(57)【要約】【課題】  肝臓組織中のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することによる肝臓癌か否かの判定方法および肝臓癌の分化度の判定方法を提供すること。【解決手段】  肝臓癌か否かの判定のためのマーカーとして用いることができる５９種のアンチセンスＲＮＡ、肝臓癌の分化度の判定のためのマーカーとして用いることができる５２種のアンチセンスＲＮＡが本発明によって提供される。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物から採取した肝臓組織中における下記の（１）〜（５９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定し、肝臓癌における発現挙動を示すか否かを調べることによる肝臓癌か否かを判定する方法。
（１）配列番号１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＦＸＮ４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２）配列番号２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＤＥＦ１ＩＴ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３）配列番号３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＬＪ４６０２６遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４）配列番号４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＯＸＣＴ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５）配列番号５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＫＩＡＡ１４３０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６）配列番号６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１７ｏｒｆ５９遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７）配列番号７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１６ｏｒｆ２４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８）配列番号８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＬＪ３２９５１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９）配列番号９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＮＡＪＢ１２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０）配列番号１０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＹＤＣ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１１）配列番号１１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＯＡＺ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１２）配列番号１２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ２０ｏｒｆ１３４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１３）配列番号１３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＮＦＫＢＩＬ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１４）配列番号１４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＺＮＦ９３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１５）配列番号１５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ４４１１７７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１６）配列番号１６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＫＩＡＡ１７７２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１７）配列番号１７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ７２８１５７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１８）配列番号１８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ３７５０１０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１９）配列番号１９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＦＮＧ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２０）配列番号２０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＲＡＢ４１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２１）配列番号２１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＲＦＮ５遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２２）配列番号２２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＲＩＭ５２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２３）配列番号２３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ６４７５００遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２４）配列番号２４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ７３２２７１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２５）配列番号２５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＭＯＴＬ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２６）配列番号２６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１ｏｒｆ１５７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２７）配列番号２７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＪＵＮＢ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２８）配列番号２８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＰ７３Ｌ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２９）配列番号２９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＰＮＲＣ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３０）配列番号３０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＲＨＢＰ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３１）配列番号３１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＯＳ（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｖａｒｉａｎｔ）遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３２）配列番号３２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＰＤＫ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３３）配列番号３３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＨＭＰ７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３４）配列番号３４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＬＪ１０９８６遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３５）配列番号３５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＡＲＣＯ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３６）配列番号３６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＸＩＮ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３７）配列番号３７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＮＡＳＥ１Ｌ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