(57)【要約】【課題】新規且つ有効な抗シワ剤を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）抑制剤、及び／又はラミニン５産生促進剤、並びに抗シワ剤に関する。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の１−ピペリジンプロピオン酸
【化１】
2012240911.tif 000016
及び／又はその塩からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）抑制剤及び／又はラミニン５産生促進剤。
【請求項２】
前記ＭＭＰがＭＭＰ２及び／又はＭＭＰ９である、請求項１に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）抑制剤及び／又はラミニン５産生促進剤。
【請求項３】
１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩からなる、抗シワ剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩からなる、抗シワ剤、より具体的には、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）抑制剤及び／又はラミニン５産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
人類を始めとする様々な動物の身体全体を覆う皮膚は、日光、乾燥、酸化、環境によるストレスなどの外的因子及び加齢によるシワの形成、硬化、しみ、くすみ、弾力性の低下等の変化に曝されている。ここで、皮膚は大きく分けて、表皮と真皮の二つの層から構成されている。表皮と真皮の間には基底膜と呼ばれる薄くて繊細な膜が存在する。表皮の代謝は、この基底膜を通して真皮の細胞が産生する因子や血液供給に依存している。皮膚における表皮の増殖と分化は、基底膜と真皮の影響を受けている。したがって、基底膜を介しての表皮・真皮間のコミュニケーションは、皮膚表皮の機能調節にとって重要な役割を担っている。
【０００３】
皮膚基底膜にはアンカリング複合体と呼ばれる特殊な構造があり、表皮と真皮という２つの組織の接着やコミュニケーションを安定させる役割を果たしている。アンカリング複合体のタンパク質は、ケラチノサイトの細胞骨格であるケラチンと真皮乳頭層の結合組織タンパク質の双方にリンクしている。アンカリング複合体の重要な構成要素の一つがラミニン５である（Rousselle et al., J Cell Biol. 1991 Aug;114(3):567-76）。
【０００４】
ラミニン５は、α３、β３及びγ２鎖からなるタンパク質であり、真皮乳頭層に接続しているアンカリング線維を形成するＶＩＩ型コラーゲンと直接結合するだけでなく、更に他のラミニン６や７と複合体を形成し、この複合体がナイドジェンを介して基底膜の骨格であるＩＶ型コラーゲンと結合することが報告されている。
【０００５】
上記複合体を構成するＩＶ型コラーゲンの発現レベルは、加齢と共に低下することが観察されており(Vazquez F et al., Maturitas 1996, 25: 209-215)、ラミニン５が結合するＶＩＩ型コラーゲンに関しても、高齢者由来の皮膚線維芽細胞では若い人由来の皮膚線維芽細胞に比べて、蛋白質レベルおよびｍＲＮＡレベルで産生能が低下するとの報告(Chen et al., J. Invest. Dermatol., 1994, 102: 205-209)がある。また、ＶＩＩ型コラーゲンにより構成されるアンカリング線維は、正常皮膚において生理的老化および光老化に伴い減少するとの報告（辻卓夫、日皮会誌，１９９５，１０５：９６３−９７５，Tidman et al., J. Invest Dermatol., 1984, 83: 448-453）もある。これらの個々の構成成分の特徴に加え、基底膜自体も皮膚老化に伴い多重化、断裂などの構造以上を示すことが知られており(Lavker et al., J. Invest. Dermatol. 1979 73: 59-66)、この構造変化の結果、シワ、たるみなどの老徴の発現、老化に伴う皮膚機能低下が生じるものと思われる。したがって、基底膜骨格を構成するコラーゲンと共に、ラミニン５の産生を促進することは、基底膜の構造を良好な状態に保ち、シワ形成などの皮膚老化を防ぐ上で極めて重要であると考えられる。
【０００６】
皮膚老化の防止の中でも抗シワは主要な問題の１つである。ここで、シワは大別すると溝の浅い「表皮ジワ」（小ジワ）と溝の深い「真皮ジワ」（大ジワ）に分類されるが、特に真皮ジワは基底膜の変化によるとともに、真皮層が変性・陥没して生じるため、この理由からも基底膜の維持は重要であると考えられる。
【０００７】
真皮は結合組織からなり、細胞外空間は、主に細胞外マトリックス（ＥＣＭ：extracellular matrix）と呼ばれる巨大分子の網目構造により満たされている。ＥＣＭは、繊維性タンパク質（コラーゲン、エラスチン等）や、細胞接着性タンパク質（グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、フィブロネクチン、ラミニン等）からなり、これらの構造により、真皮は皮膚の弾力、張りなどに大きく影響している。
【０００８】
