(57)【要約】【課題】白血球の計数とともにマラリア原虫の存在の有無の判定を簡便に行う。【解決手段】  血液中の赤血球を溶血させて測定用試料を調製し、測定用試料に光を照射し、測定用試料中の各粒子から粒子の性状を反映する二種類以上の光学的情報を検出し、各光学的情報の光強度を示すデータを粒子毎に関連付けた粒子データとして獲得し、前記粒子データを解析し、白血球に対応する粒子データ及びマラリア原虫に対応する粒子データをそれぞれ特定して白血球の計数及びマラリア原虫の存在の有無の判定を行う。【選択図】図１２
2007024844.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液中の赤血球を溶血させて測定用試料を調製する試料調製ステップ、
測定用試料に光を照射し、測定用試料中の各粒子から粒子の性状を反映する二種類以上の光学的情報を検出し、各光学的情報の光強度を示すデータを粒子毎に関連付けた粒子データとして獲得する粒子データ獲得ステップ、
前記粒子データを解析し、白血球に対応する粒子データ及びマラリア原虫に対応する粒子データをそれぞれ特定して白血球の計数及びマラリア原虫の存在に関する判定を行うデータ解析ステップを有する血液分析方法。
【請求項２】
前記光強度データとは、光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した第一の散乱光の強度を示すデータと、前記第一の散乱光とは異なる範囲の方向に散乱した第二の散乱光の強度を示すデータである、請求項１に記載の血液分析方法。
【請求項３】
前記試料調製ステップは、溶血した赤血球から遊離したマラリア原虫と、残存した白血球とを蛍光染色するステップを含み、
前記光強度データとは、光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した散乱光の強度を示すデータと、粒子から発せられた蛍光の強度を示すデータである、請求項１に記載の血液分析方法。
【請求項４】
前記散乱光の強度を示すデータとは、光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した第一の散乱光の強度を示すデータと、前記第一の散乱光とは異なる範囲の方向に散乱した第二の散乱光の強度を示すデータである、請求項３に記載の血液分析方法。
【請求項５】
前記データ解析ステップにおいて、細分類された各種の白血球に対応する粒子データを特定し、白血球の細分類情報を得る、請求項４に記載の血液分析方法。
【請求項６】
前記白血球の細分類情報は、獲得した粒子のデータから、第一の散乱光の強度、第二の散乱光の強度、および蛍光の強度が所定の範囲内に入る粒子のデータを差し引き、残った粒子のデータを、第一の散乱光の強度および蛍光の強度に基づき解析することにより得る、請求項５に記載の血液分析方法。
【請求項７】
白血球の計数結果及びマラリア原虫の存在に関する判定の結果を表示するステップをさらに有する、請求項１乃至６に記載の血液分析方法。
【請求項８】
白血球の細分類情報及びマラリア原虫の存在に関する判定の結果を表示するステップをさらに有する、請求項５又は６に記載の血液分析方法。
【請求項９】
血液に溶血剤を添加して血液中の赤血球を溶血させる溶血剤添加機構を有し、測定用試料を調製する試料調製部、
測定用試料を流すフローセル、フローセル中を流れる測定用試料に光を照射する光源、光を照射された測定用試料中の各粒子から粒子の性状を反映する第一の光学的情報を検出し、その光学的情報の光強度に応じた出力を行う第一の光検出素子、光を照射された測定用試料中の各粒子から粒子の性状を反映する第二の光学的情報を検出し、その光強度に応じた出力を行う第二の光検出素子、を有し、第一及び第二の光検出素子の出力に基づく第一、第二の光強度データを粒子毎に関連付けた粒子データとして獲得する粒子データ獲得部、
前記粒子データ獲得部が獲得した粒子データを解析し、白血球に対応する粒子データ及びマラリア原虫に対応する粒子データをそれぞれ特定して白血球の計数及びマラリア原虫の存在に関する判定を行うデータ解析部、を有する血液分析装置。
【請求項１０】
前記第一の光学的情報とは、光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した第一の散乱光であり、前記第二の光学的情報とは、前記第一の散乱光とは異なる範囲の方向に散乱した第二の散乱光である、請求項１０に記載の血液分析装置。
【請求項１１】
前記試料調製部は、溶血した赤血球から遊離したマラリア原虫と、残存した白血球とを蛍光染色する蛍光染色機構をさらに有し、
前記第一の光学的情報とは、光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した散乱光であり、前記第二の光学的情報とは、粒子から発せられた蛍光である、請求項９に記載の血液分析装置。
【請求項１２】
前記粒子データ獲得部は、前記光を照射された測定用試料中の各粒子から粒子の性状を反映する第三の光学的情報を検出し、その光強度に応じた出力を行う第三の光検出素子をさらに有し、前記第三の光検出素子の出力に基づく第三の光強度データを、前記第一、第二の光強度データと共に粒子毎に関連付けた粒子データとして獲得し、
前記第一の光学的情報とは、光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した第一の散乱光であり、前記第二の光学的情報とは、前記第一の散乱光とは異なる範囲の方向に散乱した第二の散乱光であり、前記第三の光学的情報とは、粒子から発せられた蛍光である、請求項１１に記載の血液分析装置。
【請求項１３】
前記データ解析部は、細分類された各種の白血球に対応する粒子データを特定し、白血球の細分類情報を得る、請求項１２に記載の血液分析装置。
【請求項１４】
前記データ解析部は、獲得した粒子データから、第一の散乱光の強度、第二の散乱光の強度、及び蛍光の強度が所定の範囲内に入る粒子データを差し引き、残った粒子データを、第一の散乱光の強度および蛍光の強度に基づき解析することにより、前記白血球の細分類情報を得る、請求項１３に記載の血液分析装置。
【請求項１５】
白血球の計数結果及びマラリア原虫の存在に関する判定の結果を出力する出力部をさらに有する、請求項９乃至１４に記載の血液分析装置。
【請求項１６】
白血球の細分類情報及びマラリア原虫の存在に関する判定の結果を出力する出力部をさらに有する、請求項１３又は１４に記載の血液分析装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、血液を分析する方法と装置に関し、特に血液中の白血球を計数するとともに、マラリア原虫の存在の有無を判定する方法と装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
マラリアは熱帯、亜熱帯に広く分布する寄生虫感染症であり、ハマダラカと呼ばれる蚊によって媒介される。マラリア原虫を持つハマダラカに吸血されると、ハマダラカの唾液とともにマラリア原虫が人の血液中に注入される。マラリア原虫は肝細胞内に進入し、そこで増殖し、再び血液中に放出される。血液中に放出されたマラリア原虫は、血液中の赤血球内に侵入し、その形態を変化させながら発育していく。
【０００３】
