(57)【要約】【課題】  検体核酸鎖とプローブ核酸鎖から形成された二重鎖に特異的に結合する電気化学的活性分子の添加、あるいはプローブ核酸鎖への電気化学活性分子の修飾、さらに検体核酸鎖と結合したプローブ核酸鎖と、結合していないプローブ核酸鎖を、測定前に分離するいわゆるB/F分離過程を必要としない新たなミスマッチ塩基対の検出手段を提供する。【解決手段】  担体に固定されている一の単鎖核酸分子とそれと結合する他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子を、検出対象とする核酸分子と共存させ、その後、当該一の単鎖核酸分子から解離する当該他の単鎖核酸分子の量又は一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子の残存量を測定することを特徴とする当該他の単鎖核酸分子と当該検出対象とする核酸分子との間のミスマッチ塩基対を検出する方法。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
担体に固定されている一の単鎖核酸分子とそれと結合する他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子を、検出対象とする核酸分子と共存させ、その後、当該一の単鎖核酸分子から解離する当該他の単鎖核酸分子の量又は一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子の残存量を測定することを特徴とする当該他の単鎖核酸分子と当該検出対象とする核酸分子との間のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【請求項２】
他の単鎖核酸分子が、一の単鎖核酸分子よりも鎖長の長い核酸分子であることを特徴とする請求項１に記載のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【請求項３】
一の単鎖核酸分子が担体上に配置された電極と結合しており、二重鎖核酸分子に電気化学活性を有するインタカレーターが導入されており、一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子の残存量を当該電極表面上に存在する当該電気化学活性を有するインタカレーターの量に基づいて測定することを特徴とする請求項１又は２に記載のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【請求項４】
電極表面上に存在する電気化学活性を有するインターカレーターの量を、電極に電位を与え、発生する電流値に基づいて測定することを特徴とする請求項３に記載のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【請求項５】
電気化学活性を有するインターカレーターが、キノン類、メタロセン類、ポルフィリン類、又は金属錯体類であることを特徴とする請求項３又は４に記載のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【請求項６】
一の単鎖核酸分子とそれと結合する他の単鎖核酸分子とからなる二重鎖核酸分子と、当該一の単鎖核酸分子が固定されている担体とを有することを特徴とする核酸チップ。
【請求項７】
他の単鎖核酸分子が、一の単鎖核酸分子よりも鎖長の長い核酸分子であることを特徴とする請求項６に記載の核酸チップ。
【請求項８】
一の単鎖核酸分子が担体上に配置された電極と結合しており、二重鎖核酸分子に電気化学活性を有するインタカレーターが導入されていることを特徴とする請求項６又は７に記載の核酸チップ。
【請求項９】
電気化学活性を有するインターカレーターが、キノン類、メタロセン類、ポルフィリン類、又は金属錯体類であることを特徴とする請求項８に記載の核酸チップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品や検査薬、診断薬等の分野において利用し得る、DNAやRNAなどの核酸の配列情報を解析するための方法に関する。より詳しくは、疾病や病変の原因を突き止め、その修復処置を講じるための、例えば、検体核酸の一塩基変異、一塩基挿入、一塩基欠損等の微少の核酸配列の違いを検出するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、ヒトゲノムプロジェクトを代表とする研究の遂行により、多数の遺伝子の塩基配列情報が明らかにされてきた。なかでも将来可能とされているテーラーメイド医療（患者の体質に応じて薬を使い分ける医療）と関連して、ゲノムレベルでの個体差の代表である一塩基多型（SNPｓ）の解読とその応用が注目されている。ヒトゲノムDNAの一塩基変異配列を効率よく識別・検出する手法の開拓は、疾患の診断・治療のみならず、望みのテーラーメイド医療の実現に向けて極めて重要な研究課題である。
【０００３】
プローブとなる核酸鎖を表面に修飾した電極を作製し、検体核酸鎖とのハイブリダイゼーション過程を利用して、検体核酸鎖とプローブ核酸鎖間のミスマッチ塩基対を検出する手法は従来から知られている（非特許文献１、非特許文献２）。しかしながら、それらの方法は、検体核酸鎖とプローブ核酸鎖により形成された二重鎖に特異的に結合する電気化学的活性分子の添加が必要であるか、あるいはプローブ核酸鎖への電気化学活性分子の修飾が必要とされ、さらに検体核酸鎖と結合したプローブ核酸鎖と、結合していないプローブ核酸鎖を、測定前に分離するいわゆるB/F分離過程が必要とされた。そのためプローブの合成や測定過程が複雑化されるか、あるいは特殊な装置の利用が不可欠であるという欠点があった。
【０００４】
【非特許文献１】E. M. Boon, D. M. Ceres, T. G. Drummond, M. G. Hill, and J. K. Barton, Nat. Biotechnol., 2000, 18, 1096.
