【手続補正書】
【提出日】平成22年7月9日(2010.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
（発明の要旨）
いくつかの態様では、本発明は被験体（例えばヒト）の肝臓中のトリグリセリドの蓄積のレベルを評価する、および／または被験体における肝障害の重篤度をモニタリング、診断、分類、評価する、および／またはその進行もしくは退行を評価する方法を提供する。いくつかの実施形態では、肝障害は肝性機能不全、肝性脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪性肝炎または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である。いくつかの実施形態では、その方法は被験体からの体液中の１つ以上の脂質代謝物（例えば脂肪酸および／またはエイコサノイド）の量を決定することを含む。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
被験体における肝障害を診断またはモニタリングする方法であって、
（Ａ）該被験体の体液からの１つ以上の試料中の１つ以上の脂質代謝物の量を決定する工程、および
（Ｂ）該１つ以上の脂質代謝物の量を肝障害の存在と相関させる工程を含み、
ここで該脂質代謝物は脂肪酸および／またはエイコサノイドであり、ここで該肝障害は肝性機能不全、肝性脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪性肝炎または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、方法。
（項目２）
前記１つ以上の脂質代謝物が、
【化３１】
2010500566.tif 000001
からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記１つ以上の脂質代謝物が１つ以上の脂肪酸を含む、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記１つ以上の脂肪酸の量が、１つ以上の試料中の１つ以上の脂質クラスの脂質中の全脂肪酸含量に対する１つ以上の脂肪酸の相対量である、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記１つ以上の脂質代謝物が１つ以上のエイコサノイドを含む、項目１または２に記載の方法。
（項目６）
前記肝障害が脂肪症、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨである、項目１または２に記載の方法。
（項目７）
前記１つ以上の脂質代謝物の量を１つ以上の参照と比較することをさらに含む、項目１または２に記載の方法。
（項目８）
前記肝障害が脂肪症またはＮＡＦＬＤであり、１つ以上の脂質代謝物が、
【化３２】
2010500566.tif 000002
からなる群から選択される、項目２に記載の方法。
（項目９）
（ａ）前記脂質代謝物：
【化３３】
2010500566.tif 000003
が前記肝障害と正に関連し、
（ｂ）前記脂質代謝物：
【化３４】
2010500566.tif 000004
が前記肝障害と負に関連する、項目８に記載の方法。
（項目１０）
前記肝障害がＮＡＳＨであり、前記１つ以上の脂質代謝物が、
【化３５−１】
2010500566.tif 000005
【化３５−２】
2010500566.tif 000006
からなる群から選択される、項目２に記載の方法。
（項目１１）
（ａ）前記脂質代謝物：
【化３６】
2010500566.tif 000007
が前記肝障害と正に関連し、
（ｂ）前記脂質代謝物：
【化３７】
2010500566.tif 000008
が前記肝障害と負に関連する、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
２つ以上の前記脂質代謝物の量が決定される、項目１または２に記載の方法。
（項目１３）
前記１つ以上の脂質代謝物が、
（ａ）１５−ＨＥＴＥおよび１５−ケト−ＰＧＦ２α、
（ｂ）ＴＧ１８：１ｎ７およびＰＣ２０：３ｎ６、
（ｃ）１１−ＨＥＴＥおよびＣＥ２２．６ｎ３、
（ｄ）１１−ＨＥＴＥおよびＰＣＴＬ、および
（ｅ）ＰＣ２２：６ｎ３およびＰＣ１８：３ｎ３、
からなる群から選択される１対の脂質代謝物を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記被験体の処置に対する応答を決定するためにモニタリングの方法が用いられる、項目１または２に記載の方法。
（項目１５）
前記肝障害が肝炎、ＨＩＶ感染、ＨＢＶ感染、ＨＣＶ感染、ウイルス誘起脂肪症、非ウイルス性感染性作用物質により誘起される脂肪症、薬物誘起脂肪症、肥満、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、糖尿病、インスリン抵抗性、代謝障害、アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、先天性代謝異常、遺伝子変化、毒素誘起脂肪症、毒素誘起脂肪性肝炎、栄養障害、栄養吸収障害、セリアック病、リポジストロフィー、肥満外科手術および肝臓移植からなる群から選択される１つ以上の状態に関連する、項目１または２に記載の方法。
（項目１６）
前記試料が血液、血漿、血清、単離されたリポタンパク質画分、唾液、尿、リンパ液および脳脊髄液からなる群から選択される、項目１、２、８、９、１０または１１に記載の方法。
（項目１７）
前記試料が血液、血漿、血清または単離されたリポタンパク質画分からなる群から選択される、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記被験体がヒトである項目１、２、８、９、１０または１１に記載の方法。
（項目１９）
被験体における肝障害を診断またはモニタリングする方法であって、該被験体の体液からの試料中の１つ以上の脂質クラスの脂質中の全脂肪酸含量に対する１つ以上の脂肪酸の相対量を決定する工程、および
該相対量を肝障害の存在と相関させる工程を含み、