従来からマラリア診断のために最も多用されている検査法は、目視による顕微鏡検査である。血液塗抹標本をギムザ染色し、顕微鏡で目視観察することによりマラリア原虫に感染している赤血球を検出して計数する。しかしこの方法は、塗抹標本の作成のために、血液検体の塗抹、固定、染色など煩雑な工程を要する。また正確な検査結果を得るためには、長時間かけて多数の赤血球を顕微鏡観察する必要があり、多数の検体を迅速に処理することが困難である。
【０００４】
一方、マラリア感染の有無を迅速に検査するための方法として、フローサイトメトリー法を応用して血液中のマラリア原虫を検出する方法が研究されている。例えば、溶血剤を含む試薬により血液試料中の赤血球を溶血させて赤血球中のマラリア原虫を遊離させ、核酸染色性色素によりマラリア原虫を蛍光染色することで測定用試料を調製し、測定用試料をフローサイトメータに導入し、シースフロー中を流れる細胞に励起光を照射し、細胞が発する前方散乱光及び蛍光を得、それらの信号強度に基づいてマラリア原虫と測定用試料中に含まれるマラリア原虫以外の粒子とを区別して検出し、マラリア原虫をリングフォーム、トロポゾイト、シゾントといった各生育段階に分類する方法が、特許文献１、特許文献２、特許文献３に開示されている。
【０００５】
また、フローサイトメトリー法を応用した血球計数装置を用い、マラリア原虫が生成したヘモゾインを含む白血球を検出することでマラリア感染を検出する方法が、非特許文献１乃至７によって報告されている。マラリア原虫は、ヒト血液の赤血球細胞内でヘモグロビンを消費して増殖する。この際、代謝産物としてヘムが生成されるが、ヘムはマラリア原虫に対する細胞毒性が強い。そこでマラリア原虫は、ヘムを無毒のポリマーであるヘモゾインに変換して自己の体内に蓄積する。ここで、ヒト血液中の白血球がマラリア原虫を貪食すると、その白血球細胞内にヘモゾインが残存する。上記非特許文献１乃至７に開示された方法においては、血液検体を血球計数装置によって測定し、特定種類の白血球数の異常や異型白血球の増加といった結果としてヘモゾインを含有する白血球を検出し、それによって患者のマラリア感染が示唆されるというものである。
【０００６】
【特許文献１】特開平１１−７５８９２号公報
【特許文献２】特開２００４−１０５０２７号公報
【特許文献３】特開２００４−１４１１５０号公報
【非特許文献１】Kramer et al., Relative Frequency of Malaria Pigment-Carrying Monocytes of Nonimmune and Semi-Immune Patients Flow Cytometric Depolarized Side Scatter, Cytometry, 2001, 45:133-140.
【非特許文献２】Grobusch et al., Sensitivity of Hemozoin Detection by Automated Flow Cytometry in Non- and Semi-Immune Malaria Patients, Cytometry Part B (Clinical Cytometry), 2003, 55B:46-51
【非特許文献３】I. B. Suh et al., Evaluation of the Abbott Cell-Dyn 4000 hematology analyzer for detection and therapeutic monitoring of Plasmodium vivax in the Republic of Korea, Tropical Medicine and International Health, December 2003, vol. 8, No. 12:1074-1081
【非特許文献４】C. S. Scott et al., Automated detection of malaria-associated intraleucocytic haemozoin by Cell-Dyn CD4000 depolarization analysis, Clin. Lab. Haem., 2003, 25:77-86
【非特許文献５】T. Hanscheid et al., Automated Malaria Diagnosis Using Pigment Detection, Parasitology Today, 2000, vol. 16, no. 12:549-551
【非特許文献６】T. Hanscheid et al., Automated Detection of Malaria Pigment in White Blood Cells for The Diagnosis of Malaria in Portugal, Am. J. Trop. Med. Hyg., 2001, 64(5,6):290-292
【非特許文献７】C. Fourcade et al., Automated detection of malaria by means of the haematology analyser Coulter(R) GEN.STM, Clin. Lab. Haem., 2004, 26:367-372
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ところで、血液検体中のマラリア原虫の存在の有無の判定は、白血球の計数とともに行われることが望まれている。血液中に含まれている白血球数は、様々な感染症や疾病の影響により変化するため、患者の白血球数が異常値を示す場合に、併せてマラリア原虫の存在の有無につき判定結果が得られれば、白血球数異常の原因としてマラリア感染を考慮すべきか否かの判断が容易となるからである。しかし、上記特許文献１乃至３に開示されているマラリア原虫の検出方法は、いずれも白血球の計数をともに行うものではない。マラリア原虫は白血球よりも遥かに小さく、マラリア原虫から検出される前方散乱光や蛍光の強度は、白血球から検出されるものと比較してかなり小さくなる。そこで、上記特許文献１乃至３に開示された技術のようにマラリア原虫を詳細に分析することを目的とした場合、光検出感度を非常に高く設定して微小な前方散乱光や蛍光の信号を多く検出して処理する必要がある。この場合、マラリア原虫から得られる信号よりも明らかに大きな信号は検出対象外となるため、多くの白血球から得られる前方散乱光や蛍光の信号も検出対象から外れてしまう。従って、一部の白血球を検出することは可能であるが、白血球数を正確に計数することや、検出した白血球をさらに細分類することは、上記のような技術において想定されていなかった。
【０００８】
