(57)【要約】  免疫調節ペプチド阻害剤を含む医薬製剤を調製するのに適する医薬品を本明細書に記載する。免疫調節ペプチド阻害剤を含む医薬製剤を本明細書に記載する。免疫調節ペプチド阻害剤を含む医薬製剤を投与することによって、癌の症状を改善、抑制、低減するか、又は癌を治療する方法も本明細書に記載する。【選択肢図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の溶液であって、前記第１の溶液に溶解されたアミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む単離ペプチドを含み、７未満又は約７未満のｐＨ、及び準等張モル浸透圧濃度を有する、第１の溶液；並びに
等張化剤及び塩基を含む第２の溶液、
を含み、
前記第１及び第２の溶液が、互いに組み合わされると等張性ゲルを作製し、前記等張性ゲルが、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度及び６．５〜７．５又は約６．５〜７．５のｐＨで前記単離ペプチドを含む、医薬品。
【請求項２】
前記第１の溶液が、直径が０．２μＭ超の粒子を実質的に含まないか又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まず、かつ前記第２の溶液が、直径が０．２μＭ超か又は直径が約０．２μＭ超の粒子を実質的に含まない、請求項１に記載の医薬品。
【請求項３】
前記第１の溶液が、１０ｍＭ以下のＮａＣｌ又は約１０ｍＭ以下であるがゼロではないＮａＣｌを含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項４】
前記第１の溶液が、ＮａＣｌを含まない、請求項１〜２のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項５】
前記第１の溶液が、１．５ｍＭ又は約１．５ｍＭ又はそれより低いが、ゼロではない酢酸ナトリウムである緩衝能を有する緩衝液をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項６】
前記第１の溶液が、１．５ｍＭ以下又は約１．５ｍＭ以下の濃度又はそれより低いがゼロではない酢酸ナトリウムをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項７】
前記第１の溶液が、緩衝液を含まない、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項８】
前記等張化剤が、ＮａＣｌであり、かつ前記第２の溶液が、１００ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌ又は約１００ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌを含むようにゲル用に構成される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項９】
前記第１の溶液が、実質的にゲルを含まない、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項１０】
前記第１の溶液中に溶解された前記単離ペプチドが、実質的にβシート構造ではない、請求項１〜９のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項１１】
前記第１の溶液が、少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で単離ペプチドを含むようにゲル用に構成される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項１２】
前記単離ペプチドが、３０個以下のアミノ酸残基を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項１３】
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項１４】
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項１５】
前記第１の溶液が、少なくとも１２〜２５ヶ月間又は少なくとも約１２〜２５ヶ月間５℃で前記第１の溶液に溶解された前記単離ペプチドの少なくとも９５％又は少なくとも約９５％を維持できる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項１６】
前記第１の溶液及び第２の溶液が、
アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌの単離ペプチド；
３０〜４０ｍＭ又は少なくとも約３０〜４０ｍＭの酢酸；
１．２〜１．６ｍＭ又は少なくとも約１．２〜１．６ｍＭの酢酸ナトリウム；
３０ｍＭ以下又は約３０ｍＭ以下の水酸化ナトリウム；及び
１００〜１２０ｍＭ又は約１００〜１２０ｍＭの塩化ナトリウム
を含むようにゲル用に構成され、
前記ゲルが、２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ又は約２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌのモル浸透圧濃度を有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の医薬品。
【請求項１７】
前記方法が、
少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度で前記前駆体溶液に溶解されたアミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む単離ペプチドを含む前駆体溶液を無菌濾過することであって、前記前駆体溶液が、前記第１の溶液を生成する、７未満又は約７未満のｐＨ及び準等張モル浸透圧濃度を有する、無菌濾過すること；
等張化剤及び塩基を含む前記第２の溶液を提供すること
を含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の医薬品を製造する方法。
【請求項１８】
前記前駆体溶液が、約０．２μＭ又は０．２μＭの孔径のフィルターで滅菌濾過される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記前駆体溶液が、４．５未満又は約４．５未満のｐＨを有する、請求項１７〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記単離ペプチドが、３０個以下のアミノ酸残基を含む、請求項１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記方法が、前記第１の溶液と前記第２の溶液とを組み合わせて前記ゲルを形成することを含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の医薬品から医薬製剤を調製する方法。
【請求項２４】
アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌの単離ペプチド；
酢酸及び酢酸ナトリウムを含み、１．６ｍＭ以下又は約１．６ｍＭ以下の酢酸ナトリウムを含む緩衝系；および
等張化剤
を含むゲル含む医薬製剤であって、前記ゲルが、等張性でありかつ４．５〜７．５又は約４．５〜７．５のｐＨを有する、医薬製剤。
【請求項２５】
前記ゲルが、直径が超の又は約０．２μＭ超の粒子を実質的に含まない、請求項２４に記載の医薬製剤。
【請求項２６】
前記等張化剤が、１００〜１２０ｍＭ又は約１００〜１２０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである、請求項２４〜２５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２７】
前記緩衝系が、３０〜４０ｍＭ又は約３０〜４０ｍＭの酢酸及び１．２〜１．６ｍＭ又は約１．２〜１．６ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２８】
３０ｍＭ以下又は約３０ｍＭ以下の濃度であるがゼロではない水酸化ナトリウムをさらに含む、請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項２９】
前記ゲルが、２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ又は約２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌのモル浸透圧濃度を有する、請求項２４〜２８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３０】
前記単離ペプチドが、３０個以下のアミノ酸残基を含む、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３１】
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３２】
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる、請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３３】
アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含み、０．２〜２０ｍｇ／ｍｌ又は約０．２〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で医薬製剤に溶解される単離ペプチド；及び
非イオン性等張化剤
を含み、
等張性であり、かつ５．０〜５．５又は約５．０〜５．５のｐＨを有し、かつ液体である、医薬製剤。
【請求項３４】
前記医薬組成物が、超又は約０．２μＭ超の直径を有する粒子を実質的に含まない、請求項３３に記載の医薬製剤。
【請求項３５】
さらに弱酸を含み、前記ペプチド及び前記弱酸が、前記医薬製剤を５．０〜５．５又は約５．０〜５．５のｐＨで維持する緩衝系を含む、請求項３３〜３４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３６】
前記弱酸が、０．０１Ｍ又は約０．０１Ｍの濃度で存在する、酢酸である、請求項３５に記載の医薬製剤。
【請求項３７】
前記非イオン性等張化剤が、０．２Ｍ〜０．４Ｍ又は約０．２Ｍ〜０．４Ｍの濃度で存在する、グルコースである、請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３８】
前記単離ペプチドが、０．２〜５ｍｇ／ｍｌ、約０．２〜５ｍｇ／ｍｌ、０．２〜１０ｍｇ／ｍｌ、約０．２〜１０ｍｇ／ｍｌ、１〜５ｍｇ／ｍｌ、約１〜５ｍｇ／ｍｌ、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、又は約１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項３９】
前記単離ペプチドが、３０個以下のアミノ酸残基を含む、請求項３３〜３８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４０】
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、請求項３３〜３９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４１】
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる、請求項３３〜３８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４２】
０．０１Ｍ又は約０．０１Ｍの酢酸をさらに含み、
前記単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなりかつ前記単離ペプチドが、１〜１０ｍｇ／ｍｌ又は約１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し、かつ
前記非イオン性等張化剤が、０．２〜０．４μＭ又は約０．２〜０．４μＭの濃度で存在する、グルコースである、
請求項３３〜４１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
【請求項４３】
それを必要とする患者における癌の症状を改善する、抑制する、低減する方法、又は癌を治療する方法であって、前記患者の請求項２４〜４２のいずれか一項の有効量の医薬製剤を投与することを含む、方法。
【請求項４４】
前記有効量が、最高で１ｍｇ／ｋｇ又は最高で５ｍｇ／ｋｇである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記医薬製剤の有効量が、８〜８００μｇ又は約８〜８００μｇの単離ペプチドを含む、請求項４３〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記医薬製剤の有効量が、６０〜１００μｇ又は約６０〜１００μｇの単離ペプチドを含む、請求項４３〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記医薬製剤が、患者の間質に、皮下に、リンパに、及び／又は間質流体に投与される、請求項４３〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記医薬製剤の投与を繰り返すことをさらに含む、請求項４３〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記癌が、腫瘍を含む、請求項４３〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記癌が、頭頸部癌、乳癌、腎癌、結腸直腸癌、皮膚癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、悪性黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（腺癌）、扁平上皮癌、膀胱癌、骨肉腫、気管支癌、又は造血細胞癌からなる群から選択される、請求項４３〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
造血組織、体液、血液試料、腫瘍生検、又は腫瘍を取り囲む組織の生検を含む試料などの、前記患者の試料中のペプチドＰ３０２８（配列番号３）の存在及び／若しくはレベルの検出又はＰ３０２８構造の結果を受け取ることをさらに含む、請求項４３〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記試料においてＰ３０２８構造などの、変性した又は損傷したアルブミンが存在するか、又は所定のレベルを超える場合に前記有効量の医薬製剤を受け取るために前記患者を選択することをさらに含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
腫瘍生検などの、前記患者の試料中の免疫細胞の存在の検出結果を受け取ることをさらに含む、請求項４３〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
前記患者の試料が、前記医薬組成物の投与の少なくとも５日後に収集される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記免疫細胞が前記試料中に存在する場合に前記有効量の医薬製剤を受け取るために前記患者を選択することをさらに含む、請求項５３〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
造血組織、体液、血液試料、又は腫瘍生検を含む試料などの、前記患者の試料中にペプチド３０２８及び／又は免疫細胞を含むとして前記患者を選択することをさらに含む、請求項４３〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
実質的にＴ細胞浸潤のない腫瘍、前記間質中に大部分のＴ細胞浸潤を含む腫瘍、又は不活性なＴ細胞により炎症が起こされ及び浸潤される腫瘍を含むとして前記患者を選択することをさらに含む、請求項４３〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記腫瘍のエフェクター細胞及び／又はサプレッサー細胞の浸潤などの、前記医薬製剤の投与後の前記腫瘍に対する炎症性応答を検出することをさらに含む、請求項４３〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記医薬組成物の投与後に、アポトーシス又は壊死などの腫瘍細胞の死を検出することをさらに含む、請求項４３〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記患者に追加の治療薬を投与することをさらに含む、請求項４３〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記追加の治療薬が、ＰＤ−１若しくはＰＤＬ−１に特異的に結合する、又はＰＤ−１及びＰＤＬ−１に対し二重特異性である抗体を含む、請求項６０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０１８年９月２８日出願の米国仮出願第６２／７３８,８５９号の利益を主張する。
【０００２】
配列リスト、表、又はコンピュータプログラムリストへの言及
本出願は、電子フォーマットの配列リストと共に提出されている。この配列リストは、２０１９年９月２４日に作成され、最後に保存されたＣＡＮＩＧ００９ＷＯＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴという名のファイルとして提供され、サイズが１，１０９バイトである。配列リストの電子フォーマットの情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００３】
分野
本明細書の実施形態は、免疫調節ペプチドを含む医薬品及び医薬製剤、並びにそれらを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
免疫系は、正常組織を破壊し、自己免疫疾患又は慢性炎症性疾患をもたらし得る、外来分子を検出し根絶させ、同時に過剰反応性を避けるように微調整される。特定の免疫応答の開始は、サイトカインの放出、特異的抗体の産生、及び／又は細胞傷害活性などのエフェクター機能の活性化を終わらせる事象のうまく組織化された鎖である。
【０００５】
データは、免疫系が癌制御のために主に重要であることを示している（Ｄｕｎｎ  ＧＰ，ら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２００４  ２１：１３７−４８．，Ｇａｌｏｎ Ｊ，ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００６ ３１３：１９６０−４．，Ｋｏｅｂｅｌ  ＣＭ，ら，Ｎａｔｕｒｅ．２００７ ４５０：９０３−７，Ｃｌｉｎｃｈｙ  Ｂ，ら，Ｃａｎｃｅｒ．  ２００７  １０９：１７４２−９，Ｔｅｎｇ  ＭＷ，ら，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．２００８ ８４：９８８−９３）が、悪性腫瘍は成長し続け、免疫療法の効力は、１０〜２０％の客観的寛解率でむしろ不十分である。この明らかなパラドックスにはいくつかの理由があり得、例えば、腫瘍は、弱い自己抗原である腫瘍抗原に起因して免疫系による認識を避け、ＴＡＰ並びにＭＨＣ  Ｉ及びＩＩの下方制御に起因して不十分な抗原提示又は耐性若しくは癌関連免疫抑制の誘導を避ける。不適な腫瘍内環境の影響は、動物実験（Ｐｅｒｄｒｉｚｅｔ  ＧＡ，ら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１９９０；１７１：１２０５−２０．，Ｙｕ Ｐ,ら，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００５ ２０１：７７９−９１）及びヒト腫瘍（Ｇａｊｅｗｓｋｉ ＴＦ，ら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６  ２９：２３３−４０，Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ  ＴＬ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００８ ２７：５９０４−１２）の結果によって実証されている。
【０００６】
