(57)【要約】  本発明は、病原体による感染症を処置するのに使用するための治療上の組み合わせを提供する。治療上の組み合わせは、アミノグリコシド系抗生物質及びアルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬を含み、治療上の組み合わせは、前記アミノグリコシド系抗生物質を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供するか、又は治療上の組み合わせは、前記核酸モノアルキル化薬を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供し、並びに前記方法を実行するためのキットを含む。
2022502507.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
病原体による感染症を処置するのに使用するための治療上の組み合わせであって
ａ．アミノグリコシド系抗生物質と、
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬と、
を含み、
前記アミノグリコシド系抗生物質を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供するか、又は
前記核酸モノアルキル化薬を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供する、治療上の組み合わせ。
【請求項２】
前記アミノグリコシド系抗生物質は、前記核酸モノアルキル化薬の前に、それと同時に、又はそれに続いて投与される、請求項１に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項３】
前記病原体は、細菌である、請求項１又は請求項２に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項４】
前記病原体は、アルキル化されたヌクレオチド付加物からアルキル基を除去するポリペプチドをコードする１つ以上の遺伝子を欠く、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項５】
前記アルキル化されたヌクレオチド付加物は、３ｍｅＣ、３ｍｅＧ、３ｍｅＡ、８−オキソ−Ｇ、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、及びＯ６−エチルグアニンから選択される１つ以上である、好ましくは、３ｍｅＣ、３ｍｅＧ、３ｍｅＡ、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、及びＯ６−エチルグアニンから選択される１つ以上である、請求項４に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項６】
前記遺伝子は、ａｌｋＡ及びａｌｋＢから選択される１つ以上である、好ましくはａｌｋＢである、請求項４又は請求項５に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項７】
前記病原体は、細胞の核酸内のアルキル化されたヌクレオチド付加物の存在に対して、前記細胞の耐性を促進するポリペプチドをコードする１つ以上の遺伝子を欠き、好ましくは、前記アルキル化されたヌクレオチド付加物は、３ｍｅＣ、３ｍｅＧ、３ｍｅＡ、８−オキソ−Ｇ、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、及びＯ６−エチルグアニンから選択される１つ以上である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項８】
前記１つ以上の遺伝子は、Ａｄａ、ＯＧＴ、ＲｅｃＡ、ＤｉｎＢ、及びＵｍｕＣＤから選択される、請求項７に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項９】
前記病原体は、サルモネラ（好ましくはＳ．エンテリカ（S.enterica））細菌、シュードモナス（好ましくは緑膿菌（P.aeruginosa））細菌、及びマイコバクテリウム（好ましくは結核菌（M.tuberculosis））細菌から選択される１つ以上である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項１０】
前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である、好ましくは、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項１１】
前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシンである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項１２】
前記核酸モノアルキル化薬は、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）、メタンスルホン酸メチル（ＭＭＳ）、ダカルバジン、メチルニトロソ尿素（ＭＭＵ）、メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）、テモゾロミド（ＴＭＺ）、エチルニトロソ尿素（ＥＮＵ）、ジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）、及びＮ−ニトロソ−Ｎ−メチル尿素（ＮＭＵ）から選択される１つ以上である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項１３】
前記核酸モノアルキル化薬は、メタンスルホン酸メチル（ＭＭＳ）である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項１４】
前記核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により核酸のヌクレオチドを置換して、３ｍｅＣ、３ｍｅＧ、３ｍｅＡ、８−オキソ−Ｇ、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、及びＯ６−エチルグアニンから選択される１つ以上のアルキル化されたヌクレオチド付加物、好ましくは、３ｍｅＣ、３ｍｅＧ、３ｍｅＡ、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、及びＯ６−エチルグアニンから選択される１つ以上のアルキル化されたヌクレオチド付加物をもたらす、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項１５】
インビトロにおける消毒薬としての薬の組み合わせの使用であって、
前記薬の組み合わせが、
ａ．アミノグリコシド系抗生物質と、
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬と、
を含み、
前記薬の組み合わせが、前記アミノグリコシド系抗生物質を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供するか、又は
前記薬の組み合わせが、前記核酸モノアルキル化薬を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供する、使用。
【請求項１６】
前記薬の組み合わせを、病原体を含む場所、病原体を含むことが疑われる場所に、又は病原体を含むリスクがある場所に投薬することを含む、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記投薬は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭの前記場所での前記アミノグリコシド系抗生物質及び前記核酸モノアルキル化薬の局所的な濃度、好ましくは
ａ．約８０ｍＭ〜約１２０ｍＭの前記アミノグリコシド系抗生物質の局所的な濃度及び／又は
ｂ．約１ｍＭ〜約４０ｍＭの前記核酸モノアルキル化薬の局所的な濃度
を提供することを含む、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
アミノグリコシド系抗生物質によって病原体の抑制を向上させるための核酸モノアルキル化薬の使用であって、前記核酸モノアルキル化薬が、アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬である、使用。
【請求項１９】
癌を処置するのに使用するための治療上の組み合わせであって、
ａ．アミノグリコシド系抗生物質と、
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬と、
を含み、
前記アミノグリコシド系抗生物質を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、癌の抑制の向上を提供するか、又は
前記核酸モノアルキル化薬を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、癌の抑制の向上を提供する、治療上の組み合わせ。
【請求項２０】
前記癌は、膠芽腫（たとえば多形性膠芽腫）、急性骨髄性白血病、乳癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、肉腫、肺癌（小及び／又は非小細胞肺癌）、卵巣癌、星状細胞腫、骨肉腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、小細胞肺癌、神経芽細胞腫、精巣癌、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、膀胱癌、小細胞肺癌、子宮頸癌、膵癌、神経内分泌腫瘍、真性赤血球増加症、骨髄様化生、線維肉腫、横紋筋肉腫、島細胞がん、髄様甲状腺癌、未分化星状細胞腫、頭頸部癌、食道癌、胃癌、前立腺癌、中皮腫、及び子宮内膜癌から選択される１つ以上である、請求項１９に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項２１】
前記癌の癌細胞（たとえば腫瘍）は、参照標準におけるＤＮＭＴの発現レベルよりも高いＤＮＭＴの発現レベルを含み、前記参照標準は、健康な細胞由来のものである、請求項１９又は２０に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項２２】
前記癌の癌細胞（たとえば腫瘍）は、参照標準におけるａｌｋＢの発現レベルよりも高いａｌｋＢの発現レベルを含み、前記参照標準は、健康な細胞由来のものである、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の使用のための治療上の組み合わせ。
【請求項２３】
ａ．アミノグリコシド系抗生物質と、
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬と、
を含むキット。
【請求項２４】
前記アミノグリコシド系抗生物質及び前記核酸モノアルキル化薬は、同じ組成物内に又は別々の組成内に含まれる、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
ａ．病原体による感染症を処置するための方法においてキットを使用するための説明書、
ｂ．インビトロにおける消毒薬としてキットを使用するための説明書、
ｃ．病原体を抑制するためのインビトロにおける方法においてキットを使用するための説明書、及び／又は
ｄ．癌を処置するための方法においてキットを使用するための説明書、
をさらに含む、請求項２３又は２４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗生物質及びアルキル化薬の組み合わせ療法並びに医薬としての及び病原体のコントロールのためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＤＮＡのアルキル化は、転移因子（ＴＥ）、サイレンシング、及び遺伝子調節などのような重要な機能と共に、真核生物における重要な調節メカニズムである。特に、シトシンの５位でのＤＮＡメチル化（５−メチルシトシン、５ｍｅＣ）は、真核生物において鍵となるエピジェネティックなマークであり、これは、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ（ＤＮＭＴ）活性を介して、ＤＮＡ複製を通して維持することができる。
【０００３】
化学療法は、特定のＤＮＡアルキル化現象が有毒であるという事実を活用したものであり（３−メチルシトシン、３ｍｅＣなど）、このように、癌細胞に細胞毒性をもたらすＤＮＡ損傷の導入を誘発するためにアルキル化薬を使用してきた。そのような化学療法は、たとえばプリン環の第７番目の窒素原子での、アルキル基によるグアニンの置換を通常もたらすアルキル化抗腫瘍薬の使用にもっぱら集中してきた。
【０００４】
しかしながら、そのようなアルキル化薬は、主として、それらの使用を、定められた療法（たとえば癌療法）に制限した代表的なアルキル化薬の危険な性質のために、抗菌剤としてごく普通のものとして実用化されることはなかった。発明者らの知る限り、アルキル化薬が、感染症（たとえば細菌感染症）のごく普通の処置として使用されたという報告はなく、特に、このような処置には、化学療法において見られるアルキル化薬の副作用を同様にもたらす投薬量は必要とされない。このことを実証してみたところ、発明者らは、野生型の細菌の成長が、アルキル化薬の存在下において抑制されないことを発見した（実施例１を参照）。後者は、有毒なＤＮＡアルキル化をコントロールする／逆転させる、細胞（たとえば細菌細胞）中の酵素の存在によって、悪化することがあり、そのような酵素によって影響を及ぼされ得るアルキル化薬の用量では効力が低くなることがある。実際に、有毒な３−メチルシトシン（３ｍｅＣ）のアルキル化は、ＡｌｋＢ（及びそのホモログ）によって逆転し、発明者らは、このメカニズムが、驚くべきことに「オフターゲットの」３ｍｅＣアルキル化（ＡｌｋＢによってコントロールされる）及び５ｍｅＣアルキル化をもたらすＤＮＡメチルトランスフェラーゼ活性と共に進化したように思われることを、最近発見した。
【０００５】
そのため、アルキル化薬を有する組成物の細胞毒性効果を向上させ、化学療法を超える、療法におけるそれらの実用性を可能にする手段及び方法が必要とされる。
【０００６】
本発明は、１つ以上の上述の問題について検討する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）が、単官能性アルキル化薬（たとえばモノアルキル化薬（monoalkylating agent））と相乗的に作用して、有毒な組み合わせをもたらし、これらの薬の組み合わせとの接触の後に細胞傷害活性を増加させるように使用することができるという驚くべき発見に基づく。したがって、本発明の独創性に富んだ発見は、組み合わせ療法が、現存している化学療法剤の効力を増加させるだけでなく、病原性感染症、病原体全般を標的にするためにも用いることができるというものである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
一態様において、本発明は、病原体による感染症を処置するために使用するための治療上の組み合わせであって、
ａ．抗生物質及び
ｂ．アルキル基（たとえばメチル基）により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含む、治療上の組み合わせを提供する。
【０００９】
本発明の別の態様は、病原体による感染症を有する対象を処置するための方法であって、対象に治療上の組み合わせを投与することを含み、前記治療上の組み合わせは、
ａ．抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）及び
ｂ．アルキル基（たとえばメチル基）により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含む、方法を提供する。
