(57)【要約】      （修正有）【課題】角質層に内在する真菌、白癬菌などを検出する免疫クロマトグラフィー法の測定キットに好適に使用される検体採取用具を提供する。【解決手段】軸部と綿球からなり、その綿球に精製水を含浸させたものであり、角質層内のケラチンを採取するために用いられる。綿棒の軸部の材質は特に限定されないが、綿球部が精製水で含浸しているため耐水性であることが望ましい。綿棒の綿球とは、綿繊維の集合体のことをいい、軸部の一端部または両端部に備えられているものをいう。綿球の形状としては、球形状、楕円形状、段々形状（スパイラル形状）などが挙げられる角質層内のケラチンを採取するための綿棒。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
綿球に精製水を含浸させた、角質層内のケラチンを採取するための綿棒。
【請求項２】
綿球がスパイラル形状である、請求項１に記載の綿棒。
【請求項３】
綿球にメントール、ペパーミント油、ハッカ油およびスペアミント油からなる群より選ばれる１種以上をさらに含浸させた、請求項１又は２に記載の綿棒。
【請求項４】
綿球にペパーミント油をさらに含浸させた、請求項１又は２に記載の綿棒。
【請求項５】
綿球にエタノールをさらに含浸させた、請求項３または４に記載の綿棒。
【請求項６】
真菌を検出するために用いられる、請求項１〜５いずれか１項に記載の綿棒。
【請求項７】
白癬菌を検出するために用いられる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の綿棒。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、角質層内のケラチンを採取するために用いられる綿棒に関する。
【背景技術】
【０００２】
綿棒とは、軸の一端部または両端部に綿繊維が巻着されて球状の繊維集合体（綿球）を形成したものである（例えば、特許文献１参照）。綿棒は様々な用途で用いられているが、大きく分けて医療衛生用と工業用とがある。医療衛生分野における綿棒の用途には、外耳・鼻腔・口腔内の清浄、臨床検査用体液の吸着採取、および、薬剤の塗布用途などが挙げられる（例えば、特許文献２参照）。
【０００３】
ところで、皮膚真菌症は、真菌が皮膚の最外層を占める角質層に感染して定着する病気であり、代表的な真菌症として、白癬菌による水虫・たむし・しらくも、及び、カンジダ菌による皮膚カンジダ等が挙げられる。皮膚科の診察では、患部の角質層を採取して顕微鏡検査により菌の有無を診断するが、菌種を同定するには面倒な培養が必要となる。
【０００４】
患者にとっては、水虫等の診断のためにわざわざ病院に足を運ぶのはおっくうであり、診断なしで市販薬にて治療するか、放置しているケースが多い。一方、医師にとっても、検体採取用器具の準備と患部表皮を切除乃至削り取る手技、２０％ＫＯＨ溶液の準備と検体の溶解、顕微鏡による観察と真菌の判別等、手間と時間がかかるため、皮膚科医以外では敬遠され診断なしで抗真菌薬を処方する場合がある。
【０００５】
そこで、最近では、妊娠検査やインフルエンザ診断に用いられている迅速かつ簡便な検査方法である免疫クロマトグラフィー法を用いた、白癬菌の簡易診断法の開発がなされている（非特許文献１参照）。これは、採取した検体を溶液にして、抗白癬菌モノクロナール抗体と反応させ、反応量に応じた試験紙の発色によって抗原濃度を求める免疫測定法である。溶液中に菌がいれば、判定ラインの所に陽性線が出て、白癬菌が数分間で検出できる。この判定方法は、他の診断薬でも同じである（例えば、非特許文献１参照）。
【０００６】
しかし、現時点で検体の簡便な採取方法乃至採取器具が開発されていないため、トータルで簡易検査になっていない。また、当該免疫検査キットも未だ世に出ておらず開発段階であるというのが現状である。
【０００７】
一般的な真菌検体の採取方法としては、上述の患部表皮を切除乃至削り取ることにより、角質層を採取する方法が採用されているが、面倒であり医師でも慣れとコツが必要であると言われている。
【０００８】
