(57)【要約】      （修正有）【課題】阿波番茶を有効活用し、抗アレルギー性を持つ新たな組成物等を提供する。【解決手段】阿波番茶から抽出された抽出物と、桑茶から抽出された抽出物とを混合することにより、阿波番茶単独投与の場合、桑茶単独投与の場合と比較して、ヒスタミン受容体Ｈ１遺伝子発現が有意に抑制されることが見出された。両抽出物を混合投与することによる、阿波番茶を有効活用できる抗アレルギー組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
阿波番茶からの抽出物と、桑茶からの抽出物とを含む
ことを特徴とする抗アレルギー組成物。
【請求項２】
前記阿波番茶からの抽出物、及び、前記桑茶からの抽出物は、
いずれも熱水により抽出されたものである
ことを特徴とする請求項１に記載の抗アレルギー組成物。
【請求項３】
前記阿波番茶からの抽出物と、前記桑茶からの抽出物との比率は、阿波番茶１：桑茶１〜阿波番茶１：桑茶４であることを特徴とする請求項１又は２に記載の抗アレルギー組成物。
【請求項４】
阿波番茶からの抽出物と、桑茶からの抽出物とを含む
ことを特徴とする抗アレルギー物質セット。
【請求項５】
前記阿波番茶からの抽出物、及び、前記桑茶からの抽出物は、
いずれも熱水により抽出されたものである
ことを特徴とする請求項４に記載の抗アレルギー物質セット。
【請求項６】
阿波番茶から熱水により抽出物を得る工程と、
桑茶から熱水により抽出物を得る工程とを含む
ことを特徴とする抗アレルギー組成物の製造方法。
【請求項７】
阿波番茶から熱水により抽出物を得る工程と、
桑茶から熱水により抽出物を得る工程とを含む
ことを特徴とする抗アレルギー物質セットの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗アレルギー組成物、抗アレルギー物質セット、及び抗アレルギー物質セットの製造方法に関し、特に、阿波番茶からの抽出物を含む抗アレルギー組成物、抗アレルギー物質セット、及び抗アレルギー物質セットの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
魚腥草と徳利苺の実の抽出物及びそれらを含む組成物を用いたアレルギー疾患の予防及び治療について、特許文献１に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２００７−５２６９１４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
徳島県には、阿波番茶というお茶がある。阿波番茶は、いわゆる「後発酵茶」であり、まず、茶葉を釜でゆでる。その後、お茶の葉を木桶に詰めて上に石を載せて「漬け物」状態とする。こうすると、茶葉についていた自然の乳酸菌の働きで、普通の漬け物と同じく乳酸発酵する。１０日から半月程度漬けた後、天日で乾燥させて、阿波番茶が完成する。もっとも、阿波番茶の、単なる飲用以外の用途については、まだまだ探求の余地が残されている。
【０００５】
本発明は、上記の点に鑑みてなされたものであって、特に、阿波番茶を有効活用できる新たな抗アレルギー組成物、抗アレルギー物質セット、及び抗アレルギー物質セットの製造方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記の問題点を解決するために、本発明に係る抗アレルギー組成物は、阿波番茶からの抽出物と、桑茶からの抽出物とを含むことを特徴としている。
【０００７】
本願発明者は、鋭意検討した結果、阿波番茶からの抽出物と、桑茶からの抽出物とを混合投与することにより、阿波番茶単独の場合や、桑茶単独の場合と比較して有意な抗アレルギー活性を示すことを見出した。
【０００８】
ここで、阿波番茶からの抽出物、桑茶からの抽出物としては、ともに熱水を用いて抽出した抽出物を用いることができる。このような相乗効果を奏する有効成分、作用機序については、本願発明者らは鋭意検討中であるが、エタノール等のアルコールで抽出した抽出物を用いることも考えられるところである。なお、このような相乗効果が実現される理由についても、鋭意検討を進めているところであるが、両者は、必ずしも「混合投与」する必要はなく、所定の時間間隔をあけて投与するような形態も可能である。即ち、本発明に係る抗アレルギー物質セットは、阿波番茶からの抽出物と、桑茶からの抽出物とを含むことを特徴としている。例えば、両者の粉末を分けて分封としたり、両者の溶液を分けてアンプルとしたり、といった形態が考えられる。