【００１０】
別の態様において、
ａ．抗生物質（好ましくはアミノグリコシド）及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含む、治療上の組み合わせ（たとえば組成物）が、提供される。
【００１１】
一実施形態において、前記抗生物質は、アミノグリコシド系抗生物質、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、フルオロキノロン系抗生物質、スルホンアミド系抗生物質、及びテトラサイクリン系抗生物質又はその組み合わせから選択される１つ以上である。一実施形態において、前記抗生物質は、アミノグリコシド系抗生物質、ペニシリン系抗生物質、セファロスポリン系抗生物質、マクロライド系抗生物質、フルオロキノロン系抗生物質、スルホンアミド系抗生物質、又はその組み合わせから選択される１つ以上である。
【００１２】
好ましい実施形態において、前記抗生物質は、アミノグリコシド系抗生物質である。
【００１３】
一態様において、本発明は、病原体による感染症を処置するために使用するための治療上の組み合わせであって、前記治療上の組み合わせは、
ａ．アミノグリコシド系抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含む、治療上の組み合わせを提供する。
【００１４】
別の態様において、
ａ．アミノグリコシド系抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含む、治療上の組み合わせ（たとえば組成物）が、提供される。
【００１５】
以下の実施形態及び定義は、本明細書において記載される本発明の任意の態様又は実施形態に、たとえば、本明細書において記載される任意の方法、使用、組成物、治療上の組み合わせ、使用のための治療上の組み合わせ、使用のための薬の組み合わせ、キット、又は使用のためのキットについての任意の態様又は実施形態に当てはめられてもよい。
【００１６】
一実施形態において、治療上の組み合わせは、前記抗生物質を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供する（好ましくは、抗生物質は、アミノグリコシド系抗生物質である）。一実施形態において、治療上の組み合わせは、前記核酸モノアルキル化薬（アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する）を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供する。
【００１７】
一実施形態において、治療上の組み合わせは、前記抗生物質を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体による感染症の抑制の向上を提供する（好ましくは、抗生物質は、アミノグリコシド系抗生物質である）。一実施形態において、治療上の組み合わせは、前記核酸モノアルキル化薬（アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する）を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体による感染症の抑制の向上を提供する。
【００１８】
「病原体による感染」という用語は、「病原体によって引き起こされる感染」という用語と同じ意味で使用されてもよい。
【００１９】
「核酸モノアルキル化薬」という用語は、本明細書において、「単官能性アルキル化薬」という用語と同じ意味で使用される。前記用語は、メチル基などのようなアルキル基により、核酸（又はより詳細には前記核酸のヌクレオチド）を置換する薬を指す。好ましくは、核酸モノアルキル化薬（たとえば単官能性アルキル化薬）は、単一のアルキル基（たとえばメチル基）により、単一のヌクレオチドを置換する。
【００２０】
本明細書において記載される「核モノアルキル化薬」は、アルキル基により、核酸の単一のヌクレオチドを置換する核モノアルキル化薬である。
【００２１】
そのようなモノアルキル化薬によって引き起こされるヌクレオチドアルキル化は、前記薬が細胞毒性を引き起こすような、永久的なものとなることがあるＤＮＡ損傷の形態である。モノアルキル化薬は、核酸アルキル化薬の１つの大まかな分類であり、もう一つの分類は、「二官能性アルキル化薬」である。二官能性アルキル化薬は、通常、アルキル基により、少なくとも２つのヌクレオチドを置換する。
【００２２】
二官能性アルキル化薬は、構造的にも、機能的にも、単官能性アルキル化薬とは別である。たとえば、モノアルキル化薬は、通常、ヌクレオチドを置換するための（前記アルキル基により）単一のアルキル基を有するが、二官能性アルキル化薬は、通常、ヌクレオチドを置換するための、少なくとも２つのそのようなアルキル基を有する。さらに、ＤＮＡに接触した際に、二官能性アルキル化薬は、通常、鎖内及び／又は鎖間架橋を引き起こし、これは、２つの異なるヌクレオチドに（たとえば２つの異なる鎖に）存在する２つの異なるアルキル置換基の間の相互作用によるものと理解されている。
【００２３】
そのようなアルキル化薬によって引き起こされる異なるタイプのＤＮＡ損傷はまた、前記損傷を取り除く又はそれに耐えるためのＤＮＡ修復の異なるモード（たとえば異なるＤＮＡ修復経路）をも必要とする。たとえば、３ｍｅＣなどのような単一のアルキル化ヌクレオチド（モノアルキル化薬）は、除去されることがあり（たとえば塩基切除修復によって）又は修復されることがあり（たとえばアルキル基のＡｌｋＢ触媒による除去を介して）、細胞生存が可能になることがある。対照的に、鎖間架橋修復メカニズムは、複雑で、ＤＮＡ複製機構にとって非常にやっかいな障害となることが理解されている。たとえば、架橋ＤＮＡ（二官能性アルキル化薬によって引き起こされる）の効率的な修復のためには、ＦＡ修復、ＮＥＲ、損傷乗り越え合成（ＴＬＳ）、及びＨＲ修復の組み合わせが必要となることがある。
【００２４】
このように、モノアルキル化薬は、好都合なことに、本発明の治療上の組み合わせが用いられる対象にとって、それほど有毒でないことがあり（二官能性アルキル化薬と比べて）、対象の細胞は、通常、結果として生じるＤＮＡ損傷を除去する／修復する能力がすぐれているのに対して、標的細胞（たとえば病原体）は、そのような結果として生じるＤＮＡ損傷を除去する／修復する能力がそれほど十分にない（たとえば、病原体がａｌｋｂホモログを欠く場合）。このように、治療上の組み合わせの効果は、病原体（たとえば細菌）に対して特異的であることがあり、（感染した）対象の細胞に対して「オフターゲットの」影響をそれほど引き起こさないことがある（モノアルキル化薬の代わりに二官能性アルキル化薬を含む以外は同一の組み合わせと比べて）。
【００２５】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、単一のアルキル基（たとえば単一の反応性アルキル基）を含む。
【００２６】
一実施形態において、本明細書において記載される核酸モノアルキル化薬は、ＤＮＡ鎖内及び／又は鎖間架橋を引き起こさない（たとえばＤＮＡに接触した際に）。
【００２７】
一実施形態において、本明細書において記載される核酸モノアルキル化薬は、ＳＮ１及び／又はＳＮ２型の薬である。たとえば、核酸モノアルキル化薬は、ＳＮ１型の薬であってもよい。その代わりに（又はそのうえ）、核酸モノアルキル化薬は、ＳＮ２型の薬であってもよい。
【００２８】
「処置すること」という用語は、感染症が処置される（たとえば、感染症が除去される）、抑制される、若しくは低下するか又は感染症の症状が低下することを意味してもよい。好ましくは、前記処置することは、治療上の組み合わせの投与の直前よりも、本発明の治療上の組み合わせが投与される対象の感染のレベルが低下している臨床エンドポイントを提供するために使用される。
【００２９】
本明細書において使用される「処置する」又は「処置すること」という用語は、予防的処置（たとえば疾患の発症を予防するための）及び是正処置（疾患をすでに患っている対象の処置）を包含する。好ましくは、本明細書において使用される「処置する」又は「処置すること」は、是正処置を意味する。「処置する」又は「処置すること」という用語は、疾患及び／又は感染症並びにその症状の両方を処置することを包含する。いくつかの実施形態では、「処置する」又は「処置すること」は、疾患及び／又は感染症の症状に関連している。
【００３０】
そのため、本発明の治療上の組み合わせは、治療有効量又は予防有効量で対象に投与されてもよい。
【００３１】
「治療有効量」は、疾患及び／又は感染症（又はその症状）を処置するために対象に単独で又は組み合わせて投与された場合に、疾患及び／又は感染症又はその症状の前述の処置を達成するのに十分である治療上の組み合わせの任意の量である。
【００３２】
「予防有効量」は、対象に単独で又は組み合わせて投与された場合に、疾患及び／又は感染症（又はその症状）の発症又は再発を阻害するか又は遅延させる、治療上の組み合わせの任意の量である。いくつかの実施形態では、予防有効量は、完全に、疾患及び／又は感染症の発症又は再発を予防する。発症を「阻害すること」は、疾患及び／又は感染症（又はその症状）の発症の可能性を小さくすること又は完全に発症を予防することを意味する。
【００３３】
理論によって束縛されることを望むものではないが、抗生物質（アミノグリコシド系抗生物質）は、核酸モノアルキル化薬の活性を向上させると考えられるか又は逆もまた同様である。したがって、これらの薬（たとえば医薬品）の組み合わせにより処置される細胞又は病原体（たとえば細菌）は、モノアルキル化薬単独で処置される細胞又は病原体と比較して、核酸（たとえばヌクレオチド）アルキル化（たとえば３ｍｅＣを引き起こす）のレベルの増加を受け、細胞又は病原体の成長は、その結果として、有毒な核酸損傷のために抑制される。したがって、抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）による処置は、モノアルキル化薬に対する細胞／病原体の感度を高め、その効力を改善してもよい（又は逆もまた同様）。この相乗作用は、アミノグリコシド系抗生物質に対して感受性である細菌細胞に限られず（たとえばコニカルメカニズム（conical mechanism）を介して）、実際に、試験された例示的なアミノグリコシド系抗生物質に対して抵抗性を有する細菌細胞（たとえば抵抗性を与える遺伝子を含む）において観察されている（実施例１を参照）。
【００３４】
したがって、一態様において、アルキル基により単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬によって核酸の（たとえば前記核酸のヌクレオチドの）アルキル化を向上させるための抗生物質の使用が、提供される。前記核酸は、ＲＮＡであってもＤＮＡであってもよい（好ましくはＤＮＡ）。
【００３５】
一態様において、さらなる核酸モノアルキル化薬によって核酸の（たとえば前記核酸のヌクレオチドの）アルキル化を向上させるためのアミノグリコシド系抗生物質の使用が、提供される。前記核酸は、ＲＮＡであってもＤＮＡであってもよい（好ましくはＤＮＡ）。
【００３６】
核酸モノアルキル化薬の活性を向上させる（たとえば相乗効果的に向上させる）抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）についてのこの新たに発見された有用性は、特に驚くべきことであり、たとえば、アミノグリコシド系抗生物質は、これまで、リボソーム活性の破壊物質として主に用いられてきた（細胞毒性を誘発する方法と別のメカニズム）。したがって、発明者らは、新しい技術的応用分野をつきとめただけでなく（すなわち、従来の抗生物質療法の分野を超える）、前記分野での予想外の技術的効果をもつきとめた（すなわち、核酸モノアルキル化薬の活性の向上）。
【００３７】
好都合なことに、この組み合わせ療法（使用のための治療上の組み合わせ）は、普通はそのような抗生物質に対して不活性である（非応答性である）細胞／生物（たとえば非細菌性細胞／生物又は抗生物質抵抗性の細菌）を標的にするための、そのような抗生物質の意図的な使用を提供する。さらに、組み合わせの相乗的な性質により、より低用量の抗生物質及びアルキル化薬が、用いられてもよく、したがって、使い過ぎによる抗生物質抵抗性（公衆衛生への根深い脅威）の発生のリスクを低下させてもよい。実際に、本発明は、免疫無防備状態の対象に対する、長期にわたる抗生物質レジメンの処方の必要性を低下させる。
【００３８】
多くの抗生物質が比較的廉価であるので、本発明の治療上の組み合わせの向上は、療法に必要とされる、通常高価なモノアルキル化薬の量の減少により、公衆衛生機関及び患者にとってかなりのコスト削減策となる。
【００３９】
さらに、本発明は、従来の用量では毒性があるためにめったに使用されない抗生物質を臨床で使用することを可能にする。実際に、治療上の組み合わせは（必要な治療用量を下げることによって）、そのような抗生物質の用途を広げる。
【００４０】
組み合わせ療法の構成成分の投薬／投与の順序は、変えることができる。抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）及び核酸モノアルキル化薬は、単一の組成物の一部として又は別々の組成物内で、同時に投与することができる（たとえば、ともに、相乗作用を実現するためのそれぞれ特定の最適な用量で）。たとえば、モノアルキル化薬は、第１の組成物中に存在してもよく（たとえば対象に対する静脈内投与のための）、抗生物質は、第２の組成物中に存在してもよい（たとえば対象に対する経口投与のための）。
【００４１】
さらに、抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）及び核酸モノアルキル化薬は、異なる時間に投与されてもよい（たとえば、アミノグリコシド系抗生物質は、アルキル化薬に対する細胞の感度を高めるために先に投与されてもよい）。したがって、さらなる実施形態では、アミノグリコシド系抗生物質及び核酸モノアルキル化薬は、別々の組成物内で、異なる時間に対象に投与される。
【００４２】
一実施形態において、抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）は、核酸モノアルキル化薬の前に投与される。一実施形態において、抗生物質は、核酸モノアルキル化薬と同時に投与される。一実施形態において、抗生物質は、モノアルキル化薬に続いて投与される。
【００４３】
一実施形態において、アミノグリコシド系抗生物質は、核酸モノアルキル化薬の前に投与される。一実施形態において、アミノグリコシド系抗生物質は、核酸モノアルキル化薬と同時に投与される。一実施形態において、アミノグリコシド系抗生物質は、核酸モノアルキル化薬に続いて投与される。
【００４４】
適切には、治療上の組み合わせは、対象に投与される。「対象」、「個人」、及び「患者」という用語は、哺乳動物対象を指すために、本明細書において区別なく使用される。一実施形態において、「対象」は、ヒト、コンパニオンアニマル（たとえばイヌ、ネコ、及び／又はウサギなどのようなペット）、家畜（たとえばブタ、ヒツジ、ウシ、及び／又はヤギ）、並びに／又はウマである。好ましい実施形態において、対象は、ヒトである。
【００４５】
一実施形態において、感染症は、急性感染症である。一実施形態において、感染症は、慢性感染症である。
【００４６】
本発明の方法において、対象は、感染症を有するとして以前に診断されていなくてもよい。その代わりに、対象は、感染症を有するとして以前に診断されていてもよい。対象はまた、疾患リスク因子を表す対象であっても、感染症の症状がない対象であってもよい。対象はまた、感染症を患っているか又は感染症にかかるリスクがある対象であってもよい。一実施形態において、対象は、感染症のための療法を以前に投与されたことがある。
【００４７】
