(57)【要約】【課題】本発明は、抗脂質異常を有する抽出物に関する。【技術手段】セイロンニッケイの葉を熱水で抽出して得られた本発明は更に、該抽出物の医薬組成物、及び該医薬組成物による脂質異常治療方法が含まれている。【選択図】図２Ａ
2012012341.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
セイロンニッケイの葉を熱水抽出で得られた、抗脂質異常を有する抽出物であることを特徴とする。
【請求項２】
次のように、
a.セイロンニッケイの葉を粉砕し、
b. 該セイロンニッケイの葉を蒸留水で沸騰させて、抽出液が得られ、
c. 該粗抽出液をろ過して、ろ過液が得られ、それから
d. 該ろ過液を乾燥する
という手順が含まれ、製造されるように設けられていることを特徴とする請求項1に記載の抽出物。
【請求項３】
請求項1に記載のセイロンニッケイの葉の抽出物の有效量、及び医薬で認められているベクターが含まれていることを特徴とする脂質異常治療用医薬組成物。
【請求項４】
セイロンニッケイの葉の抽出物1〜1.5wt%、及び医薬で認められているベクター99〜98.5wt%が含まれていることを特徴とする請求項3に記載の医薬組成物。
【請求項５】
該ベクターは、澱粉、乳糖、ショ糖、微結晶セルロースまたはカルボキシメチルセルロースであることを特徴とする請求項3に記載の医薬組成物。
【請求項６】
更に、医薬で認められている添加剤が含まれており、該添加剤は、アミノ酸、ビタミンまたはミネラルであることを特徴とする請求項3に記載の医薬組成物。
【請求項７】
錠剤、カプセル、皮膚パッチ剤、懸濁剤、粉末、鼻吸入剤、スプレー剤または注射剤であることを特徴とする請求項3に記載の医薬組成物。
【請求項８】
被験物質を請求項3〜7のいずれかの一つに記載の医薬組成物に接触させることが含まれていることを特徴とする低比重リポ蛋白低下方法。
【請求項９】
該被験物質は、哺乳動物であることを特徴とする請求請8に記載の方法。
【請求項１０】
該哺乳動物は、人類であることを特徴とする請求請9に記載の方法。
【請求項１１】
被験物質を請求項3〜7に記載のいずれかの一つに記載の医薬組成物に接触させることが含まれていることを特徴とする総コレステロール低下方法。 
【請求項１２】
該被験物質は、哺乳動物であることを特徴とする請求請11に記載の方法。
【請求項１３】
該哺乳動物は、人類であることを特徴とする請求請12に記載の方法。
【請求項１４】
被験物質を請求項3〜7に記載のいずれかの一つに記載の医薬組成物に接触させることが含まれていることを特徴とするドリグリセリド低下方法。 
【請求項１５】
該被験物質は、哺乳動物であることを特徴とする請求請14に記載の方法。
【請求項１６】
該哺乳動物は、人類であることを特徴とする請求請15に記載の方法。
【請求項１７】
被験物質を請求項3〜7に記載のいずれかの一つに記載の医薬組成物に接触させることが含まれていることを特徴とする治療脂質異常治療方法。
【請求項１８】
該被験物質は、哺乳動物であることを特徴とする請求請17に記載の方法。
【請求項１９】
該哺乳動物は、人類であることを特徴とする請求請18に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、セイロンニッケイ抽出物に関わり、特に、セイロンニッケイの葉の抽出物、及びその医薬組成物及び該医薬組成物による脂質異常治療方法( Cinnamomum osmophloeum
Kaneh leaves extract、pharmaceutical composition comprising the extract and method for dyslipidemia treatment by using the same method ) に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂質異常(dyslipidemia)は、血中脂質の含有量は異常があることで、よく見られる高脂血症(hyperlipidemia)は、血中脂質の含有量が高すぎたことをいい、通常は、アテローム産生性リポ蛋白表現型 (atherogenic lipoprotein phenotype)と脂質三徴(lipid triad、すなわち、血中低比重リポ蛋白(LDL)の含有量が多く、ドリグリセリド(TG)の含有量が多く、そして高比重リポ蛋白(HDL)の含有量が少なくなった症状)を持つのが特徴であり、脂質異常(特に高脂血症)は、よく見られる文明病であり、脂質異常症患者は、心臓病、高血圧と糖尿病など心血管疾患の発症が高いグループである。合成医薬品で生じられた副作用及び抗生物質の薬剤耐性がだんだん重要視されている今日、天然化合物を活性成分の替代藥とするのが、学術研究のメインとなり、効果がよく、副作用が低い脂質異常治療藥物の開発が必要なのは、確かなことである。
