(57)【要約】５−アザ−２’−デオキシシチジンのハロゲン化アナログ、例えば、５−アザ−４’−チオ−２’−デオキシシチジン（５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄ）のハロゲン化アナログが記載される。ハロゲン化アナログを含む薬学的組成物および該ハロゲン化アナログを使用して新形成を阻害する方法が記載される。いくつかの例では、該ハロゲン化アナログは、式Ｉａに記載の構造またはその立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容され得る塩を有する。2022502378.tif 000034
2022502378.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉａに記載の化合物またはその立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容され得る塩であって、
【化２５】
2022502378.tif 000028
式中、Ｘは、ハロであり；
Ｙは、水素、ハロまたはジュウテリウムであり；
各Ｒは、独立して、水素またはジュウテリウムであり；
Ｒａは、水素、ジュウテリウム、アルキル、アルコキシ、アミノまたはハロである、
化合物またはその立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
（ｉ）Ｘが、Ｆである；または
（ｉｉ）Ｙが、水素またはＦである；または
（ｉｉｉ）各Ｒが、水素である；または
（ｉｖ）Ｒａが、水素である；または
（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）の任意の組み合わせである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式ＩＩａ〜Ｖａのいずれか１つに記載の立体化学、またはそれらの任意の組み合わせを有する、請求項１または請求項２に記載の化合物。
【化２６】
2022502378.tif 000029
【請求項４】
前記化合物が、
【化２７】
2022502378.tif 000030
またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記化合物が、
【化２８】
2022502378.tif 000031
またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が、４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン：
【化２９】
2022502378.tif 000032
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物。
【請求項８】
前記薬学的組成物が、静脈内、経口、腹腔内、皮下、直腸または頬側投与のために製剤化されている、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
新形成を阻害する方法であって、前記方法は、
新生物性細胞を有効量の請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物と接触させる工程
を含む、方法。
【請求項１０】
前記新生物性細胞を前記有効量の前記化合物と接触させる工程が、前記新生物性細胞の増殖を低減する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物が、４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン：
【化３０】
2022502378.tif 000033
である、請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記新生物性細胞を前記有効量の前記化合物と接触させる工程が、新生物性細胞の存在を少なくとも部分的に特徴とする疾患を有するかまたは有すると疑われる被験体に治療有効量の前記化合物を投与する工程を含む、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記疾患が、がんである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記がんが、腎臓、膀胱、乳房、結腸、子宮内膜、皮膚、血液、膵臓、前立腺、骨、肝臓、肺、食道または中枢神経系のがんである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記治療有効量の前記化合物を前記被験体に投与する工程が、前記疾患の徴候または症候を低減する、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記疾患の前記徴候または症候が、固形腫瘍であり、前記治療有効量の前記化合物を前記被験体に投与する工程が、前記固形腫瘍の成長を低減するか、前記固形腫瘍の体積を小さくするか、前記固形腫瘍の転移を減少させるか、またはそれらの任意の組み合わせである；または
前記疾患の前記徴候または症候が、異常な全血球数であり、前記治療有効量の前記化合物を前記被験体に投与する工程が、前記全血球数を少なくとも部分的に正常化する、
請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記治療有効量の前記化合物を投与する工程が、前記治療有効量の前記化合物を含む薬学的組成物を前記被験体に投与する工程を含む、請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
投与する工程が、静脈内、経口、腹腔内、皮下、直腸または頬側投与を含む、請求項１２〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
第２の活性な作用物質を前記被験体に投与する工程をさらに含む、請求項１２〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記第２の活性な作用物質が、抗がん剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、麻酔剤またはそれらの任意の組み合わせである、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１８年９月２５日出願の米国仮特許出願第６２／７３６，２４６号の先の出願日の利益を主張する。この米国仮特許出願は、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
分野
本開示は、５−アザ−２’−デオキシシチジンのハロゲン化アナログ、例えば、５−アザ−４’−チオ−２’−デオキシシチジン（５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄ）のハロゲン化アナログ、および前記ハロゲン化アナログを使用する方法に関する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
概要
５−アザ−２’−デオキシシチジンのハロゲン化アナログおよび前記ハロゲン化アナログを使用する方法が開示される。いくつかの実施形態において、前記化合物は、式Ｉａに記載の構造またはその立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容され得る塩を有し、
【化１】
2022502378.tif 000003
式中、Ｘは、ハロであり；Ｙは、水素、ハロまたはジュウテリウムであり；各Ｒは、独立して、水素またはジュウテリウムであり；Ｒａは、水素、ジュウテリウム、アルキル、アルコキシ、アミノまたはハロである。ある特定の実施形態において、（ｉ）Ｘは、Ｆである；または（ｉｉ）Ｙは、水素である；または（ｉｉｉ）各Ｒは、水素である；または（ｉｖ）Ｒａは、水素である；または（ｖ）（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）の任意の組み合わせである。
【０００４】
いくつかの実施形態において、上記化合物は、式ＩＩａ〜Ｖａのいずれか１つに記載の構造、またはそれらの任意の組み合わせを有する。
【化２】
2022502378.tif 000004
【０００５】
化合物ＩＩａ〜Ｖａのいずれかまたはすべてにおいて、Ｘは、Ｆであり得、Ｙは、ＨまたはＦであり得、各Ｒは、Ｈであり得、かつ／またはＲａは、Ｈであり得る。ある特定の実施形態において、上記化合物は、
【化３】
2022502378.tif 000005
またはそれらの任意の組み合わせである。
【０００６】
薬学的組成物は、開示される化合物のうちの少なくとも１つおよび薬学的に許容され得るキャリアを含み得る。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、静脈内、経口、腹腔内、皮下、直腸または頬側投与のために製剤化されている。
【０００７】
新形成を阻害する方法は、有効量の本明細書中に開示されるような化合物と新生物性細胞を接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、有効量の化合物と新生物性細胞を接触させる工程は、新生物性細胞の増殖を低減する。
【０００８】
任意のまたはすべての実施形態において、有効量の化合物と新生物性細胞を接触させることは、新生物性細胞の存在を少なくとも部分的に特徴とする疾患、例えば、がんを有するかまたは有すると疑われる被験体に治療有効量の化合物を投与することを含み得る。いくつかの例において、がんは、腎臓、膀胱、乳房、結腸、子宮内膜、皮膚、血液、膵臓、前立腺、骨、肝臓、肺、食道または中枢神経系のがんである。任意のまたはすべての実施形態において、治療有効量の化合物を被験体に投与することにより、その疾患の徴候または症候が低減し得る。１つの実施形態において、その疾患の徴候または症候は、固形腫瘍であり、治療有効量の化合物を被験体に投与することにより、その固形腫瘍の成長が低減するか、その固形腫瘍の体積が小さくなるか、その固形腫瘍の転移が減少するか、またはそれらの任意の組み合わせが生じる。別の実施形態において、その疾患の徴候または症候は、異常な全血球数であり、治療有効量の化合物を被験体に投与することにより、その全血球数が少なくとも部分的に正常化する。任意のまたはすべての実施形態において、治療有効量の化合物を投与することは、治療有効量の化合物を含む薬学的組成物を被験体に投与することを含み得る。
【０００９】
本発明の前述のおよび他の目的、特徴および利点は、添付の図面を参照して進められる以下の詳細な説明からより明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１）についての例示的な合成スキームである。
【００１１】
【図２】図２は、４−オキシルオキシフェニルメタンチオールについての例示的な合成スキームである。
【００１２】
【図３Ａ】図３Ａおよび３Ｂはそれぞれ、白血病細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０（正味のタンパク質増加の５０％減少をもたらす薬物濃度）データを示している。
【図３Ｂ】図３Ａおよび３Ｂはそれぞれ、白血病細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０（正味のタンパク質増加の５０％減少をもたらす薬物濃度）データを示している。
【００１３】
【図４Ａ】図４Ａおよび４Ｂはそれぞれ、中枢神経系（ＣＮＳ）がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【図４Ｂ】図４Ａおよび４Ｂはそれぞれ、中枢神経系（ＣＮＳ）がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【００１４】
【図５Ａ】図５Ａおよび５Ｂはそれぞれ、腎がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【図５Ｂ】図５Ａおよび５Ｂはそれぞれ、腎がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【００１５】
【図６Ａ】図６Ａおよび６Ｂはそれぞれ、非小細胞肺がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【図６Ｂ】図６Ａおよび６Ｂはそれぞれ、非小細胞肺がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【００１６】
【図７Ａ】図７Ａおよび７Ｂはそれぞれ、メラノーマ細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【図７Ｂ】図７Ａおよび７Ｂはそれぞれ、メラノーマ細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【００１７】
【図８】図８Ａおよび８Ｂはそれぞれ、前立腺がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【００１８】
【図９Ａ】図９Ａおよび９Ｂはそれぞれ、結腸がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【図９Ｂ】図９Ａおよび９Ｂはそれぞれ、結腸がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【００１９】
【図１０Ａ】図１０Ａおよび１０Ｂはそれぞれ、卵巣がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【図１０Ｂ】図１０Ａおよび１０Ｂはそれぞれ、卵巣がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【００２０】
【図１１Ａ】図１１Ａおよび１１Ｂはそれぞれ、乳がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【図１１Ｂ】図１１Ａおよび１１Ｂはそれぞれ、乳がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
【００２１】
【図１２Ａ】図１２Ａおよび１２Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬、そしてこのサイクルを４回反復で；４００ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２４０ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×４で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬、そしてこのサイクルを４回反復で；または１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で投与されたマウスのＨＣＴ−１１６ヒト結腸癌異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【図１２Ｂ】図１２Ａおよび１２Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬、そしてこのサイクルを４回反復で；４００ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２４０ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×４で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬、そしてこのサイクルを４回反復で；または１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で投与されたマウスのＨＣＴ−１１６ヒト結腸癌異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【００２２】
【図１３Ａ】図１３Ａおよび１３Ｂは、８ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；２５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２００ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×３で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬、そしてこのサイクルを３回反復で；１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で；または８ｍｇ／ｋｇの化合物１を経口的にＱＤ×５、休薬で３サイクル、投与されたマウスのＢＬ０３８２ヒト膀胱癌異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【図１３Ｂ】図１３Ａおよび１３Ｂは、８ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；２５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２００ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×３で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬、そしてこのサイクルを３回反復で；１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で；または８ｍｇ／ｋｇの化合物１を経口的にＱＤ×５、休薬で３サイクル、投与されたマウスのＢＬ０３８２ヒト膀胱癌異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【００２３】
