(57)【要約】  細胞を培養するための流体デバイスは、マイクロプレートおよびプレート蓋を備える。そのマイクロプレートは、多数のウェルト通路を備え、その通路は、通路がウェルを相互接続するようにウェル間に延在する。そのプレート蓋は、マイクロプレートに解放可能に係合し、それによって、ウェルと通路を囲む。そのウェルは、培養表面を、その中に受け入れられた細胞培養培地がその培養表面上に堆積されるように備える。ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、その隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、少なくとも１つの通路と、隣接するウェルの培養表面との間に、細胞培養培地を収集するための間隙を画成する。
2022501003.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を培養するための流体デバイスにおいて、
（ａ）多数のウェルおよび多数の通路を含むマイクロプレートであって、該通路が該ウェルを相互接続するように該通路が該ウェル間に延在する、マイクロプレート、および
（ｂ）前記マイクロプレートに解放可能に係合し、それによって、前記ウェルと前記通路を囲むプレート蓋、
を備え、
前記ウェルは、培養表面を、その中に受け入れられた細胞培養培地が該培養表面上に堆積されるように備え、
前記ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、該隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、前記少なくとも１つの通路と、該隣接するウェルの培養表面との間に、前記細胞培養培地を収集するための間隙を画成する、流体デバイス。
【請求項２】
前記通路が、前記複数のウェルに亘る前記培地の循環を促進し、それによって、前記培養表面に沿って剪断力を生じるようなサイズである、請求項１記載の流体デバイス。
【請求項３】
前記通路が、前記ウェルの間に延在する側壁を含み、該側壁が、該通路内に前記細胞培養培地を部分的に保持するようなサイズである、請求項１記載の流体デバイス。
【請求項４】
前記培養表面が、ガス透過性マイクロキャビティ基体を構成する、請求項１記載の流体デバイス。
【請求項５】
前記プレート蓋が、その中を通って延在する多数のポートを含み、該ポートが、該プレート蓋が前記マイクロプレートと係合したときに、前記ウェルと揃うようなサイズと形状である、請求項１記載の流体デバイス。
【請求項６】
前記ポートの第１の部分が、循環のために、流体を外部流体源から前記ウェルに移動させるように作られており、該ポートの第２の部分が、循環した流体を該ウェルから外部槽に移動させるように作られている、請求項５記載の流体デバイス。
【請求項７】
前記プレート蓋が、該プレート蓋と前記マイクロプレートとの間にシールを形成するエラストマー裏地を底面に沿って備える、請求項６記載の流体デバイス。
【請求項８】
前記エラストマー裏地が、該エラストマー裏地がその中を穿孔されて、前記マイクロプレートと前記外部流体源との間の流体連通を確立するように前記プレート蓋と該マイクロプレートとの間に隔膜を形成する、請求項７記載の流体デバイス。
【請求項９】
前記プレート蓋を前記マイクロプレートにしっかりと取り付けるように作られた締結機構をさらに備える、請求項１記載の流体デバイス。
【請求項１０】
前記複数のウェル内に位置付けられた複数のマイクロウェルを有する挿入物をさらに備える、請求項１記載の流体デバイス。
【請求項１１】
前記挿入物の複数のマイクロウェルが、多孔質膜を含む、請求項１０記載の流体デバイス。
【請求項１２】
前記ウェルが、平らな底面を形成するような形状であり、前記複数のマイクロウェルが、マイクロキャビティの底面を形成するような形状であり、前記ウェルの平らな底面が、該複数のマイクロウェルのマイクロキャビティの底面を受け入れるように作られている、請求項１０記載の流体デバイス。
【請求項１３】
前記ウェルが、マイクロキャビティの底面を形成するような形状であり、前記複数のマイクロウェルが、平らな底面を形成するような形状であり、該ウェルのマイクロキャビティの底面が、該複数のマイクロウェルの平らな底面を受け入れるように作られている、請求項１０記載の流体デバイス。
【請求項１４】
前記ウェルおよび前記複数のマイクロウェルが、該複数のマイクロウェルのマイクロキャビティの底面が、該ウェルのマイクロキャビティの底面内に嵌まるようなサイズと形状であるように、マイクロキャビティの底面を形成するように同様の形状である、請求項１０記載の流体デバイス。
【請求項１５】
細胞を培養するための流体装置において、
（ａ）多数のウェルおよび多数の通路を含むマイクロプレートであって、該通路が該ウェルを相互接続するように該通路が該ウェル間に延在し、該ウェルは、その中の細胞を育てる培養表面を備える、マイクロプレート、
（ｂ）前記マイクロプレートに解放可能に係合し、それによって、前記ウェルと前記通路を囲むプレート蓋であって、該マイクロプレートに係合する該プレート蓋に反応して、前記ウェルと揃うポートを備えるプレート蓋、および
（ｃ）外部流体源であって、該外部流体源が細胞培養培地を前記ポートに通じて前記マイクロプレートのウェルに移送するように、該ポートに結合された外部流体源、
を備え、
前記ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、該隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、該少なくとも１つの通路と、該隣接するウェルの培養表面との間に、前記細胞培養培地を収集するための間隙を画成する、流体装置。
【請求項１６】
前記通路が、前記外部流体源から前記ウェルに亘る前記流体の循環を促進させ、それによって、前記培養表面に沿って剪断力を生じるようなサイズである、請求項１５記載の流体装置。
【請求項１７】
前記外部流体源が、マニホールドを介して前記ポートと流体連通しており、該マニホールドが、該外部流体源から前記多数のウェルに移動される細胞培養培地の流れを制御するように作られた制御弁を備える、請求項１５記載の流体装置。
【請求項１８】
前記外部流体源が、ポンプを介して前記ポートと流体連通しており、該ポンプが、該外部流体源から前記多数のウェルに移動される細胞培養培地の流れを制御するように作られている、請求項１５記載の流体装置。
【請求項１９】
複数のマイクロウェルであって、前記ウェルが該複数のマイクロウェルをその中に受け入れるように作られるように、該ウェルにしたがうサイズと形状である複数のマイクロウェルを有する挿入物をさらに備え、該挿入物は、該複数のマイクロウェル内でオルガノイドを育て、該挿入物は、該オルガノイドが前記ウェルの培養表面と流体連通するような多孔質膜を含む、請求項１５記載の流体装置。
【請求項２０】
各通路が、一対の側壁であって、該側壁が該通路内に循環した細胞培養培地および細胞を保持するように、各ウェルに沿って延在する一対の側壁を含む、請求項１６記載の流体装置。
【請求項２１】
流体デバイスを使用して細胞を培養する方法において、
マイクロプレートの多数のウェルに細胞培養培地に提供する工程であって、該ウェルは培養表面を含み、該マイクロプレートは、該ウェルの隣接するものの間に延在する多数の通路を含み、該ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、該隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、該少なくとも１つの通路と、該隣接するウェルの培養表面との間に、前記細胞培養培地を収集するための間隙を画成する、工程、および
前記ウェルに流体を導入し、それによって、前記通路を通って前記ウェルの間に流体が流れる工程、
を有してなる方法。
【請求項２２】
前記マイクロプレートにプレート蓋を係合させて、前記ウェル内に前記細胞培養培地を囲む工程をさらに含む、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記マイクロプレートをインキュベーションして、前記ウェルおよび通路内にオルガノイドを形成する工程をさらに含む、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
前記プレート蓋を前記マイクロプレートから外して、前記培養表面が前記細胞培養培地に浸るように、前記多数のウェルに該細胞培養培地を提供する工程をさらに含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記ウェルに流体を導入する工程が、前記マイクロプレートに前記プレート蓋を再び係合させ、該ウェル内に位置付けられた細胞培養培地が前記通路を介して該多数のウェルを通って循環するように該ウェルに前記流体を灌流させ、それによって、その中に収容されたオルガノイドを剪断力に曝す工程を含む、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
前記マイクロプレートを加熱システムに結合させて、前記多数のウェルおよび前記通路内に貯蔵された細胞培養培地の温度を上昇させる工程をさらに含む、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
細胞を培養するための流体デバイスにおいて、
（ａ）多数のウェルを含むマイクロプレート、および
（ｂ）多数の通路を含むプレート蓋であって、前記マイクロプレートに解放可能に係合して、該通路が揃えられて前記ウェルの間に延在するように該ウェルを囲むプレート蓋、
を備え、
前記ウェルは、培養表面を、その中に受け入れられた細胞培養培地が該培養表面上に堆積されるように備え、
前記ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、該隣接するウェルの培養表面の間の前記細胞培養培地の連通のために前記ウェルを相互接続する、流体デバイス。
【請求項２８】
前記プレート蓋が、該プレート蓋と前記マイクロプレートとの間にシールを形成するエラストマー裏地を底面に沿って備える、請求項２７記載の流体デバイス。
