【事件の表示】
　特願２００７−５２０５６３「治療用ペプチド」拒絶査定不服審判事件〔平成１８年１月２６日国際公開、ＷＯ２００６／０１００５７、平成２０年２月２８日国内公表、特表２００８−５０５９２８〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　
　この出願は，２００５年７月８日（パリ条約による優先権主張外国庁受理２００４年７月８日，米国（ＵＳ））を国際出願日とする出願であって，以降の手続の経緯は以下のとおりのものである。
　
　平成２０年　８月　７日　　　手続補正書
　平成２３年　２月２１日付け　拒絶理由通知書
　平成２３年　９月　１日　　　意見書・手続補正書
　平成２３年１０月２８日付け　拒絶査定
　平成２４年　３月　１日　　　審判請求書
　平成２４年　３月１３日　　　手続補正書（方式）
　
第２　本願発明の認定
　
　この出願の請求項１に係る発明は，平成２０年８月７日付けで全文補正された明細書，特許請求の範囲及び図面の記載からみて，平成２３年９月１日提出の手続補正書の特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定されるとおりのものであると認められるところ，請求項１にかかる発明（以下「本願発明」という。）は，次のとおりのものであると認める。
　
「PEG-Fc-GGGGG-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA(配列番号：２)のアミノ酸配列を含む実質的に均質な化合物であって，当該ＰＥＧが，２０ｋＤの分子量を有し，当該化合物が，二量体であり，かつ，c-Mp1に結合して血小板産生を刺激する性質を有し，および，反復投与で生物有効性を改善する性質を有する，ことを特徴とする均質な化合物。」
　
第３　原査定の拒絶の理由の概要
　
　原査定の拒絶の理由の概要は，本願発明は，その出願前日本国内又は外国において頒布された下記の刊行物に記載された発明又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった発明に基いて，その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない，というものである。
　　　　　　　　　　　　　　　記　
刊行物１：特表２００２−５３６９６０号公報（原査定の引用文献１）
　
第４　刊行物及び刊行物に記載された事項
　
１　刊行物
　
　刊行物１：上記第３に記載の刊行物１と同じ。
　刊行物Ａ：特許第２９９６４１５号公報
　刊行物Ｂ：国際公開第０２／０１５９２６号
　刊行物Ｃ：特表２００２−５２４０５３号公報
　刊行物Ｄ：特表２００２−５３１０５０号公報
　刊行物Ｅ：特表２００３−５３０８７１号公報
　
　刊行物ＡないしＥは，この出願の優先日における周知技術又は技術水準を示すために引用するものである。
　
２　刊行物に記載された事項
　
　この優先日前に頒布された刊行物である刊行物１及び刊行物ＡないしＥには，以下の事項がそれぞれ記載されている。
　
（１）刊行物１　
１ａ「【特許請求の範囲】
【請求項１】構造
　TMP1-(L1)n-TMP2　[式中，TMP1およびTMP2は，それぞれ独立して，構造：
　　X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10　
（式中，
　　X2は，Glu，Asp，LysおよびValよりなる群から選ばれる；
　　X3は，GlyおよびAlaよりなる群から選ばれる；
　　X4は，Proである；
　　X5は，ThrおよびSerよりなる群から選ばれる；
　　X6は，Leu，Ile，Val，AlaおよびPheよりなる群から選ばれる；
　　X7は，ArgおよびLysよりなる群から選ばれる；
　　X8は，Gln，AsnおよびGluよりなる群から選ばれる；
　　X9は，Trp，TyrおよびPheよりなる群から選ばれる；
　　X10は，Leu，Ile，Val，Ala，Phe，MetおよびLysよりなる群から選ばれる）
　を含むコア化合物の群から選ばれる；
　L1はリンカーである；および
　nは0または1である]
を含んでなる，mp1受容体に結合する化合物およびその生理的に許容される塩。
　　　　　　　　　　・・・・・
【請求項２４】
【化４】
　
よりなる群から選ばれる，請求項1に記載の化合物。
【請求項２５】巨核球または血小板を増加させる必要がある患者において巨核球または血小板を増加させる方法であって，請求項1に記載の化合物の有効量を該患者に投与することを含んでなる方法。
　　　　　　　　　　・・・・・
【請求項２７】請求項1に記載の化合物とその医薬上許容される担体とを
含んでなる医薬組成物。」
　
１ｂ「【０００２】
（発明の背景）
　本発明は，血小板およびその前駆体細胞（例えば，巨核球）のインビトロおよびインビボ産生を刺激する能力を有する化合物，特にペプチドに関する。本発明の化合物の性質を論じる前に，血小板生成活性を有する2つのタンパク質 [トロンボポエチン（TPO）および巨核球成長・発生因子（megakaryocyte growth and development factor）（MGDF）]に関する背景として，以下を説明する。
　　　　　　　　　　・・・・・
【０００７】
　TPOおよびMGDFは，主として或る造血細胞（例えば，巨核球，血小板，CD34+細胞および原始前駆細胞）の表面上で発現されるc-Mp1受容体への結合を介してそれらの作用を発揮する（Debili, Nら, Blood 85:391-401 (1995); de Sauvage, F.J.ら, Nature 369:533-538 (1994); Bartley, T.D.ら, Cell 77:1117-1124 (1994); Lok, Sら, Nature 369:565-8 (1994)）。インターロイキンおよびタンパク質ホルモンに対するほとんどの受容体と同様に，c-Mp1は，クラスIサイトカイン受容体スーパーファミリーに属する（Vigon, Iら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5640-5644 (1992)）。このクラスの受容体の活性化は，リガンドの結合により誘発される受容体のホモ二量体形成を含み，そして今度はそれがシグナル伝達事象のカスケードを誘発する。
