(57)【要約】【課題】迅速且つ簡便な検出および診断を可能とするジカルボン酸の検出方法、診断剤および診断用キットを実現する。【解決手段】アントラセン骨格を有するジアミジンであって、検出対象であるジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体、または、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成可能なジアミジンを用いると、蛍光発光を測定するだけで、ジカルボン酸を選択的に検出することができるので、迅速且つ簡便な検出・診断が可能となる。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジカルボン酸の検出方法であり、
アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を用い、
検出対象試料を、前記ジアミジンと接触させる接触工程と、
蛍光発光を検出する検出工程と、
を含むことを特徴とする検出方法。
【請求項２】
前記ジカルボン酸は、下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有する化合物であることを特徴とする請求項１に記載の検出方法。
【請求項３】
前記ジアミジンは、１，８−ジアミジノアントラセンであることを特徴とする請求項１または２に記載の検出方法。
【請求項４】
溶媒として、極性溶媒を用いることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の検出方法。
【請求項５】
前記検出対象試料として、哺乳動物から採取された生体試料を用いることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の検出方法。
【請求項６】
前記生体試料は、尿、血液、血清、血漿、唾液、関節液、腹水、胸水、髄液、または痰であることを特徴とする請求項５に記載の検出方法。
【請求項７】
哺乳動物の生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患の診断用キットであり、
アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を含むことを特徴とする診断用キット。
【請求項８】
基材を含み、当該基材に前記ジアミジンが担持されていることを特徴とする請求項７に記載の診断用キット。
【請求項９】
前記ジアミジンは、１，８−ジアミジノアントラセンであることを特徴とする請求項７または８に記載の診断用キット。
【請求項１０】
前記疾患は、先天性脂質代謝異常であることを特徴とする請求項７〜９のいずれか１項に記載の診断用キット。
【請求項１１】
異なる鎖長の範囲を有するジカルボン酸とそれぞれ前記会合体を形成する複数のジアミジンを含むことを特徴とする請求項７または８に記載の診断用キット。
【請求項１２】
アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有するジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有するジカルボン酸の同一化合物２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を有効成分として含むことを特徴とする先天性脂質代謝異常診断剤。
【請求項１３】
前記ジアミジンは、１，８−ジアミジノアントラセンであることを特徴とする請求項１２に記載の先天性脂質代謝異常診断剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジカルボン酸の検出方法、診断剤および診断用キットに関するものであり、特に迅速且つ簡便な検出および診断を可能とするジカルボン酸の検出方法、診断剤および診断用キットに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ジカルボン酸尿症は、先天的代謝異常による疾患の１つであり、早期発見および早期治療の必要性から、新生児マススクリーニングの対象とすることが望まれている。ジカルボン酸尿症の患者は尿中のジカルボン酸量が顕著に高いことから、ジカルボン酸尿症の診断は尿中のジカルボン酸量を分析することにより行われる。
【０００３】
現在、ジカルボン酸尿症の診断には尿検体のガスクロマトグラフ質量分析が行われている。しかし、ガスクロマトグラフ質量分析では、試料中のジカルボン酸を有機溶媒に抽出し、エステル化するという前処理を行う必要があり、測定に長時間を要する事や、装置が高額であるという問題がある。
【０００４】
かかる問題を解決する方法として、実用化には至っていないが、ジカルボン酸をピレン誘導体化することにより起こるエキシマー発光を用いた分析方法が提案されている（例えば、特許文献１、非特許文献１参照）。
【０００５】
また、ジカルボン酸尿症の診断方法としてではないが、ジカルボン酸を検出する方法として、ジカルボン酸を認識する分子を用いる方法について、いくつかの報告がされている（例えば、非特許文献２、３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平１１‐２８１５７８号公報（１９９９年１０月１５日公開）
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Analytical Chemica Acta 2005, 534, 177-183
【非特許文献２】J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 8447
【非特許文献３】J. Am. Chem. Soc. 1999, 121, 6103
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、前記従来の診断方法や検出方法では、迅速且つ簡便に診断や検出を行うという点では十分ではない。
【０００９】
具体的には、特許文献１、非特許文献１に記載のピレンのエキシマー発光を応用する方法では、スペクトルが顕著に変化しない、前処理段階で検体をピレン誘導体化する必要があるなどの問題点がある。
【００１０】
また、非特許文献２、３に記載のジカルボン酸を認識する分子を用いる方法は、いずれも、非極性溶媒中でのみジカルボン酸の認識が可能であるため、尿中のジカルボン酸を検出するためには、有機溶媒に抽出し脱水するという前処理が必要である。さらに、核磁気共鳴を用いて分子中の基の動きからジカルボン酸の有無を判断するものであるため、ジカルボン酸とモノカルボン酸との識別が困難であるという問題がある。
【００１１】
本発明は、前記の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、迅速且つ簡便な検出および診断を可能とするジカルボン酸の検出方法、診断剤および診断用キットを実現することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明に係るジカルボン酸の検出方法は、前記課題を解決するために、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を用い、検出対象試料を、前記ジアミジンと接触させる接触工程と、蛍光発光を検出する検出工程と、を含むことを特徴としている。
【００１３】
前記の構成によれば、事前の誘導体化の必要がなく、検出対象試料を添加して、蛍光発光を測定するだけで、ジカルボン酸を選択的に検出することができるという効果を奏する。また、従来のジカルボン酸を認識する分子は非極性溶媒中でのみ使用可能であるが、本発明では極性溶媒が使用可能であり、実用性に優るという効果を奏する。
【００１４】
本発明に係る検出方法では、前記ジカルボン酸は、下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）で表される構造を有する化合物であってもよい。
【００１５】
前記の構成によれば、哺乳動物の生体試料に含まれる前記ジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患の診断を、前処理を行うことなく蛍光発光を測定するだけで迅速且つ簡便に行うことができるという効果を奏する。
【００１６】
本発明に係る検出方法では、前記ジアミジンは、１，８−ジアミジノアントラセンであることが好ましい。
【００１７】
前記ジアミジンが、１，８−ジアミジノアントラセンであることにより、生体内に存在する広範囲のジカルボン酸を好適に検出することができる。
【００１８】
本発明に係る検出方法では、溶媒として、極性溶媒を用いることができる。
【００１９】
溶媒として、極性溶媒を用いることができることにより、検出対象試料を有機溶媒に抽出する必要がなく、そのまま検出を行うことができる。
【００２０】
本発明に係る検出方法では、前記検出対象試料として、哺乳動物から採取された生体試料を用いてもよい。
【００２１】
これにより、哺乳動物の生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患の診断を、前処理を行うことなく、蛍光発光を測定するだけで迅速且つ簡便に行うことができるというさらなる効果を奏する。
【００２２】
本発明に係る検出方法では、前記生体試料は、尿、血液、血清、血漿、唾液、関節液、腹水、胸水、髄液、または痰であってもよい。
【００２３】
本発明に係る診断用キットは、哺乳動物の生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患の診断用キットであり、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジンを含むことを特徴としている。
【００２４】
これにより、哺乳動物の生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患の診断を、前処理を行うことなく、蛍光発光を測定するだけで迅速且つ簡便に行うことができるという効果を奏する。
【００２５】
本発明に係る診断用キットは、基材を含み、当該基材に前記ジアミジンが担持されているものであってもよい。
【００２６】
これにより、診断用キットに生体試料を流し、蛍光発光を測定するだけで迅速且つ簡便に診断を行うことができるというさらなる効果を奏する。
【００２７】
本発明に係る診断用キットでは、前記ジアミジンは、１，８−ジアミジノアントラセンであることが好ましい。
【００２８】
前記ジアミジンが、１，８−ジアミジノアントラセンであることにより、生体内に存在する広範囲のジカルボン酸を好適に検出することができる。
【００２９】
本発明に係る診断用キットでは、前記疾患は、先天性脂質代謝異常でありうる。
【００３０】
これにより、予備的な新生児マススクリーニングを行えば、全ての人の生体試料について質量分析を行う必要がなくなるというさらなる効果を奏する。
【００３１】
また、本発明の診断用キットは、異なる鎖長の範囲を有するジカルボン酸とそれぞれ前記会合体を形成する複数のジアミジンを含んでいてもよい。
【００３２】
かかる複数のジアミジンを含む診断用キットをそれぞれ用いて、試料を測定することにより、試料中に含まれるジカルボン酸の鎖長の範囲を略特定することが可能となる。
【００３３】
