(57)【要約】  本開示は特に、４−アルキル−５−ヘテロアリール−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオンの回転異性体、個々の回転異性型が安定化により得られているそのような異性体の複合体、及び安定化された複合体として個々の回転異性体（回転異性体過剰）を過剰に含む組成物を提供する。本開示はまた、例えば、粘膜炎などの様々な障害の症状を予防する、処置する、または減少させる、及び／または医学的目的で様々な器官及び組織において酸化的損傷に対する防御を与えるために、そのような回転異性体またはその複合体を用いてヒトまたは動物患者を処置する方法を含めて、そのような回転異性体及び複合体を作製及び使用する方法に関する。【選択図】図２
2022501424.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
回転異性体過剰の４−メチル−５−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオン（オルチプラズ）の（＋）回転異性体を含む組成物。
【請求項２】
回転異性体過剰の前記（＋）回転異性体を有する１種または複数のオルチプラズ複合体（例えば、オルチプラズの１種または複数の塩）を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記１種または複数のオルチプラズ複合体が、Ｎ置換ピラジニウムイオン及び会合アニオンを生成する、オルチプラズのピラジニル環のアルファ窒素への基の付加から生じる塩を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記１種または複数のオルチプラズ複合体が、オルチプラズと、アルキルハロゲン化物、アルケニルハロゲン化物、アルキニルハロゲン化物、アシルハロゲン化物、ベンゾイルハロゲン化物、及びその組合せからなる群から選択される１種または複数の反応物との反応から形成される少なくとも１種のオルチプラズ複合体を含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記（＋）回転異性体の回転異性体過剰が、３０〜４０％の過剰、４０〜５０％の過剰、５０〜６０％の過剰、及び６０〜７０％の過剰、７０〜８０％の過剰、及び８０％超の過剰からなる群から選択される範囲である、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
オルチプラズ複合体を含む組成物であって、前記オルチプラズ複合体が、過剰の４−メチル−５−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオン（オルチプラズ）の（−）回転異性体を有する前記組成物。
【請求項７】
回転異性体過剰の前記（−）回転異性体を有する１種または複数のオルチプラズ複合体を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記１種または複数のオルチプラズ複合体の少なくとも１種が、ピラジニル環のアルファ窒素と電気陰性原子との間の直接結合を含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記電気陰性原子が、酸素、硫黄、及びリンからなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記１種または複数のオルチプラズ複合体が、ヒドロキシマレアートオルチプラズ複合体を含む、請求項６〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記１種または複数のオルチプラズ複合体が、オルチプラズを、カルボン酸またはその塩、リン酸またはその塩、アルキルホスファート、アリールホスファート、アルキルスルホン酸またはその塩、アリールスルホン酸またはその塩、置換及び非置換チオカルボン酸またはその塩、ならびに前記の１種または複数の組合せ、例えば、乳酸、タルトロン酸、イソチオン酸、イソセリン、２−メルカプトエタンスルホン酸、タウリン、プロピルホスホン酸、２−アミノエチルホスホン酸、ジチオリン酸ジエチル、チオリン酸ジエチル、リン酸ジメチルからなる群から選択される１種または複数の反応物と反応させることにより形成される１種または複数の複合体を含む、請求項６〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記１種または複数のオルチプラズ複合体が、オルチプラズを、乳酸、タルトロン酸、イソチオン酸、イソセリン、２−メルカプトエタンスルホン酸、タウリン、プロピルホスホン酸、２−アミノエチルホスホン酸、ジチオリン酸ジエチル、チオリン酸ジエチル、リン酸ジメチル、及びそれらの組合せからなる群から選択される１種または複数の反応物と反応させることにより形成される１種または複数の複合体を含む、請求項６〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記（−）回転異性体の回転異性体過剰が、３０〜４０％の過剰、４０〜５０％の過剰、５０〜６０％の過剰、６０〜６５％の過剰、６０〜７０％の過剰、７０〜８０％の過剰、８０〜９０％の過剰、及び９０〜１００％の過剰からなる群から選択される範囲である、請求項６〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
ヒトへの投与に適している、請求項１〜１３のいずれかに記載の少なくとも１つの組成物を含む医薬組成物。
【請求項１５】
局所投与に適した形態である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
直腸投与または吸入による投与に適した形態である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
皮下、筋肉内、胸骨内、または静脈内注射に適した形態である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
経口投与に適した形態である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
散剤、丸剤、錠剤の形態であるか、またはカプセル剤の中に含まれている、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
液体形態である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
処置を必要とするヒトまたは非ヒト動物患者を処置するためのプロセスであって、前記患者に、請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む前記プロセス。
【請求項２２】
前記投与が経口投与を含む、請求項２１に記載のプロセス。
【請求項２３】
前記投与が頬側投与を含む、請求項２２に記載のプロセス。
【請求項２４】
粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、請求項１８〜２０のいずれかに記載の医薬組成物を経口投与することを含む前記プロセス。
【請求項２５】
粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、請求項１８〜２０のいずれかに従って調製された医薬組成物を経口投与することを含む前記プロセス。
【請求項２６】
粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、前記患者に、請求項１８〜２０のいずれかに記載の医薬組成物を経口投与することを含む前記プロセス。
【請求項２７】
前記粘膜炎が口腔粘膜炎である、請求項２４〜２６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２８】
前記粘膜炎が消化管の粘膜炎である、請求項２４〜２６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２９】
粘膜炎または皮膚炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、請求項１５に記載の組成物を局所投与することを含む前記プロセス。
【請求項３０】
粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、請求項１６に記載の組成物を直腸投与することを含む前記プロセス。
【請求項３１】
粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、請求項１６に記載の組成物を吸入により投与することを含む前記プロセス。
【請求項３２】
前記患者が放射線療法を受けている、請求項２１〜３１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３３】
オルチプラズのヒドロキシマレイン酸無水物（−）回転異性体を作製するプロセスであって、
（ｉｉｉ）無水極性溶媒の存在下でオルチプラズを（＋）−ジアセチル−Ｌ−酒石酸無水物と反応させて、反応混合物を形成するステップと；
（ｉｖ）酢酸を前記反応混合物に添加するステップと
を含む前記プロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年９月１８日出願の米国特許仮出願第６２／７３２，８６７号の利益を請求し、その実体は、その明細書、特許請求の範囲及び図面を含めて、参照により本明細書に明らかに援用される。
分野
本開示は特に、４−アルキル−５−ヘテロアリール−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオンの回転異性体（ｒｏｔｏｍｅｒｉｃ  ｉｓｏｍｅｒ）、個々の回転異性型が安定化により得られているそのような異性体の複合体、及び安定化された複合体として個々の回転異性体（回転異性体過剰）を過剰に含む組成物に関する。本開示はまた、そのような回転異性体；個々の回転異性体が安定化により得られていて、かつ回転異性体過剰で存在する複合体；上記回転異性体またはその複合体を含む組成物（回転異性体医薬組成物を含む）を作製及び使用する方法；そのような回転異性体またはその複合体を使用することによりヒト酸化防御遺伝子の機能を制御する方法；ならびにそのような回転異性体またはその複合体を用いてヒトまたは動物患者を処置する方法（例えば、粘膜炎などの様々な障害の症状を予防する、処置する、または減少させる、及び／または医学的目的で様々な器官及び組織において酸化的損傷に対する防御を与えるために）に関する。
【発明の概要】
【０００２】
