(57)【要約】【課題】本発明の課題は、有効性の高いカバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物に関して有効に活用する方法を見つけることにある。また、一方で、新規で有効なコラーゲン産生促進作用剤、線維芽細胞増殖促進剤、並びにこれらを配合した皮膚外用剤を提供することを課題とする。【解決手段】カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物がこれまでに確認されていなかった機能、すなわちコラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖促進作用を有することを見出し、よってコラーゲン産生促進剤、線維芽細胞増殖促進剤として応用すること、さらに皮膚外用剤にも使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物を含有するコラーゲン産生促進作用剤。
【請求項２】
カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物を含有する線維芽細胞増殖促進剤。
【請求項３】
請求項１記載のコラーゲン産生促進作用剤及び請求項２記載の線維芽細胞増殖促進剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】本発明品は、カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物が、コラーゲン産生促進作用ならびに線維芽細胞増殖促進作用を有意に促進することで、肌のしわ、たるみといった皮膚の悩みを予防・改善する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】シラカバ（学名：Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）はシラカンバとも呼ばれるカバノキ科の落葉樹で、亜寒帯から温帯に生育している。シラカバという名はその樹皮が白いことからついたといわれている。シラカバの樹液、樹皮、葉などはすでに化粧料の原料として使用されており、樹液では美白効果や老化防止効果（特許文献１）が、樹皮や葉では抗酸化作用や抗炎症作用、収斂作用等が知られている（特許文献２−５）。【０００３】女性にとって外見の美しさは日常生活に欠かせない要素であり、また近年では女性の社会進出が進んでおり、とりわけ肌の美しさに多くの女性の関心が集まっている。一方で加齢や紫外線、生活上のストレスなどの要因で、しわやたるみといった肌上の悩みは進行してしまうのが現状であり、肌の種々の悩み・トラブルに対応した健康食品、化粧料が数多く販売されている。【０００４】肌の悩みの上位に挙げられるしわやたるみが進行するメカニズムについては研究が進んでいる。肌の中心的役割を果たしている真皮には線維芽細胞があり、コラーゲン・エラスチンなどを合成する働きをしている。しかし老化皮膚では、線維芽細胞の活性低下に伴い、真皮マトリックス成分であるコラーゲン線維、エラスチン線維、酸性ムコ多糖の質的、量的な変化が起こる。コラーゲンは動物の結合組織を構成している主要なタンパク質で、皮膚では表皮基底膜、真皮に存在し、真皮ではその７０％以上を占め、皮膚に弾力をもたらす。しかし加齢や光によって変性・崩壊し、変わってアミノ酸組成の異なるエラスチンやコラーゲンが代償的に産生されて機能障害が進行する。その結果皮膚は大きく柔軟性を失ってしわやたるみが発生する。よって、これら生理的皮膚老化を予防する目的で、コラーゲン産生や線維芽細胞の増殖を促進させることはしわやたるみ形成抑制に極めて重要である（特許文献６，７）。
【特許文献１】  特開２００７−３２０９２１号
【特許文献２】  特開平１０−１８２３４７号
【特許文献３】  特開２００４−３３９１３８号
【特許文献４】  特開２００６−１０４１１８号
【特許文献５】  特開２００８−０８８１０９号
【特許文献６】  特開２００３−０３４６３１号
【特許文献７】  特開２００８−２８０３１９号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】本発明の目的は、これまでコラーゲン産生促進作用、線維芽細胞増殖促進作用としての効果が知られていないカバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物にその作用を見出し、肌のしわ、たるみといった皮膚の悩みを予防・改善するため、さらにはこれを有効に活用するために種々検討を行った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】前記目的を達成するため、本発明者らは鋭意検討した結果、カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物がコラーゲン産生促進作用と線維芽細胞増殖促進作用があることを見出し、これによりしわやたるみを予防・改善することが分かった。【０００７】上記したカバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物は、皮膚に適応した場合の使用感と安全性に優れているため、皮膚外用剤に配合するのに好適である。本発明の皮膚外用剤は、上記カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物を含有し、コラーゲン産生ならびに線維芽細胞増殖促進作用を有する。もちろん、製剤化した本発明のコラーゲン産生ならびに線維芽細胞増殖促進作用剤を含有するものも本発明の皮膚外用剤の範囲に含まれる。