【０００３】
セイロンニッケイ(Cinnamomum osmophloeum Kaneh.)は、台湾特有の広葉植物であり、現在、多くの研究によると、セイロンニッケイのエッセンスオイル(essential oil)は、細菌、白蟻、ダニ、ばい菌と真菌の生物活性に対する抑制効果があり、そして、その研究によると、セイロンニッケイのエッセンスオイル及びその含まれた主要化合物cinnamaldehydeは、マウスの実験にて、キサンチンオキシダーゼ阻害活性(xanthine
oxidase inhibitory activity)及び抗高尿酸血症への阻害(anti-hyperuricemia)
に顕著な効果があった。しかし、いまのところ、セイロンニッケイによる脂質異常治療の研究はまだないようである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、セイロンニッケイの葉の抽出物を医薬組成物の天然活性成分として提供することを目的とする。
本発明は、該抽出物を活性成分として、脂質異常の治療を達成させるための医薬組成物を提供することをもう一つの目的とする。
本発明は、コレステロール、ドリグリセリドと低比重リポ蛋白コレステロールを低下させるための脂質異常治療方法を提供することを更にもう一つの目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上述の目的を達成させるため、本発明は、セイロンニッケイの葉を熱水で抽出して得られた、抗脂質異常を有する抽出物を提供する。
該抽出物は、以下のように、セイロンニッケイの葉を粉砕するが、該セイロンニッケイの葉を蒸留水で沸騰させて、抽出液が得られ、該粗抽出液をろ過して、ろ過液が得られ、それから、該ろ過液を乾燥するという好適な手順で製造されるように設けられていることを特徴とする。
【０００６】
本発明は、セイロンニッケイの葉の抽出物の有效量、及び医薬で認められているベクターが含まれている脂質異常治療用医薬組成物を提供することを特徴とする。
【０００７】
好適な該医薬組成物は、セイロンニッケイの葉の抽出物1〜1.5wt%、及び医薬で認められているベクター99〜98.5wt%が含まれていることを特徴とする。
好適な該ベクターは、澱粉、乳糖、ショ糖、微結晶セルロースまたはカルボキシメチルセルロースであることを特徴とする。
好適な該医薬組成物は更に、医薬で認められている添加剤が含まれており、該添加剤は、アミノ酸、ビタミンまたはミネラルであることを特徴とする。
好適な該医薬組成物は、錠剤、カプセル、皮膚パッチ剤、懸濁剤、粉末、鼻吸入剤、スプレー剤または注射剤であることを特徴とする。
【０００８】
本発明はまた、被験物質を該医薬組成物に接触させることが含まれていることを特徴とする低比重リポ蛋白低下方法を提供する。
【０００９】
本発明は、更に、被験物質を該医薬組成物に接触させることが含まれていることを特徴とする総コレステロール低下方法を提供する。
本発明は、また更に、被験物質を該医薬組成物に接触させることが含まれていることを特徴とするドリグリセリド低下方法を提供する。
本発明は、なお、被験物質を該医薬組成物に接触させることが含まれていることを特徴とする脂質異常治療方法を提供する。
好適な該被験物質は、哺乳動物であることをいう。
好適な該哺乳動物は、人類であることをいう。
【００１０】
上述の内容をまとめると、本発明は、セイロンニッケイの葉の抽出物を活性成分とする医薬組成物に関わり、該医薬組成物は、脂質異常への治療效果があり、詳しく言えば、低比重リポ蛋白コレステロール、総コレステロールとドリグリセリドの活性を顕著に低下することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１Ａ】本発明の実施例二におけるセイロンニッケイの葉の抽出物によるマウス実験のHDL-CとLDL-Cの含有量に影響した効果。
