(57)【要約】  本開示は、限定はされないが、操作されたプロモータの開発を含む、インビトロおよび／またはインビボであろうとなかろうと、フラタキシン（ＦＸＮ）の発現を変更する、例えば、増強するための組成物および方法に関する。かかる組成物は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子の投与を介した送達を含む。本開示の組成物および方法は、フリードライヒ運動失調症あるいはフラタキシンの量および／もしくは機能における欠損から生じるまたはフラタキシンの減少した発現もしくはタンパク質レベルに関連する別の神経筋または神経学的状態と診断されたあるいはそれを有すると疑われる対象の治療において有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
５’末端逆位配列（ＩＴＲ）、操作されたプロモータ、ペイロード領域および３’ＩＴＲを含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターゲノムであって、前記ペイロード領域が、フラタキシン（ＦＸＮ）タンパク質をコードする、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターゲノム。
【請求項２】
前記操作されたプロモータが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＡ）プロモータおよびＦＸＮプロモータのうち１つ以上から選択されるプロモータに由来する、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３】
前記操作されたプロモータが、ＣＭＶプロモータに由来する、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４】
前記操作されたプロモータが、ＣＢＡプロモータに由来する、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５】
前記操作されたプロモータが、ＦＸＮプロモータに由来する、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３４〜１７７７から選択される配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３４〜１７７７から選択される配列に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３４〜１７７７から選択される配列に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３４〜１７７７から選択される配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０】
前記操作されたプロモータが、ＣＭＶプロモータに由来し、５０〜７００ヌクレオチド長である、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１】
前記操作されたプロモータが、１０９ヌクレオチド長である、請求項１０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４３〜１７５１、１７６７および１７７２〜１７７４から選択される配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７７７を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１４】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５０に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１５】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５０に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１６】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５０に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１７】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５０を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１８】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５０からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１９】
前記操作されたプロモータが、ＣＢＡプロモータに由来し、１００〜７００ヌクレオチド長である、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２０】
前記操作されたプロモータが、１００〜４００ヌクレオチド長、任意選択で約１００ヌクレオチド長である、請求項１９に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２１】
前記操作されたプロモータが、２００〜３５０ヌクレオチド長、任意選択で約２６０ヌクレオチド長である、請求項１９に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２２】
前記操作されたプロモータが、約３３２ヌクレオチド長である、請求項１９に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２３】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３４〜１７４２、１７６０〜１７６６、１７６８および１７７５〜１７７６から選択される配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２４】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２５】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３８に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２６】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３８に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２７】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３８を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２８】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７３８からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項２９】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４０に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３０】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４０に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３１】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４０に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３２】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４０を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３３】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４０からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３４】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４２に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３５】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４２に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３６】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４２に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３７】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４２を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３８】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７４２からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項３９】
前記操作されたプロモータが、ＦＸＮプロモータに由来し、２００〜１４００ヌクレオチド長である、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４０】
前記操作されたプロモータが、９５０〜１１５０ヌクレオチド長、任意選択で約１０６０ヌクレオチド長である、請求項３９に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４１】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５２〜１７５９および１７６９〜１７７０からなる群から選択される配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４２】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５６に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４３】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５６に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４４】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５６に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４５】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５６を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４６】
前記操作されたプロモータが、配列番号１７５６からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４７】
前記フラタキシンタンパク質が、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）フラタキシンである、請求項１乃至４６のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４８】
前記フラタキシンタンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１７２５、１７２６または１７２７に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％配列同一性を有する、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項４９】
前記フラタキシンタンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１７２５、１７２６および１７２７から選択される、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５０】
前記フラタキシンタンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１７２５を含む、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５１】
前記フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号１７２８、１７２９もしくは１７３０、またはその断片に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％配列同一性を有する、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５２】
前記フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号１７２８、１７２９および１７３０、またはその断片から選択される、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５３】
前記フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号１７２８またはその断片を含む、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５４】
前記フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含むまたはそれからなる、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５５】
前記フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号１８２３または１８２４に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％配列同一性を有する、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５６】
前記フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号１８２３または１８２４から選択される、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５７】
前記フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号１８２３を含む、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５８】
前記フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号１８２４を含む、請求項４７に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項５９】
前記フラタキシンタンパク質が、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）フラタキシンである、請求項１乃至４６のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６０】
前記フラタキシンタンパク質が、アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）フラタキシンである、請求項１乃至４６のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６１】
前記フラタキシンタンパク質が、少なくとも部分的にヒト化されている、請求項５９乃至６０のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６２】
前記フラタキシンタンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１７３１、１７３２または１７３３に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一である、請求項５５乃至５７のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６３】
前記フラタキシンタンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１７３１、１７３２または１７３３を含む、請求項５５乃至５６のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６４】
前記５’ＩＴＲが、ＡＡＶ２  ＩＴＲである、請求項１乃至６３のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６５】
前記５’ＩＴＲが、１４１ヌクレオチド長である、請求項１乃至６４のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６６】
前記３’ＩＴＲが、ＡＡＶ２  ＩＴＲである、請求項１乃至６５のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６７】
前記３’ＩＴＲが、１４１ヌクレオチド長である、請求項１乃至６６のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６８】
前記５’ＩＴＲが、配列番号１８１１に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１乃至６７のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項６９】
前記３’ＩＴＲが、配列番号１８１２に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１乃至６８のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７０】
以下の成分：イントロン（例えば、エンハンサーを含むまたはそれからなる）、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位、ポリアデニル化（ポリＡ）配列またはフィラー配列のうち１つ以上（例えば、全て）を含む、請求項１乃至６９のいずれか１項に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７１】
前記イントロンが、配列番号１８１５〜１８２１からなる群から選択される配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７２】
前記イントロンが、配列番号１８１６に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７３】
前記イントロンが、配列番号１８１６に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７４】
前記イントロンが、配列番号１８１６に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７５】
前記イントロンが、配列番号１８１６を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７６】
前記イントロンが、配列番号１８１６からなる、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７７】
前記ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位が、配列番号１８２７に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７８】
前記ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位が、配列番号１８２７に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項７９】
前記ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位が、配列番号１８２７に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８０】
前記ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位が、配列番号１８２７を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８１】
前記ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲ）結合部位が、配列番号１８２７からなる、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８２】
３コピーのｍｉＲ結合部位（ｍｉＲ結合部位シリーズ）を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８３】
前記ｍｉＲ結合部位シリーズが、配列番号１８２６に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項８２に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８４】
前記ｍｉＲ結合部位シリーズが、配列番号１８２６に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項８２に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８５】
前記ｍｉＲ結合部位シリーズが、配列番号１８２６に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項８２に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８６】
前記ｍｉＲ結合部位シリーズが、配列番号１８２６を含む、請求項８２に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８７】
前記ｍｉＲ結合部位シリーズが、配列番号１８２６からなる、請求項８２に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８８】
前記ポリアデニル化配列が、配列番号１８２８に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項８９】
前記ポリアデニル化配列が、配列番号１８２８に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９０】
前記ポリアデニル化配列が、配列番号１８２８に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９１】
前記ポリアデニル化配列が、配列番号１８２８を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９２】
前記ポリアデニル化配列が、配列番号１８２８からなる、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９３】
前記フィラーが、配列番号１８２９〜１８４２からなる群から選択される配列を含む、請求項７０に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９４】
前記フィラーが、配列番号１８３８に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９５】
前記フィラーが、配列番号１８３８に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９６】
前記フィラーが、配列番号１８３８に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９７】
前記フィラーが、配列番号１８３８を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９８】
前記フィラーが、配列番号１８３８からなる、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項９９】
前記フィラーが、配列番号１８３９に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１００】
前記フィラーが、配列番号１８３９に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０１】
前記フィラーが、配列番号１８３９に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０２】
前記フィラーが、配列番号１８３９を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０３】
前記フィラーが、配列番号１８３９からなる、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０４】
前記フィラーが、配列番号１８４０に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０５】
前記フィラーが、配列番号１８４０に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０６】
前記フィラーが、配列番号１８４０に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０７】
前記フィラーが、配列番号１８４０を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０８】
前記フィラーが、配列番号１８４０からなる、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１０９】
前記フィラーが、配列番号１８４１に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１０】
前記フィラーが、配列番号１８４１に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１１】
前記フィラーが、配列番号１８４１に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１２】
前記フィラーが、配列番号１８４１を含む、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１３】
前記フィラーが、配列番号１８４１からなる、請求項９３に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１４】
配列番号１７７８〜１８１０から選択される配列に対して少なくとも８０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１５】
配列番号１７７８〜１８１０から選択される配列に対して少なくとも８５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１６】
配列番号１７７８〜１８１０から選択される配列に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１７】
配列番号１７７８〜１８１０から選択される配列に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１８】
配列番号１７７８〜１８１０から選択される配列に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１１９】
配列番号１７７８〜１８１０から選択される配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２０】
配列番号１７７８〜１７９５から選択される配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２１】
配列番号１７９６〜１８１０から選択される配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２２】
配列番号１７９７に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２３】
配列番号１７９７に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２４】
配列番号１７９７に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２５】
配列番号１７９７を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２６】
配列番号１７９７からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２７】
配列番号１８０１に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２８】
配列番号１８０１に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１２９】
配列番号１８０１に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３０】
配列番号１８０１を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３１】
配列番号１８０１からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３２】
配列番号１８０８に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３３】
配列番号１８０８に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３４】
配列番号１８０８に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３５】
配列番号１８０８を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３６】
配列番号１８０８からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３７】
配列番号１８０９に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３８】
配列番号１８０９に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１３９】
配列番号１８０９に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１４０】
配列番号１８０９を含む、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１４１】
配列番号１８０９からなる、請求項１に記載のＡＡＶベクターゲノム。
【請求項１４２】
請求項１乃至１４１のいずれか一項に記載のＡＡＶベクターゲノムおよびカプシドを含むＡＡＶ粒子。
【請求項１４３】
前記カプシドが、配列番号１〜１７２４から選択される配列を含むまたはそれによってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１４４】
前記カプシドが、配列番号１３６を含むアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１４５】
前記カプシドが、配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１４６】
前記カプシドが、配列番号９を含むアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１４７】
前記カプシドが、配列番号３を含むアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１４８】
前記カプシドが、配列番号４を含む核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１４９】
前記カプシドが、配列番号２を含むアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１５０】
前記カプシドが、配列番号１を含むアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１５１】
前記カプシドが、配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１５２】
前記カプシドが、配列番号１７２４を含むアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１５３】
前記カプシドが、配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載のＡＡＶ粒子。
【請求項１５４】
請求項１４２乃至１５３のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子を含む医薬組成物。
【請求項１５５】
塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含む、請求項１５４に記載の医薬組成物。
【請求項１５６】
１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含む、請求項１５４に記載の医薬組成物。
【請求項１５７】
前記リン酸ナトリウムが二塩基性であり、前記リン酸カリウムが一塩基性である、請求項１５５乃至１５６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５８】
前記組成物のｐＨが７．３〜７．７である、請求項１５５乃至１５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５９】
前記組成物のｐＨが７．４である、請求項１５５乃至１５７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６０】
ＡＡＶベクターゲノムおよびカプシドを含むＡＡＶ粒子であって、前記ＡＡＶベクターゲノムが、配列番号１７９７を含み、前記カプシドがＶＯＹ  １０１である、ＡＡＶ粒子。
【請求項１６１】
請求項１６０に記載のＡＡＶ粒子を含む医薬組成物であって、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含み、任意選択で、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含み、前記組成物のｐＨが７．４である、医薬組成物。
【請求項１６２】
ＡＡＶベクターゲノムおよびカプシドを含むＡＡＶ粒子であって、前記ＡＡＶベクターゲノムが、配列番号１８０１を含み、前記カプシドがＶＯＹ  １０１である、ＡＡＶ粒子。
【請求項１６３】
請求項１６２に記載のＡＡＶ粒子を含む医薬組成物であって、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含み、任意選択で、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含み、前記組成物のｐＨが７．４である、医薬組成物。
【請求項１６４】
ＡＡＶベクターゲノムおよびカプシドを含むＡＡＶ粒子であって、前記ＡＡＶベクターゲノムが、配列番号１８０８を含み、前記カプシドがＶＯＹ  １０１である、ＡＡＶ粒子。
【請求項１６５】
請求項１６４に記載のＡＡＶ粒子を含む医薬組成物であって、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含み、任意選択で、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含み、前記組成物のｐＨが７．４である、医薬組成物。
【請求項１６６】
ＡＡＶベクターゲノムおよびカプシドを含むＡＡＶ粒子であって、前記ＡＡＶベクターゲノムが、配列番号１８０９を含み、前記カプシドがＶＯＹ  １０１である、ＡＡＶ粒子。
【請求項１６７】
請求項１６６に記載のＡＡＶ粒子を含む医薬組成物であって、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含み、任意選択で、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含み、前記組成物のｐＨが７．４である、医薬組成物。
【請求項１６８】
神経学的または神経筋障害を治療する方法であって、請求項１５４乃至１５９、１６１、１６３、１６５または１６７のいずれか１項に記載の医薬組成物を対象に投与する工程を含む方法。
【請求項１６９】
前記神経学的または神経筋障害が、フリードライヒ運動失調症である、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７０】
前記神経学的または神経筋障害が、減少したフラタキシンタンパク質レベルに関連する障害である、請求項１６８に記載の方法。
【請求項１７１】
前記医薬組成物の投与が、減少したフラタキシンタンパク質レベルに関連する障害を有さない対象中の等価な標的細胞におけるフラタキシン発現と比較して、前記対象の標的細胞におけるフラタキシンタンパク質発現の０．５×〜３．０×の増加をもたらす、請求項１６８乃至１７０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インビトロであれインビボであれ、新規の操作されたプロモータの開発を少なくとも一部介して、フラタキシン（ＦＸＮ）の発現を増強することに関する、フラタキシンに基づく組成物および方法に関する。かかるフラタキシンに基づく組成物は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター中で送達されてもよい。他の実施形態において、フラタキシンに基づく組成物、例えば、ＡＡＶ−フラタキシン組成物は、それを必要とする対象、例えば、フリードライヒ運動失調症またはフラタキシンの量および／もしくは機能における欠損から生じる他の神経学的状態と診断されたヒト対象を治療するために、あるいはかかる疾患または状態の細胞または動物モデルにおける疾患または状態の研究における研究ツールとして使用される。
【背景技術】
【０００２】
１８６０年代にドイツ人医師ニコラス・フリードライヒ（Ｎｉｋｏｌａｓ  Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ）によって最初に記載されたフリードライヒ運動失調症（ＦＡ）は、神経系に対する進行性の損傷を引き起こす常染色体劣性遺伝性疾患である。非特許文献１（その内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。発症は通常思春期に、大抵は２５歳までに起きる。非特許文献２（その内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。ＦＡは、典型的には、（小脳との接続を介して）腕および脚の筋肉運動を指示する感覚ニューロンにおけるミトコンドリアタンパク質フラタキシン（ＦＸＮ）の低減された発現に起因する脊髄の神経組織の変性から生じる。非特許文献３（その内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。脊髄は細くなり、末梢神経細胞は、神経インパルスの伝達を助ける一部の神経細胞を覆う絶縁であるそのミエリン鞘の一部を喪失する。ＦＡの初期症状としては、協調不良、例えば、歩行障害、平衡不良、脚の脱力、歩行の減少、協調不全、構音障害、眼振、感覚不全、脊柱後側弯症および足変形が挙げられる。非特許文献１を参照されたい。ＦＡには、脊柱側弯症、心臓疾患および糖尿病も関連する。この疾患は一般に、移動のために車椅子が必要になるまで進行する。白人集団におけるＦＡの発生は、およそ２０，０００人中１人からおよそ５０，０００人中１人の間であり、ヨーロッパ人集団ではおよそ１２０人中１人の推定キャリア頻度である。非特許文献４；非特許文献２（その各々の内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。
【０００３】
ＦＸＮ遺伝子中のイントロンＧＡＡトリプレット反復の拡大が、ＦＡをもたらすフラタキシンの低減された発現の遺伝的原因である。非特許文献１を参照されたい。経時的に、この欠損は、前述の症状、ならびに細胞代謝に対する影響に起因する頻繁な疲労を引き起こす。
【０００４】
硬化症および変性は、後根神経節、脊髄小脳路、外側皮質脊髄路および後索において最も頻繁である。非特許文献５（その内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。
【０００５】
後根神経節の進行性の破壊により、後根は細くなり、後柱の変性、クラーク柱および背側脊髄小脳線維中の神経細胞の経シナプス萎縮、薄束核および楔状束核の萎縮、ならびに感覚神経の神経障害が引き起こされる。非特許文献３（その内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。歯状核の病変は、大きいグルタミン酸作動性ニューロンの進行性かつ選択的な萎縮ならびにガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を含有する皮質核シナプス終末のグルモース変性からなる。歯状核オリーブ路（ｄｅｎｔａｔｏ−ｏｌｉｖａｒｙ  ｔｒａｃｔ）中の小さいＧＡＢＡ作動性ニューロンおよびそれらの突起線維は生存する。Ｂｅｔｚ細胞および皮質脊髄路の萎縮は、第２の病変を構成する。現在、ＦＡの有効な治療は存在せず、患者は、症状管理のために単にモニターされることがほとんどである。
【０００６】
結果として、ＦＸＮ関連障害の治療のための医薬組成物および方法を開発する長年の切実な必要、ならびにＦＡに苦しむ患者においてこのタンパク質の欠損を改善する長年の切実な必要が、当該技術分野に依然として存在している。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、哺乳動物細胞への治療有効ポリペプチドの送達のための最も広く研究および利用されたウイルス粒子の１つとして浮上してきた。例えば、非特許文献６および非特許文献７（その各々の内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。したがって、このモダリティは、ＦＡの治療、ならびにフラタキシンならびにフラタキシン関連タンパク質およびペプチドの送達に向けた開発に十分適している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】パーキンソンら（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１３，１２６（Ｓｕｐｐｌ．１），１０３−１１７
【非特許文献２】カンプサーノら（Ｃａｍｐｕｚａｎｏ，ｅｔ  ａｌ．），Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７１．５２５４（Ｍａｒ  ８，１９９６）：１４２３
【非特許文献３】ケッペン、アルヌルフ（Ｋｏｅｐｐｅｎ，Ａｒｎｕｌｆ）；Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ．，２０１１，Ａｐｒｉｌ  １５；３０３（１−２）：１−１２
【非特許文献４】ナゲシュワラン（Ｎａｇｅｓｈｗａｒａｎ）およびフェステンシュタイン（Ｆｅｓｔｅｎｓｔｅｉｎ），Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６，Ａｒｔ．２６２（２０１５）
【非特許文献５】サンディら（Ｓａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．），Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．５，Ａｒｔ．１６５（Ｊｕｎｅ  ２０１４）
【非特許文献６】トラッチンら（Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．），Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，５（１１）：３２５１−３２６０（１９８５）
【非特許文献７】グリムら（Ｇｒｉｍｍ  ｅｔ  ａｌ．），Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１０（１５）：２４４５−２４５０（１９９９）
【発明の概要】
【０００８】
一部の態様では、本開示は、少なくとも１つの末端逆位配列（ＩＴＲ）とペイロード領域とを含むＡＡＶウイルスゲノムを提供し、ペイロード領域は、フラタキシンタンパク質をコードする。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、５’ＩＴＲ、操作されたプロモータ、ペイロード領域および３’ＩＴＲを含む。コード化フラタキシンタンパク質は、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）フラタキシン、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）フラタキシンもしくはアカゲザルサル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）フラタキシン、合成（天然に存在しない）フラタキシン、またはそれらの誘導体、例えば、野生型フラタキシンの１つ以上の機能を保持するバリアントであってもよい。一部の実施形態において、フラタキシンタンパク質は、少なくとも部分的にヒト化されていてもよい。
【０００９】
ＡＡＶウイルスゲノムの操作されたプロモータは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＡ）プロモータまたはフラタキシン（ＦＸＮ）プロモータに由来してもよい。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、親プロモータ配列のプロモータバリアントまたは誘導体である。
【００１０】
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＭＶプロモータに由来する。
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＢＡプロモータに由来する。
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＦＸＮプロモータに由来する。
【００１１】
本明細書に記載されるＡＡＶウイルスゲノムの操作されたプロモータは、配列番号１７３４〜１７７７のいずれかによって与えられる配列を含んでもよい。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３４〜１７７７のいずれかに対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３４〜１７７７のいずれかに対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３４〜１７７７のいずれかに対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３４〜１７７７のいずれかからなってもよい。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＭＶプロモータに由来し、配列番号１７４３〜１７５１、１７６７および１７７２〜１７７４のいずれかによって与えられる配列を含んでもよい。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７７７を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＢＡプロモータに由来し、配列番号１７３４〜１７４２、１７６０〜１７６６、１７６８および１７７５〜１７７６のいずれかによって与えられる配列を含んでもよい。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＦＸＮプロモータに由来し、配列番号１７５２〜１７５９および１７６９〜１７７０のいずれかによって与えられる配列を含んでもよい。
【００１２】
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３８によって与えられる配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３８に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３８に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７３８からなる。
【００１３】
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４０によって与えられる配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４０に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４０に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４０に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４０からなる。
【００１４】
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４２によって与えられる配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４２に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４２に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４２に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７４２からなる。
【００１５】
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５０によって与えられる配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５０に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５０に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５０に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５０からなる。
【００１６】
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５６によって与えられる配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５６に対して少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５６に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５６に対して少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、配列番号１７５６からなる。
【００１７】
本明細書に記載される操作されたプロモータは、５０〜１４００ヌクレオチド（ｎｔ）の長さを有してもよい。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＭＶプロモータに由来し、５０〜７００ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＭＶプロモータに由来し、１０９ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＢＡプロモータに由来し、１００〜７００ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＢＡプロモータに由来し、１００〜４００ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＢＡプロモータに由来し、１００ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＢＡプロモータに由来し、２００〜３５０ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＢＡプロモータに由来し、２６０ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＣＢＡプロモータに由来し、３３２ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＦＸＮプロモータに由来し、２００〜１４００ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、９５０〜１１５０ｎｔ長である。一部の実施形態において、操作されたプロモータは、ＦＸＮプロモータに由来し、１０６０ｎｔ長である。
【００１８】
一部の実施形態において、操作されたプロモータは、エンハンサー領域を含む。
操作されたプロモータと、フラタキシンをコードするペイロード領域とは、ＡＡＶウイルスゲノム中に取り込まれていてもよい。
【００１９】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、操作されたプロモータおよびペイロード領域に加えて、５’ＩＴＲ、エンハンサー、イントロン、少なくとも１つのｍｉＲ結合部位（例えば、１、２または３つのｍｉＲ結合部位）、ポリＡ配列、フィラー配列および３’ＩＴＲを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、連続して出現しても１つ以上のヌクレオチドによって分離されて出現してもよい複数のｍｉＲ結合部位（「ｍｉＲ結合部位シリーズ」）を含む。一部の実施形態において、５’ＩＴＲおよび／または３’ＩＴＲは、ＡＡＶ２  ＩＴＲである。
【００２０】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのＩＴＲ配列を含む。一部の実施形態において、ＩＴＲは、ＡＡＶ２  ＩＴＲであってもよい。一部の実施形態において、５’ＩＴＲは、ＡＡＶ２  ＩＴＲであってもよい。一部の実施形態において、３’ＩＴＲは、ＡＡＶ２  ＩＴＲであってもよい。一部の実施形態において、５’および／または３’ＩＴＲは、１４１ｎｔ長であってもよい。一部の実施形態において、５’ＩＴＲは、配列番号１８１１に対して少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、３’ＩＴＲは、配列番号１８１２に対して少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。
【００２１】
一部の実施形態において、ＩＴＲからＩＴＲまでの配列は、イントロン／エクソン領域を含む。一部の実施形態において、イントロン／エクソン領域は、エンハンサー配列であってもよい。非限定的な例として、エンハンサー配列は、２つ以上の下位成分、例えば、限定はされないが、ｉｅ１エクソン（例えば、エクソン１）、ｉｅ１イントロン（例えば、イントロン１）、ヒトベータ−グロビンイントロン（例えば、イントロン２）および／もしくはヒトベータグロビンエクソン（例えば、エクソン３）、またはそれらの断片を含んでもよい。一部の実施形態において、イントロン／エクソン領域は、配列番号１８１５〜１８２１のいずれかによって与えられる配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１８１５〜１８２１のいずれかによって与えられる配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１７７７に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、イントロン／エクソン領域は、１つ以上のヒトベータ−グロビン配列、例えば、配列番号１８２０および／または１８２１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、イントロンは、配列番号１８１５〜１８２１のいずれかによって与えられる配列を含んでもよい。一部の実施形態において、イントロンは、配列番号１８１６に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を有する。一部の実施形態において、イントロンは、配列番号１８１６からなってもよい。
【００２２】
一部の実施形態において、ｍｉＲ結合部位シリーズは、少なくとも１つのｍｉＲ１２２結合部位配列を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのｍｉＲ１２２結合部位は、配列番号１８２７に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのｍｉＲ１２２結合部位は、配列番号１８２７からなる。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、３コピーのｍｉＲ１２２結合部位、例えば、３コピーの配列番号１８２７または少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態において、ｍｉＲ結合部位シリーズは、配列番号１８２６に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、ｍｉＲ結合部位シリーズは、配列番号１８２６からなってもよい。
【００２３】
一部の実施形態において、ポリＡ配列は、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡ配列である。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８２８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一なｈＧＨポリＡ配列を含む。一部の実施形態において、ポリＡ配列は、配列番号１８２８からなる。
【００２４】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、フィラー配列、例えば、アルブミンフィラー配列を更に含む。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８２９〜１８４２のいずれかによって与えられる配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８３８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８３８からなってもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８３９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８３９からなってもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８４０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８４０からなってもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８４１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８４１からなってもよい。
【００２５】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかによって与えられる配列を含んでもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して８０〜８５％、８０〜９０％、８０〜９５％、８０〜９９％、８０〜１００％、９０〜９５％、９０〜９９％または９０〜１００％配列同一性を有する配列を含む。コード化フラタキシンがカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）種のフラタキシンであるＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１７９５のいずれかによって与えられる配列を含んでもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１７９５のいずれかに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１７９５のいずれかに対して８０〜８５％、８０〜９０％、８０〜９５％、８０〜９９％、８０〜１００％、９０〜９５％、９０〜９９％または９０〜１００％配列同一性を有する配列を含む。コード化フラタキシンがヒトフラタキシンであるＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７９６〜１８１０のいずれかによって与えられる配列を含んでもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７９６〜１８１０のいずれかに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７９６〜１８１０のいずれかに対して８０〜８５％、８０〜９０％、８０〜９５％、８０〜９９％、８０〜１００％、９０〜９５％、９０〜９９％または９０〜１００％配列同一性を有する配列を含む。
【００２６】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７９７に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１７９７からなってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１８０１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１８０１からなってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１８０８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１８０８からなってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１８０９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含んでもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、配列番号１８０９からなってもよい。
【００２７】
一部の実施形態において、フラタキシンをコードするＡＡＶベクターゲノムのペイロード領域は、配列番号１８２２〜１８２４のいずれかによって与えられる配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一な核酸配列を含む。一部の実施形態において、フラタキシンをコードするＡＡＶベクターゲノムのペイロード領域は、配列番号１８２２〜１８２４のいずれかによって与えられる核酸配列を含む。一部の実施形態において、フラタキシンをコードする核酸配列は、配列番号１８２２を含む。一部の実施形態において、フラタキシンをコードする核酸配列は、配列番号１８２３を含む。一部の実施形態において、フラタキシンをコードする核酸配列は、配列番号１８２４を含む。一部の実施形態において、フラタキシンをコードする核酸配列は、配列番号１７２８、１７２９もしくは１７３０の断片、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくは少なくとも９９％配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態において、フラタキシンをコードする核酸配列は、配列番号１７２８の断片を含む。一部の実施形態において、フラタキシンをコードする核酸配列は、配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む。
【００２８】
一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムのペイロード領域は、配列番号１７２５、１７２６または１７２７に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％配列同一性を有するフラタキシンポリペプチドをコードする核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムのペイロード領域は、配列番号１７２５、１７２６または１７２７のフラタキシンポリペプチドをコードする核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７２５を含むフラタキシンポリペプチドをコードする核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムのペイロード領域は、配列番号１７３１、１７３２または１７３３に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％または９９％配列同一性を有するフラタキシンポリペプチドをコードする核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムのペイロード領域は、配列番号１７３１、１７３２または１７３３のフラタキシンポリペプチドをコードする核酸配列を含む。
【００２９】
操作されたプロモータまたはプロモータバリアントを含むウイルスゲノムは、ＡＡＶ粒子中に取り込まれてもよく、ＡＡＶ粒子は、ウイルスゲノムとカプシドとを含む。一部の実施形態において、カプシドは、表１に示される配列を含み、または配列番号１〜１７２４からなる群から選択される。カプシドの非限定的な例としては、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｎ、ＶＯＹ１０１（配列番号１のアミノ酸配列を有するおよび／または配列番号１７２２の核酸配列を有する）および／またはＶＯＹ２０１（配列番号１７２４のアミノ酸配列を有するおよび／または配列番号１７２３の核酸配列を有する）が挙げられる。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号４、１３５、１７２２および１７２３から選択される核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号１、２、３、９、１３６または１７２４のいずれかによって与えられるアミノ酸配列を有してもよい。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号１３６によって与えられるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号１３５によって与えられる核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号９によって与えられるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号３によって与えられるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号４によって与えられる核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号２によって与えられるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号１によって与えられるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号１７２２によって与えられる核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号１７２３によって与えられる核酸配列によってコードされるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシドは、配列番号１７２４によって与えられるアミノ酸配列を含む。
【００３０】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＡＡＶ粒子は、医薬組成物に使用することができる。一部の実施形態において、医薬組成物は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含む。一部の実施形態において、医薬組成物は、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含む。一部の実施形態において、組成物のリン酸ナトリウムは、二塩基性である。一部の実施形態において、組成物のリン酸カリウムは、一塩基性である。一部の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、７．３〜７．７である。一部の実施形態において、医薬組成物のｐＨは、７．４である。
【００３１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７によって与えられるベクターゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含んでもよい。一部の実施形態において、配列番号１７９７によって与えられるベクターゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子を含む医薬組成物は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含み；任意選択で、医薬組成物は、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含み、組成物のｐＨは７．４である。
【００３２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１によって与えられるベクターゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含んでもよい。一部の実施形態において、配列番号１８０１によって与えられるベクターゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子を含む医薬組成物は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含み；任意選択で、医薬組成物は、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含み、組成物のｐＨは７．４である。
【００３３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８によって与えられるベクターゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含んでもよい。一部の実施形態において、配列番号１８０８によって与えられるベクターゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子を含む医薬組成物は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含み；任意選択で、医薬組成物は、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含み、組成物のｐＨは７．４である。
【００３４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９によって与えられるベクターゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含んでもよい。一部の実施形態において、配列番号１８０９によって与えられるベクターゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子を含む医薬組成物は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびポロキサマー１８８を含み；任意選択で、医薬組成物は、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウムおよび０．００１％ポロキサマー１８８（ｖ／ｖ）を含み、組成物のｐＨは７．４である。
【００３５】
本開示の医薬組成物および／またはＡＡＶ粒子は、神経学的または神経筋障害、例えば、限定はされないが、フリードライヒ運動失調症を治療するために使用することができる。
【００３６】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、減少したフラタキシン発現またはタンパク質レベルに関連する障害または状態を治療するために使用される。一部の実施形態において、減少したフラタキシン発現またはタンパク質レベルに関連する障害または状態は、神経学的または神経筋障害である。一部の実施形態において、減少したフラタキシンタンパク質レベルに関連する障害または状態は、ＦＡまたはフラタキシン欠損症である。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子の投与は、減少したフラタキシンレベルに関連する障害を患っていない正常な対象の等価な標的細胞におけるフラタキシン発現の０．５〜３×（例えば、０．５〜１×、１〜１．５×、１．５〜２×、２〜２．５×、２．５〜３×）のレベルまで増強された、標的細胞におけるフラタキシン発現をもたらすことができる。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子の投与は、およそ５．５〜３２．８ｎｇ／ｍｇのタンパク質の、標的細胞におけるフラタキシン発現をもたらすことができる。
【００３７】
本開示の様々な態様または実施形態の詳細は、以下に示される。本開示の他の特徴、目的および利点は、説明および特許請求の範囲から明らかであろう。説明では、単数形は、文脈により明白にそうでないと指示されない限り、複数形もまた含む。別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって広く理解されているものと同じ意味を有する。矛盾する場合には、本明細書の記載が優先されるものとする。
【００３８】
先述および他の目的、特徴、および利点は、添付の図面に例示される、本明細書に提示される特定の実施形態についての以下の説明から明らかであろう。図面は必ずしも原寸に比例ではなく、本明細書に記載される様々な実施形態の原理を説明することに重点を置いている。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１Ａ】心臓組織についての、ＥＬＩＳＡによるフラタキシン発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）についての定量化結果および定量的ＰＣＲによるＡＡＶ生体内分布（ＶＧ／ＤＣ）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図１Ｂ】小脳の組織についての、ＥＬＩＳＡによるフラタキシン発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）についての定量化結果および定量的ＰＣＲによるＡＡＶ生体内分布（ＶＧ／ＤＣ）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図１Ｃ】後根神経節（ＤＲＧ）についての、ＥＬＩＳＡによるフラタキシン発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）についての定量化結果および定量的ＰＣＲによるＡＡＶ生体内分布（ＶＧ／ＤＣ）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図１Ｄ】肝臓組織についての、ＥＬＩＳＡによるフラタキシン発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）についての定量化結果および定量的ＰＣＲによるＡＡＶ生体内分布（ＶＧ／ＤＣ）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図２】本開示の特定のプロモータコンストラクトについての、ＥＬＩＳＡによる線条体ｃＦＸＮタンパク質レベルについての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図３Ａ】腰椎ＤＲＧ組織についての、ＥＬＩＳＡによるフラタキシン発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図３Ｂ】小脳の組織についての、ＥＬＩＳＡによるフラタキシン発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図４】Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウスおよび野生型（ＷＴ）マウスと比較した、ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮまたはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ  ＡＡＶ粒子で静脈内治療したＰｖａｌｂ  ｃＫＯ動物における電気筋運動記録（Ｈ波強度）測定値を示すグラフを示す図。
【図５】Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウスおよび野生型（ＷＴ）マウスと比較した、ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮまたはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ  ＡＡＶ粒子で静脈内治療したＰｖａｌｂ  ｃＫＯマウスにおけるノッチバー試験（ｎｏｔｃｈｅｄ−ｂａｒ  ｔｅｓｔ）を通じた行動分析を示すグラフを示す図。
【図６Ａ】本開示の特定のＤＲＧ組織についての、ＥＬＩＳＡによるフラタキシン発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図６Ｂ】配列番号１８０８を有するｈＦＸＮ１３（ＣＢＡ．Ｄ４）、配列番号１８０９を有するｈＦＸＮ１４（ＣＢＡ．Ｄ６）および配列番号１７９７を有するｈＦＸＮ２（ＣＢＡ．Ｄ８）についての、図６Ａ中の定量化結果の拡大図を示す図。
【図６Ｃ】本開示の特定の心室組織についての、ＥＬＩＳＡによるフラタキシン発現レベル（ｎｇ／ｍｇ）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【図６Ｄ】配列番号１８０８を有するｈＦＸＮ１３（ＣＢＡ．Ｄ４）、配列番号１８０９を有するｈＦＸＮ１４（ＣＢＡ．Ｄ６）および配列番号１７９７を有するｈＦＸＮ２（ＣＢＡ．Ｄ８）についての、図６Ｃ中の定量化結果の拡大図を示す図。
【図７】本開示のプロモータコンストラクトについての、ルシフェラーゼ発現によるフラタキシン発現レベル（ＦＸＮ：ルシフェラーゼ比）についての定量化結果を示すグラフを示す図。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
Ｉ．組成物
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター
パルボウイルス科のウイルスは、一本鎖ＤＮＡゲノムによって特徴付けられる小型非エンベロープ二十面体カプシドウイルスである。パルボウイルス科ウイルスは、２つの亜科：脊椎動物に感染するパルボウイルス亜科および無脊椎動物に感染するデンソウイルス亜科からなる。このウイルスファミリーは、標準的分子生物学技法を使用して操ることができる比較的単純な構造に起因して、生物学的ツールとして有用であり得る。ウイルスのゲノムは、所望の核酸コンストラクトまたはペイロード、例えば、トランス遺伝子、ポリペプチドコード化ポリヌクレオチドもしくはＦＸＮを有するかまたはそれを発現もしくは送達するように操作されている機能的組換えウイルスまたはウイルス粒子をアセンブリするための最低限の成分を含有するように改変することができ、それを、標的細胞、組織、または生物に送達することができる。一部の実施形態において、標的細胞は、ＣＮＳ細胞である。一部の実施形態において、標的組織は、ＣＮＳ組織である。
【００４１】
パルボウイルスおよびパルボウイルス科の他のメンバーは、ケネス  Ｉ．ベルン（Ｋｅｎｎｅｔｈ  Ｉ．Ｂｅｒｎｓ）、「パルボウイルス科：ウイルスおよびそれらの複製（Ｔｈｅ  Ｖｉｒｕｓｅｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）」、ＦＩＥＬＤＳ  ＶＩＲＯＬＯＧＹ（第３版、１９９６年）の第６９章に概説されている。その内容は本明細書において全体として参照により援用される。
【００４２】
パルボウイルス科は、限定はされないが、ヒト、霊長類、ウシ、イヌ、ウマ、およびヒツジ種を含む脊椎動物宿主において複製可能なアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含むディペンドウイルス属を含む。
【００４３】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、約５０００ヌクレオチド長のゲノムを有する一本鎖非エンベロープＤＮＡウイルスであり、複製を担うタンパク質（Ｒｅｐ）およびカプシドの構造タンパク質（Ｃａｐ）をコードする２つのオープンリーディングフレームを含有する、依存性パルボウイルス（他のパルボウイルスと同様）である。これらのオープンリーディングフレームには、ウイルスゲノムの複製起点として働く２つの末端逆位配列（ＩＴＲ）配列が隣接する。野生型ＡＡＶウイルスゲノムは、２つのオープンリーディングフレームについてのヌクレオチド配列を含み、１つのオープンリーディングフレームは、４つの非構造Ｒｅｐタンパク質（Ｒｅｐ遺伝子によってコードされるＲｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２、Ｒｅｐ４０）についてのものであり、１つのオープンリーディングフレームは、３つのカプシドすなわち構造タンパク質（カプシド遺伝子すなわちＣａｐ遺伝子によってコードされるＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３）についてのものである。Ｒｅｐタンパク質は、複製およびパッケージングにとって重要であるが、カプシドタンパク質は、アセンブルして、ＡＡＶのタンパク質シェルすなわちＡＡＶカプシドを創出する。選択的スプライシングならびに選択的開始コドンおよびプロモータは、単一のオープンリーディングフレームからの４つの異なるＲｅｐタンパク質の生成および単一のオープンリーディングフレームからの３つのカプシドタンパク質の生成をもたらす。ＡＡＶ血清型、非限定的な例として、ＡＡＶ９／ｈｕ．１４（米国特許第７，９０６，１１１号明細書（その内容は全体として本願明細書に援用される）の配列番号１２３）によって異なるが、ＶＰ１は、アミノ酸１〜７３６を指し、ＶＰ２は、アミノ酸１３８〜７３６を指し、ＶＰ３は、アミノ酸２０３〜７３６を指す。言い換えると、ＶＰ１は全長カプシド配列であるが、ＶＰ２およびＶＰ３は、全体のより短い成分である。結果として、ＶＰ３領域中の配列における変化は、ＶＰ１およびＶＰ２に対する変化でもあるが、ＶＰ３がこれら３つのうち最も短い配列なので、親配列と比較したパーセント差異は、ＶＰ３で最も高くなるであろう。アミノ酸配列と関連して本明細書に記載しているが、これらのタンパク質をコードする核酸配列も、同様に記載することもできる。一緒になって、３つのカプシドタンパク質はアセンブルして、ＡＡＶカプシドタンパク質を創出する。理論によって束縛されることを望むものではないが、ＡＡＶカプシドタンパク質は、典型的には、１：１：１０のモル比のＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３を含む。本明細書で使用されるとき、「ＡＡＶ血清型」は、ＡＡＶカプシドによって主に定義される。一部の場合において、ＩＴＲもまた、ＡＡＶ血清型によって具体的に記載される（例えば、ＡＡＶ２／９）。
【００４４】
ＡＡＶベクターは、典型的には、感染細胞において増殖性感染を受けるために、コヘルパー（ｃｏ−ｈｅｌｐｅｒ）（例えば、アデノウイルス）を必要とする。かかるヘルパー機能が存在しない場合、ＡＡＶビリオンは本質的に、宿主細胞に進入するが、細胞のゲノム中には組み込まれない。本明細書で使用されるとき、用語「ＡＡＶベクター」または「ＡＡＶ粒子」は、カプシドとポリヌクレオチドペイロードを含むウイルスゲノムとを含む。本明細書で使用されるとき、「ペイロード」または「ペイロード領域」は、ウイルスゲノムによりもしくはその内にコードされる１つ以上のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド領域、またはかかるポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド領域、例えばトランス遺伝子、ポリペプチドもしくはマルチポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えばＦＸＮを指す。
【００４５】
ＡＡＶベクターは、幾つかの固有の特徴に起因して、送達について調査されてきた。特徴の非限定的な例としては、（ｉ）分裂細胞および非分裂細胞の両方に感染する能力；（ｉｉ）ヒト細胞を含む、感染性のための広い宿主範囲；（ｉｉｉ）野生型ＡＡＶは、いずれの疾患にも関連付けられておらず、感染細胞において複製しないことが示されている；（ｉｖ）ベクターに対する細胞媒介性免疫応答が欠如している、ならびに（ｖ）長期の遺伝子変更の潜在性を低減させる、宿主染色体中に組み込まれない性質、が挙げられる。更に、ＡＡＶベクターによる感染は、細胞遺伝子発現のパターンを変化させることに対して最小限の影響を有する（スティルウェルおよびサムルスキーら（Ｓｔｉｌｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２００３，３４，１４８（その内容は全体として本願明細書に援用される））。
【００４６】
典型的には、ＦＸＮ送達のためのＡＡＶベクターは、ウイルスゲノム内に機能的ＲｅｐおよびＣａｐタンパク質をコードする配列を欠如するので、複製欠損型である組換えウイルスベクターであり得る。一部のケースにおいて、欠損ＡＡＶベクターは、ほとんどのまたは全てのコード配列を欠如してもよく、１つまたは２つのＡＡＶ  ＩＴＲ配列およびペイロード配列のみを本質的に含有する。特定の実施形態において、ウイルスゲノムは、ＦＸＮをコードする。例えば、ウイルスゲノムは、ヒトＦＸＮをコードする。
【００４７】
一実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、哺乳類細胞に導入することができる。
ＡＡＶベクターは、送達の効率を増強するために改変することができる。本開示のかかる改変されたＡＡＶベクターは、効率的にパッケージングすることができ、高頻度でおよび最低限の毒性で標的細胞への感染を成功させるために使用することができる。
【００４８】
他の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ＦＸＮを中枢神経系に送達するために使用することができる（例えば、米国特許第６，１８０，６１３号明細書を参照されたい；その内容は全体として本願明細書に援用される）。
【００４９】
ＡＡＶ血清型
本開示のＡＡＶ粒子は、任意の天然または組換えＡＡＶ血清型を含んでもよく、またはそれに由来してもよい。本開示によれば、ＡＡＶ粒子は、以下のいずれか、ＶＯＹ１０１、ＶＯＹ２０１、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ（ＰＨＰ．Ｂ）、ＡＡＶＰＨＰ．Ａ（ＰＨＰ．Ａ）、ＡＡＶＧ２Ｂ−２６、ＡＡＶＧ２Ｂ−１３、ＡＡＶＴＨ１．１−３２、ＡＡＶＴＨ１．１−３５、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ２（ＰＨＰ．Ｂ２）、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ３（ＰＨＰ．Ｂ３）、ＡＡＶＰＨＰ．Ｎ／ＰＨＰ．Ｂ−ＤＧＴ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＥＳＴ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＧＧＴ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＡＴＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＡＴＴ−Ｔ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＤＧＴ−Ｔ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＧＧＴ−Ｔ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＳＧＳ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＡＱＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＱＱＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＳＮＰ（３）、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＳＮＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＱＧＴ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＮＱＴ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＥＧＳ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＳＧＮ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＥＧＴ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＤＳＴ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＤＳＴ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＳＴＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＰＱＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＳＱＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＱＬＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＴＭＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ−ＴＴＰ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｓ／Ｇ２Ａ１２、ＡＡＶＧ２Ａ１５／Ｇ２Ａ３（Ｇ２Ａ３）、ＡＡＶＧ２Ｂ４（Ｇ２Ｂ４）、ＡＡＶＧ２Ｂ５（Ｇ２Ｂ５）、ＰＨＰ．Ｓ、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２Ｇ９、ＡＡＶ３、ＡＡＶ３ａ、ＡＡＶ３ｂ、ＡＡＶ３−３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ４−４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ６．１．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ７．２、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９．１１、ＡＡＶ９．１３、ＡＡＶ９．１６、ＡＡＶ９．２４、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ９．６１、ＡＡＶ９．６８、ＡＡＶ９．８４、ＡＡＶ９．９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１６．３、ＡＡＶ２４．１、ＡＡＶ２７．３、ＡＡＶ４２．１２、ＡＡＶ４２−１ｂ、ＡＡＶ４２−２、ＡＡＶ４２−３ａ、ＡＡＶ４２−３ｂ、ＡＡＶ４２−４、ＡＡＶ４２−５ａ、ＡＡＶ４２−５ｂ、ＡＡＶ４２−６ｂ、ＡＡＶ４２−８、ＡＡＶ４２−１０、ＡＡＶ４２−１１、ＡＡＶ４２−１２、ＡＡＶ４２−１３、ＡＡＶ４２−１５、ＡＡＶ４２−ａａ、ＡＡＶ４３−１、ＡＡＶ４３−１２、ＡＡＶ４３−２０、ＡＡＶ４３−２１、ＡＡＶ４３−２３、ＡＡＶ４３−２５、ＡＡＶ４３−５、ＡＡＶ４４．１、ＡＡＶ４４．２、ＡＡＶ４４．５、ＡＡＶ２２３．１、ＡＡＶ２２３．２、ＡＡＶ２２３．４、ＡＡＶ２２３．５、ＡＡＶ２２３．６、ＡＡＶ２２３．７、ＡＡＶ１−７／ｒｈ．４８、ＡＡＶ１−８／ｒｈ．４９、ＡＡＶ２−１５／ｒｈ．６２、ＡＡＶ２−３／ｒｈ．６１、ＡＡＶ２−４／ｒｈ．５０、ＡＡＶ２−５／ｒｈ．５１、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．６、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．９、ＡＡＶ３−９／ｒｈ．５２、ＡＡＶ３−１１／ｒｈ．５３、ＡＡＶ４−８／ｒ１１．６４、ＡＡＶ４−９／ｒｈ．５４、ＡＡＶ４−１９／ｒｈ．５５、ＡＡＶ５−３／ｒｈ．５７、ＡＡＶ５−２２／ｒｈ．５８、ＡＡＶ７．３／ｈｕ．７、ＡＡＶ１６．８／ｈｕ．１０、ＡＡＶ１６．１２���ｈｕ．１１、ＡＡＶ２９．３／ｂｂ．１、ＡＡＶ２９．５／ｂｂ．２、ＡＡＶ１０６．１／ｈｕ．３７、ＡＡＶ１１４．３／ｈｕ．４０、ＡＡＶ１２７．２／ｈｕ．４１、ＡＡＶ１２７．５／ｈｕ．４２、ＡＡＶ１２８．３／ｈｕ．４４、ＡＡＶ１３０．４／ｈｕ．４８、ＡＡＶ１４５．１／ｈｕ．５３、ＡＡＶ１４５．５／ｈｕ．５４、ＡＡＶ１４５．６／ｈｕ．５５、ＡＡＶ１６１．１０／ｈｕ．６０、ＡＡＶ１６１．６／ｈｕ．６１、ＡＡＶ３３．１２／ｈｕ．１７、ＡＡＶ３３．４／ｈｕ．１５、ＡＡＶ３３．８／ｈｕ．１６、ＡＡＶ５２／ｈｕ．１９、ＡＡＶ５２．１／ｈｕ．２０、ＡＡＶ５８．２／ｈｕ．２５、ＡＡＶＡ３．３、ＡＡＶＡ３．４、ＡＡＶＡ３．５、ＡＡＶＡ３．７、ＡＡＶＣ１、ＡＡＶＣ２、ＡＡＶＣ５、ＡＡＶ−ＤＪ、ＡＡＶ−ＤＪ８、ＡＡＶＦ３、ＡＡＶＦ５、ＡＡＶＨ２、ＡＡＶｒｈ．７２、ＡＡＶｈｕ．８、ＡＡＶｒｈ．６８、ＡＡＶｒｈ．７０、ＡＡＶｐｉ．１、ＡＡＶｐｉ．３、ＡＡＶｐｉ．２、ＡＡＶｒｈ．６０、ＡＡＶｒｈ．４４、ＡＡＶｒｈ．６５、ＡＡＶｒｈ．５５、ＡＡＶｒｈ．４７、ＡＡＶｒｈ．６９、ＡＡＶｒｈ．４５、ＡＡＶｒｈ．５９、ＡＡＶｈｕ．１２、ＡＡＶＨ６、ＡＡＶＬＫ０３、ＡＡＶＨ−１／ｈｕ．１、ＡＡＶＨ−５／ｈｕ．３、ＡＡＶＬＧ−１０／ｒｈ．４０、ＡＡＶＬＧ−４／ｒｈ．３８、ＡＡＶＬＧ−９／ｈｕ．３９、ＡＡＶＮ７２１−８／ｒｈ．４３、ＡＡＶＣｈ．５、ＡＡＶＣｈ．５Ｒ１、ＡＡＶｃｙ．２、ＡＡＶｃｙ．３、ＡＡＶｃｙ．４、ＡＡＶｃｙ．５、ＡＡＶＣｙ．５Ｒ１、ＡＡＶＣｙ．５Ｒ２、ＡＡＶＣｙ．５Ｒ３、ＡＡＶＣｙ．５Ｒ４、ＡＡＶｃｙ．６、ＡＡＶｈｕ．１、ＡＡＶｈｕ．２、ＡＡＶｈｕ．３、ＡＡＶｈｕ．４、ＡＡＶｈｕ．５、ＡＡＶｈｕ．６、ＡＡＶｈｕ．７、ＡＡＶｈｕ．９、ＡＡＶｈｕ．１０、ＡＡＶｈｕ．１１、ＡＡＶｈｕ．１３、ＡＡＶｈｕ．１５、ＡＡＶｈｕ．１６、ＡＡＶｈｕ．１７、ＡＡＶｈｕ．１８、ＡＡＶｈｕ．２０、ＡＡＶｈｕ．２１、ＡＡＶｈｕ．２２、ＡＡＶｈｕ．２３．２、ＡＡＶｈｕ．２４、ＡＡＶｈｕ．２５、ＡＡＶｈｕ．２７、ＡＡＶｈｕ．２８、ＡＡＶｈｕ．２９、ＡＡＶｈｕ．２９Ｒ、ＡＡＶｈｕ．３１、ＡＡＶｈｕ．３２、ＡＡＶｈｕ．３４、ＡＡＶｈｕ．３５、ＡＡＶｈｕ．３７、ＡＡＶｈｕ．３９、ＡＡＶｈｕ．４０、ＡＡＶｈｕ．４１、ＡＡＶｈｕ．４２、ＡＡＶｈｕ．４３、ＡＡＶｈｕ．４４、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ１、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ２、ＡＡＶｈｕ．４４Ｒ３、ＡＡＶｈｕ．４５、ＡＡＶｈｕ．４６、ＡＡＶｈｕ．４７、ＡＡＶｈｕ．４８、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ１、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ２、ＡＡＶｈｕ．４８Ｒ３、ＡＡＶｈｕ．４９、ＡＡＶｈｕ．５１、ＡＡＶｈｕ．５２、ＡＡＶｈｕ．５４、ＡＡＶｈｕ．５５、ＡＡＶｈｕ．５６、ＡＡＶｈｕ．５７、ＡＡＶｈｕ．５８、ＡＡＶｈｕ．６０、ＡＡＶｈｕ．６１、ＡＡＶｈｕ．６３、ＡＡＶｈｕ．６４、ＡＡＶｈｕ．６６、ＡＡＶｈｕ．６７、ＡＡＶｈｕ．１４／９、ＡＡＶｈｕ．ｔ  １９、ＡＡＶｒｈ．２、ＡＡＶｒｈ．２Ｒ、ＡＡＶｒｈ．８、ＡＡＶｒｈ．８Ｒ、ＡＡＶｒｈ．１０、ＡＡＶｒｈ．１２、ＡＡＶｒｈ．１３、ＡＡＶｒｈ．１３Ｒ、ＡＡＶｒｈ．１４、ＡＡＶｒｈ．１７、ＡＡＶｒｈ．１��、ＡＡＶｒｈ．１９、ＡＡＶｒｈ．２０、ＡＡＶｒｈ．２１、ＡＡＶｒｈ．２２、ＡＡＶｒｈ．２３、ＡＡＶｒｈ．２４、ＡＡＶｒｈ．２５、ＡＡＶｒｈ．３１、ＡＡＶｒｈ．３２、ＡＡＶｒｈ．３３、ＡＡＶｒｈ．３４、ＡＡＶｒｈ．３５、ＡＡＶｒｈ．３６、ＡＡＶｒｈ．３７、ＡＡＶｒｈ．３７Ｒ２、ＡＡＶｒｈ．３８、ＡＡＶｒｈ．３９、ＡＡＶｒｈ．４０、ＡＡＶｒｈ．４６、ＡＡＶｒｈ．４８、ＡＡＶｒｈ．４８．１、ＡＡＶｒｈ．４８．１．２、ＡＡＶｒｈ．４８．２、ＡＡＶｒｈ．４９、ＡＡＶｒｈ．５１、ＡＡＶｒｈ．５２、ＡＡＶｒｈ．５３、ＡＡＶｒｈ．５４、ＡＡＶｒｈ．５６、ＡＡＶｒｈ．５７、ＡＡＶｒｈ．５８、ＡＡＶｒｈ．６１、ＡＡＶｒｈ．６４、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ１、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ２、ＡＡＶｒｈ．６７、ＡＡＶｒｈ．７３、ＡＡＶｒｈ．７４、ＡＡＶｒｈ８Ｒ、ＡＡＶｒｈ８Ｒ  Ａ５８６Ｒ突然変異体、ＡＡＶｒｈ８Ｒ  Ｒ５３３Ａ突然変異体、ＡＡＡＶ、ＢＡＡＶ、ヤギＡＡＶ、ウシＡＡＶ、ＡＡＶｈＥ１．１、ＡＡＶｈＥｒ１．５、ＡＡＶｈＥＲ１．１４、ＡＡＶｈＥｒ１．８、ＡＡＶｈＥｒ１．１６、ＡＡＶｈＥｒ１．１８、ＡＡＶｈＥｒ１．３５、ＡＡＶｈＥｒ１．７、ＡＡＶｈＥｒ１．３６、ＡＡＶｈＥｒ２．２９、ＡＡＶｈＥｒ２．４、ＡＡＶｈＥｒ２．１６、ＡＡＶｈＥｒ２．３０、ＡＡＶｈＥｒ２．３１、ＡＡＶｈＥｒ２．３６、ＡＡＶｈＥＲ１．２３、ＡＡＶｈＥｒ３．１、ＡＡＶ２．５Ｔ、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ、ＡＡＶ−ＬＫ０１、ＡＡＶ−ＬＫ０２、ＡＡＶ−ＬＫ０３、ＡＡＶ−ＬＫ０４、ＡＡＶ−ＬＫ０５、ＡＡＶ−ＬＫ０６、ＡＡＶ−ＬＫ０７、ＡＡＶ−ＬＫ０８、ＡＡＶ−ＬＫ０９、ＡＡＶ−ＬＫ１０、ＡＡＶ−ＬＫ１１、ＡＡＶ−ＬＫ１２、ＡＡＶ−ＬＫ１３、ＡＡＶ−ＬＫ１４、ＡＡＶ−ＬＫ１５、ＡＡＶ−ＬＫ１６、ＡＡＶ−ＬＫ１７、ＡＡＶ−ＬＫ１８、ＡＡＶ−ＬＫ１９、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ２、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ４、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ６、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ７、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ８、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ１１、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ１２、ＡＡＶ−２−ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡ−１０１、ＡＡＶ−８ｈ、ＡＡＶ−８ｂ、ＡＡＶ−ｈ、ＡＡＶ−ｂ、ＡＡＶ  ＳＭ  １０−２、ＡＡＶシャッフル１００−１、ＡＡＶシャッフル１００−３、ＡＡＶシャッフル１００−７、ＡＡＶシャッフル１０−２、ＡＡＶシャッフル１０−６、ＡＡＶシャッフル１０−８、ＡＡＶシャッフル１００−２、ＡＡＶ  ＳＭ  １０−１、ＡＡＶ  ＳＭ  １０−８、ＡＡＶ  ＳＭ  １００−３、ＡＡＶ  ＳＭ  １００−１０、ＢＮＰ６１  ＡＡＶ、ＢＮＰ６２  ＡＡＶ、ＢＮＰ６３  ＡＡＶ、ＡＡＶｒｈ．５０、ＡＡＶｒｈ．４３、ＡＡＶｒｈ．６２、ＡＡＶｒｈ．４８、ＡＡＶｈｕ．１９、ＡＡＶｈｕ．１１、ＡＡＶｈｕ．５３、ＡＡＶ４−８／ｒｈ．６４、ＡＡＶＬＧ−９／ｈｕ．３９、ＡＡＶ５４．５／ｈｕ．２３、ＡＡＶ５４．２／ｈｕ．２２、ＡＡＶ５４．７／ｈｕ．２４、ＡＡＶ５４．１／ｈｕ．２１、ＡＡＶ５４．４Ｒ／ｈｕ．２７、ＡＡＶ４６．２／ｈｕ．２８、ＡＡＶ４６．６／ｈｕ．２９、ＡＡＶ１２８．１／ｈｕ．４３、トゥルータイプＡＡＶ（ｔｔＡＡＶ）、ＵＰＥＮＮ  ＡＡＶ  １０、ジャパニーズＡＡＶ１０血清型、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．１、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．１０、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．２、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．３、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．４、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．５、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．７、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．８、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｂ７．３、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｂ７．４、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ１、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ２、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ３、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ４、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ５、ＡＡＶ  ＣＢｒ−ｅ５、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ６、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ７、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ８、ＡＡＶ  ＣＨｔ−１、ＡＡＶ  ＣＨｔ−２、ＡＡＶ  ＣＨｔ−３、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．１、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．１０、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．５、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．６、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．７、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．８、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ１、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ２、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ５、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ６、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ８、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ９、ＡＡＶ  ＣＫｄ−１、ＡＡＶ  ＣＫｄ−１０、ＡＡＶ  ＣＫｄ−２、ＡＡＶ  ＣＫｄ−３、ＡＡＶ  ＣＫｄ−４、ＡＡＶ  ＣＫｄ−６、ＡＡＶ  ＣＫｄ−７、ＡＡＶ  ＣＫｄ−８、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ１、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ２、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ３、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ４、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ５、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ６、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ７、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ８、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ１、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ２、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ３、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ４、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ５、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ６、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｎ３、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｎ４、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｎ９、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ１、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ２、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ３、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ４、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ５、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ６、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ７、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ８、ＡＡＶ  ＣＬｖ−１、ＡＡＶ  ＣＬｖ１−１、ＡＡＶ  Ｃｌｖ１−１０、ＡＡＶ  ＣＬｖ１−２、ＡＡＶ  ＣＬｖ−１２、ＡＡＶ  ＣＬｖ１−３、ＡＡＶ  ＣＬｖ−１３、ＡＡＶ  ＣＬｖ１−４、ＡＡＶ  Ｃｌｖ１−７、ＡＡＶ  Ｃｌｖ１−８、ＡＡＶ  Ｃｌｖ１−９、ＡＡＶ  ＣＬｖ−２、ＡＡＶ  ＣＬｖ−３、ＡＡＶ  ＣＬｖ−４、ＡＡＶ  ＣＬｖ−６、ＡＡＶ  ＣＬｖ−８、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ１、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ２、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ３、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ４、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ５、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ６、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ７、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ８、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｅ１、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｋ１、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｋ３、Ａ
