【手続補正書】
【提出日】平成22年5月10日(2010.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
部位特異的ＤＮＡ結合活性を有する第１ドメイン、及びアルギニンメチルトランスフェラーゼ活性を有する第２ドメインとを少なくとも含む単離ポリペプチド複合体であって、前記第２ドメインは、ヒストンＨ２Ａの尾部領域に位置するアルギニン残基をメチル化可能である、ポリペプチド複合体。
【請求項２】
前記第２ドメインは、アルギニン残基の対称的なＮＧ、Ｎ’Ｇジメチル化を供するアルギニンメチルトランスフェラーゼ活性を有する請求項１に記載のポリペプチド複合体。
【請求項３】
前記第２ドメインは、ヒストンＨ２Ａの尾部領域の第３位に位置するアルギニン残基（Ｈ２ＡＲ３）をメチル化可能である請求項１又は２に記載のポリペプチド複合体。
【請求項４】
前記第２ドメインは、ヒストンＨ４の尾部領域に位置するアルギニン残基をメチル化可能である請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項５】
前記第２ドメインは、ヒストンＨ４の尾部領域の第３位に位置するアルギニン残基（Ｈ４Ｒ３）をメチル化可能である請求項４に記載のポリペプチド複合体。
【請求項６】
前記アルギニンメチルトランスフェラーゼ活性は、Ｐｒｍｔ５アルギニンメチルトランスフェラーゼドメイン、若しくはその誘導体又は相同体内で呈される請求項１〜５のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項７】
前記第１ドメインは、哺乳類のゲノムＤＮＡにおける遺伝子発現の制御に関連する１以上のコンセンサス配列への結合を特異的に対象とする請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項８】
前記第１ドメインは、ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１型コンセンサス結合部位に特異的に結合する請求項７に記載のポリペプチド複合体。
【請求項９】
前記第１ドメインは、ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチド、前記ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチドのＤＮＡ結合部、又はその誘導体を含む請求項１〜８のいずれか一項に記載のポリペプチド複合体。
【請求項１０】
部位特異的ＤＮＡ結合活性を有する第１ドメインとアルギニンメチルトランスフェラーゼ活性を有する第２ドメインとを少なくとも含む単離ポリペプチドであって、前記第１ドメインは、哺乳類のゲノムＤＮＡにおける遺伝子発現の制御に関与する１以上のコンセンサス配列への結合を特異的に対象とし、前記第２ドメインは、アルギニン残基の対称的なＮＧ，Ｎ’Ｇジメチル化を供するアルギニンメチルトランスフェラーゼ活性を有する単離ポリペプチド。
【請求項１１】
前記第１ドメインは、ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１型コンセンサス結合部位に特異的に結合する請求項１０に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１２】
前記アルギニンメチルトランスフェラーゼ活性は、Ｐｒｍｔ５アルギニンメチルトランスフェラーゼドメイン、若しくはその誘導体又は相同体内で呈される請求項１０又は１１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１３】
哺乳類細胞におけるポリペプチド複合体の発現を誘導するのに好適な核酸発現ベクター構築体であって、
前記ベクターは、プロモーター配列に操作可能に連結した１以上のコード配列を備え、
ここで、前記１以上のコード配列は、部位特異的ＤＮＡ結合活性を有する第１のポリペプチドドメインとを少なくとも、そして、アルギニンメチルトランスフェラーゼ活性を有する第２のポリペプチドドメインを少なくともコードし、前記第１ドメインは、哺乳類のゲノムＤＮＡにおける遺伝子発現の制御に必要な１以上のコンセンサス配列への結合を特異的に対象とし、前記第２ドメインは、ポリペプチド基質内に位置するアルギニン残基の対称性ＮＧ，Ｎ’Ｇジメチル化を呈するアルギニンメチルトランスフェラーゼ活性を有してなる発現ベクター。
【請求項１４】
前記ポリペプチド基質は、ヒストンである請求項１３に記載の発現ベクター。
【請求項１５】
前記第２のポリペプチドドメインは、ヒストンＨ２Ａの尾部領域の第３位に位置するアルギニン残基（Ｈ２ＡＲ３）をメチル化可能である請求項１３又は１４に記載の発現ベクター。
【請求項１６】
前記第２のポリペプチドドメインはさらに、ヒストンＨ４の尾部領域に位置するアルギニン残基をメチル化可能である請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項１７】
前記第２ドメインは、ヒストンＨ４の尾部領域の第３位に位置するアルギニン残基（Ｈ４Ｒ３）をメチル化可能である請求項１６に記載の発現ベクター。
【請求項１８】
前記アルギニンメチルトランスフェラーゼ活性は、Ｐｒｍｔ５アルギニンメチルトランスフェラーゼドメイン、若しくはその誘導体又は相同体内で備える請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項１９】
前記第１ドメインは、遺伝子発現の制御に関連する哺乳類のゲノムＤＮＡにおける１以上のコンセンサス配列への結合を特異的に対象とする請求項１３〜１８のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項２０】
前記第１ドメインは、ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１型コンセンサス結合部位に特異的に結合する請求項１９に記載の発現ベクター。
【請求項２１】
前記第１ドメインは、ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチド、前記ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチドのＤＮＡ結合部、又はその誘導体を含む請求項２０に記載の発現ベクター。
【請求項２２】
前記プロモーターは、誘導性プロモーターである請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項２３】
前記プロモーターは、構成的活性化プロモーターである請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項２４】
第１のコード配列が前記第１のポリペプチドドメインをコードし、第２のコード配列が前記第２のポリペプチドドメインをコードする発現カセットを含む請求項１３〜２３のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項２５】
前記第１のコード配列は、ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチドをコードし、前記第２のコード配列は、Ｐｒｍｔ５ポリペプチドをコードする請求項２４に記載の発現ベクター。
【請求項２６】