【０００８】本発明に係る皮膚外用剤は、カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉を含有することを特徴とする。【０００９】本発明で用いられる抽出物の調製方法は特に限定されないが、例えば種々の溶媒を用い、低温から加温下において抽出する方法があげられる。【００１０】具体的に抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等の低級一価アルコール、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステル、ベンゼン、ヘキサン、ペンタン等の炭化水素、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジプロピルエーテル、アセトニトリル等のエーテル類が例示され、これらの一種又は二種以上の混合溶媒を用いることができる。【００１１】本発明で使用する抽出物は、そのまま用いてもよいが、必要に応じてろ過、濃縮してもよい。また、抽出物をカラムクロマト法、向流分配法等により、分画、精製して用いることもできる。【００１２】更に、上記のものを減圧乾燥又は凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製し、適宜製剤化して用いることもできる。【００１３】カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物は０．００１〜２０重量％で配合すればしわ、たるみ改善効果等を十分発揮することから、この濃度で配合することが望ましい。【００１４】本発明の皮膚外用剤は、常法に従い、通常の皮膚外用剤として知られる種々の形態の基剤に配合して調製することができ、外用剤の形態としては特に限定されず、例えば、乳液、クリーム、水溶液、パック等の任意の剤形を選択することができる。【００１５】本発明の皮膚外用剤において、カバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕ���ａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物とともに構成成分として利用可能なものは例えば、保湿剤・紫外線吸収剤・複合脂質・活性酸素消去作用を有する物質・抗炎症剤・ビタミンおよびその誘導体・油性成分・界面活性剤・防腐剤・粉体成分・精製水・高分子化合物・ゲル化剤・酸化防止剤・コレステロール類・植物ステロール類・リポプロテイン類・微生物由来成分・藻類抽出物・血行促進剤・抗脂漏剤・増粘剤・着色料・美容成分などをなどが挙げられ、本発明の効果を損なわない範囲で適宜選択して用いることが出来る。
【実施例】
【００１６】次に実施例および比較例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれになんら制約されるものではない。また使用した薬剤のエキスについての抽出方法についても何ら限定されるものではない。【００１７】（製造例１）シラカバの葉の乾燥物１５０ｇに５０ｖ／ｖ％エタノール１５００ｇを加えて室温にて一週間抽出し、ろ過し、溶媒留去して固形抽出物Ａ約２０ｇを製した。【００１８】（製造例２）シラカバの葉の乾燥物１５０ｇに５０ｖ／ｖ％エタノール１５００ｇを加え、５０℃にて５時間抽出した。これをろ過し、濃縮乾固した後、５０ｖ／ｖ％エタノール溶液１５００ｇに加温溶解し、抽出物Ｂを製した。抽出物Ｂの乾燥固形分は、１．７７％であった。【００１９】（製造例３）シラカバの葉の乾燥物１５０ｇに精製水２０００ｇを加え、８０℃にて５時間抽出した。これをろ過し、抽出物Ｃを製した。抽出物Ｃの乾燥固形分は２．４％であった。【００２０】（製造例４）乾燥したシラカバの葉２００ｇに５０ｖ／ｖ％エタノール溶液２０００ｇを加え、５０℃にて８時間攪拌抽出を行い、冷後ろ過した後、濃縮し、オクタデシルシリル化したシリカゲルを充填したカラムに通液した。水洗後、１０〜３０ｖ／ｖ％エタノール溶液にて溶出した画分を合わせ、減圧濃縮して、溶媒を留去した。得られた濃縮物に適量の５０ｖ／ｖ％エタノール溶液を加え、乾燥固形分１．５％の抽出物Ｄを製した。【００２１】（試験例１）コラーゲン産生促進作用試験
試験試料は、製造例１にて調製した抽出物Ａを使用した。ヒト皮膚由来線維芽細胞１０％ウシ胎児血清（以下ＦＢＳと略記）を含むＭＥＭ培地にて調製し、９６穴プレートに２×１０４個／穴ずつ播種し、３７℃、５％炭酸ガス下、２４時間培養した。２４時間培養後、ＰＢＳ（−）にて２回洗浄後、試験試料を添加した無血清培地（５ｇ／ＬのＢＳＡ、０．０１ｍｇ／ＬのＥＧＦ、１ｍｇ／Ｌのインシュリン及び１ｍｇ／Ｌのハイドロコーチゾンを添加したＭＥＭ培地）にて、４８時間同条件にて培養した。培養後、１００μＬの培養上清をＥＬＩＳＡ用プレートに添加し、１８時間室温中に保管した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄後、１％スキムミルク含有ＰＢＳ−Ｔを加え、室温にて２時間ブロッキングした。抗ヒトＩ型コラーゲン抗体、ペルオキシダーゼ標準抗ラットＩｇＧ抗体で処理し、ペルオキシダーゼ用発色キットを用いて発色させた。４５０ｎｍの吸光度から培養上清中に含まれるＩ型コラーゲン量を求めた。コントロールのＩ型コラーゲン量を１００％とし、単位蛋白当たりにて算出した。蛋白定量は、Ｌｏｗｒｙ法を用いた。結果を表１に記す。【００２２】
【表１】
2012017311.tif 000002
【００２３】（試験例２）線維芽細胞増殖促進効果試験
