(57)【要約】  いくつかの実施形態では、転移がんを含むがん、免疫チェックポイント阻害剤療法に対する抵抗性があるがん、及び免疫チェックポイント阻害剤療法に対して応答しないか又は免疫チェックポイント阻害剤療法に対する獲得耐性を有するがんを治療する方法が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるがんを治療する方法であって、
（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤；及び
（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチン
を治療有効量で含む１つ以上の組成物を、それを必要とする前記対象に同時投与することを含む方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤が、前記自己二ハプテン化ワクチンの前記投与前に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤が、前記自己二ハプテン化ワクチンの前記投与後に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記自己二ハプテン化ワクチンが、隔週で少なくとも８週間投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記自己二ハプテン化ワクチンが、週１回で少なくとも６週間投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記初回注射の約６か月後の、前記自己二ハプテン化ワクチンの少なくとも１回のブースター注射をさらに含む、請求項４又は請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記自己二ハプテン化ワクチンが、前記遅延型過敏症の診断検査が陽性であるまで、隔週で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記自己二ハプテン化ワクチンが、前記遅延型過敏症の診断検査が陽性であるまで、毎週投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記がんが、卵巣がん、子宮がん、膣がん、外陰部がん、子宮内膜がん、及びメラノーマからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＯＸ４０、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＮＦＲ５Ｆ４、ＢＴＬＡ、ＯＸ４０Ｌ、ＴＩＭ３、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１阻害剤である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤が、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４阻害剤である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＣＴＬＡ−４免疫チェックポイント阻害剤が、イピリムマブ及びトレメリムマブからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤が、ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤及びＣＴＬＡ−４免疫チェックポイント阻害剤を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
個別化された診断検査キットであって、
（ｉ）シリンジフィルが薬学的に許容できる担体中に二ハプテン化自己腫瘍細胞を含む、１回以上の単回用量の充填シリンジ；
（ｉｉ）シリンジフィルが薬学的に許容できる担体中に検査陰性対照を含む、１回以上の単回用量の充填シリンジ；
（ｉｉｉ）書面の使用説明書；及び
（ｉｖ）前記検査結果をスコア化するためのガイド
を含むキット。
【請求項１７】
がんを治療する方法であって、
（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を有効量で投与することと；
（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチンを有効量で投与することと、を含み、前記自己二ハプテン化ワクチンが、
（ａ）直径が少なくとも約１ｃｍである、切除された腫瘍断片を洗浄するステップと；
（ｂ）前記腫瘍断片を細胞の懸濁液に解離させるステップと；
（ｃ）前記細胞の懸濁液にγ線を照射するステップと；
（ｄ）前記照射された細胞の懸濁液を少なくとも２つのほぼ等しい部分に分離するステップと；
（ｅ）第１部分を第１のハプテン化試薬で、且つ第２部分を第２のハプテン化試薬でハプテン化するステップと；
（ｆ）各部分を固定するステップと；
（ｇ）前記部分を組み合わせるステップと；
（ｈ）ステップ（ｇ）の前記生成物を含む細胞を約６×１０６個〜約５０×１０６個の細胞／ｍＬの一定分量にアリコートするステップと、
を含むプロセスによって調製される、方法。
【請求項１８】
前記第１のハプテン化試薬が、ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第２のハプテン化試薬が、トリニトロクロロベンゼン（ＴＮＣＢ）、２，４−ジフルオロニトロベンゼン（ＤＮＦＢ）、Ｎ−ヨードアセチル−Ｎ’−（５−スルホニック−ｌ−ナフチル）エチレンジアミン（ＡＥＤ）、スルファニル酸（ＳＡ）、トリニトロフェノール（ＴＮＰ）、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記γ線の線量が、約２５００ｃＧｙである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
各部分が、約３７．５％のエタノールで固定される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記がんが、卵巣がん及びメラノーマからなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
[001]  本願は、２０１８年９月２４日に出願された米国仮特許出願第６２／７３５，３８１号、及び２０１８年１０月１６日に出願された米国仮特許出願第６２／７４６，０６６号（それら全体が本明細書で参照により援用される）の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
[002]  本明細書に記載の本発明は、一般に、転移がんを治療する方法、及びより詳細には、排他的でないが、自己ワクチンと他の治療との組み合わせを使用することに関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
[003]  患者から採取された腫瘍から調製された非修飾のインタクトな腫瘍細胞を使用する免疫療法レジメンは、文献にて幅広く説明されている（例えば、Berd el al. , Cancer Research 1986; 46:2572-2577; Hoover et al, Cancer 1985; 55: 1236-1243；及びHannaらに交付された米国特許第５，４８４，５９６号を参照）。例えば、腫瘍細胞膜（例えば、Levin et al. , Human Tumors in Short Term Culture: Techniques and Clinical Applications, P. P. Dendy, Ed., 1976, Academic Press, London, pp. 277-280を参照）又は腫瘍から抽出された腫瘍ペプチド（例えば、Eberleinに交付された米国特許第５，５５０，２１４号、及びElliotらに交付された米国特許第５，４８７，５５６号を参照）を含む、破壊細胞に基づく代替的なワクチン組成物も提示されている。さらに、腫瘍細胞は、免疫応答を改変又は増強するため、いくつかの様式で修飾され得る（例えば、Hostetler et al, Cancer Research 1989; 49: 1207-1213;及びMuller et al, Anticancer Research 1991; 11 :925- 930を参照）。
【０００４】
[004]  免疫療法に対して明白な効果を有する腫瘍細胞修飾の１つの特定形態が、ハプテンの腫瘍細胞への結合である。ハプテンジニトロフェニル（ＤＮＰ）で修飾された自己全細胞ワクチンは、メラノーマ患者の転移部位で炎症性応答をもたらすことが示されている。ＤＮＰ修飾ワクチンによるアジュバント療法は、手術単独後に報告される場合よりも顕著に高い手術後生存率をもたらす。Berdに交付された米国特許第５，２９０，５５１号は、ハプテン化メラノーマ細胞を含むワクチン組成物を開示及び主張している。これらの細胞で治療されたメラノーマ患者は、強力な免疫応答を発現した。この応答は、ハプテン化及び非ハプテン化腫瘍細胞に対する遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答において検出され得る。より重要なことに、その免疫応答は、メラノーマ患者の生存率増加をもたらした。
【０００５】
[005]  ハプテン化腫瘍細胞ワクチンは、肺がん、乳がん、結腸がん、膵がん、卵巣がん、及び白血病を含むがんの他のタイプ（国際特許公開の国際公開第９６／４０１７３号及び国際公開第００／０９１４０号、並びに米国特許第６，３３３，０２８号を参照、またそれに関連する技術及び最適化された治療計画（国際特許公開の国際公開第００／３８７１０号、国際公開第００／３１５４２号、国際公開第９９／５２５４６号、及び国際公開第９８／１４２０６号を参照）についても記載されている。例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の添加により、ハプテン化腫瘍細胞調製物の安定性が増強されることが示されている（国際公開第００／２９５５４号及び米国特許第６，２４８，５８５号を参照）。
【０００６】
[006]  さらに、腫瘍細胞抽出物、例えば原形質膜又はペプチドのハプテン化により、免疫療法ワクチンを得ることができることが特定されている（国際特許公開の国際公開第９６／４０１７３号及び国際公開第９９／４０９２５号（いずれもBerdらによる）を参照）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
[007]  さらに、チェックポイント遺伝子産物に特異的な治療抗体が同時に開発されている。例えば、Ribas and Wolchok,“Cancer immunotherapy using checkpoint blockade,” Science 359: 1350-55 (2018)を参照されたい。これらのチェックポイント療法がやや有効性を示している一方で、チェックポイント療法に対して不応性になる、初期腫瘍の非感受性、獲得耐性、又は予め反応性のある腫瘍についての課題が未だに存在する。
【０００８】
[008]  獲得耐性を有するか、又はそれ以外では一般にチェックポイント療法に対して不応性になる腫瘍である非感受性腫瘍を有するこれらの患者を治療することは、がん治療の分野における主要な技術的課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の概要
[009]  本明細書で開示される実施形態は、がんを治療する方法であって、少なくとも１つのチェックポイント療法と組み合わせた自己二ハプテン化腫瘍ワクチンを投与することを含む方法である。いくつかの実施形態では、がんは転移がんである。いくつかの実施形態では、がんは、免疫チェックポイント阻害剤に対する獲得耐性を有する。いくつかの実施形態では、がんは、免疫チェックポイント阻害剤に対して非感受性である。
【００１０】
図面の簡単な説明
[0010]  前述の概要とともに本発明の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて解釈されるとき、より十分に理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１−Ａ】[0011]典型的な陽性のワクチン後の遅延型過敏症応答を示す。
【図１−Ｂ】[0011]典型的な陰性対照（媒体）及び陽性対照（ＢＣＧ）のＤＴＨ応答を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
[0012]  特に定義されない限り、本明細書で用いられるすべての科学技術用語は、本発明が属する当業者によって一般に理解されている場合と同じ意味を有する。本明細書で参照されるすべての特許及び刊行物は、それら全体が参照により援用される。
【００１３】
[0013]  一実施形態では、本発明は、がんを治療する方法であって、
（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を有効量で投与することと、
（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチンを有効量で投与することと、
を含む方法を提供する。
【００１４】
[0014]  いくつかの実施形態では、自己二ハプテン化ワクチンは、隔週で少なくとも８週間投与される。いくつかの実施形態では、自己二ハプテン化ワクチンは、週１回で少なくとも６週間投与される。いくつかの実施形態では、該方法は、初回注射から約６か月後の、自己二ハプテン化ワクチンの少なくとも１回のブースター注射をさらに含む。いくつかの実施形態では、ブースター注射は、疾患進行まで６か月ごとに継続する。
【００１５】
[0015]  一実施形態では、本発明は、がんを治療する方法であって、
