(57)【要約】      （修正有）【課題】人体に安全な植物抽出物を有効成分とする、歯周病の予防および治療に有効な抗歯周病剤の提供。【解決手段】古来より食材として用いられ安全性の高い月桂樹（Ｌａｕｒｕｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｌ．）葉を７０〜９０％エタノールで抽出し、濃縮または抽出液そのままも使用できることを特徴とする抗歯周病剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
月桂樹葉抽出物が７０〜９０％エタノールで抽出されたものであることを特徴とする抗歯周病剤。
【請求項２】
請求項１に記載の抗歯周病剤を含有することを特徴とする抗歯周病用飲食品。
【請求項３】
請求項１に記載の抗歯周病剤を含有することを特徴とする口腔用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】    本発明は、歯周病病原菌の生育阻害作用を有し、且つ安全性高い抗歯周病剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】    歯周病は細菌性由来の炎症性疾患であり、歯周病原性プラーク細菌の増加、細菌の組織内侵入及び感染に対する宿主応答がその要因となっている。歯周病はほとんどの成人に罹病する可能性があるとされており、高齢化が進む現在における罹病率は益々増加する傾向にある。歯周病の症状としては、歯肉からの出血や、不快な口臭の発生、歯の喪失等が挙げられるが、近年の研究では、歯周病が単に口腔内の局所的疾病に止まらず、全身の各臓器に影響を及ぼすことが報告され、歯周病と多くの成人病との関連性についても注目されている。歯周病を有効に予防しまた治療するためには、口腔内の歯周病菌の生育を抑えることが重要である。【０００３】    歯周病の原因とされている歯周病原菌としては、現在ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、プレボテラ・インターメディア（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）およびアクチノマイセス・ビスコーサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｖｉｓｃｏｓｕｓ）などが挙げられる。また、ポリフィロモナス・ジンジバリスは、歯周病の中でも最も多いとされる成人性歯周炎の病原菌として確立されている細菌であり、歯周病患者の歯周ポケット低部から高い頻度で分離されている。【０００４】    歯周病菌に対する殺菌効果、増殖抑制効果があり、さらには日常的に頻度高く使用するものであるから人体に対して極めて安全なものが強く求められている。【０００５】    従来、歯周病病原菌の生育を阻害することによって歯周炎の症状を改善する薬剤としてテトラサイクリン、ミノサイクリン等の抗生物質が用いられている。しかしながら、かかる抗生物質は作用が強力で効果が優れる反面、耐性菌の出現や副作用等の問題があり、その使用は制限されているのが実情である。【０００６】    月桂樹はクスノキ科の常緑高木である。葉を乾燥させたものをローリエ（フランス語：ｌａｕｒｉｅｒ）、ローレル（英語：ｌａｕｒｅｌ）、ベイリーフ（英語：ｂａｙ  ｌｅａｆ）などと呼び、香辛料として広く流通している。また、欧州では、毎朝２枚の月桂樹の葉を食べることで肝臓を強くすることができるとされている。
月桂樹葉はいままで、アミラーゼ阻害剤（特許文献１）、白癬治療剤（特許文献２）、花粉症及び鼻炎の諸症状の緩和薬（特許文献３）、アブラムシ類駆除剤（特許文献４）、皮膚外用抗菌剤（特許文献５）などとして提案されている。また、特開昭６３−１３９１１７（特許文献６）には口臭に対する消臭作用が記載されているが、抗歯周病菌作用については言及されていない。【０００７】    非特許文献１においては、月桂樹葉の酢酸エチル抽出物が歯周病菌に抑制作用があると報告されたが、含水エタノールで抽出したものではない。そして、抽出溶媒の酢酸エチルは毒物及び劇物取締法により劇物に指定され、使用する際、作業環境および作業人員への危険性、歯磨き粉、ガムなどへ利用のとき残存溶媒による安全性の問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平５−１４８１５３「アミラーゼ阻害物質」
【特許文献２】特開平９−４０５７１「白癬治療剤」
【特許文献３】特開２００３−２５２７８１「月桂樹を使った花粉症及び鼻炎の諸症状の緩和薬」