上述の皮膚の変化を生じさせる因子として、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の関与が報告されている。ＭＭＰは、細胞外マトリックスタンパク質を主な基質とする一群のプロテアーゼの総称である。ＭＭＰには、多くの種類が知られており、構造的、機能的特徴に共通点を有してはいるが、それぞれの基質タンパク質が異なる（宮崎香、１９９６，生化学６８巻１２号：１７９１−１８０７）。
【０００９】
例えば、ＭＭＰ１は、ＥＭＣの構成成分であるＩ型及びＩＩＩ型コラーゲンを分解し、ゼラチナーゼ群に属するＭＭＰ２及びＭＭＰ９は、基底膜成分であるラミニンやＩＶ型コラーゲン、ＥＭＣ成分であるエラスチン等を分解し、そしてストロメライシン群に属するＭＭＰ３及びＭＭＰ１０は、プロテオグリカンやＩＶ型コラーゲン、ラミニン等を分解する酵素として知られている。皮膚の繊維芽細胞に中波領域の紫外線（ＵＶＢ）を照射すると、このＭＭＰのｍＲＮＡ発現、酵素活性、タンパク質分解レベルが上昇することが報告されており（Fisher G. J. et al., Nature, 1996, 379, 335-339）、紫外線によるＥＭＣの減少変性の原因の一つと考えられている。
【００１０】
したがって、ＭＭＰを阻害することで、真皮及び基底膜の構成成分を維持し、ひいてはシワ形成を抑制することができると考えられる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Rousselle et al., J Cell Biol. 1991 Aug;114(3):567-76
【非特許文献２】Vazquez F et al., Maturitas 1996, 25: 209-215
【非特許文献３】Chen et al., J. Invest. Dermatol., 1994, 102: 205-209
【非特許文献４】辻卓夫、日皮会誌，１９９５，１０５：９６３−９７５
【非特許文献５】Tidman et al., J. Invest Dermatol., 1984, 83: 448-453
【非特許文献６】Lavker et al., J. Invest. Dermatol. 1979, 73: 59-66
【非特許文献７】宮崎香、１９９６，生化学６８巻１２号：１７９１−１８０７
【非特許文献８】Fisher G. J. et al., Nature, 1996, 379, 335-339
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、皮膚、特に基底膜と真皮のシワ形成メカニズムにおけるＭＭＰ及びラミニン５の機能に着目し、新規且つ有効な抗シワ剤、より具体的にはＭＭＰ抑制剤及び／又はラミニン５産生促進剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者は、上記課題を解決するために、表皮、真皮、及び基底膜における様々な因子とそれが引き起こす作用について検討を重ねた結果、表皮のダメージに関与することが知られていた扁平上皮細胞癌関連抗原（ＳＣＣＡ１：Squamous Cell Carcinoma Antigen 1）の産生を抑制することにより、真皮及び基底膜においてシワ形成に影響を及ぼす因子であるＭＭＰの抑制、及び／又はラミニン５の産生促進が可能であることを初めて見出した。
【００１４】
したがって、ＳＣＣＡ１の産生を抑制する１−ピペリジンプロピオン酸が、ＭＭＰ抑制活性及び／又はラミニン５産生促進活性を有すると考え、本発明を完成するに至った。
【００１５】
すなわち、本発明は以下の発明を包含する。
【００１６】
［１］一般式（Ｉ）の１−ピペリジンプロピオン酸
【化１】
2012240911.tif 000003
及び／又はその塩を含有するＳＣＣＡ１産生抑制剤からなる、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）抑制剤及び／又はラミニン５産生促進剤。
［２］前記ＭＭＰがＭＭＰ２及び／又はＭＭＰ９である、［１］に記載のマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）抑制剤及び／又はラミニン５産生促進剤。
［３］１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩からなる、抗シワ剤。
【発明の効果】
【００１７】
本発明により、新規且つ有効なマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）抑制剤及び／又はラミニン５産生促進剤、さらには抗シワ剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、女性のライフステージとＳＣＣＡ１発現の関係を示すグラフを示す。
【図２】図２はＳＣＣＡ１高発現細胞の確立手段を示す。
【図３】図３はＳＣＣＡ１低発現細胞の確立手段を示す。
【図４】図４は、実施例１の実験方法を模式的に示す。
【図５】図５は、ＳＣＣＡ１がＭＭＰ２及びＭＭＰ９に及ぼす影響を示す。
【図６】図６は、ＳＣＣＡ１がコラーゲン産生に及ぼす影響を示す。
【図７】図７は、ＳＣＣＡ１がラミニン５産生に及ぼす影響を示す。
【図８】図８は、ヒト線維芽細胞へのｒＳＣＣＡ１添加によるＭＭＰ発現の変動を示す。
【図９】図９は、細胞系における、１−ピペリジンプロピオン酸添加の有無によるラミニン５の遺伝子発現量の比較を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
