(57)【要約】【課題】安全性の高い虚血性疾患の治療予防剤ならびにそれを含む食品および医薬組成物を提供する。【解決手段】鰓脚綱（Branchiopoda）、顎脚綱（Maxillopoda）および軟甲綱（Malacostraca）等脚目（Isopoda）を除く甲殻類の抽出物に含まれ、血小板および血管平滑筋細胞のいずれか一方または双方においてセロトニンに対する反応を減弱させる活性を有する１または複数の化合物を有効成分とする虚血性疾患の治療予防剤。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
鰓脚綱、顎脚綱および軟甲綱等脚目を除く甲殻類の抽出物に含まれ、血小板および血管平滑筋細胞のいずれか一方または双方においてセロトニンに対する反応を減弱させる活性を有する１または複数の化合物を有効成分とする虚血性疾患の治療予防剤。
【請求項２】
セロトニン受容体５ＨＴ2A刺激反応に対する抑制効果を有することを特徴とする請求項１記載の虚血性疾患の治療予防剤。
【請求項３】
前記セロトニンに対する反応が、血小板の凝集および血管平滑筋の収縮の一方または双方であることを特徴とする請求項１および２のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤。
【請求項４】
前記甲殻類が軟甲綱真軟甲亜綱ホンエビ上目およびトゲエビ亜綱のいずれかに属することを特徴とする請求項１から３のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤。
【請求項５】
前記甲殻類が真軟甲亜綱本エビ上目十脚目およびオキアミ目、ならびにトゲエビ亜綱口脚目のいずれかに属することを特徴とする請求項４記載の虚血性疾患の治療予防剤。
【請求項６】
前記抽出物が、腹部および脚部の一方または双方の筋肉部からの水抽出物であることを特徴とする請求項１から５のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤。
【請求項７】
前記虚血性疾患が、一過性脳虚血、脳梗塞、心筋梗塞、不安定狭心症、冠動脈バイパス術後のグラフト閉塞、経皮的冠動脈形成術後の冠動脈閉塞、血行再建術後の血管閉塞、閉塞性動脈硬化症、閉塞性血栓血管炎、糸球体腎炎、ネフローゼ症候群、本態性血小板血症、血栓性血小板減少性紫斑病、溶血性尿毒症症候群、抗リン脂質抗体症候群、および川崎病のいずれかであることを特徴とする請求項１から６のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤を含むことを特徴とする食品。
【請求項９】
請求項１から７のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤を含むことを特徴とする医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な虚血性疾患の治療予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管の閉塞や狭窄により血流が悪化し、最終的には細胞死や壊死をもたらす疾患を総称して虚血性疾患という。このような病態が進行し、臨床的に問題となる動脈として、脳、心臓、四肢が知られている。虚血性疾患には、狭心症、心筋梗塞等の虚血性心疾患、脳梗塞等の虚血性脳疾患（虚血性脳血管障害）、虚血性大腸炎等の虚血性腸疾患等が存在するが、特に前二者は日本人の死亡原因の上位を占めており、生活習慣の欧米化や社会的ストレスの増大に伴い、現代人において増加傾向にある。
【０００３】
虚血性疾患の治療法としては、薬剤療法により血管の狭窄や閉塞を解消し血管を拡張することが通常困難であるため、経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）、冠動脈バイパス術、血行再建術等の外科的手技が主流となっている。
【０００４】
