(57)【要約】      （修正有）【課題】医療器具の洗浄に用いるための酵素含有組成物の効力を高める方法を提供する。【解決手段】Ｃ８〜Ｃ１８の線形アルキルピロリドンのようなアルキルピロリドンと、アルキルポリグルコシドのようなアルキルポリサッカリドとの組み合わせを含む水性組成物、及び、医療器具の洗浄に用いるための酵素含有組成物の効力を高める方法であって、前記組成物にアルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとを含ませるステップを含む方法に関する。本発明の方法及び組成物は、プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、及びセルラーゼのような、少なくとも１種類の酵素をさらに含んでいてもよい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとの組み合わせを含む水性組成物。
【請求項２】
前記アルキルピロリドンが、Ｃ８〜Ｃ１８の線形アルキルピロリドンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アルキルポリサッカリドが、アルキルポリグルコシド（「ＡＰＧ」）である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記アルキルピロリドンが、ｎ−ドデシルピロリドン（「ｎ−ＤＰ」）である、請求項１〜３のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリサッカリドの割合が、アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド３重量部〜アルキルピロリドン３重量部：アルキルポリグルコシド１重量部である、請求項１〜４のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリサッカリドの割合が、アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド３重量部〜アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド１重量部である、請求項１〜５のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
ｎ−ドデシルピロリドン約１重量部とアルキルポリグルコシド約１重量部とを含む、請求項１〜６のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
医療器具の洗浄に用いるための酵素含有組成物の効力を高める方法であって、前記組成物にアルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとを含ませるステップを含む方法。
【請求項９】
請求項１〜６のうちのいずれか一項に記載の組み合わせを酵素含有組成物に添加する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとを酵素含有組成物に別々に添加する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記酵素含有組成物が濃縮物であり、前記アルキルピロリドン及び前記アルキルポリサッカリドを前記濃縮物に、使用強さに稀釈する前に添加する、請求項９〜１０のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとをそれぞれ１種類以上の酵素と組み合わせて調合し、稀釈に適した濃縮物を生成することによって、酵素洗浄液をもたらす、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
少なくとも１種類の酵素、アルキルピロリドン、及びアルキルポリサッカリドを含有する組成物で、医療器具を処理するステップを含む、医療器具洗浄方法。
【請求項１４】
前記アルキルピロリドンが、Ｃ８〜Ｃ１８の線形アルキルピロリドンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記アルキルポリサッカリドが、アルキルポリグルコシド（「ＡＰＧ」）である、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記アルキルピロリドンが、ｎ−ドデシルピロリドン（「ｎ−ＤＰ」）である、請求項１３〜１５のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリサッカリドの割合が、アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド３重量部〜アルキルピロリドン３重量部：アルキルポリグルコシド１重量部である、請求項１３〜１６のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリサッカリドの割合が、アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド３重量部〜アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド１重量部である、請求項１３〜１７のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ｎ−ドデシルピロリドン約１重量部とアルキルポリグルコシド約１重量部とを含む、請求項１２〜１５のうちのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
