(57)【要約】【課題】  安全な食品素材由来である血中中性脂肪上昇抑制剤およびその製造方法および組成物を提供すること。【解決手段】  本発明は、シソ（Perilla frutescens）乾燥物の濃度９０〜９９．９容量％エタノール水溶液の抽出物を有効成分とする血中中性脂肪上昇抑制剤、およびそれを含有する高脂血症とりわけ高中性脂肪血症の予防及び／又は改善・処置用組成物を提供する。本発明の上記の組成物は、安全であり、高脂血症とりわけ高中性脂肪血症の予防及び／又は改善・処置に有効である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シソ（Perilla frutescens）乾燥物の濃度９０〜９９．９容量％エタノール水溶液の抽出物を有効成分とする血中中性脂肪上昇抑制剤。
【請求項２】
シソが、Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo、Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispa MakinoおよびPerilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispi-discolor Makinoからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする請求項１記載の血中中性脂肪上昇抑制剤。
【請求項３】
シソ乾燥物が、水分含量２５％未満の乾燥物であることを特徴とする請求項１または２記載の血中中性脂肪上昇抑制剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の血中中性脂肪上昇抑制剤からなる脂質吸収阻害剤。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の血中中性脂肪上昇抑制剤からなるリパーゼ阻害剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の血中中性脂肪上昇抑制剤からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αリガンド剤。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の血中中性脂肪上昇抑制剤を含有する高脂血症の予防または改善用組成物。
【請求項８】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の血中中性脂肪上昇抑制剤を含有するメタボリックシンドロームの予防または改善用組成物。
【請求項９】
医薬用または動物薬用である請求項７または８記載の組成物。
【請求項１０】
飲食用である請求項７または８記載の組成物。
【請求項１１】
医薬部外品用である請求項７または８記載の組成物。
【請求項１２】
シソ（Perilla frutescens）乾燥物を、濃度９０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出することを特徴とする、血中中性脂肪上昇抑制剤の製造方法。
【請求項１３】
シソが、Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo、Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispa MakinoおよびPerilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispi-discolor Makinoからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする請求項１２記載の血中中性脂肪上昇抑制剤の製造方法。
【請求項１４】
シソ乾燥物が、水分含量２５％未満の乾燥物であることを特徴とする請求項１２または１３記載の血中中性脂肪上昇抑制剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血中中性脂肪上昇抑制剤およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、総カロリー摂取量および脂肪摂取量の急激な増加や、医療技術の進歩による長寿化により、高脂血症などの循環器障害が増加している。また、これらの現象は、脂肪摂取量の増加が特に著しい若年層においても、顕著である。上記循環器障害の増加とこの若年化が、社会問題の一つとなっている。
【０００３】
