(57)【要約】【課題】酸化ＬＤＬを特異的に検出する不安定プラーク検出用放射性画像診断剤を提供する。【解決手段】アミノ酸配列Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙを有する一定のペプチドのＮ末端側のアミノ酸にベンゾイル基を介して放射性ヨウ素を結合させたペプチドおよび当該ペプチドを配合させた放射性画像診断剤。本発明に係るペプチドおよび放射性画像診断剤を用いる事により、酸化ＬＤＬを特異的に検出する事が可能となり、ＳＰＥＣＴにて不安定プラークを描出する事が可能となった。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１〜５のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるペプチドにおいて、Ｎ末端のアミノ酸に、ベンゾイル基を用いて放射性ヨウ素を結合させた放射性ヨウ素標識ペプチド。
【請求項２】
ＸＢｚ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ，
ＸＢｚ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ，
ＸＢｚ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ，
ＸＢｚ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ，
Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐまたは、
Ｄ−Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐで表される、放射性ヨウ素標識ペプチド（各式中、Ｘは放射性ヨウ素、Ｂｚはベンゾイルである）。
【請求項３】
Ｄ−Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐで表される、放射性ヨウ素標識ペプチド（各式中、Ｘは放射性ヨウ素、Ｂｚはベンゾイルである）。
【請求項４】
配列番号１〜５のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるペプチドにおいて、Ｎ末端のアミノ酸に、ベンゾイル基を用いて放射性ヨウ素を結合させた放射性ヨウ素標識ペプチドを配合してなる不安定プラーク検出用放射性画像診断剤。
【請求項５】
ＸＢｚ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ，
ＸＢｚ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ，
ＸＢｚ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ，
ＸＢｚ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ，
Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ，または、
Ｄ−Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐの、いずれかの放射性ヨウ素標識ペプチド（各式中、Ｘは放射性ヨウ素、Ｂｚはベンゾイルである）を配合してなる、不安定プラーク検出用放射性画像診断剤。
【請求項６】
Ｄ−Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐで表される放射性ヨウ素標識ペプチド（各式中、Ｘは放射性ヨウ素、Ｂｚはベンゾイルである）を配合してなる、不安定プラーク検出用放射性画像診断剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  この発明は、放射性ハロゲン標識ペプチドおよび当該ペプチドを含有する画像診断剤に関する。より詳しくは、酸化ＬＤＬ（低比重リポタンパク質）に親和性を有する新規放射性ハロゲン標識ペプチド並びに不安定プラーク検出用の放射性画像診断剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  近年、食生活をはじめとする生活習慣の変化や社会の高齢化を背景として、種々の生活習慣病の発症率が増加しており、大きな社会的関心を集めている。生活習慣病は、種々の疾患の原因となることが知られているが、その中でも、動脈硬化、特に、アテローム性粥状動脈硬化症は、心筋梗塞や脳梗塞の原因となり、深刻な後遺症を残すばかりでなく発見が遅れた場合には死に至る事もあるため、その予防並びに早期発見は、非常に重要である。【０００３】  アテローム性粥状動脈硬化症は、動脈の内側に粥状の隆起（いわゆる、不安定プラーク）が発生することを基本的な特徴とした疾患であり、この不安定プラークの破裂により血栓が形成されると、脳梗塞や心筋梗塞の原因となると考えられている。【０００４】  ところで、上述した不安定プラーク内には、酸化変性した低比重リポタンパク質（以下、ＬＤＬという）が蓄積している事が知られており、この酸化ＬＤＬを特異的に検出できれば、不安定プラークを早期に検出でき、脳梗塞や心筋梗塞などの重篤な疾患を未然に予防できるものと考えられている。このような背景から、酸化ＬＤＬに親和性を有する種々の化合物が検討され、開示されている。例えば、特開２００２−５３５９８号公報には、酸化ＬＤＬに親和性を有する種々のペプチドが開示されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−５３５９８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】  特許文献１に開示された種々のペプチドは、酸化ＬＤＬへの特異的な親和性を有しており、アテローム性粥状動脈硬化症の診断または治療への応用が期待されている。しかし、酸化ＬＤＬに親和性を有するこのような化合物を診断剤として用いるためには、更なる検討が必要である。本発明はこのような事情に鑑みてなされたものであり、酸化ＬＤＬに親和性を有する放射性ハロゲン標識ペプチド並びに当該ペプチドを配合してなる不安定プラーク検出用放射性画像診断剤を提供する事を目的とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】  発明者は鋭意検討を重ねた結果、アミノ酸配列Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙを有する一定のペプチドのＮ末端側のアミノ酸にベンゾイル基を介して放射性ヨウ素を結合させたペプチドを用いる事により、酸化ＬＤＬ特異的な親和性を有する放射性ヨウ素標識ペプチドを得ることが可能であることを見出し、本発明を完成させた。【０００８】  本発明は、配列番号１〜５のいずれかに記載のアミノ酸配列からなるペプチドにおいて、Ｎ末端側のアミノ酸に、ベンゾイル基を用いて放射性ヨウ素を結合させた放射性ヨウ素標識ペプチドおよび当該ペプチドを配合してなる不安定プラーク検出用放射性画像診断剤である。