ＡＶ  ＣＬｖ−Ｋ６、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｌ４、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｌ５、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｌ６、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ１、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ１１、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ２、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ５、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ６、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ７、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ８、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ９、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ１、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ２、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ３、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ４、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ５、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ６、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ７、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ８、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ９、ＡＡＶ  ＣＳｐ−１、ＡＡＶ  ＣＳｐ−１０、ＡＡＶ  ＣＳｐ−１１、ＡＡＶ  ＣＳｐ−２、ＡＡＶ  ＣＳｐ−３、ＡＡＶ  ＣＳｐ−４、ＡＡＶ  ＣＳｐ−６、ＡＡＶ  ＣＳｐ−７、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．１０、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．２、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．４、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．５、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．６、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．７、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．８、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．９、ＡＡＶ  ＣＳｐ−９、ＡＡＶ．ｈｕ．４８Ｒ３、ＡＡＶ．ＶＲ−３５５、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶＦ１／ＨＳＣ１、ＡＡＶＦ１１／ＨＳＣ１１、ＡＡＶＦ１２／ＨＳＣ１２、ＡＡＶＦ１３／ＨＳＣ１３、ＡＡＶＦ１４／ＨＳＣ１４、ＡＡＶＦ１５／ＨＳＣ１５、ＡＡＶＦ１６／ＨＳＣ１６、ＡＡＶＦ１７／ＨＳＣ１７、ＡＡＶＦ２／ＨＳＣ２、ＡＡＶＦ３／ＨＳＣ３、ＡＡＶＦ４／ＨＳＣ４、ＡＡＶＦ５／ＨＳＣ５、ＡＡＶＦ６／ＨＳＣ６、ＡＡＶＦ７／ＨＳＣ７、ＡＡＶＦ８／ＨＳＣ８、および／またはＡＡＶＦ９／ＨＳＣ９、ならびにそれらのバリアントまたはハイブリッド／キメラ／組合せから選択される血清型を利用してもよく、またはそれをベースとしてもよく、あるいは、それらから選択されるペプチドを含んでもよい。
【００５０】
一部の実施形態において、本明細書で開示される組成物において使用されるＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号６および６４）、ＡＡＶ２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号７および７０）、ＡＡＶ３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号８および７１）、ＡＡＶ４（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号６３）、ＡＡＶ５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号１１４）、ＡＡＶ６（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号６５）、ＡＡＶ７（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号１〜３）、ＡＡＶ８（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号４および９５）、ＡＡＶ９（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号５および１００）、ＡＡＶ１０（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号１１７）、ＡＡＶ１１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号１１８）、ＡＡＶ１２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号１１９）、ＡＡＶｒｈ１０（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書の配列番号８１のアミノ酸１〜７３８）、ＡＡＶ１６．３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１０）、ＡＡＶ２９．３／ｂｂ．１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１１）、ＡＡＶ２９．４（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１２）、ＡＡＶ２９．５／ｂｂ．２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１３）、ＡＡＶ１．３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１４）、ＡＡＶ１３．３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１５）、ＡＡＶ２４．１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１６）、ＡＡＶ２７．３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１７）、ＡＡＶ７．２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１８）、ＡＡＶＣ１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号１９）、ＡＡＶＣ３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２０）、ＡＡＶＣ５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２１）、ＡＡＶＦ１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２２）、ＡＡＶＦ３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２３）、ＡＡＶＦ５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２４）、ＡＡＶＨ６（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２５）、ＡＡＶＨ２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２６）、ＡＡＶ４２−８（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２７）、ＡＡＶ４２−１５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２８）、ＡＡＶ４２−５ｂ（米国特���出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号２９）、ＡＡＶ４２−１ｂ（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３０）、ＡＡＶ４２−１３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３１）、ＡＡＶ４２−３ａ（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３２）、ＡＡＶ４２−４（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３３）、ＡＡＶ４２−５ａ（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３４）、ＡＡＶ４２−１０（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３５）、ＡＡＶ４２−３ｂ（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３６）、ＡＡＶ４２−１１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３７）、ＡＡＶ４２−６ｂ（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３８）、ＡＡＶ４３−１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号３９）、ＡＡＶ４３−５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４０）、ＡＡＶ４３−１２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４１）、ＡＡＶ４３−２０（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４２）、ＡＡＶ４３−２１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４３）、ＡＡＶ４３−２３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４４）、ＡＡＶ４３−２５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４５）、ＡＡＶ４４．１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４６）、ＡＡＶ４４．５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４７）、ＡＡＶ２２３．１（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４８）、ＡＡＶ２２３．２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号４９）、ＡＡＶ２２３．４（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５０）、ＡＡＶ２２３．５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５１）、ＡＡＶ２２３．６（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５２）、ＡＡＶ２２３．７（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５３）、ＡＡＶＡ３．４（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５４）、ＡＡＶＡ３．５（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５５）、ＡＡＶＡ３．７（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５６）、ＡＡＶＡ３．３（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５７）、ＡＡＶ４２．１２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５８）、ＡＡＶ４４．２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号５９）、ＡＡＶ４２−２（米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書  配列番号９）など、米国特許出願公開第２００３０１３８７７２号明細書（その内容は全体として本願明細書に援用される）に記載される配列、またはそれらのバリアントもしくはハイブリッド／キメラ／組合せであってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００５１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ２（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号７および２３）、ｒｈ２０（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１）、ｒｈ３２／３３（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号２）、ｒｈ３９（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号３、２０および３６）、ｒｈ４６（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４および２２）、ｒｈ７３（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号５）、ｒｈ７４（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号６）、ＡＡＶ６．１（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号２９）、ｒｈ．８（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４１）、ｒｈ．４８．１（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４４）、ｈｕ．４４（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４５）、ｈｕ．２９（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４２）、ｈｕ．４８（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号３８）、ｒｈ５４（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４９）、ＡＡＶ２（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号７）、ｃｙ．５（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号８および２４）、ｒｈ．１０（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号９および２５）、ｒｈ．１３（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１０および２６）、ＡＡＶ１（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１１および２７）、ＡＡＶ３（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１２および２８）、ＡＡＶ６（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１３および２９）、ＡＡＶ７（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１４および３０）、ＡＡＶ８（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１５および３１）、ｈｕ．１３（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１６および３２）、ｈｕ．２６（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１７および３３）、ｈｕ．３７（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１８および３４）、ｈｕ．５３（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号１９および３５）、ｒｈ．４３（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号２１および３７）、ｒｈ２（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号３９）、ｒｈ．３７（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４０）、ｒｈ．６４（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４３）、ｒｈ．４８（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４４）、ｃｈ．５（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４６）、ｒｈ．６７（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４７）、ｒｈ．５８（米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書の配列番号４８）、またはそれらのバリアントなど、限定はされないが、Ｃｙ５Ｒ１、Ｃｙ５Ｒ２、Ｃｙ５Ｒ３、Ｃｙ５Ｒ４、ｒｈ．１３Ｒ、ｒｈ．３７Ｒ２、ｒｈ．２Ｒ、ｒｈ．８Ｒ、ｒｈ．４８．１、ｒｈ．４８．２、ｒｈ．４８．１．２、ｈｕ．４４Ｒ１、ｈｕ．４４Ｒ２、ｈｕ．４４Ｒ３、ｈｕ．２９Ｒ、ｃｈ．５Ｒ１、ｒｈ６４Ｒ１、ｒｈ６４Ｒ２、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ６．１、ＡＡＶ６．１２、ｈｕ．４８Ｒ１、ｈｕ．４８Ｒ２、もしくはｈｕ．４８Ｒ３など、米国特許出願公開第２０１５０１５９１７３号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列、またはそれらのバリアントもしくはハイブリッド／キメラ／組合せであってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００５２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ９（米国特許第７１９８９５１号明細書の配列番号１〜３）、ＡＡＶ２（米国特許第７１９８９５１号明細書の配列番号４）、ＡＡＶ１（米国特許第７１９８９５１号明細書の配列番号５）、ＡＡＶ３（米国特許第７１９８９５１号明細書の配列番号６）もしくはＡＡＶ８（米国特許第７１９８９５１号明細書の配列番号７）など、米国特許第７１９８９５１号明細書（その内容は全体として本願明細書に援用される）に記載される配列、またはそれらのバリアントもしくはハイブリッド／キメラ／組合せであってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００５３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ９．９、ＡＡＶ９．１１、ＡＡＶ９．１３、ＡＡＶ９．１６、ＡＡＶ９．２４、ＡＡＶ９．４５、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ９．６１、ＡＡＶ９．６８、もしくはＡＡＶ９．８４など、Ｎ・プリチャーラ（Ｎ  Ｐｕｌｉｃｈｅｒｌａ）ら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、第１９巻、第６号、ｐ．１０７０〜１０７８、２０１１年、その内容は本明細書において全体として参照により援用される）により記載される通りのＡＡＶ９配列、またはそれらのバリアントであってもよい。
【００５４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ３Ｂ（米国特許第６１５６３０３号明細書の配列番号１および１０）、ＡＡＶ６（米国特許第６１５６３０３号明細書の配列番号２、７および１１）、ＡＡＶ２（米国特許第６１５６３０３号明細書の配列番号３および８）、ＡＡＶ３Ａ（米国特許第６１５６３０３号明細書の配列番号４および９）など、米国特許第６１５６３０３号明細書（その内容は全体として本願明細書に援用される）に記載される配列、またはそれらの誘導体もしくはバリアントもしくはハイブリッド／キメラ／組合せであってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００５５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ８（米国特許出願公開第２０１４０３５９７９９号明細書の配列番号１）、ＡＡＶＤＪ（米国特許出願公開第２０１４０３５９７９９号明細書の配列番号２および３）、またはそれらのバリアントなど、米国特許出願公開第２０１４０３５９７９９号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００５６】
一部の実施形態において、血清型は、グリム（Ｇｒｉｍｍ）ら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、第８２巻、第１２号、ｐ．５８８７〜５９１１、２００８年、本明細書において全体として参照により援用される）により記載される通り、ＡＡＶＤＪまたはそのバリアント、例えばＡＡＶＤＪ８（またはＡＡＶ−ＤＪ８）であってもよい。ＡＡＶＤＪ８のアミノ酸配列は、ヘパリン結合ドメイン（ＨＢＤ）を除去するのに有効な２つ以上の突然変異を含み得る。非限定的な例として、米国特許第７，５８８，７７２号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に配列番号１として記載されるＡＡＶ−ＤＪ配列は、２つの突然変異：（１）Ｒ５８７Ｑ［アミノ酸５８７のアルギニン（Ｒ；Ａｒｇ）がグルタミン（Ｑ；Ｇｌｎ）に変更される］および（２）Ｒ５９０Ｔ［アミノ酸５９０のアルギニン（Ｒ；Ａｒｇ）がスレオニン（Ｔ；Ｔｈｒ）に変更される］を含み得る。別の非限定的な例として、米国特許第７，５８８，７７２号明細書に記載されるＡＡＶ−ＤＪ配列は、３つの突然変異：（１）Ｋ４０６Ｒ［アミノ酸４０６のリシン（Ｋ；Ｌｙｓ）がアルギニン（Ｒ；Ａｒｇ）に変更される］、（２）Ｒ５８７Ｑ［アミノ酸５８７のアルギニン（Ｒ；Ａｒｇ）がグルタミン（Ｑ；Ｇｌｎ）に変更される］、および（３）Ｒ５９０Ｔ［アミノ酸５９０のアルギニン（Ｒ；Ａｒｇ）がスレオニン（Ｔ；Ｔｈｒ）に変更される］を含み得る。
【００５７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ４（国際公開第１９９８０１１２４４号パンフレットの配列番号１〜２０）など、国際公開第１９９８０１１２４４号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りのＡＡＶ４の配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００５８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、国際公開第２０１４１４４２２９号パンフレットに記載されおよび本明細書において全体として参照により援用される通りのＡＡＶ２Ｇ９を生じさせるＡＡＶ２配列における突然変異であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００５９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ３−３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２１７）、ＡＡＶ１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２１９および２０２）、ＡＡＶ１０６．１／ｈｕ．３７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０）、ＡＡＶ１１４．３／ｈｕ．４０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１１）、ＡＡＶ１２７．２／ｈｕ．４１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号６および８）、ＡＡＶ１２８．３／ｈｕ．４４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号８１）、ＡＡＶ１３０．４／ｈｕ．４８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号７８）、ＡＡＶ１４５．１／ｈｕ．５３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１７６および１７７）、ＡＡＶ１４５．６／ｈｕ．５６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１６８および１９２）、ＡＡＶ１６．１２／ｈｕ．１１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５３および５７）、ＡＡＶ１６．８／ｈｕ．１０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５６および５６）、ＡＡＶ１６１．１０／ｈｕ．６０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１７０）、ＡＡＶ１６１．６／ｈｕ．６１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１７４）、ＡＡＶ１−７／ｒｈ．４８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号３２）、ＡＡＶ１−８／ｒｈ．４９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０３および２５）、ＡＡＶ２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２１１および２２１）、ＡＡＶ２−１５／ｒｈ．６２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号３３および１１４）、ＡＡＶ２−３／ｒｈ．６１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２１）、ＡＡＶ２−４／ｒｈ．５０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２３および１０８）、ＡＡＶ２−５／ｒｈ．５１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０４および２２）、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号５および８４）、ＡＡＶ３．１／ｈｕ．９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５５および５８）、ＡＡＶ３−１１／ｒｈ．５３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１８６および１７６）、ＡＡＶ３−３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２００）、ＡＡＶ３３．１２／ｈｕ．１７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号４）、ＡＡＶ３３．４／ｈｕ．１５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号５０）、ＡＡＶ３３．８／ｈｕ．１６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号５１）、ＡＡＶ３−９／ｒｈ．５２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号９６および１８）、ＡＡＶ４−１９／ｒｈ．５５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１１７）、ＡＡＶ４−４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２０１および２１８）、ＡＡＶ４−９／ｒｈ．５４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１１６）、ＡＡＶ５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９９および２１６）、ＡＡＶ５２．１／ｈｕ．２０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号６３）、ＡＡＶ５２／ｈｕ．１９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１３３）、ＡＡＶ５−２２／ｒｈ．５８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２７）、ＡＡＶ５−３／ｒｈ．５７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０５）、ＡＡＶ５−３／ｒｈ．５７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２６）、ＡＡＶ５８．２／ｈｕ．２５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号４９）、ＡＡＶ６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２０３および２２０）、ＡＡＶ７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２２２および２１３）、ＡＡＶ７．３／ｈｕ．７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号５５）、ＡＡＶ８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号２２３および２１４）、ＡＡＶＨ−１／ｈｕ．１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号４６）、ＡＡＶＨ−５／ｈｕ．３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号４４）、ＡＡＶｈｕ．１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４４）、ＡＡＶｈｕ．１０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５６）、ＡＡＶｈｕ．１１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５３）、ＡＡＶｈｕ．１２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号５９）、ＡＡＶｈｕ．１３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１２９）、ＡＡＶｈｕ．１４／ＡＡＶ９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１２３および３）、ＡＡＶｈｕ．１５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４７）、ＡＡＶｈｕ．１６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４８）、ＡＡＶｈｕ．１７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号８３）、ＡＡＶｈｕ．１８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４９）、ＡＡＶｈｕ．１９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１３３）、ＡＡＶｈｕ．２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４３）、ＡＡＶｈｕ．２０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１３４）、ＡＡＶｈｕ．２１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１３５）、ＡＡＶｈｕ．２２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１３８）、ＡＡＶｈｕ．２３．２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１３７）、ＡＡＶｈｕ．２４（国際���開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１３６）、ＡＡＶｈｕ．２５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４６）、ＡＡＶｈｕ．２７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４０）、ＡＡＶｈｕ．２９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１３２）、ＡＡＶｈｕ．３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４５）、ＡＡＶｈｕ．３１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１２１）、ＡＡＶｈｕ．３２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１２２）、ＡＡＶｈｕ．３４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１２５）、ＡＡＶｈｕ．３５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１６４）、ＡＡＶｈｕ．３７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号８８）、ＡＡＶｈｕ．３９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０２）、ＡＡＶｈｕ．４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４１）、ＡＡＶｈｕ．４０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号８７）、ＡＡＶｈｕ．４１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号９１）、ＡＡＶｈｕ．４２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号８５）、ＡＡＶｈｕ．４３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１６０）、ＡＡＶｈｕ．４４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４４）、ＡＡＶｈｕ．４５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１２７）、ＡＡＶｈｕ．４６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５９）、ＡＡＶｈｕ．４７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１２８）、ＡＡＶｈｕ．４８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５７）、ＡＡＶｈｕ．４９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１８９）、ＡＡＶｈｕ．５１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９０）、ＡＡＶｈｕ．５２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９１）、ＡＡＶｈｕ．５３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１８６）、ＡＡＶｈｕ．５４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１８８）、ＡＡＶｈｕ．５５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１８７）、ＡＡＶｈｕ．５６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９２）、ＡＡＶｈｕ．５７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９３）、ＡＡＶｈｕ．５８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９４）、ＡＡＶｈｕ．６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号８４）、ＡＡＶｈｕ．６０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１８４）、ＡＡＶｈｕ．６１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１８５）、ＡＡＶｈｕ．６３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット���配列番号１９５）、ＡＡＶｈｕ．６４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９６）、ＡＡＶｈｕ．６６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９７）、ＡＡＶｈｕ．６７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１９８）、ＡＡＶｈｕ．７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５０）、ＡＡＶｈｕ．８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号１２）、ＡＡＶｈｕ．９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５５）、ＡＡＶＬＧ−１０／ｒｈ．４０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１４）、ＡＡＶＬＧ−４／ｒｈ．３８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号８６）、ＡＡＶＬＧ−４／ｒｈ．３８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号７）、ＡＡＶＮ７２１−８／ｒｈ．４３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１６３）、ＡＡＶＮ７２１−８／ｒｈ．４３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号４３）、ＡＡＶｐｉ．１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号２８）、ＡＡＶｐｉ．２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号３０）、ＡＡＶｐｉ．３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号２９）、ＡＡＶｒｈ．３８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号８６）、ＡＡＶｒｈ．４０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号９２）、ＡＡＶｒｈ．４３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１６３）、ＡＡＶｒｈ．４４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号３４）、ＡＡＶｒｈ．４５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号４１）、ＡＡＶｒｈ．４７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号３８）、ＡＡＶｒｈ．４８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１１５）、ＡＡＶｒｈ．４９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０３）、ＡＡＶｒｈ．５０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０８）、ＡＡＶｒｈ．５１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０４）、ＡＡＶｒｈ．５２（国際公開第２００５０３３
３２１号パンフレットの配列番号９６）、ＡＡＶｒｈ．５３（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号９７）、ＡＡＶｒｈ．５５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号３７）、ＡＡＶｒｈ．５６（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１５２）、ＡＡＶｒｈ．５７（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０５）、ＡＡＶｒｈ．５８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０６）、ＡＡＶｒｈ．５９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号４２）、ＡＡＶｒｈ．６０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号３１）、ＡＡＶｒｈ．６１（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１０７）、ＡＡＶｒｈ．６２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号１１４）、ＡＡＶｒｈ．６４（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレットの配列番号９９）、ＡＡＶｒｈ．６５（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号３５）、ＡＡＶｒｈ．６８（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号１６）、ＡＡＶｒｈ．６９（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号３９）、ＡＡＶｒｈ．７０（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号２０）、ＡＡＶｒｈ．７２（国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット  配列番号９）、またはそれらのバリアントなど、限定はされないが、ＡＡＶｃｙ．２、ＡＡＶｃｙ．３、ＡＡＶｃｙ．４、ＡＡＶｃｙ．５、ＡＡＶｃｙ．６、ＡＡＶｒｈ．１２、ＡＡＶｒｈ．１７、ＡＡＶｒｈ．１８、ＡＡＶｒｈ．１９、ＡＡＶｒｈ．２１、ＡＡＶｒｈ．２２、ＡＡＶｒｈ．２３、ＡＡＶｒｈ．２４、ＡＡＶｒｈ．２５、ＡＡＶｒｈ．２５／４２  １５、ＡＡＶｒｈ．３１、ＡＡＶｒｈ．３２、ＡＡＶｒｈ．３３、ＡＡＶｒｈ．３４、ＡＡＶｒｈ．３５、ＡＡＶｒｈ．３６、ＡＡＶｒｈ．３７、またはＡＡＶｒｈ１４を含め、国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。バリアントの非限定的な例としては、国際公開第２００５０３３３２１号パンフレット（その内容は全体として本願明細書に援用される）の配列番号１３、１５、１７、１９、２４、３６、４０、４５、４７、４８、５１、５２、５３、５４、６０、６１、６２、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７９、８０、８２、８９、９０、９３、９４、９５、９８、１００、１０１、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１８、１１９、１２０、１２４、１２６、１３１、１３９、１４２、１５１、１５４、１５８、１６１、１６２、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、２０２、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１５、２１９、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５または２３６が挙げられる。
【００６０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶｒｈ８Ｒ（国際公開第２０１５１６８６６６号パンフレットの配列番号９）、ＡＡＶｒｈ８Ｒ  Ａ５８６Ｒ突然変異体（国際公開第２０１５１６８６６６号パンフレットの配列番号１０）、ＡＡＶｒｈ８Ｒ  Ｒ５３３Ａ突然変異体（国際公開第２０１５１６８６６６号パンフレットの配列番号１１）、またはそれらのバリアントなど、国際公開第２０１５１６８６６６号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００６１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶｈＥ１．１（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号４４）、ＡＡＶｈＥｒ１．５（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号４５）、ＡＡＶｈＥＲ１．１４（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号４６）、ＡＡＶｈＥｒ１．８（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号４７）、ＡＡＶｈＥｒ１．１６（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号４８）、ＡＡＶｈＥｒ１．１８（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号４９）、ＡＡＶｈＥｒ１．３５（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５０）、ＡＡＶｈＥｒ１．７（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５１）、ＡＡＶｈＥｒ１．３６（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５２）、ＡＡＶｈＥｒ２．２９（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５３）、ＡＡＶｈＥｒ２．４（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５４）、ＡＡＶｈＥｒ２．１６（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５５）、ＡＡＶｈＥｒ２．３０（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５６）、ＡＡＶｈＥｒ２．３１（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５８）、ＡＡＶｈＥｒ２．３６（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５７）、ＡＡＶｈＥＲ１．２３（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５３）、ＡＡＶｈＥｒ３．１（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号５９）、ＡＡＶ２．５Ｔ（米国特許第９２３３１３１号明細書の配列番号４２）、またはそれらのバリアントなど、米国特許第９２３３１３１号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００６２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１）、ＡＡＶ−ＬＫ０１（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２）、ＡＡＶ−ＬＫ０２（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号３）、ＡＡＶ−ＬＫ０３（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号４）、ＡＡＶ−ＬＫ０４（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号５）、ＡＡＶ−ＬＫ０５（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号６）、ＡＡＶ−ＬＫ０６（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号７）、ＡＡＶ−ＬＫ０７（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号８）、ＡＡＶ−ＬＫ０８（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号９）、ＡＡＶ−ＬＫ０９（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１０）、ＡＡＶ−ＬＫ１０（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１１）、ＡＡＶ−ＬＫ１１（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１２）、ＡＡＶ−ＬＫ１２（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１３）、ＡＡＶ−ＬＫ１３（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１４）、ＡＡＶ−ＬＫ１４（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１５）、ＡＡＶ−ＬＫ１５（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１６）、ＡＡＶ−ＬＫ１６（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１７）、ＡＡＶ−ＬＫ１７（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１８）、ＡＡＶ−ＬＫ１８（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号１９）、ＡＡＶ−ＬＫ１９（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２０）、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ２（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２１）、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ４（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２２）、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ６（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２３）、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ７（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２４）、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ８（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２５）、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ１１（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２６）、ＡＡＶ−ＰＡＥＣ１２（米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書の配列番号２７）、またはそれらのバリアントなど、米国特許出願公開第２０１５０３７６６０７号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００６３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ−２−ｐｒｅ−ｍｉＲＮＡ−１０１（米国特許第９１６３２６１号明細書の配列番号１）、またはそのバリアントなど、米国特許第９１６３２６１号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００６４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ−８ｈ（米国特許出願公開第２０１５０３７６２４０号明細書の配列番号６）、ＡＡＶ−８ｂ（米国特許出願公開第２０１５０３７６２４０号明細書の配列番号５）、ＡＡＶ−ｈ（米国特許出願公開第２０１５０３７６２４０号明細書の配列番号２）、ＡＡＶ−ｂ（米国特許出願公開第２０１５０３７６２４０号明細書の配列番号１）、またはそれらのバリアントなど、米国特許出願公開第２０１５０３７６２４０号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。
【００６５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ  ＳＭ  １０−２（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号２２）、ＡＡＶシャッフル１００−１（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号２３）、ＡＡＶシャッフル１００−３（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号２４）、ＡＡＶシャッフル１００−７（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号２５）、ＡＡＶシャッフル１０−２（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号３４）、ＡＡＶシャッフル１０−６（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号３５）、ＡＡＶシャッフル１０−８（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号３６）、ＡＡＶシャッフル１００−２（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号３７）、ＡＡＶ  ＳＭ  １０−１（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号３８）、ＡＡＶ  ＳＭ  １０−８（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号３９）、ＡＡＶ  ＳＭ  １００−３（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号４０）、ＡＡＶ  ＳＭ  １００−１０（米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書の配列番号４１）、またはそれらのバリアントなど、米国特許出願公開第２０１６００１７２９５号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。
【００６６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＢＮＰ６１  ＡＡＶ（米国特許出願公開第２０１５０２３８５５０号明細書の配列番号１）、ＢＮＰ６２  ＡＡＶ（米国特許出願公開第２０１５０２３８５５０号明細書の配列番号３）、ＢＮＰ６３  ＡＡＶ（米国特許出願公開第２０１５０２３８５５０号明細書の配列番号４）、またはそれらのバリアントなど、米国特許出願公開第２０１５０２３８５５０号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００６７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶｒｈ．５０（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号１０８）、ＡＡＶｒｈ．４３（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号１６３）、ＡＡＶｒｈ．６２（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号１１４）、ＡＡＶｒｈ．４８（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号１１５）、ＡＡＶｈｕ．１９（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号１３３）、ＡＡＶｈｕ．１１（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号１５３）、ＡＡＶｈｕ．５３（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号１８６）、ＡＡＶ４−８／ｒｈ．６４（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号１５）、ＡＡＶＬＧ−９／ｈｕ．３９（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号２４）、ＡＡＶ５４．５／ｈｕ．２３（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号６０）、ＡＡＶ５４．２／ｈｕ．２２（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号６７）、ＡＡＶ５４．７／ｈｕ．２４（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号６６）、ＡＡＶ５４．１／ｈｕ．２１（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号６５）、ＡＡＶ５４．４Ｒ／ｈｕ．２７（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号６４）、ＡＡＶ４６．２／ｈｕ．２８（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号６８）、ＡＡＶ４６．６／ｈｕ．２９（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号６９）、ＡＡＶ１２８．１／ｈｕ．４３（米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書の配列番号８０）、またはそれらのバリアントなど、米国特許出願公開第２０１５０３１５６１２号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００６８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、トゥルータイプＡＡＶ（ｔｔＡＡＶ）（国際公開第２０１５１２１５０１号パンフレットの配列番号２）、「ユーペンＡＡＶ１０」（国際公開第２０１５１２１５０１号パンフレットの配列番号８）、「ジャパニーズＡＡＶ１０」（国際公開第２０１５１２１５０１号パンフレットの配列番号９）、またはそれらのバリアントなど、国際公開第２０１５１２１５０１号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００６９】
本開示によれば、ＡＡＶカプシド血清型の選択または使用は様々な種からであってよい。一実施形態において、ＡＡＶは鳥類ＡＡＶ（ＡＡＡＶ）であってもよい。ＡＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＡＶ（米国特許第９２３８８００号明細書の配列番号１、２、４、６、８、１０、１２、もしくは１４）、またはそのバリアントなど、米国特許第９２３８８００号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。
【００７０】
一実施形態において、ＡＡＶはウシＡＡＶ（ＢＡＡＶ）であってもよい。ＢＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＢＡＡＶ（米国特許第９１９３７６９号明細書の配列番号１および６）、またはそのバリアントなど、米国特許第９，１９３，７６９号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。ＢＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＢＡＡＶ（米国特許第７４２７３９６号明細書の配列番号５および６）、またはそのバリアントなど、米国特許第７４２７３９６号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。
【００７１】
一部の実施形態において、ＡＡＶはヤギＡＡＶであってもよい。ヤギＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ヤギＡＡＶ（米国特許第７４２７３９６号明細書の配列番号３）、またはそのバリアントなど、米国特許第７４２７３９６号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。
【００７２】
一部の実施形態において、ＡＡＶは２つ以上の親血清型からハイブリッドＡＡＶとして操作されてもよい。一実施形態において、このＡＡＶは、ＡＡＶ２およびＡＡＶ９からの配列を含むＡＡＶ２Ｇ９であってもよい。ＡＡＶ２Ｇ９  ＡＡＶ血清型は、米国特許出願公開第２０１６００１７００５号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。
【００７３】
一実施形態において、ＡＡＶは、プリチャーラ（Ｐｕｌｉｃｈｅｒｌａ）ら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、第１９巻、第６号、ｐ．１０７０〜１０７８、２０１１年、その内容は本明細書において全体として参照により援用される）により記載される通りのアミノ酸３９０〜６２７（ＶＰ１の付番）に突然変異を有するＡＡＶ９カプシドライブラリによって生成された血清型であってもよい。血清型ならびに対応するヌクレオチドおよびアミノ酸の置換は、限定はされないが、ＡＡＶ９．１（Ｇ１５９４Ｃ；Ｄ５３２Ｈ）、ＡＡＶ６．２（Ｔ１４１８ＡおよびＴ１４３６Ｘ；Ｖ４７３ＤおよびＩ４７９Ｋ）、ＡＡＶ９．３（Ｔ１２３８Ａ；Ｆ４１３Ｙ）、ＡＡＶ９．４（Ｔ１２５０ＣおよびＡ１６１７Ｔ；Ｆ４１７Ｓ）、ＡＡＶ９．５（Ａ１２３５Ｇ、Ａ１３１４Ｔ、Ａ１６４２Ｇ、Ｃ１７６０Ｔ；Ｑ４１２Ｒ、Ｔ５４８Ａ、Ａ５８７Ｖ）、ＡＡＶ９．６（Ｔ１２３１Ａ；Ｆ４１１Ｉ）、ＡＡＶ９．９（Ｇ１２０３Ａ、Ｇ１７８５Ｔ；Ｗ５９５Ｃ）、ＡＡＶ９．１０（Ａ１５００Ｇ、Ｔ１６７６Ｃ；Ｍ５５９Ｔ）、ＡＡＶ９．１１（Ａ１４２５Ｔ、Ａ１７０２Ｃ、Ａ１７６９Ｔ；Ｔ５６８Ｐ、Ｑ５９０Ｌ）、ＡＡＶ９．１３（Ａ１３６９Ｃ、Ａ１７２０Ｔ；Ｎ４５７Ｈ、Ｔ５７４Ｓ）、ＡＡＶ９．１４（Ｔ１３４０Ａ、Ｔ１３６２Ｃ、Ｔ１５６０Ｃ、Ｇ１７１３Ａ；Ｌ４４７Ｈ）、ＡＡＶ９．１６（Ａ１７７５Ｔ；Ｑ５９２Ｌ）、ＡＡＶ９．２４（Ｔ１５０７Ｃ、Ｔ１５２１Ｇ；Ｗ５０３Ｒ）、ＡＡＶ９．２６（Ａ１３３７Ｇ、Ａ１７６９Ｃ；Ｙ４４６Ｃ、Ｑ５９０Ｐ）、ＡＡＶ９．３３（Ａ１６６７Ｃ；Ｄ５５６Ａ）、ＡＡＶ９．３４（Ａ１５３４Ｇ、Ｃ１７９４Ｔ；Ｎ５１２Ｄ）、ＡＡＶ９．３５（Ａ１２８９Ｔ、Ｔ１４５０Ａ、Ｃ１４９４Ｔ、Ａ１５１５Ｔ、Ｃ１７９４Ａ、Ｇ１８１６Ａ；Ｑ４３０Ｌ、Ｙ４８４Ｎ、Ｎ９８Ｋ、Ｖ６０６Ｉ）、ＡＡＶ９．４０（Ａ１６９４Ｔ、Ｅ５６５Ｖ）、ＡＡＶ９．４１（Ａ１３４８Ｔ、Ｔ１３６２Ｃ；Ｔ４５０Ｓ）、ＡＡＶ９．４４（Ａ１６８４Ｃ、Ａ１７０１Ｔ、Ａ１７３７Ｇ；Ｎ５６２Ｈ、Ｋ５６７Ｎ）、ＡＡＶ９．４５（Ａ１４９２Ｔ、Ｃ１８０４Ｔ；Ｎ４９８Ｙ、Ｌ６０２Ｆ）、ＡＡＶ９．４６（Ｇ１４４１Ｃ、Ｔ１５２５Ｃ、Ｔ１５４９Ｇ；Ｇ４８１Ｒ、Ｗ５０９Ｒ、Ｌ５１７Ｖ）、９．４７（Ｇ１２４１Ａ、Ｇ１３５８Ａ、Ａ１６６９Ｇ、Ｃ１７４５Ｔ；Ｓ４１４Ｎ、Ｇ４５３Ｄ、Ｋ５５７Ｅ、Ｔ５８２Ｉ）、ＡＡＶ９．４８（Ｃ１４４５Ｔ、Ａ１７３６Ｔ；Ｐ４８２Ｌ、Ｑ５７９Ｌ）、ＡＡＶ９．５０（Ａ１６３８Ｔ、Ｃ１６８３Ｔ、Ｔ１８０５Ａ；Ｑ５４６Ｈ、Ｌ６０２Ｈ）、ＡＡＶ９．５３（Ｇ１３０１Ａ、Ａ１４０５Ｃ、Ｃ１６６４Ｔ、Ｇ１８１１Ｔ；Ｒ１３４Ｑ、Ｓ４６９Ｒ、Ａ５５５Ｖ、Ｇ６０４Ｖ）、ＡＡＶ９．５４（Ｃ１５３１Ａ、Ｔ１６０９Ａ；Ｌ５１１Ｉ、Ｌ５３７Ｍ）、ＡＡＶ９．５５（Ｔ１６０５Ａ；Ｆ５３５Ｌ）、ＡＡＶ９．５８（Ｃ１４７５Ｔ、Ｃ１５７９Ａ；Ｔ４９２Ｉ、Ｈ５２７Ｎ）、ＡＡＶ．５９（Ｔ１３３６Ｃ；Ｙ４４６Ｈ）、ＡＡＶ９．６１（Ａ１４９３Ｔ；Ｎ４９８Ｉ）、ＡＡＶ９．６４（Ｃ１５３１Ａ、Ａ１６１７Ｔ；Ｌ５１１Ｉ）、ＡＡＶ９．６５（Ｃ１３３５Ｔ、Ｔ１５３０Ｃ、Ｃ１５６８Ａ；Ａ５２３Ｄ）、Ａ���Ｖ９．６８（Ｃ１５１０Ａ；Ｐ５０４Ｔ）、ＡＡＶ９．８０（Ｇ１４４１Ａ；Ｇ４８１Ｒ）、ＡＡＶ９．８３（Ｃ１４０２Ａ、Ａ１５００Ｔ；Ｐ４６８Ｔ、Ｅ５００Ｄ）、ＡＡＶ９．８７（Ｔ１４６４Ｃ、Ｔ１４６８Ｃ；Ｓ４９０Ｐ）、ＡＡＶ９．９０（Ａ１１９６Ｔ；Ｙ３９９Ｆ）、ＡＡＶ９．９１（Ｔ１３１６Ｇ、Ａ１５８３Ｔ、Ｃ１７８２Ｇ、Ｔ１８０６Ｃ；Ｌ４３９Ｒ、Ｋ５２８Ｉ）、ＡＡＶ９．９３（Ａ１２７３Ｇ、Ａ１４２１Ｇ、Ａ１６３８Ｃ、Ｃ１７１２Ｔ、Ｇ１７３２Ａ、Ａ１７４４Ｔ、Ａ１８３２Ｔ；Ｓ４２５Ｇ、Ｑ４７４Ｒ、Ｑ５４６Ｈ、Ｐ５７１Ｌ、Ｇ５７８Ｒ、Ｔ５８２Ｓ、Ｄ６１１Ｖ）、ＡＡＶ９．９４（Ａ１６７５Ｔ；Ｍ５５９Ｌ）、またはＡＡＶ９．９５（Ｔ１６０５Ａ；Ｆ５３５Ｌ）であってもよい。
【００７４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶＦ１／ＨＳＣ１（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号２および２０）、ＡＡＶＦ２／ＨＳＣ２（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号３および２１）、ＡＡＶＦ３／ＨＳＣ３（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号５および２２）、ＡＡＶＦ４／ＨＳＣ４（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号６および２３）、ＡＡＶＦ５／ＨＳＣ５（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号１１および２５）、ＡＡＶＦ６／ＨＳＣ６（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号７および２４）、ＡＡＶＦ７／ＨＳＣ７（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号８および２７）、ＡＡＶＦ８／ＨＳＣ８（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号９および２８）、ＡＡＶＦ９／ＨＳＣ９（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号１０および２９）、ＡＡＶＦ１１／ＨＳＣ１１（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号４および２６）、ＡＡＶＦ１２／ＨＳＣ１２（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号１２および３０）、ＡＡＶＦ１３／ＨＳＣ１３（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号１４および３１）、ＡＡＶＦ１４／ＨＳＣ１４（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号１５および３２）、ＡＡＶＦ１５／ＨＳＣ１５（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号１６および３３）、ＡＡＶＦ１６／ＨＳＣ１６（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号１７および３４）、ＡＡＶＦ１７／ＨＳＣ１７（国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレットの配列番号１３および３５）、またはそれらのバリアントもしくは誘導体など、国際公開第２０１６０４９２３０号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００７５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１３および８７）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１４および８８）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１５および８９）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１６および９０）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ５（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７および９１）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−ｅ５（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１８および９２）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１９および９３）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ７（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２０および９４）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｅ８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２１および９５）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２２および９６）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２３および９７）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２４および９８）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２５および９９）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ５（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２６および１００）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２７および１０１）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ７（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２８および１０２）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｄ８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号２９および１０３）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｅ１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１３および８７）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３０および１０４）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３１および１０５）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３２および１０６）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３３および１０７）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ５（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３４および１０８）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３５および１０９）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ７（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３６および１１０）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３７および１１１）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｒ９（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３８および１１２）、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３９および１１３）、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４０および１１４）、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４１および１１５）、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４２および１１６）、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ５（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４３および１１７）、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４３および１１７）、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ７（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４４および１１８）、ＡＡＶ  ＣＬｇ−Ｆ８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４３および１１７）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４５および１１９）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−１０（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４６および１２０）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−１１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４７および１２１）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４８および１２２）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号４９および１２３）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５０および１２４）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５１および１２５）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−７（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５２および１２６）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５３および１２７）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−９（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５４および１２８）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５５および１２９）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５６および１３０）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５７および１３１）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−１０（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５８および１３２）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号５９および１３３）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６０および１３４）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６１および１３５）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６２および１３６）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−７（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６３および１３７）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６４および１３８）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号３５および１３９）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−１２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６６および１４０）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−１３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６７および１４１）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６８および１４２）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号６９および１４３）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７０および１４４）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７１および１４５）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７２および１４６）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７３および１４７）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７４および１４８）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７５および１４９）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７６および１５０）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ５（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７７および１５１）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７８および１５２）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ７（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７９および１５３）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｂ８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号８０および１５４）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号８１および１５５）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号８２および１５６）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号８３および１５７）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号８４および１５８）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ５（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号８５および１５９）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｈ６（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号７７および１５１）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号８６および１６０）、ＡＡＶ  ＣＬｖ１−１（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７１）、ＡＡＶ  ＣＬｖ１−２（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７２）、ＡＡＶ  ＣＬｖ１−３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７３）、ＡＡＶ  ＣＬｖ１−４（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７４）、ＡＡＶ  Ｃｌｖ１−７（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７５）、ＡＡＶ  Ｃｌｖ１−８（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７６）、ＡＡＶ  Ｃｌｖ１−９（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７７）、ＡＡＶ  Ｃｌｖ１−１０（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１７８）、ＡＡＶ．ＶＲ−３５５（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１８１）、ＡＡＶ．ｈｕ．４８Ｒ３（米国特許第８７３４８０９号明細書の配列番号１８３）、またはそれらのバリアントもしくは誘導体など、米国特許第８７３４８０９号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００７６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ２（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１および５１）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ５（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２および５２）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ９（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３および５３）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．１（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４および５４）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．２（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号５および５５）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．３（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号６および５６）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．４（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号７および５７）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．５（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号８および５８）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．７（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号９および５９）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．８（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１０および６０）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−７．１０（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１１および６１）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｎ３（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１２および６２）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｎ４（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１３および６３）、ＡＡＶ  ＣＫｄ−Ｎ９（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１４および６４）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｌ４（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１５および６５）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｌ５（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１６および６６）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｌ６（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１７および６７）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｋ１（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１８および６８）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｋ３（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号１９および６９）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｋ６（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２０および７０）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ１（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２１および７１）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ１１（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２２および７２）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ２（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２３および７３）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ５（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２４および７４）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ６（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２５および７５）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ７（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２６および７６）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ８（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２７および７７）、ＡＡＶ  ＣＬｖ−Ｍ９（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号２８および７８）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ１（国際公開第２０１６０６５００１号パ��フレットの配列番号２９および７９）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ６（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３０および８０）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−Ｐ８（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３１および８１）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．１（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３２および８２）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．１０（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３３および８３）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．５（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３４および８４）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．６（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３５および８５）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．７（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３６および８６）、ＡＡＶ  ＣＨｔ−６．８（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３７および８７）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．１０（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３８および８８）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．２（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号３９および８９）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．４（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４０および９０）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．５（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４１および９１）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．６（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４２および９２）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．７（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４３および９３）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．８（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４４および９４）、ＡＡＶ  ＣＳｐ−８．９（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４５および９５）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｂ７．３（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４６および９６）、ＡＡＶ  ＣＢｒ−Ｂ７．４（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４７および９７）、ＡＡＶ３Ｂ（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４８および９８）、ＡＡＶ４（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号４９および９９）、ＡＡＶ５（国際公開第２０１６０６５００１号パンフレットの配列番号５０および１００）、またはそれらのバリアントもしくは誘導体など、国際公開第２０１６０６５００１号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。