異なる種類の免疫抑制細胞、調節性Ｔ細胞、未成熟樹状細胞(ｉＤＣ)、腫瘍関連マクロファージ(ＴＡＭ)及び骨髄由来サプレッサー細胞(ＭＤＳＣ)は、実質的に癌関連免疫抑制において機能できる。免疫バランスは一般に、ＩＬ−４、ＩＬ−１０及びＰＧＥ２などのサイトカインによって特徴付けられるＴｈ２優勢に歪められる。さらに、血清遮断因子、循環免疫複合体、増強されたＩＬ−１Ｒａ産生及び増強された腫瘍内タンパク質分解活性などの他の免疫抑制機構が、癌関連免疫抑制において機能できる。
【０００７】
癌患者におけるインターロイキン−６（ＩＬ−６）の誘導の機構を調査する一方で、血清アルブミン由来の免疫調節ペプチド配列が見出された(例えば、米国特許第７，９６０，１２６号；同第８，１１０，３４７号；及び同第８，１１０，３４７号；並びに米国特許公開第２０１０／０３２３３７０号及びＰＣＴ公開第２０１６／１４４６５０号参照、それらの各々は、その全体が参照により明示的に本明細書に組み込まれる)。インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、免疫応答の開始及び活性化、リンホカイン活性化キラー細胞（ＬＡＫ−細胞)を誘導するその能力、Ｔ細胞増殖及び細胞毒性において主要な役割を果たす。いくつかの報告は、癌患者からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が、減少されたＩＬ−２を合成する能力（Ｗａｎｅｂｏ  ＨＪ，ら，Ｃａｎｃｅｒ．１９８６  ５７：６５６−６２，Ｍａｎｔｏｖａｎｉ，Ｇ．ら，Ｄｉａｇｎ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８７  ５：１０４−１１１，Ｌａｕｅｒｏｖａ  Ｌ，ら，Ｎｅｏｐｌａｓｍａ  １９９９  ４６：１４１−１４９）とＩＬ−２に応答する能力（Ｔｓｕｂｏｎｏ  Ｍ，ら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９０  ３３：１０７−１１５，Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｉ  Ｐ，ら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ １９９６ ４２：１−８）の両方を有することを示した。癌患者からの腫瘍外植片又は血清からの可溶性生成物は、サイトカイン産生を阻害し、ＩＬ−２受容体発現を阻害し（Ｂｏｔｔｉ  Ｃ，ら，Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｍａｒｋｅｒｓ  １９９８  １３：５１−６９，Ｌａｕｅｒｏｖａ  Ｌ，ら，Ｎｅｏｐｌａｓｍａ  １９９９  ４６：１４１−１４９）、かつ／又は正常なＴリンパ球における増殖能を低下させ得る（Ｂｏｔｔｉ  Ｃ，ら，Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｍａｒｋｅｒｓ  １９９８  １３：５１−６９）。
【０００８】
インテグリンは、細胞間相互作用及び細胞基層相互作用を媒介する、白血球に主に見出される膜貫通糖タンパク質のスーパーファミリーである。インテグリンは、免疫調節においても重要な役割を果たし、特に、αＬβ２(白血球機能関連分子−１、ＬＦＡ−１)は、免疫応答の開始及び調節、組織の動員及び炎症細胞の移動及びリンパ球の細胞傷害活性に極めて重要である（Ｈｏｇｇ  Ｎ，ら，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．２００３  １１６：４６９５−７０５，Ｇｉｂｌｉｎ  ＰＡ，ら，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．２００６  １２：２７７１−９５，Ｅｖａｎｓ  Ｒ，ら，Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．２００９  １２２：２１５−２５）。加えて、ＬＦＡ−１は、インターロイキン−２に対する増殖応答に関与し（Ｖｙｔｈ−Ｄｒｅｅｓｅ  ＦＡ，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９３  １２：３２９２−９）、アルブミンのいくつかの断片は、ＬＦＡ−１及び／又はＩＬ−２受容体に結合し、それにより免疫細胞増殖を含むこれらの受容体を介して媒介される機能的特性を調節する(参照によりその全体が明示的に本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１１／０２６２４７０号参照)。
【発明の概要】
【０００９】
要約
選択肢１は、７より低いか又は約７未満のｐＨ、及び準等張モル浸透圧濃度を有する第１の溶液に溶解されたアミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む単離ペプチドを含む第１の溶液を含む医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。医薬品は、等張化剤及び塩基を含む第２の溶液を含んでよく、第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされたときに等張性ゲルを作製し、等張性ゲルは、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度及び６．５〜７．５又は約６．５〜７．５のｐＨで単離ペプチドを含む。
【００１０】
選択肢２は、第１の溶液が実質的に、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まず、第２の溶液が実質的に、直径が０．２μＭ超か、又は約０．２μＭ超の粒子を含まない、選択肢１の医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１１】
選択肢３は、前記第１の溶液が、１０ｍＭ以下のＮａＣｌ又は約１０ｍＭ以下であるがゼロではないＮａＣｌを含む、選択肢１〜２のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１２】
選択肢４は、第１の溶液がＮａＣｌを含まない、選択肢１〜２のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１３】
選択肢５は、第１の溶液が、１．５ｍＭ以下又は約１．５ｍＭ以下であるがゼロではない酢酸ナトリウムに同等の緩衝能を有する緩衝液をさらに含む、選択肢１〜４のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１４】
選択肢６は、第１の溶液が、１．５ｍＭ以下又は約１．５ｍＭ以下の濃度又はそれより低いがゼロではない酢酸ナトリウムをさらに含む、選択肢１〜４のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１５】
選択肢７は、第１の溶液が緩衝液を含まない、選択肢１〜４のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１６】
選択肢８は、等張化剤がＮａＣｌであり、第２の溶液が、１００ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌ又は約１００ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌを含むようにゲル用に構成される、選択肢１〜７のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１７】
選択肢９は、第１の溶液が実質的にゲルを含まない、選択肢１〜８のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１８】
選択肢１０は、第１の溶液中に溶解された単離ペプチドが実質的に、βシート構造ではない、選択肢１〜９のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００１９】
選択肢１１は、第１の溶液が、少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で単離ペプチドを含むようにゲル用に構成される、選択肢１〜１１のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００２０】
選択肢１２は、単離ペプチドが３０個以下のアミノ酸残基を含む、選択肢１〜１１のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００２１】
選択肢１３は、単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、選択肢１〜１２のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００２２】
選択肢１４は、単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる、選択肢１〜１１のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００２３】
選択肢１５は、第１の溶液が、５℃で少なくとも１２〜２５ヶ月間又は少なくとも約１２〜２５ヶ月間、上記第１の溶液に溶解された単離ペプチドの少なくとも９５％又は少なくとも約９５％を維持できる、選択肢１〜１１のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００２４】
選択肢１６は、第１の溶液及び第２の溶液が、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる単離ペプチドを少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌ；３０〜４０ｍＭ又は少なくとも約３０〜４０ｍＭの酢酸；１．２〜１．６ｍＭ又は少なくとも約１．２〜１．６ｍＭの酢酸ナトリウム；３０ｍＭ以下又は約３０ｍＭ以下の水酸化ナトリウム；及び１００〜１２０ｍＭ又は約１００〜１２０ｍＭの塩化ナトリウムを含むようにゲル用に構成される、選択肢１〜１５のいずれか１つの医薬品を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ゲルは、２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ又は約２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌのモル浸透圧濃度を有してよい。
【００２５】
選択肢１７は、選択肢１〜１６のいずれか１つの医薬品を製造する方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。本方法は、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度で前駆体溶液に溶解されたアミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む単離ペプチドを含む前駆体溶液を無菌濾過することを含んでよく、前駆体溶液は、前記第１の溶液を生成する、７未満又は約７未満のｐＨ及び準等張モル浸透圧濃度を有する。本方法は、等張化剤及び塩基を含む第２の溶液を提供することを含んでよい。
【００２６】
選択肢１８は、前駆体溶液が、約０．２μＭ又は０．２μＭの孔径のフィルターで滅菌濾過される、選択肢１７の方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００２７】
選択肢１９は、前駆体溶液が４．５未満又は約４．５未満のｐＨを有する、選択肢１７〜１８のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００２８】
選択肢２０は、単離ペプチドが、３０個以下のアミノ酸残基を含む、選択肢１７〜１９のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００２９】
選択肢２１は、単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、選択肢１７〜２０のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００３０】
選択肢２２は、単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる、選択肢１７〜２１のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００３１】
選択肢２３は、選択肢１〜２２のいずれか１つの医薬品から医薬製剤を調製する方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。本方法は、第１の溶液と第２の溶液を組み合わせて、上記ゲルを形成することを含んでよい。
【００３２】
選択肢２４は、ゲルを含む医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ゲルは、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌの単離ペプチドを含んでよい。ゲルは、酢酸及び酢酸ナトリウムを含む緩衝系を含んでよく、緩衝系は、１．６ｍＭ以下又は約１．６ｍＭ以下の酢酸ナトリウムを含む。ゲルは、等張化剤を含んでよい。ゲルは等張性で、４．５〜７．５又は約４．５〜７．５のｐＨを有してよい。
【００３３】
選択肢２５は、ゲルが実質的に、直径が０．２ｍＭ超又は約０．２ｍＭ超の粒子を含まない、選択肢２４の医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００３４】
選択肢２６は、等張化剤が、１００〜１２０ｍＭ又は約１００〜１２０ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである、選択肢２５〜２６のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００３５】
選択肢２７は、緩衝系が、３０〜４０ｍＭ又は約３０〜４０ｍＭの酢酸及び１．２〜１．６ｍＭ又は約１．２〜１．６ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、選択肢２４〜２６のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００３６】
選択肢２８は、３０ｍＭ以下又は約３０ｍＭ以下の濃度であるが、ゼロではない水酸化ナトリウムをさらに含む、選択肢２４〜２７のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００３７】
選択肢２９は、ゲルが、２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ又は約２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌのモル浸透圧濃度を有する、選択肢２４〜２８のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００３８】
選択肢３０は、単離ペプチドが、３０個以下のアミノ酸残基を含む、選択肢２４〜２９のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００３９】
選択肢３１は、単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、選択肢２４〜３０のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００４０】
選択肢３２は、単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる、選択肢２４〜３１のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００４１】
選択肢３３は、医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。医薬製剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む単離ペプチドを含んでよく、単離ペプチドは、０．２〜２０ｍｇ／ｍｌ又は約０．２〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で医薬製剤に溶解される。医薬製剤は、非イオン性等張化剤を含んでよい。前記医薬製剤は等張性であり、５．０〜５．５又は約５．０〜５．５のｐＨを有してよく、医薬製剤は液体であり得る。
【００４２】
選択肢３４は、医薬組成物が実質的に、０．２μＭ超又は約０．２μＭ超の直径を有する粒子を含まない、選択肢３３の医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００４３】
選択肢３５は、さらに弱酸を含む、選択肢３３〜３４のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド及び弱酸は、医薬製剤を５．０〜５．５又は約５．０〜５．５のｐＨで維持する緩衝系を含んでよい。
【００４４】
選択肢３６は、弱酸が、酢酸であり、０．０１Ｍ又は約０．０１Ｍの濃度で存在する、選択肢３５の医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００４５】
選択肢３７は、非イオン性等張化剤が、グルコースであり、０．２Ｍ〜０．４Ｍ又は約０．２Ｍ〜０．４Ｍの濃度で存在する、選択肢３３〜３６のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００４６】
選択肢３８は、単離ペプチドが、０．２〜５ｍｇ／ｍｌ、約０．２〜５ｍｇ／ｍｌ、０．２〜１０ｍｇ／ｍｌ、約０．２〜１０ｍｇ／ｍｌ、１〜５ｍｇ／ｍｌ、約１〜５ｍｇ／ｍｌ、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、又は約１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度である、選択肢３３〜３７のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００４７】
選択肢３９は、単離ペプチドが３０個以下のアミノ酸残基を含む、選択肢３３〜３８のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００４８】
選択肢４０は、単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、選択肢３３〜３９のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００４９】
選択肢４１は、単離ペプチドが、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる、選択肢３３〜３８のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５０】
選択肢４２は、０．０１Ｍ又は約０．０１Ｍの酢酸をさらに含む、選択肢３３〜４１のいずれか１つの医薬製剤を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。単離ペプチドは、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなってよく、単離ペプチドは、１〜１０ｍｇ／ｍｌ又は約１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在してよい。非イオン性等張化剤はグルコースであり得、０．２〜０．４μＭ又は約０．２〜０．４μＭの濃度で存在する。
【００５１】
選択肢４３は、それを必要とする患者における癌の症状を改善する、抑制する、低減する方法、又は癌を治療する方法であって、患者に選択肢２４〜４２のいずれか１つの有効量の医薬製剤を投与することを含む方法、を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５２】
選択肢４４は、有効量が、最高で１ｍｇ／ｋｇ又は最高で５ｍｇ／ｋｇである、選択肢４３の方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５３】
選択肢４５は、医薬製剤の有効量が、８〜８００μｇ又は約８〜８００μｇの単離ペプチドを含む、選択肢４３〜４４のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５４】
選択肢４６は、医薬製剤の有効量が、６０〜１００μｇ又は約６０〜１００μｇの単離ペプチドを含む、選択肢４３〜４４のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５５】