好ましい態様において、本発明に係る放射性ヨウ素標識ペプチドは、ＸＢｚ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ；
ＸＢｚ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ；
ＸＢｚ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ；
ＸＢｚ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ；
Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ；
または、Ｄ−Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（各式中、Ｘは放射性ヨウ素、Ｂｚはベンゾイルである）といった構造を有し、本発明に係る不安定プラーク検出用放射性画像診断剤は、ＸＢｚ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ；
ＸＢｚ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ；
ＸＢｚ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ；
ＸＢｚ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ；
Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ；
または、Ｄ−Ｌｙｓ（−ＸＢｚ）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（各式中、Ｘは放射性ヨウ素、Ｂｚはベンゾイルである）といった構造を有する放射性ヨウ素標識ペプチドを配合する。【０００９】  本発明において、放射性ヨウ素は、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉおよび１３１Ｉから選択される同位体を好ましく用いる事ができる。つまり、ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴにおける核医学画像診断剤として用い得る放射性同位元素であれば良い。また、ベンゾイル基における放射性ヨウ素の結合位置は、特に限定する必要は無く、放射性ヨウ素をベンゾイル基を介してペプチドに結合させる事ができれば良い。
【発明の効果】
【００１０】  本発明により、不安定プラーク検出用放射性画像診断剤に用いる事ができる、酸化ＬＤＬに特異的な親和性を有する放射性ハロゲン標識ペプチド並びに当該ペプチドが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】化合物１（［１２５Ｉ］標識体）のＨＰＣＬチャートを示す図
【図２】マウス各臓器中における放射能の時間変化を表す図
【図３】酸化処理時間の異なるＬＤＬに対する化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の結合量（ＬＤＬ結合量）を示す図
【図４】化合物１（［１２５Ｉ］標識体）のＬＤＬ結合量とＴＢＡＲＳ値との関係を示す図
【図５】化合物１標準品（非放射性ヨウ素標識体）添加試料における化合物１（［１２５Ｉ］標識体）のＬＤＬ結合量（化合物１標準品（非放射性ヨウ素標識体）無添加試料における値を１００とした場合の相対値）を示す図
【図６】ＡｐｏＥノックアウトマウス大動脈におけるＡｚａｎ染色像（ａ）とオートラジオグラフィー画像（ｂ）
【図７】ノーマルマウス大動脈におけるＡｚａｎ染色像（ａ）とオートラジオグラフィー画像（ｂ）
【図８】化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の、各臓器における放射能集積
【図９】化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の、各臓器における放射能集積
【図１０】化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の、大動脈のＤＵＲ
【図１１】化合物１（［１２５Ｉ］標識体）における放射能の大動脈／血液比および大動脈／筋肉比の測定結果
【図１２】化合物１標準品投与によるブロッキングの有無におけるＤＵＲの比較
【図１３】ＷＨＨＬＭＩウサギ（１１月齢）における大動脈のオートラジオグラフィー
【図１４】正常日本白色種（１２週齢）における大動脈のオートラジオグラフィー
【図１５】血漿中インキュベート５分後試料における化合物１（［１２５Ｉ］標識体）のＨＰＬＣチャート
【図１６】血漿中インキュベート３０分後試料における化合物１（［１２５Ｉ］標識体）のＨＰＬＣチャート
【図１７】血漿中インキュベート５分後試料における化合物１Ｄ（［１２５Ｉ］標識体）のＨＰＬＣチャート
【図１８】血漿中インキュベート３０分後試料における化合物１Ｄ（［１２５Ｉ］標識体）のＨＰＬＣチャート
【発明を実施するための形態】
【００１２】（骨格となるペプチドの合成方法および前駆体化合物の合成方法）
本発明に係る放射性ヨウ素標識ペプチドは、前駆体となるペプチドを、市販のペプチド合成機等を用いて公知の方法により合成し、公知の方法による放射性ヨードベンゾイル基の付加および公知の方法による脱保護を行う事によって、得ることができる。
【００１３】  好ましい態様において、当該前駆体ペプチドは、下記の構造を有する。
Ｒ２−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ；
Ｒ２−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ａｓｐ；
