンタンパク質、アンキリンリピートタンパク質、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、アフィボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、四量体ポリエチレンオキシドクラスターペプチド、１つもしくは複数の受容体（例えば、ＶＥＧＦ受容体、またはヒトＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分）に由来するペプチド、またはそれらの誘導体であり得る。
【００８４】
追加の抗原結合性ドメイン（例えば、ｓＶＤ、ｓｃＦｖ、単鎖Ｆａｂ、ペプチド、アンキリンタンパク質、アンキリンリピートタンパク質、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、四量体ポリエチレンオキシドクラスターペプチド、または１つもしくは複数の受容体に由来するペプチド）は、例えばペプチドリンカーを介して、ＩｇＧまたはＦａｂの軽鎖および／もしくは重鎖のＮ末端あるいはＣ末端に付加され得る。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＩｇＧの重鎖のＣ末端に付加されて、四価二特異性抗体を提供することができる。ｓｃＦｖは、ＩｇＧの軽鎖のＣ末端に付加されて、四価二特異性抗体を提供することができる。ｓｃＦｖは、ＩｇＧの軽鎖のＣ末端および重鎖のＣ末端に付加されて、六価二特異性抗体を提供することができる。一部の実施形態では、ＤＡＲＰｉｎは、ＩｇＧの重鎖のＣ末端に付加されて、四価二特異性抗体を提供することができる。ＤＡＲＰｉｎは、ＩｇＧの軽鎖のＣ末端に付加されて、四価二特異性抗体を提供することができる。ＤＡＲＰｉｎは、ＩｇＧの軽鎖のＣ末端および重鎖のＣ末端に付加されて、六価二特異性抗体を提供することができる。クローニング技術によって生成される多特異性抗体の追加の例としては、（ｉ）ＤＶＤ−Ｉｇ（商標）（二重可変ドメイン免疫グロブリン、第２のＶＨおよびＶＬのそれぞれＨＣおよびＬＣのＮ末端へのタンデム連結）、（ｉｉ）Ｔａｎｄｅｍａｂ（共通ＬＣの組合せにおける２つのＶＨ−ＣＨ１のタンデム連結）、（ｉｉｉ）ＤＮＬ（ＰＫＡ（プロテインキナーゼＡ）由来のＤＤＤ（二量化およびドッキングドメイン）およびＡ−キナーゼアンカータンパク質（ＡＫＡＰ）由来のＡＤ（アンカー性ドメイン）によりそれぞれ固定された２つの抗体または抗体断片の天然の会合）、（ｉｖ）ＬＵＺ−Ｙ（ＨＣのＣ末端で繋留され、その後タンパク質分解的に除去されたロイシンジッパー）、（ｖ）２−ｉｎ−１−ＩｇＧ（二重認識ができる同じＬＣおよびＨＣ）、ならびに（ｖｉ）ｍＡｂ２（第２の特異性を得るためのＩｇＧのＣＨ３ドメインにおける操作されたループ）が挙げられる。
【００８５】
多特異性抗体の別のクラスは、ビルディングブロックとして可変ドメインまたはｓｃＦｖを有する構造によって特徴付けられ得る。このような多特異性抗体の非限定的な例としては、タンデムで接合された２つのＶＨドメイン、ディアボディ（ＶＬＡ−ＶＨＢおよびＶＨＡ−ＶＬＢをＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨの順序でコードする２つのポリペプチド鎖と５アミノ酸のリンカーとを含有するヘテロ二量体）、ｄｓＤｂ（同じ抗体のＶＬおよびＶＨの間の鎖間ジスルフィド結合）、ＤＡＲＴ（二重親和性再標的化、２つのＶＬの間の鎖間ジスルフィド結合）、ｓｃＤｂ（単鎖ディアボディ）、ｔａｎｄＡｂ（中間にフレキシブルリンカーを介したディアボディ二量体）、および調節可能リンカーによってタンデムで連結された２つのｓｃＦｖが挙げられる。
【００８６】
多特異性抗体の別のクラスは、基本のＩｇＧ構造を維持しながら、異なる抗原結合性断片を含有することができる。このような抗体は、例えば、２つの別個の重鎖および／または２つの別個の軽鎖を含むことができる。さまざま技術を使用して、無作為の鎖会合よりもむしろ、望ましい軽鎖および重鎖の組合せの対形成を促進することができる。このような技術の非限定的な例としては、通常の軽鎖、直交Ｆａｂ界面（１つのＦａｂにおいてＬＣおよびＨＣ界面で導入され、他のＦａｂに変更がない相補的突然変異）、クロスマブ（１つのＦａｂ  ＶＨまたはＣＨ１ドメインは、パートナーのＶＬおよびＣＬドメインと、手付かずの他のＦａｂと切り替えられ得る）、およびＦａｂの単鎖抗原結合性ドメインによる置き換えの使用が挙げられる。さらなる例としては、ＣＨ３ドメインに突然変異を導入して、立体的または静電的な相補性に基づいてヘテロ二量化を促進することができる操作戦略が挙げられる。「ノブインホール（ｋｎｏｂｓ  ｉｎ  ｈｏｌｅｓ）」アプローチは、１つの重鎖において嵩高いトリプトファン残基で３６６位のトレオニンを置き換えることによって「ノブ」を作出すること、およびパートナーの重鎖においてトリプル突然変異（Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ）によって対応する「ホール」を作製することを含むことができる。別のアプローチは、ＣＨ３において代替のヒトＩｇＧおよびＩｇＡ断片を作出して、重鎖のヘテロ二量化をガイドする、いわゆるＳＥＥＤボディ（鎖交換操作されたドメイン）を提供することを含むことができる。
【００８７】
多特異性抗体の非限定的な概略図を、図２〜１５に提供する。
【００８８】
図２は、重鎖Ｃ末端に付加された配列を有する四価の二特異性抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００８９】
図３は、軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する四価の二特異性抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９０】
図４は、重鎖および軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する六価の二特異性抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｃ」および「ＳＥＱ  Ｅ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９１】
図５は、重鎖および軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する六価の三特異性抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｃ」および「ＳＥＱ  Ｅ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｄ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９２】
図６は、２つの異なる重鎖配列および２つの異なる軽鎖配列を有する二価の二特異性抗体の概略図を提供する。軽鎖配列は「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。重鎖配列は「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９３】
図７は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、および１つの軽鎖のＣ末端に付加された配列を有する三価の三特異性抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９４】
図８は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、および１つの重鎖のＣ末端に付加された配列を有する三価の三特異性抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９５】
図９は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、および両方の軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する四価抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９６】
図１０は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、および両方の重鎖Ｃ末端に付加された配列を有する四価抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９７】
図１１は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに１つの重鎖Ｃ末端および１つの軽鎖Ｃ末端にシスで付加された配列を有する四価抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９８】
図１２は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに１つの重鎖Ｃ末端および１つの軽鎖Ｃ末端にトランスで付加された配列を有する四価抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」および「ＳＥＱ  Ｆ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【００９９】
図１３は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに両方の重鎖Ｃ末端および１つの軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する五価抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」、「ＳＥＱ  Ｆ」および「ＳＥＱ  Ｇ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｈ」、「ＳＥＱ  Ｉ」および「ＳＥＱ  Ｊ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【０１００】
図１４は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに１つの重鎖Ｃ末端および両方の軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する五価抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」、「ＳＥＱ  Ｆ」および「ＳＥＱ  Ｇ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｈ」、「ＳＥＱ  Ｉ」および「ＳＥＱ  Ｊ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【０１０１】
図１５は、２つの異なる重鎖配列、２つの異なる軽鎖配列、ならびに重鎖および軽鎖Ｃ末端に付加された配列を有する六価抗体の概略図を提供する。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの軽鎖配列は、「ＳＥＱ  Ａ」および「ＳＥＱ  Ｄ」によって表される。ＩｇＧアイソタイプ抗体ユニットの重鎖配列は、「ＳＥＱ  Ｂ」および「ＳＥＱ  Ｃ」によって表される。リンカー配列は、「ＳＥＱ  Ｅ」、「ＳＥＱ  Ｆ」、「ＳＥＱ  Ｇ」および「ＳＥＱ  Ｈ」によって表される。付加された抗原結合性ドメイン配列は、「ＳＥＱ  Ｉ」、「ＳＥＱ  Ｊ」、「ＳＥＱ  Ｋ」および「ＳＥＱ  Ｌ」によって表される。ＮおよびＣは、それぞれ、Ｎ末端およびＣ末端を示す。−Ｓ−Ｓ−は、ジスルフィド結合を示す。
【０１０２】
例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、例えば、ＲＴＫアゴニストに対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせて、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＲＴＫアゴニストの両方に結合することができる多価多特異性化合物を提供することができる。例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、ＶＥＧＦ、Ａｎｇ１、Ａｎｇ２、ＢＤＮＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＩＧＦ、インスリン、ＭＳＰ、ＮＧＦ、ＮＴ−３、ＰＤＧＦ、またはそれらの任意の組合せに対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせて、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＲＴＫアゴニストの両方に結合することができる多価多特異性化合物を提供することができる。
【０１０３】
例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、例えば、ＶＥＧＦに対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせて、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦの両方に結合することができる多価多特異性化合物を提供することができる。ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦの両方に結合する化合物は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を阻害し、Ｔｉｅ２を活性化し、ＶＥＧＦのＶＥＧＦＲへの結合を阻害し、ＶＥＧＦＲシグナル伝達を阻害することができる。
【０１０４】
ヒトＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分を含む組換えタンパク質であるアフリベルセプトに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、アフリベルセプトに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。アフリベルセプトに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。アフリベルセプトに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１０５】
ＶＥＧＦの受容体結合性部位に結合するＶＥＧＦのヒト化単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）阻害剤であるブロルシズマブに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、ブロルシズマブ由来の配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。ブロルシズマブに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。ブロルシズマブに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１０６】
ＶＥＧＦに結合し、その活性を阻害するヒト化モノクローナル抗体断片（Ｆａｂ）であるラニビズマブに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、ラニビズマブ由来の配列は、ｓｃＦｖにクローニングすることができ、ラニビズマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。ラニビズマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。ラニビズマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１０７】
ＶＥＧＦに結合し、その活性を阻害するヒト化モノクローナル抗体であるベバシズマブに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、ベバシズマブ由来の配列は、ｓｃＦｖにクローニングすることができ、ベバシズマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。ベバシズマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。ベバシズマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１０８】
ＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分を含む組換えタンパク質であるコンバセプトに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、コンバセプトに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。コンバセプトに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。コンバセプトに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１０９】
ＶＥＧＦ結合性ＤＡＲＰｉｎであるアビシパルに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、アビシパルに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。アビシパルに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。アビシパルに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１１０】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、ＤＡＲＰｉｎ、またはそれら由来のアミノ酸配列、例えば、配列番号１５８〜２１７のいずれか１つを含むアミノ酸配列と組み合わせることができる。配列番号１５８〜２１７のいずれか１つを含むアミノ酸配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。配列番号１５８〜２１７のいずれか１つを含むアミノ酸配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。配列番号１５８〜２１７のいずれか１つを含むアミノ酸配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１１１】
多数のＶＥＧＦ特異的化合物は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、１つの結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列）は、抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）抗体の重鎖のＣ末端と融合することができ、別の結合性ドメイン（例えば、ブロルシズマブ由来配列）は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、六価の三特異性抗体を提供することができる（図５）。
【０１１２】
異なる重鎖が、基本の４つの鎖ＩｇＧ抗体ユニットにおいて使用される場合（例えば、「ノブインホール」アプローチを使用して）、二価、三価、四価、五価または六価であり、一特異性、二特異性、三特異性、四特異性、五特異性または六特異性である抗体を生じさせることができる。
【０１１３】
非限定的な一例では、抗体ユニットの１つのアームは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的なＣＤＲを含有することができる一方、抗体ユニットの他のアームは、ＶＥＧＦに対して特異的なＣＤＲを含有することができる（図６）。
【０１１４】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの軽鎖と融合されて、三価二特異性抗体を提供することができる（図７）。
【０１１５】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの重鎖と融合されて、三価二特異性抗体を提供することができる（図８）。
【０１１６】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの軽鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第２の異なる結合性ドメインは、他の軽鎖と融合されて、四価三特異性抗体を提供することができる（図９）。
【０１１７】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの重鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第２の異なる結合性ドメインは、他の重鎖と融合されて、四価三特異性抗体を提供することができる（図１０）。
【０１１８】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの重鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第２の異なる結合性ドメインは、１つの軽鎖にシスで融合されて、四価三特異性抗体を提供することができる（図１１）。
【０１１９】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの重鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第２の異なる結合性ドメインは、１つの軽鎖にトランスで融合されて、四価三特異性抗体を提供することができる（図１２）。
【０１２０】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの重鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第２の異なる結合性ドメインは、第２の重鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第３の異なる結合性ドメインは、１つの軽鎖と融合されて、五価四特異性抗体を提供することができる（図１３）。
【０１２１】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの重鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第２の異なる結合性ドメインは、１つの軽鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第３の異なる結合性ドメインは、他の軽鎖と融合されて、五価四特異性抗体を提供することができる（図１４）。
【０１２２】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、ＶＥＧＦに対して特異的な結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列、ブロルシズマブ由来配列、ラニビズマブ由来配列、またはベバシズマブ由来配列）は、１つの重鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第２の異なる結合性ドメインは、他の重鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第３の異なる結合性ドメインは、１つの軽鎖と融合することができ、ＶＥＧＦに対して特異的な第４の結合性ドメインは、他の軽鎖と融合されて、六価五特異性抗体を提供することができる（図１５）。
【０１２３】
非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、１つの結合性ドメイン（例えば、アフリベルセプト由来配列）は、１つの重鎖のＣ末端と融合することができ、第２の結合性ドメイン（例えば、ブロルシズマブ由来配列）は、他の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の三特異性抗体を提供することができる（図１０）。非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、アフリベルセプト由来配列は、１つの軽鎖のＣ末端と融合することができ、ブロルシズマブ由来配列は、別の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の三特異性抗体を提供することができる（図９）。非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、アフリベルセプト由来配列は、１つの重鎖のＣ末端と融合することができ、ブロルシズマブ由来配列は、１つの軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の三特異性抗体を提供することができる（図１１、図１２）。非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、アフリベルセプト由来配列は、１つの重鎖のＣ末端と融合することができ、ブロルシズマブ由来配列は、別の重鎖のＣ末端と融合することができ、ラニビズマブ由来配列は、両方の軽鎖のＣ末端と融合されて、六価の四特異性抗体を提供することができる（図１５）。非限定的な一例では、基本の抗体ユニットの両方の抗原結合性断片は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的であり得、アフリベルセプト由来配列は、１つの重鎖のＣ末端と融合することができ、ブロルシズマブ由来配列は、別の重鎖のＣ末端と融合することができ、ラニビズマブ由来配列は、１つの軽鎖のＣ末端と融合することができ、ベバシズマブ由来配列は、別の軽鎖のＣ末端と融合されて、六価の五特異性抗体を提供することができる（図１５）。
【０１２４】
例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、他のアミノ酸配列と組み合わせて、例えば、Ｔｉｅ２活性化を増強する、Ｔｉｅ２リン酸化を増強する、Ｔｉｅ２シグナル伝達を増強する、ＶＥＧＦＲ活性化を低減する、ＶＥＧＦＲリン酸化を低減する、ＶＥＧＦＲシグナル伝達を低減する、またはそれらの組合せである、多価多特異性化合物を提供することができる。
【０１２５】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、ＩＶ型コラーゲン由来の生体模倣ペプチド、例えば、配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列と組み合わせることができる。配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１２６】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、Ａｎｇ１模倣体、例えば、バスクロチドと組み合わせることができる。バスクロチドに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。バスクロチドに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。バスクロチドに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１２７】
例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、例えば、ＲＴＫに対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせて、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＲＴＫの両方に結合することができる多価多特異性化合物を提供することができる。例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物は、ＶＥＧＦＲ（例えば、ＶＥＧＦＲ２）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせて、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦＲの両方に結合することができる多価多特異性化合物を提供することができる。
【０１２８】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦＲの両方に結合する化合物は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を阻害し、Ｔｉｅ２を活性化し、ＶＥＧＦのＶＥＧＦＲへの結合を阻害し、ＶＥＧＦＲシグナル伝達を阻害することができる。
【０１２９】
ＶＥＧＦＲ２の細胞外ドメインに結合し、ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達を阻害するヒト化モノクローナル抗体であるラムシルマブに由来する配列は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、ラムシルマブ由来の配列は、ｓｃＦｖにクローニングすることができ、ラムシルマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の重鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図２）。ラムシルマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、四価の二特異性抗体を提供することができる（図３）。ラムシルマブ由来ｓｃＦｖは、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖および重鎖のＣ末端と融合されて、六価の二特異性抗体を提供することができる（図４）。
【０１３０】
Ｔｉｅ２活性化を増強する、Ｔｉｅ２リン酸化を増強する、Ｔｉｅ２シグナル伝達を増強する、ＶＥＧＦＲ活性化を低減する、ＶＥＧＦＲリン酸化を低減する、ＶＥＧＦＲシグナル伝達を低減する、またはそれらの組合せである、多数の化合物は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗原結合性化合物と組み合わせることができる。例えば、１つの結合性ドメイン（例えば、ブロルシズマブ由来配列）は、抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）抗体の重鎖のＣ末端と融合することができ、別の結合性ドメイン（例えば、バスクロチド由来配列）は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）特異的抗体の軽鎖のＣ末端と融合されて、六価の三特異性抗体を提供することができる（図５）。
【０１３１】
本明細書に開示される化合物、抗体またはそれらの誘導体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０、またはそれよりも多くのドメインを有することができる。それぞれのドメインは、本明細書に開示される任意の標的、例えば、ホスファターゼ、Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートするホスファターゼ、タンパク質チロシンホスファターゼ、受容体様タンパク質チロシンホスファターゼ、Ｔｉｅ２モジュレーター、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の細胞外ドメイン、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の細胞外ドメインの最初のＦＮ３リピート、キナーゼ、チロシンキナーゼ、受容体チロシンキナーゼ、受容体チロシンキナーゼ活性化剤、受容体チロシンキナーゼアゴニスト、増殖因子、増殖因子受容体活性化剤、増殖因子受容体アゴニスト、システインノット増殖因子スーパーファミリーメンバー、血管新生促進因子、ＰＤＧＦファミリーメンバー、ＶＥＧＦ受容体、ＶＥＧＦ受容体アゴニスト、ＶＥＧＦファミリーメンバー、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＰＧＦ、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１４８、ＶＥＧＦ１６２、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１６５ｂ、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１８９またはＶＥＧＦ２０６を、モジュレート、結合、アンタゴナイズ、阻害または活性化することができる。
阻害剤、活性化剤、モジュレーターおよび結合剤
【０１３２】
本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、化合物、組換えタンパク質、抗体、抗原結合性断片、バリアントもしくはそれらの誘導体、Ｔｉｅ２ペプト模倣体、四量体ポリエチレンオキシドクラスターペプチド、ＩＶ型コラーゲン生体模倣ペプチド、ＤＡＲＰｉｎもしくはその誘導体、アフィニボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、または１つもしくは複数の受容体に由来するペプチドを、単独でまたは別のアミノ酸配列もしくは複数の他のアミノ酸配列と組み合わせてのいずれかで、含むことができる。阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、改変、例えば、酵素的切断または翻訳後修飾を受け得る。
【０１３３】
一部の実施形態では、本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＴｉｅ２の相互作用を妨げることによって、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を阻害することができる。一部の実施形態では、本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、不活性立体構造中でＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を安定化することによって、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を阻害することができる。一部の実施形態では、本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の内部移行を促進すること（例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）のエンドサイトーシスおよび分解を促進すること）によって、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を阻害することができる。一部の実施形態では、本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を活性化するリガンドの結合をブロックすることによって、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を阻害することができる。一部の実施形態では、本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）のオリゴマー化をモジュレートすることによって、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を阻害することができる。
【０１３４】
一部の実施形態では、本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）のドミナントネガティブなアイソフォームに結合することができる。ドミナントネガティブなアイソフォームは、内因性ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）と競合することができるホスファターゼ活性におけるＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）欠乏の形態に相当し得る。
【０１３５】
本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、複数のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）結合性部位を含むことができる。一部の実施形態では、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、２つのＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）分子に同時に結合することができ、それによって、２つのＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）分子を近接させる。一部の実施形態では、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、３つのＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）分子に同時に結合することができ、それによって、３つのＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）分子を近接させる。一部の実施形態では、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、４つのＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）分子に同時に結合することができ、それによって、４つのＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）分子を近接させる。
【０１３６】
本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、別の部分またはビヒクルと、共有結合的または非共有結合的にコンジュゲートすることができる。部分またはビヒクルは、例えば、追加の標的に対する結合特異性を提供し、分解を阻害し、半減期を増加させ、吸収を増加させ、毒性を低減し、免疫原性を低減し、および／または阻害剤、モジュレーターもしくは結合剤の生物活性を増加させることができる。阻害剤、モジュレーターまたは結合剤がコンジュゲートされ得る部分の非限定的な例としては、免疫グロブリンのＦｃドメイン、ペプチド、脂質、炭水化物、デンドリマー、オリゴ糖、ステロイドなどのコレステロール群、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリリシンまたはデキストランなどのポリマーが挙げられる。
【０１３７】