また、これまでに、簡便な採取方法乃至採取器具として、セロハン粘着テープを用いたテープストリッピング法が提案されている（例えば、非特許文献２参照）。
しかし、テープストリッピング法では、湿潤タイプ（いわゆるジュクジュクタイプ）の疾患には適用できないし、乾燥タイプの水虫でも剥離範囲が広いため侵襲も無視できないこと、更に、上記免疫クロマトグラフィー法で必要とする検体溶液の作成が容易でないこと等でテープストリッピング法を利用するには困難性が伴う。
【０００９】
一方、皮膚微生物の採取に、滅菌綿棒を皮膚表面上に強く押し付けて菌を拭き取るｓｗａｂ法（例えば、非特許文献３参照）が知られているが、本法では皮膚の角質層内に生息する真菌まで採取することは難しく、また、後述のように乾いた綿棒で拭き取る方法は角質層内のケラチンを採取できないことが判明した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開平１０−８５２５６１号公報
【特許文献２】特開２００６−２８０６０５号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】産官学連携ジャーナル  Ｖｏ．２  Ｎｏ．４  ２００６  ｐ．２６−２７
【非特許文献２】真菌誌  Ｖｏ．４８  Ｎｏ．３  ２００７  ｐ．１３２−１３６
【非特許文献３】防菌防ばい  Ｖｏ．２２  Ｎｏ．４  １９９４  ｐ．１−６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
綿棒は一般的に、前述の通り、外耳、鼻腔、口腔内などの清浄、臨床検査用体液の吸着採取、薬剤の塗布などに使用される。例えば、外耳の清浄においては、空気中のほこり、皮膚の残骸などがたまったものと、外耳道の耳垢腺から出る分泌物が混ざったものを除去するために綿棒は使用される。つまり、綿棒を用いて表皮から剥がれ落ちたものを採取することは容易であると考えられる。しかし、皮膚の表皮に現に存在している角質層からケラチンを採取するために綿棒を使用することができるということは報告も示唆もされていない。
【００１３】
すなわち、本発明の課題は、角質層に内在する真菌、白癬菌などを検出する免疫クロマトグラフィー法の測定キットに好適に使用される検体採取用具を見出すことである。検体採取用具に求められる条件は、（１）免疫クロマトグラフィー法に供すのに充分量の検体の採取ができること、（２）湿潤タイプの患部からでも乾燥タイプの患部からでも検体を採取できること、（３）患部及び正常な皮膚のいずれにおいても侵襲や痛みがないこと、かつ（４）簡便に検体の採取が実施できることである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、かかる条件を満たす採取用具を開発するために鋭意研究を進めてきた。その結果、精製水を含浸させた綿球を備える綿棒を使用することにより、上記４条件を満たす検体採取手段を提供できることを突き止めた。更に、微量のミント系精油を含有させた場合、飛躍的にケラチンの採取量が増すことも見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１５】
すなわち、本発明は、
（１）綿球に精製水を含浸させた、角質層内のケラチンを採取するための綿棒；
（２）綿球がスパイラル形状である、（１）に記載の綿棒；
（３）綿球にメントール、ペパーミント油、ハッカ油およびスペアミント油からなる群より選ばれる１種以上をさらに含浸させた、（１）又は（２）に記載の綿棒；
（４）綿球にペパーミント油をさらに含浸させた、（１）又は（２）に記載の綿棒；
（５）綿球にエタノールをさらに含浸させた、（３）または（４）に記載の綿棒；
（６）真菌を検出するために用いられる、（１）〜（５）いずれか１項に記載の綿棒；ならびに、
（７）白癬菌を検出するために用いられる、（１）〜（５）のいずれか１項に記載の綿棒；