本明細書での開示は、複合体で安定化されていてよい個々の回転異性体で富化された４−メチル−５−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオン（オルチプラズとしても公知）回転異性体の集団を含む、新たな医薬製剤、組成物及び治療に関する。
【図面の簡単な説明】
【０００３】
【図１】オルチプラズ（４−アルキル−５−−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオン）。
【０００４】
【図２】２つの環が相互にほぼ直交している立体配置で示されるオルチプラズが図示されている。
【０００５】
【図３】アルファジチオール硫黄原子が炭素原子で置換されているオルチプラズ類似体が図示されている。
【０００６】
【図４Ａ】オルチプラズのプラス（＋）回転異性体が図示されている。
【０００７】
【図４Ｂ】オルチプラズのマイナス（−）回転異性体が図示されている。
【０００８】
【図５】オルチプラズのヒドロキシマレイン酸無水物複合体が図示されている。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
図２〜５において原子は円（球）として示されており、水素では「Ｈ」と、硫黄では「Ｓ」と、窒素では「Ｎ」と、または酸素では「Ｏ」とマークされている。炭素原子は、マークされていない円（球）として示されている。
【００１０】
オルチプラズとしても公知の４−メチル−５−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオンは、結晶形及び非晶形の両方で開示されている。オルチプラズは、様々な特性を有する、例えば、住血吸虫症を制御する抗微生物化合物として、抗腫瘍薬として、化学防御物質として、かつ化学放射線誘導性粘膜炎の制御に役立つ化合物として記載されている。
【００１１】
化学防御及び粘膜炎制御効果の作用機序は、転写因子、核因子赤血球２−関連因子２（Ｎｒｆ２）防御遺伝子の上方制御を介すると記載されている。活性酸素種（ＲＯＳ）により活性化されるＮｒｆ２は、酸化ストレス遺伝子制御における重要な制御物質であると考えられる。Ｎｒｆ２は、ｂＺＩＰタンパク質のＣａｐ’ｎ’Ｃｏｌｌａｒファミリーのメンバーである。通常の条件下では、Ｎｒｆ２は、その阻害物質であり、そのプロテアソーム分解を促進することによりＮｒｆ２を抑制する細胞骨格関連タンパク質Ｋｅａｐ１に結合する。抗酸化物質により処理すると、Ｎｒｆ２はＫｅａｐ１から解放されて、２０００超の抗酸化遺伝子の上方制御を開始する。
【００１２】
オルチプラズは、貯留されたヒト歯肉上皮細胞を使用するｉｎ  ｖｉｔｒｏ遺伝子発現アッセイにおいて、一連の酸化防御遺伝子を活性化させることが示されている。遺伝子発現も、ＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺障害）を有する対象において、健康な喫煙者と比較した場合に２００の示差的に発現される酸化遺伝子を示すために使用されており、ｉｎ  ｖｉｖｏで観察されたオキシダント応答遺伝子の有意な変化が、同じドナーに由来する初代気管支上皮細胞を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで再生された［Ｐｉｅｒｒｏｕ，Ｓ．，Ｂｒｏｂｅｒｇ，Ｐ．，Ｏ’Ｄｏｎｎｅｌｌ，Ｒ．Ａ．，Ｐａｗｌｏｗｓｋｉ，Ｋ．，Ｖｉｒｔａｌａ，Ｒ．，Ｌｉｎｄｑｖｉｓｔ，Ｅ．（２００７）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  Ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔｒｅｓｓ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｉｎ  Ａｉｒｗａｙ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌｓ  ｏｆ  Ｓｍｏｋｅｒｓ  ｗｉｔｈ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍ．Ｊ．ｏｆ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１７５（６），５７７−５８７］。
【００１３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ遺伝子発現は、核の酸化ＤＮＡ損傷が加齢に伴って増大するかどうかを決定するために、ヒト角膜内皮細胞（ＨＣＥＣ）でも研究されている。ＨＣＥＣは、それらの酸化ストレス及びＤＮＡ損傷シグナル伝達遺伝子８４のうちの４つを年齢依存的に上方制御することにより、この損傷に応答する［Ｊｏｙｃｅ，Ｎ．Ｃ．，Ｈａｒｒｉｓ，Ｄ．Ｌ．，Ｚｈｕ，Ｃ．Ｃ．Ａｇｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇｅｎｅ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｒｎｅａｌ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ  ｔｏ  Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ＤＮＡ  Ｄａｍａｇｅ（２０１１）Ｃｏｒｎｅａ，５２（３），１６４１−１６４９］。
【００１４】
したがって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞アッセイにおいて観察された遺伝子発現の変化が、特異的な器官及び組織に付与された生理学的酸化防御を代表し得ると示されていることは広く認められている。
【００１５】
定量的構造活性相関（ＱＳＡＲ）研究により、住血吸虫症制御のためにオルチプラズの化学構造が最適化された。オルチプラズは近年、Ｎｒｆ２上方制御活性を示しているが、Ｎｒｆ２上方制御のために最適な構造または最適な立体配置であるかどうかは未知である。
【００１６】
下に論述するとおり、オルチプラズの２種の異なる回転異性体を含む安定な組成物を調製することができることが発見された。上記組成物は、オルチプラズ複合体の形態で安定化されていてよい２種の回転異性体のうちの一方を最高約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％または９９％の回転異性体過剰で含み得る。高い回転異性体過剰パーセンテージ、例えば、９０％超（すなわち、一方の回転異性体９５％及び他方５％）を含む組成物は、回転に対する相対的に低いバリアにより、高温での安定性が低いことがある。本明細書で使用する場合、「オルチプラズ複合体」は、分子または原子と解離可能に（共有結合性または非共有結合性に）会合したオルチプラズを意味する。回転異性体過剰の個々の回転異性体のいずれかを含むそのような組成物は、転写因子Ｎｒｆ２効果の上方制御を特異的に増大させることができ、したがって、口腔を含む胃腸系において化学放射線及び免疫療法誘導性粘膜炎からの酸化防御をもたらす。
【００１７】
オルチプラズ（４−アルキル−５−−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオン）は、炭素−炭素単結合により結合した２つの環、ピラジニル環及びジチオールチオン環からなる（図１）。
【００１８】
通常、そのような炭素−炭素（Ｃ−Ｃ）結合のまわりで自由回転が可能であり、そのため、上記２つの環が特定の方向でロックされることはなく、上記２つの環は、上で図１において示されているとおり、Ｘ線構造の公表において、各環における不飽和結合間の共役が最も低いエネルギー安定状態を可能にするねじれた平面的立体配置にあると記載されている。Ｗｅｉ，Ｃ．Ｈ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ４−Ｍｅｔｈｙｌ−５−（２−ｐｙｒａｚｉｎｙｌ）−３Ｈ−１，２−ｄｉｔｈｉｏｌｅ−３−ｔｈｉｏｎｅ（Ｏｌｔｉｐｒａｚ），Ａ  Ｎｅｗ  Ａｎｔｉｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａｌ  Ｄｒｕｇ．Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．（１９８３）．Ｃ３９，１０７９−１０８２）を参照されたい。
【００１９】
エネルギー最小化コンピューターシミュレーションを、Ｔｉｎｋｅｒ（Ｒ）ツール及び共通パラメーターセット、例えば、Ａｍｂｅｒ及びＭＭＦＦを適用して使用すると、オルチプラズの分子は、例えば、図２に示されているとおり、上記２つの環が相互にほぼ直交している安定な立体配置でも見い出され得ることが発見された。
【００２０】
さらに、類似体構造でのコンピューター解析は、この好ましい直交立体配置がおそらく硫黄超共役によることを示した。超共役に参加し得ない炭素原子でのアルファジチオール硫黄原子の置換は、図３に示されているとおり、Ｃ−Ｃ単結合の結合のまわりでの自由回転を伴う最小エネルギー立体配置としての平面的構造をもたらした。
【００２１】
シミュレーションはまた、１４．１ｋＪ／ｍｏｌの予測されなかった異常に高いエネルギー障壁が、２つの直交した環の一方向とその鏡像との間に存在することを示した。これは、上記２つの環の間の結合に沿った回転を可能にするためには破壊される必要がある硫黄超共役作用に帰せられ得る。したがって、上記回転異性体は、オルチプラズの２つの環の間の結合のまわりでの障害回転により、アトロプ異性体の対である。
【００２２】
回転異性体組成物
したがって、オルチプラズでは２つの別個の回転異性体が可能である。２つの回転異性体はそれぞれ、相互に直交している２つの環として定義することができる；（＋）−回転異性体は、頂部にチオン及びメチル基を、かつ右側にピリミジン環のアルファ窒素を配向することにより定義される一方で、（−）−回転異性体は、左側にピリミジン環のアルファ窒素を有する（図４Ａ及び４Ｂを参照されたい）。
【００２３】
下記するとおりのいくつかの塩の形態でオルチプラズ複合体を調製することで、（＋）−回転異性体（図４Ａ）が回転異性体過剰（例えば、最高約８０％）で存在し得る組成物が得られることが見い出されている。本明細書で使用する場合、「回転異性体過剰」という用語は、「鏡像異性体過剰率」という用語に一般に適用されるとおり、一方の回転異性体が他方よりも過剰であることを意味する。したがって、本明細書の「回転異性体過剰」は、全体としてオルチプラズ回転異性体の集団の純度の測定値として記載される。これは、あるサンプルが一方の回転異性体を他方よりも多量に含有する程度を反映する。メソ混合物は０％の回転異性体過剰を有する一方で、単一の完全に純粋な回転異性体は１００％の回転異性体過剰を有する。したがって、例えば、一方の回転異性体７０％及び他方３０％を含むサンプルは、４０％の回転異性体過剰（７０％−３０％）を有する。
