(57)【要約】      （修正有）【課題】光学活性なアミノ化合物を、微生物菌体を用いて効率的鉱工業的に製造する方法を提供する。【解決手段】アミノ基供与体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体またはその処理物を、下記一般式（１）で表されるケトン化合物に作用させ、生成する下記一般式（２）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴とする；2007116916.tif 000030（Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基又は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基のいずれかを示し、Ｒ1は順位則による優先順位がＲ2よりも高い基である）。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ基供与体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体またはその処理物を、下記一般式（１）で表されるケトン化合物に作用させ、生成する下記一般式（２）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴とするアミノ化合物の製法；
【化１】
2007116916.tif 000024
（式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基又は下記Ｂ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基のいずれかを示し、Ｒ1は順位則による優先順位がＲ2よりも高い基である；
Ａ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、ハロＣ１−６アルキル基、−Ｏ（ＣＨ2）nＯ−（ｎは１または２）；
Ｂ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基；
または、Ｒ1とＲ2とは互いに結合し、隣接する炭素原子と一緒になって５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環を形成していてもよく、該５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環は、下記置換基Ｃ群から選ばれる置換基を有していてもよい；
Ｃ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０アリール基、Ｃ６−１０アリールＣ１−６アルキル基）；
【化２】
2007116916.tif 000025
（式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ前記一般式（１）と同義である。）。
【請求項２】
前記微生物がシュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物、セラチア（Serratia）属に属する微生物および配列番号：３で示される16S rDNA配列を含むキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記シュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物が、シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記セラチア（Serratia.）属に属する微生物が、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11株であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記配列番号：３で示される16S rDNA配列を含むキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物が、12A4株であることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記ケトン化合物が、アセトフェノン、4-クロロアセトフェノン、4-メチルアセトフェノン、2-メトキシアセトフェノン、3-メトキシアセトフェノン、4-メトキシアセトフェノン、4-ヒドロキシアセトフェノン、1-(3,4-ジメトキシフェニル)プロパン-2-オン、1-(4-メトキシフェニル)プロパン-2-オン、1-（4-クロロフェニル）プロパン-2-オン、1-（4-ヒドロキシフェニル）プロパン-2-オン、1-（4-メチルフェニル）プロパン-2-オン、1-（3,4-メチレンジオキシフェニル）プロパン-2-オン、ベンジルアセトン、α-アセトナフトン、β-アセトナフトン、1-インダノン、α-テトラロン、β-テトラロン、7-メトキシ-2-テトラロン、1-ベンジル-3-ピロリジノン、1-メチル-3-ピロリジノン、1-ベンジル-3-ピペリドンおよび1-メチル-3-ピペリドンからなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記一般式（１）で表されるケトン化合物が下記一般式（３）で表されるケトン化合物であり、前記一般式（２）で表される化合物が下記一般式（４）で表される光学活性アミノ化合物であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の方法；
【化３】
2007116916.tif 000026
（式中、ＹはＨまたはアミノ基の保護基を示し、ｐは２〜３の整数、ｑは１〜２の整数を示し、ｐ>ｑである。）。
【請求項８】
前記アミノ基の保護基が、Ｃ１−６アルキル基、ベンジル基、ホルミル基またはｔ−ブトキシカルボニル基である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ケトン化合物が、1-ベンジル-3-ピロリジノンであることを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記アミノ基供与体が、
Ｌ−アラニン、イソプロピルアミン、1-ブチルアミン、sec-ブチルアミン、1,3-ジメチル-1-ブチルアミン、2-メチルブチルアミン、1-ペンチルアミン、2-ペンチルアミン、3-ペンチルアミン、1-ヘキシルアミン、2-ヘキシルアミン、1-ヘプチルアミンおよび2-ヘプチルアミンから選ばれる脂肪族アミン；
１−フェニルエチルアミン、2-フェニルエチルアミン、ベンジルアミン、3-アミノ-1-フェニルブタン、4-アミノ-１-フェニルペンタン、α−エチルベンジルアミンおよび1-(1-ナフチル)エチルアミンから選ばれる芳香族アミン；
2-アミノ-１-フェニルエタノールおよび2-フェニルグリシノールから選ばれるアミノアルコール類；および
１−アミノインダンからなる群から選ばれる１種である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記作用を、メタノールまたはアセトニトリルを５〜５０％（全溶媒に対する割合（体積／体積））含む溶媒中で行うことを特徴とする請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
アミノ基受容体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体あるいはその処理物を、下記一般式（５）で表されるアミノ化合物のエナンチオマー混合物に作用させ、残存する下記一般式（６）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴とするアミノ化合物の製法；
【化４】
2007116916.tif 000027
（式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基又は下記Ｂ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基のいずれかを示し、Ｒ1は順位則による優先順位がＲ2よりも高い基である；
Ａ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、ハロＣ１−６アルキル基、−Ｏ（ＣＨ2）nＯ−（ｎは１または２）；
Ｂ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基；
または、Ｒ1とＲ2とは互いに結合し、隣接する炭素原子と一緒になって５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環を形成していてもよく、該５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環は、下記置換基Ｃ群から選ばれる置換基を有していてもよい；
Ｃ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０アリール基、Ｃ６−１０アリールＣ１−６アルキル基）；
【化５】
2007116916.tif 000028
（式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ前記一般式（５）と同義である。）。
【請求項１３】
前記微生物がシュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物、セラチア（Serratia）属に属する微生物および配列番号：３で示される16S rDNA配列を有するキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記シュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物が、シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記セラチア（Serratia.）属に属する微生物が、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11株であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記配列番号：３で示される16S rDNA配列を含むキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物が、12A4株であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記一般式（５）で表されるアミノ化合物が、1-フェニルエチルアミン、α-エチルベンジルアミン、1-フェニル-2-アミノプロパン、1-(3,4-ジメトキシフェニル)-2-アミノプロパン、1-アミノインダン、1-アミノテトラリン、2-アミノテトラリン、1-フェニル-3-アミノブタン、3-アミノピロリジン、1-ベンジル-3-アミノピロリジン、3-アミノピペリジンおよび1-ベンジル-3-アミノピペリジンからなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１２〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記一般式（５）で示される化合物が下記一般式（７）で表されるアミノ化合物であり、前記一般式（６）で示される化合物が下記一般式（８）で表される光学活性アミノ化合物であることを特徴とする請求項１２〜１６のいずれかに記載の方法；
【化６】
2007116916.tif 000029
（式中、ＹはＨまたはアミノ基の保護基を示し、ｐは２〜３の整数、ｑは１〜２の整数を示し、ｐ>ｑである。）。
【請求項１９】
前記アミノ基の保護基が、Ｃ１−６アルキル基、ベンジル基、ホルミル基またはｔ−ブトキシカルボニル基である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記一般式（７）で表されるアミノ化合物が、1-ベンジル-3-アミノピロリジンであることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記アミノ基受容体が、ピルビン酸、グリオキシル酸、2-ケトグルタル酸、アセトフェノン、プロピオフェノン、ベンジルアセトン、プロピオンアルデヒド、1-ブチルアルデヒド、ベンズアルデヒドおよびフェニルアセトアルデヒドからなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする請求項１２〜２０のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は微生物を用いる光学活性なアミノ化合物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般的に光学活性アミン類は、有機化学的な合成方法によりラセミ体を合成し、酒石酸、酒石酸誘導体、光学活性マンデル酸など光学活性な酸とジアステレオマー塩を作り、晶析により光学分割する方法が行われている（非特許文献１）。また、L-アスパラギン酸など光学活性アミノ酸など、天然のキラルプールから誘導する方法も知られている（特許文献１、２、３）。さらに、近年、ケトン類から対応する光学活性なアミン類を微生物菌体あるいは取り出した酵素を用いて製造する方法が注目されている。酵素法によるアミン類の製造法としては、ブレビバクテリウム（Brevibacterium）属微生物を用いアンモニウム塩をアミノ源とする方法（特許文献４）、及びトランスアミナーゼ法（特許文献５〜９）によるものなどが挙げられる。
【０００３】
しかしながら、3-アミノピロリジンあるいはその誘導体の対応するケトン化合物からの生化学的製法に関しての文献は少ない。スターリングらの文献（非特許文献２）においてω-アミノ酸トランスアミナーゼを用いて合成できるとする化合物中にアミノピロリジンの例示があるが、どのような酵素、反応条件、反応成績かは具体的には記載されておらず、実体は明確でない。また、マッカムらの文献（非特許文献３）においてもω-アミノ酸トランスアミナーゼを用いて合成できる光学活性なアミンの例として、1-ベンジル-3-アミノピロリジンの記載があるが、これも具体的な酵素、反応条件、反応成績等は全く開示されておらず、前述の文献同様に技術情報の開示は不十分である。
【０００４】
また、キムらの文献（非特許文献４）ではビブリオ・フルビアリス(Vibrio fluvialis) JS17株のω-アミノ酸トランスアミナーゼがアセトフェノンおよびピルビン酸を受容体とした時、3-アミノピロリジンが弱いながらアミノ基供与体として活性を示すことが示されているが、1-ベンジル-3-アミノピロリジンをアミノ基供与体とした例、および3-ピロリジノン、1-ベンジル-3-ピロリジノンを受容体とした例などは記載されておらず、3-アミノピロリジン、1-ベンジル-3-アミノピロリジンを合成できるか、1-ベンジル-3-アミノピロリジンに作用するかは不明である。
【０００５】
このように、3-ピロリジノンあるいはその誘導体をアミノ基の受容体としてアミン類あるいはアミノ酸からアミノ基を転移し、(S)-3-アミノピロリジンあるいはその誘導体を微生物菌体あるいは酵素を用いて合成する製法、あるいは3-アミノピロリジンおよび誘導体のエナンチオマー混合物に微生物菌体あるいは酵素を作用させ、光学活性な3-アミノピロリジンあるいはその誘導体を残存させる製法を記述した文献は見当たらない。
【特許文献１】特開2002-212155号公報
【特許文献２】特開2002-316977号公報
【特許文献３】特開昭63-273486号公報
【特許文献４】特開平3-103192号公報
【特許文献５】WO 97/15682号
【特許文献６】WO 00/26351号
【特許文献７】特開2001-8696号公報
【特許文献８】特開2002-142793号公報
【特許文献９】特開2000-342276号公報
【非特許文献１】有機合成実験法ハンドブック（有機合成協会編、丸善、761-766 (1990).）
【非特許文献２】Stirling D.L., "Chirality in Industry"(ed. Collins A.N, Sheldrake G.N. & Crosby J.), 209-222, J. Wiley & Sons, NY(1992).
