【手続補正書】
【提出日】平成22年9月13日(2010.9.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ部、Ｂ部、及びＣ部を含み、
ａ）Ａ部は、以下の成分、すなわち炭酸水素ナトリウム、緩衝剤、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、重量オスモル濃度調節剤、界面活性剤及び単糖グルコースを含まない、改変基本培地から本質的になり、
ｂ）Ｂ部は、無機鉄源から本質的になり、及び
ｃ）Ｃ部は、組換え増殖因子、緩衝剤、重量オスモル濃度調節剤、エネルギー源、及び少なくとも２種類の非動物加水分解物を含む、
無血清細胞培地。
【請求項２】
Ａ部が、非鉄（ＩＩ）金属イオン、ビタミン、又は両方の組合せを更に含む、又は
Ｂ部の無機鉄源が、クエン酸鉄（ＩＩＩ）である、又は
Ｃ部の組換え増殖因子が、インスリン又は組換え類似体ＩＧＦ−１、及びインスリンとＩＧＦ−１の組合せからなる群から選択される、又は
改変基本培地から除外される緩衝剤が、ＨＥＰＥＳ緩衝剤である、又は
Ｃ部の緩衝剤が、リン酸緩衝液、ＨＥＰＥＳ、及び炭酸水素ナトリウムを含む、又は
Ｃ部が、アスパラギン、グルタミン、又はグルタミンとアスパラギンを更に含む、又は
Ｃ部の重量オスモル濃度調節剤が、ＮａＣｌである、又は
Ｃ部のエネルギー源が、単糖である、又は
Ｃ部の少なくとも２種類の非動物系加水分解物が、植物系加水分解物、及び動物系でも植物系でもない加水分解物である、
請求項１に記載の細胞培地。
【請求項３】
Ｂ部の無機鉄源がクエン酸鉄（ＩＩＩ）であり、細胞培地が最終溶液濃度約１２２．５ｍｇ／Ｌ又は０．５ｍＭのクエン酸鉄（ＩＩＩ）を含む、請求項２に記載の細胞培地。
【請求項４】
Ｃ部の組換え増殖因子が、インスリン又は組換え類似体であり、細胞培地が約４ｍｇ／Ｌから１３ｍｇ／Ｌのインスリン又はその組換え類似体を含む、請求項２に記載の細胞培地。
【請求項５】
Ｃ部の緩衝剤が、リン酸緩衝剤、ＨＥＰＥＳ及び炭酸水素ナトリウムを含み、及び
細胞培地が、約１．６ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウムを含む、又は
細胞培地が、約１．８ｇ／Ｌ  ＨＥＰＥＳを含む、又は
リン酸緩衝剤が、約０．０１から０．５ｇ／Ｌのリン酸ナトリウム及びリン酸水素ナトリウムを含む、請求項２に記載の細胞培地。
【請求項６】
Ｃ部の重量オスモル濃度調節剤がＮａＣｌであり、細胞培地が約１．０から６．５ｇ／Ｌを含む、請求項２に記載の細胞培地。
【請求項７】
Ｃ部のエネルギー源が単糖であり、単糖が、グルコース、マルトース、マンノース、ガラクトース及びフルクトースからなる群から選択される、請求項２に記載の細胞培地。
【請求項８】
グルコースがＤ−グルコースであり、約７．０ｇ／Ｌ以下のグルコースを含む、請求項７に記載の細胞培地。
【請求項９】
Ｃ部の少なくとも２種類の非動物系加水分解物が、植物系加水分解物、及び動物系でも植物系でもない加水分解物であり、植物系加水分解物がダイズ系加水分解物である、請求項２に記載の細胞培地。
【請求項１０】
メトトレキサート、細胞保護剤、界面活性剤、又はＬ−グルタミンを更に含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の細胞培地。
【請求項１１】
約１００ｎＭから５０００ｎＭのメトトレキサートを更に含む、請求項１０に記載の細胞培地。
【請求項１２】
界面活性剤を更に含み、界面活性剤がメチルセルロース又はＰｌｕｒｏｎｉｃポリオールである、請求項１０に記載の細胞培地。
【請求項１３】
ＰｌｕｒｏｎｉｃポリオールがＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８である、請求項１２に記載の細胞培地。
【請求項１４】
ｐＨが７．１から７．３の範囲であるか、又は重量オスモル濃度が３２０から４５０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲である、請求項１から９のいずれか一項に記載の細胞培地。
【請求項１５】
請求項１から９のいずれか一項に記載の細胞培地中で哺乳動物細胞を培養することを含む、タンパク質を製造する方法。
【請求項１６】
哺乳動物細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
タンパク質が抗体である、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
抗体が、抗ＴＮＦα抗体、抗ＩＬ−１２抗体、抗ＩＬ−１８抗体、及び抗ＥＰＯ受容体（ＥＰＯ−Ｒ）抗体からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ａ）基本培地、
ｂ）約８−１２ｍｌ／ｋｇ又は１１６−１２６ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｃ）約２−６ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｄ）約２−５ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｅ）約０．１−０．５ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｆ）約１−３ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｇ）約０．０１−０．０５ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｈ）約０．４から０．５ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、及び
ｉ）約１．０−３．０ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物
を含む、無血清細胞培地。
