(57)【要約】  【課題】  フィルター基材の表面のアニオン性電荷量を正確に定量化することにより、フィルター基材のブラジキニン産生能を適切に評価ができるアニオン性電荷定量化方法を提供すること  【解決手段】  アニオン性電荷を有する不織布の表面にカチオン性電荷を有する化物質が保持されたフィルター基材の表面を、カチオン性電荷を有する色素からなる染色剤を用いて染色し、フィルター基材の表面の反射吸光度を測定することによりアニオン性電荷を定量化する。フィルター基材の表面を染色する際には、染色助剤を用いてフィルター基材の表面に染色剤を吸着させる。また、フィルター基材の表面を染色した後に、フィルター基材の表面を媒染剤に接触させてフィルター基材の表面に染色剤を固定する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィルター基材の表面を、カチオン性電荷を有する色素からなる染色剤を用いて染色し、前記フィルター基材の表面の反射吸光度を測定することを特徴とするアニオン性電荷定量化方法。
【請求項２】
前記フィルター基材は、アニオン性電荷を有する不織布にカチオン性電荷を有する物質を保持させたものである請求項１に記載のアニオン性電荷定量化方法。
【請求項３】
前記フィルター基材の表面を染色する際に、染色助剤を用いて前記フィルター基材の表面に染色剤を吸着させる請求項１または２に記載のアニオン性電荷定量化方法。
【請求項４】
前記フィルター基材の表面を染色した後に、前記フィルター基材の表面を媒染剤に接触させて前記フィルター基材の表面に染色剤を固定する請求項１ないし３のいずれかに記載のアニオン性電荷定量化方法。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれかに記載のアニオン性電荷定量化方法によって測定された反射吸光度が０．２６以下であるフィルター基材を有することを特徴とする血液処理フィルター。
【請求項６】
前記フィルター基材は、アニオン性電荷を有する不織布の表面にカチオン性電荷を有する物質が保持されたものである請求項５に記載の血液処理フィルター。
【請求項７】
前記フィルター基材は、ゼータ電位が６〜３０ｍＶである請求項５または６に記載の血液処理フィルター。
【請求項８】
白血球捕捉フィルターまたは凝集塊捕捉フィルターである請求項５ないし７のいずれかに記載の血液処理フィルター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アニオン性電荷定量化方法および血液処理フィルターに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、臨床輸血の場においては、必要な成分のみを分離した血液等や、さらに不必要な成分を除去した血液等が用いられている。例えば、同種抗原感作、非溶血性発熱反応等の副作用を防止するために白血球を除去した血液等が挙げられる。
【０００３】
このような、必要な成分の分離や、不必要な成分の除去には、ポリエステル製不織布やコットン綿等からなるフィルターを有する血液処理フィルターが用いられる場合が多い。
【０００４】
しかし、上記の不必要な成分等を血液処理フィルターを用いて濾過し、除去したにも関わらず、処理後の血液等の使用により、上記とは異なる副作用が発生する場合がある。
【０００５】
例えば、表面にアニオン性電荷を持つ材料からなるフィルターを有する血液処理フィルターを用いて濾過すると、濾過後の血液中にブラジキニンが多量に産生することがある。このブラジキニンは、血圧降下作用を持つ物質であるので、多量に産生することは好ましくない。
【０００６】
ブラジキニンが産生（上昇）するのは、アニオン性電荷を持つ材料と血液とが接触すると、血液凝固第XII因子の活性化が起こり、活性化血液凝固第XII因子によってプレカリクレインからカリクレインが生成され、さらにカリクレインによって高分子量キニノーゲンが限定分解されてブラジキニンが生成（産生）されるためである。
【０００７】