【非特許文献３】Matcham G.W. & Bowen A.R.STG., CHIMICA/chemistry today, 20-24(1996).
【非特許文献４】Shin J.S. & Kim B.G., Biotechnol. Bioengi., 65(2), 206-211(1999).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、光学活性なアミノ化合物を、微生物菌体を用いて効率的鉱工業的に製造する方法を提供することを課題とする。特に、特定の（Ｓ）体または（Ｒ）体の光学活性アミン類を、それぞれ、効率的に製造する方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らはこれらの点に鑑み鋭意検討した結果、１−ベンジル−３−ピペリジノンから１−ベンジル−３−アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体またはその処理物を用いることにより、特定構造を有する（Ｓ）体または（Ｒ）体の光学活性アミン類を、それぞれ対応するケトンまたは対応するラセミ体から効率的に製造することができることを見出し本願発明を完成するに至った。
このような酵素法によるアミン類の合成法は、合成副産物が少ない、常温、常圧で行うことができ、安全、簡便であるなどの理由からアミン類の合成に有用な手段であるが、既知のω-アミノ酸トランスアミナーゼではこのような反応を行うことはできず、このような技術はこれまでまったく知られていなかった。
【０００８】
すなわち本発明は以下を含む。
〔１〕
アミノ基供与体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体またはその処理物を、下記一般式（１）で表されるケトン化合物に作用させ、生成する下記一般式（２）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴とするアミノ化合物の製法；
【化７】
2007116916.tif 000002
（式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基又は下記Ｂ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基のいずれかを示し、Ｒ1は順位則による優先順位がＲ2よりも高い基である；
Ａ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、ハロＣ１−６アルキル基、−Ｏ（ＣＨ2）nＯ−（ｎは１または２）；
Ｂ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基；
または、Ｒ1とＲ2とは互いに結合し、隣接する炭素原子と一緒になって５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環を形成していてもよく、該５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環は、下記置換基Ｃ群から選ばれる置換基を有していてもよい；
Ｃ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０アリール基、Ｃ６−１０アリールＣ１−６アルキル基）；
【化８】
2007116916.tif 000003
（式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ前記一般式（１）と同義である。）。
〔２〕
前記微生物がシュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物、セラチア（Serratia）属に属する微生物および配列番号：３で示される16S rDNA配列を含むキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物である、〔１〕に記載の方法。
〔３〕
前記シュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物が、シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株であることを特徴とする〔２〕に記載の方法。
〔４〕
前記セラチア（Serratia.）属に属する微生物が、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11株であることを特徴とする〔２〕に記載の方法。
〔５〕
前記配列番号：３で示される16S rDNA配列を含むキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物が、12A4株であることを特徴とする〔２〕に記載の方法。
〔６〕
前記ケトン化合物が、アセトフェノン、4-クロロアセトフェノン、4-メチルアセトフェノン、2-メトキシアセトフェノン、3-メトキシアセトフェノン、4-メトキシアセトフェノン、4-ヒドロキシアセトフェノン、1-(3,4-ジメトキシフェニル)プロパン-2-オン、1-(4-メトキシフェニル)プロパン-2-オン、1-（4-クロロフェニル）プロパン-2-オン、1-（4-ヒドロキシフェニル）プロパン-2-オン、1-（4-メチルフェニル）プロパン-2-オン、1-（3,4-メチレンジオキシフェニル）プロパン-2-オン、ベンジルアセトン、α-アセトナフトン、β-アセトナフトン、1-インダノン、α-テトラロン、β-テトラロン、7-メトキシ-2-テトラロン、1-ベンジル-3-ピロリジノン、1-メチル-3-ピロリジノン、1-ベンジル-3-ピペリドンおよび1-メチル-3-ピペリドンからなる群から選ばれる少なくとも１種の化合物であることを特徴とする〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔７〕
前記一般式（１）で表されるケトン化合物が下記一般式（３）で表されるケトン化合物であり、前記一般式（２）で表される化合物が下記一般式（４）で表される光学活性アミノ化合物であることを特徴とする〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の方法；
【化９】
2007116916.tif 000004
（式中、ＹはＨまたはアミノ基の保護基を示し、ｐは２〜３の整数、ｑは１〜２の整数を示し、ｐ>ｑである。）。
〔８〕
前記アミノ基の保護基が、Ｃ１−６アルキル基、ベンジル基、ホルミル基またはｔ−ブトキシカルボニル基である、〔７〕に記載の方法。
〔９〕
前記ケトン化合物が、1-ベンジル-3-ピロリジノンであることを特徴とする〔７〕に記載の方法。
〔１０〕
前記アミノ基供与体が、
Ｌ−アラニン、イソプロピルアミン、1-ブチルアミン、sec-ブチルアミン、1,3-ジメチル-1-ブチルアミン、2-メチルブチルアミン、1-ペンチルアミン、2-ペンチルアミン、3-ペンチルアミン、1-ヘキシルアミン、2-ヘキシルアミン、1-ヘプチルアミンおよび2-ヘプチルアミンから選ばれる脂肪族アミン；
１−フェニルエチルアミン、2-フェニルエチルアミン、ベンジルアミン、3-アミノ-1-フェニルブタン、4-アミノ-１-フェニルペンタン、α−エチルベンジルアミンおよび1-(1-ナフチル)エチルアミンから選ばれる芳香族アミン；
2-アミノ-１-フェニルエタノールおよび2-フェニルグリシノールから選ばれるアミノアルコール類；および
１−アミノインダンからなる群から選ばれる１種である、〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の方法。
〔１１〕
前記作用を、メタノールまたはアセトニトリルを５〜５０％（全溶媒に対する割合（体積／体積））含む溶媒中で行うことを特徴とする〔１〕〜〔１０〕のいずれかに記載の方法。
〔１２〕
アミノ基受容体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体あるいはその処理物を、下記一般式（５）で表されるアミノ化合物のエナンチオマー混合物に作用させ、残存する下記一般式（６）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴とするアミノ化合物の製法；
【化１０】
2007116916.tif 000005
（式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基又は下記Ｂ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基のいずれかを示し、Ｒ1は順位則による優先順位がＲ2よりも高い基である；
Ａ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、ハロＣ１−６アルキル基、−Ｏ（ＣＨ2）nＯ−（ｎは１または２）；
Ｂ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基；
または、Ｒ1とＲ2とは互いに結合し、隣接する炭素原子と一緒になって５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環を形成していてもよく、該５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環は、下記置換基Ｃ群から選ばれる置換基を有していてもよい；
Ｃ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０アリール基、Ｃ６−１０アリールＣ１−６アルキル基）；