虚血性疾患の治療予防剤としては、硝酸剤（ニトログリセリン、亜硝酸アミル等）等の発作の軽減を目的とするものと、抗血小板剤、カルシウムチャンネル開口剤、β−ブロッカー、カルシウム拮抗剤等の虚血性発作の発症の予防を目的とするものに大別される。
【０００５】
また、近年、発作の軽減以外の目的に使用される虚血性疾患の治療薬も提案されており、その一例としては、１−ベンジル−４−［（５，６−ジメトキシ−１−インダノン）−２−イル］メチルピペリジンおよび／またはその塩を含む虚血性疾患に対する血管新生促進治療薬が挙げられる（特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００７−１１９３６３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、従来の虚血性疾患の治療予防剤には、副作用を伴うものもあり、予防目的で長期間服用することについての安全性については確立されているとは言い難い。
【０００８】
本発明は、かかる課題に鑑みてなされたものであり、安全性の高い虚血性疾患の治療予防剤ならびにそれを含む食品および医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、鋭意検討を重ねた結果、長く食用に供されているエビ、カニ、オキアミ類をはじめとする甲殻類からの抽出物に抗血小板活性や血管拡張作用を有する成分が含まれている事を見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明は、下記の（１）〜（７）に記載の虚血性疾患の治療予防剤、下記の（８）に記載の食品、および下記の（９）に記載の医薬組成物を提供することにより上記課題を解決するものである。
（１）鰓脚綱（Branchiopoda）、顎脚綱（Maxillopoda）および軟甲綱（Malacostraca）等脚目（Isopoda）を除く甲殻類の抽出物に含まれ、血小板および血管平滑筋細胞のいずれか一方または双方においてセロトニンに対する反応を減弱させる活性を有する１または複数の化合物を有効成分とする虚血性疾患の治療予防剤。
（２）セロトニン受容体５ＨＴ2A刺激反応に対する抑制効果を有する上記（１）記載の虚血性疾患の治療予防剤。
（３）前記セロトニンに対する反応が、血小板の凝集および血管平滑筋の収縮の一方または双方である上記（１）および（２）のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤。
（４）前記甲殻類が軟甲綱（Malacostraca）真軟甲亜綱（Eumalacostraca）ホンエビ上目（Eucarida）およびトゲエビ亜綱（Hoplocarida）のいずれかに属する上記（１）から（３）のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤。
（５）前記甲殻類が真軟甲亜綱ホンエビ上目十脚目（エビ目：Decapoda）および同オキアミ目（Euphausiacea）、ならびにトゲエビ亜綱口脚目（シャコ目：Stomatopoda）のいずれかに属する上記（４）記載の虚血性疾患の治療予防剤。
（６）前記抽出物が、腹部および脚の一方または双方の筋肉部からの水抽出物である上記（１）から（５）のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤。
（７）前記虚血性疾患が、一過性脳虚血、脳梗塞、心筋梗塞、不安定狭心症、冠動脈バイパス術後のグラフト閉塞、経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の冠動脈閉塞、血行再建術後の血管閉塞、閉塞性動脈硬化症、閉塞性血栓血管炎、糸球体腎炎、ネフローゼ症候群、本態性血小板血症、血栓性血小板減少性紫斑病、溶血性尿毒症症候群、抗リン脂質抗体症候群、および川崎病のいずれかである上記（１）から（６）のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤。
（８）上記（１）から（７）のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤を含む食品。
