(57)【要約】      （修正有）【課題】窒素原子含有量が大きい有機化合物のフラグメントイオンの炭素原子数を精度良く推定する方法。【解決手段】第一の有機化合物を、また、第一の有機化合物の炭素原子数を変化させることにより得られる第二の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第一の、また、第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、第一のフラグメントイオン及び第一のフラグメントイオンよりも質量電荷比が１小さい第二のフラグメントイオンのピークの高さの比を求める工程と、第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、第一のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオン及び第二のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオンのピークの高さの比を求める工程を有する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンデム質量分析計を用いて、第一の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、
タンデム質量分析計を用いて、前記第一の有機化合物の炭素原子数を変化させることにより得られる第二の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、
前記第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、第一のフラグメントイオン及び該第一のフラグメントイオンよりも質量電荷比が１小さい第二のフラグメントイオンのピークの高さの比を求める工程と、
前記第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、前記第一のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオン及び前記第二のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオンのピークの高さの比を求める工程を有することを特徴とする分析方法。
【請求項２】
タンデム質量分析計を用いて、第一の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、
タンデム質量分析計を用いて、前記第一の有機化合物の炭素原子数を変化させることにより得られる第二の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、
前記第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、第一のフラグメントイオン及び該第一のフラグメントイオンよりも質量電荷比が１小さい第二のフラグメントイオンのピークの面積の比を求める工程と、
前記第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、前記第一のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオン及び前記第二のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオンのピークの面積の比を求める工程を有することを特徴とする分析方法。
【請求項３】
前記第一の有機化合物の炭素原子数を変化させて前記第二の有機化合物を合成する工程をさらに有することを特徴とする請求項１又は２に記載の分析方法。
【請求項４】
前記タンデム質量分析計は、液体クロマトグラフと接続されていることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、質量分析計を用いて質量分析する際に、フラグメントイオンを同定する方法としては、種々の方法が知られている。
【０００３】
非特許文献１には、タンデム質量分析計を用いて、３−エチルアスコルビン酸にプロトンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｈ］＋）よりも質量電荷比（ｍ／ｚ）が１大きいプリカーサーイオン（［Ｍ＋１＋Ｈ］＋）から生成するプロダクトイオンを質量分析し、フラグメントイオンとフラグメントイオンよりもｍ／ｚが１小さいフラグメントイオンのピークの高さの比から、フラグメントイオンの炭素原子数を推定する方法が開示されている。
【０００４】
