(57)【要約】【課題】  高い抗老化効果、抗酸化効果、アルギナーゼ活性促進効果、痩身効果、および美白効果を発揮する抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤を提供する。【解決手段】  タチギボウシの抽出物を有効成分として含有する抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ユリ科ギボウシ属タチギボウシの抽出物を有効成分として含有する、抗老化剤。
【請求項２】
ユリ科ギボウシ属タチギボウシの抽出物を有効成分として含有する、抗酸化剤。
【請求項３】
ユリ科ギボウシ属タチギボウシの抽出物を有効成分として含有する、アルギナーゼ活性促進剤。
【請求項４】
ユリ科ギボウシ属タチギボウシの抽出物を有効成分として含有する、痩身剤。
【請求項５】
ユリ科ギボウシ属タチギボウシの抽出物を有効成分として含有する、美白剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高い抗老化効果、抗酸化効果、アルギナーゼ活性促進効果、痩身効果、および美白効果を発揮する抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、皮膚の美観を保つことに対する女性の関心は非常に高く、シワ、シミ、タルミなどは女性の肌に対する悩みの上位に常に位置する。これらの悩みのうち、シワやタルミは、加齢等による真皮線維芽細胞の機能低下や、それに伴うコラーゲンやエラスチン等の真皮マトリックスの減少や変性、さらには紫外線等の外来ストレスによる酸化障害などが重要な要因となっている。また、もう一方の大きな悩みである皮膚の黒化は、一部不明な点もあるがホルモンの異常や日光の紫外線の刺激によるメラニン色素の産生が原因であり、その中でも、シミやソバカスはメラニン色素が異常沈着することが、その要因である。
【０００３】
これまでにも、上述の皮膚の美観を損なうような諸症状を防止、或いは改善するために、さまざまな細胞賦活剤や抗酸化剤、メラニン産生抑制剤の検索および配合検討が成されてきた。
【０００４】
例えば、細胞賦活剤としては、ポンカンのエッセンス（特許文献１参照）、ツリガネニンジン属、クサギおよびそれらの抽出物（特許文献２参照）、有機溶媒によるクロレラ抽出物（特許文献３参照）等、抗酸化剤としては、キク科ヘテロテカ属植物抽出物（特許文献４参照）やカユンアンギンの抽出物（特許文献５参照）等、さらにメラニン産生抑制剤としては、ホンダワラの抽出物（特許文献６参照）、ショウガ属植物の抽出物（特許文献７参照）等が知られている。
【０００５】
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２０００−１７８１９８号公報
【特許文献３】特開平１１−３３５２９３号公報
【特許文献４】特開平１１−１８０８８６号公報
【特許文献５】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献６】特開平１０−３３０２２０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などが皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用されている。しかし、天然由来成分の中には未だその効果が知られていないものも数多く存在し、優れたアルギナーゼ活性促進作用、細胞賦活作用、抗酸化作用、美白作用などを有する有効成分の開発が期待されていた。本発明は、このような有効成分を見出すためになされたものであり、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、皮膚外用剤や飲食品などの分野に幅広く応用が可能な抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤を見出すために、天然由来の種々の物質について検討を行った。その結果、タチギボウシの抽出物に、優れた抗老化効果、抗酸化効果、アルギナーゼ活性促進効果、痩身効果、および美白効果を見出し、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、タチギボウシの抽出物を有効成分として含有する抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、優れた効果を有する抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の原料として用いられる植物であるタチギボウシ（Ｈｏｓｔａ  ｒｅｃｔｉｆｏｌｉａ  Ｎａｋａｉ：Ｈｏｓｔａ  ｓｉｅｂｏｒｄｉｉ）は、ユリ科ギボウシ属に属する草本で、北海道から本州、九州に広くに分布する。
【００１０】
本発明において、タチギボウシは原体や乾燥物を用いてもよいが、各種溶媒を用いて抽出した抽出物を用いるのが好ましい。抽出には、タチギボウシの茎、葉、花、種子、根、地下茎、果実、芽などのいずれの部位を用いても構わないが、有効性の点からは全草を用いるとよい。抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１１】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール、１、３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【００１２】
タチギボウシの上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもでき、これらの生理作用を損なわない範囲で脱色、脱臭、脱塩等の精製処理やカラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。タチギボウシの前記抽出物やその処理物および分画物は、各処理および分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。
【００１３】