選択肢４７は、医薬製剤が、患者の間質、皮下、リンパ、及び／又は間質流体に投与される、選択肢４３〜４６のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５６】
選択肢４８は、医薬製剤の投与を繰り返すことをさらに含む、選択肢４３〜４７のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５７】
選択肢４９は、癌が、腫瘍を含む、選択肢４３〜４８のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５８】
選択肢５０は、癌が、頭頸部癌、乳癌、腎癌、結腸直腸癌、皮膚癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、悪性黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（腺癌）、扁平上皮癌、膀胱癌、骨肉腫、気管支癌、又は造血細胞癌からなる群から選択される、選択肢４３〜４９のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００５９】
選択肢５１は、造血組織、体液、血液試料、腫瘍生検、又は腫瘍を取り囲む組織の生検を含む試料などの患者の試料中のペプチドＰ３０２８（配列番号３）の存在及び／若しくはレベルの検出又はＰ３０２８構造の結果を受け取ることをさらに含む、選択肢４３〜５０のいずれか１つを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、試料は、造血組織、血液試料、又は腫瘍生検を含む。
【００６０】
選択肢５２は、Ｐ３０２８構造などの、変性又は損傷したアルブミンが試料中に存在するか、又は所定のレベルを超える場合に、有効量の医薬製剤を受け取るための患者を選択することをさらに含む、選択肢５１の方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００６１】
選択肢５３は、腫瘍生検などの、患者の試料中の免疫細胞の存在の検出結果を受け取ることをさらに含む、選択肢４３〜５２のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００６２】
選択肢５４は、患者の試料が、医薬組成物の投与の少なくとも５日後に収集される、選択肢５３の方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００６３】
選択肢５５は、免疫細胞が試料中に存在する場合、有効量の医薬製剤を受け取るための患者を選択することをさらに含む、選択肢５３〜５４のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００６４】
選択肢５６は、造血組織、体液、血液試料、又は腫瘍生検を含む試料などの、患者の試料中にペプチド３０２８及び／又は免疫細胞を含むとして患者を選択することをさらに含む、選択肢４３〜５５のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、試料は、造血組織、血液試料、又は腫瘍生検を含む。
【００６５】
選択肢５７は、実質的にＴ細胞浸潤がない腫瘍、間質中に大部分のＴ細胞浸潤を含む腫瘍、又は不活性なＴ細胞により炎症が起こされる及び浸潤される腫瘍を含むとして患者を選択することをさらに含む、選択肢４３〜５６のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００６６】
選択肢５８は、腫瘍のエフェクター細胞及び／又はサプレッサー細胞の浸潤などの、医薬製剤の投与後の腫瘍に対する炎症性応答を検出することをさらに含む、選択肢４３〜５７のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００６７】
選択肢５９は、医薬組成物の投与後に、アポトーシス又は壊死などの、腫瘍細胞の死を検出することをさらに含む、選択肢４３〜５８のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００６８】
選択肢６１は、追加の治療薬を患者に投与することをさらに含む、選択肢４３〜５９のいずれか１つの方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００６９】
選択肢６２は、追加の治療薬が、ＰＤ−１若しくはＰＤＬ−１に特異的に結合する抗体、又はＰＤ−１及びＰＤＬ−１に対して二重特異性である抗体を含む、選択肢６１の方法を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１Ａ】ＩＬ−２への抑制された増殖応答に対するＰ２８Ｒの刺激活性を示す一連のグラフである。図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、及び１Ｄはそれぞれ、４人の異なる癌患者についての刺激活性を示す。
【図１Ｂ】ＩＬ−２への抑制された増殖応答に対するＰ２８Ｒの刺激活性を示す一連のグラフである。図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、及び１Ｄはそれぞれ、４人の異なる癌患者についての刺激活性を示す。
【図１Ｃ】ＩＬ−２への抑制された増殖応答に対するＰ２８Ｒの刺激活性を示す一連のグラフである。図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、及び１Ｄはそれぞれ、４人の異なる癌患者についての刺激活性を示す。
【図１Ｄ】ＩＬ−２への抑制された増殖応答に対するＰ２８Ｒの刺激活性を示す一連のグラフである。図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、及び１Ｄはそれぞれ、４人の異なる癌患者についての刺激活性を示す。
【図２Ａ】正常なヒトＡＢ血清を含む培地中の全長ペプチドＰ２８Ｒ及び６個のアミノ酸中心配列（３２２３０、ＦＦＶＫＬＳ、配列番号１）の効果を示す一連のグラフである。活性化は、フローサイトメトリーを用いて、増強されたマーカーＣＤ６９又はＣＤ７１を有する細胞の百分率として決定される。ＰＢＭＣを、ＲＰＭＩ＋１０％ヒトＡＢ血清中で２４時間、ペプチド（４０μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。図２Ａは、各ペプチドについて実施された２つの実験（４２０及び４２２）の結果を示す。
【図２Ｂ】正常なヒトＡＢ血清を含む培地中の全長ペプチドＰ２８Ｒ及び６個のアミノ酸中心配列（３２２３０、ＦＦＶＫＬＳ、配列番号１）の効果を示す一連のグラフである。活性化は、フローサイトメトリーを用いて、増強されたマーカーＣＤ６９又はＣＤ７１を有する細胞の百分率として決定される。ＰＢＭＣを、ＲＰＭＩ＋１０％ヒトＡＢ血清中で２４時間、ペプチド（４０μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。図２Ｂは、各ペプチドについて実施された２つの実験（４２４及び４２６）の結果を示す。
【図３】２人の異なる癌患者（「ヒトｃａ血清１」４３０及び「ヒトｃａ血清２」４３２）からの血清を含む培地中の全長ペプチドＰ２８Ｒと６個のアミノ酸「Ｐ２８コア」配列（３２２３０、ＦＦＶＫＬＳ、配列番号１）の比較を示すグラフである。
【図４】本明細書のいくつかの実施形態による、５匹の未治療の対照イヌと比較した、乳房腫瘍を有する７匹のイヌにおけるＰ２８Ｒ治療の評価を示すグラフである。代表画像（ｎ＝１〜５）では、治療した腫瘍（Ｐ２８Ｒ＃４、＃７、＃８、＃１１、＃１３、＃１６、及び＃１７内のダークバー８８１）と対照腫瘍（対照＃２、＃３、＃４、＃５、及び＃６内のダークバー８８２）からの腫瘍細胞の総数を計数し、炎症細胞数（ライトグレーバー８８３）と比較した。
【図５Ａ】自発性イヌ乳房腫瘍の皮下Ｐ２８Ｒ治療（単回用量８０μｇ）が、炎症性細胞の動員及び腫瘍細胞死をもたらすことを示す一連のグラフである。（対照Ｎ＝１２及び治療Ｎ＝５）。
【図５Ｂ】自発性イヌ乳房腫瘍の皮下Ｐ２８Ｒ治療（単回用量８０μｇ）が、炎症性細胞の動員及び腫瘍細胞死をもたらすことを示す一連のグラフである。（対照Ｎ＝１２及び治療Ｎ＝５）。
【図６Ａ】Ｐ３０２８（赤）及びＣＤ３（褐色）に対する抗体を用いて二重染色した３つの異なる舌癌の一連の顕微鏡画像である。免疫砂漠（ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｓｅｒｔ）癌（図６Ａ）は、３０２８の強力な発現および間質中にほんのわずかな散乱したＴ細胞を有する。
【図６Ｂ】Ｐ３０２８（赤）及びＣＤ３（褐色）に対する抗体を用いて二重染色した３つの異なる舌癌の一連の顕微鏡画像である。真ん中の免疫排除癌（図６Ｂ）は、３０２８の強い発現及び間質に浸潤するＴ細胞を有する。
【図６Ｃ】Ｐ３０２８（赤）及びＣＤ３（褐色）に対する抗体を用いて二重染色した３つの異なる舌癌の一連の顕微鏡画像である。右の炎症癌（図６Ｃ）は、３０２８についてわずかに染色され、Ｔ細胞の非常に強い浸潤を有する。
【図７Ａ】ＣＤ１１ａに対する抗体により染色された炎症細胞を示す乳癌患者からの腫瘍切片の一連の顕微鏡画像である。固定されていない新鮮な凍結腫瘍切片を、染色前に緩衝液（図７Ａ）又はＰ２８Ｒ（図７Ｂ）とインキュベートした。
【図７Ｂ】ＣＤ１１ａに対する抗体により染色された炎症細胞を示す乳癌患者からの腫瘍切片の一連の顕微鏡画像である。固定されていない新鮮な凍結腫瘍切片を、染色前に緩衝液（図７Ａ）又はＰ２８Ｒ（図７Ｂ）とインキュベートした。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
ペプチド阻害剤、及びペプチド阻害剤の医薬製剤を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなる医薬品、並びにこれらの医薬品及び医薬製剤の作製方法と使用方法が、本明細書に記載される。ペプチド阻害剤は、ヒト（例えば、癌を有するヒト）において免疫抑制を引き起こす免疫調節ペプチドと相互作用し、並びにインビトロで癌患者血清中の免疫細胞の免疫抑制を緩和し、かつインビボで哺乳動物腫瘍の回帰的な変化及び根絶を引き起こすことが示されている（実施例１〜４及び８参照）。これらの結果は、イヌにおける追加用量漸増研究でさらに確認された（実施例４参照）。ペプチド阻害剤の従来の製剤は、例えば低いモル浸透圧濃度及び／又は酢酸塩の存在により、注射部位付近の細胞の健康に影響を及ぼし得ることが観察された（実施例９参照）。さらに、ペプチド阻害剤は、高いｐＨ及び／又は上昇したナトリウムの存在下でゲルを形成でき、これは、フィルターの細孔を目詰まりさせることにより滅菌濾過を妨害し得ることが観察された（実施例１０及び１１参照）。したがって、本明細書のいくつかの実施形態によれば、無菌で安定的にペプチド阻害剤を維持し、かつ酢酸塩及び非等張モル浸透圧濃度に関連する副作用を回避しつつ適切な投与量のペプチド阻害剤の投与を可能にする医薬品、医薬製剤が本明細書に記載される。
【００７２】
いくつかの実施形態では、酸性ｐＨでＰ２８Ｒなどのペプチド阻害剤を含む第１の溶液と、塩基を含む第２の溶液とを含む医薬品が提供される。第１の溶液と第２の溶液は、癌患者への投与に適するｐＨ及びモル浸透圧濃度で、ペプチド阻害剤を含むゲルを形成するために、使用前に組み合わされてよい。第１の溶液は、例えば、滅菌濾過を介して滅菌できる（第１の溶液の酸性ｐＨおよび低いナトリウム含量は、フィルターの細孔を目詰まりさせるゲルの形成を回避させ得る；実施例１０参照）。第１の溶液は、酸性ｐＨ及び準等張モル浸透圧濃度を有してよい。第２の溶液は、塩基性ｐＨ及び等張を上回るモル浸透圧濃度を有してよい。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む、本質的にそれからなる、又はそれからなるペプチドである。ペプチドは、５０、４５、４０、３５、３０、２５又は２０個以下のアミノ酸を含んでよい。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む、本質的にそれからなる、又はそれからなるペプチドである。
【００７３】
Ｐ２８Ｒの最初の８０μｇ用量を２倍及び４倍にすると、副作用が観察されることなく、抗腫瘍効果を維持したことが、本明細書に記載の用量漸増研究において観察された（実施例４参照）。したがって、より高い濃度のペプチド阻害剤を含む製剤は、安全かつ効果的であり得ることが企図される。本明細書のいくつか実施形態によると、約０．２〜２０ｍｇ／ｍｌ、例えば、０．２〜５ｍｇ／ｍｌ、０．２〜１０ｍｇ／ｍｌ、１〜５ｍｇ／ｍｌ、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、又は１〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤の医薬製剤を含むか、それからなるか、本質的にそれからなるか、又はペプチド阻害剤の医薬製剤に構成されるように形成される医薬品が記載される。医薬製剤は、本明細書に記載のペプチド阻害剤、及び非イオン性等張化剤を含んでよい。製剤は、等張性であり、５．０〜５．５又は約５．０〜５．５のｐＨを有してよい。製剤は液体であり得る。ペプチド阻害剤は、液体に溶解したままであり得る。このように、医薬製剤は、ゲルを含まないか、又は実質的にゲルを含み得ない。このように、医薬製剤は、沈殿物を含まないか、又は実質的に沈殿物を含み得ない。
【００７４】
本明細書で使用される「実質的に含まない」は、本開示の観点から当業者に理解される通常の、慣例的な意味を有する。それは、医薬品又は製剤の安定性及び効力に顕著な影響を与えない微量を指し、特定の物質が存在しないことも包含する。いくつかの実施形態では、付加的な数値精度が対象である場合、組成物（医薬品又は医薬製剤など）は、５％（ｗ／ｗ）以下、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む５％、４％、３％、２％、１％、０．９％、０．５％、０．２％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％以下の物質を含む場合、その物質を実質的に含まない。
【００７５】
それを必要とする患者における癌の症状を改善、抑制、低減するか、又は癌を治療する方法であって、本明細書に記載の有効量の医薬製剤を患者に投与することを含む方法、も本明細書に記載される。
【００７６】
ペプチド阻害剤
いくつかの実施形態は、ペプチド阻害剤を含む。アルブミン由来のペプチドＰ３０２８（ＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫ−配列番号３）は、「Ｐ３０２８構造」（例えば、Ｐ３０２８に特異的な抗体及び／又はペプチドによって同定され得る損傷及び／又は変性したアルブミン）のように、免疫細胞増殖及び活性化を阻害するのに十分であり、かつ免疫系を阻害することが示されている（実施例１参照；その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，７９６、７７号、及びＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１５／０３５３３２及びＷＯ  ２０１６／１４４６５０も参照）。Ｐ３０２８のペプチドに基づく結合パートナーが開発された。アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）、例えば、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）を含むか、本質的にそれからなるか、及びそれからなるペプチドは、ペプチドＰ３０２８に結合するのに十分であることが示された（実施例１０及び３６のＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１６／１４４６５０参照）。さらに、モチーフＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含む、本質的にそれからなる、及びそれからなるペプチド阻害剤、例えば、Ｐ２８Ｒ（配列番号２）は、Ｐ３０２８の免疫抑制効果を緩和するのに十分であり（実施例１〜２参照）、かつ免疫抑制を緩和でき、インビボで腫瘍の免疫系浸潤及び破壊を引き起こす（実施例３５参照）。
【００７７】
いくつかの実施形態の組成物、医薬品、医薬製剤のペプチド阻害剤、及び方法は、Ｐ３０２８及び／又は１以上の他のアルブミン由来の免疫調節ペプチドなどの免疫調節ペプチドに結合し、阻害することができる（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１６／１４４６５０の表１〜４で同定されたブロッカーペプチド参照）。いくつかの実施形態のペプチド阻害剤は、例えば、合成ペプチドを含むペプチド、環状ペプチド、ペプチド模倣物、及びタンパク質を含み得るが、これらに限定されない。以下の節は、抗体又は抗体断片ベースのペプチド阻害剤に関するより多くの詳細を提供する。
【００７８】
いくつかの実施形態の組成物、医薬品、医薬製剤、及び方法において、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態の組成物、医薬品、医薬製剤、及び方法において、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含み、１００個以下のアミノ酸長、例えば、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４９、４８、４７、４６、４５、４４、４３、４２、４１、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、又は６個以下のアミノ酸残基を、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含んで、例えば、６〜１００、６〜５０、６〜３０、６〜２９、６〜２５、６〜２０、６〜１５、６〜１６、１０〜１００、１０〜５０、１０〜３０、１０〜２９、１０〜２５、１０〜２０、１０〜１６、１５〜１００、１５〜５０、１５〜３０、１５〜２９、１５〜２５、１５〜２０、又は１５〜１６個のアミノ酸残基を有する。いくつかの実施形態の組成物、医薬品、製剤、及び方法において、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００７９】
いくつかの実施形態のペプチド阻害剤は、Ｐ３０２８（ＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫ−配列番号３）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなるペプチドに結合する。いくつかの実施形態のペプチド阻害剤は、Ｐ３０２８のＬＦＡ−１受容体への結合を阻害し、したがってＬＦＡ−１受容体を脱ブロッキングする。したがって、いくつかの実施形態のペプチド阻害剤は、損傷した若しくは変性したアルブミン又はＰ３０２８構造などのアルブミンペプチドにより免疫抑制された免疫細胞の活性化を誘導するのに十分である。免疫細胞活性化の例は、ＣＤ６９及び／又はＣＤ７１の増殖、発現の増加、ＩＬ−１２又はＩＦＮγの分泌、又はパーフォリン若しくはグランザイムＢの分泌、増強された細胞毒性、細胞移動、又はサイトカイン産生、又は列挙した項目の２以上を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、医薬品、医薬製剤、組成物、又は方法は、ＬＦＡ−１受容体へのＰ３０２８の結合を阻害するのに有効な量のペプチド阻害剤を含み、したがってＬＦＡ−１受容体を脱ブロッキングする。いくつかの実施形態では、医薬品、医薬製剤、組成物、又は方法は、損傷した若しくは変性したアルブミン又はＰ３０２８構造などのアルブミンペプチドにより免疫抑制された免疫細胞の活性化に有効な量のペプチド阻害剤を含む。
【００８０】
特に明示的に記載されない限り、例えば、いくつかの実施形態の医薬品、製剤、組成物、又は方法の文脈において、「単離ペプチド」が本明細書述べられるときはいつでも、特に記載されない限り、本明細書に記載の「ペプチド阻害剤」を指すことが理解されるであろう。
【００８１】
緩衝系
本明細書で使用される「緩衝液」及び「緩衝系」は、この開示の観点から当業者に理解されるそれらの通常の、慣例的な意味を有する。それらは、溶液のｐＨの変化に抵抗する組成物を指す。そのため、緩衝液は、特定のｐＨ範囲内のいくつかの実施形態の組成物、医薬品、及び／又は医薬製剤の維持を容易にすることができる。
【００８２】