（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤；及び
（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチン
を治療有効量で含む１つ以上の組成物を同時投与することを含む方法を提供する。
【００１６】
[0016]  いくつかの実施形態では、有効量の自己二ハプテン化ワクチンは、遅延型過敏症の診断検査が陽性であるまで、隔週投与される。
【００１７】
[0017]  いくつかの実施形態では、がんは、卵巣がん、子宮がん、膣がん、外陰部がん、及び子宮内膜がんからなる群から選択される。
【００１８】
[0018]  いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＯＸ４０、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＮＦＲ５Ｆ４、ＢＴＬＡ、ＯＸ４ＯＬ、及びＴＩＭ３又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。一部の好ましい実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブからなる群から選択される。
【００１９】
[0019]  一部の好ましい実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４である。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ及びトレメリムマブからなる群から選択される。
【００２０】
[0020]  いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤及びＣＴＬＡ−４免疫チェックポイント阻害剤を含む。
【００２１】
[0021]  一実施形態では、本発明は、個別化された診断検査キットであって、
（ｉ）シリンジフィルが薬学的に許容できる担体中に二ハプテン化自己腫瘍細胞を含む場合の、１回以上の単回用量の充填シリンジ；
（ｉｉ）シリンジフィルが薬学的に許容できる担体中に検査陰性対照を含む場合の、１回以上の単回用量の充填シリンジ；
（ｉｉｉ）書面の使用説明書；及び
（ｉｖ）検査結果をスコア化するためのガイド
を含むキットを提供する。
【００２２】
[0022]  一実施形態では、本発明は、がんを治療する方法であって：
（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を有効量で投与することと；
（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチンを有効量で投与することと、を含み、ここで自己二ハプテン化ワクチンが、
（ａ）直径が少なくとも約１ｃｍである、切除された腫瘍断片を洗浄するステップと；
（ｂ）腫瘍断片を細胞の懸濁液に解離させるステップと；
（ｃ）細胞の懸濁液にγ線を照射するステップと；
（ｄ）照射された細胞の懸濁液を少なくとも２つのほぼ等しい部分に分離するステップと；
（ｅ）第１部分を第１のハプテン化試薬で、且つ第２部分を第２のハプテン化試薬でハプテン化する（haptenizing）ステップと；
（ｆ）各部分を固定するステップと；
（ｇ）該部分を組み合わせるステップと；
（ｈ）ステップ（ｇ）の生成物を含む細胞を約６×１０６個〜約５０×１０６個の細胞／ｍＬの一定分量にアリコートするステップと、
を含むプロセスによって調製される、方法を提供する。
【００２３】
[0023]  一実施形態では、γ線の線量は、約１０００、約１５００、約２０００、約２５００、約３０００、約３５００、約４０００、約４５００、又は約５０００ｃＧｙである。一実施形態では、各部分は、約３５％、約３７．５％、約４０％、約４２．５％、約４５％、約４７．５％、又は約５０％のエタノールで固定される。
【００２４】
定義
[0024]  用語「自己」は、患者自身の細胞が、本明細書で開示される実施形態を調製するために使用されることを意味する。
【００２５】
[0025]  用語「免疫チェックポイント阻害剤」は、免疫チェックポイント遺伝子又は遺伝子産物の細胞機能を低下又は減少させる治療薬を意味する。任意の好適な免疫チェックポイント阻害剤は、本明細書に開示される方法での使用を意図して検討される「免疫チェックポイント阻害剤」は、本明細書で用いられるとき、免疫チェックポイント分子の活性を阻害する任意の修飾物質を指す。チェックポイント阻害剤として、限定はされないが、免疫チェックポイント分子結合タンパク質、小分子阻害剤、抗体、抗体誘導体（Ｆａｂ断片及びｓｃＦｖを含む）、抗体−薬物コンジュゲート、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、アプタマー、ペプチド及びペプチド模倣物を挙げることができる。免疫チェックポイント分子の発現及び／又は活性を低減する阻害性核酸もまた、本明細書で開示される方法において使用可能である。本明細書では、用語「免疫チェックポイント阻害剤」及び「チェックポイント阻害剤」は、互換可能に用いられる。
【００２６】
[0026]  用語「同時投与」、「同時投与する」、「〜と組み合わせて投与される」、「〜と組み合わせて投与する」、「同時」及び「併用」は、本明細書で用いられるとき、活性医薬成分及び／又はそれらの代謝産物の双方が同時に対象内に存在するように、対象に２以上の活性医薬成分を投与することを包含する。同時投与は、別々の組成物における同時投与、別々の組成物における異なる時刻での投与、又は２以上の活性医薬成分が存在する場合の組成物における投与を含む。別々の組成物における異なる時刻での投与が好ましい。
【００２７】
[0027]  用語「インビボ」は、対象の身体内で生じる事象を指す。
【００２８】
[0028]  用語「インビトロ」は、対象の身体の外部で生じる事象を指す。インビトロアッセイは、生存細胞又は死細胞が利用される場合の細胞に基づくアッセイを包含し、インタクト細胞が利用されない場合の無細胞アッセイをさらに包含してもよい。
【００２９】
[0029]  用語「有効量」又は「治療有効量」は、限定はされないが、疾患治療を含む意図される適用をもたらすのに十分である、本明細書に記載のような化合物又は化合物の組み合わせの量を指す。治療有効量は、意図される適用（インビトロ又はインビボ）、又は治療されている対象及び病状（例えば、対象の体重、年齢及び性別）、病状の重症度、投与様式などに応じて変化してもよく、当業者によって容易に測定され得る。該用語は、標的細胞における特定の応答（例えば、血小板粘着及び／又は細胞遊走の減少）を誘導することになる用量にも適用される。具体的用量は、選択される特定の化合物、従うべき投与計画、該化合物が他の化合物と組み合わせて投与されるか否か、投与のタイミング、それが投与される対象組織、及び化合物が運搬される場合の物理的送達系に応じて変化することになる。
【００３０】
[0030]  「治療効果」は、本明細書で用いられるとき、治療効果及び／又は予防効果を包含する。予防効果は、疾患若しくは病態の出現を遅延させるか若しくは除去すること、疾患若しくは病態の症状の発症を遅延させるか若しくは除去すること、疾患若しくは病態の進行を緩徐化、停止、若しくは逆転させること、又はそれらの任意の組み合わせを含む。
【００３１】
[0031]  「薬学的に許容できる担体」又は「薬学的に許容できる賦形剤」は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、並びに不活性成分を含むことが意図される。活性医薬成分のためのかかる薬学的に許容できる担体又は薬学的に許容できる賦形剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の通常の薬学的に許容できる担体又は薬学的に許容できる賦形剤が活性医薬成分に適合しない限りは、本発明の治療組成物におけるその使用が検討される。追加的な活性医薬成分、例えば他の薬剤もまた、記載される組成物及び方法に組み込むことが可能である。
【００３２】
[0032]  例えば、分子量又は化学式などの物理的又は化学的特性を記載するための範囲が本明細書で用いられるとき、そこでの範囲及び具体的な実施形態のすべての組み合わせ及び部分的組み合わせは、含めることが意図される。数又は数値範囲を参照するときの用語「約」の使用は、参照される数又は数値範囲が実験的変動性以内（又は統計学的実験誤差以内）の近似であり、ひいては数又は数値範囲が変化することがあることを意味する。変動は、典型的には指定の数又は数値範囲の０％〜１５％、好ましくは０％〜１０％、より好ましくは０％〜５％である。用語「含む（comprising）」（及び「含む（comprise）」又は「含む（comprises）」又は「有する」又は「含む（including）」などのその関連用語）は、例えば、説明された特徴「からなる」又は「から本質的になる」物質の任意の組成物、方法又はプロセスの一実施形態などの実施形態を含む。
【００３３】
[0033]  本発明の化合物はまた、抗体を含む。用語「抗体（antibody）」及びその複数形「抗体（antibodies）」は、全免疫グロブリン及び任意の抗原結合断片（「抗原結合部分」）又はその一本鎖を指す。「抗体」は、さらに、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖、又はその抗原結合部分を含む糖タンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中でＶＨと省略される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３といった３つのドメインからなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中でＶＬと省略される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬからなる。抗体のＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変領域（ＨＶＲ）と称され、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域とともに散在され得る超可変性の領域にさらに細分化されてもよい。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲからなる。重鎖及び軽鎖の可変領域は、１つ以上の抗原エピトープと相互作用する結合ドメインを有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織又は因子への結合を媒介することがある。
【００３４】
[0034]  用語「モノクローナル抗体」、「ｍＡｂ」、「モノクローナル抗体組成物」又はそれらの複数形は、単一分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＯＸ４０、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＮＦＲ５Ｆ４、ＢＴＬＡ、ＯＸ４０Ｌ、又はＴＩＭ３に特異的なモノクローナル抗体は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌｌ、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＯＸ４０、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＮＦＲ５Ｆ４、ＢＴＬＡ、ＯＸ４ＯＬ、又はＴＩＭ３抗原を試験対象に注射し、次に所望される配列又は機能特性を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離する、当該技術分野における知見及び技能を用いて作製され得る。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、通常の手順を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合する能力があるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）容易に単離され、配列決定され得る。ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。一旦単離されると、ＤＮＡは発現ベクターに挿入されてもよく、次いでそうでなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しない、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞内でモノクローナル抗体の合成が得られる。抗体の組換え産生については、以下により詳細に説明されることになる。
【００３５】
