(57)【要約】      （修正有）【課題】活魚輸送において、密閉容器内の酸素および水質を、長時間に渡って安定に維持出来る方法を提供する。【解決手段】魚をマイクロナノバブルで満たした淡水あるいは海水に入れ、酸素を密閉容器内に充填することに加え、二酸化炭素除去剤を使用することで高酸素状態を維持し、魚の呼吸を長期間可能にし、さらに硝化菌が着床した発泡樹脂を入れ、その活性化に必要な銅、鉄、リン酸、油脂あるいは脂肪酸を添加することによって、硝化作用を促進し、水質を安定に維持する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
高酸素濃度下、硝化菌活性化物質の存在下、硝化菌を着床させた素材の存在下、適正なｐＨ下および水温下で、魚の呼吸を保障し、かつ硝化菌の硝化作用を直ちに発現させることにより水質を維持し、閉鎖容器内で魚を長期間生存させること、を特徴とする活魚輸送法。
【請求項２】
高酸素濃度が、輸送魚の入る水相では、酸素のマイクロナノバブルに満たされた淡水あるいは海水を使用し、また気相では、密閉容器内に純酸素を封入し、さらに魚の呼吸によって生ずる二酸化炭素はポリエチレンの袋に充填した吸収剤で除き、高酸素分圧を維持すること、を特徴とする請求項１に記載の活魚輸送法。
【請求項３】
硝化菌活性化物質の組成が、１）リン酸緩衝液（淡水の場合ｐＨ７．０、海水の場合ｐＨ８．２）であり、その最終濃度が０．１から５ｍＭ、好ましくは１ｍＭであること、２）鉄塩（ＩＩ）であり、その最終濃度が１５０から５００μｇ／Ｌ、好ましくは２００から４００μｇ／Ｌであること、３）銅塩（ＩＩ）であり、その最終濃度２０から２００μｇ／Ｌ、好ましくは４０から８０μｇ／Ｌであること、また４）油脂あるいはその構成成分である脂肪酸が長鎖、好ましくは炭素数が１２から２４、より好ましくは炭素数が１８であること、また好ましくは不飽和脂肪酸、あるいは不飽和脂肪酸で構成される油脂であること、最終添加量が０．１〜５０μＬ／Ｌ、好ましくは１０μＬ／Ｌであること、５）炭素源が炭酸塩硬度（ＫＨ）を指標として８以上、好ましくは１２以上であること、を特徴とする、請求項１〜２のそれぞれに記載の活魚輸送法。
【請求項４】
硝化菌着床素材が、親水性樹脂の発泡体、好ましくはメラミン樹脂の発泡体（メラミンフォーム）、あるいは繊維、好ましくは炭素系繊維であることを特徴とする、請求項１〜３のそれぞれに記載の活魚輸送法。
【請求項５】
適正なｐＨが、淡水の場合５．０から９．２、好ましくは７．０から８．０であること、海水の場合７．５から９．０、好ましくは８．０から８．５であることを特徴とする、請求項１〜４のそれぞれに記載の活魚輸送法。
【請求項６】
適正な水温が、４℃から３０℃、好ましくは１０℃から２５℃であることを特徴する、請求項１〜５のそれぞれに記載の活魚輸送法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、活魚輸送において、魚の呼吸のための酸素供給、二酸化炭素の除去、および排泄で汚染された水質の改善を行なうための技術に関する。
【背景技術】
【０００２】  活魚輸送は寿司ブームの台頭とともに世界的な需要が増大して来ている。新鮮な魚肉を提供するには、１）活締め、２）チルド保存、３）急速凍結保存、４）極低温保存、５）活魚輸送が主な方法として利用されている。活締めは、魚の神経系を切断することにより即殺し、鮮度を保持するものである。チルド保存は凍結直前の温度で保存し、鮮度を保持する技術である。最近は冷蔵庫に常備されているものもあり、一般的な技術として定着している。急速冷凍は、凍結の際に針状の氷結晶が形成される温度帯を急速に通過することで、細胞を破壊する結晶形成を抑える技術である。