(57)【要約】【課題】安全性が高く、経口投与により優れた抗腫瘍作用等を示す医薬等を提供する。【解決手段】Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられることを特徴とするＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられることを特徴とするＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する組成物。
【請求項２】
Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン、及びそれらのアシル誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であり、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられる請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシンである請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられることを特徴とするＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する腫瘍の発生又は増殖抑制剤。
【請求項５】
脾臓交感神経活動を抑制するために用いられる請求項４に記載の腫瘍の発生又は増殖抑制剤。
【請求項６】
Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられることを特徴とするＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する脾臓交感神経活動抑制剤。
【請求項７】
Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン、及びそれらのアシル誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であり、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられる請求項４〜６のいずれか一項に記載の剤。
【請求項８】
Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシンである請求項４〜７のいずれか一項に記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｌ−カルノシン類等を経口投与することにより脾臓交感神経活動を低下させて腫瘍免疫を促進し、抗腫瘍効果が発揮される組成物、該組成物を用いる腫瘍の治療方法等に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類の骨格筋や心筋で合成されるＬ−カルノシン（β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン）は運動により血中に放出され、副腎、腎臓、肝臓などを支配する交感神経の活動を抑制し血糖及び血圧を低下させる作用を持っている（非特許文献１〜６）。
【０００３】
ところで、これまで、脾臓交感神経活動を低下させるとＮＫリンパ球細胞の活性化が引き起されることを示す結果が報告されており（非特許文献７）、脾臓交感神経活動を低下させる物質はヌードマウスの皮下に移植したヒト大腸癌細胞（ＨＣＴ１１６細胞）やヒト乳癌（ＭＣＦ７）細胞の増殖を抑制する作用を有することが報告されている（非特許文献８及び９）。ＮＫリンパ球細胞は腫瘍細胞を殺傷する細胞であるので、脾臓交感神経活動を低下させる作用があればＮＫ細胞の活性を上昇させて腫瘍免疫を促進し腫瘍の発生や増殖を抑制することができると考えられる。
【０００４】
一方、これまでＬ−カルノシンの抗腫瘍作用については多数の報告がある（特許文献１〜４、及び非特許文献１０〜１４）。しかしながら、いずれの先行文献においても経口によるＬ−カルノシンの単独投与で抗腫瘍作用が確認された例はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開昭６０−１６９３４号公報
【特許文献２】国際公開第ＷＯ９５／２５５１５号（１９９５）
【特許文献３】特開２００３−２６７９９２号公報
【特許文献４】特開２００５−１２０００７号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Yamano, T. et al., Neurosci. Lett. 2001 vol. 313, p. 78-82.
【非特許文献２】Niijima, A. et al., Autonom Neurosci. Basic & Clinical 2002 vol. 97, p. 99-102.
【非特許文献３】Nagai K. et al., Exp. Biol. Med (Maywood). 2003 vol. 228(10), p. 1138-1145.
【非特許文献４】Tanida M. et al., Am. J. Physiol. 2005 vol. 288, p. R447-R455.
【非特許文献５】Tanida M. et al., Regulatory Peptides 2007 vol. 144, p. 62-71.
【非特許文献６】Shen J. et al., Neurosci. Lett. 2008 vol. 441, p. 100-104.
【非特許文献７】Katafuchi T. et al., J. Physiol. 1993 vol. 471 p. 209-221.
【非特許文献８】Shen J. et al., Auton. Neurosci. Basic & Clin. 2009 vol. 145 p. 50-54.
【非特許文献９】Shen J. et al., Auton Neurosci. Basic & Clin. 2009 vol. 14 p. 86-90.
【非特許文献１０】永井ら 日本生理学雑誌 1986 48(11)巻, p. 741-7.
【非特許文献１１】Boissonneault, Gilbert A. et al., Nutrition Research (New York) 1998 vol. 18(4) p. 723-733.
【非特許文献１２】Renner, C. et al., Int. J. Pept. Res. Ther. 2008 vol. 14 p. 127-135.
【非特許文献１３】Renner, C. et al., Neurological Res. 2010 vol. 32(1) p. 101-105.
