(57)【要約】      （修正有）【課題】効果的にしわを防止または改善する阻害剤の提供。【解決手段】下記一般式（Ｉ）で示されるベンゾヒドロキサム酸またはその塩からなるADAM阻害剤を皮膚に適用する。2007119444.tif 000006（式中、R1は炭素数1〜18のアルキル基、炭素数3〜8のシクロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、炭素数1〜18のアルコキシ基、ベンジルオキシ基、アミノ基またはアシルアミノ基であり、R2は水素原子、メチル基またはフェニル基であり、nは0〜3の整数である。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で示されるベンゾヒドロキサム酸またはその塩からなるADAM(a disintegrin and metalloprotease)阻害剤。
【化１】
2007119444.tif 000005
（式中、R1はそれぞれ独立して、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数3〜8のシクロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、炭素数1〜18のアルコキシ基、ベンジルオキシ基、アミノ基またはアシルアミノ基であり、R2は水素原子、メチル基またはフェニル基であり、nは0〜3の整数である。）
【請求項２】
R2が水素原子であることを特徴とする請求項１記載のADAM阻害剤。
【請求項３】
R1が、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数3〜8のシクロアルキル基、ヒドロキシル基、または炭素数1〜18のアルコキシ基であり、nが1〜2の整数であることを特徴とする請求項１または２記載のADAM阻害剤。
【請求項４】
n=1であり、R1が4位に置換することを特徴とする請求項１から３いずれか１項記載のADAM阻害剤。
【請求項５】
R1が、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数3〜8のシクロアルキル基、または炭素数1〜18のアルコキシ基であり、R2が水素原子であることを特徴とする請求項４記載のADAM阻害剤。
【請求項６】
請求項１から５いずれか１項記載のADAM阻害剤からなるしわ防止または改善剤。
【請求項７】
請求項１から５いずれか１項記載のADAM阻害剤を皮膚に適用することを特徴とするしわを防止または改善する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なADAM阻害剤、ならびにそれを用いたしわの防止または改善に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、中高年の女性における美容に対する関心の高まりから、加齢に伴う表皮角質層の保水能力の低下や表皮脂質の分泌低下による皮脂の減少によって顕在化する、目尻や口元に生じる小じわに対する関心が高まっている。小じわは、皮膚の乾燥が原因と考えられており、その発生メカニズムや、形態学的、組織学的、または生化学的変化等において、光老化によって生じる大じわとは大きく異なると考えられている。例えば、角質層水分量と小じわの程度に相関性があることがヒトにおいて検証されている（非特許文献１）。また、不飽和脂肪酸で継続的にバリア機能を破壊すると、表皮性のしわが生じることが報告されている（非特許文献２）。これまでこのような小じわの防止および改善は、グリセリン、ソルビトール、植物液エキス等の保湿剤やコラーゲン等を含む化粧料による皮膚の乾燥からの保護による対処に頼らざるを得なかった。しかしながら、保湿剤等による皮膚の乾燥からの保護のみでは、小じわを十分に防止・改善することはできず、より効果的に小じわを防止・改善することが強く望まれていた。
【０００３】
ADAM (a disintegrin and metalloprotease)と呼ばれる一群の膜型メタロプロテアーゼは、マトリックスメタロプテアーゼ（matrix metalloprotease； MMP）と並び、ヘパリン結合性EGF様増殖因子(heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor; HB-EGF) や腫瘍壊死因子 （tumor necrosis factor; TNF）などの各種増殖因子、ならびにその他の多くの膜タンパク質を細胞表面から切断して細胞外に遊離させ、それら増殖因子等による細胞の増殖や分化等に寄与することが知られてきている。例えば、細胞表面に発現したHB-EGFは、ADAM-9、10、12及び17によって切断されて細胞外に遊離することが報告されている。(例えば、非特許文献３−７を参照)。
【０００４】
さらに、紫外線、酸化、浸透圧など種々の刺激により、皮膚細胞においてHB-EGF、TNF-α等の増殖因子の発現・細胞膜からの遊離が促進され、オートクライン、パラクラインの機構によって細胞に増殖、分化等のシグナルが伝わり皮膚の増殖および肥厚を生じさせるが、その際に皮膚細胞に存在するADAMの活性化が起きていることが知られてきている。
【非特許文献１】芋川ら、Fragrance Journal; 1992(11) 29-42
【非特許文献２】正木仁  香料会誌；2001 Vol.25, No. 1, 34-38
【非特許文献３】Asakura, M., et al. 2002. Cardiac hypertrophy is inhibited by antagonism of ADAM12 processing of HB-EGF:  metalloproteinase inhibitors as a new therapy. Nat. Med. 8:35-40
【非特許文献４】Izumi, Y., et al. 1998. A metalloprotease- disintegrin, MDC9/meltrin-_/ADAM9 and PKC_ are involved in TPA-induced ectodomain shedding of membrane-anchored heparin-binding EGF-like growth factor. EMBO J. 17:7260-7272.
【非特許文献５】Lemjabbar, H., and C. Basbaum. 2002. Platelet-activating factor receptor and ADAM10 mediate responses to Staphylococcus aureus in epithelial cells. Nat. Med. 8:41-46
【非特許文献６】Sunnarborg, S.W., et al. 2002. Tumor necrosis factor-alpha converting enzyme (TACE) regulates epidermal growth factor receptor ligand availability. J. Biol. Chem. 277: 12838-12845
【非特許文献７】Yan, Y., K. Shirakabe, and Z. Werb. 2002. The metalloprotease Kuzbanian (ADAM10) mediates the transactivation of EGF receptor by G protein-coupled receptors. J. Cell Biol. 158:221-226.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記のような事情に鑑み、しわ、特に小じわを効果的に防止または改善できる新規な化合物を見出し、それを用いてより効果的にしわを防止または改善することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、ヘアレスマウスにテープストリッピングを繰り返し施すことによる皮膚の継続バリア破壊によって、ヒトの皮膚における小じわと同様の表皮および真皮の変化がマウスの皮膚に生じることを見出し、小じわマウスモデルを作成することに成功した。さらに、かかる小じわマウスモデルにおいて、ADAM-9およびADAM-17等のADAM(a disintegrin and metalloprotease)ファミリーに属するタンパク質（以下ADAMと称する）、ならびにそれらADAMによって細胞膜からの遊離および活性化がなされるHB-EGFおよびAmphiregulinの表皮における遺伝子発現が亢進していること、さらには皮膚におけるADAMを阻害することによって表皮および真皮の肥厚を抑制してしわ形成を防止し得ることを見出した。
【０００７】
そこで、ADAMを阻害し得る新規化合物を探索する中で、ある種のベンゾヒドロキサム酸及びその塩が高いADAM阻害活性を有し、さらにはしわ形成を顕著に阻害し得ることを発見し、本発明を達成するに至った。
【０００８】
ADAM-9、ADAM-10およびADAM-17等のADAMは、皮膚の細胞表面に存在し、皮膚においてHB-EGF、Amphiregulin、TNF-α、TGF-α等の増殖因子を細胞膜から遊離させ活性化させる酵素である。皮膚のバリア破壊によって、皮膚において、それらADAMが活性化されまたは発現亢進され、HB-EGF等の増殖因子の遊離・活性化を促進させ、表皮および真皮の肥厚を生じさせることが、小じわ形成の１つの重要な機構であると考えられる。したがって、皮膚におけるADAMの活性を抑制することによって、HB-EGF等の活性亢進を抑えることができ、表皮および真皮の肥厚を抑制して、しわ、特に小じわを防止または改善できると考えられる。図１に、皮膚におけるADAMの活性阻害によりしわを防止または改善する機構について説明した概略図を示す。
【０００９】
本発明のADAM阻害剤は、下記一般式（Ｉ）で示されるベンゾヒドロキサム酸またはその塩からなることを特徴とする。
【化１】
2007119444.tif 000002
【００１０】
（式中、R1はそれぞれ独立して、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数3〜8のシクロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、炭素数1〜18のアルコキシ基、ベンジルオキシ基、アミノ基またはアシルアミノ基であり、R2は水素原子、メチル基またはフェニル基であり、nは0〜3の整数である。）
前記ベンゾヒドロキサム酸またはその塩において、R2が水素原子であることが好適である。さらには、R1が炭素数1〜18のアルキル基、炭素数3〜8のシクロアルキル基、ヒドロキシル基、または炭素数1〜18のアルコキシ基であり、nは1〜2であることが好適である。また、R1が4位に置換することが好適であり、さらにこの場合、R1が炭素数1〜18のアルキル基、炭素数3〜8のシクロアルキル基、または炭素数1〜18のアルコキシ基であり、R2は水素原子であることが好適である。
【００１１】
ここで、アルキル基は、直鎖または分岐のいずれでもよく、炭素数1〜18であり、好ましくは炭素数1〜6である。
【００１２】
シクロアルキル基は、炭素数3〜8であり、好ましくはシクロペンチル基、シクロヘキシル基、またはシクロヘプチル基である。
【００１３】
ハロゲン原子は、好ましくは、フッ素原子または塩素原子である。
【００１４】
アルコキシ基は、炭素数1〜18のアルキルで置換されたヒドロキシル基であり、好ましくは炭素数1〜6のアルキルで置換されたヒドロキシル基であるが、さらに好ましくは、メトキシ基である。
【００１５】
ベンジルオキシ基は、ベンゼン環上に置換基を持つこともでき、アルキル基、シクロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、アルコキシ基、ベンジルオキシ基、アリールオキシ基、アミノ基、アシルアミノ基、アリール基等で置換されてもよい。
【００１６】
アシルアミノ基は、アシル基で置換されたアミノ基であり、アシル基は、アルキル基、シクロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、アルコキシ基、ベンジルオキシ基、アリールオキシ基、アミノ基、アシルアミノ基、アリール基等の置換基で置換されてもよい。
【００１７】
本発明のADAM阻害剤のうち、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸は、チロシナーゼ阻害剤であり、色素形成を防止または阻害することによって美白作用を有することが報告されている（例えば国際公開第03/057184号パンフレットを参照）が、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸がADAM活性を阻害し、しわを防止または改善し得ることについては全く知られていなかった。
【００１８】
本発明のしわ防止または改善剤は、ADAM阻害剤である上記のベンゾヒドロキサム酸またはその塩からなることを特徴とする。
【００１９】
また、本発明のしわを防止または改善する方法は、ADAM阻害剤である上記のベンゾヒドロキサム酸またはその塩を皮膚に適用することを特徴とする。
【００２０】
上述したように、本発明のベンゾヒドロキサム酸は、皮膚におけるADAMの活性を阻害または抑制することによってHB-EGF等の活性亢進を抑えることができ、表皮および真皮の肥厚を抑制して、しわ形成を防止し、または形成されたしわを改善する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明のADAM阻害剤を皮膚に適用することによって、ADAM-9、ADAM-10またはADAM-17等の皮膚に存在するADAMの活性を阻害して、皮脂の減少や洗顔等の様々な要因によって生じる皮膚のバリア破壊によって誘起される表皮および真皮におけるHB-EGF等の増殖因子の遊離・活性化の亢進を抑制し、表皮や真皮の肥厚を抑えることができ、非常に効果的にしわ、特に小じわの形成を防止または改善することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明で用いるベンゾヒドロキサム酸またはその塩は下記一般式（Ｉ）で表される：
【化２】
2007119444.tif 000003
【００２３】
（式中、R1はそれぞれ独立して、炭素数1〜18のアルキル基、炭素数3〜8のシクロアルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、炭素数1〜18のアルコキシ基、ベンジルオキシ基、アミノ基またはアシルアミノ基であり、R2は水素原子、メチル基またはフェニル基であり、nは0〜3の整数である。）
本発明のベンゾヒドロキサム酸として、例えば、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸、4-ブチルベンゾヒドロキサム酸、ベンゾヒドロキサム酸、2-ヒドロキシ-3-メチルベンゾヒドロキサム酸、3-(フェノキシアセチルアミノ)ベンゾヒドロキサム酸、4-シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸、2-クロロベンゾヒドロキサム酸、3-メトキシベンゾヒドロキサム酸、2-メトキシベンゾヒドロキサム酸、4-クロロベンゾヒドロキサム酸、4-(4-フルオロベンジルオキシ)-3-イソブチルベンゾヒドロキサム酸、2-ヒドロキシ-5-メチルベンゾヒドロキサム酸等が挙げられる。
【００２４】
本発明で用いられるベンゾヒドロキサム酸は、遊離酸以外にその医学的に許容される塩の形態も含む。これらの塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、メチルアミン塩、ジメチルアミン塩、トリメチルアミン塩、メチルピペリジン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、リジン塩などのアミン塩、アンモニウム塩、あるいは塩基性アミノ酸塩などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２５】
ベンゾヒドロキサム酸及びその塩は、公知の製造方法に従い製造することが可能であり、また市販品を用いることも可能である。
【００２６】
限定はされないが、本発明のベンゾヒドロキサム酸またはその塩からなるしわ防止または改善剤は、好ましくは皮膚外用剤において使用する。皮膚外用剤におけるベンゾヒドロキサム酸またはその塩の配合量は、その使用態様や製品形態等によって異なり特に限定はされないが、例えば、皮膚外用剤全量に対して、好ましくは0.001質量％から10質量％、より好ましくは0.005質量％から5質量％、さらに好ましくは0.01質量％から1質量％である。
【００２７】