ここで該肝障害は肝性機能不全、肝性脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪性肝炎または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、方法。
（項目２０）
１つ以上の脂肪酸が、
【化３８】
2010500566.tif 000009
からなる群から選択される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
前記１つ以上の脂肪酸の相対量を参照と比較する工程をさらに含む、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２２）
（ａ）
【化３９】
2010500566.tif 000010
の相対量が参照よりも多い、および／または
（ｂ）
【化４０】
2010500566.tif 000011
の相対量が参照よりも少ない場合、肝性機能不全、肝性脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪性肝炎または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が示される、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記被験体におけるＮＡＳＨを診断する方法であって、項目１９に記載の方法の工程を含み、さらに被験体からの体液中のエイコサノイドのレベルを決定する工程を含み、ここで正常レベルよりも高いことがＮＡＳＨを示す、方法。
（項目２４）
前記エイコサノイドがｌ５−ＨＥＴＥ；ＰＧＢ２；ＰＧＥ２；ＰＧＦ２α；１５−ケト−ＰＧＦ２α；５−ＨＥＴＥ；８−ＨＥＴＥ；９−ＨＥＴＥ；１１−ＨＥＴＥ；１２−ＨＥＴＥ；１２−ＨＥＰＥ；１１，１２−ＥｐＥＴｒＥ；および８，９−ＤｉＨＥＴｒＥからなる群から選択される、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
２つ以上の脂肪酸の相対量が決定される、項目１９または２０に記載の方法。
（項目２６）
前記被験体の処置に対する応答を決定するためにモニタリングの方法が用いられる、項目１または１９に記載の方法。
（項目２７）
被験体の肝臓中のトリグリセリドのレベルを評価する方法であって、該被験体の体液からの試料中の脂質代謝物の量を決定する工程を含み、
ここで該脂質代謝物は脂質クラスに存在する脂肪酸であり、
ここで該脂質クラスは遊離脂肪酸、全脂肪酸、トリグリセリド、コレステロールエステル、ホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノールアミンからなる群から選択される、方法。
（項目２８）
前記代謝物の量が試料中の１つ以上の脂質クラスの脂質中の全脂肪酸含量に対する脂肪酸の相対量である、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記脂肪酸が、
【化４１】
2010500566.tif 000012
からなる群から選択される、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
１つ以上の脂肪酸の相対量を参照と比較する工程をさらに含む、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
（ａ）
【化４２】
2010500566.tif 000013
の相対量が参照よりも多い、および／または
（ｂ）
【化４３】
2010500566.tif 000014
の相対量が参照よりも少ない場合、肝臓中のトリグリセリドの蓄積が示される、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記被験体の体液からの試料中の第２の異なる脂質代謝物の相対量を決定する工程をさらに含み、ここで該第２の脂質代謝物が、
【化４４】
2010500566.tif 000015
からなる群から選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３３）
前記肝障害が肝炎、ＨＩＶ感染、ＨＢＶ感染、ＨＣＶ感染、ウイルス誘起脂肪症、非ウイルス性感染性作用物質により誘起される脂肪症、薬物誘起脂肪症、肥満、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、糖尿病、インスリン抵抗性、代謝障害、アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、先天性代謝異常、遺伝子変化、毒素誘起脂肪症、毒素誘起脂肪性肝炎、栄養障害、栄養吸収障害、セリアック病、リポジストロフィー、肥満外科手術および肝臓移植からなる群から選択される１つ以上の状態に関連する、項目１９または２７に記載の方法。
（項目３４）
前記試料が血液、血漿、血清、単離されたリポタンパク質画分、唾液、尿、リンパ液および脳脊髄液からなる群から選択される、項目１９、２０、２２、２７、２８、２９、３０、３１または３２に記載の方法。
（項目３５）
前記試料が血液、血漿、血清または単離されたリポタンパク質画分からなる群から選択される、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記被験体がヒトである項目１９、２０、２２、２７、２８、２９、３０、３１または３２に記載の方法。
（項目３７）
前記被験体が肝臓移植片ドナー候補であるか、肥満外科手術のために評価されているか、肥満外科手術を行ったことがあるか、または体重減少に関してモニタリングされている、
項目１、１９または２７に記載の方法。
（項目３８）
項目１９、２０、２７、２８または２９に記載の方法で使用するためのキットであって、該キットが、
（ａ）脂肪酸に対する抗体および
（ｂ）使用のための説明書、
を含む、キット。
（項目３９）
前記キットが、
（ｃ）第２の脂肪酸に対する第２の抗体、
をさらに含む、項目３８に記載のキット。
（項目４０）
項目１または２に記載の方法で使用するためのキットであって、該キットが、