【非特許文献１４】Renner, C. et al., Molecular Cancer 2010, doi:10.1186/1476-4598-9-2 (online journal)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記現状に鑑み、安全性が高く、経口投与により優れた抗腫瘍作用等を示す医薬等を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、Ｌ−カルノシンがラットの脾臓交感神経活動を有意に抑制することを見出し、その作用に基づき、Ｌ−カルノシンを経口投与した場合のヌードマウスの皮下に移植したヒト大腸癌細胞（ＨＣＴ１１６細胞）の増殖を抑制する作用について検討した。その結果、Ｌ−カルノシンを一定量経口投与したとき、ヌードマウスの皮下に移植したヒト大腸癌細胞（ＨＣＴ１１６細胞）から形成される腫瘍塊の増殖が有意に抑制されることを見出した。
これらの結果は、Ｌ−カルノシンが脾臓交感神経活動を低下させて、腫瘍の増殖を抑制したことを示すものである。脾臓交感神経活動を抑制すると、腫瘍細胞を殺傷するナチュラルキラー（ＮＫ）リンパ球細胞活性が上昇することが知られている（非特許文献７）。従って、Ｌ−カルノシンの抗腫瘍作用には脾臓交感神経活動の抑制によるＮＫ細胞の活性化が関与しているものと考えられた。また、このときのヌードマウスにおいて腫瘍増殖を抑制したＬ−カルノシン経口投与量は、例えばヒト換算で１日あたり体重あたり約１０．５〜１１．３ｍｇ／ｋｇであったことから、１日あたり体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇのＬ−カルノシンを経口投与することにより、ヒトを含む哺乳動物において腫瘍の発生又は増殖を効果的に抑制できることに想到した。
本発明者らは、上記知見に基づきさらに研究を重ね、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち本発明は、以下の（１）〜（８）に関する。
（１）Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられることを特徴とするＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する組成物。
（２）Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン、及びそれらのアシル誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であり、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられる前記（１）に記載の組成物。
（３）Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシンである前記（１）又は（２）に記載の組成物。
（４）Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられることを特徴とするＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する腫瘍の発生又は増殖抑制剤。
（５）脾臓交感神経活動を抑制するために用いられる前記（４）に記載の腫瘍の発生又は増殖抑制剤。
（６）Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられることを特徴とするＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する脾臓交感神経活動抑制剤。
（７）Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン、及びそれらのアシル誘導体からなる群より選択される少なくとも１種であり、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられる前記（４）〜（６）のいずれか一項に記載の剤。
（８）Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシンである前記（４）〜（７）のいずれか一項に記載の剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、腫瘍の発生又は増殖を効果的に抑制することができる。さらに、本発明の有効成分であるＬ−カルノシン類は、哺乳類や鳥類、魚類の体内に存在するジペプチド化合物等であり、人体に安全な成分である。このため、本発明の組成物は長期にわたって摂取しても安全であり、医薬組成物、機能性食品等として広く適用が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、ウレタン麻酔ラットにおいて１ｍｇ及び１０ｍｇのＬ−カルノシンを含む水溶液１ｍＬをそれぞれ十二指腸内投与したときの脾臓交感神経活動(splenic sympathetic nerve activity、以下、Splenic-SNAと略)の変化を示す図である。
【図２】図２は、ウレタン麻酔ラットにおいてＬ−カルノシン１ｍｇを含む水溶液１ｍＬを十二指腸内投与したときの脾臓交感神経活動(Splenic-SNA)の変化を、対照群（水のみ投与）と比較した結果を示す図である。