（９）上記（１）から（７）のいずれか１項記載の虚血性疾患の治療予防剤を含む医薬組成物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の虚血性疾患の治療予防剤は、血小板の凝固に関連する血小板のセロトニンに対する反応、血管の収縮に関連する血管平滑筋細胞のセロトニンに対する反応の一方または双方を減弱させる活性を有している。そのため、血管の狭窄や血栓による血管の閉塞を予防すると共に、虚血性疾患の症状の緩和にも有用である。特に、虚血性疾患の治療予防剤が、血小板および血管平滑筋細胞の両者に存在するセロトニン受容体５ＨＴ2A刺激に対する抑制効果を有する場合、虚血性疾患の治療および予防に高い効果を有することが期待される。
【００１２】
また、虚血性疾患の治療予防剤の抽出源となる甲殻類が、軟甲綱ホンエビ上目（Eucarida）、特に、長らく食用に供されてきた十脚目（エビ目：Decapoda）および同オキアミ目（Euphausiacea）のいずれかに属するものである場合、特に安全性に優れた虚血性疾患の治療予防剤を提供できると共に、水産資源の利用価値の向上にも資することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】セロトニン（５−ＨＴ）に誘発される血小板凝集に及ぼす甲殻類抽出物の効果を示すグラフである。
【図２】摘出ヒト伏在静脈におけるセロトニン（５−ＨＴ）誘発性収縮に対するヒゲナガエビ水溶性抽出物による前処置の効果を示すグラフである。
【図３】セロトニン（５−ＨＴ）に誘発される血小板凝集に及ぼすヒゲナガエビ抽出物の各水溶性画分の効果を示すグラフである。
【図４】セロトニン（５−ＨＴ）に誘発される血小板凝集に及ぼすヒゲナガエビ抽出物の水溶性画分ＨＥ１−４の効果の濃度依存性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明を具現化した実施の形態について説明する。本発明の一実施の形態に係る虚血性疾患の治療予防剤（以下、「虚血性疾患の治療予防剤」と略称する場合がある。）は、鰓脚綱（Branchiopoda、カブトエビ、ミジンコ等が属する。）、顎脚綱（Maxillopoda、フジツボ、ケンミジンコ、チョウ、ウミホタル等が属する。）および軟甲綱（Malacostraca）等脚目（Isopoda、ワラジムシ、フナムシ、ダンゴムシ等が属する。）を除く甲殻類の抽出物に含まれ、血小板および血管平滑筋細胞のいずれか一方または双方においてセロトニンに対する反応を減弱させる活性を有する１または複数の化合物を有効成分として含有している。
【００１５】
抽出源となる甲殻類は、上記の条件を満たしている限り、任意のものを用いることができるが、入手の容易さや安定供給の観点から、水産資源として一定量の水揚げを有する海洋性甲殻類であることが好ましい。虚血性疾患の治療予防剤の抽出源として好ましく用いることができる甲殻類の具体例としては、下記のものが挙げられる。なお、下記に列挙した甲殻類には、これらの亜種も含まれ、地域によって異なる名称で呼称される場合もあるため、学名を併記する。
【００１６】
軟甲綱（Malacostraca）真軟甲亜綱（Eumalacostraca）ホンエビ上目（Eucarida）十脚目（エビ目：Decapoda）に属するもの
１．クルマエビ（Marsupenaeus japonicus）およびバナメイエビ（Penaeus Vannami）［クルマエビ科（Penaeidae）クルマエビ属（Marsupenaeus）］
２．ウシエビ（ブラックタイガー、Penaeus monodon）［同科ウシエビ属（Penaeus）］
３．ヒゲナガエビ（Haliporoides sibogae）［クダヒゲエビ科（Solenoceridae）ヒゲナガエビ属（Haliporoides）］
４．サクラエビ（Sergia lucens）［サクラエビ科（Sergestidae）サクラエビ属（Sergia）］
