(57)【要約】【課題】抗原抗体反応に基づく測定において、アビディティを高め、高精度かつ迅速な分析が可能なヒトアルブミン測定用抗体試薬を提供する。【解決手段】ヒトアルブミン測定用抗体試薬は、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３８号の産生細胞株より産生される第１の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４６０号の産生細胞株より産生される第２の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３０７号の産生細胞株より産生される第３の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４５９号の産生細胞株より産生される第４の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３７号の産生細胞株より産生される第５の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体とを含み、前記第１〜第３の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体の重量比が、１：１：１である。【選択図】図１
2007225417.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体中のヒトアルブミンを抗原抗体反応の原理に基づいて測定するための複数のモノクローナル抗体を混合した試薬であって、
受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３８号の産生細胞株より産生される第１の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、
受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４６０号の産生細胞株より産生される第２の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、
受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３０７号の産生細胞株より産生される第３の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、
受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４５９号の産生細胞株より産生される第４の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、
受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３７号の産生細胞株より産生される第５の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体とを含み、
前記第１〜第３の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体の重量比が、１：１：１である、試薬。
【請求項２】
前記第４の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体の重量、及び前記第５の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体の重量が共に、前記第１の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体の重量以下である、請求項１に記載の試薬。
【請求項３】
前記第１〜第５の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体の重量比が、１：１：１：１：１である、請求項１に記載の試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、試料中の特定成分を免疫測定方法によって分析するための抗体試薬に関し、より特定的には、血液や尿中等のヒトアルブミンを免疫測定方法によって分析するための抗体試薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
医療分野では、様々な疾患を診断したり病状の経過を調べたりするために、ヒトの体液中に存在する、各疾患に特徴的な蛋白質の含有量を調べることが広く利用されている。これらの蛋白質の含有量を測定するためには、主に、特異性の高い抗原抗体反応を利用した免疫反応測定方法が広く用いられる。免疫反応測定方法としては、特に、抗原と抗体の反応により生じる凝集複合体を検出する免疫比朧法や免疫比濁法がよく用いられる。
【０００３】
免疫比朧法や免疫比濁法では、凝集複合体を生成させるために、抗原及び抗体がともに２価以上である必要がある（例えば、非特許文献１参照）。したがって、分析対象がヒトアルブミンである場合、ヒトアルブミンは多価抗原ではないため、抗原結合部位を複数有するポリクローナル抗体を用いることにより、相対的にヒトアルブミンが２価以上となるようにすることが一般的に行われている。
【０００４】