【００２４】
他方の異性体に対する一方の異性体の相対パーセントは、ＦＴＩＲ解析において約１２００及び約４４０ｃｍ−１にあるチオンピークの相対強度を使用して指定することができる。（＋）回転異性体は、４２０〜４２４及び１２１０〜１２１５の間にＦＴＩＲチオンピークを示すが、（−）回転異性体は、４３２〜４３６及び１２００〜１２０５の間にＦＴＩＲチオンピークを示す。
【００２５】
（＋）−回転異性体についての回転異性体優先性（下の実施例１及び３〜６を参照されたい）を示し得るオルチプラズの複合体の例には、Ｎ置換ピラジニウムイオン（ピラジニル基のアルファ窒素におそらく集中する正電荷を有する）及び会合アニオンをもたらす、オルチプラズのピラジニル環（例えば、アルファ窒素のところで）への基の付加または会合（例えば、ＨＣｌ、アルキルハロゲン化物またはアシルハロゲン化物の可逆的付加）から生じる塩が含まれる。塩形成の結果としてピラジン環の上に存在し得る一部の置換基には、これに限定されないが、水素、アルキル、アルケン、アルキニル、アシル、フェナシルまたはベンゾイルが含まれ、これらは、非置換であってもよいし、またはこれに限定されないが、ハロゲン化物（例えば、ＣｌまたはＦ）、アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル）、アルコキシ（−ＯＣＨ３または−ＯＣＨ２ＣＨ３）、アリールオキシ（例えば、−Ｏ−フェニル）などを含む他の官能基で置換されていてもよい。例えば、そのような塩は、オルチプラズをＨＣｌと反応させることにより形成することができる。別の例では、そのような塩は、オルチプラズをアルキル、アルケン、またはアルキニルハロゲン化物、例えば、塩化メチル、ヨウ化メチルなどと反応させることにより形成することができる。別の例では、そのような塩を、アシル、フェナシルまたはベンゾイルハロゲン化物（例えば、塩化物）、例えば、塩化アセチル、塩化ｎ−ブチル、塩化ベンゾイルなどとの反応により形成することができる。
【００２６】
実質的回転異性体過剰（例えば、３０〜４０％過剰、４０〜５０％過剰、５０〜６０％過剰、及び６０〜６５％、６０〜７０％及び７０〜８０％過剰を含めて、最高約９０％以上）で存在し得る（−）回転異性体（下の実施例２及び７〜１１を参照されたい）を調製することができることも見い出されている。
【００２７】
例えば、実施例２及び７〜１１に記載のとおり、オルチプラズを様々なカルボン酸またはリン酸及びそれらの塩、アルキル及びアリールホスファート、アルキル及びアリールスルホン酸ならびにそれらの塩、置換及び非置換チオカルボン酸ならびにそれらの塩と反応させることにより、（−）回転異性体オルチプラズ複合体を調製することができる。例えば、ヒドロキシマレアートオルチプラズ複合体の場合には、オルチプラズを、（＋）−ジアセチル−Ｌ−酒石酸無水物と無水極性溶媒、例えば、超脱水アセトン５ｍｌ中で反応させ、続いて、氷酢酸を添加する。この反応は、ピラジニル環のアルファ窒素とマレアートの酸素原子との間の結合を、酒石酸ジアセチルの環化転位と実質的に同時に形成して、マレアート無水物環をもたらす。
【００２８】
（−）回転異性体について回転異性体優先性を示し得るオルチプラズの他の複合体には、ピラジニル環のアルファ窒素と、分子内の超共役を破壊するのに十分な電気陰性原子、例えば、酸素、硫黄、またはリンとの間に直接結合が形成されているものが含まれる。そのようなオルチプラズ複合体は、上記超共役の破壊及び／または立体歪の増大を介して（−）回転異性体立体配置を安定化し得る場合には、（−）回転異性体の最高１００％の回転異性体過剰をもたらし得る。例えば、そのようなオルチプラズ複合体は、回転異性体過剰の（−）回転異性体を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％からなる群から選択される量でもたらし得る。したがって回転異性体過剰の（−）回転異性体は、例えば、３０〜４０％過剰、４０〜５０％過剰、５０〜６０％過剰、６０〜６５％過剰、６０〜７０％過剰、７０〜８０％過剰、８０〜９０％過剰、及び９０〜１００％過剰からなる群から選択される量であり得る。そのようなオルチプラズ複合体には、オルチプラズを、様々なカルボン酸またはリン酸及びそれらの塩、アルキル及びアリールホスファート、アルキル及びアリールスルホン酸ならびにそれらの塩、例えば、置換及び非置換チオカルボン酸ならびにそれらの塩、例えば、乳酸、タルトロン酸、イソチオン酸、イソセリン、２−メルカプトエタンスルホン酸、タウリン、プロピルホスホン酸、２−アミノエチルホスホン酸、ジチオリン酸ジエチル、チオリン酸ジエチル、リン酸ジメチルと反応させることにより形成されるものが含まれる。５−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオンを、ジチオールチオン環の４位上の置換基（オルチプラズではメチル基である）のサイズを変更することにより、オルチプラズの（−）回転異性体のもののような立体配置に誘導することは不可能であると考えられることに留意すべきである。
【００２９】
ピラジニル環のアルファ窒素を必要とする超共役に加えて、またはその代わりに、超共役は、ピラジニル環のメタ窒素でのオルチプラズ複合体の形成によっても影響を受け得る。そのような（−）回転異性体複合体は、上記メタ窒素原子と炭素、酸素、硫黄またはリン原子との間の結合を介して形成することができる。この結合を、単一で、またはピラジニル環上のアルファ（オルト）窒素原子を必要とする錯化と一緒に生じるように作製することができる。
【００３０】
オルチプラズ配座異性体は、ボルツマン分布においてそれらの相対エネルギーの関数として分布すると理解されるので、任意の所与の条件セット（例えば、具体的な溶媒）下で最も安定である個々のオルチプラズ回転異性体（またはオルチプラズ複合体の個々の回転異性体）をより高い回転異性体過剰で得る手段の１つは、所望のオルチプラズ組成物の溶液を（例えば、−７８℃以下などの室温未満に）冷却することと、回転異性体が実質的に平衡化するのに十分な時間を与えることとを含む。そのような条件下では、多くの分子が、室温においてよりも安定した（より低いエネルギーの）立体配座（複数可）になるであろう。次いで、冷却した組成物を蒸発及び／または凍結乾燥により、好ましくは加温せずに乾燥させる。さらに、（−）−回転異性体または（＋）−回転異性体のいずれかが回転異性体過剰で存在するオルチプラズ複合体（例えば、塩）を、例えば、９０％超、９１％超、９２％超、９３％超、９４％超、９５％超、９６％超、９７％超、９８％超、及び９９％超の純度まで実質的に精製することができることが見い出されている。精製プロセス及び条件は、組成物の所望の回転異性体過剰の変化を最小化するように選択すべきである。例えば、精製中に４０℃超の温度を使用すること、またはＤＭＳＯなどの非常に極性の溶媒を使用することは、平衡化をもたらし、かつ回転異性体過剰をゼロ近くに、またはゼロに等しいほどに実質的に失わせるが、キラルクロマトグラフィーの使用は、回転異性体過剰収率の改善をもたらすと考えられる。したがって、一方の回転異性型が、別の回転異性型よりも強力に媒体と会合する条件下でオルチプラズ複合体をキラル媒体に暴露すること、複合体が平衡化する時間を許すこと、かつ回転異性体の平衡化に不利な条件（例えば、低温）下で複合体を溶離することが、所望の立体配置のオルチプラズ複合体を富化する手段である。
【００３１】
さらに、上記（＋）−回転異性体及び上記（−）−回転異性体配向は、それらの複合体（例えば、塩）が室温、例えば、１５℃〜３０℃及び相対湿度４０％〜８０％、例えば、２０℃〜２５℃及び相対湿度５０％で貯蔵される場合、遷移状態ではなく、むしろ、実質的に安定な立体配置であることが見い出されている。この文脈では、「実質的に安定」は、最終精製から３０分以内にＦＴＩＲにより測定した場合（下で論述するとおり）の組成物中の上記（＋）−回転異性体及び上記（−）−回転異性体の濃度が、最終精製から４週間後に同じＦＴＩＲ分析を使用して測定した場合に１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％及び１％からなる群から選択される量よりも大きく変わらないであろうことを意味する。
【００３２】
回転異性体組成物を含む医薬組成物
上記回転異性体組成物は、医薬組成物として、（ｉ）回転異性体過剰の（＋）−回転異性体を含む１種または複数のオルチプラズ複合体（例えば、塩）、（ｉｉ）回転異性体過剰の（−）−回転異性体を含む１種または複数のオルチプラズ複合体（例えば、実施例２及び７〜１１の複合体）、または（ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）の混合物のいずれかとして調製することができる。上の医薬組成物（ｉ）〜（ｉｉｉ）は本明細書において、「回転異性体医薬組成物」と称される。そのような回転異性体医薬組成物を、乾燥または液体組成物で投与することができる。経口投与用の上記回転異性体医薬組成物の製剤を口内洗浄薬、または炭酸液、または口腔スプレーもしくはエアロゾル、または口腔軟膏剤、ゲル、またはクリームとして提示することもできる。
【００３３】
ある特定の態様では、経口投与、例えば、頬側投与のために回転異性体医薬組成物を製剤化するために適した液体には、水性及び非水性担体、例えば、水；生理食塩水；バッファー液；有機溶媒、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、グリコール、脂肪族アルコール；水及び有機溶媒の混合物、ならびに有機溶媒の混合物（任意選択で、水も含む）；脂質ベースの物質、多糖ベースの物質、ならびに口腔への投与に適した他のビヒクル及びビヒクル構成成分、さらには、上で同定したとおりか、または別段に当技術分野で公知の頬側ビヒクル構成成分の混合物が含まれ得る。
【００３４】
経口投与に有用な液体剤形には、薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルジョン剤、懸濁剤、シロップ剤及びエリキシル剤が含まれる。活性成分に加えて、液体剤形は、当技術分野で一般に使用される不活性な希釈剤を含有してもよい。不活性な希釈剤の他に、口腔組成物は、補助剤、例えば、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤（乳剤及び懸濁剤のために）、甘味剤、香味剤、着色剤、芳香剤及び防腐剤を含むこともできる。
【００３５】
