【手続補正書】
【提出日】平成22年8月19日(2010.8.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体により認識されるヒトＢＭＰ２またはＢＭＰ４上のエピトープに結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分、抗体断片、もしくは抗体模倣体。
【請求項２】
前記抗体が、全抗体（ｗｈｏｌｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、抗体断片、ヒト化抗体、一本鎖抗体、免疫複合体、脱フコシル化抗体、および二重特異性抗体からなる群から選択され、
前記断片が、ＵｎｉＢｏｄｙ、ドメイン抗体、およびＮａｎｏｂｏｄｙからなる群から選択され、または、
前記抗体模倣体が、Ａｆｆｉｂｏｄｙ、ＤＡＲＰｉｎ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ、Ａｖｉｍｅｒ、Ｖｅｒｓａｂｏｄｙ、およびＤｕｏｃａｌｉｎからなる群から選択される、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項３】
ヒトＢＭＰ２またはＢＭＰ４に５．５×１０−９Ｍ以下、３×１０−９Ｍ以下、または２×１０−９Ｍ以下のＫＤで結合する、請求項１に記載の単離された抗体。
【請求項４】
以下の工程を含む、抗−ＢＭＰ２抗体または抗−ＢＭＰ４抗体を調製するための方法：
（ａ）請求項１に記載の抗体をコードする１つ以上の核酸分子を含有する宿主細胞を得る工程；
（ｂ）宿主細胞培養物内で前記宿主細胞を成長させる工程；
（ｃ）前記１つ以上の核酸分子が発現される宿主細胞培養条件を提供する工程；および
（ｄ）前記宿主細胞または前記宿主細胞培養物から前記抗体を回収する工程。
【請求項５】
異常な骨形成および骨化を伴う疾患を治療または予防するための医薬を製造するための、該疾患を治療または予防するために有効な量での、抗−ＢＭＰ２抗体もしくは抗−ＢＭＰ４抗体またはその抗原結合部分の使用。
【請求項６】
前記疾患が、進行性骨化性線維形成異常症（ＦＯＰ）、進行性骨異形成（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｏｓｓｅｏｕｓ  ｈｅｔｅｒｏｐｌａｓｉａ）（ＰＯＨ）、脊髄損傷、筋肉内血腫、整形手術からの合併症、乾癬性関節炎、変形性関節症、強直性脊椎炎（ＡＳ）、血清反応陰性関節症、骨格骨化過剰症、耳硬化症、あぶみ骨強直症、骨癌、前立腺癌、外骨腫、アテローム硬化症（ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、弁膜性心疾患、肺癌、メラノーマ、造血癌（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、腎癌、および乳癌からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
以下からなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体により認識されるヒトＢＭＰ２またはＢＭＰ４上のエピトープに結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分、抗体断片、もしくは抗体模倣体：
ａ．配列番号３３で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号３６で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
ｂ．配列番号３４で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号３７で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
ｃ．配列番号５６で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号６４で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
ｄ．配列番号５７で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号６５で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
ｅ．配列番号５８で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号６６で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
ｆ．配列番号５９で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号６７で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
ｇ．配列番号６０で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号６８で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
ｈ．配列番号６１で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号６９で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
ｉ．配列番号６２で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号７０で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、ならびに
ｊ．配列番号６３で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号７１で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列。
【請求項８】
全抗体、抗体断片、ヒト化抗体、一本鎖抗体、免疫複合体、脱フコシル化抗体、および二重特異性抗体からなる群から選択され、
前記断片が、ＵｎｉＢｏｄｙ、ドメイン抗体、およびＮａｎｏｂｏｄｙからなる群から選択され、または、
前記抗体模倣体が、Ａｆｆｉｂｏｄｙ、ＤＡＲＰｉｎ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ、Ａｖｉｍｅｒ、Ｖｅｒｓａｂｏｄｙ、およびＤｕｏｃａｌｉｎからなる群から選択される、
