(57)【要約】【課題】新規なヘリコバクターピロリの運動能阻害剤を提供すること。【解決手段】β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、３−カレン、ゲラニオール、ネロール及びボルネオールからなる群から選択される少なくとも１種のモノテルペン化合物を有効成分として含有する、ヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、３−カレン、ゲラニオール、ネロール及びボルネオールからなる群から選択される少なくとも１種のモノテルペン化合物を有効成分として含有する、ヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項２】
β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン及び３−カレンからなる群から選択される少なくとも１種のモノテルペン化合物を有効成分として含有する、請求項１に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤を含有するヘリコバクターピロリ感染の予防又は治療薬。
【請求項４】
請求項１又は２に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤と抗菌剤とを有効成分として含有するヘリコバクターピロリの除菌剤。
【請求項５】
請求項１又は２に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤、胃酸分泌抑制剤及び抗菌剤を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの除菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘリコバクターピロリの運動能阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘリコバクターピロリは、慢性胃炎患者の胃粘膜から分離されたグラム陰性のらせん状菌である。そして本菌の感染は、急性胃炎、慢性胃炎を引き起こすとともに、胃十二指腸潰瘍の再発因子及び治癒遅延因子として作用することが知られている。そのため、抗生物質を中心とした２剤併用療法、３剤併用療法等による除菌治療が行われている。
【０００３】
しかし、ヘリコバクターピロリの除菌は、消化性潰瘍の治療にとっては大きなメリットを有しているが、その除菌方法には副作用をともなう、耐性菌が出現する、或いは新たな噴門部癌が発生するという問題点が指摘されている。
【０００４】
そのため、より安全で副作用の少ない抗ヘリコバクターピロリ活性を有する有効成分が望まれている。
【０００５】
一方で、これまでに白檀の抽出物より単離されたセスキテルペンアルコールが抗ピロリ菌活性を有すること（引用文献１）、及び延命草由来のジテルペン化合物がヘリコバクターピロリの生育抑制効果を有すること（引用文献２）が報告されているが、モノテルペン化合物がヘリコバクターピロリの運動能を抑制するとの報告例はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−１２４２９６号公報
【特許文献２】特開平９−５２８４０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、新規なヘリコバクターピロリの運動能阻害剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記した目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、特定のモノテルペン化合物が、優れたヘリコバクターピロリの運動能阻害作用を有することを見出し、ここに本発明を完成するに至った。
【０００９】
即ち、本発明は、下記のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤等を提供する。
【００１０】
項１．β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、３−カレン、ゲラニオール、ネロール及びボルネオールからなる群から選択される少なくとも１種のモノテルペン化合物を有効成分として含有する、ヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【００１１】
項２．β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン及び３−カレンからなる群から選択される少なくとも１種のモノテルペン化合物を有効成分として含有する、上記項１に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤。
【００１２】
項３．上記項１又は２に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤を含有するヘリコバクターピロリ感染の予防又は治療薬。
【００１３】
項４．上記項１又は２に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤と抗菌剤とを有効成分として含有するヘリコバクターピロリの除菌剤。
【００１４】