しかしながら、アルギニン等の窒素原子の含有量が大きい有機化合物のフラグメントイオンの炭素原子数を精度良く推定することができないという問題がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】質量分析総合討論会講演要旨集，２００９，５７ｔｈ，５０６−５０７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記の従来技術が有する問題に鑑み、窒素原子の含有量が大きい有機化合物のフラグメントイオンの炭素原子数を精度良く推定することが可能な分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の分析方法は、タンデム質量分析計を用いて、第一の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、タンデム質量分析計を用いて、前記第一の有機化合物の炭素原子数を変化させることにより得られる第二の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、前記第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、第一のフラグメントイオン及び該第一のフラグメントイオンよりも質量電荷比が１小さい第二のフラグメントイオンのピークの高さの比を求める工程と、前記第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、前記第一のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオン及び前記第二のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオンのピークの高さの比を求める工程を有する。
【０００８】
本発明の分析方法は、タンデム質量分析計を用いて、第一の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、タンデム質量分析計を用いて、前記第一の有機化合物の炭素原子数を変化させることにより得られる第二の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比が１大きい第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程と、前記第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、第一のフラグメントイオン及び該第一のフラグメントイオンよりも質量電荷比が１小さい第二のフラグメントイオンのピークの面積の比を求める工程と、前記第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析することにより得られる、前記第一のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオン及び前記第二のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオンのピークの面積の比を求める工程を有する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、窒素原子の含有量が大きい有機化合物のフラグメントイオンの炭素原子数を精度良く推定することが可能な分析方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ピンドロールの質量分析結果を示す図である。
【図２】アルギニン及びアルギニンメチルエステルの質量分析結果（その１）を示す図である。
【図３】アルギニン及びアルギニンメチルエステルの質量分析結果（その２）を示す図である。
【図４】アルギニン及びアルギニンメチルエステルの質量分析結果（その３）を示す図である。
【図５】図４（ａ）及び（ｂ）における質量電荷比が６０及び６１のフラグメントイオンのピークを模式的に示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
次に、本発明を実施するための形態を図面と共に説明する。
【００１２】
本発明の分析方法は、タンデム質量分析計を用いて、第一の有機化合物をイオン化させたイオンよりも質量電荷比（ｍ／ｚ）が１大きい第一のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程を有する。これにより、第一のフラグメントイオン及び第一のフラグメントイオンよりもｍ／ｚが１小さい第二のフラグメントイオンのピークの高さの比が求められる。
【００１３】
なお、第一のフラグメントイオン及び第二のフラグメントイオンのピークの高さは、タンデム質量分析計の解析ソフトを用いて測定してもよいし、定規を用いて測定してもよい。
【００１４】
