(57)【要約】【課題】優れた作用を有し、安全性、環境性、及び生産性に優れた、ＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤、並びにＩｇＡ抽出方法及び該抽出方法により得られたＩｇＡの提供。【解決手段】テンペを有効成分として含有するＩｇＡ産生促進剤、及びテンペを有効成分として含有する免疫賦活剤である。テンペを投与した対象から糞を採取し、該糞に溶媒及びタンパク質分解酵素阻害剤を添加して懸濁して懸濁液を調製し、該懸濁液を遠心分離して得られた上清からＩｇＡを抽出するＩｇＡ抽出方法、及び該抽出方法により得られたＩｇＡである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
テンペを有効成分として含有することを特徴とするＩｇＡ産生促進剤。
【請求項２】
テンペを有効成分として含有することを特徴とする免疫賦活剤。
【請求項３】
請求項１に記載のＩｇＡ産生促進剤、及び請求項２に記載の免疫賦活剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品。
【請求項４】
テンペを投与した対象から糞を採取し、該糞に溶媒及びタンパク質分解酵素阻害剤を添加して懸濁して懸濁液を調製し、該懸濁液を遠心分離して得られた上清からＩｇＡを抽出することを特徴とするＩｇＡ抽出方法。
【請求項５】
請求項４に記載のＩｇＡ抽出方法により得られたことを特徴とするＩｇＡ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩｇＡ産生促進剤及び免疫賦活剤、並びにＩｇＡ抽出方法及び該抽出方法により得られたＩｇＡに関する。
【背景技術】
【０００２】
現代の食生活は欧米化が進み、高脂肪・低食物繊維食の傾向が強くなっている。それに伴って肥満などの生活習慣病の増加が問題になっている。また、近年、このような食事の欧米化により、大腸がんや炎症性腸疾患などの大腸疾病の発症率も年々増加しており、その原因の一つとして高脂肪食が指摘されている。
【０００３】
大腸の腸内環境に影響を与える因子として、ＩｇＡが知られている。生体が外界と接する境面である皮膚及び粘膜、特に、腸管粘膜などの消化管粘膜は、ウィルス、細菌、寄生虫、病原性抗原、食物抗原などの多くの物質と接触している。ＩｇＡは、消化管のみならず気管粘膜にも分泌され、気道を守り、また乳汁にも分泌され、新生児の腸管を守るなど、一般に粘膜免疫の主体として働いている。消化管や呼吸器における免疫機構の最前線として、粘膜面に侵入する病原体の上皮細胞への付着、定着、及び侵入の阻止作用を持ち、粘膜面経由の毒素、細菌などに中和作用を発揮する。ＩｇＡ分泌量が増加すると、腸管免疫機能を増強させ、感染症、炎症性腸疾患、アレルギー疾患など様々な疾患を予防する（非特許文献１参照）。さらに、ＩｇＡと大腸がんとの関連性も報告されている（非特許文献２参照）。
【０００４】
そのような中で、最近、広島大学の岡崎らは、ポリフェノールの一種であるクルクミンを高脂肪食の条件下において摂取することにより糞中のＩｇＡを増加させることを明らかにし、クルクミンの大腸がん予防の機構へのＩｇＡ増加の関与を指摘している（非特許文献３参照）。
【０００５】
したがって、安全性、環境性及び生産性に優れ日常的に摂取可能であり、かつ安価でありながら、優れたＩｇＡ産生促進作用、及び免疫賦活作用の少なくともいずれかを有する天然系の各種製剤に対する需要は極めて強い。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｈｕａｎｇ  ＭＴ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．５４，ｐ．５８４１−５８４７，１９９４
【非特許文献２】Ｌａｍｂｅｒｔ  ＪＤ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ，ｖｏｌ．８１，ｐ．２８４−２９１，２００５
【非特許文献３】Ｏｋａｚａｋｉ  Ｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｕｔｒ  Ｓｃｉ  Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ，ｖｏｌ．５６，ｐ．６８−７１，２０１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れたＩｇＡ産生促進作用を有し、安全性の高いＩｇＡ産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れた免疫賦活作用を有し、安全性の高い免疫賦活剤を提供することを目的とする。また、本発明は、ＩｇＡ抽出方法及び該抽出方法により得られたＩｇＡを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、テンペが、優れたＩｇＡ産生促進作用、及び優れた免疫賦活作用を有することを見出した。
【０００９】
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  テンペを有効成分として含有することを特徴とするＩｇＡ産生促進剤である。
＜２＞  テンペを有効成分として含有することを特徴とする免疫賦活剤である。