項５．上記項１又は２に記載のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤、胃酸分泌抑制剤及び抗菌剤を有効成分として含有するヘリコバクターピロリの除菌剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のヘリコバクターピロリの運動能阻害剤によれば、ヘリコバクターピロリの運動能を効果的に抑制又は阻害することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】代表的な１９種のモノテルペン化合物のヘリコバクターピロリ運動能阻害効果を示す図である。
【図２】β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、及び３−カレンの濃度依存的ヘリコバクターピロリ運動能阻害効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１８】
本発明のヘリコバクターピロリ（以下、「ＨＰ」と表記する場合がある）の運動能阻害剤は、β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、３−カレン、ゲラニオール、ネロール及びボルネオールからなる群から選択される少なくとも１種のモノテルペン化合物を有効成分として含有するものである。
【００１９】
モノテルペン化合物がヘリコバクターピロリの運動能阻害剤として用いられるということが報告された例は今までなかった。一般に、ＨＰが感染するためには、胃粘膜表層部の粘液ゲル層を突破し、表層粘膜上皮に付着・増殖することが不可避である。その場合、ＨＰは活発な運動能を有し、鞭毛が重要な働きを有していることが知られている。本発明者らは、主要な１９種のモノテルペン化合物について、ＨＰ運動能阻害作用を評価したところ、β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、３−カレン、ゲラニオール、ネロール及びボルネオールにＨＰ運動能阻害活性があることを確認した（下記実施例において詳述する）。そのため、β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、３−カレン、ゲラニオール、ネロール及びボルネオールは、ＨＰ運動能阻害剤として有用である。なお、ＨＰ運動能阻害作用の評価は、例えば、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２００６，２９（１）：１７２−１７３に従って行われた。
【００２０】
これらのモノテルペン化合物の中でも、β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、又は３−カレンが、ＨＰ運動能阻害活性が強いことから、これらの化合物を有効成分として含有するものが、ＨＰ運動能阻害剤として好ましい。
【００２１】
これらのモノテルペン化合物は、１種単独で又は２種以上を混合して用いてもよい。これらの化合物はいずれも公知の化合物であり、容易に入手可能であり、また上記モノテルペン化合物が含まれる精油を使用することも可能である。
【００２２】
このように、上記のモノテルペン化合物は、ＨＰに対して高い運動能阻害作用を発揮するため、ＨＰ運動能阻害剤として有用であり、またＨＰの感染予防又は治療剤として有用である。しかも、本発明のＨＰ運動能阻害剤は、天然物由来の成分であることから、安全性が高いというメリットがある。
【００２３】
さらに、ＨＰ除菌を目的として、抗菌剤との併用剤として用いることも可能である。これにより、抗菌剤の使用量等を軽減することができ、副作用や耐性菌の出現等の問題点を改善することもできる。抗菌剤としては、例えば、抗生物質（アモキシシリン、クラリスロマイシン等）、ニトロニダゾール系抗虫剤（メトロニダゾール、チニダゾール等）、ビスマス製剤等が挙げられる。さらに、胃酸分泌抑制剤を併用することも可能である。胃酸分泌抑制剤としては、例えば、Ｈ２阻害剤（ファモチジン、ニザチジン、ロキサチジン、ラジチジン、シメチジン等）、プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ）（オメプラゾール、ランソプラゾール、ラベプラゾールナトリウム）などが挙げられる。
【００２４】
本発明のＨＰ運動能阻害剤の使用形態については、経口的に摂取する場合が好ましく、例えば、食品添加剤として食品に添加して摂取することができる。
【００２５】
食品添加剤として用いる場合には、その添加量については、特に限定的ではなく、食品の種類に応じ適宜決めればよい。例えば、清涼飲料、炭酸飲料などの液体食品や菓子類やその他の各種食品等の固形食品に添加して用いることができるが、これらの場合の添加量については、食品の種類に応じて適宜決めればよく、一例としては、上記した抽出物の乾燥重量として、含有量が０．００５重量％〜５重量％程度の範囲内となるように添加すればよい。
【００２６】