[0035]  抗体（又は単純に「抗体部分」）の用語「抗原結合部分」又は「抗原結合断片」は、本明細書で用いられるとき、抗原（例えば、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＯＸ４０、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＮＦＲ５Ｆ４、ＢＴＬＡ、ＯＸ４ＯＬ、又はＴＩＭ３）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能が完全長抗体の断片によって実施され得ることが示されている。抗体の用語「抗原結合部分」の中に包含される結合断片の例として、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片のＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片のＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨ又はＶＬドメインから構成されてもよいドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ward et al, Nature, 1989, 341, 544-546）；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインＶＬ及びＶＨが別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、ＶＬ及びＶＨ領域が一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知の一価分子を形成するように対合している単一のタンパク質鎖として作製されることを可能にする合成リンカーにより、組換え方法を用いて連結され得る；例えば、Bird et al ., Science 1988, 242, 423-426; and Huston et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988, 85, 5879-5883を参照）。かかるｓｃＦｖ抗体はまた、抗体の用語「抗原結合部分」又は「抗原結合断片」の中に包含されることが意図される。これらの抗体断片は、当業者に公知の通常の技術を用いて得られる、且つ該断片は、インタクトな抗体の場合と同様に、有用性についてスクリーニングされる。
【００３６】
[0036]  用語「ヒト抗体」は、本明細書で用いられるとき、フレームワーク及びＣＤＲ領域の双方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する場合の可変領域を有する抗体を含むことが意図される。さらに、抗体が定常領域を有するとき、定常領域もまた、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的変異原性により、又はインビボでの体細胞突然変異により導入された突然変異）を含んでもよい。用語「ヒト抗体」は、本明細書で用いられるとき、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植されている場合の抗体を含むことは意図されない。
【００３７】
[0037]  用語「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の双方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する場合の可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【００３８】
[0038]  用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で用いられるとき、組換え手段によって調製、発現、作出又は単離されるすべてのヒト抗体、例えば（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニック若しくはトランスクロモソーマルである動物（例えばマウス）又はそれらから調製されたハイブリドーマから単離される抗体（さらに以下に説明される）、（ｂ）例えばトランスフェクトーマに由来する、ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離される抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、及び（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列から他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む任意の他の手段により調製、発現、作出又は単離される抗体を含む。かかる組換えヒト抗体は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する場合の可変領域を有する。しかし、特定の実施形態では、かかる組換えヒト抗体は、インビトロ変異原性（又は、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物が使用されるときのインビボ体細胞変異原性）を有することができ、それ故、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、且つそれらに関連する一方で、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリーの中に天然に存在しないことがある配列である。
【００３９】
[0039]  本明細書で用いられるとき、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭ又はＩｇＧ１）を指す。哺乳類では、５つの抗体アイソタイプ：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＭ及びＩｇＥが存在する。ヒトでは、ＩｇＧアイソタイプの４つのサブクラス：ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４、並びにＩｇＡアイソタイプの２つのサブクラス：ＩｇＡ１及びＩｇＡ２が存在する。
【００４０】
[0040]  語句「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」は、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と本明細書中で互換可能に用いられる。
【００４１】
[0041]  用語「ヒト抗体誘導体」は、ヒト抗体の任意の修飾形態、例えば抗体と別の活性医薬成分又は抗体とのコンジュゲートを指す。用語「コンジュゲート」、「抗体−薬物コンジュゲート」、「ＡＤＣ」又は「免疫複合体」は、治療部分、例えば、細菌性毒素、細胞傷害性薬物又は放射性核種含有毒素（radionuclide-containing toxin）にコンジュゲートされた抗体、又はその断片を指す。毒性部分は、当該技術分野で利用可能な方法を用いて、本発明の抗体にコンジュゲートされ得る。
【００４２】
[0042]  用語「ヒト化抗体」、「ヒト化抗体」及び「ヒト化」は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植されている場合の抗体を指すことが意図される。追加的なフレームワーク領域修飾は、ヒトフレームワーク配列内に設けられてもよい。非ヒト（例えばマウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を有するキメラ抗体である。大部分においては、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望される特異性、親和性、及び能力を有する、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種の１５の超可変領域（ドナー抗体）からの残基で置換される場合のヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中又はドナー抗体中で見出されない残基を含んでもよい。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練させるために設けられる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含むことになり、ここで超可変ループのすべて又は実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンの場合に相当し、ＦＲ領域のすべて又は実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列の場合に相当する。ヒト化抗体はまた、任意選択的には、典型的にはヒト免疫グロブリンの場合の、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含むことになる。さらなる詳細については、Jones et al, Nature 1986, 321, 522-525; Riechmann et al, Nature 1988, 332, 323-329;及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 1992, 2, 593-596を参照されたし。
【００４３】
[0043]  用語「キメラ抗体」は、可変領域配列が１つの種に由来し、且つ定常領域配列が別の種に由来する場合の抗体、例えば可変領域配列がマウス抗体に由来し、且つ定常領域配列がヒト抗体に由来する場合の抗体を指すことが意図される。
【００４４】
[0044]  「二重特異性抗体」は、２つの抗原結合部位を有する小さい抗体断片である。該断片は、同じポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ又はＶＬ−ＶＨ）。同じ鎖上での２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、強制的に、もう一方の鎖の相補的ドメインと対合し、２つの抗原結合部位を作出する。二重特異性抗体は、例えば、欧州特許の欧州特許第４０４，０９７号、国際特許公開の国際公開第９３／１１１６１号；及びBolliger et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993, 90, 6444-6448にてより十分に説明されている。
【００４５】
[0045]  用語「グリコシル化」は、抗体の修飾誘導体を指す。非グリコシル化（aglycoslated）抗体は、グリコシル化が欠如している。グリコシル化は、例えば抗体の抗原に対する親和性を増強するために改変され得る。かかる糖修飾は、例えば抗体配列内のグリコシル化の１つ以上の部位を改変することにより行うことができる。例えば、１つ以上のアミノ酸置換を設けることで、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の除去を生じさせ、それによりその部位でグリコシル化を除去することができる。グリコシル化は、米国特許第５，７１４，３５０号及び米国特許第６，３５０，８６１号に記載の通り、抗体の抗原に対する親和性を増強することがある。追加的又は代替的に、改変されたグリコシル化タイプを有する抗体、例えば低減量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体又は増加したバイセクト型ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体を作製することが可能である。かかる改変されたグリコシル化パターンは、抗体の能力を増強することが示されている。かかる糖修飾は、例えば改変されたグリコシル化機構を有する宿主細胞内で抗体を発現させることにより行うことができる。改変されたグリコシル化機構を有する細胞は、当該技術分野で記載がなされており、本発明の組換え抗体を発現させ、それにより改変されたグリコシル化を有する抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えば細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（α−（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）が欠如することで、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９細胞株中で発現される抗体は、それらの糖上のフコースが欠如する。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９  ＦＵＴ８−／−細胞株は、２つの置換ベクターを使用してのＣＨＯ／ＤＧ４４細胞内でのＦＵＴ８遺伝子の標的化破壊により作出された（例えば、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号又はYamane-Ohnuki, et al. Biotechnol. Bioeng., 2004, 87, 614-622を参照）。別の例として、欧州特許の欧州特許第１，１７６，１９５号は、フコシルトランスフェラーゼをコードする、機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株であって、かかる細胞株中で発現された抗体がα−ｌ，６結合に関連した酵素を低減又は除去することにより低フコシル化を示すような細胞株について記載し、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンにフコースを付加するため、低い酵素活性を有するか又はその酵素活性を有しない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１６６２）についても記載している。国際特許公開の国際公開第０３／０３５８３５号は、フコースをＡｓｎ（２９７）結合糖に結合させる能力が低下し、それによりその宿主細胞内で発現される抗体の低フコシル化ももたらす、変異体ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｅ  １３細胞について記載している（Shields, et al, J. Biol. Chem. 2002, 277, 26733-26740も参照）。国際特許公開の国際公開第９９／５４３４２号は、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β−（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように改変された細胞株であって、改変された細胞株��で発現された抗体がバイセクト型ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示し、抗体の増強されたＡＤＣＣ活性をもたらすような細胞株について記載している（Umana, et al, Nat. Biotech. 1999, 17, 176-180も参照）。或いは、抗体のフコース残基は、フコシダーゼ酵素を使用して切断されてもよい。例えば、フコシダーゼのα−Ｌ−フコシダーゼは、Tarentino, et al, Biochem. 1975, 14, 5516-5523に記載の通り、抗体からフコシル残基を除去する。