【００７７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、表１中に見出されるもののうちいずれかから選択される血清型であってもよく、またはそれを含んでもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、表１中の任意の配列の配列、断片またはバリアントを含んでもよい。
【００７８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、表１中の任意の配列の配列、断片またはバリアントによってコードされてもよい。
本明細書において引用および／または記載したＤＮＡおよびＲＮＡ配列において、一文字記号は以下の説明を有する：Ａはアデニンであり；Ｃはシトシンであり；Ｇはグアニンであり；Ｔはチミンであり；Ｕはウラシルであり；Ｗはアデニンまたはチミンなどの弱塩基であり；Ｓはシトシンおよびグアニンなどの強ヌクレオチドであり；Ｍはアデニンおよびシトシンなどのアミノヌクレオチドであり；Ｋはグアニンおよびチミンなどのケトヌクレオチドであり；Ｒはプリンのアデニンおよびグアニンであり；Ｙはピリミジンのシトシンおよびチミンであり；ＢはＡではない任意の塩基（例えば、シトシン、グアニン、およびチミン）であり；ＤはＣではない任意の塩基（例えば、アデニン、グアニン、およびチミン）であり；ＨはＧではない任意の塩基（例えば、アデニン、シトシン、およびチミン）であり；ＶはＴではない任意の塩基（例えば、アデニン、シトシン、およびグアニン）であり；Ｎは任意のヌクレオチドであり（ギャップではない）；Ｚはゼロである。
【００７９】
本明細書において引用および／または記載したアミノ酸配列のいずれかにおいて、一文字記号は以下の説明を有する：Ｇ（Ｇｌｙ）はグリシンであり；Ａ（Ａｌａ）はアラニンであり；Ｌ（Ｌｅｕ）はロイシンであり；Ｍ（Ｍｅｔ）はメチオニンであり；Ｆ（Ｐｈｅ）はフェニルアラニンであり；Ｗ（Ｔｒｐ）はトリプトファンであり；Ｋ（Ｌｙｓ）はリシンであり；Ｑ（Ｇｌｎ）はグルタミンであり；Ｅ（Ｇｌｕ）はグルタミン酸であり；Ｓ（Ｓｅｒ）はセリンであり；Ｐ（Ｐｒｏ）はプロリンであり；Ｖ（Ｖａｌ）はバリンであり；Ｉ（Ｉｌｅ）はイソロイシンであり；Ｃ（Ｃｙｓ）はシステインであり；Ｙ（Ｔｙｒ）はチロシンであり；Ｈ（Ｈｉｓ）はヒスチジンであり；Ｒ（Ａｒｇ）はアルギニンであり；Ｎ（Ａｓｎ）はアスパラギンであり；Ｄ（Ａｓｐ）はアスパラギン酸であり；Ｔ（Ｔｈｒ）はスレオニンであり；Ｂ（Ａｓｘ）はアスパラギン酸またはアスパラギンであり；Ｊ（Ｘｌｅ）はロイシンまたはイソロイシンであり；Ｏ（Ｐｙｌ）はピロリジンであり；Ｕ（Ｓｅｃ）はセレノシステインであり；Ｘ（Ｘａａ）は任意のアミノ酸であり；Ｚ（Ｇｌｘ）はグルタミンまたはグルタミン酸である。
【００８０】
【表１−１】
2022500066.tif 000002
【００８１】
【表１−２】
2022500066.tif 000003
【００８２】
【表１−３】
2022500066.tif 000004
【００８３】
【表１−４】
2022500066.tif 000005
【００８４】
【表１−５】
2022500066.tif 000006
【００８５】
【表１−６】
2022500066.tif 000007
【００８６】
【表１−７】
2022500066.tif 000008
【００８７】
【表１−８】
2022500066.tif 000009
【００８８】
【表１−９】
2022500066.tif 000010
【００８９】
【表１−１０】
2022500066.tif 000011
【００９０】
【表１−１１】
2022500066.tif 000012
【００９１】
【表１−１２】
2022500066.tif 000013
【００９２】
【表１−１３】
2022500066.tif 000014
【００９３】
【表１−１４】
2022500066.tif 000015
【００９４】
【表１−１５】
2022500066.tif 000016
【００９５】
【表１−１６】
2022500066.tif 000017
【００９６】
【表１−１７】
2022500066.tif 000018
【００９７】
【表１−１８】
2022500066.tif 000019
【００９８】
【表１−１９】
2022500066.tif 000020
【００９９】
【表１−２０】
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【０１００】
【表１−２１】
2022500066.tif 000022
【０１０１】
【表１−２２】
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【０１０２】
【表１−２３】
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【０１０３】
【表１−２４】
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【０１０４】
【表１−２５】
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【０１０５】
【表１−２６】
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【０１０６】
【表１−２７】
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【０１０７】
【表１−２８】
2022500066.tif 000029
【０１０８】
【表１−２９】
2022500066.tif 000030
【０１０９】
【表１−３０】
2022500066.tif 000031
【０１１０】
【表１−３１】
2022500066.tif 000032
【０１１１】
【表１−３２】
2022500066.tif 000033
【０１１２】
【表１−３３】
2022500066.tif 000034
【０１１３】
【表１−３４】
2022500066.tif 000035
【０１１４】
表１中に列挙される特許、出願および／または公報の各々の内容は、全体として本願明細書に援用される。
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ９（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号２および１１、または本明細書における配列番号１３５および１３６）、ＰＨＰ．Ｂ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号８および９、本明細書における配列番号３および４）、Ｇ２Ｂ−１３（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号１２、本明細書における配列番号５）、Ｇ２Ｂ−２６（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号１３、本明細書における配列番号３）、ＴＨ１．１−３２（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号１４、本明細書における配列番号６）、ＴＨ１．１−３５（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号１５、本明細書における配列番号７）など、国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレット（その内容は全体として本願明細書に援用される）に記載される配列、またはそれらのバリアントであってもよく、またはそれを含んでもよい。更に、国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットに記載される「ターゲティングペプチド」または「アミノ酸インサート」（ＣＮＳ組織への送達を容易にするためにＡＡＶカプシド配列に挿入されてもよい配列を意味するために、互換性があるように本明細書で使用される）のいずれかが、限定はされないが、ＡＡＶ９（ＤＮＡ配列について配列番号１３５およびアミノ酸配列について配列番号１３６）など、任意の親ＡＡＶ血清型に挿入されてもよい。一部の実施形態において、アミノ酸インサートは親ＡＡＶ（例えばＡＡＶ９）のアミノ酸５８６〜５９２に挿入される。一部の実施形態において、アミノ酸インサートは親ＡＡＶ配列のアミノ酸５８８〜５８９に挿入される。アミノ酸インサートは、限定はされないが、以下のアミノ酸配列、ＴＬＡＶＰＦＫ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号１；本明細書における配列番号１２６０）、ＫＦＰＶＡＬＴ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３；本明細書における配列番号１２６１）、ＬＡＶＰＦＫ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３１；本明細書における配列番号１２６２）、ＡＶＰＦＫ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３２；本明細書における配列番号１２６３）、ＶＰＦＫ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３３；本明細書における配列番号１２６４）、ＴＬＡＶＰＦ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３４；本明細書における配列番号１２６５）、ＴＬＡＶＰ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３５；本明細書における配列番号１２６６）、ＴＬＡＶ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３６；本明細書における配列番号１２６７）、ＳＶＳＫＰＦＬ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号２８；本明細書における配列番号１２６８）、ＦＴＬＴＴＰＫ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号２９；本明細書における配列番号１２６９）、ＭＮＡＴＫＮＶ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３０；本明細書における配列番号１２７０）、ＱＳＳＱＴＰＲ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号５４；本明細書における配列番号１２７１）、ＩＬＧＴＧＴＳ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号５５；本明細書における配列番号１２７２）、ＴＲＴＮＰＥＡ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号５６；本明細書における配列番号１２７３）、ＮＧＧＴＳＳＳ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号５８；本明細書における配列番号１２７４）、またはＹＴＬＳＱＧＷ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号６０；本明細書における配列番号１２７５）のいずれかであってもよい。アミノ酸インサートをコードし得るヌクレオチド配列の非限定的な例としては、限定はされないが、以下、ＡＡＧＴＴＴＣＣＴＧＴＧＧＣＧＴＴＧＡＣＴ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号３について；本明細書における配列番号１２７６）、ＡＣＴＴＴＧＧＣＧＧＴＧＣＣＴＴＴＴＡＡＧ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号２４および４９；本明細書における配列番号１２７７）、ＡＧＴＧＴＧＡＧＴＡＡＧＣＣＴＴＴＴＴＴＧ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号２５；本明細書における配列番号１２７８）、ＴＴＴＡＣＧＴＴＧＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＡＧ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号２６；本明細書における配列番号１２７９）、ＡＴＧＡＡＴＧＣＴＡＣＧＡＡＧＡＡＴＧＴＧ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号２７；本明細書における配列番号１２８０）、ＣＡＧＴＣＧＴＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＴＡＧＧ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号４８；本明細書における配列番号１２８１）、ＡＴＴＣＴＧＧＧＧＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＣＧ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号５０および５２；本明細書における配列番号１２８２）、ＡＣＧＣＧＧＡＣＴＡＡＴＣＣＴＧＡＧＧＣＴ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号５１；本明細書における配列番号１２８３）、ＡＡＴＧＧＧＧＧＧＡＣＴＡＧＴＡＧＴＴＣＴ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号５３；本明細書における配列番号１２８４）、またはＴＡＴＡＣＴＴＴＧＴＣＧＣＡＧＧＧＴＴＧＧ（国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットの配列番号５９；本明細書における配列番号１２８５）が挙げられる。
【０１１５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４５、本明細書における配列番号９）、ＰＨＰ．Ｎ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４６、本明細書における配列番号２）、ＰＨＰ．Ｓ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４７、本明細書における配列番号８）、またはそれらのバリアントなど、国際公開第２０１７１００６７１号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。更に、国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットに記載されるターゲティングペプチドまたはアミノ酸インサートのいずれかが、限定はされないが、ＡＡＶ９（配列番号９または配列番号１３６）など、任意の親ＡＡＶ血清型に挿入されてもよい。一部の実施形態において、アミノ酸インサートは親ＡＡＶ（例えばＡＡＶ９）のアミノ酸５８６〜５９２に挿入される。一部の実施形態において、アミノ酸インサートは親ＡＡＶ配列のアミノ酸５８８〜５８９に挿入される。アミノ酸インサートは、限定はされないが、以下のアミノ酸配列、ＡＱＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１；本明細書における配列番号１２８６）、ＡＱＳＶＳＫＰＦＬＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２；本明細書における配列番号１２８７）、ＡＱＦＴＬＴＴＰＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列表の配列番号３；本明細書における配列番号１２８８）、ＤＧＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列表の配列番号４；本明細書における配列番号１２８９）、ＥＳＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５；本明細書における配列番号１２９０）、ＧＧＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６；本明細書における配列番号１２９１）、ＡＱＴＬＡＴＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７および３３；本明細書における配列番号１２９２）、ＡＴＴＬＡＴＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８；本明細書における配列番号１２９３）、ＤＧＴＬＡＴＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号９；本明細書における配列番号１２９４）、ＧＧＴＬＡＴＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１０；本明細書における配列番号１２９５）、ＳＧＳＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１１；本明細書における配列番号１２９６）、ＡＱＴＬＡＱＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１２；本明細書における配列番号１２９７）、ＡＱＴＬＱＱＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１３；本明細書における配列番号１２９８）、ＡＱＴＬＳＮＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１４；本明細書における���列番号１２９９）、ＡＱＴＬＡＶＰＦＳＮＰ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１５；本明細書における配列番号１３００）、ＱＧＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１６；本明細書における配列番号１３０１）、ＮＱＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１７；本明細書における配列番号１３０２）、ＥＧＳＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１８；本明細書における配列番号１３０３）、ＳＧＮＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号１９；本明細書における配列番号１３０４）、ＥＧＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２０；本明細書における配列番号１３０５）、ＤＳＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの表１の配列番号２１；本明細書における配列番号１３０６）、ＡＶＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２２；本明細書における配列番号１３０７）、ＡＱＴＬＳＴＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２３；本明細書における配列番号１３０８）、ＡＱＴＬＰＱＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２４および３２；本明細書における配列番号１３０９）、ＡＱＴＬＳＱＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２５；本明細書における配列番号１３１０）、ＡＱＴＬＱＬＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２６；本明細書における配列番号１３１１）、ＡＱＴＬＴＭＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２７および３４ならびに国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列表の配列番号３５；本明細書における配列番号１３１２）、ＡＱＴＬＴＴＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２８；本明細書における配列番号１３１３）、ＡＱＹＴＬＳＱＧＷＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号２９；本明細書における配列番号１３１４）、ＡＱＭＮＡＴＫＮＶＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号３０；本明細書における配列番号１３１５）、ＡＱＶＳＧＧＨＨＳＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号３１；本明細書における配列番号１３１６）、ＡＱＴＬＴＡＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの表１の配列番号３５；本明細書における配列番号１３１７）、ＡＱＴＬＳＫＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号３６；本明細書における配列番号１３１８）、ＱＡＶＲＴＳＬ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号３７；本明細書における配列番号１３１９）、ＹＴＬＳＱＧＷ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号３８；本明細書における配列番号１２７５）、ＬＡＫＥＲＬＳ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号３９；本明細書における配列番号���３２０）、ＴＬＡＶＰＦＫ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列表の配列番号４０；本明細書における配列番号１２６０）、ＳＶＳＫＰＦＬ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４１；本明細書における配列番号１２６８）、ＦＴＬＴＴＰＫ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４２；本明細書における配列番号１２６９）、ＭＮＳＴＫＮＶ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４３；本明細書における配列番号１３２１）、ＶＳＧＧＨＨＳ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４４；本明細書における配列番号１３２２）、ＳＡＱＴＬＡＶＰＦＫＡＱＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４８；本明細書における配列番号１３２３）、ＳＸＸＸＬＡＶＰＦＫＡＱＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号４９、式中Ｘは任意のアミノ酸であってもよい；本明細書における配列番号１３２４）、ＳＡＱＸＸＸＶＰＦＫＡＱＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５０、式中Ｘは任意のアミノ酸であってもよい；本明細書における配列番号１３２５）、ＳＡＱＴＬＸＸＸＦＫＡＱＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５１、式中Ｘは任意のアミノ酸であってもよい；本明細書における配列番号１３２６）、ＳＡＱＴＬＡＶＸＸＸＡＱＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５２、式中Ｘは任意のアミノ酸であってもよい；本明細書における配列番号１３２７）、ＳＡＱＴＬＡＶＰＦＸＸＸＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５３、式中Ｘは任意のアミノ酸であってもよい；本明細書における配列番号１３２８）、ＴＮＨＱＳＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６５；本明細書における配列番号１３２９）、ＡＱＡＱＴＧＷ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６６；本明細書における配列番号１３３０）、ＤＧＴＬＡＴＰＦＫ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６７；本明細書における配列番号１３３１）、ＤＧＴＬＡＴＰＦＫＸＸ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６８、式中Ｘは任意のアミノ酸であってもよい；本明細書における配列番号１３３２）、ＬＡＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８０；本明細書における配列番号１３３３）、ＶＰＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８１；本明細書における配列番号１３３４）、ＦＫＡＱ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８２；本明細書における配列番号１３３５）、ＡＱＴＬＡＶ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８３；本明細書における配列番号１３３６）、ＡＱＴＬＡＶＰＦ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８４；本明細書における配列番号１３３７）、ＱＡＶＲ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８５；本明細書における配列番号１３３８）、ＡＶＲＴ（国際公開第２０１７１００６７１号パン���レットの配列番号８６；本明細書における配列番号１３３９）、ＶＲＴＳ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８７；本明細書における配列番号１３４０）、ＲＴＳＬ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８８；本明細書における配列番号１３４１）、ＱＡＶＲＴ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号８９；本明細書における配列番号１３４２）、ＡＶＲＴＳ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号９０；本明細書における配列番号１３４３）、ＶＲＴＳＬ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号９１；本明細書における配列番号１３４４）、ＱＡＶＲＴＳ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号９２；本明細書における配列番号１３４５）、またはＡＶＲＴＳＬ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号９３；本明細書における配列番号１３４６）のいずれかであってもよい。
【０１１６】
アミノ酸インサートをコードし得るヌクレオチド配列の非限定的な例としては、以下、ＧＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＧＧＣＧＧＴＧＣＣＴＴＴＴＡＡＧＧＣＡＣＡＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５４；本明細書における配列番号１３４７）、ＧＡＴＧＧＧＡＣＧＴＴＧＧＣＧＧＴＧＣＣＴＴＴＴＡＡＧＧＣＡＣＡＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５５；本明細書における配列番号１３４８）、ＣＡＧＧＣＧＧＴＴＡＧＧＡＣＧＴＣＴＴＴＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５６；本明細書における配列番号１３４９）、ＣＡＧＧＴＣＴＴＣＡＣＧＧＡＣＴＣＡＧＡＣＴＡＴＣＡＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５７および７８；本明細書における配列番号１３５０）、ＣＡＡＧＴＡＡＡＡＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＴＡＡＡＡＴＣＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５８；本明細書における配列番号１３５１）、ＡＣＴＣＡＴＣＧＡＣＣＡＡＴＡＣＴＴＧＴＡＣＴＡＴＣＴＣＴＣＴＡＧＡＡＣ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号５９；本明細書における配列番号１３５２）、ＧＧＡＡＧＴＡＴＴＣＣＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＡＣＣＣＡ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６０；本明細書における配列番号１３５３）、ＧＧＴＣＧＣＧＧＴＴＣＴＴＧＴＴＴＧＴＧＧＡＴ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６１；本明細書における配列番号１３５４）、ＣＧＡＣＣＴＴＧＡＡＧＣＧＣＡＴＧＡＡＣＴＣＣＴ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６２；本明細書における配列番号１３５５）、ＧＴＡＴＴＣＣＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＡＣＣＣＡＡＣＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＴＧＣＭＮＮＭＮＮＭＮＮＭＮＮＭＮＮＭＮＮＭＮＮＴＴＧＧＧＣＡＣＴＣＴＧＧＴＧＧＴＴＴＧＴＣ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６３、式中ＮはＡ、Ｃ、Ｔ、もしくはＧであってもよい；本明細書における配列番号１３５６）、ＧＴＡＴＴＣＣＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＡＣＣＣＡＡＣＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＭＮＮＭＮＮＭＮＮＡＡＡＡＧＧＣＡＣＣＧＣＣＡＡＡＧＴＴＴＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号６９、式中ＮはＡ、Ｃ、Ｔ、もしくはＧであってもよい；本明細書における配列番号１３５７）、ＧＴＡＴＴＣＣＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＡＣＣＣＡＡＣＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＴＧＣＭＮＮＭＮＮＭＮＮＣＡＣＣＧＣＣＡＡＡＧＴＴＴＧＧＧＣＡＣＴ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７０、式中ＮはＡ、Ｃ、Ｔ、もしくはＧであってもよい；本明細書における配列番号１３５８）、ＧＴＡＴＴＣＣＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＡＣＣＣＡＡＣＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＡＡＭＮＮＭＮＮＭＮＮＣＡＡＡＧＴＴＴＧＧＧＣＡＣＴＣＴＧＧＴＧＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７１、式中ＮはＡ、Ｃ、Ｔ、もしくはＧであってもよい；本明細書における配列番号１３５９）、ＧＴＡＴＴＣＣＴＴＧＧＴＴＴＴＧＡＡＣＣＣＡＡＣＣＧＧＴＣＴＧＣＧＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＭＮＮＭＮＮＭＮＮＴＴＧＧＧＣＡＣＴＣＴＧＧＴＧＧＴＴＴＧＴＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７２、式中ＮはＡ、Ｃ、Ｔ、もしくはＧであってもよい；本明細書における配列番号１３６０）、ＡＣＴＴＴＧＧＣＧＧＴＧＣＣＴＴＴＴＡＡＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７４；本明細書における配列番号１２７７）、ＡＧＴＧＴＧＡＧＴＡＡＧＣＣＴＴＴＴＴＴＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７５；本明細書における配列番号１２７８）、ＴＴＴＡＣＧＴＴＧＡＣＧＡＣＧＣＣＴＡＡＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７６；本明細書における配列番号１２７９）、ＴＡＴＡＣＴＴＴＧＴＣＧＣＡＧＧＧＴＴＧＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７７；本明細書における配列番号１２８５）、またはＣＴＴＧＣＧＡＡＧＧＡＧＣＧＧＣＴＴＴＣＧ（国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットの配列番号７９；本明細書における配列番号１３６１）が挙げられる。
【０１１７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ１（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８１）、ＡＡＶ６（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８２）、ＡＡＶ２（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８３）、ＡＡＶ３ｂ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８４）、ＡＡＶ７（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８５）、ＡＡＶ８（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８６）、ＡＡＶ１０（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８７）、ＡＡＶ４（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８８）、ＡＡＶ１１（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８９）、ｂＡＡＶ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１９０）、ＡＡＶ５（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１９１）、ＧＰＶ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１９２；本明細書における配列番号９９２）、Ｂ１９（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１９３；本明細書における配列番号９９３）、ＭＶＭ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１９４；本明細書における配列番号９９４）、ＦＰＶ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１９５；本明細書における配列番号９９５）、ＣＰＶ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１９６；本明細書における配列番号９９６）、またはそれらのバリアントなど、米国特許第９６２４２７４号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを含んでもよい。更に、米国特許第９６２４２７４号明細書に記載される構造タンパク質インサートのいずれかが、限定はされないが、ＡＡＶ２（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１８３）などの任意の親ＡＡＶ血清型の、限定はされないが、Ｉ−４５３およびＩ−５８７に挿入されてもよい。アミノ酸インサートは、限定はされないが、以下のアミノ酸配列、ＶＮＬＴＷＳＲＡＳＧ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号５０；本明細書における配列番号１３６２）、ＥＦＣＩＮＨＲＧＹＷＶＣＧＤ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号５５；本明細書における配列番号１３６３）、ＥＤＧＱＶＭＤＶＤＬＳ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号８５；本明細書における配列番号１３６４）、ＥＫＱＲＮＧＴＬＴ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号８６；本明細書における配列番号１３６５）、ＴＹＱＣＲＶＴＨＰＨＬＰＲＡＬＭＲ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号８７；本明細書における配列番号１３６６）、ＲＨＳＴＴＱＰＲＫＴＫＧＳＧ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号８８；本明細書における配列番号１３６７）、ＤＳＮＰＲＧＶＳＡＹＬＳＲ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号８９；本明細書における配列番号１３６８）、ＴＩＴＣＬＷＤＬＡＰＳＫ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９０；本明細書における配列番号１３６９）、ＫＴＫＧＳＧＦＦＶＦ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９１；本明細書における配列番号１３７０）、ＴＨＰＨＬＰＲＡＬＭＲＳ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９２；本明細書における配列番号１３７１）、ＧＥＴＹＱＣＲＶＴＨＰＨＬＰＲＡＬＭＲＳＴＴＫ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９３；本明細書における配列番号１３７２）、ＬＰＲＡＬＭＲＳ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９４；本明細書における配列番号１３７３）、ＩＮＨＲＧＹＷＶ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９５；本明細書における配列番号１３７４）、ＣＤＡＧＳＶＲＴＮＡＰＤ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号６０；本明細書における配列番号１３７５）、ＡＫＡＶＳＮＬＴＥＳＲＳＥＳＬＱＳ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９６；本明細書における配列番号１３７６）、ＳＬＴＧＤＥＦＫＫＶＬＥＴ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９７；本明細書における配列番号１３７７）、ＲＥＡＶＡＹＲＦＥＥＤ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９８；本明細書における配列番号１３７８）、ＩＮＰＥＩＩＴＬＤＧ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号９９；本明細書における配列番号１３７９）、ＤＩＳＶＴＧＡＰＶＩＴＡＴＹＬ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１００；本明細書における配列番号１３８０）、ＤＩＳＶＴＧＡＰＶＩＴＡ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０１；本明細書における配列番号１３８１）、ＰＫＴＶＳＮＬＴＥＳＳＳＥＳＶＱＳ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０２；本明細書における配列番号１３８２）、ＳＬＭＧＤＥＦＫＡＶＬＥＴ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０３；本明細書における配列番号１３８３）、ＱＨＳＶＡＹＴＦＥＥＤ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０４；本明細書における配列番号１３８４）、ＩＮＰＥＩＩＴＲＤＧ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０５；本明細書における配列番号１３８５）、ＤＩＳＬＴＧＤＰＶＩＴＡＳＹＬ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０６；本明細書における配列番号１３８６）、ＤＩＳＬＴＧＤＰＶＩＴＡ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０７；本明細書における配列番号１３８７）、ＤＱＳＩＤＦＥＩＤＳＡ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０８；本明細書における配列番号１３８８）、ＫＮＶＳＥＤＬＰＬＰＴＦＳＰＴＬＬＧＤＳ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１０９；本明細書における配列番号１３８９）、ＫＮＶＳＥＤＬＰＬＰＴ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１０；本明細書における配列番号１３９０）、ＣＤＳＧＲＶＲＴＤＡＰＤ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１１；本明細書における配列番号１３９１）、ＦＰＥＨＬＬＶＤＦＬＱＳＬＳ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１２；本明細書における配列番号１３９２）、ＤＡＥＦＲＨＤＳＧ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号６５；本明細書における配列番号１３９３）、ＨＹＡＡＡＱＷＤＦＧＮＴＭＣＱＬ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１３；本明細書における配列番号１３９４）、ＹＡＡＱＷＤＦＧＮＴＭＣＱ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１４；本明細書における配列番号１３９５）、ＲＳＱＫＥＧＬＨＹＴ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１５；本明細書における配列番号１３９６）、ＳＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＷＡＮＰＱＡＥ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１６；本明細書における配列番号１３９７）、ＳＲＴＰＳＤＫＰＶＡＨＷＡＮＰ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１７；本明細書における配列番号１３９８）、ＳＳＲＴＰＳＤＫＰ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１８；本明細書における配列番号１３９９）、ＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶＰ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１１９；本明細書における配列番号１４００）、ＤＧＮＶＤＹＨＭＮＳＶ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１２０；本明細書における配列番号１４０１）、ＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１２１；本明細書における配列番号１４０２）、ＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１２２；本明細書における配列番号１４０３）、またはＱＭＷＡＰＱＷＧＰＤ（米国特許第９６２４２７４号明細書の配列番号１２３；本明細書における配列番号１４０４）のいずれかであってもよい。
【０１１８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、天然ＡＡＶ２カプシドタンパク質のアミノ酸５８５〜５９０位に１つ以上のアミノ酸の改変を含むＡＡＶカプシドタンパク質など、米国特許第９４７５８４５号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。更に、改変は、限定はされないが、以下のアミノ酸配列、ＲＧＮＲＱＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号３；本明細書における配列番号１４０５）、ＳＳＳＴＤＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４；本明細書における配列番号１４０６）、ＳＳＮＴＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５；本明細書における配列番号１４０７）、ＳＮＳＮＬＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６；本明細書における配列番号１４０８）、ＳＳＴＴＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７；本明細書における配列番号１４０９）、ＡＡＮＴＡＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８；本明細書における配列番号１４１０）、ＱＱＮＴＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９；本明細書における配列番号１４１１）、ＳＡＱＡＱＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０；本明細書における配列番号１４１２）、ＱＡＮＴＧＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１；本明細書における配列番号１４１３）、ＮＡＴＴＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２；本明細書における配列番号１４１４）、ＳＳＴＡＧＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３および２０；本明細書における配列番号１４１５）、ＱＱＮＴＡＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４；本明細書における配列番号１４１６）、ＰＳＴＡＧＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５；本明細書における配列番号１４１７）、ＮＱＮＴＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１６；本明細書における配列番号１４１８）、ＱＡＡＮＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１７；本明細書における配列番号１４１９）、ＳＩＶＧＬＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１８；本明細書における配列番号１４２０）、ＡＡＳＴＡＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１９および２７；本明細書における配列番号１４２１）、ＳＱＮＴＴＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号２１；本明細書における配列番号１４２２）、ＱＱＤＴＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号２２；本明細書における配列番号１４２３）、ＱＴＮＴＧＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号２３；本明細書における配列番号１４２４）、ＱＴＮＧＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号２４；本明細書における配列番号１４２５）、ＱＱＮＡＡＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号２５；本明細書における配列番号１４２６）、またはＡＡＮＴＱＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号２６；本明細書における配列番号１４２７）をもたらし得る。一部の実施形態において、アミノ酸改変は、天然ＡＡＶ２カプシドタンパク質のアミノ酸２６２〜２６５位、またはターゲティング配列を有する別のＡＡＶのカプシドタンパク質の対応する位置における置換である。ターゲティング配列は、限定はされないが、以下のアミノ酸配列、ＮＧＲＡＨＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号３８；本明細書における配列番号１４２８）、ＱＰＥＨＳＳＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号３９および５０；本明細書における配列番号１４２９）、ＶＮＴＡＮＳＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４０；本明細書における配列番号１４３０）、ＨＧＰＭＱＫＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４１；本明細書における配列番号１４３１）、ＰＨＫＰＰＬＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４２；本明細書における配列番号１４３２）、ＩＫＮＮＥＭＷ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４３；本明細書における配列番号１４３３）、ＲＮＬＤＴＰＭ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４４；本明細書における配列番号１４３４）、ＶＤＳＨＲＱＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４５；本明細書における配列番号１４３５）、ＹＤＳＫＴＫＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４６；本明細書における配列番号１４３６）、ＳＱＬＰＨＱＫ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４７；本明細書における配列番号１４３７）、ＳＴＭＱＱＮＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４８；本明細書における配列番号１４３８）、ＴＥＲＹＭＴＱ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号４９；本明細書における配列番号１４３９）、ＤＡＳＬＳＴＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５１；本明細書における配列番号１４４０）、ＤＬＰＮＫＫＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５２；本明細書における配列番号１４４１）、ＤＬＴＡＡＲＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５３；本明細書における配列番号１４４２）、ＥＰＨＱＦＮＹ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５４；本明細書における配列番号１４４３）、ＥＰＱＳＮＨＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５５；本明細書における配列番号１４４４）、ＭＳＳＷＰＳＱ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５６；本明細書における配列番号１４４５）、ＮＰＫＨＮＡＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５７；本明細書における配列番号１４４６）、ＰＤＧＭＲＴＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５８；本明細書における配列番号１４４７）、ＰＮＮＮＫＴＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号５９；本明細書における配列番号１４４８）、ＱＳＴＴＨＤＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６０；本明細書における配列番号１４４９）、ＴＧＳＫＱＫＱ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６１；本明細書における配列番号１４５０）、ＳＬＫＨＱＡＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６２；本明細書における配列番号１４５１）、ＳＰＩＤＧＥＱ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６３；本明細書における配列番号１４５２）、ＷＩＦＰＷＩＱＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６４および１１２；本明細書における配列番号１４５３）、ＣＤＣＲＧＤＣＦＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６５；本明細書における配列番号１４５４）、ＣＮＧＲＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６６；本明細書における配列番号１４５５）、ＣＰＲＥＣＥＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６７；本明細書における配列番号１４５６）、ＣＴＴＨＷＧＦＴＬＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６８および１２３；本明細書における配列番号１４５７）、ＣＧＲＲＡＧＧＳＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号６９；本明細書における配列番号１４５８）、ＣＫＧＧＲＡＫＤＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７０；本明細書における配列番号１４５９）、ＣＶＰＥＬＧＨＥＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７１および１１５；本明細書における配列番号１４６０）、ＣＲＲＥＴＡＷＡＫ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７２；本明細書における配列番号１４６１）、ＶＳＷＦＳＨＲＹＳＰＦＡＶＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７３；本明細書における配列番号１４６２）、ＧＹＲＤＧＹＡＧＰＩＬＹＮ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７４；本明細書における配列番号１４６３）、ＸＸＸＹＸＸＸ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７５；本明細書における配列番号１４６４）、ＹＸＮＷ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７６；本明細書における配列番号１４６５）、ＲＰＬＰＰＬＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７７；本明細書における配列番号１４６６）、ＡＰＰＬＰＰＲ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７８；本明細書における配列番号１４６７）、ＤＶＦＹＰＹＰＹＡＳＧＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号７９；本明細書における配列番号１４６８）、ＭＹＷＹＰＹ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８０；本明細書における配列番号１４６９）、ＤＩＴＷＤＱＬＷＤＬＭＫ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８１；本明細書における配列番号１４７０）、ＣＷＤＤＸＷＬＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８２；本明細書における配列番号１４７１）、ＥＷＣＥＹＬＧＧＹＬＲＣＹＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８３；本明細書における配列番号１４７２）、ＹＸＣＸＸＧＰＸＴＷＸＣＸＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８４；本明細書における配列番号１４７３）、ＩＥＧＰＴＬＲＱＷＬＡＡＲＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８５；本明細書における配列番号１４７４）、ＬＷＸＸＸ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８６；本明細書における配列番号１４７５）、ＸＦＸＸＹＬＷ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８７；本明細書における配列番号１４７６）、ＳＳＩＩＳＨＦＲＷＧＬＣＤ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８８；本明細書における配列番号１４７７）、ＭＳＲＰＡＣＰＰＮＤＫＹＥ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号８９；本明細書における配列番号１４７８）、ＣＬＲＳＧＲＧＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９０；本明細書における配列番号１４７９）、ＣＨＷＭＦＳＰＷＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９１；本明細書における配列番号１４８０）、ＷＸＸＦ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９２；本明細書における配列番号１４８１）、ＣＳＳＲＬＤＡＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９３；本明細書における配列番号１４８２）、ＣＬＰＶＡＳＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９４；本明細書における配列番号１４８３）、ＣＧＦＥＣＶＲＱＣＰＥＲＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９５；本明細書における配列番号１４８４）、ＣＶＡＬＣＲＥＡＣＧＥＧＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９６；本明細書における配列番号１４８５）、ＳＷＣＥＰＧＷＣＲ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９７；本明細書における配列番号１４８６）、ＹＳＧＫＷＧＷ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９８；本明細書における配列番号１４８７）、ＧＬＳＧＧＲＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号９９；本明細書における配列番号１４８８）、ＬＭＬＰＲＡＤ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１００；本明細書における配列番号１４８９）、ＣＳＣＦＲＤＶＣＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０１；本明細書における配列番号１４９０）、ＣＲＤＶＶＳＶＩＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０２；本明細書における配列番号１４９１）、ＭＡＲＳＧＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０３；本明細書における配列番号１４９２）、ＭＡＲＡＫＥ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０４；本明細書における配列番号１４９３）、ＭＳＲＴＭＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０５；本明細書における配列番号１４９４）、ＫＣＣＹＳＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０６；本明細書における配列番号１４９５）、ＭＹＷＧＤＳＨＷＬＱＹＷＹＥ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０７；本明細書における配列番号１４９６）、ＭＱＬＰＬＡＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０８；本明細書における配列番号１４９７）、ＥＷＬＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１０９；本明細書における配列番号１４９
８）、ＳＮＥＷ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１０；本明細書における配列番号１４９９）、ＴＮＹＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１１；本明細書における配列番号１５００）、ＷＤＬＡＷＭＦＲＬＰＶＧ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１３；本明細書における配列番号１５０１）、ＣＴＶＡＬＰＧＧＹＶＲＶＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１４；本明細書における配列番号１５０２）、ＣＶＡＹＣＩＥＨＨＣＷＴＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１６；本明細書における配列番号１５０３）、ＣＶＦＡＨＮＹＤＹＬＶＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１７；本明細書における配列番号１５０４）、ＣＶＦＴＳＮＹＡＦＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１８；本明細書における配列番号１５０５）、ＶＨＳＰＮＫＫ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１１９；本明細書における配列番号１５０６）、ＣＲＧＤＧＷＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２０；本明細書における配列番号１５０７）、ＸＲＧＣＤＸ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２１；本明細書における配列番号１５０８）、ＰＸＸＸ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２２；本明細書における配列番号１５０９）、ＳＧＫＧＰＲＱＩＴＡＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２４；本明細書における配列番号１５１０）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＸＸＸＸＸ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２５；本明細書における配列番号１５１１）、ＶＹＭＳＰＦ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２６；本明細書における配列番号１５１２）、ＡＴＷＬＰＰＲ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２７；本明細書における配列番号１５１３）、ＨＴＭＹＹＨＨＹＱＨＨＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２８；本明細書における配列番号１５１４）、ＳＥＶＧＣＲＡＧＰＬＱＷＬＣＥＫＹＦＧ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１２９；本明細書における配列番号１５１５）、ＣＧＬＬＰＶＧＲＰＤＲＮＶＷＲＷＬＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３０；本明細書における配列番号１５１６）、ＣＫＧＱＣＤＲＦＫＧＬＰＷＥＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３１；本明細書における配列番号１５１７）、ＳＧＲＳＡ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３２；本明細書における配列番号１５１８）、ＷＧＦＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３３；本明細書における配列番号１５１９）、ＡＥＰＭＰＨＳＬＮＦＳＱＹＬＷＹＴ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３４；本明細書における配列番号１５２０）、ＷＡＹＸＳＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３５；本明細書における配列番号１５２１）、ＩＥＬＬＱＡＲ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３６；本明細書における配列番号１５２２）、ＡＹＴＫＣＳＲＱＷＲＴＣＭＴＴＨ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３７；本明細書における配列番号１５２３）、ＰＱＮＳＫＩＰＧＰＴＦＬＤＰＨ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３８；本明細書における配列番号１５２４）、ＳＭＥＰＡＬＰＤＷＷＷＫＭＦＫ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１３９；本明細書における配列番号１５２５）、ＡＮＴＰＣＧＰＹＴＨＤＣＰＶＫＲ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４０；本明細書における配列番号１５２６）、ＴＡＣＨＱＨＶＲＭＶＲＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４１；本明細書における配列番号１５２７）、ＶＰＷＭＥＰＡＹＱＲＦＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４２；本明細書における配列番号１５２８）、ＤＰＲＡＴＰＧＳ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４３；本明細書における配列番号１５２９）、ＦＲＰＮＲＡＱＤＹＮＴＮ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４４；本明細書における配列番号１５３０）、ＣＴＫＮＳＹＬＭＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４５；本明細書における配列番号１５３１）、ＣＸＸＴＸＸＸＧＸＧＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４６；本明細書における配列番号１５３２）、ＣＰＩＥＤＲＰＭＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４７；本明細書における配列番号１５３３）、ＨＥＷＳＹＬＡＰＹＰＷＦ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４８；本明細書における配列番号１５３４）、ＭＣＰＫＨＰＬＧＣ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１４９；本明細書における配列番号１５３５）、ＲＭＷＰＳＳＴＶＮＬＳＡＧＲＲ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５０；本明細書における配列番号１５３６）、ＳＡＫＴＡＶＳＱＲＶＷＬＰＳＨＲＧＧＥＰ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５１；本明細書における配列番号１５３７）、ＫＳＲＥＨＶＮＮＳＡＣＰＳＫＲＩＴＡＡＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５２；本明細書における配列番号１５３８）、ＥＧＦＲ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５３；本明細書における配列番号１５３９）、ＡＧＬＧＶＲ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５４；本明細書における配列番号１５４０）、ＧＴＲＱＧＨＴＭＲＬＧＶＳＤＧ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５５；本明細書における配列番号１５４１）、ＩＡＧＬＡＴＰＧＷＳＨＷＬＡＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５６；本明細書における配列番号１５４２）、ＳＭＳＩＡＲＬ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５７；本明細書における配列番号１５４３）、ＨＴＦＥＰＧＶ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５８；本明細書における配列番号１５４４）、ＮＴＳＬＫＲＩＳＮＫＲＩＲＲＫ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１５９；本明細書における配列番号１５４５）、ＬＲＩＫＲＫＲＲＫＲＫＫＴＲＫ（米国特許第９４７５８４５号明細書の配列番号１６０；本明細書における配列番号１５４６）、ＧＧＧ、ＧＦＳ、ＬＷＳ、ＥＧＧ、ＬＬＶ、ＬＳＰ、ＬＢＳ、ＡＧＧ、ＧＲＲ、ＧＧＨまたはＧＴＶのいずれかであってもよい。
【０１１９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、ＡＡＶ２（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９７；本明細書における配列番号１５４７）の部位特異的突然変異カプシドタンパク質、またはそのバリアントであって、特異的突然変異部位が、ＶＰ１またはその断片の部位Ｒ４４７、Ｇ４５３、Ｓ５７８、Ｎ５８７、Ｎ５８７＋１、Ｓ６６２から選択される少なくとも１つの部位であるものなど、米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。
【０１２０】
更に、米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書に記載される突然変異配列のいずれかが、限定はされないが、以下の配列、ＳＤＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１および配列番号２３１；本明細書における配列番号１５４８）、ＳＰＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２；本明細書における配列番号１５４９）、ＳＨＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３；本明細書における配列番号１５５０）、ＳＲＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４；本明細書における配列番号１５５１）、ＳＫＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５；本明細書における配列番号１５５２）、ＳＮＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６；本明細書における配列番号１５５３）、ＳＧＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７；本明細書における配列番号１５５４）、ＳＡＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８、１７５、および２２１；本明細書における配列番号１５５５）、ＳＥＳＧＴＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９；本明細書における配列番号１５５６）、ＳＴＴＧＧＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０；本明細書における配列番号１５５７）、ＳＳＡＧＳＴＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１１；本明細書における配列番号１５５８）、ＮＮＤＳＱＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１２；本明細書における配列番号１５５９）、ＮＮＲＮＱＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１３；本明細書における配列番号１５６０）、ＮＮＮＫＱＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１４；本明細書における配列番号１５６１）、ＮＡＫＲＱＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１５；本明細書における配列番号１５６２）、ＮＤＥＨＱＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１６；本明細書における配列番号１５６３）、ＮＴＳＱＫＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１７；本明細書における配列番号１５６４）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＤＴＱＳＲＬＶＦＳＱＡＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１８；本明細書における配列番号１５６５）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＤＳＧＴＥＴＱＳＧＬＤＦＳＱＡＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１９；本明細書における配列番号１５６６）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＥＳＧＴＰＴＱＳＡＬＥＦＳＱＡＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２０；本明細書における配列番号１５６７）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＨＳＧＴＨＴＱＳＰＬＨＦＳＱＡＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１；本明細書における配列番号１５６８）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＳＳＧＴＩＴＩＳＨＬＩＦＳＱＡＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２２；本明細書における配列番号１５６９）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＲＳＧＩＭＴＫＳＳＬＭＦＳＱＡＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２３；本明細書における配列番号１５７０）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＫＳＧＲＫＴＬＳＮＬＳＦＳＱＡＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２４；本明細書における配列番号１５７１）、ＹＹＬＳＲＴＮＤＧＳＧＰＶＴＰＳＫＬＲＦＳＱＲＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２５；本明細書における配列番号１５７２）、ＹＹＬＳＲＴＮＡＡＳＧＨＡＴＨＳＤＬＫＦＳＱＰＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６；本明細書における配列番号１５７３）、ＹＹＬＳＲＴＮＧＱＡＧＳＬＴＭＳＥＬＧＦＳＱＶＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２７；本明細書における配列番号１５７４）、ＹＹＬＳＲＴＮＳＴＧＧＮＱＴＴＳＱＬＬＦＳＱＬＳＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２８；本明細書における配列番号１５７５）、ＹＦＬＳＲＴＮＮＮＴＧＬＮＴＮＳＴＬＮＦＳＱＧＲＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２９；本明細書における配列番号１５７６）、ＳＫＴＧＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３０；本明細書における配列番号１５７７）、ＳＫＴＤＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３１；本明細書における配列番号１５７８）、ＳＫＴＥＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３２；本明細書における配列番号１５７９）、ＳＫＴＰＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３３；本明細書における配列番号１５８０）、ＳＫＴＨＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３４；本明細書における配列番号１５８１）、ＳＫＴＱＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３５；本明細書における配列番号１５８２）、ＳＫＴＩＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３６；本明細書における配列番号１５８３）、ＳＫＴＭＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３７；本明細書における配列番号１５８４）、ＳＫＴＲＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３８；本明細書における配列番号１５８５）、ＳＫＴＮＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号３９；本明細書における配列番号１５８６）、ＳＫＴＶＧＲＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４０；本明細書における配列番号１５８７）、ＳＫＴＡＤＲＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４１；本明細書における配列番号１５８８）、ＳＫＫＬＳＱＮＮＮＳＫＹＳＷＱＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４２；本明細書における配列番号１５８９）、ＳＫＰＴＴＧＮＮＮＳＤＹＳＷＰＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４３；本明細書における配列番号１５９０）、ＳＴＱＫＮＥＮＮＮＳＮＹＳＷＰＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４４；本明細書における配列番号１５９１）、ＨＫＤＤＥＧＫＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４５；本明細書における配列番号１５９２）、ＨＫＤＤＮＲＫＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４６；本明細書における配列番号１５９３）、ＨＫＤＤＴＮＫＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４７；本明細書における配列番号１５９４）、ＨＥＤＳＤＫＮＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４８；本明細書における配列番号１５９５）、ＨＲＤＧＡＤＳＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号４９；本明細書における配列番号１５９６）、ＨＧＤＮＫＳＲＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５０；本明細書における配列番号１５９７）、ＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＦＥＥＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５１；本明細書における配列番号１５９８）、ＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＳＥＥＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５２；本明細書における配列番号１５９９）、ＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＶＥＥＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５３；本明細書における配列番号１６００）、ＫＱＧＳＤＫＴＮＶＤＤＡＧＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５４；本明細書における配列番号１６０１）、ＫＱＧＳＳＫＴＮＶＤＰＲＥＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５５；本明細書における配列番号１６０２）、ＫＱＧＳＲＫＴＮＶＤＨＫＱＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５６；本明細書における配列番号１６０３）、ＫＱＧＳＫＧＧＮＶＤＴＮＲＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５７；本明細書における配列番号１６０４）、ＫＱＧＳＧＥＡＮＶＤＮＧＤＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５８；本明細書における配列番号１６０５）、ＫＱＤＡＡＡＤＮＩＤＹＤＨＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号５９；本明細書における配列番号１６０６）、ＫＱＳＧＴＲＳＮＡＡＡＳＳＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６０；本明細書における配列番号１６０７）、ＫＥＮＴＮＴＮＤＴＥＬＴＮＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６１；本明細書における配列番号１６０８）、ＱＲＧＮＮＶＡＡＴＡＤＶＮＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６２；本明細書における配列番号１６０９）、ＱＲＧＮＮＥＡＡＴＡＤＶＮＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６３；本明細書における配列番号１６１０）、ＱＲＧＮＮＰＡＡＴＡＤＶＮＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６４；本明細書における配列番号１６１１）、ＱＲＧＮＮＨＡＡＴＡＤＶＮＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６５；本明細書における配列番号１６１２）、ＱＥＥＮＮＩＡＡＴＰＧＶＮＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６６；本明細書における配列番号１６１３）、ＱＰＰＮＮＭＡＡＴＨＥＶＮＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６７；本明細書における配列番号１６１４）、ＱＨＨＮＮＳＡＡＴＴＩＶＮＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６８；本明細書における配列番号１６１５）、ＱＴＴＮＮＲＡＡＦＮＭＶＥＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号６９；本明細書における配列番号１６１６）、ＱＫＫＮＮＮＡＡＳＫＫＶＡＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７０；本明細書における配列番号１６１７）、ＱＧＧＮＮＫＡＡＤＤＡＶＫＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７１；本明細書における配列番号１６１８）、ＱＡＡＫＧＧＡＡＤＤＡＶＫＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７２；本明細書における配列番号１６１９）、ＱＤＤＲＡＡＡＡＮＥＳＶＤＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７３；本明細書における配列番号１６２０）、ＱＱＱＨＤＤＡＡＹＱＲＶＨＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７４；本明細書における配列番号１６２１）、ＱＳＳＳＳＬＡＡＶＳＴＶＱＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７５；本明細書における配列番号１６２２）、ＱＮＮＱＴＴＡＡＩＲＮＶＴＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７６；本明細書における配列番号１６２３）、ＮＹＮＫＫＳＤＮＶＤＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７７；本明細書における配列番号１６２４）、ＮＹＮＫＫＳＥＮＶＤＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７
８；本明細書における配列番号１６２５）、ＮＹＮＫＫＳＬＮＶＤＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号７９；本明細書における配列番号１６２６）、ＮＹＮＫＫＳＰＮＶＤＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８０；本明細書における配列番号１６２７）、ＮＹＳＫＫＳＨＣＶＤＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８１；本明細書における配列番号１６２８）、ＮＹＲＫＴＩＹＶＤＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８２；本明細書における配列番号１６２９）、ＮＹＫＥＫＫＤＶＨＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８３；本明細書における配列番号１６３０）、ＮＹＧＨＲＡＩＶＱＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８４；本明細書における配列番号１６３１）、ＮＹＡＮＨＱＦＶＶＣＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８５；本明細書における配列番号１６３２）、ＮＹＤＤＤＰＴＧＶＬＬＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８６；本明細書における配列番号１６３３）、ＮＹＤＤＰＴＧＶＬＬＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８７；本明細書における配列番号１６３４）、ＮＦＥＱＱＮＳＶＥＷＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８８；本明細書における配列番号１６３５）、ＳＱＳＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号８９および配列番号２４１；本明細書における配列番号１６３６）、ＮＮＧＳＱＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９０；本明細書における配列番号１６３７）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＷＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９１；本明細書における配列番号１６３８）、ＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９２；本明細書における配列番号１６３９）、ＨＫＤＤＥＥＫＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９３、２０９、２１４、２１９、２２４、２３４、２３９、および２４４；本明細書における配列番号１６４０）、ＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＥＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９４；本明細書における配列番号１６４１）、ＱＲＧＮＮＱＡＡＴＡＤＶＮＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９５；本明細書における配列番号１６４２）、ＮＹＮＫＫＳＶＮＶＤＦＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９６；本明細書における配列番号１６４３）、ＳＱＳＧＡＳＮＹＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０６；本明細書における配列番号１６４４）、ＳＡＳＧＡＳＮＦＮＳＥＧＧＳＬＴＱＳＳＬＧＦＳＴＤＧＥＮＮＮＳＤＦＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０７；本明細書における配列番号１６４５）、ＳＱＳＧＡＳＮＹＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＴＤＧＥＮＮＮＳＤＦＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０８；本明細書における配列番号１６４６）、ＳＡＳＧＡＳＮＹＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＴＳＡＤＮＮＮＳＥＦＳＷＰＧＡＴＴＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０９；本明細書における配列番号１６４７）、ＳＱＳＧＡＳＮＦＮＳＥＧＧＳＬＴＱＳＳＬＧＦＳＴＤＧＥＮＮＮＳＤＦＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１１０；本明細書における配列番号１６４８）、ＳＡＳＧＡＳＮＹＮＴＰＳＧＳＬＴＱＳＳＬＧＦＳＴＤＧＥＮＮＮＳＤＦＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１１１；本明細書における配列番号１６４９）、ＳＱＳＧＡＳＮＹＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＴＳＡＤＮＮＮＳＤＦＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１１２；本明細書における配列番号１６５０）、ＳＧＡＧＡＳＮＦＮＳＥＧＧＳＬＴＱＳＳＬＧＦＳＴＤＧＥＮＮＮＳＤＦＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１１３；本明細書における配列番号１６５１）、ＳＧＡＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１７６；本明細書における配列番号１６５２）、ＮＳＥＧＧＳＬＴＱＳＳＬＧＦＳ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１７７、１８５、１９３および２０２；本明細書における配列番号１６５３）、ＴＤＧＥＮＮＮＳＤＦＳ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１７８；本明細書における配列番号１６５４）、ＳＥＦＳＷＰＧＡＴＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１７９；本明細書における配列番号１６５５）、ＴＳＡＤＮＮＮＳＤＦＳＷＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１８０；本明細書における配列番号１６５６）、ＳＱＳＧＡＳＮＹ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１８１、１８７、および１９８；本明細書における配列番号１６５７）、ＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１８２、１８８、１９１、および１９９；本明細書における配列番号１６５８）、ＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１８３；本明細書における配列番号１６５９）、ＳＡＳＧＡＳＮＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１８４；本明細書における配列番号１６６０）、ＴＤＧＥＮＮＮＳＤＦＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１８６、１８９、１９４、１９７、および２０３；本明細書における配列番号１６６１）、ＳＡＳＧＡＳＮＹ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１９０および配列番号１９５；本明細書における配列番号１６６２）、ＴＳＡＤＮＮＮＳＥＦＳＷＰＧＡＴＴＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１９２；本明細書における配列番号１６６３）、ＮＴＰＳＧＳＬＴＱＳＳＬＧＦＳ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１９６；本明細書における配列番号１６６４）、ＴＳＡＤＮＮＮＳＤＦＳＷＴＧＡＴＫＹＨ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２００；本明細書における配列番号１６６５）、ＳＧＡＧＡＳＮＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２０１；本明細書における配列番号１６６６）、ＣＴＣＣＡＧＶＶＳＶＶＳＭＲＳＲＶＣＶＮＳＧＣＡＧＣＴＤＨＣＶＶＳＲＮＳＧＴＣＶＭＳＡＣＡＣＡＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２０４；本明細書における配列番号１６６７）、ＣＴＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＧＣＡＧＣＴＡＣＣＧＣＡＧＡＴＧＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２０５；本明細書における配列番号１６６８）、ＳＡＡＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２０６；本明細書における配列番号１６６９）、ＹＦＬＳＲＴＮＴＥＳＧＳＴＴＱＳＴＬＲＦＳＱＡＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２０７；本明細書における配列番号１６７０）、ＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＤＦＳ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２０８、２２８、および２５３；本明細書における配列番号１６７１）、ＫＱＧＳＥＫＴＤＶＤＩＤＫＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１０；本明細書における配列番号１６７２）、ＳＴＡＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１１；本明細書における配列番号１６７３）、ＹＦＬＳＲＴＮＴＴＳＧＩＥＴＱＳＴＬＲＦＳＱＡＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１２および配列番号２４７；本明細書における配列番号１６７４）、ＳＫＴＤＧＥＮＮＮＳＤＦＳ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１３および配列番号２４８；本明細書における配列番号１６７５）、ＫＱＧＡＡＡＤＤＶＥＩＤＧＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１５および配列番号２５０；本明細書における配列番号１６７６）、ＳＥＡＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１６；本明細書における配列番号１６７７）、ＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１７、２３２および２４２；本明細書における配列番号１６７８）、ＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２１８、２３３、２３８、および２４３；本明細書における配列番号１６７９）、ＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２２０、２２５および２４５；本明細書における配列番号１６８０）、ＹＦＬＳＲＴＮＤＡＳＧＳＤＴＫＳＴＬＬＦＳＱＡＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２２２；本明細書における配列番号１６８１）、ＳＴＴＰＳＥＮＮＮＳＥＹＳ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２２３；本明細書における配列番号１６８２）、ＳＡＡＧＡＴＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２２６および配列番号２５１；本明細書における配列番号１６８３）、ＹＦＬＳＲＴＮＧＥＡＧＳＡＴＬＳＥＬＲＦＳＱＡＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２２７；本明細書における配列番号１６８４）、ＨＧＤＤＡＤＲＦ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２２９および配列番号２５４；本明細書における配列番号１６８５）、ＫＱＧＡＥＫＳＤＶＥＶＤＲＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２３０および配列番号２５５；本明細書における配列番号１６８６）、ＫＱＤＳＧＧＤＮＩＤＩＤＱＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２３５；本明細書における配列番号１６８７）、ＳＤＡＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２３６；本明細書における配列番号１６８８）、ＹＦＬＳＲＴＮＴＥＧＧＨＤＴＱＳＴＬＲＦＳＱＡＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２３７；本明細書における配列番号１６８９）、ＫＥＤＧＧＧＳＤＶＡＩＤＥＶ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２４０；本明細書における配列番号１６９０）、ＳＮＡＧＡＳＮ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２４６；本明細書における配列番号１６９１）、ならびにＹＦＬＳＲＴＮＧＥＡＧＳＡＴＬＳＥＬＲＦＳＱＰＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２５２；本明細書における配列番号１６９２）のいずれかであってもよく、またはいずれを有してもよい。アミノ酸突然変異部位をコードし得るヌクレオチド配列の非限定的な例としては、以下、ＡＧＣＶＶＭＤＣＡＧＧＡＲＳＣＡＳＣＡＡＣ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９７；本明細書における配列番号１６９３）、ＡＡＣＲＡＣＲＲＳＭＲＳＭＡＧＧＣＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９８；本明細書における配列番号１６９４）、ＣＡＣＲＲＧＧＡＣＲＲＣ
