(57)【要約】  本発明は、下式（Ｉ）のリンカーまたはその塩：（Ｉ）に関する。本発明は、下式（ＩＩ）のリンカー薬物複合体またはその塩：（ＩＩ）に関する。本発明はまた、下式（ＩＩＩ）もしくは（ＩＶ）の抗体薬物複合体などの結合単位薬物複合体またはその塩：（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、ならびにこのような結合単位薬物複合体を含んでなる医薬組成物および癌の治療におけるその使用に関する。2022502431.tif 000211
2022502431.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式（Ｉ）のリンカー：
【化１】
2022502431.tif 000175
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、互いに独立に、Ｈ、ハロゲン原子、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されていてもよいアリールオキシ、または−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨを表し、ただし、Ｘ１およびＸ２は同時にＨを表すことはなく；
Ｌ１は、式Ｌ１’−（ＣＯ−Ｚ’）ｚ’の基を表し、ここで、Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルカンジイル、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、または−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−であり；
各Ｗは独立に、アミノ酸単位を表し；
Ｙは、ＰＡＢ−ＣＯ−（Ｚ）ｚ−であり、ここで、ＰＡＢは、
【化２】
2022502431.tif 000176
であり、前記ＰＡＢ単位の酸素は、ＣＯ−（Ｚ）ｚに連結され；
Ｚは、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−であり、前記ＮＲ４基は、ＰＡＢ−ＣＯのＣＯ基に連結され；
Ｚ’は、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−であり、前記ＮＲ４基は、ＣＯ−Ｚ’のＣＯ基に連結され；
Ｒ４およびＲ５は独立に、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基であり；
ｃは、０または１、好ましくは、１であり；
ｍは、１〜１５の整数であり；
ｎは、１〜６の整数であり；
ｐは、１〜６の整数であり；
ｑは、０、１または２、好ましくは、２であり；
ｒは、１〜２４、特に、１〜１２の整数であり、；
ｕは、１〜６の整数であり；
ｖは、１〜６の整数であり；
ｗは、０〜５の整数、好ましくは、０または２であり；
ｙは、０または１であり；
ｚは、０または１であり；
ｚ’は、０または１であり；かつ
Ｘ３は、ｙ＝ｚ＝１かつＺが−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合またはｃ＝ｗ＝ｙ＝０、ｚ’＝１かつＺ’が−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合にＨを表し、他の場合には、Ｘ３は、ＯＨ、ＮＨ２または脱離基を表し、ここで、前記脱離基は、ハロゲン原子、式−ＯＳＯ２−ＲＬＧのスルホナート、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、４−ニトロ−フェニルオキシ、ペンタフルオロフェノキシまたはＮ−ベンゾトリアゾロキシであり、ＲＬＧは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アリール基を表し、前記基は、１または複数のフッ素原子などのハロゲン原子で場合により置換されていてもよく、
ただし、
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化３】
2022502431.tif 000177
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化４】
2022502431.tif 000178
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化５】
2022502431.tif 000179
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化６】
2022502431.tif 000180
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化７】
2022502431.tif 000181
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化８】
2022502431.tif 000182
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＢｒである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化９】
2022502431.tif 000183
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＩである；
Ｘ１がＨであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１０】
2022502431.tif 000184
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＨであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１１】
2022502431.tif 000185
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＨであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１２】
2022502431.tif 000186
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１３】
2022502431.tif 000187
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１４】
2022502431.tif 000188
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１５】
2022502431.tif 000189
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１６】
2022502431.tif 000190
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１７】
2022502431.tif 000191
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１８】
2022502431.tif 000192
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；または
Ｘ１がＢｒであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１９】
2022502431.tif 000193
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである
式（Ｉ）の化合物ではなく；
ここで、破線は、Ｌ１と
【化２０】
2022502431.tif 000194
の窒素原子との結合点を示し、また、波線は、Ｌ１とＸ３との結合点を示す］
またはその塩。
【請求項２】
下式（Ｉａ）：
【化２１】
2022502431.tif 000195
［式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｌ１、Ｗ、Ｙ、ｃおよびｗは請求項１に定義される通りであり、かつ、
ｗが０である場合、ｙは０であり、ｗが１〜５の整数である場合、ｙは０または１である］
を有する、請求項１に記載のリンカーまたはその塩。
【請求項３】
少なくともＸ１またはＸ２がハロゲン原子を表す、請求項２に記載のリンカー。
【請求項４】
少なくともＸ１またはＸ２がＢｒまたはＣｌを表す、請求項３に記載のリンカー。
【請求項５】
Ｘ１およびＸ２の一方がＢｒまたはＣｌを表し、他方の基がＨ、ＣｌまたはＢｒを表す、請求項４に記載のリンカー。
【請求項６】
Ｌ１’が−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、−シクロアルカンジイル−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｎ−、
【化２２】
2022502431.tif 000196
を表す、請求項１〜５のいずれか一項に記載のリンカー。
【請求項７】
Ｌ１’が−（ＣＨ２）ｎ−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、特に、−（ＣＨ２）ｎ−、例えば、−（ＣＨ２）５−である、請求項６に記載のリンカー。
【請求項８】
各Ｗがアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、リシン、アセチルまたはホルミルで保護されたリシン、アルギニン、トシルまたはニトロ基で保護されたアルギニン、ヒスチジン、オルニチン、アセチルまたはホルミルで保護されたオルニチン、およびシトルリンから選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載のリンカー。
【請求項９】
ｗ＝０かつ（Ｗ）ｗが結合であるか、または
ｗ＝２かつ（Ｗ）ｗがＶａｌ−ＣｉｔまたはＶａｌ−Ａｌａ、好ましくは、Ｖａｌ−Ｃｉｔである、
請求項１〜８のいずれか一項に記載のリンカー。
【請求項１０】
Ｘ１およびＸ２が同一であって、Ｃｌ、Ｂｒ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ならびにアリールオキシ（ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２、および１または複数のフッ素原子などのハロゲン原子で場合により置換されていてもよいアリールオキシから選択される１または複数の基で場合により置換されていてもよい)から選択されるか、あるいは
Ｘ１およびＸ２の一方がＨであって、他方がＣｌ、Ｂｒ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ならびにアリールオキシ（ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２および場合により１または複数のフッ素原子などのハロゲン原子で置換されていてもよいアリールオキシから選択される１または複数の基で場合により置換されていてもよい）から選択される、
請求項１、２および６〜９のいずれか一項に記載のリンカー。
【請求項１１】
ｙ＝ｚ＝１かつＺが−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合またはｃ＝ｗ＝ｙ＝０、ｚ’＝１かつＺ’が−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合にＸ３はＨであり、他の場合には、Ｘ３はＯＨ、ＣｌまたはＮ−スクシンイミジルオキシである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のリンカー。
【請求項１２】
下式（ＩＩ）のリンカー薬物複合体：
【化２３】
2022502431.tif 000197
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、互いに独立に、Ｈ、ハロゲン原子、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されていてもよいアリールオキシ、または−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨを表し、ただし、Ｘ１およびＸ２は同時にＨを表すことはなく；
Ｌ１は、式Ｌ１’−（ＣＯ−Ｚ’）ｚ’の基を表し、ここで、Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルカンジイル、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、または−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−であり；
各Ｗは独立に、アミノ酸単位を表し；
Ｙは、ＰＡＢ−ＣＯ−（Ｚ）ｚ−であり、ここで、ＰＡＢは、
【化２４】
2022502431.tif 000198
であり、前記ＰＡＢ単位の酸素は、ＣＯ−（Ｚ）ｚに連結され；
Ｚは、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−であり、前記ＮＲ４基は、ＰＡＢ−ＣＯのＣＯ基に連結され；
Ｚ’は、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−であり、前記ＮＲ４基は、ＣＯ−Ｚ’のＣＯ基に連結され；
Ｒ４およびＲ５は独立に、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基であり；
Ｑは、薬物部分を表し；
ｃは、０または１、好ましくは、１であり；
ｍは、１〜１５の整数であり；
ｎは、１〜６の整数であり；
ｐは、１〜６の整数であり；
ｑは、０、１または２、好ましくは、２であり；
ｒは、１〜２４、特に、１〜１２の整数であり；
ｕは、１〜６の整数であり；
ｖは、１〜６の整数であり；
ｗは、０〜５、好ましくは、０または２の整数であり；
ｙは、０または１であり；
ｚは、０または１であり；かつ
ｚ’は０または１である］
またはその塩。
【請求項１３】
下式（ＩＩａ）：
【化２５】
2022502431.tif 000199
［式中、
Ｘ１、Ｘ２、Ｌ１、Ｗ、Ｙ、Ｑ、ｃおよびｗは、請求項１２に定義される通りであり、かつ
ｗが０である場合、ｙは０であり、ｗが１〜５の整数である場合、ｙは０または１である］
を有する、請求項１２に記載のリンカー薬物複合体、またはその塩。
【請求項１４】
Ｌ１’、Ｗ、ｗ、Ｘ１およびＸ２が請求項３〜１０のいずれか一項に定義される通りである、請求項１２または１３に記載のリンカー薬物複合体。
【請求項１５】
Ｑがアウリスタチン、アントラサイクリン、カンプトテシン、ＳＮ−３８、チューブリシン、カリケアマイシン、メイタンシノイド、デュオカルマイシン、アマニチン、ピロロベンゾジアゼピンの残基、またはインターフェロン遺伝子（ＳＴＩＮＧ）アゴニストの刺激剤の残基またはインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤の残基などの免疫チェックポイントの活性剤の残基である、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載のリンカー薬物複合体。
【請求項１６】
Ｑが、
モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）もしくはモノメチルドラスタチン−１０の残基、または下式（Ｃ）：
【化２６】
2022502431.tif 000200
［式中、
Ｒ１はＨまたはＯＨであり、
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）またはチアゾリルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、特に、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ｘ４は、ＯまたはＮＲ９であり、
Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、かつ
ｔは、１〜８、特に、１〜６、有利には、１〜４の整数であり、好ましくは、１または２である］
を有するその誘導体の残基、
ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、２−ピロリノドキソルビシン、プロ−２−ピロリノドキソルビシンもしくはＰＮＵ−１５９６８２の残基、または下式（Ａ）もしくは（Ｂ）： 
【化２７】
2022502431.tif 000201
の残基；
カンプトテシンまたはＳＮ−３８の残基；
チューブリシンＡ、チューブリシンＢ、チューブリシンＣまたはチューブリシンＤの残基；
エスペラミシン、カリケアマイシンγ１、またはＮ−アセチルジメチルヒドラジドカリケアマイシンの残基；
メイタンシン、ＤＭ１またはＤＭ４の残基；
デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシンＣ２、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、またはＣＣ−１０６５の残基；
α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチンまたはε−アマニチンの残基；
アントラマイシンまたはＳＧＤ−１８８２の残基；
下式（Ｄ）：
【化２８】
2022502431.tif 000202
［式中、
Ｘ１１およびＸ２１は独立に、ＯまたはＳ、好ましくは、Ｏであり、
Ｘ１２およびＸ２２は独立に、ＯＨ、ＳＨ、ＯまたはＳであり、
Ａ１１およびＡ２１は独立に、式：
【化２９】
2022502431.tif 000203
の基であり、式中、
・Ｚ１は、ＯＲ１１、ＮＲ１１Ｒ１２、ＯまたはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は独立に、Ｈ、Ｒ１３またはＣＯＲ１３であり、ここで、Ｒ１３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールまたはアリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
・Ｚ２は、Ｈ、ＮＲ２１Ｒ２２またはＮＲ２１であり、ここで、Ｒ２１およびＲ２２は独立に、Ｈ、Ｒ２３またはＣＯＲ２３であり、ここで、Ｒ２３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールまたはアリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
・Ｚ３は、ＮまたはＣＲ３３であり、ここで、Ｒ３３は、Ｈまたはハロゲン原子であり、かつ
・Ｚ４は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ａ１２およびＡ２２は独立に、Ｈ、ＯＨまたはＦであり、かつ
Ａ２はＨであるか、またはＡ２およびＡ２２は相互に連結され、ここで、Ａ２はＣＨ２であり、Ａ２２はＯであり、
ここで、
・Ｘ１２がＯまたはＳである場合、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、Ｚ２はＮＲ２１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｘ１２によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｘ２２がＯまたはＳである場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、Ｚ２はＮＲ２１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｘ２２によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｚ１がＯまたはＮＲ１１である場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ２はＮＲ２１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｚ１によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｚ２がＮＲ２１である場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｚ２によって分子の残りの部分に連結されている］
の残基である、
請求項１２〜１５のいずれか一項に記載のリンカー薬物複合体。
【請求項１７】
Ｑが
下式（Ａ）：
【化３０】
2022502431.tif 000204
下式（Ｂ）：
【化３１】
2022502431.tif 000205
下式（Ｃ）：
【化３２】
2022502431.tif 000206
［式中、
Ｒ１は、ＨまたはＯＨであり、
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）またはチアゾリルであり、
Ｒ３は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、特に、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ｘ４は、ＯまたはＮＲ９であり、
Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、かつ
ｔは、１〜８、特に、１〜６、有利には、１〜４の整数であり、好ましくは、１または２である］；または
下式（Ｄ）：
【化３３】
2022502431.tif 000207
［式中、
Ｘ１１およびＸ２１は独立に、ＯまたはＳ、好ましくは、Ｏであり、
Ｘ１２およびＸ２２は独立に、ＯＨ、ＳＨ、ＯまたはＳであり、
Ａ１１およびＡ２１は独立に、式：
【化３４】
2022502431.tif 000208
の基であり、式中、
・Ｚ１は、ＯＲ１１、ＮＲ１１Ｒ１２、ＯまたはＮＲ１１であり、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は独立に、Ｈ、Ｒ１３またはＣＯＲ１３であり、ここで、Ｒ１３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールまたはアリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
・Ｚ２は、Ｈ、ＮＲ２１Ｒ２２またはＮＲ２１であり、ここで、Ｒ２１およびＲ２２は独立に、Ｈ、Ｒ２３またはＣＯＲ２３であり、ここで、Ｒ２３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールまたはアリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
・Ｚ３は、ＮまたはＣＲ３３であり、ここで、Ｒ３３は、Ｈまたはハロゲン原子であり、かつ
・Ｚ４は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ａ１２およびＡ２２は独立に、Ｈ、ＯＨまたはＦであり、かつ
Ａ２はＨであるか、またはＡ２およびＡ２２は相互に連結され、ここで、Ａ２はＣＨ２であり、Ａ２２はＯであり、
ここで、
・Ｘ１２がＯまたはＳである場合、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、Ｚ２はＮＲ２１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｘ１２によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｘ２２がＯまたはＳである場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、Ｚ２はＮＲ２１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｘ２２によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｚ１がＯまたはＮＲ１１である場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ２はＮＲ２１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｚ１によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｚ２がＮＲ２１である場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｚ２によって分子の残りの部分に連結されている］
を有する、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載のリンカー薬物複合体。
【請求項１８】
薬物を、ペプチド、タンパク質、抗体およびその抗原結合フラグメントから選択される、特に、抗体およびその抗原結合フラグメントから選択される結合単位に共有結合的に連結するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のリンカーまたは請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の薬物リンカー複合体の使用。
【請求項１９】
ｑが２である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
下式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）：
【化３５】
2022502431.tif 000209
［式中、
結合単位は、ペプチド、タンパク質、抗体、またはその抗原結合フラグメントであり；
Ｌ１は、式Ｌ１’−（ＣＯ−Ｚ’）ｚ’の基を表し、ここで、Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルカンジイル、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−、または−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−であり；
各Ｗは独立に、アミノ酸単位を表し；
Ｙは、ＰＡＢ−ＣＯ−（Ｚ）ｚ−であり、ここで、ＰＡＢは、
【化３６】
2022502431.tif 000210
（前記ＰＡＢ単位の酸素は、ＣＯ−（Ｚ）ｚに連結されている）であり；
Ｚは、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−であり、前記ＮＲ４基は、ＰＡＢ−ＣＯのＣＯ基に連結され；
Ｚ’は、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−であり、前記ＮＲ４基は、ＣＯ−Ｚ’のＣＯ基に連結され；
Ｒ４およびＲ５は独立に、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基であり；
Ｑは、薬物部分を表し；
ｃは、０または１、好ましくは、１であり；
ｍは、１〜１５の整数であり；
ｎは、１〜６の整数であり；
ｐは、１〜６の整数であり；
ｓは、１〜８の整数であり；
ｕは、１〜６の整数であり；
ｖは、１〜６の整数であり；
ｗは、０〜５の整数、好ましくは、０または２であり；
ｙは、０または１であり；
ｚは、０または１であり；かつ
ｚ’は、０または１である］
の結合単位薬物複合体、またはその塩、好ましくは、その薬学上許容可能な塩。
【請求項２１】
Ｌ１’、Ｗ、およびｗが請求項６〜９のいずれか一項に定義され。かつ／またはＱは、請求項１５〜１７のいずれか一項に定義される、請求項２０に記載の結合単位薬物複合体。
【請求項２２】
前記結合単位が抗体、またはその抗原結合フラグメントである、請求項２０または２１に記載の結合単位薬物複合体。
【請求項２３】
前記抗体がＩＧＦ−１Ｒ抗体またはＨＥＲ２抗体である、請求項２２に記載の結合単位薬物複合体。
【請求項２４】
請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の結合単位薬物複合体と少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤を含んでなる、医薬組成物。
【請求項２５】
前立腺癌、骨肉腫、肺癌、乳癌、子宮内膜癌、膠芽腫、結腸癌、胃癌、腎臓癌、膵臓癌、または頭頸部癌などの癌の治療において使用するための、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の結合単位薬物複合体または請求項２４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬物分子を、有利には抗体である結合単位に共有結合的に連結することによる、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）などの複合体の作製において有用なスルホマレイミドに基づくリンカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＡＤＣは、総て、種々の薬物負荷種の制御された混合物であり（抗体当たりの薬物分子＝ＤＡＲが０〜８）、典型的な平均ＤＡＲは３．５または４である。非複合体種は一般に活性がなく、抗原との結合に関して薬物負荷種と競合する。加えて、４を超えるＤＡＲを有する種は、より低い忍容性、より高い血漿クリアランス速度および有効性の低下につながることが示されている。現在上市されているおよび臨床試験中のＡＤＣのほとんどは、チオールとアルキルマレイミドの反応により形成されるチオスクシンイミド結合などの共通の構造的特徴を有する。このタイプの化学反応は、マレイミドとチオールの反応が生理学的条件下で極めて迅速かつ（どちらの原料種も大過剰に用いることなく）定量的であることから広く使用されている。しかしながら、チオスクシンイミド形成は、生理学的条件下で緩慢な可逆性がある。アルキルマレイミドを含有するＡＤＣは、長期循環中に薬物損失をもたらすことがある。このＡＤＣからのマレイミドの排出（レトロマイケル反応による）の薬理学的結果には、薬物とリンカーの非標的遊離から生じる抗体結合型の薬物への曝露の低下およびより高い毒性のための、抗腫瘍活性の低下が含まれる。このことは、チオエーテルリンカーＳＭＣＣ（スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート）を介したシステイン結合ＡＤＣおよびリシン結合ＡＤＣの両方に関して記載されている。
【０００３】
よって、本発明は、薬物と結合単位の結合に有用な化合物に関し、得られる複合体はより安定かつより有効である。
【発明の概要】
【０００４】
よって、本発明は、下式（Ｉ）：
【化１】
2022502431.tif 000003
、好ましくは、下式（Ｉａ）：
【化２】
2022502431.tif 000004
のリンカーまたはその塩に関し、
式中、
Ｘ１およびＸ２は互いに独立に、Ｈ、ハロゲン原子、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されていてもよいアリールオキシ、または−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨ（−Ｏ−ＰＥＧ）、を表し、ただし、Ｘ１およびＸ２は同時にＨを表すことはなく；
Ｌ１は、式Ｌ１’−（ＣＯ−Ｚ’）ｚ’の基を表し、ここで、Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルカンジイル、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、または−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−であり；
各Ｗは独立に、アミノ酸単位を表し；
Ｙは、−ＰＡＢ−ＣＯ−（Ｚ）ｚ−であり、ここで、ＰＡＢは、
【化３】
2022502431.tif 000005
（ＰＡＢ単位の酸素は、ＣＯ−（Ｚ）ｚに連結されている）であり；
Ｚは、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−もしくは−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−、またはさらに他には−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−もしくは−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−であり（前記ＮＲ４基は、ＰＡＢ−ＣＯのＣＯ基に連結されている）；
Ｚ’は、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−であり（前記ＮＲ４基は、ＣＯ−Ｚ’のＣＯ基に連結されている）；
Ｒ４およびＲ５は独立に、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基であり；
ｃは、０または１、好ましくは、１であり；
ｍは、１〜１５の整数であり；
ｎは、１〜６の整数であり；
ｐは、１〜６の整数であり；
ｑは、０、１または２、好ましくは、２であり；
ｒは、１〜２４、特に、１〜１２の整数であり；
ｕは、１〜６の整数であり；
ｖは、１〜６の整数であり；
ｗは、０〜５の整数であり、好ましくは、０または２であり；
ｙは、０または１であり（好ましくは、ｗが０である場合、ｙは０であり、ｗが１〜５の整数である場合、ｙは０または１である）；
ｚは、０または１であり；
ｚ’は、０または１、特に、０であり；かつ
Ｘ３は、ｙ＝ｚ＝１かつＺが−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合、またはｃ＝ｗ＝ｙ＝０、ｚ’＝１かつＺ’が−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合にＨを表し、他の場合には、Ｘ３は、ＯＨ、ＮＨ２または脱離基を表す。
【０００５】
脱離基は、より詳しくは、ハロゲン原子、式−ＯＳＯ２−ＲＬＧのスルホナート、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、４−ニトロ−フェニルオキシ、ペンタフルオロフェノキシまたはＮ−ベンゾトリアゾロキシであり、ＲＬＧは、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アリール基を表し、前記基は１または複数のフッ素原子などのハロゲン原子で場合により置換されていてもよい。
【０００６】
好ましくは、式（Ｉ）の化合物は、
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化４】
2022502431.tif 000006
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化５】
2022502431.tif 000007
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化６】
2022502431.tif 000008
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化７】
2022502431.tif 000009
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化８】
2022502431.tif 000010
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化９】
2022502431.tif 000011
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＢｒである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＨであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１０】
2022502431.tif 000012
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＩである；
Ｘ１がＨであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１１】
2022502431.tif 000013
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＨであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１２】
2022502431.tif 000014
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＨであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１３】
2022502431.tif 000015
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１４】
2022502431.tif 000016
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１５】
2022502431.tif 000017
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＣｌであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１６】
2022502431.tif 000018
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１７】
2022502431.tif 000019
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１８】
2022502431.tif 000020
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；
Ｘ１がＣｌであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化１９】
2022502431.tif 000021
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである；または
Ｘ１がＢｒであり、Ｘ２がＢｒであり、ｑが０であり、Ｌ１が
【化２０】
2022502431.tif 000022
であり、ｃが０であり、ｗが０であり、ｙが０であり、かつ、Ｘ３がＣｌである化合物でなく；
ここで、破線は、Ｌ１と
【化２１】
2022502431.tif 000023
の窒素原子との結合点を示し、また、波線は、Ｌ１とＸ３の結合点を示す。
【０００７】
これらの化合物は、ＷＯ２００７／００１９３２またはＵＳ４，１２７，６８７に開示されているが、より詳しくは、ＡＤＣなどの複合体の作製が意図されるリンカーとしてではない。
【０００８】
本発明はまた、下式（ＩＩ）：
【化２２】
2022502431.tif 000024
、好ましくは、下式（ＩＩａ）：
【化２３】
2022502431.tif 000025
のリンカー薬物複合体またはその塩に関し、
式中、
Ｘ１およびＸ２は、互いに独立に、Ｈ、ハロゲン原子、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されていてもよいアリールオキシ、または−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨを表し、ただし、Ｘ１およびＸ２は同時にＨを表すことはなく；
Ｌ１は、式Ｌ１’−（ＣＯ−Ｚ’）ｚ’の基を表し、ここで、Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルカンジイル、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、または−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−であり；
各Ｗは独立に、アミノ酸単位を表し；
Ｙは、−ＰＡＢ−ＣＯ−（Ｚ）ｚ−であり、ここで、ＰＡＢは、
【化２４】
2022502431.tif 000026
（ＰＡＢ単位の酸素は、ＣＯ−（Ｚ）ｚに連結されている）であり；
Ｚは、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−もしくは−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−、またはさらに他には−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−もしくは−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−であり（前記ＮＲ４基は、ＰＡＢ−ＣＯのＣＯ基に連結されている）；
Ｚ’は、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−であり（前記ＮＲ４基は、ＣＯ−Ｚ’のＣＯ基に連結されている）；
Ｒ４およびＲ５は独立に、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基であり；
Ｑは、薬物部分を表し；
ｃは、０または１、好ましくは、１であり；
ｍは、１〜１５の整数であり；
ｎは、１〜６の整数であり；
ｐは、１〜６の整数であり；
ｑは、０、１または２、好ましくは、２であり；
ｒは、１〜２４、特に、１〜１２の整数であり；
ｕは、１〜６の整数であり；
ｖは、１〜６の整数であり；
ｗは、０〜５、好ましくは、０または２の整数であり；
ｙは、０または１であり（好ましくは、ｗが０である場合、ｙは０であり、ｗが１〜５の整数である場合、ｙは０または１である）；
ｚは、０または１であり；かつ
ｚ’は、０または１、特に、０である。
【０００９】
本発明はまた、下式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）：
【化２５】
2022502431.tif 000027
の結合単位薬物複合体またはその塩、好ましくは、その薬学上許容可能な塩に関し、
式中、
結合単位は、ペプチド、タンパク質（例えば、操作タンパク質）、抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメントであり；
Ｌ１は、式Ｌ１’−（ＣＯ−Ｚ’）ｚ’の基を表し、ここで、Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルカンジイル、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、または−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−であり；
各Ｗは独立に、アミノ酸単位を表し；
Ｙは、−ＰＡＢ−ＣＯ−（Ｚ）ｚ−であり、ここで、ＰＡＢは、
【化２６】
2022502431.tif 000028
（ＰＡＢ単位の酸素は、ＣＯ−（Ｚ）ｚに連結されている）；
Ｚは、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−、またはさらに他には−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−（前記ＮＲ４基は、ＰＡＢ−ＣＯのＣＯ基に連結されている）であり；
Ｚ’は、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−であり（前記ＮＲ４基は、ＣＯ−Ｚ’のＣＯ基に連結されている）；
Ｒ４およびＲ５は独立に、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基であり；
Ｑは、薬物部分を表し；
ｃは、０または１、好ましくは、１であり；
ｍは、１〜１５の整数であり；
ｎは、１〜６の整数であり；
ｐは、１〜６の整数であり；
ｓは、１〜８の整数であり；
ｕは、１〜６の整数であり；
ｖは、１〜６の整数であり；
ｗは、０〜５の整数、好ましくは、０または２であり；
ｙは、０または１であり（好ましくは、ｗが０の場合、ｙは０であり、ｗが１〜５の整数である場合、ｙは０または１である）；
ｚは、０または１であり；かつ
ｚ’は、０または１、特に、０である。
【００１０】
好ましい実施形態によれば、結合単位は、ＩＧＦ−１Ｒ抗体、ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ）またはその抗原結合フラグメントである。
【００１１】
本発明はまた、薬物を抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメントなどの結合単位に共有結合的に連結するための式（Ｉ）のリンカーまたは式（ＩＩ）の薬物リンカー複合体（好ましくは、ｑ＝２）に関する。このような共有結合は、リンカー部分によって作り出される。
【００１２】
実際に、好ましくは、ｑ＝２の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、薬物を抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメントなどの結合単位に共有結合的に連結するために有用である。
【００１３】
ｑ＝０または１の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物はまた、ｑ°＝°２の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物を作製するために合成中間体として使用することもできる。結論として、本発明はまた、合成中間体としての上記に定義されるようなｑ＝０または１の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物に関する。
【００１４】
本発明はまた、式（Ｉ）のリンカーまたは式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）もしくは（ＩＶ）の複合体を作製するための方法に関する。
【００１５】
本発明はまた、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）の結合単位薬物複合体と少なくとも１つの薬学上許容可能な賦形剤とを含んでなる医薬組成物に関する。
【００１６】
本発明はまた、癌の治療において使用するための、式（ＩＩＩ）もしくは（ＩＶ）の結合単位薬物複合体、または式（ＩＩＩ）もしくは（ＩＶ）結合単位薬物複合体と少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤とを含んでなる医薬組成物に関する。
【００１７】
本発明はまた、癌の治療において使用することが意図される薬剤の製造のための、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）の結合単位薬物複合体の使用に関する。
【００１８】
本発明はまた、必要とする対象への有効量の式（ＩＩＩ）もしくは（ＩＶ）の結合単位薬物複合体または式（ＩＩＩ）もしくは（ＩＶ）の結合単位薬物複合体と少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤とを含んでなる医薬組成物の投与を含んでなる、癌を治療するための方法に関する。
【００１９】
定義
本発明において、用語「薬学上許容可能な」は、医薬組成物の作製に有用であるもの、および薬学的使用のために、一般に安全かつ非毒性のものを意味することが意図される。
【００２０】
用語「薬学上許容可能な塩」は、本発明の枠組みにおいて、上記に定義されるように薬学上許容可能な、および対応する化合物の薬理活性を有する化合物の塩を意味することが意図される。
【００２１】
薬学上許容可能な塩には、
（１）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸およびリン酸などの無機酸を伴って形成される酸付加塩；または酢酸、ベンゼンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２−ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、コハク酸、ジベンゾイル−Ｌ−酒石酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸、およびトリフルオロ酢酸などの有機酸を伴って形成される酸付加塩、ならびに