（ａ）１つ以上の脂質代謝物に対する抗体および
（ｂ）使用のための説明書、
を含む、キット。
（項目４１）
前記キットが２つ以上の脂質代謝物に対する抗体を含む、項目４０に記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における肝障害の診断またはモニタリングを補助する方法であって、
（Ａ）該被験体の体液からの１つ以上の試料中の１つ以上の脂質代謝物の量を決定する工程、および
（Ｂ）該１つ以上の脂質代謝物の量を一つ以上の参照と比較する工程であって、該比較する工程は肝障害の存在を示す、工程、
を含み
ここで該脂質代謝物は脂肪酸および／またはエイコサノイドであり、ここで該肝障害は肝性機能不全、肝性脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪性肝炎または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、方法。
【請求項２】
前記１つ以上の脂質代謝物が、
【化３１】
2010500566.tif 000016
からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つ以上の脂質代謝物が１つ以上の脂肪酸を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記１つ以上の脂肪酸の量が、１つ以上の試料中の１つ以上の脂質クラスの脂質中の全脂肪酸含量に対する１つ以上の脂肪酸の相対量である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記１つ以上の脂質代謝物が１つ以上のエイコサノイドを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
前記肝障害が脂肪症、ＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
前記肝障害が脂肪症またはＮＡＦＬＤであり、前記１つ以上の脂質代謝物が、
【化３２】
2010500566.tif 000017
からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
（ａ）前記脂質代謝物：
【化３３】
2010500566.tif 000018
が前記肝障害と正に関連し、
（ｂ）前記脂質代謝物：
【化３４】
2010500566.tif 000019
が前記肝障害と負に関連する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記肝障害がＮＡＳＨであり、前記１つ以上の脂質代謝物が、
【化３５−１】
2010500566.tif 000020
【化３５−２】
2010500566.tif 000021
からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）前記脂質代謝物：
【化３６】
2010500566.tif 000022
が前記肝障害と正に関連し、
（ｂ）前記脂質代謝物：
【化３７】
2010500566.tif 000023
が前記肝障害と負に関連する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
２つ以上の前記脂質代謝物の量が決定される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
前記１つ以上の脂質代謝物が、
（ａ）１５−ＨＥＴＥおよび１５−ケト−ＰＧＦ２α、
（ｂ）ＴＧ１８：１ｎ７およびＰＣ２０：３ｎ６、
（ｃ）１１−ＨＥＴＥおよびＣＥ２２．６ｎ３、
（ｄ）１１−ＨＥＴＥおよびＰＣＴＬ、および
（ｅ）ＰＣ２２：６ｎ３およびＰＣ１８：３ｎ３、
からなる群から選択される１対の脂質代謝物を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記被験体の処置に対する応答を決定するためにモニタリングを補助する方法が用いられる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１４】
前記肝障害が肝炎、ＨＩＶ感染、ＨＢＶ感染、ＨＣＶ感染、ウイルス誘起脂肪症、非ウイルス性感染性作用物質により誘起される脂肪症、薬物誘起脂肪症、肥満、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、糖尿病、インスリン抵抗性、代謝障害、アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、先天性代謝異常、遺伝子変化、毒素誘起脂肪症、毒素誘起脂肪性肝炎、栄養障害、栄養吸収障害、セリアック病、リポジストロフィー、肥満外科手術および肝臓移植からなる群から選択される１つ以上の状態に関連する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１５】
前記試料が血液、血漿、血清、単離されたリポタンパク質画分、唾液、尿、リンパ液および脳脊髄液からなる群から選択される、請求項１、２、７、８、９、または１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記試料が血液、血漿、血清または単離されたリポタンパク質画分からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記被験体がヒトである請求項１、２、７、８、９、または１０に記載の方法。
【請求項１８】
被験体における肝障害の診断またはモニタリングを補助する方法であって、
該被験体の体液からの試料中の１つ以上の脂質クラスの脂質中の全脂肪酸含量に対する１つ以上の脂肪酸の相対量を決定する工程、および
該相対量を参照と比較する工程であって、該比較する工程は肝障害の存在を示す、工程
を含み、
ここで該肝障害は肝性機能不全、肝性脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪性肝炎または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）である、方法。