ＲＭＳＲＲＳＡＲＳＴＴＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号９９；本明細書における配列番号１６９５）、ＴＡＴＴＴＣＴＴＧＡＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＣＲＶＣＶＶＳＲＳＣＧＧＡＭＮＣＶＨＳＡＣＧＭＨＳＴＣＡＶＶＳＣＴＴＶＤＳＴＴＴＴＣＴＣＡＧＳＢＣＲＧＳＧＣＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１００；本明細書における配列番号１６９６）、ＴＣＡＡＭＡＭＭＡＶＮＳＲＶＣＳＲＳＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＧＴＲＡＳＴＴＣＴＣＧＴＧＧＭＭＡＧＧＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０１；本明細書における配列番号１６９７）、ＡＡＧＳＡＡＲＲＣＲＳＣＲＶＳＲＶＡＲＶＣＲＡＴＲＹＣＧＭＳＮＨＣＲＶＭＶＲＳＧＴＣ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０２；本明細書における配列番号１６９８）、ＣＡＧＶＶＳＶＶＳＭＲＳＲＶＣＶＮＳＧＣＡＧＣＴＤＨＣＶＶＳＲＮＳＧＴＣＶＭＳＡＣＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０３；本明細書における配列番号１６９９）、ＡＡＣＴＷＣＲＶＳＶＡＳＭＶＳＶＨＳＤＤＴＧＴＧＳＷＳＴＫＳＡＣＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号１０４；本明細書における配列番号１７００）、ＴＴＧＴＴＧＡＡＣＡＴＣＡＣＣＡＣＧＴＧＡＣＧＣＡＣＧＴＴＣ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２５６；本明細書における配列番号１７０１）、ＴＣＣＣＣＧＴＧＧＴＴＣＴＡＣＴＡＣＡＴＡＡＴＧＴＧＧＣＣＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２５７；本明細書における配列番号１７０２）、ＴＴＣＣＡＣＡＣＴＣＣＧＴＴＴＴＧＧＡＴＡＡＴＧＴＴＧＡＡＣ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２５８；本明細書における配列番号１７０３）、ＡＧＧＧＡＣＡＴＣＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＴＧＣＴＧＴＧＧＴＣＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２５９；本明細書における配列番号１７０４）、ＡＧＧＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＧＡＣＴＣＧＣＣＣＴＡＡＴＣＣ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６０；本明細書における配列番号１７０５）、ＴＣＣＴＡＧＴＡＧＡＡＧＡＣＡＣＣＣＴＣＴＣＡＣＴＧＣＣＣＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６１；本明細書における配列番号１７０６）、ＡＧＴＡＣＣＡＴＧＴＡＣＡＣＣＣＡＣＴＣＴＣＣＣＡＧＴＧＣＣ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６２；本明細書における配列番号１７０７）、ＡＴＡＴＧＧＡＣＧＴＴＣＡＴＧＣＴＧＡＴＣＡＣＣＡＴＡＣＣＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６３；本明細書における配列番号１７０８）、ＡＧＣＡＧＧＡＧＣＴＣＣＴＴＧＧＣＣＴＣＡＧＣＧＴＧＣＧＡＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６４；本明細書における配列番号１７０９）、ＡＣＡＡＧＣＡＧＣＴＴＣＡＣＴＡＴＧＡＣＡＡＣＣＡＣＴＧＡＣ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６５；本明細書における配列番号１７１０）、ＣＡＧＣＣＴＡＧＧＡＡＣＴＧＧＣＴＴＣＣＴＧＧＡＣＣＣＴＧＴＴＡＣＣＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＡＧＴＣＴＣＡＡＭＡＭＭＡＶＮＳＲＶＣＳＲＳＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＧＴＲＡＳＴＴＣＴＣＣＴＧＧＭＭＡＧＧＡＧＣＴＡＣＣＡＡＧＴＡＣＣＡＣＣＴＣＡＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＣＴＣＴＣＴＧＧＴＧＡＡＴＣＣＣＧＧＡＣＣＡＧＣＴＡＴＧＧＣＡＡＧＣＣＡＣＲＲＧＧＡＣＲＲＣＲＭＳＲＲＳＡＲＳＴＴＴＴＴＴＣＣＴＣＡＧＡＧＣＧＧＧＧＴＴＣＴＣＡＴＣＴＴＴＧＧＧＡＡＧＳＡＡＲＲＣＲＳＣＲＶＳＲＶＡＲＶＣＲＡＴＲＹＣＧＭＳＮＨＣＲＶＭＶＲＳＧＴＣＡＴＧＡＴＴＡＣＡＧＡＣＧＡＡＧＡＧＧＡＧＡＴＣＴＧＧＡＣ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６６；本明細書における配列番号１７１１）、ＴＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＣＧＧＴＣＧＴＣＴＣＴＣＡＧＡＧＴＴＫＴＫＫＴ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６７；本明細書における配列番号１７１２）、ＡＧＡＧＧＡＣＣＫＫＴＣＣＴＣＧＡＴＧＧＴＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＴＴＡ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６８；本明細書における配列番号１７１３）、ＣＣＡＣＴＴＡＧＧＧＣＣＴＧＧＴＣＧＡＴＡＣＣＧＴＴＣＧＧＴＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２６９；本明細書における配列番号１７１４）、またはＴＣＴＣＧＣＣＣＣＡＡＧＡＧＴＡＧＡＡＡＣＣＣＴＴＣＳＴＴＹＹＧ（米国特許出願公開第２０１６０３６９２９８号明細書の配列番号２７０；本明細書における配列番号１７１５）が挙げられる。
【０１２１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、国際公開第２０１６１３４３７５号パンフレットの配列番号９または配列番号１０など、国際公開第２０１６１３４３７５号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの眼細胞ターゲティングペプチドを含み得る。更に、国際公開第２０１６１３４３７５号パンフレットに記載される眼細胞ターゲティングペプチドまたはアミノ酸のいずれかが、限定はされないが、ＡＡＶ２（国際公開第２０１６１３４３７５号パンフレットの配列番号８；本明細書における配列番号１７１６）、またはＡＡＶ９（国際公開第２０１６１３４３７５号パンフレットの配列番号１１；本明細書における配列番号１７１７）など、任意の親ＡＡＶ血清型に挿入されてもよい。一部の実施形態において、挿入などの改変は、ＡＡＶ２タンパク質のＰ３４〜Ａ３５、Ｔ１３８〜Ａ１３９、Ａ１３９〜Ｐ１４０、Ｇ４５３〜Ｔ４５４、Ｎ５８７〜Ｒ５８８、および／またはＲ５８８〜Ｑ５８９になされる。特定の実施形態において、挿入は、ＡＡＶ９のＤ３８４、Ｇ３８５、１５６０、Ｔ５６１、Ｎ５６２、Ｅ５６３、Ｅ５６４、Ｅ５６５、Ｎ７０４、および／またはＹ７０５になされる。眼細胞ターゲティングペプチドは、限定はされないが、以下のアミノ酸配列、ＧＳＴＰＰＰＭ（国際公開第２０１６１３４３７５号パンフレットの配列番号１；本明細書における配列番号１７１８）またはＧＥＴＲＡＰＬ（国際公開第２０１６１３４３７５号パンフレットの配列番号４；本明細書における配列番号１７１９）のいずれかであってもよい。
【０１２２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、米国特許出願公開第２０１７０１４５４０５号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りに改変されていてもよい。ＡＡＶ血清型としては、改変ＡＡＶ２（例えば、Ｙ４４４Ｆ、Ｙ５００Ｆ、Ｙ７３０Ｆおよび／またはＳ６６２Ｖの改変）、改変ＡＡＶ３（例えば、Ｙ７０５Ｆ、Ｙ７３１Ｆおよび／またはＴ４９２Ｖの改変）、ならびに改変ＡＡＶ６（例えば、Ｓ６６３Ｖおよび／またはＴ４９２Ｖの改変）が挙げられ得る。
【０１２３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、国際公開第２０１７０８３７２２号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りに改変されていてもよい。ＡＡＶ血清型としては、ＡＡＶ１（Ｙ７０５＋７３１Ｆ＋Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ２（Ｙ４４４＋５００＋７３０Ｆ＋Ｔ４９１Ｖ）、ＡＡＶ３（Ｙ７０５＋７３１Ｆ）、ＡＡＶ５、ＡＡＶ５（Ｙ４３６＋６９３＋７１９Ｆ）、ＡＡＶ６（ＶＰ３バリアントＹ７０５Ｆ／Ｙ７３１Ｆ／Ｔ４９２Ｖ）、ＡＡＶ８（Ｙ７３３Ｆ）、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９（ＶＰ３バリアントＹ７３１Ｆ）、およびＡＡＶ１０（Ｙ７３３Ｆ）が挙げられ得る。
【０１２４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、国際公開第２０１７０１５１０２号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの、アミノ酸ＳＰＡＫＦＡ（国際公開第２０１７０１５１０２号パンフレットの配列番号２４；本明細書における配列番号１７２０）またはＮＫＤＫＬＮ（国際公開第２０１７０１５１０２号パンフレットの配列番号２；本明細書における配列番号１７２１）を含む操作されたエピトープを含み得る。エピトープは、ＡＡＶ８（国際公開第２０１７０１５１０２号パンフレットの配列番号３）のＶＰ１カプシドの付番に基づきアミノ酸６６５〜６７０の領域および／またはＡＡＶ３Ｂ（配列番号３）の残基６６４〜６６８の領域に挿入されていてもよい。
【０１２５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、限定はされないが、いずれかの組合せで、ＡＡＶ１のアミノ酸残基２６２〜２６８、３７０〜３７９、４５１〜４５９、４７２〜４７３、４９３〜５００、５２８〜５３４、５４７〜５５２、５８８〜５９７、７０９〜７１０、もしくは７１６〜７２２の１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、もしくは７つ）に、またはＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｒｈ３２．３３、ウシＡＡＶ、もしくは鳥類ＡＡＶの等価なアミノ酸残基に置換を含み得る、カプシドタンパク質を有するＡＡＶバリアントなど、国際公開第２０１７０５８８９２号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの配列であってもよく、またはそれを有してもよい。アミノ酸置換は、限定はされないが、国際公開第２０１７０５８８９２号パンフレットに記載されるアミノ酸配列のいずれかであってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶは、以下の残基、ＡＡＶ１（国際公開第２０１７０５８８９２号パンフレットの配列番号１）の２５６Ｌ、２５８Ｋ、２５９Ｑ、２６１Ｓ、２６３Ａ、２６４Ｓ、２６５Ｔ、２６６Ｇ、２７２Ｈ、３８５Ｓ、３８６Ｑ、Ｓ４７２Ｒ、Ｖ４７３Ｄ、Ｎ５００Ｅ、５４７Ｓ、７０９Ａ、７１０Ｎ、７１６Ｄ、７１７Ｎ、７１８Ｎ、７２０Ｌ、Ａ４５６Ｔ、Ｑ４５７Ｔ、Ｎ４５８Ｑ、Ｋ４５９Ｓ、Ｔ４９２Ｓ、Ｋ４９３Ａ、Ｓ５８６Ｒ、Ｓ５８７Ｇ、Ｓ５８８Ｎ、Ｔ５８９Ｒおよび／または７２２Ｔのいずれかの組合せ、ＡＡＶ５（国際公開第２０１７０５８８９２号パンフレットの配列番号５）の２４４Ｎ、２４６Ｑ、２４８Ｒ、２４９Ｅ、２５０Ｉ、２５１Ｋ、２５２Ｓ、２５３Ｇ、２５４Ｓ、２５５Ｖ、２５６Ｄ、２６３Ｙ、３７７Ｅ、３７８Ｎ、４５３Ｌ、４５６Ｒ、５３２Ｑ、５３３Ｐ、５３５Ｎ、５３６Ｐ、５３７Ｇ、５３８Ｔ、５３９Ｔ、５４０Ａ、５４１Ｔ、５４２Ｙ、５４３Ｌ、５４６Ｎ、６５３Ｖ、６５４Ｐ、６５６Ｓ、６９７Ｑ、６９８Ｆ、７０４Ｄ、７０５Ｓ、７０６Ｔ、７０７Ｇ、７０８Ｅ、７０９Ｙおよび／または７１０Ｒのいずれかの組合せ、ＡＡＶ５（国際公開第２０１７０５８８９２号パンフレットの配列番号５）の２４８Ｒ、３１６Ｖ、３１７Ｑ、３１８Ｄ、３１９Ｓ、４４３Ｎ、５３０Ｎ、５３１Ｓ、５３２Ｑ、５３３Ｐ、５３４Ａ、５３５Ｎ、５４０Ａ、５４１Ｔ、５４２Ｙ、５４３Ｌ、５４５Ｇ、５４６Ｎ、６９７Ｑ、７０４Ｄ、７０６Ｔ、７０８Ｅ、７０９Ｙおよび／または７１０Ｒのいずれかの組合せ、ＡＡＶ６（国際公開第２０１７０５８８９２号パンフレットの配列番号６）の２６４Ｓ、２６６Ｇ、２６９Ｎ、２７２Ｈ、４５７Ｑ、５８８Ｓおよび／または５８９Ｉのいずれかの組合せ、ＡＡＶ８（国際公開第２０１７０５８８９２号パンフレットの配列番号８）の４５７Ｔ、４５９Ｎ、４９６Ｇ、４９９Ｎ、５００Ｎ、５８９Ｑ、５９０Ｎおよび／または５９２Ａのいずれかの組合せ、ＡＡＶ９（国際公開第２０１７０５８８９２号パンフレットの配列番号９）の４５１Ｉ、４５２Ｎ、４５３Ｇ、４５４Ｓ、４５５Ｇ、４５６Ｑ、４５７Ｎおよび／または４５８Ｑのいずれかの組合せでアミノ酸置換を含み得る。
【０１２６】
一部の実施形態において、ＡＡＶは、国際公開第２０１７０６６７６４号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りに、ＶＰ１の１５５、１５６、および１５７位またはＶＰ２の１７、１８、１９、および２０位にアミノ酸の配列を含み得る。アミノ酸の配列は、限定はされないが、Ｎ−Ｓ−Ｓ、Ｓ−Ｘ−Ｓ、Ｓ−Ｓ−Ｙ、Ｎ−Ｘ−Ｓ、Ｎ−Ｓ−Ｙ、Ｓ−Ｘ−Ｙ、またはＮ−Ｘ−Ｙであってもよく、式中、Ｎ、Ｘ、およびＹは、限定はされないが、独立に、非セリンまたは非スレオニンのアミノ酸であり、ＡＡＶは、限定はされないが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、またはＡＡＶ１２であってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶは、ＶＰ１の１５６、１５７、もしくは１５８位またはＶＰ２の１９、２０、もしくは２１位の少なくとも１つのアミノ酸の欠失を含んでいてもよく、ＡＡＶは、限定はされないが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、またはＡＡＶ１２であってもよい。
【０１２７】
一部の実施形態において、ＡＡＶは、デバーマン（Ｄｅｖｅｒｍａｎ）ら（ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、第３４巻、第２号、ｐ．２０４〜２０９、２０１６年）、チャン（Ｃｈａｎ）ら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、第２０巻、第８号、ｐ．１１７２〜１１７９、２０１７年）、ならびに国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットおよび国際公開第２０１７１００６７１号パンフレット（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）により記載される通りのＣｒｅ組換えに基づくＡＡＶ標的進化（Ｃｒｅ−ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ＡＡＶ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ、ＣＲＥＡＴＥ）によって作製した血清型であり得る。一部の実施形態において、この様式で作製したＡＡＶ血清型は、この様式で作製しなかったＡＡＶ血清型と比較して改善されたＣＮＳ伝達ならびに／または神経およびアストロサイト向性を有する。非限定的な例として、ＡＡＶ血清型は、ターゲティングペプチド、例えば、限定はされないが、ＰＨＰ．Ｂ、ＰＨＰ．Ｂ２、ＰＨＰ．Ｂ３、ＰＨＰ．Ａ、ＰＨＰ．Ｓ、ＰＨＰ．Ｎ、Ｇ２Ａ１２、Ｇ２Ａ１５、Ｇ２Ａ３、Ｇ２Ｂ４またはＧ２Ｂ５を含んでもよい。一部の実施形態において、これらのＡＡＶ血清型は、アミノ酸５８８と５８９との間にアミノ酸インサートを有するＡＡＶ９（配列番号１３６）またはＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒ（配列番号９）の誘導体であってもよい。これらのアミノ酸インサートの非限定的な例としては、ＴＬＡＶＰＦＫ（ＰＨＰ．Ｂ；配列番号１２６０）、ＳＶＳＫＰＦＬ（ＰＨＰ．Ｂ２；配列番号１２６８）、ＦＴＬＴＴＰＫ（ＰＨＰ．Ｂ３；配列番号１２６９）、ＹＴＬＳＱＧＷ（ＰＨＰ．Ａ；配列番号１２７５）、ＱＡＶＲＴＳＬ（ＰＨＰ．Ｓ；配列番号１３１９）、ＬＡＫＥＲＬＳ（Ｇ２Ａ３；配列番号１３２０）、ＭＮＳＴＫＮＶ（Ｇ２Ｂ４；配列番号１３２１）、ＶＳＧＧＨＨＳ（Ｇ２Ｂ５；配列番号１３２２）および／またはＤＧＴＬＡＶＰＦＫＡＱ（ＰＨＰ．Ｎ；配列番号１２８９）が挙げられる。
【０１２８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ジャクソン（Ｊａｃｋｓｏｎ）ら（Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、第９巻、第１５４号、２０１６年）（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りであり得る。
【０１２９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶ９（配列番号１３５または１３６）である。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ペプチドインサートを有するＡＡＶ９である。
【０１３０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、Ｋ４４９Ｒ  ＡＡＶ９バリアント（配列番号９）である。ＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒは、野生型ＡＡＶ９と同じ機能を有する。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ペプチドインサートを有するＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒである。
【０１３１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は（例えば、国際公開第２０１５０３８９５８号パンフレットに記載されるような）ＰＨＰ．Ｂである。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型をシナプシンプロモータと対にして、より遍在的なプロモータを使用した場合（すなわち、ＣＢＡまたはＣＭＶ）と比較して神経伝達を増強させる。
【０１３２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＰＨＰ．Ｎ（例えば、国際公開第２０１７１００６７１号パンフレットに記載される）である。
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶＰＨＰ．Ｎ（ＰＨＰ．Ｎ）ペプチドまたはそのバリアントを含む血清型である。
【０１３３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ（ＰＨＰ．Ｂ）ペプチドまたはそのバリアントを含む血清型である。
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶＰＨＰ．Ａ（ＰＨＰ．Ａ）ペプチドまたはそのバリアントを含む血清型である。
【０１３４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＰＨＰ．Ｓペプチドまたはそのバリアントを含む血清型である。
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＰＨＰ．Ｂ２ペプチドまたはそのバリアントを含む血清型である。
【０１３５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＰＨＰ．Ｂ３ペプチドまたはそのバリアントを含む血清型である。
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、Ｇ２Ｂ４ペプチドまたはそのバリアントを含む血清型である。
【０１３６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、Ｇ２Ｂ５ペプチドまたはそのバリアントを含む血清型である。
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＶＯＹ１０１またはそのバリアントである。一部の実施形態において、ＶＯＹ１０１は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシド配列は、配列番号１７２２の核酸配列を含む。
【０１３７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、ＶＯＹ２０１またはそのバリアントである。一部の実施形態において、ＶＯＹ２０１は、配列番号１７２４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、カプシド配列は、配列番号１７２３の核酸配列を含む。
【０１３８】
一部の実施形態において、ＡＡＶカプシドは、静脈内投与後に血液脳関門の透過を可能にする。かかるＡＡＶカプシドの非限定的な例としては、ペプチドインサート、例えば、限定はされないが、ＡＡＶＰＨＰ．Ｎ（ＰＨＰ．Ｎ）、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ（ＰＨＰ．Ｂ）、ＰＨＰ．Ｓ、Ｇ２Ａ３、Ｇ２Ｂ４、Ｇ２Ｂ５、Ｇ２Ａ１２、Ｇ２Ａ１５、ＰＨＰ．Ｂ２、ＰＨＰ．Ｂ３またはＡＡＶＰＨＰ．Ａ（ＰＨＰ．Ａ）を含む、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒ、ＶＯＹ１０１、ＶＯＹ２０１またはＡＡＶカプシドが挙げられる。
【０１３９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、上述したもののいずれかと５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一性を有するカプシドアミノ酸配列を含み得る。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号１、２、３、９、１３６または１７２４に対して少なくとも８０％同一なカプシドアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号１、２、３、９、１３６または１７２４に対して少なくとも８５％同一なカプシドアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号１、２、３、９、１３６または１７２４に対して少なくとも９０％同一なカプシドアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号１、２、３、９、１３６または１７２４に対して少なくとも９５％同一なカプシドアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号１、２、３、９、１３６または１７２４に対して少なくとも９９％同一なカプシドアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号１、２、３、９、１３６または１７２４のカプシドアミノ酸を含む。
【０１４０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、上述したもののいずれかと５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一性を有するカプシド核酸配列によってコードされてもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号４、１３５、１７２２または１７２３に対して少なくとも８０％同一なカプシド核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号４、１３５、１７２２または１７２３に対して少なくとも８５％同一なカプシド核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号４、１３５、１７２２または１７２３に対して少なくとも９０％同一なカプシド核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号４、１３５、１７２２または１７２３に対して少なくとも９５％同一なカプシド核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号４、１３５、１７２２または１７２３に対して少なくとも９９％同一なカプシド核酸配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ血清型は、配列番号４、１３５、１７２２または１７２３のカプシド核酸配列を含む。
【０１４１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ  ＶＰ１カプシドタンパク質の翻訳の開始コドンは、米国特許第８１６３５４３号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りのＣＴＧ、ＴＴＧ、またはＧＴＧであり得る。
【０１４２】
本開示は、カプシド（Ｃａｐ）遺伝子にコードされる構造的カプシドタンパク質（ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含む）に言及する。これらのカプシドタンパク質はＡＡＶなどのウイルスベクターのタンパク質外部の構造的殻（すなわちカプシド）を形成する。Ｃａｐポリヌクレオチドから合成されたＶＰカプシドタンパク質には、一般に、ペプチド配列中の最初のアミノ酸としてメチオニンが含まれ（Ｍｅｔ１）、これは対応するＣａｐヌクレオチド配列中の開始コドン（ＡＵＧまたはＡＴＧ）に関連している。しかし、最初のメチオニン（Ｍｅｔ１）残基または一般にどの最初のアミノ酸（ＡＡ１）でも、ポリペプチド合成後またはその間に、Ｍｅｔ−アミノペプチダーゼなどのタンパク質プロセシング酵素によって切断されることが一般的である。この「Ｍｅｔ／ＡＡクリッピング」プロセスは、しばしば、ポリペプチド配列中の２番目のアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、セリン、スレオニンなど）の対応するアセチル化に関連している。Ｍｅｔクリッピングは一般的にＶＰ１およびＶＰ３のカプシドタンパク質で起こるが、ＶＰ２カプシドタンパク質でも起こる場合がある。
【０１４３】
Ｍｅｔ／ＡＡクリッピングが不完全な場合、ウイルスカプシドを含む１つ以上（１つ、２つ、または３つ）のＶＰカプシドタンパク質の混合物が生成される場合があり、その一部はＭｅｔ１／ＡＡ１アミノ酸（Ｍｅｔ＋／ＡＡ＋）を含む場合があり、一部はＭｅｔ／ＡＡクリッピング（Ｍｅｔ−／ＡＡ−）の結果としてＭｅｔ１／ＡＡ１アミノ酸を欠く場合がある。カプシドタンパク質におけるＭｅｔ／ＡＡクリッピングに関する更なる議論には、ジン（Ｊｉｎ）ら、「組換えアデノ随伴ウイルスカプシドタンパク質の完全な特徴付けのための、直接液体クロマトグラフィー／質量分析による分析（Ｄｉｒｅｃｔ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｆｏｒ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｄｅｎｏ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃａｐｓｉｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．）」Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０１７年１０月、第２８巻、第５号、ｐ．２５５〜２６７；ホワン（Ｈｗａｎｇ）ら、「細胞タンパク質のＮ末端アセチル化は特定の分解シグナルを生じる（Ｎ−Ｔｅｒｍｉｎａｌ  Ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ＰＲｏｔｅｉｎｓ  Ｃｒｅａｔｅｓ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  Ｓｉｇｎａｌｓ．）」、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０１０年２月１９日、第３２７巻、第５９６８号、ｐ．９７３〜９７７（これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）を参照されたい。
【０１４４】
本開示によれば、カプシドタンパク質への言及は、クリップされた（Ｍｅｔ−／ＡＡ−）配列またはクリップされていない（Ｍｅｔ＋／ＡＡ＋）配列のどちらかに限定されず、文脈内において、独立したカプシドタンパク質、カプシドタンパク質の混合物から構成されるウイルスカプシド、および／または本開示のカプシドタンパク質をコードする、記載する、生じる、もしくはもたらすポリヌクレオチド配列（もしくはその断片）を指してもよい。また、「カプシドタンパク質」または「カプシドポリペプチド」（ＶＰ１、ＶＰ２、またはＶＰ３など）への直接の言及は、Ｍｅｔ１／ＡＡ１アミノ酸（Ｍｅｔ＋／ＡＡ＋）、ならびにＭｅｔ／ＡＡクリッピング（Ｍｅｔ−／ＡＡ−）の結果としてＭｅｔ１／ＡＡ１アミノ酸を欠く対応するＶＰカプシドタンパク質を含むＶＰカプシドタンパク質も含み得る。
【０１４５】
更に、本開示によれば、Ｍｅｔ１／ＡＡ１アミノ酸（Ｍｅｔ＋／ＡＡ＋）を含む１つ以上のカプシドタンパク質をそれぞれ含むまたはコードする、特定の配列番号（タンパク質または核酸にかかわらない）への言及は、配列を再調査した際に、最初の列挙したアミノ酸（メチオニンであるかどうかにかかわらない）を単に欠く任意の配列であることは容易に明らかであるため、Ｍｅｔ１／ＡＡ１アミノ酸を欠くＶＰカプシドタンパク質を教示するものと理解されたい。
【０１４６】
非限定的な例として、７３６個のアミノ酸の長さであり、ＡＵＧ／ＡＴＧ開始コドンにコードされる「Ｍｅｔ１」アミノ酸（Ｍｅｔ＋）を含む、ＶＰ１ポリペプチド配列への言及も、７３５個のアミノ酸の長さであり、７３６個のアミノ酸のＭｅｔ＋配列の「Ｍｅｔ１」アミノ酸（Ｍｅｔ−）が含まれない、ＶＰ１ポリペプチド配列を教示するものと理解され得る。第２の非限定的な例として、７３６個のアミノ酸の長さであり、任意のＮＮＮ開始コドンにコードされる「ＡＡ１」アミノ酸（ＡＡ１＋）を含む、ＶＰ１ポリペプチド配列への言及も、７３５個のアミノ酸の長さであり、７３６個のアミノ酸のＡＡ１＋配列の「ＡＡ１」アミノ酸（ＡＡ１−）が含まれない、ＶＰ１ポリペプチド配列を教示するものと理解され得る。
【０１４７】
ＶＰカプシドタンパク質から形成されたウイルスカプシドへの言及（特定のＡＡＶカプシド血清型への言及など）は、Ｍｅｔ１／ＡＡ１アミノ酸（Ｍｅｔ＋／ＡＡ１＋）、Ｍｅｔ／ＡＡ１クリッピング（Ｍｅｔ−／ＡＡ１−）の結果としてＭｅｔ１／ＡＡ１アミノ酸を欠く対応するＶＰカプシドタンパク質、またはその組合せ（Ｍｅｔ＋／ＡＡ１＋およびＭｅｔ−／ＡＡ１−）を含むＶＰカプシドタンパク質を組み入れることができる。
【０１４８】
非限定的な例として、ＡＡＶカプシド血清型としては、ＶＰ１（Ｍｅｔ＋／ＡＡ１＋）、ＶＰ１（Ｍｅｔ−／ＡＡ１−）、またはＶＰ１（Ｍｅｔ＋／ＡＡ１＋）とＶＰ１（Ｍｅｔ−／ＡＡ１−）との組合せを挙げることができる。ＡＡＶカプシド血清型として、ＶＰ３（Ｍｅｔ＋／ＡＡ１＋）、ＶＰ３（Ｍｅｔ−／ＡＡ１−）、またはＶＰ３（Ｍｅｔ＋／ＡＡ１＋）とＶＰ３（Ｍｅｔ−／ＡＡ１−）との組合せを挙げることもでき、また、ＶＰ２（Ｍｅｔ＋／ＡＡ１）とＶＰ２（Ｍｅｔ−／ＡＡ１−）との同様の任意選択の組合せも挙げることができる。
【０１４９】
発現ベクター
一部の態様では、本開示のＡＡＶ粒子は、ＦＸＮをコードする発現ベクターとして働く。発現ベクターは、ＡＡＶに限定されず、アデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、プラスミド、ベクター、またはそれらの任意のバリアントであってもよい。
【０１５０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子発現ベクターは、５’から３’へと記載されるＩＴＲからＩＴＲまでに、ＩＴＲ、プロモータ、イントロン、ＦＸＮをコードする核酸配列、ポリＡ配列およびＩＴＲを含んでもよい。
【０１５１】
末端逆位配列（ＩＴＲ）
本開示のＡＡＶ粒子は、少なくとも１つのＩＴＲ領域とＦＸＮをコードするペイロード領域とを有するウイルスゲノムを含む。本明細書で使用されるとき、「ウイルスゲノム」または「ベクターゲノム」は、少なくとも１つの末端逆位ＩＴＲと少なくとも１つのコード化ペイロードとを含むポリヌクレオチドである。一実施形態において、ウイルスゲノムは２つのＩＴＲを有する。これらの２つのＩＴＲは５’末端および３’末端でペイロード領域に隣接する。ＩＴＲは、複製のための認識部位を含む複製起点として働く。ＩＴＲは、相補的でかつ対称に配置され得る配列領域を含む。本開示のウイルスゲノムに組み込まれるＩＴＲは、天然に存在するポリヌクレオチド配列または組換え的に誘導されたポリヌクレオチド配列を含み得る。
【０１５２】
ＩＴＲは、表１に挙げられる血清型のいずれか、またはその誘導体から選択される、カプシドと同じ血清型に由来していてもよい。ＩＴＲはカプシドとは異なる血清型のものであってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は２つ以上のＩＴＲを有する。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、２つのＩＴＲを含むウイルスゲノムを有する。一部の実施形態において、ＩＴＲは互いに同じ血清型のものである。一部の実施形態において、ＩＴＲは異なる血清型のものである。非限定的な例としては、ＩＴＲのうちのゼロ個、一方、または両方がカプシドと同じ血清型を有することが挙げられる。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子のウイルスゲノムの両方のＩＴＲがＡＡＶ２  ＩＴＲである。
【０１５３】
独立に、各ＩＴＲは約１００ヌクレオチド〜約１５０ヌクレオチド長であってもよい。ＩＴＲは、約１００〜１０５ヌクレオチド長、１０６〜１１０ヌクレオチド長、１１１〜１１５ヌクレオチド長、１１６〜１２０ヌクレオチド長、１２１〜１２５ヌクレオチド長、１２６〜１３０ヌクレオチド長、１３１〜１３５ヌクレオチド長、１３６〜１４０ヌクレオチド長、１４１〜１４５ヌクレオチド長または１４６〜１５０ヌクレオチド長であってもよい。一部の実施形態において、ＩＴＲは１４０〜１４２ヌクレオチド長である。ＩＴＲ長さの非限定的な例は、１０２、１０５、１１９、１３０、１４０、１４１、１４２、または１４５ヌクレオチド長、およびそれと少なくとも９５％の同一性を有するものである。
【０１５４】
一部の実施形態において、１つ以上のＩＴＲは、ＡＡＶ２  ＩＴＲまたはその断片もしくはバリアントである。一部の実施形態において、５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲは共に、ＡＡＶ２  ＩＴＲまたはその断片もしくはバリアントである。一部の実施形態において、１つ以上のＩＴＲは、１４１ヌクレオチド長である。一部の実施形態において、５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲは共に、１４１ヌクレオチド長である。一部の実施形態において、５’ＩＴＲは、配列番号１８１１に対して少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、３’ＩＴＲは、配列番号１８１２に対して少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、５’ＩＴＲは、配列番号１８１１に対して少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含み、３’ＩＴＲは、配列番号１８１２に対して少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、上述した５’および３’ＩＴＲと、フラタキシンをコードする、例えば、配列番号１７２５または少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、上述した５’および３’ＩＴＲと、フラタキシンをコードするペイロード領域、例えば、配列番号１８２４または少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアント、例えば、野生型フラタキシンの機能的特性のうち１つ以上を保持するバリアントを含むペイロード領域とを含む。
【０１５５】
プロモータ
当業者であれば、標的細胞には、限定はされないが、種特異的な、誘導可能な、組織特異的な、または細胞周期特異的なプロモータを含む、特異的なプロモータが必要とされ得ることを認識し得る（パー（Ｐａｒｒ）ら著、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、第３巻、ｐ．１１４５〜９（１９９７年）；その内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０１５６】
一部の実施形態において、中枢神経系（例えば、実質）の細胞へのＡＡＶ粒子の送達は、ＡＡＶゲノムが細胞特異的プロモータ領域を更に含む組成物を含む。一部の実施形態において、送達は、ＡＡＶゲノムが遍在的なプロモータ領域を更に含む組成物を含む。
【０１５７】
一部の実施形態において、プロモータは、ペイロードまたはトランス遺伝子の発現をドライブするのに効率的である。一部の実施形態において、プロモータは、ＦＸＮの発現をドライブするのに効率的である。
【０１５８】
一部の実施形態において、ＦＸＮプロモータは、ＦＸＮまたはそのバリアントをコードするＡＡＶ粒子のウイルスゲノムにおいて使用される。特定の実施形態は、ＦＸＮプロモータが最適なＦＸＮ発現のために操作されることを提供する。
【０１５９】
一部の実施形態において、プロモータは、標的組織、例えば、限定はされないが、神経系組織（例えば、ＣＮＳ組織）において、一定期間にわたるペイロード、例えば、ＦＸＮの発現を提供する弱いプロモータである。発現は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、２週間、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、３週間、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月、１１ヵ月、１年、１３ヵ月、１４ヵ月、１５ヵ月、１６ヵ月、１７ヵ月、１８ヵ月、１９ヵ月、２０ヵ月、２１ヵ月、２２ヵ月、２３ヵ月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年または１０年超の期間であってもよい。発現は、１〜５時間、１〜１２時間、１〜２日、１〜５日、１〜２週間、１〜３週間、１〜４週間、１〜２ヵ月、１〜４ヵ月、１〜６ヵ月、２〜６ヵ月、３〜６ヵ月、３〜９ヵ月、４〜８ヵ月、６〜１２ヵ月、１〜２年、１〜５年、２〜５年、３〜６年、３〜８年、４〜８年または５〜１０年であってもよい。一部の実施形態において、プロモータは、神経組織においてペイロードを持続的に発現させる弱いプロモータである。
【０１６０】
一部の実施形態において、プロモータは、１ｋｂサイズ未満のプロモータであってもよい。プロモータは、５０、５５、１００、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３３２、３４０、３５０、３６０、３６１、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５０５、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、または８００ヌクレオチド超の長さを有してもよい。プロモータは、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜３００、２００〜４００、２００〜５００、２００〜６００、２００〜７００、２００〜８００、３００〜４００、３００〜５００、３００〜６００、３００〜７００、３００〜８００、４００〜５００、４００〜６００、４００〜７００、４００〜８００、５００〜６００、５００〜７００、５００〜８００、６００〜７００、６００〜８００、または７００〜８００ヌクレオチドの長さを有してもよい。
【０１６１】
一部の実施形態において、プロモータは、２つ以上の成分、例えば、限定はされないが、ＣＭＶとＣＢＡとの組合せであってもよい。各成分は、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０、５００、５１０、５２０、５３０、５４０、５５０、５６０、５７０、５８０、５９０、６００、６１０、６２０、６３０、６４０、６５０、６６０、６７０、６８０、６９０、７００、７１０、７２０、７３０、７４０、７５０、７６０、７７０、７８０、７９０、８００、または８００ヌクレオチド超の長さを有してもよい。各成分は、２００〜３００、２００〜４００、２００〜５００、２００〜６００、２００〜７００、２００〜８００、３００〜４００、３００〜５００、３００〜６００、３００〜７００、３００〜８００、４００〜５００、４００〜６００、４００〜７００、４００〜８００、５００〜６００、５００〜７００、５００〜８００、６００〜７００、６００〜８００、または７００〜８００ヌクレオチドの長さを有してもよい。一部の実施形態において、プロモータは、３８２ヌクレオチドＣＭＶエンハンサー配列と２６０ヌクレオチドＣＢＡプロモータ配列との組合せである。一部の実施形態において、プロモータは、３８０ヌクレオチドＣＭＶエンハンサー配列と２６０ヌクレオチドＣＢＡプロモータ配列との組合せである。
【０１６２】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＦＸＮの標的特異性および発現を増強する少なくとも１つのエレメントを含む（例えば、パウエルら（Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．），遺伝子療法におけるトランス遺伝子標的特異性および発現を増強するウイルス発現カセットエレメント（Ｖｉｒａｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃａｓｓｅｔｔｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ｔｏ  Ｅｎｈａｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）、２０１５を参照されたい；その内容は全体として本願明細書に援用される）。発現を増強するエレメントの非限定的な例としては、プロモータ、内因性ｍｉＲＮＡ、転写後調節エレメント（ＰＲＥ）、ポリアデニル化（ポリＡ）シグナル配列、上流エンハンサー（ＵＳＥ）、ＣＭＶエンハンサーおよび／またはイントロンが挙げられる。特定の実施形態において、ＦＸＮの標的特異性および／または発現を増強するために使用されるエレメントは、「エンハンサー」または「エンハンサー配列」と称される。一部の実施形態において、プロモータは、エンハンサー配列を含んでもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、プロモータとは別の、ウイルスゲノムの成分であってもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、ウイルスゲノム中のプロモータ配列に対して５’であってもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、ウイルスゲノム中のプロモータ配列に対して３’であってもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１７７７を含むまたはそれからなる。
【０１６３】
本明細書で使用されるとき、「イントロン」または「イントロン配列」は、全長イントロンまたはその断片を包含する。本明細書で使用されるとき、「エクソン」または「エクソン配列」は、全長エクソンまたはその断片を包含する。一部の実施形態において、エンハンサーは、少なくとも１つのイントロンまたはエクソン配列を含んでもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、少なくとも１つのイントロン配列を含んでもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、少なくとも１つのエクソン配列を含んでもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、１つのイントロン配列および１つのエクソン配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサー配列は、２つのイントロン配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサー配列は、２つのエクソン配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサー配列は、２つのイントロン配列および２つのエクソン配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１８１８を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、２つのイントロン配列および２つのエクソン配列を含んでもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、ｉｅ１エクソン（例えば、エクソン１）、ｉｅ１イントロン（例えば、イントロン１）、ヒトベータ−グロビンイントロン（例えば、イントロン２）およびヒトベータ−グロビンエクソン（例えば、エクソン３）を含んでもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、５’から３’へと、配列番号１８１７、１８１９、１８２０、１８２１を含んでもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１８１６を含んでもよい。
【０１６４】
ほとんどの組織で発現を促進するプロモータとしては、限定はされないが、ヒト伸長因子１α−サブユニット（ＥＦ１α）、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ニワトリβ−アクチン（ＣＢＡ）およびその誘導体ＣＡＧ、βグルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）またはユビキチンＣ（ＵＢＣ）が挙げられる。組織特異的発現エレメントは、限定はされないが、ニューロン、アストロサイトまたはオリゴデンドロサイトに発現を制限するために使用することができる神経系プロモータなど、発現を特定の細胞型に限定するために使用することができる。ニューロンの組織特異的発現エレメントの非限定的な例としては、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血小板由来増殖因子Ｂ鎖（ＰＤＧＦ−β）、シナプシン（Ｓｙｎ）、メチル−ＣｐＧ結合タンパク質２（ＭｅＣＰ２）、ＣａＭＫＩＩ、ｍＧｌｕＲ２、ＮＦＬ、ＮＦＨ、ｎβ２、ＰＰＥ、ＥｎｋおよびＥＡＡＴ２プロモータが挙げられる。アストロサイトに対する組織特異的発現エレメントの非限定的な例としては、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）およびＥＡＡＴ２プロモータが挙げられる。オリゴデンドロサイトに対する組織特異的発現エレメントの非限定的な例としては、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）プロモータが挙げられる。
【０１６５】
一部の実施形態において、ベクターゲノムはユビキタスプロモータを含む。ユビキタスプロモータの非限定的な例としては、Ｈ１、Ｕ６、ＣＭＶ、ＣＢＡ（誘導体ＣＡＧ、ＣＢｈ等を含む）、ＥＦ−１α、ＰＧＫ、ＵＢＣ、ＧＵＳＢ（ｈＧＢｐ）、およびＵＣＯＥ（ＨＮＲＰＡ２Ｂ１−ＣＢＸ３のプロモータ）が挙げられる。ユー（Ｙｕ）ら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｉｎ、２０１１年、第７巻、ｐ．６３；これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）は、レンチウイルスベクターを使用してラットＤＲＧ細胞および初代ＤＲＧ細胞におけるＣＡＧ、ＥＦＩα、ＰＧＫおよびＵＢＣプロモータ下のｅＧＦＰの発現を評価し、ＵＢＣが他の３つのプロモータよりも弱い発現を示し、全てのプロモータについてわずか１０〜１２％のグリア細胞発現しか見られなかったことを見出した。セーデルブロム（Ｓｏｄｅｒｂｌｏｍ）ら（Ｅ．Ｎｅｕｒｏ、２０１５年；これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）は、運動皮質における注射後のＣＭＶおよびＵＢＣプロモータを含むＡＡＶ８およびＣＭＶプロモータを含むＡＡＶ２におけるｅＧＦＰの発現を研究した。ＵＢＣまたはＥＦＩαプロモータを含むプラスミドの鼻腔内投与は、ＣＭＶプロモータによる発現よりも高い持続的気道発現を示した（例えば、ギル（Ｇｉｌｌ）ら著、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、２００１年、第８巻、ｐ．１５３９〜１５４６（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）を参照のこと）。フセイン（Ｈｕｓａｉｎ）ら（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、２００９年；これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）は、ｈＧＵＳＢプロモータ、ＨＳＶ−１ＬＡＴプロモータおよびＮＳＥプロモータを含むＨβＨコンストラクトを評価し、このＨβＨコンストラクトがマウス脳においてＮＳＥよりも弱い発現を示したことを見出した。パッシーニ（Ｐａｓｓｉｎｉ）およびウォルフ（Ｗｏｌｆｅ）（Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、２００１年、ｐ．１２３８２〜１２３９２、これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）は、新生仔マウスにおける脳室内注射後のＨβＨベクターの長期効果を評価し、少なくとも１年間にわたり持続的発現があったことを見出した。スー（Ｘｕ）ら（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、２００１年、第８巻、ｐ．１３２３〜１３３２；これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）により、ＮＦ−ＬおよびＮＦ−Ｈプロモータを使用したとき、ＣＭＶ−ｌａｃＺ、ＣＭＶ−ｌｕｃ、ＥＦ、ＧＦＡＰ、ｈＥＮＫ、ｎＡＣｈＲ、ＰＰＥ、ＰＰＥ＋ｗｐｒｅ、ＮＳＥ（０．３ｋｂ）、ＮＳＥ（１．８ｋｂ）およびＮＳＥ（１．８ｋｂ＋ｗｐｒｅ）と比較して全ての脳領域で低発現が見出された。スー（Ｘｕ）らは、プロモータ活性が、降順に、ＮＳＥ（１．８ｋｂ）、ＥＦ、ＮＳＥ（０．３ｋｂ）、ＧＦＡＰ、ＣＭＶ、ｈＥＮＫ、ＰＰＥ、ＮＦＬおよびＮＦＨであることを見出した。ＮＦＬは６５０ヌクレオチドプロモータであり、ＮＦＨは９２０ヌクレオチドプロモータであり、両方とも肝臓には存在しないが、ＮＦＨは固有受容感覚ニューロン、脳および脊髄に豊富にあり、ＮＦＨは心臓に存在する。Ｓｃｎ８ａは、ＤＲ���、脊髄および脳全体にわたって発現する４７０ヌクレオチドプロモータであり、特に海馬ニューロンおよび小脳プルキンエ細胞、皮質、視床および視床下部に高発現が見られる（例えば、ドレウス（Ｄｒｅｗｓ）ら、２００７年、およびレイモンド（Ｒａｙｍｏｎｄ）ら著、２００４年を参照のこと；この各々の内容は本明細書において全体として参照により援用される）。
【０１６６】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＵＢＣプロモータを含む。ＵＢＣプロモータは、３００〜３５０ヌクレオチドのサイズを有してもよい。一部の実施形態において、ＵＢＣプロモータは、３３２ヌクレオチド長である。
【０１６７】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＧＵＳＢプロモータを含む。ＧＵＳＢプロモータは、３５０〜４００ヌクレオチドのサイズを有してもよい。一部の実施形態において、ＧＵＳＢプロモータは、３７８ヌクレオチド長である。一部の実施形態において、コンストラクトは、ＡＡＶ−プロモータ−ＣＭＶ／グロビンイントロン−ＦＸＮ−ＲＢＧであってもよく、ここで、ＡＡＶは自己相補的であってもよく、ＡＡＶは、ＡＡＶ６、ＡＡＶｒｈ１０またはＡＡＶＤＪ血清型であってもよい。
【０１６８】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＮＦＬプロモータを含む。ＮＦＬプロモータは、６００〜７００ヌクレオチドのサイズを有してもよい。一部の実施形態において、ＮＦＬプロモータは、６５０ヌクレオチド長である。
【０１６９】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＮＦＨプロモータを含む。ＮＦＨプロモータは、９００〜９５０ヌクレオチドのサイズを有してもよい。一部の実施形態において、ＮＦＨプロモータは、９２０ヌクレオチド長である。
【０１７０】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ｓｃｎ８ａプロモータを含む。ｓｃｎ８ａプロモータは、４５０〜５００ヌクレオチドのサイズを有してもよい。一部の実施形態において、ｓｃｎ８ａプロモータは、４７０ヌクレオチド長である。
【０１７１】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＦＸＮプロモータを含む。
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＰＧＫプロモータを含む。
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＣＢＡプロモータを含む。
【０１７２】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、ＣＭＶプロモータを含む。
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、Ｈ１プロモータを含む。
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、Ｕ６プロモータを含む。
【０１７３】
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、肝臓または骨格筋プロモータを含む。肝臓プロモータの非限定的な例としては、ｈＡＡＴおよびＴＢＧが挙げられる。骨格筋プロモータの非限定的な例としては、デスミン、ＭＣＫおよびＣ５−１２が挙げられる。
【０１７４】
一部の実施形態において、ＡＡＶベクターは、エンハンサーエレメント、プロモータおよび／または５’ＵＴＲイントロンを含む。エンハンサーは、限定はされないが、ＣＭＶエンハンサーであってもよい；プロモータは、限定はされないが、ＣＭＶ、ＣＢＡ、ＦＸＮ、ＵＢＣ、ＧＵＳＢ、ＮＳＥ、シナプシン、ＭｅＣＰ２またはＧＦＡＰプロモータであってもよい；５’ＵＴＲ／イントロンは、限定はされないが、ＳＶ４０およびＣＢＡ−ＭＶＭであってもよい。一部の実施形態において、組み合わせて使用されるエンハンサー、プロモータおよび／またはイントロンは、（１）ＣＭＶエンハンサー、ＣＭＶプロモータ、ＳＶ４０  ５’ＵＴＲイントロン；（２）ＣＭＶエンハンサー、ＣＢＡプロモータ、ＳＶ４０  ５’ＵＴＲイントロン；（３）ＣＭＶエンハンサー、ＣＢＡプロモータ、ＣＢＡ−ＭＶＭ  ５’ＵＴＲイントロン；（４）ＵＢＣプロモータ；（５）ＧＵＳＢプロモータ；（６）ＮＳＥプロモータ；（７）シナプシンプロモータ；（８）ＭｅＣＰ２プロモータ；（９）ＧＦＡＰプロモータ；（１０）Ｈ１プロモータ；および／または（１１）Ｕ６プロモータ、であってもよい。
【０１７５】
一部の実施形態において、ＡＡＶベクターは、操作されたプロモータを有する。
一部の実施形態において、ＡＡＶベクターは、配列番号１７３４〜１７７７からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含むプロモータを含む。一部の実施形態において、プロモータは、ＣＭＶプロモータであるまたはそれに由来し、配列番号１７４３〜１７５１、１７６７、１７７２〜１７７４および１７７７からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、ＣＢＡプロモータであるまたはそれに由来し、配列番号１７３４〜１７４２、１７６０〜１７６６、１７６８および１７７５〜１７７６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、ＦＸＮプロモータであるまたはそれに由来し、配列番号１７５２〜１７５９および１７６９〜１７７０からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。
【０１７６】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７３８である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有し（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）、および／または表５〜１１に提供される１つ以上の配列もしくはそれらの９５％同一なバリアントを更に含むフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０１７７】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４０である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有し（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）、および／または表５〜１１に提供される１つ以上の配列もしくはそれらの９５％同一なバリアントを更に含むフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０１７８】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４２である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有し（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）、および／または表５〜１１に提供される１つ以上の配列もしくはそれらの９５％同一なバリアントを更に含むフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０１７９】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７５０である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有し（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）、および／または表５〜１１に提供される１つ以上の配列もしくはそれらの９５％同一なバリアントを更に含むフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０１８０】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、エンハンサー、例えば、前初期「ｉｅ」エンハンサーまたはＣＭＶ／グロビンエンハンサーを含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、ｉｅ１エクソン１およびｉｅ１イントロン１またはそれらの断片を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、ｉｅ１エクソン１、ｉｅ１イントロン１またはそれらの断片、ヒトベータ−グロビンイントロン２、およびヒトベータ−グロビンエクソン３を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１８１５〜１８２１のいずれかによって与えられる配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１８１６によって与えられる配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、上述したエンハンサーと、フラタキシンをコードする、例えば、配列番号１７２５もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントをコードする、または核酸配列である配列番号１８２４もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するバリアントを含むペイロード領域とを含む。
【０１８１】
イントロン
一部の実施形態において、ベクターゲノムは、少なくとも１つのイントロンまたはその断片もしくは誘導体を含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのイントロンは、ＦＸＮの発現を増強することができる（例えば、パウエルら（Ｐｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．），遺伝子療法におけるトランス遺伝子標的特異性および発現を増強するウイルス発現カセットエレメント（Ｖｉｒａｌ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃａｓｓｅｔｔｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ  ｔｏ  Ｅｎｈａｎｃｅ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ），２０１５を参照されたい；その内容は全体として本願明細書に援用される）。イントロンの非限定的な例としては、ＭＶＭ（６７〜９７ｂｐ）、Ｆ．ＩＸトランケート型イントロン１（３００ｂｐ）、β−グロビンＳＤ／免疫グロブリン重鎖スプライスアクセプター（２５０ｂｐ）、アデノウイルススプライスドナー／イムノグロビン（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ）スプライスアクセプター（５００ｂｐ）、ＳＶ４０後期スプライスドナー／スプライスアクセプター（１９Ｓ／１６Ｓ）（１８０ｂｐ）およびハイブリッドアデノウイルススプライスドナー／ＩｇＧスプライスアクセプター（２３０ｂｐ）が挙げられる。
【０１８２】
一部の実施形態において、イントロンは、１００〜５００ヌクレオチド長であってもよい。イントロンは、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０または５００ヌクレオチドの長さを有してもよい。イントロンは、８０〜１００、８０〜１２０、８０〜１４０、８０〜１６０、８０〜１８０、８０〜２００、８０〜２５０、８０〜３００、８０〜３５０、８０〜４００、８０〜４５０、８０〜５００、２００〜３００、２００〜４００、２００〜５００、３００〜４００、３００〜５００、または４００〜５００ヌクレオチドの長さを有してもよい。
【０１８３】
一部の実施形態において、ＡＡＶベクターは、ＳＶ４０イントロンまたはその断片もしくはバリアントを含んでもよい。一部の実施形態において、プロモータは、ＣＭＶであってもよい。一部の実施形態において、プロモータは、ＣＢＡであってもよい。一部の実施形態において、プロモータは、Ｈ１であってもよい。
【０１８４】
一部の実施形態において、ＡＡＶベクターは、１つ以上のベータ−グロビンイントロンまたはその断片もしくはバリアントを含んでもよい。一部の実施形態において、イントロンは、１つ以上のヒトベータ−グロビン配列（例えば、その断片／バリアントを含む）を含む。
【０１８５】
一部の実施形態において、イントロンは、配列番号１８１５〜１８２１のいずれかによって与えられる配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、上述したイントロンと、フラタキシンをコードする、例えば、配列番号１７２５もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントをコードする、または核酸配列である配列番号１８２４もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するバリアントを含むペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、プロモータは、ＣＭＶであってもよい。一部の実施形態において、プロモータは、ＣＢＡであってもよい。一部の実施形態において、プロモータは、Ｈ１であってもよい。
【０１８６】
一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のイントロン、例えば、限定はされないが、ＳＶ４０イントロンもしくはベータグロビンイントロンまたは当該技術分野で公知の他のものの下流に位置してもよい。更に、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のポリアデニル化配列の上流に位置してもよい。一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のイントロンを有するプロモータから下流および／またはポリアデニル化配列の上流１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３０ヌクレオチド超以内に位置してもよい。一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のイントロンから下流および／またはポリアデニル化配列の上流１〜５、１〜１０、１〜１５、１〜２０、１〜２５、１〜３０、５〜１０、５〜１５、５〜２０、５〜２５、５〜３０、１０〜１５、１０〜２０、１０〜２５、１０〜３０、１５〜２０、１５〜２５、１５〜３０、２０〜２５、２０〜３０、または２５〜３０ヌクレオチド以内に位置してもよい。一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のイントロンから下流および／またはポリアデニル化配列の上流のヌクレオチドの最初の１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、または２５％超以内に位置してもよい。一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のイントロンから下流および／またはポリアデニル化配列の上流の配列の最初の１〜５％、１〜１０％、１〜１５％、１〜２０％、１〜２５％、５〜１０％、５〜１５％、５〜２０％、５〜２５％、１０〜１５％、１０〜２０％、１０〜２５％、１５〜２０％、１５〜２５％、または２０〜２５％以内に位置してもよい。
【０１８７】
特定の実施形態において、イントロン配列は、エンハンサー配列ではない。特定の実施形態において、イントロン配列は、プロモータ配列の下位成分ではない。
ウイルスゲノム成分：非翻訳領域（ＵＴＲ）
定義上、遺伝子の野生型非翻訳領域（ＵＴＲ）は、転写されるが翻訳されない。一般的には、５’ＵＴＲは、転写開始部位から始まり、開始コドンで終了し、３’ＵＴＲは、終止コドンの直後から始まり、転写の終結シグナルまで継続する。
【０１８８】
特定の標的臓器の、豊富に発現される遺伝子に典型的に見出される特徴を、ＵＴＲ内に操作して、安定性およびタンパク質産生を増強することができる。非限定的な例として、肝臓において通常発現されるｍＲＮＡ（例えば、アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、アルファフェトプロテイン、エリスロポエチン、または第ＶＩＩＩ因子）に由来する５’ＵＴＲを、本開示のＡＡＶ粒子のウイルスゲノムに使用して、肝細胞株または肝臓での発現を増強することができる。
【０１８９】
理論によって束縛されることを望むものではないが、野生型５’非翻訳領域（ＵＴＲ）は、翻訳開始に役割を果たす特徴を含む。コザック配列は、リボソームが多数の遺伝子の翻訳を開始させる過程に関与することが広く知られており、通常は５’ＵＴＲに含まれている。コザック配列は、コンセンサスＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧを有し、式中Ｒは、開始コドン（ＡＴＧ）の３塩基上流にあるプリン（アデニンまたはグアニン）であり、別の「Ｇ」がその後に続く。
【０１９０】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムの５’ＵＴＲは、コザック配列を含む。
一部の実施形態において、ウイルスゲノムの５’ＵＴＲは、コザック配列を含まない。
理論によって束縛されることを望むものではないが、野生型３’ＵＴＲは、アデノシンおよびウリジンのストレッチがそこに埋め込まれていることが知られている。これらのＡＵリッチシグネチャーは、高いターンオーバー率を有する遺伝子において特に広く見受けられる。それらの配列特徴および機能的特性に基づき、ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）は、３つのクラスに分離することできる（チェン（Ｃｈｅｎ）ら著、１９９５年。その内容は本明細書において全体として参照により援用される）：限定はされないが、ｃ−ＭｙｃおよびＭｙｏＤなどのクラスＩ  ＡＲＥは、Ｕリッチ領域内にＡＵＵＵＡモチーフの幾つかの分散コピーを含有する。限定はされないが、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−ａなどのクラスＩＩ  ＡＲＥは、２つ以上のオーバーラップＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）ノナマーを有する。限定はされないが、ｃ−ＪｕｎおよびミオゲニンなどのクラスＩＩＩ  ＡＲＥＳは、それほど十分に規定されていない。これらのＵリッチ領域は、ＡＵＵＵＡモチーフを含有しない。ＡＲＥに結合するほとんどのタンパク質は、メッセンジャーを不安定化することが知られているが、ＥＬＡＶファミリーのメンバーである最も顕著にはＨｕＲは、ｍＲＮＡの安定性を増加させることが実証されている。ＨｕＲは、３つ全てのクラスのＡＲＥに結合する。ＨｕＲ特異的結合部位を核酸分子の３’ＵＴＲ内に、操作により加えることは、インビボにて、ＨｕＲ結合を、したがってメッセージの安定化をもたらすことになる。
【０１９１】
３’ＵＴＲ  ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）の導入、除去または改変を使用して、ポリヌクレオチドの安定性を調節することができる。特異的なポリヌクレオチド、例えばウイルスゲノムのペイロード領域を操作する場合、ＡＲＥの１つ以上のコピーを導入して、ポリヌクレオチドをより不安定にし、それにより、翻訳を減らし、結果として生じるタンパク質の産生を減少させることができる。同様に、ＡＲＥを、同定および除去または突然変異させて、細胞内安定性を増加させ、したがって結果として生じるタンパク質の翻訳および産生を増加させることができる。
【０１９２】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムの３’ＵＴＲは、ポリＡテールを鋳型付加するためのオリゴ（ｄＴ）配列を含み得る。
当該技術分野で公知の任意の遺伝子に由来する任意のＵＴＲを、ＡＡＶ粒子のウイルスゲノムに組み込むことができる。これらのＵＴＲまたはそれらの部分は、それらが選択されたかまたはそれらの配向性もしくは位置が変更され得る遺伝子と同じ配向性に配置され得る。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子のウイルスゲノムに使用されるＵＴＲは、逆位化、短縮化、延長化、または当該技術分野で公知の１つ以上の他の５’ＵＴＲもしくは３’ＵＴＲで作製され得る。本明細書で使用されるとき、用語「変更される」は、ＵＴＲに関する場合、ＵＴＲが、参照配列に対して何らかの点で変化していることを意味する。例えば、３’または５’ＵＴＲは、上記で教示されるような配向性または位置の変化によって野生型または天然ＵＴＲに対して変更されていてもよく、または追加ヌクレオチドの介在、ヌクレオチドの欠失、ヌクレオチドの交換もしくは転位によって変更されていてもよい。
【０１９３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子のウイルスゲノムは、野生型ＵＴＲのバリアントでない少なくとも１つの人工ＵＴＲを含む。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子のウイルスゲノムは、そのタンパク質が、共通の機能、構造、特徴、または特性を共有する転写物のファミリーから選択されているＵＴＲを含む。
【０１９４】
ｍｉＲＮＡ標的部位
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含んでもよい。ｍｉｃｒｏＲＮＡ（またはｍｉＲＮＡまたはｍｉＲ）は、核酸標的の部位に結合し、核酸分子安定性を低減することまたは翻訳を阻害することのいずれかによって遺伝子発現を下方調節する１９〜２５ヌクレオチド非コードＲＮＡである。一部の実施形態において、ウイルスゲノムの３’ＵＴＲは、少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含むように操作されてもよい。
【０１９５】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、特定の組織におけるトランス遺伝子の発現を低減させるｍｉＲＮＡ標的部位をコードする少なくとも１つの配列を含む。ｍｉＲＮＡおよびその標的組織は、当該技術分野で周知である。一部の実施形態において、ｍｉＲ−１２２  ｍｉＲＮＡ標的部位（ｍｉＲ−１２２ＴＳ）、またはそのタンデムコピーは、ｍｉＲ−１２２が豊富に発現される肝臓におけるウイルスゲノムの発現を低減させるために、ウイルスゲノムにコードされ得る。
【０１９６】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのｍｉＲ１２２結合部位を含む。一部の実施形態において、ｍｉＲ１２２結合部位は、配列番号１８２７に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、３コピーのｍｉＲ１２２結合部位、例えば、３コピーの配列番号１８２７または少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態において、ｍｉＲ１２２結合部位シリーズは、配列番号１８２６に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、上述した１、２または３つのｍｉＲ１２２結合部位と、フラタキシンをコードする、例えば、配列番号１７２５もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントをコードする、または核酸配列である配列番号１８２４もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するバリアントを含むペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、上述した３つのｍｉＲ１２２結合部位と、フラタキシンをコードする、例えば、配列番号１７２５もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントをコードする、または核酸配列である配列番号１８２４もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するバリアントを含むペイロード領域とを含む。
【０１９７】
骨格
特定の実施形態において、シス−エレメント、例えばベクター骨格は、ＦＸＮをコードするウイルス粒子中に取り込まれる。骨格配列は、ウイルス産生の間の転写を調節することができる。骨格配列は、ＦＸＮ発現の安定性に寄与することができる。骨格配列は、ｐＡＡＶｓｃまたはｐｃＤＮＡ３．１ベクター骨格中にクローニングすることができるＦＸＮの発現のレベルに寄与することができる。
【０１９８】
ポリアデニル化配列
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子のウイルスゲノムは少なくとも１つのポリアデニル化配列を含む。ＡＡＶ粒子のウイルスゲノムは、ペイロードコード配列の３’末端と３’ＵＴＲの５’末端との間にポリアデニル化配列を含み得る。
【０１９９】
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列または「ポリＡ配列」は、存在しない〜約５００ヌクレオチド長の範囲であってもよい。ポリアデニル化配列は、限定はされないが、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、または５００ヌクレオチド長であってもよい。
【０２００】
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は５０〜１００ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は５０〜１５０ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は５０〜１６０ヌクレオチド長である。
【０２０１】
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は５０〜２００ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は６０〜１００ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は６０〜１５０ヌクレオチド長である。
【０２０２】
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は６０〜１６０ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は６０〜２００ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は７０〜１００ヌクレオチド長である。
【０２０３】
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は７０〜１５０ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は７０〜１６０ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は７０〜２００ヌクレオチド長である。
【０２０４】
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は８０〜１００ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は８０〜１５０ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は８０〜１６０ヌクレオチド長である。
【０２０５】
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は８０〜２００ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は９０〜１００ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は９０〜１５０ヌクレオチド長である。
【０２０６】
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は９０〜１６０ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、ポリアデニル化配列は９０〜２００ヌクレオチド長である。
一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のポリアデニル化配列の上流に位置してもよい。更に、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のＳＶ４０イントロンを有するプロモータ、例えば、限定はされないが、ＣＭＶ、Ｕ６、ＣＢＡもしくはＣＢＡプロモータ、またはそれらの断片（例えば、本明細書で開示されるもの）の下流に位置してもよい。一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のプロモータから下流および／またはポリアデニル化配列の上流１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３０ヌクレオチド超以内に位置してもよい。一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のプロモータから下流および／またはポリアデニル化配列の上流１〜５、１〜１０、１〜１５、１〜２０、１〜２５、１〜３０、５〜１０、５〜１５、５〜２０、５〜２５、５〜３０、１０〜１５、１０〜２０、１０〜２５、１０〜３０、１５〜２０、１５〜２５、１５〜３０、２０〜２５、２０〜３０、または２５〜３０ヌクレオチド以内に位置してもよい。一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のプロモータから下流および／またはポリアデニル化配列の上流のヌクレオチドの最初の１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、または２５％超以内に位置してもよい。一部の実施形態において、コード化ＦＸＮは、発現ベクター中のプロモータから下流および／またはポリアデニル化配列の上流の最初の１〜５％、１〜１０％、１〜１５％、１〜２０％、１〜２５％、５〜１０％、５〜１５％、５〜２０％、５〜２５％、１０〜１５％、１０〜２０％、１０〜２５％、１５〜２０％、１５〜２５％、または２０〜２５％以内に位置してもよい。
【０２０７】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡ配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８２８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一なポリＡ配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、上述したｈＧＨポリＡと、フラタキシンをコードする、例えば、配列番号１７２５もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントをコードする、または核酸配列である配列番号１８２４もしくはそれに対して少なくとも９０％配列同一性を有するバリアントを含むペイロード領域とを含む。
【０２０８】
フィラー配列
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、１つ以上のフィラー配列を含む。フィラー配列は、野生型配列または操作された配列であってもよい。フィラー配列は、野生型配列のバリアントであってもよい。一実施形態において、フィラー配列は、ヒトアルブミンの誘導体である。
【０２０９】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ウイルスゲノムの長さをパッケージングに最適なサイズにするために、１つ以上のフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ウイルスゲノムの長さを約２．３ｋｂにするために、少なくとも１つのフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ウイルスゲノムの長さを約４．６ｋｂにするために、少なくとも１つのフィラー配列を含む。
【０２１０】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、一本鎖（ｓｓ）ウイルスゲノムであり、限定はされないが、０．１ｋｂ、０．２ｋｂ、０．３ｋｂ、０．４ｋｂ、０．５ｋｂ、０．６ｋｂ、０．７ｋｂ、０．８ｋｂ、０．９ｋｂ、１ｋｂ、１．１ｋｂ、１．２ｋｂ、１．３ｋｂ、１．４ｋｂ、１．５ｋｂ、１．６ｋｂ、１．７ｋｂ、１．８ｋｂ、１．９ｋｂ、２ｋｂ、２．１ｋｂ、２．２ｋｂ、２．３ｋｂ、２．４ｋｂ、２．５ｋｂ、２．６ｋｂ、２．７ｋｂ、２．８ｋｂ、２．９ｋｂ、３ｋｂ、３．１ｋｂ、３．２ｋｂ、３．３ｋｂ、３．４ｋｂ、３．５ｋｂ、３．６ｋｂ、３．７ｋｂまたは３．８ｋｂなど、約０．１ｋｂ〜３．８ｋｂの長さを独立にまたは一緒に有する１つ以上のフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ベクターゲノム中のフィラー配列の合計長は、３．１ｋｂである。一部の実施形態において、ベクターゲノム中のフィラー配列の合計長は、２．７ｋｂである。一部の実施形態において、ベクターゲノム中のフィラー配列の合計長は、０．８ｋｂである。一部の実施形態において、ベクターゲノム中のフィラー配列の合計長は、０．４ｋｂである。一部の実施形態において、ベクターゲノム中の各フィラー配列の長さは、０．８ｋｂである。一部の実施形態において、ベクターゲノム中の各フィラー配列の長さは、０．４ｋｂである。
【０２１１】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、自己相補的（ｓｃ）ウイルスゲノムであり、限定はされないが、０．１ｋｂ、０．２ｋｂ、０．３ｋｂ、０．４ｋｂ、０．５ｋｂ、０．６ｋｂ、０．７ｋｂ、０．８ｋｂ、０．９ｋｂ、１ｋｂ、１．１ｋｂ、１．２ｋｂ、１．３ｋｂ、１．４ｋｂまたは１．５ｋｂなど、約０．１ｋｂ〜１．５ｋｂの長さを独立にまたは一緒に有する１つ以上のフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ベクターゲノム中のフィラー配列の合計長は、０．８ｋｂである。一部の実施形態において、ベクターゲノム中のフィラー配列の合計長は、０．４ｋｂである。一部の実施形態において、ベクターゲノム中の各フィラー配列の長さは、０．８ｋｂである。一部の実施形態において、ベクターゲノム中の各フィラー配列の長さは、０．４ｋｂである。
【０２１２】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、フィラー配列の任意の部分を含む。ウイルスゲノムは、フィラー配列の１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％を含んでいてもよい。
【０２１３】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、一本鎖（ｓｓ）ウイルスゲノムであり、ウイルスゲノムの長さを約４．６ｋｂにするために、１つ以上のフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、５’ＩＴＲ配列の３’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、プロモータ配列の５’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、ポリアデニル化シグナル配列の３’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、３’ＩＴＲ配列の５’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、２つのイントロン配列間に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、イントロン配列内に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、２つのフィラー配列を含み、第１のフィラー配列は、５’ＩＴＲ配列の３’に位置し、第２のフィラー配列は、ポリアデニル化シグナル配列の３’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、２つのフィラー配列を含み、第１のフィラー配列は、プロモータ配列の５’に位置し、第２のフィラー配列は、ポリアデニル化シグナル配列の３’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、２つのフィラー配列を含み、第１のフィラー配列は、５’ＩＴＲ配列の３’に位置し、第２のフィラー配列は、５’ＩＴＲ配列の５’に位置する。
【０２１４】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、自己相補的（ｓｃ）ウイルスゲノムであり、ウイルスゲノムの長さを約２．３ｋｂにするために、１つ以上のフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、５’ＩＴＲ配列の３’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、プロモータ配列の５’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、ポリアデニル化シグナル配列の３’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、３’ＩＴＲ配列の５’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、２つのイントロン配列間に位置する。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列を含み、フィラー配列は、イントロン配列内に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、２つのフィラー配列を含み、第１のフィラー配列は、５’ＩＴＲ配列の３’に位置し、第２のフィラー配列は、ポリアデニル化シグナル配列の３’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、２つのフィラー配列を含み、第１のフィラー配列は、プロモータ配列の５’に位置し、第２のフィラー配列は、ポリアデニル化シグナル配列の３’に位置する。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、２つのフィラー配列を含み、第１のフィラー配列は、５’ＩＴＲ配列の３’に位置し、第２のフィラー配列は、５’ＩＴＲ配列の５’に位置する。
【０２１５】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ウイルスゲノムのより多くの領域の１つの間に１つ以上のフィラー配列を含み得る。一部の実施形態において、フィラー領域は、限定はされないが、ペイロード領域、末端逆位配列（ＩＴＲ）、プロモータ領域、イントロン領域、エンハンサー領域、ポリアデニル化シグナル配列領域、および／またはエクソン領域などの領域の前に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー領域は、限定はされないが、ペイロード領域、末端逆位配列（ＩＴＲ）、プロモータ領域、イントロン領域、エンハンサー領域、ポリアデニル化シグナル配列領域、および／またはエクソン領域などの領域の後に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー領域は、限定はされないが、ペイロード領域、末端逆位配列（ＩＴＲ）、プロモータ領域、イントロン領域、エンハンサー領域、ポリアデニル化シグナル配列領域、および／またはエクソン領域などの領域の前および後に位置していてもよい。
【０２１６】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ウイルスゲノムの少なくとも１つの領域を二分する１つ以上のフィラー配列を含んでもよい。ウイルスゲノムの二分された領域は、フィラー配列領域の５’にある領域の１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％を含んでいてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の１０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の９０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の２０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の８０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の３０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の７０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の４０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の６０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の５０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の５０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の６０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の４０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の７０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の３０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の８０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の２０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、領域の９０％がフィラー配列の５’に位置し、領域の１０％がフィラー配列の３’に位置するように、少なくとも１つの領域を二分してもよい。
【０２１７】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、５’ＩＴＲの後にフィラー配列を含む。
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、プロモータ領域の後にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ペイロード領域の後にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、イントロン領域の後にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、エンハンサー領域の後にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ポリアデニル化シグナル配列領域の後にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、エクソン領域の後にフィラー配列を含む。
【０２１８】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、プロモータ領域の前にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ペイロード領域の前にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、イントロン領域の前にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、エンハンサー領域の前にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ポリアデニル化シグナル配列領域の前にフィラー配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、エクソン領域の前にフィラー配列を含む。
