(57)【要約】【課題】  天然からの糖類を用いたこれまでの技術では、その組成が一定でないため必ずしも安定したウイルス捕捉機能を有する高分子化合物を調整できるわけではなく、十分なウイルス捕捉能を発現しているものとはいえなかった。本発明では、天然の糖類を用いない高分子化合物において、十分なウイルス捕捉能を発現する高分子化合物を提供することを課題とする。【解決手段】  グルコサミン骨格を有する糖類が固定化された高分子化合物を提供することによる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2012250168.tif 000016
（Ｘはアリーレン基を表し、ＹはＯＨ、又はＮＨ２を表し、Ｒ１〜Ｒ３のうち少なくとも一つはＳＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｎａ、又はＳＯ３Ｋを表し、ｎは、２〜１０４の整数である。）
で表されるポリアミド誘導体を含むウイルス捕捉高分子。
【請求項２】
アリーレン基がフェニレン基、又はナフチレン基である請求項１に記載のウイルス捕捉高分子。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のウイルス捕捉高分子の製造方法において、
一般式（２）
【化２】
2012250168.tif 000017
（ＹはＯＨ、又はＮＨ２を表す。）
で表される重合性化合物（Ｉ）、及び一般式（３）
【化３】
2012250168.tif 000018
（Ｘはアリーレン基を表し、Ｒ１〜Ｒ３のうち少なくとも一つはＳＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｎａ、又はＳＯ３Ｋを表す。）
で表される重合性化合物（ＩＩ）とのラジカル重合反応により製造することを特徴とするウイルス捕捉高分子の製造方法。
【請求項４】
請求項３に記載のウイルス捕捉高分子の製造方法において、
一般式（３）で表される重合性化合物（ＩＩ）のモル数／一般式（２）で表される重合性化合物（Ｉ）のモル数の比率が、１以上である請求項３に記載のウイルス捕捉高分子の製造方法。
【請求項５】
ウイルスが、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、又はヒト免疫不全ウイルスである請求項１〜３に記載のウイルス捕捉高分子。
【請求項６】
ウイルスが、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、又はヒト免疫不全ウイルスである請求項４に記載のウイルス捕捉高分子の製造方法。
【請求項７】
請求項１に記載のウイルス捕捉高分子を用いたウイルスを捕捉する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス捕捉能を有する高分子に関し、特に硫酸化されたグルコサミン骨格を有する糖類が固定化された高分子化合物に関する。当該高分子化合物は、ウイルス、特に肝炎ウイルスを好適に捕捉することが可能である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎はＨＣＶウイルスの慢性的感染が原因であり、薬剤による治療法としてペグインターフェロン、リバビリンの併用療法が一般的である。ジェノタイプ１ｂかつ血液中のウイルス量の多い患者では、治療成績は５０％程度であり、肝硬変、肝がんへの移行割合が高いことからより有効な治療法、薬剤の開発が望まれている（非特許文献１）。一般的に薬剤による治療では血中のウイルス量が低い場合、治療成績が高いことが知られており、血中のＨＣＶウイルスを多孔性のフィルターで除去し、薬剤との併用療法を行うと、治療成績が向上するとの報告がある（非特許文献２）。すなわち体内のウイルス量を下げることで、治療成績が向上したものと推定される。
【０００３】
また、一旦血球と血漿を分離した後、血漿成分からウイルスを除去することから、回路構成は複雑で、より簡便に血中からウイルスを除去する方法がさらに望ましいと考えられる。そこで、ＨＣＶに結合するリガンドを用いる事でより簡便にＨＣＶを除去する可能性があると考えられる。このＨＣＶの吸着する物質の一つにヘパリンが挙げられる（非特許文献３）。しかし、このヘパリンは、血中のアンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）やＬＤＬの構成蛋白質であるアポリポ蛋白質Ｂ（ＡｐｏＢ）と結合することが知られ、ヘパリンを用いて血中からＨＣＶを吸着除去する際、ＡＴＩＩＩやＡｐｏＢも合わせて吸着するため、ＨＣＶの吸着効率は低下する。この為、ヘパリンを改変して選択性の向上させる必要がある。
【０００４】
上記のようにウイルスを吸着する機能を有する糖類としては、ヘパリンを初め、天然由来の硫酸化多糖が存在することが知られているが、これらの糖類は組成が一定でない為、合成は容易ではなく、さらに、組成を改変して相互作用を向上させる検討は困難であった。また、動物由来成分の場合、動物由来成分や感染性微生物が混入する危険性が常にあり、合成品が求められている。
そこで、高分子鎖に糖類を固定化させた糖類高分子の機能について各種検討がされてきた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】ウイルス性肝炎−基礎・臨床研究の進歩−日本臨床６２巻増刊号７（２００４）
【非特許文献２】Ｋ．Ｆｕｊｉｗａｒａ ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，３７，７０１（２００７）