Ｒ２−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ；
Ｒ２−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ａｓｐ−Ｇｌｙ；
Ｒ１−Ｌｙｓ（−Ｒ２）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ；
Ｒ１−Ｄ−Ｌｙｓ（−Ｒ２）−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（−Ｒ３）−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ；
ここで、Ｒ１はＮ末端におけるアミノ基の保護基であり、Ｒ２は標識部位であるアミノ基の保護基であり、Ｒ３は標識反応に用いないリジンのεアミノ基の保護基である。
【００１４】  Ｎ末端のアミノ基の保護基Ｒ１としては、同様の目的に用いられる種々の保護基を用いる事ができるが、後述する標識部位であるアミノ基の保護基Ｒ２の脱保護条件にて、脱保護されない保護基を用いる必要がある。例えば、Ｒ２がｔｅｒｔ‐ブトキシカルボニル基（以下、Ｂｏｃ基という）であった場合には、９‐フルオレニルメチルオキシカルボニル基（以下、Ｆｍｏｃ基という）や、４，４−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ基（以下、Ｄｄｅ基という）を好ましく用いる事ができる。標識部位であるアミノ基の保護基Ｒ２は、アミノ基の保護基として用いられる種々の保護基を用いることができるが、Ｎ末端のアミノ基の保護基Ｒ１や、後述するリジンのεアミノ基の保護基Ｒ３が脱保護されない条件で脱保護される保護基を用いる必要がある。リジンのεアミノ基の保護基Ｒ３は、同様の目的に用いられる種々の保護基を用いる事ができるが、前出の標識部位であるアミノ基の保護基Ｒ２が脱保護される条件において脱保護されないような保護基を用いる必要がある。好ましい態様におけるＲ２とＲ３の組み合わせとしては、Ｒ２がＢｏｃ基でＲ３がＤｄｅ基、Ｒ２が４−ｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ基（以下、Ｍｍｔ基という）または４−ｍｅｔｈｙｌｔｒｉｔｙｌ基（以下、Ｍｔｔ基という）でＲ３がＦｍｏｃ基、Ｂｏｃ基またはＤｄｅ基である保護基の組み合わせを例示する事ができる。
【００１５】  既に述べたように、上記前駆体ペプチドは、市販のペプチド合成機等を用いて公知の方法により合成する事ができる。より具体的には、汎用のペプチド自動合成装置を用い、Ｂｏｃ法、あるいはＦｍｏｃ法等のペプチド合成に広く用いられる方法により合成する事ができる。合成された前駆体ペプチドは、固相用樹脂担体に結合した状態からの切り放しを行い、その後、逆相系カラム等を用いた高速液体クロマトグラフ法（以下、ＨＰＬＣ法という）にて精製される。ここで、固相用樹脂担体からの切り離し操作においては、Ｒ１およびＲ３が脱保護されない条件を選択することが好ましい。例えば、保護基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３がそれぞれＦｍｏｃ基、Ｂｏｃ基およびＤｄｅ基であり、固相樹脂担体がＦｍｏｃ−Ａｍｉｎｏｍｅｔｈｙｌ−Ｓｕｐｅｒ  Ａｃｉｄ−Ｌａｂｉｌｅ−ＭＢＨＡ  Ｒｅｓｉｎである場合には、９５％トリフルオロ酢酸（以下、ＴＦＡという）を用い、脱Ｂｏｃ基処理と同時に切断するといった条件を用いる事ができる。ただし、そのような方法に限定する必要は無く、保護基の一部または全てが切断される条件で切り離しを行った後、公知の方法にて保護基の付加を行う事も可能である。
なお、前駆体ペプチドは、ペプチド自動合成機を用いた固相法の他、ペプチド液相合成法により調製してもよく、また、培養細胞等から採取したペプチドに目的とする保護基を付加させるといった方法を用いても良い。
【００１６】（放射性ヨウ素標識ペプチドの合成方法）
本発明に係る放射性ヨウ素標識ペプチドは、上述した前駆体ペプチドに、公知の方法を用いて放射性ヨードベンゾイル基を付加後、残りの保護基を脱保護して精製することによって得ることができる。以下、保護基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３が、それぞれＦｍｏｃ基、Ｂｏｃ基、Ｄｄｅ基である場合を例にとり、最も好ましい態様における放射性ヨウ素標識ペプチドの合成方法について説明する。
【００１７】  好ましい態様において、放射性ヨードベンゾイル基の付加は、以下の方法によって行う事ができる。
まず、目的とする前駆体ペプチドを含む反応液を調製し、必要な場合は酸性条件を与えて標識部位の脱Ｂｏｃ処理を行う。次いで、目的とする放射性ヨウ素で標識されたＮ−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−３−ｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅを添加する。ここで、放射性ヨウ素で標識されたＮ−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−３−ｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅは、公知の方法、例えば文献（Ｇａｎｅｓａｎ  Ｖａｉｄｙａｎａｔｈａｎ＆Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｒ  Ｚａｌｕｔｓｋｙ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，１（２），２００６，ｐ．７０７−７１３）記載の方法にて合成する事ができる。また溶媒としては、前駆体ペプチドおよびＮ−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−３−ｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅを共に溶解する性質を示し、かつ、これらの原料に対して反応性を有さない溶媒を選択する。
次に、この反応液にアルカリ添加等を行ってｐＨを８〜９とし、室温下で反応させる事により、前駆体ペプチドに放射性ヨードベンゾイル基を付加することができる。
【００１８】  放射性ヨードベンゾイル基の付加が完了したら、脱保護を行う。脱保護は、公知の方法を用いる事ができる。例えば、上記反応溶液に１０％ヒドラジン１水和物・Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液を添加し、塩基性条件（ｐＨ９〜１０）を与える事により行う事ができる。
