(57)【要約】【課題】  固体状の生物試料を対象とする核酸抽出方法は、生物試料の破砕、及び核酸抽出を目的とする２種類以上の器具を用いる為、操作が複雑化し、操作労力の増大，操作時間の延長、さらに操作時間の延長に伴う核酸の性状劣化を引き起こす。また、生物試料の破砕操作において破砕器具に付着してしまった試料は、次工程の核酸抽出操作へと持ち込まれず、核酸抽出効率を低下させるという課題を持っている。【解決手段】  本発明は、生物試料を破砕する工程と、破砕した試料から遊離状態となった核酸を抽出する核酸抽出工程で構成される核酸抽出方法において、２つの工程を単一の器具により実施することに関する。  本発明により、試料破砕器具に付着した試料を損失することなく核酸抽出効率を向上させ、操作を簡便化して操作性を向上できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸を含有する生物試料から核酸を抽出する核酸抽出方法であって、
核酸抽出器具に備えられた試料破砕機構により生物試料を破砕し、破砕された試料から遊離した核酸を、前述核酸抽出器具に備えられた核酸結合性の固相へ吸着させて、核酸を抽出する核酸抽出方法。
【請求項２】
請求項１記載の核酸抽出方法であって、
核酸抽出器具が、加減圧機器と接続可能な配管の内部に、核酸結合性の固相を固定している核酸抽出方法。
【請求項３】
請求項１記載の核酸抽出方法であって、
核酸抽出器具が、加減圧機器の内部に、核酸結合性の固相を固定している核酸抽出方法。
【請求項４】
請求項１記載の核酸抽出方法であって、
核酸抽出器具に備えられた試料破砕機構が、加減圧機器との接続が可能な中空状の細管状の配管であり、配管に接続した加減圧機器による加減圧により、配管に生物試料を通過させることで、生物試料を破砕する核酸抽出方法。
【請求項５】
請求項１記載の核酸抽出方法であって、
核酸抽出器具に備えられた試料破砕機構が、加減圧機器との接続が可能な中空状の配管の先端部に設けられた部材であり、配管先端を容器内の生物試料に押し付けると、配管通液孔を覆い、容器底面と接面し、生物試料を押しつぶし、破砕する核酸抽出方法。
【請求項６】
請求項１記載の核酸抽出方法であって、
核酸抽出器具に備えられた試料破砕機構が、加減圧機器との接続が可能な中空状の配管の先端部に設けられた通液孔開閉板である方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸を含む生物試料からの核酸抽出技術に関する。例えば、核酸を含む固体状の生物試料から、生物試料の破砕操作と破砕した生物試料から遊離した核酸の抽出操作を単一の器具を用いて一貫して行う方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
核酸の分析により得られる遺伝子情報は、医療，臨床検査，医薬品産業，食品産業等の様々な分野で活用されている。この核酸分析には、様々な生物試料からの核酸抽出が必須の前処理となっている。
【０００３】
近年の核酸抽出方法としては、有害な有機溶媒であるフェノールやクロロホルム等を使用する方法ではなく、〔B. Vogelstein and D. Gillespie, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 76(2), 615-619(1979)〕に報告されるカオトロピック剤の存在下で核酸がシリカに結合する性質に基づいた方法、あるいは、〔特開２００１−９５５７２号公報〕，〔特開２００２−３６０２４５号公報〕に報告される有機溶媒の存在下で核酸がシリカに結合する性質に基づいた方法が一般的である。
【０００４】
尚、動植物組織，培養細胞等の固体状の生物試料からの核酸抽出方法としては、生物試料に対して、カオトロピック剤，タンパク質変性剤，界面活性剤等による化学的溶解処理、及び、機械的ホモジナイザー，ビーズミル，ペッスル，注射針を備えたシリンジ，試験管ミキサー等による物理的破砕処理を行い、生物試料に含まれる核酸を遊離状態とした後に、シリカと核酸の結合特性を利用した方法により核酸を抽出する方法が一般的である。
【０００５】
【特許文献１】特開２００１−９５５７２号公報
【特許文献２】特開２００２−３６０２４５号公報