【請求項２９】
前記エラストマー裏地が、該エラストマー裏地がその中を穿孔されて、前記プレート蓋を通る前記マイクロプレートへの流体連通を確立するように該プレート蓋と該マイクロプレートとの間に隔膜を形成する、請求項２８記載の流体デバイス。
【請求項３０】
前記多数の通路が前記エラストマー裏地内に形成され、該多数の通路が、前記底面に亘って横に延在し、それによって、直線行の多数の通路を形成する、請求項２８記載の流体デバイス。
【請求項３１】
前記多数の通路が前記エラストマー裏地内に形成され、該多数の通路が、前記底面に亘って縦に延在し、それによって、直線列の多数の通路を形成する、請求項２８記載の流体デバイス。
【請求項３２】
前記エラストマー裏地が、前記プレート蓋が前記マイクロプレートに解放可能に契合されているときに、前記多数のウェルの各ウェルの周りに個々のシールを形成するように作られている、請求項２８記載の流体デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書は、広く、その中で増殖される３Ｄ細胞を成熟させ、分化させるための細胞培養物の灌流に関し、より詳しくは、ウェル間の流体の流動を促進させるために相互接続されたウェルを有するマイクロプレートを備えた流体デバイスに関する。
【背景技術】
【０００２】
様々な臓器、筋肉、皮膚などを含む人体の多くの組織は、機械力に必然的に曝され、このことは、そのような組織の完全な成長にとって重要である。したがって、細胞培養物に特定の機械力、すなわち、剪断応力を印加すると、マイクロプレートの環境中でそのような組織を成長させようとするときに、その中に含まれる幹細胞に所望の生理学的反応が与えられる。剪断応力は、これらの組織の完全に機能的な体現へのオルガノイドの分化および熟成を引き起こし、それによって、科学研究の目的に適した組織のシミュレーションを与えることができる。
【０００３】
一般に、微小流体細胞培養プレートは、作動させるのに特殊な器具を必要とするマイクロメートルサイズの流体流路を有する。これらのデバイスは、できるだけ小さい規模でヒトの臓器の活動をシミュレーションしようとする小型構造物を備え、それによって、適切な作動を確保するために、定期的な手作業の介在が必要である。幹細胞を剪断応力に曝すことによって与えられるプラス効果を最小にすることに加え、流体流路の非常に小さい寸法も、特殊な灌流装置を必要とせずに、そのような細胞培養プレートを使用する能力を妨げる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、マイクロプレート内で成熟したオルガノイドを成長するための比較的大きい流体流路が組み込まれたマイクロプレート装置が依然として必要とされている。それに加え、流体流路に向上したプロファイルを与えると、適切な灌流装置で、そのマイクロプレートの自動化可能な工程管理がより一層可能になる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
１つの実施の形態によれば、細胞を培養するための流体デバイスは、多数のウェルおよび多数の通路を含むマイクロプレートを備え、その通路がウェルを相互接続するようにその通路がウェル間に延在する。この流体デバイスは、マイクロプレートに解放可能に係合し、それによって、ウェルと通路を囲むプレート蓋をさらに備える。そのウェルは、培養表面を、その中に受け入れられた細胞培養培地がその培養表面上に堆積されるように備える。ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、その隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、その少なくとも１つの通路と、その隣接するウェルの培養表面との間に、細胞培養培地を収集するための間隙を画成する。
【０００６】
別の実施の形態によれば、細胞を培養するための流体装置は、多数のウェルおよび多数の通路を含むマイクロプレートを備え、その通路がウェルを相互接続するようにその通路がウェル間に延在し、そのウェルは、その中の細胞を育てる培養表面を備える。この流体装置は、マイクロプレートに解放可能に係合し、それによって、ウェルと通路を囲むプレート蓋をさらに備え、そのプレート蓋は、マイクロプレートに係合するプレート蓋に反応して、ウェルと揃うポートを備える。この流体装置は、そのポートに結合された外部流体源を、その外部流体源が細胞培養培地をそのポートに通じてマイクロプレートのウェルに移送するようにさらに備える。ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、その隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、その少なくとも１つの通路と、その隣接するウェルの培養表面との間に、細胞培養培地を収集するための間隙を画成する。
【０００７】
別の実施の形態によれば、流体デバイスを使用して細胞を培養する方法は、マイクロプレートの多数のウェルに細胞培養培地に提供する工程であって、そのウェルは培養表面を含み、そのマイクロプレートが、ウェルの隣接するものの間に延在する多数の通路を含み、ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、その隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、その少なくとも１つの通路と、その隣接するウェルの培養表面との間に、細胞培養培地を収集するための間隙を画成する、工程；およびそのウェルに流体を導入し、それによって、通路を通ってウェルの間に流体が流れる工程を有してなる。
【０００８】
ここに記載されたマイクロプレート装置および流体デバイスの追加の特徴と利点が、以下の詳細な説明に述べられており、一部は、その説明から当業者に容易に明白となるか、または以下の詳細な説明、特許請求の範囲、並びに添付図面を含む、ここに記載された実施の形態を実施することによって認識されるであろう。
【０００９】
先の一般的な説明および以下の詳細な説明の両方とも、様々な実施の形態を記載しており、請求項の主題の性質と特徴を理解するための概要または骨子を提供する目的であることが理解されよう。添付図面は、様々な実施の形態のさらなる理解を与えるために含まれ、本明細書に包含され、その一部を構成する。図面は、ここに記載された様々な実施の形態を示しており、説明と共に、請求項の主題の原理および作動を説明する働きをする。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、多数のウェルおよび多数の通路を中に有するマイクロプレートの斜視図
【図２】多数の通路が多数のウェルの列に沿って延在し、それによって、多数のウェルの列を相互接続する、図１のマイクロプレートの上面図
【図３】多数の通路が多数のウェルの行に沿って延在し、それによって、多数のウェルの行を相互接続する、マイクロプレートの別の実施の形態の上面図
【図４】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、多数のウェルが、ウェルの底壁に沿ってマイクロキャビティ基体を含む、多数のウェルと多数の通路の側面図
【図５】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、外部表面に沿って延在する多数のポートを有するプレート蓋の斜視図
【図５Ａ】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、エラストマー裏地が間に配置された、図５のプレート蓋および図１のマイクロプレートの、図５の線Ａ−Ａに沿ってとられた断面図
【図６】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、多数のウェルが多数のウェル上に揃えられた、マイクロプレート上に組み立てられたプレート蓋の上面図
【図７】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、マイクロプレートとプレート蓋の組立体と流体連通した流体装置の斜視図
【図８】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、プレート蓋およびマイクロプレートをそのプレート蓋にしっかりと係合させる締結機構の斜視図
【図９】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、多数のウェル内に収容された挿入物を含むマイクロプレートの部分斜視図
【図１０】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、マイクロキャビティ形状を有する挿入物がその中に収容された、マイクロプレートのウェルの部分斜視図
【図１１】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、挿入物がその中に収容された、マイクロプレートの、マイクロキャビティ形状を有するウェルの部分斜視図
【図１２】流体流路が直線行でエラストマー裏地に亘り横に延在する、内部エラストマー裏地および中に形成された多数の流体流路を有するプレート蓋の別の実施の形態の上面図
【図１３】平面に沿って互いから別々に隔離された多数のウェルを有するマイクロプレートの別の実施の形態の斜視図
【図１４】プレート蓋の流体流路がマイクロプレートの多数のウェルを相互接続している、図１３のマイクロプレート上に組み立てられた図１２のプレート蓋の上面図
【図１５】図１３のマイクロプレート上に組み立てられた図１２のプレート蓋の、図１４の線１５−１５に沿ってとられた断面図
【図１６】プレート蓋が、内部エラストマー裏地およびその中に形成された多数の流体流路を有し、その流体流路が直線列でエラストマー裏地に亘り縦方向に延在する、図１３のマイクロプレート上に組み立てられた代わりのプレート蓋の上面図
【図１７】図１３のマイクロプレート上に組み立てられた図１６のプレート蓋の、図１６の線１７−１７に沿ってとられた断面図