このとき、ピークの高さとして、複数回質量分析することにより得られるピークの高さの平均値を用いてもよい。
【００１５】
タンデム質量分析計としては、特に限定されないが、四重極イオントラップ質量分析計三連四重極型質量分析計、四重極−飛行時間型ハイブリッド質量分析計等が挙げられる。
【００１６】
第一の有機化合物をイオン化させる方法としては、特に限定されないが、電子イオン化（ＥＩ）法、化学イオン化（ＣＩ）法、電界脱離（ＦＤ）法、高速原子衝突（ＦＡＢ）法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）法、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）法等が挙げられる。
【００１７】
第一の有機化合物をイオン化させたイオンとしては、特に限定されないが、分子イオン（Ｍ＋）、プロトンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｈ］＋）、ナトリウムイオンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｎａ］＋）、アンモニウムイオンが付加したイオン（［Ｍ＋ＮＨ４］＋）、ハイドライドが脱離したイオン（［Ｍ−Ｈ］＋）、電子が付加したイオン（Ｍ−）、ハロゲンイオンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｘ］−）、プロトンが脱離したイオン（［Ｍ−Ｈ］−）等の１価のイオン；プロトンが付加したイオン（［Ｍ＋ｎＨ］ｎ＋）、プロトンが脱離したイオン（［Ｍ−ｎＨ］ｎ−）等の２価以上のイオン等の分子量関連イオン；分子量関連イオンのフラグメントイオン等が挙げられる。
【００１８】
第一の有機化合物をイオン化させたイオンにおける分子量関連イオンのフラグメントイオンとしては、例えば、アルギニンにプロトンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｈ］＋）から水が脱離したイオン等が挙げられる。
【００１９】
第一の有機化合物としては、炭素原子数を変化させることが可能であれば、特に限定されない。
【００２０】
ここで、本発明の分析方法と対比するために、非特許文献１に記載された方法を用いて、化学式
【００２１】
【化１】
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で表される分子量が２４８．３２のピンドロール（Ｃ１４Ｈ２０Ｎ２Ｏ２）を分析する場合について説明する。
【００２２】
図１に、高速液体クロマトグラフＮＡＮＯＳＰＡＣＥ  ＳＩ−２（資生堂社製）を接続したリニアイオントラップ−フーリエ変換型ハイブリッド質量分析計ＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ（サーモサイエンティフィック社製）を用いて、ピンドロールを質量分析した結果を示す。なお、（ａ）は、ＭＳスペクトルであり、（ｂ）及び（ｃ）は、それぞれピンドロールをイオン化させたイオン及びピンドロールをイオン化させたイオンよりもｍ／ｚが１大きい第一のイオンをプリカーサーイオンとしたときのＭＳ／ＭＳプロダクトイオンスペクトルである。
【００２３】
図１（ａ）から、ピンドロールをイオン化させたイオンは、ピンドロールにプロトンが付加したｍ／ｚが２４９のイオン（［Ｍ＋Ｈ］＋）であり、第一のイオンは、ピンドロールにプロトンが付加したｍ／ｚが２５０のイオン（［Ｍ＋１＋Ｈ］＋）であることがわかる。
【００２４】
図１（ｂ）から、［Ｍ＋Ｈ］＋のフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが１１６、１４６及び１７２のフラグメントイオンが存在することがわかる。
【００２５】
図１（ｃ）から、［Ｍ＋１＋Ｈ］＋のフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが１１７、１４７及び１７３のフラグメントイオン、これらのフラグメントイオンよりもｍ／ｚが１小さいフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが１１６、１４６及び１７２のフラグメントイオンが存在することがわかる。これは、［Ｍ＋１＋Ｈ］＋から中性種が脱離してフラグメントイオンが生成するが、［Ｍ＋１＋Ｈ］＋に含まれる質量数が１大きい同位体が脱離した中性種に含まれる場合とフラグメントイオンに含まれる場合があるためである。
【００２６】
ここで、１２Ｃの同位体存在度に対する１３Ｃの同位体存在度の比が１．１０８／９８．８９２、１Ｈの同位体存在度に対する２Ｈの同位体存在度の比が０．０１５／９９．９８５、１４Ｎの同位体存在度に対する１５Ｎの同位体存在度の比が０．３６５／９９．６３５、１６Ｏの同位体存在度に対する１７Ｏの同位体存在度の比が０．０３７／９９．７５９である。
