(57)【要約】【課題】良好な風味と物性を有するチーズを製造するためのチーズスターター及び当該チーズスターターを用いるチーズの製造方法の提供。【解決手段】ガラクトマイセス・ゲオトリスム（Galactomyces geotrishum）を含む、チーズスターター。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガラクトマイセス  ジェオトリカム（Galactomyces geotrichum）を含む、チーズスターター。
【請求項２】
ガラクトマイセス  ジェオトリカムが、１３−１３（受領番号ＮＩＴＥ  ＡＰ−２３３）株である、請求項１に記載のチーズスターター。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のチーズスターターを用いることを含む、チーズの製造方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法によって製造されたチーズ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ガラクトマイセス  ジェオトリカム（Galactomyces geotrishum）を含む、チーズスターターに関する。さらに、本発明は、当該チーズスターターを用いて良好な風味と物性を有するチーズを製造するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
よいチーズを製造するためには安定したチーズスターターを使用することが第一の要件である。さらに、チーズの熟成中におけるチーズスターターの機能、すなわち生菌としての代謝作用、死滅後に遊離してくる酵素の作用を正しく把握し、最適の特性をもつチーズスターターを選択使用することが重要である。
【０００３】
チーズスターターとしては、乳酸菌やペニシリウム・キャンディダム等の真菌が用いられる。しかし、酵母を利用したチーズの研究報告は限られており、良好な風味と物性を有する高品質のチーズを作ることができる酵母を含むチーズスターターは、実用化されていない。また、このようなチーズスターターを利用した高品質なチーズの製造方法も、知られていなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、ガラクトマイセス・ゲオトリスム（Galactomyces geotrishum）を含む、チーズスターターを提供することである。さらに、本発明は、当該チーズスターターを用いて良好な風味と物性を有するチーズを製造するための方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、チーズスターターに加える酵母を検索し、ガラクトマイセス・ゲオトリスム、１３−１３株をチーズスターターとして用いることにより、上記課題が解決できることを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は、下記に関する。
１．ガラクトマイセス  ジェオトリカム（Galactomyces geotrichum）を含む、チーズスターター、
２．ガラクトマイセス  ジェオトリカムが、１３−１３株（受領番号ＮＩＴＥ  ＡＰ−２３３）である、上記１に記載のチーズスターター、
３．上記１又は２に記載のチーズスターターを用いることを含む、チーズの製造方法、及び
４．上記３に記載の方法によって製造されたチーズ。
【０００７】
本発明のガラクトマイセス・ゲオトリスムは、下記の科学的性質を有する。
１．細胞形状：角型楕円形、長楕円形
２．細胞の大きさ：（７−１０）×（６−９）μｍ（ＹＰＤ培地、３０℃、３日間培養）
３．偽菌糸の形成：長角形細胞から連鎖した角形細胞が枝別れした偽菌糸
４．コロニーの形状：表面がラフな灰色のコロニー
５．糖類の発酵性：なし（グルコース、ガラクトース、スクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース）
６．炭水化物の資化性：あり（グルコース、ガラクトース）、なし（スクロース、マルトース、ラクトース、ラフィノース、イヌリン）
７．硝酸塩の資化性：なし
８．３７℃生育性：弱い
９．菌種の分類方法：形態的・生理的性質とＩＴＳ領域のＤＮＡ塩基配列を用いた遺伝子同定による
本菌は、高いプロテアーゼ活性を有する。
【０００８】
