(57)【要約】本発明は、自閉症スペクトラム障害を治療または予防するためのＰＤＥ１０Ａ阻害剤の使用である。特に、有効量の１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩を哺乳動物に投与することを含む、自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害を治療または予防する方法である。さらには、自閉症スペクトラム障害の治療または予防のための医薬、および自閉症スペクトラム障害の治療または予防のための医薬の製造におけるＰＤＥ１０Ａ阻害剤の使用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のＰＤＥ１０Ａ阻害剤を哺乳動物に投与することを含む、自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害を治療または予防する方法。
【請求項２】
ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
自閉症スペクトラム障害が、ＣＤＫＬ５欠損症である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
自閉症スペクトラム障害が、脆弱性Ｘ症候群である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＰＤＥ１０Ａ阻害剤と共に第２活性成分を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
有効量の１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩を哺乳動物に投与することを含む、ＣＤＫＬ５欠損症を治療または予防する方法。
【請求項７】
有効量の１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩を哺乳動物に投与することを含む、脆弱性Ｘ症候群を治療または予防する方法。
【請求項８】
自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害の治療または予防に使用するための、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
【請求項９】
ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩である、請求項８に記載のＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
【請求項１０】
自閉症スペクトラム障害が、ＣＤＫＬ５欠損症である、請求項８に記載のＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
【請求項１１】
自閉症スペクトラム障害が、脆弱性Ｘ症候群である、請求項８に記載のＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
【請求項１２】
ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、第２活性成分と組み合わせて使用される、請求項８に記載のＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
【請求項１３】
ＣＤＫＬ５欠損症の治療または予防に使用するための、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩。
【請求項１４】
脆弱性Ｘ症候群の治療または予防に使用するための、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩。
【請求項１５】
自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害の治療または予防のための医薬の製造における、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤の使用。
【請求項１６】
ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
自閉症スペクトラム障害が、ＣＤＫＬ５欠損症である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１８】
自閉症スペクトラム障害が、脆弱性Ｘ症候群である、請求項１５に記載の使用。
【請求項１９】
医薬が第２活性成分をさらに含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項２０】
ＣＤＫＬ５欠損症の治療または予防のための医薬の製造における、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩の使用。
【請求項２１】
脆弱性Ｘ症候群の治療または予防のための医薬の製造における、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自閉症スペクトラム障害を治療または予防するためのバリポデクト（Ｂａｌｉｐｏｄｅｃｔ）に関する。
【０００２】
（発明の背景）
自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）は、コミュニケーションと行動に影響を与える発達障害である。自閉症はどの年齢でも診断し得るが、症状は一般的に生後２年以内に現れるため、「発達障害」と言われている。ＡＳＤは、自閉症の観点から全体的な表現型を共有している。ＡＳＤを持つ人々は、社会的コミュニケーションと相互作用、会話、制限された興味、および反復的行動に困難を抱えており、多動性および／または発作のような行動上の問題をしばしば抱えている。ＡＳＤは、例えば、自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害を含む。
【０００３】
