(57)【要約】【課題】接着性及び生体安全性に優れた医療用接着剤を提供する。【解決手段】ゼラチン水溶液Ａとグルタルアルデヒド水溶液Ｂとから構成される組織接着性を有する医療用接着剤であって、上記ゼラチン水溶液Ａは、ゼラチン濃度が５〜４０質量％であって、かつ粘度が１〜２０００ｍＰａ・ｓであり、上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、グルタルアルデヒド濃度が０．０１〜１０質量％である医療用接着剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゼラチン水溶液Ａとグルタルアルデヒド水溶液Ｂとから構成される組織接着性を有する医療用接着剤であって、
前記ゼラチン水溶液Ａは、ゼラチン濃度が５〜４０質量％であって、かつ、粘度が１〜２０００ｍＰａ・ｓであり、さらに
前記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、グルタルアルデヒド濃度が０．０１〜１０質量％である  
ことを特徴とする医療用接着剤。
【請求項２】
ゼラチンの重量平均分子量が５，０００〜３０万である請求項１記載の医療用接着剤。
【請求項３】
ゼラチン水溶液ＡのｐＨが５〜９である請求項１又は２記載の医療用接着剤。
【請求項４】
グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、更に増粘剤を０．５〜１０質量％含有する請求項１、２又は３記載の医療用接着剤。
【請求項５】
グルタルアルデヒド水溶液Ｂの粘度が１〜２０００ｍＰａ・ｓである請求項４記載の医療用接着剤。
【請求項６】
グルタルアルデヒド水溶液Ｂとゼラチン水溶液Ａとの混合比（Ｂ／Ａ）が、質量比で０．０１〜２である請求項１、２、３、４又は５記載の医療用接着剤。
【請求項７】
ゼラチン水溶液Ａとグルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合する場合の温度が３０〜６５℃である請求項１、２、３、４、５又は６記載の医療用接着剤。
【請求項８】
ゼラチン水溶液Ａとグルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合してからゲルが生成するまでのゲル化時間が５〜１００秒である請求項１、２、３、４、５、６又は７記載の医療用接着剤。
【請求項９】
ゼラチン水溶液Ａとグルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合して生成されるゲルを主体とする医療用材料であって、
前記ゼラチン水溶液Ａは、ゼラチン濃度が５〜４０質量％であり、
前記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、グルタルアルデヒド濃度が０．０１〜１０質量％である
ことを特徴とする医療用材料。
【請求項１０】
接着強度が２０ｇｆ／ｃｍ２以上である請求項９記載の医療用材料。
【請求項１１】
引張強度が２０ｇｆ／ｃｍ２以上である請求項９記載の医療用材料。
【請求項１２】
重量比が５倍のリン酸緩衝液中に、３７℃で１分間浸漬することにより抽出されたグルタルアルデヒド濃度が０〜５０μｇ／ｍｌである請求項９、１０又１１記載の医療用材料。
【請求項１３】
ゲル生成反応中は生体組織と接着し、ゲル生成後は生体組織の癒着が起こらない請求項９、１０、１１又は１２記載の医療用材料。
【請求項１４】
生体内において、埋入１日後の重量残存率が３０％以上であって、かつ埋入５日後の重量残存率が３０％以下であることを特徴とする、請求項９、１０、１１、１２又は１３記載の医療用材料。
【請求項１５】
含水率が８０％〜９５％になることを特徴とする、請求項９、１０、１１、１２、１３又は１４記載の医療用材料。
【請求項１６】
請求項１、２、３、４、５、６、７又は８記載の医療用接着剤を塗布するための外科用接着剤塗布システムであり、
ゼラチン水溶液Ａ充填部、グルタルアルデヒド水溶液Ｂ充填部、前記充填部を加温するための加温器、並びに、ゼラチン水溶液Ａ及びグルタルアルデヒド水溶液Ｂを混合して塗布するための先端ノズルを備えた
ことを特徴とする外科用接着剤塗布システム。
【請求項１７】
生体吸収性多孔体及び請求項１、２、３、４、５、６、７又は８記載の医療用接着剤からなることを特徴とする止血剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療用接着剤及び医療用材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
外科手術時に、生体患部の止血や、生体組織又は臓器を接合する手段として、医療用接着剤が広く用いられている。
