【手続補正書】
【提出日】平成22年6月21日(2010.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析物組成物から分離する１つの分析物をフリー・フロー等電点電気泳動によって分離する方法であって、
フリー・フロー電気泳動（ＦＦＥ）チェンバーの中でアノードとカソードの間に、ｐＨの平均が分離する分析物の等電点（ｐＩ）に実質的に対応していて、上限ｐＨと下限ｐＨによって限定されたｐＨ範囲を持つｐＨ分離平坦部と、前記アノードとそのｐＨ分離平坦部の間にあって、そのｐＨ分離平坦部のｐＨよりも小さな平均ｐＨを持つおよび／またはそのｐＨ分離平坦部よりも大きな導電率を持つｐＨ機能と、前記カソードとそのｐＨ分離平坦部の間にあって、そのｐＨ分離平坦部のｐＨよりも大きな平均ｐＨを持つおよび／またはそのｐＨ分離平坦部よりも大きな導電率を持つｐＨ機能とを含む、ｐＨ機能プロファイルを形成するステップと；
分析物混合物から分離する１つの分析物を含むサンプルを、ＦＦＥチェンバー内の前記ｐＨ分離平坦部、そのｐＨ分離平坦部のアノード側の領域、またはそのｐＨ分離平坦部のカソード側の領域に導入するステップと；
ＦＦＥチェンバーから前記分析物を流出させるステップとを含む方法。
【請求項２】
前記分析物をフリー・フロー等電点電気泳動によって分離する前に、分析物組成物から分離する１つの分析物のｐＩを同定するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ分離平坦部と、ｐＨ平坦部を形成するｐＨ機能とを含み、前記ｐＨ分離平坦部と、隣接する前記ｐＨ平坦部とのｐＨの差が０．５ｐＨ単位より大きい、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ分離平坦部と、前記ｐＨ分離平坦部のアノード側に隣接していて少なくとも０．５ｐＨ単位の範囲にわたるｐＨ勾配と、前記ｐＨ分離平坦部のカソード側に隣接していて少なくとも０．５ｐＨ単位の範囲にわたるｐＨ勾配とを含む、または
前記ｐＨ機能プロファイルがｐＨ分離平坦部を含んでいて、そのアノード側にｐＨ勾配が隣り合い、カソード側にｐＨ平坦部が隣り合っている、または
前記ｐＨ機能プロファイルがｐＨ分離平坦部を含んでいて、そのアノード側にｐＨ平坦部が隣り合い、カソード側にｐＨ勾配が隣り合っている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ｐＨ機能プロファイルが、前記ｐＨ機能を形成する媒体に隣接して配置される少なくとも１つのフォーカス媒体を含み、前記ｐＨ機能がｐＨ分離平坦部に隣接する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ｐＨ機能プロファイルが少なくとも１つのフォーカス媒体を含み、前記フォーカス媒体の導電率が、ｐＨ機能またはｐＨ分離平坦部を形成する媒体の導電率の少なくとも２倍である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
分画化されたサンプルの分析物を分析するため、その分析の前にフリー・フロー等電点電気泳動を実施する操作を含む方法であって、そのフリー・フロー等電点電気泳動が、
フリー・フロー電気泳動（ＦＦＥ）チェンバーの中でアノードとカソードの間に、ｐＨの平均が分離する分析物の等電点（ｐＩ）に実質的に対応していて、上限ｐＨと下限ｐＨによって限定されたｐＨ範囲を持つｐＨ分離平坦部と、前記アノードとそのｐＨ分離平坦部の間にあって、そのｐＨ分離平坦部のｐＨよりも小さな平均ｐＨを持つおよび／またはそのｐＨ分離平坦部よりも大きな導電率を持つｐＨ機能と、前記カソードとそのｐＨ分離平坦部の間にあって、そのｐＨ分離平坦部のｐＨよりも大きな平均ｐＨを持つおよび／またはそのｐＨ分離平坦部よりも大きな導電率を持つｐＨ機能とを含む、ｐＨ機能プロファイルを形成するステップと；
分析物混合物から分離する１つの分析物を含むサンプルを、ＦＦＥチェンバー内の前記ｐＨ分離平坦部、そのｐＨ分離平坦部のアノード側の領域、またはそのｐＨ分離平坦部のカソード側の領域に導入するステップと；
ＦＦＥチェンバーから前記分析物を流出させるステップと；
それによって、そのサンプルから、少なくとも１つの非枯渇部分と、前記ｐＨ分離平坦部上でその非枯渇部分から分離される分析物を含む部分とを生成させるステップと；
その後、前記ＦＦＥチェンバーから流出した１つ以上の画分を分析するステップとを含む方法。
【請求項８】