【００４６】
[0046]  「ペグ化」は、典型的にはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体と、１つ以上のＰＥＧ基が抗体又は抗体断片に結合されるようになる条件下で反応される修飾抗体、又はその断片を指す。ペグ化は、例えば、抗体の生物学的（例えば血清）半減期を増加させることがある。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（又は類似反応性の水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応を介して実施される。本明細書で用いられるとき、用語「ポリエチレングリコール」は、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−又はアリールオキシ−ポリエチレングリコール又はポリエチレングリコール−マレイミドなど、他のタンパク質を誘導体化するように使用されているＰＥＧの形態のいずれかを包含するように意図される。ペグ化対象の抗体は、脱グリコシル化抗体であってもよい。ペグ化のための方法は、例えば欧州特許の欧州特許第０１５４３１６号及び欧州特許第０４０１３８４号に記載の通り、当該技術分野で公知であり、本発明の抗体に適用され得る。
【００４７】
[0047]  用語「バイオシミラー」は、臨床的に不活性な成分において小さい差異があるにもかかわらず米国で承認された参照生物学的製剤に高度に類似した生物学的製剤を意味し、その場合、製品の安全性、純度、及び効力の観点で生物学的製品と参照製品との間に臨床的に有意な差異は認められない。さらに、類似の生物学的薬剤又は「バイオシミラー」薬は、欧州医薬品庁（European Medicines Agency）により既に使用が認可されている別の生物学的薬剤に類似する生物学的薬剤である。用語「バイオシミラー」は、他の国や地方の規制当局によっても同義的に使用される。生物学的製剤又は生物学的薬剤は、生物学的供給源、例えば細菌又は酵母によって作製されるか又はそれらに由来する薬剤である。それらは、ヒトインスリン若しくはエリスロポエチンなどの比較的小さい分子、又はモノクローナル抗体などの複合分子からなり得る。例えば、参照抗ＣＤ２０モノクローナル抗体がリツキシマブである場合、リツキシマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＣＤ２０バイオシミラーモノクローナル抗体は、リツキシマブ「に対するバイオシミラー」又はリツキシマブの「そのバイオシミラー」である。欧州では、類似の生物学的薬剤又は「バイオシミラー」薬は、欧州医薬品庁（European Medicines Agency）（EMA）により既に使用が認可されている別の生物学的薬剤に類似する生物学的薬剤である。欧州における類似の生物学的用途の関連法的根拠は、改正された規制（ＥＣ）Ｎｏ７２６／２００４の第６条及び指令２００１／８３／ＥＣの第１０条（４）であり、それ故、欧州では、バイオシミラーは、規制（ＥＣ）Ｎｏ７２６／２００４の第６条及び指令２００１／８３／ＥＣの第１０条（４）の下で認可される、認可が承認される、又は認可申請の対象であることがある。既に認可されたオリジナルの生物学的医薬品は、欧州では「参照医薬品」と称されることがある。バイオシミラーとみなされるべき製品に対する要件の一部は、類似生物学的医薬品に関するＣＨＭＰガイドライン中に概説されている。さらに、モノクローナル抗体バイオシミラーに関するガイドラインを含む製品向けガイドラインは、ＥＭＡによる製品別に基づいて提供され、そのウェブサイトで公表されている。本明細書に記載のようなバイオシミラーは、品質特性、生物学的活性、作用機構、安全性特性及び／又は有効性として参照医薬品に類似してもよい。さらに、バイオシミラーは、参照医薬品と同じ病態を治療するため、使用されるか又は使用が意図されてもよい。したがって、本明細書に記載のようなバイオシミラーは、参照医薬品に類似するか又は高度に類似する品質特性を有するとみなされてもよい。代替的又は追加的に、本明細書に記載のようなバイオシミラーは、参照医薬品に類似するか又は高度に類似する生物学的活性を有するとみなされてもよい。代替的又は追加的に、本明細書に記載のようなバイオシミラーは、参照医薬品に類似するか又は高度に類似する安全性特性を有するとみなされてもよい。代替的又は追加的に、本明細書に記載のようなバイオシミラーは、参照医薬品に類似するか又は高度に類似する有効性を有するとみなされてもよい。本明細書に記載の通り、欧州におけるバイオシミラーは、ＥＭＡによって認可��れている参照医薬品と比較される。しかし、場合によっては、バイオシミラーは、特定の試験において欧州経済領域（European Economic Area）外部で認可されている生物学的医薬品（非ＥＥＡ認可の「対照薬」）と比較されてもよい。かかる試験は、例えば特定の臨床試験及びインビボ非臨床試験を含む。本明細書で用いられるとき、用語「バイオシミラー」はまた、非ＥＥＡ認可の対照薬と比較されているか又は比較されてもよい生物学的医薬品に関する。特定のバイオシミラーは、抗体、抗体断片（例えば抗原結合部分）及び融合タンパク質などのタンパク質である。タンパク質バイオシミラーは、ポリペプチドの機能に有意には影響しない、（例えば、アミノ酸の欠失、付加、及び／又は置換を含む）アミノ酸構造におけるマイナーな修飾を有するアミノ酸配列を有してもよい。バイオシミラーは、その参照医薬品のアミノ酸配列に対して９７％以上、例えば、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよい。バイオシミラーは、参照医薬品の翻訳後修飾と異なる１つ以上の翻訳後修飾、例えば限定はされないが、グリコシル化、酸化、脱アミド、及び／又は切断を含んでもよいが、但し、その差異は医薬品の安全性及び／又は有効性における変化をもたらさない。バイオシミラーは、参照医薬品に対して同じ又は異なるグリコシル化パターンを有してもよい。特に、排他的でないが、バイオシミラーは、異なるグリコシル化パターンを、その差異が参照医薬品に関連する安全性の懸念に対処するか又は対処することが意図される場合、有してもよい。加えて、バイオシミラーは、医薬品の安全性及び有効性が損なわれないならば、例えば、その強度、医薬品形態、製剤、賦形剤及び／又は外観について参照医薬品から逸脱してもよい。バイオシミラーは、参照医薬品と比べての、例えば薬物動態（ＰＫ）及び／又は薬力学（ＰＤ）特性における差異を含んでもよいが、認可されるか又は認可に適すると考えられることに関しては、依然として参照医薬品に十分に類似するとみなされる。特定の環境下で、バイオシミラーは、参照医薬品と比べて異なる結合特性を示し、ここで異なる結合特性は、ＥＭＡなどの規制当局により、類似の生物学的製品として認可における障壁でないものと考えられる。用語「バイオシミラー」はまた、他の国や地方の規制当局により同義的に使用される。
【００４８】
[0048]  用語「血液悪性腫瘍」は、哺乳動物がん、並びに限定はされないが、血液、骨髄、リンパ節、及びリンパ系の組織を含む造血及びリンパ系組織の腫瘍を指す。血液悪性腫瘍は、「液性腫瘍」とも称される。血液悪性腫瘍として、限定はされないが、ＡＬＬ、ＣＬＬ、ＳＬＬ、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫が挙げられる。用語「Ｂ細胞血液悪性腫瘍」は、Ｂ細胞を冒す血液悪性腫瘍を指す。
【００４９】
[0049]  用語「固形腫瘍」は、通常は嚢胞又は液性領域を含まない組織の異常な腫瘤を指す。固形腫瘍は、良性又は悪性であってもよい。用語「固形腫瘍がん」は、悪性、腫瘍性、又はがん性固形腫瘍を指す。固形腫瘍がんとして、限定はされないが、肉腫、がん、及びリンパ腫、例えば、肺、乳房、前立腺、結腸、直腸、及び膀胱のがんが挙げられる。固形腫瘍の組織構造は、がん細胞が分散され、支持微小環境をもたらすことがある、実質（がん細胞）及び支持間質細胞を含む、相互依存的な組織区画を含む。
【００５０】
[0050]  用語「微小環境」は、本明細書で用いられるとき、全体としての腫瘍微小環境又は微小環境内部の細胞の各サブセットを指してもよい。
【００５１】
[0051]  用語「配列同一性」、「パーセント同一性」及び「配列パーセント同一性」は、２以上の核酸又はポリペプチドとの関連で、配列同一性の一部としての任意の保存的アミノ酸置換を考慮せずに、最大対応について（必要に応じてギャップを導入して）比較及び整列されるとき、同じであるか又は同じであるヌクレオチド若しくはアミノ酸残基の特定の百分率を有する２以上の配列又は部分配列を指す。パーセント同一性は、配列比較ソフトウェア若しくはアルゴリズムを用いて、又は外観検査により、評価され得る。アミノ酸又はヌクレオチド配列の整列を得るために使用可能である様々なアルゴリズム及びソフトウェアは、当該技術分野で公知である。パーセント配列同一性を判定するのに適したプログラムとして、例えば、米国政府の国立バイオテクノロジー情報センター（National Center for Biotechnology Information）BLASTウェブサイトから入手可能なプログラムのBLASTスイートが挙げられる。２つの配列間の比較は、BLASTN又はBLASTPアルゴリズムのいずれかを使用して実施され得る。BLASTNは、核酸配列を比較するために使用される一方で、BLASTPは、アミノ酸配列を比較するために使用される。DNASTARから入手可能であるALIGN、ALIGN-2（Genentech,South San Francisco,California）又はMegAlignは、配列を整列するために使用可能である、追加的な公的に利用可能なソフトウェアプログラムである。当業者は、特定の整列化ソフトウェアにより、最大整列化に適したパラメータを決定することができる。特定の実施形態では、整列化ソフトウェアのデフォルトパラメータが使用される。
【００５２】
[0052]  本発明の特定の実施形態は、抗体、例えば、抗ＣＴＬＡ−４又は抗ＬＡＧ３抗体及び／又は抗ＩＤＯ−１抗体及び／又は抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌｌ及び／又は抗ＰＤ−Ｌ２抗体の変異体を含む。本明細書で用いられるとき、用語「変異体」は、限定はされないが、参照抗体のアミノ酸配列内部の又はそれに隣接する特定の位置での１つ以上の置換、欠失及び／又は付加を通じて参照抗体のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含む抗体を包含する。変異体は、そのアミノ酸配列内に、参照抗体のアミノ酸配列と比べて、１つ以上の保存的置換を含んでもよい。保存的置換は、例えば同様に荷電又は非荷電アミノ酸の置換を含んでもよい。変異体は、参照抗体の抗原に特異的に結合する能力を保持する。
【００５３】
[0053]  疑いを回避するため、本明細書では、本発明の特定の態様、実施形態又は実施例と併記される特定の特徴（例えば、整数、特性、値、使用、疾患、処方、化合物又は基）が、本明細書に記載の任意の他の態様、実施形態又は実施例に、それらに不適合でない限り、適用可能と理解されるべきであることが意図される。それ故、かかる特徴は、本明細書で定義される定義、特許請求の範囲又は実施形態のいずれかと組み合わせて適切である場合、使用されてもよい。（任意の添付の特許請求の範囲、要約及び図面を含む）本明細書で開示される特徴のすべて、及び／又は開示される通りの任意の方法若しくはプロセスのステップのすべては、特徴及び／又はステップの少なくとも一部が相互に排他的である場合の組み合わせを除き、任意の組み合わせで組み合わせてもよい。本発明は、いかなる開示される実施形態のいかなる詳細に限定されない。本発明は、（任意の添付の特許請求の範囲、要約及び図面を含む）本明細書で開示される特徴の、任意の新規なもの、若しくは新規な組み合わせ、又は開示される通りの任意の方法若しくはプロセスのステップの、任意の新規なもの、若しくは任意の新規な組み合わせに拡張される。
【００５４】
自己ワクチンを調製する方法
[0054]  単一のハプテン試薬を使用しての自己ワクチンの調製は、当業者に公知である。例えば、Berdに交付された米国特許第５，２９０，５５１号は、単一のハプテン試薬を使用する、メラノーマ患者の腫瘍サンプルからの自己ワクチンの調製について開示している。米国特許第５，２９０，５５１号は、その全体が参照により援用される。腫瘍サンプルを貯蔵する方法は、特に腫瘍細胞を貯蔵する方法について、米国特許出願公開第２００３−０１７０７５６Ａｌ号（参照により援用される）中でBerdにより考察されている。
【００５５】
[0055]  一実施形態では、本発明は、個別化された自己二ハプテン化ワクチンを提供し、かかる腫瘍ワクチンは、次のように調製されてもよい：自己二ハプテン化ワクチンは、
（ａ）直径が少なくとも約１ｃｍである、切除された腫瘍断片を洗浄するステップと；
（ｂ）腫瘍断片を細胞の懸濁液に解離させるステップと；
（ｃ）細胞の懸濁液にγ線を照射するステップと；
（ｄ）照射された細胞の懸濁液を少なくとも２つのほぼ等しい部分に分離するステップと；
（ｅ）第１部分を第１のハプテン化試薬で、且つ第２部分を第２のハプテン化試薬でハプテン化するステップと；
（ｆ）各部分を固定するステップと；
（ｇ）該部分を組み合わせるステップと；