このような医療用接着剤は、対象とする生体組織面にはよく接着するが、その塗布面に生成した固化接着剤面は相対するいかなる組織とも接着しない、すなわち、二つの物体を結合するのではなく、一つの対象組織面の被覆材として使用される。一般的には、損傷した組織面が修復するまでそれを被覆する保護材、閉鎖材、止血材、癒着防止材等として使用されるのである。
【０００３】
このような医療用接着剤は、生体組織や生体代替組織に素早く接着し、かつ、接着力が優れることが必要とされる。同時に、局所に刺激を与えず、また、生体に害を与えないことが重要である。
【０００４】
上記医療用接着剤の成分として、従来より、フィブリン糊、シアノアクリレートやゼラチン−ホルムアルデヒド等が知られている。いずれも外科手術に大いに貢献しているのは事実であるが、それぞれ問題を抱えている。例えば、フィブリン糊では、原料の一つがヒトの血液から得られるフィブリノーゲンであり、これがウイルスによって汚染されているおそれがあるという問題があった。また、接着剤の引っ張り強度や、生体組織への接着強度が不充分であるといった問題があった。
【０００５】
特許文献１には、コラーゲン蛋白部分加水分解物質、水及び多価フェノールとからなる接着成分と、ホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドを含有する水溶液からなる硬化成分とよりなる生体組織接着用組成物が開示されている。
しかしながら、上記生体組織接着用組成物では、原料に発癌性物質であるホルムアルデヒドが使用されており、生体への安全面では未だ充分ではない。
【０００６】
特許文献２には、血漿タンパク質及び二又は多官能アルデヒドの混合液を含んでなる接着剤組成物が開示されている。
しかしながら、使用される血漿タンパク質は、ヒトの血清アルブミンとグルタルアルデヒド（ＧＡ）であり、ヒト血清由来の、又は、ゲル化アルブミンより溶出するグルタルアルデヒドが高い濃度で残存するといった問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平６−７０９７２号公報
【特許文献２】国際公開第９４／０１５０８号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記現状に鑑み、接着性及び生体安全性に優れた医療用接着剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、ゼラチン水溶液Ａとグルタルアルデヒド水溶液Ｂとから構成される組織接着性を有する医療用接着剤であって、上記ゼラチン水溶液Ａは、ゼラチン濃度が５〜４０質量％であって、かつ粘度が１〜２０００ｍＰａ・ｓであり、上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、グルタルアルデヒド濃度が０．０１〜１０質量％であることを特徴とする医療用接着剤である。
【００１０】
本発明者らは、鋭意検討の結果、特定の濃度のゼラチン水溶液及びグルタルアルデヒド水溶液とを使用することにより、優れた接着性及び生体安全性を有する医療用接着剤とすることができることを見出し、本発明を完成させた。
【００１１】
本発明は、ゼラチン水溶液Ａとグルタルアルデヒド水溶液Ｂとから構成される医療用接着剤である。
上記ゼラチン水溶液Ａは、ゼラチンを水又はｐＨ５〜８の緩衝液である溶媒に溶解又は分散させたものである。
上記ゼラチンは、水に不溶性のコラーゲンを酸又はアルカリで前処理してから、熱加水分解して可溶化したものである。本発明においては、いずれのゼラチンを使用してもよく、求められる効果には差はない。ただし、塩基性細胞成長因子等を複合化する場合にはアルカリ処理したゼラチンを選択することが好ましい。
【００１２】
上記ゼラチンは、重量平均分子量が５，０００〜３０万であることが好ましい。上記重量平均分子量が５，０００未満であると、ゼラチンが固まらないおそれがある。３０万を超えると、ゼラチン水溶液の粘度が高くなりすぎて接着剤として塗布することが困難になるおそれがある。上記重量平均分子量は、５万〜２０万であることがより好ましい。
なお、上記重量平均分子量は、ＧＰＣの方法にて得られる値である。
【００１３】
上記ゼラチンは、市販品を用いてもよく、例えば、メディゼラチン（ニッピ社製）等を使用することができる。
【００１４】
上記ゼラチン水溶液Ａの溶媒である上記ｐＨ５〜８の緩衝液としては、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、トリス塩酸緩衝液（Ｔｒｉｓ−Ｃｌ）等を挙げることができる。
【００１５】
上記ゼラチン水溶液Ａは、ゼラチン濃度が５〜４０質量％である。
上記ゼラチン濃度が５質量％未満であると、流動性が高く、目的部位に塗布した時に流れてしまい、接着剤としての役割を果たせなくなる。４０質量％を超えると、粘度が高くなり過ぎるために、目的部位に塗布して塗り拡げることが不可能になってしまう。
