(57)【要約】      （修正有）【課題】パネポフェナンスリンよりも強いユビキチン化阻害活性を有する新規化合物、及びこの新規化合物乃至はパネポフェナンスリンの効率的な製造方法を提供する。【解決手段】新規のパネポフェナンスリン誘導体化合物及びその製造方法であって、カルボニル化合物と、ニトロソ化合物と、を不斉触媒の存在下で反応させる第１反応工程と、この第１反応工程により生成した生成物を、立体選択的に反応させ、前記新規化合物の誘導体を得る第２反応工程と、を備えた。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）で示される構造を有する新規化合物。
【化１】
2007238506.tif 000030
［式中、Ｒ１は水素原子、官能基を有していてもよい炭素数１から３０のアルキル基、置換基を有していてもよい炭素数６から１２のアリール基、置換基を有していてもよい炭素数６から１２のヘテロアリール基からなる群から選ばれるいずれか１種の基である。］
【請求項２】
請求項１に記載の新規化合物を有効成分として含有するユビキチン化阻害剤。
【請求項３】
請求項２に記載のユビキチン化阻害剤を有効成分として含有する医薬品。
【請求項４】
一般式（１）で示される構造を有する新規化合物の製造方法であって、
カルボニル化合物と、ニトロソ化合物と、を不斉触媒の存在下で反応させる第１反応工程と、
この第１反応工程により生成した生成物を、立体選択的に反応させ、前記新規化合物の誘導体を得る第２反応工程と、
を有する一般式（１）で示される構造を有する新規化合物の製造方法。
【化２】
2007238506.tif 000031
［式中、Ｒ１は水素原子、官能基を有していてもよい炭素数１から３０のアルキル基、置換基を有していてもよい炭素数６から１２のアリール基、置換基を有していてもよい炭素数６から１２のヘテロアリール基からなる群から選ばれるいずれか１種の基である。］
【請求項５】
前記不斉触媒は、プロリンである請求項４に記載の新規化合物の製造方法。
【請求項６】
前記第２反応工程は、前記第１反応工程により得られた生成物中のアミノオキシ基を還元的に切断して水酸基にする還元工程と、
前記水酸基をエポキシ化させるエポキシ化工程と、
このエポキシ化工程により得られたエポキシ化合物に、側鎖を導入する側鎖導入工程と、
を含む工程である請求項４又は５に記載の新規化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物に関する。具体的には、ユビキチン化阻害活性を有する新規化合物、及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
真核細胞の増殖制御機構において、蛋白質分解を調節するユビキチン−プロテアソーム系は重要な役割を担っており、ユビキチン−プロテアソーム系を介した蛋白質分解経路の異常は、癌や、炎症、神経疾患等の疾病要因の一つとして考えられている（非特許文献１参照）。
【０００３】
ユビキチンは、高度に保存された７６アミノ酸残基からなり、ユビキチン活性化酵素（以下Ｅ１酵素とする）、ユビキチン結合酵素（以下、Ｅ２酵素とする）、ユビキチンリガーゼ（以下、Ｅ３酵素とする）からなるマルチ酵素システムによって、標的蛋白質に付加されポリユビキチン鎖が形成され、標的蛋白質は最終的にプロテアソームで分解される。Ｅ１酵素は、単量体ユビキチンのＣ末端に存在するシステイン残基を活性化しチオエステルを形成した後に、Ｅ２酵素の反応性のあるシステイン残基へと転移し、Ｅ２酵素はＥ３酵素と協同的に作用し、標的蛋白質上のリシン残基のアミノ基にユビキチンを結合させる。
【０００４】
従って、Ｅ１酵素はユビキチン化経路の初期に重要な酵素であり、Ｅ１活性を阻害する薬剤はユビキチン−プロテアソーム系の異常が要因の１つとして考えられる様々な疾病の治療薬になりうる。これまでに、Ｅ１酵素阻害剤としては、パネポフェナンスリン（ｐａｎｅｐｏｐｈｅｎａｎｔｈｒｉｎ）が報告されている（非特許文献２参照）。
【０００５】
また、既に様々なところでこの化合物の全合成の検討がなされている（非特許文献３から６参照）。
【非特許文献１】Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ  ２００１，  ６，  ２４４
【非特許文献２】Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２００２，６５，１４９１
【非特許文献３】Ｌｅｉ，Ｘ．；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｒ．Ｐ．；Ｐｏｒｃｏ，Ｊ．Ａ．，Ｊｒ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００３，４２，３９１３．
【非特許文献４】Ｍｏｓｅｓ，Ｊ．Ｅ．；Ｃｏｍｍｅｉｒａｓ，Ｌ．；Ｂａｌｄｗｉｎ，Ｊ．Ｅ．；Ａｄｌｉｎｇｔｏｎ，Ｒ．Ｍ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００３，５，２９８７．
【非特許文献５】（ａ）Ｍｅｈｔａ，Ｇ．；Ｒａｍｅｓｈ，Ｓ．Ｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００４，４５，１９８５．
【非特許文献６】（ｂ）Ｍｅｈｔａ，Ｇ．；Ｉｓｌａｍ，Ｋ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００４，４５，７６８３．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献２に開示されているパネポフェナンスリンは、細胞膜透過性に乏しく、医薬品として使用するためには、パネポフェナンスリンを多量に添加しなければならない。
【０００７】
また、パネポフェナンスリンを合成する場合において、非特許文献３に開示されている方法は、光学活性体を得る為に不斉エポキシ化を行っている方法が開示されているが、原料の１．６等量の不斉補助剤を必要とし、大量合成には不向きである。更に、非特許文献４に開示されている合成方法は、ラセミ体の合成であり、必要とする光学活性体が合成されていない。更に、非特許文献５，６に開示されている方法は、酵素を用いた光学分割を行っており、生成物の半分は不要な鏡像異性体である。この鏡像異性体は、環境に良くなく、また製造コストもかかる。
【０００８】
以上の課題に鑑み、本発明はパネポフェナンスリンよりも強いユビキチン化阻害活性を有する新規化合物を提供することを目的とする。また本発明は、この新規化合物及びパネポフェナンスリンの効率的な製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、パネポフェナンスリンの原料物質と不斉触媒を用いることにより、得られた誘導体から、パネポフェナンスリンよりもユビキチン化阻害活性の高い新規物質を効率的に合成することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。また、この誘導体の合成方法を経由して、パネポフェナンスリンを製造したところ、従来の合成方法よりも、より効率的に製造することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。具体的には以下のものを提供する。
【００１０】
（１）  一般式（１）で示される構造を有する新規化合物。
【化１】
2007238506.tif 000002
［式中、Ｒ１は水素原子、官能基を有していてもよい炭素数１から３０のアルキル基、置換基を有していてもよい炭素数６から１２のアリール基、置換基を有していてもよい炭素数６から１２のヘテロアリール基からなる群から選ばれるいずれか１種の基である。］
【００１１】
パネポフェナンスリンは、下記の構造式（２）で示される構造を有している。（１）の発明によれば、新規化合物のＲを、アルキル基やアリール基、ヘテロアリール基としたことによって、パネポフェナンスリンよりも高いユビキチン化阻害活性を付与することが可能となる。
【化２】
2007238506.tif 000003
【００１２】
（２）  （１）に記載の新規化合物を有効成分として含有するユビキチン化阻害剤。
【００１３】
（２）の発明によれば、上記の新規化合物を有効成分として含有したことにより、パネポフェナンスリンを有効成分として含有するユビキチン化阻害剤よりも、より即効性のあるユビキチン化阻害剤を製造することが可能となる。また、パネポフェナンスリンよりも少ない量でも同等の活性を有するユビキチン化阻害剤を得ることが可能となる。
【００１４】
（３）  （２）に記載のユビキチン化阻害剤を有効成分として含有する医薬品。
【００１５】
（３）の発明によれば、上記の新規化合物を有効成分として含有したことにより、パネポフェナンスリンを有効成分として含有する医薬品よりも、より即効性のある医薬品を製造することが可能となる。また、パネポフェナンスリンよりも少ない量でも同等の効果を奏する医薬を得ることが可能となる。これにより、副作用の心配が少ない医薬品を提供することが可能となる。
【００１６】
（４）  一般式（１）で示される構造を有する新規化合物の製造方法であって、カルボニル化合物とニトロソ化合物と、を不斉触媒の存在下で反応させる第１反応工程と、この第１反応工程により生成した生成物を、立体選択的に反応させ、前記新規化合物の誘導体を得る第２反応工程と、を有する一般式（１）で示される構造を有する新規化合物の製造方法。
【００１７】
パネポフェナンスリンや、（１）から（３）に記載の新規化合物を製造する際に重要となるのは、生成物の立体選択性の制御である。従って（４）の発明によれば、第１反応工程を、不斉触媒の存在下で反応させたことによって、光学活性化合物を得ることが可能となる。その結果、第２反応工程を立体選択的に進行させることが可能となる。これによって高い収率でパネポフェナンスリンや新規化合物を得ることが可能となる。
【００１８】