　　　　　　　　　　・・・・・
【０００９】
　これに向けた検討の過程で，大きなタンパク質リガンドの小さなペプチド模倣体（mimetics）を同定する有力な技術として，ファージペプチドライブラリー提示系が得られた（Scott, J.K.ら, Science 249:386 (1990); Devlin, J.J.ら, Science 249:404 (1990)）。この技術を用いることにより，c-Mp1受容体のアゴニストとして作用する小さなペプチド分子が見出された（Cwirla, S.E.ら, Science 276:1696-1699 (1997)）。
【００１０】・・・最終的に，IC50=2nMおよびEC50=400nMを有する非常に活性なペプチドの単離がもたらされた（Cwirla, S.E.ら, Science 276:1696-1699 (1997)）。TMP（TPO模倣ペプチド）と称されるこの14残基のペプチドは，TPOに対してもMGDFに対しても明らかな配列類似性を有さない。このTMP化合物の構造は以下のとおりである：
Ile Glu Gly Pro Thr Leu Arg Gln Trp Leu Ala Ala Arg Ala（配列番号1）または
IEGPTLRQWLAARA（1文字アミノ酸略号を用いた場合）。
　　　　　　　　　　・・・・・
【００１２】
　同様のC末端二量体形成方法がTPO模倣ペプチド（TMP）に適用された（Cwirla,S.E.ら, Science 276:1696-1699 (1997)）。・・・・・
　　　　　　　　　　・・・・・
【００１４】
　本発明のもう1つの態様においては，該縦列二量体を更に，免疫グロブリンのFc領域と総称される免疫グロブリンタンパク質由来の1以上の部分に結合させることができる。得られた化合物は，TMP縦列二量体のFc融合体と称される。」
　
１ｃ「【００１８】
　TPOおよびMGDFが利用可能であるにもかかわらず，血小板の産生を刺激する生物活性（血小板生成活性）および／または血小板前駆細胞（特に巨核球）を刺激する生物活性（巨核球生成活性）を有する追加的な化合物を得ることが依然として必要とされている。本発明は，そのような活性を有する新規化合物および関連態様を提供する。
【００１９】
（発明の概要）
　本発明は，内因性トロンボポエチン（TPO）の活性を媒介する同じ受容体であるc-Mp1受容体に結合しそれを介した膜貫通シグナルを誘発しうる（すなわち，c-Mp1受容体を活性化しうる）化合物の一群を提供する。したがって，本発明の化合物は，血小板生成活性（すなわち，血小板の産生をインビボおよびインビトロで刺激する能力）および／または巨核球生成活性（すなわち，血小板前駆体の産生をインビボおよびインビトロで刺激する能力）を有する。」
　
１ｄ「【００２９】
　図2は，ペジル化（pegylated）ペプチド19（配列番号17）の製造のための合成スキームを示す。
【００３０】
　図3は，ペジル化ペプチド20（配列番号18）の製造のための合成スキームを示す。
【００３１】
　図4は，以下の種々の化合物の1回の100μg/kgボーラス注射で処理された正常な雌BDF1マウスにおいてインビボで生成した血小板の数を示す。PEGF-MGDFは，大腸菌（E. coli）内で発現された（したがってグリコシル化されていない）天然ヒトTPOのアミノ酸1〜163の還元的アミノ化によりN末端アミノ基に結合した20kDの平均分子量のPEGを意味する（WO 95/26746（題名: Compositions and Methods for Stimulating Megakaryocyte Growth and Differentiation）を参照されたい）。TMPは配列番号1の化合物を意味する。TMP-TMPは配列番号21の化合物を意味する。PEG-TMP-TMPは配列番号18の化合物を意味し，そのPEG基は，図3に示すとおりに結合した5kDの平均分子量のPEGである。TMP-TMP-Fcは，本明細書中に後記で定義されており，Fc-TMP-TMPは，該TMP-TMPペプチドのC末端ではなくN末端にFc基が結合していること以外はTMP-TMP-Fcと同じである。
【００３２】
　図5は，7日間にわたり移植浸透ポンプを介して運搬された種々の化合物で処理された正常なBDF1マウスにおいてインビボで生成した血小板の数を示す。該化合物は，図4に関して前記したのと同様に定義される。
【００３３】
　図6A，6Bおよび6Cは，本発明の好ましい化合物の概要図を示す。図6Aは，Fc部分がTMP二量体のN末端で融合している及びFc部分が単量体（一本鎖）形態であるFc融合化合物を示す。図6Bは，Fc領域がTMP二量体のN末端で融合している及びFc部分が二量体であり一方のFc単量体がTMP二量体に結合しているFc融合化合物を示す。図6Cは，Fc部分がTMP二量体のN末端で融合している及びFc部分が二量体であり各Fc単量体がTMP二量体に結合しているFc融合化合物を示す。」
　
１ｅ「【００３４】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
　より望ましい特性を有する治療剤の開発におけるリード化合物としての小さな構造体を見出すために，1つのTMPペプチドのC末端がもう1つのTMPペプチドのN末端に直接的に又はリンカーを介して結合した異なるタイプのTMP二量体および関連構造体を設計し，ついで，得られた二量体分子の生物活性に対するこの二量体形成方法の効果を調べた。いくつかの場合には，2つの単量体の間にリンカー（該リンカーは，好ましくは，天然アミノ酸を含み，したがってそれらの合成に組換え技術が利用可能となる）を有する，これらのいわゆる縦列二量体（C-N連結体）を設計した。
