(57)【要約】      （修正有）【課題】優れた腫瘍増殖抑制作用及び鎮痛作用を有する、化合物を提供する。【解決手段】式（Ｉ）：Ｘ−Ｌ−Ｙ（式中、Ｘは細胞膜透過性を促進する機能を有するペプチド残基であり、Ｌはリンカーまたはペプチド結合であり、ＹはＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する機能を有し、且つ特定のアミノ酸配列の部分配列）を含む１５アミノ酸長以下のペプチド残基で表されるペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。前記ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩を含む腫瘍治療剤。前記ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩を含む疼痛治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ｘ−Ｌ−Ｙ    （Ｉ）
（式中、Ｘは細胞膜透過性を促進する機能を有するペプチド残基であり、Ｌはリンカーまたはペプチド結合であり、ＹはＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する機能を有し、且つ配列番号１で表されるアミノ酸配列の部分配列（ただし、該部分配列は配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む）を含む１５アミノ酸長以下のペプチド残基である）で表されるペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｙが配列番号４または配列番号５で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド残基である、請求項１記載の、ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
【請求項３】
Ｘが配列番号６〜１１で表されるアミノ酸配列のいずれかを有するポリペプチド残基である、請求項１または２に記載の、ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
【請求項４】
Ｌがε−アミノカプロン酸リンカーである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の、ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
【請求項５】
ペプチド化合物が、式（II）：
ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＧＭＳＲＤＩＹＳ−ＮＨ２    （II）
または式（III）：
ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２    （III）
（式中、ａｃｐはε−アミノカプロン酸リンカーを示す）で表される化合物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のペプチド化合物、またはそれらの薬理学的に許容される塩を含有する医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のペプチド化合物、またはそれらの薬理学的に許容される塩を含有する、腫瘍治療剤。
【請求項８】
腫瘍が、褐色細胞腫、神経芽細胞腫、甲状腺癌、肺癌、前立腺癌、尿管癌、膀胱癌、乳癌、膵臓癌、メラノーマ、ウィルムス腫瘍またはホジキンリンパ腫である、請求項７に記載の腫瘍治療剤。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のペプチド化合物、またはそれらの薬理学的に許容される塩を含有する、疼痛治療剤。
【請求項１０】
癌疼痛治療剤である、請求項９に記載の疼痛治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、緩和医療学におけるがん疼痛の治療に用いられるペプチドに関する。
【背景技術】
【０００２】
がん疼痛は、慢性腰痛、頸肩腕症候群などと共に、神経障害性疼痛と侵害受容性疼痛を併せ持つ痛みである。侵害受容性疼痛とは、例えば、けがや火傷などによって損傷部位に炎症が起こり、その場所で発痛物質が生成され、それが末梢神経の侵害受容器を刺激することで発生する痛みなどをいい、侵害受容器が活性化することによって引き起こされる疼痛である。一方、神経障害性疼痛は、神経が損傷を受けた結果として起こる痛みなどをいい、痛みが長期間続いたり、通常では何ともない程度の刺激に対して強い痛みを感じるなどの特徴があり、体性感覚系に対する損傷や疾患の直接的結果として生じている疼痛とされている。
【０００３】
現在、疼痛抑制のために、モルヒネに代表されるオピオイドや非ステロイド性消炎鎮痛剤（ＮＳＡＩＤｓ）などが用いられているが、これらの鎮痛剤は、有用性、安全性、常習性等の面で改善の余地があり、また、神経障害性疼痛に関しては、こうした薬剤の効果が十分に得られないのが現状である。従って、安全性・常習性等の問題がなく、かつ神経障害性疼痛にも優れた効果を発揮するような医薬組成物、治療方法が望まれている。
【０００４】
侵害受容性疼痛および神経障害性疼痛に関与するメカニズムの一つとして、神経成長因子（ＮＧＦ）、およびその高親和性受容体であるＴｒｋＡが知られている。ＴｒｋＡは、インスリン受容体ファミリーと呼ばれる細胞膜受容体型チロシンキナーゼの一つであり、その酵素活性の中心部に活性化ループを有する。この活性化ループ中のアミノ酸配列を含む合成ポリペプチドは、インスリン受容体やＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制することが示されている（非特許文献１）。