【図１４Ａ】図１４Ａおよび１４Ｂは、８ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；２５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２００ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×３で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬、そしてこのサイクルを３回反復で；１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で；または８ｍｇ／ｋｇの化合物１を経口的にＱＤ×５、休薬で３サイクル、投与されたマウスのＯＶＣＡＲ３ヒト卵巣癌異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【図１４Ｂ】図１４Ａおよび１４Ｂは、８ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；２５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２００ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×３で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬、そしてこのサイクルを３回反復で；１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で；または８ｍｇ／ｋｇの化合物１を経口的にＱＤ×５、休薬で３サイクル、投与されたマウスのＯＶＣＡＲ３ヒト卵巣癌異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【００２４】
【図１５Ａ】図１５Ａおよび１５Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；８０ｍｇ／ｋｇの化合物１を経口的にＱＤ×５、休薬で３サイクル；４００ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２４０ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×３で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；または１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で投与されたマウスのＮＣＩ−Ｈ２３  ＮＳＣＬＣヒト肺癌異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【図１５Ｂ】図１５Ａおよび１５Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；８０ｍｇ／ｋｇの化合物１を経口的にＱＤ×５、休薬で３サイクル；４００ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２４０ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×３で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；または１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で投与されたマウスのＮＣＩ−Ｈ２３  ＮＳＣＬＣヒト肺癌異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【００２５】
【図１６Ａ】図１６Ａおよび１６Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；４００ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２４０ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×３で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；または１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で投与されたマウスのＨＬ−６０ヒト白血病異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【図１６Ｂ】図１６Ａおよび１６Ｂは、１０ｍｇ／ｋｇの化合物１（Ｆ−アザ−ＴｄＣｙｄ）を腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；４００ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内にＱ７Ｄ×３で；２４０ｍｇ／ｋｇのＦ−ＴｄＣｙｄを静脈内にＱ７Ｄ×３で；１．５ｍｇ／ｋｇの５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄを腹腔内にＱＤ×５、休薬で３サイクル；または１５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを腹腔内にＱ７Ｄ×３で投与されたマウスのＨＬ−６０ヒト白血病異種移植片の腫瘍体積およびマウス体重をそれぞれ経時的に示している。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
詳細な説明
５−アザ−２’−デオキシシチジンのハロゲン化アナログおよび前記ハロゲン化アナログを使用する方法が開示される。いくつかの実施形態において、前記化合物は、５−アザ−４’−チオ−２’−デオキシシチジン（５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄ）のハロゲン化アナログである。開示される化合物は、新生物性細胞の存在を少なくとも部分的に特徴とする疾患（例えば、がん）の処置に有用であり得る。開示されるハロゲン化アナログのいくつかの実施形態は、ある特定のがんの処置に関して、対応する非ハロゲン化アザ化合物および／または対応する非アザのハロゲン化アナログよりも効果的であり得る。
Ｉ．定義および省略形
【００２７】
以下の用語および省略形の説明は、本開示をより良く説明するため、および本開示の実施に際して当業者を導くために提供される。本明細書中で使用されるとき、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」を意味し、単数形「ａ」または「ａｎ」または「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。用語「または」とは、文脈が明らかに他のことを示さない限り、述べられている択一的エレメントのうちの１つのエレメントまたは２つもしくはそれを超えるエレメントの組み合わせのことを指す。
【００２８】
別段説明されない限り、本明細書中で使用されるすべての専門用語および科学用語は、本開示が属する分野の当業者が通常理解している意味と同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似のまたは等価な方法および材料を、本開示の実施または試験において用いることができるが、好適な方法および材料が下記に記載される。前記材料、方法および例は、単なる例証的なものであって、限定するものであると意図されていない。本開示の他の特徴は、以下の詳細な説明および請求項から明らかである。
【００２９】
別段示されない限り、明細書または請求項において使用される、構成要素、分子量、パーセンテージ、温度、時間などの量を表現するすべての数字が、用語「約」によって修飾されていると理解されるべきである。したがって、別段黙示的にもしくは明示的に示されない限り、またはより限定的な解釈を有すると当業者が文脈を適切に理解しない限り、示される数値パラメータは、求める所望の特性および／または当業者に公知の標準的な試験条件／方法における検出限界に依存し得る近似値である。議論されている従来技術と実施形態を直接かつ明示的に区別するときは、「約」という単語が記述されない限り、実施形態の数字は近似値ではない。
【００３０】
本明細書中に示される様々な構成要素、パラメータ、操作条件などの代替物が存在するが、それは、それらの代替物が、必ず均等物であること、かつ／または等しく機能することを意味しない。また、別段述べられない限り、それらの代替物が好ましい順序で列挙されていることも意味しない。
【００３１】
化学における一般的な用語の定義は、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｊ．Ｌｅｗｉｓ，Ｓｒ．（ｅｄ．），Ｈａｗｌｅｙ’ｓ  Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．による出版，１９９７（ＩＳＢＮ  ０−４７１−２９２０５−２）に見られることがある。本開示の様々な実施形態の検討を容易にするために、特定の用語の説明を以下に提供する：
【００３２】
活性な作用物質：疾患もしくは障害またはそれらに関連する少なくとも１つの症候の処置、回復または予防などの変化をもたらすために被験体に投与される、薬物、薬、医薬品、治療薬、機能性食品または他の化合物。活性な作用物質という用語には、生物学的に活性な作用物質、例えば、タンパク質、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、オリゴヌクレオチド、ワクチン、およびそのような材料の様々な誘導体も含まれる。
【００３３】
アルキル：飽和炭素鎖を有する炭化水素基。その鎖は、環状であっても、分枝状であっても、非分枝状であってもよい。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニルおよびデシルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】
アルコキシ：構造−ＯＲを有するラジカル（または置換基）であって、ここで、Ｒは、置換または非置換アルキルである。メトキシ（−ＯＣＨ３）が、例示的なアルコキシ基である。置換アルコキシでは、Ｒは、非妨害置換基で置換されたアルキルである。
【００３５】
アノマー：環状サッカライドに存在するエピマー（ただ１つのキラル炭素に異なる配置を有する異性体）。
【００３６】
共投与：用語「共投与」および「共投与する」とは、本明細書中に開示される化合物を少なくとも１つの他の活性な作用物質とともに、同じ大まかな時間内で投与することを指し、厳密に同じ瞬間における投与を必要としない（が、共投与は厳密に同じ瞬間に投与することを含む）。したがって、共投与は、同じ日もしくは異なる日、または同じ週もしくは異なる週に行われ得る。
【００３７】
有効量または治療有効量：有益な効果すなわち治療効果を被験体または所与のパーセンテージの被験体に提供するのに十分な量。
【００３８】
阻害する：本明細書中で使用されるとき、用語「阻害する」は、低減するまたは予防することを意味する。
【００３９】
新形成／新生物／新生物性：新形成は、組織または血液細胞の異常な成長である。その異常な成長によって、固体塊または腫瘍が形成され得る。新生物は、良性、上皮内（ｉｎ  ｓｉｔｕ）（例えば、非浸潤がんまたは前がん性新生物）または悪性（例えば、がん）であり得る。
【００４０】
薬学的に許容され得るキャリア：本開示において有用な薬学的に許容され得るキャリア（ビヒクル）は、従来のキャリアである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｅｄｉｔｏｒ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００５）には、本明細書中に開示されるような１つまたはそれを超えるシアニンフルオロフォアの薬学的送達に適した組成物および製剤が記載されている。
【００４１】
一般に、キャリアの性質は、用いられる特定の投与様式に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、薬学的および生理的に許容され得る流体、例えば、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、デキストロース水溶液、グリセロールなどをビヒクルとして含む注射可能な流体を含む。いくつかの例において、薬学的に許容され得るキャリアは、被験体への投与（例えば、非経口、筋肉内または皮下注射による投与）に適するように滅菌され得る。投与される薬学的組成物は、生物学的に中性のキャリアに加えて、少量の無毒性の補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、保存剤およびｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレート）を含み得る。
【００４２】
薬学的に許容され得る塩：開示されるシアニンフルオロフォアの生物学的に適合する塩であって、これらの塩は、当該分野で周知の種々の有機対イオンおよび無機対イオンから得られ、それらの単なる例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩、テトラアルキルアンモニウム塩など；および分子が塩基性官能基を含むとき、有機酸または無機酸の塩（例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩など）が挙げられる。薬学的に許容され得る酸付加塩は、生物学的にもその他の点でも望ましくないことのない酸パートナー、例えば、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など、ならびに有機酸、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などによって形成されている一方で、遊離塩基の生物学的有効性を保持する塩である。薬学的に許容され得る塩基付加塩としては、無機塩基から得られる塩基付加塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩、アルミニウム塩などが挙げられる。例示的な塩は、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩である。薬学的に許容され得る無毒性の有機塩基から得られる塩としては、第一級、第二級および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、ならびに塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などの塩が挙げられるが、これらに限定されない。例示的な有機塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、コリンおよびカフェインである（例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９７７；６６：１−１９（参照により本明細書中に組み込まれる）を参照のこと）。
【００４３】
立体化学：分子の３次元の空間的配置。
【００４４】
立体異性体：分子式および結合原子の配列が同じであるが、空間内の原子の３次元配向だけが異なる異性体。
【００４５】
被験体：処置、観察または実験に供される動物またはヒト。
【００４６】
互変異性体：陽子および電子の位置だけが異なり、水素原子の移動によって相互転換できる、有機化合物の構造異性体。互変異性体は、通常、平衡状態で共存する。
【００４７】
処置する／処置：本明細書中で使用されるとき、用語「処置する」および「処置」は、状態、すなわち、障害または疾患に関連する少なくとも１つの徴候または症候を阻害する（低減するまたは予防する）ことを意味する。腫瘍に関して、処置は、腫瘍成長を低減もしくは予防すること、腫瘍体積を小さくすること、および／または腫瘍転移を低減もしくは予防することを意味し得る。処置は、例えば、腫瘍の一部もしくは全部の臨床症候の重症度を低下し得るか、腫瘍の進行を遅くし得る（例えば、腫瘍を有する被験体を延命することによって）か、腫瘍の再発数を減少させ得るか、被験体の全体的な健康状態もしくは福祉を改善し得るか、または特定の障害もしくは疾患に特異的な当該分野で周知の他のパラメータによってもたらされ得る。
【００４８】
ＩＩ．５−アザ−２’−デオキシシチジンのハロゲン化アナログ
５−アザ−２’−デオキシシチジンのハロゲン化アナログおよびその立体異性体は、一般式Ｉに記載の構造：
【化４】
2022502378.tif 000006
を有し、式中、Ｘは、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）であり、Ｙは、水素、ハロ（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）またはジュウテリウムであり、Ｚは、ＳまたはＯであり、各Ｒは、独立して、水素またはジュウテリウムであり、Ｒａは、水素、ジュウテリウム、アルキル（例えば、Ｃ１−５またはＣ１−３アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピルまたはイソプロピル）アルコキシ、アミノまたはハロである。いくつかの実施形態において、Ｚは、Ｓである。任意のまたはすべての実施形態において、Ｘは、Ｆであり得る。任意のまたはすべての実施形態において、Ｙは、水素またはＦであり得る。任意のまたはすべての実施形態において、各Ｒは、水素であり得る。任意のまたはすべての実施形態において、Ｒａは、水素であり得る。
【００４９】
いくつかの実施形態において、上記化合物は、５−アザ−４’−チオ−２’−デオキシシチジン（５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄ）のハロゲン化アナログであり、一般式Ｉａに記載の構造を有し、式中、Ｘ、Ｙ、ＲおよびＲａは、上で定義されたとおりである。
【化５】
2022502378.tif 000007
【００５０】
上記ハロゲン化アナログは、式ＩＩ〜Ｖのいずれか１つに記載の立体化学またはそれらの任意の組み合わせを有し得、式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＲおよびＲａは、上で定義されたとおりである。
【化６】
2022502378.tif 000008
【化７】
2022502378.tif 000009
【００５１】
いくつかの実施形態において、Ｚは、Ｓであり、上記化合物は、式ＩＩａ〜Ｖａのいずれか１つに記載の構造またはそれらの任意の組み合わせを有する。
【化８】
2022502378.tif 000010
【００５２】
ある特定の実施形態において、上記化合物は、β−アノマー、すなわち、式ＩＩ、ＩＩａ、ＩＩＩまたはＩＩＩａに記載の化合物である。
【００５３】
例示的な化合物としては、
【化９】
2022502378.tif 000011
またはそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
いくつかの実施形態において、上記化合物は、
【化１０】
2022502378.tif 000012
またはそれらの任意の組み合わせである。
【００５５】
ある特定の実施形態において、上記化合物は、
【化１１】
2022502378.tif 000013
４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オンである。
ＩＩＩ．薬学的組成物
【００５６】
本開示は、本明細書中に開示されるような少なくとも１つの化合物を含む薬学的組成物も含む。上記薬学的組成物のいくつかの実施形態は、薬学的に許容され得るキャリアおよび少なくとも１つの化合物を含む。上記薬学的組成物は、１つまたはそれを超えるさらなる活性成分、例えば、抗がん剤、抗炎症剤、抗ウイルス剤、抗菌剤、麻酔薬なども含み得る。これらの製剤に有用な薬学的に許容され得るキャリアは、従来のものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９５）には、例えば、本明細書中に開示される化合物の薬学的送達に適した組成物および製剤が記載されている。
【００５７】
本明細書中に開示される式Ｉに記載の化合物は、非経口、経口または直腸経路を含む種々の経路によって被験体に投与され得る。非経口経路としては、静脈内、腹腔内、皮下、頬側および舌下経路が挙げられるが、これらに限定されない。他の代替の実施形態では、上記化合物は、被験体を起源とする細胞、組織または器官への直接的な曝露によってエキソビボで投与され得る。エキソビボ投与は、例えば、細胞（例えば、がん細胞）が上記化合物の投与に反応性であるかを判定するために有用であり得る。
【００５８】
上記薬学的組成物は、投薬単位形態（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆｏｒｍ）、例えば、注射可能な流体、経口送達用の流体（例えば、溶液または懸濁液）、経鼻送達用の流体（例えば、エアロゾルまたは吸入剤として送達するための流体）、半固体の形態（例えば、局所クリーム）または固体の形態、例えば、散剤、丸剤、錠剤またはカプセル剤の形態であり得る。
【００５９】
一般に、キャリアの性質は、用いられる特定の投与形式に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、薬学的および生理的に許容され得る流体、例えば、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、デキストロース水溶液、グリセロールなどをビヒクルとして含む注射可能な流体を含む。固体の組成物（例えば、散剤、丸剤、錠剤またはカプセル剤の形態）の場合、従来の無毒性の固体キャリアとしては、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプンまたはステアリン酸マグネシウムが挙げられ得る。投与される薬学的組成物は、生物学的に中性のキャリアに加えて、少量の無毒性の補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、保存剤およびｐＨ緩衝剤など、例えば、酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートを含み得る。
【００６０】
上記薬学的組成物を製剤化するために、上記化合物は、その化合物を分散させるための基剤またはビヒクルのみならず、様々な薬学的に許容され得る添加物と組み合わせることができる。所望の添加物としては、ｐＨ調整剤、例えば、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸などが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、等張化剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール）、吸着阻害剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０ポリエチレンソルビトールエステルまたはＭｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８１２トリグリセリド）、溶解促進剤（例えば、シクロデキストリンおよびその誘導体）、安定剤（例えば、血清アルブミン）および還元剤（例えば、グルタチオン）を含めることができる。アジュバント、例えば、当該分野で周知の他の多くの好適なアジュバントの中でも、水酸化アルミニウム（例えば、Ａｍｐｈｏｇｅｌ、Ｗｙｅｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＮＪ）、フロイントアジュバント、ＭＰＬＴＭ（３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ；Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＩＮ）およびＩＬ−１２（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を組成物に含めることができる。組成物が液体であるとき、０．９％（ｗ／ｖ）生理食塩水溶液の張度を１とする基準として計測される製剤の張度は、通常、実質的かつ不可逆的な組織損傷が投与部位において誘導されない値に調整される。一般に、溶液の張度は、約０．３〜約３．０、例えば、約０．５〜約２．０または約０．８〜約１．７という値に調整される。
【００６１】
上記化合物は、その化合物を分散させる能力を有する親水性化合物および任意の所望の添加物を含み得る、基剤またはビヒクル中に分散され得る。その基剤は、広範囲の好適な化合物から選択でき、それらとしては、ポリカルボン酸またはその塩、カルボン酸無水物（例えば、無水マレイン酸）と他のモノマー（例えば、メチル（メタ）アクリレート、アクリル酸など）との共重合体、親水性ビニルポリマー、例えば、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、セルロース誘導体、例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなど、ならびに天然高分子、例えば、キトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸およびそれらの無毒性の金属塩が挙げられるがこれらに限定されない。基剤またはビヒクルとして、生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体、ポリヒドロキシ酪酸、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール酸）共重合体およびそれらの混合物が選択されることが多い。代替的または追加的に、合成脂肪酸エステル、例えば、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステルなどもビヒクルとして使用され得る。親水性ポリマーおよび他のビヒクルは、単独でまたは組み合わせて使用することができ、部分結晶化、イオン結合、架橋などによって高い構造的完全性がビヒクルに付与され得る。ビヒクルは、種々の形態で提供され得、その形態としては、流体または粘稠性溶液、ゲル、ペースト、粉末、ミクロスフェア、および粘膜表面に直接適用するための薄膜が挙げられる。
【００６２】
上記化合物は、種々の方法に従って基剤またはビヒクルと組み合わされ得、それらの化合物は、拡散、ビヒクルの崩壊、または付随する水路の形成によって放出され得る。いくつかの状況においては、上記化合物は、好適なポリマー、例えば、イソブチル２−シアノアクリレートから調製されたマイクロカプセル（ミクロスフェア）またはナノカプセル（ナノスフェア）内に分散され（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｙ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３：１−５，１９９１を参照のこと）、そして生体適合性の分散媒中に分散され、それにより、長時間にわたる持続的な送達および生物学的活性がもたらされる。
【００６３】
本開示の組成物は、生理学的条件に近づけるために必要な物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、張度調整剤、湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、ソルビタンモノラウレートおよびオレイン酸トリエタノールアミンを薬学的に許容され得るビヒクルとして択一的に含むことができる。固体組成物の場合、従来の無毒性の薬学的に許容され得るビヒクルを使用することができ、それらとしては、例えば、薬学グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが挙げられる。
【００６４】
上記化合物を投与するための薬学的組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、または高濃度の活性成分に適した他の秩序構造としても製剤化することができる。ビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散性の製剤の場合は所望の粒径を維持することによって、および界面活性剤を使用することによって、溶液にとって適切な流動性を維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、多価アルコール（例えば、マンニトールおよびソルビトール）または塩化ナトリウムを組成物中に含めることが望ましい。吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによって、上記化合物を長期にわたって吸収させることができる。
【００６５】
ある特定の実施形態において、上記化合物は、持効性製剤、例えば、緩効性ポリマーを含む組成物として投与され得る。これらの組成物は、急速放出から保護するビヒクル、例えば、制御放出ビヒクル、例えば、ポリマー、マイクロカプセル化送達系または生体接着ゲルを用いて調製され得る。吸収を遅延させる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムヒドロゲルおよびゼラチンを組成物中に含めることによって、本開示の様々な組成物を長期にわたって送達させることができる。制御放出製剤が望まれる場合、本開示に従った使用に適した制御放出結合剤としては、活性な化合物に対して不活性であり、その化合物および／または他の生物学的に活性な作用物質を組み込むことができる、任意の生体適合性の制御放出材料が挙げられる。数多くのそのような材料が当該分野で公知である。有用な制御放出結合剤は、送達後に生理学的条件下において（例えば、粘膜表面において、または体液の存在下において）ゆっくり代謝される材料である。適切な結合剤としては、徐放製剤において使用するための、当該分野で周知の生体適合性ポリマーおよび共重合体が挙げられるがこれらに限定されない。そのような生体適合性の化合物は、周囲組織に対して無毒性かつ不活性であり、有意な有害な副作用（例えば、鼻の刺激作用、免疫応答、炎症など）を引き起こさない。それらは、生体適合性であって身体から容易に排出される代謝産物に代謝される。
【００６６】
本開示において使用するための例示的なポリマー材料としては、加水分解性のエステル結合を有する共重合体のおよびホモポリマーのポリエステルから得られる高分子マトリックスが挙げられるが、これらに限定されない。これらのうちのいくつかは、生分解性であること、および毒性がないまたは低い分解産物に到達することが当該分野で公知である。例示的なポリマーとしては、ポリグリコール酸およびポリ乳酸、ポリ（ＤＬ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリ（Ｄ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）およびポリ（Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）が挙げられる。他の有用な生分解性または生体内分解性のポリマーとしては、ポリ（イプシロン−カプロラクトン）、ポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−乳酸）、ポリ（イプシロン−カプロラクトン−ＣＯ−グリコール酸）、ポリ（ベータ−ヒドロキシ酪酸）、ポリ（アルキル−２−シアノアクリレート）、ヒドロゲル、例えば、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリアミド、ポリ（アミノ酸）（例えば、Ｌ−ロイシン、グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸など）、ポリ（エステル尿素）、ポリ（２−ヒドロキシエチルＤＬ−アスパルトアミド）、ポリアセタールポリマー、ポリオルトエステル、ポリカーボネート、ポリマレアミド、多糖およびそれらの共重合体などのようなポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。そのような製剤を調製するための多くの方法が、当業者に周知である（例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと）。他の有用な製剤としては、制御放出マイクロカプセル（米国特許第４，６５２，４４１号および同第４，９１７，８９３号）、マイクロカプセルおよび他の製剤の作製において有用な乳酸−グリコール酸共重合体（米国特許第４，６７７，１９１号および同第４，７２８，７２１号）および水溶性ペプチド用の徐放組成物（米国特許第４，６７５，１８９号）が挙げられる。
【００６７】
本開示の薬学的組成物は、通常、滅菌され、製造、保存および使用の条件下で安定である。滅菌された溶液は、本明細書中に列挙される成分の１つまたは組み合わせを必要に応じて含む適切な溶媒に化合物を必要量で組み込んだ後、濾過滅菌することによって、調製され得る。一般に、分散物は、基礎分散媒および本明細書中に列挙されるもの由来の必要な他の成分を含む滅菌されたビヒクルに化合物および／または他の生物学的に活性な作用物質を組み込むことによって調製される。滅菌された粉末の場合、調製方法には、予め濾過滅菌された溶液から化合物および任意のさらなる所望の成分の粉末をもたらす真空乾燥および凍結乾燥が含まれる。微生物の作用は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって防止され得る。
【００６８】
本開示の様々な処置方法に応じて、上記化合物は、処置または予防が求められる障害の管理に関連する従来の方法と一致した様式で被験体に送達され得る。本明細書中の本開示に従って、上記化合物の予防有効量または治療有効量は、疾患（例えば、がん）または１つもしくはそれを超えるその症候を阻害および／または処置するのに十分な時間にわたって、かつ十分な条件下において、そのような処置を必要とする被験体に投与される。
【００６９】
上記化合物は、経口経路によって、または単回のボーラス送達で、長時間にわたる連続的な送達（例えば、連続的な経皮的、粘膜または静脈内送達）により、または反復投与プロトコルで（例えば、毎時間、毎日または毎週の反復投与プロトコルによって）、被験体に投与され得る。治療的に有効な投与量の化合物は、臨床的に有意な結果をもたらして、１つもしくはそれを超える症候、または本明細書中に示されるような標的状態に関連する検出可能な状態を軽減する、長期の予防レジメンまたは処置レジメン内の反復用量として提供され得る。この文脈における有効な投与量の決定は、通常、ヒト臨床試験の前に行われる動物モデル研究に基づき、被験体における標的疾患の症候または状態の発生または重症度を有意に低減する投与プロトコルによって導かれる。この点において好適なモデルとしては、例えば、マウス、ラット、鳥類、ブタ、ネコ、非ヒト霊長類、および当該分野で公知の他の容認された動物モデル被験体が挙げられる。
ＩＶ．使用方法
【００７０】
いくつかの実施形態において、式Ｉに記載の化合物またはその立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容され得る塩は、新生物性細胞が有効量の上記化合物と接触すると、新形成を阻害する。新形成の阻害には、新形成に関連する徴候または症候の低減、例えば、上記化合物の非存在下における増殖速度と比べたときの新生物性細胞の成長速度または増殖速度の低下が含まれる。新形成が固形腫瘍であるとき、上記新形成の阻害によって、腫瘍成長が低減または予防し得、腫瘍体積が小さくなり得、そして／または固形腫瘍の転移が低減し得る。
【００７１】
新形成は、良性、上皮内／前がん性または悪性であり得る。いくつかの実施形態において、新形成は、悪性、すなわちがんであり、がん細胞を有効量の式Ｉに記載の化合物と接触させることにより、がん細胞の増殖が低減または予防される。開示される化合物の投与によって阻害または処置され得るがんとしては、腎臓（腎細胞）がん、膀胱がん、乳がん（男性および女性）、結腸がん、子宮内膜がん、肺がん（気管支を含む）、皮膚がん（メラノーマを含む）、血液のがん（例えば、白血病、リンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫）、ミエローマ）、膵臓がん、前立腺がん、骨がん、肝臓がん、肺がん、食道がんおよび中枢神経系がんが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
新生物性細胞と式Ｉに記載の化合物との接触は、インビトロ、インビボまたはエキソビボで行われ得る。化合物が特定の新形成に対して有効であり得るかを確かめるとき、細胞をインビトロで（例えば、細胞培養物において）またはエキソビボで（例えば、被験体から得られた生物学的サンプルにおいて）接触させることにより、上記化合物が細胞の成長および／または増殖を低減または予防するかが判定され得る。
【００７３】
