(57)【要約】      （修正有）【課題】  トキソプラズマ遺伝子を特異的かつ高感度で検出することができるプライマーセットを提供すること。【解決手段】  特定な配列で表されるプライマーを含む、トキソプラズマを検出するためのキット、ならびに該キットを用いてＰＣＲ反応を行うことにより、試料におけるトキソプラズマを特異的に検出する方法が開示される。また、さらに特定な配列で表すプライマーを用いてネステッドＰＣＲを行うことにより、より高い感度でトキソプラズマを検出することができる。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
それぞれ配列番号１および配列番号２で表される塩基配列からなる２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット、それぞれ配列番号３および配列番号４で表される塩基配列からなる２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット、それぞれ配列番号５および配列番号６で表される塩基配列からなる２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット、それぞれ配列番号７および配列番号８で表される塩基配列からなる２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマーセットからなる群より選択される１またはそれ以上のプライマーセットを含む、トキソプラズマを検出するためのキット。
【請求項２】
さらに配列番号９−１２のいずれかで表される塩基配列からなるオリゴヌクレオチドの１またはそれ以上を含む、請求項１記載のキット。
【請求項３】
試料におけるトキソプラズマの存在または発現を検出する方法であって、前記試料から得られたＤＮＡまたは前記試料から得られたｍＲＮＡから逆転写により調製したｃＤＮＡをテンプレートとして、請求項１または２に記載のキットを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行い、そして、増幅されたトキソプラズマ遺伝子を検出することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トキソプラズマ遺伝子を検出するための特異的プライマーセット、およびこれを用いるトキソプラズマ遺伝子の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
トキソプラズマ (Toxoplasma gondii)は、胞子虫綱、真コクシジウム目、サルコシスティス科に属する原虫であり、ネコ科の動物を終宿主とする。中間宿主域はきわめて広く、ヒトを含むほ乳類から鳥類などの温血動物に感染する。感染経路は、主に３つ考えられている。トキソプラズマに初感染したネコの糞に排出されるトキソプラズマのオーシスト(接合子嚢)を摂取した場合、感染した動物の肉を生や加熱調理が不十分な状態で食べ、シスト(嚢子)を摂取した場合と、タキゾイト(栄養体)が母体から胎児へ入る場合で、これは女性が妊娠中に初感染したときに起こりえる。
【０００３】
トキソプラズマに感染すると、人畜共通感染症であるトキソプラズマ症となることがある。しかし、トキソプラズマ感染は健常人で症状が出ることはほとんどなく、症状があったとしてもリンパ節が腫れ、インフルエンザ様の症状が一時的に見られるが、回復に向かう。問題となるのは、後天性免疫不全症候群(エイズ)に罹っている場合や臓器移植などにより、免疫抑制状態にある場合、また、妊娠中の女性が初感染した場合である。
【０００４】
妊娠中の女性が初感染した場合には、胎児が先天性トキソプラズマ症にかかることがある。トキソプラズマは、血液、胎盤を通して胎児に移行し、重症の場合は流産または死産の可能性がある。胎内感染が起きた時期により、胎児感染率および、症状の度合いが異なる。
【０００５】
【表１】
2007282601.tif 000002
【０００６】
妊娠初期では胎児移行率は下がるが重症であり、妊娠後期では胎児移行率は上がるが軽症である。水頭症、脳の石灰化、網脈絡膜炎、精神運動障害などが見られる。また、出生時に何の症状も示さなかった場合でも、成長するに従って、網脈絡膜炎(眼トキソプラズマ症)が見られる場合がある。
【０００７】
母体感染から胎内感染の成立までには数ヶ月を有するとされているため、母親の感染を早期に診断し、治療を開始することができれば、先天性トキソプラズマ症の発症を低下させることができる。またもし発症したとしても重症化を防ぐことが可能である。したがって、トキソプラズマ症の治療には、早期診断、早期治療が重要である。
