【手続補正書】
【提出日】平成22年6月11日(2010.6.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）３０から３００の範囲の重合度（ＤＰｎ）を有する低分子量キトサン（ここで、前記低分子量キトサンの脱アセチル化度は９０％を超える）と、
（ｂ）オリゴヌクレオチド
の複合体を含む組成物。
【請求項２】
前記低分子量キトサンが化学的または酵素的方法を用いて高分子量キトサンから得られたものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記低分子量キトサンの脱アセチル化度が９５％を超える、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が本質的に正味の正電荷比を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記低分子量キトサンがターゲティングリガンドおよび安定剤を用いて誘導体化されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記オリゴヌクレオチドが、宿主細胞中に導入されるとその機能を発現するサイレンシング配列を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡ分子、アンチセンス分子、リボザイム、およびミクロＲＮＡからなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が３．５から８．０の範囲のｐＨを有する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
（ａ）低分子量キトサンを水性溶媒と接触させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の水溶液をオリゴヌクレオチドと水性溶媒中で混合するステップと、
（ｃ）前記混合物のｐＨを３．５〜８．０の範囲に維持するステップと、
を含む、請求項１に記載の組成物の調製法。
【請求項１０】
ステップ（ｂ）で製造された生成物溶液の体積を減じて、所望の濃度の組成物を得ることをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物を有効成分とする核酸製剤。
【請求項１２】
核酸製剤の剤型が、肺、鼻、口腔、眼、頬、舌下、局所、直腸、または膣経路によって粘膜組織に投与する剤型である、請求項１１に記載の核酸製剤。
【請求項１３】
核酸製剤の剤型が、静脈内、筋肉内、皮内、頭蓋内、髄腔内、皮下、もしくは心臓内投与からなる非経口経路による粘膜下組織への投与、あるいは内臓器官、血管、または手術中に露出する他の体表面もしくは体腔への投与のための剤型である、請求項１１に記載の核酸製剤。
【請求項１４】
前記組成物が、哺乳動物の少なくとも１つの細胞の内部でその機能を発現できるオリゴヌクレオチドである、請求項１１に記載の核酸製剤。
【請求項１５】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物を有効成分とするインビボまたはインビトロ診断剤。
【請求項１６】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物を有効成分とする、悪性腫瘍、自己免疫疾患、遺伝性疾患、病原性感染症および他の疾患を予防または治療するための遺伝子療法、アンチセンス療法、または遺伝子ワクチン接種において使用される医薬であって、
ａ）肺、鼻、口腔、眼、頬、舌下、直腸、もしくは膣経路により粘膜組織へ、
ｂ）静脈内、筋肉内、皮内、頭蓋内、髄腔内、皮下、もしくは心臓内投与である非経口経路により粘膜下組織へ、あるいは
ｃ）内臓器官、血管、または手術中に露出する他の体表面もしくは体腔へ、の投与によって、哺乳動物中導入して用いるための医薬。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
インビトロでのＲＮＡｉの動態