である。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の綿棒を用いることによって角質層から採取されたケラチンは、免疫クロマトグラフィー法に供するのに充分な量であり、患部及び正常な皮膚いずれも侵襲や痛みがなく、かつ特殊な手技を必要としないため患者自身でも簡便に角質層内のケラチンを採取できるという効果を奏する。そして、角質層内のケラチンを栄養分として生息する真菌、特に白癬菌の採取を可能にするという効果を奏する。また、本発明の綿棒を水虫の検査に適用する場合、患部が湿潤タイプでも乾燥タイプのいずれのタイプにも適用できるという効果を奏する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の綿棒は、軸部と綿球からなり、その綿球に精製水を含浸させたものであり、角質層内のケラチンを採取するために用いられる。本発明の綿棒の軸部の材質は特に限定されないが、綿球部が精製水で含浸しているため耐水性であることが望ましい。本発明の綿棒の綿球とは、綿繊維の集合体のことをいい、軸部の一端部または両端部に備えられているものをいう。綿球の形状としては、球形状、楕円形状、段々形状（スパイラル形状）などが挙げられるが、スパイラル形状が好ましい。
【００１８】
綿球への精製水の含浸率は、特に限定されないが、５０〜１００％であることが好ましい。ここで、含浸率が１００％であるとは、綿球を精製水に浸した後、精製水から引き上げても、精製水が綿球から滴り落ちない状態をいう。５０％とは、含浸率１００％の状態の精製水の重量を５０％にした状態をいう。
【００１９】
本発明の綿棒は、市販されている精製水が含浸されていない綿棒（以下、「乾燥綿棒」という場合がある）を精製水に浸して製造することもできるし、市販されている精製水が含浸された綿棒（以下、「濡れ綿棒」という場合がある）を用いてもよい。
【００２０】
本発明の綿棒の綿球には、さらにミント系の精油を含浸させることが好ましい。かかるミント系精油としては、例えば、ペパーミント油、ハッカ油、スペアミント油等を挙げることができ、好ましくは、ペパーミント油である。また、ペパーミント油の代わりに、ペパーミント油の成分の１つであるメントールを含浸させることも好ましい。本発明の綿棒の綿球にミント系の精油またはメントールを含浸させる場合、精製水に対して、０．００１〜１重量％となるように含浸させることが好ましい。
【００２１】
本発明の綿棒の綿球には、さらにエタノールを含浸させることが好ましい。本発明の綿棒の綿球にエタノールを含浸させる場合、精製水に対して、１〜３０重量％となるように含浸させることが好ましく、さらに４〜２０重量％となるように含浸させることが好ましい。
【００２２】
ミント系の精油、エタノールなどをさらに含浸させた綿棒は、市販されているものを使用してもよいし、精製水を含浸させた綿棒に添加することにより製造してもよいし、精製水、ミント系精油、エタノールなどを含有する水溶液に乾燥綿棒を浸して製造してもよい。
【００２３】
本発明の綿棒は、精製水を含浸させたいわゆる濡れ綿棒であるため、また、検査目的から、１患部あたり１本の綿棒を使用することが望ましく、綿棒一つ一つを密封包装した形態が好適である。当該包装は密封保存できる包装形態であれば特に限定はないが、開封用切欠部を設けた防水ラミネート包装が例示される。また、綿棒の軸は、濡れ綿棒であるため樹脂性であることが好ましい。
【００２４】
本発明の綿棒は、患部に軽く押し当てながら往復擦過を数回乃至数十回行うだけで、検体が採取できるため、これまでのような手技の違いによる検査結果への影響は出ないため、患部からの検体の採取は医師でなくとも、患者自身や家族が行うことができる。
【００２５】
本発明の綿棒を用いて、検体を採取した後、抽出液に約５分間浸し、攪拌すると、検体が抽出液中に溶出する。この液を免疫クロマトグラフィーに滴下すると、数分後に真菌陽性ならば判定（陽性）ラインが出現し測定が完了する。この場合に併せて、測定終了を示す終了ラインが出るようにする方が望ましい。
【実施例】
【００２６】
試験例１
１．１  供試綿棒
精製水、ペパーミント油およびエタノールを含浸したスパイラル状綿棒（実施例１）、植毛綿棒、スパイラル状綿棒および俵形綿棒を株式会社山洋から入手した。なお、植毛綿棒、スパイラル状綿棒および俵形綿棒については、精製水に含浸させた後、余分な水分はよく振って、それぞれ実施例２、３および４の綿棒とした。そして、俵形綿棒を比較例１の綿棒とした。綿棒はそれぞれ８本用意した。