【非特許文献３】Ａ．Ｚａｈｎ，Ｊ．Ｐ．Ａｌｌａｉｎ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，８６，６７７（２００５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記のように、これまでの技術では、天然からの糖類を用いた場合には、その組成が一定でないため必ずしも安定したウイルス捕捉機能を有する高分子化合物を調整できるわけではなく、また、ウイルス捕捉能を有する天然の糖類を用いていない高分子化合物においても、必ずしも十分なウイルス捕捉能を発現しているものとはいえない。
そこで、本発明の課題は、天然の糖類を用いていない高分子化合物においても、十分なウイルス捕捉能を発現する高分子化合物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために、本発明者らはグルコサミン骨格を有する糖類が固定化された高分子化合物の検討、及び最適化を行うことにより本発明を完成させるに至った。
【０００８】
即ち、本発明は、グルコサミン骨格を有する糖類が固定化されたウイルス捕捉作用を有する高分子化合物に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、ウイルスを含む液からウイルスを捕捉することができ、ウイルスを含む液中のウイルスを減じることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
即ち、本発明は、
１．一般式（１）
【００１１】
【化１】
2012250168.tif 000002
【００１２】
（Ｘはアリーレン基を表し、ＹはＯＨ、又はＮＨ２を表し、Ｒ１〜Ｒ３のうち少なくとも一つはＳＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｎａ、又はＳＯ３Ｋを表し、ｎは、２〜１０４の整数である。）
で表されるポリアミド誘導体を含むウイルス捕捉高分子、
２．アリーレン基がフェニレン基、又はナフチレン基である１．に記載のウイルス捕捉高分子、
３．１．又は２．に記載のウイルス捕捉高分子の製造方法において、
一般式（２）
【００１３】
【化２】
2012250168.tif 000003
【００１４】
（ＹはＯＨ、又はＮＨ２を表す。）
で表される重合性化合物（Ｉ）、及び一般式（３）
【００１５】
【化３】
2012250168.tif 000004
【００１６】
（Ｘはアリーレン基を表し、Ｒ１〜Ｒ３のうち少なくとも一つはＳＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｎａ、又はＳＯ３Ｋを表す。）
で表される重合性化合物（ＩＩ）とのラジカル重合反応により製造することを特徴とするウイルス捕捉高分子の製造方法、
４．３．に記載のウイルス捕捉高分子の製造方法において、一般式（３）で表される重合性化合物（ＩＩ）のモル数／一般式（２）で表される重合性化合物（Ｉ）のモル数の比率が、１以上である請求項３に記載のウイルス捕捉高分子の製造方法、
５．ウイルスが、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、又はヒト免疫不全ウイルスである１．〜３．に記載のウイルス捕捉高分子、
６．ウイルスが、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、又はヒト免疫不全ウイルスである４．に記載のウイルス捕捉高分子の製造方法、
７．１．に記載のウイルス捕捉高分子を用いたウイルスを捕捉する方法、
に関する。
【００１７】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いられる糖類に制限はないが、合成が容易であること、硫酸化誘導体には好ましいウイルス捕捉能を有することから、糖類の水酸基がスルホン酸化されることにより、スルホ基、或いはスルホニウム塩基を有するグルコサミン誘導体が好適である。
【００１８】
スルホン化は、通常公知のスルホン化条件化に行うことができる。
本発明の中空糸のスルホン酸化は、濃硫酸又は発煙硫酸等のスルホン酸化剤を用いた通常公知の方法で行うことが可能である。また、Ｍｅ３ＮＳＯ３等の公知慣用のスルホン酸化剤も用いることができる。得られたスルホン酸基は、公知慣用の方法により、スルホン酸塩とすることができる。このような塩としては、ウイルスを捕捉することができるものであれば特に制限はないが、スルホン酸のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等の金属イオンと形成される塩、トリアルキルアミン類、芳香族アミン類と形成される塩等を好ましい塩として挙げることができる。
【００１９】
また、本発明に使用されるグルコサミン誘導体では、グリコシド結合により結合されたアリーレン基を有する化合物を使用することに特徴を有する。このような、アレーレン基の種類に制限はないが、フェニレン基、ナフチレン基が好ましい。また、高分子化合物として、ポリアミドが好ましいことから、アレーレン基の置換基として、アミノ基を有することが好ましい。アレーレン基の導入は、公知慣用の方法で行うことができ、例えば、１位がハロゲン化されたグルコサミン誘導体に、４−ニトロベンゼンを反応させ、更にニトロ基を還元することにより得ることができる。
【００２０】
更に、得られたアミノ基を有する糖類誘導体に塩化アクリロイルを反応させることにより、アクリルアミド基を有する糖類誘導体とすることができる。
【００２１】
上記アクリルアミド基を有する糖類誘導体の合成スキームの概略は以下のように表すことができる。但し、使用する試薬は、本反応に用いられる一例でありこれらに限られるものではない。
【００２２】
【化４】
2012250168.tif 000005
【００２３】
本発明のウイルス補足用高分子化合物は、上記で得られたアクリルアミド基を有する糖類誘導体と、アクリル酸或いはアクリルアミドを重合反応させることにより得ることができる。本重合反応は、ラジカル重合反応が好ましく、本ラジカル反応は、アクリル酸或いはアクリルアミド等のアクリル系モノマーを重合できる公知慣用の方法で行うことができる。