（２）化合物の酸プロトンがアルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、もしくはアルミニウムイオンなどの金属イオンによって置換されているか；または有機もしくは無機塩基が配位している場合に形成される塩
が含まれる。許容可能な有機塩基には、ジエタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどが含まれる。許容可能な無機  塩基には、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウムが含まれる。
【００２２】
用語「ハロゲン」は、本明細書において使用する場合、フッ素、臭素、塩素またはヨウ素原子を指す。
【００２３】
用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルキル」は、本明細書において使用する場合、１〜６個の炭素原子を含む一価の直鎖または分岐型飽和炭化水素鎖を指し、限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどを含む。
【００２４】
用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ」は、本明細書において使用する場合、酸素原子を介して分子に結合された、上記に定義されるような（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を指し、限定されるものではないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシなどを含む。
【００２５】
用語「（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル」は、本明細書において使用する場合、２〜６個の炭素原子を含み、かつ、少なくとも１つの二重結合を含んでなる直鎖または分岐型一価不飽和炭化水素鎖を指し、限定されるものではないが、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニルなどを含む。
【００２６】
用語「シクロアルカンジイル」は、本明細書において使用する場合、有利には４〜１０個の炭素原子、特に、５または６個の炭素原子を有する二価和炭化水素環を指し、限定されるものではないが、シクロペンタンジイル、シクロヘキサンジイルなどを含む。好ましくは、それはシクロヘキサンジイル基である。
【００２７】
用語「アリール」は、本明細書において使用する場合、例えば、フェニル基またはナフチル基など、好ましくは、６〜１０個の炭素原子を含んでなり、かつ、１以上の縮合環を含んでなる一価芳香族炭化水素基を指す。有利には、それはフェニル基であろう。
【００２８】
用語「アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル」は、本明細書において使用する場合、上記に定義されるようなアリール基で置換された、上記に定義されるような（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基を指す。特に、それはベンジル基であり得る。
【００２９】
用語「（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アリール」は、本明細書において使用する場合、上記に定義されるような（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基で置換された、上記に定義されるようなアリール基を指す。特に、それはトリル基（ＣＨ３Ｐｈ）であり得る。
【００３０】
用語「アリールオキシ」は、本明細書において使用する場合、酸素原子を介して分子に結合された、上記に定義されるようなアリール基を指し、限定されるものではないが、フェニルオキシを含む。
【００３１】
用語「アリーレン」は、本明細書において使用する場合、例えば、フェニレン基またはナフチレン基など、好ましくは、６〜１０個の炭素原子を含んでなり、かつ、１以上の縮合環を含んでなる二価芳香族炭化水素基を指す。有利には、それはフェニレン基であろう。
【００３２】
用語「ヘテロアリーレン」は、本明細書において使用する場合、１または複数の、特に、１〜４個の、有利には、１〜３個の炭素原子がそれぞれ、硫黄原子、酸素原子および窒素原子から選択される、好ましくは、酸素原子および窒素原子から選択されるヘテロ原子、より好ましくは、窒素原子で置換されている、１または複数の、特に、１または２個の縮合炭化水素環を含んでなる二価芳香族基を指す。有利には、それは二価１，２，３−トリアゾール、例えば、二価１Ｈ−１，２，３−トリアゾールである。
【００３３】
用語「脱離基」は、本明細書において使用する場合、求核試薬置換反応の際に求核試薬（例えば、それぞれ官能基ＮＨまたはＯＨを有するアミンまたはアルコール）で容易に置換され得る化学基を指す。このような脱離基は、特に、ハロゲン原子、スルホナート、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、４−ニトロ−フェニルオキシ、ペンタフルオロフェノキシまたはＮ−ベンゾトリアゾロキシであり得る。スルホナートは特に、基−ＯＳＯ２−ＲＬＧであり、ここで、ＲＬＧは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アリール基を表し、前記基は１または複数のフッ素原子などのハロゲン原子で場合により置換されていてもよい。スルホナートは、特に、メシラート（ＯＭｓ、ＣＨ３−Ｓ（Ｏ２）Ｏ−）、トリフラート（ＯＴｆ、ＣＦ３−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−）またはトシラート（ＯＴｓ、ｐ−Ｍｅ−Ｃ６Ｈ４−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−）であり得る。脱離基は、特に、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＴｆ、ＯＭｓ、ＯＴｆ、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、４−ニトロ−フェニルオキシまたはＮ−ベンゾトリアゾロキシであり得る。
【００３４】
用語「トリアルキルシリル基」は、本明細書において使用する場合、−ＳｉＡｌｋ１Ａｌｋ２Ａｌｋ３基を指し、Ａｌｋ１、Ａｌｋ２およびＡｌｋ３は、同一または異なり、上記に定義されるような（Ｃ１−Ｃ６）−アルキル基を表す。例えば、それはトリメチルシリル基またはトリエチルシリル基であり得る。
【００３５】
分子の「保護形態」という用語は、前記分子に存在する少なくともＯＨまたはＮＨ官能基がそれぞれＯ−保護基またはＮ−保護基で保護されることを意味する。
【００３６】
用語「保護基」は、本明細書において使用する場合、多官能基化合物の、ある反応性部位を、別の非保護反応性部位での化学反応が選択的に遂行し得るように選択的に遮断する化学基を指す。
【００３７】
用語「Ｏ−保護基」は、本明細書において使用する場合、“Greene’s Protective Groups In Organic Synthesis”, 第4版, 2007, John Wiley & Sons, ホーボーケン, ニュージャージー州に開示されているＯ−保護基などの、合成手順中に望ましくない反応からヒドロキシル基（ＯＨ）を保護する置換基を指す。Ｏ−保護基により保護されるヒドロキシル基は、例えば、エーテル、エステル、カーボネート、アセタールなどであり得る。特に、Ｏ−保護基は、１または複数（特に、１〜３個）のハロゲン原子（例えば、塩素原子）で場合により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、例えば、メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチルまたは２，２，２−トリクロロエチル；アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、例えば、ベンジル（前記アリール部分は１または複数のメトキシ基で場合により置換されていてもよい）、例えば、ベンジル（Ｂｎ）またはｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）；式−ＣＡｒ１Ａｒ２Ａｒ３のトリチル誘導体、例えば、トリフェニルメチル（トリチル−Ｔｒとも呼称）、（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル（メトキシトリチル−ＮＭＴとも呼称）またはビス−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル（ジメトキシトリチル−ＤＭＴとも呼称）；式−ＣＨ２ＯＲＧＰ２または−ＣＨ２ＳＲＧＰ２（特に、−ＣＨ２ＯＲＧＰ２）の置換メチル基、例えば、メトキシメチル（ＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２−（トリメチルシリル）エトキシメチルまたはメチルチオメチル；式−ＣＨ２ＣＨ２ＯＲＧＰ２または−ＣＨ２ＣＨ２ＳＲＧＰ２（特に、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＲＧＰ２）の置換エチル基、例えば、エトキシエチル（ＥＥ）；式−ＳｉＲＧＰ３ＲＧＰ４ＲＧＰ５のシリル基、例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳまたはＴＢＤＭＳ）およびｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）；式−ＣＯ−ＲＧＰ６のカルボニル化基、例えば、アセチル（Ａｃ）、ピバロイル（ＰｉｖもしくはＰｖ）もしくはベンゾイル（Ｂｚ）または式−ＣＯ２−ＲＧＰ７のシリル基、例えば、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）または９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）；あるいはテトラヒドロピラニル（
【化２７】
2022502431.tif 000029
）
（ＴＨＰ）またはテトラヒドロフラニル（
【化２８】
2022502431.tif 000030
）基であり得；ここで、Ａｒ１、Ａｒ２およびＡｒ３は、互いに独立に、１または複数のメトキシ基で場合により置換されていてもよいフェニルなどのアリールを表し；ＲＧＰ２は、アリール（例えば、フェニル）、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ（例えば、メトキシ）またはトリアルキルシリル基（例えば、ＳｉＭｅ３）で場合により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、メチルまたはエチル）を表し；ＲＧＰ３、ＲＧＰ４およびＲＧＰ５は、互いに独立に、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたはアリール（例えば、フェニル）基を表し；かつ、ＲＧＰ６およびＲＧＰ７は、互いに独立に、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、アリール、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルまたは９−フルオレニルメチル基を表す。
【００３８】
用語「Ｎ−保護基」は、本明細書において使用する場合、合成手順中に望ましくない反応からアミン官能基（特に、第一級アミン官能基）を保護することが意図される基を指す。慣用されるＮ−保護基は、“Greene’s Protective Groups In Organic Synthesis”, 第4版, 2007, John Wiley & Sons, ホーボーケン, ニュージャージー州に開示されている。Ｎ−保護基により保護されるアミン官能基は、カルバマート、アミド、スルホンアミド、Ｎ−アルキル誘導体、アミノアセタール誘導体、Ｎ−ベンジル誘導体、イミン誘導体、エナミン誘導体またはＮ−ヘテロ原子誘導体であり得る。特に、Ｎ−保護基は、ホルミル；１または複数のメトキシ基で場合により置換されていてもよいフェニルなどのアリール、例えば、ｐ−メトキシフェニル（ＰＭＰ）；アリール部分が１または複数のメトキシ基で場合により置換されていてもよいベンジルなどのアリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、例えば、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）または３，４−ジメトキシベンジル（ＤＭＰＭ）；−ＣＯ−ＲＧＰ１、例えば、アセチル（Ａｃ）、ピバロイル（ＰｉｖもしくはＰｖ）、ベンゾイル（Ｂｚ）またはｐ−メトキシベンジルカルボニル（Ｍｏｚ）；−ＣＯ２−ＲＧＰ１、例えば、ｔブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、トリクロロエトキシカルボニル（ＴＲＯＣ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣｂｚもしくはＺ）または９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）；−ＳＯ２−ＲＧＰ１、例えば、フェニルスルホニル、トシル（ＴｓもしくはＴｏｓ）または２−ニトロベンゼンスルホニル（ノシル−ＮｏｓもしくはＮｓとも呼称）など；
ここで、ＲＧＰ１は、１または複数のＦまたはＣｌなどのハロゲン原子で場合により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）アルキルを表す；（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、例えば、アリル；ＯＭｅ（メトキシ）およびＮＯ２（ニトロ）から選択される１または複数の基で場合により置換されていてもよいフェニルなどのアリール；アリール部分が１または複数のメトキシ基で場合により置換されていてもよい、ベンジルなどのアリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル；または９−フルオレニルメチル基であり得る。
【００３９】
用語「抗体」、「ａｂ」、「Ａｂ」、「ＭＡｂ」または「免疫グロブリン」は、広義には互換的に使用され、モノクローナル抗体、単離された、操作されたまたは組換え型の抗体（例えば、全長または完全モノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、多価抗体または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）およびまた所望の生物活性を示す限りそれらの抗体フラグメントも含む。
【００４０】
用語「組換え抗体」は、生細胞内での組換えＤＮＡの発現から生じる抗体を指す。本発明による組換え抗体は、生物学的生物には見られないＤＮＡ配列を作り出す、当業者に周知の遺伝子組換えの実験室的方法を使用することにより得られる。
【００４１】
本発明による抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、抗体の標的（一般には抗原と呼称）に結合する能力を保持する任意のペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質を示すことが意図される。
【００４２】
「結合」、「結合する」などとは、抗体、またはその抗原結合フラグメントが抗原と生理学的条件下で比較的安定である複合体を形成することが意図される。特異的結合は、少なくとも約１×１０−６Ｍの平衡解離定数を特徴とし得る。２つの分子が結合するかどうかを決定するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴、放射性標識アッセイなどが含まれる。疑念を避けるため、それは前記抗体が別の抗原と低レベルで結合または干渉できないことを意味するものではない。しかしながら、ある実施形態において、前記抗体は前記抗原にのみ結合する。
【００４３】
本明細書において使用する場合、「ＩＧＦ−１Ｒ抗体」という表現は、「抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体」と同様に解釈されるべきであり、ＩＧＦ−１Ｒと結合し得る抗体を意味する。
【００４４】
本明細書において使用する場合、「ＨＥＲ２抗体」という表現は、「抗ＨＥＲ２抗体」と同様に解釈されるべきであり、ＨＥＲ２と結合し得る抗体を意味する。
【００４５】
半数効果濃度（ＥＣ５０）という用語は、ある特定の曝露時間の後にベースラインと最大値の間の半分の応答を誘導する薬物、抗体または毒物の濃度に相当する。これは薬物の効力の尺度として慣用されている。よって、漸増用量反応曲線のＥＣ５０は、その最大効果の５０％が見られる化合物の濃度を表す。段階的用量反応曲線(quantal dose response curve)のＥＣ５０は、特定の曝露期間の後に集団の５０％が反応を示す化合物の濃度を表す。濃度測定は、一般に、比較的小さい濃度変化で急速に増加するシグモイド曲線をたどる。これはベストフィット直線の導出によって数学的に決定することができる。
【００４６】
好ましい実施形態として、本発明において決定されるＥＣ５０は、ヒト腫瘍細胞上に露出しているＩＧＦ−１Ｒ  ＥＣＤに結合する抗体の効力を特徴付ける。ＥＣ５０パラメーターは、ＦＡＣＳ分析を用いて決定される。ＥＣ５０パラメーターは、ヒト腫瘍細胞上に発現しているヒトＩＧＦ−１Ｒへの最大結合の５０％が得られる抗体濃度を表す。各ＥＣ５０値は、４パラメーター回帰曲線フィッティングプログラム（Ｐｒｉｓｍソフトウエア）を用いて、用量反応曲線の中点として計算される。このパラメーターは、生理学的／病理学的状態に典型的となるように選択されたものである。
【００４７】
用語「エピトープ」は、抗体が結合する抗原の領域である。エピトープは、構造的または機能的として定義され得る。機能的エピトープは一般に構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープはまた、立体配座的である場合もあり、これは非線形アミノ酸から構成される。特定の実施形態において、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基など、化学的に活性な表面分子群である決定基を含み得、特定の実施形態において、特定の三次元構造特徴、および／または特定の電荷特徴を有し得る。
【００４８】
用語「モノクローナル抗体」または「Ｍａｂ」は、本明細書において使用する場合、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団の個々の抗体は、微量存在し得る潜在的天然突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、特異性が高く、単一のエピトープに向けられる。このようなモノクローナル抗体は、Ｂ細胞の単一クローンまたはハイブリドーマによって生産され得る。モノクローナル抗体はまた、組換え型であってもよく、すなわち、タンパク質工学または化学合成によって生産され得る。モノクローナル抗体はまた、ファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。加えて、一般に種々の決定基またはエピトープに対する種々の抗体を含むポリクローナル抗体の作製とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原の単一のエピトープに向けられる。本明細書においてモノクローナル抗体は、マウス、キメラおよびヒト化抗体を含む。
【００４９】
用語「キメラ抗体」は、所与の種の抗体に由来する天然可変領域（軽鎖および重鎖）を、前記の所与の種とは異種の抗体の軽鎖および重鎖の定常領域と組み合わせて含む抗体に関する。キメラ抗体は、組換え遺伝学の技術を使用することにより作製することができる。例えば、キメラ抗体は、プロモーター、および非ヒト、特に、マウスモノクローナル抗体の可変領域をコードする配列、および異種、好ましくは、ヒト抗体定常領域をコードする配列を含む組換えＤＮＡをクローニングすることにより作製することができる。このような１つの組換え遺伝子によりコードされる本発明によるキメラ抗体は、例えば、マウス−ヒトキメラであり得、この抗体の特異性はマウスＤＮＡに由来する可変領域により決定され、そのアイソタイプはヒトＤＮＡに由来する定常領域により決定される。
【００５０】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト起源の抗体に由来するＣＤＲ領域を含み、抗体分子の他の部分は１つ（または複数の）ヒト抗体に由来する抗体を意味する。加えて、骨格セグメント残基（ＦＲと呼称される）の一部は、結合親和性を保存するように改変することができる。ヒト化抗体またはそのフラグメントは、当業者に公知の技術によって作製することができる。このようなヒト化抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける予防的および／または治療的処置を含む方法におけるそれらの使用に好ましい。例えば、ＰＤＬにより特許および特許出願ＥＰ０４５１２１６、ＥＰ０６８２０４０、ＥＰ０９３９１２７、ＥＰ０５６６６４７、ＵＳ５，５３０，１０１、ＵＳ６，１８０，３７０、ＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１において記載されている「ＣＤＲグラフティング」技術などの他のヒト化技術も当業者に公知である。米国特許第５，６３９，６４１号、同第６，０５４，２９７号、同第５，８８６，１５２号および同第５，８７７，２９３号も引用することができる。
【００５１】
本明細書において特段の記載がない限り、相補性決定領域またはＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングシステムに従って定義されるような免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域を意味する。
【００５２】
しかしながら、ＣＤＲはまた、Ｋａｂａｔナンバリングシステム(Kabat et al., Sequences of proteins of immunological interest, 第5版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH, 1991、および以降の版)に従って定義することもできる。３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲが存在する。ここで、用語「ＣＤＲ」は、場合によって、それが認識する抗原またはエピトープに対する抗体の結合親和性を担う大多数のアミノ酸残基を含む領域の１以上、またはさらには総てを示すために使用される。本願の解釈を簡単にするために、ＫａｂａｔによるＣＤＲは定義しない。しかしながら、ＩＭＧＴによるＣＤＲの定義を使用して、ＫａｂａｔによるＣＤＲを定義することは当業者に自明である。
【００５３】
本発明の意味において、２つの核酸配列またはアミノ酸配列間の「同一性」または「同一性パーセンテージ」は、最適なアラインメントの後に得られる。比較する２配列間で同一のヌクレオチドまたはアミノ酸残基のパーセンテージを意味し、このパーセンテージは純粋に統計学的なものであり、２配列間の差はそれらの長さに沿ってランダムに分布している。２つの核酸配列またはアミノ酸配列の比較は、慣例的には、それらを最適にアラインした後に配列を比較することによって行われ、前記比較はセグメントによりまたは「アラインメントウィンドウ」の使用により行うことができる。比較のための配列の最適アラインメントは、手による比較に加え、Smith and Waterman (1981) [Ad. App. Math. 2:482]のローカル相同性アルゴリズムの手段、Neddleman and Wunsch (1970) [J. Mol. Biol. 48:443]のローカル相同性アルゴリズムの手段、Pearson and Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444]の類似性検索法の手段、またはこれらのアルゴリズムを用いたコンピューターソフトウエアの手段（Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WIのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡまたは比較ソフトウエアＢＬＡＳＴ  ＮＲもしくはＢＬＡＳＴ  Ｐによる）によって行うことができる。
【００５４】
同一性パーセンテージは、２配列間、好ましくは、２つの完全配列間でアミノ酸ヌクレオチドまたは残基が同一である位置の数を求め、その同一の位置の数をアラインメントウィンドウの位置の総数で割って、その商に１００を掛けて２配列間の同一性パーセンテージを得ることによって計算される。
【００５５】
例えば、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.htmlのサイトで利用可能なＢＬＡＳＴプログラム「ＢＬＡＳＴ２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」(Tatusova et al., “Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences”, FEMS Microbiol., 1999, Lett. 174:247−250)をデフォルトパラメーター（特に、「オープンギャップペナルティー」：５、および「エクステンションギャップペナルティー」：２のパラメーターに関して；選択されるマトリックスは、例えば、このプログラムにより提案されている「ＢＬＯＳＵＭ  ６２」マトリックスである）で使用することができ；比較する２配列間の同一性パーセンテージは、このプログラムにより直接計算される。
【００５６】
「復帰突然変異」という表現は、生殖細胞系に存在するヒト残基の、マウス配列に元々存在する対応する残基による突然変異または置換を意味する。
【００５７】
本明細書において互換的に使用される用語「核酸」、「核配列」、「核酸配列」、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド配列」および「ヌクレオチド配列」は、改変されているまたはされてない、核酸のフラグメントまたは領域を定義する、非天然ヌクレオチドを含むまたは含まない、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡまたは前記ＤＮＡの転写産物である、正確なヌクレオチド配列を意味する。
【００５８】
用語「ペプチド」は、ペプチド（アミド）結合によって互いに連結されたアミノ酸モノマーの鎖に関する。共有ペプチド結合（アミド）は、あるアミノ酸のカルボキシル基（ＣＯＯＨ）と別のアミノ酸のアミノ基（ＮＨ２）を反応させることによって形成される。ペプチドという用語には、オリゴペプチドおよびポリペプチドが含まれる。
【００５９】
用語「タンパク質」は、生物学上機能的な様式で構成されるように翻訳後修飾およびタンパク質折り畳みを受けている、上記に定義されるような１または複数のペプチドの集合体である。
【００６０】
用語「アミノ酸」は、本明細書において使用する場合、Ｄ型またはＬ型の天然α−アミノ酸（例えば、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、システイン（Ｃｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リシン（Ｌｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）およびバリン（Ｖａｌ））、ならびに非天然アミノ酸（例えば、β−アラニン、アリルグリシン、ｔｅｒｔ−ロイシン、３−アミノ−アジピン酸、２−アミノ安息香酸、３−アミノ安息香酸、４−アミノ安息香酸、２−アミノブタン酸、４−アミノ−１−カルボキシメチルピペリジン、１−アミノ−１−シクロブタンカルボン酸、４−アミノシクロヘキサン酢酸、１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸(cyclohexanecarboxyilic acid)、（１Ｒ，２Ｒ）−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ）−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、（１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、（１Ｓ，２Ｓ）−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、３−アミノシクロヘキサンカルボン酸、４−アミノシクロヘキサンカルボン酸、（１Ｒ，２Ｒ）−２−アミノシクロペンタンカルボン酸(aminocyclopentanecarboxyilic acid)、（ｌＲ，２Ｓ）−２−アミノシクロペンタンカルボン酸、１−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸、１−アミノ−１−シクロプロパンカルボン酸、４−（２−アミノエトキシ）−安息香酸、３−アミノメチル安息香酸、４−アミノメチル安息香酸、２−アミノブタン酸、４−アミノブタン酸、６−アミノヘキサン酸、１−アミノインダン−１−カルボン酸、４−アミノメチル−フェニル酢酸、４−アミノフェニル酢酸、３−アミノ−２−ナフトエ酸、４−アミノフェニルブタン酸、４−アミノ−５−（３−インドリル）−ペンタン酸、（４Ｒ，５Ｓ）−４−アミノ−５−メチルヘプタン酸、（Ｒ）−４−アミノ−５−メチルヘキサン酸、（Ｒ）−４−アミノ−６−メチルチオヘキサン酸、（Ｓ）−４−アミノ−ペンタン酸、（Ｒ）−４−アミノ−５−フェニルペンタン酸、４−アミノフェニルプロピオン酸、（Ｒ）−４−アミノピメリン酸、（４Ｒ，５Ｒ）−４−アミノ−５−ヒドロキシヘキサン酸(hyroxyhexanoic acid)、（Ｒ）−４−アミノ−５−ヒドロキシペンタン酸、（Ｒ）−４−アミノ−５−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−ペンタン酸、８−アミノオクタン酸、（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−ピロリジン−２−カルボン酸、（２Ｓ，４Ｓ）−４−アミノ−ピロリジン−２−カルボン酸、アゼチジン−２−カルボン酸、（２Ｓ，４Ｒ）−４−ベンジル−ピロリジン−２−カルボン酸、（Ｓ）−４，８−ジアミノオクタン酸、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン酸、γ−カルボキシグルタマート、β−シクロヘキシルアラニン、シトルリン、２，３−ジアミノプロピオン酸、馬尿酸、ホモシクロヘキシルアラニン、モロイシン(moleucine)、ホモフェニルアラニン、４−ヒドロキシプロリン、インドリン−２−カルボン酸、イソニペコチン酸、α−メチル−��ラニン、ニコペチン酸(nicopetic acid)、ノルロイシン、ノルバリン、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸、オルニチン、ペニシラミン、フェニルグリシン、４−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、ピペコリン酸、プロパルギルグリシン、３−ピリジニルアラニン、４−ピリジニルアラニン、１−ピロリジン−３−カルボン酸、サルコシン、スタチン、テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン酸、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、またはトラネキサム酸）を指す。
【発明の具体的説明】
【００６１】
詳細な説明
リンカー部分
本発明によるリンカー部分は、抗体を少なくとも１つの薬物部分に共有結合的に結合させることができる。
【００６２】
リンカー部分は、「切断不能」または「切断可能」であり得る。
【００６３】
好ましい実施形態において、それは「切断可能」リンカー部分に含まれ、細胞内で薬物の放出を促進する。
【００６４】
例えば、いくつかの実施形態において、リンカーは、細胞内環境（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ内）に存在する切断因子によって切断可能である。リンカーは、例えば、限定されるものではないが、リソソームまたはエンドソームプロテアーゼを含む、細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチジルリンカーであり得る。一般に、ペプチジルリンカーは、少なくとも２つの連続するアミノ酸または少なくとも３つの連続するアミノ酸を含んでなる。切断因子はカテプシンＢおよびＤならびにプラスミンを含み得、これらは総て、標的細胞内でジペプチド薬物誘導体を加水分解して活性薬物の放出をもたらすことが知られている。例えば、癌組織で発現の高いチオール依存性プロテアーゼカテプシン−Ｂにより切断可能なペプチジルリンカー（例えば、Ｐｈｅ−ＬｅｕまたはＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを含んでなるリンカー）が使用可能である。特定の実施形態において、細胞内プロテアーゼにより切断可能なペプチジルリンカーは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−ＬｙｓまたはＶａｌ−Ａｌａを含んでなるか、またはそれである。細胞内タンパク質分解性の薬物放出を用いる１つの利点は、薬物は一般に複合体を形成した場合に減弱され、それらの複合体の血清安定性が一般に高いということである。
【００６５】
基−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−は、必ず存在するリンカー部分のストレッチャー単位を表す。基−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−は、式−Ｌ１’−（ＣＯ−Ｚ’）ｚ’−（ＣＯ）ｃ−の基であり、ここで、ｚ’およびｃは０または１であり、例えば、ｚ’が０である場合には、基−Ｌ１’−（ＣＯ）ｃ−である。好ましくは、ｗおよびｙの少なくとも一方が０でない場合、ｚ’は０であり、他の場合には、ｚ’は０または１である。
【００６６】
Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、ヘテロアリーレン、シクロアルカンジイル、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−アリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘテロアリーレン−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｐ−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−ヘテロアリーレン−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−、または−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−を表す。より詳しくは、アリーレンは、フェニレンであり；シクロアルカンジイルは、シクロヘキサンジイル、例えば、パラ−シクロヘキサンジイルであり；ヘテロアリーレンは、二価１，２，３−トリアゾール、例えば、二価１Ｈ−１，２，３−トリアゾールである。
【００６７】
特定の実施形態によれば、Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、アリーレン、−シクロアルカンジイル−、−（ＣＨ２）ｎ−アリーレン−、−アリーレン−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−シクロアルカンジイル−、−シクロアルカンジイル−（ＣＨ２）ｎ−、
【化２９】
2022502431.tif 000031
を表す。より詳しくは、アリーレンは、フェニレンであり；シクロアルカンジイルは、シクロヘキサンジイル、例えば、パラ−シクロヘキサンジイルである。
【００６８】
別の特定の実施形態によれば、Ｌ１’は、−（ＣＨ２）ｎ−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、特に、−（ＣＨ２）ｎ−、例えば、−（ＣＨ２）５−を表す。
【００６９】
Ｌ１’ストレッチャー単位部分は、ストレッチャー単位部分ＣＯ−Ｚ’で終了することができ、ここで、ｚ’＝１である場合、Ｚ’は、−ＣＯ−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＣＯ−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−である。Ｒ４およびＲ５は独立に、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、例えば、ＨまたはＭｅである。ｕおよびｖは独立に、１〜６、例えば、１〜４の整数、特に、１または２、例えば、２である。
【００７０】
（Ｗ）ｗは、リンカーのアミノ酸単位を表す。
【００７１】
リンカーのアミノ酸単位は、薬物を遊離させるために、限定されるものではないが、腫瘍関連プロテアーゼを含む酵素によって酵素的に切断することができる。
【００７２】
特定の腫瘍関連プロテアーゼによる酵素的切断に対するその選択性においてアミノ酸単位を設計および最適化することができる。好適な単位は、プロテアーゼ、カテプシンＢ、ＣおよびＤ、ならびにプラスミンによって切断が触媒されるものである。
【００７３】
（Ｗ）ｗは存在しなくてもよく（ｗ＝０）、またはジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチド単位であってもよく（ｗ＝１、２、３、４または５）、ここで、ペプチドを形成するアミノ酸は互いに異なり得る。
【００７４】
よって、（Ｗ）ｗは下式：（Ｗ１）ｗ１（Ｗ２）ｗ２（Ｗ３）ｗ３（Ｗ４）ｗ４（Ｗ５）ｗ５により表すことができ、ここで、各Ｗ１〜Ｗ５は互いに独立にアミノ酸単位を表し、各ｗ１〜ｗ５は０または１である。
【００７５】
いくつかの実施形態において、アミノ酸単位（Ｗ）ｗは、天然に存在するもの、ならびに希少アミノ酸および非天然アミノ酸類似体、例えば、シトルリンなどのアミノ酸残基を含んでなり得る。
【００７６】
アミノ酸単位（Ｗ）ｗのアミノ酸残基には、限定されるものではないが、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、プロリン、アセチルまたはホルミルで保護されたまたは保護されていないリシン、アルギニン、トシルまたはニトロ基で保護されたまたは保護されていないアルギニン、ヒスチジン、オルニチン、アセチルまたはホルミル保護されたまたは保護されていないオルニチン、およびシトルリンが含まれる。例示的アミノ酸リンカー成分としては、好ましくは、ジペプチドまたはトリペプチドが含まれる。
【００７７】
例示的ジペプチドとしては、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ｃｉｔ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、およびＰｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、好ましくは、Ｖａｌ−ＣｉｔまたはＶａｌ−Ａｌａが含まれる。
【００７８】
例示的トリペプチドとしては、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓが含まれる。
【００７９】
例示的テトラペプチドとしては、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号５３）、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号５４）が含まれる。
【００８０】
例示的ペンタペプチドとしては、Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ（配列番号５５）が含まれる。
【００８１】
特定の実施形態によれば、（Ｗ）ｗは、ジペプチド（すなわち、ｗ＝２）、例えば、Ｖａｌ−ＣｉｔもしくはＶａｌ−Ａｌａ、好ましくは、Ｖａｌ−Ｃｉｔであり得、またはリンカーは、アミノ酸単位を欠いている（ｗ＝０）。リンカーがアミノ酸単位を欠いている場合、好ましくは、それはスペーサー単位Ｙも欠いている（ｙ＝０）。
【００８２】
好ましい実施形態によれば、ｗ＝０（すなわち、（Ｗ）ｗは一重結合である）またはｗ＝２（すなわち、（Ｗ）ｗはジペプチドである）であり、よって（Ｗ）ｗは、
【化３０】
2022502431.tif 000032
から選択することができ、特に、Ｖａｌ−Ｃｉｔであり、ここで、
アスタリスクは、スペーサー単位（Ｙ）ｙとの結合点を示し；かつ
波線は、−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（ｃ＝１の場合ＣＯまたはｃ＝０の場合Ｌ１）との結合点を示す。
【００８３】
Ｙは、リンカーのスペーサー単位を表す。
【００８４】
スペーサー単位は、２つの一般種のものである：自壊的および非自壊的。
【００８５】
非自壊的スペーサー単位は、抗体薬物複合体からのアミノ酸単位の酵素的切断の後に、スペーサー単位の一部または全部が薬物に結合したままであるものである。非自壊的スペーサー単位の例としては、限定されるものではないが、（グリシン−グリシン）スペーサー単位およびグリシンスペーサー単位が含まれる。薬物を遊離させるためには、グリシン−薬物単位結合を切断するために標的細胞内で、独立した加水分解反応が起こらなければならない。
【００８６】
自壊的スペーサー単位は、別の加水分解工程の必要なく、薬物を放出することができる。これらの実施形態において、（Ｙ）は、ｐ−アミノベンジルアルコール単位（ＰＡＢ）の残基であり、ＰＡＢ基の窒素原子を介して（Ｗ）ｗに連結し、エステル基、炭酸基、カルバミン酸基またはエーテル基を介して薬物に直接接続している。ＰＡＢ部分を含んでなるこのようなリンカーもまた、トレースレスリンカーと考えることができる。
【００８７】
本発明において、スペーサー単位（Ｙ）は、−ＰＡＢ−ＣＯ−（Ｚ）ｚ−であり、ここで、ＰＡＢは、
【化３１】
2022502431.tif 000033
（ＰＡＢ単位の酸素は、カルボニルに連結されている）、−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−とも呼称され、かつ、ｙ＝１であり、またはこのリンカーはスペーサー単位を欠く（ｙ＝０）。
【００８８】
スペーサー−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−はスペーサーＺで終了することができ、スペーサーＺは、ｚ＝１の場合、−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−またはさらには−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−または−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−である。Ｒ４およびＲ５は独立に、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、例えば、ＨまたはＭｅである。ｕおよびｖは独立に、１〜６、例えば、１〜４の整数、特に、１または２、例えば、２である。
【００８９】
有利には、ｗが０の場合、ｙは０であり、ｗが１〜５の整数である場合、ｙは０または１であり、これは、スペーサー単位Ｙはアミノ酸単位Ｗが存在する場合にのみ存在し得ることを意味する。
【００９０】
好ましくは、ｗが０の場合、ｙは０であり、ｗが１〜５の整数である場合、ｙは１であり、これは、スペーサー単位Ｙはアミノ酸単位（Ｗ）ｗが存在する場合に存在し、アミノ単位（Ｗ）ｗが存在しない場合には存在しないことを意味する。
【００９１】
特定の実施形態によれば、基−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−��Ｏ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、-（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、
【化３２】
2022502431.tif 000034
2022502431.tif 000035
2022502431.tif 000036
2022502431.tif 000037
を表す。
【００９２】
基−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−はまた、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−ＣＨ２−パラ−シクロヘキシル−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−アリール−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−または−アリール−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａ
ｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−も表し得る。
【００９３】
別の特定の実施形態によれば、基−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−は、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、-（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−を表し、ここで、ｎおよびｕは従前に定義した通りであり、特に、ｎ＝５およびｕ＝２である。
【００９４】
基−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−はまた、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、-（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−も表し得、ここで、ｎ、ｕおよびｖは従前に定義した通りであり、特に、ｎ＝５およびｕ＝ｖ＝２である。
【００９５】
好ましい実施形態によれば、基−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−は、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−を表し、ここで、ｎおよびｕは従前に定義した通りであり、特に、ｎ＝５およびｕ＝２である。
【００９６】
基−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−はまた、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｕ−ＮＨ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−、または−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−パラ−アミノベンジル−Ｏ−ＣＯ−ＮＣＨ３−（ＣＨ２）ｕ−ＮＣＨ３−ＣＯ−（ＣＨ２）ｖ−ＣＯ−を表し得、ここで、ｎ、ｕおよびｖは従前に定義した通りであり、特に、ｎ＝５およびｕ＝ｖ＝２である。
【００９７】
基
【化３３】
2022502431.tif 000038
、好ましくは、
【化３４】
2022502431.tif 000039
は、抗体などの結合単位と反応させ、前記結合単位上に存在するスルフヒドリル基によって、それに薬物部分を結合させる官能基である。スルフヒドリル基は、存在する場合、特に、抗体の結合単位の分子内ジスルフィド結合の還元によって生成することができる。あるいは、スルフヒドリル基は、結合単位のリシン部分のアミノ基を２−イミノチオランまたはその他のスルフヒドリル生成試薬と反応させることによって生成することもできる。特定の実施形態において、抗体などの結合単位は、１以上のリシンを有するように操作される。より好ましくは、抗体などの結合単位は、以上のシステインを有するように操作することができる（ＴｈｉｏＭａｂｓと比較）。