特にＣＤＫＬ５欠損症は、ＣＤＫＬ５遺伝子（Ｘｐ２２．１３）の機能変異の喪失に起因する稀な神経発達障害である。ＣＤＫＬ５は「サイクリン依存性キナーゼ様５」の略語である。ＣＤＫＬ５遺伝子は、正常な脳の発達に不可欠なタンパクを作る指示を与える。「早期乳児てんかん性脳症２」とも呼ばれるＣＤＫＬ５欠損症は、発作の早期発症（生後５か月未満）を引き起こし得、レット症候群に類似している。ＣＤＫＬ５欠損症は、発話の欠如、睡眠障害、手の常同行動、頭の成長の鈍化、運動制御の低下および重度の精神遅滞を伴う知的障害も引き起こし得る。ＣＤＫＬ５遺伝子はＸ染色体上にある（女性には２つのＸ染色体があり、男性には１つのＸ染色体と１つのＹ染色体がある）ため、この障害はＸ連鎖優性であり、女性で罹患率がより高い。文書化された症例は約１６００あるが、これらの数は遺伝子スクリーニングにより増加すると予想される。現在、すべての患者に対する疾患修飾療法、非発作症状からの治療、および難治性発作の治療が必要とされている。
【０００４】
脆弱Ｘ症候群（「ＦＸＳ」）は、Ｘ染色体上のＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）遺伝子の変異に起因する遺伝子疾患である。ＦＭＲ１は、脳に一般的に見られ、かつ認知発達に不可欠なタンパクＦＭＲＰ（脆弱Ｘ精神遅滞タンパク）をコードする。ＦＭＲ１のプロモーター領域でのトリヌクレオチドリピート伸長は、ＦＭＲＰ産生の転写サイレンシングを引き起こす。ＦＭＲ１での広範なリピート伸長は、この部位での高メチル化により、染色体の外観収縮を引き起こす。ＦＭＲＰは、興奮性シナプスの発達と機能に重要なタンパクの翻訳を負に調節すると考えられている。ＦＭＲＰは、脳のｍＲＮＡの約４％の翻訳を調節すると推定される。ＦＸＳ、ＦＸＴＡＳ（脆弱Ｘ振戦運動失調症候群）およびＦＸＰＯＩ（脆弱Ｘ関連早期卵巣不全）の表現型には重複がある。https://www.nimh.nih.gov/labs-at-nimh/research-areas/clinics-and-labs/snpm/fragile-x-syndrome.shtml; Jonathan Ting et al., Nat. Med., 2011, 17, 1352; and Reymundo Lozano et al., Intractable Rare Dis Res. 2014, 3, 134を参照のこと。
【０００５】
ＦＸＳは、知的障害、行動および学習の課題、および種々の身体的特徴を引き起こす。それは男性でより一般的でより重症であるが、女性でも発生する。ＦＸＳは、不安症やＡＤＨＤのような多動性行動に関連しており、発作は男性の１５％、女性の５％で発生する。会話と言語の欠陥は２歳までに明らかとなる。身体的特徴には、患者の５０％で狭い顔と柔軟な指が含まれる。ＦＸＳは臨床の遺伝子検査によって診断される。未熟児はリスクがより高い。現在、ＦＸＳを治療する治療法はない。一部の子供たちは、ＡＤＤ、ＡＤＨＤおよびその他の注意欠陥を治療する医薬の恩恵を受けている。全般性不安障害、社会不安障害、ＯＣＤおよびその他の固執性障害を経験している他の子供たちは、様々なタイプの抗不安薬の恩恵を受け得る。他の治療法には行動療法が含まれる。National Fragile X Foundation、https：//fragilex.org/を参照のこと。
【０００６】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、２１の遺伝子によってコードされ、かつ構造的および機能的特性に従って１１の異なるファミリーに細分される酵素のスーパーファミリーである。これらの酵素は、遍在する細胞内セカンドメッセンジャーである環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）および環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）を代謝的に不活性化し；ＰＤＥは、３’−エステル結合の加水分解を選択的に触媒して、不活性な５’−一リン酸を形成する。基質特異性に基づいて、ＰＤＥファミリーはさらに３つのグループに分類できる：ｉ）ｃＡＭＰ−ＰＤＥ（ＰＤＥ４、ＰＤＥ７、ＰＤＥ８）、ｉｉ）ｃＧＭＰ−ＰＤＥ（ＰＤＥ５、ＰＤＥ６およびＰＤＥ９）、およびｉｉｉ）デュアル基質ＰＤＥ（ＰＤＥ１、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３、ＰＤＥ１０およびＰＤＥ１１）。
【０００７】
ｃＡＭＰとｃＧＭＰは、炎症誘発性メディエーターの産生と作用、イオンチャネル機能、筋肉弛緩、学習と記憶形成、分化、アポトーシス、脂質生成、グリコーゲン分解および糖新生のような、事実上すべての生理学的プロセスの調節に関与している。特に、ニューロンでは、これらのセカンドメッセンジャーは、シナプス伝達の調節、ならびにニューロンの分化および生存において重要な役割を果たす（Nat. Rev. Drug Discov. 2006, vol. 5: 660-670）。ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰによるこれらのプロセスの調節には、プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）およびプロテインキナーゼＧ（ＰＫＧ）の活性化が伴い、これらは、転写因子、イオンチャネル、および種々の生理学的プロセスを調節する受容体を含む、種々の基質をリン酸化する。細胞内ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ濃度は、細胞外シグナル伝達およびＰＤＥによる分解に応答するアデニルおよびグアニルシクラーゼの調節により、時間的、空間的および機能的に区分化されると思われる。Circ. Res. 2007, vol. 100(7): 950-9667を参照のこと。ＰＤＥは、細胞内の環状ヌクレオチドｃＡＭＰおよびｃＧＭＰを分解する唯一の手段を提供し、よってＰＤＥは環状ヌクレオチドシグナル伝達において重要な役割を果たす。これにより、ＰＤＥは種々の治療薬の有望なターゲットとなり得るだろう。