【０００５】
また、ＴｒｋＡは、褐色細胞腫、神経芽細胞腫、甲状腺癌、肺癌、前立腺癌、尿管癌、膀胱癌、乳癌、膵臓癌、メラノーマ、ウィルムス腫瘍、ホジキンリンパ腫などで発現していること、ＮＧＦがＴｒｋＡを介して腫瘍細胞の増殖に関与することが知られており、ＮＧＦとＴｒｋＡを介した細胞情報伝達系が、腫瘍細胞の増殖に関与する可能性が指摘されてきた。これらのことから、ＮＧＦおよびＴｒｋＡは癌治療薬および疼痛治療薬のターゲットの一つと考えられている。
【０００６】
これまで、腫瘍増殖抑制作用や疼痛治療の目的で、ＮＧＦの働きやその高親和性受容体ＴｒｋＡの活性を阻害するための手段として、ＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する薬剤、抗ＮＧＦ抗体、抗ＴｒｋＡ抗体などが提案されてきた（特許文献１、特許文献２）。ＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する薬剤としては、Ｋ２５２ａが知られているが、Ｋ２５２ａは、ＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性以外のプロテインキナーゼＣ活性も抑制する作用があるため、腫瘍および疼痛治療薬として臨床応用するには毒性が高く、また、抗体医薬については、膨大な製造コストがかかってしまうのが現状である。これに対し、ペプチドは、タンパク質と比較して分子量が少なく構造も単純であるため、生産コストを比較的抑えることが可能であり、また、不必要な分は体内のプロテイナーゼにより分解されるため、遺伝子治療において予想されるような危険性は少ない。従って、ＴｒｋＡ活性を特異的に抑制するようなペプチドを得ることができれば、臨床上非常に大きなメリットがあると考えられる。
【０００７】
本発明者らは、ＴｒｋＡ活性化ループのアミノ酸配列と腫瘍細胞の増殖および痛みとの関係について研究を行った。その結果、ＴｒｋＡ活性化ループのアミノ酸配列（６６４−ＧＭＳＲＤＩＹＳＴＤＹＹＲＶＧＧＲ−６８０）（配列番号１）の部分配列ＳＲＤＩＹＳＴＤＹＹＲ（配列番号２）を有するペプチドを、細胞膜透過性を促進する機能を有するペプチドと連結して腫瘍細胞や神経細胞内へ導入すると、ＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性が抑制され、腫瘍細胞の増殖が抑制されること（特許文献３、非特許文献１）、さらに鎮痛作用が得られる（侵害受容性疼痛および神経障害性疼痛ともに抑制できる）こと（非特許文献２、非特許文献３）を既に報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２０１０−１６２０２８号公報
【特許文献２】国際公開第２００６／１３７１０６号パンフレット
【特許文献３】特開２０１０−６７３１号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Munetaka Hirose et al., J Pharmacol Sci 106,107-113,2008
【非特許文献２】Koyo Ueda et al., J Pharmacol Sci 112,438-443,2010
【非特許文献３】Wei-Ying Ma et al., J Pharmacol Sci 114,79-84,2010
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ＴｒｋＡ活性を抑制するペプチドを用いた、優れた腫瘍治療薬および疼痛治療薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、上記の知見を基に、さらに検討を重ね、ＴｒｋＡ活性を強力に抑制することが報告されているＴｒｋＡ活性化ループ内の部分配列ＳＲＤＩＹＳＴＤＹＹＲ（配列番号２）よりも、Ｎ末端側のＭＳＲＤＩＹＳ（配列番号３）を少なくとも含む領域を用いれば、より強力に、且つ短い長さのペプチドでＴｒｋＡ活性を抑制し、腫瘍や疼痛を治療し得ることを見出し、更に検討を進めた結果、本発明を完成した。
【００１２】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１）式（Ｉ）：
Ｘ−Ｌ−Ｙ    （Ｉ）
（式中、Ｘは細胞膜透過性を促進する機能を有するペプチド残基であり、Ｌはリンカーまたはペプチド結合であり、ＹはＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する機能を有し、且つ配列番号１で表されるアミノ酸配列の部分配列（ただし、該部分配列は配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む）を含む１５アミノ酸長以下のペプチド残基である）で表されるペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
（２）Ｙが配列番号４または配列番号５で表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド残基である、（１）に記載の、ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
（３）Ｘが配列番号６〜１１で表されるアミノ酸配列のいずれかを有するポリペプチド残基である、（１）または（２）に記載の、ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