いくつかの実施形態において、新生物性細胞を有効量の化合物と接触させることには、新生物性細胞の存在を少なくとも部分的に特徴とする疾患を有するかまたは有すると疑われる被験体に治療有効量の化合物を投与することが含まれる。被験体は、哺乳動物、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ、ウサギなど）であり得る。ある特定の実施形態において、新生物性細胞は、悪性であり、疾患は、がんである。任意のまたはすべての実施形態において、治療有効量の化合物を被験体に投与することにより、上記疾患の徴候または症候が低減し得る。いくつかの実施形態において、徴候または症候は、固形腫瘍であり、治療有効量の化合物を被験体に投与することにより、その固形腫瘍の成長が低減されるか、上記固形腫瘍の体積が小さくなるか、上記固形腫瘍の転移が減少するか、またはそれらの任意の組み合わせが生じる。他の実施形態において、上記徴候または症候は、異常な全血球数であり得、治療有効量の化合物を被験体に投与することにより、全血球数が部分的または完全に正常化される。新生物性細胞の存在を少なくとも部分的に特徴とする疾患の他の徴候または症候としては、咳嗽、息切れ、喀血、腫脹、疼痛、発熱、悪寒、頻回の感染症、皮膚の痒みまたは発疹、食欲不振、悪心、寝汗、持続的な脱力、疲労、息切れ、腹部膨満、腸または膀胱の習慣の変化、便秘、下痢、血便、直腸出血、黄疸、異常な膣出血、嚥下困難、音声変化、口のびらん、口渇、インフルエンザ様症候、頭痛、易皮下出血または易出血、リンパ節肥大、および黒子の外観の変化が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７４】
治療有効量の化合物を投与することには、治療有効量の化合物を含む薬学的組成物を被験体に投与することが含まれ得る。投与は、任意の好適な経路による投与であってよく、その経路としては、静脈内、経口、腹腔内、皮下、直腸または頬側投与が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７５】
上記化合物の実際の投与量は、被験体の疾患の指標および特定の状態（例えば、被験体の齢、サイズ、フィットネス、症候の程度、感受性因子など）、投与時間および投与経路、同時に投与される他の薬物または処置、ならびに被験体において所望の活性または生物学的応答を誘発するための作用物質の特定の薬理学などの因子に従って変わる。投与レジメンは、最適な予防反応または治療反応がもたらされるように調整され得る。治療有効量は、臨床表現において、当該化合物の有毒または有害な副作用よりも治療的に有益な効果が上回る量でもある。
【００７６】
あるいは、有効な投与量は、インビトロモデルを用いて決定することもできる。そのようなモデルを用いれば、治療有効量の化合物を投与するのに適切な濃度および用量（例えば、所望の免疫応答を誘発するまたは標的疾患の１つもしくはそれを超える症候を軽減するのに有効な量）を決定するために、通常の計算および調整だけしか必要なくなる。代替の実施形態では、有効量または有効用量の化合物は、単に、治療目的または診断目的で、本明細書中に示されるような疾患または状態と相関する１つまたはそれを超える選択された生物学的活性を阻害し得るかまたは高め得る。
【００７７】
本開示の方法および製剤における式Ｉに記載の化合物の治療有効量に対する非限定的な範囲は、成人の場合、０．０００１グラム〜１００グラム、例えば、０．００１グラム〜５０グラム、０．０１グラム〜２５グラムまたは０．１グラム〜１０グラムである。いくつかの実施形態において、上記治療有効量は、０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０ｍｇ／ｋｇ体重  ０．０５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ体重または０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。上記治療有効量は、単回で投与されてもよいし、２回またはそれを超える回数に分けて時間をかけて投与されてもよい。いくつかの実施形態において、治療有効量の化合物または上記化合物を含む薬学的組成物が、１日あたり１回、２回または３回の投薬レジメンで被験体に投与される。投薬レジメンは、１〜１４日間の休薬日を含み得る。
【００７８】
投与量は、標的部位（例えば、体循環）において所望の濃度を維持するように主治医によって変更され得る。送達様式（例えば、経口送達  対  静脈内送達または皮下送達）に基づいて、より高いまたはより低い濃度が選択され得る。投与量は、投与される製剤（例えば、徐放経口  対  注射微粒子または直腸坐剤など）の放出速度に基づいても調整され得る。
【００７９】
いくつかの実施形態において、第２の活性な作用物質が、上記化合物と共投与され得る。上記化合物と第２の活性な作用物質とは、別々に投与されてもよく、単一の組成物として一緒に投与されてもよい。第２の活性な作用物質は、同じ経路によって投与されてもよく、異なる経路によって投与されてもよい。上記化合物と第２の作用物質とは、同時に投与されてもよく、別個の時点において投与されてもよい。別個の投与は、任意の順序で行ってよい。同時に投与される場合、上記化合物および第２の活性な作用物質は、単一の薬学的組成物に組み合わされてもよく、２つの薬学的組成物として同時に投与されてもよい。第２の活性な作用物質は、例えば、抗がん剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、麻酔剤などであり得る。
【００８０】
例証的な抗がん剤としては、アビラテロン、アクチノマイシンＤ、アルトレタミン、アミホスチン、アナストロゾール、アスパラギナーゼ、ベキサロテン、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル  シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、コンブレタスタチンＡ４、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、デガレリクス、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドキソルビシン、デュオカルマイシンＤＭ、エピルビシン、エチニルエストラジオール、エトポシド、エキセメスタン、５−フルオロウラシル、フルダラビン、フルタミド、フォリン酸、フルベストラント、ゲムシタビン、ゴセレリン、イバンドロン酸、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ランレオチド、レナリドマイド、レトロゾール、リュープロレリン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メスナ（ｍｅｓｎａ）、メトトレキサート、オクトレオチド、パミドロネート、ペメトレキセド、マイトマイシン（ｍｉｔｏｃｍｙｃｉｎ）、ミトタン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペントスタチン（ｐｅｎｔａｓｔａｔｉｎ）、ピポブロマン（ｐｉｐｂｒｏｍａｎ）、プリカマイシン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、スチルベストロール、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロマイド、テニポシド、トポテカン、トリプトレリン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビンおよびゾレドロン酸（ｚｏｌｅｎｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００８１】
Ｖ．実施例
実施例１
４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オンの合成
図１は、４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オンについての例示的な合成スキーム（スキーム１）である。図２は、前駆体４−オキシルオキシフェニルメタンチオールについての例示的な合成スキーム（スキーム２）である。
４−オクチルオキシフェニルメタノール（１３）
【化１２】
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【００８２】
調製：アセトニトリル（８．０Ｌ）中の、４−ヒドロキシベンズアルデヒド（９９８．０ｇ，８．１７ｍｏｌ）、１−ブロモオクタン（１６６４．２ｇ，８．６１７ｍｏｌ）および炭酸カリウム（１１６４．２ｇ，８．４３６ｍｏｌ）の混合物を一晩還流し、周囲温度に冷却した。固体を濾別し、濾液を減圧下で濃縮することにより、１９５９．０ｇ（１０２．３％）の粗４−オクチルオキシベンズアルデヒドを得た。生成物をメタノール（６．０Ｌ）に溶解させ、温度を１５℃未満で維持しながら、形成された溶液に水素化ホウ素ナトリウム（１００．０ｇ，２．６４ｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を周囲温度で１時間撹拌した。水酸化ナトリウム（３３．３ｇ，８３２．５ｍｍｏｌ）の水（５００ｍＬ）溶液を加えた後、酢酸エチル（３．０Ｌ）およびブライン（３．０Ｌ）を加えた。有機溶液を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残渣にヘプタン（２Ｌ）を加え、形成された混合物を４℃に冷却した。得られた固体を濾別し、氷冷ヘプタンで洗浄し、真空中で乾燥させることにより、１７１５．０ｇ（８８．８％）の粗４−オクチルオキシフェニルメタノール（１３）を得て、それをさらに精製することなく以下の工程で使用した。
1H NMR (300MHz, CDCl3/TMS) d 7.26 (d,   J = 8.7 Hz,2H); 6.87 (d,   J = 8.7 Hz, 2H);   4.59 (s, 2H); 3.95 (t, J =   6.6Hz, 2 H); 1.73-1.81 (m, 3 H); 1.30-1.48 (m, 10 H); 0.89 (t, J = 6.9 Hz,3 H) ppm.
４−オクチルオキシフェニルメタンチオール（１４）
【化１３】
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【００８３】
調製：４−オクチルオキシフェニルメタノール（１３）（１７１６．２ｇ，７．２６ｍｏｌ）、濃ＨＣｌ（１３４５ｍＬ，１６．４１ｍｏｌ）およびアセトニトリル（３．８Ｌ）の混合物を周囲温度で一晩撹拌した。次いで、チオ尿素（６６３．８ｇ，８．７２ｍｏｌ）およびアセトニトリル（１．３Ｌ）を加えた。混合物を２時間加熱還流し、室温に冷却し、一晩維持した。水酸化ナトリウム（１２１６２．７ｇ，２９．０７ｍｏｌ）の水（２．３Ｌ）溶液を加えた。混合物を３時間加熱還流し、１０℃に冷却した。温度を１５℃未満で維持しながら、濃ＨＣｌ（１．３４Ｌ）を加えた。混合物をメチルｔ−ブチルエーテル（７Ｌ）で抽出した。抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮した。残渣にヘプタン（２．２Ｌ）を加え、混合物を蒸発させた。残渣にヘプタン（３．４Ｌ）を再度加えた。形成された乳白色の溶液を一晩維持し、シリカゲルパッド（１．０ｋｇ）で濾過した。濾液を蒸発させることにより、１６３６．０ｇ（８９．３％）の４−オクチルオキシフェニルメタンチオール（１４）を得た。
1H NMR (300MHz, CDCl3/TMS) d 7.23 (d, J = 8 Hz, 2 H); 6.83(d, J = 8 Hz, 2 H); 3.95 (m, 2 H); 3.72 (d, J = 7.5 Hz, 2 H);1.75 (m, 3H); 1.25 (m, 9 H); 0.87 (m, 3 H) ppm.
【００８４】
（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−（ベンゾイルオキシ）−４−フルオロ−５−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチルベンゾエート（３）
【化１４】
2022502378.tif 000016
【００８５】
調製：窒素下の３０００ｍＬの一口丸底フラスコ内のジクロロメタン（６００ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（（ベンゾイルオキシ）メチル）−３−フルオロテトラヒドロフラン−２，４−ジイルジベンゾエート（２）（１７６ｇ，３７９ｍｍｏｌ）の溶液に、臭化水素酸の３３％酢酸溶液（１３１ｍＬ，７９６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を室温で６時間撹拌した。溶液を、０℃で保持された１２００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム、固体の炭酸水素ナトリウム（１２１ｇ，１４４０ｍｍｏｌｅ）および１２００ｍＬのジクロロメタンの激しく撹拌した混合物に注ぎ込んだ。層を分離し、有機層を１×１００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮することにより、１３６ｇ（８４％）の中間体臭化物を薄黄色油状物として得た。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.14 - 7.99(m, 3H), 7.66 - 7.45 (m, 2H), 7.50 - 7.43 (m, 1H), 7.48 - 7.37 (m, 1H), 6.62(m, 1H), 5.59 - 5.47 (m, 1H), 4.87 - 4.64 (m, 2H) ppm.
【００８６】
粗臭化物を、周囲雰囲気下の３０００ｍＬの一口丸底フラスコ内のＤＭＦ（６００ｍＬ）に溶解させた。溶液をトリエチルアミン（３１７ｍＬ，２２７４ｍｍｏｌ）および水（２０５ｍＬ，１．１４Ｅ＋０４ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を室温で撹拌した。反応物は、水／トリエチルアミン混合物を加えると２３〜３７℃の発熱を示した。反応物を１時間撹拌し、次いで、２４００ｍＬの酢酸エチルで希釈した。１２００ｍＬの５０％飽和塩化ナトリウムとともに激しく撹拌した後、層を分離し、有機層を３×５００ｍＬの５０％飽和塩化ナトリウムで洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで濾過し、濾液を真空中で濃縮することにより、１１６グラム（８５％）の表題化合物（３）を粘稠性の琥珀色油状物として得た。粗油状物をさらに精製することなく直接使用することを選んだ。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.07 - 8.02 (m, 1H), 8.06 - 7.99(m, 2H), 8.04 - 7.91 (m, 1H), 7.63 - 7.28 (m, 6H), 5.66 (dd, J = 10.4,0.9 Hz, 1H), 5.46 (ddd, J = 22.3, 4.5, 1.0 Hz, 1H), 5.21 - 5.06 (m, 1H),4.78 - 4.54 (m, 4H) ppm.
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−４−フルオロ−２−ヒドロキシ−５，５−ビス（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）ペンタン−１，３−ジイルジベンゾエート（４）
【化１５】
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【００８７】
調製：窒素下の２，０００ｍＬの一口丸底フラスコに、５００ｍＬのジクロロメタン中の、（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−３−（ベンゾイルオキシ）−４−フルオロ−５−ヒドロキシテトラヒドロフラン−２−イル）メチルベンゾエート（３）（５８ｇ，１６１ｍｍｏｌ）および（４−（オクチルオキシ）フェニル）メタンチオール（１０２ｇ，４０２ｍｍｏｌ）（１４）を入れた。溶液を０℃に冷却し、５０ｍＬのジクロロメタン中の三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（３９．７ｍＬ，３２２ｍｍｏｌ）で滴下処理した。反応物を０℃で１．５時間撹拌し、２００ｍＬのジクロロメタンと層を成した６００ｍＬの水中の炭酸カリウム（１５０ｇ，１．０８ｍｏｌ）の氷冷溶液に急速滴下した。混合物をセライト５０３で濾過し、層を分離した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾液を、琥珀色油状物になるまで真空中で濃縮した。油状物をヘキサンで希釈し、１２５Ｇ  ＲｅｄｉＳｅｐ（登録商標）Ｒｆカラム（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＣＯ）にロードし、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）システムにおいて０〜２０％酢酸エチル／ヘキサン勾配を用いて３４０Ｇ  ＵｌｔｒａＳｉｌ  ＳＮＡＰカートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ，ＮＣ）で２７ｍＬの画分に溶出した。画分２８〜１００を合わせ、濃縮することにより、８５ｇ（６２％）の表題化合物（４）を山吹色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d): δ 8.03 - 7.93 (m, 2H), 7.94 - 7.86 (m,2H), 7.61 - 7.49 (m, 2H), 7.40 (m, 4H), 7.19 - 7.10 (m, 2H), 6.97 - 6.88 (m,2H), 6.71 - 6.62 (m, 2H), 6.57 - 6.48 (m, 2H), 5.65 (ddd, J = 26.9, 7.7, 1.7Hz, 1H), 5.01 (ddd, J = 45.2, 9.1, 1.8 Hz, 1H), 4.45 (dd, J = 11.7, 2.9 Hz,1H), 4.34 - 4.17 (m, 2H), 3.97 - 3.62 (m, 8H), 2.73 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 1.80 -1.65 (m, 4H), 1.49 - 1.32 (m, 4H), 1.37 - 1.20 (m, 17H), 0.92 - 0.81 (m, 6H).