また、その他に、本発明のＨＰ運動能阻害剤を、医薬として人体に投与する場合には、次のような投与方法及び投与量が例示される。投与は、種々の方法で行うことができ、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤等の剤型による経口投与とすることができる。投与量については、経口投与の場合には、通常、成人において、有効成分量として０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ程度が適当であり、これを１日１回〜数回に分けて投与すればよい。経口投与剤は、通常の製造方法に従って製造することができる。例えば、デンプン、乳糖、マンニット等の賦形剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、軽質無水ケイ酸等の流動性向上剤等を適宜組み合わせて処方することにより、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等として製造することができる。本発明の特定のモノテルペン化合物を有効成分として含有するＨＰ運動能阻害剤の製剤は、いずれも公知の方法により製造することができる。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。
【００２８】
実施例１
（１）ＨＰ運動能阻害作用の評価
本評価方法は、上述のようにＢｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２００６，２９（１）：１７２−１７３に従い評価した。なお、ＨＰはヘリコバクターピロリＡＴＣＣ４３５０４（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ， ＵＳＡ）を用いた。
【００２９】
ＨＰは、血液寒天プレート（５％羊血液を追加したトリプチカーゼ（Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ） 豆寒天）上で、微好気性下（１０％ Ｏ２ ａｎｄ ９０％ ＣＯ２）、３７℃で４日間成長させた。その後、形成されたコロニーを、７％胎児ウシ血清（ＦＢＳ：Ｇｉｂｃｏ， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， Ｍｄ．）を含むブルセラブロス（Ｂｒｕｃｅｌｌａ Ｂｒｏｔｈ）液体培地（Ｄｉｆｃｏ，ｐＨ７．４±０．２）に懸濁させ、微好気性下３７℃で１８〜２０時間培養した。この菌株をブルセラブロス液体培地で２倍に懸濁させた後、さらに微好気性下３７℃で１８〜２０時間培養した。この菌株を運動能の評価に供した。
【００３０】
２４穴培養プレートに菌液をそれぞれ１ｍＬずつ分注し、下記のネオテルペン化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して５０μｇ／ｍＬの濃度にした試験サンプルを１０μＬ加え、微好気性下３７℃で１時間培養した。ポジティブコントロールはＤＭＳＯのみを加えた。この時、試験サンプル添加による菌液のｐＨ変化がないことを確認した。
【００３１】
なお、モノテルペン化合物をして、β−ミルセン、ゲラニオール、ネロール、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、ｌ−メントール、α−テルピネオール、テルピネン−４−オール、ペリリルアルコール、ｌ−メントン、ｄ−プレゴン、１，８−シネオール、α−ピネン、β−ピネン、３−カレン、ボルネオール、カンファー、及びベルベノンを用いた。
【００３２】
ＨＰの運動能は、約１０μＬの菌液を、試料の温度を調整するマイクロウォームプレート（登録商標、（株）北里サプライ製）に入れた反転位相差顕微鏡を用いて測定した。運動速度（マイクロメーター／秒）を、（Ｃ−Ｉｍａｇｉｎｇ Ｃ−ＭＥＮ （Ｃｏｍｐｌｉｘ Ｉｎｃ．， Ｃｒａｍｂｅｒｒｙ， Ｐａ．）を備えた運動能分析システムを用いて測定した。ガラススライドとガラスカバーとの間（２０μｍ）における７％ＦＢＳ含有ブルセラブロス液体培地におけるＨＰの運動能を、各０．０５秒ごとに１５回連続的に記録した（計０．７５秒）。そして、試料中の各ＨＰ細胞の泳動速度（マイクロメーター／秒）を取得した。この操作を、試料の少なくとも５つの異なる部分で実施した。約３００個の細菌の泳動速度を試料ごとに集めて、運動能を有するＨＰのパーセントを測定した。ＨＰのブラウン運動は０．４±０．３（マイクロメーター／秒）と見積もられ、４．０ マイクロメーター／秒（ブラウン運動の速度より１０倍高い速度）の平均速度を、正の運動能として判定した。ＨＰの運動能は、位相差顕微鏡で肉眼によっても判断した。その結果を図１に示す。
【００３３】
図１の結果から、β−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン及び３−カレンが、５０μｇ／ｍＬの濃度で、ＨＰの運動能を９０％以上阻害することがわかった。また、ゲラニオール、ネロール及びボルネオールもＨＰの運動能阻害効果を示すことがわかった。
【００３４】
（２）濃度依存的ＨＰ運動能阻害作用の評価
上記（１）でＨＰの運動能阻害作用を示したβ−ミルセン、ｄ−リモネン、ｌ−リモネン、ｐ−シメン、α−ピネン、β−ピネン、３−カレン、ゲラニオール、ネロール及びボルネオールについて、濃度を５、１０、２５、５０μｇ／ｍＬに調整した試料を試験サンプルとして用い、上記（１）と同様にしてＨＰの運動能を測定した。その結果を図２に示す。
【００３５】
図２の結果から、５０％阻害濃度であるＩＣ５０値は、β−ミルセンが２７μｇ／ｍＬ、ｄ−リモネンが９μｇ／ｍＬ、ｌ−リモネンが１５μｇ／ｍＬ、ｐ−シメンが１８μｇ／ｍＬ、α−ピネンが９μｇ／ｍＬ、β−ピネンが１２μｇ／ｍＬ及び３−カレンが１６μｇ／ｍＬであることがわかった。
【図１】
2012077033.tif 000002
【図２】
2012077033.tif 000003