本開示の化合物は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）を標的にするために使用して、Ｔｉｅ２活性を回復させることができる。ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、したがって、Ｔｉｅ２活性化剤であり得る。一部の実施形態では、本開示の化合物は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）またはＴｉｅ２の下流のシグナル伝達カスケード、例えば、Ａｋｔ／ＰＩ３−Ｋシグナル伝達、Ｒａｃ１シグナル伝達、ＭＡＰＫ／Ｒａｓシグナル伝達またはＮＦ−κＢシグナル伝達を、開始または阻害することができる。
【０１３８】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害は、血管安定化をもたらすことができ、これは、血管不安定性、血管新生、新血管形成、血管漏出および／または浮腫によって特徴付けられる、例えば障害の処置のために有利であり得る。例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害は、血管障害、眼障害、がん、腎臓障害、糖尿病の合併症、および他の障害の処置のために有利であり得る。一部の実施形態では、本開示のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）の阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、例えば、糖尿病性網膜症、非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）、緑内障、眼圧、眼球浮腫、眼出血、高眼圧症、眼の炎症、眼の新血管形成、眼の血管漏出、網膜灌流または網膜症を処置するために使用することができる。
【０１３９】
本開示のＴｉｅ２の活性化剤、モジュレーターまたは結合剤は、例えば、化合物、組換えタンパク質、ペプチド、抗体、抗原結合性断片、バリアントもしくはそれらの誘導体、アンジオポエチン１組換えタンパク質、Ａｎｇ１模倣体、Ｔｉｅ２アゴニスト、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）ホスファターゼ阻害剤、Ｔｉｅ２ペプト模倣体、四量体ポリエチレンオキシドクラスターペプチド、ＩＶ型コラーゲン生体模倣ペプチド、ＤＡＲＰｉｎもしくはその誘導体、アフィニボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、または１つもしくは複数の受容体に由来するペプチドを、単独でまたは別のアミノ酸配列もしくは複数の他のアミノ酸配列と組み合わせてのいずれかで、含むことができる。活性化剤、モジュレーターまたは結合剤は、改変、例えば、酵素的切断または翻訳後修飾を受け得る。
【０１４０】
本開示のＴｉｅ２の活性化剤、モジュレーターまたは結合剤は、別の部分またはビヒクルと、共有結合的または非共有結合的にコンジュゲートすることができる。部分またはビヒクルは、例えば、追加の標的に対する結合特異性を提供し、分解を阻害し、半減期を増加させ、吸収を増加させ、毒性を低減し、免疫原性を低減し、および／または活性化剤、モジュレーターもしくは結合剤の生物活性を増加させることができる。活性化剤、モジュレーターまたは結合剤がコンジュゲートされ得る部分の非限定的な例としては、免疫グロブリンのＦｃドメイン、ペプチド、脂質、炭水化物、デンドリマー、オリゴ糖、ステロイドなどのコレステロール群、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリリシンまたはデキストランなどのポリマーが挙げられる。
【０１４１】
一部の実施形態では、本開示の化合物は、Ｔｉｅ２の下流のシグナル伝達カスケード、例えば、Ａｋｔ／ＰＩ３−Ｋシグナル伝達、Ｒａｃ１シグナル伝達、ＭＡＰＫ／Ｒａｓシグナル伝達またはＮＦ−κＢシグナル伝達を、開始または阻害することができる。
【０１４２】
Ｔｉｅ２の活性化は、血管安定化をもたらすことができ、これは、血管不安定性、血管新生、新血管形成、血管漏出および／または浮腫によって特徴付けられる、例えば障害の処置のために有利であり得る。例えば、Ｔｉｅ２の活性化は、眼障害、がん、腎臓障害、糖尿病の合併症、および他の障害の処置のために有利であり得る。一部の実施形態では、本開示のＴｉｅ２の活性化剤、モジュレーターまたは結合剤は、糖尿病性網膜症、非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）、緑内障、眼圧、眼球浮腫、眼出血、高眼圧症、眼の炎症、眼の新血管形成、眼の血管漏出、網膜灌流または網膜症を処置するために使用することができる。
【０１４３】
本開示のＶＥＧＦの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、化合物、組換えタンパク質、ペプチド、抗体、抗原結合性断片、バリアントもしくはそれらの誘導体、ＤＡＲＰｉｎもしくはその誘導体、アフィニボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、四量体ポリエチレンオキシドクラスターペプチド、ＩＶ型コラーゲン生体模倣ペプチド、または１つもしくは複数の受容体（例えば、ＶＥＧＦ受容体、またはヒトＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分）に由来するペプチドを、単独でまたは別のアミノ酸配列もしくは複数の他のアミノ酸配列と組み合わせてのいずれかで、含むことができる。阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、改変、例えば、酵素的切断または翻訳後修飾を受け得る。
【０１４４】
本開示のＶＥＧＦの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、複数のＶＥＧＦ結合性部位を含むことができる。一部の実施形態では、ＶＥＧＦの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、２つのＶＥＧＦ分子に同時に結合することができ、それによって、２つのＶＥＧＦ分子を近接させる。一部の実施形態では、ＶＥＧＦの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、３つのＶＥＧＦ分子に同時に結合することができ、それによって、３つのＶＥＧＦ分子を近接させる。一部の実施形態では、ＶＥＧＦの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、４つのＶＥＧＦ分子に同時に結合することができ、それによって、４つのＶＥＧＦ分子を近接させる。
【０１４５】
本開示のＶＥＧＦの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、別の部分またはビヒクルと、共有結合的または非共有結合的にコンジュゲートすることができる。部分またはビヒクルは、例えば、追加の標的に対する結合特異性を提供し、分解を阻害し、半減期を増加させ、吸収を増加させ、毒性を低減し、免疫原性を低減し、および／または阻害剤、モジュレーターもしくは結合剤の生物活性を増加させることができる。阻害剤、モジュレーターまたは結合剤がコンジュゲートされ得る部分の非限定的な例としては、免疫グロブリンのＦｃドメイン、ペプチド、脂質、炭水化物、デンドリマー、オリゴ糖、ステロイドなどのコレステロール群、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリリシンまたはデキストランなどのポリマーが挙げられる。
【０１４６】
本開示のＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、化合物、組換えタンパク質、抗体、抗原結合性断片、バリアントもしくはそれらの誘導体、四量体ポリエチレンオキシドクラスターペプチド、ＩＶ型コラーゲン生体模倣ペプチド、ＤＡＲＰｉｎもしくはその誘導体、アフィニボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、または１つもしくは複数の受容体に由来するペプチドを、単独でまたは別のアミノ酸配列もしくは複数の他のアミノ酸配列と組み合わせてのいずれかで、含むことができる。阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、改変、例えば、酵素的切断または翻訳後修飾を受け得る。
【０１４７】
本開示のＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、複数のＶＥＧＦＲ結合性部位を含むことができる。一部の実施形態では、ＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、２つのＶＥＧＦＲ分子に同時に結合することができ、それによって、２つのＶＥＧＦＲ分子を近接させる。一部の実施形態では、ＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、３つのＶＥＧＦＲ分子に同時に結合することができ、それによって、３つのＶＥＧＦＲ分子を近接させる。一部の実施形態では、ＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、４つのＶＥＧＦＲ分子に同時に結合することができ、それによって、４つのＶＥＧＦＲ分子を近接させる。
【０１４８】
本開示のＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、別の部分またはビヒクルと、共有結合的または非共有結合的にコンジュゲートすることができる。部分またはビヒクルは、例えば、追加の標的に対する結合特異性を提供し、分解を阻害し、半減期を増加させ、吸収を増加させ、毒性を低減し、免疫原性を低減し、および／または阻害剤、モジュレーターもしくは結合剤の生物活性を増加させることができる。阻害剤、モジュレーターまたは結合剤がコンジュゲートされ得る部分の非限定的な例としては、免疫グロブリンのＦｃドメイン、ペプチド、脂質、炭水化物、デンドリマー、オリゴ糖、ステロイドなどのコレステロール群、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリリシンまたはデキストランなどのポリマーが挙げられる。
【０１４９】
一部の実施形態では、本開示のＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、不活性立体構造中でＶＥＧＦＲを安定化することによって、ＶＥＧＦＲを阻害することができる。一部の実施形態では、本開示のＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、ＶＥＧＦＲの内部移行を促進すること（例えば、ＶＥＧＦＲのエンドサイトーシスおよび分解を促進すること）によって、ＶＥＧＦＲを阻害することができる。一部の実施形態では、本開示のＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、ＶＥＧＦＲを活性化するリガンドの結合をブロックすること（例えば、ＶＥＧＦＲのＶＥＧＦライゲーションをブロックすること）によって、ＶＥＧＦＲを阻害することができる。一部の実施形態では、本開示のＶＥＧＦＲの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、ＶＥＧＦＲのオリゴマー化をモジュレートすること（例えば、ＶＥＧＦＲの二量化またはオリゴマー化の可能性を防止または低減すること）によって、ＶＥＧＦＲを阻害することができる。
【０１５０】
本開示の化合物は、ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲの相互作用を妨げるために使用することができ、それによって、ＶＥＧＦＲリン酸化および下流のシグナル伝達を低減する。一部の実施形態では、ＶＥＧＦの阻害は、異常な脈管形成、血管新生または血管透過性上昇を低減することができ、それによって、病的な血管不安定性を低減する。一部の実施形態では、ＶＥＧＦの阻害は、血管不安定性、血管新生、新血管形成、血管漏出および／または浮腫によって特徴付けられる障害の処置のために有利であり得る。例えば、ＶＥＧＦの阻害は、血管障害、眼障害、がん、腎臓障害、糖尿病の合併症、および他の障害の処置のために有利であり得る。一部の実施形態では、本開示のＶＥＧＦの阻害剤、モジュレーターまたは結合剤は、糖尿病性網膜症、非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）、緑内障、眼圧、眼球浮腫、眼出血、高眼圧症、眼の炎症、眼の新血管形成、眼の血管漏出、網膜灌流または網膜症を処置するために使用することができる。一部の実施形態では、ＶＥＧＦの阻害は、がんを低減することができる。
方法
【０１５１】
Ｔｉｅ２シグナル伝達の促進およびＶＥＧＦＲシグナル伝達の阻害は、血管安定化をもたらすことができ、これは、血管成分による状態の処置のために有利であり得る。本明細書に開示される化合物は、例えば、脈管構造における変化によって特徴付けられる疾患、減少したＴｉｅ２活性化によって特徴付けられる疾患、または進行性であろうと非進行性であろうと、急性であろうと慢性であろうと、病態形成においてＶＥＧＦの関与によって特徴付けられる疾患を処置するために使用することができる。
【０１５２】
一部の実施形態では、本明細書に開示される化合物は、眼障害を処置するために使用することができる。本明細書に開示される化合物は、例えば、加齢性黄斑変性症（乾燥型）、加齢性黄斑変性症（湿潤型）、アトピー性角膜炎、ベスト病、眼瞼炎、霧視、脈絡膜新血管形成、慢性網膜剥離、慢性ぶどう膜炎／硝子体炎、脈絡膜炎、結膜炎、コンタクトレンズの過度の装用、角膜移植片新血管形成、角膜移植片拒絶、角膜新血管形成、嚢胞様黄斑浮腫、糖尿病性黄斑浮腫、複視、糖尿病性網膜症、ルベオーシスに関連する疾患（隅角新生血管）、増殖性硝子体網膜症のすべての形態を含む線維性血管もしくは線維性組織の異常増殖によって引き起こされる疾患、イールズ病、眼圧亢進、流行性角結膜炎、飛蚊症、緑内障、隣接する網膜肥厚を伴う中心窩の中心から５００μｍ以内の硬い黄色の滲出液、過粘稠度症候群、脈絡膜炎を引き起こす感染症、網膜炎を引き起こす感染症、虹彩新血管形成、虚血性網膜症、コントラストの喪失、黄斑の毛細血管拡張症（telangectasia）、周辺（mariginal）角質溶解、多発性脈絡膜炎、近視、新血管形成緑内障、非増殖性糖尿病性網膜症（ＮＰＤＲ）、眼球浮腫、眼出血、眼ヒストプラスマ症、高眼圧症、眼の炎症、眼の虚血、眼の新血管形成、眼外傷、眼の血管漏出、視窩、視神経乳頭浮腫、毛様体扁平部炎、フィレクテヌローシス、ポリープ状脈絡膜血管症、レーザー後の合併症、増殖性糖尿病性網膜症、翼状片乾燥性角膜炎、放射状角膜切開術、網膜血管腫状増殖、網膜変性、網膜浮腫（黄斑浮腫を含む）、網膜新血管形成、網膜灌流、中心窩の中心から１ディスク径以内の網膜肥厚、中心窩の中心から５００μｍ以内の網膜肥厚、網膜静脈閉塞症（中心または分岐部）、網膜炎、網膜色素変性症、網膜症、未熟児網膜症、強膜炎、シュタルガルト（Stargarts）病、上輪部結膜炎、手術誘発性浮腫、手術誘発性新血管形成、テリエン周辺変性、トラコーマ、外傷、ぶどう膜炎、血管炎（例えば、中心網膜静脈閉塞症）、あるいは目の疾患または障害が眼の新血管形成、血管漏出もしくは網膜浮腫、またはそれらの組合せに関連する他の眼疾患を処置するために使用することができる。
【０１５３】
一部の実施形態では、本明細書に開示される化合物は、糖尿病の合併症（例えば、糖尿病の併存疾患）を処置するために使用することができる。本明細書に開示される化合物は、例えば、急性糸球体腎炎、急性心筋梗塞、切断、筋萎縮症、動脈瘤、狭心症、大動脈瘤、大動脈解離、アテローム性動脈硬化症、アテローム動脈硬化性心血管疾患、心房細動、自律神経ニューロパチー、失明、糖尿病の心血管系合併症、糖尿病の脳血管系合併症、シャルコー関節症、慢性糸球体腎炎、慢性腎不全、跛行、臨床的に重要な黄斑浮腫、冠動脈疾患、脳神経麻痺、嚢胞性黄斑変性症、嚢胞状黄斑浮腫、糖尿病性心筋症、糖尿病性手関節症、糖尿病性昏睡、糖尿性脳症、糖尿病性の足の創傷、糖尿病性高血糖、糖尿病性高脂血症、糖尿病性高浸透圧症候群、糖尿病性低血糖症、糖尿病性ケトアシドーシス、糖尿病性筋壊死、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性眼疾患、糖尿病性末梢血管疾患、糖尿病性網膜症、広汎性特発性骨増殖症、デュピュイトラン拘縮、塞栓症、末期腎疾患、勃起不全、フォレスティエ病、壊疽、ガス壊疽、胃不全麻痺／下痢、心不全、高血糖緊急症、高血圧、虚血性心疾患、ケトアシドーシス、脂肪肥大症、糖尿病の代謝性合併症、単ニューロパチー、心筋梗塞、腎炎、腎症、ネフローゼ、ネフローゼ症候群、神経因性膀胱、神経障害性関節症、ニューロパチー、起立性低血圧、変形性関節症、骨粗しょう症、歯周病、末梢血管疾患、多発ニューロパチー、増殖網膜症、腎不全、腎機能不全、拘束性肺疾患、網膜剥離、網膜浮腫、網膜症、脳卒中、血栓症、一過性虚血性発作、潰瘍、心室細動、硝子体出血、またはそれらの組合せを処置するために使用することができる。
【０１５４】
一部の実施形態では、本明細書に開示される化合物は、腎臓障害を処置するために使用することができる。本明細書に開示される化合物は、例えば、急性腎損傷、急性増殖性糸球体腎炎、アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ欠損症、アルポート症候群、鎮痛薬腎症、常染色体優性多発性嚢胞腎、常染色体劣性多発性嚢胞腎、バルカン腎症、良性腎硬化症、ブライト病、心腎症候群、ＣＦＨＲ５腎症、慢性腎臓病、慢性腎臓病−ミネラルおよび骨障害、先天性ネフローゼ症候群、腎錐体症候群、造影剤誘発腎症、嚢胞性腎疾患、デント病、糖尿病性腎症、びまん性増殖性腎炎、遠位尿細管性アシドーシス、利尿、ＥＡＳＴ症候群、末期腎疾患、上皮間葉移行、エプスタイン症候群、ファンコニー症候群、フェクトナー症候群、限局性増殖性腎炎、限局性分節性糸球体硬化症、フレーリー症候群、ギャロウェイ・モワト症候群、ギテルマン症候群、糸球体嚢胞腎、糸球体症、グッドパスチャー症候群、高アニオンギャップ代謝性アシドーシス、ＨＩＶ関連腎症、馬蹄腎、水腎症、高血圧性腎疾患、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎、若年性ネフロン癆、腎臓がん、腎疾患、腎臓結石疾患、ライトウッド−アルブライト症候群、ループス腎炎、マラリア腎症、髄質嚢胞性腎疾患、海綿腎、膜性糸球体腎炎、メソアメリカ腎症、ミルク−アルカリ症候群、微小メサンギウム糸球体腎炎、多嚢胞性異形成腎、腎炎、腎石灰化症、腎性尿崩症、腎肥大症、腎下垂症、ネフローゼ、ネフローゼ症候群、ナットクラッカー症候群、乳頭腎症候群、リン酸腎症、多発性嚢胞腎、原発性高シュウ酸尿症、近位尿細管性アシドーシス、腎盂腎炎、膿腎症、急速進行性糸球体腎炎、腎無形成、腎アンギナ、腎動脈狭窄、腎嚢胞、腎虚血、腎性骨異栄養症、腎乳頭壊死、尿細管性アシドーシス、腎静脈血栓症、二次性高血圧症、蛇行性線維−多嚢胞性腎臓症候群、シャント腎炎、鎌状赤血球性腎症、菲薄基底膜病、移植糸球体症、尿細管間質性腎炎およびぶどう膜炎、細尿管症、尿毒症、尿素霜、ワンダーリッヒ症候群、またはそれらの組合せを処置するために使用することができる。
【０１５５】
一部の実施形態では、本明細書に開示される化合物は、がんを処置するために使用することができる。本明細書に開示される化合物は、例えば、急性白血病、星状細胞腫、胆道がん（胆管細胞癌）、骨がん、乳がん、脳幹神経膠腫、細気管支肺胞細胞肺がん、副腎のがん、肛門部のがん、膀胱のがん、内分泌系のがん、食道のがん、頭頸部のがん、腎臓のがん、副甲状腺のがん、陰茎のがん、胸膜／腹膜のがん、唾液腺のがん、小腸のがん、甲状腺のがん、尿管のがん、尿道のがん、子宮頸部の癌腫、子宮内膜の癌腫、卵管の癌腫、腎盂の癌腫、腟の癌腫、外陰部の癌腫、子宮頸がん、慢性白血病、結腸がん、結腸直腸がん、皮膚黒色腫、上衣腫、類上皮腫、ユーイング肉腫、胃がん、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、神経膠腫、血液系悪性腫瘍、肝細胞（肝臓）癌、肝細胞腫、ホジキン病、眼球内黒色腫、カポジ肉腫、肺がん、リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、中皮腫、多発性骨髄腫、筋肉がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、神経がん、非小細胞肺がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、小児悪性腫瘍、下垂体腺腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞癌、軟組織の肉腫、シュワン腫（schwanoma）、皮膚がん、脊髄軸腫瘍、扁平上皮癌、胃がん、滑膜肉腫、精巣がん、子宮がん、または上記のがんのいずれかの抵抗性バージョンを含む腫瘍およびそれらの転移、あるいはそれらの組合せを処置するために使用することができる。
【０１５６】
一部の実施形態では、本明細書に開示される化合物は、脈管構造における変化によって特徴付けられる疾患、減少したＴｉｅ２活性化によって特徴付けられる疾患、または病態形成においてＶＥＧＦの関与によって特徴付けられる疾患を処置するために使用することができる。本明細書に開示される化合物は、例えば、酒さ性ざ瘡、急性肺損傷、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、腹部手術による癒着形成、脂肪過多症、アルブミン尿、アレルギー性浮腫、アレルギー、アンギナ、血管線維腫、動脈硬化症、動脈閉塞、腹水、アテローム、アテローム性動脈硬化症、喘息、無腐性壊死、細菌性潰瘍、Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ  ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ感染症、ベーチェット病、バージャー病（閉塞性血栓血管炎）、心線維症、心肥大、心筋症、頸動脈閉塞症、脳梗塞、化学熱傷、ＣＯＰＤ、クローン病、サイトカイン誘発性血管漏出、不安定な血流、糖尿病（インスリン非依存型糖尿病を含む）、機能性子宮出血、子宮内膜症、エプスタインバーウイルス感染症、勃起不全、多毛症、濾胞性嚢胞、足部潰瘍（例えば、糖尿病性足部潰瘍）、真菌性潰瘍、巨細胞性動脈炎、糸球体硬化症、グレイブス病、橋本自己免疫性甲状腺炎、血管腫、血管内皮腫、血友病性関節症、出血、Ｃ型肝炎、遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴ）、単純ヘルペス感染症、帯状疱疹感染症、高血圧、特発性血小板減少性紫斑病、創傷の治癒障害、炎症および感染プロセス（例えば、肝炎、肺炎、糸球体腎炎）、間質性線維症、虚血、腎臓病、リーシュマニア症、白質軟化症、脂質変性、肝再生、ループス腎炎、ライム病、リンパ増殖性障害、マラリア（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ感染症）、モーレン潰瘍、多発性硬化症、マイコバクテリア感染症、心筋梗塞、鼻ポリープ、腎症、神経の炎症、ニューロパチー、肥満、骨髄炎、骨棘、卵巣過刺激、パジェット病、パンヌス増殖、末梢動脈疾患、腹膜硬化症、類天疱瘡、多発動脈炎、原虫感染症、弾性線維性仮性黄色腫、乾癬、肺高血圧症、化膿性肉芽腫、腎線維症、呼吸促迫、関節リウマチ、リケッチア感染症、瘢痕ケロイド、敗血症、鎌状赤血球貧血、スティーブンス−ジョンソン病、脳卒中、滑膜炎、全身性エリテマトーデス、梅毒、甲状腺肥大、甲状腺炎、毒素性ショック症候群、トキソプラズマ症、外傷、潰瘍性大腸炎、血管漏出、血管漏出症候群、血管奇形（例えば、オスラー−ウェーバー症候群）、静脈閉塞、ウイルス性出血性熱（例えば、デング熱）、ビタミンＡ欠乏症、疣贅、もしくはウェゲナーサルコイドーシス、またはそれらの組合せを処置するために使用することができる。
配列
【０１５７】
本明細書で使用される場合、Ｌ−エナンチオマーおよびＤ−エナンチオマーのアミノ酸についての略号は以下の通りである：アラニン（Ａ、Ａｌａ）；アルギニン（Ｒ、Ａｒｇ）；アスパラギン（Ｎ、Ａｓｎ）；アスパラギン酸（Ｄ、Ａｓｐ）；システイン（Ｃ、Ｃｙｓ）；グルタミン酸（Ｅ、Ｇｌｕ）；グルタミン（Ｑ、Ｇｌｎ）；グリシン（Ｇ、Ｇｌｙ）；ヒスチジン（Ｈ、Ｈｉｓ）；イソロイシン（Ｉ、Ｉｌｅ）；ロイシン（Ｌ、Ｌｅｕ）；リシン（Ｋ、Ｌｙｓ）；メチオニン（Ｍ、Ｍｅｔ）；フェニルアラニン（Ｆ、Ｐｈｅ）；プロリン（Ｐ、Ｐｒｏ）；セリン（Ｓ、Ｓｅｒ）；トレオニン（Ｔ、Ｔｈｒ）；トリプトファン（Ｗ、Ｔｒｐ）；チロシン（Ｙ、Ｔｙｒ）；バリン（Ｖ、Ｖａｌ）。一部の実施形態では、アミノ酸はＬ−エナンチオマーである。一部の実施形態では、アミノ酸はＤ−エナンチオマーである。
【０１５８】
表２は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合するヒト化ＶＨ抗体領域のアミノ酸配列を示す。配列番号１は、ＶＨ１であり、配列番号２は、ＶＨ２であり、配列番号３は、ＶＨ３であり、配列番号４は、ＶＨ４である。
【表２】
2022502367.tif 000005
【０１５９】
表３は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合するヒト化ＶＬ抗体領域のアミノ酸配列を示す。配列番号５は、ＶＬ１であり、配列番号６は、ＶＬ２であり、配列番号７は、ＶＬ３であり、配列番号８は、ＶＬ４である。
【表３】
2022502367.tif 000006
【０１６０】
それぞれのＶＨドメインは、フレーム中で、定常ドメイン配列、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭまたはＩｇＤ配列を用いて合成することができる。全重鎖配列をコードするＤＮＡ配列は、コドン最適化および検証することができる。
【０１６１】
定常ドメイン配列の例示的なアミノ酸配列を表４に提供する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＧ１定常ドメイン配列は、配列番号２２０を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＧ２定常ドメイン配列は、配列番号２２１を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＧ３定常ドメイン配列は、配列番号２２２を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＧ４アイソタイプの定常ドメイン配列は、２２８位でセリンよりもむしろプロリンに突然変異して、Ｆａｂアーム交換を低減することができる（Ｓ２２８Ｐ突然変異を安定化する）。Ｓ２２８Ｐ突然変異を有するＩｇＧ４定常ドメインのアミノ酸配列は、配列番号９を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＥ定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＥ定常ドメイン配列は、配列番号２２３を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＡ１定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＡ１定常ドメイン配列は、配列番号２２４を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＡ２定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＡ２定常ドメイン配列は、配列番号２２５を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＭ定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＭ定常ドメイン配列は、配列番号２２６を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＨドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＤ定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＤ定常ドメイン配列は、配列番号２２７を含むことができる。
【表４−１】
2022502367.tif 000007
【表４−２】
2022502367.tif 000008
【表４−３】
2022502367.tif 000009
【０１６２】
それぞれのＶＬドメインは、フレーム中で、ヒト軽鎖定常ドメイン配列、例えば、カッパ（ＩｇＫ）またはラムダ（ＩｇＬ）鎖を用いて合成することができる。全軽鎖配列は、次いで、コドン最適化することができ、ＤＮＡ配列を検証することができる。表５は、軽鎖定常ドメイン配列の例を提供する。
【０１６３】
一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＬドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＫ定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＫ定常ドメイン配列は、配列番号１０を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＶＬドメインは、フレーム中で、ヒトＩｇＬ定常ドメイン配列を用いて合成される。ヒトＩｇＬ定常ドメイン配列は、配列番号２２８を含むことができる。
【表５】
2022502367.tif 000010
【０１６４】
シグナルペプチドは、細胞によるより高いタンパク質の発現および／または分泌をもたらすことができる。以下のシグナルペプチドは、本明細書に開示されるすべての構築物に付加され得る。
重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）：ＭＧＷＴＬＶＦＬＦＬＬＳＶＴＡＧＶＨＳ
軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）：ＭＶＳＳＡＱＦＬＧＬＬＬＬＣＦＱＧＴＲＣ
【０１６５】
シグナルペプチダーゼは、例えば、分泌プロセスの間に、タンパク質からシグナルペプチドを切断することができ、シグナルペプチド配列を含まない成熟タンパク質を生じさせる。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、本開示の化合物または抗体を切断する。一部の実施形態では、本開示の成熟化合物または抗体は、シグナルペプチドを含まない。
【０１６６】
表６および表７は、それぞれ、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合するヒト化重鎖および軽鎖の全アミノ酸配列を列挙する。ＨＣ１、ＨＣ２、ＨＣ３およびＨＣ４は、ＶＨ１、ＶＨ２、ＶＨ３およびＶＨ４にそれぞれ接合され、付加されたシグナルペプチドを有する、安定化Ｓ２２８Ｐ突然変異を有するヒトＩｇＧ４アイソタイプの定常ドメインである。配列番号１３、１４、１５および１６のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。付加されたシグナルペプチドなしのＨＣ１、ＨＣ２、ＨＣ３およびＨＣ４も示す（配列番号２４６、２４７、２４８および２４９）。一部の実施形態では、本開示の成熟化合物または抗体は、シグナルペプチドを含まない。
【０１６７】
ＬＣ１、ＬＣ２、ＬＣ３およびＬＣ４は、ＶＬ１、ＶＬ２、ＶＬ３およびＶＬ４にそれぞれ接合され、付加されたシグナルペプチドを有する、ヒトＩｇＫアイソタイプの定常ドメインである。配列番号１７、１８、１９および２０のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。付加されたシグナルペプチドなしのＬＣ１、ＬＣ２、ＬＣ３およびＬＣ４も示す（配列番号２５０、２５１、２５２および２５３）。一部の実施形態では、本開示の成熟化合物または抗体は、シグナルペプチドを含まない。
【表６−１】
2022502367.tif 000011
【表６−２】
2022502367.tif 000012
【表６−３】
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【表７−１】
2022502367.tif 000014
【表７−２】
2022502367.tif 000015
【０１６８】
本明細書に開示されるＶＨ領域のいずれかは、追加の付加された配列ありまたはなしで、本明細書に開示されるＶＬ領域のいずれかと組み合わせて、抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合する化合物を生成することができる。例えば、シグナルペプチドおよび定常領域配列は、表６および表７に示されるＶＨおよびＶＬ領域にそれぞれ付加され得、得られる重鎖および軽鎖は、任意の組合せで対形成して、抗体を形成することができる。表８は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合するＨＣ１〜４およびＬＣ１〜４の１６の可能な対形成を示す。表８における抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）抗体のそれぞれのトランスフェクションおよび発現を追跡することができる。
【表８−１】
2022502367.tif 000016
【表８−２】
2022502367.tif 000017
【０１６９】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗体または抗原結合性化合物は、Ｔｉｅ２を活性化する、ＶＥＧＦを阻害する、もしくはＶＥＧＦＲを阻害する、抗体または化合物と組み合わせて、多特異性化合物を形成することができる。
【０１７０】
表９は、ＩＶ型コラーゲン由来の生体模倣ペプチドの配列を提供する。配列番号１５２は、ＶＥＧＦＲのリン酸化／活性化／シグナル伝達を阻害し、Ｔｉｅ２のリン酸化／活性化／シグナル伝達を促進することができるインテグリンを標的にするＩＶ型コラーゲン由来の生体模倣ペプチドであるＡＸＴ−１０７である。配列番号１５３は、コンセンサス配列を提供し、ここで、Ｘは、任意の標準アミノ酸または非遺伝的にコードされるアミノ酸である。一部の実施形態では、７位のＸは、Ｍ、ＡまたはＧであり；９位のＸは、Ｆ、Ａ、ＹまたはＧであり；０位のＸは、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｄ−アラニン（ｄＡ）またはノルロイシン（Ｎｌｅ）であり；１１位のＸは、Ｆ、Ａ、Ｙ、Ｇまたは４−クロロフェニルアラニン（４−ＣｉＰｈｅ）であり；１２位および１８位のＸは、２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、Ｇ、Ｓ、Ａ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌまたはアリルグリシン（ＡｌｌｙｌＧｌｙ）から独立して選択される。
【表９】
2022502367.tif 000018
【０１７１】
表１０は、Ｔｉｅ２アゴニストとして作用し、Ｔｉｅ２シグナル伝達を活性化することができる合成Ａｎｇ１模倣ペプチドであるバスクロチドに関する配列を提供する。配列番号２２９は、Ｔｉｅ２受容体に結合する合成７アミノ酸長の配列を提供する。配列番号２３０は、Ｎ末端に付加されたシステイン残基を有する８アミノ酸長を提供し、ポリエチレングリコール主鎖への共有結合性の繋留を可能にして、ペプチドの四量体ポリエチレンオキシドクラスターバージョンを生じさせる。
【表１０】
2022502367.tif 000019
【０１７２】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な抗体または抗原結合性化合物は、ＶＥＧＦもしくはＶＥＧＦＲに特異的な抗体または化合物と組み合わせて、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲに結合する多特異性化合物を形成することができる。表１１、表１２、表１３、表１４、表１５および表１７は、ＶＥＧＦに対して特異的な化合物の配列の例を提供する。表１６は、ＶＥＧＦＲに結合する抗体の配列を提供する。
【０１７３】
表１１は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分と融合されたヒトＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分を含む組換えタンパク質であるアフリベルセプトに関する配列を提供する。配列番号２１は、アフリベルセプトの全アミノ酸配列である。配列番号２２は、ＩｇＧのＦｃ部分なしのヒトＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分を含有する短縮された配列である。
【表１１】
2022502367.tif 000020
【０１７４】
表１２は、ＶＥＧＦの受容体結合性部位に結合し、それによって、ＶＥＧＦとＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２の相互作用を妨げる、ＶＥＧＦのヒト化単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）阻害剤であるブロルシズマブ（配列番号２３）の配列を提供する。
【表１２】
2022502367.tif 000021
【０１７５】
表１３は、ＶＥＧＦに結合し、その活性を阻害するヒト化モノクローナル抗体断片（Ｆａｂ）であるラニビズマブに関する配列を提供する。配列番号２４は、ラニビズマブの重鎖配列である。配列番号２５は、ラニビズマブの軽鎖配列である。配列番号２６は、単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）のクローニングにおいて使用することができるラニビズマブの重鎖の短縮された配列である。配列番号２７は、単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）のクローニングにおいて使用することができるラニビズマブの軽鎖の短縮された配列である。配列番号２８は、配列番号２６、配列番号２７および配列番号３３（リンカーペプチド、下線）を含む単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）である。
【表１３】
2022502367.tif 000022
【０１７６】
表１４は、ＶＥＧＦに結合し、その活性を阻害するヒト化モノクローナル抗体であるベバシズマブに関する配列を提供する。配列番号２９は、ベバシズマブの重鎖配列である。配列番号３０は、ベバシズマブの軽鎖配列である。
【表１４−１】
2022502367.tif 000023
【表１４−２】
2022502367.tif 000024
【０１７７】
表１５は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分と融合されたＶＥＧＦ受容体１および２由来の細胞外ドメインを含む組換えタンパク質であるコンバセプトに関する配列を提供する。配列番号１５４は、コンバセプトの全アミノ酸配列である。配列番号１５５は、ＩｇＧのＦｃ部分なしのＶＥＧＦ受容体１および２由来の配列を含有する短縮された配列である。
【表１５−１】
2022502367.tif 000025
【表１５−２】
2022502367.tif 000026
【０１７８】
配列番号１６は、ＶＥＧＦＲ２の細胞外ドメインに結合し、ＶＥＧＦＲ２シグナル伝達を阻害するヒト化モノクローナル抗体であるラムシルマブに関する配列を提供する。配列番号１５６は、ラムシルマブの重鎖配列である。配列番号１５７は、ラムシルマブの軽鎖配列である。
【表１６】
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【０１７９】