（５）  前記不斉触媒は、プロリンである（４）に記載の新規化合物の製造方法。
【００１９】
プロリンは高い立体選択性を付与する触媒である。従って、（５）の発明によれば、第１反応工程における不斉触媒を、プロリンとしたことによって、第１反応工程を、プロリンの存在下で反応させたことによって、高い光学活性を有した化合物を得ることが可能となる。また、プロリンは安価であることから、パネポフェナンスリンや新規化合物を工業的に大量合成することが可能となる。また、プロリンは安定した物質であることから、安全に合成することができ、かつ、有機物廃液による環境汚染の心配も少ない。
【００２０】
（６）  前記第２反応工程は、前記第１反応工程により得られた生成物中のアミノオキシ基を還元的に切断して水酸基にする還元工程と、前記水酸基をエポキシ化させるエポキシ化工程と、このエポキシ化工程により得られたエポキシ化合物に、側鎖を導入する側鎖導入工程と、を含む工程である（４）又は（５）に記載の新規化合物の製造方法。
【００２１】
（６）の発明によれば、第２反応工程を、還元工程、エポキシ化工程及び側鎖導入工程含む工程としたことによって、より高い立体選択性を付与することが可能となった。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、第１反応工程を、不斉触媒の存在下で反応させたことによって、光学活性化合物を得ることが可能となる。その結果、第２反応工程を立体選択的に進行させることが可能となる。これによって高い収率でパネポフェナンスリンや新規化合物を得ることが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
以下、本発明の実施形態について説明する。
【００２４】
［新規物質］
本発明に係る新規化合物は、一般式（１）で示される。
【化３】
2007238506.tif 000004
［式中、Ｒ１は水素原子、官能基を有していてもよい炭素数１から３０のアルキル基、置換基を有していてもよい炭素数６から１２のアリール基、置換基を有していてもよい炭素数６から１２のヘテロアリール基からなる群から選ばれるいずれか１種の基である。］
【００２５】
ここで、「官能基を有していてよい炭素数１から３０のアルキル基」とは、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔ−ペンチル基、イソアミル基、ｎ−へキシル基等の直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基が挙げられる。また、官能基を有していてもよいアルキル基としては、アルキル基又はアリール基で置換されたシリル基、アルコキシ基、アミノ基、アミド基、水酸基等が挙げられる。
【００２６】
また、「置換基を有していてもよい炭素数６から１２のアリール基」とは、トリル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、又はこれらのアリール基を、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基等の直鎖又は分岐状のアルキル基、又は上述のような官能基を有していてもよいアルキル基で置換した基等が挙げられる。
【００２７】
また、「置換基を有していてもよい炭素数６から１２のヘテロアリール基」とは、ヘテロアリール基であって、酸素原子、窒素原子及びイオウ原子から選択される、１個から３個のヘテロ原子を含む、単環又は２環の、芳香族基をいう。このヘテロアリール基は、１個以上のハロゲン原子で置換されていてもよい基をいう。具体的には、フラン、チオフェン、イミダゾール、インドール、等が挙げられる。中でも、Ｒが、水素原子、又は炭素数４から８のアルキル基であることが好ましい。
【００２８】
［製造方法］
この一般式（１）で示される新規化合物は、下記に示す製造方法により製造された誘導体から製造される。なお、この誘導体からは、新規化合物だけではなく、パネポフェナンスリンを製造することが可能である。
【００２９】
＜誘導体の合成＞
誘導体は、カルボニル化合物と、ニトロソ化合物と、を不斉触媒の存在下で反応させる第１反応工程と、この第１反応工程により生成した生成物を、立体選択的に反応させ、前記新規化合物の誘導体を得る第２反応工程を経て製造される。
【００３０】
第１反応工程において、出発原料となる「カルボニル化合物」は、不斉触媒と反応する化合物である。また、このカルボニル化合物は、カルボニル基と、２以上のオキシ基若しくはチオ基と、を有する炭素数８から３０の環状化合物であることが好ましい。更に、環状化合物中のカルボニル基とオキシ基若しくはチオ基は、それぞれ別々の脂環に配されていることが好ましい。具体的には下記の構造式（３）又は（４）で示されることが好ましい。
【化４】
2007238506.tif 000005
［式中、Ｒ２，Ｒ３はそれぞれ独立して炭素数１から２３のアルキル基であり、Ｒ２とＲ３が一緒になって環を形成していてもよい。］
【００３１】
Ｒ２，Ｒ３の「アルキル基」とは、直鎖状であっても分岐状であってもよい。具体的には、上述のようにメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔ−ペンチル基、イソアミル基、ｎ−へキシル基等の直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキル基が挙げられる。
【００３２】
第１反応工程のもうひとつの出発原料である「ニトロソ化合物」は、下記の一般式（５）で示されるものをいう。ここで、Ｒ４は、アリール基、ヘテロ環、アルキル基、アルケニル基又はアルキニル基を示す。これらは全て置換基を有していてもよい。
【化５】
2007238506.tif 000006
【００３３】
アリール基としては、置換基を有していてもよいフェニル基、ナフチル基等が挙げられる。中でもフェニル基であることが好ましい。また、置換基は、炭素数１から１５の直鎖状又は分岐状のアルキル基であることが好ましい。
【００３４】
ヘテロ環基のヘテロ環としては、ピペリジン、フラン、チオフェン、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、ジオキソラン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、ジオキサン、ジチアン、モルホリン、アゼピン、オキセピン、チエピン等が挙げられる。
【００３５】
上述と同様に、アリール基及びヘテロ環基も置換基を有していてもよい。このような置換基としては、アルキル基、アルケニル基、ニトロ基、ハロゲン原子（たとえば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子）等が挙げられる。
【００３６】
アルキル基は、炭素数が１から２０のものが好ましく、特に炭素数１から５のものが好ましい。具体的には、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、ｎ−オクチル基、２−エチルヘキシル基、ｔ−オクチル基、ノニル基、デシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、２−ヘキシルデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、イコシル基等が挙げられる。
【００３７】
アルケニル基は、炭素数が２から２０のものが好ましく、炭素数２から５程度のものがより好ましい。アルケニル基としては、例えば、ビニル基、アリル基等のプロペニル基、ブチリル基、ペンテニル基、ヘキセニル基、ヘプテニル基、オクテニル基、ノネニル基、デセニル基、ウンデセニル基、ドデセニル基、トリデセニル基、テトラデセニル基、ペンタデセニル基、ヘキサデセニル基、ヘプタデセニル基、オクタデセニル基、ノナデセニル基、イコセニル基等が挙げられる。アルケニル基は、更に置換基を有していてもよく、このような置換基としては、上記のアリール基、ヘテロ環基等が挙げられる。
【００３８】
また、Ｒ４で示されるアルキニル基としては炭素数２から２０のものが好ましく、特に２から５のものが好ましい。
【００３９】
このようなニトロソ化合物の中でも、ニトロソベンゼンを用いることが好ましい。
【００４０】
また、この第１反応工程では不斉触媒として、下記の一般式（６）で示される構造を有するプロリン又はプロリン誘導体を用いることができるが、立体選択性や反応性の面を考慮すると、プロリンを用いることが好ましい。
【化６】
2007238506.tif 000007
【００４１】
上記式中、Ａは水素原子、アルコキシ基、アリールオキシ基、アシルオキシ基又は置換基を有していてもよいシリルオキシ基を示す。ここで、アルコキシ基としては、炭素数１から２０のもの、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基等が挙げられる。また、アリールオキシ基としては、フェニルオキシ基、ナフチルオキシ基等が挙げられる。アシルオキシ基としてはアセトキシ基、ベンゾイルオキシ基等が挙げられる。シリルオキシ基の置換基としては、アルキル基、アリール基、アルケニル基等が挙げられる。
【００４２】
第１反応工程における反応条件としては、まず、出発原料であるカルボニル化合物と、ニトロソ化合物と、を有機溶媒に溶解して、溶液を調製する。ここで、不斉触媒であるプロリン、又はプロリン誘導体は、ニトロソ化合物に対して、０．０１当量から１当量用いることが好ましく、特に０．０５当量０．３当量用いることがより好ましい。
【００４３】
ここで用いる有機溶媒としては、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ニトロメタン（ＣＨ３ＮＯ２）、Ｎ−メチル−ピロリジノン、アセトニトリル（ＣＨ３ＣＮ）、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）、ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）、等の極性溶媒が好ましいが、これらに限定されない。