少なくとも１種類の酵素をさらに含む、請求項１〜７のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、及びセルラーゼから成る群から選択される、少なくとも１種類の酵素を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、及びセルラーゼから成る群からそれぞれ選択される、少なくとも２種類の異なる酵素を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
プロピレングリコールをさらに含む、請求項２０〜２２のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
非イオン界面活性剤をさらに含む、請求項２０〜２３のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
ＡＰＧが７．５％ｗ/ｗ未満の濃度で含まれている、請求項２０〜２４のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
ｎ−ＤＰが７．５％ｗ/ｗ未満の濃度で含まれている、請求項２０〜２５のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２７】
ＡＰＧが０．３％ｗ/ｗ未満の濃度で含まれている、請求項２０〜２６のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
ｎ−ＤＰが０．３％ｗ/ｗ未満の濃度で含まれている、請求項２０〜２７のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２９】
本明細書中において例のうちのいずれか１つに関して実質的に説明した組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水性組成物に用いるための界面活性剤系に関し、より詳細には、水性酵素を基剤とした洗浄剤に用いるための、又はこのような洗浄剤に添加するための界面活性剤系に関する。本発明は、医療器具の洗浄に用いることが目的である、酵素を基剤とした洗浄剤に利用すると、特に有益である。
【背景技術】
【０００２】
本明細書全体を通して、従来技術に関する論議はいずれも、このような従来技術は広く知られている又は当該分野における一般常識の一部を成している、ということを承認しているものとみなしてはならない。
【０００３】
本明細書では、本発明を特に医療器具洗浄用組成物に関して説明するが、本発明は、この用途に限定されるわけではない。本明細書中で使用する「医療器具」という語は、メス、生検用器具、鉗子などのような外科用器具や、外科的検査又は介入に用いられる内視鏡、結腸鏡、腹腔鏡、及びその他の器具や、内科、外科、及び歯科的治療を行う際に用いられる、洗浄、消毒、又は殺菌が必要なその他の器具を広く含むことが意図される。また、この「医療器具」という語は、理髪、美容整形、入れ墨、ボディピアスなどに加え、人間／動物の皮脂及び／又は身体の分泌物を除去することが必要とされるその他の用途において用いられるような、同様に洗浄が必要な器具を含むことも意図される。多くの医療器具は、様々な構成材料からできており若しくは構成されており、洗浄組成物は、このような材料をいずれも腐食しないようなものでなければならない。
【０００４】
一般的に、医療器具は、ある患者に対して使用した後で且つ別の患者を治療する前に、こすり洗いして、血液、組織、遊離タンパク性の汚れ、及びその他の汚れを除去してから、器具表面上に残っているあらゆるタンパク性材料をさらに蒸解又は遊離させるように構成された酵素製剤に所定時間浸すことによって、洗浄を行う。次に、この器具をきれいにすすぎ、さらに消毒又は殺菌処理を行う。交差感染の可能性を最小限に抑えるためには、ある患者に対して用いた器具は、別の患者に対して用いた器具と分けて洗浄するのが望ましい。
【０００５】
医療器具の洗浄に用いるための製剤は、一般的に、１種類以上の界面活性剤と１種類以上のタンパク質分解酵素との組み合わせを含む濃縮物で構成されている。この濃縮物は、使用前に、使用強さ（通常、１００倍）に稀釈される。このような製剤の１つが、ノボ・ノルディスク(NOVO NORDISK)によって説明されている（「ノボ製剤(Novo-formulation)」）。この用途に対して国際的に用いられている製剤には３種類あり、エピザイム(EPIZYME)（登録商標）（３Ｍの製品）と、メディザイム(MEDIZYME)（登録商標）（オーストラリアのシドニーにある、ホワイトレイ・インダストリーズ非公開会社(Whiteley Industries Pty Ltd.)の製品）と、エンドザイム(ENDOZYME)（登録商標）（アメリカ合衆国のニューヨークにある、ルホルフ・コーポレイション(Ruholf Corporation)の製品）である。このような製品は、一般的に効果的であり、広く使用されているが、より効率的な製品、特に、現在利用可能なものよりも短時間で所定レベルの効果をもたらすことのできる製剤の需要は、依然として残っている。
【０００６】