例えば、特許文献１には、カチオン性電荷を有する色素の水溶液に血液濾過材料を浸漬し、血液濾過材料に色素を吸着した後の水溶液の上清の吸光度と、血液濾過材料を加えずに同様の操作を行って未吸着時の吸光度を測定するとともに、予め、陰性電荷量が解った材料で検量線を作製し、血液濾過材料に吸着された色素の量より、陰性電荷量を測定する表面陰性荷電測定方法が記載されている。
なお、ここで得られる陰性電荷量は、陽性荷電量をプラス（＋）、陰性荷電量をマイナス（−）で表わした時の両荷電が相殺された後の荷電量、即ち、陽性荷電量から陰性荷電量を差し引いた荷電量である。
【特許文献１】特許第３１７６７５２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、本発明者の研究により、特許文献１に記載されている水溶液の吸光度測定による表面陰性荷電測定方法では、フィルター基材の表面にカチオン性電荷を有する物質が保持させた後に、フィルター基材の表面に残留するアニオン性電荷量を正確に把握することができないことが解った。
【０００９】
すなわち、水溶液の吸光度測定による表面陰性荷電測定方法では、フィルター基材の表面にカチオン性電荷を有する物質を保持させたかどうかの判別はできるが、ブラジキニンの産生を予測する精度はないことが解った。
また、水溶液の吸光度測定による表面陰性荷電測定方法では、血液濾過材料（フィルター基材）の親水性が低い場合には、水溶液に浸漬させることが難しいので、水溶液の吸光度測定結果にバラツキが発生するという問題点もある。
このため、水溶液の吸光度測定による表面陰性荷電測定方法では、血液の濾過によるフィルター基材のブラジキニン産生能を適切に評価することが極めて困難である。
【００１０】
したがって、本発明の課題は、フィルター基材の表面のアニオン性電荷量を正確に定量化することにより、フィルター基材のブラジキニン産生能を適切に評価ができるアニオン性電荷定量化方法を提供することである。
また、濾過後の血液中のブラジキニンの産生量の低いフィルター基材を有する血液処理フィルターを提供することである。
なお、本発明において「血液」とは、血漿、白血球、赤血球、および血小板からなる群から選択される少なくとも１種を含む血液成分もしくは全血を意味する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者は、フィルター基材の総荷電量ではなく、カチオン性電荷量の存在下であってもアニオン性電荷のみを測定する方法を見出した。
また、この方法により測定される表面のアニオン性電荷量が特定範囲であるフィルター基材を有する血液処理フィルターが、ブラジキニン産生能の低いことを見出した。
上記課題は、以下に示す（１）〜（８）の本発明によって解決される。
【００１２】
（１）フィルター基材の表面を、カチオン性電荷を有する色素からなる染色剤を用いて染色し、前記フィルター基材の表面の反射吸光度を測定することを特徴とするアニオン性電荷定量化方法。
【００１３】
（２）前記フィルター基材は、アニオン性電荷を有する不織布にカチオン性電荷を有する物質を保持させたものである上記（１）に記載のアニオン性電荷定量化方法。
【００１４】
（３）前記フィルター基材の表面を染色する際に、染色助剤を用いて前記フィルター基材の表面に染色剤を吸着させる上記（１）または（２）に記載のアニオン性電荷定量化方法。
【００１５】
（４）前記フィルター基材の表面を染色した後に、前記フィルター基材の表面を媒染剤に接触させて前記フィルター基材の表面に染色剤を固定する上記（１）ないし（３）のいずれかに記載のアニオン性電荷定量化方法。
【００１６】
（５）上記（１）ないし（４）のいずれかに記載のアニオン性電荷定量化方法によって測定された反射吸光度が０．２６以下であるフィルター基材を有することを特徴とする血液処理フィルター。
【００１７】
（６）前記フィルター基材は、アニオン性電荷を有する不織布の表面にカチオン性電荷を有する物質が保持されたものである上記（５）に記載の血液処理フィルター。
