【手続補正書】
【提出日】平成22年4月7日(2010.4.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式(IA)又は(IB)の17-オキシマクベシン類似体、又はそれらの医薬として許容し得る塩：
【化１】
2009536934.tif 000001
(式中、R1は、H、OH又はOCH3を表し；
R2は、H又はCH3を表し；
R3は、H又はCONH2を表し；
R4及びR5は、両方ともHを表すか、又はこれらは一緒に結合(すなわち、C4-C5は二重結合である)を表すかのいずれかであり；並びに
R6は、H又はOHを表し；並びに
R7は、H又はCH3を表す。)。
【請求項２】
前記17-オキシマクベシン類似体が、式(IA)に従う、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
前記17-オキシマクベシン類似体が、式(IB)に従う、請求項1記載の化合物。
【請求項４】
前記R3が、CONH2を表す、請求項1〜3のいずれか1項記載の化合物。
【請求項５】
前記R6が、OHを表す、請求項1〜4のいずれか1項記載の化合物。
【請求項６】
前記R6が、Hを表す、請求項1〜4のいずれか1項記載の化合物。
【請求項７】
前記R7が、Hを表す、請求項1〜6のいずれか1項記載の化合物。
【請求項８】
前記17-オキシマクベシン類似体が、R1がHを表し、R2がHを表し、R3がCONH2を表し、R4及びR5が各々Hを表し、R6がOHを表し、並びにR7がHを表す、式(IA)の構造を有する、請求項1記載の化合物。
【請求項９】
前記17-オキシマクベシン類似体が、R1がHを表し、R2がHを表し、R3がCONH2を表し、R4及びR5が各々Hを表し、並びにR7がHを表す、式(IB)の構造を有する、請求項1記載の化合物。
【請求項１０】
前記17-オキシマクベシン類似体が、R1がHを表し、R2がHを表し、R3がCONH2を表し、R4及びR5が各々Hを表し、R6がOHを表し、並びにR7がCH3を表す、式(IA)の構造を有する、請求項1記載の化合物。
【請求項１１】
前記17-オキシマクベシン類似体が、R1がHを表し、R2がHを表し、R3がCONH2を表し、R4及びR5が各々Hを表し、並びにR7がCH3を表す、式(IB)の構造を有する、請求項1記載の化合物。
【請求項１２】
前記17-オキシマクベシン類似体が、R1がHを表し、R2がHを表し、R3がCONH2を表し、R4及びR5が各々Hを表し、R6がHを表し、並びにR7がHを表す、式(IA)の構造を有する、請求項1記載の化合物。
【請求項１３】
前記17-オキシマクベシン類似体が、R1がHを表し、R2がHを表し、R3がCONH2を表し、R4及びR5が各々Hを表し、R6がHを表し、並びにR7がCH3を表す、式(IA)の構造を有する、請求項1記載の化合物。
【請求項１４】
下記式の化合物：
【化２】
2009536934.tif 000002
又は下記式の化合物：
【化３】
2009536934.tif 000003
又はそれらの医薬として許容し得る塩である、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか1項記載の17-オキシマクベシン類似体を、1種以上の医薬として許容し得る希釈剤又は担体と共に含有する、医薬組成物。
【請求項１６】
医薬品として使用するための、請求項1〜14のいずれか1項記載の17-オキシマクベシン類似体。
【請求項１７】
癌、B-細胞性悪性疾患、マラリア、真菌感染症、中枢神経系の疾患及び神経変性疾患、血管新生依存性疾患、自己免疫疾患の治療、並びに/又は癌の予防的前処置のための医薬品として使用するための、請求項1〜14のいずれか1項記載の17-オキシマクベシン類似体。
【請求項１８】
17-オキシマクベシン類似体又はそれらの医薬として許容し得る塩が、他の治療と組合せて投与される、請求項1〜17のいずれか1項記載の17-オキシマクベシン類似体、組成物、又は使用。
【請求項１９】
前記他の治療が、メトトレキセート、ロイコボリン、プレニゾン、ブレオマイシン、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ドキソルビシン、タモキシフェン、トレミフェン、酢酸メゲストロール、アナストロゾール、ゴセレリン、抗-HER2モノクローナル抗体、カペシタビン、塩酸ラロキシフェン、EGFR阻害剤、VEGF阻害剤、プロテアソーム阻害剤、放射線治療及び手術からなる群から選択される、請求項18記載の17-オキシマクベシン類似体、組成物、又は使用。