【非特許文献２】S. Takenaka, K. Yamashita, M. Takagi, Y. Uto, H. Kondo, Anal. Chem. 2000, 72, 1334-1341.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、検体核酸鎖とプローブ核酸鎖から形成された二重鎖に特異的に結合する電気化学的活性分子の添加、あるいはプローブ核酸鎖への電気化学活性分子の修飾、さらに検体核酸鎖と結合したプローブ核酸鎖と、結合していないプローブ核酸鎖を、測定前に分離するいわゆるB/F分離過程を必要としない新たなミスマッチ塩基対の検出手段を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、二重鎖核酸分子と単鎖核酸分子間の鎖交換反応において、単鎖核酸分子が二重鎖核酸分子の完全相補鎖である場合とミスマッチ鎖である場合とで鎖交換反応の速度に差があることに着目し、この鎖交換反応速度の差を利用することにより、簡易かつ高精度に検体核酸鎖とプローブ核酸鎖間のミスマッチ塩基対を検出できることを見出し、この知見に基づき本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、以下の（１）〜（９）を提供するものである。
【０００７】
（１）担体に固定されている一の単鎖核酸分子とそれと結合する他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子を、検出対象とする核酸分子と共存させ、その後、当該一の単鎖核酸分子から解離する当該他の単鎖核酸分子の量又は一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子の残存量を測定することを特徴とする当該他の単鎖核酸分子と当該検出対象とする核酸分子との間のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【０００８】
（２）他の単鎖核酸分子が、一の単鎖核酸分子よりも鎖長の長い核酸分子であることを特徴とする（１）に記載のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【０００９】
（３）一の単鎖核酸分子が担体上に配置された電極と結合しており、二重鎖核酸分子に電気化学活性を有するインタカレーターが導入されており、一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子の残存量を当該電極表面上に存在する当該電気化学活性を有するインタカレーターの量に基づいて測定することを特徴とする（１）又は（２）に記載のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【００１０】
（４）電極表面上に存在する電気化学活性を有するインターカレーターの量を、電極に電位を与え、発生する電流値に基づいて測定することを特徴とする（３）に記載のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【００１１】
（５）電気化学活性を有するインターカレーターが、キノン類、メタロセン類、ポルフィリン類、又は金属錯体類であることを特徴とする（３）又は（４）に記載のミスマッチ塩基対を検出する方法。
【００１２】
（６）一の単鎖核酸分子とそれと結合する他の単鎖核酸分子とからなる二重鎖核酸分子と、当該一の単鎖核酸分子が固定されている担体とを有することを特徴とする核酸チップ。
【００１３】
（７）他の単鎖核酸分子が、一の単鎖核酸分子よりも鎖長の長い核酸分子であることを特徴とする（６）に記載の核酸チップ。
【００１４】
（８）一の単鎖核酸分子が担体上に配置された電極と結合しており、二重鎖核酸分子に電気化学活性を有するインタカレーターが導入されていることを特徴とする（６）又は（７）（９）電気化学活性を有するインターカレーターが、キノン類、メタロセン類、ポルフィリン類、又は金属錯体類であることを特徴とする（８）に記載の核酸チップ。
【発明の効果】
【００１５】
