【手続補正書】
【提出日】平成21年11月19日(2009.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）配列番号２１又は２６から選択されるアミノ酸配列の少なくとも５個の連続したアミノ酸を有するエピトープ；
ｂ）配列番号２１又は２６から選択されるアミノ酸配列を有するエピトープ：
ｃ）ａ）又はｂ）で定義したアミノ酸配列に少なくとも６０％相同であるエピトープ；
から成るグループから選択されるグリコシド化されていないTSHレセプターの部分配列のエピトープ。
【請求項２】
被験者の生体液中の試料で、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体を検出及び／又は定量化する方法であって、該方法は、以下のａ）およびｂ）の工程
ａ）上記生体液と以下(i)、(ii)、(iii)および／又は(iv)のものを接触させる工程、
(i) 以下のａ）〜ｆ）の工程を有する方法によって得られる、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質を有する、グリコシド化されていない単離かつ精製した、１以上の組換えポリペプチド、
ａ）原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主を、融合タンパク質をコードする単離かつ精製した核酸配列を有するベクターで形質転換し、
その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、ポリペプチドに融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片及びその変異体から成っている；
ｂ）原核宿主細胞を培養し、それにより前記融合タンパク質を発現させ、前記原核宿主細胞内に蓄積させ；
ｃ）前記原核宿主細胞を単離し；
ｄ）界面活性剤の存在で前記原核宿主細胞を溶解し；
ｅ）溶解産物の可溶性成分を不溶性成分から分離し；かつ
ｆ）前記溶解産物の可溶性成分からの融合タンパク質を精製する；
(ii) 原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主内で発現されるグリコシド化されていない組換えポリペプチドであって、前記グリコシド化されていない単離かつ精製した組換えポリペプチドは、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質を有し、その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、主にグルタチオンSトランスフェラーゼ（GST）から成るポリペプチド、その断片又はその変異体に融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている、グリコシド化されていない組換えポリペプチド、
(iii) 以下のａ）〜ｈ）の工程を有する方法により得られるＴＳＨレセプターの部分配列であって、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合でき、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている、１以上の前記グリコシド化されていないＴＳＨレセプターの部分配列、
ａ）原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主を、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質をコードする単離かつ精製した核酸配列を有するベクターで形質転換し、
その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、ポリペプチドに融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている；
ｂ）原核宿主細胞を培養し、それにより前記融合タンパク質を発現させ、前記原核宿主細胞内に蓄積させ；
ｃ）前記原核宿主細胞を単離し；
ｄ）界面活性剤の存在で前記原核宿主細胞を溶解し；
ｅ）溶解産物の可溶性成分を不溶性成分から分離し；
ｆ）前記溶解産物の可溶性成分からの融合タンパク質を精製し；
ｇ）前記TSHレセプターの部分配列に融合した前記ポリペプチドを消化又は切断し；かつ
ｈ）前記TSHレセプターの部分配列、その断片又はその変異体を回収する；
および／又は
(iv) １以上の請求項１に記載のエピトープ
および
ｂ）前記グリコシド化されていない単離かつ精製した組換えポリペプチド及び／又は前記グリコシド化されていないTSHレセプターの部分配列及び／又は前記エピトープに結合した前記自己抗体を検出及び／又は定量化する工程
を含む、被験者の生体液中で、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体を検出及び／又は定量化する方法。
【請求項３】
TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体を、インビトロで検出及び／又は定量化し、その際、生体液が被験者からのサンプルとして得られる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
生体液を被験者からサンプルとして得て、かつ前記サンプルを、固体担体上に固定した、グリコシド化されていない単離かつ精製した組換えポリペプチド及び／又はグリコシド化されていないTSHレセプターの部分配列及び／又はエピトープと接触させ、かつ前記固体担体に結合した自己抗体を検出及び／又は定量化する、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
サンプルをグリコシド化されていない単離かつ精製した組換えポリペプチドと接触させ、１つ以上のTSHレセプターの部分配列を、主にグルタチオンSトランスフェラーゼ（GST）、その断片又はその変異体から成るポリペプチドに融合させ、かつ前記融合タンパク質がその表面上にグルタチオンを提供する固体担体とのジスルフィド結合により固体担体上に並ぶように、前記融合タンパク質を固定する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
自己抗体は、ELISA、LISA、RIA、ウェスタンブロット、免疫沈降又はフローサイトメトリーから選択されるアッセイにより検出及び／又は定量化される、請求項２から５までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
アッセイはELISAである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
検出及び／又は定量化された自己抗体は、アイソタイプIgG、IgM及び／又はIgAのものである、請求項２から７までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
更に、
ｃ）検出及び／又は定量化した自己抗体を単離する
ことを含む、請求項２から８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
更に、TG及び／又はTPOに対する自己抗体を検出及び／又は定量化する、請求項２から９までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
被験者の生体液中でTSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生された自己抗体を検出及び／又は定量化するためのキットであって、場合により、試薬および／または取扱説明書の付いた、少なくとも１つ以上の以下(i)-(iv)、
(i) 以下のａ）〜ｆ）の工程を有する方法によって得られる、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質を有する、グリコシド化されていない単離かつ精製した、１以上の組換えポリペプチド、