【請求項２０】
前記他の治療が、通常の化学療法薬、例えばシスプラチン、シタラビン、シクロヘキシルクロロエチルニトロソ尿素、ゲムシタビン、イホスファミド、ロイコボリン、マイトマイシン、ミトキサントン、オキサリプラチンなど；タキソールを含むタキサン、及びビンデシン；ホルモン療法；モノクローナル抗体療法、例えばセツキシマブ(抗-EGFR)など；プロテインキナーゼ阻害剤、例えばダサチニブ及びラパチニブなど；ヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤、例えばボリノスタットなど；血管新生阻害剤、例えばスニチニブ、ソラフェニブ、レナリドマイドなど；mTOR阻害剤、例えばテムシロリムスなど；並びに、イマチニブからなる群から選択される、請求項18記載の17-オキシマクベシン類似体、組成物、使用又は方法。
【請求項２１】
a)好適な条件下で培養した場合に、マクベシン又はそれらの類似体を生成する第一の宿主菌株を提供する工程；
b)マクベシンPKS遺伝子クラスターに通常は会合しない1種以上のポスト-PKS遺伝子を挿入する工程であり、ここで該ポスト-PKS遺伝子の少なくとも1種はgdmL又はそれらの相同体である工程；
c)該修飾された宿主菌株を、新規化合物の生成に適した条件下で培養する工程；並びに
d)任意に、生成された化合物を単離する工程：を含む、請求項1〜14のいずれか1項記載の17-オキシマクベシン類似体の製造方法。
【請求項２２】
e)1種以上のマクベシンポスト-PKS遺伝子、又はそれらの相同体を欠失又は失活する工程を追加的に含み、該工程が通常、工程c)の前に行われる、請求項21記載の方法。
【請求項２３】
f)1種以上の欠失されたポスト-PKS遺伝子を再導入する工程を追加的に含み、該工程が通常、工程c)の前に行われる、請求項22記載の方法。
【請求項２４】
g)別のPKSクラスター由来のポスト-PKS遺伝子を導入する工程を追加的に含み、該工程が通常、工程c)の前に行われる、請求項21〜23記載の方法。
【請求項２５】
その不変の状態でマクベシンを天然に生成する遺伝子操作された宿主菌株であって、該菌株が、マクベシンPKS遺伝子クラスターに天然には会合しない1種以上のポスト-PKS遺伝子を有し、ここで該ポスト-PKS遺伝子の少なくとも1種は挿入されたgdmL又はそれらの相同体である、前記菌株。
【請求項２６】
マクベシンPKS遺伝子クラスター由来の1種以上のポスト-PKS遺伝子が、追加的に欠失されている、請求項25記載の宿主菌株。
【請求項２７】
1種以上の欠失されたポスト-PKS遺伝子が、再導入されている、請求項26記載の宿主菌株。
【請求項２８】
異種PKSクラスター由来の1種以上のポスト-PKS遺伝子が、再導入されている、請求項25〜27のいずれか1項記載の宿主菌株。
【請求項２９】
mbcP、mbcP450、mbcMT1及びmbcMT2が、欠失され、かつgdmLが、導入されている、請求項26記載の宿主菌株。
【請求項３０】
A.プレチオスム(A. pretiosum)又はA.ミルム(A. mirum)である、請求項25〜29のいずれか1項記載の宿主菌株。
【請求項３１】
請求項25〜30のいずれか1項記載の菌株を培養することを含む、17-オキシマクベシン又はそれらの類似体の製造方法。
【請求項３２】
17-オキシマクベシン又はそれらの類似体を単離する工程を更に含む、請求項31記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
式(I)の化合物のような、本発明の化合物の医薬として許容し得る塩は、医薬として許容し得る無機又は有機の酸又は塩基から形成される通常の塩、更には第4級アンモニウム塩、酸付加塩を含む。好適な酸性塩のより詳細な例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ギ酸、乳酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、パルモン酸(palmoic)、マロン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ナフタレン-2-スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ヒドロキシナフトエ酸、ヨウ化水素酸、リンゴ酸、ステアリン酸、タンニン酸などの塩を含む。シュウ酸などの他の酸は、それら自身医薬として許容し得るものではないが、本発明の化合物及びそれらの医薬として許容し得る塩を得るための中間体として有用な塩の調製において有用なことがある。好適な塩基性塩のより詳細な例は、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、N-メチルグルカミン及びプロカインの塩を含む。以後本発明の化合物の言及は、式(I)の化合物及びそれらの医薬として許容し得る塩の両方を含む。