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロアセトキシ）−４−フルオロ−５，５−ビス（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）ペンタン−１，３−ジイルジベンゾエート（５）
【化１６】
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【００８８】
調製：窒素下のオーブン乾燥させた１，０００ｍＬの三口丸底フラスコに、トリフェニルホスフィン（３８．７ｇ，１４８ｍｍｏｌ）および３４０ｍＬの無水ＴＨＦを入れた。溶液を−１５℃に冷却し、トルエン中の４０ｗｔ％アゾジカルボン酸ジエチル（６７．２ｍＬ，１４８ｍｍｏｌ）で滴下処理した。混合物を、それが沈殿物を伴って高粘度になるように１時間撹拌した。スラリーを、６０ｍＬの無水ＴＨＦ中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−４−フルオロ−２−ヒドロキシ−５，５−ビス（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）ペンタン−１，３−ジイルジベンゾエート（４）（２５ｇ，２９．５ｍｍｏｌ）で素早く滴下処理した。得られた懸濁液を、１００ｍＬの無水ＴＨＦ中のクロロ酢酸（１３．９４ｇ，１４８ｍｍｏｌ）で滴下処理した。反応物は、一時的に均一になり、次いで、スラリーとなり、白色固体が析出した。反応物を、冷却浴が有効でなくなるまで一晩撹拌した。揮発性物質を真空中で除去することにより、薄黄色ペースト状物を得た。ペースト状物を９００ｍＬの２：１ヘキサン／ｔＢｕＯＭｅ（メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル）でスラリー化し、不溶性材料を濾過により除去した。濾液を真空中で濃縮することにより、４８ｇの粗黄色油状物を得た。粗材料を、少量のジクロロメタンを含むヘキサンに溶解させ、１００Ｇ  ＵｌｔｒａＳｉｌ  ＳＮＡＰカートリッジにロードし、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）システムにおいて０〜２０％酢酸エチル／ヘキサン勾配を用いて１２０ｇ  Ｚｉｐ（登録商標）Ｓｐｈｅｒｅカートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅ，ＮＣ）で溶出した。画分４〜２１を合わせ、濃縮することにより、２１．７０ｇ（８０％）の表題化合物（５）を黄色油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.02 - 7.86 (m, 4H), 7.63 - 7.49(m, 2H), 7.48 - 7.33 (m, 4H), 7.19 - 7.11 (m, 2H), 6.97 - 6.86 (m, 2H), 6.70 -6.60 (m, 2H), 6.63 - 6.52 (m, 2H), 5.92 (ddd, J = 25.5, 6.2, 2.4 Hz,1H), 5.54 (td, J = 6.3, 3.2 Hz, 1H), 4.78 (ddd, J = 46.0, 8.5,2.5 Hz, 1H), 4.61 - 4.44 (m, 2H), 4.37 (ddd, J = 12.5, 6.3, 1.2 Hz, 1H),4.02 - 3.64 (m, 10H), 1.81 - 1.66 (m, 4H), 1.49 - 1.36 (m, 4H), 1.41 - 1.20 (m,16H), 0.99 - 0.80 (m, 6H).
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−フルオロ−２−ヒドロキシ−５，５−ビス（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）ペンタン−１，３−ジイルジベンゾエート（６）
【化１７】
2022502378.tif 000019
【００８９】
調製：窒素下、周囲温度の１０００ｍＬの一口丸底フラスコに、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−２−（２−クロロアセトキシ）−４−フルオロ−５，５−ビス（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）ペンタン−１，３−ジイルジベンゾエート（５）（２１．７０ｇ，２３．４９ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２０５ｍＬ）およびメタノール（２４０ｍＬ）を入れた。黄色溶液をチオ尿素（１７．８８ｇ，２３５ｍｍｏｌ）で処理したところ、黄色混合物が急速に脱色したのと同時に、懸濁液は希薄になった後、高粘度になった。懸濁液を、３５ｍＬのジクロロメタン中の２，６−ルチジン（２．７４ｍＬ，２３．４９ｍｍｏｌ）で滴下処理した。高粘度の懸濁液は、ルチジン添加の１５分以内に徐々にほぼ均一になった。撹拌を室温で一晩、合計２３時間続けた。反応物をクエン酸（４．５１ｇ，２３．４９ｍｍｏｌ）の水（５２ｍＬ）溶液で中和し、混合物を１Ｌのジクロロメタンで希釈し、層を分離した。有機層を１×２５０ｍＬの１：１の１５％クエン酸水溶液および飽和塩化ナトリウムで洗浄した。層を分離し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮することにより、２１ｇの蒼白色ペースト状物を得た。残渣の有機成分を１：３ジクロロメタン／ヘキサンに溶解させ、１００Ｇ  ＵｌｔｒａＳｉｌ  ＳＮＡＰカートリッジにロードし、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）システムにおいて０〜２０％酢酸エチル／ヘキサン勾配を用いて１２０Ｇ  Ｚｉｐ（登録商標）Ｓｐｈｅｒｅカートリッジで２７ｍＬの画分に溶出した。画分２４〜５４を合わせ、濃縮することにより、１６．９８ｇ（８５％）の表題化合物（６）を蒼白色油状物として得た。
1HNMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.03 - 7.92 (m, 4H), 7.60 - 7.49 (m, 2H), 7.45 -7.34 (m, 4H), 7.12 - 6.98 (m, 4H), 6.74 - 6.59 (m, 4H), 5.72 (m, 1H), 5.02(ddd, J = 46.6, 6.3, 4.4 Hz, 1H), 4.40 - 4.28 (m, 2H), 3.94 (m, 1H), 3.89 -3.67 (m, 8H), 2.64 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.71 (m, 4H), 1.49 - 1.38 (m, 4H), 1.41- 1.20 (m, 18H), 0.99 - 0.80 (m, 6H).
（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−フルオロ−２−（（メチルスルホニル）オキシ）−５，５−ビス（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）ペンタン−１，３−ジイルジベンゾエート（７）
【化１８】
2022502378.tif 000020
【００９０】
調製：窒素下の１０００ｍＬの一口丸底フラスコに、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−フルオロ−２−ヒドロキシ−５，５−ビス（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）ペンタン−１，３−ジイルジベンゾエート（６）（１６．９５ｇ，２０．０１ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（２００ｍＬ）を入れた。溶液を０℃に冷却し、２０ｍＬのジクロロメタン中の塩化メタンスルホニル（２．０３ｍＬ，２６．０ｍｍｏｌ）で滴下処理した後、２０ｍＬのジクロロメタン中のトリエチルアミン（３．６３ｍＬ，２６．０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物を、冷却浴が有効でなくなるまで７２時間撹拌した。混合物を、１×１００ｍＬの水、１×１００ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウムおよび１×１００ｍＬの１：１飽和塩化ナトリウム／１５％クエン酸水溶液で順次洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮することにより、１７．９９ｇ（９７％）の表題化合物を粘稠性の琥珀色油状物として得た。材料をさらに精製することなく使用した。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.99 (m, 4H), 7.70 - 7.49 (m,2H), 7.49 - 7.35 (m, 4H), 7.21 - 7.10 (m, 2H), 7.01 - 6.85 (m, 2H), 6.77 - 6.64(m, 2H), 6.62 - 6.50 (m, 2H), 5.92 (m, 1H), 5.22 - 5.14 (m, 1H), 4.85 (m, 1H),4.68 - 4.56 (m, 1H), 4.44 (m, 1H), 3.93 - 3.62 (m, 10H), 2.93 (s, 3H), 1.72 (h,J = 6.8 Hz, 4H), 1.50 - 1.18 (m, 19H), 0.98 - 0.84 (m, 6H). 19FNMR (376 MHz, Chloroform-d) δ -188.51 (ddd, J = 45.7, 25.7, 11.3Hz).
（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（ベンゾイルオキシ）−４−フルオロ−５−（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）テトラヒドロチオフェン−２−イル）メチルベンゾエート（８）
【化１９】
2022502378.tif 000021
【００９１】
調製：窒素下の３０００ｍＬの三口丸底フラスコに、（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−４−フルオロ−２−（（メチルスルホニル）オキシ）−５，５−ビス（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）ペンタン−１，３−ジイルジベンゾエート（７）（５９ｇ，６３．８ｍｍｏｌ）、無水アセトニトリル（１０００ｍＬ）、トリエチルアミン（１７．７８ｍＬ，１２８ｍｍｏｌ）およびヨウ化テトラブチルアンモニウム（４７．１ｇ，１２８ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を９６時間加熱還流した。反応物を室温に冷却し、次いで、混合物を４００ｍＬのシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）に注ぎ込み、濃縮乾固した。充填物を、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）システムにおいて０〜１５％酢酸エチル／ヘキサン勾配で溶出する３４０Ｇ  ＵｌｔｒａＳｉｌ  ＳＮＡＰカートリッジでクロマトグラフィーに供した。画分２８〜６９を合わせ、濃縮することにより、２７．６ｇ（７１％）の表題化合物（８）を粘稠性の油状物として得て、それを真空下で結晶化することにより、クリーム色の固体を得た。１９Ｆ−ＮＭＲは、１５：１のＣ−１α／β混合物を示した。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.02 - 7.90 (m, 3H), 7.65 - 7.47(m, 2H), 7.47 - 7.33 (m, 4H), 7.29 - 7.19 (m, 3H), 6.86 - 6.76 (m, 2H), 5.97(ddd, J = 9.9, 5.0, 3.9 Hz, 1H), 5.15 (dt, J = 50.5, 4.7 Hz, 1H),4.69 - 4.42 (m, 3H), 3.97 - 3.82 (m, 4H), 3.80 - 3.69 (m, 1H), 1.75 (m, 2H),1.50 - 1.19 (m, 10H), 0.95 - 0.82 (m, 3H). 19F NMR (376 MHz,Chloroform-d) -187.14 (ddd, J = 50.5, 16.6, 9.9 Hz).
（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−４−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−５−（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）テトラヒドロチオフェン−３−オール（９）
【化２０】
2022502378.tif 000022
【００９２】
調製：７Ｍアンモニアのメタノール（ＭｅＯＨ）溶液（１８７ｍＬ，１３１０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５０ｍＬ，１６．３７ｍｍｏｌ）中の（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−３−（ベンゾイルオキシ）−４−フルオロ−５−（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）テトラヒドロチオフェン−２−イル）メチルベンゾエート（８）（１０ｇ，１６．３７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を室温で撹拌した。室温で６５時間撹拌した後、揮発性物質を真空中で除去することにより、ペースト状の固体を得た。固体を、ヘキサン（６０ｍＬ）とともに室温で１時間撹拌した。細かい白色固体を回収し、ヘキサンで洗浄し、フィルター上で乾燥させることにより、６．６０ｇ（１００％）の表題化合物（９）を白色固体として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.24 - 7.16 (m, 2H), 6.90- 6.81 (m, 2H), 5.68 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.00 (t, J = 5.5 Hz,1H), 4.85 (dt, J = 51.4, 4.9 Hz, 1H), 4.49 (dd, J = 16.1, 4.5 Hz,1H), 4.20 (m, 1H), 3.92 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.91 - 3.75 (m, 2H), 3.68(m, 1H), 3.40 - 3.28 (m, 1H), 3.09 (dddd, J = 7.6, 6.1, 4.7, 0.9 Hz,1H), 1.68 (m, 2H), 1.46 - 1.33 (m, 2H), 1.28 (m, 8H), 0.90 - 0.82 (m, 3H).