５．ボタンエビ（Pandalus nipponensis）およびホッコクアカエビ（アマエビ、Pandalus eous）［コエビ下目（Caridea）タラバエビ科（Pandalidae）タラバエビ属（Pandalus）］
６．ヨーロピアンロブスター（Homarus gammarus）およびアメリカンロブスター（Homarus americanus）［ザリガニ下目（Astacidea）アカザエビ科（ネフロプス科：Nephropidae）ロブスター属（Homarus）］
７．イセエビ（Panulirus japonicus）［イセエビ下目（Panulidera）イセエビ科（Panulidae）イセエビ属（Panulirus）］
８．ウチワエビ（Ibacus ciliatus）［イセエビ下目（Panulidera）セミエビ科（Scyllaridae）ウチワエビ属（Ibacus）］
９．タラバガニ（Paralithodes camtschaticus）およびアブラガニ（Paralithodes platypus）［異尾下目（Anomura）タラバガニ科（Lithodidae）タラバガニ属（Paralithodes）］
10．ズワイガニ（Chionoecetes opilio）およびベニズワイガニ（Chionoecetes japonicus）［短尾下目（Brachyura）クモガニ科（Majidae）ズワイガニ属（Chionoecetes）］
11．タイワンガザミ（ワタリガニ、Portunus pelagicus）［短尾下目（Brachyura）ワタリガニ科（Porutunidae）ガザミ属（Portunus）］
12．ケガニ（Erimacrus isenbeckii）［短尾下目（Brachyura）クリガニ科（Atelecyclidae）ケガニ属（Erimacrus）］
13．チュウゴクモクズガニ（上海蟹、Eriocheir sinensis）［短尾下目（Brachyura）イワガニ科（Grapsidae）モクズガニ属（Eriocheir）］
【００１７】
軟甲綱（Malacostraca）真軟甲亜綱（Eumalacostraca）オキアミ目（Euphausiacea）オキアミ科（Euphausiidae）、ソコオキアミ科（Bentheuphausiidae）に属するもの
【００１８】
軟甲綱（Malacostraca）トゲエビ亜綱（Hoplocarida）口脚目（シャコ目：Stomatopoda）に属するもの
シャコ（Oratosquilla oratoria）［シャコ科（Squillidae）シャコ属（Oratosquilla）］
【００１９】
甲殻類は、全身を丸のまま抽出に供してもよいが、特に、エビ、カニ、シャコ等の大型のものの場合、殻や内臓と筋肉（エビやシャコの場合には腹部、カニの場合は脚部やはさみの筋肉）とを分離し、それらのうち一方または双方を被抽出物として用いてもよい。また、抽出効率の向上等のために、必要に応じて、適当な大きさに切断、粉砕等の前処理を行ってもよい。あるいは、前処理として、余分な水分を除去するために凍結乾燥等を行ってもよい。例えば、頭胸部および尾部を切除後、残った腹部から殻および内臓を除去して得られる腹部の筋肉を被抽出物として用いる。
【００２０】
甲殻類からの虚血性疾患の治療予防剤の抽出には、抽出対象となる成分の溶解性等に応じて、水および任意の有機溶媒を適宜用いることができる。溶媒は単独で用いてもよく、相溶性を有する任意の２種類以上の溶媒を混合して用いてもよい。
【００２１】
水溶性成分の抽出に用いる水は純水でもよいが、食品添加物として認められているエタノールなどの有機溶媒を水と混合したものを用いてもよい（以下、混合溶媒についても「水」という場合がある。）。或いは、抽出効率を向上させるために、必要に応じて、酸、塩基、塩等を適宜含んでいてもよい。抽出に用いる水の温度及びｐＨについては特に制限はないが、ｐＨについては、生体への使用を考慮して中性付近、より具体的にはｐＨ４〜９であることが好ましく、ｐＨ６〜８であることがより好ましい。
【００２２】
