(57)【要約】【課題】優れたＶＥＧＦ産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用、ＨＧＦ産生促進作用、及びＢＭＰ−２産生促進作用を有する、安全性の高いＶＥＧＦ産生促進剤、ＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤の提供。【解決手段】シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＶＥＧＦ産生促進剤。
【請求項２】
シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＩＧＦ−１産生促進剤。
【請求項３】
シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＨＧＦ産生促進剤。
【請求項４】
シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＢＭＰ−２産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
毛髪は、成長期、退行期、休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。これらの周期の中でも、発毛に最も重要な周期は、休止期から成長期へかけての新たな毛包が形成されるステージである。そして、このステージにおける細胞の増殖及び分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根の根幹部分に位置し、毛根近傍の毛包上皮系細胞へ働きかけてその増殖を促す等、毛髪の分化に重要な役割を担っている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
これらの毛髪の分化や発毛のメカニズムに関与する因子として、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、骨形成タンパク質（骨形成因子）−２（ＢＭＰ−２）などが知られている。
【０００４】
血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、正常細胞や腫瘍細胞等のあらゆる細胞において産生される分子量３４ｋＤａ〜４６ｋＤａの糖蛋白質であり、血管内皮細胞に働きかけ、細胞の増殖や遊走を促進し、個体の発達や組織形成に関与することが知られている。ＶＥＧＦは、体毛の形成に重要な働きをする外毛根鞘細胞及び毛乳頭細胞からも産生されており（例えば、非特許文献２及び３参照）、産生が阻害されるとヘアサイクルの成長期の遅れや毛包サイズの矮小化に繋がることから、毛髪の成長に深く関与することが知られている（例えば、非特許文献４参照）。このようなＶＥＧＦの産生を促進する天然由来の物質として、ヒルガオ科のアサガオカラクサ属植物の抽出物（例えば、特許文献１参照）、ローヤルゼリー（例えば、特許文献２参照）、Ｌ−グルタミン酸又はその塩、Ｌ−セリン、ＰＣＡ（ピロリドンカルボン酸）又はその塩、モノニトログアヤコールナトリウム、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）の抽出物、ユズ（Ｃｉｔｒｕｓ  ｊｕｎｏｓ）の果実の抽出物、ウンシュウミカン（Ｃｉｔｒｕｓ  ｕｎｓｈｉｕ）の果皮の抽出物、エイジツ（Ｒｏｓａ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒａ）の果実の抽出物、イチョウ（Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ）の葉の抽出物より選択されるもの（例えば、特許文献３参照）などが提案されているが、より優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有する物質が求められている。
【０００５】
インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）は、インスリンに非常に良く似た構造及び作用を持つ分子量約７，５００のペプチドホルモンであり、細胞の分化及び増殖の促進、細胞の健康的な状態の維持（例えば、非特許文献５及び６参照）、細胞の老化進行の阻止に関与することが知られている（例えば、非特許文献７参照）。ＩＧＦ−１は、毛乳頭細胞にて発現し、毛根を活発化させ育毛効果を有することが報告されており（例えば、非特許文献８参照）、ＩＧＦ−１を有効成分とする育毛剤が提案されている（例えば、特許文献４参照）。前記育毛剤の有効成分であるＩＧＦ−１は動物由来の物質であるため、分子量が大きく、外用塗布による経皮吸収が困難であるという問題がある。ＩＧＦ−１産生促進作用を示す植物由来の物質も見つかってはいるが、より優れたＩＧＦ−１産生促進作用を有する植物由来の物質が求められている。
【０００６】
肝細胞成長因子（ＨＧＦ）は、肝細胞をはじめ、各臓器由来の上皮細胞、内皮細胞、造血系細胞等の増殖を促進することが知られており、臓器の障害や線維化を抑制し、臓器の再生を促進する作用を有している。ＨＧＦは、毛乳頭細胞にて発現し、毛根を活発化させ育毛効果を有することが報告されている（例えば、非特許文献９参照）。このようなＨＧＦの産生を促進する植物由来の物質として、米の抽出物が提案されているが（例えば、特許文献５参照）、より優れたＨＧＦ産生促進作用を有する物質が求められている。
【０００７】
骨形成蛋白質（ＢＭＰ）は、細胞増殖や分化調節を介して、体軸形成やほぼ全ての器官形成において必須の役割を果たす多機能因子であり、皮膚においては、毛包の形成に促進的に関与することが知られている。また、男性型脱毛症部位の毛乳頭細胞では、ＢＭＰが有する約２０種のサブユニットのうちのＢＭＰ−２の遺伝子発現が低下していることから、この遺伝子に着目した育毛剤研究が注目されており（例えば、特許文献６参照）、より優れたＢＭＰ−２産生促進作用を有する物質が求められている。
【０００８】
以上のように、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用、ＨＧＦ産生促進作用、及びＢＭＰ−２産生促進作用を有する各剤に対する需要は極めて高い。
【０００９】
一方、シャクヤクはボタン科の多年草であり、消炎剤、鎮痛剤、抗菌剤、止血剤、及び抗けいれん剤として広く用いられているが、ＶＥＧＦ産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用、ＨＧＦ産生促進作用、及びＢＭＰ−２産生促進作用を有することは知られておらず、安全性が高く、優れた活性を有するＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤の速やかな提供が強く求められているのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００３−１６０５０３号公報
