(57)【要約】  本発明は、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が本明細書で説明されるとおりである式（Ｉ）の化合物、ならびにそれらの医薬として許容され得る塩、鏡像異性体またはジアステレオマー、ならびに該化合物を含む組成物、ならびに該化合物を自己免疫疾患および自己炎症性疾患の処置におけるＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９のアンタゴニストとして使用する方法に関する。2022502353.tif 000051
2022502353.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化４０】
2022502353.tif 000043
の化合物であって、式中、
Ｒ１が
【化４１】
2022502353.tif 000044
であり、式中、Ｒ８がシアノ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン、ハロＣ１〜６アルキル又はニトロであり、
Ｒ２がＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル又はハロＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３が
【化４２】
2022502353.tif 000045
であり、式中、
Ｒ４およびＲ５がＨおよびＣ１〜６アルキルから独立して選択され、
Ｒ６がＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキル又はヘテロシクリルであり、
Ｒ７がＨ又はＣ１〜６アルキルであり、
ｍが０、１、２又は３であり、
ｎが１、２又は３である、化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、
Ｒ１が
【化４３】
2022502353.tif 000046
であり、式中、Ｒ８がシアノであり、
Ｒ２がＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３が
【化４４】
2022502353.tif 000047
であり、式中、
Ｒ４がＨであり、
Ｒ５がＨであり、
Ｒ６がＨ、ハロゲン、テトラヒドロピリジニル、ジアザスピロ［４．４］ノナニル、ヒドロキシピペリジニル、Ｃ１〜６アルキルピペラジニル、モルホリニル、ピペラジニル又はピペリジニルであり、
Ｒ７がＨであり、
ｍが１又は２であり、
ｎが１、２又は３である、化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物であって、
Ｒ１が
【化４５】
2022502353.tif 000048
であり、式中、Ｒ８がシアノであり、
Ｒ２がメチルであり、
Ｒ３が
【化４６】
2022502353.tif 000049
であり、式中、
Ｒ４がＨであり、
Ｒ５がＨであり、
Ｒ６がＨ、ブロモ、テトラヒドロピリジニル、２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−２−イル、ヒドロキシピペリジニル、メチルピペラジニル、モルホリニル、ピペラジニル又はピペリジニルであり、
Ｒ７がＨであり、
ｍが１又は２であり、
ｎが１、２又は３である、化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー。
【請求項４】
Ｒ６がＣ１〜６アルキルピペラジニルまたはピペラジニルである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ６がメチルピペラジニルまたはピペラジニルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ｎが１である、請求項４または５に記載の化合物。
【請求項７】
請求項２に記載の化合物であって、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（５−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（１，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（７−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（８−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（５−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（６−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（７−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（８−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［５−（４−ヒドロキシ−１−ピペリジル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（５−モルホリノ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［５−（２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−２−イル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［（６−（１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル）−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（７−ピペラジン−１−イル−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、および
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［５−（４−ピペリジル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリルから選択される化合物、
またはその薬学的に許容され得る塩、鏡像異性体もしくはジアステレオマー。
【請求項８】
以下のステップ、すなわち、
ａ）酸の存在下での式（ＶＩＩ）
【化４７】
2022502353.tif 000050
の化合物の環化を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の調製のためのプロセスであって、
前記酸が、ｔ−ＢｕＯＨ中のＨＣｌであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ｍおよびｎが、請求項１〜６のいずれか一項にあるとおり定義されている、プロセス。
【請求項９】
治療活性のある物質として使用するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容され得る塩、鏡像異性体、もしくはジアステレオマー。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物と治療上不活性である担体とを含む、医薬組成物。
【請求項１１】
全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎の処置または予防のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の、使用。
【請求項１２】
全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎の処置または予防のための薬剤の調製のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の、使用。
【請求項１３】
ＴＬＲ７またはＴＬＲ８またはＴＬＲ９アンタゴニストとしての、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の、使用。
【請求項１４】
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８およびＴＬＲ９アンタゴニストとしての、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物の、使用。
【請求項１５】
全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎の処置または予防のための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容され得る塩、鏡像異性体、もしくはジアステレオマー。
【請求項１６】
請求項８に記載のプロセスにより製造されるときの、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、または薬学的に許容され得る塩、鏡像異性体、もしくはジアステレオマー。
【請求項１７】
全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎の処置または予防のための方法であって、治療有効量の請求項１〜７のいずれか一項において定義される化合物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物における療法および／または予防に有用な有機化合物、特に全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎を処置するのに有用なＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９のアンタゴニストに関する。
【背景技術】
【０００２】
自己免疫性結合組織病（ＣＴＤ）は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、原発性シェーグレン症候群（ｐＳｊＳ）、混合性結合組織病（ＭＣＴＤ）、皮膚筋炎／多発性筋炎（ＤＭ／ＰＭ）、関節リウマチ（ＲＡ）、および全身性強皮症（ＳＳｃ）など、プロトタイプの自己免疫症候群を含む。ＲＡを除き、患者にとって実際に有効かつ安全な療法は、利用可能ではない。ＳＬＥは、有病率が１００，０００例当たり２０〜１５０例であるプロトタイプのＣＴＤであり、皮膚および関節における通常観察される症状から、腎不全、肺不全（ｌｕｎｇ  ｆａｉｌｕｒｅ）、または心不全まで、異なる器官における広範な炎症および組織損傷を生じる。従来、ＳＬＥは、非特異的な抗炎症薬または免疫抑制薬を用いて処置されてきた。しかしながら、免疫抑制薬、例えばコルチコステロイドの長期使用は、部分的にしか有効ではなく、望ましくない毒性および副作用を伴う。ベリムマブは、ここ５０年間においてループスに対する唯一のＦＤＡ認可薬であるが、その有効性は一部のＳＬＥ患者においてのみ中等度かつ遅延している（Ｎａｖａｒｒａ，Ｓ．Ｖ．ｅｔ  ａｌ  Ｌａｎｃｅｔ  ２０１１，３７７，７２１）。抗ＣＤ２０ｍＡｂ、特定のサイトカインに対するｍＡｂまたは該サイトカインの可溶性受容体など、他の生物製剤は、ほとんどの臨床試験において失敗してきた。したがって、より大きな比率の患者群において持続した改善を提供し、かつ多くの自己免疫疾患および自己炎症疾患における長期的な使用にとってより安全である、新規の療法が必要とされる。
【０００３】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、幅広い種類の免疫細胞における広範な免疫応答を開始することができるパターン認識受容体（ＰＲＲ）の重要なファミリーである。天然の宿主防御センサとして、エンドソームＴＬＲ７、８および９は、ウイルス、細菌に由来する核酸を認識し、具体的には、ＴＬＲ７／８およびＴＬＲ９はそれぞれ、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）および一本鎖ＣｐＧ−ＤＮＡを認識する。しかしながら、ＴＲＬ７、８、９の異常な核酸感知は、広範な自己免疫疾患および自己炎症性疾患における鍵となる中心と見なされている（Ｋｒｉｅｇ，Ａ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２００７，２２０，２５１。Ｊｉｍｅｎｅｚ−Ｄａｌｍａｒｏｎｉ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ．２０１６，１５，１。Ｃｈｅｎ，Ｊ．Ｑ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ＆Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０１６，５０，１。）それゆえ、ＴＬＲ７、８、および９の経路は、有効なステロイド非含有および非細胞毒性の経口薬が存在しない自己免疫疾患および自己炎症性疾患のための新たな治療標的であり、これらの経路の最上流からの阻害は、満足のいく治療効果をもたらすかもしれない。安全性の観点から、複数の核酸感知経路（例えば、他のＴＬＲ、ｃＧＡＳ／ＳＴＩＮＧ）があるので、このような冗長性は、ＴＬＲ７８９阻害の存在下でも感染に対して応答することが当然できる。このようなものとして、本発明者らは、自己免疫疾患および自己炎症性疾患の処置のために、ＴＬＲ７、８および９を標的としかつ抑制する経口化合物を発明した。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、式（Ｉ）
【化１】
2022502353.tif 000003
の新規化合物であって、式中、
Ｒ１が
【化２】
2022502353.tif 000004
であり、式中、Ｒ８がシアノ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン、ハロＣ１〜６アルキルもしくはニトロであり、
Ｒ２がＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキルもしくはハロＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３が
【化３】
2022502353.tif 000005
であり、式中、
Ｒ４およびＲ５がＨおよびＣ１〜６アルキルから独立して選択され、
Ｒ６がＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルもしくはヘテロシクリルであり、
Ｒ７がＨもしくはＣ１〜６アルキルであり、
ｍが０、１、２、もしくは３であり、
ｎが１、２、もしくは３である、
新規化合物またはその医薬として許容され得る塩、鏡像異性体、もしくはジアステレオマーに関する。
【０００５】
本発明の別の目的は、式（Ｉ）の新規の化合物と、その製造と、本発明に従った化合物に基づく薬剤およびその製造と、ＴＬＲ７アンタゴニストおよび／またはＴＬＲ８アンタゴニストおよび／またはＴＬＲ９アンタゴニストとしての式（Ｉ）の化合物の使用と、全身性エリテマトーデスまたはループス腎炎の処置または予防のための使用とに関する。式（Ｉ）の化合物は、優れたＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９の拮抗活性を示す。加えて、式（Ｉ）の化合物はまた、良好な細胞毒性、溶解度、ヒトミクロソーム安定性、およびＳＤＰＫといった特性、ならびに低いＣＹＰ阻害も示す。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
定義
「Ｃ１〜６アルキル」という用語は、１〜６個、特に１〜４個の炭素原子を含有する飽和直鎖または分枝鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチルなどを示す。特定の「Ｃ１〜６アルキル」基は、メチル、エチル、およびｎ−プロピルである。
【０００７】
「ハロゲン」および「ハロ」という用語は、本明細書で相互交換可能に使用されており、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを表す。
【０００８】
「ハロＣ１〜６アルキル」という用語は、アルキル基の水素原子のうちの少なくとも１個が、同じまたは異なるハロゲン原子、特にフルオロ原子によって置き換えられたアルキル基を表す。ハロＣ１〜６アルキルの例としては、モノフルオロメチル、ジフルオロメチル、もしくはトリフルオロメチル、モノフルオロエチル、ジフルオロエチル、もしくはトリフルオロエチル、またはモノフルオロプロピル、ジフルオロプロピル、もしくはトリフルオロプロピル、例えば、３，３，３−トリフルオロプロピル、２−フルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、およびトリフルオロエチルが挙げられる。