【００２７】
なお、１２Ｃの同位体存在度に対する１３Ｃの同位体存在度の比、１Ｈの同位体存在度に対する２Ｈの同位体存在度の比、１４Ｎの同位体存在度に対する１５Ｎの同位体存在度の比及び１６Ｏの同位体存在度に対する１７Ｏの同位体存在度の比としては、種々のデータが存在する。
【００２８】
２Ｈ、１５Ｎ及び１７Ｏの同位体存在度が１３Ｃの同位体存在度よりも十分に小さいことから、非特許文献１に記載された方法では、質量数が１大きい同位体として、１３Ｃのみが存在すると仮定して炭素原子数が推定される。具体的には、ｍ／ｚが１７３及び１７２のフラグメントイオンのピークの高さの比が約１１：３であることから、ｍ／ｚが１７２及び１７３のフラグメントイオンの炭素原子数が１１であると推定される。
【００２９】
なお、ｍ／ｚが１７２及び１７３のフラグメントイオンは、［Ｍ＋１＋Ｈ］＋から２−アミノプロパン（Ｃ３Ｈ９Ｎ）及び水（Ｈ２Ｏ）が脱離して生成する化学式
【００３０】
【化２】
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で表されるイオン（Ｃ１１Ｈ１０ＮＯ＋）である。
【００３１】
このとき、ｍ／ｚが１７３のフラグメントイオン（Ｃ１１Ｈ１０ＮＯ）に１３Ｃが含まれる場合と、２−アミノプロパン（Ｃ３Ｈ９Ｎ）に１３Ｃが含まれる場合の比は、それぞれの炭素原子数に比例するため、１１：３となる。
【００３２】
同様にして、ｍ／ｚが１４７及び１４６のフラグメントイオンのピークの高さの比が約９：５であることから、ｍ／ｚが１４６及び１４７のフラグメントイオンの炭素原子数が９であると推定される。また、ｍ／ｚが１１７及び１１６のフラグメントイオンのピークの高さの比が約６：８であることから、ｍ／ｚが１１６及び１１７のフラグメントイオンの炭素原子数が６であると推定される。
【００３３】
しかしながら、窒素原子の含有量が大きい化合物は、フラグメントイオンのピークにおける１５Ｎの寄与が大きくなるため、非特許文献１に記載された方法を用いると、炭素原子数を精度良く推定することができない。
【００３４】
そこで、本発明の分析方法は、タンデム質量分析計を用いて、第一の有機化合物の炭素原子数を変化させることにより得られる第二の有機化合物をイオン化させたイオンよりもｍ／ｚが１大きい第二のプリカーサーイオンから生成するプロダクトイオンを質量分析する工程をさらに有する。これにより、第一のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオン及び第一のフラグメントイオンよりもｍ／ｚが１小さい第二のフラグメントイオンに対応するフラグメントイオンのピークの高さの比が得られる。その結果、窒素原子の含有量が大きい有機化合物のフラグメントイオンの炭素原子数を精度良く推定することができる。
【００３５】
第二の有機化合物をイオン化させる方法としては、特に限定されないが、電子イオン化（ＥＩ）法、化学イオン化（ＣＩ）法、電界脱離（ＦＤ）法、高速原子衝突（ＦＡＢ）法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）法、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）法、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）法等が挙げられる。
【００３６】
第二の有機化合物をイオン化させたイオンとしては、特に限定されないが、分子イオン（Ｍ＋）、プロトンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｈ］＋）、ナトリウムイオンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｎａ］＋）、アンモニウムイオンが付加したイオン（［Ｍ＋ＮＨ４］＋）、ハイドライドが脱離したイオン（［Ｍ−Ｈ］＋）、電子が付加したイオン（Ｍ−）、ハロゲンイオンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｘ］−）、プロトンが脱離したイオン（［Ｍ−Ｈ］−）等の１価のイオン；プロトンが付加したイオン（［Ｍ＋ｎＨ］ｎ＋）、プロトンが脱離したイオン（［Ｍ−ｎＨ］ｎ−）等の２価以上のイオン等の分子量関連イオン；分子量関連イオンのフラグメントイオン等が挙げられる。
【００３７】
第二の有機化合物をイオン化させたイオンにおける分子量関連イオンのフラグメントイオンとしては、例えば、アルギニンメチルエステルにプロトンが付加したイオン（［Ｍ＋Ｈ］＋）から水が脱離したイオン等が挙げられる。
【００３８】