高脂血症は、動物性食品の過剰な摂取と運動不足やストレスなどが要因となっている疾患であるといわれている。高脂血症が進行により中性脂肪やコレステロールが血管壁に沈着して動脈硬化、高血圧、心筋梗塞、脳血管障害などの疾病につながることが知られている。
【０００４】
一般に、血中の中性脂肪値が１５０ｍｇ／ｄｌ以上、または、コレステロール値が２２０ｍｇ／ｄｌ以上になった状態を高脂血症と呼ぶ。また、高脂血症は、血中コレステロール値の高い高コレステロール血症、血中中性脂肪値の高い高中性脂肪血症、そのどちらの値も高い複合型高脂血症の３つのタイプに分けることができる。日本人の平均中性脂肪値は１４０ｍｇ／ｄｌと言われている。１５０ｍｇ／ｄｌ以上の中性脂肪高値者は、男性で３人に１人、女性で４人に１人にのぼり、その罹患者は非常に多い。そのため、高脂血症から誘発される動脈硬化といった疾患を予防する上でも、血中中性脂肪値を低減させることは非常に重要である。
【０００５】
食事により摂取された脂質は、膵臓から分泌される膵臓リパーゼによって脂肪酸とモノグリセライドに分解されて小腸から吸収される。そのため膵臓リパーゼを阻害する組成物は、消化管からの脂質吸収を阻害しうることが知られている。
【０００６】
また、血中中性脂肪はメタボリックシンドロームのリスクとしても提案されておりその値を低減させることはメタボリックシンドロームの予防又は改善にも寄与しうると考えられる。ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor、以下ＰＰＡＲと記す）リガンドは肥満・インスリン抵抗性を改善し、高脂血症及び糖尿病などに係わるメタボリックシンドロームの予防作用が期待される。PPARは、脂質及び糖代謝の遺伝子制御を担う核内受容体ファミリーに属するリガンド依存性転写因子である。ほ乳類ではPPARα、PPARδ（PPARβ、NUC-１、FAAR）、PPARγの３種のサブタイプの存在が知られている（非特許文献１）。３種のサブタイプのうち、とりわけ、PPARαのリガンドは、主に肝臓のPPARαを活性化し、脂質代謝を亢進させることにより、血中脂質の低下作用を有していることが知られている（非特許文献２）。
【０００７】
従来、高中性脂肪血症など血中脂質のバランスが崩れた病態を改善する薬剤として、リパーゼ阻害剤であるオルリスタット、PPARαリガンド剤であるフィブラート剤やＥＰＡ製剤、およびニコチン酸製剤などが用いられている。しかしながら、フィブラート剤には腹痛、発疹、肝障害といった副作用、ＥＰＡ製剤には出血、胃部不快感といった副作用、ニコチン酸製剤には全身紅潮、血糖値上昇といった副作用があるという問題があった。そこで、血中中性脂肪値を低減させ血中脂質量のバランスの崩れを改善する作用に優れ、かつ安全性が高く長期投与が可能な血中中性脂肪上昇抑制剤の開発が望まれていた。
【０００８】
シソはシソ科シソ属（Perilla frutescens）の植物であり、赤シソ、青シソ、チリメンジソ、チリメンカタジソなどの品種が存在し、薬味、天ぷら、シソ巻き、菓子原料として広く用いられている。また、防腐、抗菌、解毒、健胃、解熱、鎮静、咳止め、発汗、利尿、整腸作用など様々な効能があることが知られており、古くから民間薬としてだけでなく、半夏厚朴湯、香蘇散などの漢方薬の主剤の一つとして用いられている（非特許文献３）。また、シソの抽出物がα−グルコシダーゼ阻害活性を有していること（特許文献１）、および、シソ熱水抽出物が抗アレルギー作用を有していること（特許文献２）が知られている。また、イソフラボンもしくはその類縁体がＰＰＡＲ依存的遺伝子転写活性化作用を有すること、シソがイソフラボンもしくはその類縁体を含有する植物の一例として報告がされている（特許文献３）。
【特許文献１】特開２０００−１０２３８３
【特許文献２】特許第３０７１６６９号
【特許文献３】特開２００２−８０３６２
【非特許文献１】Journal of Medicinal Chemistry,２０００年,４３巻,５２７〜５５０頁
【非特許文献２】Diabetes，２００１年，５０巻，４１１〜４１７頁
【非特許文献３】月刊フードケミカル，２０００年，７巻，３７−４２頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、上記を鑑み、血中脂質のバランスの崩れを改善する作用、特に血中中性脂肪上昇を抑制する作用を有し、かつ安全性が高い、食品由来の血中中性脂肪上昇抑制剤およびその製造方法並びにこの血中中性脂肪上昇抑制剤を含有する組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記実情に鑑み鋭意研究を行った結果、シソを濃度９０〜９９．５容量％のエタノール水溶液で抽出することにより、血中中性脂肪上昇抑制作用を有するシソ抽出物が得られることを見いだした。