本発明の高分子を得るためには、ラジカル重合開始剤を用いることができる。
【００２４】
本発明で用いるラジカル重合開始剤は、光重合開始剤、及び熱重合開始剤が挙げられる。光重合開始剤としては、具体的には、ベンゾイン、ベンゾインメチルエーテル、ベンゾインエチルエーテル、ベンゾインブチルエーテル、２−メチルベンゾイン、ベンゾフェノン、ミヒラーズケトン、ベンジルジメチルケタール、２，２−ジエトキシアセトフェノン、ベンゾイル安息香酸、４−ベンゾイル−４’−メチルジフェニルサルファイド、３，３’−ジメチル−４−メトキシベンゾフェノン、１−（４−ドデシルフェニル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−１−オン、１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニルプロパン−１−オン、２−メチル−１−〔４−（メチルチオフェニル）〕−２−モルホリノ）プロパン−１、２−クロロチオキサントン、２，４−ジエチルチオキサントン、２，４−ジイソプロピルチオキサントン、２，４，６−トリメチルベンゾイルジフェニルホスフィンオキサイド等が挙げられる。
【００２５】
また、これらの光重合開始剤には、アミン類等の光重合促進剤を併用することができる。例えば、２−ジメチルアミノエチルベンゾエート、ジメチルアミノアセトフェノン、ｐ−ジメチルアミノ安息香酸エチル、ｐ−ジメチルアミノ安息香酸イソアミル等が挙げられる。これらの光重合促進剤の使用割合は、光重合開始剤１００重量部に対して、０．１〜１００重量部の範囲であることが、重合速度が速く、かつ、硬化物の屈折率が高くなる点から好ましい。
【００２６】
その他、重合開始剤としては、公知の過酸化物系開始剤やアゾビス系開始剤を使用することができる。過酸化物系開始剤としては、具体的には、メチルエチルケトンパーオキサイド、メチルイソブチルケトンパーオキサイド、シクロヘキサノンパーオキサイド、メチルシクロヘキサンケトンパーオキサイド、アセチルアセトンパーオキサイド等のケトンパーオキサイド系開始剤、イソブチルパーオキサイド、ｍ−クロロベンゾイルパーオキサイド、２，４−ジクロロベンゾイルパーオキサイド、α−メチルベンゾイルパーオキサイド、ビス−３，５，５−トリメチルヘキサノイルパーオキサイド等のジアシルパーオキサイド系開始剤、２，４，４−トリメチルペンチル−２−ハイドロパーオキサイド、ジイソプロピルベンゼンハイドロパーオキサイド、クメンハイドロパーオキサイド、ｔ−ブチルハイドロパーオキサイド等のハイドロパーオキサイド系開始剤、ジクミルパーオキサイド、２，５−ジメチル−２，５−ジ（ｔ−ブチルパーオキシ）ヘキサン、１，３−ビス（ｔ−ブチルパーオキシイソプロピル）ベンゼン、ｔ−ブチルクミルパーオキサイド等のジアルキルパーオキサイド系開始剤、１，１−ジ−ｔ−ブチルパーオキシ−３，３，５−トリメチルシクロヘキサン、２，２−ジ−（ｔ−ブチルパーオキシ）ブタン、４，４−ジ−ｔ−ブチルパーオキシ吉草酸−ｎ−ブチルエステル等のパーオキシケタール系開始剤、２，４，４−トリメチルペンチルパーオキシフェノキシアセテート、α−クミルパーオキシネオデカノエート、ｔ−ブチルパーオキシベンゾエート、ジ−ｔ−ブチルパーオキシトリメチルオジペート等のアルキルパーエステル系開始剤、ジ−ｔ−メチキシブチルパーオキシジカーボネート、ジ−２−エチルヘキシルパーオキシジカーボネート、ビス（４−ｔ−ブチルシクロヘキシル）パーオキシジカーボネート、ジイソプロピルパーオキシジカーボネート等のパーカーボネート系開始剤、その他のアセチルシクロヘキシルスルフォニルパーオキシジカーボネート、ｔ−ブチルパーオキシアリルカーボネート等のものが挙げられ、また、アゾビス系開始剤としては、具体的には、１，１’−アゾビスシクロヘキサン−１−カルボニトリル、２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）ジハイドロクロライド（ＡＡＰＤ）、２，２’−アゾビス−（２，４−ジメチルバレロニトリル）、２，２’−アゾビス−（４−メトキシ−２，４−ジメチルバレロニトリル）、２，２’−アゾビス−（メチルイソブチレート）、α，α’−アゾビス−（イソブチロニトリル）、４，４’−アゾビス−（４−シアノバレイン酸）等が挙げられる。
【００２７】
これらの熱重合開始剤は、それぞれ単独で用いることができ、また、２種以上の混合物として使用することもできる。
【００２８】
反応時間は、１〜２４時間範囲で十分であるが、開始剤の種類、反応温度によりその反応時間を設定することが望ましい。更に、反応時間の設定は、得られる重合体の分子量制御に合わせて、設定することが望ましい。下式に、高分子化合物の反応式を示すが、記載された反応温度、重合触媒は、これらに限らない。
【００２９】
【化５】
2012250168.tif 000006
【００３０】
本発明のウイルス捕捉高分子は、各種ウイルスを捕捉する能力があることから、広く各種ウイルスを含む液からウイルスを捕捉する用途に用いることができ、例えば、医薬、医療用器具、環境水中に含まれるウイルス量の測定等に用いることができる。ここで、ウイルスを含む液としては、例えば、ウイルスを含み得る環境水、ヒトの体内液体成分である体液、ウイルスを含んだ培養液、生活用水等を挙げることができる。体液のより具体的な例としては、血液、唾液、汗、尿、鼻水、精液、血漿、リンパ液、組織液等を挙げることができる。環境水の具体的な例としては、河川水、湖沼水、地下水、海水等が挙げられる。生活用水としては、水道水、井戸水、温泉、プール水等が挙げられる。
【００３１】