好都合なことに、本発明の治療上の組み合わせの相乗的性質を考慮すれば、最低限の用量の抗生物質が、投与されてもよく、これは、従来より、特定の使用及び／又は投与のためにのみ処方されてきた抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）の使用におけるよりすぐれた柔軟性を可能にする。
【００４８】
適切には、感染症を抑制するための治療上の組み合わせの効力と宿主の非感染細胞（たとえば感染した対象の健康な細胞）に対する損傷とのバランスを保つ、治療上の組み合わせの用量が、選ばれてもよい。好ましくは、ヒト対象に（たとえばヒト細胞に）有毒でない治療上の組み合わせの用量が、使用されてもよい。いくつかの抗生物質が高用量で副作用を引き起こすことがある−たとえば、あるアミノグリコシド系抗生物質（たとえばカナマイシン）は、高用量で聴器毒性を引き起こすので、これは特に好都合である。したがって、本発明の治療上の組み合わせは、聴器毒性の発生のリスクを予防するように使用されてもよい。
【００４９】
相乗的な組み合わせとして用いられる場合の抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）及び核酸モノアルキル化薬の有用性の広がりを例示するために、本発明は、病原体を抑制するための、たとえば消毒薬としての一般的な使用のための抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）及び核酸モノアルキル化薬の組み合わせを包含する。構成成分どうしの間の相乗効果は、比較的低い濃度の抗生物質及び核酸モノアルキル化薬（又はアルキル化様薬）を含む比較的薄い組成物／溶液（又は任意の他の配合物）が、病原体に投薬されてもよく、それでも、別の方法ではずっと高濃度の個々の構成成分でのみ可能であると思われる同様の（又はよりすぐれた）レベルの抑制を実現することを意味する。
【００５０】
一態様において、消毒薬（好ましくはインビトロ消毒薬）としての薬の組み合わせの使用であって、前記薬の組み合わせ（たとえば消毒薬）は、
ａ．抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含む、使用が、提供される。
【００５１】
一態様において、消毒薬としての薬の組み合わせの使用であって、前記薬の組み合わせ（たとえば消毒薬）は、
ａ．アミノグリコシド系抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含む、使用が、提供される。
【００５２】
一実施形態において、薬の組み合わせは、前記アミノグリコシド系抗生物質を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供する。そのうえ又はその代わりに、薬の組み合わせは、前記核酸モノアルキル化薬を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、病原体の抑制の向上を提供してもよい。
【００５３】
適切には、前記使用は、病原体を含む場所に、病原体を含むことが疑われる場所に、又は病原体を含むリスクがある場所に、前記消毒薬（たとえば治療上の組み合わせ）を投薬することを含んでいてもよい。
【００５４】
「消毒薬」という用語は、病原体を抑制する配合物（たとえば組成物又は溶液）を指す。消毒薬としてのそのような使用は、病原体（たとえば微生物）の細胞壁を破壊するための使用又は病原体の代謝を妨げるための使用に限定されない。実際に、本発明は、病原体の核酸に有毒なアルキル化による損傷を引き起こすことによって、消毒の好都合な手段を提供し、このようにして利用可能な消毒液の幅を広げる。
【００５５】
「抑制する」又は「抑制すること」という用語は、病原体（又は他の標的細胞）「の成長を阻害する」又は「を死滅させる」ことを意味してもよい。「阻害する」又は「阻害すること」という用語は、病原体（又は他の標的細胞／生物）「の成長を妨害する」という用語と同義である。一実施形態において、本発明の治療上の組み合わせは、病原体（若しくは他の標的細胞／生物）「を死滅させ」てもよいか又は病原体（若しくは他の標的細胞／生物）「を死滅させるために使用されてもよい」。「抑制すること」という用語はまた、たとえば病原体（又は他の標的細胞／生物）による混入を予防するための前処置として投薬される場合に、病原体（又は他の標的細胞／生物）の成長を予防することをも包含する。
【００５６】
さらなる態様において、病原体の成長を抑制するためのインビトロにおける方法であって、抗生物質及び核酸モノアルキル化薬（アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する）の組み合わせを含む消毒薬を場所に対して投薬することを含み、前記場所は、
ｉ．病原体を含む場所
ｉｉ．病原体を含むことが疑われる場所、又は
ｉｉｉ．病原体を含むリスクのある場所
である、インビトロにおける方法が、提供される。
【００５７】
さらなる態様において、病原体の成長を抑制するためのインビトロにおける方法であって、アミノグリコシド系抗生物質及び核酸モノアルキル化薬（アルキル基により単一のヌクレオチドを置換する）の組み合わせを含む消毒薬を場所に対して投薬することを含み、前記場所は、
ｉ．病原体を含む場所
ｉｉ．病原体を含むことが疑われる場所、又は
ｉｉｉ．病原体を含むリスクのある場所
である、インビトロにおける方法が、提供される。
【００５８】
一実施形態において、本発明の薬の組み合わせ及び／又は消毒薬は、医療機器、寝具、家具、壁、若しくは病院の床などのような床又はその組み合わせから選択される１つ以上の場所に投薬されてもよい又は使用されてもよい。
【００５９】
適した医療機器は、把持装置、鉗子、並びに／若しくはオクルーダー（たとえば血管及び他の器官用の）、持針器（たとえば縫合針を保持するための）、牽引子（たとえば皮膚を開くための）、機械式カッター（たとえばメス、ランセット、ドリルビット、やすり、トロカール、Ligasure、超音波振動メス、外科鋏、骨鉗子等）、注射針、挿管器、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。
【００６０】
一実施形態において、本発明の使用又は方法は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ（たとえば約２０ｍＭ〜１８０ｍＭ、約４０ｍＭ〜１６０ｍＭ、約６０ｍＭ〜１４０ｍＭ、又は約８０ｍＭ〜１２０ｍＭ）の場所での抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）及び核酸モノアルキル化薬の局所的な濃度を提供することを含む。
【００６１】
適切には、約８０ｍＭ〜約１２０ｍＭ（たとえば約８５ｍＭ〜１１５ｍＭ、約９０ｍＭ〜１１０ｍＭ、又は約９５ｍＭ〜１００ｍＭ）の場所での抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）の局所的な濃度が、提供されてもよい。一実施形態において、約１ｍＭ〜約４０ｍＭ（たとえば約５ｍＭ〜３５ｍＭ、１０ｍＭ〜３０ｍＭ、又は１５ｍＭ〜２５ｍＭ）の場所での核酸モノアルキル化薬の局所的な濃度が、提供されてもよい。
【００６２】
好ましい実施形態において、約８０ｍＭ〜約１２０ｍＭ（たとえば約８５ｍＭ〜１１５ｍＭ、約９０ｍＭ〜１１０ｍＭ、又は約９５ｍＭ〜１００ｍＭ）の場所での抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）の局所的な濃度及び約１ｍＭ〜約４０ｍＭ（たとえば約５ｍＭ〜３５ｍＭ、１０ｍＭ〜３０ｍＭ、又は１５ｍＭ〜２５ｍＭ）の場所でのアルキル化薬の局所的な濃度が、提供されてもよい。
【００６３】
一態様において、抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）によって病原体の抑制を向上させるための核酸モノアルキル化薬の使用であって、前記核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬である、使用が、提供される。
【００６４】
一態様において、核酸モノアルキル化薬によって病原体の抑制を向上させるための抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）の使用であって、前記核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬である、使用が、提供される。
【００６５】
一態様において、抗生物質の殺菌力を向上させるための核酸モノアルキル化薬の使用であって、前記核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬である、使用が、提供される。
【００６６】
一態様において、アミノグリコシド系抗生物質の殺菌力を向上させるための核酸モノアルキル化薬の使用であって、前記核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬である、使用が、提供される。
【００６７】
別の態様において、核酸モノアルキル化薬による核酸へのアルキル化による損傷（たとえば３ｍｅＣ）の導入を促進する（たとえば向上させる）ための抗生物質の使用であって、前記核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する、使用が、提供される。
【００６８】
別の態様において、核酸モノアルキル化薬による核酸へのアルキル化による損傷（たとえば３ｍｅＣ）の導入を促進する（たとえば向上させる）ためのアミノグリコシド系抗生物質の使用であって、前記核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により単一のヌクレオチドを置換する、使用が、提供される。
【００６９】
本発明の治療上の組み合わせ又は消毒薬は、キットの一部として適切に提供されてもよく、これは、たとえば、ラベルがつけられていてもよいか又はキットの適した使用を概説する取扱説明書を含んでいてもよい。
【００７０】
一態様において、
ａ．抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含むキットが、提供される。
【００７１】
一態様において、
ａ．アミノグリコシド系抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換する核酸モノアルキル化薬
を含むキットが、提供される。
【００７２】
前記キットは、抗生物質（好ましくはアミノグリコシド系抗生物質）及び核酸モノアルキル化薬を含有するためのケースをさらに含んでいてもよい。
【００７３】
一態様において、前記キットは、病原体によって引き起こされる感染症を処置するために使用されるものであってもよい。別の態様において、前記キットは、消毒薬として使用されるものであってもよい。さらなる態様において、前記キットは、病原体を抑制するためのインビトロにおける方法において使用されるものであってもよい。
【００７４】
一実施形態において、アミノグリコシド系抗生物質及び核酸モノアルキル化薬は、同じ組成物内に含まれる。別の実施形態において、アミノグリコシド系抗生物質及び核酸モノアルキル化薬は、別々の組成物内に含まれる。
【００７５】
一実施形態において、キットは、病原体による感染症を処置するための方法においてキットを使用するための説明書を含んでいてもよい。前記説明書は、たとえば、投与される治療上の組み合わせの最適な用量、治療上の組み合わせを投与する最適な回数、最適な投与方法、又は病原性感染症を処置するために（たとえば伝染病を処置するために）本発明の治療上の組み合わせを使用することに関連する任意の他の情報を含んでいてもよい。
【００７６】
前記説明書は、ラベルの一部として又はキットと一緒に若しくは別々に提供される取扱説明書の一部として提供されてもよい。
【００７７】
一実施形態において、キットは、消毒薬としてキットを使用するための説明書を含んでいてもよい。前記説明書は、たとえば、消毒薬として投薬される治療上の組み合わせの最適な濃度、消毒薬を投薬するための最適な回数、最適な投薬方法、又は消毒薬として本発明の治療上の組み合わせを使用することに関連する任意の他の情報を含んでいてもよい。
【００７８】
一実施形態において、キットは、病原体を抑制するためのインビトロにおける方法においてキットを使用するための説明書を含んでいてもよい。
【００７９】
消毒薬として又は病原体を抑制するためのインビトロにおける方法において使用するために提供されるキットは、適切には、すぐ使用できる（ＲＴＵ）キットであってもよい。したがって、一実施形態において、キットは、消毒薬として使用するための又は病原体を抑制するためのインビトロにおける方法において使用するためのＲＴＵキットであってもよい。消毒薬（たとえばアミノグリコシド系抗生物質及び核酸モノアルキル化薬を含む）は、関心のある場所に前記消毒薬を噴霧する、注入する、塗布する、又はすり込むことによって投薬されてもよい。
【００８０】
感染症の治療上の組み合わせはまた、創傷を保護するか又は縫合するための材料に提供されてもよい。たとえば、本発明の治療上の組み合わせは、創傷被覆材（たとえば包帯及び／又は硬膏）、ゲージ、縫合糸、又はその組み合わせに提供されてもよい。
【００８１】
核酸アルキル化による損傷が、多数の生物／微生物において毒性をもたらすことがあるので、本発明は、驚くべきことに、細菌の範囲を超えた生物におけるアミノグリコシド系抗生物質の使用を可能にする。
【００８２】
したがって、一実施形態において、病原体は、細菌、ウイルス、原生生物、菌類、蠕虫、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。
【００８３】
一実施形態において、病原体は、細菌、原生生物、菌類、蠕虫、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。
【００８４】
好ましい実施形態において、前記病原体は、細菌である。
【００８５】
前記細菌は、サルモネラ（Salmonella）種、シュードモナス（Pseudomonas）種、マイコバクテリウム（Mycobacterium）種、エシェリキア（Escherichia）種、プロテウス（Proteus）種、セラチア（Serratia）種、クレブシエラ（Klebsiella）種、アシネトバクター（Acinetobacter）種、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。
【００８６】
好ましくは、前記病原体は、サルモネラ（Salmonella）種、シュードモナス（Pseudomonas）種、マイコバクテリウム（Mycobacterium）種、又はその組み合わせから選択される１つ以上である。
【００８７】
前記サルモネラ（Salmonella）種は、Ｓ．ボンゴリ（S.bongori）、Ｓ．エンテリカ（S.enterica）、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。適切には、前記サルモネラ（Salmonella）種は、Ｓ．エンテリカ（S.enterica）（たとえばネズミチフス菌（S.enterica serovar Typhimurium））であってもよい。
【００８８】
前記シュードモナス（Pseudomonas）種は、緑膿菌（P.aeruginosa）、Ｐ．アルカリゲネス（P.alcaligenes）、Ｐ．アンギリセプチカ（P.anguilliseptica）、Ｐ．アルゼンチネンシス（P.argentinensis）、Ｐ．ボルボリ（P.borbori）、Ｐ．シトロネロリス（P.citronellolis）、Ｐ．フラベッセンス（P.flavescens）、Ｐ．メンドシナ（P.mendocina）、Ｐ．ニトロレデュセンス（P.nitroreducens）、Ｐ．オレオボランス（P.oleovorans）、Ｐ．シュードアルカリゲネス（P.pseudoalcaligenes）、Ｐ．レシノボランス（P.resinovorans）、Ｐ．ストラミネア（P.straminea）、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。適切には、前記シュードモナス（Pseudomonas）は、緑膿菌（P.aeruginosa）（たとえば緑膿菌（P.aeruginosa）ＰＡＯ１）であってもよい。