核酸配列の微細な変化が遺伝子機能に強く影響を及ぼすことが知られている。とりわけ遺伝子内の一塩基多型は、疾病に対する罹患率、医薬作用および副作用の個人差に関連し、この解析がテーラーメイド医療（患者の体質に応じて薬を使い分ける医療）の実現に不可欠である。微細な核酸配列の違いを検出する手法は、これまでにも種々検討されているが、操作が複雑であるなどの欠点を有している。一塩基多型などの微細な遺伝子配列の変化は、その総数が極めて多く、迅速、安価、簡便な検査手法が強く求められている。
【００１６】
電極に固定化されたプローブ二重鎖と検体核酸との鎖交換速度に依存して電気化学応答が変化する本発明の検出方法によれば、検体核酸の一塩基変異、一塩基挿入、一塩基欠損等の微少の核酸配列の違いを容易に検出することができ、また核酸配列を厳密にかつ迅速、簡便に精査できる。このことは、単なる疾患の診断・予防・治療のみならず、テーラーメイド医療の実現に向けて、極めて重要且つ意義のあることである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のミスマッチ塩基対を検出する方法は、担体に固定されている一の単鎖核酸分子とそれと結合する他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子を、検出対象とする核酸分子と共存させ、その後、当該一の単鎖核酸分子から解離する当該他の単鎖核酸分子の量又は一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子の残存量を測定することを特徴とするものである。
【００１８】
最初に本発明のミスマッチ塩基対の検出方法の原理を説明する。担体に固定されている一の単鎖核酸分子とそれと結合する他の単鎖核酸分子とからなる二重鎖核酸分子を、検出対象とする核酸分子と共存させると、他の単鎖核酸分子と検出対象とする核酸分子の間に一定の相補性がある場合には、二重鎖核酸分子と検出対象とする核酸分子との間に鎖交換反応が起こる。鎖交換反応は、検出対象とする核酸分子が他の単鎖核酸分子の完全相補鎖である場合の方が、ミスマッチ鎖である場合よりも早く進行することが知られている。従って、一の単鎖核酸分子から解離する他の単鎖核酸分子の量は、完全相補鎖である場合の方がミスマッチ鎖である場合よりも多くなり、逆に、残存している一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子からなる二重鎖核酸分子の量は、完全相補鎖である場合の方がミスマッチ鎖である場合よりも少なくなる。よって、他の単鎖核酸分子の解離量又は二重鎖核酸分子の残存量を測定することにより、検出対象とする核酸分子が他の単鎖核酸分子の完全相補鎖であったか、ミスマッチ鎖であったかがわかる。
【００１９】
本発明において「核酸分子」とは、主としてDNAを意味するが、RNAや核酸類似分子（例えば、ペプチド核酸、LNA、モルフォリノヌクレオチドなど）なども含む。
一の単鎖核酸分子の鎖長は特に限定されないが、核酸チップに利用する場合は10〜50塩基であることが好ましく、10〜30塩基であることが好ましい。
他の単鎖核酸分子の鎖長も特に限定されないが、核酸チップに利用する場合は10〜50塩基であることが好ましく、10〜30塩基であることが好ましい。
【００２０】
一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子は同じ鎖長であってもよいが、他の単鎖核酸分子が一の単鎖核酸分子よりも鎖長の長いものであることが好ましい。また、このように一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子の鎖長が異なる場合、これらによって形成される核酸分子は、単鎖部分と二重鎖部分とを持つ部分二重鎖構造をとるが、検出しようとするミスマッチ塩基対が単鎖部分に対応するようにすることが好ましい。このように部分二重鎖構造の単鎖部分にミスマッチ塩基対が対応するようにすることにより、完全相補鎖の鎖交換速度とミスマッチ鎖の鎖交換速度の差がより大きくなり（国際公開第2005/012571号パンフレット）、高い精度でミスマッチ塩基対を検出することが可能になる。部分二重鎖構造における単鎖部分の長さは特に限定されないが、3 〜20塩基であることが好ましく、3 〜10塩基であることが好ましい。
【００２１】