【０００９】
また、本発明に係る抗アレルギー物質セットの製造方法は、阿波番茶から熱水により抽出物を得る工程と、桑茶から熱水により抽出物を得る工程とを含むことを特徴としている。
【発明の効果】
【００１０】
本発明に係る抗アレルギー組成物等によると、阿波番茶を有効活用でき、新たな抗アレルギー組成物が提供されるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】桑茶０．５ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔ、阿波番茶０．５ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔを混合投与（ｍｉｘ１）の抗アレルギー活性について説明するための図である。
【図２】図１の具体的な数値を示す図である。
【図３】桑茶２．０ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔ、阿波番茶０．５ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔを混合投与（ｍｉｘ２）の抗アレルギー活性について説明するための図である。
【図４】図３の具体的な数値を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
（１）阿波番茶抽出物の調製
阿波番茶の茶葉（茶葉としては、上勝番茶、若しくは那賀町番茶を用いた。）１０ｇを９０℃の熱水１０００ｍｌで５分間抽出し、熱時ろ過後冷却した。その抽出液を真空凍結乾燥し、抽出物を得た。
【００１３】
（２）桑茶抽出物の調製
桑茶の茶葉（茶葉としては、山桑茶と川桑茶との混合物を用いた。）１０ｇを９０℃の熱水１０００ｍｌで５分間抽出し、熱時ろ過後冷却した。その抽出液を真空凍結乾燥し、抽出物を得た。
【００１４】
（３）アレルギーモデルラットの作成
６週齢のBrown−Norway系雄性ラットの両側鼻前庭に極細耳鼻用綿棒を用い、１０μｌの１０％toluene  ２，４−diisocyanate（ＴＤＩ）−酢酸エチル溶液を１日１回連日５日間×２回塗布し（ＴＤＩ感作）、その後１週間無処置期間をおいた上で１０％ＴＤＩ溶液の鼻前庭塗布にて誘発した（ＴＤＩ誘発）。各抽出物は１日１回ＴＤＩ感作の１時間前にラット１匹につき以下の各サンプルに示す量を水に溶解して２ｍｌにし、３週間連日投与した。
【００１５】
（４）テストに用いたサンプルの種類
（Ａ）桑茶抽出物０．５ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔ
（Ｂ）桑茶抽出物２．０ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔ
（Ｃ）阿波番茶抽出物０．５ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔ
（Ｄ）桑茶０．５ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔ、阿波番茶０．５ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔを混合投与（ｍｉｘ１）
（Ｅ）桑茶２．０ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔ、阿波番茶０．５ｍｇ／ｄａｙ／ｒａｔを混合投与（ｍｉｘ２）
なお、何も加えていないもの（コントロール）は、サンプルＦとする。
【００１６】
（５）鼻粘膜採取
ＴＤＩ誘発の４時間後に断頭し、鼻粘膜を採取して１００μｌのＲＮＡｌａｔｅｒ中に入れて−８０℃で保存し、その後、ｔｏｔａｌＲＮＡを抽出して逆転写反応を行った。
【００１７】
なお、ｔｏｔａｌＲＮＡの抽出は、以下のようにして行った。