【００１９】  脱保護操作が終了したら、精製工程に付し、本発明に係る放射性ヨウ素標識ペプチドを得ることができる。精製は、公知の方法を用いる事ができ、逆相ＨＰＬＣを好ましく用いる事ができる。
【００２０】（本発明に係る不安定プラーク検出用放射性画像診断剤の調製方法および使用方法）
本発明に係る不安定プラーク検出用放射性画像診断剤は、本発明に係る放射性ヨウ素標識ペプチドを溶解した液として調製することができる。放射性ヨウ素標識ペプチドを溶解する液は、水、生理食塩水やリンゲル液等を用いる事ができる。放射性ヨウ素標識ペプチドの水溶性が低い場合には、必要に応じて可溶化剤を添加するか、当該ペプチドを溶解させる事ができる液に溶解後、生体認容性ある液と混合する。例えば、放射性ヨウ素標識ペプチドとして、後述する化合物１（［１２５Ｉ］標識体）を用いた場合には、５％ＤＭＳＯ生理食塩水を用いる。また、必要に応じて、安定化剤を配合しても良い。
【００２１】  本発明に係る放射性ヨウ素標識ペプチドの投与量は、投与された薬剤の分布を画像化するために十分な濃度であれば特に限定する必要はない。例えば、１２３Ｉ標識ペプチドの場合は、体重６０ｋｇの成人一人当り５０〜６００ＭＢｑ程度、静脈投与又は局所投与して使用することができる。投与された薬剤の分布は、ＳＰＥＣＴ装置を用いて公知の方法により画像化することができる。
【００２２】  以下、実施例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。
【実施例】
【００２３】（実施例１）Ｆｍｏｃ‐Ｌｙｓ‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（標識前駆体１、ここで、Ｄｄｅ：４，４−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ）の合成
標識前駆体１は、ペプチド自動合成装置（株式会社島津製作所製、形式：ＰＳＳＭ−８）を用い、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成した。得られた化合物をメタノール：水＝２：１に溶解後、下記の条件のＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ条件１）を用いて精製を行った。精製後の標識前駆体１は、ＥＳＩ−ＭＳにより生成を確認した。【００２４】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件１）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８‐ＡＲ‐ＩＩ  １０×２５０
流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）
移動相：メタノール（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝６０：４０（０ｍｉｎ）→９５：５（４０ｍｉｎ）【００２５】（実施例２）Ｌｙｓ（ｍ−Ｉｏｄｏｂｅｎｚｏｙｌ）‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（化合物１）標準品（非放射性ヨウ素標識体）の合成
ＦｍｏｃＬｙｓ（Ｍｍｔ）‐Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）‐Ｔｙｒ（ＯｔＢｕ）‐Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）‐Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）を、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成した（ここで、Ｍｍｔ：４−ｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ、ＯｔＢｕ：ｏ−ｔ−ｂｕｔｙｌである）。得られた化合物にジクロロメタン：トリイソプロピルシラン：ＴＦＡ＝９３．５：５：１．５溶液を１ｍＬ加え、１時間攪拌する事により脱Ｍｍｔ基を行った。次いで、３−Ｉｏｄｏｂｅｎｚｏｙｌ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ  １２０μＬ，Ｎ，Ｎ−Ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ  １５０μＬ、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１ｍＬを加え、３時間攪拌することにより３−Ｉｏｄｏｂｅｎｚｏｙｌ  ＣｈｌｏｒｉｄｅとＮ末Ｌｙｓ  ε−アミノ基縮合反応を行い、ピペリジン２５０μＬ，ＤＭＦ１ｍＬを加えて３０分攪拌し脱Ｆｍｏｃ基処理を行った。その後、ＴＦＡ９５０μＬと、水５０μＬを加え、４時間攪拌することにより脱樹枝を行い、下記の条件のＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ条件２）に付すことにより、化合物１標準品（非放射性ヨウ素体）を得た。【００２６】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件２）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ  １０×２５０
流速：  ２．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）
移動相：メタノール（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝２０：８０（０ｍｉｎ）→９５：５（３０ｍｉｎ））【００２７】（実施例３）化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の合成