しかしながら、ポリクローナル抗体は、動物に抗原を投与することにより血液中に抗原に結合する抗体を多量に出現させ、この血液の全部あるいは一部を採取し、精製することにより得られる。よって、得られるポリクローナル抗体の性質は、動物の個体差や生育環境、状態などに依存する。したがって、ポリクローナル抗体を作製する毎に、その性状を常に同一のものとすることは困難であるため、用いるポリクローナル抗体によってヒトアルブミンとの反応性が変動するおそれがある。
【０００５】
この問題点を解決するために、３種類のモノクローナル抗体を混合した試薬の例が開示されている（例えば、特許文献１参照）。特許文献１は、ＥＬＩＳＡ法のインヒビション半値に基づいた第１の抗体及び第２の抗体の選択基準、並びに第３の抗体の組み合わせ例について開示している。特許文献１に記載の従来のモノクローナル抗体試薬によれば、継続して同質のモノクローナル抗体を得ることができるため、抗原との安定した反応性を得ることができる。
【特許文献１】特開２００４−４５３８４号公報
【非特許文献１】ウィリアム・イー・ポール（Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｅ．  Ｐａｕｌ）編、「ファンダメンタル・イミュノロジー（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」、第２版、レイバン  プレス（Ｒａｖａｎ  Ｐｒｅｓｓ）、米国、１９８９年、ｐ３３７−３３８
【非特許文献２】中村桂子、藤山秋佐夫、松原謙一監訳、「細胞の分子生物学」、第３版、ニュートン  プレス、１９９５年、ｐ１２０８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１に記載の従来のモノクローナル抗体試薬は、ポリクローナル抗体に比べ、アビディティが低いという問題がある。ここで、アビディティとは、抗原及び抗体の結合力をいう。特許文献１に記載の従来のモノクローナル抗体試薬は、アビディティが低いため、同試薬を免疫比朧法や免疫比濁法による測定に用いた場合、反応の進行に時間がかかる。このため、検体を迅速に分析することができない。
【０００７】
特許文献１に記載の従来のモノクローナル抗体試薬のアビディティを高めるために、混合するモノクローナル抗体の数を増やす方法が考えられる。しかしながら、特許文献１に記載の従来のモノクローナル抗体試薬は、３種類のモノクローナル抗体の組み合わせ例を開示しているにすぎない。したがって、４種類以上のモノクローナル抗体を用いてモノクローナル抗体試薬を構成する場合の数や配合比は不明である。
【０００８】
また、複数のモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体試薬は、混合するモノクローナル抗体の数やその配合比によっては、免疫比朧法や免疫比濁法による測定に用いた場合、測定時間に伴う濁度指標の変化が典型的な飽和曲線を形成せず、反応の飽和領域での値に基づく測定が困難であるという問題点がある。したがって、モノクローナル抗体試薬に混合するモノクローナル抗体の数を単に増やすだけでは、アビディティを高めることができない。
【０００９】
それゆえに、本発明の目的は、抗原抗体反応に基づく測定において、アビディティを高め、高精度かつ迅速な分析が可能なヒトアルブミン測定用抗体試薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、検体中のヒトアルブミンを抗原抗体反応の原理に基づいて測定するための複数のモノクローナル抗体を混合した試薬であって、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３８号の産生細胞株より産生される第１の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４６０号の産生細胞株より産生される第２の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３０７号の産生細胞株より産生される第３の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４５９号の産生細胞株より産生される第４の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体と、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３７号の産生細胞株より産生される第５の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体とを含み、第１〜第３の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体の重量比が、１：１：１である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、抗原抗体反応に基づく測定において、アビディティを高め、高精度かつ迅速な分析が可能なヒトアルブミン測定用抗体試薬が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下に、本発明の一実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬について説明する。ヒトアルブミン測定用抗体試薬は、代表的には以下の手順で作製することができる。