【非特許文献１】B. Vogelstein and D. Gillespie, Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 76  (2), 615-619(1979)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述の固体状の生物試料を対象とする核酸抽出方法は、生物試料の破砕、及び核酸抽出を目的とする２種類以上の器具を用いる為、操作が複雑化し、操作労力の増大，操作時間の延長、さらに操作時間の延長に伴う核酸の性状劣化を引き起こす。また、生物試料の破砕操作において破砕器具に付着してしまった試料は、次工程の核酸抽出操作へと持ち込まれず、核酸抽出効率を低下させるという課題を持っている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、生物試料を破砕する工程と、破砕した試料から遊離状態となった核酸を抽出する核酸抽出工程で構成される核酸抽出方法において、２つの工程を単一の器具により実施することに関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、試料破砕器具に付着した試料を損失することなく核酸抽出効率を向上させ、操作を簡便化して操作性を向上できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
器具としては、生物試料を効率的に破砕することができる先端構造や細管構造を備えたチップの内部に核酸を結合する為の固相担体を固定したものであり、チップに接続した加減圧機器により、溶液をチップ内部、及び固相担体内部を通過させることができるものである。或いは、生物試料を効率的に破砕することができる先端構造や細管構造を備えたチップを接続したシリンジの内部に核酸を結合する為の固相担体を固定したものでも良い。
【００１０】
生物試料を効率的に破砕することができるチップ先端構造とは、例えば、チップ先端部が試料を添加する容器の最底面と接面可能な形状であり、チップ先端部を容器内の生物試料に押し付けた状態で回転運動，円運動、或いは上下運動等をさせることで試料を破砕することができる形状である。但し、上述方法により生物試料を破砕する際に、チップ先端の通液孔に生物試料を詰らせない為、通液孔を開閉可能な機構として、通液孔を閉孔した状態で破砕工程を行う必要がある。
【００１１】
チップ先端部を回転運動，円運動、或いは上下運動させる方法としては、手動、或いは、モーター駆動させる方法がある。
【００１２】
チップ先端の通液孔を開閉とする機構としては、チップ先端部に通液孔開閉板を１枚以上付加し、チップ先端を容器底面に押し付けると、開閉板が弾性変形により、通液孔方向に折れ曲がり、通液孔を覆って閉孔状態となり、一方、チップ先端部を容器底面から離すと開閉板が通液孔から離れて開孔状態と戻るような機構が好ましい。このような開閉機構においては、試料を破砕する際に、閉孔状態の通液孔と開閉板の微細な隙間に破砕した試料が詰まった場合でも、チップ先端を容器底面から離して開孔状態とすることで、詰まった試料を取り除くことができる。
【００１３】
また、生物試料を効率的に破砕することができる細管構造とは、チップ内部に設けられた細管状の通液路であり、チップに接続した加減圧機器により、試料を複数回、吸引・排出し、細管に試料を通過させることで、試料を破砕することができる形状であり、細管の内径は０.５〜１.５mm程度が好ましい。
【００１４】
チップ内部、或いはシリンジ内部に固定する固相担体としては、ガラス繊維濾紙，ガラス粒子，シリカ粒子，シリカウール、あるいは、それら破砕物，ケイソウ土など、酸化ケイ素を含有する物質で構成される多孔性固相であり、最大孔径は２〜２０μｍが好ましい。
【００１５】
固体状の生物試料としては、動物組織，植物組織，細菌，細胞、等である。
【００１６】
生物試料を破砕する工程は、生物試料の溶解を化学的、或いは生化学的に促進させる為の溶解剤を添加した試料に対して、器具のチップ先端部分を押し付けた状態で、回転運動，円運動、或いは上下運動させることで試料を破砕する工程、及び、加減圧機器を用いて、溶解剤を添加した試料を、器具のチップ内部の細管通液路を通過させることで試料を破砕する工程、の両方、或いは、一方で構成される。
【００１７】
溶解剤としては、ヨウ化ナトリウム，ヨウ化カリウム，チオシアン酸ナトリウム，チオシアン酸グアニジン，塩酸グアニジン等のカオトロピック剤を含むものであり、これに、界面活性剤やタンパク質分解酵素を添加しても良い。カオトロピック剤は、タンパク質変性作用により生物試料を溶解し、且つ、生物試料に由来する核酸分解酵素を不活性化し、さらに、後工程の核酸抽出工程においてシリカと核酸の結合を促進する。
【００１８】