ＳＣＣＡ１とは、もともと、扁平上皮癌細胞で発見された抗原であり、子宮頸部、胚、食道、皮膚の扁平上皮細胞癌で高い血中濃度を示し、扁平上皮細胞癌の診断に利用されている（H. Kato et al., Cancer, 1997, 40; 1621-1628、N. Mno et al., Cancer, 1998, 62; 730-734）。
【００２０】
これまで本発明者等は、表皮におけるＳＣＣＡ１の作用について研究を行ってきた。本発明者等により、乾癬表皮の上層においてＳＣＣＡ１発現の亢進が認められること（Takeda A. et al、J. Invest. Dermatol., 2002, 118(1), 147-154）、ＳＣＣＡ１は細胞のアポトーシス抑制作用を有する抗アポトーシス因子であること（特開２００５−２８１１４０）、ＳＣＣＡ１の発現を指標とする肌の感受性評価を目的とする研究を行ったところ、コントロールと比較して、アトピー性乾燥皮膚では１６倍、露光部皮膚では９０倍、花粉症アレルギー性皮膚では２３２倍、乾癬皮膚では４６６倍もＳＣＣＡ１の発現が亢進していることが報告されている（特開２００７−２７９０２４）。
【００２１】
さらに本発明者等は、ＳＣＣＡ高発現マウスにおいて細胞増殖の活性化、表皮肥厚が見られること、ＳＣＣＡ１高発現細胞株において、細胞増殖とＳＣＣＡ１発現量に相関性があること、及びＳＣＣＡノックダウン細胞株において細胞増殖活性が低下することを見出した。そして、本発明者は、多種多様な薬物スクリーニングにより、１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩が、ＳＣＣＡ１産生を有意に抑制すること、さらに、表皮肥厚を予防、改善できること報告している（特開２００９−２４２３４５）。
【００２２】
また本発明者等は、女性のライフステージにおいてＳＣＣＡ１発現量が変化することも見出している。この研究では、女性の年代を、以下の５つのステージ：幼年期（２〜９歳）、思春期（１０〜１９歳：初潮を迎えた人）、成人期（２０〜４４歳：規則正しい性周期であり、且つ妊娠・授乳中でない人）、更年期（４５〜５９歳：更年期症状を有し、且つ妊娠・授乳中でない人）、及び閉経後（６０〜９０歳：閉経した人）に分けてＳＣＣＡ１の発現量を測定したところ、更年期以降、顕著にＳＣＣＡ１発現量が増加することがわかった（図１）。
【００２３】
ＳＣＣＡ１とＭＭＰとの関係については、K. Sueoka等が、子宮頸癌細胞を用いた研究を報告している。この研究によると、ＳＣＣＡ１を子宮頸癌細胞に直接作用させた結果、ＭＭＰ９の発現量は増加したが、ＭＭＰ２の発現量については影響がなかったことが記載されている（K. Sueoka et al., International Jornal of Oncology,2005, 27: 1345-1353）。これは、表皮細胞においてＳＣＣＡ１発現を亢進させた場合に、真皮におけるＭＭＰ２の発現が亢進したという本発明者等の実験結果とは一致しない。また、本発明者等は、線維芽細胞にｒＳＣＣＡ１を直接作用させたところ、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９及びＭＭＰ１０の発現が亢進することを初めて確認した（実施例２を参照されたい）。
【００２４】
すなわち、本発明の１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩を含有するＳＣＣＡ１産生抑制剤からなる、ＭＭＰ抑制剤及び／又はラミニン５産生促進剤は、ＭＰＰの存在に起因するシワ及び／又はラミニン５欠如によるシワを予防及び／又は改善することのできる抗シワ剤として利用することができる。
【００２５】
本発明に係る１−ピペリジンプロピオン酸は以下の一般式（Ｉ）の化合物である。
【００２６】
【化２】
2012240911.tif 000004
【００２７】
本発明に係る一般式（Ｉ）で示される１−ピペリジンプロピオン酸は公知の物質であり、公知の方法により容易に合成することができ、または市販品を容易に購入することができる。
【００２８】
また、本発明に係る一般式（Ｉ）で示される１−ピペリジンプロピオン酸は公知の方法により無機塩又は有機塩とすることができる。本発明において用いられる塩としては、特に限定されないが、例えば、無機塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、臭化水素酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。有機塩としては、酢酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、トリエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、アミノ酸塩等が挙げられる。
【００２９】
本発明の抗シワ剤、ＭＭＰ抑制剤、及び／又はラミニン５産生促進剤は、１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩を含んでなる。この抗シワ剤、ＭＭＰ抑制剤、及び／又はラミニン５産生促進剤には、抗シワ活性、ＭＭＰ抑制活性、及び／又はラミニン５産生促進活性を発揮するために有効な量の１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩が含有され、その含有量は、組成物中０．０００１〜２０質量％が好ましく、さらに好ましくは０．０００５〜１０質量％であり、特に好ましくは０．００１〜５質量％である。０．０００１質量％未満では効果が十分に発揮されず、一方、２０質量％を超えて含有させてもさほど大きな効果の向上は認められず、また製剤化に困難をきたすことがある。
