(57)【要約】      （修正有）【課題】有用性の高いＮＭＤＡを簡易に提供する。【解決手段】Ｄ−アスパラギン酸を添加した乳成分を乳酸菌発酵させＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）を富化する工程によりＮＭＤＡ含有食品を製造する。前記乳酸菌発酵は、発酵食品から分離されたラクチス菌、酢酸菌、ブルガリア菌およびサーモフィラス菌による乳酸菌発酵であるＮＭＤＡ含有食品、ＮＭＤＡ含有食品の製造方法に関する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌発酵により得られるＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）含有食品。
【請求項２】
請求項１記載のＮＭＤＡ含有食品において、
前記乳酸菌発酵は、Ｄ−アスパラギン酸を添加した乳成分を乳酸菌発酵させたものであることを特徴とするＮＭＤＡ含有食品。
【請求項３】
請求項１または２記載のＮＭＤＡ含有食品において、
前記乳酸菌発酵は、発酵食品から分離されたラクチス菌および酢酸菌による乳酸菌発酵であることを特徴とするＮＭＤＡ含有食品。
【請求項４】
請求項１または２記載のＮＭＤＡ含有食品において、
前記乳酸菌発酵は、発酵食品から分離されたブルガリア菌およびサーモフィラス菌による乳酸菌発酵であることを特徴とするＮＭＤＡ含有食品。
【請求項５】
乳酸菌発酵によりＮＭＤＡを富化する工程を包含するＮＭＤＡ含有食品の製造方法。
【請求項６】
請求項５記載のＮＭＤＡ含有食品の製造方法において、
前記乳酸菌発酵によりＮＭＤＡを富化する工程に先立って、乳成分にＤ−アスパラギン酸を添加する工程を包含することを特徴とするＮＭＤＡ含有食品の製造方法。
【請求項７】
乳酸菌発酵によりＮＭＤＡを富化する工程を包含する方法により製造されるＮＭＤＡ含有組成物。
【請求項８】
請求項７記載のＮＭＤＡ含有組成物において、
前記方法は、前記乳酸菌発酵によりＮＭＤＡを富化する工程に先立って、乳成分にＤ−アスパラギン酸を添加する工程を包含することを特徴とするＮＭＤＡ含有組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＮＭＤＡ含有食品、その製造方法およびＮＭＤＡ含有組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
１９６０年代、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）は、自然界に存在しない人工物として化学合成された（非特許文献１参照）。ＮＭＤＡは中枢神経系における主要な興奮性神経伝達物質であるグルタミン酸を受容する４種類の受容体の内、１種類の受容体にのみ作用するアゴニストとして知られている。
【０００３】
ところが、自然界に存在しないと思われていたＮＭＤＡが、アカガイ、サルボウガイ、カキ、ハマグリ、ムール貝、魚類の頭部、タコ、カニ、ホヤに含まれていることが２００１年に発見された（非特許文献２及び非特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】WATKIN J.C, The Synthesis of Some Acidic Amino Acids Possessing Neuropharmacological Activity, J. Med. Pharmacol. Chem. 5, 1187-1199
【非特許文献２】Shibata K. et al., Occurrence of N-methyl-L-aspartate in bivalubes and its distribution compared with that of N-methyl-D-aspartate and D,L-aspartate., Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2001 Dec;130(4):493-500.