また血液中の白血球の計数や、白血球の細分類を行う血球計数装置が従来から知られている。白血球の細分類とは、例えば、白血球を単球、リンパ球、顆粒球の三種類、或いは単球、リンパ球、好中球、好酸球、好塩基球の五種類に分類し、それぞれの数又は総白血球数に対する割合を求めることである。このような血球計数装置においてさらに血液中のマラリア原虫の存在の有無を判定する機能を有するものは知られていない。上記非特許文献１乃至７に開示されている方法は、血球計数装置を使用する方法ではあるが、いずれもマラリア原虫を直接検出するものではなく、マラリア原虫を貪食した白血球を検出するものである。従って、通常の血液検査においてこれらの方法を適用すると、単に白血球数の異常や、異型白血球の増加としてのみ捉えられてしまう虞がある。また上記方法によれば、貪食されていないマラリア原虫は検出されないので、貪食されていないマラリア原虫の割合が増えるほど、マラリア感染の検出感度が落ちることになる。さらに、未熟なマラリア原虫を貪食した白血球のヘモゾインは量が少なく、顆粒等の細胞内物質を有する他の白血球と有意に形態学上の相違を有さないため、ヘモゾイン含有白血球と他の白血球との識別が困難となる虞がある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題に鑑み、本発明は、マラリア原虫を直接検出して検体中のマラリア原虫の存在の有無を判断し、且つ検体中にマラリア原虫が存在する場合であっても精度良く白血球の計数を行う方法および装置を提供する。本発明の第一の局面による血液分析方法は、血液中の赤血球を溶血させて測定用試料を調製する試料調製ステップ、測定用試料に光を照射し、測定用試料中の各粒子から粒子の性状を反映する二種類以上の光学的情報を検出し、各光学的情報の光強度を示すデータを粒子毎に関連付けた粒子データとして獲得する粒子データ獲得ステップ、前記粒子データを解析し、白血球に対応する粒子データ及びマラリア原虫に対応する粒子データをそれぞれ特定して白血球の計数及びマラリア原虫の存在に関する判定を行うデータ解析ステップ、を有することを特徴とする。
【００１０】
また本発明の第二の局面による血液分析装置は、血液に溶血剤を添加して血液中の赤血球を溶血させる溶血剤添加機構を有し、測定用試料を調製する試料調製部、測定用試料を流すフローセル、フローセル中を流れる測定用試料に光を照射する光源、光を照射された測定用試料中の各粒子から粒子の性状を反映する第一の光学的情報を検出し、その光学的情報の光強度に応じた出力を行う第一の光検出素子、光を照射された測定用試料中の各粒子から粒子の性状を反映する第二の光学的情報を検出し、その光強度に応じた出力を行う第二の光検出素子、を有し、第一及び第二の光検出素子の出力に基づく第一、第二の光強度データを粒子毎に関連付けた粒子データとして獲得する粒子データ獲得部、前記粒子データ獲得部が獲得した粒子データを解析し、白血球に対応する粒子データ及びマラリア原虫に対応する粒子データをそれぞれ特定して白血球の計数及びマラリア原虫の存在の有無の判定を行うデータ解析部、を有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、マラリア原虫を直接検出して検体中のマラリア原虫の存在に関する判定を行い、且つ検体中にマラリア原虫が存在する場合であっても精度良く白血球の計数を行うことが出来る。これにより、白血球数と併せてマラリア原虫の存在を示唆する情報が得られるため、患者の白血球数が異常値を示す場合に、その原因としてマラリア感染を考慮すべきか否かの判断が容易となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明の一実施形態にかかる血液分析装置による血液検体の分析について説明するが、本発明はこれに限定されるわけではない。
【００１３】
概要
本例の血液分析装置は、フローサイトメトリー法を応用したものである。検体としては、ヒトの血液を用いる。この血液分析装置は、まず所定量の検体と試薬（溶血剤及び染色液）を混合することにより、測定用試料を調製する。測定用試料の調製においては、溶血剤の作用によって検体中の赤血球を溶血させ、赤血球内に寄生しているマラリア原虫が液中に遊離させる。そこへ染色液を添加し、マラリア原虫及び白血球を蛍光染色して測定用試料とする。次に、測定用試料をフローセルに流し、そのフローセル中を流れる測定用試料にレーザ光を照射する。そして、レーザ光を照射された測定用試料から発せられる散乱光や蛍光を、フォトダイオードやフォトマルチプライヤチューブ等の光検出素子により受光して光電変換し、光の強度に応じた電気信号を得る。このようにして得た電気信号を解析し、白血球の計数及びマラリア原虫の検出を行う。またそれと併せて検体中の白血球をリンパ球、好中球、好酸球、好塩基球の五種類に細分類する。白血球細分類の結果としては、細分類された各種の白血球の計数結果を得る。
【００１４】
試薬
本例の血液分析装置において測定用試料を調製するために用いる試薬（溶血剤及び染色液）は以下のものを用いた。
【００１５】
溶血剤としては、自動血球分析装置用溶血剤として市販されているストマトライザ-4DL（シスメックス株式会社製）を用いた。この溶血剤は界面活性剤（第四級アンモニウム塩）を含有しており、この界面活性剤の作用により血液中の赤血球を溶血する。また染色液としては、自動血球分析装置用染色液として市販されているストマトライザ-4DS（シスメックス株式会社製）を用いた。この染色液はポリメチン系の蛍光色素を含有しており、この色素により血液中の白血球やマラリア原虫が染色される。
【００１６】
血液分析装置
図１は、血液分析装置１００の外観を示したものである。装置の前面には、操作者が各種設定入力を行ったり、また測定結果を表示出力するための液晶タッチパネル１０１、後述する試料調製部２００を覆うカバー１０２、スタートスイッチ１０３を備えている。図２は血液分析装置１００の内部構成を示したものである。装置の右側のスペースには、装置の動作や解析処理を司る制御部４００が備えられている。装置の左下のスペースには、測定用試料から信号を検出するための検出部３００が備えられている。また残りのスペースに、測定用試料を調製するための試料調製部２００が備えられている。
【００１７】
以下、試料調製部２００、検出部３００、制御部４００の各部について説明する。
【００１８】
試料調製部２００の構成
図３は試料調製部２００を示す説明図である。試料調製部２００は、手前右側に検体セット部２０１、手前左側に試薬セット部２０２、奥側にインキュベータ２０３を備えている。また分注装置２０４を備えている。操作者が前記図１のカバー１０２を開けることにより、図３に示した試料調製部２００が現れる。試料調製部２００において、検体セット部２０１には、検体の入った検体容器２０５をセットするよう構成されている。インキュベータ２０３には、反応容器２０６をセットするよう構成されている。また試薬セット部２０２には、溶血剤の入った試薬容器２０７、染色液の入った試薬容器２０８をセットするよう構成されている。インキュベータ２０３は、セットされた反応容器２０６の中の液体を、所定の温度に保ちながら振盪撹拌するよう構成されている。分注装置２０４は、その先端から所定量の液体を吸引・吐出するようになっており、また図示しない駆動装置によって前後・上下・左右に移動可能に構成されている。試料容器２０９は、後述する検出部３００のフローセル３０１と接続されている。
【００１９】
検出部３００の構成
検出部３００は、測定用試料中の各粒子から光学的情報を電気信号として検出するための光学系と、検出した電気信号を処理して各粒子に対応したデジタルデータに変換する信号処理回路３１７を有する。図４は検出部３００において光学系を中心に説明する図である。検出部３００は、測定用試料を流すためのフローセル３０１を有する。フローセル３０１は、レーザ光が照射される部分であり内部流路が細く絞られているオリフィス部３０２、測定用試料をオリフィス部に向かって上方へ噴射するノズル３０３、シース液供給口３０４、排液口３０５を有する。オリフィス部３０２は無色透明の無機ガラスからなる。また検出部３００は、レーザ光を照射するためのレーザ光源３０６を有する。レーザ光源３０６は、波長６３３ｎｍのレーザ光を出射する赤色半導体レーザ光源である。検出部３００はさらに、レーザ光源から発せられたレーザ光をフローセル３０１へ照射するためのコンデンサレンズ３０７を有する。