この濃縮物は、使用前の運搬及び保管において、商取引のニーズを満たす程度の安定性がなければならない。実際に濃縮水溶液に調合できる界面活性剤の選択は、制限されている。界面活性剤は、濃縮物の保管安定性を制限するため稀釈の際に発泡という問題が生じることとなるか、表面張力の低減を不十分にするか、系中の例えば酵素のような他の成分を不安定化するか、その他の不利益を招く。一般に、調合士は、このような用途を満たすことがわかっている、従来のよく知られた非イオン界面活性剤の小グループから選択された界面活性剤を利用するが、効率が改良された製剤の需要は、満たされないまま依然として残っている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、改良された界面活性剤系を提供することであり、また、本発明の好適な実施形態の目的は、従来技術の問題を回避する且つ／又は改良された性能をもたらすような、酵素を基剤とした洗浄組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の態様によれば、本発明は、アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとの組み合わせを含む水性組成物を提供する。
【０００９】
好ましくは、アルキルピロリドンは、Ｃ８〜Ｃ１８の線形アルキルピロリドンである。ｎ−ドデシルピロリドン（「ｎ−ＤＰ」）であると、非常に好ましい。望ましくは、アルキルポリサッカリドは、アルキルポリグルコシド（「ＡＰＧ」）である。
【００１０】
第２の態様によれば、本発明は、医療器具の洗浄に用いるための酵素含有組成物の効力を高める方法であって、アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとを含ませるステップを含む方法を提供する。
【００１１】
この組成物は、前記第１の態様による界面活性剤をその製剤の一部として含有する濃縮物であるのが好ましいが、この界面活性剤系は、後で濃縮物或いは使用液に添加してもよい。
【００１２】
第３の態様によれば、本発明は、少なくとも１種類の酵素、アルキルピロリドン、及びアルキルポリサッカリドを含有する組成物で、医療器具を処理するステップを含む、医療器具洗浄方法を提供する。
【００１３】
特許請求の範囲及び発明の詳細な説明を通して、文脈が明らかに別の意味を必要としていない限り、「含む」、「含んでいる」などの語は、排他的又は排除的な意味と反対の包含的な意味、つまり、「含むが、それに限定されるわけではない」という意味で解釈されるべきである。
【００１４】
アルキルピロリドンは、水中濃度が高いほど、表面張力を低減することが知られており、ドデシルピロリドンの場合には約０．１％、オクチルピロリドンの場合には約０．００２％の濃度（各ピロリドンの最大水中溶解度に相当）で、表面張力が最小（効果が最大）となる。この最大水中濃度は、いずれの実際濃度に稀釈されても、界面活性剤として最大の効果をもたらす濃度よりも必然的に低くなってしまうため、従来、濃縮物には用いられてこなかった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
ｎ−ドデシルピロリドン（「ｎ−ＤＰ」）とアルキルポリグルコシド（「ＡＰＧ」）との組み合わせで構成された本発明による添加剤を、市販されている３種類の酵素洗浄剤濃縮物のそれぞれから調製された溶液に添加した。この３種類の酵素洗浄剤濃縮物とは、メディザイム（登録商標）、エンドザイム（登録商標）、及びエピザイム（登録商標）であった。ノボ・インダストリーズ(NOVO INDUSTRIES)によってNovo NordiskPublications Application Sheet B-613の「内視鏡洗浄用洗剤における酵素の応用(Application of Enzymes in Detergents for Endoscope Cleaning)」に説明されている製品である、第４の濃縮物「ノボ製剤」も調製して試験した。表１に示す試験ではそれぞれ、添加剤は、濃縮物の重量に対し０．２％ｗ/ｗのｎ−ドデシルピロリドン（「ｎ−ＤＰ」）と０．１％ｗ/ｗのアルキルポリグルコシド（「ＡＰＧ」）とで構成された。
【００１６】
ノボ製剤（濃縮物）の組成は次のとおりである。
成分                                                  ％ｗ/ｗ
非イオン界面活性剤（テリック(Teric) ＢＬ９）          １２
プロピレングリコール                                  ２２
トリエタノールアミン                                    ７
ホウ酸                                                  ４
塩化カルシウム                                          ０．１
サビナーゼ(Savinase) １６．０Ｌ（プロテアーゼ）        １３
ターマミル(Termamyl)（アミラーゼ）                      ７
水                                                  １００とするまで
ｐＨ                                                    ７
【００１７】
エピザイム組成物（濃縮物）の組成は次のとおりである。
成分                                                  ％ｗ/ｗ
水道水                                                １９．０
テリック  ＢＬ９（非イオン界面活性剤）                １０．０
