(57)【要約】    タンパク質と、一般式Ｉ（Ｉ）  【化１】2022500376.tif 000020  のポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤と、を含む組成物であって、  式中、Ｒ１−Ｃ（＝Ｏ）は脂肪酸アシル基であり、Ｒ２はＨ又は置換若しくは未置換ヒドロカルビル基であり、Ｘ１はＯ又はＮＨであり、Ｘ２はＯ又はＮＨであり、ｎは０又は１〜５の整数であり、Ｒ３は、一般式ＩＩ及びＩＩＩ（ＩＩ）（ＩＩＩ）  【化２】2022500376.tif 000021  の重合単位を含むポリマー基であり、  前記タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤の重量比が、２００：１〜１０００：１の範囲である、組成物。  【選択図】なし
2022500376.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質と、一般式Ｉのポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤
【化１】
2022500376.tif 000018
と、を含む組成物であって、
式中、Ｒ１−Ｃ（＝Ｏ）は脂肪酸アシル基であり、Ｒ２は、Ｈ又は置換若しくは未置換ヒドロカルビル基であり、Ｘ１はＯ又はＮＨであり、Ｘ２はＯ又はＮＨであり、ｎは０又は１〜５の整数であり、Ｒ３は、一般式ＩＩ及びＩＩＩ
【化２】
2022500376.tif 000019
の重合単位を含むポリマー基であり、前記タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤との重量比が、２００：１〜１０００：１の範囲である、組成物。
【請求項２】
前記タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤との重量比が、２５０：１〜９００：１の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤との重量比が、３００：１〜８００：１の範囲である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤との重量比が、４００：１〜７００：１の範囲である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤との重量比が、２０１：１〜２５０：１の範囲である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項６】
タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤との重量比が、２０５：１〜２４５：１の範囲である、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤との重量比が、２１０：１〜２４０：１の範囲である、請求項５又は６に記載の組成物。
【請求項８】
Ｒ１がＣ９〜２２直鎖状アルキルである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
Ｘ２はＮＨである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
ｎは１、２、３、４又は５、好ましくは１である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
Ｘ１はＮＨである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
ｎは１であり、且つ式Ｉの基におけるＲ２が天然アミノ酸の側鎖を表す、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
Ｒ２がＨであり、未置換Ｃ１〜４アルキル又は−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ５）である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
Ｒ３が、数平均分子量６００〜５０００、好ましくは８００〜３０００を有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
プロピレンオキシド（ＰＯ）単位とエチレンオキシド（ＥＯ）単位の比が、０．０１：１〜２：１、好ましくは０．０５：１〜１：１、より好ましくは０．１：１〜０．５：１である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
式Ｉにおいて、Ｒ１がＣＨ３−（ＣＨ２）１１−ＣＨ２−であり、ｎが１であり、Ｘ１及びＸ２はどちらもＮＨであり、Ｒ２は−ＣＨ２（Ｃ６Ｈ５）であり、Ｒ３が、近似の分子量１０００及びＰＯ：ＥＯ比３：１９を有する、ＣＨ３でキャップされたＰＯ及びＥＯ単位のコポリマーである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
