【手続補正書】
【提出日】平成22年7月30日(2010.7.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２５】
表７に要約される結果は、然るべきＩＨＨＮＶ鋳型が存在するとき、各プライマー／プローブセットについて然るべきサイズのアンプリコン産物が産生されたことを実証している。鋳型の最小検出レベルは、使用されるプライマー及びプローブに応じて５０コピー／ｒｘｎであった。鋳型を含まない試料は、検出可能な産物を産生しなかった。
増幅（ＣＴ）及びアンプリコン産物の形成は、鋳型の出発濃度の対数にそれぞれ反比例及び正比例した。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２６】
【表９】
2010501178.tif 000001
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２７】
以上、本発明を要約すると下記のとおりである。
１．配列番号１に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号１と完全に相補的な単離核酸分子。
２．配列番号２に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号２と完全に相補的な単離核酸分子。
３．配列番号３に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号３と完全に相補的な単離核酸分子。
４．配列番号４に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号４と完全に相補的な単離核酸分子。
５．配列番号５に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号５と完全に相補的な単離核酸分子。
６．配列番号６に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号６と完全に相補的な単離核酸分子。
７．配列番号７に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号７と完全に相補的な単離核酸分子。
８．配列番号８に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号８と完全に相補的な単離核酸分子。
９．ＩＨＨＮＶゲノム内の核酸の領域を増幅する核酸増幅反応をプライムする能力を有する、上記１〜８のいずれかに記載の２つの異なるＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の対。
１０．配列番号１及び２、配列番号３及び４、配列番号５及び６、配列番号７及び８、並びに配列番号１及び４からなる群から選択される、上記９に記載の２つの異なるＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の対。
１１．上記９に記載のＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の少なくとも１つの対を含むＩＨＨＮＶの検出用キット。
１２．耐熱性ポリメラーゼ、４つの異なるデオキシヌクレオチド三リン酸の混合物、核酸結合性蛍光分子、試料内部対照プライマーの少なくとも１つの対、少なくとも１つの鋳型内部対照及び鋳型内部対照プライマーの少なくとも１つの対、並びにＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の少なくとも１つの対により増幅可能なＩＨＨＮＶゲノム内の核酸の少なくとも１つの領域の一部分と相補的な配列を含むプローブからなる群から選択された少なくとも１つの試薬をさらに含む、上記１０に記載のＩＨＨＮＶの検出用キット。
１３．試料中のＩＨＨＮＶの存在を検出するための方法であって、
（ｉ）ＩＨＨＮＶを含むことが疑われる試料からＤＮＡを提供する工程、及び
（ii）好適なハイブリダイゼーション条件下で、上記１〜８のいずれかに記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列に由来するプローブにより上記ＤＮＡを探索する工程、
を含み、ハイブリダイズ可能な核酸断片が同定されると、それがＩＨＨＮＶの存在の確証となる、上記方法。
１４．単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列に由来するプローブが、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、及びそれらの完全相補配列からなる群から選択される、上記１３に記載の試料中のＩＨＨＮＶの存在を検出するための方法。
１５．プローブが３’末端に複製阻害部分を含む、上記１３に記載の方法。
１６．複製阻害部分が、ジデオキシヌクレオチド、３’デオキシヌクレオチド、ミスマッチヌクレオシド又はヌクレオチドの配列、３’リン酸基及び化学剤からなる群から選択される、上記１５に記載の方法。
１７．３’デオキシヌクレオチドがコルジセピンである、上記１６に記載の方法。
１８．試料中のＩＨＨＮＶの存在を検出するための方法であって、
（ｉ）ＩＨＨＮＶを含むことが疑われる試料からＤＮＡを提供する工程、及び
（ii）増幅産物が生成されるよう、上記９に記載のＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の少なくとも１つの対により上記ＤＮＡを増幅する工程、
を含み、増幅産物が存在すると、それがＩＨＨＮＶの存在の確証となる上記方法。
１９．（ii）の増幅工程がポリメラーゼ連鎖反応を用いて行われる、上記１８に記載の試料中のＩＨＨＮＶの存在を検出するための方法。
２０．（ii）の増幅工程が核酸結合性蛍光剤又は蛍光標識プローブの存在下で行われ、増幅産物の存在が蛍光検出を用いて確認される、上記１８に記載の試料中のＩＨＨＮＶの存在を検出するための方法。
２１．蛍光標識プローブが、配列番号１７及び配列番号１８からなる群から選択される、上記２０に記載の方法。