検出対象とする核酸分子は特に限定されないが、本発明の核酸分子は１塩基変異の識別に有効なので、１塩基変異を含む遺伝子などを検出対象とするのが好ましい。
二重鎖核酸分子と検出対象とする核酸分子を共存させる方法は両核酸分子間の鎖交換反応が起こり得る方法であれば特に限定されない。
【００２２】
担体としては、一の単鎖核酸分子を固定できるものであれば特に限定されず、例えば、核酸チップなどに用いられている一般的な基板などを使用することができる。
他の単鎖核酸分子の解離量や二重鎖核酸分子の残存量を測定する方法は特に限定されない。
【００２３】
二重鎖核酸分子の残存量を測定する場合は、一の単鎖核酸分子を担体上に配置された電極と結合させ、二重鎖核酸分子に電気化学活性を有するインターカレーターを導入し、当該電極表面上に存在する当該電気化学活性を有するインターカレーターに基づいて二重鎖核酸分子の残存量を測定することが好ましい。このように電気化学的に二重鎖核酸分子の残存量を測定する方法の原理を図１を用いて説明する。電極と結合している一の単鎖核酸分子とそれと結合する他の単鎖核酸分子とからなる二重鎖核酸分子を、検出対象とする核酸分子と共存させると、鎖交換反応が起こる。この鎖交換反応により、他の単鎖核酸分子は一の単鎖核酸分子から解離し、検出対象とする核酸分子と新たな二重鎖核酸分子を形成する。このとき、インターカレーターは、他の単鎖核酸分子とともに電極表面上から遊離し、新たに形成される二重鎖核酸分子へと移行する。従って、電極表面上に残存するインターカレーターの量は、電極表面上に残存する一の単鎖核酸分子と他の単鎖核酸分子とからなる二重鎖核酸分子の量と対応する。よって、電極表面上に残存するインターカレーターの量に基づいて二重鎖核酸分子の残存量を測定することが可能である。
【００２４】
この方法において、一の単鎖核酸分子を結合させる電極としては、金電極が好ましいが、これ以外のものであってもよい。金電極以外の電極としては、グラファイト、グラシーカーボン等の炭素電極、白金、パラジウム、ロジウム等の貴金属電極、酸化チタン、酸化スズ、酸化マンガン、酸化鉛等の酸化物電極、Ｓｉ、Ｇｅ、ＺｎＯ、ＣｄＳ等の半導体電極などを例示できる。
【００２５】
電極表面への一の単鎖核酸分子の結合法は特に限定されず、共有結合を利用した結合方法などを例示できる。共有結合を利用した結合方法としては、例えば、一の単鎖核酸分子の末端をチオール基やジスルフィド基を含む化合物で修飾しておき、活性化した金電極などの表面にチオール結合やジスルフィド結合させる方法が挙げられる。このような結合の際、一の単鎖核酸分子と電極表面の活性基との間に適当な大きさのスペーサー分子を介在させてもよい。
【００２６】
二重鎖核酸分子に導入する電気化学活性を有するインターカレーターは特に限定されず、例えば、＋１．０〜−１．０Ｖ程度の酸化還元電位を有する物質であって、塩基配列の中に比較的安定にインターカレートできる平面構造をとる物質を使用することができる。このような物質としては、アントラキノンなどのキノン類、フェロセンなどのメタロセン類、リボフラビンなどのフラビン類、ポルフィリン類、金属錯体類などを例示できる。本発明に使用する好ましい電気化学活性を有するインターカレーターとしては、下記式（Ｉ）で表されるアントラキノン誘導体を例示できる。
【００２７】
【化１】
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インターカレーターの量の測定は、電気化学的手法によって行うことができる。電気化学活性を有するインターカレーターが電極表面上に存在する場合（即ち、二重鎖核酸分子に導入されている場合）、電極に電位を与えると電流が生じる。この電流値は、インターカレーターが電極表面上から遊離することにより減少するので、この電流の減少値からインターカレーターの残存量を推定することが可能である。電位に応答する電流値の測定は、例えば、パルスボルタンメトリーなどによって行うことができる。
【００２８】
他の単鎖核酸分子の解離量や二重鎖核酸分子の残存量の測定は、以上のような方法以外にも、蛍光物質などを用いて行うことも可能である。例えば、一の単鎖核酸分子をドナー蛍光色素（例えば、フルオレスセインイソチオシアネートなど）で標識し、他の単鎖核酸分子をアクセプター蛍光色素（例えば、テトラメチルローダミン、ダブシルなど）で標識しておけば、鎖交換反応に伴い他の単鎖核酸分子が一の単鎖核酸分子から解離することによって蛍光が生じるので、蛍光強度に基づいて他の単鎖核酸分子の解離量や二重鎖核酸分子の残存量を測定できる。