【００３０】
本発明の抗シワ剤、ＭＭＰ抑制剤、及び／又はラミニン５産生促進剤を、例えばシワ改善剤として使用する場合、１−ピペリジンプロピオン酸及び／又はその塩以外に、本発明の効果を損なわない範囲で、通常化粧品や外用剤等に用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、希釈剤、各種皮膚栄養剤、色素、香料、アルコール類、水性成分、油性成分、水、粉末等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００３１】
さらに、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属キレート剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸及びその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸及びその誘導体、又はその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール等の糖類、レチノイン酸、レチノール、レチノール酢酸、レチノールパルミチン酸等のビタミンＡ誘導体なども適宜配合できる。
【００３２】
皮膚外用剤の剤型は特に限定されるものではない。例えば、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水−油二相系、水−油−粉末三相系、固形、軟膏、ゲル、エアロゾル、ムース、ミスト、スプレー、パッチ、貼付ゲル等、任意の剤型を適用できる。また、その使用態様も任意であり、例えば、ローション、乳液、クリーム、パック、美容液等の基礎化粧料や、ファンデーション等のメーキャップ化粧料、日焼け止め剤等の機能性化粧料、毛髪用化粧料、芳香化粧料、浴用剤等とすることができ、これらに限定されるものではない。
【００３３】
以下、具体例を挙げて本発明を説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。
【実施例１】
【００３４】
ＳＣＣＡ１発現量の基底膜及び真皮に与える影響の検討：
ＳＣＣＡ１の高発現細胞と低発現細胞を用意し（特開２００９−２４２３４５に記載の方法により作製、図２及び３も参照されたい）、ＤＭＥＭ−１０％ＦＢＳ培地で２４時間培養し、その後、各々のヒト線維芽細胞（１×１０5細胞／ウェル）に培地を添加し、２４時間培養した（図４）。その後、ＲＮＡを採取し、定量的ＰＣＲを用いてＭＭＰ２、ＭＭＰ９、コラーゲン（Ｉ型コラーゲンα２鎖、ＩＩＩ型コラーゲンα１鎖、ＩＶ型コラーゲンα１鎖、ＩＶ型コラーゲンα２鎖、ＶＩＩ型コラーゲンα１鎖）、ラミニン５（ラミニン５α３鎖）の遺伝子発現量を測定した（内部標準はＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド３リン酸脱水酵素）を使用）。その結果を図５（ＭＭＰ２及びＭＭＰ９）、図６（コラーゲン）及び図７（ラミニン５）に示す。
【００３５】
結果：
１）表皮細胞においてＳＣＣＡ１が高発現している系では、真皮のＭＭＰ２及びＭＭＰ９の産生が亢進され、逆にＳＣＣＡ１発現をノックダウンした場合は（ＳＣＣＡ１低発現系）、真皮でＭＭＰ２及びＭＭＰ９の産生が抑制された。
２）表皮細胞においてＳＣＣＡ１が高発現している系では、ラミニン５α３鎖の産生が抑制され、逆にＳＣＡＡ−１発現をノックダウンした場合は、真皮でラミニン５α３鎖の産生が亢進された。
３）コラーゲンの産生について、ＳＣＣＡ１の発現量の影響は観察されなかった。
【実施例２】
【００３６】
ヒト線維芽細胞へのｒＳＣＣＡ１添加によるＭＭＰの発現：
１．細胞
細胞は、ヒト線維芽細胞（#HDF342 P5100709）を用いた。細胞は、６ウェルプレートに１ウェルあたり２.０×１０5個となるように播種し、ダルベッコ変法イーグル(ＤＭＥＭ)培地（日水製薬株式会社）に１０％ＦＢＳを添加した培地を用いて、３７℃、５％ＣＯ２及び飽和水蒸気雰囲気下で２４時間培養した。その後１０％ＦＢＳを含まないＤＭＥＭ培地へ置換、さらに２４時間培養した。
【００３７】
２．ｒＳＣＣＡ１の添加
その後、細胞を、ｒＳＣＣＡ１(2010/7/20作成)を０μＭ〜２.０μＭ添加した培地に置換し、２４時間培養した。
【００３８】
３．ＲＮＡ抽出・ｃＤＮＡ合成
１ウェル当り２ｍｌ ＰＢＳで２回洗浄後、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン）１ｍＬを加えて回収した。マニュアルに従いＲＮＡを抽出し、その濃度と２６０ｎｍ／２８０ｎｍ ＯＤ比をＮａｎｏＤｒｏｐで確認した。トータルＲＮＡ溶液をＲＮａｓｅフリー水で１５０ｎｇ／μＬに調整し、２０μＬ(４μｇ)を５０μＭ ランダムプライマー（ＴＡＫＡＲＡ）と２ｍＭ ｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ（ＴＯＹＯＢＯ）、５×Ｆｉｒｓｔ ｓｔｒａｎｄ ｂｕｆｆｅｒ（Ｉｎｂｉｔｒｏｇｅｎ）、０．１Ｍ ＤＴＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩ(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ)、ＲＮａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により全反応量８０μＬとして逆転写反応した。
