(57)【要約】【課題】マツタケの子実体を良好に形成させる、マツタケの人工栽培用培地及びマツタケの人工栽培方法を提供する。【解決手段】本発明のマツタケの人工栽培用培地は、大麦、小麦、ライ麦及び米糠を含む有効成分と、水とを含有することを特徴とする。また、本発明のマツタケの人工栽培方法は、上記のマツタケの人工栽培用培地を用いるマツタケの人工栽培方法であって、人工栽培用培地にマツタケの菌糸を接種した菌糸含有培地を３０℃以下の温度で培養する栽培培養工程を備え、上記栽培培養工程において、上記菌糸含有培地の表面を、人工栽培用培地より高いｐＨの、湿った被覆用材料（ピートモス）で覆うことを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
大麦、小麦、ライ麦及び米糠を含む有効成分と、水と、を含有することを特徴とするマツタケの人工栽培用培地。
【請求項２】
上記大麦、上記ライ麦及び上記米糠の含有量が、上記小麦１質量部に対して、それぞれ１〜１００質量部、１〜１００質量部及び０．１〜１０質量部である請求項１に記載のマツタケの人工栽培用培地。
【請求項３】
上記有効成分の含有量が、上記人工栽培用培地の全体積１Ｌに対して、５０〜１０００ｇである請求項１又は２に記載のマツタケの人工栽培用培地。
【請求項４】
クエン酸化合物及び糖類を更に含有する請求項１乃至３のいずれか１項に記載のマツタケの人工栽培用培地。
【請求項５】
上記人工栽培用培地のｐＨが、３〜８である請求項１乃至４のいずれか１項に記載のマツタケの人工栽培用培地。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか１項に記載のマツタケの人工栽培用培地を用いるマツタケの人工栽培方法であって、
上記人工栽培用培地にマツタケの菌糸を接種した菌糸含有培地を３０℃以下の温度で培養する栽培培養工程を備え、
上記栽培培養工程において、上記菌糸含有培地の表面を、被覆用材料で覆うことを特徴とするマツタケの人工栽培方法。
【請求項７】
上記被覆用材料のｐＨが、上記人工栽培用培地のｐＨより高いｐＨである請求項６に記載のマツタケの人工栽培方法。
【請求項８】
上記被覆用材料が、ピートモスである請求項６又は７に記載のマツタケの人工栽培方法。
【請求項９】
上記栽培培養工程において、１８℃〜２５℃の温度（ａ）で行う培養と、
１５℃〜２２℃の温度（ｂ）で行う培養と、を備え、
上記温度（ａ）が、上記温度（ｂ）より高い温度であり、
上記温度（ａ）及び上記温度（ｂ）の差が１℃以上である請求項６乃至８のいずれか１項に記載のマツタケの人工栽培方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マツタケの人工栽培用培地及びマツタケの人工栽培方法に関する。更に詳しくは、マツタケの子実体を良好に形成させることができるマツタケの人工栽培用培地及びマツタケの人工栽培方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
キノコ類の人工栽培は、古くから研究されており、シイタケ、ナメコ、ヒラタケ及びエノキタケ等の木材腐朽性キノコ類の人工栽培については、既に実用化されている。
また、菌根性キノコ類のマツタケは、生木の根の養分を吸収して成長するため、人工栽培が困難であり、実用化には至っていないが、様々な取り組みが試みられている。
【０００３】
例えば、マツタケの人工栽培方法としては、下記特許文献１に、培地に松茸菌を接種し室内温度を１５℃〜２５℃に保持して培地が白色の菌糸で覆われるまで培養し、培地の色が黄色から薄褐色となり皮膜が形成された時点で、該皮膜と培地全体の表面の所要厚さの部分とを取り除いて中心部を取り出して松茸の元菌となすことを特徴とする松茸の種菌培養方法が開示されている。
また、マツタケの人工栽培に用いる人工栽培用培地としては、下記特許文献２に、皮を剥いた馬鈴薯を水と共に煮沸、冷却したものをガーゼで包み、強制的な濾し方によってより多くの澱粉粒子を混入するようにして濃度を高め、乾物重量比２ないし５％となるようにした煮汁に対し，グルコースなどマツタケ菌糸の成長を促す有効成分の夫々を適量加えた上、ｐＨ５ないし６に調製したもの（以下、「調製煮汁」という。）とし、それらが、ビスコースやマツタケ山の土壌を成形加工した多孔質素材等吸着材に吸収、付着させられたものに、松の生葉と同生実、天然石灰石を夫々適量混入してなるものとし、それらの適量を透明栽培袋に装填、殺菌してなる基本培地と、前記調製煮汁に、フルクトースその他マツタケ菌糸から同子実体への成長を促す有効成分の夫々を適量加えた上、ｐＨ５ないし６に調製、殺菌してなる追加液体培地とからなるものとしたことを特徴とするマツタケ子実体の人工栽培用培地が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平９−２５２６４８号公報
【特許文献２】２００７−１２９９０４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、上記特許文献１及び２に記載されているマツタケの人工栽培用培地及びマツタケの人工栽培方法は、マツタケの子実体を形成させる方法として、いまだ十分満足できるものではない。
本発明の目的は、マツタケの子実体を良好に形成させるマツタケの人工栽培用培地及びマツタケの人工栽培方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下に示す通りである。
１．大麦、小麦、ライ麦及び米糠を含む有効成分と、水と、を含有することを特徴とするマツタケの人工栽培用培地。
２．上記大麦、上記ライ麦及び上記米糠の含有量が、上記小麦１質量部に対して、それぞれ１〜１００質量部、１〜１００質量部及び０．１〜１０質量部である上記１．に記載のマツタケの人工栽培用培地。
３．上記有効成分の含有量が、上記人工栽培用培地の全体積１Ｌに対して、５０〜１０００ｇである上記１．又は２．に記載のマツタケの人工栽培用培地。
４．クエン酸化合物及び糖類を更に含有する上記１．乃至３．のいずれか１項に記載のマツタケの人工栽培用培地。
５．上記人工栽培用培地のｐＨが、３〜８である上記１．乃至４．のいずれか１項に記載のマツタケの人工栽培用培地。
６．上記１．乃至５．のいずれか１項に記載のマツタケの人工栽培用培地を用いるマツタケの人工栽培方法であって、
上記人工栽培用培地にマツタケの菌糸を接種した菌糸含有培地を３０℃以下の温度で培養する栽培培養工程を備え、
上記栽培培養工程において、上記菌糸含有培地の表面を、被覆用材料で覆うことを特徴とするマツタケの人工栽培方法。
７．上記被覆用材料のｐＨが、上記人工栽培用培地のｐＨより高いｐＨである上記６．に記載のマツタケの人工栽培方法。
８．上記被覆用材料が、ピートモスである上記６．又は７．に記載のマツタケの人工栽培方法。
９．上記栽培培養工程において、１８℃〜２５℃の温度（ａ）で行う培養と、
１５℃〜２２℃の温度（ｂ）で行う培養と、を備え、
上記温度（ａ）が、上記温度（ｂ）より高い温度であり、
上記温度（ａ）及び上記温度（ｂ）の差が１℃以上である上記６．乃至８．のいずれか１項に記載のマツタケの人工栽培方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のマツタケの人工栽培用培地によれば、有効成分として、大麦、小麦、ライ麦及び米糠を含有するので、マツタケの菌糸を良好に生育させることができ、マツタケの子実体形成に有用なマツタケの人工栽培用培地とすることができる。
また、本発明のマツタケの人工栽培方法によれば、大麦、小麦、ライ麦及び米糠を含有するマツタケの人工栽培用培地を用いて、マツタケの菌糸を接種した人工栽培用培地（菌糸含有培地）を３０℃以下の温度で培養する栽培培養工程を備え、その栽培培養工程において、人工栽培用培地を被覆用材料で覆うことにより、マツタケの菌糸を良好に生育させ、且つ、マツタケの子実体を良好に形成させる実用的なマツタケの人工栽培方法とすることができる。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
〔１〕マツタケの人工栽培用培地
本発明のマツタケ（松茸）の人工栽培用培地（以下、単に「培地」ともいう）は、大麦、小麦、ライ麦及び米糠を含む有効成分と、水と、を含有することを特徴とする。
【０００９】
上記培地は、マツタケの人工栽培の有効成分として、少なくとも、大麦、小麦、ライ麦及び米糠を含有するものである。
上記の大麦、小麦及びライ麦は、好ましくは精麦したものであり、より好ましくは粉砕した粉砕物であり、更に好ましくは粉末状の粉体である。