【請求項１９】
１つ以上の脂肪酸が、
【化３８】
2010500566.tif 000024
からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（ａ）
【化３９】
2010500566.tif 000025
の相対量が参照よりも多い、および／または
（ｂ）
【化４０】
2010500566.tif 000026
の相対量が参照よりも少ない場合、肝性機能不全、肝性脂肪症、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、脂肪性肝炎または非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が示される、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体におけるＮＡＳＨの診断を補助する方法であって、請求項１８に記載の方法の工程を含み、さらに被験体からの体液中のエイコサノイドのレベルを決定する工程を含み、ここで正常レベルよりも高いことがＮＡＳＨを示す、方法。
【請求項２２】
前記エイコサノイドが１５−ＨＥＴＥ；ＰＧＢ２；ＰＧＥ２；ＰＧＦ２α；１５−ケト−ＰＧＦ２α；５−ＨＥＴＥ；８−ＨＥＴＥ；９−ＨＥＴＥ；１１−ＨＥＴＥ；１２−ＨＥＴＥ；１２−ＨＥＰＥ；１１，１２−ＥｐＥＴｒＥ；および８，９−ＤｉＨＥＴｒＥからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
２つ以上の脂肪酸の相対量が決定される、請求項１８または１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記被験体の処置に対する応答を決定するためのモニタリングを補助する方法が用いられる、請求項１または１８に記載の方法。
【請求項２５】
被験体の肝臓中のトリグリセリドのレベルを評価する方法であって、該被験体の体液からの試料中の脂質代謝物の量を決定する工程を含み、
ここで該脂質代謝物は脂質クラスに存在する脂肪酸であり、
ここで該脂質クラスは遊離脂肪酸、全脂肪酸、トリグリセリド、コレステロールエステル、ホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノールアミンからなる群から選択される、方法。
【請求項２６】
前記代謝物の量が試料中の１つ以上の脂質クラスの脂質中の全脂肪酸含量に対する脂肪酸の相対量である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記脂肪酸が、
【化４１】
2010500566.tif 000027
からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
１つ以上の脂肪酸の相対量を参照と比較する工程をさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
（ａ）
【化４２】
2010500566.tif 000028
の相対量が参照よりも多い、および／または
（ｂ）
【化４３】
2010500566.tif 000029
の相対量が参照よりも少ない場合、肝臓中のトリグリセリドの蓄積が示される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験体の体液からの試料中の第２の異なる脂質代謝物の相対量を決定する工程をさらに含み、ここで該第２の脂質代謝物が、
【化４４】
2010500566.tif 000030
からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記肝障害が肝炎、ＨＩＶ感染、ＨＢＶ感染、ＨＣＶ感染、ウイルス誘起脂肪症、非ウイルス性感染性作用物質により誘起される脂肪症、薬物誘起脂肪症、肥満、多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、糖尿病、インスリン抵抗性、代謝障害、アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性脂肪性肝炎、先天性代謝異常、遺伝子変化、毒素誘起脂肪症、毒素誘起脂肪性肝炎、栄養障害、栄養吸収障害、セリアック病、リポジストロフィー、肥満外科手術および肝臓移植からなる群から選択される１つ以上の状態に関連する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３２】
前記試料が血液、血漿、血清、単離されたリポタンパク質画分、唾液、尿、リンパ液および脳脊髄液からなる群から選択される、請求項１８、１９、２０、２５、２６、２７、２８、２９、または３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記試料が血液、血漿、血清または単離されたリポタンパク質画分からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記被験体がヒトである請求項１８、１９、２０、２５、２６、２７、２８、２９、または３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記被験体が肝臓移植片ドナー候補であるか、肥満外科手術のために評価されているか、肥満外科手術を行ったことがあるか、または体重減少に関してモニタリングされている、
請求項１、１８または２５に記載の方法。
【請求項３６】
請求項１８、１９、２０、２５、２６または２７に記載の方法で使用するためのキットであって、該キットが、
（ａ）脂肪酸に対する抗体および
（ｂ）使用のための説明書、
を含む、キット。
【請求項３７】
前記キットが、
（ｃ）第２の脂肪酸に対する第２の抗体、
をさらに含む、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
請求項１または２に記載の方法で使用するためのキットであって、該キットが、
（ａ）１つ以上の脂質代謝物に対する抗体および
（ｂ）使用のための説明書、
を含む、キット。
【請求項３９】
前記キットが２つ以上の脂質代謝物に対する抗体を含む、請求項３８に記載のキット。