【００９８】
Ｘ１およびＸ２は、互いに独立に、Ｈ、ハロゲン原子（例えば、ＣｌまたはＢｒ）、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されていてもよいアリールオキシ、または−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨを表し、ただし、Ｘ１およびＸ２は同時にＨを表すことはない。アリールオキシはより詳しくは、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２およびアリールオキシ（例えば、フェニルオキシ）（１または複数のフッ素原子などのハロゲン原子で場合により置換されていてもよい）から選択される１または複数（例えば、１個）の基で場合により置換されていてもよい。特に、アリールオキシは、ＣＮ、ＮＯ２およびペンタフルオロフェニルオキシ（特に、ＣＮで場合により置換されていてもよい）から選択される１または複数（例えば、１個）の基で場合により置換されていてもよい。アリールオキシは、特に、フェニルオキシであり得る。
【００９９】
特定の実施形態によれば、Ｘ１およびＸ２は、互いに独立に、Ｈ、ハロゲン原子（例えば、ＣｌまたはＢｒ）、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシまたは場合により置換されていてもよいアリールオキシを表し、ただし、Ｘ１およびＸ２は同時にＨを表すことはない。アリールオキシはより詳しくは、ハロゲン、ＣＮ、ＮＯ２およびアリールオキシ（例えば、フェニルオキシ）（フッ素原子などの１または複数のハロゲン原子で場合により置換されていてもよい）から選択される１または複数（例えば、１個）の基で場合により置換されていてもよい。特に、アリールオキシは、ＣＮ、ＮＯ２およびペンタフルオロフェニルオキシ（特に、ＣＮで場合により置換されていてもよい）から選択される１または複数（例えば、１個）の基で場合により置換されていてもよい。アリールオキシは、特に、フェニルオキシであり得る。
【０１００】
別の特定の実施形態によれば、Ｘ１およびＸ２は、互いに独立に、Ｈ、Ｃｌ、Ｂｒ、メトキシ、またはＣＮで置換されたフェニルオキシ、特に、Ｈ、ＣｌまたはＢｒを表し、ただし、Ｘ１およびＸ２は同時にＨを表すことはない。
【０１０１】
有利には、Ｘ１およびＸ２は同一であり、かつ、Ｈでなく、またはＸ１およびＸ２の一方はＨであり、他方はＨでない。Ｘ１および／またはＸ２がＨでない場合、それはＣｌまたはＢｒなどのハロゲン原子、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、場合により置換されていてもよいアリールオキシ、または−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨ；特に、ＣｌまたはＢｒなどのハロゲン原子、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシまたは場合により置換されていてもよいアリールオキシ；好ましくは、Ｃｌ、Ｂｒ、メトキシまたはＣＮで置換されたフェニルオキシ；特に、ＣｌまたはＢｒである。
【０１０２】
ｑは、０、１または２を表す。好ましくは、ｑは、２を表す。
【０１０３】
Ｘ３は、最終的に薬物を抗体などの結合単位に共有結合的に連結するために、薬物（ＱＨまたはＱ−ＯＨ）と反応させることを目的とする官能基（ｙ＝ｚ＝１の場合、場合によりＺの末端窒素を有しｃ＝ｗ＝ｙ＝０かつｚ’＝１かつＺ’が−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合、Ｚは−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−であるかまたはＺ’の末端窒素を有する）を表す。
【０１０４】
また、スルホマレイミド官能基を有するストレッチャー単位を連結する前にまず、存在する場合、スペーサー単位Ｙおよびアミノ酸単位（Ｗ）ｗを薬物部分に導入することも想定され得る。この場合、ｗ＝ｙ＝０の（すなわち、ストレッチャー単位とスルホマレイミド官能基のみを含んでなる）式（Ｉ）の化合物が使用され、Ｘ３は、この場合、薬物単位にすでに結合されているアミノ酸単位（Ｗ）ｗまたはスペーサー単位Ｙと反応させる官能基を表す。
【０１０５】
ｙ＝ｚ＝１かつＺが−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合またはｃ＝ｗ＝ｙ＝０、ｚ’＝１かつＺ’が−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である（かつ、ＺまたはＺ’基の末端窒素とともにＮＨ官能基を形成する）場合に、Ｘ３は、Ｈを表し、他の場合には、Ｘ３は、ＯＨ、ＮＨ２または脱離基、例えば、ＯＨまたは脱離基を表す。脱離基は、ハロゲン原子（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、スルホナート（例えば、ＯＴｆ、ＯＭｓ、ＯＴｓ）、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、４−ニトロ−フェニルオキシ、ペンタフルオロフェニルオキシまたはＮ−ベンゾトリアゾロキシであり得る。特に、ｙ＝ｚ＝１かつＺが−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合またはｃ＝ｗ＝ｙ＝０、ｚ’＝１かつＺ’が−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−である場合、Ｘ３は、Ｈを表し、他の場合には、Ｘ３は、より詳しくは、ＯＨ、ＣｌまたはＮ−スクシンイミジルオキシであり得る。
【０１０６】
薬物部分
薬物部分（Ｑ）は、薬物ＱＨまたは薬物Ｑ−ＯＨの残基である。
【０１０７】
本発明による薬物は、ヒト療法または獣医学的療法に、特に、癌の治療のために有用な任意の薬物であり得る。薬物は特に、細胞傷害性薬剤であり得る。有利には、このような薬物は、この薬物をリンカー部分に連結することが可能となるような官能基を含んでなる。また、架橋を行うために薬物上にこのような官能基を付加することも想定され得る。この官能基は、例えば、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨまたはＣＯＯＨであり得、薬物をリンカー部分に連結するためにリンカーのＸ３末端と反応させる。カップリング反応は、例えば、求核置換（例えば、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨまたはＣＯＯＨとＸ３＝脱離基との反応）、ペプチドカップリング（例えば、ＣＯＯＨと、Ｘ３＝ＮＨ２またはＮＨを末端とするＺＸ３もしくはＺ’Ｘ３との反応）、エステル化（ＣＯＯＨとＯＨの間の反応）、光延反応などであり得る。
【０１０８】
薬物部分Ｑは、例えば、以下のものであり得る：
アウリスタチン誘導体の残基、例えば、モノメチルアウリスタチン（ＭＭＡＦ）の残基（その末端ＮＨまたはＣＯＯＨ基により連結されている）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）の残基（その末端ＮＨまたはＯＨ基により連結されている）、モノメチルドラスタチン−１０の残基（その末端ＮＨ基により連結されている）またはその誘導体、例えば、下記で定義されるような式（Ｃ）の薬物部分の残基；
【０１０９】
【表１】
2022502431.tif 000040
【０１１０】
アントラサイクリンの残基、例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシンまたはイダルビシンの残基（−ＣＯＣＨ２ＯＨのＮＨ２基またはＯＨ基により連結されている）、またはその誘導体、例えば、２−ピロリノドキソルビシンまたはプロ−２−ピロリノドキソルビシンの残基（−ＣＯＣＨ２ＯＨのＯＨ基により連結されている）、またはＰＮＵ−１５９６８２の残基（−ＣＯＣＨ２ＯＨのＯＨ基により連結されている）もしくはその誘導体の残基；特に、ドキソルビシンの残基（−ＣＯＣＨ２ＯＨのＮＨ２基またはＯＨ基により連結されている）、２−ピロリノドキソルビシン、プロ−２−ピロリノドキソルビシンの残基（−ＣＯＣＨ２ＯＨのＯＨ基により連結されている）またはＰＮＵ−１５９６８２の残基（−ＣＯＣＨ２ＯＨのＯＨ基により連結されている）もしくは特に以下に示されるようなＰＮＵ−１５９６８２の誘導体の残基；好ましくは、ＰＮＵ−１５９６８２の残基（−ＣＯＣＨ２ＯＨのＯＨ基により連結されている）基または以下に示されるようなＰＮＵ−１５９６８２誘導体の残基（ＣＯＯＨにより連結されている）；
【０１１１】
【表２】
2022502431.tif 000041
2022502431.tif 000042
【０１１２】
カンプトテシンまたはその誘導体、例えば、ＳＮ−３８の残基（そのＯＨ基により連結されている）；
【０１１３】
【表３】
2022502431.tif 000043
【０１１４】
チューブリシン、例えば、チューブリシンＡ、チューブリシンＢ、チューブリシンＣまたはチューブリシンＤの残基（存在する場合、ＣＯＯＨ基またはＯＨ基により連結されている）；
【０１１５】
【表４】
2022502431.tif 000044
【０１１６】
カリケアマイシン、例えば、エスペラミシンもしくはカリケアマイシンγ１、またはその誘導体、例えば、Ｎ−アセチルジメチルヒドラジドカリケアマイシンの残基（そのヒドラジド部分により連結されている）；
【０１１７】
【表５】
2022502431.tif 000045
【０１１８】
メイタンシノイド、例えば、メイタンシン（メイタンシンとも呼称）またはその誘導体、例えば、ＤＭ１またはＤＭ４の残基（ＳＨ基により連結されている）；特に、ＤＭ１またはＤＭ４の残基（ＳＨ基により連結されている）；
【０１１９】
【表６】
2022502431.tif 000046
【０１２０】
デュオカルマイシン、例えば、デュオカルマイシンＡ、デュオカルマイシンＢ１、デュオカルマイシンＢ２、デュオカルマイシンＣ１、デュオカルマイシンＣ２、デュオカルマイシンＤ、デュオカルマイシンＳＡ、またはＣＣ−１０６５の残基（ＣＯＮＨ２基により連結されている）；特に、ＣＣ−１０６５の残基（ＣＯＮＨ２基により連結されている）；
【０１２１】
【表７】
2022502431.tif 000047
【０１２２】
アマニチンの残基（ＯＨ、ＮＨ、ＣＯＯＨまたはＣＯＮＨ２基、特に、ＯＨ基により連結されている）、例えば、α−アマニチン、β−アマニチン、γ−アマニチンまたはε−アマニチンの残基；特に、α−アマニチンの残基（特に、ＣＨ２ＯＨ基により連結されている）；
【０１２３】
【表８】
2022502431.tif 000048
2022502431.tif 000049
【０１２４】
ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、例えば、アントラマイシンの残基（そのＯＨまたはＮＨ２基により連結されている）またはＳＧＤ−１８８２の残基（そのＮＨ２基により連結されている）；特に、ＳＧＤ−１８８２の残基（そのＮＨ２基により連結されている）；
【０１２５】
【表９】
2022502431.tif 000050
【０１２６】
免疫チェックポイントの活性剤の残基、例えば、有利には以下に定義されるような式（Ｄ）のＳＴＩＮＧ（インターフェロン遺伝子刺激剤）アゴニストの残基（ＯＨ、ＳＨまたはＮＨにより連結されている）またはＩＤＯ（インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ）阻害剤、例えば、エパカドスタット（ＩＮＣＢ０２４３６０）またはＢＭＳ−９８６２０５の残基。
【０１２７】
有利には、薬物部分Ｑは、以下のものである：
アウリスタチン誘導体の残基、例えば、ＭＭＡＦの残基（その末端ＮＨまたはＣＯＯＨ基により連結されている）、ＭＭＡＥの残基（その末端ＮＨまたはＯＨ基により連結されている）、またはモノメチルドラスタチン−１０の残基（その末端ＮＨ基により連結されている）または以下に定義されるような式（Ｃ）の薬物部分の残基；
ＳＴＩＮＧアゴニスト、特に、以下に定義されるような式（Ｄ）の残基；あるいは
上記に定義されるものなどのアントラサイクリンの残基、および好ましくは、以下に示されるようなＰＮＵ−１５９６８２またはその誘導体の残基：
【０１２８】
【表１０】
2022502431.tif 000051
【０１２９】
薬物部分Ｑは特に、上記に定義されるようなアントラサイクリンの残基、および好ましくは、以下に示されるようなＰＮＵ−１５９６８２またはその誘導体の残基：
【０１３０】
【表１１】
2022502431.tif 000052
【０１３１】
第１の実施形態によれば、アウリスタチン誘導体の残基は下式（Ｃ）：
【化３５】
2022502431.tif 000053
を有し、式中、
Ｒ１はＨまたはＯＨであり、
Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、メチル）、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）（例えば、ＣＯＯＭｅ）またはチアゾリル（例えば、チアゾール−２−イル）であり、
Ｒ３は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、メチル）、特に、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基であり、
Ｘ４は、ＯまたはＮＲ９であり、
Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル（例えば、メチル）であり、かつ
ｔは、１〜８、特に、１〜６、有利には、１〜４の整数であり、好ましくは、１または２である。
【０１３２】
特定の実施形態によれば、
Ｒ１は、ＯＨであり、かつ、Ｒ２は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、例えば、メチルであり；または
Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、チアゾリル、例えば、チアゾール−２−イル、ＣＯＯ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、例えば、ＣＯＯＭｅ、もしくはＣＯＯＨである。
【０１３３】
有利には、Ｒ１は、Ｈであり、かつ、Ｒ２は、チアゾリル、例えば、チアゾール−２−ｙｌ、ＣＯＯ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、例えば、ＣＯＯＭｅ、またはＣＯＯＨである。好ましくは、Ｒ１は、Ｈであり、かつ、Ｒ２は、ＣＯＯＨまたはＣＯＯＭｅ、特に、ＣＯＯＨである。
【０１３４】
ｔは、１〜８、特に、１〜６、有利には、１〜４の整数であり、好ましくは、１または２である。
【０１３５】
有利には、Ｒ３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル基、好ましくは、メチル基である。
【０１３６】
特定の実施形態によれば、Ｒ１は、Ｈであり、Ｒ２は、ＣＯＯＨまたはＣＯＯＭｅ（好ましくは、ＣＯＯＨ）であり、Ｒ３は、メチルであり、かつ、ｔは、１または２である。
【０１３７】
有利には、Ｘ４はＮＲ９であり、ここで、Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、好ましくは、Ｈまたはメチルである。
【０１３８】
好ましい実施形態において、
Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＣＯＯＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｘ４はＮＲ９であり、Ｒ９はメチルであり、かつ、ｔは１または２であるか、または
Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＣＯＯＨであり、Ｒ３はメチルであり、Ｘ４はＮＲ９であり、Ｒ９はＨであり、かつ、ｔは１または２である。
【０１３９】
好ましい実施形態によれば、Ｘ４基は、フェニル環上の、（ＣＨ２）ｔ基に対してパラ位にある。
【０１４０】
有利には、式（Ｃ）のアウリスタチンの残基は、以下の部分の中から選択される。
【化３６】
2022502431.tif 000054
2022502431.tif 000055
2022502431.tif 000056
【０１４１】
このようなアウリスタチン誘導体の作製は、例えば、ＷＯ２０１４／１７４０６４またはＷＯ２０１５／１６２２９３に開示されている。
【０１４２】
第２の実施形態によれば、ＳＴＩＮＧアゴニストは、下式（Ｘ）：
【化３７】
2022502431.tif 000057
を有し、式中、
Ｘ１１およびＸ２１は独立に、ＯまたはＳ、好ましくは、Ｏであり、
Ｘ１２およびＸ２２は独立に、ＯＨまたはＳＨ、好ましくは、ＳＨであり、
Ａ１１およびＡ２１は独立に、式：
【化３８】
2022502431.tif 000058
好ましくは、
【化３９】
2022502431.tif 000059
の基であり、ここで、
・Ｚ１は、ＯＲ１１またはＮＲ１１Ｒ１２であり、ここで、Ｒ１１およびＲ１２は独立に、Ｈ、Ｒ１３またはＣＯＲ１３であり、ここで、Ｒ１３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールまたはアリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
・Ｚ２は、ＨまたはＮＲ２１Ｒ２２であり、ここで、Ｒ２１およびＲ２２は独立に、Ｈ、Ｒ２３またはＣＯＲ２３であり、ここで、Ｒ２３は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリールまたはアリール（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
・Ｚ３は、ＮまたはＣＲ３３、好ましくは、Ｎであり、ここで、Ｒ３３は、Ｈまたはハロゲン原子、例えば、ＦまたはＣｌであり、かつ
・Ｚ４は、Ｈまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり、
Ａ１２およびＡ２２は独立に、Ｈ、ＯＨまたはＦであり、かつ
Ａ２はＨであり、またはＡ２およびＡ２２は相互に連結され、ここで、Ａ２はＣＨ２であり、Ａ２２はＯである。
【０１４３】
Ｚ１がＯＨであるか、またはＺ４がＨである場合、以下の互変異性形が得られる。
【化４０】
2022502431.tif 000060
【０１４４】
特定の実施形態によれば、ＳＴＩＮＧアゴニストは下式のうちの１つを有する：
【化４１】
2022502431.tif 000061
（式中、Ｘ１１、Ｘ２１、Ｘ１２、Ｘ２２、Ａ１１、Ａ２１、Ａ１２、Ａ２２およびＡ２は上記または下記に定義される通り）。
【０１４５】
別の特定の実施形態によれば、ＳＴＩＮＧアゴニストは下式のうちの１つを有する：
【化４２】
2022502431.tif 000062
（式中、Ｘ１１、Ｘ２１、Ｘ１２、Ｘ２２、Ａ１１、Ａ２１、Ａ１２、Ａ２２およびＡ２上記または下記に定義される通り）。
【０１４６】
有利には、Ｘ１１およびＸ２１は両方ともＯである。有利には、Ｘ１２およびＸ２２の少なくとも一方はＳＨであり、好ましくは、Ｘ１２およびＸ２２は両方ともＳＨである。好ましくは、Ｘ１１およびＸ２１は両方ともＯであり、かつ、Ｘ１２およびＸ２２は両方ともＳＨである。
【０１４７】
特に、Ｒ１１およびＲ１２は両方ともＨであり、有利には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ２１およびＲ２２はそれぞれＨである。
【０１４８】
Ｚ３は特にＮである。有利には、Ｚ１は、ＯＨまたはＮＨ２であり；Ｚ２は、またはＮＨ２であり；Ｚ３はＮであり；かつＺ４はＨである。
【０１４９】
好ましくは、Ａ１１およびＡ２１は独立に、
【化４３】
2022502431.tif 000063
から選択され、より好ましくは、シトシン、アデニン、アデニン−６−ベンズアミド、２，６−ジアミノプリン、ヒポキサンチン、グアニンおよびグアニン−２−イソブチラミドから選択され；最も好ましくは、アデニン、ヒポキサンチンおよびグアニンから選択される。
【０１５０】
それは特に下式のＡＤＵ−Ｓ１００であり得る。
【化４４】
2022502431.tif 000064
【０１５１】
あるいは、それは特に、Lioux et al. J. Med. Chem., 2016, 59 (22), pp 10253−10267に具体的に開示されている化合物のうちの１つであり得る。
【０１５２】
このようなＳＴＩＮＧアゴニストの作製は、例えば、ＷＯ２０１４／１７９３３５、ＷＯ２０１６／０９６１７４、ＷＯ２０１６／１４５１０２、ＷＯ２０１７／１０６７４０またはＷＯ２０１８／１００５５８に開示されている。
【０１５３】
前記ＳＴＩＮＧアゴニストは、分子に存在するＳＨ、ＯＨまたはＮＨ基により、すなわち、基Ｘ１２（ＯＨまたはＳＨ）、Ｘ２２（ＯＨまたはＳＨ）、Ｒ１１およびＲ１２の少なくとも一方がＨである場合にはＺ１（ＯＨ、ＮＨＲ１１またはＮＨＲ１２）、またはＲ２１およびＲ２２の少なくとも一方がＨである場合にはＺ２（ＮＨＲ２１またはＮＨＲ２２）によりリンカー部分に連結されている。好ましくは、Ｘ１２およびＸ２２の少なくとも一方はＳＨであり、ＳＴＩＮＧアゴニストはこのＳＨ基により連結されている。
【０１５４】
結論として、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、有利には、下式（Ｄ）、（Ｄ−１）、（Ｄ−２）、（Ｄ−３）、（Ｄ−１ａ）、（Ｄ−２ａ）または（Ｄ−３ａ）：
【化４５】
2022502431.tif 000065
を有し、式中、
Ｘ１１およびＸ２１は上記に定義される通りであり、
Ｘ１２およびＸ２２は上記に定義される通り、またはＯもしくＳであり、
Ａ１１およびＡ２１は上記に定義される通り、すなわち、独立に式：
【化４６】
2022502431.tif 000066
の基、好ましくは、
【化４７】
2022502431.tif 000067
であり、式中、
・Ｚ１は上記に定義される通り、またはＯもしくはＮＲ１１であり、
・Ｚ２は上記に定義される通り、またはＮＲ２１であり、
・Ｚ３は上記に定義される通りであり、かつ
・Ｚ４は上記に定義される通りであり、
Ａ１２およびＡ２２は上記に定義される通りであり、かつ
Ａ２は上記に定義される通りであり、
ここで、
・Ｘ１２がＯまたはＳである場合、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、Ｏでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｘ１２によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｘ２２がＯまたはＳである場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、Ｏでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｘ２２によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｚ１がＯまたはＮＲ１１である場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｏでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｚ１によって分子の残りの部分に連結されており；
・Ｚ２がＮＲ２１である場合、Ｘ１２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｘ２２はＯでなく、かつ、Ｓでなく、Ｚ１はＯでなく、かつ、ＮＲ１１でなく、ＳＴＩＮＧアゴニストの残基は、Ｚ２によって分子の残りの部分に連結されている。
【０１５５】
結合単位部分
結合単位は、ペプチド、タンパク質（例えば、操作タンパク質）、抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメントである。
【０１５６】
好ましくは、本発明による結合単位は、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、従って、本発明による結合単位薬物複合体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）である。ある実施形態において、本発明の抗体は、組換え抗体からなる。別の実施形態において、本発明のＡＤＣの抗体は、化学的に合成された抗体からなる。
【０１５７】
より詳しくは、このような分子は、ジスルフィド結合により相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖を含んでなる糖タンパク質からなる。各重鎖は、重鎖可変領域（またはドメイン）（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略される）および重鎖定常領域を含んでなる。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含んでなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略される）および軽鎖定常領域を含んでなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬを含んでなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が挿入されている。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含む宿主の組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【０１５８】
ある実施形態において、「抗原結合フラグメント」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（ｓｃは一本鎖を表す）、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ−Ｆｃフラグメントまたはダイアボディ、あるいはポリ（アルキレン）グリコール、例えば、ポリ（エチレン）グリコールの付加（「ＰＥＧ化」）（Ｆｖ−ＰＥＧ、ｓｃＦｖ−ＰＥＧ、Ｆａｂ−ＰＥＧ、Ｆ（ａｂ’）２−ＰＥＧもしくはＦａｂ’−ＰＥＧと呼ばれるＰＥＧ化フラグメント）（「ＰＥＧ」はポリ（エチレン）グリコールを表す）などの化学修飾により、またはリポソームへの組み込みによりその半減期が延長された任意のフラグメントからなる群から選択され、前記フラグメントは本発明による抗体の特徴的なＣＤＲのうち少なくとも１つを有する。好ましくは、前記「抗原結合フラグメント」は、それらが由来する抗体の可変重鎖または可変軽鎖の部分配列から構成されるか、または前記部分配列を含んでなり、前記部分配列は、標的に対して、それが派生した抗体と同じ結合特異性、かつ、好ましくは、それが派生した抗体の親和性の少なくとも１／１００、より好ましい様式では、少なくとも１／１０に相当する十分な親和性を保持するのに十分である。より好ましくは、前記「抗原結合フラグメント」は、それらが由来する抗体の可変重鎖の少なくとも３つのＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３と可変軽鎖の３つのＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３から構成されるか、またはそれらを含んでなる。
【０１５９】
好ましい実施形態によれば、結合単位は、ＩＧＦ−１Ｒ抗体、ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０１６０】
ＨＥＲ２抗体は、より詳しくは、トラスツズマブである。
【０１６１】
本願のある実施形態において、抗体は、ＩＧＦ−１Ｒ抗体であり、抗体のエピトープは、優先的には、ヒトＩＧＦ−１Ｒの細胞外ドメイン（ＩＧＦ−１Ｒ  ＥＣＤとも呼ばれる）に位置する。
【０１６２】
特定の実施形態において、抗体、またはその任意の抗原結合フラグメントは、１０×１０−１０〜１×１０−１０、より優先的には、８×１０−１０〜２×１０−１０の間に含まれるＥＣ５０で、ＩＧＦ−１Ｒに結合することができる。
【０１６３】
ＩＧＦ−１Ｒとの結合に関する競合は、限定されるものではないが、放射能、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーなどの当業者に公知の任意の方法または技術によって決定することができる。「ＩＧＦ−１Ｒとの結合に関して競合する」場合、それは少なくとも２０％、優先的には、少なくとも５０％、より優先的には、少なくとも７０％の競合を意味する。
【０１６４】
同じエピトープへの結合の決定は、限定されるものではないが、放射能、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリーなどの当業者に公知の任意の方法または技術によって行うことができる。「ＩＧＦ−１Ｒの同じエピトープに結合する」場合、それは少なくとも２０％、優先的には、少なくとも５０％、より優先的には、少なくとも７０％の競合を意味する。
【０１６５】
上述のように、一般的な知見とは対照的に、本発明は、ＩＧＦ−１Ｒ結合の後に内部移行される高い能力を示す特異的ＩＧＦ−１Ｒ抗体に注目する。本明細書において使用する場合、「内部移行される」または「内部移行された」（これら２つの表現は同等である）抗体は、哺乳動物細胞上のＩＧＦ−１Ｒに結合した際に細胞によって取り込まれる（それが進入することを意味する）ものである。このような抗体はＡＤＣの一部として関心が寄せられ、従って、それは連結された細胞傷害性を標的癌細胞にアドレスを指定する、または向ける。ひと度、内部移行されれば、細胞傷害性が癌細胞の死滅を誘発する。
【０１６６】
有利には、本発明によるＩＧＦ−１Ｒ抗体は、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ２については総て同じ配列を示し、他の３つのＣＤＲは異なる。抗体の結合特異性に関して、ＣＤＲ−Ｈ３は最も重要であり、エピトープの認識に最も関連があると記載されていることは一般知識の一部であるので、この所見は一貫していると思われる。
【０１６７】
ＡＤＣ療法による成功の重要な鍵は、標的抗原特異性と抗原抗体複合体の癌細胞への内部移行であると思われる。明らかに内部移行しない抗原は、内部移行する抗原よりも細胞傷害性薬剤を送達する効果が低い。内部移行プロセスは抗原によって異なり、抗体により影響を受け得る複数のパラメーターに依存する。
【０１６８】
ＡＤＣにおいて、薬物部分は細胞傷害活性を付与し、使用する抗体は癌細胞に対する特異性を担うとともに、細胞傷害性を正しくアドレス指定するために細胞内に進入させるためのベクターである。よって、ＡＤＣを改良するために、抗体は標的癌細胞への高い内部移行能を示し得る。抗体により媒介される内移行の効率は、標的化されるエピトープによって著しく異なる。強力な内部移行性ＩＧＦ−１Ｒ抗体の選択は、ＩＧＦ−１Ｒの下方調節だけでなく、その後の細胞へのＩＧＦ−１Ｒ抗体の内部移行も研究する様々な実験データを必要とする。
【０１６９】
ある実施形態において、本発明によるＡＤＣの抗体の内部移行は、免疫蛍光もしくはＦＡＣＳ（フローサイトメトリー）（本願の以下に例示される通り）または内部移行機構を専門とする当業者に公知のいずれかの方法またはプロセスによって評価することができる。好ましい実施形態において、本発明によるＡＤＣの抗体は、少なくとも３０％、優先的には５０％およびより優先的には８０％のＩＧＦ−１Ｒと結合した後に内部移行を誘導し得る。
【０１７０】
複合体ＩＧＦ−１Ｒ／抗体は、抗体が前記ＩＧＦ−１ＲのＥＣＤに結合した後に内部移行され、細胞表面のＩＧＦ−１Ｒの量の減少が誘導される。この減少は、限定されない例としてのウエスタンブロット、ＦＡＣＳ、および免疫蛍光などの当業者に公知のいずれかの方法によって定量することができる。
【０１７１】
１つの実施形態において、ひいては内部移行を反映するこの減少は、好ましくは、ＦＡＣＳにより測定され、抗体との４時間のインキュベーション後の、４℃で測定される平均蛍光強度（ＭＦＩ）と３７℃で測定されるＭＦＩの間の差異またはΔとして表すことができる。
【０１７２】
限定されない例として、このΔは、ｉ）本明細書に記載の抗体との４時間のインキュベーション期間の後の乳癌細胞ＭＣＦ７およびｉｉ）Ａｌｅｘａ４８８で標識された二次抗体を用い、非処理細胞と抗体で処理された細胞で得られたＭＦＩに基づいて決定される。このパラメーターは、下式：Δ（ＭＦＩ４℃−ＭＦＩ３７℃）で計算されると定義される。
【０１７３】
このＭＦＩ間の差異は、ＭＦＩが胞表面に発現されるＩＧＦ−１Ｒに比例することから、ＩＧＦ−１Ｒの下方調節を反映する。
【０１７４】
ある有利な側面において、抗体は、ＭＣＦ−７に対するΔ（ＭＦＩ４℃−ＭＦＩ３７℃）として少なくとも２８０、好ましくは、少なくとも４００を誘導する抗体からなる。
【０１７５】
より詳細には、上述のΔは、以下の工程に従って測定することができるが、これらは例示的で限定されない例であると考えなければならない：
ａ）対象とする腫瘍細胞を冷（４℃）または温（３７℃）いずれかの完全培養培地中で、本発明の抗体で処理およびインキュベートする；
ｂ）工程ａ）の処理細胞および並行して非処理細胞を二次抗体で処理する；
ｃ）処理細胞および非処理細胞のＭＦＩ（表面に存在するＩＧＦ−１Ｒの量の典型）を、本発明の抗体に結合し得る二次標識抗体を用いて測定する；ならびに
ｄ）非処理細胞で得られたＭＦＩから処理細胞で得られたＭＦＩを差し引いたものとしてΔを計算する。
【０１７６】
このΔＭＦＩから、内部移行パーセンテージを、
１００×（ＭＦＩ４℃−ＭＦＩ３７℃）／ＭＦＩ４℃
として計算することができる。
【０１７７】
本発明によるＡＤＣの抗体は、好ましくは、ＭＣＦ７に対して、５０％〜９９％、７０％〜９０％、優先的には７５％〜８７％の間に含まれる内部移行パーセンテージを示す。
【０１７８】
本明細書に記載の抗体の特定の利点は、それらの内部移行率によるものである。
【０１７９】
一般に、ＡＤＣに関して、使用する抗体は抗体の投与から好ましくは２４時間以内、より好ましくは１２時間以内、いっそうより好ましくは６時間以内という迅速な内部移行を示すことが望ましいと知られている。
【０１８０】
本発明において、内部移行率は、細胞表面結合抗体減少または細胞表面抗体減衰とも呼ばれ、ｔ１／２（半減期）として表され、これは、ΔＭＦＩの５０％の低下を得るために必要な時間に相当する（この側面は、以下の例に関して明瞭に理解されるであろう）。
【０１８１】
特定の利点は、本発明のＡＤＣの抗体が５〜２５分、優先的には１０〜２０分の間に含まれるｔ１／２を有するということである。
【０１８２】
本発明の特定の実施形態によれば、抗体は、配列番号１、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４、５および６の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる。
【０１８３】
本発明の特定の実施形態によれば、抗体は、配列番号１、２および３の配列、または配列番号１、２もしくは３と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列を含んでなるまたはからなる３つの重鎖ＣＤＲ；ならびに配列番号４、５および６の配列、または配列番号４、５もしくは６と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列を含んでなるまたはからなる３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる。
【０１８４】
本発明の特定の実施形態によれば、結合単位は、
ｉ）配列番号２の配列のＣＤＲ−Ｈ２および配列番号３の配列のＣＤＲ−Ｈ３を有する３つの重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５の配列のＣＤＲ−Ｌ２を有する３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｉｉ）ＩＧＦ−１Ｒとの結合に関してｉ）の抗体と競合する抗体；ならびに
ｉｉｉ）ＩＧＦ−１Ｒの、ｉ）の抗体と同じエピトープに結合する抗体
から選択される、ヒトＩＧＦ−１Ｒに結合し得る抗体、またはその抗原結合フラグメントである。
【０１８５】
本発明の特定の実施形態によれば、結合単位は、
ｉ）配列番号１、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４、５および６の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｉｉ）ＩＧＦ−１Ｒとの結合に関してｉ）の抗体と競合する抗体；ならびに
ｉｉｉ）ＩＧＦ−１Ｒの、ｉ）の抗体と同じエピトープに結合する抗体
から選択される、ヒトＩＧＦ−１Ｒに結合し得る抗体、またはその抗原結合フラグメントである。
【０１８６】
別の実施形態において、抗体、またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１、２および３の配列を含んでなる３つの重鎖ＣＤＲ；ならびに配列番号４、５および６の配列を含んでなる３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる。
【０１８７】
ＩＭＧＴ独自ナンバリングは、抗原受容体、鎖のタイプ、または種が何であれ、可変ドメインを比較するために定義されたものである[Lefranc M.-P., Immunology Today 18, 509 (1997) / Lefranc M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999) / Lefranc, M.-P., Pommie, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V. and Lefranc, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]。ＩＭＧＴ独自ナンバリングでは、例えば、システイン２３（１ｓｔ−ＣＹＳ）、トリプトファン４１（ＣＯＮＳＥＲＶＥＤ−ＴＲＰ）、疎水性アミノ酸８９、システイン１０４（２ｎｄ−ＣＹＳ）、フェニルアラニンまたはトリプトファン１１８（Ｊ−ＰＨＥまたはＪ−ＴＲＰ）など、保存されているアミノ酸は常に同じ位置を有する。ＩＭＧＴ独自ナンバリングは、フレームワーク領域（ＦＲ１−ＩＭＧＴ：１〜２６番、ＦＲ２−ＩＭＧＴ：３９〜５５番、ＦＲ３−ＩＭＧＴ：６６〜１０４番およびＦＲ４−ＩＭＧＴ：１１８〜１２８番）および相補性決定領域：ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ：２７〜３８番、ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ：５６〜６５番およびＣＤＲ３−ＩＭＧＴ：１０５〜１１７番の標準的な画定を提供する。ギャップは占有されていない位置を表すので、ＣＤＲ−ＩＭＧＴ長（括弧の間にドットで区切られて示される、例えば、［８．８．１３］）は、重要な情報となる。ＩＭＧＴ独自ナンバリングは、ＩＭＧＴ  Ｃｏｌｌｉｅｒｓ  ｄｅ  Ｐｅｒｌｅｓ[Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002) / Kaas, Q. and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)]として表される２ＤグラフおよびＩＭＧＴ／３Ｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ＤＢ[Kaas, Q., Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)]における３Ｄ構造で使用される。
【０１８８】
参照アミノ酸配列と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示すアミノ酸配列では、好ましい例としては、参照配列、特定の改変、特に、少なくとも１つのアミノ酸の欠失、付加もしくは置換、末端切断または延長を含むものが含まれる。１以上の保存的または非保存的アミノ酸の置換の場合、置換アミノ酸が「等価な」アミノ酸で置き換わる置換が好ましい。ここで、「等価なアミノ酸」という表現は、対応する抗体の、および以下に定義される特定の例の生物活性を変更することなく構造的アミノ酸の１つに関して置換され得るいずれのアミノ酸も示すことを意味する。
【０１８９】
等価なアミノ酸は、置換されるアミノ酸との構造的相同性または生成され得る種々の抗体間の生物活性の比較試験の結果に基づいて決定することができる。
【０１９０】
限定されない例として、下表１に対応する改変抗体の生物活性に有意な変更をもたらさずに実施され得る可能性のある置換をまとめる；同じ条件下で逆の置換も当然可能である。
【０１９１】
【表１２】
2022502431.tif 000068
【０１９２】
本発明の特定の側面は、抗体がインスリン受容体（ＩＲ）に結合しないというものである。この側面は、本明細書に記載の抗体がＩＲ、すなわち、インスリン代謝に悪影響を示さないので注目される。
【０１９３】
別の実施形態において、この抗体のさらに別の利点は、それがヒトＩＧＦ−１Ｒにだけでなく、サルＩＧＦ−１Ｒ、より詳しくは、カニクイザルＩＧＦ−１Ｒにも結合し得ることである。この側面も、臨床試験に要される毒性評価を助けるので注目される。
【０１９４】
さらに別の実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体からなる。本明細書のモノクローナル抗体としては、後述されるものなどのマウス、キメラおよびヒト化抗体が含まれる。
【０１９５】
抗体は、好ましくは、Ｆｒｅｎｃｈ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＮＣＭ、パスツール研究所、２５  ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ、７５７２４  Ｐａｒｉｓ  Ｃｅｄｅｘ  １５、フランス）に提出されたマウス起源のハイブリドーマに由来し、前記ハイブリドーマは、Ｂａｌｂ／Ｃ免疫マウス脾細胞／リンパ球と骨髄腫Ｓｐ２／Ｏ−Ａｇ  １４細胞株の細胞の融合により得られたものである。
【０１９６】
ある実施形態において、ＩＧＦ−１Ｒ抗体はマウス抗体からなり、従って、ｍ［抗体の名称］として呼称される。
【０１９７】
ある実施形態において、ＩＧＦ−１Ｒ抗体はキメラ抗体からなり、従ってｃ［抗体の名称］、として呼称される。
【０１９８】
ある実施形態において、ＩＧＦ−１Ｒ抗体はヒト化抗体からなり、従って、ｈｚ［抗体の名称］として呼称される。
【０１９９】
疑念を避けるため、以下の明細書では、「ＩＧＦ−１Ｒ抗体」および「［抗体の名称］」という表現は同等であり、（特段の断りがない限り）前記ＩＧＦ−１Ｒ抗体または前記「［抗体の名称］」のマウス、キメラおよびヒト化型を含む。必要であれば、接頭辞ｍ−（マウス）、ｃ−（キメラ）またはｈｚ−（ヒト化）が使用される。
【０２００】
より明瞭にするために、下表２に、好ましい抗体に関して、ＩＭＧＴにより定義されるＣＤＲ配列を示す。
【０２０１】
【表１３】
2022502431.tif 000069
【０２０２】
上記のような６つのＣＤＲのいずれの組合せも本発明の一部と見なされるべきであることは当業者には明らかであろう。
【０２０３】
この表２から見て取れるように、本明細書に記載の抗体は総て、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３およびＣＤＲ−Ｌ２に関して同じ配列を有し、この特性は、上記のように特に注目されるものである。
【０２０４】
特定の側面によれば、抗体は、前記抗体がマウスとは異種の、特に、ヒトの抗体に由来する軽鎖および重鎖定常領域も含んでなることを特徴とするマウス抗体である。
【０２０５】
別の特定の側面によれば、抗体は、前記抗体がマウスとは異種の、特に、ヒトの抗体に由来する軽鎖および重鎖定常領域も含んでなることを特徴とするキメラ（ｃ）抗体である。
【０２０６】
キメラ抗体は、所与の種の抗体に由来する天然可変領域（軽鎖および重鎖）を前記所与の種とは異種の抗体の軽鎖および重鎖の定常領域と組み合わせて含むものである。
【０２０７】
キメラ抗体は、組換え遺伝学の技術を使用することにより作製することができる。例えば、キメラ抗体は、プロモーターおよび非ヒトモノクローナル抗体、特に、マウスの可変領域をコードする配列、および異種、好ましくは、ヒト抗体定常領域をコードする配列を含む組換えＤＮＡをクローニングすることにより作製され得る。１つのこのような組換え遺伝子によりコードされる本発明によるＡＤＣのキメラ抗体は、例えば、マウス−ヒトキメラであり得、この抗体の特異性は、マウスＤＮＡに由来する可変領域により決定され、そのアイソタイプはヒトＤＮＡに由来する定常領域により決定される。
【０２０８】
本発明のある実施形態によれば、抗体は、
ａ）配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｂ）配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号１０、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｃ）配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号９、５および１２の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｄ）配列番号８、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２０９】
限定されるものではないが、好ましい実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号１３の配列または配列番号１３と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｂ）配列番号１４の配列または配列番号１４と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号１０、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｃ）配列番号１５の配列または配列番号１５と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１２の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｄ）配列番号１６の配列または配列番号１６と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲと含んでなる抗体；ならびに
ｅ）配列番号１７の配列または配列番号１７と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１２の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２１０】
「配列番号１３〜１７と少なくとも８０％、好ましくは、８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列」とは、番号１、２および３の３つの重鎖ＣＤＲを示し、それに加えて、ＣＤＲに相当する配列（すなわち、配列番号１、２および３）以外の全配列配列番号１３〜１７と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す配列を表すことが意図される。
【０２１１】
本発明のある実施形態によれば、抗体は、