（ｈ）ステップ（ｇ）の生成物を含む細胞を約６×１０６個〜約５０×１０６個の細胞／ｍＬの一定分量にアリコートするステップと、
を含むプロセスによって調製される。
【００５６】
[0056]  一実施形態では、γ線の線量は、約１０００、約１５００、約２０００、約２５００、約３０００、約３５００、約４０００、約４５００、又は約５０００ｃＧｙである。一実施形態では、各部分は、約３５％、約３７．５％、約４０％、約４２．５％、約４５％、約４７．５％、又は約５０％のエタノールで固定される。
【００５７】
[0057]  ハプテン化するステップは、細胞の第１の一定分量をＤＮＰで、第１のハプテン化試薬２，４−ジフルオロニトロベンゼン（ＤＮＦＢ）との３０分インキュベーションにより修飾し、次いで細胞の第２の一定分量を第２のハプテン化試薬スルファニル酸（ＳＡ）で、ＳＡのジアゾニウム塩との５分インキュベーションにより修飾することで実施されてもよい。ハプテン化された細胞が、ＨＢＳＳで洗浄され、計数され、最終濃度が約３７．５％のエタノールで約１０分間固定される。第２のハプテン化試薬は、当該技術分野で公知のもの、例えば、Nahas and Leskowitz,“The ability of hapten-conjugated cells to induce cell-mediated cytotoxicity is affected by the mode of hapten linkage,”Cell.Immunol.,54:241-247(1980)に記載のものから選択されてもよい。好ましいハプテン化試薬は、アミノ酸のε−アミノ基を標的にしてもよい。
【００５８】
[0058]  腫瘍断片の細胞の懸濁液への解離は、当該技術分野で公知の方法により行われてもよい。好ましい実施形態では、腫瘍断片は、機械的解離のための手段により、細胞の懸濁液に解離される。
【００５９】
[0059]  いくつかの実施形態では、第１のハプテン化試薬及び第２のハプテン化試薬の各々は、トリニトロクロロベンゼン（ＴＮＣＢ）、２，４−ジフルオロニトロベンゼン（ＤＮＦＢ）、Ｎ−ヨードアセチル−Ｎ’−（５−スルホニック−１−ナフチル）エチレンジアミン（ＡＥＤ）、スルファニル酸（ＳＡ）、トリニトロフェノール（ＴＮＰ）、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）及びそれらの組み合わせから独立して選択される。一実施形態では、第１のハプテン化試薬は、第２のハプテン化試薬と異なる。
【００６０】
[0060]  いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンの用量は、約４×１０６個の細胞〜約５０×１０６個の細胞の間の範囲内である。いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンの用量は、約８×１０６個の細胞；約９×１０６個の細胞；約１０×１０６個の細胞；約１１×１０６個の細胞；約１２×１０６個の細胞；約１３×１０６個の細胞；約１４×１０６個の細胞；約１５×１０６個の細胞；約１６×１０６個の細胞；約１７×１０６個の細胞；約１８×１０６個の細胞；約１９×１０６個の細胞；約２０×１０６個の細胞；約２１×１０６個の細胞；２２×１０６個の細胞；約２３×１０６個の細胞；約２４×１０６個の細胞；約２５×１０６個の細胞；約２６×１０６個の細胞；約２７×１０６個の細胞；約２８×１０６個の細胞；約２９×１０６個の細胞；又は約３０×１０６個の細胞である。いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンの用量は、約１２×１０６個の細胞である。
【００６１】
ワクチンの凍結保存
[0061]  ハプテン化細胞を凍結保存するための方法は、当業者に公知である。例えば、Berdらは、米国特許第８，４３５，７８４号（その全体が参照により援用される）において、ハプテン化細胞の浸透圧保護及び制御された温度での凍結についての手法を開示している。
【００６２】
化合物の同時投与
[0062]  化合物の同時投与は、特に新たな免疫チェックポイント阻害剤における貴重な臨床的手法である。治療前に、いずれの患者が特定の免疫チェックポイント阻害剤から利益を得ることがあるかを予測することは、いまだ不明である。例えば、Snyder el al.,“Genetic Basis for Clinical Response to CTLA-4 Blockade in Melanoma,”N Engl.J. of Med.371:2189-2199(2014)。
【００６３】
[0063]  本発明の一態様は、免疫チェックポイント阻害剤と自己二ハプテン化腫瘍ワクチンとの組み合わせを含む組成物、例えば医薬組成物である。がんを治療する方法であって、（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を有効量で投与することと；（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチンを有効量で投与することと、を含む方法。一実施形態では、自己二ハプテン化ワクチンは、隔週で少なくとも８週間投与される。一実施形態では、自己二ハプテン化ワクチンは、毎週、少なくとも７週間投与される。一実施形態では、自己二ハプテン化ワクチンは、アジュバントの存在下又は不在下で投与される。一実施形態では、アジュバントは、カルメット−ゲラン菌（Bacille Calmette- Guerin）である。一実施形態では、アジュバントは、細菌リポ多糖、細菌リポタンパク質、抗菌ペプチド、サポニン、リポテイコ酸、スクアレン、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、一本鎖ＲＮＡ、合成リン脂質、ＭＦ５９、Ｅ６０２０、ＩＣ３１、リポペプチド、イミダゾキノリン化合物、ベンゾナフチリジン化合物、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００６４】
[0064]  一実施形態では、がんは、卵巣がん、子宮がん、膣がん、外陰部がん、及び子宮内膜がんからなる群から選択される。
【００６５】
[0065]  いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＯＸ４０、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＮＦＲ５Ｆ４、ＢＴＬＡ、ＯＸ４ＯＬ、及びＴＩＭ３又はそれらの組み合わせからなる群から選択される。
【００６６】
[0066]  一実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１免疫チェックポイントの阻害剤である。一実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４免疫チェックポイントの阻害剤である。
【００６７】
免疫チェックポイント阻害剤
[0067]  ヒト女性におけるがんを治療するための方法であって、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を有効量で投与することを含み、ここで少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＯＸ４０、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＮＦＲ５Ｆ４、ＢＴＬＡ、ＯＸ４ＯＬ、及びＴＩＭ３又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、方法。
【００６８】
[0068]  Mooreは、“Immunotherapy in Cancer Treatment: A Review of Checkpoint Inhibitors,”U.S.Pharm.,43(2):27-31(2018)において、ＦＤＡで承認された免疫チェックポイント阻害剤の簡潔なサマリーを提示している。本発明の組成物、方法、及びプロセスは、免疫チェックポイントの阻害剤と組み合わせることで機能的であると理解されている。
【００６９】
ＰＤ−Ｌ１阻害剤
[0069]  いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対する抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対するモノクローナル抗体である。その他の又は追加的な実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１に対するヒト又はヒト化抗体である。例えば、米国特許第７，０２９，６７４号；米国特許第６，８０８，７１０号；又は米国特許出願公開第２００５０２５０１０６号及び米国特許出願公開第２００５０１５９３５１号に開示されたＰＤ−１生物学的活性の阻害剤（又はそのリガンド）は、本明細書に提供される方法において使用可能である。ＰＤ−１に対する例示的な抗体として、Bio X Cell製の抗マウスＰＤ−１抗体クローンＪ４３（カタログ番号BE0033-2）；Bio X Cell製の抗マウスＰＤ−１抗体クローンＲＭＰ１−１４（カタログ番号BE0l46）；マウス抗ＰＤ−１抗体クローンＥＨ１２；MerckのＭＫ−３４７５抗マウスＰＤ−１抗体（キイトルーダ（商標）、ペンブロリズマブ、ランブロリズマブ）；及びAnaptysBioの抗ＰＤ−１抗体、ＡＮＢ０１１としても公知；抗体ＭＤＸ−ｌ１０６（ＯＮＯ−４５３８）；Bristol-Myers SquibbのヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体ニボルマブ（オプジーボ（商標）、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ１１０６）；AstraZenecaのＡＭＰ−５１４、及びＡＭＰ−２２４；並びにピディリズマブ（ＣＴ−０１１），CureTech Ltd.が挙げられる。さらなる例示的な抗ＰＤ−１抗体及びそれらを使用するための方法は、Goldberg et al.,“Role of PD-l and its ligand,B7-H1,in early fate decisions of CD8T+ cells,”Blood 110:186-192(2007),Thompson et al,“PD-l Is Expressed by Tumor-Infiltrating Immune Cells and Is Associated with Poor Outcome for Patients with Renal Cell Carcinoma,”Clin.Cancer Res.13(6):1757-1761(2007),及びKorman et al.、国際出願ＰＣＴ／ＪＰ２００６／３０９６０６号（公開番号、国際公開第２００６／１２１１６８Ａｌ号）（それらの各々は参照により本明細書中に明示的に援用される）によって記載されている。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、以下の特許公開（参照により本明細書中に援用される）：国際公開第０１４５５７号；国際公開第２０１１１１０６０４号；国際公開第２００８１５６７１２号；米国特許出願公開第２０１２０２３７５２号；国際公開第２０１１１１０６２１号；国際公開第２００４０７２２８６号；国際公開第２００４０５６８７５号；国際公開第２０１０００３６９５９号；国際公開第２０１００２９４３４号；国際公開第２０１６／０５７８９８号；国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５４８９９号  国際公開第２０１２１３５４８号；国際公開第２００２０７８７３１号；国際公開第号２０１２１４５４９３号；国際公開第２０１００８９４１１号；国際公開第２００１０１４５５７号；国際公開第２０１３０２２０９１号；国際公開第２０１３０１９９０６号；国際公開第２００３０１１９１１号；米国特許出願公開第２０１４０２９４８９８号；及び国際公開第２０１０００１６１７号のいずれかに開示された抗ＰＤ−１抗体である。
【００７０】
[0070]  いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、国際公開第２００９１４３３５号（参照により本明細書中に援用される）に開示のようなＰＤ−１結合タンパク質である。
【００７１】
[0071]  いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、国際公開第２０１３１３２３１７号（参照により本明細書中に援用される）に開示のようなＰＤ−１のペプチド模倣阻害剤である。
【００７２】
[0072]  いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、抗マウスＰＤ−１  ｍＡｂ：クローンＪ４３，Bio X Cell（West Lebanon,NH）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、Regneron及びSanofiにより共に市販された、抗ＰＤ−１抗体治療薬cemiplimam-rwlc（Libtayo）である。
【００７３】
[0073]  いくつかの実施形態では、ＰＤ−１阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１タンパク質、ＰＤ−Ｌ２タンパク質、又は断片、並びに特定の悪性腫瘍の治療についての臨床試験において試験された抗体ＭＤＸ−１  １０６（ＯＮＯ−４５３８）である（Brahmer et al.,“Phase I study of single-agent anti-programmed death-1(MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates, ”J.Clin.Oncol.28(19):3167-75(2010)）。他の遮断抗体は、上記の通り、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２との間の相互作用の公知のドメインに基づいて、当業者により容易に同定され、調製されてもよい。
