(57)【要約】【課題】プロバイオティクスを利用し、腸内菌叢における毒素産生バクテロイデス・フラギリス（ＥＴＢＦ）の生育又は増殖を抑制する抗菌剤を提供する。【解決手段】ビフィドバクテリウム属細菌を、毒素産生バクテロイデス・フラギリス（ＥＴＢＦ）に対する抗菌剤の有効成分とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分とする、毒素産生バクテロイデス・フラギリスに対する抗菌剤。
【請求項２】
ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・インファンティス、ビフィドバクテリウム・アニマリス、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス、及びビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータムからなる群から選択されるいずれかである、請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項３】
ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムＡＴＣＣ  ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ロンガムＪＣＭ１２１７、ビフィドバクテリウム・インファンティスＪＣＭ１２２２、ビフィドバクテリウム・アニマリスＪＣＭ１１９０、ビフィドバクテリウム・ビフィダムＪＣＭ１２５４、ビフィドバクテリウム・ブレーベＪＣＭ１１９４、ビフィドバクテリウム・アドレセンティスＪＣＭ１２７５、及びビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータムＪＣＭ１２００からなる群から選択されるいずれかである、請求項２に記載の抗菌剤。
【請求項４】
毒素産生バクテロイデス・フラギリスが、バクテロイデス・フラギリス MBFT101（ＪＣＭ １７５８５）、バクテロイデス・フラギリス MBFT201（ＪＣＭ １７５８６）、バクテロイデス・フラギリス MBFT301（ＪＣＭ １７５８７）、又はバクテロイデス・フラギリス 2-078382-3（ＡＴＣＣ ４３８５８）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗菌剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗菌剤、及び薬学的に許容される担体を含む、毒素産生バクテロイデス・フラギリスによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療用の医薬組成物。
【請求項６】
前記疾患が、大腸癌又は結腸癌である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記疾患が、炎症性の腸疾患である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗菌剤を含有する、毒素産生バクテロイデス・フラギリスによって引き起こされる疾患の予防のための飲食品。
【請求項９】
前記疾患が、大腸癌又は結腸癌である、請求項８に記載の飲食品。
【請求項１０】
前記疾患が、炎症性の腸疾患である、請求項８に記載の飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、毒素産生バクテロイデス・フラギリス（ＥＴＢＦ）に対する抗菌剤に関する。また、本発明は、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療用の医薬組成物に関する。また、本発明は、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防用の飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
腸内菌叢に存在する様々な菌のうち、バクテロイデス（Bacteroides）属に属する細菌は、日和見菌であり、宿主が健康な状態では宿主に重大な悪影響を及ぼさないとされている。
バクテロイデス属に属する細菌の１種であるバクテロイデス・フラギリス（Bacteroides fragilis）の菌株の多くは毒素を産生しないが、中には、メタロプロテアーゼという毒素を産生する毒素産生バクテロイデス・フラギリス（ＥＴＢＦ）も存在する（非特許文献１）。このＥＴＢＦについては、炎症性の下痢を始めとする様々な炎症性の腸疾患への関与が疑われている。近年では、動物実験でＥＴＢＦが大腸癌を引き起こすこと（非特許文献２）、および結腸癌患者は健常人に比べＥＴＢＦ保有率が高いこと（非特許文献３）が報告されており、ＥＴＢＦがヒトの大腸癌のリスク因子となっている可能性が考えられる。
【０００３】
腸内菌叢に存在するＥＴＢＦの増殖を抑制する方法としては、グラム陰性細菌が感受性を示す抗生物質を用いることが考えられる。しかしながら、近年はエリスロマイシンやテトラサイクリンなどの抗生物質に耐性を示す菌株が増えており、薬剤耐性遺伝子のプールとなることが懸念されている。
【０００４】
ところで、宿主がスギ花粉症などのアレルギー症状を抱えている際、花粉の飛散に伴い、宿主の腸内におけるバクテロイデス・フラギリスの菌数が増加するとの報告がある（非特許文献４）。また、同文献により、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）ＢＢ５３６には、バクテロイデス・フラギリスの増加を抑制する効果があること、ＢＢ５３６が花粉症の緩和に寄与する可能性があることが報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Sears，クリニカル・マイクロバイオロジー・レビューズ（Clinical Microbiology Reviews），22巻，2号，349-369頁，2009年