破砕された生物試料から核酸を抽出する核酸抽出工程は、生物試料から遊離状態となった核酸を固相担体に結合させる工程，固相担体に結合した核酸を洗浄する工程，固相担体に結合した核酸を溶離する工程、で構成される。
【００１９】
核酸を固相担体に結合させる工程は、加減圧機器を用いて、生物試料から遊離状態となった核酸を含む溶解液に結合剤を添加した溶液を、チップ内部、或いはシリンジ内部に固定した固相担体を隔てる一方の空間から他方の空間へと固相担体内部を通過させて、核酸を固相担体に結合させる。
【００２０】
結合剤とは、有機溶媒を含む水溶液である。
【００２１】
有機溶媒としては、脂肪族アルコール，脂肪族エーテル，脂肪族エステル，脂肪族ケトンの中から選ばれた２から１０個の炭素数を有する化合物の１種または２種以上の組み合わせが使用可能である。
【００２２】
脂肪族アルコールとして、好ましくは、エタノール，イソプロパノール，プロパノール，ブタノールを用いる。
【００２３】
脂肪族エーテルとして、好ましくは、エチレングリコールジメチルエーテル，エチレングリコールジエチルエーテル，プロピレングリコールジメチルエーテル，プロピレングリコールジエチルエーテル，ジエチレングリコールジメチルエーテル，ジエチレングリコールジエチルエーテルを用いる。
【００２４】
脂肪族エステルとして、好ましくは、プロピレングリコールモノメチルエーテルアセテート，乳酸エチルを用いる。
【００２５】
脂肪族ケトンとして、好ましくは、アセトン，ヒドロキシアセトン，メチルケトンを用いる。
【００２６】
固相担体に結合した核酸を洗浄する工程は、加減圧機器を用いて、洗浄溶液を、チップ内部、或いはシリンジ内部に固定した固相担体を隔てる一方の空間から他方の空間へと、固相担体内部を通過させて、固相担体に吸着した不純物を除去する。洗浄溶液としては、固相担体に結合した核酸を溶離せず、かつ、非特異的に吸着した不純物の除去を効率的に行うために、エタノール等の有機溶媒を含む低塩濃度緩衝液などを用いる。また、エタノール等の有機溶媒を含む低塩濃度緩衝液にカオトロピック剤や界面活性剤を加えても良い。
【００２７】
固相担体に結合した核酸を溶離する工程は、加減圧機器を用いて、溶離溶液を、チップ内部、或いはシリンジ内部に固定した固相担体を隔てる一方の空間から他方の空間へと、固相担体内部を通過させて、固相担体に結合した核酸を溶離し、精製核酸溶液として回収する。溶離液としては、固相担体に結合した核酸を効率的に溶離し、かつ、核酸の性状を劣化させない為に核酸分解酵素除去、あるいは核酸分解酵素失活化処理を行った純水や低塩濃度緩衝液、等を用いる。
【実施例１】
【００２８】
生物試料の破砕操作と生物試料から遊離状態となった核酸の抽出操作を一貫して行うことができる核酸抽出器具を用いて、生物試料からＲＮＡ抽出を行った。抽出ＲＮＡは、分光光度計により濃度定量と純度算出を行った。以下に本実施例に用いた核酸抽出器具，試薬，容器，生物試料，プロトコルを説明する。尚、本実施例に対する比較対照１として、一般的な試料破砕器具を用いて破砕工程を行った後に、上記器具を用いて核酸抽出工程のみを実施し、ＲＮＡ抽出を行った。以下に本比較方法において用いた試料破砕器具とプロトコルについても説明する。
＜核酸抽出器具＞
核酸抽出器具は、チップ内部に固相担体を固定し、ピペットチップ先端部に通液孔開閉板を備えたものを用いる。以下に核酸抽出器具の詳細を説明する。
【００２９】
核酸抽出器具は、図１に示すように、加減圧機器との接続部１を有するチップ本体２の先端内部に核酸結合性の固相担体３と固相担体保持部材４，５が固定化され、また、先端部に通液孔６と通液孔開閉板７を備える。
【００３０】
チップ本体は、ポリプロピレン製のピペットチップを加工し、加減圧機器との接続部はピペッター、或いはシリンジとの接続を可能にする。固相担体は、ガラス繊維ろ紙
（Whatman社製 ＧＭＦ１５０）をポンチ状のカッターによってチップ内径と同径の円形状に切り抜いたものである。固相担体保持部材は、ポリプロプレン製粒子を焼結して、チップ内径と同径の円形状に成形した、多孔性を有するものである。本部材は、固相担体を固定，保持すると同時に、固相担体への通液におけるプレフィルターとしての効果も併せ持つ。試料破砕用の通液孔開閉板は、通液孔の円周部分に付加した楕円形状の板である。通液孔開閉板は先端部を容器底面に押し付けると、弾性変形により開閉板が通液孔方向に折れ曲がり、通液孔を覆って閉孔状態となり、開閉板は容器底面に密着し、先端部を容器底面から離すと、開閉板が通液孔から離れて開孔状態に戻る。
【００３１】