13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 158.15, 131.59, 130.42,129.75, 128.59, 127.86, 114.79, 99.37, 97.49, 75.29, 75.06, 67.81, 64.27,64.25, 53.22, 53.19, 50.32, 50.13, 36.00, 35.97, 31.67, 29.18, 29.13, 29.10,25.97, 22.51, 14.38.
19F-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ -186.62 (dddd, 1F)
（３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イルアセテート（１０）
【化２１】
2022502378.tif 000023
【００９３】
調製：窒素下の５００ｍＬの一口丸底フラスコに、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ）−４−フルオロ−２−（ヒドロキシメチル）−５−（（４−（オクチルオキシ）ベンジル）チオ）テトラヒドロチオフェン−３−オール（３７．５ｇ，９３ｍｍｏｌ）および酢酸（２２５ｍＬ，３９７２ｍｍｏｌ）を入れた。無色の懸濁液を、アセトキシ水銀（４４．５ｇ，１４０ｍｍｏｌ）で一度に処理し、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を８００ｍＬのヘプタンで希釈し、不溶性材料を濾過により除去した。濾過ケークを３００ｍＬのジクロロメタン（ＤＣＭ）で洗浄した後、６００ｍＬのヘプタンで洗浄し、濾液を、薄い琥珀色の油状物になるまで真空中で濃縮した。粗材料を最小量のＤＣＭに溶かし、５０Ｇ  ＵｌｔｒａＳＩＬ（登録商標）ＳＮＡＰ（登録商標）カートリッジ（Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標），Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）にロードし、０〜５０％酢酸エチル／ＤＣＭ勾配を用いて１００Ｇ  ＵｌｔｒａＳＩＬ（登録商標）ＳＮＡＰ（登録商標）カートリッジで溶出した。画分２７〜９２を合わせ、濃縮することにより、１７．５９ｇ（９０％）の表題化合物（１０）をアノマーの１：１混合物として得た。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 6.02 - 5.88 (m, 1H), 5.09 (dd, J= 7.1, 4.5 Hz, 0.2H), 5.00 - 4.92 (m, 0.5H), 4.83 (dd, J = 9.3, 4.7 Hz,0.3H), 4.50 (ddd, J = 12.1, 9.3, 8.0 Hz, 0.5H), 4.33 (dt, J =14.7, 7.5 Hz, 0.5H), 3.87 - 3.68 (m, 2H), 3.54 (dtd, J = 7.9, 5.1, 1.3Hz, 0.5H), 3.24 (ddd, J = 7.9, 5.3, 4.5 Hz, 0.5H), 2.88 (s, 1H), 2.11(m, 3H).
19F NMR (376 MHz, Chloroform-d) δ -188.81 (dt, J = 51.3,15.2 Hz), -193.39 (dd, J = 50.9, 12.2 Hz).
（３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）−３−フルオロテトラヒドロチオフェン−２−イルアセテート（１１）
【化２２】
2022502378.tif 000024
【００９４】
調製：（３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イルアセテート（１０）（１１．８５ｇ，５６．４ｍｍｏｌ）を、窒素下、１，０００ｍＬの一口丸底フラスコ内のＤＭＦ（１８０ｍＬ）に溶解させた。溶液をイミダゾール（９．５９ｇ，１４１ｍｍｏｌ）で処理した後、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルクロロシラン（４３．４ｍＬ，１６９ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応物を１，０００ｍＬの酢酸エチルで希釈し、１×５００ｍＬの５０％飽和塩化ナトリウムで抽出した後、３×１５０ｍＬの５０％飽和塩化ナトリウムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、無色の油状物になるまで真空中で濃縮した。粗材料を最小量のヘキサンに溶解させ、３４０Ｇ  ＵｌｔｒａＳｉｌ  ＳＮＡＰカートリッジにロードし、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）システムにおいて０〜１５％酢酸エチル／ヘキサン勾配を用いて２７ｍＬの画分に溶出した。画分２７〜６６を合わせ、濃縮することにより、３６．７ｇ（９５％）の表題化合物（１１）を無色の油状物として得た。
1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.78 - 7.68 (m, 4H), 7.65 - 7.46(m, 4H), 7.46 - 7.20 (m, 12H), 6.07 - 5.87 (m, 1H), 5.15 - 4.86 (m, 1H), 4.37 -4.19 (m, 1H), 3.81 (qd, J = 6.1, 3.1 Hz, 0.4H), 3.64 (m, 1H), 3.41 (m,1H), 3.25 (ddd, J = 24.0, 10.3, 8.5 Hz, 1H), 2.17 (s, 2H), 1.88 (s, 1H),1.07 (s, 9H), 0.94 (s, 9H). 19F NMR (376 MHz, Chloroform-d) δ-184.98 (dt, J = 49.3, 14.2 Hz), -190.33 - -190.64 (m).
４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）−３−フルオロテトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン（１２）
【化２３】
2022502378.tif 000025
【００９５】
調製：ＨＭＤＳ（２１．９７ｍＬ，１０５ｍｍｏｌ）を、アザシトシン（２．９１ｇ，２６．２ｍｍｏｌ）および硫酸アンモニウム（０．１１５ｇ，０．８７３ｍｍｏｌ）に加え、得られた混合物を１３０℃で２０時間撹拌した。過剰なＨＭＤＳを減圧下で除去し、残りの残渣を１，２−ジクロロエタン（５０ｍＬ）中に懸濁させた。その間に、臭化水素酸（３３％の酢酸溶液）（３．４５ｍＬ，２０．９６ｍｍｏｌ）を、１，２−ジクロロエタン（５０ｍＬ）中の（３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）−３−フルオロテトラヒドロチオフェン−２−イルアセテート（１１）（６ｇ，８．７３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、得られた混合物を０℃で２時間撹拌した。反応物を７５ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウムの添加によってクエンチし、混合物を、１５分間激しく撹拌した。層を分離し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。中間体の臭化物を、シリル化アザシトシンの懸濁液に一度に加え、白色の懸濁液を８４℃に加温した。反応物が温度に達すると、懸濁液は軽いスラリーになった。反応物を８４℃で５時間撹拌した。反応物を一晩かけて室温まで冷却し、７５ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウムで希釈し、１０分間撹拌した。スラリーをＣｅｌｉｔｅ（登録商標）珪藻土ベッドで濾過し、フィルターパッドを新しいジクロロメタンで洗浄した。層を分離し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮することにより、５．３ｇのオフホワイト色泡状物を得た。粗材料を最小量のジクロロメタンに溶解させ、５０Ｇ  ＵｌｔｒａＳｉｌ  ＳＮＡＰカートリッジにロードし、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）システムにおいて１０〜６５％酢酸エチル／ジクロロメタン勾配を用いて２７ｍＬの画分に溶出した。画分１９〜３３を合わせ、濃縮することにより、２．７ｇ（４２％）の白色泡状物を得た。Ｈ−ＮＭＲは、その材料が２：１のβ／α混合物であることを示した。
【００９６】
上記白色泡状物を１０ｍＬの無水エタノール（ＥｔＯＨ）に溶解させ、室温で２時間撹拌したところ、混合物から細かい白色固体が晶出した。固体を回収し、少量のＥｔＯＨで洗浄し、フィルター上で乾燥させることにより、６３０ｍｇ（９％）の純粋なＣ−１アルファアノマーを白色固体として得た。母液を真空中で濃縮することにより、２．０７グラム（３２％）の表題化合物１２を白色泡状物（＞２０：１のＣ−１ベータアノマー）として得た。この材料をさらなる分画なしに用いた。
プロトン、Ｃ−１アルファアノマー：1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.85 (s,1H), 7.53 (ddd, J = 14.6, 8.0, 4.2 Hz, 6H), 7.48 - 7.25 (m, 14H), 6.75 (s, 1H),6.10 (dd, J = 14.0, 1.8 Hz, 1H), 5.72 (s, 1H), 5.09 (dt, J = 46.7, 2.0 Hz, 1H),4.30 (m, 1H), 3.97 - 3.88 (m, 1H), 3.47 (dd, J = 10.2, 6.6 Hz, 1H), 3.43 - 3.33(m, 1H), 0.96 (m,18H).
フッ素、Ｃ−１アルファアノマー：19F NMR (376 MHz, Chloroform-d) δ-177.38 (dt, J = 46.8, 12.5 Hz).
プロトン、Ｃ−１ベータアノマー：1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 8.41 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.68 - 7.52 (m, 6H), 7.57 - 7.42 (m, 4H), 7.47 - 7.28 (m, 10H),7.04 - 6.99 (m, 1H), 6.80 (dd, J = 24.5, 3.6 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H), 4.81 (dt, J= 50.8, 2.8 Hz, 1H), 4.47 (m, 1H), 3.70 - 3.65 (m, 1H), 3.60 - 3.44 (m, 2H),1.10 (s, 9H), 0.89 (s, 9H).
フッ素、Ｃ−１ベータアノマー：19F NMR (376 MHz, Chloroform-d) δ-194.16 (ddd, J = 50.5, 24.6, 7.4 Hz).
４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン（１）
【化２４】
2022502378.tif 000026
【００９７】
調製１：４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）−３−フルオロテトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン（１２）（５．９ｇ，７．９８ｍｍｏｌ）を、窒素下、２００ｍＬの一口丸底フラスコ内のテトラヒドロフラン（４５ｍＬ，５５５ｍｍｏｌ）に溶解させた。溶液を、シリカゲル上のフッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム（２１．１６ｇ，２９．１ｍｍｏｌ）で処理し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を１８ｇのシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）で処理し、濃縮乾固した。固体充填物を、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）システムにおいて０〜１２．５％（１０％ＭｅＯＨのＩＰＡ溶液）／ジクロロメタン勾配（０〜５０％の、２５％（１０％ＭｅＯＨのＩＰＡ溶液）／ジクロロメタン極性相）で２７ｍＬの画分に溶出しつつ、５０グラムのＵｌｔｒａＳｉｌ（登録商標）ＳＮＡＰ（登録商標）カートリッジでクロマトグラフィーに供した。画分３３〜８４を合わせ、濃縮することにより、１．８３ｇのペースト状の固体を得た。その固体を、２０ｍＬのアセトニトリルと共に摩砕し、濾過によって回収し、フィルター上で乾燥させることにより、１．４８ｇ（７１％）の表題化合物（１）をオフホワイト色固体として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.78 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 7.68 - 7.60 (m,2H), 6.29 (dd, J = 11.6, 5.4 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.34 (t, J =5.2 Hz, 1H), 5.00 (dt, J = 50.7, 5.8 Hz, 1H), 4.27 (m, 1H), 3.68 (m, 2H), 3.23(q, J = 5.5 Hz, 1H) ppm. 13C NMR (101 MHz, dmso) δ 165.87, 158.07,158.04, 153.63, 96.79, 94.87, 73.44, 73.21, 61.28, 61.26, 57.44, 57.27, 51.97,51.93.   19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -192.78 (dt, J = 50.6, 11.7 Hz).融点：２０８〜２０９℃、ｄ．燃焼解析：計算値：Ｃ，３６．６４；Ｈ，４．２３；Ｆ，７．２４；Ｎ，２１．３６；Ｓ，１２．２２，実測値：Ｃ，３６．６６；Ｈ，４．１４；Ｆ，７．０４；Ｎ，２１．０８；Ｓ，１２．２７。
【００９８】
調製２：４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）−５−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）オキシ）メチル）−３−フルオロテトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン（１２）（１２．２ｇ，１６．５１ｍｍｏｌ）を、窒素下、２００ｍＬの一口丸底フラスコ内のメタノール（無水）（１１０ｍＬ，１６．５１ｍｍｏｌ）に溶解させた。溶液をフッ化アンモニウム（５．２０ｇ，１４０ｍｍｏｌ）で処理し、６０℃で撹拌した。６０℃での２時間後の薄層クロマトグラフィー（３０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）は、出発物質が完全に消費されたことを示した。混合物を合計３時間、６０℃に加温した。反応物を室温に冷却し、１２ｇのシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）と合わせ、混合物を濃縮乾固した。粗充填物を、２５Ｇ  ＵｌｔｒａＳｉｌ（登録商標）ＳＮＡＰ（登録商標）カートリッジで５〜２５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ勾配を用いて２７ｍＬの画分に溶出した。画分１２〜６６を合わせ、濃縮することにより、４．８ｇの白色固体を得た。その固体を、２０ｍＬの無水ＥｔＯＨと共に１時間摩砕し、白色固体を回収し、ＭｅＯＨで洗浄した後、ジエチルエーテルで洗浄し、フィルター上で一晩乾燥させることにより、２．４０ｇ（５５％）の表題化合物（１）を細かい白色固体として得た。母液を真空中で濃縮することにより、２．０５ｇの白色泡状物を得た。その泡状物は、ＴＬＣおよびＬＣＭＳによると表題化合物の分解産物を主に含むとみられた。この残渣をＭｅＯＨに溶解させ、１０ｍＬのＦｌｏｒｉｓｉｌ（登録商標）吸着媒（６０〜１００メッシュ，Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）で処理し、濃縮乾固した。充填物を、５〜２５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ勾配で２７ｍＬの画分に溶出する２５Ｇ  ＵｌｔｒａＳｉｌ（登録商標）ＳＮＡＰ（登録商標）カートリッジでクロマトグラフィーに供した。画分１５〜２２を合わせ、濃縮することにより、３６０ｍｇの白色泡状物を得た。その泡状物をＭｅＣＮから結晶化することにより、さらなる２６４ｍｇ（６％）の表題化合物（１）を細かい白色固体として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.74 (d, J = 1.3Hz, 1H), 7.64 - 7.57 (m, 2H), 6.23 (dd, J = 11.5, 5.4 Hz, 1H), 5.89 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 5.31 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.96 (dt, J = 50.7, 5.9Hz, 1H), 4.22 (dq, J = 11.5, 5.7 Hz, 1H), 3.71 - 3.55 (m, 2H), 3.17 (q, J= 5.5 Hz, 1H).