本明細書において、「皮膚外用剤」は、化粧料、医薬品、医薬部外品等を含む。また、その剤型も、水溶液系、可溶化系、乳化系、油液系、ゲル系、ペースト系、軟膏系、エアゾール系、水−油２層系、水−油−粉末３層など、任意の剤型を含む。また、シート状基剤に担持されたものも含む。
【００２８】
また、皮膚外用剤の採り得る製品形態および用途も任意であり、例えば、化粧水、乳液、クリーム、パック等のフェーシャル、ボディまたは頭皮用の外用剤として用いることが可能である。
【００２９】
皮膚外用剤は、上記のベンゾヒドロキサム酸またはその塩の他に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる他の任意の成分を必要に応じて適宜配合し、目的とする剤形に応じて常法により製造することが出来る。例えば、ベンゾヒドロキサム酸またはその塩と、下記成分の１種または２種以上とを配合して皮膚外用剤を調製できる。
【００３０】
紫外線吸収剤としては、例えば、パラアミノ安息香酸(以下 PABAと略す)、PABAモノグリセリンエステル、N,N-ジプロポキシPABAエチルエステル、N,N-ジエトキシPABAエチルエステル、N,N-ジメチルPABAエチルエステル、N,N-ジメチルPABAブチルエステル、N,N-ジメチルPABAメチルエステル等の安息香酸系紫外線吸収剤、ホモメンチル-N- アセチルアントラニレート等のアントラニル酸系紫外線吸収剤、アミルサリシレート、メンチルサリシレート、ホモメンチルサリシレート、オクチルサリシレート、フェニルサリシレート、ベンジルサリシレート、p-イソプロパノールフェニルサリシレート等のサリチル酸系紫外線吸収剤、オクチルシンナメート、エチル-4-イソプロピルシンナメート、メチル-2,5- ジイソプロピルシンナメート、エチル-2,4-ジイソプロピルシンナメート、メチル-2,4-ジイソプロピルシンナメート、プロピル-p-メトキシシンナメート、イソプロピル-p-メトキシシンナメート、イソアミル-p-メトキシシンナメート、オクチル-p-メトキシシンナメート(2- エチルヘキシル-p-メトキシシンナメート)、2-エトキシエチル-p-メトキシシンナメート、シクロヘキシル-p- メトキシシンナメート、エチル-α-シアノ−β-フェニルシンナメート、2-エチルヘキシル-α-シアノ-β-フェニルシンナメート、グリセリルモノ-2-エチルヘキサノイル-ジパラメトキシシンナメート、トリメトキシ桂皮酸メチルビス（トリメチルシロキサン）シリルイソペンチル等の桂皮酸系紫外線吸収剤、3-(4'-メチルベンジリデン)-ｄ,1-カンファー、3-ベンジリデン-d,1-カンファー、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチルエステル、2-フェニル-5-メチルベンゾキサゾール、2,2'-ヒドロキシ-5-メチルフェニルベンゾトリアゾール、2-(2'-ヒドロキシ-5'-t-オクチルフェニル) ベンゾトリアゾール、2-(2'-ヒドロキシ-5'-メチルフェニルベンゾトリアゾール、ジベンザラジン、ジアニソイルメタン、4-メトキシ-4'-t-ブチルジベンゾイルメタン、5-(3,3-ジメチル-2-ノルボルニリデン)-3-ペンタン-2-オン、ジモルホリノピリダジノン等が挙げられ、任意の１種または２種以上を用いることができる。
【００３１】
紫外線散乱剤としては、酸化チタン、微粒子酸化チタン、酸化亜鉛、微粒子酸化亜鉛、酸化鉄、微粒子酸化鉄、酸化セリウムなどの粉末が挙げられる。
【００３２】
これら紫外線散乱剤は、通常、針状、紡錘状、球状、粒状の粉末が使用される。また、粒子径が0.1μm以下の微粒子粉末が好ましい。
【００３３】
メチルハイドロジェンポリシロキサンやシランカップリング剤などのシリコーン処理；金属石鹸処理；パーフルオロアルキルリン酸ジエタノールアミン塩やパーフルオロアルキルシラン等のフッ素処理、デキストリン脂肪酸エステル処理等により、疎水化処理した紫外線散乱剤も好ましい。
【００３４】
液体油脂としては、例えば、アボガド油、ツバキ油、タートル油、マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、オリーブ油、ナタネ油、卵黄油、ゴマ油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、シナギリ油、日本キリ油、ホホバ油、胚芽油、トリグリセリン等が挙げられる。
【００３５】
固体油脂としては、例えば、カカオ脂、ヤシ油、馬脂、硬化ヤシ油、パーム油、牛脂、羊脂、硬化牛脂、パーム核油、豚脂、牛骨脂、モクロウ核油、硬化油、牛脚脂、モクロウ、硬化ヒマシ油等が挙げられる。
【００３６】
ロウ類としては、例えば、ミツロウ、カンデリラロウ、綿ロウ、カルナウバロウ、ベイベリーロウ、イボタロウ、鯨ロウ、モンタンロウ、ヌカロウ、ラノリン、カポックロウ、酢酸ラノリン、液状ラノリン、サトウキビロウ、ラノリン脂肪酸イソプロピル、ラウリン酸ヘキシル、還元ラノリン、ジョジョバロウ、硬質ラノリン、セラックロウ、POEラノリンアルコールエーテル、POEラノリンアルコールアセテート、POEコレステロールエーテル、ラノリン脂肪酸ポリエチレングリコール、POE水素添加ラノリンアルコールエーテル等が挙げられる。
【００３７】
炭化水素油としては、例えば、流動パラフィン、オゾケライト、スクワラン、プリスタン、パラフィン、セレシン、スクワレン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス、ポリエチレンワックス、フィッシャートロプッシュワックス等が挙げられる。
【００３８】
高級脂肪酸としては、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、オレイン酸、ウンデシレン酸、トール酸、リノール酸、リノレイン酸、エイコサペンタエン酸（EPA）、ドコサヘキサエン酸（DHA）等が挙げられる。
【００３９】
高級アルコールとしては、例えば、直鎖アルコール（例えば、ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、ミリスチルアルコール、オレイルアルコール、セトステアリルアルコール等）；分枝鎖アルコール（例えば、モノステアリルグリセリンエーテル(バチルアルコール)、2-デシルテトラデシノール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、ヘキシルドデカノール、オクチルドデカノール等）等が挙げられる。
【００４０】
合成エステル油としては、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、12-ヒドロキシステアリン酸コレステリル、ジ-2-エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸N-アルキルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ-2-ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ-2-エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ-2-エチルヘキサン酸ペンタエリスリトール、トリ-2-エチルヘキサン酸グリセリン、トリオクタン酸グリセリン、トリイソパルミチン酸グリセリン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、セチル2-エチルヘキサノエート、2-エチルヘキシルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリン、トリ-2-ヘプチルウンデカン酸グリセライド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイン酸オレイル、アセトグリセライド、パルミチン酸2-ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソブチル、N-ラウロイル-L-グルタミン酸-2-オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ-2-ヘプチルウンデシル、エチルラウレート、セバシン酸ジ−2-エチルヘキシル、ミリスチン酸2-ヘキシルデシル、パルミチン酸2-ヘキシルデシル、アジピン酸2-ヘキシルデシル、コハク酸2-エチルヘキシル、クエン酸トリエチル、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンランダム重合体メチルエーテル等が挙げられる。
【００４１】
シリコーン油としては、例えば、鎖状ポリシロキサン（例えば、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン等）；環状ポリシロキサン（例えば、オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサシロキサン等）、３次元網目構造を形成しているシリコーン樹脂、シリコーンゴム、各種変性ポリシロキサン（アミノ変性ポリシロキサン、ポリエーテル変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等）等が挙げられる。
【００４２】
その他には、例えば、ポリエチレングリコール，グリセリン、1,3-ブチレングリコール，エリスリトール，ソルビトール，キシリトール，マルチトール等の保湿剤；セルロース，ヒドロキシエチルセルロース，ヒドロキシプロピルセルロース，メチルヒドロキシプロピルセルロース，メチルセルロース，カルボキシメチルセルロース，クインスシード，カラギーナン，ペクチン，マンナン，カードラン，コンドロイチン硫酸，デンプン，ガラクタン，デルマタン硫酸，グリコーゲン，アラビアガム，ヘパラン硫酸，ヒアルロン酸，ヒアルロン酸ナトリウム，トラガントガム，ケラタン硫酸，コンドロイチン，キサンタンガム，ムコイチン硫酸，ヒドロキシエチルグアガム，カルボキシメチルグアガム，グアガム，デキストラン，ケラト硫酸，ローカストビーンガム，サクシノグルカン，カロニン酸，キチン，キトサン，カルボキシメチルキチン，寒天等の増粘剤、エタノール等の低級アルコール；ブチルヒドロキシトルエン，トコフェロール，フィチン等の酸化防止剤；安息香酸，サリチル酸，ソルビン酸，パラオキシ安息香酸アルキルエステル，ヘキサクロロフェン等の抗菌剤；アシルサルコシン酸（例えばラウロイルサルコシンナトリウム）、グルタチオン、クエン酸，リンゴ酸，酒石酸，乳酸等の有機酸；ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＢ６塩酸塩，ビタミンＢ６トリパルミテート，ビタミンＢ６ジオクタノエート，ビタミンＢ２及びその誘導体，ビタミンＢ１２，ビタミンＢ１５及びその誘導体等のビタミンＢ類、アスコルビン酸，アスコルビン酸硫酸エステル（塩），アスコルビン酸リン酸エステル（塩），アスコルビン酸ジパルミテート等のビタミンＣ類、α−トコフェロール，β−トコフェロール，δ−トコフェロール，ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン等のビタミン類；ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル、γ−オリザノール、アラントイン、グリチルリチン酸（塩）、グリチルレチン酸及びその誘導体、ヒノキチオール、ビサボロール、ユーカルプトーン、チモール、イノシトール、サイコサポニン、ニンジンサポニン、ヘチマサポニン、ムクロジサポニン等のサポニン類、パントテニルエチルエーテル、エチニルエストラジオール、トラネキサム酸、アルブチン、セファランチン、プラセンタエキス等の各種薬剤、ギシギシ、クララ、コウホネ、オレンジ、セージ、ノコギリソウ、ゼニアオイ、センブリ、タイム、トウキ、トウヒ、バーチ、スギナ、ヘチマ、マロニエ、ユキノシタ、アルニカ、ユリ、ヨモギ、シャクヤク、アロエ、クチナシ、サワラ、セイヨウサンザシエキス、セイヨウオトギリソウエキス、アイリス・インエキス、アセンヤクエキス、イチョウ葉エキス、イブキジャコウエキス、ウイキョウエキス、ウーロン茶エキス、ウオーターリリーエキス、エイジツエキス、エンメイソウエキス、オウゴンエキス、オウバクエキス、オドリコソウエキス、カンゾウエキス、クチナシエキス、紅茶エキス、セイカリュウエキス、トルメンチラエキス、バラエキス、ヘチマエキス、ペパーミントエキス、ローズマリーエキス、ローヤルゼリーエキス等の植物の抽出物、色素、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキセチレンソルビタン、ポリエチレングリコールモノオレート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリグリコールジエーテル、ラウロイルジエタノールアマイド、脂肪酸イソプロパノールアマイド、マルチトールヒドロキシ脂肪酸エーテル、アルキル化多糖、アルキルグルコシド、シュガーエステル等の非イオン性活性剤、ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン性界面活性剤、パルミチン酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、ラウリル酸ナトリウム、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル、ロート油、リニアドデシルベンゼン硫酸、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油マレイン酸、アシルメチルタウリン等のアニオン性界面活性剤、両性界面活性剤、中和剤、δ−トコフェロール、ブチルヒドロキシトルエン等の酸化防止剤、フェノキシエタノール、パラベン等の防腐剤が挙げられる。
【００４３】
本発明のしわを防止または改善する方法において、ベンゾヒドロキサム酸またはその塩は、皮膚への適用が可能でかつ本発明の目的を達成できる限り、任意の形態で皮膚に適用することができ、また単独で適用しても、あるいは他の任意の成分と共に配合して適用してもよい。また適用する皮膚の場所も限定されず、頭皮を含む体表面のあらゆる皮膚を含む。本発明の方法は、通常美容方法として用いられる。
【００４４】
尚、本発明のベンゾヒドロキサム酸またはその塩からなるADAM阻害剤の用途は、上述したしわの防止または改善に限定されず、ADAMの活性を阻害することによって効果を発揮できる任意の用途を含み、例えばADAMの活性化による皮膚細胞の増殖や分化により悪影響を受ける各種疾患の治療または予防にも用いることができる。
【実施例】
【００４５】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。なお、化合物の配合量は特に断りのない限り質量％である。
【００４６】
１.  新規なADAM阻害剤の探索
まず、以下の方法によりADAM活性阻害効果について各種化合物をスクリーニングして、新規なADAM阻害剤を探索した。
【００４７】
HB-EGF-AP/HT-1080（ヒトHB-EGFのN末端に耐熱性アルカリフォスファターゼ（AP）を付加した融合蛋白質を強制的に発現するように改変したヒト線維肉腫由来培養細胞HT-1080）を用いてADAM酵素阻害活性を有する化合物のスクリーニングを行った。用いた細胞株HB-EGF-AP/HT-1080の細胞表面上にはアルカリフォスファターゼと融合した形でHB-EGF全長分子が発現している。この細胞をホルボールエステルで刺激すると、細胞膜表面上のADAM酵素が活性化されてHB-EGF分子を切断する。切断されて遊離型となったHB-EGFにはアルカリフォスファターゼが結合しているため、培養上清中のアルカリフォスファターゼ活性を測定することで化合物のADAM酵素阻害活性を間接的に測定できる。
【００４８】
具体的には、2.0 x 105 cells/ml になるように細胞数を調整したHB-EGF-AP/HT-1080を96ウェル培養用マイクロプレートに0.2 ml/wellずつ播種し、37℃で一晩培養した。培地を除去しPBS(-)で洗浄後、被験物質を含む培地を0.1 ml/wellずつ添加し、37℃で30分間インキュベートして前処置した。その後、培養上清を除去し、再度被験物質と60 nM TPA（ホルボールエステル：12-o-Tetradecanoylphorbol-acetate; Sigma P8139）を含む培地を0.2 ml/wellずつ添加し、さらに60分間インキュベートして処置した。処置終了後の各ウェルの培養上清0.1 mlをアルカリフォスファターゼ活性測定用マイクロプレートのウェルに移し、65℃にて10分間インキュベートし、内在性のアルカリフォスファターゼを失活させた。1 mg/ml のAP基質（p-nitrophenylphosphate，Wako; 141-02341）を0.1 ml/wellずつ各ウェルに添加し、直ちに各ウェルの405 nmでの吸光度を測定した。遮光して室温にて2時間インキュベートしたのち、再び各ウェルの405 nmでの吸光度を測定した。2時間インキュベート後の吸光度からAP基質添加直後の吸光度を減じたものを各ウェルの吸光度とした。0% 阻害コントロール（TPAのみを含む培地）の吸光度をA0、100% 阻害コントロール（培地のみ）の吸光度をA100、試料の吸光度をASとし、以下の式により阻害率（％）を算出した：