【００２０】
集光レンズ３０８は、レーザ光源３０６からフローセル３０１に入射するレーザ光の光軸の略延長線方向に散乱した散乱光（前方散乱光）を集めることができる位置に配置されている。集光レンズ３０８により集められた前方散乱光は、ピンホール３０９を介してフォトダイオード３１０に入射する。フォトダイオード３１０は、受光した前方散乱光の強度に応じた電気信号を出力する。
【００２１】
集光レンズ３１１は、レーザ光源３０６からフローセル３０１に入射するレーザ光の光軸と略直角に交わる方向に発せられた光を集めることができる位置に配置されている。ダイクロイックミラー３１２は、集光レンズ３１１により集められた光の内、散乱光（側方散乱光）を反射し、蛍光を透過させる。フォトマルチプライヤチューブ３１３は、ダイクロイックミラー３１２が反射した側方散乱光を受光し、受光した側方散乱光の強度に応じた電気信号を出力する。一方、ダイクロイックミラー３１２を透過した蛍光は、フィルタ３１４、ピンホール３１５を経てフォトマルチプライヤチューブ３１６に入射する。フォトマルチプライヤチューブ３１６は、受光した蛍光の強度に応じた電気信号を出力する。
【００２２】
上記のように、検出部３００では、マラリア原虫や血球といった粒子を含む測定用試料から発せられた前方散乱光、側方散乱光及び蛍光を集光し、それぞれの光強度に応じた電気信号を得る。フォトダイオード３１０、フォトマルチプライヤチューブ３１３、フォトマルチプライヤチューブ３１６それぞれが出力した電気信号は、信号処理回路３１７に入力され処理され、デジタルデータに変換される。    
【００２３】
制御部４００の構成
図５は制御部４００の構成、及び制御部４００と装置各部との関係を示すブロック図である。制御部４００は、メモリ４０１、中央演算処理装置（ＣＰＵ）４０２、動作制御回路４０３、粒子信号入力インターフェイス４０４、画面出力インターフェイス４０５を有する。メモリ４０１は、測定用試料から得た信号の解析に関する解析プログラムや、検体を分析するための装置各部の一連の動作を制御する分析動作制御プログラム、液晶タッチパネル１０１に表示される各種画像データを記憶している。また、検出部３００の信号処理回路３１７により得られたデータや、解析プログラムによる処理結果を記憶する。ＣＰＵ４０２は、メモリ４０１から読み出された解析プログラムや分析動作制御プログラムを実行する。動作制御回路４０３は、血液分析装置１００の装置各部の動作を制御するための制御信号を出入力処理する。粒子信号入力インターフェイス４０４は、検出部３００の信号処理回路３１７により得られた測定用試料中の粒子に関するデータの入力を受け付ける。解析プログラムによる解析結果や各種画像データは、画面出力インターフェイス４０５を介して液晶タッチパネル１０１に出力される。
【００２４】
以下、血液分析装置１００の動作につき説明する。図６は、分析動作制御プログラムによる血液分析装置１の全体制御を示すフローチャートである。溶血剤の入った試薬容器２０７及び染色液の入った試薬容器２０８をそれぞれ試料調製部２００の試薬セット部２０２にセットした状態で、血液分析装置１００の電源をオンにすることにより、以下に説明するステップＳ１からステップＳ５までの各処理が実行される。
【００２５】
ステップＳ１：血液分析装置１００の初期設定処理が行われる。これにより、試料調製部２００の分注装置２０４を初期位置に戻すための動作や、制御部４００に記憶されているプログラムの初期化が行われる。
【００２６】
ステップＳ２：操作者による検体情報の入力を受け付ける。操作者は検体情報の入力を行う場合、液晶タッチパネル１０１を用い、これから分析を行う検体を識別するための検体識別番号を入力する。入力された検体識別番号は制御部４００のメモリ４０１に記憶される。なお、本ステップにおいて、前記ステップＳ１での初期設定処理が完了してから所定の時間内に入力があった場合、ステップＳ３へ進む。所定の時間内に入力が無い場合はステップＳ４へ進む。
【００２７】
ステップＳ３：検体の分析を実行する。操作者が、前記検体番号に対応する検体の入った検体容器２０５を試料調製部２００の検体セット部２０１にセットした後、スタートスイッチ１０３を押すと、分析動作制御プログラムが起動し、ステップＳ３１（測定用試料の調製）、ステップＳ３２（粒子データの獲得）、ステップＳ３３（粒子データの解析）、ステップＳ３４（分析結果の出力）の一連の動作が自動的に実行される。ステップＳ３１、Ｓ３２、Ｓ３３及びＳ３４による装置各部の動作については後に詳述する。
【００２８】
ステップＳ４：血液分析装置１００のシャットダウンの指示が入力されたか否かが判断される。シャットダウンの指示は、操作者が液晶タッチパネル１０１を用いて行う。所定時間以上シャットダウンの指示が入力されていないと判断された場合はステップＳ２に戻り、次の分析対象検体の検体識別番号が操作者により入力されるのを待つ。一方、所定時間内にシャットダウンの指示が入力された場合は、ステップＳ５に進む。
【００２９】
ステップＳ５：血液分析装置１００のシャットダウン処理がなされる。ここでは、分注装置２０４や反応容器２０６、また試料容器２１０からフローセル３０１の廃液口３０５に至る流体回路の洗浄が行われ、その後、血液分析装置１００の電源が自動的にオフとなる。
【００３０】
ステップＳ３（分析）の詳細
以下、上記ステップＳ３（分析）について更に詳細に説明する。ステップＳ３は、図７のフローチャートに示すように、ステップＳ３１（測定用試料の調製）、ステップＳ３２（粒子データの獲得）、ステップＳ３３（解析）及びステップＳ３４（分析結果の出力）の各ステップからなる。
【００３１】
ステップＳ３１（測定用試料の調製）
ステップＳ３１では、試料調製部２００が制御され、測定用試料の調製が実行される。ステップＳ３１における試料調製部２００の動作を、図３を用いて説明する。まず分注装置２０４は、試薬セット部２０２の試薬容器２０７から０．８８２ｍＬの溶血剤を吸引する。次に分注装置２０４は、検体セット部２０１にセットされている検体容器２０５から検体を１８μＬ吸引する。そして前記吸引した溶血剤と検体とを反応容器２０６に吐出する。これにより、反応容器２０６内で検体が溶血剤と混合される。さらに、分注装置２０４が、試薬セット部２０２の試薬容器２０８から染色液を１８μＬ吸引し、検体及び溶血剤の入った反応容器２０６に吐出する。この後インキュベータ２０３が、検体、溶血剤、及び染色液が入った反応容器２０６内の液温を４０℃に保ったまま１４秒間撹拌する。これにより、検体中の赤血球を溶血させ、赤血球中に寄生するマラリア原虫を遊離させる。また検体中の白血球及び遊離したマラリア原虫が、染色液により蛍光染色される。このようにして調製した測定用試料を分注装置２０４が吸引し、試料容器２０９に供給する。試料容器２０９に供給された測定用試料は、検出部３００のフローセル３０１に流される。
【００３２】
ステップＳ３２（粒子データの獲得）