式Ｉにおいて、Ｒ１がＣＨ３−（ＣＨ２）１１−ＣＨ２−であり、ｎが０であり、Ｘ２がＮＨであり、且つＲ３が、近似の分子量１０００及びＰＯ：ＥＯ比３：１９を有する、ＣＨ３でキャップされたＰＯ及びＥＯ単位のコポリマーである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記タンパク質が、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体薬物複合体、成長因子、インスリン、免疫グロブリン、ペプチドホルモン、酵素、ポリペプチド、融合タンパク質、グリコシル化タンパク質、抗原、抗原サブユニット及びその組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
タンパク質の量が、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜４００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．１ｍｇ／ｍｌ〜３００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１ｍｇ／ｍｌ〜２５０ｍｇ／ｍｌの範囲である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
ショ糖、グルコース、マンノース、トレハロース、マルトース、ブドウ糖、デキストラン、ソルビトール、マンニトール、及びキシリトールからなる群から選択される糖又は糖アルコールをさらに含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
塩、例えばフッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、リン酸、カルボン酸、酢酸、クエン酸、硫酸の、水素、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム又はアンモニウム塩をさらに含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
天然アミノ酸、好ましくはリジン、グリシン、アルギニン又はヒスチジンをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記タンパク質がセツキシマブである、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
式（Ｉ）（式中、Ｒ１はＣＨ３−（ＣＨ２）１１−ＣＨ２−であり、ｎは１であり、Ｘ１及びＸ２はどちらもＮＨであり、Ｒ２は−ＣＨ２（Ｃ６Ｈ５）であり、且つＲ３は、近似の数平均分子量１０００及びＰＯ／ＥＯ比３：１９を有する、ＣＨ３でキャップされたＰＯ及びＥＯ単位のコポリマーである）のポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤を含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
セツキシマブとポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤の比が３００：１〜７５０：１である、請求項２３又は２４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質及びポリオキシアルキル脂肪酸アシル界面活性剤を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質又は他の生体由来巨大分子から誘導される生物薬剤は、薬剤の重要な種類として急速に現れている。タンパク質材料の比較的脆弱な性質のために、治療上有益であり、且つ加工、分配、及び投与に耐えるのに十分に安定性である、生物活性物質の開発は依然としてかなりの難題である。タンパク質生物学的薬物の製造者及び配合者は、配合物の貯蔵性を向上させるために、様々なプロセス技術及び配合方法を用いるが、賦形剤の現在のツールボックスはかなり小さい。タンパク質の乾燥粉末は、貯蔵安定性が高いことが多いため、凍結乾燥又はより最近では噴霧乾燥によって、多くの第一世代商品が乾燥されている。しかしながら、乾燥製品は、免疫原性を生じ得る不溶性種が形成される、再構成に関連する難題を有し得る。さらに、再構成は通常、医療専門家が実施する必要があるプロセスであり、そのためコストが増加し、患者に不便が生じる。多くのタンパク質薬物は、特に腫瘍学的薬物については静脈内注入によってクリニックにて投与される。タンパク質薬物は他の疾患、例えば慢性関節リウマチ又は他の自己免疫疾患用に開発されているため、患者は自宅で自己投与することを好む。クリニックから自宅へ移動するのであれば、実行可能な場合には、液体製剤は好ましい送達形態である。
【０００３】