【０００８】
トキソプラズマ検査法には、（１）トキソプラズマ感染が疑われる血液／細胞をハツカネズミの腹腔内に接種して直接検出する方法、（２）セービン・フェルドマン反応を用いた色素試験、および（３）血清を用いた診断がある。（１）および（２）については、生きたトキソプラズマを検査に使うため、危険であり現在は使用されていない（矢野昭彦ほか：トキソプラズマ症における免疫反応 Medical  Immunology  1991 April; vol.21 no.3・4）。妊娠している女性に対する検査は主に、（３）の血清を用いた検査がスクリーニング的に行われている。一般的に赤血球凝集反応法(HA法)を用いた抗体検査が行われ、トキソプラズマ抗体価が高値を示した場合に投薬などの治療が行われる。ただし、健常人でもIgG抗体価が高い場合や、IgM抗体価が感染後の数ヶ月から数年持続する場合があり、感染時期を特定できない事がある。感染時期を特定するためには、IgG抗体アビディティ試験法がある。この方法は、感染初期には、アビディティ(結合力)の弱いIgG抗体を産生し、時間経過とともにアビディティの高いIgG抗体を産生するという原理に基づくものであり、初感染からの時期を推定することができる（小島俊行、堤  治、武谷雄二.トキソプラズマ感染におけるIgG抗体アビディティの有用性 産婦人科の世界、54(2)：23-31, 2002）。
【０００９】
従来のトキソプラズマ遺伝子検査では、PCR法により脳や胎盤などの組織から大量のトキソプラズマを検出することは可能であるが、羊水や母体血中の僅かなトキソプラズマを検出することは難しい（小島俊行、堤  治、武谷雄二.トキソプラズマ感染におけるIgG抗体アビディティの有用性 産婦人科の世界、54(2)：23-31, 2002）。
【００１０】
したがって、検査の現場においては、感度の高いトキソプラズマの検出方法が求められている。
【００１１】
本発明に関連する先行技術文献情報としては以下のものがある。
【非特許文献１】矢野昭彦ほか：トキソプラズマ症における免疫反応 Medical  Immunology  1991 April; vol.21 no.3・4
【非特許文献２】小島俊行、堤  治、武谷雄二.トキソプラズマ感染におけるIgG抗体アビディティの有用性  産婦人科の世界、54(2)：23-31, 2002
【非特許文献３】関  克義、関谷宗英. 妊婦とトキソプラズマ感染症  日産婦関東連会報  37 : 447-456, 2000
【非特許文献４】矢野明彦、清水久美子、関谷宗英：トキソプラズマの母子感染  産婦人科の実際  1998:47:321-330
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、トキソプラズマ遺伝子を特異的かつ高感度で検出することができるプライマーセットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、それぞれ配列番号１および配列番号２で表される塩基配列からなる２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット、それぞれ配列番号３および配列番号４で表される塩基配列からなる２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット、それぞれ配列番号５および配列番号６で表される塩基配列からなる２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット、それぞれ配列番号７および配列番号８で表される塩基配列からなる２つのオリゴヌクレオチドを含むプライマーセットからなる群より選択される１またはそれ以上のプライマーセットを含む、トキソプラズマを検出するためのキットを提供する。これらのプライマーの配列は以下の表２に示される。
【００１４】
【表２】
2007282601.tif 000003
【００１５】
なお、ここでいう「からなる」とは、本願発明のプライマーが、本願発明の作用効果を奏する程度に、配列番号により特定される配列を有していれば足りることを意味し、付加的な配列が一切含まれないことまでを意味するものではない。当業者であれば、プライマーとして所望の作用効果を奏するためには、配列の５’側および３’側にそれぞれどの程度の配列の付加が許容されるかを当然に理解することができる。
【００１６】
好ましくは、本発明のキットはさらにネステッドＰＣＲ用のプライマーを含み、このプライマーは、配列番号９−１２のいずれかで表される塩基配列を有する。