回転異性体医薬組成物の経口投与に適した回転異性体医薬組成物の代替の態様には、それぞれ活性成分として本明細書に記載のとおりの回転異性体医薬組成物の量を含む所定量の組成物を含有する、カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）、サシェ剤、スティックパック剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤、凍結乾燥剤、散剤、顆粒剤、埋め込み注射用組成物の形態での、または例えば、注射もしくは注入に適した組成物を含む水性もしくは非水性液体中の液剤もしくは懸濁剤としての、または水中油型もしくは油中水型液体乳剤としての、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤としての、または香錠及び／または口内洗浄剤などとしての組成物が含まれる。組成物または化合物を、ボーラス剤、舐剤またはペースト剤として投与してもよい。
【００３６】
経口投与用の固体剤形（カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）、錠剤、丸剤、糖剤、散剤、顆粒剤など）を調製するために、上記回転異性体医薬組成物の量を含む組成物を、１種または複数の薬学的に許容される担体、及び／または充填剤または増量剤、結合剤、保湿剤、崩壊剤、溶解遅延剤、吸収促進剤、湿潤剤、吸収剤、滑沢剤、錯生成剤、及び着色剤のいずれかと混合することができる。上記回転異性体医薬組成物はさらに、上記製剤の安定性または有効性を改善するために適用される構成成分を含んでもよい。カプセル剤（スプリンクルカプセル剤及びゼラチンカプセル剤を含む）、錠剤及び丸剤の場合には、上記回転異性体医薬組成物は、緩衝剤も含んでよい。同様の種類の固体組成物は、公知の添加剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル剤における充填剤として使用することもできる。
【００３７】
上記回転異性体医薬組成物の錠剤、及び他の固体剤形に任意選択で割線を入れる、またはそれらを、コーティング及びシェル、例えば、腸溶コーティング及び当技術分野で周知の他のコーティングを用いて調製することができる。それらをまた、所望の放出プロファイルを得るために、その中の活性成分の遅延または制御放出が得られるように製剤化することもできる。これらの組成物は任意選択で、不透明化剤を含有してもよく、かつ消化管のある特定の部分でのみ、または優先的に、任意選択で遅延して活性成分（複数可）を放出する組成物であってよい。活性成分はまた、適切ならば上記添加剤のうちの１種または複数と共にマイクロ封入された形態であってもよい。
【００３８】
局所投与のための回転異性体医薬組成物
一部の態様では、上記回転異性体医薬組成物を局所投与に適し得る製剤に組み込むことができ、かつこれは、局所投与用の保湿剤、湿潤剤、及び他の既知の添加剤を含んでよい。上記局所組成物はまた、皮膚上に施与される貼付剤を介して経皮送達され得、そのような貼付剤は当技術分野で周知である。当業者は、使用することができる他の局所送達組成物及びビヒクルが分かるであろう。
【００３９】
直腸／結腸送達のための回転異性体医薬組成物
ある特定の態様では、上記回転異性体医薬組成物を、公知の方法及び組成物を使用して直腸投与のために製剤化して、結腸特異的送達を得ることができる。一般的に述べて、直腸投与経路を介した回転異性体医薬組成物の送達は、坐剤、浣腸剤、軟膏剤、クリーム剤またはフォーム剤を使用することにより達成することができる。坐剤は最も一般的な直腸剤形のものであり、基材は一般に、本質的に脂肪質であるが、水溶性または水混和性基材も利用することができる。望ましい生物学的利用能を達成するために、活性成分は、直腸または結腸粘膜と接触すべきである。
【００４０】
直腸投与に適した組成物を調製するために公知である適切な添加剤には、これに限定されないが、ビヒクル、防腐剤、界面活性剤、乳化剤、鉱油、噴射剤、増粘剤、滑沢剤、防腐剤、ｐＨ調節剤、キレート化剤、皮膚軟化剤及び／または湿潤剤、透過促進剤、懸濁形成剤または粘膜付着剤またはそれらの組合せが含まれる。ビヒクルには、直腸及び結腸粘膜と適合性であることが公知の水性、非水性またはヒドロアルコール構成成分が含まれ得る。
【００４１】
別法では、結腸で活性なオルチプラズを放出するように設計されている回転異性体医薬組成物の経口投与を介して、結腸吸収を達成することができる。そのような組成物は、剤形が結腸内に至るまでの遅延放出をもたらす経口剤形、例えば、丸剤、カプセル剤または液剤であり得る。
【００４２】
吸入投与のための回転異性体医薬組成物及びデバイス
他の態様では、上記回転異性体医薬組成物を、吸入可能な形態で、例えば、吸入デバイスで、乾燥粉末形態または液体担体中のいずれかで上記組成物を提供することにより、気道を介して送達することができる。例えば、吸入可能な組成物は、乾燥粉末吸入器に供給される乾燥粉末組成物中に活性な回転異性体医薬組成物を含むことができる。例えば、ＷＯ２０１４１７７５１９及びＵＳ２０１４００６５２１９を参照されたい。別法では、吸入可能な組成物は、エタノールなどの液体担体中に活性成分を含み得る。例えば、ＥＰ２５３６４１２Ａ２を参照されたい。
【００４３】
したがって、本開示は（ｉ）上記のとおりの回転異性体医薬組成物、及び（ｉｉ）吸入によりそのような組成物を投与するためのデバイスを含むキットも提供する。上記キットは任意選択でさらに、取扱説明書を含む。
【００４４】
経口投与のためのデバイス
ある特定の態様では、経口投与用の上記回転異性体医薬組成物の液体製剤を、回転異性体医薬組成物の単回用量の投与を容易にするデバイスを用いて調製及び投与することができる。当技術分野で公知のそのようなデバイスはキャビティーまたはレザバーを含み得て、そこで、乾燥組成物及び液体、例えば、水及び／または非水性溶媒を混合し、次いで、そのデバイスの開口部を介して患者に投与することができる。典型的には、そのようなデバイスは、キャビティーと、キャビティーから区分されているコンパートメントとを含み、そのコンパートメント内に、乾燥粉末が存在し得る。投与時に、上記粉末をコンパートメントからキャビティーまたはまたはレザバーへと放出する。一部のデバイスでは、これは、コンパートメントをキャビティーまたはレザバーから区分するバリアーの破壊によって達成される。その後、粉末を、典型的には振盪により、前もって添加されていたか、またはその時に添加されてよいキャビティー内の液体と混合することができる。キャビティーは、乾燥回転異性体医薬組成物と、乾燥回転異性体医薬組成物を混合して液体組成物を形成することを可能にするのに十分な量の水及び／または非水性溶媒を含む液体量との両方を保持するために十分なサイズのものである。上記液体をパッケージング時に容器に添加して、投与時に一緒に混合することができる乾燥組成物及び液体の両方を含む自給型製品を作製することができる。別法では、上記容器は乾燥回転異性体医薬組成物のみを含有することができ、その後、上記液体を投与前に添加する。上記液体は、下で論述するとおりの香味添加剤を含有してもよい。別法では、乾燥及び液体成分を分離する他の種類のパッケージングを使用することもできる。例えば、上記粉末及び上記液体を、並んでいるか、または重なっていて、破断可能なシールにより分離されている２つのフォームフィルシールパウチ内に密閉することができる。その後、薬物の投与者は、シールを破断し、溶解または懸濁するまで、内容物を２つのコンパートメント間で相互に混合することとなる。
【００４５】
上記組成物が実質的に均一になったら（例えば、振盪により）、次いで、これを、作製されたデバイスの開口部を介して、例えば、デバイスの一部を分離して、液体混合物を含有するキャビティーを露出させることにより、患者に投与する。例えば、上記デバイスの一部、例えば、頂部を、ねじ込み部分を容器の別のねじ込み部分からねじ戻すことにより除去し、液体混合物を含有するキャビティーを露出させることができ、次いでこれを患者に投与するか、または患者が投与することができる。そのようなデバイスの例は、米国特許第６，１４８，９９６号、米国特許出願公開第２００８０２０２９４９号、及び米国特許第３，１５６，３６９号に示されている。そのような単回使用用デバイスを、本明細書に記載の経口投与用液体組成物のために、特に、下記のとおりの口腔粘膜炎またはその症状を予防または処置するために使用することができる。
【００４６】
したがって本開示は、（ｉ）上記のとおりの回転異性体医薬組成物、（ｉｉ）そのような組成物を経口投与するためのデバイスも提供する。上記キットは任意選択で、取扱説明書をさらに含む。
【００４７】
そのようなデバイスでは、上記回転異性体医薬組成物は乾燥形態であってよい。そのような場合、例えば、上記のとおりのコンパートメント内に一緒に存在してもよい乾燥組成物を、上で論述したとおり投与前に、水及び／または他の液体溶媒と混合する（例えば、乾燥組成物を液体に暴露し、振盪することにより）。
【００４８】
処置方法
ある特定の態様では、上記回転異性体医薬組成物及びデバイスを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者を処置するために使用することができる。上記患者は典型的には、ヒト患者であるが、本開示の回転異性体医薬組成物を、非ヒト動物を処置するために、例えば、獣医学用途で使用することができる。本開示の組成物を、オルチプラズでの処置が公知である疾患及び状態を含む広範囲の様々な疾患及び状態を予防または処置するために使用することができる。そのような疾患及び状態の例には、粘膜炎、ＨＩＶ、がん、肝炎（ＨＢＶ及びＨＣＶを含む）、皮膚水疱形成及び単純型表皮水疱症及び関連疾患を含むケラチンベースの皮膚疾患、皮膚炎、炎症性障害または疾患（内皮機能障害及び心臓血管疾患を含む）、悪液質、体重減少、敗血症、造影誘導性腎障害、糖尿病、肥満、ＰＣＯＳ、脂肪症、高脂血症、及び高血圧、慢性腎疾患、肺線維症、低酸素状態、化学物質誘導性肺損傷、呼吸困難障害、アニオンギャップアシドーシス、腎炎、狼瘡、間質性肺疾患、移植片機能障害、肝炎、急性腎損傷、騒音性聴力障害、毒物摂取、網膜障害、神経毒性、がん誘導性損傷、例えば、耳毒性、呼吸器感染症、自閉症、血管痙攣を伴う状態、ならびにｎ−アセチルシステイン、注射用還元型グルタチオン、または既知の細胞内グルタチオン増強薬の提供により処置可能と考えられている状態が含まれる。
【００４９】
典型的には、上記回転異性体医薬組成物を患者に有効量で与える。「有効量」という用語は本明細書では、有意な生物学的応答（例えば、炎症の有意な減少）を生じさせるために十分な量の回転異性体医薬組成物を指すために用いられる。特定の対象及び／または用途で所望の治療応答を達成するために有効である量を投与するように、上記回転異性体医薬組成物の実際の投薬レベルを変動させることができる。もちろん、任意の特定の場合における有効量は、製剤、投与経路、他の薬物または処置との組合せ、処置される状態の重症度、ならびに処置される対象の身体状態及び先行の病歴を含む様々な因子に依存することとなる。
【００５０】