【００７４】
ＣＴＬＡ−４阻害剤
[0074]  いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４の阻害剤である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４に対する抗体である。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４に対するモノクローナル抗体である。その他の又は追加的な実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４に対するヒト又はヒト化抗体である。一実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、ＣＴＬＡ−４の、抗原提示細胞上で発現されるＣＤ８０（Ｂ７−１）及び／又はＣＤ８６（Ｂ７−２）への結合を遮断する。ＣＴＬＡ−４に対する例示的な抗体は、Bristol Meyers Squibbの抗ＣＴＬＡ−４抗体イピリムマブ（ヤーボイ（商標）、ＭＤＸ−０１０、ＢＭＳ−７３４０１６及びＭＤＸ−１０１としても公知）；Millipore製の抗ＣＴＬＡ４抗体、クローン９Ｈ１０；Pfizerのトレメリムマブ（ＣＰ−６７５，２０６、チシリムマブ）；及びAbeam製の抗ＣＴＬＡ４抗体クローンＢＮＩ３を含む。
【００７５】
[0075]  いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、以下の特許公開（その全体が参照により援用される）：国際公開第２００１０１４４２４号；国際公開第２００４０３５６０７号；米国特許出願公開第２００５／０２０１９９４号；欧州特許第１２１２４２２Ｂｌ号；国際公開第２００３０８６４５９号；国際公開第２０１２１２０１２５号；国際公開第２００００３７５０４号；国際公開第２００９１００１４０号；国際公開第２００６０９６４９号；国際公開第２００５０９２３８０号；国際公開第２００７１２３７３７号；国際公開第２００６０２９２１９号；国際公開第２０１００９７９５９７号；国際公開第２００６１２１６８号；及び国際公開第１９９７０２０５７４号のいずれかにおいて開示された抗ＣＴＬＡ−４抗体である。さらなるＣＴＬＡ−４抗体が、米国特許第５，８１１，０９７号、米国特許第５，８５５，８８７号、米国特許第６，０５１，２２７号、及び米国特許第６，９８４，７２０号；ＰＣＴ公開の国際公開第０１／１４４２４号及び国際公開第００／３７５０４号；並びに米国特許出願公開第２００２／００３９５８１号及び米国特許出願公開第２００２／０８６０１４号；及び／又は米国特許第５，９７７，３１８号、米国特許第６，６８２，７３６号、米国特許第７，１０９，００３号、及び米国特許第７，１３２，２８１号（参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
【００７６】
[0076]  いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、国際公開第９８／４２７５２号；米国特許第６，６８２，７３６号及び米国特許第６，２０７，１５６号；Hurwitz et al.,“CTLA-4 blockade synergizes with tumor-derived granulocyte-macrophage colony-stimulating factor for treatment of an experimental mammary carcinoma,”Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95(17):10067-10071(1998);Camacho et al., “Phase 1 clinical trial of anti-CTLA4 human monoclonal antibody CP-675,206 in patients(pts) with advanced solid malignancies, ”J.Clin.Oncol.,22(145):Abstract No.2505(2004)(antibody CP-675206);Mokyr et al., “Realization of the Therapeutic Potential of CTLA-4 Blockade in Low-Dose Chemotherapy-treated Tumor-bearing Mice, ”Cancer Res.,58:5301-5304(1998)に開示されたものである。
【００７７】
[0077]  いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、国際公開第１９９６０４０９１５号に開示のようなＣＴＬＡ−４リガンドである。他の実施形態では、ＣＴＬＡ−４阻害剤は、米国特許第６，６３０，５７５号に開示のようなＢ７様ペプチド又は核酸分子であってもよい。
【００７８】
がんを治療する方法
[0078]  いくつかの実施形態では、本発明の治療方法は、膀胱がん、扁平上皮がん、例えば頭頚部がん、膵管腺癌（ＰＤＡ）、膵がん、結腸がん、乳腺がん、乳がん、線維肉腫、中皮腫、腎細胞がん、肺がん、胸腺腫、前立腺がん、結腸直腸がん、卵巣がん、急性骨髄性白血病、胸腺がん、脳がん、扁平細胞がん、皮膚がん、眼がん、網膜芽細胞腫、メラノーマ、眼内黒色腫、口腔及び中咽頭がん、胃がん（gastric cancer）、胃がん（stomach cancer）、子宮頸がん、腎がん（renal cancer）、腎がん（kidney cancer）、肝がん、卵巣がん、食道がん、睾丸がん、婦人科がん、甲状腺がん、ウイルス誘発性がん、神経膠芽腫、食道腫瘍（esophageal tumors）、血液腫瘍、非小細胞肺がん、慢性骨髄球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道腫瘍（esophagus tumor）、濾胞中心リンパ腫、頭頸部腫瘍、Ｃ型肝炎ウイルス感染、肝細胞がん、ホジキン病、転移性結腸がん、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、無痛性非ホジキンリンパ腫、卵巣腫瘍、膵腫瘍、腎細胞がん、小細胞肺がん、ステージＩＶメラノーマ、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、成熟Ｂ細胞ＡＬＬ、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、及びバーキットリンパ腫からなる群から選択されるがんの治療における使用が意図される。
【００７９】
[0079]  本発明の実施形態は、がんを治療する方法であって、（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を有効量で投与することと；（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチンを有効量で投与することと、を含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、ステップ（ｉ）及びステップ（ｉｉ）は、同じ期間内に行われる。いくつかの実施形態では、自己二ハプテン化ワクチンは、隔週で少なくとも８週間投与される。いくつかの実施形態では、自己二ハプテン化ワクチンは、週１回で少なくとも６週間投与される。
【００８０】
[0080]  一実施形態では、本発明は、がんを治療する方法であって、（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤；及び（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチンを治療有効量で含む１つ以上の組成物を同時投与することを含む方法を提供する。
【００８１】
[0081]  いくつかの実施形態では、該方法は、初回注射から約６か月後の自己二ハプテン化ワクチンの少なくとも１つのブースター注射をさらに含む。いくつかの実施形態では、有効量の自己二ハプテン化ワクチンは、遅延型過敏症の診断検査が陽性であるまで隔週で投与される。
【００８２】
[0082]  いくつかの実施形態では、本発明は、卵巣がん、子宮がん、膣がん、外陰部がん、及び子宮内膜がんからなる群から選択されるがんを治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、転移性である。いくつかの実施形態では、がんは、チェックポイント阻害剤に対する獲得耐性を有する。
【００８３】
[0083]  本発明の実施形態は、がんを治療する方法であって、（ｉ）少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤を有効量で投与することと；（ｉｉ）自己二ハプテン化ワクチンを有効量で投与することと、を含み、ここで少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、ＯＸ４０、ＩＤＯ−１、ＩＤＯ−２、ＣＥＡＣＡＭ１、ＩＮＦＲ５Ｆ４、ＢＴＬＡ、ＯＸ４ＯＬ、及びＴＩＭ３又はそれらの組み合わせからなる群から選択される、方法を提供する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、及びデュルバルマブからなる群から選択される。
【００８４】
[0084]  いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ−４を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ及びトレメリムマブからなる群から選択される。
【００８５】
[0085]  いくつかの実施形態では、少なくとも１つのチェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１免疫チェックポイント阻害剤及びＣＴＬＡ−４免疫チェックポイント阻害剤を含む。
【００８６】
[0086]  いくつかの実施形態では、がんは、免疫チェックポイント阻害剤療法に対して抵抗性がある。いくつかの実施形態では、がんは、免疫チェックポイント阻害剤療法に対して応答しない。いくつかの実施形態では、がんは、免疫チェックポイント阻害剤療法に対する獲得耐性を有する。
【００８７】
併用療法
[0087]  いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンは、チェックポイント阻害剤治療のサイクル（治療サイクル）が開始する前に投与される。治療サイクルは、治療期間とそれに続く休止期間（非治療）を指し、それは規則的スケジュールで反復される。例えば、１０週間与えられる治療とそれに続く３週間の休止が１治療サイクルである。このサイクルが規則的スケジュールで複数回反復されるとき、それは治療期間を形成する。二ハプテン化ワクチンの治療サイクルは、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週、２１週、２２週、２３週、２４週、２５週、２６週、２７週、又は２８週の治療とそれに続く０週、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週、２１週、２２週、２３週、２４週、２５週、２６週、２７週、又は２８週の休止（二ハプテン化ワクチンで非治療）を含む。チェックポイント阻害剤の治療サイクルは、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週、２１週、２２週、２３週、２４週、２５週、２６週、２７週、又は２８週の治療とそれに続く０週、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、８週、９週、１０週、１１週、１２週、１３週、１４週、１５週、１６週、１７週、１８週、１９週、２０週、２１週、２２週、２３週、２４週、２５週、２６週、２７週、又は２８週の休止（チェックポイント阻害剤で非治療）を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤の治療サイクルと二ハプテン化ワクチンの治療サイクルの双方は、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、又はそれ以上の回数、独立して反復され得る。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤の治療サイクルと二ハプテン化ワクチンの治療サイクルとは、重複しない。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤の治療サイクルと二ハプテン化ワクチンの治療サイクルとは、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、又は２０週間重複する。いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンは、チェックポイント阻害剤療法のサイクルを開始する１週前；２週前；３週前；４週前；５週前；６週前；７週前；８週前；９週前；１０週前；１１週前；又は１２週前に投与される。いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンの初回投与が実施され、約１０週後、免疫チェックポイント阻害剤の初回投与が実施され、免疫チェックポイント阻害剤の治療サイクルを開始する。
【００８８】