【化１１】
2007116916.tif 000006
（式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ前記一般式（５）と同義である。）。
〔１３〕
前記微生物がシュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物、セラチア（Serratia）属に属する微生物および配列番号：３で示される16S rDNA配列を有するキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物からなる群から選ばれる少なくとも１種の微生物である、〔１２〕に記載の方法。
〔１４〕
前記シュードモナス（Pseudomonas）属に属する微生物が、シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株であることを特徴とする〔１３〕に記載の方法。
〔１５〕
前記セラチア（Serratia.）属に属する微生物が、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11株であることを特徴とする〔１３〕に記載の方法。
〔１６〕
前記配列番号：３で示される16S rDNA配列を含むキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物が、12A4株であることを特徴とする〔１３〕に記載の方法。
〔１７〕
前記一般式（５）で表されるアミノ化合物が、1-フェニルエチルアミン、α-エチルベンジルアミン、1-フェニル-2-アミノプロパン、1-(3,4-ジメトキシフェニル)-2-アミノプロパン、1-アミノインダン、1-アミノテトラリン、2-アミノテトラリン、1-フェニル-3-アミノブタン、3-アミノピロリジン、1-ベンジル-3-アミノピロリジン、3-アミノピペリジンおよび1-ベンジル-3-アミノピペリジンからなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする〔１２〕〜〔１６〕のいずれかに記載の方法。
〔１８〕
前記一般式（５）で示される化合物が下記一般式（７）で表されるアミノ化合物であり、前記一般式（６）で示される化合物が下記一般式（８）で表される光学活性アミノ化合物であることを特徴とする〔１２〕〜〔１６〕のいずれかに記載の方法；
【化１２】
2007116916.tif 000007
（式中、ＹはＨまたはアミノ基の保護基を示し、ｐは２〜３の整数、ｑは１〜２の整数を示し、ｐ>ｑである。）。
〔１９〕
前記アミノ基の保護基が、Ｃ１−６アルキル基、ベンジル基、ホルミル基またはｔ−ブトキシカルボニル基である、〔１８〕に記載の方法。
〔２０〕
前記一般式（７）で表されるアミノ化合物が、1-ベンジル-3-アミノピロリジンであることを特徴とする〔１８〕に記載の方法。
〔２１〕
前記アミノ基受容体が、ピルビン酸、グリオキシル酸、2-ケトグルタル酸、アセトフェノン、プロピオフェノン、ベンジルアセトン、プロピオンアルデヒド、1-ブチルアルデヒド、ベンズアルデヒドおよびフェニルアセトアルデヒドからなる群から選ばれる少なくとも１種であることを特徴とする〔１２〕〜〔２０〕のいずれかに記載の方法。
【０００９】
以下に、本明細書において記載する用語、記号等の意義を説明し、本発明を詳細に説明する。
【００１０】
本明細書における「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数１〜６個の脂肪族炭化水素から任意の水素原子を１個除いて誘導される一価の基である、炭素数１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基を意味する。
具体的には例えば、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、２−メチル−１−プロピル基、２−メチル−２−プロピル基、１−ブチル基、２−ブチル基、１−ペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチル−１−ブチル基、３−メチル−１−ブチル基、２−メチル−２−ブチル基、３−メチル−２−ブチル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、１−へキシル基、２−へキシル基、３−へキシル基、２−メチル−１−ペンチル基、３−メチル−１−ペンチル基、４−メチル−１−ペンチル基、２−メチル−２−ペンチル基、３−メチル−２−ペンチル基、４−メチル−２−ペンチル基、２−メチル−３−ペンチル基、３−メチル−３−ペンチル基、２，３−ジメチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−１−ブチル基、２，２−ジメチル−１−ブチル基、２−エチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−２−ブチル基、２，３−ジメチル−２−ブチル基等があげられる。
【００１１】
本明細書における「Ｃ１−６アルコキシ基」とは前記定義の「Ｃ１−６アルキル基」が結合したオキシ基であることを意味する。
具体的には例えば、メトキシ基、エトキシ基、１−プロピルオキシ基、２−プロピルオキシ基、２−メチル−１−プロピルオキシ基、２−メチル−２−プロピルオキシ基、１−ブチルオキシ基、２−ブチルオキシ基、１−ペンチルオキシ基、２−ペンチルオキシ基、３−ペンチルオキシ基、２−メチル−１−ブチルオキシ基、３−メチル−１−ブチルオキシ基、２−メチル−２−ブチルオキシ基、３−メチル−２−ブチルオキシ基、２，２−ジメチル−１−プロピルオキシ基、１−へキシルオキシ基、２−へキシルオキシ基、３−へキシルオキシ基、２−メチル−１−ペンチルオキシ基、３−メチル−１−ペンチルオキシ基、４−メチル−１−ペンチルオキシ基、２−メチル−２−ペンチルオキシ基、３−メチル−２−ペンチルオキシ基、４−メチル−２−ペンチルオキシ基、２−メチル−３−ペンチルオキシ基、３−メチル−３−ペンチルオキシ基、２，３−ジメチル−１−ブチルオキシ基、３，３−ジメチル−１−ブチルオキシ基、２，２−ジメチル−１−ブチルオキシ基、２−エチル−１−ブチルオキシ基、３，３−ジメチル−２−ブチルオキシ基、２，３−ジメチル−２−ブチルオキシ基等があげられる。
【００１２】
本明細書中における「Ｃ６−１０アリール基」とは、炭素数６〜１０の芳香族性の炭化水素環式基をいい、具体的には例えば、フェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基などが挙げられる。
【００１３】
本明細書における「ヘテロ原子」とは、硫黄原子、酸素原子または窒素原子を意味する。
【００１４】
本明細書における「ヘテロアリール基」は、環を構成する原子中に１または複数個のヘテロ原子を含有する芳香族性の環の基を意味し、部分的に飽和されていてもよい。環は単環、またはベンゼン環または単環へテロアリール環と縮合した２環式ヘテロアリール基であってもよい。環を構成する原子の数は好ましくは５〜１０である（Ｃ5-10ヘテロアリール基）。
ヘテロアリール基としては具体的には、たとえば、ピリジル基、ピラジニル基、チエニル基、フリル基、チアゾリル基などが挙げられる。
【００１５】
本明細書における「ハロゲン原子」は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味する。
【００１６】
本明細書における「Ｃ６−１０アリールＣ１−６アルキル基」は、前記定義「Ｃ１−６アルキル基」中の任意の水素原子を、前記定義「Ｃ６−１０アリール基」で置換した基を意味する。アリールアルキル基としては、好ましくはＣ６−１０アリールＣ１−４アルキル基が挙げられる。
具体的にはたとえば、ベンジル基、フェネチル基、３−フェニル−１−プロピル基などが挙げられる。
【００１７】
本明細書中において表わされる「ハロＣ１−６アルキル基」とは前記定義「Ｃ１−６アルキル基」中の任意の水素原子を、前記定義「ハロゲン原子」で置換した基を意味する。
【００１８】
基質、生成物、アミノ基供与体、アミノ基受容体
本発明に係るアミノ化合物の製造方法は、アミノ基供与体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体またはその処理物を、下記一般式（１）で表されるケトン化合物に作用させ、生成する下記一般式（２）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴としている。
【化１３】
2007116916.tif 000008
【００１９】
ケトン化合物について詳説するが、ケトン化合物（１）のＲ1、Ｒ2と、得られるアミノ化合物（２）のＲ1、Ｒ2とは同意義である。
式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基、下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基又は下記Ｂ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基のいずれかを示し、Ｒ1は順位則による優先順位がＲ2よりも高い基である。
【００２０】
Ａ群およびＢ群の置換基は、反応に不活性な置換基であれば限定されないが、好ましくは下記の置換基が挙げられる。
