(57)【要約】【課題】  中枢神経系プロスタサイクリン受容体のプローブ等として有用な、イソカルバサイクリン誘導体の3Ｈ標識化合物からなる新規標識剤を提供する。【解決手段】  次式【化１】2007302694.tif 000046（Ｒ1は水素原子、アルキル基または１当量のカチオンを示し、Ｒ2はアルキレン基、Ｒ3はメチル基を示す）で表わされるイソカルバサイクリン誘導体が3Ｈ標識されているものとする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式〔Ｉ〕〔式中、Ｒ1は水素原子、アルキル基または１当量のカチオンを示し、Ｒ2はアルキレン基を示し、Ｒ3はメチル基を示す。〕で表されるイソカルバサイクリン誘導体が3Ｈ標識されている、中枢神経系プロスタサイクリン受容体のプローブ用のイソカルバサイクリン誘導体標識剤。
【化１】
2007302694.tif 000045
【請求項２】
式〔Ｉ〕においてＲ1が水素原子または炭素数１〜５の低級アルキル基である請求項１のイソカルバサイクリン誘導体標識剤。
【請求項３】
Ｒ1がメチル基である請求項２のイソカルバサイクリン誘導体標識剤。
【請求項４】
Ｒ1が水素原子である請求項２のイソカルバサイクリン誘導体標識剤。
【請求項５】
式〔Ｉ〕においてＲ2が−（ＣＨ2）n−（ｎは１〜４の数を示す）で表されるアルキレン基である請求項１から４のいずれかのイソカルバサイクリン誘導体標識剤。
【請求項６】
ｎが１である請求項５のイソカルバサイクリン誘導体標識剤。
【請求項７】
Ｒ3がＲ2に対してメタ位に結合したメチル基であり、式〔Ｉ〕のベンゼン環上のアジド基がもう一方のメタ位に結合している請求項１から６のいずれかのイソカルバサイクリン誘導体標識剤。
【請求項８】
式〔Ｉ〕の１５位の水酸基の立体配置がＲ配置である請求項１から７のいずれかのイソカルバサイクリン誘導体標識剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、イソカルバサイクリン誘導体標識剤に関するものである。
さらに詳しくは、この発明は、脳内におけるプロスタサイクリン受容体の機能探索、特に単離されていない新たな中枢型プロスタサイクリン受容体のフォトアフィニティーラベル化のプローブとしての役割や、中枢神経系におけるプロスタサイクリン誘導体の適応領域の特定等において有用な、同位体元素によって標識したイソカルバサイクリン誘導体標識剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来より、プロスタグランジン類は、強い血小板凝集抑制作用、血管拡張性血圧降下作用、胃酸分泌抑制作用、平滑筋収縮作用、細胞保護作用、利尿作用等多彩な生理活性を有しており、心筋梗塞、狭心症、動脈硬化、高血圧症、十二指腸潰瘍、分娩誘発、中絶等の治療または予防に有用な化合物であることが知られて
いる。
【０００３】
ところで天然プロスタサイクリンは、生体内において、主として血管内皮で産生される局所ホルモンであり、その強力な生理活性、例えば血小板凝集抑制作用、血管拡張作用等を利用して、このものを直接医薬品として供する試みが行われてきた（P.J.Lewis, J.O.Grady, Clinical Pharmacology of Prosutaglangin)。しかしながら、天然プロスタサイクリンは分子内に加水分解されやすいエノールエーテル結合を有するために、中性または酸性条件下で容易に失活してしまうという問題がある。従って、医薬品としてはその化学的不安定性のために好ましい化合物とは云えない。このために天然プロスタサイクリンと同様の活性を示し、化学的に安定なプロスタサイクリン誘導体の合成研究が鋭意行われてきた(Synthesis, １９８４，４４９）。その課程において、プロスタサイクリンの６，９位の酸素原子をメチレン基（−ＣＨ＝）に置き換えることにより、化学的安定性を充分に満足するプロスタサイクリンである９（Ｏ）−メタノ−Δ6(9α)−プロスタグラジンＩ1類（イソカルバサイクリン類）が合成された（特開昭５９−２１００４４号参照）。
【０００４】
このようにプロスタサイクリン誘導体の合成研究が進むなかで、プロスタサイクリンの受容体に関する研究も精力的に行われてきた。プロスタサイクリンの受容体はその生理活性から主に血管や血小板などに存在し、循環器作用の調節に重要な役割を担っているものとされてきた。
【０００５】
一方脳に関しては、ＰＧＤ2，ＰＧＥ2、ＰＧＦ2α以外にもＰＧＩ2やＴＸＡ2の存在が知られていた。しかしながらこの両者は、脳神経系における作用とともに、脳実質細胞で産生されるか否かもあまり明らかで無く、脳内の血管や血小板に由来するものと考えられてきた。これに対し、１９８５年、Kellerら（Neurochem Int ７：６５５−６６５，１９８５）により、一次培養細胞アストログリア細胞が上記３者のＰＧ以外にＰＧＩ2やＴＸＡ2の代謝物を多く産生することが明らかとなった。また、渡辺ら（Neurosci. Res.１６，(Suppl) Ｓ２１，１９９１）は、ラベル化されたプロスタサイクリン誘導体（〔3Ｈ〕iloprost-Schering)を用いたニホンザル脳半球の大冠状切片でのin vitroオートラジオグラフィー評価を行った結果、プロスタサイクリン結合部位を線条体、扁桃核、海馬、大脳皮質の一部に見いだした。またここで見いだされた〔3Ｈ〕iloprostの結合部位は〔3Ｈ〕ＰＧＥ2の結合部位とは局在が異なり、また、ＰＧＥ2とＰＧＥ1が同一の受容体を認識することが明らかになっている。血小板では、iloprostの結合部位はＰＧＥ1とも反応し、ＰＧＥ2の受容体とは全く異なることが知られている。以上の経緯からも、中枢神経系での新たなＰＧＩ2受容体の存在がクローズアップされている。さらに、iloprostの神経系の作用としては、ドーパミンＤ1受容体結合阻害、鎮静、抗けいれん、抗低酸素（低酸素での延命効果）やアンフェタミンで拮抗される脳波の同期化誘導作用などが知られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