また、米糠としては、玄米を精米する工程で得られる赤糠、中糠及び白糠等が挙げられ、無洗米の製造時に出る肌糠等も使用できる。これらは、１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。
【００１０】
上記大麦の含有量は、上記小麦１質量部に対して、好ましくは１〜１００質量部、より好ましくは５〜５０質量部、更に好ましくは８〜３０質量部である。
上記ライ麦の含有量は、上記小麦１質量部に対して、好ましくは１〜１００質量部、より好ましくは２〜５０質量部、更に好ましくは５〜３０質量部である。
上記米糠の含有量は、上記小麦１質量部に対して、好ましくは０．１〜１０質量部であり、より好ましくは０．５〜５質量部であり、更に好ましくは０．５〜２質量部である。
大麦、小麦、ライ麦及び米糠の含有量が上記範囲であると、マツタケの菌糸を良好に生育させることができ、マツタケの子実体形成に有用なマツタケの人工栽培用培地とすることができる。
【００１１】
上記大麦の有効成分全体における含有量としては、有効成分の全量を１００質量％としたときに、好ましくは１０〜９０質量％、より好ましくは２５〜７０質量％、更に好ましくは３０〜６０質量％である。
また、上記大麦の培地全体における含有量としては、培地の体積の全量を１Ｌとしたときに、好ましくは１０〜１０００ｇであり、より好ましくは３０〜９００ｇであり、更に好ましくは８０〜７００ｇである。
【００１２】
上記ライ麦の有効成分全体における含有量としては、有効成分の全量を１００質量％としたときに、好ましくは５〜９０質量％、より好ましくは１０〜８０質量％、更に好ましくは３０〜６５質量％である。
また、上記ライ麦の培地全体における含有量としては、培地の体積の全量を１Ｌとしたとき、好ましくは１０〜１２００ｇであり、より好ましくは３０〜１０００ｇであり、更に好ましくは５００〜９００ｇである。
【００１３】
上記小麦の有効成分全体における含有量としては、有効成分の全量を１００質量％としたときに、好ましくは０．５〜５０質量％、より好ましくは１〜１０質量％、更に好ましくは２〜５質量％である。
また、上記小麦の培地全体における含有量としては、培地の体積の全量を１Ｌとしたときに、好ましくは１〜１００ｇであり、より好ましくは５〜５０ｇであり、更に好ましくは８〜３０ｇである。
【００１４】
上記米糠の有効成分全体における含有量としては、有効成分の全量を１００質量％としたときに、好ましくは０．５〜５０質量％、より好ましくは１〜１０質量％、更に好ましくは２〜５質量％である。
また、上記米糠の培地全体における含有量としては、培地の体積の全量を１Ｌとしたときに、好ましくは１〜１００ｇであり、より好ましくは５〜５０ｇであり、更に好ましくは８〜３０ｇである。
【００１５】
上記各種の有効成分の含有量が、それぞれ上記範囲内であるとマツタケの菌糸が良好に生育することができ、子実体を良好に形成することができる。
【００１６】
上記有効成分全量の培地全体における含有量は、培地の体積の全量を１Ｌとしたときに、好ましくは５０〜１０００ｇであり、より好ましくは１００〜８００ｇであり、更に好ましくは２５０〜７００ｇである。
【００１７】
上記培地は、上記有効成分以外に、水を含有する。上記水としては、精製水、蒸留水及び水道水を特に限定されることなく使用することができる。
上記水の含有量としては、特に限定されないが、培地全量を１００質量％としたときに、通常３０質量％以上であり、含水量を３０〜９５質量％に調整するのが好ましく、４０〜８５質量％に調整するのがより好ましい。
具体的には、水の含有量としては、培地が上記有効成分を５０ｇ以上含む場合に、培地全量が１Ｌとなる量にすることができる。
また、培地が、上記有効成分を５０ｇ以上含み、更に、後述のその他添加剤を含む場合であっても、水の含有量としては、培地全量が１Ｌとなる量にすることができる。
【００１８】
また、上記培地には、上記有効成分及び水以外に、クエン酸化合物及び糖類を含有することが好ましい。
本発明においては、クエン酸化合物及び糖類が培地に含有されている場合、マツタケの菌糸が良好に生育することができ、子実体を良好に形成することができる。
【００１９】
上記クエン酸化合物としては、具体的には、クエン酸及びクエン酸塩が挙げられる。これらは、１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。クエン酸塩としては、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸銅（ＩＩ）及びクエン酸鉄アンモニウム等が挙げられる。これらのうち、菌糸の成長に優れるクエン酸が好ましい。
【００２０】
また、上記クエン酸化合物の含有量は、上記小麦１質量部に対して、好ましくは０．００５〜０．５質量部であり、より好ましくは０．０１〜０．１質量部であり、更に好ましくは０．０３〜０．０８質量部である。
上記クエン酸化合物の培地全体における含有量としては、培地の体積の全量を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０１〜５０ｇであり、より好ましくは０．１〜３０ｇであり、更に好ましくは０．５〜５ｇである。
【００２１】
上記糖類としては、フラクトース及びスクロース等が挙げられる。これらは、１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。
上記糖類の含有量は、上記小麦１質量部に対して、好ましくは０．１〜５０質量部であり、より好ましくは０．５〜１０質量部であり、更に好ましくは１〜５質量部である。
また、上記糖類の培地全体における含有量としては、培地の体積の全量を１Ｌとしたときに、好ましくは１〜３００ｇであり、より好ましくは５〜１００ｇであり、更に好ましくは１０〜５０ｇである。
上記クエン酸化合物及び糖類の含有量が、それぞれ上記範囲内であるとマツタケの菌糸が良好に生育することができ、子実体を良好に形成することができる。
【００２２】
また、上記培地には、上記有効成分、水、クエン酸化合物及び糖類以外に、その他の添加剤を含有することができる。その他の添加剤としては、ビタミン類、無機成分、アミノ酸類、活性炭、ゲル化剤、その他の植物成分及びアミン化合物等が挙げられる。
本発明においては、上記その他添加剤のうち、ビタミン類、無機成分、アミノ酸類及び活性炭等が含有されていることが好ましい。これらのその他添加剤が培地に含有されている場合、マツタケの菌糸が良好に生育することができ、子実体を良好に形成することができる。
【００２３】
上記ビタミン類としては、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、イノシトール、ミオイノシトール及びビタミンＫ等が挙げられる。これらのビタミン類は１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。これらのうち、本発明の培地では、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ニコチン酸アミド、及びミオイノシトールを含有することが好ましい。
上記ビタミン類の全量の含有量としては、具体的には、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは１０〜１０００ｍｇであり、より好ましくは５０〜５００ｍｇである。
【００２４】
また、本発明の培地が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ニコチン酸アミド及びミオイノシトールを含有する場合、ビタミンＢ１の含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０１〜１ｍｇであり、より好ましくは０．０５〜０．５ｍｇである。
また、ビタミンＢ６の含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０５〜５ｍｇであり、より好ましくは０．１〜１ｍｇである。
また、ニコチン酸アミドの含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０５〜５ｍｇであり、より好ましくは０．１〜１ｍｇである。
また、ミオイノシトールの含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは１０〜１０００ｍｇであり、より好ましくは５０〜５００ｍｇである。