【００１３】
本発明の一実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬は、５種類の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体を混合することによって得られる。以下、５種類の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体をそれぞれ区別するために、第１〜第５の抗体と呼ぶ。
【００１４】
第１の抗体は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３８号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体であり、第２の抗体は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４６０号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体であり、第３の抗体は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３０７号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体であり、第４の抗体は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４５９号（２Ｆ１３Ｆ１１Ｇ１１株）の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体であり、第５の抗体は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３７号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体である。
【００１５】
本発明の一実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬は、第１〜第５の抗体を含む。混合される第１〜第５の抗体のうち、第１〜第３の抗体の重量比は１：１：１である。
【００１６】
本実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬によれば、５種類の抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体を混合することにより、アビディティを高め、抗原抗体反応の原理に基づく測定において、凝集複合体の生成が飽和に達するまでの時間を短縮することができる。よって、免疫比朧法や免疫比濁法などの抗原抗体反応の原理に基づく測定において、抗ヒトアルブミン血清よりＩｇＧ分画を分離して得た抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体と同等以上のスピードで反応を進行させることができるため、分析に要する時間を短縮することができる。
【００１７】
また、第１〜第３の抗体は、ＥＬＩＳＡ法のインヒビション半値による判定（図示せず）で、第４及び第５の抗体に比べ、ヒトアルブミンに対して親和性が高いと考えられる。したがって、第１〜第３の抗体の重量比を等しくすることにより、ヒトアルブミン測定用抗体試薬とヒトアルブミンとの反応開始時から、効率的に凝集複合体の粒径を成長させることができるため、安定した散乱光の経時変化を得ることができる。
【００１８】
また、本実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬を用いれば、免疫比朧法や免疫比濁法による測定を行った際に、測定時間に伴う濁度指標の変化が典型的な飽和曲線を形成する。したがって、凝集複合体の生成の飽和点が明瞭であるため、反応の飽和領域での値に基づく測定を容易に行うことができる。以上のように、本実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬を用いることにより、アビディティを高め、高精度かつ迅速な分析が可能である。
【００１９】
また、本実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬は、複数のモノクローナル抗体を組み合わせて構成しているため、ポリクローナル抗体を用いた従来の試薬に比べ、性能を一定化し易い。なぜなら、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ細胞株により産生されるからである。以下に、その理由について詳細に説明する。
【００２０】
抗体を産生するＢ細胞と、骨髄腫瘍細胞（ミエローマ細胞）とを細胞融合することにより、融合細胞集団が得られる。融合細胞集団は、抗体産生能と強い増殖能とを併せ持つ融合細胞の集合体であり、その中から一つの細胞のみを分離し、増殖させることによってハイブリドーマ細胞株である産生細胞株を確立する。したがって、確立したハイブリドーマ細胞株が産生する抗体の性状は常に同一のものとなる。また、ハイブリドーマ細胞株は増殖能が強く、凍結保存が可能であるため、適切な管理をしていれば尽きることがない。よって、ハイブリドーマ細胞株を、培養液あるいは腹腔中で培養し、精製することにより、半永久的に同一性状の抗体を得ることができる。
【００２１】