【請求項２０】
ａ）約８から１２ｍｌ／ｋｇ又は１２２．４５ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｂ）約４から８ｍＬ／ｋｇ又は１０から１４ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｃ）約５から９ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｄ）約０．５から０．７ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｅ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ  ＨＥＰＥＳ、
ｇ）約２から３ｇ／ｋｇ  ＮａＣｌ、
ｈ）約０．５から２ｇ／ｋｇ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、
ｉ）約０．０１から０．１ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｊ）約０．４から０．５ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、
ｋ）約８から１２ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物、及び
ｌ）約６０から７０ｇ／ｋｇ植物系加水分解物
を含む、請求項１に記載の無血清細胞培地。
【請求項２１】
ａ）約８から１２ｍｌ／ｋｇ又は１２２．４５ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｂ）約３から５ｍＬ／ｋｇ又は６から８ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｃ）約５から９ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｄ）約０．１から２ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｅ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ  ＨＥＰＥＳ、
ｇ）約２から３ｇ／ｋｇ  ＮａＣｌ、
ｈ）約０．１から２ｇ／ｋｇ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、
ｉ）約０．０１から０．１ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｊ）約０．４から０．５ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、
ｋ）約０．４から０．５ｇ／ｋｇ  Ｌ−アスパラギン一水和物、
ｌ）約２から６ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物、及び
ｍ）約２から４ｇ／ｋｇ植物系加水分解物
を含む、請求項１に記載の無血清細胞培地。
【請求項２２】
約２．５０ｍＬ／ｋｇメトトレキサートを更に含む、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の細胞培地。
【請求項２３】
請求項１９、２０又は２１に記載の細胞培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養することを含む、タンパク質を製造する方法。
【請求項２４】
哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞であり、又はタンパク質が抗体である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ａ）約８から１０ｍｌ／ｋｇ又は１２０から１３０ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｂ）約３から５ｍＬ／ｋｇ又は７．８ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｃ）約５から９ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｄ）約０．８から０．９ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｅ）約０．３から０．５ｇ／ｋｇ  Ｌ−アスパラギン一水和物、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｇ）約１から２ｇ／ｋｇ  ＨＥＰＥＳ、
ｈ）約２から３ｇ／ｋｇ  ＮａＣｌ、
ｉ）約０．５から２ｇ／ｋｇ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、
ｊ）約０．０１から０．１ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｋ）約０．１から１．０ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、
ｌ）約２から６ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物、及び
ｍ）約２から４ｇ／ｋｇ植物系加水分解物
を含む、請求項１に記載の細胞培地。
【請求項２６】
ａ）基本細胞増殖培地、
ｂ）約８から１２ｍｌ／ｋｇ又は１２０から１３０ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｃ）約２から６ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｄ）約１５０から２５０ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｅ）約０．１から０．５ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、及び