【図３】図３は、ＢＡＬＢ／Ｃマウスに移植したヒト大腸癌細胞（ＨＣＴ１１６）（２．５×１０６細胞／匹を皮下投与）が形成した腫瘍塊の体積の増加を示す図である（●：Ｌ−カルノシン水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）自由摂取投与群、○：対照群（水のみ自由摂取投与））。
【図４】図４は、ＢＡＬＢ／Ｃマウスにヒト大腸癌細胞（ＨＣＴ１１６）（２．５×１０６細胞／匹を皮下投与）移植後２２日目のＬ−カルノシン水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を唯一の飲料水として自由摂取させた群（図４のＢ）及び水を自由摂取させたコントロール群（図４のＡ）における腫瘍塊の外観写真である（各群ｎ＝６）。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の組成物は、Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有し、当該Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられるものである。
Ｌ−カルノシン類としては、例えば、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン、又はそれらのアシル誘導体（例えば、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシン等）等が挙げられる。アシル誘導体は、公知のアシル化剤を使用して自体公知の方法で製造することができる。
Ｌ−カルノシン類の薬学的に許容される塩として、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、亜鉛等の塩が挙げられる。
有効成分であるＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩は、１種であってもよく、２種以上であってもよい。
【００１３】
本発明の組成物は、有効成分としてＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有するものであるが、Ｌ−カルノシン類は、好ましくは、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン、又はそれらのアシル誘導体である。Ｌ−カルノシン類が、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン、及びそれらのアシル誘導体からなる群より選択される少なくとも１種である組成物は、本発明の好ましい態様の１つである。Ｌ−カルノシン類は、より好ましくは、Ｌ−カルノシン又はＮ−アセチル−Ｌ−カルノシンであり、さらに好ましくは、Ｌ−カルノシンである。Ｌ−カルノシン若しくはＮ−アセチル−Ｌ−カルノシン、又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシンとして体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられるＬ−カルノシン若しくはＮ−アセチル−Ｌ−カルノシン、又はその塩を含有する組成物は、本発明の好ましい実施態様の１つである。Ｌ−カルノシン類は、特に好ましくは、Ｌ−カルノシンである。すなわち、１日あたり体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇのＬ−カルノシンが、ヒトを含む哺乳動物に対して経口投与されるように用いられる、Ｌ−カルノシンを含有する組成物は、本発明の特に好ましい実施態様の１つである。
【００１４】
本発明の組成物は、Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩と、他の成分とを混合することにより容易に製造される。他の成分は、本発明の効果を奏する限り特に限定されない。本発明の組成物は、医薬品、医薬部外品、飲食品、飼料等の形態として用いることができる。本発明の組成物を含む医薬品、医薬部外品、飲食品、及び飼料も、本発明に包含される。
【００１５】
本発明の組成物は、例えば、医薬品であれば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、丸薬、トローチ剤、チュアブル剤、散剤、シロップ剤等の経口投与用製剤の形態で好適に用いられる。中でも、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等が好ましい。これらの製剤は、賦形剤（例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトール、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、結晶性セルロース、アラビアゴム、デキストラン、プルラン、軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、燐酸水素カルシウム等）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、コロイドシリカ等）、結合剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等）、崩壊剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルスターチ、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等）、安定剤（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール等）、矯味矯臭剤（例えば、通常使用される甘味料、酸味料、香料等）、希釈剤等の当業界で使用される公知の添加剤等を用いて自体公知の方法に従って製造することができる。