【０００８】
ホスホジエステラーゼ１０Ａ（ＰＤＥ１０Ａ）は、１９９９年に３つの独立したグループによって発見された（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, vol. 96: 8991-8996, J. Biol. Chem. 1999, vol. 274: 18438-18445, Gene 1999, vol. 234: 109-117）。発現研究は、ＰＤＥ１０Ａがすべての既知のＰＤＥファミリーの中で最も制限された分布を有し；ＰＤＥ１０Ａ  ｍＲＮＡは、脳と精巣でのみより高度に発現することを示した（Eur. J. Biochem. 1999, vol. 266: 1118-1127, J. Biol. Chem. 1999, vol. 274: 18438-18445）。脳では、ＰＤＥ１０ＡのｍＲＮＡとタンパクは、線条体の中型有棘ニューロン（ＭＳＮ）により高度に豊富である（Eur. J. Biochem. 1999, vol. 266: 1118-1127, Brain Res. 2003, vol. 985: 113-126）。ＭＳＮは２つのグループに分類される：直接（線条体黒質）経路に関与するＤ１ドーパミン受容体を発現するＭＳＮと、間接（線条体淡蒼球）経路に関与するＤ２ドーパミン受容体を発現するＭＳＮである。直接経路の機能は計画と実行であるが、間接経路は行動活性化のブレーキとして機能する。ＰＤＥ１０Ａは両方のＭＳＮで発現するため、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤はこれらの経路の両方を活性化し得るだろう。現在の医薬であるＤ２またはＤ２／５−ＨＴ２Ａ拮抗薬の抗精神病の有効性は、主に線条体の間接経路の活性化に由来する。ＰＤＥ１０Ａ阻害剤はこの経路を活性化できるため、このことはＰＤＥ１０Ａ阻害剤が抗精神病薬として有望であることを示唆している。Ｄ２拮抗薬による脳内の過剰なＤ２受容体拮抗作用は、錐体外路系の副作用と高プロラクチン血症の問題を引き起こす。しかし、ＰＤＥ１０Ａの発現は脳内のこれらの線条体経路に限定されるため、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤による副作用は、現在のＤ２拮抗薬と比較して弱いと予想された。高プロラクチン血症に関しては、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤は、下垂体におけるＤ２受容体拮抗作用の欠如により、プロラクチンの上昇を引き起こさないだろう。さらに、直接経路にＰＤＥ１０Ａが存在すると、ＰＤＥ１０Ａ阻害が現在のＤ２拮抗薬に対していくらか有利になる可能性があり；直接経路は望ましい作用を促進すると考えられており、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤によるこの経路の活性化は、過剰なＤ２受容体拮抗作用によって誘発される錐体外路の症状を和らげ得る。さらに、この経路の活性化は、線条体−視床の流出を促進して、手順戦略の実行を促進させ得るだろう。さらに、ドーパミンおよび／または他の神経伝達物質受容体を遮断せずにセカンドメッセンジャーレベルを高めることもまた、現在の抗精神病薬と比較して、有害な副作用（例えば、高プロラクチン血症および体重増加）がより少なく治療上の利点を提供し得る。脳内のこのユニークな分布と機能は、ＰＤＥ１０Ａが神経障害の治療のための重要な新しい標的であることを示している。
【０００９】
ＰＤＥ１０Ａ阻害剤は、例えば、ＷＯ２００６／０７２８２８、ＷＯ２００８／００１１８２、ＷＯ２００７／１３７８１９、ＷＯ２００７／１３７８２０、ＷＯ２００９／０６８２４６、ＷＯ２００９／０６８３２０、ＷＯ２００９／０７０５８３、ＷＯ２００９／０７０５８４、ＷＯ２００７／０８５９５４、ＷＯ２００７／０２２２８０、ＷＯ２００７／０９６７４３、ＷＯ２００７／１０３３７０、ＷＯ２００８／０２０３０２、ＷＯ２００８／００６３７２、ＷＯ２００９／０３６７６６、ＷＯ２００６／０２８９５７、ＷＯ２００７／０９８１６９、ＷＯ２００７／０９８２１４、ＷＯ２００７／１０３５５４、ＷＯ２００９／０２５８２３、ＷＯ２００９／０２５８３９、ＷＯ２００７／１００８８０、ＷＯ２００８／００４１１７、ＷＯ２００７／０８２５４６、ＵＳ特許Ｎｏ．９，９９４，５９０、ＵＳ特許Ｎｏ．９，９３８，２６９およびＵＳ２００７／０１５５７７９で報告されている。
【００１０】
特に、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤は、ＷＯ２０１０／０９０７３７に開示されており、その全体は本明細書に組み込まれる。より具体的には、ＷＯ２０１０／０９０７３７は、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オン（以下、「化合物Ａ」）およびその塩を開示している。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、自閉症スペクトラム障害を治療または予防するためのＰＤＥ１０Ａ阻害剤の使用である。より具体的には、有効量のＰＤＥ１０Ａ阻害剤を哺乳動物に投与することを含む、自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害を治療または予防する方法である。
より具体的には、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩（化合物Ａ）またはその塩である、自閉症スペクトラム障害を治療または予防する方法である。
より具体的には、自閉症スペクトラム障害が、ＣＤＫＬ５欠損症または脆弱性Ｘ症候群である。
当該方法は、自閉症スペクトラム障害を治療または予防するための第２活性成分をＰＤＥ１０Ａ阻害剤と共に投与することをさらに含む。
従って、本発明は以下を提供する。