本発明に係る先天性脂質代謝異常診断剤は、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有するジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有するジカルボン酸の同一化合物２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジンを有効成分として含むことを特徴としている。
【００３４】
これにより、先天性脂質代謝異常の診断を、前処理を行うことなく、蛍光発光を測定するだけで迅速且つ簡便に行うことができるという効果を奏する。また、予備的な新生児マススクリーニングを行えば、全ての人の尿について質量分析を行う必要がなくなるという効果を奏する。
【００３５】
本発明に係る先天性脂質代謝異常診断剤では、前記ジアミジンは、１，８−ジアミジノアントラセンであることが好ましい。
【発明の効果】
【００３６】
本発明に係るジカルボン酸の検出方法は、以上のように、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を用い、検出対象試料を、前記ジアミジンと接触させる接触工程と、蛍光発光を検出する検出工程と、を含む構成を備えているので、事前の誘導体化の必要がなく、検出対象試料を添加して蛍光発光を測定するだけで、ジカルボン酸を選択的に検出することができるという効果を奏する。
【００３７】
また、従来のジカルボン酸を認識する分子は非極性溶媒中でのみ使用可能であるが、本発明では極性溶媒が使用可能であり、実用性に優るという効果を奏する。
【００３８】
また、本発明に係る診断用キットは、以上のように、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を含む構成を備えているので、哺乳動物の生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患の診断を、前処理を行うことなく蛍光発光を測定するだけで迅速且つ簡便に行うことができるという効果を奏する。
【００３９】
また、本発明に係る先天性脂質代謝異常診断剤は、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有するジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有するジカルボン酸の同一化合物２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を有効成分として含む構成を備えているので、先天性脂質代謝異常の診断を、前処理を行うことなく、蛍光発光を測定するだけで迅速且つ簡便に行うことができるという効果を奏する。また、予備的な新生児マススクリーニングを行えば、全ての人の生体試料について質量分析を行う必要がなくなるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】本発明の実施例２、３において、量子化学計算（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊）により、ジアミジンと１，３−アダマンタン二酢酸との１：１会合体、および、ジアミジンと１，３−フェニレン二酢酸との１：１会合体の最適化構造を求めた結果を示す図である。
【図２】本発明の実施例２において、ジアミジンおよび１，３−アダマンタン二酢酸の溶液をＮＭＲサンプルチューブ内で混合して１ＨＮＭＲ測定を行った結果を示す図である。
【図３】本発明の実施例２、３において、ジアミジンとジカルボン酸が１：１で会合している水溶液から得た単結晶のＸ線結晶構造解析を行った結果を示す図であり、（ａ）はジアミジンと１，３−アダマンタン二酢酸が１：１で会合している水溶液から得た単結晶のＸ線結晶構造解析を行った結果を示す図であり、（ｂ）はジアミジンと１，３−フェニレン二酢酸が１：１で会合している水溶液から得た単結晶のＸ線結晶構造解析を行った結果を示す図である。
【図４】本発明の実施例４において、ジアミジンのみ、ジアミジンと１，３−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、ジアミジンと１，３−アダマンタン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、およびジアミジンと安息香酸とを１：２の比率で混合した溶液の蛍光スペクトルを測定した結果を示す図である。
【図５】本発明の実施例４において、ジアミジンと種々のカルボン酸の混合溶液の蛍光スペクトルについて、ＴＤ−ＤＦＴ（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊）を用いて蛍光波長の予測を行った結果および実測値を示す図である。
【図６】本発明の実施例５において、ジアミジンと種々のジカルボン酸とを１：１の比率で混合した溶液の蛍光スペクトルを測定した結果を示す図である。
【図７】本発明の実施例６において、量子化学計算（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊）により、ジアミジンと飽和脂肪族ジカルボン酸との１：１会合体の最適化構造を求めた結果を示す図である。
【図８】本発明の実施例６において、ジアミジンと種々の飽和脂肪族ジカルボン酸とを１：１の比率で混合した溶液、およびジアミジンと酢酸とを１：２の比率で混合した溶液の蛍光スペクトルを測定した結果を示す図である。
【図９】本発明の実施例７において、ジアミジンのジメチルスルホキシド溶液に、添加するアジピン酸を溶解させる溶媒としてジメチルスルホキシドを用いる場合と、ジメチルスルホキシドの代わりに水を用いる場合の、ジアミジンに対してアジピン酸を０から８当量および０から１２当量の割合で混合した溶液の蛍光スペクトルを測定した結果を示す図である。
【図１０】本発明の実施例９において、ジアミジンを担持した基材と、かかる基材にアジピン酸を加えたものとを紫外線照射下で観察した結果を示す図である。
【図１１】本発明の実施例６において用いた飽和脂肪族ジカルボン酸における同一分子中のカルボキシル基間の距離を示す図である。
【図１２】本発明の実施例６において、１，８−ジアミジノアントラセンおよびピメリン酸の溶液をＮＭＲサンプルチューブ内で混合して１ＨＮＭＲ測定を行った結果を示す図である。
【図１３】本発明に係る診断用キットの一態様を模式的に示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
以下本発明について詳細に説明する。
【００４２】
（Ｉ）ジカルボン酸の検出方法
本発明者らは、これまでに、アントラセンを基本骨格とするジアミジンを、トリカルボン酸であるトリメシン酸誘導体と、３：２の濃度比になるように混合することにより、ジアミジン１分子中の２個のアミジノ基がそれぞれ別のトリカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して５成分の自己集合体が得られることを確認している。
【００４３】
かかる自己集合体では、アミジノ基とカルボキシル基との間でアミジニウム−カルボキシレート塩とよばれる安定な分極型の水素結合が形成されている。このアミジニウム−カルボキシレート塩は、ジメチルスルホキシド（以下、本明細書において、「ＤＭＳＯ」と称することがある。）等の極性溶媒中でも比較的安定な結合を形成することができることが知られている。
【００４４】
本発明者らは、前記課題を解決するために、このアミジニウム−カルボキシレート塩の形成を利用することができないかと考え、アントラセン骨格を有するジアミジンによる、ジカルボン酸の認識について検討を行った。そして、認識する対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基と、それぞれ、アミジニウム−カルボキシレート塩を形成可能な距離にある２個のアミジノ基を有するジアミジンを用いて、当該ジアミジンを当該認識の対象であるジカルボン酸と混合したところ、特定の波長領域に発光ピークを有する蛍光発光を示すことを見出した。
【００４５】
そして、かかる波長領域における蛍光発光は、アントラセン骨格を有するジアミジンとモノカルボン酸とを混合したときには見られない、ジカルボン酸の場合に特有のものであることが判った。かかる結果から、本発明者らは、検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジンを用いることにより、ジカルボン酸を選択的に検出可能であることを見出し本発明を完成させるに至った。
【００４６】
さらに、本発明者らは、検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基間の距離が、ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基間の距離よりも明らかに短い場合にも、当該ジアミジンを当該ジカルボン酸と混合すると、上記と同様の波長領域に発光ピークを有する蛍光発光が観察されることを見出した。かかる場合には、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体は形成されず、ジアミジン２分子が、ジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成していると考えられる。かかる結果から、本発明者らは、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成しているジアミジンを用いることによっても、ジカルボン酸を選択的に検出可能であることを見出し本発明を完成させるに至った。
【００４７】
すなわち、本発明に係るジカルボン酸の検出方法は、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を用い、検出対象試料を前記ジアミジンと接触させる接触工程と、蛍光発光を検出する検出工程とを含む検出方法である。
【００４８】
（Ｉ‐１）本発明に係るジカルボン酸の検出方法において用いられるジアミジン
本発明において用いられるジアミジンは、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、検出対象であるジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体、または、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成可能なジアミジンであれば特に限定されるものではない。
【００４９】
検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有するジアミジンを用いることにより、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体、すなわち、検出対象であるジカルボン酸１分子と、ジアミジン１分子とが、１：１で結合してなる会合体（以下、本明細書において、「１：１会合体」と称することがある。）が形成される。
【００５０】
かかる１：１会合体は、例えば図１に示すように、ジカルボン酸１分子と、ジアミジン１分子との間で、同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと、同一分子内の２個のアミジノ基のそれぞれとにより形成される２つの分極型水素結合、すなわち２つのアミジニウム−カルボキシレート塩によって、前記ジカルボン酸と、前記ジアミジンとが結合してなる会合体である。
【００５１】
前記１：１会合体は、極性溶媒中でも安定な結合を形成することができるため、例えば生体試料中のジカルボン酸を、有機溶媒中に抽出して脱水する必要がなく、そのまま検出することができる。それゆえ、迅速且つ簡便にジカルボン酸を検出することが可能となる。