【００８９】
前記マイコバクテリウム（Mycobacterium）種は、Ｍ．アフリカヌム（M.africanum）、Ｍ．ボビス（M.bovis）、Ｍ．ボビス（M.bovis）ＢＣＧ、Ｍ．カネッティ（M.canetti）、Ｍ．カプラエ（M.caprae）、Ｍ．ミクロティ（M.microti）、Ｍ．ムンギ（M.mungi）、Ｍ．オリギス（M.orygis）、Ｍ．ピンニペディ（M.pinnipedii）、Ｍ．スリカタエ（M.suricattae）、結核菌（M.tuberculosis）から選択される１つ以上であってもよい。適切には、前記マイコバクテリウム（Mycobacterium）は、結核菌（M.tuberculosis）であってもよい。
【００９０】
前記エシェリキア（Escherichia）種は、Ｅ．アルベルティイ（E.albertii）、大腸菌（E.coli）、Ｅ．フェルグソニー（E.fergusonii）、Ｅ．ハーマンニイ（E.hermannii）、Ｅ．マーモタエ（E.marmotae）、Ｅ．バルネリス（E.vulneris）、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。適切には、前記エシェリキア（Escherichia）種は、大腸菌（E.coli）であってもよい。
【００９１】
前記プロテウス（Proteus）種は、Ｐ．ハウセリ（P.hauseri）、Ｐ．ミラビリス（P.mirabilis）、Ｐ．ミクソファシエンス（P.myxofaciens）、Ｐ．ペンネリ（P.penneri）、Ｐ．ブルガリス（P.vulgaris）、又は組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。適切には、前記プロテウス（Proteus）種は、Ｐ．ブルガリス（P.vulgaris）であってもよい。
【００９２】
前記セラチア（Serratia）種は、Ｓ．マルセセンス（S.marcescens）であってもよい。
【００９３】
前記クレブシエラ（Klebsiella）種は、Ｋ．アエロゲネス（K.aerogenes）、Ｋ．グラニュロマティス（K.granulomatis）、Ｋ．オキシトカ（K.oxytoca）、Ｋ．ミシガネンシス（K.michiganensis）、肺炎桿菌（K.pneumoniae）、Ｋ．クアシプネウモニアエ（K.quasipneumoniae）、Ｋ．グリモンティ（K.grimontii）、Ｋ．バリイコーラ（K.variicola）、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。適切には、前記クレブシエラ（Klebsiella）種は、肺炎桿菌（K.pneumoniae）であってもよい。
【００９４】
前記アシネトバクター（Acinetobacter）種は、Ａ．アルベンシス（A.albensis）、Ａ．アピス（A.apis）、Ａ．バウマンニ（A.baumannii）、Ａ．ベイジェリンキイ（A.beijerinckii）、Ａ．ブレジニエ（A.bereziniae）、Ａ．ボヘミカス（A.bohemicus）、Ａ．ボイシエリ（A.boissieri）、Ａ．ブーヴェティイ（A.bouvetii）、Ａ．ブリソウイイ（A.brisouii）、Ａ．カルコアセティカス（A.calcoaceticus）、Ａ．セルティカス（A.celticus）、Ａ．コリスチニレシステンス（A.colistiniresistens）、Ａ．コウルバリニイ（A.courvalinii）、Ａ．デフルビイ（A.defluvii）、Ａ．ディスパーセス（A.disperses）、Ａ．ジジュクスホールニアエ（A.dijkshoorniae）、Ａ．エクイ（A.equi）、Ａ．ガンデンシス（A.gandensis）、Ａ．ゲルネリ（A.gerneri）、Ａ．ガンドンジェンシス（A.guangdongensis）、Ａ．グイロウイアエ（A.guillouiae）、Ａ．ジレンベルギイ（A.gyllenbergii）、Ａ．ヘモリティカス（A.haemolyticus）、Ａ．ハービネンシス（A.harbinensis）、Ａ．インディカス（A.indicus）、Ａ．ジュニー（A.junii）、Ａ．コーキイ（A.kookii）、Ａ．ラクツカエ（A.lactucae）、Ａ．ラーバエ（A.larvae）、Ａ．ルオフィイ（A.lwoffii）、Ａ．モデスタス（A.modestus）、Ａ．ネクタリス（A.nectaris）、Ａ．ノソコミアリス（A.nosocomialis）、Ａ．パルブス（A.parvus）、Ａ．パキスタネンシス（A.pakistanensis）、Ａ．ポプリ（A.populi）、Ａ．プロテオリチカス（A.proteolyticus）、Ａ．ピッティー（A.pittii）、Ａ．ピスシコラ（A.piscicola）、Ａ．プラゲンシス（A.pragensis）、Ａ．プロテオリチカス（A.proteolyticus）、Ａ．プヤンゲンシス（A.puyangensiｓ）、Ａ．キングフェンゲンシス（A.qingfengensis）、Ａ．ラディオレジステンス（A.radioresistens）、Ａ．ルディス（A.rudis）、Ａ．シンドレリ（A.schindleri）、Ａ．セイフェルティ（A.seifertii）、Ａ．ソリ（A.soli）、Ａ．タンドイイ（A.tandoii）、Ａ．チェルンベルギアエ（A.tjernbergiae）、Ａ．タウネリ（A.towneri）、Ａ．ウルシンジイ（A.ursingii）、Ａ．バリアビリス（A.variabilis）、Ａ．ベネチアヌス（A.venetianus）、Ａ．ビビアニイ（A.vivianii）、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。適切には、前記アシネトバクター（Acinetobacter）種は、Ａ．バウマンニ（A.baumannii）であってもよい。
【００９５】
一実施形態において、病原体は、菌類である。適切には、前記菌類は、カンジダ（Candida）種である。
【００９６】
前記カンジダ（Candida）種は、Ｃ．アルビカンス（C.albicans）、Ｃ．アスカラフィダラム（C.ascalaphidarum）、Ｃ．アムフィキシアエ（C.amphixiae）、Ｃ．アンタルクティカ（C.Antarctica）、Ｃ．アルゲンテア（C.argentea）、Ｃ．アトランティカ（C.atlantica）、Ｃ．アトモスファエリカ（C.atmosphaerica）、Ｃ．アウリス（C.auris）、Ｃ．ブラッタエ（C.blattae）、Ｃ．ブロメリアセアルム（C.bromeliacearum）、Ｃ．カルポフィラ（C.carpophila）、Ｃ．カルワヤリス（C.carvajalis）、Ｃ．セラムビシダラム（C.cerambycidarum）、Ｃ．カウリオデス（C.chauliodes）、Ｃ．コリダリス（C.corydalis）、Ｃ．ドッセイ（C.dosseyi）、Ｃ．デュブリニエンシス（C.dubliniensis）、Ｃ．エルガテンシス（C.ergatensis）、Ｃ．フルクツス（C.fructus）、Ｃ．グラブラタ（C.glabrata）、Ｃ．フェルメンタチ（C.fermentati）、Ｃ．グイルリエルモンディイ（C.guilliermondii）、Ｃ．ハエムロニイ（C.haemulonii）、Ｃ．フミリス（C.humilis）、Ｃ．インセクタメンス（C.insectamens）、Ｃ．インセクトルム（C.insectorum）、Ｃ．インテルメディア（C.intermedia）、Ｃ．エッフレシイ（C.jeffresii）、Ｃ．ケフィル（C.kefyr）、Ｃ．ケロセネアエ（C.keroseneae）、Ｃ．クルセイ（C.krusei）、Ｃ．ルシタニアエ（C.lusitaniae）、Ｃ．リキソソフィラ（C.lyxosophila）、Ｃ．マルトセ（C.maltose）、Ｃ．マリナ（C.marina）、Ｃ．メムブラニファシエンス（C.membranifaciens）、Ｃ．モギイ（C.mogii）、Ｃ．オレオフィラ（C.oleophila）、Ｃ．オレゴネンシス（C.oregonensis）、Ｃ．パラプシロシス（C.parapsilosis）、Ｃ．クエルシトルサ（C.quercitrusa）、Ｃ．ルゴセ（C.rugose）、Ｃ．サケ（C.sake）、Ｃ．シェハテア（C.shehatea）、Ｃ．テムノキラエ（C.temnochilae）、Ｃ．テヌイス（C.tenuis）、Ｃ．テアエ（C.theae）、Ｃ．トレランス（C.tolerans）、Ｃ．トロピカリス（C.tropicalis）、Ｃ．ツキヤエ（C.tsuchiyae）、Ｃ．シノラボランチウム（C.sinolaborantium）、Ｃ．ソヤエ（C.sojae）、Ｃ．スブハシイ（C.subhashii）、Ｃ．ウイスワナティイ（C.viswanathii）、Ｃ．ウチリス（C.utilis）、Ｃ．ウバツベンシス（C.ubatubensis）、及びＣ．ゼムプリニナ（C.zemplinina）から選択される１つ以上であってもよい。適切には、前記カンジダ（Candida）種は、Ｃ．アルビカンス（C.albicans）であってもよい。
【００９７】
別の実施形態において、前記病原体は、蠕虫である。前記蠕虫は、環形動物（Annelida）門、扁形動物（Platyhelminthes）門、線形動物（Nematoda）門、及び鉤頭動物（Acanthocephala）門から選択される１つ以上であってもよい。
【００９８】
一実施形態において、前記蠕虫は、寄生性扁形動物である。前記寄生性扁形動物は、条虫綱（Cestoda）、吸虫綱（Trematoda）、及び単生類（Monogenea）から選択される１つ以上であってもよい。
【００９９】
一実施形態において、前記蠕虫は、寄生性線形動物である。前記寄生性線形動物は、回虫（回虫属（Ascaris））、フィラリア、鉤虫、蟯虫（蟯虫属（Enterobius））、及び鞭虫（トリクリス・トリキウラ（Trichuris trichiura））から選択される１つ以上であってもよい。
【０１００】
好ましい実施形態において、病原体は、アルキル化されたヌクレオチド付加物からアルキル基を除去するポリペプチドをコードする１つ以上の遺伝子を欠く。たとえば、病原体は、アルキル化されたヌクレオチド付加物からアルキル基を除去するポリペプチドをコードするａｌｋａ又はａｌｋｂ遺伝子を欠いてもよい。好ましい実施形態において、病原体は、アルキル化されたヌクレオチド付加物からアルキル基を除去するポリペプチドをコードするａｌｋｂ遺伝子を欠いてもよい。
【０１０１】
本明細書において記載される１つ以上の遺伝子を欠く病原体又は細胞に対する言及は、非機能的ポリペプチド（又は機能が低下したポリペプチド）をコードする前記遺伝子の突然変異形態を含む病原体又は細胞を含む。
【０１０２】
一実施形態において、前記アルキル化されたヌクレオチド付加物は、３ｍｅＣ、３ｍｅＧ、３ｍｅＡ、８−オキソ−Ｇ、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、及びＯ６−エチルグアニンから選択される１つ以上である。一実施形態において、前記アルキル化されたヌクレオチド付加物は、３ｍｅＣ、３ｍｅＧ、３ｍｅＡ、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、及びＯ６−エチルグアニンから選択される１つ以上である。
【０１０３】
ＡｌｋＢタンパク質は、アルキル化による損傷の直接的な回復に関与するタンパク質である（発明者らが説明したように、３ｍｅＣの回復を含む）。ＡｌｋＢ遺伝子は、もともと大腸菌（E.coli）において発見された。大腸菌（E.coli）ＡｌｋＢ遺伝子と高い配列同一性を有する及び／又はそれと同じ若しくは同様の機能を有するタンパク質を発現する遺伝子は、「ＡｌｋＢホモログ」と呼ばれる。したがって、本明細書において使用されるａｌｋＢという用語は、ａｌｋＢホモログを含む。したがって、ａｌｋｂを欠く病原体又は細胞に対する言及は、そのホモログ（ａｌｋｂホモログ）を欠く病原体又は細胞を含む。同様に、ａｌｋｂを欠く病原体又は細胞に対する言及は、そのホモログ（ａｌｋｂホモログ）を欠く細胞を含む。ａｌｋａという用語はまた、ａｌｋａホモログをも含む。
【０１０４】
一実施形態において、病原体は、細胞の核酸内のアルキル化されたヌクレオチド付加物の存在に対する細胞の耐性を促進するポリペプチドをコードする１つ以上の遺伝子を欠いてもよい。たとえば、病原体は、細胞の核酸内のアルキル化されたヌクレオチド付加物の存在に対する細胞の耐性を促進するポリペプチドをコードするＡｄａ、ＯＧＴ、ＲｅｃＡ、ＤｉｎＢ、及び／又はＵｍｕＣＤ遺伝子を欠いてもよい。
【０１０５】
Ａｄａ及びＯＧＴは、８−オキソグアニン（８−オキソ−Ｇ）を修復する酵素であり、これは、グアニンのアルキル化損傷から結果として生じる；ＡｌｋＡは、３−メチルグアニン（３ｍｅＧ）及び３−メチルアデニン（３ｍｅＡ）を修復する；ＲｅｃＡは、ＤＮＡ損傷の耐性を促進する；並びにＤｉｎＢ及びＵｍｕＣＤ（損傷乗り越えＤＮＡポリメラーゼ）は、細胞がアルキル化による損傷をすり抜けるのを可能にする。
【０１０６】
本明細書において使用されるＡｄａ、ＯＧＴ、ＲｅｃＡ、ＤｉｎＢ、及びＵｍｕＣＤという用語は、それぞれ、Ａｄａ、ＯＧＴ、ＲｅｃＡ、ＤｉｎＢ、及びＵｍｕＣＤホモログを含む。
【０１０７】
大腸菌（Escherichia coli）ＡｌｋＢタンパク質は、鉄−及び２−オキソグルタル酸依存性オキシゲナーゼであり、主に、ＤＮＡにおける１−メチルアデニン及び３−メチルシトシン傷害の修復を担う（たとえば、図２に示すように、核酸からアルキル基を除去する）。ＡｌｋＢホモログはまた、多くの原核生物及び真核生物の種においても存在する。たとえば、ＡｌｋＢの９つのヒト相同体、すなわち、Ａｌｋｂ相同体１（ＮＣＢＩ  Ｇｅｎｅ  ＩＤ：８８４６）、ヒストンｈ２ａジオキシゲナーゼ、ＡＬＫＢＨ２（ＧｅｎｅＩＤ：１２１６４２）、ＡＬＫＢＨ３（ＧｅｎｅＩＤ：２２１１２０）、ＡＬＫＢＨ４（ＮＣＢＩ  ＧｅｎｅＩＤ：５４７８４）、ＡＬＫＢＨ５（ＮＣＢＩ  ＧｅｎｅＩＤ：５４８９０）、ＡＬＫＢＨ６（ＮＣＢＩ  ＧｅｎｅＩＤ：８４９６４）、ＡＬＫＢＨ７（ＮＣＢＩ  ＧｅｎｅＩＤ：８４２６６）、ＡＬＫＢＨ８（ＮＣＢＩ  ＧｅｎｅＩＤ：９１８０１）、及びＦＴＯ（ＮＣＢＩ  ＧｅｎｅＩＤ：７９０６８）が、存在することが知られている。
【０１０８】
ＤＮＭＴ（ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ）は、核酸の（たとえばＤＮＡのＣｐＧ部位での）アルキル化（たとえばメチル化）を触媒する酵素である。
【０１０９】
たとえば、核酸のヌクレオチドは、アルキル化されて、５ｍｅＣ及び／又は３ｍｅＣなどのようなヌクレオチド付加物をもたらしてもよい。
【化１】
2022502507.tif 000003
【０１１０】
発明者らは、ＤＮＡがメチル化されていることがわかっている（たとえば遺伝子調節のエピジェネティックなコントロールの一部として）生物が、大抵、細菌酵素ＡｌｋＢ（たとえばＡＬＫＢ２）のホモログを持っていること及びそのようなそのホモログは、ＤＮＡメチル化活性を有していない生物（又は種）において失われていることを最近発見した。
【０１１１】
興味深いことに、緑膿菌（P.aeruginosa）は、進化の中で、比較的最近になってＡｌｋＢを失っており、したがって、本発明の治療上の組み合わせに特に適した標的であってもよい。緑膿菌（P.aeruginosa）は、慢性の肺の病（たとえば嚢胞性線維症）を有する対象にとって大きな健康上の問題となるので、本発明の治療上の組み合わせは、そのような患者において感染症を処置するのに特に適していてもよい。したがって、一実施形態において、治療上の組み合わせは、嚢胞性線維症などのような、慢性の肺の病を有する患者において、病原体による感染症を処置するために使用されてもよい。
【０１１２】