液体製剤の安定性を高めるために、製剤には、緩衝剤、塩、糖、及び界面活性剤など、生物製剤を安定化するように設計された様々な賦形剤が用いられる。これらの賦形剤を使用して、タンパク質周囲の環境を最適化し、そのコロイド安定性を最大限にし、隣接タンパク質との相互作用を低減し、表面との相互作用をブロックする。界面活性剤は特に、それらがその上に吸着し、変性させ、最終的に凝集し得る、疎水性表面（例えば、バイアル壁又は空気界面）へのタンパク質のアクセスをブロックすることによってタンパク質を安定化する。一部の生物製剤に関しては、界面活性剤は、特定のタンパク質サブ領域を安定化する、又は変性を生じさせ得るタンパク質間相互作用をブロックするとも提唱されているが、これは有力な作用メカニズムであると考えられない。界面活性剤を使用して配合された製品のほぼ大部分は、安全性プロファイルが確立されているため、ポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）（ポリソルベート８０若しくはポリソルベート２０）又はポロキサマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）１８８を含有する。
【０００４】
注射可能な製剤におけるその安定性のため、ポリソルベート及びポロキサマー１８８が利用されているが、特に界面活性剤の劣化が原因で、それらはまだ重大な欠点を有する。タンパク質製剤で使用される一般的な不活性構成単位で構成される一連の界面活性剤は最近、国際公開第２０１７／０４４３６６号パンフレットに開示されるように開発されている。これらの新規な界面活性剤は、天然脂質で一般に見出される完全飽和アルキル鎖、界面活性剤の官能性を微調整することができるアミノ酸残基、及びポリエーテル非イオン性親水性ヘッド基（ｈｅａｄ  ｇｒｏｕｐ）を含む。これらの構成単位はアミド結合によって結合され、ポリソルベートの劣化に関与している疎水結合の加水分解に抵抗する（エステル結合と比較して）。水溶液中のタンパク質を安定化するための、これらの界面活性剤の使用は国際公開第２０１７／０４４３６７号パンフレットに開示されている。国際公開第２０１７／０４４３６７号パンフレットの製剤中の、報告されるタンパク質に対する界面活性剤の濃度は１：２００以下、好ましくは１：１００以下である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
意外なことに、国際公開第２０１７／０４４３６６号パンフレットに開示される界面活性剤を使用して、国際公開第２０１７／０４４３６７号パンフレットに報告される濃度よりも、タンパク質濃度に対して、かなり低い濃度で水溶液中のタンパク質の凝集を防ぐことができることが判明した。
したがって、本発明は、タンパク質と、一般式Ｉのポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤
【化１】
2022500376.tif 000003
（式中、Ｒ１−Ｃ（＝Ｏ）は脂肪酸アシル基であり、Ｒ２は、Ｈ又は置換若しくは未置換ヒドロカルビル基であり、Ｘ１はＯ又はＮＨであり、Ｘ２はＯ又はＮＨであり、ｎは０又は１〜５の整数であり、Ｒ３は、一般式ＩＩ及びＩＩＩ：
【化２】
2022500376.tif 000004
の重合単位を含むポリマー基である）と、を含む組成物であって、前記タンパク質と前記ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤の重量比が２００：１〜１０００：１の範囲である、組成物に関する。
【０００６】
式（Ｉ）の界面活性剤は、ポリソルベート若しくはポロキサマー１８８などの従来の界面活性剤よりも低い臨界ミセル濃度（その濃度を超えると界面活性剤が自発的にミセルへと集合する）を示すことが判明した。臨界ミセル濃度が低いほど、集合に対する誘導が強くなることを表し、界面の安定化が速くなると解釈され得る。特定の理論に束縛されないが、臨界ミセル濃度が低いほど、式（Ｉ）の界面活性剤は、従来の界面活性剤よりも１〜２桁速く表面平衡状態に近づき、界面でタンパク質に打ち勝ち、したがってタンパク質凝集の可能性が低減されるという知見が説明される。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
定義
ポリアルコキシ化合物は、構−（−Ａ−Ｏ）ｍ−を有する１つ又は複数の基を含有する化合物であり、ｍは３以上であり、Ａは未置換アルキル基である。Ａ基は直鎖状、分岐状、環状又はその組み合わせであり得る。種々のＡ基、特に種々の−（−Ａ−Ｏ）−基は互いに同じ又は異なり得る。
【０００８】
脂肪酸化合物は、１つ又は複数の脂肪酸基を含有する化合物である。脂肪酸基は、それぞれが基において他の炭素原子の１つ又は複数と結合されている、炭素原子８個以上を含有する基である。ポリアルコキシ脂肪酸化合物は、ポリアルコキシ化合物と脂肪酸化合物の両方である化合物である。
【０００９】
数平均分子量は、試料における分子の数で割られた試料の全重量として定義される。
