【誤訳訂正書】
【提出日】平成21年12月15日(2009.12.15)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
HIV感染の予防または治療のための方法であって、該方法は、
a)有益な遺伝子を有する幹細胞を特定するために複数の細胞をスクリーニングする段階；および
b)該幹細胞を患者に移植し、これにより、該HIV感染を予防または治療する段階を含む方法。
【請求項２】
有益な遺伝子が、免疫細胞により発現されたタンパク質をコードする遺伝子の多型である、請求項1記載の方法。
【請求項３】
有益な遺伝子が、免疫細胞に感染するHIVの能力を抑制するものである、請求項1記載の方法。
【請求項４】
有益な遺伝子が、免疫の再構築を通して、ウイルスを中和する免疫細胞の能力を増強させるものである、請求項1記載の方法。
【請求項５】
タンパク質がHIV進入のためのレセプターのリガンドである、請求項2記載の方法。
【請求項６】
リガンドが、SDF-1αであり、多型がSDF-1α3'Aである、請求項5記載の方法。
【請求項７】
リガンドがRANTESであり、ならびに多型がプロモーター領域にあり、かつ発現レベルを増加させるものである、請求項5記載の方法。
【請求項８】
タンパク質がHLA複合体中の遺伝子によりコードされるものである、請求項2記載の方法。
【請求項９】
HLA複合体中の遺伝子によりコードされるタンパク質が、MHCクラスI分子、MHCクラスII分子、TNF、および補体からなる群から選択されるものである、請求項８の方法。
【請求項１０】
タンパク質がHIV進入のためのレセプターまたは共レセプターである、請求項2記載の方法。
【請求項１１】
HIV進入のためのレセプターがCD4である、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
HIV進入のためのレセプターがCCR2である、請求項10記載の方法。
【請求項１３】
多型がCCR2-64Iである、請求項12の方法。
【請求項１４】
HIV進入のための共レセプターがCCR5である、請求項10記載の方法。
【請求項１５】
多型がコード領域における32塩基対の欠失である、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
多型がCCR5m303である、請求項14記載の方法。
【請求項１７】
多型がCCR5のプロモーター領域にある、請求項14記載の方法。
【請求項１８】
HIV感染が主に単球親和性のHIV単離体により引き起こされる、請求項14記載の方法。
【請求項１９】
複数の細胞が、胚、骨髄、末梢血、胎盤血、臍帯血、および脂肪組織からなる群から得られるものである、請求項1記載の方法。
【請求項２０】
幹細胞のインビトロまたはインビボの増殖をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項２１】
該幹細胞のHLAの遺伝子型または表現型の特定をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項２２】
HLAの遺伝子型の特定が対立遺伝子に特異的なプライマーおよび固層に固定されたHLA遺伝子座に特異的な捕捉オリゴヌクレオチドを用いるハイスループットな方法によるものである、請求項21記載の方法。
【請求項２３】
スクリーニングが、有益な遺伝子のタンパク質産物を発現する幹細胞の特定を含む、請求項1記載の方法。
【請求項２４】
タンパク質産物が、イムノアッセイ法を用いることにより検出または特定される、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
スクリーニングが、有益な遺伝子を有する幹細胞の特定を含む、請求項1記載の方法。
【請求項２６】
有益な遺伝子が、ハイブリダイゼーションに基づくアッセイ法、シークエンシングアッセイ法、または機能的なアッセイ法を用いて検出される、請求項25記載の方法。
【請求項２７】
非天然のHLAタンパク質を発現するための、または天然のHLAタンパク質の発現を阻害するための幹細胞の処置をさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項２８】
生存するヒト造血性幹細胞を含むヒト細胞の単離された集合体であって、該幹細胞が、HIV感染に対する耐性を与える有益な遺伝子を含む、単離された集合体。
【請求項２９】
幹細胞が、胚、骨髄、末梢血、胎盤血、臍帯血、および脂肪組織からなる群のメンバーから誘導される、請求項28記載のヒト細胞の単離された集合体。
【請求項３０】
有益な遺伝子が、CCR5の多型である、請求項28記載のヒト細胞の単離された集合体。
【請求項３１】
有益な遺伝子が、CCR5δ32、CCR5m303、CCR5プロモーターにおける多型、およびCCR5R60Sからなる群から選択される、CCR5の多型である請求項30記載のヒト細胞の単離された集合体。
【請求項３２】
有益な遺伝子が、CCR5δ32多型のホモ接合体である、請求項31記載のヒト細胞の単離された集合体。