ｇ）約５から１５ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物
を含む、無血清細胞培地。
【請求項２７】
メトトレキサートを更に含む、請求項２５又は２６に記載の細胞培地。
【請求項２８】
請求項２５から２７のいずれか一項に記載の細胞培地中で、タンパク質をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養することを含む、タンパク質を製造する方法。
【請求項２９】
タンパク質が抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ａ）基本細胞増殖培地、
ｂ）約８から１２ｍｌ／ｋｇ又は１２０から１３０ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｃ）約２から６ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｄ）約１から３ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｅ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、及び
ｇ）約１から４ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物
を含む、無血清細胞培地。
【請求項３２】
メトトレキサートを更に含む、又は
約７．１０から７．３０のｐＨを有する、又は
約３００から３４０ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を有する、又は
少なくとも８ｇ／ｋｇの酵母系加水分解物を含む、請求項３１に記載の細胞培地。
【請求項３３】
請求項２９又は３０に記載の細胞培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養することを含む、タンパク質を製造する方法。
【請求項３４】
ａ）約８から１２ｍｌ／ｋｇ又は１２０から１３０ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｂ）約２．５から４．５ｍＬ／ｋｇ又は７．８ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｃ）約５から９ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｄ）約０．５から１ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｅ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｌ−アスパラギン一水和物、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｇ）約１から２ｇ／ｋｇ  ＨＥＰＥＳ、
ｈ）約１から４ｇ／ｋｇ  ＮａＣｌ、
ｉ）約０．１から２ｇ／ｋｇ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、
ｊ）約０．０１から０．１ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｋ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、
ｌ）約２から６ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物、及び
ｍ）約２から６ｇ／ｋｇ植物系加水分解物
を含む、請求項１に記載の細胞培地。
【請求項３５】
約７．１０から７．２０のｐＨ、又は約３７３から４０３ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を有する、請求項３４に記載の細胞培地。
【請求項３６】
ａ）約８から１２ｍｌ／ｋｇ又は１２０から１３０ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｂ）約４から８ｍＬ／ｋｇ又は１０から１４ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｃ）約５から９ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｄ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｅ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ  ＨＥＰＥＳ、
ｇ）約１から３ｇ／ｋｇ  ＮａＣｌ、
ｈ）約０．５から２ｇ／ｋｇ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、
ｉ）約０．０１から０．１ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｊ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、
ｋ）約８から１２ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物、及び
ｌ）約６から８ｇ／ｋｇ植物系加水分解物
を含む、請求項１に記載の細胞培地。
【請求項３７】
約７．１０から７．２０のｐＨ、又は約３７３から４０３ｍＯｓｍ／ｋｇの重量オスモル濃度を有する、請求項３５又は３６に記載の細胞培養産生培地。
【請求項３８】
ａ）約８から１２ｍｌ／ｋｇ又は１１０から１３０ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｂ）約４から８ｍＬ／ｋｇ又は１１から１５ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｃ）約５から９ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｄ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｅ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ  ＨＥＰＥＳ、