同様に、結核菌（M.tuberculosis）は、ＡｌｋＢホモログを欠き、３’位のシトシンをアルキル化する（たとえばメチル化する）ことができるので、本発明の治療上の組み合わせが、結核（ＴＢ）を処置するのに特に適していてもよい。
【０１１３】
核酸アルキル化（たとえばモノアルキル化）のコントロール／回復／耐性のための遺伝子を欠くいかなる病原体（たとえば感染性生物）も、本発明の治療上の組み合わせによる攻撃を特に受けやすいことがある。したがって、一実施形態において、本発明の治療上の組み合わせにより標的にされる病原体（たとえば細菌、ウイルス、原生生物、菌類、及び／又は蠕虫）は、ＡｌｋＡ、ＡｌｋＢ、Ａｄａ、ＯＧＴ、ＲｅｃＡ、ＤｉｎＢ、ＵｍｕＣＤ、又はその組み合わせから選択される遺伝子を欠いてもよい。適切には、病原体は、ＡｌｋＢ遺伝子を欠く。
【０１１４】
したがって、病原性感染症を有する対象は、感染症の病原体が前記遺伝子の１つ以上を欠くかどうかに基づいて層別化されてもよく、前記対象は、本発明の治療上の組み合わせに特に適したレシピエントとして選ばれてもよい。
【０１１５】
大腸菌（E.coli）遺伝子ＡｌｋＡ、ＡｌｋＢ、Ａｄａ、ＯＧＴ、ＲｅｃＡ、ＤｉｎＢ、ＵｍｕＣＤに対する言及は、そのホモログ（たとえば様々なドメイン、門、綱、目、科、又は属に存在するホモログ）を含む。当業者は、相同遺伝子を同定する及び／又は分類するのに適したツール及び技術を認識している（たとえば、下記の「配列同一性」の段落を参照）。
【０１１６】
例示的なＡｌｋｂ配列は、配列番号１（ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ＿０００９１３．３に相当する）において提供される。Ａｌｋｂホモログは、配列番号１の配列に対して、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％の配列同一性を示してもよい。たとえば、Ａｌｋｂホモログは、配列番号１の配列に対して、少なくとも８０％又は少なくとも９０％の配列同一性を示してもよい。適切には、Ａｌｋｂホモログは、配列番号１の配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を示してもよい。
【０１１７】
好ましい実施形態において、本発明の治療上の組み合わせにより標的にされる病原体（たとえば細菌、ウイルス、原生生物、菌類、及び／又は蠕虫）は、ＡｌｋＢ又はそのホモログを欠いてもよい。
【０１１８】
一実施形態において、病原体（好ましくはＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、センモウヒラムシ（Trichoplax adherens）、マンソン住血吸虫（Schistosoma mansoni）、マレー糸状虫（Brugia malayi）、及びクロアシマダニ（Ixodes scapularis）から選択される１つ以上の後生動物である。
【０１１９】
本発明の治療上の組み合わせが投薬されてもよい非病原性後生動物の生物は、エノムルス・ブレウィス（Enoplus brevis）、線虫（Caenorhabditis elegans）、ヒプシビウム・ドゥヤルジニ（Hypsibium dujardini）、オオミジンコ（Daphnia magna）、ミツバチ（Apis mellifera）、アメリカマツノキクイムシ（Dendroctonus ponderosae）、オオカバマダラ（Danaus plexippus）、及びキイロショウジョウバエ（Drosophila melanogaster）を含む。
【０１２０】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、赤痢アメーバ（Entamoeba histolytica）、腟トリコモナス（Trichomonas vaginalis）、ヒトブラストシスチス（Blastocystis hominis）、リーシュマニア（Leishmania）種、及びランブル鞭毛虫（Giardia lamblia）から選択される１つ以上の原生生物である。
【０１２１】
本発明の治療上の組み合わせが投薬されてもよい非病原性原生生物の生物は、フォンチクラ・アルバ（Fonticula alba）、キイロタマホコリカビ（Dictyostelium discoideum）、コナミドリムシ（Chlamydomonas reinhardtii）、クリトモナス・パラメジウム（Crytomonas paramedium）、ビンカムリ（Paulinella chromatophora）、ナンノクロロプシス・ガジタナ（Nannochloropsis gaditana）、テトラヒメナ（Tetrahymena）種を含む。
【０１２２】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、エンセファリトゾーン・クニクリ（Encephalitozoon cuniculi）、ノセマ・アピス（Nosema apis）、ナメマ・セラナエ（Namema ceranae）、ウィッタフォルマ・カルネアエ（Vittaforma carneae）、エンテロシトソアン・ビエネウシ（Enterocytosoan bieneusi）、スプラグエア・ロフィイ（Spraguea lophii）、ウアウラ・クリクリス（Vavra culiculis）、エドハルザルディア・アエデス（Edharzardia aedes）、ネマトシダ・パリシイ（Nematocida parisii）、ラゼラ（Razella）種、パラシテラ・パラシチカ（Parasitella parasitica）、リキテイミア・ラモセ（Lichteimia ramose）、スポリソリウム・スシタミネウム（Sporisorium scitamineum）、カワラタケ（Trametes versicolor）、及びケシワウロコタケ（Punctularia strigosozonata）から選択される１つ以上の菌類である。
【０１２３】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、ドレクスレラ・ステノブロカ（Drechslera stenobrocha）及びカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）又はその組み合わせから選択される１つ以上の子嚢菌である。
【０１２４】
本発明の治療上の組み合わせが投薬されてもよい非病原性子嚢菌生物は、分裂酵母（Schizosaccharomyces pombe）及び出芽酵母（Saccharomyces cerevisiae）又はその組み合わせを含む。
【０１２５】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、結核菌（Mycobacterium tuberculosis）ＮＣＧＭ２２０９、らい菌（Mycobacterium leprae）ＴＮ、トロフェリマ・ウィッペリ（Tropheryma whipplei）ＴＷ０８／２７、及びマイコバクテリウム・ウルセランス（Mycobacterium ulcerans）Ａｇｙ９９又はその組み合わせから選択される１つ以上のアクチノバクテリア（Actinobacteria）である。
【０１２６】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、リケッチア・リケッチイ（Rickettsia rickettsii）株ハウケ（Hauke）、エーリキア・カニス（Ehrlichia canis）株ジェイク（Jake）、バルトネラ・ヘンセラ（Bartonella henselae）株ヒューストン−１（Houston-1）、エーリキア・シャフェンシス（Ehrlichia chaffeensis）株アーカンソー（Arkansas）、及び塹壕熱菌（Bartonella quintana）株トゥールーズ（Toulouse）又はその組み合わせから選択される１つ以上のアルファプロテオバクテリアである。
【０１２７】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、肺炎球菌（Streptococcus pneumoniae）ＧＡ０４３７５、ストレプトコッカス・アガラクチア（Streptococcus agalactiae）ＢＳＵ２４７、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）亜種アウレウスＭＳＨＲ１１３２、表皮ブドウ球菌（Staphylococcus epidermidis）ＮＩＨ０５１６６８、リステリア菌（Listeria monocytogenes）ＦＳＬ  Ｊ２−０７１、エンテロコッカス・フェカリス（Enterococcus faecalis）ＥＲＶ１０３、エンテロコッカス・フェシウム（Enterococcus faecium）ＴＸ０１３３Ｃ、リステリア・インノクア（Listeria innocua）Ｃｌｉｐ１１２６２、炭疽菌（Bacillus anthracis）株Ａ０４４２、セレウス菌（Bacillus cereus）Ｒｏｃｋ１−３、化膿性連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）ＭＧＡＳ３１５、及びスタフィロコックス・サプロフィチクス（Staphylococcus saprophyticus）亜種サプロフィチクス（saprophyticus）ＡＴＣＣ  １５３０５、又はその組み合わせから選択される１つ以上の桿菌（Bacilli）である。
【０１２８】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、バクテロイデス・フラギリス（Bacteroides fragilis）ＨＭＷ  ６１５である。
【０１２９】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）Ｍ０４−２４０１９６及び淋菌（Neisseria gonorrhoeae）ＰＩＤ１又はその組み合わせから選択される１つ以上のベータプロテオバクテリア（Betaproteobacteria）である。
【０１３０】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、肺炎クラミジア（Chlamydophila pneumoniae）Ｊ１３８、トラコーマクラミジア（Chlamydia trachomatis）Ｆ／ＳｏｔｏｎＦ３、及びオウム病クラミジア（Chlamydia psittaci）ＮＪ１又はその組み合わせから選択される１つ以上のクラミジア（Chlamydiae）である。
【０１３１】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）Ａ株ＡＴＣＣ  ３５０２、クロストリジウム・ディフィシレ（Clostridium difficile）ＮＡＰ０８、ウエルチ菌（Clostridium perfringens）株１３、及び破傷風菌（Clostridium tetani）Ｅ８８又はその組み合わせから選択される１つ以上のクロストリジウム（Clostridia）である。
【０１３２】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii）ＡＴＣＣ  １７９７８、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）ＬＥＳＢ５８、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）２２．４−２１、野兎病菌（Francisella tularensis）亜種ツラレンシス（tularensis）ＳＣＨＵ  Ｓ４、ステノトロフォモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）Ｒ５５１−３、仮性結核菌（Yersinia pseudotuberculosis）ＩＰ  ３１７５８、ペスト菌（Yersinia pestis）次亜種オリエンタリス（Orientalis）株ＢＡ２００９０１７９９、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophila）株レンズ（Lens）、ステノトロフォモナス（Stenotrophomonas）種ＳＫＡ１４、及びコレラ菌（Vibrio cholera）ＣＩＲＳ  １０１又はその組み合わせから選択される１つ以上のガンマプロテオバクテリア（Gammaproteobacteria）である。
【０１３３】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、ウレアプラズマ・ウレアリチカム（Ureaplasma urealyticum）血清型４株ＡＴＣＣ  ２７８１６及び肺炎マイコプラスマ（Mycoplasma pneumoniae）Ｍ１２９又はその組み合わせから選択される１つ以上のモリクテス（Mollicutes）である。
【０１３４】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、カンピロバクター・ジェジュニ（Campylobacter jejuni）亜種ジェジュニ（jejuni）ＬＭＧ  ２３２１８及びピロリ菌（Helicobacter pylori）ＳｏｕｔｈＡｆｒｉｃａ７又はその組み合わせから選択される１つ以上のプロテオバクテリア（Proteobacteria）である。
【０１３５】
一実施形態において、病原体（好ましくは、ＡｌｋＢホモログを欠く病原体）は、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidum）亜種パリダム（pallidum）株ニコルズ（Nichols）、レプトスピラ・サンタロサイ（Leptospira santarosai）株２００００２７８７０、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borrelia burgdorferi）２９８０５、レプトスピラ・インテロガンス（Leptospira interrogans）血清型コペンハゲニ（Copenhageni）株Ｆｉｏｃｒｕｚ  ＬＶ２７９１、レプトスピラ・ウエイリイ（Leptospira weilii）血清型トパーズ（Topaz）株ＬＴ２１１６、レプトスピラ・ノグキイ（Leptospira noguchii）株２００６００１８７０、ボレリア・アフゼリ（Borrelia afzelii）ＰＫｏ、回帰熱ボレリア（Borrelia recurrentis）Ａ１、及びボレリア・ガリニ（Borrelia garinii）ＰＢｒ又はその組み合わせから選択される１つ以上のスピロカエチア（Spirochaetia）である。
【０１３６】
誤解を避けるために、病原体は、ＡｌｋＢホモログを含んでいてもよい。ＡｌｋＢ／ＡｌｋＢホモログの保護的な役割（核酸からのアルキル化による損傷の除去における）並びにＤＮＭＴ酵素（たとえばＤＮＭＴ１及び／又はＤＮＭＴ２）のアルキル化（たとえばメチル化）の役割を考慮すれば、ＡｌｋＢ発現と比べて高レベルのＤＮＭＴ発現を有する病原体は、本発明の治療上の組み合わせに対して、特に感受性であってもよい。当業者は、遺伝子の発現を決定するための方法を理解しており、これは、たとえばマイクロアレイ分析、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＴ）、ノーザンブロット、遺伝子発現のシリアル分析（Serial Analysis of Gene Expression）（ＳＡＧＥ）、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、及び／又はＲＮＡ−シークエンシング（ＲＮＡ−ｓｅｑ）を介して実現されてもよい。
【０１３７】
前記遺伝子発現は、絶対的な遺伝子発現であっても、相対的な遺伝子発現であってもよい。相対的発現の決定は、適した標準／参照遺伝子（たとえばハウスキーピング遺伝子）の発現と比べたＤＮＭＴ遺伝子の発現及び／又はＡｌｋＢホモログ遺伝子の発現を分析することを含んでいてもよい。