【請求項３３】
有益な遺伝子が、CCR5δ32多型のヘテロ接合性である、請求項31記載のヒト細胞の単離された集合体。
【請求項３４】
幹細胞が、幹細胞のレシピエントと一致するHLAの遺伝子型をさらに含む、請求項28記載のヒト細胞の単離された集合体。
【請求項３５】
薬学的な担体を更に含む、請求項28記載のヒト細胞の単離された集合体。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】発明の名称
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の名称】HIV感染に対する幹細胞スクリーニングおよび移植治療
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
関連出願の相互参照
この出願は、2001年11月29日に出願された関連する米国特許出願第09/998,832号の利益を主張するとともに、それは、全ての目的で参照として本明細書に組み入れられる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
発明の背景
ヒト免疫不全ウイルス（HIV)感染は、低分子のプロテアーゼ阻害剤、ヌクレオシド類縁体、および非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤のような、ウイルスの複製を阻害する作用物質を用いて最も一般的に治療される。これらの抗ウイルス治療は、ウイルス量の低減および免疫機能の回復のために比較的有効であった。しかし、これらの薬剤は、多くの副作用を示し、しばしば薬剤耐性を誘導する長期間にわたる治療が要求され、身体からのウイルスの完全な根絶をもたらさない。したがって、最近の多くの研究は、HIVを中和する免疫系の能力を増強させるか、または免疫細胞に感染するウイルスの能力を阻害する治療を開発することに焦点をおいている。特に、これらの治療は、特定の遺伝子多型が感受性の低下および疾病の進行の緩慢に関連するという増えている証拠を活用する（Rogerら、FASEB,12:625-632(1998);O'Brienら、Hospital Practice,July 15(1998);Hoganら、Ann.Intern.Med.,134:978-996(2001)参照)。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
これらの有益な多型の多くは、免疫細胞へのHIVの進入を仲介するレセプター、およびレセプターのリガンドの変異体である。ヒト免疫不全ウイルスのタイプ1（「HIV-1」）はT細胞表面分子CD4を第一のレセプターとして用いるが、成功裏のウイルスの細胞への進入および感染は、第二の分子、即ち、「共レセプター」の存在が要求されることが見いだされた（ClaphamおよびWeiss,Nature,388:230-231(1997)参照）。7つの共レセプター分子が同定され、その各々は、7つの膜貫通ドメインを有するGタンパク質共役レセプターであるケモカインレセプターのファミリーのメンバーであるか、またはそれに関連する。間質細胞由来因子−1（SDF-1）ケモカインレセプターCXCR4は、Ｔ細胞トロピックなHIV種のための共レセプターであるが、RANTES、MIP-1α、およびMIP-1βに選択的に結合するケモカインレセプターCCR5は、HIVのマクロファージトロピックな種の共レセプターとして提供される。CCR3、CCR2b、およびCCR1は、他のあまり一般的でないHIV種の共レセプターとして提供される。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
特徴づけられる最初のHIV耐性遺伝子は、第一のHIVの共レセプターCCR5の多型であった（Deanら、Science,273:1856-1862(1996);Liuら、Cell,86:367-377(1996)参照）。CCR5レセプター（CCR5δ32）の32塩基の欠失は、フレームシフト変異、および最後の3つの膜透過ドメインの欠失を引き起こす。このような欠失に対してホモ接合性の個体は、複数の性のHIVへの暴露にもかかわらず、非感染を維持する。しかし、AIDSへの進行が遅くなりうるが、この欠失のヘテロ接合性は、感染に感受性である。他の有益な多型は、CCR5(CCR5m303)の303残基における点突然変異であり、これは、終止コドン、および最後の5つの膜透過ドメイン、および、細胞質尾部の欠失を生じる。この変異は、CCR5δ32変異と関連する場合、HIV感染への耐性を与える（Quillentら、Lancet,351:14-18(1998)参照）。CCR5の一つのアミノ酸の置換、R89Cもまた、HIV感染への抵抗を与えるようである。（Tamasauskasら、Blood,97:3651-3654(2001)参照）これらの共レセプターのプロモーター領域における多型（例えば、CCR5P1、CCR5 59029Aおよび59353C）もまた、疾病の早い進行に関係する（Omettoら、J.Infectious Disease,183:814-818(2001);Martinら、Infectious Disease,282:1907-1911(1998);Cleggら、AIDS,14:103-108(2000)参照）。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