ｇ）約１から３ｇ／ｋｇ  ＮａＣｌ、
ｈ）約０．１から２ｇ／ｋｇ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、
ｉ）約０．０１から０．１ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｊ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、
ｋ）約１２から１６ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物、及び
ｌ）約８から１０ｇ／ｋｇ植物系加水分解物
を含む、請求項１に記載の細胞培地。
【請求項３９】
メトトレキサートを更に含む、請求項３６から３８のいずれか一項に記載の細胞培養産生培地。
【請求項４０】
請求項３６から３８のいずれか一項に記載の細胞産生培養培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養することを含む、抗体を製造する方法。
【請求項４１】
植物系加水分解物がダイズ系加水分解物である、請求項１９、２０、２１、２５、３４、３６又は３８のいずれか一項に記載の細胞培地。
【請求項４２】
請求項１から１４、１９から２２、２５から２７、３１、３２、及び３６から３９のいずれか一項に記載の細胞培地中のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞。
【請求項４３】
タンパク質が製造されるように、
ａ）細胞培養産生培地を含む細胞培養物中で、タンパク質をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養すること、及び
ｂ）ある期間中、加水分解物濃縮溶液及び基本濃縮溶液を細胞培養物に添加することによって、哺乳動物細胞を培養すること
を含み、
加水分解物濃縮溶液が少なくとも２種類の非動物系加水分解物を含む、
タンパク質を製造する流加培養法。
【請求項４４】
基本濃縮溶液が高濃度基本培地を含む、又は基本濃縮溶液が基本培地、アスパラギン及びグルコースを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
基本培地がＰＦ  ＣＨＯである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
哺乳動物細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、又は
タンパク質が抗体である、又は
加水分解物濃縮溶液が、植物由来でも動物由来でもない第１の加水分解物と、第２の植物系加水分解物とを含む、請求項４３から４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
加水分解物濃縮溶液が、植物由来でも動物由来でもない第１の加水分解物と、第２の植物系加水分解物とを含み、植物由来でも動物由来でもない加水分解物、及び植物系加水分解物が、酵母系加水分解物である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
植物系加水分解物がダイズ系加水分解物である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
抗ＴＮＦα抗体が製造されるように、
ａ）細胞培養産生培地を含む細胞培養物中で、抗ＴＮＦα抗体をコードする核酸を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を培養すること、及び
ｂ）ある期間中、加水分解物濃縮溶液及び基本濃縮溶液を細胞培養物に添加することによって、ＣＨＯ細胞を培養すること
を含み、
基本濃縮溶液が基本培地、アスパラギン及びグルコースを含み、
加水分解物濃縮溶液が少なくとも２種類の非動物系加水分解物を含む、
抗ＴＮＦα抗体を製造する流加培養法。
【請求項５０】
段階ａ）の細胞培養産生培地が少なくとも２．０ｇ／Ｌのグルコースを含み、前記段階においてグルコース濃度は、少なくとも２．０ｇ／Ｌのグルコース濃度を維持するのに必要なグルコースを細胞培養産生培地に添加することによって調節される、請求項４９に記載の流加培養法。
【請求項５１】
抗ＴＮＦα抗体を回収することを更に含む、又は
細胞培養物が約３２から３８℃の温度で培養され、
細胞培養産生培地が溶存酸素２０から６５％で維持され、
細胞培養産生培地の重量オスモル濃度が、培養を通して５００ｍＯｓｍ以下に維持され、
加水分解物濃縮溶液が、植物由来でも動物由来でもない第１の加水分解物と、第２の植物系加水分解物とを含み、
加水分解物濃縮溶液が、約５０−２８０ｇ／ｋｇのダイズ系加水分解物と、約７５−３００ｇ／ｋｇの酵母系加水分解物とから本質的になり、  
基本培地がＰＦ  ＣＨＯである、又は
基本濃縮溶液が約９．０から１０．５のｐＨを有する、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５２】
細胞培養物が約３２から３８℃の範囲の温度で培養され、培養温度が約３５℃である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
細胞培養産生培地が溶存酸素２０−６５％で維持され、溶存酸素が約３０％で維持される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
加水分解物濃縮溶液が、植物由来でも動物由来でもない第１の加水分解物と第２の植物系加水分解物とを含み、植物由来でも動物由来でもない加水分解物及び植物系加水分解物が酵母系加水分解物である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