このため、凍結を融解した際に細胞から滲出するドリップが少なく、鮮度が維持される。低い凍結温度はこれまで多く使われていた−２０℃を遥かに越えた低温、すなわち−４０℃から−６０℃で保存する技術である。それぞれが従来技術を越え、新鮮さが実感出来る。【０００３】  保存と比べ、活魚輸送は、直前まで活かしているので最も新鮮な魚肉を提供出来る。しかしながら、輸送のために魚を容器に密閉することは多くの問題を生み、これまで十分解決されていない。  活魚輸送は、主として養殖魚に適用されるが、現在までに養殖場から都市部への確立した輸送形態がある。その技術は日々向上しているが、主要な輸送手段は活魚車もしくは活魚船である。しかしながら、両者とも浄化槽は設けられていない。活魚船は移動中に海水が船に入り込み、灌水出来る構造になっているが、活魚車には通常、通気装置だけが設置されている。  浄化槽は１）自体の占有面積が大きいこと、２）経済性を上げるため、魚の輸送密度が高く、相当な浄化能力が要求されるため、の理由により、活魚車に設置することは困難である。【０００４】  流通上、活魚車もしくは活魚船以外の活魚輸送手段は、十分確立していない。すなわち、観賞魚などの場合には、ビニール袋などに魚を入れ、空気あるいは酸素を袋に充填し、輸送する。また一部食用の活魚輸送に用いられており、水温を下げて魚の代謝を落とし、水質悪化を避けている。しかし、短時間の場合にはこのような方法でも輸送は可能であるが、遠距離で数日に渡る場合には、浄化槽がない限り水質の悪化が進み、魚は死滅してしまうので、極めて困難である。【０００５】  閉鎖状態で魚の排泄物が水質の悪化を招くが、その中で魚の生存に影響を及ぼすのはアンモニアである。アンモニアは毒性が強いため、陸上動物の体内ではすぐに無害な尿素や尿酸に転換され、これが尿中に排泄される。しかし、魚類は体内で生成するアンモニアの殆どを鰓から、残りを尿の成分として水中に放出している。一般に、餌を構成する蛋白質重量のうち約１６％が窒素原子であるが、その約半分がアンモニアとして放出されると言われている。  アンモニアはｐＨ、温度によってその存在様式が異なる。酸性、すなわち水素イオン濃度が高い状態にあれば、ほとんどがアンモニウムイオンに変わり、アンモニアほどの毒性はない。しかし、塩基性ではアンモニアとして存在するので、極めて有毒となる。  このアンモニアを除去出来れば、魚は生存が出来るが、魚は常時排泄をしているので、アンモニアは常に増加している。活性炭などの吸着剤で増え続けるアンモニアを除去しようとする方��もあるが、増え続けるアンモニアに対しては圧倒的大量の吸着剤を使用しなければならず、実用的ではない。これに対応出来るのは生物的浄化方法しかあり得ないが、これは一般の水槽で自然に立ち上がり、安定している浄化槽でしか見られない活性である。【０００６】  水槽の浄化槽には様々な形態があるが、基本的にはポンプで水を循環させ、多孔性素材あるいは繊維を通して浄化する。多孔性素材あるいは繊維には硝化細菌が棲み付き、これら細菌の働きでアンモニアが浄化される。硝化作用を担う硝化細菌は、アンモニア態窒素を亜硝酸塩に酸化する「アンモニア酸化細菌」（あるいは亜硝酸菌とも言う）と、亜硝酸塩を硝酸塩に酸化する「亜硝酸酸化細菌」（あるいは硝酸菌とも言う）の２つの細菌群からなる。これらの細菌は二酸化炭素（ＣＯ２）を唯一の炭素源とする独立栄養細菌であり、アンモニアあるいは亜硝酸を酸化することでエネルギーを獲得し、代謝を行なっている。  硝化菌はほとんどが個体表面に定着しており、定着部位から離脱した分裂細菌は約１５％あるが、定着していることが活性の高さにほぼ比例している。従って、硝化菌は担体に定着したものが有効である。担体の表面積が大きい物体ほど多くの細菌が付着出来る。