緩衝液又は緩衝系は、弱酸及びその共役塩基を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなってよい。Ｋａは、酸のプロトンの解離定数を指し、Ｋａ＝（［Ｈ＋］［Ａ−］／［ＨＡ］）として算出できる。緩衝能は、緩衝液のｐＫａ（すなわち、Ｋａの負の対数）で最大である。このように、緩衝液は、緩衝化される物質の所望のｐＨ若しくはｐＨ範囲にあるか又はその付近にあるｐＫａ、例えば、所望のｐＨの±２以内のｐＫａ、所望のｐＨの±１以内のｐＫａ、又は所望のｐＨの±０．５以内のｐＫａを有するように選択できる。いくつかの酸は、２以上のプロトンを有してよく、このように、緩衝系は、２以上のｐＫａを有してよいことに留意されたい。リン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、及びホウ酸塩系などの従来の小分子緩衝液に加えて、アミノ酸は、アミノ酸の酸性側鎖のように弱酸を表し、したがってこれらのアミノ酸及び側鎖は緩衝作用も提供できる。したがって、いくつかの実施形態の酸性側鎖（Ａｓｐ、Ｇｌｕ、及びＨｉｓなど）は、特に酸性側鎖のｐＫａ又はその付近のｐＨ範囲において、本明細書に記載のペプチド阻害剤の緩衝に寄与し得る（ただし、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、及びＨｉｓの側鎖のｐＫａは、それぞれ、３．７、４．３、及び６．５であることに留意されたい）。
【００８３】
「緩衝能」は、この開示の観点から当業者に理解される通常の、慣例的な意味を有する。それは、ｐＨを１つの単位で変化させるのに必要とされる強酸又は強塩基の量を指す。典型的には、緩衝能単位は、グラム又はモル当量として表される。緩衝能は、経験的に（例えば、酸及び／又は塩基の滴定によって）決定でき、また計算できる。一例として、以下の式（Ｉ）を使用して、酸［ＨＡ］及びその共役塩基［Ａ−］を含み、かつＫａの解離定数を有する緩衝系の緩衝能を推定できる：
緩衝能＝［Ａ−］＋［Ｈ＋］［Ａ−］／Ｋａ）    （Ｉ）
【００８４】
緩衝能（例えば、緩衝液と酢酸ナトリウム又はクエン酸ナトリウムなどの基準緩衝液との間）の比較は、温度及び／又は圧力などの同等の条件下で適切に行われることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、緩衝能は、圧力１気圧で室温又は室温付近で決定される。いくつかの実施形態では、緩衝能は、標準温度及び圧力（０℃及び１気圧）で決定される。
【００８５】
いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤は、列挙した項目の２以上を含む、トリズマ、ビシン、トリシン、ＭＯＰＳ、ＭＯＰＳＯ、ＭＯＢＳ、トリス、Ｈｅｐｅｓ、ＨＥＰＢＳ、ＭＥＳ、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、ホウ酸塩、ＡＣＥＳ、ＡＤＡ、酒石酸塩、ＡＭＰ、ＡＭＰＤ、ＡＭＰＳＯ、ＢＥＳ、ＣＡＢＳ、カコジル酸塩、ＣＨＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＥＰＰＳ、エタノールアミン、グリシン、ＨＥＰＰＳＯ、イミダゾール、イミダゾール乳酸、ＰＩＰＥＳ、ＳＳＣ、ＳＳＰＥ、ＰＯＰＳＯ、ＴＡＰＳ、ＴＡＢＳ、ＴＡＰＳＯ、ＴＥＳ、及び本明細書に記載のペプチド阻害剤の酸性側鎖からなる群から選択される緩衝系を含む。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は医薬製剤は、本明細書に記載のペプチド阻害剤の酢酸塩及び酸性側鎖からなる群から選択される緩衝系か、又は列挙した項目の両方を含む。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は医薬製剤は、本明細書に記載のペプチド阻害剤の酢酸塩及び酸性側鎖を含む緩衝系を含む。
【００８６】
等張化剤
適切な浸透圧を有するいくつかの実施形態の組成物、医薬品、又は製剤のために（組成物、医薬品、又は製剤の投与時の疼痛及び組織損傷を最小にするために）、組成物、医薬品、又は医薬製剤は、等張化剤を含んでよい。組成物、医薬品、又は医薬製剤のモル浸透圧濃度を生理学的範囲又はその近くにするために、等張化剤を、本明細書に記載の組成物、医薬品、又は製剤中に含めることができる。典型的には、ヒト血液のモル浸透圧濃度は、２７５〜２９９ｍＯｓｍ／Ｌ又は約２７５〜２９９ｍＯｓｍ／Ｌ、例えば、２７５〜２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、２７５〜２９６ｍＯｓｍ／Ｌ、２７５〜２９７ｍＯｓｍ／Ｌ、２８０〜２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、２８０〜２９６ｍＯｓｍ／Ｌ、２８０〜２９７ｍＯｓｍ／Ｌ、２８１〜２９５ｍＯｓｍ／Ｌ、２８１〜２９６ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は２８１〜２９７ｍＯｓｍ／Ｌである。
【００８７】
様々な因子（脱水などの）は、個々のヒトの血液のモル浸透圧濃度に影響を及ぼし得るが、本明細書の実施形態によると、等張モル浸透圧濃度は、モル浸透圧濃度の違いによる不快感及び生理的悪影響を抑制しつつ投与を可能にするような、患者の血液のモル浸透圧濃度若しくはその付近、又は患者の血液の予想されるモル浸透圧濃度範囲内のモル浸透圧濃度を指すことが理解される。付加的な数値精度が対象である場合、いくつかの実施形態では、等張モル浸透圧濃度は、患者の血液のモル浸透圧濃度の±１０％以内、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、又は±１％以内である。いくつかの実施形態では、等張モル浸透圧濃度は、約２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌを指す。このように、「準等張」モル浸透圧濃度は、等張モル浸透圧濃度よりも数値的に低い、例えば、２８０ｍＯｓｍ／Ｌ未満、２７０ｍＯｓｍ／Ｌ、又は２６０ｍＯｓｍ／Ｌ未満のモル浸透圧濃度を指すことも理解されるであろう。トニックよりも大きいモル浸透圧濃度は、等張モル浸透圧濃度よりも数値的に大きい、例えば、３００ｍＯｓｍ／Ｌ、３１０ｍＯｓｍ／Ｌ、又は３２０ｍＯｓｍ／Ｌよりも大きいモル浸透圧濃度を指すことも理解される。
【００８８】
いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤は、約２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、又は約２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌのモル浸透圧濃度を有する。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤は、２７０〜２８０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２７０〜２９０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２７０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２８０〜２９０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２８０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２９０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、２９０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ、又は３００〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌのモル浸透圧濃度を有する。
【００８９】
いくつかの実施形態の組成物、医薬品、又は製剤に適切な等張化剤の例は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グルコース、スクロース、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、トレハロース、グリセロール、又はこれらの組み合わせ若しくはこれらの２以上を含むが、これらに限定されない。等張化剤の例は、レミントンの薬学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ （２００５）、並びにＧｉｌｍａｎら（編）（１９９０）；Ｇｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｍａｎの治療薬の薬理学的基礎（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ），第８版，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓにも見出すことができ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００９０】
いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤（例えば、製剤Ｃなどの少なくとも１０ｍｇ／ｍＬのペプチド阻害剤を含む製剤）は、グルコース、スクロース、デキストロース、マンニトール、グリセリン、又は列挙した項目の２以上の組み合わせなどの非イオン性等張化剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤の等張化剤はナトリウムを含まない。このように、いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤は、ナトリウムを含まないか、又は実質的に含まない。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤の等張化剤は、塩化ナトリウムを含まない。このように、いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤は、塩化ナトリウムを含まないか、又は実質的に含まない。
【００９１】
担体
組成物、医薬品、又は医薬製剤は、適切な担体中に配合されてよい。担体は、組成物、医薬品、又は医薬製剤の成分の一部又は全部のための溶媒であり得る。適切な担体の例は、例えば、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、液体スクロース、ソルビトール、及び／又は水を含むか、本質的にそれらからなるか、又はそれらからなるシロップ、エリキシル、エマルジョン及び／又は懸濁液を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は製剤は水溶液である。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は医薬製剤は、水を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる担体中に配合される。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は医薬製剤は、水である担体中に配合される。いくつかの実施形態では、組成物、医薬品、又は医薬製剤は、水性製剤含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。
【００９２】
医薬品
いくつかの実施形態では、医薬品は、ペプチド阻害剤の製剤、又はペプチド阻害剤の製剤の成分を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態の医薬品は、７未満又は約７未満（例えば、７、６、５、４．５、４、３．５、又は３以下）のｐＨでペプチド阻害剤を含み、準等張モル浸透圧濃度を有する第１の溶液を含む。第１の溶液は、例えば、無菌濾過によって滅菌できる。比較的高いｐＨ（４．５以上のｐＨなど）で、ペプチド阻害剤は、無菌濾過に干渉するゲルを形成でき、かつ溶液から沈殿させることができることが本明細書で示された（実施例１０〜１１参照）。したがって、特定の酸性ｐＨは、濾過できる滅菌溶液中でペプチド阻害剤を維持するのに有利であり得ることが企図される。医薬品は、等張化剤を含む第２の溶液をさらに含んでよい。第１の溶液と第２の溶液は、組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度、かつ６〜８又は約６〜８のｐＨでペプチド阻害剤を含む等張性ゲルを生成できる。ペプチド阻害剤は、Ｐ２８コア（ＦＦＶＫＬＳ；配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、直径が０．２μＭ超か、又は約０．２μＭ超の粒子を実質的に含まない。第２の溶液は、直径が０．２μＭ超か、又は約０．２μＭ超の粒子を実質的に含み得ない。いくつかの実施形態では、第１及び第２の溶液は、組み合わされると、４．５〜７．５、約４．５〜７．５、６．５〜７．５、又は約６．５〜７．５のｐＨを有する等張性ゲルを生成する。いくつかの実施形態では、第１溶液及び第２溶液は、組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度、かつ４．５〜７．５又は約４．５〜７．５のｐＨでペプチド阻害剤を含む等張性ゲルを生成する。いくつかの実施形態では、第１の溶液と第２の溶液は、組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ又は約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度、かつ６．５〜７．５又は約６．５〜７．５のｐＨでペプチド阻害剤を含む等張性ゲルを生成する。
【００９３】
ＮａＣｌの濃度を増加させることにより、本明細書に記載のペプチド阻害剤を凝集させ、ゲルを形成できることが本明細書に示されている（実施例１１）。ゲルは滅菌濾過を干渉し得る。したがって、いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、第１の溶液などの液体中にある。第１の溶液は、例えば、０．２μＭを超えない、例えば、０．２μＭ以下、又は０．１μＭ以下の孔径を有するフィルターを介する滅菌濾過によって滅菌できる。このように、第１溶液と第２溶液との組み合わせにより形成されるゲルは、フィルターコアの直径以上の直径を有する粒子を実質的に含み得ない。したがって、いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液はそれぞれ、直径が０．２μＭ超の粒子、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液はそれぞれ、直径が０．２μＭ超の粒子を実質的に含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を実質的に含まない。
【００９４】
いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ、又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム、又は１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウムの緩衝能、例えば、１．５ｍＭ、１．３ｍＭ、１．２ｍＭ、１ｍＭ、０．９ｍＭ、０．７ｍＭ、又は０．５ｍＭの酢酸ナトリウムの緩衝能を有する緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、緩衝液は、酢酸ナトリウム（及びその共役酸）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。緩衝能が、同じ条件下（温度及び圧力など）で基準（酢酸ナトリウムなど）と比較され得ることに留意されたい。いくつかの実施形態では、緩衝能は、標準温度及び圧力で決定される。ナトリウム（酢酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、及び／又は塩化ナトリウムなど）はゲルを、溶解性及び滅菌濾過に干渉し得るペプチドに形成させることができることが本明細書に示されている（実施例１１参照）。したがって、ペプチドを含む溶液中のナトリウム含量を最小にすることは、溶解性及び滅菌濾過を容易にできると企図される。いくつかの実施形態では、第１の溶液は酢酸ナトリウムを含まない。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、緩衝液を含まない。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、ＮａＣｌを含まない。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、実質的にＮａＣｌを含まない。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、１０ｍＭ以下のＮａＣｌ又は約１０ｍＭ以下であるが、ゼロではないＮａＣｌを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、第２の溶液と同じ体積であるか、又はほぼ同じ体積である。
【００９５】
いくつかの実施形態では、医薬品は、表１Ａの第１の溶液及び表１Ｂの第２の溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。第１及び第２の溶液は互いに分離できる。第１の溶液と第２の溶液は、互いに組み合わされると、表１Ｃのゲルを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる医薬製剤を生成できる。このように、本明細書のいくつかの実施形態によれば、医薬製剤は、表１Ｃのゲルを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなることが理解されるであろう。
【００９６】
表１Ａ：いくつかの実施形態の第１の溶液
【表１】
2022500480.tif 000003
【００９７】
表１Ｂ：いくつかの実施形態の第２の溶液
【表２】
2022500480.tif 000004
【００９８】
表１Ｃ：いくつかの実施形態のゲル
【表３】
2022500480.tif 000005