【００５２】
また、前記１：１会合体は、特定の波長領域に発光ピークを有する蛍光発光を示すため、誘導体化の必要がなく、ジアミジンと検出対象試料とを接触させて蛍光発光を測定するだけでジカルボン酸を選択的に検出することができる。
【００５３】
前記ジアミジンは、検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有していればよい。言い換えれば、前記ジアミジンは、検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基と、それぞれ、アミジニウム−カルボキシレート塩を形成可能な距離にある２個のアミジノ基を有していればよい。すなわち、アントラセン骨格を有するジアミジン分子中の２個のアミジノ基間の距離は、検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基と、それぞれ、アミジニウム−カルボキシレート塩を形成可能な距離となっていればよい。検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基と、それぞれ、アミジニウム−カルボキシレート塩を形成可能な距離であるためには、ジアミジン１分子中の２個のアミジノ基間の距離と、ジカルボン酸１分子中の２個のカルボキシル基間の距離とが近似しているとともに、アミジノ基とカルボキシル基とが相互に対向するような向きとなっていることが好ましい。
【００５４】
なお、前記１：１会合体は、ジアミジン１分子中の２個のアミジノ基間の距離およびジカルボン酸１分子中の２個のカルボキシル基間の距離がともに変動しない剛直な化合物間で形成されると考えられる。これに対し、ジカルボン酸が鎖式ジカルボン酸であるときは、不安定なコンフォーメーションをとるため、ジアミジンによる認識は困難であると考えられる。しかし、本発明者らが、アントラセン骨格を有するジアミジンと、様々なジカルボン酸との間で、前記会合体の形成の有無を確認したところ、驚くべきことに、ジアミジンと、２個のカルボキシル基が鎖状炭化水素のような柔軟な基に結合しているジカルボン酸との間で、予測に反して、前記１：１会合体が形成されることが、ＮＭＲ測定およびＤＯＳＹスペクトルにより確認された。また、かかる１：１会合体においても、前記特定の波長領域に顕著な蛍光発光が認められた。
【００５５】
このように、検出対象であるジカルボン酸の２個のカルボキシル基が、柔軟な基に結合しているジカルボン酸である場合は、ジカルボン酸１分子中の２個のカルボキシル基間の距離が、ジアミジン１分子中の２個のアミジノ基間の距離と近似している場合に限られず、ジアミジン１分子中の２個のアミジノ基間の距離よりも大きい場合にも１：１会合体が形成される。すなわち、ジカルボン酸が柔軟な化合物である場合は、ジカルボン酸１分子中の２個のカルボキシル基間の距離は、ジアミジン１分子中の２個のアミジノ基間の距離に対して、０．７５倍以上であることがより好ましく、０．７５倍以上、３倍以下であることがさらに好ましい。
【００５６】
なお、本発明において、「アントラセン骨格を有するジアミジン」とは、アントラセン骨格に２個のアミジノ基が、直接または間接に結合している化合物であればよい。
【００５７】
また、本発明において、「芳香族ジカルボン酸」とは、１分子中に２個のカルボキシル基を有する芳香族化合物をいい、芳香環に２個のカルボキシル基が、直接または間接に結合している化合物であればよい。
【００５８】
なお、前記ジアミジン１分子中の２個のアミジノ基が、同一分子内の２個のカルボキシル基と、それぞれ、アミジニウム−カルボキシレート塩を形成可能な距離にあるジアミジンを決定する方法は、特に限定されるものではないが、例えば、Ｘ線結晶構造解析、量子化学計算、ＭＭ２等の力場計算等を用いて、検出対象であるジカルボン酸に対して、適切なジアミジンを決定すればよい。
【００５９】
従って、本発明にかかるジカルボン酸の検出方法は、前記接触工程および検出工程に加えて、検出対象であるジカルボン酸に対して、適切なジアミジンを決定する工程を含んでいてもよい。
【００６０】
さらに、本発明者らは、上述したように、検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基の距離が、ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基間の距離よりも明らかに短い場合にも、当該ジアミジンを当該ジカルボン酸と混合すると、上記と同様の波長領域に発光ピークを有する蛍光発光を示すことを見出した。かかる場合には、同一分子内の２個のカルボキシル基の距離が短いために、ジアミジン２分子が、ジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成していると考えられる。
【００６１】
したがって、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジンを用いる場合にも、ジカルボン酸を選択的に検出することが可能となる。そして、かかるジアミジンを用いることにより、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体、すなわち、検出対象であるジカルボン酸２分子と、ジアミジン２分子とが結合してなる会合体（以下、本明細書において、「２：２会合体」と称することがある。）が形成される。
【００６２】
かかる２：２会合体は、ジカルボン酸２分子と、ジアミジン２分子との間で、各ジカルボン酸毎に、同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれが、異なる２分子のジアミジンのアミジノ基のそれぞれに結合して形成される合計４つの分極型水素結合、すなわち４つのアミジニウム−カルボキシレート塩によって、前記ジカルボン酸２分子と、前記ジアミジン２分子とが結合してなる会合体である。
【００６３】
前記２：２会合体は、極性溶媒中でも安定な結合を形成することができるため、例えば生体試料中のジカルボン酸を、有機溶媒中に抽出して脱水する必要がなく、そのまま検出することができる。それゆえ、迅速且つ簡便にジカルボン酸を検出することが可能となる。
【００６４】
また、前記２：２会合体は、特定の波長領域に発光ピークを有する蛍光発光を示すため、誘導体化の必要がなく、ジアミジンと検出対象試料とを接触させて蛍光発光を測定するだけでジカルボン酸を選択的に検出することができる。
【００６５】
前記ジアミジンは、２個のアミジノ基が、アントラセン骨格に直接または間接に結合しているジアミジンであれば特に限定されるものではないが、例えば、前記ジアミジンとしては、アントラセン骨格を構成する２個の異なる炭素原子に、それぞれ、アミジノ基が結合した構造を有する化合物を挙げることができる。かかるジアミジンでは、２個のアミジノ基が剛直なアントラセン骨格に結合しているので、２つのジアミジノ基間の距離が変動できない。それゆえ、特定のジカルボン酸を選択的に検出するために適切なジアミジンを好適に決定することができる。
【００６６】
また、２個のアミジノ基の結合位置も特に限定されるものではなく、検出対象であるジカルボン酸に応じて決定すればよい。例えば、１，８−ジアミジノアントラセン、１，９−ジアミジノアントラセン等を好適に用いることができる。
【００６７】
前記ジアミジンは、どのような製造方法によって製造されたものであってもよいが、例えば、ジアミジノアントラセンを一例として挙げると、例えば、ジシアノアントラセンをトリメチルアルミニウムと塩化アンモニウムと反応させることにより製造することができる。かかる方法により得られるジアミジンは、例えば、Boc（tert−ブトキシカルボニル基）により保護して、カラムクロマトグラフィーにて精製した後、塩酸で脱保護し、水酸化ナトリウム水溶液で中和することにより単離することができる。
【００６８】
（Ｉ‐２）ジカルボン酸
本発明で検出対象とされるジカルボン酸は、１分子中に２個のカルボキシル基を有する化合物であれば特に限定されるものではなく、カルボキシル基以外の他の置換基を有していてもよい。
【００６９】
前記ジカルボン酸は、芳香族ジカルボン酸であってもよいし、脂環式ジカルボン酸であってもよい。かかるジカルボン酸としては、より具体的には、例えば、フタル酸、イソフタル酸、テレフタル酸、１，３−フェニレン二酢酸、１，２−フェニレン二酢酸、１，４−フェニレン二酢酸等の芳香族ジカルボン酸；１，３−アダマンタン二酢酸等の脂環式ジカルボン酸を挙げることができる。
【００７０】
また、上述したように、本発明に係る検出方法によれば、不安定なコンフォーメーションをとる鎖式ジカルボン酸をも良好に検出することができる。前記鎖式ジカルボン酸は、飽和脂肪族ジカルボン酸であってもよく、不飽和脂肪族ジカルボン酸であってもよい。これらの鎖式ジカルボン酸には、生体関連物質が多く含まれ、また、生体試料中の量を測定することにより、疾患の診断に用いることができる化合物が含まれる。
【００７１】
前記飽和脂肪族ジカルボン酸は、１分子中に２個のカルボキシル基を有する直鎖状または枝分かれ状の鎖式飽和脂肪族炭化水素であれば特に限定されるものではないが、例えば、下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
で表される構造を有する化合物を挙げることができる。前記一般式（１）中、ｎは１以上であれば特に限定されるものではないが、１以上２０以下であることがより好ましく、２以上１５以下であることがさらに好ましく、２以上１１以下であることがさらに好ましい。かかるジカルボン酸としては、より具体的には、例えば、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、セバシン酸等を挙げることができる。
【００７２】
また、前記不飽和脂肪族ジカルボン酸としては、例えば、マレイン酸、フマル酸等のジカルボン酸を挙げることができる。
【００７３】
なお、前記ジカルボン酸は１種類のジカルボン酸が単独で検出対象試料中に含まれていてもよいし、２種類以上のジカルボン酸が含まれていてもよい。すなわち、本発明に係るジカルボン酸の検出方法によれば、複数のジカルボン酸を分離することなく検出することができる。
【００７４】
（Ｉ‐３）接触工程
本発明にかかるジカルボン酸の検出方法は、前記ジアミジンを用い、検出対象試料を、前記ジアミジンと接触させる接触工程と、蛍光発光を検出する検出工程とを含んでいればよい。
【００７５】
接触工程では、検出対象試料と前記ジアミジンとを接触させることができれば、その方法は特に限定されるものではない。例えば、検出対象試料と前記ジアミジンとの溶液同士を接触させる方法でもよいし、ジアミジンを固定した基材と検出対象試料の溶液とを接触させる方法であってもよいし、ジアミジンの溶液と固体状の検出対象試料とを接触させる方法であってもよい。検出対象試料中に検出対象であるジカルボン酸が含まれていれば、当該ジカルボン酸とジアミジンとが結合して、前記１：１会合体または２：２会合体が形成される。なお、前記１：１会合体または２：２会合体の形成は、核磁気共鳴スペクトルにおいて、アミジニウム−カルボキシレート塩に基づく特徴的なピークが形成されていることにより確認することができる。また、前記１：１会合体と２：２会合体とは、会合体の形成が強固である場合には、ＤＯＳＹスペクトルにより得られた拡散係数から、分子の体積を計算することにより区別することができる。
【００７６】