阻害率（％） = (A0-AS)/(A0-A100) * 100
【００４９】
その結果、本発明のベンゾヒドロキサム酸に高いHB-EGF遊離抑制効果が認められ、ADAM活性を阻害することが示唆された。各ベンゾヒドロキサム酸の遊離阻害率を表１に示す。
【表１】
2007119444.tif 000004
【００５０】
２．  4-メトキシベンゾヒドロキサム酸のしわ改善効果の評価
次に、バリア破壊しわマウスモデルを用いて、新規なADAM阻害化合物のうち阻害率（％）が高かった4-メトキシベンゾヒドロキサム酸のしわ改善効果について検討した。
【００５１】
ヘアレスマウス（HR-1, 雄6週齢、星野実験動物）の左側背部に経皮水分蒸散量（TEWL）（水分蒸散量測定装置MEECO；Meeco社、USAを用いて測定）が4-8mg/cm2/hになるようにテープストリッピングを週3回、4週間継続して行った。テープストリッピング処置直後に毎回、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸をそれぞれ1％になるように50%エタノール水溶液に溶解させたものを、マウス左側背部に100μlずつ塗布し、また、陰性対象として50％エタノール水溶液(Vehicle)を同様に塗布した。ｎ数は各群６から７とした。
【００５２】
4週間後のしわの発生状況を視感判定によりスコア化した。しわの発生状況の評価基準は「しわなし；０」、「うすいしわ；１」、「明らかなしわ；２」、「深いしわ；３」とし、0.5刻みで点数化した。評点が大きいほどしわが深いことを示す。各群の平均値および標準偏差を算出し、結果を図２に示す。
【００５３】
図２から明らかであるように、Vehicleのスコアが平均値で1.17なのに対して、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸は0.91と有意に低く、顕著なしわ抑制効果を示した。
【００５４】
次に、マウス背部のレプリカをしわ解析装置（浜野エンジニアリング）を用いて解析し、しわ面積（％）を算出した。しわ面積のパーセンテージが低いほどしわ形成が抑制されていることを表す。結果を図３に示す。
【００５５】
図３から明らかであるように、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸のしわ面積（％）の平均値はVehicleよりも有意に低く、高いしわ抑制効果を示した。
【００５６】
さらにマウス背部における試験開始前と開始後4週間目の経表皮水分蒸散量（TEWL）についても検討した。テープストリッピング処置を施し、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸または50％エタノール水溶液(Vehicle)を塗布した左側背部、および何も処置を施していない右側背部におけるTEWL値を、Vapometer（Technologies Ltd, Kuopio, フィンランド）でそれぞれ2回ずつ測定した。各個体の右側のTEWL値を100とした時の左側のTEWL値の比率（相対的TEWL（％））を求め、各群毎の平均値を算出した。パーセンテージの値が高いほど肌荒れが亢進していることを示す。結果を図４に示す。
【００５７】
図４から明らかであるように、Vehicle塗布群ではTEWLが216％まで上昇したのに対し、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸塗布群では126％の上昇に留まっており、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸はテープストリッピングによるTEWLの上昇を有意に抑制した。
【００５８】
これらの結果から、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸は、活性化したADAMを阻害することにより表皮増殖因子であるHB-EGFの遊離を抑制し、皮膚の増殖および肥厚を抑制してしわ形成を防止または改善し得ることが示唆された。さらには、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸は、皮膚のバリア破壊による経表皮水分蒸散量（TEWL）の上昇を顕著に抑制し、肌荒れ防止効果も有することが示唆された。
【００５９】
以下に、本発明のベンゾヒドロキサム酸またはその塩を含有する皮膚外用剤の製剤例を示すが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、配合量は全て外用剤全量に対する質量％で表す。
【００６０】
製剤例１：乳液
（処方）                                                          質量％
ステアリン酸                                                      ２．５
セチルアルコール                                                  １．５
ワセリン                                                          ５．０
流動パラフィン                                                    ５．０
ポリオキシエチレン（１０モル）モノオレイン酸エステル              ２．０
ポリエチレングリコール１５００                                    ３．０
トリエタノールアミン                                              １．０
カルボキシビニルポリマー                                          ０．０５
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ２．０
亜硫酸水素ナトリウム                                              ０．０１
エチルパラベン                                                    ０．２
香料                                                              適量
精製水                                                            残余
（製法）少量の精製水にカルボキシビニルポリマーを溶解する（Ａ相）。残りの精製水にポリエチレングリコール１５００とトリエタノールアミン、４−メトキシベンゾヒドロキサム酸を加え、加熱溶解して７０℃に保つ（水相）。他の成分を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相を加え予備乳化を行い、Ａ相を加えホモミキサーで均一乳化し、乳化後よくかき混ぜながら３０℃まで冷却し、乳液を得た。
【００６１】
製剤例２：化粧水
（処方）                                                          質量％
エタノール                                                        ５．０
カルボキシビニルポリマー                                          ０．３
ポリオキシエチレン（１５モル）オレイルエーテル                    ０．８
１，３−ブチレングリコール                                        ５．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ２．０
クエン酸                                                          ０．０３
クエン酸ナトリウム                                                ０．０７
メチルパラベン                                                    ０．１
精製水                                                            残余
（製法）精製水に、クエン酸、クエン酸ナトリウム及び４−メトキシベンゾヒドロキサム酸を溶解し、これを水相とした。他方、その他の成分を撹拌溶解し、これを水相に添加して均質にし、化粧水を得た。
【００６２】
製剤例３：クリーム
（処方）                                                          質量％
ステアリン酸                                                      ２．０
ステアリルアルコール                                              ７．０
水添ラノリン                                                      ２．０
２−オクチルドデシルアルコール                                    ６．０
ポリオキシエチレン（２５モル）セチルアルコールエーテル            ３．０
グリセリンモノステアリン酸エステル                                ２．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ２．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ２．０
１，３−ブチレングリコール                                        ５．０
エデト酸３ナトリウム                                              ０．１
グリチルレチン酸ナトリウム                                        ０．１
ビタミンＥアセテート                                              ０．３
エチルパラベン                                                    ０．３
精製水                                                            残余
（製法）精製水に４−メトキシベンゾヒドロキサム酸、２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸、１，３−ブチレングリコール、エデト酸３ナトリウム、グリチルレチン酸ナトリウムを加えて７０℃に保ち、これを水相とした。他方、その他の成分を混合し、加熱融解し７０℃に保ち、これを油相とした。水相に油相を加えて予備乳化を行ない、ホモミキサーで均一に乳化した後、３０℃に冷却しクリームを得た。
【００６３】
製剤例４  乳液
（処方）                                                          質量％
ジメチルポリシロキサン                                            ３．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                                  ４．０
エタノール                                                        ５．０
グリセリン                                                        ６．０
１，３−ブチレングリコール                                        ５．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ０．５
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ０．５
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                                ３．０
ヒマワリ油                                                        １．０
スクワラン                                                        ２．０
水酸化カリウム                                                    ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン                        ０．１
４−メトキシサリチル酸カリウム                                    １．０
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．０５
ビワ葉エキス                                                      ０．１
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                                        ０．０５
ウイキョウエキス                                                  ０．１
酵母エキス                                                        ０．１
ラベンダー油                                                      ０．１
ジオウエキス                                                      ０．１
ジモルホリノピリダジノン                                          ０．１
キサンタンガム                                                    ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．１
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−１）    ０．１
ベンガラ                                                          適量
黄酸化鉄                                                          適量
パラベン                                                          適量
精製水                                                            残余
【００６４】
製剤例５  乳液
（処方）                                                          質量％
ジメチルポリシロキサン                                            ３．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                                  ４．０
エタノール                                                        ５．０
グリセリン                                                        ６．０
１，３−ブチレングリコール                                        ５．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                                ３．０