一方、ポリクローナル抗体は、動物に抗原を投与し、血液中に抗原に結合する抗体を多量に出現させ、この血液の全部あるいは一部を採取し、精製することにより得られる。よって、得られるポリクローナル抗体の性質は、動物の個体差、生育環境、状態などに依存する。このため、同一性状のポリクローナル抗体を得続けることが困難である。しかしながら、本実施形態によれば、モノクローナル抗体を用いるため、常に同一性状の抗体を使用することが可能となる。したがって、試薬としての抗体の供給が安定するため、ヒトアルブミン測定用抗体試薬の性能を安定させ、一定に維持し易い。
【００２２】
また、本実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬は、好ましくは、第４の抗体の重量、及び第５の抗体の重量が共に、第１の抗体の重量以下であるとよい。第４の抗体の重量及び第５の抗体の重量を共に、第１の抗体の重量以下とすることにより、ヒトアルブミンに対する親和性の高い抗体（第１の抗体）の試薬における含有量を増やすことができる。したがって、抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体を用いる場合と比べ、免疫比朧法や免疫比濁法による測定時の凝集複合体の生成が飽和に達するまでの時間をより短縮することができ、また、抗原との反応も強くすることができる。
【００２３】
また、本実施形態に係るヒトアルブミン測定用抗体試薬は、さらに好ましくは、第１〜第５の抗体の重量比が１：１：１：１：１であるとよい。第１〜第５の抗体の重量を等しくすることにより、免疫比朧法や免疫比濁法による測定において、特に後地帯領域においても、より強い凝集複合体の生成を得ることができる。後地帯領域とは、抗原または抗体が過剰に存在する範囲をいい、地帯現象（プロゾーン現象とも呼ばれる）が発生する領域である。地帯現象とは、抗原と抗体が最大の凝集複合体を形成する当領域よりも、いずれかが過剰に存在する場合に、凝集複合体が生じにくくなり、測定値（例えば、散乱光強度）が低下する現象である。しかしながら、上述のように、本実施形態によれば、後地帯領域においても、凝集複合体の生成を促進することができるので、測定値の低下を緩和することができる。
【００２４】
上記の要件を満たしていれば、混合時における各抗体の存在形態は特に限定されない。抗体の存在形態は、例えば、水溶液状態、風乾燥状態、凍結乾燥状態などのいずれであってもよい。また、各抗体と共存する物質は、各抗体のヒトアルブミンへの結合能を消失させない限り、任意の組成であってよい。なお、作製したヒトアルブミン測定用抗体試薬は室温でも保存することができるが、抗体の変性防止の点からは、より低温保存が好ましく、４℃で保存することがより好ましい。
【００２５】
上記の要件を満たすように作製されたヒトアルブミン測定用抗体試薬を免疫比朧法や免疫比濁法による測定に利用するためには、例えば、当該ヒトアルブミン測定用抗体試薬を２〜６重量％程度のポリエチレングリコール６０００の存在下で、ヒトアルブミンを含む検体と反応させる。また、この場合、溶液状態のヒトアルブミン測定用抗体試薬を用いてもよく、また、溶液状態のヒトアルブミン測定用抗体試薬を風乾、あるいは、凍結乾燥して用いてもよい。
【００２６】
本発明に係る「抗アルブミンモノクローナル抗体」には、その結合特性を保持した機能性の断片もまた含まれる。抗体の断片は、免疫グロブリンのＦ（ａｂ’）２を含み得る。抗体の断片は、インタクトな免疫グロブリンの酵素的または化学的分離によって生じ得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、非特許文献２に記載されたような標準的な方法を用い、ｐＨ３．０〜３．５においてペプシンでタンパク質消化することによってＩｇＧ分子から得ることができる。
【００２７】
なお、ヒトアルブミン測定用抗体試薬を構成するモノクローナル抗体を、例えば、ラテックス、金コロイド、磁気微粒子などの微粒子担体に固定化させて用いてもよく、また、モノクローナル抗体に酵素、色素、蛍光物質、発光物質などを標識してもよい。
【００２８】
また、ヒトアルブミン測定用抗体試薬の緩衝剤成分及びｐＨは、抗体の結合能を消失させない限り、任意であって良い。ヒトアルブミン測定用抗体試薬のｐＨは、例えば、ｐＨ５〜７．４である。また、緩衝剤として、例えば、リン酸やクエン酸、フタル酸などのカルボン酸を用いることができる。
【００２９】
なお、ヒトアルブミン測定用抗体試薬が分析対象とする検体は特に限定されず、例えば、尿、血液、血漿、血清、またはヒトアルブミンを溶解した水溶液等が挙げられる。また、以上説明した本実施形態に係る検体中のヒトアルブミン測定用抗体試薬は、臨床検査やＰＯＣＴ検査機器等においても有用である。
【００３０】
以下に示す実施例１〜３及び比較例１〜３について、免疫比朧法により、ヒトアルブミンとの反応性の経時変化について評価した。また、実施例２及び比較例１について、免疫比朧法により、ヒトアルブミン濃度と散乱光強度との関係について評価した。なお、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００３１】
（実施例１）
以下、ヒトアルブミン測定用抗体試薬の作製方法を示す。なお、以下に示す緩衝液などの調製には、Ｍｉｌｌｉ−Ｑ  ＳＰ  ＴＯＣ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製）でろ過した純水を使用した。また、以下に示す塩、緩衝剤などの試薬のうち、特に記載の無いものは、いずれも和光純薬工業製の特級試薬を使用した。
