【手続補正書】
【提出日】平成22年7月7日(2010.7.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
さらに別の実施形態では、本発明によるベクターは、細胞への細菌媒介性遺伝子導入（バクトフェクション）に使用できる。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
（ａ）挿入部位を含む切除可能な断片と；
（ｂ）第１及び第２の複製開始点と；
（ｃ）切除可能な断片に隣接する１対の転写ターミネーターと
を含むベクター。
（項目２）
前記第１の複製開始点が低コピー数複製開始点である、項目１に記載のベクター。
（項目３）
前記低コピー数複製開始点がｏｒｉＳである、項目２に記載のベクター。
（項目４）
前記第２の複製開始点が誘導可能な高コピー数複製開始点である、項目１に記載のベクター。
（項目５）
前記高コピー数複製開始点がｏｒｉＶである、項目４に記載のベクター。
（項目６）
前記高コピー数複製開始点がアラビノースプロモーターの支配下にある、項目４に記載のベクター。
（項目７）
前記高コピー数複製開始点が、アラビノースプロモーターの支配下にある遺伝子によりコードされるＴｒｆＡにより制御される、項目６に記載のベクター。
（項目８）
前記切除可能な断片が少なくとも１つのＩＩＳ型制限酵素認識部位を含む、項目１に記載のベクター。
（項目９）
前記切除可能な断片に隣接する２つの誘導可能な切除媒介部位をさらに含む、項目１に記載のベクター。
（項目１０）
前記切除可能な断片が前記第２の複製開始点を含む、項目４に記載のベクター。
（項目１１）
前記切除可能な断片が前記第１の複製開始点を含まない、項目１０に記載のベクター。
（項目１２）
前記切除可能な断片が前記第１又は第２の複製開始点を含まない、項目４に記載のベクター。
（項目１３）
前記切除可能な断片に隣接する配列プライマー結合部位をさらに含む、項目１に記載のベクター。
（項目１４）
項目１に記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目１５）
異種核酸をクローニングする方法であって、
（ａ）前記異種核酸を準備することと；
（ｂ）項目１に記載のベクターを準備することと；
（ｃ）前記ベクターの挿入部位に前記異種核酸を導入することとを含む方法。
（項目１６）
前記ベクターがＩＩＳ型制限酵素で消化され、前記異種核酸が平滑末端を含み、二重鎖アダプターがさらに準備され、前記アダプターの第１の末端が平滑末端であり、前記アダプターの第２の末端が前記消化されたベクターの末端に相補的である、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
項目１５に記載の方法により生成されたベクター。
（項目１８）
前記異種核酸がポリペプチドをコードする、項目１７に記載のベクター。
（項目１９）
前記ベクターが、前記異種核酸に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、項目１８に記載のベクター。
（項目２０）
異種核酸をさらに含む、項目１に記載のベクター。
（項目２１）
核酸のライブラリーを生成する方法であって、
（ａ）異種核酸のライブラリーを準備することと；
（ｂ）項目１に記載のベクターを準備することと；
（ｃ）前記ベクターの挿入部位に前記異種核酸を導入することとを含む方法。
（項目２２）
前記ベクターがＩＩＳ型制限酵素で消化され、前記異種核酸のライブラリーが平滑末端を含み、二重鎖アダプターがさらに準備され、前記アダプターの第１の末端が平滑末端であり、前記アダプターの第２の末端が前記消化されたベクターの末端に相補的である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
項目２１に記載の方法により生成されたライブラリー。
（項目２４）
動物細胞において核酸を誘導及び発現する方法であって、
（ａ）挿入部位、第１の複製開始点、第２の複製開始点、及び１対の転写ターミネーターを含むベクターを準備することと；
（ｂ）前記ベクターの挿入部位に前記核酸を導入することと；
（ｃ）少なくとも１つの侵襲性細菌を前記ベクターで形質転換し、少なくとも１つの形質転換された細菌を形成することと；
（ｄ）前記少なくとも１つの形質転換された細菌で前記動物細胞を感染させることとを含む方法。
（項目２５）
前記第１の複製開始点が低コピー数複製開始点である、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記低コピー数複製開始点がｏｒｉＳである、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記第２の複製開始点が誘導可能な高コピー数複製開始点である、項目２４に記載の方法。
（項目２８）
前記高コピー数複製開始点がｏｒｉＶである、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記高コピー数複製開始点がアラビノースプロモーターの支配下にある、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記高コピー数複製開始点が、アラビノースプロモーターの支配下にある遺伝子によりコードされるＴｒｆＡにより制御される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記核酸が異種ＤＮＡ又はＲＮＡを含む、項目２４に記載の方法。
（項目３２）
異種ＤＮＡ又はＲＮＡが治療剤又は予防剤をコードする、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記治療剤又は予防剤が、免疫調節剤、抗原、アンチセンスＲＮＡ、触媒ＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、抗体、サイトカイン、又は低分子を含む、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記動物細胞が哺乳動物細胞である、項目２４に記載の方法。
（項目３５）