ヒマワリ油                                                        １．０
スクワラン                                                        ２．０
水酸化カリウム                                                    ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン                        ０．１
４−メトキシサリチル酸カリウム                                    １．０
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．０５
ビワ葉エキス                                                      ０．１
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                                        ０．０５
ウイキョウエキス                                                  ０．１
酵母エキス                                                        ０．１
ラベンダー油                                                      ０．１
ジオウエキス                                                      ０．１
ジモルホリノピリダジノン                                          ０．１
キサンタンガム                                                    ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．１
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−１）    ０．１
ベンガラ                                                          適量
黄酸化鉄                                                          適量
パラベン                                                          適量
精製水                                                            残余
【００６５】
製剤例６  乳液
（処方）                                                          質量％
ジメチルポリシロキサン                                            ２．０
ベヘニルアルコール                                                １．０
バチルアルコール                                                  ０．５
グリセリン                                                        ５．０
１，３−ブチレングリコール                                        ７．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ０．５
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
トラネキサム酸メチルアミド塩酸塩                                  ０．７
エリスリトール                                                    ２．０
硬化油                                                            ３．０
スクワラン                                                        ６．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      ２．０
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル                      １．０
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                      １．０
水酸化カリウム                                                    適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
フェノキシエタノール                                              適量
カルボキシビニルポリマー                                          ０．１
精製水                                                            残余
【００６６】
製剤例７  乳液
（処方）                                                          質量％
ジメチルポリシロキサン                                            ２．０
ベヘニルアルコール                                                １．０
バチルアルコール                                                  ０．５
グリセリン                                                        ５．０
１，３−ブチレングリコール                                        ７．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
トラネキサム酸メチルアミド塩酸塩                                  ０．７
エリスリトール                                                    ２．０
硬化油                                                            ３．０
スクワラン                                                        ６．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      ２．０
イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル                      １．０
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                      １．０
水酸化カリウム                                                    適量
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
フェノキシエタノール                                              適量
カルボキシビニルポリマー                                          ０．１
精製水                                                            残余
【００６７】
製剤例８  乳液
（処方）                                                          質量％
流動パラフィン                                                    ７．０
ワセリン                                                          ３．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                                  ２．０
ベヘニルアルコール                                                ０．５
グリセリン                                                        ５．０
ジプロピレングリコール                                            ７．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  １．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
ポリエチレングリコール１５００                                    ２．０
ホホバ油                                                          １．０
イソステアリン酸                                                  ０．５
ステアリン酸                                                      ０．５
ベヘニン酸                                                        ０．５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      ３．０
２−エチルヘキサン酸セチル                                        ３．０
モノステアリン酸グリセリン                                        １．０
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                      １．０
水酸化カリウム                                                    ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
グリチルレチン酸ステアリル                                        ０．０５
Ｌ−アルギニン塩酸塩                                              ０．１
ローヤルゼリーエキス                                              ０．１
酵母エキス                                                        ０．１
ウコンエキス                                                      ０．１
酢酸トコフェロール                                                ０．１
アセチル化ヒアルロン酸ナトリウム                                  ０．１
エデト酸三ナトリウム                                              ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン                  ０．１
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                              ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．１５
パラベン                                                          適量
精製水                                                            残余
香料                                                              適量
【００６８】
製剤例９  乳液
（処方）                                                          質量％
ワセリン                                                          ５．０
ベヘニルアルコール                                                ０．５
バチルアルコール                                                  ０．５
グリセリン                                                        ７．０
１，３−ブチレングリコール                                        ７．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
１，２−ペンタンジオール                                          １．０
キシリット                                                        ３．０
ポリエチレングリコール２００００                                  ２．０
硬化油                                                            ２．０
ホホバ油                                                          ２．０
スクワラン                                                        ５．０
イソステアリン酸                                                  ０．５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      ２．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                    ０．５
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン                                ０．４
水酸化カリウム                                                    適量
ピロ亜硫酸ナトリウム                                              ０．０１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．０５
トリメチルグリシン                                                ３．０
アルブチン                                                        ３．０
イチヤクソウエキス                                                ０．１
オドリコソウエキス                                                ０．１
ルンプヤンエキス                                                  ０．１