防腐剤                                                  ０．１５
酵素安定剤                                              ６．０
５０％苛性ソーダ                                        ２．５
プロピレングリコール                                    ６．０
プロテアーゼ                                          １０．０
リパーゼ                                                ０．２
アミラーゼ                                              １．５
セルラーゼ                                              ０．５
香料                                                    ０．１５
水                                                  １００とするまで
【００１８】
例えば、プロテアーゼはサブチリシン、アミラーゼはα−アミラーゼ、セルラーゼはエンド−１，４−β−グルカナーゼ、リパーゼはトリアシルグリセロールであってよい。しかし、その他の酵素又は複数の酵素の組み合わせを、これらの代わりに用いてもよい。
【００１９】
これらの洗浄組成物濃縮物をそれぞれ、標準硬水１００部に対し濃縮物１部の割合で稀釈した（蒸留水１Ｌあたり、塩化カルシウム０．３０４ｇ及び塩化マグネシウム０．０６５ｇ：医薬品目５４及びガイドライン(Therapeutic Goods Order 54 & Guidelines)、１９９６、ｐ．１７）。次に、各製品の効力を、（１）そのままの状態と（２）本発明による添加剤を加えた状態で、スライドガラス上の標準汚れ製剤に対して試験した。製剤の効率（所定の評点に達するのに必要な時間）を、様々な温度において測定した。その結果を、本発明による添加剤を含む組成物の結果と比較して、表１に示す。
【００２０】
促進老化試験について、表２にまとめる。標準汚れ製剤の詳細については、表３と、「食器洗い機用洗剤の洗浄性能を確認する方法(Methods for Ascertaining the Cleaning Performance of Dishwasher Detergents)」（ＳＯＦＷ−ジャーナル(SOFW-Journal)、１２６．Jahrgang ３−２０００）とに示されている。
【００２１】
【表１】
2012072409.tif 000002
【００２２】
表１から明らかであるように、添加剤を加えた方が、組成物が所定の評点に達するのに必要とする時間が短縮されるが、このような時間の短縮は、各温度において見られる。この添加剤は、特に、より低い温度において効果的である。
【００２３】
表１に示した結果は、濃縮物に対し、Ｎ−ＤＰを０．２ｗ/ｗ％、ＡＰＧを０．１ｗ/ｗ％用いることによって得られたが、このＮ−ＤＰとＡＰＧとの割合は変更してもよい。この割合は、アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド３重量部〜アルキルピロリドン３重量部：アルキルポリグルコシド１重量部であるのが好ましく、より好ましくは、アルキルピロリドン３重量部：アルキルポリグルコシド１重量部〜アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド１重量部であると良い。
【００２４】
Ｎ−ＤＰ及びＡＰＧの濃度はそれぞれ、濃縮物に対して７．５％ｗ/ｗ未満（即ち、濃縮物を濃縮物１部：水１００部で稀釈した稀釈物に対して約０．００７５％未満）であるのが好ましく、より好ましくは、３％ｗ/ｗ未満であると良い。実際に用いられる濃度は、必要とされる表面張力性、アルキルポリグルコシドの親水性、及び製剤中のその他の賦形剤がアルキルポリグルコシドに対してもたらす屈水度、並びに、個々の製剤に関して生じ得るその他の要素によって決まる。
【００２５】
表２は、促進老化試験における添加剤の効果を示している。この結果により、添加剤は、保管安定性をわずかに向上させる、又は、少なくとも、保管安定性に悪影響は及ぼさない、ということが実証されている。
【００２６】
【表２】
2012072409.tif 000003
【００２７】
表３は、アルキルピロリドン及びアルキルポリグルコシドの濃度並びに割合を変更した場合の効果を示している。これにより、この組成物は、広範囲にわたるアルキルピロリドンとアルキルポリグルコシドの割合に関して、洗浄のための接触時間を短縮する効果をもたらす、ということがわかる。
【００２８】
【表３】
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【００２９】
【表４】
2012072409.tif 000005
【００３０】
【表５】
2012072409.tif 000006
【００３１】
【表６】
2012072409.tif 000007
【００３２】
表４
汚れの組成及び洗剤の酵素活性度試験
電子レンジで加熱した牛乳：・牛乳６０ｍｌ
・ビーカー６個
・４５０Ｗに設定した電子レンジ
・８０℃に設定したオーブンヒーター