【０００９】
「ヘテロシクリル」という用語は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１、２、または３環のヘテロ原子を含み、残りの環構成原子が炭素である、３〜１２個の環原子からなる一価の飽和または部分的に不飽和の単環式または二環式の環系を表す。特定の実施形態では、ヘテロシクリルとは、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１、２、または３環のヘテロ原子を含み、残りの環構成原子が炭素である、４〜１０個の環構成原子からなる一価の飽和単環式環系である。単環式飽和ヘテロシクリルについての例は、アジリジニル、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロ−チエニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリル、チアゾリジニル、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１，１−ジオキソ−チオモルホリン−４−イル、アゼパニル、オキサゼパニル、ジアゼパニル、ホモピペラジニル、またはオキサゼパニルである。二環式飽和ヘテロシクリルについての例は、アミノアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、アミノアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、Ｃ１〜６アルキルジアザスピロ［５．５］ウンデカニル、ジアザスピロ［３．５］ノナニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．４］ノナニル、ジアザスピロ［５．５］ウンデカニルおよびジアザスピロ［５．５］ウンデカニルである。部分不飽和ヘテロシクリルについての例は、ジヒドロフリル、イミダゾリニル、ジヒドロ−オキサゾリル、テトラヒドロピリジニル、およびジヒドロピラニルである。単環式または二環式ヘテロシクリルは、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１〜６アルキル、ハロＣ１〜６アルキルまたはヘテロシクリルによってさらに置換することができる。
【００１０】
ｍが０のとき、
【化４】
2022502353.tif 000006
としての構造を有する基が、
【化５】
2022502353.tif 000007
に等しくなることは理解される。
【００１１】
「鏡像異性体」という用語は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を表す。
【００１２】
「ジアステレオマー」という用語は、キラリティーの中心が２つ以上ある、かつその分子が互いに鏡像ではない立体異性体を示す。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、および反応性を有する。
【００１３】
「医薬として許容され得る塩」という用語は、生物学的にまたは他の点で望ましくないものではない塩を表す。医薬として許容され得る塩は、酸付加塩および塩基付加塩の両方を含む。
【００１４】
「医薬として許容され得る酸付加塩」という用語は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、炭酸、リン酸などの無機酸、ならびにギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、アントラニル酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、エンボン酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、およびサリチル酸などの、脂肪族類、脂環式類、芳香族類、アリール基含有脂肪族（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）類、複素環式類、カルボン酸類、およびスルホン酸類の有機酸から選択される有機酸で形成される医薬として許容され得る塩を表す。
【００１５】
「医薬として許容され得る塩基付加塩」という用語は、有機塩基または無機塩基で形成される医薬として許容され得る塩を示す。許容され得る無機塩基の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、マンガン塩、およびアルミニウム塩が挙げられる。医薬として許容され得る有機非毒性塩基から得られる塩は、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペリジン（ｐｉｐｅｒｉｚｉｎｅ）、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、およびポリアミン樹脂など、第一級アミン、第二級アミン、および第三級アミン、天然の置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、および塩基性イオン交換樹脂の塩を含む。
【００１６】
「医薬として活性のある代謝産物」という用語は、特定の化合物またはその塩の本体において代謝を経て生成される薬理学的に活性のある生成物を表す。体内に入った後、ほとんどの薬物は化学反応の基質となり、該化学反応は、該基質の物理的特性および生物学的効果を変化させることができる。これらの代謝的転化は、通常、本発明の化合物の極性に影響を与え、薬物が体内に分配されて体内から排泄される方法を変える。しかしながら、場合によっては、治療効果のために薬物の代謝が必要とされる。
【００１７】
「治療有効量」という用語は、対象へ投与されると、（ｉ）特定の疾患、容態もしくは障害を処置するもしくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、容態もしくは障害のうちの１つ以上の症状を減弱させる、寛解させる、もしくは除去する、または（ｉｉｉ）本明細書に説明する特定の疾患、容態もしくは障害のうちの１つ以上の症状の発症を予防するもしくは遅延させる、本発明の化合物または分子の量を表す。治療有効量は、化合物、処置される疾患の状態、処置される疾患の重症度、対象の齢および相対的な健康状態、投与の経路および形式、担当の医師または獣医の判断、ならびに他の因子によって変わることになる。
【００１８】
「医薬組成物」という用語は、該医薬組成物を必要とする哺乳動物、例えば、ヒトへ投与されるべき医薬として許容され得る賦形剤とともに治療有効量の活性のある医薬成分を含む、合剤または液剤を表す。
【００１９】
ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９のアンタゴニスト
本発明は、式（Ｉ）
【化６】
2022502353.tif 000008
の化合物であって、式中、
Ｒ１が
【化７】
2022502353.tif 000009
であり、式中、Ｒ８がシアノ、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン、ハロＣ１〜６アルキルもしくはニトロであり、
Ｒ２がＣ１〜６アルキル、Ｃ３〜７シクロアルキルもしくはハロＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３が
【化８】
2022502353.tif 000010
であり、式中、
Ｒ４およびＲ５がＨおよびＣ１〜６アルキルから独立して選択され、
Ｒ６がＨ、ハロゲン、Ｃ１〜６アルキルもしくはヘテロシクリルであり、
Ｒ７がＨもしくはＣ１〜６アルキルであり、
ｍが０、１、２、もしくは３であり、
ｎが１、２、もしくは３である、
化合物またはその医薬として許容され得る塩、鏡像異性体、もしくはジアステレオマーに関する。
【００２０】
本発明のさらなる実施形態は，（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物であって、式中、
Ｒ１が
【化９】
2022502353.tif 000011
であり、式中、Ｒ８がシアノであり、
Ｒ２がＣ１〜６アルキルであり、
Ｒ３が
【化１０】
2022502353.tif 000012
であり、式中、
Ｒ４がＨであり、
Ｒ５がＨであり、
Ｒ６がＨ、ハロゲン、テトラヒドロピリジニル、ジアザスピロ［４．４］ノナニル、ヒドロキシピペリジニル、Ｃ１〜６アルキルピペラジニル、モルホリニル、ピペラジニルもしくはピペリジニルであり、
Ｒ７がＨであり、
ｍが１もしくは２であり、
ｎが１、２、もしくは３である、
化合物またはその医薬として許容され得る塩、鏡像異性体、もしくはジアステレオマーである。
【００２１】
本発明のさらなる実施形態は、（ｉｉｉ）（ｉｉ）による式（Ｉ）の化合物であって、式中、
Ｒ１が
【化１１】
2022502353.tif 000013
であり、式中、Ｒ８がシアノであり、
Ｒ２がメチルであり、
Ｒ３が
【化１２】
2022502353.tif 000014
であり、式中、
Ｒ４がＨであり、
Ｒ５がＨであり、
Ｒ６がＨ、ブロモ、テトラヒドロピリジニル、２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−２−イル、ヒドロキシピペリジニル、メチルピペラジニル、モルホリニル、ピペラジニルもしくはピペリジニルであり、
Ｒ７がＨであり、
ｍが１もしくは２であり、
ｎが１、２、もしくは３である、
化合物またはその医薬として許容され得る塩、鏡像異性体、もしくはジアステレオマーである。
【００２２】
本発明のさらなる実施形態は、（ｉｖ）（ｉｉ）による式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｒ６は、Ｃ１〜６アルキルピペラジニルまたはピペラジニルである。
【００２３】
本発明のさらなる実施形態は、（ｖ）（ｉｖ）による式（Ｉ）の化合物であって、式中、Ｒ６は、メチルピペラジニルまたはピペラジニルである。
【００２４】
本発明のさらなる実施形態は、（ｖｉ）（ｉｖ）または（ｖ）による式（Ｉ）の化合物であって、式中、ｎは１である。
【００２５】
本発明の別の実施形態は、（ｖｉｉ）式（Ｉ）の特定の化合物が以下である、すなわち、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（５−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（１，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（７−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（８−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（５−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（６−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（７−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（８−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［５−（４−ヒドロキシ−１−ピペリジル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（５−モルホリノ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［５−（２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−２−イル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［（６−（１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル）−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（７−ピペラジン−１−イル−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、および
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［５−（４−ピペリジル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル、
である化合物、またはその医薬として許容され得る塩、鏡像異性体、もしくはジアステレオマーである。
【００２６】
合成
本発明の化合物は、何らかの従来の手段によって調製することができる。これらの化合物および該化合物の出発材料を合成するのに適したプロセスは、以下のスキームにおいておよび実施例において提供されている。すべての置換基、特にＲ１〜Ｒ８は、別段の記載がない限り、先に定義したとおりである。さらに、別段の明白な記述がない限り、すべての反応、反応条件、略語および記号は、有機化学の当業者に周知の意味を有する。
【００２７】
式（Ｉ）の化合物を調製するための一般的な合成経路を以下のスキーム１に示す。
【００２８】
スキーム１
【化１３】
2022502353.tif 000015
式中、Ｘはハロゲンであり、ｍは０、１、２または３であり、ｎは１、２または３である。
【００２９】
ハロゲン化物（ＩＩＩ）と式（ＩＶ）とのカップリングは、式（Ｖ）の化合物を提供するために、ＤＩＰＥＡもしくはＫ２ＣＯ３などの塩基の存在下で、またはＢｕｃｈｗａｌｄ−Ｈａｒｔｗｉｇアミノ化条件（参考文献：Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．１９９８，３１，８０５−８１８、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１６，１１６，１２５６４−１２６４９、Ｔｏｐｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２１９，１３１−２０９、およびそれらの中で引用された参考文献）下でＲｕｐｈｏｓ  Ｐｄ−Ｇ２などの触媒、およびＣｓ２ＣＯ３などの塩基を用いて達成することができる。ＴＨＦおよび水における水酸化リチウムなどの塩基性条件下での式（Ｖ）の化合物の加水分解は、カルボン酸（ＶＩ）を与え、該カルボン酸（ＶＩ）は、ＨＡＴＵなどのカップリング試薬の存在下で式（ＶＩ）の化合物とカップリングして、式（ＶＩＩ）の化合物を与える。ｔ−ＢｕＯＨ中のＨＣｌなどの酸性条件下で、式（ＶＩＩ）の化合物を環化して式（ＩＩ）を得ることができる。いくつかの実施形態では、式（ＶＩＩ）の化合物は、保護基、例えば、Ｂｏｃを含有していてもよく、該保護基を除去した後に、式（ＩＩ）の最終化合物を生じることになる。
【００３０】
本発明はまた、次のステップ、すなわち、
ａ）酸の存在下での式（ＶＩＩ）
【化１４】
2022502353.tif 000016
の化合物の環化のステップのいずれかを含む式（Ｉ）の化合物の調製のためのプロセスにも関しており、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、ｍおよびｎは、先に定義したとおりである。
【００３１】
ステップａ）において、酸は、例えば、ｔ−ＢｕＯＨ中のＨＣｌであってよい。
【００３２】
式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物はまた、先のプロセスによって製造されるとき、本発明の目的となる。
【００３３】
本発明の化合物は、ジアステレオマーまたは鏡像異性体の混合物として取得することができ、該ジアステレオマーまたは鏡像異性体は、当技術分野で周知の方法、例えば、（キラル）ＨＰＬＣまたはＳＦＣによって分離することができる。
【００３４】
適応症および処置方法
本発明は、ＴＬＲ７ならびに／またはＴＬＲ８ならびに／またはＴＬＲ９のアンタゴニストとして使用することができる化合物を提供し、該アンタゴニストは、ＴＬＲ７および／もしくはＴＬＲ８および／もしくはＴＬＲ９を経た経路の活性化、ならびに全種類のサイトカインおよび全形態の自己抗体の産生を経て媒介される先天免疫応答および適応免疫応答を含むがこれらに限定されない個々の下流の生物学的事象を阻害する。したがって、本発明の化合物は、形質細胞様樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、単球、好中球、ケラチノサイト、上皮細胞を含むがこれらに限定されないＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９を発現する全種類の細胞においてこのような受容体（複数可）を遮断するのに有用である。このようなものとして、該化合物は、全身性エリテマトーデスおよびループス腎炎のための治療薬または予防薬として使用することができる。