【００２７】
１．２  試験方法
社内ボランティア４名で試験した。まず、石鹸を使用して両手を充分に洗浄したのち、指と指の付け根の谷間領域（以下、趾間と称す）の前後約２ｃｍ間に、綿棒の綿球を３０往復擦過して皮膚ケラチン検体を得た。なお、検体の採取は、１趾間につき１綿棒を使用した。
【００２８】
該擦過後の綿棒を、抽出液（０．１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００含有リン酸緩衝液）１００μＬ中に５分間浸けて放置した後、取り出した。リン酸緩衝液（ＰＢＳ）はＧＩＢＣＯ社製のものを用いた。該抽出液を１０μＬ分取して、タンパク染色液（Ｑｕｉｃｋ  Ｓｔａｒｔ  Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｄｙｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ，  １Ｘ、ＢＩＯ−ＲＡＤ社）１００μＬ中に分注し、１５分間放置した。
【００２９】
該タンパク染色液を５９５ｎｍの吸光度測定により測定し、予め作成した検量線から、タンパク量を算出した。なお、同じ種類の綿棒が同じ部位の趾間に偏らないように割付を行った。
【００３０】
１．３  試験結果
試験結果を表１に示す。表１の値は実施例４の綿棒で採取できたケラチン量を１．０とした相対的な値を示している。なお、比較例１の綿棒は、抽出液を全て吸い上げてしまい、抽出液中にケラチンを溶出させることができなかった。
【００３１】
【表１】
2012005536.tif 000002
【００３２】
表１より、俵形状の綿棒（実施例４）と比較して、スパイラル形状の綿棒（実施例３）は１．２倍、植毛綿棒（実施例２）は２．９倍、ケラチンを多く採取できることが判明した。実施例２の綿棒よりもペパーミント油及びエタノール含有の濡れ綿棒（実施例１）の方が、皮膚ケラチン採取能はさらに優れていることも判明した。
【００３３】
試験例２
２．１  含浸成分
次に、エタノールおよびペパーミント油（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）の影響を調べるために、俵形状のみの綿棒（ジョンソン・エンド・ジョンソン社製）を用いて以下の試験を行った。
【００３４】
含浸成分は、（１）精製水、（２）２０重量％となるようにエタノールを添加した精製水、（３）２０重量％となるようにエタノールを、０．１重量％となるようにペパーミント油を添加した精製水を含浸させた濡れ綿棒（それぞれ、実施例５、６および７）について調べた。綿棒はそれぞれ８本用意した。
【００３５】
２．２  試験方法
社内ボランティア４名で試験した。まず、石鹸を使用して両手を充分に洗浄したのち、趾間の前後約２ｃｍ間に、綿棒の綿球を３０往復擦過して皮膚ケラチン検体を得た。なお、検体の採取は、１趾間につき１綿棒を使用した。
【００３６】
該擦過後の綿棒を、抽出液（０．１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００含有ＰＢＳ）１００μＬ中に５分間浸けて放置した後、取り出した。該抽出液を１０μＬ分取して、タンパク染色液（Ｑｕｉｃｋ  Ｓｔａｒｔ  Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｄｙｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ，  １Ｘ、ＢＩＯ−ＲＡＤ社）１００μＬ中に分注し、１５分間放置した。
【００３７】
該タンパク染色液を５９５ｎｍの吸光度測定により測定し、予め作成した検量線から、タンパク量を算出した。なお、同じ種類の綿棒が同じ部位の趾間に偏らないように割付を行った。
【００３８】
２．３  試験結果
試験結果を表２に示す。表２の値は実施例５の綿棒で採取できたケラチン量を１．０とした相対的な値を示している。