【特許文献４】特開平８−１３３９２３「アブラムシ類駆除剤」
【特許文献５】特開２０００−４４４１９「抗菌性植物抽出物、及びこれを含有する抗菌性皮膚外用剤」
【特許文献６】特開昭６３−１３９１１７「口中清浄剤」
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】福山  則明、猪野  千恵子、八十川  要平、小林  憲忠、浜本  洋、関水  和久：ゲッケイジュ（Ｌａｕｒｕｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｌ．）由来の抗菌セスキテルペノイド（薬学会第１３０回年会発表）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】    本発明は、歯周病病原細菌に対して成長阻害活性を有し、かつ安全性の高い抗歯周病剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】    本発明者らは、以上のような課題を解決し、本発明目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、月桂樹（Ｌａｕｒｕｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｌ．）葉を７０〜９０％エタノールで抽出し、歯周病病原細菌に対して成長阻害活性を有し、かつ安全性の高い抗歯周病剤を見出し、本発明を完成するに至った。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】    本発明に用いられる月桂樹の葉は生葉、乾燥葉もしくは葉の加工したものを利用できる。また、葉を含む月桂樹の地上部をそのまま用いても良い。【００１３】    抽出溶媒の量は月桂樹葉の乾燥重量に対して、２−１００重量部が好ましい。抽出温度は４−９０℃が好ましい。抽出時間は３０分−１週間が好ましい。抽出方法は攪拌抽出、浸漬抽出、向流抽出、超音波抽出、超臨界抽出などの任意の方法で行うことができる。【００１４】    抽出物は、得られた抽出液を濾過し得られた濾液、もしくは濾液を濃縮した濃縮液を使用することができる。濃縮方法は、蒸発式濃縮、膜濃縮などの任意の方法で行うことができる。また濾液、濃縮液を乾燥させた乾燥物を使用しても良い。必要な場合にはデキストリンなどの賦形剤を入れてもよい。乾燥方法は、減圧乾燥、凍結乾燥、スプレー乾燥などの任意の方法で行うことができる。
【実施例】
【００１５】      これより本発明を以下の実施例で詳しく説明するが、本発明はこれに限定されない。
【実施例１】
【００１６】    月桂樹葉乾燥物５ｋｇに水、５０％エタノール、８０％エタノール、または９９ｖ％エタノール２０Ｌを加え、９５℃または還流で２時間攪拌抽出したのち、固液分離を行って上清を得た。得られた上清に濾過助剤を加え濾過し、濾液を減圧濃縮し、濃縮液を減圧乾燥することによって、それぞれ８４８ｇ、９７５ｇ、１０９０ｇ、１１２６ｇの月桂樹葉抽出物を得た。【００１７】    前記製造例１で作成した月桂樹葉抽出物４種については、３種歯周病菌ルフィロモナス・ジンジバリス、プレボテラ・インターメディアおよびアクチノマイセス  ビスコーサスを用いて、抗菌活性試験を行った。【００１８】    ペーパーディスク法による抗菌活性評価
各試料を５０ｍｇとり、水または５０％ＤＭＳＯ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）１ｍＬに溶解した。そのうち４０μＬを８×８ｍｍのペーパーディスクに浸潤させ、これを供試試料とした。即ち８×８ｍｍのディスクには試料２．０ｍｇを含ませた。
９０×９０ｍｍのシャーレに寒天培地を入れ、各試料ディスクをのせ、供試菌を全体に植菌し、歯周病菌アクチノミセス・ビスコーサス（明海大学微生物学教室供与株）は菌濃度１×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、３６時間培養、プレボテラ・インテルメディア（ＡＴＣＣ３３２７７）は菌濃度１×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、３日間、ポルフィロモナス・ジンジバリス（ＡＴＣＣ３３２７７）は菌濃度４．６×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、４日間、３７℃で培養後、生育阻止円を測定した。培地としては、アクチノミセス・ビスコーサスにはＧＡＭ培地（日水製薬株式会社）、プレボテラ・インテルメディアおよびポルフィロモナス・ジンジバリスにはミュラーヒントンＳヒツジ血液培地（栄研化学株式会社）を用いた。三者ともアネロパック・アネロジャー（三菱ガス化学株式会社）にて嫌気培養で行った。十分な生育期間後、各試料浸潤ディスクの周辺に観察される菌の生育阻止円の直径を定規で測定した。結果を表１に示す。【００１９】    試験結果