第一の有機化合物の炭素原子数を変化させる方法としては、特に限定されないが、置換反応、付加反応、脱離反応、加水分解反応、縮合反応、酵素反応等の公知の反応が挙げられる。
【００３９】
なお、第一の有機化合物の炭素数を変化させて第二の有機化合物を合成してもよいし、予め合成されている第二の有機化合物の市販品等を用いてもよい。
【００４０】
一例として、化学式
【００４１】
【化３】
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で表される分子量が１７４．２０のアルギニン（Ｃ６Ｈ１４Ｎ４Ｏ２）を質量分析する場合について説明する。このとき、アルギニンの炭素原子数を１増加させることにより得られる化合物として、アルギニンとメタノールを脱水縮合させることにより得られるアルギニンメチルエステルを用いる。
【００４２】
図２に、高速液体クロマトグラフＮＡＮＯＳＰＡＣＥ  ＳＩ−２（資生堂社製）を接続したリニアイオントラップ−フーリエ変換型ハイブリッド質量分析計ＬＴＱ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ（サーモサイエンティフィック社製）を用いて、アルギニン及びアルギニンメチルエステルを質量分析した結果（その１）を示す。なお、（ａ）及び（ｂ）は、それぞれアルギニン及びアルギニンメチルエステルのＭＳスペクトルである。
【００４３】
図２（ａ）から、アルギニンをイオン化させたイオンは、アルギニンにプロトンが付加したｍ／ｚが１７５のイオン（［Ｍ１＋Ｈ］＋）であることがわかる。また、アルギニンをイオン化させたイオンよりもｍ／ｚが１大きい第一のイオンは、アルギニンにプロトンが付加したｍ／ｚが１７６のイオン（［Ｍ１＋１＋Ｈ］＋）であることがわかる。
【００４４】
図２（ｂ）から、アルギニンメチルエステルをイオン化させたイオンは、アルギニンメチルエステルにプロトンが付加したｍ／ｚが１８９のイオン（［Ｍ２＋Ｈ］＋）であることがわかる。また、アルギニンメチルエステルをイオン化させたイオンよりもｍ／ｚが１大きい第二のイオンは、ｍ／ｚが１９０のイオン（［Ｍ２＋１＋Ｈ］＋）であることがわかる。
【００４５】
図３に、アルギニン及びアルギニンメチルエステルを質量分析した結果（その２）を示す。なお、（ａ）及び（ｂ）は、それぞれ［Ｍ１＋Ｈ］＋及び［Ｍ２＋Ｈ］＋をプリカーサーイオンとしたときのＭＳ／ＭＳプロダクトイオンスペクトルである。
【００４６】
図３（ａ）から、［Ｍ１＋Ｈ］＋のフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが６０、７０、１１２、１１６及び１４０のフラグメントイオンが存在することがわかる。
【００４７】
図３（ｂ）から、［Ｍ２＋Ｈ］＋のフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが６０、７０、１１２、１３０及び１４０のフラグメントイオンが存在することがわかる。
【００４８】
このとき、アルギニンの炭素原子数を変化させても、ｍ／ｚが６０、７０、１１２及び１４０のフラグメントイオンのｍ／ｚが変化しないことがわかる。一方、アルギニンの炭素原子数を変化させたことにより、図３（ａ）におけるｍ／ｚが１１６のフラグメントイオンが、図３（ｂ）におけるｍ／ｚが１３０のフラグメントイオンに変化したことがわかる。
【００４９】
図４に、アルギニン及びアルギニンメチルエステルを質量分析した結果（その３）を示す。なお、（ａ）及び（ｂ）は、それぞれ［Ｍ１＋１＋Ｈ］＋及び［Ｍ２＋１＋Ｈ］＋をプリカーサーイオンとしたときのＭＳ／ＭＳプロダクトイオンスペクトルである。
【００５０】
図４（ａ）から、［Ｍ１＋１＋Ｈ］＋のフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが６１、７１、１１３、１１７、１３１及び１４１のフラグメントイオン、［Ｍ１＋１＋Ｈ］＋のフラグメントイオンよりもｍ／ｚが１小さいフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが６０、７０、１１２、１１６、１３０及び１４０のフラグメントイオンが存在することがわかる。
【００５１】
図４（ｂ）から、［Ｍ２＋１＋Ｈ］＋のフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが６１、７１、１１３、１３１及び１４１のフラグメントイオン、［Ｍ２＋１＋Ｈ］＋のフラグメントイオンよりもｍ／ｚが１小さいフラグメントイオンとして、ｍ／ｚが６０、７０、１１２、１３０及び１４０のフラグメントイオンが存在することがわかる。
【００５２】
