【手続補正書】
【提出日】平成22年2月16日(2010.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１４からの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドのヌクレオチド配列を含むセンス鎖と、配列番号１５からの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むアンチセンス鎖と、を含むｉＲＮＡ剤。
【請求項２】
鎖あたり１、２又は３個以下のヌクレオチドがそれぞれ他のヌクレオチドによって置換されているが、培養ヒトＳＥＭ細胞中におけるＭＬＬ−ＡＦ４の発現を阻害する能力を本質的に維持していること以外は、配列番号１４と本質的に同一である少なくとも１６、１７又は１８個のヌクレオチドの配列を含むセンス鎖中のヌクレオチド配列と配列番号１５と本質的に同一である少なくとも１６、１７又は１８個のヌクレオチドの配列を含むアンチセンス鎖中のヌクレオチド配列とを含むｉＲＮＡ剤。
【請求項３】
前記ｉＲＮＡ剤は、該ｉＲＮＡ剤とのインキュベーション後に、培養ヒトＳＥＭ細胞中に存在するＭＬＬ−ＡＦ４  ｍＲＮＡの量を、該ｉＲＮＡ剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して６０％超減少させる、請求項１に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項４】
前記アンチセンスＲＮＡ鎖は長さが３０ヌクレオチド以下であり、前記ｉＲＮＡ剤の二重鎖領域の長さが１５乃至３０ヌクレオチド対である、請求項１乃至３のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項５】
１乃至４個の不対ヌクレオチドを有する少なくとも一つのヌクレオチド突出部分を含む、請求項１乃至３のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項６】
前記ヌクレオチド突出部分が２又は３の不対ヌクレオチドを有する、請求項５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項７】
前記ヌクレオチド突出部分がｉＲＮＡ剤のアンチセンス鎖の３’末端に存在する、請求項５又は６に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項８】
請求項１に記載のｉＲＮＡ剤であって、
前記ｉＲＮＡ剤は、
（ａ）センス鎖配列の配列番号１４の（５’から３’へ向かって）１位〜１９位又は１位〜２１位のヌクレオチド配列の群から選択されるヌクレオチド配列から構成されたセンス鎖と、前記センス鎖が該センス鎖配列の１位〜２１位のヌクレオチドの配列から構成されることが選択された場合にはアンチセンス鎖配列の配列番号１５の（５’から３’へ向かって）１位〜２１位又は３位〜２１位のヌクレオチドの配列、並びに前記センス鎖が該センス鎖配列の１位〜１９位のヌクレオチド配列から構成されることが選択された場合にはアンチセンス鎖配列の配列番号１５の３位〜２１位のヌクレオチドの配列、の群から選択されるヌクレオチド配列から構成されたアンチセンス鎖と、により形成される２本鎖構造と、
（ｂ）前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖の少なくとも一方の３’−末端に１乃至４個の不対ヌクレオチドからなる少なくとも１つの１本鎖の突出部分であって、前記１本鎖突出部分は、前記センス鎖の３’−末端にある場合には該センス鎖配列の２０位及び２１位のヌクレオチドをそれらのそれぞれの位置に選択的に含むか及び／または前記アンチセンス鎖の３’−末端にある場合には該アンチセンス鎖配列の２２位及び２３位のヌクレオチドをそれらのそれぞれの位置に選択的に含む、１本鎖の突出部分と、
から構成されており、
前記２本鎖構造が前記センス鎖配列の１位〜２１位のヌクレオチド配列から構成されるセンス鎖と、前記アンチセンス鎖配列の１位〜２１位のヌクレオチド配列から構成されるアンチセンス鎖と、により形成されている場合には、前記ｉＲＮＡ剤は、該センス鎖の３’−末端に１乃至４個の不対オリゴヌクレオチドの１本鎖突出部分を含んでいない、ｉＲＮＡ剤。
【請求項９】
前記センス鎖のヌクレオチド配列は配列番号１４のヌクレオチド配列から構成され、かつ前記アンチセンス鎖のヌクレオチド配列は配列番号１５のヌクレオチド配列から構成される、請求項８に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１０】
前記ｉＲＮＡ剤は該ｉＲＮＡ剤とのインキュベーション後に、培養ヒトＳＥＭ細胞中に存在するＭＬＬ−ＡＦ４  ｍＲＮＡの量を、該ｉＲＮＡ剤とともにインキュベーションしなかった細胞と比較して４０％超減少させる、請求項１乃至９のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１１】
前記ｉＲＮＡ剤に生物試料中での増大した安定性を持たせる修飾を更に含む、請求項１乃至１０のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１２】