上記ゼラチン濃度は、１０〜３０質量％であることが好ましい。
【００１６】
上記ゼラチン水溶液Ａは、細胞成長因子を更に含有していてもよい。
細胞成長因子を含有することにより、接着剤として塗布した臓器表面の創傷治癒を促進させることができる。
上記細胞成長因子としては、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）などを挙げることができる。
【００１７】
上記ゼラチン水溶液Ａは、粘度が１〜２０００ｍＰａ・ｓである。
粘度が２０００ｍＰａ・ｓを超えると、ゼラチン水溶液Ａを目的部位に塗布して塗り拡げるげることができない。
【００１８】
上記ゼラチン水溶液Ａは、ｐＨが５〜９であることが好ましい。
ｐＨが５未満であると、ゼラチンのゲル化時間が長くなってしまい、接着剤としての機能を果たせないおそれがある。ｐＨが９を超えると、アルカリ性となり塗布した部位の組織に炎症を惹起させてしまうおそれがある。
上記ゼラチン水溶液Ａは、ｐＨが６〜８であることがより好ましい。なお、ｐＨの調整は、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、トリス塩酸緩衝液（Ｔｒｉｓ−Ｃｌ）、炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）等を使用して行うとよい。
【００１９】
上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、グルタルアルデヒドを蒸留水に溶解させたものである。
【００２０】
上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、グルタルアルデヒド濃度が０．０１〜１０質量％である。グルタルアルデヒド濃度が０．０１質量％未満であると、ゼラチンの架橋反応が進まず、接着剤としての機能を発揮できなくなる。１０質量％を超えると、ゲル化速度が高まりすぎ、手術時の混合操作などに支障を及ぼす。
上記グルタルアルデヒド濃度は、０．１〜１質量％であることが好ましい。
【００２１】
上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、更に、増粘剤を含有することが好ましい。
増粘剤を含有することにより、ゼラチン水溶液Ａと混合する際にグルタルアルデヒド水溶液Ｂが流延することなく混合させることができる。
上記増粘剤としては、水溶液の粘度を高める物質であれば特に限定されるものではないが、多糖類であることが好ましい。上記多糖類としては、アルギン酸、ヒアルロン酸、カルボシキメチルセルロース、アミロース、アミロペクチン等が例示できる。
【００２２】
上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂ中の増粘剤の濃度は、０．５〜１０質量％であることが好ましい。０．５質量％未満であると、十分な粘性が得られずにグルタルアルデヒド水溶液Ｂが流延してしまうおそれがある。１０質量％を超えると、粘性が高くなり過ぎてゼラチン水溶液Ａと十分に混合できないおそれがある。
上記増粘剤の濃度は、２〜５質量％であることがより好ましい。
上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、粘度が１〜２０００ｍＰａ・ｓであることが好ましい。
【００２３】
上記グルタルアルデヒド水溶液ＢのｐＨは特に限定されるものではないが、ｐＨが高くなるとグルタルアルデヒドが縮合反応してしまい、架橋剤として使えなくなってしまう。上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂは、ｐＨが３〜５であることがより好ましい。
【００２４】
本発明の医療用接着剤では、上記ゼラチン水溶液Ａと上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合することにより、ゲルが生成される。このゲルにより、生体組織や臓器が接着又は接合される。
【００２５】
上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂと上記ゼラチン水溶液Ａとの混合比（Ｂ／Ａ）は、質量比で０．０１〜２であることが好ましい。上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂの量が上記範囲より少ないと十分な接着強度が得られないおそれがあり、多いと接着剤全体が硬くなり脆くなるおそれがある。
上記混合比は、０．０５〜１であることがより好ましい。
【００２６】