[0088]  いくつかの実施形態では、対象は、二ハプテン化ワクチンの初回投与前に予めチェックポイント阻害剤療法を受けている。いくつかの実施形態では、対象は、以前のチェックポイント阻害剤治療後、疾患進行を有する。
【００８９】
[0089]  いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンは、７用量シリーズで投与され、ここで１用量は約７週の期間中、約７日ごとに投与される。いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンの治療サイクル中に、シクロホスファミドが投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、二ハプテン化ワクチンの治療サイクルの約２日目、約３日目、約４日目、約５日目、約６日目、又は約７日目に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、二ハプテン化ワクチンの治療サイクルの７週の約７日目に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、二ハプテン化ワクチンの２回目投与の１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前又は７日前に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、二ハプテン化ワクチンの初回投与の１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後又は７日後に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、二ハプテン化ワクチンの初回投与の１日前、２日前、３日前、４日前、５日前、６日前又は７日前に投与される。例示的なシクロホスファミド用量は、約３００ｍｇ／ｍ２である。
【００９０】
[0090]  いくつかの実施形態では、二ハプテン化ワクチンは、がんを治療するため、毎週、隔週、３週ごと、毎月、隔月、３か月ごと、４か月ごと、５か月ごと、又は６か月ごとに対象に投与される。一実施形態では、対象はヒトである。
【００９１】
[0091]  いくつかの実施形態では、周期的な二ハプテン化ワクチンブースター用量が投与される。いくつかの実施形態では、ブースターは、二ハプテン化ワクチンの初回投与後の約２６週目に最初に投与される。いくつかの実施形態では、完全な最初の二ハプテン化ワクチン治療サイクル後、ワクチンブースター用量は、約３か月ごとに投与される。いくつかの実施形態では、完全な最初の二ハプテン化ワクチン治療サイクル後、ワクチンブースター用量は、約６か月ごとに投与される。いくつかの実施形態では、完全な最初の二ハプテン化ワクチン治療サイクル後、ワクチンブースター用量は、約１年ごとに１回投与される。
【００９２】
[0092]  いくつかの実施形態では、１つ以上のチェックポイント阻害剤は、二ハプテン化ワクチンと同時投与される。
【００９３】
[0093]  二ハプテン化腫瘍ワクチンのレジメンの間、免疫シグナル伝達における変化を利用するため、１つ以上のチェックポイント阻害剤療法が実施される。いくつかの実施形態では、患者は、抗ＣＴＬＡ−４剤（例えば、イピリムマブ又はトレメリムマブ）及び／又は抗ＰＤ−１剤（例えば、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、又はセミプリマブ）を受ける。免疫チェックポイント阻害剤は、非経口的に、例えばいくつかの実施形態では、皮下、腫瘍内、静脈内に投与され得る。例えば、様々な実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に投与される。様々な実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、約１ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に投与される。免疫チェックポイント阻害剤の初回投与は、二ハプテン化ワクチンの初回投与の少なくとも６週後、例えば、約６週目、約７週目、約８週目、約９週目、又は約１０週目に実施され得る。いくつかの実施形態では、免疫療法剤は、約２回〜約６回（例えば約４回、好ましくは３週ごと）投与される。
【００９４】
[0094]  いくつかの実施形態では、患者は、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、例えば、アテゾリズマブ（テセントリク）、アベルマブ（バベンチオ）、及び／又はデュルバルマブ（イミフィンジ）を受ける。
【００９５】
[0095]  いくつかの実施形態では、二ハプテン化腫瘍ワクチンは、免疫チェックポイント遮断療法に対して非応答性であるか又はあくまで部分的に応答性であることが以前に見出された転移がん患者に皮下投与される。例えば、二ハプテン化腫瘍ワクチンは、１週目、２週目、３週目、４週目、５週目、６週目、及び７週目に約８×１０６個の細胞〜約２２×１０６個の細胞の用量で投与され、イピリムマブは、３ｍｇ／ｋｇで静脈内投与される。イピリムマブは、１０週目から３週ごとに投与され得る。或いは、ペンブロリズマブは、１０週目から３週ごとに２ｍｇ／ｋｇで静脈内投与され得る。
【００９６】
[0096]  いくつかの実施形態では、二ハプテン化腫瘍ワクチンは、免疫チェックポイント遮断療法に対して非応答性であるか又はあくまで部分的に応答性であることが以前に見出された転移がん患者に皮下投与される。例えば、二ハプテン化腫瘍ワクチンは、１週目、２週目、３週目、４週目、５週目、６週目、及び７週目に約８×１０６個の細胞〜約２２×１０６個の細胞の用量で投与され、３５０ｍｇのセミプリマブ（Libtayo）は、１０週目から疾患進行又は許容できない毒性に至るまで３週ごとに、静脈内注入により３０分間にわたり投与される。
【００９７】
医薬組成物
[0097]  一実施形態では、本発明は、本明細書に記載の疾患及び病態の治療における使用が意図された医薬組成物を提供する。好ましい実施形態では、本発明は、免疫チェックポイント阻害剤治療に対して抵抗性があるがんの治療における使用が意図された下記を含む医薬組成物を提供する。
【００９８】
[0098]  いくつかの実施形態では、本発明は、免疫チェックポイント阻害剤治療に対する獲得耐性を有するがんを治療するための医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、転移がんを治療するための医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、免疫チェックポイント阻害剤治療に対して抵抗性があるがんを治療するための医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤により以前に治療されているがんを治療するための医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、がんは、免疫チェックポイント阻害剤療法単独に対して応答しない。
【００９９】
[0099]  医薬組成物は、本明細書に記載のような組み合わせ、例えば少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤及び自己二ハプテン化腫瘍ワクチンを含む組み合わせを治療有効量で提供するため、典型的には製剤化される。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤は、自己二ハプテン化腫瘍ワクチンの初回投与前に投与される。いくつかの実施形態では、自己二ハプテン化腫瘍ワクチンの初回投与は、少なくとも１つの免疫チェックポイント阻害剤の前に実施される。
【０１００】
[00100]  所望される場合、医薬組成物は、薬学的に許容できる塩及び／又は活性成分の１つ以上の配位化合物を含有する。典型的には、医薬組成物はまた、１つ以上の薬学的に許容できる賦形剤、担体、例えば不活性固体希釈剤及び充填剤、希釈剤、例えば滅菌水溶液及び様々な有機溶媒、透過促進剤、可溶化剤及びアジュバントを含む。
【０１０１】
[00101]  上記の医薬組成物は、好ましくは、本明細書に記載の疾患及び病態の治療における使用が意図される。
【０１０２】
[00102]  好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、卵巣がん、子宮がん、膣がん、外陰部がん、及び子宮内膜がんの治療における使用が意図される。
【０１０３】
[00103]  いくつかの実施形態では、本発明の方法及び医薬組成物は、膀胱がん、扁平上皮がん、例えば頭頚部がん、膵管腺癌（ＰＤＡ）、膵がん、結腸がん、乳腺がん、乳がん、線維肉腫、中皮腫、腎細胞がん、肺がん、胸腺腫、前立腺がん、結腸直腸がん、卵巣がん、急性骨髄性白血病、胸腺がん、脳がん、扁平細胞がん、皮膚がん、眼がん、網膜芽細胞腫、メラノーマ、眼内黒色腫、口腔及び中咽頭がん、胃がん（gastric cancer）、胃がん（stomach cancer）、子宮頸がん、腎がん（renal cancer）、腎がん（kidney cancer）、肝がん、卵巣がん、食道がん、睾丸がん、婦人科がん、甲状腺がん、ウイルス誘発性がん、神経膠芽腫、食道腫瘍（esophageal tumors）、血液腫瘍、非小細胞肺がん、慢性骨髄球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、食道腫瘍（esophagus tumor）、濾胞中心リンパ腫、頭頸部腫瘍、Ｃ型肝炎ウイルス感染、肝細胞がん、ホジキン病、転移性結腸がん、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、無痛性非ホジキンリンパ腫、卵巣腫瘍、膵腫瘍、腎細胞がん、小細胞肺がん、ステージＩＶメラノーマ、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、成熟Ｂ細胞ＡＬＬ、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、及びバーキットリンパ腫からなる群から選択されるがんの治療における使用が意図される。
【０１０４】
[00104]  自己二ハプテン化腫瘍ワクチンを含む組成物は、皮下に投与されてもよい。自己二ハプテン化腫瘍ワクチンを含む組成物は、優先的に皮内に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、自己二ハプテン化腫瘍ワクチンを含む組成物は、筋肉内に投与される。いくつかの実施形態では、自己二ハプテン化腫瘍ワクチンを含む組成物は、筋肉内経路を介して三角筋又は大腿の前外側面に投与される。臨床技術における当業者に公知の方法は、たとえ皮下脂肪層厚の差異や男性と女性との間での差異があっても信頼できる筋肉内注射を可能にする。例えば、Zuckerman,“The Importance of Injecting Vaccines into Muscle:Different Patients Need Different Needle Sizes,”BMJ 321:1237-1238(2000)。
【０１０５】
[00105]  下記は、非限定的な医薬組成物及びそれらを調製するための方法である。
【０１０６】
注射用の医薬組成物
[00106]  好ましい実施形態では、本発明は、自己二ハプテン化腫瘍ワクチンの医薬組成物を、ワクチンアジュバントを含む注射向けに提供する。
【０１０７】
[00107]  本明細書に記載の組成物において、当業者に公知の他の成分が使用されてもよい。自己二ハプテン化腫瘍ワクチンのいくつかの実施形態は、免疫応答を非特異的に刺激し、ワクチンに対する免疫応答の有効性を増強するため、アジュバント、例えばカルメット−ゲラン桿菌（Bacillus Calmette-Guerin）（BCG）、サイトカイン（非限定例として、顆粒球・マクロファージコロニー刺激（ＧＭ−ＣＳＦ））、アルミニウムゲル剤若しくはアルミニウム塩、又は当業者に公知の他のアジュバントをさらに含んでもよい。少なくとも１つの好ましい実施形態では、アジュバントは、BCG Ticeである。
【０１０８】
[00108]  自己二ハプテン化腫瘍ワクチンは、当業者に公知の保存剤、例えば限定はされないが、ホルムアルデヒド、抗生物質、グルタミン酸ナトリウム、２−フェノキシエタノール、フェノール、及び塩化ベンゼトニウムをさらに含んでもよい。自己二ハプテン化腫瘍ワクチンは、注射用滅菌水、注射用平衡塩類溶液をさらに含んでもよい。
【０１０９】
個別化された診断キット
[00109]  本発明はまた、キットを提供する。キットは、（ｉ）シリンジフィルが薬学的に許容できる担体中に二ハプテン化自己腫瘍細胞を含む場合の、１回以上の単回用量の充填シリンジ；（ｉｉ）シリンジフィルが薬学的に許容できる担体中に検査陰性対照を含む場合の、１回以上の単回用量の充填シリンジ；（ｉｉｉ）書面の使用説明書；及び（ｉｖ）検査結果をスコア化するためのガイドの各々を含む。
【０１１０】
[00110]  かかるキットはまた、情報、例えば科学参考文献、添付文書類、臨床試験結果、及び／又はこれらのサマリーなどを含んでもよく、それらは、組成物の活性及び／若しくは利点を指示若しくは確立し、且つ／又は医療提供者にとって有用な投薬、投与、副作用、薬物相互作用、若しくは他の情報を記述する。かかる情報は、様々な試験、例えばヒト臨床試験に基づくインビボモデル及び試験を含む実験動物を使用する試験の結果に基づいてもよい。キットは、別の活性医薬成分をさらに含有してもよい。いくつかの実施形態では、別の活性医薬成分は、キット中の別々の容器内の別々の組成物であってもよい。
【０１１１】
[00111]  一実施形態では、個別化された診断検査結果をスコア化するためのガイドは、硬結、膨疹及び紅斑の直径を測定するためのゲージであってもよい。一実施形態では、ガイドは、一連のピクトグラム、代表的な写真、又は膨疹及び紅斑、硬結を図示する図面、又は診断試薬、例えば陽性及び陰性対照に対する応答についての他の特長であってもよい。一実施形態では、キットは、応答性皮膚表面の輪郭を描くためのマーカーをさらに含んでもよい。