本工程において、ジアミジンを溶解する溶媒は有機溶媒であることが好ましい。ジアミジンを溶解する溶媒として使用できる有機溶媒としては、具体的には、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）等のアミド；アセトニトリル等のニトリル；アセトン、２−ブタノン、３−ペンタノン、メチルイソプロピルケトン、メチルｎ−プロピルケトン、３−ヘキサノン、メチルｎ−ブチルケトン等のケトン；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン等のエーテル；ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン等の低級飽和炭化水素；酢酸エチルエステル等のエステル等を挙げることができる。また、前記ジアミジンを溶解する溶媒は、上述した有機溶媒の２種以上の混合物であってもよい。これらの中でも、ジアミジンを溶解する溶媒は、極性溶媒であることがより好ましい。極性溶媒を用いることにより、かかる溶媒に溶解したジアミジンを、生体試料と接触させて、生体試料中のジカルボン酸を、そのまま測定することができる。かかる極性溶媒としては、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）またはこれらの２種類以上の混合物等を挙げることができる。
【００７７】
また、本工程において、検出対象試料を溶解する溶媒としては、特に限定されるものではなく、水性溶媒であっても有機溶媒であってもよい。なお、ここで水性溶媒とは、水または水を含む溶媒をいう。検出対象試料を溶解する溶媒として使用できる有機溶媒としては、具体的には、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）等のアミド；アセトニトリル等のニトリル；メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、イソブチルアルコール、イソペンチルアルコール等のアルコール；アセトン、２−ブタノン、３−ペンタノン、メチルイソプロピルケトン、メチルｎ−プロピルケトン、３−ヘキサノン、メチルｎ−ブチルケトン等のケトン；ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン等のエーテル；ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン等の低級飽和炭化水素；酢酸エチルエステル等のエステル等を挙げることができる。また、前記検出対象試料を溶解する溶媒は、上述した有機溶媒の２種以上の混合物であってもよいし、上述した有機溶媒の１種以上を含む水性溶媒であってもよい。これらの中でも、検出対象試料を溶解する溶媒としては、極性溶媒であることがより好ましい。極性溶媒を用いることにより、生体試料中のジカルボン酸を、そのまま測定することができる。かかる極性溶媒としては、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）、水、またはこれらの２種類以上の混合物等を挙げることができる。
【００７８】
また、用いる溶媒の量も特に限定されるものではなく、検出対象であるジカルボン酸およびジアミジン、接触方法、蛍光発光を測定する手段や装置の性能等に応じて適宜選択すればよい。
【００７９】
また、検出対象試料と前記ジアミジンとを接触させる時間や温度も特に限定されるものではない。
【００８０】
（Ｉ‐４）検出工程
本発明において検出工程は、蛍光発光を検出する工程であればよい。本工程では、前記接触工程において、検出対象であるジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とが結合してなる１：１会合体、または、検出対象であるジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とが結合してなる２：２会合体の蛍光発光を検出する。前記１：１会合体または２：２会合体が発する、特有の波長領域に発光ピークを有する蛍光発光が検出されたときに、検出対象試料中に検出対象であるジカルボン酸が含まれると判断することができる。
【００８１】
検出する蛍光発光は、前記会合体特有の波長領域に発光ピークを有するものであればよい。かかる波長領域は、用いるジアミジン、検出対象であるジカルボン酸、カルボキシル基を２個以上含む他のカルボン酸 (ヒドロキシジカルボン酸等)、カルボキシル基を２個以上含むアミノ酸、および、ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸類、スルホン酸、スルフィン酸等の酸性官能基を２個以上含む化合物（上記酸性官能基が２種以上含まれてもよい）により変動しうる。予め、検出対象であるジカルボン酸に応じて、当該ジカルボン酸を認識可能なジアミジンを選択し、これらの会合体の蛍光スペクトルを測定することにより、検出すべき発光ピークが確認される波長領域を決定すればよい。
【００８２】
例えば、１，８−ジアミジノアントラセンを用いて、ジカルボン酸を検出する場合は、当該１，８−ジアミジノアントラセンとジカルボン酸との１：１会合体および当該１，８−ジアミジノアントラセンとジカルボン酸との２：２会合体の蛍光発光は、好ましくは４３０ｎｍ〜４４０ｎｍの波長領域に発光ピークを有する。
【００８３】
また、検出される蛍光発光の発光ピークの半値幅は特に限定されるものではないが、１２０ｎｍ以下であることがより好ましく、９０ｎｍ以下であることがさらに好ましく、７５ｎｍ以下であることが特に好ましい。かかる半値幅であることにより、ジカルボン酸の検出を高精度に行うことができる。
【００８４】
また、蛍光発光を検出するために用いる励起光の波長も、特に限定されるものではなく、用いるジアミジン、検出対象であるジカルボン酸、カルボキシル基を２個以上含む他のカルボン酸 (ヒドロキシジカルボン酸等)、カルボキシル基を２個以上含むアミノ酸、および、ホスフィン酸、ホスホン酸、リン酸類、スルホン酸、スルフィン酸等の酸性官能基を２個以上含む化合物（上記酸性官能基が２種以上含まれてもよい）等によって、適宜選択すればよい。
【００８５】
また、本発明にかかる検出方法では、検出対象試料中にモノカルボン酸が含まれていても、ジアミジンとモノカルボン酸とを混合する場合の蛍光発光はジカルボン酸の場合とは異なる波長領域である。それゆえ、本発明に係るジカルボン酸の検出方法によれば、ジカルボン酸を選択的に検出することができる。
【００８６】
（ＩＩ）検出対象試料として生体試料を用いるジカルボン酸の検出方法
哺乳動物の疾患の中には、生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患がある。
【００８７】
上述したように、本発明に係る検出方法によれば、不安定なコンフォーメーションをとる鎖式ジカルボン酸をも良好に検出することができる。生体試料に含まれるジカルボン酸は主として鎖式ジカルボン酸である。それゆえ、本発明に係る検出方法では、前記検出対象試料として、哺乳動物から採取された生体試料を用いた場合も、好適にジカルボン酸を検出することができる。
【００８８】
また、本発明に係る検出方法によれば、極性溶媒中で好適に鎖式ジカルボン酸を検出することができるので、水性の生体試料は、有機溶媒に抽出する必要なくそのままジカルボン酸の検出に供することができる。
【００８９】
検出対象試料として哺乳動物から採取された生体試料を用いる本発明のジカルボン酸の検出方法は、前記疾患の診断方法であるということもできる。
【００９０】
かかる診断方法は、哺乳動物の生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患の診断方法であって、前記検出対象試料として、哺乳動物から採取された生体試料を用いて、上述した本発明の検出方法によりジカルボン酸を検出し、検出結果に基づいて疾患の有無を診断する方法である。
【００９１】
かかる診断方法は、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を用い、哺乳動物から採取された生体試料を、前記ジアミジンと接触させる接触工程と、蛍光発光を検出する検出工程とを含んでいればよい。ここで、前記診断方法に用いられるジアミジン、接触工程および検出工程については、前記（Ｉ）で説明したとおりであるので、ここでは説明を省略する。
【００９２】
またかかる診断方法において、検出対象となるジカルボン酸は、前記（Ｉ−２）で説明したジカルボン酸のうち、生体試料中に含まれうる化合物であれば特に限定されるものではない。中でも、生体試料中に含まれるジカルボン酸は、主として鎖式ジカルボン酸であると考えられる。
【００９３】
前記診断方法により、診断することができる疾患は、被検体から採取された生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患であれば特に限定されるものではなくどのような疾患でも診断可能である。
【００９４】
ここで、前記生体試料としては、特に限定されるものではなく、尿、血液、血清、血漿、唾液、関節液、腹水、胸水、髄液、痰等を挙げることができる。
【００９５】
例えば、先天性脂質代謝異常の１つであるジカルボン酸尿症の場合は、患者の尿中に含まれる、グルタル酸（前記一般式（１）中ｎ＝３）、アジピン酸（前記一般式（１）中ｎ＝４）、スベリン酸（前記一般式（１）中ｎ＝６）、セバシン酸（前記一般式（１）中ｎ＝８）の量が顕著に高い。したがって、これらのジカルボン酸との間で、前記会合体を形成するジアミジンを用いれば、事前の誘導体化の必要がなく、当該ジアミジンと、前記生体試料とを接触させて、蛍光発光を測定するだけで、ジカルボン酸を選択的に検出することができる。このようにして、ジカルボン酸尿症の場合は、前記ジカルボン酸が検出されたときに、疾患に罹っていると診断することができる。
【００９６】
かかる先天性脂質代謝異常、特にジカルボン酸尿症の診断では、前記ジアミジンとして、例えば１，８−ジアミジノアントラセンを好適に用いることができる。１，８−ジアミジノアントラセンは、グルタル酸、アジピン酸、スベリン酸およびセバシン酸との間で、安定な前記会合体を形成し、図８に示されるように、４３０ｎｍ〜４４０ｎｍの波長領域に特徴的な発光ピークを有する蛍光発光を示す。かかる蛍光発光は、１，８−ジアミジノアントラセンとモノカルボン酸である安息香酸とを混合した場合には見られない蛍光発光であり、アミジニウム‐カルボキシレート塩が形成されることにより生成した、１：１会合体または２：２会合体を表している。したがって、前記生体試料特に尿と、１，８−ジアミジノアントラセンとを接触させたときに、４３０ｎｍ〜４４０ｎｍの波長領域に特徴的な発光ピークが検出されれば、ジカルボン酸尿症である可能性が高いと診断される。
【００９７】
かかる診断方法では、ジカルボン酸を選択的に検出でき、事前にカルボン酸を修飾するなどの必要がなく、ジカルボン酸と生体試料とを接触させて約１分ほどの測定時間で、ジカルボン酸を検出することができる。それゆえ、精密測定前の簡易型の診断方法として使用し、精密測定に要する時間と費用を節約することが可能となる。
【００９８】
また、新生児マススクリーニングの対象とすることが望まれているジカルボン酸尿症等の先天的代謝異常による疾患について、本発明に係る診断方法により予備的なスクリーニングを行えば、全ての人の尿について質量分析を行う必要がなくなると考えられる。
【００９９】
（ＩＩＩ）診断用キット