＜３＞  前記＜１＞に記載のＩｇＡ産生促進剤、及び前記＜２＞に記載の免疫賦活剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする飲食品である。
＜４＞  テンペを投与した対象から糞を採取し、該糞に溶媒及びタンパク質分解酵素阻害剤を添加して懸濁して懸濁液を調製し、該懸濁液を遠心分離して得られた上清からＩｇＡを抽出することを特徴とするＩｇＡ抽出方法である。
＜５＞  前記＜４＞に記載のＩｇＡ抽出方法により得られたことを特徴とするＩｇＡである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＩｇＡ産生促進剤によると、従来における諸問題を解決することができ、優れたＩｇＡ産生促進作用を有し、安全性の高いＩｇＡ産生促進剤を提供することができる。
本発明の免疫賦活剤によると、従来における諸問題を解決することができ、優れた免疫賦活作用を有し、安全性の高い免疫賦活剤を提供することができる。
本発明のＩｇＡ抽出方法及びＩｇＡによると、従来における諸問題を解決することができ、優れたＩｇＡ抽出方法及び該抽出方法により得られたＩｇＡを提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（ＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤）
本発明のＩｇＡ産生促進剤は、テンペを有効成分として含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含む。
本発明の免疫賦活剤は、テンペを有効成分として含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含む。
【００１２】
＜テンペ＞
前記テンペは、大豆などの穀物をテンペ菌（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓ）により発酵させて得られた組成物である。
前記テンペは、インドネシアの伝統食品として知られ、インドネシアの納豆とも呼ばれるが、納豆のような系を引く粘性物質や特有の臭いは生成されない。テンペは４００年〜５００年以上前からジャワ島で作られ、１９世紀初め、インドネシア各地に広まったとされる。明確な記録として残っているのは、１８９５年オランダ学術調査団のジャワ島のテンペの成分分析と微生物の検索についての報告が始まりとなっている。
しかしながら、これまでテンペそのものを摂取した場合の健康への影響に関する研究は非常に少ない。
前記穀物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、大豆、落花生、米、麦などが挙げられる。これらの中でも、大豆が好ましい。
前記テンペを製造する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて公知の方法を選択することができ、例えば、大豆などの穀物を吸水させた後に、茹でて冷まし、酢などを加えて酸性とし、そこに、テンペ菌と呼ばれる接合菌に属するクモノスカビの一種であるＲｈｉｚｏｐｕｓ ｏｌｉｇｏｓｐｏｒｕｓを含む麹を混合し、薄くならして、発酵させることにより得られる。
前記発酵の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、３０℃〜４０℃が好ましく、３２℃〜３５℃がより好ましい。前記温度が、３０℃未満であると、発酵が進まないことがあり、４０℃を超えると、酸敗することがある。
前記発酵の時間としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、２０時間〜３０時間が好ましく、２２時間〜２６時間がより好ましい。前記温度が、２０時間未満であると、発酵が十分進まないことがあり、３０時間を超えると、酸敗することがある。
前記テンペとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、市販品を用いることができる。該市販品としては、例えば、テンペ（国延社製）などが挙げられる。
【００１３】
前記テンペは、ＩｇＡ産生促進作用、及び免疫賦活作用を有しているため、それらの作用を利用して、ＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤として用いることができる。
【００１４】
本発明のＩｇＡ産生促進剤は、前記テンペのみからなるものであってもよいし、その他の成分を含むものであってもよい。前記ＩｇＡ産生促進剤中の前記テンペの含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００１５】
本発明の免疫賦活剤は、前記テンペのみからなるものであってもよいし、その他の成分を含むものであってもよい。前記免疫賦活剤中の前記テンペの含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００１６】
＜その他の成分＞
前記テンペは、デキストリン、シクロデキストリンなどの薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状などの任意の剤形に製剤化して提供することができ、他の組成物（例えば、経口医薬品など）に配合して使用できる他、軟膏剤、外用液剤、貼付剤などとして使用することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味剤、矯臭剤などを用いることができる。