試験試料は、製造例１にて調製した抽出物Ａを使用した。１０％ＦＢＳ（牛胎児血清；日冷より購入）含有ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ社）を用い、ヒト由来正常皮膚線維芽細胞（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ社）を９６穴プレートに３×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度で播種し、３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間培養する。Ｍｅｄｉｕｍ除去後ＰＢＳ（−）（日水製薬）で洗浄し、上記試験品を精製水にて１００ｐｐｍに調製した試験品溶液を添加した０．５％ＦＢＳ含有ＭＥＭに交換し、３７℃、５％ＣＯ２にて培養する。このとき、ブランクは試験試料を含まない０．５％ＦＢＳ含有ＭＥＭとする。７２時間毎に培地交換を行い、９日間培養した後、ＭＴＴ還元法により、５７０ｎｍ及び６３０ｎｍの吸光度差を測定し、このときブランクの吸光度差を１００として、それに対する試験溶液添加群の細胞増殖率を測定した。【００２４】
【表２】
2012017311.tif 000003
【００２５】（試験例３）皮膚外用剤の効果
３５〜６０歳の女性３０名をパネルとし、表３記載の本発明シラカバ葉抽出物配合外用組成物、対照皮膚外用組成物を、毎日朝と夜の２回、１２週間に渡って洗顔後に被験外用剤の適量を顔面に塗布した。塗布による美肌効果の結果を表４に示す。
【表３】
2012017311.tif 000004
【００２６】
【表４】
2012017311.tif 000005
【実施例１】
【００２７】クリーム
下記の成分（１）〜（１０）、これとは別に書き成分（１１）〜（１５）を７５℃に加温溶解しそれぞれＡ液及びＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（１６）を加え、クリームを調整した。
（成分）                                                  （重量％）
（１）ホホバ油                                              ３．０％
（２）スクワラン                                            ２．０％
（３）メチルポリシロキサン                                  ０．５％
（４）ステアリルアルコール                                  ０．５％
（５）セチルアルコール                                      ０．５％
（６）トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル              １２．５％
（７）モノステアリン酸グリセリル                            ５．０％
（８）モノステアリン酸ジグリセリル                          １．５％
（９）モノステアリン酸デカグリセリル                        ３．０％
（１０）パラオキシ安息香酸プロピル                          ０．１％
（１１）キサンタンガム                                      ０．１％
（１２）本発明シラカンバの葉抽出物（製造例４）              １．０％
（１３）１，３−ブチレングリコール                          ２．５％
（１４）パラオキシ安息香酸メチル                            ０．２％
（１５）精製水                                            ６７．５％
（１６）香料                                                ０．１％
【実施例２】
【００２８】化粧水
下記成分（５）〜（８）を混合溶解させてＡ液とし、これとは別に下記成分（１）〜（４）及び（９）を混合溶解させて（Ｂ）液とし、Ａ液とＢ液を均一に混合し、化粧水を得た。
（成分）                                                  （重量％）
（１）マルメロ種子エキス                                    ８．０％
（２）グリセリン                                            ３．０％
（３）１，３−ブチレングリコール                            ５．０％
（４）本発明シラカンバの葉抽出物（製造例２）                ２．０％
（５）ポリオキシエチレンソルビタンラウリン酸エステル        １．２％
（６）エチルアルコール                                      ５．０％
（７）防腐剤                                                ０．２％
（８）香料                                                  ０．１％
（９）精製水                                              ７５．５％
【実施例３】
【００２９】乳液