たとえば以上のように、従来は、プロスタサイクリン誘導体についての検討の目的は、その強力な生理活性、例えば血小板凝集抑制作用、血管拡張作用等を利用した循環器領域に対する医薬品の開発が主たるものであった。しかしながらこのような作用はこれら化合物を中枢神経系に適用しようとした場合には副作用となるという問題があった。そこでこの発明の発明者らは上述した諸点に着目し、脳内のプロスタサイクリン受容体についての検討を課題とし、まずなによりも、その受容体に対するプローブ、その受容体取得のためのフォトアフィニティーラベル用化合物、あるいは中枢神経系医薬品として有用な９（Ｏ）−メタノ−Δ6(9α)−プロスタグランジンＩ1 類（イソカルバサイクリン類）に着目してきた。
【０００７】
すなわち、この発明は、以上の通りの事情からなされたものであって、従来の技術知識の限界を越えて、脳内におけるプロスタサイクリン受容体の機能探索研究に有用なばかりでなく、中枢神経系におけるプロスタサイクリン誘導体の適用領域特定に関しても有用な、イソカルバサイクリン誘導体標識剤を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この発明は、上記課題を解決する目的のために
下記式〔Ｉ〕
【０００９】
【化１】
2007302694.tif 000002
【００１０】
〔式中のＲ1は、水素原子、アルキル基または１当量のカチオンを示し、Ｒ2はアルキレン基を示し、Ｒ3はメチル基を示す。〕
で表わされるイソカルバサイクリン誘導体が3Ｈ標識されているイソカルバサイクリン誘導体標識剤を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
以上詳しく説明したとおり、この発明により、脳内、特に中枢組織で産生されるプロスタサイクリン受容体の探索研究（特に、構造未知の中枢型プロスタサイクリン受容体のフォトアフィニティーラベル化による取得）や、中枢神経系の疾患の治療薬の開発として有用なイソカルバサイクリン誘導体標識剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
この発明は、上記のとおりの式〔Ｉ〕で表わされる新規なイソカルバサイクリン誘導体標識剤とその製造法を提供するものであるが、以下に詳しく発明の実施の形態について説明する。
化合物の構造
上記式〔Ｉ〕において、Ｒ1は水素原子、直鎖状あるいは分岐状のアルキル基または１当量のカチオンを示すものであるが、このうちアルキル基としては炭素数１〜５の低級アルキル基がより具体的に例示され、たとえば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル基，ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基，ｎ−ペンチル基等を挙げることができる。なかでも炭素数１〜２のアルキル基が好ましい。１当量のカチオンとしては、例えば、Ｎａ+、Ｋ+、などのアルカリ金属カチオン；１／２Ｃａ2+、１／２Ｍｇ2+、１／３Ａｌ3+などの２価もしくは３価の金属カチオン；アンモニウムイオン、テトラメチルアンモニウムイオンなどのアンモニウムイオンが挙げられる。そして、このＲ1 としては、特に、水素原子、メチル基が好ましいものとして挙げることができる。
【００１３】
また上記〔Ｉ〕におけるＲ2のアルキレン基としては、直鎖状あるいは分岐状のアルキレン基、たとえば−（ＣＨ2）n−（ｎは１〜４の数を表す）で表されるものを例示することができ、このうち、好ましくはｎが１である。
【００１４】
また、上記式〔Ｉ〕において、オメガ鎖上のトリル基上のＲ3はメチル基を示すが、その置換位置はメタ位が好ましく、アジド基の置換位置はもう一方のメタ位が好ましい。
【００１５】
さらに、上記式〔Ｉ〕で表されるイソカルバサイクリン類の８位、９位、１１位、１２位、１５位の立体配置は天然プロスタサイクリンと同一である。また１５位はＲ体、Ｓ体いずれの立体配置でもかまわないが、特に、Ｒ体が好ましく、この立体配置を有するものが特に有用な異性体である。ただし、この発明に関わるイソカルバサイクリン誘導体は、こうした立体配置であるもの、またはその鏡像体、あるいはそれらの不斉炭素に由来するすべての異性体を含むものである。
【００１６】
この発明においてイソカルバサイクリン誘導体の好ましい具体例を挙げれば、次のとおりである。
【００１７】
（１）１６−（３−アジド−５−メチル）−１７，１８，１９，２０−テトラノル−９（Ｏ）−メタノ−Δ6(9α)−プロスタグランジンＩ1
（２）１６−（３−アジド）−１７，１８，１９，２０−テトラノル−９（Ｏ）−メタノ−Δ6(9α)−プロスタグランジンＩ1
（３）１７−（３−アジド−５−メチル））−１８，１９，２０−テトラノル−９（Ｏ）−メタノ−Δ6(9α)−プロスタグランジンＩ1
（４）（１）〜（３）のメチルエステル
（５）（１）〜（３）の１５Ｒ体
もちろん、この発明は、これらに限定されるものではない。
製造法