【００１７】
前記賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸などが挙げられる。また、前記結合剤としては、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられ、前記崩壊剤としては、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖などが挙げられ、前記滑沢剤としては、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコールなどが挙げられ、前記安定化剤としては、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられ、前記矯味・矯臭剤としては、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。
【００１８】
なお、本発明のＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤は、必要に応じてＩｇＡ産生促進作用、及び免疫賦活作用のいずれかを有する他の天然抽出物などを共に配合して用いることができる。
【００１９】
前記ＩｇＡ産生促進剤は、有効成分として含有されるテンペの作用により、ＩｇＡ産生促進作用を発揮する。
前記免疫賦活剤は、有効成分として含有されるテンペの作用により、免疫賦活作用を発揮する。
【００２０】
本発明のＩｇＡ産生促進剤によると、優れたＩｇＡ産生促進作用を通じて、例えば、腸管免疫機能を増強させ、感染症、炎症性腸疾患、アレルギー疾患、大腸がんなどの様々な疾患の予防乃至治療に好適に利用することが可能となる。ただし、本発明のＩｇＡ産生促進剤は、これらの用途以外にもＩｇＡ産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００２１】
本発明の免疫賦活剤によると、優れた免疫賦活作用を通じて、例えば、腸管免疫機能を増強させ、感染症、炎症性腸疾患、アレルギー疾患、大腸がんなどの様々な疾患の予防乃至治療に好適に利用することが可能となる。ただし、本発明の免疫賦活剤は、これらの用途以外にも免疫賦活作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００２２】
本発明のＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤は、優れた作用を有するとともに、食用とされるテンペを有効成分としており、安全性に優れているため、美容用飲食品、乃至経口用医薬に配合するのに好適である。
【００２３】
また、本発明のＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤は、優れた作用を有するので、ＩｇＡ、及び免疫賦活に関連する疾患の研究のための試薬として好適に利用できる。
【００２４】
なお、本発明のＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００２５】
（飲食品）
本発明の飲食品は、本発明のＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤の少なくともいずれかを含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含む。
【００２６】
前記飲食品とは、人の健康に危害を加える恐れが少なく、通常の社会生活において、経口乃至消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、美容食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
また、本発明の飲食品は飲料、ハードカプセル、ソフトカプセル、顆粒などの形状に形態に加工することにより簡便に飲食でき、広範囲に利用することが可能である。
【００２７】
前記飲食品としては、前記ＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤の少なくともいずれかを含有する限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これら飲料の濃縮液及び調整用粉末を含む。）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；サラダ、漬物等の惣菜；種々の形態の健康・美容・栄養補助食品；錠剤、顆粒剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。また、前記テンペを肉類の代用品として用いてもよい。なお、前記飲食品は上記例示に限定されるものではない。
【００２８】
