(57)【要約】【課題】皮膚細胞内におけるメラニンの生成量を抑制することができるメラニン生成量抑制剤を提供すること。【解決手段】本発明のメラニン生成量抑制剤は、松樹皮抽出物を含有しているので、ＮＯを消去することができる（減少させることができる）。よって、松樹皮抽出物を含有した本発明は、松樹皮抽出物を含有しないものと比較して、メラニンの生成量を抑制できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
松樹皮抽出物を含有することでメラニンの生成量を抑制することを特徴とするメラニン生成量抑制剤。
【請求項２】
前記松樹皮抽出物は、一酸化窒素を消去させることで、メラニンの生成量を抑制することを特徴とする請求項１記載のメラニン生成量抑制剤。
【請求項３】
前記松樹皮抽出物が、ＯＰＣ含量４０質量％以上で構成されていることを特徴とする請求項１または２に記載のメラニン生成量抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メラニン生成量抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、シミやソバカス対策等の美容に対する意識が高まるにつれて、活性酸素を減少（消去）できる機能を有する製品の開発が進んでいる。これは、シミやソバカスが次の作用により発生することに起因する。即ち、皮膚が紫外線を浴びると、皮膚の表皮細胞や真皮の細胞（繊維芽細胞、血管内皮細胞など）に活性酸素が発生する。すると、この活性酸素によって細胞が損傷を受け、種々の情報伝達物質が生成・放出される。そして、この種々の情報伝達物質によって、皮膚細胞内でメラニンが生成され、シミ・ソバカスが発生することに起因する。つまり、活性酸素を減少（消去）できれば、メラニンの生成量を抑制でき、結果、シミやソバカスの発生を抑制できることから、上述のような製品が開発されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−２８２５９８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このような背景の中、特許文献１に記載の技術以外にも、皮膚細胞内におけるメラニンの生成量を抑制することができるものの開発が望まれていた。
【０００５】
本発明は、上述の要望に応えたものであり、皮膚細胞内におけるメラニンの生成量を抑制することができるメラニン生成量抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上述の目的を達成するために、請求項１記載のメラニン生成量抑制剤は、松樹皮抽出物を含有することでメラニンの生成量を抑制するものである。
【０００７】
請求項２記載のメラニン生成量抑制剤は、請求項１記載のメラニン生成量抑制剤において、前記松樹皮抽出物は、一酸化窒素の活性化を阻害することで、メラニンの生成量を抑制するものである。
【０００８】
請求項３記載のメラニン生成量抑制剤は、請求項１または２記載のメラニン生成量抑制剤において、前記松樹皮抽出物が、ＯＰＣ含量４０質量％以上で構成されているものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、松樹皮抽出物を含有しないものと比較して、皮膚細胞内におけるメラニンの生成量を抑制することができるという効果がある。この効果について説明する。メラニンの生成量を抑制するための一つの手段としては、α-メラノサイト刺激ホルモン（以後、「α−ＭＳＨ」と称す）の作用を低下させる手段がある。このα−ＭＳＨの作用を低下させるには、その作用を増強させる機能のある一酸化窒素（以後、「ＮＯ」と称す）を減少（消去）させればよい。ここで発明者は、松樹皮抽出物を用いることで、ＮＯを減少（消去）させることができることを見出した。これにより、松樹皮抽出物を含有した本発明は、松樹皮抽出物を含有しないものと比較して、メラニンの生成量を抑制できるのである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】各素材におけるＮＯ消去活性率を示した図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明の実施形態について説明する。なお、本発明は、後述する実施形態の記載により限定して解釈されるものではなく、特許請求の範囲における記載の範囲内で種々の変更が可能である。
【００１２】
本発明のメラニン生成量抑制剤は、松樹皮抽出物を含有することでメラニンの生成量を抑制することを特徴とする。また、メラニン生成量抑制剤に含有される松樹皮抽出物は、一酸化窒素を消去させることで、メラニンの生成量を抑制することを特徴とする。更に、メラニン生成量抑制剤に含有される松樹皮抽出物が、ＯＰＣ含量４０質量％以上で構成されていることを特徴とする。なお、本明細書では、プロアントシアニジンにおける重合度が２〜４の重合体を、ＯＰＣ（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）という。