図５に、図４（ａ）及び（ｂ）におけるｍ／ｚが６０及び６１のフラグメントイオンのピークを模式的に示す。なお、（ａ）は、図４（ａ）におけるｍ／ｚが６０及び６１のフラグメントイオンのピークであり、（ｂ）は、図４（ｂ）におけるｍ／ｚが６０及び６１のフラグメントイオンのピークである。このとき、（ａ）及び（ｂ）は、ｍ／ｚが６１のフラグメントイオンのピークの高さが同一になるように調整されている。
【００５３】
図５から、アルギニンメチルエステルとアルギニンの間のｍ／ｚが６０のフラグメントイオンのピークの高さの差Δｈが炭素原子数１に相当し、［Ｍ２＋１＋Ｈ］＋及び［Ｍ１＋１＋Ｈ］＋から脱離した中性種の炭素原子数が、それぞれ６及び５であると推定される。また、アルギニンメチルエステル及びアルギニンの炭素原子数が、それぞれ７及び６であることから、ｍ／ｚが６０及び６１のフラグメントイオンの炭素原子数が１であると推定される。
【００５４】
なお、ｍ／ｚが６０及び６１のフラグメントイオンは、［Ｍ１＋１＋Ｈ］＋（又は［Ｍ２＋１＋Ｈ］＋）から中性種として、２−アミノペンタン酸（Ｃ５Ｈ１１ＮＯ２）（又は２−アミノペンタン酸メチル（Ｃ６Ｈ１３ＮＯ２））が脱離して生成する化学式
【００５５】
【化４】
2012247258.tif 000006
で表されるイオン（ＣＨ６Ｎ３＋）である。
【００５６】
一方、ｍ／ｚが６１のフラグメントイオンのピークの高さと、ｍ／ｚが６１のフラグメントイオンの炭素数とΔｈの積、即ち、Δｈとの差Δｈ’は、１３Ｃ以外の質量数が１大きい同位体の寄与であると推定される。
【００５７】
ここで、２Ｈ及び１７Ｏの同位体存在度が１３Ｃ及び１５Ｎの同位体存在度よりも十分に小さいことから、質量数が１大きい同位体として、１３Ｃ及び１５Ｎのみが存在すると仮定すると、１２Ｃの同位体存在度に対する１３Ｃの同位体存在度の比が１．１０８／９８．８９２、１４Ｎの同位体存在度に対する１５Ｎの同位体存在度の比が０．３６５／９９．６３５であることから、ｍ／ｚが６０及び６１のフラグメントイオンの窒素原子数は、式
（１．１０８／９８．８９２）／（０．３６５／９９．６３５）×（Δｈ’／Δｈ）
から推定することができる。
【００５８】
このとき、アルギニンは、Δｈ’がΔｈと略同一である、即ち、ｍ／ｚが６１のフラグメントイオンのピークにおける１５Ｎの寄与が大きいため、非特許文献１に記載された方法を用いて、ｍ／ｚが６０及び６１のフラグメントイオンのピークの高さの比から、アルギニンの炭素原子数を推定しても、精度良く推定することができない。
【００５９】
なお、上記と同様にして、図４（ａ）におけるｍ／ｚが７０及び７１のフラグメントイオン、ｍ／ｚが１１２及び１１３のフラグメントイオン、ｍ／ｚが１１６及び１１７のフラグメントイオン、ｍ／ｚが１４０及び１４１のフラグメントイオンの炭素原子数を推定することができる。
【００６０】
一方、図４（ｂ）におけるｍ／ｚが７０及び７１のフラグメントイオン、ｍ／ｚが１１２及び１１３のフラグメントイオン、ｍ／ｚが１３０及び１３１のフラグメントイオン、ｍ／ｚが１４０及び１４１のフラグメントイオンの炭素原子数を推定することができる。
【００６１】
このことから、第一の有機化合物の炭素原子数を増加させる代わりに、減少させてもよいことがわかる。
【００６２】
なお、第一の有機化合物の炭素原子数を変化させることにより得られる第二の有機化合物と第一の有機化合物の炭素原子数の差は、１以外であってもよく、通常、１〜１０である。
【００６３】
また、第二の有機化合物として、二種以上の有機化合物を用いてもよい。これにより、フラグメントイオンのピークの重なりを検出することができる。
【００６４】
さらに、フラグメントイオンの炭素原子数を推定する際に、ピークの高さの比の代わりに、ピークの面積の比を用いてもよい。
【００６５】
なお、第一の有機化合物の炭素原子数が未知である場合、質量数が１大きい同位体として、１３Ｃのみが存在すると仮定すると、１２Ｃの同位体存在度に対する１３Ｃの同位体存在度の比が１．１０８／９８．８９２であることから、［Ｍ１＋Ｈ］＋及び［Ｍ１＋１＋Ｈ］＋のピークの高さを、それぞれｈ１及びｈ２とすると、第一の有機化合物の炭素原子数は、式
（ｈ２／ｈ１）／（１．１０８／９８．８９２）
から推定することができる。
【００６６】
以上、本発明の分析方法をＬＣ／ＭＳ／ＭＳに適用する場合について説明したが、本発明の分析方法は、ＧＣ／ＭＳ／ＭＳ、直接分析ＭＳ／ＭＳ、直接試料導入ＭＳ／ＭＳ、ＭＳ／ＭＳ／ＭＳ等に適用することができる。
【図１】
2012247258.tif 000007
【図２】
2012247258.tif 000008
【図３】
2012247258.tif 000009
【図４】
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【図５】
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