本発明のガラクトマイセス・ゲオトリスム１３−１３株は、帯広畜産大学でチーズから分離され、保存されている。本株は、２００６年５月１０日付けで独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに受領番号ＮＩＴＥ  ＡＰ−２３３として寄託されている。
【０００９】
ガラクトマイセス・ゲオトリスムは、乳酸菌と併用したチーズスターターとして有用である。また、本発明のチーズスターターを用いることにより、良好な風味と物性を有するチーズを製造することができる。
【００１０】
より具体的には、本発明のチーズスターターを用いることによって、内部の真菌の成育を適度に抑制し、タンパク質の過剰分解による風味バランスの劣化を防ぎ、販売期間を延長することができる。また、内部から酵母によるタンパク質分解を促進することで、旨味を適度に増加し、かつ、熟成期間を短縮することができる。
【００１１】
また、本発明のチーズスターターを用いることによって、菌叢における酵母の優性の保持、好ましくない汚染酵母の増殖の抑制、及び汚染酵母による風味醸成の変動や不快臭生成の抑制をもたらし、安定した品質のチーズを製造することができる。
【００１２】
さらに、本発明のチーズスターターを用いることによって、チーズカード中に残存する乳糖を迅速に消費し、汚染菌の栄養源を消失することで、初期汚染による品質劣化を防ぐことができる。
【００１３】
本発明のチーズスターターは、ソフトチーズ、好ましくは、カマンベールチーズの製造に用いることができる。
【００１４】
以下に、実施例により本発明を詳しく説明するが、本発明は、これらの実施例によって限定されるものではない。
【実施例１】
【００１５】
酵母のタンパク質分解度測定試験
４℃にて継代培養保管していたG. geotrichum株を１白金耳ＹＰＤ液体培地に接種し、２８℃で７２時間培養した。再度、ＹＰＤ液体培地に継代培養し、２８℃で７２時間培養して活性を高めた。
得られた培養液を１０％（Ｗ／Ｖ）スキムミルク培地１０ｍｌに接種し、３０℃で２４時間培養した。次いで、１０％（Ｗ／Ｖ）スキムミルク培地５０ｍｌに５％量（２．５ｍｌ）接種し、３０℃で２０日間培養した。経時的に得られた各培養液に対し、２０％ＴＣＡ溶液を等量（５０ｍｌ）加えて３０分間室温に放置した。
これを遠心分離（１１０００×ｇ、１０ｍｉｎ．）して上清（ＴＣＡ可溶性画分）を回収し、上清を試験溶液としてＬｏｗｒｙ法にてタンパク量を測定しタンパク分解度とした。
【００１６】
Ｌｏｗｒｙ法を詳述する。試薬Ａ５０ｍｌ（Ｎａ２ＣＯ３１０ｇ＋ＮａＯＨ２ｇ／５００ｍｌ蒸留水）と試薬Ｂ１ｍｌ（ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ２．７ｇ＋ロッシェル塩１ｇ／１００ｍｌ蒸留水）を適時加えて混合した。その後、試験溶液２００μｌに混合試薬１ｍｌを加え、ヴォルテックスミキサーを用いてよく攪拌し、３０℃で１０分間静置した。さらに、フェノール試薬１００μｌを加え、速やかにヴォルテックスミキサーを用いてよく攪拌し、３０℃で３０分間静置し、分光光度計を用いてＯＤ７００ｎｍのときの吸光度を測定し、その値をタンパク分解度として表した。
【００１７】
結果
帯広畜産大学保有菌株からのスターター用酵母のスクリーニング結果を図１に示した。最もプロテアーゼ活性が高く、コロニーの形態が特徴的であり、汚染酵母との判別が目視で容易に行えるという観点から１３−１３株を選択した。
【実施例２】
【００１８】
酵母を添加したチーズと酵母を添加しないチーズを調製し、製造中及び熟成３週間までのチーズを試料として経時的に比較した。試料１０ｇを無菌的に採取し、滅菌したリン酸緩衝液９０ｍｌを加えてストマッカーにて１分間ホモジナイズして１０１希釈液を作成し、この希釈液１ｍｌをリン酸緩衝液９ｍｌに段階的に希釈して１０１〜１０８希釈液を調製した。
各希釈液を１００ｐｐｍクロラムフェニコール添加ＰＤＡ寒天培地に混釈し、３０℃で培養し、生育状態を判定した。
G. geotrichumのコロニーは培養１〜３日後にカビ様の特徴的なコロニーを形成するため、これを目視で選択し、この中から培養１週間後にカビのコロニーと確認できたものを差し引いて総数を判定した。
カビのコロニーは培養後３〜５日で生育し、十分に生育すると分生子（胞子）を形成するため、これを目視で選択し、成長したカビのコロニーを２週間後に判定した。
汚染酵母のコロニーはG. geotrichum同様、培養後１〜３日で生育するが、細菌と類似したコロニーを形成するため、培養１週間後に目視によりこのコロニーを汚染酵母と判定し、G. geotrichumと区別した。
【００１９】
結果