前記分析物をフリー・フロー等電点電気泳動によって分離する前に、分析物混合物から分離する１つの分析物のｐＩを同定するステップをさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ分離平坦部と、ｐＨ平坦部を形成するｐＨ機能とを含み、前記ｐＨ分離平坦部と、隣接する前記ｐＨ平坦部とのｐＨの差が０．５ｐＨ単位より大きい、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ分離平坦部と、前記ｐＨ分離平坦部のアノード側に隣接していて少なくとも０．５ｐＨ単位の範囲にわたるｐＨ勾配と、前記ｐＨ分離平坦部のカソード側に隣接していて少なくとも０．５ｐＨ単位の範囲にわたるｐＨ勾配とを含む、または
前記ｐＨ機能プロファイルがｐＨ分離平坦部を含んでいて、そのアノード側にｐＨ勾配が隣り合い、カソード側にｐＨ平坦部が隣り合っている、または
前記ｐＨ機能プロファイルがｐＨ分離平坦部を含んでいて、そのアノード側にｐＨ平坦部が隣り合い、カソード側にｐＨ勾配が隣り合っている、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記ｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ機能を形成する媒体に隣接して配置される少なくとも１つのフォーカス媒体を含み、前記ｐＨ機能がｐＨ分離平坦部に隣接する、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
後で実施する分析に、フリー・フロー電気泳動、ゲル電気泳動、１Ｄ−ＰＡＧＥ、２Ｄ−ＰＡＧＥ、ＭＳ、ＭＡＬＤＩ、ＥＳＩ、ＳＥＬＤＩ、ＬＣ−ＭＳ（／ＭＳ）、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＭＳ（／ＭＳ）、化学発光、ＨＰＬＣ、エドマン・シークエンシング、ＮＭＲ分光、Ｘ線回折、核酸シークエンシング、エレクトロブロッティング、アミノ酸シークエンシング、フロー・サイトメトリー、および円二色性からなる群から選択された１つの技術、またはこれらの組み合わせが含まれる、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
電気泳動による分離の後に、前記ｐＨ分離平坦部から流出する分析物をＦＦＥチェンバーから流出する１種類以上の分析物から差し引いたものが回収され、回収された分析物の少なくとも一部に対してゲル電気泳動、質量分析、またはこれらの組み合わせが実施される、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
サンプル中の前記非枯渇部分からの少なくとも１つの分析物がバイオマーカーである、請求項７に記載の方法。
【請求項１５】
分離する前記分析物が、アルブミン、α１アンチトリプシン、トランスフェリン、ハプトグロブリン、カゼイン、ミオシン、およびアクチンからなる群から選択されるタンパク質である、請求項７に記載の方法。
【請求項１６】
前記フリー・フロー等電点電気泳動による分離が天然状態下で実施され、前記ｐＨ分離平坦部のｐＨが、ｐＨ４．７〜ｐＨ５．０の範囲である、または
前記フリー・フロー等電点電気泳動による分離が変性条件下で実施され、前記ｐＨ分離平坦部のｐＨが、ｐＨ６．２〜ｐＨ６．５の範囲である、または
前記フリー・フロー等電点電気泳動による分離が変性条件下で実施され、このとき興味の対象である分析物が還元およびアルキル化され、前記ｐＨ分離平坦部のｐＨがｐＨ５．９〜ｐＨ６．２の範囲である、請求項７に記載の方法。
請求項７に記載の方法。
【請求項１７】
２つ以上のサンプルに由来する分析物組成物から分離する１つ以上の分析物をフリー・フロー等電点電気泳動によって同時に分離する方法であって、
フリー・フロー電気泳動（ＦＦＥ）チェンバーの中で単一のアノードと単一のカソードの間に、Ｎ個の分離領域と、それぞれの分離領域を隣接する各分離領域から隔てる（Ｎ−１）個の電極間安定化媒体とを含むｐＨ機能プロファイルを形成するステップと；
ここで、各分離領域は、ｐＨが分離する各分析物の等電点（ｐＩ）に実質的に対応していて、ｐＨの範囲が上限ｐＨと下限ｐＨによって限定されているｐＨ分離平坦部と、そのｐＨ分離平坦部のアノード側に隣接していて、そのｐＨ分離平坦部のｐＨよりも小さな平均ｐＨを持つおよび／またはそのｐＨ分離平坦部よりも大きな導電率を持つｐＨ機能と、そのｐＨ分離平坦部のカソード側に隣接していて、その第１のｐＨ分離平坦部のｐＨよりも大きな平均ｐＨを持つおよび／またはそのｐＨ分離平坦部よりも大きな導電率を持つｐＨ機能とを備えており；
分析物組成物から分離する１つの分析物を含む各サンプルを個別に、前記ＦＦＥチェンバーの１つの分離領域のｐＨ分離平坦部、そのｐＨ分離平坦部のアノード側の領域、またはそのｐＨ分離平坦部のカソード側の領域に導入するステップであって、各分離領域には、分析物組成物から分離するその分析物をその分離領域において分離するのに適したｐＨ分離平坦部が含まれている、ステップと；