（４）Ｌがε−アミノカプロン酸リンカーである、（１）〜（３）のいずれか１つに記載の、ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
（５）ペプチド化合物が、式（II）：
ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＧＭＳＲＤＩＹＳ−ＮＨ２    （II）
または式（III）：
ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２    （III）
（式中、ａｃｐはε−アミノカプロン酸リンカーを示す）で表される化合物である、（１）〜（４）のいずれか１つに記載の、ペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩。
（６）（１）〜（５）のいずれか１つに記載のペプチド化合物、またはそれらの薬理学的に許容される塩を含有する医薬組成物。
（７）（１）〜（５）のいずれか１つに記載のペプチド化合物、またはそれらの薬理学的に許容される塩を含有する、腫瘍治療剤。
（８）腫瘍が、褐色細胞腫、神経芽細胞腫、甲状腺癌、肺癌、前立腺癌、尿管癌、膀胱癌、乳癌、膵臓癌、メラノーマ、ウィルムス腫瘍またはホジキンリンパ腫である、（７）に記載の腫瘍治療剤。
（９）（１）〜（５）のいずれか１つに記載のペプチド化合物、またはそれらの薬理学的に許容される塩を含有する、疼痛治療剤。
（１０）癌疼痛治療剤である、（９）に記載の疼痛治療剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、優れた腫瘍増殖抑制作用を有し、製造コストの低い、腫瘍治療剤を提供することが出来る。また、本発明によれば、優れた鎮痛作用を有し、製造コストの低い、疼痛治療剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】Ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、ペプチド化合物によるＴｒｋＡチロシンキナーゼ活性抑制作用を示す図である。
【図２】マウスメラノーマ細胞株（Ｂ１６−Ｆ１）を、血清およびペプチド化合物を加えて培養した場合の、ペプチド化合物による細胞増殖抑制作用を示す図である。
【図３】マウスメラノーマ細胞株（Ｂ１６−Ｆ１）を、血清無しでＮＧＦおよびペプチド化合物を加えて培養した場合の、ペプチド化合物による細胞増殖抑制作用を示す図である。
【図４】マウスメラノーマ細胞株（Ｂ１６−Ｆ１）を、血清およびペプチド化合物を加えて培養した場合の、ペプチド化合物による細胞毒性を示す図である。
【図５】マウスメラノーマモデルにおける、ペプチド化合物による鎮痛効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、式（Ｉ）：
Ｘ−Ｌ−Ｙ    （Ｉ）
（式中、Ｘは細胞膜透過性を促進する機能を有するペプチド残基であり、Ｌはリンカーまたはペプチド結合であり、ＹはＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する機能を有し、且つ配列番号１で表されるアミノ酸配列の部分配列を含むペプチド残基である）で表されるペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩を提供するものである。
【００１６】
Ｙで表されるペプチド残基は、ＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する機能を有する。
【００１７】
ＴｒｋＡは、神経成長因子（ＮＧＦ）の高親和性受容体として知られる公知のタンパク質である。ＴｒｋＡは、その細胞内ドメインにチロシンキナーゼ活性を有しており、ＮＧＦがＴｒｋＡに結合すると、該チロシンキナーゼ活性によりＴｒｋＡの細胞内ドメインに含まれる５つのチロシン残基が自己リン酸化され、下流の細胞内情報伝達系へ情報伝達を行う。「ＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性の抑制」とは、このＴｒｋＡの自己リン酸化の抑制および下流の細胞内情報伝達系への情報伝達の抑制を意味する。
【００１８】
Ｙで表されるペプチド残基は、配列番号１で表されるアミノ酸配列の部分配列を含む。配列番号１で表されるアミノ酸配列は、ヒトＴｒｋＡの活性化ループ部位に相当する。また、該部分配列は、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含む。該部分配列の長さは、Ｙで表されるペプチド残基がＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性の抑制作用を有し、且つ式（Ｉ）で表されるペプチド化合物が腫瘍細胞の増殖や、疼痛を抑制する機能を発揮し得る限り特に限定されないが、十分な強さのＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性抑制機能を確保する観点から、該部分配列の長さは７アミノ酸長以上、好ましくは８アミノ酸長以上である。また、該部分配列の長さは、通常１５アミノ酸長以下、好ましくは１３アミノ酸長以下、より好ましくは１１アミノ酸長以下、更に好ましくは９アミノ酸長以下である。
【００１９】
一態様において、該部分配列の長さは、好ましくは７〜９アミノ酸であり、最も好ましくは８アミノ酸である。
【００２０】
一方、該ペプチド残基が長すぎると、式（Ｉ）で表されるペプチド化合物の細胞内への導入効率が低下する恐れがある。従って、細胞内への高い導入効率を達成する観点から、Ｙで表されるペプチド残基の全長は、通常１５アミノ酸長以下、好ましくは１３アミノ酸長以下、より好ましくは１１アミノ酸長以下、更に好ましくは９アミノ酸長以下である。