HIV共レセプターCCR5およびCXCR4のリガンドをコードする遺伝子の多型は、疾病の進行に影響を与えるが、感受性には影響しない。例えば、間質細胞由来因子−１α(SDF-1α)の3'非翻訳領域における点突然変異のホモ接合性は、劣性の方法で、疾病の進行を遅らせる（Winklerら、Science,279:389-393(1998)参照）。3'A変異はSDF-1αの生合成を上方制御するので、CXCR4レセプターへのHIVとの競合が増加することが仮説される。RANTESの発現を増加させるRANTESプロモーターの多型は、同様な方法で機能することが信じられているが、この場合、CCR5レセプターへのHIVとの競合を増加させることによる（Liuら、PNAS,96:4581-4585(1999)参照）。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
最後に、HLA対立遺伝子はHIV-1疾病の進行に影響するという証拠もある。動物実験は、マウスのAIDSへの耐性は、HLA遺伝子座のマウスの相同体であるH-2複合体に位置づけられることを示す（Makinoら、J.Immunol.,144:4347-4355(1990)参照）。HLA複合体は、3つのタイプの遺伝子（クラスI,IIおよびIII）を含み、それらの全ては、免疫反応の調節に関与する。MHC遺伝子として知られる、クラスI（A,B,C,D,E,F,G）およびクラスII(DM,DP,DQ,DR)分子は、Ｔ細胞への抗原の提示に関与する。クラスIIIのHLAは、抗原プロセシングのトランスポーター(TAP)、プロテアゾームのポリペプチド、補体成分因子(Bf,C2,C4)、および腫瘍壊死因子(TNF-α、TNF-β)を含む関連のない様々なタンパク質を含む。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
調査は、MHCクラスIおよびII分子についての個体の特徴的なタイプは、疾病の進行に影響しうることを示す。HIV-1に感染した血友病患者の兄弟のペアーの調査は、一つまたは二つのHLAクラスII対立遺伝子を共有する兄弟のペアーが、疾病の進行の同様の速度を示すことを示した（Kronerら、AIDS,9:275-280(1995)参照）。更に最近の研究は、HLAクラスIB＊5701が未発症感染者におけるウイルスの複製の制限に著しく関与することを見いだされた（Flores-Villanuevaら、PNAS,98:5140-5145(2001)参照）。プロセシングされたHIV-1抗原に関連する特定のMHCタンパク質の強化された能力は、特定の個体に、ウイルスに対して著しく有効なCD8リンパ球の反応を生じさせることが仮説される。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
HIV疾病の進行に影響する別の多型は、IL10-5'A、即ち、インターロイキン-10(IL-10)のプロモーター領域の変異体である。この多型は、IL-10の産生を抑制し、ホモ接合体およびヘテロ接合体の両方においてAIDSの速い進行に関連する（Shinら、PNAS,97:14467-72(2000)参照）。IL-10は、マクロファージ、T-リンパ球、およびHIVの複製を阻害することが知られている。おそらく、IL-10レベルを高めるプロモーターの変異が、AIDSの進行を遅くするのであろう。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１０】
特定の多型がHIVへの耐性を与えるという発見は、感染に抵抗することがより有能な、および/またはウイルスを中和することがより有能な細胞に免疫系を再配置（repopulate）するという治療の提案を導いた。細胞の新規な感染を防ぐことにより、そのような治療はウイルスの複製阻害剤を用いた長期化された治療の必要性を取り除くことができる。さらに、そのような治療の特異的な性質は副作用を減少させる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１２】
しかし、疾病耐性の多型を有する循環するＴリンパ球を形質転換するには問題がある。これらの細胞は、広い範囲に広がるため、現行のベクターデリバリーシステムを用いて、全ての標的細胞に到達することが困難であるためである。さらに、幹細胞のインビトロ遺伝子工学およびそのような細胞を使った遺伝子治療もまた、問題でありうる。インビトロで幹細胞を培養して形質導入することは困難である。有益な遺伝子は、有効となる十分に高いレベルで発現されず、HIVによる感染を許す遺伝子は本方法を用いることにより有効に「ノックアウト」されず、また、形質導入はその後の免疫系の細胞への分化に影響するかもしれない。最終的に、インボトロの操作か否かに関わらず、HLAの表現型に一致させた後に、ドナーからの幹細胞の注入が、好んで実施される。ドナーとレシピエントとの間の違いは、移植の拒絶を引き起こすか、またはさらに悪いことに、ドナーの組織の免疫細胞が宿主の組織を攻撃するかもしれない（移植組織-対-宿主の疾患）。現在の方法は、望ましい疾病耐性遺伝子およびHLAの表現型の両方を発現する細胞の速く効率的な特定を許容しない。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