【０２１９】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、３’ＩＴＲの前にフィラー配列を含む。
一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、５’ＩＴＲおよびプロモータ領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、５’ＩＴＲおよびペイロード領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、５’ＩＴＲおよびイントロン領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、５’ＩＴＲおよびエンハンサー領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、５’ＩＴＲおよびポリアデニル化シグナル配列領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。
【０２２０】
一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、５’ＩＴＲおよびエクソン領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。
一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、プロモータ領域およびペイロード領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、プロモータ領域およびイントロン領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、プロモータ領域およびエンハンサー領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、プロモータ領域およびポリアデニル化シグナル配列領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、プロモータ領域およびエクソン領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、プロモータ領域および３’ＩＴＲなどの、２つの領域間に位置していてもよい。
【０２２１】
一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、ペイロード領域およびイントロン領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、ペイロード領域およびエンハンサー領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、ペイロード領域およびポリアデニル化シグナル配列領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。一部の実施形態において、フィラー配列は、限定はされないが、ペイロード領域およびエクソン領域などの、２つの領域間に位置していてもよい。
【０２２２】
一部の実施形態において、フィラー配列は、２つの領域間、例えば、限定はされないが、ペイロード領域と３’ＩＴＲとの間に位置してもよい。
自己相補的および一本鎖ベクター
一部の実施形態において、本開示で使用されるＡＡＶベクターは、一本鎖ベクター（ｓｓＡＡＶ）である。
【０２２３】
一部の実施形態において、ＡＡＶベクターは、自己相補的ＡＡＶベクター（ｓｃＡＡＶ）であってもよい。例えば、米国特許第７，４６５，５８３号明細書を参照されたい。ｓｃＡＡＶベクターは、共にアニーリングして二本鎖ＤＮＡを形成するＤＮＡ鎖を含有する。第２鎖の合成をスキップすることにより、ｓｃＡＡＶは、細胞において迅速に発現することが可能である。
【０２２４】
一部の実施形態において、本開示で使用されるＡＡＶベクターは、ｓｃＡＡＶである。
ＡＡＶベクターを産生および／または改変するための方法は、シュードタイプＡＡＶベクター（国際公開第２０００２８００４号パンフレット；国際公開第２００１２３００１号パンフレット；国際公開第２００４１１２７２７号パンフレット；国際公開第２００５００５６１０号パンフレットおよび国際公開第２００５０７２３６４号パンフレット（その各々の内容は全体として本願明細書に援用される））など、当該技術分野で開示されている。
【０２２５】
ゲノムサイズ
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子のウイルスゲノムは、一本鎖または二本鎖であってもよい。ベクターゲノムのサイズは、小型、中型、大型または最大サイズであってもよい。
【０２２６】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＦＸＮをコードする核酸配列を含むベクターゲノムは、小型一本鎖ベクターゲノムであってもよい。小型一本鎖ベクターゲノムは、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４または約３．５ｋｂサイズなど、約２．７ｋｂ〜約３．５ｋｂサイズであってもよい。一部の実施形態において、小型一本鎖ベクターゲノムは、３．２ｋｂサイズであってもよい。
【０２２７】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＦＸＮをコードする核酸配列を含むベクターゲノムは、小型二本鎖ベクターゲノムであってもよい。小型二本鎖ベクターゲノムは、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６または約１．７ｋｂサイズなど、約１．３〜約１．７ｋｂサイズであってもよい。一部の実施形態において、小型二本鎖ベクターゲノムは、１．６ｋｂサイズであってもよい。
【０２２８】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＦＸＮをコードする核酸配列を含むベクターゲノムは、中型一本鎖ベクターゲノムであってもよい。中型一本鎖ベクターゲノムは、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２または約４．３ｋｂサイズなど、約３．６〜約４．３ｋｂサイズであってもよい。一部の実施形態において、中型一本鎖ベクターゲノムは、４．０ｋｂサイズであってもよい。
【０２２９】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＦＸＮをコードする核酸配列を含むベクターゲノムは、中型二本鎖ベクターゲノムであってもよい。中型二本鎖ベクターゲノムは、約１．８、約１．９、約２．０または約２．１ｋｂサイズなど、約１．８〜約２．１ｋｂサイズであってもよい。一部の実施形態において、中型二本鎖ベクターゲノムは、２．０ｋｂサイズであってもよい。加えて、ベクターゲノムはプロモータおよびポリＡテールを含み得る。
【０２３０】
一実施形態において、本明細書に記載されるＦＸＮをコードする核酸配列を含むベクターゲノムは、大型一本鎖ベクターゲノムであってもよい。大型一本鎖ベクターゲノムは、約４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９および６．０ｋｂサイズなど、４．４〜６．０ｋｂサイズであってもよい。非限定的な例として、大型一本鎖ベクターゲノムは、４．７ｋｂサイズであってもよい。別の非限定的な例として、大型一本鎖ベクターゲノムは、４．８ｋｂサイズであってもよい。更に別の非限定的な例として、大型一本鎖ベクターゲノムは６．０ｋｂサイズであってもよい。
【０２３１】
一実施形態において、本明細書に記載されるＦＸＮをコードする核酸配列を含むベクターゲノムは、大型二本鎖ベクターゲノムであってもよい。大型二本鎖ベクターゲノムは、約２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９および３．０ｋｂサイズなど、２．２〜３．０ｋｂサイズであってもよい。非限定的な例として、大型二本鎖ベクターゲノムは、２．４ｋｂサイズであってもよい。
【０２３２】
ペイロード
一部の実施形態において、本明細書の開示は、遺伝子療法ベクターによって送達されるＦＸＮの発現を改善させるコンストラクトを提供する。
【０２３３】
一部の態様では、本開示は、フラタキシン（ＦＸＮ）またはその機能的断片（複数可）をコードする核酸配列（複数可）を含有するまたは含む組成物、ならびに疾患のヒトおよび／または動物モデルにおいてこれらの組成物をインビトロまたはインビボで投与する方法に関する。
【０２３４】
本開示のＡＡＶ粒子は、少なくとも１つの「ペイロード」をコードする核酸分子を含んでもよい。本明細書で使用されるとき、「ペイロード」または「ペイロード領域」は、ウイルスゲノムによりもしくはその内にコードされる１つ以上のポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド領域、またはかかるポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド領域、例えば、トランス遺伝子、ポリペプチドもしくはマルチポリペプチド、例えば、ＦＸＮもしくはそのバリアントをコードするポリヌクレオチドの発現産物を指す。ペイロードは、ペイロードを有するＡＡＶ粒子で形質導入されたまたはそれと接触された標的細胞におけるＦＸＮの発現（タンパク質産物の補充または調節性核酸を使用する遺伝子置換による）のために有用な当該技術分野で公知の任意の核酸を含んでもよい。
【０２３５】
ペイロードコンストラクトは、コードおよび非コード核酸配列の組合せを含んでもよい。
ウイルスゲノムの任意の区分、断片、またはウイルスゲノム全体、およびその中のペイロードコンストラクトは、コドン最適化されてもよい。
【０２３６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子の核酸配列は、ＦＸＮをコードする少なくとも１つの部分を含むペイロードコンストラクトであってもよい。
一部の実施形態において、ペイロードコンストラクトは、１つ超のペイロードをコードする。限定的な例として、１つ超のペイロードをコードするペイロードコンストラクトは、複製され得、ウイルス粒子へとパッケージングされ得る。１つ超のペイロードを含むウイルス粒子で形質導入された標的細胞は、単一細胞においてペイロードの各々を発現することができる。
【０２３７】
一部の実施形態において、ペイロードコンストラクトは、コードまたは非コードＲＮＡをコードしてもよい。特定の実施形態において、アデノ随伴ウイルスベクター粒子は、コザック配列、骨格配列およびイントロン配列からなる群から選択される少なくとも１つのシス−エレメントを更に含む。
【０２３８】
一部の実施形態において、ペイロードは、ペプチドまたはタンパク質であってもよいポリペプチドである。ペイロードコンストラクトによってコードされるタンパク質は、分泌型タンパク質、細胞内タンパク質、細胞外タンパク質および／または膜タンパク質を含んでもよい。コード化タンパク質は、構造的または機能的であってもよい。ペイロードコンストラクトによってコードされるタンパク質としては、限定はされないが、哺乳動物タンパク質が挙げられる。特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、ＦＸＮまたはそのバリアントをコードするウイルスゲノムを含有する。ペイロードをコードするＡＡＶ粒子は、ヒト疾患、獣医学的応用の分野、ならびに様々なインビボおよびインビトロ設定において有用であり得る。
【０２３９】
一部の実施形態において、ペイロードは、細胞形質転換および発現を評価するためのマーカータンパク質として働くポリペプチド、融合タンパク質、所望の生物学的活性を有するポリペプチド、遺伝的欠損を補完できる遺伝子産物、ＲＮＡ分子、転写因子、ならびに調節および／または発現において目的とされる他の遺伝子産物を含んでもよい。一部の実施形態において、ペイロードは、所望の効果または調節機能を提供するヌクレオチド配列（例えば、トランスポゾン、転写因子）を含んでもよい。
【０２４０】
コード化ペイロードは、遺伝子療法産物を含んでもよい。遺伝子療法産物としては、限定はされないが、ポリペプチド、ＲＮＡ分子、または標的細胞において発現させた場合に所望の治療効果を提供する他の遺伝子産物が挙げられ得る。一部の実施形態において、遺伝子療法産物は、非機能的遺伝子、または存在しない、不十分な量で発現される、もしくは突然変異された遺伝子の代用品を含んでもよい。一部の実施形態において、遺伝子療法産物は、非機能的タンパク質もしくはポリペプチド、または存在しない、不十分な量で発現される、ミスフォールドされた、あまりに迅速に分解される、もしくは突然変異されたタンパク質もしくはポリペプチドの代用品を含んでもよい。例えば、遺伝子療法産物は、ＦＸＮ欠損またはＦＡを治療するための、ＦＸＮポリペプチド、またはＦＸＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでもよい。
【０２４１】
一部の実施形態において、ペイロードは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）をコードする。本明細書で使用されるとき、用語「メッセンジャーＲＮＡ」（ｍＲＮＡ）は、目的のポリペプチドをコードし、目的のコード化ポリペプチドをインビトロ、インビボ、インサイチュまたはエキソビボで産生するように翻訳されることが可能な任意のポリヌクレオチドを指す。特定の実施形態は、ＦＸＮまたはそのバリアントをコードするｍＲＮＡを提供する。
【０２４２】
ｍＲＮＡの成分としては、限定はされないが、コード領域、５’−ＵＴＲ（非翻訳領域）、３’−ＵＴＲ、５’−キャップおよびポリＡテールが挙げられる。一部の実施形態において、ＡＡＶゲノムのコード化ｍＲＮＡまたは任意の部分は、コドン最適化されてもよい。
【０２４３】
一部の実施形態において、ＦＸＮまたはそのバリアントをコードするペイロードコンストラクトによってコードされるタンパク質またはポリペプチドは、約５０〜約４５００アミノ酸残基長である（この文脈で、本明細書で以下、「Ｘアミノ酸長」は、Ｘアミノ酸残基を指す）。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜２０００アミノ酸長である。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜１０００アミノ酸長である。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜１５００アミノ酸長である。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜１０００アミノ酸長である。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜８００アミノ酸長である。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜６００アミノ酸長である。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜４００アミノ酸長である。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜２００アミノ酸長である。一部の実施形態において、コードされるタンパク質またはポリペプチドは、５０〜１００アミノ酸長である。
【０２４４】
ペイロードをコードするペイロードコンストラクトは、選択可能なマーカーを含んでもよくまたはそれをコードしてもよい。選択可能なマーカーは、選択可能なマーカーを発現するまたはしないかもしれない細胞の集団からの、宿主細胞の同定、選択および／または精製を可能にする、宿主細胞中の遺伝子配列、または宿主細胞において発現される遺伝子配列によってコードされるタンパク質もしくはポリペプチドを含んでもよい。一部の実施形態において、選択可能なマーカーは、宿主細胞をさもなければ死滅させる選択プロセス、例えば、抗生物質による治療を生存するための耐性を提供する。一部の実施形態において、抗生物質選択可能なマーカーは、限定はされないが、ネオマイシン耐性（例えば、ｎｅｏ）、ハイグロマイシン耐性、カナマイシン耐性および／またはピューロマイシン耐性が挙げられる１つ以上の抗生物質耐性因子を含んでもよい。
【０２４５】
一部の実施形態において、タンパク質またはポリペプチドをコードする任意の核酸配列が、特異的抗体による認識を含め、選択可能なマーカーとして使用することができる。
一部の実施形態において、ペイロードをコードするペイロードコンストラクトは、限定はされないが、β−ラクタマーゼ、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、または細胞表面マーカー、例えば、ＣＤ４もしくはトランケート型神経成長因子（ＮＧＦＲ）を含め、その用語が当該技術分野で理解される通りの任意の他の受容体遺伝子が挙げられる、選択可能なマーカーを含んでもよい（ＧＦＰについては、国際公開第９６／２３８１０号パンフレット；ハイムら（Ｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：１７８−１８２（１９９６）；ハイムら（Ｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９５）；またはハイムら（Ｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３７３：６６３−６６４（１９９５）を参照されたい；β−ラクタマーゼについては、国際公開第９６／３０５４０号パンフレットを参照されたい）；その各々の内容は全体として本願明細書に援用される。
【０２４６】
一部の実施形態において、選択可能なマーカーをコードするペイロードコンストラクトは、蛍光タンパク質を含んでもよい。本明細書に記載される蛍光タンパク質は、限定はされないが、緑色、黄色および／または赤色蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＹＦＰおよび／またはＲＦＰ）が挙げられる、任意の蛍光マーカーを含んでもよい。一部の実施形態において、選択可能なマーカーをコードするペイロードコンストラクトは、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）タグを含んでもよい。
【０２４７】
特定の実施形態において、標的細胞におけるペイロードの発現のための核酸は、ウイルスゲノム中に取り込まれ、２つのＩＴＲ配列間に位置するであろう。
ペイロード：フラタキシン
一部の実施形態において、ペイロードは、フラタキシンタンパク質である。本明細書で使用されるとき、用語「フラタキシンタンパク質」または「ＦＸＮタンパク質」は、「フラタキシンポリペプチド」または「ＦＸＮポリペプチド」と互換性があるように使用され、野生型ＦＸＮならびにその機能的バリアントを包含する。機能的バリアントは、所望の治療効果を達成するように、その野生型対応物の活性の一部または全てを保持するバリアントである。例えば、一部の実施形態において、機能的バリアントは、障害または状態、例えば、ＦＸＮ欠損またはＦＡを治療するために、遺伝子療法において有効に使用される。別途示されない限り、本明細書に記載されるＦＸＮのバリアント（例えば、本開示のコンストラクト、ベクター、ゲノム、方法、キット、組成物などに関連して）は、機能的バリアントである。
【０２４８】
フリードライヒ運動失調症（ＦＡ）は、フラタキシン（ＦＸＮ）遺伝子が増幅されたイントロンＧＡＡ反復（トリヌクレオチド反復拡大の例）を含有する場合に生じる常染色体劣性障害である。パーキンソンら（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１３，１２６（Ｓｕｐｐｌ．１），１０３−１１７（その内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。遺伝子内のＧＡＡ反復拡大は、ＦＸＮタンパク質レベルの低減を引き起こす。ＦＸＮは、鉄−硫黄クラスター形成を担う鉄結合タンパク質である。ＦＸＮタンパク質欠損の１つの結果は、多くのタンパク質に対する損傷を引き起こす可能性があるミトコンドリア鉄過負荷である。ナゲシュワラン（Ｎａｇｅｓｈｗａｒａｎ）およびフェステンシュタイン（Ｆｅｓｔｅｎｓｔｅｉｎ），Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６，Ａｒｔ．２６２（２０１５）（その内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。ＦＸＮ遺伝子は、９番染色体上に位置する。サンディら（Ｓａｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ．），Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌ．５，Ａｒｔ．１６５（Ｊｕｎｅ  ２０１４）（その内容は全体として本願明細書に援用される）を参照されたい。
【０２４９】
突然変異体遺伝子は、第１のイントロン中に拡大されたＧＡＡトリプレット反復を含有し、わずかな例では、点突然変異が検出されている。欠損はイントロン（転写と翻訳との間でｍＲＮＡ転写物から除去される）中に位置するので、この突然変異は、異常なＦＸＮタンパク質の産生をもたらさない。ナゲシュワラン（Ｎａｇｅｓｈｗａｒａｎ）およびフェステンシュタイン（Ｆｅｓｔｅｎｓｔｅｉｎ），Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６，Ａｒｔ．２６２（２０１５）を参照されたい。その代わり、突然変異は、斑入り位置効果と類似の様式でのヘテロクロマチン構造の誘導を介して、遺伝子サイレンシングを引き起こす（すなわち、この突然変異は、遺伝子の転写を減少させる）。ＦＸＮタンパク質の発現を低減させることの他に、ＧＡＡ反復の長いトラクトは、インビボ酵母研究において染色体切断を誘導する。
【０２５０】
低レベルのＦＸＮタンパク質は、ミトコンドリア電子伝達および機能的アコニターゼのアセンブリのために必要な鉄−硫黄クラスターの不十分な生合成、ならびに細胞全体の調節不全の鉄代謝をもたらす。ナゲシュワラン（Ｎａｇｅｓｈｗａｒａｎ）およびフェステンシュタイン（Ｆｅｓｔｅｎｓｔｅｉｎ），Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６，Ａｒｔ．２６２（２０１５）を参照されたい。正常な個体では、ＦＸＮ遺伝子は、ミトコンドリアマトリックスＦＸＮタンパク質をコードする。この球状タンパク質は、２つのαヘリックスおよび７つのβ鎖からなり、高度に保存され、全ての真核生物および一部の原核生物中に存在する。ＦＸＮタンパク質は、様々な公知の機能を有する；最も顕著には、これは、電子伝達鎖における鉄−硫黄タンパク質合成を支援して、細胞において代謝機能を実行するために必要なエネルギー通貨であるアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を最終的に生成する。ＦＸＮタンパク質はまた、正常なプロセスを維持するために適切な量の反応性酸素種（ＲＯＳ）を提供するために、ミトコンドリアにおける鉄移行を調節する。ＦＸＮタンパク質が存在しないと、ミトコンドリア中のエネルギーが不足し、過剰な鉄が余計なＲＯＳの創出を引き起こし、更なる細胞損傷をもたらす。
【０２５１】
中枢神経系の他の障害は、ＦＸＮタンパク質の異常な発現またはその量もしくは機能における欠損に関連することが最終的に見出される場合がある。かかる障害としては、限定はされないが、神経学的または神経筋障害、例えば、アルツハイマー病、ハンチントン病、自閉症、パーキンソン病および脊髄性筋萎縮症、または本明細書に記載される他の神経学的もしくは神経筋疾患、障害もしくは状態を挙げることができる。
【０２５２】
本明細書で使用されるとき、「減少したフラタキシンタンパク質レベルに関連する」または「減少した発現に関連する」は、疾患の１つ以上の症状が、標的組織または生物流体（ｂｉｏｆｌｕｉｄ）、例えば血液中の、正常よりも低いフラタキシンタンパク質レベルによって引き起こされることを意味する。減少したフラタキシンタンパク質レベルまたは発現に関連する疾患または状態は、中枢神経系の障害であってもよい。かかる疾患または状態は、神経筋または神経学的障害または状態であってもよい。例えば、減少したフラタキシンタンパク質レベルに関連する疾患は、ＦＡであってもよく、または本明細書に記載される別の神経学的もしくは神経筋障害であってもよい。
【０２５３】
本開示は、ＦＡの治療のためのＡＡＶに基づく組成物および複合体によって送達可能なＦＸＮ関連治療を提供することにより、新たな技術の要求に対処する。
送達はＡＡＶに関連して例示されるが、他のウイルスベクター、非ウイルスベクター、ナノ粒子またはリポソームが、治療的ＦＸＮを送達するために同様に使用することができ、これには、限定はされないが、ＡＡＶ血清型のいずれかのベクターゲノム、または他のウイルス送達ビヒクルもしくはレンチウイルスなどが挙げられる。観察および教示は、本明細書に記載される様式でＣＮＳ中に導入される改変細胞が挙げられる、任意の高分子構造に及ぶ。
【０２５４】
本明細書で開示されるウイルスゲノムにおいて使用することができ、フラタキシンペイロードを構成することができるフラタキシンの代表的なポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列の配列識別子が表２に与えられる。機能的バリアント、例えば、表２に示される配列に対して少なくとも約９０％または少なくとも９５％配列同一性を保持するものも使用することができる。コドン最適化された、および同じまたは本質的に同じＦＸＮアミノ酸配列をコードする他のバリアント（例えば、少なくとも約９０％アミノ酸配列同一性を有するもの）も使用することができる。
【０２５５】
【表２】
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【０２５６】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、フラタキシンタンパク質をコードするペイロード領域を含む。コード化フラタキシンは、任意の種、例えば、限定はされないが、ヒト、非ヒト霊長類または齧歯動物に由来してもよい。
【０２５７】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）フラタキシンまたはそのバリアントをコードするペイロード領域を含む。
本明細書の開示の様々な実施形態は、ウイルスゲノムを含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子を提供し、そのウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２５、１７２６および／もしくは１７２７のヒトフラタキシン（ｈＦＸＮ）配列またはそれらのバリアントに対して少なくとも９０％配列同一性を有するポリペプチドをコードする核酸配列とを含む。
【０２５８】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％配列同一性を有するポリペプチドをコードする核酸配列とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％配列同一性を有するポリペプチドをコードする核酸配列とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２５に対して少なくとも９８％配列同一性を有するポリペプチドをコードする核酸配列とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２５に対して少なくとも９９％配列同一性を有するポリペプチドをコードする核酸配列とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と配列番号１７２５をコードする核酸配列とを含む。
【０２５９】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２８に対して少なくとも９０％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２８に対して少なくとも９５％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２８に対して少なくとも９８％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１７２８に対して少なくとも９９％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と配列番号１７２８の核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、配列番号１７２８の断片は、配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む。
【０２６０】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２３に対して少なくとも９０％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２３に対して少なくとも９５％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２３に対して少なくとも９８％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２３に対して少なくとも９９％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と配列番号１８２３の核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、核酸配列は、終止コドンを更に含む。
【０２６１】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２４に対して少なくとも９８％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２４に対して少なくとも９９％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と配列番号１８２４の核酸配列またはその断片とを含む。
【０２６２】
一部の実施形態において、ＦＸＮポリペプチドは、非ヒト霊長類、例えば、カニクイザルＭａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓのＦＸＮ配列（ｃｙｎｏＦＸＮ）に由来する。特定の実施形態は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓのヒト化版（ＨｃｙｎｏＦＸＮ）配列などのＦＸＮポリペプチドを提供する。一部の実施形態において、ＦＸＮポリペプチド配列は、配列番号１７２８の核酸配列によってコードされてもよい配列番号１７２５の当該技術分野で受容されたカノニカルヒトＦＸＮアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＦＸＮポリペプチド配列は、配列番号１７２９の核酸配列によってコードされる配列番号１７２６の当該技術分野で受容されたカノニカルヒトＦＸＮアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％配列同一性を有する。一部の実施形態において、ＦＸＮポリペプチド配列は、配列番号１７３０の核酸配列によってコードされる配列番号１７２７の当該技術分野で受容されたカノニカルヒトＦＸＮアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％配列同一性を有する。
【０２６３】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、カニクイザルもしくは蟹食い（尾長）猿（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）フラタキシンまたはそのバリアントをコードするペイロード領域を含む。
【０２６４】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）フラタキシンまたはそのバリアントをコードするペイロード領域を含む。
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２２に対して少なくとも９０％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２２に対して少なくとも９５％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２２に対して少なくとも９８％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と、配列番号１８２２に対して少なくとも９９％配列同一性を有する核酸配列またはその断片とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列領域と配列番号１８２２の核酸配列またはその断片とを含む。
【０２６５】
一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、上述したもののいずれかに対して５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。
【０２６６】
一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、上述したもののいずれかに対して５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一性を有する核酸配列によってコードされてもよい。
【０２６７】
ウイルスゲノム：プロモータ
一部の実施形態において、ウイルスゲノムのペイロード領域は、ペイロード発現を増強または調節するエレメント、例えば、限定はされないが、プロモータを含む。プロモータは、野生型もしくは操作されたプロモータ、またはそれらの組合せであってよい。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、少なくとも１つのプロモータを含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、１つ超のプロモータを含む。
【０２６８】
一部の実施形態において、プロモータは、野生型フラタキシンプロモータまたはその誘導体（例えば、トランケーションまたはバリアント）である。野生型フラタキシンプロモータの好適な誘導体は、機能的な、例えば、ペイロードを少なくとも最小限に検出可能なレベルで発現するのに有効な誘導体である。
【０２６９】
一部の実施形態において、プロモータは、操作されたフラタキシンプロモータである。フラタキシンプロモータのより短いバリアントが本明細書に含まれる。フラタキシンプロモータは、２００〜１４００ｎｔ長、またはそれらの間の任意の長さであってよい。一部の実施形態において、フラタキシンプロモータバリアントは、２２３、３６３、５３４、７４７、９０６、１０６０、１２２６または１３５３ヌクレオチド長であってよい。フラタキシンプロモータバリアントは、プロモータ配列の任意の領域、例えば、限定はされないが、プロモータ配列の５’末端、プロモータ配列の３’末端、またはプロモータ配列内部中の欠失に起因して、野生型フラタキシンプロモータ配列よりも短くてもよい。
【０２７０】
一部の実施形態において、プロモータは、本明細書に記載されるプロモータのいずれかのうち１つ以上の組合せである。一部の実施形態において、プロモータは、エンハンサー配列と共に使用される。一部の実施形態において、エンハンサー配列は、サイトメガロウイルス前初期遺伝子（ＣＭＶｉｅ）に由来してもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、プロモータに対して上流（５’）に位置してもよい。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１７７７を含む。
【０２７１】
一部の実施形態において、プロモータは、ＣＢＡプロモータまたはその誘導体（例えば、トランケーションまたはバリアント）である。ＣＢＡプロモータの好適な誘導体は、機能的、例えば、ペイロードを発現するのに有効であることが理解される。
【０２７２】
一部の実施形態において、ＣＢＡプロモータは、５’から３’へと列挙した場合、ＣＭＶｉｅエンハンサー、骨格配列およびＣＢプロモータ配列を含む。３つの成分（ＣＭＶｉｅエンハンサー、骨格およびＣＢ配列）の各々は、バリアント間で異なる長さであってもよい。
【０２７３】
一部の実施形態において、ＣＢＡプロモータは、５’から３’へと列挙した場合、骨格配列およびＣＢプロモータ配列を含む。
一部の実施形態において、ＣＢＡプロモータは、ＣＢプロモータ配列を含む。
【０２７４】
一部の実施形態において、ＣＢＡプロモータは、１００〜７００ｎｔ長、またはそれらの間の任意の長さであってもよい。一部の実施形態において、ＣＢＡプロモータバリアントは、１００、１８０、２６０、２７０、３３２、４１２、４９２または５７２ヌクレオチド長であってもよい。ＣＢＡプロモータバリアントは、エンハンサー、骨格またはプロモータ配列の任意の領域、例えば、限定はされないが、プロモータ配列の５’末端、プロモータ配列の３’末端、またはプロモータ配列内部中の欠失に起因して、野生型ＣＢＡプロモータ配列よりも短くてもよい。
【０２７５】
一部の実施形態において、プロモータは、ＣＭＶプロモータまたはその誘導体（例えば、トランケーションまたはバリアント）である。ＣＭＶプロモータの好適な誘導体は、機能的、例えば、ペイロードを発現するのに有効であることが理解される。ＣＭＶプロモータは、ＣＭＶエンハンサーおよびＣＭＶプロモータ配列、またはＣＭＶプロモータ配列のみを含んでもよい。ＣＭＶエンハンサーおよびＣＭＶプロモータ配列は、プロモータバリアント間で異なる長さであってもよい。
【０２７６】
一部の実施形態において、ＣＭＶプロモータは、５０〜７００ｎｔ長、またはそれらの間の任意の長さであってもよい。一部の実施形態において、ＣＭＶプロモータバリアントは、５５、１０９、１６３、２１７、２８９、３６１、４３３または５０５ヌクレオチド長であってもよい。ＣＭＶプロモータバリアントは、エンハンサーまたはプロモータ配列の任意の領域、例えば、限定はされないが、プロモータ配列の５’末端、プロモータ配列の３’末端、またはプロモータ配列内部中の欠失に起因して、野生型ＣＭＶプロモータ配列よりも短くてもよい。
【０２７７】
一部の実施形態において、プロモータは、１つ以上のヌクレオチドが親配列から除去された、親プロモータ配列の欠失バリアントである。
一部の実施形態において、プロモータは、１つ以上のヌクレオチドが親配列に付加された、親プロモータ配列の挿入バリアントである。
【０２７８】
一部の実施形態において、プロモータは、親プロモータ配列と比較して、１つ以上の突然変異を含む。
一部の実施形態において、プロモータは、プロモータバリアントを創出するために、１つ以上の方法（例えば、欠失、突然変異および／または挿入）で改変される。
【０２７９】
一部の実施形態において、プロモータは、表３中の配列のいずれかの、配列、その断片またはバリアントを含んでもよい。例えば、プロモータは、配列番号１７３４〜１７７７からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列、例えば、指定されるパーセント同一性を有し、配列番号１７３４〜１７７７からなる群から選択される配列と同じ機能の一部または全てを提供する配列を含んでもよい。一部の実施形態において、プロモータは、ＣＭＶプロモータであるまたはそれに由来し、配列番号１７４３〜１７５１、１７６７、１７７２〜１７７２および１７７７からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、ＣＢＡプロモータであるまたはそれに由来し、配列番号１７３４〜１７４２、１７６０〜１７６６、１７６８および１７７５〜１７７６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、ＦＸＮプロモータであるまたはそれに由来し、配列番号１７５２〜１７５９および１７６９〜１７７０からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。
【０２８０】
一部の実施形態において、プロモータは、表３中に列挙されたもののいずれかのうち１つ超の配列の組合せを含んでもよい。一部の実施形態において、プロモータ配列は、表６に与えられるイントロン／エクソン配列のうち少なくとも１つを更に含んでもよい。
【０２８１】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７３８である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０２８２】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４０である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０２８３】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４２である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０２８４】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７５０である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０２８５】
一部の実施形態において、本明細書で開示されるウイルスゲノムにおいて使用されるプロモータは、表３中のプロモータ配列のうちいずれか１つを含む。表３中、ＣＭＶは、「サイトメガロウイルス」を示し；ＣＢＡは、ＣＭＶ  ＩＥ（「前初期」）エンハンサー領域とプロモータ領域とを有していてもよい「ニワトリβ−アクチン」を示し；ＣＡＧは、ＣＭＶエンハンサー、ＣＢＡプロモータおよびウサギベータ−グロビンスプライスアクセプター部位を示し；ＦＸＮは、「フラタキシン」を示し；ｍＣＢＡは、ＰＣＲを使用して生成したＣＢＡプロモータのバリアントを示す。
【０２８６】
【表３】
2022500066.tif 000037
【０２８７】
一部の実施形態において、プロモータは、標的細胞におけるフラタキシン発現を調節するために使用される。特定の実施形態において、プロモータは、標的細胞におけるフラタキシン発現を、正常な内因性フラタキシン発現のレベルよりも高いレベルまで増加させるために使用することができる。特定の実施形態において、プロモータは、標的細胞におけるフラタキシン発現を、正常な内因性フラタキシン発現のレベルに近いまたはそれと等しいレベルに誘導するために使用することができる。
【０２８８】
一部の実施形態において、接合部配列は、本明細書に記載されるプロモータ、例えば、限定はされないが、表３中に列挙されるものと組み合わせて使用することができる。特定の実施形態において、接合部配列は、ウイルスゲノム中のプロモータに対して５’に位置してもよい。特定の実施形態において、接合部配列は、ウイルスゲノム中のプロモータに対して３’に位置してもよい。特定の実施形態において、ウイルスゲノムは、１つ超の接合部配列を含んでもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、プロモータの５’末端およびプロモータの３’末端に、接合部配列を含んでもよい。接合部配列は、同じ配列、２つの異なる配列、またはプロモータ配列のいずれの側にも分割された配列であってもよい。特定の実施形態において、接合部配列は、配列番号１８１３を含む。特定の実施形態において、接合部配列は、配列番号１８１４を含む。
【０２８９】
一部の実施形態において、プロモータは、標的細胞（例えば、神経系または心組織）におけるフラタキシン発現を増強するために使用される。フラタキシン発現は、その標的細胞についての内因性フラタキシン発現の０．０１〜１００（０．０１〜１００×）倍増加され得る。一部の実施形態において、プロモータは、標的細胞におけるフラタキシン発現を、内因性フラタキシン（すなわち、正常なヒトレベルまたはおよそ５．５〜３２．８ｎｇ／ｍｇのタンパク質）の０．５〜３×（例えば、０．５〜１×、１〜１．５×、１．５〜２×、２〜２．５×、２．５〜３×）で維持するために使用される。
【０２９０】
一部の実施形態において、プロモータ、例えば、表３中のプロモータは、フラタキシンポリペプチド配列、例えば、ヒトフラタキシンポリペプチド配列をコードする配列を更に含むＡＡＶベクターゲノムにおいて使用される。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４２である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４２のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有し（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）、および／または表５〜１１に提供される１つ以上の配列もしくはそれらの９５％同一なバリアントを更に含むフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０２９１】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７５０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７５０である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７５０のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有し（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）、および／または表５〜１１に提供される１つ以上の配列もしくはそれらの９５％同一なバリアントを更に含むフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０２９２】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７３８である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７３８のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有し（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）、および／または表５〜１１に提供される１つ以上の配列もしくはそれらの９５％同一なバリアントを更に含むフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０２９３】
一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４０に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、プロモータは、配列番号１７４０である。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０に対して少なくとも９０％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９０％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０に対して少なくとも９５％配列同一性を有するプロモータ配列と、配列番号１７２５に対して少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域（例えば、配列番号１８２４に対して少なくとも９５％同一な核酸配列を含むペイロード領域）とを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、配列番号１７４０のプロモータ配列と、配列番号１７２５のアミノ酸配列を有し（例えば、配列番号１８２４を含むペイロード領域）、および／または表５〜１１に提供される１つ以上の配列もしくはそれらの９５％同一なバリアントを更に含むフラタキシンポリペプチドをコードするペイロード領域とを含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１７２８またはその断片、任意選択で配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。
【０２９４】
様々な実施形態において、本明細書で開示されるプロモータのいずれか、例えば、表３からのプロモータまたはそれと９０％以上の相同性を有するプロモータは、ＡＡＶウイルスベクターゲノム中で、単独で、または追加配列、例えば、フィラー配列（複数可）と組み合わせて、表５〜１１に開示される成分のうち１つ以上またはそれと９０％以上の相同性を有する成分（複数可）と対にしてもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、複数のコピー（例えば、２、３、またはそれより多くのコピー）の、本明細書に記載される１つ以上のウイルスゲノム成分を含んでもよい。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、２つのｍｉＲ結合部位（例えば、２つのｍｉＲ１２２結合部位）を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、３つのｍｉＲ結合部位（例えば、３つのｍｉＲ１２２結合部位）を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、本明細書で開示されるプロモータのいずれか、例えば、表３からのプロモータまたはそれと９０％以上の相同性を有するプロモータを、表５〜１１のいずれかに提供されるまたは本明細書に別途記載される１つ以上の成分と共に、表４、１２、１３、１４、１５、１６または１７のいずれかに示される５’から３’までの順序で含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、表３に提供されるプロモータを、表５〜１１のいずれかに提供されるまたは本明細書に別途記載される１つ以上の成分と共に、表４、１２、１３、１４、１５、１６または１７のいずれかに示される５’から３’までの順序で含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、全ての成分を、表４、１２、１３、１４、１５、１６または１７のいずれかに示される５’から３’までの順序で含む。
【０２９５】
例えば、配列番号１７４２を含む、またはそれと９０％以上の相同性を有するプロモータは、ＡＡＶベクターゲノム中で、表５〜１１中の成分（またはそれと９０％以上の相同性を有する成分（複数可））のいずれか、例えば、５’ＩＴＲ配列とｉｅ１エクソン１との間に（例えば、それら２つの他の成分と直接接触して、または１つ以上の非コード配列によって分離されて）位置するプロモータと対にしてもよい。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、３つのｍｉＲ１２２結合部位を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ペイロード領域、例えば、フラタキシンタンパク質をコードするものを更に含む。
【０２９６】
別の例において、配列番号１７５０を含む、またはそれと９０％以上の相同性を有するプロモータは、ＡＡＶベクターゲノム中で、表５〜１１中の成分（またはそれと９０％以上の相同性を有する成分（複数可））のいずれか、例えば、５’ＩＴＲ配列とｉｅ１エクソン１との間に（例えば、それら２つの他の成分と直接接触して、または１つ以上の非コード配列によって分離されて）位置するプロモータと対にしてもよい。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、３つのｍｉＲ１２２結合部位を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ペイロード領域、例えば、フラタキシンタンパク質をコードするものを更に含む。
【０２９７】
例えば、配列番号１７３８を含む、またはそれと９０％以上の相同性を有するプロモータは、ＡＡＶベクターゲノム中で、表５〜１１中の成分（またはそれと９０％以上の相同性を有する成分（複数可））のいずれか、例えば、５’ＩＴＲ配列とｉｅ１エクソン１との間に（例えば、それら２つの他の成分を直接接触して、または１つ以上の非コード配列によって分離されて）位置するプロモータと対にしてもよい。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、３つのｍｉＲ１２２結合部位を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ペイロード領域、例えば、フラタキシンタンパク質をコードするものを更に含む。
【０２９８】
別の例において、配列番号１７４０を含む、またはそれと９０％以上の相同性を有するプロモータは、ＡＡＶベクターゲノム中で、表５〜１１中の成分（またはそれと９０％以上の相同性を有する成分（複数可））のいずれか、例えば、５’ＩＴＲ配列とｉｅ１エクソン１との間に（例えば、それら２つの他の成分と直接接触して、または１つ以上の非コード配列によって分離されて）位置するプロモータと対にしてもよい。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、３つのｍｉＲ１２２結合部位を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ペイロード領域、例えば、フラタキシンタンパク質をコードするものを更に含む。
【０２９９】
一部の実施形態において、プロモータは、ＣＢＡプロモータであるまたはそれに由来する。ＣＢＡプロモータは、対象の様々な組織においてペイロードの発現をドライブすることができる。非限定的な例として、ＣＢＡプロモータ（プロモータは配列番号１７７６として示され、ＩＴＲからＩＴＲまでは配列番号１７７８として提供される）を使用するＦＸＮの発現は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号（その内容は全体として本願明細書に援用される）の表１６〜２８を含む実施例４に示される。ＩＶ注射後のマウスにおけるＦＸＮの発現は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表１６に示され、そこで、発現は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ１０１粒子で、皮質、腰髄、腰椎後根神経節、三叉神経節、心臓および肝臓において見られる。ＩＶ注射後のＮＨＰにおけるＦＸＮの発現は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表１８に示され、そこで、発現は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ１０１粒子で、脳幹、頸髄、胸髄、腰髄、頸椎ＤＲＧ、胸椎ＤＲＧ、腰椎／仙椎ＤＲＧ、心室、心房、肝臓、ヒラメ筋および空腸において見られる。異なる用量（６．３×１０１１ＶＧ／ｋｇ、２×１０１２ＶＧ／ｋｇまたは２×１０１３ＶＧ／ｋｇ）でのＩＶ注射後のＮＨＰにおけるＦＸＮの発現は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表１９に示され、そこで、発現は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ２０１粒子で、脳幹、小脳、頸髄、胸髄、腰髄、頸椎ＤＲＧ、胸椎ＤＲＧ、腰椎／仙椎ＤＲＧ、心室、心房、肝臓、腎臓、肺、ヒラメ筋および／または脾臓において見られる。異なる用量（６．７×１０１２ＶＧ／ｋｇまたは４．８９×１０１３ＶＧ／ｋｇ）でのＩＶ注射後のＮＨＰにおけるＦＸＮの発現は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表２０に示され、そこで、発現は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ１０１粒子で、脳幹、小脳、皮質、頸髄、胸髄、腰髄、頸椎ＤＲＧ、胸椎ＤＲＧ、腰椎／仙椎ＤＲＧ、心室、心房、肝臓、腎臓、ヒラメ筋、胸椎交感神経幹神経節（ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃ  ｔｈｏｒａｃｉｃ  ｃｈａｉｎ  ｇａｎｇｌｉａ）および／または副腎において見られる。マウスにおけるＩＶ注射後のベクターゲノムの分布は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表１７に示され、そこで、分布は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ１０１およびＡＡＶ９粒子で、皮質、腰髄、胸椎後根神経節、三叉神経節、心臓および肝臓において見られる。ＮＨＰにおけるＩＶ注射後のベクターゲノムの分布は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表１８に示され、そこで、分布は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ１０１粒子で、前頭皮質、線条体、脳幹、小脳、頸髄、胸髄、頸椎後根神経節、胸椎後根神経節、腰椎／仙椎後根神経節、心室、心房、肝臓、腎臓、肺、ヒラメ筋、空腸および脾臓において見られる。異なる用量（６．３×１０１１ＶＧ／ｋｇ、２×１０１２ＶＧ／ｋｇまたは２×１０１３ＶＧ／ｋｇ）でのＩＶ注射後のＮＨＰにおけるベクターゲノムの分布は、共有に係る国際��許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表１９に示され、そこで、分布は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ２０１粒子で、前頭皮質、線条体、脳幹、小脳、頸髄、胸髄、腰髄、頸椎ＤＲＧ、胸椎ＤＲＧ、腰椎／仙椎ＤＲＧ、心室、心房、肝臓、腎臓、肺、ヒラメ筋、空腸および／または脾臓において見られる。異なる用量（６．７×１０１２ＶＧ／ｋｇまたは４．８９×１０１３ＶＧ／ｋｇ）でのＩＶ注射後のＮＨＰにおけるベクターゲノムの分布は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表２０に示され、そこで、分布は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ１０１粒子で、運動皮質、感覚運動皮質、線条体、脳幹、小脳皮質、頸髄、胸髄、腰髄、胸髄、頸椎ＤＲＧ、胸椎ＤＲＧ、腰椎／仙椎ＤＲＧ、心室、心房、肝臓、腎臓、ヒラメ筋、空腸、脾臓、胸椎交感神経幹神経節および／または副腎において見られる。
【０３００】
一部の実施形態において、プロモータは、ＣＭＶｉｅエンハンサー、ＣＢＡ、ＣＭＶ、フラタキシンプロモータ、トランケート型ＣＢＡおよび／またはトランケート型ＣＭＶプロモータが挙げられるプロモータであるまたはそれに由来する。プロモータは、対象の様々な組織においてペイロードの発現をドライブすることができる。非限定的な例として、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号（その内容は全体として本願明細書に援用される）の実施例５に示される、ＦＸＮを有するＶＯＹ１０１粒子のＩＶ投薬のインビボ分布、発現および有効性を評価するためのフリードライヒ運動失調症のマウスモデルが使用され得る。特定の実施形態において、プロモータ、例えば、限定はされないが、表３中のものは、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の実施例５で概説されるように、マウスにおけるＦＸＮの発現をドライブすることについて評価され得る。別の非限定的な例として、ＦＸＮを有するＶＯＹ１０１粒子のＩＶ投薬のインビボ分布および発現を評価するためのフリードライヒ運動失調症ＮＨＰモデルは、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号（その内容は全体として本願明細書に援用される）の実施例５に示される。特定の実施形態において、プロモータ、例えば、限定はされないが、表３中のものは、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の実施例５で概説されるように、ＮＨＰにおけるＦＸＮの発現をドライブすることについて評価され得る。
【０３０１】
一部の実施形態において、プロモータは、対象の様々な組織においてペイロードの発現をドライブすることができるＣＢＡプロモータであるまたはそれに由来する。非限定的な例として、ＣＢＡプロモータ（プロモータは配列番号１７７６として示され、ＩＴＲからＩＴＲまでは配列番号１７７８として提供される）を使用するＦＸＮの発現は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号（その内容は全体として本願明細書に援用される）の表３３〜３４を含む実施例１４に示される。ＩＶ注射後のマウスにおけるＦＸＮの発現は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表３３に示され、そこで、発現は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ１０１、ＶＯＹ８０１および／またはＶＯＹ１１０１粒子で、皮質、線条体、海馬、脳幹、胸髄、胸椎ＤＲＧ、心臓および／または肝臓において見られる。マウスにおけるＩＶ注射後のベクターゲノムの分布は、共有に係る国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０３２３８７号の表３４に示され、そこで、分布は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ１０１、ＶＯＹ８０１および／またはＶＯＹ１１０１粒子で、皮質、線条体、海馬、脳幹、胸髄、心臓および肝臓において見られる。別の非限定的な例として、ＶＯＹ７０１およびＶＯＹ１０１カプシドにおける、ＣＢＡプロモータ（プロモータは配列番号１７７６として示され、ＩＴＲからＩＴＲまでは配列番号１７７８として提供される）を使用するＦＸＮの発現は、共有に係る米国仮特許出願第６２／８３９，８８９号（その内容は全体として本願明細書に援用される）の表３５〜３６を含む実施例１４に示される。ＩＶ注射後のマウスにおけるＦＸＮの発現は、共有に係る米国仮特許出願第６２／８３９，８８９号の表３５に示され、そこで、発現は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ７０１および／またはＶＯＹ１０１粒子で、皮質、線条体、海馬、脳幹、胸髄および／または肝臓において見られる。マウスにおけるＩＶ注射後のベクターゲノムの分布は、共有に係る米国仮特許出願第６２／８３９，８８９号の表３６に示され、そこで、分布は、ＣＢＡプロモータを有するＶＯＹ７０１および／またはＶＯＹ１０１粒子で、皮質、線条体、海馬、脳幹、胸髄および／または肝臓において見られる。
【０３０２】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＡＡＶ粒子は、フラタキシンタンパク質をコードするペイロード領域を有するウイルスゲノムを含む。ウイルスゲノムは、標的細胞におけるフラタキシン発現を最適化するために操作されてもよい。
【０３０３】
ウイルスゲノム：フラタキシンペイロードを含むＩＴＲからＩＴＲまでの配列
本明細書に記載される成分のいずれかが、所望のフラタキシン発現のためにウイルスゲノムのＩＴＲからＩＴＲまでの配列を設計および最適化するために使用され得る。ウイルスゲノムは、任意の数の成分、例えば、限定はされないが、ＩＴＲ、エンハンサー、プロモータ、イントロン、ＵＴＲ、ペイロード領域、タグもしくは選択可能なマーカー、ｍｉＲ結合もしくは標的部位、骨格領域、ポリＡ配列および／またはフィラー配列のうち１つ以上を含んでもよい。これらの成分の各々は、所与のウイルスゲノム中に、０、１、２、または２回超存在してもよい。
【０３０４】
ＩＴＲ、プロモータ、エンハンサー、イントロン、エクソン、ペイロード、タグ、ｍｉＲ結合部位、ポリＡおよび／またはフィラー成分の各々は、表３および５〜１１中に提供される配列から、独立に、または任意の組合せで選択され得る。
【０３０５】
一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、５’ＩＴＲ、エンハンサー、イントロン、ペイロード領域、任意選択のタグ、最大３つのｍｉＲ結合部位、ポリＡ配列、任意選択のフィラー配列および３’ＩＴＲを含む。一部の実施形態において、５’ＩＴＲは、ＡＡＶ２  ＩＴＲである。一部の実施形態において、５’ＩＴＲは、配列番号１８１１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、ｉｅ１エクソン１およびｉｅ１イントロン１またはそれらの断片を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１８１７および／または１８１９に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、１つ以上のヒトベータ−グロビン配列、例えば、配列番号１８１６、１８２０および／または１８２１に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１８１７、１８１９、１８２０および１８２１を含む。一部の実施形態において、エンハンサーは、配列番号１８１６を含む。
【０３０６】
一部の実施形態において、ペイロード領域は、配列番号１７２５、１７２６、１７２７、１７３１、１７３２または１７３３に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する、例えば、配列番号１７２５に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む。一部の実施形態において、ペイロード領域は、配列番号１７２８、１７２９、１７３０またはそれらの断片に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％配列同一性を有する核酸配列を含む。一部の実施形態において、配列番号１７２８の断片は、配列番号１７２８のヌクレオチド２２１〜８５３を含む。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、配列番号１８２２、１８２３または１８２４を含む核酸配列によってコードされる。一部の実施形態において、タグは存在しない。一部の実施形態において、タグは存在し、ヒトインフルエンザヘマグルチニンＨＡタグである。一部の実施形態において、ＨＡタグは、配列番号１８２５を含む。一部の実施形態において、ｍｉＲ結合部位は存在しない。一部の実施形態において、少なくとも１つのｍｉＲ結合部位が存在し、ｍｉＲ１２２結合部位を含む。一部の実施形態において、ｍｉＲ１２２結合部位は、配列番号１８２７に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶベクターゲノムは、３コピーのｍｉＲ１２２結合部位、例えば、３コピーの配列番号１８２７または少なくとも９０％配列同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態において、３コピーのｍｉＲ１２２結合部位を含むｍｉＲ結合部位シリーズは、配列番号１８２６を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、ヒト成長ホルモンポリＡ配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８２８に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一なポリＡ配列を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶウイルスゲノムは、フィラー配列、例えば、アルブミンフィラー配列を更に含む。一部の実施形態において、フィラー配列は、配列番号１８２９〜１８４２によって与えられる配列のいずれかを含む。一部の実施形態において、３’ＩＴＲは、ＡＡＶ２  ＩＴＲである。一部の実施形態において、３’ＩＴＲは、配列番号１８１２に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％または１００％同一な配列を含む。
【０３０７】
特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、限定はされないが、コザック配列、骨格配列および／またはイントロン配列が挙げられる少なくとも１つのシス−エレメントを含む。特定の実施形態は、ＡＡＶ粒子がプロモータ領域を更に含むことを提供する。例えば、プロモータは、ＣＢＡ、ＣＭＶ、ＦＸＮおよび／もしくはＳＶ４０遺伝子、またはそれらのバリアントのいずれかからのものを含んでもよい。フラタキシンタンパク質をコードするペイロード領域を有するウイルスゲノムを含むＡＡＶ粒子のＩＴＲからＩＴＲまでの配列の非限定的な例は、表４に記載される。
【０３０８】
表４中、ｃＦＸＮは、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）フラタキシンを示し、ｈＦＸＮは、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）フラタキシンを示し、ｈβｇｌｏｂｉｎは、ヒトベータ−グロビンを示し、ＨＡは、ヒトインフルエンザヘマグルチニンＨＡタグを示し、ｈＧＨは、ヒト成長ホルモンを示す。Ａｌｂは、アルブミンを示す。ａｌｂの後ろの数字は、アルブミンフィラーの長さを示す。ｍｉＲ−１２２  ＢＳは、ｍｉＲ−１２２結合部位である。「−」符号は、コンストラクトがその成分または配列を有さないことを示す。「＋」符号は、コンストラクトがその成分または配列を有することを示す。
【０３０９】
【表４】
2022500066.tif 000038
【０３１０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して一定のパーセント同一性を有する配列を含むウイルスゲノムを含む。ウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一性を有してもよい。ウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して１〜１０％、１０〜２０％、３０〜４０％、５０〜６０％、５０〜７０％、５０〜８０％、５０〜９０％、５０〜９９％、５０〜１００％、６０〜７０％、６０〜８０％、６０〜９０％、６０〜９９％、６０〜１００％、７０〜８０％、７０〜９０％、７０〜９９％、７０〜１００％、８０〜８５％、８０〜９０％、８０〜９５％、８０〜９９％、８０〜１００％、９０〜９５％、９０〜９９％または９０〜１００％同一性を有してもよい。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して少なくとも８０％同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して少なくとも８５％同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して少なくとも９０％同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して少なくとも９５％同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１７７８〜１８１０のいずれかに対して少なくとも９９％同一性を有する配列を含む。
【０３１１】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１７９７に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１７９７を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８０１に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８０１を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８０８に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８０８を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８０９に対して少なくとも９５％配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、配列番号１８０９を含む。一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子のウイルスゲノムは、表１に列挙されるまたは本明細書に記載されるカプシドのいずれか中に被包された、表２〜１１に記載されるまたは本明細書に別途記載される配列領域の任意の組合せを含んでもよい。
【０３１２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、表２〜１１に記載される少なくとも１つの配列領域を含んでもよい。これらの領域は、本明細書に記載される他の配列領域のいずれかの前または後に位置してもよい。ウイルスゲノムは、１つ超のコピーの、表２〜１１に記載される１つ以上の配列領域を更に含んでもよい。
【０３１３】
ウイルスゲノム：末端逆位配列（ＩＴＲ）
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列（ＩＴＲ）領域を含んでもよい。ＩＴＲ領域（複数可）は、独立に、例えば、限定はされないが、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、および１７５ヌクレオチドの長さを有してもよい。ウイルスゲノムのためのＩＴＲ領域の長さは、７５〜８０、７５〜８５、７５〜１００、８０〜８５、８０〜９０、８０〜１０５、８５〜９０、８５〜９５、８５〜１１０、９０〜９５、９０〜１００、９０〜１１５、９５〜１００、９５〜１０５、９５〜１２０、１００〜１０５、１００〜１１０、１００〜１２５、１０５〜１１０、１０５〜１１５、１０５〜１３０、１１０〜１１５、１１０〜１２０、１１０〜１３５、１１５〜１２０、１１５〜１２５、１１５〜１４０、１２０〜１２５、１２０〜１３０、１２０〜１４５、１２５〜１３０、１２５〜１３５、１２５〜１５０、１３０〜１３５、１３０〜１４０、１３０〜１５５、１３５〜１４０、１３５〜１４５、１３５〜１６０、１４０〜１４５、１４０〜１５０、１４０〜１６５、１４５〜１５０、１４５〜１５５、１４５〜１７０、１５０〜１５５、１５０〜１６０、１５０〜１７５、１５５〜１６０、１５５〜１６５、１６０〜１６５、１６０〜１７０、１６５〜１７０、１６５〜１７５、および１７０〜１７５ヌクレオチドであってもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１４１ヌクレオチド長である５’ＩＴＲを含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１３０ヌクレオチド長である５’ＩＴＲを含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１１９ヌクレオチド長である５’ＩＴＲを含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１４１ヌクレオチド長である３’ＩＴＲを含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１３０ヌクレオチド長である３’ＩＴＲを含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１１９ヌクレオチド長である３’ＩＴＲを含む。非限定的な例として、５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲは、同じ長さおよび／または同じ配列を含んでもよい。別の非限定的な例では、５’ＩＴＲおよび３’ＩＴＲは、長さおよび／または配列が異なる。
【０３１４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つの末端逆位配列配列領域を含む。ＩＴＲ配列領域の非限定的な例は、表５に記載される。
【０３１５】
【表５】
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【０３１６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、ＩＴＲ１を含むＩＴＲを有してもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、ＩＴＲ２を含むＩＴＲを有してもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、２つのＩＴＲを有してもよい。非限定的な例として、２つのＩＴＲは、ＩＴＲ１およびＩＴＲ２であってもよい。
【０３１７】
ウイルスゲノム：ペイロード領域のイントロンおよびエクソン配列
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのイントロンおよび／またはエクソン配列領域を含む。イントロンおよびエクソン配列領域の非限定的な例は、表６に記載される。
【０３１８】
【表６】
2022500066.tif 000040
【０３１９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのイントロン配列領域を含んでもよい。イントロン配列領域（複数可）は、独立に、例えば、限定はされないが、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、および３５０ヌクレオチド超の長さを有してもよい。ウイルスゲノムのためのイントロン配列領域の長さは、２５〜３５、２５〜５０、３５〜４５、４５〜５５、５０〜７５、５５〜６５、６５〜７５、７５〜８５、７５〜１００、８５〜９５、９５〜１０５、１００〜１２５、１０５〜１１５、１１５〜１２５、１２５〜１３５、１２５〜１５０、１３５〜１４５、１４５〜１５５、１５０〜１７５、１５５〜１６５、１６５〜１７５、１７５〜１８５、１７５〜２００、１８５〜１９５、１９５〜２０５、２００〜２２５、２０５〜２１５、２１５〜２２５、２２５〜２３５、２２５〜２５０、２３５〜２４５、２４５〜２５５、２５０〜２７５、２５５〜２６５、２６５〜２７５、２７５〜２８５、２７５〜３００、２８５〜２９５、２９５〜３０５、３００〜３２５、３０５〜３１５、３１５〜３２５、３２５〜３３５、３２５〜３５０、および３３５〜３４５ヌクレオチドであってもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約３２ヌクレオチド長であるイントロン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約５３ヌクレオチド長であるイントロン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１３４ヌクレオチド長であるイントロン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約３４７ヌクレオチド長であるイントロン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約３７９ヌクレオチド長であるイントロン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約５６６ヌクレオチド長であるイントロン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１０１６ヌクレオチド長であるイントロン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１０１６ヌクレオチド超長であるイントロン配列領域を含む。
【０３２０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、２つのイントロン配列領域を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、３つのイントロン配列領域を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、３つ超のイントロン配列領域を含む。
【０３２１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのエクソン配列領域を含んでもよい。エクソン配列領域（複数可）は、独立に、例えば、限定はされないが、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、および３５０ヌクレオチド超の長さを有してもよい。ウイルスゲノムのためのエクソン配列領域の長さは、２５〜３５、２５〜５０、３５〜４５、４５〜５５、５０〜７５、５５〜６５、６５〜７５、７５〜８５、７５〜１００、８５〜９５、９５〜１０５、１００〜１２５、１０５〜１１５、１１５〜１２５、１２５〜１３５、１２５〜１５０、１３５〜１４５、１４５〜１５５、１５０〜１７５、１５５〜１６５、１６５〜１７５、１７５〜１８５、１７５〜２００、１８５〜１９５、１９５〜２０５、２００〜２２５、２０５〜２１５、２１５〜２２５、２２５〜２３５、２２５〜２５０、２３５〜２４５、２４５〜２５５、２５０〜２７５、２５５〜２６５、２６５〜２７５、２７５〜２８５、２７５〜３００、２８５〜２９５、２９５〜３０５、３００〜３２５、３０５〜３１５、３１５〜３２５、３２５〜３３５、３２５〜３５０、および３３５〜３４５ヌクレオチドであってもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約３２ヌクレオチド長であるエクソン領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約５３ヌクレオチド長であるエクソン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１３４ヌクレオチド長であるエクソン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約３４７ヌクレオチド長であるエクソン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約３７９ヌクレオチド長であるエクソン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約５６６ヌクレオチド長であるエクソン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１０１６ヌクレオチド長であるエクソン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１０１６ヌクレオチド超長であるエクソン配列領域を含む。
【０３２２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、２つのエクソン配列領域を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、３つのエクソン配列領域を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、３つ超のエクソン配列領域を含む。
【０３２３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのイントロンおよび少なくとも１つのエクソンを含むハイブリッドイントロン／エクソン配列領域を含む。一部の実施形態において、ハイブリッドイントロン／エクソン配列領域は、１つのイントロンおよび１つのエクソンを含む。一部の実施形態において、ハイブリッドイントロン／エクソン配列領域は、２つのイントロンおよび２つのエクソンを含む。一部の実施形態において、イントロンまたはエクソン配列は、全長イントロンまたはエクソンを含んでもよい。一部の実施形態において、イントロンまたはエクソン配列は、イントロンまたはエクソン配列の断片またはバリアントを含んでもよい。
【０３２４】
ハイブリッドイントロン／エクソン配列領域（複数可）は、独立に、例えば、限定はされないが、１５〜１００、１００〜２００、２００〜３００、３００〜４００、４００〜５００、５００〜６００、６００〜７００、７００〜８００、８００〜９００、９００〜１０００、１０００〜１１００、１１００〜１２００、および１２００ヌクレオチド超の長さを有してもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約３７９ヌクレオチド長であるハイブリッドイントロン／エクソン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約５６６ヌクレオチド長であるハイブリッドイントロン／エクソン配列領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約３７９ヌクレオチド長であるハイブリッドイントロン／エクソン領域を含む。
【０３２５】
一部の実施形態において、イントロン／エクソン配列領域は、エンハンサー配列である。一部の実施形態において、イントロン／エクソン配列領域は、エンハンサー配列ではない。
【０３２６】
一部の実施形態において、イントロン／エクソン配列領域は、プロモータ配列の成分である。一部の実施形態において、イントロン／エクソン配列領域は、プロモータ配列の成分ではない。
【０３２７】
ウイルスゲノム：フラタキシンペイロード
一部の実施形態において、ペイロードは、表７に与えられる配列のいずれを含んでもよい。
【０３２８】
【表７】
2022500066.tif 000041
【０３２９】
一部の実施形態において、ペイロード配列は、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に由来するフラタキシンタンパク質またはそのバリアントをコードする。一部の実施形態において、ペイロード配列は、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に由来するが、少なくとも１アミノ酸とは異なるフラタキシンタンパク質をコードする。一部の実施形態において、ペイロード配列は、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に由来するが、少なくとも１アミノ酸野生型とは異なるフラタキシンタンパク質をコードする。一部の実施形態において、ペイロード配列は、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に由来するが、少なくとも２アミノ酸野生型とは異なるフラタキシンタンパク質をコードする。
【０３３０】
一部の実施形態において、ペイロード配列は、ヒト（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）に由来するフラタキシンタンパク質またはそのバリアントをコードする。一部の実施形態において、ペイロード配列は、終止コドンを含む。
【０３３１】
ウイルスゲノム：タグ配列
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのタグ配列領域を含んでもよい。本明細書で使用されるとき、用語「タグ」は、発現されると、発現されたペイロードを同定するために使用することができる、ペイロードに加えられるポリヌクレオチド配列を示す。あるいは、用語「タグ」は、細胞の特定の領域（例えば、小胞体）における発現されたペイロードの保持のためのシグナルを伝達する、ペイロードに加えられるポリヌクレオチド配列を示してもよい。タグ配列領域（複数可）は、独立に、例えば、限定はされないが、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、または３０ヌクレオチド超の長さを有してもよい。ウイルスゲノム中のタグ配列領域の長さは、１０〜１５、１５〜２０、２０〜２５、２５〜３０、または３０ヌクレオチド超であってもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約２７ヌクレオチド長であるタグ配列領域を含む。
【０３３２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのタグ配列領域を含む。タグ配列領域の非限定的な例は、表８に示される。
【０３３３】
【表８】
2022500066.tif 000042
【０３３４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、１つのタグ配列領域を含む。一部の実施形態において、タグ配列領域は、ヒトインフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）タグである。
【０３３５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、１つ超のタグ配列領域を含む。一実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、２つのタグ配列領域を含む。一実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、３つのタグ配列領域を含む。一実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、３つ超のタグ配列領域を含む。
【０３３６】
ウイルスゲノム：ｍｉｃｒｏＲＮＡ（すなわち、ｍｉＲ）結合部位
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのｍｉＲ結合部位を含んでもよい。ｍｉＲ結合部位配列領域の非限定的な例は、表９に示される。
【０３３７】
【表９】
2022500066.tif 000043
【０３３８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、単一のｍｉＲ結合部位配列を含む。非限定的な例として、ｍｉＲ結合部位配列は、ｍｉＲ−１２２結合部位であってもよい。
【０３３９】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、１つ超のｍｉＲ結合部位配列を含んでもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、２、３、４または５つのｍｉＲ結合部位配列を含んでもよい。
【０３４０】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、３つの単一のｍｉＲ結合部位配列（配列番号１８２７）を含むｍｉＲ結合部位シリーズ（配列番号１８２６）を含んでもよい。
ｍｉＲ結合部位配列領域は、例えば、限定はされないが、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、または１２５ヌクレオチドの長さを有してもよい。
【０３４１】
ウイルスゲノム：ポリＡシグナル
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのポリアデニル化（ポリＡ）配列領域を含んでもよい。ポリアデニル化配列領域（複数可）は、独立に、例えば、限定はされないが、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、５１１、５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２、５６３、５６４、５６５、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５７２、５７３、５７４、５７５、５７６、５７７、５７８、５７９、５８０、５８１、５８２、５８３、５８４、５８５、５８６、５８７、５８８、５８９、５９０、５９１、５９２、５９３、５９４、５９５、５９６、５９７、５９８、５９９、および６００ヌクレオチドの長さを有してもよい。ウイルスゲノムのためのポリアデニル化配列領域の長さは、４〜１０、１０〜２０、１０〜５０、２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、５０〜１００、６０〜７０、７０〜８０、８０〜９０、９０〜１００、１００〜１１０、１００〜１５０、１１０〜１２０、１２０〜１３０、１３０〜１４０、１４０〜１５０、１５０〜１６０、１５０〜２００、１６０〜１７０、１７０〜１８０、１８０〜１９０、１９０〜２００、２００〜２１０、２００〜２５０、２１０〜２２０、２２０〜２３０、２３０〜２４０、２４０〜２５０、２５０〜２６０、２５０〜３００、２６０〜２７０、２７０〜２８０、２８０〜２９０、２９０〜３００、３００〜３１０、３００〜３５０、３１０〜３２０、３２０〜３３０、３３０〜３４０、３４０〜３５０、３５０〜３６０、３５０〜４００、３６０〜３７０、３７０〜３８０、３８０〜３９０、３９０〜４００、４００〜４１０、４００〜４５０、４１０〜４２０、４２０〜４３０、４３０〜４４０、４４０〜４５０、４５０〜４６０、４５０〜５００、４６０〜４７０、４７０〜４８０、４８０〜４９０、４９０〜５００、５００〜５１０、５００〜５５０、５１０〜５２０、５２０〜５３０、５３０〜５４０、５４０〜５５０、５５０〜５６０、５５０〜６００、５６０〜５７０、５７０〜５８０、５８０〜５９０、および５９０〜６００ヌクレオチドであってもよい。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、約４７７ヌクレオチド長であるポリアデニル化配列領域を含む。
【０３４２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのポリＡ配列領域を含む。ポリＡ配列領域の非限定的な例は、表１０に記載される。
【０３４３】
【表１０】
2022500066.tif 000044
【０３４４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、１つのポリＡ配列領域を含む。非限定的な例として、ポリＡ配列は、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
一実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、１つ超のポリＡ配列領域を含む。
【０３４５】
ウイルスゲノム：フィラー（またはスタッファー）配列
一実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つまたは複数のフィラー配列領域を含んでもよい。フィラー領域（複数可）は、独立に、例えば、限定はされないが、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３、２７４、２７５、２７６、２７７、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２８４、２８５、２８６、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、３４６、３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、３９２、３９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４０３、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１３、４１４、４１５、４１６、４１７、４１８、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４２８、４２９、４３０、４３１、４３２、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８、４３９、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４４６、４４７、４４８、４４９、４５０、４５１、４５２、４５３、４５４、４５５、４５６、４５７、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４６４、４６５、４６６、４６７、４６８、４６９、４７０、４７１、４７２、４７３、４７４、４７５、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４８２、４８３、４８４、４８５、４８６、４８７、４８８、４８９、４９０、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７、５０８、５０９、５１０、５１１、５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５１８、５１９、５２０、５２１、５２２、５２３、５２４、５２５、５２６、５２７、５２８、５２９、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８、５３９、５４０、５４１、５４２、５４３、５４４、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１、５６２、５６３、５６４、５６５、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５７２、５７３、５７４、５７５、５７６、５７７、５７８、５７９、５８０、５８１、５８２、５８３、５８４、５８５、５８６、５８７、５８８、５８９、５９０、５９１、５９２、５９３、５９４、５９５、５９６、５９７、５９８、５９９、６００、６０１、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６、６０７、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５、６１６、６１７、６１８、６１９、６２０、６２１、６２２、６２３、６２４、６２５、６２６、６２７、６２８、６２９、６３０、６３１、６３２、６３３、６３４、６３５、６３６、６３７、６３８、６３９、６４０、６４１、６４２、６４３、６４４、６４５、６４６、６４７、６４８、６４９、６５０、６５１、６５２、６５３、６５４、６５５、６５６、６５７、６５８、６５９、６６０、６６１、６６２、６６３、６６４、６６５、６６６、６６７、６６８、６６９、６７０、６７１、６７２、６７３、６７４、６７５、６７６、６７７、６７８、６７９、６８０、６８１、６８２、６８３、６８４、６８５、６８６、６８７、６８８、６８９、６９０、６９１、６９２、６９３、６９４、６９５、６９６、６９７、６９８、６９９、７００、７０１、７０２、７０３、７０４、７０５、７０６、７０７、７０８、７０９、７１０、７１１、７１２、７１３、７１４、７１５、７１６、７１７、７１８、７１９、７２０、７２１、７２２、７２３、７２４、７２５、７２６、７２７、７２８、７２９、７３０、７３１、７３２、７３３、７３４、７３５、７３６、７３７、７３８、７３９、７４０、７４１、７４２、７４３、７４４、７４５、７４６、７４７、７４８、７４９、７５０、７５１、７５２、７５３、７５４、７５５、７５６、７５７、７５８、７５９、７６０、７６１、７６２、７６３、７６４、７６５、７６６、７６７、７６８、７６９、７７０、７７１、７７２、７７３、７７４、７７５、７７６、７７７、７７８、７７９、７８０、７８１、７８２、７８３、７８４、７８５、７８６、７８７、７８８、７８９、７９０、７９１、７９２、７９３、７９４、７９５、７９６、７９７、７９８、７９９、８００、８０１、８０２、８０３、８０４、８０５、８０６、８０７、８０８、８０９、８１０、８１１、８１２、８１３、８１４、８１５、８１６、８１７、８１８、８１９、８２０、８２１、８２２、８２３、８２４、８２５、８２６、８２７、８２８、８２９、８３０、８３１、８３２、８３３、８３４、８３５、８３６、８３７、８３８、８３９、８４０、８４１、８４２、８４３、８４４、８４５、８４６、８４７、８４８、８４９、８５０、８５１、８５２、８５３、８５４、８５５、８５６、８５７、８５８、８５９、８６０、８６１、８６２、８６３、８６４、８６５、８６６、８６７、８６８、８６９、８７０、８７１、８７２、８７３、８７４、８７５、８７６、８７７、８７８、８７９、８８０、８８１、８８２、８８３、８８４、８８５、８８６、８８７、８８８、８８９、８９０、８９１、８９２、８９３、８９４、８９５、８９６、８９７、８９８、８９９、９００、９０１、９０２、９０３、９０４、９０５、９０６、９０７、９０８、９０９、９１０、９１１、９１２、９１３、９１４、９１５、９１６、９１７、９１８、９１９、９２０、９２１、９２２、９２３、９２４、９２５、９２６、９２７、９２８、９２９、９３０、９３１、９３２、９３３、９３４、９３５、９３６、９３７、９３８、９３９、９４０、９４１、９４２、９４３、９４４、９４５、９４６、９４７、９４８、９４９、９５０、９５１、９５２、９５３、９５４、９５５、９５６、９５７、９５８、９５９、９６０、９６１、９６２、９６３、９６４、９６５、９６６、９６７、９６８、９６９、９７０、９７１、９７２、９７３、９７４、９７５、９７６、９７７、９７８、９７９、９８０、９８１、９８２、９８３、９８４、９８５、９８６、９８７、９８８、９８９、９９０、９９１、９９２、９９３、９９４、９９５、９９６、９９７、９９８、９９９、１０００、１００１、１００２、１００３、１００４、１００５、１００６、１００７、１００８、１００９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３、１０１４、１０１５、１０１６、１０１７、１０１８、１０１９、１０２０、１０２１、１０２２、１０２３、１０２４、１０２５、１０２６、１０２７、１０２８、１０２９、１０３０、１０３１、１０３２、１０３３、１０３４、１０３５、１０３６、１０３７、１０３８、１０３９、１０４０、１０４１、１０４２、１０４３、１０４４、１０４５、１０４６、１０４７、１０４８、１０４９、１０５０、１０５１、１０５２、１０５３、１０５４、１０５５、１０５６、１０５７、１０５８、１０５９、１０６０、１０６１、１０６２、１０６３、１０６４、１０６５、１０６６、１０６７、１０６８、１０６９、１０７０、１０７１、１０７２、１０７３、１０７４、１０７５、１０７６、１０７７、１０７８、１０７９、１０８０、１０８１、１０８２、１０８３、１０８４、１０８５、１０８６、１０８７、１０８８、１０８９、１０９０、１０９１、１０９２、１０９３、１０９４、１０９５、１０９６、１０９７、１０９８、１０９９、１１００、１１０１、１１０２、１１０３、１１０４、１１０５、１１０６、１１０７、１１０８、１１０９、１１１０、１１１１、１１１２、１１１３、１１１４、１１１５、１１１６、１１１７、１１１８、１１１９、１１２０、１１２１、１１２２、１１２３、１１２４、１１２５、１１２６、１１２７、１１２８、１１２９、１１３０、１１３１、１１３２、１１３３、１１３４、１１３５、１１３６、１１３７、１１３８、１１３９、１１４０、１１４１、１１４２、１１４３、１１４４、１１４５、１１４６、１１４７、１１４８、１１４９、１１５０、１１５１、１１５２、１１５３、１１５４、１１５５、１１５６、１１５７、１１５８、１１５９、１１６０、１１６１、１１６２、１１６３、１１６４、１１６５、１１６６、１１６７、１１６８、１１６９、１１７０、１１７１、１１７２、１１７３、１１７４、１１７５、１１７６、１１７７、１１７８、１１７９、１１８０、１１８１、１１８２、１１８３、１１８４、１１８５、１１８６、１１８７、１１８８、１１８９、１１９０、１１９１、１１９２、１１９３、１１９４、１１９５、１１９６、１１９７、１１９８、１１９９、１２００、１２０１、１２０２、１２０３、１２０４、１２０５、１２０６、１２０７、１２０８、１２０９、１２１０、１２１１、１２１２、１２１３、１２１４、１２１５、１２１６、１２１７、１２１８、１２１９、１２２０、１２２１、１２２２、１２２３、１２２４、１２２５、１２２６、１２２７、１２２８、１２２９、１２３０、１２３１、１２３２、１２３３、１２３４、１２３５、１２３６、１２３７、１２３８、１２３９、１２４０、１２４１、１２４２、１２４３、１２４４、１２４５、１２４６、１２４７、１２４８、１２４９、１２５０、１２５１、１２５２、１２５３、１２５４、１２５５、１２５６、１２