13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ 165.88, 158.08, 158.05,153.65, 96.78, 94.86, 73.42, 73.19, 61.26, 57.43, 57.26, 51.94, 51.90 ppm.
19F NMR (376 MHz, DMSO-d6) δ -192.77 (dt, J =50.8, 11.7 Hz).
ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝２６３．１、９８．２％純度。
実施例２
ＮＣＩ６０ヒト腫瘍細胞株抗がん薬スクリーニング
【００９９】
開示される化合物の実施形態は、ＮＣＩ６０ヒト腫瘍細胞株抗がん薬スクリーニング（例えば、Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００６，６：８１３−８２３；ｈｔｔｐｓ：／／ｄｔｐ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ／ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ＿ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ／ｎｃｉ−６０／ｈａｎｄｌｉｎｇ．ｈｔｍを参照のこと）を用いて抗がん活性についてスクリーニングされ得る。
サンプル調製のための標準的な操作手順：
【０１００】
全般：ＮＣＩ６０試験は、２部にわけて行う：まず、６０種すべての細胞株において１０−５モル濃度または１５μｇ／ｍｌという単回用量で単一濃度を試験する。得られた結果が選択基準を満たす場合、化合物を、最高用量を１０−４モル濃度または１５０μｇ／ｍｌとして５×１０倍の希釈度で６０種すべての細胞株において再試験する。ＮＣＩ６０試験で認められた化合物を、１用量試験と５用量試験の両方に向けて同時に調製する。
【０１０１】
投与される作用物質：分子量が既知である合成物質および純粋な化合物ならびに分子量が不明の高分子および化合物−試験のために特定された作用物質のアリコートを計量し、予め計量されたガラスバイアルに移す。化合物をこれらのバイアル内で可溶化する。明確に述べられる場合を除いて、すべての作用物質を−７０℃冷凍庫で保存する。粗天然物−粗天然物抽出物を、取り外し可能なポリプロピレン（ＰＰ）９６ウェルマイクロタイタープレート上にプレーティングする。プレートを乾燥させ、１用量試験で必要とされるまで−２０℃で保存する。１用量試験の結果に基づいて、５用量試験のために選択されるそれらのサンプルを、標準的な作用物質であるアドリアマイシン、ＮＳＣ１２３１２７の縦列を含む９６ウェルプレート１枚あたり８８ウェルから７２ウェルに再配置し、新しいプレートマップを作成し、割り当てのためにアップロードする。次いで、抽出物をＤＭＳＯまたは水で４０ｍｇ／ｍｌで可溶化する。
【０１０２】
濃度要件−１用量／がんインビトロプログラム：１用量アッセイの場合は４ｍＭ、５用量アッセイの場合は４０ｍＭの濃度の、ＤＭＳＯ：グリセロール９：１（別段述べられない限り）。両方の場合において、溶液を１：４００希釈して、それぞれ１０または１００μＭというＨｉｇｈ  Ｔｅｓｔ濃度を得る。分子量が不明の合成作用物質（高分子）は、ＤＭＳＯ：グリセロール９：１（別段述べられない限り）中に６および６０ｍｇ／ｍｌという濃度で調製し、それを１：４００希釈して、１５および１５０μｇ／ｍｌというＨｉｇｈ  Ｔｅｓｔ濃度を得る。有機溶媒に可溶性の天然物粗抽出物は、ＤＭＳＯ中で調製し、水性抽出によって生成された天然物粗抽出物は、水に可溶化し、両者とも４０ｍｇ／ｍｌとした。
【０１０３】
体積要件−プレスクリーニング／がんインビトロプログラム：がんスクリーニングでは、通常の化合物の１ｌｏｇの５用量希釈の場合は１００μｌ、および１用量試験の場合は７５μｌが必要である。１用量試験は、５用量試験の高濃度の１／１０で行うので、体積要件は、分子量が既知の化合物の場合、４０ｍＭの２１０μｌ＋２０％であるか、または分子量が不明の化合物（高分子）の場合、６０，０００μｇ／ｍｌの２１０μｌ＋２０％＝２５０μｌ（すなわち、ＭＷ＝１０００の場合、１０ｍｇ未満、または重量／体積として試験される化合物の場合、１５ｍｇ）である。
【０１０４】
化合物の特記事項：特記事項（例えば、酸素感受性、光感受性）によって、指示に従った作用物質の取り扱いが変化し得る。
【０１０５】
新鮮な化合物：使用前に新しく調製される必要があると特定される化合物は、段階希釈の１時間以内に可溶化される。それをＴＥＣＡＮ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ２００において段階希釈し（２薬物／プレート）、カラムプレートに移し、検査室に送達されるまでデシケーターボックス内の窒素下で保存する。
可溶化の標準的な操作手順
【０１０６】
ＮＰＳＧ  ＴＥＣＡＮシステムへの情報の入力：可溶化手順を始める前に、ＴＥＣＡＮ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ２００によって可溶化される各化合物についての情報をＮＰＳＧ  ＴＥＣＡＮ（Ｖｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃ機器制御およびＯＲＡＣＬＥフロントエンド）システムに入力する。シップリスト（ｓｈｉｐｌｉｓｔ）番号を入力することによって、７２種の化合物セットをプレートセットに割り当てる。シップリストをＴＥＣＡＮソフトウェアにロードすると、そのソフトウェアは、量およびＭＷを（ＤＩＳ  Ｏｒａｃｌｅ表から）検索し、一定濃度（４０ｍＭまたは６０，０００μｇ／ｍｌ）を得るために各バイアルに加えられる溶媒の体積を計算し、１用量および１回の試験＆１回再試験にとって不十分な材料である場合、濃度を調整する（７５μｌ＠４ｍＭ＆２００μｌ＠４０ｍＭ＋２０％または７５μｌ＠６，０００μｇ／ｍｌ＆２００μｌ＠６０，０００μｇ／ｍｌ＋２０％）。プレスクリーニングのためのプレートマップ（化合物が入るウェルを定義する）を、ＯＲＡＤＩＳを介してＯＲＡＣＬＥ  ＰＬＡＴＥＷＥＬＬ表にアップロードする。
【０１０７】
供給品および装置：ＰＬＡＴＥＭＡＰの印刷物上に指定されたシップリスト順でバイアルをＴＥＣＡＮテーブルに置く。ＴＥＣＡＮ  Ｆｒｅｅｄｏｍロボットが、適切な体積の溶媒（メタノール／酢酸エチル／メチル−ｔ−ブチルエーテル、６：３：１）を各バイアルに加えることにより、一定濃度を得る。技師が、各バイアルを個別に調べ、超音波処理、加温などを行って、２時間未満の曝露時間にわたって溶液を維持する。薬物溶液を移す前のプレート調製：技師が、３枚の取り外し可能な９６ウェルＰＰウェルプレート（１枚が１用量のため、２枚が６０細胞試験のため）を調製する：１００μｌの１０％グリセロールのイソプロパノール溶液を各ウェルに加える。［薬物溶液の添加および真空乾燥の後、１ウェルあたり１０μＬグリセロールが残る。］
【０１０８】
ＴＥＣＡＮは、バイアル内の薬物溶液を一度混合し、次いで、１用量の場合、４０μＬ（４００μＭ）の薬物溶液を、取り外し可能な９６ウェルプレートの各ウェルに移し、６０細胞のフルスクリーニングの場合、取り外し可能な９６ウェルＰＰウェルプレートに４００μＬ（４，０００μＭ）を移す。すべてのプレートを、乾燥のためにＳｐｅｅｄＶａｃシステムに移す。加熱なしでの高真空によってすべての溶媒を除去すると、グリセロールおよび薬物の残渣がウェルの底に残る。乾燥したプレートを、試験で必要とされるまで、通常１〜３週間、−７０℃で保存する。ガラスバイアル内の移されなかった残渣は、ＳｐｅｅｄＶａｃにおいて乾燥され、乾燥した状態で−７０℃において保存され、さらなる再試験が必要となった場合、使用され得る。
【０１０９】
１用量６０細胞試験の場合：組織培養中の生育細胞に薬物を加える当日または前日に、１つの標準物質（化合物と同じように調製および保存された、アドリアマイシン、ＮＳＣ１２３１２７）を、取り外し可能なウェルプレートに加え、９０μｌのＤＭＳＯを各ウェルに加え（４ｍＭ溶液）、混合／超音波処理し、１２チャネル手動ピペッターを用いて７５μｌを１２チャネルレザバープレート（カラムプレート）に移し、そのプレートを密封し、検査室に送達されるまでデシケーターボックス内の窒素下で保存する。レザバープレートの前面の左右にラベルを貼る。それは、列の最初および最後のＮＳＣ番号であり得る。列は、取り外し可能なプレートからカラムプレートのカラム３〜１２に移される。プレートを密封し、薬物添加前に２４時間を超えずに窒素下で保存する。
【０１１０】
５用量６０細胞試験の場合：組織培養中の生育細胞に薬物を加える当日に、９０μｌのＤＭＳＯを各ウェルに加え（４０ｍＭ溶液）、ＴＥＣＡＮ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ２００の振盪機において混合／超音波処理する。次いで、チューブをＴＥＣＡＮ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ２００に設置し（２薬物／プレート）、段階希釈し／カラムプレートに移し、そのプレートを密封し、検査室に送達されるまでデシケーターボックス内の窒素下で保存する。ＯＲＡＣＬＥフロントエンドプログラムオプションＡＡ−Ｅｘｐｉｄ  ＮＳＣラベルを利用するＳＡＴＯ熱転写プリンターによって、プレートのラベルを印刷する。それらのラベルをレザバープレートの前面の左右に貼り、薬物１はカラム１、薬物２はカラム１２に配置される。
【０１１１】
ビヒクル選択−合成物質：最適なビヒクルは、ＤＭＳＯおよび水である。ほとんどの作用物質が、これら２つのビヒクルのうちの一方を用いて可溶化される。供給業者の要請により、または過去の試験方法に基づいて、他のビヒクルが使用される。揮発性溶媒をビヒクルとして使用する作用物質は、「新鮮」とラベルされ、スクリーニング添加の１時間以内に調製される。別のビヒクルが示されない限り、一般に、プレスクリーニング／がんスクリーニング用の合成作用物質のすべてが、ＤＭＳＯ：グリセロール９：１において調製される。水が示されるとき、化合物は、蒸留水、または血清を含まない細胞培養液（ＲＰＭＩ１６４０）に可溶化される。ＴＨＦ、エタノール、メタノールまたは他の揮発性溶媒を必要とするすべての可溶化は、蒸発を減少させるために、新しく調製される。
【０１１２】
最小体積要件：可溶化の目標は、要求された最も高い濃度の作用物質をスクリーニングプロセスに届けることである。しかしながら、作用物質をスクリーニングするプログラムが要求するバイアル数が、加えることができるビヒクルの最小量を決定する。材料の量が、必要な数のアリコートを作製するのに不十分である場合、濃度を下げて、適切な体積を確保する。
【０１１３】
体積要件−１用量／がんインビトロプログラム：がんスクリーニングでは、通常の化合物の１ｌｏｇの５用量希釈の場合、１００μｌが必要である。１用量がんアッセイと５用量がんアッセイの両方に向けてＴＥＣＡＮにおいて可溶化された化合物の場合、２５０μｌという最小体積が必要であり、これは、最初の１用量アッセイ、５用量アッセイにおける試験および再試験にとって十分である。
【０１１４】
溶解度コード：作用物質は、必ずしも粒子のない透明な溶液になるまで可溶化しない。ゆえに、その溶液は、ビヒクル中の作用物質の溶解度を記載する最善のコードによって説明される。それは、評価されている溶液の透明度である。溶解度コードでは、色の有無は考慮されない。
ＮＣＩ６０スクリーニング方法
ＮＣＩ６０細胞の１用量スクリーニング：
【０１１５】
概要：ＮＣＩ６０細胞スクリーニングに供されるすべての化合物が、はじめに全ＮＣＩ６０細胞パネルにおいて単一の高用量（１０−５Ｍ）で試験される。最低限の数の細胞株において所定の閾値阻害基準を満たした化合物だけが、５用量フルアッセイに進む。５用量スクリーニングに進むための閾値阻害基準は、歴史的ＤＴＰスクリーニングデータの慎重な解析に基づいて、抗増殖活性を有する化合物を効率的に捕捉するように選択された。閾値基準は、さらなるデータが入手可能になると更新される場合がある。
【０１１６】
１用量データの解釈：１用量データは、処置細胞の成長率の平均値グラフとして報告され、５用量アッセイの平均値グラフと形が似ている。１用量アッセイで報告される数字は、薬物なしのコントロールおよび時間０の細胞数を基準とした成長である。これにより、成長阻害（０〜１００の値）と致死（０未満の値）の両方の検出が可能になる。これは、下記に記載される５用量アッセイについても同じである。例えば、１００という値は、成長阻害なしを意味する。４０という値は、６０％成長阻害を意味し得る。０という値は、実験を通して正味の成長が無いこと意味する。−４０という値は、４０％の致死率を意味し得る。−１００という値は、すべての細胞が死ぬことを意味する。１用量の平均値グラフからの情報は、ＣＯＭＰＡＲＥ解析に利用可能である。
ＮＣＩ６０細胞５用量スクリーニング：
【０１１７】
１用量スクリーニングにおいて有意な成長阻害を示した化合物を、５つの濃度レベルで６０細胞パネルに対して評価する。