１．  有効量のＰＤＥ１０Ａ阻害剤を哺乳動物に投与することを含む、自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害を治療または予防する方法。
２．  ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩である、１に記載の方法。
３．  自閉症スペクトラム障害が、ＣＤＫＬ５欠損症である、１に記載の方法。
４．  自閉症スペクトラム障害が、脆弱性Ｘ症候群である、１に記載の方法。
５．  ＰＤＥ１０Ａ阻害剤と共に第２活性成分を投与することをさらに含む、１に記載の方法。
６．  有効量の１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩を哺乳動物に投与することを含む、ＣＤＫＬ５欠損症を治療または予防する方法。
７．  有効量の１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩を哺乳動物に投与することを含む、脆弱性Ｘ症候群を治療または予防する方法。
８．  自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害の治療または予防に使用するための、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
９．  ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩である、８に記載のＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
１０．  自閉症スペクトラム障害が、ＣＤＫＬ５欠損症である、８に記載のＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
１１．  自閉症スペクトラム障害が、脆弱性Ｘ症候群である、８に記載のＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
１２．  ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、第２活性成分と組み合わせて使用される、８から１１のいずれかに記載のＰＤＥ１０Ａ阻害剤。
１３．  ＣＤＫＬ５欠損症の治療または予防に使用するための、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩。
１４．  脆弱性Ｘ症候群の治療または予防に使用するための、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩。
１５．  自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害の治療または予防のための医薬の製造における、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤の使用。
１６．  ＰＤＥ１０Ａ阻害剤が、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩である、１５に記載の使用。
１７．  自閉症スペクトラム障害が、ＣＤＫＬ５欠損症である、１５に記載の使用。
１８．  自閉症スペクトラム障害が、脆弱性Ｘ症候群である、１５に記載の使用。
１９．  医薬が第２活性成分をさらに含む、１５〜１８のいずれかに記載の使用。
２０．  ＣＤＫＬ５欠損症の治療または予防のための医薬の製造における、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩の使用。
２１．  脆弱性Ｘ症候群の治療または予防のための医薬の製造における、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩の使用。
２２．  ＰＤＥ１０Ａ阻害剤を含む、自閉性障害、ＣＤＫＬ５欠損症、小児期崩壊性障害、レット症候群、脆弱性Ｘ症候群、クリーフストラ症候群、ピット−ホプキンス症候群、アンジェルマン症候群、歌舞伎症候群、アスペルガー症候群、ヘラー症候群および広汎性発達障害からなる群から選ばれる自閉症スペクトラム障害の治療または予防のための医薬。
２３．  阻害剤が、１−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩である、２２に記載の医薬。
２４．  自閉症スペクトラム障害が、ＣＤＫＬ５欠損症である、２２に記載の医薬。
２５．  自閉症スペクトラム障害が、脆弱性Ｘ症候群である、２２に記載の医薬。
２６．  医薬が、第２活性成分をさらに含む、２２〜５のいずれかに記載の医薬。
２７．  １−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩を含む、ＣＤＫＬ５欠損症の治療または予防のための医薬。
２８．  １−［２−フルオロ−４−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）フェニル］−５−メトキシ−３−（１−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）ピリダジン−４（１Ｈ）−オンまたはその塩を含む、脆弱性Ｘ症候群の治療または予防のための医薬。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、ＣＤＫＬ５ノックアウトマウスモデルにおける後肢クラスピング（抱接（amplexus））試験の結果を示す。
【００１３】
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、ＣＤＫＬ５ノックアウトマウスモデルにおけるオープンフィールド試験の結果を示す。
【００１４】
【図３】図３は、ＣＤＫＬ５における化合物Ａの提案の作用機序を示す。
【００１５】