【図１Ｂ】本発明の実施例二におけるセイロンニッケイの葉の抽出物によるマウス実験のHDL-C/LDL-Cの割合に影響した効果。
【図２Ａ】本発明の実施例二におけるセイロンニッケイの葉の抽出物の主要成分を示すためのHPLCグラフ。
【図２Ｂ】図2Aの二つの主要成分に関する回復曲線。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明でいう、「治療」は、肝炎に罹った者を対象に、本発明の医薬組成物で取り扱うことをいい、詳しく言えば、アルコール性肝炎に罹った者を対象に、肝炎に罹った個体に対して、本発明の医薬組成物で取り扱い、当該疾患・症状への完治、緩和、解消、治療、予防を目的とすることである。本発明でいう「活性成分」は、本発明の医薬組成物は実際に当該治療効果がある成分をいい、本発明でいう「有效量」は、該治療を行うために、単独使用、またはそのほかの薬物との併用で、本発明の医薬組成物が提供される量をいう。
【００１３】
本発明でいう「医薬で認められているベクター」は、所属分野で知られ、しかも本発明の医薬組成物の活性成分效果に影響しないベクターをいい、例えば、澱粉、乳糖、ショ糖、微結晶セルロースまたはカルボキシメチルセルロースであり、しかし、それに限らないが、本発明の医薬組成物は更に、医薬で認められている添加剤を配合して、本発明の個体に余分な栄養を補充できるが、それはアミノ酸、ビタミンまたはミネラルが含まれるが、それに限らないが、該ビタミンは、ビタミンB群、ビタミンC、ビタミンEまたはその組合せが含まれるが、それに限らないが、本発明の医薬組成物は、錠剤、カプセル、皮膚パッチ剤、懸濁剤、粉末、鼻吸入剤、スプレー剤または注射剤でもよいが、それを制限する必要はない。本発明の医薬組成物は原則として、従来のよく知られている方法で投薬されるが、好適な投薬方法は経口投与であり、本発明の医薬組成物の剤量は、取扱い待ちの患者の年齢、健康状態、治療コース及び/または症状によって使用される。
【００１４】
実施例において、本発明でいうセイロンニッケイの葉の抽出物は、セイロンニッケイの葉を熱水で抽出して得られた抽出物であり、その製造方法は次の手順が含まれるが、まず、セイロンニッケイの葉を提供し、該葉っぱを乾燥したあと、その葉を粉砕するが、粉砕された葉は、大きさが制限されないが、抽出効果をよくするため、粉砕された葉は粉状にしたほうがよいが、次は、粉砕された葉を水で沸騰させるが、蒸留水で沸騰したほうがよいが、該沸騰温度は特に制限しないが、該葉っぱを該蒸留水で沸騰させた状態で、抽出できればよいが、詳しく言えば、摂氏95〜100で、30〜40分間ぐらい沸騰させてから、粗抽出液が得られる。
【００１５】
そのあと、該粗抽出液をろ過して、ろ過液が得られるが、該ろ過方法は、所属分野で知られているろ過方法であり、制限する必要はないが、好適な該ろ過方法は、ガーゼによるろ過、遠心、フィルターまたは放置沈殿が含まれるが、それに限らないが、最後は、該ろ過液を乾燥したら、本発明の熱水によるセイロンニッケイの葉の抽出物が得られる。該乾燥は、所属分野でよく知られている乾燥方法であり、特に制限する必要はないが、好適な該乾燥方法は、冷凍乾燥(lyophilization)、自然乾燥(air-dry)、減圧乾燥または噴霧乾燥が含まれるが、それに限らない。
【実施例１】
【００１６】
実施例１:本発明のセイロンニッケイの葉の熱水抽出物の製造方法
まず、自然乾燥(air-dried)で、しかも、粉末状(powdered)に粉砕されたセイロンニッケイの葉950gを、蒸留水15Lで1時間沸騰させて、粗抽出液(crude
extract)が得られるが、該粗抽出液を集め、ガーゼ(cheesecloth)でろ過するが、ろ過して得られたろ過液(filtrate)を冷凍乾燥(lyophilization)したら、本発明セイロンニッケイの葉熱水抽出物(hot-water extract)150gが得られるが、本実施例の生産率は約16%(w/dry weight of leaves)。
【実施例２】
【００１７】
実施例２: 動物もモデル(animal model)の実験設計