【００１７】
別の観点においては、本発明は、試料におけるトキソプラズマの存在を検出する方法を提供する。該方法は、前記試料から得られたＤＮＡをテンプレートとして、上述の本発明のキットを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行い、そして、増幅されたトキソプラズマ遺伝子を検出することを含む。試料におけるトキソプラズマの発現を検出するためには、前記試料からｍＲＮＡを調製し、ｃＤＮＡを合成した後、上述と同様にしてトキソプラズマ遺伝子を増幅し、これを検出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明のトキソプラズマ検出用キットは、上記の表１に示されるプライマーセットの１つまたはそれ以上を含む。本発明のキットを用いるトキソプラズマ遺伝子検査法においては、これらのプライマーセットを用いてトキソプラズマのゲノムDNAの特定領域をPCR増幅することにより、直接的にトキソプラズマのゲノムDNAの存在を検出する。本発明のキットを用いることにより、トキソプラズマを簡便・迅速、かつ高い感度で検出することが可能である。
【００１９】
本発明の好ましい態様においては、上述の本発明のプライマーセットの２以上を混合物として用いてマルチプレックスＰＣＲを行う。マルチプレックスＰＣＲ法は、２以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを用いてＰＣＲを行う方法である。プライマーミックスを用いて異なるターゲット遺伝子領域を増幅することにより、より正確な検出が可能となる。本発明にしたがう各プライマーセットは、試料中にトキソプラズマが存在すると、異なるサイズの複数の増幅産物が得られるように設計されている。例えば、下記の実施例においては、マルチプレックスPCR法を採用し、トキソプラズマの4つの遺伝子領域を1チューブにて増幅した。増幅産物は、電気泳動でサイズを分画することにより容易に検出が可能である。さらに、本発明の方法は、ハイブリダイゼーション等の操作を必要としないため、コストを安く抑えることができ、検査時間も短い。また、検査の現場においても特別な訓練を必要とせず実施が可能である。
【００２０】
本発明の別の好ましい態様においては、微量のトキソプラズマDNAを検出するために、ネステッド-PCR法を使用する。ネステッド-PCR法とは、一回目のPCR(1st PCR)産物をテンプレートとして、もう一度PCR(2nd PCR)を行うが、その際に片側（セミネステッド PCR法とも称される）または両側のネステッドプライマーを1回目のPCR産物の内部で設計する方法である。片側のネステッドプラマーを用いる場合には、例えば、表２のプライマーTg001（配列番号１）とTg002（配列番号２）とのプライマーセットを用いて1st PCRを行い、このPCR産物をテンプレートとして、Tg001の５塩基内側で設計されたプライマーTg009（配列番号９）とTg002とのプライマーセットを用いて2nd PCRを行う。両側のネステッドプライマーを用いる場合には、Tg002より内側で設計されたネステッドプライマーとTg009とのプライマーセットを用いて2nd PCRを行う。ネステッド-PCR法を用いることにより、標的とするDNAの増幅効率と特異性を高めることができる。
【００２１】
本発明のプライマーセットの各オリゴヌクレオチドは、例えば汎用のＤＮＡ合成装置（例えば、Applied Biosystems社製  Model 394）を用いて化学的に合成することができる。また、オリゴヌクレオチドは、当該技術分野においてよく知られる他の方法を用いて合成してもよい。
【００２２】
本発明のプライマーセットを用いて試料におけるトキソプラズマ遺伝子の存在を検出するためには、試料からＤＮＡを抽出し、これをテンプレートとして本発明のプライマーセットを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行い、トキソプラズマ遺伝子を増幅させる。試料としては、土壌、砂場の砂、動物の糞便、水、細胞、組織など、あらゆるサンプルから抽出したDNAをテンプレートに用いることが可能である。生体サンプルの例としては、例えば、妊婦血液または羊水、臍帯血、胎児血、胎児髄液が挙げられる。また、その他の組織、細胞を生サンプル、固定サンプル、パラフィン切片等も本発明において使用可能である。
【００２３】