【図１８】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、図１４のマイクロプレートとプレート蓋の組立体と流体連通した流体装置の斜視図
【図１９】ここに示され、記載された１つ以上の実施の形態による、図１６のマイクロプレートとプレート蓋の組立体と流体連通した流体装置の斜視図
【発明を実施するための形態】
【００１１】
ここで、その例が添付図面に示されている、様々な安定化装置が中に配置された、細胞培養容器の様々な実施の形態を詳しく参照する。できるときはいつでも、図面に亘り、同じまたは同様の部分を称するために、同じ参照番号が使用される。ここに用いられているような方向を示す用語−例えば、上、下、右、左、前、後ろ、上部、底部、遠位、および近位−は、描かれた図面に関してのみ用いられ、絶対的な向きを暗示する意図はない。
【００１２】
範囲は、「約」１つの特定の値から、および／または「約」別の特定の値まで、としてここに表現することができる。そのような範囲が表現されている場合、別の実施の形態は、その１つの特定の値から、および／または他方の特定の値までを含む。同様に、値が、「約」という先行詞によって近似として表現されている場合、その特定値は別の実施の形態を形成すると理解されよう。範囲の各々の端点は、他方の端点に関してと、他方の端点に関係なくの両方で有意であることがさらに理解されよう。
【００１３】
特に明記のない限り、ここに述べられたどの方法も、その工程が特定の順序で行われることを必要とする、または任意の装置について、特定の向きが要求されると解釈されることは決して意図されていない。したがって、方法の請求項が、その工程が従うべき順序を実際に列挙していない場合、または装置の請求項が、個々の構成要素に関する順序または向きを実際に列挙していない場合、もしくは請求項または記載に、工程が特定の順序に限定されること、または装置の構成要素に対する特定の順序または向きが列挙されていない場合、どの点に関しても、順序または向きが暗示されることは決して意図されていない。このことは、工程の配列、操作の流れ、構成要素の順序、または構成要素の向き；文法構成または句読法に由来する明白な意味；および明細書に記載された実施の形態の数またはタイプに関する論理事項を含む、解釈に関するどの可能性のある非表現基準にも適用される。
【００１４】
ここに用いられているように、名詞は、内容が明白に他に示していない限り、複数の対象を含む。それゆえ、例えば、成分に対する言及は、内容が明白に他に示していない限り、そのような成分を２つ以上有する態様を含む。
【００１５】
ここで図１を参照すると、マイクロプレート１００の１つの実施の形態は、中に形成された複数のウェル１０４および複数の流体流路１０６を含む本体１０２を備える。詳しくは、複数の流体流路１０６の各流体流路１０６は、複数のウェル１０４が複数の流体流路１０６を介して互いに相互接続されるように、２つの直接隣接したウェル１０４の間に位置付けられている。各ウェル１０４が流体流路１０６によって隣接するウェル１０４から隔てられているので、流体流路１０６は、マイクロプレート１００上で隣接するウェル１０４間に間隙を効果的に形成する。下記により詳しく記載されるように、複数のウェル１０４は、その複数のウェル１０４を共に相互接続する複数の流体流路１０６を介して互いに流体連通されている。これも下記にさらに記載されるように、複数の流体流路１０６は、あるウェル１０４から隣接するウェル１０４への流体流の動きを促進して、複数のウェル１０４内で増殖されるオルガノイドの熟成および分化を促進させるようなサイズと形状である。
【００１６】
この例において、本体１０２は、ウェル１０４および流体流路１０６がプラスチック材料から同様に成形されるように、そのプラスチック材料から形成される；しかしながら、本体１０２、ウェル１０４、および流体流路１０６は、細胞を培養するための様々な他の適切な材料から形成されてもよいことを理解すべきである。
【００１７】
図２から最もよく分かるように、複数の流体流路１０６は、流体流路１０６がウェル１０４の列を互いに相互接続するように、本体１０２に沿って横に延在する。この例において、マイクロプレート１００は、間に配置された流体流路１０６を介して互いに流体連通されている様々な列のウェル１０４を含む。あるいは、流体流路１０６は、流体流路１０６が、この例に示されたもの以外の様々な配列のウェル１０４を相互接続するように作られるようにウェル１０４に対して様々な他の向きで本体１０２内に配置されてもよい。例えば、図３から分かるように、流体流路１０６は、複数の流体流路１０６がウェル１０４の行を相互接続するように、本体１０２に沿って縦に延在する。この例において、マイクロプレート１００は、間に配置された流体流路１０６を介して互いに流体連通されている様々な行のウェル１０４を含む。図示されていないが、流体流路１０６およびウェル１０４の他の様々な配列がマイクロプレート１００に含まれてもよいことを理解すべきである。
【００１８】
図４は、一連の流体流路１０６により相互接続された一行のウェル１０４を示す。この例において、複数のウェル１０４は、各ウェル１０４のウェル床１１０に沿って複数のマイクロキャビティ１０８を備える。マイクロキャビティ（１０８）は、各々が互いに関して規定の空間を画成する、平面に沿って、この例では、ウェル１０４のウェル床１１０に沿って、形成された小型キャビティである。マイクロキャビティ１０８は、培養のために各マイクロキャビティ１０８内に複数の細胞を収容するようなサイズと形状である。この例において、ウェル１０４のウェル床１１０は、三次元（３Ｄ）細胞集合体（すなわち、スフェロイド）の形成を可能にするように作られた細胞培養基体を構成する。したがって、ウェル１０４のウェル床１１０に沿って配置された複数のマイクロキャビティ１０８は、同様に、その中に収容された細胞（例えば、幹細胞）からスフェロイドを増殖させ、成長するのを促進させる機能を持つ細胞培養基体を構成する。ある場合には、マイクロキャビティ１０８およびウェル床１１０の細胞培養基体は、ウェル１０４内の３Ｄ細胞集合体の形成をさらに促進するために、ガス透過性材料から作られることがある。マイクロキャビティ１０８およびウェル床１１０は、スフェロイドの増殖および成長に適した他の材料から作られてもよいことを理解すべきである。
【００１９】
マイクロプレート１００の複数の流体流路１０６は、ウェル１０４のウェル床１１０に対して高くされて、流体流路１０６とウェル床１１０との間に間隙１１５を提供する通路床１１２を有する。複数の流体流路１０６は、通路床１１２に対して上方に延在する一対の側壁１１４をさらに備え、それによって、流体流路１０６内に体積を形成する。したがって、間隙１１５は、流体流路１０６の隣接接続にかかわらず、ウェル１０４内のマイクロキャビティ１０８内に最初に収容された複数の細胞を部分的に貯蔵および／または維持するように作られている。側壁１１４はさらに、側壁１１４の間であって、複数のウェル１０４から流体流路１０６中に移送される任意の液体培地または細胞を部分的に貯蔵および／または維持するように作られている。ある場合には、流体流路１０６は、オルガノイドを培養し、成長させるためにその中に複数の細胞を収容するように同様に作られることがある。複数の流体流路１０６は、流体流路１０６の通路床１１２が複数のウェル１０４と共に、３Ｄ細胞集合体の形成を可能にするように作られるように、ウェル１０４のウェル床１１０と同様に、通路床１１２に沿って細胞培養基体を構成してもよいことを理解すべきである。
【００２０】
図３に戻ると、流体流路１０６は、流体流路１０６がウェル１０４より狭いプロファイルを含む寸法であるように、ウェル１０４の幅より小さい幅を有するようなサイズである。単に説明のための一例として、流体流路１０６は、ウェル１０４の幅の約５０％の幅を含むことがある。下記により詳しく記載されるように、流体流路１０６の幅は、流体流路１０６を通る物質の移動を促進して、それぞれ、流体流路１０６が連結された複数のウェル１０４内で増殖されるスフェロイドの成長を促進する働きをする。流体流路１０６により移動される物質は、液体培養培地、流体（例えば、水を含む）、可溶性因子、細胞、または培養される細胞の増殖に貢献する他の様々な物質であってよい。ウェル１０４に対する流体流路１０６の相対的サイズにより、マイクロプレート１００を、３Ｄ細胞培養物を灌流するための流体デバイスなどの、マイクロプレート１００内で細胞を培養するための様々な適切な器具に使用することができる。
【００２１】
図５は、マイクロプレート１００と係合するようなサイズと形状のプレート蓋１２０を示す。プレート蓋１２０は、プレート蓋１２０の上面に沿った外部表面１２２を備える。プレート蓋１２０は、外部表面１２２から反対の表面１２３までプレート蓋１２０を通って延在する、外部表面１２２に沿った複数のポート１２４をさらに備える。この例において、複数のポート１２４は、外部表面１２２からプレート蓋１２０の内部表面へのアクセスを提供するように作られている。以下により詳しく記載されるように、複数のポート１２４は、プレート蓋１２０の内部表面と、例えば、図７に示された、流体装置１３０との間の流体連通を確立するために中に管を収容するサイズと形状である。この例において、プレート蓋１２０は、プレート蓋１２０の反対の表面１２３、ウェル１０４および流体流路１０６が外部表面１２２から目に見えるように透明プラスチック材料から形成されている。他の態様において、プレート蓋１２０は、他の適切な材料から形成されてもよいことを理解すべきである。
【００２２】
ある場合には、プレート蓋１２０の内部表面は、図５Ａから分かるように、反対の表面１２３で複数のポート１２４を覆うようなサイズと形状のエラストマー裏地１２５をその上に備えることがある。この場合、エラストマー裏地１２５は、プレート蓋１２０がマイクロプレート１００上に組み立てられたときに、プレート蓋１２０をマイクロプレート１００に封止し、それによって、プレート蓋１２０をマイクロプレート１００にしっかりと留めるように作られている。単に説明のための一例として、エラストマー裏地１２５は、シリコーン接着剤または他の様々なシーラント高分子であってもよい。それに加え、エラストマー裏地１２５は、プレート蓋１２０の下に位置付けられたマイクロプレート１００が見えるように透明または半透明であることがある。エラストマー裏地１２５は、プレート蓋１２０の内部表面と接触しないように、複数のウェル１０４および複数の流体流路１０６を隔てる保護裏地としての機能も果たすことができる。この場合、エラストマー裏地１２５は、ウェル１０４および流体流路１０６を封止して、ウェル１０４および流体流路１０６の内容物を汚染させる虞を最小にする。