【００２５】
上記無機成分としては、硫酸マグネシウム（硫酸マグネシウム７水和物）、リン酸二水素カリウム、塩化カルシウム（塩化カルシウム２水和物）、硝酸アンモニウム、硝酸カリウム、硫酸鉄（硫酸鉄７水和物）、硫酸マンガン（硫酸マンガン４水和物）、硫酸亜鉛（硫酸亜鉛７水和物、硫酸亜鉛４水和物）、硫酸銅（硫酸銅５水和物）、塩化コバルト（塩化コバルト６水和物）、ヨウ化カリウム、モリブデン酸ナトリウム（モリブデン酸ナトリウム２水和物）等が挙げられる。これらの無機成分は１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。これらのうち、本発明の培地では、硫酸マグネシウム７水和物及びリン酸二水素カリウムを含有することが好ましい。
上記無機成分の全量の含有量としては、キノコ類等の培養培地に使用される量を使用することができる。具体的には、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０５〜５ｇであり、より好ましくは０．２〜１．５ｇである。
【００２６】
また、本発明の培地が、硫酸マグネシウム７水和物及びリン酸二水素カリウムを含有する場合、硫酸マグネシウム７水和物の含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０３〜３ｇであり、より好ましくは０．１〜１ｇである。
また、リン酸二水素カリウムの含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０１〜１．５ｇであり、より好ましくは０．０５〜０．５ｇである。
【００２７】
上記アミノ酸類としては、グリシン、グルタミン及びグルタミン酸等が挙げられる。これらのアミノ酸類は１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。これらのうち、本発明の培地では、グリシンを含有することが好ましい。
上記アミノ酸類の全量の含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０２〜１０ｍｇであり、より好ましくは０．５〜５ｍｇである。
【００２８】
上記活性炭としては、通常の培養培地に用いられる活性炭を適宜用いることができる。
上記活性炭の含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０５〜５０ｇであり、より好ましくは０．１〜５ｇである。
【００２９】
上記ゲル化剤としては、通常の培養培地に用いられる、液体をゲル化して固化させる化合物を用いることができる。本発明においては、大麦等の有効成分を含有し、この有効成分により培地をゲル化することができるが、有効成分の含有量が培地をゲル化させる量としては、少ない場合、ゲル化剤を用いることができる。
ゲル化剤を用いる場合、例えば、和光純薬工業株式会社製の「ゲルライト（登録商標）」や寒天（アガロース）等を用いることができる。これらのゲル化剤は１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。
上記ゲル化剤の含有量としては、培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．５〜３０ｇであり、より好ましくは１〜１０ｇである。
【００３０】
また、その他の植物成分としては、木粉（おがくず）、ふすま、稲藁及び麦藁等が挙げられる。
また、アミン化合物としては、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム等が挙げられる。
【００３１】
本発明の培地のｐＨは、マツタケの菌糸が生育できる範囲であれば特に限定されないが、好ましくは培地のｐＨは３〜８であり、より好ましくは４〜６であり、更に好ましくは４．５〜５．５である。培地のｐＨが上記範囲内であるとマツタケの菌糸が良好に生育することができる。尚、培地のｐＨの調整には、水酸化ナトリウム及び塩酸を適宜使用することができる。
また、本発明の培地は、通常のキノコ類の培養培地と同様に、オートクレーブ等により常圧又は高圧加熱して減菌して使用するのが好ましい。
【００３２】
本発明の培地の製造方法は、特に限定されず、公知の培養培地の製造方法により製造することができる。具体的には、それぞれの有効成分、必要に応じて添加されるクエン酸化合物、糖類並びにその他の添加剤、及び水を混合し、更に、水を添加して所定量までメスアップする。そして、必要に応じて、水酸化ナトリウム及び塩酸等によりｐＨを調整した後、培養容器に分注し、オートクレーブ等に供し、滅菌及びゲル化することができる。
【００３３】
〔２〕マツタケの人工栽培方法
本発明のマツタケの人工栽培方法は、上記のマツタケの人工栽培用培地を用いるマツタケの人工栽培方法であって、上記人工栽培用培地（以下、単に「培地」ともいう）にマツタケの菌糸を接種した菌糸含有培地を３０℃以下の温度で培養する栽培培養工程を備え、上記栽培培養工程において、上記菌糸含有培地の表面を、被覆用材料で覆うことを特徴とする。
【００３４】
上記栽培培養工程は、マツタケの菌糸を接種した上記のマツタケの人工栽培用培地（菌糸含有培地）を３０℃以下の温度（培養温度）で培養する工程である。そして、この栽培培養工程により、マツタケの菌糸を生育させて、更に、マツタケの子実体を形成させる。
【００３５】
本発明において、上記培地へのマツタケ菌糸の接種は、上記培養温度範囲に設定された無菌室で行うことが好ましい。
また、上記人工栽培用培地に接種されるマツタケ菌糸としては、公知の方法により、マツタケの胞子及び組織等から、キノコ類の菌糸培養に用いられる通常の寒天培地等の培養培地により増殖されたマツタケ菌糸を用いることができる。尚、マツタケ菌糸の調製方法における具体例については後述する。
【００３６】
人工栽培用培地へのマツタケ菌糸の接種は、特に限定されないが、マツタケ菌糸を増殖させた培養培地を含んだ状態の菌糸を人工栽培用培地に載せることにより行ってもよいし、人工栽培用培地に傷をつけて穴を開けてその穴に植えてもよい。
【００３７】
栽培培養工程での培養温度は、３０℃以下であり、好ましくは５℃〜２８℃であり、より好ましくは１０℃〜２５℃である。培養温度が上記範囲内であると、マツタケの菌糸が良好に生育し、効率良く子実体を形成することができる。
また、上記栽培培養工程では、全期間において一定の温度で行ってもよいが、１８℃〜２５℃の温度（ａ）で行う培養と、上記温度（ａ）より低い温度である１５℃〜２２℃の温度（ｂ）で行う培養と、を備える複数の培養温度によることが好ましい。
また、上記温度（ａ）は、上記温度（ｂ）より高い温度であり、この温度（ａ）及び温度（ｂ）の差は、好ましくは１℃以上であり、より好ましくは２℃〜８℃であり、更に好ましくは２℃〜５℃である。
【００３８】
上記栽培培養工程において、上記温度（ａ）で行う培養と、上記温度（ｂ）で行う培養とを備える場合、栽培培養工程としては、以下の態様が挙げられる。
（１）栽培培養工程を２段階（２つの期間）に分けて、培養開始から一定期間行う培養を第一培養とし、その第一培養の終了から子実体形成までを第二培養とする。そして、第一培養を上記温度（ａ）により行い、次に、第二培養を上記温度（ｂ）により行う。
（２）栽培培養工程において、上記温度（ａ）での培養と、上記温度（ｂ）での培養と、を交互に備える培養とする。この場合、温度（ａ）での培養と温度（ｂ）での培養の順序は限定されない。
（３）栽培培養工程において、上記（１）の態様における第二培養を、上記（２）の態様で培養を行う。
【００３９】
上記（１）の態様としては、栽培培養工程において、上記温度（ａ）による第一段の培養を行った後に、上記第一段の培養温度より、１℃以上低い温度の上記温度（ｂ）で第二段の培養を行うことによる栽培培養工程が挙げられる。この場合、相対的に高い温度である温度（ａ）による第一段の培養により、マツタケの菌糸の成長に優れ、次に、相対的に低い温度である温度（ｂ）による第二段の培養により、菌糸から子実体の形成が促され、子実体形成に優れる人工栽培方法とすることができる。更に、上記温度（ａ）による第一段の培養と、上記温度（ｂ）による第二段の培養を行う場合、上記温度（ｂ）は、２０℃以下（好ましくは１９℃以下、より好ましくは１８℃以下）が、子実体形成に優れることから好ましい。
また、上記の二段階の培養温度による栽培培養工程の場合、上記第一段及び上記第二段の培養期間は、特に限定されないが、後述の被覆用材料で菌糸含有培地を覆う前までを、上記第一段の培養とし、被覆用材料で菌糸含有培地を覆った後を、上記第二段の培養とするのが好ましい。