ステップＳ３２では、検出部３００が制御され、白血球やマラリア原虫といった粒子を含む測定用試料から、各粒子の特徴を反映する電気信号が検出される。ステップＳ３２における検出部３００の動作を、図４を用いて説明する。前記の通り試料容器２３３に測定用試料が供給されると、図示しないポンプやバルブの動作により測定用試料がノズル３０３へ導かれる。そして測定用試料がノズル３０３からフローセル３０１に吐出される。それと同時にシース液が、図示しないシース液容器からシース液供給口３０４を介してフローセル３０１に供給される。これによって測定用試料は、フローセル３０１内でシース液に包まれ、更にオリフィス部３０２で細く絞られて流れる。測定用試料の流れを細く絞り込むことにより、測定用試料に含まれる白血球やマラリア原虫等の粒子を一列に整列させてオリフィス部３０２に流すことができる。オリフィス部３０２を流れる測定用試料に対し、レーザ光源３０６から出射されたレーザ光がコンデンサレンズ３０７で絞られて照射される。
【００３３】
レーザ光を受けた測定用試料中の粒子から発せられた前方散乱光は集光レンズ３０８により集光される。そしてピンホール３０９を通過した前方散乱光は、フォトダイオード３１０で受光、光電変換される。そしてフォトダイオード３１０は、前方散乱光の強度に応じた電気信号（前方散乱光信号）を出力する。
【００３４】
レーザ光を受けた測定用試料中の粒子から発せられた側方散乱光は、集光レンズ３１１により集光される。そしてダイクロイックミラー３１２に反射され、フォトマルチプライヤチューブ３１３で受光、光電変換される。そしてフォトマルチプライヤチューブ３１３は、側方散乱光の強度に応じた電気信号（側方散乱光信号）を出力する。
【００３５】
レーザ光を受けた測定用試料中の粒子から発せられた蛍光は、集光レンズ３１１により集光される。そしてダイクロイックミラー３１２を透過し、フィルタ３１４、ピンホール３１５を経てフォトマルチプライヤチューブ３１６で受光、光電変換される。そしてフォトマルチプライヤチューブ３１６は、蛍光の強度に応じた電気信号（蛍光信号）を出力する。
【００３６】
フォトダイオード３１０、フォトマルチプライヤチューブ３１３、及びフォトマルチプライヤチューブ３１６が出力した前方散乱光信号、側方散乱光信号及び蛍光信号は、それぞれ信号処理回路３１７へ入力される。信号処理回路３１７ではまず、入力された各信号を増幅する。前方散乱光信号、側方散乱光信号及び蛍光信号のいずれにおいても、増幅された一連の信号波形において、粒子を検出している部分はパルス状の波形を生じる。そこで各信号において、パルスのピーク値を得る。これをＡ／Ｄ変換し、粒子毎の信号強度を示すデジタルデータを得る。なお、前方散乱光強度は、測定用試料中に含まれる粒子の大きさを反映する。側方散乱光強度は、前記粒子の内部における密度や構造といった内部情報、或いは粒子の表面状態を反映する。蛍光強度は、蛍光色素によって染色を施された粒子の、染色度合いを反映する。
【００３７】
なお血液分析装置１００では、白血球やマラリア原虫などの粒子から得られる信号よりも明らかに強度の小さな信号や明らかに強度の大きな信号については、その信号強度をデジタルデータとして記憶しないよう検出感度を設定してある。前記のような信号はノイズ信号であり、これらの信号についてもデジタルデータとして記憶し、後述する解析の対象とすると、データ処理の効率が低下する虞があるためである。
【００３８】
前方散乱光強度、側方散乱光強度、及び蛍光強度のそれぞれについて、検出感度はＡ／Ｄ変換の対象とすべき信号強度の上限及び下限に閾値を設けることにより設定している。血液分析装置１００では信号強度の下限を０、上限を２５５とし、検出感度範囲に入る信号の強度は０（最小値）から２５５（最大値）までの２５６個の整数のいずれかの値を有するデジタルデータとして記憶される。なお、ここで検出感度を過度に高く設定すると、大型の白血球から得られる信号強度はレンジオーバーして検出の対象から外れ、白血球の正確な計数が困難になる。また感度を過度に低く設定すると、白血球全体を検出することができたとしても、個々の白血球が有する微小な信号強度の差を識別できず、信号強度に基づく白血球の細分類が困難になる。従って血液分析装置１００の検出感度は、白血球の全体を検出し、且つ白血球を細分類可能な程度に調整されている。
【００３９】
このようにして、測定用試料中の各粒子に対応した前方散乱光強度（以下、Ｆｓｃという）、側方散乱光強度（以下、Ｓｓｃという）、及び蛍光強度（以下、Ｆｌという）が得られる。Ｆｓｃ、Ｓｓｃ、及びＦｌは、粒子毎に関連付けられたデータとして、制御部４００のメモリ４０１に記憶される。なお、本例の血液分析装置１００では、一回の検体分析において約６万５千個分の粒子に対応するＦｓｃ、Ｓｓｃ、及びＦｌを記憶する。
【００４０】
ステップＳ３３（粒子データの解析）
メモリ４０１に記憶された粒子毎のＦｓｃ、Ｓｓｃ、及びＦｌのデータは、メモリ４０１に予め記憶されている解析プログラムにより解析される。ＣＰＵ４０２に読み出されて実行される解析プログラムの各ステップにつき、図８のフローチャートを用いて説明する。
【００４１】
ステップＳ３３１：メモリ４０１から、測定用試料中の各粒子に対応したＦｓｃ、Ｓｓｃ、及びＦｌのデータを取得する。
【００４２】
ステップＳ３３２：ステップＳ３３１で取得したデータのうち、Ｆｓｃ、Ｓｓｃ、及びＦｌが所定の範囲Ｍ内にある粒子のデータを計数する。この範囲Ｍとは、マラリア原虫から得られるＦｓｃ、Ｓｓｃ、及びＦｌのデータを包含し、且つ白血球など他の粒子から得られるＦｓｃ、Ｓｓｃ、及びＦｌのデータを包含しないよう設定された範囲であり、この範囲を定義するデータが予めメモリ４０１に記憶されている。
【００４３】
ステップＳ３３３：ステップＳ３３２における粒子データの計数結果と所定値Ｔを比較する。比較の結果、計数結果が所定値Ｔより大きい場合は、マラリア原虫が存在する可能性があると判断してステップＳ３３４へ進む。一方、計数結果が所定値Ｔ以下の場合は、マラリア原虫による感染を疑うには数が少ないと判断し、ステップＳ３３５へ進む。
【００４４】
ステップＳ３３４：「マラリア原虫が存在する可能性がある」とした判断結果を、検体識別番号と関連付けてメモリ４０１に記憶させる。その後ステップＳ３３５へ進む。
【００４５】
ステップＳ３３５：ステップＳ３３１で取得したデータのうち、前記範囲Ｍに包含されない粒子のデータを抽出する。これはマラリア原虫以外の粒子、つまり白血球（単球、リンパ球、好中球、好酸球及び好塩基球）や溶血した赤血球の残骸に対応するデータとみなされる。
【００４６】
ステップＳ３３６：前記ステップＳ３３５で抽出された粒子のデータから、単球、リンパ球、好中球、好酸球、好塩基球に相当するデータをＳｓｃ及びＦｌの値に基づき特定し、それぞれの粒子数を計数する。各白血球に対応するＳｓｃ及びＦｌの範囲は、単球、リンパ球、好中球、好酸球、好塩基球それぞれを含む検体から得られるＳｓｃ及びＦｌに基づき経験的に定められたものであり、これらの範囲を定義するデータが予めメモリ４０１に記憶されている。
【００４７】
ステップＳ３３７：前記ステップＳ３３６で計数された単球、リンパ球、好中球、好酸球、好塩基球の各粒子数を、測定用試料調製において検体が希釈される倍率やフローセル３０１に吐出される測定用試料の体積に基づき全血中の血球数に換算し、各白血球に対応する血球数の換算結果を検体識別番号と関連付けてメモリ４０１に記憶させる。また各種白血球の数の和から、白血球数（白血球総数）を算出し、検体識別番号と関連付けてメモリ４０１に記憶させる。