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１、２２８２、２２８３、２２８４、２２８５、２２８６、２２８７、２２８８、２２８９、２２９０、２２９１、２２９２、２２９３、２２９４、２２９５、２２９６、２２９７、２２９８、２２９９、２３００、２３０１、２３０２、２３０３、２３０４、２３０５、２３０６、２３０７、２３０８、２３０９、２３１０、２３１１、２３１２、２３１３、２３１４、２３１５、２３１６、２３１７、２３１８、２３１９、２３２０、２３２１、２３２２、２３２３、２３２４、２３２５、２３２６、２３２７、２３２８、２３２９、２３３０、２３３１、２３３２、２３３３、２３３４、２３３５、２３３６、２３３７、２３３８、２３３９、２３４０、２３４１、２３４２、２３４３、２３４４、２３４５、２３４６、２３４７、２３４８、２３４９、２３５０、２３５１、２３５２、２３５３、２３５４、２３５５、２３５６、２３５７、２３５８、２３５９、２３６０、２３６１、２３６２、２３６３、２３６４、２３６５、２３６６、２３６７、２３６８、２３６９、２３７０、２３７１、２３７２、２３７３、２３７４、２３７５、２３７６、２３７７、２３７８、２３７９、２３８０、２３８１、２３８２、２３８３、２３８４、２３８５、２３８６、２３８７、２３８８、２３８９、２３９０、２３９１、２３９２、２３９３、２３９４、２３９５、２３９６、２３９７、２３９８、２３９９、２４００、２４０１、２４０２、２４０３、２４０４、２４０５、２４０６、２４０７、２４０８、２４０９、２４１０、２４１１、２４１２、２４１３、２４１４、２４１５、２４１６、２４１７、２４１８、２４１９、２４２０、２４２１、２４２２、２４２３、２４２４、２４２５、２４２６、２４２７、２４２８、２４２９、２４３０、２４３１、２４３２、２４３３、２４３４、２４３５、２４３６、２４３７、２４３８、２４３９、２４４０、２４４１、２４４２、２４４３、２４４４、２４４５、２４４６、２４４７、２４４８、２４４９、２４５０、２４５１、２４５２、２４５３、２４５４、２４５５、２４５６、２４５７、２４５８、２４５９、２４６０、２４６１、２４６２、２４６３、２４６４、２４６５、２４６６、２４６７、２４６８、２４６９、２４７０、２４７１、２４７２、２４７３、２４７４、２４７５、２４７６、２４７７、２４７８、２４７９、２４８０、２４８１、２４８２、２４８３、２４８４、２４８５、２４８６、２４８７、２４８８、２４８９、２４９０、２４９１、２４９２、２４９３、２４９４、２４９５、２４９６、２４９７、２４９８、２４９９、２５００、２５０１、２５０２、２５０３、２５０４、２５０５、２５０６、２５０７、２５０８、２５０９、２５１０、２５１１、２５１２、２５１３、２５１４、２５１５、２５１６、２５１７、２５１８、２５１９、２５２０、２５２１、２５２２、２５２３、２５２４、２５２５、２５２６、２５２７、２５２８、２５２９、２５３０、２５３１、２５３２、２５３３、２５３４、２５３５、２５３６、２５３７、２５３８、２５３９、２５４０、２５４１、２５４２、２５４３、２５４４、２５４５、２５４６、２５４７、２５４８、２５４９、２５５０、２５５１、２５５２、２５５３、２５５４、２５５５、２５５６、２５５７、２５５８、２５５９、２５６０、２５６１、２５６２、２５６３、２５６４、２５６５、２５６６、２５６７、２５６８、２５６９、２５７０、２５７１、２５７２、２５７３、２５７４、２５７５、２５７６、２５７７、２５７８、２５７９、２５８０、２５８１、２５８２、２５８３、２５８４、２５８５、２５８６、２５８７、２５８８、２５８９、２５９０、２５９１、２５９２、２５９３、２５９４、２５９５、２５９６、２５９７、２５９８、２５９９、２６００、２６０１、２６０２、２６０３、２６０４、２６０５、２６０６、２６０７、２６０８、２６０９、２６１０、２６１１、２６１２、２６１３、２６１４、２６１５、２６１６、２６１７、２６１８、２６１９、２６２０、２６２１、２６２２、２６２３、２６２４、２６２５、２６２６、２６２７、２６２８、２６２９、２６３０、２６３１、２６３２、２６３３、２６３４、２６３５、２６３６、２６３７、２６３８、２６３９、２６４０、２６４１、２６４２、２６４３、２６４４、２６４５、２６４６、２６４７、２６４８、２６４９、２６５０、２６５１、２６５２、２６５３、２６５４、２６５５、２６５６、２６５７、２６５８、２６５９、２６６０、２６６１、２６６２、２６６３、２６６４、２６６５、２６６６、２６６７、２６６８、２６６９、２６７０、２６７１、２６７２、２６７３、２６７４、２６７５、２６７６、２６７７、２６７８、２６７９、２６８０、２６８１、２６８２、２６８３、２６８４、２６８５、２６８６、２６８７、２６８８、２６８９、２６９０、２６９１、２６９２、２６９３、２６９４、２６９５、２６９６、２６９７、２６９８、２６９９、２７００、２７０１、２７０２、２７０３、２７０４、２７０５、２７０６、２７０７、２７０８、２７０９、２７１０、２７１１、２７１２、２７１３、２７１４、２７１５、２７１６、２７１７、２７１８、２７１９、２７２０、２７２１、２７２２、２７２３、２７２４、２７２５、２７２６、２７２７、２７２８、２７２９、２７３０、２７３１、２７３２、２７３３、２７３４、２７３５、２７３６、２７３７、２７３８、２７３９、２７４０、２７４１、２７４２、２７４３、２７４４、２７４５、２７４６、２７４７、２７４８、２７４９、２７５０、２７５１、２７５２、２７５３、２７５４、２７５５、２７５６、２７５７、２７５８、２７５９、２７６０、２７６１、２７６２、２７６３、２７６４、２７６５、２７６６、２７６７、２７６８、２７６９、２７７０、２７７１、２７７２、２７７３、２７７４、２７７５、２７７６、２７７７、２７７８、２７７９、２７８０、２７８１、２７８２、２７８３、２７８４、２７８５、２７８６、２７８７、２７８８、２７８９、２７９０、２７９１、２７９２、２７９３、２７９４、２７９５、２７９６、２７９７、２７９８、２７９９、２８００、２８０１、２８０２、２８０３、２８０４、２８０５、２８０６、２８０７、２８０８、２８０９、２８１０、２８１１、２８１２、２８１３、２８１４、２８１５、２８１６、２８１７、２８１８、２８１９、２８２０、２８２１、２８２２、２８２３、２８２４、２８２５、２８２６、２８２７、２８２８、２８２９、２８３０、２８３１、２８３２、２８３３、２８３４、２８３５、２８３６、２８３７、２８３８、２８３９、２８４０、２８４１、２８４２、２８４３、２８４４、２８４５、２８４６、２８４７、２８４８、２８４９、２８５０、２８５１、２８５２、２８５３、２８５４、２８５５、２８５６、２８５７、２８５８、２８５９、２８６０、２８６１、２８６２、２８６３、２８６４、２８６５、２８６６、２８６７、２８６８、２８６９、２８７０、２８７１、２８７２、２８７３、２８７４、２８７５、２８７６、２８７７、２８７８、２８７９、２８８０、２８８１、２８８２、２８８３、２８８４、２８８５、２８８６、２８８７、２８８８、２８８９、２８９０、２８９１、２８９２、２８９３、２８９４、２８９５、２８９６、２８９７、２８９８、２８９９、２９００、２９０１、２９０２、２９０３、２９０４、２９０５、２９０６、２９０７、２９０８、２９０９、２９１０、２９１１、２９１２、２９１３、２９１４、２９１５、２９１６、２９１７、２９１８、２９１９、２９２０、２９２１、２９２２、２９２３、２９２４、２９２５、２９２６、２９２７、２９２８、２９２９、２９３０、２９３１、２９３２、２９３３、２９３４、２９３５、２９３６、２９３７、２９３８、２９３９、２９４０、２９４１、２９４２、２９４３、２９４４、２９４５、２９４６、２９４７、２９４８、２９４９、２９５０、２９５１、２９５２、２９５３、２９５４、２９５５、２９５６、２９５７、２９５８、２９５９、２９６０、２９６１、２９６２、２９６３、２９６４、２９６５、２９６６、２９６７、２９６８、２９６９、２９７０、２９７１、２９７２、２９７３、２９７４、２９７５、２９７６、２９７７、２９７８、２９７９、２９８０、２９８１、２９８２、２９８３、２９８４、２９８５、２９８６、２９８７、２９８８、２９８９、２９９０、２９９１、２９９２、２９９３、２９９４、２９９５、２９９６、２９９７、２９９８、２９９９、３０００、３００１、３００２、３００３、３００４、３００５、３００６、３００７、３００８、３００９、３０１０、３０１１、３０１２、３０１３、３０１４、３０１５、３０１６、３０１７、３０１８、３０１９、３０２０、３０２１、３０２２、３０２３、３０２４、３０２５、３０２６、３０２７、３０２８、３０２９、３０３０、３０３１、３０３２、３０３３、３０３４、３０３５、３０３６、３０３７、３０３８、３０３９、３０４０、３０４１、３０４２、３０４３、３０４４、３０４５、３０４６、３０４７、３０４８、３０４９、３０５０、３０５１、３０５２、３０５３、３０５４、３０５５、３０５６、３０５７、３０５８、３０５９、３０６０、３０６１、３０６２、３０６３、３０６４、３０６５、３０６６、３０６７、３０６８、３０６９、３０７０、３０７１、３０７２、３０７３、３０７４、３０７５、３０７６、３０７７、３０７８、３０７９、３０８０、３０８１、３０８２、３０８３、３０８４、３０８５、３０８６、３０８７、３０８８、３０８９、３０９０、３０９１、３０９２、３０９３、３０９４、３０９５、３０９６、３０９７、３０９８、３０９９、３１００、３１０１、３１０２、３１０３、３１０４、３１０５、３１０６、３１０７、３１０８、３１０９、３１１０、３１１１、３１１２、３１１３、３１１４、３１１５、３１１６、３１１７、３１１８、３１１９、３１２０、３１２１、３１２２、３１２３、３１２４、３１２５、３１２６、３１２７、３１２８、３１２９、３１３０、３１３１、３１３２、３１３３、３１３４、３１３５、３１３６、３１３７、３１３８、３１３９、３１４０、３１４１、３１４２、３１４３、３１４４、３１４５、３１４６、３１４７、３１４８、３１４９、３１５０、３１５１、３１５２、３１５３、３１５４、３１５５、３１５６、３１５７、３１５８、３１５９、３１６０、３１６１、３１６２、３１６３、３１６４、３１６５、３１６６、３１６７、３１６８、３１６９、３１７０、３１７１、３１７２、３１７３、３１７４、３１７５、３１７６、３１７７、３１７８、３１７９、３１８０、３１８１、３１８２、３１８３、３１８４、３１８５、３１８６、３１８７、３１８８、３１８９、３１９０、３１９１、３１９２、３１９３、３１９４、３１９５、３１９６、３１９７、３１９８、３１９９、３２００、３２０１、３２０２、３２０３、３２０４、３２０５、３２０６、３２０７、３２０８、３２０９、３２１０、３２１１、３２１２、３２１３、３２１４、３２１５、３２１６、３２１７、３２１８、３２１９、３２２０、３２２１、３２２２、３２２３、３２２４、３２２５、３２２６、３２２７、３２２８、３２２９、３２３０、３２３１、３２３２、３２３３、３２３４、３２３５、３２３６、３２３７、３２３８、３２３９、３２４０、３２４１、３２４２、３２４３、３２４４、３２４５、３２４６、３２４７、３２４８、３２４９、および３２５０ヌクレオチドの長さを有してもよい。ウイルスゲノムのための任意のフィラー領域の長さは、５０〜１００、１００〜１５０、１５０〜２００、２００〜２５０、２５０〜３００、３００〜３５０、３５０〜４００、４００〜４５０、４５０〜５００、５００〜５５０、５５０〜６００、６００〜６５０、６５０〜７００、７００〜７５０、７５０〜８００、８００〜８５０、８５０〜９００、９００〜９５０、９５０〜１０００、１０００〜１０５０、１０５０〜１１００、１１００〜１１５０、１１５０〜１２００、１２００〜１２５０、１２５０〜１３００、１３００〜１３５０、１３５０〜１４０
０、１４００〜１４５０、１４５０〜１５００、１５００〜１５５０、１５５０〜１６００、１６００〜１６５０、１６５０〜１７００、１７００〜１７５０、１７５０〜１８００、１８００〜１８５０、１８５０〜１９００、１９００〜１９５０、１９５０〜２０００、２０００〜２０５０、２０５０〜２１００、２１００〜２１５０、２１５０〜２２００、２２００〜２２５０、２２５０〜２３００、２３００〜２３５０、２３５０〜２４００、２４００〜２４５０、２４５０〜２５００、２５００〜２５５０、２５５０〜２６００、２６００〜２６５０、２６５０〜２７００、２７００〜２７５０、２７５０〜２８００、２８００〜２８５０、２８５０〜２９００、２９００〜２９５０、２９５０〜３０００、３０００〜３０５０、３０５０〜３１００、３１００〜３１５０、３１５０〜３２００、および３２００〜３２５０ヌクレオチドであってもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約４５０ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約５７０ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１３１３ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１３８４ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１７８５ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１７９０ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１８５６ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１８６８ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約１８７０ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約２０１２ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約２０１４ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約２０３４ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約２１０６ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約２２６４ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約２２６６ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、約２３３５ヌクレオチド長であるフィラー領域を含む。
【０３４６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、少なくとも１つのフィラー配列領域を含む。フィラー配列領域の非限定的な例は、表１１に記載される。
【０３４７】
【表１１】
2022500066.tif 000045
【０３４８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、ヒトアルブミン配列を含むフィラー配列領域を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ４５０を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ５７０を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ１３１３を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ１３８４を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ１７８５を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ１７９０を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ１８５６を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ１８７０を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ２０１４を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ２０３４を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ２１０６を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ２２６４を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ２２６６を含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ウイルスゲノムは、フィラー配列領域Ａｌｂ２３３５を含む。
【０３４９】
ウイルスゲノム：接合部配列
一部の実施形態において、接合部配列は、本明細書に記載されるウイルスゲノム成分、例えば、限定はされないが、表５〜１１に列挙されるもののいずれかと組み合わせて使用することができる。特定の実施形態において、接合部配列は、ウイルスゲノム内のウイルスゲノム成分（例えば、プロモータ、エンハンサー、イントロン／エクソン、ｍｉＲ結合部位、タグ、ポリＡ）に対して５’に位置してもよい。特定の実施形態において、接合部配列は、ウイルスゲノム内のウイルスゲノム成分（例えば、プロモータ、エンハンサー、イントロン／エクソン、ｍｉＲ結合部位、タグ、ポリＡ）に対して３’に位置してもよい。特定の実施形態において、ウイルスゲノムは、１つ超の接合部配列を含んでもよい。非限定的な例として、ウイルスゲノムは、ウイルスゲノム成分の５’末端およびウイルスゲノム成分の３’末端に、接合部配列を含んでもよい。接合部配列は、同じ配列、２つの異なる配列、またはウイルスゲノム成分のいずれの側にも分割された配列であってもよい。特定の実施形態において、接合部配列は、配列番号１８１３を含む。特定の実施形態において、接合部配列は、配列番号１８１４を含む。
【０３５０】
ウイルスゲノム：ＩＴＲからＩＴＲまでのモジュール性
一部の実施形態において、ウイルスゲノムのＩＴＲからＩＴＲまでの配列は、表１２〜１７に与えられる配列のいずれを含んでもよい。
【０３５１】
【表１２】
2022500066.tif 000046
【０３５２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７７８を含み（ｃＦＸＮ１）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３５３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７７９を含み（ｃＦＸＮ２）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３５４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８０を含み（ｃＦＸＮ３）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ４プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３５５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８１を含み（ｃＦＸＮ４）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ６プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３５６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８２を含み（ｃＦＸＮ５）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ６プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３５７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８３を含み（ｃＦＸＮ６）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ８プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３５８】
【表１３】
2022500066.tif 000047
【０３５９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８４を含み（ｃＦＸＮ７）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ８プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３６０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８５を含み（ｃＦＸＮ８）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ｍＣＢＡプロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３６１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８６を含み（ｃＦＸＮ９）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ｍＣＢＡ−Ｄ１プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３６２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８７を含み（ｃＦＸＮ１０）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ｍＣＢＡ−Ｄ２プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３６３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８８を含み（ｃＦＸＮ１１）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶエンハンサーおよびプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３６４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７８９を含み（ｃＦＸＮ１２）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶエンハンサーおよびプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３６５】
【表１４】
2022500066.tif 000048
【０３６６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９０を含み（ｃＦＸＮ１３）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ−Ｄ１プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３６７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９１を含み（ｃＦＸＮ１４）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ−Ｄ３プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３６８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９２を含み（ｃＦＸＮ１５）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ−Ｄ７プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３６９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９３を含み（ｃＦＸＮ１６）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ−Ｄ７プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３７０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９４を含み（ｃＦＸＮ１７）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、フラタキシンプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３７１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９５を含み（ｃＦＸＮ１８）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、フラタキシンプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、カニクイザルフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３７２】
【表１５】
2022500066.tif 000049
【０３７３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９６を含み（ｈＦＸＮ１）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、ＨＡタグ配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ならびにヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含む。
【０３７４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９７を含み（ｈＦＸＮ２）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ８プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３７５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９８を含み（ｈＦＸＮ３）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ８プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３７６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１７９９を含み（ｈＦＸＮ４）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶエンハンサーおよびプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３７７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８００を含み（ｈＦＸＮ５）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶエンハンサーおよびプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３７８】
【表１６】
2022500066.tif 000050
【０３７９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０１を含み（ｈＦＸＮ６）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ−Ｄ７プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０２を含み（ｈＦＸＮ７）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ−Ｄ７プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０３を含み（ｈＦＸＮ８）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、フラタキシンプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０４を含み（ｈＦＸＮ９）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、フラタキシンプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０５を含み（ｈＦＸＮ１０）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶプロモータ領域およびＣＢＡプロモータ領域を含むＣＡＧプロモータ領域、イントロン、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８４】
【表１７】
2022500066.tif 000051
【０３８５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０６を含み（ｈＦＸＮ１１）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ−Ｄ１プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０７を含み（ｈＦＸＮ１２）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ−Ｄ３プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０８を含み（ｈＦＸＮ１３）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ４プロモータ領域、接合部配列、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８０９を含み（ｈＦＸＮ１４）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＢＡ−Ｄ６プロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。
【０３８９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子ゲノムは、配列番号１８１０を含み（ｈＦＸＮ１５）、これは、５’末端逆位配列（ＩＴＲ）配列領域および３’ＩＴＲ配列領域、ＣＭＶ領域およびＣＢＡ領域を含むプロモータ領域、ｉｅ１エクソン１領域、ｉｅ１イントロン１領域、ヒトベータ−グロビンイントロン領域、ヒトベータ−グロビンエクソン領域を含むヒトベータグロビンイントロン／エクソン領域、ヒトフラタキシンペイロード配列、３反復の単一のｍｉＲ１２２結合部位配列を含むｍｉＲ結合部位シリーズ、ヒト成長ホルモンポリアデニル化配列、ならびにアルブミンフィラー配列を含む。特定の実施形態は、表１から選択される血清型を有するカプシド中にパッケージングされるウイルスゲノムを提供する。例えば、カプシド血清型は、ＶＯＹ１０１、ＶＯＹ１０２、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶＰＨＰ．Ｎ、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ９．４７、ＡＡＶ９（ｈｕ１４）、ＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒ、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶＤＪ、およびＡＡＶＤＪ８、またはそれらの任意のバリアントからなる群から選択することができる。一部の実施形態において、カプシド血清型は、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ９、ＡＡＶ６、ＡＡＶｒｈ１０および／またはＡＡＶＤＪである。
【０３９０】
一部の実施形態において、表４、１２、１３、１４、１５、１６または１７のいずれかに提供されるウイルスゲノムは、ＡＡＶカプシド中にパッケージングされて、ＡＡＶ粒子を生成する。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＶＯＹ２０１カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｂカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｎカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１７２４を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１３６を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号３を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号４を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号２を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号９を含むカプシドとを含む。
【０３９１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＶＯＹ２０１カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｂカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｎカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１７２４を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１３６を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号３を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号４を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号２を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号９を含むカプシドとを含む。
【０３９２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＶＯＹ２０１カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｂカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｎカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１７２４を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１３６を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号３を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号４を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号２を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号９を含むカプシドとを含む。
【０３９３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＶＯＹ２０１カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９カプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｂカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｎカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１７２４を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１３６を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号３を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号４を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号２を含むカプシドとを含む。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号９を含むカプシドとを含む。
【０３９４】
一部の実施形態において、表４、１２、１３、１４、１５、１６または１７のいずれかに与えられるウイルスゲノムとカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、投与に好適な溶液、例えば、１つ以上の塩および１つ以上の界面活性剤を含む製剤で製剤化される。一部の実施形態において、製剤は、ｐＨが約７〜８で、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウムおよびプルロニック（登録商標）Ｆ−６８のうち１つ以上を含む。一部の実施形態において、製剤は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む（本開示における製剤１）。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＶＯＹ２０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｂカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｎカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリ���酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１７２４を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１３６を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号３を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号４を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号２を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶���で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１７９７を含むウイルスゲノムと配列番号９を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。
【０３９５】
一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＶＯＹ２０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｂカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｎカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１７２４を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７���Ｍ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１３６を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号３を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号４を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号２を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０１を含むウイルスゲノムと配列番号９を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。
【０３９６】
一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＶＯＹ２０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｂカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｎカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１７２４を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７���Ｍ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１３６を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号３を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号４を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号２を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０８を含むウイルスゲノムと配列番号９を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。
【０３９７】
一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＶＯＹ１０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＶＯＹ２０１カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９カプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＡＡＶ９  Ｋ４４９Ｒカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｂカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムとＡＡＶＰＨＰ．Ｎカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１７２２を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１７２４を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７���Ｍ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１７２３を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１３６を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号１３５を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号３を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号４を含む核酸配列によってコードされるカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号２を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。一部の実施形態において、配列番号１８０９を含むウイルスゲノムと配列番号９を含むカプシドとを含むＡＡＶ粒子は、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および０．００１％プルロニックＦ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化される。
【０３９８】
一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、一本鎖である。一部の実施形態において、ウイルスゲノムは、自己相補的である。本開示のＡＡＶ粒子の特定の実施形態は、２つの末端逆位配列（ＩＴＲ）領域を含む。一部の実施形態において、ＩＴＲは、ＡＡＶ２  ＩＴＲである。一部の実施形態において、一方のＩＴＲは、配列番号１８１１を含み、他方のＩＴＲは、配列番号１８１２を含む。特定の実施形態は、ポリヌクレオチド配列に対して５’に位置する第１のＩＴＲ領域とポリヌクレオチド配列に対して３’に位置する第２の末端逆位配列領域とを含むウイルスゲノムを提供する。
【０３９９】
ＩＩ．ウイルス産生
一般的なウイルス産生プロセス
ＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ粒子を作製するための細胞は、一部の実施形態において、哺乳類細胞（ＨＥＫ２９３細胞など）および／または昆虫細胞（Ｓｆ９細胞など）を含んでもよい。
【０４００】
様々な実施形態において、ＡＡＶ産生は、ペイロード、例えば、ペイロード分子をコードするヌクレオチドを含む組換えウイルスコンストラクトを送達するために標的細胞に接触することができる、ＡＡＶ粒子およびベクターを作製するためのプロセスおよび方法を含む。特定の実施形態において、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、例えば組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターである。特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子、例えば組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）粒子である。
【０４０１】
様々な実施形態において、（ａ）ウイルス産生細胞を、少なくとも１つのＡＡＶカプシドタンパク質をコードする１つ以上のウイルス発現コンストラクト、ならびにトランス遺伝子、タンパク質をコードするポリヌクレオチドおよび調節性核酸から選択され得るペイロード分子をコードする１つ以上のペイロードコンストラクトと接触させる工程、（ｂ）少なくとも１つのＡＡＶ粒子またはベクターが作製されるような条件下でウイルス産生細胞を培養する工程、ならびに（ｃ）作製ストリームからＡＡＶ粒子またはベクターを単離する工程によって、ＡＡＶ粒子またはベクターを作製する方法が本明細書において提供される。
【０４０２】
これらの方法において、ウイルス発現コンストラクトは、少なくとも１つの構造タンパク質および／または少なくとも１つの非構造タンパク質をコードし得る。構造タンパク質は、天然もしくは野生型カプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、および／もしくはＶＰ３またはそれらのキメラタンパク質のいずれかを含んでもよい。非構造タンパク質は、天然もしくは野生型Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ６８、Ｒｅｐ５２、および／もしくはＲｅｐ４０タンパク質またはそれらのキメラタンパク質のいずれかを含んでもよい。
【０４０３】
特定の実施形態において、接触は、一過性トランスフェクション、ウイルス形質導入、および／またはエレクトロポレーションを介して生じる。
特定の実施形態において、ウイルス産生細胞は、哺乳類細胞および昆虫細胞から選択される。特定の実施形態において、昆虫細胞は、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）昆虫細胞を含む。特定の実施形態において、昆虫細胞は、Ｓｆ９昆虫細胞を含む。特定の実施形態において、昆虫細胞は、Ｓｆ２１昆虫細胞を含む。
【０４０４】
本開示のペイロードコンストラクトベクターは、様々な実施形態において、少なくとも１つの末端逆位配列（ＩＴＲ）を含んでもよく、哺乳類ＤＮＡを含んでもよい。
本明細書に記載される方法に従って作製されたＡＡＶ粒子およびウイルスベクターも提供される。
【０４０５】
様々な実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、１つ以上の許容可能な賦形剤を有する医薬組成物として製剤化されてもよい。
特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子またはウイルスベクターは、本明細書に記載される方法によって作製されてもよい。
【０４０６】
特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、ウイルス産生細胞（例えば、昆虫細胞または哺乳類細胞）を、少なくとも１つのカプシドタンパク質および少なくとも１つのペイロードコンストラクトベクターをコードする少なくとも１つのウイルス発現コンストラクトと接触させることによって作製され得る。ウイルス産生細胞は、一過性トランスフェクション、ウイルス形質導入、および／またはエレクトロポレーションによって接触させてもよい。ペイロードコンストラクトベクターは、ペイロード分子、例えば、限定はされないが、トランス遺伝子、タンパク質をコードするポリヌクレオチド、および調節性核酸をコードするペイロードコンストラクトを含んでもよい。ウイルス産生細胞は、少なくとも１つのＡＡＶ粒子またはベクターが作製、単離（例えば、温度誘導溶解、機械的溶解、および／もしくは化学的溶解を使用）、ならびに／または精製（例えば、濾過、クロマトグラフィー、および／もしくは免疫親和性精製を使用）されるような条件下で培養され得る。非限定的な例として、ペイロードコンストラクトベクターは、哺乳類ＤＮＡを含んでもよい。
【０４０７】
特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、本明細書に記載される方法を使用して、昆虫細胞（例えば、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｆ９）細胞）において作製される。非限定的な例として、昆虫細胞を、バキュロウイルス形質導入を含み得るウイルス形質導入を使用して接触させる。
【０４０８】
特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、本明細書に記載される方法を使用して、哺乳類細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）において作製される。非限定的な例として、哺乳類細胞を、マルチプラスミド一過性トランスフェクション（三重プラスミド一過性トランスフェクションなど）を含み得るウイルス形質導入を使用して接触させる。
【０４０９】
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＡＡＶ粒子作製方法は、ウイルス産生細胞において、１０１個を超える、１０２個を超える、１０３個を超える、１０４個を超える、または１０５個を超えるＡＡＶ粒子を作製する。
【０４１０】
特定の実施形態において、本開示のプロセスは、少なくとも１つのウイルス発現コンストラクトおよび少なくとも１つのペイロードコンストラクトを含むウイルス産生システムを使用した、ウイルス産生細胞におけるウイルス粒子の作製を含む。少なくとも１つのウイルス発現コンストラクトおよび少なくとも１つのペイロードコンストラクトは、ウイルス産生細胞にコトランスフェクト（例えば、二重トランスフェクション、三重トランスフェクション）させてもよい。トランスフェクションは、当業者によってルーチン的に行われる公知の標準的分子生物学的技法を用いて完了される。ウイルス産生細胞は、ペイロードコンストラクトを複製するＲｅｐタンパク質、および複製されたペイロードコンストラクトを封入するカプシドを形成するようにアセンブルするＣａｐタンパク質を含む、ＡＡＶ粒子を作製するために必要なタンパク質および他のバイオマテリアルの発現に必要な細胞機構を提供する。得られたＡＡＶ粒子は、ウイルス産生細胞から抽出され、投与のための医薬調製物へ処理される。
【０４１１】
様々な実施形態において、本明細書に開示されるＡＡＶ粒子は、投与されると、理論によって束縛されるものではないが、標的細胞に接触して、細胞、例えばエンドソーム内に入り得る。ＡＡＶ粒子、例えば、エンドソームから放出されるＡＡＶ粒子は、次いで、標的細胞の核に接触して、ペイロードコンストラクトを送達し得る。ペイロードコンストラクト、例えば組換えウイルスコンストラクトは、ペイロードコンストラクトによってコードされるペイロード分子が発現され得る標的細胞の核に送達され得る。
【０４１２】
特定の実施形態において、ウイルス粒子の作製のためのプロセスは、１つ以上のバキュロウイルス（例えば、バキュロウイルス発現ベクター（ＢＥＶ）またはウイルス発現コンストラクトおよびペイロードコンストラクトベクターでトランスフェクトされたバキュロウイルス感染昆虫細胞（ＢＩＩＣ））を含む、ウイルス産生細胞のシード培養物を利用する。特定の実施形態において、シード培養物は、回収され、アリコートに分割され、凍結される。更に、シード培養物は、後の時点で、産生細胞のナイーブ集団の感染を開始するために使用されてもよい。
【０４１３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子の大規模な作製は、バイオリアクターを利用する。理論によって束縛されるものではないが、バイオリアクターの使用は、質量、温度、混合条件（インペラー回転数または波動オシレーション）、ＣＯ２濃度、Ｏ２濃度、ガススパージ速度および体積、ガスオーバーレイ速度および体積、ｐＨ、生存細胞密度（ＶＣＤ）、細胞バイアビリティ、細胞直径、および／または光学濃度（ＯＤ）などの、ウイルス産生細胞の増殖および活性を支援する変数の正確な測定および／または制御を可能にし得る。特定の実施形態において、バイオリアクターは、培養物全体が実験的に決定された時点で回収され、ＡＡＶ粒子が精製される、バッチ産生のために使用される。一部の実施形態において、バイオリアクターは、ＡＡＶ粒子の精製のために実験的に決定された時点で培養物の一部が回収され、バイオリアクター中の残りの培養物が追加の成長培地成分でリフレッシュされる、連続生産のために使用される。
【０４１４】
様々な実施形態において、ＡＡＶウイルス粒子は、細胞溶解、清澄化、滅菌、および精製を含むプロセスにおいて、ウイルス産生細胞から抽出されてもよい。細胞溶解は、ウイルス産生細胞の構造を破壊し、それによってＡＡＶ粒子を放出する、任意のプロセスを含む。特定の実施形態において、細胞溶解は、熱ショック、化学的または機械的溶解方法を含み得る。清澄化は、溶解細胞、培地成分、およびＡＡＶ粒子の混合物の総精製（ｇｒｏｓｓ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ）を含み得る。特定の実施形態において、清澄化は、限定はされないが、デプスエンド、タンジェンシャルフロー、および／または中空繊維濾過を含む、遠心分離および／または濾過を含む。
【０４１５】
様々な実施形態において、ウイルス産生の最終結果物は、以下の２つの成分：（１）ペイロードコンストラクト（例えば、組換えＡＡＶベクターゲノムコンストラクト）、および（２）ウイルスカプシドを含むＡＡＶ粒子の精製収集物である。
【０４１６】
特定の実施形態において、本開示のウイルス産生システムまたはプロセスは、ウイルス産生細胞（ＶＰＣ）およびプラスミドコンストラクトを使用して、バキュロウイルス感染昆虫細胞（ＢＩＩＣ）を作製するための工程を含む。細胞バンク（ＣＢ）からのウイルス産生細胞（ＶＰＣ）を融解し、拡大させて、標的作業体積およびＶＰＣ濃度を提供する。得られたＶＰＣプールを、Ｒｅｐ／Ｃａｐ  ＶＰＣプールとペイロードＶＰＣプールに分割する。１つ以上のＲｅｐ／Ｃａｐプラスミドコンストラクト（ウイルス発現コンストラクト）をＲｅｐ／Ｃａｐバクミドポリヌクレオチドへ処理し、Ｒｅｐ／ＣａｐＶＰＣプールにトランスフェクトする。１つ以上のペイロードプラスミドコンストラクト（ペイロードコンストラクト）をペイロードバクミドポリヌクレオチドへ処理し、ペイロードＶＰＣプールにトランスフェクトする。２つのＶＰＣプールをインキュベートして、Ｐ１Ｒｅｐ／Ｃａｐバキュロウイルス発現ベクター（ＢＥＶ）およびＰ１ペイロードＢＥＶを作製する。２つのＢＥＶプールは、クローナルプラーク（ＣＰ）精製のために選択された単一のプラークを用いて、プラークのコレクションに拡大される（単一プラーク拡大とも呼ばれる）。プロセスは、単一のＣＰ精製工程を含んでもよく、または一連のもしくは他のプロセシング工程によって分離された複数のＣＰ精製工程を含んでもよい。１つ以上のＣＰ精製工程により、ＣＰ  Ｒｅｐ／Ｃａｐ  ＢＥＶプールおよびＣＰペイロードＢＥＶプールが提供される。次いで、これら２つのＢＥＶプールを保管し、将来の作製工程のために使用してもよく、またはそれらをＶＰＣにトランスフェクトして、Ｒｅｐ／Ｃａｐ  ＢＩＩＣプールおよびペイロードＢＩＩＣプールを作製してもよい。
【０４１７】
特定の実施形態において、本開示のウイルス産生システムまたはプロセスは、ウイルス産生細胞（ＶＰＣ）およびバキュロウイルス感染昆虫細胞（ＢＩＩＣ）を使用してＡＡＶ粒子を作製するための工程を含む。細胞バンク（ＣＢ）からのウイルス産生細胞（ＶＰＣ）を融解し、拡大させて、標的作業体積およびＶＰＣ濃度を提供する。ウイルス産生細胞の作業体積を、産生バイオリアクターに播種し、ＢＩＩＣ感染のための標的ＶＰＣ濃度を有する２００〜２０００Ｌの作業体積に更に拡大してもよい。次に、産生バイオリアクター中のＶＰＣの作業体積を、標的ＶＰＣ：ＢＩＩＣ比および標的ＢＩＩＣ：ＢＩＩＣ比で、Ｒｅｐ／Ｃａｐ  ＢＩＩＣおよびペイロードＢＩＩＣに共感染させる。ＶＣＤ感染は、ＢＥＶを利用してもよい。共感染させたＶＰＣを、産生バイオリアクター内でインキュベートし、拡大させて、ＡＡＶ粒子およびＶＰＣのバルク回収物を作製する。
【０４１８】
ウイルス発現コンストラクト
様々な実施形態において、本開示のウイルス産生システムは、ウイルス産生細胞にトランスフェクト／形質導入され得る１つ以上のウイルス発現コンストラクトを含む。特定の実施形態において、本開示のウイルス発現コンストラクトまたはペイロードコンストラクトは、バキュロウイルスプラスミドまたは組換えバキュロウイルスゲノムとしても知られるバクミドであり得る。特定の実施形態において、ウイルス発現は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列、およびウイルス産生細胞において発現するための少なくとも１つの発現制御配列を含む。特定の実施形態において、ウイルス発現は、ウイルス産生細胞において発現するための少なくとも１つの発現制御配列に作動可能に連結されたタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、ウイルス発現コンストラクトは、１つ以上のプロモータの制御下にパルボウイルス遺伝子を含む。パルボウイルス遺伝子は、Ｒｅｐ５２、Ｒｅｐ４０、Ｒｅｐ６８、またはＲｅｐ７８タンパク質をコードするＲｅｐ遺伝子などの非構造ＡＡＶ複製タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含んでもよい。パルボウイルス遺伝子は、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３タンパク質をコードするＣａｐ遺伝子などの構造ＡＡＶタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含んでもよい。
【０４１９】
本開示のウイルス発現コンストラクトは、核酸を有する細胞の形質転換、トランスフェクション、または形質導入を容易にする任意の化合物もしくは製剤、または生物学的もしくは化学的物質を含んでもよい。例示的な生物学的ウイルス発現コンストラクトとしては、プラスミド、線状核酸分子、および組換えウイルス、例えばバキュロウイルスが挙げられる。例示的な化学的ベクターとしては、脂質複合体が挙げられる。ウイルス発現コンストラクトは、核酸配列を、本開示に従ってウイルス複製細胞に組み込むために使用される。（オライリー（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ）、デイビッド  Ｒ．（Ｄａｖｉｄ  Ｒ．）、ロイス  Ｋ．ミラー（Ｌｏｉｓ  Ｋ．Ｍｉｌｌｅｒ）およびベルネ  Ａ  ラコウ（Ｖｅｒｎｅ  Ａ．Ｌｕｃｋｏｗ）、Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｖｅｃｔｏｒｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、オックスフォード大学出版局（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、１９９４年）；マニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら編、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、ＣＳＨラボラトリー（ＣＳＨ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、ニューヨーク州ニューヨーク所在（１９８２年）；ならびにフィリポート（Ｐｈｉｌｉｐｏｒｔ）およびスクルバー（Ｓｃｌｕｂｅｒ）編、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  ｔｏｏｌｓ  ｉｎ  Ｂａｓｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、ＣＲＣプレス（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）、ミシガン州アナーバー（Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ）所在（１９９５年）、これらの各々の内容は、ウイルス発現コンストラクトおよびその使用に関係して、本明細書において全体として参照により援用される。
【０４２０】
特定の実施形態において、ウイルス発現コンストラクトは、非構造ＡＡＶ複製タンパク質、構造ＡＡＶカプシドタンパク質、またはその組合せをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むＡＡＶ発現コンストラクトである。
【０４２１】
特定の実施形態において、本開示のウイルス発現コンストラクトは、プラスミドベクターであり得る。特定の実施形態において、本開示のウイルス発現コンストラクトは、バキュロウイルスコンストラクトであり得る。
【０４２２】
本開示は、ＡＡＶ粒子またはウイルスベクターを作製するために用いられるウイルス発現コンストラクトの数によって限定されない。特定の実施形態において、本開示に従って、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または６つより多くのウイルス発現コンストラクトが、ウイルス産生細胞においてＡＡＶ粒子を作製するために用いられてもよい。本開示の特定の実施形態において、ウイルス発現コンストラクトは、昆虫細胞においてＡＡＶ粒子を作製するために使用されてもよい。特定の実施形態において、例えば、感染性もしくは特異性の増加などのウイルス粒子の属性を改善するために、または産生収率を向上させるために、カプシドおよび／またはｒｅｐ遺伝子の野生型ＡＡＶ配列に改変を行ってもよい。
【０４２３】
特定の実施形態において、ウイルス発現コンストラクトは、開始コドン領域を含むヌクレオチド配列、例えば、１つ以上の開始コドン領域を含むＡＡＶカプシドタンパク質をコードする配列を含んでもよい。特定の実施形態において、開始コドン領域は、発現制御配列内にあってもよい。開始コドンは、ＡＴＧまたは非ＡＴＧコドン（すなわち、ＡＡＶ  ＶＰ１カプシドタンパク質の開始コドンが非ＡＴＧである、最適以下の開始コドン）であってもよい。
【０４２４】
特定の実施形態において、ＡＡＶ産生に使用されるウイルス発現コンストラクトは、ＡＡＶ  ＶＰ１カプシドタンパク質の開始コドンが非ＡＴＧ、すなわち最適以下の開始コドンである、ＡＡＶカプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含んでもよく、産生システムにおけるウイルスカプシドタンパク質の改変比率の発現を可能にして、宿主細胞の改善された感染性を提供し得る。非限定的な例において、ウイルスコンストラクトベクターは、ＡＡＶ  ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３カプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸コンストラクトであって、ＡＡＶ  ＶＰ１カプシドタンパク質の翻訳の開始コドンが、米国特許第８，１６３，５４３号明細書（その内容は、ＡＡＶカプシドタンパク質およびその産生に関係して、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているように、ＣＴＧ、ＴＴＧまたはＧＴＧである、核酸コンストラクトを含んでもよい。
【０４２５】
特定の実施形態において、本開示のウイルス発現コンストラクトは、昆虫細胞内での発現のためのパルボウイルスｒｅｐタンパク質をコードするプラスミドベクターまたはバキュロウイルスコンストラクトであってもよい。特定の実施形態において、Ｒｅｐ７８およびＲｅｐ５２タンパク質には、例えば、高いベクター収率を促進し得るＲｅｐ５２と比較してＲｅｐ７８のより少ない発現を促進するために、単一のコード配列が使用され、ここで、Ｒｅｐ７８タンパク質の翻訳開始コドンは、米国特許第８，５１２，９８１号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているように、昆虫細胞内での発現時に部分的なエクソンスキップをもたらす、ＡＣＧ、ＴＴＧ、ＣＴＧおよびＧＴＧからなる群から選択される最適以下の開始コドンである。
【０４２６】
特定の実施形態において、ＶＰコード領域は、特異的ＡＡＶ血清型の１つ以上のＡＡＶカプシドタンパク質をコードする。ＶＰコード領域のＡＡＶ血清型は、同じであっても異なってもよい。特定の実施形態において、ＶＰコード領域は、コドン最適化されてもよい。特定の実施形態において、ＶＰコード領域またはヌクレオチド配列は、哺乳類細胞に対してコドン最適化されてもよい。特定の実施形態において、ＶＰコード領域またはヌクレオチド配列は、昆虫細胞に対してコドン最適化されてもよい。特定の実施形態において、ＶＰコード領域またはヌクレオチド配列は、スポドプテラ・フルギペルダ細胞に対してコドン最適化されてもよい。特定の実施形態において、ＶＰコード領域またはヌクレオチド配列は、Ｓｆ９またはＳｆ２１細胞株に対してコドン最適化されてもよい。
【０４２７】
特定の実施形態において、１つ以上のＶＰカプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、参照ヌクレオチド配列と１００％未満のヌクレオチド相同性を有するようにコドン最適化されてもよい。特定の実施形態において、コドン最適化ＶＰヌクレオチド配列と参照ＶＰヌクレオチド配列との間のヌクレオチド相同性は、１００％未満、９９％未満、９８％未満、９７％未満、９６％未満、９５％未満、９４％未満、９３％未満、９２％未満、９１％未満、９０％未満、８９％未満、８８％未満、８７％未満、８６％未満、８５％未満、８４％未満、８３％未満、８２％未満、８１％未満、８０％未満、７８％未満、７６％未満、７４％未満、７２％未満、７０％未満、６８％未満、６６％未満、６４％未満、６２％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、および４０％未満である。
【０４２８】
特定の実施形態において、本開示のウイルス発現コンストラクトまたはペイロードコンストラクトは、バキュロウイルスプラスミドまたは組換えバキュロウイルスゲノムとしても知られるバクミドであり得る。特定の実施形態において、本開示のウイルス発現コンストラクトまたはペイロードコンストラクト（例えば、バクミド）は、当業者によって行われる公知の標準的分子生物学的技法によって、バクミドへの相同組換え（トランスポゾンドナー／アクセプターシステム）によって組み込まれるポリヌクレオチドを含んでもよい。
【０４２９】
特定の実施形態において、バクミドに組み込まれたポリヌクレオチド（すなわち、ポリヌクレオチドインサート）は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含み得る。特定の実施形態において、バクミドに組み込まれたポリヌクレオチドは、ｐ１０またはｐｏｌｈなどのプロモータを含み、構造ＡＡＶカプシドタンパク質（例えば、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、またはそれらの組合せ）をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含み得る。特定の実施形態において、バクミドに組み込まれたポリヌクレオチドは、ｐ１０またはｐｏｌｈなどのプロモータを含み、非構造ＡＡＶカプシドタンパク質（例えば、Ｒｅｐ７８、Ｒｅｐ５２、またはそれらの組合せ）をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含み得る。
【０４３０】
本開示の方法は、特定の発現制御配列の使用によって限定されない。しかしながら、ＶＰ産物の特定の化学量論量が達成されるとき（ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３についてそれぞれ１：１：１０近く）、およびＲｅｐ５２またはＲｅｐ４０（ｐ１９Ｒｅｐとも呼ばれる）のレベルがＲｅｐ７８またはＲｅｐ６８（ｐ５Ｒｅｐとも呼ばれる）よりも著しく高いとき、産生細胞（昆虫細胞など）におけるＡＡＶの収率が改善され得る。特定の実施形態において、ｐ５／ｐ１９比は、０．６未満、０．４未満、または０．３未満であるが、常に少なくとも０．０３である。これらの比は、タンパク質レベルで測定され得るか、または特定のｍＲＮＡの相対レベルから含意され得る。
【０４３１】
特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、ウイルス産生細胞（哺乳類細胞または昆虫細胞など）において作製され、ここで、３つ全てのＶＰタンパク質は、次の通りの、またはその約の、またはその近傍である化学量論量で発現される：１：１：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；２：２：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；２：０：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；１〜２：０〜２：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；１〜２：１〜２：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；２〜３：０〜３：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；２〜３：２〜３：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；３：３：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；３〜５：０〜５：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）；または３〜５：３〜５：１０（ＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３）。
【０４３２】
特定の実施形態において、発現制御領域は、約または正確に１：０：１０、約または正確に１：１：１０、約または正確に２：１：１０、約または正確に２：１：１０、約または正確に２：２：１０、約または正確に３：０：１０、約または正確に３：１：１０、約または正確に３：２：１０、約または正確に３：３：１０、約または正確に４：０：１０、約または正確に４：１：１０、約または正確に４：２：１０、約または正確に４：３：１０、約または正確に４：４：１０、約または正確に５：５：１０、約または正確に１〜２：０〜２：１０、約または正確に１〜２：１〜２：１０、約または正確に１〜３：０〜３：１０、約または正確に１〜３：１〜３：１０、約または正確に１〜４：０〜４：１０、約または正確に１〜４：１〜４：１０、約または正確に１〜５：１〜５：１０、約または正確に２〜３：０〜３：１０、約または正確に２〜３：２〜３：１０、約または正確に２〜４：２〜４：１０、約または正確に２〜５：２〜５：１０、約または正確に３〜４：３〜４：１０、約または正確に３〜５：３〜５：１０、および約または正確に４〜５：４〜５：１０からなる群から選択されるＶＰ１：ＶＰ２：ＶＰ３比を生じるように操作される。
【０４３３】
本開示の特定の実施形態において、Ｒｅｐ５２またはＲｅｐ７８は、バキュロウイルス由来多面体プロモータ（ｐｏｌｈ）から転写される。Ｒｅｐ５２またはＲｅｐ７８は、弱いプロモータ、例えば、ｉｅ−１プロモータの欠失変異体であり、ｉｅ−１プロモータの転写活性の約２０％を有するΔｉｅ−１プロモータからも転写され得る。Δｉｅ−１プロモータに対して実質的に相同なプロモータを用いてもよい。プロモータに関して、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または９０％超の相同性は、実質的に相同なプロモータとみなされる。
【０４３４】
哺乳類細胞
本明細書に開示される本開示のウイルス産生は、ペイロードコンストラクト、例えばペイロード分子をコードするヌクレオチドを含む組換えＡＡＶ粒子またはウイルスコンストラクトを送達するために標的細胞に接触するＡＡＶ粒子またはウイルスベクターを作製するためのプロセスおよび方法を説明する。ウイルス産生細胞は、原核（例えば、細菌）細胞、ならびに昆虫細胞、酵母細胞および哺乳類細胞を含む真核細胞を含む、任意の生物学的生物から選択され得る。
【０４３５】
特定の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、哺乳類細胞を含むウイルス産生細胞において作製され得る。ウイルス産生細胞は、Ａ５４９、ＷＥＨ１、３Ｔ３、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ（２９３Ｔ）、Ｓａｏｓ、Ｃ２Ｃ１２、Ｌ細胞、ＨＴ１０８０、Ｈｕｈ７、ＨｅｐＧ２、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨｅＬａ細胞、ＫＢ細胞、ＢＨＫなどの哺乳類細胞、ならびに哺乳動物由来の初代線維芽細胞、肝細胞、および筋芽細胞を含み得る。ウイルス産生細胞は、任意の哺乳類種、例えば、限定はされないが、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、およびハムスター、または、任意の細胞型、例えば、限定はされないが、線維芽細胞、肝細胞、腫瘍細胞、細胞株形質転換細胞など、に由来する細胞を含み得る。
【０４３６】
組換えＡＡＶ粒子を作製するために一般的に使用されるＡＡＶウイルス産生細胞は、限定はされないが、米国特許第６，１５６，３０３号明細書、同第５，３８７，４８４号明細書、同第５，７４１，６８３号明細書、同第５，６９１，１７６号明細書、同第６，４２８，９８８号明細書、および同第５，６８８，６７６号明細書；米国特許出願公開第２００２／００８１７２１号明細書；ならびに国際公開第００／４７７５７号パンフレット、同第００／２４９１６号パンフレット、および同第９６／１７９４７号パンフレットに記載されている他の哺乳類細胞株を含み、これらの文献の各々の内容は、それらが本開示と矛盾しない限り、本明細書において全体として参照により援用される。特定の実施形態において、ＡＡＶウイルス産生細胞は、複製欠損ヘルパーウイルスから欠失された機能を提供するトランス相補（ｔｒａｎｓ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ）パッケージング細胞株、例えば、ＨＥＫ２９３細胞または他のＥａトランス相補細胞である。
【０４３７】
特定の実施形態において、パッケージング細胞株２９３−１０−３（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−２３６１）は、米国特許第６，２８１，０１０号明細書（その内容は、２９３−１０−３パッケージング細胞株およびその使用に関係して、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているように、ＡＡＶ粒子を作製するために使用され得る。
【０４３８】
特定の実施形態において、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモータの制御下で、アデノウイルスＥ１ａおよびアデノウイルスＥ１ｂをコードするＥ１欠失アデノウイルスベクターをトランス相補するための、本開示の細胞株、例えばＨｅＬＡ細胞株が、米国特許第６３６５３９４号明細書（その内容は、ＨｅＬａ細胞株およびその使用に関係して、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されるように、ＡＡＶ粒子作製のために使用され得る。
【０４３９】
特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、マルチプラスミド一過性トランスフェクション方法（例えば、三重プラスミド一過性トランスフェクション）を使用して、哺乳類細胞において作製される。特定の実施形態において、マルチプラスミド一過性トランスフェクション方法は、以下の３つの異なるコンストラクト：（ｉ）ペイロードコンストラクト、（ｉｉ）Ｒｅｐ／Ｃａｐコンストラクト（パルボウイルスＲｅｐおよびパルボウイルスＣａｐ）、ならびに（ｉｉｉ）ヘルパーコンストラクト、のトランスフェクションを含む。特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子作製の３つの成分の三重トランスフェクション方法は、形質導入効率、標的組織（向性）評価、および安定性を含むアッセイのための小ロットのウイルスを産生するために利用されてもよい。特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子作製の３つの成分の三重トランスフェクション方法は、臨床または商業用途のための大ロットの材料を作製するために利用されてもよい。
【０４４０】
製剤化されるＡＡＶ粒子は、三重トランスフェクションもしくはバキュロウイルス媒介性ウイルス産生、または当該技術分野において公知の任意の他の方法によって作製され得る。当該技術分野で公知の任意の適切な許容される細胞またはパッケージング細胞を、ベクターを作製するために利用してもよい。特定の実施形態において、複製欠損ヘルパーウイルスから欠失された機能を提供するトランス相補パッケージング細胞株、例えば、２９３細胞、または他のＥ１ａトランス相補細胞が使用される。
【０４４１】
遺伝子カセットは、パルボウイルス（例えば、ＡＡＶ）ｃａｐおよびｒｅｐ遺伝子の一部または全てを含んでもよい。特定の実施形態において、ｃａｐおよびｒｅｐ機能の一部または全ては、カプシドおよび／またはＲｅｐタンパク質をコードするパッケージングベクター（複数可）を細胞に導入することによって、トランスで提供される。特定の実施形態において、遺伝子カセットは、カプシドまたはＲｅｐタンパク質をコードしない。あるいは、安定に形質転換されてｃａｐおよび／またはｒｅｐ遺伝子を発現するパッケージング細胞株が使用される。
【０４４２】
特定の実施形態において、組換えＡＡＶウイルス粒子は、米国特許出願公開第２０１６／００３２２５４号明細書（その内容は、組換えＡＡＶウイルス粒子の作製およびプロセシングに関係して、全体として参照により援用される）に記載される手順に従って、培養上清から作製および精製される。作製はまた、２９３Ｔ細胞、三重トランスフェクション、または任意の好適な産生方法を使用する方法などの、当該技術分野で公知の方法を含んでもよい。
【０４４３】
特定の実施形態において、哺乳類ウイルス産生細胞（例えば、２９３Ｔ細胞）は、接着／接着性状態（例えば、リン酸カルシウムを用いて）であってもよく、または懸濁状態（例えば、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いて）であってもよい。哺乳類ウイルス産生細胞を、ＡＡＶの産生に必要なプラスミド（すなわち、ＡＡＶ  ｒｅｐ／ｃａｐコンストラクト、アデノウイルスヘルパーコンストラクト、および／またはＩＴＲ隣接ペイロードコンストラクト）でトランスフェクトする。特定の実施形態において、トランスフェクションプロセスは、任意選択の培地変更（例えば、接着形態の細胞について培地変更、懸濁形態の細胞について培地変更なし、所望される場合、懸濁形態の細胞について培地変更）を含み得る。特定の実施形態において、トランスフェクションプロセスは、ＤＭＥＭまたはＦ１７などのトランスフェクション培地を含んでもよい。特定の実施形態において、トランスフェクション培地は、血清を含んでもよく、または無血清であってもよい（例えば、リン酸カルシウムおよび血清を用いて接着状態にある細胞、ＰＥＩを用い、血清なしで懸濁状態にある細胞）。
【０４４４】
細胞は、その後、掻爬（接着性形態）および／またはペレット化（懸濁形態および掻爬された接着性形態）によって収集し、容器に移してもよい。産生された細胞を完全に収集するために、必要に応じて収集工程を繰り返してもよい。次に、細胞溶解を、連続的な凍結融解サイクル（−８０℃〜３７℃）、化学溶解（洗浄剤トリトンの添加など）、もしくは機械的溶解によって、または約０％のバイアビリティに達した後に細胞培養物を分解させることによって達成してもよい。細胞残屑は、遠心分離および／または深度濾過によって除去する。試料は、ＤＮＡ  ｑＰＣＲによるＤＮａｓｅ耐性ゲノム滴定によって、ＡＡＶ粒子について定量する。
【０４４５】
ＡＡＶ粒子力価は、ゲノムコピー数（１ミリリットル当たりのゲノム粒子）に応じて測定される。ゲノム粒子濃度は、以前に報告されたように、ベクターＤＮＡのＤＮＡ  ｑＰＣＲに基づく（クラーク（Ｃｌａｒｋ）ら（１９９９）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．，１０：１０３１−１０３９、フェルトワイク（Ｖｅｌｄｗｉｊｋ）ら（２００２）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，６：２７２−２７８、これらの各々の内容は、粒子濃度の測定に関係して、全体として参照により援用される）。
【０４４６】
昆虫細胞
本開示のウイルス産生は、ペイロードコンストラクト、例えばペイロード分子をコードするヌクレオチドを含む組換えウイルスコンストラクトを送達するために標的細胞に接触するＡＡＶ粒子またはウイルスベクターを作製するためのプロセスおよび方法を含む。特定の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子またはウイルスベクターは、昆虫細胞を含むウイルス産生細胞において作製されてもよい。
【０４４７】
培養中の昆虫細胞の増殖条件、および培養中の昆虫細胞における異種産物の産生は、当該技術分野において周知である。米国特許第６，２０４，０５９号明細書を参照されたい（その内容は、ウイルス産生における昆虫細胞の増殖および使用に関係して、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４４８】
パルボウイルスの複製を可能にし、培養中に維持され得る任意の昆虫細胞を、本開示に従って使用し得る。組換えＡＡＶ粒子の作製に一般的に使用されるＡＡＶウイルス産生細胞としては、限定されないが、Ｓｆ９またはＳｆ２１細胞株を含むスポドプテラ・フルギペルダ、ショウジョウバエ細胞株、またはヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ  ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）由来細胞株などの蚊細胞株が挙げられる。異種タンパク質の発現のための昆虫細胞の使用は、ベクター、例えば昆虫細胞適合性ベクターなどの核酸をそのような細胞に導入する方法、およびそのような細胞を培養物中で維持する方法と同様に、十分に報告されている。例えば、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、リチャード（Ｒｉｃｈａｒｄ）編、ヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー州所在（１９９５年）；オライリー（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ）ら、Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、オックスフォード大学出版局（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ）（１９９４年）；サムルスキ（Ｓａｍｕｌｓｋｉ）ら，Ｊ．Ｖｉｒ．第６３巻：３８２２−８（１９８９年）；カジガヤ（Ｋａｊｉｇａｙａ）ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  第８８巻：４６４６−５０（１９９１年）；ラフィング（Ｒｕｆｆｉｎｇ）ら，Ｊ．Ｖｉｒ．第６６巻：６９２２−３０（１９９２年）；キムバウアー（Ｋｉｍｂａｕｅｒ）ら、Ｖｉｒ．第２１９巻：３７−４４（１９９６年）；チャオ（Ｚｈａｏ）ら、Ｖｉｒ．第２７２巻：３８２−９３（２０００年）、およびサムルスキ（Ｓａｍｕｌｓｋｉ）ら、米国特許第６，２０４，０５９号明細書が参照され、これらの各々の内容は、ウイルス産生における昆虫細胞の使用に関係して、本明細書において全体として参照により援用される。
【０４４９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、国際公開第２０１５／１９１５０８号パンフレット（その内容は、本開示と矛盾しない限り、本明細書において全体として参照により援用される）に記載される方法を使用して作製される。
【０４５０】
特定の実施形態において、昆虫宿主細胞システムは、バキュロウイルスシステム（例えば、ラコウ（Ｌｕｃｋｏｗ）ら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  第６巻：４７（１９８８年）に記載されるような）と組み合わせて使用してもよい。特定の実施形態において、キメラペプチドを調製するための発現システムは、米国特許第６６６０５２１号明細書（その内容は、ウイルス粒子の作製に関係して、本明細書において全体として参照により援用される）に記載されているように、高レベルのタンパク質に使用され得るイラクサギンウワバ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ），Ｔｎ  ５Ｂ１−４昆虫細胞／バキュロウイルスシステムである。
【０４５１】
昆虫細胞の拡大、培養、トランスフェクション、感染、および保管は、当該技術分野で公知の任意の細胞培養培地、細胞トランスフェクション培地、または保管培地、例えば、Ｈｙｃｌｏｎｅ（商標）ＳＦＸ−Ｉｎｓｅｃｔ（商標）細胞培養培地、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＥＳＦ  ＡＦ（商標）昆虫細胞培養培地、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｆ−９００ＩＩ（商標）培地、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｆ−９００ＩＩ（商標）培地、またはＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｇｒａｃｅ昆虫培地、において行い得る。本開示の昆虫細胞混合物は、本開示に記載される任意の製剤添加剤または要素、例えば、（限定はされないが）塩、酸、塩基、緩衝液、界面活性剤（ポロキサマー１８８／プルロニックＦ−６８など）および他の公知の培養培地要素を含んでもよい。製剤添加剤は、徐々に、または「スパイク」（短時間で大量の組込み）として組み込んでもよい。
【０４５２】
バキュロウイルス産生システム
特定の実施形態において、本開示のプロセスは、ウイルス発現コンストラクトおよびペイロードコンストラクトベクターを使用するバキュロウイルスシステムにおける、ＡＡＶ粒子またはウイルスベクターの作製を含み得る。特定の実施形態において、バキュロウイルスシステムは、バキュロウイルス発現ベクター（ＢＥＶ）および／またはバキュロウイルス感染昆虫細胞（ＢＩＩＣ）を含む。特定の実施形態において、本開示のウイルス発現コンストラクトまたはペイロードコンストラクトは、バキュロウイルスプラスミドまたは組換えバキュロウイルスゲノムとしても知られるバクミドであり得る。特定の実施形態において、本開示のウイルス発現コンストラクトまたはペイロードコンストラクトは、当業者によって行われる公知の標準的分子生物学的技法によって、バクミドへの相同組換え（トランスポゾンドナー／アクセプターシステム）によって組み込まれるポリヌクレオチドであり得る。別個のウイルス複製細胞集団のトランスフェクションは、バキュロウイルス（ＢＥＶ）の２つ以上の群（例えば２つ、３つ）、ウイルス発現コンストラクト（発現ＢＥＶ）を含み得る１つ以上の群、およびペイロードコンストラクト（ペイロードＢＥＶ）を含み得る１つ以上の群を作製する。バキュロウイルスを、ＡＡＶ粒子またはウイルスベクターの作製のためにウイルス産生細胞に感染させるために使用してもよい。
【０４５３】
特定の実施形態において、プロセスは、ウイルス発現コンストラクトおよびペイロードコンストラクトの両方を含む単一バキュロウイルス（ＢＥＶ）群を作製するための単一のウイルス複製細胞集団のトランスフェクションを含む。これらのバキュロウイルスを、ＡＡＶ粒子またはウイルスベクターの作製のためにウイルス産生細胞に感染させるために使用してもよい。
【０４５４】
特定の実施形態において、ＢＥＶは、バクミドトランスフェクション剤、例えば、Ｐｒｏｍｅｇａ  ＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤ、ＷＦＩ水、またはＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ（登録商標）ＩＩ試薬を使用して産生される。特定の実施形態において、ＢＥＶは、昆虫細胞などのウイルス産生細胞において産生され、拡大される。
【０４５５】
特定の実施形態において、方法は、バキュロウイルス感染昆虫細胞（ＢＩＩＣ）を含む、１つ以上のＢＥＶを含むウイルス産生細胞のシード培養を利用する。シードＢＩＩＣは、ウイルス発現コンストラクトを含む発現ＢＥＶ、およびペイロードコンストラクトを含むペイロードＢＥＶでトランスフェクト／形質導入／感染されている。特定の実施形態において、シード培養物は、回収され、アリコートに分割され、凍結される。更にシード培養物は、後の時点で、産生細胞のナイーブ集団のトランスフェクション／形質導入／感染を開始するために使用してもよい。特定の実施形態において、シードＢＩＩＣのバンクは、−８０℃でまたはＬＮ２蒸気中で保管される。
【０４５６】
バキュロウイルスは、複製タンパク質、エンベロープタンパク質およびカプシドタンパク質などのバキュロウイルスの機能および複製に不可欠な幾つかの必須タンパク質から作られている。したがって、バキュロウイルスゲノムは、必須タンパク質をコードする幾つかの必須遺伝子ヌクレオチド配列を含む。非限定的な例として、ゲノムは、バキュロウイルスコンストラクトのための必須タンパク質をコードする必須遺伝子ヌクレオチド配列を含む、必須遺伝子領域を含み得る。必須タンパク質としては、ＧＰ６４バキュロウイルスエンベロープタンパク質、ＶＰ３９バキュロウイルスカプシドタンパク質、またはバキュロウイルスコンストラクトのための他の類似の必須タンパク質が挙げられ得る。
【０４５７】
昆虫細胞、例えば、限定はされないが、スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｆ９）細胞、においてＡＡＶ粒子を作製するためのバキュロウイルス発現ベクター（ＢＥＶ）は、高力価のウイルスベクター生成物を提供する。ウイルス発現コンストラクトおよびペイロードコンストラクトをコードする組換えバキュロウイルスは、ウイルスベクター複製細胞の増殖性感染を開始する。一次感染から放出される感染性バキュロウイルス粒子は、培養物中の追加の細胞に二次的に感染し、感染の初期多重度の関数である幾つかの感染サイクルで細胞培養集団全体に指数関数的に感染する。ウラベ，Ｍ．（Ｕｒａｂｅ，Ｍ．）ら、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．２００６年２月；８０（４）：１８７４−８５を参照されたい（その内容は、ＢＥＶおよびウイルス粒子の作製および使用に関係して、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４５８】
昆虫細胞システムにおけるバキュロウイルスによるＡＡＶ粒子の作製は、既知のバキュロウイルスの遺伝的および物理的不安定性に対処し得る。
特定の実施形態において、本開示の作製システムは、力価のない感染細胞の保存およびスケールアップシステムを利用することによって、複数継代にわたるバキュロウイルスの不安定性に対処する。ウイルス産生細胞の小規模シード培養物を、ＡＡＶ粒子の構造成分および／または非構造成分をコードするウイルス発現コンストラクトでトランスフェクトする。バキュロウイルス感染ウイルス産生細胞は、液体窒素中で凍結保存され得るアリコートに回収される；アリコートは、大規模ウイルス産生細胞培養物の感染のためのバイアビリティおよび感染性を保持する。ワシルコ  ＤＪ（Ｗａｓｉｌｋｏ  ＤＪ）ら  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒ  Ｐｕｒｉｆ．２００９年６月；６５（２）：１２２−３２参照（その内容は、ＢＥＶおよびウイルス粒子の作製および使用に関係して、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４５９】
遺伝的に安定なバキュロウイルスを使用して、無脊椎動物細胞においてＡＡＶ粒子を作製するための１つ以上の成分の供給源を作製してもよい。特定の実施形態において、欠損バキュロウイルス発現ベクターは、昆虫細胞内でエピソーム的に維持され得る。かかる実施形態において、対応するバクミドベクターは、複製制御エレメント、例えば、限定はされないが、プロモータ、エンハンサー、および／または細胞周期調節複製エレメントを用いて操作される。
【０４６０】
特定の実施形態において、バキュロウイルス感染を許容する安定なウイルス産生細胞は、ＡＡＶ複製およびベクター産生に必要な任意のエレメント、例えば、限定はされないが、ＡＡＶゲノム全体、ＲｅｐおよびＣａｐ遺伝子、Ｒｅｐ遺伝子、Ｃａｐ遺伝子、別個の転写カセットとしての各Ｒｅｐタンパク質、別個の転写カセットとしての各ＶＰタンパク質、ＡＡＰ（アセンブリ活性化タンパク質）、または天然もしくは非天然プロモータを有する少なくとも１つのバキュロウイルスヘルパー遺伝子の少なくとも１つの安定に組み込まれたコピーを用いて操作される。
【０４６１】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９細胞）において作製され得る。
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、三重トランスフェクションを使用して作製され得る。
【０４６２】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、哺乳類細胞において作製され得る。
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、哺乳類細胞において三重トランスフェクションによって作製され得る。
【０４６３】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ＨＥＫ２９３細胞において三重トランスフェクションによって作製され得る。
本明細書に記載されるフラタキシンをコードするＡＡＶウイルスゲノムは、ヒト疾患、獣医学的応用の分野、ならびに様々なインビボおよびインビトロ設定において有用であり得る。本開示のＡＡＶ粒子は、神経学的または神経筋疾患および／または障害を治療、予防、緩和、または改善するための医学分野に有用であり得る。一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、フリードライヒ運動失調症の予防および／または治療のために使用される。
【０４６４】
本明細書における本開示の様々な実施形態は、本明細書に記載されるＡＡＶ粒子および薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
本明細書における本開示の様々な実施形態は、それを必要とする対象を治療する方法であって、前記対象に、治療有効量の本明細書に記載される医薬組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【０４６５】
本方法の特定の実施形態は、対象が、静脈内、脳室内、実質内、髄腔内、軟膜下および筋肉内、またはこれらの組合せからなる群から選択される医薬組成物の投与経路によって治療されることを提供する。本方法の特定の実施形態は、対象が、フラタキシンの量または機能の不足に起因するフリードライヒ運動失調症および／または他の神経学的障害について治療されることを提供する。本方法の一態様において、フリードライヒ運動失調症もしくは他の神経学的障害の病理学的特徴が軽減される、および／またはフリードライヒ運動失調症もしくは他の神経学的障害の進行が停止、遅延、改善、または逆転される。
【０４６６】
本明細書における本開示の様々な実施形態は、それを必要とする対象の中枢神経系におけるフラタキシンのレベルを増加させる方法であって、前記対象に、注入を介して、有効量の本明細書に記載される医薬組成物を投与する工程を含む方法を説明する。
【０４６７】
ＡＡＶ粒子の設計、調製、製造および／または製剤化のための組成物、方法、プロセス、キットおよびデバイスも本明細書に記載される。一部の実施形態において、ペイロード、例えば、限定はされないが、ＦＸＮは、ペイロードコンストラクトによってコードされてもよく、またはプラスミドもしくはベクター、または組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）内に含有されてもよい。
【０４６８】
本開示は、フリードライヒ運動失調症の治療または改善のためのベクターおよびウイルス粒子、例えばＡＡＶ粒子の投与および／または送達方法も提供する。かかる方法は、遺伝子置換または遺伝子活性化を伴ってもよい。そのような結果は、本明細書で教示される方法および組成物を利用することによって達成される。
【０４６９】
ＩＩＩ．医薬組成物
本開示は、ヒト対象を含む哺乳類対象においてフラタキシンタンパク質の機能または発現の欠損に関連するＦＡおよび障害を治療するための方法であって、本明細書に記載されるＡＡＶポリヌクレオチドもしくはＡＡＶゲノム（すなわち、「ベクターゲノム」、「ウイルスゲノム」、もしくは「ＶＧ」）のいずれかを前記対象に投与する工程、または前記ＡＡＶポリヌクレオチドもしくはＡＡＶゲノムを含む粒子を前記対象に投与する工程、または医薬組成物を含む、記載された組成物のいずれかを前記対象に投与する工程を含む方法を更に提供する。
【０４７０】
本明細書で使用されるとき、用語「組成物」は、ＡＡＶポリヌクレオチドまたはＡＡＶゲノムまたはＡＡＶ粒子と、少なくとも１つの賦形剤とを含む。
本明細書で使用されるとき、用語「医薬組成物」は、ＡＡＶポリヌクレオチドまたはＡＡＶゲノムまたはＡＡＶ粒子と、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤とを含む。
【０４７１】
本明細書で提供される医薬組成物、例えば、送達されるＦＸＮコンストラクトをコードするペイロードを含むＡＡＶの説明は、主に、ヒトへの投与に好適な医薬組成物に向けられているが、当業者であれば、かかる組成物が、任意の他の動物、例えば非ヒト動物、例えば非ヒト哺乳類への投与に一般的に好適であることを理解するであろう。組成物を種々の動物への投与に好適にするための、ヒトへの投与に好適な医薬組成物の修飾については十分に理解されており、獣医薬理学の当業者は、あったとしても通常通りに過ぎない実験をもって、かかる修飾を設計および／または実施することができる。医薬組成物の投与が企図される対象としては、限定はされないが、ヒトおよび／または他の霊長類；ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、および／もしくはラットなど、ならびに／または商業的に関連性のある哺乳類を含めた哺乳類、家禽、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、および／もしくはシチメンチョウなど、商業的に関連性のある鳥類を含めた鳥類が挙げられる。