【００３５】
本発明は、全身性エリテマトーデスおよびループス腎炎の処置または予防を必要とする患者における該処置または予防のための方法を提供する。
【００３６】
別の実施形態は、このような処置を必要とする哺乳動物における全身性エリテマトーデスおよびループス腎炎を処置または予防する方法を含み、該方法は、該哺乳動物に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、その立体異性体、互変異性体、プロドラッグまたは医薬として許容され得る塩を投与することを含む。
【実施例】
【００３７】
本発明は、以下の実施例に対する参照によってより完全に理解されることになる。しかしながら、本実施例は、本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。
【００３８】
略語
本発明は、以下の実施例に対する参照によってより完全に理解されることになる。しかしながら、本実施例は、本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。
【００３９】
本明細書で使用する略語は、次のとおりである。
【００４０】
ＡＣＮ：アセトニトリル
Ｂｏｃ２Ｏ：二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
Ｔｆ２Ｏ：トリフルオロメタンスルホン酸無水物
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＤＩ  薬物間相互作用
ＤＩＰＥＡ  ジエチルイソプロピルアミン
ＤＭＡ  ジメチルアセトアミド
ＥＡまたはＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＦＡ：ギ酸
ＨＡＴＵ  １−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスファート
ＨＬＭ  ヒト肝ミクロソーム
ｈｒ  時間
ｈｒｓ  時間
ＩＣ５０：５０％阻害濃度
ＬＣＭＳ  液体クロマトグラフィー質量分析
ＬＹＳＡ  凍結乾燥溶解度アッセイ
ＭＳ：質量分析法
ＰＥ：石油エーテル
分取ＨＰＬＣ：分取高速液体クロマトグラフィー
ｒｔ：室温
ＲＴ：保持時間
ＲｕＰｈｏｓ  Ｐｄ  Ｇ２：第２世代のクロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジイソプロポキシ−１，１’−ビフェニル）［２−（２’−アミノ−１，１’−ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）
ＳＦＣ：超臨界流体クロマトグラフィー
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ｖ／ｖ  体積比
【００４１】
一般的な実験条件
中間体および最終化合物を、以下の機器のうちの１つを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって精製した：ｉ）Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＰ１システムおよびＱｕａｄ１２／２５Ｃａｒｔｒｉｄｇｅモジュール。ｉｉ）ＩＳＣＯコンビフラッシュクロマトグラフィー機。シリカゲル銘柄および孔径：ｉ）ＫＰ−ＳＩＬ６０Å、粒径：４０〜６０μｍ、ｉｉ）ＣＡＳ登録番号：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ：６３２３１−６７−４、粒径：４７〜６０ミクロンシリカゲル、ｉｉｉ）Ｑｉｎｇｄａｏ  Ｈａｉｙａｎｇ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ製ＺＣＸ、孔：２００〜３００または３００〜４００。
【００４２】
中間体および最終化合物を、ＸＢｒｉｄｇｅ（商標）Ｐｒｅｐ−Ｃ１８（５μｍ、ＯＢＤ（商標）３０×１００ｍｍ）カラム、ＳｕｎＦｉｒｅ（商標）Ｐｒｅｐ−Ｃ１８（５μｍ、ＯＢＤ（商標）３０×１００ｍｍ）カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ−Ｃ１８（１０μｍ、２５×１５０ｍｍ）またはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ−Ｃ１８（１０μｍ、２５×１５０ｍｍ）を用いる逆相カラム上での分取ＨＰＬＣによって精製した。Ｗａｔｅｒｓ  ＡｕｔｏＰ精製システム（試料管理装置２７６７、ポンプ２５２５、検出器：Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱおよびＵＶ２４８７、溶媒系：アセトニトリルおよび水中の０．１％水酸化アンモニウム、アセトニトリルおよび水中の０．１％ＦＡまたはアセトニトリルおよび水中の０．１％ＴＦＡ）。またはＧｉｌｓｏｎ−２８１精製システム（ポンプ３２２、検出器：ＵＶ１５６、溶媒系：アセトニトリルおよび水中の０．０５％水酸化アンモニウム、アセトニトリルおよび水中の０．２２５％ＦＡ、アセトニトリルおよび水中の０．０５％ＨＣｌ、アセトニトリルおよび水中の０．０７５％ＴＦＡ、またはアセトニトリルおよび水）。
【００４３】
ＳＦＣキラル分離について、中間体を、キラルカラム（Ｄａｉｃｅｌ  ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＩＣ、５μｍ、３０×２５０ｍｍ）、ＡＳ（１０μｍ、３０×２５０ｍｍ）またはＡＤ（１０μｍ、３０×２５０ｍｍ）によって、Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  Ｍｕｔｉｇｒａｍ  ＩＩＩシステムＳＦＣ、Ｗａｔｅｒｓ  ８０Ｑ分取ＳＦＣまたはＴｈａｒ８０分取ＳＦＣ、溶媒系：ＣＯ２およびＩＰＡ（ＩＰＡ中の０．５％ＴＥＡ）またはＣＯ２およびＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ中の０．１％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）、背圧１００バール、２５４ｎｍまたは２２０ｎｍでの検出紫外線を用いて分離した。
【００４４】
化合物のＬＣ／ＭＳスペクトルは、ＬＣ／ＭＳ（Ｗａｔｅｒｓ（商標）Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２７９５−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２０２０−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱまたはＡｇｉｌｅｎｔ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ６１１０−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＱ）を用いて取得し、ＬＣ／ＭＳ条件は、以下のとおりとした（試行時間３分または１．５分）。
【００４５】
酸性条件Ｉ：Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．１％ＴＦＡ、Ｂ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡ、
酸性条件ＩＩ：Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．０３７５％ＴＦＡ、Ｂ：アセトニトリル中の０．０１８７５％ＴＦＡ、
塩基性条件Ｉ：Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．１％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ、Ｂ：アセトニトリル、
塩基性条件ＩＩ：Ａ：Ｈ２Ｏ中の０．０２５％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ、Ｂ：アセトニトリル、
中性条件：Ａ：Ｈ２Ｏ、Ｂ：アセトニトリル。
質量スペクトル（ＭＳ）：概して、親質量を示すイオンのみが報告されており、別段の記載がない限り、引用される質量イオンは、正の質量イオン（ＭＨ）＋である。
【００４６】
ＮＭＲスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ４００ＭＨｚを用いて取得した。
【００４７】
マイクロ波支援反応は、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  Ｓｉｘｔｙマイクロ波合成装置において実施した。空気感受性試薬を包含する反応はすべて、アルゴン雰囲気下または窒素雰囲気下で実施した。試薬は、別段の記述がない限り、さらなる精製なしで、商業的供給元から受領したまま使用した。
【００４８】
調製例
以下の例は、本発明の意味を説明するために企図されているが、決して、本発明の意味の範囲内での制限であるものではない。
【００４９】
実施例１
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（５−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化１５】
2022502353.tif 000017
【００５０】
表題化合物は、以下のスキームによって調製した。
【化１６】
2022502353.tif 000018
【００５１】
ステップ１：メチル（２Ｒ，６Ｒ）−６−メチルモルホリン−２−カルボキシラートヒドロクロリド（化合物１ｂ）の調製
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｒ）−４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−６−メチル−モルホリン−２−カルボン酸（化合物１ａ、ＣＡＳ：１５８１７５２−９３−３、ＷＵＸＩ  ＡＰＰＴＥＣ（Ｔｉａｎｊｉｎ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ、カタログ：ＲＣ−１６０３２５、１．５ｇ、６．１ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でＳＯＣｌ２（１ｍＬ）を滴下して添加した。この反応混合物を２時間加熱還流し、次に室温へ冷却し、真空で濃縮して、粗化合物１ｂ（１．２ｇ、１００％収率）を白色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝９．６３（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、４．５５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１０．８８Ｈｚ，１Ｈ）、３．９５（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝１０．２１，５．９３Ｈｚ，１Ｈ）、３．４１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１０．６４Ｈｚ，１Ｈ）、３．２２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．９８Ｈｚ，１Ｈ）、２．９４（ｔ，Ｊ＝１２．１０Ｈｚ，１Ｈ）、２．６５（ｔ，Ｊ＝１１．９２Ｈｚ，１Ｈ）、１．１６（ｄ，Ｊ＝６．３６Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５２】
ステップ２：（２Ｒ，６Ｒ）−メチル４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボキシラート（化合物１ｄ）の調製
ジオキサン（１０ｍＬ）中の５−ブロモキノリン−８−カルボニトリル（化合物１ｃ、ＣＡＳ：５０７４７６−７０−２、Ｂｅｐｈａｒｍ、カタログ：Ｂ２１９９３５、５００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）、（２Ｒ，６Ｒ）−メチル６−メチルモルホリン−２−カルボキシラートヒドロクロリド（化合物１ｂ、４２０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓ  Ｇ２（５０ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（１．０５ｇ、３．２ｍｍｏｌ）の混合物にＮ２を入れた後、８０℃で一晩撹拌した。この反応混合物を室温に冷却した後、固形物を濾別し、フィルタケークをＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄した。合わせた濾液を真空で濃縮して粗混合物を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜２：１で溶離）によって精製して、化合物１ｄ（５４０ｍｇ、収率７９％）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値３１２［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値３１２［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５３】
ステップ３：［（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボン酸（化合物１ｅ）の調製
ＴＨＦ（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｒ）−メチル４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボキシラート（化合物１ｄ、５４０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（１４６ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で３時間撹拌した。ＴＨＦを蒸発させた後、残った水溶液をＨＣｌ（１Ｎ）によってｐＨ約６〜７に調整し、この混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮して、化合物１ｅ（５０１ｍｇ、９５％収率）を淡黄色の固形物として得、これをさらに精製することなく次の反応に直接使用した。ＭＳ：計算値２９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値２９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５４】
ステップ４：２−（アミノメチル）−３−ブロモアニリン（化合物１ｇ）の調製
２−アミノ−６−ブロモ−ベンゾニトリル（化合物１ｆ、０．５ｇ、２．５ｍｍｏｌ）およびＢＨ３（ＴＨＦ中１Ｍ、２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の混合物を３時間加熱還流した。冷却後、ＥｔＯＨ（５ｍＬ）を緩徐に添加することによってこの混合物をクエンチした後、溶媒を真空で除去した。得られた残分をＥＡ（５０ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＨの水溶液（０．５Ｎ、２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮して、化合物１ｇ（４８０ｍｇ、９５％収率）を明褐色の蝋状固形物として得、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。ＭＳ：計算値２０１および２０３［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値２０１および２０３［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５５】