植物系加水分解物がダイズ系加水分解物である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
期間が約９から１５日間である、又は
基本濃縮溶液が、期間の以下の日、すなわち４日目、６日目、９日目及び１１日目の少なくとも１日に細胞培養産生培地に添加される、又は
加水分解物濃縮溶液が、期間の４日目、７日目、又は４日目と７日目に細胞培養産生培地に添加される、又は
方法が細胞培養産生培地のｐＨをｐＨ線形勾配に従って調節することを更に含み、ｐＨ線形勾配が約７．１から７．２のｐＨから出発し、約６．９の最終ｐＨに帰結する、請求項５１から５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
方法が細胞培養産生培地のｐＨをｐＨ線形勾配に従って調節することを更に含み、
ｐＨ線形勾配が約７．１から７．２のｐＨから出発し、約６．９の最終ｐＨに帰結することを含み、
ｐＨ線形勾配が少なくとも約２４時間、少なくとも約４８時間、及び約７２時間からなる群から選択される時間に亘り調節される、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
細胞培養産生培地が、
ａ）以下の成分、すなわち炭酸水素ナトリウム、緩衝剤、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、重量オスモル濃度調節剤、界面活性剤及び単糖グルコースを含まない、改変基本培地、
ｂ）約８から１０ｍｌ／ｋｇ又は１１０から１３０ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｃ）約４から８ｍＬ／ｋｇ又は１０から１４ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｄ）約５から９ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｅ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｆ）約１から３ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｇ）約１から３ｇ／ｋｇ  ＨＥＰＥＳ、
ｈ）約２から３ｇ／ｋｇ  ＮａＣｌ、
ｉ）約０．１から２ｇ／ｋｇ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、
ｊ）約０．０１から０．１ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｋ）約０．１から０．１ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、
ｌ）約８から１２ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物、及び
ｍ）約６から８ｇ／ｋｇ植物系加水分解物
を含む、請求項４９又は５０に記載の方法。
【請求項５９】
哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、又は細胞培養物が大規模細胞培養物である、請求項４９から５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
細胞培養物が大規模細胞培養物であり、大規模細胞培養物が約１０Ｌを超える、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
抗ＩＬ−１２抗体が製造されるように、
ａ）細胞培養産生培地を含む細胞培養物中で、抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞を培養すること、
ｂ）ある期間中、加水分解物濃縮溶液及び基本濃縮溶液を細胞培養物に添加することによって、ＣＨＯ細胞を培養すること
を含み、
基本濃縮溶液が基本培地、アスパラギン及びグルコースを含み、
加水分解物濃縮溶液が少なくとも２種類の非動物系加水分解物を含む、
抗ＩＬ−１２抗体を製造する流加培養法。
【請求項６２】
加水分解物濃縮溶液が、グルコースを更に含む、又は
方法が、抗ＩＬ−１２抗体を回収することを更に含む、又は
細胞培養物が、約３２から３８℃の範囲の温度で培養される、又は
培養温度が約３３℃である、又は
細胞培養産生培地が、２０−６５％の間の溶存酸素で維持される、又は
細胞培養産生培地が、約６．７から７．２のｐＨを有する、又は
加水分解物濃縮溶液が、植物由来でも動物由来でもない加水分解物と植物系加水分解物とを含む、又は
加水分解物濃縮溶液が、約５０−２２５ｇ／ｋｇのダイズ系加水分解物、約７５−３００ｇ／ｋｇの酵母系加水分解物、及び約２から３ｇ／Ｌグルコースから本質的になる、又は
基本濃縮溶液が、基本培地、アスパラギン及びグルコースを含む、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
細胞培養産生培地が溶存酸素２０−６５％で維持され、溶存酸素が約４０％溶存酸素で維持される、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
加水分解物濃縮溶液が、植物由来でも動物由来でもない加水分解物と植物系加水分解物とを含み、植物由来でも動物由来でもない加水分解物が酵母系加水分解物である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
植物系加水分解物がダイズ系加水分解物である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
基本濃縮溶液が、基本培地、アスパラギン及びグルコースを含み、
基本濃縮溶液が、約９．７のｐＨ、及び約１４００から１５００ｍＯｓｍの重量オスモル濃度を有する、又は