【非特許文献３】D'Aniello A. et al., A specific enzymatic high-performance liquid chromatography method to determine N-methyl-D-aspartic acid in biological tissues., Anal Biochem. 2002 Sep 1;308(1):42-51.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ここで、ＮＭＤＡを摂取することによる作用については、十分な研究がなされておらず、その用途の開発が望まれるところであるが、本願発明者により、ＮＭＤＡによってテストステロン量が増加することが明らかにされ、ＮＭＤＡを有効成分として含有することを特徴とするテストステロン増加剤が開発されている（特願２０１０−０９５３５１参照）。このテストステロン増加剤によれば、原発性又は続発性精巣機能低下症や、加齢又は環境因子によるテストステロン欠乏症の治療薬又は予防薬としての効果を期待することができる。また、本発明のテストステロン増加剤は、テストステロンの低下に起因する各種疾病を予防、改善又は治療することができ、特に、筋肉、認知機能、集中力、意欲、血管の柔軟性、脂質代謝、性機能、排尿機能等の低下を予防、改善又は治療することができる。
【０００６】
本発明は、このような有用性の高いＮＭＤＡを簡易に提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本願発明者の鋭意の研究によれば、乳酸菌発酵により得られる食品にＮＭＤＡが含有されることが知見された。
【０００８】
上述のように、ＮＭＤＡは、化学合成またはアカガイ、サルボウガイ、カキ、ハマグリ、ムール貝、魚類の頭部、タコ、カニ、ホヤから抽出・精製することが必要であったが、乳酸菌発酵によりＮＭＤＡ含有食品が得られることは予想外であり、これにより有用性の高いＮＭＤＡを簡易に提供することができると共に、量産の可能性を知見して、本願発明を完成させた。
【０００９】
さらに、本願発明者は、乳酸菌発酵による量産の可能性に関して、鋭意の研究を継続し、特に、乳酸菌発酵に際して、乳成分にＤ−アスパラギン酸を添加することで、ＮＭＤＡの生成量が数万倍という飛躍的な値で向上することを知見した。
【００１０】
第１発明は、乳酸菌発酵により得られるＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）含有食品である。
【００１１】
第２発明は、第１発明のＮＭＤＡ含有食品において、
前記乳酸菌発酵は、Ｄ−アスパラギン酸を添加した乳成分を乳酸菌発酵させたものであることを特徴とする。
【００１２】
第３発明は、第１発明または第２発明のＮＭＤＡ含有食品において、
前記乳酸菌発酵は、発酵食品から分離されたラクチス菌および酢酸菌による乳酸菌発酵であることを特徴とする。
【００１３】
第４発明は、第１発明または第２発明のＮＭＤＡ含有食品において、
前記乳酸菌発酵は、発酵食品から分離されたブルガリア菌およびサーモフィラス菌による乳酸菌発酵であることを特徴とする。
【００１４】
第５発明は、乳酸菌発酵によりＮＭＤＡを富化する工程を包含するＮＭＤＡ含有食品の製造方法である。
【００１５】
第６発明は、請求項５記載のＮＭＤＡ含有食品の製造方法において、
前記乳酸菌発酵によりＮＭＤＡを富化する工程に先立って、乳成分にＤ−アスパラギン酸を添加する工程を包含することを特徴とする。
【００１６】
第７発明は、乳酸菌発酵によりＮＭＤＡを富化する工程を包含する方法により製造されるＮＭＤＡ含有組成物である。
【００１７】
第８発明は、第７発明のＮＭＤＡ含有組成物において、
前記方法は、前記乳酸菌発酵によりＮＭＤＡを富化する工程に先立って、乳成分にＤ−アスパラギン酸を添加する工程を包含することを特徴とする。
【００１８】
本発明により、有用性の高いＮＭＤＡを乳酸菌発酵により簡易に提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＮＭＤＡ含有食品の製造方法を示すフローチャート。
【図２】乳酸菌発酵によるＮＭＤＡ濃度の経時変化を示す図。
【図３】乳成分にＤ−アスパラギン酸を添加した場合の経時変化を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の一実施例を以下に示す。なお、本発明は、以下に示す一実施例に限定されるものではない。
【００２１】
まず、分離工程では、発酵食品から乳酸菌を分離する（図１／ＳＴＥＰ１０）。本実施形態では、（１）第１の場合として、発酵食品からブルガリア菌(Lactobacillus bulgaricus)およびサーモフィラス菌(Streptococcus thermophilus)が分離され、（２）第２の場合として、他の発酵食品からラクチス菌(Lactococcus lactis)および酢酸菌(Acetbacter orientalis)が分離される。
【００２２】
例えば、このときの分離条件としては、まず、発酵食品１ｇを滅菌水４９ｍｌを滅菌済みのコニカルチューブに入れ、約５分間混濁処理を行う。そして、その混濁液を希釈し、乳酸菌分離用培地（日水製薬、ＢＣＰ加プレートカウントアガール）で、約３０℃で平板培養し、育成したコロニーを分離する。