【００１０】
ヒドロカルビル基は、水素原子と炭素原子を含有する基である。未置換ヒドロカルビル基は、水素原子と炭素原子のみを含有する。置換ヒドロカルビル基は、水素及び炭素以外の１つ又は複数の原子を含有する１つ又は複数の置換基を含有する。
【００１１】
タンパク質は、その重合単位がアミノ酸の重合単位である、ポリマーである。アミノ酸は、ペプチド結合によって互いに結合される。タンパク質は、１つ又は複数のアミノ酸残基の重合単位を２０個以上含有する。タンパク質という用語は、直鎖状ポリペプチド鎖並びにポリペプチド鎖を含有する、より複雑な構造を包含する。
【００１２】
タンパク質の分子が、個々の溶解分子の形態で連続液体媒体全体に分布される場合、タンパク質は、液体媒中に溶解状態である（又は、同義で液体媒体に溶解されている）とみなされる。連続液体媒体の重量に対して６０重量％以上の量で、連続液体媒体が水を含有する場合には、タンパク質は水に溶解されているとみなされる。
【００１３】
ｐＨ値が４．５〜８．５である場合、化学基はイオン性基であり、そのため化学基がそのｐＨ値で水と接触した場合、存在するそれらの化学基の５０モル％以上がイオン性形態をとる。
【００１４】
緩衝剤は、（ｉ）プロトンを受け入れてその化合物の共役酸を形成する能力を有する化合物であって、その化合物の共役酸が１０未満のｐＫａを有する化合物か、（ｉｉ）プロトンを放出する能力を有する化合物であって、その化合物が４超のｐＫａを有する化合物かのどちらかである。
【００１５】
実施形態
式Ｉのポリアルコキシ脂肪酸化合物において、Ｒ１は好ましくは、置換若しくは未置換脂肪族基である。置換脂肪族基の中でも、好ましい置換基はヒドロキシルである。より好ましくは、Ｒ１は、未置換脂肪族基；より好ましくは、Ｒ１は未置換アルキル基である。好ましくは、Ｒ１は、炭素原子９〜２２個、好ましくは炭素原子１０〜１８個、より好ましくは炭素原子１０〜１６個を有する直鎖状アルキル基である。
【００１６】
好ましくは、Ｘ１はＮＨである。好ましくは、Ｘ２はＮＨである。
【００１７】
好ましくは、ｎは０又は１、２、３、４又は５である。より好ましくは、ｎは０又は１である。
【００１８】
好ましくは、Ｒ２は、２０個以下；より好ましくは１５個以下の原子を有する。好ましくは、Ｒ２が水素ではない場合、Ｒ２は１つ又は複数の炭素原子を含有する。好ましくは、Ｒ２は水素又は未置換炭化水素基であり；より好ましくはＲ２は、水素、未置換アルキル基、又はその唯一の置換基が未置換の芳香族炭化水素基であるアルキル基である。未置換アルキル基の中では、メチルが好ましい。その唯一の置換基が未置換芳香族炭化水素基であるアルキル基の中では、−ＣＨ２−（Ｃ６Ｈ５）が好ましく、−（Ｃ６Ｈ５）はベンゼン環である。好ましくは、Ｒ２は、天然に存在するアミノ酸の側鎖を表す。
好ましくは、Ｒ３は数平均分子量６００〜５０００ダルトン、より好ましくは８００〜３０００ダルトンを有する。
【００１９】
好ましくは、Ｒ３基は、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の統計コポリマー、又はコポリマー（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）のブロックコポリマーであり；より好ましくは、Ｒ３は（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の統計コポリマーである。好ましくは、−Ｒ３は構−Ｒ４−ＣＨ３を有し、Ｒ４は、構造（ＩＩ）及び構造（ＩＩＩ）の重合単位を含むポリマー基である。好ましくは、Ｒ４は、構造（ＩＩ）及び構造（ＩＩＩ）に加えて他の重合単位を含まない。
【００２０】
構造（ＩＩ）の単位と構造（ＩＩＩ）単位とのモル比（本明細書において、「ＰＯ／ＥＯ比」）を特徴付けることは有用である。好ましくは、ＰＯ／ＥＯ比は、０．０１：１〜２：１、より好ましくは０．０５：１〜１：１、特に０．１：１〜０．５：１である。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物の特に好ましい実施形態において、Ｒ１はＣＨ３−（ＣＨ２）１１−ＣＨ２−であり、ｎは１であり、Ｘ１及びＸ２はどちらもＮＨであり、Ｒ２はＣＨ２（Ｃ６Ｈ５）であり、Ｒ３は、近似の数平均分子量１０００及びＰＯ／ＥＯ比３：１９を有する、ＣＨ３でキャップされたＰＯ及びＥＯ単位のコポリマーである。タンパク質水溶液の安定化に使用される標準的な界面活性剤であるポリソルベート又はポロキサマー１８８よりも、この界面活性剤は１〜２桁速く界面を安定化することが判明している。より速い動力学が、攪拌で誘発される凝集に対するモデルタンパク質薬の安定化の向上を導くことが判明した。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物の他の好ましい実施形態において、Ｒ１はＣＨ３−（ＣＨ２）１１−ＣＨ２−であり、ｎは０であり、Ｘ２はＮＨであり、Ｒ３は、近似の数平均分子量１０００及びＰＯ／ＥＯ比３：１９を有する、ＣＨ３でキャップされたＰＯ単位とＥＯ単位のコポリマーである。