【００２３】
それに加え、またはそれに代えて、エラストマー裏地１２５はさらに、マイクロプレート１００とプレート蓋１２０、特に、複数のポート１２４との間に隔膜を形成するように作られることがある。この場合、プレート蓋１２０上にマイクロプレート１００が組み立てられているにもかかわらず、複数のポート１２４は、プレート蓋１２０の反対の表面１２３に沿ったエラストマー裏地１２５の存在のために、マイクロプレート１００の複数のウェル１０４および／または流体流路１０６と連通していないことがある。したがって、プレート蓋１２０をマイクロプレート１００上に組み立てた後に、複数のウェル１０４および流体流路１０６へのアクセスを確立するために、エラストマー裏地１２５により作られた隔膜を、穿孔器具で貫通させることがある。ほんの一例として、カニューレ、針、または他の適切な穿刺器具を外部表面１２２に沿って複数のポート１２４に挿入して、エラストマー裏地１２５を貫通させることができる。
【００２４】
図６は、マイクロプレート１００がプレート蓋１２０の内部表面に沿って収容されるようにマイクロプレート１００上に組み立てられたプレート蓋１２０を示している。この場合、マイクロプレート１００はプレート蓋１２０内に位置付けられており、複数のウェル１０４および流体流路１０６は、プレート蓋１２０中に上向きに、プレート蓋１２０の内部表面に向いて面している。プレート蓋１２０がマイクロプレート１００上に組み立てられたときに、複数のポート１２４は、プレート蓋１２０の外部表面１２２に沿って形成されて、マイクロプレート１００のウェル１０４の位置と揃っている。言い換えると、プレート蓋１２０は、プレート蓋１２０がその上に組み立てられることを目的とした特定のマイクロプレート１００と対応して、複数のポート１２４がそれにしたがってマイクロプレート１００内のウェル１０４の位置と揃うように位置付けられるように作られている。この例において、マイクロプレート１００は、本体１０２に亘って垂直に延在し、それによって、ウェル１０４の列を接続する複数の流体流路１０６を備えている。したがって、プレート蓋１２０の複数のポート１２４は、相互接続されたウェル１０４の各列が、プレート蓋１２０の少なくとも２つのポート１２４と連通するように、ウェル１０４の位置に対応するように、外部表面１２２の縦の長さに沿って位置付けられている。以下により詳しく記載されるように、相互接続されたウェル１０４の各列と連通した２つのポート１２４の一方のポート１２４は、ウェル１０４の列中への「流入」アクセス地点として機能し（以後、流入ポート１２６と称される）、ウェル１０４の列に連結された２つのポート１２４の他方のポートは、「流出」アクセス地点を提供する（以後、流出ポート１２８と称される）。
【００２５】
マイクロプレート１００が、先に記載されたように、図３から分かるように、複数の流体流路１０６によって互いに相互接続されたウェル１０４の行を備える他の場合には、プレート蓋１２０の複数のポート１２４は、外部表面１２２の幅に沿って位置付けられ、それによって、相互接続されたウェル１０４の各行が、プレート蓋１２０の２つのポート１２４と連通するように、ウェル１０４の位置に対応することを理解すべきである。プレート蓋１２０の複数のポート１２４のさらに他の配列および位置が、マイクロプレート１００の複数のウェル１０４および複数の流体流路１０６の配列を考慮して、当業者に明白であろう。
【００２６】
使用に際して、ウェル１０４の複数のマイクロキャビティ１０８に、細胞が播種され、その後、プレート蓋１２０がマイクロプレート１００上に組み立てられて、その中に細胞を閉じ込める。この場合、マイクロプレート１００とプレート蓋１２０の組立体は、ロッカー・テーブルを備えたインキュベータ内に配置されることがある。このインキュベータは、始動され、それによって、マイクロプレート１００がその上に配置されたロッカー・テーブルの運動を与え、それにより、その中の複数のウェル１０４および／または流体流路１０６内でスフェロイドおよび／またはオルガノイドが形成される。その後、マイクロプレート１００とプレート蓋１２０の組立体がインキュベータから取り出され、プレート蓋１２０がマイクロプレート１００から取り外される。この例において、複数のウェル１０４および流体流路１０６は、その中で成長したスフェロイドおよび／またはオルガノイドが液体培養培地に浸されるように、液体培養培地で溢れることがある。
【００２７】
プレート蓋１２０は、その後、マイクロプレート１００上に再び組み立てられ、プレート蓋１２０とマイクロプレート１００の組立体は、図７に示されるように、流体装置１３０に接続される。この例において、複数のウェル１０４および流体流路１０６へのアクセスは、プレート蓋１２０の複数のポート１２４を通じてしか与えられていない。マイクロプレート１００とプレート蓋１２０の組立体は流体装置１３０に結合されているので、流体装置１３０は、プレート蓋１２０の複数のポート１２４を通じて、複数のウェル１０４および流体流路１０６との流体連通を確立する。一般に、流体装置１３０は、複数のウェル１０４および流体流路１０６に液体を灌流させ、それによって、その中に含まれるスフェロイドおよび／またはオルガノイドを剪断力に曝すように作られている。
【００２８】
流体装置１３０は、外部流体源１３２、流体分配装置１３４、および外部流体槽１４０を備える。外部流体源１３２は流体分配装置１３４に、それらの間に配置された導管１３６を通じて連結され、それによって、外部流体源１３２と流体分配装置１３４との間の流体連通を確立している。この例において、外部流体源１３２は、その中に流体を収容する加圧培地用袋である。さらに、流体分配装置１３４は、それぞれ、マイクロプレート１００内に含まれるウェル１０４の各々の相互接続された列のための流量制御弁を備えたマニホールドである。したがって、流体分配装置１３４（すなわち、マニホールド）の各流量制御弁は、相互接続されたウェル１０４のそれぞれの列に揃えられた複数のポート１２４の流入ポート１２６に結合されている。この流量制御弁は、外部流体源１３２から流入ポート１２６への流体の量と速度を選択的に管理する（すなわち、制御可能に放出する）ように作られている。流体分配装置１３４は、流体分配装置１３４の流量制御弁と複数の流入ポート１２６との間に延在する一連の管１３８を通じて、プレート蓋１２０とマイクロプレート１００の組立体に結合されている。
【００２９】
流体分配装置１３４の流量制御弁は、外部流体源１３２から、流体分配装置１３４を通じて、一連の管１３８を介してプレート蓋１２０の流入ポート１２６に向けて流体の移動を開始するように始動される。その流体は、流入ポート１２６に到達した際に、ウェル１０４の相互接続された列の最初のウェル１０４に入る。ウェル床１１０の細胞培養基体は、マイクロキャビティ１０８内に貯蔵された細胞と液体培地が灌流されるように、流体流に曝される。その流体は、最初のウェル１０４を残りの複数のウェル１０４に接続する複数の流体流路１０６を介して、最初のウェル１０４に相互接続された他の複数のウェル１０４を通じて移送される。その流体が複数の流体流路１０６を介して複数のウェル１０４を通過するにつれて、その流体は、ウェル１０４および流体流路１０６を通って剪断力を生じる。したがって、複数の流体流路１０６により与えられる接続性を通じて複数のウェル１０４を灌流すると、ウェル１０４および流体流路１０６の内容物（すなわち、マイクロキャビティ１０８およびウェル床１１０の培養基体に沿って収容された細胞および液体培地）を、ウェル１０４の細胞培養基体を効果的に差別化し、ウェル１０４および／または流体流路１０６内のオルガノイドの細胞分化および成熟に役立つ剪断力／応力に曝す。
【００３０】
言い換えると、複数の流体流路１０６によるウェル１０４の接続性のために、複数のウェル１０４内に形成されたスフェロイドに沿って一定の流体流を引き起こすことによって、ウェル床１１０に沿って増殖した３Ｄ細胞集合体は、分化機能を備えて成熟する。複数のウェル１０４の各ウェル１０４内で異なるオルガノイドが増殖される場合、ひいては、相互接続されたウェル１０４の列に流体を灌流させることによって、分化機能をさらに促進させる可溶性因子が循環し、これは、ヒトの臓器の機能的体現を密接にシミュレーションするオルガノイドの形成に役立つ。マイクロプレート１００内で誘発される剪断力／応力は、流体分配装置１３４から移送される流体の流れにある程度起因し、流体流路１０６のサイズと形状にある程度起因する。詳しくは、先に詳しく記載されたように、流体流路１０６は、複数の流体流路１０６が、各ウェル１０４内で増殖されるオルガノイドの細胞分化および成熟を与えるために各ウェル１０４内の十分な流体の運動を生じるように作られるように、流体が中を移動するための向上した導管を提供するようなサイズである。
【００３１】
流体が複数のウェル１０４を流通するにつれて、各流体流路１０６の下の間隙１１５は、それぞれのウェル１０４内のウェル床１１０のマイクロキャビティ１０８に沿って成長したスフェロイドおよび／またはオルガノイドを部分的に維持する。一対の側壁１１４は、流体が十分な速度で複数の通路１０６を同時に流通し、それによって、各ウェル１０４の３Ｄ細胞集合体に沿った必要な剪断応力の形成を促進して、その中に位置付けられたオルガノイドを成熟させるようなサイズと形状である。したがって、複数の流体流路１０６のサイズと形状は、流体がマイクロプレート１００を通って灌流されるときに、多数の目的を果たす。流体がウェル１０４の直線列内の最後のウェル１０４に一旦到達したら、その流体は、ウェル１０４の各相互接続された列の最後のウェル１０４に揃えられたそれぞれの流出ポート１２８を介してマイクロプレート１００から出るように移送される。この例において、各流出ポート１２８は、一端で外部表面１２２のプレート蓋１２０に、反対の端部で外部流体槽１４０に結合された管１３８に結合されている。外部流体槽１４０は、貯蔵およびその後の廃棄のために、マイクロプレート１００からの循環流体を収集する。