基本濃縮溶液中の基本培地がＰＦ  ＣＨＯである、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
期間が１４−１５日間である、又は
基本濃縮溶液が、期間の５日目から１日おきに細胞培養産生培地に添加される、又は
加水分解物濃縮溶液が、期間の６日目から毎日、細胞培養産生培地に添加される、又は
基本濃縮溶液及び加水分解物濃縮溶液が、期間の５日目から毎日、細胞培養産生培地に添加される、請求項６１から６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
細胞培養産生培地が、
ａ）以下の成分、すなわち炭酸水素ナトリウム、緩衝剤、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、重量オスモル濃度調節剤、界面活性剤及び単糖グルコースを含まない、改変基本培地、
ｂ）約８から１２ｍｌ／ｋｇ又は１１０から１３０ｍｇ／Ｌクエン酸鉄（ＩＩＩ）、
ｃ）約５から８ｍＬ／ｋｇ又は１１から１５ｍｇ／ｋｇ組換えヒトインスリン、
ｄ）約５から９ｇ／ｋｇ無水グルコース、
ｅ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｌ−グルタミン、
ｆ）約１から２ｇ／ｋｇ炭酸水素ナトリウム、
ｇ）約１から２ｇ／ｋｇ  ＨＥＰＥＳ、
ｈ）約２から３ｇ／ｋｇ  ＮａＣｌ、
ｉ）約０．１から２ｇ／ｋｇ  Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８、
ｊ）約０．０１から０．１ｇ／ｋｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・Ｈ２Ｏ、
ｋ）約０．１から１ｇ／ｋｇ  Ｎａ２ＨＰＯ４・７Ｈ２Ｏ、
ｌ）約６から１２ｇ／ｋｇ酵母系加水分解物、及び
ｍ）約６から８ｇ／ｋｇ植物系加水分解物
を含む、請求項６１から６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
細胞培養物が大規模細胞培養物であり、大規模細胞培養物が１０Ｌを超える、請求項６１から６８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７０】
ａ）グルコース、
ｂ）基本培地、
ｃ）グルタミン以外のアミノ酸、及び
ｄ）少なくとも２種類の非動物系加水分解物
を含み、
供給溶液が約６．０から８．０のｐＨを有する、
組合せ供給溶液。
【請求項７１】
組合せ供給溶液が約１００から２５０ｇ／ｋｇグルコースを含む、又は
アミノ酸がアスパラギンである、又は
少なくとも２種類の非動物系加水分解物が、植物系加水分解物、及び動物系でも植物系でもない加水分解物である、又は
基本培地がＰＦ−ＣＨＯ又はＤＭＥＭ／Ｆ１２のいずれかである、又は
基本細胞培地が、改変基本培地であり、以下の成分、すなわち炭酸水素ナトリウム、緩衝剤、リン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、重量オスモル濃度調節剤、界面活性剤、グルタミン及びグルコースを含まない、請求項７０に記載の組合せ供給溶液。
【請求項７２】
アミノ酸がアスパラギンであり、組合せ供給溶液が約１．０から１５．０ｇのアスパラギンを含む、請求項７１に記載の組合せ供給溶液。
【請求項７３】
アミノ酸がアスパラギンであり、組合せ供給溶液が約３．０から５．０ｇ／ｋｇアスパラギンを含む、請求項７１に記載の組合せ供給溶液。
【請求項７４】
少なくとも２種類の非動物系加水分解物が、植物系加水分解物及び動物系でも植物系でもない加水分解物であり、動物系でも植物系でもない加水分解物が酵母系加水分解物である、請求項７１に記載の組合せ供給溶液。
【請求項７５】
少なくとも２種類の非動物系加水分解物が、植物系加水分解物及び動物系でも植物系でもない加水分解物であり、植物系加水分解物がダイズ系加水分解物である、請求項７１に記載の組合せ供給溶液。
【請求項７６】
約１５ＮＴＵ未満の濁度を更に有する、請求項７１から７５のいずれか一項に記載の組合せ供給溶液。
【請求項７７】
請求項７１から７５のいずれか一項に記載の組合せ供給溶液を添加することを含む、細胞培養産生培地の定常グルコースレベルを維持する方法。
【請求項７８】
ａ）グルコースと基本細胞培地を組み合わせて溶液にすること、
ｂ）ａ）の溶液のｐＨを約９．５から１０．５に調節すること、
ｃ）少なくとも２種類の非動物系加水分解物をｂ）の溶液に添加すること、及び
ｄ）組合せ供給溶液が約６．５から７．５のｐＨを有するように、ｃ）の溶液のｐＨを調節すること
を含む、基本培地、グルコース及び少なくとも２種類の非動物系加水分解物を含む組合せ供給溶液を製造する方法。
【請求項７９】
段階ｃ）が、動物系でも植物系でもない第１の加水分解物と、第２の植物系加水分解物とを添加することを含む、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
動物系でも植物系でもない加水分解物が酵母系加水分解物であり、又は植物系加水分解物がダイズ系加水分解物である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
少なくとも約１．５ｇ／Ｌの抗体が製造されるように、
ａ）細胞培養産生培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養すること、及び
ｂ）約６．７から７．２のｐＨを有する組合せ供給溶液を細胞培養産生培地に添加すること（組合せ供給溶液は、グルコース、基本細胞培地、グルタミン以外のアミノ酸、及び少なくとも２種類の非動物系加水分解物を含む）
を含む、哺乳動物細胞培養物から少なくとも約１．５ｇ／Ｌの抗体を製造する方法。
【請求項８２】
組合せ供給溶液が約１００から２５０ｇ／ｋｇグルコースを含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