【０４７２】
一部の実施形態において、組成物は、ヒト、ヒト患者または対象に投与される。
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＡＡＶ粒子製剤は、少なくとも１つのペイロードをコードする核酸を含有してもよい。一部の実施形態において、製剤は、１、２、３、４または５つのペイロードをコードする核酸を含有してもよい。一部の実施形態において、製剤は、限定はされないが、ヒトタンパク質、獣医学的タンパク質、細菌タンパク質、生物学的タンパク質、抗体、免疫原性タンパク質、治療用ペプチドおよびタンパク質、分泌タンパク質、血漿膜タンパク質、細胞質タンパク質、細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質、ならびに／または非ヒト疾患に関連するタンパク質などのカテゴリーから選択されるタンパク質をコードするペイロードコンストラクトをコードする核酸を含んでもよい。一部の実施形態において、製剤は、タンパク質をコードする少なくとも３つのペイロードコンストラクトを含む。特定の実施形態は、少なくとも１つのペイロードが、ＦＸＮまたはそのバリアントであることを提供する。
【０４７３】
本開示に係る医薬組成物は、バルクで、単回単位用量として、および／または複数の単回単位用量として調製、包装、および／または販売されてもよい。本明細書で使用されるとき、「単位用量」は、所定量の有効成分を含む医薬組成物の個別的な量を指す。有効成分の量は、概して対象に投与されるであろう有効成分の投薬量に等しく、および／またはかかる投薬量の好都合な一部、例えばかかる投薬量の２分の１または３分の１である。
【０４７４】
ＩＶ．製剤
本明細書に記載されるＡＡＶ医薬組成物の製剤は、薬理学の技術分野において公知のまたは今後開発される任意の方法によって調製されてもよい。一般に、かかる調製方法は、有効成分を賦形剤および／または１つ以上の他の補助成分と合わせる工程、次いで、必要な場合および／または望ましい場合に、生成物を所望の単回または複数回用量単位に分割、付形および／または包装する工程を含む。
【０４７５】
本開示に係る医薬組成物中の有効成分、薬学的に許容可能な賦形剤、および／または任意の追加成分の相対量は、治療下の対象のアイデンティティ、サイズ、および／または状態に応じて、更には組成物が投与される経路に応じて変動するであろう。
【０４７６】
例えば、組成物は、０．１％〜９９％（ｗ／ｗ）の有効成分を含んでもよい。例として、組成物は、０．１％〜１００％、例えば０．５〜５０％、１〜３０％、５〜８０％、または少なくとも８０％（ｗ／ｗ）の有効成分を含んでもよい。
【０４７７】
本開示のＡＡＶ粒子は、（１）安定性を増加させるために、（２）細胞トランスフェクションもしくは形質導入を増加させるために、（３）ペイロードの持続放出もしくは遅延放出を可能にするために、（４）生体内分布を変更するために（例えば、ウイルス粒子を、特定の組織もしくは細胞タイプへと標的化するために）、（５）コードされたタンパク質の翻訳をインビボで増加させるために、（６）コードされたタンパク質の放出プロファイルをインビボで変更するために、および／または（７）ペイロードの調節可能な発現を可能にするために、１つ以上の賦形剤を使用して製剤化され得る。
【０４７８】
本開示の製剤は、限定なしで、生理食塩水、リピドイド、リポソーム、脂質ナノ粒子、ポリマー、リポプレックス、コアシェルナノ粒子、ペプチド、タンパク質、ウイルスベクターでトランスフェクトされた細胞（例えば、対象への移植用の）、ナノ粒子模倣体、およびそれらの組合せを含み得る。更に、本開示のウイルスベクターは、自己組織化核酸ナノ粒子を使用して製剤化されてもよい。
【０４７９】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、バリシティおよび／または浸透圧を最適化するために製剤化されてもよい。一部の実施形態において、製剤のバリシティおよび／または浸透圧は、中枢神経系または中枢神経系の領域もしくは成分における最適な薬物分布を確実にするために最適化されてもよい。
【０４８０】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ｐＨが約７．０の０．００１％プルロニック酸（Ｆ−６８）を有するＰＢＳで製剤化され得る。
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、エチレンオキシド／プロピレンオキシドコポリマー（プルロニックまたはポロキサマーとしても知られている）と組み合わせてＰＢＳで製剤化され得る。
【０４８１】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ｐＨが約７．０の０．００１％ｗ／ｖプルロニック酸（Ｆ−６８）（ポロキサマー１８８）を有するＰＢＳで製剤化され得る。
【０４８２】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ｐＨが約７．３の０．００１％ｗ／ｖプルロニック酸（Ｆ−６８）（ポロキサマー１８８）を有するＰＢＳで製剤化され得る。
【０４８３】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ｐＨが約７．４の０．００１％ｗ／ｖプルロニック酸（Ｆ−６８）（ポロキサマー１８８）を有するＰＢＳで製剤化され得る。
【０４８４】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウムおよびエチレンオキシド／プロピレンオキシドコポリマーを含む溶液で製剤化され得る。
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、塩化ナトリウム、リン酸二ナトリウム、塩化カリウム、リン酸一カリウム、およびポロキサマー１８８／プルロニック酸（Ｆ−６８）を含む溶液で製剤化されてもよい。
【０４８５】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ｐＨが約７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）、および０．００１％プルロニック酸Ｆ−６８（ｖ／ｖ）を含む溶液で製剤化されてもよい。本開示において、この製剤を製剤１と称す。
【０４８６】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ｐＨが約７．３の約１９２ｍＭ塩化ナトリウム、約１０ｍＭリン酸二ナトリウム、および約０．００１％ポロキサマー１８８を含む溶液で製剤化されてもよい。最終溶液中の塩化ナトリウムの濃度は、１５０ｍＭ〜２００ｍＭであってもよい。非限定的な例として、最終溶液中の塩化ナトリウムの濃度は、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭまたは２００ｍＭであってもよい。最終溶液中のリン酸二ナトリウムの濃度は、１ｍＭ〜５０ｍＭであってもよい。非限定的な例として、最終溶液中のリン酸二ナトリウムの濃度は、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭ、または５０ｍＭであってもよい。ポロキサマー１８８（プルロニック酸（Ｆ−６８））の濃度は、０．０００１％〜１％であってもよい。非限定的な例として、ポロキサマー１８８（プルロニック酸（Ｆ−６８））の濃度は、０．０００１％、０．０００５％、０．００１％、０．００５％、０．０１％、０．０５％、０．１％、０．５％、または１％であってもよい。最終溶液は、６．８〜７．７のｐＨを有してもよい。最終溶液のｐＨの非限定的な例としては、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、または７．７のｐＨが挙げられる。
【０４８７】
一実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ｐＨが約７．４の約１．０５％塩化ナトリウム、約０．２１２％リン酸二ナトリウム七水和物、約０．０２５％リン酸一ナトリウム一水和物、および０．００１％ポロキサマー１８８を含む溶液で製剤化され得る。非限定的な例として、この製剤化溶液中のＡＡＶ粒子の濃度は、約０．００１％であってもよい。最終溶液中の塩化ナトリウムの濃度は、０．１〜２．０％であってもよく、非限定的な例は、０．１％、０．２５％、０．５％、０．７５％、０．９５％、０．９６％、０．９７％、０．９８％、０．９９％、１．００％、１．０１％、１．０２％、１．０３％、１．０４％、１．０５％、１．０６％、１．０７％、１．０８％、１．０９％、１．１０％、１．２５％、１．５％、１．７５％、または２％である。最終溶液中のリン酸二ナトリウムの濃度は、０．１００〜０．３００％であってもよく、非限定的な例としては、０．１００％、０．１２５％、０．１５０％、０．１７５％、０．２００％、０．２１０％、０．２１１％、０．２１２％、０．２１３％、０．２１４％、０．２１５％、０．２２５％、０．２５０％、０．２７５％、０．３００％が挙げられる。最終溶液中のリン酸一ナトリウムの濃度は、０．０１０〜０．０５０％であってもよく、非限定的な例は、０．０１０％、０．０１５％、０．０２０％、０．０２１％、０．０２２％、０．０２３％、０．０２４％、０．０２５％、０．０２６％、０．０２７％、０．０２８％、０．０２９％、０．０３０％、０．０３５％、０．０４０％、０．０４５％、または０．０５０％である。ポロキサマー１８８（プルロニック酸（Ｆ−６８））の濃度は、０．０００１％〜１％であってもよい。非限定的な例として、ポロキサマー１８８（プルロニック酸（Ｆ−６８））の濃度は、０．０００１％、０．０００５％、０．００１％、０．００５％、０．０１％、０．０５％、０．１％、０．５％、または１％であってもよい。最終溶液は、６．８〜７．７のｐＨを有してもよい。最終溶液のｐＨの非限定的な例としては、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、または７．７のｐＨが挙げられる。
【０４８８】
賦形剤
本開示の製剤は、１つ以上の賦形剤を、それぞれ、ＡＡＶ粒子の安定性を一緒に増加させ、ウイルス粒子による細胞トランスフェクションもしくは形質導入を増加させ、ウイルス粒子にコードされたタンパク質の発現を増加させ、および／またはＡＡＶ粒子にコードされたタンパク質の放出プロファイルを変化させる量で含み得る。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の純度であってもよい。一部の実施形態において、賦形剤はヒトへの使用および動物への使用が承認されている。一部の実施形態において、賦形剤は米国食品医薬品局によって承認されていてもよい。一部の実施形態において、賦形剤は医薬品グレードであってもよい。一部の実施形態において、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、および／または国際薬局方の規格に適合し得る。
【０４８９】
賦形剤には、本明細書で使用されるとき、限定はされないが、所望の特定の剤形に適する通りのあらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散液または懸濁液助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤などが含まれる。医薬組成物を製剤化するための様々な賦形剤および組成物の調製技法は、当該技術分野において公知である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ａ．Ｒ．ジェンナロ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ）著、リッピンコット・ウィリアムズ・アンド・ウィルキンス（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）、メリーランド州ボルチモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ）所在、２００６年を参照されたい；その内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。従来の賦形剤媒体の使用は本開示の範囲内に企図され得るが、ただし、任意の望ましくない生物学的効果を生じたり、またはその他、医薬組成物の任意の他の１つ以上の成分と有害な形で相互作用したりするなどにより、任意の従来の賦形剤媒体が物質またはその誘導体と不適合である場合は除く。
【０４９０】
非有効成分
一部の実施形態において、ＡＡＶ製剤は、非有効成分である少なくとも１つの賦形剤を含んでもよい。本明細書で使用されるとき、用語「非有効成分」は、製剤に含まれる医薬組成物の活性に寄与しない１つ以上の薬剤を指す。一部の実施形態において、本開示の製剤に使用し得る非有効成分は、全てが米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認されているか、いずれも承認されていないか、または一部が承認されているものであり得る。
【０４９１】
本明細書において開示されるＡＡＶ粒子の製剤は、カチオンまたはアニオンを含んでもよい。一実施形態において、製剤は、限定はされないが、Ｚｎ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｕ２＋、Ｍｇ＋またはこれらの組合せなどの、金属カチオンを含む。一部の実施形態において、製剤は、金属カチオンと複合化されたポリマーまたはポリヌクレオチドを含んでもよい（例えば、米国特許第６，２６５，３８９号明細書および同第６，５５５，５２５号明細書を参照されたい。これらの各々の内容は、本明細書において全体として参照により援用される）。
【０４９２】
Ｖ．使用および適用
本開示の組成物は、対象に投与されてもよく、またはＦＸＮの量もしくは機能の欠損またはＦＸＮ発現減少に関連する疾患もしくは状態を有する対象に投与するための医薬の製造において使用されてもよい。一部の実施形態において、疾患は、ＦＡである。特定の実施形態において、ＦＸＮを含むＡＡＶ粒子は、ＦＡを治療するために対象に投与されてもよい。一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスゲノムを含むＡＡＶ粒子の投与は、中枢経路を変性から保護し得る。
【０４９３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子が有するペイロードは、配列番号１７２５〜１７２７のヒトＦＸＮ配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＦＸＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。一部の実施形態において、フラタキシンポリペプチドは、非ヒト霊長類のフラタキシンポリペプチドである。一部の実施形態において、非ヒト霊長類ポリペプチドは、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）のＦＸＮ（ｃｙｎｏＦＸＮもしくはｃＦＸＮ）またはアカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）のＦＸＮである。一部の実施形態において、非ヒト霊長類フラタキシンポリペプチドは、少なくとも部分的にヒト化されている。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子が有するペイロードは、配列番号１７３１〜１７３３のいずれかの配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＦＸＮポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。
【０４９４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子の送達は、ｍＦＡＲＳ／ＳＡＲＡによってコンパレータ群に対して５０％で測定されるように、フリードライヒ運動失調症の進行を停止または遅延させ得る。特定の実施形態において、ＡＡＶ粒子の送達は、機能的ＦＸＮの存在を増加させ、歩行を改善および安定化させ、運動失調症に関連する心臓状態を改善させ、疲労感を減少させ、糖尿病などの代謝障害を治療する。
【０４９５】
一部の実施形態において、本開示は、医薬用、予防用、診断用またはイメージング用組成物と、それらのバイオアベイラビリティを改善し、それらの代謝を低減および／もしくは改変し、ならびに／またはそれらの体内分布を改変し得る薬剤とを組み合わせた送達を包含する。
【０４９６】
特定の実施形態において、本明細書において記載される医薬組成物は、研究ツールとして使用され、特に、ＨＥＫ２９３Ｔなどのヒト細胞株を使用するインビトロ調査、およびヒト臨床試験の前にある非ヒト霊長類でのインビボ試験において使用される。
【０４９７】
ＣＮＳ疾患
本開示は、ヒト対象を含む哺乳類対象における疾患、障害、および／または状態を治療するための方法であって、前記対象に、本明細書に記載されるＦＸＮ（すなわち、ウイルスゲノムもしくは「ＶＧ」）を産生するウイルス粒子、例えばＡＡＶ、ＡＡＶ粒子もしくはＡＡＶゲノム、のいずれかを投与する工程、または前記対象に、前記ＡＡＶ粒子もしくはＡＡＶゲノムを含む粒子を投与する工程、または前記対象に、医薬組成物を含む、記載された組成物のいずれかを投与する工程を含む方法を提供する。
【０４９８】
一部の実施形態において、ＣＮＳにおける遺伝子産物のレベルまたは機能を調節し得るＦＸＮまたはそのバリアントを含む治療用産物である機能性ペイロードの送達を通じての本開示のＡＡＶ粒子。
【０４９９】
機能性ペイロードは、それを必要とする対象において遺伝子産物の異常なレベルおよび／もしくは機能（例えば、タンパク質の不在もしくは欠陥）から生じる症状、またはそうでなければそれを必要とする対象においてＣＮＳ障害に利益を付与する症状を軽減または低減させ得る。
【０５００】
非限定的な例として、本開示のＡＡＶ粒子によって送達されるコンパニオンまたは組合せ治療用産物としては、限定はされないが、成長因子および栄養因子、サイトカイン、ホルモン、神経伝達物質、酵素、抗アポトーシス因子、血管新生因子、ＦＸＮポリペプチド、ならびにＦＡなどの病理障害において突然変異していることが公知の任意のタンパク質（例えば、脳特異的Ｍｉｒ−１２８ａ、本明細書において全体として参照により援用されるアドラカ（Ａｄｌａｋｈａ）およびサイニ（Ｓａｉｎｉ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃａｎｃｅｒ、２０１４年、第１３巻、第３３号を参照されたい）を挙げ得る。
【０５０１】
一部の実施形態において、神経変性障害は、ＦＸＮ遺伝子におけるイントロンＧＡＡトリプレットリピートが拡大し、ミトコンドリアタンパク質フラタキシンの発現が減少して神経系に進行性の損傷を引き起こすことから生じる、フリードライヒ運動失調症である。
【０５０２】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、ＣＮＳの成長および発達の機能障害、すなわち、神経発達障害と関連している疾患を治療するために使用してもよい。一部の態様において、かかる神経発達障害は、遺伝子突然変異によって引き起こされ得る。
【０５０３】
一部の実施形態において、神経学的障害は、ＣＮＳに神経学的起源を有する運動症状および／または感覚症状を伴う機能性神経学的障害であり得る。非限定的な例として、機能性神経学的障害は、慢性疼痛、発作、発話問題、不随意運動、または睡眠障害であり得る。
【０５０４】
一部の実施形態において、神経学的または神経筋疾患、障害および／または状態は、フリードライヒ運動失調症である。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子の送達は、既知の分析方法およびフリードライヒ運動失調症のコンパレータ群を用いて、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９５％超でフリードライヒ運動失調症の疾患進行を停止または遅延し得る。非限定的な例として、ＡＡＶ粒子の送達は、ｍＦＡＲＳ／ＳＡＲＡによってコンパレータ群に対して５０％で測定されるように、フリードライヒ運動失調症の進行を停止または遅延させ得る。
【０５０５】
一部の実施形態において、ペイロードをコードするＡＡＶ粒子は、組織中のＦＸＮの量を１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％超増加させ得る。一部の実施形態において、ペイロードをコードするＡＡＶ粒子は、組織中のＦＸＮの量を、健康な対象の対応する組織におけるＦＸＮの量に匹敵する（例えば、ほぼ同じ）ものに増加させ得る。一部の実施形態において、ペイロードをコードするＡＡＶ粒子は、組織中のＦＸＮの量を、ＦＸＮの発現の減少、またはＦＸＮの量および／もしくは機能の不足に関連する疾患、例えばＦＡの１つ以上の症状を低減させるために有効な量に増加させ得る。
【０５０６】
ＶＩ．用量設定および投与
投与
一部の態様において、本開示は、ＣＮＳの疾患または障害の予防、治療、または改善のための、ＦＸＮまたはそのバリアントをコードするベクターおよびウイルス粒子、例えばＡＡＶ粒子、の投与および／または送達方法を提供する。例えば、ＦＡを予防、治療、または改善する、ＦＸＮをコードするＡＡＶ粒子の投与。
【０５０７】
本開示のＡＡＶ粒子は、治療上有効な結果をもたらす任意の送達経路によって投与されてもよい。それらとしては、限定はされないが、経腸（腸の中）、胃腸、硬膜上（硬膜の中）、経口（口を介して）、経皮、硬膜外、大脳内（大脳の中）、脳室内（脳室の中）、頭蓋内（頭蓋骨の中）、皮膚上（ｐｉｃｕｔａｎｅｏｕｓ）（皮膚への塗布）、皮内（皮膚それ自体の中）、皮下（皮膚の下）、鼻腔投与（鼻を通じて）、静脈内（静脈の中）、静脈内ボーラス、静脈内点滴、動脈内（動脈の中）、筋肉内（筋肉の中）、心臓内（心臓の中）、骨内注入（骨髄の中）、実質内（実質の中）、髄腔内（脊柱管の中）、腹腔内（腹膜への注入または注射）、小胞内注入、硝子体内（眼を通じて）、海綿体内注射（病的腔の中）、腔内（陰茎の基部の中）、膣内投与、子宮内、羊膜外投与、経皮（全身分布のためのインタクトな皮膚を通じた拡散）、経粘膜（粘膜を通じた拡散）、経膣、インサフレーション（鼻から吸い込む）、舌下、唇下、浣腸、点眼薬（結膜上）、点耳薬で、耳介（耳内または耳を介して）、頬側（頬の方に向けて）、結膜、皮膚、歯（１本以上の歯に対して）、電気浸透、子宮頸管内、副鼻腔内、気管内、体外、血液透析、浸潤、間質性、腹腔内、羊膜内、関節内、胆管内、気管支内、嚢内、軟骨内（軟骨の範囲内）、仙骨内（馬骨（ｃａｕｄａ  ｅｑｕｉｎｅ）の範囲内）、大槽内（大槽小脳延髄槽の範囲内）、角膜内（角膜の範囲内）、歯冠内、冠内（冠動脈の範囲内）、海綿体内（ｉｎｔｒａｃｏｒｐｏｒｕｓ  ｃａｖｅｒｎｏｓｕｍ）（陰茎海綿体（ｃｏｒｐｏｒｕｓ  ｃａｖｅｒｎｏｓａ）の可膨張性腔の範囲内）、椎間板内（椎間板の範囲内）、管内（腺管の範囲内）、十二指腸内（十二指腸の範囲内）、硬膜内（硬膜の範囲内または真下）、表皮内（表皮に対して）、食道内（食道に対して）、胃内（胃の範囲内）、歯肉内（歯肉の範囲内）、回腸内（小腸の遠位部分の範囲内）、病巣内（局所病変の範囲内、またはそこに直接導入される）、菅腔内（管の管腔の範囲内）、リンパ内（リンパの範囲内）、髄内（骨の髄腔の範囲内）、髄膜内（髄膜の範囲内）、眼内（眼の範囲内）、卵巣内（卵巣の範囲内）、心膜内（心膜の範囲内）、胸膜内（胸膜の範囲内）、前立腺内（前立腺の範囲内）、肺内（肺またはその気管支の範囲内）、洞内（鼻洞または眼窩周囲洞の範囲内）、脊髄内（脊柱の範囲内）、滑液嚢内（関節の滑膜腔の範囲内）、腱内（腱の範囲内）、精巣内（精巣の範囲内）、髄腔内（脳脊髄軸の任意のレベルにおける脳脊髄液の範囲内）、胸腔内（胸部の範囲内）、細管内（臓器の細管の範囲内）、腫瘍内（腫瘍の範囲内）、鼓室内（中耳（ａｕｒｕｓ  ｍｅｄｉａ）の範囲内）、血管内（１つ以上の血管の範囲内）、脳室内（脳室の範囲内）、イオントフォレシス（電流を用いるもので、可溶性塩のイオンが体の組織に移動する）、潅注（開放創または体腔を浸すまたはフラッシュする）、咽頭（喉頭に対して直接）、経鼻胃（鼻を通じて胃の中に）、密封包帯療法（局所経路投与、これは次に包帯で覆われ、包帯がその範囲を閉塞する）、眼（外部眼に対して）、中咽頭（口および咽頭に対して直接）、非経口、経皮、関節周囲、硬膜外、神経周囲、歯周、直腸、呼吸器（局所または全���作用のため経口的または鼻腔的に吸入することにより気道の範囲内に）、球後（橋の後ろまたは眼球の後ろ）、軟部組織、くも膜下、結膜下、粘膜下、軟膜下、局所、経胎盤（胎盤を通じてまたは越えて）、経気管（気管の壁を通じて）、経鼓室（鼓室を越えてまたは通じて）、尿管（尿管に対して）、尿道（尿道に対して）、膣、仙骨ブロック、診断的、神経ブロック、胆管灌流、心灌流、フォトフェレーシス、または脊髄が挙げられる。
【０５０８】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、標的細胞または組織に送達されるように投与される。理論によって束縛されることを望むものではないが、標的細胞への送達は、ＦＸＮ発現をもたらす。標的細胞は、ＦＸＮ発現レベルを増加させることが望ましいと考えられる任意の細胞であり得る。標的細胞は、ＣＮＳ細胞であり得る。かかる細胞および／または組織の非限定的な例としては、脊髄後根神経節および後柱、固有受容感覚ニューロン、クラーク柱、薄束核および楔状束核、小脳歯状核、皮質脊髄路、およびそれらを含む細胞、ベッツ細胞、ならびに心臓の細胞が挙げられる。
【０５０９】
一部の実施形態において、組成物は、それらが血液脳関門、脈管障壁、または他の上皮性障壁を越えることを可能にするように投与されてもよい。
一部の実施形態において、中枢神経系（例えば、実質）の細胞へのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子によるＦＸＮの送達は、脳脊髄液（ＣＳＦ）への注入を含む。ＣＳＦは、脳の室に位置する脈絡叢を含む特殊な上衣細胞によって生成される。脳内で生成されたＣＳＦは、次いで、脳および脊髄を含む中枢神経系を循環し、中枢神経系を包む。ＣＳＦは、生成と、血管系への再吸収との恒常的なバランスを維持しながら、脳の室ならびに脳および脊髄の両方を包むくも膜下空間を含む中枢神経系の周囲を継続的に循環する。ＣＳＦの全体容積は、１日におよそ４〜６回、またはおよそ４時間に１回置き換えられ、ただし、個体の値は変動し得る。
【０５１０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、全身性送達によって送達されてもよい。一部の実施形態において、全身性送達は、血管内投与によるものであってもよい。一部の実施形態において、全身性送達は、静脈内投与によるものであってもよい。
【０５１１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、静脈内送達によって送達されてもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、ＣＳＦ経路への注射によって送達されてもよい。ＣＳＦ経路への送達の非限定的な例としては、髄腔内および脳室内投与が挙げられる。
【０５１２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、視床送達によって送達されてもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、大脳内送達によって送達されてもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、心臓内送達によって送達されてもよい。
【０５１３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、頭蓋内送達によって送達されてもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、臓器（例えば、ＣＮＳ（脳または脊髄））内へ直接（実質内）注射によって送達されてもよい。一部の実施形態において、実質内送達は、脳またはＣＮＳの任意の領域、例えば、線条体内へのものであってもよい。
【０５１４】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、脳の室へ投与されてもよい。
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、脳室内送達によって脳の室に投与されてもよい。
【０５１５】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、筋肉内送達によって投与されてもよい。
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、上述の２つ以上の経路によって投与される。非限定的な例として、ＡＡＶ粒子は、静脈内送達および視床送達によって投与されてもよい。
【０５１６】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、上述の２つ以上の経路によって投与される。非限定的な例として、ＡＡＶ粒子は、静脈内送達および大脳内送達によって投与されてもよい。
【０５１７】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、上述の２つ以上の経路によって投与される。非限定的な例として、ＡＡＶ粒子は、静脈内送達および頭蓋内送達によって投与されてもよい。
【０５１８】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、上述の２つ以上の経路によって投与される。一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、髄腔内および脳室内投与によって送達されてもよい。
【０５１９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、ミトコンドリア機能不全を改善および／または是正するために対象に送達されてもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、ニューロンを保存するために対象に送達されてもよい。ニューロンは、一次および／または二次感覚ニューロンであってもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、脊髄後根神経節および／またはそのニューロンに送達される。
【０５２０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子の投与は、感覚経路における機能を保存および／または是正し得る。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、静脈内（ＩＶ）、脳室内（ＩＣＶ）、実質内、および／または髄腔内（ＩＴ）注入を介して送達されてもよく、療法剤は、骨格筋に療法剤を送達するために、筋肉内（ＩＭ）四肢注入を介して対象に送達されてもよい。血管内四肢注入による少なくとも１つのＦＸＮまたはそのバリアントをコードするＡＡＶの送達は、グルントマン（Ｇｒｕｎｔｍａｎ）およびフロッテ（Ｆｌｏｔｔｅ）、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０１５年，２６（３），１５９−１６４（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）によって説明されている。
【０５２１】
一部の実施形態において、本開示に係るウイルスベクター医薬組成物の、中枢神経系（例えば、実質）の細胞への送達は、ＶＧ／時間＝ｍＬ／時間＊ＶＧ／ｍＬ（式中、ＶＧはウイルスゲノムであり、ＶＧ／ｍＬは組成物濃度であり、ｍＬ／時間は注入速度である）によって定義される送達速度を含む。
【０５２２】
一部の実施形態において、本開示に係るＡＡＶ粒子医薬組成物の、中枢神経系（例えば、実質）の細胞への送達は、最大１ｍＬの注入を含む。一部の実施形態において、本開示に係るウイルスベクター医薬組成物の、中枢神経系（例えば、実質）の細胞への送達は、０．０００１、０．０００２、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００８、０．０１０、０．０１５、０．０２０、０．０２５、０．０３０、０．０４０、０．０５０、０．０６０、０．０７０、０．０８０、０．０９０、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、または０．９ｍＬの注入を含んでもよい。
【０５２３】
一部の実施形態において、本開示に係るＡＡＶ粒子医薬組成物の、中枢神経系（例えば、実質）の細胞への送達は、約１ｍＬ〜約１２０ｍＬの注入を含む。一部の実施形態において、本開示に係るウイルスベクター医薬組成物の、中枢神経系（例えば、実質）の細胞への送達は、０．１、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、または１２０ｍＬの注入を含んでもよい。一部の実施形態において、中枢神経系（例えば、実質）の細胞へのＡＡＶ粒子の送達は、少なくとも３ｍＬの注入を含む。一実施形態において、中枢神経系（例えば、実質）の細胞へのＡＡＶ粒子の送達は、３ｍＬの注入からなる。一実施形態において、中枢神経系（例えば、実質）の細胞へのＡＡＶ粒子の送達は、少なくとも１０ｍＬの注入を含む。一部の実施形態において、中枢神経系（例えば、実質）の細胞へのＡＡＶ粒子の送達は、１０ｍＬの注入からなる。
【０５２４】
一部の実施形態において、対象の中枢神経系（例えば、実質）の細胞に送達されるＡＡＶ粒子医薬組成物の容積は、２μｌ、２０μｌ、５０μｌ、８０μｌ、１００μｌ、２００μｌ、３００μｌ、４００μｌ、５００μｌ、６００μｌ、７００μｌ、８００μｌ、９００μｌ、１０００μｌ、１１００μｌ、１２００μｌ、１３００μｌ、１４００μｌ、１５００μｌ、１６００μｌ、１７００μｌ、１８００μｌ、１９００μｌ、２０００μｌ、または２０００μｌ超である。
【０５２５】
一部の実施形態において、対象脳の両半球の領域に送達されるＡＡＶ粒子医薬組成物の容積は、２μｌ、２０μｌ、５０μｌ、８０μｌ、１００μｌ、２００μｌ、３００μｌ、４００μｌ、５００μｌ、６００μｌ、７００μｌ、８００μｌ、９００μｌ、１０００μｌ、１１００μｌ、１２００μｌ、１３００μｌ、１４００μｌ、１５００μｌ、１６００μｌ、１７００μｌ、１８００μｌ、１９００μｌ、２０００μｌ、または２０００μｌ超である。一部の実施形態において、両半球の領域に送達される容積は２００μｌである。非限定的な別の例として、両半球の領域に送達される容積は９００μｌである。更に別の非限定的な例として、両半球の領域に送達される容積は１８００μｌである。
【０５２６】
特定の実施形態において、本開示に係るＡＡＶ粒子またはウイルスベクター医薬組成物は、約１０〜約６００μｌ／部位、約５０〜約５００μｌ／部位、約１００〜約４００μｌ／部位、約１２０〜約３００μｌ／部位、約１４０〜約２００μｌ／部位、または約１６０μｌ／部位で投与されてもよい。
【０５２７】
一部の実施形態において、対象に送達される総容積は、１つ以上の投与部位、例えば、１、２、３、４、５つ、または５つより多くの部位間で分割されてもよい。一部の実施形態において、総容積は、左半球および右半球への投与間で分割される。
【０５２８】
ＡＡＶ粒子の送達
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、米国特許第８，９９９，９４８号明細書または国際公開第２０１４１７８８６３号パンフレット（これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される疾患の治療方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５２９】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、米国特許出願公開第２０１５０１２６５９０号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの、アルツハイマー病または他の神経変性状態において遺伝子療法を送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３０】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、米国特許第６，４３６，７０８号明細書、および同第８，９４６，１５２号明細書、ならびに国際公開第２０１５１６８６６６号パンフレット（これらの内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される通りの、ＣＮＳ遺伝子療法を送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３１】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子は、欧州特許出願第１８５７５５２号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ＡＡＶビリオンを送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３２】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、欧州特許出願第２６７８４３３号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ＡＡＶベクターを使用してタンパク質を送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３３】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、米国特許第５，８５８，３５１号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ＡＡＶベクターを使用してＤＮＡ分子を送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３４】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、米国特許第６，２１１，１６３号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、血流にＤＮＡを送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３５】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、米国特許第６，３２５，９９８号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ＡＡＶビリオンを送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３６】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、米国特許第６，３３５，０１１号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ＤＮＡを筋肉細胞に送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３７】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、米国特許第６，６１０，２９０号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ＤＮＡを筋肉細胞および組織に送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３８】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、米国特許第７，７０４，４９２号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ＤＮＡを筋肉細胞に送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５３９】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、米国特許第７１１２３２１号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ペイロードを骨格筋に送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４０】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、米国特許第７，５８８，７５７号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ペイロードを中枢神経系に送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４１】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、米国特許第８，２８３，１５１号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ペイロードを送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４２】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、米国特許第８３１８６８７号明細書（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ペイロードをアルツハイマー病の治療のために送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４３】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、国際公開第２０１２１４４４４６号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ペイロードを送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４４】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、国際公開第２００１０８９５８３号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）送達ベクターを使用したペイロードの送達方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４５】
一部の実施形態において、本開示のＡＡＶ粒子または医薬組成物は、国際公開第２０１２０５７３６３号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、神経細胞へのペイロードの送達方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４６】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、国際公開第２００１０９６５８７号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ペイロードを送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４７】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするウイルスベクターは、国際公開第２００２０１４４８７号パンフレット（その内容は本明細書において全体として参照により援用される）に記載される、ペイロードを筋肉組織に送達するための方法を使用して、投与または送達されてもよい。
【０５４８】
一部の実施形態において、カテーテルを使用して、ＡＡＶ粒子を投与してもよい。特定の実施形態において、カテーテルまたはカニューレは、多部位送達のために、脊椎内の２つ以上の部位に配置させてもよい。ＦＸＮをコードするウイルス粒子は、連続および／またはボーラス注入で送達されてもよい。各送達部位は、異なる投与レジメンであってもよく、または同じ投与レジメンが、各送達部位に使用されてもよい。一部の実施形態において、送達部位は、頸部および腰部領域にあってもよい。一部の実施形態において、送達部位は、頸部領域にあってもよい。一部の実施形態において、送達部位は、腰部領域にあってもよい。
【０５４９】
一部の実施形態において、対象は、本明細書に記載されるＦＸＮをコードするＡＡＶ粒子の送達の前に、脊椎解剖学および病理学について分析されてもよい。非限定的な例として、脊柱側弯症を有する対象は、脊柱側弯症を有しない対象と比較して、異なる投薬レジメンおよび／またはカテーテル位置を有してもよい。
【０５５０】
一部の実施形態において、送達方法および持続時間は、脊髄において広範な形質導入を提供するために選択される。一部の実施形態において、髄腔内送達は、脊髄の体軸方向長に沿った広範な形質導入を提供するために使用される。一部の実施形態において、多部位注入は、脊髄の体軸方向長に沿ったより均一な形質導入を提供する。
【０５５１】
細胞への送達
一部の態様では、本開示は、上述のＡＡＶ粒子のいずれかを細胞または組織に送達する方法であって、前記ＡＡＶ粒子と細胞もしくは組織を接触させる工程、または前記ＡＡＶ粒子を含む製剤と細胞もしくは組織を接触させる工程、または医薬組成物を含めた記載される組成物のいずれかと細胞もしくは組織を接触させる工程を含む方法を提供する。ＡＡＶ粒子を細胞または組織に送達する方法は、インビトロ、エキソビボ、またはインビボで達成することができる。
【０５５２】
対象への送達
一部の態様において、本開示は、上述のＡＡＶ粒子のいずれかを、対象、例えば哺乳類対象に送達する方法であって、前記ＡＡＶ粒子を前記対象に投与する工程、または前記ＡＡＶ粒子を含む製剤を前記対象に投与する工程、または医薬組成物を含む記載される組成物のいずれかを前記対象に投与する工程を含む方法を更に提供する。
【０５５３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、解剖学的封鎖、例えば、限定はされないが、血液脳関門をバイパスするために送達されてもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、製剤化され、経口送達と比較して薬物効果の速度を増加させる経路によって対象に送達されてもよい。
【０５５４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、脊髄および脊髄後根神経節（ＤＲＧ）の均一な形質導入を提供するための方法によって送達されてもよい。一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、髄腔内注入を使用して送達されてもよい。
【０５５５】
一部の実施形態において、対象は、ボーラス注入を使用して、本明細書に記載されるＡＡＶ粒子を投与されてもよい。本明細書で使用されるとき、「ボーラス注入」とは、物質または組成物の単回かつ迅速な注入を意味する。
【０５５６】
一部の実施形態において、ＦＸＮをコードするＡＡＶ粒子は、連続および／またはボーラス注入で送達されてもよい。各送達部位は、異なる投与レジメンであってもよく、または同じ投与レジメンが、各送達部位に使用されてもよい。非限定的な例として、送達部位は、頸部および腰部領域にあってもよい。別の非限定的な例として、送達部位は、頸部領域にあってもよい。別の非限定的な例として、送達部位は、腰部領域にあってもよい。
【０５５７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、単一経路投与を介して対象に送達されてもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、多部位投与経路を介して対象に送達されてもよい。例えば、対象には、ＡＡＶ粒子が、２、３、４、５つ、または５つより多い部位で投与されてもよい。
【０５５８】
一部の実施形態において、対象には、本明細書に記載されるＡＡＶ粒子が、数分間、数時間、または数日間の時間をかけた徐放送達を用いて投与されてもよい。注入速度は、対象、分布、製剤、または当業者に公知の別の送達パラメータに応じて変更されてもよい。
【０５５９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子の連続送達（連続注入）が使用される場合、連続注入は、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、または２４時間超であってもよい。
【０５６０】
一部の実施形態において、頭蓋内圧力は、投与の前に評価されてもよい。経路、容積、ＡＡＶ粒子濃度、注入持続時間、および／またはベクター力価は、対象の頭蓋内圧力に基づいて最適化されてもよい。
【０５６１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、全身性送達によって送達されてもよい。一部の実施形態において、全身性送達は、血管内投与によるものであってもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、ＣＳＦ経路への注射によって送達されてもよい。ＣＳＦ経路への送達の非限定的な例としては、髄腔内および脳室内投与が挙げられる。
【０５６２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、臓器、例えば、脳の１つ以上の領域の物質への直接（実質内）注射によって送達されてもよい。
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、脊髄への軟膜下注射によって送達されてもよい。例えば、対象は、脊髄固定装置に配置される場合がある。脊髄を露出させるために、背側椎弓切除が行われてもよい。ガイドチューブおよびＸＹＺマニピュレータが、カテーテルの配置を補助するために使用されてもよい。ガイドチューブからカテーテルを前進させることによって、軟膜下カテーテルを軟膜下腔内に配置して、当該カテーテルを通してＡＡＶ粒子を注射してもよい（ミヤノハラ（Ｍｉｙａｎｏｈａｒａ）ら，Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｃｌｉｎ  Ｄｅｖ．２０１６；３：１６０４６）。一部の場合において、ＡＡＶ粒子は、頸部軟膜下腔内に注射されてもよい。一部の場合において、ＡＡＶ粒子は、胸部軟膜下腔内に注射されてもよい。
【０５６３】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、内因性レベルと比較して脊髄後根神経節（ＤＲＧ）におけるＦＸＮタンパク質レベルを増加させるために、対象に送達されてもよい。増加は、内因性レベルと比較して、０．１倍〜５倍、０．５倍〜５倍、１倍〜５倍、２倍〜５倍、３倍〜５倍、４倍〜５倍、０．１倍〜４倍、０．５倍〜４倍、１倍〜４倍、２倍〜４倍、３倍〜４倍、０．１倍〜３倍、０．５倍〜３倍、１倍〜３倍、２倍〜３倍、０．１倍〜２倍、０．５倍〜２倍、０．１倍〜１倍、０．５倍〜１倍、０．１倍〜０．５倍、１倍〜２倍、０．１倍、０．２倍、０．３倍、０．４倍、０．５倍、０．６倍、０．７倍、０．８倍、０．９倍、１．０倍、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３．０倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４．０倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、または５倍超であり得る。増加は、脊椎の頸部、胸部および／または腰部領域において見られ得る。非限定的な例として、ＤＲＧにおけるＦＸＮの増加は、内因性レベルの０．５倍超であり得る。非限定的な例として、ＤＲＧにおけるＦＸＮの増加は、内因性レベルと比較して、０．５倍〜３倍であり得る。
【０５６４】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、脊髄後根神経節（ＤＲＧ）におけるＦＸＮタンパク質レベルを増加させるために、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンに形質導入することによって、対象に送達されてもよい。形質導入は、陽性であるＤＲＧの量として参照されてもよい。形質導入は、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、１５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、２０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、２５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、３０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、３５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、４０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、４５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、５０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、５５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、６０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、６５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンの形質導入は、７０％より大きいかそれに等しくてもよい。
【０５６５】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、脊髄後根神経節（ＤＲＧ）におけるＦＸＮタンパク質レベルを内因性レベルと比較して増加させるために、ならびに頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンに形質導入するために、対象に送達されてもよい。ＤＲＧにおけるＦＸＮタンパク質レベルは、頸部、胸部および／または腰部領域における内因性レベルと比較して０．５倍〜３倍増加してもよく、頸部、胸部および／または腰部領域における大型ＤＲＧニューロンは、少なくとも２０％形質導入されてもよい。
【０５６６】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、小脳歯状核の大型ニューロンに形質導入するために対象に送達されてもよい。形質導入は、陽性である大型ニューロンの数として参照されてもよい。形質導入は、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、１５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、２０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、２５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、３０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、３５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、４０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、４５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、５０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、５５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、６０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、６５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、小脳歯状核の大型ニューロンの形質導入は、７０％より大きいかそれに等しくてもよい。
【０５６７】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、クラーク柱のニューロンに形質導入するために対象に送達されてもよい。形質導入は、陽性であるニューロンの数として参照されてもよい。形質導入は、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、１５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、２０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、２５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、３０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、３５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、４０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、４５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、５０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、５５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、６０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、６５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、クラーク柱のニューロンの形質導入は、７０％より大きいかそれに等しくてもよい。
【０５６８】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、薄束核のニューロンに形質導入するために対象に送達されてもよい。形質導入は、陽性であるニューロンの数として参照されてもよい。形質導入は、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、１５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、２０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、２５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、３０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、３５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、４０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、４５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、５０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、５５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、６０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、６５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、薄束核のニューロンの形質導入は、７０％より大きいかそれに等しくてもよい。
【０５６９】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、楔状束核のニューロンに形質導入するために対象に送達されてもよい。形質導入は、陽性であるニューロンの数として参照されてもよい。形質導入は、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、１５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、２０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、２５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、３０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、３５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、４０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、４５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、５０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、５５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、６０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、６５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、楔状束核のニューロンの形質導入は、７０％より大きいかそれに等しくてもよい。
【０５７０】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、内因性レベルと比較して心臓におけるＦＸＮタンパク質レベルを増加させるために、対象に送達されてもよい。増加は、内因性レベルと比較して、０．１倍〜５倍、０．５倍〜５倍、１倍〜５倍、２倍〜５倍、３倍〜５倍、４倍〜５倍、０．１倍〜４倍、０．５倍〜４倍、１倍〜４倍、２倍〜４倍、３倍〜４倍、０．１倍〜３倍、０．５倍〜３倍、１倍〜３倍、２倍〜３倍、０．１倍〜２倍、０．５倍〜２倍、０．１倍〜１倍、０．５倍〜１倍、０．１倍〜０．５倍、１倍〜２倍、０．１倍、０．２倍、０．３倍、０．４倍、０．５倍、０．６倍、０．７倍、０．８倍、０．９倍、１．０倍、１．１倍、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍、２．０倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３．０倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍、４．０倍、４．１倍、４．２倍、４．３倍、４．４倍、４．５倍、４．６倍、４．７倍、４．８倍、４．９倍、または５倍超であり得る。非限定的な例として、心臓におけるＦＸＮの増加は、内因性レベルの０．５倍を超えてもよい。非限定的な例として、心臓におけるＦＸＮの増加は、内因性レベルと比較して、０．５倍〜３倍であってもよい。
【０５７１】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、心筋細胞に形質導入することによってＦＸＮタンパク質レベルを増加させるために、対象に送達されてもよい。形質導入は、陽性である心筋細胞の数として参照されてもよい。形質導入は、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、１５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、２０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、２５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、３０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、３５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、４０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、４５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、５０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、５５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、６０％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、６５％より大きいかそれに等しくてもよい。非限定的な例として、心筋細胞の形質導入は、７０％より大きいかそれに等しくてもよい。
【０５７２】
一部の実施形態において、ＡＡＶ粒子は、内因性レベルと比較して心臓におけるＦＸＮタンパク質レベルを増加させるために、および心筋細胞に形質導入するために、対象に送達されてもよい。心臓におけるＦＸＮタンパク質レベルは、内因性レベルと比較して０．５倍〜３倍増加してもよく、および／または心筋細胞は、少なくとも３０％形質導入されてもよい。
【０５７３】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＦＸＮをコードするウイルスゲノムを含むＡＡＶ粒子の、脊髄後根神経節（ＤＲＧ）、上行性脊髄感覚路および小脳における感覚ニューロンへの送達は、ＦＸＮの発現増加を導くであろう。発現増加は、様々な細胞タイプの生存および機能の改善を導き得る。
【０５７４】
具体的には、一部の実施形態において、フラタキシンの発現増加は、運動失調症（バランス）および歩行、感覚能力、動作および強弱の協調、機能的能力および／または生活の質の改善を導き得る。
【０５７５】
投薬
一部の態様において、本開示は、本開示に係るウイルスベクターおよびそれらのペイロードを、それを必要とする対象に投与する工程を含む方法を提供する。ウイルスベクターの医薬用、イメージング用、診断用、または予防用のその組成物は、疾患、障害、および／または状態（例えば、ＦＸＮ発現の減少またはＦＸＮの量および／もしくは機能の不足に関連する疾患、障害、および／または状態）を予防、治療、診断、またはイメージングするために有効な任意の投与量および任意の投与経路を使用して、対象に投与され得る。一部の実施形態において、疾患、障害および／または状態は、ＦＡである。必要となる正確な量は、対象の種、年齢、および全身状態、疾患の重症度、詳細な組成物、その投与様式、その活性様式などに応じて対象毎に異なることになる。本開示に係る組成物は、典型的には、投与の簡便性および投薬量の均一性のため、単位剤形に製剤化される。しかし、本開示の組成物の１日の総使用量は、主治医が妥当な医学的判断の範囲内で決定し得ることは理解されるであろう。任意の特定の患者のための具体的な治療有効用量レベル、予防有効用量レベル、または適切なイメージング用量レベルは、治療下の障害および障害の重症度；用いられる具体的な化合物の活性；用いられる具体的な組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康、性別、および食事；用いられる具体的なＦＸＮの投与時間、投与経路、および排泄速度；治療継続期間；用いられる具体的な化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；ならびに医学分野で周知の同様の要因を含めた、様々な要因に依存することになる。
【０５７６】
特定の実施形態において、本開示に係るＡＡＶ粒子医薬組成物は、１日当たり対象体重の約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約０．００５ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇのＦＸＮを、１日に１回以上送達して、所望の治療効果、診断効果、予防効果、またはイメージング効果を得るために十分な投薬量レベルで投与されてもよい。上記の投薬濃度は、ＶＧに、または１ｋｇ当たりのウイルスゲノムに、または当業者によって投与される総ウイルスゲノムへと変換され得ることが理解されるであろう。
【０５７７】
特定の実施形態において、所望の投薬量は、複数回の投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回、またはそれより多くの投与）を使用して送達されてもよい。複数回の投与が用いられる場合、本明細書に記載されるものなどの分割用量投与レジメンが使用されてもよい。本明細書で使用されるとき、「分割用量」は、単一単位用量または総１日用量を２つ以上の用量へと分割するもの、例えば、単一単位用量の２回以上の投与である。本明細書で使用されるとき、「単一単位用量」は、１用量／１回／単一経路／単一接触点、すなわち単一の投与イベントで投与される、任意の療法組成物の用量である。一部の実施形態において、単一単位用量は、別個の剤形（例えば、錠剤、カプセル、パッチ、充填済みシリンジ、バイアルなど）として提供される。本明細書で使用されるとき、「総１日用量」は、２４時間の期間内に与えられるまたは処方される量である。これは単一単位用量として投与されてもよい。ウイルス粒子は、緩衝液のみにおいて、または本明細書に記載される製剤において製剤化されてもよい。
【０５７８】
本明細書に記載される医薬組成物は、本明細書に記載される剤形、例えば、局所、鼻腔内、肺、気管内、または注射可能（例えば、静脈内、眼内、硝子体内、筋肉内、心臓内、腹腔内、および／または皮下）剤形に製剤化することができる。
【０５７９】
一部の実施形態において、本明細書に記載されるＡＡＶ粒子の送達は、ＡＡＶ粒子の送達の結果として、最小限の重篤有害事象（ＳＡＥ）をもたらす。
特定の実施形態において、本開示に係るＡＡＶ粒子医薬組成物の、中枢神経系（例えば、実質）の細胞への送達は、約１×１０６ＶＧ／ｍＬ〜約１×１０１６ＶＧ／ｍＬの総濃度を含んでもよい。一部の実施形態において、送達は、約１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、２×１０１０、３×１０１０、４×１０１０、５×１０１０、６×１０１０、７×１０１０、８×１０１０、９×１０１０、１×１０１１、１．６×１０１１、１．８×１０１１、２×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、５×１０１１、５．５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、０．８×１０１２、０．８３×１０１２、１×１０１２、１．１×１０１２、１．２×１０１２、１．３×１０１２、１．４×１０１２、１．５×１０１２、１．６×１０１２、１．７×１０１２、１．８×１０１２、１．９×１０１２、２×１０１２、２．１×１０１２、２．２×１０１２、２．３×１０１２、２．４×１０１２、２．５×１０１２、２．６×１０１２、２．７×１０１２、２．８×１０１２、２．９×１０１２、３×１０１２、３．１×１０１２、３．２×１０１２、３．３×１０１２、３．４×１０１２、３．５×１０１２、３．６×１０１２、３．７×１０１２、３．８×１０１２、３．９×１０１２、４×１０１２、４．１×１０１２、４．２×１０１２、４．３×１０１２、４．４×１０１２、４．５×１０１２、４．６×１０１２、４．７×１０１２、４．８×１０１２、４．９×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、９×１０１２、１×１０１３、２×１０１３、２．３×１０１３、３×１０１３、４×１０１３、５×１０１３、６×１０１３、７×１０１３、８×１０１３、９×１０１３、１×１０１４、１．９×１０１４、２×１０１４、３×１０１４、４×１０１４、５×１０１４、６×１０１４、７×１０１４、８×１０１４、９×１０１４、１×１０１５、２×１０１５、３×１０１５、４×１０１５、５×１０１５、６×１０１５、７×１０１５、８×１０１５、９×１０１５、または１×１０１６ＶＧ／ｍＬの組成物濃度を含んでもよい。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、１×１０１３ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、１．１×１０１２ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、３．７×１０１２ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、８×１０１１ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、２．６×１０１２ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、４．９×１０１２ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイ���スベクターの濃度は、０．８×１０１２ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、０．８３×１０１２ＶＧ／ｍＬである。一実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、バイアル中に含有され得る最大最終用量である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、１．６×１０１１ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、５×１０１１ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、２．３×１０１３ＶＧ／ｍＬである。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、１．９×１０１４ＶＧ／ｍＬである。
【０５８０】
一部の実施形態において、本開示に係るＡＡＶ粒子医薬組成物の、中枢神経系（例えば、実質）の細胞への送達は、対象当たり約１×１０６ＶＧ〜約１×１０１６ＶＧの総濃度を含んでもよい。一部の実施形態において、送達は、約１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、２×１０１０、３×１０１０、４×１０１０、５×１０１０、６×１０１０、７×１０１０、８×１０１０、９×１０１０、１×１０１１、１．６×１０１１、２×１０１１、２．１×１０１１、２．２×１０１１、２．３×１０１１、２．４×１０１１、２．５×１０１１、２．６×１０１１、２．７×１０１１、２．８×１０１１、２．９×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、４．６×１０１１、５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、７．１×１０１１、７．２×１０１１、７．３×１０１１、７．４×１０１１、７．５×１０１１、７．６×１０１１、７．７×１０１１、７．８×１０１１、７．９×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、１×１０１２、１．１×１０１２、１．２×１０１２、１．３×１０１２、１．４×１０１２、１．５×１０１２、１．６×１０１２、１．７×１０１２、１．８×１０１２、１．９×１０１２、２×１０１２、２．３×１０１２、３×１０１２、４×１０１２、４．１×１０１２、４．２×１０１２、４．３×１０１２、４．４×１０１２、４．５×１０１２、４．６×１０１２、４．７×１０１２、４．８×１０１２、４．９×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、８．１×１０１２、８．２×１０１２、８．３×１０１２、８．４×１０１２、８．５×１０１２、８．６×１０１２、８．７×１０１２、８．８×１０１２、８．９×１０１２、９×１０１２、１×１０１３、２×１０１３、３×１０１３、４×１０１３、５×１０１３、６×１０１３、７×１０１３、８×１０１３、９×１０１３、１×１０１４、２×１０１４、３×１０１４、４×１０１４、５×１０１４、６×１０１４、７×１０１４、８×１０１４、９×１０１４、１×１０１５、２×１０１５、３×１０１５、４×１０１５、５×１０１５、６×１０１５、７×１０１５、８×１０１５、９×１０１５、または１×１０１６ＶＧ／対象の組成物濃度を含んでもよい。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、２．３×１０１１ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、７．２×１０１１ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、７．５×１０１１ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、１．４×１０１２ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、４．８×１０１２ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイル��ベクターの濃度は、８．８×１０１２ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、２．３×１０１２ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、２×１０１０ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、１．６×１０１１ＶＧ／対象である。一部の実施形態において、組成物中のウイルスベクターの濃度は、４．６×１０１１ＶＧ／対象である。
【０５８１】
一部の実施形態において、中枢神経系（例えば、実質）の細胞へのＡＡＶ粒子の送達は、約１×１０６ＶＧ〜約１×１０１６ＶＧの総用量を含んでもよい。一部の実施形態において、送達は、約１×１０６、２×１０６、３×１０６、４×１０６、５×１０６、６×１０６、７×１０６、８×１０６、９×１０６、１×１０７、２×１０７、３×１０７、４×１０７、５×１０７、６×１０７、７×１０７、８×１０７、９×１０７、１×１０８、２×１０８、３×１０８、４×１０８、５×１０８、６×１０８、７×１０８、８×１０８、９×１０８、１×１０９、２×１０９、３×１０９、４×１０９、５×１０９、６×１０９、７×１０９、８×１０９、９×１０９、１×１０１０、１．９×１０１０、２×１０１０、３×１０１０、３．７３×１０１０、４×１０１０、５×１０１０、６×１０１０、７×１０１０、８×１０１０、９×１０１０、１×１０１１、２×１０１１、２．５×１０１１、３×１０１１、４×１０１１、５×１０１１、６×１０１１、７×１０１１、８×１０１１、９×１０１１、１×１０１２、２×１０１２、３×１０１２、４×１０１２、５×１０１２、６×１０１２、７×１０１２、８×１０１２、９×１０１２、１×１０１３、２×１０１３、３×１０１３、４×１０１３、５×１０１３、６×１０１３、７×１０１３、８×１０１３、９×１０１３、１×１０１４、２×１０１４、３×１０１４、４×１０１４、５×１０１４、６×１０１４、７×１０１４、８×１０１４、９×１０１４、１×１０１５、２×１０１５、３×１０１５、４×１０１５、５×１０１５、６×１０１５、７×１０１５、８×１０１５、９×１０１５、または１×１０１６ＶＧの総用量を含んでもよい。一部の実施形態において、総用量は、１×１０１３ＶＧである。一部の実施形態において、総用量は、３×１０１３ＶＧである。一部の実施形態において、総用量は、３．７３×１０１０ＶＧである。一部の実施形態において、総用量は、１．９×１０１０ＶＧである。一部の実施形態において、総用量は、２．５×１０１１ＶＧである。一部の実施形態において、総用量は、５×１０１１ＶＧである。一部の実施形態において、総用量は、１×１０１２ＶＧである。一部の実施形態において、総用量は、５×１０１２ＶＧである。
【０５８２】
組合せ
ＡＡＶ粒子は、１つ以上の他の療法剤、予防剤、診断剤、またはイメージング剤と組み合わせて使用されてもよい。語句「と組み合わせて」とは、薬剤が、同時に投与されなければならない、および／または一緒に送達するために製剤化されなければならないことを要請するよう意図するものではない。しかしながら、これらの送達方法は本開示の範囲内にある。組成物は、１つ以上の他の所望の療法剤または医療手技と同時に、その前に、またはその後に投与することができる。一般に、各薬剤は、当該の薬剤について決定された用量および／またはタイムスケジュールで投与されることになる。一部の実施形態において、本開示は、医薬用、予防的、診断用、またはイメージング用組成物を、それらのバイオアベイラビリティを向上させ得る、それらの代謝を低減および／もしくは改変させ得る、ならびに／またはそれらの体内分布を改変させ得る薬剤と組み合わせて送達することを包含する。
【０５８３】
発現の測定
ウイルスゲノムからのＦＸＮの発現は、限定はされないが、免疫化学（例えばＩＨＣ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、親和性ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、フローサイトメトリー、免疫細胞学、表面プラズモン共鳴分析、速度論的排除アッセイ、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣＭＳ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ＢＣＡアッセイ、免疫電気泳動法、ウェスタンブロット、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、タンパク質免疫沈殿、ＰＣＲ、および／またはインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）などの、当該技術分野で公知の種々の方法を使用して決定されてもよい。一部の実施形態において、異なるＡＡＶキャプシドにおいて送達されるＦＸＮをコードするトランス遺伝子は、脊髄後根神経節（ＤＲＧ）において異なる発現レベルを有し得る。
【０５８４】
特定の実施形態において、ＦＸＮポリペプチドは、ウェスタンブロットによって検出可能である。
ＶＩＩ．キットおよびデバイス
キット
一部の態様において、本開示は、本開示の方法を便宜的および／または効果的に実施するための様々なキットを提供する。典型的に、キットは、ユーザが対象の複数の治療を行うことおよび／または複数の実験を行うことを可能にするのに十分な量および／または数の成分を含むであろう。
【０５８５】
本開示のベクター、コンストラクト、またはＦＸＮのいずれかがキットに含まれてもよい。一部の実施形態において、キットは、本開示の化合物および／または組成物を作製および／または合成するための試薬および／または説明書を更に含んでもよい。一部の実施形態において、キットはまた、１つ以上の緩衝液も含んでもよい。一部の実施形態において、本開示のキットは、タンパク質または核酸のアレイまたはライブラリを作製するための成分を含んでもよく、したがって、例えば、固体支持体を含んでもよい。
【０５８６】
一部の実施形態において、キットの成分は、水性媒体中または凍結乾燥形態のいずれかで、パッケージングされてもよい。キットの容器手段は、一般に、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、または他の容器手段を含み、その中に成分が配置され、好適にアリコートされてもよい。１つを上回ってキットの構成要素が存在する場合（標識化試薬および標識が、一緒にパッケージングされてもよい）、キットはまた、通常、追加の構成要素が別個に配置され得る第２、第３、またはその他の追加の容器も含んでよい。一部の実施形態において、キットはまた、滅菌の薬学的に許容可能な緩衝液および／または他の希釈剤を格納する第２の容器手段を含んでもよい。一部の実施形態において、様々な組合せの構成要素が、１つ以上のバイアルに含まれてもよい。本開示のキットはまた、典型的に、本開示の化合物および／または組成物を格納するための手段、例えば、タンパク質、核酸、および任意の他の試薬の容器を、商業販売のために緊密に封止した状態で含み得る。そのような容器としては、所望されるバイアルが中に保持される、射出成形または吹込み成形された容器を挙げることができる。
【０５８７】
一部の実施形態において、キットの成分は１つおよび／または複数の溶液で提供される。一部の実施形態において、溶液は、水溶液であり、滅菌水溶液が、特に使用される。一部の実施形態において、キットの成分は、乾燥粉末として提供されてもよい。試薬および／または成分が乾燥粉末として提供される場合、かかる粉末は、好適な容積の溶媒の添加によって、復元されてもよい。一部の実施形態において、溶媒が別の容器手段で提供されてもよいことも想定される。一部の実施形態において、標識化色素は、乾燥粉末として提供される。一部の実施形態において、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００マイクログラム、または少なくとももしくは多くともこれらの量の乾燥色素が、本開示のキットにおいて提供されることが、企図される。かかる実施形態において、色素は、次いで、任意の好適な溶媒、例えば、ＤＭＳＯ中に再懸濁させてもよい。
【０５８８】
一部の実施形態において、キットは、キットの成分を用いるため、ならびにキットに含まれない任意の他の試薬を使用するための説明書を含んでもよい。説明書は、実装され得るバリエーションを含んでもよい。
【０５８９】
デバイス
一部の実施形態において、本開示の化合物および／または組成物は、デバイスと組み合わせられるか、デバイス上にコーティングされるか、またはデバイス内に埋め込まれてもよい。デバイスとしては、限定はされないが、歯科用インプラント、ステント、骨置換、人工関節、バルブ、ペースメーカー、および／または他の埋込み型治療用デバイスが挙げられ得る。
【０５９０】
本開示は、１つ以上のＦＸＮ分子をコードするウイルスベクターを組み込み得るデバイスを提供する。これらのデバイスは、安定した製剤中にウイルスベクターを含有し、これは、それを必要とする対象、例えばヒト患者に即座に送達され得る。
【０５９１】
投与のためのデバイスは、本明細書において教示される単回、複数回、または分割用量の投薬レジメンに従って、本開示のＦＸＮをコードするウイルスベクターを送達するために利用してもよい。
【０５９２】
細胞、臓器、および組織への複数回投与のための当該技術分野において公知の方法およびデバイスは、本開示の実施形態として本明細書に開示されている方法および組成物との併用での使用が企図される。
【０５９３】
ＶＩＩＩ．定義
本明細書の様々な箇所において、本開示の化合物の置換基は、群または範囲で、開示されている。本開示は、かかる群および範囲のメンバーのありとあらゆる個々の部分的な組合せを含むことが、具体的に意図される。以下は、用語の定義の非限定的なリストである。
【０５９４】
アデノ随伴ウイルス：用語「アデノ随伴ウイルス」または「ＡＡＶ」は、本明細書で使用されるとき、ディペンドウイルス属のメンバーを指し、それに由来する任意の粒子、配列、遺伝子、タンパク質、または成分を含む。本明細書で使用されるとき、用語「ＡＡＶ粒子」は、カプシドと、ＡＡＶゲノムまたはウイルス（もしくはベクター）ゲノム（ＶＧ）と称されるポリヌクレオチドとを含む。ＡＡＶ粒子は、本明細書に記載されるもしくは当該技術分野において公知の任意の血清型（血清型の組合せ（すなわち、「シュードタイプ」ＡＡＶ）を含む）、または様々なゲノム（例えば、一本鎖もしくは自己相補的）に由来してもよい。加えて、ＡＡＶ粒子は複製欠損型および／またはターゲティング型であってもよい。
【０５９５】
有効成分：本明細書において使用されるとき、用語「有効成分」は、生物学的に活性であり、生物学的効果を生み出す役割を担う分子またはその複合体を指す。医薬組成物中の有効成分は、有効医薬成分と呼ばれる場合もある。本開示の目的のために、語句「有効成分」は、一般に、ペイロードを有するウイルス粒子、または本明細書に記載されるウイルス粒子によって送達されるペイロード（もしくはその遺伝子産物）のいずれかを指す。これに対して、「非有効成分」とは、生物学的に不活性な物質を示す。賦形剤は、非有効成分の一例である。
【０５９６】
活性：本明細書で使用されるとき、用語「活性」は、物事が生じているまたは行われている状態を指す。本開示の組成物は、活性を有してもよく、この活性が、１つ以上の生物学的事象を伴ってもよい。
【０５９７】
組み合わせて投与される：本明細書で使用されるとき、用語「組み合わせて投与される」または「組み合わせて送達される」または「組合せ投与」は、ある時点で対象が両方の薬剤に同時に曝露されるように、および／または患者に各薬剤の効果のオーバーラップが存在するように、同時にまたはある間隔以内に、投与される２つ以上の薬剤（例えば、ＡＡＶ）の曝露を指す。一部の実施形態において、少なくとも１用量の１つ以上の薬剤は、少なくとも１用量の１つ以上の他の薬剤の約２４時間、１２時間、６時間、３時間、１時間、３０分、１５分、１０分、５分、または１分以内に投与される。一部の実施形態において、投与はオーバーラッピング投薬レジメンで行われる。本明細書で使用されるとき、用語「投薬レジメン」は、時間の間隔が空いた複数回の用量を指す。かかる用量は、規則的な間隔で投与されてもよく、または、投与中に１回以上の中断を含んでもよい。一部の実施形態において、本明細書に記載されるように、本開示の１つ以上の化合物および／または組成物の個々の用量の投与は、コンビナトリアル（例えば、相乗）効果が達成されるように、十分に一緒に近接した間隔となっている。
【０５９８】
改善：本明細書で使用されるとき、用語「改善」または「改善すること」は、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度を低下させることを指す。例えば、神経変性障害の文脈において、改善は、ニューロン喪失の低減または安定化を含む。
【０５９９】
動物：本明細書で使用されるとき、用語「動物」は、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態において、「動物」は、発達の任意のステージにあるヒトを指す。一部の実施形態において、「動物」は、発達の任意のステージにある非ヒト動物を指す。特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、齧歯動物、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類、またはブタ）である。一部の実施形態において、動物は、限定はされないが、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、および蠕虫を含む。一部の実施形態において、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作動物、またはクローンである。
【０６００】
およそ：本明細書で使用されるとき、１つ以上の目的の値に適用される用語「およそ」または「約」は、言及された参照値に類似である値を指す。特定の実施形態において、用語「およそ」または「約」は、別段に示されない限り、または文脈から明らかでない限り、言及された参照値のいずれかの方向で（より大きいかまたは小さい）、２５％以内、２０％以内、１９％以内、１８％以内、１７％以内、１６％以内、１５％以内、１４％以内、１３％以内、１２％以内、１１％以内、１０％以内、９％以内、８％以内、７％以内、６％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、０．５％以内、０．２５％以内、０．１％以内、またはそれ以下に入る値の範囲を指す（ただし、かかる数が可能な値の１００％を超える場合を除く）。
【０６０１】
生物学的に活性：本明細書で使用されるとき、語句「生物学的に活性」は、生物システムおよび／または生物において活性を有する任意の物質（例えば、ＡＡＶ）の特徴を指す。例えば、生物に投与された際に、その生物に対して生物学的効果を有する物質は、生物学的に活性であるとみなされる。特定の実施形態において、本開示の化合物および／または組成物は、その一部分が、生物学的に活性である、または生物学的に関連性があるとみなされる活性を模倣する場合でさえも、生物学的に活性であるとみなされ得る。一部の実施形態において、生物学的活性は、フラタキシンまたはそのバリアントの発現を誘導することを指す。一部の実施形態において、生物学的活性は、フラタキシンの発現の減少、またはフラタキシンの量および／もしくは機能の不足に関連する疾患の予防および／または治療を指す。一部の実施形態において、生物学的活性は、フリードライヒ運動失調症の予防および／または治療を指す。
【０６０２】
生物システム：本明細書で使用されるとき、用語「生物システム」は、細胞膜、細胞内コンパートメント、細胞、組織、臓器、臓器システム、多細胞生物、または任意の生物学的実体内において、ある特定の生物学的タスクを一緒に行うように機能する、臓器、組織、細胞、細胞内成分、タンパク質、核酸、分子（限定はされないが、生体分子を含む）の群を指す。一部の実施形態において、生物システムは、細胞内および／または細胞外の細胞シグナル伝達生体分子を含む、細胞シグナル伝達経路である。一部の実施形態において、生物システムは、細胞外／細胞マトリックスおよび／または細胞ニッチ内の成長因子シグナル伝達事象を含む。
【０６０３】
カプシド：本明細書で使用されるとき、用語「カプシド」は、ウイルスにおけるタンパク質の殻を指す。カプシドは、幾つかのカプシドタンパク質（例えば、ＡＡＶのＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３）からなる。カプシドはウイルスの遺伝物質を封入する。カプシドは、野生型カプシドであってもよく、組換えもしくは操作されたカプシドであってもよい。
【０６０４】
中枢神経系またはＣＮＳ：本明細書で使用されるとき、「中枢神経系」または「ＣＮＳ」とは、神経系の２つの主要な細分類のうちの１つを指し、脊椎動物においては、脳および脊髄を含む。中枢神経系は、神経系全体の活動をコーディネートする。
【０６０５】
頸部領域：本明細書で使用されるとき、「頸部領域」とは、頸椎Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、およびＣ８を含む脊髄の領域を指す。
Ｃｉｓエレメント：本明細書で使用されるとき、ｃｉｓエレメントまたは同義語「ｃｉｓ調節エレメント」とは、近傍の遺伝子の転写を調節する非コードＤＮＡ領域を指す。ラテン語の接頭辞「ｃｉｓ」は「こちら側（ｏｎ  ｔｈｉｓ  ｓｉｄｅ）」と翻訳される。ｃｉｓエレメントは、それが調節する１つ以上の遺伝子の近傍で見出される。ｃｉｓエレメントの例としては、Ｋｏｚａｋ配列、ＳＶ４０イントロン、またはその骨格の一部が挙げられる。
【０６０６】
ＣＮＳ組織：本明細書で使用されるとき、「ＣＮＳ組織」とは、中枢神経系の組織であって、脊椎動物においては、脳および脊髄ならびにその部分構造を含む組織を指す。
ＣＮＳ構造：本明細書で使用されるとき、「ＣＮＳ構造」とは、中枢神経系の構造およびその部分構造を指す。脊髄内の構造の非限定的な例としては、前角、後角、白質、および神経系経路または内部の核が挙げられ得る。脳内の構造の非限定的な例としては、前脳、中脳、後脳、間脳、終脳、髄脳、後脳胞、中脳胞、前脳胞、菱脳胞、皮質、前頭葉、頭頂葉、側頭葉、後頭葉、大脳、視床、視床下部、蓋、被蓋、小脳、脳橋、髄質、扁桃腺、海馬、基底神経節、脳梁、下垂体、被殻、線条体、室、およびそれらの部分構造が挙げられる。
【０６０７】
ＣＮＳ細胞：本明細書で使用されるとき、「ＣＮＳ細胞」とは、中枢神経系およびその部分構造の細胞を指す。ＣＮＳ細胞の非限定的な例としては、ニューロンおよびそのサブタイプ、グリア、ミクログリア、オリゴデンドロサイト、上衣細胞、ならびにアストロサイトが挙げられる。ニューロンの非限定的な例としては、感覚ニューロン、運動ニューロン、介在ニューロン、単極細胞、双極細胞、多極細胞、擬似単極細胞、錐体細胞、バスケット細胞、星状細胞、プルキンエ細胞、ベッツ細胞、アマクリン細胞、顆粒細胞、卵形細胞、中型有棘ニューロン、および大型有棘ニューロンが挙げられる。
【０６０８】
コドン最適化：本明細書で使用されるとき、用語「コドン最適化」とは、遺伝子によってコードされるポリペプチド配列が同一性を維持しながら、変化したコドンが当該ポリペプチド配列の発現プロセスを改善するような様式で、所与の遺伝子のコドンを変更するプロセスを指す。例えば、ポリペプチドがヒトタンパク質配列のポリペプチドであり、大腸菌で発現させる場合、コドン最適化をそのＤＮＡ配列に対して行い、ヒトコドンを大腸菌での発現により効果的なコドンに変化させると、発現が改善されることが多いであろう。
【０６０９】
組成物：本明細書で使用されるとき、用語「組成物」は、ＡＡＶポリヌクレオチド、ＡＡＶゲノムまたはＡＡＶ粒子と、少なくとも１つの賦形剤とを含む。
化合物：本明細書で使用されるとき、用語「化合物」は、異なる化学的実体を指す。一部の実施形態において、特定の化合物は、１つ以上の異性体または同位体形態（限定はされないが、立体異性体、幾何異性体、および同位体を含む）で存在してもよい。一部の実施形態において、化合物は、単一のかかる形態のみで提供または利用される。一部の実施形態において、化合物は、２つ以上のかかる形態の混合物（限定はされないが、立体異性体のラセミ混合物を含む）として、提供または利用される。一部の化合物が、異なるかかる形態で存在し、異なる特性および／または活性（限定はされないが、生物学的活性を含む）を示すことが、当業者には理解される。かかる事例において、本開示に従って使用するための化合物の特定の形態を選択または回避することは、当業者の技能の範囲内である。例えば、非対称置換された炭素原子を含有する化合物は、光学的に活性な形態またはラセミ形態で単離することができる。ラセミ混合物の分解または立体選択的合成によるものなど、光学的に活性な出発材料から、光学的に活性な形態を調製する方法は、当該技術分野において公知である。
【０６１０】
保存されている：本明細書で使用されるとき、用語「保存されている」は、比較されている２つ以上の配列の同じ位置に変更されずに生じる、ポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列の、それぞれ、ヌクレオチドまたはアミノ酸残基を指す。比較的保存されているヌクレオチドまたはアミノ酸は、配列中の別の箇所に出現するヌクレオチドまたはアミノ酸よりも、より関連する配列間で保存されているものである。
【０６１１】
一部の実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに１００％同一である場合に、「完全に保存されている」と言われる。一部の実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合に、「高度に保存されている」と言われる。一部の実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％、または約９９％同一である場合に、「高度に保存されている」と言われる。一部の実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、または少なくとも９５％同一である場合に、「保存されている」と言われる。一部の実施形態において、２つ以上の配列は、それらが互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、または約９９％同一である場合に、「保存されている」と言われる。配列の保存は、オリゴヌクレオチドもしくはポリペプチドの全長に適用され得るか、または、その一部分、領域、もしくは特徴に適用され得る。
【０６１２】
一実施形態において、保存されている配列は、連続していない。当業者であれば、連続的アラインメントにおけるギャップが配列の間に存在する場合にアラインメントを達成する方法、および挿入または欠失が存在するにもかかわらず、対応する残基をアラインメントする方法を、理解することができる。
【０６１３】
送達：本明細書で使用されるとき、「送達」は、パルボウイルス、例えば、ＡＡＶ化合物、物質、実体、部分、カーゴ、またはペイロードを標的に送達する動作または方式を指す。かかる標的は、細胞、組織、臓器、生物、またはシステム（生物学的もしくは製品に関係なく）であってもよい。
【０６１４】
送達剤：本明細書で使用されるとき、「送達剤」は、少なくとも部分的に、ターゲティングされる細胞への、１つ以上の物質（限定はされないが、本開示の化合物および／もしくは組成物、例えば、ウイルス粒子もしくはＡＡＶベクターを含む）の送達を容易にする、任意の薬剤または物質を指す。
【０６１５】
送達経路：本明細書で使用されるとき、用語「送達経路」および同義の用語「投与経路」は、治療剤を対象にもたらす異なる方法のいずれかを指す。投与経路は、物質が適用される場所により一般に分類され、作用の標的がある場所に基づき分類されてもよい。例としては、静脈内投与、皮下投与、経口投与、非経口投与、経腸投与、局所投与、舌下投与、吸入投与、および注射投与、または本明細書において記載される他の投与経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０６１６】
誘導体：本明細書で使用されるとき、用語「誘導体」は、親組成物からもたらされるか、または親組成物においてその基礎を見出す組成物（例えば、配列、化合物、製剤など）を指す。親組成物の非限定的な例は、野生型もしくはオリジナルのアミノ酸または核酸配列、あるいは希釈されていない製剤を含む。一部の実施形態では、誘導体は、親組成物のバリアントである。誘導体は、約１％未満、約５％未満、約１０％未満、約１５％未満、約２０％未満、約２５％未満、約３０％未満、約３５％未満、約４０％未満、約４５％未満、または約５０％未満、親組成物と異なってもよい。特定の実施形態では、誘導体は、約５０％より多く、親組成物と異なってもよい。特定の実施形態では、誘導体は、約７５％より多く、親組成物と異なってもよい。一部の実施形態では、誘導体は、親アミノ酸またはヌクレオチド配列の断片またはトランケーションであってもよい。非限定的な例として、誘導体は、親核酸またはアミノ酸配列と比較してヌクレオチドまたはペプチドインサートを有する配列（例えば、ＡＡＶ９と比較したＡＡＶＰＨＰ．Ｂ）であってもよい。
【０６１７】
有効量：本明細書で使用されるとき、用語、薬剤の「有効量」は、例えば、対象または細胞への単回または複数回の用量の投与の際に、障害の１つ以上の症状の治癒、軽減、緩和、または改善において有益なまたは所望の結果をもたらすために十分な量であり、したがって、「有効量」は、それが適用されるコンテクストに依存する。例えば、ＦＡを治療する薬剤を投与するコンテクストでは、薬剤の有効量は、例えば、その薬剤の投与なしで得られる応答と比較して、本明細書に定義される通りのＦＡの治療を達成するために十分な量である。
【０６１８】