３８）配列番号３８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＲＡＳＧＥＦ１Ｂ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３９）配列番号３９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＡＰＳ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４０）配列番号４０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＴＥＡＰ４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４１）配列番号４１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＥＴＰ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４２）配列番号４２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＴ１Ｅ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４３）配列番号４３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４４）配列番号４４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＴＦ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４５）配列番号４５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＲＩＢ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４６）配列番号４６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＧ６ＰＣ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４７）配列番号４７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＹＰ１Ａ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４８）配列番号４８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＵＳＰ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４９）配列番号４９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＶＰＲ１Ａ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５０）配列番号５０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＴＲ２Ａ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５１）配列番号５１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＥＴＳ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５２）配列番号５２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＳ４Ａ６Ａ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５３）配列番号５３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＩＧＦＢＰ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５４）配列番号５４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＤＲＡ１Ａ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５５）配列番号５５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＧＰＡＴ５遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５６）配列番号５６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＬＲ８遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５７）配列番号５７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＰＧＥＡ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５８）配列番号５８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＴ１Ｍ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５９）配列番号５９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＧＲＩＫ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
【請求項２】
（１）〜（２３）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも多い場合に肝臓癌であると判定する請求項１記載の方法。
【請求項３】
（２４）〜（５９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも少ない場合に肝臓癌であると判定する請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
（７）のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも多く、かつ、（３１）および／または（３６）のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも少ない場合に肝臓癌であると判定する請求項１乃至３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
哺乳動物から採取した肝臓組織中における下記の（６０）〜（１１１）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定し、肝臓癌における高分化型、中分化型、低分化型のいずれの発現挙動を示すかを調べることによる肝臓癌の分化度を判定する方法。
（６０）配列番号６０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＩＰＰＫ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６１）配列番号６１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＫＲＡＳ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６２）配列番号６２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１ｏｒｆ７６遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６３）配列番号６３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＲＨＢＰ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６４）配列番号６４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＳＴ１Ｈ２ＢＪ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６５）配列番号６５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＰＲ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６６）配列番号６６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＵＳＰ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６７）配列番号６７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ７２８７３２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６８）配列番号６８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＤＯ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６９）配列番号６９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＥＣ２３Ｂ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７０）配列番号７０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＲＰＬ７Ｌ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７１）配列番号７１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＴＫ１１ＩＰ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７２）配列番号７２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＩＮ２８Ｂ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７３）配列番号７３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＳＴ１Ｈ４Ｅ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７４）配列番号７４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＰＴＸ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７５）配列番号７５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＥＸ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７６）配列番号７６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＫＲＡＳ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７７）配列番号７７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＬＪ１４３９７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７８）配列番号７８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１７ｏｒｆ６２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７９）配列番号７９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＳＴ２Ｈ２ＡＢ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８０）配列番号８０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＴＰ１Ａ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８１）配列番号８１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＤＣＡ５遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８２）配列番号８２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＯＢＲＡ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８３）配列番号８３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＣＮ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８４）配列番号８４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＧＡＬＳ８遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８５）配列番号８５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ３９１６４０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８６）配列番号８６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＯＲ５ＢＦ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８７）配列番号８７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＭＬＨＥ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８８）配列番号８８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＢＤ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８９）配列番号８９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＡＭＫＫ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９０）配列番号９０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＸＮＤＣ４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９１）配列番号９１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＧＴＮ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９２）配列番号９２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＹＭＳ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９３）配列番号９３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＮＡＰＣ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９４）配列番号９４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＮＦＡＩＰ８Ｌ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９５）配列番号９５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＲＩＰ５遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９６）配列番号９６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＯＭＭ２２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９７）配列番号９７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＧＧＮ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９８）配列番号９８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＳＴ１Ｈ１Ｃ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９９）配列番号９９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＥＳＴＤ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１００）配列番号１００で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ４４１８７８遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０１）配列番号１０１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＵＢＧ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０２）配列番号１０２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＹＯＣ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０３）配列番号１０３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ４０１６５０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０４）配列番号１０４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ６４４８８１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０５）配列番号１０５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＺＮＦ７０４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０６）配列番号１０６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＣＦ２０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０７）配列番号１０７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ１２６２４８遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０８）配列番号１０８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＲＲＣ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０９）配列番号１０９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１１０）配列番号１１０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＥＢＰＧ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１１１）配列番号１１１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＢＲ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
【請求項６】
（６０）〜（７７）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定する請求項５記載の方法。
【請求項７】
請求項１記載の（１）〜（５９）から選択される肝臓癌か否かを判定するためのアンチセンスＲＮＡ。
【請求項８】
請求項５記載の（６０）〜（１１１）から選択される肝臓癌の分化度を判定するためのアンチセンスＲＮＡ。
【請求項９】
請求項１記載の（１）〜（５９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸を少なくとも含んでなる肝臓癌か否かを判定するための試薬。
【請求項１０】
請求項５記載の（６０）〜（１１１）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸を少なくとも含んでなる肝臓癌の分化度を判定するための試薬。
【請求項１１】