【００３９】
【表２】
2012005536.tif 000003
【００４０】
表２より、意外にも、エタノール含有濡れ綿棒（実施例６）よりも、精製水含有の濡れ綿棒（実施例５）の方がケラチンの採取量は格段に多いことが判った。一方で、精製水、エタノールおよびペパーミント油を含有させた濡れ綿棒（実施例７）は、精製水含有の濡れ綿棒（実施例５）よりもケラチンの採取量は優れることも判明した。
【００４１】
以上、表１および表２の結果から、エタノール含有の濡れ綿棒よりも、精製水のみ含有した濡れ綿棒の方が皮膚ケラチン採取能は優れること、エタノールを添加させた場合には併せてペパーミント油を添加すればよいことが判明した。
【００４２】
試験例３
３．１  含浸成分
ペパーミント油（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）の効果をより詳細に調べるために、俵形状の綿棒（ジョンソン・エンド・ジョンソン社製）のみを用いた。含浸成分は、精製水のみ（実施例８）、０．０１％のペパーミント油のみを溶解した精製水を用いた（実施例９）。綿棒はそれぞれ２本用意した。
【００４３】
３．２  試験方法
社内ボランティア１名で試験した。まず、石鹸を使用して両手を充分に洗浄したのち、趾間の前後約２ｃｍ間に、綿球を３０往復擦過して皮膚ケラチン検体を得た。なお、検体の採取は、１趾間につき１綿棒を使用した。
【００４４】
該擦過後の綿棒を、抽出液（０．１％  ＴｒｉｔｏｎＸ−１００含有ＰＢＳ）１００μＬ中に５分間浸けて放置した後、取り出した。該抽出液を１０μＬ分取して、タンパク染色液（Ｑｕｉｃｋ  Ｓｔａｒｔ  Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｄｙｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ，  １Ｘ、ＢＩＯ−ＲＡＤ社）１００μＬ中に分注し、１５分間放置した。
【００４５】
該タンパク染色液を５９５ｎｍの吸光度測定により測定し、予め作成した検量線から、タンパク量を算出した。なお、同じ種類の綿棒が同じ部位の趾間に偏らないように割付を行った。
【００４６】
３．３  試験結果
試験結果を表３に示す。表３の値は実施例８の綿棒で採取できたケラチン量を１．０とした相対的な値を示している。
【００４７】
【表３】
2012005536.tif 000004
【００４８】
表３より、精製水に、わずかにペパーミント油（０．０１％）を含有させただけでも、ケラチンの採取量は約３倍も増加することが判った。
【００４９】
以上の結果から、精製水にペパーミント油を添加した濡れ綿棒が好適であることが判明した。
【００５０】
試験例４
４．１  供試綿棒
比較例１と同じ綿棒を２本用意した。
【００５１】
４．２  検体採取
社内ボランティア１名に試験した。まず、石鹸を使用して両手を充分に洗浄したのち、趾間の前後約２ｃｍ間に、綿棒の綿球を３０往復擦過して皮膚ケラチン検体を得た。なお、検体の採取は、１趾間につき１綿棒を使用した。
【００５２】
該擦過後の綿棒を、抽出液（０．１％  Ｉｇｅｐａｌ  ＣＡ−６３０含有ＰＢＳ）５００μＬ中に５分間浸けて放置した後、取り出した。該抽出液を１０μＬ分取して、タンパク染色液（Ｑｕｉｃｋ  Ｓｔａｒｔ  Ｂｒａｄｆｏｒｄ  Ｄｙｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ，  １Ｘ、ＢＩＯ−ＲＡＤ社）１００μＬ中に分注し、１５分間放置した。
【００５３】
該タンパク染色液を５９５ｎｍの吸光度測定により測定し、予め作成した検量線から、タンパク量を算出した。
【００５４】
４．３  試験結果
比較例１の綿棒のケラチン採取量は、検出限界以下であった。従って、乾いた綿棒では、角質内のケラチンを採取できないことがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明により、簡易に白癬菌などを検出することができ、検査用キットの部品として利用可能である。