酵母エキス                                                        ０．１
酢酸トコフェロール                                                ０．１
チオタウリン                                                      ０．１
クララエキス                                                      ０．１
ベンガラ                                                          適量
クインスシードエキス                                              ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．２
フェノキシエタノール                                              適量
精製水                                                            残余
【００６９】
製剤例１０  乳液
（処方）                                                          質量％
ワセリン                                                          ５．０
ジメチルポリシロキサン                                            ２．０
ベヘニルアルコール                                                ０．６
バチルアルコール                                                  ０．５
ジプロピレングリコール                                            ２．０
１，３−ブチレングリコール                                        ４．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                １０．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ３．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ３．０
キシリット                                                        １．０
ポリエチレングリコール１５００                                    １．０
スクワラン                                                        ５．０
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                                ２．０
酢酸レチノール                                                    ０．０３
レチノール（１５０万単位）                                        ０．０１
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                    ０．５
トラネキサム酸メチルアミド塩酸塩                                  ０．７
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．１
２−Ｏ−エチル−Ｌ−アスコルビン酸                                ０．１
酵母エキス                                                        ０．１
アセンヤクエキス                                                  ０．１
シャクヤクエキス                                                  ０．１
ヒオウギ抽出液                                                    ０．１
ＨＥＤＴＡ  ３ナトリウム                                          ０．０５
キサンタンガム                                                    ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．１５
精製水                                                            残量
香料                                                              適量
【００７０】
製剤例１１  化粧水
（処方）                                                          質量％
エチルアルコール                                                  ５．０
グリセリン                                                        １．０
１，３−ブチレングリコール                                        ５．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ３．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                  １０．０
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシルテトラデシルエーテル  ０．２
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０３
トリメチルグリシン                                                １．０
ポリアスパラギン酸ナトリウム                                      ０．１
α−トコフェロール２−Ｌ−アスコルビン酸リン酸ジエステルカリウム  ０．１
２−Ｏ−エチル−Ｌ−アスコルビン酸                                ０．１
緑茶エキス                                                        ０．１
ブナエキス                                                        ０．１
トウニンエキス                                                    ０．１
西洋ハッカエキス                                                  ０．１
イリス根エキス                                                    ０．１
ＨＥＤＴＡ３ナトリウム                                            ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．０５
水酸化カリウム                                                    ０．０２
フェノキシエタノール                                              適量
精製水                                                            残余
香料                                                              適量
【００７１】
製剤例１２  化粧水
（処方）                                                          質量％
グリセリン                                                        ２．０
１，３−ブチレングリコール                                        ４．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
エリスリトール                                                    １．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                                １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                    ０．５
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド                                  ２．０
キシリトール                                                      ０．１
クエン酸                                                          ０．０２
クエン酸ナトリウム                                                ０．０８
フェノキシエタノール                                              適量
Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシルＬ−アルギニンエチル
・ＤＬ−ピロリドンカルボン酸                  ０．１
精製水                                                            残余
【００７２】
製剤例１３  化粧水
（処方）                                                          質量％
グリセリン                                                        ２．０
１，３−ブチレングリコール                                        ４．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
エリスリトール                                                    １．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                                １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                    ０．５
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド                                  ２．０
キシリトール                                                      ０．１
クエン酸                                                          ０．０２
クエン酸ナトリウム                                                ０．０８
フェノキシエタノール                                              適量
Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシルＬ−アルギニンエチル
・ＤＬ−ピロリドンカルボン酸                  ０．１
精製水                                                            残余
【００７３】
製剤例１４  化粧水
（処方）                                                          質量％
エタノール                                                      １０．０
ジプロピレングリコール                                            １．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  １．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
ポリエチレングリコール１０００                                    １．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                                １．０
ホホバ油                                                          ０．０１
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                                ０．１
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                    ０．２
ジイソステアリン酸ポリグリセリル                                  ０．１５
Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                      ０．１
クエン酸                                                          ０．０５
クエン酸ナトリウム                                                ０．２
水酸化カリウム                                                    ０．４
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．１
塩酸アルギニン                                                    ０．１
Ｌ−アスコルビン酸  ２−グルコシド                                ２．０
オウゴンエキス                                                    ０．１
ユキノシタエキス                                                  ０．１
オドリコソウエキス                                                ０．１
タイムエキス                                                      ０．１
マヨナラエキス                                                    ０．１
トラネキサム酸                                                    １．０
エデト酸三ナトリウム                                              ０．０５
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                              ０．０１
ジブチルヒドロキシトルエン                                        適量