【００９９】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約７未満のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液と第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、約６．５〜７．５のｐＨ、並びに約２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は約２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどのほぼ等張のモル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを生成するように構成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１００】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は７未満のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液と第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は実質的に含まない。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約５未満のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液と第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、約６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどのほぼ等張のモル浸透圧濃度を有する、表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は実質的に含まない。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、５未満のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約３〜約４．５のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液と第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、約６．５〜７．５のｐＨ、及び約２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は約２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどのほぼ等張のモル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は約３〜約４．５のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液と第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液を含む、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約７未満のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、約６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどのほぼ等張のモル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液を含む表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、７未満のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液を含む表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約５未満のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、約６．５〜７．５のｐＨ、及び約２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は約２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどのほぼ等張のモル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液を含む表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、５未満のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液を含む、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約３．５〜４．５のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、約６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどのほぼ等張のモル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液を含む。ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、３．５〜４．５のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む。ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約５未満、例えば、約５，４．５、４、３．５、又は３未満、列挙する値の任意の２つの間の範囲、例えば、約３〜５、約３．５〜５、約４〜５、約４．５〜５、約３〜４．５、約３．５〜４．５、約４〜４．５、約３〜４、又は約３．５〜４を含むｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ（少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌなど）の濃度でペプチド阻害剤を含み、約６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどのほぼ等張のモル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む。ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約５未満、例えば、５，４．５、４、３．５、又は３未満、列挙する値の任意の２つの間の範囲、例えば、３〜５、３．５〜５、４〜５、４．５〜５、３〜４．５、３．５〜４．５、４〜４．５、３〜４、又は３．５〜４を含むｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ（少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌなど）の濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液を含む。ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約５未満、例えば、約５，４．５、４、３．５、又は３未満、列挙する値の任意の２つの間の範囲、例えば、約３〜５、約３．５〜５、約４〜５、約４．５〜５、約３〜４．５、約３．５〜４．５、約４〜４．５、約３〜４、又は約３．５〜４を含むｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌ（少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌなど）の濃度でペプチド阻害剤を含み、約６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどのほぼ等張のモル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、１〜１．５ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液を含む。ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１の溶液は、約５未満、例えば、５，４．５、４、３．５、又は３未満、列挙する値の任意の２つの間の範囲、例えば、３〜５、３．５〜５、４〜５、４．５〜５、３〜４．５、３．５〜４．５、４〜４．５、３〜４、又は３．５〜４を含むｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ（少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌなど）の濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、表１Ａの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなり、約１．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液と同等の緩衝能を有する緩衝液を含む。ペプチド阻害剤は、Ｐ２８Ｒ（ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ；配列番号２）のアミノ酸配列を含んでよい。第１の溶液は、３〜４．５のｐＨを有してよい。第２の溶液は、表１Ｂの溶液を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。第１及び第２の溶液は、互いに組み合わされると、少なくとも０．２ｍｇ／ｍｌ（少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌなど）の濃度でペプチド阻害剤を含み、６．５〜７．５のｐＨ、及び２７０〜３１０ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌなどの等張モル浸透圧濃度を有する表１Ｃのゲルを形成できる。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、約１０ｍＭ以下のＮａＣｌを含んでよい。第２の溶液の等張化剤は、ＮａＣｌを含んでよい。理論に束縛されることなく、第２の溶液中にＮａＣｌを提供することにより、第１の溶液中でナトリウムを最小限にでき、したがって第１の溶液中のペプチド阻害剤によるゲル形成を最小にできることが企図される。いくつかの実施形態では、第２の溶液の等張化剤はＮａＣｌであり、表１Ｃのゲルは、１００ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌ、又は約１００ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、ゲルを含まないか又は実質的にゲルを含まない。いくつかの実施形態では、第１の溶液中のペプチド阻害剤は、βシート構造中に存在しないか、又はβシート構造中にペプチド阻害剤を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、約１０ｍＭ以下のＮａＣｌ、例えば、約１０ｍＭ以下であるが、ゼロではないＮａＣｌ、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、約１０、９、８、７、５６、５、４、３、２、１、又は０．１ｍＭ以下のＮａＣｌを含み、例えば、約０．１〜１０ｍＭのＮａＣｌ、約０．１〜７ｍＭのＮａＣｌ、約１〜７ｍＭのＮａＣｌ、約１〜１０ｍＭのＮａＣｌ、約５〜７ｍＭのＮａＣｌ、又は約５〜１０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、１０ｍＭ以下のＮａＣｌ、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、１０、９、８、７、５６、５、４、３、２、１、又は０．１ｍＭ以下のＮａＣｌを含み、例えば、０．１〜１０ｍＭのＮａＣｌ、０．１〜７ｍＭのＮａＣｌ、１〜７ｍＭのＮａＣｌ、１〜１０ｍＭのＮａＣｌ、５〜７ｍＭのＮａＣｌ、又は５〜１０ｍＭのＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、実質的にＮａＣｌを含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、ＮａＣｌを含まない。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、１．５ｍＭ以下、又は約１．５ｍＭ以下であるがゼロではない酢酸ナトリウム、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、１．５ｍＭ、１．３ｍＭ、１．１ｍＭ、１ｍＭ、０．７ｍＭ、又は０．５ｍＭ以下の酢酸ナトリウム（しかしゼロではない）に同等の、緩衝能を有する緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、緩衝液を含まない。例えば、いくつかの実施形態では、表１Ａの第１の溶液は、緩衝液を含まないか、又は実質的に緩衝液を含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、実質的に緩衝液を含まない。実質的に緩衝液を含まない医薬品は、ペプチド阻害剤自体に起因する緩衝能を有してよいが、酢酸ナトリウムなどの小分子緩衝液を含まないか、又は実質的に含まないことに留意されたい。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、１．５ｍＭ以下、又は約１．５ｍＭ以下であるが、ゼロではない濃度の酢酸ナトリウム、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、１．５ｍＭ、１．３ｍＭ、１．１ｍＭ、１ｍＭ、０．７ｍＭ、又は０．５ｍＭ以下（しかしゼロではない）の酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、酢酸ナトリウムを含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、実質的に酢酸ナトリウムを含まない。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品又は製剤について、等張化剤は、ＮａＣｌを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、第２の溶液は、１００ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌ又は約１００ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌを含むようにゲル用に構成される。いくつかの実施形態では、第２の溶液は、９０ｍＭ〜１３０ｍＭのＮａＣｌ、約９０ｍＭ〜１３０ｍＭのＮａＣｌ、１１０ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌ、約１１０ｍＭ〜１２０ｍＭのＮａＣｌ、１００ｍＭ〜１１０ｍＭのＮａＣｌ、又は約１００ｍＭ〜１１０ｍＭのＮａＣｌを含むようにゲル用に構成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、ＮａＣｌを含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬品又は医薬製剤は、実質的にＮａＣｌを含まない。いくつかの実施形態では、医薬品又は医薬製剤は、ＮａＣｌを含まない。したがって、第２溶液の等張化剤は、ＮａＣｌ以外の等張化剤、例えば、非イオン性毒性剤であり得る。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液はゲルを含まないか、又は実質的にゲルを含まない。いくつかの実施形態では、第１の溶液のペプチド阻害剤の５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．１％未満がゲル中にある。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、ペプチド阻害剤は、第１の溶液に溶解される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、ペプチド阻害剤は、第１の溶液に溶解され、実質的にβシート構造ではない、又はβシート構造ではない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、ペプチド阻害剤は、第１の溶液に溶解され、第１の溶液のペプチド阻害剤の５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．１％未満は、βシート構造である。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含むように、医薬製剤のゲル用に構成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、第１の溶液は、少なくとも０．４、０．５、０．６、０．８又は１ｍｇ／ｍｌなどの、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド阻害剤を含むようにゲル用に構成される。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品又は医薬製剤について、ペプチド阻害剤は、３０個以下のアミノ酸残基、例えば、３０個、２９個、２８個、２７個、２５個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、又は１０個以下の、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、アミノ酸残基を含む。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品又は医薬製剤について、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、第１の溶液は、例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％のペプチド阻害剤が溶解される場合、少なくとも１２〜２５ヶ月又は少なくとも約１２〜２５ヶ月間、５℃で、前記第１の溶液に溶解されたペプチド阻害剤の少なくとも９５％又は少なくとも約９５％を維持できる。いくつかの実施形態では、第１の溶液は、上記第１の溶液に溶解された少なくとも９５％又は少なくとも約９５％のペプチド阻害剤、例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％以内の溶解されたペプチド阻害剤を、５℃で、少なくとも１２〜１９ヶ月又は少なくとも約１２〜１９ヶ月間維持できる。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、第１の溶液及び第２の溶液は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌのペプチド阻害剤を含むようにゲル用に構成される。第１の溶液及び第２の溶液は、３０〜４０ｍＭ又は少なくとも約３０〜４０ｍＭの酢酸、１．２〜１．６ｍＭ又は少なくとも約１．２〜１．６ｍＭの酢酸ナトリウム；３０ｍＭ以下又は約３０ｍＭ以下の水酸化ナトリウム；及び１００〜１２０ｍＭ又は約１００〜１２０ｍＭの塩化ナトリウムを含むようにゲル用にさらに構成できる。ゲルは、２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌ又は約２８０〜３００ｍＯｓｍｏｌ／Ｌのモル浸透圧濃度を有してよい。
【０１２６】
医薬製剤
ゲル製剤
いくつかの実施形態では、医薬製剤が記載される。医薬製剤は、ゲル、例えば、表１Ｃのゲルを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。ゲルは、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる少なくとも０．４ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約０．４ｍｇ／ｍｌの単離ペプチドを含んでよい。ゲルは、酢酸及び酢酸ナトリウムを含む緩衝系を含んでよく、緩衝系は、１．６ｍＭ以下又は約１．６ｍＭ以下の酢酸ナトリウムを含む。ゲルは、等張化剤を含んでよい。ゲルは、等張性であり得、かつ／又は４．５〜７．５又は約４．５〜７．５のｐＨを有してよい。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、医療用途のためのものである。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、本明細書に記載の癌の症状の改善、抑制、低減、又は癌の治療で使用するためのものである。
【０１２７】
本明細書で述べられるように、ゲルは滅菌濾過を干渉し得るが、前駆体溶液は、例えば、０．２μＭ以下の、例えば、０．２μＭ以下、又は０．１μＭ以下の孔径を有するフィルターを介して、滅菌濾過できる。このように、いくつかの実施形態では、ゲルは、直径が０．２μＭ超か、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、ゲルは、直径が０．２μＭ超か、又は直径が約０．２μＭ超の粒子を含まない。いくつかの実施形態では、ゲルは、直径が約０．１μＭ超か、又は約０．１μＭ超の粒子を含まない。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のゲルを含む任意の医薬製剤について、ゲルの等張化剤は、ＮａＣｌを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ゲルは、１００〜１２０ｍＭ又は約１００〜１２０ｍＭの濃度で等張化剤（ＮａＣｌ）を含んでよい。いくつかの実施形態では、ゲルは、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１３０、１４０、又は１５０ｍＭ以下の、例えば、５０〜１５０ｍＭの濃度でＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、ゲルは、１０５〜１１５ｍＭ又は約１０５〜１１５ｍＭの濃度でＮａＣｌを含む。いくつかの実施形態では、ゲルは、約１１０ｍＭの濃度でＮａＣｌを含む。