Ｎ−Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ３−（ｔｒｉ−ｎ−ｂｕｔｙｌｓｔａｎｎｙｌ）ｂｅｎｚｏａｔｅ（ＡＴＥ）２００μｇを、５％酢酸を含むメタノール溶液１００μＬに溶解して２ｍｇ／ｍＬとし、その７２．２μＬをＮ−クロロスクシンイミド（以下、ＮＣＳ）のメタノール溶液（０．５ｍｇ／ｍＬ）１９．８μＬと混合した。得られた液に、Ｎａ［１２５Ｉ］Ｉを１０μＬ（約５００μＣｉ）加えた。室温で３０分反応後、亜硫酸水素ナトリウム溶液（０．７２ｍｇ／ｍＬ）を３．２μＬ加えて反応を停止し、［１２５Ｉ］Ｎ−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−３−ｉｏｄｏｂｅｎｚｏａｔｅ（以下、［１２５Ｉ］ＳＩＢ）を得た。得られた［１２５Ｉ］ＳＩＢにつき、下記の条件のＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ条件３）により精製を行い、窒素ガスにより溶媒を留去後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５０μＬを加えた。【００２８】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件３）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ  １０×２５０
流速：１．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）
移動相：アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝４０：６０（０ｍｉｎ）→９０：１０（１５ｍｉｎ）→９０：１０（３０ｍｉｎ）【００２９】  標識前駆体１  ５００μｇにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド：０．２ｍｏｌ／Ｌホウ酸緩衝液（ｐＨ＝７．８）＝１：１混合溶液４０μＬを加え、次いで［１２５Ｉ］ＳＩＢ溶液を加えた。トリエチルアミンでｐＨ＝８．５に調整した後、室温で１時間反応させた。次いで、１０％ヒドラジン１水和物・Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液３０μＬを加え、室温で１５分間反応させた。下記の条件のＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ条件４）により精製を行い、放射化学的収率２２％、放射化学的純度９９％以上で化合物１（［１２５Ｉ］標識体）を得た。なお、標識体の同定は、ＨＰＬＣ条件４による分析を行い、保持時間を化合物１標準品（非放射性ヨウ素標識体）と比べることで行った。【００３０】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件４）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ  ４．６×１５０
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）
移動相：メタノール（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝２０：８０（０ｍｉｎ）→９５：５（３０ｍｉｎ）【００３１】（実施例４）Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ（標識前駆体２）の合成
標識前駆体２はペプチド自動合成装置（国産化学株式会社製、形式：ＲＯＴＡＲＹ  ＳＨＡＫＥＲ  Ｎ‐５００）を用い、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成した。精製は、下記の条件（ＨＰＬＣ条件５）を用いて行い、化合物の確認はＥＳＩ−ＭＳで行った。【００３２】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件５）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ  １０×２５０
流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）
移動相：アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝５：９５（０ｍｉｎ）→６０：４０（４０ｍｉｎ）【００３３】（実施例５）ｍ‐Ｉｏｄｏｂｅｎｚｏｙｌ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ（化合物２）標準品（非放射性ヨウ素標識体）の合成
化合物２標準品（非放射性ヨウ素標識体）はペプチド自動合成装置（国産化学株式会社製、形式：ＲＯＴＡＲＹ  ＳＨＡＫＥＲ  Ｎ‐５００）を用い、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成した。化合物の確認はＥＳＩ−ＭＳで行った。【００３４】（実施例６）ｍ‐Ｉｏｄｏｂｅｎｚｏｙｌ‐Ｔｒｐ‐Ｇｌｙ‐Ｌｙｓ‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（化合物３）標準品（非放射性ヨウ素標識体）の合成
化合物３標準品（非放射性ヨウ素標識体）はペプチド自動合成装置（国産化学株式会社製、形式：ＲＯＴＡＲＹ  ＳＨＡＫＥＲ  Ｎ‐５００）を用い、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成した。化合物の確認はＥＳＩ−ＭＳで行った。【００３５】（実施例７〜１０）その他のペプチドの合成
下記のペプチドは、株式会社ベックスに委託することによってＦｍｏｃ法による固相合成法（自動合成装置：ＰＩＯＮＥＥＲ／ａｐｐｌｉｅｄ  ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｊａｐａｎ（ＡＢＩ）社）により合成した。【００３６】  標識前駆体４：Ｌｅｕ‐Ｓｅｒ‐Ｔｒｐ‐Ｇｌｙ‐Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ‐Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）‐Ａｓｐ‐Ａｌａ‐Ｇｌｕ‐Ｉｌｅ
化合物４（非放射性ヨウ素標識体）：ｍ‐Ｉｏｄｏｂｅｎｚｏｙｌ‐Ｌｅｕ‐Ｓｅｒ‐Ｔｒｐ‐Ｇｌｙ‐Ｌｙｓ‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ‐Ｌｙｓ‐Ａｓｐ‐Ａｌａ‐Ｇｌｕ‐Ｉｌｅ