【０１３８】
一実施形態において、病原体は、ＡｌｋＢホモログ遺伝子発現に対して高い比のＤＮＭＴ遺伝子発現を含む。一実施形態において、ＤＮＭＴ遺伝子発現対ＡｌｋＢホモログ遺伝子発現の比は、約２：１、約５：１、約１０：１、約１５：１、約２０：１、約２５：１、約３０：１、約３５：１、約４０：１、約４５：１、及び約５０：１から選択される１つ以上である。
【０１３９】
さらに、細菌の（特に結核菌（M.tuberculosis）の）多くの株は、あるアミノグリコシド系抗生物質（特にカナマイシン）に対して抵抗性を有することが報告されており、したがって、そのような抗生物質を、本発明の治療上の組み合わせの一部として意図的に使用することができること（たとえば治療上の組み合わせの向上）により、そのような抵抗性の株を特に適した標的にする。
【０１４０】
前記「病原体の抑制の向上」の評価は、以下の実施例を参照することによって実証され、実施例（たとえば実施例１）において記載される手法を使用して評価されてもよい。たとえば、実施例１は、治療上の組み合わせの構成成分の１つにより（又はどちらによっても）処置しないサンプルと共に、治療上の組み合わせにより処置したサンプルにおけるコロニー形成単位（ＣＦＵ）の数を測定する方法を記載する。これは、本発明の治療上の組み合わせとアミノグリコシド系抗生物質若しくは核酸モノアルキル化薬（又はその両方）を欠く以外は同一の組成物との間の、病原体抑制の直接的な比較を可能にする。
【０１４１】
一実施形態において、Ｂ細胞悪性疾患の抑制は、２つの主要な活性化合物（たとえばアミノグリコシド系抗生物質及び核酸モノアルキル化薬）の組み合わせについて得られる「ＣＦＵ」値が、本発明のアミノグリコシド系抗生物質又は核酸モノアルキル化薬が不在である（がそれ以外は同一の条件下の）場合に得られる「ＣＦＵ」値よりも低い場合、向上しているとみなされる。
【０１４２】
したがって、一実施形態において、病原体の抑制の向上は、本発明のアミノグリコシド系抗生物質及び核酸モノアルキル化薬の組み合わせについて得られる「ＣＦＵ」値を、同じ条件下で、本発明のアミノグリコシド系抗生物質又は核酸モノアルキル化薬が不在の同じ配合物／組成物について得られた「ＣＦＵ」値と比較することによって、決定されてもよい。
【０１４３】
一実施形態において、本発明は、本発明のアミノグリコシド系抗生物質が不在であるか又は核酸モノアルキル化薬が不在であるが、それ以外は同じ条件下の同じ配合物（たとえば組成物）によって提供されるＣＦＵ値がよりも、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％（好ましくは少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％；より好ましくは少なくとも約１０％）低いＣＦＵ値を提供する。
【０１４４】
一実施形態において、本発明の治療上の組み合わせは、病原体の相乗的抑制を表してもよい。
【０１４５】
本明細書において使用される「相乗的」という用語は、表される病原体の抑制が、その１つ１つの合計よりもすぐれていることを意味する。言い換えれば、病原体の抑制は、相加的なものを超える。
【０１４６】
核酸（たとえばＤＮＡ）がアルキル化されてもよい任意の細胞（たとえば腫瘍）又は生物は、本発明の治療上の組み合わせによって標的にされてもよい。したがって、本発明の治療上の組み合わせは、癌を患っている対象における腫瘍を抑制するために好都合に使用されてもよい。
【０１４７】
より詳細には、本発明の治療上の組み合わせは、核酸モノアルキル化薬の投与を伴う化学療法の効力を増加させるためにさらに使用されてもよい。アミノグリコシドが、従来より、そのような癌療法の一部として（たとえばその補助薬として）使用されていないので、これは、非常に驚くべきことである。
【０１４８】
したがって、さらなる態様において、癌を処置するのに使用するための治療上の組み合わせであって、
ａ．抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換するさらなる核酸モノアルキル化薬
を含む、治療上の組み合わせが、提供される。
【０１４９】
別の態様において、癌を処置するのに使用するための治療上の組み合わせであって、
ａ．アミノグリコシド系抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換するさらなる核酸モノアルキル化薬
を含む、治療上の組み合わせが、提供される。
【０１５０】
一実施形態において、治療上の組み合わせは、前記アミノグリコシド系抗生物質を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、癌の（好ましくは癌細胞の、より好ましくは腫瘍の）抑制の向上を提供する。一実施形態において、治療上の組み合わせは、前記核酸モノアルキル化薬を欠く以外は同一の組成物と比較した場合に、癌の（好ましくは癌細胞の、より好ましくは腫瘍の）抑制の向上を提供する。
【０１５１】
適切には、前記治療上の組み合わせは、対象に投与されてもよい。対象は、癌を有するとして以前に診断されていなくてもよい。その代わりに、対象は、癌を有するとして以前に診断されていてもよい。対象はまた、疾患リスク因子を表す対象であっても、癌の症状がない対象であってもよい。対象はまた、癌を患っているか又は癌になるリスクがある対象であってもよい。一実施形態において、対象は、癌のための療法を以前に投与されたことがある。
【０１５２】
療法の方法が癌を処置するための方法である実施形態において、癌細胞の損傷を最大にし且つ非癌細胞の損傷を最小にする治療上の組み合わせの投薬量が、選ばれてもよい。
【０１５３】
一実施形態において、前記癌は、膠芽腫（たとえば多形性膠芽腫）、急性骨髄性白血病、乳癌、白血病、リンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、肉腫、肺癌（小及び／又は非小細胞肺癌）、卵巣癌、星状細胞腫、骨肉腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、小細胞肺癌、神経芽細胞腫、精巣癌、軟部組織肉腫、骨原性肉腫、膀胱癌、小細胞肺癌、子宮頸癌、膵癌、神経内分泌腫瘍、真性赤血球増加症、骨髄様化生、線維肉腫、横紋筋肉腫、島細胞がん、髄様甲状腺癌、未分化星状細胞腫、頭頸部癌、食道癌、胃癌、前立腺癌、中皮腫、及び子宮内膜癌から選択される１つ以上である。
【０１５４】
好ましい実施形態において、前記癌は、膠芽腫、急性骨髄性白血病、及び乳癌から選択される１つ以上であってもよい。
【０１５５】
適切には、前記乳癌は、ＢＲＣＡ欠損（たとえばＢＲＣＡ１及び／又はＢＲＣＡ２欠損）であってもよい。
【０１５６】
興味深いことに、ＤＮＭＴ活性は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の病因において重要であるので、ＡＭＬは、本発明の治療上の組み合わせの特に適した標的であってもよい。したがって、一実施形態において、前記癌は、急性骨髄性白血病である。
【０１５７】
前記癌の癌細胞（たとえば腫瘍）は、参照標準におけるＤＮＭＴの発現レベルよりも高いＤＮＭＴの発現レベルを含んでいてもよく、参照標準は、健康な細胞由来のものである。好ましくは、健康な細胞は、非癌細胞である。
【０１５８】
前記癌の癌細胞（たとえば腫瘍）は、参照標準におけるａｌｋｂの発現レベルよりも高いａｌｋＢの発現レベルを含んでいてもよく、参照標準は、健康な細胞由来のものである。好ましくは、健康な細胞は、非癌細胞である。
【０１５９】
癌は、ＤＮＭＴ遺伝子発現対ＡｌｋＢホモログ遺伝子発現の比によって層別化されてもよい。たとえば、癌の癌細胞は、ＡｌｋＢホモログ遺伝子発現のレベルと比べて、高レベルのＤＮＭＴ遺伝子発現を有していてもよい。
【０１６０】
一実施形態において、癌細胞は、ＡｌｋＢホモログ遺伝子発現に対して高い比のＤＮＭＴ遺伝子発現を含む。一実施形態において、ＤＮＭＴ遺伝子発現対ＡｌｋＢホモログ遺伝子発現の比は、約２：１、約５：１、約１０：１、約１５：１、約２０：１、約２５：１、約３０：１、約３５：１、約４０：１、約４５：１、及び約５０：１から選択される１つ以上である。
【０１６１】
一実施形態において、癌細胞は、非癌細胞（たとえば健康な細胞）におけるＡｌｋＢホモログ遺伝子の発現と比べて、ＡｌｋＢホモログ遺伝子の発現が減少している。一実施形態において、癌細胞は、非癌細胞（たとえば健康な細胞）におけるＤＮＭＴ遺伝子の発現と比べて、ＤＮＭＴ遺伝子の発現が増加している。一実施形態において、癌細胞は、非癌細胞におけるＡｌｋＢホモログ遺伝子の発現と比べて、ＡｌｋＢホモログ遺伝子の発現が減少しており且つ非癌細胞におけるＤＮＭＴ遺伝子の発現と比べて、ＤＮＭＴ遺伝子の発現が増加している。
【０１６２】
一実施形態において、前記ＡｌｋＢホモログは、Ａｌｋｂ相同体１、ヒストンｈ２ａジオキシゲナーゼ、ＡＬＫＢＨ２、ＡＬＫＢＨ３、ＡＬＫＢＨ４、ＡＬＫＢＨ５、ＡＬＫＢＨ６、ＡＬＫＢＨ７、ＡＬＫＢＨ８、及びＦＴＯ又はその組み合わせから選択される１つ以上である。適した実施形態において、前記ＡｌｋＢホモログは、ＡＬＫＢＨ２である。
【０１６３】
一実施形態において、前記ＤＮＭＴは、ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、及びＤＮＭＴ３Ｂから選択される１つ以上である。
【０１６４】
適切には、前記非癌細胞は、癌（たとえば癌である腫瘍）が存在する同じ器官及び／又は組織由来の細胞である。
【０１６５】
一態様において、
ａ．抗生物質及び
ｂ．アルキル基により、核酸の単一のヌクレオチドを置換するさらなる核モノアルキル化薬
を含む、癌を処置するための方法において使用するためのキットが、提供される。
【０１６６】
一態様において、
ａ．アミノグリコシド系抗生物質及び
ｂ．アルキル基により核酸の単一のヌクレオチドを置換するさらなる核酸モノアルキル化薬
を含む、癌を処置するための方法において使用するためのキットが、提供される。
【０１６７】
前記キットは、抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）及びモノアルキル化薬を含有するためのケースをさらに含んでいてもよい。
【０１６８】
一実施形態において、抗生物質及びモノアルキル化薬は、同じ組成物内に含まれる。別の実施形態において、抗生物質及びモノアルキル化薬は、別々の組成物内に含まれる。一実施形態において、アミノグリコシド系抗生物質及びモノアルキル化薬は、同じ組成物内に含まれる。別の実施形態において、アミノグリコシド系抗生物質及びモノアルキル化薬は、別々の組成物内に含まれる。
【０１６９】
一実施形態において、キットは、癌を処置するための方法においてキットを使用するための説明書を含んでいてもよい。前記説明書は、たとえば、投与される治療上の組み合わせの最適な用量、治療上の組み合わせを投与する最適な回数、最適な投与方法、又は癌を処置するために治療上の組み合わせを使用することに関連する任意の他の情報を含んでいてもよい。
【０１７０】
前記説明書は、ラベルの一部として又はキットと一緒に若しくは別々に提供される取扱説明書の一部として提供されてもよい。
【０１７１】
以下の実施形態及び定義は、本明細書において記載される本発明の任意の態様（又は他の実施形態）に、たとえば、本明細書において記載される任意の方法、使用、組成物、治療上の組み合わせ、使用のための治療上の組み合わせ、使用のための薬の組み合わせ、キット、又は使用のためのキットに当てはめられてもよい。
【０１７２】
一実施形態において、本発明の治療上の組み合わせは、経口、静脈内、筋肉内、皮下、及び皮内投与又はその組み合わせから選択される１つ以上によって投与されてもよい。抗生物質（たとえばアミノグリコシド系抗生物質）及び核酸モノアルキル化薬は、同じ又は別々の手段によって投与されてもよい。たとえば、抗生物質（アミノグリコシド系抗生物質）は、経口的に投与されてもよく、核酸モノアルキル化薬は、静脈内に投与されてもよい。
【０１７３】
抗生物質のアミノグリコシド系の分類は、約１０の様々な抗生物質からなり、それぞれ、共通の作用メカニズムを有する。アミノグリコシドは、主として、３０Ｓリボソームサブユニット内の１６ＳリボソームＲＮＡのアミノアシル部位に結合することによって作用し、これは、遺伝子コードの誤読、したがって転座の阻害をもたらす。ｍＲＮＡの結合及び５０Ｓリボソームサブユニットの合体などのような、ペプチド合成に必要とされる初めのステップは、中断されないが、翻訳の精度を保証するためのメカニズムの破壊のために、伸長が起こらない。結果として生じる抗菌活性は、感受性の好気性グラム陰性桿菌に対して、通常殺菌性である。アミノグリコシドの最も一般的な臨床上の用途は、好気性グラム陰性桿菌によって引き起こされる深刻な感染症の処置のためのものである。
【０１７４】
一実施形態において、アミノグリコシドは、カナマイシン（たとえばカナマイシンＡ）、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、又はその組み合わせから選択される１つ以上である。そのような抗生物質は、多くの場合、塩形態で使用され／投与され、このように、アミノグリコシド系抗生物質の任意の塩が、本発明によって包含される。
【０１７５】
一実施形態において、アミノグリコシドは、カナマイシン（たとえばカナマイシンＡ）、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、ストレプトマイシン、又はその組み合わせから選択される１つ以上である。
【０１７６】
前記ネオマイシンは、ネオマイシンＢ、ネオマイシンＣ、又はネオマイシンＥ（たとえばパロモマイシン）の１つ以上であってもよい。
【０１７７】
好ましい実施形態において、アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン（たとえばカナマイシンＡ）及びネオマイシンから選択される１つ以上である。適切には、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン（たとえばカナマイシンＡ）である。
【０１７８】
一実施形態において、ペニシリン系抗生物質は、ベンジルペニシリン（ペニシリンＧ）、プロカインベンジルペニシリン（プロカインペニシリン）、ベンザチンベンジルペニシリン（ベンザチンペニシリン）、及びフェノキシメチルペニシリン（ペニシリンＶ）、又はその組み合わせから選択される１つ以上である。
【０１７９】
一実施形態において、セファロスポリン系抗生物質は、セファゾリン、セファクロル、セフジニル、セフチン（ceftin）、セフロキシム、セファドロキシル、セファレキシン、セフェピム、セフトリアキソン、セフィキシム、及びセフタロリンフォサミル又はその組み合わせから選択される１つ以上である。
【０１８０】
一実施形態において、マクロライド系抗生物質は、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、フィダキソマイシン、及びテリスロマイシン又はその組み合わせから選択される１つ以上である。
【０１８１】
一実施形態において、フルオロキノロン系抗生物質は、シプロフロキサシン、デラフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、及びオフロキサシン又はその組み合わせから選択される１つ以上である。
【０１８２】
一実施形態において、スルホンアミド系抗生物質は、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジミジン、スルファフラゾール（スルフィソキサゾール）、スルフィソミジン、スルファメトキサゾール、スルファモキソール、スルファニトラン、スルファジメトキシン、スルファメトキシピリダジン、スルファメトキシジアジン、スルファドキシン、スルファメトピラジン、及びテレフチル（terephtyl）並びにその組み合わせから選択される１つ以上である。
【０１８３】