＜試薬＞
カオトロピック溶液：４Ｍ  チオシアン酸グアニジン，８mM MES-KOH（ｐＨ５.５)
有機溶媒：５０％  ジエチレングリコールジメチルエーテル水溶液
洗浄液：８０％  ＥｔＯＨ水溶液
溶離液：RNase Free  滅菌純水
【００３２】
＜容器＞
抽出用容器：２.０ｍｌマイクロチューブ（ポリプロピレン製）
精製品用容器：１.５ｍｌマイクロチューブ（ポリプロピレン製）
【００３３】
＜生物試料＞
マウス肝臓
【００３４】
＜プロトコル＞
１．抽出用容器にマウス肝臓組織５ｍｇを秤量する。
２．抽出用容器にカオトロピック溶解液０.５ｍｌを添加する。
３．核酸抽出器具の先端部を容器底面に接した状態で円運動させ、途中で先端部を容器底    面から離し、溶液を固相担体に達しないように吸引・排出する。
４．抽出用容器に有機溶媒０.５ｍｌを添加し、混合する
５．核酸抽出器具により混合液が固相担体を通液するように５回、吸引・排出し、溶液を    廃棄する。
６．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
７．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
８．洗浄液１０ｍｌを抽出用シリンジ１で３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
９．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
10．核酸抽出器具により溶離液０.１ｍｌを１０回、吸引・排出し、溶液を精製品用容器    へ排出する。
【００３５】
＜比較対照１の試料破砕器具＞
【００３６】
ペッスル
【００３７】
＜比較対照１のプロトコル＞
１．抽出用容器にマウス肝臓組織５ｍｇを秤量する。
２．抽出用容器にカオトロピック溶解液０.５ｍｌを添加する。
３．ペッスルを準備する。
４．ペッスルを容器内に挿入し、ペッスル先端部を容器底面に接した状態で円運動させる。
５．ペッスルに付着した試料と溶液を可能な限り容器内に戻して、ペッスルを廃棄する。
６．抽出用容器に有機溶媒０.５ｍｌを添加し、混合する。
７．核酸抽出器具により混合液が固相担体を通液するように５回、吸引・排出し、溶液を    廃棄する。
８．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
９．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
10．洗浄液１０ｍｌを抽出用シリンジ１で３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
11．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
12．核酸抽出器具により溶離液０.１ｍｌを１０回、吸引・排出し、溶液を精製品用容器    へ排出する。
【００３８】
＜抽出結果＞
以下に、実施例１、及び比較対照１におけるＲＮＡ抽出の結果を示す。実施例１のRNA抽出量は、比較対照よりも高い値を示した。これは、比較対照の方法が、試料破砕工程後のペッスルに付着した試料を損失してしまうのに対して、実施例１の方法は、試料破砕工程後の試料を損失しないためである。尚、ＲＮＡ純度は比較対照１と同等の値を示した。また、実施例１の操作は、比較対照の操作よりも簡便であり、操作性に優れるものであった。
【００３９】
【表１】
2007074914.tif 000003
【実施例２】
【００４０】
生物試料の破砕操作と生物試料から遊離状態となった核酸の抽出操作を一貫して行うことができる核酸抽出器具を用いて、生物試料からＲＮＡ抽出を行った。抽出ＲＮＡは、分光光度計により濃度定量と純度算出を行った。本実施例に用いた核酸抽出器具，試薬，容器，生物試料，プロトコルを説明する。尚、本実施例に対する比較対照１として、実施例１の比較対照と同様に、実施例２で用いる器具を用いて核酸抽出工程のみを実施し、RNA抽出を行った。
【００４１】
＜核酸抽出器具＞
核酸抽出器具は、実施例１に用いた器具において、通液孔開閉板の形状が異なるものである。
【００４２】
核酸抽出器具は、図２に示すように、加減圧機器との接続部１を有するチップ本体２の先端内部に核酸結合性の固相担体３と固相担体保持部材４，５が固定化され、また、先端部に通液孔６と通液孔開閉板７を備える。接続部，チップ本体，固相担体，固相担体保持部材，通液孔は実施例１と同様である。
【００４３】