ＦＦＥチェンバーから前記分析物を流出させるステップとを含む方法。
【請求項１８】
前記分析物をフリー・フロー等電点電気泳動によって分離する前に、分析物組成物から分離する１つ以上の分析物のｐＩを同定するステップをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ分離平坦部と、ｐＨ平坦部を形成するｐＨ機能とを含み、前記ｐＨ分離平坦部と、隣接する前記ｐＨ平坦部とのｐＨの差が０．５ｐＨ単位より大きい、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ分離平坦部と、前記ｐＨ分離平坦部のアノード側に隣接していて少なくとも０．５ｐＨ単位の範囲にわたるｐＨ勾配と、前記ｐＨ分離平坦部のカソード側に隣接していて少なくとも０．５ｐＨ単位の範囲にわたるｐＨ勾配とを含む、または
前記ｐＨ機能プロファイルがｐＨ分離平坦部を含んでいて、そのアノード側にｐＨ勾配が隣り合い、カソード側にｐＨ平坦部が隣り合っている、または
前記ｐＨ機能プロファイルがｐＨ分離平坦部を含んでいて、そのアノード側にｐＨ平坦部が隣り合い、カソード側にｐＨ勾配が隣り合っている、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記ｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ分離平坦部に隣接するｐＨ勾配またはｐＨ機能を形成する媒体に隣接して配置される少なくとも１つのフォーカス媒体を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
Ｎが２〜９の整数である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
分離するサンプルの数が２〜９である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
分析物組成物から分離する前記分析物が、各サンプルで同じである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
前記アノード電極間安定化媒体が、一プロトン性の酸を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記カソード電極間安定化媒体が、一塩基性の塩基を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
フリー・フロー等電点電気泳動分離を実施するためのキットであって、フリー・フロー電気泳動（ＦＦＥ）チェンバーの中で単一のアノードと単一のカソードの間に形成されたｐＨ機能プロファイルが、ｐＨ分離平坦部に隣接したカソードｐＨ機能と、前記ｐＨ分離平坦部に隣接したアノードｐＨ機能とを含んでおり、
ｐＨ機能プロファイル内にｐＨ分離平坦部を形成することのできる少なくとも１つの分離媒体と、
前記ｐＨ分離平坦部に隣接したアノードｐＨ機能を形成することのできる少なくとも１つの分離媒体と、
前記ｐＨ分離平坦部に隣接したカソードｐＨ機能を形成することのできる少なくとも１つの分離媒体とを含むキット。
【請求項２８】
分析物組成物から分離する分析物を分離するための、フリー・フロー電気泳動法を実施するための装置であって、
フリー・フロー電気泳動（ＦＦＥ）チェンバーの中でアノードとカソードの間に、
ｐＨの平均が分離する分析物の等電点（ｐＩ）に実質的に対応していて、上限ｐＨと下限ｐＨによって限定されたｐＨ範囲を持ち、少なくとも１つの分離媒体入口によって導入された少なくとも１つの分離媒体によって形成される、ｐＨ分離平坦部と、
前記アノードとそのｐＨ分離平坦部の間にあって、そのｐＨ分離平坦部のｐＨよりも小さな平均ｐＨを持つおよび／またはそのｐＨ分離平坦部よりも大きな導電率を持ち、少なくとも１つの別の分離媒体入口によって導入された少なくとも１つの分離媒体によって形成される、ｐＨ機能と、
前記カソードとそのｐＨ分離平坦部の間にあって、そのｐＨ分離平坦部のｐＨよりも大きな平均ｐＨを持つおよび／またはそのｐＨ分離平坦部よりも大きな導電率を持ち、少なくとも１つの別の分離媒体入口によって導入された少なくとも１つの分離媒体によって形成される、ｐＨ機能とを含む、ｐＨ機能プロファイルを形成するための複数の分離媒体入口と、
分析物混合物から分離する分析物を含むサンプルを前記ＦＦＥチェンバーの中に導入するためのサンプル入口と、
前記サンプルから、少なくとも１つの非枯渇部分と、前記ｐＨ分離平坦部上でその非枯渇部分から分離された分析物を含む部分とに、前記ＦＦＥチェンバーから分析物を流出させるための複数の回収出口とを含む、装置。