【図４】図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃは、化合物ＡのＥＬＩＳＡアッセイからの、海馬、小脳および皮質におけるＢＤＮＦタンパクの発現を示す。
【００１６】
【図５】図５は、脆弱性Ｘ症候群のＦＭＲ１マウスモデル（「ＦＸＳマウスモデル」）における発作の発症までの潜時に対する６−メチル−２−（フェニルエチニル）ピリジン塩酸塩（「ＭＰＥＰ」）および化合物Ａの効果を示す。
【００１７】
【図６】図６は、ＦＸＳマウスモデルで発作を起こしたマウスの割合に対するＭＰＥＰと化合物Ａの効果を示す。
【００１８】
【図７】図７は、ＦＸＳマウスモデルのオープンフィールド試験で移動した総距離に対する化合物Ａの効果を示す。
【００１９】
【図８】図８は、ＦＸＳマウスモデルのオープンフィールド試験中に移動した距離に対する化合物Ａの効果の時間経過を示す。
【００２０】
【図９】図９は、ＦＸＳマウスモデルの恐怖文脈条件付けに対する化合物Ａの効果、特に５分の試験期間中の平均すくみ行動を示す。
【００２１】
【図１０】図１０は、ＦＸＳマウスモデルの恐怖文脈条件付けに対する化合物Ａの効果、特に５分の試験期間中のすくみ行動の時間経過を示す。
【００２２】
【図１１】図１１は、ＦＸＳマウスモデルの恐怖手がかり条件付けに対する化合物Ａの効果を示す。
【００２３】
【図１２】図１２は、Catherine Choi et al., J. Neurosci. 2015, 35, 396から採用された、ＦＸＳにおける化合物Ａの提案された作用機序を示す。
【００２４】
（発明の詳細な説明）
本発明者は、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤、すなわち化合物ＡのようなＰＤＥ１０Ａ阻害活性を有する化合物が、ＣＤＫＬ５欠損症および脆弱Ｘ症候群のような自閉症スペクトラム障害を治療または予防できることを発見した。
【００２５】
化合物ＡのようなＰＤＥ１０Ａ阻害活性を有する化合物が塩である場合、例えば、金属塩、アンモニウム塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩が含まれ得る。金属塩の好適な例としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩等のアルカリ土類金属塩；およびアルミニウム塩が挙げられる。有機塩基との塩の好適な例としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６−ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン等との塩が挙げられる。無機酸との塩の好適な例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等との塩が挙げられる。有機酸との塩の好適な例としては、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等との塩が挙げられる。塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、アルギニン、リジン、オルニチン等との塩が挙げられる。酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、アスパラギン酸、グルタミン酸等との塩が挙げられる。このうち、薬学的に許容し得る塩が好ましい。例えば、化合物内に酸性官能基が存在する場合には、アルカリ金属塩（例、ナトリウム塩等）およびアルカリ土類金属塩（例、カルシウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩等）を含む無機塩およびアンモニウム塩が好ましい。一方、化合物内に塩基性官能基が存在する場合には、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等の無機酸との塩、または酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸との塩が好ましい。
【００２６】
化合物ＡのようなＰＤＥ１０Ａ阻害活性を有する化合物は安全であり、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、サル、マウス、ラット等の哺乳動物、特にヒトにおける自閉症スペクトラム障害およびその症状を治療および予防する方法において有用である。
【００２７】
化合物ＡのようなＰＤＥ１０Ａ阻害活性を有する化合物は、医薬製剤を製造するための自体公知の方法（例えば、日本薬局方に記載されている方法）に従って製造される剤形、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠、舌下錠、口腔内崩壊錠およびバッカル錠を含む）、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤およびマイクロカプセル剤を含む）、トローチ剤、シロップ剤、液剤、乳剤、放出制御製剤（例、速放性製剤、徐放性製剤、徐放性マイクロカプセル剤）、エアゾール剤、フィルム剤（例、口腔内崩壊フィルム、口腔粘膜貼付フィルム）、注射剤（例、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤）、点滴剤、経皮吸収型製剤、軟膏剤、ローション剤、貼付剤、坐剤（例、肛門坐剤、膣坐剤）、ペレット、経鼻剤、経肺剤（吸入剤）、点眼剤等として、経口または非経口経路（例、静脈内、筋肉内、皮下、臓器内、鼻腔内、皮内、点眼、脳内、直腸内、膣内、腹腔内、病巣に直接）で投与し得る。
【００２８】
医薬製剤（医薬組成物または薬剤ともいう）は、医薬的に許容される担体を含み得る。化合物ＡのようなＰＤＥ１０Ａ阻害活性を有する化合物の医薬的に許容される担体として、慣用の有機または無機担体物質が製剤原料として使用される。担体は、賦形剤、滑沢剤、結合剤および崩壊剤として固形製剤に添加され、可溶化剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤および無痛化剤として液状製剤に添加される。必要に応じ、防腐剤、酸化防止剤、着色剤、甘味料のような配合添加剤を使用し得る。
