(57)【要約】  ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体および抗体断片が開示される。ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体および抗体断片を含む組成物ならびにその使用の方法もまた、本明細書に提供される。関連のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびそれを含む細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞またはマクロファージ）、ならびに腫瘍を標的化しそれを死滅させること、喘息処置、または（例えば、感染または感染性疾患を処置するために）感染細胞を標的化しそれを除去すること、または自己免疫疾患もしくは移植片拒絶に関与する免疫系細胞を抑制することにおけるＣＡＲおよび細胞の使用もまた提供される。
2022501428.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ２（ＬＩＬＲＢ２）に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｂ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｃ）配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄ）配列番号９１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅ）配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆ）配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉ）配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｊ）配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｋ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｌ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｍ）配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｎ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｏ）配列番号９８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｐ）配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｑ）配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｒ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｓ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｔ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｕ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｗ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｘ）配列番号１０４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｙ）配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｚ）配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ａａ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｂｂ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｃｃ）配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄｄ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅｅ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆｆ）配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇｇ）配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈｈ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉｉ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１３０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｊｊ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｋｋ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｌｌ）配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｍｍ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｎｎ）配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｏｏ）配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｐｐ）配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｑｑ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｒｒ）配列番号１１３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｓｓ）配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｔｔ）配列番号１１５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｕｕ）配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖｖ）配列番号１１６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｗｗ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｘｘ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｙｙ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｚｚ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ａａａ）配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｂｂｂ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｃｃｃ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄｄｄ）配列番号１１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅｅｅ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆｆｆ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇｇｇ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈｈｈ）配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉｉｉ）配列番号２２４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｊｊｊ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｋｋｋ）配列番号２１７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｌｌｌ）配列番号２１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｍｍｍ）配列番号２１９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１９７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｎｎｎ）配列番号２２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｏｏｏ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｐｐｐ）配列番号２２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｑｑｑ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｒｒｒ）配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｓｓｓ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１９９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｔｔｔ）配列番号２２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２００に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｕｕｕ）配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｖｖｖ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｗｗｗ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｘｘｘ）配列番号３７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号３７８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｙｙｙ）配列番号３６３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号３６５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号３６２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｚｚｚ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号３７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ａａａａ）配列番号２６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１１９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｂｂｂｂ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
（ａ）配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｂ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０を含むＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｃ）配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅ）配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆ）配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇ）配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉ）配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｊ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｋ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｌ）配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｍ）配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｎ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｏ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｐ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｑ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｒ）配列番号２１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｓ）配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
ＬＩＬＲＢ２活性のアンタゴニストである、請求項１から３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ２（ＬＩＬＲＢ２）に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、
（ａ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；
（ｂ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｃ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆ）配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈ）配列番号２２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉ）配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｊ）配列番号１１２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６】
（ａ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｂ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｃ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｄ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｅ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｆ）配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｇ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｈ）配列番号２２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；
（ｉ）配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または
（ｊ）配列番号１１２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ
を含む、請求項５に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９】
ＬＩＬＲＢ２活性のアゴニストである、請求項５から８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０】
抗体であり、前記抗体がＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
抗体であり、前記抗体がＩｇＧ２重鎖定常領域を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
前記抗体が、カッパ軽鎖定常領域を含む、請求項１０または１１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子。
【請求項１４】
請求項１３に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項１５】
第１の核酸分子および第２の核酸分子を含むベクターであって、前記第１の核酸分子が、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片のＶＨをコードし、前記第２の核酸分子が、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片のＶＬをコードする、ベクター。
【請求項１６】
請求項１４または１５に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１７】
原核細胞または真核細胞である、請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を生産するための方法であって、
（ａ）請求項１６または１７に記載の宿主細胞による前記抗体またはその抗原結合性断片の発現に適切な条件下で、前記宿主細胞を培養するステップ；および
（ｂ）前記抗体またはその抗原結合性断片を回収するステップ
を含む、方法。
【請求項１９】
請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む組成物。
【請求項２０】
化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
対象への静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化されている、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
請求項５から９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む医薬組成物。
【請求項２４】
化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
対象への静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化されている、請求項２３から２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
それを必要とする哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１９から２２のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項２８】
化学療法剤または鎮痛薬を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
免疫チェックポイント阻害剤を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
それを必要とする哺乳動物においてがんを処置する方法であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１９から２２のいずれか一項に記載の医薬組成物およびＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項３１】
前記がんが、リンパ腫、白血病、結腸がんまたは乳がんである、請求項２７から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
それを必要とする哺乳動物において感染を処置する方法であって、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項１９から２２のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項３３】
前記感染が細菌感染である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
それを必要とする哺乳動物において炎症促進性免疫応答を減少させる方法であって、治療有効量の、請求項５から９のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項２３から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項３５】
それを必要とする哺乳動物において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の、請求項５から９のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片または請求項２３から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項３６】
前記哺乳動物が、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記哺乳動物が、臓器または組織移植のために選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項２７から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２７から３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、
前記重鎖ＣＤＲ１が、配列番号１１１、２６５、２６７、２６９、２７４、２７７、２７９、２８２、２８４、２８５、１１２、２６７、２９２および２９５のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号１１１、２６５、２６７、２６９、２７４、２７７、２７９、２８２、２８４、２８５、１１２、２６７、２９２および２９５のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号１４７、１５７、２７０、２７２、２７５、２８０、２８３、２８６、２８８、２９０、２９３および２９６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号１４７、１５７、２７０、２７２、２７５、２８０、２８３、２８６、２８８、２９０、２９３および２９６のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号２６１〜２６４、２６６、２６８、２７１、２７３、２７６、２７８、２８１、２８７、２８９、２９１、２９４および２９７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２６１〜２６４、２６６、２６８、２７１、２７３、２７６、２７８、２８１、２８７、２８９、２９１、２９４および２９７のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４１】
前記単離された抗体または抗原結合性断片が、軽鎖ＣＤＲ１、２および３をさらに含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１が、配列番号２９８、３００、３０２、３０５、２６、３０８、７、１９７、３１２、３１４、３１６、３１７、３１８、３２０、３２２、３２５および３１のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２９８、３００、３０２、３０５、２６、３０８、７、１９７、３１２、３１４、３１６、３１７、３１８、３２０、３２２、３２５および３１のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２が、配列番号３８、４１、４４、４９、４２、４５、３９、３２３および３２６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３８、４１、４４、４９、４２、４５、３９、３２３および３２６のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号２９９、３０１、３０３、３０４、３０６、３０７、１３０、３０９、３１０、３１１、３１３、３１５、３１９、３２１、３２４、５２および３２７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２９９、３０１、３０３、３０４、３０６、３０７、１３０、３０９、３１０、３１１、３１３、３１５、３１９、３２１、３２４、５２および３２７のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む、
請求項４０に記載の単離された抗体。
【請求項４２】
ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
前記抗体またはその抗原結合性断片は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、
（ｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１４７）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号２６１）；
（ｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＳＧＨＳＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号２６２）；
（ｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＳＧＨＮＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号２６３）；
（ｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＧＡＬＹＹＦＤＮＷ（配列番号２６４）；
（ｖ）それぞれ、ＧＹＭＦＴＴＹＧ（配列番号２６５）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号２６７）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＴＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６８）；
（ｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号２６９）、ＩＳＹＤＧＮＮ（配列番号２７０）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＹＷ（配列番号２７１）；
（ｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号２６９）、ＩＳＹＤＧＮＤ（配列番号２７２）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＣＷ（配列番号２７３）；
（ｘｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＦＳＤＹＧ（配列番号２７４）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号２７５）およびＣＧＰＳＤＹＷＹＦＤＶＷ（配列番号２７６）；
（ｘｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号２７７）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号２７５）およびＣＡＲＤＹＦＹＧＮＮＹＧＦＰＹＷ（配列番号２７８）；
（ｘｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号２７９）、ＩＹＰＧＮＩＮＳ（配列番号２８０）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＳＹＹ（配列番号２８２）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号２８４）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＮＹＤ（配列番号２８５）、ＩＷＴＧＧＮＴ（配列番号２８６）およびＣＶＲＥＧＦＲＱＧＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号２８７）；
（ｘｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１１２）、ＩＤＴＫＮＧＧＴ（配列番号２８８）およびＣＡＳＧＧＲＧＹＷ（配列番号２８９）；
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号２６７）、ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号２９０）およびＣＴＲＮＹＹＲＰＹＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号２９１）；
（ｘｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号２９２）、ＩＮＰＹＮＤＮＴ（配列番号２９３）およびＣＡＲＥＧＮＹＹＧＡＳＰＷＦＡＹＷ（配列番号２９４）；または
（ｘｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＨＹＧ（配列番号２９５）、ＩＮＴＳＴＧＥＴ（配列番号２９６）およびＣＡＲＹＹＹＧＳＳＲＷＲＤＹＷＦＡＹＷ（配列番号２９７）
からなるものである、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４３】
ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
前記抗体またはその抗原結合性断片は、
ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域であって、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、
（ｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１４７）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号２６１）；
（ｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＳＧＨＳＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号２６２）；
（ｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＳＧＨＮＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号２６３）；
（ｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＧＡＬＹＹＦＤＮＷ（配列番号２６４）；
（ｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＭＦＴＴＹＧ（配列番号２６５）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号２６７）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＴＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６８）；
（ｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号２６９）、ＩＳＹＤＧＮＮ（配列番号２７０）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＹＷ（配列番号２７１）；
（ｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号２６９）、ＩＳＹＤＧＮＤ（配列番号２７２）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＣＷ（配列番号２７３）；
（ｘｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＦＳＤＹＧ（配列番号２７４）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号２７５）およびＣＧＰＳＤＹＷＹＦＤＶＷ（配列番号２７６）；
（ｘｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号２７７）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号２７５）およびＣＡＲＤＹＦＹＧＮＮＹＧＦＰＹＷ（配列番号２７８）；
（ｘｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号２７９）、ＩＹＰＧＮＩＮＳ（配列番号２８０）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＳＹＹ（配列番号２８２）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号２８４）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＮＹＤ（配列番号２８５）、ＩＷＴＧＧＮＴ（配列番号２８６）およびＣＶＲＥＧＦＲＱＧＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号２８７）；
（ｘｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１１２）、ＩＤＴＫＮＧＧＴ（配列番号２８８）およびＣＡＳＧＧＲＧＹＷ（配列番号２８９）；
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号２６７）、ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号２９０）およびＣＴＲＮＹＹＲＰＹＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号２９１）；
（ｘｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号２９２）、ＩＮＰＹＮＤＮＴ（配列番号２９３）およびＣＡＲＥＧＮＹＹＧＡＳＰＷＦＡＹＷ（配列番号２９４）；または
（ｘｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＨＹＧ（配列番号２９５）、ＩＮＴＳＴＧＥＴ（配列番号２９６）およびＣＡＲＹＹＹＧＳＳＲＷＲＤＹＷＦＡＹＷ（配列番号２９７）からなるものである、重鎖可変領域；ならびに
ｂ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域であって、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、
（ｘｘｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号２９８）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＩＰＰＴＦ（配列番号２９９）；
（ｘｘｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＦＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号３００）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＳＰＰＴＦ（配列番号３０１）；
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＩＮＹ（配列番号３０２）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＤＰＰＬＴＦ（配列番号３０３）；
（ｘｘｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号２９８）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＨＨＹＤＰＰＬＴＦ（配列番号３０４）；
（ｘｘｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号３０５）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＮＴＰＰＴＦ（配列番号３０６）；
（ｘｘｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号２６）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＰＰＰＴＦ（配列番号３０７）；
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＩＳＳＮＱＮＮＹ（配列番号３０８）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＴＰＰＴＦ（配列番号１３０）；
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号３０５）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＴＰＰＴＦ（配列番号１３０）；
（ｘｘｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＩＳＮＹ（配列番号７）、ＹＴＳ（配列番号４１）およびＣＱＱＧＨＴＬＰＹＴＦ（配列番号３０９）；
（ｘｘｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＩＳＮＹ（配列番号７）、ＹＴＳ（配列番号４１）およびＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦ（配列番号３１０）；
（ｘｘｘｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＶＧＴＮ（配列番号１９７）、ＳＴＳ（配列番号４４）およびＣＱＱＹＮＳＹＰＦＴＦ（配列番号３１１）；
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＴＩＧＴＷ（配列番号３１２）、ＡＡＴ（配列番号４９）およびＣＱＱＬＹＳＴＰＬＴＦ（配列番号３１３）；
（ｘｘｘｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＩＲＴＡ（配列番号３１４）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｘｘｘｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＶＲＴＡ（配列番号３１６）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｘｘｘｖ）それぞれ、ＬＮＶＲＴＡ（配列番号３１７）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｘｘｘｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号３１８）、ＷＡＳ（配列番号４５）およびＣＱＱＹＹＳＹＲＴＦ（配列番号３１９）；
（ｘｘｘｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＶＹＴＴ（配列番号３２０）、ＳＡＳ（配列番号３９）およびＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦ（配列番号３２１）；
（ｘｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＥＮＩＹＳＹ（配列番号３２２）、ＤＡＫ（配列番号３２３）およびＣＱＨＨＹＧＦＰＹＴＦ（配列番号３２４）；
（ｘｘｘｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＥＴＶＤＴＹＧＮＲＦ（配列番号３２５）、ＲＡＳ（配列番号３２６）およびＣＱＱＳＮＥＤＰＦＴＦ（配列番号５２）；および
（ｘｘｘｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＶＳＮＡ（配列番号３１）、ＳＡＳ（配列番号３９）およびＣＰＱＨＹＳＴＬＣＴＦ（配列番号３２７）からなるものである、軽鎖可変領域
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４４】
ＬＩＬＲＢ２活性のアンタゴニストである、請求項４０から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項４５】
請求項４０から４４のいずれか一項に記載の抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子。
【請求項４６】
請求項４５に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項４７】
請求項４６に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４８】
原核細胞または真核細胞である、請求項４７に記載の宿主細胞。
【請求項４９】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片を生産するための方法であって、
（ａ）請求項４７に記載の宿主細胞による前記ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片の発現に適切な条件下で、前記宿主細胞を培養するステップ；および
（ｂ）前記ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片を回収するステップ
を含む、方法。
【請求項５０】
前記宿主細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
請求項４０から４４のいずれか一項に記載の抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む組成物。
【請求項５２】
化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化されている、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５５】
哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の、請求項４０から４４のいずれか一項に記載のＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項５６】
化学療法剤または鎮痛薬を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２および３を含み、
前記重鎖ＣＤＲ１が、配列番号２７９、２８４、９４、１１２、３２８、３３１、３３４、１０２、３４２および３４４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２７９、２８４、９４、１１２、３２８、３３１、３３４、１０２、３４２および３４４のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ２が、配列番号２８３、３２９、３３２、３３５、３３７、３３９、３４０、２３２、３４５および３４７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２８３、３２９、３３２、３３５、３３７、３３９、３４０、２３２、３４５および３４７のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記重鎖ＣＤＲ３が、配列番号３３０、３３３、３３６、３３８、３４１、３４３、３４６および３４８のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３３０、３３３、３３６、３３８、３４１、３４３、３４６および３４８のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む、
単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５８】
前記単離された抗体または抗原結合性断片が、軽鎖ＣＤＲ１、２および３をさらに含み、
前記軽鎖ＣＤＲ１が、配列番号３１４、３１６、８７、２３、３５３、３５５、９１、３５７、１２および２７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３１４、３１６、８７、２３、３５３、３５５、９１、３５７、１２および２７のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ２が、配列番号４１、４２、４５、３４９、３５１、９７、４０および４８のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号４１、４２、４５、３４９、３５１、９７、４０および４８のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含み、
前記軽鎖ＣＤＲ３が、配列番号３１５、３５０、３５２、３５４、３５６、１０４、３５８、３５９、５５および３６０のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３１５、３５０、３５２、３５４、３５６、１０４、３５８、３５９、５５および３６０のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む、
請求項５７に記載の単離された抗体。
【請求項５９】
ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
前記抗体またはその抗原結合性断片は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、
（ｘｌ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＴＦＴＧＹＷ（配列番号３２８）、ＩＬＰＶＳＧＩＴ（配列番号３２９）およびＣＡＲＲＧＳＰＹＦＤＹＷ（配列番号３３０）；
（ｘｌｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＮＴＦＤＭＧ（配列番号３３１）、ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号３３２）およびＣＧＲＫＰＧＧＹＧＮＹＶＬ（配列番号３３３）；
（ｘｌｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号３３４）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号３３５）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３６）；
（ｘｌｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１１２）、ＬＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号３３７）およびＣＡＲＧＳＧＮＳＦＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３８）；
（ｘｌｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号２７９）、ＩＹＰＧＮＶＮＳ（配列番号３３９）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｌｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号１０２）、ＩＳＹＤＧＳＮ（配列番号３４０）およびＣＴＳＩＹＧＲＦＶＹＷ（配列番号３４１）；
（ｘｌｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号３３４）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号３３５）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３６）；
（ｘｌｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＦＷ（配列番号３４２）、ＩＨＰＮＳＧＳＴ（配列番号２３２）およびＣＡＲＮＳＧＤＹＬＶＹＦＤＳＷ（配列番号３４３）、
（ｘｌｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号２８４）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｌｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号３４４）、ＩＮＰＳＴＧＤＴ（配列番号３４５）およびＣＡＲＧＡＴＶＶＤＹＰＦＤＹＷ（配列番号３４６）、または
（ｘｌｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号９４）、ＩＨＰＮＧＧＳＴ（配列番号３４７）およびＣＴＲＧＬＴＧＬＦＡＹＷ（配列番号３４８）
からなるものである、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６０】
ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
前記抗体またはその抗原結合性断片は、
ｃ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域であって、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、
ｘｌ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＴＦＴＧＹＷ（配列番号３２８）、ＩＬＰＶＳＧＩＴ（配列番号３２９）およびＣＡＲＲＧＳＰＹＦＤＹＷ（配列番号３３０）；
（ｘｌｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＮＴＦＤＭＧ（配列番号３３１）、ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号３３２）およびＣＧＲＫＰＧＧＹＧＮＹＶＬ（配列番号３３３）；
（ｘｌｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号３３４）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号３３５）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３６）；
（ｘｌｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１１２）、ＬＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号３３７）およびＣＡＲＧＳＧＮＳＦＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３８）；
（ｘｌｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号２７９）、ＩＹＰＧＮＶＮＳ（配列番号３３９）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｌｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号１０２）、ＩＳＹＤＧＳＮ（配列番号３４０）およびＣＴＳＩＹＧＲＦＶＹＷ（配列番号３４１）；
（ｘｌｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号３３４）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号３３５）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３６）；
（ｘｌｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号２８４）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｌｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＦＷ（配列番号３４２）、ＩＨＰＮＳＧＳＴ（配列番号２３２）およびＣＡＲＮＳＧＤＹＬＶＹＦＤＳＷ（配列番号３４３）、
（ｘｌｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号３４４）、ＩＮＰＳＴＧＤＴ（配列番号３４５）およびＣＡＲＧＡＴＶＶＤＹＰＦＤＹＷ（配列番号３４６）、または
（ｌ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号９４）、ＩＨＰＮＧＧＳＴ（配列番号３４７）およびＣＴＲＧＬＴＧＬＦＡＹＷ（配列番号３４８）
からなるものである、重鎖可変領域；ならびに
ｄ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域であって、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、
（ｌｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＳＳＶＳＳＳＹ（配列番号８７）、ＧＴＳ（配列番号３４９）およびＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦ（配列番号３５０）；
（ｌｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＳＳＶＳＹ（配列番号２３）、ＤＴＳ（配列番号３５１）およびＣＦＱＧＳＧＹＰＦＴＦ（配列番号３５２）；
（ｌｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＶＬＹＳＳＤＱＫＮＹ（配列番号３５３）、ＷＡＳ（配列番号４５）およびＣＨＱＹＬＳＨＴＦ（配列番号３５４）；
（ｌｉｖ）それぞれ、ＱＤＶＮＴＡ（配列番号３５５）、ＷＡＳ（配列番号４５）およびＣＱＱＬＹＫＬＰＲＴＦ（配列番号３５６）；
（ｌｖ）それぞれ；
（ｌｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＩＲＴＡ（配列番号３１４）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｌｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＳＳＶＮＹ（配列番号３５７）、ＹＴＳ（配列番号４１）およびＣＱＱＦＳＳＳＰＹＴＦ（配列番号３５８）；
（ｌｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＶＲＴＡ（配列番号３１６）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｌｖｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＳＳＶＳＹ（配列番号２３）、ＤＴＳ（配列番号３５１）およびＣＱＱＷＲＳＹＱＬＴＦ（配列番号３５９）；
（ｌｖｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＩＮＶＷ（配列番号６）、ＫＡＳ（配列番号４０）およびＣＱＱＧＱＳＹＰＬＴＦ（配列番号５５））；および
（ｌｖｘi）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＩＮＳＹ（配列番号２７）、ＲＡＮ（配列番号４８）およびＣＬＱＹＤＥＦＬＬＴＦ（配列番号３６０）
からなるものである、軽鎖可変領域
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６１】
ＬＩＬＲＢ２活性のアゴニストである、請求項５７から６０のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項６２】
請求項５７から６１のいずれか一項に記載の抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子。
【請求項６３】
請求項６１に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項６４】
請求項６３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項６５】
原核細胞または真核細胞である、請求項６４に記載の宿主細胞。
【請求項６６】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片を生産するための方法であって、
（ａ）請求項６５に記載の宿主細胞によるＬＩＬＲＢ２結合タンパク質の発現に適切な条件下で、前記宿主細胞を培養するステップ；および
（ｂ）前記ＬＩＬＲＢ２結合タンパク質を回収するステップ
を含む、方法。
【請求項６７】
前記宿主細胞が原核細胞または真核細胞である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
請求項５７から６１のいずれか一項に記載の抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む組成物。
【請求項６９】
化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化されている、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７２】
哺乳動物において炎症促進性免疫応答を減少させる方法であって、治療有効量の、請求項６２から６５のいずれか一項に記載のＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項７３】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤のうち１種または複数を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記哺乳動物が、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
哺乳動物において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の、請求項６２から６４のいずれか一項に記載のＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項７６】
骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤のうち１種または複数を前記哺乳動物に投与するステップをさらに含む、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記哺乳動物が、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記哺乳動物が、臓器または組織移植のために選択される、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
がんを処置する方法であって、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤と組み合わせた請求項４０に記載の抗体をそれを必要とする患者に投与するステップを含む、方法。
【請求項８０】
請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体のＶＨおよびＶＬを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項８１】
前記ＶＨが、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含み；前記ＶＬが、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項８０に記載のＣＡＲ。
【請求項８２】
前記ＶＨが、配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含み；前記ＶＬが、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項８０に記載のＣＡＲ。
【請求項８３】
請求項８０から８２のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチド。
【請求項８４】
請求項８３に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項８５】
請求項８０から８２のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む細胞。
【請求項８６】
請求項８３に記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
【請求項８７】
請求項８４に記載のベクターを含む細胞。
【請求項８８】
Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞またはマクロファージである、請求項８５から８７のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項８９】
請求項８０から８２のいずれか一項に記載のＣＡＲおよび適切な薬学的担体を含む医薬組成物。
【請求項９０】
請求項８５から８８のいずれか一項に記載の細胞および適切な薬学的担体を含む医薬組成物。
【請求項９１】
請求項５から８のいずれか一項に記載の抗体のＶＨおよびＶＬを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
【請求項９２】
請求項９１に記載のＣＡＲをコードするポリヌクレオチド。
【請求項９３】
請求項９２に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項９４】
請求項９１に記載のＣＡＲを含む細胞。
【請求項９５】
請求項９２に記載のポリヌクレオチドを含む細胞。
【請求項９６】
請求項９３に記載のベクターを含む細胞。
【請求項９７】
Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞またはマクロファージである、請求項９４から９６のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項９８】
請求項９１に記載のＣＡＲおよび適切な薬学的担体を含む医薬組成物。
【請求項９９】
請求項９４から９７のいずれか一項に記載の細胞および適切な薬学的担体を含む医薬組成物。
【請求項１００】
ＣＡＲを生産する方法であって、（ａ）請求項８６、８７、９５または９６に記載の細胞を培養するステップ、および（ｂ）前記ＣＡＲを単離するステップを含む、方法。
【請求項１０１】
それを必要とする哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の、請求項８０から８２のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項８５から８８のいずれか一項に記載の細胞、または請求項８９もしくは９０に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０２】
それを必要とする哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の、請求項９１に記載のＣＡＲ、請求項９４から９７のいずれか一項に記載の細胞、または請求項９８もしくは９９に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０３】
前記がんが、リンパ腫、白血病、結腸がんまたは乳がんである、請求項１０１または１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
それを必要とする哺乳動物において喘息を処置する方法であって、治療有効量の、請求項８０から８２のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項８５から８８のいずれか一項に記載の細胞、または請求項８９もしくは９０に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０５】
それを必要とする哺乳動物において喘息を処置する方法であって、治療有効量の、請求項９１に記載のＣＡＲ、請求項９４から９７のいずれか一項に記載の細胞、または請求項９８もしくは９９の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０６】
それを必要とする哺乳動物において感染を処置する方法であって、治療有効量の、請求項８０から８２のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項８５から８８のいずれか一項に記載の細胞、または請求項８９もしくは９０に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０７】
それを必要とする哺乳動物において感染を処置する方法であって、治療有効量の、請求項９１に記載のＣＡＲ、請求項９４から９７のいずれか一項に記載の細胞、または請求項９８もしくは９９の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０８】
それを必要とする哺乳動物において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の、請求項８０から８２のいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項８５から８８のいずれか一項に記載の細胞、または請求項８９もしくは９０に記載の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１０９】
それを必要とする哺乳動物において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の、請求項９１に記載のＣＡＲ、請求項９４から９７のいずれか一項に記載の細胞、または請求項９８もしくは９９の医薬組成物を前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項１１０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０１から１０９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１８年９月１７日出願の米国特許仮出願第６２／７３２，２９９号および２０１８年９月１７日出願の米国特許仮出願第６２／７３２，３３４号の優先権の利益を主張し、これら各々の内容は、その全体が本明細書で参照により組み込まれる。
【０００２】
連邦支援の研究または開発
本発明は、米国立衛生研究所によって授与された助成金番号ＣＡ  １０９３２２、Ｒ０１  ＣＡ  １８８６１０、Ｒ０１  ＣＡ  ２０４１９１およびＣＡ  １２７４８３の下で政府支援を得て行われたものである。政府は、本発明において特定の権利を有する。
【０００３】
本発明は一般に、白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体（ＬＩＬＲ）Ｂ２（ＬＩＬＲＢ２）をモジュレートするため（「抗ＬＩＬＲＢ２抗体」）および骨髄細胞においてＭ１またはＭ２の機能的表現型のいずれかの獲得を誘導するようにＬＩＬＲＢ２シグナル伝達をモジュレートするために結合を生じる抗体またはその抗原結合性断片、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を含む組成物、ならびにそれらの使用に関する。本発明はまた、関連のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびそれを含む細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞またはマクロファージ）、ならびに腫瘍を標的化しそれを死滅させること、喘息処置、または（例えば、感染または感染性疾患を処置するために）感染細胞を標的化しそれを除去すること、または自己免疫疾患もしくは移植片拒絶に関与する免疫系細胞を抑制することにおけるＣＡＲおよび細胞の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体（ＬＩＬＲ）は、免疫グロブリン様転写物（ＩＬＴ）としても公知であり、白血球受容体複合体内でコードされる阻害性および刺激性細胞表面受容体のファミリーであり、骨髄およびリンパの両方の系列の免疫細胞型によって発現される。ＩＬＴは、自然免疫系および獲得免疫系の両方に影響を与え、免疫細胞活性に対するＬＩＬＲシグナル伝達の広範な影響を実証している。阻害性受容体（ＬＩＬＲＢ）の阻害活性は、活性化受容体との共クロスリンクの際に生じる。
【０００５】
骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）は、マウスにおいて、Ｇｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃ＋単球性（Ｍ）細胞およびＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋顆粒球性（Ｇ）細胞を含んだ、免疫抑制機能を有する骨髄前駆体である（Gabrilovich et al., Cancer Res. 67:425, 2007；Huang et al., Cancer Res. 66:1123-1131, 2006）。ヒトＭＤＳＣは、ＣＤ３３＋ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋、ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４低ＣＤ３３＋またはＬｉｎ−ＨＬＡ−ＤＲ低−ＣＤ３３＋骨髄細胞として特徴付けられる（Chen et. al., Clin. Cancer Res., 21(18):4073-2742, 2015；Ostrand-Rosenberg et al., J. Immunol. 182:4499-4506, 2009；Raychaudhuri et al., Neuro. Oncol. 13:591-599, 2011）。近年、ＭＤＳＣは、感染、悪性腫瘍、移植および他の免疫障害における免疫応答の調節において、重要な役割を果たすことが見出されている（例えば、Yin et al., J. Immunol. 185:5828-5834, 2010）。
【０００６】
ＭＤＳＣは、Ｍ１系列およびＭ２系列の細胞（ｉＮＯＳ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−ｇＲ、ＭＨＣクラスＩおよびＣＣＲ７を発現するＭ１細胞、ならびにアルギナーゼ、ＩＬ−１０、ＣＤ３６、ＣＤ２０６、ＣＤ１６３、ＰＤ−Ｌ１、ＤＣ−ＳＩＧＮおよびＣＣＲ２を発現するＭ２細胞）へと分化および極性化され得る。Ｍ２細胞は、Ｔ細胞の共培養においておよびｉｎ  ｖｉｖｏで、それらのＭ１様対応物と比較して、Ｔｅｆｆの活性化および増殖を抑制する増強された能力を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ２細胞はまた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方において、Ｍ１表現型を有する細胞よりも、Ｔｒｅｇの拡大増殖（expansion）においてより高い潜在力を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ２細胞は、Ｔｅｆｆの活性化および増殖を抑制し、Ｔｒｅｇの拡大増殖を促進するので、Ｍ２細胞は、炎症促進性免疫応答における減少が望まれる自己免疫疾患を処置するために使用できる。
【０００７】
Ｍ１細胞は、直接的腫瘍死滅を増加させ、フリーラジカル、デスリガンド、ＨＬＡ−ＤＲおよび免疫賦活性サイトカイン−ＴＮＦａの増大を介して抗腫瘍免疫の発達を促進し（例えば、Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011を参照のこと）、したがって、Ｍ１細胞は、炎症促進性免疫応答の増加が望まれるがんまたは他の障害を処置するために使用できる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本開示は、白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体Ｂ２（「ＬＩＬＲＢ２」）に結合する抗体およびその抗原結合性断片、例えば、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。これらの抗体は、３つのクラスにグループ分けできる：１つのクラス（クラスＩ）は、がんの処置における使用のためのＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体およびその抗原結合性断片を含み；第２のクラス（クラスＩＩ）は、免疫抑制における処置における使用のためのＬＩＬＲＡ１に交差結合するＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体およびその抗原結合性断片を含む。
【０００９】
一態様では、ＬＩＬＲＢ２に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、（ａ）配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）；（ｂ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｃ）配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｄ）配列番号９１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｅ）配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｆ）配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｇ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｈ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｉ）配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｊ）配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｋ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｌ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｍ）配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｎ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｏ）配列番号９８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｐ）配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｑ）配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｒ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｓ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｔ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｕ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｖ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｗ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｘ）配列番号１０４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｙ）配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｚ）配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ａａ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｂｂ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｃｃ）配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤ
Ｒ２および配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｄｄ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｅｅ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｆｆ）配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｇｇ）配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｈｈ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｉｉ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１３０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｊｊ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｋｋ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｌｌ）配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｍｍ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｎｎ）配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｏｏ）配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｐｐ）配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｑｑ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｒｒ）配列番号１１３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｓｓ）配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｔｔ）配列番号１１５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｕｕ）配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｖｖ）配列番号１１６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｗｗ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｘｘ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｙｙ）配列番号１１７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｚｚ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ａａａ）配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｂｂｂ）配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｃｃｃ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｄｄｄ）配列番号１１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｅｅｅ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号
４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｆｆｆ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｇｇｇ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｈｈｈ）配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｉｉｉ）配列番号２２４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｊｊｊ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｋｋｋ）配列番号２１７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｌｌｌ）配列番号２１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｍｍｍ）配列番号２１９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１９７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｎｎｎ）配列番号２２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１９８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｏｏｏ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｐｐｐ）配列番号２２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｑｑｑ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｒｒｒ）配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｓｓｓ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１９９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｔｔｔ）配列番号２２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２００に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｕｕｕ）配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｖｖｖ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｗｗｗ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｘｘｘ）配列番号３７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号３７８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｙｙｙ）配列番号３６３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号３６５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号３６２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｚｚｚ）配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号３７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ａａａａ）配列番号２６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１１９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または（ｂｂｂｂ）配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｂ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｃ）配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｄ）配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｅ）配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６
に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｆ）配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｇ）配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｈ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｉ）配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｊ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｋ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｌ）配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｍ）配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｎ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｏ）配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｐ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｑ）配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｒ）配列番号２１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または（ｓ）配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２活性のアンタゴニストである。
【００１０】
別の態様では、ＬＩＬＲＢ２に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、（ａ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｂ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｃ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｄ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｅ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｆ）配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｇ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｈ）配列番号２２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｉ）配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または（ｊ）配列番号１１２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む抗体またはその抗原結合性断片が、本明細書に提供される。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、（ａ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｂ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｃ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７０を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｄ）配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｅ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｆ）配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｇ）配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｈ）配列番号２２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；（ｉ）配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬ；または（ｊ）配列番号１１２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２活性のアゴニストである。
【００１１】
一実施形態では、上述の抗体またはその抗原結合性断片は、抗体の抗原結合性断片である。
【００１２】
一実施形態では、上述の抗体またはその抗原結合性断片は、抗体である。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１重鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。一実施形態では、抗体は、カッパ軽鎖定常領域を含む。
【００１３】
別の態様では、上述の抗体またはその抗原結合性断片のうちいずれか１つをコードする単離された核酸分子が、本明細書に提供される。
【００１４】
別の態様では、上述の抗体またはその抗原結合性断片のうちいずれか１つをコードする核酸分子を含むベクターが、本明細書に提供される。
【００１５】
別の態様では、第１の核酸分子および第２の核酸分子を含むベクターであって、第１の核酸分子が、上述の抗体またはその抗原結合性断片のうちいずれか１つのＶＨをコードし、第２の核酸分子が、抗体またはその抗原結合性断片のＶＬをコードする、ベクターが、本明細書に提供される。
【００１６】
別の態様では、上述の抗体またはその抗原結合性断片のうちいずれか１つをコードする１つまたは複数の核酸分子を含む宿主細胞が、本明細書に提供される。一実施形態では、宿主細胞は、原核細胞または真核細胞である。
【００１７】
別の態様では、上述のベクターのうちいずれか１つを含む宿主細胞が、本明細書に提供される。一実施形態では、宿主細胞は、原核細胞または真核細胞である。
【００１８】
別の態様では、上述の抗体またはその抗原結合性断片のうちいずれか１つを生産するための方法であって、（ａ）宿主細胞による抗体またはその抗原結合性断片の発現に適切な条件下で、上述の宿主細胞のうちいずれか１つを培養するステップ；および（ｂ）抗体またはその抗原結合性断片を回収するステップを含む方法が、本明細書に提供される。
【００１９】
別の態様では、上述の抗体またはその抗原結合性断片のうちいずれか１つおよび適切な薬学的担体を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。一実施形態では、医薬組成物は、化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む。一実施形態では、医薬組成物は、骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤（mobilizing agent）、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む。一実施形態では、医薬組成物は、対象への静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化されている。
【００２０】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の上述の抗体もしくはその抗原結合性断片または上述の医薬組成物のうちいずれか１つを哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、本方法は、化学療法剤または鎮痛薬を哺乳動物に投与するステップをさらに含む。一実施形態では、本方法は、免疫チェックポイント阻害剤を哺乳動物に投与するステップをさらに含む。一実施形態では、がんは、リンパ腫、白血病または乳がんである。一実施形態では、抗体は、ＬＩＬＲＢ２のアンタゴニストである。
【００２１】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物においてがんを処置する方法であって、上述の抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物のうちいずれか１つおよびＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤を哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、がんは、リンパ腫、白血病または乳がんである。一実施形態では、抗体は、ＬＩＬＲＢ２のアンタゴニストである。
【００２２】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において感染を処置する方法であって、上述の抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物のうちいずれか１つを哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、感染は細菌感染である。一実施形態では、抗体は、ＬＩＬＲＢ２のアンタゴニストである。
【００２３】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において炎症促進性免疫応答を減少させる方法であって、治療有効量の上述の抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬品のうちいずれか１つを哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、哺乳動物は、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている。一実施形態では、哺乳動物は、臓器または組織移植のために選択される。
【００２４】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の上述の抗体もしくはその抗原結合性断片または医薬組成物のうちいずれか１つを哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、哺乳動物は、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている。一実施形態では、哺乳動物は、臓器または組織移植のために選択される。
【００２５】
上述の方法の一実施形態では、方法は、骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤を哺乳動物に投与するステップをさらに含む。
【００２６】
上述の方法の一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００２７】
別の態様では、本明細書に記載される抗体のＶＨおよびＶＬを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が、本明細書に提供される。一実施形態では、ＶＨは、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含み；ＶＬは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、ＶＨは、配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含み；ＶＬは、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
【００２８】
別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つをコードするポリヌクレオチドが、本明細書に提供される。
【００２９】
別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つをコードするポリヌクレオチドを含むベクターが、本明細書に提供される。
【００３０】
別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つを含む細胞が、本明細書に提供される。別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つをコードするポリヌクレオチドを含む細胞が、本明細書に提供される。別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む細胞が、本明細書に提供される。一実施形態では、細胞はＴ細胞である。一実施形態では、細胞はナチュラルキラー細胞である。一実施形態では、細胞はマクロファージである。
【００３１】
別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つおよび適切な薬学的担体を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つを含む細胞および適切な薬学的担体を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つをコードするポリヌクレオチドを含む細胞および適切な薬学的担体を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。別の態様では、上述のＣＡＲのうちいずれか１つをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む細胞および適切な薬学的担体を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。
【００３２】
別の態様では、ＣＡＲを生産する方法であって、（ａ）上述の細胞（例えば、上述のＣＡＲのうちいずれか１つをコードするポリヌクレオチドを含む細胞または上述のＣＡＲのうちいずれか１つをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む細胞）のうち１つを培養するステップ、および（ｂ）ＣＡＲを単離するステップを含む方法が、本明細書に提供される。
【００３３】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の、上述のＣＡＲのうちいずれか１つ、上述の細胞のうちいずれか１つ、または上述の医薬組成物のうちいずれか１つを哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、がんは、リンパ腫、白血病、結腸がんまたは乳がんである。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００３４】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において喘息を処置する方法であって、治療有効量の、上述のＣＡＲのうちいずれか１つ、上述の細胞のうちいずれか１つ、または上述の医薬組成物のうちいずれか１つを哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００３５】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において感染を処置する方法であって、治療有効量の、上述のＣＡＲのうちいずれか１つ、上述の細胞のうちいずれか１つ、または上述の医薬組成物のうちいずれか１つを哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００３６】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の、上述のＣＡＲのうちいずれか１つ、上述の細胞のうちいずれか１つ、または上述の医薬組成物のうちいずれか１つを哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００３７】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号１１１、２６５、２６７、２６９、２７４、２７７、２７９、２８２、２８４、２８５、１１２、２６７、２９２、および２９５のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号１１１、２６５、２６７、２６９、２７４、２７７、２７９、２８２、２８４、２８５、１１２、２６７、２９２、および２９５のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号１４７、１５７、２７０、２７２、２７５、２８０、２８３、２８６、２８８、２９０、２９３、および２９６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号１４７、１５７、２７０、２７２、２７５、２８０、２８３、２８６、２８８、２９０、２９３、および２９６のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号２６１〜２６４、２６６、２６８、２７１、２７３、２７６、２７８、２８１、２８７、２８９、２９１、２９４、および２９７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２６１〜２６４、２６６、２６８、２７１、２７３、２７６、２７８、２８１、２８７、２８９、２９１、２９４、および２９７のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００３８】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号２９８、３００、３０２、３０５、２６、３０８、７、１９７、３１２、３１４、３１６、３１７、３１８、３２０、３２２、３２５、および３１のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２９８、３００、３０２、３０５、２６、３０８、７、１９７、３１２、３１４、３１６、３１７、３１８、３２０、３２２、３２５、および３１のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３８、４１、４４、４９、４２、４５、３９、３２３、および３２６のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３８、４１、４４、４９、４２、４５、３９、３２３、および３２６のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２９９、３０１、３０３、３０４、３０６、３０７、１３０、３０９、３１０、３１１、３１３、３１５、３１９、３２１、３２４、５２、および３２７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２９９、３０１、３０３、３０４、３０６、３０７、１３０、３０９、３１０、３１１、３１３、３１５、３１９、３２１、３２４、５２、および３２７のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００３９】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体またはその抗原結合性断片は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、（ｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１４７）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号２６１）；
（ｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１４７）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号２６１）；
（ｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＳＧＨＳＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号２６２）；
（ｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＳＧＨＮＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号２６３）；
（ｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＧＡＬＹＹＦＤＮＷ（配列番号２６４）；
（ｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＭＦＴＴＹＧ（配列番号２６５）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号２６７）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＴＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６８）；
（ｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号２６９）、ＩＳＹＤＧＮＮ（配列番号２７０）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＹＷ（配列番号２７１）；
（ｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号２６９）、ＩＳＹＤＧＮＤ（配列番号２７２）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＣＷ（配列番号２７３）；
（ｘｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＦＳＤＹＧ（配列番号２７４）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号２７５）およびＣＧＰＳＤＹＷＹＦＤＶＷ（配列番号２７６）；
（ｘｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号２７７）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号２７５）およびＣＡＲＤＹＦＹＧＮＮＹＧＦＰＹＷ（配列番号２７８）；
（ｘｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号２７９）、ＩＹＰＧＮＩＮＳ（配列番号２８０）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＳＹＹ（配列番号２８２）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号２８４）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＮＹＤ（配列番号２８５）、ＩＷＴＧＧＮＴ（配列番号２８６）およびＣＶＲＥＧＦＲＱＧＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号２８７）；
（ｘｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１１２）、ＩＤＴＫＮＧＧＴ（配列番号２８８）およびＣＡＳＧＧＲＧＹＷ（配列番号２８９）；
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号２６７）、ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号２９０）およびＣＴＲＮＹＹＲＰＹＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号２９１）；
（ｘｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号２９２）、ＩＮＰＹＮＤＮＴ（配列番号２９３）およびＣＡＲＥＧＮＹＹＧＡＳＰＷＦＡＹＷ（配列番号２９４）；および
（ｘｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＨＹＧ（配列番号２９５）、ＩＮＴＳＴＧＥＴ（配列番号２９６）およびＣＡＲＹＹＹＧＳＳＲＷＲＤＹＷＦＡＹＷ（配列番号２９７）からなるものである、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４０】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体またはその抗原結合性断片は、
相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域であって、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、
（ｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＭＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１４７）、およびＣＡＲＭＧＲＧＳＬＹＧＭＤＹＷ（配列番号２６１）；
（ｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＳＧＨＳＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号２６２）；
（ｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＳＧＨＮＹＳＬＹＶＭＧＹＷ（配列番号２６３）；
（ｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＧＡＬＹＹＦＤＮＷ（配列番号２６４）；
（ｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＭＦＴＴＹＧ（配列番号２６５）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号２６７）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＡＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６６）；
（ｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＴＹＧ（配列番号１１１）、ＩＮＴＹＳＧＶＰ（配列番号１５７）およびＣＴＲＩＧＮＴＮＳＬＹＴＶＨＹＷ（配列番号２６８）；
（ｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号２６９）、ＩＳＹＤＧＮＮ（配列番号２７０）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＹＷ（配列番号２７１）；
（ｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＨＹ（配列番号２６９）、ＩＳＹＤＧＮＤ（配列番号２７２）およびＣＶＲＧＹＹＹＹＧＳＲＡＭＤＣＷ（配列番号２７３）；
（ｘｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＦＳＤＹＧ（配列番号２７４）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号２７５）およびＣＧＰＳＤＹＷＹＦＤＶＷ（配列番号２７６）；
（ｘｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＤＹＧ（配列番号２７７）、ＩＳＳＧＳＳＴＩ（配列番号２７５）およびＣＡＲＤＹＦＹＧＮＮＹＧＦＰＹＷ（配列番号２７８）；
（ｘｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号２７９）、ＩＹＰＧＮＩＮＳ（配列番号２８０）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＳＹＹ（配列番号２８２）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＹ（配列番号２８４）、ＩＹＰＧＮＶＮＴ（配列番号２８３）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＮＹＤ（配列番号２８５）、ＩＷＴＧＧＮＴ（配列番号２８６）およびＣＶＲＥＧＦＲＱＧＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号２８７）；
（ｘｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１１２）、ＩＤＴＫＮＧＧＴ（配列番号２８８）およびＣＡＳＧＧＲＧＹＷ（配列番号２８９）；
（ｘｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＹＧ（配列番号２６７）、ＩＮＴＹＴＧＥＰ（配列番号２９０）およびＣＴＲＮＹＹＲＰＹＹＹＡＭＤＹＷ（配列番号２９１）；
（ｘｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＧＹＴ（配列番号２９２）、ＩＮＰＹＮＤＮＴ（配列番号２９３）およびＣＡＲＥＧＮＹＹＧＡＳＰＷＦＡＹＷ（配列番号２９４）；および
（ｘｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＨＹＧ（配列番号２９５）、ＩＮＴＳＴＧＥＴ（配列番号２９６）およびＣＡＲＹＹＹＧＳＳＲＷＲＤＹＷＦＡＹＷ（配列番号２９７）からなるものである、重鎖可変領域；ならびに
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域であって、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、
（ｘｘｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号２９８）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＩＰＰＴＦ（配列番号２９９）；
（ｘｘｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＦＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号３００）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＳＰＰＴＦ（配列番号３０１）；
（ｘｘｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＩＮＹ（配列番号３０２）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＤＰＰＬＴＦ（配列番号３０３）；
（ｘｘｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＩＳＴＮＱＫＮＹ（配列番号２９８）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＨＨＹＤＰＰＬＴＦ（配列番号３０４）；
（ｘｘｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号３０５）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＮＴＰＰＴＦ（配列番号３０６）；
（ｘｘｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＮＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号２６）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＰＰＰＴＦ（配列番号３０７）；
（ｘｘｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＩＳＳＮＱＮＮＹ（配列番号３０８）、ＦＡＳ（配列番号３８）およびＣＱＱＨＹＳＴＰＰＴＦ（配列番号１３０）；
（ｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＩＳＮＹ（配列番号７）、ＹＴＳ（配列番号４１）およびＣＱＱＧＨＴＬＰＹＴＦ（配列番号３０９）；
（ｘｘｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＩＳＮＹ（配列番号７）、ＹＴＳ（配列番号４１）およびＣＱＱＧＮＴＬＰＹＴＦ（配列番号３１０）；
（ｘｘｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＶＧＴＮ（配列番号１９７）、ＳＴＳ（配列番号４４）およびＣＱＱＹＮＳＹＰＦＴＦ（配列番号３１１）；
（ｘｘｘｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＴＩＧＴＷ（配列番号３１２）、ＡＡＴ（配列番号４９）およびＣＱＱＬＹＳＴＰＬＴＦ（配列番号３１３）；
（ｘｘｘｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＩＲＴＡ（配列番号３１４）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｘｘｘｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＶＲＴＡ（配列番号３１６）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｘｘｘｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＬＮＶＲＴＡ（配列番号３１７）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｘｘｘｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＬＬＹＳＳＮＱＫＮＹ（配列番号３１８）、ＷＡＳ（配列番号４５）およびＣＱＱＹＹＳＹＲＴＦ（配列番号３１９）；
（ｘｘｘｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＶＹＴＴ（配列番号３２０）、ＳＡＳ（配列番号３９）およびＣＱＱＹＮＳＹＰＹＴＦ（配列番号３２１）；
（ｘｘｘｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＥＮＩＹＳＹ（配列番号３２２）、ＤＡＫ（配列番号３２３）およびＣＱＨＨＹＧＦＰＹＴＦ（配列番号３２４）；
（ｘｘｘｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＶＳＮＡ（配列番号３１）、ＳＡＳ（配列番号３９）およびＣＰＱＨＹＳＴＬＣＴＦ（配列番号３２７）からなるものである、軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４１】
一部の態様では、単離された抗体または抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２活性のアンタゴニストである。
【００４２】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号２７９、２８４、９４、１１２、３２８、３３１、３３４、１０２、３４２、および３４４のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２７９、２８４、９４、１１２、３２８、３３１、３３４、１０２、３４２、および３４４のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２８３、３２９、３３２、３３５、３３７、３３９、３４０、２３２、３４５，および３４７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号２８３、３２９、３３２、３３５、３３７、３３９、３４０、２３２、３４５，および３４７のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、ならびに配列番号３３０、３３３、３３６、３３８、３４１、３４３、３４６、および３４８のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３３０、３３３、３３６、３３８、３４１、３４３、３４６、および３４８のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４３】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号２９８、３００、３０２、３０５、２６、３０８、７、１９７、３１２、３１４、３１６、３１７、３１８、３２０、３２２、３２５、および３１のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３１４、３１６、８７、２３、３５３、３５５、９１、３５７、１２、および２７のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３１４、３１６、８７、２３、３５３、３５５、９１、３５７、１２、および２７のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４１、４２、４５、３４９、３５１、９７、４０、および４８のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号４１、４２、４５、３４９、３５１、９７、４０、および４８のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号３１５、３５０、３５２、３５４、３５６、１０４、３５８、３５９、５５、および３６０のうち１つに示されるアミノ酸配列、または配列番号３１５、３５０、３５２、３５４、３５６、１０４、３５８、３５９、５５、および３６０のうち１つに示されるアミノ酸配列において２つ以下のアミノ酸位置に置換を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４４】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体またはその抗原結合性断片は、相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域を含み、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、
（ｘｌ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＴＦＴＧＹＷ（配列番号３２８）、ＩＬＰＶＳＧＩＴ（配列番号３２９）およびＣＡＲＲＧＳＰＹＦＤＹＷ（配列番号３３０）；
（ｘｌｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＮＴＦＤＭＧ（配列番号３３１）、ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号３３２）およびＣＧＲＫＰＧＧＹＧＮＹＶＬ（配列番号３３３）；
（ｘｌｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号３３４）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号３３５）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３６）；
（ｘｌｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１１２）、ＬＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号３３７）およびＣＡＲＧＳＧＮＳＦＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３８）；
（ｘｌｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号２７９）、ＩＹＰＧＮＶＮＳ（配列番号３３９）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｌｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号１０２）、ＩＳＹＤＧＳＮ（配列番号３４０）およびＣＴＳＩＹＧＲＦＶＹＷ（配列番号３４１）；
（ｘｌｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号３３４）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号３３５）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３６）；
（ｘｌｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＦＷ（配列番号３４２）、ＩＨＰＮＳＧＳＴ（配列番号２３２）およびＣＡＲＮＳＧＤＹＬＶＹＦＤＳＷ（配列番号３４３）、
（ｘｌｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号３４４）、ＩＮＰＳＴＧＤＴ（配列番号３４５）およびＣＡＲＧＡＴＶＶＤＹＰＦＤＹＷ（配列番号３４６）、または
（ｘｌｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号９４）、ＩＨＰＮＧＧＳＴ（配列番号３４７）およびＣＴＲＧＬＴＧＬＦＡＹＷ（配列番号３４８）からなるものである、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４５】
一態様では、本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体またはその抗原結合性断片は、
相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域であって、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３が、
（ｘｌ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＴＦＴＧＹＷ（配列番号３２８）、ＩＬＰＶＳＧＩＴ（配列番号３２９）およびＣＡＲＲＧＳＰＹＦＤＹＷ（配列番号３３０）；
（ｘｌｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＮＴＦＤＭＧ（配列番号３３１）、ＩＷＷＤＤＤＫ（配列番号３３２）およびＣＧＲＫＰＧＧＹＧＮＹＶＬ（配列番号３３３）；
（ｘｌｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号３３４）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号３３５）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３６）；
（ｘｌｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＤＹＹ（配列番号１１２）、ＬＮＰＹＮＧＧＴ（配列番号３３７）およびＣＡＲＧＳＧＮＳＦＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３８）；
（ｘｌｉｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＩＮＹＹ（配列番号２７９）、ＩＹＰＧＮＶＮＳ（配列番号３３９）およびＣＡＭＴＮＳＳＡＭＤＹＷ（配列番号２８１）；
（ｘｌｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＩＴＳＧＹＹ（配列番号１０２）、ＩＳＹＤＧＳＮ（配列番号３４０）およびＣＴＳＩＹＧＲＦＶＹＷ（配列番号３４１）；
（ｘｌｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＦＳＬＴＲＹＧ（配列番号３３４）、ＩＷＳＧＧＳＴ（配列番号３３５）およびＣＡＲＤＧＲＶＹＡＭＤＹＷ（配列番号３３６）；
（ｘｌｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＮＦＷ（配列番号３４２）、ＩＨＰＮＳＧＳＴ（配列番号２３２）およびＣＡＲＮＳＧＤＹＬＶＹＦＤＳＷ（配列番号３４３）、
（ｘｌｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＳＦＴＧＹＦ（配列番号３４４）、ＩＮＰＳＴＧＤＴ（配列番号３４５）およびＣＡＲＧＡＴＶＶＤＹＰＦＤＹＷ（配列番号３４６）、または
（ｘｌｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＷ（配列番号９４）、ＩＨＰＮＧＧＳＴ（配列番号３４７）およびＣＴＲＧＬＴＧＬＦＡＹＷ（配列番号３４８）からなるものである、重鎖可変領域；ならびに
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域であって、前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３は、
（ｌ）それぞれ、アミノ酸配列ＳＳＶＳＳＳＹ（配列番号８７）、ＧＴＳ（配列番号３４９）およびＣＨＱＹＨＲＳＰＦＴＦ（配列番号３５０）；
（ｌｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＳＳＶＳＹ（配列番号２３）、ＤＴＳ（配列番号３５１）およびＣＦＱＧＳＧＹＰＦＴＦ（配列番号３５２）；
（ｌｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＳＶＬＹＳＳＤＱＫＮＹ（配列番号３５３）、ＷＡＳ（配列番号４５）およびＣＨＱＹＬＳＨＴＦ（配列番号３５４）；
（ｌｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＶＮＴＡ（配列番号３５５）、ＷＡＳ（配列番号４５）およびＣＱＱＬＹＫＬＰＲＴＦ（配列番号３５６）；
（ｌｖ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＩＲＴＡ（配列番号３１４）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｌｖｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＳＳＶＮＹ（配列番号３５７）、ＹＴＳ（配列番号４１）およびＣＱＱＦＳＳＳＰＹＴＦ（配列番号３５８）；
（ｌｖｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＶＲＴＡ（配列番号３１６）、ＬＡＳ（配列番号４２）およびＣＬＱＨＷＮＹＰＦＴＦ（配列番号３１５）；
（ｌｖｉｉｉ）それぞれ、アミノ酸配列ＳＳＶＳＹ（配列番号２３）、ＤＴＳ（配列番号３５１）およびＣＱＱＷＲＳＹＱＬＴＦ（配列番号３５９）；
（ｌｖｉｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＮＩＮＶＷ（配列番号６）、ＫＡＳ（配列番号４０）およびＣＱＱＧＱＳＹＰＬＴＦ（配列番号５５））；および
（ｌｖｘ）それぞれ、アミノ酸配列ＱＤＩＮＳＹ（配列番号２７）、ＲＡＮ（配列番号４８）およびＣＬＱＹＤＥＦＬＬＴＦ（配列番号３６０）からなるものである、軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
【００４６】
一部の態様では、単離された抗体または抗原結合性断片は、ＬＩＬＲＢ２活性のアゴニストである。
【００４７】
一部の態様では、本開示は、本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子を提供する。本開示は、本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を含むベクターもまた提供する。本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を含むベクターを含む、原核細胞または真核細胞が含まれる宿主細胞もまた、本明細書に提供される。
【００４８】
一部の態様では、本開示は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片を生産するための方法であって、（ａ）宿主細胞によるＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片の発現に適切な条件下で、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を培養するステップ；および（ｂ）ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片を回収するステップを含む方法を提供する。
【００４９】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片および適切な薬学的担体を含む組成物が、本明細書に開示される。一部の態様では、組成物は、化学療法剤または鎮痛薬をさらに含む。一部の態様では、組成物は、骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤（mobilizing agent）、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤をさらに含む。
【００５０】
本開示の組成物は、例えば、静脈内、筋肉内、経口、皮下、腹腔内、くも膜下腔内、腫瘍内または筋肉内投与のために製剤化され得る。
【００５１】
一部の態様では、本開示は、対象においてがんを処置するための方法であって、治療有効量の本明細書に記載されるＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を対象に投与するステップを含む方法を提供する。一部の態様では、本方法は、化学療法剤または鎮痛薬を哺乳動物に投与するステップをさらに含む。
【００５２】
一態様では、本開示は、本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００５３】
上記態様のある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、約１５０ｐＭ〜約１００ｎＭの見かけの一価親和性を有する。
【００５４】
上記態様の全てのある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、Ｆｖ、Ｆｄ、ダイアボディ（diabody）、ｓｃＦｖまたはｓｃ（Ｆｖ）２である。具体的な実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆａｂである。
【００５５】
本明細書で使用する場合、用語「１つまたは複数の」は、少なくとも１つの、より適切には、１、２、３、４、５、１０、２０、５０、１００、５００などの、「１つまたは複数の」が言及する項目を含む。
【００５６】
他に定義しない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。方法および材料は、本発明における使用のために本明細書に記載される；当該分野で公知の他の適切な方法および材料もまた使用され得る。材料、方法および例は、例示に過ぎず、限定を意図しない。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリーおよび他の参考文献は、その全体が参照によって組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が支配する。
【００５７】
本発明の他の特色および利点は、以下の詳細な説明および図面、ならびに特許請求の範囲から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１−１】ヒトＰＢＭＣからのＴＮＦアルファ産生に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図１Ａ〜１Ｃは、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）による２４時間にわたる刺激後１６時間にわたる一晩の、精製された抗ＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照とのインキュベーション後の、健康なドナーから得たヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）由来のＴＮＦ−αの産生を示すグラフである。抗ＬＩＬＲＢ２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、ＴＮＦアルファ放出を抑制するクローンから、ＴＮＦアルファ分泌を増強するクローンの順でランキングした。ＴＮＦ−αのレベルを、ＥＬＩＳＡによって決定した。図１ＡからのＴＮＦアルファ放出における相対的変化倍数に基づくクローンランキングが示される。ＴＮＦアルファの分泌が図１Ａに示される（Ｉｇ対照との変化倍数）。図１ＢからのＴＮＦアルファレベルにおける全体的差異が図１Ｃに示される（Ｉｇ対照の差し引きによる）。
【図１−２】ヒトＰＢＭＣからのＴＮＦアルファ産生に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図１Ａ〜１Ｃは、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）による２４時間にわたる刺激後１６時間にわたる一晩の、精製された抗ＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照とのインキュベーション後の、健康なドナーから得たヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）由来のＴＮＦ−αの産生を示すグラフである。抗ＬＩＬＲＢ２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、ＴＮＦアルファ放出を抑制するクローンから、ＴＮＦアルファ分泌を増強するクローンの順でランキングした。ＴＮＦ−αのレベルを、ＥＬＩＳＡによって決定した。図１ＡからのＴＮＦアルファ放出における相対的変化倍数に基づくクローンランキングが示される。ＴＮＦアルファの分泌が図１Ａに示される（Ｉｇ対照との変化倍数）。図１ＢからのＴＮＦアルファレベルにおける全体的差異が図１Ｃに示される（Ｉｇ対照の差し引きによる）。
【図１−３】ヒトＰＢＭＣからのＴＮＦアルファ産生に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図１Ａ〜１Ｃは、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）による２４時間にわたる刺激後１６時間にわたる一晩の、精製された抗ＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照とのインキュベーション後の、健康なドナーから得たヒト末梢血単核球（ＰＢＭＣ）由来のＴＮＦ−αの産生を示すグラフである。抗ＬＩＬＲＢ２モノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、ＴＮＦアルファ放出を抑制するクローンから、ＴＮＦアルファ分泌を増強するクローンの順でランキングした。ＴＮＦ−αのレベルを、ＥＬＩＳＡによって決定した。図１ＡからのＴＮＦアルファ放出における相対的変化倍数に基づくクローンランキングが示される。ＴＮＦアルファの分泌が図１Ａに示される（Ｉｇ対照との変化倍数）。図１ＢからのＴＮＦアルファレベルにおける全体的差異が図１Ｃに示される（Ｉｇ対照の差し引きによる）。
【図２−１】ヒトＰＢＭＣからのＩＬ−１０産生に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図２Ａ〜２Ｃは、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）による２４時間にわたる刺激後１６時間にわたる一晩の、精製されたＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による処理後の、健康なドナーから得たＰＢＭＣからのＩＬ−１０の産生を示すグラフである。上清を収集し、ＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。ＩＬ−１０放出における相対的変化倍数が図２Ａに示される（Ｉｇ対照との変化倍数による）。ＩＬ−１０の分泌が図２Ｂに示される。図２ＢからのＩＬ−１０濃度における全体的差異が図２Ｃに示される（Ｉｇ対照の差し引きによる）。
【図２−２】ヒトＰＢＭＣからのＩＬ−１０産生に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図２Ａ〜２Ｃは、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）による２４時間にわたる刺激後１６時間にわたる一晩の、精製されたＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による処理後の、健康なドナーから得たＰＢＭＣからのＩＬ−１０の産生を示すグラフである。上清を収集し、ＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。ＩＬ−１０放出における相対的変化倍数が図２Ａに示される（Ｉｇ対照との変化倍数による）。ＩＬ−１０の分泌が図２Ｂに示される。図２ＢからのＩＬ−１０濃度における全体的差異が図２Ｃに示される（Ｉｇ対照の差し引きによる）。
【図２−３】ヒトＰＢＭＣからのＩＬ−１０産生に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図２Ａ〜２Ｃは、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）による２４時間にわたる刺激後１６時間にわたる一晩の、精製されたＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による処理後の、健康なドナーから得たＰＢＭＣからのＩＬ−１０の産生を示すグラフである。上清を収集し、ＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡによって測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。ＩＬ−１０放出における相対的変化倍数が図２Ａに示される（Ｉｇ対照との変化倍数による）。ＩＬ−１０の分泌が図２Ｂに示される。図２ＢからのＩＬ−１０濃度における全体的差異が図２Ｃに示される（Ｉｇ対照の差し引きによる）。
【図２−４】単球由来マクロファージからのＭ１／Ｍ２分化／ＴＡＭマーカーに対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果（アンタゴニスト）。図２Ｄは、複数の肺がん患者由来の腫瘍関連マクロファージのＭ１／Ｍ２マーカーに対するＬＩＬＲＢ２抗体の効果についてのフローサイトメトリー分析である。腫瘍浸潤したリンパ球を単離し、ＩＦＮガンマの存在下でＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）で２日間処理した。試験細胞を、上パネル中のサイトメトリー分析のために採取し、複数の患者についての統計分析が下パネルに示される。
【図２−５】単球由来マクロファージからのＭ１／Ｍ２分化／ＴＡＭマーカーに対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果（アゴニスト）。図２Ｅは、複数の健康なドナーにおけるＭ１／Ｍ２マーカーに対するＬＩＬＲＢ２抗体の効果についてのフローサイトメトリー分析である。Ｍ１型マクロファージを、健康なドナーから選別されたＣＤ３３＋骨髄細胞から、ＧＭ−ＣＳＦ  １００ｎｇ／ｍｌおよびアゴニスト抗ＬＩＬＲＢ２  Ａｂ（１２Ｈ６、５μｇ／ｍｌ）の存在下で６日間、ならびに最後の２４時間についてはＩＦＮガンマ（２５ｎｇ／ｍｌ）およびＬＰＳ（２５ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、分化させた。試験細胞を、上パネル中のサイトメトリー分析のために採取し、複数の健康なドナーについての統計分析が下パネルに示される。
【図２−６】抗ＣＤ３で刺激した、抗ＬＩＬＲＢ２処理したＰＢＭＣのマスサイトメトリー分析。図２Ｆは、複数の健康なドナー由来のＯＫＴ３刺激されたＰＢＭＣに対するアンタゴニストおよびアゴニストＬＩＬＲＢ２抗体のマスサイトメトリー分析である。ＰＢＭＣを、健康なドナーから得、ＯＫＴ３（０．０１μｇ／ｍｌ）による３日間にわたる刺激後１６時間にわたって一晩、精製されたＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト（Ｃ＿１Ｈ３）およびアゴニスト（Ｃ＿８Ｂ５）抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照で処理した。試験細胞を、サイトメトリー分析のために採取した（ヒートマップ、左パネルおよびＤｉｓｎｅｙ図、右パネル）。左パネルは、免疫細胞サブセット（ＰＢＭＣ、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞）における示されたマーカーの発現を示すヒートマップを示す。右パネルは、本発明者らの３８−抗体パネルを用いて分析し、ＩｇＧ対照に基づいて正規化したマーカー発現によって色付けした、１×１０６個のＰＢＭＣ、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞のサブセットについてのデータを示すｔ−ＳＮＥマップを示す。
【図３−１】低用量の抗ＯＫＴ３で刺激したヒトＰＢＭＣのＴ増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果（アンタゴニスト）。図３Ａは、健康なドナー由来のＰＢＭＣの刺激後のＯＫＴ３媒介性のＴ細胞増殖（ＣＰＭ）を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。３日間の処理後、［３Ｈ］−チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）における相対的変化倍数が図３Ａに示される（Ｉｇ対照との変化倍数に基づく）。
【図３−２】低用量の抗ＯＫＴ３で刺激したヒトＰＢＭＣのインターフェロンガンマ産生に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果（アンタゴニスト）。図３Ｂは、健康なドナー由来のＰＢＭＣのＯＫＴ３媒介性のＴ細胞増殖からのＩＦＮ−γ産生を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。上清を図３Ａから収集し、ＩＦＮ−γ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した（Ｉｇ対照との変化倍数に基づく）。
【図３−３】低用量のＯＫＴ３で刺激したヒトＰＢＭＣからのＴ細胞増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果（アゴニスト）。図３Ｃは、ＣＦＳＥで標識したＯＫＴ３刺激されたヒトＰＢＭＣからのフローサイトメトリーデータのセットである。ＣＦＳＥ標識されたＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。３日間の培養後、生存ＣＤ４  Ｔ細胞（左パネル）およびＣＤ８  Ｔ細胞（中央パネル）を、フローサイトメトリーによって分析した。代表的なフロープロットを、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞のＣＦＳＥ希釈（左パネルおよび中央パネル）ならびに増殖指数（ＣＤ４細胞については右中央パネル、およびＣＤ８細胞については右下パネル）として示した。上清を、右上パネルに示されるＩＦＮガンマ検出のために採取した。
【図３−４】ＭＬＲにおけるＴ細胞増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図３Ｄは、ＣＦＳＥで標識し、ＩｇＧアイソタイプ対照または示されたＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）の存在下で、照射された（３０Ｇｙ）無関係のドナーＰＢＭＣ（刺激側）で刺激した、培養されたヒトＰＢＭＣ（応答側）からのフローサイトメトリーデータのセットである。応答側／刺激側の比率は、１／２であった。５日間の共培養後、生存ＣＤ４  Ｔ細胞（左パネル）およびＣＤ８  Ｔ細胞（右パネル）を、フローサイトメトリーによって分析した。代表的なフロープロットがＣＦＳＥ希釈として示される。
【図４−１】ヒト骨髄性白血病細胞ＴＨＰ−ＲＢ２増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図４Ａは、抗ＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による４２時間の処理後の、ＬＩＬＲＢ２形質導入したヒト骨髄性白血病細胞（ＴＨＰ１）の増殖を示すグラフである。ＬＩＬＲＢ２＋ＴＨＰ−１細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積もった。細胞を、培養の最後の８時間にわたって［３Ｈ］−チミジンでパルスした。
【図４−２】ヒト固形がんＭＣＦ７増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果。図４Ｂは、抗ＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照による４日間の処理後の、ＬＩＬＲＢ２形質導入したヒト乳がん細胞（ＭＣＦ７）の増殖を示すグラフである。ＬＩＬＲＢ２＋ＭＣＦ７細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積もった。細胞を、培養の最後の８時間にわたって［３Ｈ］−チミジンでパルスした。
【図５】抗ＬＩＬＲＢ３は、ＲＢ３＋乳がん細胞の遊走を減少させる。図５Ａ〜５Ｂは、ＬＩＬＲＢ２＋ＭＤＡＭＢ２３１乳がん細胞の遊走／浸潤活性を示すグラフである。図５Ａは、ＬＩＬＲＢ２＋ＭＤＡＭＢ２３１の遊走活性を評価するためのスクラッチアッセイ実施を示す。細胞単層を直線でスクラッチし、無血清培地中の抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂまたは対照Ｉｇ（５μｇ／ｍｌ）で処理した。２４時間後、ＬＩＬＲＢ２＋ＭＤＡＭＢ２３１細胞の遊走能を、Ｉｍａｇｅ  Ｊによって測定される面積に基づくスクラッチ閉鎖によって決定した。図５Ｂは、ＬＩＬＲＢ２＋ＭＤＡＭＢ２３１の浸潤活性を評価するために実施したトランスウェル（transwell）アッセイを示す。１×１０５個の細胞を、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｃ＿５Ｃ１２）または対照Ｉｇ（５μｇ／ｍｌ）の存在下で上チャンバー中に播種した。２４時間後、トランスウェルメンブレンを、クリスタルバイオレットで染色し、１視野当たりの細胞を計数した。上パネルに、遊走した細胞を示す写真が示される。図５Ａ〜５Ｂ中の上パネルの統計分析が下パネルに示される。
【図６−１】アンタゴニスト抗ＬＩＬＲＢ２は、ワクチンアジュバント効果（ＣｐＧ）および細菌オプソニン化／食作用を増強する。図６Ａは、アジュバント効果の増強（左パネル）およびＧＦＰ発現大腸菌（Escherichia coli）に対するヒト単球の食作用活性（中央パネルおよび右パネル）に対するＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）の効果を示すグラフである。左パネル、ＭＩＳＴＲＧマウスに、ＩｇＧ対照またはＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）（１５０μｇ／マウス）を２日間にわたって静脈内注射し、次いで、５ｎｍｏｌで腹腔内チャレンジした。２時間後、血清を試験マウスから収集し、ＴＮＦαレベルについてのＥＬＩＳＡ分析に供した。中央パネルおよび右パネル、ヒト化ＭＩＳＴＲＧマウスに、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）または対照Ｉｇ（１５０μｇ／マウス）を４８時間にわたって腹腔内注射した。末梢血細胞を単離し、１×１０７個の末梢血細胞当たり２×１０８個の大腸菌（E. coli)の比率で、ＧＦＰを発現する大腸菌（E. coli）と共に３７℃で４時間インキュベートした。細胞を採取し、ＰＢＳで洗浄し、生存ＣＤ４５＋ＣＤ３３＋集団に対してゲートすることによって分析した。
【図６−２】マウスおよびヒト肺がん細胞の腫瘍成長は、腫瘍モデルにおいて、アンタゴニスト抗ＬＩＬＲＢ２によって阻害された。図６Ｂは、ＬＬＣ細胞の腫瘍成長が、ＢＡＣ  ＬＩＬＲＢ２／３トランスジェニックマウスにおいて、抗ＰＤＬ１と併せたＬＩＬＲＢ２アンタゴニストクローン（Ｐ＿５Ｇ５）によって抑制されたことを示すグラフである。試験マウスに、４×１０５個のＬＬＣ細胞を皮下（ｓｃ）移植した。腫瘍サイズが２〜３ｍｍ直径に達したところで、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストクローンであるクローンＰ＿５Ｇ５（白抜き丸）または対照ＩｇＧ（白抜き菱形）（１５０μｇ／マウス、３日毎）を、Ｉ．Ｖ．注射を介して注入した。抗ＰＤＬ−１（１５０μｇ／マウス、３日毎）を、ＬＩＬＲＢ２抗体であるクローンＰ＿５Ｇ５（白抜き四角）または対照ＩｇＧ（白抜き三角）の２回目の注射から開始した。腫瘍体積を、２〜３日毎に決定した；図６Ｂに示される。マウスおよびヒト肺がん細胞の腫瘍成長は、腫瘍モデルにおいて、アンタゴニスト抗ＬＩＬＲＢ２によって阻害された。図６Ｃは、ＨＬＡ−Ａ２が一致するヒト化ＮＣＧマウスモデルにおけるルシフェラーゼ発現Ａ５４９の腫瘍成長に対するＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）の抗腫瘍効果を示すグラフである。試験マウスに、２×１０６個のＡ５４９細胞を静脈内（ｉｖ）注射した。ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストクローンであるクローンＰ＿５Ｇ５または対照ＩｇＧを、３日目に、Ｉ．Ｖ．注射を介して注入した（２００μｇ／マウス、３日毎）。同じドナー由来のＨＬＡ−Ａ２が一致したＰＢＭＣを、３日目および１３日目に注入した。抗ＰＤ−１（２００μｇ／マウス）を、４日目に開始し、３週間にわたって毎週与えた。ＨＬＡ−Ａ２＋ＰＢＭＣヒト化ＮＣＧマウスにおけるルシフェラーゼ発現Ａ５４９腫瘍接種の２５日後の肺におけるルシフェラーゼ活性についての統計分析を、生物発光シグナルによって定量化し（平均放射輝度［ｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ］）、図６Ｃに示す。
【図７】抗ＬＩＬＲＢ２と共刺激分子との相乗効果。図７Ａは、実験の模式図である。図７Ｂ〜Ｃは、ヒトＰＢＭＣ増殖およびインターフェロンガンマ分泌に対する抗ＬＩＬＲＢ２の共刺激効果を示すグラフを示す。健康なドナー由来の１×１０５個の総ＰＢＭＣを、１μｇ／ｍｌのａ−ＰＤ−１、１μｇ／ｍｌの４−１ＢＢＬ、１００ｎｇ／ｍｌのＯＸ４０Ｌまたは１μｇ／ｍｌのＧＩＴＲＬの存在下で、抗ＬＩＬＲＢ２  Ａｂ（５μｇ／ｍｌ）で一晩（１６時間）刺激し、低用量の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、０．０１μｇ／ｍｌ）を３日間プラスして、培養した。３日間の処理後、Ｔ細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積もった。チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）に対する効果が図７Ｂに示される。上清を、図７Ｃに示されるインターフェロンガンマ産生の検出のために採取した。
【図８】抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、初代ヒト単球においてＬＰＳ応答を増強する。図８Ａ：ＩｇＧ処理サンプルと比較した、ＴＮＦαおよびＣＤ８６  ＭＦＩレベルの変化倍数。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２反応性ハイブリドーマ上清と共に４８時間培養し、その後、ブレフェルジンＡの存在下でＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）で６時間刺激した。ＭＦＩ値は、ＣＤ３３＋単球に対してゲートされた細胞を示す。図８Ｂ：図８Ａからの強調されたクローンの生ＣＤ８６およびＴＮＦαデータ（赤線）。データは、オーバーレイされたＩｇ対照処理ＰＢＭＣ（黒線）である。図８Ｃ：図８Ａ中の強調されたクローンのＬＩＬＲＢおよびＬＩＬＲＡ１受容体認識。抗体結合を、ヤギポリクローナル抗マウスＩｇＧ二次抗体を使用して検出した。図８Ｄ：ＴＨＰ１親細胞およびＬＩＬＲＢ２レトロウイルス形質導入細胞上のＬＩＬＲＢ２の発現。図８Ｅ：固定化された抗ＬＩＬＲＢ２（１０μｇ／ｍｌ）へのＬＩＬＲＢ２−Ｈｉｓの会合（ｔ＝１〜６００ｓ）およびそれからの解離（ｔ＝６００〜１４５０ｓ）を試験するバイオレイヤー干渉法データ。ＬＩＬＲＢ２−Ｈｉｓの濃度および計算された抗ＬＩＬＲＢ２親和性（クローンＡ）が示される。
【図９−１】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、ＭＣＳＦの存在下で炎症性マクロファージを生成する。図９Ａ：ｍＩｇＧ２ａまたは抗ＬＩＬＲＢ２（αＬＩＬＲＢ２、１μｇ／ｍｌ）の存在下で成熟させたＭＣＳＦ  Ｍ（−）マクロファージの代表的な明視野顕微鏡画像。図９Ｂ：ｍＩｇＧ２ａ（青線）または抗ＬＩＬＲＢ２（赤線）の存在下でのＭ（−）によるＣＤ１４およびＣＤ１６３発現の代表的なレベル。図９Ｃ：複数の実験にわたって健康なドナー（ｎ＝１０）から収集した、図９ＢからのプールされたペアのＭＦＩデータ。図９Ｄ：１６時間のＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍＬ）刺激およびＥＬＩＳＡによる検出後の、図９Ｃ中のマクロファージから分泌されたＴＮＦαおよびＩＬ１０。図９Ｅ：ＭＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下で２日間培養したＩｇＧ処理した未熟なマクロファージにおける平均値と比較した、ＩＲＦ３、４、５および７  ｍＲＮＡ発現における変化倍数。ｐ値を、両側スチューデントｔ検定を使用することによって計算した。
