【手続補正書】
【提出日】平成22年8月2日(2010.8.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃ末端切断がアミノ酸２８１およびアミノ酸３２９での位置またはアミノ酸２８１〜アミノ酸３２９の間での位置において存在する、Ｃ末端切断された成熟型ミオスタチンペプチド、あるいは、そのフラグメント、変種または誘導体を含む、ミオスタチンアンタゴニスト活性を有する単離された組換えポリペプチド。
【請求項２】
Ｃ末端切断が、２８１位、２８２位、２８３位、２８４位、２８５位、２８６位、２８７位、２８８位、２８９位、２９０位、２９１位、２９２位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９７位、２９８位、２９９位、３００位、３０１位、３０２位、３０３位、３０４位、３０５位、３０６位、３０７位、３０８位、３０９位、３１０位、３１１位、３１２位、３１３位、３１４位、３１５位、３１６位、３１７位、３１８位、３１９位、３２０位、３２１位、３２２位、３２３位、３２４位、３２５位、３２６位、３２７位、３２８位または３２９位のアミノ酸位置において存在する、Ｃ末端切断された成熟型ミオスタチンペプチド、あるいは、そのフラグメント、変種または誘導体からなる群から選択される、請求項１記載の単離された組換えポリペプチド。
【請求項３】
Ｃ末端切断が、３２９位、３２０位、３１０位、３００位、２９５位、２８９位、２８４位、２８２位または２８１位のアミノ酸位置において存在する、Ｃ末端切断された成熟型ミオスタチンポリペプチド（それぞれ、配列番号３〜配列番号１１）、あるいは、そのフラグメント、変種または誘導体、あるいは、それに対する実質的な配列相同性を有するポリペプチドからなる群から選択される、請求項２記載の単離された組換えポリペプチド。
【請求項４】
請求項１に記載されるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列またはその相補的な配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項５】
アミノ酸配列またはヌクレオチド配列が、選択的に変化させられた結合特性を有するミオスタチンアンタゴニスト、あるいは、改善された生体分布、または、インビボもしくは棚での改善された半減期を有するミオスタチンアンタゴニストを作製するために改変される、請求項１記載の単離された組換えポリペプチドまたは請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
１つまたは複数の改変されたアミノ酸残基が、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質成分にコンジュゲート化されたアミノ酸、Ｄ−アミノ酸、または、有機誘導体化剤にコンジュゲート化されたアミノ酸からなる群から選択される、請求項５記載の単離された組換えポリペプチドまたはポリヌクレオチド。
【請求項７】
請求項１に記載される１つまたは複数の組換えポリペプチドを、精製、タンパク質複合体の形成、組織局在化もしくは組織分布、取り込み／投与、インビボ安定性および／またはインビボ半減期からなる群から選択される１つまたは複数の機能を高める１つまたは複数のさらなるポリペプチドと一緒に含む融合タンパク質。
【請求項８】
１つまたは複数のさらなるポリペプチドが、ＩｇＧ１のＦｃフラグメントなどの免疫グロブリンのＦｃドメインを含む、請求項７記載の融合タンパク質。
【請求項９】
１つまたは複数のさらなるポリペプチドが、エピトープタグ、ＦＬＡＧタグ、ポリヒスチジン配列またはＧＳＴ融合物からなる群から選択される精製配列を含む、請求項７記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
請求項３に記載される組換えポリペプチドと、ポリヒスチジン配列と、タグ配列とを含む、請求項９記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
ポリヒスチジン配列が組換えポリペプチドのＮ末端に位置し、かつ、前記タグ配列がＣ末端に位置する、請求項１０記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
ポリヒスチジン配列が配列番号１３からなる、請求項１１記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
Ｃ末端タグ配列が配列番号１４からなる、請求項１０記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
請求項１に記載される少なくとも１つの単離されたポリペプチドを医薬的に許容され得るキャリアとともに含む医薬組成物。
【請求項１５】
請求項７に記載される少なくとも１つの融合タンパク質を含む医薬組成物。
【請求項１６】
単離されたポリペプチドまたは融合タンパク質が、標的細胞または標的組織に対する治療効果を高めるための第２の医薬的に活性な化合物にコンジュゲート化され、かつ、組成物が、前記単離されたポリペプチドまたは融合タンパク質および前記第２の化合物の個別投与、連続投与または同時投与のために配合される、請求項１４または１５記載の医薬組成物。
【請求項１７】