パラベン                                                          適量
海洋深層水                                                        ３．０
精製水                                                            残余
香料                                                              適量
【００７４】
製剤例１５  化粧水
（処方）                                                          質量％
ジメチルポリシロキサン                                            １．０
エタノール                                                        ３．０
ベヘニルアルコール                                                ０．３
グリセリン                                                        ５．０
ジプロピレングリコール                                            ５．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ０．１
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ０．１
エリスリトール                                                    １．０
ポリエチレングリコール４０００                                    １．０
スクワラン                                                        ０．４
２−エチルヘキサン酸セチル                                        ０．１
Ｎ−ステアロイル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                      ０．２
塩化マグネシウム                                                  ０．１
塩化アルギニン                                                    ０．１
ヒポタウリン                                                      ０．１
エデト酸三ナトリウム                                              ０．１
パラベン                                                          適量
精製水                                                            残余
香料                                                              適量
【００７５】
製剤例１６  化粧水
（処方）                                                          質量％
エタノール                                                      ４０．０
ジプロピレングリコール                                            １．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ０．１
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ０．１
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシルテトラデシルエーテル  ０．１
無水ケイ酸                                                        １．０
サリチル酸                                                        ０．１
クエン酸ナトリウム                                                ０．２
パラフェノールスルホン酸亜鉛                                      ０．２
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．１
塩酸ピリドキシン                                                  ０．１
Ｌ−セリン                                                        ０．１
Ｌ−メントール                                                    ０．０５
ＨＥＤＴＡ３ナトリウム                                            ０．０５
セルロース粉末                                                    １．０
ベントナイト                                                      ０．８
精製水                                                            残余
【００７６】
製剤例１７  化粧水
（処方）                                                          質量％
エタノール                                                      ４０．０
ジプロピレングリコール                                            １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ０．１
ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシルテトラデシルエーテル  ０．１
無水ケイ酸                                                        １．０
サリチル酸                                                        ０．１
クエン酸ナトリウム                                                ０．２
パラフェノールスルホン酸亜鉛                                      ０．２
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．１
塩酸ピリドキシン                                                  ０．１
Ｌ−セリン                                                        ０．１
Ｌ−メントール                                                    ０．０５
ＨＥＤＴＡ３ナトリウム                                            ０．０５
セルロース粉末                                                    １．０
ベントナイト                                                      ０．８
精製水                                                            残余
【００７７】
製剤例１８  ジェル
（処方）                                                          質量％
ジメチルポリシロキサン                                            ５．０
グリセリン                                                        ２．０
１，３−ブチレングリコール                                        ５．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ０．１
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ０．１
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ０．１
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            ０．１
ポリエチレングリコール１５００                                    ３．０
ポリエチレングリコール２００００                                  ３．０
オクタン酸セチル                                                  ３．０
クエン酸                                                          ０．０１
クエン酸ナトリウム                                                ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．１
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．１
Ｌ−アスコルビン酸２−グルコシド                                  ２．０
Ｌ−アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム                      ０．１
酢酸トコフェロール                                                ０．１
オウゴンエキス                                                    ０．１
タイムエキス                                                      ０．１
ユキノシタエキス                                                  ０．１
エデト酸三ナトリウム                                              ０．１
キサンタンガム                                                    ０．３
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−２）    ０．０５
寒天末                                                            １．５
フェノキシエタノール                                              適量
ジブチルヒドロキシトルエン                                        適量
精製水                                                            残余
【００７８】
製剤例１９  パック
（処方）                                                          質量％
エタノール                                                      １０．０
１，３−ブチレングリコール                                        ６．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
ポリエチレングリコール４０００                                    ２．０
オリーブ油                                                        １．０
マカデミアナッツ油                                                １．０
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル                              ０．０５
乳酸                                                              ０．０５
乳酸ナトリウム                                                    ０．１
Ｌ−アスコルビン酸硫酸エステル２ナトリウム                        ０．１
α−トコフェロール２−Ｌ−アスコルビン酸リン酸ジエステルカリウム  ０．１
ビタミンＥアセテート                                              ０．１
魚コラーゲン                                                      ０．１
コンドロイチン硫酸ナトリウム                                      ０．１
カルボキシメチルセルロースナトリウム                              ０．２
ポリビニルアルコール                                            １２．０
パラオキシ安息香酸エステル                                        適量
精製水                                                            残余
香料                                                              適量
【００７９】
製剤例２０  パック
（処方）                                                          質量％
エタノール                                                        ３．０
グリセリン                                                        ５．０
１，３−ブチレングリコール                                        ６．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
ポリエチレングリコール１５００                                    ５．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                                ２．０
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                                １．０
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン                        ０．１
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．１
ビワ葉エキス                                                      ０．１