Ａ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、ハロＣ１−６アルキル基、−Ｏ（ＣＨ2）nＯ−（ｎは１または２）；
Ｂ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基。
【００２１】
また、Ｒ1とＲ2とは互いに結合し、隣接する炭素原子と一緒になって５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環を形成していてもよい。該５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環は、下記置換基Ｃ群から選ばれる置換基を有していてもよい。Ｃ群の置換基は、反応に不活性な置換基であれば限定されないが、好ましくは下記の置換基が挙げられる。
Ｃ群：Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０アリールＣ１−６アルキル基。
【００２２】
このうち、好ましくは、（ｉ）Ｒ1とＲ2のいずれかがＢ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基で、いずれかがＡ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基もしくはＡ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基の組み合わせであるか、または、（ｉｉ）Ｒ1とＲ2とは互いに結合し、隣接する炭素原子と一緒になった５〜８員炭素環もしくは５〜８員ヘテロ環が挙げられ、該５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環は、下記置換基Ｃ群から選ばれる置換基を有していてもよい。
【００２３】
前記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基のうち、好ましくは、無置換のＣ６−１０アリール基、または、置換基としてハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基もしくはＣ１−６アルコキシ基を有するＣ６−１０アリール基が挙げられる。
置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基のうちでは、さらに好ましくはフェニル基、ナフチル基、ハロゲン化フェニル基、ヒドロキシフェニル基、Ｃ１−４アルキルフェニル基、Ｃ１−４アルコキシフェニル基が挙げられ、特に好ましくは、フェニル基、ナフチル基、クロロフェニル基、ヒドロキシフェニル基、トルイル基、メトキシフェニル基が挙げられる。
【００２４】
下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基のうちでは、好ましくは、無置換のＣ６−１０アリール基Ｃ１−６アルキル基、または、置換基としてハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基または−Ｏ（ＣＨ2）nＯ−（ｎは１または２）を有するＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基が挙げられる。
【００２５】
置換基を有していてもよいＣ６−１０アリールＣ１−６アルキル基のうち、さらに好ましくはベンジル基、フェネチル基、ハロゲン化ベンジル基、ヒドロキシベンジル基、Ｃ１−４アルキルベンジル基、Ｃ１−４アルコキシベンジル基、ジＣ１−４アルコキシベンジル基、メチレンジオキシベンジル基が挙げられ、特に好ましくは、ベンジル基、フェネチル基、クロロベンジル基、ヒドロキシベンジル基、メチルベンジル基、メトキシベンジル基、ジメトキシベンジル基、メチレンジオキシベンジル基が挙げられる。
【００２６】
前記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基のうちでは、好ましくは、無置換の５〜１０員ヘテロアリール基またはＣ１−４アルキル基を置換基に有する５〜１０員ヘテロアリール基（Ｃ１−４アルキル５〜１０員ヘテロアリール基）が挙げられる。
置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基としては、さらに好ましくはピリジル基、ピペラジル基、チエニル基、フリル基、チアゾリル基が挙げられる。
【００２７】
前記Ｂ群から選ばれる置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基のうちでは、好ましくは、無置換のＣ１−６アルキル基、さらに好ましくはＣ１−４アルキル基である。
置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基のうちでは、特に好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基が挙げられる。
【００２８】
また、Ｒ1とＲ2とは互いに結合し、隣接する炭素原子と一緒になって５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環を形成していてもよく、該５〜８員炭素環又は５〜８員ヘテロ環は、反応に不活性な置換基を有していてもよく、具体的に下記置換基Ｃ群から選ばれる置換基を有していてもよい。
Ｃ群：ハロゲン原子、水酸基、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ６−１０アリール基、Ｃ６−１０アリールＣ１−６アルキル基。
【００２９】
５〜８員炭素環としては、環を構成する炭素原子数が好ましくは５〜８（５〜８員炭素環）であり、環中に二重結合を有していてもよく、環は単環、またはベンゼン環と非芳香族性の環が縮合した２環式の環であってもよい。
具体的には、シクロペンチル環、シクロヘキシル環、シクロヘプチル環、シクロオクチル環、インダン環、１，２，３，４‐テトラヒドロナフタレン（テトラリン）環などが挙げられる。
置換基としては、好ましくはＣ１−６アルコキシ基が挙げられる。
【００３０】
５〜８員ヘテロ環としては、環を構成する原子数が好ましくは５〜８（５〜８員ヘテロ環）であり、環を構成する原子中に１〜３個のヘテロ原子を含み、環中に二重結合を有していてもよく、単環式である非芳香族性または１価の環を意味する。ヘテロ原子としては好ましくは窒素原子である。
ヘテロ環としては具体的には、たとえば、ピロリジン環、ピペリジン環、イミダゾリジン環、イミダゾリン環、ピラゾリジン環、ピラゾリン環、ピペラジン環などが挙げられる。
置換基としては好ましくは、Ｃ１−４アルキル基、Ｃ６−１０アリールＣ１−６アルキル基が挙げられる。
【００３１】
前記一般式（１）で表される化合物において、より好ましくは、下記一般式（３）で表される化合物が挙げられ、前記一般式（２）で表される化合物において、より好ましくは、下記一般式（４）で表される化合物が挙げられる。
【化１４】
2007116916.tif 000009
【００３２】
式中、ＹはＨまたはアミノ基の保護基を示し、ｐは２〜３の整数、ｑは１〜２の整数を示し、ｐ>ｑである。
【００３３】
アミノ基の保護基としては、好ましくは、メチル基、エチル基などのＣ１−６アルキル基、ホルミル基、ベンジル基、ｔ−ブトキシカルボニル基（ＢＯＣ基）などを挙げることができる。
【００３４】
これらのうち、さらに好ましくはベンジル基、ｔ−ブトキシカルボニル基（ＢＯＣ基）である。
【００３５】
ｐは好ましくは２または３、ｑは好ましくは１である。
【００３６】
前記一般式（１）さらには（３）で表される化合物としては、具体的には、たとえば、アセトフェノン、4-クロロアセトフェノン、4-メチルアセトフェノン、2-メトキシアセトフェノン、3-メトキシアセトフェノン、4-メトキシアセトフェノン、4-ヒドロキシアセトフェノン、1-(3,4-ジメトキシフェニル)プロパン-2-オン、1-(4-メトキシフェニル)プロパン-2-オン、1-（4-クロロフェニル）プロパン-2-オン、1-（4-ヒドロキシフェニル）プロパン-2-オン、1-（4-メチルフェニル）プロパン-2-オン、1-（3,4-メチレンジオキシフェニル）プロパン-2-オン、ベンジルアセトン、α-アセトナフトン、β-アセトナフトン、1-インダノン、α-テトラロン、β-テトラロン、7-メトキシ-2-テトラロン、1-ベンジル-3-ピロリジノン、1-メチル-3-ピロリジノン、1-ベンジル-3-ピペリドン、1-メチル-3-ピペリドン等を挙げることができる。
【００３７】
本発明方法において、使用できるアミノ基供与体は、一般的なアミノ酸、アミン類が挙げられる。具体的には、例えばＬ−アラニン、イソプロピルアミン、1-ブチルアミン、sec-ブチルアミン、1,3-ジメチル-1-ブチルアミン、2-メチルブチルアミン、1-ペンチルアミン、2-ペンチルアミン、3-ペンチルアミン、1-ヘキシルアミン、2-ヘキシルアミン、1-ヘプチルアミン、2-ヘプチルアミン等の脂肪族アミン；１−フェニルエチルアミン、2-フェニルエチルアミン、ベンジルアミン、3-アミノ-1-フェニルブタン、4-アミノ-１-フェニルペンタン、1-フェニルプロピルアミン（α−エチルベンジルアミン）、1-(1-ナフチル)エチルアミン等の芳香族アミン；2-アミノ-１-フェニルエタノール、2-フェニルグリシノール等のアミノアルコール類；１−アミノインダンなどの環式アミンを挙げることができる。
【００３８】