標識前駆体５：Ｔｒｐ‐Ｇｌｙ‐Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ‐Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）‐Ａｓｐ
化合物５（非放射性ヨウ素標識体）：ｍ‐Ｉｏｄｏｂｅｎｚｏｙｌ‐Ｔｒｐ‐Ｇｌｙ‐Ｌｙｓ‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ‐Ｌｙｓ‐Ａｓｐ【００３７】（実施例１１）化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の血漿中安定性評価
ｄｄＹマウス心臓採血後、遠心分離を行い、上清を回収することで血漿を採取した。化合物１（［１２５Ｉ］標識体）１０μＬを血漿１００μＬに添加し、３７度で６時間インキュベートを行った。メタノール２００μＬを添加して遠心分離後、上清につき下記の条件のＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ条件６）を用いた分析を行った。その結果、図１に示すように、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）は６時間の時点で６５％（ＨＰＬＣチャートにおける面積％の値）が未変化体で存在していた。この結果から、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）は、血漿中において良好な安定性を有する事が確認された。【００３８】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件６）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ  ４．６×１５０
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）
移動相：メタノール（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝２０：８０（０ｍｉｎ）→９５：５（３０ｍｉｎ）【００３９】（実施例１２）化合物１（［１２５Ｉ］標識体）のノーマルマウス体内分布
６週齢のｄｄＹマウスに化合物１（［１２５Ｉ］標識体）１００μＬ（０．５７μＣｉ）を尾静脈投与し、５分、３０分、１時間、３時間、および６時間後に、それぞれ血液、大動脈および各臓器を摘出し、それぞれの重量および放射能（ガンマカウンタ：１４８０  Ｗｉｚａｒｄ３”、パーキンエルマー社製）を測定した。測定は、各時間点につき３匹（１時間点のみ４匹）の動物を用いて行った。
その結果、図２に示すように、正常マウス投与１時間後の血液、血管の放射能はそれぞれ０．５３、０．９８％ＩＤ／ｇと低く、体内からの速やかなクリアランスと、低い非特異的集積性を認めた。また、胃への顕著な放射能集積が認められなかったことから、体内脱ヨウ素化反応に対する安定性が示された。【００４０】（実施例１３）化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の酸化ＬＤＬ結合性
（酸化ＬＤＬの調製）
ＬＤＬ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．製）は限外濾過フィルター処理によりＰＢＳ（０．１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．４）溶液（１．７８ｍｇ／ｍＬ）に調製後、３７度で１０μｍｏｌ／Ｌ硫酸銅処理し、酸化反応時間を最長２９時間までに様々に変化させ、酸化度の異なる酸化ＬＤＬを作成した。酸化反応の停止は、過剰量のエチレンジアミン４酢酸を添加することにより行った。酸化度の確認はＴＢＡＲＳ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ製）を用いてチオバルビツール酸反応物質（ＴＢＡＲＳ）量を測定することにより行った。
（化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の酸化ＬＤＬ結合性）
化合物１（［１２５Ｉ］標識体）（０．０３μＣｉ）を種々の酸化度のＬＤＬ溶液（８０ｎｍｏｌ／Ｌ）に添加し、４℃で３時間インキュベート後、ＭＩＣＲＯＣＯＮ（登録商標、ミリポア・コーポレイション、形式：ＹＭ‐３０）にアプライし、遠心分離（４１６０ｇ，５０ｍｉｎ）後、ＰＢＳ（０．１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．４）溶液（１．７８ｍｇ／ｍＬ）を１００μＬ加え、再度遠心分離した。次に、ＰＢＳ（０．１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．４）溶液（１．７８ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加え、ＭＩＣＲＯＯＮ（登録商標、ミリポア・コーポレイション）を上下逆向きにして遠心分離（１０００ｇ，１０ｍｉｎ）を行い、ＬＤＬを回収した。最初の遠心時のろ液、ＭＩＣＲＯＣＯＮ（登録商標、ミリポア・コーポレイション）、逆向きに遠心時のろ液それぞれについて、放射能を測定し（測定された放射能を、それぞれ、「先のろ液の放射能」、「ＭＩＣＲＯＣＯＮの放射能」、「後のろ液の放射能」という）、下記の式（１）に従って、ＬＤＬ結合量を測定した。【００４１】
【数１】
2012082166.tif 000002
【００４２】  図３および４に示すように、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）は未酸化ＬＤＬに比べ２４時間酸化処理したＬＤＬに６倍高く結合し、その結合は酸化度の指標であるＴＢＡＲＳ値との高い相関（ｒ＝０．９１）を認めた。
また、化合物１標準品（非放射性ヨウ素標識体）を８．７７、８７．７、２９２．３、８７７、１７５４μｍｏｌ／Ｌの濃度となるように２９時間酸化のＬＤＬ溶液（４０ｎｍｏｌ／Ｌ）に添加した試料をそれぞれ調製し、４℃で２時間インキュベートし、次いで化合物１（［１２５Ｉ］標識体）（０．０３μＣｉ０．０３μＣｉ）を添加した。上記と同様に分離を行い、放射能を測定した。その結果、図５に示すように、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）の２９時間酸化ＬＤＬに対する結合は化合物１標準品（非放射性ヨウ素標識体）の添加濃度に依存して減少した。【００４３】（実施例１４）化合物１（［１２５Ｉ］標識体）のＩｎ  ｖｉｔｒｏオートラジオグラフィー（ＡＲＧ）