【００４８】
以下、本例の血液分析装置１００における白血球の計数と細分類、及びマラリア原虫の存在の有無の判断方法につき詳細に説明する。図９は、マラリア原虫を含有しない測定用試料から、ステップＳ３３１で取得した各粒子のデータを、Ｓｓｃ及びＦｌをそれぞれ軸にとった二次元散布図として表現したものである。なお、血液分析装置１００の説明に用いる二次元散布図を示した図９、及び後述する図１０、図１１、図１２、図１３、図１４、図１５、図１７、図１８、図１９は、いずれも二次元散布図を構成する各軸の最小値が０、最大値が２５５となっており、各粒子のデータが有する値に対応する二次元座標上の位置にドットを表示している。また横軸については右へ行くほど、縦軸については上に行くほど座標の値が大きくなる。
【００４９】
図９の二次元散布図においては、各種白血球（単球、リンパ球、好中球、好酸球、好塩基球）に対応するドットが集団を形成している。従って、これらの各種白血球の集団が有するＳｓｃ及びＦｌの範囲に応じて、各種白血球に対応する粒子のデータを計数することができる。またそれらを合計することで、白血球に対応する粒子のデータを計数することができる。しかし、測定用試料中にマラリア原虫が存在していると、図１０中で矢印により示すように、マラリア原虫に対応するドットが、好中球に対応するドットの集団と重なる位置にかけて広がって出現する。すなわち、マラリア原虫から得られるＳｓｃとＦｌの範囲と好中球から得られるＳｓｃとＦｌの範囲には重なる部分がある。従って、Ｓｓｃ及びＦｌのみに基づいて白血球とマラリア原虫を区別し、それぞれを計数することは困難である。なお、図９及び図１０において好塩基球に対応するドットの出現位置の左下方に出現しているドットは、主として溶血した赤血球の残骸に由来するものである。
【００５０】
図１１は、マラリア原虫を含有しない測定用試料から、ステップＳ３３１で取得した各粒子のデータを、Ｓｓｃ及びＦｓｃをそれぞれ軸にとった二次元散布図として表現したものである。この二次元散布図においては、白血球に対応するドットが集団を形成している。一方図１２は、マラリア原虫を含有する測定用試料から、図１１と同様に作成した二次元散布図であり、ここでは、マラリア原虫に対応するドットの集団が、白血球に対応するドットの集団と明確に分離した位置に出現する。従って、白血球に対応するドットが出現せず、マラリア原虫に対応するドットが出現するＳｓｃ及びＦｓｃの範囲を特定できる。この範囲は図１２において頂点ａ、ｂ、ｃ、ｄを有する四角形の領域Ｐとして示されている。各頂点の二次元座標上の位置は、ａ（９０，０）、ｂ（１７０，０）、ｃ（１７０，６０）、ｄ（９０，３０）である。ここでＸ軸はＳｓｃに、Ｙ軸はＦｓｃに対応している。また各軸とも最小値は０、最大値は２５５であり、信号処理回路４０３でＡ／Ｄ変換して得られた粒子毎の光信号強度の値に対応している。なお、図１１及び図１２において白血球に対応する粒子データに対応するドットの出現位置の左下方に出現しているドットは、主として溶血した赤血球の残骸に由来するものである。
【００５１】
図１３は、マラリア原虫を含有しない測定用試料から、ステップＳ３３１で取得した各粒子のデータを、Ｆｌ及びＦｓｃをそれぞれ軸にとった二次元散布図として表現したものである。この二次元散布図においては、白血球に対応するドットが集団を形成している。一方図１４は、マラリア原虫を含有する測定用試料から、図１３と同様に作成した二次元散布図であり、ここでは、マラリア原虫に対応するドットの集団が、白血球に対応するドットの集団と分離した位置に出現する。従って、白血球に対応するドットが出現せず、マラリア原虫に対応するドットが出現するＦｌ及びＦｓｃの範囲を特定できる。この範囲は図１４において頂点ｅ、ｆ、ｇ、ｈを有する四角形の領域Ｑとして示されている。各頂点の二次元座標上の位置は、ｅ（０，１６）、ｆ（３０，１６）、ｇ（５０，５０）、ｈ（０，５０）である。ここでＸ軸はＦｓｃに、Ｙ軸はＦｌに対応している。また各軸とも最小値は０、最大値は２５５であり、信号処理回路４０３でＡ／Ｄ変換して得られた粒子毎の光信号強度の値に対応している。なお、図１３及び図１４において白血球に対応する粒子データに対応するドットの出現位置の左下方かつ領域Ｑの下方に出現しているドットは、主として溶血した赤血球の残骸に由来するものである。
【００５２】
これらに基づき、本例の血液分析装置１００においては、領域Ｐ及び領域Ｑに共通して出現するドットに対応する粒子をマラリア原虫とみなすこととし、これらの粒子が有するＳｓｃ、Ｆｌ及びＦｓｃの範囲として前記範囲Ｍを定めている。なお前記の通り、ステップＳ３３３において、Ｆｓｃ、Ｓｓｃ、及びＦｌが所定の範囲Ｍ内にある粒子の計数結果と所定値Ｔとが比較される。ここで計数結果が所定値以下の場合、範囲Ｍに包含される粒子のデータは、マラリア原虫の感染を疑うには数が少ないため、ノイズ信号や溶血した赤血球の残骸などに由来するものであるとみなされる。所定値Ｔはマラリア原虫を含有しない測定用試料を多数測定して範囲Ｍ内にある粒子を計数した結果から経験的に定められる。本例において、所定値Ｔは１０と設定されている。
【００５３】
図１５は、前記ステップＳ３３５において抽出されたデータを、Ｓｓｃ及びＦｌをそれぞれ軸にとった二次元散布図として表現したものである。これはマラリア原虫に対応するドットが除去されたものとなるので、マラリア原虫を含有しない測定用試料から得られたデータに基づき作成された二次元散布図（例えば図９）と同様のものとなる。従って、前記ステップＳ３３５において抽出されたデータを、マラリア原虫に対応する粒子データの影響を受けることなく、Ｓｓｃ及びＦｌの範囲に応じて、各種白血球に対応する粒子データを計数することができる。
【００５４】
以上の説明に用いてきた各種の二次元散布図は、ステップＳ３３の一連の粒子データの解析においても作成される。作成された二次元散布図は、他の分析結果、即ち白血球や細分類された各種の白血球の計数結果、またマラリア原虫の存在の有無に関する判定結果と同様に、検体識別番号と関連付けられてメモリ４０１に記憶される。
【００５５】
ステップＳ３４（分析結果の出力）
ステップＳ３３により得られ、メモリ４０１に記憶された白血球の計数結果、細分類された各種の白血球の計数結果、マラリア原虫の存在の有無に関する判定結果、解析の過程で作成された二次元散布図、といった各種の解析結果を、結果表示用の画面として液晶タッチパネル１０１に出力する。図１６にその画面の例を示す。液晶タッチパネル１０１に表示される画面１０１１には、白血球数（白血球総数）と、単球、リンパ球、好中球、好酸球及び好塩基球それぞれの数すなわち五分類された各種白血球の数とが表示される欄１０１２、マラリア原虫の有無の判定結果が表示される欄１０１３、前記図９又は図１０、図１１又は図１２、及び図１３又は図１４に示したのと同様の二次元散布図が表示される欄１０１４が含まれている。この例では、検体中にマラリア原虫が存在するとの判定結果が示されている。なお、前記ステップＳ３３３で計数結果が所定値Ｔ以下でありマラリア原虫による感染を疑うには数が少ないと判断された場合には、デフォルト値としてマラリア原虫が陰性であることを示す記号（−）が表示される。一方、前記ステップＳ３３３で計数結果が所定値Ｔより大きく、マラリア原虫が存在する可能性があると判断され、ステップＳ３３４においてその判断結果がメモリ４０１に記憶された場合は、図１６に示すように欄１０１３にはマラリア原虫が陽性であることを示す記号（＋）が表示される。