水を満たした６個のビーカーをガラス製のターンテーブル上に輪になるように置き、「高温」（９００Ｗ）で１０分間放置することによって、電子レンジを予熱した。次に、これらの水の入ったビーカーを、それぞれ牛乳が１０ｍｌ入ったビーカーに置き換えた。この牛乳を、４５０Ｗで１０分間加熱した後、冷却して、膜を形成させ、８０℃のオーブンに２時間入れた。
ひき肉：・牛ひき肉２０グラム
・卵黄及び卵白７．５グラム
・水８．０グラム
・３０×３０ｍｍの極性基体（セラミックタイル）
ハンドブレンダーを用いて、ひき肉を卵黄及び水と混ぜ合わせた。均質化した混合物１ｇを、３×３ｃｍのセラミックタイルの滑面側に、スプーンですくって載せた。次に、このタイルを１０分間オーブンに入れておいた。
エディンバラの土：・卵黄２０ｇ
・水２０ｇ
・コレステロール０．５ｇ
・牛ゼラチン３ｇ
・豚ムチン０．４５ｇ
牛ゼラチンと水とを混ぜ合わせ、この混合物が均質になるまで加熱した。このゼラチンを３０℃まで冷却した後、これに、コレステロール、豚ムチン、及び卵黄を混ぜ入れた。この汚物０．１ｇを、顕微鏡用スライドの表面上に付着させた。各組のスライドに対して、この付着物を均一な厚さにした。即ち、付着させる器具の各縁に沿って貼ってある粘着テープの縁によって、厚さを調整した。内視鏡洗浄の状態をシミュレートするために、このスライドを２０℃の開放空気に２０分間放置して乾燥させた。
【００３３】
理論に縛られることは望まないけれども、ポリサッカリド（多糖）はピロリドンを安定化するように見られ、この組み合わせは濃縮物中により溶解しやすいため、その使用稀釈物における表面張力の低減が実質的に改良されることとなる。
【００３４】
これらの試験結果は、ｎ−ドデシルピロリドンを用いた場合のものであるが、他のアルキルピロリドン、特にＣ８〜Ｃ１８のアルキルピロリドンを代わりに用いてもよい。添加量は、単純に試してみることによって決定してもよいが、一般的には、濃度を本明細書中で用いたレベルよりも著しく高くすると、利点が弱まる傾向にある。同様に、他のアルキルポリサッカリドを、ＡＰＧの代わりに用いてもよい。例えば、他の糖単位及び糖単位の誘導体を、グルコース単位の代わりに用いてもよい。繰り返しになるが、最適な濃度というものがあるので、それ以上に濃度を高くすると、相対的に利点が弱まってしまうこととなる。ｎ−アルキルピロリドンとＡＰＧとを組み合わせて用いるのが非常に好ましいが、単独で添加しても、少なくともいくらかの汚れに対しては有益な効果を得ることができる。ｎ−ＤＰとＡＰＧとの最適な割合は、所定の濃度を単純に試してみることによって決定してもよい。
【００３５】
本発明の組み合わせによって、多数の最終用途での使用が期待されるような、改良された界面活性剤系が提供される。医療器具用洗浄剤の分野において、本発明の界面活性剤系は、市販されている酵素洗浄製品又はその濃縮物にそのまま添加してもよいし、適切な稀釈度で稀釈してから使用前に使用液に添加してもよい。しかし、これらの添加剤は、濃縮物の製造時に、あとは使用前に稀釈するだけである濃縮物に混合するのが好ましい。
【００３６】
本発明による添加剤は、食器洗い用、手洗い用、及びその他の表面洗浄用組成物に添加してもよい。
【００３７】
本発明の実施形態は、本明細書中に開示した発明概念から逸脱しない限り、本明細書の教示から当業者に明らかな程度で変更してもよく、他の化学薬品を添加したり、他の化学薬品に置き換えてもよい。
【００３８】
付属文書１
ノボ・ノルディスク  Ｂ  ８６３ｂ−ＧＢ
酵素製剤及び洗剤（アゾカゼイン基質）におけるタンパク質分解活性度を測定するための手順
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】この方法の図式による説明が、図１に示されている。
【００４０】
・原理
プロテアーゼによって、アゾカゼインを４０℃で３０分間加水分解させる。蒸解されなかったタンパク質をトリクロロ酢酸で沈殿させ、蒸解された生成物の量を分光測光法によって測定する。
・酵素単位の定義
別の単位は定義しない。活性度は、既知の活性度の標準に関して測定し、その結果は、この標準に対して用いられたのと同じ単位で示す。
・検定条件
ｐＨ：      ８．５（０．２Ｍのトリス−ＳＯ4緩衝液）
温度：      ４０℃
基質：      ０．５％のアゾカゼイン（反応混合物中）
反応時間：  ３０分間
・装置
３９０ｎｍにおける吸光度を読み取るための分光光度計
ｐＨ計
４０℃・０．５℃の水浴
秒針の付いたタイマー
ボルテックス・ミキサー
１６・１２５ｍｍの試験管
５ｍｌ容量の反復ディスペンサー
ワットマン(Whatman)ｎｏ．３又はそれと同等の小型漏斗及び濾紙
・試薬
１）２．０Ｍのトリス緩衝原液
脱イオン水７００〜８００ｍｌに、トリスヒドロキシメチルアミノメタン（シグマ(Sigma)「トリズマベース(Trizma Base)」Ｔ−１５０３又はそれと同等のもの）２４２ｇを溶解させる。
１０ＮのＨ2ＳＯ4を用いて、ｐＨを８．５に調整する。
容量を１リットルに調整する。
この濃縮物は、０．２Ｍのトリス緩衝液を含む全ての最終稀釈物１００ｍｌ容量に対し、１０ｍｌの割合で用いるべきである。
２）５０％の尿素溶液
温かい脱イオン水５０ｍｌに、尿素（分析用）５０ｇを溶解させる。
容量を１リットルに調整する。
３）１０％のトリクロロ酢酸溶液（停止試薬）
脱イオン水２００ｍｌに、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）１００ｇを溶解させる。
容量を１リットルに調整する。
４）アゾカゼイン（基質溶液）
２５０ｍｌビーカーを毎日きれいにする。つまり、使用しなかった基質はいずれも廃棄する。
