【手続補正書】
【提出日】平成22年3月30日(2010.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された宿主細胞であって、ビタミンＫエポキシド還元酵素（ＶＫＯＲ）をコードする異種核酸とビタミンＫ依存性タンパク質をコードする核酸とを含み、ＶＫＯＲをコードする核酸とビタミンＫ依存性タンパク質をコードする核酸の両方を発現している宿主細胞。
【請求項２】
（ａ）ビタミンＫ依存性タンパク質をコードする核酸と、
（ｂ）ビタミンＫ依存性カルボキシラーゼをコードする異種核酸と、
（ｃ）ビタミンＫエポキシド還元酵素をコードする異種核酸と
を含む単離された宿主細胞。
【請求項３】
前記ビタミンＫ依存性タンパク質をコードする核酸は、異種のものである請求項１または２に記載の宿主細胞。
【請求項４】
異種プロモーターと機能的に連結しているビタミンＫエポキシド還元酵素（ＶＫＯＲ）をコードする核酸を含む組換え核酸を含み、かつ、発現している単離された宿主細胞。
【請求項５】
前記組換えビタミンＫ依存性タンパク質は、凝固因子を含む請求項１〜４のいずれか１項に記載の宿主細胞。
【請求項６】
前記凝固因子は、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、プロトロンビン、プロテインＣおよびプロテインＳからなる群から選択される請求項５に記載の宿主細胞。
【請求項７】
前記細胞は、哺乳動物細胞である請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項８】
前記細胞は、植物細胞である請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項９】
前記細胞は、昆虫細胞である請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞。
【請求項１０】
宿主細胞におけるビタミンＫ依存性タンパク質の生産する方法であって、
（ａ）ビタミンＫ依存性タンパク質をコードする組換え核酸を宿主細胞に導入するステップと、
（ｂ）ビタミンＫエポキシド還元酵素（ＶＫＯＲ）をコードする組換え核酸を前記宿主細胞に導入するステップと、
（ｃ）ビタミンＫ依存性タンパク質を生産するためにステップ（ａ）と（ｂ）の組換え核酸を発現させるステップと
を含む方法。
【請求項１１】
宿主細胞におけるビタミンＫ依存性タンパク質の生産する方法であって、
（ａ）ビタミンＫ依存性タンパク質をコードする核酸を発現する単離された宿主細胞を提供するステップと、
（ｂ）ビタミンＫエポキシド還元酵素（ＶＫＯＲ）をコードする組換え核酸を前記宿主細胞に導入するステップと、
（ｃ）ビタミンＫ依存性タンパク質を生産するためにステップ（ａ）と（ｂ）の核酸を発現させるステップと
を含む方法。
【請求項１２】
宿主細胞におけるビタミンＫ依存性タンパク質の生産する方法であって、
（ａ）ビタミンＫエポキシド還元酵素（ＶＫＯＲ）をコードする異種核酸を発現する単離された宿主細胞を提供するステップと、
（ｂ）ビタミンＫ依存性タンパク質をコードする組換え核酸を前記宿主細胞に導入するステップと、
（ｃ）ビタミンＫ依存性タンパク質を生産するためにステップ（ａ）と（ｂ）の核酸を発現させるステップと
を含む方法。
【請求項１３】
宿主細胞におけるビタミンＫ依存性タンパク質の生産する方法であって、
（ａ）ビタミンＫの存在下でビタミンＫ依存性タンパク質をコードする核酸を発現し、ビタミンＫ依存性タンパク質を産生する宿主細胞を培養するステップと、
（ｂ）前記培養から前記ビタミンＫ依存性タンパク質を採取するステップと、ここで、前記宿主細胞は、ビタミンＫ依存性カルボキシラーゼをコードする異種核酸を含み、かつ、発現し、
を含み、前記宿主細胞は、ビタミンＫエポキシド還元酵素（ＶＫＯＲ）をコードする異種核酸をさらに含み、かつ、発現する、方法。
【請求項１４】
前記ビタミンＫ依存性タンパク質は、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、プロテインＣ、プロテインＳ、およびプロトロンビンからなる群から選択される請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の方法により得られるビタミンＫ依存性タンパク質。
【請求項１６】
前記宿主細胞は、哺乳動物細胞である請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記宿主細胞は、植物細胞である請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記宿主細胞は、昆虫細胞である請求項１０〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ビタミンＫ依存性カルボキシラーゼは、ウシビタミンＫ依存性カルボキシラーゼである請求項１３、１４、１６、１７または１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
ワルファリンに対する増加した感受性を有するヒト被験者を同定する方法であって、前記被験者においてＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在を検出するステップを含み、ここで、前記一塩基多型の対立遺伝子がワルファリンに対する増加した感受性と相関させられ、それによりワルファリンに対する増加した感受性を有する被験者を同定する、方法。
【請求項２１】
前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型が、配列番号１１のヌクレオチド配列のヌクレオチド２５８１におけるＧ→Ｃ変換である請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ワルファリンに対する増加した感受性を有するヒト被験者を同定する方法であって、