動物実験の取り扱いはすべて、実験動物飼養管理(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)及び関連する台湾の動物保護法、また、現地の道徳委員会の許可を得て行われている。
体重100〜120gのゴールデンハムスター(Golden Syrian hamster) 40匹は、独立したプラスチック籠で、明暗は12時間周期(light/dark
cycle)、湿度(humidity)60%、室温25℃で飼育されており、実験を行う前、環境に適応させるように、実験用ハムスターに餌と水を無制限に供給するという実験室の恒常条件で、4週間飼育する。実験前、ハムスターをランダムで5群(8匹/群)に分け、その体重を記録し、それから、次の表一の実験設計に示すように、該5群別に正常食及び高コレステロール食(コレステロール0.2 %)を与え、4週間飼育したあと、実験設計により、実施例一のセイロンニッケイの葉熱水抽出物またはゲムフィブロジル(gemfibrozil、よく知られているコレステロール低下薬の一種)を5〜10週間投薬し、その後、吸入麻醉剤(isoflurane inhalation) 2%を投与し、犠死させ、総コレステロール(total cholesterol、TC)、ドリグリセリド (triglyceride、TG)、高比重リポ蛋白コレステロール
(HDL-cholesterol、HDL-C)、低比重リポ蛋白コレステロール (LDL-cholesterol、LDL-C)を分析するための血液被験物質(眼窩洞(orbital
sinus) と心臓穿刺(cardiac
puncture))を採取する。
【００１８】
【表１】
2012012341.tif 000003
該セイロンニッケイの葉の熱水抽出物とゲムフィブロジルは、実験設計の剤量を、Tween 80 0.5%を含有する水1 mlに溶かしてから、実験マウスに経口的に投与する。
【実施例３】
【００１９】
実施例３: 本発明のセイロンニッケイ抽出物の毒性分析
本発明は、セイロンニッケイの葉の抽出物による脂質異常の治療について、マウスモデル(mouse model)を実験して行われるが、本実施例は、実験マウスの体重変化、肝機能と腎機能を測定することにより、本発明のセイロンニッケイの葉の抽出物が生体動物の生理に不良な影響を与えるかどうかを分析するために行われれるが、該体重変化の測定により、セイロンニッケイの葉の抽出物が生体動物の生理に不良な影響を与えるかを確定できると同時に、後続する動物実験を標準化して、体重はセイロンニッケイの葉の抽出物がマウスの生理に与える影響の変化要素の一つであるかを確認できる。
【００２０】
（体重変化）
実験マウスの体重変化は、次の表２に示す。
【００２１】
【表２】
2012012341.tif 000004
*表中の週間数は、本発明のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジルを投与したあとの週間数を表す。
* 各群は、8匹の実験マウス (n=8)を用いて、各群から得られたデータは、標準偏差を計算したあと、該群のデータはそのほかの群のデータの差異に比べて、統計的に意義がある(p < 0.05)場合、異なった上付き記号をつけて表す。
【００２２】
実験結果によると、マウスの体重は摂食量により、自然に増加するが、各群別の間には、顕著な差異がない(表中に表示される上付き記号は同様)。そして、実験マウスは、健康な外観と行動能力を示している (データは、本明細書に未記載)。
【００２３】
（肝機能と腎機能）
次は、実施例２のセイロンニッケイの葉の抽出物を投与して、実験マウスの肝機能または腎機能に異常を生じさせるかを観察するが、マウスの血清中のグルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ(glutamate oxaloacetate transaminase、GOT)とグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ(glutamic pyruvic