ステップ５：（２Ｒ，６Ｒ）−Ｎ−（２−アミノ−６−ブロモベンジル）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボキサミド）（化合物１ｈ）の調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボン酸（化合物１ｅ、１００ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、２−（アミノメチル）−３−ブロモアニリン（化合物１ｇ、６７．６ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１５３ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（６５．２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を真空で除去した後、残分をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中に溶解し、水（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜２：１で溶離）によって精製して、化合物１ｈ（１３０ｍｇ、８０％収率）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４８０および４８２［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４８０および４８２［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００５６】
ステップ６：５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（５−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル（実施例１）の調製
ＡｃＯＨ（５ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｒ）−Ｎ−（２−アミノ−６−ブロモベンジル）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボキサミド（化合物１ｈ、１３０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃で３時間撹拌した。室温へ冷却した後、溶媒を真空で蒸発させ、残分をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中に溶解した後、ＮａＨＣＯ３の水溶液（１Ｎ、１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：３〜０：１で溶離）によって精製して、実施例１（１１０ｍｇ、８６％収率）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６２および４６４［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６２および４６４［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．０２（ｄｄ，Ｊ＝４．２２，１．５３Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，１．５９Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，４．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｔ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），４．５８−４．７３（ｍ，３Ｈ），４．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．１２，６．２７，２．２０Ｈｚ，１Ｈ）、３．７０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．１０Ｈｚ，１Ｈ）、３．４４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．１０Ｈｚ，１Ｈ），２．９６（ｔ，Ｊ＝１１．３１Ｈｚ，１Ｈ）、２．８１（ｄｄ，Ｊ＝１１．９２，１０．３３Ｈｚ，１Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５７】
実施例２
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化１７】
2022502353.tif 000019
【００５８】
２−アミノ−６−ブロモ−ベンゾニトリル（化合物１ｆ）の代わりに２−アミノ−５−ブロモ−ベンゾニトリルを使用することによって、実施例１の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例２（３０１ｍｇ）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６２および４６４［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６２および４６４［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．０１（ｄｄ，Ｊ＝４．２２，１．６５Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．６２，１．６５Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，４．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄｄ，Ｊ＝８．４４，２．３２Ｈｚ，１Ｈ），７．０９−７．１４（ｍ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝８．４４Ｈｚ，１Ｈ），４．５９−４．６６（ｍ，３Ｈ），４．１９（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．１５，６．３０，２．２６Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｄｔ，Ｊ＝１１．９８，２．１４Ｈｚ，１Ｈ），３．３９−３．４７（ｍ，１Ｈ），２．９４（ｄｄ，Ｊ＝１１．９２，１０．７０Ｈｚ，１Ｈ），２．８０（ｄｄ，Ｊ＝１１．９８，１０．２７Ｈｚ，１Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５９】
実施例３
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（１，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化１８】
2022502353.tif 000020
【００６０】
２−アミノ−６−ブロモ−ベンゾニトリル（化合物１ｆ、）の代わりに２−アミノベンゾニトリルを使用することによって、実施例１の調製と同様に、表題化合物を調製した。
【００６１】
実施例３（１３．５ｍｇ）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値３８４［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値３８４［（Ｍ＋Ｈ）＋］  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）＝９．０１−９．０７（ｍ，１Ｈ），８．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．５７，８．６０Ｈｚ，１Ｈ）、８．２０（ｄｄ，Ｊ＝２．２０，７．９７Ｈｚ，１Ｈ）、７．７２（ｄｄｄ，Ｊ＝１．０７，４．２７，８．６０Ｈｚ，１Ｈ）、７．２６〜７．４１（ｍ，３Ｈ），７．１９〜７．２４（ｍ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，１Ｈ）、５．０３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１０．５４Ｈｚ，１Ｈ），４．９０−４．９４（ｍ，２Ｈ），４．２７−４．３７（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．８０Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．０５Ｈｚ，１Ｈ）、３．１５（ｔ，Ｊ＝１１．２３Ｈｚ，１Ｈ），２．８６（ｄｄ，Ｊ＝１０．４２，１２．３０Ｈｚ，１Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝６．２７Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６２】
実施例４
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（７−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化１９】
2022502353.tif 000021
【００６３】
２−アミノ−６−ブロモ−ベンゾニトリル（化合物１ｆ）の代わりに２−アミノ−４−ブロモ−ベンゾニトリルを使用することによって、実施例１の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例４（１３０ｍｇ）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６２および４６４［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６２および４６４［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．０２（ｄｄ，Ｊ＝４．２２，１．６５Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，１．７１Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，４．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄｄ，Ｊ＝８．０７，１．９６Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），４．５４−４．６４（ｍ，３Ｈ），４．２０（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．１８，６．２７，２．２６Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．９８Ｈｚ，１Ｈ），３．４０−３．４７（ｍ，１Ｈ），２．９４（ｄｄ，Ｊ＝１１．８６，１０．７６Ｈｚ，１Ｈ），２．７７−２．８５（ｍ，１Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６４】
実施例５
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（８−ブロモ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２０】
2022502353.tif 000022
【００６５】
２−アミノ−６−ブロモ−ベンゾニトリル（化合物１ｆ）の代わりに２−アミノ−３−ブロモ−ベンゾニトリルを使用することによって、実施例１の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例５（１３０ｍｇ）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６２および４６４［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６２および４６４［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．０２（ｄｄ，Ｊ＝４．１６，１．５９Ｈｚ，１Ｈ），８．７７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．４４Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，４．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），６．８５−７．０１（ｍ，２Ｈ），４．７４（ｄｄ，Ｊ＝１０．４５，２．６３Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ）４．２４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．７８（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．４７Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．９８Ｈｚ，１Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝１１．３１Ｈｚ，１Ｈ），２．８１（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝１１．２５Ｈｚ，１Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６６】
実施例６
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（５−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２１】
2022502353.tif 000023
【００６７】
表題化合物は、以下のスキームによって調製した。
【化２２】
2022502353.tif 000024
【００６８】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−シアノ−３−ニトロフェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｃ）の調製
ジオキサン（（２０ｍＬ）中の２−クロロ−６−ニトロベンゾニトリル（化合物６ａ、１．１ｇ、６．０ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｂ、１．２ｇ、６．６ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（２．９ｇ、９．０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１１０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびキサントホス（１０５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の混合物にＮ２を入れ、８０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、この反応混合物をフィルタにかけ、フィルタケークをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空で濃縮して粗残分を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜１：１で溶離）によって精製して、化合物６ｃ（１．５ｇ、７５％収率）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値３３３［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値３３３［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００６９】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−アミノ−２−シアノフェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｄ）の調製
ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）およびＴＨＦ（１５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（２−シアノ−３−ニトロフェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｃ、１．５ｇ、４．５ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＯＨ）２（３１．７ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の混合物を水素雰囲気下で一晩撹拌した。触媒を濾別した後、濾液を真空中で濃縮して、化合物６ｄ（１．３ｇ、９５％収率）を明褐色の蝋状固形物として得、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。ＭＳ：計算値３０３［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値３０３［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００７０】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−アミノ−２−（アミノメチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｅ）の調製
ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−アミノ−２−シアノフェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｅ、０．５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）およびＢＨ３（ＴＨＦ中１Ｍ、２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の混合物を３時間加熱還流した。室温に冷却した後、この反応をＥｔＯＨ（５ｍＬ）の滴下による添加によってクエンチし、溶媒を真空で除去した。得られた残分をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＨ水溶液（０．５Ｎ、２０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮して、化合物６ｅ（４５０ｍｇ、８８％収率）を明褐色の蝋状固形物として得、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。ＭＳ：計算値３０７［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値３０７［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００７１】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−アミノ−２−（（（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボキサミド）メチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｆ）の調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボン酸（化合物２ｅ、１５０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−アミノ−２−（アミノメチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｅ、１５５ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２３０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＩＰＥＡ（１３０ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を真空で除去した後、残分をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中に溶解し、水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：３〜０：１で溶離）によって精製して、化合物６ｆ（２０１ｍｇ、６８％収率）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値５８６［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値５８６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００７２】
ステップ５：５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（５−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル（実施例６）の調製
ｔｅｒｔ−ブタノール（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−（３−アミノ−２−（（（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボキサミド）メチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｆ、１４０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に濃ＨＣｌ（１ｍＬ）を添加し、混合物を８０℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、溶媒を真空で除去して、粗生成物を得、これをＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）で洗浄した。この固形物を濾過により収集し、空気乾燥させて、実施例６（１２０ｍｇ、８８％収率）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．１０（ｄｄ，Ｊ＝４．４６，１．５３Ｈｚ，１Ｈ），８．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．６２，１．５３Ｈｚ，１Ｈ），８．２８（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝８．６８，４．５２Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．３５−７．４３（ｍ，１Ｈ），７．１９（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄｄ，Ｊ＝１０．５１，２．５７Ｈｚ，１Ｈ），４．８５−４．８９（ｍ，１Ｈ），４．２８−４．３８（ｍ，１Ｈ），３．８３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．８６Ｈｚ，１Ｈ），３．４８−３．６５（ｍ，２Ｈ），３．３８−３．４５（ｍ，４Ｈ），３．１１−３．２２（ｍ，５Ｈ），２．９２（ｄｄ，Ｊ＝１２．２９，１０．４５Ｈｚ，１Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７３】
実施例７
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（６−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２３】
2022502353.tif 000025
【００７４】
２−クロロ−６−ニトロベンゾニトリル（化合物６ａ）の代わりに５−クロロ−２−ニトロベンゾニトリルを使用することにより、実施例６の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例７（１２ｍｇ）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．３８（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．１９Ｈｚ，１Ｈ），９．２３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝４．２８Ｈｚ，１Ｈ），８．４５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），８．１１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５．０１Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．６８Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．１７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝９．２９Ｈｚ，１Ｈ），４．８７（ｓ，２Ｈ），４．３２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．４９Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１０．８８Ｈｚ，１Ｈ），３．５９−３．５４（ｍ，２Ｈ），３．５１−３．４７（ｍ，４Ｈ），３．４３−３．３８（ｍ，４Ｈ），３．２４（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝９．６０Ｈｚ，１Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝５．８７Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７５】
実施例８
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（７−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２４】
2022502353.tif 000026
【００７６】
２−クロロ−６−ニトロベンゾニトリル（化合物６ａ）の代わりに４−クロロ−２−ニトロベンゾニトリルを使用することにより、実施例６の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例８（２４ｍｇ）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．５６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ），９．２９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝４．７７Ｈｚ，１Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝８．１９Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝８．１９，５．２６Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．４４Ｈｚ，１Ｈ），６．９１−７．０１（ｍ，２Ｈ），５．２４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝９．９０Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），４．３５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝６．４８Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．６２Ｈｚ，１Ｈ），３．５９−３．６６（ｍ，１Ｈ），３．５１（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝５．９９，３．４２Ｈｚ，４Ｈ），３．３７−３．４６（ｍ，４Ｈ），３．２２−３．３１（ｍ，１Ｈ），３．０７−３．１６（ｍ，１Ｈ），１．４５（ｄ，Ｊ＝５．９９Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７７】
実施例９
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（８−ピペラジン−１−イル−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２５】
2022502353.tif 000027
【００７８】
２−クロロ−６−ニトロベンゾニトリル（化合物６ａ）の代わりに３−クロロ−２−ニトロベンゾニトリルを使用することにより、実施例６の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例９（１０ｍｇ）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．０２（ｄｄ，Ｊ＝４．２８，１．５９Ｈｚ，１Ｈ）８．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，１．７１Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ）７．７２（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，４．１６Ｈｚ，１Ｈ）７．２９−７．３８（ｍ，３Ｈ）７．０８（ｔ，Ｊ＝４．４０Ｈｚ，１Ｈ）５．３３（ｄｄ，Ｊ＝１０．３９，２．５７Ｈｚ，１Ｈ），４．９１（ｓ，２Ｈ）４．３６（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．２７，６．３６，２．２０Ｈｚ，１Ｈ），３，７７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．７４Ｈｚ，１Ｈ）３．３８−３．５７（ｍ，５Ｈ）３．０７−３．２４（ｍ，５Ｈ）２．８２（ｄｄ，Ｊ＝１２．３５，１０．３９Ｈｚ，１Ｈ）１．４３（ｄ，Ｊ＝６．３６Ｈｚ，３Ｈ）。
【００７９】
実施例１０
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［５−（４−ヒドロキシ−１−ピペリジル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２６】
2022502353.tif 000028
【００８０】
ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｂ）の代わりにピペリジン−４−オールを使用することにより、実施例６の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例１０（５ｍｇ）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４８３［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４８３［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．０４（ｄｄ，Ｊ＝４．２２，１．５３Ｈｚ，１Ｈ），８．７５（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，１．５９Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄｄ，Ｊ＝８．６２，４．２２Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．１０−７．１３（ｍ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄｄ，Ｊ＝１０．５８，２．６３Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｄ，Ｊ＝３．４２Ｈｚ，２Ｈ），４．３３（ｄｄｄ，Ｊ＝１０．１５，６．３０，２．２６Ｈｚ，１Ｈ）３．７０−３．８２（ｍ，２Ｈ），３．５１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．３５Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝１１．２５Ｈｚ，１Ｈ），２．９９−３．０７（ｍ，２Ｈ），２．９２（ｓ，１Ｈ），２．８２−２．９０（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．８１（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．０３（ｍ，２Ｈ），１．６３−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【００８１】
実施例１１
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（５−モルホリノ−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２７】