【０１２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のゲルを含む任意の医薬製剤について、緩衝系は、２０ｍＭ以下の酢酸ナトリウム緩衝液の、例えば、１〜２ｍＭ、１〜５ｍＭ、１〜１０ｍＭ、１〜２０ｍＭ、２〜５ｍＭ、２〜１０ｍＭ、２〜２０ｍＭ、５〜１０ｍＭ、又は５〜２０ｍＭの、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、例えば、２０、１５、１０、５、４、３、２、又は１ｍＭ以下の酢酸ナトリウムの緩衝能以下の緩衝能を有する。いくつかの実施形態では、緩衝系は、３０〜４０ｍＭの酢酸及び１．２〜１．６ｍＭの酢酸ナトリウム、又は約３０〜４０ｍＭの酢酸及び約１．２〜１．６ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、緩衝系は酢酸ナトリウムを含まない。いくつかの実施形態では、緩衝系は、実質的に酢酸ナトリウムを含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬製剤は、実質的に緩衝液を含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬製剤は、緩衝液を含まない。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬製剤は、水酸化ナトリウムを含む。水酸化ナトリウムは、３０ｍＭ以下又は約３０ｍＭ以下であるがゼロではない、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、３０ｍＭ、２５ｍＭ、２０ｍＭ、１５ｍＭ、１０ｍＭ、又は１ｍＭ以下の濃度であり得る。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のゲルを含む任意の医薬製剤について、ゲルは、等張モル浸透圧濃度を有する。いくつかの実施形態では、ゲルは、２７０〜３１０ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ、約２７０〜３１０ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ、２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ、２８０〜３００ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ、２８５〜２９５ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ、約２８５〜２９５ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ、２８９〜２９１ｍＯＳｍｏｌ／Ｌ、又は約２８９〜２９１ｍＯＳｍｏｌ／Ｌのモル浸透圧濃度を有する。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のゲルを含む任意の医薬製剤について、ペプチド阻害剤は、３０個以下のアミノ酸残基、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、３０個、２９個、２８個、２７個、２５個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、又は１０個以下のアミノ酸残基を含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のゲルを含む任意の医薬製剤について、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬品について、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる。
【０１３４】
単一溶液医薬製剤
いくつかの実施形態では、医薬製剤は、液体を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。ペプチド阻害剤は、比較的高い濃度、例えば、最高で約１０ｍｇ／ｍｌで製剤化できることが本明細書に示されている（実施例１４参照）。理論に束縛されるものではないが、ナトリウム及び／又は４．５を超えるｐＨは、ペプチド阻害剤を沈殿させ得ることが企図され（実施例１０〜１１参照）、より高濃度の製剤において、ペプチド阻害剤自体は、弱い緩衝液として作用し（例えば、ペプチド阻害剤上の酸側鎖間の相互作用による）、そのため低レベルのナトリウムを許容できる。医薬製剤の単離ペプチドは、アミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含んでよい。単離ペプチドは、０．２〜２０ｍｇ／ｍｌ、又は約０．２〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度で医薬製剤に溶解できる。医薬製剤は、さらに、非イオン性等張化剤を含んでよい。医薬製剤は等張性であり得る。いくつかの実施形態では、医薬製剤は等張性であり、５．０〜５．５又は約５．０〜５．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、医療用途のためのものである。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、本明細書に記載の癌の症状の改善、抑制、低減、又は癌の治療に使用するためのものである。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬製剤について、医薬組成物は、０．２μＭ超か、又は約０．２μＭ超の直径を有する粒子、例えば、０．１μＭ超の直径を有する粒子を含まないか、又は実質的に含まない。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬製剤について、医薬製剤は、弱酸をさらに含む。ペプチド及び弱酸は、４．５〜５、例えば、約４．５〜５、４．５〜５．５、４．５〜６、４．５〜６．５、４．５〜７、５〜５．５、５〜６、５〜６．５、５〜７、５．５〜６、５．５〜６．５、５．５〜７、６〜６．５、又は６〜７のｐＨで医薬製剤を維持する緩衝系を含んでよい。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬製剤について、弱酸は、０．０２Ｍ又は約０．０２Ｍ以下、例えば、０．０２Ｍ、約０．０２Ｍ、０．０１Ｍ、約０．０１Ｍ、０．００５Ｍ、又は約０．００５Ｍ以下の濃度で存在する酢酸である。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬製剤について、非イオン性等張化剤はグルコースである。いくつかの実施形態では、非イオン性等張化剤はグルコースであり、等張性である医薬製剤に有効な濃度で存在する。いくつかの実施形態では、非イオン性等張化剤はグルコースであり、０．１〜０．５Ｍ、約０．１〜０．５Ｍ、０．２〜０．４Ｍ、約０．２〜０．４Ｍ、０．２〜０．３Ｍ、約０．２〜０．３Ｍ、０．３〜０．４μＭ、又は約０．３〜０．４Ｍの濃度で存在する。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の液体を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる任意の医薬製剤について、単離ペプチドは、０．２〜５ｍｇ／ｍｌ、約０．２〜５ｍｇ／ｍｌ、０．２〜１０ｍｇ／ｍｌ、約０．２〜１０ｍｇ／ｍｌ、０．２〜２０ｍｇ／ｍｌ、約０．２〜２０ｍｇ／ｍｌ、１〜５ｍｇ／ｍｌ、約１〜５ｍｇ／ｍｌ、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、１〜２０ｍｇ／ｍｌ、約１〜２０ｍｇ／ｍｌ、５〜１０ｍｇ／ｍi、約５〜１０ｍｇ／ｍｌ、５〜２０ｍｇ／ｍｌ、又は約５〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度である。いくつかの実施形態では、単離ペプチドは、１０ｍｇ／ｍｌ以下の濃度、例えば、１０ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌ、又は約１ｍｇ／ｍｌ以下の濃度である。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬製剤について、ペプチド阻害剤は、３０個以下のアミノ酸残基、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、３０、２９、２８、２７、２５、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、又は１０個以下のアミノ酸残基を含む。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の液体を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる任意の医薬製剤について、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の液体を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる任意の医薬製剤について、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる。
【０１４２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の液体を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる任意の医薬製剤は、０．０１Ｍ又は約０．０１Ｍの酢酸をさらに含む。単離ペプチドは、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる。ペプチド阻害剤は、１〜１０ｍｇ／ｍｌ又は約１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在してよい。非イオン性等張化剤はグルコースであり得、これは０．２〜０．４Ｍ又は約０．２〜０．４Ｍの濃度で存在してよい。医薬製剤は、本明細書に記載のように等張性であり得、例えば、約２８０〜３００ｍＯｓｍ／Ｌ又は２８０〜３００ｍＯｓｍ／Ｌのモル浸透圧濃度を有する。
【０１４３】
医薬製剤の調製方法
いくつかの実施形態は、本明細書に記載の医薬品から医薬製剤を調製する方法を含む。本方法は、本明細書に記載の第１の溶液（例えば、表１Ａの第１の溶液）を、本明細書に記載の第２の溶液（例えば、表１Ｂの第２の溶液）と組み合わせて、ゲル（表１Ｃのゲルなど）を形成することを含んでよい。医薬製剤は、ゲルを含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなってよい。
【０１４４】
医薬品の製造方法
いくつかの実施形態では、医薬品を製造する方法について記載される。本方法は、本明細書に記載のアミノ酸配列ＦＦＶＫＬＳ（配列番号１）を含むペプチド阻害剤を含む溶液を滅菌濾過することを含んでよい。ペプチド阻害剤は、列挙した値の任意の２つの間の範囲を含む、少なくとも又は少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌ、０．３ｍｇ／ｍｌ、０．４ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍｌ、０、６ｍｇ／ｍｌ、０．７ｍｌ／ｍｌ、０．８ｍｇ／ｍｌ、０．９ｍｇ／ｍｌ、又は１ｍｇ／ｍｌの濃度で前駆体溶液に溶解されてよい。高ｐＨ及び／又は高ナトリウムは、本明細書に記載のペプチド阻害剤にゲルを形成させることができることを理解されたい（実施例１０〜１１参照）。したがって、本明細書のいくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤は、無菌濾過の前にゲル形成を回避するように選択される前駆体溶液（表１Ａの溶液など）、例えば、約５、４．５、４，３．５、３、２．５、若しくは２又は列挙した値の任意の２つの間の範囲、例えば、２〜３、２〜３．５、２〜４、２〜４．５、２〜５、３〜３．５、３〜４、３〜４．５、３〜５、３．５〜４、３．５〜４．５、３．５〜５、４〜４．５、又は４〜５未満などの酸性ｐＨ；及び１０ｍＭ以下のＮａＣｌ又は約１０ｍＭ以下のＮａＣｌ；及び１．５ｍＭ以下のＮａＣｌ又は約１．５ｍＭ以下のＮａＣｌ又はそれより低いがゼロではないＮａＣｌを含む溶液に溶解されることを理解されたい。いくつかの実施形態では、溶液のｐＨ、ＮａＣｌ、及び酢酸ナトリウム含量は、ペプチド阻害剤が前駆体溶液中に溶解されたままであり、前駆体溶液は、ゲルを含まないか、又は実質的にゲルを含まないようなものである。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤を含む前駆体溶液は、約０．２μＭ又は０．２μＭの孔径を有するフィルターで無菌濾過される。４．５を超えるｐＨか、又はあるレベルの塩化ナトリウムの存在下で（実施例１０〜１１参照）、ペプチド阻害剤は、無菌濾過に干渉するゲルを形成できることを理解されたい。滅菌濾過された前駆体溶液は、少なくともほぼフィルターの孔径の大きさの直径を有する粒子を含まないか、又は実質的に含まないことをさらに理解されたい。例えば、０．２μＭの孔径のフィルターで滅菌濾過されたペプチド阻害剤を含む前駆体溶液は、直径が０．２μＭ超の粒子を含まないか、又は実質的に含まないことを理解されたい。いくつかの実施形態では、ペプチド阻害剤を含む前駆体溶液は、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、１μＭ、約１μＭ、０．５μＭ、約０．５μＭ、０．４μＭ、約０．４μＭ、０．３μＭ、約０．３μＭ、０．２μＭ、約０．２μＭ、０．１μＭ、又は約０．１μＭ以下の孔径のフィルターで無菌濾過される。
【０１４６】
上昇されたｐＨで、ペプチド阻害剤はゲルを形成できることが示された（実施例１１）。いくつかの実施形態の方法では、前駆体溶液は酸性ｐＨを有する。ｐＨは、ペプチド阻害剤によるゲルの形成を阻害するのに十分であり得る。いくつかの実施形態の方法では、前駆体溶液は、列挙した値の任意の２つの間の範囲、例えば、２〜３、２〜３．５、２〜４、２〜４．５、２〜５、３〜３．５、３〜４、３〜４．５、３〜５、３．５〜４、３．５〜４．５、３．５〜５、４〜４．５、又は４〜５、を含む、約５、４．５、４、３．５、３、２．５、又は２未満のｐＨを有する。
【０１４７】
いくつかの実施形態の方法では、ペプチド阻害剤は、３０個以下のアミノ酸残基、例えば、列挙した値の任意の２つの間の範囲を含む、３０個、２９個、２８個、２７個、２５個、２６個、２５個、２４個、２３個、２２個、２１個、２０個、１９個、１８個、１７個、１６個、１５個、１４個、１３個、１２個、１１個、又は１０個以下のアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態の方法では、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）を含む。いくつかの実施形態の方法では、ペプチド阻害剤は、アミノ酸配列ＫＫＬＤＴＦＦＶＫＬＳＬＦＴＥＲ（配列番号２）からなる。
【０１４８】
癌の症状を改善する、抑制する、低減するか、又は癌を治療する方法
いくつかの実施形態では、それを必要とする患者における癌の症状を改善する、抑制する、低減する、又は癌を治療する方法が記載される。本方法は、本明細書に記載の有効量の医薬製剤を患者に投与することを含んでよい。癌の症状を改善する、抑制する、低減する方法、又は癌を治療する方法が本明細書に記載される（及び本方法は医薬製剤を含む）場合はいつでも、癌の症状を改善する、抑制する、低減する、又は癌を治療することにおける使用の対応する医薬製剤も明確に企図されることを理解されたい。癌の症状を改善する、抑制する、低減すること、又は癌を治療することを必要とする患者は、本明細書では「対象」と呼ばれ得る。
【０１４９】
いくつかの実施形態の方法では、有効量の医薬製剤は、患者における癌の症状を改善する、抑制する、低減するか、又は癌を治療するのに十分な量のペプチド阻害剤を含む医薬製剤の量を指す。いくつかの実施形態の方法では、有効量の医薬製剤は、腫瘍の免疫細胞浸潤を引き起こすのに十分な量のペプチド阻害剤を含む。いくつかの実施形態の方法では、有効量の医薬製剤は、腫瘍における細胞死を引き起こすのに十分な量のペプチド阻害剤を含む。いくつかの実施形態の方法では、有効量の医薬製剤は、最高で５ｍｇ／ｋｇ、例えば、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、最高で０．０１、０．０２、０．０５、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、又は５ｍｇ／ｋｇのペプチド阻害剤を含む。いくつかの実施形態の方法では、有効量の医薬製剤は、最高で約５ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇのペプチド阻害剤を含む。いくつかの実施形態の方法では、有効量は、最高で約２０００μｇ又は約２０００μｇ、例えば、最高で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、又は２０００μｇのペプチド阻害剤、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、例えば、１〜５０μｇ、１〜８０μｇ、１〜１００μｇ、１〜５００μｇ、１〜８００μｇ、１〜１０００μｇ、１〜２０００μｇ、８〜５０μｇ、８〜８０μｇ、８〜１００μｇ、８〜５００μｇ、８〜８００μｇ、８〜１０００μｇ、８〜２０００μｇ、１０〜５０μｇ、１０〜８０μｇ、１０〜１００μｇ、１０〜５００μｇ、１０〜８００μｇ、１０〜１０００μｇ、１０〜２０００μｇ、５０〜８０μｇ、５０〜１００μｇ、５０〜５００μｇ、５０〜８００μｇ、５０〜１０００μｇ、５０〜２０００μｇ、１００〜５００μｇ、１００〜８００μｇ、１００〜１０００μｇ、１００〜２０００μｇ、５００〜８００μｇ、５００〜１０００μｇ、又は５００〜２０００μｇのペプチド阻害剤を含む。いくつかの実施形態の方法では、有効量の医薬製剤は、８〜８００μｇ又は約８〜８００μｇのペプチド阻害剤を含む。いくつかの実施形態の方法では、有効量の医薬製剤は、６０〜１００μｇ又は約６０〜１００μｇのペプチド阻害剤を含む。
【０１５０】
任意の数の適切な投与経路を、本明細書のいくつかの実施形態の方法で使用できる。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、患者の腫瘍内、皮下、リンパ、及び／又は間質流体に投与される。
【０１５１】
いくつかの実施形態の方法では、医薬製剤の投与は繰り返される。投与は、列挙する値の任意の２つの間の範囲を含む、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、又は５０回行うことができる。いくつかの実施形態では、医薬製剤の投与は、ある期間にわたって繰り返され、例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０週間ごとに繰り返される。
【０１５２】
いくつかの実施形態の方法では、癌は、腫瘍を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態の方法では、癌は、頭頸部癌、乳癌、腎癌、結腸直腸癌、皮膚癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、悪性黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（腺癌）、扁平上皮癌、膀胱癌、骨肉腫、気管支癌、及び／又は造血細胞癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、患者は、列挙した癌の２以上を有する。
【０１５３】
いくつかの実施形態のペプチド阻害剤は、Ｐ３０２８構造に関連づけられる免疫抑制を緩和できる（実施例１〜３参照）。したがって、いくつかの実施形態の方法では、患者は、Ｐ３０２８構造、及び／又はＰ３０２８構造の免疫抑制を有するものとして選択される。この選択は本明細書に記載のペプチド阻害剤を含む医薬組成物による治療の候補として患者を特定できることが、企図される（実施例７参照）。いくつかの実施形態では、本方法は、造血組織、体液、血液試料、腫瘍生検、又は腫瘍を取り囲む組織の生検などの、患者の試料中の損傷した若しくは変性したアルブミンなどのペプチドＰ３０２８（配列番号３）若しくはＰ３０２８構造の存在及び／又はレベルを検出することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、造血組織、体液、血液試料、腫瘍生検、又は腫瘍を取り囲む組織の生検などの、患者の試料中の損傷した若しくは変性したアルブミンなどのＰ３０２８構造の存在及び／又はレベルを検出することを含む。患者が健康（非免疫抑制）対照よりも多いペプチドＰ３０２８（配列番号３）若しくはＰ３０２８構造の存在及び又はレベルを含む場合、患者は、ペプチド阻害剤を含む医薬組成物での治療のために選択されてよい。いくつかの実施形態では、本方法は、造血組織、体液、血液試料、腫瘍生検、又は腫瘍を取り囲む組織の生検を含む試料などの、患者の試料中の損傷した若しくは変性したアルブミンなどのペプチドＰ３０２８（配列番号３）若しくはＰ３０２８構造の存在及び／又はレベルの検出の結果を受け取ることを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、造血組織、体液、血液試料、腫瘍生検、又は腫瘍を取り囲む組織の生検を含む試料などの、患者の試料中の損傷した若しくは変性したアルブミンなどのＰ３０２８構造の存在及び／又はレベルの検出の結果を受け取ることを含む。患者が健康（非免疫抑制）対照よりも多いペプチドＰ３０２８（配列番号３）若しくはＰ３０２８構造の存在及び又はレベルを含む場合、患者は、ペプチド阻害剤を含む医薬組成物での治療のために選択されてよい。いくつかの実施形態では、試料は、造血組織、血液試料、血液試料、腫瘍生検、又は腫瘍を取り囲む組織の生検を含む。