操作されている：本明細書で使用されるとき、本開示の実施形態は、出発点、野生型、または天然の分子から構造的であるか化学的であるかにかかわらず、変化した特徴または特性を有するように設計されている場合、「操作されている」。したがって、操作された薬剤または実体は、その設計および／または産生が、人間の手による行為を含むものである。
【０６１９】
発現：本明細書で使用されるとき、核酸配列の「発現」は、以下の事象のうちの１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の産生（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、および／もしくは３’末端プロセシングによる）；（３）ＲＮＡのポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳；（４）ポリペプチドもしくはタンパク質のフォールディング；ならびに／または（５）ポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾。
【０６２０】
賦形剤：本明細書で使用されるとき、用語「賦形剤」は、活性な医薬剤または他の活性物質のためのビヒクルまたは媒体として働く不活性な物質を指す。
製剤：本明細書で使用されるとき、「製剤」は、本開示の少なくとも化合物および／または組成物（例えば、ベクター、ＡＡＶ粒子など）、ならびに送達剤を含む。
【０６２１】
断片：「断片」は、本明細書で使用されるとき、全体のうちの連続した一部分を指す。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離した完全長タンパク質を消化することによって得られるポリペプチドを含んでもよい。一部の実施形態において、タンパク質の断片は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、またはそれ以上のアミノ酸を含む。断片はまた、タンパク質のトランケーション（例えば、Ｎ末端および／もしくはＣ末端のトランケーション）または核酸のトランケーション（例えば、５’および／もしくは３’末端における）を指してもよい。タンパク質断片は、核酸が、全長タンパク質の一部をコードするように、切断された核酸の発現により得られてもよい。
【０６２２】
遺伝子発現：用語「遺伝子発現」は、核酸配列が首尾よく転写およびほとんどの場合は翻訳を受けて、タンパク質またはペプチドを産生する過程を指す。明確にするため、「遺伝子発現」の測定に言及する場合、これは、測定が、核酸転写産物、例えばＲＮＡもしくはｍＲＮＡ、またはアミノ酸翻訳産物、例えばポリペプチドもしくはペプチドの測定であり得ることを意味するものと理解されたい。ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ポリペプチド、およびペプチドの量またはレベルを測定する方法は当該技術分野において周知である。
【０６２３】
相同性：本明細書で使用されるとき、用語「相同性」は、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）間ならびに／またはポリペプチド分子間の全般的な関連性を指す。一部の実施形態において、ポリマー分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一または類似である場合に、互いに「相同」であるとみなされる。用語「相同」は、必然的に、少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列）間の比較を指す。本開示に従って、２つのポリヌクレオチド配列は、それらがコードするポリペプチドが、少なくとも約２０個のアミノ酸の少なくとも１つのストレッチに関して、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または更には９９％同一である場合に、相同であるとみなされる。一部の実施形態において、相同的なポリヌクレオチド配列は、少なくとも４〜５個の固有に指定されるアミノ酸のストレッチをコードする能力によって特徴付けられる。６０ヌクレオチド長未満のポリヌクレオチド配列については、相同性は、典型的に、少なくとも４〜５個の固有に指定されるアミノ酸のストレッチをコードする能力によって決定される。本開示に従って、２つのタンパク質配列は、タンパク質が、少なくとも約２０個のアミノ酸の少なくとも１つのストレッチについて、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％同一である場合に、相同であるとみなされる。多数の実施形態において、相同的なタンパク質は、大きな全般的な相同性の程度、および少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、またはそれ以上のアミノ酸の少なくとも１つの短いストレッチにわたる高い程度の相同性を示してもよい。多数の実施形態において、相同的なタンパク質は、１つ以上の特徴的な配列エレメントを共有している。本明細書で使用されるとき、用語「特徴的な配列エレメント」は、関連するタンパク質に存在するモチーフを指す。一部の実施形態において、かかるモチーフの存在は、特定の活性（例えば、生物学的活性）と相関する。
【０６２４】
ヒト化：本明細書で使用されるとき、用語「ヒト化」は、その対応するヒト配列に対するその類似性を増加させるように変更されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドの非ヒト配列を指す。
【０６２５】
同一性：本明細書で使用されるとき、用語「同一性」は、ポリマー分子間、例えば、オリゴヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）間ならびに／またはポリペプチド分子間の全般的な関連性を指す。２つのポリヌクレオチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、２つの配列を最適な比較の目的でアラインメントすることによって、行ってもよい（例えば、ギャップが、最適なアラインメントのために、第１および第２の核酸配列の一方または両方に導入することができ、非同一配列は比較目的で無視することができる）。特定の実施形態において、比較目的のためにアラインメントした配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％である。次いで、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドが比較される。第１の配列における位置が、第２の配列における対応する位置と同じヌクレオチドによって占有されている場合、分子はその位置において同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、それらの配列によって共有される同一な位置の数の関数であり、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮する。２つの配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、レスクＡ．Ｍ．（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．）編、オックスフォード・ユニバーシティ・プレス（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、スミスＤ．Ｗ．（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．）編、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９３年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、フォン  ヘインジェＧ．（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．）、アカデミックプレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ、グリフィンＡ．Ｍ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．）およびグリフィンＨ．Ｇ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．）編、ヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）、１９９４年；ならびにＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ、グリブスコフＭ．（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．）およびデヴェルーＪ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）編、Ｍストックトンプレス（Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９１年に記載されるものなどの方法を使用して、決定することができる。これらの各々は、本明細書においてその全体として参照により援用される。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、例えば、アライン（ＡＬＩＧＮ）プログラム（バージョ��２．０）に組み込まれているマイヤーズ（Ｍｅｙｅｒｓ）およびミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）（ＣＡＢＩＯＳ、１９８９年、４：ｐ．１１〜１７）のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０の重み付け残基表、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップペナルティ４を使用して決定することができる。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、代替として、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用し、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおいてＧＡＰプログラムを使用して決定することができる。配列間の同一性パーセントを決定するために一般的に用いられる方法としては、限定はされないが、カリロＨ．（Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．）およびリップマンＤ．（Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．）、ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．、第４８号：ｐ．１０７３（１９８８年）に開示されているものが挙げられ、これは本明細書において全体として参照により援用される。同一性を決定するための技法は、公的に利用可能なコンピュータプログラムにおいて成文化されている。２つの配列間の相同性を決定するためのコンピュータソフトウェアとしては、限定はされないが、ＧＣＧプログラムパッケージ、（デヴェルーＪ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）ら、Ｎｕｃｅｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第１２巻（第１号）、ｐ．３８７、１９８４年）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（アルチュルＳ．Ｆ．（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．）ら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌ．、第２１５巻、ｐ．４０３（１９９０年））が挙げられる。
【０６２６】
インビトロ：本明細書で使用されるとき、用語「インビトロ」は、生物（例えば、動物、植物、または微生物）内ではなく、人工環境、例えば、試験管または反応槽内、細胞培養物中、ペトリ皿内等で起こる事象を指す。
【０６２７】
インビボ：本明細書で使用されるとき、用語「インビボ」は、生物（例えば、動物、植物、もしくは微生物、またはその細胞もしくは組織）内で起こる事象を指す。
単離された：本明細書で使用されるとき、用語「単離された」は、「分離された」と同義であるが、分離が人間の手によって行われたという推測を含意する。用語「単離された」および「実質的に単離された」は、本明細書において互換性があるように使用される。単離された物質または実体は、それらが以前に関連付けられていた（天然または実験設定のいずれか）成分の少なくとも一部から部分的または全体的に分けられたものである。単離された物質は、それが会合していた物質に関して、様々なレベルの純度を有してもよい。単離された物質および／または実体は、それが最初に会合していた他の成分のうちの少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、またはそれ以上から分離されていてもよい。一部の実施形態において、単離された薬剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％より高く、または約９９％を上回って純粋である。
【０６２８】
腰部領域：本明細書で使用されるとき、用語「腰部領域」は、腰椎Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、およびＬ５を含む脊髄の領域を指す。
改変された（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ）：本明細書で使用されるとき、用語「改変された」は、親または参照の分子または実体と比較して変化した、分子または実体の状態または構造を指す。分子は、化学的、構造的、および機能的なものを含めて、多くの様式で改変されてもよい。一部の実施形態において、本開示の化合物および／または組成物は、非天然アミノ酸または非天然ヌクレオチドの導入によって改変される。
【０６２９】
突然変異：本明細書で使用されるとき、用語「突然変異」は、変化および／または変更を指す。一部の実施形態において、突然変異は、タンパク質（ペプチドおよびポリペプチドを含む）ならびに／または核酸（ポリ核酸を含む）に対する変化および／または変更であってもよい。一部の実施形態において、突然変異は、タンパク質および／または核酸配列に対する変化および／または変更を含む。かかる変化および／または変更は、１つ以上のアミノ酸（タンパク質および／もしくはペプチドの場合）ならびに／またはヌクレオチド（核酸および  もしくはポリ核酸の場合）の付加、置換、および  または欠失を含んでもよい。突然変異がアミノ酸および／またはヌクレオチドの付加および／または置換を含む実施形態において、かかる付加および／または置換は、１つ以上のアミノ酸および／またはヌクレオチド残基を含んでもよく、改変されたアミノ酸および／またはヌクレオチドを含んでもよい。１つまたは複数の変異は、「変異体」、「誘導体」、または「バリアント」、例えば、核酸配列またはポリペプチドもしくはタンパク質配列の「変異体」、「誘導体」、または「バリアント」をもたらしてもよい。
【０６３０】
天然に存在する：本明細書で使用されるとき、「天然に存在する」または「野生型」は、人工的な助け、または人の手という環境がない天然に存在することを意味する。「天然に存在する」または「野生型」は、生体分子、配列、または実体の天然形態を指してもよい。
【０６３１】
非ヒト脊椎動物：本明細書で使用されるとき、「非ヒト脊椎動物」は、野生種および家畜種を含む、ホモ・サピエンス以外の全ての脊椎動物を含む。非ヒト脊椎動物の例としては、限定はされないが、アルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、イヌ、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、水牛、およびヤクなどの哺乳動物が挙げられる。
【０６３２】
核酸：本明細書で使用されるとき、用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」、および「オリゴヌクレオチド」は、ポリデオキシリボヌクレオチド（２−デオキシ−Ｄ−リボースを含有する）もしくはポリリボヌクレオチド（Ｄ−リボースを含有する）のいずれか、あるいは、プリンもしくはピリミジン塩基のＮグリコシド、または改変されたプリンもしくはピリミジン塩基である、任意の他の種類のポリヌクレオチドで構成される、任意の核酸ポリマーを指す。用語「核酸」、「ポリヌクレオチド」、および「オリゴヌクレオチド」の間で長さの区別は意図されず、これらの用語は互換性があるように使用される。これらの用語は、分子の一次構造のみを指す。したがって、これらの用語は、二本鎖および一本鎖のＤＮＡ、ならびに二本鎖および一本鎖のＲＮＡを含む。
【０６３３】
作動可能に連結された：本明細書で使用されるとき、語句「作動可能に連結された」は、２つ以上の分子、コンストラクト、転写物、実体、部分などの間の機能的接続を指す。
粒子：本明細書で使用されるとき、「粒子」は、少なくとも２つの成分、タンパク質カプシドおよびカプシド内に封入されたポリヌクレオチド配列から構成されるウイルスである。
【０６３４】
患者：本明細書で使用されるとき、「患者」は、治療を求めていても、もしくは必要としていてもよい対象、治療を必要としている対象、治療を受けている対象、治療を受けるであろう対象、または、特定の疾患もしくは状態について訓練された（例えば、資格のある）専門家によるケアを受けている対象を指す。
【０６３５】
ペイロード：本明細書で使用されるとき、「ペイロード」または「ペイロード領域」は、ウイルスゲノムによりコードされるもしくはウイルスゲノム内の１つもしくは複数のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド領域、またはかかるポリヌクレオチドもしくはポリヌクレオチド領域、例えば、導入遺伝子、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの発現産物を指す。
【０６３６】
ペイロードコンストラクト：本明細書で使用されるとき、「ペイロードコンストラクト」は、一方または両方に末端逆位反復（ＩＴＲ）配列が隣接している、ペイロードをコードするまたは含む１つ以上のポリヌクレオチド領域である。ペイロードコンストラクトは、ウイルス産生細胞において複製されてウイルスゲノムを産生する鋳型である。
【０６３７】
ペイロードコンストラクトベクター：本明細書で使用されるとき、「ペイロードコンストラクトベクター」は、ペイロードコンストラクト、ならびに細菌細胞における複製および発現のための制御性領域をコードするまたは含むベクターである。ペイロードコンストラクトベクターはまた、ウイルス複製細胞におけるウイルス発現のための構成要素を含んでもよい。
【０６３８】
ペプチド：本明細書で使用されるとき、用語「ペプチド」は、約５０アミノ酸長、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは５０アミノ酸長未満またはそれと等しいアミノ酸鎖を指す。
【０６３９】
薬学的に許容可能：語句「薬学的に許容可能」は、本明細書では、妥当な医学的判断の範囲内にあり、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしでヒトおよび動物の組織と接触して使用するために適しており、妥当なリスク対効果比に相応の、化合物、材料、組成物、および／または剤形を指して用いられる。
【０６４０】
薬学的に許容可能な賦形剤：本明細書で使用されるとき、用語「薬学的に許容可能な賦形剤」は、本明細書で使用されるとき、医薬組成物中に存在し、対象において実質的に非毒性かつ非炎症性である特性を有する、活性剤（例えば、本明細書に記載されるもの）以外の任意の成分を指す。一部の実施形態において、薬学的に許容可能な賦形剤は、活性剤を懸濁および／または溶解させることができるビヒクルである。賦形剤としては、例えば、抗接着剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング剤、圧縮補助剤、崩壊剤、色素（着色剤）、エモリエント、乳化剤、充填剤（希釈剤）、フィルム形成剤またはコーティング剤、香味剤、香料、滑剤（流動増強剤）、潤沢剤、保存剤、印刷用インク、吸着剤、懸濁剤または分散剤、甘味剤、および水和の水を挙げることができる。賦形剤としては、限定はされないが、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、α化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロースナトリウム、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、および／またはキシリトールが挙げられる。
【０６４１】
薬学的に許容可能な塩：本明細書において記載される化合物の薬学的に許容可能な塩は、酸性または塩基性部分が、その塩形態（例えば、遊離塩基を適当な有機酸と反応させることにより、生成される）で存在する、開示された化合物の形態である。薬学的に許容可能な塩の例としては、限定はされないが、アミン類などの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられる。代表的な酸付加塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンカチオンが挙げられ、限定はされないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩は、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに無毒性のアンモニウム、四級アンモニウム、およびアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含むが、これらに限定されない、アミンカチオンを含む。薬学的に許容可能な塩は、従来の無毒性の塩、例えば、無毒性の無機酸または有機酸由来の従来の無毒性の塩を含む。一部の実施形態では、薬学的に許容可能な塩は、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から、従来の化学的方法により調製される。一般に、かかる塩は、遊離酸または塩基形態のこれらの化合物を、化学量論量の適切な塩基または酸と、水中もしくは有機溶媒中、または２つの混合物中で；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水溶液が使用される、反応させることにより、調製することができる。適当な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１７編、マック出版社（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、イーストン（Ｅ���ｓｔｏｎ）、ペンシルベニア州、１９８５、ｐ．１４１８、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄＵｓｅ、ピー  エッチ  シュタール（Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ）およびシー  ジー  ワームース（Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ）（編）、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００８、およびベルジュら（Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６、１−１９（１９７７）において見られ、その各々の内容全体を、本明細書に援用する。
【０６４２】
医薬組成物：本明細書で使用されるとき、用語「医薬組成物」または「薬学的に許容可能な組成物」は、ＡＡＶポリヌクレオチド、ＡＡＶゲノム、またはＡＡＶ粒子および１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤、溶媒、アジュバントなどを含む。
【０６４３】
ポリペプチド：本明細書で使用されるとき、用語「ポリペプチド」は、鎖における一緒に結合した多数のアミノ酸残基からなる有機ポリマーを指す。モノマータンパク質分子は、ポリペプチドである。
【０６４４】
予防すること：本明細書で使用されるとき、用語「予防すること」は、感染症、疾患、障害、および／もしくは状態の発症を部分的もしくは完全に遅延させること；特定の感染症、疾患、障害、および／もしくは状態の１つ以上の症状、特徴、もしくは臨床兆候の発症を部分的もしくは完全に遅延させること；特定の感染症、疾患、障害、および／もしくは状態の１つ以上の症状、特徴、もしくは兆候の発症を部分的もしくは完全に遅延させること；感染症、特定の疾患、障害、および／もしくは状態からの進行を部分的もしくは完全に遅延させること；ならびに／または、感染症、疾患、障害、および／もしくは状態と関連する病理を発生する危険性を減少させることを指す。
【０６４５】
プロモータ：本明細書で使用されるとき、用語「プロモータ」は、ポリメラーゼ酵素が、転写（ＤＮＡからＲＮＡ）または逆転写（ＲＮＡからＤＮＡ）を開始するために結合する核酸部位を指す。
【０６４６】
目的のタンパク質：本明細書で使用されるとき、用語「目的のタンパク質」または「所望のタンパク質」は、本明細書に提供されるもの、およびその断片、突然変異体、バリアント、または変更形態を含む。
【０６４７】
精製された：本明細書で使用されるとき、用語「精製する」は、実質的に純粋にするか、または１つもしくは複数の不所望の成分、物質汚染、混合もしくは不完全なものを取り除くことを意味する。「精製された」は、純粋である状態を指す。「精製」は、純粋にするプロセスを指す。本明細書で使用されるとき、物質は、１つまたは複数の成分、例えば、天然の環境において見られる１つまたは複数の成分を実質的に含まない（実質的に単離される）なら、それは「純粋」である。
【０６４８】
領域：本明細書で使用されるとき、用語「領域」は、区域または一般的な範囲を指す。一部の実施形態において、タンパク質またはタンパク質モジュールに言及する場合、領域は、タンパク質もしくはタンパク質モジュールに沿ったアミノ酸の線形配列を含んでもよく、または、三次元の範囲、エピトープ、および／もしくはエピトープのクラスターを含んでもよい。一部の実施形態では、領域は、末端領域を含む。本明細書で使用されるとき、用語「末端領域」は、所定の薬剤の端または末端に位置する領域を指す。タンパク質を指すとき、末端領域は、Ｎおよび／またはＣ末端を含んでもよい。Ｎ末端は、遊離アミノ基を有するアミノ酸を含むタンパク質の端を指す。Ｃ末端は、遊離カルボキシル基を有するアミノ酸を含むタンパク質の端を指す。Ｎおよび／またはＣ末端領域は、Ｎおよび／またはＣ末端ならびに周囲のアミノ酸を含んでもよい。一部の実施形態では、Ｎおよび／またはＣ末端領域は、約３個のアミノ酸〜約３０個のアミノ酸、約５個のアミノ酸〜約４０個のアミノ酸、約１０個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、約２０個のアミノ酸〜約１００個のアミノ酸および／または少なくとも１００個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、Ｎ末端領域は、Ｎ末端を含むが、Ｃ末端を含まない、任意の長さのアミノ酸を含んでもよい。一部の実施形態では、Ｃ末端領域は、Ｃ末端を含むが、Ｎ末端を含まない、任意の長さのアミノ酸を含んでもよい。
【０６４９】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドを指すとき、領域は、ポリヌクレオチドに沿った核酸の直線配列を含んでもよいか、または三次元範囲、二次構造、または三次構造を含んでもよい。一部の実施形態では、領域は、末端領域を含む。本明細書で使用されるとき、用語「末端領域」は、所定の薬剤の端または末端に見られる領域を指す。ポリヌクレオチドを指すとき、末端領域は、５’および３’末端を含んでもよい。５’末端は、遊離リン酸基を有する核酸を含むポリヌクレオチドの端を指す。３’末端は、遊離ヒドロキシル基を有する核酸を含むポリヌクレオチドの端を指す。そのため、５’および３’領域は、５’および３’末端ならびに周囲の核酸を含んでもよい。一部の実施形態では、５’および３’末端領域は、約９個の核酸〜約９０個の核酸、約１５個の核酸〜約１２０個の核酸、約３０個の核酸〜約１５０個の核酸、約６０個の核酸〜約３００個の核酸および／または少なくとも３００個の核酸を含んでもよい。一部の実施形態では、５’領域は、５’末端を含むが、３’末端を含まない、任意の長さの核酸を含んでもよい。一部の実施形態では、３’領域は、３’末端を含むが、５’末端を含まない、任意の長さの核酸を含んでもよい。
【０６５０】
ＲＮＡまたはＲＮＡ分子：本明細書で使用されるとき、用語「ＲＮＡ」または「ＲＮＡ分子」または「リボ核酸分子」は、リボヌクレオチドのポリマーを指し、用語「ＤＮＡ」または「ＤＮＡ分子」または「デオキシリボ核酸分子」は、デオキシリボヌクレオチドのポリマーを指す。ＤＮＡおよびＲＮＡは、例えば、それぞれＤＮＡの複製およびＤＮＡの転写によって、天然で合成することができるか、または化学的に合成することができる。ＤＮＡおよびＲＮＡは、一本鎖（すなわち、それぞれｓｓＲＮＡもしくはｓｓＤＮＡ）または多重鎖（例えば二本鎖、すなわち、それぞれｄｓＲＮＡおよびｄｓＤＮＡ）であることができる。用語「ｍＲＮＡ」または「メッセンジャーＲＮＡ」は、本明細書で使用されるとき、１本以上のポリペプチド鎖のアミノ酸配列をコードする一本鎖ＲＮＡを指す。
【０６５１】
試料：本明細書で使用されるとき、用語「試料」は、供給源から採取された、および／または分析もしくはプロセシングのために提供される、アリコート、サブセット、または一部分を指す。一部の実施形態において、試料は、組織、細胞、または成分部分（例えば、限定はされないが、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、羊水臍帯血、尿、膣液、および精液を含む、体液）などの生物学的供給源に由来する。一部の実施形態において、試料は、全生物、あるいは、限定はされないが、例えば、血漿、血清、脊髄液、リンパ液；皮膚、呼吸器、腸、および尿生殖管の外切片；涙液、唾液、乳、血液細胞、腫瘍、または臓器を含む、その組織、細胞、もしくは成分部分のサブセット、またはその画分もしくは一部分から調製された、ホモジネート、ライセート、または抽出物であるか、またはそれを含んでもよい。一部の実施形態において、試料は、タンパク質または核酸分子などの細胞成分を含有してもよい栄養培地またはゲルなどの培地であるか、またはそれを含む。一部の実施形態において、「一次」試料は供給源のアリコートである。一部の実施形態において、一次試料は、分析または他の使用のための試料を調製するために、１つ以上のプロセシング（例えば、分離、精製など）の工程に供される。
【０６５２】
血清型：本明細書で使用されるとき、用語「血清型」は、亜種レベルでのＡＡＶの疫学分類を可能にする表面抗原に基づく、ＡＡＶのカプシドにおける別個のバリエーションを指す。
【０６５３】
シグナル配列：本明細書で使用されるとき、語句「シグナル配列」は、輸送または局在化を誘導することができる配列を指す。
単一単位用量：本明細書で使用されるとき、「単一単位用量」は、１用量／１回／単一経路／単一接触点で、すなわち単一の投与イベントで投与される、任意の療法剤の用量である。一部の実施形態において、単一単位用量は、別個の剤形（例えば、錠剤、カプセル、パッチ、充填済みシリンジ、バイアルなど）として提供される。
【０６５４】
類似性：本明細書で使用されるとき、用語「類似性」は、ポリマー分子間、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）間ならびに／またはポリペプチド分子間の全般的な関連性を指す。ポリマー分子の互いに対する類似性パーセントの計算は、同一性パーセントの計算と同じ方式で行うことができるが、ただし、類似性パーセントの計算は、当該技術分野において理解される保存的置換を考慮に入れることを除く。
【０６５５】
安定：本明細書で使用されるとき、「安定」は、反応混合物から有用な程度の純度への単離に耐えるために十分に頑強であり、好ましくは有効な療法剤へと製剤化することができる、化合物または実体を指す。
【０６５６】
安定化された：本明細書で使用されるとき、用語「安定化する」、「安定化された」、「安定化された領域」は、安定にするまたは安定になることを意味する。一部の実施形態において、安定性は絶対値と比べて測定される。一部の実施形態において、安定性は参照の化合物または実体と比べて測定される。
【０６５７】
対象：本明細書で使用されるとき、用語「対象」または「患者」は、例えば、実験的、診断的、予防的、および／または治療的な目的で本開示に係る組成物を投与してもよい、任意の生物を指す。同様に、「対象」または「患者」は、治療を求めていてもよい生物、必要としていてもよい生物、治療を受けている生物、もしくは治療を受けるであろう生物、または、特定の疾患もしくは状態について訓練された専門家によるケアを受けている生物を指す。典型的な対象は、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、およびヒトなどの哺乳類）を含む。特定の実施形態では、対象または患者は、フリードライヒ運動失調を有することが疑われるか、または疑いがあってもよい。特定の実施形態では、対象または患者は、フリードライヒ運動失調と診断されていてもよい。
【０６５８】
実質的に：本明細書で使用されるとき、用語「実質的に」は、目的の特徴または特性の完全またはほぼ完全な程度または度合を呈する定性的状態を指す。生物学分野の当業者には、生物学的および化学的な現象が完全となるおよび／もしくは完全性へと進行する、または絶対的な結果を達成するもしくは回避することは、あったとしても稀であることを理解されるであろう。したがって、用語「実質的に」は、本明細書において、多くの生物学的および化学的な現象において固有の完全性の潜在的な欠如を捉えるために使用される。
【０６５９】
実質的に同等：本明細書で使用されるとき、用量間の時間的相違に関しての場合、この用語は、プラス／マイナス２％を意味する。
実質的に同時に：本明細書で使用されるとき、複数の用量に関しての場合、この用語は、典型的に、約２秒以内を意味する。
【０６６０】
罹患している：疾患、障害、および／または状態を「罹患している」個体は、疾患、障害、および／または状態を診断されている、またはその１つ以上の症状を呈する。
罹り易い：疾患、障害、および／または状態に「罹り易い」個体は、疾患、障害、および／または状態を診断されていない、および／またはその症状を呈さなくてもよいが、疾患またはその症状を発症する傾向を有する。一部の実施形態において、疾患、障害、および／または状態（例えば、がん）に罹り易い個体は、以下のうちの１つ以上によって特徴付けられてもよい：（１）疾患、障害、および／または状態の発症と関連する遺伝子突然変異；（２）疾患、障害、および／または状態の発症と関連する遺伝的多型；（３）疾患、障害、および／または状態と関連するタンパク質および／または核酸の発現および／または活性の増加および／または減少；（４）疾患、障害、および／または状態の発症と関連する習慣および／または生活様式；（５）疾患、障害、および／または状態の家族歴；ならびに（６）疾患、障害、および／または状態の発症と関連する微生物への曝露および／または感染。一部の実施形態において、疾患、障害、および／または状態に罹り易い個体は、疾患、障害、および／または状態を発症するであろう。一部の実施形態において、疾患、障害、および／または状態に罹り易い個体は、疾患、障害、および／または状態を発症しないであろう。
【０６６１】
合成：用語「合成」は、人間の手によって生成、調製、および／または製造されることを意味する。本開示のポリヌクレオチドもしくはポリペプチドまたは他の分子の合成は、化学的または酵素的であってもよい。
【０６６２】
ターゲティング：本明細書で使用されるとき、「ターゲティング」は、標的核酸にハイブリダイズして所望の効果を誘導するであろう核酸配列の設計および選択のプロセスを意味する。
【０６６３】
ターゲティングされる細胞：本明細書で使用されるとき、「標的細胞」または「ターゲティングされる細胞」は、任意の１つ以上の目的の細胞を指す。細胞は、インビトロ、インビボ、インサイチュ、または生物の組織もしくは臓器において見出されてもよい。生物は、動物、哺乳動物、ヒト、および／または患者であってもよい。標的細胞は、ＣＮＳ細胞またはＣＮＳ組織における細胞であってもよい。
【０６６４】
療法剤：用語「療法剤」は、対象に投与された際に、治療的、診断的、および／もしくは予防的な効果を有する、ならびに／または所望の生物学的および／もしくは薬理学的効果を誘発する、任意の薬剤を指す。
【０６６５】
治療有効量：本明細書で使用されるとき、用語「治療有効量」は、感染症、疾患、障害、および／または状態に罹患しているまたは罹り易い対象に投与された際に、感染症、疾患、障害、および／または状態を治療する、その症状を改善する、それを診断する、予防する、および／またはその発症を遅延させるために十分である、送達しようとする薬剤（例えば、核酸、薬物、療法剤、診断剤、予防剤など）の量を意味する。一部の実施形態において、治療有効量は単一用量で提供される。一部の実施形態において、治療有効量は、複数の用量を含む投薬レジメンで投与される。当業者には、一部の実施形態において、単位剤形は、かかる投薬レジメンの一部として投与された場合に有効である量を含む場合に、治療有効量の特定の薬剤または実体を含むとみなされてよいことが理解されよう。
【０６６６】
治療上有効な結果：本明細書で使用されるとき、用語「治療上有効な結果」は、感染症、疾患、障害、および／または状態に罹患しているまたは罹り易い対象において、感染症、疾患、障害、および／または状態を治療する、その症状を改善する、それを診断する、予防する、および／またはその発症を遅延させるために十分である結果を意味する。
【０６６７】
胸部領域：本明細書で使用されるとき、「胸部領域」は、胸椎Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４、Ｔ５、Ｔ６、Ｔ７、Ｔ８、Ｔ９、Ｔ１０、Ｔ１１、およびＴ１２を含む脊髄の領域を指す。
【０６６８】
治療すること：本明細書で使用されるとき、用語「治療すること」は、特定の感染症、疾患、障害、および／または状態の１つまたは複数の症状または特徴を、部分的または完全に軽減させる、改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ）、改善する（ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ）緩和させる、逆転させる、その発症を遅延させる、その進行を阻害する、その重症度を低減させる、および／またはその発生を低減させることを指す。治療は、疾患、障害、および／もしくは状態の兆候を呈さない対象、ならびに／または疾患、障害、および／もしくは状態の初期兆候のみを呈する対象に、疾患、障害、および／または状態と関連する病理を発症する危険性を減少させる目的で投与されてもよい。
【０６６９】
未修飾（Ｕｎｍｏｄｉｆｉｅｄ）：本明細書で使用されるとき、「未修飾」は、任意の様式で変化される前の任意の物質、化合物、または分子を指す。未修飾は、生体分子または実体の野生型または天然の形態を指してもよいが、必ずしもそうとは限らない。分子または実体は一連の修飾を受けてもよく、その場合、各々の修飾された製品は、後続の修飾の「未修飾」の出発分子または実体として役割を果たしてもよい。
【０６７０】
ベクター：本明細書で使用されるとき、「ベクター」は、異種分子を輸送する、形質導入する、またはその他担体として働く、任意の分子または部分である。本開示のベクターは組換えにより産生されてもよく、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）親または参照配列に基づいてもよい、および／またはそれを含んでもよい。かかる親または参照ＡＡＶ配列は、ベクターを操作するための元の、第２の、第３の、または後続の配列として働いてもよい。非限定的な例では、かかる親または参照ＡＡＶ配列は、次の配列：ポリペプチドまたは複数のポリペプチドをコードし、野生型であり得るか、または野生型から改変され得る、その配列が、全長または部分配列のタンパク質、タンパク質ドメイン、または１つもしくは複数のサブユニットのＦＸＮおよびそのバリアントをコードし得る配列を有するポリヌクレオチド配列；ＦＸＮおよびそのバリアントをコードし、野生型であるか、または野生型から改変されてもよい配列を有するポリヌクレオチド；ならびにＦＸＮおよび野生型配列から改変され得るか、またはできないそのバリアントをコードする導入遺伝子のいずれか１つまたは複数を含んでもよい。
【０６７１】
ウイルスコンストラクトベクター：本明細書で使用されるとき、「ウイルスコンストラクトベクター」は、Ｒｅｐおよび  またはＣａｐタンパク質をコードするまたは含む１つまたは複数のポリヌクレオチド領域を含むベクターである。ウイルスコンストラクトベクターはまた、ウイルス複製細胞におけるウイルス発現のための成分をコードするまたは含む１つまたは複数のポリヌクレオチド領域を含んでもよい。
【０６７２】
ウイルスゲノム：本明細書で使用されるとき、「ウイルスゲノム」または「ベクターゲノム」は、少なくとも１つの末端逆位配列（ＩＴＲ）および少なくとも１つのコードされたペイロードを含むポリヌクレオチドである。ウイルスゲノムは、少なくとも１つのコピーのペイロードをコードする。
【０６７３】
野生型：本明細書で使用されるとき、「野生型」は、生体分子、配列、または実体の天然形態である。
ＡＡＶ粒子の設計、調製、製造および／または製剤のための組成物、方法、プロセス、キットおよび装置が、本明細書において記載される。
【０６７４】
本開示の１つまたは複数の実施形態の詳細は、以下の付随する説明において記載される。本明細書において記載されるものと類似または均等な任意の物質および方法を、本開示の実施または試験において使用することができるが、物質および方法が、ここで記載される。
【０６７５】
本開示は、以下の非限定的な実施例により更に説明される。
【実施例】
【０６７６】
実施例１．プロモータバリアントの設計
Ａ．プロモータ
従前の研究は、ＣＭＶプロモータが、最も高いレベルのフラタキシン発現をもたらし、ＣＢＡが、発現をもたらすことに関しより低い有効性を示すことを示した。ＰＧＫおよびＦＸＮプロモータは、タンパク質発現をもたらすのにずっと弱いプロモータであることが示されている。どのプロモータがペイロードの最も高い発現（例えば、フラタキシンまたはルシフェラーゼ）をもたらすかを決定するために、ＣＭＶ、ＣＢＡおよびＦＸＮプロモータのバリアントを生成した。プロモータを、標準的な分子クローニング技術を使用して構築したルシフェラーゼ発現ベクターに挿入した。
【０６７７】
設計したプロモータを、上の表３に記載する。表３において、「サイトメガロウイルス」についてのＣＭＶ鎖、ＣＭＶ  ＩＥエンハンサー領域およびプロモータ領域を有し得る「ニワトリβ−アクチン」についてのＣＢＡ鎖、ＣＭＶエンハンサー、ＣＢＡプロモータ、およびウサギベータ−グロビンスプライス受容部位についてのＣＡＧ鎖、「フラタキシン」についてのＦＸＮ鎖、ならびにＣＢＡプロモータのバリアントについてのｍＣＢＡ鎖を、ＰＣＲを使用して生成した。
【０６７８】
操作されたプロモータバリアントの各々を、ゲル電気泳動により解析し、切断し（Ｓａｃ１およびＨｉｎｄＩＩＩ）、検証し、配列決定した。
Ｂ．プロモータのインビトロ評価
７種のフラタキシンプロモータバリアント、１５種のＣＢＡプロモータバリアントおよび８種のＣＭＶプロモータバリアントを、発現活性についてインビトロで評価した。ＨＥＫ２９３細胞を、９６ウェルプレートに播種し（３．０×１０４個の細胞／ウェル、ＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤトランスフェクション試薬１ウェル当たり０．３ｕｌを含む）、表３のプロモータおよびルシフェラーゼペイロード（ホタル（約７５ｎｇ）またはウミシイタケ（２５ｎｇ）のいずれか）を含むプラスミドを、二連または三連のいずれかでトランスフェクトした（５回のトランスフェクション）。トランスフェクションの４８時間後、ルシフェラーゼの活性および発現を、ＤＵＡＬ−ＧＬＯ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイシステムを使用して決定した。簡単に述べると、等しい体積のＤｕａｌ−Ｇｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼ試薬を、成長培地中の細胞に直接加え、１０分間インキュベーションし、次に、ホタルルシフェラーゼ発現について測定した。次に、同体積の試薬を加えて、ホタル発光をクエンチし、ウミシイタケルシフェラーゼ活性を１０分後に測定した。ｐＧＬ３−ｂａｓｉｃのプロモータのないベクターの対照を、対照として使用した。
【０６７９】
ホタルおよびウミシイタケルシフェラーゼ発現により決定したプロモータバリアントの活性を、表１８〜２０に示し、相対的光単位（ＲＬＵ）で定量する。表１８は、開始のＦＸＮ、ＣＢＡおよびＣＭＶプロモータバリアントについてのデータを示し、一方、表１９は、第二世代のＰＣＲにより生成したＣＢＡプロモータバリアントについてのデータを示す。表２０は、全てのプロモータバリアントが一緒に実行したデータを示す。
【０６８０】
【表１８】
2022500066.tif 000052
【０６８１】
【表１９】
2022500066.tif 000053
【０６８２】
【表２０】
2022500066.tif 000054
【０６８３】
プロモータの活性は、対照と比較して、０．４〜１２５倍の増加の範囲にあった。これは、最も低い発現を有するプロモータと最も高い発現をもたらすプロモータの間の活性における３２１倍の差である。ＣＭＶ（配列番号１７４３）プロモータが、最大の活性をもたらし、ＣＢＡ（配列番号１７３４）、ｍＣＢＡ（配列番号１７６０）、ＣＭＶ−Ｄ２（配列番号１７４５）、ＣＢＡ−Ｄ１（配列番号１７３５）、ＣＢＡ−Ｄ２（配列番号１７３６）、ＣＭＶ−Ｄ６（配列番号１７４９）、ｍＣＢＡ−Ｄ１（配列番号１７６１）、およびＣＭＶ−Ｄ４（配列番号１７４７）プロモータ各々が、ルシフェラーゼの発現の誘導において減少する有効性を示した。プロモータバリアントの全体的な活性ランキングは、以下の通りであり、最も高い発現を有するプロモータから、最小の活性を有するプロモータの順で列挙する：ＣＭＶ（配列番号１７４３）、ｍＣＢＡ（配列番号１７６０）、ＣＢＡ（配列番号１７３４）、ＣＭＶ−Ｄ２（配列番号１７４５）、ＣＭＶ−Ｄ１（配列番号１７４４）、ＣＢＡ−Ｄ１（配列番号１７３５）、ＣＢＡ−Ｄ２（配列番号１７３６）、ＣＭＶ−Ｄ６（配列番号１７４９）、ｍＣＢＡ−Ｄ１（配列番号１７６１）、ＣＭＶ−Ｄ４（配列番号１７４７）、ＣＭＶ−Ｄ５（配列番号１７４８）、ＣＭＶ−Ｄ３（配列番号１７４６）、ｍＣＢＡ−Ｄ３（配列番号１７６３）、ｍＣＢＡ−Ｄ２（配列番号１７６２）、ＣＢＡ−Ｄ５（配列番号１７３９）、ＣＢＡ−Ｄ６（配列番号１７４０）、ｍＣＢＡ−Ｄ６（配列番号１７６６）、ＣＢＡ−Ｄ３（配列番号１７３７）、ｍＣＢＡ−Ｄ５（配列番号１７６５）、ｍＣＢＡ−Ｄ４（配列番号１７６４）、ＣＢＡ−Ｄ４（配列番号１７３８）、ＣＢＡ−Ｄ７（配列番号１７４１）、ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）、ＣＭＶ−Ｄ８（配列番号１７５１）、ＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）、ｐＧＬ３−ＦＸＮｐｒｏ１３３６（配列番号１７５９）、ｐＧＬ３−ＦＸＮｐｒｏ１０６０（配列番号１７５６）、ｐＧＬ３−ＦＸＮｐｒｏ１２２６（配列番号１７５７）、ｐＧＬ３−ＦＸＮｐｒｏ５３４（配列番号１７５４）、ｐＧＬ３−ＦＸＮｐｒｏ３６３（配列番号１７５３）、ｐＧＬ３−ＦＸＮｐｒｏ２２３（配列番号１７５２）およびｐＧＬ３−ｂａｓｉｃ。
【０６８４】
これらの知見に基づき、１２種のプロモータバリアントを、更なる研究のため選択した。これらは、ＣＭＶ（配列番号１７４３）、ＣＢＡ（配列番号１７３４）、ＣＭＶ−Ｄ１（配列番号１７４４）、ｍＣＢＡ−Ｄ１（配列番号１７６１）、ＣＭＶ−Ｄ３（配列番号１７４６）、ｍＣＢＡ−Ｄ２（配列番号１７６２）、ＣＢＡ−Ｄ６（配列番号１７４０）、ＣＢＡ−Ｄ４（配列番号１７３８）、ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）、ＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）、ｐＧＬ３−ＦＸＮｐｒｏ１０６０（配列番号１７５６）、およびｐＧＬ３−ＦＸＮｐｒｏ５３４（配列番号１７５４）を含む。低、中、および高発現を示したプロモータを選択した。
【０６８５】
実施例２．フラタキシンをコードするペイロードコンストラクトの設計
フラタキシンタンパク質をコードする核酸配列を最小で含むペイロードコンストラクトを設計した。ペイロードコンストラクトを、標準的な分子クローニング技術を使用して構築した。ＦＸＮ−タグ導入遺伝子を、ＡＡＶ発現ベクターにクローニングし、得られたクローンを更に配列決定して、ＩＴＲ、プロモータ、およびタグのような全てのエレメントが正確であるかを確認した。
【０６８６】
カニクイザルフラタキシン（ｃＦＸＮ）ペイロードコンストラクトを構築するために、血球凝集素（ＨＡ）タグ付ｃＦＸＮ導入遺伝子を、ＡＡＶ２ゲノム由来の５’および３’ＩＴＲ配列（１４１個のヌクレオチド）、ＣＢＡ、ＣＭＶまたはＦＸＮプロモータ、ｈβグロビンイントロン領域、ｈＧＨポリ（Ａ）シグナルおよび肝臓脱ターゲティングのための３つのｍｉＲ−１２２結合部位（ｍｉＲ−１２２  ＢＳ）を含有するプラスミドにクローニングした。ＣＢＡ、ＣＭＶまたはＦＸＮプロモータの欠損バリアントを評価した。４５０ｂｐのヒトアルブミン配列（Ａｌｂ４５０）を、３種のコンストラクトにおけるフィラー配列として試験した（表４；ＩＴＲ〜ＩＴＲ配列を参照）。
【０６８７】
異なる配置を有するヒトフラタキシン（ｈＦＸＮ）ペイロードコンストラクトを構築するために、ＡＡＶ２ゲノム由来の５’および３’ＩＴＲ配列（１４１個のヌクレオチド）、ＣＢＡプロモータ、ｈβグロビンイントロン領域、ｈＦＸＮ遺伝子、およびｈＧＨポリ（Ａ）シグナルを含む開始コンストラクトを利用した。開始コンストラクト由来のその後のペイロードコンストラクトは、次の４種のプロモータ欠損バリアント：ＣＢＡ−Ｄ８、ＣＭＶ、ＣＭＶ−Ｄ７、およびＦＸＮｐｒｏ１０６０のうちの１つを含有していた。完全なゲノムサイズを有するために、フィラー（Ａｌｂ１３８４、Ａｌｂ１８５６、Ａｌｂ４５０、Ａｌｂ２２６６、Ａｌｂ２３３５、Ａｌｂ１７８５、Ａｌｂ２２６４、またはＡｌｂ１３１３）として働くヒトアルブミンを選択し、その後のペイロードコンストラクトに加えた。肝臓脱ターゲティングのためのｍｉＲ−１２２結合部位（ｍｉＲ−１２２  ＢＳ）を有するか、または有さない、フィラー配列を含有するヒトフラタキシンコンストラクトを構築した（表４を参照）。
【０６８８】
ペイロードコンストラクトを含有するプラスミドを、表４に記載する。これらのペイロードコンストラクトは、ベクター骨格、ＡＡＶ２ゲノム由来の５’および３’ＩＴＲ配列（１４１個のヌクレオチド）、ヒトβ−グロビン（ｈβグロビン）イントロン領域、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリ（Ａ）シグナルを含み、次の成分：ＣＢＡ、ｍＣＢＡ、ＣＭＶ、またはＦＸＮプロモータもしくはその欠損バリアント；カニクイザルフラタキシン（ｃＦＸＮ）またはヒトフラタキシン（ｈＦＸＮ）遺伝子；血球凝集素（ＨＡ）タグ；３つのｍｉＲ−１２２結合部位（ＢＳ）；およびヒトアルブミン遺伝子由来の様々な長さのフィラー配列も含んでもよい。ｈβグロビンイントロン領域は、前初期タンパク質１（ｉｅ１）エキソン１、部分ｉｅ１イントロン、ｈβグロビンイントロン２およびｈβグロビンエキソン３を含む。ＩＴＲ配列間の成分を、表４において５’から３’で提示する。
【０６８９】
コンストラクトＩＴＲ〜ＩＴＲ配列を、配列決定により確認し、配列番号１７７８〜１８０４として与えた。
実施例３．ｃＦＸＮコンストラクトおよびその成分の検証
Ａ．プロモータバリアントおよびｈβグロビンイントロンの同定
ＣＭＶ、ＣＢＡ、およびＦＸＮプロモータバリアントがもたらした操作されたｃＦＸＮコンストラクトにおけるプロモータおよびｈβグロビンイントロン領域を検証するために、コンストラクトを、高忠実度の制限酵素ＭｌｕＩ−ＨＦおよびＡｇｅＩ−ＨＦで切断した。二重切断により、プロモータおよびｈβグロビンイントロン領域からなる切断産物が生じる。切断した試料を、アガロースゲル電気泳動により解析した。試験したバリアントは、ｃＦＸＮ１−ｃＦＸＮ１８（配列番号１７７８〜１７９５）を含んでいた。ゲルにより、プロモータバリアントのサイズに対応するパターンを有するバンドが明らかになった。
【０６９０】
Ｂ．ｍｉＲ−１２２およびｈＧＨポリ（Ａ）の同定
ＣＭＶ、ＣＢＡ、およびＦＸＮプロモータバリアントがもたらした操作されたｃＦＸＮコンストラクトにおけるｍｉＲ−１２２およびｈＧＨポリ（Ａ）領域を検証するために、コンストラクトを、制限酵素ＸｈｏＩおよびＣｌａＩで切断した。二重切断により、ｍｉＲ−１２２結合部位、ｈＧＨポリ（Ａ）配列およびある場合には、フィラー配列からなる切断産物が生じる。切断した試料を、アガロースゲル電気泳動により解析した。試験したバリアントは、ｃＦＸＮ１−ｃＦＸＮ１８（配列番号１７７８〜１７９５）を含んでいた。ｍｉＲ−１２２およびｈＧＨポリ（Ａ）領域に対応するバンドを、大部分のコンストラクトにおいて検出した。ｍｉＲ−１２２配列を欠くバリアントは、ｍｉＲ−１２２配列を有するコンストラクトと比較して、より小さいバンドを示した。フィラー配列を有するバリアントは、より大きいバンドを示し、これにより、フィラーの存在を確認した。
【０６９１】
Ｃ．ＩＴＲの同定
ＣＭＶ、ＣＢＡ、およびＦＸＮプロモータバリアントがもたらした操作されたｃＦＸＮコンストラクトにおける末端逆位配列（ＩＴＲ）を検証するために、コンストラクトを、制限酵素ＸｍａＩまたはＭｓｃＩで個別に切断した。ＸｍａＩとＭｓｃＩの両方が、ＩＴＲ内およびコンストラクトにおける１つの追加部位で切断する。切断した試料を、アガロースゲル電気泳動により解析した。試験したバリアントは、ｃＦＸＮ１−ｃＦＸＮ１８（配列番号１７７８〜１７９５）を含んでいた。両方のゲルにより、全てのコンストラクトにおける３つの切断産物が明らかになり、これにより、ＩＴＲの存在を確認した。
【０６９２】
実施例４．哺乳類細胞におけるｃＦＸＮコンストラクトの産生
ｃＦＸＮコンストラクト（配列番号１７７８〜１７９５）を使用して、ＨＥＫ−２９３ＴまたはＨｕｈ７細胞にトランスフェクトした。トランスフェクションを、１ウェル当たりおよそ１．５×１０５個の細胞を有する１２ウェルプレートにおいて行った。細胞を、ｃＦＸＮコンストラクト１．０μｇ、ＥＧＦＰ遺伝子を含有する対照プラスミド１．０μｇ、およびＦＵＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤトランスフェクション試薬（プロメガ株式会社（Ｐｒｏｍｅｇａ）、マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ）、ウィスコンシン州）４．０μｌとインキュベーションした。トランスフェクションの７２時間後、細胞を、ＥＧＦＰ発現について蛍光顕微鏡により解析した。ＥＧＦＰプラスミド単独をトランスフェクトした細胞は、蛍光を示し、陽性対照として働き、一方、トランスフェクトしていない細胞は、陰性対照として働き、蛍光を示さなかった。様々なコンストラクトは、類似のレベルのＥＧＦＰ発現を示し、これにより、効果的なトランスフェクションを示した。次に、細胞を、その後の解析のためＲＮＡおよびタンパク質抽出に供した。
【０６９３】
実施例５．ｈβグロビンイントロンスプライシングの検出
フォワードプライマーおよびリバースプライマーを使用して、ｈβグロビンイントロンおよびｃＦＸＮコンストラクト由来のｃＦＸＮ−ＨＡ導入遺伝子配列をカバーする断片を増幅した。ＰＣＲ反応を行い、産物を、アガロースゲル電気泳動により解析した。全てのコンストラクトは、ｈβグロビンイントロンを保持する断片に対応する同一のバンドを示した。
【０６９４】
ｃＤＮＡを、トランスフェクトしたＨＥＫ−２９３ＴまたはＨｕｈ７細胞から抽出したＲＮＡからの逆転写により合成した。ｃＤＮＡ鋳型を用いたＰＣＲ反応を繰り返し、産物を、アガロースゲル電気泳動により解析した。ｃＤＮＡ反応により、コンストラクトから直接増幅した断片と比較して、より小さい断片が生じた。サイズ差は、ｉｅ１イントロンおよびｈβグロビンイントロン２の長さと合致した。結果は、トランスフェクション後のｈβグロビンイントロンの良好なスプライシングを示した。
【０６９５】
実施例６．ＨＥＫ−２９３ＴおよびＨｕｈ７細胞におけるｃＦＸＮタンパク質の発現
Ａ．ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞
異なるｃＦＸＮコンストラクトの導入後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるｃＦＸＮ（配列番号１７７８〜１７９５）の発現を、ウェスタンブロットによって検出した。総タンパク質を、ｃＦＸＮ１−ｃＦＸＮ１８を含む異なるｃＦＸＮコンストラクト（配列番号１７７８〜１７９５）をトランスフェクトしたＨＥＫ−２９３Ｔ細胞から抽出した。総タンパク質１０μｇを、各試料に添加した。ＧＡＰＤＨは、内部対照として働いた。ウェスタンブロットにより、３つの異なる種のｃＦＸＮタンパク質、すなわち、前駆体タンパク質（約２５ＫＤａ）、中間体タンパク質（約２０ＫＤａ）、および成熟タンパク質（約１５ＫＤａ）が明らかになった。ｃＦＸＮタンパク質は、ＥＧＦＰのみをトランスフェクトした細胞において検出されなかった。ほぼ全てのコンストラクトは、ｃＦＸＮ１７（配列番号１７９４）およびｃＦＸＮ１８（配列番号１７９５）を除く、ｃＦＸＮタンパク質のロバストな発現を示した。ｃＦＸＮ１１（配列番号１７８８）、ｃＦＸＮ１２（配列番号１７８９）、ｃＦＸＮ１３（配列番号１７９０）、ｃＦＸＮ１４（配列番号１７９１）は、最も高い発現を有していた。
【０６９６】
発現したｃＦＸＮタンパク質の量を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって定量した。総タンパク質２０ｎｇを、１つの群当たり使用した。ｃＦＸＮコンストラクトは、ｃＦＸＮを異なるレベルで発現し、ｃＦＸＮ発現のレベルは、ＣＢＡ／ＣＭＶ／ＦＸＮプロモータバリアントのプロモータ活性と高度に一致した。表２１は、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞において異なるｃＦＸＮコンストラクトが発現したｃＦＸＮタンパク質濃度を列挙する。
【０６９７】
【表２１】
2022500066.tif 000055
【０６９８】
Ｂ．Ｈｕｈ７細胞
異なるｃＦＸＮコンストラクトの導入後のＨｕｈ７細胞におけるｃＦＸＮの発現を、ウェスタンブロットによって検出した。総タンパク質を、ｃＦＸＮ１−ｃＦＸＮ１８を含む異なるｃＦＸＮコンストラクト（配列番号１７７８〜１７９５）をトランスフェクトしたＨｕｈ７細胞から抽出した。総タンパク質１０μｇを、各試料に添加した。ＧＡＰＤＨは、内部対照として働いた。ウェスタンブロットにより、３つの異なる種のｃＦＸＮタンパク質、すなわち、前駆体タンパク質（２５ＫＤａ）、中間体タンパク質（２０ｋＤａ）、および成熟タンパク質（１５ｋＤａ）が明らかになった。ｃＦＸＮタンパク質は、ＥＧＦＰのみをトランスフェクトした細胞において検出されなかった。小さいバンドは、ｍｉＲ−１２２結合部位を含有するコンストラクトをトランスフェクトした細胞において見られ、これは、ｍｉＲ−１２２が、肝細胞におけるｃＦＸＮタンパク質発現を有効に低減したことを示している。
【０６９９】
発現したｃＦＸＮタンパク質の量を、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって定量した。総タンパク質２０ｎｇを、コンストラクト毎に使用した。ｃＦＸＮコンストラクトは、ｃＦＸＮを異なるレベルで発現し、ｃＦＸＮ発現のレベルは、ＣＢＡ／ＣＭＶ／ＦＸＮプロモータバリアントのプロモータ活性と高度に一致した。ｍｉＲ−１２２結合部位を含有するコンストラクトをトランスフェクトした細胞は、非ｍｉＲ−１２２コンストラクトをトランスフェクトした細胞と比較して、より低いレベルのｃＦＸＮタンパク質を有意に示した。表２２は、Ｈｕｈ７細胞における異なるｃＦＸＮコンストラクトが発現したｃＦＸＮタンパク質濃度を列挙する。
【０７００】
【表２２】
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【０７０１】
実施例７．ｈＦＸＮ１コンストラクトのインビトロ試験
ｈＦＸＮ１（配列番号１７９６）を、プラスミドをＨＥＫ−２９３Ｔ細胞にパッケージングするＡＡＶ  ＰＨＰ．Ｂをコトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞の４つのディッシュを使用して、ＡＡＶ粒子を精製した。ＡＡＶ粒子を、ヨードキサノール勾配超遠心分離により精製した。精製した試料は、１Ｅ１２ｖｇ／ｍｌＡＡＶ粒子を含有していた。試料を、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ゲル泳動させ、続いて、導入遺伝子バンドを視覚化し、不純物についてチェックするための銀染色を行った。ゲルにより、同時精製したｈＦＸＮタンパク質が明らかになり、これにより、導入遺伝子のＡＡＶへの良好なパッケージングを確認した。
【０７０２】
感染（ＭＯＩ）の３つの異なるＡＡＶ多様性を利用して、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞、すなわち、５×１０５、１×１０５、および２×１０４個のＨＥＫ−２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。トランスフェクション後、タンパク質を細胞から抽出し、発現を、ウェスタンブロットを行うことにより検出した。ｈＦＸＮの発現は、ＭＯＩのトランスフェクションと正比例した。ロバストなｈＦＸＮ発現は、５×１０５の最大ＭＯＩで感染させた細胞で見られた。ｈＦＸＮタンパク質は、２×１０４のＭＯＩでトランスフェクトしたＨＥＫ−２９３Ｔ細胞では検出されず、一方、１×１０５のＭＯＩでトランスフェクトしたＨＥＫ−２９３Ｔ細胞では検出された。
【０７０３】
ＡＡＶウイルスゲノムのサイズを、変性アガロースゲル電気泳動を使用して解析した。予測ゲノムサイズ（２８８１ｂｐ）に対応する一本のバンドを検出した。
実施例８．ヒトｈＦＸＮコンストラクトの生成
Ａ．ｈＦＸＮ１をコードするコンストラクトの代替プロモータ設計
ｈＦＸＮ１（配列番号１７９６）コンストラクトを、開始鋳型として利用して、プロモータを交換することにより、４種の中間体プラスミドを生成した。生成した４種の中間体プラスミドは、各々、次のプロモータ：ＦＸＮｐｒｏ１０６０（配列番号１７５６）、ＣＭＶ（配列番号１７４３）、ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）、およびＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）のうちの１つを含有していた。中間体プラスミドを、４種のプロモータ配列をｈＦＸＮ１鋳型に、ＭｌｕＩおよびＨｉｎｄ３制限酵素部位を使用してサブクローニングすることにより、生成した。ライゲーション産物を細菌細胞に形質転換し、プラスミドを、標準的な操作プロトコールを使用して精製した。精製したプラスミドを、ＭｌｕＩ／Ｈｉｎｄ３またはＭｌｕＩ／ＡｇｅＩでの制限酵素切断、続いて、アガロースゲル電気泳動により検証した。
【０７０４】
Ｂ．ヒトアルブミン（Ａｌｂ）フィラー配列の挿入
完全なゲノムサイズを確認するために、フィラーとして機能するヒトアルブミンＤＮＡを選択した。ヒトアルブミンのゲノムＤＮＡを、ＨＥＫ−２９７ＴおよびＨｅＬａ細胞から単離した。ＰＣＲ反応を行い、８種の異なるサイズのアルブミンＤＮＡ、すなわち、１３１３ｂｐ（配列番号１８３１）、１３８４ｂｐ（配列番号１８３２）、１７８５ｂｐ（配列番号１８３３）、１８５６ｂｐ（配列番号１８３５）、２２６４ｂｐ（配列番号１８４０）、２２６６ｂｐ（配列番号１８４１）、および２３３５ｂｐ（配列番号１８４２）を増幅した。４種の中間体プラスミドを、ｍｉＲ−１２２結合部位と３’ＩＴＲの間で切断物を作る、いずれか１つの制限酵素ＡｖｒＩＩ、またはｍｉＲ−１２２結合部位を含有する断片を削除する、２つの制限酵素ＡｖｒＩＩおよびＢｓｐＥＩで切断した。８種のアルブミンＰＣＲ産物を、Ｇｉｂｓｏｎアセンブリを介してｍｉＲ−１２２結合部位を有するか、または有さない酵素で切断したプラスミドとライゲーションした。ライゲーション産物を、細菌細胞に形質転換し、プラスミドを、標準的な操作プロトコールを使用して精製した。精製したプラスミドを、ＸｂａＩ／ＫｐｎＩでの制限酵素切断、続いて、アガロースゲル電気泳動により検証した。
【０７０５】
ゲノムサイズ４．６ｋｂを有する最終の８種のコンストラクトを、末端逆位配列（ＩＴＲ）からＩＴＲに配列決定して、配列完全性を確認した。
実施例９．ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞におけるｈＦＸＮタンパク質の発現
ｈＦＸＮコンストラクトを、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞にトランスフェクトし、ｈＦＸＮタンパク質発現を、ウェスタンブロットおよびＥＬＩＳＡによって評価した。トランスフェクションを、以前に記載の通り行った。ＧＦＰプラスミドを、内部対照として使用した。総タンパク質１０μｇを、試料毎に添加した。ウェスタンブロットにより、３種の形態のｈＦＸＮタンパク質：前駆体、中間体および成熟ｈＦＸＮを検出した。コンストラクトｈＦＸＮ４およびｈＦＸＮ５（配列番号１７９９および１８００）は、最も強いｈＦＸＮ発現を有し、一方、ｈＦＸＮ２、ｈＦＸＮ３、ｈＦＸＮ６、およびｈＦＸＮ７（配列番号１７９７、１７９８、１８０１、および１８０２）は、制限された発現を示し、ｈＦＸＮ８−ｈＦＸＮ９（配列番号１８０３〜１８０４）は、弱い発現から検出不可能な発現を有していた。
【０７０６】
ｈＦＸＮタンパク質およびＧＦＰ発現の量を、ＥＬＩＳＡにより定量した。ｈＦＸＮコンストラクトのうち、ｈＦＸＮ４（配列番号１７９９）およびｈＦＸＮ５（配列番号１８００）は、最大のｈＦＸＮタンパク質濃度を示し、これは、他の物より２０倍より高い相対的なｈＦＸＮ発現を伴った。表２３は、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞におけるｈＦＸＮタンパク質濃度およびＧＦＰ発現を列挙する。相対的なｈＦＸＮ発現を、ｈＦＸＮ／ＧＦＰ比として計算し、これは、内在性ｈＦＸＮ対照に対する倍数変化を示している。
【０７０７】
【表２３】
2022500066.tif 000057
【０７０８】
実施例１０．インビボプロモータ選択研究
プロモータを含むＩＴＲからＩＴＲ配列を、ＡＡＶ６カプシドにパッケージングし、用量１×１０１０ＶＧでのスプラーグドーリーラットへの線条体内注射により送達した。組織試料を、３週または１０週目に収集し、フラタキシンタンパク質レベルを定量した。コンストラクトｃＦＸＮ２（配列番号１７７９）、ｃＦＸＮ３（配列番号１７８０）、ｃＦＸＮ４（配列番号１７８１）、ｃＦＸＮ１３（配列番号１７９０）、ｃＦＸＮ１４（配列番号１７９１）、ｃＦＸＮ１７（配列番号１７９４）、ｃＦＸＮ１８（配列番号１７９５）、ｈＦＸＮ２（配列番号１７９７）、ｈＦＸＮ４（配列番号１７９９）、ｈＦＸＮ５（配列番号１８００）、およびｈＦＸＮ６（配列番号１８０１）を、これらの研究のため使用した。
【０７０９】
フラタキシン発現の定量に基づき、ｃＦＸＮ２より３倍（ｈＦＸＮ４；配列番号１７９９）、５倍（ｈＦＸＮ８；配列番号１８０３）、８倍（ｈＦＸＮ２；配列番号１７９７）および２５倍（ｈＦＸＮ６；配列番号１８０１）弱い発現を示すコンストラクトを、更なる研究のため選択した。野生型ＣＢＡおよびＣＭＶプロモータ含有コンストラクト（例えば、ｃＦＸＮ１；配列番号１７７８）を、対照として使用した。ウイルスゲノムを、カプシドＶＯＹ２０１（配列番号１７２４）にパッケージングし、用量６．３×１０１２または２×１０１３ＶＧ／ｋｇのいずれかでのスプラーグドーリーラットへの静脈内送達により投与した。２８または９０日後、組織試料を収集し、フラタキシン発現（ｎｇ／ｍｇ）の定量のため処理した。
【０７１０】
プロモータＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）およびＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）は、他のコンストラクトと比較して、中程度の標的フラタキシン発現を示し、故に、更なる研究のため選択した。
【０７１１】
ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）およびＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）プロモータがもたらすフラタキシン発現の耐久性および持続性を試験するために、時間経過研究を行った。ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）、ＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）、ＣＢＡ（配列番号１７３４）またはＣＭＶ（配列番号１７４３）プロモータをフラタキシンペイロード配列と共に含むウイルスゲノムをＶＯＹ１０１（配列番号１）カプシドにパッケージングして、ＡＡＶ粒子を生成した。これらのＡＡＶ粒子を、２回用量の１回（６．３×１０１２または２×１０１３）でのオスのスプラーグドーリーラットへの尾静脈を介した静脈内送達により投与した。投与の２８、９０、または１８０日後に、組織試料を収集し（心臓、肝臓、小脳、胸部および腰部ＤＲＧ）、抗フラタキシンＳｉｍｐｌｅＳｔｅｐ  ＥＬＩＳＡに基づく二倍体細胞毎のベクターゲノムおよびフラタキシン発現レベルの定量のため処理した。データを、以下で、表２４および２５、図１Ａ、図１Ｂ、図１Ｃおよび図１Ｄにおいて示す。
【０７１２】
【表２４】
2022500066.tif 000058
【０７１３】
【表２５】
2022500066.tif 000059
【０７１４】
心室から収集した組織において、ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）プロモータを使用してフラタキシン発現をもたらすことにより、フラタキシン発現を０．２〜２．５倍増強し、一方、ＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）プロモータを使用してフラタキシン発現をもたらすことにより、フラタキシン発現を０．３〜７．８倍増強した。比較として、ＣＢＡ（配列番号１７３４）プロモータは、通常のフラタキシン発現と比較して、フラタキシン発現を４１．２〜７０倍増強し、ＣＭＶ（配列番号１７４３）プロモータは、フラタキシン発現を２９７倍増強した。
【０７１５】
小脳から収集した組織において、ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）プロモータを使用してフラタキシン発現をもたらすことにより、フラタキシン発現を０．０１〜０．３１倍増強し、一方、ＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）プロモータを使用してフラタキシン発現をもたらすことにより、フラタキシン発現を０．０１〜０．２８倍増強した。比較として、ＣＢＡ（配列番号１７３４）プロモータは、通常のフラタキシン発現と比較して、フラタキシン発現を０．０〜０．９倍増強し、ＣＭＶ（配列番号１７４３）プロモータは、フラタキシン発現を０．２１倍増強した。
【０７１６】
腰部ＤＲＧから収集した組織において、ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）プロモータを使用してフラタキシン発現をもたらすことにより、フラタキシン発現を１．６〜６．２倍増強し、一方、ＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）プロモータを使用してフラタキシン発現をもたらすことにより、フラタキシン発現を１．１〜５．２倍増強した。比較として、ＣＢＡ（配列番号１７３４）プロモータは、通常のフラタキシン発現と比較して、フラタキシン発現を０．０〜５．４倍増強し、ＣＭＶ（配列番号１７４３）プロモータは、フラタキシン発現を０．５倍増強した。
【０７１７】
免疫組織化学解析を、ＡＡＶ粒子投与の２８日後に収集した３０μｍの試料で行った。抗ｈＦＸＮ抗体（１／５０，０００）を使用した。ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）およびＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）プロモータがもたらしたフラタキシン発現を、処置したラットの歯状核において検出した。
【０７１８】
ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）、ＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）およびＣＢＡ（配列番号１７３４）プロモータの各々が、ＤＲＧおよび脳における類似の分布および発現パターンを示した。心臓において、ＣＭＶ−Ｄ７およびＣＢＡ−Ｄ８プロモータは、ＣＢＡがもたらしたフラタキシン発現のおよそ５０〜２６０分の１のＦＸＮ発現を生じた。
【０７１９】
ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）とＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）プロモータの両方が、ＡＡＶ粒子の投与の１８０日後に小脳、心臓およびＤＲＧにおいてフラタキシン発現をもたらす。この時点において、小脳における発現は、参照ＣＢＡプロモータを使用して達成したものよりおよそ３倍高く、これは、ＣＭＶ−Ｄ７およびＣＢＡ−Ｄ８プロモータが、小脳の標的細胞において活性であることを示している。
【０７２０】
実施例１１．ラットにおける代替プロモータバリアントを含むウイルスゲノムの線条体内投与後のインビボｃＦＸＮ発現レベル
別段示さない限り、代替プロモータバリアントがもたらしたフラタキシン発現を試験するために、次のプロモータ：ＣＭＶ−Ｄ１（配列番号１７４４）、ＣＭＶ−Ｄ３（配列番号１７４６）、ＣＢＡ−Ｄ４（配列番号１７３８）およびＣＢＡ−Ｄ６（配列番号１７４０）（表３において教示した）のいずれかから選択した１つのプロモータ、ＡＡＶ２野生型ＩＴＲ、ＨＡ−タグを有するカニクイザルフラタキシン（ｃｙｎｏＦＸＮまたはｃＦＸＮ）、３回反復のｍｉＲ−１２２標的およびヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含むウイルスゲノムを、ＡＡＶ６カプシドにパッケージングし、用量１×１０１０ＶＧ／ｋｇでスプラーグドーリーラットに線条体内注射により送達した。対照として、ＦＸＮｐｒｏ５３４（配列番号１７５４）、ＦＸＮｐｒｏ１０６０（配列番号１７５６）、ＣＭＶ（配列番号１７４３）、ＣＢＡ（配列番号１７３４）プロモータまたはそれらのバリアントを使用して、ウイルスゲノムからｃＦＸＮ発現をもたらし、ＡＡＶ６カプシドにパッケージングした。組織試料を、注射の３週間後に収集し、線条体ｃＦＸＮタンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡにより定量した。データを、以下の表２６および図２に示す。
【０７２１】
【表２６】
2022500066.tif 000060
【０７２２】
ＦＸＮｐｒｏ５３４（配列番号１７５４）プロモータがもたらした線条体ｃＦＸＮ発現は、内在性フラタキシンレベルに匹敵し、一方、ＦＸＮｐｒｏ１０６０（配列番号１７５６）プロモータは、内在性ＦＸＮレベルの６．６倍となった。対照として、高レベルのｃＦＸＮ発現を、それぞれ、ＣＭＶ．ｍｉＲ１２２（２４．４倍）、ＣＢＡ．ｍｉＲ１２２（３４．７倍）またはＣＢＡ（８６倍）プロモータにより達成した。ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）またはＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）プロモータがもたらした中程度の発現レベルのｃＦＸＮが、１．４倍および４．２倍で観察され、これらはそれぞれ、２種のＦＸＮプロモータバリアントがもたらしたものの範囲内であった。代替プロモータバリアントＣＭＶ−Ｄ１（配列番号１７４４）、ＣＭＶ−Ｄ３（配列番号１７４６）、ＣＢＡ−Ｄ４（配列番号１７３８）およびＣＢＡ−Ｄ６（配列番号１７４９）は、ＣＭＶ−Ｄ７（配列番号１７５０）またはＣＢＡ−Ｄ８（配列番号１７４２）のいずれかより高いｃＦＸＮ発現をもたらしたが、依然として、ＣＭＶ．ｍｉＲ１２２よりずっと低かった。まとめると、これらのデータは、追加のプロモータバリアントが、ラット線条体においてｃＦＸＮ発現を誘導するのに有効であったことを示した。
【０７２３】
実施例１２．ＶＯＹ１０１−ｃＦＸＮ−ＨＡ  ＡＡＶベクターの視床内投与後のインビボｃＦＸＮ発現およびベクターゲノム生体内分布
小脳核におけるｃＦＸＮの広がった発現ならびに脊髄および後根神経節における関連するｃＦＸＮレベルを達成するために、ＶＯＹ１０１−ｃＦＸＮ−ＨＡ（配列番号１７７８）ベクターを、スプラーグドーリーラットへの両側の視床内注射により投与した。
【０７２４】
ＣＢＡプロモータおよびｃＦＸＮ−ＨＡ配列を含む一本鎖ウイルスゲノムを、ＶＯＹ１０１粒子にパッケージングし、用量５×１０１０ｖｇ／注射で視床内注射した。注射体積および注射速度は、それぞれ、１２μｌ／注射および０．５μｌ／分であった。１匹のラットを、ビヒクル対照で処置した。処置の６週間後、免疫組織化学解析を行い、抗ＨＡ免疫染色を使用して、小脳の歯状核および脊髄におけるｃＦＸＮ−ＨＡの発現を評価した。ビヒクル対照と比較すると、強力なＨＡ染色を、全ての処置した動物において小脳の歯状核の全体を通じて観察した。更に、広がったｃＦＸＮ発現は、注射部位から遠い、脊髄後柱、中心管、頸部の腹角およびクラーク柱、胸部および腰髄において明らかであった。これらの結果は一緒になって、ＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−ｃＦＸＮベクターの視床内注射が、深部小脳核および脊髄のニューロンの効果的な伝達を引き起こし、ＦＸＮタンパク質の発現をもたらすことができたことを示した。
【０７２５】
実施例１３．ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮまたはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ  ＡＡＶ粒子を用いたＰｖａｌｂ  ｃＫＯマウスの静脈内投与後のｈＦＸＮの導入遺伝子発現レベル
フリードライヒ運動失調（ＦＡ）を、フラタキシン遺伝子におけるイントロンＧＡＡ拡大により引き起こし、ミトコンドリアにおいてＦＸＮ発現を有意に低減させる。フリードライヒ運動失調の早期の患者は、抹消後根神経節（ＤＲＧ）における巨大固有受容性ニューロンの喪失に起因した歩行困難および平衡感覚の喪失を示す。続いて、胴体および腕の機能が、増加する脊髄小脳ニューロン障害のため、悪化する。患者は、車椅子に頼らざるを得なくなり、行動能力を奪われ、これにより、平均寿命は約４０歳に低減されてしまう。ＦＡにおけるニューロン喪失の選択的性質をモデル化するために、ＦＸＮ発現を、パルブアルブミン発現細胞におけるＣｒｅ  Ｌｏｘ系を介して廃止している（Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウス）、トランスジェニックマウスを生成した（ピゲら（Ｐｉｇｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）２０１８）。Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウスは、生後数週間以内に固有受容性感覚機能の喪失および進行性運動失調を示した。
【０７２６】
ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）を含むウイルスゲノムを使用して、ＶＯＹ１０１（配列番号１）のカプシド血清型を有する、ＡＡＶ粒子を生成した。プロモータ（ＣＭＶ−Ｄ７またはＣＢＡ−Ｄ８）、２つのＡＡＶ２  ＩＴＲ、ｈＦＸＮ、３回反復のｍｉＲ−１２２標的およびヒト成長ホルモンポリアデニル化配列を含むウイルスゲノムを、ＨＥＫ２９３細胞の三重トランスフェクションにより、ＶＯＹ１０１  ＡＡＶ粒子にパッケージングした。ＡＡＶ粒子を精製し、０．００１％Ｆ−６８を含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）において製剤化し、次に、用量２×１０１３ＶＧ／ｋｇでマウスに静脈内投与した。
【０７２７】
一本鎖ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮまたはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ  ＡＡＶ粒子を静脈内投与したＰｖａｌｂ  ｃＫＯ動物におけるｈＦＸＮ発現レベルを試験するために、粒子を、３回用量の１回の６．３２×１０１２ＶＧ／ｋｇ、または２．０×１０１３ＶＧ／ｋｇで７．５週齢のＰｖａｌｂ  ｃＫＯマウスに静脈内投与した。Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウスの群を、７．０×１０１２ＶＧ／ｋｇでＡＡＶ９−ｈＦＸＮ粒子を静脈内投与した。ＷＴまたはＰｖａｌｂ  ｃＫＯマウスに、ビヒクル対照も投与した。
【０７２８】
投与の４週間後、１１．５週齢のマウスを安楽死させた。小脳および腰部ＤＲＧ組織を収集し、ｈＦＸＮ発現レベルの定量のため処理した。ｈＦＸＮタンパク質レベルを、ＥＬＩＳＡにより測定し、総タンパク質１ｍｇ当たりのｈＦＸＮ  ｎｇで報告した。ＷＴ内在性ＦＸＮレベルと比較した小脳または腰部ＤＲＧにおけるｈＦＸＮ発現の倍数変化を計算した。データを、表２７、図３Ａ、および図３Ｂにおいて示す。
【０７２９】
【表２７】
2022500066.tif 000061
【０７３０】
腰部ＤＲＧから収集した組織における、Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯ動物におけるＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）粒子の静脈内投与は、送達の４週間後にＷＴ内在性ＦＸＮレベルと比較して、ｈＦＸＮ発現を２．８〜６．４倍増強した。Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯ動物におけるＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）粒子の静脈内投与は、送達の４週間後にｈＦＸＮ発現を０．８〜２．６倍増強した。
【０７３１】
小脳から収集した組織において、Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯ動物におけるＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）粒子の静脈内投与は、送達の４週間後にＷＴ内在性ＦＸＮレベルと比較して、ｈＦＸＮ発現を１０．３〜２４．３倍増強した。Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯ動物におけるＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）粒子の静脈内投与は、送達の４週間後にＷＴ内在性ＦＸＮレベルと比較して、ｈＦＸＮ発現を６．４〜１８．８倍増強した。
【０７３２】
まとめると、Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯ動物における小脳および腰部ＤＲＧでの高いｈＦＸＮ発現レベルは、ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）粒子のいずれかが、これらの組織を形質導入する能力があったことを示した。
【０７３３】
実施例１４．ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮまたはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ  ＡＡＶ粒子の静脈内投与後のＰｖａｌｂ  ｃＫＯマウスにおける運動機能および筋機能の固有受容性不足の修正およびレスキュー
ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）ベクターの治療有効性を評価するために、Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウスにおける固有受容性不足のレスキューを、用量６．３２×１０１２ＶＧ／ｋｇまたは２．０×１０１３ＶＧ／ｋｇでのこれらのベクターの静脈内（ＩＶ）送達後の筋電図解析により試験した。
【０７３４】
一本鎖ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）粒子を精製し、０．００１％プルロニック酸（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８）を含み、ｐＨ７．４の１９２ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）において製剤化し、単回用量６．３２×１０１２ＶＧ／ｋｇまたは２．０×１０１３ＶＧ／ｋｇで７．５週齢の大人のＰｖａｌｂ  ｃＫＯマウスに静脈注射によって投与した。対照群は、用量７×１０１２ＶＧ／ｋｇでのＡＡＶ９−ｈＦＸＮ粒子の静脈注射を受けた。
【０７３５】
筋電図解析を、Ｎａｔｕｓ  ＵｌｔｒａＰｒｏＳ１００装置（メグツーヘルス社（Ｍａｇ２Ｈｅａｌｔｈ）、フランス）を使用して行った。Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウスを、ケタミン／キシラジン（１３０／１３ｍｇ／ｋｇ）でのＩＰ注射を使用して麻酔した。動物を、電機生理学評価を通じて３７℃で維持した。坐骨神経刺激（０．１ｍｓおよび強度８ｍＡ）後の足の裏の後足の筋肉における脊髄の体性感覚の誘発応答（Ｈ波）の潜伏および振幅を記録した。ピゲら（Ｐｉｇｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ）２０１８に従い６．５週齢で開始し、マウスの年齢に応じて毎週、２週間毎または３週間毎に脊髄の体性感覚の誘発応答（Ｈ波）を記録することにより、筋電図解析を行った。
【０７３６】
図４に示す通り、６．５週齢のＰｖａｌｂ  ｃＫＯマウスにおけるＨ波強度は、ＷＴマウスと比較して有意に低減した。注射の１週間後の８．５週齢のｃＫＯマウスにおいて、Ｈ波レベルは、もはや測定可能でなかった。対照的に、ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）粒子のいずれかの静脈注射は、投与の１週間以内、ＷＴ動物において見られるものに匹敵するレベルまでほぼ完全にＨ波強度を保存し、これは、Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウスの固有受容性不足の逆転を示している。完全なレスキューを、ＡＡＶ粒子のいずれかを使用した２．０×１０１３ＶＧ／ｋｇの高用量の投与の４週間後に観察した。
【０７３７】
これらの結果は、脊髄の体性感覚の誘発応答に対するＩＶ  ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）、特に、１１．５週齢のマウスにおける６．３２×１０１２ＶＧ／ｋｇ〜２．００×１０１３ＶＧ／ｋｇのＩＶ用量の、用量依存性の効果を示した。
【０７３８】
ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）粒子のいずれかの静脈内送達後のＰｖａｌｂ  ｃＫＯ動物における運動および筋機能のレスキューを試験するために、以前に記載（ピゲら（Ｐｉｇｕｅｔ  ｅｌ  ａｌ．）２０１８）された切欠試片実験（上肢または下肢の滑り−「落下」数の記録）を、７．５、８．５、９．５および１１．５週齢のｃＫＯ動物において行った。ＶＯＹ１０１粒子を、上で記載した通り、ｃＫＯ動物（７．５週齢）へのＩＶ注射により投与した。
【０７３９】
図５に示す通り、Ｐｖａｌｂ  ｃＫＯマウスは、７．５〜１１．５週に運動失調不足を直ぐに発症した。対照的に、用量６．３×１０１２または２．０×１０１３ＶＧ／ｋｇでのＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）粒子のいずれかの静脈内投与は、注射の１週間後に運動失調の表現型を迅速に逆転させた。レスキュー効果は、処置の４週間後のｃＫＯ動物において依然として持続した。
【０７４０】
実施例１５．非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ  ＡＡＶ粒子の静脈内投与後のインビボｈＦＸＮ発現およびベクターゲノム生体内分布
２つのＡＡＶ２  ＩＴＲ、プロモータ（ＣＭＶ−Ｄ７またはＣＢＡ−Ｄ８）、ｈＦＸＮ  ｃＤＮＡ配列、３回反復のｍｉＲ−１２２標的、ヒト成長ホルモンポリＡ配列、スタッファー配列としてのヒトアルブミンの断片を含む一本鎖ウイルスゲノムを、ＶＯＹ１０１カプシドにパッケージングし、三重トランスフェクションにより作製し、精製し、０．００１％Ｆ−６８を含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）において製剤化する。
【０７４１】
ＬＥＣ２  ｎＡｂインビトロアッセイとＩｇＧ  ＥＬＩＳＡの両方を使用して低抗ＡＡＶＶｏｙ１０１抗体について予めスクリーニングした、およそ２．７〜５．８歳の大人のカニクイザルの３つの群（１群当たり３匹の動物）は、静脈注射によって用量５×１０１３ＶＧ／ｋｇ（力価１．０×１０１３ＶＧ／ｍｌ）のビヒクル（０．００１％Ｆ−６８を含むＰＢＳ）、ＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）を受ける。注射速度は、３ｍｌ／分であり、用量体積は、５ｍＬ／ｋｇ（約１７．５ｍＬ／動物）である。
【０７４２】
ＮＨＰにおけるＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）の分布および発現を試験するために、当該技術分野において公知の任意の試験を利用してもよい。ｈＦＸＮタンパク質およびｍＲＮＡ発現を、ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ、免疫組織化学、インサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）および液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）により評価する。異なる組織におけるベクターゲノムレベルを、ＰＣＲおよびＩＳＨを使用して定量する。
【０７４３】
次の試料：頸部の、胸部および／または腰部ＤＲＧ、頸部、胸部、および／または腰髄、前頭皮質、運動皮質、海馬、線条体、小脳、脳幹、肝臓、心臓、心房、心室を収集してもよい。ＤＲＧ、心室、下側の腰髄、上側の腰髄、前頭皮質、小脳および肝臓の組織を使用し、ＥＬＩＳＡおよびＬＣ−ＭＳならびにベクターゲノム／二倍体細胞を定量するための指先の小滴ＰＣＲを使用して標的組織におけるｈＦＸＮ発現を決定する。ｈＦＸＮの発現および分布を、インサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）により、ＤＲＧ、小脳歯状核、クラーク柱、薄束核および楔状束核ならびに心臓の細胞において測定する。得られたデータを使用して、非ヒト霊長類におけるＶＯＹ１０１−ＣＭＶ−Ｄ７−ｈＦＸＮ（配列番号１８０１）またはＶＯＹ１０１−ＣＢＡ−Ｄ８−ｈＦＸＮ（配列番号１７９７）ＡＡＶ粒子の予測した組織生体内分布および導入遺伝子ｈＦＸＮ発現を確認する。
【０７４４】
実施例１６．非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるインビボプロモータ選択研究
プロモータバリアント配列を含むウイルスゲノムを有する選択ＡＡＶ粒子を、非ヒト霊長類において試験して、標的細胞および組織におけるフラタキシン発現を決定する。ｈＦＸＮ２（配列番号１７９７）、ｈＦＸＮ３（配列番号１７９８）、ｈＦＸＮ６（配列番号１８０１）、ｈＦＸＮ７（配列番号１８０２）、ｈＦＸＮ１３（配列番号１８０８）およびｈＦＸＮ１４（配列番号１８０９）を含む、表４から選択したｈＦＸＮ  ＩＴＲ−ｔｏ−ＩＴＲコンストラクトを使用する。
【０７４５】
ＶＯＹ１０１カプシドにおける選択したｈＦＸＮ  ＩＴＲ−ｔｏ−ＩＴＲコンストラクトを含むＡＡＶ粒子を、本開示に従い、哺乳類ＨＥＫ２９３細胞を使用した三重トランスフェクションにより生成する。得られたＡＡＶ粒子を精製し、次に、製剤１（０．００１％プルロニック酸（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８）を含み、ｐＨ７．４の、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、２ｍＭリン酸カリウム（一塩基性）および１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性））に製剤化する。
【０７４６】
若年のカニクイザル（中国起源、ＮＡｂアッセイを使用して低抗ＡＡＶＶｏｙ１０１抗体について予めスクリーニングした）の群を、試験している各ｈＦＸＮ  ＩＴＲ−ｔｏ−ＩＴＲコンストラクトのため選択する（１群当たり２匹のメスおよび１匹のオス）。カニクイザルは、表２８の試験パラメータに従い、静脈注射（伏在静脈）によってＡＡＶ粒子を受け取る。
【０７４７】
【表２８】
2022500066.tif 000062
【０７４８】
選択したｈＦＸＮコンストラクトの得られた分布および発現を、次の：頸部ＤＲＧ、胸部ＤＲＧ、腰部ＤＲＧ、頸髄、胸髄、腰髄、前頭皮質、運動皮質、海馬、線条体、小脳、脳幹、肝臓、心臓、心房、および心室の１つまたは複数を含む、様々な組織において試験する。
【０７４９】
次の：完全血球算定（ＣＢＣ）、血清化学、血清サイトカインタンパク質、ケージ側での観察、体重、ＡＡＶベクターゲノム（ＶＧ）分布、ｈＦＸＮタンパク質分布、およびｈＦＸＮタンパク質発現の一次読み出しを測定し、試験対象から収集する。これらの一次読み出しを試験し、ＥＬＩＳＡ、ＰＣＲ、免疫組織化学、インサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）および液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を含む、当該技術分野において公知の様々な方法に従い、測定する。
【０７５０】
実施例１７．代替カプシドを用いたプロモータコンストラクトの試験
表４の選択プロモータバリアントコンストラクトを含むウイルスゲノム（例えば、ｈＦＸＮ２；配列番号１７９７、ｈＦＸＮ６；配列番号１８０１）を、表１から選択した代替カプシドを有するＡＡＶ粒子に取り込む。これらのカプシドは、ＣＴＧのような、だがこれに限定されない、ＶＰ１の翻訳のための最適以下または非標準的開始コドンを有する。かかるＡＡＶ粒子を使用して、尾静脈を介した静脈注射によりマウスにおける標的細胞にフラタキシンタンパク質を送達する。２３匹のオスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、２×１０１３ＶＧ／ｋｇ容量のＡＡＶ粒子組成物を与える。送達の１４日後、マウスは、冷１×ＰＢＳでの経心臓灌流を受け、組織試料を収集する。
【０７５１】
次の組織試料のいずれかまたは全てを収集する。頸部、胸部および／または腰部ＤＲＧ、頸髄、胸髄、および／または腰髄、前頭皮質、運動皮質、海馬、線条体、小脳、脳幹、肝臓、心臓、心房、心室、および／または腓腹筋。腰部ＤＲＧ、心室、下側の腰髄、前頭皮質および小脳の組織をＥＬＩＳＡのため使用して、標的組織におけるフラタキシン発現を決定する。胸部ＤＲＧ、心室、上側の腰髄、前頭皮質、小脳、および／または肝臓を指先の小滴ＰＣＲのため使用して、ベクターゲノム／二倍体細胞を定量する。得られたデータを使用して、予測組織生体内分布および導入を確認する。代替カプシドの使用が、ＶＯＹ１０１、ＶＯＹ２０１、および／もしくはＡＡＶ９またはそのバリアントと比較して、より良好な生体内分布および導入でないなら、類似であると予想する。
【０７５２】
実施例１８．ラットにおけるインビボプロモータ選択研究
プロモータバリアント配列を含むウイルスゲノムを有する選択ＡＡＶ粒子をラットにおいて試験して、標的細胞および組織におけるフラタキシン発現を決定した。次の表４から選択したｈＦＸＮ  ＩＴＲ−ｔｏ−ＩＴＲコンストラクト：ｈＦＸＮ２（配列番号１７９７）、ｈＦＸＮ１０（配列番号１８０５）、ｈＦＸＮ１１（配列番号１８０６）、ｈＦＸＮ１２（配列番号１８０７）、ｈＦＸＮ１３（配列番号１８０８）、ｈＦＸＮ１４（配列番号１８０９）、およびｈＦＸＮ１５（配列番号１８１０）を使用した。ＶＯＹ１０１カプシドにおいて選択したｈＦＸＮ  ＩＴＲ−ｔｏ−ＩＴＲコンストラクトを含むＡＡＶ粒子を、本開示に従い、哺乳類ＨＥＫ２９３細胞を使用して三重トランスフェクションにより生成した。得られたＡＡＶ粒子を精製し、次に、０．００１％プルロニック酸（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８）を含み、ｐＨ７．４の、１９２ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム、および１０ｍＭリン酸ナトリウム（二塩基性）に製剤化した。
【０７５３】
ＡＡＶ粒子を、２回用量の１回：６．３×１０１２ｖｇ／ｋｇまたは２×１０１３ｖｇ／ｋｇ（１時間にわたり５ｍｌ／ｋｇ）でオスのスプラーグドーリーラット（１群当たり５匹）に尾静脈を介して静脈内送達により投与した。投与の２８日後、組織試料を収集し（心室およびＤＲＧ）、抗フラタキシンＳｉｍｐｌｅＳｔｅｐ  ＥＬＩＳＡに基づき、フラタキシン発現レベルについて解析した。データを、図６Ａ、図６Ｂ、図６Ｃ、および図６Ｄに示す。
【０７５４】
ｈＦＸＮ１３（ＣＢＡ．Ｄ４）、ｈＦＸＮ１４（ＣＢＡ．Ｄ６）およびｈＦＸＮ２（ＣＢＡ．Ｄ８）は、６．３×１０１２ｖｇ／ｋｇまたは２×１０１３ｖｇ／ｋｇで十分に許容され、これは、ｈＦＸＮ１０、ｈＦＸＮ１１、ｈＦＸＮ１２およびｈＦＸＮ１５と比較して、ＤＲＧと心室組織の両方における低い発現レベルを伴った。
【０７５５】
実施例１９．プロモータバリアントのインビトロ評価
ｈＦＸＮ２（配列番号１７９７）、ｈＦＸＮ６（配列番号１８０１）、ｈＦＸＮ１０（配列番号１８０５）、ｈＦＸＮ１１（配列番号１８０６）、ｈＦＸＮ１２（配列番号１８０７）、ｈＦＸＮ１３（配列番号１８０８）、およびｈＦＸＮ１４（配列番号１８０９）を含む７種のプロモータバリアントコンストラクトを、ＨＥＫ２９３細胞におけるインビトロ発現活性について評価した。ＣＭＶおよびＣＢＡプロモータコンストラクトを対照として使用した。細胞に、ｈＦＸＮコンストラクトまたは対照およびルシフェラーゼペイロードのうちの１つを含むプラスミドをトランスフェクトした。ルシフェラーゼの活性および発現を、ルシフェラーゼアッセイシステムを使用して決定した。２３９Ｔ細胞を、陰性対照として使用した。
【０７５６】
ルシフェラーゼ発現により決定したプロモータバリアントの活性を、図７に示す。
Ｘ．均等物および範囲
当業者は、本明細書に記載される本開示に係る具体的な実施形態の多くの均等物を認識し、またはルーチンに過ぎない実験を用いて確かめることが可能であろう。本開示の範囲は、上記の説明に限定されることが意図されず、むしろ、添付の請求の範囲において説明される。
【０７５７】
特許請求の範囲では、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」などの冠詞は、反する旨が示されない限り、または文脈上特に明らかでない限り、１つまたは２つ以上を意味し得る。ある群の１つ以上のメンバーの間に「または」を含むクレームまたは説明は、反する旨が示されない限り、または文脈上特に明らかでない限り、その群メンバーの１つ、２つ以上、または全てが所与の製品または方法に存在する、それに用いられる、または他の形でそれに関連する場合に満たされるものとみなされる。本開示は、群の正確に１つのメンバーが所与の製品または方法に存在する、それに用いられる、または他の形でそれに関連する実施形態を含む。本開示は、２つ以上の、または群メンバー全体が所与の製品または方法に存在する、それに用いられる、または他の形でそれに関連する実施形態を含む。
【０７５８】
また、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は非限定的（ｏｐｅｎ）であることが意図され、追加の要素または工程の包含を許容するがそれは必須でないことにも注意されたい。したがって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」が本明細書で使用されるとき、用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」も包含され、開示される。
【０７５９】
範囲が与えられる場合、端の値は含まれる。更に、示されない限り、またはそうでない場合は文脈および当業者の理解から明白でない限りは、範囲として表される値は、文脈により明白にそうでないと指示されない限り、その範囲の下限の単位の１０分の１に至るまでの、本開示の様々な実施形態において記述された範囲内の任意の特定の値または部分範囲をとることができることが理解されよう。
【０７６０】
加えて、先行技術に含まれる本開示の任意の特定の実施形態は、クレームの任意の１つ以上から明示的に除外され得ることが理解されるべきである。かかる実施形態は当業者に公知であるとみなされるため、除外が本明細書に明示的に示されないとしても、それらは除外され得る。本開示の組成物の任意の詳細な実施形態（例えば、任意の抗生物質、治療または有効成分；任意の製造方法；任意の使用方法など）が、先行技術の存在に関係するか否かにかかわらず、何らかの理由で任意の１つ以上のクレームから除外されることがある。
【０７６１】
使用される語句は、制限よりむしろ説明の語句であり、より広い側面の本開示の真の範囲および趣旨から逸脱することなく、添付の請求の範囲の範囲内で、修正がなされ得ることは、理解されるべきである。
【０７６２】
本開示をかなり詳しく、幾つかの説明される実施形態に関するある具体性をもって説明したが、それが任意のかかる具体例もしくは実施形態または任意の具体的な実施形態に限定されるべきであることを意図するものではなく、しかし先行技術を考慮してかかる特許請求の範囲の最も広義の可能な解釈を提供し、したがって本開示の意図される範囲を有効に包含するように添付の特許請求の範囲を参照して解釈されるべきである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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