ホスホロチオエート又は２’−修飾ヌクレオチドを含む、請求項１乃至１１のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１３】
ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの５’−ウリジン−アデニン−３’（５’−ＵＡ−３’）ジヌクレオチド；５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの５’−ウリジン−グアニン−３’（５’−ＵＧ−３’）ジヌクレオチド；５’−シチジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの５’−シチジン−アデニン−３’（５’−ＣＡ−３’）ジヌクレオチド；又は５’−ウリジンが２’−修飾ヌクレオチドである少なくとも一つの５’−ウリジン−ウリジン−３’（５’−ＵＵ−３’）ジヌクレオチド、を含む、請求項１乃至１２のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１４】
前記２’−修飾が、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−Ｏ−メチル、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−Ｏ−ＭＯＥ）、２’−Ｏ−アミノプロピル（２’−Ｏ−ＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＯＥ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノプロピル（２’−Ｏ−ＤＭＡＰ）、２’−Ｏ−ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’−Ｏ−ＤＭＡＥＯＥ）、及び２’−Ｏ−Ｎ−メチルアセトアミド（２’−Ｏ−ＮＭＡ）からなる群より選択される、請求項１２又は１３に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１５】
コレステロール部分を含む、請求項１乃至１４のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１６】
前記コレステロール部分が前記ｉＲＮＡ剤のセンス鎖の３’−末端に結合している、請求項１５に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１７】
前記ｉＲＮＡ剤は肝臓の細胞により取り込まれるように標的化されている、請求項１乃至１６のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１８】
前記ｉＲＮＡ剤は消化管の細胞により取り込まれるように標的化されている、請求項１乃至１６のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤。
【請求項１９】
（ａ）請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤と、
（ｂ）製薬的に許容可能な担体と、
からなる製薬組成物。
【請求項２０】
前記ｉＲＮＡ剤のヒト及び／又はマウスの血漿中での半減期を延長させるか、又は細胞中における該ｉＲＮＡ剤の取り込みを容易にするための処方化剤を更に含む、請求項１９に記載の製薬組成物。
【請求項２１】
前記処方化剤はポリカチオンを含む、請求項２０に記載の製薬組成物。
【請求項２２】
前記製薬組成物は増殖性疾患の治療に有用である、請求項１９乃至２１のいずれか一項に記載の製薬組成物。
【請求項２３】
前記増殖性疾患は、癌である、請求項２２に記載の製薬組成物。
【請求項２４】
前記癌は白血病および急性リンパ芽球性白血病から選択される、請求項２３に記載の製薬組成物。
【請求項２５】
前記製薬組成物は、対象に該製薬組成物を投与することにより、該対象の細胞又は組織中でのＭＬＬ−ＡＦ４融合遺伝子の発現を低減すること及び／又はｔ（４；１１）−陽性細胞の増殖率を抑制することを可能にする、請求項１９乃至２４のいずれか一項に記載の製薬組成物。
【請求項２６】
前記対象はヒトである、請求項２５に記載の製薬組成物。
【請求項２７】
増殖性疾患を有するヒト対象または増殖性疾患の発生する危険性のあるヒト対象を治療する際に使用するための組成物であって、請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤を含む、組成物。
【請求項２８】
前記増殖性疾患は、癌である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記癌は、急性リンパ芽球性白血病である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物は対象の細胞又は組織中でのＭＬＬ−ＡＦ４の発現を低減すること及び／又はｔ（４；１１）−陽性細胞の増殖率を抑制することを可能にするのに十分な量にて投与されることを特徴とする、請求項２７、２８又は２９に記載の組成物。
【請求項３１】