【００５６】
このように、血液分析装置１００では、白血球の計数結果や、白血球の細分類情報（ここでは各種白血球の数）とともに、マラリア原虫の存在を示唆する情報が画面に示されるため、本例の分析装置の操作者にとって、患者の白血球数が異常または変化を示した場合や、特定の種類の白血球の数や割合が異常または変化を示した場合に、それらの原因としてマラリア感染を考慮すべきか否かの判断が容易となる。例えば、白血球の中でも感染症と特に関係の深い好中球の数をモニタリングすることが可能であり、マラリア原虫の有無の判定結果と併せ、マラリア感染の診断を行う際に有用な情報を得ることが出来る。
【００５７】
患者検体の分析結果例
図１７は、マラリア患者から採取した血液を検体とし、上記血液分析装置１００で分析を行って得られた粒子データをＳｓｃ及びＦｌをそれぞれ軸にとった二次元散布図として表現したものである。前記図１０と同様、マラリア原虫に対応する粒子データのドットの集団が、好中球に対応する粒子データのドットの集団と重なる位置に出現している。また同じ粒子データにつき、Ｆｓｃ及びＦｌを軸にとった二次元散布図を図１８に、Ｆｌ及びＦｓｃを軸にとった二次元散布図を図１９に示す。図１８、図１９には、それぞれ前記図１２、図１４と同様、領域Ｐ、領域Ｑにマラリア原虫に対応する粒子データのドットの集団が出現している。本検体を血液分析装置１００で分析した結果と、顕微鏡による目視観察（チュルク液を用いた視算法）を行った結果を以下の表１に示す。なお目視観察の結果は、検体中の白血球２００個を観察して細分類し計数し、その計数結果を検体１μＬ当たりの計数値に換算したものである。また細分類された各種白血球については、計数結果と併せて白血球総数に対する割合も算出した。
【００５８】
【表１】
2007024844.tif 000003
【００５９】
表１に示す通り、血液分析装置１００で分析した結果と顕微鏡による目視観察の結果はほぼ同様の結果となっている。このことから、血液分析装置１００はマラリア原虫に感染した赤血球を含有する検体を分析する場合であっても、白血球数の計数及び白血球の細分類を精度良く行なうことが可能であることがわかる。
【００６０】
対照法との比較
上記に説明した血液分析装置を用いて複数の検体を分析し、白血球の計数結果、細分類した各種白血球の計数結果およびマラリア原虫の存在の有無の判定結果につき対照法との比較を行った。検体としては、顕微鏡による目視観察の結果マラリア原虫に感染した赤血球を含むことが確認された全血検体２８検体と、マラリア原虫に感染した赤血球を含まないことが確認された全血検体２５９検体とを含む計２８７検体を用いた。対照法としては、顕微鏡による目視観察を実施した。比較の結果、白血球の計数結果及び細分類した各種白血球の計数結果については、各検体とも対照法との間で良好な相関が得られた。またマラリア原虫の存在の有無の判定は、以下の表２に示す通り、ほとんどの検体について対照法による判定と結果が一致した。
【００６１】
【表２】
2007024844.tif 000004
【００６２】
上記のように、血液分析装置１００では、フローセルにおいて光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した第一の散乱光の強度を示すデータと、前記第一の散乱光とは異なる範囲の方向に散乱した第二の散乱光の強度を示すデータと、粒子から発せられた蛍光の強度を示すデータと、を用いて解析することにより、白血球の計数、白血球の細分類、及びマラリア原虫の検出を簡便かつ精度よく行うことができる。特にマラリア原虫が存在する場合であっても、白血球の細分類を精度よく行うことができる。
【００６３】
上記血液分析装置１００によれば、白血球の計数（白血球総数）は、白血球細分類の結果得られた各種白血球の数を合計して算出しているが、白血球の計数は必ずしもこのように行う必要はない。例えば、図１１及び図１２に示すように、ステップＳ３３１で取得した各粒子のデータをＳｓｃ及びＦｓｃに基づき解析することで、白血球のデータとマラリア原虫等の他の粒子のデータとを弁別できるので、このようにして弁別された白血球のデータを計数し、それに基づき白血球数を算出してもよい。或いは図１３及び図１４に示すように、ステップＳ３３１で取得した各粒子のデータをＦｌ及びＦｓｃに基づき解析することで、白血球のデータとマラリア原虫等の他の粒子のデータとを弁別できるので、このようにして弁別された白血球のデータを計数し、それに基づき白血球数を算出してもよい。
【００６４】
また上記血液分析装置１００によれば、白血球の細分類情報として、細分類された各種白血球の数を得ているが、必ずしもこのようにする必要はない。例えば、白血球の細分類情報として、各種白血球の総白血球数に占める割合を得てもよい。
【００６５】
なお、白血球の細分類および細分類された各種白血球の計数を行わず、単に白血球の計数とマラリア原虫の存在の有無の判定を併せて行うよう血液分析装置を構成することもできる。その一形態として、フローセルにおいて光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した散乱光の強度を示すデータと、粒子から発せられた蛍光の強度を示すデータとを用いて解析することにより、白血球の計数とマラリア原虫の検出を簡便かつ精度よく行うことができる。例えば上記血液分析装置１００において、図１３や図１４に示したように、測定用試料から得られるＦｌとＦｓｃを用いれば、それらの範囲に基づき白血球に対応する粒子データとマラリア原虫に対応する粒子データを区別して計数できる。この場合、測定用試料中の粒子から検出する光学的情報は蛍光と前方散乱光であり、側方散乱光を検出する必要が無い。従って、フォトマルチプライヤチューブ３１３など側方散乱光を検出するための光学部品が不要となるので、装置構成をより簡素化することが出来る。
【００６６】
またフローセルにおいて光を照射された測定用試料中の粒子から所定範囲の方向に散乱した第一の散乱光の強度を示すデータと、前記第一の散乱光とは異なる範囲の方向に散乱した第二の散乱光の強度を示すデータとを用いて解析することにより、白血球の計数とマラリア原虫の検出を簡便かつ精度よく行うことができる。例えば上記血液分析装置１００において、図１１や図１２に示したように、測定用試料から得られるＦｓｃとＳｓｃを用いれば、それらの範囲に基づき白血球に対応する粒子データとマラリア原虫に対応する粒子データを区別して計数できる。この場合、測定用試料中の粒子から検出する光学的情報は前方散乱光と側方散乱光であり、蛍光を検出する必要が無い。従って、フォトマルチプライヤチューブ３１６など蛍光を検出するための光学部品が不要となるので、検出部３００の構成をより簡素化することが出来る。また蛍光色素を含む染色液による検体の染色処理が不要となり、試薬コストの低減が可能になるとともに、試料調製部２００の構成をより簡素化することが出来る。また従来、自動分析装置において、使用した染色液の蛍光色素が装置内の流体系に残存すると、次回の測定の結果に影響を及ぼす場合あるため、流体系の洗浄を充分に行う必要があったが、染色液の使用が不要となれば、装置内の洗浄作業をより簡易なものとすることができ、洗浄液コストの削減、装置構成の簡素化を図ることができる。