通液孔開閉板７は、図３に示すように、通液孔の円周部分に付加した４枚の三角形状の板であり、図４に示すように、通液孔開閉板はチップ先端部を容器底面に押し付けると、弾性変形により開閉板が通液孔の中心方向に折れ曲り、各々の側辺と密接して、通液孔を覆って閉孔状態となり、開閉板が容器底面と密着し、チップ先端部を容器底面から離すと、開閉板が通液孔から離れて、開孔状態に戻る。
【００４４】
＜生物試料＞
実施例１と同じ
【００４５】
＜試薬＞
実施例１と同じ
【００４６】
＜容器＞
実施例１と同じ
【００４７】
＜プロトコル＞
以下に示す工程の操作方法以外は、実施例１と同じ
３．核酸抽出器具の先端部を容器底面に接した状態で上下運動、及び円運動させ、途中で先端部を容器底面から離し、溶液を固相担体に達しないように吸引・排出する。
【００４８】
＜抽出結果＞
以下に、実施例２、及び比較対照におけるＲＮＡ抽出の結果を示す。実施例２のＲＮＡ抽出量は、比較対照、及び実施例１よりも高い値を示した。これは、実施例２の方法が、試料破砕工程後の試料を損失しないことに加えて、通液孔開閉板の開閉機構の特性により、組織破砕の効率が向上した為と考えられる。本方法の核酸抽出器具は、上下運動させて通液孔開閉板を容器底面に押し付ける際に、試料を効率的に容器底面にかき集めて押し潰し、さらに、開閉板の各々の側辺が密接する際に、試料を挟み込んで潰し、試料を効率的に破砕する。尚、ＲＮＡ純度は比較対照と同等の値を示し、実施例２の操作は実施例１と同様に比較対照の操作よりも簡便であり、操作性に優れるものであった。
【００４９】
【表２】
2007074914.tif 000004
【実施例３】
【００５０】
生物試料の破砕操作と生物試料から遊離状態となった核酸の抽出操作を一貫して行うことができる核酸抽出器具を用いて、試料からＲＮＡ抽出を行った。抽出ＲＮＡは、分光光度計により濃度定量と純度算出を行った。本実施例に用いた核酸抽出器具，試薬，容器，生物試料，プロトコルを説明する。尚、本実施例に対する比較対照２として、一般的な試料器具を用いて破砕操作を行った後に、上記器具を用いて核酸抽出工程のみを実施し、
ＲＮＡ抽出を行った。以下に本比較方法において用いた試料器具とプロトコルについても説明する。
【００５１】
＜核酸抽出器具＞
核酸抽出器具は、シリンジ内部に固相担体を固定し、通液孔開閉板と細管通液路を備えたチップを接続したものを用いる。以下に器具の詳細を説明する。
【００５２】
核酸抽出器具は、図５、及び図６に示すように、シリンジ本体１０，プランジャ２０，チップ本体３０及び固相担体ユニット４０から構成される。
【００５３】
シリンジ本体１０は、円筒状の円筒部１０１と、上端の開口部１０２と、下端の底部
１０３と、開口部１０２の周囲に設けられた鍔形の保持部１０４と、底部１０３に設けられたチップ本体を接続するための接続部１０５とを有する。
【００５４】
プランジャ２０は、プランジャ本体２０１とシールピース２０３とを有する。シールピース２０３は、プランジャ本体２０１とは別個の部材として形成され、プランジャ本体
２０１の下端の取り付け部２０２に取り付けられる。シールピース２０３は、下端に円錐状の突起２０４を有する。
【００５５】
チップ本体３０は、上端の接続部３０１，通液孔３０２，通液孔開閉板３０３，細管通液路３０４を有する。通液孔開閉板による開閉機構は、実施例１に用いる器具と同様である。尚、ノズルの接続部３０１とシリンジ本体の接続部１０５は、ねじによって接続される。
【００５６】
固相担体ユニット４０は、図６に示すように、円板状の固相担体４１、固相担体４１の上側及び下側に配置された２つの円板状の固相担体保持部材４２，４３及び円筒状のホルダ４４から構成される。固相担体は、ガラス繊維ろ紙（Whatman社製 ＧＭＦ１５０）をポンチ状のカッターによって切り抜いたものである。また、固相担体保持部材は、プリプロピレン粒子を焼結して成形された多孔性を有するものであり、固相担体を保持すると同時に、固相担体への通液におけるプレフィルターとしての効果を持つ。
【００５７】
＜生物試料＞
マウス腎臓
【００５８】
＜試薬＞
カオトロピック溶液：ＲＬＴバッファー（ＱＩＡＧＥＮ社製）
有機溶媒：７０％  エタノール水溶液
洗浄液：８０％  ＥｔＯＨ水溶液
溶離液：RNase Free  滅菌純水
【００５９】
＜容器＞
実施例１と同じ
【００６０】
＜プロトコル＞
１．抽出用容器にマウス腎臓組織５ｍｇを秤量する。
２．抽出用容器にカオトロピック溶解液０.５ｍｌを添加する。