抗体が、少なくとも２ｇ／Ｌ、少なくとも４ｇ／Ｌ、少なくとも５ｇ／Ｌ、及び約６ｇ／Ｌからなる群から選択される濃度で製造される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
製造される抗体の力価が、段階ｂ）を含まずに段階ａ）によって培養された対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも５０％高く製造されるように、
ａ）細胞培養産生培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養すること、及び
ｂ）約６．７から７．２のｐＨを有する組合せ供給溶液を細胞培養産生培地に添加すること（組合せ供給溶液は、グルコース、基本細胞培地、グルタミン以外のアミノ酸、及び少なくとも２種類の非動物系加水分解物を含む）
を含む、哺乳動物細胞培養物から産生される抗体の力価を増加させる方法。
【請求項８５】
製造される抗体の力価が、対照よりも少なくとも１００％高いこと、及び対照よりも少なくとも１５０％高いことからなる群から選択される、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
細胞密度が、少なくとも２．０×１０６細胞／ｍＬ、及び約３．５×１０６細胞／ｍＬからなる群から選択される数値に到達したときに、組合せ供給溶液が添加される、請求項８１から８５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８７】
抗体が製造されるように、
ａ）細胞培養産生培地中で、タンパク質をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養すること、及び
ｂ）細胞培養産生培地中の代謝指標レベルを監視するフィードバック制御系を用いて、組合せ供給溶液を細胞培養産生培地に添加すること（組合せ供給溶液は、フィードバック制御系によって決定される時点で細胞培養産生培地に添加される）
を含む、哺乳動物細胞培養物中でタンパク質を製造する方法。
【請求項８８】
哺乳動物細胞がチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
代謝指標がグルコース又はグルタミンである、請求項８７又は８８に記載の方法。
【請求項９０】
供給溶液が、グルコース、基本細胞培地、グルタミン以外のアミノ酸、及び少なくとも２種類の非動物系加水分解物を含む組合せ供給溶液である、請求項８７又は８８に記載の方法。
【請求項９１】
タンパク質が抗体である、請求項８７又は８８に記載の方法。
【請求項９２】
抗体が、少なくとも１．５ｇ／Ｌ、及び少なくとも２ｇ／Ｌからなる群から選択される力価で製造される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
組合せ供給溶液が、約３．０から１２．５ｇ／ｋｇアスパラギンを含む、又は
少なくとも２種類の非動物系加水分解物が、植物系加水分解物、及び動物系でも植物系でもない加水分解物を含む、又は
組合せ供給溶液が、約１００から２００ｇ／ｋｇグルコースを含む、又は
グルコース濃度が約０．２５から２０．０ｇ／Ｌの間に維持されるように、方法が細胞培地中のグルコース濃度を監視することを更に含む、
請求項８１から８６及び９０に記載の方法。
【請求項９４】
少なくとも２種類の非動物系加水分解物が、植物系加水分解物、及び動物系でも植物系でもない加水分解物を含み、動物系でも植物系でもない加水分解物が酵母系加水分解物である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
少なくとも２種類の非動物系加水分解物が、植物系加水分解物及び動物系でも植物系でもない加水分解物を含み、植物系加水分解物がダイズ系加水分解物である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
グルコース濃度が約０．２５から２０．０ｇ／Ｌの間に維持されるように細胞培地中のグルコース濃度を監視することを更に含み、グルコースレベルが自動試料採取装置を用いて監視される、請求項９３に記載の方法。
【請求項９７】
供給プロファイルが決定されるように、
ａ）細胞培養産生培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養すること、及び
ｂ）細胞培養産生培地中の代謝指標を監視するフィードバック制御系を用いて、組合せ供給溶液を細胞培養産生培地に添加すること（組合せ供給溶液は、目標代謝指標設定値に適合するように細胞培養産生培地に添加される）、及び
ｃ）１日当たりに細胞培養産生培地に添加される組合せ供給溶液の量を決定すること
を含む、哺乳動物細胞培養物中でタンパク質を産生するための供給プロファイルを決定する方法。
【請求項９８】
代謝指標がグルコース又はグルタミンである、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
請求項９７に記載の供給プロファイルに従って、組合せ供給溶液を哺乳動物細胞培養物に添加することを含む、哺乳動物細胞培養物中でタンパク質を製造する流加培養法。
【請求項１００】
抗体が少なくとも１００ｍｇ／Ｌの力価で製造されるように、
ａ）細胞培養産生培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養すること、
ｂ）酪酸ナトリウム、Ｎ−アセチルシステイン又はこれらの組合せを細胞培地に添加すること（酪酸ナトリウムを約０．１ｍＭから１０ｍＭの最終濃度まで添加し、Ｎ−アセチルシステインを約１ｍＭから８０ｍＭの最終濃度まで添加する）
を含む、抗体の力価が少なくとも１００ｍｇ／Ｌであるように、哺乳動物細胞培養物中で抗体を製造する方法。
【請求項１０１】