【００３５】
　本発明は，血小板生成活性を有し内因性TPO受容体c-Mp1への結合により活性を現す化合物の一群を見出したことに基づく。」
　
１ｆ「【００６３】
　本発明の化合物は，担体分子，例えば，直鎖状重合体（例えば，ポリエチレングリコール，ポリリシン，デキストランなど），分枝重合体（例えば，1981年9月15日付け発行のDenkenwalterらの米国特許第4,289,872号，1993年7月20日付け発行のTamらの米国特許第5,229,490号，1993年10月28日付け公開のFrechetらのWO 93/21259を参照されたい），脂質，コレステロール基（例えば，ステロイド），または炭水化物またはオリゴ糖と共有的または非共有的に結合していてもよい。他の可能な担体には，1以上の水溶性重合体，例えば，ポリオキシエチレングリコール，またはポリプロピレングリコール，例えば，米国特許第4,640,835号，第4,496,689号，第4,301,144号，第4,670,417号，第4,791,192号および第4,179,337号に記載されているものが含まれる。当技術分野で公知のその他の有用な重合体には，モノメトキシ-ポリエチレングリコール，デキストラン，セルロースまたは他の炭水化物に基づく重合体，ポリ-(N-ビニルピロリドン)-ポリエチレングリコール，プロピレングリコールホモ重合体，ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体，ポリオキシエチル化ポリオール（例えば，グリセロール）およびポリビニルアルコール，ならびにこれらの重合体の混合物が含まれる。
【００６４】
　好ましいそのような担体としては，ポリエチレングリコール（PEG）が挙げられる。PEG基は，簡便な任意の分子量のものであってもよく，直鎖状または分枝状であることが可能である。該PEGの平均分子量は，好ましくは，約2kDa〜約100kDa，より好ましくは約5kDa〜約50kDa，最も好ましくは約5kDa〜約10kDaである。
【００６５】
　該PEG基は，一般には，該PEG部分上の反応性基（例えば，アルデヒド，アミノ，エステル，チオール，α-ハロアセチル，マレイミドまたはヒドラジノ基）を介した標的化合物の反応性基（例えば，アルデヒド，アミノ，エステル，チオール，α-ハロアセチル，マレイミドまたはヒドラジノ基）へのアシル化，還元的アルキル化，マイケル付加，チオールアルキル化または他の化学選択的共役／連結方法により，本発明の化合物に結合させる。」
　
１ｇ「【０１４６】
　
ペジル化
　
１ｈ「【０１８０】
　プラスミドpAMG21中に含まれ従って宿主株GM221に含まれるFc融合構築物（本発明ではpAMG21-Fc-TMP-TMPと称される）は，ATCCに受託番号98957で1998年10月22日付けで寄託されている。
【０１８１】　
　
発現
【０１８２】　
　
Fc-TMP-TMPの精製
　細胞を高圧ホモジナイゼーション（14,000 PSIで2回）により水（1/10）中で破壊し，封入体を遠心分離（J-６B中，4200 RPMで1時間）により回収した。封入体を，6Mグアニジン，50mM Tris，8mM DTT（pH8.7）中，1/10の比率で1時間可溶化した。該可溶化混合物を2M尿素，50mM Tris，160mMアルギニン，3mMシステイン（pH8.5）中に20倍希釈した。該混合物を冷所で一晩攪拌した。該操作のこの時点で，該Fc-TMP-TMP単量体サブユニットは二量体形成して，図6Cに示す構造を有するジスルフィド連結化合物を与えた。ついでそれを限外濾過により約10倍濃縮した。ついでそれを10mM Tris，1.5M尿素（pH9）で3倍希釈した。ついでこの混合物のpHを酢酸でpH5に調節した。該沈殿物を遠心分離により除去し，該上清を，20mM NaAc，100mM NaCl（pH5）で平衡化されたSP-Sepharose Fast Flowカラム上にローディングした（10mg/mlのタンパク質のローディング，室温）。100mM NaClから500mM NaClの範囲の同じバッファー中の20カラム容積の勾配を用いて，該タンパク質を溶出した。該カラムからのプールを3倍希釈し，20mM NaAc，100mM NaCl（pH5）中のSP-Sepharose HPカラム上にローディングした（10mg/mlのタンパク質のローディング，室温）。150mM NaClから400mM NaClの範囲の同じバッファー中の20カラム容積の勾配を用いて，該タンパク質を溶出した。該ピークをプールし，濾過した。
　　　　　　　　　　・・・・・
【０１８９】
　IV．
考察
　MGDFはヒト成長ホルモン（hGH）と同様に作用することが，十分に受け入れられている。すなわち，該タンパク質リガンドの1分子は該受容体の2分子に結合して，その活性化をもたらす（Well, J.A.ら, Ann. Rev. Biochem. 65:609-634 (1996)）。この相互作用は，それよりはるかに小さなTMPペプチドの作用により模倣される。しかしながら，本研究は，この模倣が2つのTMP分子の協奏作用を要すると示唆している。なぜなら，C-C平行的またはC-N逐次的なTMPの共有的二量体形成は，元の単量体のインビトロ生物学的効力を103倍以上増加させたからである。該単量体の比較的低い生物作用能は，おそらく，非共有性二量体の非効率的な形成によるものであろう。予め形成された共有性二量体は，小さな14残基のペプチドの2つの分子間の弱い非共有相互作用により専ら駆動される非共有性二量体の形成のためのエントロピー障壁を排除しうる。
【０１９０】