３．核酸抽出器具の先端部を容器底面に接した状態で円運動させ、途中で先端部を容器底    面から離し、溶液が細管通液路に達しないように吸引・排出する。
４．核酸抽出器具の先端部を容器底面から離し、溶液が固相担体に達しないように、細管    通液路を通液させて、吸引・排出する。
５．抽出用容器に有機溶媒０.５ｍｌを添加し、混合する。
６．核酸抽出器具により混合液が固相担体を通液するように５回、吸引・排出し、溶液を    廃棄する。
７．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
８．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
９．洗浄液１０ｍｌを抽出用シリンジ１で３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
10．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
11．核酸抽出器具により溶離液０.１ｍｌを１０回、吸引・排出し、溶液を精製品用容器
へ排出する。
【００６１】
＜比較対照２の組織破砕器具＞
ペッスル
注射針（２０Ｇ）を備えたシリンジ
【００６２】
＜比較対照２のプロトコル＞
１．抽出用容器にマウス肝臓組織５ｍｇを秤量する。
２．抽出用容器にカオトロピック溶解液０.５ｍｌを添加する。
３．ペッスルを準備する。
４．ペッスルを容器内に挿入し、ペッスル先端部を容器底面に接した状態で円運動させる    。
５．ペッスルに付着した試料と溶液を可能な限り容器内に戻して、ペッスルを廃棄する。
６．注射針を備えたシリンジを準備する。
７．注射針を備えたシリンジにより溶液を５回、吸引・排出する。
８．注射針とシリンジに残存した試料を可能な限り容器内に戻して、注射針とシリンジを    廃棄する。
９．抽出用容器に有機溶媒０.５ｍｌを添加し、混合する。
10．核酸抽出器具により混合液が固相担体を通液するように５回、吸引・排出し、溶液を    廃棄する。
11．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
12．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
13．洗浄液１０ｍｌを抽出用シリンジ１で３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
14．核酸抽出器具により洗浄液１.５ｍｌを３回、吸引・排出し、溶液を廃棄する。
15．核酸抽出器具により溶離液０.１ｍｌを１０回、吸引・排出し、溶液を精製品用容器    へ排出する。
【００６３】
＜抽出結果＞
以下に、実施例３、及び比較対照２におけるＲＮＡ抽出の結果を示す。実施例３のRNA抽出量は、比較対照よりも高い値を示した。これは、比較対照の方法が、試料破砕工程後のペッスル、及び、注射針を備えたシリンジに付着した試料を損失してしまうのに対して、実施例３の方法は、試料破砕工程後の試料を損失しないためであると考えられる。尚、ＲＮＡ純度は比較対照１と同等の値を示した。また、実施例３の操作は、試料破砕工程に異なる２種類の器具を用いる比較対照の操作よりも、簡便で操作性に優れるものであり、所要操作時間も短縮された。
【００６４】
【表３】
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【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】核酸抽出器具の概略図。
【図２】核酸抽出器具の概略図。
【図３】通液孔開閉板（開いた状態）の概略図。
【図４】通液孔開閉板（閉じた状態）の概略図。
【図５】核酸抽出器具の断面図。
【図６】核酸抽出器具の分解図。
【符号の説明】
【００６６】
１，１０５，３０１…接続部、２，３０…チップ本体、３，４１…固相担体、４，５，４２，４３…固相担体保持部材、６，３０２…通液孔、７，３０３…通液孔開閉板、１０…シリンジ本体、２０…プランジャ、４０…固相担体ユニット、４４…ホルダ、１０１…円筒部、１０２…開口部、１０３…底部、１０４…保持部、２０１…プランジャ本体、
２０２…取り付け部、２０３…シールピース、２０４…円錐状の突起、３０４…細管通液路。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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