タチギボウシの抽出物は、優れた抗老化作用、抗酸化作用、アルギナーゼ活性促進作用、痩身作用、および美白作用を有し、タチギボウシの抽出物を有効成分として含有する抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤として利用することができる。タチギボウシの抽出物を有効成分とする抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤は、皮膚に外用するだけではなく、毛髪に利用することや経口摂取も可能であり、食品、飲料、あるいは医薬品などにも応用することが可能である。
【００１４】
タチギボウシの抽出物は、細胞賦活作用（抗老化作用）、コラーゲン産生促進作用（抗老化作用）、スーパーオキサイドアニオン消去能（抗酸化作用）、フリーラジカル消去能（抗酸化作用）、過酸化脂質耐性促進作用（抗酸化作用）、アルギナーゼ活性促進作用、中性脂肪蓄積抑制作用（痩身作用）、チロシナーゼ活性阻害作用（美白作用）、メラニン産生抑制作用（美白作用）を発揮し、抗老化剤、抗酸化剤、アルギナーゼ活性促進剤、痩身剤、および美白剤として有用である。
【実施例】
【００１５】
以下にタチギボウシ抽出物の製造例、各作用を評価するための試験についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによってなんら限定されるものではない。
【００１６】
［抽出物１］
タチギボウシの茎、蕾、花、新芽を含む地上部位全草の乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの熱水で２０分間加熱抽出した。抽出上清を濾別したのち、凍結乾燥を行い、抽出物１を得た。
【００１７】
［抽出物２］
タチギボウシの茎、蕾、花、新芽を含む地上部位全草の乾燥粉砕物１００ｇを、２．０ｋｇの５０容量％エタノール水溶液に、分散させ、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出上清を濾別したのち、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物２を得た。
【００１８】
［抽出物３］
タチギボウシの茎、蕾、花、新芽を含む地上部位全草の乾燥粉砕物を耐圧セルに投入し、液化二酸化炭素をポンプで連続的に流し込み、２５ＭＰａ、５ｍＬ／ｍｉｎ、４０℃の条件下でそのまま二酸化炭素を流し、抽出成分を気液分離器内に集めて抽出物を得た。
【００１９】
上記抽出物１、抽出物２、抽出物３を用いて、真皮線維芽細胞賦活作用、真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生促進作用、ヒト表皮角化細胞賦活作用、スーパーオキサイドアニオン消去作用、ＤＰＰＨラジカル消去能、表皮細胞を用いた過酸化脂質耐性向上作用、アルギナーゼ活性促進作用、中性脂肪蓄積抑制作用、ヒト表皮メラニン細胞を用いたチロシナーゼ活性阻害作用、メラニン産生抑制作用の評価を行った。なお各評価結果に記載した＊および＊＊は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊でそれぞれ表したものである。
【００２０】
［抗老化作用：ヒト真皮線維芽細胞賦活作用］
正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間培養後、表１に示す各濃度となるよう抽出物３を添加した１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養した。次に４００μｇ／ｍＬとなるよう培地にて調整したＭＴＴ試薬を、上清を除いた細胞に添加し、約２時間培養した。最後に２−プロパノールにて生じたフォルマザンを抽出し、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて細胞賦活作用を評価した。評価結果を、試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を１００とした相対値にて表１に示す。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
表１より明らかなように、タチギボウシ抽出物を添加した培地では、有意な真皮線維芽細胞賦活作用を示すことが明らかとなった。
【００２３】
［抗老化作用：ヒト真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生促進作用］
正常ヒト真皮線維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間培養後、表２に示す各濃度となるように抽出物１を添加した０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した。培養上清中に分泌されたタイプＩコラーゲンの定量にはＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）及び過酸化水素を添加し反応させた後、４０５ｎｍの吸光度を測定した。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔにて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのタイプＩコラーゲン産生量を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのタイプＩコラーゲン産生量を１００とした時の相対値にて表２に示す。
【００２４】
【表２】
2012097028.tif 000003
【００２５】
表２より明らかなように、タチギボウシ抽出物を添加した培地では、有意な真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生促進作用を示すことが明らかとなった。
【００２６】
［抗老化作用：ヒト表皮角化細胞賦活作用］