これらのうち、好ましくは、L-アラニン、イソプロピルアミン、1-ブチルアミン、sec-ブチルアミン、1-ペンチルアミン、2-ペンチルアミン、1-ヘキシルアミン、2-ヘキシルアミン、ベンジルアミン、1-フェニルエチルアミン、2-フェニルエチルアミン、2-フェニルグリシノール、1-アミノインダン、3-アミノ-フェニルブタンおよびα-エチルベンジルアミン
なお、アミノ基含有化合物において、不斉炭素原子を有する化合物については、光学活性体のいずれか、またはその２種以上の混合物を適宜選択して用いることができる。
【００３９】
このようなアミノ基供与体の使用量は、好ましくは、基質に対して、１．０〜５当量である。なお、基質とは、原料として使用する（１）、（３）、（５）、（７）で表される化合物を意味する。
【００４０】
本発明に係るアミノ化合物の製法の他の態様は、アミノ基受容体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体あるいはその処理物を、下記一般式（５）で表されるアミノ化合物のエナンチオマー混合物に作用させ、残存する下記一般式（６）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴としている。
【化１５】
2007116916.tif 000010
【００４１】
式中、Ｒ1、Ｒ2は前記一般式（１）におけるＲ1、Ｒ2とそれぞれ同意義である。
【００４２】
前記一般式（５）で表される化合物において、より好ましくは、下記一般式（７）で表される化合物が挙げられ、前記一般式（６）で表される化合物において、より好ましくは、下記一般式（８）で表される化合物が挙げられる。
【化１６】
2007116916.tif 000011
【００４３】
式中、ＹはＨまたはアミノ基の保護基を示し、ｐは２〜３の整数、ｑは１〜２の整数を示し、ｐ>ｑである。
アミノ基は、前記一般式（３）で示されるＹにおけるアミノ基と同意義である。
【００４４】
一般式（５）、（７）で表されるアミノ化合物はとしては、より具体的には、1-フェニルエチルアミン、α-エチルベンジルアミン、1-フェニル-2-アミノプロパン、1-(3,4-ジメトキシフェニル)-2-アミノプロパン、1-アミノインダン、1-アミノテトラリン、2-アミノテトラリン、1-フェニル-3-アミノブタン、3-アミノピロリジン、1-ベンジル-3-アミノピロリジン、3-アミノピペリジン、1-ベンジル-3-アミノピペリジンなどを挙げることができる。
【００４５】
また、該アミノ化合物のエナンチオマー混合物に微生物菌体を作用させる方法におけるアミノ基受容体としては、一般的なα-ケト酸、ケトン、アルデヒド化合物が挙げられる。具体的には、好ましくは、ピルビン酸、グリオキシル酸、2-ケトグルタル酸、アセトフェノン、プロピオフェノン、ベンジルアセトン、プロピオンアルデヒド、1-ブチルアルデヒド、ベンズアルデヒド、フェニルアセトアルデヒドなどを挙げることができる。
【００４６】
これらのうち、さらに好ましくはピルビン酸、グリオキシル酸、2-ケトグルタル酸、アセトフェノン、ブチルアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ベンズアルデヒドが挙げられる。
【００４７】
このようなアミノ基受容体の使用量は、好ましくは、基質に対して、１．０〜５当量である。
【００４８】
微生物
本発明で使用することができる微生物は、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有していればよい。このような微生物菌体あるいはその処理物を用いて、本発明の反応を行うことができる。
【００４９】
このような微生物としては、具体的には、たとえば、シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11株、および配列番号：３の16S rDNAを含むキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する微生物12A4株が挙げられる。これらは、本発明者らがアミノ基転移活性の高い微生物として新たに日本国内の土壌より分離したものである。表１にこれらの形態学的、生理学的特徴を示す。
【００５０】
【表１】
2007116916.tif 000012
【００５１】
10F6株はグラム染色陰性、桿菌、無芽胞、運動性、カタラーゼ反応陽性、オキシダーゼ反応陽性、非発酵性から、運動性のグラム陰性桿菌である。
11E11株はグラム染色陰性、桿菌、無芽胞、運動性、オキシダーゼ反応陰性、グルコースの発酵性から、腸内細菌の一種である。
12A4株はグラム染色陰性、桿菌、無芽胞、運動性、カタラーゼ反応陽性、オキシダーゼ反応陽性、非発酵性から、運動性のグラム陰性桿菌である。
【００５２】
さらに、遺伝学的方法として16SリボソームRNAゲノムDNAの解析を行った。ゲノムDNAの抽出にはInstaGene Matrix（BIORAD社）を使用し、操作はBIORAD社のプロトコールに従った。抽出したゲノムDNAを鋳型としてPCRにより16SリボソームRNA遺伝子（16S rDNA）のうち5’末端側約500 bpの領域を増幅した。プライマーとしては5F、531Rを用いた。
【００５３】
その後、増幅された塩基配列をシーケンシングし、16S rDNA配列を得た。PCRにはMicroSeq 500 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit（Applied Biosystems社）を使用した。サイクルシーケンスにはMicroSeq 500 16S rDNA Bacterial Identification Sequencing Kit（Applied Biosystems社）を使用した。
【００５４】
サーマルサイクラーにはGeneAmp PCR System 9600（Applied Biosystems社）、DNAシーケンサーにはABI PRISM 3100 DNA Sequencer（Applied Biosystems社）を使用した。なお、PCRからサイクルシークエンスまでの基本的操作はApplied Biosystems社のプロトコール（P/N 4346296 Rev.B）に従った。
【００５５】
得られた16S rDNAの塩基配列を用いて相同性検索を行った。相同性検索および分子系統樹の作成にはMicroSeq Microbial Identification System Software V.1.4.1を、相同性検索を行う際のデータベースとしてMicroSeq Bacterial 500 Library v.0023（Applied Biosystems社）を使用した。分子系統樹は近隣結合法により行った。
【００５６】
その結果、16S rDNA配列として、10F6株は配列1、11E11株は配列2、12A4株は配列3をそれぞれ得た。系統樹を図１〜３に示す。
【００５７】
10F6株の配列1はPseudomonas corrugataのそれと相同率100%で完全に一致したこと、分子系統樹上でもPseudomoans corrugataの16S rDNAと同じ場所に位置したことから（図１）、10F6株をPseudomoans corrugataと同定した。またこの結果は先の形態学的、生理学的特徴とも合致する。
【００５８】
11E11株の16S rDNA配列2はSerratia fonticolaのそれと相同率97.72%で最も高い相同性を示した。また、分子系統樹上ではSerratiaの16S rDNAの形成するクラスター内に含まれ、Serratia proteamaculans subsp. proteamculanceの16S rDNAとクラスターを形成した（図２）。配列2に完全に一致する配列がないことから、現時点で種レベルまで同定することはできず、11E11株をSerratia sp.と同定した。またこの結果は先の形態学的、生理学的特徴とも合致する。
【００５９】
12A4株の16S rDNA配列3はXantomonas campestris subsp. betilicolaおよびXanthomonas axonopodis subsp. glycinesのそれと相同率96.79%で最も高い相同性を示した。また、分子系統樹上ではPseudomonas pictorumの16S rDNAとクラスターを形成した（図３）。配列番号：３に関しては高い相同性を示す配列が見当たらないため、現時点で属レベルまで同定することはできず、12A4株をXanthomonasを含むキサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する菌株と同定した。
【００６０】
なお、Pseudomonas pictorumに関しては16S rRNAの塩基配列による分類研究の結果、Pseudomonas属とするのは不適当であり、キサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に移行させることが適当であること、属レベルの同定にはさらに研究が必要なことが報告されている（Anzai Y. et al.,, Int. J. Syst. Evol. Microbiol., 50, 1563-1589(2000).)。
【００６１】