脂溶性成分の抽出に用いる有機溶媒の具体例としては、エタノール、２−プロパノール、１−ブタノール等のアルコール系溶媒、アセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ−メチルピロリドン等の非プロトン性極性溶媒、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン等のパラフィン系溶媒、ジクロロメタン、ジクロロエタン等のハロゲン化アルキル系溶媒、酢酸エチル、乳酸エチル等のエステル系溶媒、およびこれらの混合溶媒等が挙げられる。
【００２３】
溶媒による抽出は任意の公知の方法により行うことができ、例えば、被抽出物を溶媒中で所定時間混合またはホモジナイズ後、ろ過、遠心分離、デカンテーション等により固形分と分離する方法、ソックスレー抽出法等の連続抽出法等の方法を用いることができる。
【００２４】
甲殻類の抽出物は、抽出液のままの状態で用いてもよいが、凍結乾燥法またはスプレードライ法によって粉末化したものを用いてもよい。なお、抽出溶媒として有機溶媒を用いる場合は、減圧蒸留等により溶媒を除去することが好ましい。いずれの場合においても、必要に応じて、高分子量成分や不溶分等を除去するために、透析、限外ろ過、ろ過、カラムクロマトグラフィー等による前処理を行ってもよい。
ろ過による除去の場合には、必要に応じて、不純物を除去するために活性炭、ベントナイト、セライト等の吸着剤やろ過助剤を添加してもよい。特に抽出液の状態で用いる場合には、メンブレンフィルター等による除菌ろ過を併せて行うことが好ましい。
【００２５】
抽出物は、必要に応じて単離精製してもよい。単離精製には、再結晶、再沈殿、カラムクロマトグラフィー、分取薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、分取液体クロマトグラフィー等の任意の公知の方法を用いて行うことができる。単離精製した各成分の活性は、後述するアッセイ方法を用いて確認することができる。必要に応じて、医薬および食品分野において許容される塩、誘導体または溶媒和物等に変換してもよい。
【００２６】
医薬および食品分野において許容される塩としては、生体に対し無害な酸及び塩基と塩を形成した任意の塩を使用することができる。このような塩の具体例としては、（１）塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩等の無機酸塩、（２）酢酸塩、プロピオン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、サリチル酸塩、シュウ酸塩、ステアリン酸塩、アスコルビン酸塩、リンゴ酸塩、アジピン酸塩、グルコン酸塩等の有機酸塩、（３）ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等の金属塩、（４）アンモニウム塩、ピリジニウム塩、塩基性アミノ酸との塩等の有機塩基との塩が挙げられる。或いは、いわゆる分子内塩（双性イオン：Zwitter ion）を形成していてもよい。
【００２７】
医薬および食品分野において許容される誘導体としては、生体に対し無害な他の化合物との反応生成物であり、生体において酵素分解を受け虚血性疾患の治療予防活性を有する化合物を生成することができるものであれば、任意の誘導体を使用することができる。誘導体の具体例としては、Ｎ−アシルアミド、Ｏ−アルキルエステル等が挙げられる。また、医薬および食品分野において許容される溶媒和物としては、水和物が挙げられる。
【００２８】
虚血性疾患の治療予防剤は、血小板凝集能抑制作用および血管平滑筋細胞弛緩作用のいずれか一方または双方の作用を有している。活性化した血小板から放出されるセロトニンは、セロトニン受容体５ＨＴ2A刺激を介して血小板凝集能促進作用および血管平滑筋細胞収縮作用を発揮させる生理活性物質である。従って、血小板および血管平滑筋細胞膜上のセロトニン受容体５ＨＴ2A刺激反応に対する抑制効果を有する物質は、虚血性疾患の治療予防剤となる。セロトニンの細胞膜上のセロトニン受容体５ＨＴ2Aへの結合ならびにそれに伴う細胞内Ｃａ2+濃度の上昇およびその他の細胞内伝達機構は、血栓の形成や血管の収縮に深く関与している。したがって、虚血性疾患の治療予防剤は、これらの細胞上のセロトニン受容体５ＨＴ2Aへのセロトニンの結合やそれに起因する細胞内伝達機構を阻害することにより、血小板の凝集の抑制効果や血管平滑筋の収縮抑制効果を有している。このように、本発明の虚血性疾患の治療予防剤は、血栓の形成や血管の狭窄を予防でき、ひいては虚血性疾患の治療および予防に対する効果が期待される。