【００２１】
Ｙで表されるペプチド残基は、上述の配列番号１で表されるアミノ酸配列の部分配列以外の領域を含んでいても含んでいなくてもよい。Ｙで表されるペプチド残基が、上述の配列番号１で表されるアミノ酸配列の部分配列以外の領域を含む場合、当該領域を構成するアミノ酸配列は、Ｙで表されるペプチド残基がＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する限り、特に限定されない。好ましくは、Ｙで表されるペプチド残基は、上述の配列番号１で表されるアミノ酸配列の部分配列からなる。
【００２２】
最も好ましくは、Ｙで表されるペプチド残基は、配列番号４または配列番号５で表されるアミノ酸配列からなる。
【００２３】
Ｘで表されるペプチド残基は、細胞膜透過性を促進する機能を有するアミノ酸配列を含む。「細胞膜透過性を促進する機能」とは、細胞外から細胞内への化合物の透過を促進する機能を意味する。式（Ｉ）で表されるペプチド化合物がこのＸで表されるペプチド残基を有することにより、生体へ該ペプチド化合物を投与すると、該ペプチド化合物が細胞内へ取り込まれ、該細胞においてＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制し、腫瘍細胞の増殖や、さらに、疼痛を抑制することができる。
【００２４】
細胞膜透過性を促進する機能を有するアミノ酸配列としては、公知のものを用いることができる。例えば、配列番号６〜１１で表されるアミノ酸配列を好適なものとして挙げることができる。このうち、配列番号６で表されるアミノ酸配列は、ヒト免疫不全ウィルスタイプ１のＴＡＴ（転写のトランス活性化因子）に由来するペプチド（４７−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−５７）に相当する。
【００２５】
Ｘで表されるペプチド残基の長さは、細胞膜透過性を促進する機能を発揮し得る限り特に限定されないが、式（Ｉ）の化合物の細胞内への高い導入効率を達成する観点から通常４〜１５アミノ酸長、好ましくは５〜１１アミノ酸長である。
【００２６】
最も好ましくは、Ｘで表されるペプチド残基は、配列番号６で表されるアミノ酸配列からなる。
【００２７】
Ｌはリンカーまたはペプチド結合を示す。リンカーとは、共有結合を介して２つの分子を連結する分子をいう。リンカーとしては、ＸおよびＹが、それぞれ細胞膜透過性促進機能およびＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性抑制機能を発揮し得る限り特にその種類は限定されない。リンカーとしては、細胞外においては切断され難く、高い可動性を有するものが好適に用いられる。好適なリンカーとしては、ε−アミノカプロン酸リンカーを挙げることができる。
【００２８】
Ｌがペプチド結合である場合、Ｘで表されるペプチド残基のカルボン酸末端にＹで表されるペプチド残基がペプチド結合を介して直接結合することにより、式（Ｉ）の化合物はひとつながりのペプチドとなる。
【００２９】
最も好ましくは、Ｌはε−アミノカプロン酸リンカーである。
【００３０】
また、式（Ｉ）のペプチド化合物は修飾されていてもよい。該修飾としては、アミド化、脂質鎖の付加（脂肪族アシル化（パルミトイル化、ミリストイル化等）、プレニル化（ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化等）等）、リン酸化（セリン残基、スレオニン残基、チロシン残基等におけるリン酸化）、アセチル化、糖鎖の付加（Ｎ−グリコシル化、Ｏ−グリコシル化）等を挙げることができる。好ましくは、式（Ｉ）のペプチド化合物はアミド化されている。
【００３１】
また、式（Ｉ）のペプチド化合物の最も好適な例としては、例えば式（II）：
ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＧＭＳＲＤＩＹＳ−ＮＨ２    （II）
または式（III）：
ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２    （III）
（式中、ａｃｐはε−アミノカプロン酸リンカーを示す）で表される化合物を挙げることができる。式（II）および(III)に含まれる「ＮＨ２」は、該ペプチド化合物のカルボン酸末端がアミド化されていることを意味する。
【００３２】
また、式（Ｉ）のペプチド化合物の薬理学的に許容される塩としては、薬理学的に許容される酸（例：無機酸、有機酸）や塩基（例：アルカリ金属塩）などとの塩が用いられ、とりわけ薬理学的に許容される酸付加塩が好ましい。このような塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが挙げられる。
【００３３】
また、式（Ｉ）のペプチド化合物の製造方法については特に制限なく、公知のペプチド合成法に従って製造することができる。ペプチド合成法は、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれであってもよい。ペプチド化合物を構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合し、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的とするペプチド化合物を製造することができる。
【００３４】