請求項１記載の（１）〜（５９）から選択されるアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸のセットが固相化されてなる肝臓癌か否かを判定するためのアレイ。
【請求項１２】
請求項５記載の（６０）〜（１１１）から選択されるアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸のセットが固相化されてなる肝臓癌の分化度を判定するためのアレイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝臓組織中のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することによる肝臓癌か否かの判定方法および肝臓癌の分化度の判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝臓癌は、胃癌や肺癌などとともに日本人に多く、また、死亡率が高いことはよく知られた事実である。従って、その治療方法の研究に加え、診断方法の研究についても古くから精力的に行われており、肝臓癌のマーカーとして機能する各種の物質が見出され、肝臓癌の診断に利用されている。近年、本発明者らの研究グループは、内在性のアンチセンスＲＮＡ（センスＲＮＡであるｍＲＮＡに対して相補的な塩基配列を有するＲＮＡ）に着目し、生体内におけるその発現挙動と癌との関係の解明を行ってきた。そしてその研究成果として、特定のアンチセンスＲＮＡのセンスＲＮＡに対する相対的発現が、肝臓癌において顕著に減少することを見出している（特許文献１）。この知見は、新たな肝臓癌の診断方法の開発に大いに貢献するものであるが、この知見による肝臓癌の診断方法は、アンチセンスＲＮＡとセンスＲＮＡの相対的な発現挙動に基づいて肝臓癌か否かを判定するものであるため、アンチセンスＲＮＡの発現量に加えてセンスＲＮＡの発現量も測定する必要があり、簡便性の点において改良の余地がある。従って、アンチセンスＲＮＡの発現量だけから肝臓癌か否かを判定することができる、肝臓癌のマーカーとして機能する新たなアンチセンスＲＮＡの探索は非常に意義深いものである。
【０００３】
また、肝臓癌は、高分化型、中分化型、低分化型の３種類の分化度に分類され、癌が進行するにつれて高分化型から低分化型に移行することが知られている。現在、肝臓癌の分化度の判定は、病理組織学的検査によって行われているが、肝臓癌の分化度の判定の指標となる内在性のアンチセンスＲＮＡに関する報告は、特許文献１を含めてこれまでに存在しない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００８−２９５３９２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで本発明は、肝臓組織中のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することによる肝臓癌か否かの判定方法および肝臓癌の分化度の判定方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、ヒト遺伝子の転写配列から想定される特異な領域のアンチセンス鎖配列を検出することができるプローブを搭載したマイクロアレイを構築し、このマイクロアレイを用いて肝臓癌の組織中と非肝臓癌の組織中のそれぞれにおけるアンチセンスＲＮＡの発現を網羅的に解析したところ、肝臓癌に特異的な発現挙動を示すアンチセンスＲＮＡと、肝臓癌の分化度に特異的な発現挙動を示すアンチセンスＲＮＡが存在することを見出した。
【０００７】
上記の知見に基づいてなされた本発明の肝臓癌か否かを判定する方法は、請求項１記載の通り、哺乳動物から採取した肝臓組織中における下記の（１）〜（５９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定し、肝臓癌における発現挙動を示すか否かを調べることによることを特徴とする。
（１）配列番号１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＦＸＮ４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２）配列番号２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＤＥＦ１ＩＴ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３）配列番号３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＬＪ４６０２６遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４）配列番号４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＯＸＣＴ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５）配列番号５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＫＩＡＡ１４３０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６）配列番号６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１７ｏｒｆ５９遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７）配列番号７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１６ｏｒｆ２４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８）配列番号８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＬＪ３２９５１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９）配列番号９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＮＡＪＢ１２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０）配列番号１０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＹＤＣ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１１）配列番号１１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＯＡＺ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１２）配列番号１２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ２０ｏｒｆ１３４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１３）配列番号１３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＮＦＫＢＩＬ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１４）配列番号１４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＺＮＦ９３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１５）配列番号１５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ４４１１７７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１６）配列番号１６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＫＩＡＡ１７７２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１７）配列番号１７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ７２８１５７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１８）配列番号１８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ３７５０１０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１９）配列番号１９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＦＮＧ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２０）配列番号２０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＲＡＢ４１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２１）配列番号２１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＲＦＮ５遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２２）配列番号２２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＲＩＭ５２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２３）配列番号２３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ６４７５００遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２４）配列番号２４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ７３２２７１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２５）配列番号２５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＭＯＴＬ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２６）配列番号２６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１ｏｒｆ１５７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２７）配列番号２７