【００２９】
本発明の虚血性疾患の治療予防剤による治療および予防効果が期待される疾患の具体例としては、一過性脳虚血、脳梗塞等の虚血性脳疾患、心筋梗塞、不安定狭心症、閉塞性動脈硬化症、閉塞性血栓血管炎等の虚血性心血管疾患、糸球体腎炎、ネフローゼ症候群、本態性血小板血症、血栓性血小板減少性紫斑病、溶血性尿毒症症候群、抗リン脂質抗体症候群、および川崎病等の虚血発作を伴う疾患が挙げられる。また、虚血性疾患の治療予防剤は、冠動脈バイパス術後のグラフト閉塞、経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の冠動脈閉塞、血行再建術後の血管閉塞の予防にも適用できる。
【００３０】
セロトニン受容体５ＨＴ2A刺激反応に対する抑制効果は、例えば、５ＨＴ2Aへのセロトニンの結合に伴う細胞内Ｃａ2+濃度の上昇をモニタすることにより評価することができる。評価系としては、例えば、特開２００９−８２０１７号公報および同公報において参考文献として引用された文献に記載の方法に従い作製した、セロトニン受容体５ＨＴ2A、および蛍光タンパク−カルモジュリンを共発現させたモデル細胞（ＨＥＫ２９３細胞、ＰＣ１２細胞、Ｃ２Ｃ１２細胞等）が挙げられる。また、セロトニンによる血管平滑筋の収縮については、血管から採取したリング標本について、等尺性張力トランスデューサー等を用いた収縮張力の測定により評価を行うことができる。
【００３１】
虚血性疾患の治療予防剤を含む食品としては、虚血性疾患の治療予防剤をそのまま食品として調製したもの、他の食品に添加したもの、或いは、カプセル、錠剤等、食品又は健康食品に通常用いられる任意の形態をとることができる。配合される食品の種類に特に制限はなく、用途に応じて、粉末、顆粒、錠剤等の形に成形してもよい。また、必要に応じて、賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤、乳化剤、着色料、香料、食品添加物、調味料等と適宜混合してもよい。
【００３２】
また、ヒトの消費に供する食品以外にも、虚血性疾患の治療予防剤を飼料中に混合して、家畜、ペット等の動物に投与する場合には、予め飼料の原料中に混合して、機能性を付与した飼料として調製することができる。また、虚血性疾患の治療予防剤を飼料に添加して投与することもできる。すなわち、虚血性疾患の治療予防剤を有効成分として含む食品は、ブタ、ニワトリ、ウシ、ウマ、ヒツジ等の家畜や、魚類、ペット（イヌ、ネコ、鳥類）等の飼料に添加することにより、安全で、虚血性疾患の治療効果及び予防効果の一方又は双方を有する機能性飼料として用いることができる。
【００３３】
虚血性疾患の治療予防剤を担体等と混合することにより、虚血性疾患に対する治療効果及び予防効果の一方又は双方を有する医薬組成物として用いることができる。医薬組成物のヒト或いは動物に対する投与形態としては、経口、経直腸、非経口（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与など）等が挙げられる。虚血性疾患の治療予防剤の投与量は、医薬組成物の製剤形態、投与方法、使用目的及びこれに適用される投与対象の年齢、体重、症状によって適宜設定され一義的に決定することは困難であるが、ヒトの場合、一般には製剤中に含有される有効成分の量で、成人一人1日あたり０．１〜１０００ｍｇ程度、好ましくは０．５〜５００ｍｇ程度、より好ましくは１ｍｇ〜１００ｍｇであり、これを１回〜数回に分けて投与する。もちろん投与量は、種々の条件によって変動するので、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、或いは範囲を超えて必要な場合もある。