２２．試料内部対照プライマーの少なくとも１つの対が（ii）の増幅工程に含まれることにより試料内部対照産物が産生される、上記１８に記載の方法。
２３．試料内部対照プライマーの少なくとも１つの対が、配列番号１３、１４及び配列番号１５、１６からなる群から選択される、上記２２に記載の方法。
２４．鋳型内部対照プライマーの少なくとも１つの対及び少なくとも１つの鋳型内部対照が、（ii）の増幅工程に含まれることにより鋳型内部対照産物が産生される、上記１８に記載の方法。
２５．試料中のＩＨＨＮＶの量を定量するための方法であって、
（ｉ）ＩＨＨＮＶを含むことが疑われる試料からＤＮＡを提供する工程、
（ii）核酸結合性蛍光剤又は蛍光標識プローブの存在下での少なくとも変性温度と伸長温度との間の熱サイクリングによって、上記９に記載のＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の少なくとも１つの対により上記ＤＮＡを増幅する工程、
（iii）上記熱サイクリング中に上記核酸結合性蛍光剤又は上記蛍光標識プローブによ
り生成される蛍光量を測定する工程、
（iv）上記核酸結合性蛍光剤又は上記蛍光標識プローブにより生成された蛍光量が基礎値を上回る固定閾値に達するときの閾値サイクル数を決定する工程、及び
（ｖ）上記試料中のＩＨＨＮＶについて決定された上記閾値サイクル数を、既知の濃度の標準溶液を用いて決定された鋳型濃度の対数に対する閾値サイクル数の標準曲線と比較することにより、該試料中のＩＨＨＮＶの量を計算する工程、
を含む、上記方法。
２６．蛍光標識プローブが、配列番号１７及び配列番号１８からなる群から選択される、上記２５に記載の方法。
２７．ＤＮＡ損傷又はＩＨＨＮＶ不活化の評価に用いられる、上記１３、１８、又は２５のいずれかに記載の方法。
２８．エビの健康及び発育を向上させるために化学的処置と組み合わせて用いられる、上記１３、１８、又は２５のいずれかに記載の方法。
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号１と完全に相補的な単離核酸分子。
【請求項２】
配列番号２に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号２と完全に相補的な単離核酸分子。
【請求項３】
配列番号３に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号３と完全に相補的な単離核酸分子。
【請求項４】
配列番号４に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号４と完全に相補的な単離核酸分子。
【請求項５】
配列番号５に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号５と完全に相補的な単離核酸分子。
【請求項６】
配列番号６に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号６と完全に相補的な単離核酸分子。
【請求項７】
配列番号７に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号７と完全に相補的な単離核酸分子。
【請求項８】
配列番号８に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列又は配列番号８と完全に相補的な単離核酸分子。
【請求項９】
ＩＨＨＮＶゲノム内の核酸の領域を増幅する核酸増幅反応をプライムする能力を有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の２つの異なるＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の対。
【請求項１０】
請求項９に記載のＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の少なくとも１つの対を含むＩＨＨＮＶの検出用キット。
【請求項１１】
試料中のＩＨＨＮＶの存在を検出するための方法であって、
（ｉ）ＩＨＨＮＶを含むことが疑われる試料からＤＮＡを提供する工程、及び
（ii）好適なハイブリダイゼーション条件下で、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離されたＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列に由来するプローブにより上記ＤＮＡを探索する工程、
を含み、ハイブリダイズ可能な核酸断片が同定されると、それがＩＨＨＮＶの存在の確証となる、上記方法。
【請求項１２】
試料中のＩＨＨＮＶの存在を検出するための方法であって、
（ｉ）ＩＨＨＮＶを含むことが疑われる試料からＤＮＡを提供する工程、及び
（ii）増幅産物が生成されるよう、請求項９に記載のＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の少なくとも１つの対により上記ＤＮＡを増幅する工程、
を含み、増幅産物が存在すると、それがＩＨＨＮＶの存在の確証となる上記方法。
【請求項１３】
試料中のＩＨＨＮＶの量を定量するための方法であって、
（ｉ）ＩＨＨＮＶを含むことが疑われる試料からＤＮＡを提供する工程、
（ii）核酸結合性蛍光剤又は蛍光標識プローブの存在下での少なくとも変性温度と伸長温度との間の熱サイクリングによって、請求項９に記載のＩＨＨＮＶ診断用プライマー配列の少なくとも１つの対により上記ＤＮＡを増幅する工程、
（iii）上記熱サイクリング中に上記核酸結合性蛍光剤又は上記蛍光標識プローブによ
り生成される蛍光量を測定する工程、
（iv）上記核酸結合性蛍光剤又は上記蛍光標識プローブにより生成された蛍光量が基礎値を上回る固定閾値に達するときの閾値サイクル数を決定する工程、及び
（ｖ）上記試料中のＩＨＨＮＶについて決定された上記閾値サイクル数を、既知の濃度の標準溶液を用いて決定された鋳型濃度の対数に対する閾値サイクル数の標準曲線と比較することにより、該試料中のＩＨＨＮＶの量を計算する工程、
を含む、上記方法。