【００３２】
図示されていないが、いくつかの態様において、流体装置１３０は、外部流体槽１４０を含まなくてもよく、そうではなく、循環流体は別の経路を切り換え、それによって、灌流サイクルが終わるまで、複数のウェル１０４および流体流路１０６を繰り返し流通することを理解すべきである。この例において、流出ポート１２８は、流体が所定の数のサイクルについて、ウェル１０４および流体流路１０６の同じ直線列を通って移送されるように、流体が最後のウェル１０４から最初のウェル１０４に再循環されるように一連の管１３８を介して流入ポート１２６に結合することができる。
【００３３】
それに加え、またはそれに代えて、ある場合には、マイクロプレート１００は、マイクロプレート１００の温度を上昇させるように作られた加熱装置内に位置付けられることがある。この例において、マイクロプレート１００とプレート蓋１２０の組立体が加熱装置内に収容されると、複数のウェル１０４および流体流路１０６内に貯蔵された内容物（すなわち、３Ｄ細胞集合体、液体培地、流体など）の内部温度が、所定の温度まで制御可能に上昇させられ、それによって、以下に限られないが、細胞の生存および細胞代謝の維持を含む様々な利点を提供する。したがって、流体が、ウェル１０４および流体流路１０６の直線列を通って移送されて、その中に貯蔵されたオルガノイドの成長を促進させるために必要な剪断応力を生じるときに、加熱装置は、細胞を同時に加熱して、その生存を維持する。
【００３４】
他の態様において、流体装置１３０の流体分配装置１３４は、管１３８を介してマイクロプレート１００とプレート蓋１２０の組立体に結合されたポンプを備える。図示されていないが、流体装置１３０を使用する方法は、ここに明白に述べられた違いを除いて、先に詳しく説明されたのと実質的に似ていることを理解すべきである。この例において、流体分配装置１３４（すなわち、ポンプ）は、マニホールドの制御弁の操作について先に記載したように流体を単に放出するのではなく、それによって流体に十分な速度を生じる対応する機械的移動を設定することによって必要な剪断応力が生じるように所定の流量で、流体を出力するように作られている。単に説明に役立つ例として、流体分配装置１３４は、蠕動ポンプであってよいが、流体装置１３０の一部として、他の適切なポンプを使用してもよいことを理解すべきである。
【００３５】
図８は、締結機構２５０を備えたプレート蓋２２０の別の実施の形態を示している。下記に特に記載されない限り、プレート蓋２２０は、上述したプレート蓋１２０と同様に作られ、機能する。締結機構２５０は、マイクロプレート１００がプレート蓋２２０内に収容されたときに、プレート蓋２２０をマイクロプレート１００にしっかりと係合するように作られている。この例において、締結機構２５０は、プレート蓋２２０の外側端２２２に沿ってプレート蓋２２０に固定された一対のクランプアーム２５２を含む。詳しくは、クランプアーム２５２は、プレート蓋２２０に対して可動性であり、それによってマイクロプレート１００をしっかりと把持し、それによって、マイクロプレート１００をプレート蓋２２０の内部表面に封止する。図示されていないが、締結機構２５０は、様々な他の形態の締結装置を含んでもよいことを理解すべきである。単に説明に役立つ例として、締結機構２５０は、マイクロプレート１００に沿って関連特徴構造に係合するように作られたスナップ特徴構造を含むことがある。あるいは、単にさらに別の例として、締結機構２５０は、プレート蓋２２０をマイクロプレート１００にしっかりと封止するように機能する接着剤を含むことがある。
【００３６】
図９、図１０、および図１１は、その中に収容された挿入物を含むマイクロプレート２００の別の実施の形態を示している。下記に別に記載されない限り、マイクロプレート２００は、上述したマイクロプレート１００と同様に作られ、機能する。したがって、マイクロプレート２００の同様の構成部材を特定するために、同様の参照番号が使用される。挿入物２６０は、マイクロプレート２００の複数のウェル２０４内に嵌まるようなサイズと形状の複数のウェル挿入物２６４を備える。この例において、挿入物２６０は、ウェル挿入物２６４がウェル２０４内に収容されたときに、ウェル挿入物２６４がウェル２０４と流体連通するように作られるように、多孔質材料から形成されている。下記により詳しく記載されるように、挿入物２６０は、多孔質材料から形成されることによって、挿入物２６０のウェル挿入物２６４が各ウェル２０４のウェル床２１０の上に収容されたときに、マイクロプレート２００内に位置付けられた細胞の共培養を可能にするように機能する。
【００３７】
図示されていないが、挿入物２６０は、マイクロプレート２００の複数の流体流路２０６内に嵌まるようなサイズと形状の複数の通路挿入物をさらに備えてもよいことを理解すべきである。さらに、挿入物２６０の複数のウェル挿入物２６４および／または複数の通路挿入物は、互いに一体に固定されてもよいことを理解すべきである。この例において、マイクロプレート２００の各ウェル２０４および／または流体流路２０６は、挿入物２６０がその中に位置付けられたときに、挿入物２６０の多孔質膜により覆われる。あるいは、他の態様において、挿入物２６０の複数のウェル挿入物２６４および／または複数の通路挿入物は、ユーザが、要望通りに、ウェル挿入物２６４および／または通路挿入物を、それぞれのウェル２０４および／または流体流路２０６に選択的に挿入できるように、互いから個々に隔てられることがある。この例において、マイクロプレート２００の全てのウェル２０４および／または流体流路２０６が、挿入物２６０により覆われている訳ではない。
【００３８】
いくつかの態様において、上述したマイクロプレート１００の複数のウェル１０４とは異なり、マイクロプレート２００の複数のウェル２０４は、図１０から分かるように、ウェル床２１０がその中に形成される複数のマイクロキャビティを含まないように、ウェル床２１０に沿って平面を有する。それどころか、挿入物２６０のウェル挿入物２６４は、ウェル挿入物２６４のウェル挿入物床２７０に沿って複数のマイクロキャビティ２６８を備える。この例において、ウェル床２１０はまだ、その中にマイクロキャビティがないにもかかわらず、その上に細胞を収容するように作られている。さらに、ウェル挿入物床２７０は、マイクロキャビティ２６８内に細胞を収容し、それによって、その中にスフェロイド／オルガノイドを形成するように作られている。したがって、ウェル２０４のウェル床２１０に沿って堆積された細胞は、挿入物２６０は多孔質膜から形成されているので、灌流中に、ウェル挿入物２６４のマイクロキャビティ２６８内に形成されたスフェロイド／オルガノイドと連通している。
【００３９】
あるいは、図１１から分かるような他の態様において、マイクロプレート２００の複数のウェル２０４は、マイクロプレート１００のウェル１０４と同様に、ウェル床２１０に沿って複数のマイクロキャビティ２０８を備える。この例において、ウェル挿入物２６４のウェル挿入物床２７０は、ウェル挿入物床２７０がその中に形成されたマイクロキャビティを持たないように平面を含む。したがって、ウェル床２１０のマイクロキャビティ２０８内に形成されたスフェロイド／オルガノイドは、多孔質材料からなる挿入物２６０のために、ウェル挿入物２６４のウェル挿入物床２７０に沿って任意の細胞および／または流体と連通したままである。図示されていないが、ウェル床２１０およびウェル挿入物床２７０の両方とも、形状表面の他の組合せを含んでよいことを理解すべきである。単に説明に役立つ例として、マイクロプレート２００のウェル床２１０および挿入物２６０のウェル挿入物床２７０の両方とも、それによってウェル床２１０のマイクロキャビティがその中にウェル挿入物床２７０のマイクロキャビティを収容できるように同様なサイズと形状のマイクロキャビティを含んでもよい。
【００４０】
使用に際して、複数のウェル２０４に、ウェル床２１０がマイクロキャビティ２０８を備えているか否かにかかわらず、上述したように細胞が播種される。ウェル２０４がその中に細胞を含んだ状態で、複数のウェル挿入物２６４および／または通路挿入物が、それぞれ、ウェル２０４および／または流体流路２０６内に収容されるように、挿入物２６０がマイクロプレート２００内に位置付けられる。この例において、播種された細胞は、ウェル床２１０と、複数のウェル挿入物２６４のウェル挿入物床２７０との間にしっかりと収容されている。挿入物２６０がマイクロプレート２００によりしっかりと収容されると、挿入物２６０が中に囲まれた状態でプレート蓋１２０をマイクロプレート２００上に組み立てる前に、複数のウェル挿入物２６４に細胞が播種される。
【００４１】
この例において、先に同様に記載したように、マイクロプレート２００とプレート蓋１２０の組立体は、インキュベータ内に置かれ、それによって、複数のウェル２０４および／または複数のウェル挿入物２６４内のスフェロイドおよび／またはオルガノイドの形成のためのマイクロプレート２００の運動を提供する。それに続き、マイクロプレート２００とプレート蓋１２０の組立体はインキュベータから取り出され、プレート蓋１２０は、マイクロプレート２００および挿入物２６０が液体培養培地で溢れるように、マイクロプレート２００から取り外される。この例において、ウェル２０４および／またはウェル挿入物２６４内で成長したスフェロイドおよび／またはオルガノイドは、液体培養培地に効果的に浸されている。
【００４２】
その後、プレート蓋１２０をマイクロプレート２００に再び組み立て、プレート蓋１２０とマイクロプレート２００の組立体は、上述し、図７に示された流体装置１３０と同様の流体デバイスに接続される。したがって、流体装置１３０によりマイクロプレート２００を通って移送されるどの流体も、挿入物２６０の複数のウェル挿入物２６４およびマイクロプレート２００の複数のウェル２０４の両方に沿って成長したオルガノイドを灌流する。詳しくは、挿入物２６０は多孔質材料から形成されているので、挿入物２６０に沿った流体の移動により生じる剪断応力はまだ、挿入物２６０の多孔質特性のために、挿入物２６０の下に配置された細胞により経験される。言い換えると、それぞれ、複数のウェル２０４および／または流体流路２０６を覆う複数のウェル挿入物２６４および／または通路挿入物にかかわらず、ウェル２０４および／または通路２０６内に堆積された細胞はまだ、流体装置１３０によりマイクロプレート２００を通って灌流される流体の剪断力に曝される。マイクロプレート２００およびその中に収容されるオルガノイドを培養し、灌流する他の工程および方法が、流体装置１３０およびマイクロプレート１００について先に記載された教示に鑑み、当業者に明白であろう。