請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤の一つを製薬的に許容可能な担体と処方化させる工程を含む、製薬組成物を製造するための方法。
【請求項３２】
前記ｉＲＮＡ剤のヒト及び／又はマウスの血漿中での半減期を延長させるか、又は細胞中における該ｉＲＮＡ剤の取り込みを容易にするための処方化剤とともに該ｉＲＮＡ剤を処方化する工程を更に含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記処方化剤はポリカチオンを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記製薬組成物は増殖性疾患の治療に有用である、請求項３１乃至３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記増殖性疾患は、癌である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記癌は白血病および急性リンパ芽球性白血病から選択される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記製薬組成物は、対象に該製薬組成物を投与することにより、該対象の細胞又は組織中でのＭＬＬ−ＡＦ４融合遺伝子の発現を低減すること及び／又はｔ（４；１１）−陽性細胞の増殖率を抑制することを可能にする、請求項３１乃至３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記対象はヒトである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
細胞中のＭＬＬ−ＡＦ４  ＲＮＡの量を低減すること及び／又はｔ（４；１１）−陽性細胞の増殖率を抑制することをインビトロにて実施する方法であって、前記単数又は複数の細胞を請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤と接触させる工程を含む、方法。
【請求項４０】
請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤を製造する方法であって、前記方法は、該ｉＲＮＡ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖を合成する工程を含み、前記センス鎖及び／又は前記アンチセンス鎖は少なくとも一つのヌクレオチド修飾を含む、方法。
【請求項４１】
前記ヌクレオチド修飾は、前記ｉＲＮＡ剤に生物試料中での増大した安定性を持たせる修飾である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
請求項４０に記載の方法に従って製造されたｉＲＮＡ剤を含む、医薬として使用するための組成物。
【請求項４３】
増殖性疾患を有すると診断された対象の治療において医薬として使用するための、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
前記増殖性疾患が癌である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
急性リンパ芽球性白血病を有すると診断された対象の治療において医薬として使用するための、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４６】
前記組成物がヒトに投与されることを特徴とする、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４７】
ＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現を阻害すると考えられているｉＲＮＡ剤を評価する方法であって、前記方法は、
（ａ）ｉＲＮＡ剤を提供する工程であって、第一の鎖がＭＬＬ−ＡＦ４  ｍＲＮＡのヌクレオチド配列と十分に相補的であり、かつ第二の鎖が第一の鎖とハイブリダイズするべく該第一の鎖と十分に相補的である、工程と、
（ｂ）前記ｉＲＮＡ剤をＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子を含む細胞と接触させる工程と、
（ｃ）細胞と前記ｉＲＮＡ剤を接触させる前のＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現又は接触させていない対照細胞のＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現と、細胞と前記ｉＲＮＡ剤を接触させた後のＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現と、を比較する工程と、
（ｄ）前記ｉＲＮＡ剤がＭＬＬ−ＡＦ４遺伝子の発現を阻害するのに有用であるかどうかを判定する工程であって、細胞中に存在するＭＬＬ−ＡＦ４  ＲＮＡの量又は該細胞によって分泌されるタンパク質の量が、細胞とｉＲＮＡ剤とを接触させる前の存在量若しくは分泌量よりも少ない場合、又はそのような接触を受けていない細胞による存在量若しくは分泌量よりも少ない場合、該ｉＲＮＡ剤は有用である工程と、
を含み、ここで、該ｉＲＮＡ剤は、請求項１乃至１８のいずれか一項に記載のｉＲＮＡ剤のうちの１つである、方法。