請求項７に記載の単離された抗体。
【請求項９】
請求項１または７に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分、および薬学的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項１０】
請求項１または７に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖をコードする、単離された核酸分子。
【請求項１１】
請求項１０に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項１２】
請求項１１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１または７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を発現するハイブリドーマ。
【請求項１４】
以下の工程を含む、請求項１または７のいずれか一項に記載の抗体を作製する方法：
ａ．ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニック動物を、ＢＭＰ２ペプチドまたはＢＭＰ４ペプチドで免疫する工程；
ｂ．前記トランスジェニック動物からＢ細胞を回収する工程；
ｃ．前記Ｂ細胞からハイブリドーマを作製する工程；
ｄ．ＢＭＰ２またはＢＭＰ４に結合する抗体を発現するハイブリドーマを選択する工程；および
ｅ．前記選択されたハイブリドーマ由来のＢＭＰ２またはＢＭＰ４に結合する前記抗体を回収する工程。
【請求項１５】
以下の工程を含む、抗−ＢＭＰ２抗体または抗−ＢＭＰ４抗体を作製する方法：
ａ．ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニック動物をＢＭＰ２ペプチドまたはＢＭＰ４ペプチドで免疫する工程；
ｂ．前記トランスジェニック動物の前記Ｂ細胞からｍＲＮＡを回収する工程；
ｃ．前記ｍＲＮＡをｃＤＮＡに変換する工程；
ｄ．ファージ内の前記ｃＤＮＡを、前記ｃＤＮＡによりコードされる抗−ＢＭＰ２抗体または抗−ＢＭＰ４抗体が前記ファージの表面上に提示されるように発現させる工程；
ｅ．抗−ＢＭＰ２抗体または抗−ＢＭＰ４抗体を提示するファージを選択する工程；
ｆ．核酸分子を、前記抗−ＢＭＰ２または抗−ＢＭＰ４免疫グロブリンをコードする前記選択されたファージから回収する工程；
ｇ．前記回収された核酸分子を宿主細胞内で発現させる工程；および
抗体をＢＭＰ２またはＢＭＰ４に結合する前記宿主細胞から回収する工程。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
本発明の他の特徴および利点は以下の詳細な説明および実施例から明白となり、それらは限定するものとして解釈されるべきではない。本願の全体を通じて言及されるあらゆる参考文献の内容、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号、特許および公開された特許出願は、参照により本明細書中に明示的に援用される。
[請求項101]
配列番号32に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号35に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体により認識されるヒトBMP2またはBMP4上のエピトープに結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分、抗体断片、もしくは抗体模倣体。
[請求項102]
IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4アイソタイプの完全長抗体である、請求項101に記載の単離された抗体。
[請求項103]
全抗体(whole antibody)、抗体断片、ヒト化抗体、一本鎖抗体、免疫複合体、脱フコシル化抗体、および二重特異性抗体からなる群から選択される、請求項101に記載の単離された抗体。
[請求項104]
UniBody、ドメイン抗体、およびNanobodyからなる群から選択される、請求項101に記載の抗体断片。
[請求項105]
Affibody、DARPin、Anticalin、Avimer、Versabody、およびDuocalinからなる群から選択される、請求項101に記載の抗体模倣体。
[請求項106]
治療物質を含む、請求項103に記載の免疫複合体。
[請求項107]
前記治療物質が細胞毒素または放射性同位体である、請求項103に記載の免疫複合体。
[請求項108]
ヒトBMP2またはBMP4に5.5×10-9M以下のKDで結合する、請求項101に記載の単離された抗体。
[請求項109]
ヒトBMP2またはBMP4に3×10-9M以下のKDで結合する、請求項101に記載の単離された抗体。
[請求項110]
ヒトBMP2またはBMP4に2×10-9M以下のKDで結合する、請求項101に記載の単離された抗体。
[請求項111]
請求項101に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分、および薬学的に許容される担体を含む、組成物。
[請求項112]
請求項101に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖をコードする、単離された核酸分子。
[請求項113]
請求項112に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
[請求項114]
請求項113に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
[請求項115]
以下の工程を含む、抗-BMP2抗体または抗-BMP4抗体を調製するための方法:
(a)請求項101に記載の抗体をコードする1つ以上の核酸分子を含有する宿主細胞を得る工程;
(b)宿主細胞培養物内で前記宿主細胞を成長させる工程;
(c)前記1つ以上の核酸分子が発現される宿主細胞培養条件を提供する工程;および
(d)前記宿主細胞または前記宿主細胞培養物から前記抗体を回収する工程。
[請求項116]
対象に、抗-BMP2抗体もしくは抗-BMP4抗体またはその抗原結合部分を、前記疾患を治療または予防するのに有効な量で投与する工程を含む、異常な骨形成および骨化を伴う疾患を治療または予防するための方法。
[請求項117]