【００４４】
得られた、ケトンとプロリン又はプロリン誘導体の反応溶液は、−５０℃から２５℃、好ましくは−１０℃から１０℃に冷却することが好ましく、次の反応時もこの温度を保つことが好ましい。また、この反応において、Ｌ−プロリンを用いると、α−アミノオキシケトンは（Ｒ）体が主生成物となり、Ｄ−プロリンを用いるとα−アミノオキシケトンは（Ｓ）体が主生成物となる。
【００４５】
この第１反応工程により生成した物質は、高い立体選択性を有している。
【００４６】
次いで、この第１反応工程により得られた生成物を、第２反応工程にて立体選択的に反応させることにより、本発明に係る新規化合物又はパネポフェナンスリンの誘導体を合成する。
【００４７】
この第２反応工程は、第１反応工程により得られた生成物中を還元する還元工程と、保護基の脱保護、脱水、水酸基の保護、エポキシ化工程と、二重結合の導入及び側鎖導入工程と、を含む工程である。
【００４８】
まず、「還元工程」とは、第１反応工程により得られた生成物中のアミノオキシ基を還元的に切断して水酸基にする工程をいう。このとき、還元剤としては、パラジウム／カーボン、白金／カーボン、水酸化パラジウム等を水素雰囲気下で用いることが好ましい。または硫酸銅を用いてもよい。
【００４９】
また、反応温度は、−１０℃から１００℃であることが好ましく、０℃から３０℃であることがより好ましい。更に反応時間は、５分から１２０時間であることが好ましく、１時間から１０時間であることがより好ましい。
【００５０】
また、溶剤としては、メタノール、テトラヒドロフラン、アセトン、エタノール等を用いることが好ましい。
【００５１】
次いで「エポキシ化工程」とは、還元工程により得られた生成物の保護基の脱保護、脱水反応で得られたアルケンを、エポキシ化させる工程をいう。このとき、使用可能な触媒としては、水酸化ベンジルトリメチルアンモニウム、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン等を用いることが好ましい。
【００５２】
また、反応温度は、−４０℃から１００℃であることが好ましく、−１０℃から３０℃であることがより好ましい。更に反応時間は、１０分間から１２０時間であることが好ましく、５分間から３時間であることがより好ましい。
【００５３】
また、溶剤としては、メタノール、テトラヒドロフラン、アセトン、エタノール等を用いることが好ましい。
【００５４】
次いで、「側鎖導入工程」とは、上記エポキシ化工程により得られたエポキシ化合物に、側鎖を導入する工程をいう。側鎖の導入は、エポキシ化合物をシリルエノールエーテルに導き、酸化反応によりシクロヘキセノン誘導体に変換する。ケトンのα−位に、ハロゲン原子を導入し、Ｓｔｉｌｌ反応又は鈴木反応により行なわれる。
【００５５】
ここで、導入される側鎖としては、例えば１−エチニル、１−プロペニル、１−ブラニル等の１−アルケニルである。
【００５６】
また、反応温度は、０℃から２００℃であることが好ましく、３０℃から１５０℃であることがより好ましい。更に反応時間は、１分から２４時間であることが好ましく、１分から１時間であることがより好ましい。
【００５７】
また、溶剤としては、トルエン、テトラヒドロフラン等を用いることが好ましい。
【００５８】
このようにして得られた誘導体により、パネポフェナンスリンや、本発明に係る新規化合物を、効率よく得ることが可能となる。
【００５９】
［ユビキチン化阻害剤の製法］
本発明に係る新規化合物は、ユビキチン化阻害剤として使用することができる。例えば、ユビキチン化阻害活性があまり強くない医薬品に含有することにより、ユビキチン化阻害効果をより増強させることは可能となる。
【００６０】
ユビキチン化阻害剤の具体的な製法としては、上述の方法で新規化合物、又はパネポフェネンスリンを製造し、所定量をユビキチン化阻害活性があまり強くない医薬品に添加する。好ましい添加量としては、医薬品１００ｍｇあたり０．０１ｍｇから１０ｍｇであることが好ましく、医薬品１００ｍｇあたり０．１ｍｇから１ｍｇ含有することが更に好ましい。
【００６１】
［医薬品の製法］
医薬品に関しては、本発明に係るユビキチン化阻害剤をそのまま、あるいは水等で希釈して、投与できる。もしくはこれを公知の医薬用担体と共に製剤化することができる。
【００６２】
医薬品中のユビキチン化阻害剤の用量は、患者の年齢、状態、及び体重、並びに適用様式に依存する。一般に、活性成分の一日の用量は経口適用で約０．５ｍｇ／体重ｋｇから５０ｍｇ／体重ｋｇであり、かつ非経口適用で約０．１ｍｇ／体重ｋｇから１０ｍｇ／体重ｋｇであることが好ましい。
【００６３】
医薬品の剤型としては例えば、散剤、顆粒剤、細粒剤、ドライシロップ剤、錠剤、カプセル剤、軟膏剤、注射剤あるいは点眼剤等が挙げられる。これらの医薬品は、その剤型に応じ、調剤学上使用される手法により適当な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤などの医薬品添加物と適宜混合または希釈・溶解し、常法に従い調剤することにより製造することができる。
【００６４】
例えば、医薬品の調製において、本発明に係るユビキチン化阻害剤に、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリルフマル酸ナトリウム及びポリエチレングリコールワックス類等の崩壊剤や、滑沢剤を添加してもよい。更に、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、スターチ、アミロペクチン、セルロース誘導体、ゼラチン等を混合してもよい。
【００６５】
カプセル剤に調製する場合には、植物性オイル、脂肪又は他の軟ゼラチンカプセルに、適切な賦形剤の混合物を含むカプセルとともに調製されることが好ましい。また、硬ゼラチンカプセルは、活性化合物の顆粒を含んでいてもよい。
【００６６】
シロップ剤又は懸濁剤を調製する場合には、糖又は糖アルコール及びエタノール、水、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及びこれらの混合物を添加することが好ましい。また、更に着色剤、香味剤、保存剤、サッカリン及びカルボキシメチルセルロース又は他の増粘剤を含んでもよい。液剤は、また、使用前に適切な溶媒に溶解するドライパウダーの形態に調製していてもよい。
【００６７】
非経口投与用の溶液として調製する場合には、薬剤的に受容可能な溶媒に、ユビキチン化阻害剤を溶解させた溶液として調製される。またこれらの溶液は、安定化成分及び／又は緩衝化成分を含む。また非経口投与用の溶液は使用前に適切な溶媒に溶解する乾燥製剤として調製してもよい。
【実施例】
【００６８】
［新規化合物及びパネポフェナンスリンの合成］
本発明に係る新規化合物及びパネポフェナンスリンは、下記の合成スキーム（Ａ）中の（１０）で示される誘導体より合成される。以下、それぞれの段階の反応について説明する。以下に示す化合物の番号は、全てこの合成スキーム（Ａ）に基づく。
【化７】
2007238506.tif 000008
全ての反応は、アルゴン雰囲気下で行なわれた。また、生成物は、薄層クロマトグラフィーにより確認した。また、生成物の同定は、偏光計（日本分光社製）、ＦＴ−ＩＲスペクトル（株式会社堀場製作所製）、ＮＭＲスペクトル（ブルカー・バイオスピン株式会社、日本電子株式会社製）を使用した。
【００６９】
＜（Ｒ）−７−アニリノキシ−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−８−オンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（４）で示される（Ｒ）−７−アニリノキシ−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−８−オンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化８】
2007238506.tif 000009
【００７０】
まず、上記合成スキーム中の構造式（３）で示される化合物１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−８−オン（２７５ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）と、Ｄ−プロリン（２３ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）とのジメチルホルムアミド溶液（９．０ｍｌ）に、ニトロソベンゼン（２１４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）が溶解されているジメチルホルムアミド溶液（３ｍｌ）を、０℃のもと、１２時間かけて徐々に添加する。添加後３０分間攪拌した。その後ｐＨ７のリン酸緩衝液を添加することにより、反応を終了させた。次いで、酢酸エチルを添加して生成物を抽出し、更に塩水で生成物を洗浄した。洗浄後の生成物に、無水硫酸ナトリウムを添加して脱水した。これらを濾過して減圧留去したものを、精製した。精製は、クロマトグラフィー（移動相は酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０から１：４の混合液）により行なわれた。なお、得られた生成物の収率は、９３％であった。
