(57)【要約】      （修正有）【課題】しわを改善でき、また皮膚弾力性を向上する光老化改善及び予防剤の提供。【解決手段】一般式（１）2007314514.tif 000006〔式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して炭素数６〜１４のアシル基を示し、Ｘは水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す。〕で表されるアデノシン−３'，５'−環状リン酸誘導体又はその塩を含有する光老化改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
2007314514.tif 000003
〔式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して炭素数６〜１４のアシル基を示し、Ｘは水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す。〕
で表されるアデノシン−３'，５'−環状リン酸誘導体又はその塩を含有する光老化予防又は改善剤。
【請求項２】
一般式（１）
【化２】
2007314514.tif 000004
〔式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して炭素数６〜１４のアシル基を示し、Ｘは水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す。〕
で表されるアデノシン−３'，５'−環状リン酸誘導体又はその塩を含有するしわ予防又は改善剤。
【請求項３】
一般式（１）
【化３】
2007314514.tif 000005
〔式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して炭素数６〜１４のアシル基を示し、Ｘは水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す。〕
で表されるアデノシン−３'，５'−環状リン酸誘導体又はその塩を含有する皮膚弾力性改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光老化予防又は改善剤、しわ防又は改善剤及び皮膚弾力性改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
しわ、たるみ、くすみやしみ等は肌年齢の目安であるため、多くの女性はこれらを改善するためのスキンケアに高い関心を寄せている。これら肌の症状は、遺伝や加齢による皮膚の新陳代謝の低下やホルモンバランスの変化といった内的要因と、紫外線曝露、温度、湿度の影響といった外的要因とによるところが大きいとされる。さらに現代生活における偏った食生活や過剰なストレス、喫煙等も要因として挙げられる。このうち、紫外線曝露による肌へのダメージは光老化ともいわれ、この光老化の予防や改善はスキンケアにとって重要である。
【０００３】
アシル化したアデノシン−３'，５'−環状リン酸（アシル化ｃＡＭＰ）は、ｃＡＭＰとは異なり細胞膜を透過できることから細胞外投与によっても活性を発現できることが知られており、ホスホジエステラーゼのような各種酵素の活性制御に関与すること、また、細胞内の脱アシル化酵素によりｃＡＭＰに分解されて、内在型ｃＡＭＰと同様に各種動物細胞の増殖・賦活等に関与することが知られている。
【０００４】
斯かるｃＡＭＰのＮ6及びＯ2'をアシル化したｃＡＭＰ誘導体は、その脂溶性が向上することから外用剤として使用でき、Ｎ6，Ｏ2'−ジブチリルｃＡＭＰが心不全治療薬（アクトシン（商標登録））として市販され、またＮ6，Ｏ2'−ジヘキサデカノイルｃＡＭＰがニキビ、肌荒れ、小じわ、しみ、ソバカス等の発生予防に有効であることが知られている（特許文献１）。
一方、アシル化ｃＡＭＰ誘導体には、分解により不快臭を発生するという問題が指摘されていた（特許文献２）。これに対しては、斯かる欠点を改善し、且つ肌荒れ改善、美肌効果を有するＮ6−ジアルキルｃＡＭＰ誘導体も報告されているが（特許文献３）、さらに、不快臭が少なく、光老化を予防又は改善することができる物質が望まれている。
【特許文献１】特公昭４９−２５３３３号公報
【特許文献２】特開平９−２９５９１５号公報
【特許文献３】特開昭６４−２５７１２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、優れた光老化予防又は改善作用を有し、且つ不快臭のない化粧品、医薬品等を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、アシル化ｃＡＭＰ誘導体についてさらに検討した結果、下記一般式（１）で表されるＮ6，Ｏ2'−ジアシルｃＡＭＰ誘導体又はその塩が、上記のＮ6，Ｏ2'−ジブチリルｃＡＭＰ及びＮ6，Ｏ2'−ジヘキサデカノイルｃＡＭＰと比較して優れた光老化改善作用を有することを見出した。
【０００７】
【化１】
2007314514.tif 000002
【０００８】