【００３２】
５種類の抗ヒトアルブミン抗体には、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３８号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体を第１の抗体として、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４６０号（４１０Ａ１株）の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体を第２の抗体として、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−８３０７号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体を第３の抗体として、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−１０４５９号（２Ｆ１３Ｆ１１Ｇ１１株）の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体を第４の抗体として、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７９３７号の産生細胞株より産生される抗ヒトアルブミンモノクローナル抗体を第５の抗体として用いた。
【００３３】
各抗体は次のようにして得た。上記の細胞株をそれぞれ、メスのＢＡＬＢ／ｃマウスの腹腔内に注入し、増殖させて腹水を得た。得られた各腹水をそれぞれ、プロテインＡカラムクロマトグラフィーを用いて精製した。カラムに充填したプロテインＡ固定化ゲルは、アマシャム・ファルマシア製のものを使用した。精製に用いた平衡化緩衝液には、１．５Ｍグリシン、３．０Ｍ  ＮａＣｌ、ｐＨ８．９の組成のものを使用し、溶出緩衝液には、０．１Ｍクエン酸、ｐＨ４．０の組成のものを使用した。精製は次のようにして行った。カラムに充填したゲル容量の５倍の平衡化緩衝液を流してカラムを平衡化した後、カラム全結合容量の１０〜２０％の抗体を含む腹水を平衡化緩衝液で容量を２倍に希釈してカラムに流し、腹水中の抗体をプロテインＡに結合させた。続いて、平衡化緩衝液をプロテインＡに吸着しない腹水成分がカラムより出てこなくなるまで流し、カラムを洗浄した。続いて、カラムに溶出緩衝液を流し、プロテインＡに結合した抗体を溶出した。溶出した抗体分画を分画分子量１万の透析チューブに入れ、約１００倍容量の０．０４重量％ＮａＮ3を含むＰＢＳ緩衝液（８ｇ／ｌ  ＮａＣｌ、０．２ｇ／ｌ  ＫＣｌ、１．１５ｇ／ｌ  Ｎａ2ＨＰＯ4・１２Ｈ2Ｏ、０．２ｇ／ｌ  ＫＨ2ＰＯ4、ｐＨ７．４）で数回透析して、緩衝液成分を置換した。続いて、各抗体濃度を２８０ｎｍの吸光度測定により推定し、透析で用いたものと同じ緩衝液で調整して各抗体濃度を１．０ｍｇ／ｍｌとした。なお、抗体濃度は、特にこれに限定されるものではない。
【００３４】
以上の手順で得た各抗体溶液を、次に示す配合比で混合し、ヒトアルブミン測定用抗体試薬を作製した。第１〜第５の抗体の全体の合計重量を１とした場合に、第１の抗体、第２の抗体、第３の抗体、第４の抗体、第５の抗体の重量比がおよそ０．２７：０．２７：０．２７：０．１０：０．１０となるように混合した。以下、同重量比で混合したヒトアルブミン測定用抗体試薬をヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａと呼ぶ。
【００３５】
（実施例２）
第１〜第５の抗体の混合比を変更したことのほかは、実施例１と同様にしてヒトアルブミン測定用抗体試薬を作製した。第１〜第５の抗体の全体の合計重量を１とした場合に、第１の抗体、第２の抗体、第３の抗体、第４の抗体、第５の抗体の重量比がおよそ０．２０：０．２０：０．２０：０．２０：０．２０となるように混合した。以下、同重量比で混合したヒトアルブミン測定用抗体試薬をヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｂと呼ぶ。ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｂは、第１〜第５の抗体の重量比が全て等しい。
【００３６】
（実施例３）
第１〜第５の抗体の混合比を変更したことのほかは、実施例１と同様にしてヒトアルブミン測定用抗体試薬を作製した。第１〜第５の抗体の全体の合計重量を１とした場合に、第１の抗体、第２の抗体、第３の抗体、第４の抗体、第５の抗体の重量比がおよそ０．１３：０．１３：０．１３：０．３０：０．３０となるように混合した。以下、同重量比で混合したヒトアルブミン測定用抗体試薬をヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｃと呼ぶ。
【００３７】
（比較例１）
抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体試薬を作製した。抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体試薬は、ヒトアルブミンを免疫したウサギより採取した抗血清より、プロテインＡカラムクロマトグラフィーを用いて精製した。溶出した抗体分画を分画分子量１万の透析チューブに入れ、約１００倍容量の０．０４重量％ＮａＮ3を含むＰＢＳ緩衝液で数回透析して、緩衝液成分を置換した。続いて、各抗体濃度を２８０ｎｍの吸光度測定により推定し、透析で用いたものと同じ緩衝液で調整して抗体濃度を１．０ｍｇ／ｍｌとした。