　縦列二量体のほとんどがC末端平行二量体より強力であることに注目することは興味深いことである。縦列二量体形成は，C-C平行二量体形成の場合より良好な適合（fit）コンホメーションを該分子に与えるらしい。縦列二量体の見掛け上の非対称性が，それを，2つの同一受容体分子に結合するのに2つの異なる部位を非対称分子として利用する天然リガンドに，より近づけたのかもしれない。
【０１９１】
　PEG部分の導入は，該修飾ペプチドをタンパク質分解に対して防御することにより及び腎臓濾過によるそのクリアランスを減速することにより，該修飾ペプチドのインビボ活性を増強すると予想された。・・・
【０１９２】
V．以下は，本発明の種々の化合物に関するサルにおけるインビボデータの要約である。
【０１９３】
　皮下投与によるAMP2の投与に関連した雌アカゲザルにおける造血パラメーターを評価するために，以下のプロトコールを設計し，実施した。それぞれ3匹のサルの5群をつくった。第1群は対照として用い，AMP2もペジル化組換えヒトMGDF（PEG-rHuMGDF）も含有しない酢酸塩バッファー（20mM酢酸ナトリウム，0.25mM塩化ナトリウム，pH5）を該群に投与した。第2群には，AMP2を後記の間隔で1回以上投与した。第3群には，1000μg/kgのAMP2を後記の間隔で投与した。第4群には，5000μg/kgのAMP2を後記の間隔で投与した。第5群には，100μg/kgのPEG-rHuMGDFを後記の間隔で投与した。
【０１９４】
　最初の1回量を投与した日をサイクル1の第0日と定めた。サイクル2においては，第21，23，25，28，30および32日に投与を行った。サイクル3中には，第84日に1回量を投与し，サイクル４では第123日に1回量を投与した。順化期間中に1日1回，投与日に1日3回（投与前，投与の直後から30分後まで，投与の2〜3時間後），および投与を行わなかった日は1日1回，臨床的徴候に関して動物を観察した。投与期間の開始の7日前から回復（recovery）期間の終わりまで，与えた食物片の数および各動物が食べ残した数に基づき，食物の消費を毎日計算した。各動物の体重を，投与計画の開始前に2回および投与および回復期間中に2回測定した。血液学的検査用の血液サンプルを，投与の開始前に1回，および第1，3，5，7，9，11，13，15，20，22，24，26，29，31，33，35，37，39，41，43，45，47，49，55，62，69，76，83，85，87，89，91，93，95，97，99，101，103，105，111，122，124，126，128，130，132，134，136，138，140，142，144，150日に1回，調製した。薬物動態学的分析のために，投与前に1回および投与の1，4および24時間後に1回，0.5mlの血清サンプルを集めた。サンプルを，第0，21，32，84および123日に集め，分析するまで約-70℃で保存した。抗体分析用に，2mlの血液サンプルを，1回の投与の1週間前および第0（投与前），6，13，20，27，34，41，48，55，62，69，76，83，90，97，104，111，118，129，136，143および150日に集めた。分析するまで，サンプルを-70℃で保存した。
【０１９５】
　結果は，血小板の値がすべての処理群において増加したことを示しており，最大の増加はPEG-rHuMGDFおよび高用量AMP2群において認められた。サイクル1においては，血小板のピーク値は，PEG-rHuMGDF群（第9日）および5000μg/kgのAMP2群（第9日）においては，対照群の平均血小板数と比較してそれぞれ約3.3倍および3.1倍増加した。低用量AMP2の血小板値は，定められた同じ研究日において対照より約1.5倍高く増加した。同様の応答が他のすべてのサイクルにおいて認められた。
　　　　　　　　　　・・・・・
【０２００】
・・・反復投与期は，単回投与期と比較して，血小板産生における高い応答を引き起こすようであった。・・・」
　
１ｉ「【図４】
　
　」（９５頁）
　
１ｊ「　
　
　」（９６頁）
　
（２）刊行物Ａ
Ａ１「【特許請求の範囲】
【請求項１】アミノ酸配列が配列表の配列番号25に示される１位から163位までのアミノ酸配列からなり，Ｎ末端にポリエチレングリコール基が結合されているモノPEG化MGDFポリペプチド。
【請求項２】ポリエチレングリコール基の平均分子量が２〜100キロダルトンであることを特徴とする，請求項１に記載のモノPEG化MGDFポリペプチド。
【請求項３】ポリペプチド部分が大腸菌（E.coli）中で産生されたものであることを特徴とする，請求項１または２に記載のモノPEG化MGDFポリペプチド。」（特許請求の範囲　請求項１ないし３）
　
Ａ２「発明の分野
　本発明は，MplリガンドまたはMGDFと同義の新規タンパク質であって，巨核球の成長を刺激し，巨核球の分化または成熟を増大させて，最終的に血小板を増大させる新規タンパク質に関する。・・・本発明は，MGDF誘導体が１つまたはそれ以上のポリエチレングリコール（PEG）基に付着しているMGDF誘導体と，かかる誘導体の調製方法にも関する。」（１頁左欄下から３行〜同頁右欄１２行）
　
Ａ３「MGDFの付加的アナログ／誘導体
　　　　　　　　　　・・・・・
　本発明におけるもう一つの態様は，MGDFタンパク質が少なくとも１つのポリエチレングリコール分子に結合したMGDF産物に関する。
本発明におけるその他の態様は，アシルまたはアルキル結合を介して少なくとも１つのポリエチレングリコール分子に結合したMGDF分子に関する。
　MGDFのPEG化は，当業界で周知となっているPEG化反応を利用して達成され得る。たとえば，Focus on Growth Factors 3（２）:4−10（1992），EP O 154 316;EP O 401 384およびその他本発明において引用されているその他のPEG化関連出版物を参照のこと。好ましくは，反応性ポリエチレングリコール分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）を用いるアシル化またはアルキル化反応を介して，PEG化を行うのがよい。ポリエチレングリコールを使用した誘導体化の好ましい手段について，以下に詳細に記述する。