【００７１】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．８８−２．０４（２Ｈ，ｍ），２．１６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ），２．３６−２．４６（２Ｈ，ｍ），２．６２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１４．０，６．８Ｈｚ），４．３８−４．２１（４Ｈ，ｍ），４．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．９，６．５Ｈｚ），６．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），６．９０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．２０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）： δ３４．９，３６．０，３９．７，６４．８，６４．９，８２．７，１０７．６，１１４．５，１２２．２，１２８．９，１４８．０，２０８．６；
ＩＲ（ＫＢｒ）：２９６０，２８８８，１７２８，１６０２，１４９４，１３０５，１１２２，１０５２ｃｍ−１；
［α］Ｄ１８＋７８．７（ｃ＝１．２，ＣＨＣｌ３），＞９９％ｅｅ；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ１４Ｈ１７ＮＯ４］：２６３．１１５８，実測値：２６３．１１７２．
【００７２】
鏡像体過剰率は、高速液体クロマトグラフィーを用いて算出した。なお、このときの測定条件は以下の通りである。
カラム：ＯＤ−Ｈカラム（ヘキサン、２−プロパノール１０：１の混合溶液）
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
ｍａｊｏｒ  ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ  ｔｒ＝２６．５ｍｉｎ
ｍｉｎｏｒ  ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ  ｔｒ＝２９．１ｍｉｎ
【００７３】
＜１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７，８−ジオールの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（６）で示される１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７，８−ジオールの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化９】
2007238506.tif 000010
【００７４】
上記の方法で合成した構造式（４）で示されるα−アミノキシケトン（３．０ｇ，１２ｍｍｏｌ）が溶解されたテトラヒドロフラン溶液（７７ｍｌ）に、還元剤として、水素化トリ（ｓｅｃ−ブチル）ホウ素カリウム（商標：Ｋ−セレクトリド）（２３．１ｍｌ，２３．１ｍｍｏｌ）を、−７８℃のもと添加した。次いで溶液の温度を、−５０℃まで上昇させ、１．５時間反応させた。次いで、この反応溶液に、ＭｅＢＯ３（１０．８ｇ，０．０７０１ｍｍｏｌ）と、水（２３ｍｌ）を添加し、室温で２時間攪拌した。その後、２相に分離した相のそれぞれを抽出し、有機相を塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムを添加して脱水した。得られた生成物４．６ｇは、アルコールに置換するために、精製することなくそのまま次の反応に用いた。
【００７５】
上記の生成物にメタノール（３８ｍｌ）を加え、更にパラジウム／カーボン触媒（１０ｗｔ％）３０４ｍｇを添加して、室温にて３時間、水素雰囲気下で攪拌した。次いで生成物を、セルライトのフィルターで濾過し、減圧留去したものを精製した。精製は、クロマトグラフィー（移動相は酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０から１：４の混合液）により行なわれた。なお、得られた生成物の収率は、８５％であった。
【００７６】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．４０−１．５０（１Ｈ，ｍ），１．６０−１．８０（４Ｈ，ｍ），１．８０−１．９０（１Ｈ，ｍ），３．２０（１Ｈ，ｓ），３．５４（１Ｈ，ｓ），３．６７（１Ｈ，ｓ），３．７９（１Ｈ，ｓ），３．８２−３．８８（４Ｈ，ｍ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２６．５，３０．１，３７．５，６４．０，６４．２，６９．１，７０．０，１０８．６；
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４１７，２９５８，２９３５，２８８８，１４４２，１１４４，１１０１，１０５９ｃｍ−１；
［α］Ｄ２１＋２．６（ｃ＝１．５，ＣＨＣｌ３）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ８Ｈ１４Ｏ４Ｎａ］：１９７．０７８５，実測値：１９７．１７８４．
【００７７】
＜４−ヒドロキシ−シクロヘキシ−２−エノンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（７）で示される４−ヒドロキシ−シクロヘキシ−２−エノンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化１０】
2007238506.tif 000011
【００７８】
上記の方法で合成した構造式（６）で示されるジオール（１１８ｍｇ、０．６７７ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（９．７ｍｌ）と水（０．９７ｍｌ）とアセトン（０．９７ｍｌ）の混合溶液に添加した。更に、イオン交換樹脂（商品名：アンバーライト１５（２０質量％））を２４．２ｍｇ添加して、８０℃のもと１５時間攪拌した。反応後の溶液に無水硫酸マグネシウムを添加して脱水し、減圧留去した。次いで、クロマトグラフィー（移動相は酢酸エチル：ヘキサン＝３：１の混合液）を用いて精製した。なお、得られた生成物の収率は、８５％であった。
【００７９】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １．９４−２．０２（１Ｈ，ｍ），２．３０−２．４０（２Ｈ，ｍ），２．４０−２．５０（１Ｈ，ｓ），２．５２−２．５９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１７．４，４．７Ｈｚ），４．５４−４．５７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．８，４．６，２．２Ｈｚ），５．９３−５．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），６．９０−６．９３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１０．０，１．８Ｈｚ） ；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ３２．４，３５．３，６６．３，１２９．２，１５２．９，１９８．９；
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４１９，２９５４，２８７１，１６６０，１２０５，１０６６，９７０，９４３，８６４ｃｍ−１；
［α］Ｄ３０＋９２．３（ｃ＝０．７，ＣＨＣｌ３）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ６Ｈ８Ｏ２］：１１２．０５２４，実測値：１１２．０５３１．
【００８０】
＜５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−２−オンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（８）で示される５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプタン−２−オンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化１１】
2007238506.tif 000012
【００８１】
上記の方法で合成した構造式（７）で示されるエノン（１００ｍｇ、０．８９２ｍｍｏｌ）と、ターシャリーブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＳＣｌ）（３４１ｍｍｇ，２．２７ｍｍｏｌ）が溶解されたジメチルホルムアミド（１．８ｍｌ）に、イミダゾール（１６８ｍｇ，２．４７ｍｍｏｌ）を加え、０℃のもと、１時間攪拌した。その後ｐＨ７のリン酸緩衝液を添加することにより、反応を終了させた。次いで、酢酸エチルを添加して生成物を抽出し、更に塩水で生成物を洗浄した。洗浄後の生成物を、無水硫酸ナトリウムを添加して脱水した。これを濾過して減圧留去したものを精製した。精製は、クロマトグラフィー（移動相は酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０から１：４の混合液）により行なわれた。なお、得られた生成物の収率は、７５％であった。
【００８２】
次いで、上記反応により得られた生成物（構造式（７）で示されるエノンのエステル化合物）（３４５ｍｇ，１．５２ｍｍｏｌ）を、０℃のもとテトラヒドロフラン（９．５ｍｌ）に溶解させ、更に過酸化水素水（０．８８ｍｌ，７．６３ｍｍｏｌ）と、水酸化ベンジルトリメチルアンモニウム（６９μＬ，０．１５ｍｍｏｌ）を加え、０℃のもと０．５時間反応させた後に、塩化アンモニウム溶液を加えて反応を終了させた。
【００８３】
次いで、水相を酢酸エチルで抽出した。有機相は塩水と炭酸ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。更に、有機相に無水硫酸ナトリウムを添加して脱水し、減圧留去した。次いで、クロマトグラフィー（移動相は酢酸エチル：ヘキサン＝１：５０の混合液）を用いて精製した。なお、得られた生成物の収率は、７６％であった。