即ち、ＰＢＳ（−）で数回洗浄した後、０．７ｍｌＲＮＡｉｓｏを加え、かきとった。ＲＮＡｉｓｏの０．３倍量のクロロホルムを加え、１５秒間強く振盪し二層に分離させた後、１５，０００ｒｐｍ、４℃で１５分、遠心した。ＲＮＡを含む上層を採取し、上層と同量のイソプロパノールを加え１５秒間強く振盪し室温で５分間放置したものを１５，０００ｒｐｍ、４℃で１０分遠心するとＲＮＡのペレットが得られた。
【００１８】
これを７５％エタノール（−２０℃）、５００μＬで洗浄するためｖｏｒｔｅｘして１０分室温で放置した。１５，０００ｒｐｍ、４℃で１０分、遠心した後、得られたペレットに２０μｌ  diethylpyrocarbonate (DEPC)水を加えＲＮＡ  ｓｏｌｕｔｉｏｎとした。これをNanoDrop ＮＤ−１０００ (NanoDrop  Technologies，  Wilmington，  DE，  USA)により波長２６０ｎｍ、２８０ｎｍで吸光度測定し、２６０ｎｍの吸光度と2つの波長の比による検定で、それぞれｔｏｔａｌＲＮＡ濃度と純度を測定した。
【００１９】
逆転写は、以下のようにして行った。
即ち、サンプルチューブにｔｏｔａｌＲＮＡ２μｇ相当のＲＮＡ  ｓｏｌｕｔｉｏｎになるようＤＥＰＣ水を加えて全量を１０μｌとした。High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits
(Applied Biosystems)を用いてサーマルサイクラーで逆転写反応を行い、ｃＤＮＡに変換した。
【００２０】
逆転写後、２種類のプライマーとＴａｑＭａｎプローブを用いてリアルタイムＰＣＲ反応を行った。より具体的な方法は、以下の通りである。
即ち、２種類のプライマーとＴａｑＭａｎプローブを用いてSequence  Detector  （GeneAmp 7300 Sequence
Detection System、Applied
Biosystems）にてＰＣＲ反応を行った。ＰＣＲ産物の増幅曲線をリアルタイムで検出し、Sequence  Detectionソフトウェアを用いて解析、定量化した。
【００２１】
また定量的ＲＴ−ＰＣＲの主な変動の要因であるＲＮＡの純度や逆転写効率の差を補正する内部標準として、細胞の活性化あるいは増殖といった環境条件に伴う発現の変動が理論上なく、常に一定レベルで発現していると考えられているハウスキーピング遺伝子のＧＡＰＤＨ（Glycelaldehyde-3-phosphate
dehydrogenase）遺伝子に特異的なＴａｑＭａｎプローブとプライマー（TaqMan rodent GAPDH Control Reagents）を用いた。
【００２２】
図１、図２、図３、図４は、それぞれ、ヒスタミンＨ１受容体（Ｈ１Ｒ）遺伝子発現の様子を示す図である。（図１はグラフであり、図２は、図１の具体的な数値を示す図、図３はグラフであり、図４は、図３の具体的な数値を示す図である。）
【００２３】
ヒスタミンＨ１受容体（Ｈ１Ｒ）は、アレルギー疾患の主要メディエーターであり、標的細胞のヒスタミンＨ１受容体を介して主要な症状が発現される。
【００２４】
図１中、ＴＤＩはコントロール（サンプルＦ）、図１における「桑」はサンプルＡ、「阿波番茶」はサンプルＣ、ｍｉｘ１は、サンプルＤ、を、それぞれ投与した結果を示す。
【００２５】
また、図２中、ＴＤＩはコントロール（サンプルＦ）、図２における「桑」はサンプルＢ、「阿波番茶」はサンプルＣ、ｍｉｘ１は、サンプルＥ、を、それぞれ投与した結果を示す。
【００２６】
両図に示されるように、桑茶抽出物と、阿波番茶抽出物とを混合投与（サンプルＤ及びサンプルＥ）することにより、ヒスタミンＨ１受容体の遺伝子発現を有意に抑制した。
【００２７】
なお、上記実施の形態に例示される阿波番茶からの抽出物と、桑茶の抽出物とは、必ずしも、投与前に混合されている必要はなく、両者を分けて販売等してもよく、例えば、両者の粉末を分けて分封としたり、両者の溶液を分けてアンプルとしたり、といった形態も考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
本発明は、例えば、抗アレルギー組成物に適用することができる。
【図１】
2012153613.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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