【手続補正書】
【提出日】平成22年7月14日(2010.7.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
間葉系幹細胞におけるアポトーシスを抑制する治療で使用するための融合タンパク質であって、前記融合タンパク質が、タンパク質導入ドメイン（PTD）および熱ショックタンパク質（Hsp）を含み、HspがHsp70またはcvHspである融合タンパク質。
【請求項２】
請求項１に記載の、治療で使用するための融合タンパク質であって、前記融合タンパク質が、Hsp70を含み、
前記Hsp70アミノ酸配列が、
(i)     配列番号１１のHSPA1Aアミノ酸配列；
(ii)    配列番号１２のHSPA1Bアミノ酸配列；
(iii)   配列番号１３のHSPA1Lアミノ酸配列；
(iv)    配列番号１４のHSPA2Aアミノ酸配列；
(v)     配列番号１５のHSPA2Bアミノ酸配列；
(vi)    配列番号１６のHSPA4アミノ酸配列；
(vii)   配列番号１７のHSPA5アミノ酸配列；
(viii)  配列番号１８のHSPA6アミノ酸配列；
(ix)    配列番号１９のHSPA7アミノ酸配列；
(x)     配列番号２０のHSP8Aアミノ酸配列；および
(xi)    配列番号２１のHSP9Aアミノ酸配列
からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるか、あるいは
前記融合タンパク質が、配列番号２２のアミノ酸配列を含むcvHspを含む、融合タンパク質。
【請求項３】
請求項１または２に記載の、治療で使用するための融合タンパク質であって、前記融合タンパク質が、PTDおよび
(i)     配列番号１１;
(ii)    配列番号１２;
(iii)   配列番号１３;
(iv)    配列番号１４;
(v)     配列番号１５;
(vi)    配列番号１６;
(vii)   配列番号１７;
(viii)  配列番号１８;
(ix)    配列番号１９;
(x)     配列番号２０; 
(xi)    配列番号２１; および
(xii)   配列番号２２
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の、治療で使用するための融合タンパク質であって、前記PTDが、
(i)     配列番号１;
(ii)    配列番号２;
(iii)   配列番号３;
(iv)    配列番号４;
(v)     配列番号５; 
(vi)    配列番号６;
(vii)   配列番号７;
(viii)  配列番号８; および
(ix)    配列番号９
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、融合タンパク質。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか１項に記載の、治療で使用するための融合タンパク質であって、前記PTDおよび前記熱ショックタンパク質が、
（a）直接的な共有結合、ペプチド結合、またはリンカー；
（b）1〜5個のアミノ酸を含む非開裂リンカー；
（c）Gly-Gly-Glyを含むリンカー；または
（d）開裂リンカー
により互いに連結される、融合タンパク質。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載の、治療で使用するための融合タンパク質であって、前記間葉系幹細胞が、骨細胞、軟骨細胞、含脂肪細胞または心筋細胞に分化することができるように個体に移植するためのものである、融合タンパク質。
【請求項７】
請求項６に記載の、治療で使用するための融合タンパク質であって、前記間葉系幹細胞が、心臓に移植するためのものである、融合タンパク質。
【請求項８】
請求項７に記載の、治療で使用するための融合タンパク質であって、前記間葉系幹細胞が、梗塞心臓に移植するためのものである、融合タンパク質。
【請求項９】
間葉系幹細胞におけるアポトーシスを抑制するための生体外での（ex vivo）方法であって、前記幹細胞を含む集団を、前記幹細胞でアポトーシスを抑制するのに効果的な量の請求項１〜６の何れか１項に記載の融合タンパク質と接触させ、これにより、前記細胞集団の生存能力を長期化することを含む方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、前記間葉系幹細胞が、心臓に移植するための間葉系幹細胞である方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記間葉系幹細胞が、梗塞心臓に移植するためのものである方法。
【請求項１２】
請求項１０または１１に記載の方法であって、前記間葉系幹細胞が、心筋細胞に分化することができる方法。
【請求項１３】