【０００７】  本発明者らは先の「魚及び水棲動物の水槽浄化用フィルター、同浄化用フィルターの製造方法、浄化用フィルターの保存方法及び魚及び水棲動物の水槽の浄化方法」（特許文献１）、および「浄化用フィルター及びその製造法並びに同フィルターの保存法」（特許文献２）において、炭化綿（木綿の炭化物）をこの原理に基づいて提唱した。しかし、活魚輸送においては、炭化綿の粉体が次第に水に流出し、魚の鰓を目詰まりさせ、呼吸を阻害するなどの問題があった。親水性で多孔質であり、よく菌を吸着させる上、安定な素材が必要である。【０００８】  魚を飼育している水槽では、時間が経過すれば自然に硝化菌が増殖し、安定化する。アンモニア態窒素が蓄積した水槽には、始めアンモニア酸化細菌が立ち上がり、アンモニア態窒素を亜硝酸態窒素に変えて行くが、十分な亜硝酸態窒素が蓄積してから、亜硝酸酸化細菌が立ち上がる。このように硝化菌が安定して活性を持つには通常数ヶ月程度かかる。  アンモニア酸化細菌の場合、生育に必要な要素が十分に揃っていれば、最少２４時間で一分裂する。亜硝酸酸化菌の場合には最少４８時間で一分裂する。１モルのアンモニア態窒素を酸化する時に得られるエネルギーは３９．５ｋｃａｌであり、また１モルの亜硝酸態窒素を酸化して得られるエネルギーは２１．６ｋｃａｌに過ぎず、好気的細菌がブドウ糖１モル（１８０ｇ）から呼吸により得られるエネルギー、６８６ｋｃａｌと比べると非常に少ない。この増殖速度は大腸菌などのバクテリアが１時間以内に一分裂する速度と比べると極端に遅い。この増殖の遅さが、硝化菌を利用するあらゆる場面で問題となって来た。【０００９】  アンモニア酸化細菌には、ニトロソモナス（Ｎｉｔｒｏｓｏｍｏｎａｓ）属、ニトロソロブス（Ｎｉｔｒｏｓｏｌｏｂｕｓ）属、ニトロソコッカス（Ｎｉｔｒｏｓｏｃｏｃｃｕｓ）属、ニトロソスピラ（Ｎｉｔｒｏｓｏｓｐｉｒａ）属、ニトロスピラ（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｒａ）属などがあり、種としては非��に種類が多い。また、亜硝酸酸化細菌もニトロバクター（Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属以外に、ニトロコッカス（Ｎｉｔｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ニトロスピナ（Ｎｉｔｒｏｓｐｉｎａ）属が知られている。【００１０】  魚が代謝を行なうこととは、第一義に酸素呼吸をし、栄養物を酸化によって分解し、エネルギーを得たり、異化作用で新しい物質を生合成することである。その結果、二酸化炭素を排出する。一方、上述した水浄化の硝化菌も同様であり、酸素を非常に多く消費する。  活魚輸送で大きな問題はこの酸素供給と、二酸化炭素処理である。閉鎖されている空間では、限られた酸素しか存在しないため、魚や硝化菌に酸素が消費されて減少するばかりではなく、呼吸により生じた二酸化炭素が、残存する酸素分圧を大幅に下げて行く。【００１１】
【特許文献１】特開２００５−１１７９２５
【特許文献２】特開２００５−８７０８３
【特許文献３】特願２０１０−１５９１２７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】  本発明の目的は、活魚輸送用の容器内で、１）魚が長期間限られた酸素で呼吸が出来る方法、２）魚の呼吸により排出される二酸化炭素を処理する方法、３）硝化菌が活性化される酸素条件、および４）常時排泄される大量のアンモニアを無害化する方法を、提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１３】  本発明者らは先に「硝化および脱窒作用の活性化物質」（特許文献１）を提案した。