ａ）配列番号１３の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｂ）配列番号１４の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号１０、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｃ）配列番号１５の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１２の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｄ）配列番号１６の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｅ）配列番号１７の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１２の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２１２】
限定されるものではないが、別の好ましい実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号１８の配列または配列番号１８と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｂ）配列番号１９の配列または配列番号１９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｃ）配列番号２０の配列または配列番号２０と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｄ）配列番号２１の配列または配列番号２１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号８、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｅ）配列番号２２の配列または配列番号２２と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２１３】
「配列番号１８〜２２と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列」とは、配列番号４、５および６の３つの軽鎖ＣＤＲを示し、それに加えて、ＣＤＲに相当する配列（すなわち、配列番号４、５および６）以外の配列番号１８〜２２の全長配列と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す配列をそれぞれ表すことが意図される。
【０２１４】
本発明のある実施形態によれば、抗体は、
ａ）配列番号１８の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｂ）配列番号１９の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｃ）配列番号２０の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｄ）配列番号２１の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号８、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｅ）配列番号２２の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２１５】
本発明のある実施形態によれば、抗体は、
ａ）配列番号１３の配列または配列番号１３と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、および配列番号１８の配列または配列番号１８と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメインを含んでなる抗体；
ｂ）配列番号１４の配列または配列番号１４と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、および配列番号１９の配列または配列番号１９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメインを含んでなる抗体；
ｃ）配列番号１５の配列または配列番号１５と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、および配列番号２０の配列または配列番号２０と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメインを含んでなる抗体；
ｄ）配列番号１６の配列または配列番号１６と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、および配列番号２１の配列または配列番号２１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメインを含んでなる抗体；ならびに
ｅ）配列番号１７の配列または配列番号１７と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、および配列番号２２の配列または配列番号２２と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメインを含んでなる抗体
から選択される抗体である。
【０２１６】
本明細書に記載のキメラ抗体はまた、定常ドメインによって特徴付けることもでき、より詳しくは、前記キメラ抗体としては、限定されるものではないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥなどが選択および設計可能である。より好ましくは、本発明に関して、前記キメラ抗体はＩｇＧ１またはＩｇＧ４である。
【０２１７】
本発明のある実施形態によれば、抗体は、ＩｇＧ１形式において上記されたような可変ドメインＶＨおよびＶＬを含んでなるキメラ抗体である。より好ましくは、前記キメラ抗体は、配列番号４３の配列のＶＨの定常ドメイン、および配列番号４５の配列のＶＬのκドメインを含んでなる。
【０２１８】
本発明のある実施形態によれば、抗体は、ＩｇＧ４形式において上記されたような可変ドメインＶＨおよびＶＬを含んでなるキメラ抗体である。より好ましくは、前記キメラ抗体は、配列番号４４の配列のＶＨの定常ドメイン、および配列番号４５の配列のＶＬのκドメインを含んでなる。
【０２１９】
限定されるものではないが、別の好ましい実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号２３の配列または配列番号２３と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号２８の配列または配列番号２８と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｂ）配列番号２４の配列または配列番号２４と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号２９の配列または配列番号２９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｃ）配列番号２５の配列または配列番号２５と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号３０の配列または配列番号３０と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｄ）配列番号２６の配列または配列番号２６と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号３１の配列または配列番号３１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；ならびに
ｅ）配列番号２７の配列または配列番号２７と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号３２の配列または配列番号３２と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体
から選択される。
【０２２０】
より明瞭にするために、下表３に、好ましいキメラ抗体に関するＶＨおよびＶＬそれぞれの配列を示す。
【０２２１】
【表１４】
2022502431.tif 000070
【０２２２】
本発明の別の特定の側面によれば、抗体は、ヒト抗体に由来する軽鎖の定常領域および重鎖がそれぞれλまたはκ領域およびγ−１、γ−２またはγ−４領域であることを特徴とするヒト化抗体である。
【０２２３】
ヒト化抗体またはそのフラグメントは、当業者に公知の技術によって作製することができる。このようなヒト化抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ診断またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける予防的および／もしくは治療的処置を含む方法におけるそれらの使用に好ましい。例えば、ＰＤＬにより特許ＥＰ０４５１２１６、ＥＰ０６８２０４０、ＥＰ０９３９１２７、ＥＰ０５６６６４７またはＵＳ５，５３０，１０１、ＵＳ６，１８０，３７０、ＵＳ５，５８５，０８９およびＵＳ５，６９３，７６１において記載されている「ＣＤＲグラフティング」技術などの他のヒト化技術も当業者に公知である。米国特許第５，６３９，６４１号、同第６，０５４，２９７号、同第５，８８６，１５２号および同第５，８７７，２９３号も引用することができる。
【０２２４】
好ましい実施形態において、抗体は、
ｉ）それぞれ配列番号７、２および３の配列のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３、ならびに
ｉｉ）ヒト生殖細胞系ＩＧＨＶ１−４６＊０１（配列番号４６）に由来するＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３、ならびに
ｉｉｉ）ヒト生殖細胞系ＩＧＨＪ４＊０１（配列番号４８）に由来するＦＲ４
を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含んでなる。
【０２２５】
好ましい実施形態において、抗体は、
ｉ）それぞれ配列番号９、５および１１の配列のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３、ならびに
ｉｉ）ヒト生殖細胞系ＩＧＫＶ１−３９＊０１（配列番号４７）に由来するＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３、ならびに
ｉｉｉ）ヒト生殖細胞系ＩＧＫＪ４＊０１（配列番号４９）に由来するＦＲ４
を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含んでなる。
【０２２６】
限定されるものではないが、本発明の好ましい実施形態において、抗体は、
ａ）それぞれ配列番号７、２および３の配列のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２およびＣＤＲ−Ｈ３、ならびにヒト生殖細胞系ＩＧＨＶ１−４６＊０１（配列番号４６）に由来するＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３、ならびにヒト生殖細胞系ＩＧＨＪ４＊０１（配列番号４８）に由来するＦＲ４を有する重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号９、５および１１の配列のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２およびＣＤＲ−Ｌ３、ならびにヒト生殖細胞系ＩＧＫＶ１−３９＊０１（配列番号４７）に由来するＦＲ１、ＦＲ２およびＦＲ３、ならびにヒト生殖細胞系ＩＧＫＪ４＊０１（配列番号４９）に由来するＦＲ４を有する軽鎖
を含んでなる。
【０２２７】
ある実施形態において、抗体は、配列番号３３の配列の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、および配列番号３５の配列の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含んでなる。前記ヒト化抗体は、以下、ｈｚ２０８Ｆ２（「変異体」または「Ｖａｒ．１」）と呼ばれる。
【０２２８】
別の実施形態において、抗体は、配列番号３３の配列が残基２０、３４、３５、３８、４８、５０、５９、６１、６２、７０、７２、７４、７６、７７、７９、８２および９５から選択される少なくとも１つの復帰突然変異を含んでなる場合の、配列番号３３の配列の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含んでなる。
【０２２９】
別の実施形態において、抗体は、配列番号３３の配列が残基２０、３４、３５、３８、４８、５０、５９、６１、６２、７０、７２、７４、７６、７７、７９、８２および９５から選択される２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６または１７の復帰突然変異を含んでなる場合の、配列番号３３の配列の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含んでなる。
【０２３０】
より明瞭にするために、下表４に、好ましい復帰突然変異を示す。
【０２３１】
【表１５】
2022502431.tif 000071
【０２３２】
ある実施形態において、抗体は、列番号３５の配列が残基２２、５３、５５、６５、７１、７２、７７および８７から選択される少なくとも１つの復帰突然変異を含んでなる場合の、配列番号３５の配列の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含んでなる。
【０２３３】
ある実施形態において、抗体は、配列番号３５の配列が残基２２、５３、５５、６５、７１、７２、７７または８７から選択される２、３、４、５、６、７または８の復帰突然変異を含んでなる場合の、配列番号３５の配列の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含んでなる。
【０２３４】
別の実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号３３の配列が残基２０、３４、３５、３８、４８、５０、５９、６１、６２、７０、７２、７４、７６、７７、７９、８２および９５から選択される少なくとも１つの復帰突然変異を含んでなる場合の、配列番号３３の配列の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と；
ｂ）配列番号３５の配列が残基２２、５３、５５、６５、７１、７２、７７および８７から選択される少なくとも１つの復帰突然変異を含んでなる場合の、配列番号３５の配列の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含んでなる。
【０２３５】
より明瞭にするために、下表５に、好ましい復帰突然変異を示す。
【０２３６】
【表１６】
2022502431.tif 000072
【０２３７】
このような実施形態において、抗体は、上述の復帰突然変異を総て含んでなり、配列番号３４の配列の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、および配列番号３６の配列の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含んでなる抗体に相当する。前記ヒト化抗体は、以下、ｈｚ２０８Ｆ２（「変異体３」または「Ｖａｒ．３」）と呼ばれる。
【０２３８】
別の実施形態において、変異体１と変異体３の間に含まれるヒト化形態もまた総て、本発明により包含される。言い換えれば、この抗体は、配列番号４１の「コンセンサス」配列の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、および配列番号４２の「コンセンサス」配列の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含んでなる抗体に相当する。前記ヒト化抗体は、全体として、以下、ｈｚ２０８Ｆ２（「変異体２」または「Ｖａｒ．２」）と呼ばれる。
【０２３９】
限定されるものではないが、好ましい実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号３３の配列または配列番号３３と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｂ）配列番号３４の配列または配列番号３４と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２４０】
「配列番号３３または３４と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列」とは、配列番号１、２および３の３つの重鎖ＣＤＲを示し、加えて、ＣＤＲに相当する配列（すなわち、配列番号１、２および３）外の配列番号３３または３４の全配列と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す配列を表すことが意図される。
【０２４１】
本発明のある実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号３３の配列または配列番号３３と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｂ）配列番号３４の配列または配列番号３４と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２４２】
本明細書において関連の段落で示されなければ、任意の配列とは、または特定の配列と少なくとも８０％の同一性を示す配列とは、前記配列が参照配列と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示すと理解されなければならない。これらの配列がＣＤＲ配列を含む場合には、それらの配列は参照配列ＣＤＲと同一の少なくともこれらのＣＤＲ、これらのＣＤＲに相当する配列外に位置する残りの配列に関して計算されなければならない全配列と８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％同一性を示すことを表すことが意図される。
【０２４３】
限定されるものではないが、好ましい実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号３５の配列の軽鎖可変ドメインまたは配列番号３５と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｂ）配列番号３６の配列または配列番号３６と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２４４】
「配列番号３５または３６と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す任意の配列」とは、配列番号４、５および６の３つの軽鎖ＣＤＲを示し、それに加えて、ＣＤＲに相当する配列（すなわち、配列番号４、５および６）外の全配列配列番号３５または３６と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を示す配列を表すことが意図される。
【０２４５】
本発明のある実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号３５の配列または配列番号３５と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｂ）配列番号３６の配列または配列番号３６と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖可変ドメイン、ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体
から選択される。
【０２４６】
本明細書に記載のヒト化抗体はまた、定常ドメインによって特徴付けることもでき、より詳しくは、前記ヒト化抗体は、限定されるものではないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥなどが選択および設計可能である。より好ましくは、本発明に関して、前記ヒト化抗体は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４である。
【０２４７】
本発明のある実施形態によれば、抗体は、ＩｇＧ１形式において上記されたような可変ドメインＶＨおよびＶＬを含んでなるヒト化抗体である。より好ましくは、前記ヒト化抗体は、配列番号４３の配列のＶＨのお定常ドメインおよび配列番号４５の配列のＶＬのκドメインを含んでなる。
【０２４８】
本発明のある実施形態によれば、抗体は、ＩｇＧ４形式において上記されたような可変ドメインＶＨおよびＶＬを含んでなるヒト化抗体である。より好ましくは、前記ヒト化抗体は、配列番号４４の配列のＶＨの定常ドメインおよび配列番号４５の配列のＶＬのκドメインを含んでなる。
【０２４９】
本発明のさらに別の実施形態によれば、抗体は、
ａ）配列番号３７の配列または配列番号３７と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号３９の配列または配列番号３９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；ならびに
ｂ）配列番号３８の配列または配列番号３８と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号４０の配列または配列番号４０と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体
から選択される。
【０２５０】
より明瞭にするために、下表６ａに、ヒト化抗体ｈｚ２０８Ｆ２の変異体１（Ｖａｒ．１）および変異体３（Ｖａｒ．３）のＶＨおよびＶＬの配列の限定されない例を示す。これにはまた変異体２（Ｖａｒ．２）のコンセンサス配列も含まれる。
【０２５１】
【表１７】
2022502431.tif 000073
【０２５２】
限定されるものではないが、別の好ましい実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号５６、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８および８０から選択される配列または配列番号５６、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８および８０と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を有する任意の配列の重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号９、５および１１の配列の３つの軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；
ｂ）配列番号５７もしくは６０から選択される配列または配列番号５７もしくは６０と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を有する任意の配列の軽鎖可変ドメイン；ならびに配列番号７、２および３の配列の３つの重鎖ＣＤＲを含んでなる抗体；ならびに
ｃ）配列番号５６、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８および８０から選択される配列または配列番号５６、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８および８０と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を有する任意の配列の重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号５７もしくは６０から選択される配列または配列番号５７もしくは６０と少なくとも８０％、好ましくは８５％、９０％、９５％および９８％の同一性を有する任意の配列の軽鎖可変ドメインを含んでなる抗体
から選択される。
【０２５３】
本発明のさらに別の実施形態によれば、抗体は、
ａ）配列番号５６、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８および８０の配列または配列番号５６、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８もしくは８０と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、ならびに配列番号５７の配列または配列番号５７と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなる抗体；ならびに
ｂ）配列番号５６、６４、６８および７８の配列または配列番号５６、６４、６８もしくは７８と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、ならびに配列番号６０の配列または配列番号６０と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなる抗体
から選択される。
【０２５４】
本発明のさらに別の実施形態によれば、抗体は、
ａ）配列番号５８の配列または配列番号５８と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列のまたは配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｂ）配列番号５８の配列または配列番号５８と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号６１の配列または配列番号６１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｃ）配列番号６３の配列または配列番号６３と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｄ）配列番号６５の配列または配列番号６５と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖，および配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｅ）配列番号６５の配列または配列番号６５と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号６１の配列または配列番号６１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｆ）配列番号６７の配列または配列番号６７と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｇ）配列番号６９の配列または配列番号６９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｈ）配列番号６９の配列または配列番号６９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号６１の配列または配列番号６１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｉ）配列番号７１の配列または配列番号７１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｊ）配列番号７３の配列または配列番号７３と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の鎖軽を含んでなるまたはからなる抗体；
ｋ）配列番号７５の配列または配列番号７５と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｌ）配列番号７７の配列または配列番号７７と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列の軽鎖、または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列を含んでなるまたはからなる抗体；
ｍ）配列番号７９の配列または配列番号７９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；
ｎ）配列番号７９の配列または配列番号７９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、および配列番号６１の配列または配列番号６１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体；ならびに
ｏ）配列番号８１の配列または配列番号８１と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の重鎖、配列番号５９の配列または配列番号５９と少なくとも８０％の同一性を示す任意の配列の軽鎖を含んでなるまたはからなる抗体
から選択される。
【０２５５】
言い換えれば、抗体は、
ａ）配列番号５８、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９および８１から選択される配列または配列番号５８、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９および８１と少なくとも８０％の同一性を有する任意の配列の重鎖；ならびに
ｂ）配列番号５９および６１から選択される配列または配列番号５９および６１と少なくとも８０％の同一性を有する任意の配列の軽鎖
を含んでなる抗体であり得る。
【０２５６】
本発明のある実施形態において、抗体は、
ａ）配列番号５８、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９および８１から選択される配列または配列番号５８、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９もしくは８１と少なくとも８０％の同一性を有する任意の配列の重鎖；ならびに
ｂ）配列番号５９および６１から選択される配列または配列番号５９もしくは６１と少なくとも８０％の同一性を有する任意の配列の軽鎖
から選択される。
【０２５７】
より明瞭にするために、下表６ｂに、ヒト化抗体ｈｚ２０８Ｆ２の種々の変異体に関するＶＨおよびＶＬ（可変ドメインおよび全長）の配列の限定されない例を示す。
【０２５８】
【表１８】
2022502431.tif 000074
【０２５９】
本発明の別の態様によれば、抗体は、ｉ）それぞれ２０１３年５月３０日、２０１３年６月２６日、２０１３年７月２６日、２０１３年４月２４日および２０１３年７月２６日にＣＮＣＭ（パスツール研究所、フランス）に寄託されたハイブリドーマＩ−４７５７、Ｉ−４７７３、Ｉ−４７７５、Ｉ−４７３６またはＩ−４７７４により産生される抗体、またはｉｉ）ＩＧＦ−１Ｒとの結合に関してｉ）の抗体と競合する抗体；またはｉｉｉ）ＩＧＦ−１Ｒの、ｉ）の抗体が結合するものと同じエピトープに結合する抗体から選択される抗体である。
【０２６０】
特定の側面によれば、結合単位は、宿主標的部位に細胞傷害性薬剤を送達するためのアドレッシングビヒクルとして使用するための、上記のような抗体、またはその抗原結合フラグメントであり、前記宿主標的部位は、ＩＧＦ−１Ｒ、好ましくは、ＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメイン、より好ましくは、ヒトＩＧＦ−１Ｒ（配列番号５０）およびいっそうより好ましくは、ヒトＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメイン（配列番号５１）、いっそうより好ましくは、ヒトＩＧＦ−１Ｒ細胞外ドメインのＮ末端（配列番号５２）、またはその任意の天然変異体配列に局在するエピトープからなる。
【０２６１】
好ましい実施形態において、前記宿主標的部位は、哺乳動物細胞、より好ましくは、ヒト細胞、より好ましくは、天然にまたは遺伝子組換えの方法によりＩＧＦ−１Ｒを発現する細胞の標的部位である。
【０２６２】
さらなる実施形態において、前記宿主標的部位は、癌、好ましくは、ＩＧＦ−１Ｒ発現癌、またはＩＧＦ−１Ｒ関連癌を有する患者、好ましくは、ヒトの細胞の標的部位である。
【０２６３】
ＩＧＦ−１Ｒ発現癌またはＩＧＦ−１Ｒ関連癌は、特に、腫瘍細胞がそれらの表面に完全なＩＧＦ−１Ｒまたはその一部を発現または過剰発現する癌を含む。
【０２６４】
本発明において結合単位として使用可能なＩＧＦ−１Ｒ抗体は、特に、ＷＯ２０１５／１６２２９１、ＷＯ２０１５／１６２２９２またはＷＯ２０１５／１６２２９３に記載されている。
【０２６５】
リンカー分子
好ましくはｑ＝２である、本発明による式（Ｉ）のリンカーは、薬物を抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメントなどの結合単位に共有結合的に連結するために有用である。
【０２６６】
そのために、リンカーのスルホマレイミド部分は、結合単位上に存在するチオール部分と反応することができ、一方、リンカーのＸ３末端は薬物（ＱＨまたはＱ−ＯＨ）上に存在する官能基と反応することができる。
【０２６７】
リンカー分子は、実験の部で例示される様々な合成方法に従って作製することができる。
【０２６８】
Ｘ１およびＸ２が独立にＨおよびＣｌから選択される場合（少なくとも１つはＣｌである）、本発明によるリンカーは、式Ｌ−ＮＨＣＯ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｓ−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＯＮＨ−Ｌ（ここで、Ｌは、Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−Ｘ３を表す）の、場合により保護された形態のジスルフィド化合物から、ＳＯ２Ｃｌ２などの塩素化剤との反応により作製することができる。
【０２６９】
Ｘ１およびＸ２が独立にＨおよびＢｒから選択される場合（少なくとも１つはＢｒである）、本発明によるリンカーは、場合により保護された形態の、式
【化４８】
2022502431.tif 000075
（ここで、ＬはＬ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−Ｘ３を表す）
の、場合により保護された形態の化合物から、Ｂｒ２などの臭素化剤との反応により作製することができる。
【０２７０】
Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方が、場合により置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アリールオキシ、または−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨである場合、本発明によるリンカーは、場合により保護された形態の、Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方がＣｌまたはＢｒである対応する式（Ｉ）のリンカーから、Ｒａが（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、場合により置換されていてもよいアリール、または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨを示す式Ｒａ−ＯＨのアルコールとの求核置換反応により作製することができる。
【０２７１】
また、末端切断型リンカー部分（例えば、Ｌ＝Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−Ｘ６を有し、Ｘ６官能基は、例えば、ＮＨ２、ＯＨまたは脱離基であり、場合により、保護された形態であってもよい）がグラフトされたスルホマレイミド部分を形成すること、および特に、薬物リンカー複合体の合成に関して以下に示されるようなスルホマレイミド部分の形成後にリンカー合成を完了することが想定できる。
【０２７２】
さらに、酸化の工程は、Ｓ（Ｏ）ｑ基を必要な酸化状態（すなわち、好ましくは、ｑ＝２）に変換するように実行可能である。このような酸化工程は当業者に周知である。使用される酸化剤は、例えば、ｍＣＰＢＡ、ＲｕＯ４またはＲｕＣｌ３／ＮａＩＯ４であり得る。
【０２７３】
さらなる保護／脱保護工程は、上記のプロセスで行うことができ、このような工程およびそれらの反応条件は当業者に周知である。
【０２７４】
得られるリンカーは、抽出、溶媒の蒸発または沈降または結晶化（次いで、濾過）によるなどの当業者に周知の方法により、反応媒体から分離することができる。
【０２７５】
リンカーは、要すれば、再結晶化、蒸留、シリカゲルカラムでのクロマトグラフィーまたは高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などの当業者に周知の方法により精製することもできる。
【０２７６】
薬物リンカー複合体
好ましくはｑ＝２の、本発明による式（ＩＩ）の薬物リンカー複合体は、薬物を抗体（例えば、モノクローナル抗体）またはその抗原結合フラグメントなどの結合単位に共有結合的に連結するために有用である。
【０２７７】
そのために、薬物リンカー複合体のスルホマレイミド部分は、結合単位上に存在するチオール部分と反応することができる。
【０２７８】
薬物リンカー複合体は、様々な合成方法に従って作製することができる。実際に、式（Ｉ）のリンカーは、複合体を形成するために薬物（ＱＨまたはＱ−ＯＨ）と反応することができる。しかしながら、リンカーが薬物分子上に段階的に形成される、すなわち、リンカーの第１の部分がまず薬物にグラフトされ、その結果得られた化合物が末端切断型リンカー分子と反応され、薬物リンカー複合体が形成するという他の可能性も想定することができる。
【０２７９】
よって、他の合成経路も考えられ得るが、以下の限定されない合成経路が本発明による式（ＩＩ）の薬物リンカー複合体の作製のために使用され得る。
【０２８０】
これら総ての合成経路において、さらなる保護／脱保護／置換工程が実施可能であり、そのような工程およびそれらの反応条件は当業者に周知である。
【０２８１】
得られる薬物リンカー複合体は、抽出、溶媒の蒸発または沈降または結晶化（次いで、濾過）によるなどの当業者に周知の方法により、反応媒体から分離することができる。
【０２８２】
薬物リンカー複合体は、要すれば、再結晶化、蒸留、シリカゲルカラムでのクロマトグラフィーまたは高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などの当業者に周知の方法により精製することもできる。
【０２８３】
スキームＩで表される合成経路Ｉ：
【化４９】
2022502431.tif 000076
末端スルホマレイミド部分は、下記に詳説するように、リンカー部分の前駆体がグラフトされている薬物にすでに存在する基から形成され得る。
【０２８４】
工程１：３−（２−クロロカルボニル−エチルジスルファニル）−プロピオニルクロリドを式Ｈ２Ｎ−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−（Ｗ）ｗ−（Ｙ）ｙ−Ｑの分子（すなわち、リンカーの部分がすでにグラフトされている薬物分子）と反応させる。このような反応は、トリメチルアミンなどの塩基の存在下で行うことができる。この反応は、ＤＣＭなどの溶媒中、特に、０℃〜室温の温度で行うことができる。
【０２８５】
３−（２−クロロカルボニル−エチルジスルファニル）−プロピオニルクロリドは、３，３’−ジチオジプロピオン酸から、（ＣＯＣｌ）２との反応によるなどの、塩化アシルを形成するための周知の方法によって作製することができる。この反応は、ＤＣＭなどの溶媒中、特に、室温で行うことができる。触媒量のＤＭＦを添加することができる。
【０２８６】
また、３−（２−クロロカルボニル−エチルジスルファニル）−プロピオニルクロリドを、例えば、場合により保護された形態の式Ｈ２Ｎ−Ｌ１−（ＣＯ）ｃ−Ｘ３の分子と反応させ、その後の工程で、特に、下記の他の合成経路の１つに従ってＱがグラフトされたリンカー部分の合成を完了することも想定することができる。
【０２８７】
工程２：工程１で得られた分子は、特に、大過剰量（例えば、５〜１０当量、例えば、約９当量）で存在するＳＯ２Ｃｌ２の存在下で環化および塩素化することができる。この反応は、ＤＣＭなどの溶媒中、特に、室温で行うことができる。
【０２８８】
塩素原子は、求核置換によるなどの周知の方法により、別のＸ１またはＸ２基（Ｈ以外）に変換することができる。
【０２８９】
工程３：必要に応じて、工程２で得られた分子を酸化すると、式（ＩＩａ）の薬物−リンカーが得られる。このような酸化工程は、当業者に周知の条件で、特に、ｍＣＰＢＡ（例えば、１０当量）の存在下で行うことができる。この反応は、ＤＣＭなどの溶媒中、特に、室温で行うことができる。
【０２９０】
スキームＩＩで表される合成経路ＩＩ：
【化５０】
2022502431.tif 000077
薬物（ＱＨまたはＱ−ＯＨ）と式（Ｉ）のリンカーの直接的カップリングを行うことができ、その条件は、Ｘ３および薬物上に存在する官能基の性質によって異なる。
【０２９１】
このカップリングは、求核置換または光延反応などの置換であり得、このような化学反応の反応条件は当業者に周知である。
【０２９２】
Ｘ３＝ＯＨおよび少なくともｙ＝１、ｗ≠０またはｃ＝１（すなわち、式（Ｉ）のリンカーの末端官能基はＣＯＯＨである）かつＱＨがＮＨ官能基を含んでなる場合、式（Ｉ）のリンカーと薬物（ＱＨ）の間のカップリングは、当業者に周知のペプチドカップリングであり得る。末端ＣＯＯＨ官能基はまた塩化アシルＣＯＣｌに変換することもでき、次にこれを薬物（ＱＨ）上に存在する求核官能基（例えば、ＮＨまたはＯＨ）と反応させることができる。
【０２９３】
Ｘ３＝ＮＨ２；またはＸ３＝Ｈ、ｙ＝ｚ＝１およびＺ＝−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−；またはＸ３＝Ｈ、ｃ＝ｗ＝ｙ＝０、ｚ’＝１かつＺ’が−ＮＲ４−（ＣＨ２）ｕ−ＮＲ５−（すなわち、式（Ｉ）のリンカーの末端官能基はＮＨである）かつびＱ−ＯＨがＣＯＯＨ官能基を含んでなる場合、式（Ｉ）のリンカーと薬物（Ｑ−ＯＨ）の間のカップリング  は、当業者に周知のペプチドカップリングであり得る。薬物の末端ＣＯＯＨ官能基はまた、塩化アシルＣＯＣｌに変換することもでき、次にこれをＮＨ官能基と反応させることができる。
【０２９４】
必要に応じて、Ｓ（Ｏ）ｑ基を必要な酸化状態（すなわち、好ましくは、ｑ＝２）に変換するために付加的酸化工程を行うことができる。このような酸化工程は当業者に周知である。使用する酸化剤は、例えば、ｍＣＰＢＡ、ＲｕＯ４またはＲｕＣｌ３／ＮａＩＯ４であり得る。
【０２９５】
スキームＩＩＩａおよびＩＩＩｂで表される合成経路ＩＩＩ：
【化５１】
2022502431.tif 000078
ペプチドカップリングは、スキームＩＩＩａおよびＩＩＩｂ示されるように、ＣＯＯＨ官能基を有する末端切断型リンカーとリンカーの他の部分がグラフトされた薬物部分の間でも行うことができる。末端切断型リンカーの末端ＣＯＯＨ官能基はまた、塩化アシルＣＯＣｌに変換することもでき、次にこれを他の反応体のＮＨ官能基と反応させることができる。このような反応の反応条件は当業者に周知である。
【０２９６】
必要に応じて、Ｓ（Ｏ）ｑ基を必要な酸化状態（すなわち、好ましくは、ｑ＝２）に変換するために、例えば、ｍＣＰＢＡ、ＲｕＯ４またはＲｕＣｌ３／ＮａＩＯ４の存在下で付加的酸化工程を行うことができる。
【０２９７】
スキームＩＶで表される合成経路ＩＶ：
【化５２】
2022502431.tif 000079
Ｘ５がＯＨまたは従前に定義したような脱離基を表すスキームＩＶで示されるように、スルホマレイミド部分とリンカーの残りの部分がすでにグラフトされている薬物の間のカップリングも行うことができる。
【０２９８】
カップリングは、求核置換などの置換であり得る。
【０２９９】
必要に応じて、Ｓ（Ｏ）ｑ基を必要な酸化状態（すなわち、好ましくは、ｑ＝２）に変換するために、例えば、ｍＣＰＢＡ、ＲｕＯ４またはＲｕＣｌ３／ＮａＩＯ４の存在下で付加的酸化工程を行うことができる。
【０３００】
スキームＶａおよびＶｂで表される合成経路Ｖ：
【化５３】
2022502431.tif 000080
リンカーがヘテロアリーレン部分を含んでなり、それが二価１Ｈ−１，２，３−トリアゾールである場合、このヘテロアリーレン基は、Ｌ２が−（ＣＨ２）ｎ−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−を表し、かつ、Ｌ３が−（ＣＨ２）ｐ−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−を表し、Ｌ２およびＬ３が同時に基−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＨ２−でない場合の上記のスキームＶａおよびＶｂに示されるように、当業者に周知の条件で、アジドとアルキンの間のクリックケミストリーによって形成することができる。
【０３０１】
必要に応じて、Ｓ（Ｏ）ｑ基を必要な酸化状態（すなわち、好ましくは、ｑ＝２）に変換するために、例えば、ｍＣＰＢＡ、ＲｕＯ４またはＲｕＣｌ３／ＮａＩＯ４の存在下で付加的酸化工程を行うことができる。
【０３０２】
結合単位薬物複合体
抗体薬物複合体などの結合単位薬物複合体は、
１）特に、ジスルフィド結合の還元により、結合単位上にチオール官能基を形成すること；および
２）スルホマレイミド官能基とチオール官能基が反応することで結合単位上に薬物部分を共有結合させるようにチオール官能基を有する前記結合単位と薬物リンカー複合体を反応させること
によって作製することができる。
【０３０３】
このような方法は以下のスキームＶＩで示される。
【０３０４】
【化５４】
2022502431.tif 000081
【０３０５】
医薬組成物
本発明による医薬組成物は、式（ＩＩＩ）または（ＩＶ）の結合単位薬物複合体と少なくとも１種類の薬学上許容可能な賦形剤とを含んでなる。
【０３０６】
本発明の医薬組成物は、経腸（例えば、経口）または非経口（例えば、静脈内）投与、好ましくは、経口または静脈内投与に意図され得る。有効成分は、従来の医薬賦形剤が混合された、動物、好ましくは、ヒトを含む哺乳動物への投与のための単位投与形であり得る。
【０３０７】
経口投与のためには、医薬組成物は固体形態または液体形態（溶液または懸濁液）であり得る。
【０３０８】
固体組成物は、錠剤、ゼラチンカプセル剤、散剤、顆粒剤などの形態であり得る。錠剤においては、有効成分は、圧縮前にゼラチン、デンプン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アラビアガムなどの医薬ビヒクルと混合することができる。錠剤は、特に、スクロースまたは他の好適な材料でさらにコーティングしてもよく、長期活性または遅延活性を有するように処理してもよい。散剤または顆粒剤においては、有効成分を分散剤、湿潤剤または沈殿防止剤と、また矯臭剤または甘味剤と混合するか、またはそれらととも造粒することができる。ゼラチンカプセル剤においては、有効成分を硬質または軟質ゼラチンカプセル中に前述のものなどの散剤もしくは顆粒剤の形態でまたは下記のものなどの液体組成物の形態で導入することができる。
【０３０９】
液体組成物は、水などの溶媒中に有効成分を甘味剤、風味増強剤または好適な着色剤とともに含有し得る。液体組成物はまた、前述のような散剤または顆粒剤を水、果汁、ミルクなどの液体に懸濁または溶解させることによって得ることもできる。液体組成物は、例えば、シロップ剤またはエリキシル剤であり得る。
【０３１０】
非経口投与のためには、組成物は、沈殿防止剤および／または湿潤剤を含有し得る水性懸濁液または溶液の形態であり得る。この組成物は有利には無菌である。この組成物は等張溶液（特に、血液に対して）の形態であり得る。
【０３１１】
このような非経口組成物は、有利には、一般に等張塩溶液、すなわち、０．９％ＮａＣｌ水溶液（生理食塩水）に基づく生理学的に許容可能な媒体を含有する。また、非水性水  混和性補助溶媒、例えば、エタノール、グリセリン、プロピレングリコールまたはｎ−ラクトアミドも使用可能である。
【０３１２】
本発明の非経口組成物また、沈殿防止剤、湿潤剤、保存剤、酸化防止剤、キレート剤、緩衝剤、等張化剤などの１以上の添加剤も含んでなり得る。このような添加剤は、当業者には慣例のものである。
【０３１３】
沈殿防止剤は、アルギン酸塩、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシルメチルセルロース、ヒドロキシルエチルセルロース、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース、微晶質セルロース、ガム（例えば、アラビアガム、トラガカントガムまたはキサンタンガム）、ゼラチン、カラギーナン、ポリビニルピロリドンなどであり得る。