抗体の力価が、少なくとも１５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも２００ｍｇ／Ｌ、少なくとも２５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも３００ｍｇ／Ｌ、及び少なくとも４００ｍｇ／Ｌからなる群から選択される、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
抗体の力価が対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも１０％高くなるように（対照哺乳動物細胞培養は、段階ａ）を含むが、段階ｂ）を含まない）、
ａ）細胞培養産生培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養すること、及び
ｂ）酪酸ナトリウム、Ｎ−アセチルシステイン又はこれらの組合せを細胞培地に添加すること（酪酸ナトリウムを約０．１ｍＭから１０ｍＭの最終濃度まで添加し、Ｎ−アセチルシステインを約１ｍＭから８０ｍＭの最終濃度まで添加する）
を含む、抗体の力価が対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも１０％高くなるように、哺乳動物細胞培養物中で抗体を製造する方法。
【請求項１０３】
哺乳動物細胞培養物の抗体力価が、対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも２９％、対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも４０％、対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも７０％、及び対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも９０％からなる群から選択される数値で向上する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
酪酸ナトリウム、Ｎ−アセチルシステイン又はこれらの組合せが、
哺乳動物細胞培養物の増殖期中、又は
培養時間の４日目から７日目、又は
培養時間の０日目に、哺乳動物細胞培養物に添加される、請求項１００から１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
酪酸ナトリウムの最終濃度が約０．１ｍＭから１０ｍＭである、請求項１００から１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
Ｎ−アセチルシステインの最終濃度が約２０ｍＭから６０ｍＭである、請求項１００から１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
哺乳動物細胞培養物の寿命が、対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも３５％延長されるように（対照哺乳動物細胞培養は、段階ａ）を含むが、段階ｂ）を含まない）、
ａ）細胞培養産生培地中で、抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞を培養すること、及び
ｂ）約１ｍＭから８０ｍＭ  Ｎ−アセチルシステインを細胞培地に添加すること
を含む、哺乳動物細胞培養物の寿命を対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも３５％延長する方法。
【請求項１０８】
哺乳動物細胞培養物の寿命が、対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも約４５％、及び対照哺乳動物細胞培養物よりも少なくとも約５５％からなる群から選択される数値で延長される、請求項１０７に記載の方法。
【請求項１０９】
最終濃度約８ｍＭのＮ−アセチルシステインを細胞培養産生培地に添加することを含む、請求項１０７から１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
抗体が、抗ＴＮＦα抗体である、請求項１９、２０、２１、８１、８４又は８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
抗ＴＮＦα抗体が、完全ヒト抗ＴＮＦα抗体である、請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
完全ヒト抗ＴＮＦα抗体が、Ｄ２Ｅ７（アダリムマブ）である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
抗ＴＮＦα抗体が、完全ヒト抗ＴＮＦα抗体である、請求項４９に記載の方法。
【請求項１１４】
完全ヒト抗ＴＮＦα抗体が、Ｄ２Ｅ７（アダリムマブ）である、請求項１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
抗体が、抗ＩＬ−１２抗体である、請求項２５、２６、２７、８１、８４又は８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
抗ＩＬ−１２抗体が、完全ヒト抗ＩＬ−１２抗体である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
完全ヒト抗ＩＬ−１２抗体が、ＡＢＴ−８７４である、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
抗ＩＬ−１２抗体が、完全ヒト抗ＩＬ−１２抗体である、請求項６１に記載の方法。
【請求項１１９】
完全ヒト抗ＩＬ−１２抗体が、ＡＢＴ−８７４である、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１２０】
抗体が、抗ＩＬ−１８抗体である、請求項３６、３８、８１、８４、８７又は１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２１】
抗体が、ＡＢＴ−３２５である、請求項１２０に記載の方法。