(57)【要約】  【課題】γ−ＧＴＰ（γ−グルタミルトランスペプチダーゼ）の発現を抑制する物質を提供すること、即ち、新規な抗炎症剤などを提供すること。  【解決手段】免疫アジュバントであるＧＭＤＰ（Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌ−β（１，４）−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｙｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕｔａｍｉｎｅ）を少なくとも含有する抗炎症剤などの薬剤及び飲食物を提供する。本発明者は、ＧＭＤＰに、γ−ＧＴＰの発現抑制作用、口臭抑制作用などがあることを新規に見出した。従って、ＧＭＤＰを含有する薬剤は、各種炎症、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎、口臭抑制などに適用できる可能性がある。  【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
γ−ＧＴＰの発現抑制作用を有するＧＭＤＰ。
【請求項２】
口臭抑制作用を有するＧＭＤＰ。
【請求項３】
ＧＭＤＰを少なくとも含有する抗炎症剤。
【請求項４】
骨吸収を伴う疾患に対して適用することを特徴とする請求項３記載の抗炎症剤。
【請求項５】
ＧＭＤＰを少なくとも含有する、慢性関節リウマチの予防又は治療のための薬剤。
【請求項６】
ＧＭＤＰを少なくとも含有する、骨粗鬆症の予防又は治療のための薬剤。
【請求項７】
ＧＭＤＰを少なくとも含有する、歯周炎の予防又は治療のための薬剤。
【請求項８】
ＧＭＤＰを少なくとも含有する口臭抑制剤。
【請求項９】
歯周炎の予防又は治療に用いる、ＧＭＤＰを少なくとも含有させた飲食物。
【請求項１０】
口臭抑制に用いる、ＧＭＤＰを少なくとも含有させた飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、γ−ＧＴＰ（「γ−グルタミルトランスペプチダーゼ」、以下同じ）の発現抑制作用及び口臭抑制作用を有するＧＭＤＰ（「Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌ−β（１，４）−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｙｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕｔａｍｉｎｅ」、以下同じ）、ＧＭＤＰを含有する薬剤、並びに飲食物などに関する。なお、本発明に係る薬剤は、各種炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ、歯周炎など）、骨粗鬆症、口臭抑制などに適用できる。
【背景技術】
【０００２】
γ−ＧＴＰは、腎臓、すい臓、肝臓など、多くの組織の細胞に存在する酵素である。アルコール代謝亢進時や黄疸の際に血液中に遊出するため、肝疾患の診断などに用いられている。
【０００３】
本発明者は、先般、γ−ＧＴＰが破骨細胞分化促進活性を有することを見い出した。そして、γ−ＧＴＰによる破骨細胞分化を抑制し骨破壊・骨吸収を抑制する薬剤が、骨粗鬆症などに対する有効な治療剤になる可能性があるという知見を得た（以上、特許文献１参照）。
【０００４】
また、本発明者は、歯肉炎を発症した患者の歯肉溝浸出液中には、γ−ＧＴＰがほとんど含まれていないが、歯肉炎から歯周炎に移行した患者の歯肉溝浸出液中には、γ−ＧＴＰが含有すること、及び、γ−ＧＴＰが歯槽骨の吸収や破壊を伴う歯周炎の発症に深く関与していることについても、先般、開示している（特許文献２参照）。
【０００５】
加えて、本発明者らは、先般、γ−ＧＴＰが炎症性サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＭＩＰ−１など）の発現を誘導することを見い出した。そして、γ−ＧＴＰの発現又は活性を抑制することにより、炎症性サイトカインの発現を抑制し、炎症の増幅・慢性化を抑制できる可能性があるという知見を得た（以上、特許文献３参照）。
【０００６】
なお、特許文献３では、γ−ＧＴＰの発現又は活性を抑制する物質が、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、悪性腫瘍の骨転移に起因する癌性疼痛、良性のリンパ増殖性疾患であるＣａｓｔｌｅｍａｎ病、原因不明の炎症性腸疾患であるＣｒｏｈｎ病、歯周炎、心不全の悪化、動脈硬化、インフルエンザ脳症などの疾患に対して適用できる可能性があることについて、開示している。
【０００７】