【表１】
2012067065.tif 000002
表１の結果から月桂樹葉の８０％エタノール抽出物のみが３種歯周病菌の生育に抑制作用を示した。【００２０】    ポルフィロモナス・ジンジバリスに対する最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定
ミニ試験管チューブを１０本用い、最初のチューブに２ｍｌ変法ＧＡＭブイヨン液体培地を入れ、他のチューブには１ｍｌずつ同液体培地をいれた。最初のチューブの液体培地から１００μｌ培地を除去し、そこにサンプルを１００μｌ加え２ｍｌとし、よく混和した後１ｍｌ採取し、次のチューブに採取したサンプルの入った１ｍｌ培地を加えよく混和し、再度１ｍｌ採取し、次のチューブにその１ｍｌの採取した培地を加え、採取を繰り返し、倍々にサンプルの濃度を希釈した。希釈された１０本のミニ試験管それぞれに４．６ｘ１０７の濃度の菌液を１０μｌ移植し、アネロジャー内でアネロパックケンキを使用し、４日間嫌気培養を行った。菌の生育の有無を肉眼で判定した。【００２１】    試験結果
【表２】
2012067065.tif 000003
表２の結果から月桂樹葉の８０％エタノール抽出物はポルフィロモナス・ジンジバリスの生育に対して、水抽出物の１５倍、５０％ＥｔＯＨ抽出物と９９％ＥｔＯＨ抽出物の１０倍強さの抑制活性が見られた。
実施例２【００２２】    下記表３の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有する歯磨粉を製造した。
【表３】
2012067065.tif 000004
【実施例３】
【００２３】    下記表４の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有する含そう剤を製造した。
【表４】
2012067065.tif 000005
2012067065.tif 000006
【実施例４】
【００２４】    下記表５の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有する洗口液を製造した。
【表５】
2012067065.tif 000007
【実施例５】
【００２５】    下記表６の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有するチューインガムを製造した。
【表６】
2012067065.tif 000008
【実施例６】
【００２６】    下記表７の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有するキャンディを製造した。
【表７】
2012067065.tif 000009
【産業上の利用可能性】
【００２７】    本発明は、歯周病の発症と進行に深く関与しているポルフィロモナス・ジンジバリス、プレボテラ・インターメディアおよびアクチノマイセス・ビスコーサスに代表される口腔内細菌に対して抗菌作用を示し、歯周病の予防及び治療に極めて有用な抗歯周病剤である。また、古来より食材として用いられ安全性の高い月桂樹葉を原料とし、安全性の高い抽出溶媒で抽出したものを有効成分とするものであるから、一部が体内に吸収されても、身体には有害作用がなく、歯磨粉、含そう剤、洗口液、キャンディ、チューインガム等の様々な形態の抗歯周病剤として広く用いることができる。
【手続補正書】