上記ゼラチン水溶液Ａと上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合する場合の温度は、３０〜６５℃であることが好ましい。３０℃未満であるとゼラチン水溶液Ａが固まってしまうおそれがある。６５℃を超えるとゼラチンが変性してしまうおそれがある。上記温度は、３５〜６０℃であることがより好ましい。
【００２７】
上記ゼラチン水溶液Ａと上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合してからゲルが生成するまでのゲル化時間は、４５℃下で５〜１００秒であることが好ましい。
上記ゲル化時間が５秒未満であると、操作中に接着剤が固まってしまい組織に接着しなくなるおそれがある。１００秒を超えると接着剤を塗布した部位から流延してしまうおそれがある。
上記ゲル化時間は、１０〜６０秒であることがより好ましい。
【００２８】
本発明の医療用接着剤の使用方法については、上記ゼラチン水溶液Ａと上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合してから、生体組織又は臓器の接合部又は止血部に塗布してもよいし、上記ゼラチン水溶液Ａを上記接合部又は止血部に塗布した後に、上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂをその上に塗布してもよい。
適用部位への接着剤の塗布が短時間にかつ簡便にできる点で、あらかじめゼラチン水溶液Ａと上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合してから、生体組織又は臓器の接合部又は止血部に塗布する方が好ましい。
【００２９】
上記塗布量としては、例えば、０．４〜４，０００ｍｇ／ｃｍ２であることが好ましい。０．４ｍｇ／ｃｍ２未満であると、ゲルを十分に伸ばせなくなるおそれがある。４，０００ｍｇ／ｃｍ２を超えると、ゲルが壊れてしまうおそれがある。上記塗布量は４〜４００ｍｇ／ｃｍ２であることがより好ましい。
【００３０】
また、本発明の医療用接着剤の混合方法としては、例えば、ゼラチン水溶液とグルタルアルデヒド水溶液をそれぞれ別のシリンジに充填し、シリンジの先端部に二股ノズルを取り付ける。そして、両方のシリンジを同時に押すことによって、ノズル先端部で２液を混合させるという方法を挙げることができる。
本発明の医療用接着剤は、このように上記ゼラチン水溶液Ａと上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂとの二液型混合接着剤であることが好ましい。
【００３１】
本発明の医療用接着剤を適用する場合に、具体的には、以下のような塗布システムを用いてもよい。
図１は、本発明の医療用接着剤を使用した外科用接着剤塗布システムの一例を示した概略図である。
図１に示すように、上記外科用接着剤塗布システムは、ゼラチン水溶液Ａ充填部１、グルタルアルデヒド水溶液Ｂ充填部２、充填部１及び２を加温するための加温器３、並びに、先端ノズル４を備える。先端ノズル４は、ゼラチン水溶液Ａ及びグルタルアルデヒド水溶液Ｂを混合して医療用接着剤を塗布するためのものである。
具体的には、例えば、ゼラチン水溶液Ａ充填部１及びグルタルアルデヒド水溶液Ｂ充填部２はシリンジ状になっており、先端ノズル４は二股ノズルとなっており、両方のシリンジを同時に押すことによって、先端ノズル４の先端で２液が混合される。
また、上記外科用接着剤塗布システムは、加温器３の温度を制御するための温度制御器５を更に備えていてもよい。
上記充填部、加温器、先端ノズル４、温度制御器は、公知のものを適宜適用するとよい。
上記外科用接着剤塗布システムにおいては、上記ゼラチン水溶液Ａ及びグルタルアルデヒド水溶液Ｂを上述した好適な温度下で混合し、得られた混合物を、所望の箇所へ、短時間で、すなわち、ゲル化反応が終了するまでの間に供することができる。
このような、外科用接着剤塗布システムもまた、本発明の一つである。
【００３２】
本発明では、このように上記ゼラチン水溶液Ａと上記グルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合することにより、ゲル化が起こり、ゲル状の医療用材料が得られる。このようなゼラチン水溶液Ａとグルタルアルデヒド水溶液Ｂとを混合して生成されるゲルを主体とする医療用材料もまた本発明の一つである。
【００３３】
上記ゲルを主体とする医療用材料は、接着強度が２０ｇｆ／ｃｍ２以上であることが好ましい。上記接着強度が２０ｇｆ／ｃｍ２未満であると、組織を接着するという目的を達成できないだけでなく、生体組織の動きによる伸縮や動きに耐えられないおそれがある。上記接着強度は、５０ｇｆ／ｃｍ２以上であることがより好ましい。
上記接着強度は、バネ秤を用いた方法により測定して得られた値である。
【００３４】
また、上記ゲルを主体とする医療用材料は、その材料自体の引張強度が２０ｇｆ／ｃｍ２以上であることが好ましい。上記引張強度が２０ｇｆ／ｃｍ２未満であると、組織活動による伸縮や動きに耐えられないおそれがある。上記引張強度は、５０ｇｆ／ｃｍ２以上であることがより好ましい。
上記引張強度は、バネ秤を用いた方法により測定して得られた値である。
【００３５】
上記ゲルを主体とする医療用材料は、重量比が５倍のリン酸緩衝液中に、３７℃で１分間浸漬することにより抽出されたグルタルアルデヒド濃度が０〜５０μｇ／ｍｌであることが好ましい。上記範囲外であると、アルデヒド基が周囲の組織に毒性を示すおそれがある。
【００３６】
上記ゲルを主体とする医療用材料は、生体内において、埋入１日後の重量残存率が３０％以上であって、かつ埋入５日後の重量残存率が３０％以下であることが好ましい。
上記ゲルを主体とする医療用材料は、また、含水率が８０％〜９５％であることが好ましい。
【００３７】
上記ゲルを主体とする医療用材料は、ゲル生成反応中は生体組織と接着し、ゲル生成後は他の生体組織と接着しないことが好ましい。このため、上記医療用材料は、接着すべき生体組織に対する所望の接着性を有し、かつ、ゲル生成後は、周辺組織等の他の生体組織と接着しないため、癒着が起こらず、生体安全性にも優れるものである。
【００３８】
このように本発明の医療用接着剤は、ゼラチンの分子量、ゼラチン水溶液の濃度、グルタルアルデヒドの濃度、水溶液のｐＨ、反応温度等について最適条件を設定することにより、ゼラチン水溶液とグルタルアルデヒド水溶液とからなる医療用接着剤において、上記グルタルアルデヒドの含有量を従来より低減させても、優れた接着性及び生体安全性を有するゲル状の医療用材料を得ることができる医療用接着剤とすることができたものである。
【００３９】
また、本発明の医療用接着剤を用いて、生体吸収性多孔体を生体組織に接着させることもできる。上記生体吸収性多孔体を生体組織に接着させることにより、止血等を好適に行うことができる。
上記生体吸収性多孔体としては、生体吸収性成分からなる多孔構造を有するものを挙げることができる。
上記生体吸収性成分としては、コラーゲン、ヒアルロン酸、ゼラチン等の天然成分；ポリ−Ｌ−乳酸、ポリグリコール酸、ポリ−ε−カプロラクトン等の合成生体内分解性高分子等を挙げることができる。
上記多孔構造を有するものとしては、不織布や多孔質フィルム、あるいはスポンジ状の基材が挙げられる。
上記生体吸収性多孔体としては、コラーゲンスポンジが好ましい。
このような本発明の医療用接着剤と上記生体吸収性多孔体とからなる止血材もまた、本発明の一つである。
【００４０】
このように本発明の医療用接着剤は、接着性及び生体安全性に優れるものである。このため、本発明の医療用接着剤は、外科用接着剤、止血材、エアリーク阻止材、組織修復材、再生医療用足場等として好適に適用することができる。
【発明の効果】
【００４１】
本発明の医療用接着剤は、上述の構成からなるものであるため、接着性及び生体安全性に優れたものである。このため、本発明の医療用接着剤は、外科手術において、生体組織等の結合や止血等に好適に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】図１は、本発明の医療用接着剤を使用した外科用接着剤塗布システムの一例を示した概略図である。
【図２】図２は、４５℃におけるゲル化時間に及ぼすグルタルアルデヒド濃度の影響を表すグラフである。
【図３】図３は、６０℃におけるゲル化時間に及ぼすグルタルアルデヒド濃度の影響を表すグラフである。
【図４】図４は、ゲル化に及ぼすゼラチン水溶液のｐＨの影響を表すグラフである。
【図５】図５は、ゲルから抽出したグルタルアルデヒド量を表すグラフである。
【図６】図６は、ゼラチン濃度と接着強度との関係を表すグラフである。
【図７】図７は、実施例で用いた耐圧試験装置の模式図である。
【図８】図８は、人工硬膜針穴モデル耐圧試験結果を表すグラフである。
【図９】図９は、人工硬膜針縫合部モデル耐圧試験結果を表すグラフである。
【図１０】図１０は、ゼラチンゲルのｉｎ  ｖｉｖｏにおける重量変化を表すグラフである。
【図１１】図１１は、ゼラチンゲルの粘度を表すグラフである。
【図１２】図１２は、ゼラチンゲルの含水率を表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
以下に実施例を掲げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。なお、特に断りのない限り、「％」及び「部」は、それぞれ「質量％」及び「質量部」を意味するものとする。
【００４４】
実施例１（ゲル化時間の最適化）