ここで、本発明に関連する物質、ＧＭＤＰについて、以下説明する。ＧＭＤＰは、免疫アジュバントであり、Ｔｈ２タイプの免疫を活性化するグルコペプチドである。なお、免疫アジュバントは、抗原の免疫原性を高める目的で、抗原とともに生体に投与される試薬であり、免疫増強剤の一種である。例えば、特許文献４には、ワクチン化を行う際において、ＧＭＤＰとコロイド溶液を含有する免疫アジュバントを用いて免疫応答を増強させる方法が開示されている。
【特許文献１】特開平１０−８７５０７号公報
【特許文献２】特開２００５−２４３３７号公報
【特許文献３】特開２００５−８０６２９号公報
【特許文献４】特開平１０−２５２５０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上述の通り、γ−ＧＴＰの発現を抑制する物質は、抗炎症剤など、各種疾患に対する予防又は治療剤として適用できる可能性がある。そこで、本発明は、γ−ＧＴＰの発現を抑制する物質を提供すること、即ち、新規な抗炎症剤などを提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明では、はじめに、ＧＭＤＰ（「Ｎ−ａｃｅｔｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌ−β（１，４）−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｍｕｒａｍｙｌ−Ｌ−ａｌａｎｙｌ−Ｄ−ｉｓｏｇｌｕｔａｍｉｎｅ」、以下同じ）を少なくとも含有する抗炎症剤などの薬剤を提供する。
【００１０】
本発明者は、ＧＭＤＰに、γ−ＧＴＰ（「γ−グルタミルトランスペプチダーゼ」、以下同じ）の発現を抑制する作用があることを新規に見出した。
【００１１】
前記の通り、γ−ＧＴＰの発現を抑制する物質は、各種炎症、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、悪性腫瘍の骨転移に起因する癌性疼痛、良性のリンパ増殖性疾患であるＣａｓｔｌｅｍａｎ病、原因不明の炎症性腸疾患であるＣｒｏｈｎ病、歯周炎、心不全の悪化、動脈硬化、インフルエンザ脳症などの疾患に対して適用できる可能性がある。従って、本発明に係るＧＭＤＰは、これらの疾患の予防又は治療に有効な可能性がある。
【００１２】
特に、本発明に係るＧＭＤＰは、骨吸収を伴う疾患、例えば、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周炎などに効果が高い可能性がある。
【００１３】
例えば、組織が傷害を受け、その障害部位にマクロファージなどが浸潤すると、そのマクロファージなどからγ−ＧＴＰが放出される。γ−ＧＴＰは、炎症性サイトカインの発現を誘導し、炎症を増幅・慢性化するとともに、破骨細胞をの分化を促進し、骨吸収を促進する。それに対し、γ−ＧＴＰの発現を抑制することにより、炎症の憎悪を抑制するとともに、骨吸収も抑制できる可能性がある。
【００１４】
なお、本発明に係る薬剤の場合、主に、γ−ＧＴＰが炎症性サイトカインを誘導する段階、即ち、炎症が重篤化・慢性化する段階における炎症反応を抑制する。それに対し、炎症の初期段階における炎症反応を過剰に抑制しない可能性が高い。従って、生体防御機構としての炎症反応を過剰に抑制せずに、重篤化・慢性化した炎症のみを予防・改善できるという利点がある。
【００１５】
続いて、本発明では、ＧＭＤＰを少なくとも含有する口臭抑制剤を提供する。
【００１６】
本発明者は、前記知見に加えて、γ−ＧＴＰが臭い物質の発生・活性化・増強などを促進する作用を有すること、及び、ＧＭＤＰが歯周病菌におけるγ−ＧＴＰの酵素活性を抑制することについても、新規に見出した。
【００１７】
歯周病は、歯周組織、即ち、歯肉、歯槽骨などに生じる炎症性の病変であり、歯肉炎及び歯周炎を含む。歯肉に炎症部位が限定されているものを歯肉炎といい、症状が進行して歯周組織にまで炎症部位が広がり、歯槽骨の骨吸収が進行したものを歯周炎という。
【００１８】
例えば、歯周炎患者の場合、口腔内には、ヒト組織由来のγ−ＧＴＰと歯周病菌由来のγ−ＧＴＰの両方が存在する。また、歯肉炎患者の場合でも、口腔内には、歯周病菌由来のγ−ＧＴＰが多く存在する。一方、前記の通り、γ−ＧＴＰは、臭い物質の発生などに関与する。従って、ＧＭＤＰを用いて口腔内におけるγ−ＧＴＰの発現・酵素活性などを抑制することにより、口臭を抑制できる。
【００１９】
加えて、上述の通り、ＧＭＤＰは歯周炎の予防又は治療にも有効であるため、本発明は、口臭抑制を含む口腔環境全体の改善にも効果がある可能性が高い。
【００２０】
なお、本発明には、ＧＭＤＰを含有させた各種飲食物も含まれる。例えば、ＧＭＤＰを各種飲食物に含有させることにより、定期的又は連続的な摂取を容易に行うことができる。