【図９−２】図９Ｆ：ｍＩｇＧ２ａ（黒）および抗ＬＩＬＲＢ２（赤）の存在下で成熟させたＭ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）における代表的なＰＤ−Ｌ１発現。図９Ｇ：複数の実験にわたって健康なドナー（ｎ＝１１）から収集した、図９ＦからのプールされたペアのＭＦＩデータ。図９Ｈ：ｍＩｇＧ２ａ（黒）および抗ＬＩＬＲＢ２（赤）の状況下で成熟させたＭ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）の代表的なＤＣ−ＳＩＧＮ発現。図９Ｉ：複数の実験にわたって健康なドナー（ｎ＝１１）から収集した、図９ＨからのプールされたペアのＭＦＩデータ。ｐ値を、対応のある両側ｔ検定を使用することによって計算した。
【図１０−１】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、ＮＦκＢ／ＳＴＡＴ１炎症経路を好む。図１０Ａ〜図１０Ｃ：ＴＨＰ１  ＬＩＬＲＢ２＋細胞を、ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２（αＬＩＬＲＢ２、１μｇ／ｍｌ）と共に２４時間培養し、その後、ＬＰＳ（図１０Ａ）、ＩＦＮγ（図１０Ｂ）またはＩＬ４（図１０Ｃ）で５、１０および３０分間急性刺激した。図１０Ａ：ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍＬ）刺激に応答したリン酸化されたＮＦκＢ、ＥＲＫ１／２およびｐ３８のイムノブロット。図１０Ｂ：ＩＦＮγ（２０ｎｇ／ｍＬ）刺激に応答したリン酸化されたＮＦκＢ、ＥＲＫ１／２、ｐ３８およびＳＴＡＴ１のイムノブロット。データは、３回の独立した実験の代表的な実験からのものであり、平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値は、一元配置ＡＮＯＶＡ、テューキーの多重比較検定によって計算した。
【図１０−２】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、ＮＦκＢ／ＳＴＡＴ１炎症経路を好む。図１０Ａ〜図１０Ｃ：ＴＨＰ１  ＬＩＬＲＢ２＋細胞を、ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２（αＬＩＬＲＢ２、１μｇ／ｍｌ）と共に２４時間培養し、その後、ＬＰＳ（図１０Ａ）、ＩＦＮγ（図１０Ｂ）またはＩＬ４（図１０Ｃ）で５、１０および３０分間急性刺激した。図１０Ｃ：ＩＬ４（２０ｎｇ／ｍＬ）刺激に応答したリン酸化されたＳＴＡＴ６のイムノブロット。図１０Ｄ：ＩＬ４（２０ｎｇ／ｍＬ）刺激に応答したＳＯＣＳ１およびＳＯＣＳ３のイムノブロット。図１０Ｅ：ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２の存在下で成熟させた初代ＭＣＳＦマクロファージからのリン酸化されたＡＫＴのイムノブロット。３人の独立したＰＢＭＣドナーからの代表的なデータ。図１０Ｆ：ＩｇＧ処理したマクロファージおよび抗ＬＩＬＲＢ２処理したマクロファージからのＬＩＬＲＢ２、ｐＳＨＰ１および総ＳＨＰ１イムノブロッティング。抗ＬＩＬＲＢ２（４２Ｄ１）免疫沈降からの結果（上）および総投入溶解物（下）。データは、３回の独立した実験の代表的な実験からのものであり、平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値は、一元配置ＡＮＯＶＡ、テューキーの多重比較検定によって計算した。
【図１０−３】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、ＮＦκＢ／ＳＴＡＴ１炎症経路を好む。図１０Ｇ：ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、Ｔｅｆｆ応答の単球／マクロファージ媒介性の抑制を阻害する。成熟ＤＣ、選別された同種Ｔ細胞、ならびにＩｇＧ（黒線）または抗ＬＩＬＲＢ２（赤線）の存在下で成熟させた滴定された比率のＭＣＳＦマクロファージを含む７２時間のＭＬＲのフローサイトメトリーによって決定した総ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞計数。図１０Ｈ：図１０Ｇ中のＭＬＲからの上清を、分泌されたＩＦＮγについてＥＬＩＳＡによって分析した。図１０Ｉ：総ＰＢＭＣを、抗ＬＩＬＲＢ２（５μｇ／ｍｌ）またはＩｇＧと共に一晩インキュベートし、その後、ＯＫＴ３刺激（０．０１μｇ／ｍｌ）の存在下で抗ＰＤ−１（１μｇ／ｍｌ）で３日間処理した。上清を、ＥＬＩＳＡによるＩＦＮγ検出のために採取した。データは、３回の独立した実験の代表的な実験からのものであり、平均±ＳＥＭとして示され、ｐ値は、一元配置ＡＮＯＶＡ、テューキーの多重比較検定によって計算した。
【図１１−１】ＬＩＬＲＢ２遮断は、従来のＭ１対Ｍ２表現型とは異なってマクロファージトランスクリプトームを変更する。図１１Ａ：単球由来マクロファージ状態Ｍ（ＬＰＳ）（左）およびＭ（ＩＬ４）（右）における抗ＬＩＬＲＢ２（αＬＩＬＲＢ２）処理対ＩｇＧ処理の正規化した遺伝子富化スコアおよび富化ｐ値のＶｏｌｃａｎｏプロット。富化カットオフ（ＦＣ≧１．５でＤＥＧ、およびＦＤＲを用いてｐ値＜０．０１）を上回る統計的に有意なＤＥＧが赤で示される。
【図１１−２】ＬＩＬＲＢ２遮断は、従来のＭ１対Ｍ２表現型とは異なってマクロファージトランスクリプトームを変更する。図１１Ｂ：抗ＬＩＬＲＢ２処理に応答した、Ｍ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）状態からの重複するおよび独自のＤＥＧ。Ｍ（ＬＰＳ）＋抗ＬＩＬＲＢ２対Ｍ（ＬＰＳ）＋ＩｇＧとＭ（ＩＬ４）＋抗ＬＩＬＲＢ２対Ｍ（ＩＬ４）＋ＩｇＧとの間のＤＥＧの重複を示すベン図（上）（ＦＣ≧１．５、およびＦＤＲを用いてｐ値＜０．０１）。重複するＤＥＧのジーンオントロジーのまとめが示される。Ｍ（ＬＰＳ）とＭ（ＩＬ４）との間の６６個の共有されたＬＩＬＲＢ２に調節される遺伝子と関連する機能的用語が下に列挙される。図１１Ｃ：Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＢｅａｄＡｒｒａｙデータセットの２Ｄ主成分分析。Ｍ（ＬＰＳ）＋ＩｇＧ（青）、Ｍ（ＬＰＳ）＋抗ＬＩＬＲＢ２（赤）、Ｍ（ＩＬ４）＋ＩｇＧ（黒）およびＭ（ＩＬ４）＋抗ＬＩＬＲＢ２（緑）；１群当たりｎ＝３が示される。
【図１１−３】ＬＩＬＲＢ２遮断は、従来のＭ１対Ｍ２表現型とは異なってマクロファージトランスクリプトームを変更する。図１１Ｄ：Ｍ（ＩＬ４）＋抗ＬＩＬＲＢ２対Ｍ（ＩＬ４）＋ＩｇＧ状態を比較することによる、Ｍ（ＩＬ４）におけるＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムの結果としての免疫機能変化と関連する正規化したＤＥＧのヒートマップ可視化。ＤＥＧは、上から下に、変化倍数によってランキングされる：赤（増加）、緑（減少）、黒（未変化）。データは、行のｚスコアによって正規化される。
【図１２−１】ＬＩＬＲＢ２遮断は、肺腫瘍関連マクロファージ成熟化をｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでリプログラミングする。図１２Ａ：Ａ５４９細胞（１×１０３細胞／ウェル）の５日間共培養による、初代ヒトＣＤ３３＋単球（１×１０５細胞／ウェル）のＦＡＣＳゲーティング分析。図１２Ｂ：図１２Ａからの生ＣＤ３３＋ＣＤ１４＋骨髄細胞の間でのＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１６３およびＤＣ−ＳＩＧＮ発現。ＩｇＧ処理細胞（黒線）に、抗ＬＩＬＲＢ２処理細胞（αＬＩＬＲＢ２、赤線）がオーバーレイされる。図１２Ｃ：その１２日前にＡ５４９腫瘍およびＣＤ３３＋単球を皮下接種したＮＳＧ−ＳＧＭ３免疫不全マウス由来のヒトＣＤ４５＋ＣＤ３３＋マクロファージを同定するためのＦＡＣＳゲーティング戦略。＊、ｐ＜０．０５、ｎｓ．＝有意性なし。データを、両側スチューデントｔ検定を使用して比較した。
【図１２−２】ＬＩＬＲＢ２遮断は、肺腫瘍関連マクロファージ成熟化をｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでリプログラミングする。図１２Ｄ：１人のドナーからの１つの代表的なデータを示した。データを、４腫瘍サンプル／群、２マウス／群から平均した。データを、両側スチューデントｔ検定を使用して比較した。５人のドナーからの個々のデータを図２０Ｂに示した。ＣＤ１４、ＨＬＡＤＲおよびＣＤ１６についての５人全てのドナーからの組み合わせたデータは図２０Ｄに示される。データを、４〜８腫瘍サンプル／群／ドナー、２〜４マウス／群／ドナー、３回の独立した実験から平均した、対応のあるｔ検定。図１２Ｅ：ＨＬＡ−Ａ２が一致したヒト化ＮＣＧマウスを使用して、ＬＵＣ−Ａ５４９（ＨＬＡ−Ａ２＋）異種移植マウスモデルにおける、抗ＰＤ−１（αＰＤ１）処置と併せたＬＩＬＲＢ２遮断（αＬＩＬＲＢ２）によるｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍応答を見積もった。ＨＬＡ−Ａ２＋ＰＢＭＣヒト化ＮＣＧマウスにおけるルシフェラーゼ発現Ａ５４９腫瘍接種の１９日後の肺におけるルシフェラーゼ活性についての統計分析を、生物発光シグナルによって定量化し（平均放射輝度［ｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ］）、棒グラフに示す（１群当たりｎ＝３〜６匹のマウス）、一元配置ＡＮＯＶＡ、テューキーの多重比較検定。図１２Ｆ：ＣｐＧチャレンジしたマウスからの血清ＴＮＦαレベルについてのＥＬＩＳＡ分析が示される、ｎ＝５（両側スチューデントｔ検定）。図１２Ｇ：ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２処置したヒト化ＭＩＳＴＲＧマウス由来のＣＤ４５＋ＣＤ３３＋集団中の生存ＣＤ１４＋ＣＤ１６−およびＣＤ１４＋ＣＤ１６−細胞におけるＧＦＰ発現大腸菌（E. coli）の平均蛍光強度を分析した（Ｎ＝３、マウス１匹当たり二連）。＊、ｐ＜０．０５、ｎｓ．＝有意性なし。データを、両側スチューデントｔ検定を使用して比較した。
【図１３−１】ＬＬＣ腫瘍モデルにおけるＬＩＬＲＢ２トランスジェニックマウスにおけるＬＩＬＲＢ２遮断の抗腫瘍効果。図１３Ａ：ＣＤ１１ｂゲートした生存末梢血細胞におけるＬＩＬＲＢ２およびＬＩＬＲＢ３発現。図１３Ｂ：総末梢血細胞を、ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２（αＬＩＬＲＢ２）の存在下でのＬＰＳ刺激後にフローサイトメトリー分析のために採取し、上清をＥＬＩＳＡアッセイのために収集した。ＣＤ１１ｂゲートした細胞中のＣＤ８６＋ＭＨＣＩＩ＋集団の代表的なドットプロット。図１３Ｃ：図１３ＢからのＣＤ１１ｂゲートした細胞中のＣＤ８６＋ＭＨＣＩＩ＋細胞の百分率についての統計分析（ｎ＝３）。図１３Ｄ：総末梢血細胞からのＴＮＦα分泌についての統計分析（ｎ＝３）。
【図１３−２】ＬＬＣ腫瘍モデルにおけるＬＩＬＲＢ２トランスジェニックマウスにおけるＬＩＬＲＢ２遮断の抗腫瘍効果。図１３Ｅ：ＬＩＬＲＢ２トランスジェニックマウスにおけるルイス肺癌（ＬＬＣ）腫瘍モデル。Ｉｇ対照または抗ＬＩＬＲＢ２（αＬＩＬＲＢ２）もしくは／および抗ＰＤ−Ｌ１（αＰＤＬ１）で処置した実験マウス。左、ＬＬＣ腫瘍成長を、２日毎または３日毎に測定し、１群当たりの平均腫瘍体積＋／−ＳＥＭ（平均の標準誤差）を報告した、Ｎ＝５〜６。右、腫瘍重量。統計的有意性を、２３日目に、群の二元配置ＡＮＯＶＡ比較を使用して決定した、ｐ値：＊、ｐ＜０．０５、＊＊、ｐ＜０．０１。
【図１３−３】ＬＬＣ腫瘍モデルにおけるＬＩＬＲＢ２トランスジェニックマウスにおけるＬＩＬＲＢ２遮断の抗腫瘍効果。図１３Ｆ：腫瘍浸潤性リンパ球を、ＣＤ１１ｂ＋細胞集団中のＬｙ６Ｇ＋Ｌｙ６Ｃｉｎｔ顆粒球性ＭＤＳＣおよびＬｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃｈｉ単球性ＭＤＳＣのフローサイトメトリー分析のために精製した。上パネル、Ｉｇ対照または抗ＬＩＬＲＢ２＋抗ＰＤＬ１で処置した試験マウスの腫瘍由来のＭＤＳＣについての代表的なフローサイトメトリー分析。下パネル、腫瘍保有マウスから収集した左図からのプールされたＭＦＩデータ（ｎ＝３〜５匹のマウス／群、一元配置ＡＮＯＶＡ、テューキーの多重比較検定）。図１３Ｇ：脾細胞および腫瘍浸潤性リンパ球を、ＣＤ４＋細胞集団中のＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇのフローサイトメトリー分析のために単離した。左、Ｉｇ対照または抗ＬＩＬＲＢ２＋抗ＰＤＬ１で処置した試験マウスの脾臓および腫瘍由来のＴｒｅｇについての代表的なフローサイトメトリー分析。右、同じ腫瘍保有マウスから収集したプールされたＭＦＩデータ（１群当たりｎ＝４〜６匹のマウス、一元配置ＡＮＯＶＡ、テューキーの多重比較検定）。
【図１４−１】肺がん患者由来腫瘍浸潤性骨髄細胞は、ＬＩＬＲＢ２遮断に応答する。図１４Ａ：ＮＳＣＬＣ切除腫瘍から単離された骨髄細胞集団の特徴付け。細胞を、ＤＡＰＩ−ＣＤ４５＋生白血球細胞に対してゲートした。ＰＭＮ−ＭＤＳＣ、Ｍ−ＭＤＳＣ、ＤＣおよびＴＡＭ集団が同定された。図１４Ｂ：図１４ＡからのＣＤ３３＋ゲートの間での代表的なＬＩＬＲＢ１−４染色。図１４Ｃ：ＭＤＳＣ（左）およびＴＡＭ（右）ゲートに対してゲートされた複数の患者生検（Ｎ＝５〜６）のＬＩＬＲＢ  ＭＦＩが示される。図１４Ｄ：肺がん由来ＴＩＬを、Ｉｇ対照または抗ＬＩＬＲＢ２（αＬＩＬＲＢ２）と併せてＭ−ＣＳＦ＋ＩＦＮγと共に４８時間培養した。上清を、ＴＮＦαおよびＩＬ１０分泌について評価した（＊、ｐ＜０．０５、ｎ＝１５、対応のあるｔ検定）。
【図１４−２】肺がん患者由来腫瘍浸潤性骨髄細胞は、ＬＩＬＲＢ２遮断に応答する。図１４Ｅ：図１４Ｄからの肺がん由来ＴＩＬを、ＣＤ１６３、ＣＤ１４およびＰＤ−Ｌ１（ｎ＝１１）ならびにＤＣ−ＳＩＧＮおよびＣＤ１６（ｎ＝７）の発現についてのフローサイトメトリー分析のために複数の患者から収集した（対応のあるｔ検定）。
【図１４−３】肺がん患者由来腫瘍浸潤性骨髄細胞は、ＬＩＬＲＢ２遮断に応答する。図１４Ｆ：Ｍ１／Ｍ２極性化に対するＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムについての提唱された機構。
【図１５】形質導入された細胞株およびＰＢＭＣ上のＬＩＬＲＢおよびＬＩＬＲＡ１検出。
【図１６】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、Ｔ細胞増殖に対するマクロファージ依存的阻害を低減させる。
【図１７−１】Ｍ（ＬＰＳ）対Ｍ（ＩＬ４）マクロファージの差次的に発現される遺伝子。
【図１７−２】Ｍ（ＬＰＳ）対Ｍ（ＩＬ４）マクロファージの差次的に発現される遺伝子。
【図１８−１】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムの観点からの、単球由来マクロファージから差次的に発現される遺伝子。
【図１８−２】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムの観点からの、単球由来マクロファージから差次的に発現される遺伝子。
【図１８−３】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムの観点からの、単球由来マクロファージから差次的に発現される遺伝子。
【図１８−４】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムの観点からの、単球由来マクロファージから差次的に発現される遺伝子。
【図１８−５】ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムの観点からの、単球由来マクロファージから差次的に発現される遺伝子。
【図１９】ＬＩＬＲＢ２遮断は、乳房腫瘍関連マクロファージ成熟化をリプログラミングする。
【図２０−１】Ａ５４９肺がん異種移植モデルおよびヒト化ＭＩＳＴＲＧマウスの生成。
【図２０−２】Ａ５４９肺がん異種移植モデルおよびヒト化ＭＩＳＴＲＧマウスの生成。
【図２１】肺がん患者由来腫瘍浸潤性骨髄細胞は、ＬＩＬＲＢ２遮断に応答する。
【図２２】腫瘍浸潤したリンパ球中のＣＤ４５＋ＣＤ３３＋ＨＬＡＤＲｈｉＣＤ１４−樹状細胞、およびＣＤ１４＋単球分化した樹状細胞上でのＬＩＬＲＢ２発現。
【図２３−１】図２３Ａ〜２３Ｃは、健康なドナー由来のＰＢＭＣの刺激後のＯＫＴ３媒介性のＴ細胞増殖（ＣＰＭ）を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。３日間の処理後、［３Ｈ］−チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）における相対的変化倍数が図２３Ａに示される。
【図２３−２】図２３Ａ〜２３Ｃは、健康なドナー由来のＰＢＭＣの刺激後のＯＫＴ３媒介性のＴ細胞増殖（ＣＰＭ）を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。３日間の処理後、［３Ｈ］−チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。Ｔ細胞増殖が図２３Ｂに示される。
【図２３−３】図２３Ａ〜２３Ｃは、健康なドナー由来のＰＢＭＣの刺激後のＯＫＴ３媒介性のＴ細胞増殖（ＣＰＭ）を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。３日間の処理後、［３Ｈ］−チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。図２３ＢからのＴ細胞増殖における全体的差異が図２３Ｃに示される。
【図２３−４】図２３Ｄ〜２３Ｆは、健康なドナーから得たＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ産生を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。上清を収集し、ＩＦＮ−γ産生をＥＬＩＳＡによって測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。ＩＦＮ−γ産生放出における相対的変化倍数が図２３Ｄに示される。
【図２３−５】図２３Ｄ〜２３Ｆは、健康なドナーから得たＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ産生を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。上清を収集し、ＩＦＮ−γ産生をＥＬＩＳＡによって測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。ＩＬ−１０の分泌が図２３Ｅに示される。
【図２３−６】図２３Ｄ〜２３Ｆは、健康なドナーから得たＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ産生を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。上清を収集し、ＩＦＮ−γ産生をＥＬＩＳＡによって測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。図２３ＥからのＩＬ−１０濃度における全体的差異が図２３Ｆに示される。
【図２３−７】ＬＩＬＲＡファミリーに対する抗ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体の交差反応性を示す。
【図２３−８】抗ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体による処理の際のＴ細胞ＩＦＮ−γ産生の抑制を示す。
【図２３−９】抗ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体によるＭＬＲ反応の抑制を示す。
【図２４】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＬＩＬＲＢ２＋白血病細胞、例えば、ＴＨＰ−１によって刺激した場合の特異的活性化およびサイトカイン放出を実証している。抗ＬＩＬＲＢ２−ＣＡＲ−Ｔの短い形態のベクターを使用する（上パネル）：抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対する活性化特異性を示した。抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、１：１〜１：１０の範囲の標的：エフェクターで、ＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞と共に２４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用する４１ＢＢ発現の検出によって決定した。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。下パネル：抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対するサイトカイン放出特異性を示した。上清を、１：１〜１：１０の範囲の標的：エフェクターでの、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞とＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞との２４時間の共培養後に収集した。サイトカイン放出を、ＥＬＩＳＡによって、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）についてアッセイした。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。
【図２５】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＬＩＬＲＢ２＋白血病細胞によって刺激した場合の特異的活性化およびサイトカイン放出を実証している。抗ＬＩＬＲＢ２−ＣＡＲ−Ｔの長い形態のベクター（上パネル）：抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対する活性化特異性を示した。抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、１：１〜１：１０の範囲の標的：エフェクターで、ＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞と共に２４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用する４１ＢＢ発現の検出によって決定した。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。下パネル：抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対するサイトカイン放出特異性を示した。上清を、１：１〜１：１０の範囲の標的：エフェクターでの、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞とＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞との２４時間の共培養後に収集した。サイトカイン放出を、ＥＬＩＳＡによって、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）についてアッセイした。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。
【図２６】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、標的ＬＩＬＲＢ２に対する結合特異性を実証している。短い形態（上パネル）および長い形態（下パネル）の両方の抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞、ＬＩＬＲＢ３発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞と共に２４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用する４１ＢＢ発現の検出によって決定した。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。
【図２７】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＨＴ２９結腸がん細胞において標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対する結合特異性を実証している。抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＬＩＬＲＢ２発現ＨＴ２９細胞、ＬＩＬＲＢ３発現ＨＴ２９細胞またはＨＴ２９対照細胞と共に２４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用する４１ＢＢ発現についての活性化マーカーの検出によって決定した。ＯＫＴ３で刺激したＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化についての陽性対照として使用した。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。
【図２８】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＬＩＬＲＢ２発現白血病細胞に対する効率的な細胞傷害性をｉｎ  ｖｉｔｒｏで示す。ＬＩＬＲＢ２発現白血病細胞（Ｂ２−ＴＨＰ１）を、０．０２：１〜１０：１の範囲のエフェクター：標的で、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔまたは形質導入されていないＴ細胞と共に共培養した。上清を、７時間の共培養後に収集し、細胞傷害性を、ＬＤＨ放出の検出によって決定した。
【図２９】ＴＨＰ１−ＬＩＬＲＢ２異種移植マウスモデルにおける抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞の有効性の実証のための実験設計。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスに、０日目にＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞を注射し、８、１５、２２および３０日目に、形質導入されていないＴ細胞（対照）または抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置した。生物発光画像を毎週撮影した。
【図３０】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＴＨＰ１−ＬＩＬＲＢ２異種移植マウスモデルにおいて白血病負荷を低減させた。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスに、０日目にＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞を注射し、８、１５、２２および３０日目に、形質導入されていないＴ細胞（対照）または抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置した。生物発光画像（ＢＬＩ）を毎週撮影した。形質導入されていないＴ細胞（左）または抗ＬＩＬＲＢ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞（右）で処置したマウスの毎週のＢＬＩを、マウスの背中から撮影した。
【図３１】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＴＨＰ１−ＬＩＬＲＢ２異種移植マウスモデルにおいて白血病負荷を低減させた。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスに、０日目にＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞を注射し、８、１５、２２および３０日目に、形質導入されていないＴ細胞（対照）または抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置した。生物発光画像（ＢＬＩ）を毎週撮影した。形質導入されていないＴ細胞（左）または抗ＬＩＬＲＢ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞（右）で処置したマウスの毎週のＢＬＩを、腹部から撮影した。
【図３２】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＴＨＰ１−ＬＩＬＲＢ２異種移植マウスモデルにおいて白血病負荷を低減させた。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスに、０日目にＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞を注射し、８、１５、２２および３０日目に、形質導入されていないＴ細胞（対照）または抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置した。生物発光画像（ＢＬＩ）を毎週撮影した。各形状は、処置群中の個々のマウスを示す。時間の関数としての全光束（ｐ／ｓ）のプロットは、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞（右）が、対照Ｔ細胞処置（左）マウスと比較して白血病負荷を減少させることを実証した。
【図３３】抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＴＨＰ１−ＬＩＬＲＢ２異種移植マウスモデルにおいて白血病負荷を低減させた。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスに、０日目にＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞を注射し、８、１５、２２および３０日目に、形質導入されていないＴ細胞（対照）または抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置した。生物発光画像（ＢＬＩ）を毎週撮影した。全光束（左パネル）および平均放射輝度（右パネル）での白血病負荷の定量化結果を示した。抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置したマウスは、形質導入されていないＴ細胞処置マウスと比較して腫瘍負荷の減少を示した。
【図３４】抗ＬＩＬＲＢ４  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、ＬＩＬＲＢ４タンパク質発現ヒトＡＭＬ細胞に対する細胞傷害性を実証した。
【図３５】アンタゴニスト抗ＬＩＬＲＢ２は、ＣＡＲ−Ｔ  Ｔ細胞増殖のＭＤＳＣ媒介性の阻害を無効にする。図３５Ａ：抗ＬＩＬＲＢ２は、ＬＩＬＲＢ４  ＣＡＲ−ＴによるＡＭＬ死滅のＭＤＳＣ媒介性の阻害を克服した。ＬＩＬＲＢ４  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、抗ＬＩＬＲＢ２抗体または対照免疫グロブリンの存在下で、ＭＤＳＣ、およびＡＭＬ細胞である、ＬＩＬＲＢ４を発現するＴＨＰ−１と共に３日間共培養した。残留ＴＨＰ−１およびＭＤＳＣ細胞を、ＣＤ３３およびＣＤ１４マーカーの染色によって同定した。抗ＬＩＬＲＢ２は、対照免疫グロブリンと比較して、ＬＩＬＲＢ４  ＣＡＲ−Ｔ媒介性のＴＨＰ−１死滅を増強した。図３５Ｂ：抗ＬＩＬＲＢ２は、ＣＡＲ−Ｔ増殖のＭＤＳＣ媒介性の抑制を克服した。ＣＦＳＥ標識されたＨｅｒ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＭＤＳＣおよび抗ＬＩＬＲＢ２の存在下で、Ｈｅｒ２＋ＳＣＣ−４７腫瘍細胞で３日間刺激した。ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の増殖を、フローサイトメトリーによってＣＦＳＥ希釈を使用して見積もった。ＣＡＲ−Ｔ細胞、腫瘍細胞およびＭＤＳＣの比率は、１０：１：５であった。
【発明を実施するための形態】
【００５９】
本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体および抗原結合性断片を特徴とする。
【００６０】
本開示は、本明細書に記載される抗体およびその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチドもまた提供する。さらに、本開示は、がんの処置において抗ＬＩＬＲＢ２抗体およびその抗原結合性断片を使用する方法または炎症促進性免疫応答を刺激する方法に関する。
【００６１】
本開示はまた、関連のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびそれを含む細胞（例えば、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞またはマクロファージ）、ならびに腫瘍を標的化しそれを死滅させること、喘息処置、または（例えば、感染または感染性疾患を処置するために）感染細胞を標的化しそれを除去すること、または自己免疫疾患もしくは移植片拒絶に関与する免疫系細胞を抑制することにおけるＣＡＲおよび細胞の使用に関する。
【００６２】
本明細書および特許請求の範囲の明確な理解を提供するために、以下の定義を下に提供する。
【００６３】
定義
実施形態が言語「含む」を用いて本明細書に記載される場合には、「〜からなる」および／または「〜から本質的になる」の語で記載される他の同様の実施形態もまた提供されることが理解される。
【００６４】
用語「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、標的、例えば、タンパク質（例えば、ＬＩＬＲＢ２、そのサブユニット、または受容体複合体）、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または上述の組合せを認識し、それに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。典型的な抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（ＨＣ）鎖および２つの軽（ＬＣ）鎖を含む。各重鎖は、「重鎖可変領域」または「重鎖可変ドメイン」（本明細書でＶＨと略される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、「軽鎖可変領域」または「軽鎖可変ドメイン」（本明細書でＶＬと略される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣ１から構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へとさらに細分され得る。各ＶＨおよびＶＬ領域は、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、ＦａｃｂおよびＦｖ断片）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ（minibody）（例えば、ｓｃ（Ｆｖ）２、ダイアボディ）、多特異性抗体、例えば、少なくとも２つのインタクトな抗体から生成された二重特異性抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、および抗体が所望の生物学的活性を示す限り、抗原認識部位を含む任意の他の改変された免疫グロブリン分子を包含する。したがって、用語「抗体」は、抗体全体およびその任意の抗原結合性断片または単鎖を含む。抗体は、裸であってもよく、または他の分子、例えば、毒素、放射性同位体、低分子薬物、ポリペプチドなどにコンジュゲートされてもよい。
【００６５】
用語「単離された抗体」とは、同定され、その天然の環境の構成成分から分離および／または回収された抗体を指す。その天然の環境の混入成分は、抗体についての診断的または治療的使用を妨害する物質であり、これには、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。一部の実施形態では、抗体は、（１）Ｌｏｗｒｙ法によって決定した場合に、９９重量％よりも多くを含めて９５重量％よりも多くの抗体まで、（２）スピニングカップシークエネーター（spinning cup sequenator）の使用によってＮ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルー、または好ましくは銀染色を使用した還元条件もしくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで、精製される。抗体の天然の環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないので、単離された抗体には、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体が含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１回の精製ステップによって分離される。
【００６６】
二重特異性抗体は、例えば、ロイシンジッパーによって連結されたＦａｂ’部分を有する二重特異性抗体を作製することを開示する、参照により組み込まれる米国特許第５，９３２，４４８号明細書；部分がリンカーで連結された二重特異性抗体を作製することを開示する、参照により組み込まれる米国特許第７，５３８，１９６号明細書；およびペプチドリンカーを介して互いに連結される少なくとも４つの可変ドメインを有する多価Ｆｖ抗体構築物を開示する、参照により組み込まれる米国特許第８，１４８，４９６号明細書に記載されている。
【００６７】
用語「ヒト化」免疫グロブリンとは、ヒトフレームワーク領域、および非ヒト（通常はマウスまたはラット）免疫グロブリン由来の１つまたは複数のＣＤＲを含む免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。定常領域は存在しなくてもよいが、存在する場合には、ヒト免疫グロブリン定常領域に対して実質的に同一、即ち、少なくとも約８５〜９０％、好ましくは約９５％またはそれよりも高く同一でなければならない。したがって、おそらくはＣＤＲを除く、ヒト化免疫グロブリンの全ての部分が、天然のヒト免疫グロブリン配列の対応する一部に対して実質的に同一である。「ヒト化抗体」は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。例えば、キメラ抗体の可変領域全体が非ヒトであるので、ヒト化抗体は、上で定義したように、典型的なキメラ抗体は包含しない。例えば、米国特許第５５８５０８９号明細書；同第５２２５５３９号明細書（参照により組み込まれる）を参照のこと。
【００６８】
用語「抗原結合性断片」とは、インタクトな抗体の一部分を指し、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片によって果たされ得ることが、当該分野で公知である。抗原結合抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、ＦｄおよびＦｖ断片、直鎖状抗体、単鎖抗体、ならびに抗体断片から形成された多特異性抗体が含まれるがこれらに限定されない。一部の例では、抗体断片は、インタクトな抗体または抗体全体のタンパク質分解性消化によって調製され得る。例えば、抗体断片は、抗体全体を、パパイン、ペプシンまたはプラスミンなどの酵素で処理することによって得ることができる。抗体全体のパパイン消化は、Ｆ（ａｂ）２またはＦａｂ断片を生じ；抗体全体のペプシン消化は、Ｆ（ａｂ’）２またはＦａｂ’を生じ；抗体全体のプラスミン消化は、Ｆａｃｂ断片を生じる。
【００６９】
用語「Ｆａｂ」とは、酵素パパインによる免疫グロブリン（典型的にはＩｇＧ）の消化によって得られる断片と本質的に等価な抗体断片を指す。Ｆａｂ断片の重鎖セグメントは、Ｆｄ小片である。そのような断片は、インタクトな抗体の断片化によって酵素的もしくは化学的に生産することができ、部分的抗体配列をコードする遺伝子から組換え生産することができ、または全体的にもしくは部分的に合成により生産することができる。用語「Ｆ（ａｂ’）２」とは、ｐＨ４．０〜４．５での酵素ペプシンによる免疫グロブリン（典型的にはＩｇＧ）の消化によって得られる断片と本質的に等価な抗体断片を指す。そのような断片は、インタクトな抗体の断片化によって酵素的もしくは化学的に生産することができ、部分的抗体配列をコードする遺伝子から組換え生産することができ、または全体的にもしくは部分的に合成により生産することができる。用語「Ｆｖ」とは、非共有結合的相互作用によって一緒にされた１つのＮＨおよび１つのＮドメインからなる抗体断片を指す。
【００７０】
本明細書で使用する場合、用語「ｓｃＦｖ」または「ｓｃＦｖ分子」は、１つの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）またはその一部分および１つの重鎖可変ドメイン（ＶＨ）またはその一部分からなる結合分子であって、各可変ドメイン（またはその一部分）が同じまたは異なる抗体に由来する、結合分子を含む。単鎖Ｆｖ分子は、好ましくは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に挟み込まれたｓｃＦｖリンカーを含む。例示的なｓｃＦｖ分子は、当該分野で公知であり、例えば、米国特許第５，８９２，０１９号明細書；Ho et al, Gene, 77:51 (1989)；Bird et al., Science, 242:423 (1988)；Pantoliano et al, Biochemistry, 30: 101 17 (1991)；Milenic et al, Cancer Research, 51 :6363 (1991)；Takkinen et al, Protein Engineering, 4:837 (1991)に記載されている。用語「ｓｃＦｖリンカー」とは、本明細書で使用する場合、ｓｃＦｖのＶＬドメインとＶＨドメインとの間に挟み込まれた部分を指す。ｓｃＦｖリンカーは、好ましくは、ｓｃＦｖ分子を抗原結合コンフォメーションで維持する。一実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、ｓｃＦｖリンカーペプチドを含むまたはそれからなる。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーペプチドは、Ｇｌｙ−Ｓｅｒペプチドリンカーを含むまたはそれからなる。他の実施形態では、ｓｃＦｖリンカーは、ジスルフィド結合を含む。
【００７１】
用語「ＬＩＬＲＢ２抗体」、「抗ＬＩＬＲＢ２抗体」、「抗ＬＩＬＲＢ２」、「ＬＩＬＲＢ２に結合する抗体」およびそれらの任意の文法的バリエーションは、抗体がＬＩＬＲＢ２を標的化する際に治療剤または診断試薬として有用であるのに十分な親和性で、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合することが可能な抗体を指す。無関係の非ＬＩＬＲＢ２タンパク質への本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ２抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）（分析物として組換えＬＩＬＲＢ２を使用し、リガンドとして抗体を使用する、逆もまた可）、または当該分野で公知の他の結合アッセイによって測定した場合に、ＬＩＬＲＢ２へのその抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＬＩＬＲＢ２に結合する抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜５０ｎＭ、＜１０ｎＭまたは＜１ｎＭの解離定数（ＫＤ）を有する。
【００７２】
２つのポリペプチド（またはポリヌクレオチド）配列間で「％同一」という用語は、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要がある付加または欠失（即ち、ギャップ）を考慮に入れた、比較ウインドウにわたって、それらの配列によって共有される同一なマッチした位置の数を指す。マッチした位置は、同一なヌクレオチドまたはアミノ酸が標的配列および参照配列の両方中に存在する、任意の位置である。標的配列中に存在するギャップは、ヌクレオチドでもアミノ酸でもないので、ギャップは数に入れない。同様に、標的配列のヌクレオチドまたはアミノ酸が計数されるのであって、参照配列由来のヌクレオチドまたはアミノ酸が計数されるわけではないので、参照配列中に存在するギャップは数に入れない。配列同一性の百分率は、同一なアミノ酸残基または核酸塩基が両方の配列中に存在する位置の数を決定してマッチした位置の数を得、マッチした位置の数を、比較のウインドウ中の位置の総数によって除算し、結果に１００を乗算して配列同一性の百分率を得ることによって計算される。２つの配列間での配列の比較およびパーセント配列同一性の決定は、オンライン使用およびダウンロードの両方で容易に入手可能なソフトウェアを使用して達成され得る。適切なソフトウェアプログラムは、種々の供給源から入手可能であり、タンパク質配列およびヌクレオチド配列の両方のアラインメントのためのものである。パーセント配列同一性を決定するための１つの適切なプログラムは、米国政府のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＢＬＡＳＴウェブサイト（blast.ncbi.nlm.nih.gov）から入手可能なＢＬＡＳＴスイートのプログラムの一部であるｂｌ２ｓｅｑである。ｂ１２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮアルゴリズムまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して２つの配列間での比較を実施する。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。他の適切なプログラムは、例えば、ＥＭＢＯＳＳスイートのバイオインフォマティクスプログラムの一部であり、www.ebi.ac.uk/Tools/psaにおいてＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＥＢＩ）からも入手可能なＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、ＷａｔｅｒまたはＭａｔｃｈｅｒである。ある特定の実施形態では、第２の配列アミノ酸に対する第１のアミノ酸配列の百分率同一性「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、ここで、Ｙは、第１の配列および第２の配列のアラインメントにおいて同一なマッチとスコアをつけたアミノ酸残基の数（目視検査または特定の配列アラインメントプログラムによってアラインした場合）であり、Ｚは、第２の配列中の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列よりも長い場合、第２の配列に対する第１の配列のパーセント同一性は、第１の配列に対する第２の配列のパーセント同一性よりも高くなる。当業者は、パーセント配列同一性の計算のための配列アラインメントの生成が、一次配列データによって排他的に行われるバイナリ配列−配列比較に限定されないことを理解するであろう。配列アラインメントは、複数の配列アラインメ��トから導出され得る。複数の配列アラインメントを生成するための１つの適切なプログラムは、www.clustal.orgから入手可能なＣｌｕｓｔａｌＷ２である（ＣｌｕｓｔａｌＸは、Ｗｉｎｄｏｗｓ環境に移植されたＣｌｕｓｔａｌＷ２プログラムのバージョンである）。別の適切なプログラムは、www.drive5.com/muscleから入手可能なＭＵＳＣＬＥである。あるいは、ＣｌｕｓｔａｌＷ２およびＭＵＳＣＬＥは、例えばＥＢＩから入手可能である。
【００７３】
用語「治療剤」とは、疾患または障害の処置において使用される任意の生物学的または化学的薬剤を指す。治療剤には、任意の適切な生物学的に活性な化合物、生物学的に誘導された構成成分、例えば、細胞、ペプチド、抗体、ＣＡＲｓ（およびＣＡＲｓを含む細胞）およびポリヌクレオチド、ならびに放射化学的治療剤、例えば放射性同位体が含まれる。一部の実施形態では、治療剤は、化学療法剤または鎮痛薬を含む。
【００７４】
用語「処置する（treat）」および「処置すること（treating）」とは、本明細書で使用する場合、増加した細胞死と関連する障害、例えば虚血に関して、動物またはヒトにおける組織および／または細胞損傷の発生における減少を指す。処置は、完全な処置であり得、例えば、対象における組織損傷が全くないことである。処置は、対象における組織損傷の発生が、治療剤なしの場合に発生した組織損傷よりも少なくなるように、部分的なものであってもよい。
【００７５】
用語「予防する（prevent）」、「予防すること（preventing）」および「予防」とは、本明細書で使用する場合、疾患の発生における減少、または対象における疾患もしくはその関連症状を獲得するリスクにおける減少を指すものとする。予防は、完全な予防であり得、例えば、対象における疾患または病的細胞が全くないことである。予防は、対象における疾患または病的細胞の発生が、本発明なしの場合に発生した疾患または病的細胞よりも少なくなるように、部分的なものであってもよい。
【００７６】
ＬＩＬＲＢ２
用語「白血球免疫グロブリン（Ｉｇ）様受容体Ｂ２」または「ＬＩＬＲＢ２」は、哺乳動物（例えば、ヒト）ＬＩＬＲＢ２タンパク質もしくはｍＲＮＡ、または哺乳動物（例えば、ヒト）ＬＩＬＲＢ２タンパク質もしくはｍＲＮＡに由来するＬＩＬＲＢ２タンパク質もしくはｍＲＮＡを意味する。ＬＩＬＲＢ２タンパク質およびｍＲＮＡの非限定的な例は、本明細書に記載されている。ＬＩＬＲＢ２タンパク質およびｍＲＮＡのさらなる例は、当該分野で公知である。
【００７７】
ヒトＬＩＬＲＢ２のアミノ酸配列は、以下に提供される：（ＮＰ＿００１２６５３３３．２）
【００７８】
【化１】
2022501428.tif 000003
およびそのバリアント。
【００７９】
用語「ＬＩＬＲＢ２アゴニスト」は、ＬＩＬＲＢ２タンパク質に特異的に結合し、哺乳動物細胞においてＬＩＬＲＢ２シグナル伝達経路を活性化する薬剤を意味する。ＬＩＬＲＢ２アゴニストの非限定的な例は、本明細書に記載されている。ＬＩＬＲＢ２シグナル伝達経路の例は、それぞれその全体が参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第２０１３／１８１４３８号パンフレットおよび米国公開番号２０５０１７４２０３号に記載されている。
【００８０】
用語「ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト」は、ＬＩＬＲＢ２タンパク質に特異的に結合し、哺乳動物細胞においてＬＩＬＲＢ２シグナル伝達経路の活性、活性化または機能を減少させる薬剤を意味する。ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストの非限定的な例は、本明細書に記載されている。
【００８１】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体
本開示は、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合する抗体およびその抗原結合性断片を提供する。抗ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（マウス）の例は、表１に提供される。
【００８２】
【表１−１】
2022501428.tif 000004
【００８３】
【表１−２】
2022501428.tif 000005
【００８４】
【表１−３】
2022501428.tif 000006
【００８５】
【表１−４】
2022501428.tif 000007
【００８６】
【表１−５】
2022501428.tif 000008
【００８７】
【表１−６】
2022501428.tif 000009
【００８８】
抗ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体（マウス）の例は、表２に提供される。
【００８９】
【表２】
2022501428.tif 000010
【００９０】
上記表は、Ｋａｂａｔ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）に従うＣＤＲを開示しているが、本開示の抗体は、任意のＣＤＲ定義（例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｈｏｔｈｉａ、ｃｏｎｔａｃｔ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ）に従うＣＤＲを含み得る。異なるＣＤＲ定義に従う抗体のＣＤＲは、例えば、ＡｂＹｓｉｓデータベース（ABySS: a parallel assembler for short read sequence data.  Simpson JT et al. Genome Res. (2009)）を使用することによって決定され得る。
【００９１】
ある特定の実施形態では、これらの抗体またはその抗原結合性断片は、表１および２に開示されたＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つまたは６つ全てを有する（ここで、ＣＤＲは、任意のＣＤＲ定義に従い得る）。