【００１６】
製剤中に含まれるＬ−カルノシン類、及びその薬学的に許容される塩の量は、通常、最終製剤中に約１０〜１００質量％の範囲から適宜選択して決定することができる。
【００１７】
本発明の組成物の投与量は、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇである。このような投与量とすることにより、脾臓交感神経作用が制御され、腫瘍の発生又は増殖を効果的に抑制することができる。より好ましくは、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシンとして体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇである。また、好ましくは、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり約８〜７０ｍｇ／ｋｇである。投与する回数としては特に限定されず、前記量を１回で経口投与してもよく、２〜６回程度に分けて経口投与してもよい。好ましくは、２〜３回程度に分けて経口投与する。
【００１８】
本発明の組成物の好ましい投与量は、動物の種類、体重等に応じて上記範囲内で適宜設定することができる。
例えば、ヒトに対しては、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）、体重あたり８〜２０ｍｇ／ｋｇ程度投与することが好ましく、体重あたり９〜１５ｍｇ／ｋｇ程度投与することがより好ましく、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１０〜１３ｍｇ／ｋｇ程度投与することがさらに好ましい。例えば、体重約５０〜８０Ｋｇのヒトに対しては、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくは、１日あたりＬ−カルノシンとして）、好ましくは約４００〜１６００ｍｇ、より好ましくは約４５０〜１２００ｍｇ、さらに好ましくは約５００〜１０４０ｍｇを経口投与する。
【００１９】
本発明の組成物は、ヒト以外の哺乳動物に用いてもよい。ヒト以外の哺乳動物に対する好ましい投与量は、上記のヒト換算の投与量から、Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics In Adult Volunteers, FDA July (2005)、Shannon Reagan-Shaw et al., FASEB Journal 2007 vol.22 march p. 659-661(2007)等の記載を基に、動物の体表面積に応じて適宜計算される。例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、サル、フェレット等のヒト以外の哺乳動物に対しては、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１５〜７０ｍｇ／ｋｇ程度投与することが好ましく、体重あたり１７〜６０ｍｇ／ｋｇ程度投与することがより好ましい。また、例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、サル等の哺乳動物に対しては、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１５〜５０ｍｇ／ｋｇ程度投与することが好ましく、体重あたり１７〜４０ｍｇ／ｋｇ程度投与することがより好ましい。
【００２０】
例えば、イヌであれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１５〜３０ｍｇ／ｋｇ程度投与することが好ましく、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１７〜２５ｍｇ／ｋｇ程度投与することがより好ましい。ウサギ又はサルであれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり２０〜５０ｍｇ／ｋｇ程度投与することが好ましく、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり２５〜４０ｍｇ／ｋｇ程度投与することがより好ましい。フェレットであれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり３０〜７０ｍｇ／ｋｇ程度投与することが好ましく、体重あたり４０〜６０ｍｇ／ｋｇ程度投与することがより好ましい。
【００２１】