そして、上記式〔Ｉ〕で表されるこの発明のイソカルバサイクリン誘導体は次のようにして製造される。
【００１８】
すなわち、下記式〔II〕
【００１９】
【化２】
2007302694.tif 000003
【００２０】
〔式中、Ｒ2はアルキレン基を示し、Ｒ3はメチル基を示す〕で表されるHorner-Emmons試薬と下記式〔III〕
【００２１】
【化３】
2007302694.tif 000004
【００２２】
〔式中、Ｒ4は炭素数１〜５の低級アルキル基を示し、Ｒ5は水素原子またはテトラヒドロピラニル基を示す。〕
で表される化合物を塩基の存在下に反応させ、必要に応じて水酸基の保護基を脱保護し、下記式〔IV〕
【００２３】
【化４】
2007302694.tif 000005
【００２４】
〔式中、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は上記定義に同じである。〕
で表される化合物に変換し、ついで還元反応、さらに必要に応じた加水分解反応に付すことを特徴とする下記式〔Ｉ〕
【００２５】
【化５】
2007302694.tif 000006
【００２６】
〔式中、Ｒ1は水素原子、アルキル基または１当量のカチオンを示し、Ｒ2はアルキレン基を示し、Ｒ3はメチル基を示す。〕
で表されるイソカルバサイクリン誘導体を製造する。
【００２７】
上記式〔II〕の化合物と上記〔III〕の化合物との反応については、〔II〕で表されるホスホネート化合物を、塩基、例えばＮａＨ，ＮａＮＨ2，ＬｉＮ（ｉＰｒ）2，ＣＨ3ＯＮａなどで処理した後、〔III〕で表されるアルデヒド化合物と反応せしめるいわゆるHorner-Emmons反応（新実験化学講座  １４，ｐ．２３８；丸善）を行うことにより可能とされる。この際用いられる反応溶媒としては、例えばベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジグライム、ジメトキシエタン（ＤＭＥ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などが用いられる。
【００２８】
ホスホネート化合物〔II〕に対しては、塩基は０．１〜１０倍当量、好ましくは０．９〜１．４倍当量、アルデヒド化合物〔III〕は０．１〜１０倍当量、好ましくは０．９〜１．４倍当量用いればよい。反応温度は０℃〜１５０℃の範囲で行われ、好ましくは１０℃〜８０℃である。反応時間は化合物により異なるが１０分から２４時間程度である。反応終了後、抽出やカラムクロマトグラフィー等の通常の処理によって前記化合物〔IV〕が得られる。原料となるアルデヒド体〔III〕は、下記反応式Ａに示すように、例えばイソカルバサイクリンメチルエステル（１）のシャープレス(Sharpless)酸化、水酸基のアセチル化、エポキシの開裂、脱アセチル化によりテトラオール体（４）に変換し、このものをＮａＩＯ4による酸化的開裂によってアルデヒド体（５）とすることができる。
【００２９】
【化６】
2007302694.tif 000007
【００３０】
Horner-Emmons反応にはアルデヒド体を直接用いてもよいが、化合物（４）の酸化によって系内に生じたアルデヒド体（５）をそのまま単離せずに用いてもよい。
【００３１】
一方、前記式〔II〕のHorner-Emmons試薬は、相当するエステル化合物より、例えば反応式Ｂに示すルートにて合成することができる。
【００３２】
【化７】
2007302694.tif 000008
【００３３】
【化８】
2007302694.tif 000009
【００３４】
【化９】
2007302694.tif 000010
【００３５】
たとえば以上のようにして原料合成された式〔II〕の化合物と式〔III〕の化合物とのHorner-Emmons反応によって、前記式〔IV〕で表される化合物が得ることができる。この化合物〔IV〕は次いで還元反応に付し、必要に応じて加水分解反応に付すことができる。
【００３６】
還元反応はそれ自体公知の方法で行うことができる。還元反応の試薬としては、金属水素錯化合物が用いられる。かかる金属水素錯化合物は、水素化アルミニウム錯化合物、水素化ホウ素錯化合物が挙げられる。水素化アルミニウム錯化合物としては、水素化アルミニウムリチウム、水素化ジエトキシアルミニウムリチウム、水素化トリ−ｔ−ブトキシアルミニウムリチウム、水素化アルミニウムマグネシウム、水素化アルミニウム塩化マグネシウム、水素化アルミニウムナトリウム、水素化トリエトキシアルミニウムナトリウム、水素化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウム等が挙げられる。水素化ホウ素錯化合物としては、水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリメトキシホウ素ナトリウム、硫化水素化ホウ素ナトリウム、シアン化水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素リチウム、シアン化水素化ホウ素リチウム、水素化トリエチルホウ素リチウム、水素化ホウ素カルシウム、水素化ホウ素カリウム、水素化ホウ素亜鉛、水素化ホウ素テトラメチルアンモニウム等が挙げられる。還元反応の試薬としては、これら金属水素錯化合物のうち、水素化ホウ素錯化合物が好ましく、特に、水素化ホウ素ナトリウムが好ましいものとして例示される。
【００３７】
水素化ホウ素ナトリウムを用いる還元反応は塩化ランタニド類存在下でおこなうのが好ましい。かかる塩化ランタニド類としては三塩化セリウム、三塩化サマリウム、三塩化ユーロピウム等が挙げられ、特に、三塩化セリウムが好ましく用いられる。
