【手続補正書】
【提出日】平成22年8月10日(2010.8.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
組換え宿主細胞の色素体内で色素体蛋白質を発現させるためのシステムであって、
核蛋白質の発現を誘導する、細胞外から加えられるか、あるいは細胞外に除去されるインデューサーと、
核に組換え核酸を含む組換え宿主細胞と、
色素体に内在性または外来性である第三の核酸を含む色素体と、を含み、
前記組換え核酸が、第二の核酸と作動的に連結して組換え核酸を形成する第一の核酸を含み、
第一の核酸が誘導性プロモーターをコードし、第二の核酸が安定化因子をコードし、
第三の核酸が、発現される色素体蛋白質をコードし、前記色素体蛋白質をコードするmRNAの発現が前記安定化因子で制御されることを特徴とするシステム。
【請求項２】
前記細胞が、第二の核酸及び／又は第三の核酸の、非作動コピーを有するかまたはコピー若しくはホモログを欠失していることを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
前記細胞が植物細胞または藻類細胞であることを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項４】
前記色素体が、葉緑体、白色体、アミロプラスト、エチオプラスト、エライオプラスト、および有色体からなる群から選択されることを特徴とする、請求項３に記載のシステム。
【請求項５】
前記誘導性プロモーターがCyc6プロモーターと少なくとも90％の配列類似性を有することを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項６】
第三の核酸がpsbD遺伝子と少なくとも90％の配列類似性を有する遺伝子をコードすることを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項７】
前記インデューサーが化学的条件または環境的条件であることを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項８】
前記蛋白質が水素ガスの産生に関与することを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項９】
前記蛋白質が、抗体、ワクチン、および抗菌剤からなる群から選択される医薬品、工業用酵素、葉緑体の成熟または分解に関与する酵素、栄養補助食品、宿主細胞のための防御産物、アミノ酸合成に関与する酵素、およびプロテアーゼからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項１０】
前記安定化因子がNac2およびMbb1からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項１１】
第三の核酸に作動的に連結しているかまたは第三の核酸に連結していない、追加の核酸が前記色素体内で発現することを特徴とする、請求項１に記載のシステム。
【請求項１２】
細胞の色素体内で色素体蛋白質を発現させる方法であって、
前記細胞をインデューサーと接触させるか、またはリプレッサーの除去をもたらす条件で前記細胞を処理するステップであって、
前記インデューサーまたは前記リプレッサーが核内の第一の核酸と結合し、
第一の核酸が誘導性プロモーターをコードし、
第一の核酸が第二の核酸と作動的に連結して組換え核酸を形成し、
第二の核酸が安定化因子をコードすることを特徴とするステップと、
前記安定化因子を発現させるステップと、
前記安定化因子を色素体に導入するステップであって、
安定化因子が色素体内でmRNAの非翻訳領域と結合して前記mRNAを安定化し、
前記mRNAが前記色素体に内在性または外来性である第三の核酸から転写され、
第三の核酸が前記蛋白質をコードすることを特徴とするステップと、
前記mRNAを発現させるステップと、
前記色素体内で前記蛋白質を産生させるステップと
を含む方法。
【請求項１３】
細胞の色素体内で色素体蛋白質を発現させることにより水素ガスの産生を促進する方法であって、
前記細胞をインデューサーと接触させるか、またはリプレッサーの除去をもたらす条件で前記細胞を処理するステップであって、
インデューサーまたはリプレッサーが核内の第一の核酸と結合し、
第一の核酸が誘導性プロモーターをコードし、
第一の核酸が第二の核酸と作動的に連結して組換え核酸を形成し、
第二の核酸が安定化因子をコードすることを特徴とするステップと、
前記安定化因子を発現させるステップと、
前記安定化因子を色素体に導入するステップであって、
前記安定化因子が前記色素体内でmRNAの非翻訳領域と結合して前記mRNAを安定化し、
前記mRNAが前記色素体に内在性または外来性である第三の核酸から転写され、
第三の核酸が前記蛋白質をコードすることを特徴とするステップと、
前記mRNAを発現させるステップと、
前記色素体内で前記蛋白質を産生させるステップと、
水素ガスを産生させるステップと
を含む方法。
【請求項１４】
細胞の色素体内で色素体蛋白質の発現を促進および抑制することにより水素ガスの産生を促進する方法であって、
順次的にi）前記細胞をインデューサーと接触させるか、またはリプレッサーの除去をもたらす条件で前記細胞を処理してから、ii）前記細胞を前記リプレッサーと接触させるか、または前記インデューサーの除去をもたらす条件で細胞を処理するステップであって、
前記インデューサーまたは前記リプレッサーが核内の第一の核酸と結合し、
第一の核酸が誘導性プロモーターをコードし、
第一の核酸が第二の核酸と作動的に連結して組換え核酸を形成し、
第二の核酸が安定化因子をコードすることを特徴とするステップと、
順次的に前記安定化因子を発現させてから抑制するステップであって、
前記安定化因子が前記色素体内でmRNAの非翻訳領域と結合してmRNAを安定化し、
前記mRNAが前記色素体に内在性または外来性である第三の核酸から転写され、
第三の核酸が前記蛋白質をコードすることを特徴とするステップと、
順次的に前記mRNAを発現させてから抑制するステップと、
前記色素体内で前記蛋白質を産生させるステップと、
水素ガスを産生するステップと
を含む方法。
【請求項１５】
前記組換え核酸を核に導入する前に、第一の核酸が第二の核酸と作動的に連結して前記組換え核酸を形成することを特徴とする、請求項１２，１３、または１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記細胞が、第二の核酸及び／又は第三の核酸の非作動コピーを有するかまたはコピー若しくはホモログを欠失することを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記細胞が植物細胞または藻類細胞であることを特徴とする、請求項１２，１３、または１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記色素体が、葉緑体、白色体、アミロプラスト、エチオプラスト、エライオプラスト、および有色体から選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記誘導性プロモーターがCyc6プロモーターと少なくとも90％の配列類似性を有することを特徴とする、請求項１２，１３、または１４に記載の方法。
【請求項２０】
第三の核酸がpsbD遺伝子と少なくとも90％の配列類似性を有する遺伝子をコードすることを特徴とする、請求項１２，１３、または１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記インデューサーが化学的条件または環境的条件であることを特徴とする、請求項１２，１３、または１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記化学的条件が銅であり、銅の枯渇が前記mRNA発現と前記蛋白質の産生を誘導することを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記環境条件が所定レベルまでの酸素濃度の低下であることを特徴とする、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記インデューサーの添加と除去を一サイクルとして、前記インデューサーの複数サイクルの添加と除去が行われることを特徴とする、請求項１２，１３、または１４に記載の方法。
【請求項２５】
前記蛋白質が水素ガスの産生に関与することを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項２６】
前記蛋白質が、抗体、ワクチン、および抗菌剤からなる群から選択される医薬品、工業用酵素、葉緑体の成熟または分解に関与する酵素、栄養補助食品、宿主細胞のための防御産物、アミノ酸合成に関与する酵素、およびプロテアーゼからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項２７】
前記安定化因子がNac2およびMbb1からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１２，１３、または１４に記載の方法。
【請求項２８】
第三の核酸に作動的に連結しているかまたは第三の核酸に連結していない、追加の核酸が前記色素体内で発現することを特徴とする、請求項１２，１３、または１４に記載の方法。