本明細書で使用する場合、「対象」という用語には、ヒト及び動物対象の両方が含まれ、したがって、獣医学での治療的使用が本開示に従って提供される。「処置」または「処置すること」という用語は、これに限定されないが、予防的処置及び治療的処置を含む目的の状態（例えば、粘膜炎、炎症性障害またはがん）の任意の処置に関する。したがって、「処置」または「処置すること」という用語には、これに限定されないが：目的の状態または目的の状態の発生を予防すること；目的の状態の進行を阻害すること；目的の状態のさらなる進展を停止または予防すること；目的の状態の重症度を軽減すること；目的の状態と関連する症状を改善または緩和すること；及び目的の状態または目的の状態と関連する症状の１つもしくは複数を部分的に、実質的に完全に、または完全に退縮させることが含まれる。
【００５１】
上記の回転異性体医薬組成物及びデバイスは、粘膜炎に罹患しているか、または例えば、口腔（ｏｒａｌ  ｃａｖｉｔｙ）（口腔（ｂｕｃｃａｌ  ｃａｖｉｔｙ）を含む）内、消化管内、結腸及び／または直腸内、及び／または皮膚上に粘膜炎をもたらし得る放射線処置または化学療法などの処置を受けることになっている患者を処置するために適している。粘膜炎が口腔粘膜炎である場合、口腔送達のために上記した組成物及びデバイスが好ましくあり得る。そのような患者は例えば、化学療法及び／または放射線療法、例えば、頭頚部領域で、または身体の別の領域に放射線処置を受けていてもよいし、または受けようとしていてよい。
【００５２】
上記回転異性体医薬組成物及びデバイスは、ヒトまたは非ヒト動物患者において次の有益効果、すなわち、（ｉ）口腔粘膜炎を含む粘膜炎（例えば、粘膜の炎症）の発症を予防的に妨げる、または遅延させる、（ｉｉ）口腔粘膜炎を含む既存の粘膜炎を処置する、（ｉｉｉ）口腔粘膜炎を含む粘膜炎と関連する症状を緩和する、（ｉｖ）口腔粘膜炎を含む既存の粘膜炎の重症度を軽減する、または下げる、（ｖ）口腔粘膜炎を含む粘膜炎の治癒または修復を促進する、（ｖｉ）口腔粘膜炎、例えば、軽度、中等度及び重度口腔粘膜炎を含む粘膜炎の発生率及び／または持続期間を減少させる、（ｖｉｉ）口腔粘膜炎を有する患者による体重減少または悪液質の発症を予防的に妨げる、または遅延させる、（ｖｉｉｉ）口腔粘膜炎を有する患者が経験する体重減少または悪液質の量を減少させる、及び／または（ｉｘ）口腔粘膜炎を有する患者の、口から食物を摂取する能力を上昇させる効果のうちの１つ、１つより多く、またはすべてを達成するために使用することができる。そのような組成物はまた、嚥下障害（嚥下困難）を患者、例えば、がん患者で予防及び／または処置するために、または嚥下障害の発症を遅延させるために、または例えば、がん患者において嚥下障害の重症度を軽減するために使用することができる。そのような組成物はまた、患者において口内乾燥（口腔乾燥の主観的感覚）を予防及び／または処置するために、または口内乾燥の発症を遅延させるために、口内乾燥の重症度を軽減するために、及び／または中等度から重度の口内乾燥の発生率を低下させるために使用することができる。ある特定の態様では、上記単回使用デバイスを液体組成物の投与のために使用して、口腔粘膜炎、嚥下障害及び口内乾燥に関連する上記のうちの１つ、１つより多く、またはすべてを達成することができる。有利には、製剤はまた、非刺激性で、良好に忍容性で、味がよく（経口投与の場合）、非細胞傷害性で、弱感作性または非感作性で、非感作性である。
【００５３】
本明細書のある特定の態様は、粘膜炎を処置するための方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の本明細書に記載のとおりの回転異性体医薬組成物を投与することを含む上記方法を提供する。本開示はまた、粘膜炎の処置において使用するための、本明細書に記載のとおりの回転異性体医薬組成物を提供する。本開示はまた、粘膜炎を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載のとおりの回転異性体医薬組成物の使用を提供する。患者への上記製剤の投与は、頬側投与を含む経口投与であってよい。本明細書に記載の投与方法は、所定の期間、例えば、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月以上の処置レジメンであってよい。本開示による回転異性体医薬組成物を１日１回、１日２回、1日３回、または必要に応じて施与または投与することができる。患者が化学療法及びまたは放射線療法を受ける状況では、投薬量を、処置前に、例えば、処置前１時間以内、３時間以内、６時間以内、１２時間以内、２４時間以内に、または２４時間より前に投与することができる。例えば、投与を、化学療法、放射線療法及び／または化学放射線療法を受ける数日前に開始することができる。例えば、患者は、治療開始の３日前に開始して１日１回、または１日１回より多くの処置を受け始めることができ、次いで、治療が投与されない日を含めて、処置経過中毎日投与を受ける。処置を受けることになっている日には、例えば、投与は、治療前に、例えば、治療が投与される前１時間以内に与えられる。治療を受けない日には、投与をその日のうちの任意の時間に、例えば、午前中に与えることができる。加えて、または別法では、投薬を、処置後に、例えば、処置後１時間以内、３時間以内、６時間以内、１２時間以内、２４時間以内、または処置の２４時間超後に投与することができる。
【００５４】
したがって、本開示は、粘膜炎を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の上記の回転異性体医薬組成物を投与することを含む上記方法を提供する。本開示はまた、粘膜炎の処置において使用するための、上記のとおりの回転異性体医薬組成物を提供する。本開示はまた、粘膜炎を処置するための医薬品の製造における、本明細書に記載のとおりの回転異性体医薬組成物の使用を提供する。患者への回転異性体医薬組成物の投与は、頬側投与を含む経口投与であってよい。
【００５５】
液体組成物を投与する場合、上記組成物を経口または非経口で、例えば、皮下、筋肉内、胸骨内、または静脈内注射により投与することができる。経口投与を用いる場合、上記液体組成物は単純に嚥下され得るか、またはこれを「すすいで飲み込む（ｓｗｉｓｈ  ａｎｄ  ｓｗａｌｌｏｗ）」レジメンもしくは「すすいで吐きだす（ｓｗｉｓｈ  ａｎｄ  ｓｐｉｔ）」レジメンにより投与することができる。上記組成物を液体形態で、口腔粘膜炎を有するか、または口腔粘膜炎を発症するリスクのある（例えば、化学療法、放射線療法及び／または化学放射線療法を受けているか、または受けようとしている）患者に経口投与することにより、上記組成物は、上記のとおりの粘膜炎に関して治療効果を与えることができる、すなわち、粘膜炎の発症を予防的に妨げるか、または遅延させる、既存の粘膜炎を処置する、粘膜炎と関連する症状（例えば、炎症及び粘膜出血）を緩和または減少させる、既存の粘膜炎の重症度を軽減する、または下げる、粘膜炎の持続期間を減少させる、及び／または粘膜炎の治癒または修復を促進することができる。そのような場合、負電荷を有する成分、例えば、陽イオン性界面活性剤またはポリマー、例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  ＲＬを含む液体組成物は、正電荷を有する傾向のある口腔との接着または会合を与えることにより、さらなる利点をもたらし得る。本明細書に記載の組成物の態様の物理的及び化学的特性は、上記製剤に、安定性、粘膜への活性薬剤の送達、及び投与の容易さなどの特徴を付与し得る。
【００５６】
上述のとおり、本明細書に記載のとおりの回転異性体医薬組成物を他の治療薬と共に一緒に、または別々に、治療レジメンの一部として同時投与することができる。そのような薬剤には、Ｎアセチルシステイン及び／または他の抗酸化剤、パントテン酸（ビタミンＢ５）またはグルタチオン合成を増強する他の薬剤、グルタチオン（例えば、局所投与で）、Ｍｅｄｉｈｏｎｅｙ（局所投与で）、クルクミン（局所投与で）または他のＮＦ−カッパＢ阻害薬、メサラミン及び／または他の抗炎症薬（例えば、経口または直腸投与組成物で）、及びスーパーオキシドジスムターゼまたは反応性Ｏ２−（超酸化物）による損傷を阻止する他の化合物が含まれる。
【実施例】
【００５７】
本開示のある特定の態様を、次の実施例によりさらに例示するが、これらは、添付の特許請求の範囲を何らかの形で限定するものと解釈されるべきではない。
【００５８】
実施例１：オルチプラズ：（＋）回転異性体の塩酸塩を作製する方法
合成オルチプラズ粉末２０ｍｇ（ＳＴ−６１７−ＡＰＩ、下に論述）を、アセトニトリル：水を使用して再結晶化させ、ゴム隔膜を備えた５ｍｌガラスバイアルに添加する。バイアルに、無水クロロホルム１ｍｌを室温で添加し、溶液が透明になるまで、バイアルを振動台の上に置く。ガスシリンジを用いて、無水塩酸ガス５ｍｌを５分かけて、バイアルを間欠的に振盪しながら溶液にゆっくり吹き込む。すべてのＨＣｌガスを添加したら、バイアルを５分間にわたって振盪し、隔膜を取り外し、窒素ガスのゆっくりとした定常流下で溶媒を穏やかに蒸発させて、オルチプラズの塩酸塩複合体をオレンジ／赤色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２０３／１２１１（相対強度３：７）及び４３３／４２１（相対強度２：８）。
実施例２：オルチプラズ：（−）−回転異性体のヒドロキシマレイン酸無水物複合体を作製する方法
合成オルチプラズ粉末２０ｍｇを、アセトニトリル：水を使用して再結晶化させ、ゴム隔膜を備えた１０ｍｌガラスバイアルに添加する。すべての水分を、ガスシリンジを使用して窒素ガスによりバイアルから除去する。バイアルを氷浴に入れ、これに、予め冷却（１０℃）しておいた超脱水アセトン５ｍｌ中の（＋）−ジアセチル−Ｌ−酒石酸無水物２２ｍｇの溶液を添加し、振動テーブル上で５分間にわたって振盪し、５分後に、氷酢酸０．５ｍｌを３０秒かけて、シリンジを使用して添加する。間欠的に振盪しながら０〜１０℃での４時間後に、バイアルを室温にする。隔膜を取り外し、窒素ガスのゆっくりとした定常流下で溶媒を穏やかに蒸発させて、オルチプラズのヒドロキシマレイン酸無水物複合体（図５を参照されたい）をオレンジ色の固体として得る。上記複合体をエチルエーテルで３回洗浄して、痕跡量の酢酸を除去する。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２０１／１２１４（相対強度８：２）及び４３４／４２３（相対強度８：２）。上記オルチプラズ複合体のサンプル２ｍｇをＫＢＲと共に摩砕し、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ１６００シリーズのＦＴＩＲでのＦＴＩＲ分析のための標準的なペレットに作製する。