【００１８】
（７）前記フィルター基材は、ゼータ電位が６〜３０ｍＶである上記（５）または（６）に記載の血液処理フィルター。
【００１９】
（８）白血球捕捉フィルターまたは凝集塊捕捉フィルターである上記（５）ないし（７）のいずれかに記載の血液処理フィルター。
【発明の効果】
【００２０】
本発明のアニオン性電荷定量化方法は、フィルター基材の表面のアニオン性電荷量を正確に定量化することができる。特に、不織布からなるフィルター基材の表面にカチオン性電荷を有する物質が保持させた後に、フィルター基材の表面に残留するアニオン性電荷量を正確に定量化することができるので、血液を使用せずに、フィルター基材のブラジキニン産生の度合を適切に評価することができる。
また、本発明の血液処理フィルターは、前記アニオン性電荷定量化方法によって測定されたフィルター基材の反射吸光度が特定範囲にあるので、血液の濾過によるフィルター基材のブラジキニン産生能が低い。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明の実施形態に係るアニオン性電荷定量化方法および血液処理フィルターを詳細に説明する。
【００２２】
本発明のアニオン性電荷定量化方法は、フィルター基材の表面を、カチオン性電荷を有する色素からなる染色剤を用いて染色し、前記フィルター基材の表面の反射吸光度を測定することを特徴とする。
【００２３】
このフィルター基材は、血液処理フィルターの濾材として用いることができる。上述したように、血液処理フィルターは、フィルター基材の表面にアニオン性電荷を有すると、濾過後の血液中のブラジキニンが多量に産生することがあることが知られているので、フィルター基材の表面に存在するアニオン性電荷量を把握（定量化）する必要がある。
【００２４】
そこで、本発明の実施形態に係るアニオン性電荷定量化方法は、血液処理フィルターに用いるフィルター基材の表面に存在するアニオン性電荷量を定量化する方法とする。
また、フィルター基材は、アニオン性電荷を有する不織布（以下、アニオン性不織布ともいう）の表面にカチオン性電荷を有する物質（以下、カチオン化物質ともいう）を保持させたものである。
【００２５】
すなわち、本実施形態のアニオン性電荷定量化方法は、アニオン性不織布にカチオン化物質が保持されたフィルター基材（血液処理フィルター）の表面を、カチオン性電荷を有する色素からなる染色剤を用いて染色し、フィルター基材の表面の反射吸光度を測定するものである。
ここで、反射吸光度を測定する際の波長は、染色剤、すなわち、カチオン性電荷を有する色素の種類によって定められる。
【００２６】
染色剤としては、中性の溶液中でカチオン性電荷をもつ物質であれば、特に限定されないが、アミノ基（−ＮＨ２）を有する塩基性染料が好ましい。具体的には、例えば、サフラニン、メチレンブルー、マゼンダ、マラカイトグリーン、オーラミン、メチルバイオレット、ビスマルクブラウン、等が挙げられる。
【００２７】
本実施形態のアニオン性電荷定量化方法では、フィルター基材の表面を染色する際に、染色助剤を用いて前記フィルター基材の表面に染色剤を吸着させることが好ましい。
【００２８】
染色助剤とは、フィルター基材の表面に染色剤を吸着する作用を促進する促染剤となるものである。具体的には、例えば、ナトリウム塩、リン酸塩、カリウム塩などの塩類であれば特に限定されない。染色助剤の濃度は、１〜５重量％程度であること適正であり、１重量％程度であることが好ましい。これ未満であると充分な期待する効果が得られず、それ以上であると染色剤の色が変色してしまうおそれがあるからである。したがって、適正な濃度の染色助剤を用いることによって、アニオン性電荷量をより正確に測定（定量化）することができる。
【００２９】
また、本実施形態のアニオン性電荷定量化方法では、フィルター基材の表面を染色した後に、前記フィルター基材の表面を媒染剤に接触させて前記フィルター基材の表面に染色剤を固定することが好ましい。
【００３０】