transaminase、GPT)の含有量を観察して、マウスの肝機能を判定し、マウスの血清中のクレアチニン(creatinine)と血中尿素窒素(blood urea nitrogen、BUN)の含有量を観察して以判斷マウス的腎機能を判定する。次の表三は、実験マウスを実施例二のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジル10週間投与してから、血清中GOT、GPT、クレアチニンとBUNの変化の実験結果を示す。
【００２４】
【表３】
2012012341.tif 000005
* 各群は、8匹の実験マウス(n=8)を用いて、各群から得られたデータは、標準偏差を計算したあと、該群のデータはそのほかの群のデータの差異に比べて、統計的に意義がある(p < 0.05)場合、異なった上付き記号をつけて表す。
【００２５】
表３のデータによると、脂質異常のあるマウス(HChol群を例として)血清中GOT、GPTとBUN値は、正常マウスより高いの(control)を示し、脂質異常で、肝機能と腎機能の異常になることを表している。そして、実験マウスに、実施例二のセイロンニッケイの葉の抽出物を投与しても、マウス血清中GOT、GPT、クレアチニンとBUN値は顕著な変化がない。
【実施例４】
【００２６】
実施例４: 本発明のセイロンニッケイ抽出物による脂質異常治療
本実施例は、実施例二のセイロンニッケイの葉の抽出物による脂質異常の治療について、該マウスモデルを、実験して行われるが、総コレステロール(total cholesterol、TC)、ドリグリセリド(triglyceride、TG)、高比重リポ蛋白コレステロール(HDL-cholesterol、HDL-C)と低比重リポ蛋白コレステロール(LDL-cholesterol、LDL-C)を、該脂質異常治療の活性指標とする。
【００２７】
（コレステロール和ドリグリセリド）
次の表４は、脂質異常のある実験マウスを対象として、実施例２のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジルを投与してから、0週、5週目、10週目のときの血中コレステロールとドリグリセリドの含有量変化をみた実験結果である。
【００２８】
【表４】
2012012341.tif 000006
* 表中の週間数は、本発明のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジルを投与したあとの週間数を表す。 
* 各群は、8匹の実験マウス(n=8)を用いて、各群から得られたデータは、標準偏差を計算したあと、該群のデータはそのほかの群のデータの差異に比べて、統計的に意義がある(p < 0.05)場合、異なった上付き記号をつけて表す。
【００２９】
表４の実験結果によると、0週のとき、高コレステロール食投与のマウス(HCholを例として)と正常食のマウス(control)のコレステロールとドリグリセリドの含有量を見て分かるように、高コレステロール食投与のマウス(HChol) は、血液中で、コレステロールとドリグリセリドの含有量が非常に高い。それにより、本発明の実験設計で、実験マウスの脂質異常への促進効果が示されている。
【００３０】
重要なのは、実施例２のセイロンニッケイの葉の抽出物が投与された群別は、100 mg/kg/day(HChol-CO100)または500 mg/kg/day (HCol-CO500)の剤量でも、コレステロールとドリグリセリドが顕著に下降し、該コレステロールとドリグリセリドの下降幅は、10週目のデータにもっと顕著に示されている。この結果によると、本発明のセイロンニッケイの葉の抽出物では、コレステロールとドリグリセリドを下降させる活性は、知られているコレステロール低下薬ゲムフィブロジルの効果とほぼ同様であることが示されている。
【００３１】
（高比重リポ蛋白コレステロールと低比重リポ蛋白コレステロール）