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                                        ０．１
ウイキョウエキス                                                  ０．１
ハマメリスエキス                                                  ０．１
オウバクエキス                                                    ０．１
ジオウエキス                                                      ０．１
ユーカリ油                                                        ０．０５
ジモルホリノピリダジノン                                          ０．１
キサンタンガム                                                    ０．０５
カルボキシビニルポリマー                                          ０．５
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−１）    ０．０５
水酸化カリウム                                                    ０．０５
フェノキシエタノール                                                適量
精製水                                                              残余
【００８０】
製剤例２１  パック
（処方）                                                          質量％
エタノール                                                        ３．０
グリセリン                                                        ５．０
１，３−ブチレングリコール                                        ６．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
ポリエチレングリコール１５００                                    ５．０
ポリオキシエチレンメチルグルコシド                                ２．０
トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                                １．０
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン                        ０．１
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．１
ビワ葉エキス                                                      ０．１
Ｌ−グルタミン酸ナトリウム                                        ０．１
ウイキョウエキス                                                  ０．１
ハマメリスエキス                                                  ０．１
オウバクエキス                                                    ０．１
ジオウエキス                                                      ０．１
ユーカリ油                                                        ０．０５
ジモルホリノピリダジノン                                          ０．１
キサンタンガム                                                    ０．０５
カルボキシビニルポリマー                                          ０．５
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−１）    ０．０５
水酸化カリウム                                                    ０．０５
フェノキシエタノール                                                適量
精製水                                                              残余
【００８１】
製剤例２２  クリーム
（処方）                                                          質量％
流動パラフィン                                                    ３．０
ワセリン                                                          １．０
ジメチルポリシロキサン                                            １．０
ステアリルアルコール                                              １．８
ベヘニルアルコール                                                １．６
グリセリン                                                        ８．０
ジプロピレングリコール                                            ５．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ５．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ５．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ５．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            ５．０
マカデミアナッツ油                                                ２．０
硬化油                                                            ３．０
スクワラン                                                        ６．０
ステアリン酸                                                      ２．０
ヒドロキシステアリン酸コレステリル                                ０．５
２−エチルヘキサン酸セチル                                        ４．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                    ０．５
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                              ３．０
水酸化カリウム                                                    ０．１５
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
トリメチルグリシン                                                ２．０
α−トコフェロール２−Ｌ−アスコルビン酸リン酸ジエステルカリウム  １．０
酢酸トコフェロール                                                ０．１
甜茶エキス                                                        ０．１
パラベン                                                          適量
エデト酸３ナトリウム                                              ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン                  ０．０５
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル          ０．０５
色剤                                                              適量
カルボキシビニルポリマー                                          ０．０５
精製水                                                            残余
【００８２】
製剤例２３  クリーム
（処方）                                                          質量％
流動パラフィン                                                    ８．０
ワセリン                                                          ３．０
ジメチルポリシロキサン                                            ２．０
ステアリルアルコール                                              ３．０
ベヘニルアルコール                                                ２．０
グリセリン                                                        ５．０
ジプロピレングリコール                                            ４．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ３．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ３．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ３．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            ３．０
トレハロース                                                      １．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      ４．０
モノイソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル                  ２．０
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                      １．０
親油型モノステアリン酸グリセリン                                  ２．０
クエン酸                                                          ０．０５
クエン酸ナトリウム                                                ０．０５
水酸化カリウム                                                    ０．０１５
油溶性甘草エキス                                                  ０．１
レチノールパルミテート（１００万単位＿）                          ０．２５
酢酸トコフェロール                                                ０．１
パラオキシ安息香酸エステル                                        適量
フェノキシエタノール                                              適量
ジブチルヒドロキシトルエン                                        適量
エデト酸三ナトリウム                                              ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン                  ０．０１
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                              ０．１
β−カロチン                                                      ０．０１
ポリビニルアルコール                                              ０．５
ヒドロキシエチルセルロース                                        ０．５
カルボキシビニルポリマー                                          ０．０５
精製水                                                            残余
香料                                                              適量
【００８３】
製剤例２４  クリーム
（処方）                                                          質量％
流動パラフィン                                                    ８．０
ワセリン                                                          ３．０
ジメチルポリシロキサン                                            ２．０
ステアリルアルコール                                              ３．０
ベヘニルアルコール                                                ２．０
グリセリン                                                        ５．０
ジプロピレングリコール                                            ４．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            ３．０
トレハロース                                                      １．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      ４．０
モノイソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル                  ２．０
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリセリン                      １．０