【００２３】
好ましくは、式（Ｉ）の化合物はイオン性基を持たない。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物はいずれかの方法によって製造され得る。好ましい方法は、構造ＮＨ２−Ｒ３を有する化合物を、構造Ｖの化合物
【化３】
2022500376.tif 000005
及び、構造ＶＩの化合物
【化４】
2022500376.tif 000006
から選択される化合物と反応させる方法である。式中、ｎが１〜５である場合には、Ｘ３はＯ又はＮＨであり、Ｘ３はそれぞれ独立して、Ｏ又はＮＨである。末端Ｘ３は好ましくはＯである。Ｒ１、Ｘ２、Ｒ２、Ｒ３、及びｎについて好ましいのは、上述のものと同じである。好ましくは、Ｘ３はＯである。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物の一部の実施形態を製造する他の好ましい方法は以下の通りである。第１工程において、塩化アシルをアミノ酸と反応させて、以下の通りにカルボキシル官能性脂肪酸アミドが形成される；
【化５】
2022500376.tif 000007
【００２６】
次いで、第２段階では、カルボキシル官能性脂肪酸アミドをアミン末端ポリアルコキシ化合物と以下の通りに反応させる：
【化６】
2022500376.tif 000008
式中、ＰＯは構造（ＩＩ）であり、且つＥＯは構造（ＩＩＩ）である。Ｒ３が上記の構造において（ＰＯ）ｘ及び（ＥＯ）ｙと示される場合、ＰＯ及びＥＯ単位が常にブロックとして存在する指標として解釈すべきではないことに留意すべきであり；実際にはそれらはランダムにＲ３全体に分布し得る。
【００２７】
本発明の組成物に含まれるべき好ましいタンパク質は、モノクローナル抗体、成長因子、インスリン、免疫グロブリン、ポリクローナル抗体、抗体薬物複合体、ホルモン、酵素、ポリペプチド、ペプチドの融合物、グリコシル化タンパク質、抗原、抗原サブユニット、又はその組み合わせである。好ましいタンパク質は、疾患若しくは病状を治療する、又ワクチンとして機能する、治療有効性を有する。治療的タンパク質の例は、免疫グロブリン−ｇ、アダリムマブ、インターフェロンα、ベバシズマブ、ヒト成長ホルモン、リツキシマブ、ヒト血清アルブミン、インスリン、エリスロポエチンα、ペムブロリズマブ、エタネルセプト、フィルグラスチム、ニボルマブ、トラスツズマブ、デュルバルマブ、インターロイキン−２、インフリキシマブ、絨毛性ゴナドトロピン、アベルマブ、デノスマブ、ラニビズマブ、アフリベルセプト、トレメリムマブ、第ＶＩＩＩ因子、インターフェロンβ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アバタセプト、トシリズマブ、ウステキヌマブ、ペグフィルグラスチム、セクキヌマブ、ストレプトキナーゼ、セツキシマブ、オマリズマブ、ラムシルマブ、ウロキナーゼ、セルトリズマブペゴル、デュピルマブ、ゴリムマブ、アルデスロイキン、モルグラモスチム、ペグインターフェロンα−２ｂ、チスレリズマブ、フォリトロピンα、ゲボキスマブ、ゴリムマブ、スパルタリズマブ、カナキヌマブ、フォラルマブ、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、ニモツズマブ、エリスロポエチンβ、エボロクマブ、ペガルギミナーゼ（ｐｅｇａｒｇｉｍｉｎａｓｅ）、ベルメキマブ、カロツキシマブ、ダラツムマブ、エクリズマブ、オンツキシズマブ、アダリムマブ、カムレリズマブ、エノブリツズマブ、インターロイキン−１２、リリルマブ、パニツムマブ、ガチポツズマブ（ｇａｔｉｐｏｔｕｚｕｍａｂ）、レラトリマブ、アンデカリキシマブ、ベリムマブ、カビラリズマブ、サシツズマブゴビテカン（ｉｓａｃｔｕｚｕｍａ  ｂｇｏｖｉｔｅｃａｎ）、モナリズマブ、パンクレアチン、パーツズマブ、トリパリマブ、イネビリズマブ、オファツムマブ、ペピネマブ、シンチリマブ、アリロクマブ、ミラツズマブ、ニダニリマブ（ｎｉｄａｎｉｌｉｍａｂ）、ソタテルセプト（ｓｏｔａｔｅｒｃｅｐｔ）、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベバシズマブβ、イサツキシマブ、オルロタマブ（ｏｒｌｏｔａｍａｂ）、チソツマブベドチン（ｔｉｓｏｔｕｍａｂｖｅｄｏｔｉｎ）、ベンラリズマブ、コシベリマブ、エマクツズマブ、ガニツマブ、ナルソプリマブ、ピディリズマブ、サリルマブ、トラスツズマブエムタンシン、アネツマブラブタンシン、ベルチリムマブ、ブリナツモマブ、グセルクマブ、イキセキズマブ、メポリズマブ、オビヌツズマブ、ウブリツキシマブ、アレムツズマブ、エミベツズマブ、フィクラツズマブ（ｆｉｃｌａｔｕｚｕｍａｂ）、イファボツズマブ、ミリキズマブ、ナタリズマブ、ラコツモマブ、シルツキシマブ、チミグツズマブ（ｔｉｍｉｇｕｔｕｚｕｍａｂ）、トラスツズマブデルクステカン、ビメキズマブ、ブロダルマブ、セトレリマブ、ファーレツズマブ、オピネルセプト、リロナセプト、トムゾツキシマブ（ｔｏｍｕｚｏｔｕｘｉｍａｂ）、ウレルマブ、アスクリンバクマ��、ブロルシズマブ、クラザキズマブ、クサツズマブ（ｃｕｓａｔｕｚｕｍａｂ）、ダロツズマブ（ｄａｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、イナルマブ、イトリズマブ、及びマルゲツキシマブである。医療用診断薬として使用することができる、又は食品組成物に有益な作用を有する、又はクリーニング（ｃｌｅａｎｉｎｇ）組成物若しくはコーティング配合物に組み込むことができるタンパク質もまた、企図される。