表１７は、ＶＥＧＦに結合し、ＶＥＧＦＲシグナル伝達を阻害するＤＡＲＰｉｎおよびＤＡＲＰｉｎ由来アミノ酸配列を提供する。配列番号１５８〜１６８は、ＶＥＧＦに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピートを含む。配列番号１６９は、ＶＥＧＦに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピート、および血清アルブミンに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピートを含む。配列番号１７０は、ＶＥＧＦに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピート、肝細胞増殖因子に対する結合特異性を有する設計アンキリンリピート、および血清アルブミンに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピートを含む。配列番号１７１〜１７７は、ＶＥＧＦに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピートを含む。配列番号１７３は、アビシパルの配列を提供し、これは、ＶＥＧＦに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピートを含む。配列番号１７８〜１９０は、ＶＥＧＦに対する結合特異性を有する個々の設計アンキリンリピート配列モチーフを提供し、ここで、Ｘは、任意のアミノ酸を表す。配列番号１９１〜２１７は、ＶＥＧＦに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピートを含む。
【表１７−１】
2022502367.tif 000028
【表１７−２】
2022502367.tif 000029
【表１７−３】
2022502367.tif 000030
【表１７−４】
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【表１７−５】
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【表１７−６】
2022502367.tif 000033
【０１８０】
ＶＥＧＦに対して特異的な抗体または抗原結合性化合物は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に特異的な抗体または抗原結合性化合物と組み合わせて、ＶＥＧＦおよびＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合する二特異性化合物などの多特異性化合物を形成することができる。ＶＥＧＦに対して特異的な本開示における任意の化合物は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に特異的な本開示における任意の化合物と組み合わせることができる。ＶＥＧＦまたはＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的な本開示における化合物のいずれかは、多特異性化合物の発生のために必要により改変することができる。多特異性化合物の発生のために必要な改変の非限定的な例としては、アミノ酸残基の付加、アミノ酸残基の除去、アミノ酸残基の置き換え、およびリンカーの使用が挙げられる。一部の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５またはそれよりも多くの残基を、本明細書に開示される配列のＮ末端および／またはＣ末端に付加することができ、得られる配列は、多特異性構築物の発生において使用することができる。一部の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５またはそれよりも多くの残基を、本明細書に開示される配列のＮ末端および／またはＣ末端から除去することができ、残った配列は、多特異性構築物の発生において使用することができる。例えば、Ｎ末端および／またはＣ末端の残基は、配列番号１７３から除去することができ（例えば、配列番号２４４を生じさせるため）、トランケートされた配列は、多特異性構築物において使用することができる。一部の実施形態では、配列番号１３〜２０または２４６〜２５３のいずれかにおける配列は、改変することができる。例えば、１つまたは複数のＣ末端の残基は、除去することができる（例えば、Ｃ末端のリシンは、配列番号１３〜１６または２４６〜２４９のいずれかから除去することができ、残った残基（残基１〜４６７）は、多特異性構築物において使用することができる）。
【０１８１】
本明細書に記載の化合物は、化合物の異なるドメインの間にリンカーを含むことができる。リンカーは、化学結合、例えば、共有結合または非共有結合であり得る。本明細書に記載のリンカーは、フレキシブルリンカーまたはリジッドリンカーを含むことができる。
【０１８２】
本開示のリンカーは、化学リンカーを含むことができる。例えば、本開示の２つのアミノ酸配列は、化学リンカーによって一緒に連結され得る。本開示のそれぞれの化学リンカーは、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、ヘテロアルキレン、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレンまたはヘテロアリーレンであり得、これらのいずれかは、必要に応じて置換される。一部の実施形態では、本開示の化学リンカーは、エステル、エーテル、アミド、チオエーテルまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であり得る。一部の実施形態では、リンカーは、例えば、リンカーによって連結されたアミノ酸配列がヘッドトゥーテールよりもむしろヘッドトゥーヘッドであるように、化合物中のアミノ酸配列の順序を反転させることができる。このようなリンカーの非限定的な例としては、オキサリルジエステル、マロニルジエステル、スクシニルジエステル、グルタリルジエステル、アジピルジエステル、ピメチルジエステル、フマリルジエステル、マレイルジエステル、フタリルジエステル、イソフタリルジエステルおよびテレフタリルジエステルなどのジカルボン酸のジエステルが挙げられる。このようなリンカーの非限定的な例としては、オキサリルジアミド、マロニルジアミド、スクシニルジアミド、グルタリルジアミド、アジピルジアミド、ピメチルジアミド、フマリルジアミド、マレイルジアミド、フタリルジアミド、イソフタリルジアミドおよびテレフタリルジアミドなどのジカルボン酸のジアミドが挙げられる。このようなリンカーの非限定的な例としては、エチレンジアミン、１，２−ジ（メチルアミノ）エタン、１，３−ジアミノプロパン、１，３−ジ（メチルアミノ）プロパン、１，４−ジ（メチルアミノ）ブタン、１，５−ジ（メチルアミノ）ペンタン、１，６−ジ（メチルアミノ）ヘキサンおよびピピリジン（pipyrizine）などのジアミノリンカーのジアミドが挙げられる。
【０１８３】
必要に応じた置換基の非限定的な例としては、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、ニトロソ基、シアノ基、アジド基、スルホキシド基、スルホン基、スルホンアミド基、カルボキシル基、カルボキシアルデヒド基、イミン基、アルキル基、ハロアルキル基、アルケニル基、ハロアルケニル基、アルキニル基、ハロアルキニル基、アルコキシ基、アリール基、アリールオキシ基、アラルキル基、アリールアルコキシ基、ヘテロシクリル基、アシル基、アシルオキシ基、カルバメート基、アミド基、ウレイド基、エポキシ基およびエステル基が挙げられる。
【０１８４】
リンカーは、ペプチドであり得る。リンカーは、リンカー配列、例えば、リンカーペプチド配列を含むことができる。リンカー配列は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５１、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９または７０アミノ酸残基長であり得る。
【０１８５】
フレキシブルリンカーは、グリシンおよびセリン残基の区間を含有する配列を有することができる。小さなサイズのグリシンおよびセリン残基は、柔軟性を提供し、連結された機能的ドメインの可動性を可能にする。セリンまたはトレオニンの組込みは、水分子との水素結合を形成することによって、水溶液中でリンカーの安定性を維持することができ、それによって、リンカーおよびタンパク質部分の間の望ましくない相互作用を低減する。
【０１８６】
フレキシブルリンカーはまた、柔軟性を維持するためのトレオニンおよびアラニンなどの追加のアミノ酸、ならびに溶解度を改善するためのリシンおよびグルタミンなどの極性アミノ酸を含有することができる。
【０１８７】
フレキシブルリンカーは、配列番号４２（ＧＧＧＳ）のリピート、例えば、配列番号４２〜５５を含むことができる。フレキシブルリンカーは、配列番号３１（ＧＧＧＧＳ）のリピート、例えば、配列番号３１〜４１を含むことができる。配列番号５９（ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ）および配列番号６０（ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ）を含むいくつかの他の種類のフレキシブルリンカーを使用することもできる。配列番号６１（ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ）のリンカーを使用することもでき、ここで、大きな疎水性残基は、水溶液中での良好な溶解性を維持するために最小化される。フレキシブルリンカーの長さは、適切なフォールディングを可能にするため、または融合タンパク質の最適な生物活性を達成するために調節することができる。
【０１８８】
リジッドリンカーは、例えば、アルファヘリックス構造を有することができる。アルファヘリカルなリジッドリンカーは、タンパク質ドメインの間のスペーサーとして作用し得る。リジッドリンカーは、配列番号６２（ＥＡＡＡＫ）のリピート、例えば、配列番号６２〜６６を含むことができる。リジッドリンカーは、配列番号６７（ＥＡＡＡＲ）のリピート、例えば、配列番号６７〜７２を含むことができる。リジッドリンカーは、プロリンリッチ配列（ＸＰ）ｎを有することができ、ここで、Ｘは、アラニン、リシン、グルタミンまたは任意のアミノ酸を示す。非ヘリカルリンカー中のプロリンの存在は、剛性を増加させることができ、タンパク質ドメインの効果的な分離を可能にする。
【０１８９】
リンカーは、表１８に開示される配列のいずれかを含むことができ、これは、本明細書に開示される化合物の任意の部分を本明細書に開示される別の化合物の任意の部分に連結するために使用することができる。
【表１８−１】
2022502367.tif 000034
【表１８−２】
2022502367.tif 000035
【表１８−３】
2022502367.tif 000036
【０１９０】
表１１、表１２、表１３、表１４、表１５、表１６および表１７に記載のＶＥＧＦ結合性およびＶＥＧＦＲ結合性の化合物は、表２、表３、表６、表７および表８に記載のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）結合性化合物と組み合わせることができる。
【０１９１】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、アフリベルセプトまたはアフリベルセプト関連配列と組み合わせて、二特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、配列番号２２は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖に配列番号２２が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。配列番号２２は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖に配列番号２２が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。配列番号２２は、配列番号１４または配列番号２４７上に付加され得、配列番号２２は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖に配列番号２２が付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０１９２】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、ブロルシズマブまたはブロルシズマブ関連配列と組み合わせて、二特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、配列番号２３は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖に配列番号２３が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。配列番号２３は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖に配列番号２３が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。配列番号２３は、配列番号１４または配列番号２４７上に付加され得、配列番号２３は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖に配列番号２３が付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０１９３】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、ラニビズマブまたはラニビズマブ関連配列と組み合わせて、二特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、配列番号２８は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖に配列番号２８が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。配列番号２８は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖に配列番号２８が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。配列番号２８は、配列番号１４または配列番号２４７上に付加され得、配列番号２８は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖に配列番号２８が付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０１９４】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、ベバシズマブまたはベバシズマブ関連配列と組み合わせて、二特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、ベバシズマブの抗原結合性ｓｃＦｖは、表１３においてラニビズマブについて実証されるように、生じさせることができた。ベバシズマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖは、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖にベバシズマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖが付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。ベバシズマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖは、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖にベバシズマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖが付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。ベバシズマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖは、配列番号１４または配列番号２４７上に付加され得、ベバシズマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖは、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖にベバシズマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖが付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０１９５】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、アビシパルまたはアビシパル関連配列と組み合わせて、二特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、配列番号１７３または配列番号２４４は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４、配列番号２４７、配列番号１４の残基１〜４６７、または配列番号２４７の残基１〜４６７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖に配列番号１７３または配列番号２４４が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。配列番号１７３または配列番号２４４は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖に配列番号１７３または配列番号２４４が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。配列番号１７３または配列番号２４４は、配列番号１４、配列番号２４７、配列番号１４の残基１〜４６７、または配列番号２４７の残基１〜４６７上に付加され得、配列番号１７３または配列番号２４４は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖に配列番号１７３または配列番号２４４が付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０１９６】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、コンバセプトまたはコンバセプト関連配列と組み合わせて、二特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、配列番号１５５は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖に配列番号１５５が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。配列番号１５５は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖に配列番号１５５が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。配列番号１５５は、配列番号１４または配列番号２４７上に付加され得、配列番号１５５は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖に配列番号１５５が付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０１９７】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、ラムシルマブまたはラムシルマブ関連配列と組み合わせて、二特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、ラムシルマブの抗原結合性ｓｃＦｖは、表１３においてラニビズマブについて実証されるように、生じさせることができた。ラムシルマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖは、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖にラムシルマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖが付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。ラムシルマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖは、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖にラムシルマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖが付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。ラムシルマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖは、配列番号１４または配列番号２４７上に付加され得、ラムシルマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖは、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖にラムシルマブ由来抗原結合性ｓｃＦｖが付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０１９８】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、ＤＡＲＰｉｎ、ＤＡＲＰｉｎリピートまたはそれら由来の配列と組み合わせて、多特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、配列番号１５８〜２１７のいずれかを含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖に配列番号１５８〜２１７のいずれかを含むアミノ酸配列が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。配列番号１５８〜２１７のいずれかを含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖に配列番号１５８〜２１７のいずれかを含むアミノ酸配列が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。配列番号１５８〜２１７のいずれかを含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上および配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖に配列番号１５８〜２１７のいずれかを含むアミノ酸配列が付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０１９９】
表９および表１０に記載のＴｉｅ２活性化化合物は、表２、表３、表６、表７および表８に記載のＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）結合性化合物と組み合わせることができる。
【０２００】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、ＩＶ型コラーゲン由来の生体模倣ペプチド配列と組み合わせて、多特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖に配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖に配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上および配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖に配列番号１５２または配列番号１５３を含むアミノ酸配列が付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０２０１】
表８に記載の１６抗体のいずれかは、Ａｎｇ２模倣体またはそれら由来の配列と組み合わせて、多特異性抗体を生じ得る。非限定的な概略例を、図２、図３および図４に提示する。例えば、配列番号２２９〜２３０のいずれかを含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖に配列番号２２９〜２３０のいずれかを含むアミノ酸配列が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図２）。配列番号２２９〜２３０のいずれかを含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖に配列番号２２９〜２３０のいずれかを含むアミノ酸配列が付加された四価二特異性抗体を生じ得る（図３）。配列番号２２９〜２３０のいずれかを含むアミノ酸配列は、抗体ＨＣ２：ＬＣ１の配列番号１４または配列番号２４７上および配列番号１７または配列番号２５０上に付加されて、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖に配列番号２２９〜２３０のいずれかを含むアミノ酸配列が付加された六価二特異性抗体を生じ得る（図４）。
【０２０２】
表９および表１０に記載のＴｉｅ２活性化化合物は、表１１、表１２、表１３、表１４、表１５、表１６および表１７に記載のＶＥＧＦ結合性およびＶＥＧＦＲ結合性の化合物と組み合わせて、多特異性化合物を生じ得る。
【０２０３】
本開示における化合物のいずれか、例えば、上記に記載の多特異性融合構築物は、所望のタンパク質のフォールディングまたは生物活性を促進するために、必要により改変することができる。
ＣＤＲ
【０２０４】
本開示における配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことができる。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ法、Ｃｈｏｔｈｉａ法、ＩＭＧＴ法またはＰａｒａｔｏｍｅ法によって特定することができる。本明細書における配列のＣＤＲは、例えば、０〜９１残基長、０〜２５残基長、５〜１４残基長、約０残基長、約１残基長、約２残基長、約３残基長、約４残基長、約５残基長、約６残基長、約７残基長、約８残基長、約９残基長、約１０残基長、約１１残基長、約１２残基長、約１３残基長、約１４残基長、約１５残基長、約１６残基長、約１７残基長、約１８残基長、約１９残基長、約２０残基長、約２１残基長、約２２残基長、約２３残基長、約２４残基長または約２５残基長であり得る。
【０２０５】
ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対する結合特異性またはＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）をモジュレートする能力を有する本開示の化合物は、例えば、表１９、表２０、表２１、表２２、表２３または表２４におけるＣＤＲのいずれかを含むことができる。
【０２０６】
表１９は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的なＨＣＤＲ１配列の非限定的な例を提供する。
【表１９】
2022502367.tif 000037
【０２０７】
表２０は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的なＨＣＤＲ２配列の非限定的な例を提供する。
【表２０】
2022502367.tif 000038
【０２０８】
表２１は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的なＨＣＤＲ３配列の非限定的な例を提供する。
【表２１】
2022502367.tif 000039
【０２０９】
表２２は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的なＬＣＤＲ１配列の非限定的な例を提供する。
【表２２−１】
2022502367.tif 000040
【表２２−２】
2022502367.tif 000041
【０２１０】
表２３は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的なＬＣＤＲ２配列の非限定的な例を提供する。
【表２３】
2022502367.tif 000042
【０２１１】
表２４は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対して特異的なＬＣＤＲ３配列の非限定的な例を提供する。
【表２４】
2022502367.tif 000043
【０２１２】
ＶＥＧＦに対する結合特異性またはＶＥＧＦをモジュレートする能力を有する本開示の化合物は、表２５、表２６、表２７、表２８、表２９または表３０におけるＣＤＲのいずれかを含むことができる。
【０２１３】
表２５は、ＶＥＧＦに対して特異的なＨＣＤＲ１配列の非限定的な例を提供する。
【表２５】
2022502367.tif 000044
【０２１４】
表２６は、ＶＥＧＦに対して特異的なＨＣＤＲ２配列の非限定的な例を提供する。
【表２６】
2022502367.tif 000045
【０２１５】
表２７は、ＶＥＧＦに対して特異的なＨＣＤＲ３配列の非限定的な例を提供する。
【表２７】
2022502367.tif 000046
【０２１６】
表２８は、ＶＥＧＦに対して特異的なＬＣＤＲ１配列の非限定的な例を提供する。
【表２８】
2022502367.tif 000047
【０２１７】
表２９は、ＶＥＧＦに対して特異的なＬＣＤＲ２配列の非限定的な例を提供する。
【表２９−１】
2022502367.tif 000048
【表２９−２】
2022502367.tif 000049
【０２１８】
表３０は、ＶＥＧＦに対して特異的なＬＣＤＲ３配列の非限定的な例を提供する。
【表３０】
2022502367.tif 000050
【０２１９】
表３１は、ヒトＶＥＧＦ受容体１のＤ２ドメイン（配列番号１４７）およびヒトＶＥＧＦ受容体２のＤ３ドメイン（配列番号１４８）に相当するアフリベルセプト由来配列を提供する。
【表３１】
2022502367.tif 000051
【０２２０】
表３２は、アビシパル由来配列を提供する。配列番号２３３〜２３６は、アビシパル内のアンキリンリピートに相当する。配列番号２３７〜２４２は、ＶＥＧＦ結合性アンキリンリピートに対するコンセンサス配列を提供する。配列番号２３７において、Ｘ１は、Ｋ、ＴまたはＹであり；Ｘ２は、ＮまたはＭであり；Ｘ３は、ＴまたはＦであり；Ｘ４は、ＳまたはＡであり；Ｘ５は、ＨまたはＲであり；Ｘ６は、Ａ、Ｙ、ＨまたはＮであり；Ｘ７は、ＡまたはＴである。配列番号２３８において、Ｘ１は、Ｋ、Ｍ、Ｎ、ＲまたはＶであり；Ｘ２は、Ｙ、Ｈ、ＭまたはＶであり；Ｘ３は、Ｆ、Ｌ、ＭまたはＶであり；Ｘ４は、Ｒ、Ｈ、Ｖ、Ａ、ＫまたはＮであり；Ｘ５は、Ｆ、Ｄ、Ｈ、Ｔ、Ｙ、ＭまたはＫであり；Ｘ６は、Ａ、Ｈ、ＮまたはＹである。配列番号２３９において、Ｘ１は、Ｌ、ＳまたはＴであり；Ｘ２は、Ｇ、ＳまたはＣであり；Ｘ３は、ＳまたはＡであり；Ｘ４は、Ｑ、Ｓ、ＭまたはＮであり；Ｘ５は、Ｌ、ＭまたはＱであり；Ｘ６は、Ａ、Ｈ、Ｎ、ＹまたはＤである。配列番号２４０において、Ｘ１は、Ｋ、Ｓ、Ｉ、Ｎ、ＴまたはＶであり；Ｘ２は、Ｋ、Ｎ、Ｗ、Ａ、Ｈ、Ｍ、ＱまたはＳであり；Ｘ３は、Ｆ、Ｑ、Ｌ、ＨまたはＶであり；Ｘ４は、ＦまたはＴであり；Ｘ５は、ＱまたはＨであり；Ｘ６は、ＹまたはＳであり；Ｘ７は、Ｎ、Ｈ、ＹまたはＭであり；Ｘ８は、Ａ、Ｈ、ＮまたはＹである。配列番号２４１において、Ｘ１は、Ａ、Ｎ、Ｒ、Ｖ、Ｙ、Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｑ、ＳまたはＴであり；Ｘ２は、Ｓ、Ａ、Ｎ、Ｒ、Ｄ、Ｆ、Ｌ、Ｐ、ＴまたはＹであり；Ｘ３は、Ｔ、Ｖ、Ｓ、Ａ、ＬまたはＦであり；Ｘ４は、Ｗ、ＦまたはＨであり；Ｘ５は、Ｐ、Ｉ、Ａ、Ｌ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＹであり；Ｘ６は、Ｗ、Ｆ、Ｉ、Ｌ、ＴまたはＶであり；Ｘ７は、ＬまたはＰであり；Ｘ８は、Ａ、Ｈ、ＮまたはＹである。配列番号２４２において、Ｘ１は、Ｈ、Ｑ、Ａ、Ｋ、Ｒ、Ｄ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、ＶまたはＹであり；Ｘ２は、Ｙ、ＦまたはＨであり；Ｘ３は、Ｑ、ＦまたはＴであり；Ｘ４は、Ｗ、Ｍ、Ｇ、Ｈ、ＮまたはＴであり；Ｘ５は、Ｔ、Ａ、Ｍ、ＬまたはＶであり；Ｘ６は、Ｉ、Ｌ、Ｖ、ＤまたはＴであり；Ｘ７は、Ａ、Ｈ、ＮまたはＹである。配列番号２４４は、ＶＥＧＦに対する結合特異性を有する設計アンキリンリピートを含むアビシパルに由来するトランケートされた配列を提供する。
【表３２】
2022502367.tif 000052
相同性
【０２２１】
本明細書における化合物の配列は、本明細書において提供されるアミノ酸配列に対して、少なくとも約７０％の相同性、少なくとも約７１％の相同性、少なくとも約７２％の相同性、少なくとも約７３％の相同性、少なくとも約７４％の相同性、少なくとも約７５％の相同性、少なくとも約７６％の相同性、少なくとも約７７％の相同性、少なくとも約７８％の相同性、少なくとも約７９％の相同性、少なくとも約８０％の相同性、少なくとも約８１％の相同性、少なくとも約８２％の相同性、少なくとも約８３％の相同性、少なくとも約８４％の相同性、少なくとも約８５％の相同性、少なくとも約８６％の相同性、少なくとも約８７％の相同性、少なくとも約８８％の相同性、少なくとも約８９％の相同性、少なくとも約９０％の相同性、少なくとも約９１％の相同性、少なくとも約９２％の相同性、少なくとも約９３％の相同性、少なくとも約９４％の相同性、少なくとも約９５％の相同性、少なくとも約９６％の相同性、少なくとも約９７％の相同性、少なくとも約９８％の相同性、少なくとも約９９％の相同性、少なくとも約９９．１％の相同性、少なくとも約９９．２％の相同性、少なくとも約９９．３％の相同性、少なくとも約９９．４％の相同性、少なくとも約９９．５％の相同性、少なくとも約９９．６％の相同性、少なくとも約９９．７％の相同性、少なくとも約９９．８％の相同性、少なくとも約９９．９％の相同性、少なくとも約９９．９１％の相同性、少なくとも約９９．９２％の相同性、少なくとも約９９．９３％の相同性、少なくとも約９９．９４％の相同性、少なくとも約９９．９５％の相同性、少なくとも約９９．９６％の相同性、少なくとも約９９．９７％の相同性、少なくとも約９９．９８％の相同性、または少なくとも約９９．９９％の相同性を有し得る。
【０２２２】
ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ、ＭＡＦＦＴ、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｏｍｅｇａ、ＡｌｉｇｎＭｅ、Ｐｒａｌｉｎｅまたは別の適切な方法もしくはアルゴリズムなどの、さまざまな方法およびソフトウェアプログラムを使用して、２つまたはそれよりも多くの配列の間の相同性を決定することができる。
医薬組成物
【０２２３】
本開示の医薬組成物は、本明細書に記載の任意の医薬化合物と、他の化学成分、例えば、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤および／または賦形剤との組合せであり得る。医薬組成物は、生物体への化合物の投与を容易にする。
【０２２４】
投与のための医薬製剤は、水溶性形態の活性化合物の水溶液を含むことができる。活性化合物の懸濁液は、油性注射懸濁液として調製することができる。適切な脂溶性の溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルもしくはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランなどの懸濁液の粘度を増加させる物質を含有することができる。懸濁液はまた、高度に濃縮された溶液の調製を可能にするために、化合物の溶解度を増加させる適切な安定剤または薬剤を含有することもできる。活性成分は、使用前の、適切なビヒクル、例えば、無菌のパイロジェンフリーの水による構成のための粉末形態であり得る。
【０２２５】
本明細書において提供される処置の方法または使用の実行において、治療有効量の本明細書に記載の化合物は、医薬組成物中で、処置される疾患または状態を有する対象に投与される。一部の実施形態では、対象は、ヒトなどの哺乳動物である。治療有効量は、疾患の重症度、対象の年齢および関連する健康、使用される化合物の効力および他の因子に応じて、広く変わり得る。
【０２２６】
医薬組成物は、薬学的に使用することができる調製物への活性化合物の処理を容易にする賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の生理学的に許容される担体を使用して製剤化することができる。製剤は、選択された投与の経路に応じて、改変することができる。本明細書に記載の化合物を含む医薬組成物は、例えば、混合、溶解、乳化、カプセル化、封入または圧縮プロセスによって、製造することができる。
【０２２７】
医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤、および遊離塩基または薬学的に許容される塩の形態として本明細書に記載の化合物を含むことができる。医薬組成物は、可溶化剤、安定剤、等張増強剤、緩衝剤および保存剤を含有することができる。
【０２２８】
本明細書に記載の化合物を含む組成物の調製のための方法は、化合物を１つもしくは複数の不活性な薬学的に許容される賦形剤または担体とともに製剤化して、固体、半固体または液体の組成物を形成することを含む。固体組成物としては、例えば、散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤およびカシェ剤が挙げられる。液体組成物としては、例えば、化合物が溶解された溶液剤、化合物を含むエマルジョン、または本明細書に開示される化合物を含むリポソーム、ミセルもしくはナノ粒子を含有する溶液剤が挙げられる。半固体組成物としては、例えば、ゲル、懸濁剤およびクリームが挙げられる。組成物は、液体の溶液剤もしくは懸濁剤、使用前には液体中の溶液剤または懸濁剤のための適切な固体形態、またはエマルジョンとしてであり得る。これらの組成物は、少量の非毒性の補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤および他の薬学的に許容される添加物を含有することもできる。
【０２２９】
本開示における使用のために適切な剤形の非限定的な例としては、液体、粉末、ゲル、ナノ懸濁液、ナノ粒子、マイクロゲル、水性または油性懸濁液、エマルジョン、およびそれらの任意の組合せが挙げられる。
【０２３０】