【０３１４】
湿潤剤は、グリセリン、プロピレングリコールまたは非イオン性界面活性剤、例えば、レシチン、ポリソルベートまたはポロキサマーであり得る。
【０３１５】
保存剤は、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、クロロブタノール、パラベン（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベンまたはプロピルパラベン）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウムなどであり得る。
【０３１６】
酸化防止剤は、アスコルビン酸、クエン酸、アセチルシステイン、亜硫酸塩（重亜硫酸塩、メタ重亜硫酸塩）、モノチオグリセロール、ホルムアルデヒスルホキシル酸ナトリウム、チオ尿素、トコフェロールなどであり得る。
【０３１７】
キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）塩であり得る。
【０３１８】
緩衝剤は、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、リン酸塩、トリエタノールアミン（ＴＲＩＳ）などであり得る。
【０３１９】
等張化剤は、デキストロース、グリセロール、塩化ナトリウム、グリセリン、マンニトールなどであり得る。
【０３２０】
本発明の結合単位薬物複合体は、医薬組成物中に、１日０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲の用量で使用することができ、１日１回１用量のみで、または１日数用量、例えば、１日２回、同用量で投与することができる。１日投与量は、有利には、５ｍｇ〜５００ｍｇの間、より有利には１０ｍｇ〜２００ｍｇの間に含まれる。しかしながら、これらの範囲外の用量を使用することが必要な場合もあり、これは当業者ならば気づき得ることである。
【０３２１】
癌治療
式（ＩＩＩ）もしくは（ＩＶ）の結合単位薬物複合体または式（ＩＩＩ）もしくは（ＩＶ）の結合単位を含んでなる医薬組成物は、それが特に細胞傷害性薬剤などの癌の治療に有用な薬物（ＱＨ）の残基である薬物部分（Ｑ）を含んでなる場合には癌の治療に使用することができる。
【０３２２】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）などの結合単位薬物複合体は、抗体などの結合単位の結合特異性と例えば細胞傷害性薬剤などの薬物効力を兼ね備える。
【０３２３】
ＡＤＣなどの結合単位薬物複合体の使用は、非複合体薬物として投与された場合に正常細胞に許容されない毒性をもたらし得る薬物の局所送達を可能とする。言い換えれば、最小の毒性の最大の有効性が求められる療法である。
【０３２４】
癌は、限定されるものではないが、前立腺癌、骨肉腫、肺癌、乳癌、子宮内膜癌、膠芽腫、結腸、癌、胃癌、腎臓癌、膵臓癌、頭頸部癌または抗体により腫瘍細胞に標的化される抗原の発現に関連する癌により例示される。
【０３２５】
本発明は、以下の限定されない例および図により示される。
【図面の簡単な説明】
【０３２６】
【図１Ａ】図１Ａは、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、本発明による薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。
【図２】図２は、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図３Ａ】図３Ａは、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、本発明による薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。
【図４Ａ】図４Ａは、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、本発明による薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。
【図５Ａ】図５Ａは、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、本発明による薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。
【図６Ａ】図６Ａは、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、本発明による薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。
【図７Ａ】図７Ａは、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図７Ｂ】図７Ｂは、本発明による薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。
【図８】図８は、本発明による薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。
【図９】図９は、本発明による薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを表す。
【図１０】図１０は、本発明による薬物−ソマトスタチン複合体の質量スペクトルを表す。
【図１１】図１１は、本発明による薬物−ソマトスタチン複合体の質量スペクトルを表す。
【図１２】図１２は、還元および非還元条件下でのＡｂ１抗体（１）および本発明による精製ＡＤＣ（ＡＤＣ１−Ａ（２）、ＡＤＣ１−Ｂ（３）、ＡＤＣ１−Ｃ（４）、ＡＤＣ１−Ｄ（５）、ＡＤＣ１−Ｅ（６）、ＡＤＣ１−Ｆ（７）およびＡＤＣ１−Ｇ（８））のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を表す。ゲル上に見られるバンドは、完全架橋抗体（すなわち、ＬＨＨＬ）；部分架橋抗体（すなわち、ＨＨＬ、ＨＨ、ＨＬ）および非架橋抗体（すなわち、ＨおよびＬ）に相当する。
【図１３】図１３は、Ａｂ１抗体および本発明によるＡＤＣ（ＡＤＣ１−Ａ、ＡＤＣ１−Ｂ、ＡＤＣ１−Ｃ、ＡＤＣ１−Ｄ、ＡＤＣ１−Ｅ、ＡＤＣ１−ＦおよびＡＤＣ１−Ｇ）のＳＥＣ分析を表す。
【図１４Ａ】図１４Ａは、本発明によるＡＤＣ：（Ａ）ＡＤＣ１−Ａのデコンボリューション前のＡＤＣ  ｍ／ｚスペクトルを表す。
【図１４Ｂ】図１４Ｂは、本発明によるＡＤＣ：（Ｂ）ＡＤＣ１−Ｂのデコンボリューション前のＡＤＣ  ｍ／ｚスペクトルを表す。
【図１４Ｃ】図１４Ｃは、本発明によるＡＤＣ：（Ｃ）ＡＤＣ１−Ｃのデコンボリューション前のＡＤＣ  ｍ／ｚスペクトルを表す。
【図１４Ｄ】図１４Ｄは、本発明によるＡＤＣ：（Ｄ）ＡＤＣ−１Ｄのデコンボリューション前のＡＤＣ  ｍ／ｚスペクトルを表す。
【図１５Ａ】図１５Ａは、（Ａ）ＡＤＣ１−ＡのＭａｘｅｎｔデコンボリューション後のＤＡＲ分布を表す。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、（Ｂ）ＡＤＣ１−ＢのＭａｘｅｎｔデコンボリューション後のＤＡＲ分布を表す。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、（Ｃ）ＡＤＣ１−ＤのＭａｘｅｎｔデコンボリューション後のＤＡＲ分布を表す。
【図１６Ａ】図１６Ａは、ＡＤＣ：（Ａ）参照ＡＤＣ  Ｒｅｆ−Ａのネイティブ質量分析による分析を表す。
【図１６Ｂ】図１６Ｂは、ＡＤＣ：（Ｂ）本発明によるＡＤＣ１−Ｃのネイティブ質量分析による分析を表す。
【図１７Ａ】図１７Ａは、（Ａ）参照ＡＤＣ  Ｒｅｆ−Ｂに関する（１）ヒト、（２）カニクイザル、（３）マウスおよび（４）ラット血清中の、各時点（Ｄ０、Ｄ３、Ｄ７およびＤ１４）それぞれにおける全抗体（１００％）およびＡＤＣのパーセンテージを示すことによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性試験の結果を表す。
【図１７Ｂ】図１７Ｂは、（Ｂ）ＡＤＣ１−Ｃに関する（１）ヒト、（２）カニクイザル、（３）マウスおよび（４）ラット血清中の、各時点（Ｄ０、Ｄ３、Ｄ７およびＤ１４）それぞれにおける全抗体（１００％）およびＡＤＣのパーセンテージを示すことによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性試験の結果を表す。
【図１７Ｃ】図１７Ｃは、（Ｃ）ＡＤＣ１−Ｅに関する（１）ヒト、（２）カニクイザル、（３）マウスおよび（４）ラット血清中の、各時点（Ｄ０、Ｄ３、Ｄ７およびＤ１４）それぞれにおける全抗体（１００％）およびＡＤＣのパーセンテージを示すことによるｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性試験の結果を表す。
【図１８Ａ】図１８Ａは、ＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞（Ａ）における種々のＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性評価を表す。
【図１８Ｂ】図１８Ｂは、ＭＣＦ−７細胞（Ｂ）における種々のＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性評価を表す。
【図１９】図１９は、卵巣癌モデルにおけるＡＤＣ１−Ｃおよび参照ＡＤＣ  Ｒｅｆ−Ａのｉｎ  ｖｉｖｏ活性を表す。
【図２０】図２０は、卵巣癌モデルにおけるＡＤＣ１−Ｃおよび参照ＡＤＣ  Ｒｅｆ−Ａのｉｎ  ｖｉｖｏ活性を表す。
【図２１】図２１は、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図２２Ａ】図２２Ａは、本発明による薬物リンカー複合体の質量スペクトルを表す。
【図２２Ｂ】図２２Ｂは、本発明による薬物リンカー複合体のＴＯＦ−ＭＳスペクトルを表す。
【図２３Ａ】図２３Ａは、Ａｂ１抗体およびＰＮＵ−１５９６８２誘導体を用いて合成された本発明によるＡＤＣのＳＥＣ分析を表す。
【図２３Ｂ】図２３Ｂは、Ａｂ２抗体およびＰＮＵ−１５９６８２誘導体を用いて合成された本発明によるＡＤＣのＳＥＣ分析を表す。
【図２４Ａ】図２４Ａは、本発明によるＡＤＣ：（Ａ）ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４のデコンボリューション前のＡＤＣ  ｍ／ｚスペクトルを表す。
【図２４Ｂ】図２４Ｂは、本発明によるＡＤＣ：（Ｂ）ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２５２４のデコンボリューション前のＡＤＣ  ｍ／ｚスペクトルを表す。
【図２４Ｃ】図２４Ｃは、本発明によるＡＤＣ：（Ｃ）ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２６１６のデコンボリューション前のＡＤＣ  ｍ／ｚスペクトルを表す。
【図２４Ｄ】図２４Ｄは、本発明によるＡＤＣ：（Ｄ）ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２６４６のデコンボリューション前のＡＤＣ  ｍ／ｚスペクトルを表す。
【図２５Ａ】図２５Ａは、本発明によるＡＤＣ：（Ａ）ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４のＭａｘｅｎｔデコンボリューション後のＤＡＲ分布を表す。
【図２５Ｂ】図２５Ｂは、本発明によるＡＤＣ：（Ｂ）ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２５２４のＭａｘｅｎｔデコンボリューション後のＤＡＲ分布を表す。
【図２５Ｃ】図２５Ｃは、本発明によるＡＤＣ：（Ｃ）ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２６１６のＭａｘｅｎｔデコンボリューション後のＤＡＲ分布を表す。
【図２５Ｄ】図２５Ｄは、本発明によるＡＤＣ：（Ｄ）ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２６４６のＭａｘｅｎｔデコンボリューション後のＤＡＲ分布を表す。
【図２６Ａ】図２６Ａは、ＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞（Ａ）におけるＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４、および相当する対照ＡＤＣ  ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２５２４のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞胞傷害性評価を表す。
【図２６Ｂ】図２６Ｂは、ＭＣＦ−７細胞（Ｂ）におけるＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４、および相当する対照ＡＤＣ  ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２５２４のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞胞傷害性評価を表す。
【図２７Ａ】図２７Ａは、ＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞（Ａ）におけるＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２６４６、および相当する対照ＡＤＣ  ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２６４６のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性評価を表す。
【図２７Ｂ】図２７Ｂは、ＭＣＦ−７細胞（Ｂ）におけるＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２６４６、および相当する対照ＡＤＣ  ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２６４６のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性評価を表す。
【図２８】図２８は、卵巣癌モデルにおけるＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４、および相当する対照ＡＤＣ  ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２５２４のｉｎ  ｖｉｖｏ活性を表す。
【実施例】
【０３２７】
略語
【０３２８】
【表１９】
2022502431.tif 000082
【０３２９】
実験手順：
無水条件を必要とする反応は総て、窒素雰囲気下で炉乾燥した器具で行った。無水溶媒は不活性雰囲気下の密閉ボトルで受け取った。試薬は総て、受け取った状態で使用した。カラムクロマトグラフィーは、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ  ｐｕｒｉＦｌａｓｈ（登録商標）４３０およびＧｒａｃｅ  Ｒｅｖｅｌｅｒｉｓ（登録商標）Ｘ２にて、シリカゲル（５０μｍ）充填ｐｕｒｉＦｌａｓｈ（登録商標）カラムで行った。ＴＬＣは、シリカ（Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０  Ｆ２５４）でプレコートされたアルミニウムシートで行い、ＵＶ−Ｌａｍｐ  ２５４ｎｍで可視化した。プロトン（１Ｈ）および炭素（１３Ｃ）ＮＭＲスペクトルは、ＢＢＯ  Ｐｒｏｄｉｇｙプローブ（５ｍｍ）を備えたＢｒｕｋｅｒ  ５００  ＭＨｚ  Ａｓｃｅｎｄ（商標）を用い、室温にてＣＤＣｌ３およびＤＭＳＯで記録した。スペクトルはＴｏｐｓｐｉｎ（商標）３．２ソフトウエアを用いて解釈した。化学シフト（δＨおよびδＣ）は、１００万分の１（ｐｐｍ）で記録し、ＣＤＣｌ３（１Ｈ°ＮＭＲ  ７．２６、１３Ｃ  ＮＭＲ  ７７．０、３重線の中央シグナル）またはＤＭＳＯ（１Ｈ  ＮＭＲ  ２．５０、１３Ｃ°ＮＭＲ  ３７．９、７重線の中央シグナル）のいずれかを参照とする。割り当てはＣＯＳＹ実験およびＨＳＱＣ実験を補助とする。結合定数（Ｊ：隣接プロトン、Ｊｃｉｓ：シス位の隣接プロトン、Ｊｏ：オルト位のプロトン、Ｊｍ：メタ位のプロトン）は、最近接±０．１Ｈｚまでヘルツで示す。多重度は、適当な場合、１重線（ｓ）、２重線（ｄ）、３重線（ｔ）、４重線（ｑ）、３重の３重線（ｔ．  ｏｆ  ｔ．）、多重線（ｍ）および幅広（ｂ）として示す。質量スペクトル（ｍ／ｚ）は、Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）ＺＱ  Ｍａｓｓ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ分光計にて、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳ＋）の技術、イオン源温度：１２０℃、脱溶媒温度：３５０℃、キャピラリ電圧：３．２０ｋＶ、コーン電圧：２５Ｖ、引き込み電極電圧：５  Ｖ、Ｒｆレンズ電圧：０．５Ｖ、ＭＳスキャン範囲：１００〜２０００を用いて記録した。ＨＰＬＣ分析は、ＭａｓｓＬｙｎｘ  ４．１ソフトウエアおよびＷａｔｅｒｓ  ２９９６  ＰＤＡ検出器ＵＶ／ｖｉｓを備えたＨＰＬＣ  Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５にて、Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ３．５μｍ（３．０ｍｍ×３０ｍｍ）カラムおよびＷａｔｅｒｓ（登録商標）Ｘ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ１８  ３．５μｍ（３．０ｍｍ×２０ｍｍ）プレカラムを用い、分析下のサンプルに適当な波長で行った。保持時間（Ｒｔ）は、最近接０．０１分まで分で示す。２つの溶出方法を使用した。
【０３３０】
【表２０】
2022502431.tif 000083
【０３３１】
【表２１】
2022502431.tif 000084
【０３３２】
方法１で示される保持時間をＲｔ，１で示し、方法２で示される保持時間をＲｔ，２で示す。
【０３３３】
１．リンカーの合成
オキソイソチアゾロンの合成経路の例：
【化５５】
2022502431.tif 000085
【０３３４】
Ｉ．１．  ３，３’−ジスルファンジイルジプロパノイルクロリド
【化５６】
2022502431.tif 000086
Ｉ．２．  ３，３’−ジスルファンジイルジプロピオン酸（４ｇ、０．０１９ｍｏｌ、１当量）を無水ＤＣＭ（１００ｍＬ）に懸濁させ、無水ＤＭＦ（３００μＬ）、次いで、塩化オキサリル（７．２４ｇ、０．０５７ｍｏｌ、３当量）を不活性雰囲気下、０℃で加えた。この溶液は明澄となった。この混合物を、それが明澄化し、気体の発生が見られなくなるまで室温で３時間置いた。この粗生成物を蒸発させ、さらに３０分間減圧下で維持して塩化オキサリルの残存物を除去した。黄色油状物（４．７０ｇ、１００％）が得られた。この粗生成物をそれ以上精製せずに使用した；Ｒｔ，１（ＭｅＯＨ中）：２．１３；ＭＳ  ＥＳ＋  ｍ／ｚ：２０６．８６。
【０３３５】
Ｉ．３．  ６，６’−（（３，３’−ジスルファンジイルビス（プロパノイル））ビス（アザンジイル））ジヘキサン酸ジベンジル
【化５７】
2022502431.tif 000087
４−メチルベンゼンスルホン酸６−（ベンジルオキシ）−６−オキソヘキサン−１−アミニウム（１２．２０ｇ、０．０３１ｍｏｌ、２．２当量）を、氷浴中、０℃、不活性雰囲気下で、激しい撹拌下、無水ＤＣＭ（７５ｍＬ）に懸濁させた。この溶液にＴＥＡ（１５．７２ｍＬ、０．１１３、８当量）を加えた。新たに作製した３ＤＣＭ（２５ｍＬ）中、３’−ジスルファンジイルジプロパノイルクロリド（３．８８ｇ、０．０１４ｍｏｌ、１当量）の溶液を、０℃に維持した溶液にゆっくり滴下した。撹拌を２４時間続け、その間に溶液を室温とした。水を加え（５０ｍＬ）、この混合物を分液漏斗に移した。有機層を分離し、ブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄し、次いで、１Ｍ  ＨＣｌ（１×１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３塩溶液（２×１００ｍＬ）および再びブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固して黄色固体を得、これをＭｅＯＨ中で摩砕し、６，６’−（（３，３’−ジスルファンジイルビス（プロパノイル））ビス（アザンジイル））ジヘキサン酸ジベンジルを淡黄色粉末として得た（６．０ｇ、６６％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3), δ 7.35 (m, 10H), 6.0 (s, 2H), 5.11 (s, 4H), 3.25 (q, J=5.9 Hz, 4H), 3.00 (t, J=7.0 Hz, 4H), 2,55 (t, J=7.10 Hz, 4H), 2,.36 (t, J=7.30 Hz, 4H), 1.66 (t of t., J=8.10 Hz, 4H), 1.52 (t of t., J=8.10 Hz, 4H), 1.35 (t of t, J=8.52 Hz, 4H); 13C NMR (500 MHz, CDCl3), δ 173.5 (2 -NH-C=O), 170.9 (-O-C=O), 136.0 (芳香環由来の2 Cquat), 128.6 (2 H-Caromatic), 128.3 (H-Caromatic), 128.2 (2 H-Caromatic), 66.2 (2 -CH2-O-), 39.4 (2 -CH2-N), 35.8 (2 -CH2-COO-), 34.3 (2 -CH2-S-), 34.1 (2 -CH2-CNO-), 29.1 (2 C), 26,3 (2 C), 24,4 (2 C); Rt,1 (MeOH中): 2.50; MS ES+ M/Z: 617.00。
【０３３６】
Ｉ．４．  ６−（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化５８】
2022502431.tif 000088
６，６’−（（３，３’−ジスルファンジイルビス（プロパノイル））ビス（アザンジイル））ジヘキサン酸ジベンジル（２．５０ｇ、４．０５ｍｍｏｌ、１当量）を無水ＤＣＭ（２０．３ｍＬ）に溶解させた。この溶液にＳＯ２Ｃｌ２（純度９７％、２．９６ｍＬ、０．０３６ｍｏｌ、９当量）を滴下し、この混合物を不活性雰囲気下、室温で５時間撹拌した。この溶液は明澄となり、淡黄色となった。次に、この溶液を水（２×１００ｍＬ）およびブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮し、クロマトグラフィーカラムを用いて精製した。６−（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（０．８２４ｇ、２９．９％）を６−（３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルとともに淡黄色油状物として得た。1H NMR (CDCl3), δ 7.35 (m, 5H), 6.25 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 3.72 (t, J=7.34 Hz, 2H), 2.37 (t, J=7.39 Hz, 2H), 1.69 (m, 4H), 1.38 (m, 2H); 13C NMR (500 MHz, CDCl3), δ 173.2 (-O-C=O), 166.9 (-N-C=O), 145.6 (Cl-HC=CH-), 136.0 (芳香族環由来のCruet.), 128.6-128.3 (5 H-Chromatic), 114.8 (Cl-HC=CH-), 66.2 (-CH2-O-), 43.5 (-CH2-N-), 34.0 (-CH2-C=O), 29.4, 25.9, 24.4; Rt,1 (in ACN): 2.35; MS ES+ m/z: 339.84。
【０３３７】
Ｉ．５．  ６−（５−クロロ−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化５９】
2022502431.tif 000089
６−（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（８０２ｇ、３．５８ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（２５ｍＬ）中に希釈した。３−クロロベンゾペルオキソ酸（１．２当量）を加える。この溶液を室温、不活性雰囲気下で４８時間撹拌した。次に、この溶液をＤＣＭで希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で処理した。次に、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３塩溶液（２×１００ｍＬ）、次いで、ブライン（１×１００ｍＬ）で順次抽出した。合わせた水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮し、クロマトグラフィーカラムを用いて精製した。その後、６−（５−クロロ−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルを無色の油状物として得た（７５３ｍｇ）。
【０３３８】
Ｉ．６．  ６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化６０】
2022502431.tif 000090
モノクロリド化合物の酸化のための標準的手順：
６−（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（１．１１ｇ、０．００３６ｍｏｌ、１当量）を無水ＤＣＭ（７ｍＬ）中に希釈した。３−クロロベンゾペルオキソ酸（２．６９ｇ、０．０１０９ｍｏｌ、３当量）を加える。この溶液を室温、不活性雰囲気下で４８時間撹拌した。次に、この溶液をＤＣＭで希釈し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で処理した。次に、有機相を飽和ＮａＨＣＯ３塩溶液（２×１００ｍＬ）、次いで、ブライン（１×１００ｍＬ）で順次抽出した。合わせた水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮し、クロマトグラフィーカラムを用いて精製した。６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルを淡黄色油状物として得た（０．７６０ｇ、６４．３％）。1H NMR (CDCl3), δ 7.36 (m, 5H), 6.68 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 3.67 (t, J=7.68 Hz, 2H), 2.37 (t, J=7.27 Hz, 2H), 1.78 (t of t, J=7.73 Hz, 2H), 1.70 (t of t, J=7.38 Hz, 2H), 1.40 (m, 2H); 13C NMR (500 MHz, CDCl3), δ 173.2 (-O-C=O), 157.0 (-N-C=O), 144.6 (Cl-HC=CH-), 136.0 (芳香族環由来のcoquet.), 128.6-128.2 (H-Aromatic’s), 123.6 (Cl-HC=CH-), 66.2 (-CH2-O), 40.3 (-CH2-N-), 34.0 (-CH2-C=O), 27.9, 26.0, 24.2; Rt,1 (in ACN): 2.49; MS ES+ M/Z: 371.83。
【０３３９】
実施例１．  ６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸
【化６１】
2022502431.tif 000091
６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルから出発し、ベンジルエステルの脱保護の標準的手順の後に、６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸を明白色粉末として得た（０．４４５ｇ、７７％）。1H NMR (CDCl3), δ 10.89 (br. s, 1H), 6.70 (s, 1H), 3.70 (t, J=7.43 Hz, 2H), 2.38 (t, J=7.38 Hz, 2H), 1.81 (t of t., J=7.60 Hz, 2H), 1.69 (t of t, J=7.71 Hz, 2H), 1.43 (t of t分割, J=7.75 Hz, J=3.31 Hz, 2H); 13C NMR (500 MHz, CDCl3), δ 178.7 (O=C-OH), 157.1 (-N-C=O), 144.7 (Cl-HC=CH-), 123.6 (Cl-HC=CH-), 40.2 (-CH2-N), 33.5 (-CH2-C=O), 27.9, 25.9, 23.9; Rt,1 (in ACN): 1.98; MS ES+ m/z: 349.89。
【０３４０】
Ｉ．７．  ６−（４，５−ジクロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化６２】
2022502431.tif 000092
６，６’−（（３，３’−ジスルファンジイルビス（プロパノイル））ビス（アザンジイル））ジヘキサン酸ジベンジル（３．２１ｇ、０．００５２ｍｏｌ、１当量）を無水ＤＣＭ（２６ｍＬ）に溶解させた。この溶液にＳＯ２Ｃｌ２（純度９７％、３．８０ｍＬ、０．０４７ｍｏｌ、９当量）を滴下し、この混合物を室温、不活性雰囲気下で、２４時間撹拌した。溶液は明澄となり、淡黄色となった。次に、この混合物を水（２×１００ｍＬ）およびブライン（１×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、次いで、減圧下で濃縮し、クロマトグラフィーカラムを用いて精製した。６−（４，５−ジクロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルを淡黄色油状物として得た（１．３９１ｇ、３５．７％）。1H NMR (CDCl3), δ 7.35 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 3.79 (t, J=7.18 Hz, 2H), 2.37 (t, J=7.33 Hz, 2H), 1.70 (m, 4H), 1.38 (m, 2H); 13C NMR (500 MHz, CDCl3), δ 173.2 (-O-C=O), 161.9 (-N-C=O), 138(-CH2-O-),.3 (Cl-C-S-), 135.6 (芳香族環由来のcruet), 128.6-128.3 (5 H-aromatic), 115.1 (Cl-C-C=O), 66.2, 44.9 (-CH2-N-), 33.9 (-CH2-C=O), 29.1, 25.9, 24.3; Rt,1 (in ACN): 2.50; MS ES+ m/z: 373.75。
【０３４１】
Ｉ．８．  ６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化６３】
2022502431.tif 000093
ジクロリド化合物の酸化のための標準的手順：
三塩化ルテニウム一水和物（１６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ、０．０１３当量）を、水：ＤＣＭ：ＡＣＮ（２：１：１、１ｍｌ）中、６−（４，５−ジクロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（１．９４ｇ、０．００５２ｍｏｌ、１当量）の撹拌溶液に一度に加えた。次に、過ヨウ素酸ナトリウム（３．３３ｇ、０．０１５６ｍｏｌ、３当量）を５分かけて加え、得られた混合物を室温、不活性雰囲気下で９０分間撹拌した。固体を濾過し、濾液を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。灰色の固体を得、次に、クロマトグラフィーカラムを用いて精製し、６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルを淡黄色油状物として得た（０．９３０ｇ、４４．２％）。1H NMR (CDCl3), δ 7.36 (m,5H), 5.12 (s, 2H), 3.72 (t, J=7.53 Hz, 2H), 2.73 (t, J=7.50 Hz, 2H), 1.80 (t of t, J=7,53 Hz, 2H), 1.70 (t of t, J=7.70 Hz), 1.41 (m, 2H); 13C NMR (500 MHz, CDCl3), δ 173.1 (-O-C=O-), 154.1 (N-C=O), 138.0 (Cl-C-SO2-), 136.0 (芳香族環由来のcoquet.), 130.7 1 (Cl-C-C=O), 128.6-128.3 (5 H-chromatic), 66.2 (-CH2-O-), 41.1 (-CH2-N-), 33.9 (-CH2-C=O), 27.9, 26.0, 24.2; Rt,1 (in ACN): 2.59; MS ES+ m/z: 405.76。
【０３４２】
実施例２．  ６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸
【化６４】
2022502431.tif 000094
ベンジルエステルの脱保護の標準的手順：
６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（０．９３０ｇ、２．２３ｍｍｏｌ、１当量）を無水ＤＣＭ（１１．５ｍＬ）中に希釈した。メタンスルホン酸（１．５ｍＬ、０．０２３ｍｏｌ、１０当量）を加えた。この溶液を室温、不活性雰囲気下で２４時間撹拌した。次に、この溶液をＤＣＭで希釈し、水（５０ｍＬ）で処理した。有機層を水（２×１００ｍＬ）、次いで、ブライン（１×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、次いで、クロマトグラフィーカラムを用いて精製した。６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸を明白色粉末として得た（０．５６３ｇ、７８％）。1H NMR (500 MHz, CDCl3), δ=3.76 (t, J=7.34 Hz, 2H), 2.38 (t, J=7.32 Hz, 2H), 1.83 (t of t, J=7.65 Hz, 2H), 1.70 (t of t, J=7.77 Hz, 2H), 1.45 (t of t, J=7.54 Hz, J=3.31 Hz, 2H); 13C NMR (500 MHz, CDCl3), δ 178.2 (O=C-OH), 154.2 (N-C=O), 138.1 (Cl-C-SO2-), 130.9 (Cl-C-C=O), 41.1 (-CH2-N-), 33.4 (-CH2-C=O), 27.9, 25.9, 23.9; Rt,1 (in ACN): 2.09; MS ES+ m/z: 315.76。
【０３４３】
Ｉ．９．  ６−（４−ブロモ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化６５】
2022502431.tif 000095
ＣＣｌ４（４０ｍＬ）中、６−（１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（６−（３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルから出発し、モノクロリド化合物の酸化のための標準的手順に従って得た）（３ｇ、８．８９ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、Ｂｒ２（１．２ｍＬ、１９．５８ｍｍｏｌ、２．２当量）を周囲温度で撹拌しながら３０分かけて滴下し、７５℃で一晩撹拌した。この反応混合物を真空濃縮し、ＣＨＣｌ３（４０ｍＬ）で希釈し、その後、ピリジン（０．９ｇ）を加えた。得られた溶液を周囲温度で３０分間撹拌し、次いで、５０ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ３溶液を加えることにより急冷した。得られた混合物を飽和炭酸ナトリウム（２×５０ｍＬ）および５０ｍＬのブラインで洗浄した。得られた混合物を真空濃縮し、残渣を、酢酸エチル／石油エーテル（１：５）を用いてシリカゲルカラムにより精製し、０．４ｇ（１０．８％）の６−（４−ブロモ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルを淡黄色油状物として得た。LC-MS (ES, m/z): 416 [M+H]+, 433[M+NH4] +; 1H-NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ 7.42 - 7.28 (m, 2H), 5.12 (s, 1H), 3.69 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 2.38 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 1.86 - 1.64 (m, 2H), 1.47 - 1.34 (m, 1H)。
【０３４４】
実施例３．  ６−（４−ブロモ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸
【化６６】
2022502431.tif 000096
ジオキサン（１０ｍＬ）中、６−（４−ブロモ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（１ｇ、２．４０ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、４Ｎ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）を０℃で撹拌しながら滴下した。得られた溶液を室温で２日間撹拌した。得られた混合物を真空濃縮し、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空濃縮した。残渣を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）を用いて、シリカゲルカラムにより精製し、１００ｍｇ（１３％）の６−（４−ブロモ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸を白色固体として得た。LC-MS (ES, m/z): 308[M+NH4] +, 326/328[M+H]+; 1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ 7.58 (s, 1H), 3.75 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.41 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.78 (dq, J = 34.6, 7.4 Hz, 4H), 1.47 (t, J = 7.7 Hz, 2H)。
【０３４５】
Ｘ１＝ＯＲのリンカーの合成のための合成経路の例：
【化６７】
2022502431.tif 000097
Ｉ．１０．  ６−（５−（４−シアノフェノキシ）−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化６８】
2022502431.tif 000098
ＴＨＦ（２ｍＬ）中、ＮａＨ（０．６３９ｍｍｏｌ）の混合物に、０℃で、ＴＨＦ（２ｍＬ）中、４−ヒドロキシベンゼンカルボニトリル（７６ｍｇ、０６３９ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。撹拌下、３０分後に、ＴＨＦ（２ｍＬ）中、６−（５−クロロ−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（２５０ｍｇ、０，７０３ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この反応混合物を室温で１８時間撹拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ（１０％水溶液）を加えた。次に、有機相をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し(filterted)、濃縮した。粗生成物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物（８０／２０）を用い、シリカゲルカラムで精製し、６−（５−（４−シアノフェノキシ）−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（２１０ｍｇ、収率７５％）を無色の油状物として得た。LC-MS (ES, m/z): 439.0 [M+H]+; 1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ 7.79 (m, 2H), 7.35 (m, 7H), 5.59 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 3.69 (m, 2H), 2.37 (m, 2H), 1.71 (m, 4H), 1.39 (m, 2H)。
【０３４６】
Ｉ．１１．  ６−（５−（４−シアノフェノキシ）−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化６９】
2022502431.tif 000099
６−（５−（４−シアノフェノキシ）−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルから出発し、モノクロリド化合物の酸化のための標準的手順に従い、無色の油状物として得た（１３６ｍｇ、収率４８％）。LC-MS (ES, m/z): 455.0 [M+H]+; 1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ 7.82 (m, 2H), 7.40 (m, 2H), 7.35 (m, 5H), 5.63 (s, 1H), 5.12 (s, 2H), 3.65 (m, 2H), 2.38 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.70 (m, 2H), 1.41 (m, 2H)。
【０３４７】
実施例４．  ６−（５−（４−シアノフェノキシ）−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸
【化７０】
2022502431.tif 000100
６−（５−（４−シアノフェノキシ）−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルから出発し、ベンジルエステルの脱保護のための標準的手順に従い、白色固体として得た（３８ｍｇ、収率３５％）。LC-MS (ES, m/z): 365.0 [M+H]+; 1H-MR (300 MHz, クロロホルム-d) 7.82 (m, 2H), 7.41 (m, 2H), 5.65 (s, 1H), 3.67 (m, 2H), 2.38 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.69 (m, 2H), 1.44 (m, 2H)。
【０３４８】
Ｉ．１２．  ６−（５−メトキシ−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化７１】
2022502431.tif 000101
メタノール（５ｍＬ）およびトリエチルアミン（１１３μｌ、０，８３５ｍｍｏｌ）中、６−（５−クロロ−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（２７０ｍｇ、０，７５９ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１８時間撹拌した。次に、揮発性物質を真空下で除去し、残渣をシリカカラム  シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ（１／１）で精製し、６−（５−メトキシ−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（１０７ｍｇ、４０％）を黄色油状物として得た。LC-MS (ES, m/z): 352.0 [M+H]+; 1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ 7.36 (m, 5H), 5.57 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.60 (m, 2H), 2.37 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.69 (m, 2H), 1.39 (m, 2H)。
【０３４９】
Ｉ．１３．  ６−（５−メトキシ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル
【化７２】
2022502431.tif 000102
６−（５−メトキシ−１−オキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルから出発し、モノクロリド化合物の酸化のための標準的手順に従い、白色固体として得た（６２ｍｇ、収率３６％）。LC-MS (ES, m/z): 368.0 [M+H]+; 1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ 7.36 (m, 5H), 5.57 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 3.60 (m, 2H), 2.37 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.69 (m, 2H), 1.39 (m, 2H)。
【０３５０】
実施例５．  ６−（５−メトキシ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸
【化７３】
2022502431.tif 000103
６−（５−メトキシ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルから出発し、ベンジルエステルの脱保護のための標準的手順に従い、白色固体として得た（３７ｍｇ、収率６７％）。HRMS (ES, m/z): [M+H] 理論値278.0698対して実測値278.0691; 1H-NMR (300 MHz, クロロホルム-d) δ 5.60 (s, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.62 (m, 2H), 2.36 (m, 2H), 1.77 (m, 2H), 1.68 (m, 2H), 1.42 (m, 2H)。
【０３５１】
Ｉ．１４．  ４−（アミノメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸ベンジル  ４−メチルベンゼンスルホン酸塩
【化７４】
2022502431.tif 000104