例えば、マウス、ラット等であれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり５０〜１５０ｍｇ／ｋｇ程度投与することが好ましく、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり６０〜４０ｍｇ／ｋｇ程度投与することがより好ましい。例えばラットであれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり６０〜７０ｍｇ／ｋｇ程度投与することがさらに好ましい。また、マウスであれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１３０〜１４０ｍｇ／ｋｇ程度投与することがさらに好ましい。
【００２２】
本発明の組成物は、ヒトを含む哺乳動物の脾臓交感神経活動を抑制する作用、腫瘍の発生を抑制する作用、腫瘍の増殖を抑制する作用等を有するものである。このような作用により、大腸癌、胃癌、肺癌、子宮癌、肝臓癌等の腫瘍の発生の予防又は腫瘍の治療に好適に用いられる。
【００２３】
本発明の組成物は、例えば、腫瘍の発生又は増殖抑制剤、脾臓交感神経活動抑制剤等として好適に用いられる。
Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられるＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する腫瘍の発生又は増殖抑制剤も、本発明に包含される。
腫瘍の発生又は増殖抑制剤は、好ましくは、脾臓交感神経活動を抑制することで腫瘍の発生又は増殖を抑制するために用いられる。
【００２４】
Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩が、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられるＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を含有する脾臓交感神経活動抑制剤も、本発明に包含される。本発明の脾臓交感神経活動抑制剤は、脾臓交感神経活動を低下させる作用を有することから、腫瘍の発生又は増殖の抑制等に好適に用いられる。
【００２５】
本発明の腫瘍の発生又は増殖抑制剤及び脾臓交感神経活動抑制剤、並びにその好ましい態様等は、上述した本発明の組成物と同様である。例えば、Ｌ−カルノシン類としては、上述したものと同様であり、例えば、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、カルシニン、及びそれらのアシル誘導体（例えば、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシン、Ｎ−アセチル−Ｌ−アンセリン、Ｎ−アセチル−Ｌ−ホモカルノシン等）等が挙げられ、１種又は２種以上を用いることができる。好ましくは、Ｌ−カルノシン、Ｌ−アンセリン、Ｌ−バレニン、Ｌ−ホモカルノシン、又はそれらのアシル誘導体であり、より好ましくは、Ｌ−カルノシン又はＮ−アセチル−Ｌ−カルノシンであり、さらに好ましくは、Ｌ−カルノシンである。
【００２６】
本発明の組成物、腫瘍の発生又は増殖抑制剤、及び脾臓交感神経活動抑制剤は、例えば、腫瘍（好ましくは悪性腫瘍）が形成された個体等に好適に適用される。個体としてはヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル、フェレット等の哺乳類が好ましく、ウサギ、イヌ、ネコ、サル、ヒト等がより好ましく、特にヒトが好ましい。
【００２７】
本発明の組成物、腫瘍の発生又は増殖抑制剤、及び脾臓交感神経活動抑制剤は、人体に安全な成分から成るため、長期にわたって摂取しても安心で、上記した医薬組成物以外にも機能性食品、健康補助食品、飲食品等の原料としても広く利用することができるものである。
【００２８】
本発明の腫瘍の発生又は増殖抑制剤を含む腫瘍の発生又は増殖抑制用飲食品組成物も、本発明の１つである。本発明の脾臓交感神経活動抑制剤を含む脾臓交感神経活動抑制用飲食品組成物も、本発明の１つである。本発明に係る飲食品組成物を、例えば腫瘍が形成されたヒトを含む哺乳動物に摂取させることにより、腫瘍の増殖を抑制することができる。飲食品組成物中に含まれる有効成分であるＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩の量は、通常、最終組成物中に約１０〜１００質量％の範囲から適宜選択して決定することができる。
【００２９】
本発明の組成物、腫瘍の発生又は増殖抑制剤、及び脾臓交感神経活動抑制剤を飲食品組成物に用いる場合、その形態は特に限定されない。液状、ゼリー状、ヨーグルト状、固体状のいずれの形態であってもよい。飲食品組成物は、自然流動食、半消化態栄養食若しくは成分栄養食、又はドリンク剤等の加工形態とすることもできる。さらに、本発明にかかる飲食品組成物は、アルコール飲料又はミネラルウォーターに用時添加する易溶性製剤としてもよい。より具体的には、本発明に係る飲食品組成物は、例えばクッキー、ケーキ、ビスケット、和菓子などの菓子類；麺類、パン類、米飯又はその加工品；果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料、アルコール飲料、茶などの飲料等の形態とすることができる。
【００３０】
本発明に係る飲食品組成物は、食品分野で慣用の補助成分、添加剤等を含んでいてもよい。例えば、乳糖、ショ糖、液糖、蜂蜜、ステアリン酸マグネシウム、オキシプロピルセルロース、各種ビタミン類、微量元素、クエン酸、リンゴ酸、香料、無機塩等が挙げられる。
【００３１】