アゾカゼイン（シグマ  Ａ−２７６５）０．６ｇを計量する。
５０％の尿素溶液１０ｍｌを添加し、溶解するまで混合する。
２．０Ｍのトリス緩衝原液１０ｍｌを添加する。
脱イオン水３０〜５０ｍｌを添加し、粒子が無くなるまで攪拌を続ける。
稀釈したＨ2ＳＯ4を用いて、ｐＨを８．５に調整する。容量を１００ｍｌに調整し、完全に混合する。
検定を始められる状態になるまで、冷却しておく。
５）酵素試料及び標準
アルカラーゼ(Alcalase)（登録商標）については付録Ｉを、エスペラーゼ(Esperase)（登録商標）及びサビナーゼ（登録商標）については付録ＩＩを、デュラザイム(Durazym)（登録商標）については付録ＩＩＩを参照。
プロテアーゼ検定のための洗剤試料を溶解した後、この溶液のｐＨを確認し、必要であれば、８．５・０．１単位に調整することを強く推奨する。
洗剤におけるプロテアーゼの正確な活性レベルが知りたいのであれば、使用されている特定の製剤がプロテアーゼの活性度に全く影響を及ぼさないということが既にわかっている場合を除き、洗剤の基剤は標準液に含めるべきである。洗剤の基剤の濃度は、プロテアーゼを含む洗剤の試料液において用いられる濃度に等しいのがよい。
溶液中にＮＴＡ又はＥＤＴＡのような強キレート化剤が含まれていると、検定のために様々な材料を調製するのに必要な時間にわたって、プロテアーゼが失活することがある。この失活は、試料液にカルシウムを余分に加えることによって克服することができる。
・手順
１）水浴を４０℃±０．５℃に予熱する（およそ１時間）。
２）検定を始める前のおよそ１０分間、基質溶液を４０℃の水浴に入れて平衡させる。
３）適切にラベルが貼られた試験管に、試料又は酵素標準液１ｍｌをピペットで入れ、水浴において４０℃に平衡させる（およそ１分間）。
４）反応開始：
正確な時間間隔で、試料又は標準液の入った各試験管に基質溶液５ｍｌを添加し、渦動し、水浴に３０分間戻す。
試料ブランク：
試料ブランクに１０％のＴＣＡ５ｍｌを添加して渦動し、次に、基質溶液５ｍｌを添加して渦動し、濾過できる状態になるまで室温で放置しておく。
５）反応停止：
きっかり３０分後、即ち、前と同じ時間間隔で、試料又は標準液の入った各試験管に１０％のＴＣＡ５ｍｌを添加して渦動し、室温で放置しておく。
６）１５〜２０分後、全ての試験管の溶液を、重力濾過により、濾紙を通して、新しくて乾いており且つ適切にラベルが貼られた試験管に濾過する。
７）脱イオン水ブランクに対し、３９０ｎｍにおける吸光度を読み取る。
・計算
１．標準曲線：
ａ）標準ブランク（ｂｌａｎｋ）（Ａ0、Ｅ0、又はＳ0）＞０．１６である場合、検定は新しい基質でやり直すべきである。
ｂ）標準ブランク＜０．１６である場合、標準からそのＡ390読取り値を引いて、・吸光度を得る。
ｃ）・吸光度対タンパク質分解活性度（ＡＵ又はＫＮＰＵ／管＝ＡＵ又はＫＮＰＵ／最終稀釈物のｍｌ）の曲線を描く。
２．試料（ｓａｍｐｌｅ）管：
・吸光度＝Ａsample−Ａblank
標準曲線を用いて、試料／管の活性度を測定する。
【００４１】
【数１】
2012072409.tif 000008
【００４２】
付録Ｉ
アルカラーゼ（登録商標）
単位の定義：アンソン単位（ＡＵ：Anson Unit）
１アンソン単位＝フェノール試薬で１ミリ当量のチロシンと同じ色をもたらすＴＣＡ可溶生成物の量が１分当たり遊離されるような初速度で、ヘモグロビンＡを蒸解する酵素*の量
*ＮＮＡＳ法  ＡＦ４／５−ＧＢ、即ち、タンパク質分解活性度の測定のための改良アンソン−ヘモグロビン法(Modified Anson-Haemoglobin Method for the Determination of Proteolytic Activity)において規定された反応条件に基づく。
アンソン単位における活性度がわかっている酵素を用いて、標準曲線を作製する。
次に、活性度がわかっていないものを、この曲線と比較する。
緩衝液：０．２Ｍのトリス、ｐＨ８．５
試料活性度範囲：５・１０-5〜１５・１０-5ＡＵ／ｍｌ
標準ブランク：０．２Ｍのトリス緩衝液１ｍｌ、ｐＨ８．５＝Ａ0
基質：アゾカゼイン溶液、０．５％、ｐＨ８．５
試料の調製：
溶液の活性度が５・１０-5〜１５・１０-5ＡＵ／ｍｌとなり且つ溶液のｐＨが８．５となるように、正確にわかっている容量の０．２Ｍのトリス緩衝液に、正確に計量した量の試料を溶解させる。
Ｎ．Ｂ．活性度がわかっていないものに対してそれぞれ、１つの試料ブランクと、（必要に応じて）１つ以上の複製とを調製する。
検定できる状態になるまで、溶液を氷上に放置する。
標準曲線
酵素標準原液：活性度が２．６・１０-3ＡＵ／ｍｌとなるように、０．２Ｍのトリス緩衝液（ｐＨ８．５）１００ｍｌに、正確に計量したアルカラーゼ標準液を溶解させる。
以下のように、原液を稀釈する。
【００４３】
【表７】
2012072409.tif 000009
【００４４】
付録ＩＩ
サビナーゼ（登録商標）／エスペラーゼ（登録商標）
単位の定義：キロ・ノボ・プロテアーゼ単位（ＫＮＰＵ：Kilo Novo Protease Unit）
１ＫＮＰＵ＝１０００ＮＩＰＵ
１ノボ・プロテアーゼ単位（ＮＰＵ）＝１分当たりのペプチド生成初速度が１分当たりグリシン１マイクロモルに相当するような速度で、カゼインを加水分解する酵素*の量
*ＮＮＡＳ法  １６２／３−ＧＢ、即ち、タンパク質分解活性度の測定のための手動ＤＭＣ法(Manual DMC Method for the Determination of ProteolyticActivity)において規定された標準条件