ＡｐｏＥノックアウトマウス、ノーマルマウス大動脈のパラフィン切片（５μｍ）をそれぞれ作製し、脱パラフィン処理後、１０％エタノール中で化合物１（［１２５Ｉ］標識体）（０．１２μＣｉ）を滴下し、１時間室温に静置した。５０％エタノール中飽和炭酸リチウム（２ｍｉｎ×２）、５０％エタノール（２ｍｉｎ×２）、精製水（３０ｓｅｃ×１）で洗浄、乾燥後、イメージングプレートに１８．５時間露光させた。バイオイメージングアナライザー（形式：ＢＡＳ  ５０００、富士フイルム株式会社製）により画像を収集した。また、ＡＲＧ切片の隣接切片についてＡｚａｎ染色を行い、オートラジオグラフィー画像と比較した。その結果、図６および図７に示すように、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）はノーマルマウス血管と比較して、ＡｐｏＥノックアウトマウス血管に対し高い放射能集積を認めた。【００４４】（実施例１５）Ｆｍｏｃ‐Ｄ‐Ｌｙｓ‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ（Ｄｄｅ）‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（標識前駆体２、ここで、Ｄｄｅ：４，４−Ｄｉｍｅｔｈｙｌ−２，６−ｄｉｏｘｏｃｙｃｌｏｈｅｘ−１−ｙｌｉｄｅｎｅ）の合成
標識前駆体２は、ペプチド自動合成装置（株式会社島津製作所製、形式：ＰＳＳＭ−８）を用い、Ｆｍｏｃ固相合成法により合成した。得られた化合物をメタノール：水＝２：１に溶解後、下記の条件のＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ条件７）を用いて精製を行った。精製後の標識前駆体２は、ＥＳＩ−ＭＳにより生成を確認した。【００４５】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件７）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ  １０×２５０
流速：２．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）
移動相：メタノール（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝６０：４０（０ｍｉｎ）→８５：１５（４０ｍｉｎ）→９５：５（４１ｍｉｎ）【００４６】（実施例１６）Ｄ−Ｌｙｓ（‐ＩＢ）‐Ｔｒｐ‐Ｔｙｒ‐Ｌｙｓ‐Ａｓｐ‐Ｇｌｙ‐Ａｓｐ（化合物１Ｄ［１２５Ｉ］標識体）の合成
標識前駆体２  ５００μｇにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド：０．２ｍｏｌ／Ｌホウ酸緩衝液（ｐＨ＝７．８）＝１：１混合溶液４０μＬを加え、次いで実施例３と同様の方法にて調製した［１２５Ｉ］ＳＩＢ溶液を加えた。トリエチルアミンでｐＨ＝８．５に調整した後、室温で１時間反応させた。次いで、５％ヒドラジン１水和物・Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液１５μＬを加え、水浴中で３時間反応させた。下記の条件のＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ条件８）により精製を行い、放射化学的収率２０％、放射化学的純度９９％以上で化合物１Ｄ［１２５Ｉ］標識体を得た。【００４７】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件８）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ  ４．６×１５０
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）
移動相：メタノール（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝１０：９０（０ｍｉｎ）→９５：５（４０ｍｉｎ）【００４８】（実施例１７）化合物１（［１２５Ｉ］標識体）のウサギ体内分布
表１に記載した月齢のＷＨＨＬＭＩモデルウサギ及び正常日本白色種ウサギ（図８および図９において、ｃｏｎｔｒｏｌと表記）に、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）を表１記載の放射能量耳静脈投与し、３０分後に抱水クロラールを過剰量投与することにより屠殺した。１例のＷＨＨＬＭＩモデルウサギについては、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）投与に先立ち、化合物１標準品２ｍｇを投与してブロッキングを行い、同様の実験を行った（表１中、ウサギ４）。各ウサギは、屠殺後、下大静脈より採血し、次いで、ＰＬＰ（Ｐｅｒｉｏｄａｔｅ  Ｌｙｓｉｎｅ  Ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）固定液にて還流固定した後、各臓器及び大動脈を摘出した。下大静脈より採取した血液および摘出した各臓器は、重量及び放射能（ガンマカウンタ：１４８０Ｗｉｚａｒｄ３”、パーキンエルマー社製）を測定し、大動脈は弓部、胸部、および腹部大動脈をそれぞれ６、９、９個に分割後、同様に重量および放射能（ガンマカウンタ：１４８０  Ｗｉｚａｒｄ３”、パーキンエルマー社製）を測定した。大動脈については、測定された放射能カウントの値に基づき、下記式（２）に従って、ＤＵＲ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｕｐｔａｋｅ  Ｒａｔｉｏ）を求めた。【００４９】
【数２】
2012082166.tif 000003
【００５０】  表１におけるウサギ２およびウサギ５から摘出した大動脈については、厚さ２０μｍの凍結切片を作成し、イメージングプレートに２週間露光させ、バイオイメージングアナライザー（形式：ＢＡＳ  ５０００、富士フイルム株式会社製）により画像を収集し、オートラジオグラフィーを得た。【００５１】
【表１】
2012082166.tif 000004