アポトーシスの上昇レベルにより特徴づけられる病的状態の治療方法で使用するための請求項１〜４の何れか１項に記載の融合タンパク質であって、前記治療が、かかる治療を必要とする個体に、その状態を治療するのに効果的な量の融合タンパク質を投与することを含む、融合タンパク質。
【請求項１４】
請求項１３に記載の、治療方法で使用するための融合タンパク質であって、前記病的状態が、
（a）ストレス誘導性の病状；
（b）虚血性脳梗塞による発作、虚血性急性腎不全、腸の虚血、心筋梗塞による虚血性心疾患、再灌流後の心筋の虚血および障害、肝臓の虚血、脳の虚血、および網膜虚血からなる群より選択される虚血イベントの結果；または
（c）アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症 (ALS)、脊髄延髄萎縮症、脱神経性萎縮症、脊髄筋ジストロフィー (SMA)、網膜の色素変性および緑内障、小脳変性症および新生児黄疸、耳硬化症、発作、痴呆、連続的な遅発性神経細胞壊死 (DND)、並びに変性萎縮からなる群より選択される慢性変性疾患
である、融合タンパク質。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９６】
詳細な説明のセクションは、特許請求の範囲を解釈するために使用されることを意図し、概要のセクションおよび要約書のセクションは、特許請求の範囲を解釈するために使用されることを意図しないことを認識すべきである。概要のセクションおよび要約書のセクションは、本発明者により想定される、全てではない一または複数の本発明の模範的態様を記載してもよく、このため、概要のセクションおよび要約書のセクションは、本発明および添付の特許請求の範囲を限定することを意図しない。
以下に、出願当初の特許請求の範囲を［１］〜［４８］として付記する。
［１］  タンパク質導入ドメイン（PTD）および熱ショックタンパク質（Hsp）を含む融合タンパク質であって、HspがHsp70またはcvHspである融合タンパク質。
［２］  前記Hsp70が、HSPA1A、HSPA1B、HSPA1L、HSPA2A、HSPA2B、HSPA4、HSPA5、HSPA6、HSPA7、HSP8AおよびHSP9Aからなる群より選択される、［１］に記載の融合タンパク質。
［３］  前記Hsp70がHSPA1Aである、［１］に記載の融合タンパク質。
［４］  前記融合タンパク質が、(i)配列番号１１；(ii)配列番号１２；(iii)配列番号１３；(iv)配列番号１４；(v)配列番号１５；(vi)配列番号１６；(vii)配列番号１７；(viii)配列番号１８；(ix)配列番号１９；(x)配列番号２０；および(xi)配列番号２１からなる群より選択されるHsp70アミノ酸配列を含む、［１］に記載の融合タンパク質。
［５］  前記融合タンパク質が、配列番号２２のcvHspアミノ酸配列を含む、［１］に記載の融合タンパク質。
［６］  前記融合タンパク質が、配列番号１１のHspA1Aアミノ酸配列を含む、［１］に記載の融合タンパク質。
［７］  前記PTDが、(i)配列番号１；(ii)配列番号２；(iii)配列番号３；(iv)配列番号４；(v)配列番号５；(vi)配列番号６；(vii)配列番号７；(viii)配列番号８；および(ix)配列番号９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、［１］に記載の融合タンパク質。
［８］  前記PTDおよび前記熱ショックタンパク質が、直接的な共有結合、ペプチド結合、またはリンカーにより互いに連結される、［１］に記載の融合タンパク質。
［９］  前記リンカーが、1〜5個のアミノ酸を含む非開裂リンカーである、［８］に記載の融合タンパク質。
［１０］  前記リンカーが、Gly-Gly-Glyを含む、［８］に記載の融合タンパク質。
［１１］  前記リンカーが、開裂リンカーである、［８］に記載の融合タンパク質。
［１２］  ［１］に記載の融合タンパク質を、一または複数の薬学的に許容可能な賦形剤と混合して含む薬学的組成物。
［１３］  少なくとも一つの抗血小板薬、抗凝固薬、抗血栓薬、またはHspコシャペロン（co-chaperone）を更に含む、［１２］に記載の薬学的組成物。
［１４］  PTD、並びに(i)配列番号１１；(ii)配列番号１２；(iii)配列番号１３；(iv)配列番号１４；(v)配列番号１５；(vi)配列番号１６；(vii)配列番号１７；(viii)配列番号１８；(ix)配列番号１９；(x)配列番号２０；(xi)配列番号２１；および(xii)配列番号２２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも95％同一のアミノ酸配列を含む、融合タンパク質。