本発明は、この先の発明の硝化細菌の活性化に着眼して、活魚輸送への利用を創案するものである。しかしながら、上記目的の達成にはさらに条件の付与が必要であり、鋭意研究を重ねた結果、マイクロナノバブル水と純酸素の併用、硝化菌活性化の最少物質の添加、および安定な硝化菌着床素材の使用により、上記の問題を解決できるとの知見を得た。  本発明は、この知見に基づいて、１．高酸素濃度下、硝化菌活性化物質の存在下、硝化菌を着床させた素材の存在下、適正なｐＨ下および水温下で、魚の呼吸を保障し、かつ硝化菌の硝化作用を直ちに発現させることにより水質を維持し、閉鎖容器内で魚を長期間生存させること、を特徴とする活魚輸送法、２．高酸素濃度が、輸送魚の入る水相では、酸素のマイクロナノバブルに満たされた淡水あるいは海水を使用し、また気相では、密閉容器内に純酸素を封入し、さらに魚の呼吸によって生ずる二酸化炭素はポリエチレンの袋に充填した吸収剤で除き、高酸素分圧を維持すること、を特徴とする１に記載の活魚輸送法、３．硝化菌活性化物質の組成が、１）リン酸緩衝液（淡水の場合ｐＨ７．０、海水の場合ｐＨ８．２）であり、その最終濃度が０．１から５ｍＭ、好ましくは１ｍＭであること、２）鉄塩（ＩＩ）であり、その最終濃度が１５０から５００μｇ／Ｌ、好ましくは２００から４００μｇ／Ｌであること、３）銅塩（ＩＩ）であり、その最終濃度２０から２００μｇ／Ｌ、好ましくは４０から８０μｇ／Ｌであること、また４）油脂あるいはその構成成分である脂肪酸が長鎖、好ましくは炭素数が１２から２４、より好ましくは炭素数が１８であること、また好ましくは不飽和脂肪酸、あるいは不飽和脂肪酸で構成される油脂であること、最終添加量が０．１〜５０μＬ／Ｌ、好ましくは１０μＬ／Ｌであること、５）炭素源が炭酸塩硬度（ＫＨ）を指標として８以上、好ましくは１２以上であること、を特徴とする、１〜２のそれぞれに記載の活魚輸送法、４．硝化菌着床素材が、親水性樹脂の発泡体、好ましくはメラミン樹脂の発泡体（メラミンフォーム）、あるいは繊維、好ましくは炭素系繊維であることを特徴とする、１〜３のそれぞれに記載の活魚輸送法、５．適正なｐＨが、淡水の場合５．０から９．２、好ましくは７．０から８．０であること、海水の場合７．５から９．０、好ましくは８．０から８．５であることを特徴とする、１〜４のそれぞれに記載の活魚輸送法、６．適正な水温が、４℃から３０℃、好ましくは１０℃から２５℃であることを特徴する、１〜５のそれぞれに記載の活魚輸送法、を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１４】  本発明者は、先願（文献１）により硝化菌の活性化が可能であることを示した。しかしながら、閉鎖された容器内で、限られた酸素しかなく、かつ常時二酸化炭素が呼吸によって生産され、さらにアンモニアが排泄される環境下ではより酸素供給を十分に行わせる条件、および硝化菌をさらに活性化した条件を得る必要がある。そのために、まず酸素供給が十分可能な条件を求めた。  魚の輸送容器は、封入した水（淡水もしくは海水）が輸送中に洩れ出ないように密閉されたものを用いる。従って、魚の呼吸のための酸素は容器内に充填する。１気圧の酸素を容器に充填した場合には、酸素が水に溶け込む量は温度で決まる。例えば、１気圧、室温（２５℃）であれば、溶存酸素量は約８ｍｇ／Ｌであり、海水の場合には約６．５ｍｇ／Ｌである。
【００１５】  高酸素状態を維持するため、マイクロナノバブル水が有効であるかどうかを検討した。  マイクロナノバブル水は強制的に酸素ガスを水中に泡の形で供給し、そのサイズがマイクロ〜ナノレベルであることから、拡大化せず、小さな泡のまま長く水中に止まることが知られている。いずれは縮小して水に溶解し、溶存酸素となるが、数週間は泡のまま存在出来る。マイクロナノバブル水の溶存酸素量は測定方法によって大きく変わり、実際の溶存酸素（ＤＯ）がどの程度かを判別するのが困難である。ＤＯメーター（隔膜電極法）で測定すると３２ｍｇ／Ｌ程度にもなるが、アジ化ウィンクラー変法では２０ｍｇ／Ｌ程度と測定された。いずれも環境基準測定の公定法である。