一実施形態において、テトラサイクリン系抗生物質は、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、デメクロサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、ロリテトラサイクリン、チゲサイクリン、及びドキシサイクリン又はその組み合わせから選択される１つ以上である。
【０１８４】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）、メタンスルホン酸メチル（ＭＭＳ）、ダカルバジン、メチルニトロソ尿素（ＭＭＵ）、メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）、テモゾロミド（ＴＭＺ）、エチルニトロソ尿素（ＥＮＵ）、ジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）、及びＮ−ニトロソ−Ｎ−メチル尿素（ＮＭＵ）から選択される１つ以上である。
【０１８５】
一実施形態において、核モノアルキル化薬は、ダカルバジン、メチルニトロソ尿素（ＭＭＵ）、メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）、テモゾロミド（ＴＭＺ）、エチルニトロソ尿素（ＥＮＵ）、ジエチルニトロソアミン（ＤＥＮ）、及びＮ−ニトロソ−Ｎ−メチル尿素（ＮＭＵ）から選択される１つ以上である。
【０１８６】
好ましい実施形態において、前記アルキル化薬は、テモゾロミド（ＴＭＺ）である。
【０１８７】
メタンスルホン酸メチル（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：４１５６）は、通常、Ｎ７−デオキシグアノシン及びＮ３−デオキシアデノシンでＤＮＡをメチル化し、また、ＤＮＡ塩基中の他の酸素原子及び窒素原子でメチル化してもよく、また、核酸のホスホジエステル連結をメチル化してもよい。
【０１８８】
メタンスルホン酸メチル（ＭＭＳ）は、以下の構造を有してもよい。
【化２】
2022502507.tif 000004
【０１８９】
メタンスルホン酸エチル（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：６１１３）は、以下の構造を有してもよい。
【化３】
2022502507.tif 000005
【０１９０】
テモゾロミド（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：５３９４）は、以下の構造を有してもよい。
【化４】
2022502507.tif 000006
【０１９１】
エチルニトロソ尿素（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：１２９６７）は、以下の構造を有してもよい。
【化５】
2022502507.tif 000007
【０１９２】
Ｎ−ニトロソ−Ｎ−メチル尿素（ＮＭＵ）（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：１２６９９）は、以下の構造を有してもよい。
【化６】
2022502507.tif 000008
【０１９３】
Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：６２６１）は、以下の構造を有してもよい。
【化７】
2022502507.tif 000009
【０１９４】
ダカルバジン（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：２９４２）は、以下の構造を有してもよい。
【化８】
2022502507.tif 000010
【０１９５】
ジエチルニトロソアミン（ＰｕｂＣｈｅｍ  ＣＩＤ：５９２１）は、以下の構造を有してもよい。
【化９】
2022502507.tif 000011
【０１９６】
そのような核酸モノアルキル化薬は、通常、核酸が、前記モノアルキル化薬と接触した場合に、前記核酸（たとえば核酸の塩基／ヌクレオチド）のアルキルによる置換をもたらす。
【０１９７】
「アルキル」（「アルキル基」及び「アルキル置換基」という用語と同義）は、飽和又は不飽和の直鎖又は分岐炭化水素鎖であってもよい。アルキル基は、１〜１８の炭素原子を有する、たとえば、アルキル基は、Ｃ１〜Ｃ１８基であってもよい又はＣ１〜Ｃ１２基、Ｃ１〜Ｃ６基、若しくはＣ１〜Ｃ４基である。低級アルキル基は、通常、１〜６の炭素を有していてもよい（また、直鎖であっても分岐であってもよい鎖であってもよい）。アルキル基は、ゼロ分岐（たとえば直鎖である）、１分岐、２分岐、又は２つ以上の分岐を有していてもよい。一実施形態において、アルキル基は、飽和されていてもよい。別の実施形態において、アルキル基は、不飽和であってもよい。一実施形態において、不飽和アルキルは、１つの二重結合、２つの二重結合、２つを超える二重結合、及び／又は１つの三重結合、２つの三重結合、若しくは２つを超える三重結合を有していてもよい。アルキル鎖は、任意選択で、１つの置換基（たとえば、アルキル基は単一置換である）又は１〜２の置換基又は１〜３の置換基又は１〜４の置換基等により置換されてもよい。置換基は、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ボロニル（boronyl）、カルボキシ、ニトロ、シアノ、又はその組み合わせからなる群から選択される１つ以上であってもよい。１つ以上のヘテロ原子を組み込むアルキル基は、ヘテロアルキル基と呼ばれてもよい。
【０１９８】
一実施形態において、アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ヘプチル、ノニル、デシル、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。適切には、アルキル基は、メチル、エチル、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい（好ましくはメチル）。
【０１９９】
一実施形態において、アルキル化薬は、メタンスルホン酸メチル（ＭＭＳ）、ＭＭＵ、メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）、テモゾロミド（ＴＭＺ）、エチルニトロソ尿素（ＥＮＵ）、及びメチルニトロソ尿素（ＮＭＵ）から選択される１つ以上である。
【０２００】
そのような核酸モノアルキル化薬の多くは、以前に、化学療法の一部としてのみ使用されたことがある。したがって、本発明は、そのような薬の好都合なさらなる、すなわち、細菌の抑制のための用途を提供する。
【０２０１】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、ニトロソ尿素であってもよい。適切には、ニトロソ尿素は、ＭＭＵ、ＥＮＵ、ＮＭＵ、又はその組み合わせから選択される１つ以上であってもよい。
【０２０２】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ＭＮＮＧであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２０３】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ＭＭＳであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２０４】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ダカルバジンであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２０５】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ＭＭＵであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２０６】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ＥＭＳであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２０７】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ＴＭＺであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２０８】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ＥＮＵであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２０９】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ＤＥＮであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２１０】
一実施形態において、前記核酸モノアルキル化薬は、ＮＭＵであり、前記アミノグリコシド系抗生物質は、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、ジベカシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ネオマイシン、及びストレプトマイシン又はその塩から選択される１つ以上である。
【０２１１】
好ましい実施形態において、本発明の核酸モノアルキル化薬は、ＤＮＡモノアルキル化薬である。そのような核酸／ＤＮＡモノアルキル化薬は、核酸のみ（又はたとえばＤＮＡのみ）をアルキル化するモノアルキル化薬に限定されない。たとえば、モノアルキル化薬は、ポリペプチドなどのような、別の分子をアルキル化することができてもよい。
【０２１２】
適切には、アミノグリコシド系抗生物質は、核酸モノアルキル化薬と相乗作用を示して、そのような薬の組み合わせが投薬される細胞（たとえば細菌細胞）又は生物において起こる核酸アルキル化（たとえば有毒なＤＮＡアルキル化）の量の増加をもたらす。したがって、アミノグリコシド系抗生物質は、モノアルキル化薬の存在下において核酸のアルキル化を向上させてもよい。さらなる実施形態において、アミノグリコシドは、核酸モノアルキル化薬の核酸アルキル化活性を向上させて、核酸（たとえばヌクレオチド）アルキル化を増加させる。好ましくは、前記核酸アルキル化は、有毒なＤＮＡアルキル化である。
【０２１３】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により核酸のヌクレオチドを置換して、１つ以上のヌクレオチド付加物、好ましくは、３−メチルシトシン（３ｍｅＣ）、３−メチルグアニン（３ｍｅＧ）、３−メチルアデニン（３ｍｅＡ）、８−オキソグアニン（８−オキソ−Ｇ）、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、Ｏ６−エチルグアニン、又は任意のその組み合わせから選択される１つ以上のヌクレオチド付加物をもたらす。
【０２１４】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基によりヌクレオチド（たとえば核酸の）を置換して、３−メチルシトシン（３ｍｅＣ）、３−メチルグアニン（３ｍｅＧ）、３−メチルアデニン（３ｍｅＡ）、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、Ｏ６−エチルグアニン、又は任意のその組み合わせから選択される１つ以上のヌクレオチド付加物をもたらす。
【０２１５】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、第３位で（たとえば第３番目の窒素で）メチル基によりシトシンを置換して（たとえばメチル化して）、ヌクレオチド付加物３ｍｅＣをもたらす。
【０２１６】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により、第３位で（たとえば第３番目の窒素で）グアニンを置換して（たとえばメチル化して）、ヌクレオチド付加物３ｍｅＧをもたらす。
【０２１７】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基により第３位で（たとえば第３番目の窒素で）でアデニンを置換して（たとえばメチル化して）、３ｍｅＡをもたらす。
【０２１８】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基によりＯ２位でチミンを置換して（たとえばアルキル化して）、Ｏ２−アルキルチミンをもたらす。
【０２１９】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基によりＯ４位でチミンを置換して（たとえばアルキル化して）、ヌクレオチド付加物Ｏ４−アルキルチミンをもたらす。
【０２２０】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基によりＯ６位でチミンを置換して（たとえばアルキル化して）、ヌクレオチド付加物Ｏ６−アルキルチミンをもたらす。
【０２２１】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基によりＯ６位でグアニンを置換して（たとえばメチル化して）、ヌクレオチド付加物Ｏ６−メチルグアニンをもたらす。
【０２２２】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、アルキル基によりＯ６位でグアニンを置換して（たとえばメチル化して）、ヌクレオチド付加物Ｏ６−エチルグアニンをもたらす。
【０２２３】
一実施形態において、核酸モノアルキル化薬は、ヌクレオチド又は核酸を置換して、３ｍｅＣ、３ｍｅＧ、３ｍｅＡ、８−オキソ−Ｇ、Ｏ２−アルキルチミン、Ｏ４−アルキルチミン、Ｏ６−メチルグアニン、及びＯ６−エチルグアニンから選択される１つ以上のヌクレオチド付加物をもたらす。
【０２２４】
抗生物質／アミノグリコシド抗生物質及び核酸モノアルキル化薬の任意の組み合わせは、本発明によって包含される。たとえば、治療上の組み合わせ又は組成物は、複数のアミノグリコシド及び／又は複数の核酸モノアルキル化薬を含んでいてもよい。様々な組み合わせが、処置される疾患／病原体／感染症に基づいて選ばれてもよく、様々な組み合わせが、特定の疾患に最適であってもよい。本発明の治療上の組み合わせ／組成物内に包含される広範な抗生物質／アミノグリコシド系抗生物質及び核酸モノアルキル化薬を考慮すれば、これは、多数の感染症、さらには、多数の様々な病原体によって引き起こされるこの分類内の多数の感染症（たとえば細菌、ウイルス、菌類等の感染）の処置の向上を可能にする。
【０２２５】
一実施形態において、治療上の組み合わせは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のアミノグリコシド系抗生物質を含んでいてもよい。たとえば、治療上の組み合わせは、少なくとも２、３、４、又は５のアミノグリコシド系抗生物質を含んでいてもよい。
【０２２６】
一実施形態において、治療上の組み合わせは、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０の核酸モノアルキル化薬を含んでいてもよい。たとえば、治療上の組み合わせは、少なくとも２、３、４、又は５の核酸モノアルキル化薬を含んでいてもよい。
【０２２７】
配列同一性
本明細書において記載される遺伝子又はポリペプチドに対する言及は、そのホモログを含む。当業者はまた、相同な／類似の核酸／ポリペプチド配列を同定するために適切な配列アライメントを用いる方法を理解している。
【０２２８】