アシル化
　アシル化によるPEG化には，一般に，ポリエチレングリコール（PEG）の活性エステル誘導体と，MGDFタンパク質との反応を含む。あらゆる既知または付随して発見された反応性PEG分子は，MGDFのPEG化に利用され得る。好適な活性化PEGエステルは，PEGをＮ−ヒドロキシスクシンイミドへエステル化したものである。ここでいう「アシル化」は，MGDFとPEG，アミド，カルバメート，ウレタン等の水溶性ポリマーとの結合型を含むがこれに限定されない。Bioconjugate Chem.5:133−140（1994）を参照のこと。反応条件は，PEG化技術において既知の条件，またはPEG化に付随して開発されたあらゆる条件から選択されるが，修飾すべきMGDF種を不活化するような温度，溶媒，およびPH等の条件を避けなくてはならない。MGDFsのPEG化に一般的に適用される反応条件を，以下に述べる。モノメトキシ−PEGのNHSエステルとの実例反応を，図14に概観する。
　アシル化によるPEG付加反応では，一般に，多数のPEGが付加したMGDF産物が生じ，そこではアシル結合基を介してリジンε−アミノ基にPEG付加が起こる。接続する結合はアミドであることが好ましい。また，生じる産物は，実質上，PEG1個の付加物，PEG2個の付加物またはPEG3個の付加物のみ（例えば＞95％）であることが好ましい。しかし，適用されている特定条件によっては，高度にPEG付加された種（MGDFのリジンにおけるε−アミノ酸基への最大付加数と，MGDFのアミノ末端部のα−アミノ基１個に付加する数までの）が形成され得るのが普通である。希望するならば，透析，塩析，該外濾過法，イオン交換クロマトグラフィー，ゲル濾過クロマトグラフィーおよび電気泳動を含む標準的技術その他の技術を適用することによって，混合物または未反応種のなかから，より精製されたPEG付加種が分離され得る。
アルキル化
　アルキル化によるPEG化には，一般に，PEGの末端アルデヒド誘導体と，MGDF等のタンパク質とを，還元剤の存在下で反応させることを含む。前述のアシル化のように反応条件を下記する。
　アルキル化によるPEG付加を行うと，多数のPEGが付加したMGDFが発生する。ポリPEG化した産物を得るためのMGDFとの還元的アルキル化反応の実例を図15に示す。さらに，前述のごとく，MGDF種のＮ−末端にあるα−アミノ基においてのみ実質的にPEG化を行う（モノPEG化された種）ような反応条件に操作することができる。・・・・PEG1個の付加反応，またはPEGが多数付加する反応のいずれかにおいては，−CH2−NH−基を介してPEG基がタンパク質に結合しているのが望ましい。特に−CH2−基を参照するにあたり，この結合型をここでは「アルキル」結合と呼ぶ。
　PEG1個が付加した産物を産生するための還元アルキル化を介して誘導体化では，MGDFの誘導体合成において利用できる（Ｎ−末端に対するリジンなどの）異なるタイプの１級アミノ基の反応性が異なることを利用する。この反応は，（後述する）PHにおいて，リジン残基におけるε−アミノ基と，タンパク質におけるＮ−末端残基のα−アミノ基との間におけるpKaの値に差があることを利点として実行することができる。かかる選択的誘導体化法によって，タンパク質へのアルデヒドなどの反応基を含む水溶性ポリマーの結合を制御する。ポリマーとのコンジュゲーションは，タンパク質のＮ−末端部において優位に発生し，リジンの側鎖のアミノ基などのその他の反応基においては有位な修飾が起こらない。」（１３頁右欄１９行〜１４頁右欄９行）
　
Ａ４「
　
　
　」（８４〜８５頁　第１４図，第１５図）
　
（３）刊行物Ｂ
Ｂ１「１．薬剤及び投与方法
　ポリエチレングリコール修飾遺伝子組換えヒト巨核球増殖発育因子（以下，ＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦという）は，国際公開ＷＯ９５／２６７４６に記載の方法を用いて，配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドを遺伝子組換え技術により大腸菌で生産し，そのＮ末端にポリエチレングリコール（平均分子量２０ｋＤａ）を化学的に結合させて得られたものである。１バイアル（１．０ｍＬ）あたりＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦをタンパク量として２５０μｇ含む注射剤を，希釈用溶液（ＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦを含まない溶媒）で１０倍希釈後，患者体重１ｋｇあたり２．５μｇ（タンパク量として）を１日１回１４日間静脈内投与した。
２．治験方法
　本試験の実施に先立って，実施計画の内容に関して実施施設の治験審査委員会で審議され承認された。また，本試験の実施にあたっては実施計画，日本国薬事法第１４条第３項及び第８０条の２に規定する基準，ヘルシンキ宣言ならびに医薬品の臨床試験の実施に関する基準（ＧＣＰ）及びその省令を遵守した。