また、リンカーによるペプチド同士の連結も、自体公知の方法により行うことができる。例えば、ε−アミノカプロン酸リンカーを用いる場合には、ケミカル・ファーマシューティカル・ブルテン（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．），２００５年，第５３巻，１１３１−１１３５頁に記載された方法を参照することにより、Ｘで表されるペプチドのカルボン酸末端にε−アミノカプロン酸リンカーを介してＹで表されるペプチドのアミノ酸末端を連結することができる。
【００３５】
式（Ｉ）のペプチド化合物またはその薬理学的に許容される塩は、良性または悪性の腫瘍細胞内に取り込まれ、ＮＧＦによるＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制することにより、該腫瘍細胞の増殖を強力に抑制し得る。また、式（Ｉ）のペプチド化合物またはその薬理学的に許容される塩は、一次知覚神経のニューロンに取り込まれ、ＮＧＦによるＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制することにより、疼痛を強力に抑制し得る。式（Ｉ）のペプチド化合物またはその薬理学的に許容される塩の有効量を哺乳動物（好ましくはヒト）に投与することにより、該哺乳動物における腫瘍を治療することができる。また、式（Ｉ）のペプチド化合物またはその薬理学的に許容される塩の有効量を哺乳動物（好ましくはヒト）に投与することにより、該哺乳動物における疼痛を治療することができる。従って、本発明は、式（Ｉ）のペプチド化合物またはその薬理学的に許容される塩を含む医薬（腫瘍治療剤又は疼痛治療剤）を提供するものである。
【００３６】
式（Ｉ）のペプチド化合物またはその薬理学的に許容される塩は、ＮＧＦによるＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制することにより、該腫瘍細胞の増殖を強力に抑制するので、式（Ｉ）のペプチド化合物またはその薬理学的に許容される塩を腫瘍の治療に用いる場合、該腫瘍は通常ＴｒｋＡを発現する腫瘍である。好ましくは、該腫瘍はＴｒｋＡを介したＮＧＦ刺激により増殖が促進している腫瘍である。褐色細胞腫、神経芽細胞腫、甲状腺癌、肺癌、前立腺癌、尿管癌、膀胱癌、乳癌、膵臓癌、メラノーマ、ウィルムス腫瘍またはホジキンリンパ腫においてはＮＧＦがＴｒｋＡを介してその増殖を促進することから、本発明の腫瘍治療剤は、褐色細胞腫、神経芽細胞腫、甲状腺癌、肺癌、前立腺癌、尿管癌、膀胱癌、乳癌、膵臓癌、メラノーマ、ウィルムス腫瘍またはホジキンリンパ腫、とりわけ褐色細胞腫の治療に効果的である。
【００３７】
また、式（Ｉ）のペプチド化合物またはその薬理学的に許容される塩は、腫瘍細胞の増殖抑制効果と、疼痛抑制効果の双方を併せ持つので、がん疼痛の治療に好適に用いられる。
【００３８】
遺伝子治療によりＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制し得るアミノ酸配列を有するペプチドを細胞内で発現させる場合は、正常細胞におけるＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性のコントロールができなくなる可能性がある。またＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性の、長期間の持続的な抑制は、免疫反応の低下やアルツハイマー病などの発症を促進する危険性がある。しかし、本発明の医薬の有効成分は、ペプチド化合物であるため、不必要な分は体内のプロテイナーゼにより分解され、このような合併症を来たす危険性は少ない。
【００３９】
本発明の医薬は、活性成分として式（Ｉ）のペプチド化合物または薬理学的に許容されるその塩単独で、あるいは任意の他の治療のための有効成分との混合物として含有することができる。また、本発明の医薬は、製剤学の技術分野において周知の方法により、活性成分を薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の担体と一緒に混合し、医薬組成物として製造することができる。
【００４０】
薬理学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、その具体例としては、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などが挙げられる。製剤化の際には、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加剤を用いてもよい。
【００４１】
賦形剤の好適な例としては、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、プルラン、軟質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどが挙げられる。
滑沢剤の好適な例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカ、ポリエチレングリコール６０００などが挙げられる。
結合剤の好適な例としては、α化デンプン、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
崩壊剤の好適な例としては、乳糖、白糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、軟質無水ケイ酸、炭酸カルシウムなどが挙げられる。
【００４２】
溶剤の好適な例としては、注射用水、生理食塩水、リンゲル液、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油などが挙げられる。