（ａ）前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在をワルファリンに対する増加した感受性と相関させるステップと、
（ｂ）前記被験者においてステップ（ａ）の前記一塩基多型の対立遺伝子を検出するステップと、それによりワルファリンに対する増加した感受性を有する被験者を同定する、方法。
【請求項２３】
ワルファリンに対する増加した感受性と相関がある前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在を同定する方法であって、
（ａ）ワルファリンに対する増加した感受性を有する被験者を同定するステップと、
（ｂ）前記被験者における前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在を検出するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記一塩基多型の存在を前記被験者におけるワルファリンに対する増加した感受性と相関させるステップと、それによりワルファリンに対する増加した感受性と相関するＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子を同定する、
を含む方法。
【請求項２４】
被験者のＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在をワルファリンに対する増加した感受性と相関させる方法であって、
（ａ）ワルファリンに対する増加した感受性を有する被験者を同定するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の被験者の前記ＶＫＯＲ遺伝子のヌクレオチド配列を決定するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）のヌクレオチド配列を前記ＶＫＯＲ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列と比較するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）のヌクレオチド配列内の一塩基多型の対立遺伝子を検出するステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）の一塩基多型の対立遺伝子をステップ（ａ）の被験者におけるワルファリンに対する増加した感受性と相関させるステップと
を含む方法。
【請求項２５】
ワルファリンに対する減少した感受性を有するヒト被験者を同定する方法であって、前記被験者においてＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在を検出するステップを含み、ここで、前記一塩基多型の対立遺伝子がワルファリンに対する減少した感受性と相関させられ、それによりワルファリンに対する減少した感受性を有する被験者を同定する、方法。
【請求項２６】
前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型が、配列番号１１のヌクレオチド配列のヌクレオチド３２９４におけるＴ→Ｃ変換である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型が、配列番号１１のヌクレオチド配列のヌクレオチド４７６９におけるＧ→Ａ変換である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
ワルファリンに対する減少した感受性を有するヒト被験者を同定する方法であって、
（ａ）前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在をワルファリンに対する減少した感受性と相関させるステップと、
（ｂ）前記被験者においてステップ（ａ）の前記一塩基多型の対立遺伝子を検出するステップと、それによりワルファリンに対する減少した感受性を有する被験者を同定する、方法。
【請求項２９】
ワルファリンに対する減少した感受性と相関がある前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在を同定する方法であって、
（ａ）ワルファリンに対する減少した感受性を有する被験者を同定するステップと、
（ｂ）前記被験者における前記ＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在を検出するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）の前記一塩基多型の存在を前記被験者におけるワルファリンに対する減少した感受性と相関させるステップと、それによりワルファリンに対する減少した感受性と相関するＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子を同定する、
を含む方法。
【請求項３０】
被験者のＶＫＯＲ遺伝子内の一塩基多型の対立遺伝子の存在をワルファリンに対する減少した感受性と相関させる方法であって、
（ａ）ワルファリンに対する減少した感受性を有する被験者を同定するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の被験者の前記ＶＫＯＲ遺伝子のヌクレオチド配列を決定するステップと、
（ｃ）ステップ（ｂ）のヌクレオチド配列を前記ＶＫＯＲ遺伝子の野生型ヌクレオチド配列と比較するステップと、
（ｄ）ステップ（ｂ）のヌクレオチド配列内の一塩基多型の対立遺伝子を検出するステップと、
（ｅ）ステップ（ｄ）の一塩基多型の対立遺伝子をステップ（ａ）の被験者におけるワルファリンに対する減少した感受性と相関させるステップと
を含む方法。