【００４３】
図１２は、プレート蓋３２０の内部表面３２３に沿って形成されたエラストマー裏地３２５を含むプレート蓋３２０の別の実施の形態を示している。下記に別に記載されない限り、プレート蓋３２０は、上述したプレート蓋１２０と同様に作られ、機能する。したがって、プレート蓋３２０の同様の構成要素を特定するために、同様の参照番号が使用される。プレート蓋３２０は、上述したポート１２４と同様に、プレート蓋３２０の内部表面３２３と、反対の外部表面３２２との間に延在する複数のポート３２４を備える。下記により詳しく記載されるように、エラストマー裏地３２５は、内部表面３２３に沿って複数のポート３２４を覆うようなサイズと形状である。プレート蓋３２０は、エラストマー裏地３２５内に形成された複数の流体流路３２６をさらに備える。言い換えると、エラストマー裏地３２５は、そのエラストマー裏地が流体流路３２６の位置で窪んだ表面を有するように、複数の流体流路３２６のところでその上に延在する複数の直線キャビティを含む。図１２から分かるように、複数の流体流路３２６は、内部表面３２３に亘り横に延在し、それによって、プレート蓋３２０上に４行の流体流路３２６を形成する。下記により詳しく記載されるように、プレート蓋３２０のエラストマー裏地３２５に沿って、他の様々な数量、配列、および向きの流体流路３２６が含まれてもよいことを理解すべきである。
【００４４】
図１３は、その中に形成された複数のウェル３０４を含むマイクロプレート３００の別の実施の形態を示している。ここに明白に述べられた違いを除いて、マイクロプレート３００は、上述したマイクロプレート１００と同様に作られ、機能することを理解すべきである。マイクロプレート１００とは異なり、マイクロプレート３００は、複数のウェル３０４を相互接続するためのその上に形成された複数の流体流路を備えていない。それどころか、複数のウェル３０４は、マイクロプレート３００の平らな平面３０５によって互いから隔てられている。したがって、マイクロプレート３００の複数のウェル３０４は、複数のウェル３０４が互いに流体連通していないように、平らな平面３０５によって互いから個々に隔てられている。マイクロプレート３００は、複数のポート３２４および複数の流体流路３２６が、プレート蓋３２０のマイクロプレート３００への係合に反応して、マイクロプレート３００の複数のウェル３０４との流体連通を確立するように機能するように、プレート蓋３２０と結合するように作られている。エラストマー裏地３２５は、プレート蓋３２０がマイクロプレート３００上に組み立てられたときに、プレート蓋３２０をマイクロプレート３００に封止し、それによって、プレート蓋３２０をマイクロプレート３００にしっかりと固定するように作られている。
【００４５】
図１４から分かるように、プレート蓋３２０がマイクロプレート３００の上に組み立てられており、複数の流体流路３２６の各流体流路３２６は、流体流路３２６が複数のウェル３０４間の流体連通のための経路を提供するように、複数のウェル３０４の内の一対のウェル３０４の間に効果的に延在している。複数の流体流路３２６がプレート蓋３２０の内部表面３２３に亘り横に延在しているので、複数の流体流路３２６は、マイクロプレート３００上にウェル３０４の行に亘る流体連通を提供するように作られている。下記により詳しく記載されるように、内部表面３２３に沿った流体流路３２６の異なる向きが、マイクロプレート３００の複数のウェル３０４の中での連通の異なる配列を与えてもよい。
【００４６】
図１５は、プレート蓋３２０がマイクロプレート３００にしっかりと結合されたときに、複数のウェル３０４との複数の流体流路３２６の整合を示している。複数のウェル３０４は、上述したマイクロプレート１００のウェル１０４と同様に、ウェル床３１０に沿って複数のマイクロキャビティ３０８を備えている。エラストマー裏地３２５が、プレート蓋３２０とマイクロプレート３００との間に密封を与え、プレート蓋３２０がその上に組み立てられたときに複数のウェル３０４の内容物がその中に維持されることを確実にする機能を果たす。プレート蓋３２０の複数の流体流路３２６は、複数のウェル３０４の対の間に揃えられ、それによって、ウェル３０４の行の間に流体連通を与える。エラストマー裏地３２５は、プレート蓋３２０がマイクロプレート３００上に組み立てられたときに、複数のウェル３０４の対の間にマイクロプレート３００の平らな平面３０５で流体流路３２６を形成するように窪んでいる、および／または凹んでいる。言い換えると、エラストマー裏地３２５は、複数のウェル３０４の内の一対のウェル３０４の間に延在する平らな平面３０５でマイクロプレート３００と接触せず、それによって、複数のウェル３０４の縁を封止しない。あるいは、下記により詳しく記載されるように、エラストマー裏地３２５は、流体流路３２６の他のプロファイルを含み、それによって、ウェル３０４の縁および一対のウェル３０４の間に延在するマイクロプレート３００部分に沿って密封を作り出せることを理解すべきである。
【００４７】
先に手短に記載したように、図１５から最もよく分かるように、エラストマー裏地３２５は、エラストマー裏地３２５が、複数のウェル３０４にアクセスするために穿孔または貫通されなければならないように、内部表面３２３に沿って複数のポート３２４を覆っている。言い換えると、エラストマー裏地３２５はさらに、マイクロプレート３００と、プレート蓋３２０、特に、複数のポート３２４との間に隔膜を形成するように作られることがある。この例において、マイクロプレート３００がプレート蓋３２０上に組み立てられているにもかかわらず、複数のポート３２４は、プレート蓋３２０の内部表面３２３に沿ったエラストマー裏地３２５の存在のために、マイクロプレート３００の複数のウェル３０４と連通していないであろう。したがって、プレート蓋３２０をマイクロプレート３００上に組み立てた後、複数のウェル３０４へのアクセスを確立するために、エラストマー裏地３２５により作られた隔膜は、穿孔器具で貫通されることがある。ほんの一例として、カニューレ、針、または他の適切な穿刺器具を外部表面３２２に沿った複数のポート３２４に挿入して、エラストマー裏地３２５を貫通させることができる。
【００４８】
単に説明に役立つ例として、エラストマー裏地３２５は、シリコーン接着剤または他の様々なシーラント高分子であることがある。それに加え、エラストマー裏地３２５は、プレート蓋３２０の下に位置付けられたマイクロプレート３００が見えるように透明または半透明であることがある。エラストマー裏地３２５は、プレート蓋３２０の内部表面３２３と接触しないように、複数のウェル３０４を隔てる保護裏地としての機能も果たすことができる。この場合、エラストマー裏地３２５は、ウェル３０４を封止して、ウェル３０４の内容物を汚染させる虞を最小にする。
【００４９】
図１６は、複数の流体流路４２６がエラストマー裏地４２５に沿って形成されて、プレート蓋３２０の流体流路３２６に関して先に記載されたように、横ではなく、内部表面４２３に対して縦に延在することを除いて、プレート蓋３２０と実質的に似た別のプレート蓋４２０を示している。言い換えると、プレート蓋４２０が、プレート蓋３２０により与えられるように一連の行ではなく、ウェル３０４の一連の相互接続された列に沿って、マイクロプレート３００に結合されているときに、プレート蓋４２０の複数の流体流路４２６は、エラストマー裏地４２５に対して垂直に延在し、それによって、複数のウェル３０４の間に流体連通を与える。さらに、図１７から分かるように、プレート蓋４２０のエラストマー裏地４２５は、プレート蓋４２０がマイクロプレート３００に結合されているときに、エラストマー裏地４２５が複数のウェル３０４の縁に沿ってシールを提供するように、複数のウェル３０４の間に延在するマイクロプレート３００の平らな平面３０５に当接するように作られている。したがって、エラストマー裏地４２５は、複数のウェル３０４の各ウェル３０４に沿って３６０度のシールを提供する。これは、マイクロプレート３００の平面にエラストマー裏地４２５を最初に成形し、その後、プレート蓋４２０の内部表面４２３にエラストマー裏地４２５を封止することによって与えられる。複数の流体流路４２６は、複数のウェル３０４の間に延在するマイクロプレート３００の平らな平面３０５からずれており、それによって、上述したプレート蓋３２０の流体流路３２６のプロファイルに対して大きいプロファイルを構成する。この例において、エラストマー裏地４２５は、間に延在する流体流路４２６を介して、複数のウェル３０４の列の間に流体連通を提供しつつ、マイクロプレート３００の複数のウェル３０４の各々の間に流体シールを維持する。
【００５０】
それぞれ、マイクロプレート１００、２００に関して上述したようにマイクロプレート３００上ではなく、プレート蓋３２０、４２０上に流体流路３２６、４２６が形成されるので、マイクロプレート３００と共に使用されるプレート蓋３２０、４２０のタイプを単に変えることによって、様々な配列の流体流路３２６、４２６を用いることができる。このことは、複数のウェル３０４が曝されるであろう培養条件の利用可能な組合せのために、細胞をマイクロプレート３００内で増殖させるべき方法の選択に、より大きい融通性を与える。例えば、マイクロプレート３００にプレート蓋３２０を結合させることによって、マイクロプレート３００の異なる行内に異なる組織モデルを最初に増殖させられる。その後、プレート蓋３２０をマイクロプレート３００から取り外し、様々な配置（例えば、一連の列に縦に延在する）の、プレート蓋３２０と異なる流体流路４２６を有する代わりのプレート蓋４２０をマイクロプレート３００に結合させて、マイクロプレート３００の隣接するウェル３０４内に収容された異なる組織モデルの間での培地の相互作用を差別化することができる。
【００５１】