【００９２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００９３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００９４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００９５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００９６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００９７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００９８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【００９９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１００】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１０９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１１９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１３０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１２９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１３９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号８９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１４９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１９６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２６０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２１７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２１９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１９７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号８７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１５９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２３９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１９９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２０６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２００に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２５２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２５７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１６９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７２】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号６６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７３】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号９４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７４】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２２２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２２８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７５】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１４６に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２５０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７６】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１１２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２５８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１８８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号８０に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７７】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３７７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号３７８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７８】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３６３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号３６４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号３６５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号３６２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１７９】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号３７４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７５に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号３７６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１８０】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２６７に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１７４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１１９に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１８１】
一実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号６９に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含むＶＨ；ならびに配列番号１０７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号１７８に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含むＶＬを含む。
【０１８２】
本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片のＶＨおよび／またはＶＬ領域は、定常領域（例えば、野生型ヒトＦｃ領域、または１つもしくは複数の変更を含むＦｃ領域）に連結され得る。一部の実施形態では、抗体は、ヒトカッパ配列に由来する軽鎖定常領域を有する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトラムダ配列に由来する軽鎖定常領域を有する。具体的な実施形態では、軽鎖定常領域は、ヒトサブグループカッパ１配列を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群から選択されるアイソタイプ（例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３またはヒトＩｇＧ４アイソタイプ）を有する。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプおよびヒトカッパ軽鎖定常領域を有する。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプを有する。ある特定の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプおよびヒトカッパ軽鎖定常領域を有する。重鎖定常領域は、野生型ヒトＦｃ領域、または１つもしくは複数のアミノ酸置換を含むヒトＦｃ領域であり得る。抗体は、免疫グロブリンの２つの重鎖間のジスルフィド結合を安定化する変異、例えば、当該分野で開示された（例えば、Angal et al, Mol. Immunol, 30: 105-08 (1993)）ようなＩｇＧ４のヒンジ領域中の変異を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００５／００３７０００号明細書も参照のこと。重鎖定常領域は、抗体の特性を改変する（例えば、以下のうち１つまたは複数を減少させる：Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、脱アミド、補体への結合、またはメチオニン酸化）置換もまた有し得る。一部の例では、抗体は、米国特許第５，６２４，８２１号明細書および米国特許第５，６４８，２６０号明細書に記載されるものなどの変異を有し得る。一部の実施形態では、抗体は、エフェクター機能を低減または排除するために改変される。一部の実施形態では、重鎖定常領域は、以下の変異のうち１つまたは複数を有する：Ｓ２２８Ｐ；Ｎ２９７ＱおよびＴ２９９Ａ（Ｋａｂａｔに従う番号付け）。重鎖定常領域は、キメラであり得る、例えば、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４アイソタイプのＩｇＧ抗体のＣＨＩおよびＣＨ２ドメイン、ならびにＩｇＧｌアイソタイプのＩｇＧ抗体由来のＣＨ３ドメインを含み得る（例えば、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１２／０１００１４０号明細書を参照のこと）。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプのＩｇＧ抗体のＣＨＩおよびＣＨ２ドメイン、ならびにＩｇＧｌアイソタイプのＩｇＧ抗体由来のＣＨ３ドメインを含むキメラ定常領域を有し、Ｓ２２８ＰおよびＮ２９７Ｑ変異をさらに含有する（Ｋａｂａｔに従う番号付け）。
【０１８３】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体の抗原結合性断片もまた、本開示によって包含される。一部の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合分子は、（ｉ）単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）；（ｉｉ）ダイアボディ；（ｉｉｉ）ｓｃ（Ｆｖ）２；（ｉｖ）抗体のポリペプチド鎖；（ｖ）Ｆ（ａｂ’）２；もしくは（ｖｉ）Ｆ（ａｂ）を含むまたはそれらからなる。一実施形態では、抗原結合性断片はＦａｂ分子である。抗原結合性断片（Ｆａｂ断片）は、抗原に結合する、抗体上の領域である。これは、重鎖および軽鎖の各々の１つの定常ドメインおよび１つの可変ドメインから構成される。これらのドメインは、パラトープ、即ち、抗原結合部位を形づくる。酵素パパインは、免疫グロブリンモノマーを２つのＦａｂ断片および１つのＦｃ断片へと切断するために使用され得る。組換え方法もまた、Ｆａｂ分子を作製するために使用され得る。別の実施形態では、抗原結合性断片は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。ｓｃＦｖは、抗体の重鎖および軽鎖の可変領域から構成される。これは、Ｆａｂ断片の半分のサイズしかないが、親免疫グロブリンの元の特異性をなおも保持する。ＳｃＦｖを作製する方法は、当該分野で周知である（例えば、Ahmad et al, Clinical and Developmental Immunology, vol. 2012, Article ID 980250, 15 pages, 2012. doi: 10.1 155/2012/980250を参照のこと）。
【０１８４】
ある特定の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合分子は、標的化部分であり得る。これらの標的化部分は、目的の薬剤（例えば、治療剤、低分子薬物）を細胞に運搬するのに有用である。
【０１８５】
本開示は、例えば、少なくとも１つの異種部分と連結および／またはコンジュゲートおよび／または他の方法で関連した、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合性断片のうち少なくとも１つを含む、「キメラ分子」もまた提供する。ある特定の実施形態では、異種部分は、細胞またはその局所的環境に運搬または送達される薬剤である。そのような薬剤は、例えば、化学療法剤などの治療剤であり得る。本明細書に開示されるキメラ分子は、（ｉ）本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合分子（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）、および（ｉｉ）少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ）の異種部分（例えば、治療的部分、化学療法剤、半減期延長部分）を含み、１つまたは複数のリンカーを任意選択で含む、任意の分子を包含する。一部の実施形態では、キメラ分子は、キメラタンパク質、即ち、その全ての構成成分（異種部分および／またはリンカー）がポリペプチドであるキメラ分子である。他のキメラ分子は、非ポリペプチド異種部分（例えば、ＰＥＧ、脂質、炭水化物、核酸、低分子治療剤、放射性核種、蛍光プローブなど）および／または非ポリペプチドリンカーを含み得る。
【０１８６】
一部の実施形態では、キメラ分子は、第２の供給源に由来する第２のアミノ酸配列に共有結合的または非共有結合的に結合した、第１の供給源に由来する第１のアミノ酸配列を含み、この第１および第２の供給源は、同じではない。同じではない第１の供給源および第２の供給源には、２つの異なる生物学的実体、または同じ生物学的実体由来の２つの異なるタンパク質、または１つの生物学的実体および１つの非生物学的実体が含まれ得る。キメラ分子は、例えば、少なくとも２つの異なる生物学的供給源に由来するタンパク質を含み得る。生物学的供給源は、任意の合成により生産されたのではない核酸またはアミノ酸配列（例えば、本明細書にさらに記載されるような、ゲノムまたはｃＤＮＡ配列、プラスミドまたはウイルスベクター、ネイティブビリオン、または上記のいずれかの変異体もしくはアナログ）を含み得る。合成供給源は、化学的に生産されたのであって生物学的系によって生産されたのではない（例えば、アミノ酸配列の固相合成）、タンパク質または核酸配列を含み得る。キメラ分子は、少なくとも２つの異なる合成供給源に由来するタンパク質、または少なくとも１つの生物学的供給源および少なくとも１つの合成供給源に由来するタンパク質もまた含み得る。キメラ分子は、任意の供給源に由来する核酸、または任意の供給源に由来する有機もしくは無機低分子に共有結合的または非共有結合的に連結された、第１の供給源に由来する第１のアミノ酸配列もまた含み得る。キメラ分子は、第１のアミノ酸配列と第２のアミノ酸配列との間、または第１のアミノ酸配列と核酸との間、または第１のアミノ酸配列と有機もしくは無機低分子との間に、リンカー分子もまた含み得る。
【０１８７】
本明細書に開示されるキメラ分子の異種部分（単数または複数）は、例えば、予防剤および／または治療剤（例えば、化学療法剤または鎮痛薬）、薬物動態学的（ＰＫ）特性を改善することが可能な分子（例えば、血漿半減期延長部分）、および検出可能な部分（例えば、蛍光分子または放射性核種）を含み得る、それらからなり得る、またはそれらから本質的になり得る。一部の実施形態では、異種部分は、凝固因子（例えば、第ＶＩＩ因子）を含む。一部の実施形態では、異種部分は、そのような異種部分を欠くキメラ分子の物理化学的特性を改変し得る分子を含む。他の実施形態では、キメラ分子中への異種部分の取込みは、その生物学的活性または機能に顕著な影響を与えることなく、１つまたは複数の薬物動態学的特性を改善できる。他の実施形態では、異種部分は、本発明のキメラ分子またはその断片の安定性を増加させる。
【０１８８】
一部の実施形態では、異種部分は、少なくとも約１０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２５００、３０００または４０００アミノ酸を含む、それから本質的になる、またはそれからなるポリペプチドである。他の実施形態では、異種部分は、約１００〜約２００アミノ酸、約２００〜約３００アミノ酸、約３００〜約４００アミノ酸、約４００〜約５００アミノ酸、約５００〜約６００アミノ酸、約６００〜約７００アミノ酸、約７００〜約８００アミノ酸、約８００〜約９００アミノ酸または約９００〜約１０００アミノ酸を含む、それから本質的になる、またはそれからなるポリペプチドである。
【０１８９】
一部の実施形態では、キメラ分子は、「半減期延長部分」である少なくとも１つの異種部分を含む。半減期延長部分は、例えば、（ｉ）ＸＴＥＮポリペプチド；（ｉｉ）Ｆｃ；（ｉｉｉ）アルブミン、（ｉｖ）アルブミン結合ポリペプチドまたは脂肪酸、（ｖ）ヒト絨毛性ゴナドトロピンのβサブユニットのＣ末端ペプチド（ＣＴＰ）、（ｖｉ）ＰＡＳ；（ｖｉｉ）ＨＡＰ；（ｖｉｉｉ）トランスフェリン；（ｉｘ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；（ｘ）ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、（ｘｉ）ポリシアル酸（ＰＳＡ）；（ｘｉｉ）クリアランス受容体、またはクリアランス受容体へのキメラ分子の結合を遮断するその断片；（ｘｉｉｉ）低複雑度ペプチド；（ｘｉｖ）ｖＷＦ；または（ｘｖ）それらの任意の組合せを含み得る。一部の実施形態では、半減期延長部分は、Ｆｃ領域を含む。他の実施形態では、半減期延長部分は、リンカーによって融合された２つのＦｃ領域を含む。例示的な異種部分には、例えば、ＦｃＲｎ結合部分（例えば、完全Ｆｃ領域、またはＦｃＲｎに結合するその部分）、単鎖Ｆｃ領域（ｓｃＦｃ領域、例えば、米国特許出願公開第２００８／０２６０７３８号明細書、ならびに国際公開第２００８／０１２５４３号パンフレットおよび国際公開第２００８／１４３９５４５号パンフレットに記載される）、またはプロセシング可能なｓｃＦｃ領域もまた含まれる。一部の実施形態では、異種部分は、非ポリペプチド部分、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、ポリシアル酸、またはこれらの部分の任意の誘導体、バリアントもしくは組合せのための結合部位を含み得る。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、本開示のキメラ分子は、そのような異種部分を欠く対応するキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期と比較して、そのキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を増加させる少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つまたは４つ）の半減期延長部分を含む。キメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期は、当業者に公知の任意の方法、例えば、活性アッセイ（発色性アッセイまたは一段階凝固ａＰＴＴアッセイ）、ＥＬＩＳＡなどによって決定できる。一部の実施形態では、１つまたは複数の半減期延長部分の存在は、そのような１つまたは複数の半減期延長部分を欠く対応するキメラ分子の半減期と比較して、そのキメラ分子の半減期を増加させる。半減期延長部分を含むキメラ分子の半減期は、そのような半減期延長部分を欠く対応するキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期よりも、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約６倍、少なくとも約７倍、少なくとも約８倍、少なくとも約９倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１１倍または少なくとも約１２倍長い。
【０１９１】
一実施形態では、半減期延長部分を含むキメラ分子の半減期は、そのような半減期延長部分を欠く対応するキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期よりも、約１．５倍〜約２０倍、約１．５倍〜約１５倍または約１．５倍〜約１０倍長い。別の実施形態では、半減期延長部分を含むキメラ分子の半減期は、そのような半減期延長部分を欠く対応するキメラ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期と比較して、約２倍〜約１０倍、約２倍〜約９倍、約２倍〜約８倍、約２倍〜約７倍、約２倍〜約６倍、約２倍〜約５倍、約２倍〜約４倍、約２倍〜約３倍、約２．５倍〜約１０倍、約２．５倍〜約９倍、約２．５倍〜約８倍、約２．５倍〜約７倍、約２．５倍〜約６倍、約２．５倍〜約５倍、約２．５倍〜約４倍、約２．５倍〜約３倍、約３倍〜約１０倍、約３倍〜約９倍、約３倍〜約８倍、約３倍〜約７倍、約３倍〜約６倍、約３倍〜約５倍、約３倍〜約４倍、約４倍〜約６倍、約５倍〜約７倍または約６倍〜約８倍延長される。
【０１９２】
抗体の特徴付け
本明細書に記載される抗体のＬＩＬＲＢ２結合特性は、任意の標準的な方法、例えば、以下の方法のうち１つまたは複数によって測定され得る：ＯＣＴＥＴ（登録商標）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＥＩＡ（酵素イムノアッセイ）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）および蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）。
【０１９３】
目的のタンパク質（抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその機能的断片）と標的（例えば、ＬＩＬＲＢ２）との結合相互作用は、ＯＣＴＥＴ（登録商標）システムを使用して分析され得る。この方法では、ＦｏｒｔｅＢｉｏ社製の機器（例えば、ＯＣＴＥＴ（登録商標）ＱＫｅおよびＱＫ）のいくつかのバリエーションのうち１つが、タンパク質相互作用、結合特異性およびエピトープマッピングを決定するために使用され得る。ＯＣＴＥＴ（登録商標）システムは、カスタムチップに沿って下に向かい次いでセンサーに戻る偏光における変化を測定することによって、リアルタイム結合をモニタリングするための容易な方法を提供する。
【０１９４】
目的のタンパク質（抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその機能的断片）と標的（例えば、ＬＩＬＲＢ２）との結合相互作用は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して分析され得る。ＳＰＲまたはＢｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（ＢＩＡ）は、いずれの相互作用物も標識することなしに、生体分子特異的（biospecific）な相互作用をリアルタイムで検出する。ＢＩＡチップの結合表面における質量の変化（結合事象を示す）は、表面近傍での光の屈折率の変更（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学的現象）を生じる。屈折性における変化は、生物学的分子間のリアルタイム反応の指標として測定される検出可能なシグナルを生じる。ＳＰＲを使用するための方法は、例えば、米国特許第５，６４１，６４０号明細書；Raether (1988) Surface Plasmons Springer Verlag；Sjolander and Urbaniczky (1991) Anal. Chem. 63:2338-2345；Szabo et al. (1995) Curr. Opin. Struct. Biol. 5:699-705、およびＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）によって提供されるオンラインリソースに記載されている。ＳＰＲからの情報は、標的への生体分子の結合についての、平衡解離定数（Ｋｄ）、ならびにＫｏｎおよびＫｏｆｆを含む動力学的パラメーターの正確な定量的尺度を提供するために使用され得る。
【０１９５】
エピトープもまた、ＢＩＡＣＯＲＥクロマトグラフィー技術を使用して、ヒトＬＩＬＲＢ２への結合について互いに競合する異なる抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその機能的断片の能力を評価することによって、直接マッピングされ得る（Pharmacia BIAtechnology Handbook, “Epitope Mapping”, Section 6.3.2, (May 1994)；Johne et al. (1993) J. Immunol. Methods, 160:191-198もまた参照のこと）。
【０１９６】
酵素イムノアッセイを用いる場合、抗体を含むサンプル、例えば、抗体産生細胞の培養上清、または精製された抗体が、抗原コーティングされたプレートに添加される。アルカリホスファターゼなどの酵素で標識された二次抗体が添加され、プレートがインキュベートされ、洗浄後、ｐ−ニトロフェニルリン酸などの酵素基質が添加され、抗原結合活性を評価するために吸光度が測定される。
【０１９７】
抗体を評価するためのさらなる一般的なガイダンス、例えば、ウエスタンブロットおよび免疫沈降アッセイは、Antibodies: A Laboratory Manual, ed. by Harlow and Lane, Cold Spring Harbor press (1988)において見出すことができる。
【０１９８】
抗体のアンタゴニスト的およびアゴニスト的生物活性の特徴付けのために、本発明者らは、パイロットスクリーニング戦略として、ＬＰＳ刺激されたＰＢＭＣ（最優先、主に骨髄細胞に標的化）およびＯＫＴ３刺激されたＰＢＭＣ（主にＴ細胞に標的化）を実施した。アンタゴニストＡｂは、減少した／未変化のＩＬ−１０分泌と、また一方では増加した／未変化のＴ細胞増殖と共に、ＴＮＦａを増加させ得る（ＴＮＦａ＞１．５倍、ＩＬ−１０＜１．１倍）。他方、アゴニストＡｂは、減少した／未変化のＴＮＦａ分泌と、また一方では減少したＴ細胞増殖と一緒に、ＩＬ−１０分泌を増加させ得る（ＩＬ−１０＞１．２倍、ＴＮＦａ＜１．１倍およびＴ細胞増殖＜０．８倍）。ＬＰＳ刺激されたＰＢＭＣおよびＯＫＴ３刺激されたＰＢＭＣに対するＡｂ候補の効果は、表３〜６に示される。Ｔ細胞ベースのアッセイからスクリーニングされたＡｂ候補のアンタゴニストおよびアゴニスト生物活性が、骨髄細胞ベースのアッセイからのものと大部分一致しているが、少数が一致していない場合があることに注目すべきである。さらに、これらのＡｂ候補を、試験ＬＩＬＲＢ２レポーターアッセイ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＨＬＡ−ＤＲ、ＰＤ−Ｌ１およびＣＤ１４、ＣＤ１６によるＭ１／Ｍ２分化／ヒトＭＤＳＣマーカー（図２Ｃ）、ならびに混合リンパ球反応（図３Ｃ）に供した。アンタゴニストは、Ｍ２分化を減少させ得（下方調節されたＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＰＤ−Ｌ１）、ＨＬＡ−ＤＲを増加させ得、ヒトＭＤＳＣ  ＣＤ３３＋ＣＤ１４＋ＣＤ１６＋を減少させ得るが、対照的に、アゴニストは、上記パラメーターを対抗調節（counter-regulate）または維持し得る。これらのアッセイは、Ａｂ候補の活性を決定するためまたはその効率／潜在力を比較するために、非常に重要なパラメーターを提供した。
【０１９９】
抗ＬＩＬＲＢ２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書に記載される抗体のＶＨおよびＶＬを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もまた、本明細書に提供される。一実施形態では、ＶＨは、配列番号９２に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２３に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号１６１に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含み；ＶＬは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号５３に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。一実施形態では、ＶＨは、配列番号２２５に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号２３０に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２および配列番号２４４に示されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３を含み；ＶＬは、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２０２に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２および配列番号２１６に示されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
【０２００】
ＣＡＲを作製する方法は、当該分野で公知である。
【０２０１】
本明細書に記載されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドもまた、本明細書に提供される。
【０２０２】
本明細書に記載されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターもまた、本明細書に提供される。
【０２０３】
本明細書に記載されるＣＡＲを含む細胞もまた、本明細書に提供される。本明細書に記載されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞もまた、本明細書に提供される。本明細書に記載されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む細胞もまた、本明細書に提供される。一実施形態では、細胞はＴ細胞である。一実施形態では、細胞はナチュラルキラー細胞である。一実施形態では、細胞はマクロファージである。
【０２０４】
本明細書に記載されるＣＡＲおよび適切な薬学的担体を含む医薬組成物もまた、本明細書に提供される。本明細書に記載されるＣＡＲを含む細胞および適切な薬学的担体を含む医薬組成物もまた、本明細書に提供される。本明細書に記載されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞および適切な薬学的担体を含む医薬組成物もまた、本明細書に提供される。別の態様では、本明細書に記載されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む細胞および適切な薬学的担体を含む医薬組成物が、本明細書に提供される。
【０２０５】
本明細書に記載されるＣＡＲを生産する方法であって、（ａ）本明細書に記載される細胞（例えば、本明細書に記載されるＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む細胞またはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含む細胞）を培養するステップ、および（ｂ）ＣＡＲを単離するステップを含む方法もまた、本明細書に提供される。
【０２０６】
さらなる薬剤
ＭＤＳＣ
ＭＤＳＣは、免疫系の重要な調節因子の１つとして最近認識されている。ＭＤＳＣは、骨髄前駆体、未熟なマクロファージ、未熟な顆粒球および未熟な樹状細胞を含む、骨髄起源の細胞の不均一な集団を示す。ＭＤＳＣは、マウスにおいて、Ｇｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃ＋単球性（Ｍ）細胞およびＧｒ１＋ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ＋顆粒球性（Ｇ）細胞へと分化および極性化する（Gabrilovich et al., Cancer Res. 67:425, 2007；Huang et al., Cancer Res. 66:1123-1131, 2006；Movahedi et al., Blood 111:4233-4244, 2008）。ヒトＭＤＳＣは、ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ１４LowＣＤ３３＋またはＬｉｎ−ＨＬＡ−ＤＲLow−ＣＤ３３＋骨髄細胞として特徴付けられる（Ostrand-Rosenberg et al., J. Immunol. 182:4499-4506, 2009；Raychaudhuri et al., Neurol. Oncol. 13:591-599, 2011）。１型古典的活性化様（Ｍ１）および２型代替的活性化様（Ｍ２）マクロファージの命名法を反映して、ＭＤＳＣは、Ｍ１細胞およびＭ２細胞（ｉＮＯＳ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−ｇＲ、ＭＨＣクラスＩおよびＣＣＲ７を発現するＭ１細胞、ならびにアルギナーゼ、ＩＬ−１０、ＣＤ３６、ＣＤ２０６およびＣＣＲ２を発現するＭ２細胞）へと分化および極性化され得る。腫瘍関連ＭＤＳＣは、腫瘍促進（pro-tumoral）活性および免疫抑制活性を有するＭ２様表現型を優勢に示す。Ｍ２細胞は、ＩＬ−１０、アルギナーゼ、ＩＬ−１０、Ｔｉｅ−２、ＣＤ３６、ＣＤ２０６、ＩＬ−４ＲおよびＣＣＲ２などのいくつかの増強されたシグネチャーマーカーによって、表現型的に特徴付けられる（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ１細胞は、ｉＮＯＳ、ＮＯ、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γＲ、ＭＨＣ  ＩおよびＣＣＲ７の発現における上昇を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ２細胞は、アルギナーゼ、ＣＣＬ２、ＣＣＬ５およびＭＭＰ−９の発現を上方調節する。対照的に、Ｍ１細胞は、上昇した発現レベルのＴＮＦ−α、ＦａｓおよびＩＣＡＭ−１を示す。
【０２０７】
ＭＤＳＣは、複数の機構を介したＴ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞、マクロファージおよび他の免疫細胞との相互連絡を介して免疫抑制を発揮する。ＭＤＳＣが他の免疫細胞とどのようにクロストークするかの詳細は、Bunt et al. (J. Leukoc. Biol. 85:996-1004, 2009)、Ostrand-Rosenberg et al. (Nat. Rev. Immunol. 12:253-268, 2012)およびSinha et al. (J. Immunol. 179:977-983, 2007)に記載されている。Ｔ細胞に関する限り、ＭＤＳＣは、エフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）の不活性化およびアポトーシスを誘導でき（例えば、Apolloni et al., J. Immunol. 165:6723-6730, 2000を参照のこと）、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を拡大増殖させることができる（例えば、Adeegbe et al., Cell Transplant. 20:941-954, 2011を参照のこと）。ＭＤＳＣによるＴ細胞抑制およびＴｒｅｇ拡大増殖の調節は、細胞接触依存的、ＭＨＣクラスＩＩ依存的、ＮＯ依存的および／またはアルギナーゼ依存的である。Ｍ２細胞は、Ｔ細胞の共培養物において、それらのＭ１様対応物と比較して、Ｔｅｆｆの活性化および増殖を抑制する増強された能力を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ２細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏの両方において、Ｍ１細胞よりも、Ｔｒｅｇの拡大増殖においてより高い潜在力を有する（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｔｒｅｇ細胞におけるＭ２細胞誘導性の増加は、ＩＬ−１０媒介性、ＩＬ−４媒介性およびＩＬ−１３媒介性であり、アルギナーゼ依存的であると思われる（Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011）。Ｍ１／Ｍ２細胞の機能性と同様に、Ｇ１細胞およびＧ２細胞は、それぞれ、抗腫瘍活性および腫瘍促進活性を有する（Fridlender et al., Cancer Cell 16:183-194, 2009）。
【０２０８】
１つの表現型から他の表現型へのＭＤＳＣサブセットの極性化には、機能的変化が伴う。Ｍ２細胞は、主に、アルギナーゼおよび免疫抑制性サイトカインにおける増加が関与する増強された免疫抑制によって、腫瘍成長を加速させる（例えば、Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011を参照のこと）。Ｍ１細胞は、直接的腫瘍死滅を増加させ、フリーラジカル、デスリガンドおよび免疫賦活性サイトカインの増大を介して抗腫瘍免疫の発達を促進する（例えば、Ma et al., Immunity 34:385-395, 2011を参照のこと）。Ｍ１／Ｍ２極性化のバランスは、疾患および健康に対して顕著な影響を有し得る。
【０２０９】
ＭＤＳＣを調製および単離する方法は、当該分野で公知である。例えば、ＭＤＳＣは、本明細書に記載される異なるＭＤＳＣサブセットの特異的タンパク質マーカーのいずれかを認識する抗体を使用する蛍光補助細胞選別を使用して単離され得る。ＭＤＳＣを調製および単離するための例示的な方法は、米国特許出願公開第２００８／０３０５０７９号明細書および国際公開第１１／０８７７９５号パンフレット（その各々が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０２１０】
動員剤
一部の実施形態では、組成物は、１種もしくは複数の動員剤をさらに含む、または１種もしくは複数の動員剤と組み合わせて使用される。動員剤は、哺乳動物の骨髄からのＭＤＳＣの放出を刺激する。動員剤の非限定的な例には、例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、シクロホスファミド、ＡＭＤ３１００、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド（Ｆｌｔ３−Ｌ）、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ−３４、ＴＳＬＰ−１、ＳＣＦ、ＦＫ５６０、Ｓ１００  Ａ８およびＳ１００  Ａ９が含まれる。
【０２１１】
一部の実施形態では、本開示は、動員剤ならびに少なくとも１種のＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ４および／またはＬＩＬＲＢ５アゴニストを含有する組成物を提供する。一部の実施形態では、組成物は、動員剤、少なくとも１種のＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ４および／またはＬＩＬＲＢ５アゴニスト、ならびに少なくとも１種のＪＮＫ阻害剤を含有する。一部の実施形態では、本開示は、動員剤をさらに含むがＭＤＳＣは含まない組成物を提供する。
【０２１２】
ＪＮＫ阻害剤
一部の実施形態では、組成物は、少なくとも１種のＪＮＫ阻害剤をさらに含む、または少なくとも１種のＪＮＫ阻害剤と組み合わせて使用される。ＪＮＫ阻害剤の非限定的な例には、例えば、ＢＩ−７８Ｄ３、ＳＰ６００１２５、ＡＥＧ  ３４８２、ＪＩＰ−１、ＳＵ  ３３２７、ＴＣＳ  ＪＮＫ  ５ａおよびＴＣＳ  ＪＮＫ  ６ｏが含まれる。ＪＮＫ阻害剤のさらなる例は、その各々が参照によって本明細書に組み込まれる、国際公開第００／３５９０６号パンフレット、国際公開第００／３５９０９号パンフレット、国際公開第００／３５９２１号パンフレット、国際公開第００／６４８７２号パンフレット、国際公開第０１／１２６０９号パンフレット、国際公開第０１／１２６２１号パンフレット、国際公開第０１／２３３７８号パンフレット、国際公開第０１／２３３７９号パンフレット、国際公開第０１／２３３８２号パンフレット、国際公開第０１／４７９２０号パンフレット、国際公開第０１／９１７４９号パンフレット、国際公開第０２／０４６１７０号パンフレット、国際公開第０２／０６２７９２号パンフレット、国際公開第０２／０８１４７５号パンフレット、国際公開第０２／０８３６４８号パンフレットおよび国際公開第０３／０２４９６７号パンフレットに記載されている。
【０２１３】
抗炎症剤
一部の例では、組成物は、１種もしくは複数の抗炎症剤もまた含有し得、または１種もしくは複数の抗炎症剤と組み合わせて使用される。抗炎症剤には、例えば、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ、例えば、シクロオキシゲナーゼＩ（ＣＯＸ  Ｉ）阻害剤およびシクロオキシゲナーゼＩＩ（ＣＯＸ−ＩＩ）阻害剤）、免疫選択的抗炎症誘導体（ＩｍＳＡＩＤ）、および生物製剤が含まれる。本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な抗炎症剤のいずれかが、本明細書に記載される組成物中に含まれ得る。
【０２１４】
ＮＳＡＩＤの非限定的な例は、サリチル酸塩（例えば、アスピリン、ジフルシナール（diflusinal）およびサルサラート）、プロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン、デクスイブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、デクスケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジンおよびロキソプロフェン）、酢酸誘導体（例えば、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ケトロラク、ジクロフェナクおよびナブメトン）、エノール酸（enolic acid）誘導体（例えば、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカムおよびイソキシカム）、フェナム酸誘導体（例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸およびトルフェナム酸）、スルホンアニリド（sulphonanilide）（例えば、ニメスリド）、リコフェロン（licofelone）およびクロニキシン酸リジン（lysine clonixinate）である。一部の実施形態では、ＮＳＡＩＤは、ＣＯＸ−Ｉ阻害剤またはＣＯＸ−ＩＩ阻害剤である。ＣＯＸ−Ｉ阻害剤の非限定的な例には、アスピリン、イブプロフェンおよびナプロキセンが含まれる。ＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の非限定的な例には、セレコキシブ、バルデコキシブおよびロフェコキシブが含まれる。
【０２１５】
ＩｍＳＡＩＤの非限定的な例には、ＦＥＧ（Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ）、そのＤ−異性体ｆｅＧ、およびＳＧＰ−Ｔペプチドが含まれる。コルチコステロイドの非限定的な例には、ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チキソコルトール（tixocortol pivalate）、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノロン、ハルシノニド、ベタメタゾン、デキサメタゾンおよびフルオコルトロンが含まれる。生物製剤の非限定的な例には、トシリズマブ、セルトリズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、アナキンラ、アバタセプト、エファリズマブ、インフリキシマブ、リツキシマブおよびゴリムマブが含まれる。
【０２１６】
免疫抑制剤
本明細書に記載される組成物は、１種もしくは複数の免疫抑制剤もまた含有し得、または１種もしくは複数の免疫抑制剤と組み合わせて使用され得る。免疫抑制剤の非限定的な例には、ミコフェノール酸塩、シクロスポリン（ciclosporin）、シクロスポリン（cyclosporine）、タクロリムス、シロリムスおよびピメクロリムスが含まれる。さらなる免疫抑制剤は、当該分野で公知である。
【０２１７】
化学療法剤
一部の実施形態では、組成物は、１種もしくは複数の化学療法剤をさらに含有する、または１種もしくは複数の化学療法剤と組み合わせて使用される。化学療法剤の非限定的な例には、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシルおよびメルファラン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロンおよびバルルビシン）、タキサン（例えば、パクリタキセル（およびドセタキセル）、エポチロン、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（例えば、ボリノスタットおよびロミデプシン）、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシドおよびタフルポシド（tafluposide））、キナーゼ阻害剤（例えば、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブおよびビスモデギブ）、ベバシズマブ、セツキシマブ、イピリムマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、ベムラフェニブ、ハーセプチン、ヌクレオチドアナログ（例えば、アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、ドキシフルリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メルカプトプリン、メトトレキサートおよびチオグアニン）、ペプチド抗生物質（例えば、ブレオマイシンおよびアクチノマイシン）、白金ベースの薬剤（例えば、カルボプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチン）、レチノイド（例えば、トレチノイン、アリトレチノインおよびベキサロテン）およびビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよびビノレルビン）が含まれる。
【０２１８】
鎮痛薬
一部の実施形態では、組成物は、１種もしくは複数の鎮痛薬をさらに含有し得、または１種もしくは複数の鎮痛薬と組み合わせて使用される。本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な鎮痛薬のいずれかが、本明細書に記載される組成物中に含まれ得る。鎮痛薬の非限定的な例には、オピオイド薬物（例えば、モルヒネ、アヘン、コデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、ジアモルヒネ、ジヒドロモルヒネ、ペチジン、ブプレノルフィン、フェンタニル、メサドン、メペリジン、ペンタゾシン、ジピパノン（dipipanone）およびトラマドール）、アセトアミノフェン、ベンラファキシン、フルピルチン、ネホパム、ガバペンチン、プレガバリン、オルフェナドリン、シクロベンザプリン、トラゾドン、クロニジン、デュロキセチンおよびアミトリプチリンが含まれる。
【０２１９】
免疫チェックポイント阻害剤
一部の実施形態では、組成物は、１種もしくは複数の免疫チェックポイント阻害剤をさらに含有し得、または１種もしくは複数の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用される。本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の例示的な鎮痛薬のいずれかが、本明細書に記載される組成物中に含まれ得る。免疫チェックポイント阻害剤の非限定的な例には、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）、Ｔ細胞膜タンパク質３（ＴＩＭ３）、ＣＤ１６０、またはアデノシンＡ２ａ受容体（Ａ２ａＲ）のアンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗体）、ならびにグルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子受容体（ＧＩＴＲ）、誘導性Ｔ細胞共刺激剤（ＩＣＯＳまたはＣＤ２７８）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ４０、リンホトキシンアルファ（ＬＴアルファ）、またはＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様、誘導性発現を示し、ＨＶＥＭについて単純ヘルペスウイルス糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球によって発現される受容体）のアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）が含まれる。具体的な実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−１のアンタゴニスト（例えば、ＰＤ−１のアンタゴニスト抗体）である。具体的な実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニスト（例えば、ＰＤ−Ｌ１のアンタゴニスト抗体）である。
【０２２０】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体を生産する方法
本開示の抗ＬＩＬＲＢ２抗体（または抗体もしくはその機能的断片の抗原結合ドメイン）は、細菌または真核細胞において産生され得る。目的のポリペプチドを生産するために、このポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが構築され、発現ベクター中に導入され、次いで、適切な宿主細胞において発現される。標準的な分子生物学の技術が、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収するために使用される。
【０２２１】
抗体が細菌細胞（例えば、大腸菌（E. coli））において発現される場合、発現ベクターは、細菌細胞中でのベクターの増幅を可能にする特徴を有するべきである。さらに、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１またはＸＬ１−Ｂｌｕｅなどの大腸菌（E. coli）が宿主として使用される場合、ベクターは、プロモーター、例えば、大腸菌（E. coli）における効率的な発現を可能にできるｌａｃＺプロモーター（Ward et al., 341:544-546 (1989)）、ａｒａＢプロモーター（Better et al., Science, 240:1041-1043 (1988)）またはＴ７プロモーターを有さなければならない。そのようなベクターの例には、例えば、Ｍ１３シリーズのベクター、ｐＵＣシリーズのベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ−５Ｘ−１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ  ｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、およびｐＥＴ（この発現ベクターが使用される場合、宿主は、好ましくは、Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が含まれる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含有し得る。大腸菌（E. coli）のペリプラズム中への産生のために、ｐｅｌＢシグナル配列（Lei et al., J. Bacteriol., 169:4379 (1987)）が、抗体分泌のためのシグナル配列として使用され得る。細菌発現のために、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法が、発現ベクターを細菌細胞中に導入するために使用され得る。
【０２２２】