ゼラチン粉末（メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、１０、２０、３０、４０％の濃度のゼラチン水溶液を調製した（Ａ液）。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、０．２５、０．５、０．７５、１、２、４％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液を調製した（Ｂ液）。前記のゼラチン水溶液（Ａ液）１．０ｍＬとＧＡ水溶液（Ｂ液）０．２ｍＬとを、それぞれ４５℃又は６０℃で３０分間保温し、両液を混合した。混合液に直径１．４ｃｍのスターラー回転子を投入し、３００ｒｐｍで回転を始めてから、溶液の粘度が高くなってスターラー回転子の回転が停止するまでの時間を、ゲル化時間として測定した。ＧＡ溶液濃度とゲル化時間の関係について、４５℃のゲル化実験結果を図２に、６０℃のゲル化実験結果を図３に示した。
【００４５】
実施例２（ゼラチン水溶液のｐＨによる影響）
ゼラチン粉末（メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２０％の濃度のゼラチン水溶液を調製し、さらにｐＨを５、５．８、６．１、７．２、９．０に調整した（Ａ液）。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、０．５％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液を調製した（Ｂ液）。前記のゼラチン水溶液（Ａ液）１．０ｍＬとＧＡ水溶液（Ｂ液）０．２ｍＬとを、それぞれ４０℃で３０分間保温し、両液を混合した。混合液に直径１．４ｃｍのスターラー回転子を投入し、３００ｒｐｍで回転を初めてから、溶液の粘度が高くなってスターラー回転子の回転が停止するまでの時間を、ゲル化時間として測定した。ゼラチン水溶液のｐＨとゲル化時間との関係について、結果を図４に示した。
【００４６】
実施例３（ゲルから抽出されるＧＡ量、タンパク質量）
実施例２と同様に調製した、ゼラチン濃度が２０又は３０％のゼラチン水溶液１ｍＬと、グルタルアルデヒド（ＧＡ）濃度が０．５又は１．０％のＧＡ水溶液０．２ｍＬとを４０℃で保温した後、両液を混合してゼラチンゲルを調製した。
比較として、市販品のアルブミングルー（ＣｒｙｏＬｉｆｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）同様の組成となるように、アルブミン（和光純薬社製）を蒸留水に添加して４５％アルブミン水溶液を調製し、１０％グルタルアルデヒド水溶液（和光純薬社製）を混合して、アルブミンゲルを調製した。
得られたこれらのゲルを、重量比が５倍のリン酸緩衝液中に、３７℃で１分間浸漬し、リン酸緩衝液中に抽出されたＧＡ量を測定し、その結果を図５に示した。
図５より、本発明の医療用接着剤により得られるゼラチンゲルから溶出するＧＡ量は、従来のアルブミンゲルから抽出される量よりも非常に少ないことがわかる。
【００４７】
実施例４（接着強度）
ゼラチン粉末（メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、１０、２０、３０％の濃度のゼラチン水溶液を調製した（Ａ液）。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、０．２５、０．５％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液を調製した（Ｂ液）。
鳥のむね肉を１×３ｃｍ２に切り、表面の水分をキムワイプで充分に抜き取ってから３７℃に保温した。上記Ａ液４０μＬ及びＢ液１０μＬを４５℃で混合し、これを肉片表面１×１ｃｍ２に塗り、他の肉片を、上記塗った１×１ｃｍ２の表面に合わせるように、上に乗せて指で軽く３０秒間押した。その後、３７℃で３分間保温した。保温後、片方の肉片にバネ秤を垂直に引っ張って、肉片が剥がれる強度を測定した。
図６に、ゼラチン濃度と接着強度との関係を示した。
【００４８】
実施例５（ゲル接着強度）
ゼラチン粉末（メディゼラチン、ニッピ社製）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、３０％の濃度のゼラチン水溶液を調製した（Ａ液）。また、同様に、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、１％の濃度のグルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液を調製した（Ｂ液）。
上記Ａ液２００μＬ及びＢ液２７μＬを４５℃で混合し、３７℃に保温した鶏肉の上に塗布した。
比較としては、医療用のフィブリン糊（商品名縁プラスト、ＣＳＬベーリング社製）を当該製品の用法に従って調整したものを用いた。
塗布した鶏肉を５分間室温で静置した後、ゲル内に封入した糸に強力測定器を取り付け、垂直にゆっくりと引張り上げ、ゲルが鶏肉から剥がれるときの数値を引張強度とした。