【００６７】
上記血液分析装置１００では、赤血球を溶血させる作用のある物質として、カチオン系界面活性剤である第四級アンモニウム塩を含有する溶血剤を用いた。しかし使用可能な溶血剤は必ずしもこれに限られない。赤血球を溶血させる作用のある物質として溶血剤に含まれるものとしては、上記各例で用いた第四級アンモニウム塩以外のカチオン系界面活性剤、ノニオン系界面活性剤、或いはアニオン系界面活性剤といった各種の界面活性剤から選択して用いることができる。これらの物質は、溶血処理時の濃度において、血液検体中の赤血球を充分に溶血させるものであり、且つ遊離したマラリア原虫がその性状をある程度保持できるものであればよい。また上記各例の血液分析装置においては、血液分析用の試薬として溶血剤、染色液を別々の液として用意し、測定用試料を調製する段階でそれらを混合している。このように、血液分析用試薬を、複数の液からなる試薬キットとして構成してもよい。しかし本発明の装置や方法に用いる試薬の構成は必ずしもこれに限られず、溶血剤、染色液を予め混合しておき一液の血液分析用試薬としてもよい。
【００６８】
上記血液分析装置１００では、測定用試料を照射するための光源として半導体レーザ光源を用いているが、本発明においてはこれに限らず、アルゴンイオンレーザ光源に代表される気体レーザ光源を用いることも可能である。
【００６９】
上記血液分析装置１００では、前方散乱光として、レーザ光源３０６からフローセル３０１に入射するレーザ光の光軸の略延長線方向に散乱した散乱光を検出している。しかし前方散乱光としては、必ずしもフローセル３０１に入射するレーザ光の光軸の略延長線方向に散乱した散乱光に限らず、粒子の大きさを反映するものであれば他の角度に散乱した散乱光でもよい。或いは、粒子の大きさを反映する光学的情報として、粒子により生じる光吸収や光損失の度合いを検出するようにしてもよい。また上記血液分析装置１００では、側方散乱光として、レーザ光源３０６からフローセル３０１に入射するレーザ光の光軸と略直角に交わる方向に散乱した散乱光を検出している。しかし側方散乱光としては、必ずしもフローセル３０１に入射するレーザ光の光軸と略直角に交わる方向に散乱した散乱光に限らず、粒子の内部情報、或いは表面状態を反映するものであれば他の角度に散乱した散乱光でもよい。例えば、前記光軸から略直角に交わる方向でなくとも、前記前方散乱光より大きな角度で散乱する散乱光を用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】この発明の一実施形態である血液分析装置の外観を説明する図である。
【図２】この発明の一実施形態である血液分析装置の内部構成を説明する図である。
【図３】この発明の一実施形態である血液分析装置の試料調製部を説明する図である。
【図４】この発明の一実施形態である血液分析装置の検出部を説明する図である。
【図５】この発明の一実施形態である血液分析装置の制御部を説明する図である。
【図６】この発明の一実施形態である血液分析装置の全体制御を説明するフローチャートである。
【図７】この発明の一実施形態である血液分析装置により実行される分析動作制御プログラムの各ステップを示すフローチャートである。
【図８】この発明の一実施形態である血液分析装置により実行される解析プログラムの各ステップを説明するフローチャートである。
【図９】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＳｓｃ及びＦｌを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１０】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＳｓｃ及びＦｌを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１１】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＳｓｃ及びＦｓｃを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１２】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＳｓｃ及びＦｓｃを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１３】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＦｌ及びＦｓｃを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１４】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＦｌ及びＦｓｃを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１５】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＳｓｃ及びＦｌを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１６】この発明の一実施形態である血液分析装置の液晶タッチパネルに、検体分析の結果が表示出力された様子を示す図である。
【図１７】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＳｓｃ及びＦｌを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１８】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＳｓｃ及びＦｓｃを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【図１９】この発明の一実施形態である血液分析装置により取得された粒子データの分布をＦｌ及びＦｓｃを軸にとって表現した二次元散布図の一例を示す図である。
【符号の説明】
【００７１】
１００  血液分析装置
１０１  液晶タッチパネル
２００  試料調製部
２０１  検体セット部
２０２  試薬セット部
２０３  インキュベータ
２０４  分注装置
２０５  検体容器
２０６  反応容器
２０７  試薬容器
２０８  試薬容器
２０９  試料容器
３００  検出部
３０１  フローセル
３０２  オリフィス部
３０３  ノズル
３０４  シース液供給孔
３０５  廃液孔
３０６  レーザ光源
３０７  コンデンサレンズ
３０８  集光レンズ
３０９  ピンホール
３１０  フォトダイオード
３１１  集光レンズ
３１２  ダイクロイックミラー
３１３  フォトマルチプライヤチューブ
３１４  フィルタ
３１５  ピンホール
３１６  フォトマルチプライヤチューブ
３１７  信号処理回路
４００  制御部
４０１  メモリ
４０２  ＣＰＵ
４０３  動作制御回路
４０４  粒子信号入力インターフェイス
４０５  画像データ出力インターフェイス
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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