【発明の効果】
【００２１】
本発明により、γ−ＧＴＰの発現を抑制できる。従って、本発明に係る薬剤は、各種炎症、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、歯周病、口臭抑制などに適用できる可能性がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
＜本発明に係るＧＭＤＰについて＞
本発明に係るＧＭＤＰは、γ−ＧＴＰの発現抑制作用、口臭抑制作用などを有する。そのため、例えば、各種薬剤又は各種飲食物に含有させて用いることができる。なお、ＧＭＤＰは通常の販売ルートにより入手可能である。
【００２３】
＜本発明に係る薬剤について＞
本発明に係る薬剤は、ＧＭＤＰを少なくとも含有していればよい。
【００２４】
上述の通り、本発明に係る薬剤は、γ−ＧＴＰの発現・酵素活性などが関与する疾患に適用できる可能性がある。
【００２５】
適用可能性のある疾患としては、例えば、各種炎症、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、悪性腫瘍の骨転移に起因する癌性疼痛、良性のリンパ増殖性疾患であるＣａｓｔｌｅｍａｎ病、原因不明の炎症性腸疾患であるＣｒｏｈｎ病、歯周炎、心不全の悪化、動脈硬化、インフルエンザ脳症、口臭などがある。
【００２６】
本発明に係る薬剤の剤型は特に限定されない。例えば、経口剤（散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、丸剤など）、外用剤（軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、外用液剤、点眼液剤、点鼻液剤、吸入剤、坐剤、スプレーなど）、注射剤などとして用いることができる。
【００２７】
経口剤の場合、例えば、本発明に係る化合物に、賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、保存剤、着色剤、矯味剤、香料、安定化剤、防腐剤、酸化防止剤などを適宜含有させてもよい。
【００２８】
外用剤の場合、例えば、本発明に係る化合物に、基材、保存剤、乳化剤、着色剤、防腐剤、酸化防止剤などを適宜含有させてもよい。
【００２９】
注射剤の場合、例えば、本発明に係る化合物に、溶剤、安定剤、溶解補助剤、懸濁化剤、保存剤、等張化剤などを適宜含有させてもよい。
【００３０】
＜本発明に係る飲食物について＞
本発明に係る飲食物は、ＧＭＤＰを少なくとも含有させたものであればよい。
【００３１】
例えば、保健機能食品（特定保健機能食品、栄養機能食品など）、いわゆる健康飲食物、その他の各種飲食物などに含有させたり、各種調味料などに配合したりすることができる。また、口中に一時的に含むもの、例えば、歯磨剤、染口剤、チューインガム、うがい剤などに含有させてもよい。
【００３２】
各種飲食物にＧＭＤＰを含有させることには、長期間・連続的な摂取が容易である、毎日の摂取量を簡易に管理できる、などの利点がある。従って、それらの飲食物は、例えば、歯周炎の予防、口臭抑制など、口臭環境の維持・改善を目的とする場合に特に有用である。また、それらの飲食物は、その他の前記各疾患の予防・治療などにも利用できる。
【００３３】
本発明に係る飲食物には、γ−ＧＴＰの発現抑制作用を有する他の物質、例えば、アントシアニンをさらに含有させてもよい。これにより、γ−ＧＴＰ発現抑制を増強させることができる。
【実施例１】
【００３４】
実施例１では、ＧＭＤＰに、ヒトγ−ＧＴＰの発現を抑制する作用があるかどうかを検証した。
【００３５】
まず、ヒト単球性白血病細胞由来の培養細胞であるＵ９３７細胞を培養し、培地にＴＰＡ（１２−Ｏ−ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｒ−１３−ａｃｅｔａｔｅ）を最終濃度で２μＭ添加し、Ｕ９３７細胞におけるγ−ＧＴＰの発現を誘導した。
【００３６】
ＴＰＡは、発ガンプロモーターとして知られる物質である。Ｕ９３７細胞などの白血病細胞をＴＰＡ処理することにより、マクロファージ系細胞へ分化させることができることが知られている。本実験では、ＴＰＡ処理することにより、同時に、γ−ＧＴＰの発現を誘導させることができた。
【００３７】
なお、培地には、ＲＰＭＩ−１６４０培地（「ＲＰＭＩ」はＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの略、ＧＩＢＣＯ社製）に、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ、Ｓｉｇｍａ社製）を最終濃度で１０％添加したものを用いた。