2022502353.tif 000029
【００８２】
ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｂ）の代わりにモルホリンを使用することにより、実施例６の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例１１（２１ｍｇ）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６９［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６９［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．４２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ），９．２３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝３．６７Ｈｚ，１Ｈ），８．４６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．０９Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．６３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．４６Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｔ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ），５．２１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），４．８２−４．９７（ｍ，２Ｈ），４．３４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．９７（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｂｒ  ｓ，４Ｈ），３．６０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．９８Ｈｚ，１Ｈ），３．２６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．０５（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝１０．７０Ｈｚ，１Ｈ），２．９１−３．００（ｍ，４Ｈ），１．４４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５．６２Ｈｚ，３Ｈ）。
【００８３】
実施例１２
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２８】
2022502353.tif 000030
【００８４】
ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｂ）の代わりに１−メチルピペラジンを使用することにより、実施例６の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例１２（１１ｍｇ）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４８２［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４８２［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．０１（ｄ，Ｊ＝３．１８Ｈｚ，１Ｈ），８．７４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｄｄ，Ｊ＝８．４４，４．１６Ｈｚ，１Ｈ），７．２８−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），５．０５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝９．４１Ｈｚ，１Ｈ），４．８５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝４．８９Ｈｚ，２Ｈ），４．２５−４．３６（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．６２Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．１０Ｈｚ，１Ｈ），３．２７（ｂｒ  ｓ，４Ｈ），３．０６−３．１６（ｍ，５Ｈ），２．８６−２．９１（ｍ，１Ｈ），２．８４（ｓ，３Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝６．１１Ｈｚ，３Ｈ）。
【００８５】
実施例１３
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−［５−（２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−２−イル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化２９】
2022502353.tif 000031
【００８６】
ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｂ）の代わりにｔｅｒｔ−ブチル２，７−ジアザスピロ［４．４］ノナン−２−カルボキシラートを使用することにより、実施例６の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例１３（１６ｍｇ）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値５０８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値５０８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．３８（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．１９Ｈｚ，１Ｈ），９．２２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝４．６５Ｈｚ，１Ｈ），８．４４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），８．１２（ｂｒ  ｄｄ，Ｊ＝８．１９，４．８９Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｔ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．３１Ｈｚ，１Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．８２Ｈｚ，１Ｈ），５．２０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝９．４１Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．３４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．９６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．２５Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．１０Ｈｚ，１Ｈ），３．３６−３．５３（ｍ，７Ｈ），３．２２−３．３０（ｍ，１Ｈ），３．０４（ｂｒ  ｔ，Ｊ＝１１．３１Ｈｚ，１Ｈ），２．０９−２．２８（ｍ，４Ｈ），１．４４（ｄ，Ｊ＝５．９９Ｈｚ，３Ｈ），１．２７−１．３４（ｍ，２Ｈ）。
【００８７】
実施例１４
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化３０】
2022502353.tif 000032
【００８８】
表題化合物は、以下のスキームによって調製した。
【化３１】
2022502353.tif 000033
【００８９】
ステップ１：２−（２−ブロモ−６−ニトロ−フェニル）アセトニトリル（化合物１４ｃ）の調製
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．２ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）の冷却した溶液に、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２−クロロアセトニトリル（化合物１４ｂ、３７５ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）および１−ブロモ−３−ニトロ−ベンゼン（化合物１４ａ、１．０ｇ、５．０ｍｍｏｌ）の溶液を１０分以内に添加した。添加中、反応温度を−１０℃〜−２０℃に維持した。添加が完了して約１０分後、この混合物をＨＣｌ水溶液（１Ｎ）でｐＨ約５に酸性化した。得られた混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で２回抽出し、有機層を水および鹹水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜５：１で溶離）によって精製して、化合物１４ｃ（７１０ｍｇ、５９％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値２３９および２４１［（Ｍ＋Ｈ）−］、実測値２３９および２４１［（Ｍ＋Ｈ）−］。
【００９０】
ステップ２：２−（２−アミノエチル）−３−ブロモ−アニリン（化合物１４ｄ）の調製
２−（２−ブロモ−６−ニトロ−フェニル）アセトニトリル（化合物１４ｃ、７１０ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）およびＢＨ３溶液（ＴＨＦ中１Ｍ、２５ｍＬ、２５ｍｍｏｌ）の混合物を７５℃で４時間撹拌した後、ＨＣｌ溶液（６Ｎ、２５ｍＬ）を０℃の反応混合物に添加した。有機溶媒を真空で除去した後、水相をＮａＯＨ溶液（４Ｎ）でｐＨ１０に塩基性化した後、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を鹹水（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮して、褐色の残分を得た。さらに精製することなく、この残分をＳｎＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（３．２７ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）および無水エタノール（２０ｍＬ）と混合し、７０℃で２時間加熱した。室温に冷却した後、この反応混合物を氷（１００ｇ）中へと注ぎ、ＮａＨＣＯ３溶液（５％）の添加によりｐＨを約８に調整した。得られた塩基性混合物を１時間撹拌した後、ＥＡ（５０ｍＬ）により３回抽出した。合わせた有機層を水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮して、化合物１４ｄ（３１０ｍｇ、５０％収率）を褐色の油として得た。ＭＳ：計算値２１５および２１７［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値２１５および２１７［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００９１】
ステップ３：（２Ｒ，６Ｒ）−Ｎ−［２−（２−アミノ−６−ブロモ−フェニル）エチル］−４−（８−シアノ−５−キノリル）−６−メチル−モルホリン−２−カルボキサミド（化合物１４ｅ）の調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２−（２−アミノエチル）−３−ブロモ−アニリン（化合物１４ｄ、１２０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）、（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノ−５−キノリル）−６−メチル−モルホリン−２−カルボン酸（化合物１ｅ、８３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１５ｍＬ、０．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＡＴＵ（１０６ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で３０分間撹拌した。この混合物を水（３０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を３回抽出し、合わせた有機層を鹹水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１〜１：２で溶離）によって精製して、化合物１４ｅ（１１０ｍｇ、７９％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４９４および４９６［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４９４および４９６［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００９２】
ステップ４：５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル（実施例１４）の調製
５ｍＬのマイクロ波バイアルに（２Ｒ，６Ｒ）−Ｎ−（２−アミノ−６−ブロモフェネチル）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボキサミド（化合物１４ｅ、１１０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ（１ｍｌ、プロピルホスホン酸無水物溶液、酢酸エチル中５０重量％）を入れた。反応混合物を１００℃のマイクロ波反応器内で３０分間加熱した後、これを濃縮し、残分を飽和ＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１〜１：７で溶離）によって精製して、実施例１４（７０ｍｇ、６６％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４７６および４７８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４７６および４７８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ９．０２（ｄｄ，Ｊ＝４．２２，１．６５Ｈｚ，１Ｈ），８．７９（ｄｄ，Ｊ＝８．６２，１．５３Ｈｚ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，４．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ），６．９５−７．１０（ｍ，２Ｈ），４．６４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），４．１８−４．２９（ｍ，１Ｈ），３．７６−３．８１（ｍ，１Ｈ），３．４８−３．７４（ｍ，３Ｈ），３．４４−３．４７（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．２９（ｍ，１Ｈ），２．８７−３．０２（ｍ，１Ｈ），２．７３−２．８７（ｍ，１Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝６．３６Ｈｚ，３Ｈ）。
【００９３】
実施例１５
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化３２】
2022502353.tif 000034
【００９４】
表題化合物は、以下のスキームによって調製した。
【化３３】
2022502353.tif 000035
【００９５】