【００３８】
還元反応は、上記式〔IV〕で表される合成中間体１当量に対し、金属水素錯化合物が発生しうる水素化物イオンにして１当量から１００当量、好ましくは１〜５０当量の範囲でおこなわれる。水素化ホウ素ナトリウムとともに用いられる塩化ランタニド類は、水素化ホウ素ナトリウム１当量に対して、塩化ランタニド類０．２〜５０当量、好ましくは０．５〜１０当量用いられる。
【００３９】
反応溶媒は、用いる還元反応試薬によって異なるが、通常メタノール、エタノール、２−プロパノール、ｔ−ブチルアルコール等のアルコール類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジオキサン、ジメトキシエタン、ジグライム等のエーテル類；ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ヘキサメチルホスホリックトリアミド等の非プロトン性極性溶媒；水、アセトニトリル等を単一あるいは任意の割合に混合して用いる。好ましくはメタノール、エタノール、２−プロパノール、ｔ−ブチルアルコール等のアルコール類が用いられ、特にメタノールが好ましい。
【００４０】
還元反応の反応温度は、用いる試薬、反応溶媒によって異なるが、好ましくは−１０℃から１００℃、特に好ましくは２０℃〜５０℃の範囲である。還元反応の反応時間は使用する試薬、反応溶媒、反応温度によって異なるが、通常５時間以内の範囲でおこなわれ、好ましくは１分〜１時間の範囲である。
【００４１】
エステル類の加水分解反応は、例えば水酸化ナトリウム、水酸化リチウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムの水溶液もしくは水−アルコール混合溶媒、あるいはナトリウムメトキシド、カリウムメトキシド、カリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドを含むメタノール、エタノール溶液中で加水分解せしめることにより実施することができる。
【００４２】
目的物の単離精製は通常の方法、すなわち、抽出、クロマトグラフィー等の一般的な手段によって行うことができる。
作用
以上、詳しく説明したとおりの製造法によって提供されるこの発明のイソカルバサイクリン誘導体は脳内の視床や線条体のプロスタサイクリン受容体（ここで、中枢神経型という）に強く結合する。また、既に神経結紮実験などで脳外の組織（末梢神経組織）と考えられる結節核(Nodus ganglion)で生産されて延髄孤束核へ軸索輸送されているプロスタサイクリン受容体（ここで末梢神経系という）には、この発明のイソカルバサイクリン誘導体はあまり結合しない。特筆すべきは、天然のイソカルバサイクリンとは１５位の立体が反対の１５Ｒ−１６−（３−アジド−５−メチル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンや１５Ｒ−１６−（３−アジド）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンが脳内の視床のプロスタサイクリン受容体（中枢神経系）に強く結合したことである。従って、本発明によって提供されるイソカルバサイクリン誘導体は、脳内、特に中枢神経組織で産生されるプロスタサイクリン受容体の探索研究に有用であるばかりでなく、中枢神経系の疾患の治療薬として期待できる有用な化合物である。
【００４３】
このような作用の特徴を踏まえ、この発明では、前記の式〔Ｉ〕で表わされるイソカルバサイクリン誘導体について、その任意の位置において、3Ｈ標識されていることを特徴とするイソカルバサイクリン誘導体標識剤をも提供する。
【００４４】
この標識剤によって、脳内、特に中枢神経組織におけるプロスタサイクリン受容体のフォトアフィニティーラベル化のプローブとしての役割が果たされ、また、中枢神経系の疾患の治療への対応が容易となる。
【００４５】
標識化合物そのものは、サイクロトロン等の利用によって製造されることになる。
【実施例】
【００４６】
以下、参考例、本発明の実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、この発明はこれらになんら限定されるものではない。
参考例１
＜１６−（３−アジドフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステルの合成＞
【００４７】
【化１０】
2007302694.tif 000011
【００４８】
１０ｍｌの丸底フラスコに２−オキソ−３−（３−アジドフェニル）プロピルホスホン酸ジメチル（５．３ｍｇ，１９μｍｏｌ）の０．４ｍｌＤＭＥ溶液を調製した。この溶液にＮａＨ（６０％  ｉｎ  ｏｉｌ，０．８ｍｇ，１９μｍｏｌ）を室温で加え、３０分間攪拌し、黄色サスペンジョンを得た。次いで、ここにメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ホルミル−７−ヒドロキシビシクロ〔３．３．０〕−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート（２．４ｍｇ，９．４μｍｏｌ）の０．４ｍｌＤＭＥ溶液を滴下し、１．５時間攪拌した。反応後飽和塩化アンモニウム水溶液（２ｍｌ）と酢酸エチル（１ｍｌ）を反応混合物に加え抽出操作を行った。水層をさらに３回酢酸エチル（１．５ｍｌ×３）で抽出し、あわせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル７００ｍｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）に供し、１６−（３−アジドフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（４．３ｍｇ、９３％）を淡黄色油状物として得た。