【００５９】
実施例３：オルチプラズ：（＋）回転異性体の塩化アセチル複合体を作製する方法
合成オルチプラズ粉末２０ｍｇを、アセトニトリル：水を使用して再結晶化させ、ゴム隔膜を備えたガラスバイアルに添加する。バイアルに、無水クロロホルム１０ｍｌを室温で添加し、溶液が透明になるまで、バイアルを振動台の上に置いた。シリンジを用いて、無水塩化アセチル５ｍｌを、バイアルを間欠的に振盪しながら溶液にゆっくり添加する。すべての塩化アセチルを添加したら、バイアルを１５分間にわたって振盪し、隔膜を取り外し、窒素ガスのゆっくりとした定常流下で溶媒及び過剰の試薬を穏やかに蒸発させて、オルチプラズの塩化アセチル複合体をオレンジ色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２０２／１２１２（相対強度３：７）及び４３２／４２２（相対強度２：８）。
【００６０】
実施例４：オルチプラズ：（＋）回転異性体の塩化ｎ−ブチル複合体を作製する方法
合成オルチプラズ粉末２０ｍｇを、アセトン：水を使用して再結晶化させ、ゴム隔膜を備えたガラスバイアルに添加する。バイアルに、無水クロロホルム１０ｍｌを室温で添加し、得られる溶液が透明になるまで、バイアルを振動台の上に置いた。シリンジを用いて、塩化ｎ−ブチル５ｍｌを、バイアルを間欠的に振盪しながら溶液にゆっくり添加する。すべての塩化ｎ−ブチルを添加したら、バイアルを６５℃に加温し、３０分間にわたって振盪し、隔膜を取り外し、窒素ガスのゆっくりとした定常流下で溶媒及び過剰の試薬を穏やかに蒸発させて、オルチプラズの塩化ｎ−ブチル複合体を赤色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２０１／１２１３（相対強度２：８）及び４３３／４２１（相対強度２：８）。
【００６１】
実施例５：オルチプラズ：（＋）回転異性体のヨウ化メチル複合体を作製する方法
合成オルチプラズ粉末５０ｍｇを、アセトン：水を使用して再結晶化させ、スクリューシールを備えた圧力定格ガラスボトルに添加する。バイアルに、無水クロロホルム２０ｍｌを室温で添加し、得られる溶液が透明になるまで、バイアルを振動台の上に置いた。シリンジを用いて、ヨウ化メチル１０ｍｌを、バイアルを間欠的に振盪しながら溶液にゆっくり添加する。すべてのヨウ化メチルを添加したら、バイアルを密閉し、圧力下で１２０℃に加熱し、３時間（「ｈｒｓ」）にわたって振盪し、バイアルを冷却し、開放し、窒素ガスのゆっくりとした定常流下で溶媒及び過剰の試薬を穏やかに蒸発させて、オルチプラズのヨウ化メチル複合体を赤／茶色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１１９７／１２１４（相対強度２：８）及び４３１／４１９（相対強度２：８）。
【００６２】
実施例６：オルチプラズ：（＋）回転異性体の塩化ベンゾイル複合体を作製する方法
粗製のオルチプラズ粉末２０ｍｇを、ゴム隔膜を備えたガラスバイアルに添加する。バイアルに、無水クロロホルム１０ｍｌを室温で添加し、得られる溶液が透明になるまで、バイアルを振動台の上に置いた。シリンジを用いて、無水塩化ベンゾイル１ｍｌを、バイアルを間欠的に振盪しながら溶液にゆっくり添加する。すべての塩化ベンゾイルを添加したら、バイアルを１５分間にわたって振盪し、隔膜を取り外し、１０ｍｍＨｇ真空下で溶媒及び過剰の試薬を穏やかに蒸発させて、オルチプラズの塩化ベンゾイル複合体を赤色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２００／１２１３（相対強度３：７）及び４３１／４１９（相対強度３：７）。
【００６３】
実施例７：オルチプラズ：（−）回転異性体のジチオリン酸ジエチル複合体を作製する方法
合成オルチプラズ粉末２２ｍｇを、アセトン：水を用いて再結晶化させ、電磁式撹拌機及び冷水凝縮器を備えたガラス丸底フラスコに添加する。フラスコにアセトン１０ｍｌを室温で添加し、撹拌を継続しながら、ジチオリン酸ジエチルアンモニウム塩２０ｍｇを溶液にゆっくり添加する。すべてのジチオリン酸ジエチルを添加したら、温度を上昇させ、３時間にわたって還流する。放出されたアンモニアを凝縮器の頂部から、希塩酸トラップに捕捉する。３時間後に、溶媒を除去して、オルチプラズのジチオリン酸ジエチル複合体をオレンジ／赤色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２０１／１２２０（相対強度９：１）及び４７２／４４４（相対強度８：２）。
【００６４】
実施例８：オルチプラズ：（−）回転異性体のチオリン酸ジエチル複合体を作製する方法
合成オルチプラズ粉末２２ｍｇを、アセトン：水を用いて再結晶化させ、電磁式撹拌機及び冷水凝縮器を備えたガラス丸底フラスコに添加する。フラスコにアセトン１０ｍｌを室温で添加し、撹拌を継続しながら、チオリン酸ジエチルアンモニウム塩１９ｍｇを溶液にゆっくり添加する。すべてのチオリン酸ジエチルを添加したら、温度を上昇させ、３時間にわたって還流する。放出されたアンモニアを凝縮器の頂部から、希塩酸トラップに捕捉する。３時間後に、溶媒を除去して、オルチプラズのジチオリン酸ジエチル複合体をオレンジ／赤色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２０８／１２２１（相対強度９：１）及び４７９／４４２（相対強度９：１）。
【００６５】
実施例９：オルチプラズ：（−）回転異性体のリン酸ジメチル複合体を作製する方法
リン酸トリメチル１７５ｍｇを粗製オルチプラズ１００ｍｇ（純度９５％）と共に、凝縮器及び撹拌機を備えた丸底フラスコに装入し、７２時間にわたって８０℃で加熱した。７２時間後に、混合物を室温に冷却し、トルエン５０ｍｌで５回洗浄する。オレンジ／赤色のＮ−メチルオルチプラズのリン酸ジメチル複合体２５５ｇを下の層から収集し、真空下で６０℃で乾燥させる。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２１０／１２２７（相対強度９：１）及び４８９／４５３（相対強度９：１）。
【００６６】
実施例１０：オルチプラズ：（−）回転異性体のイセチオン酸複合体を作製する方法
粗製オルチプラズ粉末２２ｍｇを、電磁式撹拌機及び冷水凝縮器を備えたガラス丸底フラスコに添加する。フラスコにアセトン１０ｍｌを室温で添加し、撹拌を継続しながら、イセチオン酸アンモニウム塩３０ｍｇを溶液にゆっくり添加する。すべてのイセチオン酸アンモニウム塩を添加したら、温度を上昇させ、６時間にわたって還流する。放出されたアンモニアを凝縮器の頂部から、希塩酸トラップに捕捉する。６時間後に、反応物を、最小量の濃塩酸でｐＨ６．８にし、得られた混合物を真空下で蒸発乾固させて、オルチプラズのイセチオン酸複合体を赤／茶色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２１６／１２２８（相対強度９：１）及び４６４／４３５（相対強度９：１）。
【００６７】
実施例１１：オルチプラズ：（−）回転異性体のチオ安息香酸複合体を作製する方法
粗製オルチプラズ粉末２０ｍｇを、ゴム隔膜を備えたガラスバイアルに添加する。バイアルに、無水クロロホルム１０ｍｌを室温で添加し、得られる溶液が透明になるまで、バイアルを振動台の上に置く。シリンジを用いて、チオ安息香酸アンモニウム塩１ｍｌを、バイアルを間欠的に振盪しながら溶液にゆっくり添加する。すべてのチオ安息香酸アンモニウム塩を添加したら、温度を上昇させ、１時間にわたって還流する。放出されたアンモニアを凝縮器の頂部から、希塩酸トラップに捕捉する。１時間後に、内容物を真空下で除去して、オルチプラズのチオ安息香酸複合体をオレンジ色の固体として得る。ＦＴＩＲ：Ｃ＝Ｓピーク１２１０／１２２３（相対強度９：１）及び４７４／４３８（相対強度９：１）
【００６８】
実施例１２：Ｈ２Ｏ２誘導性酸化ストレスを受けたＨＧＥＰｐ細胞におけるＲＯＳ産生に対する、（＋）及び（−）回転異性体の効果
活性酸素種（ＲＯＳ）の形成は酸化ストレスを示す。酸化ストレスの増大と一体となったＲＯＳの蓄積は、多くの疾患の病因に関係しており、その１つが粘膜炎である。Ｓｏｎｉｓ，Ａ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ，Ｊ  Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｏｎｃｏｌ  ２００４；２：２１−３６；Ｈａｌｌｉｗｅｌｌ  ＆  Ｗｈｉｔｅｍａｎ，Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ：  ｈｏｗ  ｓｈｏｕｌｄ  ｙｏｕ  ｄｏ  ｉｔ  ａｎｄ  ｗｈａｔ  ｄｏ  ｔｈｅ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｍｅａｎ？，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  １４２，Ｉｓｓｕｅ  ２，Ｍａｙ  ２００４，２３１−２５５；及びＩｇｌｅｓｉａｓ−Ｂａｒｔｏｌｏｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｍＴＯＲ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｓ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｆｒｏｍ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｍｕｃｏｓｉｔｉｓ，Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  １１，４０１−４１４，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ７，２０１２）を参照されたい。遊離ラジカル及び他の反応種がｉｎ  ｖｉｖｏで絶えず生成されており、複数の抗酸化物質及び修復システムにより阻止されるプロセスである生体分子に対する酸化的損傷をもたらす。
【００６９】
ＨＧＥＰｐ細胞を使用して細胞内ＲＯＳに対するオルチプラズ及び製剤化オルチプラズ結晶の効果を決定するアッセイは、ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／００１３１２（出願人ＳＴ  ＩＰ  Ｈｏｌｄｉｎｇ  ＡＧに付与されたＷＯ２０１８／０４７０１３として公開）の実施例７に記載されている。製剤化オルチプラズ結晶を、ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／００１３１２の実施例１に記載のプロセスにおおむね従って調製した（約３５０ｎｍ未満のＭＨＤ）。その同じアッセイを、上の実施例１〜１１で調製した回転異性体組成物で実施して、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）により誘導される酸化的損傷から初代ヒト歯肉上皮細胞（ＨＧＥＰｐ）細胞を防御することに対するそれらの効果を決定した。