【００８４】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
構造式（７）で示されるエノンのエステル化合物
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．０１（３Ｈ，ｓ），０．０２（３Ｈ，ｓ），０．８１（９Ｈ，ｓ），１．９０−２．００（１Ｈ，ｍ），２．１０−２．２０（１Ｈ，ｍ），２．２６−２．３５（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７，１７．０，４．５Ｈｚ），２．４９−２．５６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１６．８，４．４Ｈｚ），４．４６−４．５１（１Ｈ，ｔｔ，Ｊ＝６．８，２．１Hｚ），５．８６−５．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ），６．７７−６．８０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１０．２，１．８Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．４，１．４，１８．３，２６．１，３３．３，３５．９，６７．４，１２９．１，１５４．３，１９９．３；
ＩＲ（ＫＢｒ）：２９５４，２８５８，１６９１，１４７１，１３８３，１２５２，１１０３，８６０，８３７ｃｍ−１；
［α］Ｄ３０＋９７．９（ｃ＝１．２，ＣＨＣｌ３）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ１１Ｈ１９Ｏ２Ｓｉ］［Ｍ−ＣＨ３］＋：２１１．１１５４，実測値：２１１．１１８６．
【００８５】
構造式（８）で示されるエポキシド
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．０３（３Ｈ，ｓ），０．０４（３Ｈ，ｓ），０．８１（９Ｈ，ｓ），１．５９−１．６６（１Ｈ，ｍ），１．９７−２．０５（１Ｈ，ｍ），２．２０−２．３５（２Ｈ，ｍ），３．１７−３．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），３．３７−３．３９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），４．３６−４．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．８，３．１Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ−５．０、−４．９，１７．９，２５．４，２５．５，３１．５，５４．８，５７．９，６５．１；
ＩＲ（ＫＢｒ）：２９５４，２８５８，１７１６，１４７３，１３６２，１２５４，１０９２，９８１，８３９，７７７ｃｍ−１；
［α］Ｄ３０−４８．５（ｃ＝１．０，ＣＨＣｌ３）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ１１Ｈ１９Ｏ３Ｓｉ］  ［Ｍ−ＣＨ３］＋：２２７．１１０３，実測値：２２７．１０７５．
【００８６】
＜５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（９）で示される５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化１２】
2007238506.tif 000013
【００８７】
上記の方法で合成した構造式（８）で示されるエポキシド（１０５ｍｇ、０．４３３ｍｍｏｌ）と、トリエチルアミン（０．９ｍｌ、６．７１ｍｍｏｌ）が溶解されているアセトニトリル溶液（２．２ｍｌ）に、０℃もと、塩化トリメチルシリル（ＴＭＳＣｌ）（０．８ｍｌ，６．５０ｍｍｏｌ）を添加した。これを室温にて４５時間攪拌して反応させ、ｐＨ７のリン酸緩衝液を添加して、反応を終了させた。得られた生成物を酢酸エチルで抽出した。
【００８８】
次いで、有機相を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムを加えて脱水した。更に、有機相に無水硫酸ナトリウムを添加して脱水し、減圧留去した。得られたトリメチルシリル体は、精製せずに次の反応に使用した。
【００８９】
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２ｄｂａ３・ＣＨＣｌ３）（６２．７ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）と、ジアーリルカルボナート（５８μｌ、０．４０ｍｍｏｌ）を、上記の生成物のアセトニトリル溶液（７．２ｍｌ）に添加し、室温にて４時間攪拌した。その後ｐＨ７のリン酸緩衝液を添加することにより、反応を終了させ、有機相をクロロホルムで抽出した。次いで、有機相に無水硫酸ナトリウムを添加して脱水し、減圧留去した。次いで、クロマトグラフィー（移動相は酢酸エチル：ヘキサン＝１：５０の混合液）を用いて精製した。なお、得られた生成物の収率は、７８％であった。
【００９０】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．１２（３Ｈ，ｓ），０．１５（３Ｈ，ｓ），０．８９（９Ｈ，ｓ），３．４２−３．４２（１Ｈ，ｍ），３．６０−３．６２（１Ｈ，ｍ），４．６２−４．６３（１Ｈ，ｍ），５．９４−５．９７（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１０．５，１．３Ｈｚ），６．５０−６．５４（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１０．５、４．５，２．７Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ−４．７，−４．５，１８．１，２５．６，５３．３，５８．４，６３．６，１２６．２，１４４．３，１９３．２；
ＩＲ（ＫＢｒ）：２９５６，２９３１，２８５８，１６９３，１２６１，１０９２，８３９，８０６，７７９ｃｍ−１；
［α］Ｄ２０−３４０（ｃ＝３．２０，ＣＨ２Ｃｌ２）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ１２Ｈ２０Ｏ３Ｓｉ］：  ２４０．１１８２，実測値：２４０．１０９０．
【００９１】
＜５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−ヨード−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（１０）で示される５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−ヨード−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化１３】
2007238506.tif 000014
【００９２】
ヨード（３０５ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）が溶解したジエチルエーテル（１．５ｍｌ）とピリジン（１．５ｍｌ）の混合溶液を０℃、暗室で２０分間攪拌した。この反応液に、上記の方法で合成した構造式（９）で示されるエノン（１４４ｍｇ、０．６００ｍｍｏｌ）を添加して、０℃のもと、２時間攪拌した。その後ｐＨ７のリン酸緩衝液を添加することにより、反応を終了させ、有機相を酢酸エチルで抽出した。次いで、有機相に無水硫酸ナトリウムを添加して脱水し、減圧留去した。次いで、クロマトグラフィー（移動相は酢酸エチル：ヘキサン＝１：５０の混合液）を用いて精製し、本発明に係る新規化合物及びパネポフェナンスリンの誘導体を得た。なお、得られた誘導体の収率は、８０％であった。
【００９３】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．１６（３Ｈ，ｓ），０．１８（３Ｈ，ｓ），０．９２（９Ｈ，ｓ），３．６２−３．６３（１Ｈ，ｍ），３．６８−３．６９（１Ｈ，ｍ），４．５９−４．６０（１Ｈ，ｍ），７．２７−７．２９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，２．４Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ−４．７、−４．５，１８．１，２５．６，５１．７，５８．２，６６．１，１０１．９，１５２．６，１８７．５；
ＩＲ（ＫＢｒ）：２９５４，２８５８，１６９７，１２５７，１０９２，８７２，８３５，７８１ｃｍ−１；
［α］Ｄ２２−１０５．６（ｃ＝１．２，ＣＨＣｌ３）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ１２Ｈ２０ＩＯ３Ｓｉ］：  ３６７．０２２７，実測値：３６７．０２４９．
【００９４】
［パネポフェナンスリンの合成］
＜５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−（３−ヒドロキシ−３−メチル−ブチニル）−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（１２）で示される５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−（３−ヒドロキシ−３−メチル−ブチニル）−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化１４】
2007238506.tif 000015
【００９５】
トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２ｄｂａ３・ＣＨＣｌ３）（８．２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）とトリフェニルアルシン（７．８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を減圧下で混合し、０．２ｍｌのトルエンを更に加えて、室温で２０分間攪拌した。この反応液に、上記の方法で合成した構造式（１０）で示される誘導体（１４４ｍｇ、０．６００ｍｍｏｌ）を添加し、構造式（１１）で示されるビニルスタンナン（３７．６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のトルエン溶液を添加して、１１０℃のもと５分間攪拌した。その後、濾過により無機生成物を取り除き、濾液を減圧留去した。次いで、クロマトグラフィー（移動相は酢酸エチル：ヘキサン＝１：５の混合液）を用いて精製した。なお、得られた誘導体の収率は、７７％であった。
【００９６】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．１３（３Ｈ，ｓ），０．１６（３Ｈ，ｓ），０．９０（９Ｈ，ｓ），１．３３（３Ｈ，ｓ），１．３５（３Ｈ，ｓ），３．４１−３．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．６０−３．６５（１Ｈ，ｍ），４．７１−４．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），６．２６−６．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），６．３８（１Ｈ，ｓ），６．３８−６．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ）；
【００９７】
上記の合成スキーム中の構造式（１）で示されるパネポフェナンスリンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化１５】
2007238506.tif 000016
【００９８】
上記の方法で合成した構造式（１２）で示される化合物のメタノール溶液（１８．９ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）３ｍｌに、過剰のフッ化アンモニウムを添加し、室温下で１２時間攪拌した。反応液を減圧下で濃縮した。残留物を、薄層クロマトグラフィーにて精製し、下記の構造式（２）で示されるモノマー（９．３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を得た。この化合物の収率は、７５％であった。このモノマーを室温で３３時間放置することにより、パネポフェナンスリン（９．２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を得た。このときの収率は９５％であった。
【化１６】
2007238506.tif 000017
【００９９】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
（２）で示されるモノマー
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１．０４（３Ｈ，ｓ），１．０５（３Ｈ，ｓ），３．３０−３．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），３．５３−３．５５（１Ｈ，ｍ），４．４９−４．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），６．０３−６．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），６．１６−６．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），６．３１−６．３３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．１，２．４Ｈｚ）；
【０１００】
パネポフェナンスリン
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１．１７（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．３５（３Ｈ，ｓ），１．４５（３Ｈ，ｓ），２．０３（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ），２．３２（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），３．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），３．３５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，１．６Ｈｚ），３．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ），３．５０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），３．８４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），４．３５（１Ｈ，ｂｒ  ｓ），４．５５（１Ｈ，ｂｒ  ｓ），５．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），５．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），６．８１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，３．０Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ２６．２，２９．５，３０．３，３２．３，５０．０，５１．２，５５．１，５５．６０．７，６６．２，６９．０，７１．８，７９．２，１０２．７，１２９．３，１３８．８，１３９．９，１４３．０，１９６．３；
ＩＲ（ＫＢｒ）：２９７８，１６７６，１５９７，１３３８，１１４２，９９７ｃｍ−１；
［α］Ｄ２４＋１４７．２（ｃ＝０．９１，ＭｅＯＨ）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ２２Ｈ２７Ｏ８］：４１９．１７１９，実測値：４１９．１７０６．
【０１０１】
［新規化合物（１）の合成］
＜５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−プロペニル−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（１６）で示される５−（ターシャリーブチル−ジメチルーシロキシ）−３−プロペニル−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化１７】
2007238506.tif 000018
【０１０２】
上記の方法で合成した構造式（１０）で示される誘導体（２３．５ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）、構造式（１３）で示される化合物（１０．３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、酸化銀（２３．８ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及びＡｓＰｈ３（１１．８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−水混合液（８：１、１．４ｍｌ）に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２ｄｂａ３・ＣＨＣｌ３）（７．４ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を加え、室温・暗室で３０分間攪拌した。この反応溶液に、塩化アンモニウム溶液５ｍｌを加え、更に１時間攪拌した。精製物を酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムを加え、減圧留去した。有機相を減圧濃縮した後、薄層クロマトグラフィーにて精製して、構造式（１６）で示されるシロキシモノマー（１５．５ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を得た。このときの収率は９２％であった。
【０１０３】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．１２（３Ｈ，ｓ），０．１５（３Ｈ，ｓ），０．９０（９Ｈ，ｓ），１．７８−１．８０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．４１−３．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），３．６２（１Ｈ，ｓ），４．７０−４．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），６．０８−６．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ），６．１９−６．２６（１Ｈ，ｍ），６．３０−６．４０（１Ｈ，ｍ）；
【０１０４】
次いで、構造式（２０）で示される新規化合物を合成した。合成スキームは以下の通りである。
【化１８】
2007238506.tif 000019
【０１０５】