下記成分（１）〜（１０）、これとは別に下記成分（１１）〜（１４）及び（１６）を７５℃で加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（１５）を加え、乳液を調製した。
（成分）                                                  （重量％）
（１）ホホバ油                                              １．０％
（２）スクワラン                                            ２．０％
（３）ベヘニルアルコール                                    １．０％
（４）トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル                ２．０％
（５）テトラグリセリン縮合リシノレイン酸                    ０．１％
（６）モノオレイン酸プロピレングリコール                    ０．５％
（７）モノステアリン酸グリセリル                            １．０％
（８）モノミリスチン酸ヘキサグリセリル                      １．０％
（９）モノミリスチン酸デカグリセリル                        ０．５％
（１０）パラオキシ安息香酸プロピル                          ０．１％
（１１）マルメロ種子エキス                                  ５．０％
（１２）本発明シラカンバの葉抽出物（製造例１）              ０．１％
（１３）１，３−ブチレングリコール                          ３．０％
（１４）パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１％
（１５）香料                                                ０．１％
（１６）精製水                                            ８２．５％
【実施例４】
【００３０】クレンジングジェル
下記成分（１）〜（３）、これとは別に下記成分（４）〜（６）及び（８）を７０℃に加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて均一になるまで攪拌する。攪拌しながら、５０℃まで冷却し、成分（７）を加えてクレンジングジェルを調製した。
（成分）                                                  （重量％）
（１）モノミリスチン酸ヘキサグリセリル                    ２０．０％
（２）流動パラフィン                                      ５９．７％
（３）パラオキシ安息香酸エステル                            ０．３％
（４）本発明シラカンバの葉抽出物（製造例３）                １．０％
（５）濃グリセリン                                          ５．０％
（６）ソルビトール                                          ５．０％
（７）香料                                                  ０．１％
（８）精製水                                                ８．９％
【実施例５】
【００３１】パック剤下記成分（１）〜（４）及び（９）を７０℃に加熱溶解しＡ液とし、（６）〜（８）を混合してＢ液とする。Ｂ液をＡ液に混合した後、冷却し（５）を均一に分散してパックを調製した。
（成分）                                                  （重量％）
（１）ポリビニルアルコール                                ２０．０％
（２）グリセリン                                            ５．０％
（３）カオリン                                              ６．０％
（４）本発明シラカンバの葉抽出物（製造例４）                １．０％
（５）塩化ベンザルコニウム                                ２０．０％
（６）エタノール                                          ２０．０％
（７）パラオキシ安息香酸メチル                              ０．２％
（８）香料                                                  ０．１％
（９）精製水                                              ２７．７％【００３２】コラーゲン産生促進作用と線維芽細胞増殖促進作用を有するカバノキ科カバノキ属シラカンバ植物（Ｂｅｔｕｌａ  Ｐｌａｔｙｐｈｙｌｌａ  Ｓｕｋａｔｃｈｅｖ  ｖａｒ．Ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｈａｒａ）の葉の抽出物はコラーゲン産生促進作用と線維芽細胞増殖促進作用を示すことが確認され、肌のしわ、たるみいった皮膚の悩みの予防、改善効果があることが分かった。