条件：
【表１】
2022501424.tif 000003
【００７０】
結果：
ＳＴ−６１７−ＤＰＩ及び実施例１〜１１の回転異性体複合体での上記アッセイの結果を下の表１に示す。下の表１に報告されているＳＴ−６１７−ＡＰＩ（ＷＯ２０１６２０７９１４に開示のプロセスに従って調製した再結晶化オルチプラズ）での結果は、ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／００１３１２の図９（１００μｇ／ｍＬで前処理）から得ている。
表１
【表２】
2022501424.tif 000004
【００７１】
対照（１３９％）と比較した場合の、アッセイにおいて１００μｇ／ｍＬのＳＴ−６１７−ＤＰＩで処理された細胞群でのＲＯＳレベルの低下（１２２％）は、１００μｇ／ｍＬでのＰＣＴ／ＩＢ２０１７／００１３１２で報告された結果（１２３％）、及びこのアッセイでＳＴ−６１７−ＤＰＩで得られた他の結果と一致した。（＋）回転異性体複合体は、ＲＯＳの中程度の減少をもたらしたが、（−）回転異性体複合体は、かなりの減少をもたらした。（−）回転異性体でのアッセイ結果は、９０％信頼水準で統計学的に有意であった。
【００７２】
実施例１３：ＳＴ−６１７−ＤＰＩ、ＳＴ−６１７−ＡＰＩ及び実施例１〜１１の回転異性体複合体で処理した後のＨＧＥＰｐ細胞における酸化ストレス関連遺伝子の示差的制御
Ｎｒｆ２システム（上で論述）は、ｐｈａｓｅ  ＩＩ解毒酵素及び抗酸化酵素をコードする遺伝子を活性化することによる、酸化的損傷に対する主な細胞防御機構であると考えられている。そのような酸化的損傷の１つが、化学療法処置中及びその後に、特に頭頚部癌処置において生じる口腔粘膜炎である。ヒト酸化ストレスＰＣＲアレイを使用して、ＨＧＥＰｐ細胞内で１００ｕｇ／ｍｌの、ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／００１３１２の実施例１に記載のプロセスにおおむね従って調製した製剤化オルチプラズ組成物（約３５０ｎｍ未満のＭＨＤ）、上の実施例１〜１１に記載の回転異性体複合体、及び陰性対照（オルチプラズを含まない製剤化オルチプラズ組成物）で前処理した後の８４のストレス遺伝子の相対発現を評価した。
【００７３】
材料
ＨＧＥＰｐ細胞は、ＣｅｌｌｎＴｅｃ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＧから購入した。ＲＮＥａｓｙ  Ｐｌｕｓ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔは、Ｑｉａｇｅｎ  Ｎ．Ｖ．、ＵＳＡから購入した。ＲＮａｓｅ−ｆｒｅｅ  ＤＮａｓｅ  ＳｅｔはＱｉａｇｅｎ  Ｎ．Ｖ．、ＵＳＡから購入した。ＲＴ２  Ｅａｓｙ  Ｆｉｒｓｔ  Ｓｔｒａｎｄ  Ｋｉｔ（ＤＮＡ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒ）及びＲＴ２  ＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｒｅｅｎ  ｆｌｕｏｒ  ｑＰＣＲ  ｍａｓｔｅｒｍｉｘは、Ｑｉａｇｅｎ  Ｎ．Ｖ．、ＵＳＡから購入した。Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  Ｓｔｒｅｓｓ  ＲＴ２  ｐｒｏｆｉｌｅｒ  ＰＣＲアレイ（８４の防御遺伝子）はＱｉａｇｅｎ  Ｎ．Ｖ．、ＵＳＡから購入した。Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｉｎｃ．、ＵＳＡからのｉＣｙｃｌｅｒ  ＰＣＲシステムをＲＴ−ＰＣＲのために使用した。
【００７４】
方法
細胞培養：
貯留した初代ＨＧＥＰｐ細胞を、ＣｅｌｌｎＴｅｃが提供するＣｎＴ−Ｐｒｉｍｅ上皮培養培地中で、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）中で希釈した３０ｍｇ／ｍｌのＩ型ラット尾コラーゲン（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でコーティングした１００ｍｍペトリ皿上で成長させた。ＨＧＥＰｐ細胞を１２×６０ｍｍ  Ｎｕｎｃ（商標）Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅディッシュ中で、２．５×１０４細胞／ｃｍ２密度濃度で成長させた。
【００７５】
投与溶液の調製：
製剤化オルチプラズ結晶（ＳＴ−６１７−ＤＰＩ）を、ＰＣＴ／ＩＢ２０１７／００１３１２の実施例１に記載のプロセスにおおむね従って調製した。再結晶化オルチプラズを、ＷＯ２０１６２０７９１４  ＳＴ−６１７−ＡＰＩに開示のプロセスに従って調製した。ＳＴ−６１７−ＤＰＩ、ＳＴ−６１７−ＡＰＩ及び実施例１〜１１の回転異性体複合体をＤＭＳＯに溶解させて、１００μｇ／ｍｌの最終濃度を達成した。すべての投与溶液は、ＨＧＥＰｐ細胞では０．８％の最大許容ＤＭＳＯパーセントよりも十分に低いＤＭＳＯ０．３％を含有した。
ＳＴ−６１７−ＤＰＩ及び回転異性体複合体溶液でのＨＧＥＰｐ細胞の前処理：
１．  対照曲線の直線部内のＯＤ吸光度を得るために、ディッシュ細胞濃度を、２．５×１０５／ｍｌであるように選択した。
２．  ディッシュ上でＨＧＥＰｐ細胞を培養し、用意ができたら（コンフルエンスに達したら）、培地を除去し、廃棄した。細胞をＤＰＢＳで２〜３回穏やかに洗浄し、最後の洗浄液を除去し、廃棄した。
３．  次いで、ＨＧＥＰｐ細胞培養皿を２４時間にわたって、１００μｇ／ｍＬ濃度のＳＴ−６１７−ＡＰＩ、ＳＴ−６１７−ＤＰＩ及び回転異性体複合体で（２連で）、３７℃で前処理した。
ＨＧＥＰｐ細胞からのｍＲＮＡの調製：
ＲＮｅａｓｙ  ＵＣＰ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔを使用して、ＨＧＥＰｐ細胞からｍＲＮＡを精製した。
１．  処理剤を廃棄及び洗浄した後に、細胞を遠心管内で１０００ＲＰＭで５分間にわたって遠心することによりペレット化した。すべての上清を吸引により慎重に除去して、すべての細胞培地が完全に除去されていることを確実にした。
２．  細胞をバッファーＲＵＬＴ３５０μｌを添加することにより破壊して、細胞ペレットを管から注意して離し、ボルテックス処理して十分に混合し、溶解産物をＲＮアーゼ非含有シリンジに装着した２０ゲージ針に５回通過させることにより混合物を均質化した。
３．  ７０％エタノール３５０μｌを溶解産物に添加し、再びピペット処理により混合した（一部の沈澱物が見えるが、アッセイには問題ない）。
４．  形成されていてもよい何らかの沈澱物を含むサンプルを、２ｍｌ捕集管内に設置されたＲＮｅａｓｙ  ＵＣＰ  ＭｉｎＥｌｕｔｅスピンカラムに移し、１０，０００ｒｐｍで１５秒間にわたって遠心した。通過画分を廃棄した。
５．  バッファーＲＵＷＴ３５０μｌをスピンカラムに添加し、１０，０００ｒｐｍで１５秒間にわたって遠心して、膜を洗浄した。通過画分を廃棄した。
６．  ＤＮａｓｅ  Ｉストック溶液１０μｌをバッファーＲＤＤ７０μｌに添加した。穏やかに混合し、ＤＮアーゼＩミックス８０ｕｌを直接、スピンカラム膜に添加し、１５分間にわたってボルテックス処理した。
７．  バッファーＲＵＷＴ３５０μｌをスピンカラムに添加し、１０，０００ｒｐｍで１５秒間にわたって遠心して、これを洗浄し、通過画分を廃棄した。
８．  スピンカラムを新たな２ｍｌ捕集管に設置し、バッファーＲＵＰＥ５００μｌを添加し、１０，０００ｒｐｍで１５秒間にわたって遠心した。通過画分を廃棄した。
９．  スピンカラムを再び８０％エタノール５００μｌで洗浄し、これを新たな２ｍｌ捕集管内に設置し、蓋をあけたままで全速で５分間にわたって遠心して、すべてのエタノールを確実に除去する。
１０．  スピンカラムを新たな１．５ｍｌ捕集管に設置し、超純水１４μｌを直接、スピンカラム膜の中心に添加し、蓋を閉め、全速で１分間にわたって遠心して、ＲＮＡを溶離した。スピンカラムの死容積は４μｌである。超純水１６μｌで溶離して、ＲＮＡ溶離液２０μｌ（４μｇ）を得た。
ＲＴ−ＰＣＲのためのｃＤＮＡの調製：
１．  上の処理のそれぞれからのＲＮＡサンプルをバッファーＧＥ２（ｇＤＮＡ除去バッファー）４０μｌ及びＲＮアーゼ非含有Ｈ２Ｏに添加して、６０μｌの最終体積にした。
２．  ３７℃で５分間にわたってインキュベートし、直ちに、２分間にわたって氷上に置いた。
３．  ＢＣ５  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  Ｍｉｘ６２μｌを各ＲＮＡサンプル６０μｌに、１０２μｌの最終体積で添加した。
４．  ４２℃で正確に１５分間にわたってインキュベートし、次いで直ちに、９５℃で５分間にわたって加熱することにより反応を停止させた（必要ならば、ｑＰＣＲまで氷上で保持）。
【００７６】
ヒト酸化ストレスＲＴ２  ｐｒｏｆｉｌｅｒ  ＰＣＲアレイ：
ＲＴ−ＰＣＲは、遺伝子発現分析のための高感度かつ信頼可能な方法である。上記アッセイは、２４時間にわたって１００μｇ／ｍｌのＳＴ−６１７−ＡＰＩ、ＳＴ−６１７−ＤＰＩ及び回転異性体複合体で前処理されたＨＧＥＰｐ細胞において、酸化ストレスに関連する８４の遺伝子の発現レベルを分析するために、信頼して使用することができた。上記からのｃＤＮＡをＲＴ２  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ｆｌｕｏｒ  Ｍａｓｔｅｒｍｉｘと混合し、ＲＴ２  ｐｒｏｆｉｌｅｒ  ＰＣＲアレイのウェルにアリコットした。ＲＴ−ＰＣＲをｉＣｙｃｌｅｒで行った。遺伝子発現を、Ｃｔ値を使用して比較し、結果を、ΔΔＣｔ法を使用して計算し、５つの共通遺伝子（ＡＣＴＢ、Ｂ２Ｍ、ＧＡＰＤＨ、ＨＰＲＴ、及びＲＰＬ１３Ａ）の平均発現レベルに対して正規化した。
【００７７】
結果：
ＳＴ−６１７−ＤＰＩ及び実施例１〜１１の回転異性体複合体でのアッセイの結果を下の表２に示す。下の表２に報告されているＳＴ−６１７−ＡＰＩ（ＷＯ２０１６２０７９１４に開示のプロセスに従って調製された再結晶化オルチプラズ）での結果は、上記のとおりに行われた先行アッセイからの結果である。
表２
【表３】
2022501424.tif 000005
【００７８】