ＫＮＰＵ単位における活性度がわかっている酵素を用いて、標準曲線を作製する。
次に、活性度がわかっていないものを、この曲線と比較する。
緩衝液：０．２Ｍのトリス、ｐＨ８．５
試料活性度範囲：２・１０-4〜６・１０-4ＫＮＰＵ／ｍｌ
標準ブランク：０．２Ｍのトリス緩衝液１ｍｌ、ｐＨ８．５＝Ｅ0又はＳ0
基質：アゾカゼイン溶液、０．５％、ｐＨ８．５
試料の調製：
溶液の活性度が２・１０-4〜６・１０-4ＫＮＰＵ／ｍｌとなり且つ溶液のｐＨが８．５となるように、正確にわかっている容量の０．２Ｍのトリス緩衝液に、正確に計量した量の試料を溶解させる。
Ｎ．Ｂ．活性度がわかっていないものに対してそれぞれ、１つの試料ブランクと、（必要に応じて）１つ以上の複製とを調製する。
検定できる状態になるまで、溶液を氷上に放置する。
標準曲線
酵素標準原液：活性度が１・１０-2ＫＮＰＵ／ｍｌとなるように、０．２Ｍのトリス緩衝液（ｐＨ８．５）１００ｍｌに、正確に計量したサビナーゼ又はエスペラーゼ標準液を溶解させる。
以下のように、原液を稀釈する。
【００４５】
【表８】
2012072409.tif 000010
【００４６】
付録ＩＩＩ
デュラザイム（登録商標）
単位の定義：デュラザイム・プロテアーゼ単位（ＤＰＵ：Durazym Protease Unit）
デュラザイム標準液に関し、試料と同じ単位、即ちＤＰＵで、活性度を測定する。
ＤＰＵにおける活性度がわかっている酵素を用いて、標準曲線を作製する。
次に、活性度がわかっていないものを、この曲線と比較する。
緩衝液：０．２Ｍのトリス、ｐＨ８．５
試料活性度範囲：６・１０-4〜１８・１０-4ＤＰＵ／ｍｌ
標準ブランク：０．２Ｍのトリス緩衝液１ｍｌ、ｐＨ８．５＝Ｄ0
基質：アゾカゼイン溶液、０．５％、ｐＨ８．５
試料の調製：
溶液の活性度が６・１０-4〜１８・１０-4ＤＰＵ／ｍｌとなり且つ溶液のｐＨが８．５となるように、正確にわかっている容量の０．２Ｍのトリス緩衝液に、正確に計量した量の試料を溶解させる。
Ｎ．Ｂ．活性度がわかっていないものに対してそれぞれ、１つの試料ブランクと、（必要に応じて）１つ以上の複製とを調製する。
検定できる状態になるまで、溶液を氷上に放置する。
標準曲線
酵素標準原液：活性度が１・１０-2ＤＰＵ／ｍｌとなるように、０．２Ｍのトリス緩衝液（ｐＨ８．５）１００ｍｌに、正確に計量したデュラザイム標準液を溶解させる。
以下のように、原液を稀釈する。
【００４７】
【表９】
2012072409.tif 000011
【図１】
2012072409.tif 000012
【手続補正書】
【提出日】平成23年12月2日(2011.12.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルキルピロリドンとアルキルポリサッカリドとの組み合わせを含む水性組成物。
【請求項２】
前記アルキルピロリドンが、Ｃ８〜Ｃ１８の線形アルキルピロリドンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アルキルポリサッカリドが、アルキルポリグルコシド（ＡＰＧ）である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記アルキルピロリドンが、ｎ−ドデシルピロリドン（ｎ−ＤＰ）である、請求項１〜３のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記アルキルポリサッカリドが、アルキルポリグルコシドであり、前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリグルコシドの割合が、アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド３重量部〜アルキルピロリドン３重量部：アルキルポリグルコシド１重量部である、請求項１〜４のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記アルキルポリサッカリドが、アルキルポリグルコシドであり、前記アルキルピロリドンと前記アルキルポリグルコシドの割合が、アルキルピロリドン３重量部：アルキルポリグルコシド１重量部〜アルキルピロリドン１重量部：アルキルポリグルコシド１重量部である、請求項１〜５のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
ｎ−ドデシルピロリドン１重量部とアルキルポリグルコシド１重量部とを含む、請求項１〜６のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも１種類の酵素をさらに含む、請求項１〜７のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、及びセルラーゼから成る群から選択される、少なくとも１種類の酵素を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
プロテアーゼ、リパーゼ、アミラーゼ、及びセルラーゼから成る群からそれぞれ選択される、少なくとも２種類の異なる酵素を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
プロピレングリコールをさらに含む、請求項８〜１０のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
非イオン界面活性剤をさらに含む、請求項８〜１１のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