【００５２】  各動物における各臓器への放射能集積を、図８および図９に示す。この図に示すように、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）は、そのほとんどが速やかに腎排泄されることが示唆され、また、ＷＨＨＬＭＩウサギは正常日本白色種ウサギ（図中、ｃｏｎｔｒｏｌと表記）と比べ、血中放射能が高く、かつ、各臓器における放射能集積が高いことが確認された。【００５３】  各動物における大動脈のＤＵＲを図１０に、大動脈／血液比および大動脈／筋肉比を図１１に示す。１４月齢のＷＨＨＬＭＩウサギ大動脈におけるＤＵＲは、正常日本白色種ウサギ（図中、ｃｏｎｔｒｏｌと表記）と比べて約５倍大きく、大動脈／血液比および大動脈／筋肉比は、それぞれ約１．８倍および約２倍高かった。１１月齢のＷＨＨＬＭＩにおいても、１４月齢ほどではないが、正常日本白色種ウサギと比べたＤＵＲ並びに大動脈／血液比および大動脈／筋肉比の有意な増加が確認された。この結果より、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）は、ＷＨＨＬＭＩウサギにおいて、正常ウサギよりもより多く大動脈に集積する事が確認された。これは、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）が酸化ＬＤＬに対する集積性を有する事を示唆する結果である。【００５４】  次に、大動脈のＤＵＲにつき、化合物１標準品２ｍｇを投与してブロッキングを行ったＷＨＨＬＭＩウサギとそうでないＷＨＨＬＭＩウサギとの間で比較を行った結果を、図１２に示す。図８および図９にも示したとおり、化合物１標準品投与によるブロッキングを行ったウサギでは、筋肉以外の各臓器における放射能集積が低下していた。また、図１２に示したように、ブロッキングにより大動脈のＤＵＲが有意に低下していた。この結果は、ＷＨＨＬＭＩウサギの大動脈に集積した化合物１（［１２５Ｉ］標識体）が、当該大動脈に結合している事を示す結果である。【００５５】  １１月齢のＷＨＨＬＭＩウサギ（ウサギ２）および１２週齢の正常日本白色種（ウサギ５）における大動脈のオートラジオグラフィーを、図１３および図１４に示す。この図から明らかなように、ＷＨＨＬＭＩウサギでは、正常日本白色種と比較して、明らかに高い放射能集積性を示していた。【００５６】（実施例１８）化合物１（［１２５Ｉ］標識体）および化合物１Ｄ（［１２５Ｉ］標識体）の血漿中安定性評価
正常日本白色種ウサギ（雄、１２週齢）をケタラール／セラクタール麻酔下、耳動脈から採血した。得られた血液を、４℃に冷却しながら、４１６０ｇで１５分間遠心分離し、血漿を採取した。得られた血漿１００μＬに対し、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）および化合物１Ｄ（［１２５Ｉ］標識体）を１０μＬ加えた試料をそれぞれ調製し、３７℃でインキュベートした。５分および３０分経過後、メタノール２００μＬを加え、４℃に冷却しながら、４１６０ｇで１５分間遠心分離した。上清をフィルター（ナカライテスク株式会社製、コスモナイス（登録商標）フィルターＳ、孔径０．４５μｍ）処理後、化合物１標準品を加え、下記の条件のＨＰＬＣ（ＨＰＬＣ条件９）にて分析を行った。なお、放射能カウントについては、フラクションコレクターで３０秒ずつ分取し、ガンマカウンタ（ガンマカウンタ：１４８０  Ｗｉｚａｒｄ３”、パーキンエルマー社製）にて各フラクションの放射能を測定した。【００５７】ＨＰＬＣ条件（ＨＰＬＣ条件９）：
カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ（登録商標、ナカライテスク株式会社）５Ｃ１８−ＡＲ−ＩＩ  ４．６×１５０
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器（検出波長：２２０ｎｍ）（化合物１標準品による未変化体の保持時間確認用）
移動相：メタノール（０．１％ＴＦＡ）：水（０．１％ＴＦＡ）＝１０：９０（０ｍｉｎ）→９５：５（３０ｍｉｎ）【００５８】  結果を、図１５〜図１８に示す。化合物１（［１２５Ｉ］標識体）は、インキュベート５分後において未変化体が約２０％であり（図１５）、３０分後では未変化体が約１．９％であった（図１６）。この結果から、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）は、ウサギ血漿中において、何らかの代謝を受けていることが示された。ただし、図１３にも示したように、ＷＨＨＬＭＩウサギの大動脈において明らかな放射能集積が示されており、化合物１（［１２５Ｉ］標識体）は、不安定プラーク検出用の画像診断剤として利用可能な化合物である事にはかわりはない。【００５９】  一方、化合物１Ｄ（［１２５Ｉ］標識体）では、インキュベート５分後において８５％が未変化体として代謝を受けずに残っており（図１７）、３０分後においても６５％が未変化体として残っていた（図１８）。この結果より、Ｎ末端側のリジンをＤ体とすることにより、酸化ＬＤＬ親和性部位であるアミノ酸配列Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙを残したまま、血漿中における代謝を抑制し得る事が示された。
【産業上の利用可能性】
【００６０】  本発明に係る放射性ヨウ素標識ペプチド並びに不安定プラーク検出用放射性画像診断剤は、放射性医薬品の製造分野において利用する事ができる。
【図１】
2012082166.tif 000005
【図２】
2012082166.tif 000006
【図３】
2012082166.tif 000007
【図４】
2012082166.tif 000008
【図５】
2012082166.tif 000009
【図６】
2012082166.tif 000010
【図７】
2012082166.tif 000011
【図８】
2012082166.tif 000012
【図９】
2012082166.tif 000013
【図１０】
2012082166.tif 000014
【図１１】
2012082166.tif 000015
【図１２】
2012082166.tif 000016
【図１３】
2012082166.tif 000017
【図１４】
2012082166.tif 000018
【図１５】
2012082166.tif 000019
【図１６】
2012082166.tif 000020
【図１７】
2012082166.tif 000021
【図１８】
2012082166.tif 000022
【配列表】
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