【実施例】
【００２９】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら限定されるものではない。
【００３０】
〔実施例１〕  DNAオリゴマーの合成
下記の表１に示すDNAオリゴマーの合成を、ABI社製のDNA自動合成機を用いて1.0μmolスケールで行った。表中のProbe 1は、3’-末端にアルキルリンカーを介してジスルフィド基を有し、Probe 2と７塩基のダングリングエンドをもつ部分二重鎖を形成する。DNAオリゴマーの3’-末端へのジスルフィドユニットの導入は、市販のCPG担体を用いることにより行った。また、ジスルフィドユニットを持たないProbe 1配列をControlとした。Probe 2の塩基配列は検体核酸鎖であるODN 1と相補的であり、ODN 2はODN 1の一塩基変異体である。
【００３１】
合成したDNAオリゴマーは、28 ％アンモニア水中55 ℃で１１時間処理することにより塩基部の脱保護を行った。その後、すべてのDNAオリゴマーは逆相高速液体クロマトグラフィー [カラム：逆相コスモシール5C18AR300（4.6×150 mm2）、溶出液：A：5 ％ CH3CN in 50 mMトリエチルアンモニウム−酢酸緩衝液（TEAA、pH = 7.0）及びB：50 ％ CH3CN in 50 mM TEAA（pH = 7.0）、グラジエントは６０分で0 ％Bから100 ％Bのグラジエントをかけて流速：1.0 mL / minで行った] を用いて精製した。DNAオリゴマーの5’-末端の脱トリチル化は80 ％酢酸水溶液中で常温で１時間静置することにより行った。各DNAオリゴマーのシークエンスを表１に示す。
【００３２】
【表１】
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〔実施例２〕  DNA二重鎖の熱安定性の比較
Probe 2に対して形成されるControl, ODN 1, ODN 2との二重鎖に関して、260 nmにおける温度に対する吸光度を測定し、それぞれの半解離温度を求めた。表２にそれぞれの半解離温度を示す。
【００３３】
【表２】
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表２から明らかなように、Probe 2とODN 1またはODN 2と形成した二重鎖（鎖交換後の二重鎖に相当する）の半解離温度は、より鎖長の短いControlと形成した二重鎖（電極上の二重鎖に相当する）と比較して10 ℃以上高く、より安定な二重鎖を形成していることが観察された。このことはDNA修飾電極上において検出対象となるDNAとの鎖交換反応が優位に進行することを示唆する。またProbe 2とODN 2により形成された二重鎖の半解離温度は一塩基ミスマッチの存在によりODN 1と形成された二重鎖よりもおよそ4 ℃不安定化した。完全相補鎖とミスマッチ鎖におけるこのようなDNA二重鎖の安定性の差は鎖交換効率の差をもたらすと考えられる。以上のことから、合成した一連のDNAシーケンスは二重鎖の安定性の観点から目的とする鎖交換反応に適するものと思われる。
【００３４】
〔実施例３〕  DNA修飾電極の作製と表面物性の評価
（１）DNA修飾金電極の作製
金電極としては、スライドガラス上に金を蒸着した電極（φ= 8 mm、蒸着膜の厚み：Cr 300 Å + Au 1 μm）を用いた。金電極へのDNAの固定は、アニーリング処理（試料を80 ℃に昇温し、室温まで徐冷）を行った二重鎖DNA溶液（0.1 mM 二重鎖DNA（Probe 1 + Probe 2）を含むリン酸緩衝液）を、ピランハ溶液（30% H2O2 : H2SO4 = 1 : 3）で洗浄（15分×2回）した金電極表面に添加したのち12 時間静置することにより行った。またDNA修飾金電極のマスキング処理は2.5 mM メルカプトプロパノールを含むリン酸緩衝液を電極上に添加したのち2 時間静置することにより行った。
【００３５】