試料からＤＮＡを抽出する方法は当該技術分野においてよく知られており、例えば、フェノール・クロロホルムによる抽出や、市販のＤＮＡ抽出試薬を用いる抽出により行うことができる。あるいは、市販のカラムキット（QIAGEN社QIAamp(登録商標) DNA Blood Midi Kit、QIAGEN社DNeasy(登録商標) Tissue Kitなど）を用いて抽出を行ってもよい。
【００２４】
さらに、本発明のプライマーセットは、試料におけるトキソプラズマ遺伝子の発現を検出するためにも用いることができる。トキソプラズマ遺伝子の発現を検出するためには、試料からＲＮＡを抽出して鋳型ｃＤＮＡを調製し、これをテンプレートとして本発明のプライマーセットを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行い、試料中で発現されているトキソプラズマ遺伝子を増幅させる。
【００２５】
試料からＲＮＡを抽出する方法は当該技術分野においてよく知られており、例えば、グアニジン−イソチオシアネートおよびフェノール・クロロホルム抽出を用いることができる。あるいは市販のＲＮＡ抽出試薬を用いてもよい。
【００２６】
ＲＮＡを鋳型としてｃＤＮＡを合成する方法も当該技術分野においてよく知られている。プライマーとしては市販のランダムプライマーを用い、ｄＮＴＰｓの存在下で、逆転写酵素を用いてｃＤＮＡを合成することができる。逆転写酵素としては、例えば、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いることができる。
【００２７】
次に、このようにして調製したＤＮＡまたはｃＤＮＡをテンプレートとして、本発明のプライマーを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行う。ポリメラーゼとしては例えばＥｘ  Ｔａｑ（登録商標）（Ｔａｋａｒａ）、Ｚ−Ｔａｑ、ＡｃｃｕＰｒｉｍｅ  Ｔａｑ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、Ｍ−ＰＣＲキット（ＱＩＡＧＥＮ）に含まれるポリメラーゼ等を用いることができる。プライマーのＴｍに基づいて適当なＰＣＲ反応条件を選択する方法は当該技術分野においてよく知られており、当業者は、プライマーの長さやＧＣ含量、目的とする特異性や感度、用いるポリメラーゼの特性等に基づいて、最適な条件を選択することができる。
【００２８】
ネステッド PCRを行う場合には、プライマーの非特異的結合を防ぐために、Tm値を極めて高く設定し、PCRのアニーリングの温度も通常よりかなり高く設定することが望ましい。Tm値を上げるためには、プライマーの長さを30塩基程度にするか、GC%を高めに設定して、極めて特異性の高いプライマーセットを設計し、70℃程度の温度でアニーリングを行う。この温度ではDNAポリメラーゼの伸長温度に近いために、アニーリング中にもポリメラーゼの伸張が進行し、伸張時間を長めに設定するのと同様の効果が期待できる。
【００２９】
次に、増幅産物を電気泳動で分離し、バンドの長さを判定することにより、試料中におけるトキソプラズマ遺伝子の存在または非存在を検出することができる。
【００３０】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【００３１】
以下の実施例においては、PCR反応を用いてトキソプラズマのゲノムDNAの特定領域を増幅することにより、試料中のトキソプラズマのゲノムDNAの存在を検出した。ここでは、マルチプレックス PCR法を採用し、トキソプラズマの4つの遺伝子領域を1チューブにて増幅した。
【００３２】
プライマーの設計
以下の配列情報に基づいてプライマーを設計した。
Toxoplasma gondii B1 遺伝子
(GenBank受託番号AF179871)
Toxoplasma gondii cdk 遺伝子（サイクリン依存性キナーゼ）
(GenBank受託番号AJ534295)
Toxoplasma gondii RH株 SAG5E
(GenBank受託番号AY363043)
Toxoplasma gondii RH 株  ブラディゾイト表面抗原BSR4
(GenBank受託番号AF394603)
【００３３】
PCR増幅産物のシーケンス結果
PCR増幅産物をシーケンスし、以下の配列が得られることを確認した。
Toxoplasma gondii B1 遺伝子