〔式中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して炭素数６〜１４のアシル基を示し、Ｘは水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す。〕。
【０００９】
すなわち、本発明は、上記一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体又はその塩を含有する光老化予防又は改善剤を提供するものである。
また本発明は、上記一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体又はその塩を含有するしわ防又は改善剤を提供するものである。
また本発明は、上記一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体又はその塩を含有する皮膚弾力性改善剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の光老化予防又は改善剤、しわ予防又は改善剤、及び皮膚弾力性改善剤は、肌に塗布して使用する際の不快臭が少なく、光によるダメージによって増加又は形成されるしわ、皮膚の弾力性の低下等の光老化に対して優れた効果を発揮する化粧品、医薬品等として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
一般式（１）中、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して炭素数６〜１４のアシル基を示すが、好ましくは炭素数８〜１２のアルカノイル基である。斯かるアシル基又はアルカノイル基における炭素鎖は、直鎖又は分岐鎖のいずれでもよいが、好ましくは直鎖である。具体的にはｎ−ヘキサノイル、ｎ−オクタノイル、ｎ−デカノイル、ｎ−ドデカノイル、及びｎ−テトラドデカノイル等が挙げられる。このうち、Ｒ1及びＲ2が共にｎ−オクタノイルである場合が特に好ましい。
【００１２】
また、一般式（１）中、Ｘは水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示すが、ここで、炭素数１〜６のアルキル基としては、炭素数１〜６の直鎖又は分岐のアルキル基、具体的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル等が挙げられる。斯かるＸは、水素原子であるのが好ましい。
【００１３】
また、上記一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体の塩としては、薬学上許容し得る塩が挙げられる。例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩類、ベリリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属類、１〜３級アミン類、４級アンモニウム塩類やアルギニン、リジン等のアミノ酸類が挙げられる。
【００１４】
本発明の一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体は、公知の方法により製造することができる。例えば、ｃＡＭＰを、例えばカルボン酸クロリド類、カルボン酸無水物、混合酸無水物等のアシル化剤を用いてアシル化し、必要に応じて、液々分配、固液分配、シリカゲル、活性炭、イオン交換樹脂等の公知の方法により分離精製を行うことにより製造することができる。
【００１５】
本発明の一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体又はその塩は、後記実施例のとおり、マウスに紫外線照射し、生じたしわに対する改善作用や低下した皮膚弾力性の改善作用を示す。すなわち、当該ｃＡＭＰ誘導体又はその塩は、光によるダメージによって増加又は形成されるしわ、皮膚の弾力性の低下等の光老化に対して有効である。従って、当該誘導体又はその塩は、ヒト皮膚の光老化予防又は改善剤、しわ予防又は改善剤、皮膚弾力性改善剤（以下、これらを光老化予防又は改善剤等という。）として使用することができ、また、光老化予防又は改善剤等を製造するために使用することができる。当該光予防又は改善剤等は化粧品、医薬品及び医薬部外品等として利用することができる。
また、本発明の光老化予防又は改善剤等を含有する化粧品や医薬部外品は、そのパッケージに本発明のｃＡＭＰ誘導体又はその塩を含有し、光老化予防又は改善、しわの予防又は改善、皮膚の弾力やハリの減少を予防又は改善する旨の表示をすることができる。
【００１６】
本発明の光老化予防又は改善剤等を医薬品として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられるが、外用剤が好ましい。また、このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、本発明の一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体又はその塩を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００１７】