溶解補助剤の好適な例としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、トレハロース、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどが挙げられる。
懸濁化剤の好適な例としては、例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリンなどの界面活性剤；例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどの親水性高分子；ポリソルベート類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが挙げられる。
等張化剤の好適な例としては、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、ブドウ糖、キシリトール、果糖などが挙げられる。
緩衝剤の好適な例としては、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝液などが挙げられる。
無痛化剤の好適な例としては、プロピレングリコール、塩酸リドカイン、ベンジルアルコールなどが挙げられる。
防腐剤の好適な例としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸などが挙げられる。
抗酸化剤の好適な例としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸塩などが挙げられる。
着色剤の好適な例としては、水溶性着色タール色素（例、食用赤色２号および３号、食用黄色４号および５号、食用青色１号および２号などの食用色素）、不溶性レーキ色素（例、前記水溶性食用タール色素のアルミニウム塩）、天然色素（例、β−カロチン、クロロフィル、ベンガラ）などが挙げられる。
甘味剤の好適な例としては、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸ニカリウム、アスパルテーム、ステビアなどが挙げられる。
【００４３】
また、投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口製剤、注射剤または経皮製剤などで投与可能である。経口製剤としては、錠剤（舌下錠、口腔内崩壊剤を含む）、カプセル剤（ソフトカプセル、マイクロカプセルを含む）、散剤、顆粒剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などが挙げられる。また、注射剤としては、皮内注射、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、脊髄腔内注射、硬膜外注射、局所注射などが挙げられる。また、経皮製剤としては、貼付剤、軟膏剤、散布剤などが挙げられる。これらの製剤は、速放性製剤または徐放性製剤などの放出制御製剤（例、徐放性マイクロカプセル）であってもよい。
【００４４】
本発明の医薬中の式（Ｉ）のペプチド化合物の含有量は、例えば、０．１〜１００重量％である。
【００４５】
次に経口製剤の製造法について説明する。経口製剤は、活性成分に、例えば、賦形剤、崩壊剤、結合剤または滑沢剤などを添加して圧縮形成することにより製造される。
さらに、味のマスキング、腸溶化あるいは徐放化を目的として、自体公知の方法により、経口製剤にコーティングを行ってもよい。コーティング剤としては、例えば、腸溶性ポリマー（例、酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマーＬ、メタアクリル酸コポリマーＬＤ、メタアクリル酸コポリマーＳ、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース）、胃溶性ポリマー（例、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマーＥ）、水溶性ポリマー（例、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、水不溶性ポリマー（例、エチルセルロース、アミノアルキルメタアクリレートコポリマーＲＳ、アクリル酸エチル・メタアクリル酸メチル共重合体）、ワックスなどが用いられる。コーティングを行う場合、前記コーティング剤とともに、ポリエチレングリコール等の可塑剤；酸化チタン、三二酸化鉄等の遮光剤を用いてもよい。
【００４６】
また、注射剤は、活性成分を分散剤（例、ツィーン（Ｔｗｅｅｎ）８０（アトラスパウダー社製、米国）、ＨＣＯ６０（日光ケミカルズ社製）、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム）、保存剤（例、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール、クロロブタノール、フェノール）、等張化剤などと共に、水性溶剤（例、蒸留水、生理的食塩水、リンゲル液）あるいは油性溶剤（例、オリーブ油、ゴマ油、綿実油、コーン油などの植物油；プロピレングリコール、マクロゴール、トリカプリリン）などに溶解、懸濁あるいは乳化することにより製造される。この際、所望により溶解補助剤、懸濁化剤、緩衝剤、安定剤（例、ヒト血清アルブミン）、無痛化剤、防腐剤等の添加剤を用いてもよい。
【００４７】
また、経皮製剤は、活性成分を固状、半固状または液状の組成物とすることにより製造される。例えば固状の組成物は、活性成分をそのまま、あるいは賦形剤、増粘剤などを添加、混合して粉状とすることにより製造される。液状の組成物は、注射剤の場合とほとんど同様にして製造される。半固状の組成物は、水性または油性のゲル剤あるいは軟膏状のものがよい。また、これらの組成物は、いずれもｐＨ調整剤、防腐剤などを含んでいてもよい。
