【手続補正書】
【提出日】平成22年4月2日(2010.4.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｄｖｌ  ＰＤＺに特異的に結合する単離ポリペプチドであって、前記ペプチドはＸ１−Ｘ２−Ｗ−Ｘ３−Ｄ−Ｘ４−Ｐを含み、ここでＸ１はＬまたはＶであり、Ｘ２はＬであり、Ｘ３はＳまたはＴであり、Ｘ４はＩ、ＦまたはＬである、単離ポリペプチド。
【請求項２】
前記ポリペプチドが、アミノ酸配列ＶＬＷＳＤＩＰを含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
前記ポリペプチドが、アミノ酸配列ＧＥＩＶＬＷＳＤＩＰＧ（配列番号１７１）を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４】
前記ポリペプチドが、事実上アミノ酸配列ＧＥＩＶＬＷＳＤＩＰＧ（配列番号１７１）からなる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
前記ポリペプチドが、配列番号１１８−１２１、１２３、１２５−１２８、１３１−１３３、１３５、１０４、１４１、１４３および１４４からなる群より選択される、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、Ｄｖｌ−介在内因性Ｗｎｔシグナル伝達を抑制する、請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリペプチドを含む、組成物。
【請求項８】
前記ポリペプチドが、ポリペプチドの細胞進入を強化するアミノ酸配列タグに連結されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
請求項８に記載のポリペプチドを含む、組成物。
【請求項１０】
前記ポリペプチドが、Ｄｖｌ−介在内因性Ｗｎｔシグナル伝達を抑制する、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記アミノ酸配列タグが配列番号１７２のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
請求項１１に記載のポリペプチドを含む、組成物。
【請求項１３】
前記ポリペプチドが、Ｄｖｌ−介在内因性Ｗｎｔシグナル伝達を抑制する、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
配列番号１７６のアミノ酸配列から事実上なる、ポリペプチド。
【請求項１５】
請求項１４に記載のポリペプチドを含む、組成物。
【請求項１６】
Ｄｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用を修飾することが可能な化合物を特定する方法であって、前記方法は、下記：
（ｉ）Ｄｖｌ  ＰＤＺ、その断片、および／またはその機能的等価物；
（ｉｉ）請求項１に記載のポリペプチドの一つ以上；および、
（ｉｉｉ）候補化合物、
を含むサンプルを接触させること、および、
前記候補化合物の存在下におけるＤｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用の量を定量すること
を含み、これによって、前記候補化合物の不在下における量と比べた場合の、前記候補化合物存在下におけるＤｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用の量の変化が、前記候補化合物がＤｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用を修飾することが可能な化合物であることを示す、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
一局面では、Ｄｖｌ、またはｗｎｔタンパクの活性の制御不良に関連する病理的状態を治療する方法であって、Ｄｖｌ  ＰＤＺと、本発明のポリペプチドとの間の相互作用を修飾することが可能な、Ｄｖｌ  ＰＤＺ−リガンド修飾因子の有効量を対象に投与することを含む方法を提供する。本発明の方法の一実施態様では、修飾因子は、Ｄｖｌ  ＰＤＺと、その結合パートナー（例えば、内因性結合パートナー）との間の相互作用を抑制する。一実施態様では、前記Ｄｖｌ−ＰＤＺリガンドは、本明細書に記載される、本発明のポリペプチドの一つ以上を含む。一実施態様では、病理的状態は癌である。一実施態様では、病理的状態は、過剰増殖性障害である。一実施態様では、病理的状態は、標準ｗｎｔシグナル伝達経路の制御不良に関連する。一実施態様では、Ｄｖｌは、ヒトのＤｖｌ  １、２、および／または３である。
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
Ｄｖｌ  ＰＤＺに特異的に結合する単離ポリペプチドであって、Ｃ−末端残基を位置０としてアミノ酸を番号付けした場合、位置−２にＧｌｙ、位置−１にＴｒｐまたはＴｙｒ、位置０にＰｈｅまたはＬｅｕ、位置−３に疎水性または芳香族残基を有する配列を含むＣ−末端領域を含む、単離ポリペプチド。
（項目２）
位置−６がＴｒｐである、項目１に記載のポリペプチド。
（項目３）
位置−１がＴｒｐである、項目１に記載のポリペプチド。
（項目４）
ＩＣ５０＝１．５μＭ（１．２、１、０．８、０．６、０．４、０．２μＭ）またはそれ以上の結合親和度においてＤｖｌ  ＰＤＺに特異的に結合する単離ポリペプチド。
（項目５）
上記ポリペプチドが、Ｄｖｌ  ＰＤＺと、その内因性結合パートナーとの相互作用を抑制する、項目１〜４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目６）