【００１３】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、主な有効成分の一つとして、プロアントシアニジンを含有する。プロアントシアニジンは、フラバン−３−オールおよび／又はフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上の縮重合体からなる化合物群をいう。プロアントシアニジンは、植物が作り出す強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果実の皮および種に含まれていることが知られている。なお、本発明に用いられる松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンを３０質量％〜６０質量％の割合で含有する。
【００１４】
本発明に用いられる松樹皮抽出物の原料としては、フランス海岸松（Ｐｉｎｕｓ  Ｍａｒｔｉｍａ）、カラマツ、クロマツ、アカマツ、ヒメコマツ、ゴヨウマツ、チョウセンマツ、ハイマツ、リュウキュウマツ、ウツクシマツ、ダイオウマツ、シロマツなど、特に制限されるわけではないが、フランス海岸松が好ましい。得られた抽出物は、必要に応じて濃縮又は乾燥して、液状、ペースト状、又は粉末としてもよい。また、株式会社東洋新薬製の松樹皮抽出物が特に好ましく用いられ得る。
【００１５】
また、本発明に用いられる松樹皮抽出物は、プロアントシアニジンとして重合度が２以上の縮重合体が含有される。特に、重合度が低い縮重合体が多く含まれるプロアントシアニジンが好ましい。重合度の低い縮重合体としては、重合度が２〜３０の縮重合体（２〜３０量体）でよく、重合度が２〜１０の縮重合体（２〜１０量体）が好ましく、重合度が２〜４の縮重合体（２〜４量体）がさらに好ましい。本発明に用いられる松樹皮抽出物は、ＯＰＣを２０質量％以上の割合で含有し、好ましくは３０質量％以上の割合で含有し、さらに好ましくは４０質量％以上の割合で含有する抽出物である。
【００１６】
本発明に用いられる松樹皮抽出物は、さらにカテキン類が含有され得る。カテキン類とは、ポリヒドロキシフラバン−３−オールの総称である。カテキン類としては、（＋）−カテキン（狭義のカテキンといわれる）、（−）−エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、およびアフゼレキン等が知られている。松樹皮抽出物からは、（＋）−カテキンの他、ガロカテキン、アフゼレキン、ならびに（＋）−カテキン又はガロカテキンの３−ガロイル誘導体が単離されている。
【００１７】
松樹皮抽出物は、松の樹皮を水又は有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には温水・熱水が好ましく用いられる。抽出に用いる有機溶媒としては、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール、ブタン、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール等の食品あるいは薬剤の製造に許容される有機溶媒が好ましく用いられる。これらの水、有機溶媒は単独で用いてもよいし、２種以上の溶媒を組合わせて用いてもよい。特に、水、エタノール、含水エタノール等が好ましく用いられる。
【００１８】
松樹皮から松樹皮抽出物を抽出する方法は特に制限はないが、例えば、加温抽出法や超臨界流体抽出法等の抽出法が用いることができる。
【００１９】
松樹皮抽出物の抽出方法においては、複数の抽出方法を組み合わせてもよい。複数の抽出方法を組み合わせることにより、種々の組成の松樹皮抽出物を得ることが可能となる。
【００２０】
上述の抽出により得られた松樹皮抽出物は、吸着剤などにより溶出処理することができる。溶出方法は特に制限が無いが、複数の溶出方法を組み合わせることにより、種々の組成の松樹皮抽出物を得ることが可能となる。
【００２１】
本発明に用いられる松樹皮抽出物の摂取量としては、特に制限されないが、１日当たり５ｍｇ以上が好ましく、２０ｍｇ以上がさらに好ましい。なお、前述の摂取量を１日数回に分けて摂取してもよい。
【００２２】
本発明のメラニン生成量抑制剤がメラニンの生成量を抑制するメカニズムに関しては、「松樹皮抽出物で、ＮＯを消去（減少）させることで、α−ＭＳＨの作用を低下させ、チロシナーゼの増加を抑制し、メラニンの生成量を抑制する。」というメカニズムとなる。
【００２３】
なお、本発明のメラニン生成量抑制剤の配合量は、配合される製品の種類、投与または摂取の対象の年齢、性別、体重、状態、投与時間、剤形、投与または摂取の方法、時期などに応じて適宜設定され得る。
【００２４】
経口投与または摂取用のメラニン生成量抑制剤は、需要者の嗜好に合わせて、ハードカプセル、ソフトカプセルのようなカプセル剤、錠剤、丸剤などの剤形、または粉末状、顆粒状、飴状などの形状に成形され得る。また、溶液、懸濁液、または乳液のような液状の剤形もしくは形状にも調製され得る。
【００２５】
経口投与または摂取用のメラニン生成量抑制剤自体を、医薬品、医薬部外品、特定保健用食品、栄養補助食品、その他の飲食品などとして用いる、あるいはこれらに配合して用いることができる。
【００２６】
経口投与または摂取用のメラニン生成量抑制剤、あるいはその配合製品は、剤形もしくは形状または好みに応じて、そのまま食されても良いし、水、湯、牛乳、豆乳、茶、ジュースなどに溶かして飲んでも良い。
【実施例】
【００２７】
以下、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は、後述する実施例に限定して解釈されるものではなく、特許請求の範囲における記載の範囲内で種々の変更が可能である。
【００２８】