［１５］  細胞、組織または器官の生存能力を長期化するための方法であって、細胞集団、組織または器官を、前記細胞集団、組織または器官の一または複数の細胞でアポトーシスを抑制するのに効果的な量のPTD-Hspと接触させ、これにより、前記細胞集団、組織または器官の生存能力を、未処理の細胞集団、組織または器官と比較して長期化する方法。
［１６］  前記細胞集団、組織または器官を、生体外（ex vivo）または生体内（in vivo）でPTD-Hsp溶液と接触させる、［１５］に記載の方法。
［１７］  前記細胞集団における細胞が、分化した細胞または前駆細胞である、［１５］に記載の方法。
［１８］  前記細胞集団における細胞が、幹細胞である、［１５］に記載の方法。
［１９］  前記幹細胞が、造血幹細胞、間葉系幹細胞、間質系幹細胞または神経幹細胞である、［１８］に記載の方法。
［２０］  前記造血幹細胞が、それを必要としている個体に移植され、前記造血幹細胞が、血液細胞に分化することができる、［１９］に記載の方法。
［２１］  前記個体が、白血病または血液の癌の患者である、［２０］に記載の方法。
［２２］  前記間葉系幹細胞が、それを必要としている個体に移植され、前記間葉系幹細胞が、骨細胞、軟骨細胞、含脂肪細胞または心筋細胞に分化することができる、［１９］に記載の方法。
［２３］  前記間葉系幹細胞が、心臓に移植される、［１９］に記載の方法。
［２４］  前記心臓が、梗塞心臓である、［２３］に記載の方法。
［２５］  前記間葉系幹細胞が、心筋細胞に分化することができる、［２３］または［２４］に記載の方法。
［２６］  前記神経幹細胞が、それを必要としている個体に移植され、前記神経幹細胞が、神経細胞または非神経細胞に分化することができる、［１９］に記載の方法。
［２７］  前記非神経細胞が、星状膠細胞または稀突起膠細胞である、［２６］に記載の方法。
［２８］  前記細胞集団における細胞が、神経系細胞（neural cell）、線維芽細胞、平滑筋細胞、腫瘍細胞、造血細胞、単球、マクロファージ、上皮細胞、ケラチノサイト、神経細胞（nerve cell）、内皮細胞、顆粒球、赤血球、リンパ球および血小板からなる群より選択される、［１５］に記載の方法。
［２９］  前記神経系細胞が、ニューロンである、［２８］に記載の方法。
［３０］  前記細胞集団における細胞が、損傷細胞であり、前記接触が、前記損傷細胞の再生につながる、［１５］に記載の方法。
［３１］  前記細胞集団における細胞が、対象の生成物を産生し、これにより、前記対象の生成物のインビトロでのバイオ生産を増大させる、［１５］に記載の方法。
［３２］  前記接触が、移入（transfusion）の間に起こる、［１５］に記載の方法。
［３３］  前記接触が、前記細胞集団、組織または器官の移植の間に起こる、［１５］に記載の方法。
［３４］  前記器官または組織の再灌流により引き起こされる前記損傷細胞における損傷が、減少する、［３０］に記載の方法。
［３５］  前記接触が、前記細胞集団、組織または器官の切除の前または切除と同時に、前記細胞集団、組織または器官のドナーにPTD-Hspを投与することによる、［１５］に記載の方法。
［３６］  前記器官が固形の器官である、［３５］に記載の方法。
［３７］  前記固形の器官が、心臓、膵臓、腎臓、肺または肝臓から選択される、［３６］に記載の方法。
［３８］  前記器官が心臓である、［３７］に記載の方法。
［３９］  前記PTD-Hspが溶液中にある、［１５］に記載の方法。
［４０］  前記溶液が、低温保存溶液である、［３９］に記載の方法。
［４１］  前記溶液が、ある濃度のガラス化（vitrification）組成物を更に含み、前記ガラス化が、細胞集団、組織または器官の中、および溶液中の両方で起こる、［４０］に記載の方法。
［４２］  アポトーシスの上昇レベルにより特徴づけられる病的状態の治療方法であって、かかる治療を必要とする個体に、その状態を治療するのに効果的な量のPTD-Hspを投与することを含む方法。
［４３］  前記病的状態が、ストレス誘導性の病状である、［４２］に記載の方法。
［４４］  前記ストレス誘導性の病状が、虚血イベントの結果である、［４３］に記載の方法。
［４５］  前記虚血イベントが、虚血性脳梗塞による発作、虚血性急性腎不全、腸の虚血、心筋梗塞による虚血性心疾患、再灌流後の心筋の虚血および障害、肝臓の虚血、脳の虚血、および網膜虚血からなる群より選択される、［４４］に記載の方法。
［４６］  前記病的状態が、慢性変性疾患である、［４２］に記載の方法。
［４７］  前記慢性変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症 (ALS)、脊髄延髄萎縮症、脱神経性萎縮症、脊髄筋ジストロフィー (SMA)、網膜の色素変性および緑内障、小脳変性症および新生児黄疸、耳硬化症、発作、痴呆、並びに連続的な遅発性神経細胞壊死 (DND) からなる群より選択される神経変性疾患である、［４６］に記載の方法。
［４８］  前記慢性変性疾患が、変性萎縮である、［４６］に記載の方法。