本発明には前述した診断に用いる診断用キットも含まれる。本発明にかかる診断用キットは、哺乳動物の生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患の診断用キットであり、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）を含んでいればよい。
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン。
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン。
【０１００】
かかる診断用キットを用いれば、ジカルボン酸を選択的に検出でき、事前にカルボン酸を修飾するなどの必要がなく、ジカルボン酸と生体試料とを接触させて約１分ほどの測定時間で、ジカルボン酸を検出することができる。それゆえ、精密測定前の簡易型の診断に使用し、精密測定に要する時間と費用を節約することが可能となる。
【０１０１】
ここで、本発明の診断用キットに用いられるジアミジンは、前記（ＩＩ）で説明したとおりであるので、ここでは説明を省略する。
【０１０２】
本発明に係る診断用キットは、前記ジアミジンを含んでいればよい。例えば、本発明に係る診断用キットとしては、基材を含み、当該基材に前記ジアミジンが担持されている診断用キットを挙げることができる。前記基材の材質としては、前記ジアミジンを担持できる材質であれば特に限定されるものではなく、例えば、ガラス繊維、綿、紙、繊維、布、ガラス、プラスチック、ケイ素等を好適に用いることができる。
【０１０３】
また、前記基材の形状は特に限定されるものではなく、例えば、平板状、フィルム状、繊維状、粒子状等の形状であればよい。また、前記基材の大きさも特に限定されるものではない。
【０１０４】
前記基材に前記ジアミジンを担持する方法も特に限定されるものではないが、例えば、前記ジアミジンを含有する溶液を基材に塗布する方法、前記ジアミジンを含有する溶液に基材を浸漬する方法、ジアミジンのアントラセン部分に予め官能基を導入し、上記基材に化学的に結合させる化学修飾による方法等を挙げることができる。
【０１０５】
また、前記基材に前記ジアミジンが担持されている診断用キットを用いる場合の診断方法としては、かかる診断用キットを、生体試料と接触させて、接触後に診断用キットの蛍光発光を検出することにより診断を行う方法を好適に用いることができる。なお、検出方法としては、例えば、診断用キットにジカルボン酸を添加した標品とモノカルボン酸を添加した標品を作成しておき、紫外線照射下で、生体試料と接触させたときの色を、標品の色と目で見比べる方法を挙げることができる。
【０１０６】
本発明に係る診断用キットにより、診断を行うことが可能な疾患については、前記（ＩＩ）で説明したとおりであるのでここでは説明を省略する。
【０１０７】
本発明では、検出対象であるジカルボン酸との間で、アミジニウム‐カルボキシレート塩を形成して１：１会合体または２：２会合体を形成可能なジアミジンを、決定することができる。それゆえ、鎖長の異なるジカルボン酸または異なる鎖長の範囲を有するジカルボン酸群をそれぞれ検出するために適した複数のジアミジンを用いることにより、試料中に含まれるジカルボン酸の鎖長を略特定することが可能となる。例えば、図１３に模式的に示すように、短鎖ジカルボン酸を検出するためのジアミジンを用いて短鎖ジカルボン酸用キットＡを作製する。同様に、中鎖ジカルボン酸および長鎖ジカルボン酸をそれぞれ検出するためのジアミジンを用いて中鎖ジカルボン酸用キットＢおよび長鎖ジカルボン酸用キットＣを作製する。かかる複数のキットをそれぞれ用いて、試料を測定することにより、試料中に含まれるジカルボン酸の鎖長を略特定することが可能となる。例えば、図１３に示す場合のように、短鎖ジカルボン酸を検出するための短鎖ジカルボン酸用キットＡのみによりジカルボン酸が検出された場合には、試料中には、短鎖ジカルボン酸のみが含まれ、中鎖ジカルボン酸および長鎖ジカルボン酸は含まれていないと診断することができる。なお、短鎖ジカルボン酸、中鎖ジカルボン酸および長鎖ジカルボン酸とは本技術分野において通常の意味に用いられるが、例えば、短鎖ジカルボン酸とは、炭素数が２〜５のジカルボン酸を、中鎖ジカルボン酸とは、炭素数が６〜１１のジカルボン酸を、長鎖ジカルボン酸とは、炭素数が１２〜２４のジカルボン酸をいう。
【０１０８】
従って、本発明に係る診断用キットには、異なる鎖長の範囲を有するジカルボン酸とそれぞれ前記会合体を形成する複数のジアミジンを含む診断用キットも含まれる。例えば、基材を含み、当該基材に前記ジアミジンが担持されている診断用キットでは、かかる複数のジアミジンが、複数の基材にそれぞれ担持されている診断用キットを好適に用いることができる。かかる診断用キットを用いれば、複数の基材を用いて測定を行うことにより、試料中に含まれるジカルボン酸の鎖長を略特定することができる。
【０１０９】
また、本願発明には、検出対象試料を異なる鎖長の範囲を有するジカルボン酸とそれぞれ前記会合体を形成する複数のジアミジンを含む診断用キットを用いて測定する、ジカルボン酸の検出方法、または、診断方法も含まれる。
【０１１０】
（ＩＶ）診断剤
上述したように、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、検出対象であるジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を用いれば、不安定なコンフォーメーションをとる鎖式ジカルボン酸をも良好に検出することができる。それゆえ、かかるジアミジンは、生体試料に含まれるジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる先天性脂質代謝異常の診断剤として好適に用いることができる。それゆえ、本発明にはかかる先天性脂質代謝異常の診断剤も含まれる。
【０１１１】
すなわち、本発明にかかる診断剤は、アントラセン骨格を有するジアミジンであって、以下の（ｉ）または（ｉｉ）：
（ｉ）下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有するジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基のそれぞれと結合可能な２個のアミジノ基を同一分子内に有し、当該２個のアミジノ基がそれぞれ前記２個のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸１分子とジアミジン１分子とからなる会合体を形成するジアミジン
（ｉｉ）ジアミジン２分子が、下記一般式（１）
ＨＯＯＣ‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＯＯＨ    ・・・（１）
（一般式（１）中、ｎは１以上１１以下を示す。）
で表される構造を有するジカルボン酸の同一化合物２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる会合体を形成するジアミジン
を有効成分として含むものであればよい。
【０１１２】
前記ジアミジンとしては、例えば前記（Ｉ−１）で説明したジアミジンを挙げることができる。
【０１１３】
中でも例えば、１，８−ジアミジノアントラセンは、前記一般式（１）で表される構造を有するジカルボン酸のうち、ｎが２以上１１以下の全てのジカルボン酸と接触させたときに、同じ特定の波長領域に発光ピークを有する蛍光発光を示す。それゆえ、１，８−ジアミジノアントラセンは、先天性脂質代謝異常の診断剤として、好適に用いることができる。
【実施例】
【０１１４】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。なお、以下の実施例において用いた機器分析方法、量子化学計算方法および試薬を以下に示す。
【０１１５】
〔核磁気共鳴スペクトル〕
核磁気共鳴スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ ＤＲＸ−５００（１Ｈ：５００ＭＨｚ、１３Ｃ：１２５．８ＭＨｚ）により測定した。溶媒にＣＤＣｌ３を用いた場合はテトラメチルシラン（以下、ＴＭＳと略記する。）を内部標準として用い、Ｄ２ＯおよびＤＭＳＯ−ｄ６を用いた場合は、ＴＭＳのＣＤＣｌ３溶液をガラスキャピラリーに封管したものを外部標準として用いた。化学シフトはδ値で表示し、次の省略形を用いた。S（一重線）、d（二重線）、t（三重線）、m（多重線）、br（幅広い線）。
【０１１６】
〔蛍光スペクトル〕
蛍光スペクトルは、日本分光ＦＰ−６２００分光蛍光光度計を用いて測定した。光学セルは、同社製の光路長１．０ｃｍの四面透過型石英製角セルを使用した。また、蛍光スペクトルはローダミンＢを標品として用い、補正を行った。
【０１１７】
〔ＵＶスペクトル〕
ＵＶスペクトルは、ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＵＶ ２５５０紫外可視分光光度計を用いて測定した。ＵＶセルはアズワン社製の光路長１．０ｃｍの石英ガラス製スクリューキャップ付き二面透過型石英製四角セルを使用した。
【０１１８】
〔量子化学計算〕
量子化学計算にはＧａｕｓｓｉａｎ ０９Ｗ ｒｅｖ．Ａ０２を使用した。
【０１１９】
〔Ｘ線結晶構造解析〕
Ｘ線結晶構造解析には(株)リガク社製ＲＡＳＡ−７Ｒを使用し、構造解析には同社製CrystalStructureを使用した。
【０１２０】
〔試薬〕
カラムクロマトグラフィーによる生成物の分離には、ワコーゲルＣ−３００を用いた。反応溶媒は通常、市販されている有機合成用溶媒をそのまま使用し、必要に応じて脱水、蒸留などにより精製して使用した。試薬類は特に精製することなく、市販品をそのまま使用した。
【０１２１】
〔実施例１：１，８−ジアミジノアントラセンの合成〕
＜１，８−ビス（tert−ブトキシカルボニルアミノ−イミノ−メチル）アントラセンの合成＞
アルゴン雰囲気下、塩化アンモニウム（６００ｍｇ、１１．２ｍｍｏｌ）に乾燥トルエン１０ｍｌを加え、０℃に冷却後、２．０Ｍのトリメチルアルミニウム／トルエン溶液（５．５９ｍｌ、１１．２ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下し、０℃で１時間撹拌したのち、室温に昇温した。１，８−ジシアノアントラセン（１００ｍｇ、０．４３８ｍｍｏｌ）を乾燥トルエン１００ｍｌに懸濁させ、カヌレーションによって反応容器に加えた後、1日間加熱還流した。１ＨＮＭＲで目的物の生成を確認したのち、反応溶液に３００ｍｌのメタノールを加え、沈澱したアルミナをセライトを用いて吸引濾過、ろ液を濃縮、乾燥したところ、黄色固体を得た。得られた黄色固体にＴＨＦ１０ｍｌを加えて懸濁させ、０℃に冷却後、１Ｎ−ＮａＯＨ水溶液１０．２ｍｌを加えてｐＨ１２以上にしたのち、ジtert−ブチルジカルボネート（２６０ｍｌ，１．１３ｍｍｏｌ）を素早く加え、室温で１．５時間撹拌した。目的物の生成をＴＬＣ（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で確認したのち反応を停止させ、酢酸エチル、食塩水を加えて分液し、水層を除去後、有機層を飽和食塩水で洗浄、硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮・減圧下乾燥することにより黄色固体を得た。得られた固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）で分離精製し、１，８−ビス（tert−ブトキシカルボニルアミノ−イミノ−メチル）アントラセンを黄色固体（１０３．２ｍｇ、収率：５１％）として得た。ｍｐ：１３６．５℃(dec.)。HRMS (FAB,NBA) m/z = 463.2344(calculated for [M+H]＋: 463.2345)。