【００１１】
即ち本発明が提供するのは、以下の通りである。
[１]  シソ（Perilla frutescens）乾燥物の濃度９０〜９９．９容量％エタノール水溶液の抽出物を有効成分とする血中中性脂肪上昇抑制剤。
[２]  シソが、Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo、Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispa MakinoおよびPerilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispi-discolor Makinoからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする[１]記載の血中中性脂肪上昇抑制剤。
[３]  シソ乾燥物が、水分含量２５％未満の乾燥物であることを特徴とする[１]または[２]記載の血中中性脂肪上昇抑制剤。
[４]  [１]〜[３]のいずれか記載の血中中性脂肪上昇抑制剤からなる脂質吸収阻害剤。
[５]  [１]〜[３]のいずれか記載の血中中性脂肪上昇抑制剤からなるリパーゼ阻害剤。
[６]  [１]〜[３]のいずれか記載の血中中性脂肪上昇抑制剤からなるペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αリガンド剤。
[７]   [１]〜[３]のいずれか記載の血中中性脂肪上昇抑制剤を含有する高脂血症の予防または改善用組成物。
[８]   [１]〜[３]のいずれか記載の血中中性脂肪上昇抑制剤を含有するメタボリックシンドロームの予防または改善用組成物。
[９]  医薬用または動物薬用である[７]または[８]記載の組成物。
[１０]  飲食用である[７]または[８]記載の組成物。
[１１]  医薬部外品用である[７]または[８]記載の組成物。
[１２]  シソ（Perilla frutescens）乾燥物を、濃度９０〜９９．９容量％のエタノール水溶液で抽出することを特徴とする、血中中性脂肪上昇抑制剤の製造方法。
[１３]  シソが、Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo、Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispa MakinoおよびPerilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispi-discolor Makinoからなる群から選ばれる１種以上であることを特徴とする[１２]記載の血中中性脂肪上昇抑制剤の製造方法。
[１４]  シソ乾燥物が、水分含量２５％未満の乾燥物であることを特徴とする[１２]または[１３]記載の血中中性脂肪上昇抑制剤の製造方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、食品由来の血中中性脂肪上昇抑制剤が得られる。本発明で得られる血中中性脂肪上昇抑制剤は、高脂血症とりわけ高中性脂肪血症を予防・緩和・処置する上で有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
【００１４】
本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤は、シソ乾燥物の濃度９０〜９９．９容量％エタノール水溶液の抽出物を有効成分とする、血中中性脂肪上昇を抑制する作用を有する組成物である。
【００１５】
上記血中中性脂肪上昇抑制作用とは、血中脂質のバランスの崩れを改善する作用、特に血中中性脂肪の上昇を抑制する作用である。本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤は、血中中性脂肪の上昇を抑制することで、高脂血症、とりわけ高中性脂肪血症を、予防、緩和、または改善することができる。本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤は、そのなかでも、高脂血症とりわけ高中性脂肪血症を予防するために有用である。本発明において、高脂血症の予防とは、日本動脈硬化学会が動脈硬化性疾患診療ガイドライン（２００２年９月発行）にて定義している高脂血症の状態又は境界域の状態になるのを防ぐ又は遅らせることを指す。また、高脂血症の改善とは、上記に示す高脂血症の状態又は境界域の状態から、上記ガイドラインにて正常域と定義している状態に近づけることを指す。