本開示における使用のために適切な薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例としては、結合剤、崩壊剤、抗付着剤、帯電防止剤、界面活性剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、可塑剤、保存剤、懸濁化剤、乳化剤、抗菌剤、球形化剤、およびそれらの任意の組合せが挙げられる。
【０２３１】
本開示の組成物は、例えば、即時放出形態または放出制御製剤であり得る。即時放出製剤は、化合物が急速に作用するのを可能にするように製剤化され得る。即時放出製剤の非限定的な例としては、直ぐに溶解可能な製剤が挙げられる。放出制御製剤は、活性剤の放出速度および放出プロファイルが、生理学的および時間治療学的要件に一致し得るように適合されているか、またはプログラムされた速度で活性剤の放出をもたらすように製剤化された、医薬製剤であり得る。放出制御製剤の非限定的な例としては、顆粒、遅延放出顆粒、ヒドロゲル（例えば、合成または天然起源の）、他のゲル化剤（例えば、ゲル形成食物繊維）、マトリックスベースの製剤（例えば、ポリマー材料に分散された少なくとも１つの活性成分を有するポリマー材料を含む製剤）、マトリックス内の顆粒、ポリマー混合物、および顆粒塊が挙げられる。
【０２３２】
一部では、放出制御製剤は、遅延放出形態である。遅延放出形態は、長期間、化合物の作用を遅延させるように製剤化され得る。遅延放出形態は、例えば、約４時間、約８時間、約１２時間、約１６時間または約２４時間、１つまたは複数の化合物の有効用量の放出を遅延させるように製剤化され得る。
【０２３３】
放出制御製剤は、持続放出形態であり得る。持続放出形態は、例えば、化合物の作用を長期間にわたって持続するように製剤化され得る。持続放出形態は、約４時間、約８時間、約１２時間、約１６時間または約２４時間にわたって、本明細書に記載の任意の化合物の有効用量を提供する（例えば、生理学的に有効な血液プロファイルを提供する）ように製剤化され得る。
【０２３４】
開示される組成物は、必要に応じて、薬学的に許容される保存剤を含むことができる。
【０２３５】
薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例は、例えば、Remington: TheScience and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack PublishingCompany, 1995)；Hoover, John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, MackPublishing Co., Easton, Pennsylvania 1975；Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds.,Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980；およびPharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams &Wilkins 1999)に見ることができ、これらのそれぞれは、その全体が参照によって組み込まれる。
【０２３６】
本明細書に記載の化合物は、好都合には、１つまたは複数の薬学的に許容される担体で構成される医薬組成物に製剤化することができる。例えば、典型的な担体および医薬組成物を調製する従来の方法を開示する、その全体が参照によって組み込まれる、Remington’s Pharmaceutical Sciences, latest edition, by E.W. MartinMack Pub. Co., Easton, PAを参照のこと。このような担体は、滅菌水、生理食塩水および生理学的ｐＨの緩衝液などの溶液を含む、ヒトおよび非ヒトへの組成物の投与のための担体であり得る。医薬組成物は、抗菌剤、抗炎症剤および麻酔剤などの１つまたは複数の追加の活性成分を含むこともできる。
【０２３７】
薬学的に許容される担体の非限定的な例としては、生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液が挙げられる。一部の実施形態では、溶液のｐＨは、約５〜約８であり得、約７〜約７．５であり得る。さらなる担体としては、化合物を含有する固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックスなどの持続放出調製物が挙げられる。マトリックスは、成形物品、例えば、フィルム、リポソーム、微粒子またはマイクロカプセルの形態であり得る。
【０２３８】
局所投与のために適切な組成物を使用することができる。一部の実施形態では、本開示の組成物は、溶液中、懸濁液中、またはその両方中に活性剤を含む液体を含み得る。液体組成物は、ゲルを含み得る。液体組成物は、例えば、水性であり得る。組成物は、ｉｎ  ｓｉｔｕでゲル化可能な水性組成物である。繰り返しとして、組成物は、ｉｎ  ｓｉｔｕでゲル化可能な水溶液である。このような組成物は、目と、または目の外側の涙液との接触の際にゲル化を促進するのに有効な濃度でゲル化剤を含むことができる。水性組成物は、眼科的に適合性のｐＨおよびオスモル濃度を有し得る。組成物は、結膜下投与のための活性剤を含む眼科用デポー製剤を含み得る。活性剤を含む微粒子は、生体適合性の薬学的に許容されるポリマーまたは脂質カプセル化剤に包埋され得る。デポー製剤は、長期間にわたって、すべてまたは実質的にすべての活性物質を放出するように適合させることができる。ポリマーまたは脂質マトリックスは、存在する場合、すべてまたは実質的にすべての活性剤の放出後に投与部位から輸送されるのに十分なほど分解されるように適合させることができる。デポー製剤は、薬学的に許容されるポリマー、および溶解または分散した活性剤を含む液体製剤であり得る。注射の際に、ポリマーは、例えば、ゲル化または沈殿によって、注射部位でデポーを形成する。組成物は、物品が活性剤を放出する目および瞼の間または結膜嚢内などの目の適切な位置に挿入することができる固体物品を含み得る。このような様式での目への移植のために適切な固体物品は、ポリマーを含むことができ、生体内分解性または生体内非分解性であり得る。
【０２３９】
医薬製剤は、本明細書に開示される薬剤に加えて、追加の担体、ならびに増粘剤、希釈剤、緩衝剤、保存剤および表面活性剤を含むことができる。
【０２４０】
開示される組成物のｐＨは、約３〜約１２の範囲であり得る。組成物のｐＨは、例えば、約３〜約４、約４〜約５、約５〜約６、約６〜約７、約７〜約８、約８〜約９、約９〜約１０、約１０〜約１１または約１１〜約１２のｐＨ単位であり得る。組成物のｐＨは、例えば、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１または約１２のｐＨ単位であり得る。組成物のｐＨは、例えば、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１または少なくとも１２のｐＨ単位であり得る。組成物のｐＨは、例えば、最大で３、最大で４、最大で５、最大で６、最大で７、最大で８、最大で９、最大で１０、最大で１１または最大で１２のｐＨ単位であり得る。本明細書に開示される医薬製剤は、約５．５〜約６．５のｐＨを有し得る。例えば、本開示の製剤は、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４または約６．５のｐＨを有し得る。一部の実施形態では、ｐＨは、６．２±０．３、６．２±０．２、６．２±０．１、約６．２または６．２である。
【０２４１】
ｐＨが製剤者によって所望される範囲外である場合、ｐＨは、十分に薬学的に許容される酸および塩基を使用することによって、調整することができる。
【０２４２】
意図される投与様式に応じて、医薬組成物は、例えば、正確な投薬量の単回投与のために適切な単位剤形の、例えば、錠剤、坐剤、丸剤、カプセル剤、散剤、液体剤、懸濁剤、ローション、クリームまたはゲルなどの、固体、半固体または液体剤形の形態であり得る。
【０２４３】
固体組成物のために、非毒性固体担体としては、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロースおよび炭酸マグネシウムが挙げられる。
【０２４４】
本開示の組成物との組合せのために適切な薬学的な活性剤の非限定的な例としては、抗感染症剤、すなわち、アミノグリコシド、抗ウイルス剤、抗菌剤、抗コリン作用剤／抗けいれん剤、抗糖尿病剤、抗高血圧剤、抗新生物剤、心血管系薬剤、中枢神経系薬剤、凝固修飾剤、ホルモン、免疫学的薬剤、免疫抑制剤および眼科用調製物が挙げられる。
【０２４５】
一部の実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物は、薬学的に許容される担体および／または賦形剤、例えば、生理食塩水、リン酸緩衝食塩水、リン酸塩およびアミノ酸、ポリマー、ポリオール、糖、緩衝剤、保存剤および他のタンパク質と混合された、治療有効量の化合物を含む。例示的な薬剤としては、オクチルフェノキシポリエトキシエタノール化合物、ポリエチレングリコールモノステアレート化合物、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、スクロース、フルクトース、デキストロース、マルトース、グルコース、マンニトール、デキストラン、ソルビトール、イノシトール、ガラクチトール、キシリトール、ラクトース、トレハロース、ウシまたはヒト血清アルブミン、クエン酸塩、酢酸塩、リンゲル液およびハンクス液、システイン、アルギニン、カルニチン、アラニン、グリシン、リシン、バリン、ロイシン、ポリビニルピロリドン、ポリエチレンならびにグリコールが挙げられる。
【０２４６】
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤は、（ｉ）本明細書に開示される化合物または抗体；（ｉｉ）緩衝剤；（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤；（ｉｖ）等張化剤；および（ｖ）安定剤を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤は、安定な液体医薬製剤である。
【０２４７】
一部の実施形態では、本明細書に開示される眼科用製剤は、（ｉ）本明細書に開示される化合物または抗体；（ｉｉ）緩衝剤；（ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤；（ｉｖ）等張化剤；および（ｖ）安定剤を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に開示される眼科用製剤は、安定な液体医薬製剤または安定な液体眼科用製剤である。
【０２４８】
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤または眼科用製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体もしくは化合物、約７．５ｍｇ／ｍＬ〜約１４０ｍｇ／ｍＬの抗体もしくは化合物、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１３０ｍｇ／ｍＬの抗体もしくは化合物、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの抗体もしくは化合物、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬの抗体もしくは化合物、または約３０ｍｇ／ｍＬ〜約７０ｍｇ／ｍＬの抗体もしくは化合物を含み得る液体製剤である。例えば、本開示の製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬもしくは約１５０ｍｇ／ｍＬの、本明細書に記載の化合物、抗体またはそれらの抗原結合性断片を含むことができる。
【０２４９】
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤または眼科用製剤は、緩衝剤を含むことができる。一部の実施形態では、緩衝剤は、安定なｐＨを維持し、本明細書に開示される化合物または抗体を安定化するのを助ける働きをする。一部の実施形態では、緩衝剤または緩衝剤系は、ｐＨ５．５〜７．４の範囲と完全または部分的に重複する緩衝範囲を有する少なくとも１つの緩衝剤を含む。一部の実施形態では、緩衝剤は、約６．２±０．５のｐＫａを有する。一部の実施形態では、緩衝剤は、リン酸ナトリウム緩衝剤を含む。一部の実施形態では、リン酸ナトリウムは、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、約６ｍＭ〜約１４ｍＭ、約７ｍＭ〜約１３ｍＭ、約８ｍＭ〜約１２ｍＭ、約９ｍＭ〜約１１ｍＭまたは約１０ｍＭの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、緩衝剤系は、６．２±０．３または６．１±０．３のｐＨで、１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含む。
【０２５０】
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤または眼科用製剤は、非イオン性界面活性剤を含むことができる。一部の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン部分を含有する非イオン性ポリマーである。一部の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポロクサマー１８８またはポリエチレングリコール３３５０のいずれか１つまたは複数である。一部の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０である。一部の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート８０である。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤または眼科用製剤は、約０．０１％〜約１％の非イオン性界面活性剤を含有することができる。例えば、本開示の製剤は、約０．００８５％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、約０．１％、約０．１１％、約０．１２％、約０．１３％、約０．１４％、約０．１５％、約０．１６％、約０．１７％、約０．１８％、約０．１９％、約０．２０％、約０．２１％、約０．２２％、約０．２３％、約０．２４％、約０．２５％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約１．１％、約１．１５％、約１．２％、約１．２５％、約１．３％、約１．３５％、約１．４％、約１．４５％、約１．５％、約１．５５％、約１．６％、約１．６５％、約１．７％、約１．７５％、約１．８％、約１．８５％、約１．９％、約１．９５％もしくは約２％の、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０またはポロクサマー１８８を含むことができる。
【０２５１】
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤または眼科用製剤は、等張化剤を含むことができる。一部の実施形態では、等張化剤は、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムである。一部の実施形態では、等張化剤は、塩化ナトリウムである。一部の実施形態では、塩化ナトリウムは、約５ｍＭ〜約１００ｍＭ、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約４０ｍＭの濃度で存在する。
【０２５２】
一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤または眼科用製剤は、安定剤を含むことができる。一部の実施形態では、安定剤は、熱ストレス条件下で、本明細書に開示される抗体または化合物を安定化することができる熱安定剤である。一部の実施形態では、安定剤は、化合物または抗体および熱安定剤を含有する溶液が、約２８日間まで約４５℃で保たれる場合に、未変性の立体構造で約９３％を超える化合物または抗体を維持する。一部の実施形態では、安定剤は、化合物または抗体の凝集を防止し、化合物または抗体の４％未満が、化合物または抗体および熱安定剤を含有する溶液が、約２８日間まで約４５℃で保たれる場合に、凝集する。一部の実施形態では、安定剤は、化合物または抗体および熱安定剤を含有する溶液が、約２８日間まで約３７℃で保たれる場合に、未変性の立体構造で約９６％を超える化合物または抗体を維持する。一部の実施形態では、安定剤は、化合物または抗体の凝集を防止し、化合物または抗体の約２％未満が、化合物または抗体および熱安定剤を含有する溶液が、約２８日間まで約３７℃で保たれる場合に、凝集する。
【０２５３】
一部の実施形態では、熱安定剤は、糖または糖アルコール、例えば、スクロース、ソルビトール、グリセロール、トレハロースもしくはマンニトール、またはそれらの任意の組合せである。一部の実施形態では、安定剤は、糖である。一部の実施形態では、糖は、スクロース、マンニトールまたはトレハロースである。一部の実施形態では、安定剤は、スクロースである。一部の実施形態では、本明細書に開示される医薬製剤または眼科用製剤は、約１％〜約２０％の糖もしくは糖アルコール、約２％〜約１８％の糖もしくは糖アルコール、約３％〜約１５％の糖もしくは糖アルコール、約４％〜約１０％の糖もしくは糖アルコールまたは約５％の糖もしくは糖アルコールを含むことができる。例えば、本開示の医薬製剤または眼科用製剤は、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％または約１４％の糖または糖アルコール（例えば、スクロース、トレハロースまたはマンニトール）を含むことができる。一部の実施形態では、安定剤は、約１％ｗ／ｖ〜約２０％ｗ／ｖの濃度である。一部の実施形態では、安定剤は、約１％ｗ／ｖ〜約１５％ｗ／ｖまたは約１％ｗ／ｖ〜約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。一部の実施形態では、安定剤は、５％ｗ／ｖまたは約５％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。一部の実施形態では、安定剤は、７．５％ｗ／ｖまたは約７．５％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。一部の実施形態では、安定剤は、１０％ｗ／ｖまたは約１０％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。一部の実施形態では、安定剤は、１２．５％ｗ／ｖまたは約１２．５％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。一部の実施形態では、安定剤は、１５％ｗ／ｖまたは約１５％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。一部の実施形態では、安定剤は、２０％ｗ／ｖまたは約２０％ｗ／ｖの濃度のスクロースである。
医薬組成物の投与
【０２５４】
本明細書に開示される医薬組成物は、治療有効量で、例えば、経口、局所、非経口、静脈内注射、静脈内注入、皮下注射、皮下注入、筋肉内注射、筋肉内注入、皮内注射、皮内注入、腹腔内注射、腹腔内注入、大脳内注射、大脳内注入、くも膜下注射、くも膜下注入、眼内注射、脊髄内注射、胸骨内注射、眼内投与、内皮投与、局所的投与、経鼻投与、肺内投与、直腸投与、動脈内投与、髄腔内投与、吸入、病巣内投与、皮内投与、硬膜外投与、上皮もしくは粘膜の内層を通した吸収（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜）、嚢内投与、被膜下投与、心臓内投与、経気管内投与、表皮下投与、くも膜下投与、被膜下投与、脊髄内投与または胸骨内投与を含む、さまざまな形態および経路によって投与することができる。
【０２５５】
医薬組成物は、局所的方法で、例えば、化合物の器官への直接注射を介して、必要に応じてデポー製剤もしくは持続放出製剤またはインプラントで投与することができる。医薬組成物は、急速放出製剤の形態、延長放出製剤の形態、または中間放出製剤の形態で提供され得る。急速放出形態は、即時放出を提供することができる。延長放出製剤は、制御放出または持続遅延放出を提供することができる。
【０２５６】
一部の実施形態では、ポンプを、医薬組成物の送達のために使用することができる。一部の実施形態では、ペン送達デバイスを、例えば、本開示の組成物の皮下送達のために、使用することができる。このようなペン送達デバイスは、再利用可能または使い捨てであり得る。再利用可能なペン送達デバイスは、本明細書に開示される医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを使用することができる。カートリッジ内のすべての医薬組成物が投与され、カートリッジが空になると、空のカートリッジは、容易に廃棄することができ、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。ペン送達デバイスは、次いで、再使用することができる。使い捨てのペンは、交換可能なカートリッジを有さない。むしろ、使い捨てのペン送達デバイスは、デバイス内のリザーバーに保持された医薬組成物で事前に充填されている。リザーバーから医薬組成物が空になると、デバイス全体が廃棄される。
【０２５７】
本明細書に開示される医薬組成物は、例えば、局所、経口、全身、硝子体内、前房内、キャニエル内（intracanieral）、結膜下、テノン嚢下、眼球後方、眼内、基質内、角膜内、後方隣接細胞、眼周囲、網膜下または脈絡膜上投与を含む、任意の適切な形態または経路を介して、目に投与することができる。送達方法は、眼細胞への組成物の直接送達のための侵襲的方法を含み得る。一部の実施形態では、抗体または化合物を含む液体医薬組成物は、網膜下注射、硝子体内注射（例えば、前部、中央部または後部硝子体注射）、硝子体内インプラント、眼窩内注射、眼窩内投与、皮下注射、前房内注射、キャニエル内注射、結膜下注射、結膜下インプラント、耳側角膜縁を介した前房への注射、基質内注射、角膜内注射、水性体液注射、テノン嚢下注射またはテノン嚢下インプラントを介して送達することができる。組成物は、前房、後眼房、硝子体腔（硝子体内）、適切な網膜および／または網膜下の空間を含む目の任意の部分に製剤を注射することによって、投与することができる。
【０２５８】
本明細書に開示される医薬組成物は、非侵襲的方法を介して送達することができる。製剤を投与する非侵襲的様式の例としては、無針注射デバイスを使用すること、および局所投与、例えば、角膜への点眼剤が挙げられ得る。複数回投与経路は、医薬組成物の効率的な送達のために用いることができる。一部の実施形態では、組成物は、抗体送達の効率を増加させるために、複数回投与経路、例えば、網膜下および硝子体内を介して送達される。一部の実施形態では、網膜下および／または硝子体内注射は、硝子体切除術に先行する。
【０２５９】
一部の実施形態では、１０ｍｇ／ｍＬ〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗体または化合物を含む液体製剤は、シリンジに事前に充填され、最大で約５００μＬの体積で硝子体内に投与される。一部の実施形態では、１０ｍｇ／ｍＬ〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗体または化合物を含む液体製剤は、シリンジに事前に充填され、最大で約１００μＬの体積で硝子体内に投与される。一部の実施形態では、１０ｍｇ／ｍＬ〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗体または化合物を含む液体製剤は、シリンジに事前に充填され、約５０μＬの体積で硝子体内に投与される。
【０２６０】
本明細書に開示される医薬組成物は、例えば、血管内皮細胞などの内皮細胞、網膜色素上皮（ＲＰＥ）などの網膜の細胞、角膜細胞、線維芽細胞、アストロサイト、グリア細胞、周皮細胞、虹彩上皮細胞、神経起源の細胞、毛様体上皮細胞、ミュラー細胞、外直筋の細胞などの目を取り囲み、目に付着した筋細胞、眼窩脂肪細胞、強膜および上強膜の細胞、線維柱帯網の細胞、または結合組織細胞を含む、任意の適切な眼細胞を標的にすることができる。
投薬
【０２６１】
本明細書に記載の化合物、抗体または治療剤は、疾患または状態の発生の前、間、または後に投与することができ、化合物、抗体または治療剤を含有する組成物を投与するタイミングは、変えることができる。例えば、組成物は、予防薬として使用することができ、疾患または状態の発生の可能性を低下させるために、状態または疾患になる傾向を有する対象に継続的に投与することができる。組成物は、疾患または状態をすでに患っている対象に、疾患または状態の症状を治癒もしくは少なくとも部分的に抑止するのに十分な量、あるいは状態を治癒する、治す、改善するもしくは軽減するのに十分な量で、投与することができる。組成物は、症状の発症の間、または症状の発症後可能な限り速やかに、対象に投与することができる。化合物、抗体または治療剤の投与は、症状の発症の最初の４８時間以内、症状の発症の最初の２４時間以内、症状の発症の最初の６時間以内、または症状の発症の３時間以内に開始することができる。最初の投与は、任意の実用的な経路を介して、例えば、本明細書に記載の任意の製剤を使用する本明細書に記載の任意の経路によってであり得る。化合物、抗体または治療剤は、疾患または状態の発症が検出されたか、または疑われた後、実行可能な限り速やかに、例えば、約１か月〜約３か月などの疾患の処置のために必要な期間の間、投与することができる。処置の長さは、それぞれの対象について変えることができる。この使用のために有効な量は、疾患または状態の重症度および経過、以前の療法、対象の健康状態、体重、および薬物への応答、ならびに処置する医師の判断に基づき、変えることができる。臨床症状の改善は、例えば、間接検眼法、眼底撮影法、フルオレセイン血管造影法、網膜電図検査、外眼部検査、細隙灯生体顕微鏡検査、圧平眼圧測定、角膜厚測定、光干渉断層撮影、または自動収縮法によって監視することができる。
【０２６２】
本明細書に記載の医薬組成物は、正確な投薬量の単回投与のために適切な単位剤形であり得る。単位剤形では、製剤は、適した量の１つもしくは複数の化合物、抗体または治療剤を含有する単位用量に分割することができる。単位投薬量は、別々の量の製剤を含有するパッケージの形態であり得る。非限定的な例は、包装された注射剤、バイアルおよびアンプルである。本明細書に開示される水性懸濁組成物は、単回用量の再び密閉できない容器に包装され得る。複数回用量の再び密閉可能な容器は、例えば、保存剤と組み合わせて、または保存剤なしで、使用することができる。本明細書に開示される注射用製剤は、単位剤形で、例えば、アンプル、または保存剤を有する複数回用量の容器で提示することができる。
【０２６３】
本明細書に開示される複数の化合物、抗体または治療剤は、任意の順序または同時に投与することができる。同時の場合、複数の化合物、抗体または治療剤は、単一の一元化形態で、または例えば、複数の別々の注射剤または注入剤としての複数の形態で提供され得る。化合物、抗体または治療剤は、一緒にまたは別々に、単一のパッケージまたは複数のパッケージに包装することができる。化合物、抗体もしくは治療剤の１つまたはすべてを、複数回用量で与えることができる。同時ではない場合、複数回用量の間のタイミングは、約１か月程度まで変えることができる。
【０２６４】
眼内注射は、送達の効率を改善し、および／または周囲組織への損傷を最小化もしくは回避するために、任意の時間間隔の間、行うことができる。２回またはそれよりも多くの眼内注射の間の時間間隔は、例えば、約１分〜約６０分、約１分〜約５分、約５分〜約１０分、約１０分〜約１５分、約１５分〜約２０分、約２０分〜約２５分、約２５分〜約３０分、約３０分〜約３５分、約３５分〜約４０分、約４０分〜約４５分、約４５分〜約５０分、約５０分〜約５５分または約５５分〜約６０分であり得る。
【０２６５】
眼内注射は、任意の速度で行うことができる。眼内注射の速度は、例えば、約１μＬ／秒〜約５００μＬ／秒、約１μＬ／秒〜約１０μＬ／秒、約１０μＬ／秒〜約２０μＬ／秒、約２０μＬ／秒〜約３０μＬ／秒、約３０μＬ／秒〜約４０μＬ／秒、約４０μＬ／秒〜約５０μＬ／秒、約５０μＬ／秒〜約６０μＬ／秒、約６０μＬ／秒〜約７０μＬ／秒、約７０μＬ／秒〜約８０μＬ／秒、約８０μＬ／秒〜約９０μＬ／秒、約９０μＬ／秒〜約１００μＬ／秒、約１００μＬ／秒〜約１１０μＬ／秒、約１１０μＬ／秒〜約１２０μＬ／秒、約１２０μＬ／秒〜約１３０μＬ／秒、約１３０μＬ／秒〜約１４０μＬ／秒、約１４０μＬ／秒〜約１５０μＬ／秒、約１５０μＬ／秒〜約１６０μＬ／秒、約１６０μＬ／秒〜約１７０μＬ／秒、約１７０μＬ／秒〜約１８０μＬ／秒、約１８０μＬ／秒〜約１９０μＬ／秒、約１９０μＬ／秒〜約２００μＬ／秒、約２００μＬ／秒〜約３００μＬ／秒、約３００μＬ／秒〜約４００μＬ／秒または約４００μＬ／秒〜約５００μＬ／秒であり得る。
【０２６６】
本明細書に開示される化合物、抗体または治療剤は、対象の質量に基づいて、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ〜約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ〜約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇまたは約３ｍｇ／ｋｇ〜約７ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与することができる。
【０２６７】
本明細書に記載の化合物、抗体または治療剤は、所望の任意の間隔で投与することができる。化合物、抗体または治療剤の投与は、化合物、抗体もしくは治療剤を投与する人、または化合物、抗体もしくは治療剤を受ける対象のいずれかに合わせるために、規則的または不規則な投薬スケジュールを有し得る。例えば、化合物、抗体または治療剤は、１日に２回、１日に１回、１週間に５回、１週間に４回、１週間に３回、１週間に２回、１週間に１回、２週間毎に１回、３週間毎に１回、４週間毎に１回、１か月に１回、５週間毎に１回、６週間毎に１回、８週間毎に１回、２か月毎に１回、１２週間毎に１回、３か月毎に１回、４か月毎に１回、６か月毎に１回、１年に１回、またはそれよりも低い頻度で投与することができる。一部の実施形態では、投与は、隔週である。
【０２６８】
投与される量は、それぞれの用量において同じ量であり得るか、または投薬量は、用量間で変えることができる。例えば、第１の量は、午前中に投与することができ、第２の量は、夜に投与することができる。
【０２６９】
本明細書に記載の化合物、抗体または治療剤は、必要または好都合な任意の量で投与することができる。例えば、本明細書に記載の化合物は、任意の投与の経路によって、対象に対して用量あたり、約０．０５ｍｇ〜約３００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約３００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約２００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０．０５ｍｇ〜約１．５ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１．５ｍｇ、約０．０５ｍｇ〜約１ｍｇ、約１ｍｇ〜約１．５ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約６ｍｇ、約１ｍｇ〜約４ｍｇ、約２ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約３０ｍｇ、約３０ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５０ｍｇ〜約７０ｍｇ、約７０ｍｇ〜約１００ｍｇ、または約０．１ｍｇ〜約１ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．０６ｍｇ、約０．０７ｍｇ、約０．０８ｍｇ、約０．０９ｍｇ、約０．１ｍｇ、約０．１１ｍｇ、約０．１２ｍｇ、約０．１３ｍｇ、約０．１４ｍｇ、約０．１５ｍｇ、約０．１６ｍｇ、約０．１７ｍｇ、約０．１８ｍｇ、約０．１９ｍｇ、約０．２ｍｇ、約０．２１ｍｇ、約０．２２ｍｇ、約０．２３ｍｇ、約０．２４ｍｇ、約０．２５ｍｇ、約０．２６ｍｇ、約０．２７ｍｇ、約０．２８ｍｇ、約０．２９ｍｇ、約０．３ｍｇ、約０．３１ｍｇ、約０．３２ｍｇ、約０．３３ｍｇ、約０．３４ｍｇ、約０．３５ｍｇ、約０．３６ｍｇ、約０．３７ｍｇ、約０．３８ｍｇ、約０．３９ｍｇ、約０．４ｍｇ、約０．４１ｍｇ、約０．４２ｍｇ、約０．４３ｍｇ、約０．４４ｍｇ、約０．４５ｍｇ、約０．４６ｍｇ、約０．４７ｍｇ、約０．４８ｍｇ、約０．４９ｍｇ、約０．５ｍｇ、約０．５１ｍｇ、約０．５２ｍｇ、約０．５３ｍｇ、約０．５４ｍｇ、約０．５５ｍｇ、約０．５６ｍｇ、約０．５７ｍｇ、約０．５８ｍｇ、約０．５９ｍｇ、約０．６ｍｇ、約０．６１ｍｇ、約０．６２ｍｇ、約０．６３ｍｇ、約０．６４ｍｇ、約０．６５ｍｇ、約０．６６ｍｇ、約０．６７ｍｇ、約０．６８ｍｇ、約０．６９ｍｇ、約０．７ｍｇ、約０．７１ｍｇ、約０．７２ｍｇ、約０．７３ｍｇ、約０．７４ｍｇ、約０．７５ｍｇ、約０．７６ｍｇ、約０．７７ｍｇ、約０．７８ｍｇ、約０．７９ｍｇ、約０．８ｍｇ、約０．８１ｍｇ、約０．８２ｍｇ、約０．８３ｍｇ、約０．８４ｍｇ、約０．８５ｍｇ、約０．８６ｍｇ、約０．８７ｍｇ、約０．８８ｍｇ、約０．８９ｍｇ、約０．９ｍｇ、約０．９１ｍｇ、約０．９２ｍｇ、約０．９３ｍｇ、約０．９４ｍｇ、約０．９５ｍｇ、約０．９６ｍｇ、約０．９７ｍｇ、約０．９８ｍｇ、約０．９９ｍｇ、約１ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２ｍｇ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ、約３．５ｍｇ、約４ｍｇ、約４．５ｍｇ、約５ｍｇ、約５．５ｍｇ、約６ｍｇ、約６．５ｍｇ、約７ｍｇ、約７．５ｍｇ、約８ｍｇ、約８．５ｍｇ、約９ｍｇ、約９．５ｍｇ、約１０ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇまたは約３００ｍｇの量で投与することができる。
併用療法
【０２７０】
本明細書に提供される医薬組成物は、他の療法、例えば、化学療法、放射線、手術、抗炎症剤またはビタミンと併用して投与することができる。他の薬剤は、医薬組成物の前、後、または同時に投与することができる。
【０２７１】
一部の実施形態では、本明細書に記載の化合物または抗体は、単独で、または混合物の成分として１つもしくは複数の治療剤と組み合わせて、使用することができる。
【０２７２】
一部の実施形態では、本開示は、例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする多特異性化合物または抗体と、新血管形成に対して脈管構造を安定化することができる１つまたは複数の追加の抗ＶＥＧＦ剤との共投与を提供する。一部の実施形態では、多特異性化合物または抗体と１つまたは複数の追加の抗ＶＥＧＦ剤との共投与は、漏出に対して脈管構造を安定化することができる。抗ＶＥＧＦ剤は、化合物、組換えタンパク質、抗体、抗原結合性断片、バリアントもしくはそれらの誘導体（例えば、ｓｃＦｖ）、１つもしくは複数の設計アンキリンリピートを含むタンパク質、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、アンキリンタンパク質、アンキリンリピートタンパク質、アフィボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、または１つもしくは複数の受容体、例えば、ＶＥＧＦ受容体もしくはヒトＶＥＧＦ受容体１および２のＶＥＧＦ結合性部分に由来するペプチドであり得る。
【０２７３】
抗ＶＥＧＦ剤の非限定的な例としては、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））、コンバセプト、ブロルシズマブ、ＲＴＨ２５８、ソラフェニブ、スニチニブ、アキシチニブ、パゾパニブ、バンデチニブ、カボザンチニブ、レゴラフェニブおよび４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピぺリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）などのＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦバリアント、可溶性ＶＥＧＦ受容体断片またはトラップ、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲをブロックすることができるアプタマー（例えば、ペガプタニブ）、中和抗ＶＥＧＦＲ抗体またはその断片（例えば、ラムシルマブ、ｐ１Ｃ１１、１１２１、１１２１Ｂ）、抗ＫＤＲ抗体、抗ｆｌｔ１抗体、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼの低分子量阻害剤、ＶＥＧＦに結合するＤＡＲＰｉｎ（例えば、アビシパル、ＭＰ０１１２、ＭＰ０２５０）、ＶＥＧＦに結合する１つまたは複数の設計アンキリンリピートを含むタンパク質、アドネクチン（例えば、ＣＴ−３２２）、アンチカリン（例えば、ＰＲＳ−０５０）、ＩＶ型コラーゲン由来の生体模倣ペプチド（例えば、ＡＸＴ−１０７）が挙げられる。
【０２７４】
ＶＥＧＦをモジュレートする薬剤のさらなる非限定的な例としては、抗炎症剤、例えば、デキサメタゾン、フルオシノロンおよびトリアムシノロンが挙げられる。例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする多特異性化合物または抗体は、任意の組合せで任意の追加の抗ＶＥＧＦ剤と組み合わせて、例えば、処置の開始時、処置の間の任意の時点、または追加の抗ＶＥＧＦ剤による処置が終了した後の任意の時点で、投与することができる。加えて、多特異性化合物または抗体の投薬量は、処置の間に調整することができる。また、追加の抗ＶＥＧＦ剤の投薬量は、処置の間に調整することができる。多特異性化合物または抗体は、例えば、毎月、３か月毎に１回、６か月毎に１回または１年に１回投与することができ、ここで、追加の抗ＶＥＧＦ剤は、処置の間に任意の頻度で投与される。また、本明細書に開示される疾患または状態を処置するための方法も本明細書に開示する。方法は、対象に、
ａ）例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする、治療有効量の多特異性化合物または抗体、ならびに
ｂ）治療有効量の追加の抗ＶＥＧＦ剤
を投与することを含み、
多特異性化合物または抗体および追加の抗ＶＥＧＦ剤の投与は、本明細書に記載の通り、実施することができる。
【０２７５】