栽培培養工程が、上記（１）の態様による培養であると、マツタケの菌糸の成長及び子実体の形成がより優れるマツタケの人工栽培方法とすることができる。
【００４０】
上記（２）の態様としては、上記温度（ａ）での培養と、上記温度（ｂ）での培養と、を交互に備え、一定時間内に複数の温度を交互に設定して、培養を行う栽培培養工程が挙げられる。
具体的には、上記温度（ａ）による培養が、４８時間あたり１時間以上継続して行われることが好ましい。また、２４時間あたり、２３時間未満１時間以上継続行うことがより好ましく、２１時間未満３時間以上継続して行うことが更に好ましい。
上記（２）の態様としては、例えば、約２２℃の温度（ａ）による培養を８時間継続した後、約１８℃の温度（ｂ）による培養を１６時間継続し、再び、約２２℃の温度（ａ）による培養を８時間継続した後、約１８℃の温度（ｂ）による培養を１６時間継続することができる。これにより、温度（ａ）及び温度（ｂ）による培養を交互に繰り返しながら行う栽培培養工程とすることができる。
栽培培養工程が、上記（２）の態様による培養であると、より効率的にマツタケの子実体を形成することができる。
【００４１】
上記（３）の態様としては、上記（１）の態様における第二段について、温度（ｂ）による培養に代えて、上記（２）の態様による栽培培養工程が挙げられる。
栽培培養工程が、上記（３）の態様による培養であると、マツタケの菌糸の成長及び子実体の形成がより優れるマツタケの人工栽培方法とすることができる。
【００４２】
本発明における栽培培養工程では、上記のマツタケの人工栽培用培地が用いられるが、上記培地において、栽培培養の開始から子実体を形成させるまで、同じ培地により継続して、栽培培養をおこなってもよいが、別途調製した新たな培地に適宜移植を行って、菌糸の成長及び子実体の形成をさせてもよい。
新たな培地の移植としては、具体的には、１５日〜６ヶ月経過毎に行うのが好ましく、１〜３ヶ月経過毎に行うのがより好ましい。菌糸の成長及び子実体の形成において、新たな培地に移植（植え替える）することにより、マツタケの菌糸に有効成分（栄養成分）を効果的に提供することができる。
また、上記移植の方法は、特に限定されず、公知のキノコ類の通常の培養における移植の方法と同様に行うことができる。例えば、移植前の培地を含んだ状態の培養された菌糸を、新たな培地に載せることにより行ってもよいし、新たな培地に傷をつけて穴を開けてその穴に菌糸（培地を含んだ菌糸）植えてもよい。
【００４３】
また、上記栽培培養工程で使用される上記培地の有効成分の含有量は、上述のとおりであるが、マツタケの菌糸を培養し、生育させていく過程で、培地の有効成分の含有量を順次増加させることができる。
培地の有効成分の含有量を順次増加させて培養を行う場合には、上記の移植において、これまで培養された菌糸（菌糸体）を、有効成分の含有量を増加させた培地に移植することにより行うことができる。
また、培地の有効成分の含有量を順次増加させる場合、その有効成分の増加量は、移植する前の培地の有効成分の全量を１００質量％としたときに、１〜３０質量％が好ましく、３〜２５質量％がより好ましい。
【００４４】
また、栽培培養工程においては、培地が乾いた場合や、培地及び菌糸に水分や栄養分を補給する場合等のため、菌糸含有培地の上部に適宜、水又は水溶液（以下、「補充液」という）を添加することができる。この補充液としては、水又は糖類含有水溶液が挙げられる。上記糖類含有水溶液の糖類としては、フラクトース及びスクロース等が挙げられる。これらは１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。
上記糖類含有水溶液に含まれる糖類の含有量としては、全量を１００質量％としたときに、好ましくは１〜５０質量％であり、より好ましくは１０〜３０質量％である。
補充液の添加量は、特に限定されないが、１回当たり培地１００ｍＬに対して、５〜３０ｍＬ程度である。
補充液を添加する場合の添加回数は、栽培培養工程を通して、１〜５回程度であり、培地の乾燥状況に応じて適宜選択できる。
【００４５】
本発明の栽培培養工程では、菌子含有培地の表面を、被覆用材料で覆う（被せる）工程を備える。
この被覆用材料で覆う工程では、菌糸含有培地の表面を被覆用材料で覆うことにより、マツタケの菌糸（菌糸体）からの子実体形成を誘導し、被覆用材料で覆われた菌子含有培地を培養することにより、マツタケの子実体を形成させることができる。また、栽培中の培地表面の乾燥防止にも優れ、子実体の形成の促進に優れる人工栽培方法とすることができる。
上記被覆用材料としては、ピートモス、バーミキュライト、木粉（オガクズ）並びに、園芸用の培養土及び腐葉土等の土壌等が挙げられる。これらは１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。また、これらの被覆用材料のうち、本発明では、通気性（排水性）及び保水性に優れ、且つマツタケ菌糸の栄養源として優れることから、ピートモスが好ましい。
【００４６】
また、上記被覆用材料は、水で湿った状態（湿潤状態）が好ましい。上記被覆用材料を水で湿らせた状態とするには、特に限定されないが、被覆用材料と水とを混合し、被覆用材料を湿潤状態にし、被覆用材料から水が垂れ落ちない程度に絞った状態で使用することができる。
また、被覆用材料に予め水を振りかけて、被覆用材料を湿らせた後、使用してもよく、菌子含有培地の表面を被覆用材料で覆った後、水を振りかけて、被覆用材料を湿らせてもよい。
上記被覆用材料の好ましい態様としては、まず、被覆用材料と水とを混合し、被覆用材料を湿潤状態となる混合物する。次いで、被覆用材料と水との混合物について、ｐＨを必要に応じて調整した上で、被覆用材料から水が垂れ落ちない程度に絞って、湿った状態の被覆用材料を用いることができる。
【００４７】
上記被覆用材料のｐＨは、マツタケの菌糸が生育できる範囲であれば特に限定されないが、被覆用材料のｐＨとしては、好ましくは４〜８であり、より好ましくは４．５〜７であり、更に好ましくは５〜５．８である。
また、上記被覆用材料のｐＨは、上記培地のｐＨより高いことが好ましい。具体的には、上記被覆用材料のｐＨは、好ましくは上記培地のｐＨより０．１以上高く、より好ましくは０．２以上高いｐＨであり、通常、上記被覆用材料のｐＨと上記培地のｐＨとの差は２以下であり、好ましくは１以下である。上記被覆用材料のｐＨが、上記培地のｐＨより高いと、菌糸（菌糸体）からの子実体の形成が促され、効率的に子実体を得ることができる。
また、上記被覆用材料が、ピートモス、バーミキュライト、木粉（オガクズ）並びに、園芸用の培養土及び腐葉土等の土壌等である場合、被覆用材料のｐＨは、水との混合物の状態（分散液の状態、或いは、湿潤状態）で、調整されたｐＨを意味する。そして、水との分散液の状態でｐＨ調整されたものを、水が垂れ落ちない程度に絞って、湿った状態で、被覆用材料として用いられる。
尚、上記被覆用材料を使用する場合、予めオートクレーブ等により常圧又は高圧加熱して減菌して使用するのが好ましい。
【００４８】
上記被覆用材料により、菌糸含有培地の表面を覆う時期（被覆時期）は、特に限定されないが、栽培培養工程において、菌糸が十分生育し、菌糸が水分を吸収した状態になった段階で行うことが好ましい。この菌糸が十分生育した状態とは、例えば、５００ｍＬの容器に培地３００ｍＬ使用したときに、菌糸が培地に蔓延する状態、及び菌子体が培地の上部を１〜２ｃｍ程度覆う状態等が挙げられ、子実体を形成させる上で菌糸が十分生育した状態が好ましい。この被覆用材料による被覆は、通常、栽培培養工程の開始から、６〜１８ヶ月程度経過した時点で行うことができ、その前でも構わない。
【００４９】
本発明においては、菌糸含有培地の表面を被覆用材料により覆うことにより、マツタケの菌糸（菌糸体）から子実体形成が誘発され、マツタケの子実体が形成される。
また、子実体を形成させる培養期間としては、特に限定されないが、形成被覆用材料の被覆から、好ましくは１週間〜６ヶ月であり、より好ましくは１月以上であり、マツタケ菌糸の成長状態及び子実体の形成状態から、適宜選択できる。
【００５０】
本発明において用いるマツタケの菌糸は、公知の方法により、キノコ類の菌糸培養に用いられる通常の寒天培地等により増殖されたマツタケ菌糸を用いることができる。マツタケ菌糸の調製方法は、特に限定されないが、例えば、以下の予備培養により調製することができる。
【００５１】