【００１６】
本発明において用いられるシソは、シソ科シソ属（Perilla frutescens）の植物であれば特に限定されない。具体的には、赤シソ（Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo ）、青ジソ（Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo forma viridis Makino）、チリメンジソ（Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispa Makino）、チリメンカタジソ（Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispi-discolor Makino）などが挙げられるが、本発明においては、Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo、Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispa Makino、Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne forma crispi-discolor Makinoがより好ましい。上記シソは単独で、あるいは２種以上を組み合わせて用いることもできる。また、シソ抽出物を得るために用いる植物部位は、特に限定されないが、本発明に  おいてはシソの葉が好ましい。上記シソの形態は、原型、ブレンダー等により粉砕したもの、切断したもの又は粉末のいずれを用いてもよい。また、本発明におけるシソは、乾燥物の状態で用いられ、該シソ乾燥物は水分含量２５％以下のものが好ましく、水分含量１５％以下のものがより好ましく、水分含量８％以下がさらに好ましい。水分含量が多いシソ乾燥物では、原料の保管の際に腐敗する可能性があり、また、抽出時にシソ乾燥物中の水分が溶媒へ移行し抽出溶媒の濃度が低下し十分な血中中性脂肪上昇抑制作用が得られない可能性がある。
【００１７】
本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤は、上記シソ乾燥物を、濃度９０〜９９．９容量％エタノール水溶液で抽出することによって得られる抽出物を有効成分とする。該抽出物は例えば、上記のシソ乾燥物を抽出溶媒に浸し、常圧下で攪拌又は放置し、静置分離、濾過又は遠心分離などを行うことにより、得ることができる。本発明で用いられる抽出溶媒は、濃度９０〜９９．５容量％のエタノール水溶液である必要がある。９０容量％未満のエタノール水溶液では、十分な血中中性脂肪上昇抑制作用が得られない。また、抽出温度は、一般に−２０〜１００℃、普通１〜９０℃、好ましくは１〜７０℃で好適に実施できる。抽出時間は、普通０．１時間〜１ヶ月、好ましくは０．５時間〜７日間で好適に実施できる。また、抽出溶媒量はシソ乾燥物１重量部に対して１倍量以上５０倍量以下が好ましく、３倍量以上２０倍量以下がより好ましい。１倍量未満ではシソ乾燥物が充分に溶媒に浸らず抽出物の回収率が低くなる。また、５０倍量以上では抽出に用いる抽出タンク等の容器が大きくなり、溶媒除去に必要となるエネルギーが極めて大きく製造コストが高くなる傾向がある。
【００１８】
本発明において、シソ抽出物の形態は、抽出液の形態でもよいし、溶媒を除去したものでもよい。さらに、他の適切な溶媒に溶解、懸濁した形態であってもよい。また、これらのシソ抽出物には、血中中性脂肪上昇抑制剤として、その活性を失わない範囲内で脱臭、精製などの操作を加えることができる。さらに、当該シソ抽出物は、飲食品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、又は粗抽出物あるいは半精製抽出物として本発明に使用できる。
【００１９】
上記製造方法で得られるシソ抽出物は、血中中性脂肪の上昇を抑制する作用を有しているだけでなく、脂質吸収阻害作用、リパーゼ阻害活性、ＰＰＡＲαリガンド活性も有していおり、本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤は、脂質吸収阻害剤、リパーゼ阻害剤、ＰＰＡＲαリガンド剤としても使用できる。
【００２０】
本発明でいう脂質吸収阻害剤とは、食事中に含まれる脂肪の吸収を抑制することができる組成物である。本発明の脂質吸収阻害剤は、食後の血中中性脂肪値の上昇を抑制することができる。即ち、本発明の脂質吸収阻害剤は、高中性脂肪血症など血中脂質のバランスが崩れた状態を予防・改善・緩和することができる。