【００１６】（実験１）［マイクロナノバブル水の効果］  市販ミネラルウォーターと酸素とを、気液混合剪断方式によってマイクロナノバブル水化し、これに人工海水塩類を溶解した。魚（クサフグ、約３０ｇ）とマイクロナノバブル海水を密閉容器に入れ、空気を入れない状態で、２５℃で飼育すると、４５分で呼吸困難になり、横転した。この時のＤＯをアジ化ウィンクラー変法で測定すると、始めは２０．２ｍｇ／Ｌであり、魚の回収後は４．６４ｍｇ／Ｌであった。一方、同じ体重の魚を使って、人工海水と比較すると７分で呼吸困難となり、横転した。この時のＤＯは、始めは６．７ｍｇ／Ｌであり、魚の回収後は４．５０ｍｇ／Ｌであった。時間当たりの酸素消費量を比較すると、  マイクロナノバブル人工海水：２０．２−４．６４ｍｇ／Ｌ／４５ｍｉｎ＝  ０．３４６ｍｇ／Ｌ／ｍｉｎ  人工海水：  ６．７−４．５ｍｇ／Ｌ／７ｍｉｎ＝  ０．３１４ｍｇ／Ｌ／ｍｉｎとなった。従って、この魚の１分当たりの酸素消費量はそれぞれ約０．３ｍｇ／Ｌであり、ほとんど差がないことが解った。つまり、マイクロナノバブル人工海水のＤＯはアジ化ウィンクラーで測定した数値に従って良いことを意味している。マイクロナノバブル水は魚の呼吸を長時間補助することは出来ないが、商用的な活魚輸送の操作中に、魚封入後の酸素供給を急がなくても良く、このことは同時操作が数多く出来る利点がある。
【００１７】（実験２）［マイクロナノバブル水の硝化菌に対する効果］  次に、好気性の硝化菌に対するマイクロナノバブル水の効果を検証した。本発明者は、硝化菌の酸素供給を十分に行なうと、硝化作用が早く立ち上がることを見いだしていたからである。また、硝化作用の活性剤は特許文献１に記載されている方法によった。すなわち、マイクロナノバブル水で作った人工海水１００ｍＬと、イオン交換水で作った人工海水１００ｍＬを１５０ｍＬビーカーに入れ、それぞれに５ｇ／Ｌキレート鉄（ＦｅＳＯ４  ０．５ｇ、Ｈ２ＳＯ４  ５０μＬ、およびＥＤＴＡ０．１４ｇを１００ｍＬのイオン交換水に溶かしたもの）５．６μＬ、１ｇ／Ｌキレート銅（ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ、Ｈ２ＳＯ４  ５０μＬ、およびＥＤＴＡ  ０．１４ｇを１００ｍＬのイオン交換水に溶かしたもの）５．６μＬ、０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．１５ｍＬ、５０ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウム１ｍＬ、オリーブオイル５μＬを添加した。これに硝化菌ストック５ｍＬ、着床用素材としてメラニンフォームブロック（１ｃｍｘ１ｃｍｘ２ｃｍ）を入れ、アンモニアとして硫酸アンモニウムを最終５ｍｇ／Ｌになるように加えた。エアポンプでビーカー内に通気しながら室温（１７℃）で保存した。  結果は表１に示してある。アンモニア態窒素を測定して両者の水質を比較すると、明らかに純水だけで行なうより、マイクロナノバブル水を使った方が硝化反応は早く立ち上がった。【表１】