本発明で対象とするウイルスは、本発明の高分子化合物で捕捉が可能なウイルスであれば、特に制限はないが、例えばＡ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、アデノウイルス、エンテロウイルス、ノロウイルス、インフルエンザウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ロタウイルス、又はポリオウイルス等を挙げることができる。
【実施例】
【００３２】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。
【００３３】
（合成例１）：ｐ−（Ｎ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｏ）ｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−６−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（９）の合成
＜ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−６−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（５）の合成＞
ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（７）（５００ｍｇ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に懸濁させ、４０℃の油浴上でＭｅ３ＮＳＯ３のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液を加え、そのままの温度で磁気攪拌した。反応開始から反応の進行を逆相ＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝４：１）でモニタリングし、副生成物のスポットが見られたところでＭｅＯＨを加えて反応を終了させた。エバポレーター、油圧ポンプで溶媒を留去し、逆相クロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝４：１）で精製した。生成物をイオン交換樹脂（Ｎａ＋ｆｏｒｍ）で２４時間イオン交換を行い、ろ紙で樹脂を取り除いた。ろ液を凍結乾燥させ、やや黄色がたった白色粉末（８）を得た。収量：４４２ｍｇ（収率：６８％）
【００３４】
＜（９）の合成＞
上記（８）（１５０ｍｇ）をＭｅＯＨ：（５ｍＬ）とＨ２Ｏ（５ｍＬ）に溶解させ、Ｐｄ／Ｃ（９ｍｇ）を加え、水素雰囲気下で４時間磁気攪拌した。反応の終了を逆相ＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で確認し、Ｐｄ／Ｃを吸引ろ過で除去した。ろ液を減圧濃縮し、真空乾燥してアミン体の粗生成物を得た。これをＨ２Ｏ（６ｍＬ）とＴＨＦ（３ｍＬ）に溶解させ、０℃でＫ２ＣＯ３（１４０ｍｇ）と塩化アクリロイル（４１μＬ）を加えた。室温へ昇温し、反応の進行を逆相ＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝１０：１）でモニタリングし、反応終了を確認した後にアンバーリストで反応液を中和した。ひだ折りろ紙で樹脂を取り除き、ろ液を留去した。残渣を逆相クロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ）で精製し、溶出液を凍結乾燥させ、白色固体（９）を得た。収量：１２７ｍｇ（収率：８０％）。
【００３５】
【化６】
2012250168.tif 000007
【００３６】
（合成例２）：ｐ−（Ｎ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｏ）ｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−３−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１３）の合成
＜ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−４，６−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌｉｄｅｎｅ−２−ｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１０）の合成＞
上記（４）（１ｇ）をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解させ、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（５３０μＬ）、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（８０ｍｇ）を加え、ロータリーエバポレーターにて減圧下、５０℃で１２時間反応を行った。順相及び逆相ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１０：１、Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝２：１）にて反応終了を確認した後、飽和重曹水を加え、室温で３０分間磁気攪拌した。析出した固体を桐山ロートでろ取し、Ｈ２ＯとＥｔ２Ｏで結晶を洗い、真空乾燥して（１０）を得た。収量：８０１ｍｇ（収率：６４％）
【００３７】
＜ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−４，６−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌｉｄｅｎｅ−３−ｓｕｌｆｏ−２−ｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１１）の合成＞