上記ポリペプチドが、Ｄｖｌ−介在内因性Ｗｎｔシグナル伝達を抑制する、項目１〜５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目７）
上記ポリペプチドが、下式：
Ｘ１−Ｇ−Ｘ３−Ｘ４−ＣＯＯＨ
の配列を含むＣ−末端領域を含む、項目１〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
（項目８）
Ｘ１が、Ｙ、Ｌ、Ｆ、またはＩであり；Ｘ３が、Ｗ、Ｍ、Ｆ、またはＹであり；Ｘ４が、ＦまたはＬであり、
上記配列が、ヒトタンパクの天然のＣ−末端配列ではない、項目７に記載のポリペプチド。
（項目９）
Ｘ３がＴｒｐである、項目７または８に記載のポリペプチド。
（項目１０）
上記カルボキシル末端アミノ酸残基がカルボキシル化される、項目１〜９のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド。
（項目１１）
上記ポリペプチドが、配列ＹＡＫＧＦＧＭＬＣＯＯＨを含まない、項目１〜１０のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド。
（項目１２）
Ｄｖｌ  ＰＤＺに特異的に結合し、Ｃ−末端残基を位置０としてアミノ酸を番号付けした場合、位置−５から０、または位置−６から０に関して表１および図１Ａの配列から成る群から選ばれるアミノ酸配列を含むカルボキシル末端領域を含む、単離ポリペプチド。
（項目１３）
Ｄｖｌ  ＰＤＺ配列に対する結合について、項目１〜１２のいずれか１項に記載のポリペプチドと競合するアミノ酸配列を含む、単離ポリペプチド。
（項目１４）
Ｄｖｌ  ＰＤＺにおいて、項目１〜１３のいずれか１項に記載のポリペプチドが結合するエピトープと同じエピトープに結合する単離ポリペプチド。
（項目１５）
上記ポリペプチドが、配列ＹＡＫＧＦＧＭＬＣＯＯＨを含まない、項目１〜１４のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド。
（項目１６）
Ｄｖｌが、ヒトのＤｖｌ１、Ｄｖｌ２、および／またはＤｖｌ３である、項目１〜１５のいずれか１項に記載の単離ポリペプチド。
（項目１７）
Ｄｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用を修飾することが可能な化合物を特定する方法であって、上記方法は、下記：
（ｉ）Ｄｖｌ  ＰＤＺ、その断片、および／またはその機能的等価物；
（ｉｉ）項目１〜１６のいずれか１項に記載のポリペプチドの一つ以上；および、
（ｉｉｉ）候補化合物、
を含むサンプルを接触させること、および、
上記候補化合物の存在下におけるＤｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用の量を定量すること
を含み、これによって、上記候補化合物の不在下における量と比べた場合の、上記候補化合物存在下におけるＤｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用の量の変化が、上記候補化合物がＤｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用を修飾することが可能な化合物であることを示す、方法。
（項目１８）
Ｄｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用の修飾因子を合理的に設計する方法であって、Ｃ−末端残基を位置０としてアミノ酸を番号付けした場合、位置−２にＧｌｙ、位置−１にＴｒｐまたはＴｙｒ、位置０にＰｈｅまたはＬｅｕ、および位置−３に疎水性または芳香族残基を有する配列を含む、Ｃ−末端ペプチドを含むか、または、その機能を模倣する修飾因子であって、Ｄｖｌ  ＰＤＺに特異的に結合することが可能な因子を設計することを含む、方法。
（項目１９）
Ｄｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用を修飾する薬剤のスクリーニング法であって、上記方法は、
（ａ）候補薬剤を準備し、Ｄｖｌ  ＰＤＺと、上記Ｄｖｌ  ＰＤＺの既知の結合パートナーとを含む反応混合物に上記薬剤を接触させる工程であって、上記混合物は、細胞混合物か、または無細胞混合物であり、上記接触は、Ｄｖｌ  ＰＤＺ−結合パートナー相互作用に好適な条件下で生じる、工程；
（ｂ）上記薬剤の存在下および不在下におけるＤｖｌ  ＰＤＺ−結合パートナー相互作用の量を定量する工程
を含み、これによって、上記薬剤の存在下および不在下において（ｂ）で定量された相互作用量の差が、上記薬剤がＤｖｌ  ＰＤＺ−リガンド相互作用の修飾因子であることを示す、方法。
（項目２０）
Ｄｖｌまたはｗｎｔタンパク活性の制御不良に関連する病理的状態を治療する方法であって、Ｄｖｌ  ＰＤＺと項目１〜１６のいずれか１項に記載のポリペプチドとの間の相互作用を修飾することが可能なＤｖｌ  ＰＤＺ−リガンド修飾因子の有効量を対象に投与することを含む方法。
（項目２１）
上記修飾因子が、Ｄｖｌ  ＰＤＺと、上記ポリペプチドとの間の相互作用を抑制する、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
上記病理的状態が癌である、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２３）
上記病理的状態が過剰増殖性障害である、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２４）
上記病理的状態が、標準ｗｎｔシグナル伝達経路の制御不良に関連する、項目２０または２１に記載の方法。
（項目２５）
Ｄｖｌが、ヒトのＤｖｌ１、Ｄｖｌ２、および／またはＤｖｌ３である、項目２０または２１に記載の方法。