松樹皮抽出物によってＮＯを消去することができる（減少させることができることを次の試験により実証した。まず、表１に示す４つの溶液（サンプルテスト溶液、サンプルブランク溶液、コントロールテスト溶液およびコントロールブランク溶液）を、松樹皮抽出物、ブドウ種子エキス、ザクロ果実乾燥エキスの各素材毎に生成した。そして、これらの各素材における４つの溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値を、Ｇｒｉｓｓ法を用いて求めた。その後、後述する式１を用いて、各素材におけるＮＯ消去活性率を算出した。
【００２９】
なお、サンプルテスト溶液およびサンプルブランク溶液とは、上述の３つの素材の内、１つの素材（サンプル）を含有した溶液であり、コントロールテスト溶液およびコントロールブランク溶液とは、素材を含有しない溶液である。
【００３０】
（表１）
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【００３１】
Ｇｒｉｓｓ法における測定に用いた各素材の詳細について説明する。各素材は、松樹皮抽出物の粉末と、ブドウ種子エキスの粉末（プロアントシアニジン８１％以上含有）と、ザクロ果実乾燥エキスの粉末とを用いた。これら、３つの素材について、次の手順で、表１に示すサンプルテスト溶液およびサンプルブランク溶液を生成した。まず、１０％のジメチルスルホキシド１ｍＬ中に、１０ｍｇの素材を溶かした。次に、その溶液を１０倍希釈して、２％のシメチルスルホキシド１ｍＬ中に、素材（サンプル）が１ｍｇ溶けた溶液を生成し、その溶液６０μＬを、サンプルテスト溶液およびサンプルブランク溶液とした（表１参照）。
【００３２】
なお、以後、松樹皮抽出物の粉末を溶かしたサンプルテスト溶液およびサンプルブランク溶液を「松試料」と称し、ブドウ種子エキスの粉末を溶かしたサンプルテスト溶液およびサンプルブランク溶液を「ブドウ試料」と称し、ザクロ果実乾燥エキスの粉末を溶かしたサンプルテスト溶液およびサンプルブランク溶液を「ザクロ試料」と称す。これに加え、上述した３素材の粉末を溶かさず、２％のシメチルスルホキシドのみを用いた試料６０μＬを、コントロールテスト溶液およびコントロールブランク溶液として生成した（表１参照）。
【００３３】
次に、Ｇｒｉｓｓ法を用いた各素材毎の４つの溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定について説明する。この測定には、株式会社同仁化学研究所製の「ＮＯ２／ＮＯ３  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ−Ｃ  ＩＩ（Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）」を使用した。以後、これを、「試験キット」と称する。なお、今回の測定においては、試験キットに含まれる「緩衝溶液、補酵素、還元酵素、試薬Ａおよび試薬Ｂ」の５つを用いた。
【００３４】
上述した４つの溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定においては、松試料を用いた場合を例に説明する。まず、サンプルテスト溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定について説明する。サンプルテスト溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定は、表２に示す「サンプルテスト溶液」部分の手順に従って実行した。
【００３５】
（表２）
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【００３６】
具体的には、松試料におけるサンプルテスト溶液６０μＬに、５０ｍＭ濃度のＳＮＰ（Ｓｏｄｉｕｍ  Ｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅ）を２０μＬ加えてよく混和し、室温にて３０分間放置する。次に、この溶液８０μＬに、補酵素１０μＬおよび還元酵素１０μＬを加えてよく混和し、室温にて１２０分間放置する。そして、この溶液に、５０μＬの試薬Ａを加えてよく混和し、室温にて５分間放置する。その後、その溶液に、５０μＬの試薬Ｂを加えてよく混和し、室温にて１０分間放置した。その後、この溶液を、遠心分離機を用いて、１０，０００ｒｐｍで１分間、遠心分離を行い、その上清を１５０μＬ／ｗｅｌｌで９６ｗｅｌｌプレートに添加した。そして、これを、マイクロプレートリーダーを用いて５４０ｎｍの吸光度を測定することで、松試料におけるサンプルテスト溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」を測定した。
【００３７】
また、サンプルブランク溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定は、表２に示す「サンプルブランク溶液」部分の手順に従って実行した。具体的には、松試料におけるサンプルブランク溶液６０μＬに、緩衝溶液２０μＬを加えてよく混和し、室温にて３０分間放置する。次に、この溶液８０μＬに、補酵素１０μＬおよび還元酵素１０μＬを加えてよく混和し、室温にて１２０分間放置する。そして、この溶液に、５０μＬの緩衝溶液を加えてよく混和し、室温にて５分間放置する。その後、その溶液に、５０μＬの緩衝溶液を加えてよく混和し、室温にて１０分間放置した。その後、この溶液を、遠心分離機を用いて、１０，０００ｒｐｍで１分間、遠心分離を行い、その上清を１５０μＬ／ｗｅｌｌで９６ｗｅｌｌプレートに添加した。そして、これを、マイクロプレートリーダーを用いて５４０ｎｍの吸光度を測定することで、松試料におけるサンプルブランク溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」を測定した。