【００３８】
次に、γ−ＧＴＰの発現を誘導したＵ９３７細胞の培地に、ＧＭＤＰを、最終濃度がそれぞれ０、３、１０、３０、１００μｇ／ｍＬになるように添加し、２４時間培養した。次に、ＲＮＡ抽出用試薬のＩＳＯＧＥＮ（株式会社ニッポンジーン製）を用いて、それらの細胞のｔｏｔａｌＲＮＡを回収した。
【００３９】
次に、回収したｔｏｔａｌＲＮＡをテンプレートにし、定量的リアルタイムＰＣＲにより、ヒトγ−ＧＴＰをコードするＲＮＡの増幅を行いながら、その転写ＲＮＡ量を相対的に計測した。
【００４０】
定量的リアルタイムＰＣＲ装置には、「ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ（登録商標、ロシュ・ダイアグノスティクス株式会社製）」を用いた。γ−ＧＴＰのセンス鎖のプライマーには配列番号１の配列を、アンチセンス鎖のプライマーには配列番号２の配列を、それぞれ用いた。「ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ  ＦａｓｔＳｔａｒｔＤＮＡ  Ｍａｓｔｅｒ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ  ｋｉｔ（「ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ」は登録商標、ロシュ・ダイアグノスティクス株式会社製）」を用いて、４３サイクル×（変性温度９５℃、アニール温度５５℃、伸長温度７２℃）の設定で、ＰＣＲによる増幅を行った。
【００４１】
結果を表１に示す。
【表１】
2007238512.tif 000002
【００４２】
表１に示す通り、Ｕ９３７細胞へのＧＭＤＰの添加量を増加させると、それらの細胞におけるγ−ＧＴＰの転写ＲＮＡ量（即ち、γ−ＧＴＰの発現量）が濃度依存的に低下した。この結果は、ＧＭＤＰに、ヒトγ−ＧＴＰの発現を抑制する作用があることを示す。
【実施例２】
【００４３】
実施例２では、ＧＭＤＰに、歯周病菌におけるγ−ＧＴＰの発現を抑制する作用があるかどうかを検証した。
【００４４】
まず、１５種類の歯周病菌を準備した。ＧＡＭブイヨン培地（日水製薬株式会社製）に、ヘミン５μｇ／ｍＬ及びメナジオン１μｇ／ｍＬを添加し、その培地にそれぞれ歯周病菌を播種し、アネロメイト（登録商標、日水製薬株式会社製）に封入し、３７℃、嫌気的条件下で、３日間、培養した。
【００４５】
次に、それぞれの歯周病菌についてパパイン処理を行った後、γ−ＧＴＰ活性を測定した。それぞれ、歯周病菌を集め、１０ｍｇ／ｍＬのパパイン及び１％のＴｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００を含む１０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ６．５）中で懸濁し、室温で一晩静置した後、その上清を採取し、γ−ＧＴＰ活性を測定した。γ−ＧＴＰ活性の測定には、Ｌ−グルタミル−Ｐ−ニトロアニリド基質法を採用した。
【００４６】
その結果、パパイン処理をした場合、１５種類の歯周病菌のうち２種類（学名「Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｎａｅｓｌｕｎｄｉｉ」及び学名「Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ」）で、γ−ＧＴＰ活性が高かった。そこで、この２種類の歯周病菌を本実験に採用した。
【００４７】
上記と同じ培地に、ＧＭＤＰを最終濃度がそれぞれ０、１００、１，０００μｇ／ｍＬになるように添加し、その培地でそれぞれの歯周病菌を培養した。そして、前記と同様に、パパイン処理を行った後、その培養上清のγ−ＧＴＰ活性を測定した。また、それぞれの培養液の臭いの程度について、三人の技術者により、官能評価を行った。
【００４８】
結果を表２に示す。
【表２】
2007238512.tif 000003
【００４９】
なお、表２の「臭い」の項目において、「＋」の数は臭いの程度を表す。臭いの程度が大きい場合、「＋」の数が多い。
【００５０】
表２に示す通り、ＧＭＤＰの添加量を増加させると、培養上清におけるγ−ＧＴＰの酵素活性が低下した。この結果は、ＧＭＤＰに、歯周病菌におけるγ−ＧＴＰの酵素活性を抑制する作用があることを示す。
【００５１】
また、表２に示す通り、ＧＭＤＰの添加量を増加させると、培養液の臭いの程度も低下した。この結果は、γ−ＧＴＰが、臭い物質の発生・活性化・増強などを抑制する作用を有すること、及び、ＧＭＤＰにより臭いの程度を抑制できることを示唆する。
【配列表】
2007238512000001.app