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＪＵＮＢ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２８）配列番号２８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＰ７３Ｌ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（２９）配列番号２９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＰＮＲＣ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３０）配列番号３０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＲＨＢＰ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３１）配列番号３１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＯＳ（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｖａｒｉａｎｔ）遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３２）配列番号３２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＰＤＫ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３３）配列番号３３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＨＭＰ７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３４）配列番号３４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＬＪ１０９８６遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３５）配列番号３５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＡＲＣＯ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３６）配列番号３６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＸＩＮ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３７）配列番号３７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＮＡＳＥ１Ｌ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３８）配列番号３８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＲＡＳＧＥＦ１Ｂ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（３９）配列番号３９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＡＰＳ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４０）配列番号４０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＴＥＡＰ４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４１）配列番号４１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＥＴＰ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４２）配列番号４２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＴ１Ｅ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４３）配列番号４３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４４）配列番号４４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＴＦ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４５）配列番号４５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＲＩＢ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４６）配列番号４６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＧ６ＰＣ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４７）配列番号４７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＹＰ１Ａ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４８）配列番号４８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＤＵＳＰ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（４９）配列番号４９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＶＰＲ１Ａ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５０）配列番号５０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＴＲ２Ａ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５１）配列番号５１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＥＴＳ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５２）配列番号５２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＳ４Ａ６Ａ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５３）配列番号５３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＩＧＦＢＰ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５４）配列番号５４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＤＲＡ１Ａ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５５）配列番号５５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＧＰＡＴ５遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５６）配列番号５６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＬＲ８遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５７）配列番号５７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＰＧＥＡ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５８）配列番号５８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＴ１Ｍ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（５９）配列番号５９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＧＲＩＫ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
【０００８】
また、請求項２記載の方法は、請求項１記載の方法において、（１）〜（２３）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも多い場合に肝臓癌であると判定することを特徴とする。
【０００９】
また、請求項３記載の方法は、請求項１または２記載の方法において、（２４）〜（５９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも少ない場合に肝臓癌であると判定することを特徴とする。
【００１０】
また、請求項４記載の方法は、請求項１乃至３のいずれかに記載の方法において、（７）のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも多く、かつ、（３１）および／または（３６）のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも少ない場合に肝臓癌であると判定することを特徴とする。
【００１１】
また、本発明の肝臓癌の分化度を判定する方法は、請求項５記載の通り、哺乳動物から採取した肝臓組織中における下記の（６０）〜（１１１）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定し、肝臓癌における高分化型、中分化型、低分化型のいずれの発現挙動を示すかを調べることによることを特徴とする。