抗体がＣＨＯ、ＣＯＳ、２９３、２９３ＴおよびＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞において発現される場合、発現ベクターは、これらの細胞における発現に必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Mulligan et al., Nature, 277:108 (1979)）、ＭＭＬＶ−ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Mizushima et al., Nucleic Acids Res., 18:5322 (1990)）またはＣＭＶプロモーターを含む。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加えて、組換え発現ベクターは、さらなる配列、例えば、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択可能なマーカー遺伝子を保有し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞の選択を促進する（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号明細書、米国特許第４，６３４，６６５号明細書および米国特許第５，１７９，０１７号明細書を参照のこと）。例えば、典型的には、選択可能なマーカー遺伝子は、ベクターが導入された宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシンまたはメトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択可能なマーカーを有するベクターの例には、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ−ＲＳＶ、ｐＢＫ−ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶおよびｐＯＰ１３が含まれる。
【０２２３】
一実施形態では、抗体は、哺乳動物細胞において産生される。ポリペプチドを発現させるための例示的な哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（例えば、Kaufman and Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601 621に記載されるようなＤＨＦＲ選択可能なマーカーと共に使用される、Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220に記載されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ヒト胎児由来腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球性細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞、ならびにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物由来の細胞が含まれる。例えば、細胞は、乳腺上皮細胞である。
【０２２４】
本開示の抗体は、宿主細胞の内側または外側（例えば、培地）から単離され得、実質的に純粋で均一な抗体として精製され得る。ポリペプチドのために一般に使用される単離および精製のための方法が、本明細書に記載される抗体の単離および精製のために使用され得、任意の特定の方法に限定されない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、濾過、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析および再結晶を適切に選択し組み合わせることによって、単離および精製され得る。クロマトグラフィーには、例えば、アフィニティクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィーおよび吸着クロマトグラフィーが含まれる（Strategies for Protein Purification and Characterization: A Laboratory Course Manual. Ed Daniel R. Marshak et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1996）。クロマトグラフィーは、液相クロマトグラフィー、例えば、ＨＰＬＣおよびＦＰＬＣを使用して実施され得る。アフィニティクロマトグラフィーに使用されるカラムには、プロテインＡカラムおよびプロテインＧカラムが含まれる。プロテインＡカラムを使用するカラムの例には、Ｈｙｐｅｒ  Ｄ、ＰＯＲＯＳおよびＳｅｐｈａｒｏｓｅ  ＦＦ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が含まれる。本開示は、これらの精製方法を使用して高度に精製される抗体もまた含む。
【０２２５】
本開示は、本明細書に開示される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合分子をコードする核酸分子または核酸分子のセットもまた提供する。一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗ＬＩＬＲ３抗体またはその抗原結合分子の軽鎖を含むポリペプチド鎖をコードする核酸分子を含む。一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される抗ＬＩＬＲ３抗体またはその抗原結合分子の重鎖を含むポリペプチド鎖をコードする核酸分子を含む。
【０２２６】
そのような核酸分子もしくは核酸分子のセットまたはそれらの相補体を含むベクターまたはベクターのセット、ならびにベクターを含む宿主細胞もまた提供される。
【０２２７】
本開示は、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２もしくはその抗原結合分子またはキメラ分子を生産するための方法もまた提供し、そのような方法は、本明細書に開示される宿主細胞を培養するステップ、および抗体、その抗原結合分子またはキメラ分子を培養培地から回収するステップを含む。
【０２２８】
種々の方法が、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子を組換え生産するために利用可能である。コードの縮重に起因して、種々の核酸配列がポリペプチドのアミノ酸配列をコードすることが理解されよう。所望のポリヌクレオチドは、ｄｅ  ｎｏｖｏ固相ＤＮＡ合成によって、または以前に調製されたポリヌクレオチドのＰＣＲ変異誘発によって、生産され得る。
【０２２９】
組換え生産のために、ポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）をコードするポリヌクレオチド配列が、適切な発現ビヒクル、即ち、挿入されたコード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含有するベクター、またはＲＮＡウイルスベクターの場合には、複製および翻訳に必要なエレメントを含むベクター中に挿入される。
【０２３０】
ポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）をコードする核酸は、適切なリーディングフレームでベクター中に挿入される。次いで、発現ベクターは、ポリペプチドを発現することになる適切な標的細胞中にトランスフェクトされる。当該分野で公知のトランスフェクション技術には、リン酸カルシウム沈殿（Wigler et al. 1978, Cell 14:725）およびエレクトロポレーション（Neumann et al. 1982, EMBO J. 1 :841）が含まれるがこれらに限定されない。種々の宿主−発現ベクター系が、本明細書に記載されるポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）を真核細胞において発現させるために利用され得る。一実施形態では、真核細胞は、哺乳動物細胞（例えば、２９３細胞、ＰｅｒＣ６、ＣＨＯ、ＢＨＫ、Ｃｏｓ、ＨｅＬａ細胞）を含む動物細胞である。ポリペプチドが真核細胞において発現される場合、ポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）をコードするＤＮＡは、ポリペプチドの分泌を可能にするシグナル配列もまたコードし得る。当業者は、ポリペプチドが翻訳される間に、シグナル配列が細胞によって切断されて、成熟キメラ分子を形成することを理解する。種々のシグナル配列が当該分野で公知であり、当業者はこれに精通している。あるいは、シグナル配列が含まれない場合、ポリペプチド（例えば、本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合分子、または本明細書に開示されるキメラ分子のいずれか）は、細胞を溶解させることによって回収され得る。
【０２３１】
医薬組成物
本開示は、以下のうち１つまたは複数：（ｉ）本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体またはその抗原結合分子；（ｉｉ）本明細書に開示されるＬＩＬＲＢ２抗体もしくは抗原結合分子をコードする核酸分子または核酸分子のセット；または（ｉｉｉ）本明細書に開示されるベクターもしくはベクターのセット、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物もまた提供する。
【０２３２】
本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片は、例えば、本明細書に記載される障害を処置するために、対象への投与のための医薬組成物として製剤化され得る。典型的には、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合性の任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含み得る（例えば、Berge, S.M., et al. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19を参照のこと）。
【０２３３】
医薬製剤は、十分に確立された技術であり、例えば、Gennaro (ed.), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2000) (ISBN: 0683306472)；Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Ed., Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1999) (ISBN: 0683305727)；およびKibbe (ed.), Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3rd ed. (2000) (ISBN: 091733096X)にさらに記載されている。
【０２３４】
医薬組成物は、種々の形態であり得る。これらには、例えば、液体、半固体および固体の剤形、例えば、液体溶液剤（例えば、注射可能な液剤および注入可能な液剤）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム剤および坐剤が含まれる。好ましい形態は、意図した投与様式および治療適用に依存し得る。典型的には、本明細書に記載される薬剤のための組成物は、注射可能な液剤または注入可能な液剤の形態である。
【０２３５】
一実施形態では、本明細書に記載される抗体は、賦形剤材料、例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム（sodium dibasic phosphate）七水和物、リン酸一水素ナトリウム（sodium monobasic phosphate）、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）−８０および安定剤を用いて製剤化される。抗体は、例えば、適切な濃度で緩衝溶液中に提供され得、２〜８℃で貯蔵され得る。一部の他の実施形態では、組成物のｐＨは、約５．５から７．５の間（例えば、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５）である。
【０２３６】
医薬組成物は、製剤化される際の抗体の凝集を低減させる薬剤もまた含み得る。凝集低減剤の例には、メチオニン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グリシンおよびグルタミン酸からなる群から選択される１種または複数のアミノ酸が含まれる。これらのアミノ酸は、約０．５ｍＭ〜約１４５ｍＭ（例えば、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２５ｍＭ、５０ｍＭ、１００ｍＭ）の濃度になるように、製剤に添加され得る。医薬組成物は、糖（例えば、スクロース、トレハロース、マンニトール、ソルビトールまたはキシリトール）および／または浸透圧改変剤（例えば、塩化ナトリウム、マンニトールまたはソルビトール）および／または界面活性剤（例えば、ポリソルベート−２０またはポリソルベート−８０）もまた含み得る。
【０２３７】
組成物は、液剤、マイクロエマルジョン剤、分散剤、リポソーム剤、または高濃度での安定な貯蔵に適切な他の秩序立った構造として製剤化され得る。無菌の注射可能な溶液は、必要量の本明細書に記載される薬剤を、上に列挙された成分のうち１つまたはそれらの組合せと共に適切な溶媒中に取込み、その後必要に応じて濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散剤は、本明細書に記載される薬剤を、基本的分散媒および上に列挙されたものからの必要な他の成分を含有する無菌のビヒクル中に組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な液剤の調製のための無菌の散剤の場合、調製の好ましい方法は、以前に無菌濾過されたその溶液から、本明細書に記載される薬剤＋任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥およびフリーズドライである。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。注射可能な組成物の延長された吸収は、ステアリン酸塩およびゼラチンなどの、吸収を遅延させる薬剤を組成物中に含めることによってもたらされ得る。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、抗体は、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む制御放出製剤など、迅速な放出に対して化合物を保護する担体を用いて調製され得る。生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸が使用され得る。そのような製剤の調製のための多くの方法は、特許されているまたは一般に公知である。例えば、Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York (1978)を参照のこと。
【０２３９】
一実施形態では、医薬製剤は、薬学的に許容される担体を用いて製剤化された、約０．００５ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬ（例えば、０．００５ｍｇ／ｍｌ、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．０５ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１７５ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍＬ、３５０ｍｇ／ｍＬ、４００ｍｇ／ｍＬ、４５０ｍｇ／ｍＬ、５００ｍｇ／ｍＬ）の濃度の抗体を含む。一部の実施形態では、抗体は、無菌の蒸留水またはリン酸緩衝食塩水中で製剤化される。医薬製剤のｐＨは、５．５〜７．５の間（例えば、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．３、７．４、７．５）であり得る。
【０２４０】
医薬組成物は、「治療有効量」の本明細書に記載される薬剤を含み得る。そのような有効量は、投与される薬剤の効果、または２種以上の薬剤が使用される場合には薬剤の効果の組合せに基づいて、決定され得る。薬剤の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答、例えば、少なくとも１つの障害パラメーターの寛解または障害の少なくとも１つの症状の寛解を惹起する化合物の能力などの因子に従っても変動し得る。治療有効量は、治療的に有益な効果が組成物の任意の毒性または有害効果を凌ぐ任意の量である。
【０２４１】
投与
抗体もしくはその抗原結合性断片、またはそれをコードする核酸は、対象、例えば、それを必要とする対象、例えば、ヒトまたは動物対象に、種々の方法によって投与され得る。多くの適用について、投与経路は、静脈内注射または非経口、注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、または筋肉内注射、腫瘍内（ＩＴ）のうち１つである。他の様式の非経口投与もまた使用され得る。そのような様式の例には、動脈内、くも膜下腔内、関節内（intracapsular）、眼窩内、心臓内、真皮内、経気管、表皮下、関節内（intraarticular）、嚢下、くも膜下、脊髄内、ならびに硬膜外および胸骨内注射が含まれる。
【０２４２】
一実施形態では、本発明の抗体の投与経路は、非経口である。本明細書で使用する場合、非経口という用語は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸または腟投与を含む。静脈内形態の非経口投与が好ましい。これらの形態の全ての投与が本発明の範囲内であることが明確に企図されるが、投与のための一形態は、注射のため、特に静脈内または動脈内注射または点滴のための溶液である。通常、注射に適切な医薬組成物は、緩衝液剤（例えば、酢酸、リン酸またはクエン酸緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、任意選択で安定剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含み得る。しかし、本明細書の教示と適合する他の方法では、ポリペプチドは、有害な細胞集団の部位に直接送達され得、それにより、罹患組織の治療剤への曝露を増加させる。
【０２４３】
非経口投与のための調製物には、無菌の水性または非水性の溶液、懸濁液およびエマルジョンが含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体には、食塩水および緩衝媒体が含まれる、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液が含まれる。薬学的に許容される担体には、０．０１〜０．１Ｍ、好ましくは０．０５Ｍのリン酸緩衝液または０．８％食塩水が含まれるがこれらに限定されない。他の一般的な非経口ビヒクルには、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、または不揮発油が含まれる。静脈内ビヒクルには、流体および栄養素補充剤、電解質補充剤、例えば、リンゲルデキストロースに基づくものなどが含まれる。防腐剤および他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガスなどもまた存在し得る。
【０２４４】
より詳細には、注射可能な使用に適切な医薬組成物は、無菌の水性溶液（水溶性の場合）または分散物、および無菌の注射可能な溶液または分散物の即時調製のための無菌の粉末を含む。そのような場合には、組成物は、無菌でなければならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流動性であるべきである。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、好ましくは、細菌および真菌などの微生物の混入作用に対して保全される。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維持され得る。
【０２４５】
微生物の作用の防止は、種々の抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射可能な組成物の延長された吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの、吸収を遅延させる薬剤を組成物中に含めることによってもたらされ得る。
【０２４６】
いずれの場合にも、無菌の注射可能な溶液は、必要量の活性化合物（例えば、それ自体または他の活性な薬剤と組み合わせたポリペプチド）を、本明細書に列挙された成分のうち１つまたはそれらの組合せと共に適切な溶媒中に取込み、その後必要に応じて濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散物は、活性化合物を、基本的分散媒および上に列挙されたものからの必要な他の成分を含有する無菌のビヒクル中に組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌の粉末の場合、調製の好ましい方法は、以前に無菌濾過されたその溶液から、活性成分＋任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥およびフリーズドライである。注射のための調製物は、当該分野で公知の方法に従って、加工され、アンプル、バッグ、ビン、シリンジまたはバイアルなどの容器中に充填され、無菌条件下で密封される。さらに、調製物は、キットの形態で包装および販売され得る。そのような製品は、好ましくは、関連する組成物が凝固障害に罹患している対象または凝固障害の素因がある対象を処置するために有用であることを示すラベルまたは添付文書を有する。
【０２４７】
状態の処置のための本開示の組成物の有効用量は、投与の手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の医薬、および処置が予防的であるか治療的であるかを含む多くの異なる因子に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物もまた処置することができる。処置投薬量は、安全性および有効性を最適化するために、当業者に公知の慣用的な方法を使用して用量設定され得る。
【０２４８】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片の投与経路および／または投与様式はまた、例えば、対象をモニタリングすることによって、個々の症例のためにテーラーメイドされ得る。
【０２４９】
抗体またはその断片は、固定の用量として、またはｍｇ／ｋｇ用量で、投与され得る。用量は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片に対する抗体の産生を低減または回避するためにも選択され得る。投薬レジメンは、所望の応答、例えば、治療的応答または組合せの治療効果を提供するために調整される。一般に、抗体またはその断片（および任意選択で第２の薬剤）の用量が、生体利用可能な量の薬剤を対象に提供するために使用され得る。例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇまたは１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が投与され得る。他の用量もまた使用され得る。ある特定の実施形態では、抗体またはその断片による処置を必要とする対象には、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇの間の用量の抗体またはその断片が投与される。一部の実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片による処置を必要とする対象には、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ  １０ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、２８ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの用量の抗体またはその断片が投与される。具体的な実施形態では、抗体またはその断片は、１ｍｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与される。別の実施形態では、抗体またはその断片は、４ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇの間の用量で静脈内投与される。
【０２５０】
組成物は、約１ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍｌまたは約１０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍｌまたは約５０〜２５０ｍｇ／ｍＬまたは約１００〜１５０ｍｇ／ｍｌまたは約１００〜２５０ｍｇ／ｍｌの抗体またはその断片を含み得る。
【０２５１】
投薬単位形態または「固定の用量」とは、本明細書で使用する場合、処置される対象にとっての単位投薬量として適した物理的に別個の単位を指す；各単位は、必要な薬学的担体と関連して、および任意選択で他の薬剤と関連して、所望の治療効果を生じるように計算された所定の量の抗体またはその断片を含有する。単一または複数の投薬量が与えられ得る。あるいは、またはさらに、抗体またはその断片は、持続注入を介して投与され得る。
【０２５２】
抗体またはその断片の用量は、例えば、１日に１回もしくは２回、または１週間に約１〜４回、または好ましくは毎週、隔週（２週間毎）、３週間毎、毎月、例えば、約１〜１２週間の間、好ましくは２〜８週間の間、より好ましくは約３〜７週間の間、さらにより好ましくは約４、５もしくは６週間にわたって、例えば、少なくとも２用量、３用量、５用量、１０用量もしくはそれよりも多くの用量を包含するのに十分な期間（処置過程）にわたって定期的な間隔で、投与され得る。対象を効果的に処置するために必要な投薬量およびタイミングに影響し得る因子には、例えば、疾患または障害の段階または重症度、製剤、送達経路、以前の処置、対象の総体的な健康および／または年齢、ならびに存在する他の疾患が含まれる。さらに、治療有効量の化合物による対象の処置は、単一の処置を含み得、または好ましくは、一連の処置を含み得る。
【０２５３】
対象が本明細書に記載される障害を発症するリスクがある場合、抗体またはその断片は、例えば、予防手段として、障害の完全な発生前に投与され得る。そのような予防的処置の持続時間は、単一の投薬量の抗体もしくはその断片であり得、または処置は継続し得る（例えば、複数の投薬量）。例えば、障害のリスクがある対象または障害の素因を有する対象は、障害の発生または劇症化を予防するために、数日間、数週間、数カ月間またはさらには数年間にわたって抗体またはその断片で処置され得る。
【０２５４】
ある特定の実施形態では、抗体またはその断片は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬ（例えば、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、３ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ、１５ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、３５ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、４５ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、５５ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、６５ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、９５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１７５ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２２５ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、２７５ｍｇ／ｍＬ、３００ｍｇ／ｍＬ、３２５ｍｇ／ｍＬ、３５０ｍｇ／ｍＬ、４００ｍｇ／ｍＬ、４５０ｍｇ／ｍＬ）の濃度で皮下投与される。一実施形態では、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片は、５０ｍｇ／ｍＬの濃度で皮下投与される。別の実施形態では、抗体またはその断片は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬの濃度で静脈内投与される。一実施形態では、抗体またはその断片は、５０ｍｇ／ｍＬの濃度で静脈内投与される。
【０２５５】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片は、所望により、単独で、または本明細書に記載されるがんもしくは免疫学的障害を処置するために有用な他の治療剤と組み合わせて（即ち、共投与または逐次投与によって）、それを必要とする患者に投与され得る。そのような治療剤は、性質が化学物質または生物製剤であり得る。用語「生物製剤」または「生物学的薬剤」とは、治療薬としての使用が意図される、生きた生物および／またはそれらの産物から作製される任意の薬学的に活性な薬剤を指す。一実施形態では、さらなる治療的タンパク質が、本発明の医薬組成物中に含まれる。
【０２５６】
上記範囲の中間の用量もまた、本発明の範囲内であることが意図される。対象には、そのような用量が毎日、１日おきに、毎週、または実験的分析によって決定される任意の他のスケジュールに従って投与され得る。例示的な処置は、延長された期間にわたる、例えば、少なくとも６カ月間の、複数の投薬量での投与を可能にする。一部の方法では、２つ以上のポリペプチドが同時に投与され得、この場合、投与される各ポリペプチドの投薬量は、示された範囲内に入る。
【０２５７】
本発明のポリペプチドは、複数回投与され得る。単一の投薬量間の間隔は、１日、１週間、１カ月または１年であり得る。間隔は、患者における改変されたポリペプチドまたは抗原の血中レベルを測定することによって示される場合、不規則であってもよい。あるいは、ポリペプチドは、徐放性製剤として投与され得、この場合、あまり頻繁な投与は要求されない。投薬量および頻度は、患者におけるポリペプチドの半減期に依存して変動する。
【０２５８】
投与の投薬量および頻度は、その処置が予防的であるか治療的であるかに依存して変動し得る。予防的適用では、本発明のポリペプチドまたはそれらのカクテルを含む組成物は、患者の耐性を増強するためまたは疾患の影響を最小化するために、まだ疾患状態にはない患者に投与される。そのような量は、「予防有効用量」と定義される。比較的低い投薬量が、長期間にわたって比較的低頻度の間隔で投与される。一部の患者は、残りの人生にわたって処置を受け続ける。
【０２５９】
使用の方法
本開示の抗体またはその抗原結合性断片は、疾患または状態を有する対象（例えば、ヒト）を処置する方法において有用であり得る。疾患または状態には、がん、または慢性感染の抗ウイルス免疫応答もしくは阻害のために炎症促進性免疫応答を刺激することが含まれ得るがこれらに限定されない。
【０２６０】
例えば、本発明は、抗ＬＩＬＲＢ２活性を有するアンタゴニストまたはアゴニストを含む抗ＬＩＬＲＢ２の使用を含む。本発明は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片を対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）に投与するステップを含み、ヒトおよび獣医学の両方での治療的使用を企図する。説明的な獣医学対象には、哺乳動物対象、例えば、家畜および飼育動物が含まれる。
【０２６１】
哺乳動物（例えば、ヒト）において炎症促進性免疫応答を刺激する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片を哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。
【０２６２】
一部の実施形態では、哺乳動物における炎症促進性免疫応答における増加は、（例えば、処置前の哺乳動物における１種もしくは複数の炎症促進性タンパク質のレベルおよび／または哺乳動物におけるエフェクターＴ細胞のレベルと比較した、あるいは健康な対照哺乳動物中に存在する１種もしくは複数の炎症促進性タンパク質のレベルおよび／またはエフェクターＴ細胞のレベルと比較した）哺乳動物における１種もしくは複数の炎症促進性タンパク質のレベルにおける増加（例えば、Ｃ反応性タンパク質、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１７およびマトリックスメタロプロテアーゼのうち１種または複数における増加）または哺乳動物におけるエフェクターＴ細胞（Ｔｅｆｆ）の数における増加として検出され得る。
【０２６３】
哺乳動物（例えば、ヒト）において処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合性断片（または抗体もしくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物）を哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。
【０２６４】
一部の実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、がん（例えば、本明細書に記載される種々の型のがんのいずれか）を有すると以前に診断されている。がんの非限定的な例には、膀胱がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、肺がん、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、甲状腺がん、胆管がん、骨がん、脳がん（brain cancer）、子宮頚がん、心腫瘍、食道がん、眼がん、胆嚢がん、胃がん、頭頚部がん、心臓がん、肝臓がん、喉頭がん、白血病、口唇がんおよび口腔（oral cavity）がん、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、口腔（mouth）がん、鼻腔がんおよび副鼻腔がん、鼻咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、卵巣がん、陰茎がん、下垂体腫瘍、網膜芽細胞腫、肉腫、皮膚がん、精巣がん、咽喉がん、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、腟がんならびに外陰部がんが含まれる。一部の実施形態では、がんは、リンパ腫、白血病または乳がんである。がんを有する哺乳動物は、以下の症状のうち１つまたは複数を提示し得る：疲労、皮膚の下に感じられるしこりまたは肥厚、体重変化、皮膚変化（例えば、皮膚の黄変、黒ずみもしくは発赤、治癒しないヒリヒリ感、または既存の黒子における変化）、排便習慣または排尿習慣における変化、持続性の咳嗽、嚥下困難、嗄声、食後の持続性の消化不良または不快感、持続性の説明できない筋肉または関節の疼痛、および説明できない持続性の発熱または寝汗。哺乳動物が経験する特定の症状は、がんの特定の型に依存する。哺乳動物は、哺乳動物におけるがんの１つまたは複数の症状（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知のがんの症状のいずれか）の観察に基づいて、がんを有すると診断され得る。哺乳動物はまた、画像化（例えば、核磁気共鳴画像法、コンピュータ断層撮影および／またはＸ線）および／または組織生検結果に基づいて、がんを有すると診断され得る。哺乳動物はまた、分子診断試験を使用することに基づいて（例えば、前立腺特異的抗原、または乳がん易罹患性２タンパク質、乳がん易罹患性１タンパク質もしくは腫瘍サプレッサータンパク質（例えば、ｐ５３）における変異の検出に基づいて）、がんを有すると診断され得る。がんを有すると哺乳動物を診断するためのさらなる方法は、当該分野で公知である。がんの処置の有効性は、哺乳動物におけるがんの症状（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知のがんの症状のいずれか）の数における減少ならびに／または哺乳動物におけるがんの１つもしくは複数の症状（例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の症状のいずれか）の頻度および／もしくは重症度における減少によって、検出され得る。哺乳動物におけるがんの有効な処置は、哺乳動物における腫瘍の成長の速度における（例えば、処置の投与前の哺乳動物における腫瘍成長の速度と比較した、または処置を投与されていないもしくは異なる処置を投与された同じ型のがんを有する対照哺乳動物と比較した）減少によっても見積もることができる。哺乳動物におけるがんの有効な処置は、哺乳動物におけるがんの寛解の長さにおける（例えば、処置を投与されていないまたは異なる処置を投与された同じ型のがんを有する対照哺乳動物と比較した）増加によっても観察され得る。
【０２６５】
哺乳動物は、雌性でも雄性でもよく、成体でも若年（例えば、乳児）でもよい。哺乳動物は、化学療法剤および／もしくは鎮痛薬で以前に処置されていてもよく、ならびに／または化学療法剤および／もしくは鎮痛薬に良好に応答しなかったものであってもよい。哺乳動物は、非転移性がんを有し得る。一部の実施形態では、哺乳動物は、転移性がんを有し得る。哺乳動物が成体である場合、この哺乳動物は、例えば、１８〜２０歳の間、または少なくとも約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５歳、または少なくとも１００歳もしくは約１００歳であり得る。
【０２６６】
哺乳動物（例えば、ヒト）においてがんを処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその抗原結合性断片（または抗体もしくはその断片を含む医薬組成物）を哺乳動物に投与するステップを含む方法もまた提供される。
【０２６７】
それを必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）においてがんを処置する方法であって、本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合性断片（または抗体もしくはその抗原結合性断片を含む医薬組成物）およびＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１阻害剤を哺乳動物に投与するステップを含む方法もまた、本明細書に提供される。
【０２６８】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるがんを処置する方法は、化学療法剤または鎮痛薬を哺乳動物に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるがんを処置する方法は、免疫チェックポイント阻害剤を哺乳動物に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるがんを処置する方法は、骨髄由来サプレッサー細胞、動員剤、ｃ−ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ阻害剤、抗炎症剤および免疫抑制剤からなる群から選択される１種または複数のさらなる薬剤を哺乳動物に投与するステップをさらに含む。
【０２６９】
それを必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）において感染を処置する方法であって、本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合性断片（または抗体もしくはその断片を含む医薬組成物）を哺乳動物に投与するステップを含む方法もまた、本明細書に提供される。一部の実施形態では、感染は細菌感染である。
【０２７０】
それを必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）において炎症促進性免疫応答を減少させる方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合性断片（または抗体もしくはその断片を含む医薬組成物）を哺乳動物に投与するステップを含む方法もまた、本明細書に提供される。一部の実施形態では、哺乳動物は、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている。一部の実施形態では、哺乳動物は、臓器または組織移植のために選択される。
【０２７１】
それを必要とする哺乳動物（例えば、ヒト）において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載される抗体もしくはその抗原結合性断片（または抗体もしくはその断片を含む医薬組成物）を哺乳動物に投与するステップを含む方法もまた、本明細書に提供される。一部の実施形態では、哺乳動物は、炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を有すると診断されている。一部の実施形態では、哺乳動物は、臓器または組織移植のために選択される。
【０２７２】
それを必要とする哺乳動物においてがんを処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載されるＣＡＲ（あるいは本明細書に記載されるＣＡＲを含むもしくはコードする細胞、またはそれを含む医薬組成物）またはそれを含む医薬組成物を哺乳動物に投与するステップを含む方法もまた、本明細書に提供される。一実施形態では、がんは、リンパ腫、白血病、結腸がんまたは乳がんである。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【０２７３】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において喘息を処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載されるＣＡＲ（あるいは本明細書に記載されるＣＡＲを含むもしくはコードする細胞、またはそれを含む医薬組成物）またはそれを含む医薬組成物を哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【０２７４】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において感染を処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載されるＣＡＲ（あるいは本明細書に記載されるＣＡＲを含むもしくはコードする細胞、またはそれを含む医薬組成物）またはそれを含む医薬組成物を哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【０２７５】
別の態様では、それを必要とする哺乳動物において炎症、自己免疫疾患または移植片拒絶を処置する方法であって、治療有効量の本明細書に記載されるＣＡＲ（あるいは本明細書に記載されるＣＡＲを含むもしくはコードする細胞、またはそれを含む医薬組成物）またはそれを含む医薬組成物を哺乳動物に投与するステップを含む方法が、本明細書に提供される。一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【０２７６】
治療のためのデバイスおよびキット
本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片を含む医薬組成物は、医療用デバイスを用いて投与され得る。携帯性、室温貯蔵、ならびに、例えば、医療施設および他の医療設備から離れた現場で訓練を受けていない対象または救急隊員によって緊急事態において使用できるような使用の容易さなどの特色を有するデバイスが設計され得る。デバイスは、例えば、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片を含む薬学的調製物を貯蔵するための１つまたは複数のハウジングを含み得、かつ１つまたは複数の単位用量の抗体またはその断片を送達するために構成され得る。デバイスはさらに、抗ＬＩＬＲＢ２抗体もしくはその断片もまた含む単一の医薬組成物として、または２つの別々の医薬組成物として、化学療法剤などの第２の薬剤を投与するために構成され得る。
【０２７７】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片は、キット中で提供され得る。一実施形態では、キットは、（ａ）本明細書に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片を含む組成物を含有する容器、および任意選択で（ｂ）情報資料を含む。情報資料は、本明細書に記載される方法および／または治療的利益のための薬剤の使用に関する、記述的、指導的、販売上のまたは他の資料であり得る。
【０２７８】
ある実施形態では、キットは、本明細書に記載される障害を処置するための第２の薬剤もまた含む。例えば、キットは、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片を含む組成物を含有する第１の容器、および第２の薬剤を含む第２の容器を含む。
【０２７９】
キットの情報資料は、その形態が限定されない。一実施形態では、情報資料は、化合物の生産、化合物の分子量、濃度、有効期限についての情報、バッチまたは生産場所情報などを含み得る。一実施形態では、情報資料は、本明細書に記載される疾患を有しているまたはその疾患のリスクがある対象を処置するために、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片を、例えば、適切な用量、剤形または投与様式（例えば、本明細書に記載される用量、剤形または投与様式）で投与する方法に関する。情報は、種々の形式で提供され得、これには、印刷されたテキスト、コンピュータ可読資料、映像記録もしくは音声記録、または例えばインターネット上の実質的な資料へのリンクもしくはアドレスを提供する情報が含まれる。
【０２８０】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片に加えて、キット中の組成物は、他の成分、例えば、溶媒もしくは緩衝剤、安定剤、または防腐剤を含み得る。抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片は、任意の形態、例えば、液体、乾燥もしくは凍結乾燥形態で、好ましくは実質的に純粋および／または無菌で、提供され得る。薬剤が液体溶液中で提供される場合、この液体溶液は、好ましくは、水性溶液である。ある特定の実施形態では、液体溶液中の抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ（例えば、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７５ｍｇ／ｍＬ、８５ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬおよび２００ｍｇ／ｍＬ）の濃度である。抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片が凍結乾燥産物として提供される場合、この抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片は、約７５ｍｇ／バイアル〜約２００ｍｇ／バイアル（例えば、１００ｍｇ／バイアル、１０８．５ｍｇ／バイアル、１２５ｍｇ／バイアル、１５０ｍｇ／バイアル）である。凍結乾燥粉末は一般に、適切な溶媒の添加によって再構成される。溶媒、例えば、無菌の水または緩衝液（例えば、ＰＢＳ）が、任意選択でキット中に提供され得る。
【０２８１】
キットは、薬剤を含む組成物（単数または複数）のための１つまたは複数の容器を含み得る。一部の実施形態では、キットは、組成物および情報資料のための別々の容器、仕切りまたは区画を含有する。例えば、組成物は、ビン、バイアルまたはシリンジ中に含まれ得、情報資料は、プラスチックスリーブまたはパケット中に含まれ得る。他の実施形態では、キットの別々の要素が、単一の分割されていない容器内に含有される。例えば、組成物は、情報資料がラベルの形態で張り付けられたビン、バイアルまたはシリンジ中に含有される。一部の実施形態では、キットは、薬剤の１つまたは複数の単位剤形（例えば、本明細書に記載される剤形）を各々が含有する複数（例えば、パック）の個々の容器を含む。容器は、組合せ単位投薬量、例えば、抗ＬＩＬＲＢ２抗体またはその断片および第２の薬剤の両方を、例えば所望の比率で含む単位を含み得る。例えば、キットは、例えば、単一の組合せ単位用量を各々が含有する、複数のシリンジ、アンプル、ホイルパケット、ブリスターパックまたは医療用デバイスを含む。キットの容器は、気密性、防水性（例えば、湿気または蒸発における変化に対して不透過性）および／または遮光性であり得る。
【０２８２】
キットは、任意選択で、組成物の投与に適切なデバイス、例えば、シリンジまたは他の適切な送達デバイスを含む。デバイスは、１種もしくは両方の薬剤が事前に充填されて提供され得、または空であるが充填に適切であり得る。
【実施例】
【０２８３】
本発明は、特許請求の範囲に記載される発明の範囲を限定しない以下の実施例にさらに記載される。
【０２８４】
以下に記載されるように、ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合するモノクローナル抗体を生成し（実施例１および９）、特徴付けた（実施例２〜９）。抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、炎症促進または抗炎症応答を示しただけでなく、ＬＩＬＲＢ２シグナル伝達のモジュレーションを介してＴ細胞媒介性免疫を調節した。さらに、以下に記載される抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２発現した腫瘍細胞に対する抗腫瘍応答を媒介した。
【０２８５】
[実施例１]
ＬＩＬＲＢ２に特異的に結合するモノクローナル抗体を、以下に記載されるように生成した。抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、炎症促進または抗炎症応答を示し得るだけでなく、ＬＩＬＲＢ２シグナル伝達のモジュレーションを介してＴ細胞媒介性免疫を調節し得る。さらに、ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＬＩＬＲＢ２発現した腫瘍細胞に対する抗腫瘍応答を媒介し得る。
【０２８６】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体の生成および精製
クローン性ハイブリドーマ細胞から生成されたモノクローナル抗体を、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ａ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養し、その後、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ−ＳＦＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して無血清条件に適応させた。ハイブリドーマ細胞を、５０ｍＬのＨｙｂｒｉｄｏｍａ  ＳＦＭ中で２週間、または培地が使い果たされるまで拡大増殖させた。抗体含有上清を遠心分離によって採取し、その後、無菌で０．２２ミクロンで濾過した。抗体を、１００ｋＤａの公称分子量限界を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心分離フィルター濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濃縮した。次いで、濃縮された抗体を、製造業者の指示書に従ってＮａｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ／Ｇ  Ｓｐｉｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して精製した。精製された抗体を、Ｚｅｂａ  Ｓｐｉｎ  Ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して脱塩した。
【０２８７】
ハイブリドーマＩｇＬおよびＩｇＨ鎖の配列決定
ハイブリドーマクローンから、Ｔｒｉｚｏｌ抽出を使用してＲＮＡを抽出した。ｃＤＮＡを、製造業者の指示書に従ってＯｎｅＳｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、精製されたＲＮＡから合成した。Ｉｇ重鎖および軽鎖のＰＣＲを、縮重プライマーを使用して実施した。増幅されたＰＣＲ産物を引き続いて配列決定し（ＧｅｎｅＷｉｚ）、Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ＳｙｓｔｅｍのＩＭＧＴ／Ｖ−ＱＵＥＳＴを使用して検証した。
【０２８８】
ハイブリドーマの配列
マウスカッパおよび重鎖Ｉｇ遺伝子に隣接する縮重プライマーを使用して、重鎖および軽鎖遺伝子ならびに相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列を、示されたクローンについて決定した。初期継代ハイブリドーマから単離された総ＲＮＡを、ＲＴ−ＰＣＲを使用してｃＤＮＡに変換し、その後重鎖および軽鎖遺伝子をＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ産物を、Ｓａｎｇｅｒ配列決定によって配列決定し、その後、データベースからの公知の対立遺伝子フレームワークに対してＩｇ−ＢＬＡＳＴ比較した。生産的抗体配列は、最も近縁のアラインしたマウス対立遺伝子およびＣＤＲ１〜３を示す表１、２、５および６に列挙される。選択された抗ＬＩＬＲＢ２抗体（マウス）のＣＤＲアミノ酸配列は、表１、２および５に提供される。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに基づく。表６は、選択された抗ＬＩＬＲＢ２抗体（マウス）についての最も近縁のアラインしたマウス対立遺伝子およびＣＤＲ１〜３を示す。