親油型モノステアリン酸グリセリン                                  ２．０
クエン酸                                                          ０．０５
クエン酸ナトリウム                                                ０．０５
水酸化カリウム                                                    ０．０１５
油溶性甘草エキス                                                  ０．１
レチノールパルミテート（１００万単位＿）                          ０．２５
酢酸トコフェロール                                                ０．１
パラオキシ安息香酸エステル                                        適量
フェノキシエタノール                                              適量
ジブチルヒドロキシトルエン                                        適量
エデト酸三ナトリウム                                              ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン                  ０．０１
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                              ０．１
β−カロチン                                                      ０．０１
ポリビニルアルコール                                              ０．５
ヒドロキシエチルセルロース                                        ０．５
カルボキシビニルポリマー                                          ０．０５
精製水                                                            残余
香料                                                              適量
【００８４】
製剤例２５  クリーム
（処方）                                                          質量％
ワセリン                                                          ２．０
ジメチルポリシロキサン                                            ２．０
エタノール                                                        ５．０
ベヘニルアルコール                                                ０．５
バチルアルコール                                                  ０．２
グリセリン                                                        ７．０
１，３−ブチレングリコール                                        ５．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
ポリエチレングリコール２００００                                  ０．５
ホホバ油                                                          ３．０
スクワラン                                                        ２．０
ヒドロキシステアリン酸フィトステリル                              ０．５
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                                    １．０
水酸化カリウム                                                    ０．１
ピロ亜硫酸ナトリウム                                              ０．０１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
グリチルレチン酸ステアリル                                        ０．１
パントテニルエチルエーテル                                        ０．１
アルブチン                                                        ７．０
トラネキサム酸                                                    １．０
酢酸トコフェロール                                                ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム                                            ０．０５
パラオキシ安息香酸エステル                                        適量
エデト酸三ナトリウム                                              ０．０５
４−ｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン                  ０．１
ジパラメトキシ桂皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル          ０．１
黄酸化鉄                                                          適量
キサンタンガム                                                    ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．２
精製水                                                            残余
【００８５】
製剤例２６  クリーム
（処方）                                                          質量％
流動パラフィン                                                  １０．０
ジメチルポリシロキサン                                            ２．０
グリセリン                                                      １０．０
１，３−ブチレングリコール                                        ２．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  １．０
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            １．０
エリスリトール                                                    １．０
ポリエチレングリコール１５００                                    ５．０
スクワラン                                                      １５．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      ５．０
水酸化カリウム                                                    ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
酢酸トコフェロール                                                ０．０５
パラオキシ安息香酸エステル                                        適量
ヒドロキシプロピルメチルセルロース                                ０．３
ポリビニルアルコール                                              ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．２
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−２）    ０．１
精製水                                                            残余
【００８６】
製剤例２７  クリーム
（処方）                                                          質量％
流動パラフィン                                                  １０．０
ジメチルポリシロキサン                                            ２．０
グリセリン                                                      １０．０
１，３−ブチレングリコール                                        ２．０
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    １．０
エリスリトール                                                    １．０
ポリエチレングリコール１５００                                    ５．０
スクワラン                                                      １５．０
テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリット                      ５．０
水酸化カリウム                                                    ０．１
ヘキサメタリン酸ナトリウム                                        ０．０５
酢酸トコフェロール                                                ０．０５
パラオキシ安息香酸エステル                                        適量
ヒドロキシプロピルメチルセルロース                                ０．３
ポリビニルアルコール                                              ０．１
カルボキシビニルポリマー                                          ０．２
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体（ペミュレンＴＲ−２）    ０．１
精製水                                                            残余
【００８７】
製剤例２８  二層タイプクリーム
（処方）                                                          質量％
ジメチルポリシロキサン                                            ５．０
デカメチルシクロペンタシロキサン                                ２５．０
トリメチルシロキシケイ酸                                          ５．０
ポリオキシエチレン・メチルポリシロキサン共重合体                  ２．０
ジプロピレングリコール                                            ５．０
４−メトキシベンゾヒドロキサム酸                                  ０．０１
２−ヒドロキシ−３−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ０．０１
２−ヒドロキシ−５−メチルベンゾヒドロキサム酸                    ０．０１
４−シクロヘキシルベンゾヒドロキサム酸                            ０．０１
パルミチン酸デキストリン被覆微粒子酸化亜鉛（６０ｎｍ）          １５．０
グリチルリチン酸ジカリウム                                        ０．０２
グルタチオン                                                      １．０
チオタウリン                                                      ０．０５
クララエキス                                                      １．０
パラベン                                                          適量
フェノキシエタノール                                              適量
エデト酸三ナトリウム                                              適量
パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル                              ７．５
ジメチルジステアリルアンモニウムヘクトライト                      ０．５
球状ポリアクリル酸アルキル粉末                                    ５．０
ブチルエチルプロパンジオール                                      ０．５
精製水                                                            残余
香料                                                              適量
【００８８】
上記の製剤例の皮膚外用剤はいずれも、高いしわ防止または改善効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】図１は、表皮におけるADAMの活性阻害によりしわを防止または改善する機構について説明した概略図
【図２】図２は、視感判定での4-メトキシベンゾヒドロキサム酸のしわ改善効果を示すグラフ
【図３】図３は、しわ面積（％）での4-メトキシベンゾヒドロキサム酸のしわ改善効果を示すグラフ
【図４】図４は、4-メトキシベンゾヒドロキサム酸のTEWL上昇抑制効果を示すグラフ。
【図１】
2007119444.tif 000007
【図２】
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【図３】
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【図４】
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