実施例の評価試験を４回行ったときの平均引張強度は１６５．６±４０．３ｇｆ／ｃｍ２であった。上記と同じ方法で測定したフィブリン糊の平均引張強度は３６．６±２６．２ｇｆ／ｃｍ２であり、明らかに接着性は本願発明のゼラチン接着剤のほうがフィブリン糊より優れていた。
【００４９】
実施例６
（止血効果）
麻酔下でラットの腹部を切開して胃を露出させ、前壁に０．５×０．５ｃｍ２の上皮剥離創を作製し、出血させた。その出血部をガーゼで３０秒間押しても止血できないことを確認してから、上記実施例５と同様に調製した、２０％ゼラチン水溶液０．５ｍＬと、０．５％グルタルアルデヒド水溶液０．１ｍＬとを混合し、得られたゼラチンゲル０．６ｍＬを、完全にゲル化する前に、患部とその周囲に塗布した。その結果、ゼラチンゲルは患部に密着し、塗布後５分後においても止血効果の持続が認められた。
【００５０】
実施例７
（空気漏れ防止効果）
犠牲死させたイヌの肺に空気を入れ、その圧を５ａｔｍに保ちながら１８Ｇ針で穿刺後、空気漏れの発生したことを確認した。次に、上記実施例５と同様に調製した、２０％ゼラチン水溶液０．５ｍＬと０．５％グルタルアルデヒド水溶液０．１ｍＬとを混合し、得られたゼラチンゲル０．６ｍＬを、完全にゲル化する前に、孔の上とその周囲に塗布した。その３分後に圧を挙げたところ、空気漏れの起こった圧は１９．０±５．５ａｔｍであった。
【００５１】
実施例８（癒着防止）
上記実施例５と同様に調製した、２０％ゼラチン水溶液１．０ｍＬと、０．２５、０．５又は１％のグルタルアルデヒド水溶液０．１ｍＬとを混合し、３７℃下でゼラチン接着剤を調製した。
上記ゼラチン接着剤のみ使用、上記ゼラチン接着剤とゼラチンシートの併用、又は、何も貼らない場合についての癒着防止効果を下記の方法により評価した。
まず、麻酔下でラットの腹部を切開して、盲腸前壁と腹膜に癒着を起こすように１５ｍｍ径の漿膜をゆるく傷つけた。この傷部位に、およそ１ｍＬの上記ゼラチン接着剤を４０℃にて塗布、又は、ゼラチンシート（多孔体）を貼った後に上記ゼラチン接着剤を塗布して、３分間放置した。ゼラチン接着剤を塗布しない場合は、傷口を併せるように盲腸と腹膜を１針ナイロン糸で縫った後、腹部を縫合した。これらを各２匹ずつ行った。
１週間後に開腹して癒着の有無を観察した結果、ゼラチン接着剤を塗布、又は、ゼラチン接着剤とゼラチンシートを併用した部分には癒着が認められなかったが、ゼラチン接着剤を用いずに組織面を傷つけたままに放置した場合には、すべて強い癒着が生じた。ここでいう癒着防止の評価においては、処理面積の５０％以上の癒着の場合を強い癒着とした。この場合、５０％以上の鋭的剥離を必要とした。
【００５２】
実施例９（ゼラチン接着剤のフィルム化）
ゼラチン接着剤のフィルム化を下記の方法により評価した。まず、トリのムネ肉に、図１に示すようなアプリケーターを用いて、０．２ｍｌのゼラチン接着剤を塗布し、すばやく薄く延ばした。この時の設定温度は５５℃で、３０％ゼラチン水溶液と１％ＧＡ水溶液とを使用した。上記ゼラチン水溶液及び上記ＧＡ水溶液は、実施例５と同様にして調製した。５分間放置後、薄いフィルムができており、端から引張っても剥がれることはなかった。
比較として、同様にムネ肉にフィブリン糊（商品名縁プラスト、ＣＳＬベーリング社製）をスプレーノズルを用いて塗布したが、薄いフィルムはできず、ピンセットで引張ると簡単に剥がれた。
【００５３】
実施例１０（耐圧試験）
人工硬膜（グンゼ社製）に２３Ｇの針で穴を１つあけ、図７に示す耐圧試験装置にセットし、温度を３７℃に調整した。人工硬膜の穴のあいた表面部分に５０℃の５％ゼラチン水溶液６０μＬを塗布し、その上からさらに５０℃の３５％ゼラチン水溶液１００μＬと１％グルタルアルデヒド水溶液２０μＬを同時に塗布して攪拌した。５分間静置した後、１０ｍｍＨｇから圧力を５ｍｍＨｇずつ上げていき、水が漏れ出した時の圧力を測定した。また、同様に、人工硬膜の穴のあいた表面部分に５０℃の１０％ゼラチン水溶液を６０μＬ塗布し、その上からさらに５０℃の３５％ゼラチン水溶液１００μＬと１％グルタルアルデヒド水溶液２０μＬを同時に塗布して攪拌した場合における、上記圧力を測定した。
比較として、あらかじめ人工硬膜の穴のあいた表面部分にゼラチン水溶液を塗布することなく、３５％ゼラチン水溶液１５０μＬと１％グルタルアルデヒド水溶液３０μＬ同時に塗布して攪拌した場合の上記圧力を測定した。
なお、上記ゼラチン水溶液及びグルタルアルデヒド水溶液は、実施例５と同様にして調製した。
これらの結果を図８に示した。あらかじめゼラチン水溶液を塗布しておいた方が、耐圧性に優れていた。
【００５４】
実施例１１（吻合部の耐圧試験）
人工硬膜（グンゼ社製）とイヌ硬膜を連続縫いで縫合し、縫合部モデルを作製した。図８に示した耐圧試験装置に縫合部モデルをセットし温度を３７℃にした。
