【手続補正書】
【提出日】平成22年10月22日(2010.10.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】ＣＴＬＡ−４タンパク質変異体
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸配列（配列番号８）において２カ所以上の以下の位置：１７位、２６位、２８位、２９位、４３位、４６位、４９位、５４位、５９位、６１位、６２位、６６位、７０位、７１位、８１位、８６位、及び９４位に突然変異を有するＣＴＬＡ−４変異体であって、該ＣＴＬＡ−４変異体は、前記位置にヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸（配列番号８）を有するＣＴＬＡ−４ポリペプチドと比較して改善された効力及び／又は改善された安定性を有し、改善された効力とは、Ｂ細胞によって活性化されたＴ細胞を用いたＩＬ−２産生アッセイにおいてＩＣ５０が少なくとも２倍低下することであり、改善された安定性とは、１０ｍＭ  ＤＴＴ存在下におけるＢ７−１又はＢ７−２への結合シグナルを、ＤＴＴ非存在下におけるＢ７−１又はＢ７−２への結合シグナルで割り、１００を掛けたものとして計算される残留結合が少なくとも１０％であることである、前記ＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項２】
配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４と比較して改善された効力及び／又は改善された安定性を有し、及び／又はヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸配列（配列番号８）において１カ所以上の以下の位置：２６位、２８位、７１位、及び９４位に突然変異を有する、請求項１に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項３】
前記位置のいずれか１カ所に提供される残基が、以下の表：
【表１】
2010506581.tif 000001
に特定されるものから選択され、及び／又はＣＴＬＡ−４変異体が、配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４において以下の突然変異セット：
（ｉ）Ｉ１７Ｓ、Ｓ２６Ｐ、Ｇ２８Ｓ、Ｌ５９Ｓ、Ｓ７１Ｌ、Ｋ９４Ｅ；
（ｉｉ）Ｓ２６Ｐ、Ｍ５４Ｖ、Ｌ５９Ｓ、Ｓ７１Ｆ、Ｋ９４Ｅ；
（ｉｉｉ）Ｉ１７Ｖ、Ｓ２６Ｐ、Ｋ２９Ｎ、Ｌ５９Ｓ、Ｉ６６Ｔ、Ｓ７１Ｆ、Ｍ８６Ｖ、Ｋ９４Ｅ；
（ｉｖ）Ｓ２６Ｐ、Ｌ５９Ｓ、Ｔ７０Ｉ、Ｓ７１Ｆ、Ｍ８６Ｔ、Ｋ９４Ｅ；
（ｖｉｉ）Ｓ２６Ｐ、Ｃ４９Ｗ、Ｌ５９Ｓ、Ｌ６２Ｐ、Ｓ７１Ｆ、Ｑ８１Ｒ、Ｋ９４Ｅ；
（ｖ）Ｉ１７Ｔ、Ｓ２６Ｐ、Ｃ４９Ｙ、Ｌ５９Ｓ、Ｆ６１Ｓ、Ｓ７１Ｆ、Ｋ９４Ｅ；
（ｖｉ）Ｓ２６Ｐ、Ｓ４３Ｇ、Ｔ４６Ｓ、Ｌ５９Ｓ、Ｓ７１Ｆ、Ｑ８１Ｒ、Ｋ９４Ｅ、
から成る群より選択される突然変異セットを含む、請求項１又は２に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項４】
残基２６がＰであり、残基５９がＳであり、残基７１がＦ又はＬであり、残基９４がＥである、請求項３に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項５】
配列番号１、２、３、４、７、５、及び６から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項６】
改善された効力を有し、及びヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸配列（配列番号８）において１カ所以上の以下の位置：１７位、２６位、２８位、２９位、５４位、５９位、６６位、７０位、７１位、８６位、及び９４位に突然変異を有し、１７位、２６位、２８位、２９位、５４位、５９位、６６位、７０位、７１位、８６位、及び９４位のいずれか１カ所に提供される残基が、任意に、以下の表：
【表２】
2010506581.tif 000002
に特定されるものから選択される残基である、請求項１に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項７】
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドに対して１０個以下の置換を有するアミノ酸配列を含み、親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４であるか、又は１７位、２６位、２８位、２９位、４３位、４６位、４９位、５４位、５９位、６１位、６２位、６６位、７０位、７１位、８１位、８６位、及び９４位のそれぞれにヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸（配列番号８）を有するその突然変異体若しくは変異体である、請求項６に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項８】
配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４において以下の突然変異セット：
（１）Ｉ１７Ｓ、Ｓ２６Ｐ、Ｇ２８Ｓ、Ｌ５９Ｓ、Ｓ７１Ｌ、Ｋ９４Ｅ；
（２）Ｓ２６Ｐ、Ｍ５４Ｖ、Ｌ５９Ｓ、Ｓ７１Ｆ、Ｋ９４Ｅ；
（３）Ｉ１７Ｖ、Ｓ２６Ｐ、Ｋ２９Ｎ、Ｌ５９Ｓ、Ｉ６６Ｔ、Ｓ７１Ｆ、Ｍ８６Ｖ、Ｋ９４Ｅ；
（４）Ｓ２６Ｐ、Ｌ５９Ｓ、Ｔ７０Ｉ、Ｓ７１Ｆ、Ｍ８６Ｔ、Ｋ９４Ｅ、
から成る群より選択される突然変異セットを含み、及び／又は配列番号１、２、３、及び４から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項６又は７に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項９】
改善された安定性を有し、及びヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸配列（配列番号８）において１カ所以上の以下の位置：１７位、２６位、４３位、４６位、４９位、５９位、６１位、６２位、７１位、８１位、及び９４位に突然変異を有し、ここで１７位、２６位、４３位、４６位、４９位、５９位、６１位、６２位、７１位、８１位、及び９４位のいずれか１カ所に提供される残基が、任意に、以下の表：
【表３】
2010506581.tif 000003
に特定されるものから選択される残基である、請求項１に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項１０】