、前記哺乳動物細胞が、ヒト、ウシ、ヒツジ、ブタ、ネコ、バッファロー、イヌ、ヤギ、ウマ、ロバ、シカ、及び霊長類の細胞からなる群から選択される、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記少なくとも１つの細菌が、シゲラ属種、リステリア属種、リケッチア属種、及び腸侵入性大腸菌からなる群から選択される、項目２４に記載の方法。
（項目３８）
前記少なくとも１つの細菌が縮小ゲノムを有する、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記少なくとも１つの細菌が大腸菌である、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記少なくとも１つの細菌が弱毒化されている、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
前記異種ＤＮＡ又はＲＮＡが、治療用タンパク質、低分子、免疫調節分子、アンチセンスＲＮＡ、及び触媒ＲＮＡからなる群から選択されるメンバーをコードする、項目３１に記載の方法。
（項目４２）
前記メンバーが少なくとも検知可能なレベルで発現される、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
動物細胞において異種ＤＮＡ又はＲＮＡを誘導及び発現する方法であって、
（ａ）挿入部位、低コピー数複製開始点、誘導可能な高コピー数複製開始点、及び１対の転写ターミネーターを含むベクターを準備することと；
（ｂ）前記ベクターの挿入部位に異種ＤＮＡ又はＲＮＡを導入することと；
（ｃ）縮小ゲノム大腸菌を前記ベクターで形質転換し、少なくとも１つの形質転換された大腸菌を形成することと；
（ｄ）前記形質転換された大腸菌で前記動物細胞を感染させることとを含む方法。
（項目４４）
前記大腸菌が弱毒化されている、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
ｒｅｐＥ、ｐａｒＡ、及びｐａｒＢ遺伝子を含む宿主株と、ｒｅｐＥ、ｐａｒＡ、及びｐａｒＢ遺伝子を含まないベクターとを含む縮小ベクター−宿主系。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物細胞において核酸を発現するための組成物であって、
ｉ．      挿入配列中に導入された核酸と
ｉｉ．    第１及び第２の複製開始点と；
ｉｉｉ．  １対の転写ターミネーター
を含むベクターで形質転換された少なくとも１つの侵襲性細菌を含む、組成物。
【請求項２】
動物細胞において核酸を発現するための組成物であって、
ａ．  挿入部位と；
ｂ．  第１及び第２の複製開始点と；
ｃ．  １対の転写ターミネーターと；
ｄ．  該挿入部位に挿入された該核酸
を含むベクターを含む侵襲性縮小ゲノム細菌を含む、組成物。
【請求項３】
前記第１の複製開始点が低コピー数複製開始点である、請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４】
前記低コピー数複製開始点がｏｒｉＳである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記第２の複製開始点が誘導可能な高コピー数複製開始点である、請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記高コピー数複製開始点がｏｒｉＶである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
ベクターが、前記挿入部位断片に隣接する２つの切除部位をさらに含み、それにより切除可能な断片を規定する、請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記切除可能な断片が第２の複製開始点を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記切除可能な断片が第１の複製開始点を含まない、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記切除可能な断片が第１又は第２の複製開始点を含まない、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
前記高コピー数複製開始点がアラビノースプロモーターの支配下にある、請求項５または６に記載の組成物。
【請求項１２】
ベクターが、前記切除可能な断片に隣接する２つの誘導可能な切除媒介部位をさらに含む、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
ベクターが、前記切除可能な断片に隣接する配列プライマー結合部位をさらに含む、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
核酸配列が異種核酸である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記異種核酸がポリペプチドをコードする、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ベクターが、前記異種核酸に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項１４〜１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記細菌が、シゲラ属種、リステリア属種、リケッチア属種、及び大腸菌からなる群から選択される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記細菌が大腸菌である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記大腸菌がＭＤＳ４２株である、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記動物細胞が哺乳動物細胞である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記哺乳動物細胞が、ヒト、ウシ、ヒツジ、ブタ、ネコ、バッファロー、イヌ、ヤギ、ウマ、ロバ、シカ、及び霊長類の細胞からなる群から選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれか１項に記載の組成物であって、細菌の侵襲能力が、Ｙｅｒｓｉｎｉａの侵入遺伝子により与えられる、組成物。