本発明に係る飲食品組成物は、Ｌ−カルノシン類として上述した組成物の場合と同様の量摂取されることが好ましい。本発明に係る飲食品組成物量は、通常、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇがヒトを含む哺乳動物に摂取されるように用いられるものである。好ましくは、１日あたりＬ−カルノシンとして体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇである。摂取する回数としては特に限定されず、前記量を１回で摂取してもよく、２〜６回程度に分けて摂取してもよい。好ましくは、前記量を２〜３回程度に分けて摂取する。
【００３２】
本発明に係る飲食品組成物の好ましい摂取量は、例えばヒトであれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり約８〜２０ｍｇ／ｋｇとすることが好ましい。ヒトであれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり９〜１５ｍｇ／ｋｇ程度摂取することがより好ましく、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１０〜１３ｍｇ／ｋｇ程度摂取することがさらに好ましい。好ましい実施態様においては、例えば、体重約５０〜８０Ｋｇのヒトに対して１日あたりＬ−カルノシン類として（より好ましくはＬ−カルノシンとして）好ましくは約４００〜１６００ｍｇ、より好ましくは約４５０〜１２００ｍｇ、さらに好ましくは約５００〜１０４０ｍｇが摂取されるように用いられる。
【００３３】
本発明に係る飲食品組成物の摂取量は、例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、サル、フェレット等のヒト以外の哺乳動物であれば、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１５〜７０ｍｇ／ｋｇ程度が摂取されることが好ましく、体重あたり１７〜６０ｍｇ／ｋｇ程度が摂取されることがより好ましい。また、例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、サル等の哺乳動物に対しては、１日あたりＬ−カルノシン類として（好ましくはＬ−カルノシンとして）体重あたり１５〜５０ｍｇ／ｋｇ程度が摂取されることが好ましく、体重あたり１７〜４０ｍｇ／ｋｇ程度が摂取されることがより好ましい。
【００３４】
Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与する腫瘍の発生又は増殖を抑制する方法も、本発明に包含される。好ましくは、脾臓交感神経活動を抑制することで腫瘍の発生又は増殖を抑制するために投与される。Ｌ−カルノシン類及びその好ましい投与量等は、上述した本発明の組成物、及び腫瘍の発生又は増殖抑制剤と同様である。
【００３５】
Ｌ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩を、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与する脾臓交感神経活動を抑制する方法も、本発明に包含される。脾臓交感神経活動を抑制することにより、腫瘍の発生又は増殖を効果的に抑制することができる。Ｌ−カルノシン類及びその好ましい投与量等は、上述した本発明の組成物、及び脾臓交感神経活動抑制剤と同様である。
【００３６】
腫瘍の発生又は増殖を抑制するために使用され、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられるＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩も、本発明に包含される。
脾臓交感神経活動を抑制するために使用され、ヒトを含む哺乳動物に対して、１日あたりＬ−カルノシン類として体重あたり約５〜１５０ｍｇ／ｋｇ経口投与されるように用いられるＬ−カルノシン類又はその薬学的に許容される塩も、本発明に包含される。
Ｌ−カルノシン類及びその好ましい投与量等は、上述した本発明の組成物、腫瘍の発生又は増殖抑制剤、及び脾臓交感神経活動抑制剤と同様である。
【実施例】
【００３７】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれによりなんら制限されるものではない。
【００３８】
実施例１
脾臓交感神経活動に対する影響の検討
体重約３００ｇのＷｉｓｔａｒ系雄ラット（約９週齢）を使用した。十二指腸に十二指腸カニューレを挿入した後、脾臓交感神経を銀電極で吊り上げ、既述の方法（非特許文献８及び９）にてそれら神経の電気活動を測定した。これらの測定値が落ち着いた時期に十二指腸カニューレを使用して種々の濃度のＬ−カルノシン水溶液１ｍＬを十二指腸内に投与し、脾臓交感神経の電気活動を電気生理学的に測定した。対照実験としては水１ｍＬを十二指腸内投与し脾臓交感神経活動を測定した。Ｌ−カルノシンは、浜理薬品工業社製のものを使用した。
【００３９】