シュードモナス・コルガータ（Pseudomoans corrugata） 10F6株、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11株、キサントモナダセアエ(Xanthomonadaceae)科に属する菌株12A4株は本願出願人によって日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８（〒２９２−０８１８）に所在の独立行政法人製品評価技術基盤機構・特許微生物寄託センター（NPMD）に寄託され、２００５年９月２１日付けで、それぞれ、受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−１３９、ＮＩＴＥ  Ｐ−１４０、ＮＩＴＥ  Ｐ−１４１が付与されている。本発明はこの寄託微生物自体はもちろん、前述した能力を有するその変異株、遺伝学子工学的に操作を行った株をも含むものである。
【００６２】
本発明に用いる微生物を培養するための培地は、その微生物が増殖しうるものであれば特に制限はない。
【００６３】
例えば、炭素源としては上記微生物が利用可能であればいずれも使用でき、具体的には、グルコース、フルクトース、シュクロース、デキストリンなどの糖類、ソルビトール、グリセロールなどのアルコール類、フマル酸、クエン酸、酢酸、プロピオン酸等の有機酸類およびその塩類、パラフィンなどの炭化水素類、トルエン、クレゾール、安息香酸などあるいはこれらの混合物を使用することができる。
【００６４】
窒素源としては例えば、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどの無機酸のアンモニウム塩、フマル酸アンモニウム、クエン酸アンモニウムなどの有機酸のアンモニウム塩、肉エキス、酵母エキス、コーンスティープリカー、カゼイン加水分解物、尿素、などの無機有機含窒素化合物、あるいはこれらの混合物を使用することができる。
【００６５】
他に無機塩、微量金属塩、ビタミン類など、通常の培養に用いられる栄養源を適宜混合して用いることができる。
【００６６】
また、必要に応じて微生物の増殖を促進する因子、本発明の目的化合物の生成能力を高める因子、具体的には1-プロピルアミン、2-プロピルアミン、1-ブチルアミン、sec-ブチルアミン、1-ペンチルアミン、2-ペンチルアミン、1-ヘキシルアミン、2-ヘキシルアミン、1-ヘプチルアミン、2-ヘプチルアミン、1-オクチルアミン、2-オクチルアミンなどの脂肪族アミン、シクロヘキシルアミン、1-ベンジル-3-アミノピロリジン、3-アミノピロリジンなどの環状アミン、1-フェニルエチルアミン、2-フェニルエチルアミン、1-アミノインダン、1-アミノテトラリン、1-(1-ナフチル)エチルアミンなどの芳香族アミンを0.01g/L〜10g/L適当な濃度添加することもできる。あるいは培地のpH保持に有効なCaCO3などの物質も添加できる。
【００６７】
培養方法としては、培地pHは3〜11、好ましくは4〜8、培養温度は15〜60℃、好ましくは20〜45℃で、嫌気的あるいは好気的に、その微生物の生育に適した条件下5〜240時間、好ましくは12〜120時間程度培養する。
【００６８】
アミノ化合物の製造方法
本発明に係るアミノ化合物の製法は、アミノ基供与体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体またはその処理物を、前記一般式（１）あるいは（３）で表されるケトン化合物に作用させ、生成する前記一般式（２）あるいは（４）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴としている。
【００６９】
また、本発明に係るアミノ化合物の製法は、アミノ基受容体の存在下、1-ベンジル-3-ピロリジノンから1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体あるいはその処理物を、前記一般式（５）あるいは（７）で表されるアミノ化合物のエナンチオマー混合物に作用させ、残存する前記一般式（６）あるいは（８）で表される光学活性アミノ化合物を採取することを特徴としている。
【００７０】
基質である一般式（１）もしくは（３）で表されるケトン化合物または一般式（５）もしくは（７）で表されるアミノ化合物は、酵素の基質阻害が起らない濃度範囲で、一括あるいは間欠的に、あるいは連続して培地等の反応系に添加すればよく、通常0.01から20%（wt/wt）（反応液の質量に対する基質の質量の割合）程度添加する。
【００７１】
基質は、そのまま水に溶解あるいは分散して、または水に溶解あるいは反応に影響を与えないようなアルコール、ＤＭＳＯなどの有機溶媒に溶解したり、界面活性剤などに分散させたりして添加すればよい。
【００７２】
本発明で用いられる前記微生物の利用形態としては、１）培地に最初から基質、アミノ基供与体またはアミノ基受容体を添加しておき、培養する方法、２）培養液をそのまま用い、該培養液に、アミノ基供与体またはアミノ基受容体、基質となるケトン化合物あるいはアミノ化合物を添加する方法、３）遠心分離などにより菌体を分離し、これをそのまま、あるいは洗浄した後、緩衝液、水などに再懸濁したものに、アミノ基供与体またはアミノ基受容体、基質を添加し、反応させる方法などがある。
【００７３】
菌体は生菌体のままでもよいし、菌体破砕物、アセトン処理、トルエン処理、凍結乾燥などの処理を施した処理物であってもよい。
【００７４】
前記微生物の菌体はカラギーナンゲル、アルギン酸ゲル、ポリアクリルアミドゲル、セルロース、寒天などに公知の方法で固定化して用いることも可能であり、限外ろ過膜などを用いて反応器中で反応させることもできる。
【００７５】
また、反応に必要なピリドキサール-5’-リン酸（PLP）などの補酵素を添加することもできる。
【００７６】
反応温度は好ましくは５〜８０℃、さらに好ましくは１５〜７０℃である。反応ｐＨは酵素が反応する範囲で適宜選択すればよいが、通常好ましくはｐＨ４〜１２、さらに好ましくはｐＨ６〜１１で、緩衝液中あるいはpHスタットを用いることができる。
【００７７】
反応は静置あるいは振とう、攪拌いずれでも行うことができる。
【００７８】
反応に用いる溶媒は通常、水であるが、反応に影響を与えない範囲でアルコールなどの有機溶媒を加えることができる。特に、1-ベンジル-3-アミノピロリジンを生成する反応においては、メタノール、アセトニトリルを1-ベンジル-3-ピロリジノンに対して５〜５０体積％添加することにより、1-ベンジル-3-アミノピロリジンの光学純度を向上させることができる。
【００７９】
また、空気中で不安定なケトン化合物の場合、反応液の気相を不活性なガスである窒素、ヘリウム、アルゴンなどで置換、あるいはそれらガスの気流下で反応を行うことで、反応収率を向上させることができる。
【００８０】
生成した一般式（２）、（４）、（６）または（８）で表されるアミノ化合物、あるいは残存する一般式（５）または（７）で表されるアミノ化合物は、限外ろ過、濃縮、カラムクロマトグラフィー、抽出、活性炭処理、蒸留など通常の方法を組み合せることで回収、精製することができる。
【００８１】
このように本発明では、基質として一般式（１）または（３）で表されるケトン化合物を用いることにより、一般式（２）または（４）で表される、光学活性な（Ｓ）アミノ化合物を純度よく得ることができる。
特に、3-ピロリジノン誘導体を基質に用いることにより、(S)-3-アミノピロリジン誘導体を効率的に生成することができる。
【００８２】
特に、光学活性1-ベンジル-3-アミノピロリジンは抗生物質、抗菌剤、ドーパミンD3受容体作動薬、CCR3拮抗剤など医薬品の原料として重要である。
【００８３】
また、本発明では、基質として一般式（５）または（７）で表されるアミノ化合物を用いることにより、一般式（６）または（８）で表される、光学活性な（Ｒ）アミノ化合物を純度よく残存させて得ることができる。
特に3-アミノピロリジン誘導体のエナンチオマー混合物から(R) -3-アミノピロリジン誘導体を選択的に残存させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００８４】
次に本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれら実施例にのみ限定されるものではない。以下、実施例中では1-ベンジル-3-ピロリジノンはPNB、1-ベンジル-3-アミノピロリジンはAPBと略す。
本発明における各アミン、アミノ酸、ケトンの定量及び光学純度の測定は高速液体クロマトグラフィーにより行った。
【００８５】
PNB、APB、1-フェニルエチルアミンの定量
カラム：Luna 5u C18,φ2.0mm×150mm（フェノメネックス（phenomenex）社）
移動相：40mM リン酸緩衝液pH2.5（5mMヘキサンスルホン酸ナトリウムを含む）/アセトニトリル[9:1, v/v] 
カラム温度：40℃
流速：0.2mL/min
検出：254nm
保持時間：PNB 11.1分、1-フェニルエチルアミン 14.3分、APB 17.8分
【００８６】
アセトフェノンの定量
カラム：Luna 5u C18,φ2.0mm×150mm（フェノメネックス（phenomenex）社）
移動相：0.1% トリフルオロ酢酸水溶液/0.1% トリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液[65:35, v/v]
カラム温度：40℃
流速：0.2mL/min
検出：254nm
保持時間：15.8分
【００８７】
3-アミノ-1-フェニルブタンの定量
カラム：Luna 5u C18,φ2.0mm×150mm（フェノメネックス（phenomenex）社）
移動相：40mM リン酸緩衝液pH2.5（5mMヘキサンスルホン酸ナトリウムを含む）/アセトニトリル〔0〜5分まで[9:1, v/v]一定、5〜20分[9:1, v/v]→[6:4, v/v]の直線濃度勾配による溶出〕