前記ＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤の前記飲食品における含有量としては、添加対象飲食品に応じて異なり一概には規定できないが、錠剤やカプセル剤などの場合は１質量％〜９０質量％が好ましく、その他の飲食品では１質量％〜９０質量％が好ましい。また、添加対象飲食品の一般的摂取量を考慮して、成人一日当たりＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤の少なくともいずれかの摂取量が５ｇ〜１５ｇ程度になるように調製することが好ましい。
【００２９】
前記その他の成分としては、前記飲食品を製造するに当り通常用いられる補助的原料乃至添加物などが挙げられる。
前記補助的原料乃至添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
【００３０】
本発明の飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分であるテンペの働きによって、ＩｇＡ産生促進作用、及び免疫賦活作用の少なくともいずれかを極めて効果的に達成することができる。
【００３１】
なお、本発明の飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００３２】
（ＩｇＡ抽出方法及びＩｇＡ）
本発明のＩｇＡ抽出方法は、前記テンペを投与した対象から糞を採取し、該糞に溶媒及びタンパク質分解酵素阻害剤を添加して懸濁して懸濁液を調製し、該懸濁液を遠心分離して得られた上清からＩｇＡを抽出することを必要とする。
本発明のＩｇＡは、前記ＩｇＡ抽出方法により得られたことを必要とする。
前記溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、リン酸緩衝生理食塩水、生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水などが挙げられる。
前記タンパク質分解酵素阻害剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、トリプシンインヒビター、フェニルメチルスルフォニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、アプロチニン等のセリンプロテアーゼ阻害剤；ロイペプチン等のセリン／システインプロテアーゼ阻害剤；Ｅ−６４等のシステインプロテアーゼ阻害剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、グリコールエーテルジアミン四酢酸（ＥＧＴＡ）等のメタロプロテアーゼ阻害剤；ラクタシスチン、ＭＧ−１１５、ＭＧ−１３２等のプロテアソーム阻害剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記ＩｇＡ抽出方法としては、上記を満たす限り特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記テンペを投与した対象から採取した糞にトリプシンインヒビター、ＥＤＴＡ、ＰＭＳＦなどのタンパク質分解酵素阻害剤を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．２）を加え、試験管ミキサーで１分間攪拌後、４℃で一晩静置し、その後、４℃、９，０００×ｇで１０分遠心分離して得られた上清から公知の方法によりＩｇＡを抽出乃至精製する方法が挙げられる。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に制限されるものではない。
【００３４】
［動物飼育］
実験動物としてＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）系雄ラット（３週齢、初体重４０−５０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｊａｐａｎ  Ｉｎｃ．社製）を用いた。実験動物の飼育は、広島大学の実験動物取扱規程に準じて行った。具体的には、ステンレス製ケージに１匹ずつ入れ、１２時間明暗交代（８：００〜２０：００明、２０：００〜翌朝８：００暗）の恒温環境（２４℃±１℃）で飼育した。予備飼育期間は７日間とし、市販の固形飼料（ＭＦ、オリエンタル酵母工業株式会社製）、及び水道水を自由に摂取させた。
予備飼育後、ラットを３群（８匹／１群）に分け、それぞれコントロール群、テンペ群、分離大豆タンパク質（ＳＰＩ）群とし、下記表１に示す制限食（実験食）を一定量と、脱イオン水を自由に摂取させて、２１日間を飼育した。なお、制限食は、３０質量％牛脂の高脂肪食の条件下で、タンパク源として、コントロール群ではカゼイン２０質量％、テンペ群では２５質量％テンペ及びカゼイン７．１質量％、並びに、分離大豆タンパク質（ＳＰＩ）群ではＳＰＩ  １２．３質量％及びカゼイン７．１質量％を含む。テンペとＳＰＩのアミノ酸組成を表２に示した。なお、テンペとして、大豆を原料とするテンペ（テンペ、国延社製）、ＳＰＩとして、ソルビー４０００（日清オイリオグループ社製）を用いた。
実験食は、１日目に９ｇ、２−４日目に１０ｇ、５−７日目に１２ｇ、８−１３日目に１４ｇ、及び１４−２１日目に１５ｇを毎日定刻（１９：００）にラットに与えた。いずれも翌朝までに食べきる量を与えた。体重は毎朝定刻（１０：００）に測った。飼育最後の３日間に糞を採取した。糞の湿重量を測定し、１２時間凍結乾燥後、乳鉢を用いて磨り潰した。乾燥糞は、−３０℃で冷凍保存し、糞中ＩｇＡの分析を行った。