その必要性のある動物において筋肉成長を調節し、脂肪生成分化を促進させ、かつ／または、骨の成長もしくは無機化を促進させるための医薬品の製造における、請求項１に記載される少なくとも１つのポリペプチドの使用。
【請求項１８】
その必要性のある動物において筋肉成長を調節し、脂肪生成分化を促進させ、かつ／または、骨の成長もしくは無機化を促進させるための医薬品の製造における、請求項７に記載される少なくとも１つの融合タンパク質の使用。
【請求項１９】
増大した筋肉量、低下した脂肪沈着、および／または、改善された骨成長を、ヒツジ、ウシ、シカ、家禽、七面鳥、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ネコ、イヌまたはヒトにおいて生じさせるための、請求項１７または１８記載の使用。
【請求項２０】
その必要性のある患者における筋肉組織または脂肪組織の異常な量、発達または代謝活性によって少なくとも部分的には特徴づけられるミオスタチン関連の病理学的状態を防止するか、または、そのような病理学的状態を処置するか、または、そのような病理学的状態の重篤度を軽減するための医薬品の製造における、請求項１に記載される少なくとも１つのポリペプチドの使用。
【請求項２１】
その必要性のある患者における筋肉組織または脂肪組織の異常な量、発達または代謝活性によって少なくとも部分的には特徴づけられるミオスタチン関連の病理学的状態を防止するか、または、そのような病理学的状態を処置するか、または、そのような病理学的状態の重篤度を軽減するための医薬品の製造における、請求項７に記載される少なくとも１つの融合タンパク質の使用。
【請求項２２】
病理学的状態が、筋肥大に関連づけられる障害；炎症性筋障害、筋ジストロフィー、運動ニューロン疾患、神経筋接合部の疾患、末梢神経の疾患、内分泌異常に起因する筋障害、代謝症候群、ＨＩＶ、ガン、サルコペニア、悪液質および他の消耗性状態に関連する筋萎縮および筋肉消耗；心不全；骨粗鬆症；腎不全または腎疾患；肝不全または肝疾患；食欲不振；肥満；糖尿病；および創傷治癒からなる群から選択される、請求項２０または２１記載の使用。
【請求項２３】
請求項１に記載される少なくとも１つのポリペプチドの効果的な量をその必要性のある患者に投与することを含む、増大したサテライト細胞活性化、筋芽細胞増殖、マクロファージおよび筋芽細胞の遊走、ならびに／または、低下した線維形成から部分的に利益を受ける状態である状態の防止、処置または改善のための医薬品の製造における、請求項１に記載される少なくとも１つのポリペプチドの使用。
【請求項２４】
請求項１に記載される少なくとも１つのポリペプチドの効果的な量をその必要性のある患者に投与することを含む、増大したサテライト細胞活性化、筋芽細胞増殖、マクロファージおよび筋芽細胞の遊走、ならびに／または、低下した線維形成から部分的に利益を受ける状態である状態の防止、処置または改善のための医薬品の製造における、請求項７に記載される少なくとも１つの融合タンパク質の使用。
【請求項２５】
状態が、外傷に起因する筋損傷；化学療法剤、放射線治療、デキサメタゾンなどの作用因子の投与に起因する筋損傷；手術後に要求されるベッド安静などの長期のベッド安静に起因する筋肉消耗；創傷治癒；筋肥大に関連づけられる障害；炎症性筋障害、筋ジストロフィー、運動ニューロン疾患、神経筋接合部の疾患、末梢神経の疾患、内分泌異常に起因する筋障害、代謝症候群、ＨＩＶ、ガン、サルコペニア、悪液質および他の消耗性状態に関連する筋萎縮および筋損傷；心不全；骨粗鬆症；腎不全または腎疾患；肝不全または肝疾患；食欲不振；肥満および糖尿病からなる群から選択される、請求項２３または２４記載の使用。
【請求項２６】
請求項１に記載される単離された組換えポリペプチドを作製する方法であって、下記の工程：
ａ．成熟型ミオスタチンペプチドを、３２９位、３２０位、３１０位、３００位、２９５位、２８９位、２８４位、２８２位または２８１位においてＣ末端切断する工程；
ｂ．前記切断ペプチドをＰＣＲ増幅する工程；
ｃ．前記ペプチドをＣ末端タグ配列およびＮ末端タグ配列とともに好適なベクターにクローン化する工程；
ｄ．前記ベクターを好適な宿主にトランスフェクションする工程；
ｅ．前記ペプチドを発現させ、前記タグ配列を使用して精製する工程；
ｆ．前記タグ配列の一方または両方を必要に応じて除く工程
を含む方法。
【請求項２７】
Ｎ末端のヒスチジンタグが制限酵素消化によって除かれる、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
Ｃ末端のタグ配列が制限酵素消化によって除かれる、請求項２６または２７記載の方法。
【請求項２９】
請求項２６〜２８のいずれか一項に記載される方法によって作製される単離された組換えポリペプチド。
【請求項３０】
処置または防止される状態がサルコペニアである場合に、請求項１に記載される少なくとも１つのポリペプチドまたは請求項７に記載される融合タンパク質の効果的な量が投与される、請求項２２または２５記載の方法。
【請求項３１】
投与が毎日である、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
投与が週に３回である、請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
投与が２週間に１回である、請求項３０記載の方法。
【請求項３４】
投与が１ヶ月に１回である、請求項３０記載の方法。