【００３４】
経口投与製剤として調製する場合は、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、コーティング剤、液剤、懸濁剤等の形態に調製でき、非経口投与製剤にする場合には、注射剤、点滴剤、座薬等の形態に調製することができる。製剤化には、任意の公知の方法を用いることができる。例えば、虚血性疾患の治療予防剤と、製薬学的に許容し得る担体又は希釈剤、安定剤、及びその他の所望の添加剤を配合して、上記の所望の剤形とすることができる。
【実施例】
【００３５】
実施例１：甲殻類の脂溶性および水溶性抽出物の調製方法
ここでは、ヒゲナガエビを用いた場合について説明する。生ヒゲナガエビ（東シナ海産。宮崎市内の鮮魚店で購入。）を可食部（筋肉部）と非可食部（殻、内臓）に分離し、それぞれ凍結乾燥して乾燥物各１００ｇを抽出試料とした。抽出試料１００ｇにエタノール６００ｍＬを加え、ホモジナイザーで破砕（８０００ｒｐｍ、５分間）した。Ｎｏ．２ろ紙で減圧ろ過してろ液を回収し、ろ紙上の固形物をエタノール２００ｍＬで洗浄した。ろ液を合わせてエバポレーターを用いて４０℃で溶媒留去して、さらに真空ポンプで減圧乾燥して脂溶性抽出物とした。また、ろ紙上の固形物を回収して蒸留水６００ｍｌとともにホモジナイズし、Ｎｏ．２ろ紙で減圧ろ過した。ろ紙上の固形物を蒸留水３００ｍｌで洗浄してろ液を合わせ、凍結乾燥にて水分除去後、水溶性抽出物とした。
【００３６】
上記と同様の方法を用いて、クルマエビ（養殖、宮崎県産）、ウシエビ（ブラックタイガー、生鮮輸入品）、バナメイエビ（生鮮輸入品）、イセエビ（冷凍輸入品）、ホッコクアカエビ（アマエビ、冷凍輸入品を解凍したもの）、タラバガニ（冷凍輸入品）、タイワンガザミ（ワタリガニ（南方種）、宮崎県産、天然もの）、およびオキアミ（宮崎市内の釣具店にて購入）の筋肉部（可食部）から脂溶性および水溶性抽出物を調製した。
【００３７】
実施例２：セロトニン（５−ＨＴ）に誘発される血小板凝集に及ぼす甲殻類抽出物の効果の検討
（１）血小板凝集能測定サンプルの調製
真空採血管（３．８％クエン酸ナトリウム含有）で採血したヒト血液４０ｍＬを試験管４本に分注し、６００ｒｐｍ、２５℃で１０分間遠心した。上清をPlatelet rich plasma（ＰＲＰ）として回収し、血小板測定機で血小板の濃度を測定した。残りの血液を、３０００ｒｐｍ、２５℃で１０分間遠心し、上清をPlatelet poor plasma（ＰＰＰ）として回収する。ＰＲＰの血小板の濃度を２０万個／μＬとなるようにＰＰＰで希釈調整し、これを血小板凝集能測定サンプルとした。
【００３８】
（２）セロトニンの添加による血小板の凝集能の測定
実施例１で調製したウシエビ、オキアミ、バナメイエビ、タラバガニ、ホッコクアカエビ、クルマエビ、タイワンガザミ、イセエビの各水溶性抽出成分１００ｍｇに超純水１ｍＬを加えて懸濁液を作製した。この各溶液を超音波処理して飽和溶液を調製し、さらに７０００ｒｐｍで１０分間遠心した上清を、抽出物の最終濃度が１．０％になるように血小板凝集能測定サンプルに添加した。コントロール群には抽出成分と同量の超純水を加えた。その後、各測定サンプルを血小板凝集能測定装置(Aggregation analyzer PA-20)で計測しながらコラーゲン（最終濃度１．０μｇ／ｍＬ）を添加し、さらにセロトニン（最終濃度１．０μｍｏｌ／Ｌ）を添加後、血小板凝集能を検討した。なお全ての測定サンプルについては、ＰＰＰによるバックグランド補正を行った。
【００３９】
図１に示すように、実験に使用した全ての水溶性抽出物サンプルで、コントロール群と比較してセロトニン誘発性血小板凝集に対する有意な抑制効果が観察された。なお、血小板の凝集が進むほど透過率は増大するため、図２において、透過率が高いほど凝集がより進行していることを示している（図３、４において同様である。）。特に、ウシエビ、クルマエビの水溶性抽出物で処理した血小板凝集能測定サンプルにおいて、セロトニン誘発性血小板凝集に対する抑制作用が顕著であった。