【００４８】
本発明の医薬の投与量および投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤度により異なるが、通常、静脈内投与の場合、成人一人当たり約１０ｍｇ〜１ｇを一日一回ないし数回投与する。より好ましくは、注射剤による静脈内投与で、成人一人当たり３０ｍｇ〜０．３ｇを一日１〜３回で１〜２週間の継続投与を１クールとし、これを３〜４クール繰り返す。
なお、これら投与量および投与回数に関しては、前述の種々の条件により変動する。
【００４９】
以下、本発明について、実施例を挙げてさらに具体的に説明する。本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００５０】
ＡＴＰによるリコンビナントＴｒｋＡのチロシンリン酸化を、ペプチド化合物１（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＧＭＳＲＤＩＹＳ−ＮＨ２）、ペプチド化合物２（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２）、ペプチド化合物３（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＳＲＤＩＹＳＴＤＹＹＲ−ＮＨ２）がどの程度抑制するか、濃度を振って（１μＭ、１０μＭ、１００μＭ）検討した。抗リン酸化チロシン抗体を用いて、細胞膜透過性促進部位のペプチドＴＡＴ（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ）を用いた場合のＴｒｋＡ活性を１００％としてｉｎ  ｖｉｔｒｏで明らかにした。
図１より、ペプチド化合物１（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＧＭＳＲＤＩＹＳ−ＮＨ２）およびペプチド化合物２（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２）はペプチド化合物３（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＳＲＤＩＹＳＴＤＹＹＲ−ＮＨ２）よりもＴｒｋＡのチロシンキナーゼ活性を抑制する作用が強いことがわかる。
【実施例２】
【００５１】
マウスのメラノーマ細胞株（Ｂ１６−Ｆ１）を、血清を加えて培養した場合と、血清なしでＮＧＦのみ加えて培養した場合において、ペプチド化合物１（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＧＭＳＲＤＩＹＳ−ＮＨ２）、ペプチド化合物２（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２）、ペプチド化合物３（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＳＲＤＩＹＳＴＤＹＹＲ−ＮＨ２）を濃度を振って（０μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ）、それぞれ２日間暴露したのち細胞増殖率を測定した。
またマウスのメラノーマ細胞株（Ｂ１６−Ｆ１）を、血清を加えて、それぞれ濃度を振った（０μＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ）ペプチド化合物と２日間培養し、培養液中のＬＤＨ濃度を測定することにより、細胞毒性を評価した。
図２および図３より、マウスのメラノーマ細胞株（Ｂ１６−Ｆ１）において、ペプチド化合物１（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＧＭＳＲＤＩＹＳ−ＮＨ２）およびペプチド化合物２（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２）はペプチド化合物３（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＳＲＤＩＹＳＴＤＹＹＲ−ＮＨ２）よりも細胞増殖抑制作用が強いことがわかる。また、図４より、ペプチド化合物１００μＭ以下では細胞毒性が生じなかったこともわかる。
【実施例３】
【００５２】
Ｂ１６−Ｆ１細胞をＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの左足底皮下に移植し、移植後５−９日目まで、ペプチド化合物２（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２）１０ｍｇ／ｋｇを１日１回腹腔内投与し、移植後０−２０日までの痛み反応（機械刺激過敏反応）を調査した。その結果、移植後２０日目の痛み反応を、ペプチド化合物２（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ａｃｐ−ＭＳＲＤＩＹＳＴ−ＮＨ２）は抑制することが示された（図５）。この結果より、本発明のペプチド化合物が優れた疼痛抑制効果を有することが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明によれば、優れた腫瘍増殖抑制作用を有し、製造コストの低い、腫瘍治療剤を提供することが出来る。また、本発明によれば、優れた鎮痛作用を有し、製造コストの低い、疼痛治療剤を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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