【提出日】平成23年9月6日(2011.9.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】    本発明は、歯周病病原菌の生育阻害作用を有し、且つ安全性高い抗歯周病剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】    歯周病は細菌性由来の炎症性疾患であり、歯周病原性プラーク細菌の増加、細菌の組織内侵入及び感染に対する宿主応答がその要因となっている。歯周病はほとんどの成人に罹病する可能性があるとされており、高齢化が進む現在における罹病率は益々増加する傾向にある。歯周病の症状としては、歯肉からの出血や、不快な口臭の発生、歯の喪失等が挙げられるが、近年の研究では、歯周病が単に口腔内の局所的疾病に止まらず、全身の各臓器に影響を及ぼすことが報告され、歯周病と多くの成人病との関連性についても注目されている。歯周病を有効に予防しまた治療するためには、口腔内の歯周病菌の生育を抑えることが重要である。【０００３】    歯周病の原因とされている歯周病原菌としては、現在ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、プレボテラ・インターメディア（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ）およびアクチノマイセス・ビスコーサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｖｉｓｃｏｓｕｓ）などが挙げられる。また、ポリフィロモナス・ジンジバリスは、歯周病の中でも最も多いとされる成人性歯周炎の病原菌として確立されている細菌であり、歯周病患者の歯周ポケット低部から高い頻度で分離されている。【０００４】    歯周病菌に対する殺菌効果、増殖抑制効果があり、さらには日常的に頻度高く使用するものであるから人体に対して極めて安全なものが強く求められている。【０００５】    従来、歯周病病原菌の生育を阻害することによって歯周炎の症状を改善する薬剤としてテトラサイクリン、ミノサイクリン等の抗生物質が用いられている。しかしながら、かかる抗生物質は作用が強力で効果が優れる反面、耐性菌の出現や副作用等の問題があり、その使用は制限されているのが実情である。【０００６】    月桂樹はクスノキ科の常緑高木である。葉を乾燥させたものをローリエ（フランス語：ｌａｕｒｉｅｒ）、ローレル（英語：ｌａｕｒｅｌ）、ベイリーフ（英語：ｂａｙ  ｌｅａｆ）などと呼び、香辛料として広く流通している。また、欧州では、毎朝２枚の月桂樹の葉を食べることで肝臓を強くすることができるとされている。
月桂樹葉はいままで、アミラーゼ阻害剤（特許文献１）、白癬治療剤（特許文献２）、花粉症及び鼻炎の諸症状の緩和薬（特許文献３）、アブラムシ類駆除剤（特許文献４）、皮膚外用抗菌剤（特許文献５）などとして提案されている。また、特開昭６３−１３９１１７（特許文献６）には口臭に対する消臭作用が記載されているが、抗歯周病菌作用については言及されていない。【０００７】    非特許文献１においては、月桂樹葉の酢酸エチル抽出物が歯周病菌に抑制作用があると報告されたが、含水エタノールで抽出したものではない。そして、抽出溶媒の酢酸エチルは毒物及び劇物取締法により劇物に指定され、使用する際、作業環境および作業人員への危険性、歯磨き粉、ガムなどへ利用のとき残存溶媒による安全性の問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平５−１４８１５３「アミラーゼ阻害物質」
【特許文献２】特開平９−４０５７１「白癬治療剤」
【特許文献３】特開２００３−２５２７８１「月桂樹を使った花粉症及び鼻炎の諸症状の緩和薬」
【特許文献４】特開平８−１３３９２３「アブラムシ類駆除剤」
【特許文献５】特開２０００−４４４１９「抗菌性植物抽出物、及びこれを含有する抗菌性皮膚外用剤」
【特許文献６】特開昭６３−１３９１１７「口中清浄剤」
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】福山  則明、猪野  千恵子、八十川  要平、小林  憲忠、浜本  洋、関水  和久：ゲッケイジュ（Ｌａｕｒｕｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｌ．）由来の抗菌セスキテルペノイド（薬学会第１３０回年会発表）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】    本発明は、歯周病病原細菌に対して成長阻害活性を有し、かつ安全性の高い抗歯周病剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】    本発明者らは、以上のような課題を解決し、本発明目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、月桂樹（Ｌａｕｒｕｓ  ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｌ．）