【００２８】
好ましくは、タンパク質と式（Ｉ）の化合物との重量比は、２５０：１〜９００：１の範囲、より好ましくは３００：１〜８００：１の範囲、特に４００：１〜７００：１の範囲である。その代わりとして、タンパク質と式（Ｉ）の化合物との重量比は、２０１：１〜２５０：１の範囲、好ましくは２０５：１〜２４５：１の範囲、より好ましくは２１０：１〜２４０：１の範囲である。
【００２９】
特に好ましい実施形態において、本発明は、上述の組成物に関し、モノクローナル抗体はセツキシマブであり、且つセツキシマブと式（Ｉ）のポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤の比は３００：１〜７５０：１の範囲である。この実施形態において、ポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤は好ましくは、式（Ｉ）の化合物であり、式中、Ｒ１はＣＨ３−（ＣＨ２）１１−ＣＨ２−であり、ｎは１であり、Ｘ１及びＸ２はどちらもＮＨであり、Ｒ２は−ＣＨ２（Ｃ６Ｈ５）であり、Ｒ３は、近似の数平均分子量１０００及びＰＯ／ＥＯ比３：１９を有するＣＨ３でキャップされたＰＯ単位とＥＯ単位のコポリマーである。
【００３０】
タンパク質と式（Ｉ）の化合物のどちらも含有する組成物を製造する好ましい方法は、水、１種又は複数種のタンパク質、式（Ｉ）の１種又は複数種の化合物、及び任意の追加の成分を互いに混合して、水にタンパク質が溶解された組成物を提供する方法である。
【００３１】
本発明の組成物において、たとえ凝集粒子が液体媒体に分散されたとしても、好ましくは、タンパク質分子は大きな粒子へと凝集しない。好ましくは、タンパク質分子を含有する凝集粒子が存在する場合、かかる粒子の体積平均流体力学的半径は１０ｎｍ以下；より好ましくは６ｎｍ以下である。
【００３２】
好ましくは、本発明の組成物中のタンパク質の量は、０．０１〜４００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．１〜３００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは１〜２５０ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【００３３】
本発明の組成物は任意に、１種又は複数種の更なる成分を含有する。更なる成分は、水、タンパク質、及び式（Ｉ）の化合物以外の化合物である。
【００３４】
好ましい更なる成分は、糖、糖アルコール、塩、緩衝剤、アミノ酸、アミノ酸の塩、及びその混合物である。かかる更なる成分が存在する場合、好ましくは、すべての更なる成分の総量は３００ｍｇ／ｍＬ以下である。
【００３５】
本発明の組成物に包含される、好ましい糖は、スクロース、グルコース、マンノース、トレハロース、マルトース、ブドウ糖、デキストラン及びその混合物である。本発明の組成物に包含される、好ましい糖アルコールは、ソルビトール、マンニトール又はキシリトールである。
【００３６】
本発明の組成物に包含される、好ましい塩は、水素、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、及びその混合物から選択されるカチオンを有する。好ましい塩は、フッ化物塩、塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、リン酸塩、カルボン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、硫酸塩、及びその混合物から選択されるアニオンを有する。好ましい緩衝剤は、水素、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、及びその混合物から選択されるカチオンを有する。好ましい緩衝剤は、フッ化物塩、塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、リン酸塩、カルボン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、硫酸塩、及びその混合物から選択されるアニオンを有する。
【００３７】
本発明の組成物に包含される、好ましいアミノ酸及びその塩は、リジン、グリシン、アルギニン、ヒスチジン、及びその混合物から選択される。