【非特許文献２】Wuら, ネイチャー・メディスン（Nature Medicine），15巻，1016-1022頁，2009年
【非特許文献３】Toprakら，クリニカル・マイクロバイオロジー・アンド・インフェクシャス・ディジーズ（Clinical Microbiology and Infectious Diseases），12巻，8号，782-786頁，2006年
【非特許文献４】Odamakiら，アプライド・アンド・エンバイロメンタル・マイクロバイオロジー（Applied and Environmental Microbiology），74巻，21号，6814-6817頁，2008年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
大腸癌や結腸癌などの宿主に深刻な影響を及ぼす可能性のあるＥＴＢＦを除菌する方法として、抗生物質を使用しない方法、例えばプロバイオティクスの摂取等が考えられる。しかしながら、これまで、ＥＴＢＦに対するプロバイオティクスの効果については一切報告がなかった。
そこで、本発明は、プロバイオティクスを利用し、腸内菌叢におけるＥＴＢＦの生育又は増殖を抑制する技術を提供することを課題とする。具体的には、ＥＴＢＦに対する抗菌剤、及びＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療用の医薬組成物、並びに、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防用の飲食品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ビフィドバクテリウム属に属する細菌（ビフィドバクテリウム属細菌）が持つ機能について鋭意探索を重ねた結果、ビフィドバクテリウム属細菌が、ＥＴＢＦに対して強い抗菌活性を示すことを見出し、発明を完成させた。
すなわち、上記課題を解決する本発明は、以下の通りである。
【０００８】
本発明は、ビフィドバクテリウム属細菌を有効成分とする、毒素産生バクテロイデス・フラギリス（ＥＴＢＦ）に対する抗菌剤である。
本発明の抗菌剤は、ＥＴＢＦの生育又は増殖を抑制するのに有効である。
【０００９】
本発明において、ビフィドバクテリウム属細菌としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、及びビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）から選ばれる細菌が好ましく用いられる。
これらの菌種は、ＥＴＢＦの生育又は増殖を抑制する効果に優れる。
【００１０】
中でも、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＪＣＭ １２１７、ビフィドバクテリウム・インファンティス ＪＣＭ １２２２、ビフィドバクテリウム・アニマリス ＪＣＭ １１９０、ビフィドバクテリウム・ビフィダム ＪＣＭ １２５４、ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＪＣＭ １１９４、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス ＪＣＭ １２７５、及びビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム ＪＣＭ １２００が好ましく挙げられる。
これらの菌株は、ＥＴＢＦの生育又は増殖を抑制する効果に優れる。
【００１１】
ＥＴＢＦとして、例えば、バクテロイデス・フラギリス MBFT101（ＪＣＭ １７５８５）、バクテロイデス・フラギリス MBFT201（ＪＣＭ １７５８６）、バクテロイデス・フラギリス MBFT301（ＪＣＭ １７５８７）、バクテロイデス・フラギリス 2-078382-3（ＡＴＣＣ ４３８５８）が挙げられる。
【００１２】
本発明は、また、本発明の抗菌剤、及び薬学的に許容される担体を含有する、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療用の医薬組成物に関する。
本発明は、また、本発明の抗菌剤を含有する、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防用の飲食品に関する。
ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患としては、炎症性の腸疾患、大腸癌、結腸癌が挙げられる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の抗菌剤は、ＥＴＢＦに対し優れた抗菌効果を示す。
そして、本発明の医薬組成物をヒトや動物の腸内に投与することにより、腸内菌叢におけるＥＴＢＦの生育又は増殖を抑制し、炎症性の腸疾患、大腸癌、結腸癌などのＥＴＢＦによって引き起こされる疾患を予防したり治療したりすることができる。
また、本発明の飲食品を摂取することにより、腸内菌叢におけるＥＴＢＦの生育又は増殖を抑制し、炎症性の腸疾患、大腸癌、結腸癌などのＥＴＢＦによって引き起こされる疾患を予防することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。なお、本明細書において、百分率は、特に断りのない限り質量による表示である。
【００１５】