チーズの内部にカビが分散している混合型製法では、酵母によるカビの生育抑制が認められた。しかし、チーズの外側表面にカビが分散しているカビ噴霧型の製法では、酵母によるカビの生育抑制は、ほとんど認められなかった。したがって、酵母スターターを用いることによってチーズ内部でのカビの影響を少なくすることができることが明らかとなった（図２、図３）。
【実施例３】
【００２０】
実施例２と同様な方法によってチーズを調製した。
その結果、カビ混合型製法、カビ噴霧型製法とも酵母スターターを用いることによって、汚染酵母の生育抑制が認められた。よって、これら汚染酵母による風味及び熟成のムラを解消することができることが明らかとなった（図４）。
【実施例４】
【００２１】
酵母を添加したチーズと酵母を添加しないチーズを調製し、製造中及び熟成３週間までのチーズを試料として経時的に比較した。
白カビチーズから表皮を除去したボディ部分を試料とし、４０ｍｌ容バイアルに試料を２００ｍｇ投入して６５℃で２０分間に暴露させた。このヘッドスペースから採取した試料香気中の下記の低級脂肪酸等をヘッドスペース−ＳＰＭＥ／ＧＣ法にて分析した。内部標準としてクロトン酸（５，０００ｐｐｍ）を１０μｌ加えた。検出ピークの同定は、同一条件で得られた以下の標準物質の保持時間により判定した。
（１）脂肪酸（酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸及びデカン酸）９種類。
（２）脂肪酸エチルエステル（酢酸、酪酸、カプロン酸、オクタン酸及びデカン酸それぞれのエステル）５種類。
（３）脂肪酸メチルエステル（酢酸、酪酸、カプロン酸、オクタン酸及びデカン酸それぞれのエステル）５種類。
【００２２】
その結果、酵母スターターを使用して製造した方が対照区に比べてエタノール、酪酸、カプロン酸などの生成が少なかった。すなわち、酵母スターターによりこれら不快臭の生成が抑制され、良好な風味を持つカマンベールチーズを製造することができることが証明された（図５）。
【実施例５】
【００２３】
酵母を添加したチーズと酵母を添加しないチーズを製造し、製造中及び熟成３週間までのチーズを試料として、乳糖量を経時的に比較した。チーズをナイフで細断し、５ｇを５０ｍｌ遠沈管に採取し、７５％エタノール２０ｍｌを加えて、ポリトロンホモジナイザーにて１０，０００ｒｐｍ．で１分間ホモジナイズした。均質化した乳液を遠心分離（３，０００ｒｐｍ．、１５ｍｉｎ．）し、上清を０．４５μｍＤＩＳＭＩＣフィルターでろ過して試験溶液とした。試験溶液をＨＰＬＣ法で分析し、乳糖量を定量した。
その結果、酵母スターターを使用して製造されたカマンベールチーズにおいて乳糖の消費がより早いことがわかった。乳糖消失は、汚染菌の栄養源の減少につながり、熟成期の汚染リスクが低減されることがわかった。すなわち、酵母スターターを使用は、チーズの品質向上につながることが示唆された（図６）。
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明は、良好な風味と物性を有するチーズを製造するためチーズスターターとして用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】帯広畜産大学保有酵母のプロテアーゼ活性を示す。
【図２】カビ及び汚染酵母の判定を示す。
【図３−１】酵母スターターを用いることによる真菌の影響を示す（カビ混合型）。
【図３−２】酵母スターターを用いることによる真菌の影響を示す（カビ噴霧型）。
【図４−１】酵母スターターを用いることによる汚染酵母の生育抑制を示す（カビ混合型）。
【図４−２】酵母スターターを用いることによる汚染酵母の生育抑制を示す（カビ噴霧型）。
【図５】酵母スターターを用いることによる低級脂肪酸の変化を示す。
【図６−１】酵母スターターを用いることによる乳糖消失効果を示す（カビ混合型）。
【図６−２】酵母スターターを用いることによる乳糖消失効果を示す（カビ噴霧型）。
【図１】
2007312634.tif 000002
【図３−１】
2007312634.tif 000003
【図３−２】
2007312634.tif 000004
【図４−１】
2007312634.tif 000005
【図４−２】
2007312634.tif 000006
【図６−１】
2007312634.tif 000007
【図６−２】
2007312634.tif 000008
【図２】
2007312634.tif 000009
【図５】
2007312634.tif 000010