【００４９】
【表１】
2007302694.tif 000012
【００５０】
参考例２
＜１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステルおよびその１５位のエピマーの合成＞
【００５１】
【化１１】
2007302694.tif 000013
【００５２】
１０ｍｌのテストチューブに１６−（３−アジドフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（８．１ｍｇ、１９μｍｏｌ）の０．８ｍｌメタノール溶液を調製した。この溶液にＣｅＣｌ3・７Ｈ2Ｏ（９．０ｍｇ，２４μｍｏｌ）を室温で加え、この混合物を０℃に冷却後ＮａＢＨ4（１．２ｍｇ，３２μｍｏｌ）を加え１０分間攪拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍｌ）にあけ、このものを５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１．５ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：２，１：２）に供し、１５−エピ−１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｒ体、低極性、３．９ｍｇ，４８％）および１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｓ体、高極性、４．０ｍｇ，４９％）を無色油状物として得た
。
【００５３】
【表２】
2007302694.tif 000014
【００５４】
参考例３
＜１５−エピ−１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンの合成＞
【００５５】
【化１２】
2007302694.tif 000015
【００５６】
１０ｍｌのテストチューブに１５−エピ−１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１．６ｍｇ，３．８μｍｏｌ）の０．５ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＮａＯＨ水溶液（５Ｎ溶液，０．１ｍｌ，０．５ｍｍｏｌ）を室温で加え１２時間攪拌した。反応混合物を１ｍｌの水で希釈し、ＮａＨＳＯ4を加えてｐＨ４に調整した。得られた混合物を５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出し、あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した後濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル７００ｍｇ，ジクロロメタン：メタノール＝９：１）に供し、１５−エピ−１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリン（１５Ｒ体、１．５ｍｇ，９７％）を淡黄色油状物とした得た。
【００５７】
【表３】
2007302694.tif 000016
【００５８】
同様にして１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１．３ｍｇ，３．０μｍｏｌ）より１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリン（１５Ｓ体、１．２ｍｇ，９５％）を淡黄色油状物とした得た。
【００５９】
【化１３】
2007302694.tif 000017
【００６０】
【表４】
2007302694.tif 000018
【００６１】
参考例４
＜１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステルの合成＞
【００６２】
【化１４】
2007302694.tif 000019
【００６３】
１０ｍｌの丸底フラスコに２−オキソ−３−（３−アジド−５−メチルフェニル）プロピルホスホン酸ジメチル（９．８ｍｇ，３３μｍｏｌ）の０．５ｍｌＤＭＥ溶液を調製した。この溶液にＮａＨ（６０％  ｉｎ  ｏｉｌ，１．３ｍｇ，３３μｍｏｌ）を室温で加え、３０分間攪拌し、黄色サスペンジョンを得た。次いで、ここにメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ホルミル−７−ヒドロキシビシクロ［３．３．０］−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート（３．９ｍｇ，１５μｍｏｌ）の０．５ｍｌＤＭＥ溶液を滴下し、１時間攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（１．５ｍｌ）を加えて反応を終結させ、次いで酢酸エチル（１ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水層をさらに３回酢酸エチル（１．５ｍｌ×３）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグ
ネシウム上で乾燥し、濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル７００ｍｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）に供し、１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（５．７ｍｇ，８５％）を淡黄色油状物として得た。
【００６４】
【表５】
2007302694.tif 000020
【００６５】
参考例５
＜１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステルおよびその１５位のエピマーの合成＞
【００６６】
【化１５】
2007302694.tif 000021
【００６７】
１０ｍｌのテストチューブに１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（４．３ｍｇ，９．８μｍｏｌ）の０．５ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＣｅＣｌ3・７Ｈ2Ｏ（６．７ｍｇ，１８μｍｏｌ）を室温で加え、この混合物を０℃に冷却後ＮａＢＨ4（０．５ｍｇ，１３μｍｏｌ）を加え１０分間攪拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍｌ）にあけ、このものを５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル０．５ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１，１：１）に供し、１５−エピ−１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｒ体、低極性、２．２ｍｇ，５０％）および１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｓ体、高極性、２．２ｍｇ，５０％）淡黄色油状物とした得た。
【００６８】
【表６】
2007302694.tif 000022
【００６９】
参考例６
＜１５−エピ−１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンの合成＞
【００７０】
【化１６】
2007302694.tif 000023
【００７１】
１０ｍｌのテストチューブに１５−エピ−１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（２．０ｍｇ，４．６μｍｏｌ）の０．５ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＮａＯＨ水溶液（５Ｎ溶液，０．１ｍｌ，０．５μｍｏｌ）を室温で加え１８時間攪拌した。反応混合物を１ｍｌの水で希釈し、ＮａＨＳＯ4を加えてｐＨ４に調整した。得られた混合物を５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出し、あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した後濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル５００ｍｇ，ジクロロメタン：メタノール＝９：１）に供し、１５−エピ−１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−
テトラノルイソカルバサイクリン（１５Ｒ体、１．９ｍｇ，９８％）を得た。
【００７２】
【表７】
2007302694.tif 000024
【００７３】
同様にして１６−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１．３ｍｇ，３．０μｍｏｌ）より１６−（３−アジドフェニル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリン（１５Ｓ体、１．２ｍｇ，９５％）を得た。
【００７４】
【化１７】
2007302694.tif 000025
【００７５】
【表８】
2007302694.tif 000026
【００７６】
参考例７
＜１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステルの合成＞
【００７７】
【化１８】
2007302694.tif 000027
【００７８】
１０ｍｌのシュレンクチューブにメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ヒドロキシメチル−７−テトラヒドロピラン−２−イルオキシビシクロ［３．３．０］−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート（２６．２ｍｇ，７４．３μｍｏｌ）の０．８ｍｌＤＭＳＯ溶液を調製した。この溶液にトリエチルアミン（１０４μＬ，０．７４３μｍｏｌ）とＳＯ3・ピリジン（５５．７ｍｇ，０．３７１μｍｏｌ）を常温で加え、混合物を３時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル（１．０ｍｌ）と冷水（１．５ｍｌ）にあけ、有機層を分離し、水層をさらに３回酢酸エチル（１．５ｍｌ×３）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥、濾別し、減圧下有機溶媒を留去しメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ホルミル−７−テトラヒドロピラン−２−イルオキシビシクロ［３．３．０］−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート（２２ｍｇ）を粗生成物として得た。これをアルゴン気下におき、精製せずに次の反応に用いた。