上記予備培養では、マツタケの胞子（菌糸）及びマツタケの組織体から選ばれる少なくとも１種と予備培養培地（以下、「予備培地」ともいう）とを用いて、マツタケの菌糸（菌糸体）を得ることができる。
予備培養に用いる予備培地は、特に限定されない。ＭＳ培地等の、キノコ類の菌糸の培養に使用される公知の培地を使用することができる。具体的には、糖類、無機成分、ビタミン類、アミノ酸類、ゲル化剤及びその他の栄養成分を含有することができる。
【００５２】
上記糖類としては、フラクトース及びスクロース等が挙げられる。これらは１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。上記糖類の含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは１〜３００ｇであり、より好ましくは５〜１００ｇであり、更に好ましくは１０〜５０ｇである。
【００５３】
上記無機成分としては、硫酸マグネシウム（硫酸マグネシウム７水和物）、リン酸二水素カリウム、塩化カルシウム（塩化カルシウム２水和物）、硝酸アンモニウム、硝酸カリウム、硫酸鉄（硫酸鉄７水和物）、硫酸マンガン（硫酸マンガン４水和物）、硫酸亜鉛（硫酸亜鉛７水和物、硫酸亜鉛４水和物）、硫酸銅（硫酸銅５水和物）、塩化コバルト（塩化コバルト６水和物）、ヨウ化カリウム、モリブデン酸ナトリウム（モリブデン酸ナトリウム２水和物）等が挙げられる。これらは１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。これらのうち、硫酸マグネシウム７水和物、リン酸二水素カリウム、硫酸アンモニウム及び塩化カルシウムが好ましい。
上記無機成分の含有量としては、キノコ類等の培養培地に使用される量を使用することができる。具体的には、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０５〜５ｇであり、より好ましくは０．２〜１．５ｇである。
【００５４】
また、予備培地が、硫酸マグネシウム７水和物、リン酸二水素カリウム、硫酸アンモニウム及び塩化カルシウムを含有する場合、硫酸マグネシウム７水和物の含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは３０ｍｇ〜３ｇであり、より好ましくは１００〜５００ｍｇである。
リン酸二水素カリウムの含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは１５ｍｇ〜１．５ｇであり、より好ましくは７０〜３００ｍｇである。
硫酸アンモニウムの含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは１０ｍｇ〜１ｇであり、より好ましくは５０〜２００ｍｇである。
塩化カルシウムの含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは１０ｍｇ〜１ｇであり、より好ましくは５０〜２００ｍｇである。
【００５５】
上記ビタミン類としては、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ニコチン酸、ニコチン酸アミド、イノシトール、ミオイノシトール及びビタミンＫ等が挙げられる。これらは１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。これらのうち、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ニコチン酸及びミオイノシトールが好ましい。
上記ビタミン類の含有量としては、キノコ類等の培養培地に使用される量を使用することができる。具体的には、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは１０ｍｇ〜１ｇであり、より好ましくは５０〜３００ｍｇである。
また、予備培地が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ニコチン酸及びミオイノシトールを含有する場合、ビタミンＢ１の含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０１〜１ｍｇであり、より好ましくは０．０５〜０．３ｍｇである。
ビタミンＢ６の含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０５〜５ｍｇであり、より好ましくは０．２〜１ｍｇである。
ニコチン酸の含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０５〜５ｍｇであり、より好ましくは０．２〜１ｍｇである。
ミオイノシトールの含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは１０ｍｇ〜１ｇであり、より好ましくは５０〜３００ｍｇである。
【００５６】
上記アミノ酸類としては、グリシン、グルタミン及びグルタミン酸等が挙げられる。これらのアミノ酸類は１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。これらのうち、グリシンが好ましい。
上記アミノ酸類の含有量としては、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．０２〜１０ｍｇであり、より好ましくは０．５〜５ｍｇである。
【００５７】
上記ゲル化剤としては、ゲルライト及び寒天等が挙げられる。これらは１種のみを用いてもよく２種以上を併用してもよい。
ゲル化剤の含有量は、予備培地がゲル化できる量であれば特に限定されず、キノコ類等の培養培地に通常使用される量とすることができる。例えば、予備培地全体の体積を１Ｌとしたときに、好ましくは０．５〜３０ｇであり、より好ましくは１〜１０ｇである。
【００５８】
上記その他の栄養成分としては、エチレンジアミン四酢酸ナトリウム等のアミン化合物が挙げられる。
【００５９】
上記予備培養における培養温度としては、マツタケの菌糸が生育できる温度であれば特に限定されないが、好ましくは１０℃〜３０℃であり、より好ましくは２８℃以下であり、更に好ましくは２５℃以下である。予備培養における培養温度が、上記範囲内であると、マツタケの菌糸が良好に生育することができる。
【００６０】
予備培養の培養期間は、特に限定されない。例えば、５０ｍＬの容器に予備培地１５ｍＬ使用したときに、菌糸が生育し、予備培地の半分程度まで菌糸が伸張している状態であればよい。予備培養の培養期間としては、具体的には、１〜６ヶ月又は２〜４ヶ月とすることができ、その前でも構わない。
【実施例】
【００６１】
以下、本発明について、実施例を挙げて具体的に説明する。尚、本発明は、これらの実施例に何ら制約されない。
【００６２】
［１］マツタケ菌糸の調製
（１）実験例１：マツタケ菌糸の培養（予備培養）
（ａ）マツタケの調製
マツタケの人工栽培に用いる菌糸として、愛知県豊田市足助町産のマツタケ５本（ｍ１〜ｍ５）及び愛知県岡崎市額田産のマツタケ３本（ｍ６〜ｍ８）から菌糸を培養した。
上記のマツタケｍ１及びｍ６の子実体のかさの状態は、かさが半分開いた半開状態のものであった。また、マツタケｍ２は、子実体のかさが開いていない、所謂、つぼみ状態のものであった。また、マツタケｍ３〜ｍ５及びｍ７〜ｍ８は、子実体のかさが開いた全開状態のものであった。
【００６３】
上記マツタケ（ｍ１〜ｍ８）のかさの部分を約２ｍｍ角の立方体に切断し、サイコロ状の角切りのかさを用いて、菌糸を培養した。また、上記「角切りかさ」は、胞子（菌糸）を含むように、かさの裏面にある「ひだ」が含まれるように切断した。マツタケｍ１〜ｍ８の産地、かさの状態、並びに、それぞれ得られた「角切りのかさ」の個数を表１に示す。
【００６４】
【表１】
2012110266.tif 000002
【００６５】
（ｂ）予備培養培地の調製
硫酸マグネシウム七水和物３００ｍｇ、リン酸二水素カリウム１５０ｍｇ、硫酸アンモニウム１００ｍｇ、塩化カルシウム１００ｍｇ、ビタミンＢ１を０．１ｍｇ、ビタミンＢ６を０．５ｍｇ、ニコチン酸０．５ｍｇ、ミオイノシトール１００ｍｇ、フラクトース３０ｇ、グリシン２ｍｇ及びゲル化剤としてゲルライト３ｇを蒸留水に溶解し、更に蒸留水を加えて全量を１０００ｍＬとした。次いで、水酸化ナトリウム及び塩酸によりｐＨ５．２に調整した（予備培養培地用組成物）。
そして、直径（口径）２ｃｍ×長さ１０．５ｃｍの試験管に、上記予備培養培地用組成物を１５ｍＬ量投入し、オートクレーブにより、１２１℃で１５分間滅菌することにより、予備培養培地を調製した。この予備培養培地の組成を表２に示す。