葉を７０〜９０％エタノールで抽出し、歯周病病原細菌に対して成長阻害活性を有し、かつ安全性の高い抗歯周病剤を見出し、本発明を完成するに至った。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】    本発明に用いられる月桂樹の葉は生葉、乾燥葉もしくは葉の加工したものを利用できる。また、葉を含む月桂樹の地上部をそのまま用いても良い。【００１３】    抽出溶媒の量は月桂樹葉の乾燥重量に対して、２−１００重量部が好ましい。抽出温度は４−９０℃が好ましい。抽出時間は３０分−１週間が好ましい。抽出方法は攪拌抽出、浸漬抽出、向流抽出、超音波抽出、超臨界抽出などの任意の方法で行うことができる。【００１４】    抽出物は、得られた抽出液を濾過し得られた濾液、もしくは濾液を濃縮した濃縮液を使用することができる。濃縮方法は、蒸発式濃縮、膜濃縮などの任意の方法で行うことができる。また濾液、濃縮液を乾燥させた乾燥物を使用しても良い。必要な場合にはデキストリンなどの賦形剤を入れてもよい。乾燥方法は、減圧乾燥、凍結乾燥、スプレー乾燥などの任意の方法で行うことができる。
【実施例】
【００１５】    これより本発明を以下の実施例で詳しく説明するが、本発明はこれに限定されない。
【実施例１】
【００１６】    月桂樹葉乾燥物５ｋｇに水、５０％エタノール、８０％エタノール、または９９ｖ％エタノール２０Ｌを加え、９５℃または還流で２時間攪拌抽出したのち、固液分離を行って上清を得た。得られた上清に濾過助剤を加え濾過し、濾液を減圧濃縮し、濃縮液を減圧乾燥することによって、それぞれ８４８ｇ、９７５ｇ、１０９０ｇ、１１２６ｇの月桂樹葉抽出物を得た。【００１７】    前記製造例１で作成した月桂樹葉抽出物４種については、３種歯周病菌ルフィロモナス・ジンジバリス、プレボテラ・インターメディアおよびアクチノマイセス  ビスコーサスを用いて、抗菌活性試験を行った。【００１８】    ペーパーディスク法による抗菌活性評価
各試料を５０ｍｇとり、水または５０％ＤＭＳＯ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）１ｍＬに溶解した。そのうち４０μＬを８×８ｍｍのペーパーディスクに浸潤させ、これを供試試料とした。即ち８×８ｍｍのディスクには試料２．０ｍｇを含ませた。
９０×９０ｍｍのシャーレに寒天培地を入れ、各試料ディスクをのせ、供試菌を全体に植菌し、歯周病菌アクチノミセス・ビスコーサス（明海大学微生物学教室供与株）は菌濃度１×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、３６時間培養、プレボテラ・インテルメディア（ＡＴＣＣ３３２７７）は菌濃度１×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、３日間、ポルフィロモナス・ジンジバリス（ＡＴＣＣ３３２７７）は菌濃度４．６×１０８ｃｆｕ／ｍＬ、４日間、３７℃で培養後、生育阻止円を測定した。培地としては、アクチノミセス・ビスコーサスにはＧＡＭ培地（日水製薬株式会社）、プレボテラ・インテルメディアおよびポルフィロモナス・ジンジバリスにはミュラーヒントンＳヒツジ血液培地（栄研化学株式会社）を用いた。三者ともアネロパック・アネロジャー（三菱ガス化学株式会社）にて嫌気培養で行った。十分な生育期間後、各試料浸潤ディスクの周辺に観察される菌の生育阻止円の直径を定規で測定した。結果を表１に示す。【００１９】    試験結果
【表１】
2012067065.tif 000010
2012067065.tif 000011
表１の結果から月桂樹葉の８０％エタノール抽出物のみが３種歯周病菌の生育に抑制作用を示した。【００２０】    ポルフィロモナス・ジンジバリスに対する最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）の測定
ミニ試験管チューブを１０本用い、最初のチューブに２ｍｌ変法ＧＡＭブイヨン液体培地を入れ、他のチューブには１ｍｌずつ同液体培地をいれた。最初のチューブの液体培地から１００μｌ培地を除去し、そこにサンプルを１００μｌ加え２ｍｌとし、よく混和した後１ｍｌ採取し、次のチューブに採取したサンプルの入った１ｍｌ培地を加えよく混和し、再度１ｍｌ採取し、次のチューブにその１ｍｌの採取した培地を加え、採取を繰り返し、倍々にサンプルの濃度を希釈した。希釈された１０本のミニ試験管それぞれに４．６ｘ１０７の濃度の菌液を１０μｌ移植し、アネロジャー内でアネロパックケンキを使用し、４日間嫌気培養を行った。菌の生育の有無を肉眼で判定した。【００２１】    試験結果