【００２９】
ＣＤＫＬ５欠損症または脆弱Ｘ症候群のような自閉症スペクトラム障害を治療または予防する方法における、化合物ＡのようなＰＤＥ１０Ａ阻害活性を有する化合物の医薬組成物中の含有量は、本発明の化合物の剤形、投与量等によって異なる。例えば、含有量は、組成物の全量に対して、約０．０１〜１００重量％の範囲、好ましくは０．１〜９５重量％の範囲である。
【００３０】
投与量は、注射対象、投与経路、対照疾患、症状等によって異なる。例えば、ＣＤＫＬ５欠損症または脆弱Ｘ症候群の患者（成人、体重約６０ｋｇ）に経口投与する場合、通常、単回投与は、約０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．２〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは約０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり、この投与量は、好ましくは１日１回または１日数回（例えば、３回）投与される。
【００３１】
当該化合物は、単一の活性剤として、または自閉症スペクトラム障害の治療または予防に使用される他剤のような、他の薬剤（第２の有効成分ともいう）と組み合わせて投与し得る。そのような組み合わせにおいては、各有効成分は、それらの通常の投与量範囲に従って、またはそれらの通常の投与量範囲未満の用量のいずれかで投与し得、同時にまたは連続して投与し得る。
【実施例】
【００３２】
実施例を参照して本発明について以下に詳細に説明する。これらは単なる例であるため、本発明はこれらの例に限定されず、本発明は、本発明の範囲から逸脱しない範囲で改変し得る。
【００３３】
実施例１：後肢クラスピング（抱接（amplexus））
後肢クラスピング試験は、Wang et al., PNAS, vol. 109, no. 52, pp. 21516-21521 (2012)によって概説された手順に従って実施した。試験は、ノックアウトマウスモデルで行う。二分間の試行のためにマウスを吊るす。クラスピングが２秒間起こるなら、マウスは、神経障害であるＣＤＫＬ５欠損に陽性である。Ｗａｎｇらは、ＣＤＫＬ５変異マウスに注目したが、定量化を行わなかった。Tang et al., J. Neurosci. 37(31):7420-7437 (2017)は、１７／１８（９４％）の半雄性マウスがクラスプ表現型に陽性であると報告した。
以下のグループのマウスを比較した：
グループ（１）Ｃ５７ＢＬ／６マウスとビヒクル
グループ（２）ＣＤＫＬ５雄性ヘミ接合性（−／Ｙ）マウスとビヒクル
グループ（３）ＣＤＫＬ５雄性ヘミ接合性（−／Ｙ）マウスとＰＤＥ１０Ａ阻害剤（化合物Ａ）
アッセイ開始前の７日間、その後アッセイ期間通してずっと、阻害剤化合物（化合物Ａ、５ｍｇ／ｋｇを１日１回）またはビヒクルで、強制経口投与でマウスを処理した。マウスが８−１０週齢のとき、神経行動アッセイを行った。試験の最後に組織を回収し、血漿およびＣＮＳ  ＰＫを測定した。
グループ（３）ＣＤＫＬ５／−Ｙマウスは、ＰＤＥ１０Ａ阻害剤である化合物Ａで処理した。
結果を図１に示す。クラスピングが２秒間起こるなら、マウスは、ＣＤＫＬ５欠損に陽性である。グループ（３）は、ビヒクルのみを与えたグループ（２）ＣＤＫＬ５／−Ｙマウスと比較して、クラスピングなしのパーセンテージを増加させた。
【００３４】
実施例２：オープンフィールド試験
オープンフィールドアリーナでの自発的な活動は、一般的な活動と歩行を評価するのに一般的に使用される。１５分間の試行のためにマウスをアリーナの中央に置いた。水平、垂直（後肢で立つ）および中央の活動は従属変数である。ＣＤＫＬ５／−Ｙマウスは、オープンフィールドで水平方向の活動の増加を示し、このことは一般的な運動機能の障害（多動性）を示唆している。実施例１のグループ（１）から（３）に対応するマウスを比較し、実施例１と同じ方法で化合物Ａまたはビヒクルを与えた。
オープンフィールド試験の結果を図２Ａおよび２Ｂに示す。図２Ａは、０〜１５分の１分あたりの結果を示す。図２Ｂは、５〜１５分までの５分間隔での結果を示す。化合物Ａを投与したグループ（３）のマウスは、グループ（１）および（２）と比較して、ＣＤＫＬ５−／Ｙマウスがオープンフィールドを移動した総距離を有意に抑制した。従って、グループ（３）は多動性の減少を示した。
【００３５】
実施例１および２（後肢クラスピング試験およびオープンフィールド試験）の結果は、化合物ＡがＣＤＫＬ５マウスモデルにおける運動障害の誘発を抑制することを示している。
【００３６】
実施例３：血漿および脳曝露分析
ＰＤＥ１０Ａ阻害剤のインビトロプロファイルは、ＣＤＫＬ５−／Ｙマウス用に作製した。
【００３７】
【表１】
2022501335.tif 000002
【００３８】
ＩＣ５０インビボ（１．１ｎｇ／ｍＬ）は、化合物Ａの目標血漿中濃度である。
【００３９】
以下の表１は、以下の手順下での化合物Ａ投与後のマウス血漿およびマウス脳における化合物Ａの濃度を示す。
動物：ＣＤＫＬ５−／Ｙマウス
経路：経口投与
投与量：５ｍｇ／ｋｇ
投与計画：１日1回
期間：１４日
時点：最終投与後２４時間
Ｎ＝６−７
【００４０】
【表２】
2022501335.tif 000003
【００４１】
表１中、「ＬＬＯＱ」は「定量下限」であり、アッセイの感度を示すのに使用される。血漿および脳のカラムの数値は、血漿の場合はｎｇ／ｍＬ、脳の場合はｎｇ／ｇである。
【００４２】
表１は、すべてのマウスの血漿中濃度が、化合物Ａの目標ＩＣ５０インビボ（１．１ｎｇ／ｍＬ）よりも高かったことを示している。ＣＤＫＬ５−／Ｙマウスにおける化合物Ａの血漿中濃度は、最終投与から２４時間後でも目標血漿中濃度を超えた。ＣＤＫＬ５−／Ｙマウスの脳内濃度は、正のターゲットエンゲージメント−薬力学（ＴＥ−ＰＤ）効果が期待されることを示唆した。有効性研究における薬物動態（ＰＫ）分析は、ＣＤＫＬ５−ＹにおけるＰＤＥ１０Ａ阻害剤である化合物Ａの正の有効性が合理的でメカニズムに基づいていることを示唆した。図３は、ＣＤＫＬ５における化合物Ａの提案の作用機序を示す。