AGACGTGTCATCAGGACAAGGTTGGTCGCTTAATTTTCTGTATATAGCATTTTTAGAATGCACCTTTCGGACCTCAACAACCGTGCAAAAGGATCGCCACCTGGTGTCTCTTCAAGCGTCAAAACGAACTATCTGTATATCTCTCAAGGAGGACTGGCAACCTGGTGTCGACAACAGAACAGCTGCAGTCCGGAAATAGAAAGCCATGAGGCACTCCAACGGGCGAGTAGCACCTGAGGAGATACAAACTGCTAAACGGTCCGGGTGAAACAATAGAGAGTACTGGAACGTCGCCGCTACTGCCCAGTTGTCATGCCATCGACGTAGACCCAGAAATGAGGCGAGAAATTAATATTGTTAGTAAAGCATTCAAAAAGTTCCGGTCGAGAGGCTAAACCACAAAAGTGCAAACCATGCGCAGCCAT（配列番号１３）
Toxoplasma gondii cdk 遺伝子（サイクリン依存性キナーゼ）
TCCGAGGCTTGTCCCCATCAAACGCGAGGGGAAGCAGCGCTATCGGCAGTGCGACGCGTTCTTGGGAGAGGGGACTTACGGGCGTGTGGAGAAGGCAGAAGATTTGCGAACTCATCAGATTGTCGCAATCAAGAAGGTGAAGGCGAGTGCGGGGAGTCTCTTCGCCTCCGGAGACAGCGGGAGTGTGGGGTCTGGAGAGAAGACGCGAGCTCAGCTGCTGCGGCAGAATGTGGGGAGCGTCGGACTGCACTTTACCACGGTTCGAGAGCTGAAAGTGATGCGA（配列番号１４）
Toxoplasma gondii RH株 SAG5E
TCACTGTTGTGCCTTCCGACACAAGTAAGATTTGCATTGGAGAAGGTCATGACGAAACACTGACGGCGTGTAACAGAAACAAAGTATCCACAATCAAGGAATTTCTGGGCGTGGCGCACGGCACCAACGCACCACAGTGGACGTCCGACCACGCTCTAACAATTCCAACAGAGCAATTCTCCATAATTGACAAAACCTTATTCGCAGGATGCTTAAGAAAAAGTGGGACCAACCAGGGCACGAAGGAGTGCTTGGTGCCTGCCAGTGTCAAAGCCAGGGCCTCGGCAGTGAAGAATGGTGTCCTCATTTGCGCCTACGGCACAGAGAGCAACAATACTGTTTCAGCGGTAACACTGGACGCCAAGAACAACTCTCTGACAATCATCTGTGACACTGAAGGACAGATGCACCCAGAAAAGGATTCCTTGACTGCTTGCCACTGCACCAATTCCAACACAGAAAACTGTAAGACCTTGAACCTGAGTTCATGCCGAGCTTCACCGAGAGGTGGTGGACGCCGGTTGACA（配列番号１５）
Toxoplasma gondii RH 株  ブラディゾイト表面抗原BSR4
TGGTCGTTGGAGCTGCATAACGAAGACCTTCCTTTAACTGACAAGGCGTTCGTCGTCGGTTGTCAAGCCACTTCCGCTGCCAGAGGTACAGAATCCGGCAAAACGGCTGCCTGCAAACTCACGGTGAATGTGGAAGCGAGGGCTTCTTCTCTTGCAGAAAATAACGTTGTGACCTGCGCATACGGCAA（配列番号１６）
【００３４】
トキソプラズマをはじめとして、臨床検査における遺伝子検査は、大量のヒトゲノムＤＮＡやその他のウイルス・微生物などのＤＮＡが存在する中から目的のウイルスのＤＮＡの存在を検出する必要があり、そのためには、配列の特異性が高く設計されている必要がある。また、プライマーをミックスして用いることから、プライマーダイマーを生じにくいように、プライマー間の特異性が高いプライマーを設計する必要がある。本発明ではまず、インシリコで特異的増幅のチェックを行って、候補プライマーを選出した。次に、これらの候補プライマーセットを用いて、トキソプラズマＤＮＡを含むサンプルを用いてＰＣＲを行い、予想されるサイズに特異的にバンドが見られることを確認した。非特異的増幅が見られた場合、そのプライマーセットは排除し、再びインシリコの検証を行い、プライマーを再設計した後、特異性を確認した。このインシリコとインビトロの検証サイクルを数十回繰り返し、最適化を行った。
【００３５】
さらに、微量の目的とするトキソプラズマDNAを検出するために、ネステッド-PCR用のプライマーも設計した。1回目の1st PCRのプライマーセットの片側のプライマーを、5bp内側に設計しなおし、Tm値を揃えた上で、2度目の2nd PCRのプライマーとした（セミネステッド PCR法）。実際にPCRを行い、検証を重ね、目的としたサイズにトキソプラズマ遺伝子ではない遺伝子が増えてきた場合などは、プライマーから設計しなおした。最終的に、上述の表２に示される最適なプライマーセットを得た。