  バイタルサイン，自覚症状及び他覚所見は，治験薬投与期間中は毎日，投与終了後経過観察第１週及び第２週は週３回以上，経過観察第３週及び第４週は週１回以上実施した。また，投与開始前６週間及び治験薬投与期間・経過観察期間中の輸血（血小板及び赤血球）についても調査した。血液学的検査は，治験薬投与期間ならびに経過観察第１週及び第２週は週３回以上，経過観察第３週及び第４週は週１回以上実施した。血液生化学検査，凝固・線溶系検査及び尿検査は，投与開始日及び投与２日目以降の全期間で週１回実施した。血中ＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦ濃度は，投与開始日の投与開始前，投与１５分後，２時間後及び８時間後，投与２日目の投与開始前，投与４日目，７日目，１０日目の投与開始前及び投与１５分後，投与１４日目の投与開始前，投与１５分後，２時間後及び８時間後，投与終了翌日及び投与終了２週間後の血清を用い，株式会社エスアールエル・テイジンバイオにて測定された。また，ＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦ及びＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦのタンパク部分に対する抗体価（ＲＩＡ法）ならびにＴＰＯ中和抗体（生物活性中和試験）は，投与開始前及び投与終了２週間後の血清を用い，株式会社エスアールエル・テイジンバイオにて測定された。」（１４頁下から２行〜１５頁下から２行）
　
Ｂ２「＜実施例１＞骨髄異形成症候群患者における試験例
　　　　　　　　　　・・・・・
　本症例においては，血小板数は図１の通り一過性の増加を示した。２．５μｇ／ｋｇ／日のＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦを患者に投与した１４日間は血小板数の持続的な増加傾向は認められなかったが，投与開始後１６日目から２８日目の間に血小板数は１６，０００／ｍｍ３から２１，０００／ｍｍ３まで増加，その後も増加傾向は持続し投与開始後４２日目には血小板数２５，０００／ｍｍ３に達した。その後，投与開始後５７日目には血小板数２２，０００／ｍｍ３と増加傾向が維持されたが，投与開始後７１日目には血小板数１２，０００／ｍｍ３と投与前と同様まで復した。」（１５頁最下行〜１６頁下から６行）
　
Ｂ３「＜実施例２＞骨髄異形成症候群患者における試験例
　　　　　　　　　　・・・・・
２．血小板数の変動
　本症例においては，血小板数は図４の通り一過性の増加を示した。２．５μｇ／ｋｇ／日のＰＥＧ−ｒＨｕＭＧＤＦを患者に投与した１４日間は血小板数の持続的な増加傾向は認められなかったが，投与開始後２１日目から２８日目の間に血小板数は２８，０００／ｍｍ３から３９，０００／ｍｍ３まで増加した後，投与開始後５２日目まで血小板数３８，０００／ｍｍ３と増加傾向が維持されたが，投与開始後８０日目には血小板数１６，０００／ｍｍ３と投与前と同様まで復した。」（１８頁５〜下から３行）
　
Ｂ４「
　
　」（５７頁　図１）
　
Ｂ５「　
　
　　」（５８頁　図４）
　
（４）刊行物Ｃ
Ｃ１「【０００６】
　プロテアーゼおよび免疫系から外因性酵素を隔離する一つの方法は，不活性で，無毒のポリマー，モノメトキシポリエチレングリコール（ＰＥＧ）をタンパク質の表面へ共有結合で結合させることである（Ｈａｍｓ　ａｎｄ　Ｚａｌｉｐｓｋｙ　１９９７）。Ｍｒ〜１．０００から＞１０，０００のＰＥＧの使用は，動物においていくつかの外来タンパク質の循環寿命を延長させ，免疫原性を減少させることを最初に示している（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ　ｅｔ　ａｌ．１９７７ａ；Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ　ｅｔ　ａｌ．１９７７ｂ；Ｄａｖｉｓ　ｅｔ　ａｌ．１９８１ａ；Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ　ｅｔ　ａｌ．１９８４；Ｄａｖｉｓ　ｅｔ　ａｌ．１９９１）。」
　
Ｃ２「【００６１】
　　　　　　　　　　・・・・・　
　
実施例６
　
構築物−担体複合体の非免疫原性
　　ＰＥＧ化組換え体ＰＢＣウリカーゼがホモ接合性ウリカーゼ欠損マウスに反復して注射されたが，促進されたクリアランスを誘導することはなく，有意な免疫原性が存在しないことと矛盾しない。このことはＥＬＩＳＡにより確認された。図４は反復注射後のウリカーゼ活性（血清で測定された）の循環寿命の維持を示している。ＰＥＧ化ＰＢＣウリカーゼは６−１０日間隔で腹腔内注射により投与された。血清ウリカーゼ活性は注射２４時間後に決定された。」
　
Ｃ３「　
　
　」（５５頁）
　
（５）刊行物Ｄ
Ｄ１「ポリエチレングリコールに結合した新規なメチオニナーゼ（「ＰＥＧ−メチオニナーゼ」または「ＰＥＧ化(PEGylated)メチオニナーゼ」）は，高いメチオニン枯渇活性，延長された半減期，および低い免疫原性を示す。したがって，ＰＥＧ化メチオニナーゼは，安定性を維持し，該酵素の血清半減期を延長し，免疫原性を低下させ，そして毒性を低下させる一方で，腫瘍増殖を阻止する新規な手段を提供する。
　安定で，長い半減期を有してメチオニン枯渇に有効であり，そして非免疫原性であるＰＥＧ化メチオニナーゼの発明は，安全で効果的な多数回投与用の抗腫瘍剤として利用可能である。・・・・・
　重要なことに，本発明のＰＥＧ−メチオニナーゼは，メチオニナーゼに感受性であって反復投与を必要とする癌患者を治療するのに該メチオニナーゼを特に望ましいものとする非免疫原性である。」（３５頁７〜２１行）
　
（６）刊行物Ｅ
Ｅ１「【００７１】　
　
リンカー
　“リンカー”基は随意選択である。リンカーが存在するとき、リンカーは主としてスペーサーとして機能するのでその化学構造を厳密に限定しなくてもよい。リンカーは好ましくは、ペプチド結合によって互いに結合されたアミノ酸から構成される。従って、好ましい実施態様では、ペプチド結合によって結合した１−２０個のアミノ酸からリンカーを構成し、これらのアミノ酸は２０種類の天然産生アミノ酸から選択する。当業者には容易に理解されるであろうが、これらのアミノ酸の幾つかはグリコシル化されていてもよい。より好ましい実施態様では、１−２０個のアミノ酸を、グリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミン及びリシンから選択する。もっと好ましくは、リンカーを構成するアミノ酸の大半をグリシン及びアラニンのような立体障害のないアミノ酸から構成する。従って、好ましいリンカーはポリグリシン（特に（Gly）４，（Gly）５）、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｌａ）及びポリアラニンである。」