【０１５４】
さらに、腫瘍における免疫細胞の存在は免疫抑制の緩和、及び腫瘍に対する免疫応答を示すことができることが、観察された（例えば、実施例４〜５参照）。したがって、いくつかの実施形態の方法における患者の腫瘍における免疫細胞の存在及び／又はレベルの検出は、医薬製剤が、患者の癌の症状を効果的に改善する、抑制する、低減するか、又は癌を治療することを示し得る。いくつかの実施形態では、本方法は、腫瘍生検などの、患者の試料中の免疫細胞の存在を検出することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、腫瘍生検などの、患者の試料中の免疫細胞の存在の検出の結果を受け取ることを含む。腫瘍生検などの、患者の試料は、本明細書に記載の医薬組成物の投与の少なくとも５日後、例えば、少なくとも５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１５日、又は２０日後に、患者から収集されていてもよい。
【０１５５】
いくつかの腫瘍微小環境はＰ３０２８構造の実質的な存在、及び免疫細胞の非存在（例えば、「免疫デザート」及び「免疫排除」癌；実施例７参照）を含むことが、観察された。さらに、腫瘍におけるＰ３０２８レベルがＴ細胞浸潤と逆相関することが観察された。この種類の「免疫デザート」及び「免疫排除」のプロファイルは、本明細書に記載のペプチド阻害剤を含む医薬組成物を使用する治療に適する患者を示せることが企図される。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｐ３０２８構造（ペプチドＰ３０２８、変性アルブミン、及び／若しくは損傷アルブミンなど）の存在若しくはレベル、並びに／又は患者の試料中の免疫細胞の存在若しくは不在を含むものとして患者を選択することを含む。試料は、造血組織、体液、血液試料、又は腫瘍生検を含んでよい。このような患者は、有効量の医薬製剤を受け取るために選択されてよい。いくつかの実施形態では、本方法は、免疫細胞が患者の試料中の腫瘍に存在しない場合に、有効量の医薬製剤を受け取るために患者を選択することを含む。試料は、造血組織、体液、血液試料、及び／又は腫瘍生検を含んでよい。いくつかの実施形態では、本方法は、患者の試料中に腫瘍及びＰ３０２８構造を含む患者の試料に免疫細胞が存在しない場合に、有効量の医薬製剤を受け取るために患者を選択することを含む。試料は、造血組織、体液、血液試料、及び／又は腫瘍生検を含んでよい。いくつかの実施形態では、本方法は、腫瘍を含む患者の試料にＴ細胞などの免疫細胞が存在しない場合に、有効量の医薬製剤を受け取るために患者を選択することを含む。試料は、造血組織、体液、血液試料、及び／又は腫瘍生検を含んでよい。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｐ３０２８構造が患者の試料中にある場合、有効量の医薬製剤を受け取るために患者を選択することを含む。試料は、造血組織、体液、血液試料、及び／又は腫瘍生検を含んでよい。いくつかの実施形態では、本方法は、患者が、実質的にＴ細胞浸潤を含まない腫瘍、間質中に大部分のＴ細胞浸潤を含む腫瘍、又は不活性Ｔ細胞によって炎症を起こされ及び浸潤される腫瘍を有する場合に、有効量の医薬製剤を受け取るために患者を選択することを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、腫瘍のエフェクター細胞及び／又はサプレッサー細胞浸潤などの、医薬製剤の投与後に、腫瘍に対する炎症応答を検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、試料は、造血組織、血液試料、及び／又は腫瘍生検を含む。
【０１５６】
腫瘍細胞の死はまた、本明細書に記載の医薬組成物に応答して腫瘍の免疫抑制及び阻害の緩和を示し得る（例えば、実施例６参照）。したがって、いくつかの実施形態では、本方法は、医薬組成物の投与後、アポトーシス又は壊死などの腫瘍細胞の死を検出することをさらに含む。
【０１５７】
本明細書に記載の医薬組成物は、追加の治療剤と相乗的に作用できることがさらに企図される。例えば、Ｐ３０２８の発現が低いＴ細胞によって透過された炎症部分を含む腫瘍が、チェックポイント阻害剤による治療に適し得ることが企図される（実施例７参照）。例えば、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１に対する抗体は、免疫抑制のＰＤ−Ｌ１媒介を阻害でき、そのため、本明細書に記載のペプチド阻害剤との相乗作用を与えられることが企図される。このように、いくつかの実施形態では、本方法は、追加の治療薬を患者に投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＰＤ−１に特異的な抗体、及び／又はＰＤ−Ｌ１に特異的な抗体を含むか、本質的にそれからなるか、又はそれからなる。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ及びアベルマブからなる群から選択されるＰＤ−Ｌ１に特異的な抗体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ニボルマブ、及びペンブロリズマブからなる群から選択される、ＰＤ−１に特異的な抗体である。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ＰＤ−１及びＰＤＬ−１に対して二重特異性である抗体又は抗体断片である。
【０１５８】
実施例１：リンパ球活性化に対するＰ３０２８の低分子量阻害剤の効果
Ｐ３０２８の阻害剤のＰ２８Ｒの分析を、ヒトエキソビボモデルにおいて行った。ＭＴＳ又はＣＦＳＥ技術を使用して測定したＰＢＭＣ上の刺激活性を、様々な診断の７人の健常対照試料及び７人の癌患者において研究した。興味深いことに、他の種類の刺激が存在しない場合であっても、Ｐ２８Ｒは、７人中６人の癌患者において有意な刺激活性を有するのに対し、対照試料からのＰＢＭＣは、ほんのわずかであるか又は全く刺激を示さなかった。
【０１５９】
図１Ａ〜Ｄに示すように、Ｐ２８Ｒの刺激活性は、ＩＬ−２に対する増殖応答を抑制した。ＰＢＭＣを、ＩＬ−２と共に７日間培養し、増殖率をＢｒｄＵの取り込みとして決定した。各バーはトリプレットの平均値を表す。癌患者からのＰＢＭＣのＩＬ−２への不十分な増殖応答として決定される癌関連免疫抑制を元に戻すための、Ｐ３０２８に対する抗体の有効性についての研究と同様に（ＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１６／１４４６５０の図２２参照）、抑制されたＩＬ−２誘導性増殖の逆転に対する低分子量阻害剤Ｐ２８Ｒの効力を調査した。４人の異なる未治療患者からのＰＢＭＣの培養結果を図１Ａ〜Ｄに示す。添加されたＰ２８Ｒの各量について、ＩＬ−２刺激細胞２４０は左に示され、刺激していない２４２が右に示される。初期増殖の低いＰＢＭＣ（図１Ａ及び１Ｂ参照）はＰ２８Ｒにより顕著に刺激されたが、高い初期増殖は薬物により本質的に影響されなかった（図１Ｃ及び１Ｄ参照）。予想通り、全身免疫抑制は全ての患者には存在せず、免疫抑制を有するもののみが刺激された。
【０１６０】
実施例２：ＰＢＭＣ活性化に対するＰ２８Ｒ及びＰ２８コアペプチドの効果
Ｐ２８Ｒ（配列番号２）は、ＲＰＭＩ＋１０％正常ヒトＡＢ血清を培地として使用した場合に、短期間培養で健康な対照からのＰＢＭＣを刺激できる。Ｐ２８Ｒの切り詰め型も、ＰＢＭＣを活性化するそれらの能力について評価した。ＰＢＭＣを、ＲＰＭＩ＋１０％ヒトＡＢ血清中で２４時間、ペプチド（４０μｇ／ｍＬ）とインキュベートした。ＰＢＭＣ活性化を、フローサイトメトリーを用いて、ＣＤ６９（図２Ａ）又はＣＤ７１（図２Ｂ）のいずれかの発現が増強した細胞の割合として測定した。各ペプチドについて２回の実験を行った。
【０１６１】
免疫細胞に対する直接刺激効果の試験を行った。図２Ａ及び２Ｂに示すように、ペプチドＰ２８Ｒ（配列番号２）は、このモデルにおける健康なＰＢＭＣを効果的に活性化したが、ペプチド３２２５１（配列番号４）及びペプチド３２２３０（「Ｐ２８コア」）（ＦＦＶＫＬＳ）（配列番号１）は、このモデルにおいて健康なＰＢＭＣを活性化しなかった。
【０１６２】
さらに、Ｐ２８Ｒ及びＰ２８コアを、癌細胞における免疫抑制を緩和するそれらの能力について試験した。培地中の正常なヒトＡＢ血清を、癌を有するイヌ又は癌を有するヒトの患者からの血清と置換したＰＢＭＣ培養において、Ｐ２８Ｒ（配列番号２）及びＰ２８コア（ペプチド３２２３０（ＦＦＶＫＬＳ）（配列番号１）はそれぞれ、ＣＤ６９の増強された発現として測定されるとおりＰＢＭＣを活性化した（図３参照）。図３は、２人の異なる癌患者（ヒトｃａ血清１の４３０及びヒトｃａ血清２の４３２）からの血清を含む培地において、全長ペプチドＰ２８Ｒ（配列番号２）と６個のアミノ酸Ｐ２８コア配列（ペプチド３２２３０）（ＦＦＶＫＬＳ）（配列番号１）の比較を示す。Ｐ２８Ｒ（配列番号２）とＰ２８コア（配列番号１）の両方は、癌血清の存在下でＰＢＭＣを活性化した。
【０１６３】
加えて、ビオチン化Ｐ２８Ｒは、ビーズがコーティングされたＰ２８Ｒ（細胞にビーズが結合している）の免疫細胞化学及びロゼット形成により実証されるように、ＰＢＭＣに直接結合することが示されている。
【０１６４】
まとめると、これらの結果は、Ｐ２８Ｒ（配列番号２）がＰ３０２８に結合し細胞受容体を脱ブロックでき、免疫細胞に対して直接刺激活性も有し得ることを示す。さらに、Ｐ２８コア（配列番号１）は、Ｐ３０２８に結合し細胞受容体を脱ブロックできる。
【０１６５】
実施例３：免疫適格マウスにおけるＰ２８Ｒによる免疫系の活性化
免疫系を活性化し、それにより腫瘍細胞溶解を誘導するＰ２８Ｒの能力を、Ｂ１６黒色腫を接種した免疫適格マウスのＣ５７Ｂ１において調べた。１００マイクロリットル中２０ｎＭのＰ２８Ｒを腫瘍内に注入し、腫瘍を３〜５日後に取り出した。実施例４９でＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１６／１４４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に示されるように、局所リンパ節反応は、Ｐ２８Ｒで腫瘍内治療した動物において定期的に見られた。Ｐ２８Ｒの腫瘍内注入は、Ｐ２８Ｒで治療した腫瘍だけでなく、注入していない反対側の腫瘍でも（ＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１６／１４４、図５５Ａ〜Ｄ）又は生理食塩水のみを注入しても顕著な腫瘍回帰変化を生じた。未治療の遠位／反対側腫瘍における効果は、治療した腫瘍へのＰ２８Ｒの注入後に時間と共に高まった。同様の結果が、Ｂ５７Ｂ１マウスにおけるルイス肺癌モデルにおいても得られた。したがって、本明細書のいくつかの実施形態によるペプチド阻害剤Ｐ２８Ｒの投与は、ペプチド阻害剤を腫瘍内に投与される腫瘍、及び患者の他の部分における腫瘍（例えば、ペプチド阻害剤が投与された腫瘍と反対側の腫瘍）を含む、腫瘍において回帰的な変化を誘導できることが示される。
【０１６６】
実施例４：Ｐ２８Ｒでのイヌにおける自然発生腫瘍の腫瘍内治療
様々な組織のイヌの自然発生腫瘍を、２００マイクロリットル中４０ｎｍｏｌのＰ２８Ｒの腫瘍内注射によって治療した。Ｐ２８Ｒでのイヌ腫瘍の治療は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１６／１４４６５０の実施例５０〜６０に詳細に記載される。乳房腫瘍を治療した７匹のイヌ及び治療していない５匹の対照イヌの腫瘍細胞（治療したイヌについては８８１、治療していない対照イヌについては８８２）及びリンパ球（治療したイヌと治療していない対照イヌの両方について８８３）を定量する例示的な結果が、図４に示される。乳房腫瘍を有するこれらのイヌにおいて、顕著な炎症浸潤が全ての治療した腫瘍において見出され、変性腫瘍細胞の数が１４個の未治療腫瘍と比較して増加した。この抗腫瘍効果は、薬物を２００μＬのみ注入した場合であっても、大きな腫瘍全体にわたって観察された。複数の腫瘍を有する２匹のイヌにおいて、Ｐ２８Ｒに対する同じ応答が、注射した腫瘍だけでなく、注射していない腫瘍においても見出された。
【０１６７】
イヌにおける自然発生腫瘍を、単回用量漸増研究でＰ２８Ｒの皮下注射を用いて治療し、腫瘍を３〜５日後に切除した。図５Ａ〜Ｂに示すように、イヌの自然発生乳房腫瘍の皮下Ｐ２８Ｒ治療（単回用量８０μｇ）は、炎症細胞の動員及び腫瘍細胞死をもたらす（対照Ｎ＝１２及び治療Ｎ＝５）。イヌにまた、１６０マイクログラム及び３２０マイクログラムで投与した。有害事象は、いずれの犬においても、いかなる用量レベルでも観察されなかった。さらに、（Ａ）複数のリンパ節が大きくなると共に全身の高度のＢ細胞リンパ腫を有するイヌにおいて、５００マイクロリットル中２００マイクログラムでのＰ２８Ｒの１回の注入を、直径２ｃｍの１つの膝窩リンパ節に施した。５日目に、注入した腫瘍は臨床的に見出されなかった。（Ｂ）硬口蓋（ｈａｒｄ ｐａｌａｔｅ）／硬口蓋（ｐａｌａｔｕｍ ｄｕｒｕｍ）中に延在する右側上、及び眼の下及び横に突起を有する右眼の下に、腫瘍サイズが３×４ｃｍの歯槽堤の進行性扁平上皮癌を有するイヌにおいて、２００マイクロリットル中８０マイクログラムのＰ２８Ｒの毎週の腫瘍内注射を１０回投与した。３ヶ月後に、注射した腫瘍の組織病理学的に完全な寛解が達成された。（Ｃ）サイズが最高で４×４ｍｍの複数の再発性乳房腫瘍を有するイヌにおいて、２０マイクロリットル中８０マイクログラムの通常は毎週の９回の注射後に、組織病理学的検査は強力な炎症応答を示すが、残存する腫瘍細胞も示す。まとめると、いくつかの実施形態のペプチド阻害剤Ｐ２８Ｒは良好に許容され、複数種の腫瘍の改善、抑制、及び治療に有効であると結論づけることができる。
【０１６８】
実施例５：Ｐ２８Ｒの全身効果
Ｐ２８Ｒの全身皮下投与の効果に関する研究を行った。この研究は、ＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１６／１４４６５０の実施例６２に記載される。ＣＴ２６結腸癌を接種したマウスを、１２マイクログラムのＰ２８Ｒで２週間、週２回治療した。アポトーシスが腫瘍細胞の大部分において誘導された。これらの結果は、本明細書のいくつかの実施形態によるＰ２８Ｒなどのペプチド阻害剤の、直接腫瘍注入に加えて、全身投与は、炎症浸潤、腫瘍細胞後退変化、及び／又は患者全体の腫瘍組織の根絶を誘導でき、かつ腫瘍細胞においてプログラム細胞死を誘導できることを示す。
【０１６９】
実施例６：Ｐ２８ＲとＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１に対する抗体との相乗作用
癌薬物Ｐ２８Ｒの開発において、増強された炎症性の応答を単に評価するために、ＣＤ４５に対する抗体が選択された。このマーカーは、腫瘍内炎症性サブセットの異なるサブセットの機能的特性間の区別ができない。多くの研究において、主に自然免疫系の活性化である、Ｐ２８Ｒの注入後の短期間が、特にイヌの研究において調査された。マウス実験では、強い炎症反応が３〜５日以内に、いくつかの実験ではすでに２４時間後に誘導された。興味深いことに、この短期間で、腫瘍細胞の印象的な根絶が観察された。腫瘍細胞死の評価は、形態学的基準、ＴＵＮＥＬ及びフォイルゲン染色に基づいた。強い抗腫瘍活性が誘発されたことは明らかであった。加えて、Ｐ２８ＲとＰＤ−１及びＰＤ−Ｌ１に対する抗体との間の統計的に有意な相乗効果が示され、成長遅延として評価された。理論に束縛されるものではないが、この観察に鑑みて、炎症性応答を詳細に分析する上での焦点は、抑制機構の発生の可能性よりも、抗腫瘍エフェクター機構に向けられた。さらに、理論に束縛されるものではないが、マクロファージは、早期応答、優勢の炎症性細胞及びＦ４／８０などのマクロファージ特異的マーカーの形態に基づいて、主な種類のエフェクター細胞であると結論づけることができた。２週間の延長された治療期間の後に、ＣＤ８＋細胞の顕著に増強された動員が生じ、これは、免疫原性細胞死の初期の自然誘導、その後の獲得免疫応答と良好に一致している。
【０１７０】
実施例７：ヒト癌におけるＰ３０２８構造の存在
現在、癌の免疫療法における治療障害は、免疫抑制表現型：免疫デザート腫瘍（Ｔ細胞による浸潤なし）、免疫排除腫瘍（周囲の間質領域に制限されたＴ細胞）、及び炎症腫瘍（非機能性Ｔ細胞による浸潤）により説明できる。免疫抑制剤３０２８の出現は、乳癌及び頭頸部癌の研究で示されているように、Ｔ細胞の腫瘍への不十分な動員と相関する。これは、ＬＦＡ−１の３０２８ブロッキングと良好に一致しており、それにより、リンパ球が腫瘍に入り、かつ腫瘍内で腫瘍細胞付近に移動する能力を阻害する。
【０１７１】
３０２８（赤）及びＣＤ３（褐色）に対する抗体を用いて二重染色した３つの異なる舌癌が示される。左の免疫デザート癌（図６Ａ）は、３０２８の強力な発現および間質中にごくわずかな散乱されたＴ細胞を有し、中央の免疫排除癌（図６Ｂ）は、３０２８の強い発現及び間質で浸潤するＴ細胞を有し、右の炎症癌（図６Ｃ）は、３０２８についてわずかに染色され、かつＴ細胞の非常に強い浸潤を有する。
【０１７２】
理論に束縛されるものではないが、従来の免疫療法は、図６Ａ及び６Ｂに示される免疫遮断を有する癌において困難であり得ることが企図される。理論に束縛されるものではないが、炎症を特徴とする癌においては、腫瘍細胞付近へのＴ細胞の移動を阻害するＬＦＡ−１遮断に起因して、大きな範囲で移動封鎖が依然として存在する可能性がある。これらの種類の癌は本明細書に記載のペプチド阻害剤を含む医薬製剤に応答する可能性があることが、さらに企図される。Ｔ細胞によって透過されかつ３０２８の低い発現を有する、図６Ｃに示される炎症性癌の種類では、チェックポイント分子などの他の抑制剤機構が動作している。これらは、チェックポイント阻害剤に応答する可能性が最も高い腫瘍である。
【０１７３】
ヒト頭頸部癌におけるさらなる調査
口腔癌における免疫抑制剤３０２８の発現を調べた。１８個の評価した舌、喉頭及び扁桃の試料のうち１６個が、腫瘍結節において中程度〜高い３０２８の発現を示した。また、残りの２つの試料は、３０２８の発現を示したが、より少ない程度であった。
【０１７４】
統計解析は、ＣＤ３＋腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の存在が０．０２４のｐ値と相関することを示し、ＣＤ３＋リンパ球の量が腫瘍結節中の３０２８の存在と有意に相関することを示した。
【０１７５】
実施例８：ヒト乳癌のエキソビボ治療
腫瘍中の３０２８発現アルブミン構造によるＬＦＡ−１ブロッキングの生物学的関連性をさらに実証するために、ヒト乳癌由来の新鮮な凍結腫瘍切片を、ＬＦＡ−１（ＣＤ１１ａ）について染色する前にＰ２８Ｒとインキュベートした。比較のために、腫瘍切片をリン酸緩衝生理食塩水のみとインキュベートした。Ｐ２８Ｒは、ＬＦＡ−１のブロッキングを無効にし、染色の強度を高め、リンパ球移動及び細胞傷害活性に重要なＬＦＡ−１受容体の機能も増強した（図７Ａ〜Ｂ）。
【０１７６】
図７Ａ〜Ｂは、ＣＤ１１ａに対する抗体により染色された炎症細胞を示す乳癌患者からの腫瘍切片を示す。固定されていない新鮮な凍結腫瘍切片を、染色前に緩衝液（図７Ａ）又はＰ２８Ｒ（図７Ｂ）とインキュベートした。Ｐ２８Ｒで処理した腫瘍切片に浸潤する炎症細胞が観察される。
【０１７７】
加えて、ヒト乳房及び舌癌からの切片を、Ｐ２８Ｒでエキソビボ処理した。腫瘍細胞付近の強い自然発生炎症応答を有する癌においては、免疫細胞はＬＦＡ−１の強い膜染色を示したが、炎症細胞の中程度の浸潤のみを有する腫瘍においては、膜の染色はブロックされたが、エキソビボＰ２８Ｒ処理によって遮断することはできなかった。
【０１７８】
実施例９：「製剤Ａ」と「製剤Ｂ」の調製
Ｐ２８Ｒは、中性ｐＨでβシートを形成する傾向を有する短いペプチドである。それを、ｐＨ５．２の酢酸緩衝液でうまく製剤化し（「製剤Ａ」；下記表２Ａ参照）、自然発生腫瘍を有するイヌの研究においてＰ２８Ｒ用のビヒクルとして使用した（研究ＣＩＧ−１３０１）（実施例４参照；ＰＣＴ公開ＷＯ  ２０１６／１４４６５０も参照）。腫瘍内投与後のＰ２８Ｒの効果を解析する際に、明確な治療効果を検出できたが、注射部位の腫瘍に近い細胞は、注入されたビヒクルによりわずかに影響されるように見えた。理論に束縛されるものではないが、これは、酢酸塩及び／又は製剤Ａの低モル浸透圧濃度から生じると考えられた。したがって、酢酸塩レベルを大幅に低下させ、モル浸透圧濃度を塩化ナトリウムの添加により等張レベルに調整して、「製剤Ｂ」を生成した（表２Ｂ参照）。
【０１７９】
表２Ａ：製剤Ａ
【表４】
2022500480.tif 000006
表２Ｂ：製剤Ｂ
【表５】
2022500480.tif 000007