【０１１２】
[00112]  一実施形態では、キットは、固有のＩＤコードを表し、且つ個別化された診断キットに独自に接続された情報伝達を可能にする固有のＱＲコードをさらに含んでもよい。
【０１１３】
[00113]  使用に適したパッケージング及び追加的な物品（例えば、大気への曝露を最小化するためのホイルラッピングなど）は、当該技術分野で公知であり、キット中に含まれてもよい。本明細書に記載のキットは、医師、看護師、薬剤師、薬局員（formulary officials）などを含む保健提供者に対して提供、市販及び／又は奨励され得る。
【０１１４】
有効性の評価
[00114]  指定された疾患又は障害の治療、予防及び／又は管理における本明細書に記載の方法、化合物、及び化合物の組み合わせの有効性は、当該技術分野で公知の様々な動物モデルを使用して試験され得る。膵がんに対する治療の有効性を判定するためのモデルは、Herreros-Villanueva,et al,World J.Gastroenterol.2012,18,1286-1294に記載されている。乳がんに対する治療の有効性を判定するためのモデルは、例えば、Fantozzi,Breast Cancer Res.2006,8,212に記載されている。卵巣がんに対する治療の有効性を判定するためのモデルは、例えば、Mullany,et al,Endocrinology 2012,153,1585-92;及びFong,et al,J.Ovarian Res.2009,2,12に記載されている。メラノーマに対する治療の有効性を判定するためのモデルは、例えば、Damsky,et al,Pigment Cell & Melanoma Res.2010,23,853-859に記載されている。肺がんに対する治療の有効性を判定するためのモデルは、例えば、Meuwissen,et al,Genes & Development,2005,19,643-664に記載されている。肺がんに対する治療の有効性を判定するためのモデルは、例えば、Kim,Clin.Exp.Otorhinolaryngol.2009,2,55-60;及びSano,Head Neck Oncol.2009,1,32に記載されている。結腸直腸がんに対する治療の有効性を判定するためのモデル、例えばＣＴ２６モデルは、Castle,et al,BMC Genomics,2013,15,190;Endo,et al,Cancer Gene Therapy,2002,9,142-148;Roth et al,Adv.Immunol.1994,57,281-351;Fearon,et al,Cancer Res.1988,48,2975-2980に記載されている。ＤＬＢＣＬにおける有効性は、ＰｉＢＣＬ１マウスモデル及びＢＡＬＢ／ｃ（ハプロタイプＨ−２ｄ）マウスを使用して評価されてもよい。Illidge,et al,Cancer Biother.& Radiopharm.2000,15,571-80。ＮＨＬにおける有効性は、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ハプロタイプ２−Ｈｋ）マウスを用いる３８Ｃ１３マウスモデル又は代替的には３８Ｃ１３  Ｈｅｒ２／ｎｅｕモデルを使用して評価されてもよい。Timmerman, et al,Blood,2001,97,1370-77; Penichet, et al, Cancer Immunolog.Immunother.2000,49,649-662。ＣＬＬにおける有効性は、ＢＡＬＢ／ｃ（ハプロタイプＨ−２ｄ）マウスを使用するＢＣＬ１モデルを使用して評価されてもよい。Dutt, et al, Blood,2011,117,3230-29。
【０１１５】
[00115]  有効性を監視するため、遅延型過敏症（ＤＴＨ）が用いられてもよい。抗腫瘍免疫を評価するためにＤＴＨが実施される場合、ＤＴＨ検査の時期は、（ａ）ベースライン応答試験である、ワクチンの初回投与の約１４日〜約２１日前；（ｂ）同時投与チェックポイント阻害剤の初回投与前である、ワクチン治療の約１０週目；及び（ｃ）少なくとも１つのチェックポイント阻害剤の少なくとも２回の同時投与後である、ワクチン治療の約２８週目である。いくつかの実施形態では、ＤＴＨは、完全ワクチン及びチェックポイント阻害剤の同時投与レジメン後、約３か月ごとに実施される。
【０１１６】
[00116]  いくつかの実施形態では、本発明は、免疫チェックポイント阻害剤と自己二ハプテン化ワクチンとの組み合わせを含む組成物で固形腫瘍を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、卵巣がん、子宮がん、膣がん、外陰部がん、及び子宮内膜がんからなる群から選択される。
【０１１７】
[00117]  免疫チェックポイント阻害剤及び自己二ハプテン化ワクチンの各々の用量は、固形腫瘍細胞と、マクロファージ、単球、マスト細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、骨髄由来サプレッサー細胞、制御性Ｂ細胞、好中球、樹状細胞、及び線維芽細胞からなる群から選択される少なくとも１つの微小環境との間のシグナル伝達を阻害するのに有効である程度である。いくつかの実施形態では、本発明は、膵がん、乳がん、卵巣がん、メラノーマ、肺がん、扁平上皮がん、例えば、頭頚部がん、及び結腸直腸がんを治療する方法を提供する。
【０１１８】
[00118]  本発明の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明される一方で、かかる実施形態は、あくまで例として提示され、本発明の範囲を限定することは意図されない。本発明を実施する場合、本発明の説明された実施形態に対する様々な選択肢が利用されてもよい。したがって、添付の特許請求の範囲の精神及び範囲は、本明細書中に含まれる好ましいバージョンの説明に限定されるべきではない。
【０１１９】
[00119]  本明細書と同時に出願され、且つ本明細書とともに一般縦覧に公開されたすべての論文及び文書は、読者の関心の的である。すべてのかかる論文及び文書の内容は参照により本明細書中に援用される。（いずれかの添付の特許請求の範囲、要約、及び図面を含む）本明細書で開示されたすべての特徴は、特に明記されない限り、同一、相当又は類似する目的に寄与する代替的特徴によって置き換えられてもよい。したがって、特に明記されない限り、開示される各特徴は、あくまで一般的な一連の相当又は類似する特徴の一例である。
【実施例】
【０１２０】
実施例
[00120]  本明細書に包含される実施形態は、ここで以下の実施例を参照して説明される。これらの実施例は、あくまで例示を目的として提示され、本明細書に包含される開示内容は、決してこれらの実施例に限定されているものとして解釈されるべきでないばかりか、本明細書に提供される教示内容の結果として明白になるありとあらゆるバリエーションを包含するように解釈される必要がある。
【０１２１】
実施例１．自己二ハプテン化腫瘍ワクチンの調製
新しい腫瘍サンプルの処理
[00121]  新しい切除された腫瘍サンプルを、２０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを有する約１５０ｍｌのハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）を有する滅菌使い捨て容器内に入れる。腫瘍サンプルをさらに処理するまで４℃で貯蔵する。サンプルは、さらなる処理を開始させる前、決して約９６時間より長く貯蔵しない。
【０１２２】
[00122]  バイオセーフティーフード内で、腫瘍組織を分割し、次に機械的に解離させ、腫瘍細胞懸濁液を生成する。腫瘍細胞懸濁液を計数し、滅菌クライオバイアルにアリコートし、コントロールレートフリーザー内で凍結させ、液体窒素中で貯蔵する。
【０１２３】
二ハプテン化
[00123]  細胞を解凍し、ＨＢＳＳを使用して洗浄する。次に、細胞に総線量が２５００ｃＧｙのγ線を照射する。次に、不活化細胞を２つの等しい一定分量に分割する。第１の一定分量は、ＤＮＰでジフルオロニトロベンゼン（ＤＮＦＢ）との３０分のインキュベーションにより修飾する。第２の一定分量は、スルファニル酸（ＳＡ）でＳＡのジアゾニウム塩との５分のインキュベーションにより修飾する。ハプテン化細胞をＨＢＳＳで洗浄し、計数し、最終濃度が約３７．５％のエタノールで約１０分間固定する。
【０１２４】
凍結保存
[00124]  各一定分量からのハプテン化細胞を組み合わせ、計数し、アリコートし、ＨＢＳＳ中、約７％スクロース及び約１０％ヒト血清アルブミンを含む凍結保存培地中で凍結させる。次に、ワクチンの一定分量を凍結させ、投与が必要になるまで液体窒素中で貯蔵する。
【０１２５】
実施例２  個別化された診断検査
[00125]  個別化された診断検査は、自己個別化腫瘍ワクチン（autologous personalized tumor vaccine）に対する遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応を評価することと、それを陰性対照と比較することと、を含む。
【０１２６】
[00126]  ＤＴＨ反応を誘発する試薬が患者自身の腫瘍組織を使用して作製された自己個別化腫瘍ワクチンであることから、診断は個別化される。
【０１２７】
[00127]   診断検査用に、患者の腕の外側表面上の皮膚の領域を選択する。この領域を検査領域と称する。典型的にはハンクス平衡塩類溶液及びヒト血清卵白を含む陰性対照を皮内に注射し、小疱を形成させる。隣接領域内に、約３×１０６個の細胞の自己個別化腫瘍ワクチンを皮内注射し、小疱を形成させる。
【０１２８】
[00128]  約４８時間後、検査領域を目視検査し、陽性対照における硬結、膨疹及び紅斑の直径を測定する。自己個別化腫瘍ワクチン注射部位における硬結、膨疹及び紅斑の直径を測定する。陽性応答は、直径が少なくとも５ｍｍである自己腫瘍ワクチンに起因する硬結である。
【０１２９】
[00129]  図１は、典型的な陽性のワクチン後遅延型過敏症応答を示す。
【０１３０】
[00130]  ＤＴＨ診断応答を、ワクチンの初回投与を実施する前に実施されたベースラインＤＴＨ応答と比較する。典型的には、このベースラインＤＴＨの評価は、個別化自己二ハプテン化ワクチンの初回投与を実施する約１４〜２１日前に実施する。この応答は、ベースラインＤＴＨ応答と称する。
【０１３１】
[00131]  ＤＴＨ応答は、初回ワクチン投与後の約１０週目と免疫チェックポイント阻害剤の初回投与前に再評価する。ＤＴＨ応答は、初回ワクチン投与後の約２８週目に再評価する。
【０１３２】
実施例３．典型的な同時投与スケジュール
[00132]  下表は、二ハプテン化ワクチン及び免疫チェックポイント阻害剤、本実施例ではキイトルーダ（商標）（ペンブロリズマブ）における例示的な投与スケジュールを示す。
【０１３３】
【表１】
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【０１３４】
実施例４．併用療法臨床試験
[00133]  記載された臨床試験は、二ハプテン化腫瘍ワクチン及び免疫チェックポイント阻害剤であるヤーボイ（商標）（イピリムマブ）の組み合わせの有効性を比較する。これは、測定可能な転移を伴う転移性卵巣がんを有する患者における第ＩＩＩ相無作為化プラセボ対照二重盲検多施設試験である。スクリーニングに適格であるように、患者は治療的介入として手術を受けており、ワクチンの調製にとって十分な量の卵巣腫瘍細胞が得られる。
【０１３５】
[00134]  患者を、二重盲検様式で、能動的ワクチン又はプラセボワクチンに２：１比（能動的ワクチン：プラセボワクチン）で割り当てる。能動的ワクチンの用量は、１２±８×１０６個の二ハプテン化自己メラノーマ腫瘍細胞である。プラセボワクチンは、専ら希釈剤からなる。能動的ワクチン又はプラセボワクチンの初回投与はＢＣＧなしに実施し、続いて低用量のシクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２、静脈内）を投与する。カルメット−ゲラン桿菌（Bacillus of Calmette and Guerin）（BCG）と混合された能動的ワクチン又はプラセボワクチンの、無作為化群に応じた後続投与は、毎週、少なくとも６週間実施する。少なくとも４用量のヤーボイ（商標）を、最終ワクチン投与の約３週後からすべての患者に投与する。この時点は約１０週目である。ヤーボイ（商標）は、１０ｍｇ／ｋｇで９０分にわたり３週ごとに静脈内に４回投与、続いて１０ｍｇ／ｋｇで１２週ごとに最大３年間、投与する。毒性が生じる場合、ヤーボイ（商標）の投与を遅延ではなく、省略する。
【０１３６】
[00135]  患者は、２４週目と２５週目との間、改定されたRECIST基準により、抗腫瘍応答について評価する。試験に留まる６か月時点の患者は、追加的な単回ブースター用量でＢＣＧと混合された能動的ワクチン又はプラセボワクチンを受ける。このブースターに続いて、ヤーボイ（商標）を１２週ごとに最大３年間投与する。抗腫瘍応答についての２つのさらなる評価を９か月後と１年後に実施する。次に、患者は、潜在的には追加的治療を必要とする進行性疾患（ＰＤ）の証拠が出るまで、腫瘍状態及び有害事象について定期的に評価される。ＰＤを伴わない患者は、最大５年間、試験に留まる。
【図１−Ａ】
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【図１−Ｂ】
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【国際調査報告】
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