最後に、ｓｉＲＮＡ−Ｌｕｃの２９３−Ｌｕｃ細胞へのデリバリー後のルシフェラーゼサイレンシング時間経過を調査した。３４〜８５モノマー単位の範囲のＤＰ値を有する低分子量キトサン、ＰＥＩおよびＬＦ２０００を試験した。ＤＰｎ１８キトサンは、さらに長いキトサンよりも有効でないため（図４）、含めなかった。直鎖ＤＰｎ８５を配合したｓｉＲＮＡ複合体はルシフェラーゼサイレンシングの早発性に関与し、この場合、１日後に著しい効果が検出され（７０％）、２日後に最大（９２％）に達した（図７Ａ）。遺伝子サイレンシング活性は５日間持続し、このことはインタクトなｓｉＲＮＡが細胞内で安定して放出されることを示唆する。分岐キトサンオリゴマーはこれらの直鎖カウンターパートと比較して有効性が低いルシフェラーゼサイレンシング動態を示した（図７Ｂ）。ＬＦ２０００およびＰＥＩは、低分子量キトサンが関与するものよりも低い遺伝子サイレンシング効果を示した（図７Ｃ）。別の細胞系（ＳＫＯＶ−３−Ｌｕｃ）におけるルシフェラーゼサイレンシング動態は、２９３−Ｌｕｃ細胞におけるものと類似した結果をもたらした（図７Ｄ）。
次に本発明とその実施態様をまとめて説明する。
１．（ａ）３０から３００の範囲の重合度（ＤＰｎ）を有する低分子量キトサン（ここで、前記低分子量キトサンの脱アセチル化度は９０％を超える）と、
（ｂ）オリゴヌクレオチド
の複合体を含む組成物。
２．前記低分子量キトサンが化学的または酵素的方法を用いて高分子量キトサンから得られるものである上記１に記載の組成物。
３．前記低分子量キトサンの脱アセチル化度が９５％を超える、上記１に記載の組成物。
４．前記低分子量キトサンの脱アセチル化度が９９％を超える、上記３に記載の組成物。
５．前記組成物が本質的に正味の正電荷比を有する、上記１に記載の組成物。
６．ターゲティングリガンドおよび安定剤を用いて前記低分子量キトサンを誘導体化する、上記１に記載の組成物。
７．前記オリゴヌクレオチドが、宿主細胞中に導入されるとその機能を発現するサイレンシング配列を含む、上記１に記載の組成物。
８．前記オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡ分子、アンチセンス分子、リボザイム、およびミクロＲＮＡからなる群から選択される、上記７に記載の組成物。
９．前記組成物が３．５から８．０の範囲のｐＨを有する、上記８に記載の組成物。
１０．前記組成物が７．１から７．６の範囲のｐＨを有する、上記９に記載の組成物。
１１．（ａ）低分子量キトサンを水性溶媒と接触させるステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の水溶液をオリゴヌクレオチドと水性溶媒中で混合するステップと、
（ｃ）前記組成物のｐＨを３．５〜８．０の範囲に維持するステップと、
を含む、上記１に記載の組成物の調製法。
１２．ステップ（ｂ）で製造された生成物溶液の体積を減じて、所望の濃度の組成物を得ることをさらに含む、上記１１に記載の方法。
１３．核酸を哺乳動物に投与する方法であって、前記哺乳動物中に上記１に記載の組成物を導入することを含む方法。
１４．前記組成物を哺乳動物に、肺、鼻、口腔、眼、頬、舌下、局所、直腸、または膣経路によって粘膜組織に投与することにより導入する、上記１３に記載の方法。
１５．前記組成物を、非経口経路（静脈内、筋肉内、皮内、頭蓋内、髄腔内、皮下、もしくは心臓内投与）による粘膜下組織への投与、あるいは内臓器官、血管、または手術中に露出する他の体表面もしくは体腔への投与により哺乳動物中に導入する、上記１３に記載の方法。
１６．前記組成物が、哺乳動物の少なくとも１つの細胞の内部でその機能を発現できるオリゴヌクレオチドである、上記１３に記載の方法。
１７．哺乳動物を予防または治療するための医薬を製造することを含む上記１に記載の組成物を使用する方法であって、前記医薬が上記１に記載の組成物を含む方法。
１８．インビボまたはインビトロ診断法において使用することを含む、診断薬として上記１に記載の組成物を使用する方法。
１９．悪性腫瘍、自己免疫疾患、遺伝性疾患、病原性感染症および他の疾患を予防または治療するための遺伝子療法、アンチセンス療法、または遺伝子ワクチン接種において使用される医薬の製造における上記１７に記載の組成物の使用であって、
ａ）肺、鼻、口腔、眼、頬、舌下、直腸、もしくは膣経路により粘膜組織へ、
ｂ）静脈内、筋肉内、皮内、頭蓋内、髄腔内、皮下、もしくは心臓内投与である非経口経路により粘膜下組織へ、あるいは
ｃ）内臓器官、血管、または手術中に露出する他の体表面もしくは体腔へ、の投与によって、哺乳動物中に前記組成物を導入することを含む使用。