５０℃の３５％ゼラチン水溶液１００μＬを縫合部に先に塗布してから、１％グルタルアルデヒド水溶液２０μＬを塗布して攪拌した。５分間放置後、１０ｍｍＨｇから圧力を５ｍｍＨｇずつ上げていき、水が漏れ出すまでどの程度の圧力に耐えられるか測定をおこなった。
また、５０℃の１％グルタルアルデヒド水溶液２０μＬを縫合部に先に塗布してから、３５％ゼラチン水溶液１００μＬを塗布して攪拌した場合の上記圧力も同様に測定した。
なお、上記ゼラチン水溶液及びグルタルアルデヒド水溶液は、実施例５と同様にして調製した。
これらの結果を図９に示した。グルタルアルデヒド水溶液を縫合部に先に塗った時の方が、耐圧性に優れているという結果になった。
【００５５】
実施例１２
（細胞毒性）
ゼラチン（ニッピ社製、メディゼラチン）をリン酸緩衝液（ＰＢＳ）（−）に添加して、２０％ゼラチン水溶液を調製し（Ａ液）、グルタルアルデヒド（和光純薬社製）を蒸留水に添加して、０．５％グルタルアルデヒド（ＧＡ）水溶液を調製し（Ｂ液）、二液型ゼラチン糊セットを作製した。３７℃に保ちながら１ｍＬのＡ液と、０．２ｍＬのＢ液とを混合して攪拌したところ、約３０秒間でゲル化した。次に、ゲル化から２分後に、得られたゲルを５ｍＬの培養液（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ）に入れ、３７℃に保温した。その１分後に抽出培養液を回収し、１２ｗｅｌｌプレートに培養しておいたヒト線維芽細胞の上に、１ｍＬ／ｗｅｌｌだけ入れ、３７℃で２４時間培養した。その後、ＭＴＴアッセイにて細胞生存率を求めた。コントロール（培養ディッシュ）を１００％とした時の抽出液のＭＴＴ量は９５．７±２．８％であり、細胞毒性は微少であった。
【００５６】
（混合操作性とゲル強度）
０．２％グルタルアルデヒド水溶液に、増粘剤としてカルボキシメチルセルロースナトリウム（和光純薬工業製）を濃度５％となるように加えて粘度６００ｍＰａ・ｓの溶液とし、３５％のゼラチン水溶液と１：１で混合した。比較として、０．２％グルタルアルデヒド水溶液にカルボキシメチルセルロースナトリウムを加えずに、３５％のゼラチン水溶液と１：１で混合したものを用いた。上記グルタルアルデヒド水溶液及びゼラチン水溶液は、実施例１２と同様にして調製した。
０．５％増粘剤含有のほうが３５％のゼラチン水溶液の粘度に近く、操作性が良かった。形成したゲルを３７℃の水に浸してゲルの硬さをピンセットでつまみ観察してみた。増粘剤が入っていた方が、ゲルがしっかりしていた。
【００５７】
（ｉｎ  ｖｉｖｏにおける分解性）
図１に示すアプリケーターを用い、４５℃の温度で、３０％ゼラチン水溶液と１％ＧＡ水溶液とを混合してプラスチックトレー上に押し出し、ゲル化させた。上記グルタルアルデヒド水溶液及びゼラチン水溶液は、実施例１２と同様にして調製した。５分後にゲルを０．５×１ｃｍ２の大きさに切り、重量を測定した。ラットの背を切開し、ポケットを作製してゲルを埋め込んだ。１、３、５、７日後にゲルを取り出して冷水で洗浄し、乾燥後、重量を測定してゲル残存率を計算した。実験結果を図１０に示した。
【００５８】
（ゼラチンゲル粘度）
５、１０、２０、３０、４０％ゼラチン水溶液３ｍＬを試料瓶に入れウォーターバスで３７又は６０℃に温めた。振動式粘度計を用いてゼラチン水溶液の粘度を測定した。上記ゼラチン水溶液は、実施例１２と同様にして調製した。実験結果を図１１に示した。
【００５９】
（ゲルの含水率）
図１に示すアプリケーターを用い、４５℃にて２０、１０％ゼラチン水溶液と１％ＧＡ水溶液からなるゲルを２．４ｍＬ、２４ｗｅｌｌプレートに流し込んだ。上記ゼラチン水溶液及びグルタルアルデヒド水溶液は、実施例１２と同様にして調製した。
流し込んだゲルに、直径１．４ｃｍのスターラー回転子を投入し、３００ｒｐｍで回転させ、スターラー回転子の回転が停止してから１０分後に３７℃のリン酸緩衝生理食塩水に２４時間浸した。浸潤重量を測定してから、９０℃のチャンバーで乾燥させ、乾燥重量を測定した。下記式（１）により含水率を求めた。
含水率（％）＝［（Ｗｓ−Ｗｄ）／Ｗｓ］×１００（％）      （１）
式（１）中、Ｗｓは湿潤重量を表し、Ｗｄは乾燥重量を表す。実験結果を図１２に示した。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明の医療用接着剤は、外科手術において、生体組織等の結合や止血等に好適に適用することができる。
【符号の説明】
【００６１】
１  ゼラチン水溶液Ａ充填部
２  グルタルアルデヒド水溶液Ｂ充填部
３  加温器
４  先端ノズル
５  温度制御器
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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