【００３８】
（比較例２）
第１〜第５の抗体の混合比を変更したことのほかは、実施例１と同様にしてヒトアルブミン測定用抗体試薬を作製した。第１〜第５の抗体の全体の合計重量を１とした場合に、第１の抗体、第２の抗体、第３の抗体、第４の抗体、第５の抗体の重量比がおよそ０．４０：０．４０：０．０６７：０．０６７：０．０６７となるように混合した。以下、同重量比で混合したヒトアルブミン測定用抗体試薬をヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｙと呼ぶ。
【００３９】
（比較例３）
第１〜第５の抗体の混合比を変更したことのほかは、実施例１と同様にしてヒトアルブミン測定用抗体試薬を作製した。第１〜第５の抗体の全体の合計重量を１とした場合に、第１の抗体、第２の抗体、第３の抗体、第４の抗体、第５の抗体の重量比がおよそ０．８：０．０５：０．０５：０．０５：０．０５となるように混合した。以下、同重量比で混合したヒトアルブミン測定用抗体試薬をヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｚと呼ぶ。
【００４０】
（試験例１）ヒトアルブミンとの反応安定性
実施例１〜３、及び比較例１〜３に示す手順により作製したヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ〜Ｃ、Ｙ、Ｚ及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体を用い、免疫比朧法によりヒトアルブミン濃度を測定した。測定には、０．０５Ｍクエン酸，４重量％ポリエチレングリコール６０００，ｐＨ５．０の緩衝液を用いた。
【００４１】
測定装置は、次のように構成した自作の測定装置を使用した。光源は、２７０Ｈｚで変調した波長６８５ｎｍの出射出力１５ｍＷ半導体レーザーポインタ（キコー技研製、型番ＭＬＸＳ−Ｄ−１２−６８０−３５）とした。検出器は、可視赤外精密測光用シリコンフォトダイオード（浜松フォトニクス製、型番Ｓ２３８７−６６Ｒ）とした。セルは、厚さ０．１ｃｍの光学ガラス板を張り合わせ、容量約２００μｌの正四角柱形に構成した。
【００４２】
光源より０．５ｃｍのところに、その一面が光源と垂直になるようにセルを配置した。検出器は、光源と９０°の角度を成す方向で、セルより５．５ｃｍ離れた場所に配置し、検出器に迷光が入射しないように、検出器とセルとの間には遮光筒を設けた。検出器により検知された光量に依存した電流信号は、電流電圧変換回路（１０6Ｖ／Ａ）およびオペアンプによる増幅回路を経て１００倍の電圧信号に増幅した後、ロックインアンプ（エヌエフ回路設計ブロック製、型番５６１０Ｂ）を通して位相敏感検波し、ＧＰＩＢ制御により、コンピュータへ測定データを取り込んだ。
【００４３】
ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ〜Ｃ、Ｙ、Ｚ及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体の、ヒトアルブミンに対する反応の経時変化を以下に示す手順で測定した。緩衝液中におけるヒトアルブミンの濃度が１．３ｍｇ／ｄｌとなり、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ〜Ｃ、Ｙ、Ｚ及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体が０．１２ｍｇ／ｍｌとなるように混合して攪拌した。混合後、散乱光を０．５秒間隔で１２０秒間継続して測定した。測定値は電圧値として得られた。なお、測定は、室温（約２０℃）で行った。
【００４４】
ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ〜Ｃ、及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体と、ヒトアルブミンとの反応の経時変化を図１に示す。図１は、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ〜Ｃ、及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体を用い、免疫比朧法によりヒトアルブミン濃度を測定した場合における、散乱光強度の経時変化を示すグラフである。図１において、縦軸は、散乱光強度（Ａ．Ｕ．）を示し、横軸は、測定時間（秒）を示す。
【００４５】
図１に示す結果から、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ〜Ｃは、抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体試薬に比べ、反応の立ち上がりが速く、また、散乱光強度も大きいことが分かる。特に、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ及びＢを用いた場合、すなわち、第４の抗体の重量及び第５の抗体の重量が共に、第１の抗体の重量以下である場合、凝集複合体の生成が飽和に達するまでの時間がより速くなり、また、反応も強いことが分かる。