前記第１および第２のコード配列は、１個以上の介在配列によって隔てられている請求項１３〜２４のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項２７】
前記１以上の介在配列は、少なくとも１の内部リボソーム進入配列（ＩＲＥＳ）を含む請求項２６に記載の発現ベクター。
【請求項２８】
選択マーカー、抗生物質耐性マーカーおよびレポーターから選択されるポリペプチドをコードする核酸配列を１以上含む請求項１３〜２７のいずれか一項に記載の発現ベクター。
【請求項２９】
部位特異的ＤＮＡ結合活性を有する第１ドメインと、ヒストンＨ２Ａの尾部領域に位置するアルギニン残基をメチル化可能であるアルギニンメチルトランスフェラーゼ活性を有する第２ドメインとを、少なくとも含むポリペプチド複合体の形成を哺乳類細胞内で誘導する工程を含む、哺乳類細胞における遺伝子発現を制御する方法。
【請求項３０】
前記細胞内における前記ポリペプチド複合体の形成は、前記細胞内におけるＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチド、もしくはその相同体又は誘導体の発現の誘導によって誘導される請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞内における前記ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチドの発現は、Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチド、もしくはその誘導体又は相同体をコードする発現ベクターを用いて前記細胞をトランスフェクトすることによって誘導される請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記細胞内における前記ＰＲＤＩ／Ｂｌｉｍｐ１ポリペプチドの発現は、請求項１３〜２８のいずれか一項に記載の発現ベクターを用いて前記細胞をトランスフェクトすることによって誘導される請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記哺乳類細胞は、ヒト細胞である請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記哺乳類細胞は、腫瘍性細胞又は癌性細胞である請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
インヴィトロで行う請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
インヴィヴォで行う請求項２９〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記遺伝子発現制御の結果、ｃ−Ｍｙｃ、Ｄｈｘ３８、Ｐｃｄｈ７、Ｑ８Ｃ９Ｔ７、Ｘｙｌｔ１、ＤｎａＨ１、Ｂａｉｐ２、Ｎｅｋ７、Ｄｕｓｐ２、ＥＮＳＭＵＳＧ００００００２７０４１、Ｓｉｒｔ４およびＢｌｉｍｐ１からなる群より選択される１以上の遺伝子の発現が制御される請求項２９〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記細胞における前記ポリペプチド複合体の誘導は、請求項３７に記載の遺伝子１以上の発現を低減させる請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
幹細胞内でのＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体の形成を阻害する工程を含む、幹細胞における自己再生を促進し分化を阻害する方法。
【請求項４０】
前記幹細胞は、哺乳類幹細胞である請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記幹細胞は、ヒト幹細胞である請求項３９又は４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記幹細胞は、成体幹細胞、幹細胞前駆体および多能性幹細胞からなる群より選択される請求項３９〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記幹細胞内におけるＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体の形成の阻害は、前記細胞を、Ｂｌｉｍｐ１阻害化合物、Ｐｒｍｔ５阻害化合物および／又はＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体阻害化合物に曝露することによって行われる請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記阻害化合物は、小分子阻害剤、Ｂｌｉｍｐ１又はＰｒｍｔ５ ｍＲＮＡに結合するｓｉＲＮＡ分子、Ｂｌｉｍｐ１又はＰｒｍｔ５ｍＲＮＡに結合するアンチセンスオリゴヌクレオチド、およびＢｌｉｍｐ１又はＰｒｍｔ５ポリペプチドのドミナントネガティブ体からなる群より選択される請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
細胞内におけるＢｌｉｍｐ１ポリペプチドの発現を誘導し、これにより前記細胞内におけるＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体の形成を誘導する工程を含む、細胞内におけるＰｒｍｔ５の局在化を制御する方法。
【請求項４６】
前記細胞は、哺乳類幹細胞である請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
癌処置に用いる、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド複合体。
【請求項４８】
癌処置用の薬物の作成における請求項１〜１２のいずれか一項に記載の単離ポリペプチド複合体の使用。
【請求項４９】
請求項１３〜２８のいずれか一項に記載の発現ベクターを含む細胞。
【請求項５０】
哺乳類細胞である請求項４９に記載の細胞。
【請求項５１】
ヒト細胞である請求項５０に記載の細胞。
【請求項５２】
Ｂｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体アンタゴニスト分子を同定するための方法であって、
化合物がＢｌｉｍｐ１、Ｐｒｍｔ５及び／又はＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体に結合し、そして、Ｂｌｉｍｐ１、Ｐｒｍｔ５及び／又はＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体の生物活性又は機能を調節できるか否かを決定する工程、そして、Ｂｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体相互作用分子としてのそのような結合化合物を同定する工程を有し、Ｂｌｉｍｐ１、Ｐｒｍｔ５及び／又はＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体に結合する化合物であり、そして、Ｂｌｉｍｐ１、Ｐｒｍｔ５及び／又はＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体の生物活性又は機能を阻害する化合物をＢｌｉｍｐ１／Ｐｒｍｔ５複合体のアンタゴニストとして同定することを特徴とする方法。