（２）DNA表面密度の定量
修飾電極における表面DNA密度の定量は、Tarlovらによって〔Anal. Chem., 1998, 70, 4670-4677.〕に報告された方法により行った。DNA修飾電極について10 mM Tris緩衝液( pH = 7.4 )中で初期電位+100 mVから-400 mVへ電位ステップを行い、時間の平方根に対する電荷量としてプロットしたクロノクーログラムを得た。このクロノクーログラムにおける直線領域の接線のｙ切片は、この修飾電極の電気二重層の充電に用いられる電荷量に相当する。また50 μM Ru(NH3)63+ を含む10 mM Tris緩衝液( pH = 7.4 )中で同様の測定を行って得たクロノクーログラムの直線領域の接線におけるｙ切片は電気二重層の充電と電極上のDNAに結合したRu(NH3)63+ の還元に要した電荷量の和に相当する。この値からすでに得られた電気二重層の電荷を差し引いてRu(NH3)63+ の還元に用いられた電荷量を求めた。この電荷量より概算されたRu(NH3)63+ の表面密度Γ0から、以下の関係式によりDNAの表面密度ΓDNAを概算した。
【００３６】
ΓDNA =Γ0 ( z / m )
ここでzはレドックス分子の電荷数、mは単位となるオリゴヌクレオチドあたりのリン酸基の数である。
測定の結果、DNA二重鎖の表面密度は3.87×10-12 (mol/cm2) と概算された。作製したすべての修飾電極についてpmol/cm2オーダーの表面修飾密度が得られ、一般に報告されているDNA修飾電極と同等の表面修飾密度が一定して得られていることが確認された。
【００３７】
（３）インターカレーターの添加
電気化学活性とインターカレーターの両性質を合わせ持つ化合物としては、Schusterらによって〔J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 2311.〕に報告されたアントラキノン誘導体を用いた。アントラキノン誘導体の化学構造を以下に示す。
【００３８】
【化２】
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電極に固定化したDNA二重鎖中へのインターカレーターの導入は、DNA修飾電極上に50 μM のインターカレーター を含むリン酸緩衝液を加え2 時間静置することにより行った。
【００３９】
〔実施例４〕  DNA鎖交換反応に関する実験
鎖交換反応に伴う電気化学応答の変化を下記の操作手順により測定した。
DNA鎖交換反応は、DNA二重鎖修飾電極を0.1 mM ODN 1 （または ODN 2）を含むリン酸緩衝液中に浸漬して行った。電気化学測定には微分パルスボルタンメトリー（DPV）を用い、鎖交換反応開始から一定の時間ごとに鎖交換反応溶液中で直接測定を行った。
【００４０】
鎖交換時間に対するDPV電流値の減少を相対的な鎖交換率に換算したプロットを図２に示した。鎖交換反応の開始後3 時間において、完全相補鎖ODN 1との鎖交換率を１とした場合、一塩基ミスマッチ鎖ODN 2での鎖交換率は0.4に留まり、半解離温度から予想されたように、完全相補鎖での鎖交換反応がミスマッチ鎖での鎖交換反応よりも効率的に進行していることが観察された。
【００４１】
これらの事実から、結論として言えることは、
（１）一塩基のミスマッチをもつDNAは、完全相補鎖より鎖交換反応が遅いため、電気化学応答の変化が少ない。
（２）鎖交換反応がDNA二重鎖の熱安定性に依存することから、シークエンスの設定によってさらなる識別能の向上が期待できる。
等々である。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】電気化学的にミスマッチ塩基対を検出する方法の概念図。
【図２】完全相補鎖又はミスマッチ鎖を用いた場合の相対鎖交換率の経時的変化を示す図。
【図２】
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【図１】
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【配列表】
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