プレート蓋３２０、４２０およびマイクロプレート３００は、ここに明白に述べられた違いを除いて、上述したプレート蓋１２０、２２０およびマイクロプレート１００、２００と実質的に同様の様式で、流体デバイスと使用可能であることを理解すべきである。詳しくは、ウェル３０４の複数のマイクロキャビティ３０８内に収容された細胞の播種およびインキュベーション後、複数のウェル３０４は、その中で成長したスフェロイドおよび／またはオルガノイドが液体培養培地で浸されるように、液体培養培地で溢れる。その後、プレート蓋３２０をマイクロプレート３００上に再び組み立て、プレート蓋３２０とマイクロプレート３００の組立体を、図１８から分かるように、流体装置３３０に接続する。この例において、複数のウェル３０４へのアクセスは、プレート蓋３２０の複数のポート３２４を通じて与えられる。マイクロプレート３００とプレート蓋３２０の組立体が流体装置３３０に結合されているので、流体装置３３０は、プレート蓋３２０の複数のポート３２４を通じて複数のウェル３０４との流体連通を確立する。一般に、流体装置３３０は、マイクロプレート３００の複数のウェル３０４およびプレート蓋３２０の複数の流体流路３２６に液体を灌流し、それによって、その中に含まれるスフェロイドおよび／またはオルガノイドを剪断力にさらすように作られている。
【００５２】
詳しくは、流体装置３３０は、一連の外部流体源３３２、流体分配装置３３４、および外部流体槽３４０を備える。外部流体源３３２は、互いに異なる培地配合物であり、それぞれの外部流体源３３２が結合されている特定の行のウェル３０４にとっての組織／臓器モデルの要求に特定の配合物を含む。言い換えると、マイクロプレート３００上の複数のウェル３０４の各行は、ウェル３０４のその特定の行に結合されたそれぞれの外部流体源３３２から異なる培地配合物を受け入れるようになっている。このことは、プレート蓋３２０をマイクロプレート３００に結合することによって与えられ、このプレート蓋３２０は、４つのそれぞれの行に横に延在する複数の流体流路３２６を備えている。各外部流体源３３２は流体分配装置３３４に、それらの間に配置された導管３３６を介して結合され、それによって外部流体源３３２と流体分配装置３３４との間に流体連通を確立する。この例において、外部流体源３３２は、中に特定の培地配合物流体を収容する加圧培地用袋であり、流体分配装置３３４は、そこに結合された各外部流体源３３２の流量制御弁を含むマニホールドである。あるいは、流体分配装置３３４は、外部流体源３３２から培地配合物流体を出力するように作られたポンプを含むことがある。
【００５３】
流体分配装置３３４は、マイクロプレート３００上の相互接続されたウェル３０４のそれぞれの行と揃えられた複数のポート３２４の流入ポート３２７に結合されている。流体分配装置３３４は、各外部流体源３３２から流入ポート３２７への流体の量および速度を選択的に管理する（すなわち、制御可能に放出する）ように作られている。流体分配装置３３４は、流体分配装置３３４と複数の流入ポート３２７との間に延在する一連の管３３８を通じてプレート蓋３２０とマイクロプレート３００の組立体に結合されている。各管３３８は、管３３８が流体連通しているウェル３０４の行に送達されるのを目的とした特定の培地配合物流体を含む外部流体源３３２に対応する特定の導管３３６に結合されている。その流体が流入ポート３２７に到達した際に、その流体は、ウェル３０４の相互接続された行の最初のウェル３０４に入り、それによって、マイクロキャビティ３０８内に貯蔵された細胞および液体培地が、その中を通って移動する特定の培地配合物により灌流されるように、ウェルの細胞培養基体を流体流に曝す。その流体は、最初のウェル３０４を残りの複数のウェル３０４に接続する複数の流体流路３２６を介して、最初のウェル３０４に相互接続された他の複数のウェル３０４を通って移動される。流体が複数のウェル３０４を通って移動するにつれて、その流体が、ウェル３０４の細胞培養基体を効果的に差別化する剪断力を生じる。
【００５４】
その流体が直線行のウェル３０４の最後のウェル３０４に一旦到達したら、流体は、ウェル３０４の各相互接続された行の最後のウェル３０４に揃えられたそれぞれの流出ポート３２８を介してマイクロプレート３００から出るように移動される。この例において、各流出ポート３２８は、一端で外部表面３２２のプレート蓋３２０に、反対の端部で外部流体槽３４０に結合された管３３８に結合されている。外部流体槽３４０は、貯蔵およびその後の廃棄のために、マイクロプレート３００からの循環流体を収集する。その後、マイクロプレート３００とプレート蓋３２０の組立体は、流体装置３３０から外され、それによって、プレート蓋３２０をマイクロプレート３００から分解することができる。この例において、プレート蓋４２０などの異なるプレート蓋をマイクロプレート３００に結合することができる。したがって、マイクロプレート３００の複数のウェル３０４は、直線行に沿って隣接するウェル３０４とはもはや流体連通しておらず、むしろプレート蓋４２０の複数の流体流路４２６の向きのために、マイクロプレート３００の複数のウェル３０４は、今では、垂直に隣接するウェル３０４と縦に連通している。
【００５５】
したがって、マイクロプレート３００とプレート蓋４２０の組立体は、マイクロプレート３００のウェル３０４の各列が、それぞれの外部流体源３３２内に収容されている特定の培地配合物流体と流体連通するように、流体装置３３０に結合されている。複数のウェル３０４の列に、外部流体源３３２内に収容される流体を灌流することは、各それぞれのウェル３０４中に移動される培地配合物の様々な組合せのために、オルガノイドの細胞分化および成熟に役立つ。ウェル３０４のそれぞれの列に結合された特定の培地配合物流体は、それぞれのウェル３０４内に適用する目的の特定の検定条件に依存する。複数のウェル３０４内に形成されるスフェロイドに沿って多様な流体流を誘発させることによって、複数のウェル３０４内で増殖する３Ｄ細胞集合体は、分化機能を生じる。各ウェル３０４内のオルガノイドを流体の異なる組合せに曝すことによって、そのオルガノイドは、分化成熟を促進し得る様々な可溶性因子に曝され、このことは、ヒトの臓器の機能的体現を密接にシミュレーションするオルガノイドの形成に役立つ。マイクロプレート３００上に組み立てられる特定のプレート蓋３２０、４２０の調節機能により、複数のウェル３０４に移動される流体の組合せにバリエーションを持たせられる。
【００５６】
上述した流体デバイス、特に、マイクロプレートは、隣接するウェルのそれぞれの対の間に位置付けられた多数の流体流路によって、互いに相互接続された多数のウェルを備える。マイクロキャビティ基体を含むその多数のウェルの各々は、オルガノイドの成長のためにその中に細胞を収容するサイズと形状である。多数の通路は、流体が多数のウェルを流通でき、それによって、各ウェルのマイクロキャビティ基体に沿って剪断力を生じるようなサイズと形状である。先に基づいて、ここに記載された流体装置は、マイクロプレートおよびプレート蓋に結合され、それによって、マイクロプレート内に剪断力を生じ、その中に収容されるオルガノイド／スフェロイドの成長、熟成、および分化を与えることを理解すべきである。
【００５７】
請求項の主題の精神および範囲から逸脱せずに、ここに記載された実施の形態に、様々な改変および変更を行えることが、当業者に明白であろう。それゆえ、本明細書は、ここに記載された様々な実施の形態の改変および変更を、そのような改変および変更が、付随に特許請求の範囲およびその等価物の範囲内に入るという前提で、包含することが意図されている。
【００５８】
以下、本発明の好ましい実施形態を項分け記載する。
【００５９】
実施形態１
細胞を培養するための流体デバイスにおいて、
（ａ）多数のウェルおよび多数の通路を含むマイクロプレートであって、該通路が該ウェルを相互接続するように該通路が該ウェル間に延在する、マイクロプレート、および
（ｂ）前記マイクロプレートに解放可能に係合し、それによって、前記ウェルと前記通路を囲むプレート蓋、
を備え、
前記ウェルは、培養表面を、その中に受け入れられた細胞培養培地が該培養表面上に堆積されるように備え、
前記ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、該隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、前記少なくとも１つの通路と、該隣接するウェルの培養表面との間に、前記細胞培養培地を収集するための間隙を画成する、流体デバイス。
【００６０】
実施形態２
前記通路が、前記複数のウェルに亘る前記培地の循環を促進し、それによって、前記培養表面に沿って剪断力を生じるようなサイズである、実施形態１に記載の流体デバイス。
【００６１】
実施形態３
前記通路が、前記ウェルの間に延在する側壁を含み、該側壁が、該通路内に前記細胞培養培地を部分的に保持するようなサイズである、実施形態１に記載の流体デバイス。
【００６２】
実施形態４
前記培養表面が、ガス透過性マイクロキャビティ基体を構成する、実施形態１に記載の流体デバイス。
【００６３】
実施形態５
前記プレート蓋が、その中を通って延在する多数のポートを含み、該ポートが、該プレート蓋が前記マイクロプレートと係合したときに、前記ウェルと揃うようなサイズと形状である、実施形態１に記載の流体デバイス。
【００６４】
実施形態６
前記ポートの第１の部分が、循環のために、流体を外部流体源から前記ウェルに移動させるように作られており、該ポートの第２の部分が、循環した流体を該ウェルから外部槽に移動させるように作られている、実施形態５に記載の流体デバイス。
【００６５】
実施形態７
前記プレート蓋が、該プレート蓋と前記マイクロプレートとの間にシールを形成するエラストマー裏地を底面に沿って備える、実施形態６に記載の流体デバイス。
【００６６】
実施形態８
前記エラストマー裏地が、該エラストマー裏地がその中を穿孔されて、前記マイクロプレートと前記外部流体源との間の流体連通を確立するように前記プレート蓋と該マイクロプレートとの間に隔膜を形成する、実施形態７に記載の流体デバイス。
【００６７】
実施形態９
前記プレート蓋を前記マイクロプレートにしっかりと取り付けるように作られた締結機構をさらに備える、実施形態１に記載の流体デバイス。