トルエン（５０ｍＬ）中、４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（１０ｇ、６３．６１ｍｍｏｌ、１当量）、フェニルメタノール（５５．０３ｇ、５０８．８７ｍｍｏｌ、５２．９１ｍＬ、８当量）およびＴｓＯＨ．Ｈ２Ｏ（１２．７０ｇ、６６．７９ｍｍｏｌ、１．０５当量）の混合物を、トルエンスルホン酸一水和物からの凝縮水を回収するためにディーン・スターク装置を用い、１４０℃で１６時間撹拌した。数時間還流した後に反応物は透明となった。この透明な反応混合物をＴＢＭＥ（５００ｍＬ）に注ぎ、生じた白色固体を濾別し、ＴＢＭＥ（２００ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥させた。４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸ベンジル；４−メチルベンゼンスルホン酸（２６．６ｇ、６３．４０ｍｍｏｌ、収率９９．６８％）を白色固体として得た；1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ ppm 7.71 (d, J=8.16 Hz, 2 H) 7.28 - 7.40 (m, 5 H) 7.23 (d, J=7.94 Hz, 2 H) 5.11 (s, 2 H) 2.77 (d, J=7.06 Hz, 2 H) 2.29 - 2.39 (m, 4 H) 1.99 - 2.08 (m, 2 H) 1.85 (br d, J=11.25 Hz, 2 H) 1.53 - 1.65 (m, 1 H) 1.43 (qd, J=12.97, 3.20 Hz, 2 H) 1.06 (qd, J=12.75, 3.20 Hz, 2 H)。
【０３５２】
Ｉ．１５．  ４，４’−（（（３，３’−ジスルファンジイルビス（プロパノイル））ビス（アザンジイル））ビス（メチレン））ビス（シクロヘキサン−１−カルボン酸ジベンジル塩）
【化７５】
2022502431.tif 000105
ＤＣＭ（３００ｍＬ）中、３−（２−カルボキシエチルジスルファニル）プロパン酸（６．６４ｇ、３１．５８ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（９．３９ｇ、６９．４８ｍｍｏｌ、２．２当量）およびＴＥＡ（１２．７８ｇ、１２６．３３ｍｍｏｌ、１７．５８ｍＬ、４当量）の溶液に、０℃でＥＤＣＩ（１３．３２ｇ、６９．４８ｍｍｏｌ、２．２当量）を加えた。次に、４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸ベンジル；４−メチルベンゼンスルホン酸（２６．５ｇ、６３．１７ｍｍｏｌ、２当量）をこの温度で加えた。この混合物を０〜２０℃で４時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ＝０．５）は、反応が完了していたことを示した。この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１００ｍＬ）に注ぎ、有機層を分離した。水層をＤＣＭ（２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解させ、白色沈澱が形成するまで石油エーテルを極めてゆっくり添加した。濾過し、石油エーテルで洗浄し、真空乾燥させた。４−［［３−［［３−［（４−ベンジルオキシカルボニルシクロヘキシル）メチルアミノ］−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（１９ｇ、２８．４０ｍｍｏｌ、収率８９．９４％）を白色固体として得た；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.27 - 7.41 (m, 10 H) 6.05 (br s, 2 H) 5.11 (d, J=1.54 Hz, 4 H) 3.10 - 3.17 (m, 4 H) 2.96 - 3.02 (m, 4 H) 2.54 - 2.63 (m, 4 H) 2.30 (td, J=12.24, 1.76 Hz, 2 H) 2.04 (br d, J=12.57 Hz, 4 H) 1.85 (br d, J=12.79 Hz, 4 H) 1.38 - 1.54 (m, 6 H) 0.99 (q, J=12.72 Hz, 4 H)。
【０３５３】
Ｉ．１６．  ４−（（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸ベンジル
【化７６】
2022502431.tif 000106
Ｉ．１７．  ４−（（４，５−ジクロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸ベンジル
【化７７】
2022502431.tif 000107
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中、４−［［３−［［３−［（４−ベンジルオキシカルボニルシクロヘキシル）メチルアミノ］−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（１０ｇ、１４．９５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、０℃で、塩化スルフリル（１０．０９ｇ、７４．７５ｍｍｏｌ、７．４７ｍＬ、５当量）を滴下した。この混合物を０〜２０℃で１２時間撹拌した。この塩化スルフリルの添加の後に透明な溶液が得られた。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ．（主要）＝０．５）は、反応が完了していたことを示した。この混合物をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（５０ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。シリカゲルカラムでの精製により、４−［（３−オキソイソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（２．１ｇ、３．４２ｍｍｏｌ、収率１１．４４％、純度５４％）を褐色固体として得、４−［（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（７．１ｇ、１８．８２ｍｍｏｌ、収率６２．９６％、純度９７％）を灰白色固体として得、４−［（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（０．４ｇ、８６９．３１μｍｏｌ、収率２．９１％、純度８７％）を褐色油状物として得た。
【０３５４】
Ｉ．１８．  ４−（（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸ベンジル
【化７８】
2022502431.tif 000108
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）中、４−［（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（２ｇ、５．０１ｍｍｏｌ、１当量）、ＡＣＮ（１０ｍＬ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（２２．５８ｍｇ、１００．１４μｍｏｌ、０．０２当量）およびＮａＩＯ４（６．４３ｇ、３０．０４ｍｍｏｌ、１．６６ｍＬ、６当量）を０℃、Ｎ２下で一度に加えた。次に、この混合物を２０℃に加熱し、１６時間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完了していたことを示した（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ−ｐ１＝０．６）。この混合物を濾過し、濾液を窒素流により濃縮し、再び現れた固体を濾過し、濾液を窒素により濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００〜２００メッシュシリカゲル、石油エーテル：酢酸エチル＝２：１）により精製し、４−［（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（１．４ｇ、３．１７ｍｍｏｌ、収率６３．２５％、純度９０％）を白色固体として得た。
【０３５５】
実施例６．  ４−（（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸
【化７９】
2022502431.tif 000109
ＤＣＭ（５ｍＬ）中、４−［（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（０．１ｇ、２２６．２０μｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＭｓＯＨ（２１７．３９ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ、１６１．０３μＬ、１０当量）３０℃、Ｎ２下で一度に加えた。この混合物を３０℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣは反応が完了していたことを示した。ＬＣＭＳ（ＥＴ１７９９２−５４−Ｐ１Ａ）は、目的のＭＳが検出されたことを示した。この混合物を氷水（５ｍＬ）に注ぎ、５分間撹拌した。水相をＤＣＭ（３ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機相をブライン（３ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００〜２００メッシュシリカゲル、石油エーテル：／酢酸エチル＝２：１）により精製し、４−［（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸（０．０２ｇ、６４．９９μｍｏｌ、収率２８．７３％）を無色の油状物として得た；LC-MS (ES, m/z): 306.0 [M-H]-; 1H-NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ 12.01 (bs, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.45 (m, 2H), 2.11 (m, 1H), 1.90 (m, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.73 (m, 1H), 1.23 (m, 2H), 0.96 (m, 2H)。
【０３５６】
Ｉ．１９  ４−（（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸ベンジル
【化８０】
2022502431.tif 000110
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＡＣＮ（１０ｍＬ）中、４−［（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（１．２ｇ、２．７０ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（１２．１６ｍｇ、５３．９６μｍｏｌ、０．０２当量）およびＮａＩＯ４（３．４６ｇ、１６．１９ｍｍｏｌ、８９６．９６μＬ、６当量）を０℃、Ｎ２下で一度に加えた。この混合物を２０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは反応が完了していたことを示した（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ−ｐ１＝０．７）。この混合物を氷水（３０ｍＬ）に注ぎ、５分間撹拌した。水相を酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機相をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００〜２００メッシュシリカゲル、石油エーテル：酢酸エチル＝５：１〜３：１）により精製し、４−［（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（０．８ｇ、１．６７ｍｍｏｌ、収率６１．７３％、純度９０％）を白色固体として得た。
【０３５７】
実施例７．  ４−（（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸
【化８１】
2022502431.tif 000111
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中、４−［（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（０．８ｇ、１．６７ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＭｓＯＨ（１．６０ｇ、１６．６５ｍｍｏｌ、１．１９ｍＬ、１０当量）を３０℃、Ｎ２下で一度に加えた。この混合物を３０℃で１６時間撹拌した。ＬＣＭＳは反応が完了していたことを示した。この混合物を氷水（５ｍＬ）に注ぎ、減圧下で濃縮し、その後、固体が現れた。この溶液を濾過し、ＥｔＯＡｃ（２ｍＬ＊３）により摩砕し、濾過ケーキを真空乾燥させ、４−［（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸（０．１７０ｇ、４８６．８６μｍｏｌ、収率２９．２３％、純度９８％）を白色固体として得た；LC-MS (ES, m/z): 364.0 [M+Na]+ ; 1H-NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ 11.99 (bs, 1H), 3.49 (m, 2H), 2.11 (m, 1H), 1.88 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.66 (m, 1H), 1.23 (m, 2H), 0.96 (m, 2H)。
【０３５８】
Ｉ．２０  ３，３’−（（（３，３’−ジスルファンジイルビス（プロパノイル））ビス（アザンジイル））ビス（４，１−フェニレン））ジプロピオン酸ジベンジル
【化８２】
2022502431.tif 000112
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中、３−（２−カルボキシエチルジスルファニル）プロパン酸（６５１．５６ｍｇ、３．１０ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（９２１．１５ｍｇ、６．８２ｍｍｏｌ、２．２当量）およびＴＥＡ（１．２５ｇ、１２．３９ｍｍｏｌ、１．７３ｍＬ、４当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（１．３１ｇ、６．８２ｍｍｏｌ、２．２当量）を０℃で加えた。次に、４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸ベンジル；４−メチルベンゼンスルホン酸（２．６ｇ、６．２０ｍｍｏｌ、２当量）をこの温度で加えた。この混合物を０〜２０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ＝０．５）は、反応が完了していたことを示した。この混合物を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）に注ぎ、有機層を分離した。水層をＤＣＭ（５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。４−［［３−［［３−［（４−ベンジルオキシカルボニルシクロヘキシル）メチルアミノ］−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（１．１ｇ、１．６４ｍｍｏｌ、収率５３．０７％）を白色固体として得た；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.28 - 7.41 (m,°10 H) 5.96 (br s, 2 H) 5.10 (s, 4 H) 3.13 (t, J=6.39 Hz, 4 H) 2.98 (t, J=6.84 Hz, 4 H) 2.57 (t, J=6.95 Hz, 4 H) 2.23 - 2.34 (m, 2 H) 2.03 (br d, J=12.79 Hz, 4 H) 1.84 (br d, J=12.13 Hz, 4 H) 1.37 - 1.63 (m,°6 H) 0.91 - 1.05 (m, 4 H)。
【０３５９】
Ｉ．２１．  ３−（４−（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）フェニル）プロパン酸ベンジル
【化８３】
2022502431.tif 000113
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中、３−［４−［３−［［３−［４−（３−ベンジルオキシ−３−オキソ−プロピル）アニリノ］−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］フェニル］プロパン酸ベンジル（１０ｇ、１４．６０ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、塩化スルフリル（５．９１ｇ、４３．８０ｍｍｏｌ、４．３８ｍＬ、３当量）を２５℃、Ｎ２下で滴下した。この溶液を２５℃で８時間撹拌した。塩化スルフリルを添加した際に溶液の色は無色から黒色に変化し、その後、１時間後に黄色に変化した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ＝０．６０）は、出発材料が消費され、２つの新たなスポットが生じていたことを示した。残渣を氷水（２００ｍｌ）に注ぎ、次いで、真空濃縮してＤＣＭを除去した。濃縮後、水相を酢酸エチル（２００ｍＬ＊３）で抽出、次いで、合わせた有機相を水（２００ｍＬ＊１）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝５：１〜１：１）により精製し、３−［４−（３−オキソイソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸ベンジル（２．５ｇ、７．３７ｍｍｏｌ、収率５０．４７％）を得；1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ = 8.56 (d, J=6.2 Hz, 1H), 7.44 - 7.39 (m, 2H), 7.37 - 7.26 (m, 7H), 6.30 (d, J=6.4 Hz, 1H), 5.09 (s, 2H), 2.98 (t, J=7.4 Hz, 2H), 2.78 - 2.66 (m, 2H)；および３−［４−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸ベンジル（５ｇ、１３．３７ｍｍｏｌ、収率９１．６０％）を黄色固体として得た; １Ｈ  ＮＭＲ（ＥＴ１７９９２−２２−Ｐ２Ａ）によりＥＴ１７９９２−２２−Ｐ２と確認された。1H NMR (400MHz, メタノール-d4) δ = 7.42 - 7.36 (m, 2H), 7.35 - 7.25 (m, 7H), 6.49 - 6.45 (m, 1H), 5.08 (s, 2H), 2.99 - 2.91 (m, 2H), 2.69 (t, J=7.5 Hz, 2H)。
【０３６０】
Ｉ．２２．  ３−（４−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）フェニル）プロパン酸ベンジル
【化８４】
2022502431.tif 000114
Ｈ２Ｏ（１２ｍＬ）、ＤＣＭ（６ｍＬ）およびＡＣＮ（６ｍＬ）中、３−［４−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸ベンジル（１．４ｇ、３．７４ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＮａＩＯ４（４．８１ｇ、２２．４７ｍｍｏｌ、１．２５ｍＬ、６当量）を２５℃で一度に加え、次いで、この混合物をＮ２で３回パージした。次に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（４２．２１ｍｇ、１８７．２４μｍｏｌ、０．０５当量）をＮ２下で加えた。この混合物を２５℃で１２時間撹拌した。この混合物は混濁し、灰色になった。残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）に注ぎ、次いで、濾過した。濾液を真空濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１０：１〜４：１）により精製し、３−［４−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸ベンジル（４６０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、収率２８．７５％、純度９５％）を黄色固体として得た；１Ｈ  ＮＭＲ（ＥＴ１７９９２−６３−Ｐ１Ａ）によりＥＴ１７９９２−６３−Ｐ１と確認された。1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.41 - 7.30 (m, 7H), 6.84 (s, 1H), 5.13 (s, 2H), 3.04 (t, J=7.6 Hz, 2H), 2.72 (t, J=7.7 Hz, 2H)。
【０３６１】
実施例８．  ３−（４−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）フェニル）プロパン酸
【化８５】
2022502431.tif 000115
ＤＣＭ（１５ｍＬ）中、３−［４−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸ベンジル（４６０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、メタンスルホン酸（１．０９ｇ、１１．３３ｍｍｏｌ、８０６．８７μＬ、１０当量）を１０℃で滴下した。次に、この溶液を３５℃に加熱し、１２時間撹拌した。残渣を水（１５ｍｌ＊３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を水（２０ｍｌ）に注ぎ、次いで、濾過した。濾過ケーキをＤＣＭ（５ｍｌ）に溶解させ、次いで、この残渣に石油エーテル（３０ｍｌ）を注ぎ、溶液を１０℃で２分撹拌し、次いで、濾過し、濾過ケーキを真空乾燥させ、３−［４−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸（１６２ｍｇ、５０１．８１μｍｏｌ、収率４４．２７％、純度９７．８％）を白色固体として得た； LC-MS (ES, m/z): 313.9 [M-H]-; 1H-NMR (300 MHz, DMSO-D6) δ 12.18 (bs, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.37 (m, 2H), 2.89 (m, 2H), 2.58 (m, 2H)。
【０３６２】
Ｉ．２３．  ３−（４−（４，５−ジクロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）フェニル）プロパン酸ベンジル
【化８６】
2022502431.tif 000116
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ＡＣＮ（１０ｍＬ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）中、４−［（３−オキソイソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（１．２ｇ、３．３２ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＲＣｌ３．Ｈ２Ｏ（１４．９５ｍｇ、６６．３３μｍｏｌ、０．０２当量）およびＮａＩＯ４（４．２６ｇ、１９．９０ｍｍｏｌ、１．１０ｍＬ、６当量）を０℃、Ｎ２下で一度に加えた。次に、この混合物を２０℃に加熱し、１６時間撹拌した。この混合物を濾過し、濾液を窒素流により濃縮し、固体が再び現れ、濾過し、濾液を窒素により濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（カラム高：２５０ｍｍ、直径：１００ｍｍ、１００〜２００メッシュシリカゲル、石油エーテル：酢酸エチル＝２：１）により精製し、４−［（１，１，３−トリオキソイソチアゾール−２−イル）メチル］シクロヘキサンカルボン酸ベンジル（０．４５ｇ、１．１１ｍｍｏｌ、収率３３．６０％、純度９０％）を無色の油状物として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.53 (dd, J=3.2, 8.7 Hz, 2H), 7.17 (ddd, J=3.2, 7.6, 9.0 Hz, 2H), 6.97 - 6.89 (m, 2H), 5.56 (br s, 1H), 4.12 - 4.06 (m, 4H), 3.92 (s, 5H), 3.55 (q, J=5.1 Hz, 5H)。
【０３６３】
Ｉ．２４．  ３−（４−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）フェニル）プロパン酸ベンジル
【化８７】
2022502431.tif 000117
Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、ＤＣＭ（５ｍＬ）、ＡＣＮ（５ｍＬ）中、３−［４−（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸ベンジル（６５０ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＩＯ４（１．３６ｇ、６．３７ｍｍｏｌ、３５２．８６μＬ、４当量）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（７．１８ｍｇ、３１．８４μｍｏｌ、０．０２当量）を０℃、Ｎ２下で一度に加えた。この混合物を２０℃で２時間撹拌した。残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝３０：１〜５：１）により精製し、３−［４−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸ベンジル（１８０ｍｇ、収率２５．６８％）を黄色固体として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.43 - 7.29 (m, 9H), 5.13 (s, 2H), 3.05 (t, J=7.6 Hz, 2H), 2.73 (t, J=7.6 Hz, 2H)。
【０３６４】
実施例９．  ３−（４−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）フェニル）プロパン酸
【化８８】
2022502431.tif 000118
ＤＣＭ（５ｍＬ）中、３−［４−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸ベンジル（１８０ｍｇ、４０８．８１μｍｏｌ、１当量）の溶液に、メタンスルホン酸（３９２．８９ｍｇ、４．０９ｍｍｏｌ、２９１．０３μＬ、１０当量）を１０℃で滴下した。この溶液を３５℃で１２時間撹拌した。残渣を水（５ｍｌ）に注ぎ、次いで、濾過した。濾過ケーキを水（１０ｍｌ＊３）で洗浄し、次いで、真空乾燥させた。残渣をジクロロメタン：メタノール（５．５ｍｌ、ｖ／ｖ＝１０：１）に溶解させ、次いで、分取ＴＬＣ（酢酸エチル、Ｒｆ＝０．２６）により精製し、３−［４−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）フェニル］プロパン酸（５７．６４ｍｇ、１５６．８３μｍｏｌ、収率３８．３６％、純度９５．２７８％）を白色固体として得た；LC-MS (ES, m/z): 347.9 [M-H]-; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.22 (br s, 1H), 7.51 - 7.40 (m, 4H), 2.90 (br t, J=7.6 Hz, 2H), 2.60 (br t, J=7.6 Hz, 2H)。
【０３６５】
Ｉ．２５．  ４，４’−（（３，３’−ジスルファンジイルビス（プロパノイル））ビス（アザンジイル））二安息香酸ジベンジル
【化８９】
2022502431.tif 000119
ＤＭＦ（１２０ｍＬ）中、３−（２−カルボキシエチルジスルファニル）プロパン酸（６．０１ｇ、２８．６０ｍｍｏｌ、１当量）およびピリジン（１４．９３ｇ、１８８．７７ｍｍｏｌ、１５．２４ｍＬ、６．６当量）の溶液に、ＥＤＣＩ（１２．０６ｇ、６２．９２ｍｍｏｌ、２．２当量）および４−アミノ安息香酸ベンジル（１３ｇ、５７．２０ｍｍｏｌ、２当量）を１０℃で加えた。次に、この混合物を５０℃で１２時間撹拌した。残渣を氷水（２００ｍＬ）に注ぎ、２０分間撹拌した。水相を酢酸エチル（２００ｍＬ＊３）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ（２００ｍＬ＊３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。次に、残渣を石油エーテル：ＤＣＭ＝５０：１から再結晶させて固体を得た。この固体を石油で３回洗浄し（１５０ｍｌ＊３）、次いで、真空乾燥させ、４−［３−［［３−（４−ベンジルオキシカルボニルアニリノ）−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］安息香酸ベンジル（１４ｇ、粗生成物）を白色固体として得た；1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 10.37 (s, 2H), 8.02 - 7.83 (m, 4H), 7.72 (d, J=8.8 Hz, 4H), 7.48 - 7.32 (m, 10H), 5.31 (s, 4H), 3.05 - 2.98 (m, 4H), 2.81 - 2.75 (m, 4H)。
【０３６６】
Ｉ．２６．  ４−（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）安息香酸ベンジル
【化９０】
2022502431.tif 000120
Ｉ．２７．  ４−（４，５−ジクロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）安息香酸ベンジル
【化９１】
2022502431.tif 000121
ＤＣＭ（１２０ｍＬ）中、４−［３−［［３−（４−ベンジルオキシカルボニルアニリノ）−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］安息香酸ベンジル（９．４ｇ、１４．９５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、塩化スルフリル（１０．０９ｇ、７４．７５ｍｍｏｌ、７．４７ｍＬ、５当量）を０℃で滴下した。この混合物を０〜２０℃で１２時間撹拌した。この混合物は数分間撹拌した後に透明となった。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１）は反応が完了していたことを示した。この混合物をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２００ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（２００ｍＬ＊２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をシリカゲル（石油エーテル：酢酸エチル＝５：１〜１：１）でのカラムクロマトグラフィーにより精製し、４−（３−オキソイソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（１．２ｇ、３．４３ｍｍｏｌ、収率１１．４７％、純度８９％）を灰白色固体として得；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.09 - 8.27 (m, 3 H) 7.63 - 7.82 (m, 2 H) 7.32 - 7.52 (m, 5 H) 6.34 (br d, J=6.36 Hz, 1 H) 5.39 (s, 2 H);４−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（３．５ｇ、１０．０１ｍｍｏｌ、収率３３．４９％、純度９８．９２％）を灰白色固体として得；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.15 (d, J=8.60 Hz, 2 H) 7.69 (d, J=8.82 Hz, 2 H) 7.33 - 7.49 (m, 4 H) 6.38 (s, 1 H) 5.38 (s, 2 H)および４−（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（２．８ｇ、７．１９ｍｍｏｌ、収率２４．０６％、純度９７．６８％）を灰白色固体として得た；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.18 (d, J=8.60 Hz, 2 H) 7.71 (d, J=8.60 Hz, 2 H) 7.33 - 7.50 (m, 4 H) 5.39 (s, 2 H)。
【０３６７】
Ｉ．２８．  ４−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）安息香酸ベンジル
【化９２】
2022502431.tif 000122
Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、ＡＣＮ（５ｍＬ）およびＤＣＭ（５ｍＬ）中、４−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（１ｇ、２．８９ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（１３．０４ｍｇ、５７．８４μｍｏｌ、０．０２当量）およびＮａＩＯ４（２．４７ｇ、１１．５７ｍｍｏｌ、６４０．９７μＬ、４当量）を０℃、Ｎ２下で一度に加えた。次に、この混合物を２０℃に加熱し、２時間撹拌した。残渣を濾過し、濾液を水（４０ｍｌ）に注いだ。水相を酢酸エチル（５０ｍＬ＊１）で抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ（３０ｍＬ＊３）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１５：１〜５：１）により精製し、４−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（５００ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ、収率４５．７７％）を黄色油状物として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 8.27 - 8.21 (m, 2H), 7.61 - 7.55 (m, 2H), 7.49 - 7.34 (m, 5H), 6.87 (s, 1H), 5.40 (s, 2H)。
【０３６８】
実施例１０．  ４−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）安息香酸
【化９３】
2022502431.tif 000123
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中、４−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（４５０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、メタンスルホン酸（１．１４ｇ、１１．９１ｍｍｏｌ、８４７．９４μＬ、１０当量）を１０℃で滴下した。この溶液を３５℃１０時間撹拌した。残渣を真空濃縮してＤＣＭを除去した。次に、残渣を酢酸エチル（１０ｍｌ）に溶解させ、次いで、有機相を水（２０ｍＬ＊５）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をメタノール（３ｍｌ）に溶解させ、次いで、石油エーテル（３０ｍｌ）を残渣に注ぎ、この溶液を１０℃で２分間撹拌し、次いで、濾過し、濾過ケーキを真空乾燥させ、４−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸（１１２．５６ｍｇ、３７９．４８μｍｏｌ、収率３１．８６％、純度９６．９８６％）を白色固体として得た； LC-MS (ES, m/z): 285.9 [M-H]-; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 13.33 (br s, 1H), 8.17 - 8.11 (m, 2H), 7.87 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.67 - 7.61 (m, 2H)。
【０３６９】
Ｉ．２９．  ４−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）安息香酸ベンジル
【化９４】
2022502431.tif 000124
Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、ＡＣＮ（５ｍＬ）およびＤＣＭ（５ｍＬ）中、４−（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（１ｇ、２．６３ｍｍｏｌ、１当量）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（１１．８６ｍｇ、５２．６０μｍｏｌ、０．０２当量）およびＮａＩＯ４（２．２５ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ、５８２．９１μＬ、４当量）を０℃、Ｎ２下で一度に加えた。次に、この混合物を２０℃に加熱し、２時間撹拌した。残渣を濾過し、濾液を真空濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝２０：１〜５：１）により精製し、４−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（１３０ｍｇ、３１５．３５μｍｏｌ、収率１１．９９％）を白色固体として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 8.25 (d, J=8.6 Hz, 2H), 7.58 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.49 - 7.34 (m, 5H), 5.41 (s, 2H)。
【０３７０】
実施例１１．  ４−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）安息香酸
【化９５】
2022502431.tif 000125
ＤＣＭ（５ｍＬ）中、４−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸ベンジル（１３０ｍｇ、３１５．３５μｍｏｌ、１当量）の溶液に、メタンスルホン酸（３０３．０７ｍｇ、３．１５ｍｍｏｌ、２２４．４９μＬ、１０当量）を１０℃で滴下した。この溶液を１０℃で５分間撹拌し、次いで、この溶液を３５℃に加熱し、１０時間撹拌した。溶液の色は無色から黄色に変化した。この反応溶液を水（２０ｍｌ）に注ぎ、次いで、濾過した。濾過ケーキを水（１０ｍｌ＊３）およびＤＣＭ（１０ｍｌ＊３）でそれぞれ３回洗浄した。次に、濾過ケーキを真空乾燥させた。残渣をＤＣＭ（１０ｍｌ）で分散させ、次いで、石油エーテル（３０ｍｌ）を残渣に注ぎ、この混合物を１０℃で２分間撹拌し、次いで、濾過し、濾過ケーキを真空乾燥させ、４−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）安息香酸（９３．４ｍｇ、２８２．９７μｍｏｌ、収率８９．７３％、純度９７．５９０％）を白色固体として得た； LC-MS (ES, m/z): 319.9 [M-H]-; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 8.16 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.68 (d, J=8.4 Hz, 2H)。
【０３７１】
Ｉ．３０．  ３−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸ベンジル  ４−メチルベンゼンスルホン酸塩
【化９６】
2022502431.tif 000126
トルエン（３０ｍＬ）中、３−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］プロパン酸（４ｇ、１８．０８ｍｍｏｌ、１当量）、フェニルメタノール（１５．６４ｇ、１４４．６３ｍｍｏｌ、１５．０４ｍＬ、８当量）およびＴｓＯＨ．Ｈ２Ｏ（３．６１ｇ、１８．９８ｍｍｏｌ、１．０５当量）の混合物を、凝縮水を回収するためにディーン・スターク装置を用い、１４０℃で８時間撹拌した。この反応物は数時間還流した後に透明となった。ＴＬＣ（ジクロロメタン：メタノール＝１０：１、Ｒｆ＝０．３）は、反応が完了していたことを示した。この透明な反応混合物をＴＢＭＥ：石油エーテル（１：１、５０ｍＬ）に注ぎ、透明な溶液を除去した。残渣をＴＢＭＥ：石油エーテル（１：１、５０ｍＬ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。粗生成物３−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル；４−メチルベンゼンスルホン酸（８．９ｇ、粗生成物）を黄色油状物として得た；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.76 (br d, J=8.07 Hz, 2 H) 7.33 - 7.38 (m, 5 H) 7.15 (d, J=7.95 Hz, 2 H) 5.11 (s, 2 H) 3.72 (q, J=6.11 Hz, 4 H) 3.53 - 3.64 (m, 8 H) 3.11 - 3.24 (m, 2 H) 2.53 - 2.69 (m, 2 H) 2.30 - 2.41 (m, 1 H) 2.34 (s, 3 H)。
【０３７２】
Ｉ．３１．  ３−［２−［２−［２−［３−［［３−［２−［２−［２−（３−ベンジルオキシ−３−オキソ−プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］−３−オキソプロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル
【化９７】
2022502431.tif 000127
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中、３−（２−カルボキシエチルジスルファニル）プロパン酸（１．９０ｇ、９．０４ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＯＢｔ（２．６９ｇ、１９．８８ｍｍｏｌ、２．２当量）およびＴＥＡ（４．５７ｇ、４５．１８ｍｍｏｌ、６．２９ｍＬ、５当量）の混合物に、ＥＤＣＩ（３．８１ｇ、１９．８８ｍｍｏｌ、２．２当量）を２０℃で加えた。次に、上記溶液に３−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル；４−メチルベンゼンスルホン酸（８．７４ｇ、１８．０７ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。この混合物を２０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝２：１、Ｒｆ＝０．２５）は、反応が完了していたことを示した。ＭｅＯＨを加え、この溶液を減圧下で濃縮し、真空乾燥させた。残渣をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。粗生成物を分取ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１、Ｒｆ＝０．５）により精製し、３−［２−［２−［２−［３−［［３−［２−［２−［２−（３−ベンジルオキシ−３−オキソ−プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（６．５２ｇ、７．９４ｍｍｏｌ、収率８７．８１％、純度９７％）を黄色油状物として加えた；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.29 - 7.42 (m, 10 H) 6.42 (br s, 2 H) 5.15 (s, 4 H) 3.79 (t, J=6.42 Hz, 4 H) 3.53 - 3.69 (m, 18 H) 2.92 - 3.00 (m, 4 H) 2.62 - 2.71 (m, 4 H) 2.53 - 2.62 (m, 4 H)。
【０３７３】
Ｉ．３２．  ３−（２−（２−（２−（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸ベンジル
【化９８】
2022502431.tif 000128
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−［３−［［３−［２−［２−［２−（３−ベンジルオキシ−３−オキソ−プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］−３−オキソプロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（６．４ｇ、８．０３ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、０℃で、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中、塩化スルフリル（４．３４ｇ、３２．１２ｍｍｏｌ、３．２１ｍＬ、４当量）の溶液を滴下した。この混合物を０〜１０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝０：１、Ｒｆ＝０．１５、０．３５）は、反応が完了していたことを示した。この混合物を氷／水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２００ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ＊２）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過し、真空濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１〜０：１）により精製し、３−［２−［２−［２−（３−オキソイソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（８２０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ、収率１０．３３％、純度８０％）を褐色油状物として得；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.06 (d, J=6.17 Hz, 1 H) 7.30 - 7.41 (m, 5 H) 6.24 (d, J=6.39 Hz, 1 H) 5.15 (s, 2 H) 3.95 - 4.03 (m, 2 H) 3.79 (t, J=6.39 Hz, 2 H) 3.68 - 3.75 (m, 2 H) 3.59 - 3.68 (m, 8 H) 2.63 - 2.70 (m, 2 H)および３−［２−［２−［２−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（２．５ｇ、４．３０ｍｍｏｌ、収率２６．７９％、純度７４％）を無色の油状物として得た；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.28 - 7.43 (m, 5 H) 6.25 (s, 1 H) 5.15 (s, 2 H) 3.92 - 3.98 (m, 2 H) 3.77 - 3.81 (m, 2 H) 3.59 - 3.