図１に、ウレタン麻酔ラットにおいて、Ｌ−カルノシンを１ｍｇ含む水溶液１ｍＬ及びＬ−カルノシンを１０ｍｇ含む水溶液１ｍＬを十二指腸内投与したときの脾臓交感神経活動（splenic sympathetic nerve activity: Splenic-SNA）の変化を示す。この試験のSplenic-SNAの測定は、Ｌ−カルノシン水溶液投与（刺激開始）後、Splenic-SNAのデータを５分間毎の５秒あたりの発火頻度（pulse/5 s）の平均値にて解析し刺激開始前５分間の平均値の値（０分値）を１００％とした百分率で表し、その平均値を計算した。図１の横軸は、Ｌ−カルノシンを含む水溶液を投与後の時間を示す（投与直前：０分）。図１中、◆は、１ｍｇのＬ−カルノシンを含む水溶液１ｍＬを投与した場合のSplenic-SNAの変化であり、■は、１０ｍｇのＬ−カルノシンを含む水溶液１ｍＬを投与した場合のSplenic-SNAの変化である。１０ｍｇ／ｍＬ及び１ｍｇ／ｍＬのＬ−カルノシン水溶液の十二指腸内投与は、いずれもSplenic-SNAを低下させた（図１）。また、Ｌ−カルノシンは用量依存的にSplenic-SNAを抑制する傾向があった。
【００４０】
これらの濃度の内で脾臓交感神経活動を低下させる１ｍｇ／ｍＬ濃度のＬ−カルノシン水溶液の効果をさらに確認するためにＬ−カルノシン投与群３匹と水投与群３匹でこの濃度のＬ−カルノシン水溶液のSplenic-SNAに対する効果を検討した。図２に、ウレタン麻酔ラットへＬ−カルノシン１ｍｇ含む水溶液１ｍＬ及び水１ｍＬを十二指腸内投与したときの脾臓交感神経活動(Splenic-SNA)の変化を示す。図２の横軸は、Ｌ−カルノシンを含む水溶液又は水を投与後の時間を示す（投与直前：０分）。図２中、◆は、１ｍｇのＬ−カルノシンを含む水溶液１ｍＬを投与した場合のSplenic-SNAの変化であり、▲は、水を投与した場合のSplenic-SNAの変化である。図２に示されるように、対照実験として行った水１ｍＬを十二指腸内投与した後にはSplenic-SNAはやや増加するものの投与前値から大きく変化しなかったのに対して、Ｌ−カルノシン  １ｍｇを含む水溶液１ｍＬを十二指腸内投与すると、Splenic-SNAを徐々に著しく低下させ、投与６０分後には４５％にまで減少させた（図２）。投与後５分から６０分までの水投与の場合とＬ−カルノシン１ｍｇ投与の場合のSplenic-SNAの値を群として比較するため、分散分析法（ANOVA with repeated measures法）により統計検定を行ったところ、Ｌ−カルノシン１ｍｇ投与時のSplenic-SNAの値は水投与の場合よりも有意（P<0.0005, F=88.7 by ANOVA）に低いことが明らかとなった。以上の事実は、Ｌ−カルノシン１ｍｇを含む水溶液１ｍＬの十二指腸内投与は膵臓交感神経活動を抑制することを示している。
【００４１】
実施例２
ヌードマウスに移植したヒト大腸癌細胞（ＨＣＴ１１６細胞）の増殖に対するＬ−カルノシンの作用の検討
実施例１の結果から、１ｍｇのＬ−カルノシンを含む水溶液１ｍＬの十二指腸内投与は脾臓交感神経活動を抑制することが明らかになった。この試験結果をふまえて担癌マウスへＬ−カルノシンを経口的に投与し、腫瘍増殖に対する作用を調べた。
具体的には、胸腺を欠損していて獲得免疫能の無いヌードマウス（雌、体重約２０ｇ）の皮下に、皮下注射によりヒト大腸癌（ＨＣＴ１１６）細胞（2.5×106個／マウス）を移植した。移植したヒト大腸癌（ＨＣＴ１１６）細胞の形成する腫瘍に対する１ｍｇ／ｍＬの濃度のＬ−カルノシン水溶液投与効果を検討した。移植後６日間は水（ＵＶ照射滅菌水）と餌を自由摂食させた後、形成された腫瘤の大きさの平均が均等になるように２群に分けた。一方の群は対照群として引き続きＵＶ照射滅菌水と餌を自由摂食させた。もう一方の群については、６日目以降はＵＶ照射滅菌餌とＬ−カルノシン（１ｍｇ／ｍＬ）を含むＵＶ滅菌水を唯一の飲料水として自由摂取させ癌細胞移植後２２日目まで飼育して、腫瘍細胞の体積と体重の変化を対照群と比較した。つまり、ヒト大腸癌（ＨＣＴ１１６）細胞（２．５×１０５細胞／マウス）を移植して６日後から、対照実験群ヌードマウスには引き続き水（ＵＶ滅菌水）を飲料水として与えたが、Ｌ−カルノシン投与群のヌードマウスには１ｍｇ／ｍＬの濃度のＬ−カルノシン水（ＵＶ滅菌水）溶液を唯一の飲料水として与え自由摂取させた。腫瘍塊の大きさについては公知の方法（Gonzalez L. et al., J. Biol. Chem.  2006 vol. 281 p. 20851-20864に記載の方法）に準拠して測定した。
【００４２】
図３に、移植した大腸癌細胞により形成された腫瘍の体積の変化を示す。水摂取対照群（ｎ＝６）では実験群への飲料水切替え日の６日目（図３中に矢印で示す）に２９．９ｍｍ３、切替え２日目（実験開始後８日目）に１２２ｍｍ３、切替え７日目（実験開始後１３日目）に３０７ｍｍ３、切替え日１６日目（実験開始後２２日目）に８７０ｍｍ３へと腫瘍体積は増加した。一方、Ｌ−カルノシン（１ｍｇ／ｍＬ）水溶液に切替えたマウス群（ｎ＝６）では大腸癌移植後の腫瘍体積は６日目（図３中に矢印で示す）に２９．６ｍｍ３、切替え２日目（実験開始後８日目）に５０ｍｍ３、切替え７日目（実験開始後１３日目）に１３８ｍｍ３、切替え１６日目（実験開始後２２日目）に４０８ｍｍ３へと増加した。これらの両群における移植大腸癌細胞の形成する腫瘍体積を比較すると、対照水投与群と比較してＬ−カルノシン水溶液投与群では遥かにそして有意に（P<0.0005, F=25.6 by ANOVA）腫瘍体積の増加抑制が認められた。移植後２２日目（Ｌ−カルノシン水溶液への切替え後１６日目）のヒト大腸癌（ＨＣＴ１１６）細胞の形成する腫瘍体積は水投与対照群では８７０ｍｍ３であるのに対して、Ｌ−カルノシン水溶液投与群では４０８ｍｍ３と対照群に比して約４７％であった。図４は大腸癌（ＨＣＴ１１６）細胞移植後２２日目（実験開始後２２日目）の対照群（図４のＡ）、及びＬ−カルノシン投与群（図４のＢ）Ｌ−カルノシン投与群両群の腫瘍の外観を示す。図４中、腫瘍を点線で囲んで示す。Ｌ−カルノシン投与群の１匹では飲料水切替え前に存在した腫瘍が消失していた（図４のＢの右列最下段のマウス）。従って、経口投与されたＬ−カルノシン水溶液は、腫瘍塊形成抑止作用を示すことが分かった。