（６０）配列番号６０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＩＰＰＫ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６１）配列番号６１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＫＲＡＳ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６２）配列番号６２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１ｏｒｆ７６遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６３）配列番号６３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＲＨＢＰ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６４）配列番号６４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＳＴ１Ｈ２ＢＪ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６５）配列番号６５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＰＲ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６６）配列番号６６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＵＳＰ３遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６７）配列番号６７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ７２８７３２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６８）配列番号６８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＤＯ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（６９）配列番号６９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＥＣ２３Ｂ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７０）配列番号７０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＲＰＬ７Ｌ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７１）配列番号７１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＴＫ１１ＩＰ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７２）配列番号７２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＩＮ２８Ｂ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７３）配列番号７３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＳＴ１Ｈ４Ｅ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７４）配列番号７４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＰＴＸ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７５）配列番号７５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＥＸ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７６）配列番号７６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＫＲＡＳ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７７）配列番号７７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＦＬＪ１４３９７遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７８）配列番号７８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣ１７ｏｒｆ６２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（７９）配列番号７９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＳＴ２Ｈ２ＡＢ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８０）配列番号８０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＴＰ１Ａ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８１）配列番号８１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＤＣＡ５遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８２）配列番号８２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＯＢＲＡ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８３）配列番号８３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＣＮ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８４）配列番号８４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＧＡＬＳ８遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８５）配列番号８５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ３９１６４０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８６）配列番号８６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＯＲ５ＢＦ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８７）配列番号８７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＭＬＨＥ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８８）配列番号８８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＢＤ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（８９）配列番号８９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＡＭＫＫ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９０）配列番号９０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＸＮＤＣ４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９１）配列番号９１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＧＴＮ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９２）配列番号９２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＹＭＳ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９３）配列番号９３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＡＮＡＰＣ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９４）配列番号９４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＮＦＡＩＰ８Ｌ２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９５）配列番号９５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＲＩＰ５遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９６）配列番号９６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＯＭＭ２２遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９７）配列番号９７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＧＧＮ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９８）配列番号９８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＨＩＳＴ１Ｈ１Ｃ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（９９）配列番号９９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＳＥＳＴＤ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１００）配列番号１００で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ４４１８７８遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０１）配列番号１０１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＵＢＧ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０２）配列番号１０２で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＹＯＣ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０３）配列番号１０３で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ４０１６５０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０４）配列番号１０４で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ６４４８８１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０５）配列番号１０５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＺＮＦ７０４遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０６）配列番号１０６で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＴＣＦ２０遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０７）配列番号１０７で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＯＣ１２６２４８遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０８）配列番号１０８で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＲＲＣ１遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１０９）配列番号１０９で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１１０）配列番号１１０で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＣＥＢＰＧ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
（１１１）配列番号１１１で表される塩基配列と同一または実質的に同一の塩基配列を含んでなる、哺乳動物のＬＢＲ遺伝子に対するアンチセンスＲＮＡ
【００１２】
また、請求項６記載の方法は、請求項５記載の方法において、（６０）〜（７７）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することを特徴とする。
【００１３】
また、本発明の肝臓癌か否かを判定するためのアンチセンスＲＮＡは、請求項７記載の通り、請求項１記載の（１）〜（５９）から選択されることを特徴とする。
【００１４】
また、本発明の肝臓癌の分化度を判定するためのアンチセンスＲＮＡは、請求項８記載の通り、請求項５記載の（６０）〜（１１１）から選択されることを特徴とする。
【００１５】
また、本発明の肝臓癌か否かを判定するための試薬は、請求項９記載の通り、請求項１記載の（１）〜（５９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸を少なくとも含んでなることを特徴とする。
【００１６】
また、本発明の肝臓癌の分化度を判定するための試薬は、請求項１０記載の通り、請求項５記載の（６０）〜（１１１）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸を少なくとも含んでなることを特徴とする。
【００１７】
また、本発明の肝臓癌か否かを判定するためのアレイは、請求項１１記載の通り、請求項１記載の（１）〜（５９）から選択されるアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸のセットが固相化されてなることを特徴とする。
【００１８】
また、本発明の肝臓癌の分化度を判定するためのアレイは、請求項１２記載の通り、請求項５記載の（６０）〜（１１１）から選択されるアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸のセットが固相化されてなることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、肝臓組織中のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することによる肝臓癌か否かの判定方法および肝臓癌の分化度の判定方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施例１におけるクラスタリング解析の結果である（肝臓癌か否かの判定）。
【図２】同、（７）（３１）（３６）のアンチセンスＲＮＡの発現量を示すグラフである。
【図３】実施例２におけるクラスタリング解析の結果である（肝臓癌の分化度の判定）。
【図４】同、（６０）〜（７７）のアンチセンスＲＮＡの発現量を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の肝臓組織中のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することによる肝臓癌か否かの判定方法に用いるアンチセンスＲＮＡは、上記の（１）〜（５９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡである。それぞれのアンチセンスＲＮＡに対する遺伝子の配列情報は、ゲノム情報としてデータベースから取得することができる（表１参照）。
【００２２】
【表１】
2012055194.tif 000003
【００２３】
上記の５９種のアンチセンスＲＮＡの中で、（１）〜（２３）のアンチセンスＲＮＡは、検査対象の肝臓組織中における発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも多い場合に肝臓癌であると判定することができる。（１）〜（８）のアンチセンスＲＮＡは、肝臓癌の組織中における発現量と非肝臓癌の組織中における発現量との間での統計学的有意差が大きい（ｐ−ｖａｌｕｅが小さい）ので、この有意差の大きいマーカーを用いて判定を行う場合は、（１）〜（８）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することが望ましい。（５）〜（９）（１２）（１８）（１９）のアンチセンスＲＮＡは、肝臓癌の組織中の発現量を非肝臓癌の組織中の発現量で除した値（Ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）が大きいので、このＦｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅの大きいマーカーを用いて判定を行う場合は、（５）〜（９）（１２）（１８）（１９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することが望ましい。（２）（３）（７）（１１）（１２）（１７）〜（１９）のアンチセンスＲＮＡは、肝臓癌の組織中の発現量が多いので、この発現量の多いマーカーを用いて判定を行う場合は、（２）（３）（７）（１１）（１２）（１７）〜（１９）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することが望ましい。（７）のアンチセンスＲＮＡは、いずれの観点においても優れたマーカーである。
【００２４】
上記の５９種のアンチセンスＲＮＡの中で、（２４）〜（５９）のアンチセンスＲＮＡは、検査対象の肝臓組織中における発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも少ない場合に肝臓癌であると判定することができる。（２４）〜（３６）のアンチセンスＲＮＡは、肝臓癌の組織中における発現量と非肝臓癌の組織中における発現量との間での統計学的有意差が大きい（ｐ−ｖａｌｕｅが小さい）ので、この有意差の大きいマーカーを用いて判定を行う場合は、（２４）〜（３６）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することが望ましい。（２５）（２６）（２８）（３０）（３１）（３６）（３８）（４０）（４２）（４３）（４９）（５４）（５８）のアンチセンスＲＮＡは、肝臓癌の組織中の発現量を非肝臓癌の組織中の発現量で除した値（Ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）が大きいので、このＦｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅの大きいマーカーを用いて判定を行う場合は、（２５）（２６）（２８）（３０）（３１）（３６）（３８）（４０）（４２）（４３）（４９）（５４）（５８）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することが望ましい。（２４）（２７）（２９）（３１）（３６）（４３）（４７）（４８）（５３）（５６）（５７）のアンチセンスＲＮＡは、非肝臓癌の組織中の発現量が多いので、この発現量の多いマーカーを用いて判定を行う場合は、（２４）（２７）（２９）（３１）（３６）（４３）（４７）（４８）（５３）（５６）（５７）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することが望ましい。（３１）と（３６）のアンチセンスＲＮＡは、いずれの観点においても優れたマーカーである。
【００２５】
以上の点に鑑みれば、（７）のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも多く、かつ、（３１）および／または（３６）のアンチセンスＲＮＡの発現量が非肝臓癌の組織中における発現量よりも少ない場合に肝臓癌であると判定することが、高い精度での判定を行うことができる点において望ましい。特定のアンチセンスＲＮＡの発現量のみを測定して肝臓癌か否かを判定してもよいが、複数のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定して判定を行うことで、判定の精度を高めることができる。なお、非肝臓癌の組織中におけるアンチセンスＲＮＡの発現量は、判定が必要な患者（対象動物）の肝臓の非癌部から採取した組織を用いて測定された数値であってもよいし、過去の症例において測定された数値やその平均値などであってもよい。
【００２６】
本発明の肝臓組織中のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することによる肝臓癌の分化度の判定方法において用いるアンチセンスＲＮＡは、下記の（６０）〜（１１１）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡである。それぞれのアンチセンスＲＮＡに対する遺伝子の配列情報は、ゲノム情報としてデータベースから取得することができる（表２参照）。
【００２７】
【表２】
2012055194.tif 000004
【００２８】