一部の実施形態では、本開示は、例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする多特異性化合物または抗体と、新血管形成に対して脈管構造を安定化することができる１つまたは複数の追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤との共投与を提供する。一部の実施形態では、多特異性化合物または抗体と１つまたは複数の追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤との共投与は、漏出に対して脈管構造を安定化することができる。抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤は、化合物、組換えタンパク質、抗体、抗原結合性断片、バリアントもしくはそれらの誘導体（例えば、ｓｃＦｖ）、１つもしくは複数の設計アンキリンリピートを含むタンパク質、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、アンキリンタンパク質、アンキリンリピートタンパク質、アフィボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、または１つもしくは複数の受容体に由来するペプチドであり得る。一部の実施形態では、追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤は、タンパク質のリン酸化、例えばＴｉｅ２タンパク質のリン酸化を促進することによって、Ｔｉｅ２シグナル伝達を活性化することができる。一部の実施形態では、追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤は、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に結合することができる。
【０２７６】
例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする多特異性化合物または抗体は、任意の組合せで任意の追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤と組み合わせて、例えば、処置の開始時、処置の間の任意の時点、または追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤による処置が終了した後の任意の時点で、投与することができる。多特異性化合物または抗体の投薬量は、処置の間に調整することができる。追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤の投薬量は、処置の間に調整することができる。多特異性化合物または抗体は、例えば、毎月、３か月毎に１回、６か月毎に１回または１年に１回投与することができ、ここで、追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤は、処置の間に任意の頻度で投与される。また、本明細書に開示される疾患または状態を処置するための方法も本明細書に開示する。方法は、対象に、
ａ）例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする、治療有効量の多特異性化合物または抗体、ならびに
ｂ）治療有効量の追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤
を投与することを含み、
多特異性化合物または抗体および追加の抗ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）剤の投与は、本明細書に記載の通り、実施することができる。
【０２７７】
一部の実施形態では、本開示は、例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする多特異性化合物または抗体と、１つまたは複数の追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物との共投与を提供する。追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物は、例えば、アンジオポエチン１組換えタンパク質、Ａｎｇ１模倣体、Ｔｉｅ２アゴニスト、ペプチド、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）ホスファターゼ阻害剤、Ｔｉｅ２ペプト模倣体、四量体ポリエチレンオキシドクラスターペプチド、ＩＶ型コラーゲン生体模倣ペプチド、化合物、組換えタンパク質、抗体、抗原結合性断片、バリアントもしくはそれらの誘導体（例えば、ｓｃＦｖ）、アフィニボディ、アビマー、アドネクチン、１つもしくは複数の設計アンキリンリピートを含むタンパク質、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、アンキリンタンパク質、アンキリンリピートタンパク質、アフィボディ、アビマー、アドネクチン、アンチカリン、フィノマー、Ｋｕｎｉｔｚドメイン、ノッチン、β−ヘアピン模倣体、または１つもしくは複数の受容体に由来するペプチドであり得る。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物は、低分子である。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物は、眼リンパ管、シュレム管または角膜縁リンパ管によるドレナージを改善する。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物は、点眼剤として投与される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物は、原発開放隅角緑内障、加齢性黄斑変性症、心臓血管疾患または嚢胞性腎疾患を処置するために投与される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物は、例えば、ＭＡＮ−０１、ＡＸＴ−１０７またはバスクロチドであり得る。一部の実施形態では、本明細書に開示される化合物は、例えば、ＭＡＮ−０１、ＡＸＴ−１０７またはバスクロチドと共投与することができる。
【０２７８】
例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする多特異性化合物または抗体は、任意の組合せで任意の追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物と組み合わせて、例えば、処置の開始時、処置の間の任意の時点、または追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物による処置が終了した後の任意の時点で、投与することができる。多特異性化合物または抗体の投薬量は、処置の間に調整することができる。追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物の投薬量は、処置の間に調整することができる。多特異性化合物または抗体は、例えば、毎月、３か月毎に１回、６か月毎に１回または１年に１回投与することができ、ここで、追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物は、多特異性化合物または抗体による処置の間に任意の頻度で投与される。また、本明細書に開示される疾患または状態を処置するための方法も本明細書に開示する。方法は、対象に、
ａ）例えば、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする、治療有効量の多特異性化合物または抗体、ならびに
ｂ）治療有効量のＴｉｅ２活性化剤
を投与することを含み、
多特異性化合物または抗体および追加のＴｉｅ２受容体活性化化合物の投与は、本明細書に記載の通り、実施することができる。
マウスモデル
酸素誘発虚血性網膜症モデル
【０２７９】
酸素誘発虚血性網膜症モデルは、増殖性網膜新血管形成および増殖性糖尿病性網膜症の態様を模倣すると考えることができる。１週齢のマウスを、密閉チャンバーに入れ、過酸素（７５±３％の酸素）に５日間曝露し、例えば、生後１７〜２１日の間に血管新生された網膜および無血管網膜の間の接合部で、過酸素誘発新血管形成をもたらすことができる。マウスは、目的の化合物、例えば、本開示の抗体または化合物を投薬されて、新血管形成および／または血管漏出に対する効果を決定することができる。新血管形成および／または血管漏出は、下記に記載の通り、評価することができる。
Ｒｈｏ／ＶＥＧＦマウスモデル
【０２８０】
Ｒｈｏ／ＶＥＧＦマウスモデルは、新生血管の加齢性黄斑変性症の態様を模倣することができる。ロドプシンプロモーターによって駆動される血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）発現を有するトランスジェニックマウス（ｒｈｏ／ＶＥＧＦマウス）は、網膜新血管形成、網膜血管腫状増殖および網膜血管漏出を発生し得る。ｒｈｏ／ＶＥＧＦマウスにおいて、光受容器におけるＶＥＧＦ発現は、深部の毛細血管床が発達している期間である生後５〜１０日の間に開始し得る。新血管形成は、網膜の深部の毛細血管床が起源であり得、網膜下の空間に成長する。マウスは、目的の化合物、例えば、本開示の抗体または化合物を投薬されて、新血管形成および／または血管漏出に対する効果を決定することができる。新血管形成および／または血管漏出は、下記に記載の通り、評価することができる。
Ｔｅｔ／オプシン／ＶＥＧＦマウスモデル
【０２８１】
ロドプシンプロモーターにカップリングされた逆テトラサイクリントランス活性化因子（ｒｔＴＡ）誘導プロモーターの制御下のＶＥＧＦを有するマウス（Ｔｅｔ／オプシン／ＶＥＧＦマウス）は、新血管形成、網膜血管漏出および網膜剥離の誘導モデルとして使用することができる。これらのマウスにおいて、網膜におけるＶＥＧＦ導入遺伝子の発現は、ドキシサイクリンを投与することによって誘導することができる。新血管形成は、ＶＥＧＦ誘導の３〜４日後までにはっきりと分かり得る。新血管形成は、より広範囲であり得、網膜外側のフォールド、続いて約５日以内に全網膜剥離を引き起こし得る。マウスは、目的の化合物、例えば、本開示の抗体または化合物を投薬されて、新血管形成、血管漏出および／または網膜剥離に対する効果を決定することができる。新血管形成および／または血管漏出は、下記に記載の通り、評価することができる。網膜剥離を評価するために、目は、包埋溶液中、切断温度で凍結することができ、１０ミクロンの切片を目全体を通して切断し、切片をヘキストで染色した。切片は、光学顕微鏡法によって、画像解析によって測定される切片あたりの網膜剥離の平均長さ、および計算された網膜の剥離のパーセンテージを調べることができる。
Ｔｅｔ／オプシン／Ａｎｇ２マウスモデル
【０２８２】
Ｔｅｔ／オプシン／Ａｎｇ２マウスは、網膜中のＡｎｇ２の誘導発現を有する。これらのマウスは、さまざまな実験条件において、Ａｎｇ２発現の影響を研究するために使用することができる。例えば、Ｔｅｔ／オプシン／Ａｎｇ２マウスは、ＶＥＧＦレベルが低い場合に対する高い場合の新血管形成に対するＡｎｇ２発現の効果、または酸素誘発虚血性網膜症モデルにおけるＡｎｇ２発現の効果を決定するために使用することができる。マウスは、目的の化合物、例えば、本開示の抗体または化合物を投薬されて、治療有効性に対するＡｎｇ２発現の影響を決定することができる。
レーザー誘発脈絡膜新血管形成モデル
【０２８３】
レーザー誘発脈絡膜新血管形成モデルは、新生血管の加齢性黄斑変性症の態様を模倣すると考えることができる。麻酔されたマウスは、それらの瞳孔を拡張させることができ、細隙灯システムおよびコンタクトレンズとしてカバーガラスを使用するクリプトンレーザーによって、例えば、網膜に、熱傷を送達することができる。多数の熱傷が、片方の目に生じ得、例えば、目毎に３か所で火傷が生じ得る。熱傷は、ブルッフ膜の破裂を引き起こし得る。脈絡膜新血管形成は、レーザー処置後のさまざまな時点、例えば、レーザー処置の１週間後、２週間後または４週間後に評価することができる。マウスは、目的の化合物、例えば、本開示の抗体または化合物を投薬されて、新血管形成に対する効果を決定することができる。眼杯は、ＦＩＴＣ標識化ＧＳＡ、平らにマウントされた脈絡膜、および蛍光顕微鏡および画像解析で測定されたそれぞれのブルッフ膜破裂部位での脈絡膜新血管形成の領域で染色され得る。新血管形成および／または血管漏出はまた、下記に記載の通り、評価することができる。
新血管形成の評価
【０２８４】
新血管形成は、さまざまな技術を使用して、評価することができる。
【０２８５】
フルオレセイン血管造影図は、色素の注射後に連続した眼底写真を撮影して、血管を明らかにすることによって行うことができ、新生血管複合体の存在、位置およびサイズの特定を可能にする。例えば、０．３ｍＬの１％のフルオレセインナトリウムの腹腔内注射を与えることができ、連続した眼底写真を撮影し、脈絡膜新血管形成の領域、総病変領域および漏出領域を測定することができる。
【０２８６】
目は、蛍光顕微鏡、光学顕微鏡または電子顕微鏡による評価のために処理され得る。例えば、マウスは、蛍光標識デキストランで灌流され得るか、あるいは目は、ＧＳＡまたはＰＥＣＡＭを標的にする抗体を注射され得る。目は、蛍光顕微鏡下で観察のために処理され得、新血管形成の程度は、例えば、網膜あたりの新血管形成の領域を定量化することによって、それぞれのブルッフ膜破裂部位での新血管形成の領域を定量化することによって、または網膜から硝子体に伸びる新しい血管の核の数を定量化することによって、定量化することができる。
【０２８７】
網膜の新血管形成の領域は、例えば、ＦＩＴＣ標識化ＧＳＡレクチンおよび蛍光顕微鏡を使用して、決定することができる。目は、１０％のホルマリン中で固定され、無傷で切開され、ＰＢＳで洗浄され、８％のブタ血清でブロッキングされ、正常な網膜の血管ではなく、網膜の新血管形成および硝子体の血管を染色するのに適切な時間（例えば、４０〜５０分）、ＦＩＴＣ標識化ＧＳＡレクチンで染色され得る。網膜は、平らにマウントされ得、デジタル画像を、蛍光顕微鏡で取得し、網膜全体の単一画像にまとめることができる。ソフトウェアを使用して、網膜あたりの新血管形成の領域を測定することができる。
【０２８８】
網膜下の新血管形成の領域は、例えば、ＦＩＴＣ標識化ＧＳＡレクチンおよび蛍光顕微鏡を使用して、決定することができる。目は、１０％のホルマリン中で固定され得、網膜は、切開され、５％のブタ血清でブロッキングされ、血管細胞を染色するために２時間、ＦＩＴＣコンジュゲート化ＧＳＡで染色され、視細胞側を上にして平らにマウントされ得る。網膜下の新血管形成の領域は、蛍光顕微鏡および画像解析で測定することができる。
網膜の血管漏出の評価
【０２８９】
網膜の血管漏出は、免疫蛍光技術を使用して、血管外遊出した血清アルブミンを測定することによって、評価することができる。例えば、目は、１０％のホルマリン中で固定され得、網膜は、切開され、洗浄され、ブロッキングされ、抗アルブミン抗体および蛍光コンジュゲート化二次抗体を使用して染色され得る。血管は、ＧＳＡレクチンで対比染色することによって標識することができ、網膜は平らにマウントすることができる。網膜は、蛍光顕微鏡によって調べることができ、アルブミン染色の領域は、画像解析によって決定することができる。網膜の血管漏出は、例えば、糖尿病性黄斑浮腫および網膜静脈閉塞症に起因する黄斑浮腫に関連する。
血管漏出のためのマイルスアッセイ
【０２９０】
マイルスアッセイを使用して、皮膚の皮下血管における血管漏出を評価することができる。エバンスブルーは、アルブミンに結合する色素である。生理学的条件下、内皮は、アルブミンに不透過性であり、そのため、エバンスブルーに結合したアルブミンは、血管内に限定されたままである。増加された血管透過性を促進する病態では、内皮細胞は、密接な接触を部分的に喪失する。内皮は、アルブミンなどの小さなタンパク質に対して透過性になる。マウスは、１％のＰＢＳ中のエバンスブルー色素で静脈内注射され得、ＶＥＧＦで皮内注射され得る。皮内注射の３０分後、皮内注射部位の組織を、切除し、ホルムアミド中で抽出して、エバンスブルー色素の血管外漏出を評価することができる。血管漏出は、例えば、光学密度測定および標準曲線を使用して、組織１ミリグラムあたりに組み込まれた色素の測定によって定量化することができる。マウスは、目的の化合物、例えば、本開示の抗体または化合物を投薬されて、血管漏出に対する効果を決定することができる。
がんモデル
【０２９１】
がんのための処置としての本開示の化合物または抗体の有効性は、さまざまながんモデルにおいて試験することができる。一部のがんモデルでは、細胞系由来のがん細胞は、レシピエント動物、例えば、マウスに移植され得る。適切なマウス系統の非限定的な例としては、Ｃ５７ＢＬ６、ＢＡＬＢ／Ｃ、Ｃ３Ｈ、ＦＶＢ／ＮおよびＦＶＢ／Ｎ−Ｔｇ（ＭＭＴＶ−ＰｙＶＴ）６３４Ｍｕｌが挙げられる。適切ながん細胞系の非限定的な例としては、４Ｔ１、Ｅ０７７１およびＰ０００８が挙げられる。４Ｔ１またはＥ０７７１細胞系の細胞は、例えば、乳がんのモデルとして、乳房体に移植され得る。４Ｔ１またはＥ０７７１細胞は、例えば、雌ヌードマウスの第３の乳房脂肪体に移植され得る。
【０２９２】
固形腫瘍のサイズは、キャリパーで測定することができ、腫瘍体積を計算することができる。腫瘍は、病理組織評価または蛍光顕微鏡のために処理されて、例えば、腫瘍面積、腫瘍グレード、転移数、転移面積、腫瘍病巣あたりの細胞核の数、腫瘍内血管径、腫瘍内血管密度、腫瘍血管成熟度、血管周囲細胞被覆率、血管周囲細胞および内皮細胞の間の近接を評価することができ、または血管内もしくは血管外として腫瘍病巣のグレードを付けることができる。
【０２９３】
自然転移モデルを使用して、転移に対する本開示の化合物または抗体の効果を研究することができる。腫瘍移植後、原発腫瘍は切除され得（例えば、サイズが５ｍｍに達したとき）、その後、動物は、例えば、肺、肝臓、リンパ節および骨における転移の数ならびにサイズを決定するために、転移について肉眼的または病理組織学的に評価することができる。
【０２９４】
転移に対する血管安定性の影響を評価するために、腫瘍細胞が静脈内注射され得るモデルを使用することができ、その後、動物は、血管外に対する血管内の転移について評価され得る。例えば、４Ｔ−１細胞は、静脈内注射され得、肺は、病理組織学的評価のために処理されて、血管外に対する血管内の転移を定量化することができる。
【０２９５】
転移は、例えば、肺をブアン液に浸し、次いで、それを実体顕微鏡で調べることによって、肉眼的に計数および測定することができる。
【０２９６】
腫瘍の血管透過性をｉｎ  ｖｉｖｏで測定するために、生体多光子顕微鏡を使用することができる。動物は、蛍光標識されたウシ血清アルブミンが、例えば、処置前および処置後の時点で注射され得る。それぞれの時点で、腫瘍内の２つの別個の領域を選択することができ、ＢＳＡ蛍光を記録する２００ミクロンの画像スタックを、多光子レーザー走査顕微鏡を使用して、それぞれの領域で１０分毎に１時間撮影することができる。分析アプローチは、血管測定基準を作出するための三次元血管追跡、および経時的な最も近い血管までの距離に対するボクセル強度の三次元マップを含み得る。画像は、三次元画像レジストレーションにより、経時的な試料の移動について補正することができる。正規化された経血管フラックスを計算することができる。
例示的なＣＤＲの組合せ
【０２９７】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、LCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、LCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、LCDR3を含む。
【０２９８】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1およびHCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1およびHCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1およびLCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2およびHCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2およびLCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR3およびLCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR3およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR3およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、LCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、LCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、LCDR2およびLCDR3を含む。
【０２９９】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2およびHCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2およびLCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR3およびLCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR3およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR3およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、LCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、LCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、HCDR3およびLCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、HCDR3およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、HCDR3およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、LCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、LCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR3、LCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR3、LCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR3、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。
【０３００】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、HCDR3およびLCDR1を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、HCDR3およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、HCDR3およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、LCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、LCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR3、LCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR3、LCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR3、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、HCDR3、LCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、HCDR3、LCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、HCDR3、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR3、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。
【０３０１】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1およびLCDR2を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR3、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。
【０３０２】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2およびLCDR3を含む。
【０３０３】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88〜90のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91〜93のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号97〜98のいずれか１つを含む。
【０３０４】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つおよび配列番号81〜87のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つおよび配列番号88〜90のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つおよび配列番号91〜93のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つおよび配列番号97〜98いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つおよび配列番号88〜90いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つおよび配列番号91〜93いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つおよび配列番号94〜96いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つおよび配列番号97〜98いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号91〜93いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号94〜96いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号97〜98いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号94〜96いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号97〜98いずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98いずれか１つを含む。
【０３０５】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80いずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つおよび配列番号88〜90のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つおよび配列番号91〜93のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号91〜93のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号91〜93のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91〜93のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。
【０３０６】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号91〜93のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。
【０３０７】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号94〜96のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。
【０３０８】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76〜80のいずれか１つ、配列番号81〜87のいずれか１つ、配列番号88〜90のいずれか１つ、配列番号91〜93のいずれか１つ、配列番号94〜96のいずれか１つおよび配列番号97〜98のいずれか１つを含む。
【０３０９】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82を含む。
【０３１０】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76および配列番号81を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76および配列番号88を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81および配列番号88を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77および配列番号82を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77および配列番号88を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82および配列番号88を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82および配列番号97を含む。
【０３１１】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81および配列番号88を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号88および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号88および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号88および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号88および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号88および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号88および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82および配列番号88を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号88および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号88および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号88および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配���番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号88および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号88および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号88および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号94および配列番号97を含む。
【０３１２】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号88および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号88および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号88および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号88、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号88、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号88、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号88、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号88、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号88、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号88および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号88および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号88および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号88、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号88、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号88、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号88、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合��は、配列番号82、配列番号88、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号88、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号88、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。
【０３１３】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号88、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号88、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号88、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号88、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号81、配列番号88、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号88、配列番号91および配列番号94を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号88、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号88、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号82、配列番号88、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。
【０３１４】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号76、配列番号81、配列番号88、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号77、配列番号82、配列番号88、配列番号91、配列番号94および配列番号97を含む。
【０３１５】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号92を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号97を含む。
【０３１６】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78および配列番号83を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78および配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78および配列番号92を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83および配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83および配列番号92を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89および配列番号92を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号92および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号92および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号95および配列番号97を含む。
【０３１７】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83および配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83および配列番号92を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号89および配列番号92を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号89および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号92および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号92および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号89および配列番号92を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号89および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号92および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号92および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89、配列番号92および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89、配列番号92および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号92、配列番号95および配列番号97を含む。