上記の方法で合成した構造式（１６）で示されるシロキシモノマー（１５．５ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を溶解したメタノール３ｍｌに、室温にて過剰のフッ化アンモニウムを添加した。１２時間攪拌した後に反応液を減圧濃縮した。残留物を、薄層クロマトグラフィーにて精製させ、下記の構造式（１６´）で示されるモノマー（９．３ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を得た。この化合物の収率は、７５％であった。このモノマーを室温で５時間放置して２量化させることにより、構造式（２０）で示される新規化合物（１５．０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を得た。このときの収率は８０％であった。
【化１９】
2007238506.tif 000020
【０１０６】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．８３−０．９１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．６６−１．６８（３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５，１．５Ｈｚ），２．３５−２．３８（１Ｈ，ｍ），２．６０−２．７０（１Ｈ，ｍ），２．９０−３．００（１Ｈ，ｍ），３．２２−３．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），３．２８−３．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），３．４９−３．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），３．５１−３．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），３．９０−３．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），４．５７−４．５８（１Ｈ，ｄ，４．２Ｈｚ），５．２０−５．４０（１Ｈ，ｍ），５．５４−５．５８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．２，１．５Ｈｚ），６．５９−６．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．７，２．３Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ １５．２，１８．４，２９．６，３４．５，４４．８，５３．３、５３．６，５８．１，６１．９，６６．５，７０．６，７６．４，１２９．１，１３１．０，１３１．８，１４２．６，１９５．４，２０３．０；
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４１９，２９２３，２８５４，１６９８，１６３３，１４５５，１２５９，１０８５  ｃｍ−１；
［α］Ｄ２２＋８３．１（ｃ＝０．１，ＣＨＣｌ３）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ１８Ｈ２１Ｏ６］：  ３３３．１３３８，実測値：３３３．１３５７．
【０１０７】
［新規化合物２の合成］
＜５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−ヘキシル−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（１７）で示される５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−ヘキシル−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化２０】
2007238506.tif 000021
【０１０８】
上記の方法により得られた構造式（１０）で示される誘導体（３．７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）、構造式（１４）で示される化合物（２．６ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、酸化銀（３．７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びトリフェニルアルシン（１．８ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−水混合液（８：１、０．４ｍｌ）に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２ｄｂａ３・ＣＨＣｌ３）（１．２ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）を加え、室温・暗室で１時間攪拌した。この反応溶液に、塩化アンモニウム溶液２ｍｌを加え、更に１時間攪拌した。精製物を酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムを加え、減圧留去した。有機相を減圧濃縮した後、薄層クロマトグラフィーにて精製して、構造式（１７）で示されるシロキシモノマー（２．３ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）を得た。このときの収率は、７０％であった。
【０１０９】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．１３（３Ｈ，ｓ），０．１５（３Ｈ，ｓ），０．９０（９Ｈ，ｓ），１．２１−１．４０（９Ｈ，ｍ），３．５０−３．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．６２（１Ｈ，ｓ），４．７０−４．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），６．０６−６．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．１Ｈｚ），６．１８−６．３２（１Ｈ，ｍ），６．３０−６．３７（１Ｈ，ｍ）；
【０１１０】
次いで、構造式（２１）で示される新規化合物を合成した。
【化２１】
2007238506.tif 000022
【０１１１】
上記の方法により得られた構造式（１７）で示されるシロキシモノマー（２．３ｍｇ、０．００７ｍｍｏｌ）のメタノール溶液０．６ｍｌに、過剰のフッ化アンモニウムを室温にて添加し、１２時間攪拌を行った。その後、生成物を減圧濃縮して、薄層クロマトグラフィーにて精製して、下記の構造式（１７´）で示されるモノマーを得た。このモノマーを５時間放置して、構造式（２１）で示される２量体（１．２ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）を得た。この２量体の収率は、８３％であった。
【化２２】
2007238506.tif 000023
【０１１２】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．８０−０．９０（６Ｈ，ｍ），１．２０−１．２８（１２Ｈ，ｍ），２．４３−２．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．０，３．８Ｈｚ），２．７２−２．７９（１Ｈ，ｍ），２．８０−２．８７（１Ｈ，ｍ），３．２８−３．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．３２−３．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．５２−３．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．５５−３．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），４．０１−４．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），４．７０−４．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８  Ｈｚ），５．２７−５．３３（１Ｈ，ｔｄ，６．８，Ｊ＝１６．４Ｈｚ），５．５７−５．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．４Ｈｚ），６．７７−６．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．８，  ２．１Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１３．８，２２．２，２２．６，２９．５，２９．７，３０．４，３１．０，３２．６，３９．９，４４．６，４７．０，５３．３，５３．９，５７．５，６１．７，６７．４，７１．６，１３０．１，１３１．６，１３４．８，１４２．３，１９４．５，２０２．４；
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４４４，２９２７，２８５７，１６９８，１６３５，１４６５，１２６８ｃｍ−１；
［α］Ｄ２１＋２５．８（ｃ＝０．２，ＣＨＣｌ３）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ２４Ｈ３３Ｏ６］：４１７．２２７７，実測値：４１７．２２６５．
【０１１３】
［新規化合物３の合成］
＜５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−デカ−１−エニル−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成＞
上記の合成スキーム（Ａ）中の構造式（１８）で示される５−（ターシャリーブチル−ジメチル−シロキシ）−３−デカ−１−エニル−７−オキサ−ビシクロ［４．１．０］ヘプト−３−エン−２−オンの合成を行なった。合成スキームは以下の通りである。
【化２３】
2007238506.tif 000024
【０１１４】