【０２８９】
低用量ＬＰＳ刺激の存在下で、抗ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストは、総末梢血単核球（ＰＢＭＣ）からのＴＮＦアルファ分泌を促進するが、抗ＬＩＬＲＢ２アゴニストは、ＩＬ−１０分泌を促進する。本発明者らは、炎症条件下で総ＰＢＭＣを用いて、生物学的機能についていくつかのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）をスクリーニングした。アンタゴニスト性の機能的特徴を有するｍＡｂは、低用量のＬＰＳ刺激下で総ＰＢＭＣからのＴＮＦアルファ産生をさらに促進できるが、ＩＬ−１０分泌には影響せず、これは、これらが、がんまたは感染性疾患を処置する際に有効であることを意味している。他方、アゴニストクローンは、自己免疫疾患、炎症または移植片拒絶を処置するために、ＩＬ−１０産生を増加させることができる（図１）。ＴＮＦアルファ分泌を誘導できるこれらのクローンを、アンタゴニストとみなしたが、ＩＬ−１０を誘導するクローンはアゴニストとみなす。アンタゴニスト抗ＬＩＬＲＢ−１抗体は、表１に記載される。アゴニスト抗ＬＩＬＲＢ−１抗体は、表２に記載される。
【０２９０】
当業者は、抗体の名称（例えば、５Ｇ５）およびそのハイブリドーマクローン名（例えば、Ｐ＿５Ｇ５）が、相互交換可能に使用され、互いに同じ配列を有する抗体を指すことを理解する。例えば、５Ｇ５およびＰ＿５Ｇ５は、それぞれ、配列番号２２５、２３０および２４４のＨＣＤＲ１〜３ならびにそれぞれ、配列番号２４、２０２および２１６のＬＣＤＲ１〜３を有する抗体を指すために、相互交換可能に使用され得る。
【０２９１】
[実施例２]
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＴＮＦアルファ分泌をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートする。
健康なドナーから得た総末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）による２４時間にわたる刺激後１６時間にわたり一晩、精製された抗ＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照と共にインキュベートした。上清を収集し、ＴＮＦアルファ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した（図１）。アイソタイプ処理を対照として使用した。抗ＬＩＬＲＢ  ｍＡｂを、ＴＮＦアルファ放出における相対的変化倍数によって、ＴＮＦアルファ放出を抑制するクローンから、ＴＮＦアルファ分泌を増強するクローンの順でランキングした（図１Ａ）。ＴＮＦアルファ放出の生データが図１Ｂに示される。図１ＢからのＴＮＦアルファレベルにおける全体的差異が図１Ｃに示される。
【０２９２】
実施例２についての生データは、表３および表４に提供される。
【０２９３】
[実施例３]
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＩＬ−１０産生をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートする。
健康なドナーから得た総末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）（５０ｎｇ／ｍｌ）による２４時間にわたる刺激後１６時間にわたり一晩、精製された抗ＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照と共にインキュベートした。上清を収集し、ＩＬ−１０濃度をＥＬＩＳＡによって測定した（図２）。アイソタイプ処理を対照として使用した。抗ＬＩＬＲＢ  ｍＡｂを、ＩＬ−１０放出における相対的変化倍数によって、ＩＬ−１０放出を抑制するクローンから、ＩＬ−１０分泌を増強するクローンの順でランキングした（図２Ａ）。ＩＬ−１０放出の生データが図２Ｂに示される。図１ＢからのＩＬ−１０レベルにおける全体的差異が図２Ｃに示される。
【０２９４】
実施例３についての生データは、表３および表４に提供される。
【０２９５】
Ｍ１／Ｍ２分化に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果
図２Ｄは、複数の肺がん患者由来の腫瘍関連マクロファージのＭ１／Ｍ２マーカーに対するＬＩＬＲＢ２抗体の効果についてのフローサイトメトリー分析を示す。腫瘍浸潤したリンパ球を単離し、ＩＦＮガンマの存在下でＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）で２日間処理した。試験細胞を、サイトメトリー分析のために採取した（図２Ｄ、上パネル）；複数の患者についての統計分析が、図２Ｄ、下パネルに示される。
【０２９６】
図２Ｅは、複数の健康なドナーにおけるＭ１／Ｍ２マーカーに対するＬＩＬＲＢ２抗体の効果についてのフローサイトメトリー分析を示す。Ｍ１型マクロファージを、健康なドナーから選別されたＣＤ３３＋骨髄細胞から、ＧＭ−ＣＳＦ  １００ｎｇ／ｍｌおよびアゴニスト抗ＬＩＬＲＢ２  Ａｂ（１２Ｈ６、５μｇ／ｍｌ）の存在下で６日間、ならびに最後の２４時間についてはＩＦＮガンマ（２５ｎｇ／ｍｌ）およびＬＰＳ（２５ｎｇ／ｍｌ）の存在下で、分化させた。試験細胞を、サイトメトリー分析のために採取した（図２Ｅ、上パネル）；複数の健康なドナーについての統計分析が、図２Ｅ、下パネルに示される。
【０２９７】
図２Ｆは、複数の健康なドナー由来のＯＫＴ３刺激されたＰＢＭＣに対するアンタゴニストおよびアゴニストＬＩＬＲＢ２抗体のマスサイトメトリー分析を示す。ＰＢＭＣを、健康なドナーから得、ＯＫＴ３（０．０１μｇ／ｍｌ）による３日間にわたる刺激後１６時間にわたって一晩、精製されたＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト（Ｃ＿１Ｈ３）およびアゴニスト（Ｃ＿８Ｂ５）抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照で処理した。試験細胞を、サイトメトリー分析のために採取した（図２Ｆ、左パネルのヒートマップ、およびＤｉｓｎｅｙ図、右パネルを参照のこと）。図２Ｆ、左パネルは、免疫細胞サブセット（ＰＢＭＣ、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞）における示されたマーカーの発現を示すヒートマップを示す。図２Ｆ、右パネルは、本発明者らの３８−抗体パネルを用いて分析し、ＩｇＧ対照に基づいて正規化したマーカー発現によって色付けした、１×１０６個のＰＢＭＣ、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞のサブセットについてのデータを示すｔ−ＳＮＥマップを示す。
【０２９８】
[実施例４]
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、Ｔ細胞増殖およびＩＦＮガンマ分泌をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートする。
ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。３日間の処理後、［３Ｈ］−チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）が図３Ａに示される。上清を、図３Ａのサンプルから収集し、ＩＦＮ−γ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した（図３Ｂ）。アイソタイプ処理を対照として使用した。図３Ｃ〜３Ｄは、ＣＦＳＥで標識し、ＩｇＧアイソタイプ対照または示されたＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）の存在下で、照射された（３０Ｇｙ）無関係のドナーＰＢＭＣ（刺激側）で刺激した、培養されたヒトＰＢＭＣ（応答側）からのフローサイトメトリーデータを示す。応答側／刺激側の比率は、１／２であった。５日間の共培養後、生存ＣＤ４  Ｔ細胞（左パネル）およびＣＤ８  Ｔ細胞（右パネル）を、フローサイトメトリーによって分析した。代表的なフロープロットを、ＣＦＳＥ希釈、および分裂した細胞のパーセントとして示した。
【０２９９】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＩＦＮガンマ放出をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートする。
ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。上清を、図３Ａのサンプルから収集し、ＩＦＮ−γ濃度をＥＬＩＳＡによって測定した（図３Ｂ）。アイソタイプ処理を対照として使用した。
【０３００】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、同種Ｔ細胞増殖をｉｎ  ｖｉｔｒｏで阻害した。
ＣＦＳＥ標識されたＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した（図３Ｃ）。３日間の培養後、生存ＣＤ４  Ｔ細胞（図３Ｃ、左パネル）およびＣＤ８  Ｔ細胞（図３Ｃ、中央パネル）を、フローサイトメトリーによって分析した。代表的なフロープロットが、ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞のＣＦＳＥ希釈（図３Ｃ、左パネルおよび中央パネル）ならびに増殖指数（図３Ｃ、ＣＤ４細胞については右中央パネル、ＣＤ８細胞については右下パネル）として示される。上清を、図３Ｃ、右上パネルに示されるＩＦＮガンマ検出のために採取した。
【０３０１】
ＯＫＴ３媒介性のＴ細胞増殖およびＩＦＮガンマ分泌は、アゴニストクローンによって強く抑制されたが、アンタゴニストクローンは、ＩＦＮガンマ産生および増殖を増強した、または異なる健康なドナーに対して影響を発揮しなかった（図３Ａ〜３Ｂ）。さらに、ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体は、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の抑制を媒介した（図３Ｄ）。
【０３０２】
抗ＬＩＬＲＢ２は、複数のがん型のがん細胞の増殖を阻害できる。
本発明者らは、骨髄性白血病細胞増殖に対するＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの効果をさらに試験した。Ｕ９３７およびＨＬ６０細胞の増殖活性は、アンタゴニストクローンによって阻害された。
【０３０３】
[実施例５]
白血病細胞の増殖は、抗ＬＩＬＲＢ２抗体によって抑制された。
ＬＩＬＲＢ２形質導入したＵ９３７白血病細胞を、対照Ｉｇまたは抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂ（５マイクログラム）で４２日間処理した。Ｕ９３７細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積もった。細胞を、培養の最後の８時間にわたって［３Ｈ］−チミジンでパルスした。ＬＩＬＲＢ２＋ＴＨＰ−１細胞の増殖（ＣＰＭ）が図４Ａに示される。
【０３０４】
乳がん細胞に対するＬＩＬＲＢ２アンタゴニストクローンの増殖
ＬＩＬＲＢ２形質導入したヒト乳がん細胞（ＭＣＦ７）を、抗ＬＩＬＲＢ２抗体（５μｇ／ｍｌ）またはアイソタイプ対照で４日間処理した。ＬＩＬＲＢ２＋ＭＣＦ７細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積もった。細胞を、培養の最後の８時間にわたって［３Ｈ］−チミジンでパルスした。ＬＩＬＲＢ２＋ＭＣＦ７細胞の増殖（ＣＰＭ）が図４Ｂに示される。
【０３０５】
[実施例６]
ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストは、ＬＩＬＲＢ２＋ＭＤＡＭＢ２３１乳がん細胞の遊走能を阻害する。
ＬＩＬＲＢ２＋ＭＤＡＭＢ２３１乳がん細胞の遊走能は、スクラッチアッセイ（図５Ａ）およびトランスウェルアッセイ（図５Ｂ）によって、５マイクログラム／ｍｌ濃度のアンタゴニストクローンＣ＿５Ｃ１２によって実質的に阻害された。
【０３０６】
[実施例７]
アンタゴニスト抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ワクチンアジュバント効果（ＣｐＧ）および細菌オプソニン化／食作用を増強する
ＭＩＳＴＲＧマウスに、ＩｇＧ対照またはＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）（１５０μｇ／マウス）を２日間にわたって静脈内注射し、次いで、５ｎｍｏｌで腹腔内チャレンジした。２時間後、血清を試験マウスから収集し、ＴＮＦαレベルについてのＥＬＩＳＡ分析に供した（図６Ａ、左パネル）。
【０３０７】
ヒト化ＭＩＳＴＲＧマウスに、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）または対照Ｉｇ（１５０μｇ／マウス）を４８時間にわたって腹腔内注射した。末梢血細胞を単離し、１×１０７個の末梢血細胞当たり２×１０８個の大腸菌（E. coli）の比率で、ＧＦＰを発現する大腸菌（E. coli）と共に３７℃で４時間インキュベートした。細胞を採取し、ＰＢＳで洗浄し、生存ＣＤ４５＋ＣＤ３３＋集団に対してゲートすることによって分析した。結果は、アンタゴニストＬＩＬＲＢ２抗体（Ｐ＿５Ｇ５）が、ＣｐＧチャレンジに対する全身応答を強く増強し、マクロファージの食作用活性を増強したことを示した（図６Ａ、右パネル）。
【０３０８】
ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストは、がん細胞の成長をｉｎ  ｖｉｖｏで阻害する。
本発明者らは、異種移植マウスモデルにおいて、ＬＩＬＲＢ２形質導入したＴＨＰ−１白血病細胞に対する抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂの抗腫瘍効果をさらに評価した。本発明者らは、抗ＰＤＬ１抗体処置ありおよびなしでの抗ＬＩＬＲＢ２  ｍＡｂ（クローンＰ＿５Ｇ５）の抗腫瘍効果を試験し、アンタゴニストクローンＰ＿５Ｇ５が、抗ＰＤＬ１の抗腫瘍効果とｉｎ  ｖｉｖｏで相乗したことを見出した（図６Ｂ）。さらに、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体（Ｐ＿５Ｇ５）の抗腫瘍効果は、抗ＰＤ−１と組み合わせた場合、ＨＬＡ−Ａ２が一致するヒト化ＮＣＧマウスモデルにおいて、ルシフェラーゼ発現Ａ５４９の腫瘍成長を阻害した（図６Ｃ）。これらのデータは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト抗体が骨髄分化を促進でき、腫瘍成長を阻害できることを示唆している（図６Ｃ）。
【０３０９】
[実施例８]
ヒトＰＢＭＣ増殖に対する抗ＬＩＬＲＢ２抗体の共刺激効果
健康なドナー由来の１×１０５個の総ＰＢＭＣを、１μｇ／ｍｌ  抗ＰＤ−１抗体、１μｇ／ｍｌ  ４−１ＢＢＬ、１００ｎｇ／ｍｌ  ＯＸ４０Ｌまたは１μｇ／ｍｌ  ＧＩＴＲＬの存在下で、抗ＬＩＬＲＢ２  Ａｂ（５μｇ／ｍｌ）で一晩（１６時間）刺激し、低用量の抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、０．０１μｇ／ｍｌ）で引き続いて３日間刺激して、培養した（図７Ａ）。３日間の処理後、Ｔ細胞増殖を、［３Ｈ］−チミジン取込みによって見積もった。チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）に対する効果が図７Ｂに示される。上清を、図７Ｃに示されるインターフェロンガンマ産生の検出のために採取した。
【０３１０】
[実施例９]
免疫阻害受容体Ｌｉｌｒｂ２を遮断することは、腫瘍関連骨髄細胞をリプログラミングし、抗腫瘍免疫を促進する
導入
マクロファージは、感染の間に炎症を媒介するだけでなく、炎症解決の間に免疫を抑制し（１）、腫瘍微小環境内の免疫エスケープを促進する（２）。マクロファージ表現型の機能的可塑性は、周囲の環境によって大きく影響される。ウイルスおよび細菌は、ＮＦκＢを駆動するようにｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達を活性化し、Ｔｈ１免疫を支持するようにｉＮＯＳ、ＴＮＦαおよびＩＬ１２のマクロファージ放出を好むが、Ｔｈ１関連ＩＦＮγは、エフェクターＴ細胞応答を支持するようにＳＴＡＴ１を活性化する。逆に、腫瘍細胞から分泌された体液性サイトカインＩＬ４／ＩＬ１３およびＩＬ１０は、ＩＬ１０、ＴＧＦβおよびアルギナーゼ１を放出するようにマクロファージを刺激する。ＳＴＡＴ６、ＳＴＡＴ３およびマトリックスプロテアーゼの同時活性化は、組織リモデリングおよびＴｈ２免疫をさらに支持する（３）。骨髄細胞分化およびマクロファージ表現型の可塑性を制御するために成熟化経路を標的化するかどうか、ならびにその方法は、現在のがん免疫療法にとってチャレンジングな課題のままである。
【０３１１】
骨髄受容体のうち、ペア型免疫グロブリン様受容体Ｂ（ＰＩＲ−Ｂ）は、ヒト白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ（ＬＩＬＲＢ）ファミリー（ＩＬＴ、ＬＩＲおよびＣＤ８５としても公知）の唯一のマウス受容体オルソログである（４、５）。Ｂ細胞では、Ｐｉｒｂ欠損は、増加したＢＣＲシグナル伝達および超活性を生じる（６）。Ｐｉｒｂ欠損マクロファージは、同様に、増加した炎症促進性サイトカイン放出および悪化した自己免疫疾患を有する（７）。ＰＩＲ−Ｂは、ＭＨＣＩにｃｉｓおよびｔｒａｎｓで結合することによって、免疫活性化を恒常性的に抑制する（８、９）。ＳＨＰ１／２ホスファターゼは、ＰＩＲ−Ｂの細胞質ドメインに構成的に結合し、定常状態で調節的であると仮説が立てられている（１０、１１）。本発明者らの以前の研究は、ＰＩＲ−Ｂが、腫瘍浸潤性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）のＭ２様表現型を維持するための重要な調節因子であることを実証した（１２）。ＴＬＲおよびＩＦＮγシグナル伝達は、Ｐｉｒｂ欠損ＭＤＳＣにおいて拡大されたが、ＩＬ４／ＩＬ１３およびＩＬ１０は抑制された。Ｐｉｒｂ欠損を有するマウスは、低減された腫瘍負荷、増強された抗腫瘍応答、減少したＴｒｅｇ活性化、およびＭ１様の古典的活性化と似た浸潤性マクロファージプロファイルを有した（１２）。ヒトＬＩＬＲＢは、マウスＰＩＲ−Ｂと同様、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）保有受容体のクロスリンク依存的活性化から生じるシグナル伝達カスケードを減弱させることができる免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を保有する（１３）。しかし、ＬＩＬＲＢがヒト骨髄細胞およびマクロファージ活性化をどのように調節するかについては、ヒトでは１つのＰＩＲ−Ｂではなく複数のＬＩＬＲＢファミリーメンバーが存在するという、ヒトとマウスとの間の保存の欠如に主に起因して、あまり知られていない。
【０３１２】
Ｌｉｌｒｂ１〜５の発現は、骨髄細胞集団において富化され、霊長類特異的なようである（１４〜１６）。ＬＩＬＲＢ３およびＬＩＬＲＢ４は、オーファン受容体であり（１７、１８）、ＬＩＬＲＢ５は、報告によれば、ＨＬＡ−Ｂ２７の、β２ｍなしの重鎖に結合する（１９）。ＬＩＬＲＢ１およびＬＩＬＲＢ２は共に、低い結合親和性（ＬＩＬＲＢ２についてＫｄ＝１４〜４５μＭ）で古典的および非古典的ＨＬＡ−クラスＩに（１７、２０）、ならびにアンジオポエチン様タンパク質ファミリーのメンバーに（２１）（２２）結合するとして最もよく特徴付けられた受容体である。さらに、ＬＩＬＲＢ１およびＬＩＬＲＢ２は、ＨＬＡ−Ｉ結合についてＣＤ８と競合して、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を潜在的にモジュレートし得る（２２）。ＨＬＡ−Ｂバリアントのウイルス発現によるＬＩＬＲＢ２の活性化は、骨髄細胞寛容を促進でき、樹状細胞（ＤＣ）の成熟化および共刺激分子発現を下方調節できる（２３）。いくつかの研究は、ＨＬＡ−Ｇ−ＬＩＬＲＢ１／２結合がＩＬ４およびＩＬ１３を増加させ、炎症促進性サイトカイン放出を促進し、ＩＬ１０およびＴＧＦβ調節性サイトカインの分泌を促進することを示している（２４）。ＤＣ上のＬＩＬＲＢ発現のより低いレベルは、増強された抗原提示細胞機能と相関する（２５）。ＬＩＬＲＢ２アゴニズムは、ＤＣ  Ｃａ２＋流動を遮断し（１７）、ＤＣの寛容化において重要な役割を果たす（２６）ことが示されている。したがって、本発明者らは、細胞表面受容体媒介性の活性化をアンタゴナイズすることによってＬＩＬＲＢ２を標的化することが、免疫抑制活性を有する骨髄細胞、即ち、ＭＤＳＣまたは腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の機能を、古典的に活性化された炎症性マクロファージ表現型に向けて、潜在的に変更し得ると仮説を立てた。
【０３１３】
本研究は、ＬＩＬＲＢ２が、骨髄細胞機能をモジュレートするために有効かつ十分な標的であるかどうかを調査するために設計した。本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２特異的モノクローナル抗体を生成し、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムのサブセットが、ＭＣＳＦに応答したマクロファージのＡＫＴ依存的成熟化を変更し、ＬＰＳ／ＩＦＮγ刺激に応答したＮＦκＢおよびＳＴＡＴ１活性化を増強したことを見出した。ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムはまた、ＩＬ４による体液性サイトカイン依存的ＳＴＡＴ６活性化に対してマクロファージを耐性にし、Ｔ細胞増殖に対するマクロファージの抑制効果を軽減し、Ａ５４９肺腫瘍モデルおよび初代ヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）由来のヒトマクロファージをリプログラミングした。さらに、ＬＩＬＲＢ２遮断は、抗ＰＤＬ１と併せて使用した場合、腫瘍微小環境を変化させ、抗腫瘍免疫を促進した。
【０３１４】
本発明者らの知見は、ヒトＬＩＬＲＢ２が、骨髄細胞の機能的決定を具体的に目的とした有望な骨髄免疫チェックポイント標的としての大きな治療的価値を有する、骨髄細胞成熟化のための重要な恒常性表面調節因子であることを示唆している。ＬＩＬＲＢ２の遮断は、腫瘍微小環境のモジュレーションを介してがん免疫療法の治療的転帰を改善するためにＴＡＭをリプログラミングするために使用され得る。
【０３１５】
結果
ＬＩＬＲＢ２抗体のサブセットは、ヒト単球の活性化を増強する
ヒトマクロファージに対するＬＩＬＲＢ２の生物学的重要性を調査するために、本発明者らは、マウスをＬｉｌｒｂ２  ｃＤＮＡコードプラスミドで免疫化し、その後、ＬＩＬＲＢ２小胞またはタンパク質でブーストすることによって、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を開発した。本発明者らは、フローサイトメトリーによってＬＩＬＲＢ結合についてハイブリドーマ上清をスクリーニングし、その後末梢血単核球（ＰＢＭＣ）ベースの機能的アッセイを行って、クローンが単球活性化を増幅できるかどうかを見積もった。いくつかの抗体クローンは、複数のＰＢＭＣドナーを横断して、ＬＰＳの存在下で、ＣＤ８６およびＴＮＦαレベルを増強できた（図９Ａ、図９Ｂ）。ＬＩＬＲＢファミリーのメンバーは、高い程度の相同性を共有するので、本発明者らは、各受容体の細胞外ドメインで安定に形質導入された細胞株を生成することによって、潜在的な交差反応性について試験した（図１６Ａ）。ＬＩＬＲＡ１は、ＬＩＬＲＢ２細胞外ドメインと約８０％の相同性を共有するので、この受容体に対する交差反応性を含めた。ＦＡＣＳ染色は、ＬＩＬＲＢ２抗体が関連のファミリーメンバーと交差反応しなかったことを実証した（図９Ｃ）。ＰＢＭＣの染色もまた、ＣＤ３３＋骨髄サブセットに限定され、具体的には、ＣＤ１４＋ＣＤ１６ｈｉおよびＣＤ１４＋ＣＤ１６ｌｏ単球集団を染色した（図１６Ｂ）。本発明者らは、低用量のＬＰＳ刺激に応答して単球炎症潜在力を増強したＬＩＬＲＢ２特異的抗体を同定した。次いで、本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２受容体を安定に発現するＴＨＰ１ヒト単球性細胞株に対する抗ＬＩＬＲＢ２の結合親和性を決定した（図９Ｄ）。バイオレイヤー干渉法は、固定化されたプローブ上での分子相互作用における変化を測定する光学技術である。このアプローチを使用して、本発明者らは、固定化された抗ＬＩＬＲＢ２と滴定された濃度のＬＩＬＲＢ２−Ｈｉｓモノマーとの会合および解離を測定した（図９Ｅ）。複合体の解離は、試験した全てのＬＩＬＲＢ２−Ｈｉｓ濃度において最小であり、親和性は、１．８〜３．８ｎＭの範囲と計算され、内因性ＨＬＡリガンド結合（Ｋｄ＝１４〜４５μＭ（２２））よりもおよそ１０００倍強かった。
【０３１６】
ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、マクロファージのＭＣＳＦ依存的成熟化を変更する
ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストは、ＬＰＳに応答して単球活性化を増幅したので、本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２遮断がマクロファージ成熟化にどのように影響するかを調査した。ヒト単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）における研究は、炎症キューから生じる異なる成熟化表現型を実証している（２７、２８）。本発明者らは、健康なドナーのＰＢＭＣ由来のＣＤ３３＋単球を、Ｍ−ＣＳＦで５〜７日間処理することによって、未熟なマクロファージＭ（−）を生成した。対照Ｉｇの存在下で培養したマクロファージは、伸長し、ゆるく接着性のように見えたが、抗ＬＩＬＲＢ２の存在下で培養した単球は、より丸く、しっかりと接着性のように見えた（図１０Ａ）。他の研究者は、ＭＣＳＦ由来ヒトマクロファージの紡錘様の形態および機能に対するＭＣＳＦおよびＩＬ１０の正の効果をｉｎ  ｖｉｔｒｏで報告している（２９、３０）。これらの観察は、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムが、典型的なＭＣＳＦ依存的成熟化を妨害している可能性があることを示唆している。本発明者らは、ＣＤ１４およびＣＤ１６３の両方の発現が、試験した全てのヒトドナーを横断して、抗ＬＩＬＲＢ２に応答して減退されたことを観察した（図１０Ｂ、図１０Ｃ）。ＣＤ１４は、ＭＣＳＦ（２７）およびＣＤ１６３によって上方調節されることが示されており、その細胞表面発現が抗炎症応答と相関するスカベンジャー受容体であり、種々のがんにおける予後不良の指標である（３１、３２）。ＣＤ１６３もまた、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＬ６、ＩＬ１０の存在下で、およびグルココルチコイドに応答して、増強された（３３）。マクロファージが、単球について示されたのと同様にＬＰＳ刺激に対する差次的応答を示すかどうかを決定するために、本発明者らは、未熟なマクロファージをＬＰＳで一晩刺激し、ＴＮＦαおよびＩＬ１０サイトカインレベルを測定した（図１０Ｄ）。本発明者らは、複数のドナーを横断して、増加したＴＮＦαおよび阻害されたＩＬ１０分泌を一貫して観察した。検出可能なＴＮＦαは、ＬＰＳ刺激前にはマクロファージ培養物中で観察できず（データ示さず）、これは、ＴＮＦαの増加が抗体の機能的活性に特異的であったことを実証している。
【０３１７】
ＩＲＦ５は、Ｉ型インターフェロンによって誘導され、ＩＲＦ４によって阻害される炎症性マクロファージ極性化を促進する（３４）。ＩＲＦ４は、選択的マクロファージ成熟化と関連し、ＩＬ４によって誘導され、ＴＬＲシグナル伝達および炎症促進性サイトカインを負に調節する（３５、３６）。ＩＲＦ３は、ＴＬＲシグナル伝達によって活性化され、Ｉ型インターフェロン−ＳＴＡＴ１シグナル伝達カスケードを誘導するが（３７）、ＩＲＦ７は、炎症性ミクログリア極性化スイッチに関与することが報告されている（３８）。本発明者らは、抗ＬＩＬＲＢ２が、未熟なマクロファージの分化の間に、ＩＲＦ３、５および７を上方調節したが、ＩＲＦ４を下方調節したことを観察し（図１０Ｅ）、これは、抗ＬＩＬＲＢ２が、古典的および炎症性のマクロファージ極性化を潜在的に好むことを示している。ＬＩＬＲＢ抗体精製における混入エンドトキシンを一切排除するために、本発明者らは、全ての抗体バッチにおいて、確実にエンドトキシンレベルが１μｇ当たり０．００５ＥＵ未満になるようにした。
【０３１８】
マクロファージ成熟化経路に対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果を探求するために、本発明者らは、ＭＣＳＦ培養したＭ（−）から成熟マクロファージを生成し、その後、それぞれＭ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）を生成するためにＬＰＳまたはＩＬ４で２４時間刺激した。Ｍ（−）およびＭ（ＩＬ４）と比較して、Ｍ（ＬＰＳ）は、ＴＬＲアゴニストに応答したＰＤ−Ｌ１上方調節を報告する文献（３９）と一致して、ＰＤ−Ｌ１の発現を顕著に増加させた。驚くべきことに、本発明者らは、抗ＬＩＬＲＢ２処理したＭ（ＬＰＳ）が、ＰＤ−Ｌ１の誘導された発現を顕著に阻害したことを見出した（図１０Ｆ、図１０Ｇ）。Ｍ（ＩＬ４）上のＰＤ−Ｌ１発現は無視できた。これらのデータは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムが、炎症環境におけるエフェクターＴ細胞のＰＤ−Ｌ１依存的抑制の防止を助け得ることを示唆している。本発明者らは、次に、抗ＬＩＬＲＢ２が体液性サイトカインＩＬ４に応答したマクロファージ成熟化にどのように影響し得るかを調査した。本発明者らは、マクロファージＤＣ−ＳＩＧＮ（ＣＤ２０９）に焦点を当てたが、それは、その発現が一部ＩＬ４依存的であり（３２）、Ｍ（ＩＬ４）マクロファージ成熟化および免疫寛容の十分に受け容れられたマーカーであることが報告されている（２７、４０）からである。本発明者らは、ＤＣ−ＳＩＧＮが、調節的背景において以前に報告されたように（４１）、ＭＣＳＦ由来Ｍ（−）およびＭ（ＬＰＳ）において低レベルで誘導されたことを見出した。ＩＬ４刺激に応答して、Ｍ（ＩＬ４）は、高レベルのＤＣ−ＳＩＧＮを発現する。Ｍ（ＩＬ４）は、抗ＬＩＬＲＢ２の存在下で成熟し、ＤＣ−ＳＩＧＮ発現の有意に低い誘導を示し、ＤＣ−ＳＩＧＮの基底発現がＭ（ＬＰＳ）において見出された（図１０Ｈ、図１０Ｉ）。合わせると、ｉｎ  ｖｉｔｒｏマクロファージ培養からの結果は、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムが、古典的に活性化された表現型に有利になるように成熟化を増感させることを支持した。
【０３１９】
ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、ＮＦκＢ／ＳＴＡＴ１の活性化およびＩＬ４によるＳＴＡＴ６活性化の阻害を好む
Ｍ１様（古典的活性化）対Ｍ２様（選択的活性化）としてマクロファージ成熟化を記述するグループが、それぞれＮＦκＢ／ＳＴＡＴ１活性化およびＳＴＡＴ６活性化と関連する炎症表現型をおおかた特徴付けている（３）。したがって、本発明者らは、シグナル伝達パターンがＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムによって調節されたかどうかを見積もった。抗ＬＩＬＲＢ２処理細胞は、ＬＰＳ刺激に応答して増加したＮＦκＢ、ＥＲＫ１／２およびｐ３８活性化を実証した（図１１Ａ）。本発明者らは、ＩＦＮγに応答した、ＮＦκＢ、ＥＲＫ１／２およびｐ３８リン酸化ならびにＳＴＡＴ１リン酸化における類似の増加を見出した（図１１Ｂ）。ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムの存在下での低減されたマクロファージＤＣ−ＳＩＧＮ発現に起因して、本発明者らは、ＩＬ４関連シグナル伝達が阻害されたかどうかも決定した。抗ＬＩＬＲＢ２処理細胞は、ＩＬ４処理に応答したＳＴＡＴ６リン酸化の強い阻害を示し（図１１Ｃ）、これには、ＳＯＣＳ１発現における顕著な変化なしの増加したＳＯＣＳ３が伴った（図１１Ｄ）。炎症性サイトカインに加えて、Ｍ−ＣＳＦは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ活性化に依存するマクロファージの増殖および生存を駆動し（４２、４３）、ノックアウトモデルは、成熟化表現型を決定する際のＡＫＴの重要な役割を示唆している（４４）。本発明者らは、外因性ＭＣＳＦの存在にもかかわらず、抗ＬＩＬＲＢ２処理マクロファージにおいて、ＡＫＴ活性化の減退したレベルを一貫して観察した（図１１Ｅ）。合わせると、本発明者らのデータは、ＬＩＬＲＢ２遮断が、ＭＣＳＦの下流のＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路を阻害することによって、炎症性シグナル伝達カスケードに対する感受性を増加させたことを示唆している。
【０３２０】
ＬＩＬＲＢ受容体は、マクロファージ集団においてＳＨＰ１を構成的に動員および活性化することが示されている（１６）。共免疫沈降実験は、ＬＩＬＲＢ２関連のＳＨＰ１リン酸化が、抗ＬＩＬＲＢ２処理マクロファージにおいて減退されたことを実証した（図１１Ｆ）。したがって、ＬＩＬＲＢ２の下流のＳＨＰ１活性化の破壊は、シグナル伝達カスケードの増加した増感を説明し得る。
【０３２１】
ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、エフェクターＴ細胞に対する骨髄依存的抑制を阻害する
ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、Ｔｈ１適応免疫を支持する炎症経路を促進したので、本発明者らは、エフェクターＴ細胞応答が、抗ＬＩＬＲＢ２成熟したマクロファージの存在下で改善されると仮説を立てた。マクロファージおよびＭＤＳＣは、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼによるトリプトファン異化、ＰＤ−Ｌ１／Ｌ２発現およびサイトカイン依存的調節的Ｔ細胞変換を含む種々の機構を使用することによる、エフェクターＴ細胞応答の公知のサプレッサーである。ネイティブ適応Ｔ細胞応答における抗ＬＩＬＲＢ２成熟したマクロファージの抑制的な性質を試験するために、本発明者らは、一方向性混合リンパ球反応（ＭＬＲ）を実施した。３日後、増生している（outgrowing）アロ抗原特異的Ｔ細胞のクローン性集団が観察された（図１７Ａ、図１７Ｂ）。ＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞の総数を、ＦＡＣＳによって決定した。抗ＬＩＬＲＢ２の存在下で生成したマクロファージは、回復したＣＤ４／ＣＤ８  Ｔ細胞数（図１１Ｇ）およびＩＦＮγ分泌（図１１Ｈ）を示し、これは、ＩｇＧ処理マクロファージと比較して、抗ＬＩＬＲＢ２が抑制能を減退させたことを示している。低用量のＯＫＴ３で刺激したＰＢＭＣ培養物では、抗ＬＩＬＲＢ２は、ＰＤ−１遮断と有意に相乗して、ＩＦＮγのエフェクターＴ細胞分泌を増強した（図１１Ｉ）。全体として、本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムが、適応Ｔｈ１エフェクターＴ細胞応答を増強するマクロファージ表現型を誘導したことを実証した。
【０３２２】
ＬＩＬＲＢ２遮断は、Ｍ（ＩＬ４）免疫、遊走性および小胞輸送経路を変更する
トランスクリプトーム研究は、マクロファージの成熟化および表現型変化に関するさらなる洞察を提供することができる。Ｍ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）集団を比較する初期のマイクロアレイ研究は、Ｍ１対Ｍ２様の機能的表現型と関連するマーカーおよび経路ネットワークを定義している（２７）。抗ＬＩＬＲＢ２との関連で同じ実験条件を使用して、本発明者らは、Ｉｌｌｕｍｉｎａマイクロアレイ分析を実施して、ＬＩＬＲＢ２遮断がＭ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）における転写ネットワークにどのように影響し得るかを決定した。Ｍ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）ＩｇＧ処理トランスクリプトームの比較は、上位１００個とＭａｎｔｏｖａｎｉ（２７）によって元々記載されたものとの間の顕著な重複を伴って、３，９２６個の差次的に発現される遺伝子（ＤＥＧ）を同定した（図１８Ａ、図１８Ｂ）。Ｍ（ＬＰＳ）の抗ＬＩＬＲＢ２対ＩｇＧ処理は、２２０個のＤＥＧを生じたが、Ｍ（ＩＬ４）における同じ処理は、６６４個のＤＥＧを生じた（図１２Ａ）。６６個のＤＥＧにおける変化が、抗ＬＩＬＲＢ２処理したＭ（ＬＰＳ）とＭ（ＩＬ４）との間で保存された（図１２Ｂ）。合わせると、これらのデータは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムが、ＩＬ４成熟化対ＬＰＳ成熟化の条件下で、実質的により多くの転写変化を生じることを実証し、６６個の保存されたＤＥＧは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニスト特異的遺伝子変更が、サイトカイン誘導性の成熟化とは無関係であることを示している。免疫機能、脂質／コレステロール恒常性および細胞骨格恒常性を調節する遺伝子が、最も突出していた。Ｍ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）の両方において、ＬＩＬＲＢ２遮断は、他のＬＩＬＲファミリーメンバーとさらに競合し得る分泌型ＬＩＬＲファミリーメンバーであるＬＩＬＲＡ３転写物を上方調節した。抗ＬＩＬＲＢ２は、Ｃｃｌ２２、ＦＧＲおよびＴｒｅｍ２転写ならびにＭ１関連Ｓｐｈｋ１転写を増加させたが、Ｓｉｇｌｅｃ１、ＰＬＣデコイメッセンジャーＰｌｃｌ２および補体タンパク質Ｃ２転写ならびにＭ２関連Ｋｌｆ２転写物を減少させた。ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２に応答したＭ（ＬＰＳ）およびＭ（ＩＬ４）の主成分分析は、ＬＩＬＲＢ２遮断が、互いに異なる独自のマクロファージ表現型を生じることを示唆している（図１２Ｃ）。
【０３２３】
ＬＩＬＲＢ２遮断が、Ｍ（ＩＬ４）対Ｍ（ＬＰＳ）のグローバル転写に対してより顕著な影響を有するという知見は、ＬＩＬＲＢ２が、定常状態またはＭ２様マクロファージ対Ｍ１様マクロファージにおいて免疫恒常性を維持するためにより重要であり得ることを示唆している。本発明者らは、ＧＯｒｉｌｌａプラットフォームを使用するジーンオントロジー分析（４５、４６）を適用して、生データの機能的解釈を提供した。Ｍ（ＬＰＳ）ＤＥＧは、Ｇ共役タンパク質受容体シグナル伝達、輸送および他の細胞プロセスと関連した。Ｍ（ＩＬ４）では、ＬＩＬＲＢ２遮断は、免疫機能、ならびに細胞遊走／運動性、脂質代謝、アポトーシス／増殖、および増加した酵素的リモデリング／活性と関連する遺伝子を有意に変更させたが（図１９Ｃ、図１９Ｄ）、免疫機能との明確な関連は、ＬＰＳ刺激では留意されなかった（図１９Ａ、図１９Ｂ）。抗ＬＩＬＲＢ２に応答して、免疫機能と関連するＭ（ＩＬ４）遺伝子は、適切に調節された（図１２Ｄ）。興味深いことに、増強された適応免疫および共刺激に関与するＣＤ８３、Ｌｉｇｈｔ、Ｒｉｐｋ２およびＴｗｅａｋｒ転写物は、上方調節された。以前の報告（２７、４７）と一致して、Ｐｆｋｐ、Ｓｐｈｋ１、Ｓｌｃ３１ａ２、Ｓｅｒｐｉｎｅ１、Ｈｓｄ１１ｂなどを含むＭ１関連遺伝子は、上方調節された（図１９Ｅ）。スフィンゴシンキナーゼ１（Ｓｐｈｋ１）は、高脂肪食およびｏｂ／ｏｂマウス由来の肥満脂肪組織マクロファージと関連する（４８）。Ｍ１関連遺伝子と比較して、Ｉｌ１３ｒα１、ＣＤ３０２、Ｆｇｌ２、カテプシンＣ、ＣＤ１６３Ｌ１、Ｄｃ−ｓｉｇｎ（ＣＤ２０９）、Ｍａｆ、Ｃｃｌ１３、Ｃｃｌ２３、Ｓｔａｂ１およびＴｌｒ５を含むより多くのＭ２関連遺伝子が、抗ＬＩＬＲＢ２によって下方調節された（図１２Ｄ）。ＬＩＬＲＢ２遮断は、Ｍ（ＩＬ４）において、マクロファージエンハンサー状況およびＭ２関連遺伝子発現の重要な調節因子であるＭＡＦを抑制した（４９）。Ｋｌｆ２／Ｋｌｆ４、Ｔｇｆｂｒ２、Ｍｓ４ａ６ａ、Ａｌｏｘ１５などを含む他のＭ２関連遺伝子もまた下方調節された（図１９Ｅ）。Ｍ１／Ｍ２分化におけるこれらの分子の生物学的役割は、いまだ解明されていない。特に、増加したＬｉｌｒａ３レベルに加えて、抗ＬＩＬＲＢ２で処置したＭ（ＩＬ４）は、Ｌｉｌｒｂ５およびＡｎｇｐｔｌ４転写物の顕著な阻害を示した。例えば、Ｃｃｌ８、Ｃｃｌ２６、Ｃｃｌ１３、Ｃｃｌ１４、Ｃｃｌ１５およびＣｃｌ２３などのケモカイン転写物レベルも、強く阻害された。本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２遮断が、ＬＰＳ誘導性の二重特異的ＰＴＰ（ＤＳＰ）、Ｄｕｓｐ１０（ＭＫＰ−５、ＪＮＫおよびｐ３８経路関連ホスファターゼ）（５０）およびＤｕｓｐ２２（ＪＳＰ−１、ＪＮＫ経路関連ホスファターゼ）（５１）を抑制したことも観察したが、それは、炎症応答の負のフィードバック制御を媒介する。
【０３２４】
要約すると、本発明者らのトランスクリプトームワイド分析は、ＬＩＬＲＢ２遮断が、免疫を含むマクロファージ成熟化における表現型変化、ならびに代謝、選別および細胞骨格変化を生じることを実証した。
【０３２５】
ＬＩＬＲＢ２遮断は、腫瘍細胞誘導性のマクロファージ成熟化を変更し得、抗腫瘍免疫を促進し得る
本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２遮断が、腫瘍由来因子および腫瘍微小環境の存在下でマクロファージ表現型を変更できるかどうかを決定した。一部の腫瘍細胞は、腫瘍細胞由来ＩＬ６に依存するプロセスにおいて、単球によるＭ−ＣＳＦの自己分泌産生を促進するのに十分である（５２）。本発明者らは、腫瘍細胞とヒト単球との共培養が、マクロファージを生成するのに十分であると仮説を立てた。ＣＤ３３＋ＣＤ１４＋細胞に対してゲートして、本発明者らは、Ａ５４９  ＮＳＣＬＣ細胞が、そのプロファイルがＭ−ＣＳＦ培養に由来するマクロファージと類似するマクロファージを生成するのに十分であったという知見を再現した（図１３Ａ）。本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストの存在下で培養したＡ５４９由来マクロファージが、ＭＣＳＦ初代マクロファージ培養物についての本発明者らの観察（図１０）と一致して、減少したレベルのＣＤ１４、ＣＤ１６３、ＣＤ１６およびＤＣ−ＳＩＧＮを有した（図１３Ｂ）ことをさらに観察した。Ａ５４９  ＮＳＣＬＣ細胞と同様、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニストは、Ｈｓ５７８Ｔ乳がん細胞由来マクロファージに対して類似の影響を発揮した（図２０Ａ、図２０Ｂ）。本発明者らは、次に、Ａ５４９細胞が免疫不全ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスにおいて皮下で共注射された場合に初代ヒトマクロファージを生成できるかどうか、およびＬＩＬＲＢ２遮断がマクロファージをｉｎ  ｖｉｖｏで同様にリプログラミングできるかどうかを見積もった（図２１）。ヒトＣＤ４５＋ＣＤ３３＋細胞に対してゲートするＦＡＣＳは、腫瘍単一細胞懸濁液からヒト骨髄細胞を同定した（図１３Ｃ）。免疫マーカーのＦＡＣＳ分析は、ＣＤ１６３における特異的低減が、合計５人のドナーのうち４人において再現性良く検出されたことを示した（図２１Ｂ）。さらに、ＣＤ１４、ＣＤ１６およびＰＤ−Ｌ１を含む他のマーカーにおける変化は、αＬＩＬＲＢ２に応答して、ドナーを横断して可変であった。図１３Ｄは、１人のドナーからの代表的なデータを示したが、ＣＤ１４、ＨＬＡＤＲおよびＣＤ１６についての５人全てのドナーからの組み合わせたデータが、図２１Ｄに示される。ＣＤ１４およびＣＤ１６は、有意に下方調節されたが、ＨＬＡ−ＤＲは、一対比較分析を使用することによって、複数のマウスおよび複数のヒト単球ドナーを横断して、抗ＬＩＬＲＢ２処理後に上方調節された（図２１Ｄ）。ＨＬＡ−Ａ２が一致したヒト化ＮＣＧマウスを、ルシフェラーゼ発現Ａ５４９（ＬＵＣ−Ａ５４９）細胞を有するＡ５４９（ＨＬＡ−Ａ２＋）異種移植モデルを使用して抗ＰＤ−１処置と併せたＬＩＬＲＢ２遮断による長期抗腫瘍応答を追跡するために、ｉｎ  ｖｉｖｏ実験に使用した。それらの結果は、抗ＬＩＬＲＢ２および抗ＰＤ−１の組合せが、ＬＵＣ−Ａ５４９腫瘍負荷を実質的に減少させたことを示した（図１３Ｅ）。ヒトマクロファージのＭ１表現型をｉｎ  ｖｉｖｏで促進することに対する抗ＬＩＬＲＢ２の効果を見積もるために、本発明者らは、ヒトＣＤ３４＋臍帯血幹細胞が生着したＭＩＳＴＲＧマウスを使用してヒト化マウスモデルを生成して、ヒトマクロファージのｉｎ  ｖｉｖｏ応答を研究した。ＭＩＳＴＲＧマウスは、マウスにおけるヒト骨髄の発生および機���の完全な再現を可能にする、自然免疫細胞の発生にとって重要なヒト化ノックイン対立遺伝子（Ｍ−ＣＳＦｈ、ＩＬ３／ＧＭ−ＣＳＦｈおよびＴＰＯｈ）に起因して、異種ヒト造血発生を支持する。類似のヒトＣＤ３３＋細胞生着率が、実験群間で観察された（図２１Ｃ）。ヒト化マウスをＣｐＧで処置し、血清中のＴＮＦα濃度を測定した。興味深いことに、およそ２倍高いヒトＴＮＦαレベルが、対照Ｉｇと比較して抗ＬＩＬＲＢ２で処置したマウスにおいて見出された（図１３Ｆ）。このヒト化マウスモデルにおける食作用に対するＬＩＬＲＢ２の効果を、ＧＦＰ発現大腸菌（Escherichia coli）を使用して試験した。抗ＬＩＬＲＢ２は、対照Ｉｇ処置群と比較した場合、ＧＦＰ発現大腸菌（Escherichia coli）に対するＣＤ１４＋ＣＤ１６−単球の食作用活性を有意に増加させた（図１３Ｇ）。
【０３２６】
合わせて考えると、本発明者らのデータは、抗ＬＩＬＲＢ２が、異種移植ヒト肺がんモデルにおける抗腫瘍応答、ヒト化ＭＩＳＴＲＧマウスにおけるＣｐＧチャレンジに対する全身応答およびマクロファージの食作用活性を増強するように、ヒトマクロファージをｉｎ  ｖｉｖｏでリプログラミングできることを示している。全体的結果は、アンタゴニストＬＩＬＲＢ２抗体が、マクロファージ機能をＭ１関連表現型へとモジュレートでき、炎症促進性応答をｉｎ  ｖｉｖｏでさらに増強できることを示している。
【０３２７】
ＬＩＬＲＢ２遮断は、同系ルイス肺癌（ＬＬＣ）保有マウスにおいて、抗腫瘍応答を増強でき、ＭＤＳＣおよびＴｒｅｇ集団を減少させることができる。
ＬＩＬＲＢ２は、マウス細胞上ではなくヒト細胞上でのみ発現され、マウスＰｉｒｂ遺伝子に対して非常に低い相同性を示すので、本発明者らの抗体は、マウスの系では交差反応しなかった。したがって、本発明者らは、ＢＡＣ  ＤＮＡ注射を用いて、ＬＩＬＲＢ２トランスジェニックマウスを開発した。これらのマウスは、末梢血中のＣＤ１１ｂ＋細胞上にＬＩＬＲＢ２／３を高度に発現し（図１４Ａ）、抗ＬＩＬＲＢ２処置は、ＣＤ８６＋ＭＨＣＩＩ＋集団（図１４Ｂ、図１４Ｃ）ならびにＬＰＳ刺激に応答したｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴＮＦα分泌（図１４Ｄ）を増加させた。本発明者らは、単独のまたは抗ＰＤ−Ｌ１処置と組み合わせたＬＩＬＲＢ２遮断が、ルイス肺癌モデルにおいて、腫瘍進行を阻害できるかどうかおよび腫瘍微小環境をモジュレートできるかどうかを評価した。ＰＤ−Ｌ１遮断は、腫瘍成長に対して効果を有さなかったが、ＬＩＬＲＢ２遮断は、中程度の抗腫瘍効果を示した。ＰＤ−Ｌ１およびＬＩＬＲＢ２の両方の遮断は、ＬＬＣ腫瘍保有マウスにおいて、有意に低減された腫瘍サイズおよび重量をもたらした（図１４Ｅ）。さらに、抗ＬＩＬＲＢ２および抗ＰＤ−Ｌ１の組合せは、腫瘍組織中の顆粒球性Ｌｙ６Ｇ＋Ｌｙ６Ｃｉｎｔ  ＭＤＳＣ集団を有意に減少させたが、単球性Ｌｙ６Ｇ−Ｌｙ６Ｃｈｉ  ＭＤＳＣは増加させた（図１４Ｆ）。抗ＬＩＬＲＢ２を抗ＰＤ−Ｌ１処置と組み合わせた場合、脾臓および腫瘍浸潤したリンパ球中のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇ集団は共に、実質的に減少した（図１４Ｇ）。全体として、ＬＩＬＲＢ２遮断は、ＭＤＳＣおよびＴｒｅｇ集団を有意に減少させ、抗ＰＤ−Ｌ１処置の治療有効性をｉｎ  ｖｉｖｏで増強させた。
【０３２８】
初代腫瘍関連マクロファージは、ＬＩＬＲＢ２遮断にｅｘ  ｖｉｖｏで応答する
本発明者らは、次に、ＬＩＬＲＢ２遮断が、単離された初代腫瘍関連マクロファージをｅｘ  ｖｉｖｏでリプログラミングできるかどうかを決定した。コラゲナーゼ消化した腫瘍組織の単一細胞懸濁液を使用して、腫瘍浸潤性白血球を単離した。ＤＡＰＩ陰性生細胞およびヒトＣＤ４５に対してゲートすることによって、本発明者らは、ＣＤ３３、ＣＤ１４およびＨＬＡ−ＤＲゲーティングに基づいて、浸潤性腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）およびＭＤＳＣを同定することができた（図１５Ａ）。ＬＩＬＲＢファミリーメンバーについての染色は、ＭＤＳＣおよびＴＡＭ集団の間での、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＬＲＢ３およびＬＩＬＲＢ４の変動するが遍在する発現を明らかにしたが（図１５Ｂ、図１５Ｃ）、がん患者の腫瘍組織から単離されたか、または健康なドナーＰＢＭＣに由来する樹状細胞は、ＬＩＬＲＢ２を発現した（図２３Ａ、図２３Ｂ）。腫瘍浸潤性骨髄集団がＬＩＬＲＢ２遮断に応答できるかどうかを調査するために、本発明者らは、ＩＦＮγまたは抗ＬＩＬＲＢ２の存在下または非存在下で、腫瘍浸潤性白血球をｅｘ  ｖｉｖｏでＭ−ＣＳＦで４８時間刺激した。ほとんどの患者由来の単球は、抗ＬＩＬＲＢ２の処理で、増強されたＴＮＦα放出を示した（図１５Ｄ）。細胞表面マーカーＣＤ１６３、ＤＣ−ＳＩＧＮおよびＣＤ１４の分析は、ＬＩＬＲＢ２遮断に応答した顕著に減退した発現を示した。減少したＣＤ１６およびＰＤ−Ｌ１発現の傾向が観察されたが、これは、統計的に有意ではなかった（図１５Ｅ）。これらの実験は、持続時間がわずか４８時間であり、腫瘍中に見出される総白血球集団を含んだ。それにもかかわらず、本発明者らのｅｘ  ｖｉｖｏデータは、患者生検由来の腫瘍関連マクロファージが、広範なＬＩＬＲＢファミリーメンバーを発現し、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムに対して応答性であることを実証している。
【０３２９】
考察
本発明者らの研究は、特異的モノクローナル抗体によるＬＩＬＲＢ２のアンタゴニズムが、単球における炎症応答を増強し、下流のマクロファージ成熟化表現型を直接変更するのに十分であることを実証している。本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２遮断の際に無効にされるＬＩＬＲＢ２の下流のＳＨＰ−１の構成的な活性化を観察した。ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムの存在下で成熟したＭＣＳＦ単球由来マクロファージは、増強されたＳＴＡＴ１、ＥＲＫおよびＮＦκＢリン酸化によって示されるように、ＬＰＳおよびＩＦＮγ刺激に対する増加した感受性を示したが、増加したＳＯＣＳ３を伴った低減されたＳＴＡＴ６リン酸化およびＤＣ−ＳＩＧＮ発現によって示されるように、ＩＬ４刺激に対して耐性であった。興味深いことに、ＬＩＬＲＢ２遮断自体は、ＮＦκＢおよびＥＲＫ１／２リン酸化を増大させ、ＡＫＴリン酸化を減少させたが、これは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズム単独が、ＭＣＳＦ単球由来マクロファージをＭ１系列に向けて適度に駆動するのに十分であることを示唆している。それにもかかわらず、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、Ｍ１表現型と関連する遺伝子クラスターを促進しつつ、Ｍ２関連のＩＬ４駆動性遺伝子クラスターを抑制した。本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２遮断がＳＨＰ１／２リン酸化を抑制でき、ＳＨＰ１／ＤＵＳＰ媒介性の直接的または間接的な脱リン酸化（ＥＲＫではＹ２０４における、ｐ３８ではＹ１８２における）の抑制によるＥＲＫ（５３）およびｐ３８の回復した活性化を介してＭ１プログラムをもたらして、ＮＦκＢのさらなる活性化をもたらすことができる、ＬＩＬＲＢ２媒介性のシグナル調節モデル（図１５Ｆ）を提唱した。文献（５４）と一致して、ＳＨＰ１／ＳＨＰ２動員／活性化の下方調節は、ＪＡＫ−ＳＴＡＴ１シグナル伝達のサプレッサーの除去をもたらし、したがって、ＩＦＮ誘導性のシグナル伝達カスケードを増強した（５５）。他方、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、ＩＬ４／ＳＴＡＴ６シグナル伝達を抑制することが報告されているＳＯＣＳ３を増加させることによって、ＳＴＡＴ６リン酸化を阻害した（５６）。ＳＯＣＳ３の誘導は、ＭＡＰＫ／ＮＦκＢカスケードの活性化を介した炎症促進性サイトカイン（ＩＬ６およびＩＬ１２）の抗ＬＩＬＲＢ２媒介性の放出から生じ得る（５７、５８）。ＡＫＴのリン酸化は、ＬＩＬＲＢ２遮断によって有意に阻害されたが、これは、以下の潜在的阻害に起因し得る：１）ＳＯＣＳ３（５９、６０）、または２）ＰＩ３−キナーゼγもしくはＳＨＩＰ−１  −  免疫刺激と抑制との間のマクロファージスイッチのための重要な調節因子として同定された２つの分子（６１、６２）。
【０３３０】