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドに対して１０個以下の置換を有するアミノ酸配列を含み、親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４であるか、又は１７位、２６位、２８位、２９位、４３位、４６位、４９位、５４位、５９位、６１位、６２位、６６位、７０位、７１位、８１位、８６位、及び９４位のそれぞれにヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸（配列番号８）を有するその突然変異体若しくは変異体であり、及び／又は配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４において以下の突然変異セット：
（７）Ｓ２６Ｐ、Ｃ４９Ｗ、Ｌ５９Ｓ、Ｌ６２Ｐ、Ｓ７１Ｆ、Ｑ８１Ｒ、Ｋ９４Ｅ；
（５）Ｉ１７Ｔ、Ｓ２６Ｐ、Ｃ４９Ｙ、Ｌ５９Ｓ、Ｆ６１Ｓ、Ｓ７１Ｆ、Ｋ９４Ｅ；
（６）Ｓ２６Ｐ、Ｓ４３Ｇ、Ｔ４６Ｓ、Ｌ５９Ｓ、Ｓ７１Ｆ、Ｑ８１Ｒ、Ｋ９４Ｅ、
から成る群より選択される突然変異セットを含み、及び／又は配列番号７、５、及び６から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項９に記載のＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項１１】
更なるポリペプチドに融合した、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＣＴＬＡ−４変異体の少なくとも細胞外ドメインを含む融合タンパク質であって、更なるポリペプチドが免疫グロブリン部分を任意に含む、前記融合タンパク質。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＣＴＬＡ−４変異体、及び医薬的に許容可能な賦形剤を含む組成物。
【請求項１３】
ヒト又は動物の身体の治療方法に用いるための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＣＴＬＡ−４変異体であって、任意に、関節リウマチ、多発性硬化症、及び／又は全身性エリテマトーデスの治療に用いる、前記ＣＴＬＡ−４変異体。
【請求項１４】
関節リウマチ、多発性硬化症、及び／又は全身性エリテマトーデスの治療に用いるための医薬の製造における、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のＣＴＬＡ−４変異体の使用。
【請求項１５】
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドと比較して効力及び／又は安定性が改善されたＣＴＬＡ−４変異体の作製方法であって、親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４であるか、又は親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号８のアミノ酸配列とは異なっている、ヒト野生型ＣＴＬＡ−４の突然変異体若しくは変異体であり、前記方法は：
コードする核酸からの発現により、ヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸配列（配列番号８）における２カ所以上の以下の位置：１７位、２６位、２８位、２９位、４３位、４６位、４９位、５４位、５９位、６１位、６２位、６６位、７０位、７１位、８１位、８６位、及び９４位に親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドと比較して突然変異を有するＣＴＬＡ−４変異体を作製し；そして
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドと比較して改善された効力及び／又は安定性に関してＣＴＬＡ−４変異体を試験する、
ことを含み、
試験前にＣＴＬＡ−４変異体を単離する工程を任意に含む、前記方法。
【請求項１６】
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドと比較して効力及び／又は安定性が改善されたＣＴＬＡ−４変異体の同定方法又は入手方法であって、親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４であるか、又は親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号８のアミノ酸配列とは異なっている、ヒト野生型ＣＴＬＡ−４の突然変異体若しくは変異体であり、前記方法は：
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドをコードする核酸を突然変異させて、ヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸配列（配列番号８）における２カ所以上の以下の位置：１７位、２６位、２８位、２９位、４３位、４６位、４９位、５４位、５９位、６１位、６２位、６６位、７０位、７１位、８１位、８６位、及び９４位に変更されたアミノ酸配列を有する１種以上のＣＴＬＡ−４変異体をコードする配列を有する１種以上の核酸を準備し；
核酸を発現させてＣＴＬＡ−４変異体を産生し；
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドと比較して改善された効力及び／又は安定性に関し、産生されたＣＴＬＡ−４変異体を試験する、
ことを含み、
任意に、変更されたアミノ酸配列を有するＣＴＬＡ−４変異体のライブラリー又は多様集団を作製し、試験する、前記方法。
【請求項１７】
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドと比較して効力が改善されたＣＴＬＡ−４変異体の作製方法であって、親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸配列を有するヒト野生型ＣＴＬＡ−４であるか、又は親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号８のアミノ酸配列とは異なっている、ヒト野生型ＣＴＬＡ−４の突然変異体若しくは変異体であり、前記方法は：
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドの１以上のＣＤＲループの構造及び／又は方向に影響を及ぼす２カ所以上のバーニア位置を同定し；そして
２カ所以上のバーニア位置に、親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドと比較してＣＴＬＡ−４変異体のＢ７分子への結合能を高める突然変異を提供する、
ことを含み、
２カ所以上のバーニア位置は、任意に、ヒト野生型ＣＴＬＡ−４のアミノ酸配列（配列番号８）における以下の位置：２６位、２８位、７１位、及び９４位から選択する、前記方法。
【請求項１８】
親ＣＴＬＡ−４ポリペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列を有するベラタセプトのアミノ酸配列を有する、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。