本発明の光老化予防又は改善剤等を医薬部外品や化粧料として用いる場合は、皮膚外用剤、洗浄剤、メイクアップ化粧料等とすることができ、使用方法に応じて、ローション、乳液、ゲル、クリーム、ジェル、ペースト、パップ、ブラスター、スティック、シート、軟膏、粉末、顆粒等の種々の剤型で提供することができる。このような種々の剤型の医薬部外品や化粧料は、本発明の一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体又はその塩を単独で、又は医薬部外品、皮膚化粧料及び洗浄料に配合される、植物油、動物油等の油性成分、薬剤（例えば、紫外線吸収剤、鎮痛炎症剤、殺菌消毒剤、収斂剤、皮膚軟化剤、ホルモン剤、ビタミン剤）、保湿剤、アルコール類、キレート剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、増粘剤、色素、香料等を適宜組み合わせることにより調製することができる。
【００１８】
光老化予防又は改善剤等中の一般式（１）で表されるｃＡＭＰ誘導体又はその塩の配合量は、０．００１〜２０質量％、特に０．０１〜５質量％が好ましい。また、当該ｃＡＭＰ誘導体又はその塩の投与量は、１日当たり０．００１〜２０ｍｇ、特に０．０１〜５ｍｇが好ましい。
【実施例】
【００１９】
製造例１  Ｎ6，Ｏ2'−ジオクタノイル−ｃＡＭＰ（DO-cAMP）の合成
cAMP（2.0ｇ、5.8mmol、和光純薬、HPLC純度99.3%）に、無水カプロン酸（6.2ｇ、4.0mol倍）とトリエチルアミン（1.2g、2.0mol倍）を加え、105〜115℃で、3時間攪拌し、反応を終了した。放冷後、酢酸エチル（150ml）を加え、1.2％リン酸水溶液（100ｍｌ）と飽和食塩水（50ｍｌ）で洗浄した後、減圧濃縮し、黄色油状物（8.14ｇ）を得た。これを、シリカゲルクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノール混合溶媒で溶出した。溶媒を留去し、残留物をエタノール：ジエチルエーテルで結晶化し、Ｎ6，Ｏ2'−ジオクタノイル-ｃAMP（3.0ｇ、収率90%）を得た。
【００２０】
IR（ATR）：2944, 2926, 2855, 1749, 1686, 1248cm-1
NMR(Py-d5/D2O):δ：0.82(t, 3H, J=7Hz), 0.824(t, 3H, J=7Hz), 1.08-1.51(m, 16H), 1.64(qn, 2H, J=8Hz), 1.85(qn, 2H, J=8Hz), 2.54(t, 2H, J=8Hz), 2.95(t, 3H, J=8Hz),4.42-4.66(m, 2H), 4.82-4.93(m,1H), 5.78-5.87(m, 1H),6.02(m, 1H), 6.61(m, 1H), 8.92(s, 1H), 8.95(s, 1H)
【００２１】
実施例１
（１）しわ形成ヘアレスマウスの作成
HR/HRとHaM/ICRとの交配により作製した６週齢のICR/HR系雌性マウスを用いた。餌及び水は自由摂取させ、温度23℃、湿度55％及び紫外線の影響のない環境下にてヘアレスマウスの飼育を行った。
飼育したヘアレスマウスにUVB照射を行った。UVB照射は、Tsukahara et al（Br J Dermatol, 2004, 151, p984-994）等記載の公知の通常の方法に準拠した。具体的には、飼育したヘアレスマウスケージを入れ、東芝SEランプを用い、照射を行った。照射量は通常の６週齢のヘアレスマウスに対する１MED（約５０mJ/cm2）以下にて、週５回１２週間照射を行った。
下記UVB照射条件にてしわを作製したヘアレスマウスを、専門パネラーによりしわスコアの平均値が各群ほほ均一になるように各群１０匹づつ５群に分けた。
（２）光老化改善作用の評価
（ｉ）しわ形成ヘアレスマウスに塗布する各試料を、0.5％cAMP/50％EtOH溶液（シグマアルドリッチ社）、１％Ｎ6，Ｏ2'−ジブチリル（以下DB）-ｃAMP/50％EtOH溶液（和光純薬社製）、１％Ｎ6，Ｏ2'−ジオクタノイル（以下DO）-ｃAMP/90％EtOH溶液として調製した。
50％及び90％EtOH（コントロール）並びに調製した各試料（0.5％cAMP、１％DB-cAMP、１％DO-cAMP）を、週５回、６週間、１回に100μL/dayで、各群のヘアレスマウスに塗布を行った。各試料を塗布した各ヘアレスマウス群は、50％EtOHコントロール群、90％EtOHコントロール群、0.5％cAMP群、１％DB-cAMP群、１％DO-cAMP群とした。
【００２２】
（ii）しわ改善評価（しわ目視評価）
Bisselt et al.（Photochem. Photobiol.,1989, 50, p763-769）記載の方法を参考にし、Tsukahara et al.（Br. J. Dermatol., 2004, 151, p984-994）等記載の公知の方法にて、しわを０〜４まで分類した５段階評価を行った。