本発明者らは、Ｐｉｒｂ欠損ＭＤＳＣの養子移入が腫瘍負荷および肺転移を減少させることを以前に示している。マクロファージ機能をモジュレートすることは、がん免疫療法のための魅力的なアプローチを提示するが、それは、文献の大多数が、ＴＡＭが、腫瘍免疫回避に寄与する腫瘍微小環境の主要な構成成分である場合が多いことを示しているからである（２）。マクロファージ枯渇に焦点を合わせたＴＡＭ標的化治療薬は、マウスモデルにおいて腫瘍負荷を低減させることにおける臨床利益を強調する（６３）。しかし、ＣＳＦ１Ｒ阻害剤は、腫瘍促進（pro-tumor）顆粒球性ＭＤＳＣの循環レベルを増強することがあり、一方、ＣＣＬ２中和処置の中止は、腫瘍への単球リバウンドを加速し得る（６４、６５）。結果として、増強された転移および悪化した転帰が、処置休止の際に乳がんのいくつかのマウスモデルにおいて観察される。ＴＡＭおよびＭ２様マクロファージは、機能的類似性を共有するようである（６６）。適応抗腫瘍免疫を支持するようにＴＡＭをリプログラミングする免疫療法は、ＴＡＭ枯渇と関連する潜在的な落とし穴を回避する代替的な戦略を提供する（６７）。ＬＩＬＲＢ２遮断は、ＭＤＭ培養物で観察されたものと同様に、マクロファージの腫瘍依存的成熟化を変更するようであった。さらに、本発明者らは、異種移植ヒト化マウスにおいて、ＬＩＬＲＢ２抗体処置に応答した増強された急性ＴＮＦα放出および増加した食作用能を実証した。ＮＳＣＬＣからの患者生検は、ＭＤＳＣおよびＴＡＭ集団の顕著な浸潤を示した。これらの初代ＭＤＳＣ／ＴＡＭは、高レベルのＬＩＬＲＢタンパク質を発現し、ｅｘ  ｖｉｖｏ研究において、ＬＩＬＲＢ２遮断の存在下でマクロファージ表現型スイッチを起こすことが可能であった。ＬＩＬＲＢ２は、患者から採取した初代単球由来マクロファージならびにＴＡＭ集団の両方において、重要な負の調節因子であるようであった。本発明者らは、抗ＬＩＬＲＢ２が、免疫適格性同系ＬＩＬＲＢトランスジェニックマウスモデルにおいて、脾臓および腫瘍組織の両方中のＬｙ６Ｇ＋Ｌｙ６Ｃｉｎｔ顆粒球性ＭＤＳＣを顕著に減少させたことも観察した。
【０３３１】
最も重要なことに、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムは、ヒト肺がん細胞Ａ５４９を保有するＰＢＭＣヒト化ＮＣＧマウスモデルにおいて、免疫チェックポイント阻害剤である抗ＰＤ−１の有効性を実質的に増強した（図１３Ｅ）。本発明者らは、免疫適格性同系Ｌｉｌｒｂ２／３  ＢＡＣトランスジェニックマウスモデルにおいて、ＬＩＬＲＢ２遮断の効果をさらに確認した（図１４Ｅ）。抗ＰＤ−Ｌ１処置単独が、ＬＬＣ腫瘍保有免疫適格性マウスにおいて限定的な抗腫瘍効果を示したことに留意することが重要である（６８、６９）。本発明者らは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムが、健康なドナー由来の活性化された単球においてＬＰＳ誘導性のＣＤ２７４（ＰＤ−Ｌ１）発現を抑制したこと（図１０）、ならびにＬＩＬＲＢ２およびＰＤ−Ｌ１の両方の遮断が、ＬＩＬＲＢ２トランスジェニックマウスにおいて、ＬＬＣ腫瘍に対する強い宿主抗腫瘍免疫を強化したことを見出した。それに付随して、本発明者らは、抗ＬＩＬＲＢ２および抗ＰＤ−Ｌ１で処置した腫瘍保有マウスにおいて、顆粒球性ＭＤＳＣおよびＴｒｅｇにおける顕著な減少を観察した。単球性ＭＤＳＣにおける予期せぬ増加は、抗ＰＤ−Ｌ１の有効性を損なわず、これは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムが、単球性ＭＤＳＣを、ＬＩＬＲＢ２遮断の存在下でのＰｉｒｂ欠損ＭＤＳＣ（１２）およびマクロファージのものと類似の、非抑制的な免疫刺激表現型へと変換したことを示唆している（図１３）。
【０３３２】
ｍＴＯＲ−セマフォリン６Ｄ（Ｓｅｍａ６Ｄ）−ペルオキシソーム増殖因子受容体γ（ＰＰＡＲγ）（７０）、ＰＩ３Ｋγ−ｍＴＯＲ（６２）およびＴＳＣ−ｍＴＯＲ経路（７１、７２）を含むいくつかの経路が、Ｍ２極性化に関与することが示されている。これらの経路を標的化することは、免疫腫瘍学において高い治療的価値を潜在的に提供し得る。本発明者らのトランスクリプトームデータは、ＬＩＬＲＢ２遮断が、Ｍ２様成熟化に関与する複数の遺伝子標的を顕著に下方調節したが、増強された適応免疫および共刺激と関連する遺伝子は上方調節されたことを示した。本発明者らの研究は、ＬＩＬＲＢ２のアンタゴニズムが、Ｓｅｍａ６Ｄ／ＰＩ３Ｋγ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路を妨害し得るＡＫＴ活性化およびＩＬ４シグナル伝達の両方を阻害したことを強調した。これは、ＬＩＬＲＢ２のアンタゴニズムが、免疫チェックポイント阻害剤の有効性を増強するように腫瘍関連マクロファージの免疫抑制機能を逆転させることに対してより広い影響を有し得ることを示唆している。本発明者らのデータは、ＬＩＬＲＢ２アンタゴニズムが、腫瘍微小環境中のＴＡＭをリプログラミングするための有望なアプローチであり、それによって、適応抗腫瘍免疫を増強することができるという強い証拠を提供した。
【０３３３】
材料および方法
動物
ＮＳＧ−ＳＧＭ３（ストック番号０１３０６２）およびＭＩＳＴＲＧマウス（ストック番号０１７７１２）は、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）から購入した。ＮＣＧマウス（ストック番号５７２）は、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入した。全ての動物実験は、Ｉｃａｈｎ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｔ  Ｍｏｕｎｔ  ＳｉｎａｉおよびＨｏｕｓｔｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの動物ガイドラインに従って実施した。
【０３３４】
細胞株
Ｌｉｌｒｂ１−４およびＬｉｌｒａ１発現２Ｂ４レポーター細胞は、対応するＬｉｌｒ−Ｆｃ融合遺伝子を保有するプラスミドによるトランスフェクションと、その後のＧＳ／ＭＡＳシステムによる選択によって生成し、１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ、Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ａｔｌａｎｔｉｃ、ＧＡ）＋１００ｎＭペニシリン／ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ、Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌｇｒｏ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）中で維持した。前単球細胞株であるＴＨＰ−１細胞は、１０％ＦＢＳ、０．１ｍＭ非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウムを補充したＲＰＭＩ  １６４０（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｅｌｌｇｒｏ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）中で培養した。ＴＨＰ−１およびヒト肺胞腺癌Ａ５４９細胞株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から購入した。ＬＩＬＲＢ２＋ＴＨＰ−１細胞は、全長ＬＩＬＲＢ２プラスミドによるレトロウイルストランスフェクションによって生成した。
【０３３５】
抗ＬＩＬＲＢ２ハイブリドーマのフローサイトメトリー分析および生成
市販の抗ＬＩＬＲＢ２抗体、クローン４２Ｄ１およびクローン２８７２１９は、それぞれ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）およびｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入した。抗ＬＩＬＲＢ１（クローンＧＨＩ／７５）、抗ＬＩＬＲＢ３（クローンＭＫＴ５．１）および抗ＬＩＬＲＢ４（クローンＺＭ４．１）抗体は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄからであった。抗ＬＩＬＲＡ１（クローン５８６３２６）抗体は、Ｎｏｖｕｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ（Ｌｉｔｔｌｅｔｏｎ、ＣＯ）からであった。ヒト抗ＣＤ４−ＦＩＴＣ（クローンＲＰＡ−Ｔ４）、抗ＣＤ８−ＰＥ（クローンＨＩＴ８ａ）、抗ＣＤ１６−ＦＩＴＣ（クローンＣＢ１６）、抗ＤＣ−ＳＩＧＮ−ＰＥ（クローンｅＢ−ｈ２０９）、抗ＣＤ１６３−ＡＰＣ（クローンＧＨＩ／６１）、抗ＰＤ−Ｌ１−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（クローンＭＩＨ１）、抗ＣＤ３３−ＰＥ−Ｃｙ７（クローンＷＭ−５３）、抗ＣＤ１４−ＡＰＣ−Ｃｙ７（クローン６１Ｄ３）、抗ＣＤ４５−ＰＥ（クローン２Ｄ１）および抗ＨＬＡ−ＤＲ−ＦＩＴＣ（クローンＬＮ３）は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅまたはＢｉｏｌｅｇｅｎｄから購入した。マウス抗ＣＤ１１ｂ−ＰｅｒＣＰ（クローンＭ１／７０）、抗ＣＤ８ａ−ｅＦｌｕｏｒ  ７８０（クローン５３−６．７）、抗ＣＤ４−ＦＯＸＰ３（クローンＦＪＫ−１６Ｓ）、抗ＣＤ４−ＦＩＴＣ（クローンＧＫ１．５）、抗ＣＤ２５−ＰＥ−Ｃｙ７（クローンＰＣ６１．５）、抗ＭＨＣＩＩ−ＰＥ−Ｃｙ７（クローンＭ５／１１４．１５．２）、抗Ｌｙ６Ｇ−ＡＰＣ−Ｃｙ７（クローン１Ａ８）および抗ＣＤ２５−ＰＥ−Ｃｙ７（クローンＰＣ６１．５）は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅまたはＢｉｏｌｅｇｅｎｄから購入した。抗Ｌｙ６Ｃ−ＦＩＴＣ（クローンＡＬ−２１）および抗マウスアルギナーゼ１−ＡＰＣ（クローンＩＣ５８６８Ｆ）は、それぞれ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）およびＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）から購入した。
【０３３６】
本発明者らは、Ｌｉｌｒｂ２  ＤＮＡで免疫化し、その後、ＬＩＬＲＢ２小胞またはタンパク質で１回ブーストすることによって、抗ＬＩＬＲＢ２抗体を生成した。増生している融合ハイブリドーマクローンを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで拡大増殖させ、上清を、ヤギポリクローナル抗マウスＩｇＧ二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で標識した２Ｂ４  ＬＩＬＲＢ２発現細胞に対するＦＡＣＳを使用することによってスクリーニングした。２Ｂ４細胞は、Ｄｒ．Ｈｉｓａｓｈｉ  Ａｒａｓｅ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、Ｏｓａｋａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｊａｐａｎからのご厚意による贈与である。
【０３３７】
抗ＬＩＬＲＢ２抗体の機能的スクリーニングのために、ＰＢＭＣを、２０μｌの抗体含有上清と共に４８時間インキュベートした。ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）およびＧｏｌｇｉＰｌｕｇ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、細胞培養の最後の４時間に添加した。細胞を、製造業者の指示書（ＧｏｌｇｉＰｌｕｇ  Ｋｉｔ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に従って、表面ＣＤ８６（抗ＣＤ８６−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８、クローンＩＴ２．２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）および細胞内ＴＮＦα（抗ＴＮＦα−ＰＥ−Ｃｙ７、クローンＭＡＢ１１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）のために採取した。フローサイトメトリー分析では、死細胞を、ＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）染色によって排除した。
【０３３８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究は抗体１Ｈ３を用いて実施した；ｉｎ  ｖｉｖｏ研究は抗体５Ｇ５を用いて実施した。
【０３３９】
バイオレイヤー干渉法結合アッセイ
ＬＩＬＲＢ２−Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｗａｙｎｅ、ＰＡ）と抗ＬＩＬＲＢ２抗体との間のリアルタイム結合アッセイを、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄシステム（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ、ＣＡ、ＵＳＡ）でバイオレイヤー干渉法を使用して実施した。このシステムは、センサー表面に結合した分子の厚さを測定するために、光ファイバーセンサーの表面から反射した光の干渉をモニタリングする。抗ＬＩＬＲＢ２抗体（１０μｇ／ｍＬ）を、速度論グレードのＰｒｏｔｅｉｎ  Ｇ／マウスＩｇＧ高結合バイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）にカップリングした。抗ＬＩＬＲＢ２抗体でコーティングしたセンサーを、０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０および１０％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ中の漸増濃度のＬＩＬＲＢ２−Ｈｉｓに結合させた。結合速度論を、観察された結合曲線についてベストフィットを決定し、会合速度定数を計算するＯｃｔｅｔ  Ｒｅｄソフトウェアパッケージを使用して計算した。ＬＩＬＲＢ２−Ｈｉｓを、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０および１０％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ中でセンサーをインキュベートすることによって解離させた。ベストフィット解離曲線を決定し、解離速度定数を計算した。結合親和性（ｋＤ）を、動力学的会合速度定数によって除算した動力学的解離速度定数として計算した。
【０３４０】
抗体精製およびエンドトキシン試験
クローン性ハイブリドーマ細胞を、ＣｌｏｎａＣｅｌｌ−ＨＹ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ａ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養し、その後、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ−ＳＦＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して無血清条件に適応させた。ハイブリドーマ細胞を、５０ｍＬのＨｙｂｒｉｄｏｍａ  ＳＦＭ中で２週間、または培地が使い果たされるまで拡大増殖させた。抗体含有上清を遠心分離（８００ｇ、１０分）によって採取し、１００ｋＤａの公称分子量限界を有するＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−１５遠心分離フィルター濃縮器を使用して濃縮した。次いで、濃縮された上清を、製造業者の指示書に従ってＮａｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ／Ｇ  Ｓｐｉｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用して精製した。精製された抗体を、Ｚｅｂａ（商標）Ｓｐｉｎ  Ｄｅｓａｌｔｉｎｇ  Ｃｏｌｕｍｎｓ、７Ｋ  ＭＷＣＯ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して脱塩した。必要に応じて、精製された抗体を、遠心分離フィルター（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によってさらに濃縮した。精製された抗体におけるエンドトキシンレベルを、製造業者のプロトコールに従って、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＬＡＬ  Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって決定した。
【０３４１】
ヒト単球由来マクロファージの生成および分化
健康なドナー由来のバフィーコートは、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒから購入した。ＰＢＭＣを、ＬｙｍｐｈｏＰｒｅｐ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ番号０７８５１）を使用することによって単離した。ＣＤ３３＋単球を、ＣＤ３３＋磁性ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１３０−０４５−５０１）を使用して健康なＰＢＭＣドナーから精製し、Ｍ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ：３００−２５）の存在下でＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２（１μｇ／ｍＬ）で５日間処理した。５日間の培養後、未熟なマクロファージを、フロー分析のために得た、またはＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）もしくはＩＬ４（２５ｎｇ／ｍｌ）で１６〜２４時間さらに刺激した。上清を収集し、ＴＮＦαおよびＩＬ１０産生を、ＥＬＩＳＡ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）によって決定した。
【０３４２】
ＮＳＧ−ＳＧＭ３免疫不全マウスにおけるＡ５４９異種移植モデル
３×１０６個のＡ５４９細胞および健康なドナー由来のＣＤ３３＋骨髄細胞を、５０％Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ３５６２３１）中に懸濁し、ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、番号０１３０６２）中に皮下で共接種した。各マウスは、右および左脇腹に２つの皮下Ａ５４９／ＣＤ３３＋移植片を受けた（０日目）。抗ＲＢ２抗体および対応するＩｇ対照を、６日目および９日目に静脈内注射した（１５０μｇ／マウス）。腫瘍を測定し、１２日目に分析のために解剖した。腫瘍浸潤性リンパ球を、Ｍ１／Ｍ２分化のフローサイトメトリー分析のために、以前に記載されたように精製した。
【０３４３】
ＨＬＡ−Ａ２＋ＰＢＭＣヒト化ＮＣＧマウスにおけるルシフェラーゼ発現Ａ５４９（ＬＵＣ−Ａ５４９）異種移植モデル
ヒトルシフェラーゼ−Ａ５４９がん細胞（ＬＵＣ−Ａ５４９、ＧｅｎＴａｒｇｅｔ，Ｉｎｃ．から）（２×１０６細胞）を、０日目にＮＣＧ免疫不全マウス中に静脈内注射した。ヒトＨＬＡ−Ａ２＋ＰＢＭＣ（１×１０７細胞）を精製し、３日目および１３日目に、抗ＬＩＬＲＢ２と一緒に試験マウス中に静脈内注射した。抗ＬＩＬＲＢ２およびＩｇＧ（２００μｇ／マウス）を、合計８回の注射にわたり、３日毎に１回与えた。抗ＰＤ−１（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）を、合計３回の注射にわたり、１週間に１回（２００μｇ／マウス）与えた。引き続いて、ＬＵＣ−Ａ５４９腫瘍保有マウスを、ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ＳｙｓｔｅｍおよびＬｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅソフトウェア（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｉｎｃ．）を使用してルシフェラーゼ活性の生物発光画像化のためにモニタリングした。画像化前に、２５０μｌのルシフェリン（１５ｍｇ／ｍｌで；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を腹腔内投与した。その後、マウスを、イソフルラン吸入によって麻酔し、画像化した。腫瘍進行を、腫瘍接種の２５日後に、肺からの生物発光シグナル（平均放射輝度［ｐ／ｓ／ｃｍ２／ｓｒ］）によって定量化した。
【０３４４】
細菌人工染色体（ＢＡＣ）トランスジェニックマウスの生成
ヒトＬｉｌｒｂ２およびＬｉｌｒｂ３遺伝子の両方についてのＢＡＣクローンを、ヒトＢＡＣライブラリー（ＢＡＣＰＡＫ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｅｒ）から単離した。ＢＡＣ  ＤＮＡを、ＮｕｃｌｅｏＢｏｎｄ  Ｘｔｒａ  Ｍｉｄｉ  ＥＦ  Ｋｉｔによって精製した。ＢＡＣ  ＤＮＡの正体を、本発明者らの目的の遺伝子（Ｌｉｌｒｂ２）についてＰＣＲを介して確認し、次いで、胚性幹（ＥＳ）細胞中にマイクロインジェクションした。標的化された対立遺伝子の生殖系列伝達を、ＰＣＲおよびフローサイトメトリーによって確認した。
【０３４５】
Ｌｉｌｒｂ２トランスジェニックマウスにおけるルイス肺癌（ＬＬＣ）腫瘍モデル。
ルイス肺癌（ＬＬＣ）腫瘍細胞（４×１０５細胞）を、ＬＩＬＲＢ２  Ｂ６トランスジェニックマウス中に皮下注射した。腫瘍が２ｍｍ×２ｍｍに達した時点で抗体処置を開始した。抗ＬＩＬＲＢ２（２００μｇ／マウス）処置を、合計６回の注射にわたり、腫瘍接種後４日目に開始した。抗ＰＤ−Ｌ１（２００μｇ／マウス）処置を、合計５回の注射にわたり、抗ＬＩＬＲＢ２の２回目の注射と共に開始した。腫瘍を、２１日目に分析のために解剖した。脾細胞および腫瘍浸潤性リンパ球を、ＭＤＳＣおよびＴｒｅｇ集団についてのフローサイトメトリー分析のために精製した。
【０３４６】
ＧＦＰ発現大腸菌（E. coli）のｅｘ  ｖｉｖｏでの食作用。
ヒト化ＭＩＳＴＲＧマウスを、ヒトＣＤ３３＋細胞生着を見積もることによってスクリーニングし、ヒトＩｇＧ対照群と抗ＬＩＬＲＢ２群との間で等しく分配した。試験マウスに、抗ＬＩＬＲＢ２  Ａｂ（１５０μｇ／マウス）を４８時間にわたって腹腔内注射した。末梢血細胞を単離し、１×１０７個の末梢血細胞当たり２×１０８個の大腸菌（E. coli）の比率で、ＧＦＰを発現する大腸菌（E. coli）と共に３７℃で４時間インキュベートした。マウス１匹当たり二連を実施した。インキュベーション後、細胞をＰＢＳで洗浄し、生存ＣＤ４５＋ＣＤ３３＋ＣＤ１４＋集団に対してゲートすることによって分析した。
【０３４７】
ＣｐＧチャレンジ実験
ＭＩＳＴＲＧ新生仔は、低用量の放射線（１５０ｒａｄ）を受け、次いで、臍帯血由来の５×１０４個のＣＤ３４＋ヒト幹細胞（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ７０００８）を、以前に記載されたように（７３）、肝内注射した。８週間後、マウスを、末梢血中のＣＤ４５＋およびＣＤ３３＋集団の生着についてチェックした。ナイーブヒト化ＭＩＳＴＲＧマウスに、ＩｇＧ対照または抗ＬＩＬＲＢ２抗体（１５０μｇ／マウス）を２日間にわたって静脈内注射し、次いで、５ｎｍｏｌのＣｐＧ（カタログＯＤＮ１６６８；Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）で腹腔内チャレンジした。２時間後、血清を収集し、ＴＮＦαレベルについてＥＬＩＳＡを使用して分析した。
【０３４８】
ウエスタンブロットおよび共免疫沈降。
ＬＩＬＲＢ２形質導入したＴＨＰ−１細胞を、１μｇ／ｍｌ  ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２で２４時間処理し、その後、５０ｎｇ／ｍｌ  ＬＰＳ、２０ｎｇ／ｍｌ  ＩＦＮγまたは２０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ４で５、１０、３０分間急性刺激した。細胞を、細胞溶解試薬（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して溶解させた。タンパク質サンプルを、８％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル上で分離し、ＰＶＤＦメンブレンに移した。メンブレンを、４％スキムミルク溶液中でブロッキングし、適切な抗体と共にインキュベートし、引き続いて、西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートされた二次抗体と共にインキュベートした。ｐ−ＳＴＡＴ１、ｐ−ＥＲＫ１／２、ｐ−ｐ３８、ｐ−ＮＦ−κＢｐ６５、ｐ−ＳＴＡＴ６、ＳＯＣＳ１、ＳＯＣＳ３、ｐ−Ａｋｔ、ＳＨＰ−１およびｐ−ＳＨＰ−１に対する抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）から購入し、アクチンに対する抗体は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｄａｌｌａｓ、ＴＸ）から購入した。免疫反応性バンドを、ＥＣＬシステム（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて可視化した。免疫沈降のために、ＬＩＬＲＢ２＋ＴＨＰ−１細胞を、ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２で２４時間処理し、最後の１時間については０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で処理した。細胞を、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４および２５ｍＭアルファ−グリセロリン酸を含む細胞溶解緩衝液を使用して溶解させた。ＤｙｎａｂｅａｄｓプロテインＧ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）をプルダウンに使用した。プルダウンサンプルをイムノブロットアッセイに供し、抗ＬＩＬＲＢ２、抗ＳＨＰ−１および抗ｐ−ＳＨＰ−１によってプローブした。
【０３４９】
ヒト多重リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ
刺激側細胞としての使用のための成熟樹状細胞を、選別されたＣＤ１４＋単球を、ヒトＧＭ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ、ＮＪ）の存在下で５日間培養し、その後ＬＰＳ刺激することによって生成した。ＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２処理した成熟マクロファージを、以前に記載されたように生成した。応答側細胞としての同種Ｔ細胞を、無関係の健康なドナーから精製し、成熟樹状細胞および滴定された比率のマクロファージと共に７２時間共培養した（図１７Ａ）。ＭＬＲの持続時間にわたって、培養物中に抗体は存在しなかった。ＭＬＲからの細胞および上清を、ＦＡＣＳによってＣＤ４およびＣＤ８  Ｔ細胞数について分析し、ＩＦＮγ分泌についてＥＬＩＳＡによって分析した。
【０３５０】
トランスクリプトーム分析
３人の健康なドナー由来のＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２処理した単球由来マクロファージを、マイクロアレイ分析に供した。ＲＮＡを、Ｈｕｍａｎ  ＨＴ−１２  ｖ４  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ＢｅａｄＣｈｉｐｓ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）にハイブリダイズさせ、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｃａｎをスキャニングに使用した。生強度データを、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｔｕｄｉｏ（バージョン２０１１．１）Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｍｏｄｕｌｅ（バージョン１．９．０）を使用して処理し、Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒからのｌｕｍｉ  Ｒパッケージを使用してさらに処理した。データは、ＢｅａｄＳｔｕｄｉｏからエクスポートする前にバックグラウンドシグナルについて調整し、ＶＳＴ変換および分位数正規化を行った。発現なしのプローブは除去した。差次的遺伝子発現分析を、ｌｉｍｍａ  Ｒパッケージを使用して実施し、有意に差次的に発現される遺伝子を、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ  ＆  Ｈｏｃｈｂｅｒｇ偽陽性率補正を用いて、変化倍数≧１．５およびｐ値＜０．０５に基づいて同定した。差次的に発現される遺伝子のヒートマップを、ｐｌｏｔｓ  Ｒパッケージを使用して創出し、教師なし階層的クラスタリングを、ユークリッド距離に基づいて実施した。発現値を、ｚスコアで正規化し、高いおよび低い発現をそれぞれ赤および緑として示し、中間の発現を白として示す。主成分分析を、Ｒにおいてｐｒｃｏｍｐ関数を使用して実施した。マイクロアレイデータについての受託番号は、ＧＳＥ１１７３４０である。
【０３５１】
逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）
ＲＴ−ＰＣＲを、Ｔｒｉ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｍｅｔｈｏｄによって調製した総ＲＮＡに対して実施した。２μｇのＲＮＡを、Ｍ−ＭＬＶ逆転写酵素（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）およびオリゴ（ｄＴ）１８（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用するｃＤＮＡ合成のために使用した。試験した遺伝子の各々について使用した５’および３’プライマーの配列はそれぞれ、以下に示される。ＩＲＦ３、フォワード：５’ＡＧＧＴＣＣＡＣＡＧＴＡＴＴＣＴＣＣＡＧＧ（配列番号３６６）；リバース：５’ＡＧＧＴＣＣＡＣＡＧＴＡＴＴＣＴＣＣＡＧＧ（配列番号３６７）；ＩＲＦ４、フォワード：５’ＧＣＴＧＡＴＣＧＡＣＣＡＧＡＴＣＧＡＣＡＧ（配列番号３６８）；リバース：５’ＣＧＧＴＴＧＴＡＧＴＣＣＴＧＣＴＴＧＣ（配列番号３６９）；ＩＲＦ５、フォワード：５’ＧＧＧＣＴＴＣＡＡＴＧＧＧＴＣＡＡＣＧ（配列番号３７０）；リバース：５’ＧＣＣＴＴＣＧＧＴＧＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧ（配列番号３７１）；ＩＲＦ７、フォワード：５’ＣＣＣＡＧＣＡＧＧＴＡＧＣＡＴＴＣＣＣ（配列番号３７２）；リバース：５’ＧＣＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＣＣＧＴＧＴＡＧ（配列番号３７３）。
【０３５２】
ヒト肺がん組織からの浸潤性白血球の単離
ＮＳＣＬＣおよび中皮腫を含む１１個の新鮮な肺がんサンプルを、Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｍｏｕｎｔ  Ｓｉｎａｉ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒから得た。ヒト組織が関与するこの研究は、Ｉｃａｈｎ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｔ  Ｍｏｕｎｔ  ＳｉｎａｉのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄによって承認され、連邦政府および組織のガイドラインに従って実施した。腫瘍サンプルを、２ｍｇ／ｍｌのＣｏｌｌａｇｅｎａｓｅ  Ｄ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で３７℃で３０〜４５分間消化した。次いで、組織溶解物を、４０μＭセルストレーナーを介して濾過し、フロースルーを、ＰＢＳで４００×ｇで５分間２回洗浄して、腫瘍細胞をペレット化した。肺がんまたは中皮腫由来の浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を、密度勾配培地Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ０７８０１）によって単離した。１００Ｋ〜２００ＫのＴＩＬを、５０ｎｇ／ｍＬ  ＩＦＮγ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）、ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）および１μｇ／ｍｌのＩｇＧまたは抗ＬＩＬＲＢ２の存在下または非存在下で、５０ｎｇ／ｍＬ  ＭＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）と共に２日間培養した。細胞および上清を、それぞれ、フローサイトメトリー分析、およびＥＬＩＳＡによるＴＮＦα／ＩＬ１０産生に供した。
【０３５３】
統計量
全てのデータは平均±標準偏差として示す。データを、両側スチューデントｔ検定を使用して比較した。対応のあるｔ検定を使用して、異なる健康なドナーまたはがん患者からの、同じ処置からの結果を比較した。全ての分析を、ＰｒｉｓｍおよびＳＰＳＳを使用して実施した。データを、ｐ＜０．０５の値において統計的に有意とみなした。
【０３５４】
研究承認
全ての動物手順は、Ｍｏｕｎｔ  Ｓｉｎａｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  ＭｅｄｉｃｉｎｅのＣｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  ＳｕｒｇｅｒｙおよびＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｏｆ  Ｈｏｕｓｔｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅにおけるＩＡＣＵＣによって承認された。
【０３５５】
参考文献：
【０３５６】
【表３−１】
2022501428.tif 000011
【０３５７】
【表３−２】
2022501428.tif 000012
【０３５８】
【表３−３】
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【０３５９】
【表３−４】
2022501428.tif 000014
【０３６０】
【表３−５】
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【０３６１】
【表３−６】
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【０３６２】
【表３−７】
2022501428.tif 000017
【０３６３】
【表３−８】
2022501428.tif 000018
【０３６４】
[実施例１０]
抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＩＦＮガンマ放出をｉｎ  ｖｉｔｒｏでモジュレートし、同種Ｔ細胞増殖をｉｎ  ｖｉｔｒｏで阻害した。
図２３Ａ〜２３Ｃは、健康なドナー由来のＰＢＭＣの刺激後のＯＫＴ３媒介性のＴ細胞増殖（ＣＰＭ）を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。３日間の処理後、［３Ｈ］−チミジンを、培養の最後の８時間にわたって添加し、その後シンチレーションカウンターで測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。Ｔ細胞増殖（ＣＰＭ）における相対的変化倍数が図２３Ａに示される。Ｔ細胞増殖が図２３Ｂに示される。図２３ＢからのＴ細胞増殖における全体的差異が図２３Ｃに示される。
【０３６５】
図２３Ｄ〜２３Ｆは、健康なドナーから得たＰＢＭＣからのＩＦＮ−γ産生を示すグラフである。ＰＢＭＣを、ＬＩＬＲＢ２抗体と共に一晩（１６時間）培養し、低用量（０．０１μｇ／ｍｌ）抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）で３日間刺激した。上清を収集し、ＩＦＮ−γ産生をＥＬＩＳＡによって測定した。図１ＡからのＴＮＦアルファに基づくクローンランキングが示される。ＩＦＮ−γ産生放出における相対的変化倍数が図２３Ｄに示される。ＩＬ−１０の分泌が図２３Ｅに示される。図２３ＥからのＩＬ−１０濃度における全体的差異が図２３Ｆに示される。
【０３６６】
ＬＩＬＲＡファミリーと交差反応するアゴニスト抗体の能力を試験した。図２３Ｇに示されるように、試験した抗ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体の各々は、ＬＩＬＲＡ１ファミリーと交差反応した。
【０３６７】
図２３Ｇは、抗ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体による処理の際のＴ細胞ＩＦＮ−γ産生の抑制を示す。
【０３６８】
図２３Ｉは、抗ＬＩＬＲＢ２アゴニスト抗体によるＭＬＲ反応の抑制を示す。
【０３６９】
[実施例１１]
抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ  Ｔ細胞
ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲを、１Ｈ３  Ｆａｂ領域を使用して生成した。
【０３７０】
図２４は、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＬＩＬＲＢ２＋白血病細胞、例えば、ＴＨＰ−１によって刺激した場合に特異的活性化およびサイトカイン放出を実証したことを示す。抗ＬＩＬＲＢ２−ＣＡＲ−Ｔの短い形態のベクター（図２４、上パネル）を使用すると、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対する活性化特異性を示した。抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、１：１〜１：１０の範囲の標的：エフェクター（Ｔ：Ｅ）比で、ＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞と共に２４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用する４１ＢＢ発現の検出によって決定した。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。図２４、下パネル：抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対するサイトカイン放出特異性を示した。上清を、１：１〜１：１０の範囲の標的：エフェクター（Ｔ：Ｅ）での、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞とＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞との２４時間の共培養後に収集した。サイトカイン放出を、ＥＬＩＳＡによって、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）についてアッセイした。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。
【０３７１】
図２５は、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＬＩＬＲＢ２＋白血病細胞によって刺激した場合に特異的活性化およびサイトカイン放出を実証したことを示す。抗ＬＩＬＲＢ２−ＣＡＲ−Ｔの長い形態のベクター（図２５、上パネル）を使用すると、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞は、標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対する活性化特異性を示した。抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、１：１〜１：１０の範囲の標的：エフェクター比で、ＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞と共に２４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用する４１ＢＢ発現の検出によって決定した。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。図２５、下パネルは、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対するサイトカイン放出特異性を示したことを示す。上清を、１：１〜１：１０の範囲の標的：エフェクター比での、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞とＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞との２４時間の共培養後に収集した。サイトカイン放出を、ＥＬＩＳＡによって、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）についてアッセイした。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。
【０３７２】
図２６は、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、標的ＬＩＬＲＢ２に対する結合特異性を実証したことを示す。短い形態（図２６、上パネル）および長い形態（図２６、下パネル）の両方の抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞、ＬＩＬＲＢ３発現ＴＨＰ１細胞または親ＴＨＰ１細胞と共に２４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用する４１ＢＢ発現の検出によって決定した。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。
【０３７３】
図２７は、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＨＴ２９結腸がん細胞において標的ＬＩＬＲＢ２タンパク質に対する結合特異性を実証したことを示す。抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＬＩＬＲＢ２発現ＨＴ２９細胞、ＬＩＬＲＢ３発現ＨＴ２９細胞またはＨＴ２９対照細胞と共に２４時間共培養した。ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーを使用する４１ＢＢ発現についての活性化マーカーの検出によって決定した。ＯＫＴ３で刺激したＣＡＲ−Ｔ細胞を、ＣＡＲ−Ｔ細胞活性化についての陽性対照として使用した。形質導入なしのＴ細胞を対照として使用した。
【０３７４】
図２８は、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＬＩＬＲＢ２発現白血病細胞に対する効率的な細胞傷害性をｉｎ  ｖｉｔｒｏで示したことを示す。ＬＩＬＲＢ２発現白血病細胞（Ｂ２−ＴＨＰ１）を、０．０２：１〜１０：１の範囲のエフェクター：標的で、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ（左の棒）または形質導入されていないＴ細胞（右の棒）と共に共培養した。上清を、７時間の共培養後に収集し、細胞傷害性を、ＬＤＨ放出の検出によって決定した。
【０３７５】
図２９は、ＴＨＰ１−ＬＩＬＲＢ２異種移植マウスモデルにおける抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞の有効性の実証のための実験設計を示す。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスに、０日目にＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞を注射し、８、１５、２２および３０日目に、形質導入されていないＴ細胞（対照）または抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置した。生物発光画像を毎週撮影した。
【０３７６】
図３０〜３３は、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＴＨＰ１−ＬＩＬＲＢ２異種移植マウスモデルにおいて白血病負荷を低減させたことを示す。ＮＳＧ−ＳＧＭ３マウスに、０日目にＬＩＬＲＢ２発現ＴＨＰ１細胞を注射し、８、１５、２２および３０日目に、形質導入されていないＴ細胞（対照）または抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置した。生物発光画像（ＢＬＩ）を毎週撮影した。図３０は、形質導入されていないＴ細胞（左）または抗ＬＩＬＲＢ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞（右）で処置したマウスの毎週のＢＬＩを示す；画像を、マウスの背中から撮影した。図３１は、形質導入されていないＴ細胞（左）または抗ＬＩＬＲＢ２−ＣＡＲ−Ｔ細胞（右）で処置したマウスの毎週のＢＬＩを示す；画像を、腹部から撮影した。
【０３７７】
図３２は、時間の関数としての全光束（ｐ／ｓ）のプロットを示す；各形状は、処置群中の個々のマウスを示す。図３２は、抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞（右）が、対照Ｔ細胞処置（左）マウスと比較して白血病負荷を減少させたことを実証している。
【０３７８】
図３３は、全光束（左パネル）および平均放射輝度（右パネル）での白血病負荷の定量化結果を示す。抗ＬＩＬＲＢ２  ＣＡＲ−Ｔ細胞で処置したマウス（四角）は、形質導入されていないＴ細胞処置マウス（丸）と比較して腫瘍負荷の減少を示した。
【０３７９】
[実施例１２]
抗ＬＩＬＲＢ４  ＣＡＲ−Ｔ細胞
抗ＬＩＬＲＢ４  ＣＡＲ−Ｔ細胞を生成した。図３４は、抗ＬＩＬＲＢ４  ＣＡＲ−Ｔ細胞が、ＬＩＬＲＢ４タンパク質発現ヒトＡＭＬ細胞に対する細胞傷害性を実証したことを示す。
【０３８０】
[実施例１３]
抗ＬＩＬＲＢ２  Ａｂは、ＣＡＲ−Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介性の抑制を無効にする。
マクロファージ成熟化に対する抗ＬＩＬＲＢ２の強い機能的活性を考慮して、本発明者らは、抗ＬＩＬＲＢ２（ヒトＩｇＧ４を有する抗体２０Ｄ３）が、ＣＡＲ−Ｔ細胞増殖のＭＤＳＣ媒介性の抑制を消失させることができるかどうかを調査した。本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養した単球由来ＭＤＳＣを生成し、標的腫瘍細胞の存在下でＣＡＲ−Ｔ細胞と共培養した。ＭＤＣＳは、標的腫瘍細胞、即ち、ＡＭＬ（ＴＨＰ−１）（図３５Ａ）またはＨｅｒ−２陽性頭頚部固形がん（ＳＣＣ−４７）（図３５Ｂ）によって誘導されるＣＡＲ−Ｔ細胞増殖を顕著に抑制した。特に、抗ＬＩＬＲＢ２抗体は、ＭＤＳＣ媒介性の抑制を無効にし、ＣＤ４およびＣＤ８の両方のＴ細胞増殖を再活性化し（図３５Ｂ）、腫瘍細胞ならびにＬＩＬＲＢ２陽性であるＭＤＳＣに対するＣＡＲ−Ｔ媒介性の死滅効果を増強した（図３５Ａ）。この結果は、抗ＬＩＬＲＢ２が、ＭＤＳＣ媒介性の抑制を克服でき、ＣＡＲ−Ｔ細胞増殖を増強できることを示唆している。
【０３８１】
【表４−１】
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【０３８２】
【表４−２】
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【０３８３】
【表４−３】
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【０３８４】
【表４−４】
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【０３８５】
【表５−１】
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【０３８６】
【表５−２】
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【０３８７】
【表５−３】
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【０３８８】
【表５−４】
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【０３８９】
【表６−１】
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【０３９０】
【表６−２】
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【０３９１】
【表６−３】
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【０３９２】
【表６−４】
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【０３９３】
【表６−５】
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【０３９４】
【表７−１】
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【０３９５】
【表７−２】
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【０３９６】
【表７−３】
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【０３９７】
【表７−４】
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【０３９８】
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明と併せて記載されてきたが、上述の説明は例示を意図し、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲を限定しないことが理解される。他の態様、利点および改変は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図７】
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【図８】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１１−３】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１３−３】
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【図１４−１】
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【図１４−２】
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【図１４−３】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１８−３】
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【図１８−４】
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【図１８−５】
2022501428.tif 000080
【図１９】
2022501428.tif 000081
【図２０−１】
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【図２０−２】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３−１】
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【図２３−２】
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【図２３−３】
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【図２３−４】
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【図２３−５】
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【図２３−６】
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【図２３−７】
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【図２３−８】
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【図２３−９】
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【図２４】
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【図２５】
2022501428.tif 000096
【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
2022501428.tif 000106
【配列表】
2022501428000001.app
【国際調査報告】
2022501428.tif 000107
2022501428.tif 000108
2022501428.tif 000109