上記の方法により得られた構造式（１０）で示される誘導体（３．７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）、構造式（１５）で示される化合物（３．７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、酸化銀（３．７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）及びトリフェニルアルシン（１．８ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ−水混合液（８：１、０．４ｍｌ）に、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（Ｐｄ２ｄｂａ３・ＣＨＣｌ３）（１．２ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）を加え、室温・暗室で１時間攪拌した。この反応溶液に、塩化アンモニウム溶液２ｍｌを加え、更に１時間攪拌した。精製物を酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムを加え、減圧留去した。有機相を減圧濃縮した後、薄層クロマトグラフィーにて精製して、構造式（１８）で示されるシロキシモノマー（２．５ｍｇ、０．００６７ｍｍｏｌ）を得た。このときの収率は、６７％であった。
【０１１５】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．１２（３Ｈ，ｓ），０．１５（３Ｈ，ｓ），１．００（９Ｈ，ｓ），１．１５−１．３０（１７Ｈ，ｍ），３．４８−３．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ），３．６２（１Ｈ，ｓ），４．７０−４．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．１Ｈｚ），６．０６−６．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ），６．１７−６．２８（１Ｈ，ｍ），６．３０−６．３７（１Ｈ，ｍ）；
【０１１６】
次いで、（２２）で示される新規化合物を合成した。
【化２４】
2007238506.tif 000025
【０１１７】
上記の方法により得られた構造式（１８）で示されるシロキシモノマー（２．５ｍｇ、０．００６７ｍｍｏｌ）のメタノール溶液０．６ｍｌに、過剰のフッ化アンモニウムを室温にて添加し、１２時間攪拌を行った。その後、生成物を減圧濃縮して、薄層クロマトグラフィーにて精製して、下記の構造式（１８´）で示されるモノマーを得た。このモノマーを５時間放置して、構造式（２２）で示される２量体（１．５ｍｇ、０．００３ｍｍｏｌ）を得た。この２量体の収率は、８４％であった。
【化２５】
2007238506.tif 000026
【０１１８】
生成物の１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲ、ＩＲ等の結果を以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ０．８４−０．８７（６Ｈ，ｍ），１．００−１．０６（２８Ｈ，ｍ），２．４５−２．４７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．３，４．０Ｈｚ），２．７２−２．８０（１Ｈ，ｍ），２．８０−２．８６（１Ｈ，ｍ），３．２７−３．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．３１−３．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．５２−３．５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．５４−３．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），４．０１−４．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），４．７０−４．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ），５．２７−５．３３（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝６．９，１６．３Ｈｚ），５．５６−５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１６．３Ｈｚ），６．７７−６．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．０，２．１Ｈｚ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ１４．１，２２．６，２７．４，２８．９，２９．２，２９．３，２９．４，２９．６，２９．７，３０．８，３１．８，３３．０，４０．０，４４．７，４７．１，５３．３，５３．５，５３．９，５７．５，６１．８，６７．５，７１．７，１３０．２，１３１．６，１３４．９，１４２．２，１９４．５，２０２．５；
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４３４，２９２５，２８５４，１７０２，１４６５，１２７０，１０５４ｃｍ−１；
［α］Ｄ２３＋３３．８（ｃ＝０．１，ＣＨＣｌ３）；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）：計算値［Ｃ３２Ｈ４９Ｏ６］：５２９．３５２９，実測値：５２９．３５０４．
【０１１９】
［実施例１］
本発明に係る新規化合物のユビキチン活性化酵素（Ｅ１酵素）阻害活性の検討を行なった。
【０１２０】
リコンビナントＥ１酵素（１０μｇ／ｍｌ，  ボストンバイオケミカル社製）を含む反応液（１００ｍＭ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ：ｐＨ９．０，５ｍＭの塩化マグネシウム，１ｍＭ  ジチオトレイトール，２５ｍＭ  アデノシン３リン酸（ＡＴＰ））に、下記の構造式を有する本発明に係る新規化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）をそれぞれ添加し、室温で１５分間静置した。
【化２６】
2007238506.tif 000027
【化２７】
2007238506.tif 000028
【化２８】
2007238506.tif 000029
【０１２１】
次いで、ビオチン化ユビキチン（１００ｎｇ／１反応，ボストンバイオケミカル社製）を添加し、３７度で１５分間反応させた。その後、ローディング緩衝液（ｌｏａｄｉｎｇ緩衝液）（最終濃度；６２．５ｍＭ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ：ｐＨ６．８，２％のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ），１０％のグリコール）を加え、１００度で３分間処理した。そして、ユビキチン化されたＥ１酵素を７．５％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動）で分離し、セミドライ法によりポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ：ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｉｄｅｎｅ  ｄｉｆｌｕｏｒｉｄｅ）膜（日本ミリポア株式会社製）に転写後、ブロッキング及び洗浄を行った。
【０１２２】
次いで、ＰＶＤＦ膜をストレプトアビジン結合型ＨＲＰ溶液で処理後、化学発光キット（商品名スーパーシグナル  ウエストピコ；ピアス社製）により、ユビキチン化されたＥ１酵素を検出した。ゲル上のユビキチン化されたＥ１酵素を示すバンドは、スキャニングイメイジャー（モレキュラーダイナミクス社製）によって定量した。その結果、本発明に係る新規化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）のＥ１酵素の５０％阻害濃度（ＩＣ５０値）は、それぞれ、９．４，３．５，９０μＭの濃度であった。なお、パネポフェナンスリンのＩＣ５０値は、７０μＭであった。
【０１２３】
［実施例２］
本発明に係る新規化合物の抗腫瘍活性の検討を行なった。
【０１２４】
ヒト乳癌細胞ＭＣＦ−７細胞（３×１０３／２００μｌ）を、ＲＰＭＩ−１６４０培地（１０％牛胎仔血清を含む）を含む９６穴プラスティックディッシュで培養した。これに本発明に係る新規化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）を添加し４８時間、５％の二酸化炭素雰囲気下で、３７度で培養した後、細胞数測定用の試薬（商品名：ＷＳＴ−８試薬［２−（２−ｍｅｔｈｏｘｙ−４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−３−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−５−（２，４−ｄｉｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍ  ｓａｌｔ］）を加え、さらに３時間培養させた後、４５０ｎｍの吸光度を測定して生存率を算出した。
【０１２５】
その結果、本発明に係る新規化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）の５０％増殖阻害濃度（ＩＣ５０値）は、それぞれ、５．４，１．０，３．６μＭの濃度であった。なお、パネポフェナンスリンのＩＣ５０値は１００μＭであった。これより、本発明に係る新規化合物（ａ）、（ｂ）、（ｃ）が抗腫瘍剤として有効であることが示された。