【０３１８】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号89および配列番号92を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号89および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号92および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号92および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号89、配列番号92および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号89、配列番号92および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号89、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号92、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号89、配列番号92および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号89、配列番号92および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号89、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号92、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89、配列番号92、配列番号95および配列番号97を含む。
【０３１９】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号89、配列番号92および配列番号95を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号89、配列番号92および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号89、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号92、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号89、配列番号92、配列番号95および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号83、配列番号89、配列番号92、配列番号95および配列番号97を含む。
【０３２０】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号78、配列番号83、配列番号89、配列番号92、配列番号95および配列番号97を含む。
【０３２１】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号90を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86を含む。
【０３２２】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79および配列番号84を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79および配列番号90を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84および配列番号90を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号90および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号90および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号90および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79および配列番号86を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86および配列番号90を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86および配列番号98を含む。
【０３２３】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84および配列番号90を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号90および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号90および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号90および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号90および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号90および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号90および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号90、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号90、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号90、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86および配列番号90を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号90および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号90および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号90および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配���番号96および配列番号98を含む。
【０３２４】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号90および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号90および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号90および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号90、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号90、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号90、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号90、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号90、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号90、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号90、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号90および配列番号93を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号90および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号90および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号90、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号90、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号90、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。
【０３２５】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号90、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号90、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号90、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号90、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号84、配列番号90、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号90、配列番号93および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号90、配列番号93および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号90、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号86、配列番号90、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。
【０３２６】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号84、配列番号90、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号79、配列番号86、配列番号90、配列番号93、配列番号96および配列番号98を含む。
【０３２７】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87を含む。
【０３２８】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80および配列番号85を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80および配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85および配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80および配列番号87を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87および配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87および配列番号97を含む。
【０３２９】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85および配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号89および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号89および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号89および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号89および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87および配列番号89を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号89および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号89および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配���番号96および配列番号97を含む。
【０３３０】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号89、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号89、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号89、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号89、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号89、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号89、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号89、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89および配列番号91を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号89、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号89、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号89、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。
【０３３１】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号89、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号85、配列番号89、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89、配列番号91および配列番号96を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89、配列番号91および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。
【０３３２】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号96および配列番号97を含む。
【０３３３】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号124〜131のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号132〜137のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号144〜146のいずれか１つを含む。
【０３３４】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つおよび配列番号114〜123のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つおよび配列番号124〜131のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つおよび配列番号132〜137のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つおよび配列番号124〜131のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つおよび配列番号132〜137のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号132〜137のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。
【０３３５】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つおよび配列番号124〜131のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つおよび配列番号132〜137のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号132〜137のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号132〜137のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号124〜131のいずれか���つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号132〜137のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。
【０３３６】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号132〜137のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。
【０３３７】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号138〜143のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。
【０３３８】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号99〜113のいずれか１つ、配列番号114〜123のいずれか１つ、配列番号124〜131のいずれか１つ、配列番号132〜137のいずれか１つ、配列番号138〜143のいずれか１つおよび配列番号144〜146のいずれか１つを含む。
【０３３９】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号103、配列番号118、配列番号125、配列番号132、配列番号140および配列番号144を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号108、配列番号123、配列番号127、配列番号135、配列番号143および配列番号145を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号113、配列番号123、配列番号130、配列番号135、配列番号143および配列番号145を含む。
【０３４０】
一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89、配列番号91、配列番号96、配列番号97、配列番号103、配列番号118、配列番号125、配列番号132、配列番号140および配列番号144を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号96、配列番号97、配列番号103、配列番号118、配列番号125、配列番号132、配列番号140および配列番号144を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89、配列番号91、配列番号96、配列番号97、配列番号108、配列番号123、配列番号127、配列番号135、配列番号143および配列番号145を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号96、配列番号97、配列番号108、配列番号123、配列番号127、配列番号135、配列番号143および配列番号145を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号85、配列番号89、配列番号91、配列番号96、配列番号97、配列番号113、配列番号123、配列番号130、配列番号135、配列番号143および配列番号145を含む。一部の実施形態では、本開示の抗体または化合物は、配列番号80、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号96、配列番号97、配列番号113、配列番号123、配列番号130、配列番号135、配列番号143および配列番号145を含む
【実施例】
【０３４１】
（実施例１）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびアフリベルセプト由来配列を含む四価二特異性抗体
抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖がアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインと融合された四価二特異性抗体を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１４（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２２（アフリベルセプト由来配列）。
【０３４２】
得られたポリペプチド（配列番号１４９）を、配列番号１７と共発現させて、表３３に示される配列を含む四価の二特異性抗体ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１を提供した。配列番号１４９のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号１７のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１は、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１は、配列番号２５４および配列番号２５０を含み得る。
【表３３】
2022502367.tif 000053
（実施例２）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびブロルシズマブ由来配列を含む四価二特異性抗体
【０３４３】
抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖がブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインと融合された四価二特異性抗体を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１４（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２３（ブロルシズマブ由来配列）。
【０３４４】
得られたポリペプチド（配列番号１５０）を、配列番号１７と共発現させて、表３４に示される配列を含む四価の二特異性抗体ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１を提供した。配列番号１５０のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号１７のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１は、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１は、配列番号２５５および配列番号２５０を含み得る。
【表３４−１】
2022502367.tif 000054
【表３４−２】
2022502367.tif 000055
（実施例３）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびラニビズマブ由来配列を含む四価二特異性抗体
【０３４５】
抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖がラニビズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインと融合された四価二特異性抗体を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１４（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２８（ラニビズマブ由来配列）。
【０３４６】
得られたポリペプチド（配列番号１５１）を、配列番号１７と共発現させて、表３５に示される配列を含む四価の二特異性抗体ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１を提供した。配列番号１５１のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号１７のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１は、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１は、配列番号２５６および配列番号２５０を含み得る。
【表３５−１】
2022502367.tif 000056
【表３５−２】
2022502367.tif 000057
（実施例４）
二特異性化合物の特性評価
【０３４７】
本開示の以下の多特異性抗体を生じさせた：（ｉ）ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１、（ｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１、（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１、（ｉｖ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１、（ｖ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＦＬ、（ｖｉ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＢＲＯ、（ｖｉｉ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＢＩ、（ｖｉｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬ、（ｉｘ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯ、および（ｘ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩ。酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を行って、ＶＥＧＦおよびＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対するこれらの抗体の結合を決定した。ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対する結合を、すべての構築物について確認し、ＶＥＧＦに対する結合を、ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１を除いて、すべての構築物について確認した。
【０３４８】
実施例１〜３に記載の四価の二特異性抗体を産生させ、表３６、図１６、図１７および図１８に記載されるように、特性評価した。
【０３４９】
表３６は、二特異性候補の小スケール産生および特性評価からの結果を提供する。
【表３６】
2022502367.tif 000058
【０３５０】
図１６は、四価二特異性抗体ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１のＨＰＴＰ−β（上パネル）およびＶＥＧＦ（下パネル）への結合を実証するＥＬＩＳＡデータを提供する。結合は、対照と比較する（上パネルにＨＣ２：ＬＣ１、下パネルにＶＥＧＦ−Ｒ２−Ｆｃキメラ）。
【０３５１】
図１７は、四価二特異性抗体ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１のＨＰＴＰ−β（上パネル）およびＶＥＧＦ（下パネル）への結合を実証するＥＬＩＳＡデータを提供する。結合は、対照と比較する（上パネルにＨＣ２：ＬＣ１、下パネルにＶＥＧＦ−Ｒ２−Ｆｃキメラ）。
【０３５２】
図１８は、四価二特異性抗体ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１のＨＰＴＰ−β（上パネル）およびＶＥＧＦ（下パネル）への結合を評価するＥＬＩＳＡデータを提供する。結合は、対照と比較する（上パネルにＨＣ２：ＬＣ１、下パネルにＶＥＧＦ−Ｒ２−Ｆｃキメラ）。
（実施例５）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびアビシパル由来配列を含む四価二特異性抗体
【０３５３】
抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖がアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインと融合された四価二特異性抗体を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１４の残基１〜４６７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２４４（アビシパル由来配列）。
【０３５４】
得られたポリペプチド（配列番号２３１）を、配列番号１７と共発現させて、表３７に示される配列を含む四価の二特異性抗体ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１を提供した。配列番号２３１のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号１７のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１は、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１は、配列番号２５７および配列番号２５０を含み得る。
【表３７】
2022502367.tif 000059
（実施例６）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびブロルシズマブ由来配列を含む六価二特異性抗体
【０３５５】
Ｃ末端に付加されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する重鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１４（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２３（ブロルシズマブ由来配列）。
【０３５６】
Ｃ末端に付加されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２３（ブロルシズマブ由来配列）。
【０３５７】
得られた配列番号１５０および配列番号２１８のポリペプチドを、共発現させて、表３８に示される六価の二特異性抗体ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯを提供した。配列番号１５０のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２１８のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯは、配列番号２５５および配列番号２５８を含み得る。
【表３８−１】
2022502367.tif 000060
【表３８−２】
2022502367.tif 000061
（実施例７）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびアフリベルセプト由来配列を含む六価二特異性抗体
【０３５８】
Ｃ末端に付加されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する重鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１４（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２２（アフリベルセプト由来配列）。
【０３５９】
Ｃ末端に付加されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２２（アフリベルセプト由来配列）。
【０３６０】
得られた配列番号１４９および配列番号２１９のポリペプチドを、共発現させて、表３９に示される六価の二特異性抗体ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬを提供した。配列番号１４９のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２１９のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬは、配列番号２５４および配列番号２５９を含み得る。
【表３９】
2022502367.tif 000062
（実施例８）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびラニビズマブ由来配列を含む六価二特異性抗体
【０３６１】
Ｃ末端に付加されたラニビズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する重鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせる：
１）配列番号１４（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２８（ラニビズマブ由来配列）。
【０３６２】
Ｃ末端に付加されたラニビズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせる：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２８（ラニビズマブ由来配列）。
【０３６３】
得られた配列番号１５１および配列番号２４３のポリペプチドを、共発現させて、表４０に示される六価の二特異性抗体ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１−ＲＡＮを提供する。配列番号１５１のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２４３のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１−ＲＡＮは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１−ＲＡＮは、配列番号２５６および配列番号２６０を含み得る。
【表４０−１】
2022502367.tif 000063
【表４０−２】
2022502367.tif 000064
（実施例９）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびアビシパル由来配列を含む六価二特異性抗体
【０３６４】
Ｃ末端に付加されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する重鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１４の残基１〜４６７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２４４（アビシパル由来配列）。
【０３６５】
Ｃ末端に付加されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２４４（アビシパル由来配列）。
【０３６６】
得られた配列番号２３１および配列番号２３２のポリペプチドを、共発現させて、表４１に示される六価の二特異性抗体ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩを提供した。配列番号２３１のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２３２のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩは、配列番号２５７および配列番号２６１を含み得る。
【表４１】
2022502367.tif 000065
（実施例１０）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびブロルシズマブ由来配列を含む四価二特異性抗体
【０３６７】
Ｃ末端に付加されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２３（ブロルシズマブ由来配列）。
【０３６８】
得られたポリペプチド（配列番号２１８）を、配列番号１４と共発現させて、表４２に示される配列を含む四価の二特異性抗体ＨＣ２：ＬＣ１−ＢＲＯを提供した。配列番号１４のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２１８のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２：ＬＣ１−ＢＲＯは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２：ＬＣ１−ＢＲＯは、配列番号２４７および配列番号２５８を含み得る。
【表４２】
2022502367.tif 000066
（実施例１１）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびアフリベルセプト由来配列を含む四価二特異性抗体
【０３６９】
Ｃ末端に付加されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２２（アフリベルセプト由来配列）。
【０３７０】