【００４３】
要約すると、ＣＤＫＬ５雄性ヘミ接合性（−／Ｙ）マウスは、８−１０週齢で、全体的な活動または馴化の欠如（オープンフィールド試験で見られるような）およびクラスピング表現型の有意な増加を論証している。ＰＤＥ１０Ａ阻害剤である化合物Ａは、ＣＤＫＬ５雄性ヘミ接合性（−／Ｙ）マウスに見られる運動亢進を有意に正常化し、クラスピング行動を改善した。血漿および脳サンプルのＰＫ分析は、これらのコンパートメントでの化合物Ａの十分な曝露を示し、ターゲットエンゲージメントを示唆している。
【００４４】
実施例４：ＢＤＮＦアッセイ
海馬、小脳および皮質におけるＢＤＮＦタンパクの発現をＥＬＩＳＡによってアッセイした。結果を、それぞれ図４Ａ、図４Ｂおよび図４Ｃに示す。これらでは化合物Ａをアッセイした。
【００４５】
実施例５：脆弱Ｘ症候群のＦＭＲ１マウスモデルにおける聴原性発作の抑制
試験動物
雄性ＦＭＲ１ノックアウトマウスはPsychoGenicsで飼育した。研究期間中、マウスをＯＰＴＩ−Ｍｉｃｅ換気ケージに収容した。適切な健康と適合性を保証し、操作に関連する非特異的ストレスを最小限に抑えるために、研究の開始前に、すべてのマウスを環境に順応させ、検査し、取り扱い、そして体重を測定した。研究の過程では、１２／１２の明／暗サイクルを維持した。相対湿度を約５０％に維持しながら、室温を２０〜２３℃に維持した。研究期間中、食事と水を自由に与えた。各マウスは、治療グループ間でランダムに割り当てた。試験は、３週齢の動物の光サイクル段階の間実施した。
【００４６】
前処理
聴原性発作の前に、試験当日に３つのグループのマウスを以下のように前処理した。
グループ（１）：試験の１５０分前に、１０ｍＬ／ｋｇの投与量でビヒクルを経口投与した。
グループ（２）：６−メチル−２−（フェニルエチニル）ピリジンＨＣｌ（「ＭＰＥＰ」）（ＭＰＥＰはｍＧｌｕ５受容体拮抗薬である）（シグマアルドリッチ；３０ｍｇ／ｋｇ）を滅菌注射用生理食塩水に溶解し、試験の３０分前に、１０ｍＬ／ｋｇの投与量で腹腔内注射で投与した。
グループ（３）：化合物Ａ（５ｍｇ／ｋｇ）を０．５％メチルセルロースに溶解し、試験の１５０分前に、１０ｍＬ／ｋｇの投与量で経口投与した。
【００４７】
行動試験
前処理後、グループ（１）〜（３）のマウスを個別にPlexiglasチャンバーに入れ、１５秒間探索させた。次に、１２５ｄＢの音に曝した。観察者は、試験中、前処理条件を知らされなかった。マウスを、以下のように、５分の試験中のマウスの反応、潜時および発作強度に基づいて観察者によってスコア付けした：
０：無反応
１：激しいランニングとジャンプ
２：間代発作
３：強直間代発作
４：強直発作
５：呼吸停止
以下のエンドポイントが報告された。反応を示さないマウスには、データ分析の目的で３００秒の潜時スコアを与えた。
１．発作までの潜時（発作がない場合は最大３００秒）
２．発作の割合
３．発作スコア
【００４８】
結果
一元配置分散分析（「一元配置ＡＮＯＶＡ」）では、有意な治療効果が見られた。事後分析では、グループ（２）ＭＰＥＰおよびグループ（３）化合物Ａが、ビヒクルグループ（１）と比較して、発作までの潜時を増加させたことが示された。発作の発症までの潜時に対する効果を図５に示す。データは平均±ＳＥＭ（平均に対する標準誤差）として表す。＊ｐ＜０．０５は、ビヒクル治療グループ（１）と比較した有意差を示す。
Ｎ−１カイ二乗検定では、発作を減らすという有意な治療効果が見られた。事後分析では、グループ（２）ＭＰＥＰおよびグループ（３）化合物Ａが、ビヒクル処理グループ（１）と比較して、発作率を有意に低下させたことが示された。これらの効果を図６に示す。データは、捕まえたマウスのパーセントとして示す。＊ｐ＜０．０５は、ビヒクル治療グループ（１）と比較した有意差を示す。
【００４９】
実施例６：ＦＸＳのＦＭＲ１マウスモデルにおけるオープンフィールド試験
試験動物
雄性ＦＭＲ１ノックアウト（「ＫＯ」）マウスと野生型（「ＷＴ」）マウスをPsychoGenicsで飼育した。これらのマウスは、実施例５に従って取り扱い、選択した。しかしながら、オープンフィールド試験は、２週間の投与後、１０週齢で開始した。マウスの３つのグループを次のように試験した。
グループ（１）：ＷＴ−ビヒクルグループ：ビヒクルを１０ｍＬ／ｋｇの投与量で２週間経口投与した。試験当日、試験の１５０分前にビヒクルを投与した。
グループ（２）：ＦＭＲ１  ＫＯ−ビヒクルグループ：ビヒクルを１０ｍＬ／ｋｇの投与量で２週間経口投与した。試験当日、試験の１５０分前にビヒクルを投与した。
グループ（３）：ＦＭＲ１  ＫＯ−化合物Ａグループ：化合物Ａ（５ｍｇ／ｋｇ）を０．５％メチルセルロースに溶解し、１０ｍＬ／ｋｇの投与量で２週間経口投与した。試験当日、試験の１５０分前に化合物Ａを投与した。
【００５０】
試験条件および結果
赤外線光ビーム（１６×１６×１６）で囲まれたPlexiglas正方形チャンバー（２７．３×２７．３×２０．３ｃｍ；Med Associates Inc., St Albans, VT）で作られたオープンフィールドチャンバーを使用して、試験したマウスの水平および垂直活動を測定した。試験前に、マウスをチャンバーに入れ、実験室の条件に少なくとも１時間馴化させた。１５０分の前処理の後、６０分の試験期間中、マウスをチャンバーの中央に置いた。６０分後、マウスをホームケージに戻した。試験期間中、自発運動を５分間隔で測定し、総移動距離を測定した。
各グループの６０分の試験期間中にオープンフィールドを移動した総距離を図７に示す。データは平均±ＳＥＭとして表す。＊ｐ＜０．０５は、ＷＴ−ビヒクルグループ（１）と比較した有意差を示す。＃ｐ＜０．０５は、ＦＭＲ１  ＫＯ−ビヒクルグループ（２）と比較した有意差を示す。
グループ（１）〜（３）について、移動した距離に対する化合物Ａの効果の時間経過を図８に示す。データは平均±ＳＥＭとして表す。