前記疾患が、進行性骨化性線維形成異常症(FOP)、進行性骨異形成(progressive osseous heteroplasia)(POH)、脊髄損傷、筋肉内血腫、整形手術からの合併症、乾癬性関節炎、変形性関節症、強直性脊椎炎(AS)、血清反応陰性関節症、骨格骨化過剰症、耳硬化症、あぶみ骨強直症、骨癌、前立腺癌、外骨腫、アテローム硬化症(artherosclerosis)、弁膜性心疾患からなる群から選択される、請求項114に記載の方法。
[請求項118]
前記疾患が、骨癌、前立腺癌、肺癌、メラノーマ、造血癌(hematopoietic cancer)、腎癌、および乳癌からなる群から選択される癌である、請求項116に記載の方法。
[請求項119]
以下からなる群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体により認識されるヒトBMP2またはBMP4上のエピトープに結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合部分、抗体断片、もしくは抗体模倣体:
a.配列番号33で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号36で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
b.配列番号34で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号37で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
c.配列番号56で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号64で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
d.配列番号57で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号65で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
e.配列番号58で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号66で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
f.配列番号59で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号67で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
g.配列番号60で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号68で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
h.配列番号61で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号69で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、
i.配列番号62で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号70で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列、ならびに
j.配列番号63で示される重鎖可変領域アミノ酸配列および配列番号71で示される軽鎖可変領域アミノ酸配列。
[請求項120]
全抗体、抗体断片、ヒト化抗体、一本鎖抗体、免疫複合体、脱フコシル化抗体、および二重特異性抗体からなる群から選択される、請求項119に記載の単離された抗体。
[請求項121]
UniBody、ドメイン抗体、およびNanobodyからなる群から選択される、請求項119に記載の抗体断片。
[請求項122]
Affibody、DARPin、Anticalin、Avimer、Versabody、およびDuocalinからなる群から選択される、請求項119に記載の抗体模倣体。
[請求項123]
請求項119に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分、および薬学的に許容される担体を含む、組成物。
[請求項124]
請求項119に記載の単離された抗体またはその抗原結合部分の重鎖または軽鎖をコードする、単離された核酸分子。
[請求項125]
請求項124に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
[請求項126]
請求項125に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
[請求項127]
請求項101または119のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合部分を発現するハイブリドーマ。
[請求項128]
以下の工程を含む、請求項101または119のいずれか一項に記載の抗体を作製する方法:
a.ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニック動物を、BMP2ペプチドまたはBMP4ペプチドで免疫する工程;
b.前記トランスジェニック動物からB細胞を回収する工程;
c.前記B細胞からハイブリドーマを作製する工程;
d.BMP2またはBMP4に結合する抗体を発現するハイブリドーマを選択する工程;および
e.前記選択されたハイブリドーマ由来のBMP2またはBMP4に結合する前記抗体を回収する工程。
[請求項129]
以下の工程を含む、抗-BMP2抗体または抗-BMP4抗体を作製する方法:
a.ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニック動物をBMP2ペプチドまたはBMP4ペプチドで免疫する工程;
b.前記トランスジェニック動物の前記B細胞からmRNAを回収する工程;
c.前記mRNAをcDNAに変換する工程;
d.ファージ内の前記cDNAを、前記cDNAによりコードされる抗-BMP2抗体または抗-BMP4抗体が前記ファージの表面上に提示されるように発現させる工程;
e.抗-BMP2抗体または抗-BMP4抗体を提示するファージを選択する工程;
f.核酸分子を、前記抗-BMP2または抗-BMP4免疫グロブリンをコードする前記選択されたファージから回収する工程;
g.前記回収された核酸分子を宿主細胞内で発現させる工程;および
抗体をBMP2またはBMP4に結合する前記宿主細胞から回収する工程。