【００２１】
本発明でいうリパーゼ阻害剤とは、リパーゼ、特に膵臓リパーゼの活性を抑制する組成物である。本発明のリパーゼ阻害剤は、食事中の脂肪の分解を抑制するために、食事中の脂肪の吸収を抑制することができる。即ち、本発明のリパーゼ阻害剤は、高中性脂肪血症など血中脂質のバランスが崩れた状態を予防・改善・処置することができる。
【００２２】
ここでリパーゼ活性は、例えば、基質に４−メチルウンベリフェロンのオレイン酸エステル（4-MUO）、酵素にブタ膵臓リパーゼを用い、生成した４−メチルウンベリフェロン（4-MU）の蛍光強度により測定することができる。これらのアッセイにおいて、サンプルの活性は一般に溶媒対照と比較し、溶媒対照よりも低いリパーゼ活性を示すサンプルを「リパーゼ阻害活性あり」と評価する。
【００２３】
本発明でいうPPARαリガンド剤とは、PPARαリガンド結合領域に結合する能力、即ちPPARαリガンド活性を有している組成物である。本発明のPPARαリガンド剤は、PPARαを介して、肝臓などの組織において脂質及び糖代謝を調節することで、肥満、インスリン抵抗性、高脂血症及び糖尿病などに係わるメタボリックシンドロームを予防・改善・緩和することができる。即ち、本発明のPPARαリガンド剤は、肥満、インスリン抵抗性、高脂血症及び糖尿病などに係わるメタボリックシンドロームに関わる各種遺伝子の発現を制御することができる。前記各種遺伝子とは、例えば、アシルCoAオキシダーゼ、中鎖アシルCoAデヒドロゲナーゼ、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ、長鎖アシルCoA合成酵素、脂肪酸結合タンパク質、リポ蛋白リパーゼ、アポリポタンパク質、脱共役タンパク質などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２４】
ここでPPARリガンド活性は、例えば、PPARリガンド結合領域とGAL４との融合タンパクに対する結合をルシフェラーゼの発現で評価するレポーター・アッセイ（Cell，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁）や、PPARリガンド結合領域を含むタンパクを用いたコンペティション・バインディング・アッセイ（Cell，１９９５年，８３巻，８１３〜８１９頁）などにより測定することができる。これらのアッセイにおいて、サンプルの活性は一般に溶媒対照と比較し、溶媒対照よりも有意に高い活性を示すサンプルを「PPARリガンド活性あり」と評価する。
【００２５】
本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤は、これを含有する組成物とすることで、高脂血症とりわけ高中性脂肪血症の予防及び／または処置のための、医薬用または動物薬用および飲食用組成物として利用することができる。さらに、本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤は、血中中性脂肪低減作用を有していることから、メタボリックシンドローム予防および／または改善用組成物としても利用することができる。また、それらの形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、健康食品、栄養補助食品などの飲食品、あるいはOTCなど容易に入手可能な医薬品又は医薬部外品、動物薬品などとして利用できる。
【００２６】
本発明の上記組成物における、シソ抽出物の含有量は、特に限定されないが、抽出された固形分重量として、組成物重量基準で好ましくは０．００１〜９９．９９９重量％、より好ましくは０．０１〜９９．９重量％である。
【００２７】
本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤や、これを含有する組成物は、そのまま直接摂取することもできるし、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に成型して摂取することもできる。また、栄養強化を目的として、ビタミンA、C、D、Eなどの各種ビタミン類を添加、併用して用いることもできる。これらの成型剤における本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤の含有量は、好ましくは０．１〜１００重量％、より好ましくは１０〜９０重量％である。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、はんぺんなどの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。これら飲食用の組成物を摂取する場合、その摂取量は有効成分であるシソ抽出物の量に換算して成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００mg／kg体重、より好ましくは１〜３００mg／kg体重である。