71 (m, 10 H) 2.66 (t, J=6.39 Hz, 2 H)。
【０３７４】
Ｉ．３３．  ３−（２−（２−（２−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸ベンジル
【化９９】
2022502431.tif 000129
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）、ＡＣＮ（１０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（１ｇ、２．３３ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＩＯ４（１．９９ｇ、９．３０ｍｍｏｌ、５１５．５７μＬ、４当量）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（２６．２２ｍｇ、１１６．３０μｍｏｌ、０．０５当量）を２０℃、Ｎ２下で一度に加えた。次に、この混合物を２０℃で１時間撹拌した。残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝５：１〜１：１）により精製し、３−［２−［２−［２−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（５６０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、収率５２．１２％、純度１００％）を紫色の油状物として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.42 - 7.29 (m, 5H), 6.70 (s, 1H), 5.15 (s, 2H), 3.92 - 3.86 (m, 2H), 3.77 (td, J=6.0, 11.9 Hz, 4H), 3.68 - 3.58 (m, 8H), 2.67 (t, J=6.5 Hz, 2H)。
【０３７５】
実施例１２．  ３−（２−（２−（２−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸
【化１００】
2022502431.tif 000130
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパンベンジル酸（５６０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、メタンスルホン酸（１．１７ｇ、１２．１２ｍｍｏｌ、８６３．０６μＬ、１０当量）を、１０℃で滴下した。この混合物を３５℃  に加熱し、１０時間撹拌した。溶液の色は黄色になった。残渣を水（３０ｍｌ＊３）で洗浄し、次いで、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（酢酸エチル：酢酸エチル：メタノール：酢酸＝４０：８：１、Ｒｆ＝０．７７）により精製し、３−［２−［２−［２−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（９５．６１ｍｇ、２４０．１６μｍｏｌ、収率１９．８１％、純度９３．３８９％）を無色の油状物として得た；  LC-MS (ES, m/z): 372.1 [M+H]+ ; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.13 (br s, 1H), 7.64 (s, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 2H), 3.61 (td, J=6.0, 16.9 Hz, 4H), 3.54 - 3.46 (m, 8H), 2.43 (t, J=6.4 Hz, 2H)。
【０３７６】
Ｉ．３４．  ３−（２−（２−（２−（４，５−ジクロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸ベンジル
【化１０１】
2022502431.tif 000131
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（１．６ｇ、３．７２ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、塩化スルフリル（１．００ｇ、７．４４ｍｍｏｌ、７４４．１７μＬ、２当量）を０℃で滴下した。この混合物を０〜１０℃で１２時間撹拌した。塩化スルフリルの添加後に透明な淡黄色溶液が得られた。ＴＬＣ（酢酸エチル：石油エーテル＝２：１、Ｒｆ＝０．５）は、反応が完了していたことを示した。この混合物を真空濃縮して粗生成物を得た。残渣をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（５０ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル＝１：２〜２：１）により精製し、３−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（１．０６ｇ、１．７６ｍｍｏｌ、収率４７．１７％、純度７６．９％）を無色の油状物として得た；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.28 - 7.40 (m, 4 H) 5.13 (s, 2 H) 3.98 - 4.04 (m, 2 H) 3.77 (t, J=6.39 Hz, 2 H) 3.67 - 3.72 (m, 2 H) 3.57 - 3.67 (m, 8 H) 2.65 (t, J=6.39 Hz, 2 H)。
【０３７７】
Ｉ．３５．  ３−（２−（２−（２−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸ベンジル
【化１０２】
2022502431.tif 000132
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ＣＨ３ＣＮ（１０ｍＬ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（１ｇ、２．１５ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＩＯ４（１．８４ｇ、８．６１ｍｍｏｌ、４７７．３２μＬ、４当量）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（７．２８ｍｇ、３２．３０μｍｏｌ、０．０１５当量）をＮ２下、０℃で加えた。この混合物を０〜１０℃で２時間撹拌した。ＴＬＣは反応が完了していたことを示した。この混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、濾過して不溶性固体を除去した。有機層を分離し、真空濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１、Ｒｆ＝０．６）により精製し、３−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（８３０ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ、収率７４．９６％、純度９６．５３３％）を無色の油状物として得た；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.28 - 7.41 (m, 5 H) 5.15 (s, 2 H) 3.91 - 3.97 (m, 2 H) 3.75 - 3.83 (m, 4 H) 3.59 - 3.68 (m, 8 H) 2.66 (t, J=6.50 Hz, 2 H)。
【０３７８】
実施例１３．  ３−（２−（２−（２−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸
【化１０３】
2022502431.tif 000133
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（８２０．００ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、メタンスルホン酸（１．５９ｇ、１６．５２ｍｍｏｌ、１．１８ｍＬ、１０当量）を１０℃で滴下した。次に、この溶液を３５℃で加熱し、１０時間撹拌した。残渣をＤＣＭ（２０ｍｌ）で希釈し、次いで、この溶液を水（１５ｍｌ＊３）で洗浄し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（酢酸エチル：酢酸＝２５０：１、Ｒｆ＝０．５５）により精製し、３−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（２４９．４ｍｇ、６０２．７６μｍｏｌ、収率３６．４９％、純度９８．１８０％）を黄色油状物として得た；LC-MS (ES, m/z): 406.0 [M+H]+; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.16 (br s, 1H), 3.85 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.65 (br t, J=5.4 Hz, 2H), 3.61 - 3.45 (m, 10H), 2.43 (t, J=6.3 Hz, 2H)。
【０３７９】
Ｉ．３６．  １−アミノ−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘニコサン−２１−酸ベンジル  ４−メチルベンゼンスルホン酸塩
【化１０４】
2022502431.tif 000134
トルエン（３０ｍＬ）中、フェニルメタノール（２．４５ｇ、２２．６４ｍｍｏｌ、２．３５ｍＬ、８当量）、３−［２−［２−［２−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（１ｇ、２．８３ｍｍｏｌ、１当量）およびＴｓＯＨ．Ｈ２Ｏ（５６５．１６ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ、１．０５当量）の混合物を、ディーンスタークトラップを用い、１４０℃で１４時間撹拌した。この混合物は数時間後に混濁から透明に変化した。残渣を真空濃縮してトルエンを除去し、次いで、ＴＢＭＥ（５０ｍｌ）を残渣に注ぎ、１分間撹拌した。次に、上清を除去し、乾燥させ、３−［２−［２−［２−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル；４−メチルベンゼンスルホン酸（１．４５ｇ、粗生成物）を黄色油状物として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.80 (d, J=8.1 Hz, 2H), 7.67 - 7.46 (m, 2H), 7.39 - 7.31 (m, 5H), 7.15 (d, J=7.8 Hz, 2H), 5.13 (s, 2H), 3.96 - 3.83 (m, 2H), 3.75 - 3.50 (m, 22H), 3.24 - 3.14 (m, 2H), 2.63 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H)。
【０３８０】
Ｉ．３７．  ２３，３０−ジオキソ−４，７，１０，１３，１６，１９，３４，３７，４０，４３，４６，４９−ドデカオキサ−２６，２７−ジチア−２２，３１−ジアザドペンタコンタン二酸ジベンジル
【化１０５】
2022502431.tif 000135
ＤＣＭ（５ｍＬ）中、３−（２−カルボキシエチルジスルファニル）プロパン酸（４７．４１ｍｇ、２２５．４７μｍｏｌ、１当量）およびＴＥＡ（９１．２６ｍｇ、９０１．８６μｍｏｌ、１２５．５３μＬ、４当量）、ＨＯＢｔ（９１．４０ｍｇ、６７６．４０μｍｏｌ、３当量）、ＥＤＣＩ（１２９．６７ｍｇ、６７６．４０μｍｏｌ、３当量）の混合物に、３−［２−［２−［２−［２−［２−（２−アミノエトキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル；４−メチルベンゼンスルホン酸（２７７．６５ｍｇ、４５０．９３μｍｏｌ、２当量）を２５℃で滴下した。添加後、この混合物を２５℃で８時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：メタノール＝３：１、Ｒｆ＝０．３３）は、出発材料が消費され、新たな主要スポットが生じていたことを示した。残渣を飽和ＮａＣｌ（１０ｍｌ）に注ぎ、２分間撹拌した。次に、水相をＤＣＭ（５ｍＬ＊３）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ（１０ｍＬ＊２）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  １５０＊２５  ５μ；移動相：［水（１０ｍＭ  ＮＨ４ＨＣＯ３）−ＡＣＮ］；Ｂ％：３２％〜６２％、１２分）により精製し、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−［３−［［３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（３−ベンジルオキシ−３−オキソ−プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（７０ｍｇ、６５．９６μｍｏｌ、収率２９．２５％）を無色の油状物として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.41 - 7.29 (m, 10H), 6.50 (br s, 2H), 5.14 (s, 4H), 3.78 (t, J=6.5 Hz, 4H), 3.67 - 3.61 (m, 40H), 3.59 - 3.55 (m, 4H), 3.45 (q, J=5.1 Hz, 4H), 2.97 (t, J=7.2 Hz, 4H), 2.66 (t, J=6.5 Hz, 4H), 2.60 (t, J=7.1 Hz, 4H)。
【０３８１】
Ｉ．３８．  １−（５−クロロ−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘニコサン−２１−酸ベンジル
【化１０６】
2022502431.tif 000136
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−［３−［［３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（３−ベンジルオキシ−３−オキソ−プロポキシ）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エチルアミノ］−３−オキソ−プロピル］ジスルファニル］プロパノイルアミノ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］−プロパン酸ベンジル（５．５ｇ、５．１８ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、塩化スルフリル（３．５０ｇ、２５．９１ｍｍｏｌ、２．５９ｍＬ、５当量）を０℃で滴下した。この混合物を０〜２０℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（酢酸エチル：メタノール＝１０：１、Ｒｆ＝０．３、０．５）は、反応が完了していたことを示した。この混合物を氷／水（１０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（２０ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機層をＨ２Ｏ（２０ｍＬ＊２）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濾過し、真空濃縮した。残渣をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１：１〜０：１）により精製し、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（３−オキソイソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（１．４ｇ、２．２９ｍｍｏｌ、収率２２．０５％、純度８６．１４８％）を褐色油状物として得；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 8.02 (d, J=6.17 Hz, 1 H) 7.22 - 7.32 (m, 5 H) 6.17 (br d, J=6.17 Hz, 1 H) 5.07 (s, 2 H) 3.92 (br t, J=4.30 Hz, 2 H) 3.51 - 3.73 (m, 24 H) 2.58 (t, J=6.39 Hz, 2 H)および３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（３．１ｇ、４．４４ｍｍｏｌ、収率４２．８５％、純度８０．５３２％）を無色の油状物として得た；1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.30 - 7.40 (m, 5 H) 6.26 (s, 1 H) 5.15 (s, 2 H) 3.93 - 3.99 (m, 2 H) 3.78 (t, J=6.50 Hz, 2 H) 3.60 - 3.72 (m, 23 H) 2.66 (t, J=6.50 Hz, 2 H)。
【０３８２】
Ｉ．３９  １−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘニコサン−２１−酸ベンジル
【化１０７】
2022502431.tif 000137
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）、ＡＣＮ（１０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（１ｇ、１．７８ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＩＯ４（１．５２ｇ、７．１２ｍｍｏｌ、３９４．３４μＬ、４当量）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（２０．０５ｍｇ、８８．９６μｍｏｌ、０．０５当量）を、２０℃、Ｎ２下で一度に加えた。次に、この混合物を２０℃で１時間撹拌した。残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ＊２）で抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル：酢酸エチル＝１：１〜酢酸エチル：メタノール＝１０：１）により精製し、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（５２０ｍｇ、８４９．０６μｍｏｌ、収率４７．７２％、純度９７％）を黄色油状物として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.44 - 7.29 (m, 5H), 6.72 (s, 1H), 5.14 (s, 2H), 3.92 - 3.86 (m, 2H), 3.80 - 3.73 (m, 4H), 3.69 - 3.59 (m, 20H), 2.66 (t, J=6.4 Hz, 2H)。
【０３８３】
実施例１４．  １−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘニコサン−２１−酸
【化１０８】
2022502431.tif 000138
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（５２０ｍｇ、８７５．３２μｍｏｌ、１当量）の溶液に、メタンスルホン酸（８４１．２３ｍｇ、８．７５ｍｍｏｌ、６２３．１３μＬ、１０当量）を１０℃で滴下した。溶液を３５℃に加熱し、１０時間撹拌した。残渣を水（３０ｍｌ＊３）で洗浄し、次いで、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（酢酸エチル：メタノール：酢酸＝４０：８：１、Ｒｆ＝０．５８）により精製した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：１％〜３０％、１０分）により精製し、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（５−クロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（５５．９３ｍｇ、１０６．２４μｍｏｌ、収率１２．１４％、純度９５．７２６％）を無色の油状物として得た；LC-MS (ES, m/z): 504.2 [M+H]+; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.30 - 11.96 (m, 1H), 7.64 (s, 1H), 3.83 - 3.76 (m, 2H), 3.65 - 3.58 (m, 4H), 3.54 - 3.52 (m, 2H), 3.52 - 3.48 (m, 18H), 2.44 - 2.42 (m, 2H)。
【０３８４】
Ｉ．４０  ３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル
【化１０９】
2022502431.tif 000139
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（５−クロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（１．３ｇ、２．３１ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、塩化スルフリル（６２４．３４ｍｇ、４．６３ｍｍｏｌ、４６２．４７μＬ、２当量）を２０℃で滴下した。この溶液を２０℃で２時間撹拌した。溶液は黄色になった。残渣を氷水（３０ｍｌ）に注ぎ、３０分間撹拌した。ＤＣＭ相を水（５０ｍＬ＊６）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（酢酸エチル：メタノール＝１０：１、Ｒｆ＝０．５０）により精製し、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（８００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ、収率５２．１９％、純度９０％）を黄色油状物として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.40 - 7.29 (m, 5H), 5.15 (s, 2H), 4.04 (t, J=4.7 Hz, 2H), 3.78 (t, J=6.4 Hz, 2H), 3.72 (t, J=4.7 Hz, 2H), 3.69 - 3.63 (m, 16H), 3.62 (s, 4H), 2.66 (t, J=6.5 Hz, 2H)。
【０３８５】
Ｉ．４１  １−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘニコサン−２１−酸ベンジル
【化１１０】
2022502431.tif 000140
Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）、ＡＣＮ（１０ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−３−オキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（６００ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＩＯ４（８６０．５６ｍｇ、４．０２ｍｍｏｌ、２２２．９４μＬ、４当量）の混合物に、ＲｕＣｌ３．Ｈ２Ｏ（１１．３４ｍｇ、５０．２９μｍｏｌ、０．０５当量）を、０℃、Ｎ２下で一度に加えた。この混合物を０℃で２分間撹拌し、次に、２５℃に加熱し、１時間撹拌した。残渣を酢酸エチル（３０ｍｌ）に注ぎ、次いで、濾過した。濾液を酢酸エチル（３０ｍＬ＊３）で抽出した。合わせた有機相を真空濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（酢酸エチル、Ｒｆ＝０．５０）により精製し、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（２２０ｍｇ、３５０．０３μｍｏｌ、収率３４．８０％、純度１００％）を無色の油状物として得た；1H NMR (400MHz, クロロホルム-d) δ = 7.40 - 7.27 (m, 4H), 5.15 (s, 2H), 3.99 - 3.90 (m, 2H), 3.78 (t, J=6.2 Hz, 4H), 3.70 - 3.58 (m, 20H), 2.66 (t, J=6.4 Hz, 2H)。
【０３８６】
実施例１５．  １−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）−３，６，９，１２，１５，１８−ヘキサオキサヘニコサン−２１−酸
【化１１１】
2022502431.tif 000141
ＤＣＭ（５ｍＬ）中、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸ベンジル（２２０ｍｇ、３５０．０３μｍｏｌ、１当量）の溶液に、メタンスルホン酸（５０４．６０ｍｇ、５．２５ｍｍｏｌ、３７３．７８μＬ、１５当量）を１０℃で滴下した。次に、この溶液を４０℃に加熱し、２０時間撹拌した。残渣をＤＣＭ（２０ｍｌ）で希釈し、次いで、溶液を水（１５ｍｌ＊３）で洗浄し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｎａｎｏ−ｍｉｃｒｏ  Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８  １００＊３０ｍｍ  ５μｍ；移動相：［水（０．０５％ＨＣｌ）−ＡＣＮ］；Ｂ％：２５％〜５５％、１０分）により精製し、３−［２−［２−［２−［２−［２−［２−（４，５−ジクロロ−１，１，３−トリオキソ−イソチアゾール−２−イル）エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］エトキシ］プロパン酸（５３．７９ｍｇ、９８．６３μｍｏｌ、収率２８．１８％、純度９８．７２４％）を黄色油状物として得た；LC-MS (ES, m/z): 538.2 [M+H]+ ; 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 12.13 (br s, 1H), 3.89 - 3.81 (m, 2H), 3.65 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.59 (t, J=6.4 Hz, 2H), 3.56 - 3.48 (m, 20H), 2.43 (t, J=6.4 Hz, 2H)。
【０３８７】
実施例１６．
【化１１２】
2022502431.tif 000142
フラスコに、アルゴン下で、生成物６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸（１２．５８ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（２ｍＬ）およびＤＭＦ（１０μｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、二塩化オキサリル（１１．６５μｌ、０．１３６ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を室温まで温め、ＬＣＭＳ（アリコートに乾燥ＭｅＯＨを加えてメチルエステルを形成することによってＬＣＭＳにより追跡）により完全な変換が見られるまで撹拌した。粗生成物を真空下で蒸発させた。残渣をＤＣＭに取り、再び真空下で乾燥させて黄色固体を得た。この粗物質をそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【０３８８】
２．薬物リンカー複合体の合成
実施例Ａ．（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）−Ｎ−メチルヘキサンアミド）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニン
【化１１３】
2022502431.tif 000143
【０３８９】
薬物−リンカーの合成のための標準的手順：
フラスコに、窒素下、室温で、６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸（２０５ｍｇ、０，７３ｍｍｏｌ）（実施例１）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）およびＤＭＦ（１００μｌ）を加えた。この混合物を、氷浴を用いて０℃で冷却し、次いで、塩化オキサリルを加えた（１９０，４μｌ、２，１８ｍｍｏｌ）。この混合物を室温まで温め、２時間撹拌した。この反応混合物を真空下で蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２に取り、再び真空下で乾燥させ、６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサノイルクロリドを黄色固体として得た。バイアルに、Ｎ２下、室温で、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（メチル（４−（メチルアミノ）フェネチル）アミノ）ブタンアミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸、（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（メチル（４−（メチルアミノ）フェネチル）アミノ）ブタンアミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸化合物を２，２，２−トリフルオロ酢酸（１：１）（１１１ｍｇ、０，１０２ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（３，７ｍＬ）とともに導入した。この混合物を０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ（７０，９μｌ、０，４０６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで、６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサノイルクロリド（３６，６ｍｇ、０，１２２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中の溶液（２ｍＬのＤＣＭ中、２４８ｍｇの酸塩化物）に滴下した。この混合物を０℃で１時間１５分撹拌した。この混合物に０℃でトリフルオロ酢酸（３２，９μｌ、０，４２６ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（２，１ｍＬ）および水（０，３ｍＬ）を加えることにより、反応を停止した。粗材料を真空濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣ（カラムＸ−Ｂｒｉｄｇｅ  Ｃ１８（１００＊３０）により、移動相としてＡＣＮおよび水（０．１％ＴＦＡ含有）の勾配を用いて精製し、（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）−Ｎ−メチルヘキサンアミド）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニンを得た。この薬物リンカー複合体の質量スペクトルおよび１Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図１Ａおよび１Ｂに表す。
【０３９０】
実施例Ｂ．（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）−Ｎ−メチルヘキサンアミド）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニン
【化１１４】
2022502431.tif 000144
これは、出発材料として６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸（実施例２）および（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（Ｓ）−３−メチル−２−（メチル（４−（メチルアミノ）フェネチル）アミノ）ブタンアミド）ブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニン化合物を２，２，２−トリフルオロ酢酸（１：１）とともに用い、薬物−リンカーの合成のための標準的手順に従って合成した。
【０３９１】
この薬物リンカー複合体の質量スペクトルを図２に表す。
【０３９２】
実施例Ｃ．（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニン
【化１１５】
2022502431.tif 000145
これは、出発材料として６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸（実施例１）および（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニンを用い、薬物−リンカー合成のための標準的手順に従って得た。
【０３９３】
この薬物リンカー複合体の質量スペクトルおよび１Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図３Ａおよび３Ｂに表す。
【０３９４】
実施例Ｄ．（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニン
【化１１６】
2022502431.tif 000146
これは、出発材料として６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸（実施例２）および（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニンを用い、薬物−リンカー合成のための標準的手順に従って得た。
【０３９５】
この薬物リンカー複合体の質量スペクトルおよび１Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図４Ａおよび４Ｂに表す。
【０３９６】
実施例Ｅ．（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２−（２−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｌ−フェニルアラニン２，２，２−トリフルオロ酢酸塩
【化１１７】
2022502431.tif 000147
出発材料として３−（２−（２−（２−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（実施例１２）および（Ｓ）−２−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパンアミド）−３−フェニルプロパン酸を用い、薬物−リンカーの合成のための標準的手順に従って合成した。
【０３９７】
この薬物リンカー複合体の質量スペクトルおよび１Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図５Ａおよび５Ｂに表す。
【０３９８】
実施例Ｆ．（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（１−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（３−（２−（２−（２−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−メチルプロパンアミド）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｄ−フェニルアラニン
【化１１８】
2022502431.tif 000148
出発材料として３−（２−（２−（２−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパン酸（実施例１２）および（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（１−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−メチルプロパンアミド）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｄ−フェニルアラニンを用い、薬物−リンカーの合成のための標準的手順に従って合成した。
【０３９９】
この薬物リンカー複合体の質量スペクトルおよび１Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図６Ａおよび６Ｂに表す。
【０４００】
実施例Ｇ．（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（１−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−メチルプロパンアミド）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｄ−フェニルアラニン
【化１１９】
2022502431.tif 000149
出発材料として６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸（実施例１）および（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（１−（（３Ｒ，４Ｒ，５Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−Ｎ−メチルプロパンアミド）フェネチル）（メチル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−Ｎ，３−ジメチルブタンアミド）−３−メトキシ−５−メチルヘプタノイル）ピロリジン−２−イル）−３−メトキシ−２−メチルプロパノイル）−Ｄ−フェニルアラニンを用い、薬物−リンカーの合成のための標準的手順に従って合成した。
【０４０１】
この薬物リンカー複合体の質量スペクトルおよび１Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ図７Ａおよび７Ｂに表す。
【０４０２】
実施例Ｈ．  （２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミド）エチル）カルバミン酸４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル
【化１２０】
2022502431.tif 000150
実施例Ｈは、以下の合成経路に従って合成した。
【化１２１】
2022502431.tif 000151
Ｉ．４２．（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６、１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボン酸
フラスコにて、メタノール（１５ｍＬ）および水（１０ｍＬ）の混合物中にＰＮＵ−１５９６８２（５２ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）を加えた。水（５ｍＬ）中、ＮａＩ０４（３４．７ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応混合物をＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで室温で撹拌した。溶媒を真空下で除去して赤色固体としてのＩ．４２を得、これをそのまま次の工程で使用した。
【０４０３】
Ｉ．４３（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（２−アミノエチル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバミン酸（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル
フラスコに、アルゴン下、ＤＭＦ（０．４４３ｍｏｌ／Ｌ）中、（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバミン酸（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（１ｇ、１．６６２ｍｍｏｌ）および炭酸ビス（４−ニトロフェニル）（１．０１１ｇ、３．３２ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この混合物を０℃で冷却し、ＤＩＰＥＡ（６３９μＬ、３．６６ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温まで温め、１８時間撹拌した。この粗混合物を真空下で濃縮した。粗生成物をＥｔ２Ｏ／ＥｔＯＡｃの１：１混合物に取り、濾過した。沈澱をＥｔ２Ｏ、５％クエン酸、Ｈ２Ｏ、次いで、再びＥｔ２Ｏで洗浄し、黄色固体を得た。この固体を自動カラムクロマトグラフィー  シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０  ＭｅＯＨ〜８０  ＤＣＭ：２０  ＭｅＯＨ）により精製し、３４５ｍｇの（（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバミン酸（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（白色固体）を得た、収率２７．１％。
【０４０４】
ＤＭＦ（６ｍＬ）中、従前の生成物（１５０ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢｔ（３４．４ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）およびピリジン（６３．３μｌ、０．７８２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。５分後、この混合物に、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中、（２−アミノエチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル１−２（４０．７ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）、次いで、ＤＩＰＥＡ（１０２μｌ、０．５８７ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を室温まで温め、２時間撹拌した。粗生成物を真空下で濃縮して白色固体を得、これを自動カラムクロマトグラフィー  シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０  ＭｅＯＨ〜８０  ＤＣＭ：２０  ＭｅＯＨ）により精製し、１２９ｍｇのｔｅｒｔ−ブチルエタン−１，２−ジイルジカルバミン酸４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（白色固体）を得た、収率８４％。
【０４０５】
フラスコにＤＣＭ（６ｍＬ）中、従前の生成物（１５４ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）を入れた。この混合物を０℃で冷却し、ＴＦＡ（７５３μＬ、９．７７ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を、ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで、０℃で撹拌した。粗混合物を真空濃縮し、Ｉ．４３を白色固体として得た（定量的収量）。
【０４０６】
Ｉ．４４  （２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−カルボキサミド）エチル）カルバミン酸４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル
フラスコにＩ．４２（５０．９ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）、Ｉ．４３（７８．０ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（８ｍＬ）、次いで、ＨＡＴＵ（３０．８ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（５６．７μｌ、０．３２４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で１８時間撹拌した。次に、この混合物にピペリジン（８０μｌ、０．８１１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１時間（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで）撹拌した。この混合物を真空下で濃縮した。得られた粗生成物をすぐに自動カラムクロマトグラフィー  シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０  ＭｅＯＨ／ＮＨ３水溶液〜８５  ＤＣＭ：２５  ＭｅＯＨ／ＮＨ３水溶液）により精製し、２０ｍｇのＩ．４４（赤色油状物）を得た、収率２３％。
【０４０７】
実施例Ｈ．
フラスコに、Ｎ２下で、ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１０μｌ）中、６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸（実施例１）（７．８６ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を加えた。
【０４０８】
この混合物を０℃で冷却し、次いで、塩化オキサリル（７．２８μｌ、０．０８５ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を室温まで温め、ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで（アリコートに乾燥ＭｅＯＨを加えてメチルエステルを形成することによってＬＣＭＳにより追跡）撹拌した。この粗混合物を真空下で蒸発させた。残渣をＤＣＭに取り、再び真空下で乾燥させ、６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサノイルクロリドを黄色固体として得た（定量的収量）。この粗材料をそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【０４０９】
フラスコに、Ｎ２下で、室温にて、ＤＣＭ（２ｍＬ）中、Ｉ．４４（２０ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を導入した。この混合物を０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ（１２．９６μｌ、０．０７４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで、ＤＣＭ（１ｍＬ）中に希釈した従前の工程の生成物（８．４０ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この混合物を０℃で２時間（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで）撹拌した。この粗混合物を真空下で濃縮し、自動カラムクロマトグラフィー、シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０  ＭｅＯＨ〜８５  ＤＣＭ：１５  ＭｅＯＨ）により精製し、６．８５ｍｇの実施例Ｈ（化合物Ｆ５６２５２４とも呼称）を赤色固体として得た、収率２７％。  
【０４１０】
この薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図８に表す。
【０４１１】
実施例Ｉ．  ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−オキソ−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−イル）エチル）  エタン−１，２−ジイルビス（メチルカルバミン酸塩）
【化１２２】
2022502431.tif 000152
実施例Ｉは、以下の合成経路に従って合成した。
【化１２３】
2022502431.tif 000153
Ｉ．４５  （ペルフルオロフェニル）炭酸２−オキソ−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−イル）エチル
フラスコに、アルゴン下、ＰＮＵ−１５９６８２（１２ｍｇ、０．０１８０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１．５ｍＬ）を加えた。この混合物を０℃で冷却し、炭酸ビス（ペルフルオロフェニル）（３６．９ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を加えた。次に、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中、ＤＩＰＥＡ（９．８０μｌ、０．０５６ｍｍｏｌ）の溶液を５分かけてゆっくり加えた。この混合物を最後に０℃で３時間撹拌した（ＬＣＭＳにより変換が確認された）。この粗混合物を真空で濃縮し、自動カラムクロマトグラフィー、シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０［８０  ＤＣＭ：２０  ＭｅＯＨ］〜５０  ＤＣＭ：５０［８０  ＤＣＭ：２  ０ＭｅＯＨ］）により精製し、５．５２ｍｇのＩ．４５を赤色油状物として得た、収率３６％。
【０４１２】
Ｉ．４６  （（Ｓ）−３−メチル−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（（（４−ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソブタン−２−イル）カルバミン酸（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル２，２，２−トリフルオロ酢酸塩
フラスコに、アルゴン下、ＤＭＦ（０．４４３ｍｏｌ／Ｌ）中、（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（１ｇ、１．６６２ｍｍｏｌ）および炭酸ビス（４−ニトロフェニル）（１．０１１ｇ、３．３２ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この混合物を０℃で冷却し、ＤＩＰＥＡ（６３９μＬ、３．６６ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を  室温まで温め、１８時間撹拌した。この粗混合物を真空下で濃縮し、Ｅｔ２Ｏ／ＥｔＯＡｃ（１／１）に取り、濾過した。沈澱をＥｔ２Ｏ、５％クエン酸、Ｈ２Ｏ、次いで、再びＥｔ２Ｏで洗浄して黄色固体を得た。この固体を自動カラムクロマトグラフィー、シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０  ＭｅＯＨ〜８０  ＤＣＭ：２０  ＭｅＯＨ）により精製し、３４５ｍｇの白色固体を得た、収率２７．１％。ＤＭＦ（６ｍＬ）中、この化合物（１１８ｍｇ、０，１５４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＯＢｔ（２７．０ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）およびピリジン（４９．８μｌ、０．６１６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた、５分後、この混合物にＤＭＦ（１．５ｍＬ）中、メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３７．７ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）、次いで、ＤＩＰＥＡ（８１．０μｌ、０．４６２ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この混合物を室温まで温め、２時間撹拌した（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで）。この粗混合物を真空下で濃縮して黄色油状物を得、これを自動カラムクロマトグラフィー、シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０  ＭｅＯＨ〜８０  ＤＣＭ：２０  ＭｅＯＨ）により精製し、１０３ｍｇの白色固体を得た、収率８２％。
【０４１３】
フラスコに、ＤＣＭ（１２ｍＬ）中、この生成物（１９８ｍｇ、０．２４３ｍｍｏｌ）を入れた。この混合物を０℃に冷却し、ＴＦＡ（９３５μｌ、１２．１３ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を０℃で４時間（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで）撹拌した。この粗混合物を真空下で濃縮し、２２０ｍｇのＩ．４６を透明な黄色固体として得た（定量的収量）。
【０４１４】
Ｉ．４７  ４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（２−オキソ−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−イル）エチル）エタン−１，２−ジイルビス（メチルカルバミン酸塩）
ＤＭＦ（１ｍＬ）中、生成物Ｉ．４５（１９ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）の溶液に、室温で、ＤＭＦ（１ｍＬ）中、生成物Ｉ．４６（２２．２ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１５．５９μｌ、０．０８９ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この反応混合物を室温で３時間（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで）撹拌した。次に、この混合物にピペリジン（２２．０９μｌ、０．２２３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１時間（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られた）撹拌した。この粗混合物を真空下で濃縮し、自動カラムクロマトグラフィー、シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０  ＭｅＯＨ／ＮＨ３（９／１）〜７５  ＤＣＭ：２５  ＭｅＯＨ／ＮＨ３（９／１））により精製し、１０ｍｇのＩ．４７を赤色油状物として得た、収率３９％。
【０４１５】
実施例Ｉ．