上記（１０）（１００ｍｇ）を乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）に懸濁させ、４０℃に加温した。ＳＯ３−ＮＭｅ３（３２３ｍｇ）を加え、そのままの温度で３日間磁気攪拌した。順相ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝４：１）で反応の進行をモニタリングし、ほぼ反応が進行したところでＭｅＯＨを加え反応を終了した。溶媒を留去し、残渣を順相フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝４：１）で精製して（１１）を得た。収量：５２ｍｇ（収率：３９％）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）  ８．２７−８．２４（２Ｈ，ｍ），７．５８−７．５６（２Ｈ，ｍ），７．４８−７．４６（３Ｈ，ｍ），７．２４−７．２２（２Ｈ，ｍ），５．７８（１Ｈ，ｓ，Ｐｈ−Ｈ），５．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ１，２８．４Ｈｚ，Ｈ−１），４．４９−４．３９（１Ｈ，ｍ），４．３４−４．２６（１Ｈ，ｍ），４．０３−３．９１（４Ｈ，ｍ），３．７４（９Ｈ，ｓ），２．００（３Ｈ，ｓ，−ＮＨＡｃ）
【００３８】
＜ｐ−（Ｎ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｏ）ｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−３−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１３）の合成＞
上記（１１）（８９４ｍｇ）を９５％ＭｅＯＨ水に溶解させ、４０℃に加温した。１０％Ｐｄ／Ｃ（９０ｍｇ）と濃塩酸（６８１μＬ）を加え、Ｎ２置換後、Ｈ２加圧下で２４時間磁気攪拌した。２４時間後、逆相ＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝４：１）で反応の終了を確認し、グラスファイバーろ紙でＰｄ／Ｃを取り除いた。ろ液を留去し、残渣をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：２、１５ｍＬ）にて溶解させ、０℃に冷却した。塩化アクリロイル（１９０μＬ）とＫ２ＣＯ３（６５１ｍｇ）を加え、５分間、０℃で攪拌した後、室温へ昇温した。１２時間攪拌した後に逆相ＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝４：１）で反応の終了を確認し、１規定塩酸で中和した。逆相カラム（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝６：１）で精製して（１２）とした後、目的物の入ったフラクションをイオン交換樹脂（Ｎａ＋ｆｏｒｍ）でイオン交換した。溶媒を減圧留去し、残渣をＨ２Ｏに溶解させ、凍結乾燥して（１３）を得た。収量：１８２ｍｇ（収率：２５％）。
【００３９】
【化７】
2012250168.tif 000008
【００４０】
（合成例３）：ｐ−（Ｎ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｏ）ｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−４−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１９）の合成
＜ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−３−Ｏ−ｂｅｎｚｏｙｌ−４，６−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌｉｄｅｎｅ−２−ｄｅｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１４）の合成＞
上記（１０）（８００ｍｇ）のＣＨ２Ｃｌ２：ピリジン＝１：１．５溶液（１５ｍＬ）に０℃で、Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）（４５ｍｇ）と塩化ベンゾイル（３２４μＬ）をゆっくり滴下し、０℃で磁気攪拌した。反応の終了を順相ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１０：１）で確認し、ＭｅＯＨを加えて反応を止め、溶媒を留去した。残渣をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（ｃａ．５：１）から再結晶し、白色固体を得た。析出した結晶を桐山ロートでろ取し、真空乾燥した（第１晶）。ろ液を減圧濃縮し、同様に結晶を析出させ、結晶をろ取して（１４）を得た。収量：４８３ｍｇ（収率：４９％）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ−ｄ６）  ８．２５−８．２０（３Ｈ，ｍ），７．９６−７．９４（２Ｈ，ｍ），７．６９−７．６４（１Ｈ，ｍ），７．５５−７．５２（２Ｈ，ｍ），７．３５−７．２９（７Ｈ，ｍ），５．７０（１Ｈ，ｓ，−ＰｈＨ），５．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ１，２８．４Ｈｚ，Ｈ−１），５．５３（１Ｈ，ｔ，Ｊ２，３＝Ｊ３，４９．８Ｈｚ，Ｈ−３），４．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ３，４９．８Ｈｚ，Ｊ４，５４．２Ｈｚ，Ｈ−４），４．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ２，３９．８Ｈｚ，Ｊ１，２８．