【００３８】
なお、コントロールテスト溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定においては、松試料６０μＬの代わりに、２％のシメチルスルホキシドのみを用いた試料６０μＬを用いる他は、表２に示すサンプルテスト溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定と同じ手順であるため、説明を省略する。同様に、コントロールブランク溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定においても、松試料６０μＬの代わりに、２％のシメチルスルホキシドのみを用いた試料６０μＬを用いる他は、表２に示すサンプルブランク溶液における「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定と同じ手順であるため、説明を省略する。
上述の手順で測定した、松試料における、サンプルテスト溶液、サンプルブランク溶液、コントロールテスト溶液およびコントロールブランク溶液の各「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値を、下に示す式１に代入して、松樹皮抽出物におけるＮＯ消去活性率を算出した。
【００３９】
（式１）
ＮＯ消去活性率（％）＝[１−{（サンプルテスト溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値−サンプルブランク溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値）／（コントロールテスト溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値−コントロールブランク溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値）}]×１００
【００４０】
なお、ブドウ試料における、サンプルテスト溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値およびサンプルブランク溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値については、松試料６０μＬの代わりに、ブドウ試料６０μＬを用いる他は、松試料の場合と同様であるので、説明を省略する。また、ブドウ種子エキスにおけるＮＯ消去活性率は、ブドウ試料おける各溶液（サンプルテスト溶液、サンプルブランク溶液、コントロールテスト溶液およびコントロールブランク溶液）の各々の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値を、式１に代入して算出した。
【００４１】
また、ザクロ試料における、サンプルテスト溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値およびサンプルブランク溶液の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値については、松試料６０μＬの代わりに、ザクロ試料６０μＬを用いる他は、松試料の場合と同様であるので、説明を省略する。また、ザクロ果実乾燥エキスにおけるＮＯ消去活性率は、ザクロ試料おける各溶液（サンプルテスト溶液、サンプルブランク溶液、コントロールテスト溶液およびコントロールブランク溶液）の各々の「ＮＯ２−＋ＮＯ３−」測定値を、式１に代入して算出した。
【００４２】
上述のようにして算出した松樹皮抽出物、ブドウ種子エキスおよびザクロ果実乾燥エキスにおける各ＮＯ消去活性率を図１に示す。図１から分かるように、松樹皮抽出物のＮＯ消去活性率は、９０．６％となっており、シミやソバカス対策等で用いられることのあるザクロ果実乾燥エキスの３９．７％と比較して、倍以上の消去活性率を示している。また、松樹皮抽出物のＮＯ消去活性率は、抗酸化機能を発揮するものとしてよく知られたプロアントシアニジンを８１％以上も含有するブドウ種子エキスの値と、略同一の結果を示している。これらの結果から、松樹皮抽出物は、ブドウ種子エキスのように、プロアントシアニジンを８１％以上も含有せずとも、ブドウ種子エキスと略同一の高いＮＯ消去活性率を実現できると共に、ザクロ果実乾燥エキスよりも優れたＮＯ消去活性率を実現できることが分かる。
【００４３】
上述した通り、松樹皮抽出物は、ＮＯを消去することができるので（減少させることができるので）、松樹皮抽出物を含有した本発明のメラニン生成量抑制剤は、松樹皮抽出物を用いないものと比較して、メラニンの生成量を抑制できる。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明のメラニン生成量抑制剤は、松樹皮抽出物を含有しているので、ＮＯを消去することができる（減少させることができる）。よって、松樹皮抽出物を含有した本発明は、松樹皮抽出物を含有しないものと比較して、メラニンの生成量を抑制できる。従って、本発明のメラニン生成量抑制剤は、メラニン生成量の抑制が必要な産業分野での利用が可能である。
【図１】
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