ヒト表皮角化細胞ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間培養後、表３に示す各濃度となるように抽出物２を添加した５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した。次に１００μｇ／ｍＬとなるよう培地にて調整したＭＴＴ試薬を、上清を除いた細胞に添加し、約２時間培養した。最後に２−プロパノールにて生じたフォルマザンを抽出し、５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて細胞賦活作用を評価した。評価結果を試料無添加のコントロールにおける細胞賦活作用を１００とした時の相対値にて表３に示す。
【００２７】
【表３】
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【００２８】
表３より明らかなように、タチギボウシ抽出物を添加した培地では、有意なヒト表皮角化細胞賦活作用を示すことが明らかとなった。
【００２９】
表１〜３に示したとおり、タチギボウシ抽出物は、ヒト真皮線維芽細胞賦活作用、ヒト真皮線維芽細胞Ｉ型コラーゲン産生促進作用およびヒト表皮角化細胞賦活作用を示すことから、優れた抗老化効果を発揮する。
【００３０】
［抗酸化作用：ＳＯＤ様活性作用］
抽出物２を、ＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液にて表４に示す各濃度に調製したサンプル溶液２５μＬに、０．２５ｍＭのＷＳＴ−１、及び１ｍＭヒポキサンチンを含むＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液７５μＬを添加した。さらに、キサンチンオキシダーゼ２５μＬ（０．００７５Ｕｎｉｔｓ）を添加し、３７℃にて１５分間反応後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。試料無添加時の吸光度を（Ａ）、試料添加時の吸光度を（Ｂ）とした時、スーパーオキサイドアニオン消去率は次式に定義される。
消去率（％）＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
評価結果を表４に示す。
【００３１】
【表４】
2012097028.tif 000005
【００３２】
表４より明らかなように、タチギボウシ抽出物は、有意なスーパーオキサイドアニオン消去作用を示すことが明らかとなった。
【００３３】
［抗酸化作用：ＤＰＰＨラジカル消去作用］
抽出物１を５０質量％エタノールにて表５に示す各濃度に調整し、９６ウェルマイクロプレートに１００μＬずつ添加した。さらに０．２ｍＭの１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を１００μＬずつ添加し、充分に混合後、室温、暗所にて２４時間静置し、ＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料無添加時の吸光度を（Ａ）、試料添加時の吸光度を（Ｂ）とした時、ＤＰＰＨラジカル消去率は次式に定義される。
消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
評価結果を表５に示す。
【００３４】
【表５】
2012097028.tif 000006
【００３５】
表５より明らかなように、タチギボウシ抽出物は、高いＤＰＰＨラジカル消去作用を示すことが明らかとなった。
【００３６】
［抗酸化作用：表皮細胞の過酸化脂質耐性試験］
ヒト表皮角化細胞ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には１０質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間培養後、表６に示す各濃度となるように抽出物２を添加した１０質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに２４時間培養した。任意濃度のｔ−ブチルヒドロペルオキシドを添加したＨＡＮＫ’Ｓ（＋）溶液に交換し、２時間培養した。さらに、１５０μｇ／ｍＬニュートラルレッドを含有するＰＢＳ（−）に交換し、３７℃にて２時間培養した。次に１容量％酢酸を含む５０容量％エタノール水溶液に交換し、細胞内に取りこまれたニュートラルレッドを抽出し、抽出液の５４０ｎｍの吸光度を測定した。評価結果をｔ−ブチルヒドロペルオキシド無添加のコントロールにおける細胞生存率を１００としたときの相対値にて表６に示す。
【００３７】
【表６】
2012097028.tif 000007
【００３８】
表６より明らかなように、タチギボウシ抽出物を添加した培地では、過酸化脂質を添加した場合の細胞生存率が有意に向上することが明らかとなった。
【００３９】
表４〜６に示したとおり、タチギボウシ抽出物は、スーパーオキサイドアニオン消去作用、ＤＰＰＨラジカル消去作用および表皮細胞の過酸化脂質耐性向上作用を示すことから、優れた抗酸化効果を発揮する。
【００４０】
［アルギナーゼ活性促進作用］
ヒト皮膚角化細胞を１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）にウシ胎児血清（ＦＢＳ）を５％添加したものを用いた。２４時間後、表７に示す各濃度となるように抽出物２を添加した１．２ｍＭＣａＣｌ２を含む５％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに９日間培養した。培地は３日に１回交換した。培養終了後、培養上清を採取し、アルギナーゼ活性促進能の評価を行った。アルギナーゼはアルギニンを加水分解し、オルニチンと尿素を生成する。尿素はウレアーゼによってアンモニアに分解され、アンモニアはペンタシアノニトロシル鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム二水和物（ニトロプルシッドナトリウム）存在下でサリチル酸、次亜塩素酸と反応し、インドフェノールが生成する。アルカリ性条件下でインドフェノールの吸収（５７０ｎｍ）を測定し、尿素濃度を求め、アルギナーゼ活性の定量を行った。尿素定量のため、和光純薬社製尿素窒素Ｂ−テストワコーを用いて同様の測定を行い、検量線を作成した。また、ＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＫｉｔにて、各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量あたりのアルギナーゼ活性促進能を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を１００とした時の相対値にて表７に示す。