【特許文献２】特開２００３−１９２５４１号公報
【特許文献３】特開２００５−００２０６８号公報
【特許文献４】特公平４−０６０５６７号公報
【特許文献５】特開２００４−０９９５０３号公報
【特許文献６】特開２００５−００２０６８号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】「Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ」，１９９２年，第８巻，ｐ．５６−６１
【非特許文献２】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１０６，１７−２３（１９９６）
【非特許文献３】Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２０９，６６１−６６８（１９９８）
【非特許文献４】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０７，４０９−４１７（２００１）
【非特許文献５】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，２８８５３−２８８６０（１９９６）
【非特許文献６】Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，２０，３２５−３２９（２００２）
【非特許文献７】Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．，１１５，５０１−５０２（２００３）
【非特許文献８】Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，９９，３４３−３４９（１９９２）
【非特許文献９】アンチエイジングシリーズ（１）、白髪・脱毛・育毛の実際，ＮＴＳ，ｐ．１−１８，２００５年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有し、安全性の高いＶＥＧＦ産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたＩＧＦ−１産生促進作用を有し、安全性の高いＩＧＦ−１産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたＨＧＦ産生促進作用を有し、安全性の高いＨＧＦ産生促進剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたＢＭＰ−２産生促進作用を有し、安全性の高いＢＭＰ−２産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記課題を解決するため、本発明者は鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、シャクヤクの抽出物が、優れたＶＥＧＦ産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用、ＨＧＦ産生促進作用、及びＢＭＰ−２産生促進作用を有することを見出した。
【００１４】
本発明は、本発明者による前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＶＥＧＦ産生促進剤である。
＜２＞  シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＩＧＦ−１産生促進剤である。
＜３＞  シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＨＧＦ産生促進剤である。
＜４＞  シャクヤクの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＢＭＰ−２産生促進剤である。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤によると、従来における諸問題を解決することができ、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を有し、安全性の高いＶＥＧＦ産生促進剤を提供することができる。
本発明のＩＧＦ−１産生促進剤によると、従来における諸問題を解決することができ、優れたＩＧＦ−１産生促進作用を有し、安全性の高いＩＧＦ−１産生促進剤を提供することができる。
本発明のＨＧＦ産生促進剤によると、従来における諸問題を解決することができ、優れたＨＧＦ産生促進作用を有し、安全性の高いＨＧＦ産生促進剤を提供することができる。
本発明のＢＭＰ−２産生促進剤によると、従来における諸問題を解決することができ、優れたＢＭＰ−２産生促進作用を有し、安全性の高いＢＭＰ−２産生促進剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
（ＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤）
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤は、シャクヤクの抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
【００１７】
＜シャクヤクの抽出物＞
前記シャクヤクは、ボタン科の多年草であり、学名はＰａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａである。前記シャクヤクは、アジア大陸北東部の地域から容易に入手可能である。前記シャクヤクの高さは、約６０ｃｍであり、初夏に紅又は白色などのボタンに似た大型の花が咲く。薬用部位は根であり、消炎剤、鎮痛剤、抗菌剤、止血剤、及び抗けいれん剤として広く用いられている。
【００１８】
前記シャクヤクの抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記シャクヤクの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、抽出液の濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。
【００１９】
前記シャクヤクの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に、抽出原料であるシャクヤクを投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら、可溶性成分を溶出した後、濾過し、抽出残渣を除くことによって、抽出液を得る方法が挙げられる。
【００２０】
前記シャクヤクの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、根を用いることが好ましい。前記シャクヤクの根を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。