　
第５　当審の判断
　
１　刊行物１に記載された発明
　
　刊行物１は，「血小板およびその前駆体細胞（例えば，巨核球）のインビトロおよびインビボ産生を刺激する能力を有する化合物」（１ｂ【０００２】）に関し記載するものであり，請求項１に記載の「構造TMP1-(L1)n-TMP2[式中・・である]を含んでなる，mp1受容体に結合する化合物」（１ａ）において，該「構造TMP1-(L1)n-TMP2[式中・・である]」の具体例として，請求項２４には，「Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA(配列番号：２５)」（１ａ）が記載されており，これは具体的に製造され（１ｈ【０１８１】【０１８２】），裏付けられている。
　
　そうすると，刊行物１には，
「Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA(配列番号：２５)を含んでなる，mp1受容体に結合する化合物。」
の発明（以下「引用発明」という。）が記載されていると認められる。
　
２　本願発明と引用発明との対比
　
（１）本願発明の「PEG-Fc-GGGGG-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA(配列番号：２)のアミノ酸配列を含む実質的に均質な化合物」について，配列番号：２のアミノ酸配列を含む化合物は，２つの「IEGPTLRQWLAARA」がリンカー「GGGGGGGG」を介し結合した二量体である「IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA」のＮ末端に，リンカーGGGGGを介して抗体のFc及びPEGが結合した化合物である。
　上記「実質的に均質な化合物」とは，本願明細書の記載より「この調製物が，調製物に含まれる全治療分子において検出可能な単一の治療化合物を含むことを意味する」（【００５７】）ことから，検出可能な単一の化合物といえる。　
　他方，引用発明の「Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA(配列番号：２５)を含んでなる」「化合物」について，配列番号：２５に示されるアミノ酸配列を含む化合物は，２つの「IEGPTLRQWLAARA」がリンカー「GGGGGGGG」を介し結合した二量体である「IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA」のＮ末端に，抗体のFcが結合した化合物である。そして，この化合物は検出可能な単一の化合物といえる。　
　そうすると，本願発明の「PEG-Fc-GGGGG-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA(配列番号：２)のアミノ酸配列を含む実質的に均質な化合物」と，引用発明の「Fc-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA(配列番号：２５)を含んでなる」「化合物」とは，「IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA」のＮ末端の方向にFcを有するアミノ酸配列を含む実質的に均質な化合物である点で，共通する。
　
（２）引用発明の「mp1受容体に結合する」とは，刊行物１の記載より，内因性トロンボポエチン（TPO）の活性を媒介する同じ受容体であるc-Mp1受容体（「mp1受容体」と同じ）に結合することである（１ｄ）。引用発明の化合物は，c-Mp1受容体に結合して該受容体を活性化させ，血小板の産生を刺激する能力及び／又は血小板前駆体の産生を刺激する能力を有するものである（１ｄ）。
　そして，上記（１）で述べたように，引用発明の化合物は，二量体であり，均質な化合物である。
　そうすると，本願発明の「当該化合物が，二量体であり，かつ，c-Mp1に結合して血小板産生を刺激する性質を有し，および，反復投与で生物有効性を改善する性質を有する，均質な化合物」と，引用発明の「mp1受容体に結合する化合物」とは，「当該化合物が，二量体であり，かつ，c-Mp1に結合して血小板産生を刺激する性質を有する，均質な化合物」である点で，共通する。
　
（３）したがって，両者は，　
「IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARAのＮ末端の方向にFcを有するアミノ酸配列を含む実質的に均質な化合物であって，当該化合物が，二量体であり，かつ，c-Mp1に結合して血小板産生を刺激する性質を有する，均質な化合物」である点で一致し，以下の点で相違するといえる。
　
相違点１：本願発明では，FcはリンカーGGGGGを介してIEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARAのＮ末端に結合し，さらにFcのＮ末端にPEGが結合しており，該PEGは20kDの分子量を有するものであるのに対し，引用発明では，FcはリンカーGGGGGを介さずIEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARAのＮ末端に結合しているものであり，さらにFcのＮ末端にPEGは結合していない点
　
相違点２：本願発明の化合物は，反復投与で生物有効性を改善する性質を有するのに対し，引用発明の化合物は，そのような性質を有するか明らかでない点
　
３　判断
　
（１）相違点について
　
ア　相違点１について
　