図７および８の結果は、化合物ＡがＦＸＳマウスモデルに見られる多動性を抑制することを示している。
【００５１】
実施例７：ＦＸＳのＦＭＲ１マウスモデルにおける恐怖条件付け試験
試験
実施例６に記載のオープンフィールド試験終了後、恐怖条件付け試験を、Coulbourn Instruments (PA, USA)によって製造された恐怖条件付けシステムでグループ（１）〜（３）のマウスに対して実施した。
１日目に、マウスをコンディショニングチャンバーに入れ、２分間文脈に馴化させた（ＣＳ）。音を２０秒間与えた。ＣＳ終了から３０秒後に、フットショック（１秒、０．５ｍＡ）を与えた（ＵＳ）。ＣＳとＵＳのペアリングを、６０秒のペアリングの間隔で、合計３回繰り返した。マウスはさらに６０秒間コンディショニングチャンバーに留まり、その後ホームケージに戻った。
２日目の朝、マウスに文脈記憶の試験を行った。マウスをチャンバーに５分間入れた。２日目の午後、マウスに手がかり記憶の試験を行った。マウスをコンディショニングチャンバーに入れて、２分間文脈に馴化させた（プレ手がかり）。次に、ＣＳを６０秒の試行間隔で２０秒間に合計３回与えた。動きが全くないこととして定義されるすくみ行動は、ビデオシステムとFreezeViewソフトウェア（Coulbourn Instruments, PA, USA）で自動的に保存した。
【００５２】
結果
化合物Ａの効果を図９および１０に示す。５分の試験中の平均すくみを図９に示す。データは平均ＳＥＭとして表す。＊ｐ＜０．０５は、ＷＴ−ビヒクルグループ（１）と比較した相違を示す。
一元配置ＡＮＯＶＡでは、有意な治療効果が見られた。ＦＭＲ１  ＫＯ−ビヒクルグループ（２）は、ＷＴ−ビヒクルグループ（１）と比較して、すくみ行動の有意な減少を示した。
５分の試験中のすくみ行動の時間経過を図１０に示す。データはＳＥＭとして表す。＊ｐ＜０．０５は、ＷＴ−ビヒクルグループ（１）と比較した有意差を示す。＃ｐ＜０．０５は、ＦＭＲ１  ＫＯ−ビヒクルグループ（２）と比較した有意差を示す。〜ｐ＜０．０９は、ＷＴ−ビヒクルグループ（１）と比較した有意差を示す。
ビヒクル処理ＦＭＲ１マウス（グループ（２））は、ビヒクル処理ＷＴマウス（グループ（１））と比較して、３〜５分の試験中のすくみ反応の減少を示した。化合物Ａ処理マウス（グループ（３））は、ビヒクル処理ＷＴマウス（グループ（１））と比較して、２〜５分の間のすくみ反応の増加を示した。
【００５３】
恐怖手がかり条件付け試験中のすくみ行動に対する化合物Ａの効果を図１１に示す。データは平均ＳＥＭとして示す。＊ｐ＜０．０５は、ＷＴ−ビヒクルグループ（１）と比較した有意差を示す。＃ｐ＜０．０５は、ＦＭＲ１  ＫＯ−ビヒクルグループ（２）と比較した有意差を示す。〜ｐ＜０．０９は、ＦＭＲ１  ＫＯ−ビヒクルグループ（２）と比較した有意差を示す。
プレ手がかり中、ＡＮＯＶＡでは治療群間で有意差が見られなかった。手がかり反応中、ＡＮＯＶＡでは有意な治療効果が見られた。ビヒクル処置ＦＭＲ１マウス（グループ（２））は、ビヒクル処置ＷＴマウス（グループ（１））と比較して、すくみ行動の有意な減少を示した。化合物Ａ処理により、ＦＭＲ１マウスのすくみ反応が増加する強い傾向を示した（ｐ＝０．０６）。同様に、ポスト手がかり反応中、ＡＮＯＶＡでは有意な治療効果が見られた。ビヒクル処理ＦＭＲ１マウス（グループ（２））は、ビヒクル処理ＷＴマウス（グループ（１））と比較して、すくみ行動の有意な減少を示した。化合物Ａ処理により、ＦＭＲ１マウスのすくみ反応は増加した。
【００５４】
血漿および脳の回収
血漿および脳は、オープンフィールドおよび恐怖条件付け試験で試験したすべてのマウスから回収した。
血漿採取のために、マウスを断頭し、体幹血液をＫ２ＥＤＴＡチューブに採取し、短期間の保管のために氷上に置いた。採血から１５分以内に、チューブを３，０００ｇで１５分間、冷蔵遠心分離機で遠心分離した。血漿は、事前にラベル付けしたチューブに抽出した。サンプルは−８０℃で保管した。
脳の回収のために、以下の脳のサンプルを回収した。
グループ（１）：ＷＴ−ビヒクルグループ。脳を２つの半球に分けた。ＢＤＮＦ分析のために、片方の半球の重さを量り、ドライアイス上で凍結した。もう一方の半球は廃棄した。サンプルは−８０℃で保管した。
グループ（２）：ＫＯ−ビヒクルグループ。脳を２つの半球に分けた。ＢＤＮＦ分析のために、片方の半球の重さを量り、ドライアイス上で凍結した。もう一方の半球は廃棄した。サンプルは−８０℃で保管した。
グループ（３）：ＫＯ−化合物Ａグループ。脳を２つの半球に分けた。ＢＤＮＦ分析のために、片方の半球の重さを量り、ドライアイス上で凍結した。もう一方の半球は均質化し、ドライアイス上で凍結した。サンプルは−８０℃で保管した。
【００５５】
要約すると、実施例５〜７は、化合物Ａが高度に選択的なＰＤＥ１０Ａ阻害剤であり、環状ヌクレオチドレベル（ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ）を増加させることによって作用することを示している。化合物Ａは、（１）聴覚誘発性発作の抑制、（２）ＦＸＳマウスにおける運動亢進の抑制、および（３）恐怖手がかり条件付けおよび恐怖文脈条件付けアッセイ（恐怖手がかり条件付けで有意に）での認知の改善の点で、ＦＸＳマウスに見られる表現型を救う。
本出願は、米国で出願された米国仮出願Ｎｏ．６２／７３７，９８５を基礎としており、その内容は、本明細書に完全に包含され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図１】
2022501335.tif 000004
【図２】
2022501335.tif 000005
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2022501335.tif 000013
【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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