【００４０】
実施例３：摘出ヒト伏在静脈におけるセロトニン（５−ＨＴ）誘発性収縮に対するヒゲナガエビ水溶性抽出物による前処置の効果の検討
（１）ヒゲナガエビ水溶性抽出物の調製
上記実施例１と同様の手順に従い、ヒゲナガエビの筋肉部から水溶性抽出物を得た。液体クロマトグラフィー（カラム：、移動相：）を用いて水溶性抽出物の分画を行い、溶出時間の短い順に４つの画分ＨＥ１−１、ＨＥ１−２、ＨＥ１−３、ＨＥ１−４を得た。
（２）血管リング標本の調製
【００４１】
宮崎市内の病院において、文書での同意を得た患者から静脈瘤手術により摘出された大伏在静脈の提供を受け、本実験に使用した。提供された血管は内皮細胞のＮＯ産生の影響を除くため、全て内皮除去標本として本実験で使用した。採取後、内皮細胞を除去したヒト大伏在静脈を、２ｍｍのリング状標本として、クレブス液（ＮａＣｌ  １１８．０ｍｍｏｌ／Ｌ、ＫＣｌ  ４．７ｍｍｏｌ／Ｌ、ＮａＨＣＯ3  ２５．０ｍｍｏｌ／Ｌ、ＭｇＳＯ4  １．２ｍｍｏｌ／Ｌ、ＫＨ2ＰＯ4  １．１ｍｍｏｌ／Ｌ、ＣａＣｌ2  ２．５ｍｍｏｌ／Ｌ、ＥＤＴＡ  ０．０１ｍｍｏｌ／Ｌ、グルコース  １１．０ｍｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．４）を満たしたマグヌス管内（５ｍＬ）に懸垂し、PowerLab8/30システムで、張力変化を等尺性に記録した。リング状標本は２．０ｇの初期張力を負荷し、１時間静止させた。次にＫＣｌ（６０ｍｍｏｌ／Ｌ）による血管収縮を観察した後、マグヌス管内をクレブス液で２回洗浄し、完全に初期張力まで戻ったことを確認した。その後、ヒゲナガエビからの水溶性抽出物の各画分（ＨＥ１−１、ＨＥ１−２、ＨＥ１−３、ＨＥ１−４）を、それぞれ、最終濃度０．００１％となるようマグヌス管内に添加し３０分処置した。ＨＥ１−１〜ＨＥ１−４処置群とコントロール群に血管収縮物質であるセロトニン（３０ｎｍｏｌ／Ｌ）を添加し血管の収縮反応を観察した。これらの実験の終わりに６０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＫＣｌ処置し、この時の血管収縮を１００％としてセロトニンの血管収縮に対するヒゲナガエビ抽出成分の影響を検討した。
【００４２】
図２に示すように、ＨＥ１−２およびＨＥ１−４により処置した場合、コントロール群と比較し、セロトニンの添加による血管収縮が有意に減弱したことが確認された。
【００４３】
実施例４：セロトニン（５−ＨＴ）に誘発される血小板凝集に及ぼすヒゲナガエビ抽出物の効果の検討
（１）血小板凝集能測定サンプルの調製
実施例２の（１）と同様の手順により、血小板凝集能測定サンプルを調製した。
【００４４】
（２）セロトニンの添加による血小板の凝集能の測定
実施例３で調製したヒゲナガエビの水溶性抽出成分ＨＥ１−２およびＨＥ１−４（１００ｍｇまたは３００ｍｇ）に超純水１ｍＬを加えて懸濁液を作製した。この各溶液を超音波処理して飽和溶液を調製し、さらに７０００ｒｐｍで１０分間遠心した上清を、抽出物の最終濃度が１．０％になるように血小板凝集能測定サンプルに添加した。コントロール群には抽出成分と同量の超純水を加えた。その後、各測定サンプルを血小板凝集能測定装置(Aggregation analyzer PA-20)で計測しながらコラーゲン（最終濃度１．０μｇ／ｍＬ）を添加し、さらにセロトニン（最終濃度１．０μｍｏｌ／Ｌ）を添加後、血小板凝集能を検討した。なお、全ての測定サンプルについては、ＰＰＰによるバックグランド補正を行った。
【００４５】
図３および図４に示すように、ＨＥ１−２により処置した場合、セロトニン誘発性血小板凝集に対する抑制作用が観測されなかったのに対し、ＨＥ１−４により処置した場合、セロトニン誘発性血小板凝集に対する濃度依存的な抑制作用が観測された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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