媒染剤とは、染色剤とフィルター基材とを仲介し、フィルター基材に吸着した染色剤を固着し易くし、発色をより鮮明にするものである。具体的には、例えば、炭酸カルシウム、水酸化カルシウム、生石灰、硫酸銅、酢酸銅、塩化第一銅、クエン酸、酒石酸カリウムナトリウム、酢酸、食酢、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムアンモニウム、塩化アルミニウム、酢酸アルミニウム、すず酸ナトリウム、塩化第一すず、酢酸クロム、塩化第一鉄、硫酸第一鉄、木酢酸鉄液、過酸化水素水、アンモニア、重クロム酸カリウム、等の各種金属塩、塩化物、酸、等が挙げられる。
【００３１】
染色助剤の濃度は、１〜５重量％程度であることが適正であり、１重量％程度であることが好ましい。それ未満では充分な期待する効果が得られず、それ以上では染色した色に変色が生じるおそれがある。したがって、適正な濃度の媒染剤を使用することによって、染色剤がフィルター基材の表面から脱離し難くなるので、アニオン性電荷量をより正確に測定することができる。
【００３２】
次に、本発明の実施形態に係る血液処理フィルターについて更に説明する。
本発明の血液処理フィルターは、上述したアニオン性電荷定量化方法によって測定された反射吸光度が０．２６以下であることを特徴とする。
上述したように、本発明の実施形態に係る血液処理フィルターは、アニオン性電荷を有する不織布（アニオン性不織布）の表面にカチオン性電荷を有する物質（カチオン化物質）が保持されたフィルター基材を有するものである。
【００３３】
アニオン性電荷とは、カルボキシル基、リン酸基、亜リン酸基、スルホン酸基、硫酸エステル基、亜硫酸基、次亜硫酸基、スルフィド基、フェノール基、ヒドロキシル基など中性のｐＨで陰性を示す酸性官能基をいう。この酸性官能基は例示であり、これに限定されるものではない。
【００３４】
このアニオン性電荷には、アニオン性不織布の材料自身が本来持つ陰性官能基、アニオン性不織布の材料の製造過程で、例えば、熱、酸化物や酸、アルカリ溶液、等の薬品、放射線などによって加水分解で生じたものを含む。
【００３５】
アニオン性不織布は、アニオン性電荷を有する不織布であれば、その平均繊維径、目付け量、材質（材料）等、特に限定されず、用途に応じて選択すればよい。
【００３６】
例えば、本発明の血液処理フィルターを白血球捕捉フィルターとして用いる場合であれば、アニオン性不織布の平均繊維径は１〜２０μｍ程度、好ましくは１．５〜１５μｍ程度である。
【００３７】
また、肉厚０．１ｍｍあたりの目付け量は１０〜６０ｇ／ｍ２程度、好ましくは２０〜５０ｇ／ｍ２程度である。
【００３８】
また、例えば、本発明の血液処理フィルターを凝集塊捕捉フィルターとして用いる場合であれば、アニオン性不織布の平均繊維径は５〜３０μｍ程度、好ましくは８〜２０μｍ程度である。
【００３９】
また、肉厚０．３ｍｍあたりの目付け量は３０〜１２０ｇ／ｍ２程度、好ましくは４０〜１００ｇ／ｍ２程度である。
【００４０】
なお、凝集塊捕捉フィルターは、単独で用いることもできるが、白血球捕捉フィルターのプレフィルターとしても用いることができるものである。
【００４１】
アニオン性不織布を製造するために用いられる材料は、それを用いて製造したアニオン性不織布の表面に前記アニオン性電荷を生じる材料であればよい。
【００４２】
このような材料としては、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートおよびポリオキシエチレンテレフタレート等のポリエステル、ポリアクリロニトリルなどが挙げられる。
【００４３】
これらの中で、特に、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどのポリエステル系合成高分子材料が好ましい。また、不織布への成形性や、得られる不織布の繊維径、繊維によって形成される細孔状態等が制御し易く、白血球等の除去対象物質に合わせた最適な血液処理フィルターの製造が可能で好ましい。さらに、このポリエステル系合成高分子材料は、血液の濡れ性の点でも好ましい。