【００７９】
１０ｍｌの丸底フラスコに３−オキソ−４−（３−アジド−５−メチルフェニル）ブチルスルホン酸ジメチル（５９．３ｍｇ，０．２μｍｏｌ）の０．７ｍｌＤＭＥ溶液を調製した。この溶液にＮａＨ（６０％  ｉｎ  ｏｉｌ，８ｍｇ，０．２μｍｏｌ）を室温で加え、１時間攪拌し、黄色サスペンジョンを得た。次いで、ここに先に得られたメチル−５−｛（１Ｓ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｒ）−６−ホルミル−７−テトラヒドロピラン−２−イルオキシビシクロ［３．３．０］−２−オクテン−３−イル｝ペンタノエート粗生成物（２２ｍｇ）の０．７ｍｌＤＭＥ溶液を滴下し、１０時間攪拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（（２ｍｌ）を加えて反応を終結させ、次いで酢酸エチル（１ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水層をさらに３回酢酸エチル（１ｍｌ×３）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）に供し、１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１１−Ｏ−（テトラヒドロピラン−２−イル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（２７．１ｍｇ，８０．６％）を淡黄色油状物として得た。
【００８０】
【表９】
2007302694.tif 000028
【００８１】
１０ｍｌのテストチューブに得られた１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１１−Ｏ−（テトラヒドロピラン−２−イル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１６．６ｍｇ，３０μｍｏｌ）の酢酸：ＴＨＦ：水＝３：２：１（１．２ｍｌ）混合溶媒溶液を調製し、４０℃にて２６時間攪拌した。室温に冷却後、反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍｌ）と酢酸エチル（１ｍｌ）を加えた。有機層を分離し、水層をさらに３回酢酸エチル（１ｍｌ×３）で抽出した。あわせた有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液ついで飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル６００ｍｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１，５：１）に供し、１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１１．３ｍｇ，８０．８％）を淡黄色油状物として得た。
【００８２】
【表１０】
2007302694.tif 000029
【００８３】
参考例８
＜１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステルおよびその１５位のエピマーの合成＞
【００８４】
【化１９】
2007302694.tif 000030
【００８５】
１０ｍｌのテストチューブに１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１５−デヒドロ−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１１．２ｍｇ，２４．８μｍｏｌ）の１．０ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＣｅＣｌ3・７Ｈ2Ｏ（１１．９ｍｇ，２９μｍｏｌ）を室温で加え、この混合物を０℃に冷却後ＮａＢＨ4（１．１ｍｇ，２．９μｍｏｌ）を加え１０分間攪拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液（１ｍｌ）にあけ、このものを５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出した。あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル０．７ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝３：１，２：１，１：２）に供し、１５−エピ−１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｒ体、低極性、５．６ｍｇ，５０％）および１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンメチルエステル（１５Ｓ体、高極性、５．６ｍｇ，５０％）を無色油状物として得た。
【００８６】
【表１１】
2007302694.tif 000031