カラム温度：40℃
流速：0.2mL/min
検出：254nm
保持時間：10.5分
【００８８】
アラニン、グルタミン酸の定量 （ダブシルクロライドによる誘導体化）
反応液を15000rpm、5分間遠心分離し上清を得る。この上清20μLをとり80μLの0.2 M NaHCO3-Na2CO3緩衝液, pH9.0を添加する。これに200μLの10mM ダブシルクロライドのアセトン溶液を添加して密栓し、70 ℃、15分間加熱する。室温まで冷却後、100μLの1 M HClを添加し、これをHPLCサンプルとする。
【００８９】
カラム：Luna 5u C18,φ2.0mm×150mm（フェノメネックス（phenomenex）社）
移動相：45mM 酢酸カリウム緩衝液, pH4.0/アセトニトリル[65:35, v/v]
カラム温度：40 ℃
流速：0.2mL/min
検出：436nm
保持時間：グルタミン酸 11.0分、アラニン 19.2分
【００９０】
APB光学純度の測定
（反応液からの測定サンプルの調製）
反応液100μLを2mL容遠心チューブにとり、純水150μLを加える。これに1N NaOHを加えてpH12以上とする。0.5mLの1-ブタノールを加えて振り混ぜた後、軽く遠心分離し、1-ブタノール層をできるだけとる。減圧下に1-ブタノールを留去し、残渣を得る。
【００９１】
（GITC誘導体化）
上記残渣にアセトニトリル100μLを加えて溶かす。このうち50μLを採り、100μLの0.4%GITCアセトニトリル溶液を加え、室温で10分間放置する。これに0.2%のエタノールアミンのアセトニトリル溶液50μLを添加し、室温、3分間放置する。これをHPLC移動相で適宜希釈し、光学純度測定HPLCサンプルとする。
GITC:2,3,4,6-テトラ-O-アセチル-β-D-グルコピラノシルイソチオシアネート
【００９２】
カラム：Luna 5u C18,φ2.0mm×150mm（フェノメネックス（phenomenex）社）
移動相：400mM 酢酸アンモニウム緩衝液, pH4.0/ メタノール[58:38, v/v]
カラム温度：30℃
流速：0.2mL/min
検出：254nm
保持時間：R体 23.5分、S体 26.3分
【００９３】
1-フェニルエチルアミンの光学純度の測定
カラム：CROWNPAK CR(+),φ4.6 mm×150mm（ダイセル化学工業製）
移動相：過塩素酸水溶液, pH1.5
カラム温度：30 ℃
流速：0.6mL/min
検出：254nm
保持時間：S体 16.0分、R体 20.4分
【００９４】
3-アミノ-1-フェニルブタンの光学純度の測定
APBの場合と同様にしてGITC化を行い、HPLCサンプルを調製した。
カラム：Luna 5u C18,φ2.0mm×150mm（フェノメネックス（phenomenex）社）
移動相：400mM 酢酸アンモニウム緩衝液, pH4.0/ メタノール[50:50, v/v]
カラム温度：50 ℃
流速：0.2mL/min
検出：254nm
保持時間：R体 63.6分、S体 67.3分
【００９５】
また、以下の実施例で用いている「菌体調製用培地1」、「菌体調製用培地2」の組成は以下の通りである。
（A培地）
グルコース3g、酵母エキス（極東製薬）0.3g、KH2PO4 1g、K2HPO4 3g、MgSO4・7H2O 0.5g、1-アミノペンタン 1g、表２のミネラル溶液10mLを混合し、脱イオン水を加えて溶解し総容量1000mLとしてpH7.0に合わせる。
【００９６】
【表２】
2007116916.tif 000013
調製方法：脱イオン水900mLにニトリロ三酢酸を溶かし、
1N KOHでpH6.5とする。次いで各金属塩を溶解させる。
最後に1N KOHでpH7.0とする。
【００９７】
（培地B）
培地Aの酵母エキスを2g/Lとした培地
【００９８】
（C培地）
培地BにさらにアデカノールLG-294を0.3g/L添加した培地
【００９９】
（D培地）
ブイヨン培地：肉エキス（極東製薬）10 g、ポリペプトン(日本製薬）10 g、NaCl 5gに脱イオン水を加えて溶解し総容量1000mLとしてpH7.3に合わせた。
【０１００】
（比較例１）
既知ω−アミノ酸トランスアミナーゼ生産菌シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida） IFO 14796による反応
シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida） IFO 14796（F-126株）を公知の方法（Yonaha K. et al., Agric. Biol. Chem., 47(10), 2257-2265(1983).）に従って培養した。具体的には、グリセリン 1g、ペプトン 2g、KH2PO4 1g、K2HPO4 1g、酵母エキス 0.5g、β-アラニン 2g/L, pH7.2よりなる培地を500mL容ヒダ付き三角フラスコに50mLずつ入れ、121℃、15分間殺菌後、保存スラントより一白金耳植菌し、30℃で24時間回転振とう培養を行った。
【０１０１】
培養液より遠心分離にて集菌した菌体はさらに10mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)で1回洗浄した。この菌体を10mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)に懸濁した。終濃度で菌体濃度OD600=24、アミノ基供与体 100mM（sec ブチルアミンのみ200mM）、受容体50mM、0.05mM PLP、100mM カリウムリン酸緩衝液, pH8.0（HClあるいはNaOHにて調整）、総液量0.50mLとなるように混合し、25 ℃, 静置、気相をN2置換して24時間反応させた。
【０１０２】
反応終了後、生成したアミン、アミノ酸をHPLCにて定量し、表３に示す。また、同様に終濃度で菌体濃度OD600=24、アミノ基供与体としてラセミ体APB 50mM、受容体としてピルビン酸30mM、0.05mM PLP、100mM カリウムリン酸緩衝液, pH8.0（HClあるいはNaOHにて調整）、総液量0.50mLとなるように混合し、25 ℃で24時間、振盪反応を行った。その結果を表４に示す。
【０１０３】
【表３】
2007116916.tif 000014
【０１０４】
【表４】
2007116916.tif 000015
【０１０５】
ω−アミノ酸トランスアミナーゼ活性のあるシュードモナス・プチダ IFO 14796菌体で反応を行ってもPNBからAPBは全く生成しないこと、また、ピルビン酸を受容体としてラセミ体APBを作用させても全くPNBは生成せず、本発明菌株の新規な作用が明らかとなった。
【０１０６】
〔実施例1〕
A培地をφ21mmの試験管にそれぞれ5mL入れ、121℃、15分間殺菌後、表５に示した菌株を保存スラントより一白金耳植菌し、25℃で48時間振とう培養を行った。
【０１０７】
それぞれの培養液全量より遠心分離した菌体を10mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)で1回洗浄した。この菌体を100mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)に懸濁し、0.2mLとした。これに下記反応液0.3mLを添加し、気相をN2ガスで置換した後、25℃にて24時間静置反応を行った。反応終了後、反応液を0.1 M HClで10倍に希釈後、遠心分離により上清を分離し、上清を高速液体クロマトグラフィーにて分析し、APBを定量した。また、APBをGITC化して光学純度を高速液体クロマトグラフィーで測定した。その結果を表５に示す。
【０１０８】
基質溶液(1)
PNB 50mM
(S)-1-フェニルエチルアミン 50mM
PLP 0.083mM
100mM カリウムリン酸緩衝液, pH7.0中
【０１０９】
【表５】
2007116916.tif 000016
【０１１０】
[実施例2〕
表６に示す3株を実施例1と同様に培養、集菌、洗浄、懸濁し、下記基質溶液0.3mLと菌体懸濁液0.2mLを混合して反応を行った。気相をN2ガスで置換した後、25℃にて24時間静置反応を行い、実施例と同様に定量、光学純度の測定を行った。結果を表６に示す。
【０１１１】
基質溶液(2)
PNB 50mM
ラセミsec-ブチルアミン 200mM
PLP 0.083mM
100mM カリウムリン酸緩衝液, pH7.0中
【０１１２】
【表６】
2007116916.tif 000017
【０１１３】
〔実施例3〕
シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株を滅菌したD培地50mLを入れたヒダ付き三角フラスコで25℃、24時間振盪し、前培養を行った。C培地1200mLをそれぞれ4台の丸菱バイオエンジ製MDL-200型2.0L容ミニジャーに入れ、121℃、20分間滅菌後冷却した後に、前述の培養液12mLずつ植菌し、580回転、25℃、0.5vvmで通気しながら48時間培養を行った。
【０１１４】
培養終了後、培養液2Lを採り、遠心分離にて菌体を集め、脱イオン水に懸濁し、120mLとした。これに5mM PLP 6mL、6.54g（54mmol）(S)-1-フェニルエチルアミン、6.31g（36mmol）gのPNBを添加し、100 mM カリウムリン酸緩衝液, pH7.0にて全体を300mLとし、同ミニジャーの1L容ベッセルに入れた。気相にN2ガス（100mL/min）を通気しながら、25℃、48時間、200rpmで反応を行った。