【００６６】
【表２】
2012110266.tif 000003
【００６７】
（ｃ）予備培養及びその結果
上記により得られた「角切りのかさ」について、少なくともひだの一部が、上記予備培養培地の中に収まるように、角切りかさの上部１／２程度が露出するように埋め込んで、菌糸を培養させた。培養温度は２１〜２５℃として、３ヶ月間培養した。尚、この予備培養は、上記のｍ１〜ｍ８により得られた全ての「角切りかさ」について行なった。
【００６８】
上記のとおり、３ヶ月間培養した結果、ｍ１〜ｍ８の全ての「角切りかさ」について、菌糸体が、予備培養培地の上に厚さ１〜２ｃｍ程度形成され、菌糸は予備培養培地に蔓延し、予備培養培地全体が白色の菌糸で覆われた状態となり、マツタケの菌糸（菌糸体）が得られた。
【００６９】
[２］マツタケ子実体の人工栽培培養
〔１〕人工栽培用培地の検討
（１）実験例２
上記実験例１により得られた菌糸体のうち、上記ｍ２により得られた菌糸体を用いて、表３に示されるＮ１培地を使用してマツタケの人工栽培を行った。このＮ１培地は、有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を使用し、大麦、ライ麦、小麦及び米糠の各有効成分の配合割合（質量比）は、（大麦：ライ麦：小麦：米糠）＝（１０：２０：１：０．７５）となるようにした。また、上記の大麦、ライ麦、小麦及び米糠は粉末状のものを使用した。
【００７０】
培地の調製方法は、粉末からなる各種の有効成分及びその他の成分を混合し、次いで、その混合物に水を添加、混合して、更に、全量が規定量（２．３５Ｌ）となるように水を加えて調製した。また、水酸化ナトリウム及び塩酸によりｐＨが５．２となるようにｐＨを調整した。
【００７１】
栽培培養に用いる容器としては、キノコ用培養瓶（ガラス製広口瓶：口径４．５ｃｍ、直径１０．５ｃｍ、高さ１５．５ｃｍ、容量５００ｍＬ）を使用した。上記容器に、上記の調製方法により得られた、表３に示されるＮ１培地を約１５０ｍＬ投入し、通常の培養に用いられる、通気性を有するシリコン製の栓をして、オートクレーブにより、１２１℃で４５分間高圧滅菌を行い、その後、インキュベーター（株式会社日立製作所製「ＣＲ４１」）により、培地温度が１８℃となるまで冷却した。
【００７２】
栽培培養は、上記のとおり滅菌されたＮ１培地に、上記実験例１により得られた菌糸のうちｍ２から予備培養により得られた菌糸体を接種して、培養を行なった。接種は、予備培養の培地を含む菌糸体をそのままＮ１培地に載せることにより行った。また、この際に、補充液として蒸留水５０ｍＬを培地の上部に添加した。
上記培養は、上記インキュベーターにより行った。培養温度は、１日（２４時間）のうち、１８時間が１８℃、６時間が２１℃として、培養温度が１８℃と２１℃とが交互になるように設定した。
【００７３】
また、この栽培培養では、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、同一組成の新たなＮ１培地に移植（植え替え）して、マツタケの人工栽培を行った。また、培養に用いる容器は、上記のキノコ用培養瓶を用いた。また、それぞれの培地は、上記と同様にオートクレーブにより、１２１℃で４５分間高圧滅菌を行った。
移植における、各培地の使用量としては、培養から３ヶ月後の最初の移植に用いたＮ１培地は２００ｍＬ、培養から６ヶ月後及び９ヶ月後の移植に用いたＮ１培地は３００ｍＬとした。
上記移植の方法としては、培地を含む菌糸体を培養瓶から取り上げて、移植する新たなＮ１培地の上に載せるようにして、移植を行った。また、最終の９ヶ月後に行った移植の際には、補充液として２０質量％のフラクトース水溶液５０ｍＬを培地の上部に添加した。
【００７４】
また、栽培培養を開始してから、約１０ヶ月の培養を行った時点で、培地表面に補充液等の水分が確認できない状態となった。その状態で、培地及び菌糸体を上から覆うようにして、厚さが２〜３ｃｍとなるようにピートモスを被せた。
上記被覆に用いたピートモスは、ピートモス１００部に対して、水５０部を加えて混合し、ｐＨを５．５に調整した上で、水が垂れない程度に絞った状態（湿潤状態）の、湿ったピートモスを、オートクレーブ（１２１℃、１５分間）により滅菌して使用した。
【００７５】
上記ピートモスで培地及び菌糸を被覆した状態で培養を始めてから、約２週間程度経過した後、培養瓶の栓を取り除いた。
そして、ピートモスで培地及び菌糸を被覆した状態で、ピートモスで被覆してから約２ヶ月間培養を行った結果、ピートモスが押し上げられた状態となり、マツタケの子実体が１本形成されていた。得られたマツタケの子実体は、長さが約８ｃｍであり、芳香に優れるマツタケであった。
【００７６】
【表３】
2012110266.tif 000004
【００７７】
実験例３
上記実験例２に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：ライ麦：小麦：米糠）＝（２０：２：１：０．７５）となるＮ２培地を用いた。また、上記Ｎ２培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たなＮ２培地に移植して培養を行った。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００７８】
実験例４
上記実験例２に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：ライ麦：小麦：米糠）＝（２０：１０：１：０．７５）となるＮ３培地を用いた。また、上記Ｎ３培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たなＮ３培地に移植して培養を行った。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００７９】
実験例５
上記実験例２に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：ライ麦：小麦：米糠）＝（１２．５：１７．５：１：０．７５）となるＮ４培地を用いた。また、上記Ｎ４培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たなＮ４培地に移植して培養を行った。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００８０】
実験例６
上記実験例２に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦及び小麦を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：小麦）＝（２０：１）となるＮ５培地を用いた。また、上記Ｎ５培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たなＮ５培地に移植して培養を行った。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００８１】
実験例７
上記実験例２に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、小麦及び米糠を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：小麦：米糠）＝（２０：１：０．７５）となるＮ６培地を用いた。また、上記Ｎ６培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たなＮ６培地に移植して培養を行った。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００８２】
実験例８
上記実験例２に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、ライ麦及び小麦を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：ライ麦：小麦）＝（１０：２０：１）となるＮ７培地を用いた。また、上記Ｎ７培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たなＮ７培地に移植して培養を行った。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００８３】
実験例９