【０１１８】
がんスクリーニングパネルのヒト腫瘍細胞株を、５％ウシ胎仔血清および２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ１６４０培地中で生育する。通常のスクリーニング実験の場合、個々の細胞株の倍加時間に応じて５，０００〜４０，０００細胞／ウェルの範囲のプレーティング密度で９６ウェルマイクロタイタープレートに１００μＬにおいて細胞を播種する。細胞播種後、実験薬を加える前に、そのマイクロタイタープレートを３７℃、５％ＣＯ２、９５％空気および１００％相対湿度で２４時間インキュベートする。
【０１１９】
２４時間後、各細胞株の２枚のプレートを、ＴＣＡを用いてインサイチュで固定して、薬物添加時（Ｔｚ）における各細胞株の細胞集団の測定値を得る。実験薬を、所望の最終的な最高試験濃度の４００倍でジメチルスルホキシドに可溶化し、使用まで凍結保存する。薬物添加時に、凍結濃縮物のアリコートを解凍し、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含む完全培地で所望の最終的な最高試験濃度の２倍に希釈する。さらなる４つの１０倍または１／２ｌｏｇ段階希釈物を作製して、合計５つの薬物濃度およびコントロールを得る。１００μＬのこれらの異なる薬物希釈物のアリコートを、１００μＬの培地をすでに含んでいる適切なマイクロタイターウェルに加えることにより、必要な最終薬物濃度が得られる。
【０１２０】
薬物添加後、プレートを３７℃、５％ＣＯ２、９５％空気および１００％相対湿度においてさらに４８時間インキュベートする。接着細胞の場合、冷ＴＣＡを加えることによって、アッセイを終結させる。５０μＬの冷５０％（ｗ／ｖ）ＴＣＡ（最終濃度、１０％ＴＣＡ）を静かに加えることによって細胞をインサイチュで固定し、４℃で６０分間インキュベートする。上清を廃棄し、プレートを水道水で５回洗浄し、風乾する。１％酢酸中０．４％（ｗ／ｖ）のスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）溶液（１００μＬ）を各ウェルに加え、プレートを室温で１０分間インキュベートする。染色後、１％酢酸で５回洗浄することによって未結合の色素を除去し、プレートを風乾する。続いて、結合した染色を１０ｍＭ  Ｔｒｉｚｍａ（登録商標）塩基（Ｔｒｉｓ塩基）で可溶化し、自動プレートリーダーにおいて５１５ｎｍの波長の吸光度を読む。浮遊細胞の場合、５０μＬの８０％ＴＣＡ（最終濃度、１６％ＴＣＡ）を静かに加えることにより、ウェルの底に定着した細胞を固定することによって、アッセイを終了させること以外は、同じ方法である。７つの吸光度測定値［時間０、（Ｔｚ）、コントロール成長（Ｃ）および５濃度レベルの薬物の存在下における試験成長（Ｔｉ）］を用いて、各薬物濃度レベルにおいて成長率を計算する。成長阻害率を、以下のように計算する：
Ｔｉ＞／＝Ｔｚである濃度の場合、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００
Ｔｉ＜Ｔｚである濃度の場合、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／Ｔｚ］×１００
【０１２１】
薬物インキュベーション中のコントロール細胞において正味のタンパク質増加の５０％低下（ＳＲＢ染色によって計測される）をもたらす薬物濃度である５０％（ＧＩ５０）を［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００＝５０から計算する。全成長阻害（ＴＧＩ）をもたらす薬物濃度は、Ｔｉ＝Ｔｚから計算する。処置後の細胞の正味の減少を示唆するＬＣ５０（開始時と比較して、薬物処置終了時に計測されたタンパク質が５０％減少する薬物濃度）は、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／Ｔｚ］×１００＝−５０から計算する。活性レベルに到達した場合、これら３つのパラメータの各々に対して値を計算する。しかしながら、効果が達成されなかったまたは超えた場合、そのパラメータに対する値は、試験した最高濃度または最低濃度より大きいまたは小さい値として表現される。
【０１２２】
図３Ａ〜３Ｂはそれぞれ、白血病細胞株に対する化合物１（４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オン）および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。図４Ａおよび４Ｂはそれぞれ、中枢神経系（ＣＮＳ）がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。図５Ａおよび５Ｂはそれぞれ、腎がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。図６Ａおよび６Ｂはそれぞれ、非小細胞肺がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。図７Ａおよび７Ｂはそれぞれ、メラノーマ細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。図８Ａおよび８Ｂはそれぞれ、前立腺がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。図９Ａおよび９Ｂはそれぞれ、結腸がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。図１０Ａおよび１０Ｂはそれぞれ、卵巣がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。図１１Ａおよび１１Ｂはそれぞれ、乳がん細胞株に対する化合物１および５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄのＧＩ５０データを示している。
実施例３
異種移植研究
【０１２３】
異種移植研究を、ＨＣＴ−１１６ヒト結腸癌細胞、ＢＬ０３８２ヒト膀胱癌細胞、ＯＶＣＡＲ３ヒト卵巣癌細胞、ＮＣＩ−Ｈ２３  ＮＳＣＬＣヒト肺癌細胞およびＨＬ−６０ヒト白血病細胞の腫瘍を有するマウスにおいて行った。１０％ウシ胎仔血清および２ｍＭ  ｌ−グルタミンを含むＲＰＭＩ１６４０を用いてインビトロで生育した腫瘍細胞（ＨＬ−６０、ＮＣＩ−Ｈ２３、ＯＶＣＡＲ−３、ＨＣＴ−１１６）を４〜６週齢の雌無胸腺ヌードマウス（ｎｕ／ｎｕ  ＮＣｒ）またはＮＳＧマウスに皮下注射することによって、ヒト腫瘍異種移植片を作製した。患者由来異種移植（ＰＤＸ）モデルであるＢＬ０３８２Ｆ１２３２の場合、他の異種移植モデルについて記載されているように、腫瘍フラグメントをドナーマウスから連続継代した（Ｐｌｏｗｍａｎら、“Ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  ＮＣＩ  ｄｒｕｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．”Ｉｎ：Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（Ｅｄ．），Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｇｕｉｄｅ：Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｒｏｖａｌ．Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，ｐｐ．１０１−１２５；１９９７）。ヒト患者から得た腫瘍材料をＮＳＧマウスに植え込むことによって、ＰＤＸドナー腫瘍を作製した。得られた腫瘍をＮＳＧマウスに連続継代し、その後、保存された材料から新たな腫瘍を有する動物を樹立するために、フラグメントを冷凍保存した。それらのマウスを、ＡＡＡＬＡＣｉ（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）によって認定された施設に、食物および水を自由に摂取できる状態で収容した。腫瘍が所定の開始重量（ステージング重量）に達したら、動物を実験群に無作為化し、処置を開始した。群には、ビヒクルコントロール群ならびに薬物処置群が含まれた。薬物用量は、それまでの経験または別の箇所（同書）に記載されているような新しく行われたマウス耐容性試験に基づいて選択した。腫瘍を二方向のノギス測定によってモニターし、腫瘍重量を、腫瘍重量（ｍｇ）＝（腫瘍の長さ（単位ｍｍ）×腫瘍の幅（単位ｍｍ２））／２として計算した。データの収集および解析を、ＳｔｕｄｙＬｏｇソフトウェアプログラムＳｔｕｄｙ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒ（Ｓｔｕｄｙｌｏｇ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を用いて行った。
【０１２４】
薬物投与は、以下のとおりであった：
【表１】
2022502378.tif 000027
【０１２５】
腫瘍移植後に腫瘍体積および体重の連続測定を行った。結果を図１２Ａおよび１２Ｂ（ＨＣＴ−１１６ヒト結腸癌細胞）、図１３Ａおよび１３Ｂ（ＢＬ０３８２ヒト膀胱癌細胞）、図１４Ａおよび１４Ｂ（ＯＶＣＡＲ３ヒト卵巣癌細胞）、図１５Ａおよび１５Ｂ（ＮＣＩ−Ｈ２３  ＮＳＣＬＣヒト肺癌細胞）ならびに図１６Ａおよび１６Ｂ（ＨＬ−６０ヒト白血病細胞）に示す。
実施例４
ハロゲン化５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄアナログによる処置
【０１２６】
ハロゲン化５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄアナログで処置され得る疾患を有するかまたは有すると疑われる被験体を特定する。上記疾患は、新生物性細胞の存在を少なくとも部分的に特徴とする疾患であり得る。いくつかの場合において、上記疾患は、がんである。被験体は、臨床像に基づいて、および／または新生物性細胞の存在を少なくとも部分的に特徴とする疾患（例えば、がん）の存在を実証する検査を行うことによって、選択され得る。いくつかの例において、被験体は、固形腫瘍または血液のがんを有し得る。
【０１２７】
被験体は、治療的に有効であると臨床医が判断した用量でハロゲン化５−アザ−Ｔ−ｄＣｙｄアナログまたはその立体異性体、互変異性体もしくは薬学的に許容され得る塩を投与することによって処置される。いくつかの例において、上記化合物は、４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−３−フルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロチオフェン−２−イル）−１，３，５−トリアジン−２（１Ｈ）−オンである。上記化合物は、任意の好適な手段、例えば、非経口（例えば、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内）注射もしくは髄腔内注射または経口投与によって投与される。処置の有効性は、従来の手段、例えば、腫瘍成長の予防、腫瘍成長の低減、転移の減少または喪失、血液細胞数の正常化などによって評価され得る。いくつかの例において、評価は、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）またはポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）走査によって行われる。
【０１２８】
治療有効量の第２の活性な作用物質が、上記化合物と共投与され得る。上記化合物と第２の活性な作用物質とは、別々に投与されてもよく、単一の組成物として一緒に投与されてもよい。第２の活性な作用物質は、同じ経路によって投与されてもよく、異なる経路によって投与されてもよい。同時に投与される場合、上記化合物と第２の活性な作用物質とは、単一の薬学的組成物に組み合わされてもよく、２つの薬学的組成物として同時に投与されてもよい。第２の活性な作用物質は、例えば、抗がん剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、麻酔剤などであり得る。
【０１２９】
開示された発明の原理が適用され得る多くの考えられる実施形態を考慮すると、例証された実施形態は、本発明の単なる好ましい例であって、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでないことが認識されるはずである。むしろ、本発明の範囲は、以下の特許請求の範囲によって定義される。ゆえに、本発明者らは、これらの特許請求の範囲の範囲および趣旨の中に含まれるものすべてを本発明者らの発明として主張する。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【国際調査報告】
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