【００４１】
【表７】
2012097028.tif 000008
【００４２】
表７より明らかなように、タチギボウシ抽出物は、有意なアルギナーゼ活性促進効果を発揮することが明らかとなった。
【００４３】
［痩身作用：中性脂肪蓄積抑制作用］
皮下脂肪由来正常ヒト前駆脂肪細胞Ｃｒｙｏ  ＨＰＲＡＤ−ＳＱ（三光純薬株式会社）を１ウェル当り１．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはＰＧＭ培地（１０質量％ＦＢＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００ｕｎｉｔｓ／ｍＬ  ペニシリン、１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシン含有）を用いた。細胞がコンフルエントになる直前に抽出物２を添加したＰＧＭ−分化用培地（１０μｇ／ｍＬ  インスリン、１μＭ  デキサメタゾン、２００μＭ  インドメタシン、５００μＭ  イソブチルメチルキサンチン含有）に交換し、脂肪細胞への分化誘導を行った。分化誘導開始後、コントロール群が成熟して細胞内に多数の脂肪滴が蓄積されるまで、１０〜１４日間培養した。細胞を回収後、１０％中性緩衝ホルムアルデヒド液を用いて細胞を固定した。ＰＢＳ（−）にて洗浄の後、０．５ｗ／ｖ％  オイルレッドＯ溶液を添加し、３７℃で２時間培養した。ＰＢＳ（−）にて洗浄の後、メタノールを添加し、色素を抽出した。抽出後、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍの吸光度を測定し、両測定値の差を用いて中性脂肪蓄積抑制作用の評価を行った。評価結果を試料無添加のコントロールにおける中性脂肪蓄積量を１００とした時の相対値にて表８に示す。
【００４４】
【表８】
2012097028.tif 000009
【００４５】
表８より明らかなように、タチギボウシ抽出物は、有意な中性脂肪蓄積抑制作用を示すことから、優れた痩身効果を発揮することが明らかとなった。
【００４６】
［美白作用：チロシナーゼ活性阻害作用］
正常ヒト表皮メラニン細胞を１ウェル当り３．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはＭｅｄｉｕｍ  １５４Ｓを用いた。２４時間培養後、表９に示す濃度となるように抽出物１を添加したＭｅｄｉｕｍ  １５４Ｓに交換し、さらに４８時間培養した。次に１質量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘを含有するリン酸緩衝液７５μＬに交換し、細胞を完全に溶解させ、内５０μＬを粗酵素液として使用した。粗酵素液に基質となる５０μＬの０．０５質量％Ｌ−ドーパ含有リン酸緩衝液を加え、３７℃で２時間静置した。基質添加直後と反応終了時の４０５ｎｍの吸光度を測定し、生成されたドーパメラニン量は両測定値の差を次式に導入して求めた。
生成されたドーパメラニン量＝｛（反応後４０５ｎｍ値−反応前４０５ｎｍ値）−２．１６６｝／５．２３８
また、ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔにて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのドーパメラニン生成量を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのドーパメラニン生成量と比較し、表９に示す。
【００４７】
【表９】
2012097028.tif 000010
【００４８】
表９より明らかなように、タチギボウシ抽出物を添加した培地では、有意なチロシナーゼ活性阻害作用を示すことが明らかとなった。
【００４９】
［美白作用：メラニン産生抑制作用］
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６Ｆ０細胞）を１ディッシュ当り１．８×１０４個となるように９０ｍｍディッシュに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間培養後、表１１に示す各濃度となるように抽出物２を添加した５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに５日間培養した。培養終了後、トリプシン処理にて細胞をはがし、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物は下記判定表を基にその黒化状況を肉眼判定した。評価ではネガティブコントロールに５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地、ポジティブコントロールに５０ｍＭ乳酸ナトリウムを含有する５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。これらの目視判定結果は判定５、及び判定１とし、サンプル判定の指標とした。目視判定は表１０に示す通り、５段階評価した。また同時に、沈殿物に組織溶解剤（商品名Ｓｏｌｖａｂｌｅ）を添加して煮沸し、室温に戻して分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ製分光光度計Ｕ−３０１０）により５００ｎｍの吸光度を測定し、総メラニン量を求めた。評価結果を表１１に示す。
【００５０】
【表１０】
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【００５１】
【表１１】
2012097028.tif 000012
【００５２】
表１１より明らかなように、タチギボウシ抽出物を添加することにより、有意なメラニン産生抑制作用を示すことが明らかとなった。
【００５３】
表９、表１１に示したとおり、タチギボウシ抽出物は、チロシナーゼ活性阻害作用およびメラニン産生抑制作用を示すことから、優れた抗酸化効果を発揮する。