ＡＰＧが７．５％ｗ／ｗ未満の濃度で含まれている、請求項８〜１２のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
ｎ−ＤＰが７．５％ｗ／ｗ未満の濃度で含まれている、請求項８〜１３のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
ＡＰＧが３％ｗ／ｗ未満の濃度で含まれている、請求項８〜１４のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
ｎ−ＤＰが３％ｗ／ｗ未満の濃度で含まれている、請求項８〜１５のうちのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
ｎ−ドデシルピロリドンとアルキルポリグルコシドとを２：１の重量比で含む組成物。
【請求項１８】
ｎ−ドデシルピロリドンとアルキルポリグルコシドとを０．２：１の重量比で含む組成物。
【請求項１９】
ｎ−ドデシルピロリドンとアルキルポリグルコシドとを１：３７．５の重量比で含む組成物。
【請求項２０】
ｎ−ドデシルピロリドンとアルキルポリグルコシドとを１０：１の重量比で含む組成物。
【請求項２１】
ｎ−ドデシルピロリドンとアルキルポリグルコシドとを７５：１の重量比で含む組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
医療器具の洗浄に用いるための製剤は、一般的に、１種類以上の界面活性剤と１種類以上のタンパク質分解酵素との組み合わせを含む濃縮物で構成されている。この濃縮物は、使用前に、使用濃度（通常、１００倍）に稀釈される。このような製剤の１つが、ノボ・ノルディスク（ＮＯＶＯ ＮＯＲＤＩＳＫ）によって説明されている（「ノボ製剤（Ｎｏｖｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）」）。この用途に対して国際的に用いられている製剤には３種類あり、エピザイム（ＥＰＩＺＹＭＥ）（登録商標）（３Ｍの製品）と、メディザイム（ＭＥＤＩＺＹＭＥ）（登録商標）（オーストラリアのシドニーにある、ホワイトレイ・インダストリーズ非公開会社（Ｗｈｉｔｅｌｅｙ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｐｔｙ Ｌｔｄ．）の製品）と、エンドザイム（ＥＮＤＯＺＹＭＥ）（登録商標）（アメリカ合衆国のニューヨークにある、ルホルフ・コーポレイション（Ｒｕｈｏｌｆ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）の製品）である。このような製品は、一般的に効果的であり、広く使用されているが、より効率的な製品、特に、現在利用可能なものよりも短時間で所定レベルの効果をもたらすことのできる製剤の需要は、依然として残っている。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
Ｎ−ＤＰ及びＡＰＧの濃度はそれぞれ、濃縮物に対して７．５％ｗ／ｗ未満（即ち、濃縮物を濃縮物１部：水１００部で稀釈した稀釈物に対して約０．０７５％未満）であるのが好ましく、より好ましくは、３％ｗ／ｗ未満であると良い。実際に用いられる濃度は、必要とされる表面張力性、アルキルポリグルコシドの親水性、及び製剤中のその他の賦形剤がアルキルポリグルコシドに対してもたらす屈水度、並びに、個々の製剤に関して生じ得るその他の要素によって決まる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
付録ＩＩ
サビナーゼ（登録商標）／エスペラーゼ（登録商標）
単位の定義：キロ・ノボ・プロテアーゼ単位（ＫＮＰＵ：Ｋｉｌｏ Ｎｏｖｏ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｕｎｉｔ）
１ＫＮＰＵ＝１０００ＮＰＵ
１ノボ・プロテアーゼ単位（ＮＰＵ）＝１分当たりのペプチド生成初速度が１分当たりグリシン１マイクロモルに相当するような速度で、カゼインを加水分解する酵素*の量
*ＮＮＡＳ法  １６２／３−ＧＢ、即ち、タンパク質分解活性度の測定のための手動ＤＭＣ法（Ｍａｎｕａｌ ＤＭＣ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ）において規定された標準条件
ＫＮＰＵ単位における活性度がわかっている酵素を用いて、標準曲線を作製する。
次に、活性度がわかっていないものを、この曲線と比較する。
緩衝液：０．２Ｍのトリス、ｐＨ８．５
試料活性度範囲：２・１０-4〜６・１０-4ＫＮＰＵ／ｍｌ
標準ブランク：０．２Ｍのトリス緩衝液１ｍｌ、ｐＨ８．５＝Ｅ0又はＳ0
基質：アゾカゼイン溶液、０．５％、ｐＨ８．５
試料の調製：
溶液の活性度が２・１０-4〜６・１０-4ＫＮＰＵ／ｍｌとなり且つ溶液のｐＨが８．５となるように、正確にわかっている容量の０．２Ｍのトリス緩衝液に、正確に計量した量の試料を溶解させる。
Ｎ．Ｂ．活性度がわかっていないものに対してそれぞれ、１つの試料ブランクと、（必要に応じて）１つ以上の複製とを調製する。
検定できる状態になるまで、溶液を氷上に放置する。
標準曲線
酵素標準原液：活性度が１・１０-2ＫＮＰＵ／ｍｌとなるように、０．２Ｍのトリス緩衝液（ｐＨ８．５）１００ｍｌに、正確に計量したサビナーゼ又はエスペラーゼ標準液を溶解させる。
以下のように、原液を稀釈する。
【外国語明細書】
2012072409000001.pdf