対照水投与群の体重と比較してＬ−カルノシン投与群の体重は大腸癌（ＨＣＴ１１６）細胞移植後１６日目及び２２日目で大きい傾向はあったが、ANOVAによる解析では有意差が認められなかった。
【００４３】
以上の実験から、次のことが分かった。
１）ウレタン麻酔ラットの十二指腸内にＬ−カルノシン１ｍｇを含む水溶液１ｍＬを注入すると脾臓交感神経活動（Splenic-SNA）が抑制された（図１及び図２）。２）ヒト大腸癌細胞（ＨＣＴ１１６細胞）を移植したヌードマウスにＬ−カルノシン水溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を唯一の飲料水として与えると、腫瘍塊の体積はがん細胞移植後２２日目で対照群の約４７％であり対照群に比して有意に（P<0.0005, F=25.6 by ANOVA）小さかった。
以上の結果はＬ−カルノシンが脾臓交感神経活動を低下させて、腫瘍の増殖を抑制したことを示すものである。
脾臓交感神経活動を抑制すると、腫瘍細胞を殺傷するナチュラルキラー（ＮＫ）リンパ球細胞活性が上昇することが知られている（非特許文献７）ので、Ｌ−カルノシンの抗腫瘍作用には脾臓交感神経活動の抑制によるＮＫ細胞の活性の活性化が関与しているものと考えられる。
【００４４】
マウスへのＬ−カルノシン投与量の見積と、Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics In Adult Volunteers, FDA July (2005)及びShannon Reagan-Shaw et al., FASEB Journal 2007 vol.22 march p. 659-661(2007)によるヒト投与量換算
Mei-chin M. et al.（European Journal of Pharmacology 2011 vol. 653(1-3) p. 82-88）では１ｍｇ／ｍＬのＬ−カルノシン溶液をマウスは２．６ｍＬ／ｄａｙ飲んだという報告がある。この摂水量を元にマウスへのＬ−カルノシン一日投与量をｍｇ／Ｋｇ単位で計算した。
【００４５】
マウスの平均摂水量を２．６ｍＬ／ｄａｙとすると、この中のＬ−カルノシン量は２．６ｍｇであり、一日あたり、２．６ｍｇ／マウス／ｄａｙの投与量となる。今回使用したマウスの平均体重はＬ−カルノシン投与開始時１８．７ｇで、試験終了時では１９．９ｇであったので、それぞれに対応するＫｇ体重あたりの投与量は、１３９ｍｇ／Ｋｇ及び１３０ｍｇ／Ｋｇとなる。これをそれぞれGuidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics In Adult Volunteers, FDA July (2005)及びShannon Reagan-Shaw et al., FASEB Journal 2007 vol.22 march p. 659-661(2007)に従ってヒト投与量に換算すると（ヒト投与量（ｍｇ／Ｋｇ）＝マウス投与量（ｍｇ／Ｋｇ）×マウスＫｍ／ヒトＫｍ、Ｋｍは体表面積から求められた定数で、マウスでは３であり、ヒトでは３７である）、１１．３ｍｇ／Ｋｇ及び１０．５ｍｇ／Ｋｇとなる。つまり上記マウスへの投与量をヒトへの経口投与量に換算すると、体重１Ｋｇあたり、Ｌ−カルノシンを１０．５〜１１．３ｍｇである。例えば体重５０〜８０Ｋｇのヒトに対しては１日あたり約５２５〜９０４ｍｇの投与に対応する。
【００４６】
ヒト以外の哺乳動物への体重あたりの投与量は、前記マウスに対する投与量から、ヒトの場合と同様に、各動物の体表面積から求められる定数（Ｋｍ）を基に容易に計算することができる（Guidance for Industry: Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics In Adult Volunteers, FDA July (2005)及びShannon Reagan-Shaw et al., FASEB Journal 2007 vol.22 march p. 659-661(2007)）。
例えば、イヌであれば、イヌのＫｍ２０を用いて、マウスへの投与量（ｍｇ／ｋｇ）×（マウスＫｍ（３）／イヌＫｍ（２０））で計算できる。
例えば、ウサギであれば、ウサギのＫｍ１２を用いて、マウスへの投与量（ｍｇ／ｋｇ）×（マウスＫｍ（３）／ウサギＫｍ（１２））で計算できる。
例えば、サルであれば、サルＫｍとして１２を用いて、上記と同様に計算される。ミニブタであれば、ミニブタＫｍは３５であり、フェレットの場合は、フェレットＫｍは７である。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明は、医薬又はサプリメントもしくは食品の分野において有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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