【００２１】
前記シャクヤクの抽出条件としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、抽出時間としては、１時間〜３時間が好ましく、抽出温度としては、常温〜９５℃が好ましい。
【００２２】
前記シャクヤクの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。なお、前記シャクヤクの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
【００２３】
前記シャクヤクの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、抽出原料としてのシャクヤクに対して、５倍量〜１５倍量（質量比）であることが好ましい。
【００２４】
前記シャクヤクの抽出物の薬理学的に許容される塩としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素塩、硝酸塩、硫酸水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ-トルエンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、スルファミン酸塩、マンデル酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、ステアリン酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、パモン酸塩、フェニル酢酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、スルファニル酸塩、２−アセトキシ安息香酸塩、エタンジスルホン酸塩、シュウ酸塩、イセチオン酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢酸塩、エチルコハク酸塩、ラクトビオン酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩、ラウリル硫酸塩、アスパラギン酸塩、アジピン酸塩、ヨウ化水素酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、ピクリン酸塩、チオシアン酸塩、ウンデカン酸塩などが挙げられる。
【００２５】
前記シャクヤクの抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。
【００２６】
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味剤、矯臭剤、着色料、香料等、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤、皮膚化粧料などが挙げられる。
【００２７】
＜用途＞
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤は、優れた活性を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、頭髪用育毛剤、頭髪化粧料等の皮膚外用剤に配合するのに好適であり、その投与部位、配合量、用法、及び剤型としては、その使用目的に応じて適宜選択することができる。
【００２８】
前記投与部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、頭髪、頭髪の毛根、頭皮、頭皮の皮脂腺等の頭部が好ましい。
【００２９】
前記配合量としては、抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記シャクヤクの精製物に換算して、０．０００１質量％〜１０質量％が好ましく、０．００１質量％〜１質量％がより好ましい。
【００３０】
前記用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの投与形態が挙げられる。
【００３１】
前記剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、ローション、ゲル、ゾル、スプレー、溶液等が挙げられる。頭髪化粧料としては、例えば、ヘアトニック、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンスなどが挙げられる。
【００３２】
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤によると、優れたＶＥＧＦ産生促進作用を通じて、例えば、血管内皮細胞の増殖や遊走、血管新生、血液凝固、血圧調節、皮膚におけるリンパ管の成長等を促進し、脱毛症、冠動脈疾患、閉塞性末梢動脈硬化症、軟骨損傷、血管形成不全、虚血性脚部疾患等を改善乃至治療することができる。ただし、本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、これらの用途以外にもＶＥＧＦ産生促進作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３３】
本発明のＩＧＦ−１産生促進剤によると、優れたＩＧＦ−１産生促進作用を通じて、例えば、細胞全般の分化、増殖及び成長、老化の進行抑制、血糖降下、生殖機能の調節、並びに軟骨への硫酸イオンの取込み等を促進し、脱毛症、皮膚老化、糖尿病、下垂体機能低下症、及び下垂体性小人症等を改善乃至治療することができる。ただし、本発明のＩＧＦ−１産生促進剤は、これらの用途以外にもＩＧＦ−１産生促進作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３４】
本発明のＨＧＦ産生促進剤によると、優れたＨＧＦ産生促進作用を通じて、例えば、各臓器由来の上皮細胞、内皮細胞、及び造血系細胞等の増殖や再生を促進し、臓器の障害や線維化を抑制し、脱毛症、線維症、肝臓疾患、及び閉塞性動脈硬化症等を改善乃至治療することができる。ただし、本発明のＨＧＦ産生促進剤は、これらの用途以外にもＨＧＦ産生促進作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３５】
本発明のＢＭＰ−２産生促進剤によると、優れたＢＭＰ−２産生促進作用を通じて、例えば脱毛症、皮膚老化、骨形成の誘導、細胞全般の分化及び増殖の調節、体軸及びほぼ全ての器官の形成、並びに神経細胞の分化及び機能維持などに好適に利用することができる。ただし、本発明のＢＭＰ−２産生促進剤は、これらの用途以外にもＢＭＰ−２産生促進作用を発揮することに意義のある全ての用途に用いることができる。
【００３６】