【００２８】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、座薬、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、有効成分であるシソ抽出物の量に換算して、成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。
【００２９】
医薬部外品として用いる場合は、必要に応じて他の添加剤などを添加して、例えば、軟膏、リニメント剤、エアゾール剤、クリーム、石鹸、洗顔料、全身洗浄料、化粧水、ローション、入浴剤などに使用することができ、局所的に用いることができる。
【実施例】
【００３０】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３１】
＜シソ抽出物の作製＞
（実施例１）
チリメンカタジソ（新和物産株式会社より購入）１０００gを、９９．５容量％エタノール水溶液５Lに浸し、常圧下、４５℃にて６時間、攪拌抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を減圧濃縮により溶媒を除去し、半固形状態のシソ抽出物、６５．６ｇを得た。
【００３２】
（比較例１）
チリメンカタジソ（新和物産株式会社より購入）１０００gを、７０容量％エタノール水溶液５Lに浸し、常圧下、４５℃にて６時間、攪拌抽出した後、濾過により抽出液を得た。その抽出液を減圧濃縮および凍結乾燥により溶媒を除去し、粉末状のシソ７０％エタノール抽出物、９３．０ｇを得た。
【００３３】
＜血中中性脂肪上昇抑制効果の確認＞
（実施例２）
ＫＫ−Ａｙマウス（雌、６週齢）を４群（各群６匹）に分け、高脂肪・高糖分食（オリエンタル酵母株式会社、表１）を基本飼料として、無添加の飼料（コントロール群）、実施例１で得られたシソ抽出物を０．１２５％、０．２５％、０．５％添加した飼料（それぞれ０．１２５％添加群、０．２５％添加群、０．５％添加群）をそれぞれ自由摂取にて４週間与えた。
【００３４】
【表１】
2007246471.tif 000002
サンプル投与終了後、エーテル麻酔下で全採血し血漿を得た。その後血漿中の中性脂肪を測定した。その結果を表２に示す。
【００３５】
【表２】
2007246471.tif 000003
表２から明らかなように、シソ抽出物摂取が血中中性脂肪値の上昇を有意に抑制した。
【００３６】
（比較例２）
ＫＫ−Ａｙマウス（雌、６週齢）を２群（各群６匹）に分け、高脂肪・高糖分食（オリエンタル酵母株式会社、表１）を基本飼料として、無添加の飼料（コントロール群）、比較例１で得られたシソ７０％エタノール抽出物を１．０％添加した飼料（シソ７０％エタノール抽出物１．０％添加群）をそれぞれ自由摂取にて４週間与えた。
【００３７】
サンプル投与終了後、エーテル麻酔下で全採血し血漿を得た。その後血漿中の中性脂肪を測定した。その結果を表３に示す。
【００３８】
【表３】
2007246471.tif 000004
表３から明らかなように、シソ７０％エタノール抽出物摂取が血中中性脂肪値の上昇を抑制することはなかった。
【００３９】
＜脂質吸収阻害活性の確認＞
（実施例３）
Wisterラット（雄、７週齢）を３群（各群６匹）に分け、実施例１で得られたシソ抽出物を1000mg/Kg、陽性対照として市販のリパーゼ阻害剤であるオルリスタットを5mg/Kgになるように0.2%Tween80溶液に懸濁し、懸濁液をラットに経口投与した。対照として0.2%Tween80のみを投与した。その後、コーン油と0.2%Tween80溶液を１：１で混ぜた脂質エマルジョン2mLを経口投与した。
【００４０】
投与前、および、投与後１、２，４および６時間後頸動脈より採血を行い、血漿を得た。その後、血漿中の中性脂肪を測定した。その結果を表４に示す。
【００４１】
【表４】
2007246471.tif 000005
表４から明らかなように、シソ抽出物投与により中性脂肪の吸収が抑制されることにより、血中中性脂肪値の上昇が抑制された。
【００４２】
＜リパーゼ阻害活性の確認＞
（実施例４）