【００２３】
次の培養工程では、ＳＴＥＰ１０の分離工程で分離した乳酸菌を培養する（図１／ＳＴＥＰ２０、本発明のＮＭＤＡを富化する工程に相当する）。
【００２４】
例えば、この培養工程の培養条件としては、（１）前記第１の場合では、８％脱脂粉乳，２％グルコース溶液（１２１℃、１５分滅菌）に、分離工程で分離したラクチス菌およびサーモフィラス菌を添加し、３７℃好気状態で３日間培養する。
【００２５】
このようにして乳酸菌発酵により得られたＮＭＤＡ濃度を、図２に示す。図２は、経過時間に対するＮＭＤＡ濃度をプロットしたものである。
【００２６】
なお、この場合のＮＭＤＡ量の測定方法としては、培養液５０ｍｌあたりに６０％過塩素酸を１ｍｌ添加した後に遠心分離を行い、上清を回収する。そして、上清を水酸化カリウム溶液を用いて中和し、再び遠心分離し、その上清を陰イオン交換カラムに通し酸性アミノ酸画分を得る。この抽出液についてＨＰＬＣ分析を行う。ＨＰＬＣ分析の手法としては、例えば、非特許文献（Todoroki,N. et al(1999)Journal of Chromatography B,278,41-47）記載の手法が採用される。
【００２７】
下表（表１）およびこれをグラフ化した図２に示すように、ＮＭＤＡは、培養前は痕跡程度に検出されるのみであったが、３日間の発酵終了後には３０ｎｇ／L 以上に増加していた。すなわち、これにより得られたものはＮＭＤＡを含有する発酵乳食品（発酵乳飲料）となる。
【００２８】
【表１】
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【００２９】
さらに、この培養液に２０％エタノール溶液を添加し、高速ホモジナイザーでホモジナイズし、ろ過または遠心分離により死菌体を除去することで、ＮＭＤＡを含有する組成物を製造することができる。
【００３０】
実際に、得られたＮＭＤＡ含有食品（発酵乳飲料）を乾燥させることで調製した粉末中のＮＭＤＡの含有量は、３１０ｎｇＮＭＤＡ／ｇ粉末であった。
【００３１】
次に、（２）前記第２の場合では、１０％脱脂粉乳または１２％全粉乳（９０℃、１０分滅菌）に、分離工程で分離したラクチス菌および酢酸菌を添加し、２５℃好気状態で４０時間培養する。このとき、比較のため、同一条件下で、一方に培養に先立って予めＤ−アスパラギン酸を添加し、他方はＤ−アスパラギン酸を添加しなかった。
【００３２】
このようにして乳酸菌発酵により得られたＮＭＤＡ濃度を、図３（ａ）に示す。図３（ａ）は、経過時間に対するＮＭＤＡ濃度をプロットしたものである。
【００３３】
なお、この場合のＮＭＤＡ量の測定方法としては、発酵乳約６gに８０％エタノールを２４mlを添加して、高速ホモナイザーを用いてホモナイズし、４℃で一晩静置した上で、遠心分離を行い、その上清を４０℃で減圧濃縮乾固させる。得られた残渣を水に溶解させ、その後、水酸化ナトリウム水溶液を用いて中和し、再び遠心分離し、その上清を陰イオン交換カラムに通し酸性アミノ酸画分を得る。この抽出液についてＨＰＬＣ分析を行う。ＨＰＬＣ分析の手法としては、上述のように、非特許文献（Todoroki,N. et al(1999)Journal of Chromatography B,278,41-47）記載の手法が採用される。
【００３４】
下表（表２）およびこれをグラフ化した図３（ａ）示すように、ＮＭＤＡは、発酵初期は痕跡程度に検出されるのみであったが、発酵に伴いＮＭＤＡ濃度は増加した。このとき、Ｄ−アスパラギン酸を発酵に先立って添加しておくことで、高濃度のＮＭＤＡが生成された。特に、１２％全粉乳にＤ−アスパラギン酸を添加して乳酸菌発酵をさせた場合に、１５時間〜２２時間のＮＭＤＡの生成が顕著であり、この場合のＮＭＤＡの含有量は、２０００μg／Ｌ以上であり、前記第１の場合の６．６万倍以上の濃度となっていた。
【００３５】
【表２】
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【００３６】
なお、１５時間〜２２時間で活発な乳酸発酵が行われ、高濃度のＮＭＤＡが生成されたことは、下表（表３）およびこれをグラフ化した図３（ｂ）に示すように、発酵中のｐＨの変化からも推察される。
【００３７】
【表３】
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【００３８】
以上から、（２）前記第２の場合では、１０％脱脂粉乳と１２％全粉乳では、１２％全粉乳のほうが高濃度のＮＭＤＡを生成させることができるとともに、特に、１２％全粉乳にＤ−アスパラギン酸を添加して乳酸菌発酵をさせた場合に、ＮＭＤＡの生成が顕著となることが確認された。
【００３９】
以上詳しく説明したように、本発明によれば、有用性の高いＮＭＤＡを乳酸菌発酵により簡易に提供することが可能となる。これにより、ＮＭＤＡを有効成分として含有する医薬、サプリメント、健康食品、機能性食品またはこれらの素材の製造技術としての有用性が期待され、ひいては、テストステロンが低下することにより生じる症状または疾病を予防、改善および治療への利用が期待される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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