１H NMR (500MHz, CD３OD) δ = 9.34 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.30 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.81 (d, J = 6.8, 2H), 7.67 (dd, J = 8.6 , 6.8 Hz, 2H), 1.63 (s, 18H)。
１３C NMR (125MHz, CD３OD) ; δ = 171.3 (Cq), 164.6 (Cq), 135.5 (Cq), 133.4 (Cq), 132.4 (CH), 129.8 (Cq), 129.0 (CH), 128.2 (CH), 126.3 (CH), 123.6 (CH), 81.1 (Cq), 28.8 (CH３)。
【０１２２】
＜アミジン塩酸塩（１，８−ジアミジノアントラセンジヒドロクロライド）の合成＞
１，８−ビス（tert−ブトキシカルボニルアミノ−イミノ−メチル）アントラセン（９９．０ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）をジエチルエーテル（５ｍｌ）および出来るだけ少量の蒸留水を加えて溶解させ、０℃に冷却後、４Ｎ−塩酸（５ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）を加えて、室温で１５分撹拌した。ＴＬＣにより１，８−ビス（tert−ブトキシカルボニルアミノ−イミノ−メチル）アントラセンの消失を確認後、反応を停止させ、有機層を除去し、水層を濃縮・減圧下乾燥することによりアミジン塩酸塩（７０．０ｍｇ、９８％）を黄色固体として得た。ｍｐ：２３２．５℃(dec.)。元素分析 計算値C１６H１６Cl２N４・H２O; C:54.40, H:5.14, N:15.86,測定値C:54.09, H:4.62, N:15.61。
１H NMR (500 MHz, D２O, TMS in CDCl３ as external standard) δ = 8.86 (s, 2H), 8.43 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.71 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 2H)。
１３C NMR (125 MHz, D２O, TMS in CDCl３ as external standard) δ = 166.8 (Cq), 133.3 (CH), 131.3 (Cq), 129.2 (CH), 128.9 (CH), 127.5 (Cq), 126.5 (Cq), 125.0 (CH), 119.0 (CH)。
【０１２３】
＜１，８−ジアミジノアントラセンの合成＞
得られたアミジン塩酸塩（１２１ｍｇ，０．３６１ ｍｍｏｌ）を２ｍｌの蒸留水に溶解させ、０℃に冷却した２Ｎ−ＮａＯＨ水溶液（１５ｍｌ、３０ｍｍｏｌ）に１滴ずつ５分かけて加えたのち、析出した白色沈澱を濾過後、蒸留水で洗浄、減圧下乾燥することで、１，８−ジアミジノアントラセン（８９．３ｍｇ、９４％）を白色固体として得た。ｍｐ：２１７．５℃(dec.)。HRMS (FAB,NBA) m/z = 263.1299(calculated for [M+H]＋: 263.1297)。
１H NMR (500 MHz, DMSO-d６, TMS in CDCl３ as external standard) δ = 9.80 (s, 1H), 9.17 (s, 1H), 8.62 (m, 2H), 8.04 (m, 4H)。
１３C NMR (125 MHz, DMSO-d６, TMS in CDCl３ as external standard) δ = 165.4 (Cq), 138.4 (Cq), 132.1 (Cq), 129.7 (CH), 128.9 (Cq), 127.7 (CH), 126.0 (CH), 125.2 (CH), 123.9 (CH)。
【０１２４】
＜１，８−ジアミジノアントラセン二塩酸塩の構造解析＞
アミジン塩酸塩の水溶液から得た単結晶のＸ線結晶構造解析を行った。単結晶構造から、２個のアミジノ基はアントラセン環に対して４０〜７０°の角度をとっており、２個のアミジノ基間の距離は５２６ｐｍであることがわかった。
【０１２５】
〔実施例２：１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸との会合体の形成〕
１，８−ジアミジノアントラセンのカルボン酸認識部位である２個のアミジノ基の間の距離（５２６ｐｍ）に適合する、カルボキシル基間の距離を有する１，３−アダマンタン二酢酸を用いて、ジアミジンのジカルボン酸認識を検討した。
【０１２６】
＜ジアミジンのジカルボン酸認識における量子化学計算による考察＞
量子化学計算(Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊)により、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸の１：１会合体の最適化構造を求めた。結果を図１に示す。
【０１２７】
図１に示す最適化構造より、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸の１：１会合体はひずみの少ない構造であることが示された。この結果に基づき、１，３−アダマンタン二酢酸を、１，８−ジアミジノアントラセンを用いたジカルボン酸認識のターゲット分子として用いた。
【０１２８】
＜１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸との会合体の形成＞
１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸とをＤＭＳＯ中において１：１の比率で混合し、会合体の形成に関する情報を得るために、１ＨＮＭＲ測定を行った。
【０１２９】
具体的には、１，８−ジアミジノアントラセンおよび１，３−アダマンタン二酢酸のＤＭＳＯ−ｄ６溶液を調製し、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸とが１：１の比率となるようにＮＭＲサンプルチューブ内で混合し、１．８９ｍＭ（６３０μｌ）の会合体の溶液を調製した。会合体の溶液は無色であった。１ＨＮＭＲ測定の結果を図２に示す。
１H NMR (500 MHz, DMSO-d６, TMS in CDCl３ as external standard) ; δ (ppm) =14.2 (br, 4H), 9.45 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 9.29 (br, 4H), 8.94 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 8.39 (d, J = 6.7Hz, 2H), 8.27 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.48 (s, 2H), 2.31 (br s, 8H), 2.11 (br s, 4H), 1.84 (br s, 4H)。
【０１３０】
＜ＮＭＲ測定結果の検討＞
得られたＮＭＲスペクトルより、ジアミジンに由来するシグナルの低磁場シフトと、１，３−アダマンタン二酢酸に由来するシグナルのシフト変化が観察された。また、１４ｐｐｍと９ｐｐｍ付近に、アミジニウム−カルボキシレート塩の結合を示唆する窒素上の水素のシグナルが観測された。この結果から、ＤＭＳＯ中においてジアミジンと１，３−アダマンタン二酢酸とがアミジニウム−カルボキシレート塩を形成して会合していることが示された。
【０１３１】
＜ＤＯＳＹ ＮＭＲによる会合体の拡散係数および分子体積の算出＞
ＤＯＳＹ（Diffusion Ordered Spectroscopy）とは、個々の分子の拡散係数の違いを利用して混合物のＮＭＲシグナルをスペクトル上で分割して観測する方法である。この手法を利用することによって、１，８−ジアミジノアントラセンおよび１，３−アダマンタン二酢酸の混合物の拡散係数を測定した。
【０１３２】
１，８−ジアミジノアントラセンのみのＤＭＳＯ−ｄ６溶液、１，３−アダマンタン二酢酸のみのＤＭＳＯ−ｄ６溶液、および両者を１：１の比率で混合した溶液（１．８９ｍＭ）のそれぞれのＤＯＳＹスペクトルを測定したところ、分子の拡散係数の差に基づいて、二次元スペクトルが得られた。
【０１３３】
次に、ＤＯＳＹの測定結果と下記計算式（２）から、各化合物の拡散係数Ｄを求めた。
ｌｎ（Ｉｇ／Ｉ０）＝−［γ２δ２Ｇ２（Δ-δ／３）］Ｄ        （２）
なお、計算式（２）中、γは磁気回転比、Ｉｇはピーク強度、Ｉ０はＧ＝０時のピーク強度、δはグラジエントの継続時間、Δは拡散時間、Ｇはグラジエント強度を示す。
【０１３４】
得られた拡散係数ＤとStokes-Einstein式（３）より、化合物を球と見なしたときの半径ｒと見かけの体積Ｖを求めた。結果を表１に示す。
Ｄ＝ｋＢＴ／６πηｒ          （３）
なお、式（３）中、ｋＢはボルツマン定数、Ｔは温度、ηは粘度、ｒは分子の半径を示す。
【０１３５】
【表１】
2012047697.tif 000003
【０１３６】
測定の結果、１，８−ジアミジノアントラセンおよび１，３−アダマンタン二酢酸の混合溶液中のスペクトルからは、それぞれが単独に存在するよりも大きい体積を持つ分子が存在することを表す拡散係数が得られた。また、１，８−ジアミジノアントラセンおよび１，３−アダマンタン二酢酸の混合溶液から得られた拡散係数から算出した分子体積は、１，８−ジアミジノアントラセンのみから得られた体積と１，３−アダマンタン二酢酸のみから得られた体積の和に近いことから、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸を混合した場合には、１：１会合体が生成していることが明らかになった。
【０１３７】
＜Ｘ線結晶構造解析＞
会合体の水溶液から得た単結晶のＸ線結晶構造解析を行った結果を図３（ａ）に示す。得られた構造から、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸は、１：１で会合し、２つのアミジニウム−カルボキシレート塩が形成されていることが明らかとなった。以上の結果より、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸とを１：１の比率で混合すると、１：１会合体が形成することが確認された。
【０１３８】
〔実施例３：１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸との会合体の製造〕
１，８−ジアミジノアントラセンのカルボン酸認識部位である２個のアミジノ基の間の距離（５２６ｐｍ）に適合する、カルボキシル基間の距離を有する１，３−フェニレン二酢酸を用いて、ジアミジンのジカルボン酸認識を検討した。
【０１３９】
＜ジアミジンのジカルボン酸認識における量子化学計算による考察＞
１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸の１：１会合体の量子化学計算(Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊)による最適化構造を図１に示す。