ａ）原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主を、融合タンパク質をコードする単離かつ精製した核酸配列を有するベクターで形質転換し、
その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、ポリペプチドに融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている；
ｂ）原核宿主細胞を培養し、それにより前記融合タンパク質を発現させ、前記原核宿主細胞内に蓄積させ；
ｃ）前記原核宿主細胞を単離し；
ｄ）界面活性剤の存在で前記原核宿主細胞を溶解し；
ｅ）溶解産物の可溶性成分を不溶性成分から分離し；
ｆ）前記溶解産物の可溶性成分からの融合タンパク質を精製する；
(ii) 原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主内で発現されるグリコシド化されていない組換えポリペプチドであって、前記グリコシド化されていない単離かつ精製した組換えポリペプチドは、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質を有し、その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、主にグルタチオンSトランスフェラーゼ（GST）から成るポリペプチド、その断片又はその変異体に融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている、グリコシド化されていない組換えポリペプチド、
(iii) 以下のａ）〜ｈ）の工程を有する方法により得られるＴＳＨレセプターの部分配列であって、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合でき、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている、前記グリコシド化されていないＴＳＨレセプターの部分配列、
ａ）原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主を、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質をコードする単離かつ精製した核酸配列を有するベクターで形質転換し、
その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、ポリペプチドに融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている；
ｂ）原核宿主細胞を培養し、それにより前記融合タンパク質を発現させ、前記原核宿主細胞内に蓄積させ；
ｃ）前記原核宿主細胞を単離し；
ｄ）界面活性剤の存在で前記原核宿主細胞を溶解し；
ｅ）溶解産物の可溶性成分を不溶性成分から分離し；
ｆ）前記溶解産物の可溶性成分からの融合タンパク質を精製し；
ｇ）前記TSHレセプターの部分配列に融合した前記ポリペプチドを消化又は切断し；
ｈ）前記TSHレセプターの部分配列、その断片又はその変異体を回収する；
および／又は
(iv) １以上の請求項１に記載のエピトープ、
を有する、被験者の生体液中でTSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生された自己抗体を検出及び／又は定量化するためのキット。
【請求項１２】
ELISA、LISA、RIA、ウェスタンブロット、免疫沈降又はフローサイトメトリーから選択されるアッセイを実施するための試薬を更に有する、請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
アッセイはELISAである、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
ポイント・オブ・ケアテストを実施するための試薬を更に有する、請求項１１に記載のキット。
【請求項１５】
TG及びTPOを検出及び／又は定量化するための試薬を更に有する、請求項１１から１４までのいずれか１項に記載のキット。
【請求項１６】
TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患を診断するための、請求項１１から１５までのいずれか１項に記載のキットの使用。
【請求項１７】
TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患の治療又は予防で使用するための、および／または診断において使用するための、１つ以上の
(i) 以下のａ）〜ｆ）の工程を有する方法によって得られる、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質を有する、グリコシド化されていない単離かつ精製した、組換えポリペプチド、
ａ）原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主を、融合タンパク質をコードする単離かつ精製した核酸配列を有するベクターで形質転換し、
その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、ポリペプチドに融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている；
ｂ）原核宿主細胞を培養し、それにより前記融合タンパク質を発現させ、前記原核宿主細胞内に蓄積させ；
ｃ）前記原核宿主細胞を単離し；
ｄ）界面活性剤の存在で前記原核宿主細胞を溶解し；
ｅ）溶解産物の可溶性成分を不溶性成分から分離し；
ｆ）前記溶解産物の可溶性成分からの融合タンパク質を精製する；
(ii) 原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主内で発現されるグリコシド化されていない組換えポリペプチドであって、前記グリコシド化されていない単離かつ精製した組換えポリペプチドは、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質を有し、その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、主にグルタチオンSトランスフェラーゼ（GST）から成るポリペプチド、その断片又はその変異体に融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている、グリコシド化されていない組換えポリペプチド、
(iii) 以下のａ）〜ｈ）の工程を有する方法により得られるＴＳＨレセプターの部分配列であって、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合でき、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている、前記グリコシド化されていないＴＳＨレセプターの部分配列、
ａ）原核宿主細胞の細胞質内でジスルフィド結合の形成を可能にする突然変異を有さない原核宿主を、TSHレセプターに対する免疫反応と関連する自己免疫疾患に応答して産生される自己抗体に結合できる融合タンパク質をコードする単離かつ精製した核酸配列を有するベクターで形質転換し、
その際、１つ以上のTSHレセプターの部分配列は、ポリペプチドに融合し、かつ前記TSHレセプターの部分配列は、主にTSHレセプターの細胞外ドメイン、その断片又はその変異体から成っている；
ｂ）原核宿主細胞を培養し、それにより前記融合タンパク質を発現させ、前記原核宿主細胞内に蓄積させ；
ｃ）前記原核宿主細胞を単離し；
ｄ）界面活性剤の存在で前記原核宿主細胞を溶解し；
ｅ）溶解産物の可溶性成分を不溶性成分から分離し；
ｆ）前記溶解産物の可溶性成分からの融合タンパク質を精製し；
ｇ）前記TSHレセプターの部分配列に融合した前記ポリペプチドを消化又は切断し；かつ
ｈ）前記TSHレセプターの部分配列、その断片又はその変異体を回収する
および／又は
(iv) １以上の請求項１に記載のエピトープ。