得られたポリペプチド（配列番号２１９）を、配列番号１４と共発現させて、表４３に示される配列を含む四価の二特異性抗体ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＦＬを提供した。配列番号１４のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２１９のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＦＬは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＦＬは、配列番号２４７および配列番号２５９を含み得る。
【表４３】
2022502367.tif 000067
（実施例１２）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびラニビズマブ由来配列を含む四価二特異性抗体
【０３７１】
Ｃ末端に付加されたラニビズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせる：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２８（ラニビズマブ由来配列）。
【０３７２】
得られたポリペプチド（配列番号２４３）を、配列番号１４と共発現させて、表４４に示される配列を含む四価の二特異性抗体ＨＣ２：ＬＣ１−ＲＡＮを提供する。配列番号１４のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２４３のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２：ＬＣ１−ＲＡＮは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２：ＬＣ１−ＲＡＮは、配列番号２４７および配列番号２６０を含み得る。
【表４４】
2022502367.tif 000068
（実施例１３）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１およびアビシパル由来配列を含む四価二特異性抗体
【０３７３】
Ｃ末端に付加されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせた：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２４４（アビシパル由来配列）。
【０３７４】
得られたポリペプチド（配列番号２３２）を、配列番号２４５（配列番号１４の残基１〜４６７）と共発現させて、表４５に示される配列を含む四価の二特異性抗体ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＢＩを提供した。配列番号２４５のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２３２のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＢＩは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＢＩは、配列番号２４７および配列番号２６１を含み得る。
【表４５−１】
2022502367.tif 000069
【表４５−２】
2022502367.tif 000070
（実施例１４）
Ｔｉｅ２を活性化する二特異性抗体
【０３７５】
ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ブタゼラチンでコーティングされたＴ７５フラスコに播種した。細胞維持を、完全培地（ＥＧＭまたはＥＧＭ−２）を使用して行い、トリプシン／ＥＤＴＡを使用して、１００ｍｍディッシュに継代した。３日後、１００ｍｍディッシュをすすぎ、基礎培地（ＥＢＭ、ＥＢＭ−２、ＯｐｔｉＭＥＭ  Ｉ）中、図１９に示される通り、５または５０ｎＭの以下の抗体の１つで、３７℃／５％ＣＯ２で３０分間処理した：（ｉ）ＨＣ２：ＬＣ１、ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体；（ｉｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｖ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価抗体；または（ｖ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価抗体。処理後、細胞を１ｍＭのＮａＯＶを含有する氷冷ＰＢＳですすぎ、完全Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ溶解緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１３７ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮａＯＶ、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１μｇ／ｍＬのロイペプチン、１μｇ／ｍＬのペプスタチン）に溶解した。
【０３７６】
溶解物を、抗Ｔｉｅ２抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体で免疫沈降させた。１〜１０μｇのＶＥＧＦＲ２抗体（ＭＡＢ３５７３、＃８９１０９）、ＴＩＥ−２抗体（Ａｂ３３）および２５μＬのプロテインＡ／Ｇアガロースビーズを、１ｍＬのＨＵＶＥＣ溶解物に添加し、チューブを、回転台上に４℃で１〜３日間置いた。ＩＰ反応チューブを、１ｍＬの完全Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ溶解緩衝液ですすぎ、２倍のＤＴＴを含有するローディング色素に再懸濁させた。チューブを９５℃で５分間インキュベートし、遠心分離し、Ｔｒｉｓグリシンゲルにウェルあたり２５μＬをロードした。試料を、ゲルで展開し、ＰＶＤＦ膜に転写し、一連のウエスタンブロットに付して、リン酸化チロシン（リン酸化Ｔｉｅ２およびリン酸化ＶＥＧＦＲ２）を検出し、続いて、総Ｔｉｅ２および総ＶＥＧＦＲ２についてブロットするために再探索した。ゲルを、１２５Ｖで７５分間流した後、ＰＶＤＦ膜に転写した。膜を、５％のＢＳＡ／０．０５％のＴｗｅｅｎ  Ｔｒｉｓ洗浄緩衝液中、回転台上で、室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした。一次抗体（ＰＹ９９；ＶＥＧＦＲ２−Ａ３；ＴＩＥ−２  Ａｂ３３）を、洗浄緩衝液中１：１０００希釈で添加し１時間置いた。二次抗体（抗マウスｈｒｐ）を、洗浄緩衝液中１：１０００希釈で添加し１時間置いた。膜を、ステップの間に、０．０５〜０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０＋Ｔｒｉｓ緩衝食塩水（ＴＢＳ）で３回すすいだ。ＥＣＬ検出システムを使用して、バンドを可視化した。再探索を、２００ｍＭのグリシンで２４〜４８時間処理されたロットにおいて行った。
【０３７７】
図１９に示されるように、試験された二特異性抗体はすべて、ＨＵＶＥＣにおいて基礎Ｔｉｅ２活性が増加したが、基礎ＶＥＧＦＲ２リン酸化は、影響を受けなかった。上パネルは、それぞれ、リン酸化Ｔｉｅ２およびリン酸化ＶＥＧＦＲ２（上半分）、ならびに総Ｔｉｅ２およびＶＥＧＦＲ２（下半分）の検出を通して示されるように、Ｔｉｅ２活性化およびＶＥＧＦＲ２活性化を示すウエスタンブロットを提供する。下パネルは、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する濃度測定比を提供する。
【０３７８】
アッセイを、本開示の以下の抗体を用いて繰り返し、これは、外因性Ａｎｇ１の非存在下でＴｉｅ２活性化も増強した：（ｉ）ＨＣ２−ＲＡＮ：ＬＣ１、（ｉｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１、（ｉｉｉ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＦＬ、（ｉｖ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＢＲＯ、（ｖ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＢＩ、および（ｖｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩ。
（実施例１５）
二特異性抗体はＡｎｇ１媒介Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦ媒介ＶＥＧＦＲ２活性化をブロックする
【０３７９】
ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ブタゼラチンでコーティングされたＴ７５フラスコに播種した。細胞維持を、完全培地（ＥＧＭまたはＥＧＭ−２）を使用して行い、トリプシン／ＥＤＴＡを使用して、１００ｍｍディッシュに継代した。３日後、１００ｍｍディッシュをすすぎ、基礎培地（ＥＢＭ、ＥＢＭ−２、ＯｐｔｉＭＥＭ  Ｉ）中、図２０に示される通り、５または５０ｎＭの以下の抗体の１つで、３７℃／５％ＣＯ２で３０分間、モック事前処理または事前処理した：（ｉ）ＨＣ２：ＬＣ１、ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体；（ｉｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｖ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価抗体；または（ｖ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価抗体。事前処理後、細胞を、基礎培地（リン酸緩衝食塩水、ＰＢＳ＋０．２％のウシ血清アルブミン、またはＯｐｔｉＭＥＭ  Ｉ）中、ＶＥＧＦ（５ｎｇ／ｍＬ）およびＡｎｇ１（５０ｎｇ／ｍＬ）で、３７℃／５％ＣＯ２で６分間、処理した。処理後、細胞を１ｍＭのＮａＯＶを含有する氷冷ＰＢＳですすぎ、完全Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ溶解緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１３７ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮａＯＶ、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１μｇ／ｍＬのロイペプチン、１μｇ／ｍＬのペプスタチン）に溶解した。
【０３８０】
溶解物を、抗Ｔｉｅ２抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体で免疫沈降させた。１〜１０μｇのＶＥＧＦＲ２抗体（ＭＡＢ３５７３、＃８９１０９）、ＴＩＥ−２抗体（Ａｂ３３）および２５μＬのプロテインＡ／Ｇアガロースビーズを、１ｍＬのＨＵＶＥＣ溶解物に添加し、チューブを、回転台上に４℃で１〜３日間置いた。ＩＰ反応チューブを、１ｍＬの完全Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ溶解緩衝液ですすぎ、２倍のＤＴＴを含有するローディング色素に再懸濁させた。チューブを９５℃で５分間インキュベートし、遠心分離し、Ｔｒｉｓグリシンゲルにウェルあたり２５μＬをロードした。試料を、ゲルで展開し、ＰＶＤＦ膜に転写し、一連のウエスタンブロットに付して、リン酸化チロシン（リン酸化Ｔｉｅ２およびリン酸化ＶＥＧＦＲ２）を検出し、続いて、総Ｔｉｅ２および総ＶＥＧＦＲ２についてブロットするために再探索した。ゲルを、１２５Ｖで７５分間流した後、ＰＶＤＦ膜に転写した。膜を、５％のＢＳＡ／０．０５％のＴｗｅｅｎ  Ｔｒｉｓ洗浄緩衝液中、回転台上で、室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした。一次抗体（ＰＹ９９；ＶＥＧＦＲ２−Ａ３；ＴＩＥ−２  Ａｂ３３）を、洗浄緩衝液中１：１０００希釈で添加し１時間置いた。二次抗体（抗マウスｈｒｐ）を、洗浄緩衝液中１：１０００希釈で添加し１時間置いた。膜を、ステップの間に、０．０５〜０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０＋Ｔｒｉｓ緩衝食塩水（ＴＢＳ）で３回すすいだ。ＥＣＬ検出システムを使用して、バンドを可視化した。再探索を、２００ｍＭのグリシンで２４〜４８時間処理されたロットにおいて行った。
ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１での処理は、ＶＥＧＦＲ２およびＴｉｅ２の増加されたリン酸化をもたらした（図２０）。ＨＰＴＰ−βに対して特異的なＨＣ２：ＬＣ１抗体での処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞において、Ａｎｇ１媒介Ｔｉｅ２活性化を増強した。二特異性抗体での処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞において、Ａｎｇ１媒介Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦ媒介ＶＥＧＦＲ２活性化をブロックした。上パネルは、それぞれ、リン酸化Ｔｉｅ２およびリン酸化ＶＥＧＦＲ２（上半分）、ならびに総Ｔｉｅ２およびＶＥＧＦＲ２（下半分）の検出を通して示されるように、Ｔｉｅ２活性化およびＶＥＧＦＲ２活性化を示すウエスタンブロットを提供する。下側パネルは、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する濃度測定比およびリン酸化されたＶＥＧＦＲ２の総ＶＥＧＦＲ２に対する濃度測定比を提供する。
（実施例１６）
二特異性抗体はＡｎｇ１媒介Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦ媒介ＶＥＧＦＲ２活性化をブロックする（免疫沈降およびウエスタンブロットアッセイ）
【０３８１】
ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ブタゼラチンでコーティングされたＴ７５フラスコに播種した。細胞維持を、完全培地（ＥＧＭまたはＥＧＭ−２）を使用して行い、トリプシン／ＥＤＴＡを使用して、１００ｍｍディッシュに継代した。３日後、１００ｍｍディッシュをすすぎ、基礎培地（ＥＢＭ、ＥＢＭ−２、ＯｐｔｉＭＥＭ  Ｉ）中、それぞれの図について示される通り、本開示の多特異性抗体の１つで、３７℃／５％ＣＯ２で３０分間、事前処理した。事前処理後、細胞を、基礎培地（リン酸緩衝食塩水、ＰＢＳ＋０．２％のウシ血清アルブミン、またはＯｐｔｉＭＥＭ  Ｉ）中、ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１で、３７℃／５％ＣＯ２で６分間、モック処理または処理した。処理後、細胞を１ｍＭのＮａＯＶを含有する氷冷ＰＢＳですすぎ、完全Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ溶解緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１３７ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮａＯＶ、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１μｇ／ｍＬのロイペプチン、１μｇ／ｍＬのペプスタチン）に溶解した。
【０３８２】
溶解物を、抗Ｔｉｅ２抗体および抗ＶＥＧＦＲ２抗体で免疫沈降させた。１〜１０μｇのＶＥＧＦＲ２抗体（ＭＡＢ３５７３、＃８９１０９）、ＴＩＥ−２抗体（Ａｂ３３）および２５μＬのプロテインＡ／Ｇアガロースビーズを、１ｍＬのＨＵＶＥＣ溶解物に添加し、チューブを、回転台上に４℃で１〜３日間置いた。ＩＰ反応チューブを、１ｍＬの完全Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ溶解緩衝液ですすぎ、２倍のＤＴＴを含有するローディング色素に再懸濁させた。チューブを９５℃で５分間インキュベートし、遠心分離し、Ｔｒｉｓグリシンゲルにウェルあたり２５μＬをロードした。試料を、ゲルで展開し、ＰＶＤＦ膜に転写し、一連のウエスタンブロットに付して、リン酸化チロシン（リン酸化Ｔｉｅ２およびリン酸化ＶＥＧＦＲ２）を検出し、続いて、総Ｔｉｅ２および総ＶＥＧＦＲ２についてブロットするために再探索した。ゲルを、１２５Ｖで７５分間流した後、ＰＶＤＦ膜に転写した。膜を、５％のＢＳＡ／０．０５％のＴｗｅｅｎ  Ｔｒｉｓ洗浄緩衝液中、回転台上で、室温（ＲＴ）で１時間ブロッキングした。一次抗体（ＰＹ９９；ＶＥＧＦＲ２−Ａ３；ＴＩＥ−２  Ａｂ３３）を、洗浄緩衝液中１：１０００希釈で添加し１時間置いた。二次抗体（抗マウスｈｒｐ）を、洗浄緩衝液中１：１０００希釈で添加し１時間置いた。膜を、ステップの間に、０．０５〜０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０＋Ｔｒｉｓ緩衝食塩水（ＴＢＳ）で３回すすいだ。ＥＣＬ検出システムを使用して、バンドを可視化した。再探索を、２００ｍＭのグリシンで２４〜４８時間処理されたロットにおいて行った。アッセイを、以下の図に示される通り、本開示の異なる多特異性抗体、ならびにＶＥＧＦおよびＡｎｇ１の異なる濃度を使用して、繰り返した。
【０３８３】
図２１Ａ、図２１Ｂおよび図２１Ｃについて、細胞を、モック事前処理、または５ｎＭもしくは５０ｎＭの以下の１つで事前処理した：（ｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１（ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体）の重鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価抗体；または（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価抗体。事前処理後、細胞を、ＶＥＧＦ（５ｎｇ／ｍＬ）およびＡｎｇ１（５０ｎｇ／ｍＬ）で、モック処理（−）または処理（＋）した。ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１での処理は、ＶＥＧＦＲ２およびＴｉｅ２の増加されたリン酸化をもたらした（図２１Ａ、図２１Ｂおよび図２１Ｃ）。二特異性抗体での処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞における場合を含め、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化をブロックした（図２１Ａ、図２１Ｂおよび図２１Ｃ）。図２１Ａは、それぞれ、リン酸化Ｔｉｅ２およびリン酸化ＶＥＧＦＲ２（上半分）、ならびに総Ｔｉｅ２およびＶＥＧＦＲ２（下半分）の検出を通して示されるように、Ｔｉｅ２活性化およびＶＥＧＦＲ２活性化を示すウエスタンブロットを提供する。図２１Ｂは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する濃度測定比を提供する。図２１Ｃは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＶＥＧＦＲ２の総ＶＥＧＦＲ２に対する濃度測定比を提供する。
【０３８４】
図２２Ａ、図２２Ｂおよび図２２Ｃについて、細胞を、モック事前処理、または５ｎＭの以下の抗体の１つで事前処理した：（ｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯ、ＨＣ２：ＬＣ１（ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体）の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価抗体；（ｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価抗体；または（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１：ＡＢＩ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体。事前処理後、細胞を、モック処理（−）、５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋）、または５０ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび２５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋＋＋）した。ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１での処理は、ＶＥＧＦＲ２およびＴｉｅ２の増加されたリン酸化をもたらした（図２２Ａ、図２２Ｂおよび図２２Ｃ）。二特異性抗体での処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞における場合を含め、Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦＲ２活性化をブロックした（図２２Ａ、図２２Ｂおよび図２２Ｃ）。図２２Ａは、それぞれ、リン酸化Ｔｉｅ２およびリン酸化ＶＥＧＦＲ２（上半分）、ならびに総Ｔｉｅ２およびＶＥＧＦＲ２（下半分）の検出を通して示されるように、Ｔｉｅ２活性化およびＶＥＧＦＲ２活性化を示すウエスタンブロットを提供する。図２２Ｂは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する濃度測定比を提供する。図２２Ｃは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＶＥＧＦＲ２の総ＶＥＧＦＲ２に対する濃度測定比を提供する。
（実施例１７）
二特異性抗体はＡｎｇ１媒介Ｔｉｅ２活性化を増強し、ＶＥＧＦ媒介ＶＥＧＦＲ２活性化をブロックする（電気化学発光アッセイ）
【０３８５】
ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ブタゼラチンでコーティングされたＴ７５フラスコに播種した。細胞維持を、完全培地（ＥＧＭまたはＥＧＭ−２）を使用して行い、トリプシン／ＥＤＴＡを使用して、１００ｍｍディッシュに継代した。３日後、１００ｍｍディッシュをすすぎ、基礎培地（ＥＢＭ、ＥＢＭ−２、ＯｐｔｉＭＥＭ  Ｉ）中、それぞれの図について下記で示される抗体の１つで、３７℃／５％ＣＯ２で３０分間、モック事前処理または事前処理した。
【０３８６】
事前処理後、細胞を、基礎培地（リン酸緩衝食塩水、ＰＢＳ＋０．２％のウシ血清アルブミン、またはＯｐｔｉＭＥＭ  Ｉ）中、ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１で、３７℃／５％ＣＯ２で６分間、モック処理または処理した。処理後、細胞を１ｍＭのＮａＯＶを含有する氷冷ＰＢＳですすぎ、完全Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ溶解緩衝液（２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１３７ｍＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＮａＯＶ、１ｍＭのＮａＦ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１μｇ／ｍＬのロイペプチン、１μｇ／ｍＬのペプスタチン）に溶解した。
【０３８７】
リン酸化されたＴｉｅ２およびリン酸化されたＶＥＧＦＲ２を、電気化学発光によって定量化した。一次抗体または捕捉抗体を、９６ウェルのＳｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒプレートにスポットした。５μＬのＴｉｅ２抗体（３０μｇ／ｍＬ、ＡＦ３１３）またはＶＥＧＦＲ２抗体（３０μｇ／ｍＬ、８９１０９）を、１時間（室温で）または終夜（４℃）でコーティングした。それぞれのプレートを、ＴＢＳ＋０．０２％のＴｗｅｅｎ  ２０で３回洗浄した（これは、それぞれのステップの間に行った）。ウェルを、洗浄緩衝液中のＭＳＤブロッカーＡ−３％で、回転台上で、室温で１時間ブロッキングした。２５μＬのＨＵＶＥＣ溶解物を、それぞれのウェルに直接添加し、回転台上で、室温で１時間インキュベートした。検出抗体（１）を、１％のブロッカー／洗浄緩衝液中（Ａｂ３３；ＡＦ２７２０／Ｙ９９２；ｐＴｙｒ  １２１４；ＮＢ１００  ５３０）、２μｇ／ｍＬに希釈し、２５μＬ／ウェルを、回転台上で、室温で１時間インキュベートした。検出抗体（２）を、１％のブロッカー／洗浄緩衝液中（ヤギ抗マウス、ＧＡＭ；ヤギ抗ウサギ、ＧＡＲ；両方ともスルホタグ標識化）、１μｇ／ｍＬに希釈し、２５μＬ／ウェルを、回転台上で、室温で１時間インキュベートした。シグナルを、ＭＳＤイメージャー装置において、それぞれのウェル中で、１５０μＬのＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）読み取り緩衝液を使用して捕捉した。アッセイを、以下の図について示される通り、本開示の異なる多特異性抗体、ならびにＶＥＧＦおよびＡｎｇ１の異なる濃度を使用して、繰り返した。
【０３８８】
図２３Ａおよび図２３Ｂについて、細胞を、モック処理、または５ｎＭの以下の抗体の１つで事前処理した：（ｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１（ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体）の重鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｉ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＢＲＯ、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体；（ｉｖ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｖ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｖｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体；（ｖｉｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｖｉｉｉ）ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＢＩ、ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；または（ｉｘ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体。図２３Ａおよび図２３Ｂは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する比、およびリン酸化されたＶＥＧＦＲ２の総ＶＥＧＦＲ２に対する比をそれぞれ提供する。処理は以下の通りであった：モック処理（−）、５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋）、または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび２５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋＋＋）。ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１での処理は、Ｔｉｅ２（図２３Ａ）およびＶＥＧＦＲ２（図２３Ｂ）の増加されたリン酸化をもたらした。多特異性抗体での事前処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞において、Ｔｉｅ２活性化を増強し（図２３Ａ）、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害した（図２３Ｂ）。
【０３８９】
図２４Ａおよび図２４Ｂについて、細胞を、モック処理、または５ｎＭの以下の抗体の１つで事前処理した：（ｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯ、ＨＣ２：ＬＣ１（ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体）の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価（hexaavalent）二特異性抗体；（ｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体；または（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体。図２４Ａおよび図２４Ｂは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する比、およびリン酸化されたＶＥＧＦＲ２の総ＶＥＧＦＲ２に対する比をそれぞれ提供する。処理は以下の通りであった：モック処理（−）、５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋）、または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび２５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋＋＋）。ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１での処理は、Ｔｉｅ２（図２４Ａ）およびＶＥＧＦＲ２（図２４Ｂ）の増加されたリン酸化をもたらした。多特異性抗体での事前処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞において、Ｔｉｅ２活性化を増強し（図２４Ａ）、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害した（図２４Ｂ）。
【０３９０】
図２５Ａおよび図２５Ｂについて、細胞を、モック処理、または５もしくは５０ｎＭの以下の抗体の１つで事前処理した：（ｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１（ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体）の重鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；または（ｉｉ）ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体。図２５Ａおよび図２５Ｂは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する比、およびリン酸化されたＶＥＧＦＲ２の総ＶＥＧＦＲ２に対する比をそれぞれ提供する。処理は以下の通りであった：モック処理（−）、５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋）、または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび２５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋＋＋）。ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１での処理は、Ｔｉｅ２（図２５Ａ）およびＶＥＧＦＲ２（図２５Ｂ）の増加されたリン酸化をもたらした。多特異性抗体での事前処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞において、Ｔｉｅ２活性化を増強し（図２５Ａ）、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害した（図２５Ｂ）。
【０３９１】
図２６Ａおよび図２６Ｂについて、細胞を、モック処理、または５ｎＭもしくは５０ｎＭの以下の抗体の１つで事前処理した：（ｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１（ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体）の重鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体；または（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１：ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体。図２６Ａおよび図２６Ｂは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する比、およびリン酸化されたＶＥＧＦＲ２の総ＶＥＧＦＲ２に対する比をそれぞれ提供する。処理は以下の通りであった：モック処理（−）、または５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋）。ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１での処理は、Ｔｉｅ２（図２６Ａ）およびＶＥＧＦＲ２（図２６Ｂ）の増加されたリン酸化をもたらした。多特異性抗体での事前処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞において、Ｔｉｅ２活性化を増強し（図２６Ａ）、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害した（図２６Ｂ）。
【０３９２】
図２７Ａおよび図２７Ｂについて、細胞を、モック処理、または５ｎＭもしくは５０ｎＭの以下の抗体の１つで事前処理した：（ｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１（ＨＰＴＰ−βに対して特異的なヒト化モノクローナル抗体）の重鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体；（ｉｉ）ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩ、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖および軽鎖のＣ末端と融合されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む六価二特異性抗体；または（ｉｉｉ）ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖のＣ末端と融合されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを含む四価二特異性抗体。図２７Ａおよび図２７Ｂは、未処理細胞に対して正規化された、リン酸化されたＴｉｅ２の総Ｔｉｅ２に対する比、およびリン酸化されたＶＥＧＦＲ２の総ＶＥＧＦＲ２に対する比をそれぞれ提供する。処理は以下の通りであった：モック処理（−）、または２５ｎｇ／ｍＬのＶＥＧＦおよび２５０ｎｇ／ｍＬのＡｎｇ１で処理（＋）。ＶＥＧＦおよびＡｎｇ１での処理は、Ｔｉｅ２（図２７Ａ）およびＶＥＧＦＲ２（図２７Ｂ）の増加されたリン酸化をもたらした。多特異性抗体での事前処理は、Ａｎｇ１およびＶＥＧＦで処理された細胞において、Ｔｉｅ２活性化を増強し（図２７Ａ）、ＶＥＧＦＲ２活性化を阻害した（図２７Ｂ）。
（実施例１８）
多特異性抗体高は親和性でＨＰＴＰ−βおよびＶＥＧＦに結合する（ｂｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴アッセイ）
【０３９３】
ｂｉａｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴アッセイを行って、ＶＥＧＦおよびＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）に対する本開示の抗体の平衡解離定数（ＫＤ）を決定した。結合実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００／Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ−２００装置において、２５℃で行った。
【０３９４】
アッセイ緩衝液は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡおよび０．０５％のＰ２０（ポリオキシエチレンソルビタン）を含有した。再生緩衝液は、１０ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ１．７５）を含有した。コンジュゲーション緩衝液は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５）を含有した。５μＬ／分の流速を、リガンドを捕捉するために使用した。３０μＬ／分の流速を、動態分析のために使用した。
【０３９５】
抗体のＨＰＴＰ−βへの結合の分析のために、ポリヒスチジンタグ化ＨＰＴＰ−β細胞外ドメイン（ＥＣＤ）１／２を、抗Ｈｉｓ抗体を介して、チップ表面上に固定化した。ヤギ抗Ｈｉｓ抗体を、最初に、ＣＭ５（カルボキシメチル化デキストランコーティング）チップのフローセル２において、ＥＤＣ／ＮＨＳ（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド）／Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド）カップリング化学反応を使用する直接固定化によって、チップの表面上に固定化した。非占有部位を、１Ｍのエタノールアミンでブロッキングした。Ｈｉｓタグ化リガンドＨＰＴＰ−β  １／２ＥＣＤを、５０の応答ユニット（ＲＵ）で捕捉した。分析物（抗体）は、一度に単一の分析物濃度でチップ上を流れた。分析物のリガンドへの結合を、リアルタイムで監視して、結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度を得た。平衡定数（ＫＤ）を、観察されたｋａおよびｋｄから計算した。
【０３９６】
抗体のＶＥＧＦへの結合の分析のために、抗体を、ＣＭ５チップのフローセル２において、ＥＣＤ／ＮＨＳカップリング化学反応を使用する直接固定化によって、チップの表面上に固定化した。非占有部位を、１Ｍのエタノールアミンでブロッキングした。分析物（ＶＥＧＦ）は、一度に単一の分析物濃度でチップ上を流れた。分析物のリガンドへの結合を、リアルタイムで監視して、結合（ｋａ）および解離（ｋｄ）速度を得た。平衡定数（ＫＤ）を、観察されたｋａおよびｋｄから計算した。
【０３９７】
分析物のスカウトを、１０ｎＭの分析物を使用して行って、およそのＫＤを決定した。カイ二乗分析を、実際のセンサーグラムおよびＢＩＡｎａｌｙｓｉｓソフトウェアから発生させたセンサーグラムの間で行って、分析の正確さを確認し、１〜２の値を、正確であると見なし、１を下回ると非常に正確であると見なした。
【０３９８】
表４６は、単一のリガンド濃度で行われたスカウト実験に基づく平衡解離定数を提供する。ＮＢ＝有意な結合は検出されなかった。
【表４６−１】
2022502367.tif 000071
【表４６−２】
2022502367.tif 000072
【０３９９】