【００３８】
以下の実施例では本発明についてさらに詳しく説明するが、それらの実施例は決して、請求した本発明の請求の範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００３９】
材料
別段の指定がない限り、すべての材料はシグマ・アルドリッチ社（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）又はフィッシャー社（Ｆｉｓｈｅｒ）から入手し、さらに精製することなく使用した。ジェファーミン（Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ）Ｍ−１０００がハンツマン社（Ｈｕｎｔｓｍａｎ）によって提供された。ポリソルベート８０（ＰＳ８０）及びポリソルベート２０（ＰＳ２０）は、それぞれシグマ・アルドリッチ製品番号５９９２４及び４４１１２の「Ｐｈ．Ｅｕｒ準拠試験済み」グレードであった。それらは、酸化を最小限に抑えるために窒素ヘッドスペース下にて保管した。ポロキサマー１８８（ＰＯ１８８）は、シグマ社（Ｓｉｇｍａ）製品番号Ｐ５５５６の１０％滅菌濾過水溶液として購入した。工業グレードのウシＩｇＧをＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ（カリフォルニア州サンタアナ（Ｓａｎｔａ  Ａｎａ，ＣＡ））から購入した。
【００４０】
ＦＭ１０００は式（Ｉ）の界面活性剤化合物であり、式中、Ｒ１はＣＨ３−（ＣＨ２）１１−ＣＨ２−であり、ｎは１であり、Ｘ１及びＸ２はどちらもＮＨであり、Ｒ２は−ＣＨ２（Ｃ６Ｈ５）であり、Ｒ３は、近似の数平均分子量１０００及びＰＯ／ＥＯ比３：１９を有するＣＨ３でキャップされたＰＯ単位とＥＯ単位のコポリマーである。ＦＭ１０００は、国際公開第２０１７／０４４３６６号パンフレットに報告されるように製造された。簡潔には、水酸化ナトリウム及びトリエチルアミンの存在下にて、塩化ミリストイルを水中のフェニルアラニンでアミド化した。得られた懸濁液を濃塩酸でｐＨ２に酸性化し、濾過した。次いで、濾過粉末をヘキサンから再結晶化した。ジェファーミンＭ−１０００での溶融縮合によって、ミリストイルフェニルアラニンをアミド化した。粗製ＦＭ１０００生成物をメタノールに溶解し、Ｄｏｗ  Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲＮ７７及びＩＲＮ７８イオン交換樹脂上で攪拌し、出発原料を除去した。最終生成物を真空下で乾燥させた。
【００４１】
ＯＭ１０００は式（Ｉ）の界面活性剤化合物であり、式中、Ｒ１はＣＨ３−（ＣＨ２）１１−ＣＨ２−であり、ｎは０であり、Ｘ１はＮＨであり、且つＲ３は、近似の数平均分子量１０００及びＰＯ／ＥＯ比３：１９を有するＣＨ３でキャップされたＰＯ単位とＥＯ単位のコポリマーである。ＯＭ１０００は、国際公開第２０１７／０４４３６６号パンフレットに報告されるように製造された。
【００４２】
方法
０．９％塩化ナトリウム水溶液中でＩｇＧ２０ｍｇ／ｍＬの濃度で試料を調製した。界面活性剤濃度は実施例に示す。動的光散乱（ＤＬＳ）測定を以下の通りに実施した。光散乱測定は、Ｗｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ（商標）高処理ＤＬＳ装置で実施した。各試料３０μＬをコーニング社（Ｃｏｒｎｉｎｇ）９６穴プレートのウェルに入れた。分析前に１０００ｒｐｍにて３分間、プレートを遠心した。分析前に２５℃で５分間、試料を平衡化した。ＤＬＳ測定値が連続的に得られ、５×３秒取得／ウェル／サイクルでウェルからウェルへと繰り返した。
【００４３】
実施例１
製剤６００μＬを１ｍＬガラスバイアル内に調製した。分析（ｔ＝０）のために１００μＬを除去し、次いで試料を３５℃にて２００ｒｐｍにて一晩、その側で振とうした。それぞれのバイアルに対して相の透明度を測定し、サイズに関して、１００μＬアリコートをＤＬＳによって測定した。結果を以下の表に示す。
【００４４】
【表１】
2022500376.tif 000009
【００４５】
【表２】
2022500376.tif 000010
【００４６】
【表３】
2022500376.tif 000011
【００４７】
実施例２：凝集のキネティクス
実施例１と同様であるが、１セットの界面活性剤濃度：０．０５ｍｇ／ｍＬ（４００：１比）にて、実験をセットアップした。それぞれの時点で、試料を振盪機から取り出し、光散乱によって流体力学的半径について分析した。１００の値を読み取り不能なデータに入力した。
【００４８】
【表４】
2022500376.tif 000012
【００４９】
【表５】
2022500376.tif 000013
【００５０】
実施例３