４Ｈｚ，Ｈ−２），４．０７（１Ｈ，ｔ，Ｊ５，６ａ＝Ｊ６ａ，６ｂ９．７Ｈｚ，Ｈ−６ａ），４．００（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ５，６ａ＝Ｊ６ａ，６ｂ９．７Ｈｚ，Ｊ４，５４．２Ｈｚ，Ｈ−５），３．８５（１Ｈ，ｔ，Ｊ５，６ｂ＝Ｊ６ａ，６ｂ９．７Ｈｚ，Ｈ−６ｂ），１．６８（３Ｈ，ｓ，−ＮＨＡｃ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ−ｄ６）  １６９．５，１６５．３，１６１．５，１４２．３，１３７．２，１３３．５，１２９．３，１２９．２，１２８．９，１２８．８，１２８．１，１２６．０，１２５．８，１１６．７，１６９．５，１６５．３，１６１．５，１００．４，９７．８，７７．９，７２．３，６７．５，６６．０，５３．４，２２．６．ＥＳＩ−ＭＳｍ／ｚｃａｌｃｄｆｏｒＣ２８Ｈ２７Ｎ２Ｏ９＋，５３５．１７；ｆｏｕｎｄ５３５．０７，［Ｍ−Ｈ］＋，ｃａｌｃｄｆｏｒＣ２８Ｈ２６Ｎ２ＮａＯ９＋，５５７．１５；ｆｏｕｎｄ５３４．１６，［Ｍ−Ｎａ］＋，ｃａｌｃｄｆｏｒＣ５６Ｈ５２Ｎ４ＮａＯ１８＋，１０９１．３１；ｆｏｕｎｄ１０９１．０７，［２Ｍ−Ｎａ］＋
【００４１】
＜ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−３−Ｏ−ｂｅｎｚｏｙｌ−６−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−４−ｈｙｄｒｏｘｙ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１５）の合成＞
上記（１４）（２９７ｍｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）懸濁液に０℃でトリフロロ酢酸（２３２μＬ）とＥｔ３ＳｉＨ（４４４μＬ）を加え、１５分間低温反応装置で磁気攪拌した。そのままの温度でトリフロロ酢酸（２０７μＬ）を滴下し、１０分間磁気攪拌し、室温へ昇温した。終夜攪拌後、順相ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘａｎｅ＝１：１）で反応の終了を確認し、反応液をＥｔＯＡｃで希釈した。ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、ｂｒｉｎｅで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ひだ折りろ紙でＭｇＳＯ４を取り除き、ろ液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：Ｈｅｘａｎｅ＝１：１）で精製し、白色固体（１５）を得た。収量：２６０ｍｇ（収率：８７％）
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  ８．０７−８．０３（２Ｈ，ｍ），７．９７−７．９５（２Ｈ，ｍ），７．５５−７．５１（１Ｈ，ｍ），７．４０−７．３６（２Ｈ，ｍ），７．２７−７．１９（５Ｈ，ｍ），７．０６−７．０２（２Ｈ，ｍ），６．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ−ＮＨ，２８．８Ｈｚ，−ＮＨ），６．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ１，２８．４Ｈｚ，Ｈ−１），４．３３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ２，３１０．４Ｈｚ，Ｊ１，２＝Ｊ−ＮＨ，２８．８Ｈｚ，Ｈ−２），３．９４−３．８５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４，Ｈ−５），３．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ６ａ，６ｂ１０．４Ｈｚ，Ｊ５，６ａ３．２Ｈｚ，Ｈ−６ａ），３．７２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ６ａ，６ｂ１０．４Ｈｚ，Ｊ５，６ａ５．２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ），３．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ−ＯＨ，４３．１８Ｈｚ，−ＮＨ），１．７７（３Ｈ，ｓ，−ＮＨＡｃ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  １７０．７，１６７．５，１６１．８，１４２．８，１３７．５，１３３．９，１２９．９，１２８．９，１２８．６，１２８．５，１２８．０，１２７．７，１２５．７，１１６．６，９８．２（Ｃ−１），７５．６（Ｃ−３），７５．０（Ｃ−４），７３．７（Ｐｈ−ＣＨ２−），７０．４（Ｃ−５），６９．８（Ｃ−６），５４．２（Ｃ−２），２３．３（−ＮＨＣＯＣＨ３）．
ＥＳＩ−ＭＳｍ／ｚｃａｌｃｄｆｏｒＣ２８Ｈ２８Ｎ２ＮａＯ９＋，５５９．１７；ｆｏｕｎｄ５５９．２０，［Ｍ−Ｎａ］＋，ｃａｌｃｄｆｏｒＣ５６Ｈ５６Ｎ４ＮａＯ１８＋，１０９５．３５；ｆｏｕｎｄ１０９５．０７，［２Ｍ−Ｎａ］＋
【００４２】
＜ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−３−Ｏ−ｂｅｎｚｏｙｌ−６−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌ−２−ｄｅｏｘｙ−４−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１６）の合成＞