陰性対照は、いずれの遺伝子制御においても変化を示さなかった。すべての回転異性体が、（＋）回転異性体よりも（−）回転異性体について高い遺伝性制御応答を示した。２種の回転異性体の間での最高の倍数変化は、ＳＯＤ１、ＧＣＬＣ、ＧＣＬＭ及びＵＣＰ２についてであった。グルタチオン（ＧＳＨ）生合成遺伝子であるＧＣＬＣ及びＧＣＬＭ遺伝子が（＋）と（−）の回転異性体の間で有意に一貫した差異を示したことは注目すべきである。これらの結果は、ＳＴ−６１７−ＤＰＩを投与されて、頭頚部癌のための放射線療法を受けている間に軽い口腔粘膜炎の発生を経験した治験中の患者で観察された血清中ＧＳＨの上昇と相関する。（−）回転異性体は、ＡＬＯＸ１２、ＳＯＤ１、ＮＱＯ１、ＧＣＬＣ及びＧＳＴＰ１について、ＳＴ−６１７−ＡＰＩと比較して高い遺伝子上方制御応答を示した。（−）回転異性体は、ＳＯＤ１、ＮＱＯ１、ＧＣＬＣ、ＧＳＴＰ１及びＧＣＬＭについて、ＳＴ−６１７−ＤＰＩと比較して高い遺伝子上方制御応答を示した。（−）回転異性体のうち、リン酸ジメチル及びイセチオン酸複合体（それぞれ実施例９及び１０）は、ＳＯＤ１、ＮＱＯ１、ＧＣＬＣ、ＧＳＴＰ１及びＧＣＬＭについて、ＳＴ−６１７−ＤＰＩ及びＳＴ−６１７−ＤＰＩと比較して有意に高い上方制御を示した。（−）回転異性体はまた、ＳＴ−６１７−ＤＰＩ及びＳＴ−６１７−ＡＰＩと比較して、ＵＣＰ２（ミトコンドリア由来ＲＯＳの制御に関係するミトコンドリア脱共役タンパク質２）の示差的下方制御を示した。
【００７９】
したがって、本開示の回転異性体医薬組成物及びその回転異性体医薬組成物を投与する方法は、細胞内活性酸素種（ＲＯＳ）を減少させる、及び／または酸化ストレスを減少させるために、化学療法または放射線療法などの酸化ストレスを与える処置を受ける患者を含む任意のヒトまたは非ヒト動物患者を処置するために使用することができる。
【００８０】
本開示の回転異性体医薬組成物及びその回転異性体医薬組成物を投与する方法は、抗酸化作用を得るために、化学療法または放射線療法などの酸化ストレスを与える処置を受ける患者を含む任意のヒトまたは非ヒト動物患者を処置するために使用することができる。本開示の回転異性体医薬組成物及びその回転異性体医薬組成物を投与する方法はまた、化学療法または放射線療法などの酸化的損傷を与える処置を受ける患者を含む患者において、酸化的損傷（例えば、口腔粘膜炎を含む粘膜炎）の発症を遅延させる、及び／または重症度を軽減する、及び／または持続期間を減少させるために使用することができる。
【００８１】
上の結果に基づきさらに、（＋）回転異性体が回転異性体過剰で存在する組成物を含めて、（＋）回転異性体は、Ｎｒｆ２経路と関連する遺伝子を上方制御し得ると考えられる。上の結果に基づきさらに、（−）回転異性体が回転異性体過剰で存在する組成物を含めて、（−）回転異性体は、Ｎｒｆ２経路と関連する遺伝子を上方制御し得ると考えられる。
態様の列挙
１．  回転異性体過剰の４−メチル−５−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオンの（＋）回転異性体（オルチプラズ、図４Ａを参照されたい）を含む組成物。
２．  回転異性体過剰の上記（＋）回転異性体を有する１種または複数のオルチプラズ複合体（例えば、オルチプラズの１種または複数の塩）を含む、態様１に記載の組成物。
３．  上記１種または複数のオルチプラズ複合体が、Ｎ置換ピラジニウムイオン及び会合アニオンを生成する、オルチプラズのピラジニル環のアルファ窒素への基の付加（例えば、ＨＣｌ、アルキルハロゲン化物またはアシルハロゲン化物の可逆的付加）から生じる、Ｎ置換ピラジニウムイオン及び会合アニオンを生成する、オルチプラズのピラジニル環のアルファ窒素への基の付加から生じる塩を含む、態様２に記載の組成物。
４．  上記１種または複数のオルチプラズ複合体が、アルキルハロゲン化物、アルケニルハロゲン化物、アルキニルハロゲン化物、アシルハロゲン化物、ベンゾイルハロゲン化物、及びその組合せからなる群から選択される１種または複数の反応物（例えば、ＨＣｌ、塩化メチル、置換または非置換メチル、置換または非置換ホルミル、置換または非置換アセチル、置換または非置換ベンゾイル、置換及び非置換ブチルからなる群から選択される１種または複数の反応物）のオルチプラズのピラジニル環のアルファ窒素への付加により形成される少なくとも１種のオルチプラズ複合体を含む、態様３に記載の組成物。そのようなオルチプラズ複合体は、オルチプラズを例えば、それぞれ塩化ホルミル、塩化アセチル、塩化ベンゾイル、及びヨウ化ｎ−ブチル、ヨウ化メチル、及びそれらの組合せと反応させることにより形成することができる。そのような態様では、上記ホルミル、アセチル、ベンゾイル及びブチル基は、ピラジン環の２または４位の窒素原子と会合してよく、例えば、ハロゲン（例えば、ＦまたはＣｌ）及び／または低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）から選択される１個または複数の置換基を有してよい。
５．  上記（＋）回転異性体の回転異性体過剰が、３０〜４０％の過剰、４０〜５０％の過剰、５０〜６０％の過剰、及び６０〜７０％の過剰、７０〜８０％の過剰、及び８０％超の過剰からなる群から選択される範囲である、態様１〜４のいずれかに記載の組成物。
６．  オルチプラズ複合体を含む組成物であって、上記オルチプラズ複合体が、過剰の４−メチル−５−（ピラジン−２−イル）−３Ｈ−１，２−ジチオール−３−チオン（オルチプラズ）の（−）回転異性体を有する前記組成物。
７．  回転異性体過剰の上記（−）回転異性体を有する１種または複数のオルチプラズ複合体を含む、態様６に記載の組成物。
８．  上記１種または複数のオルチプラズ複合体の少なくとも１種が、ピラジニル環のアルファ窒素と電気陰性原子との間の直接結合を含む、態様７に記載の組成物。
９．  上記電気陰性原子が、酸素、硫黄、及びリンからなる群から選択される、態様８に記載の組成物。
１０．  上記１種または複数のオルチプラズ複合体が、ヒドロキシマレアートオルチプラズ複合体を含む、実施形態６〜９のいずれかに記載の組成物。
１１．  上記１種または複数のオルチプラズ複合体が、オルチプラズを、カルボン酸またはその塩、リン酸またはその塩、アルキルホスファート、アリールホスファート、アルキルスルホン酸またはその塩、アリールスルホン酸またはその塩、置換及び非置換チオカルボン酸またはその塩、ならびに上述の１種または複数の組合せ、例えば、乳酸、タルトロン酸、イソチオン酸、イソセリン、２−メルカプトエタンスルホン酸、タウリン、プロピルホスホン酸、２−アミノエチルホスホン酸、ジチオリン酸ジエチル、チオリン酸ジエチル、リン酸ジメチルからなる群から選択される１種または複数の反応物と反応させることにより形成される１種または複数の複合体を含む、態様６〜９のいずれかに記載の組成物。
１２．  上記１種または複数のオルチプラズ複合体が、オルチプラズを、乳酸、タルトロン酸、イソチオン酸、イソセリン、２−メルカプトエタンスルホン酸、タウリン、プロピルホスホン酸、２−アミノエチルホスホン酸、ジチオリン酸ジエチル、チオリン酸ジエチル、リン酸ジメチル、及びそれらの組合せからなる群から選択される１種または複数の反応物と反応させることにより形成される１種または複数の複合体を含む、態様６〜９のいずれかに記載の組成物。
１３．  上記（−）回転異性体の回転異性体過剰が、３０〜４０％の過剰、４０〜５０％の過剰、５０〜６０％の過剰、６０〜６５％の過剰、６０〜７０％の過剰、７０〜８０％の過剰、８０〜９０％の過剰、及び９０〜１００％の過剰からなる群から選択される範囲である、態様６〜１２のいずれかに記載の組成物。
１４．  ヒトへの投与に適している、態様１〜１３のいずれかに記載の少なくとも１つの組成物を含む医薬組成物。
１５．  局所投与に適した形態である、態様１４に記載の医薬組成物。
１６．  直腸投与または吸入による投与に適した形態である、態様１５に記載の医薬組成物。
１７．  皮下、筋肉内、胸骨内、または静脈内注射に適した形態である、態様１４に記載の医薬組成物。
１８．  経口投与に適した形態である、態様１４に記載の医薬組成物。
１９．  散剤、丸剤、錠剤の形態であるか、またはカプセル剤の中に含まれている、態様１８に記載の医薬組成物。
２０．  液体形態である、態様１８に記載の医薬組成物。
２１．  処置を必要とするヒトまたは非ヒト動物患者を処置するためのプロセスであって、上記患者に、態様１３〜２０のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む上記プロセス。
２２．  前記投与が経口投与を含む、態様２１に記載のプロセス。
２３．  前記投与が頬側投与を含む、態様２１に記載のプロセス。
２４．  粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、態様１８〜２０のいずれかに記載の医薬組成物を経口投与することを含む上記プロセス。
２５．  粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、態様１８〜２０のいずれかに従って調製された医薬組成物を経口投与することを含む上記プロセス。
２６．  粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、上記患者に、態様１８〜２０のいずれかに記載の医薬組成物を経口投与することを含む上記プロセス。
２７．  上記粘膜炎が口腔粘膜炎である、態様２４〜２６のいずれかに記載のプロセス。
２８．  上記粘膜炎が消化管の粘膜炎である、態様２４〜２６のいずれかに記載のプロセス。
２９．  粘膜炎または皮膚炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、態様１５に記載の組成物を局所投与することを含む上記プロセス。
３０．  粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、態様１６に記載の組成物を直腸投与することを含む上記プロセス。
３１．  粘膜炎を予防する、処置する、寛解させる、その重症度を軽減する、及び／またはその持続期間を短縮することを、それを必要とするヒトまたは非ヒト動物患者について行うプロセスであって、態様１６に記載の組成物を吸入により投与することを含む上記プロセス。
３２．  上記患者が放射線療法を受けている、態様２１〜３１のいずれかに記載のプロセス。
３３．  オルチプラズのヒドロキシマレイン酸無水物（−）回転異性体を作製するプロセスであって、
（ｉ）無水極性溶媒の存在下でオルチプラズを（＋）−ジアセチル−Ｌ−酒石酸無水物と反応させて、反応混合物を形成するステップと；
（ｉｉ）酢酸を上記反応混合物に添加するステップと
を含む上記プロセス。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【国際調査報告】
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