【００６８】
実施形態１０
前記複数のウェル内に位置付けられた複数のマイクロウェルを有する挿入物をさらに備える、実施形態１に記載の流体デバイス。
【００６９】
実施形態１１
前記挿入物の複数のマイクロウェルが、多孔質膜を含む、実施形態１０に記載の流体デバイス。
【００７０】
実施形態１２
前記ウェルが、平らな底面を形成するような形状であり、前記複数のマイクロウェルが、マイクロキャビティの底面を形成するような形状であり、前記ウェルの平らな底面が、該複数のマイクロウェルのマイクロキャビティの底面を受け入れるように作られている、実施形態１０に記載の流体デバイス。
【００７１】
実施形態１３
前記ウェルが、マイクロキャビティの底面を形成するような形状であり、前記複数のマイクロウェルが、平らな底面を形成するような形状であり、該ウェルのマイクロキャビティの底面が、該複数のマイクロウェルの平らな底面を受け入れるように作られている、実施形態１０に記載の流体デバイス。
【００７２】
実施形態１４
前記ウェルおよび前記複数のマイクロウェルが、該複数のマイクロウェルのマイクロキャビティの底面が、該ウェルのマイクロキャビティの底面内に嵌まるようなサイズと形状であるように、マイクロキャビティの底面を形成するように同様の形状である、実施形態１０に記載の流体デバイス。
【００７３】
実施形態１５
細胞を培養するための流体装置において、
（ａ）多数のウェルおよび多数の通路を含むマイクロプレートであって、該通路が該ウェルを相互接続するように該通路が該ウェル間に延在し、該ウェルは、その中の細胞を育てる培養表面を備える、マイクロプレート、
（ｂ）前記マイクロプレートに解放可能に係合し、それによって、前記ウェルと前記通路を囲むプレート蓋であって、該マイクロプレートに係合する該プレート蓋に反応して、前記ウェルと揃うポートを備えるプレート蓋、および
（ｃ）外部流体源であって、該外部流体源が細胞培養培地を前記ポートに通じて前記マイクロプレートのウェルに移送するように、該ポートに結合された外部流体源、
を備え、
前記ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、該隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、該少なくとも１つの通路と、該隣接するウェルの培養表面との間に、前記細胞培養培地を収集するための間隙を画成する、流体装置。
【００７４】
実施形態１６
前記通路が、前記外部流体源から前記ウェルに亘る前記流体の循環を促進させ、それによって、前記培養表面に沿って剪断力を生じるようなサイズである、実施形態１５に記載の流体装置。
【００７５】
実施形態１７
前記外部流体源が、マニホールドを介して前記ポートと流体連通しており、該マニホールドが、該外部流体源から前記多数のウェルに移動される細胞培養培地の流れを制御するように作られた制御弁を備える、実施形態１５に記載の流体装置。
【００７６】
実施形態１８
前記外部流体源が、ポンプを介して前記ポートと流体連通しており、該ポンプが、該外部流体源から前記多数のウェルに移動される細胞培養培地の流れを制御するように作られている、実施形態１５に記載の流体装置。
【００７７】
実施形態１９
複数のマイクロウェルであって、前記ウェルが該複数のマイクロウェルをその中に受け入れるように作られるように、該ウェルにしたがうサイズと形状である複数のマイクロウェルを有する挿入物をさらに備え、該挿入物は、該複数のマイクロウェル内でオルガノイドを育て、該挿入物は、該オルガノイドが前記ウェルの培養表面と流体連通するような多孔質膜を含む、実施形態１５に記載の流体装置。
【００７８】
実施形態２０
各通路が、一対の側壁であって、該側壁が該通路内に循環した細胞培養培地および細胞を保持するように、各ウェルに沿って延在する一対の側壁を含む、実施形態１６に記載の流体装置。
【００７９】
実施形態２１
流体デバイスを使用して細胞を培養する方法において、
マイクロプレートの多数のウェルに細胞培養培地に提供する工程であって、該ウェルは培養表面を含み、該マイクロプレートは、該ウェルの隣接するものの間に延在する多数の通路を含み、該ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、該隣接するウェルの培養表面から間隔が空けられて、該少なくとも１つの通路と、該隣接するウェルの培養表面との間に、前記細胞培養培地を収集するための間隙を画成する、工程、および
前記ウェルに流体を導入し、それによって、前記通路を通って前記ウェルの間に流体が流れる工程、
を有してなる方法。
【００８０】
実施形態２２
前記マイクロプレートにプレート蓋を係合させて、前記ウェル内に前記細胞培養培地を囲む工程をさらに含む、実施形態２１に記載の方法。
【００８１】
実施形態２３
前記マイクロプレートをインキュベーションして、前記ウェルおよび通路内にオルガノイドを形成する工程をさらに含む、実施形態２２に記載の方法。
【００８２】
実施形態２４
前記プレート蓋を前記マイクロプレートから外して、前記培養表面が前記細胞培養培地に浸るように、前記多数のウェルに該細胞培養培地を提供する工程をさらに含む、実施形態２３に記載の方法。
【００８３】
実施形態２５
前記ウェルに流体を導入する工程が、前記マイクロプレートに前記プレート蓋を再び係合させ、該ウェル内に位置付けられた細胞培養培地が前記通路を介して該多数のウェルを通って循環するように該ウェルに前記流体を灌流させ、それによって、その中に収容されたオルガノイドを剪断力に曝す工程を含む、実施形態２４に記載の方法。
【００８４】
実施形態２６
前記マイクロプレートを加熱システムに結合させて、前記多数のウェルおよび前記通路内に貯蔵された細胞培養培地の温度を上昇させる工程をさらに含む、実施形態２５に記載の方法。
【００８５】
実施形態２７
細胞を培養するための流体デバイスにおいて、
（ａ）多数のウェルを含むマイクロプレート、および
（ｂ）多数の通路を含むプレート蓋であって、前記マイクロプレートに解放可能に係合して、該通路が揃えられて前記ウェルの間に延在するように該ウェルを囲むプレート蓋、
を備え、
前記ウェルは、培養表面を、その中に受け入れられた細胞培養培地が該培養表面上に堆積されるように備え、
前記ウェルの隣接するものの間に延在する少なくとも１つの通路は、該隣接するウェルの培養表面の間の前記細胞培養培地の連通のために前記ウェルを相互接続する、流体デバイス。
【００８６】
実施形態２８
前記プレート蓋が、該プレート蓋と前記マイクロプレートとの間にシールを形成するエラストマー裏地を底面に沿って備える、実施形態２７に記載の流体デバイス。
【００８７】
実施形態２９
前記エラストマー裏地が、該エラストマー裏地がその中を穿孔されて、前記プレート蓋を通る前記マイクロプレートへの流体連通を確立するように該プレート蓋と該マイクロプレートとの間に隔膜を形成する、実施形態２８に記載の流体デバイス。
【００８８】
実施形態３０
前記多数の通路が前記エラストマー裏地内に形成され、該多数の通路が、前記底面に亘って横に延在し、それによって、直線行の多数の通路を形成する、実施形態２８に記載の流体デバイス。
【００８９】
実施形態３１
前記多数の通路が前記エラストマー裏地内に形成され、該多数の通路が、前記底面に亘って縦に延在し、それによって、直線列の多数の通路を形成する、実施形態２８に記載の流体デバイス。
【００９０】
実施形態３２
前記エラストマー裏地が、前記プレート蓋が前記マイクロプレートに解放可能に契合されているときに、前記多数のウェルの各ウェルの周りに個々のシールを形成するように作られている、実施形態２８に記載の流体デバイス。
【符号の説明】
【００９１】
１００、２００、３００    マイクロプレート
１０２    本体
１０４、２０４、３０４    ウェル
１０６、２０６、３２６、４２６    流体流路
１０８、２０８、２６８、３０８    マイクロキャビティ
１１０、２１０、３１０    ウェル床
１１２    通路床
１１４    側壁
１１５    間隙
１２０、２２０、３２０、４２０    プレート蓋
１２２、３２２    外部表面
１２３    反対の表面
１２４、３２４    ポート
１２５、３２５、４２５    エラストマー裏地
１２６    流入ポート
１２８    流出ポート
１３０、３３０    流体装置
１３２、３３２    外部流体源
１３４、３３４    流体分配装置
１３６、３３６    導管
１３８、３３８    管
１４０、３４０    外部流体槽
２５０    締結機構
２５２    クランプアーム
２６０    挿入物
２６４    ウェル挿入物
２７０    ウェル挿入物床
３０５    平らな平面
３２３、４２３    内部表面
【図１】
2022501003.tif 000003
【図２】
2022501003.tif 000004
【図３】
2022501003.tif 000005
【図４】
2022501003.tif 000006
【図５】
2022501003.tif 000007
【図５Ａ】
2022501003.tif 000008
【図６】
2022501003.tif 000009
【図７】
2022501003.tif 000010
【図８】
2022501003.tif 000011
【図９】
2022501003.tif 000012
【図１０】
2022501003.tif 000013
【図１１】
2022501003.tif 000014
【図１２】
2022501003.tif 000015
【図１３】
2022501003.tif 000016
【図１４】
2022501003.tif 000017
【図１５】
2022501003.tif 000018
【図１６】
2022501003.tif 000019
【図１７】
2022501003.tif 000020
【図１８】
2022501003.tif 000021
【図１９】
2022501003.tif 000022
【国際調査報告】
2022501003.tif 000023
2022501003.tif 000024
2022501003.tif 000025