蛍光測定用の黒色９６穴プレートに２１μｌのMcllvain緩衝液（０．１Ｍのリン酸水素二ナトリウム、０．１Ｍのクエン酸でｐＨ７．４に調整）、４μｌの被検物質、および、５０μｌのブタ膵臓リパーゼ（Sigma社）を溶解したMcllvain緩衝液を加え、さらに、０．１ｍMの４−MUO（Sigma社）を懸濁したMcllvain緩衝液を２５μｌ加え３７℃で３０分間反応させた。０．１Ｎ塩酸を５０μｌを添加して反応を停止させ、１Ｍクエン酸ナトリウム１００μｌを添加してｐＨを４．３付近に調整し、励起波長３４０ｎｍ、蛍光波長４５０ｎｍの蛍光ををWallac  1420  ARVOsx（パーキンエルマー社）により測定した。なおコントロールとしてDMSOを用い、コントロールおよび被検物質を添加した反応液中にリパーゼにより生成した４−ＭＵ量（反応値）は、リパーゼ存在下の蛍光強度からリパーゼ非存在下の蛍光強度を差し引いて求めた。なお、阻害活性は次式より求めた。
阻害活性（％）＝｛１−（被検物質の反応値／コントロールの反応値）｝×１００
実施例１で得られたシソ抽出物のリパーゼ阻害活性を表５に示す。
【００４３】
【表５】
2007246471.tif 000006
表５から明らかなように、実施例１で得られたシソ抽出物はリパーゼ阻害活性を示した。ＩＣ５０は１６．３μｇ／ｍLであった。
【００４４】
＜ＰＰＡＲαリガンド活性の確認＞
（実施例５）
Hep-G2細胞（ヒト肝癌由来の培養細胞）を９６穴培養プレートに２×１０4cells／wellとなるように植え込み、３７℃、５％CO2条件下で２４時間培養した。培地には、１０％FBS（ウシ胎仔血清）、１０ml／Lペニシリン・ストレプトマイシン溶液（それぞれ５０００IU／ml、５０００μg／ml、Invitrogen社）、３７mg／Lアスコルビン酸（和光純薬工業株式会社）を含むDMEM（Dulbecco's  Modified  Eagle  Medium：Invitrogen社）を用いた。その細胞をOPTI-MEM（Invitrogen社）で洗浄した後、pM-PPARαと４xUASg-lucをリポフェクトアミン・プラス（Invtrogen社）を用いてトランスフェクションした。なお、pM-PPARαは、哺乳類発現プラスミドであるpM（Clontech社）に酵母由来転写因子GAL４遺伝子（アミノ酸配列１〜１４７）とヒトPPARαリガンド結合部位遺伝子（アミノ酸配列１６７〜４６８）を結合したキメラタンパクの遺伝子を挿入したプラスミドであり、４xUASg-lucはルシフェラーゼ遺伝子の上流にGAL４の応答配列（UASg）を４回組み込んだレポーター・プラスミドである（Cell，１９９５年，８３巻，８０３〜８１２頁などに記載の方法で作成可能）。トランスフェクションの約２４時間後、被検物質を含む培地に交換し（n=４）、２４時間培養した。溶媒対照にはDMSOを用い、培地に１／１０００量添加した。細胞をCa、Mg含有リン酸緩衝生理食塩水（PBS+）で洗浄した後、ルックライト（パーキンエルマー社）を添加し、トップカウント・マイクロプレートシンチレーション／ルミネッセンスカウンター（パーキンエルマー社）にてルシフェラーゼの発光強度を測定した。コントロールの発光強度に対するサンプルの発光強度の比をサンプルのPPARαリガンド活性とした。
【００４５】
実施例１で得られたシソ抽出物のＰＰＡＲαリガンド活性を表６に示す。
【００４６】
【表６】
2007246471.tif 000007
陽性対照には既知のＰＰＡＲαリガンド剤であるフェノフィブラートを用いた。表７から明らかなように、実施例１で得られたシソ抽出物は有意なＰＰＡＲαリガンド活性を示した。
【００４７】
＜カプセルの調整＞
（実施例６）
実施例１で調製したシソ抽出物を４０重量部、カルボキシメチルセルロース・ナトリウムを３０重量部、結晶セルロースを２０重量部、ビタミンCを１０重量部の組成で混合、粉砕し、ゼラチン製カプセル（サイズ：０２号、カプスゲル・ジャパン株式会社）に充填して、抽出物を４０重量％含有する飲食用カプセル剤を調製した。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明によれば、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、又は、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができる血中中性脂肪上昇抑制作用剤およびその製造方法を得ることができる。
【００４９】
本発明の血中中性脂肪上昇抑制剤は、優れた血中中性脂肪上昇抑制作用を有しており、高脂血症とりわけ高中性脂肪血症の予防及び／又は改善・処置に有効である。