【００４６】
次に、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｙ及びＺと、ヒトアルブミンとの反応の経時変化を、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａとヒトアルブミンとの反応の経時変化と共に図２に示す。図２において、縦軸は、散乱光強度（Ａ．Ｕ．）を示し、横軸は、測定時間（秒）を示す。なお、図２に示す経時変化を測定した際の条件は、図１に示す経時変化を測定した際の条件と同様であるため、説明を省略する。
【００４７】
図２に示す結果から、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａと比較すると、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｙ、Ｚ共に散乱光強度が低いことが分かる。ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｙは、散乱光強度がいったん増加するものの、約５０秒経過後を境に散乱光強度が低下し、不安定な反応性を示した。また、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｚは、３つの試薬の中でも最も反応の立ち上がりが遅く、飽和点も不明瞭である。しかしながら、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａを用いた場合、測定時間が経過しても散乱光強度が低下しないことが分かる。図１に示すヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｂ及びＣについても同様のことが言える。
【００４８】
（試験例２）ヒトアルブミン濃度に対する反応性の変動
次に、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｂ、及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体試薬を用い、免疫比朧法により、ヒトアルブミン濃度に対する反応性の変動について評価した。緩衝液中のヒトアルブミン濃度を０．４３，１．３，２．１，４．２ｍｇ／ｄｌと４段階に設定し、それぞれのヒトアルブミン濃度におけるヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｂ、及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体試薬の反応性を評価した。測定時間は、各試薬とヒトアルブミンの混合後、３００秒後である。これ以外の免疫比朧法の条件は試験例１と同様であるため、説明を省略する。
【００４９】
その結果を図３に示す。図３において、縦軸は、散乱光強度（Ａ．Ｕ．）を示し、横軸は、ヒトアルブミン濃度（ｍｇ／ｄｌ）を示す。また、黒丸は、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｂの散乱光強度を示し、白丸は、ポリクローナル抗体試薬の散乱光強度を示す。
【００５０】
図３に示す結果から、ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｂは、抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体試薬に比べ、特に、後地帯領域における散乱光強度が強いことから、より強い凝集複合体の生成を得ることができることが分かる。
【００５１】
以上の結果から、実施例１〜３に示すヒトアルブミン測定用抗体試薬を用いることにより、比較例１〜３に示すヒトアルブミン測定用抗体試薬の配合に比べ、抗原抗体反応に基づく測定時において、アビディティを高め、高精度かつ迅速な分析が可能となることが分かる。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明は、抗原抗体反応に基づく測定において、アビディティを高め、高精度かつ迅速な分析が可能なヒトアルブミン測定用抗体試薬等として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ〜Ｃ、及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体を用い、免疫比朧法によりヒトアルブミン濃度を測定した場合における、散乱光強度の経時変化を示すグラフ
【図２】ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ａ、Ｙ及びＺを用い、免疫比朧法によりヒトアルブミン濃度を測定した場合における、散乱光強度の経時変化を示すグラフ
【図３】ヒトアルブミン測定用抗体試薬Ｂ、及び抗ヒトアルブミンポリクローナル抗体試薬を用い、免疫比朧法によりヒトアルブミン濃度を測定した場合における、ヒトアルブミン濃度に対する散乱光強度の変化を示すグラフ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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