【０１４０】
図１に示す最適化構造より、アントラセンを基本骨格とするジアミジンと１，３−フェニレン二酢酸との１：１会合体はひずみの少ない構造であることが示された。この結果に基づき、１，３−フェニレン二酢酸を、１，８−ジアミジノアントラセンを用いたジカルボン酸認識のターゲット分子として用いた。
【０１４１】
＜１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸との会合体の形成＞
１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸とをＤＭＳＯ中において１：１の比率で混合し、会合体の形成に関する情報を得るために、１ＨＮＭＲ測定を行った。
【０１４２】
具体的には、１，８−ジアミジノアントラセンおよび１，３−フェニレン二酢酸のＤＭＳＯ−ｄ６溶液を調製し、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸とが１：１の比率となるようにＮＭＲサンプルチューブ内で混合し、１．８９ｍＭ（６３０μｌ）の会合体の溶液を調製した。会合体の溶液は無色であった。１H NMR (500 MHz, DMSO-d６, TMS in CDCl３ as external standard) δ =13.4 (br s, 4H, NH) 9.46 (br s, 5H, NH+CH), 9.34 (s, 1H), 8.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 8.42 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 8.27 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 8.13 (br s, 1H), 7.68 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 3.1 Hz, 2H)。
【０１４３】
＜ＮＭＲ測定結果の検討＞
得られたスペクトルより、１，８−ジアミジノアントラセンおよび１，３−フェニレン二酢酸に由来するシグナルのシフト変化ならびにアミジニウム−カルボキシレートの結合形成を表す窒素上の水素のシグナルが観測された。この結果から、ＤＭＳＯ中においてジアミジンと１，３−フェニレン二酢酸とがアミジニウム−カルボキシレート塩を形成して会合していることが示された。
【０１４４】
＜ＤＯＳＹ ＮＭＲによる会合体の拡散係数および分子体積の算出＞
次に、会合体の分子体積に関する情報を得るために、実施例２と同様にして、ＤＯＳＹ ＮＭＲ測定を行った。結果を表２に示す。
【０１４５】
【表２】
2012047697.tif 000004
【０１４６】
ＤＯＳＹ測定の結果、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸との混合溶液中のスペクトルからは、それぞれが単独に存在するよりも大きい体積を持つ分子が存在することを表す拡散係数が得られた。また、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸の混合溶液から得られた拡散係数から算出した分子体積は、１，８−ジアミジノアントラセンのみから得られた体積と１，３−フェニレン二酢酸のみから得られた体積の和に近いことから、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸とを混合した場合には、１：１会合体が生成していることが明らかになった。
【０１４７】
＜Ｘ線結晶構造解析＞
会合体の水溶液から得た単結晶のＸ線結晶構造解析を行った結果を図３（ｂ）に示す。会合体の水溶液から得た単結晶のＸ線結晶構造解析を行った結果、ジアミジンと１，３−フェニレン二酢酸は１：１で会合していることが明らかとなった。なお、図３（ｂ）では、結晶中でのパッキング（圧縮効果等）により、アミジニウム−カルボキシレート２個のうち１個では、６員環が形成されていないが、溶液中では２個のアミジニウムーカルボキシレートが形成されていると考えられる。以上の結果より、ジアミジンと１，３−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合すると、１：１会合体が形成することが確認された。
【０１４８】
〔実施例４：蛍光発光特性を有するジアミジンの性質とジカルボン酸認識〕
＜１，８−ジアミジノアントラセンの蛍光発光特性＞
１，８−ジアミジノアントラセン単独のＤＭＳＯ溶液は蛍光発光を示さなかったが、安息香酸を添加したところ、顕著な蛍光発光を示した。１，８−ジアミジノアントラセンでは、光励起時にアミジノ基の２個の窒素上の電子がアントラセン部位へ流れ込むことにより消光現象（光誘起電子移動）が起こっていると考えられる。また、１，８−ジアミジノアントラセンに安息香酸を加えることで発光を示したのは、カルボン酸からプロトンを受け取ったアミジノ基がアミジニウムとなり、光励起時に窒素上の電子がアントラセン部位へ流れ込むことが抑制されたためであると考えられる。
【０１４９】
１，８−ジアミジノアントラセンとカルボン酸とを混合すると蛍光発光が観察されることが明らかとなったので、蛍光測定を用いて、１，８−ジアミジノアントラセンのカルボン酸認識について検討した。
【０１５０】
＜蛍光スペクトルの比較＞
１，８−ジアミジノアントラセンのみ、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、および１，８−ジアミジノアントラセンと安息香酸とを１：２の比率で混合した溶液の蛍光スペクトルを測定し、比較した。蛍光スペクトルの測定結果を図４に示す。
【０１５１】
具体的には、１，８−ジアミジノアントラセンの２５μＭ ＤＭＳＯ溶液３ｍｌを光学セルに入れ、５ｍＭのカルボン酸のＤＭＳＯ溶液を、任意のモル比率となるようにマイクロシリンジを用いて光学セル内に添加し、パスツールピペットでよく混ぜて均一にした後に、３４８ｎｍの励起波長で励起し、蛍光測定を行った。
【０１５２】
図４に示すように、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、および、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液では、短波長側（４３０〜４４０ｎｍの波長領域）に発光ピークを有する蛍光発光が観測された。これに対して、モノカルボン酸である安息香酸を混合した場合は、長波長側（４６０〜４７０ｎｍの波長領域）に発光ピークを有する蛍光発光が観測された。短波長側の蛍光発光がアミジニウム−カルボキシレート塩の結合形成に由来し、長波長側の蛍光発光が解離状態のアミジニウム[アミジン・２Ｈ＋]に由来すると考えられる。
【０１５３】
＜ＴＤ−ＤＦＴ（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊）を用いた蛍光スペクトルの予測＞
次に、１，８−ジアミジノアントラセンと種々のカルボン酸の混合溶液の蛍光スペクトルについて、ＴＤ−ＤＦＴ（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊）を用いて蛍光波長の予測を行った。結果を図５に示す。図５中、「λｍａｘ  ｃａｌｃ」はＴＤ−ＤＦＴ（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊）による計算の結果を、「λｍａｘ  ｅｘｐ」は実測値を示す。
【０１５４】
ＴＤ−ＤＦＴ（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊）による計算の結果、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸との１：１会合体、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸との１：１会合体、および１，８−ジアミジノアントラセンと安息香酸との１：２会合体はいずれも短波長側に蛍光発光の発光ピークを有し、アミジニウム[アミジン・２Ｈ＋]は長波長側に蛍光発光の発光ピークを有することがわかった。この結果から、アミジニウム−カルボキシレート塩を形成すると、短波長側に蛍光発光が観測されることがわかった。１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸との１：１会合体と、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸との１：１会合体とは、実測値とよく一致した。しかし、１，８−ジアミジノアントラセンと安息香酸との１：２会合体の場合は、蛍光測定により求めた実測値ではアミジニウム[アミジン・２Ｈ＋]とほぼ同じ値が得られており、安息香酸を用いた場合には１，８−ジアミジノアントラセンと安息香酸との１：２会合体が安定に形成していないことがわかった。
【０１５５】
以上より、１，８−ジアミジノアントラセンは、ＤＭＳＯ中において単独では発光しないが、ジカルボン酸と混合して蛍光スペクトル測定を行うと、モノカルボン酸である安息香酸と混合した場合には見られない短波長側（４３０〜４４０ｎｍの波長領域）に蛍光発光の発光ピークが観測され、この蛍光発光がアミジニウム−カルボキシレート塩の形成を表していることが示された。すなわち、前記のようにして、モノカルボン酸とジカルボン酸を蛍光発光の波長で識別することができることが確認された。
【０１５６】
なお、蛍光測定で使用する励起波長は、１，８−ジアミジノアントラセンと種々のカルボン酸を任意の比率で混合し、ＵＶ測定により等吸収点を確認することにより行った。
【０１５７】
〔実施例５：１，８−ジアミジノアントラセンと２個のカルボキシル基間の距離が異なる種々のジカルボン酸とを用いたときの蛍光スペクトルの比較〕
１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、１，８−ジアミジノアントラセンと１，２−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、１，８−ジアミジノアントラセンと１，４−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、１，８−ジアミジノアントラセンとフタル酸とを１：１の比率で混合した溶液、および、１，８−ジアミジノアントラセンとイソフタル酸とを１：１の比率で混合した溶液の蛍光スペクトルを測定し、比較した。蛍光スペクトルの測定結果を図６に示す。
【０１５８】
具体的には、１，８−ジアミジノアントラセンの２５μＭ ＤＭＳＯ溶液３ｍｌを光学セルに入れ、５ｍＭのカルボン酸のＤＭＳＯ溶液を、１：１のモル比率となるようにマイクロシリンジを用いて光学セル内に添加し、パスツールピペットでよく混ぜて均一にした後に、３４８ｎｍの励起波長で励起し、蛍光測定を行った。
【０１５９】