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【００１８】（実験３）［硝化菌の培養法］  硝化菌は別途培養が必要である。硝化菌は本発明者が自然界から採取したニトロソモナスおよびニトロバクターの混合菌を用いた。培養は（文献１）に記載されている通りに行なった。すなわち、培地には、１Ｌのイオン交換水に対して、ＮａＣｌ  ３５ｇ、Ｋ２ＨＰＯ４  ０．５ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．５ｇ、０．２ｇ／Ｌ  ＭｎＣｌ２  ２．３ｍＬ、１０ｍｇ／Ｌ  ＣａＣｌ２  ０．５ｍＬ、０．０５ｍｇ／Ｌ  Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ  ０．５ｍＬ、０．０５ｍｇ／ＬＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．５ｍＬ、０．００１ｍｇ／Ｌ  ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ  ０．５ｍＬ、５ｇ／Ｌキレート鉄２８０μＬ、および１ｇ／Ｌキレート銅２８０μＬ、を溶解し、５０ｇ／ＬＮａＨＣＯ３  ２ｍＬを添加し、ｐＨを塩酸で８．２に調製した。この培地６Ｌに硝化菌を植え、（ＮＨ４）２ＳＯ４を最終０．２ｇ／Ｌになるように加え、３０℃で、循環ポンプで循環させながらアンモニア、亜硝酸、硝酸が検出されなくなるまで培養した。（ＮＨ４）２ＳＯ４を再び加え、完全に硝化されるまで培養を続け、これを４回繰り返し、ストック菌とした。  メラミンフォームは厚さ２ｃｍ、縦１６ｃｍ、横８ｃｍのシートを循環ポンプの中に入れ、硝化菌の着床を行なった。循環しながら硝化菌は次第にメラミンフォームに着床を始め、活性が立ち上がる。着床したメラミンフォームはカッターナイフなどで、ブロックに切り、使用した。
【実施例及び比較例】
【００１９】  次に、本発明の実施例及び比較例について説明する。なお、以下に示す実施例は、本発明の理解を容易にするためのものであって、本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。すなわち、本発明の技術思想に基づく、他の例又は変形は、当然本発明に包含されるものである。
【実施例１】
【００２０】［二酸化炭素除去剤の検討］  ビニール袋にクサフグ（Ｔａｋｉｆｕｇｕ  ｎｉｐｈｏｂｌｅｓ）（体重約３０ｇ）を人工海水あるいはマイクロナノバブル人工海水と共に入れ、酸素を封入し、室温で保存した時に、二酸化炭素除去剤を入れた場合と、入れなかった場合とで、生存時間の差がどの程度になるか比較検証した。人工海水またはマイクロナノバブル人工海水４００ｍＬに実験２の要領で、鉄、銅、リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）をそれぞれ添加し、さらにＫＨ＝１０になるようＮａＨＣＯ３を約１ｍＬそれぞれ添加後、ｐＨは塩酸で調整しｐＨ８．２とした。  硝酸菌は、実験３で記載した要領でメラミンフォームに着床し、このブロック（２ｃｍｘ２ｃｍｘ２ｃｍ）にオリーブオイル２μＬを染み込ませた後、それぞれのビニール袋に入れ、一方はそのまま（Ａ）、一方は二酸化炭素除去剤（ソーダ石灰（水：約２０％、水酸化カルシウム：約７５％、水酸化ナトリウム：約３％、水酸化カリウム：約１％））１０ｇをポリエチレン袋に入れ、熱シールし密閉した（Ｂ）。用いたポリエチレン袋は、低密度ポリエチレンであり、密度は０．９０〜０．９２５である。酸素ガス、二酸化炭素などの無機ガスはよく通すが、水分子はほとんど通さない。次いで、酸素を封入したが、それぞれ約８００ｍＬであった。圧力はほぼ１４０％前後であった。なお、海水と硝化菌着床メラミンフォームを入れただけのコントロール（Ｃ）も比較のために用意した。【００２１】  室温（２５℃）のまま保存し、生存を比較した。結果を表２に示したが、（Ｂ）は６７．５時間まで生存した。