【００３９】
４．定量ＰＣＲ
ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ ＦａｓｔＳｔａｒｔ ＤＮＡ ＭａｓｔｅｒＰｌｕｓ ＳＹＢＥＲ Ｇｒｅｅｎ１（Ｒｏｃｈｅ  Ｃａｔ．Ｎｏ.０３ ５１５ ８８５ ００１）を用い、上記に従って調製したｃＤＮＡ ４μＬ、フォワード側及びリバース側プライマー（下記参照）各０．８μＭ（終濃度）、Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ５μＬに水を加えて全量２５μＬとした反応液を調製し、ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅr Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖｅｒ．３．５(Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ)により定量ＰＣＲを行った。反応は９５℃−１５分、（９５℃−１５秒→６５℃−２０秒→７２℃−２０秒）×４５サイクルを終了した後、９５℃から６２℃の融解曲線解析を行った。用いたプライマーは下記配列の通りである。プライマーは、ＭＭＰ１、エラスチン、及びラミニン５α３は市販品を使用し、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、及びＭＭＰ１０は本発明者等が作製したものである。各ｃＤＮＡ検体の遺伝子のサイクル数を求め、ｒＳＣＣＡ１(２．０μＭ）をスタンダードとした検量線を用いて値を算出した。また各ｃＤＮＡ検体の酸で得られたＧＡＰＤＨ値で補正したものを同一条件検体の平均±ＳＥで表した。群間の有意差はスチューデントのｔ検定で検定した。
【００４０】
調べた皮膚関連因子、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ９、及びＭＭＰ１０のうち、ＭＭＰ２及びＭＭＰ９については、ヒト線維芽細胞へのｒＳＣＣＡ１添加によって発現量が有意に増加した（図６）。
【００４１】
ＧＡＰＤＨ
フォワード（hGAP69F） 5’- GGTGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGCG -3’（配列番号１）
リバース（hGAP206R） 5’- TATTGGAACATGTAAACCATGTAGTTGAGG -3’（配列番号２）
ＭＭＰ１
フォワード   5’- GACTTCTACCCATTTGATGG -3’（配列番号３）
リバース   5’- TTAGGGTTGGGGTCTTCATC -3’（配列番号４）
ＭＭＰ２
フォワード   5’- ACTCCTGAGATCTGCAAACAGGA -3’（配列番号５）
リバース   5’- ACACCTGCAAAGAACACAGCC -3’（配列番号６）
ＭＭＰ３
フォワード   5’- GACTCGGTTCCGCCTGTCT -3’（配列番号７）
リバース   5’- CGCCTGAAGGAAGAGATGGC -3’（配列番号８）
ＭＭＰ９
フォワード   5’- TGGGCAAGGGCGTCGTGGTTC -3’（配列番号９）
リバース   5’- TGGTGCAGGCGGAGTAGGATT -3’（配列番号１０）
ＭＭＰ１０
フォワード   5’- CAGGATTGTGAATTATACACCAGATTTGCC -3’（配列番号１１）
リバース   5’- GAATGCCATTCACATCATCTTGCGA -3’（配列番号１２）
【実施例３】
【００４２】
細胞系における１−ピペリジンプロピオン酸によるラミニン５発現への影響：
ヒト表皮細胞を播種し、１％の１−ピペリジンプロピオン酸の存在下又は不存在下で、２４時間培養した。この上清を採取し、繊維芽細胞に当該上清を添加して培養を行った。ＩＳＯＧＥＮにて回収後、ＲＮＡを精製し、定量的ＰＣＲによりラミニン量を測定した。プライマーは実施例２において用いたものを用い、ラミニン５α３は以下のプライマーを用いた。ＧＡＰＤＨを内部標準とし、１−ピペリジンプロピオン酸の存在下又は不存在下でラミニン５α３鎖の遺伝子発現量を比較したところ、１−ピペリジンプロピオン酸の存在下でラミニン５α３鎖の発現が顕著に亢進することが認められた（図９）。
ラミニン５α３
フォワード   5’- CCCGGTCAAAGTCAACTGCA -3’（配列番号１３）
リバース   5’- GGCGTTGCCATAGTAGCCCT -3’（配列番号１４）
【実施例４】
【００４３】
処方例１．クリーム
【００４４】
【表１】
2012240911.tif 000005
【００４５】
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールと苛性カリを加え溶解し、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を徐々に加え、全部加え終わってからしばらくその温度に保ち反応を起こさせる。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４６】
処方例２．クリーム
【００４７】
【表２】
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【００４８】