【００３５】
【表１】
2012087102.tif 000002
【００３６】
【表２】
2012087102.tif 000003
【００３７】
＜分析方法＞
＜＜糞中ＩｇＡ測定方法＞＞
糞中ＩｇＡの測定は、Ｓｈａｒｍａらの方法（Ｓｈａｒｍａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｖｏｌ．６９：ｐ．２９２８−２９３４，２００１）に従って以下のようにして行った。
【００３８】
（ＩｇＡの抽出）
乾燥糞（０．１ｇ）に４０倍量のトリプシンインヒビター（０．１ｍｇ／ｍｌ、大豆由来、和光純薬社製）、ＥＤＴＡ（５０ｍＭ）、フェニルメチルスルフォニルフルオライド（ＰＭＳＦ、１ｍＭ）を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．２）を加えた。試験管ミキサーで１分間攪拌後、４℃で一晩静置した。その後、４℃、９，０００×ｇで１０分遠心分離し、上清を回収し、ＩｇＡ測定用サンプルとした。得られたサンプルは、測定まで−３０℃で冷凍保存した。
【００３９】
（ＩｇＡ量の測定）
ＩｇＡ量の測定は、Ｒａｔ  ＩｇＡ  ＥＬＩＳＡ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢＥＴＨＹＬ社製）を用いたＥＬＩＳＡ法によって行った。抗原としてヤギ抗ラットＩｇＡ抗体を使用し、０．０５Ｍ  炭酸カルシウム緩衝液（ｐＨ９．６）で１μｌ抗原原液／０．１ｍｌ濃度となるように希釈した。この希釈溶液を９６穴プレートの各ウェルに１００μｌ入れ、４℃で一晩静置させて抗原処理を行った。翌日、各ウェルを洗浄液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液、０．１４Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０）で３回洗浄し、各ウェルに、１％ＢＳＡを含む５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液、０．１４Ｍ  ＮａＣｌ溶液（ｐＨ８．０）２００μｌを加え、マイクロプレートミキサーで攪拌後、室温（２０℃〜２５℃）で３０分間ブロッキングした。サンプルまたはラットＩｇＡ抗体の標準液を、希釈液（１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ緩衝液−０．１４Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．０）で希釈した。各ウェルを洗浄液で３回洗浄後、サンプル及びラットＩｇＡ抗体の標準品１００μｌを加え、マイクロプレートミキサーで攪拌後、室温（２０℃〜２５℃）で１時間インキュベートした。各ウェルを洗浄液で５回洗浄後、２次抗体として、希釈したＨＲＰ標識ヤギ抗ラットＩｇＡ抗体液を１００μｌ加え、マイクロプレートミキサーで攪拌後、室温（２０℃〜２５℃）で１時間インキュベートした。各ウェルを洗浄液で５回洗浄後、０．４ｍｇ／ｍｌ濃度のＯＰＤ（和光純薬社製）と０．０２６％Ｈ２Ｏ２を含む０．１Ｍクエン酸リン酸緩衝液（ｐＨ５．０）を加えアルミホイルで遮光しながら室温（２０℃〜２５℃）で１５分間反応させた。反応後、２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を１００μｌ加えて反応を停止し、４５０ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーにより測定した。
【００４０】
＜＜統計処理方法＞＞
実験により得られた各群のデータは、平均±標準誤差で示し、一元配置の分散分析を行った後、各群の有意差の判定はＦｉｓｈｅｒ’ｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｒａｎｇｅ  ｔｅｓｔを用いて行った（ｐ＜０．０５）。
【００４１】
＜結果＞
各群の制限食の摂取による糞中のＩｇＡ量を測定した結果を表３に示した。テンペ群の乾燥糞当たりのＩｇＡ量は、コントロール群より大幅に増加していた（ｐ＜０．０５）。なお、テンペ群で糞の乾燥重量が低下していたが、糞中の水分含有量が増加していた（データ示さず；ｐ＜０．０５）。糞中ＩｇＡを３日間の総排泄量として表すと、テンペ群ではコントロール群と比較して３．８７倍と著しく増加していた（ｐ＜０．０５）。ＳＰＩ群でも、乾燥糞当たりのＩｇＡ量及び糞中ＩｇＡの３日間総排泄量の増加が見られたが、テンペ群ほど顕著ではなかった（ｐ＜０．０５）。
【００４２】
【表３】
2012087102.tif 000004
【００４３】
表３の結果から、テンペが、優れたＩｇＡ産生促進作用を有することが認められた。ＳＰＩ群でもＩｇＡ産生促進作用を有することが認められたが、テンペ群の方がその効果は、顕著であった。また、テンペが、優れたＩｇＡ産生促進作用を有することから、テンペが、優れた免疫賦活作用を有すると考えられた。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明のＩｇＡ産生促進剤、及び免疫賦活剤は、優れたＩｇＡ産生促進作用、及び免疫賦活作用を有するので、腸管免疫機能を増強させ、感染症、炎症性腸疾患、アレルギー疾患、大腸がんなどの様々な疾患の予防乃至治療に好適に利用できる。