図６に示すように、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、１，８−ジアミジノアントラセンと１，３−アダマンタン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液、および、１，８−ジアミジノアントラセンと１，２−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液では、短波長側（４３０〜４４０ｎｍの波長領域）に蛍光発光の発光ピークが観測された。これに対して、１，８−ジアミジノアントラセンとフタル酸とを１：１の比率で混合した溶液、１，８−ジアミジノアントラセンとイソフタル酸とを１：１の比率で混合した溶液、および、１，８−ジアミジノアントラセンと１，４−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液では、長波長側（４５０〜４７０ｎｍの波長領域）に蛍光発光の発光ピークが観測された。１，８−ジアミジノアントラセンとイソフタル酸とを１：１の比率で混合した溶液、および、１，８−ジアミジノアントラセンと１，４−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液では４５０ｎｍ付近に蛍光発光が観測されたが、これは前記アミジニウムーカルボキシレートとアミジニウの両方が溶液中で生成し、平衡混合物で存在していると考えられる。また、１，８−ジアミジノアントラセンと１，２−フェニレン二酢酸とを１：１の比率で混合した溶液で、短波長側に蛍光発光が観測されたのは、若干の歪みが生じるものの、１：１会合体が生成しているためであると考えられる。
【０１６０】
かかる結果より、２個のアミジノ基が、検出対象であるジカルボン酸の同一分子内の２個のカルボキシル基と、それぞれ、アミジニウム−カルボキシレート塩を形成可能な距離にある場合に、ジカルボン酸を特徴的な蛍光発光の波長で識別することができることが確認された。
【０１６１】
〔実施例６：１，８−ジアミジノアントラセンによる飽和脂肪族ジカルボン酸の認識についての検討〕
１，８−ジアミジノアントラセンと種々の飽和脂肪族ジカルボン酸とを１：１の比率で混合した溶液、および１，８−ジアミジノアントラセンと酢酸とを１：２の比率で混合した溶液の蛍光スペクトルを測定し、比較した。飽和脂肪族ジカルボン酸としては、前記一般式（１）中、ｎが２〜１１の飽和脂肪族ジカルボン酸を用いた。蛍光スペクトルの測定結果を図８に示す。
【０１６２】
具体的には、１，８−ジアミジノアントラセンの２５μＭ ＤＭＳＯ溶液３ｍｌを光学セルに入れ、５ｍＭのカルボン酸のＤＭＳＯ溶液を、任意のモル比率となるようにマイクロシリンジを用いて光学セル内に添加し、パスツールピペットでよく混ぜて均一にした後に、３４８ｎｍの励起波長で励起し、蛍光測定を行った。なお、コハク酸（一般式（１）中、ｎ＝２）、グルタル酸（一般式（１）中、ｎ＝３）の場合は、１，８−ジアミジノアントラセンの２５μＭ ＤＭＳＯ溶液に代えて、１，８−ジアミジノアントラセンの２００μＭ ＤＭＳＯ溶液を用いた。
【０１６３】
図８に示すように、１，８−ジアミジノアントラセンと前記一般式（１）中、ｎが２〜１１の飽和脂肪族ジカルボン酸とを１：１の比率で混合した溶液では、短波長側（４３０〜４４０ｎｍの波長領域）に発光ピークを有する蛍光発光が観測された。これに対して、１，８−ジアミジノアントラセンとモノカルボン酸である酢酸を混合した場合は、長波長側（４６０〜４７０ｎｍの波長領域）に発光ピークを有する蛍光発光が観測された。
【０１６４】
かかる結果から、驚くべきことに、アントラセン骨格を有するジアミジンと、２個のカルボキシル基が鎖状炭化水素のような柔軟な基に結合しているジカルボン酸との間で会合体が形成され、特定波長領域に顕著な蛍光発光が認められることが見出された。
【０１６５】
量子化学計算（Ｂ３ＬＹＰ／６−３１Ｇ＊）により、１，８−ジアミジノアントラセンとアジピン酸（前記一般式（１）中、ｎ＝４）との１：１会合体の最適化構造、および、１，８−ジアミジノアントラセンとピメリン酸（前記一般式（１）中、ｎ＝５）との１：１会合体の最適化構造を求めた。結果を図７に示す。
【０１６６】
図７に示す最適化構造より、１，８−ジアミジノアントラセンと前記一般式（１）中、ｎが４、５の飽和脂肪族ジカルボン酸との１：１会合体はひずみの小さい構造であることが示された。また、ひずみの小さいｎが４、５の飽和脂肪族ジカルボン酸では１：１会合体の形成率が高くなり、蛍光スペクトルにおいて、短波長側（４３０〜４４０ｎｍの波長領域）の発光が強くなっていると考えられる（図８）。
【０１６７】
図１１に示すように、前記一般式（１）中、ｎが２、３である場合には、同一分子内の２個のカルボキシル基の距離が短いために、かかる場合には、ジアミジン２分子が、ジカルボン酸２分子との間で、各ジアミジンの同一分子内の２個のアミジノ基がそれぞれ異なるジカルボン酸分子のカルボキシル基と結合して、ジカルボン酸２分子とジアミジン２分子とからなる２：２会合体を形成していると考えられる。この事実は、図８に示すように、本実施例において、高濃度の条件下では短波長の領域に蛍光発光が検出されることから支持される。すなわち、成分数の多い会合体の形成は高濃度にすることによりその形成率が増加するという、周知の事実から説明できる。
【０１６８】
＜ＮＭＲ測定＞
１，８−ジアミジノアントラセンとピメリン酸（前記一般式（１）中、ｎ＝５）との会合体の形成に関する情報を得るために、１，８−ジアミジノアントラセンおよびピメリン酸の溶液をＮＭＲサンプルチューブ内で混合して１ＨＮＭＲ測定を行った。１ＨＮＭＲ測定の結果を図１２に示す。
【０１６９】
得られたＮＭＲスペクトルより、ジアミジンに由来するシグナルの低磁場シフトと、ピメリン酸に由来するシグナルのシフト変化が観察された。また、１４ｐｐｍと９ｐｐｍ付近に、アミジニウム−カルボキシレート塩の結合を示唆する窒素上の水素のシグナルが観測された。この結果から、ＤＭＳＯ中においてジアミジンとピメリン酸とがアミジニウム−カルボキシレート塩を形成して会合していることが示された。
【０１７０】
＜ＤＯＳＹ ＮＭＲによる会合体の拡散係数および分子体積の算出＞
次に、ジアミジンとピメリン酸の会合体の分子体積に関する情報を得るために、ＤＯＳＹ ＮＭＲ測定を行った。結果を表３に示す。
【０１７１】
【表３】
2012047697.tif 000005
【０１７２】
測定の結果、１，８−ジアミジノアントラセンとピメリン酸との混合溶液中のスペクトルからは、それぞれが単独に存在するよりも大きい体積を持つ分子が存在することを表す拡散係数が得られた。また、１，８−ジアミジノアントラセンとピメリン酸との混合溶液から得られた拡散係数から算出した分子体積は、１，８−ジアミジノアントラセンのみから得られた体積とピメリン酸のみから得られた体積の和に近いことから、１，８−ジアミジノアントラセンとピメリン酸とを混合した場合には、１：１会合体が生成していることが明らかになった。
【０１７３】
〔実施例７：１，８−ジアミジノアントラセンのＤＭＳＯ溶液にアジピン酸の水溶液を添加した場合の認識についての検討〕
蛍光発光特性によるジカルボン酸認識において、１，８−ジアミジノアントラセンのＤＭＳＯ溶液に種々の比率でアジピン酸のＤＭＳＯ溶液を添加した場合と、種々の比率でアジピン酸の水溶液を添加した場合の蛍光スペクトルを測定し、比較した。蛍光スペクトルの測定結果を図９に示す。
【０１７４】
具体的には、１，８−ジアミジノアントラセンの２５μＭ ＤＭＳＯ溶液３ｍｌを光学セルに入れ、５ｍＭのアジピン酸のＤＭＳＯ溶液を、任意のモル比率となるようにマイクロシリンジを用いて光学セル内に添加し、パスツールピペットでよく混ぜて均一にした後に、３４８ｎｍの励起波長で励起し、蛍光測定を行った。また、５ｍＭのアジピン酸のＤＭＳＯ溶液の代わりにアジピン酸の水溶液を用いた以外は、前記と同様にして蛍光測定を行った。
【０１７５】
図９の左図に示すように、アジピン酸の溶媒としてＤＭＳＯを用いた場合は、短波長側（４３０〜４４０ｎｍの波長領域）に発光ピークを有する蛍光発光が観測され、１，８−ジアミジノアントラセンに対する、アジピン酸の当量が０から８当量に向かって大きくなるに従い、蛍光発光の強度が増した。
【０１７６】
また、アジピン酸の溶媒として水を用いた場合も、１，８−ジアミジノアントラセンに対する、アジピン酸の当量が０から４当量までは、短波長側（４３０〜４４０ｎｍの波長領域）に発光ピークを有する蛍光発光が観測され、アジピン酸の量が大きくなるに従い、蛍光発光の強度が増した。
【０１７７】
かかる結果より、１，８−ジアミジノアントラセンのＤＭＳＯ溶液にアジピン酸の水溶液を加えた場合にも認識が良好に行われることが確認された。
【０１７８】
〔実施例８：１，８−ジアミジノアントラセンによるアジピン酸の認識における、モノカルボン酸（酢酸）の影響についての検討〕
蛍光発光特性によるジカルボン酸認識において、検出対象試料中に酢酸が含まれる場合の、ジカルボン酸認識に対する影響を検討した。
【０１７９】
具体的には、１，８−ジアミジノアントラセンとアジピン酸の１：１会合体の２５μＭ ＤＭＳＯ溶液を調製し、この溶液３ｍｌを光学セルに入れ、５ｍＭの酢酸のＤＭＳＯ溶液を、任意のモル比率となるようにマイクロシリンジを用いて光学セル内に添加し、パスツールピペットでよく混ぜて均一にした後に、３４８ｎｍの励起波長で励起し、蛍光測定を行った。
【０１８０】
１，８−ジアミジノアントラセンとアジピン酸との１：１会合体のＤＭＳＯ溶液を調製し、さらに酢酸を１，８−ジアミジノアントラセンに対して、０〜１０の当量となるように添加して蛍光スペクトルを測定したところ、いずれの酢酸量においても、短波長側（４３０〜４４０ｎｍの波長領域）に発光ピークを有する蛍光発光が観測された。
【０１８１】
かかる結果より、他の酸が含まれる検出対象試料中においても、１，８−ジアミジノアントラセンによるアジピン酸の認識が良好に行われることが確認された。
【０１８２】
〔実施例９：診断用キットの製造〕
１，８−ジアミジノアントラセンのＤＭＳＯ溶液 （２５μＭ）をガラス繊維製ろ紙（ＧＡ−１００ ＡＤＶＡＮＴＥＣ社製）および脱脂綿に吸収させ、アジピン酸のＤＭＳＯ溶液（５ｍＭ）を加えて、アジピン酸を加えていないものと紫外線照射下（３５６ｎｍ）で比較した。結果を図１０に示す。
【０１８３】
図１０中（ａ）に、ガラス繊維製ろ紙に１，８−ジアミジノアントラセンのＤＭＳＯ溶液を吸収させて紫外線照射した結果を示す。図１０（ａ）中、左側は、アジピン酸のＤＭＳＯ溶液を添加する前の診断用キットを示し、右側はアジピン酸のＤＭＳＯ溶液を添加した後の診断用キットを示す。白い部分は発光していることを示す。
【０１８４】
図１０中（ｂ）に、脱脂綿に１，８−ジアミジノアントラセンのＤＭＳＯ溶液を吸収させて紫外線照射した結果を示す。図１０（ｂ）中、右側は、アジピン酸のＤＭＳＯ溶液を添加する前の診断用キットを示し、左側はアジピン酸のＤＭＳＯ溶液を添加した後の診断用キットを示す。白い部分は発光していることを示す。以上の結果より、ジアミジンは診断用キットに使用できる可能性があることがわかる。
【０１８５】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【産業上の利用可能性】
【０１８６】
以上にように、本発明に係るジカルボン酸の検出方法によれば、種々のジカルボン酸を、迅速且つ簡便に検出することができるため、本発明は、医薬品製造業、農薬品製造業、食品製造業、工業薬品製造業等の各種化学工業、さらには医療産業等に利用可能であり、しかも非常に有用であると考えられる。
【０１８７】
また、本発明に係る診断剤および診断用キットによれば、生体試料中のジカルボン酸の量が患者と正常者との間で異なる疾患を迅速且つ簡便に検出することができるため、本発明は、医療産業等に利用可能であり、しかも非常に有用であると考えられる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１０】
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