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００４９】
処方例３．クリーム
【００５０】
【表３】
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【００５１】
（製法）
イオン交換水に石けん粉末と硼砂を加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかきまぜながら徐々に加え反応を行う。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００５２】
処方例４．乳液
【００５３】
【表４】
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【００５４】
（製法）
少量のイオン交換水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りのイオン交換水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミンを加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一乳化し、乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００５５】
処方例５．乳液
【００５６】
【表５】
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【００５７】
（製法）
イオン交換水にプロピレングリコールを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し、加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかきまぜながらこれに水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化する。乳化後よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【００５８】
処方例６．ゼリー
【００５９】
【表６】
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【００６０】
（製法）
イオン交換水にカーボポール９４０を均一に溶解し、一方、９５％エタノールに１−ピペリジンプロピオン酸、ポリオキシエチレン（５０モル）オレイルアルコールエーテルを溶解し、水相に添加する。次いで、その他の成分を加えたのち苛性ソーダ、Ｌ−アルギニンで中和させ増粘し、ゼリーを得る。
【００６１】
処方例７．美容液
【００６２】
【表７】
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【００６３】
（製法）
Ａ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ｃ相にＡ相を加えて可溶化する。次いでＢ相を加えた後充填を行う。
【００６４】
処方例８．パック
【００６５】
【表８】
2012240911.tif 000012
【００６６】
（製法）
Ａ相、Ｂ相、Ｃ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。次いでこれをＣ相に加えたのち充填を行う。
【００６７】
処方例９．固形ファンデーション
【００６８】
【表９】
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【００６９】
（製法）
タルク〜黒色酸化鉄の粉末成分をブレンダーで十分混合し、これにスクワラン〜オクタン酸イソセチルの油性成分、１−ピペリジンプロピオン酸、防腐剤、香料を加え良く混練
した後、容器に充填、成型する。
【００７０】
処方例１０．乳化型ファンデーション（クリームタイプ）
【００７１】
【表１０】
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【００７２】
（製法）
水相を加熱撹拌後、十分に混合粉砕した粉体部を添加してホモミキサー処理する。更に加熱混合した油相を加えてホモミキサー処理した後、撹拌しながら香料を添加して室温まで冷却する。
【００７３】
処方例１１．クリーム
【００７４】
【表１１】
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【００７５】
（製法）
精製水に、グリセリン、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、リン酸Ｌ−アスコルビルマグネシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウムを加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかきまぜながら３０℃まで冷却する。
【図１】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図９】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図８】
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【配列表】
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