溶媒コントロール群を１００としたときの各群のしわスコアを評価した。
【００２３】
（iii）皮膚弾力性測定
皮膚弾力性測定は、Tsukahara K et al.（Br. J. Dermatol., 2004, 151, p984-994）等記載の公知の方法にて、キュートメータSEM575(C+K社)を用い、100mbで１秒間吸引後解除し、その後１秒間の計２秒間の変位を測定した。測定は、１匹に対して５回ずつ行い、生物学的弾性を表すパラメーターであるUr/Ufについて求めた。
【００２４】
（iv）結果
（ａ）しわ目視評価結果：
溶媒コントロール群を１００として、中級脂肪酸である１％DO-cAMP群に最もしわ改善が認められ、次いで低級脂肪酸である１％DB-cAMP群、置換基を有さない0.5％cAMP群の順に有意な差が認められた（図１）。
【００２５】
（ｂ）皮膚弾力性測定結果：
溶媒コントロール群を基準として、中級脂肪酸である１％DO-cAMP群に最も皮膚弾力改善効果が認められ、次いで低級脂肪酸である１％DB-cAMP群、アシル基を有さない0.5％cAMP群の順に有意な差が認められた（図２）。
【００２６】
（ｃ）総合評価：
Ｎ6及びＯ2'の位置に中級脂肪酸のジアシル基を有するＮ6，Ｏ2'−ジオクタノイル−ｃＡＭＰ誘導体は、しわ改善及び皮膚弾力性向上が認められた。
また、１％DB-cAMP及び１％DO-cAMPを使用する際に、低級脂肪酸であるＮ6，Ｏ2'−ジブチリル−ｃＡＭＰ誘導体ではアシル基が遊離した際の不快臭が認められたが、中級脂肪酸であるＮ6，Ｏ2'−ジオクタノイル−ｃＡＭＰ誘導体では不快臭があまり認められなかった。
【００２７】
実施例２
比較物質として、Ｎ6，Ｏ2'−ジパルミトイル−ｃＡＭＰを製造し、実施例１（１）で作成したしわ形成ヘアレスマウスを用いて、実施例１と同様の評価を行った。
（１）Ｎ6，Ｏ2'−ジパルミトイル−ｃＡＭＰ（DP-ｃAMP）の合成
ｃAMP（2.0ｇ、5.8mol、和光純薬、HPLC純度99.3％）と無水パルミチン酸（12.4ｇ、4.0mol倍）とトリエチルアミン（1.2g、2.0mol倍）から、製造例１と同様な方法によりＮ6,Ｏ2'-ジパルミトイル-ｃAMP（3.8ｇ、収率85%）を得た。
【００２８】
IR(ATR):2921, 2852, 1751, 1706, 1250cm-1
NMR(Py-d5/D2O):δ：0.89(t, 6H, J=7Hz), 1.16-1.35(m, 44H), 1.31-1.50(m, 2H), 1.49-1.66(m, 2H), 1.91-1.96(m, 2H), 2.40(m, 2H), 3.06(t, 2H, J=7Hz), 3.18(q, 1H,J=7Hz), 4.49-4.59(m, 2H), 4.89(m, 1H), 5.91(s, 1H), 6.08(m, 1H), 6.72(m,1H), 8.91(s, 1H), 9.09（s, 1H）
【００２９】
（２）光老化改善作用の評価
（ｉ）しわ形成ヘアレスマウスに塗布する各試料を、0.5wt% DO cAMP/90％エタノール溶液と0.5% N6,O2-ジパルミトイル（以下 DP） cAMP/90％ブタノール溶液として調整した。90％エタノール及び90％ブタノール（コントロール）並びに調整した各試料（0.5%  DO-ｃAMP、0.5%DP-ｃAMP）を週5回、6週間、1回に100μL/dayで、各ヘアレスマウスに塗布を行った。各試料を塗布した各ヘアレスマウス群は、90％EtOHコントロール群、90％BuOHコントロール群、0.5％DO -cAMP群、0.5％DP-ｃAMP群とした。
【００３０】
（ii）結果
（ａ）しわ目視評価結果
溶媒コントロール群を100として、中級脂肪酸である0.5％DO-ｃAMP群に有意にしわ改善が認められたが、長鎖脂肪酸である0.5％DP-ｃAMPでは差が認められなかった（図３）。
（ｂ）皮膚弾力性測定結果
溶媒コントロール群を基準として、中鎖脂肪酸である0.5％DO-ｃAMP群にもっとも皮膚弾力性改善が認められ、ついで長鎖脂肪酸である0.5％DP-ｃAMP群では差が認められなかった（図４）。
（ｃ）総合評価
Ｎ6及びＯ2'の位置に中鎖脂肪酸のジアシル基を有するDO-ｃAMP誘導体は、しわ改善及び皮膚弾力性向上が認められた。これに対し、長鎖のジアシル基を有するDP-ｃAMP誘導体は、しわの改善が認められず、弾力性向上はわずかであった。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】溶媒コントロール群を１００としたときの各群のしわスコア。
【図２】各群の皮膚弾力性測定結果（Ur/Uf）。
【図３】溶媒コントロール群を１００としたときの各群のしわスコア。
【図４】各群の皮膚弾力性測定結果（Ur/Uf）。
【図１】
2007314514.tif 000007
【図２】
2007314514.tif 000008
【図３】
2007314514.tif 000009
【図４】
2007314514.tif 000010