上記実験例２に用いたＮ１培地のフラクトースに代えて、スクロースを糖類として用いたＮ８培地を用いた。また、上記Ｎ８培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たなＮ８培地に移植して培養を行った。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００８４】
上記実験例２〜９で使用したＮ１〜Ｎ８培地の組成及び栽培培養の結果等について、表３に併記する。
また、栽培培養の結果は、下記のように評価した。
◎；良好な子実体（長さが６〜１０ｃｍ）が形成できた。
○；子実体は形成できたが、足がやや短い形状であった。
△；子実体は形成できたが、足が短く椎茸形状となり、形がやや悪かった。
×；子実体は形成できなかった。
【００８５】
有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を含有する培地を使用した実験例２〜５及び実験例９では、マツタケの子実体が形成できた。また、ライ麦の含有量が少ない培地を使用した実験例３及び４では、足の長さが短い子実体が得られた。実験例２、５及び９で得られたマツタケの子実体は、長さ約８ｃｍ、太さ（直径）約２ｃｍの子実体であった。また、実験例３で得られたマツタケは、椎茸形状の子実体であった。実験例４で得られたマツタケの子実体は、長さが約５ｃｍ、太さ（直径）約２ｃｍの子実体であった。
一方、ライ麦や米糠を含有しない培地を使用した実験例６〜８では、マツタケの菌糸は生育し、培地全体に菌糸は蔓延したが、マツタケの子実体は形成できなかった。
【００８６】
（１）実験例１０
上記実験例２と同様にマツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たな培地に移植する際に、上記実験例２に用いたＮ１培地について、有効成分の配合割合は、（大麦：ライ麦：小麦：米糠）＝（１０：２０：１：０．７５）となるように同一としながら、移植する際に、培地の有効成分の含有量を少しずつ増加させた培地を用いて培養を行った。実験例１０で使用した培地の組成等を表４に示す。この場合、最初の培地をＮ１−１、次に移植した培地をＮ１−２、更にその次の培地をＮ１−３と表し、以下同様にして、培地の種類を表す表記の後に、ハイフン（−）と共に表される数字が、培養に用いた培地の順序を示す数字とした。そして、移植の際に、表４に示される成分の培地に順次移植して、培養を行った。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００８７】
【表４】
2012110266.tif 000005
【００８８】
実験例１１
上記実験例１０に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：ライ麦：小麦：米糠）＝（２０：２：１：０．７５）となるＮ２培地を用いた。また、上記Ｎ２培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たな培地に移植した。その場合のＮ２培地としては、上記有効成分の配合割合は同一としながら、マツタケの菌糸体を移植する際に、培地の有効成分の含有量を少しずつ増加させて、表５に示される成分の培地に順次移植して培養を行った。それら以外は、実験例１０と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００８９】
【表５】
2012110266.tif 000006
【００９０】
実験例１２
上記実験例１０に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：ライ麦：小麦：米糠）＝（２０：１０：１：０．７５）となるＮ３培地を用いた。また、上記Ｎ３培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たな培地に移植した。その場合のＮ３培地としては、上記有効成分の配合割合は同一としながら、マツタケの菌糸体を移植する際に、培地の有効成分の含有量を少しずつ増加させて、表６に示される成分の培地に順次移植して培養を行った。それら以外は、実験例１０と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００９１】
【表６】
2012110266.tif 000007
【００９２】
実験例１３
上記実験例１０に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：ライ麦：小麦：米糠）＝（１２．５：１７．５：１：０．７５）となるＮ４培地を用いた。また、上記Ｎ４培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たな培地に移植した。その場合のＮ４培地としては、上記有効成分の配合割合は同一としながら、マツタケの菌糸体を移植する際に、培地の有効成分の含有量を少しずつ増加させて、表７に示される成分の培地に順次移植して培養を行った。それら以外は、実験例１０と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００９３】
【表７】
2012110266.tif 000008
【００９４】
実験例１４
上記実験例１０に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦及び小麦を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：小麦）＝（２０：１）となるＮ５培地を用いた。また、上記Ｎ５培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たな培地に移植した。その場合のＮ５培地としては、上記有効成分の配合割合は同一としながら、マツタケの菌糸体を移植する際に、培地の有効成分の含有量を少しずつ増加させて、表８に示される成分の培地に順次移植して培養を行った。それら以外は、実験例１０と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００９５】
【表８】
2012110266.tif 000009
【００９６】
実験例１５
上記実験例１０に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、小麦及び米糠を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：小麦：米糠）＝（２０：１：０．７５）となるＮ６培地を用いた。また、上記Ｎ６培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たな培地に移植した。その場合のＮ６培地としては、上記有効成分の配合割合は同一としながら、マツタケの菌糸体を移植する際に、培地の有効成分の含有量を少しずつ増加させて、表９に示される成分の培地に順次移植して培養を行った。それら以外は、実験例１０と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００９７】
【表９】
2012110266.tif 000010
【００９８】
実験例１６
上記実験例１０に用いたＮ１培地に代えて、有効成分として、大麦、ライ麦及び小麦を使用し、それぞれ有効成分の配合割合が、（大麦：ライ麦：小麦）＝（１０：２０：１）となるＮ７培地を用いた。また、上記Ｎ７培地を用いた栽培培養でも、マツタケの菌糸体を約３ヶ月毎に、新たな培地に移植した。その場合のＮ７培地としては、上記有効成分の配合割合は同一としながら、マツタケの菌糸体を移植する際に、培地の有効成分の含有量を少しずつ増加させて、表１０に示される成分の培地に順次移植して培養を行った。それら以外は、実験例１０と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【００９９】
【表１０】
2012110266.tif 000011
【０１００】
上記実験例１０〜１６において、それぞれ使用した最終培地の組成と、培養の結果を、表１１に示す。
上記実験例１０〜１６の結果は、上記実験例２〜８の結果と同様の結果であった。即ち、有効成分として、大麦、ライ麦、小麦及び米糠を含有する培地を使用した実験例１０〜１３では、マツタケの子実体が形成できた。また、ライ麦の含有量が少ない培地を使用した実験例１１及び１２では、やや足の長さが短い子実体が得られた。
また、実験例１０〜１３では、上記実験例２〜５における培地の有機の使用量を少なくすることができることから、経済的に優れるマツタケの人工栽培方法とすることができる。