上記（１５）（５０ｍｇ）のＤＭＦ（５ｍＬ）に懸濁させ、５０℃に加温した。Ｍｅ３ＮＳＯ３（１０ｅｑ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液をゆっくり滴下し、そのままの温度で３日間磁気攪拌した。逆相ＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝３：１）で反応の進行をモニタリングし、反応が進行したところでＭｅＯＨを加え反応を終了した。エバポレーター、油圧ポンプで溶媒を留去し、逆相クロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝１：１）で精製した。生成物をイオン交換樹脂（Ｎａ＋ｆｏｒｍ）で３日間イオン交換を行い、ひだ折りろ紙で樹脂を取り除いた。ろ液を凍結乾燥させ、茶色がかった白色固体（１６）を得た。収量：１９４ｍｇ（収率：＞９９％）
【００４３】
＜ｐ−（Ｎ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｏ） ｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−４−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１９）の合成＞
上記（１６）（５３ｍｇ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解させ、ＮａＯＭｅを加え、ｐＨ１０とした。室温で１２時間反応を行い、順相ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝７：３）で反応終了を確認し、アンバーリストで中和した。桐山ロートで樹脂を取り除き、ろ液を減圧留去した。残渣にＥｔ２Ｏを加え、析出した結晶を桐山ロートでろ取した。さらに、同様に粗結晶をＥｔ２Ｏで再結晶し、やや茶色の白色粉末を得た。Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝１０：１に溶解し、ＥｔＯＡｃで逆抽出した。得られた水層の溶媒を減圧留去して、（１７）を得た。
残渣（１７）をＨ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝１：１溶液５０ｍＬに溶解させた。１規定塩酸（０．１ｍＬ）とＰｄ／Ｃ（９０ｍｇ）を加え、耐圧容器に入れ、Ｎ２置換の後、Ｈ２置換した。２５時間後、反応の終了をＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＣＯＯＨ＝９５：５）で確認し、反応液をグラスファイバーろ紙でろ過した。溶媒を留去し、残渣をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：２、１０ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却した。塩化アクリロイル（１７６μＬ）とＫ２ＣＯ３（６０１ｍｇ）を加え、５分間、０℃で攪拌した後、室温へ昇温した。１２時間攪拌した後にＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＣＯＯＨ＝９５：５）で反応の終了を確認し、１規定塩酸で中和した。逆相カラム（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝９：１）で精製し、溶媒を減圧留去した後、残渣（１８）をＨ２Ｏに溶解させ、イオン交換し、凍結乾燥して（１９）を得た。収量：２６４ｍｇ（収率：４２％）
【００４４】
【化８】
2012250168.tif 000009
【００４５】
（合成例４）：ｐ−（Ｎ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｏ）ｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−３，４，６−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（２１）の合成
＜ｐ−Ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−３，４，６−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（２０）の合成＞
上記（４）（５００ｍｇ）をピリジン（１５ｍＬ）を加え、４０℃に加温した。ＳＯ３−Ｐｙ（２．３２ｇ）を加え、４０℃で６日間攪拌した。ＴＬＣ（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ＝１：１）で反応の終了を確認し、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）を加えた。イオン交換カラム（Ｎａ＋ｆｏｒｍ）に反応液を通し、イオン交換を行い、目的物のフラクションを回収し、溶媒を留去した。残渣を逆相クロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝９：１）で精製して（２０）とした。収量：４４２ｍｇ（収率：６８％）
【００４６】
＜ｐ−（Ｎ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｏ）ｐｈｅｎｙｌ ２−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−２−ｄｅｏｘｙ−３，４，６−ｓｕｌｆｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（２１）の合成＞