また、本発明のＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤は、優れた作用を有するとともに、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、美容用飲食品又は経口用医薬への配合に好適である。
【００３７】
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤は、優れた作用を有するので、ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２の機能の研究や、ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２に関連する疾患の研究のための試薬として好適に利用できる。
【００３８】
なお、本発明のＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３９】
以下に本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００４０】
（実施例１）
＜ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２の産生促進試験＞
シャクヤクの抽出物としては、シャクヤク抽出液（丸善製薬株式会社製）の凍結乾燥物を試料として用い、下記の試験法によりＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２のｍＲＮＡ発現率を測定した。
まず、正常ヒト頭髪毛乳頭細胞（東洋紡績株式会社製、ＣＡ６０２０５）を、毛乳頭細胞増殖培地（東洋紡績株式会社製、ＴＰＧＭ−２５０）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２×１０５個／ｍＬの濃度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地で希釈した後、直径６０ｍｍシャーレに５ｍＬずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、無血清ＤＭＥＭ培地にて６．２５ｐｐｍに調製した被験試料に交換し６時間培養した後、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社製、Ｃａｔ．Ｎｏ．３１１−０２５０１）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００μｇ／ｍＬになるように総ＲＮＡを調製した。
この総ＲＮＡを鋳型とし、ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２、並びに内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Ｓｍａｒｔ  Ｃｙｃｌｅｒ（Ｃｅｐｈｅｉｄ社製）を用いて、ＴａＫａＲａ  ＳＹＢＲ  ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ  ＲＴ−ＰＣＴ  Ｋｉｔ（Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ）（ｃｏｄｅ  Ｎｏ．ＲＲ０６３Ａ）によるリアルタイム２  Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ反応により行った。
【００４１】
ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２、並びにＧＡＰＤＨの各遺伝子を検出するために、下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマー（タカラバイオ社製）を使用した。
【００４２】
＜＜ＶＥＧＦ遺伝子検出用プライマー＞＞
センスプライマー      ：５’−ｇａｇｃｃｔｔｇｃｃｔｔｇｃｔｇｃｔｃｔａｃ−３’（配列番号１）
アンチセンスプライマー：５’−ｃａｃｃａｇｇｇｔｃｔｃｇａｔｔｇｇａｔｇ−３’（配列番号２）
【００４３】
＜＜ＩＧＦ−１遺伝子検出用プライマー＞＞
センスプライマー      ：５’−ｔｃｔｔｃａｇｔｔｃｇｔｇｔｇｔｇｇａｇａｃａｇ−３’（配列番号３）
アンチセンスプライマー：５’−ｇｇｇｔｇｃｇｃａａｔａｃａｔｃｔｃｃａｇ−３’（配列番号４）
【００４４】
＜＜ＨＧＦ遺伝子検出用プライマー＞＞
センスプライマー      ：５’−ｔｇｇｃｃａｔｇａａｔｔｔｇａｃｃｔｃｔａｔｇａ−３’（配列番号５）
アンチセンスプライマー：５’−ｇｇｃｔｇａｃａｔｔｔｇａｔｇｃｃａｃｔｃｔｔａ−３’（配列番号６）
【００４５】
＜＜ＢＭＰ−２遺伝子検出用プライマー＞＞
センスプライマー      ：５’−ａａｃａｃｔｇｔｇｃｇｃａｇｃｔｔｃｃ−３’（配列番号７）
アンチセンスプライマー：５’−ｃｃｔａａａｇｃａｔｃｔｔｇｃａｔｃｔｇｔｔｃｔｃ−３’（配列番号８）
【００４６】
＜＜ＧＡＰＤＨ遺伝子検出用プライマー＞＞
センスプライマー      ：５’−ｇｃａｃｃｇｔｃａａｇｇｃｔｇａｇａａｃ−３’（配列番号９）
アンチセンスプライマー：５’−ａｔｇｇｔｇｇｔｇａａｇａｃｇｃｃａｇｔ−３’（配列番号１０）
【００４７】
ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２のｍＲＮＡの発現量については、同一サンプルにおけるＧＡＰＤＨの発現量の値で補正を行った後、下記数式１により、各遺伝子（ＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２）のｍＲＮＡ発現率（％）を算出した。結果を表１に示す。
＜数式１＞
各遺伝子のｍＲＮＡ発現率（％）  ＝  Ｂ／Ａ  ×  １００
ただし、前記数式１中、Ａは、試料無添加時の補正値を表す。Ｂは、試料添加時の補正値を表す。
【００４８】
【表１】
2012121856.tif 000002
【００４９】
表１の結果から、シャクヤクの抽出物が、高いＶＥＧＦのｍＲＮＡ発現促進作用、ＩＧＦ−１のｍＲＮＡ発現促進作用、ＨＧＦのｍＲＮＡ発現促進作用、及びＢＭＰ−２のｍＲＮＡ発現促進作用を有し、これらの作用を通じて対応する各タンパク質であるＶＥＧＦ、ＩＧＦ−１、ＨＧＦ、及びＢＭＰ−２の産生が促進されることが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【００５０】
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤、ＩＧＦ−１産生促進剤、ＨＧＦ産生促進剤、及びＢＭＰ−２産生促進剤は、優れたＶＥＧＦ産生促進作用、ＩＧＦ−１産生促進作用、ＨＧＦ産生促進作用、及びＢＭＰ−２産生促進作用を有するので、育毛剤及び頭髪化粧料をはじめとする皮膚外用剤、美容用化粧品、及び医薬への配合、更には研究用の試薬として好適に利用できる。
【配列表】
2012121856000001.app