本明細書において使用される用語「18,21-ジヒドロマクベシン」及び「マクベシンII」(マクベシンのジヒドロキノン型)は、互換的に使用される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
ひとつの実施態様において、本発明の化合物は、別の治療薬、例えば、癌又はB-細胞性悪性疾患の治療のための細胞傷害性薬物又は細胞増殖抑制薬のような治療薬と同時投与される。更なる薬剤の例は、細胞傷害性薬物、例えばアルキル化剤及び有糸分裂阻害剤(トポイソメラーゼII阻害剤及びチューブリン阻害剤を含む)である。更なる薬剤のその他の例は、DNA結合剤、代謝拮抗薬及び細胞増殖抑制薬、例えばプロテインキナーゼ阻害剤及びチロシンキナーゼ受容体遮断薬がある。好適な薬剤は、メトトレキセート、ロイコボリン、プレニゾン、ブレオマイシン、シクロホスファミド、5-フルオロウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ドキソルビシン(アドリアマイシン)、タモキシフェン、トレミフェン、酢酸メゲストロール、アナストロゾール、ゴセレリン、抗-HER2モノクローナル抗体(例えば、トラスツズマブ、商品名ハーセプチン(Herceptin)(商標))、カペシタビン、塩酸ラロキシフェン、EGFR阻害剤(例えば、ゲフィチニブ、商品名イレッサ(Iressa)(登録商標)、エルロチニブ、商品名Tarceva(商標)、セツキシマブ、商品名エルビタックス(Erbitax)(商標))、VEGF阻害剤(例えば、ベバシズマブ、商品名アバスチン(Avastin)(商標))、プロテアソーム阻害剤(例えば、ボルテゾミブ、商品名ベルケード(Velcade)(商標))を含むが、これらに限定されるものではない。更に好適な薬剤は、通常の化学療法薬、例えば、シスプラチン、シタラビン、シクロヘキシルクロロエチルニトロソ尿素、ゲムシタビン、イホスファミド、ロイコボリン、マイトマイシン、ミトキサントン、オキサリプラチン、タキソールを含むタキサン、及びビンデシンなど；ホルモン療法；モノクローナル抗体療法、例えばセツキシマブ(抗-EGFR)など；プロテインキナーゼ阻害剤、例えばダサチニブ、ラパチニブなど；ヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤、例えばボリノスタットなど；血管新生阻害剤、例えばスニチニブ、ソラフェニブ、レナリドマイドなど；並びに、mTOR阻害剤、例えばテムシロリムスなどを含むが、これらに限定されるものではない。更に好適な薬剤は、商品名Glivec(登録商標)のイマチニブである。加えて本発明の化合物は、非限定的に放射線治療又は手術を含む、他の療法と組合せて投与されてよい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
(2.5  プラスミドLit28gdmLの単離)
オリゴBioSG110(配列番号:18)及びBioSG111(配列番号:19)を用い、標準技術を利用し、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカスNRRL 3602 (配列の寄託番号：AY179507)のゲルダナマイシン生合成遺伝子クラスター由来のDNAの1512bp領域を増幅した(配列番号:20；図6A、gdmLのアミノ酸配列も示す、図6B、配列番号:21)。これらのプライマーの末端に導入されたXbaI及びNdeI制限部位には、下線を付けた。増幅されたPCR産物を、標準技術を利用し、先にEcoRVで線状とされたベクターLitmus28へクローニングした。プラスミドLit28gdmLを単離し、DNA配列解析により確認した。
【化８】
2009536934.tif 000004