【表２】
2012067065.tif 000012
表２の結果から月桂樹葉の８０％エタノール抽出物はポルフィロモナス・ジンジバリスの生育に対して、水抽出物の１５倍、５０％ＥｔＯＨ抽出物と９９％ＥｔＯＨ抽出物の１０倍強さの抑制活性が見られた。
【実施例２】
【００２２】    下記表３の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有する歯磨粉を製造した。
【表３】
2012067065.tif 000013
【実施例３】
【００２３】下記表４の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有する含そう剤を製造した。
【表４】
2012067065.tif 000014
【実施例４】
【００２４】下記表５の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有する洗口液を製造した。
【表５】
2012067065.tif 000015
2012067065.tif 000016
【実施例５】
【００２５】    下記表６の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有するチューインガムを製造した。
【表６】
2012067065.tif 000017
【実施例６】
【００２６】    下記表７の配合により、本発明の抗歯周病剤を含有するキャンディを製造した。
【表７】
2012067065.tif 000018
2012067065.tif 000019
【実施例７】
【００２７】      ヒト試験における月桂樹葉８０％ＥｔＯＨ抽出物の口腔内嫌気性菌に対する増殖抑制効果
歯周病菌は主としてポルフィロモナス・ジンジバリス、プレボテラ・インターメディアおよびアクチノマイセス・ビスコーサスが挙げられ、これら以外にＴａｎｎｅｒｅｌｌａ  ｆｏｒｓｙｔｈｕｓ、Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍなど数多く存在している。歯周病菌は酸素の届きにくい歯周ポケットの奥に存在するため、ほとんどの歯周病菌が嫌気性菌である。
試験方法：プラセボ対照二重盲検比較試験により、被検者（ｎ＝３）に月桂樹ガム又はプラセボガムを毎食後に摂取させ、二日間後に洗口によるガム摂取前後の口腔内嫌気性菌数を測定し、口腔内嫌気性菌に対する増殖抑制効果を検討した。月桂樹ガムは実施例５に記載の組成で調整した。プラセボガムは月桂樹８０％ＥｔＯＨエキスをガムベースで置換し調整した。
試験開始２日間前から、予め各被検者に歯磨剤を使用せずに通常のブラッシングをするよう指導した。試験開始当日（０日目）、昼食後に歯磨剤を使用せずブラッシングしたのち１時間後、１０ｍＬのＰＢＳで１０秒間洗口し、洗口液を滅菌チューブに吐出した。この液はガム摂取前の洗口液とした。その後２日間連続、毎食後に歯磨剤を使用せずブラッシングし、月桂樹ガム２粒、またはプラセボガム２粒を被検者に３０分間噛ませた。２日目の昼食後に歯磨剤を使用せずブラッシングし、１時間後１０ｍＬのＰＢＳで１０秒間洗口し、洗口液を滅菌チューブに吐出した。この液はガム摂取後の洗口液とした。
ガム摂取前後の各吐出液を遠心分離（２０００×ｇ、５分間）し、滅菌ＰＢＳで上清を１０００倍希釈した後、ミューラーヒントンヒツジ血液寒天平板培地に１００μＬ塗布した。この培地を３７℃、７２時間嫌気条件下で培養した。培地上に形成されたコロニーの数を算出した。
その結果、ガム摂取前後の唾液中の嫌気性菌数を比較すると、月桂樹ガム摂取群の口腔中の嫌気性菌数が２倍増加したのに対して、プラセボガム摂取群が５倍増加した（表８）。即ち、月桂樹葉８０％ＥｔＯＨ抽出物を含有するガムを摂取することにより、口腔中の嫌気性菌の増殖が抑制された。
【表８】
2012067065.tif 000020
【産業上の利用可能性】
【００２８】    本発明は、歯周病の発症と進行に深く関与しているポルフィロモナス・ジンジバリス、プレボテラ・インターメディアおよびアクチノマイセス・ビスコーサスに代表される口腔内細菌に対して抗菌作用を示し、歯周病の予防及び治療に極めて有用な抗歯周病剤である。また、古来より食材として用いられ安全性の高い月桂樹葉を原料とし、安全性の高い抽出溶媒で抽出したものを有効成分とするものであるから、一部が体内に吸収されても、身体には有害作用がなく、歯磨粉、含そう剤、洗口液、キャンディ、チューインガム等の様々な形態の抗歯周病剤として広く用いることができる。