ジオキサン（５ｍＬ）中の５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル（実施例１４、３０ｍｇ、０．０６３ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓ  Ｇ２（４．６ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（６１ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の混合物にＮ２を入れ、８０℃で一晩撹拌した。室温に冷却した後、この反応混合物をセライトを通じてフィルタにかけ、フィルタケークをＥＡ（１０ｍＬ）で２回洗浄し、合わせた濾液を真空で濃縮した。この残分を分取ＨＰＬＣによって精製して、実施例１５（４．５ｍｇ、１８％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値３９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値３９８［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ９．０４（ｄｄ，Ｊ＝４．２２，１．５３Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．６２，１．５３Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，４．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．２４−７．３６（ｍ，４Ｈ），５．０１（ｄｄ，Ｊ＝１０．３９，２．４５Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−４．３９（ｍ，１Ｈ），３．８１−３．９１（ｍ，２Ｈ），３．７２−３．８１（ｍ，１Ｈ），３．５３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１２．３５Ｈｚ，１Ｈ），３．２５−３．２９（ｍ，２Ｈ），３．１７（ｔ，Ｊ＝１１．１３Ｈｚ，１Ｈ），２．８４（ｄｄ，Ｊ＝１２．２３，１０．３９Ｈｚ，１Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【００９６】
実施例１６
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［（６−（１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル）−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化３４】
2022502353.tif 000036
表題化合物は、以下のスキームによって調製した。
【化３５】
2022502353.tif 000037
【００９７】
ステップ１：ｔｅｒｔ−ブチル４−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノ−５−キノリル）−６−メチル−モルホリン−２−イル］−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−６−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボキシラート（１６ｂ）の調製
【００９８】
１，４−ジオキサン（５ｍＬ）中の５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−（６−ブロモ−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）−６−メチル−モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル（実施例１４、３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボキシラート（化合物１６ａ、５５．６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２Ｍ、０．０９ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２．ＤＣＭ（５ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物をＮ２下で１００℃で２時間撹拌した。この反応混合物を真空で濃縮し、残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１〜１：２で溶離）によって精製して、化合物１６ｂ（１９ｍｇ、５４％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値５７９［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値５７９［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【００９９】
ステップ２：５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［６−（１，２，３，６−テトラヒドロピリジン−４−イル）−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル（実施例１６）の調製
【０１００】
ＤＣＭ（３ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル４−［２−［（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノ−５−キノリル）−６−メチル−モルホリン−２−イル］−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−６−イル］−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボキシラート（化合物１６ｂ、１９ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃のＴＦＡ（１ｍＬ）を滴下して添加したこの反応混合物を室温で１時間撹拌した後、濃縮して粗生成物を得、これを分取ＨＰＬＣにより精製して実施例１６（１３ｍｇ、８２％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４７９［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４７９［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ９．０５（ｄｄ，Ｊ＝４．２８，１．５９Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，１．５９Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．６８，４．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．３３−７．４３（ｍ，２Ｈ），７．２７−７．３２（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｄｄ，Ｊ＝７．５２，１．１６Ｈｚ，１Ｈ），５．７０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１０．５２，２．５７Ｈｚ，１Ｈ），４．３０−４．４５（ｍ，１Ｈ），３．７０−３．９１（ｍ，５Ｈ），３．４５−３．６３（ｍ，３Ｈ），３．３１−３．３４（ｍ，２Ｈ），３．１３−３．２３（ｍ，１Ｈ），２．８５（ｄｄ，Ｊ＝１２．１７，１０．４５Ｈｚ，１Ｈ），２．５９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，２Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１０１】
実施例１７
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−（７−ピペラジン−１−イル−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化３６】
2022502353.tif 000038
【０１０２】
表題化合物は、以下のスキームによって調製した。
【化３７】
2022502353.tif 000039
【０１０３】
ステップ１：２−（５−フルオロ−２−ニトロ−フェニル）アセトニトリル（化合物１７ｂ）の調製
ＴＨＦ（２０ｍｌ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（３．２ｇ、２８．４ｍｍｏｌ）の冷却した溶液に、ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の２−クロロアセトニトリル（化合物１４ｂ、１．０ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）および１−フルオロ−４−ニトロベンゼン（化合物１７ａ、２．０ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）の溶液を１０分以内に添加した。添加中、反応温度を−１０℃〜−２０℃に維持した。添加が完了して約１０分後、この混合物をＨＣｌ（１Ｎ）でｐＨ約５に酸性化し、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を水および鹹水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２０：１〜４：１で溶離）によって精製して、化合物１７ｂ（８２０ｍｇ、３２％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値１７９［（Ｍ＋Ｈ）−］、実測値１７９［（Ｍ＋Ｈ）−］。
【０１０４】
ステップ２：ｔｅｒｔ−ブチル４−（３−（シアノメチル）−４−ニトロ−フェニル］ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物１７ｄ）の調製
２−（５−フルオロ−２−ニトロフェニル）アセトニトリル（化合物１７ｂ、５００ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキシラート（化合物１７ｃ、１．５ｇ、８．３ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で２時間加熱した後、Ｈ２Ｏ（５０ｍｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を、鹹水（２０ｍＬ）で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残分をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜１：２で溶離）によって精製して、化合物１７ｄ（８２０ｍｇ、８４％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値３４５［（Ｍ＋Ｈ）−］、実測値３４５［（Ｍ＋Ｈ）−］。
【０１０５】
ステップ３：ｔｅｒｔ−ブチル４−［４−アミノ−３−（２−アミノエチル）フェニル］ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物１７ｅ）の調製
ｔｅｒｔ−ブチル４−［３−（シアノメチル）−４−ニトロ−フェニル］ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物１７ｄ、５００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）およびＢＨ３（ＴＨＦ中１Ｍ、２０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の混合物を３時間加熱還流した。室温に冷却した後、この混合物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）の滴下による添加によってクエンチし、溶媒を真空で除去した。残分をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＨ水溶液（０．５Ｎ、２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。得られた黄色の油に、ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）、ＴＨＦ（１５ｍＬ）およびＰｄ（ＯＨ）２（１００ｍｇ）を添加した。次に、この反応混合物を水素ガス雰囲気（１気圧）下で、室温で３時間撹拌した。触媒を濾別した後、濾液を真空で濃縮して、化合物１７ｅ（３３０ｍｇ、７３％収率）を褐色の油として得、これをさらに精製することなく次のステップに直接使用した。ＭＳ：計算値３２１［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値３２１［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【０１０６】
ステップ４：ｔｅｒｔ−ブチル４−［４−アミノ−３−［２−［［（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノ−５−キノリル）−６−メチル−モルホリン−２−カルボニル］アミノ］エチル］フェニル］ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物１７ｆ）の調製
ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノキノリン−５−イル）−６−メチルモルホリン−２−カルボン酸（化合物２ｅ、３５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４−アミノ−３−（２−アミノエチル）フェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物１７ｅ、３７．７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（４４．８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（５９．６ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、１０ｍＬのＨ２Ｏ中へと注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を鹹水（１０ｍＬ）で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、濾液を真空で濃縮した。残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１〜０：１で溶離）によって精製して、化合物１７ｆ（３１ｍｇ、４３％収率）を黄色の油として得た。ＭＳ：計算値６００［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値６００［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【０１０７】
ステップ５：５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−６−（７−ピペラジン−１−イル−４，５−ジヒドロ−３Ｈ−１，３−ベンゾジアゼピン−２−イル）モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル（実施例１７）の調製