一方、ライ麦や米糠を含有しない培地を使用した実験例１４〜１６では、実験例６〜８と同様にマツタケの菌糸は生育し、培地全体に菌糸は蔓延したが、マツタケの子実体は形成できなかった。
【０１０１】
【表１１】
2012110266.tif 000012
【０１０２】
〔２〕培養温度の検討
実験例１７
上記実験例２の培養温度である、１８℃で１８時間及び２１℃で６時間で交互に培養することに代えて、培養温度を約１８℃の一定温度として、培養を行った。
この場合、マツタケの菌糸の生育が、実験例２と比べて遅かったため、約３ヶ月毎の移植回数を１回増やして、栽培培養期間を実験例２より３ヶ月間長く培養を行った。尚、培養開始から１２ヶ月後に行った最終の移植における培地の使用量は３００ｍＬとし、その最終の移植の際に、補充液として２０質量％フラクトース水溶液５０ｍＬを培地上部に添加した。そして、最終の移植から１ヶ月経過後、培地表面に水分が確認できない状態となり、この状態で、培地及び菌糸全体を上から覆うようにして、厚さが２〜３ｃｍとなるようにピートモスを被せて、人工栽培を継続した。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
ピートモスで被覆してから、約３ヶ月培養を継続した結果、ピートモスが押し上げられた状態となり、マツタケの子実体が形成されていた。得られた子実体は、実験例２で得られた子実体より細く小さいものであった。
【０１０３】
実験例１８
上記実験例２の培養温度である、１８℃で１８時間及び２１℃で６時間で交互に培養することに代えて、栽培培養の開始からピートモスで被覆するまでの９ヶ月間は、培養温度を２３℃の一定温度とし、その後は１８℃で１８時間及び２１℃で６時間で交互に培養することにより栽培培養を行った。また、実験例１８においても、約３ヶ月毎にマツタケの菌糸体の移植を行ったが、菌糸の生育速度が、実験例２よりも速かったため、培養開始から８ヶ月経過時に３回目の移植（最終の移植）を行った。そして、培養開始から８ヶ月経過後に行った移植の際に、補充液として２０質量％フラクトース水溶液５０ｍＬを培地上部に添加した。そして、最終の移植から１ヶ月経過後、培地表面に水分が確認できない状態となり、この状態で、培地及び菌糸全体を上から覆うようにして、厚さが２〜３ｃｍとなるようにピートモスを被せて、人工栽培を継続した。それら以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
ピートモスで被覆してから、約３ヶ月培養を継続した結果、ピートモスが押し上げられた状態となり、実施例２と同様に、良好なマツタケの子実体が形成されていた。
【０１０４】
人工栽培工程を約１８℃の一定温度で行った実験例１７では、マツタケの子実体は良好に形成されたが、菌糸の成長速度は、実施例２より遅く、培養期間がやや長くなった。
また、２３℃の培養温度による第一段の培養と、１８℃で１８時間及び２１℃で６時間での交互の培養温度による第二段の培養との人工栽培培養による実験例１８では、実施例２より菌糸の成長速度が速く、短い培養期間で、実施例２と同様に、良好なマツタケの子実体が得られた。
【０１０５】
〔３〕ピートモスの検討
実験例１９
上記実験例２で使用したピートモスのｐＨを５．５に代えて、ピートモスのｐＨを５．０に調整して用いた以外は、上記実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
ピートモスのｐＨが５．０の実験例１９では、マツタケの菌糸は生育したが、生育した菌糸がピートモスを突き抜けて蔓延していき、子実体の形成はされなかった。
【０１０６】
実験例２０
上記実験例２で使用したピートモスのｐＨを５．５に代えて、ピートモスのｐＨを５．１とした以外は、上記実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
ピートモスのｐＨが５．１の実験例２０では、マツタケの菌糸は生育したが、生育した菌糸がピートモスを突き抜けて蔓延していき、子実体の形成はされなかった。
【０１０７】
実験例２１
上記実験例２で使用したピートモスのｐＨを５．５に代えて、ピートモスのｐＨを５．２とした以外は、上記実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
ピートモスのｐＨが５．２の実験例２１では、マツタケの菌糸は生育したが、生育した菌糸がピートモスを突き抜けて蔓延していき、子実体の形成はされなかった。
【０１０８】
実験例２２
上記実験例２で使用したピートモスのｐＨを５．５に代えて、ピートモスのｐＨを５．３とした以外は、上記実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
ピートモスのｐＨが５．３の実験例２２では、マツタケの菌糸は生育し、一部の菌糸がピートモスを突き抜けたが、多くの菌糸は、ピートモスの下部で蔓延し、子実体の形成が確認できた。尚、実験例２２得られたマツタケの子実体は、実験例２で得られた子実体の半分程度の大きさだった。
【０１０９】
実験例２３
上記実験例２で使用したピートモスのｐＨを５．５に代えて、ピートモスのｐＨを５．５とした以外は、上記実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
ピートモスのｐＨが５．４の実験例２３では、実験例２と同様に、マツタケの菌糸は生育し、菌糸はピートモスを突き抜けず、ピートモスの下部で蔓延し、良好に子実体が形成できた。
【０１１０】
実験例２４
上記実験例２で使用したピートモスのｐＨを５．５に代えて、ピートモスのｐＨを５．６とした以外は、上記実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
ピートモスのｐＨが５．６の実験例２４では、実験例２と同様に、マツタケの菌糸は生育し、菌糸はピートモスを突き抜けず、ピートモスの下部で蔓延し、良好に子実体が形成できた。
【０１１１】
〔４〕補充液の検討
実験例２５
上記実験例２に用いた２０質量％のフラクトース水溶液に代えて、２０質量％のスクロース水溶液を補充液として使用した。それ以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
２０質量％のスクロース水溶液を補充液として使用した実験例２５についても実験例２と同様に、マツタケの菌糸は生育し、菌糸はピートモスを突き抜けず、ピートモスの下部で蔓延し、良好に子実体が形成できた。
【０１１２】
〔５〕菌糸体の検討
実験例２６
上記実験例２に用いた、ｍ２から得られた菌糸体に代えて、上記実験例１によりｍ１から得られた菌糸体を使用した。それ以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【０１１３】
実験例２７
上記実験例２に用いた、ｍ２から得られた菌糸体に代えて、上記実験例１によりｍ３から得られた菌糸体を使用した。それ以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【０１１４】
実験例２８
上記実験例２に用いた、ｍ２から得られた菌糸体に代えて、上記実験例１によりｍ４から得られた菌糸体を使用した。それ以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【０１１５】
実験例２９
上記実験例２に用いた、ｍ２から得られた菌糸体に代えて、上記実験例１によりｍ５から得られた菌糸体を使用した。それ以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【０１１６】
実験例３０
上記実験例２に用いた、ｍ２から得られた菌糸体に代えて、上記実験例１によりｍ６から得られた菌糸体を使用した。それ以外は、実験例２と同様にして、マツタケの人工栽培を行った。
【０１１７】
上記実験例２６〜３０において、いずれも実験例２と同様に、マツタケの菌糸は生育し、菌糸はピートモスを突き抜けず、ピートモスの下部で蔓延し、良好に子実体が形成できた。
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明のマツタケの人工栽培用培地によれば、マツタケ菌糸の成長に優れる有効成分を含有していることから、マツタケの人工栽培として用いる培地に好適である。
また、本発明のマツタケの人工栽培方法は、マツタケ菌糸の生育とマツタケ子実体の形成とに優れることから、実用的なマツタケの人工栽培方法として、好適である。