こうして、免疫細胞にHIV感染への抵抗性を有効に与え、および／または免疫学的な不適合性の危険性が減少しており且つウイルスを中和する免疫系の能力を増強させる、HIV感染の治療方法のニーズが残る。本発明は、このことおよび他のニーズを満たす。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
実施例
次の実施例はクレーム発明の説明のために提供されるが、クレームの発明を制限するものではない。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７４】
実施例１：
この実施例は、本発明の方法の一つの態様を説明する（図１）。幹細胞は、臍帯血、または別の適切な源から収集され、その後、有益な変異についてスクリーニングされる。あるいは潜在的なドナーは、標準的な遺伝子型の決定方法を用いて有益な変異についてスクリーニングされる。有益な変異を有する幹細胞、および／またはドナーが一度、特定されると、それらはHLA型が決定され、治療を望むHIV/AIDS患者のHLA型と適合される。次に、潜在的なレシピエントが、関連する臨床基準を用いて選択され、標準的な幹細胞移植プロトコールに従って、幹細胞が移植される。特定の事例においては、幹細胞もまた、HLAが適合していなくても、患者に移植される。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７５】
実施例２：
本実施例は、本発明の方法をCCR5δ32の多型についてスクリーニングするために用いる場合について、本発明の方法を説明するものである。この欠失についてホモ接合性の個体からの免疫細胞は、HIVのその個体への感染にもかかわらず、非感染が維持されるが、これはおそらく、変異が、細胞表面のHIV共レセプターCCR5の発現を阻害するためである。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７６】
無関係の乳児からの臍帯血のサンプルはステムサイト臍帯血バンクから得られた。DNAは、塩抽出法を用いて、濃縮サンプルから抽出された。細胞は最初に溶解され、遠心分離された。その後、水が加えられ、サンプルは再び遠心分離された。ペレットはプロテイナーゼKで分解された。DNAは、その後、6Mの塩酸グアニジンの添加によって抽出され、数分間、70℃でインキュベートされた。サンプルは再び遠心分離され、上清は95％エタノールで沈殿された。ペレットはその後、乾燥され、適当なバッファーに再懸濁された。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７７】
DNAサンプルは配列決定され、CCR5δ32の多型の核酸配列に相当する核酸配列の存在についてスクリーニングされた。ホモ接合性またはヘテロ接合性の多型を含む細胞のサンプルは、また、商用の手法を用いてHLAの型を決定した。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
約5千個の臍帯サンプルが、HIV抵抗性のホモ接合性のCCR5の変異の存在について検査された。CCR5δ32の多型がホモ接合性であるHIV抵抗性の22サンプルが同定された。CCR5δ32の多型がヘテロ接合性であるHIV抵抗性の約500サンプルが同定された。サンプルは、また、HLA遺伝子型についてスクリーニングされ、凍結保存された。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７９】
有益な多型および患者に最も近いHLAの適合を有するサンプルが選択され、HIVの治療のための患者に静脈注入される。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
本明細書に記載された実施例および態様は、単に説明の目的のためであり、その観点から様々な修正、または変化が当業者に示唆され、本明細書の精神および権限ならびに添付のクレームの範囲内に含まれることが理解される。本明細書に引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、全ての目的のために、全体として本明細書に参照として組み入れられる。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】全図
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
2005519877.tif 000001