図1A (図中には、該群のデータは、該群のデータはそのほかの群のデータの差異に比べて、統計的に意義がある(p < 0.05)場合、異なった英文字の記号で示される)は、該マウスモデルのマウスには、実施例二のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジルを投与後してから、10週目の高比重リポ蛋白コレステロールと低比重リポ蛋白コレステロールの含有量が示されており、図中のデータによると、正常食投与のマウス(control)に比べて、高コレステロール食投与のマウス(HCholを例として)のほうが、高比重リポ蛋白コレステロールと低比重リポ蛋白コレステロールが高く、実施例二のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジルの投与で、低比重リポ蛋白コレステロールの含有量への下降が促進されるが、そこで、注意すべきなのは、実施例二のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジルを投与しても、高比重リポ蛋白コレステロールの含有量への低下が促進されないことであり、図1B (図中には、該群のデータは、該群のデータはそのほかの群のデータの差異に比べて、統計的に意義がある(p < 0.05)場合、異なった英文字の記号で示される)は、実施例二のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジルの投与で、実験マウス体内の高比重リポ蛋白コレステロールと低比重リポ蛋白コレステロール値の変化(LDL/HDL)が示されており、その結果によると、実施例２のセイロンニッケイの葉の抽出物またはゲムフィブロジルを投与したあと、マウス体内のLDL/HDL値は、正常食投与のマウスと同じようになった。この結果から分かるように、本発明のセイロンニッケイの葉の抽出物は、低比重リポ蛋白コレステロール(悪コレステロール)を下降させる活性はあるが、高比重リポ蛋白コレステロール(善コレステロール)の含有量には影響しない。
【実施例５】
【００３２】
実施例５: 本発明にけるセイロンニッケイの葉の抽出物の主要成分
最後は、高速液体クロマトグラフィ(high-performance
liquid chromatography、HPLC)で、本発明におけるセイロンニッケイの葉の抽出物の主要成分を解析するが、該HPLCは、従来の知られている実験方法で行われるが、簡単に言えば、その実験パラメーターは次の通り。
【００３３】
・システム: fixed
loop 500 μlとUV検出器のAgilent1100
(Agilent、Germany)を設置。
・固定相: Luna C18カラム( 10.0 mm × 250 mm,粒子径 5 μm、Phenomnex Co.、USA)。
・流動相: 純水(溶剤A)とアセトニトリル(acetonitrile、溶剤B)。
・グラジエント勾配: まず、5分は79%の溶剤A を用いるが、10分間内で、グラジエント勾配を次第に緩やかにして、溶剤Aの濃度を77%に、それから、20分間に入ると、溶剤Bを5分間用いる。
・流動相の流速: 2.0 mL/min。
・偵測波長: 254 nm。
【００３４】
HPLCの結果は、図2Aに示すように、本発明のセイロンニッケイの葉の抽出物は、二つの主要成分が含まれ、保持時間(retention time)はそれぞれ、12.5分間(成分1)と14分間(成分2)であり、分光測定(IR (PerkinElmer Spectrum 100 FT-IR spectrometry)、UV (Bio-Tek μQuant
MQX200 ELISA reader)、NMR (1H-NMR、13C-NMR、Varian Utility
Inova-600 MHz spectrometer)、HREIMS (Thermo/Finnigan Quest MAT 95XL
Mass Spectrometer)により、この二つの主要成分はそれぞれ、
Kaempferol-O-β-D-
apiofuranosyl-(1->2)-α-L-arabinofuranosyl-7-O-α-L- rthamno-pyranoside
(成分1)とKaempferitrin (成分2)であることが確認された。最後に、図2B(Ｉは成分1、ＩＩは成分2、HPLCグラフにより、該二主要成分の回復曲線(linear regressing curve)を求めたところ、算出された図2Aの二つの主なピーク(すなわち、成分1と成分2)面積値は、含有量8.20%(成分1)と6.98%(成分2)を示している。
【図１Ａ】
2012012341.tif 000007
【図１Ｂ】
2012012341.tif 000008
【図２Ａ】
2012012341.tif 000009
【図２Ｂ】
2012012341.tif 000010