本発明の抗菌剤の有効成分は、ビフィドバクテリウム属細菌である。本発明においては、ビフィドバクテリウム属細菌を含む種々の試料から、ビフィドバクテリウム属細菌を分離して用いることもできるし、市販菌株や寄託菌株を用いることもできる。
ビフィドバクテリウム属細菌としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Bifidobacterium infantis）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、又はビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）の菌株が好ましく挙げられる。
中でも、好ましい菌株として、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＪＣＭ １２１７、ビフィドバクテリウム・インファンティス ＪＣＭ １２２２、ビフィドバクテリウム・アニマリス ＪＣＭ １１９０、ビフィドバクテリウム・ビフィダム ＪＣＭ １２５４、ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＪＣＭ １１９４、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス ＪＣＭ １２７５、及びビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム ＪＣＭ １２００が挙げられる。
これらの菌株のうちビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９は、American Type Culture Collection (ＡＴＣＣ)から、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＪＣＭ １２１７、ビフィドバクテリウム・インファンティス ＪＣＭ １２２２、ビフィドバクテリウム・アニマリス ＪＣＭ １１９０、ビフィドバクテリウム・ビフィダム ＪＣＭ １２５４、ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＪＣＭ １１９４、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス ＪＣＭ １２７５、及びビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム ＪＣＭ １２００は、Japan Collection of Microorganisms（ＪＣＭ、独立行政法人理化学研究所 バイオリソースセンター微生物材料開発室）から、一般に入手することが可能である。
【００１６】
特に飲食品に利用する場合には、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９を用いることが好ましい。これは、試験例に示す通り、ＥＴＢＦに対する抗菌活性が高い上に、３０年以上の食経験から安全性が確認されているためである。
【００１７】
本発明の抗菌剤が、抗菌の対象とするのは、毒素を産生するバクテロイデス・フラギリス（毒素産生バクテロイデス・フラギリス、ＥＴＢＦ）である。
ＥＴＢＦの菌株として、バクテロイデス・フラギリス 2-078382-3（ＡＴＣＣ ４３８５８）、バクテロイデス・フラギリス MBFT101（ＪＣＭ １７５８５）、バクテロイデス・フラギリス MBFT201（ＪＣＭ １７５８６）、バクテロイデス・フラギリス MBFT301（ＪＣＭ １７５８７）などの菌株が挙げられる。これらの菌株のうちＡＴＣＣ ４３８５８はＡＴＣＣから、ＪＣＭ １７５８５、ＪＣＭ １７５８６、ＪＣＭ １７５８７はＪＣＭから、一般に入手することが可能である。
なお、ＪＣＭ１７５８５、ＪＣＭ １７５８６、ＪＣＭ １７５８７は、本発明者らがヒト糞便中から分離した菌株である。菌株の同定は、例えば、「『微生物の分類・同定実験法−分子遺伝学・分子生物学的手法を中心に−』、シュプリンガー・フェアラーク東京株式会社発行、２００１年９月１６日発行」に記載されている方法（P.9-14, P.48-64, P.231-285等）に従って、各種菌株の１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子の全長を解析することにより行った。
【００１８】
本発明の抗菌剤の抗菌効果は、有効成分であるビフィドバクテリウム属細菌を、抗菌の対象となる毒素を産生するバクテロイデス・フラギリス（毒素産生バクテロイデス・フラギリス、ＥＴＢＦ）菌とともに混合培養した際の、ＥＴＢＦの生育率で表すことが可能であり、ＥＴＢＦのみを培養した場合に比して７０％以下であることが好ましく、６０％以下であることがより好ましく、５０％以下であることが特に好ましいものである。
【００１９】
ビフィドバクテリウム属細菌は、公知の方法により培養することができる。
【００２０】
後述する試験例に示す通り、ビフィドバクテリウム属細菌は、ＥＴＢＦに対する抗菌活性を示す。従って、ビフィドバクテリウム属細菌を含む本発明の抗菌剤は、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療用の医薬組成物、又は該疾患の予防用の飲食品に、有効成分として含有させることができる。ここで、「予防」の概念は、疾患が発生するリスクを低減させることを含む。
【００２１】
非特許文献１〜３に記載されるように、ＥＴＢＦは、炎症性の下痢等の炎症性の腸疾患、大腸癌、結腸癌等の疾患の原因となり得る。