実施例１と同様に実験をセットアップしたが、アミノ酸残基を含有しない式（Ｉ）のポリアルコキシ脂肪酸アシル界面活性剤（ＯＭ１０００、ｎ＝０、Ｘ１＝ＮＨ２）を賦形剤として使用し、ＦＭ１０００を比較した。ＩｇＧの濃度は２０ｍｇ／ｍＬであり；界面活性剤濃度は０．０５ｍｇ／ｍＬであった（タンパク質と界面活性剤の比は４００：１であった）。ポリソルベート２０も対照として調べた。試料５００μＬを他の実施例と同様に１８時間振とうした。そのデータは以下の通りである。
【００５１】
【表６】
2022500376.tif 000014
【００５２】
実施例４
実施例３と同様に実験をセットアップしたが、溶液は０．９％塩化ナトリウムではなく２５ｍＭクエン酸塩（ｐＨ６）を含有した。ＩｇＧの濃度は２０ｍｇ／ｍＬであり；界面活性剤濃度は０．０５ｍｇ／ｍＬであった（タンパク質と界面活性剤の比は４００：１であった）。これらの試料については、透明度を測定しなかった。そのデータは以下の通りである：
【００５３】
【表７】
2022500376.tif 000015
【００５４】
実施例５
セツキシマブの安定性に対する界面活性剤の効果
セツキシマブは商品名Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）で市販されており、薬局で入手できた。それは、１０ｍＭリン酸緩衝液及び１４５ｍＭ塩化ナトリウム中の２ｍｇ／ｍＬ溶液（ｐＨ７．２）として配合される。
【００５５】
マイクロフローイメージングがＢｉｏｔｅｃｈｎｅ  Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｉｎｇユニットで行われ、肉眼では見えない粒子を定量化した。粒子カウントは、ソフトウェアによって自動化された。紫外線検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２６０  Ｂｉｏｉｎｅｒｔ液体クロマトグラフィーシステムでサイズ排除クロマトグラフィーを実施した。カラムはＡｇｉｌｅｎｔ  ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏ  ３００Ａ  ＳＥＣカラムであり、流す緩衝液はリン酸緩衝液であった。紫外線吸光度をＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｍ３プレートリーダーで測定した。動的光散乱（ＤＳＣ）はＷｙａｔｔ  ＤｙｎａＰｒｏ  ＩＩで測定した。
【００５６】
様々な量のＦＭ１０００又はポリソルベート８０を含有するように、セツキシマブを再配合した。１．５ｍｇ／ｍＬセツキシマブ試料を直接、Ｅｒｂｉｔｕｘ（２ｍｇ／ｍＬ）から最終製剤へと希釈した。遠心濾過によって、試料７．５ｍｇ／ｍＬを１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、次いで７．５ｍｇ／ｍＬに希釈した。１０ｍＭリン酸塩、１４５ｍＭ  ＮａＣｌ中で界面活性剤ストック溶液を調製した（ｐＨ７．２）。それぞれの振とう試料は、ウイトン社（Ｗｈｅａｔｏｎ）からの５ｍＬ血清バイアル内で３．０ｍＬであった。振とう前の試料は、振とう試料体積を３ｍＬにするために除去されたアリコートであった。往復式振盪機にて１５０ストローク／分で振とう試料を一晩振とうした。
【００５７】
【表８】
2022500376.tif 000016
【００５８】
【表９】
2022500376.tif 000017
【００５９】
セツキシマブ１．５ｍｇ／ｍｌ及び界面活性剤０．０７５ｍｇ／ｍｌ若しくは０．０５ｍｇ／ｍｌのレベルにて、ポリソルベート８０を界面活性剤として含有させた場合、粒子数は少なかったと上記の表から考えられる。これらのレベルの界面活性剤では、粒径（半径ｎｍ）は、２種類の界面活性剤の間と、振とう前及び後の試料の間に有意な差はなかった。界面活性剤０．０２ｍｇ／ｍｌでは、粒子数も粒径も、２種類の界面活性剤の間に有意な差はなかった。
【００６０】
セツキシマブ１．５ｍｇ／ｍｌ及びポリソルベート８０若しくはＦＭ１０００のいずれか０．０１ｍｇ／ｍｌ（タンパク質：界面活性剤比１５０：１）のレベルにて、ＦＭ１０００を界面活性剤として含有させた場合、粒子数が少なく、粒径はそのままであった。
【００６１】
セツキシマブ１．５ｍｇ／ｍｌ及びポリソルベート８０若しくはＦＭ１０００のいずれか０．００５ｍｇ／ｍｌ（タンパク質：界面活性剤比３００：１）のレベルにて、ＦＭ１０００を界面活性剤として含有させた場合、粒子数はかなり少なく、粒径も有意に小さかった。
【００６２】
セツキシマブ７．５ｍｇ／ｍｌ及びポリソルベート８０及びＦＭ１０００のいずれか０．０１ｍｇ／ｍｌ（タンパク質：界面活性剤比７５０：１）のレベルにて、ＦＭ１０００を界面活性剤として含有させた場合、粒子数が少なかった。
【００６３】
これらの結果から、ＦＭ１０００を界面活性剤として使用して、非常に低レベルの界面活性剤でさえ、著しい攪拌応力後のセツキシマブ粒子の形成をベースライン付近のレベルに低減できることが分かる。
【国際調査報告】
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