飼育後の人工海水のアンモニア態窒素濃度はほぼ０になっており、硝化菌のうちアンモニア酸化菌が極めてよく活性化されていることが判った。一方、亜硝酸態窒素はやや高いが生存を危うくする濃度では無く、亜硝酸酸化菌も同様に活性化されていた。（Ａ）と（Ｂ）の違いは二酸化炭素の吸収があったか、無かったであるので、二酸化炭素の蓄積した（Ａ）は、二酸化炭素によって酸素分圧が低下し、魚への酸素供給も十分行なわれず、また硝化菌も十分活性化されなかったことを示している。ｐＨも死亡した順に低くなっており、水質悪化と比例していた。海水だけのコントロールでは、活性化剤が無いために、硝化菌の活性が見られず、高いアンモニア態窒素が蓄積し、亜硝酸態窒素も硝酸態窒素も検出されなかった。【表２】
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【実施例２】
【００２２】［エゾメバルによる室温保存実験］  実施例１で保存条件が整ったため、別の魚でその効果を確認した。用いた魚はエゾメバル（Ｓｅｂａｓｔｅｓ  ｔａｃｚａｎｏｗｓｋｉｉ）、体重約６０ｇであった。ナノバブル人工海水８００ｍＬに対し、実施例１（Ｂ）の要領で、全てを添加し、酸素を充填した。同じものを３組用意した。それぞれ酸素量は２Ｌであった。室温で保存し、その生存を調べた。結果は表３に示してある。いずれも７０時間袋の中で生存し、回収後も生存した。アンモニア態窒素も実施例１と同様の傾向を示し、平均で０．３ｍｇ／Ｌであり、亜硝酸態窒素は平均で４．３ｍｇ／Ｌ、硝酸態窒素は平均で７．１ｍｇ／Ｌであった。【表３】
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【実施例３】
【００２３】［エゾメバルによる低温保存実験］  実際の輸送の場合には、室温（通常２５℃）を維持するのは困難である。季節はもとより、夏期の場合、日照がある日では例えば、トラック荷台の温度が４０℃を越えることがある。また、逆に冬期では、寒冷地では氷点下になることもあり、いずれも活魚には好ましい温度ではない。しかしながら、低温での輸送は、冷蔵車の利用により確立している。この状況を鑑み、低温での保存実験を行なった。実施例２と同様の魚と手順で行なった。但し、保存は冷蔵庫内で行なった（平均４℃）。結果は表４に示してある。いずれも１７０時間生存し、３尾中１尾は死亡したが、それはさらに３時間保存を続け、その結果酸欠になったためである。しかしながら、水質は極めてよく維持されていることが判った。【表４】
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【発明の効果】
【００２４】  本発明の活魚輸送法は、十分な酸素供給量と、硝化菌の活性化を図っており、輸送期間中に素早く水質を浄化し、魚の長期に渡る輸送を安定して行なうことが出来る。このため、個別の魚輸送が可能になり、全国的な宅配便を利用することが可能となるばかりか、世界を対象にグローバルな輸送が可能となる。室温では３日間の輸送が可能であり、冷蔵では約１週間の輸送が可能である。長期輸送、保存が可能であるため、幅広く活魚輸送に利用することが可能である。〔図表の簡単な説明〕
【００２５】〔表１〕マイクロナノバブル水の魚に対する効果  硝化菌の活性を、酸素のマイクロナノバブル水で調製した人工海水と、イオン交換水で調製した人工海水とで比較した表である。〔表２〕トラフグによる二酸化炭素除去剤の検討  二酸化炭素除去剤を使用した場合としなかった場合とで魚の生存を比較した表である。〔表３〕エゾメバルによる室温保存実験  エゾメバルを用いて、室温で保存実験を行なった結果を表わした表である。〔表３〕エゾメバルによる低温保存実験  エゾメバルを用いて、低温で保存実験を行なった結果を表わした表である。