従って、ビフィドバクテリウム属細菌を含む本発明の抗菌剤は、炎症性の腸疾患、大腸癌、結腸癌などのＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療用の医薬組成物、又は該疾患の予防用の飲食品に、有効成分として含有させることができる。
【００２２】
本発明の医薬組成物は、有効成分であるビフィドバクテリウム属細菌を薬学的に許容される担体を用いて製剤化することにより製造できる。
この場合において、医薬組成物におけるビフィドバクテリウム属細菌の含有量は、通常０．０１〜３０質量％、好ましくは０．１〜１０質量％である。
また、医薬組成物におけるビフィドバクテリウム属細菌の含有量は、通常１×１０6〜１×１０12ＣＦＵ／ｇ、好ましくは１×１０7〜５×１０11ＣＦＵ／ｇである。
また、本発明の医薬組成物には、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。
【００２３】
本発明の医薬組成物は、ヒトを含む哺乳動物に投与することができる。また、投与形態としては、ビフィドバクテリウム属細菌が腸に到達する形態であればよく、患者の症状等に応じて経口投与及び非経口投与の何れを選択してもよい。
ビフィドバクテリウム属細菌の投与量は、医薬組成物の剤形、患者の症状、年齢等によって異なるが、一日当たり、通常２×１０6ＣＦＵ／ｋｇ体重以上、好ましくは２×１０7〜２×１０9ＣＦＵ／ｋｇ体重を目安とすることができる。また、投与は、１日に１回又は数回に分けて行うことができ、投与期間は、数日以上継続することが好ましい。
【００２４】
本発明の飲食品は、有効成分であるビフィドバクテリウム属細菌を、通常の飲食品の原材料と共に加工することにより製造できる。本発明における飲食品には、哺乳動物に供与する飼料も含まれる。
この場合において、飲食品におけるビフィドバクテリウム属細菌の含有量は、飲食品の形態に応じて決定することができる。例えば、一日当たり、通常２×１０6ＣＦＵ／ｋｇ体重以上、好ましくは２×１０7〜２×１０9ＣＦＵ／ｋｇ体重のビフィドバクテリウム属細菌を摂取するのに適した含有量とすることが好ましい。
例えば、飲食品に対し、０．０１〜３０質量％、好ましくは０．１〜１０質量％程度の含有量とすることができる。また、飲食品に対し、通常１×１０6〜１×１０12ＣＦＵ／ｇ、好ましくは１×１０7〜５×１０11ＣＦＵ／ｇ程度の含有量とすることもできる。
【００２５】
本発明の飲食品は、好ましくは機能性食品として販売されるものである。
「機能性食品」とは、疾患の予防効果、又は疾患の発生リスクの低減効果が、直接的又は間接的に表示された食品を含む。例えば、現在、日本においては特定保健用食品、健康補助食品の態様で販売される食品が挙げられる。
【００２６】
特に、飲食品の形態としては、十分量のビフィドバクテリウム属細菌が腸に到達し得るような形態が好ましい。このような形態として、例えば、発酵乳の形態が好ましく挙げられる。発酵乳は、ビフィドバクテリウム属細菌と乳酸菌とを組み合わせたスターターを調製し、これを乳製品に添加して発酵させることにより製造することができる。
また、顆粒状、タブレット状又は液状のサプリメントとすることも、生菌数を維持し易い点、摂取者が有効成分の摂取量を把握し易い点で好ましい。
【００２７】
本発明の飲食品は、「ＥＴＢＦの抑制のため」、「ＥＴＢＦを減らすため」、「ＥＴＢＦの抗菌のため」、「ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防のため」、「炎症性の腸疾患の予防のため」、「大腸癌又は結腸癌のリスクの低減のため」などの用途の表示が付された形態とすることが好ましい。すなわち、本発明の飲食品は、例えば、「ＥＴＢＦにより引き起こされる疾患の予防のため」の用途が付された飲食品として販売することが好ましい。前記用途の表示としては、ＥＴＢＦに対する抗菌作用又は効果、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防に対する作用又は効果を表現する文言、該疾患の発生リスクを低減する作用又は効果に関する表現の全てを含む。
前記「表示」は、需要者に対して前記用途を知らしめる機能を有する全ての表示を含む。すなわち、前記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、全て前記「表示」に該当する。
また、前記「表示が付された」とは、前記表示と、飲食品（製品）を関連付けて認識させようとする表示行為が存在していることをいう。
表示行為は、需要者が前記用途を直接的に認識できるものであることが好ましい。具体的には、本発明の飲食品に係る商品又は商品の包装への前記用途の記載行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類（電磁気的方法により提供されるものを含む）への前記用途の記載行為が例示できる。
【００２８】
一方、表示される内容（表示内容）としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましい。
例えば、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、医薬用部外品等の表示を例示することができる。特に、厚生労働省によって認可される表示、例えば、特定保健用食品制度、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日  日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。
【００２９】
また、本発明の飲食品は、前記用途の表示に加え、前記有効成分の表示、さらには、前記用途と前記有効成分の関連性を示す表示を含むことも好ましい。