全体的な方法、局所的な方法、及びハイブリッド方法、たとえばセグメントアプローチ方法などを含むが、これらに限定されない、種々の配列アライメント方法のいずれも、同一性パーセントを決定するために、使用することができる。同一性パーセントを決定するためのプロトコールは、当業者の範囲内のごく普通の手順である。全体的な方法は、分子の初めから終わりまで配列をアライメントし、個々の残基のペアのスコアを合計することによって及びギャップペナルティーを課すことによって最も良いアライメントを決定する。非限定的な方法は、たとえば、ＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗ、たとえばJulie D. Thompson et al., CLUSTAL W: Improving the Sensitivity of Progressive Multiple Sequence Alignment Through Sequence Weighting, Position- Specific Gap Penalties and Weight Matrix Choice, 22(22) Nucleic Acids Research 4673-4680 (1994)を参照、及び反復改良法、たとえばOsamu Gotoh, Significant Improvement in Accuracy of Multiple Protein. Sequence Alignments by Iterative Refinement as Assessed by Reference to Structural Alignments, 264(4) J. MoI. Biol. 823-838 (1996)を参照、を含む。局所的な方法は、インプット配列のすべてによって共有される１つ以上の保存モチーフを同定することによって、配列をアライメントする。非限定的な方法は、たとえば、Ｍａｔｃｈ−ｂｏｘ、たとえばEric Depiereux and Ernest Feytmans, Match-Box: A Fundamentally New Algorithm for the Simultaneous Alignment of Several Protein Sequences, 8(5) CABIOS 501 -509 (1992)を参照、Ｇｉｂｂｓ  ｓａｍｐｌｉｎｇ、たとえばC. E. Lawrence et al., Detecting Subtle Sequence Signals: A Gibbs Sampling Strategy for Multiple Alignment, 262(5131 ) Science 208-214 (1993)を参照、Ａｌｉｇｎ−Ｍ、たとえばIvo Van WaIIe et al., Align-M - A New Algorithm for Multiple Alignment of Highly Divergent Sequences, 20(9) Bioinformatics:1428-1435 (2004)を参照、を含む。
【０２２９】
このように、配列同一性パーセントは、従来の方法によって決定される。たとえばAltschul et al., Bull. Math. Bio. 48: 603-16, 1986及びHenikoff and Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-19, 1992を参照。簡単に述べると、２つのアミノ酸配列が、下記に示されるように（アミノ酸は標準的な一文字コードによって示される）、Henikoff and Henikoff（同書）の１０のギャップオープニングペナルティー、１のギャップエクステンションペナルティー、及び「ｂｌｏｓｕｍ  ６２」スコアリングマトリックスを使用してアライメントスコアを最適化するようにアライメントされる。
【０２３０】
配列同一性を決定するためのアライメントスコア
【化１０】
2022502507.tif 000012
【０２３１】
同一性パーセントは、次いで、次のように算出される。
【数１】
2022502507.tif 000013
【０２３２】
実質的に相同なポリペプチドは、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、又は追加を有するとして特徴付けられる。これらの変化は、好ましくは軽微な類いのものである、すなわち、保存的アミノ酸置換（下記を参照）及びポリペプチドのフォールディング又は活性に著しく影響を及ぼさない他の置換、通常１〜約３０アミノ酸のわずかな欠失、並びにアミノ末端メチオニン残基、約２０〜２５残基以下の小さなリンカーペプチド、又はアフィニティータグなどのようなわずかなアミノ又はカルボキシ末端伸張である。
【０２３３】
特に定義されない限り、本明細書において使用される技術用語及び科学用語はすべて、本開示が属する当技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。Singleton, et al., DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY, 20 ED., John Wiley and Sons, New York (1994)及びHale & Marham, THE HARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY, Harper Perennial, NY (1991)は、本開示で使用される用語の多くについての一般的な辞書を当業者に提供する。
【０２３４】
本開示は、本明細書において開示される例示的な方法及び材料によって限定されず、本明細書において記載されるものと同様の又は等価な任意の方法及び材料は、本開示の実施形態を実施するか又は試験するのに使用することができる。数の範囲は、範囲を定めている数を含む。特に明記しない限り、それぞれ、いずれの核酸配列も、左から右に５’〜３’方向に書かれており、アミノ酸配列は、左から右にアミノ〜カルボキシ方向に書かれている。
【０２３５】
本明細書において提供される見出しは、本開示のさまざまな態様又は実施形態を限定するものではない。
【０２３６】
アミノ酸は、アミノ酸の名称、三文字の略語、又は１文字の略語を使用して、本明細書において参照される。「タンパク質」という用語は、本明細書において使用されるように、タンパク質、ポリペプチド、及びペプチドを含む。本明細書において使用されるように、「アミノ酸配列」という用語は、「ポリペプチド」という用語及び／又は「タンパク質」という用語と同義である。いくつかの場合では、「アミノ酸配列」という用語は、「ペプチド」という用語と同義である。いくつかの場合では、「アミノ酸配列」という用語は、「酵素」という用語と同義である。「タンパク質」及び「ポリペプチド」という用語は、本明細書において区別なく使用される。本開示及び請求項において、アミノ酸残基の従来の一文字及び三文字コードが、使用されてもよい。アミノ酸の３文字コードは、ＩＵＰＡＣＩＵＢ  Joint Commission on Biochemical Nomenclature（ＪＣＢＮ）に従って定義されるとおりである。ポリペプチドが、遺伝子コードの縮重のために２つ以上のヌクレオチド配列によってコードされてもよいこともまた理解される。
【０２３７】
用語の他の定義は、明細書の全体にわたって記されていてもよい。例示的な実施形態をさらに詳細に記載する前に、本開示が記載される特定の実施形態に限定されず、このように、変更されてもよいことが理解されるべきである。本開示の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ定められるので、本明細書において使用される術語は、特定の実施形態を記載する目的のみのためにあり、限定するようには意図されないこともまた、理解されるべきである。
【０２３８】
値の範囲が提供される場合、文脈が明確に指示しない限り、その範囲の上限値と下限値との間の、下限値の単位の１０分の１までのそれぞれの介在値もまた、明確に開示されることが理解される。所定の範囲における任意の所定の値又は介在値とその所定の範囲における任意の他の所定の値又は介在値との間のそれぞれのより小さな範囲が、本開示内に包含される。これらのより小さな範囲の上限値及び下限値は、独立して、範囲に含まれてもよく又は除外されてもよく、所定の範囲における任意の明確に除外される限界値に従って、より小さな範囲において限界値のどちらかが含まれる、どちらも含まれない、又は両方とも含まれるそれぞれの範囲もまた、本開示内に包含される。所定の範囲が、一方又は両方の限界値を含むのに対して、それらの含まれる限界値の一方又は両方を除外する範囲もまた、本開示に含まれる。
【０２３９】
本明細書及び添付の請求項において使用されるように、文脈が明確に指示しない限り、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その（the）」は、複数形の指示物を含むことに注意しなければならない。したがって、たとえば、「アルキル化薬」に対する言及は、複数のそのような薬を含み、「アミノグリコシド系抗生物質」に対する言及は、１つ以上のアミノグリコシド系抗生物質及び当業者らに知られているその等価物に対する言及を含む、などとする。
【０２４０】
本明細書において論じられる刊行物は、本出願の出願日前のそれらの開示に限って提供される。そのような刊行物が、本明細書に添付される請求項に対する先行技術を構成するという許可として解釈されるようなものは本明細書において何もない。
【０２４１】
図面の簡単な説明
本発明の実施形態は、ここで、単なる例として、以下の図及び実施例の参照と共に記載される。
【図面の簡単な説明】
【０２４２】
【図１】図１は、細菌の抑制における、アルキル化薬及びアミノグリコシド系抗生物質の組み合わせの相乗的効果を示す図である。エラーバーは、少なくとも３回の繰り返しについての標準偏差を示す。ＣＦＵ＝コロニー形成単位。左の４本のバーは、野生型（ＷＴ）細胞に相当する。右の４本のバーは、ａｌｋｂ−／−細胞に相当する（ａｌｋｂ）。
【図２】図２は、カナマイシンと組み合わせた二官能性アルキル化薬ロムスチンに対して、ＷＴとａｌｋＢ突然変異体との間に感受性における差がないことを示す図である。ｗｔ＝野生型、ａｌｋｂ＝ａｌｋｂ突然変異体（非機能的ａｌｋｂ）。「生存可能なコロニーロムスチン／未処置」＝ＤＭＳＯ処置の後のコロニーに対するロムスチン処置の後に観察されるコロニーの比。
【図３】図３は、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ活性によるアルキル化による損傷の導入のためのモデルを示す概略図を示す図である。主たる活性は、５ｍｅＣの導入であるが（濃い矢印）、３ｍｅＣもまた、低含量の副産物（薄い矢印）として導入される。３ｍｅＣは、真核生物においてＡＬＫＢ２の活性によって除去され、ＡＬＫＢ２は、細菌ＡｌｋＢに対して相同である。
【実施例】
【０２４３】
実施例
材料及び方法
大腸菌（E.coli）におけるｍＳＳＳＩの過剰発現
カナマイシン抵抗性遺伝子（ネオマイシンホスホトランスフェラーゼＩＩをコードする）を含有するｍＳＳＳＩ発現プラスミドｐＡＩＴ２は、New England Biolabsから寄贈された。このプラスミドは、ＩＰＴＧ誘発性のｐＴａｃプロモーターのコントロール下で、ｍＳＳＳＩメチルトランスフェラーゼ（ＤＮＭＴ）を発現する。
【０２４４】
標準的なＣａＣｌ２形質転換を、ａｌｋＢ遺伝子（ＡＬＫＢ）の欠失を有していない（ＷＴ）又は有する大腸菌（E.coli）株Ｃ２３５３（ＮＥＢ）の中にｐＡＩＴ２プラスミドを導入するために使用した。両方のバックグラウンドにおけるｍＳＳＳＩ遺伝子の基本的な活性を、ＨｐａＩＩ及びＭｓｐＩを使用するメチル感受性制限消化を使用することによって検証した。
【０２４５】
ＤＮＭＴ過剰発現の非存在下におけるカナマイシン抵抗性に対するアルキル化による損傷の効果を試験するために、これもまたカナマイシン抵抗性遺伝子を持つ標準タンパク質発現プラスミドｐＥＴ２８ａを、ネガティブコントロールとして使用した。Ｃ２３５３への形質転換は、ｐＡＩＴ２と同様とした。
【０２４６】
実施例１−アルキル化薬感受性アッセイは細菌の成長の抑制におけるアミノグリコシドのアルキル化薬との相乗作用を示す
例示的なアミノグリコシド系カナマイシンと例示的なアルキル化薬ＭＭＳとの間の相乗作用が、実証される。
【０２４７】
大腸菌（E.coli）株は、０．６のＯＤに達するまで、３７℃でLuria Bertani（ＬＢ）培地において単一のコロニーから成長させた。細菌は、次いで、異なる処置に対して異なる一定分量に分離し、５分間３０００毎分回転数（ｒｐｍ）で遠心分離し、ペレットダウンさせた。細菌を、次いで、５０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンあり又はなしの、２０ｍＭメタンスルホン酸メチル（ＭＭＳ；シグマアルドリッチ（Sigma-Aldrich））を補足した又は補足しなかったＬＢ培地中に再懸濁した。３７℃で３０分後、細菌は、ＬＢ中でくまなく洗浄して、ＭＭＳを除去し、５０ｕｇ／ｍｌのカナマイシンあり又はなしのＬＢで平板培養した。感受性は、コロニー形成単位（ＣＦＵ）の数を算出し、１０を底とする対数を求めることによってアッセイした。実験は、それぞれの条件について３回繰り返し、平均値及び標準偏差をプロットした。有意差は、両側ｔ検定を使用して算出した。
【０２４８】
図１に示すように、２０ｍＭの低用量のＭＭＳに対して、ＷＴ大腸菌（E.coli）が耐性を示し、細菌の成長に対して最低限の効果しかない。ＭＭＳに対する感受性は、カナマイシンと同時に処置した際に増加し、ＤＮＭＴを発現する細菌ではなおさらそうであった。驚くべきことに、これらの細菌がカナマイシン抵抗性をコードするプラスミドを持っていた場合であっても、ＭＭＳとカナマイシンとの間の相乗作用のように、この感受性は、ａｌｋＢ突然変異体において著しく増加した。この感受性及び相乗作用は、ＤＮＭＴ（有毒なアルキル化による損傷をＤＮＡに導入することができる酵素、図２を参照）の過剰発現に際して、なおさらに増加し、カナマイシンがＭＭＳと相乗作用を示して、有毒な３ｍｅＣアルキル化による損傷のＤＮＡへの導入を増加させることを示唆した。
【０２４９】
実施例２−カナマイシンと組み合わせた二官能性アルキル化薬ロムスチンに対してＷＴとａｌｋＢ突然変異体との間で感受性の差がない
この実験は、ロムスチンをＭＭＳの代わりに使用したことを除いて、実施例１と同様の方法で実行した。
【０２５０】
細胞を、０．８のＯＤまで、ＬＢ＋５０ｕｇ／ｍｌカナマイシンにおいて成長させ、２０ｍＭのロムスチン（実施例１に従って同様の方法で）又はＤＭＳＯ（コントロール）により２時間処置した。細胞は、カナマイシン抵抗性遺伝子（ネオマイシンホスホトランスフェラーゼＩＩをコードする）を発現した。
【０２５１】
生存は、未処置コントロール（ＤＭＳＯコントロール）と比べたコロニー数として測定した。結果を図２に示す。それぞれのバーは、生物学的反復実験であり、両側ｔ検定からのｐ値は、０．９３であった。ロムスチン＋カナマイシンの組み合わせに対するＡｌｋＢの過剰な感受性は、見られなかった。
【０２５２】
上記の本明細書において言及される刊行物はすべて、参照によって本明細書に援用される。本発明について記載される方法及びシステムの様々な修飾及び変更は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく当業者に明らかであろう。本発明が特定の好ましい実施形態に関連して記載されたが、主張される本発明がそのような特定の実施形態に不当に限定されないことを理解されたい。実際に、生化学及びバイオテクノロジー又は関係する分野の当業者らに明白である、本発明を実行するために記載されたモードのさまざまな修飾は、以下の請求項の範囲内にあることが意図される。
【０２５３】
配列
配列番号１（大腸菌（E.coli）株、Ｋ−１２  ａｌｋｂ；ＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＣ＿０００９１３．３）
【化１１】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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