（ア）FcをリンカーGGGGGを介して，IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARAのＮ末端に結合させることについて
　刊行物１の請求項２４には，「mp1受容体に結合する化合物」の「構造」（１ａ 請求項１）の具体例として，引用発明の配列番号：２５のアミノ酸配列の他に，「Fc-GGGGG-IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARA(配列番号：３３)」（１ａ 請求項２４）も同列の具体例として記載されている。これは，FcがリンカーGGGGGを介してIEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARAのＮ末端に結合しているものである。
　加えて，刊行物１には，「mp1受容体に結合する化合物」につき，好ましい化合物の概要図として，図６Ａには，TMP（TPO模倣ペプチド：IEGPTLRQWLAARA）二量体のＮ末端でFc部分がリンカーL2を介して結合されているものが記載されている（１ｄ【００３３】，１ｊ）。
　一般に，ペプチドどうしを結合させる際，立体障害を回避する等の目的でスペーサーとしてリンカーを介して結合させること，好ましいリンカーとして立体障害のないポリグリシンGGGGGがあることは，本願優先日当時，周知技術である（Ｅ１）。
　そうすると，引用発明において，IEGPTLRQWLAARA-GGGGGGGG-IEGPTLRQWLAARAのＮ末端にFcを結合させる際，立体障害を回避し両者を結合させる目的で，mp1受容体に結合する化合物の概要図である図６Ａ及び引用発明と同列の具体例として記載されている配列番号：３３の配列を参酌しつつ，周知技術を適用し，リンカーとして立体障害のないポリグリシンGGGGGを介して結合させることは，当業者が容易になし得たことである。
　
（イ）FcのＮ末端にPEGを結合させ，該PEGが20kDの分子量を有するものであることについて　　
　刊行物１には，引用発明は担体と結合しても良く，好ましい担体としてポリエチレングリコール（PEG）があることが記載され（１ｆ），実際に図４には，血小板生成活性及び巨核球生成活性を有する巨核球成長・発生因子MGDFの１位から１６３位までのアミノ酸配列からなるポリペプチドのＮ末端に平均分子量20kDのPEGを結合させたものが記載されており（１ｄ【００３１】，１ｉ），該PEG化MGDFの作製方法として国際公開第95/26746号を参照するよう記載されている（１ｄ【００３１】）。実際に，国際公開第95/26746号のパテントファミリーである刊行物Ａには，MGDFのPEG化は当業界で周知となっているPEG化反応を利用して達成されること，及び，該MGDFのPEG化方法が詳述されている（Ａ３）。
　そして，刊行物１には，PEGの導入は，ペプチドを蛋白質分解より防御する及び腎臓濾過によるクリアランスを減速することにより，ペプチドのインビボ活性を増強すると予想されることも記載されている（１ｈ【０１９１】）。　
　そうすると，引用発明における，血小板生成活性及び／又は巨核球生成活性を有する追加的な新規化合物を提供するという課題の下（１ｃ），蛋白質分解より防御する及び腎臓濾過によるクリアランスを減速することによりインビボの血小板生成活性をより増強させた化合物を提供しようとして，引用発明において，刊行物１の上記記載を勘案してPEGを結合させようとし，本願優先日前周知技術であり，刊行物１でも引用している刊行物Ａ記載のPEG化方法（Ａ３）を適用して，引用発明のＮ末端アミノ基にPEGを結合させることは，当業者が容易になし得たことである。そして，この際結合させるPEGとして，刊行物１の図４で実際に結合させている平均分子量20kDのPEGを適用することに，格別の困難性はない。
　
イ　相違点２について
　
　本願発明の「反復投与で生物有効性を改善する」とは，本願明細書の実施例６の記載（【０３２７】）及び図１より，反復投与で血小板産生の減退を招かないことであると理解される。この点につき，以下検討する。
　刊行物１には，種々の「mp1受容体に結合する化合物」に関するサルにおけるインビボデータの結果として，「反復投与期は，単回投与期と比較して，血小板産生における高い応答を引き起こすようであった」（１ｈ【０２００】）と記載されている。　
　一般に，生物活性を有する蛋白質のPEG化は，見せかけの分子量を増加させることにより血流からの浄化率を低下させて半減期を長期化させたり，免疫原性を減少させたり，蛋白質の凝集を減少させる（Ｃ１，Ｄ１）のみならず，PEG化した該蛋白質を反復投与すると生物活性は減退しないことは，刊行物Ｂ及びＣの記載（Ｂ１ないしＢ５，Ｃ２，Ｃ３）からも理解されるように，本願優先日前，良く知られていた事項であり技術常識であった。
　そうすると，引用発明において，上記ア（イ）で述べた手法でそのＮ末端アミノ基にPEGを結合させたものは，上記技術常識に加え刊行物１の上記記載を勘案すると，反復投与で血小板産生の減退を招かないものであると当業者は予測し得たといえ，実際に該性質を確認し，該性質を引用発明の特徴の一つとして特定することに，格別の困難性はない。
　
（２）本願発明の効果について
　
　本願発明の効果は，本願明細書の記載を参酌しても，刊行物１及び周知事項から予測される範囲内のものであり，格別顕著なものではない。
　
４　まとめ
　
　したがって，本願発明は，その優先日前に頒布された刊行物１に記載された発明及び本願優先日前の周知事項に基いて当業者が容易に発明をすることができたものであるから，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　
第６　むすび
　
　以上のとおり，本願発明は特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないものであるから，その余について言及するまでもなく，この出願は，拒絶すべきものである。
　
　よって，結論のとおり審決する。