【００３６】
マルチプレックス-ネステッド PCR
通常のPCRでは、テンプレートDNAとプライマーの結合が起きるアニーリングの温度が、50-60℃で設定されていることが多い。通常用いられる20塩基前後のプライマーでは、その程度のTmになることが多く、設計する場合にも特にTmを考慮する必要がない。しかし、ネステッド PCRを行うことから、プライマーの非特異的結合を防ぐために、プライマーの長さを３０塩基程度とするか、またはGC%を高めに設定してTm値を極めて高く設定し、PCRのアニーリングの温度も通常よりかなり高く設定してPCRを行った。
【００３７】
トキソプラズマ強毒株であるRH株をサンプルとして使用した。トキソプラズマDNAを2ng／チューブとなるように加え、QIAGEN Multiplex PCR Kit（QIAGEN）を使用して、以下の条件でPCRを行った。
PCR反応液組成
1st PCR (テンプレートDNA量は100ng使用)
ＰＣＲマスターミックス  12.5
プライマーミックス      4 
テンプレート            n 
DDW                  8.5-n      
計          25μｌ
2nd PCR (テンプレートは1st PCR産物を1μl使用)
ＰＣＲマスターミックス  12.5
プライマーミックス      4 
テンプレート            1 
DDW                  7.5      
計          25μｌ
【００３８】
PCR反応条件は、以下のとおりとした：95℃で15分、次に、94℃で30秒、70℃で1.5分および72℃で30秒を35サイクル、72℃で2分、その後4℃。アニーリング温度は70℃に設定した。この温度はポリメラーゼの伸張反応の72℃とほぼ同じである。この温度ではDNAポリメラーゼの伸長温度に近いために、アニーリング中にポリメラーゼの伸張も生じており、伸張時間を長めに設定するのと同様の効果が期待できる。
【００３９】
その結果、目的とするサイズのPCR増幅産物が確認された（図２）。PCR増幅産物は、クローニングとシーケンス解析を行い、目的のトキソプラズマの塩基配列であることを確認した（配列番号13、14、15、16）。
【００４０】
次に、プラスミドの希釈系列溶液を作製しＰＣＲのテンプレートとして用いて検出感度の測定を行った。1st PCRにて102コピー（100コピー/μlまで確認され、2nd PCRでは、検出できたターゲット遺伝子は減ったが、100コピー（１コピー）/μlまで確認できた。100コピー/μlで検出できなかったターゲット遺伝子は、増幅効率の違いなどにより検出できなかったと思われた。
【００４１】
さらに、ヒトゲノム100ng存在下でプラスミドDNAを用いてトキソプラズマの検出を行った。その結果、ヒトゲノムDNAの存在下でも同様の検出感度が得られた(図３)。すなわち、本発明のプライマーセットを用いることにより、2nd PCRにおいて、100コピー/μlまで検出できることが確認された。
【００４２】
次に、実際の臨床サンプルとして羊水を用いて、DNAの抽出を行い、上述と同様に解析した結果、バンドが確認された（図４）。これらの結果から、羊水サンプルによる遺伝子検査が可能であり、トキソプラズマが存在することが直接示された。従来のPCRによる方法よりも、その特異性および感度は非常に高く、臨床の現場において十分使用に耐え得る方法であることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
本発明は、トキソプラズマ感染の診断に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】図１は、本発明のプライマーセットにより増幅されるDNA断片の長さを示す。
【図２】図２は、プラスミドDNAを用いたトキソプラズマの検出を示す。
【図３】図３は、ヒトゲノム100ng存在下でのプラスミドDNAを用いたトキソプラズマの検出を示す。
【図４】図４は、臨床サンプルを用いたToxoplasma gondiiの検出の結果を示す。
【図１】
2007282601.tif 000004
【図２】
2007282601.tif 000005
【図３】
2007282601.tif 000006
【図４】
2007282601.tif 000007
【配列表】
2007282601000001.app