【００８７】
参考例９
＜１５−エピ−１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリンの合成＞
【００８８】
【化２０】
2007302694.tif 000032
【００８９】
１０ｍｌのテストチューブに１５−エピ−１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリン（５．６ｍｇ，１２μｍｏｌ）の０．７ｍｌのメタノール溶液を調製した。この溶液にＮａＯＨ水溶液（５Ｎ溶液，０．１ｍｌ，０．５μｍｏｌ）を室温で加え１８時間攪拌した。反応混合物を１ｍｌの水で希釈し、ＮａＨＳＯ4を加えてｐＨ４に調整した。得られた混合物を５回酢酸エチル（１ｍｌ×５）で抽出し、あわせた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した後濾別し、減圧下有機溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル５００ｍｇ，ジクロロメタン：メタノール＝９：１）に供し、１５−エピ−１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリン（１５Ｒ体、４．５ｍｇ，８３％）を得た。
【００９０】
【表１２】
2007302694.tif 000033
【００９１】
同様にして１７−（３−アジド−５−メチルフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリン（５．６ｍｇ，１２μｍｏｌ）より１７−（３−アジドフェニル）−１８，１９，２０−トリノルイソカルバサイクリン（１５Ｓ体、４．５ｍｇ，８３％）を得た。
【００９２】
【化２１】
2007302694.tif 000034
【００９３】
【表１３】
2007302694.tif 000035
【００９４】
実施例１
＜3Ｈ標識１６−ｍ−アジドフェニル体および１６−ｍ−アジドトリル体の製造例＞
１６−ｍ−アジドフェニル−イソカルバサイクリン、および１６−ｍ−アジドトリル−イソカルバサイクリンの１５−ケト、α−メチルエステル体をそれぞれ前駆体として、常法により、〔3Ｈ〕ＮａＢＨ4で１５−ケト基の還元反応を行い、１５−ＲＳ−ＯＨ−体の3Ｈ標識混合物を得た。この混合物をＨＰＬＣ（条件１、下記に記載）を用いて、１５Ｒ−体と１５Ｓ−体に分離精製し（図１）、それぞれを分取した。各画分を酢酸エチルで抽出後、合わせた有機溶媒層を減圧下、有機溶媒を除去した。得られた生成物をエタノールに溶解し、約１／５量の５Ｎ  ＮａＯＨを加えて、約４時間加水分解反応を行った。加水分解物は、さらにＨＰＬＣを用いて精製し（条件２、下記に記載）、この精製画分を上記の抽出・乾固法によりエタノール溶液として保存し、実施例２の実験に供した。
ＨＰＬＣ条件１
カラム：コスモシール５Ｃ１８（ナカライテスク社）  ４．６×２５０ｍｍ
移動相：７５％  メタノール
流  速：０．７ｍｌ／ｍｉｎ
ＨＰＬＣ条件２
カラム：条件１と同一
移動相：５５％  アセトニトリル＋０．０２％酢酸
流  速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ
実施例２
＜イソカルバサイクリン誘導体のトリチウムラベル１５Ｓ−（１６−メタ−トリル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンに対するdisplacement実験＞
ラット脳から全身生食灌流により血液成分を除去し、これを凍結して１０μｍ厚の凍結切片を作成した。これを５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ  ｐＨ７．４，２０ｍＭ  ＭｇＣｌ2 液中で１０ｎＭの、１５位にトリチウムが入っているトリチウムラベル１５Ｓ−（１６−メタ−トリル）−１７，１８，１９，２０−テトラノルイソカルバサイクリンおよび種々の濃度のイソカルバサイクリン誘導体とともに４℃で２時間Incubationした。Incubation洗浄後、乾燥を行い、切片のオートラジオグラフィーのフィルムを作成した。このオートラジオグラフィー（ｎ＝４以上）の定量解析により、各イソカルバサイクリンのdisplacement値を算出した。
【００９５】
表１４に視床（中枢神経系）での結果を示した。
【００９６】
【化２２】
2007302694.tif 000036
【００９７】
【化２３】
2007302694.tif 000037
【００９８】
【化２４】
2007302694.tif 000038
【００９９】
【化２５】
2007302694.tif 000039
【０１００】
【化２６】
2007302694.tif 000040
【０１０１】
【化２７】
2007302694.tif 000041
【０１０２】
【化２８】
2007302694.tif 000042
【０１０３】
【化２９】
2007302694.tif 000043
【０１０４】
【表１４】
2007302694.tif 000044
【０１０５】
以上の結果より、視床でのプロスタサイクリン受容体（中枢神経系）に対して、この発明化合物（特に化合物Ａ、Ｃ）が非天然型立体配置（１５位）をもつにも関わらず強い活性を示すことがわかる。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１】3Ｈ標識化合物のＨＰＬＣ分離ピーク図である。
【図１】
2007302694.tif 000047