【００３０】
次に、試験例を示して各種ビフィドバクテリウム属細菌によるＥＴＢＦへの抗菌活性を詳細に説明する。
［試験例１］
（１）ＥＴＢＦ及びビフィドバクテリウム属細菌の前培養液の調製
ＥＴＢＦ（ＪＣＭ １７５８５、ＪＣＭ １７５８６、ＪＣＭ １７５８７）及び表に示すビフィドバクテリウム属細菌を、グルコースを1％(w/v)添加したＧＡＭブイヨン（日水製薬社製）培地を用いて嫌気条件で１６時間培養し、各菌の前培養液を調製した。次に同じ培地に、ビフィドバクテリウム属細菌及びＥＴＢＦの前培養液を1％(v/v)ずつ添加し、嫌気条件で８時間混合培養して試験混合液を調製した。続いて、試験混合液をＮＢＧＴ寒天培地に接種し、コロニー数を測定した。検出された細菌のコロニー数から、上記の試験混合液１ｍＬ当たりのＥＴＢＦ生菌数（CFU／mL）を求めた。
対照実験として、ＥＴＢＦの前培養液のみを1％(v/v)接種した試験液についても、同様に、ＥＴＢＦ生菌数を求めた。また、ＥＴＢＦの前培養液のみを添加した試験液のＥＴＢＦ生菌数に対する各試験混合液のＥＴＢＦ生菌数の割合を算出し、ＥＴＢＦ生育率とした。
【００３１】
（４）試験結果
本試験の結果を表１〜３に示す。
【００３２】
【表１】
2012180288.tif 000002
【００３３】
【表２】
2012180288.tif 000003
【００３４】
【表３】
2012180288.tif 000004
【００３５】
その結果、試験に用いたビフィドバクテリウム属細菌の全てが、ＥＴＢＦの各菌株の生育を有効に抑制した。特に、ＥＴＢＦを、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９、ビフィドバクテリウム・インファンティス ＪＣＭ １２２２、ビフィドバクテリウム・ビフィダム ＪＣＭ １２５４、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム ＪＣＭ １２００、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＪＣＭ １２１７、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス ＪＣＭ １２７５、ビフィドバクテリウム・ブレーベ ＪＣＭ １１９４に属する菌株と混合培養した場合は、ＥＴＢＦを単菌培養した場合と比較して、ＥＴＢＦ生菌数を６０％以下に抑制していた。また、ビフィドバクテリウム・アニマリス ＪＣＭ １１９０に属する菌株と混合培養した場合は、ＥＴＢＦを単菌培養した場合と比較して、ＥＴＢＦ生菌数を７０％以下に抑制していた。
これより、これらの菌株は、ＥＴＢＦに対する十分な抗菌活性を有することが分かった。
【実施例】
【００３６】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
［実施例１］
肉エキス５０ｇ、酵母エキス１００ｇ、ペプトン１００ｇ、乳糖２００ｇ、リン酸水素二カリウム５０ｇ、リン酸二水素カリウム１０ｇ、シスチン４ｇ及び水９．５Ｌの組成からなる培地を用い、２５℃で１６時間前培養して調製したビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９のシードカルチャー５００ｍＬを、前記培地と同一組成の培地１０Ｌに接種し、３７℃で１６時間培養した。更に、９０℃で３０分間殺菌した前記培地と同一組成の培地２００Ｌに、前記培養液全量（１０．５Ｌ）を接種し、３７℃で１６時間培養した。培養後の生菌数は３．９×１０9ＣＦＵ／ｍＬであった。
次いで、シャープレス型遠心分離機を用いて、遠心分離（１５，０００ｒｐｍ）により菌体を集め、培地と同量の生理食塩水（９０℃、３０分間殺菌済）に懸濁し、前記と同様遠心分離して再度集菌した。集めた菌体を、脱脂粉乳１０％、蔗糖１％、グルタミン酸ソーダ１％からなる溶液（９０℃、３０分間殺菌済）２０Ｌに懸濁し、常法に従って凍結乾燥し、９．３×１０10ＣＦＵ／ｇのビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９株を含む粉末約２．２ｋｇを得た。
この粉末は、ＥＴＢＦに対する抗菌作用を有するため、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療用の医薬組成物や飲食品に配合することができる。
【００３７】
［実施例２］
還元難消化性デキストリン１４ｋｇ及びソルビトール６ｋｇに、実施例１で得られたビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９株を含む粉末２０ｇを加えて均一に混合し、ビフィドバクテリウム・ロンガム ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９株の菌末を含有する生菌剤約２０ｋｇを得た。
この生菌剤は、ＥＴＢＦに対する抗菌作用を有するため、ＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療用の医薬組成物や飲食品として用いることができる。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明のビフィドバクテリウム属細菌を有効成分とする抗菌剤、及びこの抗菌剤を応用した医薬組成物や飲食品は、ＥＴＢＦの抗菌手段として効果的である。また、本発明の医薬組成物や飲食品は、炎症性の下痢等の炎症性腸疾患、大腸癌、結腸癌等のＥＴＢＦによって引き起こされる疾患の予防及び／又は治療に用いることができる。ビフィドバクテリウム属細菌は、安全で副作用が少ないことも知られているので、長期間の日常的な摂取にも適している。