【０１８０】
製剤ＢのＰ２８Ｒは、生成技術的理由から２つのバイアルに分けられており、製剤Ｂ中でＰ２８Ｒを生成するために、使用前に混合されるべきである（実施例１０参照）。
【０１８１】
Ｐ２８Ｒは、ＧＭＰ規格に従い、Ｃ  Ｓ  Ｂｉｏ  Ｃｏ．ＣＡ，ＵＳＡにより生成された。ビヒクル生成に使用される化学物質は、氷酢酸（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＫ）、塩化ナトリウム（Ｓ３０１４−５ｋｇ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、水酸化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ，２２１４６５−５００ｇ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、酢酸ナトリウム（７１１８３−２５０Ｇ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）であった。使用した滅菌フィルターは、２５ｍｍの滅菌注射器フィルターｗ／０．２μｍのポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）膜（Ｅｕｒｏｐｅａｎカタログ番号５１４−００７３ ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｒａｄｎｏｒ，ＰＡ，ＵＳＡ）又は５０ｍｍのＢａｘｔｅｒ、０．２ミクロンフィルター（ＲＥＦ Ｈ９３８３５，Ｂａｘｔｅｒ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）であった。タンパク質濃度を、対照として相関するブランクを用いるＤｅＮｏｖｉｘ ＤＳ−１１分光光度計で「ペプチド」設定を用いて決定した。ｐＨを、新たに較正されたＷＴＷ Ｉｎｏｌａｂ  ｐＨ７２０を用いて測定した。
【０１８２】
実施例１０：ゲルを形成するＰ２８Ｒの傾向は水酸化ナトリウム及び／又はｐＨ依存性である
製剤Ｂ中のＰ２８Ｒは、フィルターの目詰まりにより滅菌濾過できないことが観察され、通過できる制限された量のフロースルーは、Ｐ２８Ｒの含有量をほとんど有していないことが観察された（データ示さず）。理論に束縛されることなく、フィルターの目詰まりは、βシート及び／又はゲルを形成するＰ２８Ｒなどの短いペプチドの可能性から生じることが疑われる。この状態のＰ２８Ｒペプチドは、微視的に調べると、非常に薄いゲルの形態である、清澄で透明な液体を形成する。
【０１８３】
異なる量の水酸化ナトリウムを添加して、製剤Ｂの５つの異なるバッチを生成し、ｐＨの勾配を作った。溶液に小ビーズを添加して、ゲル形成の存在を可視化した（表３）。
【０１８４】
表３：異なるｐＨにおける製剤Ｂのゲル形成能。製剤中でゲルを形成するＰ２８Ｒの傾向を、小ビーズの添加を用いてｐＨ５．３５〜１０．９７の範囲の異なるｐＨで、特定した（＊沈殿したペプチドは、管壁上に付着する傾向を有するため、様々な濃度を与える）。
【０１８５】
表３
【表６】
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【０１８６】
ゲル形成は、水酸化ナトリウムの添加により影響を受けることが観察される。理論に束縛されることなく、ゲル形成は、ナトリウム添加に起因し得、かつ／又はｐＨ依存性であり得る。しかし、ゲルが形成されていない、約ｐＨ１０の上のｐＨ閾値があるが、製剤は透明な溶液から白色の粒状の外観に変わる。
【０１８７】
そのため、ナトリウムの存在及び／又は少なくとも５．３５のｐＨが、Ｐ２８Ｒペプチドにゲルを形成させることができ、これは滅菌濾過を妨害し得ることが企図される。一方で、３．６などのより低いｐＨでは、Ｐ２８Ｒペプチドは、液体溶液に溶解されたままであった（例えば、表４参照）。
【０１８８】
実施例１１：塩化ナトリウムがＰ２８Ｒの凝集を誘導する
水酸化ナトリウムを製剤Ｂに添加した場合、滅菌濾過はフィルターの目詰まりにより不可能であったが、水酸化ナトリウムと塩化ナトリウムの両方が存在しない場合には、濾過が可能であり、ゲル形成を検出できなかった（データ示さず）。
【０１８９】
溶解したペプチドが濾過の間に膜に結合するかどうかを評価するために、ＮａＯＨ及びＮａＣｌを含まず、ｐＨ３．６をもたらす製剤Ｂ（ＤｅＮｏｖｉｘ ＤＳ−１１分光光度計で測定した場合０．２７ｍｇ／ｍｌのＰ２８Ｒをもたらす１０ｍｇのＰ２８Ｒ（ＣＳ８０４０）、４７１．７μｌの１０％酢酸及び２３．１６ｍｌの１．６ｍＭ酢酸ナトリウム）を、０．２μｍのＰＥＳフィルターを通して濾過し、フロースルーを１ｍｌの量に分けた。フロースルーのＰ２８Ｒ濃度を、ＤｅＮｏｖｉｘ ＤＳ−１１分光光度計（表４）を用いて決定した。なお、Ｐ２８Ｒの平均分子量は１９７２．３Ｄａであったことに留意されたい。
【０１９０】
表４は、２５ｍｍのＰＥＳフィルターを用いた滅菌後のフロースルー中のＰ２８Ｒ濃度を示す。ＮａＯＨ及びＮａＣｌを含まず、ｐＨ３．６をもたらす製剤Ｂ（１０ｍｇのＰ２８Ｒ（ＣＳ８０４０）、４７１．７μｌの１０％酢酸及び２３．１６ｍｌの１．６ｍＭの酢酸ナトリウム）を、０．２μｍのＰＥＳフィルターを通して滅菌した。フロースルーのＰ２８Ｒ濃度を、ＤｅＮｏｖｉｘ ＤＳ−１１分光光度計を用いて決定した（＊試料の限定された選択物を測定し、Ｐ２８Ｒ濃度は常に０．２６〜０．２８ｍｇ／ｍｌであった、データ示さず）。
【０１９１】
表４
【表７】
2022500480.tif 000009
【０１９２】
同じバッチを次いで、Ｐｈａｒｍａ−Ｓｋａｎからの５０ｍｍのＢａｘｔｅｒフィルターを通してろ過し、フロースルー中のタンパク質含量を、分光光度計で決定した（表５）。
【０１９３】
表５は、５０ｍｍのＢａｘｔｅｒフィルターを用いた滅菌後のフロースルー中のＰ２８Ｒ濃度を示す。ＮａＯＨ及びＮａＣｌを含まない製剤Ｂを、５０ｍｍのＢａｘｔｅｒフィルターを通してろ過し、フロースルーを１ｍｌ量に分けた。フロースルーの最初の２４ミリリットルのＰ２８Ｒ濃度を、ＤｅＮｏｖｉｘ ＤＳ−１１分光光度計を用いて決定した（＊液体をこの間に、膜上の乾燥領域に予め充填した）。
【０１９４】
表５
【表８】
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【０１９５】
製剤化された状態でのＰ２８Ｒの挙動に対するｐＨの影響をさらに評価するために、チューブ３〜１２及び１５〜２５中の試料をプールし、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを４．８に調整し、タンパク質濃度を０．２６ｍｇ／ｍｌに決定し、その後に、表５で使用したのと同じバクターフィルターを通して溶液を流した。タンパク質含量（１．０ｍｌ／チューブ）を、フロースルーの最初の６ミリリットルについて決定した（表６）。
【０１９６】
表６は、上昇されたｐＨは、５０ｍｍのＢａｘｔｅｒフィルターへのＰ２８Ｒの結合を誘導することを示す。ＮａＣｌを含まずｐＨ４．８での製剤Ｂのフィルターを通した濾液を、ｐＨ３．６での製剤Ｂの前の濾液からのＰ２８Ｒで飽和した。最初の６ミリリットルのフロースルーのＰ２８Ｒ濃度を、ＤｅＮｏｖｉｘ ＤＳ−１１分光光度計を用いて決定した。
【０１９７】
表６
【表９】
2022500480.tif 000011
【０１９８】
フロースルーの最初の１ｍｌがそれに続く試料よりもわずかに低い濃度を含むことは、増加されたｐＨ（４．８）が、フィルターに結合するようペプチドを誘導することを示す（３．６のｐＨと比較して）。フィルターはすでに、表５に示した実験で行った濾過から飽和されているはずであるが、上昇したｐＨは、フィルター特性又は製剤中のペプチドのいずれかを変更して、増加されたＰ２８Ｒ結合能を促進する可能性がある。
【０１９９】
ＮａＣｌ及びＮａＯＨを含まない製剤Ｂにおいて、より高いＰ２８Ｒ濃度の滅菌濾過が可能であるかどうかを調べるために、０．３７ｍｇ／ｍｌのタンパク質含量を有する新しいバッチを生成し、ＰＥＳフィルターを介して濾過した（表７）。
【０２００】
表７は、ＰＥＳフィルターを用いた滅菌後のフロースルー中のＰ２８Ｒ濃度を示す。ｐＨ３．６であり及びＰ２８Ｒの含有量が０．３７ｍｇ／ｍｌである製剤Ｂの濾過。フロースルーの最初の１２ミリリットルのＰ２８Ｒ濃度を、ＤｅＮｏｖｉｘ ＤＳ−１１分光光度計を用いて決定した。
表７
【表１０】
2022500480.tif 000012
【０２０１】
ゲルを形成するＰ２８Ｒの能力が、製剤Ｂに懸濁される場合に観察されるが、製剤Ａでは観察されない。理論に束縛されることなく、この現象は、目詰まりすることなく製剤Ａを滅菌濾過するが製剤Ｂは滅菌濾過しない可能性の背後にある、最も可能性の高い原因であると企図される。製剤Ａの高い酢酸濃度及び低いモル浸透圧濃度のために、製剤Ｂは、臨床的使用により適していると企図される。
【０２０２】
ゲル形成の背後にある理由を調査するために、より低いｐＨであり及び／又はＮａＣｌを含まない製剤Ｂのいくつかのバージョンを調べた。ＮａＣｌを含有する製剤は滅菌フィルターを通過できず、ＮａＣｌ又は生じたモル浸透圧濃度の上昇がＰ２８Ｒペプチドのゲル形成を誘導していることを実証する。
【０２０３】
ＮａＣｌを含まない製剤Ｂの濾過後に、飽和に達成する前に、少量のＰ２８Ｒがフィルターに結合し得ることは明らかであった。飽和前にフィルターに結合し得るＰ２８Ｒの量は、表５に示すようにｐＨ依存性であった。
【０２０４】
フィルターに結合できるＰ２８Ｒの量は、材料の種類とフィルターサイズの両方に依存する。５０ｍｍのＢａｘｔｅｒフィルターを飽和させるのに必要なペプチドの総量は、表６の濾過後のペプチドの損失から計算して、０．１ｍｇの大きさのＰ２８Ｒである。このＢａｘｔｅｒフィルターは、臨床使用のために作製されたＰ２８Ｒの滅菌中にＰｈａｒｍａ−Ｓｋａｎ  ＡｐＳにより使用されるフィルターと同一である。最も頻繁には、１００ｍｇ超のＰ２８Ｒが臨床バッチの生成に使用され、そのため、１／１０００未満に等しい０．１ｍｇの損失は無視できると考えられる。
【０２０５】
実施例１２：ＧＭＰに従い臨床的に使用するためのＰ２８Ｒの製剤
現在のＧＭＰ規格に従い２バイアルを用いる製剤Ｂの生成を、バッチ番号６１１１７０において（ＡＰＩ  ＣＳ８０４０バッチＧＨ１００８を用いる）Ｐｈａｒｍａ−Ｓｋａｎ  ＡｐＳにより行った。Ｐ２８Ｒ濃縮物（Ｐ２８Ｒバイアル−Ａ）は、ＮａＣｌ及びＮａＯＨを含まない製剤Ｂ緩衝液の０．７６ｍＬ中に全てのＰ２８Ｒを含有した。希釈物（Ｐ２８Ｒバイアル−Ｂ）は、０．２４ｍＬの溶液中に全てのＮａＣｌ及びＮａＣＨを含有した。製剤Ｂを形成するための「Ｐ２８Ｒバイアル−Ａ」と「Ｐ２８Ｒバイアル−Ｂ」の融合は後に、注射の直前にクリニックで行われた。
【０２０６】
製剤Ｂは、等張性であり、製剤Ａと比較して酢酸が少ないので、製剤Ｂを臨床使用に優先させる。製剤Ｂのゲル誘導能は、ＮａＣｌ含量のために、濾過滅菌工程の間に生成技術上の問題を引き起こしている。この問題を回避するために、Ｐ２８Ｒは、ＮａＣｌの不在下で、かつ低ｐＨで滅菌濾過されてよい。したがって、臨床使用のためのＰ２８Ｒの生成は、製剤Ｂを２バイアルシステム（「Ｐ２８Ｒバイアル−Ａ」中にＰ２８Ｒ濃縮物及び「Ｐ２８Ｒバイアル−Ｂ」中に希釈物）に分割することを用いて達成できる。バイアル−Ａは、酢酸及び酢酸ナトリウムに溶解されたＰ２８Ｒからなる。バイアル−Ｂは、塩化ナトリウム及び水酸化ナトリウムを含有する。２つのバイアルのブレンド中にＰ２８ＲがｐＨを上昇させるのを回避するために、バイアル−Ｂ、水酸化ナトリウムを、Ｐ２８Ｒを含むバイアル−Ａ中に添加しなければならない。バイアル−Ａとバイアル−Ｂを混合すると、すぐに臨床使用が可能な製剤Ｂが生成される。
【０２０７】
実施例１３：ＧＭＰ生成されたＰ２８Ｒバッチの安定性試験
バッチ６１１１７０の安定性を、貯蔵条件の監視及びＱ＆Ｑ−Ｌａｂｓ  ＡＢにより実施されるＨＰＬＣ純度分析について、ＢｉｒｋａＢｉｏＳｔｏｒａｇｅ ＡＢと共同で試験した。貯蔵の直前に純度分析を行い、得られた９７．０％純度を、後の分析との比較のために基準値として使用した。＋５℃で１９ヶ月保存した後に、純度は９４．８％に低下した。全ての安定性結果を表８に示す。
【０２０８】
表８は、バッチ６１１１７０からのＰ２８Ｒ安定性の結果を示す。公認の貯蔵施設のＢｉｒｋａ Ｂｉｏｓｔｏｒａｇｅ ＡＢ（Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）により監視された＋５℃の条件下で貯蔵されたＰ２８Ｒ濃縮物（Ｐ２８Ｒバイアル−Ｂ）の純度を、現在のＧＭＰ規格に準拠して、Ｑ＆Ｑ−Ｌａｂｓ  ＡＢ（Ｍｏｌｎｄａｌ，Ｓｗｅｄｅｎ）により指示された時点でＨＰＬＣを用いて試験した。Ｐ２８Ｒペプチドの純度、最大の個々の関連物質及び０．１％超の追加の個々の関連物質が表に示される。
【０２０９】
表８
【表１１】
2022500480.tif 000013
【０２１０】
実施例１４：高濃度Ｐ２８Ｒのためのビヒクル
将来の使用のために、Ｐ２８Ｒ濃度を顕著に増加させる可能性を有する最適化された「製剤Ｃ」を開発した。
【０２１１】
製剤Ｃを、０．０１Ｍの酢酸中のＰ２８Ｒを１３．３ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解することにより生成し、そこへ１．１２Ｍのグルコースを添加して、１０ｍｇ／ｍＬのＰ２８Ｒ濃度の等張液を得る。０．０１Ｍの酢酸の酸性度は、酢酸塩であるペプチド対イオンによって相殺され、したがってｐＨが約５．２になる。この１０ｍｇ／ｍＬの製剤Ｃは、フィルターを目詰まりさせることなく滅菌濾過できるが、粘性であり、顕著に泡立つ。重要な部分は、それがゲルを形成せず、したがって高いＰ２８Ｒ濃度が将来的に必要とされる場合には代替となることである。より低いＰ２８Ｒ濃度を有する製剤Ｃは、等張グルコースで希釈することにより、容易に生成できる。Ｐ２８Ｒを有する製剤Ｃの予備調査は、５ｍｇ／ｍＬ未満の濃度が利用するのに実用的であることを示す。
【０２１２】
製剤Ｃは、生産コスト、生産技術、穏やかな緩衝能、Ｐ２８Ｒ濃度を増加させる可能性を含むいくつかの点において高い可能性を有し、かつクリニックにおいて２バイアルシステムよりむしろ単一バイアルシステムを有することはより実用的である。
【０２１３】
上記の実施形態の少なくともいくつかにおいて、一実施形態で使用される１以上の要素は、そのような置換が技術的に実行可能でない場合を除き、他の実施形態において互換的に使用され得る。特許請求の範囲から逸脱することなく、種々の他の省略、付加及び修飾が、方法、組成物、医薬品、医薬製剤、及び本明細書に記載の使用に対してなされ得ることは、当業者には理解されるであろう。全てのそのような修正及び変更は、添付の特許請求の範囲によって定義される主題の範囲内に入ることが意図される。
【０２１４】
本明細書において実質的に任意の複数及び／又は単一の用語の使用に関して、当業者は、文脈及び／又は適用に適切であるように、複数から単数及び／又は単数から複数へと翻訳できる。様々な単数／複数の順列は、本明細書において明確に説明するために明示的に記載され得る。
【０２１５】
一般に、本明細書、及び特に添付の特許請求の範囲（例えば、添付の特許請求の範囲の本体）で使用される用語は、一般的に「オープン」用語（例えば、用語「を含んでいる」は、「を含んでいるが、これらに限定されない」として解釈されるべきであり、用語「有する」は、「少なくとも有する」として解釈されるべきであり、用語「を含む」は、「を含むが、これらに限定されない」として解釈されるべきである、など）として意図されることが理解される。さらに、導入される請求項の列挙の特定の数が意図される場合、そのような意図は、請求項に明示的に列挙されており、そのような列挙が存在しない場合には、そのような意図は存在しないことを理解されたい。例えば、理解を助けるために、以下の添付の特許請求の範囲は、請求項の列挙を導入するために、「少なくとも１つ」及び「１以上」の導入句の使用を含んでよい。しかし、そのような語句の使用は、たとえ同じ請求項が、導入句「１以上」又は「少なくとも１つ」及び「１つ（ａ）」又は「１つ（ａｎ）」などの不定の冠詞を含む場合でも、不定の冠詞「１つ（ａ）」又は「１つ（ａｎ）」による請求項の列挙の導入が、そのように導入される請求項の列挙を含む任意の特定の請求項を、１つのみのそのような列挙を含む実施形態に限定することを暗示するものと解釈されるべきではない（例えば、「１つ（ａ）」および／又は「１つ（ａｎ）」は、「少なくとも１つ」又は「１以上」を意味すると解釈されるべきである）：同じことは、請求項の列挙を導入するために使用される一定の冠詞の使用については真であると考える。加えて、導入される請求項の列挙の特定の数が明示的に列挙されていても、当業者は、そのような列挙が少なくとも列挙した数を意味すると解釈されるべきであることを認識するであろう（例えば、他の修飾のない「２つの列挙」の最小限の列挙は、少なくとも２つの列挙、又は２以上の列挙を意味する）。さらに、「Ａ、Ｂ、及びＣの少なくとも１つなど」に類似する慣例が使用される場合には、一般に、そのような構成は、当業者がその慣例を理解する意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、及びＣの少なくとも１つを有するデバイス又は基板」は、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡとＢを一緒に、ＡとＣを一緒に、ＢとＣを一緒に、及び／又はＡとＢとＣを一緒に、などを含むが、これらに限定されない）。「Ａ、Ｂ、又はＣの少なくとも１つ」に類似する慣例が使用される場合には、一般に、そのような構成は、当業者がその慣例を理解する意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、又はＣの少なくとも１つを有するデバイス又は基板」は、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡとＢを一緒に、ＡとＣを一緒に、ＢとＣを一緒に、及び／又はＡとＢとＣを一緒に、などを含むが、これらに限定されない）。明細書、特許請求の範囲、又は図面であろうと、２以上の代替的な用語を示す実質的に任意の離接語及び／又は句は、用語の１つ、用語のいずれか１つ又は両方の用語を含む可能性を企図することを理解されるべきであることは当業者によってさらに理解されるであろう。例えば、語句「Ａ又はＢ」は、「Ａ」又は「Ｂ」又は「Ａ及びＢ」の可能性を含むと理解される。さらに、組成物、医薬製剤、又は医薬品を含む方法が本明細書に記載される場合には、使用のための対応する組成物、医薬製剤、又は医薬品も企図される。例えば、ペプチド阻害剤を含む医薬製剤を投与することを含む癌を治療する方法も、癌を治療する際に使用するためのペプチド阻害剤を含む医薬製剤を明確に企図する。
【０２１６】
加えて、本開示の特徴又は態様がマーカッシュグループに関して記載される場合、当業者は、本開示もそれにより、マーカッシュグループの任意の個々のメンバー又はメンバーのサブグループに関して記載されることを認識するであろう。
【０２１７】
記載された説明を提供する観点などの任意の及び全ての目的について当業者に理解されるように、本明細書に開示される全ての範囲は、任意の及び全ての可能なサブ範囲及びそのサブ範囲の組み合わせも包含する。任意の列挙した範囲は、十分に記載されたものとして容易に認識され、同じ範囲が少なくとも等しい半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに分解されることを可能にする。非限定的な例として、本明細書で議論される各範囲は、下３分の１、中央３分の１、上３分の１に容易に分解されることを可能にする。また当業者に理解されるように、「最大」、「少なくとも」、「より多い」、及び「より少ない」などの全ての言語は、列挙した数を含み、続いて、上記のサブ範囲に分解できる範囲を指す。最後に、当業者に理解されるように、範囲は各個々のメンバーを含む。そのため、例えば、１〜３個の冠詞を有するグループは、１、２又は３個の冠詞を有するグループを指す。同様に、１〜５個の冠詞を有するグループは、１、２、３、４、又は５個の冠詞などを有するグループを指す。
【０２１８】
様々な態様及び実施形態が本明細書に開示されているが、他の態様及び実施形態は、当業者には明らかであろう。本明細書に開示される様々な態様及び実施形態は、例示のためのものであり、限定することを意図するものではなく、真の範囲及び趣旨は、以下の特許請求の範囲によって示される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
2022500480.tif 000024
【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【手続補正書】
【提出日】令和3年5月27日(2021.5.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2022500480000001.app
【国際調査報告】
2022500480.tif 000029
2022500480.tif 000030