フラスコに、Ｎ２下で、ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＤＭＦ（１０μｌ）中、６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸（実施例１）（７．８６ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）を加えた。
【０４１６】
この混合物を０℃で冷却し、次いで、塩化オキサリル（７．２８μｌ、０．０８５ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を室温まで温め、ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで（アリコートに乾燥ＭｅＯＨを加えてメチルエステルを形成することによってＬＣＭＳにより追跡）撹拌した。この粗混合物を真空下で蒸発させた。残渣をＤＣＭに取り、再び真空下で乾燥させ、６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサノイルクロリドを黄色固体として得た（定量的収量）。この粗材料をそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【０４１７】
フラスコに、Ｎ２下、室温で、ＤＣＭ（２ｍＬ）中、生成物Ｉ．４７（１０ｍｇ、０．００８６ｍｍｏｌ）を導入した。この混合物を０℃で冷却し、ＤＩＰＥＡ（６．０μｌ、０．０３４ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで、ＤＣＭ（１ｍＬ）中に希釈した従前の生成物（３．９０ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この混合物を０℃で２時間（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで）撹拌した。粗生成物を真空濃縮し、自動カラムクロマトグラフィー、シリカゲル（１００  ＤＣＭ：０  ＭｅＯＨ〜８５  ＤＣＭ：１５  ＭｅＯＨ）により精製し、２．４５ｍｇの実施例Ｉを赤色固体として得た、収率１９％。
【０４１８】
この薬物リンカー複合体の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを図９に表す。
【０４１９】
実施例Ｊ．
【化１２４】
2022502431.tif 000154
実施例Ｊ以下の合成経路に従って合成した。
【化１２５】
2022502431.tif 000155
化合物Ｉ．５０は、以下の合成経路に従って作製した。
【化１２６】
2022502431.tif 000156
化合物Ｉ．４８：
フラスコに、アルゴン下で、ＤＣＭ（５ｍＬ）中、２−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）プロパン−２−オール（１ｇ、４．７１ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．４６５ｍｌ、５．７５ｍｍｏｌ）を加えた。次に、この混合物を０℃に冷却し、乾燥ＤＣＭ（２．４ｍＬ）中、クロロギ酸フェニル（０．６６２ｍｌ、５．２８ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温まで温め、１８時間（ＬＣＭＳにより確認）撹拌した。この粗生成物
を真空濃縮した。固体混合物をＤＣＭに溶解させ、ブラインで３回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、目的化合物Ｉ．４８、収量８８０ｍｇ、５６％を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：３３３．４０（ＭＨ＋）。
【０４２０】
化合物Ｉ．４９：
Ｎ，Ｎ’−ジメチル−１，２−エタンジアミン（２７９１μｌ、２６．２ｍｍｏｌ）、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（３０５μｌ、１．７４８ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（４ｍＬ）を含有すフラスコに、アルゴン下で、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中、炭酸２−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）プロパン−２−イルフェニル（５８１ｍｇ、１．７４８ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で加えた。この反応混合物を室温まで温め、２４時間（ＬＣＭＳにより確認）撹拌した。この粗生成物を真空濃縮し、残渣を自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９／１により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的化合物Ｉ．４９、収量４３３ｍｇ、７６％を黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：３２７．４３（ＭＨ＋）。
【０４２１】
化合物Ｉ．５０：
炭酸ビス（トリクロロメチル）（１５７ｍｇ、０．５３１ｍｍｏｌ）およびトルエン（４．３ｍＬ）を含有するフラスコに、アルゴン下で、トルエン（２．９ｍＬ）中、メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバミン酸２−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）プロパン−２−イル（４３３ｍｇ、１，３２６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３６８μｌ、２．６５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で加えた。この反応混合物を室温まで温め、１時間（ＬＣＭＳにより確認）撹拌した。この溶液を濾過し、溶媒を真空濃縮し、残渣を自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：シクロヘキサン／酢酸エチル：７／３により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的化合物Ｉ．５０、収量１６６ｍｇ、３３％を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：４０５．６０（ＭＨ＋）。
【０４２２】
化合物Ｉ．５２は、以下の合成経路に従って作製した。
【化１２７】
2022502431.tif 000157
化合物Ｉ．５１：
（８Ｓ，１０Ｓ）−６，８，１１−トリヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−１０−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−７，８，９，１０−テトラヒドロテトラセン−５，１２−ジオン（５０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（４７，６ｍｇ、０，３９０ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブス０．４ｎｍ（３３ｍｇ）およびＤＣＭ（１ｍＬ）を含有するフラスコに、アルゴン下で、ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中、（２−（（クロロカルボニル）（メチル）アミノ）エチル）（メチル）カルバミン酸２−（［１，１’−ビフェニル］−４−イル）プロパン−２−イル（９１ｍｇ、０．２３４ｍｍｏｌ））の溶液を加えた。この混合物を暗所、２５℃で５日間撹拌した。溶液を濾過し、溶媒を真空濃縮し、残渣をそれ以上精製せずに次の工程で使用した。
【０４２３】
化合物Ｉ．５２：
氷浴にて、ＤＣＭ（１ｍｌ）中、生成物Ｉ．５１の溶液に、０．５ｍＬのＤＣＭ中、ジクロロ酢酸（９６μｌ、１．１６９ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。この溶液を室温で２時間撹拌した。溶媒を真空濃縮し、残渣を自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９／１により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的化合物Ｉ．５２、収量１３ｍｇ、２２％を赤色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：７５６．７６（ＭＨ＋）。
【０４２４】
化合物Ｉ．５３：
フラスコに、アルゴン下で、（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバミン酸（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２５０ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）、炭酸ビス（ペルフルオロフェニル）（３８２ｍｇ、０．９７０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（４ｍＬ）を加えた。次に、この混合物を０℃に冷却し、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（１２７μｌ、０．７２７ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温まで温め、２時間（ＬＣＭＳにより確認）撹拌した。この粗生成物を真空濃縮した。粗生成物を自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９／１により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的化合物Ｉ．５３、収量２８１ｍｇ、８０％を黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：７２６．６５（ＭＨ＋）。
【０４２５】
化合物Ｉ．５４：
フラスコに、アルゴン下で、メチル（２−（メチルアミノ）エチル）カルバミン酸２−オキソ−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−イル）エチル（７８ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２７．９ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（３５．１μｌ、０．２０６ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）を加えた。次に、この混合物を０℃に冷却し、（（Ｓ）−３−メチル−１−オキソ−１−（（（Ｓ）−１−オキソ−１−（（４−（（（（ペルフルオロフェノキシ）カルボニル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）プロパン−２−イル）アミノ）ブタン−２−イル）カルバミン酸（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（１１２ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温まで温め、２時間（ＬＣＭＳにより確認）撹拌した。この粗生成物を真空濃縮した。粗生成物を自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９／１により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的化合物Ｉ．５４、収量７７ｍｇ、５８％を赤色油状物として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：１２９８．０（ＭＨ＋）。
【０４２６】
化合物Ｉ．５５：
フラスコに、アルゴン下で、４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル（２−オキソ−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−イル）エチル）エタン−１，２−ジイルビス（メチルカルバミン酸塩）（７７．７ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）を加えた。次に、この混合物を０℃に冷却し、モルホリン（２５９μｌ、２．９９ｍｍｏｌ）を滴下した。この反応混合物を室温まで温め、２時間（ＬＣＭＳにより確認）撹拌した。この粗生成物を真空濃縮した。粗生成物を自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９／１により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的化合物Ｉ．５５、収量３２ｍｇ、５０％を赤色油状物として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：１０７５．８０（ＭＨ＋）。
【０４２７】
実施例Ｊ：
フラスコに、アルゴン下、２５℃で、ジクロロメタン（２ｍＬ）中、４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジル（２−オキソ−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２，５，１２−トリヒドロキシ−７−メトキシ−４−（（（１Ｓ，３Ｒ，４ａＳ，９Ｓ，９ａＲ，１０ａＳ）−９−メトキシ−１−メチルオクタヒドロ−１Ｈ−ピラノ［４’，３’：４，５］オキサゾロ［２，３−ｃ］［１，４］オキサジン−３−イル）オキシ）−６，１１−ジオキソ−１，２，３，４，６，１１−ヘキサヒドロテトラセン−２−イル）エチル）エタン−１，２−ジイルビス（メチルカルバミン酸塩）（３２ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、１当量）を導入した。この混合物を０℃に冷却し、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（２０．７４μｌ、０．１１９ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃で、１０分間撹拌し、次いで、ジクロロメタン（２ｍＬ）中に希釈した実施例１６を加えた。次に、この混合物を０℃で２時間（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで）撹拌した。この粗生成物を真空濃縮し、自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、１２ｇ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：９／１により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的実施例Ｊ（化合物Ｆ５６２６４６とも呼称）、収量１７．４ｍｇ、４０％を赤色油状物として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：１３３８．４１（ＭＨ＋）。
【０４２８】
この薬物リンカー複合体の質量スペクトルを図２１に表す。
【０４２９】
実施例Ｋ．
【化１２８】
2022502431.tif 000158
実施例Ｋは以下の合成経路に従って合成した。
【化１２９】
2022502431.tif 000159
化合物Ｉ．５６：
フラスコに、アルゴン下で、出発材料ＳＭ１（１００ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中、３−ブロモプロパン酸（２２．７９ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）および２，３，４，６，７，８，９，１０−オクタヒドロピリミド［１，２−ａ］アゼピン（４０．５μｌ、０．２７１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。次に、この混合物を室温まで温め、ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで撹拌した。この粗生成物を真空濃縮し、自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、１２ｇ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：８０／２０により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的化合物Ｉ．５６、収量１０８ｍｇ、９８％を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：８１１．３５（ＭＨ＋）。
【０４３０】
化合物Ｉ．５７：
フラスコに、アルゴン下で、化合物Ｉ．５６（８７．０ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（２ｍＬ）を加えた。次に、この混合物を０℃に冷却し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１３．５９ｍｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（３０．９ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温まで温め、２時間（ＬＣＭＳ確認）撹拌した。この粗生成物を真空濃縮した。粗材料をそれ以上精製せずに次の工程に使用した。
【０４３１】
化合物Ｉ．５８：
フラスコに、アルゴン下で、化合物Ｉ．５７（９７ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（１ｍｌ）を加え、次いで、１ｍＬのＤＣＭ中、化合物Ｉ．４９の溶液およびＮ、Ｎ’−ジイソプロピルエチルアミン（３７．３μｌ、０．２１４ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物をＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで撹拌した。粗生成物を真空濃縮し、それ以上精製せずに次の工程に使用した。
【０４３２】
化合物Ｉ．５９：
フラスコに、アルゴン下で、化合物Ｉ．５８（５８ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（１ｍｌ）を加えた。この混合物を０℃に冷却し、次いで、ジクロロ酢酸（８６μｌ、１．０３７ｍｍｏｌ）を滴下した。次いで、混合物を室温まで温め、ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで撹拌した。この粗生成物を真空濃縮し、自動カラムクロマトグラフィー（Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ、１２ｇ、ｓｏｌｉｄ  ｄｅｐｏｓｉｔ）：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ：８０／２０により精製した。目的画分を真空濃縮し、目的化合物Ｉ．５９、収量３９ｍｇ、８６％を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：８８２．６（ＭＨ＋）。
【０４３３】
実施例Ｋ：
フラスコに、アルゴン下、２５℃で、ジクロロメタン（１ｍＬ）中、化合物Ｉ．５９を導入した。この混合物を０℃に冷却し、Ｎ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（１５．８３μｌ、０．０９１ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を０℃で１０分間撹拌し、次いで、ジクロロメタン（２ｍＬ）中に希釈した実施例１６を加えた。次に、混合物を０℃で２時間（ＬＣＭＳにより完全な変換が見られるまで）撹拌した。この粗生成物を真空濃縮し、分取ＨＰＬＣ（ＨＣＯＯＨ条件）により精製し、目的実施例Ｋ、収量６ｍｇ、２２％を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：１１６５．３７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０４３４】
この薬物リンカー複合体の質量スペクトルおよびＴＯＦ−ＭＳスペクトルをそれぞれ図２２Ａおよび２２Ｂに表す。
【０４３５】
３．ソマトスタチンとの複合体形成
ＶＩ１．ソマトスタチンと６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルとの反応
【化１３０】
2022502431.tif 000160
１ｍｇの凍結乾燥ソマトスタチン（ｍｅｘａｃｔ＝１６３６，７２）を４ｍＬのバッファー（５７．５％ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ、ｐＨ６．５、４０％ＡＣＮ、２．５％ＤＭＦ）で可溶化し、１５３μＭ（０．２５ｍｇ／ｍＬ）の濃度とした。３３．５ｍｇのＴＣＥＰを４ｍＬのバッファー（５７．５％ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ、ｐＨ６．５、４０％ＡＣＮ、２．５％ＤＭＦ）に溶解させた。３００μＬのソマトスタチン溶液（１当量）に、３μＬのＴＣＥＰ溶液（１．１当量）を加えた。この溶液を３７℃で１時間撹拌した。市販のソマトスタチン：Ｒｔ，１（ＡＣＮ中）：１．５７；ＭＳ  ＥＳ＋：Ｍ＋３／３＝５４６．４、Ｍ＋２／２＝８１９．２。還元ジスルフィド結合ソマトスタチン：Ｒｔ，１（ＡＣＮ中）：１．５０；ＭＳ  ＥＳ＋：Ｍ＋３／３＝５４７．２、Ｍ＋２／２＝８２０．３。５ｍｇの６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（Ｉ．６）を８００μＬのＡＣＮで可溶化した。このソマトスタチン溶液に３μＬの６−（５−クロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（１．１当量）溶液を加えた。この溶液を３７℃で撹拌した。Ｒｔ，１（ＡＣＮ中）：１．６６；ＭＳ  ＥＳ＋：Ｍ＋３／３＝６３７．６、Ｍ＋２／２＝９５６．０。
【０４３６】
同じ反応をバッファーｐＨ８（５７．５％ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ、ｐＨ８、４０％ＡＣＮ、２．５％ＤＭＦ）中で行った。
【０４３７】
得られた複合体の質量スペクトルを図１０に表す。
【０４３８】
ＶＩ２．ソマトスタチンと６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジルの反応：
【化１３１】
2022502431.tif 000161
１ｍｇの凍結乾燥ソマトスタチン（ｍｅｘａｃｔ＝１６３６，７２）を４ｍＬのバッファー（５７．５％ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ、ｐＨ６．５、４０％ＡＣＮ、２．５％ＤＭＦ）で可溶化し、１５３μＭ（０．２５ｍｇ／ｍＬ）の濃度とした。３３．５ｍｇのＴＣＥＰを４ｍＬのバッファー（５７．５％ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ、ｐＨ６．５、４０％ＡＣＮ、２．５％ＤＭＦ）に溶解させた。３００μＬのソマトスタチン溶液（１当量）に、３μＬのＴＣＥＰ溶液（１．１当量）を加えた。この溶液を３７℃で１時間撹拌した。市販のソマトスタチン：Ｒｔ，１（ＡＣＮ中）：１．５７；ＭＳ  ＥＳ＋：Ｍ＋３／３＝５４６．４、Ｍ＋２／２＝８１９．２。還元ジスルフィド結合ソマトスタチン：Ｒｔ，１（ＡＣＮ中）：１．５０；ＭＳ  ＥＳ＋：Ｍ＋３／３＝５４７．２、Ｍ＋２／２＝８２０．３。５．４ｍｇの６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（Ｉ．７）を８００μＬのＡＣＮで可溶化した。このソマトスタチン溶液に、３μＬの６−（４，５−ジクロロ−１，１−ジオキシド−３−オキソイソチアゾール−２（３Ｈ）−イル）ヘキサン酸ベンジル（１．１当量）溶液を加えた。この溶液を３７℃で撹拌した。Ｒｔ，１（ＡＣＮ中）：１．６５；ＭＳ  ＥＳ＋：Ｍ＋３／３＝６３７．３、Ｍ＋２／２＝９５５．５。
【０４３９】
同じ反応をバッファーｐＨ８（５７．５％ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ、ｐＨ８、４０％ＡＣＮ、２．５％ＤＭＦ）中で行った。
【０４４０】
得られた複合体の質量スペクトルを図１１に表す。
【０４４１】
４．モノクローナル抗体との複合体形成
４．１．ＡＤＣの合成、精製および特性評価
下記の手順はキメラ、ヒト化およびヒトＩｇＧｌ形態に当てはまる。ＩｇＧ２、ＩｇＧ４などの他のいずれの形態についても、当業者ならば一般知識を用いてこの手順を当てはめることができると理解されるべきである。
【０４４２】
Ａｂ１抗体は、抗ＩＧＦ１Ｒ  ＩｇＧ１モノクローナル抗体である。この抗体は、ＷＯ２０１５１６２２９１の抗体２０８Ｆ２（３６頁の表３参照）に相当し、ここで、３つの軽鎖ＣＤＲは、配列番号９、５および１１の配列を有し；３つの重鎖ＣＤＲは、配列番号７、２および３の配列を有し；軽鎖可変ドメインは、配列番号１８の配列を有し；かつ、重鎖可変ドメインは、配列番号１３の配列を有する。
【０４４３】
Ａｂ２抗体は、細菌タンパク質、すなわち、大腸菌由来の外膜タンパク質Ａに対する無関連のキメラ（ＩｇＧ１）抗体であり、ｃ９Ｇ４と呼ばれる(Haeuw J.F. and Beck A. Proteomics for development of immunotherapies, In Proteomics: Biomedical and Pharmaceutical Applications, Kluwer Academic Publishers, Ed. Hondermarck H., 2014, 243-278頁; WO2015162291)。
【０４４４】
抗体（１〜５ｍｇ／ｍｌ）を３７℃で２〜４時間、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび２ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する１０ｍＭホウ酸バッファーｐＨ８．４中、ＴＣＥＰ塩酸塩で部分的に還元した。一般に、４前後のＤＡＲを標的とするために６〜２０ｍｏｌ当量のＴＣＥＰを使用した。部分的な抗体還元は、非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により確認した。次に、抗体濃度を１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、６％スクロースを含有する１０ｍＭホウ酸バッファーｐＨ８．４で１ｍｇ／ｍｌに調整し、１０ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液から、抗体に対して５〜２０モル過剰の薬物リンカー複合体を加えた。
【０４４５】
本発明による数例の薬物リンカー複合体をＡｂ１に結合させた：
それぞれＡＤＣ１−ＡおよびＡＤＣ１−Ｂ（切断不能リンカー）を示す実施例Ａおよび実施例Ｂ；
それぞれＡＤＣ１−Ｃ、ＡＤＣ１−Ｄ、ＡＤＣ１−Ｅ、ＡＤＣ１−ＦおよびＡＤＣ１−Ｇ（切断可能リンカー）を示す実施例Ｃ、実施例Ｄ、実施例Ｅ、実施例Ｆおよび実施例Ｇ。
【０４４６】
最終のＤＭＳＯ濃度は、カップリングの際に水性媒体で薬物の溶解性を維持するために１０％に調整した。反応は１〜４時間室温でまたは３７℃で行った。過剰な薬物は、薬物モル当たり２．５モルのＮ−アセチルシステインを添加して、室温で１時間インキュベーションを行うことにより急冷した。
【０４４７】
４℃で一晩、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび６％スクロースを含有する２５ｍＭ  ＨｉｓバッファーｐＨ６．５に対して透析した後、再架橋された抗体薬物複合体を、当業者に公知の方法を使用することで、市販のクロマトグラフィーカラムおよび限外濾過単位を用いて精製した。精製されたＡＤＣを０．２μｍフィルターで濾過除菌した後に４℃で保存した。
【０４４８】
それらを、薬物との結合を確認するために還元および非還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、また、モノマーおよび凝集形態の含量を決定するために分析的ＴＳＫ  Ｇ３０００  ＳＷＸＬカラムでのＳＥＣによりさらに分析した。ＳＥＣクロマトグラム（図１３）から導き出された凝集形態の含量は、表９に示されるように、５％より低かった。
【０４４９】
【表２２】
2022502431.tif 000162
【０４５０】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析から、完全架橋抗体Ｈ２Ｌ２の形成が確認された（図１２）。しかしながら、部分的架橋抗体に相当する他の種（Ｈ２Ｌ、Ｈ２およびＨＬ）も検出された。これらの種は、サンプルが還元条件で熱処理された際に、無傷の鎖内架橋によって連結されてない重鎖と軽鎖（ＨとＬ）の完全な解離を保証するための実施の前に見られることに注目することが重要である。
【０４５１】
タンパク質濃度は、標準としてＩｇＧを用いるＢＣＡアッセイを使用することにより決定した。ＤＡＲは、各精製ＡＤＣに関して、ＴＳＫ−ブチル−ＮＰＲカラムを用いるＨＩＣによって評価した。それは３．５〜４．３の間に含まれた（表１０）。ＨＩＣプロフィールは、合成されたＡＤＣのほとんどに関してＤＡＲ０は見られず、ＤＡＲ４の主要ピークが見られたことが明らかになった。実際に、ＡＤＣ１−ＣおよびＥのみが微量のＤＡＲ０を示す。さらに、ＡＤＣ１−Ａ、Ｂ、ＣおよびＧでは、ＤＡＲ３、ＤＡＲ４およびＤＡＲ５のみが見られた。ＡＤＣ１−Ｄを除き、主要ピークはＤＡＲ４である。第２世代のＡＤＣに比べ、これらのＡＤＣは表１０に示されるようにより均質である。
【０４５２】
【表２３】
2022502431.tif 000163
【０４５３】
アドセトリス（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）は、抗体のシステインに結合された第２世代のマレイミドリンカーを用いていることから参照として使用されているた。それは第２世代ＡＤＣの最良の代表例であり、この需要において記載されている技術は第３世代と見なすことができる。
【０４５４】
４．２．ネイティブ質量分析によるＡＤＣ分析
総ての化学薬剤はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した：酢酸アンモニウム（Ａ１５４２）、ヨウ化セシウム（２１００４）、２−プロパノール（Ｉ９５１６）。ＩｇＧＺＥＲＯ（Ａ０−ＩＺ１−０１０）酵素は、Ｇｅｎｏｖｉｓから入手した。水溶液は、超純水システム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、ゲッティンゲン、ドイツ）を用いて作製した。
【０４５５】
ＡＤＣ１−Ａ〜ＡＤＣ１−Ｇは、ネイティブＭＳ実験の前に脱グリコシル化した。これは、ＡＤＣ１ミリグラム当たり１単位のＩｇＧＺＥＲＯを３７℃で３０分間インキュベートすることにより行った。次に、ＡＤＣに対し、マイクロコンセントレーター（Ｖｉｖａｓｐｉｎ、１０ｋＤカットオフ、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、ゲッティンゲン、ドイツ）を用いた６回の濃縮／希釈サイクルを用い、１５０ｍＭ酢酸アンモニウム溶液（ｐＨ６．９）に対するバッファー交換を行った。タンパク質濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、フランス）を用い、ＵＶ吸光度により決定した。
【０４５６】
ＡＤＣの非変性（ネイティブ）質量分析は、自動チップに基づくナノエレクトロスプレーデバイス（Ｔｒｉｖｅｒｓａ  Ｎａｎｏｍａｔｅ、Ａｄｖｉｏｎ、イサカ、ＵＳＡ）にともに連結した、ポジティブイオンモードで作動するＱ−ＴＯＦ（Ｓｙｎａｐｔ  Ｇ２  ＨＤＭＳ、Ｗａｔｅｒｓ、マンチェスター、ＵＫ）質量分析計で行った。分析はｍ／ｚ  １０００〜１００００の範囲で行った。サンプルをｐＨ６．９の１５０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃに希釈し、１０μＭで注入した。遅延引き出しは、２−プロパノール／水（５０／５０ｖ／ｖ）中、ヨウ化セシウムの２ｇ／Ｌ溶液によって生成される１価の電荷を有するイオンを用いて行った。
【０４５７】
ナノエレクトロスプレーの電圧は１．７５ｋＶに設定し、窒素ナノ流は０．７５ｐｓｉに設定した。コーン電圧は１８０ボルトに設定し、背圧は６ミリバールに設定した。
【０４５８】
図１４は、デコンボリューションを行わないＭＳスペクトルの例を表す。
【０４５９】
ＤＡＲ分布（図１５）は、Ｍａｓｓ  Ｌｙｎｘ  ４．１（Ｗａｔｅｒｓ、マンチェスター、ＵＫ）のＭａｘＥｎｔ（商標）アルゴリズムを用い、デコンボリューション後に決定した。ソフトウエアのパラメーターは、各スペクトルに関して最適化した。
【０４６０】
平均ＤＡＲ値（図１５）は、下式（式中、ｊは最大薬物負荷数である）を用いて計算した。
【０４６１】
【数１】
2022502431.tif 000164
結果は、生のスペクトルにおける各帯電状態の相対的ピーク強度に由来するものであり、以下の表１１に表す。
【０４６２】
【表２４】
2022502431.tif 000165
【０４６３】
図１６は、質量デコンボリューション後に生のスペクトルから決定したＤＡＲ分布を、
２つの異なるＡＤＣ、すなわち、
Ａｂ１抗体および薬物リンカー複合体Ｃから作製した本発明によるＡＤＣ１−Ｃ（図１６Ｂ）および
同じ抗体（Ａｂ１）およびスルホマレイミド部分（
【化１３２】
2022502431.tif 000166
）がマレイミド部分（
【化１３３】
2022502431.tif 000167
）に置換された薬物リンカー複合体Ｃに相当する薬物リンカー複合体から合成された比較ＡＤＣである、参照ＡＤＣ  Ｒｅｆ−Ａ（図１６Ａ）
に関して比較したものである。
【０４６４】
薬物と抗体の連結に古典的なマレイミド化学法を使用することにより合成されたＡＤＣについては、ＤＡＲ０からＤＡＲ８まで不均一な分布が見られ（図１６Ａ）、一方、本発明によるスルホマレイミド化学法を使用することにより作製されたＡＤＣは、ＤＡＲ４は７５％、ＤＡＲ０／２および６／８種は無く、極めて均一である（図１６Ｂ）。これらの結果を下表１２にまとめる。
【０４６５】
【表２５】
2022502431.tif 000168
【０４６６】
４．３．リガンド結合アッセイ法を用いた４種類の哺乳動物血清におけるＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性試験
安定性の獲得を確認するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性試験を行った。この試験は、３７℃で１４日間のＡＤＣのインキュベーションからなる。サンプルは０、３、７および１４日目に採取した。次に、種々のサンプル（Ｄ０、Ｄ３、Ｄ７およびＤ１４）を、        ４ＡＤＣの濃度に対する総抗体の濃度を決定するためにＬＢＡにより分析した。実際には、各ＡＤＣの溶液を４種類の血清（ヒト、カニクイザル、マウスおよびラット）中に１００μｇ／ｍｌで調製し、３７℃で最大１４日間インキュベートした。次に、Ｄ０、Ｄ３、Ｄ７およびＤ１４アリコートを採取し、投与まで−８０℃で保存した。総ＡｂおよびＡＤＣの定量のために、プレートを振盪しながら室温で解凍し、両ＬＢＡアッセイを並行して行う。簡単に述べれば、標準的なマイクロタイタープレート（ＭＳＤ、ゲイザースバーグ、ＵＳＡ）を、１×ＰＢＳ中に調製した２μｇ／ｍｌの抗Ｈｉｓ抗体溶液５０μｌを用いてコーティングする。４℃で一晩のインキュベーションの後、アッセイプレートを３７℃にて１時間、ブロッキングバッファー（３％ＭＳＤ  Ｂｌｏｃｋｅｒ  Ａ（ＭＳＤ、ゲイザースバーグ、ＵＳＡ））で処理する。次に、組換えＨｉｓタグを有する抗原を３７℃にて１時間、アッセイバッファー中、２．５μｇ／ｍｌの濃度で添加する。洗浄工程の後、サンプルを１／５０００希釈にて２反復で分析し、３７℃で１時間インキュベートし、一方、標準ＡＤＣは、アッセイプレートに２反復で負荷する。検出工程は、総Ａｂの検出のための１μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇ  κスルホタグ溶液またはＡＤＣ検出のためのスルホタグで標識されたマウスモノクローナル抗薬物抗体のいずれかを用いて行う。３７℃で１時間のインキュベーション期間の後、ＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  Ｉｍａｇｅｒを用いて読み取る直前に界面活性剤（ＭＳＤ、ゲイザースバーグ、ＵＳＡ）を含有する１５０μＬの２×ＭＳＤリードＴバッファーを用いて検出を行う。
【０４６７】
各時点で総抗体およびＡＤＣ濃度を決定し、各時点の総ＡＤＣまたは抗体の量を１００％としてパーセンテージに変換する。
【０４６８】
３種類のＡＤＣに関して図１７Ａ、１７Ｂおよび１７Ｃにデータを示し：本発明によるスルホマレイミド化学法を用いてＡｂ１抗体に薬物が連結されたＡＤＣ１−Ｃ（図１７Ｂ）およびＡＤＣ１−Ｅ（図１７Ｃ）（それぞれ薬物リンカー複合体ＣまたはＥの手段による）と古典的なマレイミド化学法を用いて薬物が抗体に連結された参照ＡＤＣ  Ｒｅｆ−Ｂ（図１７Ａ）との比較。
【化１３４】
2022502431.tif 000169
比較対象として、同じ弾頭および切断不能リンカーを用いた薬物−リンカーを選択した（ＡＤＣ  Ｒｅｆ−Ｂの薬物−リンカー）。これを、マレイミド化学法を用いて同じ抗体に結合させた。この比較対象の選択は、レトロマイケル反応による抗体からの脱共役による、血清中での参照ＡＤＣの「不安定性」を制限する。よって、切断可能リンカーに基づく本発明者らの構築物に比べて、この比較対象は本発明者らの薬物−リンカーの安定性の向上をいっそうより著しいものとするということを支持した。
【０４６９】
予想されたように、古典的マレイミド化学法を用いて合成されたＡＤＣ（ＡＤＣ  Ｒｅｆ−Ｂ）ではＡＤＣ濃度の低下が見られるが、本発明によるスルホマレイミド化学法を用いて生成されたＡＤＣ（ＡＤＣ１−ＣおよびＡＤＣ１−Ｅ）は意外にも１４日にわたってはるかにより安定である。
【０４７０】
４．４．ＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性
本発明によるＡＤＣのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性を評価した。非特異的細胞傷害性を評価するために、化合物をまた、ｃ９Ｇ４と呼ばれる無関連のキメラ抗体（Ａｂ２）に、同じＤＡＲで、同じ薬物リンカー複合体を用いて結合させ、実施例ＣでＡＤＣ２−Ｃを、実施例ＥでＡＤＣ２−Ｅを、実施例ＦでＡＤＣ２−Ｆを作製した。
【０４７１】
ＭＣＦ−７細胞およびＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞を９６ウェルプレートの完全増殖培地に播種した（２５００細胞／ウェル）。翌日、供試ＡＤＣの連続希釈液を対応するウェルに添加し、３７℃で６日間インキュベートした。ＡＤＣの添加の６日後に、細胞の生存率を確認するために、これらのプレートでＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイ（ＰＲＯＭＥＧＡ）を行った。
【０４７２】
生存率パーセンテージで表される、得られた結果を図１８Ａおよび１８Ｂに示す。予想されたように、無関連の抗体を用いて合成されたＡＤＣは、ＭＣＦ−７細胞およびＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞の両方に対して細胞傷害活性が無いか、または中等度の細胞傷害活性を示した。これに対して、本発明のＡＤＣ：ＡＤＣ１−Ｃ、ＡＤＣ１−ＥおよびＡＤＣ１−Ｆは、細胞生存率を劇的に低下させた。ＮＣＩ−Ｈ２１２２に対しては、ＡＤＣ１−Ｃ、ＡＤＣ１−ＥおよびＡＤＣ１−Ｆでそれぞれ７，６１．１０−１１、７，１６．１０−１１および３，６４．１０−１１ＭのＥＣ５０値が得られ、ＭＣＦ７に対しては、ＡＤＣ１−Ｃ、ＡＤＣ１−ＥおよびＡＤＣ１−Ｆでそれぞれ１，０４．１０−１１、１，３３．１０−１１および７，３９．１０−１１ＭのＥＣ５０値が得られ、強力な細胞傷害活性を示す。
【０４７３】
４．５．ｉｎ  ｖｉｖｏ
実験プロトコールは総て、ピエール・ファーブルの所内動物実験委員会により承認を受けた。
【０４７４】
卵巣癌モデルでは、７週齢の雌ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  ＲＩＶＥＲ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に１０．１０６個のＣａｏＶ３細胞を皮下移植した（各群６個体）。
【０４７５】
本発明によるＡＤＣ１−Ｃ、参照ＡＤＣ  Ｒｅｆ−ＡまたはＡＤＣビヒクルの静脈内投与による処置は、腫瘍がおよそ１５０ｍｍ３に達した際に開始した。動物は１回注射（Ｑ１ｄ１）または３回注射（毎週１回）（Ｑ７ｄ３）のいずれかにより処置した。腫瘍体積（長さ×幅×高さ×０．５２）を、電子カリパスにより少なくとも週に２回、初回注射後およそ２５日間測定した。結果を図１９（Ｑ１ｄ１で処置した動物）および図２０（Ｑ７ｄ３で処置した動物）。
【０４７６】
図１９および２０で見て取れるように、本発明によるＡＤＣは著しい有効性を有し、単回注射後であっても完全な腫瘍退縮を示した。
【０４７７】
５．ＰＮＵ−１５９６８２誘導体とモノクローナル抗体の複合体形成
５．１．ＡＤＣの合成、精製および特性評価
２つのＰＮＵ−１５９６８２誘導体、すなわち、Ｆ５６２５２４（実施例Ｊ）およびＦ５６２６４６（実施例Ｈ）を、従前に実施例４で記載した条件下で、抗体２０８Ｆ２（Ａｂ１）およびｃ９Ｇ４（Ａｂ２）に結合させた。２０８Ｆ２（Ａｂ１）およびｃ９Ｇ４（Ａｂ２）は実施例４に開示した通りである。簡単に述べれば、抗体（１〜５ｍｇ／ｍｌ）を、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび２ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する１０ｍＭホウ酸バッファーｐＨ８．４中、６〜２０当量のＴＣＥＰ塩酸塩で３７℃にて２〜４時間、部分的に還元した。次に、抗体濃度を、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、６％スクロースを含有する１０ｍＭホウ酸バッファーｐＨ８．４で１ｍｇ／ｍｌに調整し、１０ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液から、抗体に対して５〜２０モル過剰の薬物リンカー複合体を加えた。反応は、１０％ＤＭＳＯの存在下、室温でまたは３７℃で１〜４時間行った。過剰な薬物は、薬物モル当たり２．５モルのＮ−アセチルシステインを添加して、室温で１時間インキュベーションを行うことにより急冷した。４℃で一晩、１５０ｍＭ  ＮａＣｌおよび６％スクロースを含有する２５ｍＭ  ＨｉｓバッファーｐＨ６．５に対して透析した後、ＡＤＣ抗体をクロマトグラフィーまたは限外濾過により精製した。ＡＤＣ濃度は、標準としてＩｇＧを用い、ＢＣＡアッセイを使用することにより決定し、精製されたＡＤＣは、０．２μｍフィルターで濾過除菌した後に４℃で保存した。
【０４７８】
薬物の複合体形成および再架橋を確認するため、ならびにモノマーおよび凝集物の含量を決定するために、従前に実施例４に記載したようにＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＳＥＣ（ＴＳＫ  Ｇ３０００  ＳＷＸＬカラム）によってＡＤＣをさらに分析した。モノマーの含量は９５％前後であった（図２３および表１３）。
【０４７９】
【表２６】
2022502431.tif 000170
【０４８０】
５．２．ネイティブＬＣ−ＭＳによるＡＤＣ分析
Ｓｙｎａｐｔ  Ｇ２Ｓｉ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ）に連結したＵＰＬＣ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｈ  Ｃｌａｓｓ  Ｂｉｏシステムでネイティブ液体クロマトグラフィー−質量分析によりＡＤＣを分析した。ＬＣ分離は、直列につないだ２本のポリヒドロキシエチルＡカラム（Ｐｏｌｙ−ＬＣ、１５０×１ｍｍ、３００Ａ、５μｍ）で行った。サンプルを溶離バッファー（１５０ｍＭ酢酸アンモニウム）で０．２ｍｇ／ｍｌに希釈した。４μｇのサンプルを注射し、４０μＬ／分の流速で溶離した。質量分析計はポジティブモードで、キャピラリ電圧２．９ｋＶで作動させた。サンプルコーンは１５０Ｖに設定した。分析は、スキャン時間１秒で、ｍ／ｚ  １０００〜８０００の範囲で行った。図２４は、デコンボリューション前のｍ／ｚスペクトルを示す。ＤＡＲ分布は、Ｍａｓｓ  Ｌｙｎｘソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ）のＭａｘＥｎｔ（商標）アルゴリズムを用い、ＭＳスペクトルのデコンボリューション後に決定した（図２５）。平均ＤＡＲ値は、下式（式中、ｊは最大薬物負荷数である）を用いて計算した。
【数２】
2022502431.tif 000171
結果を下表１４に示す。
【０４８１】
【表２７】
2022502431.tif 000172
【０４８２】
５．３．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性
ＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４を、カニクイザル血清中２００μｇ／ｍｌで、３７℃にて１４日間インキュベートした。サンプルは０、３、７および１４日目に採取し、平均ＤＡＲを決定するためのＬＣ−ＭＳ分析まで、−８０℃で保存した。
【０４８３】
ＬＣ−ＭＳ分析前に、サンプルを、Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｓｅｌｅｃｔ抗ヒトＩｇＧ−ビオチン複合体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、８μｇ抗体／２００μＬビーズ）でコーティングしたストレプトアビジン磁性ビーズ（Ｍ−２８０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用することにより免疫精製した。サンプルを抗ＩｇＧコーティングビーズとともに室温で２時間インキュベートし（１００μＬサンプル／２００μＬビーズ）、その後、４０μＬの０．４％トリフルオロ酢酸で酸性溶出を行った。４μＬの３Ｍ  Ｔｒｉｓ／ＨＣＬ  ｐＨ８．８溶液を添加することによりｐＨを上昇させた。免疫精製したサンプルを、２μＬのＩｇＧＺｅｒｏとともに３７℃で３０分間インキュベートし、その後、上記のように非変性条件下でＬＣ−ＭＳ分析を行った。ＤＡＲ分布は、Ｍａｓｓ  Ｌｙｎｘソフトウエア（Ｗａｔｅｒｓ）のＭａｘＥｎｔ（商標）アルゴリズムを用い、ＭＳスペクトルのデコンボリューション後に決定し、平均ＤＡＲ値は、下式（式中、ｊは最大薬物負荷数である）を用いて計算した。
【数３】
2022502431.tif 000173
結果を下表１５に示す。ＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４は、カニクイザル血清中でのｉｎ  ｖｉｔｒｏインキュベーション後１４日まで極めて安定であることを示した。
【０４８４】
【表２８】
2022502431.tif 000174
【０４８５】
５．４．ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞傷害性
ＡＤＣの細胞傷害性をＭＣＦ−７細胞およびＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞で評価した。細胞を９６ウェルプレートの完全増殖培地に播種した（２５００細胞／ウェル）。翌日、供試ＡＤＣの連続希釈液を対応するウェルに添加し、３７℃で６日間インキュベートした。細胞生存率は、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてＡＴＰを測定することにより決定した。発光は、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  ＣｏｍｐａｎｙのプレートリーダーＭｉｔｈｒａｓを用いて読み取った。生存率パーセンテージで表される、得られた結果を図２６および２７に示す。非処理ウェルの生存率を１００％とした。
【０４８６】
予想されたように、ＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４およびｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２６４６は、細胞生存率を劇的に低下させた。ＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞に対しては、ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４およびｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２６４６でそれぞれ２．４８．１０−１１Ｍおよび１．９２．１０−１２ＭのＥＣ５０値が決定され、ＭＣＦ−７細胞に対しては、ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４およびｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２６４６でそれぞれ５．８６．１０−１２Ｍおよび９．４５．１０−１３ＭのＥＣ５０値が得られ、強力な細胞傷害活性を示す。これに対して、無関連の抗体を用いて合成された対応するＡＤＣは、ＭＣＦ−７細胞およびＮＣＩ−Ｈ２１２２細胞の両方で中等度の細胞傷害活性を示した。
【０４８７】
５．５．ｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍活性
７週齢の雌ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に、１０．１０６個のＣａｏｖ３細胞を皮下移植した（各群６個体）。ＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４（０．３ｍｇ／ｋｇ）、対応する対照ＡＤＣ  ｃ９Ｇ４−Ｆ５６２５２４（０．３ｍｇ／ｋｇ）、またはビヒクルの静脈内投与（Ｑ７ｄ２）による処置は、腫瘍がおよそ１５０ｍｍ３に達した際に開始した。腫瘍体積（長さ×幅×高さ×０．５２）を、電子カリパスにより少なくとも週に２回、初回注射後およそ２５日間測定した。結果を図１９（Ｑ１ｄ１で処置した動物）および図２０（Ｑ７ｄ３で処置した動物）。結果を図２８に示す。ＡＤＣ  ｈｚ２０８Ｆ２−Ｆ５６２５２４の２回の注射の後に完全な腫瘍退縮が見られたが、対照ＡＤＣまたはビヒクルで抗腫瘍効果が見られなかった。
【０４８８】
５．６．結論
スルホマレイミドリンカー技術を使用することによりＰＮＵ−１５９６８２誘導体を用いて合成されたＡＤＣは、血清中で極めて均質かつ安定である。それらの有効性は種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて実証された。
【０４８９】
６．総体的結論
全体的に見れば、本明細書に記載されるスルホマレイミドに基づくリンカー技術は、アドセトリスなどの上市されている化合物に使用されている通常のマレイミドに基づくリンカーに比べて、種々の種の血漿中でより高い安定性およびｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルでより高い有効性を示す。これらの特性は、種々の細胞株、より詳しくは、抗原の発現がより低い細胞株（ＣＡＯＶ３）においてｉｎ  ｖｉｖｏ有効性の明らかな改善になって現れた。
【０４９０】
また、本発明によるＡＤＣは、ヒト治療において改善された有効性および安全域に関連して循環中でより安定であることから、より良い忍容性も予想される。
【図１Ａ】
2022502431.tif 000212
【図１Ｂ】
2022502431.tif 000213
【図２】
2022502431.tif 000214
【図３Ａ】
2022502431.tif 000215
【図３Ｂ】
2022502431.tif 000216
【図４Ａ】
2022502431.tif 000217
【図４Ｂ】
2022502431.tif 000218
【図５Ａ】
2022502431.tif 000219
【図５Ｂ】
2022502431.tif 000220
【図６Ａ】
2022502431.tif 000221
【図６Ｂ】
2022502431.tif 000222
【図７Ａ】
2022502431.tif 000223
【図７Ｂ】
2022502431.tif 000224
【図８】
2022502431.tif 000225
【図９】
2022502431.tif 000226
【図１０】
2022502431.tif 000227
【図１１】
2022502431.tif 000228
【図１２】
2022502431.tif 000229
【図１３】
2022502431.tif 000230
【図１４Ａ】
2022502431.tif 000231
【図１４Ｂ】
2022502431.tif 000232
【図１４Ｃ】
2022502431.tif 000233
【図１４Ｄ】
2022502431.tif 000234
【図１５Ａ】
2022502431.tif 000235
【図１５Ｂ】
2022502431.tif 000236
【図１５Ｃ】
2022502431.tif 000237
【図１６Ａ】
2022502431.tif 000238
【図１６Ｂ】
2022502431.tif 000239
【図１７Ａ】
2022502431.tif 000240
【図１７Ｂ】
2022502431.tif 000241
【図１７Ｃ】
2022502431.tif 000242
【図１８Ａ】
2022502431.tif 000243
【図１８Ｂ】
2022502431.tif 000244
【図１９】
2022502431.tif 000245
【図２０】
2022502431.tif 000246
【図２１】
2022502431.tif 000247
【図２２Ａ】
2022502431.tif 000248
【図２２Ｂ】
2022502431.tif 000249
【図２３Ａ】
2022502431.tif 000250
【図２３Ｂ】
2022502431.tif 000251
【図２４Ａ】
2022502431.tif 000252
【図２４Ｂ】
2022502431.tif 000253
【図２４Ｃ】
2022502431.tif 000254
【図２４Ｄ】
2022502431.tif 000255
【図２５Ａ】
2022502431.tif 000256
【図２５Ｂ】
2022502431.tif 000257
【図２５Ｃ】
2022502431.tif 000258
【図２５Ｄ】
2022502431.tif 000259
【図２６Ａ】
2022502431.tif 000260
【図２６Ｂ】
2022502431.tif 000261
【図２７Ａ】
2022502431.tif 000262
【図２７Ｂ】
2022502431.tif 000263
【図２８】
2022502431.tif 000264
【配列表】
2022502431000001.app
【国際調査報告】
2022502431.tif 000265
2022502431.tif 000266
2022502431.tif 000267