上記の５２種のアンチセンスＲＮＡの中で、（６６）〜（７７）のアンチセンスＲＮＡは、肝臓癌の組織中において、高分化型、中分化型、低分化型の３群間での発現量の統計学的有意差が大きいので、（６６）〜（７７）から選択される１種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することが望ましい。特定のアンチセンスＲＮＡの発現量のみを測定して肝臓癌の分化度を判定してもよいが、複数のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定して判定を行うことで、判定の精度を高めることができる。例えば、望ましくは５種以上、より望ましくは１０種以上のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定し、それぞれのアンチセンスＲＮＡの発現量から把握される全体としての発現傾向を、過去の症例から標準化されたそれぞれの分化度における発現傾向と比較することによってどの分化度に該当するのか判定するのがよい。
【００２９】
本発明において用いる上記のアンチセンスＲＮＡは、それぞれの配列番号で表される塩基配列に相補的な６０ｍｅｒの塩基配列とハイブリダイズし得るものである。従って、上記のアンチセンスＲＮＡは、それぞれの配列番号で表される塩基配列の全部または一部を含んでなる。実質的に同一の塩基配列には、例えば天然のアレル変異体や多型などが含まれる。
【００３０】
本発明において用いる上記のアンチセンスＲＮＡは、これとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸をプローブやプライマーとして用い、例えばハイブリダイゼーション法やＰＣＲ法を利用した自体公知のＲＮＡ検出方法によって検出することができる。従って、上記のアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸は、肝臓癌か否かの判定のための試薬または肝臓癌の分化度の判定のための試薬として用いることができる。上記のアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸は、ストリンジェントな条件下で上記のアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸が望ましい。ここでストリンジェントな条件とは、例えば、上記のアンチセンスＲＮＡの塩基配列に対して完全相補的な塩基配列と９５％以上、好ましくは９７％以上、より好ましくは９９％以上が同一である塩基配列を有する核酸のみがハイブリダイズし得る条件を意味する。また、上記のアンチセンスＲＮＡとハイブリダイズし得る塩基配列を有する核酸のセットを、自体公知の方法によって固相に固定化し、アレイの形態で用いてもよい（必要であれば特許文献１を参照のこと）。
【００３１】
上記のアンチセンスＲＮＡの肝臓組織中の発現量を測定することにより、ヒトを含む哺乳動物の肝臓癌か否かの判定または肝臓癌の分化度の判定を行うことができる。上記のアンチセンスＲＮＡは、肝臓組織に特異的なマーカーである。肝臓組織中における上記のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定するための試料の調製は、ＲＮＡを検出するための自体公知の方法によって行うことができる。肝臓組織は、外科手術やバイオプシーによって採取したものでよい。
【実施例】
【００３２】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００３３】
実施例１：肝臓癌に特異的な発現挙動を示すアンチセンスＲＮＡ
（Ａ）マイクロアレイの作製
ヒト遺伝子の転写配列について、既知の転写領域または予想される転写領域から個々の遺伝子に特異な領域を得る作業を行った。ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ｖａｒｉａｎｔが存在する遺伝子については、ｖａｒｉａｎｔを識別できるような設計とした。転写の可能性のない領域に対しても、相互に相同性を持たないようにプローブ領域を設定した。このようにして選んだポリヌクレオチド（１２０ｍｅｒ）の中から、アレイ用のプローブとして６０ｍｅｒのポリヌクレオチドを選び、センスプローブとした。アンチセンスプローブには、センスプローブと相補な配列を用いた。そして各種プローブをＡｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のシステムを利用してアレイ上に搭載し、目的とするマイクロアレイ（４４Ｋアレイ：４００００以上のプローブセットを搭載したアレイ）を得た。
【００３４】
（Ｂ）ＲＮＡの抽出
ＨＢＶ（−），ＨＣＶ（−）の肝細胞癌患者８名、ＨＢＶ（＋），ＨＣＶ（＋）の肝細胞癌患者１名、ＨＢＶ（＋），ＨＣＶ（−）の肝細胞癌患者４名、ＨＢＶ（−），ＨＣＶ（＋）の肝細胞癌患者１６名、合計２９名の肝細胞癌患者の同意を得て、それぞれの外科手術の際に切除した肝臓検体の癌部から組織を採取した。採取した組織から、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社）を用い、組織中のＴｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出した。また、大腸癌の肝転移を伴う患者７名の同意を得て、それぞれの外科手術の際に切除した肝臓検体の非癌部から組織を採取し、同様の方法で組織中のＴｏｔａｌ  ＲＮＡを抽出した（肝臓非癌部の組織を大腸癌の肝転移を伴う患者から採取したのは肝炎ウイルスの影響を排除するため）。
【００３５】
（Ｃ）ＲＮＡ発現の測定
ＬａｂｅｌＳｔａｒ  Ａｒｒａｙ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）とＣｙ３蛍光色素（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）を用い、製品説明書に記載のプロトコルに従って、（Ｂ）の方法で抽出したＴｏｔａｌ  ＲＮＡ５μｇからＣｙ３蛍光色素にて標識したターゲットｃＤＮＡを作製し、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社が推奨するプロトコルに従って、（Ａ）で作製したマイクロアレイにハイブリダイズさせた後、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＤＮＡマイクロアレイスキャナ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いて蛍光強度を測定した。得られた測定値は、Ｆｅａｔｕｒｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いてデータの補正を行い、シグナル値（ｐｒｏｃｅｅｄ  ｓｉｇｎａｌ）を算出した。
【００３６】
（Ｄ）ＲＮＡ発現の解析
試料中のセンスＲＮＡとアンチセンスＲＮＡの発現量を測定し、癌部と非癌部の間での統計学的有意差の条件をｐ＜０．００１（Ｔ−ｔｅｓｔ）、Ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ＞４．０として該当するセンスＲＮＡとアンチセンスＲＮＡを調べたところ、１１９種のセンスＲＮＡと５９種のアンチセンスＲＮＡを同定することができた。同定された５９種のアンチセンスＲＮＡは、上記の（１）〜（５９）のアンチセンスＲＮＡの相当するものであり、このうち、（１）〜（２３）のアンチセンスＲＮＡは、その発現量が非癌部よりも癌部の方が多いものであった。これに対し、（２４）〜（５９）のアンチセンスＲＮＡは、その発現量が非癌部よりも癌部の方が少ないものであった。同定された５９種のアンチセンスＲＮＡについて、それぞれＧｅｎｅ  Ｓｐｒｉｎｇ  ＧＸ１０（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いてクラスタリング解析を行った。結果を図１に示す。図１から明らかなように、同定された５９種のアンチセンスＲＮＡは、色分布による識別から癌部と非癌部の間でクラスター分類が可能であり、肝臓癌か否かの判定を行うためのマーカーとして用いることができるものであることがわかった。（７）（３１）（３６）のアンチセンスＲＮＡの発現量を図２に示す。図２から明らかなように、（７）のアンチセンスＲＮＡは非癌部（ｎｏｎ−ｃａｎｃｅｒ）よりも癌部（ｃａｎｃｅｒ）の方が発現量が顕著に多く、（３１）（３６）のアンチセンスＲＮＡは非癌部よりも癌部の方が発現量が顕著に少なかった。
【００３７】
実施例２：肝臓癌の分化度に特異的な発現挙動を示すアンチセンスＲＮＡ
高分化型の肝細胞癌患者５名、中分化型の肝細胞癌患者７名、低分化型の肝細胞癌患者３名、合計１５名の肝細胞癌患者（全員ＨＢＶ（−），ＨＣＶ（＋））の同意を得て、それぞれの外科手術の際に切除した肝臓検体の癌部から採取した組織を用いて実験を行うこと以外は実施例１と同様にしてＲＮＡ発現の解析を行った。なお、肝臓癌の分化度は病理組織学的検査によって予め判定しておいた。試料中のセンスＲＮＡとアンチセンスＲＮＡの発現量を測定し、３群間での統計学的有意差の条件をｐ＜０．００１（Ａｎｏｖａ）として該当するセンスＲＮＡとアンチセンスＲＮＡを調べたところ、７４種のセンスＲＮＡと５２種のアンチセンスＲＮＡを同定することができた。同定された５２種のアンチセンスＲＮＡは、上記の（６０）〜（１１１）のアンチセンスＲＮＡの相当するものであり、なかでも、（６０）〜（７７）のアンチセンスＲＮＡは、３群間での統計学的有意差が大きいものであった。同定された５２種のアンチセンスＲＮＡについて、それぞれＧｅｎｅ  Ｓｐｒｉｎｇ  ＧＸ１０（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いてクラスタリング解析を行った。結果を図３に示す。図３から明らかなように、同定された５２種のアンチセンスＲＮＡは、色分布による識別から高分化型と中分化型と低分化型の間でクラスター分類が可能であり、肝臓癌の分化度の判定を行うためのマーカーとして用いることができるものであることがわかった。（６０）〜（７７）のアンチセンスＲＮＡの発現量を図４に示す。図４から明らかなように、（６０）〜（７７）のアンチセンスＲＮＡは、それぞれ高分化型（ｗ）、中分化型（ｍ）、低分化型（ｐ）の癌部において特異的な発現挙動を示した。
【００３８】
参考例１：
血液を試料とした場合、上記のアンチセンスＲＮＡは、肝臓癌か否かの判定または肝臓癌の分化度の判定を行うためのマーカーとして機能しなかった。従って、上記のアンチセンスＲＮＡは、肝臓組織に特異的なマーカーであることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明は、肝臓組織中のアンチセンスＲＮＡの発現量を測定することによる肝臓癌か否かの判定方法および肝臓癌の分化度の判定方法を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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