上記（２０）（８６０ｍｇ）をＨ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝１：１溶液５０ｍＬに溶解させた。Ｐｄ／Ｃ（９０ｍｇ）を加え、Ｎ２置換後、Ｈ２置換した。２５時間後、反応の終了をＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＣＯＯＨ＝９５：５）で確認し、反応液をグラスファイバーろ紙でろ過した。溶媒を留去し、残渣をＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：２、１０ｍＬ）に溶解させ、０℃に冷却した。塩化アクリロイル（１７６μＬ）とＫ２ＣＯ３（６０１ｍｇ）を加え、５分間、０℃で攪拌した後、室温へ昇温した。１２時間攪拌した後にＴＬＣ（Ｈ２Ｏ：ＣＨ３ＣＯＯＨ＝９５：５）で反応の終了を確認し、１規定塩酸で中和した。逆相カラム（Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ＝９：１）で精製し、溶媒を減圧留去した後、残渣をＨ２Ｏに溶解させ、凍結乾燥して（２１）を得た。収量：１．０７ｇ（収率：＞９９％）
【００４７】
【化９】
2012250168.tif 000010
【００４８】
（合成例５）：Ｐｏｌｙ（ａｃｒｙｌａｍｉｄｏｐｈｅｎｙｌ−６−ｓｕｌｆｏ−ＧｌｃＮＡｃ−ｃｏ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）（２２）の合成
シュレンク管を吸引しながらヒートガンで熱し、水分を除去した。吸引しながら室温まで下げた。ＤＭＦに溶解した合成例１で得られたモノマー（９）とアクリルアミドをシュレンク管に入れ、Ｎ２でバブリングした。ＡＡＰＤを加え、吸引後、Ｎ２充填した。オイルバス（６０℃）で、下記表に記載の反応時間攪拌した。反応終了後、開封しパスツールピペットで空気を入れ反応を止めた。反応液をアセトンに加え、沈殿物を得た。遠心分離機で沈殿させた後、上澄みをパスツールピペットで取り除いた。残渣をＨ２Ｏに溶解し、透析を行った。透析液を凍結乾燥して、目的物を得た。なお、共重合は下表の比率で行い、ポリマー（２２）を得た。
【００４９】
【表１】
2012250168.tif 000011
【００５０】
（合成例６）：３Ｓ−ＧｌｃＮＡｃポリマー：Ｐｏｌｙ（ａｃｒｙｌａｍｉｄｏｐｈｅｎｙｌ−３−ｓｕｌｆｏ−ＧｌｃＮＡｃ−ｃｏ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）（２３）の合成
合成例５における、合成例１で得られたモノマー（９）の替わりに合成例２で得られたモノマー（１３）を用いる他は、合成例５と同様にして、ポリマー（２３）を得た。なお、共重合は下表の比率で行った。
【００５１】
【表２】
2012250168.tif 000012
【００５２】
（合成例７）４Ｓ−ＧｌｃＮＡｃポリマー：Ｐｏｌｙ（ａｃｒｙｌａｍｉｄｏｐｈｅｎｙｌ−４−ｓｕｌｆｏ−ＧｌｃＮＡｃ−ｃｏ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）（２３）の合成
合成例５における、合成例１で得られたモノマー（９）の替わりに合成例３で得られたモノマー（１９）を用いる他は、合成例５と同様にして、ポリマー（２４）を得た。なお、共重合は下表の比率で行った。
【００５３】
【表３】
2012250168.tif 000013
【００５４】
（合成例８）３，４，６Ｓ−ＧｌｃＮＡｃポリマー：Ｐｏｌｙ（ａｃｒｙｌａｍｉｄｏｐｈｅｎｙｌ−３，４，６−ｓｕｌｆｏ−ＧｌｃＮＡｃ−ｃｏ−ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）（２５）の合成
合成例５における、合成例１で得られたモノマー（９）の替わりに合成例４で得られたモノマー（２１）を用いる他は、合成例５と同様にして、ポリマー（２５）を得た。なお、共重合は下表の比率で行った。
【００５５】
【表４】
2012250168.tif 000014
【００５６】
（実施例）＜Ｅ２吸着能（Ｅ２吸着阻害活性）＞
ヘパリン固定化プレート（ＢＤ社製）にヘパリン２５μｇ／ｍＬ、１００μＬをプレートのウエルに分注する。４℃で一晩放置し、０．１％ツイーン２０−ＰＢＳ４００μＬで３回洗浄する。１％ＢＳＡ−ＰＢＳ  ２００μＬをウエルに分注し、室温で１時間放置する。０．１％ツイーン２０−ＰＢＳ４００μＬで３回洗浄する。次に、適宜希釈した硫酸化糖ポリマー液と５μｇ／ｍＬ  ＨＣＶ  Ｅ２蛋白質（Ｈｉｓ−ｔａｇ）（Ａｂｃａｍ製）液を等量混合し、室温で１時間放置したものをウエルに１００μＬ分注し、室温で１時間攪拌する。０．１％ツイーン２０−ＰＢＳ４００μＬで３回洗浄する。ペルオキシダーゼ標識化抗Ｈｉｓ−ｔａｇ抗体溶液（Ｒｏｃｈｅ製）をウエルに１００μＬ分注し、室温で１時間攪拌する。０．１％ツイーン２０−ＰＢＳ４００μＬで３回洗浄する。ＴＭＢ基質液（ＰＩＥＲＣＥ社）をウエルに１００μＬ分注し、室温で１０分間攪拌する。０．５ｍｏｌ／Ｌ硫酸をウエルに１００μＬ添加して、４５０ｎｍで吸光度を測定する。硫酸化糖ポリマー液の代わりにＰＢＳとＨＣＶ  Ｅ２蛋白質（Ｈｉｓ−ｔａｇ）溶液を混合したものを同様に測定する。下記の式から硫酸化糖ポリマーがＨＣＶ  Ｅ２蛋白質（Ｈｉｓ−ｔａｇ）の吸着を阻害した割合を算出する。さらに、５０％阻害した濃度からＥ２吸着阻害活性を算出する（ＩＣ５０μｇ／ｍＬ）。なお、この値は小さいほど硫酸化高分子のＥ２結合能が高い。作製したポリマーのＥ２吸着能を測定した結果、３，４，６Ｓ−ＧｌｃＮＡｃポリマーはＥ２と強い相互作用を有していた。
Ｅ２吸着阻害活性（％）＝１００−（硫酸化糖ポリマー液＋ＨＣＶ  Ｅ２蛋白質（Ｈｉｓ−ｔａｇ）液）の吸光度／ＨＣＶＥ２蛋白質（Ｈｉｓ−ｔａｇ）液の吸光度）×１００
結果を、表５に示す。
【００５７】
【表５】
2012250168.tif 000015
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明の糖類が固定化された高分子化合物は、ウイルス捕捉高分子として利用が可能である。