全動態分析を、０ｎＭ、０．６２５ｎＭ、１．２５ｎＭ、５ｎＭおよび１０ｎＭの分析物を使用して行って、ＫＤを決定した。カイ二乗分析を、実際のセンサーグラムおよびＢＩＡｎａｌｙｓｉｓソフトウェアから発生させたセンサーグラムの間で行って、分析の正確さを確認し、１〜２の値を、正確であると見なし、１を下回ると非常に正確であると見なした。
【０４００】
表４７は、複数のリガンド濃度で行われた全動態実験に基づく平衡解離定数を提供する。ＮＢ＝有意な結合は検出されなかった。
【表４７】
2022502367.tif 000073
【０４０１】
これらの結果は、多特異性抗体のＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１、ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１、ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１、ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２：ＬＣ１−ＢＲＯ、ＨＣ２：ＬＣ１−ＡＢＩ、ＨＣ２−ＡＦＬ：ＬＣ１−ＡＦＬ、ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＢＲＯおよびＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＡＢＩが、高親和性で、ＨＰＴＰ−βおよびＶＥＧＦに結合することを実証する。
（実施例１９）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１、アビシパル由来配列およびブロルシズマブ由来配列を含む六価抗体
【０４０２】
Ｃ末端に付加されたアビシパル由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する重鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせる：
１）配列番号１４の残基１〜４６７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２４４（アビシパル由来配列）。
【０４０３】
Ｃ末端に付加されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせる：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２３（ブロルシズマブ由来配列）。
【０４０４】
得られる配列番号２３１および配列番号２１８のポリペプチドを、共発現させて、表４８に示される六価抗体ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＢＲＯを提供する。配列番号２３１のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２１８のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＢＲＯは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＡＢＩ：ＬＣ１−ＢＲＯは、配列番号２５７および配列番号２５８を含み得る。抗体は、標的分子に対して二特異性であり、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦに対する特異性を含む。抗体は、標的エピトープに対して三特異性であり、１つのＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）エピトープおよび２つのＶＥＧＦエピトープに対する特異性を含む。
【表４８−１】
2022502367.tif 000074
【表４８−２】
2022502367.tif 000075
（実施例２０）
抗体ＨＣ２：ＬＣ１、アフリベルセプト由来配列およびブロルシズマブ由来配列を含む六価抗体
【０４０５】
Ｃ末端に付加されたブロルシズマブ由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する重鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせる：
１）配列番号１４（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の重鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２３（ブロルシズマブ由来配列）。
【０４０６】
Ｃ末端に付加されたアフリベルセプト由来ＶＥＧＦ結合性ドメインを有する軽鎖を生じさせるために、以下に添付のＮ末端からＣ末端のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を生じさせる：
１）配列番号１７（抗体ＨＣ２：ＬＣ１の軽鎖）；
２）配列番号３１（リンカーペプチド、下線）；および
３）配列番号２２（アフリベルセプト由来配列）。
【０４０７】
得られる配列番号１５０および配列番号２１９のポリペプチドを、共発現させて、表４９に示される六価抗体ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＡＦＬを提供する。配列番号１５０のアミノ酸１〜１９は、重鎖シグナルペプチド（配列番号１１）である。配列番号２１９のアミノ酸１〜２０は、軽鎖シグナルペプチド（配列番号１２）である。一部の実施形態では、成熟ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＡＦＬは、シグナルペプチドを含まない。例えば、本開示の成熟ＨＣ２−ＢＲＯ：ＬＣ１−ＡＦＬは、配列番号２５５および配列番号２５９を含み得る。抗体は、標的分子に対して二特異性であり、ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦに対する特異性を含む。抗体は、標的エピトープに対して三特異性であり、１つのＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）エピトープおよび２つのＶＥＧＦエピトープに対する特異性を含む。
【表４９】
2022502367.tif 000076
【０４０８】
実施形態
以下の非限定的な実施形態は、本開示の実例を提供するが、本開示の範囲を限定するものではない。
【０４０９】
実施形態１．（ａ）ホスファターゼをモジュレートする第１のドメインであって、ホスファターゼが、Ｔｉｅ２をモジュレートする、第１のドメイン；および（ｂ）受容体チロシンキナーゼアゴニストと特異的に結合する第２のドメインを含む化合物。
【０４１０】
実施形態２．抗体である、実施形態１の化合物。
【０４１１】
実施形態３．多特異性抗体である、実施形態１〜２のいずれか１つの化合物。
【０４１２】
実施形態４．四価抗体である、実施形態１〜３のいずれか１つの化合物。
【０４１３】
実施形態５．六価抗体である、実施形態１〜３のいずれか１つの化合物。
【０４１４】
実施形態６．二特異性抗体である、実施形態１〜５のいずれか１つの化合物。
【０４１５】
実施形態７．四価二特異性抗体である、実施形態１〜４および６のいずれか１つの化合物。
【０４１６】
実施形態８．六価二特異性抗体である、実施形態１〜３および５〜６のいずれか１つの化合物。
【０４１７】
実施形態９．Ｔｉｅ２をモジュレートするホスファターゼを阻害する、実施形態１〜８のいずれか１つの化合物。
【０４１８】
実施形態１０．ＨＰＴＰ−βを阻害する、実施形態１〜９のいずれか１つの化合物。
【０４１９】
実施形態１１．ＶＥ−ＰＴＰを阻害する、実施形態１〜１０のいずれか１つの化合物。
【０４２０】
実施形態１２．Ｔｉｅ２を活性化する、実施形態１〜１１のいずれか１つの化合物。
【０４２１】
実施形態１３．受容体チロシンキナーゼアゴニストを阻害する、実施形態１〜１２のいずれか１つの化合物。
【０４２２】
実施形態１４．ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を阻害する、実施形態１〜１３のいずれか１つの化合物。
【０４２３】
実施形態１５．ＶＥＧＦを阻害する、実施形態１〜１４のいずれか１つの化合物。
【０４２４】
実施形態１６．ＶＥＧＦ−Ａを阻害する、実施形態１〜１５のいずれか１つの化合物。
【０４２５】
実施形態１７．Ｔｉｅ２をモジュレートするホスファターゼを阻害し、かつ受容体チロシンキナーゼアゴニストを阻害する、実施形態１〜１６のいずれか１つの化合物。
【０４２６】
実施形態１８．ホスファターゼが、ＨＰＴＰ−βであり、受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦである、実施形態１〜１７のいずれか１つの化合物。
【０４２７】
実施形態１９．ホスファターゼが、ＨＰＴＰ−βであり、受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ−Ａである、実施形態１〜１８のいずれか１つの化合物。
【０４２８】
実施形態２０．Ｔｉｅ２を活性化し、受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦである、実施形態１〜１９のいずれか１つの化合物。
【０４２９】
実施形態２１．Ｔｉｅ２を活性化し、受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ−Ａである、実施形態１〜２０のいずれか１つの化合物。
【０４３０】
実施形態２２．Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートするホスファターゼが、タンパク質チロシンホスファターゼである、実施形態１〜２１のいずれか１つの化合物。
【０４３１】
実施形態２３．Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートするホスファターゼが、受容体様タンパク質チロシンホスファターゼである、実施形態１〜２２のいずれか１つの化合物。
【０４３２】
実施形態２４．Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートするホスファターゼが、ＨＰＴＰ−βである、実施形態１〜２３のいずれか１つの化合物。
【０４３３】
実施形態２５．Ｔｉｅ２シグナル伝達をモジュレートするホスファターゼが、ＶＥ−ＰＴＰである、実施形態１〜２３のいずれか１つの化合物。
【０４３４】
実施形態２６．受容体チロシンキナーゼアゴニストが、増殖因子である、実施形態１〜２５のいずれか１つの化合物。
【０４３５】
実施形態２７．受容体チロシンキナーゼアゴニストが、システインノット増殖因子スーパーファミリーメンバーである、実施形態１〜２６のいずれか１つの化合物。
【０４３６】
実施形態２８．受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＰＤＧＦファミリーメンバーである、実施形態１〜２７のいずれか１つの化合物。
【０４３７】
実施形態２９．受容体チロシンキナーゼアゴニストが、血管新生促進因子である、実施形態１〜２８のいずれか１つの化合物。
【０４３８】
実施形態３０．受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ受容体アゴニストである、実施形態１〜２９のいずれか１つの化合物。
【０４３９】
実施形態３１．受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦである、実施形態１〜３０のいずれか１つの化合物。
【０４４０】
実施形態３２．受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ−Ａである、実施形態１〜３１のいずれか１つの化合物。
【０４４１】
実施形態３３．第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βに結合する、実施形態１〜３２のいずれか１つの化合物。
【０４４２】
実施形態３４．第１のドメインが、ＶＥ−ＰＴＰに結合する、実施形態１〜３３のいずれか１つの化合物。
【０４４３】
実施形態３５．第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βの細胞外ドメインに結合する、実施形態１〜３４のいずれか１つの化合物。
【０４４４】
実施形態３６．第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βの細胞外ドメインの第１のＦＮ３リピートに結合する、実施形態１〜３４のいずれか１つの化合物。
【０４４５】
実施形態３７．第２のドメインが、ＶＥＧＦに結合する、実施形態１〜３６のいずれか１つの化合物。
【０４４６】
実施形態３８．第２のドメインが、ＶＥＧＦ−Ａに結合する、実施形態１〜３７のいずれか１つの化合物。
【０４４７】
実施形態３９．第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βに結合し、受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦである、実施形態１〜３８のいずれか１つの化合物。
【０４４８】
実施形態４０．第１のドメインが、ＨＰＴＰ−βに結合し、受容体チロシンキナーゼアゴニストが、ＶＥＧＦ−Ａである、実施形態１〜３９のいずれか１つの化合物。
【０４４９】
実施形態４１．第１のドメインが、配列番号７６〜９８のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４０のいずれか１つの化合物。
【０４５０】
実施形態４２．第１のドメインが、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４１のいずれか１つの化合物。
【０４５１】
実施形態４３．第１のドメインが、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４２のいずれか１つの化合物。
【０４５２】
実施形態４４．第１のドメインが、配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４３のいずれか１つの化合物。
【０４５３】
実施形態４５．第１のドメインが、配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４４のいずれか１つの化合物。
【０４５４】
実施形態４６．第１のドメインが、配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４５のいずれか１つの化合物。
【０４５５】
実施形態４７．第１のドメインが、配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４６のいずれか１つの化合物。
【０４５６】
実施形態４８．第１のドメインが、（ａ）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列；（ｂ）配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列；（ｃ）配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列；（ｄ）配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列；（ｅ）配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列；および（ｆ）配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４７のいずれか１つの化合物。
【０４５７】
実施形態４９．第２のドメインが、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４８のいずれか１つの化合物。
【０４５８】
実施形態５０．第２のドメインが、配列番号９９〜１４６のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜４９のいずれか１つの化合物。
【０４５９】
実施形態５１．第２のドメインが、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２または配列番号１１３と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５０のいずれか１つの化合物。
【０４６０】
実施形態５２．第２のドメインが、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５１のいずれか１つの化合物。
【０４６１】
実施形態５３．第２のドメインが、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０または配列番号１３１と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５２のいずれか１つの化合物。
【０４６２】
実施形態５４．第２のドメインが、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６または配列番号１３７と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５３のいずれか１つの化合物。
【０４６３】
実施形態５５．第２のドメインが、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５４のいずれか１つの化合物。
【０４６４】
実施形態５６．第２のドメインが、配列番号１４４、配列番号１４５または配列番号１４６と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５５のいずれか１つの化合物。
【０４６５】
実施形態５７．第２のドメインが、（ａ）配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２または配列番号１１３と少なくとも８０％同一である配列；（ｂ）配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３と少なくとも８０％同一である配列；（ｃ）配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０または配列番号１３１と少なくとも８０％同一である配列；（ｄ）配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６または配列番号１３７と少なくとも８０％同一である配列；（ｅ）配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３と少なくとも８０％同一である配列；および（ｆ）配列番号１４４、配列番号１４５または配列番号１４６と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５６のいずれか１つの化合物。
【０４６６】
実施形態５８．第２のドメインが、配列番号１４７、配列番号１４８、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５７のいずれか１つの化合物。
【０４６７】
実施形態５９．（ａ）第１のドメインが、配列番号７６〜９８のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、配列番号９９〜１４８のいずれか１つまたは配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５８のいずれか１つの化合物。
【０４６８】
実施形態６０．（ａ）第１のドメインが、（ｉ）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｉ）配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｉｉ）配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｖ）配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列；（ｖ）配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列；および（ｖｉ）配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、（ｉ）配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２または配列番号１１３と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｉ）配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２または配列番号１２３と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｉｉ）配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０または配列番号１３１と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｖ）配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４、配列番号１３５、配列番号１３６または配列番号１３７と少なくとも８０％同一である配列；（ｖ）配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２または配列番号１４３と少なくとも８０％同一である配列；および（ｖｉ）配列番号１４４、配列番号１４５または配列番号１４６と少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜５９のいずれか１つの化合物。
【０４６９】
実施形態６１．（ａ）第１のドメインが、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜６０のいずれか１つの化合物。
【０４７０】
実施形態６２．（ａ）第１のドメインが、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜６１のいずれか１つの化合物。
【０４７１】
実施形態６３．（ａ）第１のドメインが、配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜６２のいずれか１つの化合物。
【０４７２】
実施形態６４．（ａ）第１のドメインが、配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜６３のいずれか１つの化合物。
【０４７３】
実施形態６５．（ａ）第１のドメインが、配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜６４のいずれか１つの化合物。
【０４７４】
実施形態６６．（ａ）第１のドメインが、配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜６５のいずれか１つの化合物。
【０４７５】
実施形態６７．（ａ）第１のドメインが、（ｉ）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９または配列番号８０と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｉ）配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６または配列番号８７と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｉｉ）配列番号８８、配列番号８９または配列番号９０と少なくとも８０％同一である配列；（ｉｖ）配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３と少なくとも８０％同一である配列；（ｖ）配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６と少なくとも８０％同一である配列；および（ｖｉ）配列番号９７または配列番号９８と少なくとも８０％同一である配列を含み；（ｂ）第２のドメインが、配列番号２２、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号２４４、または配列番号２３３〜２４２のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含む、実施形態１〜６６のいずれか１つの化合物。
【０４７６】
実施形態６８．（ａ）配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１または配列番号２３１と少なくとも８０％同一である重鎖配列；および（ｂ）配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０と少なくとも８０％同一である軽鎖配列を含む、実施形態１〜６７のいずれか１つの化合物。
【０４７７】
実施形態６９．（ａ）配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列；（ｂ）配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５または配列番号１６と少なくとも８０％同一である配列；（ｃ）配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列；および（ｄ）配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０と少なくとも８０％同一である配列を含む四価二特異性抗体である、実施形態１〜４、６〜７および９〜６８のいずれか１つの化合物。
【０４７８】
実施形態７０．（ａ）リンカーを含む第１の鎖であって、リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、リンカーのＮ末端が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５または配列番号１６と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、リンカーのＣ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第１の鎖；および（ｂ）配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０と少なくとも８０％同一である配列を含む第２の鎖を含む四価二特異性抗体である、実施形態１〜４、６〜７および９〜６９のいずれか１つの化合物。
【０４７９】
実施形態７１．（ａ）配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５または配列番号１６と少なくとも８０％同一である配列を含む第１の鎖；および（ｂ）リンカーを含む第２の鎖であって、リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、リンカーのＮ末端が、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、リンカーのＣ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第２の鎖を含む四価二特異性抗体である、実施形態１〜４、６〜７、９〜６７および６９のいずれか１つの化合物。
【０４８０】
実施形態７２．（ａ）配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列；（ｂ）配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５または配列番号１６と少なくとも８０％同一である配列；（ｃ）配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列；および（ｄ）配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０と少なくとも８０％同一である配列を含む六価二特異性抗体である、実施形態１〜３、５〜６および８〜６７のいずれか１つの化合物。
【０４８１】
実施形態７３．（ａ）リンカーを含む第１の鎖であって、リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、リンカーのＮ末端が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５または配列番号１６と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、リンカーのＣ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第１の鎖；および（ｂ）リンカーを含む第２の鎖であって、リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、リンカーのＮ末端が、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９または配列番号２０と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、リンカーのＣ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第２の鎖を含む六価二特異性抗体である、実施形態１〜３、５〜６、８〜６７および７２のいずれか１つの化合物。
【０４８２】
実施形態７４．（ａ）配列番号２４５、または配列番号１３〜１６のいずれか１つと少なくとも８０％同一である重鎖配列；および（ｂ）配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２３２または配列番号２４３と少なくとも８０％同一である軽鎖配列を含む、実施形態１〜６７のいずれか１つの化合物。
【０４８３】
実施形態７５．（ａ）配列番号１４９、配列番号１５０、配列番号１５１または配列番号２３１と少なくとも８０％同一である重鎖配列；および（ｂ）配列番号２１８、配列番号２１９、配列番号２３２または配列番号２４３と少なくとも８０％同一である軽鎖配列を含む、実施形態１〜６７のいずれか１つの化合物。
【０４８４】
実施形態７６．化合物のＨＰＴＰ−βに対する結合親和性（ＫＤ）が、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭである、実施形態１〜７５のいずれか１つの化合物。
【０４８５】
実施形態７７．化合物のＶＥＧＦに対する結合親和性（ＫＤ）が、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭである、実施形態１〜７６のいずれか１つの化合物。
【０４８６】
実施形態７８．化合物のＨＰＴＰ−βに対する結合親和性（ＫＤ）が、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭであり、化合物のＶＥＧＦに対する結合親和性（ＫＤ）が、約３０ｆＭ〜約７０ｎＭである、実施形態１〜７５のいずれか１つの化合物。
【０４８７】
実施形態７９．それを必要とする対象における状態を処置する方法であって、治療有効量の実施形態１〜７８のいずれか１つの化合物を対象に投与することを含む、方法。
【０４８８】
実施形態８０．状態が、眼の状態である、実施形態７９の方法。
【０４８９】
実施形態８１．状態が、糖尿病性網膜症である、実施形態７９〜８０のいずれか１つの方法。
【０４９０】
実施形態８２．状態が、新血管形成である、実施形態７９〜８０のいずれか１つの方法。
【０４９１】
実施形態８３．状態が、血管漏出である、実施形態７９〜８０のいずれか１つの方法。
【０４９２】
実施形態８４．状態が、増加した眼圧である、実施形態７９〜８０のいずれか１つの方法。
【０４９３】
実施形態８５．状態が、眼球浮腫である、実施形態７９〜８０のいずれか１つの方法。
【０４９４】
実施形態８６．状態が、糖尿病性黄斑浮腫である、実施形態７９〜８０および８５のいずれか１つの方法。
【０４９５】
実施形態８７．状態が、高眼圧症である、実施形態７９〜８０のいずれか１つの方法。
【０４９６】
実施形態８８．状態が、眼の炎症である、実施形態７９〜８０のいずれか１つの方法。
【０４９７】
実施形態８９．状態が、緑内障である、実施形態７９〜８０のいずれか１つの方法。
【０４９８】
実施形態９０．投与が、対象の目に対してである、実施形態７９〜８９のいずれか１つの方法。
【０４９９】
実施形態９１．投与が、硝子体内である、実施形態７９〜９０のいずれか１つの方法。
【０５００】
実施形態９２．投与が、皮下である、実施形態７９〜８９のいずれか１つの方法。
【０５０１】
実施形態９３．投与が、局所である、実施形態７９〜９０のいずれか１つの方法。
【０５０２】
実施形態９４．対象が、ヒトである、実施形態７９〜９３のいずれか１つの方法。
【０５０３】
実施形態９５．治療有効量が、約０．２５ｍｇ〜約２００ｍｇである、実施形態７９〜９４のいずれか１つの方法。
【０５０４】
実施形態９６．治療有効量が、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである、実施形態７９〜９５のいずれか１つの方法。
【０５０５】
実施形態９７．治療有効量が、約１ｍｇ〜約５０ｍｇである、実施形態７９〜９５のいずれか１つの方法。
【０５０６】
実施形態９８．治療有効量が、約５０ｍｇ〜約２００ｍｇである、実施形態７９〜９５のいずれか１つの方法。
【０５０７】
実施形態９９．（ａ）配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６または配列番号２５７と少なくとも８０％同一である重鎖配列；および（ｂ）配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である軽鎖配列を含む、実施形態１〜６７のいずれか１つの化合物。
【０５０８】
実施形態１００．（ａ）配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列；（ｂ）配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列；（ｃ）配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列；および（ｄ）配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列を含む四価二特異性抗体である、実施形態１〜４、６〜７および９〜６８のいずれか１つの化合物。
【０５０９】
実施形態１０１．（ａ）リンカーを含む第１の鎖であって、リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、リンカーのＮ末端が、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、リンカーのＣ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第１の鎖；および（ｂ）配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列を含む第２の鎖を含む四価二特異性抗体である、実施形態１〜４、６〜７および９〜６９のいずれか１つの化合物。
【０５１０】
実施形態１０２．（ａ）配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列を含む第１の鎖；および（ｂ）リンカーを含む第２の鎖であって、リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、リンカーのＮ末端が、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、リンカーのＣ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第２の鎖を含む四価二特異性抗体である、実施形態１〜４、６〜７、９〜６７および６９のいずれか１つの化合物。
【０５１１】
実施形態１０３．（ａ）配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列；（ｂ）配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列；（ｃ）配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列；および（ｄ）配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列を含む六価二特異性抗体である、実施形態１〜３、５〜６および８〜６７のいずれか１つの化合物。
【０５１２】
実施形態１０４．（ａ）リンカーを含む第１の鎖であって、リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、リンカーのＮ末端が、配列番号２４６、配列番号２４７、配列番号２４８または配列番号２４９と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、リンカーのＣ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第１の鎖；および（ｂ）リンカーを含む第２の鎖であって、リンカーが、配列番号３１〜７５のいずれか１つと少なくとも８０％同一である配列を含み、リンカーが、Ｎ末端およびＣ末端を含み、リンカーのＮ末端が、配列番号２５０、配列番号２５１、配列番号２５２または配列番号２５３と少なくとも８０％同一である配列のＣ末端に結合されており、リンカーのＣ末端が、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２８または配列番号２４４と少なくとも８０％同一である配列のＮ末端に結合されている、第２の鎖を含む六価二特異性抗体である、実施形態１〜３、５〜６、８〜６７および７２のいずれか１つの化合物。
【０５１３】
実施形態１０５．（ａ）配列番号２６２、または配列番号２４６〜２４９のいずれか１つと少なくとも８０％同一である重鎖配列；および（ｂ）配列番号２５８、配列番号２５９、配列番号２６１または配列番号２６０と少なくとも８０％同一である軽鎖配列を含む、実施形態１〜６７のいずれか１つの化合物。
【０５１４】
実施形態１０６．（ａ）配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２５６または配列番号２５７と少なくとも８０％同一である重鎖配列；および（ｂ）配列番号２５８、配列番号２５９、配列番号２６１または配列番号２６０と少なくとも８０％同一である軽鎖配列を含む、実施形態１〜３、５〜６および８〜６７のいずれか１つの化合物。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１−１】
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【図２１−２】
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【図２２−１】
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【図２２−２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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