５ｍＬのマイクロ波バイアルに４−［４−アミノ−３−［２−［［（２Ｒ，６Ｒ）−４−（８−シアノ−５−キノリル）−６−メチル−モルホリン−２−カルボニル］アミノ］エチル］フェニル］ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物１７ｆ、１６ｍｇ、０．０２７ｍｍｏｌ）およびＴ３Ｐ（１ｍＬ、プロピルホスホン酸無水物溶液、酢酸エチル中５０重量％）を入れた。バイアルのふたを閉め、マイクロ波で１００℃で３０分間加熱した。この反応混合物を濃縮した後、ＮａＨＣＯ３（飽和、２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。この残分を分取ＨＰＬＣによって精製して、実施例１７（３．２ｍｇ、２４％収率）を黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４８２［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４８２［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ  ｐｐｍ  ８．９３（ｄｄ，Ｊ＝４．２８，１．５９Ｈｚ，１Ｈ），８．６５（ｄｄ，Ｊ＝８．６８，１．５９Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｄ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．５６，４．２８Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．０７Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝８．８０Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．８６，２．７５Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝２．８１Ｈｚ，１Ｈ），４．８９（ｄｄ，Ｊ＝１０．３９，２．４５Ｈｚ，１Ｈ），４．１８−４．３２（ｍ，１Ｈ），３．６８−３．７８（ｍ，２Ｈ），３．６３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１１．７４Ｈｚ，１Ｈ），３．３８−３．４６（ｍ，１Ｈ），３．３２−３．３８（ｍ，４Ｈ），３．２３−３．３１（ｍ，４Ｈ），３．１３（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝１．９６Ｈｚ，２Ｈ），３．０２−３．０９（ｍ，１Ｈ），２．７２（ｄｄ，Ｊ＝１２．２９，１０．４５Ｈｚ，１Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝６．２４Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１０８】
実施例１８
５−［（２Ｒ，６Ｒ）−２−メチル−６−［５−（４−ピペリジル）−３，４−ジヒドロキナゾリン−２−イル］モルホリン−４−イル］キノリン−８−カルボニトリル
【化３８】
2022502353.tif 000040
【０１０９】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−シアノ−３−ニトロフェニル）ピペラジン−１−カルボキシラート（化合物６ｃ）の代わりにｔｅｒｔ−ブチル４−（２−シアノ−３−ニトロ−フェニル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボキシラート（化合物１８ｂ）を使用することにより、実施例６の調製と同様に、表題化合物を調製した。実施例１８（１９ｍｇ）を明褐色の固形物として得た。ＭＳ：計算値４６７［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値４６７［（Ｍ＋Ｈ）＋］。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ＝９．３４（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．５８Ｈｚ，１Ｈ），９．２１（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝３．７９Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．０９Ｈｚ，１Ｈ），８．０９（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．６０（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．２１Ｈｚ，１Ｈ），７．３１−７．４０（ｍ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ），５．１９（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．７０Ｈｚ，１Ｈ），４．８５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝４．８９Ｈｚ，２Ｈ），４．３４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），３．９６（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝７．３４Ｈｚ，１Ｈ），３．４５−３．６５（ｍ，３Ｈ），３．２５（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），２．８９−３．０９（ｍ，２Ｈ），１．８８−２．１４（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｂｒ  ｄ，Ｊ＝５．３８Ｈｚ，３Ｈ）。
【０１１０】
ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−シアノ−３−ニトロ−フェニル）−３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピリジン−１−カルボキシラート（化合物１８ｂ）の調製
【化３９】
2022502353.tif 000041
【０１１１】
トルエン（５ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の２−クロロ−６−ニトロベンゾニトリル（化合物６ａ、７０．８ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−３，６−ジヒドロピリジン−１（２Ｈ）−カルボキシラート（化合物１８ａ、ＣＡＳ：２８６９６１−１４−６、Ｓｈａｏｙｕａｎ、１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１５８ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（１８．７ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）の混合物にＮ２を入れ、８０℃まで一晩加熱した。室温に冷却した後、この反応混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、水（１０ｍＬ）で洗浄した。この有機層を、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、真空で濃縮した。残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１〜１：１で溶離）で精製して、化合物１８ｂ（７８ｍｇ、７３％）を淡黄色の固形物として得た。ＭＳ：計算値３３０［（Ｍ＋Ｈ）＋］、実測値３３０［（Ｍ＋Ｈ）＋］。
【０１１２】
実施例１９
以下の試験は、ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−７／８／９細胞アッセイにおいて式（Ｉ）の化合物の活性を測定するために行った。
【０１１３】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−７細胞アッセイ：
安定ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−７細胞株をＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ−ｈｔｌｒ７、米国カリフォルニア州サンディエゴ市）から購入した。これらの細胞はもともと、ＮＦ−κＢの活性化を監視することによってヒトＴＬＲ７の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子は、５つのＮＦ−κＢおよびＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−ベータ最小プロモーターの制御下に置いた。ＳＥＡＰを、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｈＴＬＲ７細胞をＴＬＲ７リガンドで刺激することを介して、ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１を活性化することによって誘導した。それゆえ、レポーター発現は、Ｒ８４８（レシキモド）などのリガンドの、２０時間のインキュベーションについての刺激の下で、ＴＬＲ７アンタゴニストによって低下した。細胞培養上清ＳＥＡＰレポーター活性は、６４０ｎｍでの波長で、アルカリホスファターゼの存在下で紫色または青色になる検出培地で、ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号ｒｅｐ−ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴ市）を用いて測定した。
【０１１４】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ７細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎児血清を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で９６ウェルプレート内で１７０μＬの容積で２５０，０００〜４５０，０００個／ｍＬの密度で、先のＤＭＥＭ中で１％の終濃度のＤＭＳＯの存在下で連続希釈した２０μＬの検査化合物および１０μＬの２０μＭ  Ｒ８４８を添加してインキュベートし、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃の下でインキュベーションを２０時間行った。次に、各ウェルからの２０μＬの上清を１８０μＬのＱｕａｎｔｉ−ｂｌｕｅ基質溶液とともに、３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を用いて６２０〜６５５ｎｍでの吸光度を読み取った。ＴＬＲ７の活性化が下流のＮＦ−κＢの活性化につながるシグナル伝達経路は広く受け入れられているため、ＴＬＲ７アンタゴニストを評価するために同様のレポーターアッセイを改変した。
【０１１５】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−８細胞アッセイ：
安定ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−８細胞株をＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ−ｈｔｌｒ８、米国カリフォルニア州サンディエゴ市）から購入した。これらの細胞はもともと、ＮＦ−κＢの活性化を監視することによって、ヒトＴＬＲ８の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子は、５つのＮＦ−κＢおよびＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−ベータ最小プロモーターの制御下に置いた。ＳＥＡＰを、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｈＴＬＲ８細胞をＴＬＲ８リガンドで刺激することを介して、ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１を活性化することによって誘導した。それゆえ、レポーターの発現は、Ｒ８４８などのリガンドの、２０時間のインキュベーションについての刺激の下でＴＬＲ８アンタゴニストによって低下した。細胞培養上清ＳＥＡＰレポーター活性は、６４０ｎｍでの波長で、アルカリホスファターゼの存在下で紫色または青色になる検出培地で、ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号ｒｅｐ−ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴ市）を用いて測定した。
【０１１６】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ８細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎児血清を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で９６ウェルプレート内で１７０μＬの容積で２５０，０００〜４５０，０００個／ｍＬの密度で、先のＤＭＥＭ中で１％の終濃度のＤＭＥＭおよび１０μＬの６０μＭのＲ８４８の存在下で連続希釈した２０μＬの検査化合物を添加してインキュベートし、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃の下でインキュベーションを２０時間行った。次に、各ウェルからの２０μＬの上清を１８０μＬのＱｕａｎｔｉ−ｂｌｕｅ基質溶液とともに、３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を用いて６２０〜６５５ｎｍでの吸光度を読み取った。ＴＬＲ８の活性化が下流のＮＦ−κＢの活性化につながるシグナル伝達経路は広く受け入れられているため、ＴＬＲ８アンタゴニストを評価するために同様のレポーターアッセイを改変した。
【０１１７】
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−９細胞アッセイ：
安定ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ−９細胞株をＩｎｖｉｖｏＧｅｎ（カタログ番号：ｈｋｂ−ｈｔｌｒ９、米国カリフォルニア州サンディエゴ市）から購入した。これらの細胞はもともと、ＮＦ−κＢの活性化を監視することによってヒトＴＬＲ９の刺激を研究するために設計された。ＳＥＡＰ（分泌型胚性アルカリホスファターゼ）レポーター遺伝子は、５つのＮＦ−κＢおよびＡＰ−１結合部位に融合したＩＦＮ−ベータ最小プロモーターの制御下に置いた。ＳＥＡＰを、ＨＥＫ−Ｂｌｕｅ  ｈＴＬＲ９細胞をＴＬＲ９リガンドで刺激することを介して、ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１を活性化することによって誘導した。それゆえ、レポーターの発現は、ＯＤＮ２００６（カタログ番号ｔｌｒｌ−２００６−１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴ市）などのリガンドの、２０時間のインキュベーションについての刺激の下でＴＬＲ９アンタゴニストによって低下した。細胞培養上清ＳＥＡＰレポーター活性は、６４０ｎｍでの波長で、アルカリホスファターゼの存在下で紫色または青色になる検出培地で、ＱＵＡＮＴＩ−Ｂｌｕｅ（商標）キット（カタログ番号ｒｅｐ−ｑｂ１、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴ市）を用いて測定した。
ＨＥＫ２９３−Ｂｌｕｅ−ｈＴＬＲ９細胞を、４．５ｇ／Ｌグルコース、５０Ｕ／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００ｍｇ／ｍＬノルモシン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％（ｖ／ｖ）熱失活ウシ胎児血清を含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で９６ウェルプレート内で１７０μＬの容積で２５０，０００〜４５０，０００個／ｍＬの密度で、先のＤＭＥＭ中で１％の終濃度のＤＭＳＯの存在下で連続希釈した２０μＬの検査化合物および１０μＬの２０μＭ  ＯＤＮ２００６を添加してインキュベートし、ＣＯ２インキュベーター内で３７℃の下でインキュベーションを２０時間行った。次に、各ウェルからの２０μＬの上清を１８０μＬのＱｕａｎｔｉ−ｂｌｕｅ基質溶液とともに、３７℃で２時間インキュベートし、分光光度計を用いて６２０〜６５５ｎｍでの吸光度を読み取った。ＴＬＲ９活性化が下流のＮＦ−κＢ活性化をもたらすシグナル伝達経路は、広範に受け入れられてきており、それゆえ、同様のレポーターアッセイを、ＴＬＲ９アンタゴニストを評価するために改変した。
【０１１８】
式（Ｉ）の化合物は、ヒトＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８阻害活性（ＩＣ５０値）が＜０．５μＭ、特に＜０．０５０μＭである。その上、本発明のいくつかの化合物はまた、ヒトＴＬＲ９阻害活性が＜０．５μＭ、特に＜０．１μＭである。本発明の化合物の活性データを表１に示した。
【表１】
2022502353.tif 000042
【国際調査報告】
2022502353.tif 000052
2022502353.tif 000053