【０１１５】
反応終了後、反応液中にはAPBが19.6g/L生成し、PNBは1.02g/L残存していた。液量の減少を補正した反応収率は87.9%であった。遠心分離にて菌体を除去し、上清を分離した。次いで、硫酸にてpHを3として280mLのメチルイソブチルケトンでPNBを抽出した。次いで水層にNaOHを添加してpHを12.5とし、1-ブタノール270mLで2回抽出した。1-ブタノール層を集め、70mLの飽和食塩水で洗浄した。1-ブタノール層を減圧下に濃縮し、粗(S)-APB 6.43gを得た。化学純度70.4%、光学純度87.9%ee、一貫収率71.3%であった。
【０１１６】
〔実施例4 アミノ基供与体の比較〕
実施例3と同様にしてシュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株を培養した。遠心集菌後、10mM カリウムリン酸緩衝液 pH7.0で一回洗浄した後、菌体を100mM カリウムリン酸緩衝液 pH7.0に懸濁し、OD600nmが60になるようにした。
【０１１７】
この菌体懸濁液0.40mLと表７に示す各アミンを含む基質溶液または懸濁液0.60mLとを混合し、気相をN2ガスで置換した後、25℃にて24時間静置反応を行い、実施例1と同様に定量した。基質溶液または懸濁液の組成は以下のとおりである。
供与体アミン 100mM（（S）-1-フェニルエチルアミンの場合）、200mM （その他のラセミ体アミンの場合）
PLP 0.083mM
PNB 50mM
100mM カリウムリン酸緩衝液、pH7.0（pHはHClにて調整した）
結果を表７に示す。
【０１１８】
【表７】
2007116916.tif 000018
【０１１９】
〔実施例5〕
A培地を500mL容ヒダ付き三角フラスコにそれぞれ50mLずつ入れ、121℃、15分間殺菌後、シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11株を保存スラントより一白金耳植菌し、25℃で48時間、140rpmで回転振盪培養した。培養液を集め、遠心集菌後、10mM カリウムリン酸緩衝液 pH7.0で一回洗浄した後、菌体を100mM カリウムリン酸緩衝液 pH7.0に懸濁し、OD 600nmが60になるようにした。この菌体懸濁液0.40mLと表８に示す各アミンを含む基質懸濁液0.60mLとを混合し、気相をN2ガスで置換した後、25℃にて24時間静置反応を行い、実施例1と同様にして定量した。結果を表８に示す。
【０１２０】
基質懸濁液
供与体アミン 167mM（光学活性体あるいは不斉炭素のないアミンの場合）、333mM（ラセミ体アミンの場合）
PLP 0.083mM
PNB 83mM
100mM カリウムリン酸緩衝液, pH7.0（pHはHClにて調整した）
【０１２１】
【表８】
2007116916.tif 000019
【０１２２】
〔実施例6〕
(S)-1-フェニルエチルアミンを供与体とした場合のアミノ基受容体の比較
500mL容のヒダ付き三角フラスコにA培地を50mLずつ入れ、121℃、15分間殺菌後、シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11、12A4株を保存スラントより一白金耳植菌し、25℃で48時間回転振とう培養を行った。それぞれの培養液より遠心分離した菌体を10mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)で1回洗浄した。この菌体を100mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)に懸濁し、培養液に対して15倍濃縮した菌体懸濁液を調製した。50mMの(S)-1-フェニルエチルアミン、50mMの表９に示すアミノ基受容体、0.167mM PLPを含む100mM カリウムリン酸緩衝液 pH7.0の各基質溶液0.3mLとその菌体懸濁液0.2mLを混合し、25 ℃, 静置、気相をN2置換して24時間反応させた。反応終了後、HPLCにて生成したアセトフェノンを定量し、ピルビン酸の場合を100とした相対値で表９に示す。
【０１２３】
３株ともピルビン酸よりもグリオキシル酸の方が良い受容体であった。特に10F6株ではPNBが最も良い受容体であった。
【０１２４】
【表９】
2007116916.tif 000020
【０１２５】
〔実施例7〕
各種アミンの合成
実施例6と同様にしてシュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株、セラチア・エスピー（Serratia sp.）11E11株を培養し、集菌、洗浄を行った。次いで、100mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)に菌体を懸濁し、ODが60となるように液量を調整した。167mMのL-アラニンまたは333mMのsec ブチルアミン、83mMの表１０に示す各ケトン、0.167mM PLPを含む100mM カリウムリン酸緩衝液 pH7.0（HClにて調整）の各基質懸濁液0.3mLとその菌体懸濁液0.2mLを混合し、25 ℃, 静置、気相をN2置換して24時間反応させた。
【０１２６】
反応終了後、生成したケトンに対応するアミンをHPLCにて定量し、さらにその光学純度を測定し、結果を表１０に示す。アミノ基の供与体としてはL- アラニンよりsec-ブチルアミンの方が良好であった。アセトフェノンからは(S)-1-フェニルエチルアミンが、ベンジルアセトンからは(S)-3-アミノ-1-フェニルブタンが高い光学純度で生成し、本発明の菌株を使用することでAPBのみならず、他の有用な(S)-アミノ化合物を幅広く合成できることが判明した。
【０１２７】
【表１０】
2007116916.tif 000021
【０１２８】
〔実施例8〕
ラセミ体APBからの(R)-APBの調製
500mL容のヒダ付き三角フラスコにB培地を50mLずつ入れ、121℃、15分間殺菌後、シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株を保存スラントより一白金耳植菌し、25℃で48時間回転振とう培養を行った。遠心集菌、10mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)で1回洗浄を行った後、100mM カリウムリン酸緩衝液(pH8.0)に菌体を懸濁した。終濃度で50mMのラセミ体APB、50mMのピルビン酸、0.05mM PLP、100mM カリウムリン酸緩衝液 pH8.0（HClにて調整）、菌体濃度OD600=12、6、総液量0.50mLとなるようそれぞれを混合し、25 ℃にて回転振盪し、24時間反応させた。反応終了後、残存するAPBの濃度と光学純度を測定した。結果を表１１に示す。
【０１２９】
【表１１】
2007116916.tif 000022
本発明の菌株をAPBのエナンチオマー混合物に作用させることにより、(R)-APBを調製できた。
【０１３０】
〔実施例9〕
APB合成反応におけるメタノール、アセトニトリルの効果
シュードモナス・コルガータ（Pseudomonas corrugata）10F6株を実施例8と同様にして培養した。培養液より遠心分離にて集菌した菌体をさらに10mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)で1回洗浄した。この菌体を10mM カリウムリン酸緩衝液(pH7.0)に懸濁し、OD600が96になるよう液量を調整した。この菌体0.075mLと基質溶液0.075mL、メタノールあるいはアセトニトリルを所定量加え、さらに純水で液量を0.30mLに調整した。これらを25℃、静置、気相をN2置換して24時間反応させた。
【０１３１】
反応終了後、生成したAPBをHPLCにて定量し、さらにその光学純度を測定した。結果を表１２に示す。メタノール、アセトニトリルを5〜35体積%添加したことにより、生成するAPBの光学純度が向上することが判明した。
【０１３２】
【表１２】
2007116916.tif 000023
基質溶液組成：120mM PNB、480mM secブチルアミン、0.2mM PLP（100mM カリウムリン酸緩衝液, pH7.0中）
【産業上の利用可能性】
【０１３３】
本発明によれば、１−ベンジル−３−ピペリジノンから１−ベンジル−３−アミノピロリジンを生成する能力を有する微生物の菌体またはその処理物を用いることにより、特定構造を有する（Ｓ）体または（Ｒ）体の光学活性アミン類を、それぞれ対応するケトンまたは対応するラセミ体から効率的に製造することができる。
このような酵素法によるアミン類の合成法は、合成副産物が少ない、常温、常圧で行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【０１３４】
【図１】図１は、10F6株と近縁株の近隣結合法による系統樹である。
【図２】図２は、11E11株と近縁株の近隣結合法による系統樹である。
【図３】図３は、12A4株と近縁株の近隣結合法による系統樹である。
【図１】
2007116916.tif 000031
【図２】
2007116916.tif 000032
【図３】
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【配列表】
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