【００４４】
アニオン性不織布は、上記のような材料を用いて、次に示すような方法により製造することができる。
まず、例えば、スパンボンド法、メルトブロー法、遠心力法、フラッシュ紡糸法、高電圧乾式紡糸法、フィルム法、エアレイ法、カード法、ガーネット機法等の従来法を適用して、不織布を製造する。
【００４５】
また、例えば、溶融紡糸した繊維を、接着剤法、熱融着法（サーマルボンド法）、超音波接着法、ニードルパンチ法、スパンレース法（水流絡合法）、ステッチボンド法等により結合する従来法により製造することもできる。
【００４６】
次に、カチオン化物質（カチオン性電荷を有する物質）について説明する。
カチオン化物質は、塩基性含窒素官能基を有する化合物であり、第１級アミノ基、第２級アミノ基、第３級アミノ基または第４級アンモニウム塩を有する塩基性含窒素化合物、もしくはピリジル基、イミダゾイル基等の含窒素芳香環基を有する塩基性含窒素化合物である。
【００４７】
主鎖または側鎖に４級窒素原子を有する塩基性含窒素化合物の例としては、下記の一般式（１）で表される４級アンモニウムイオンをエステル基とした（メタ）アクリル酸系重合体のアルキルスルホナート（アルキルスルホン酸イオン）を対イオンとした化合物であってもよい。
【００４８】
【化１】
2007054212.tif 000002
【００４９】
ここで、一般式（１）中、Ｒ1 は炭素数１〜４のアルキル基を表し、Ｒ2 およびＲ7は互いに独立してメチル基または水素原子を表し、Ｒ3 は炭素数１〜４のアルキレン基を表し、Ｒ4 〜Ｒ6は互いに独立して炭素数１〜４のアルキル基または水素原子を表し、ｎおよびｍは整数（ｎ＞ｍ）を表し、好ましくはｎおよびｍは合計で２０〜４０００である。
【００５０】
ここで、カチオン化物質は、特に限定されないが、好ましくは前述の一般式（１）で表される４級アンモニウムイオンをエステル基とした（メタ）アクリル酸系重合体のアルキルスルホナート（アルキルスルホン酸イオン）を対イオンとしたカチオン性化合物である。
【００５１】
例えば、（メタ）アクリル酸−（メタ）アクリロイルオキシエチルジエチルメチルアンモニウムメチルサルフェイトの共重合体、（メタ）アクリル酸−（メタ）アクリロイルオキシプロピルジエチルメチルアンモニウムメチルサルフェイトの共重合体等が挙げられる。
【００５２】
一般式（１）で表される化合物は、分子量が数千から数十万程度であればよく、好ましくは２，０００〜５００，０００である。分子量が上記の範囲であれば、アニオン性不織布をカチオン化物質を含む溶液に浸漬する際の作業性が良好であり、かつアニオン性不織布から容易に脱離しない。
【００５３】
このようなカチオン化物質を前記アニオン性不織布の表面に保持させる方法は、カチオン化物質をアニオン性不織布の表面に均一に保持させることができれば特に限定されないが、コーティング、ディッピング、スプレーまたはスピンコートにより、アニオン性不織布の表面に、カチオン化物質を溶解させたコート液で被覆した後、６０〜１００℃で加熱乾燥することにより、アニオン性不織布の表面にカチオン化物質を保持させることが好ましい。
【００５４】
なお、アニオン性不織布の表面にカチオン化物質を保持させる方法は、ポリアクリル酸を主成分とした化合物の４級アミンエステル体を白血球除去フィルター基材表面に塗布し、加熱乾燥させ、アルキルスルホン酸ナトリウム溶液で処理したのでも良い。
また、加熱乾燥後にアニオン性不織布を水洗し、溶出物の洗い出しを行えばさらに好ましい。
【００５５】
このような方法により、上述したアニオン性不織布の表面に、前記カチオン化物質を備えるカチオン化不織布を得ることができる。
そして、本発明の実施形態に係る血液処理フィルターは、このようなカチオン化不織布からなるフィルター基材を有する。
【００５６】
このカチオン化不織布からフィルター基材を得る方法（カチオン化不織布を濾材の形態にする方法）は、特に限定されず、従来法を適用することができる。例えば、前記カチオン化不織布にプレス圧縮や熱収縮を施し、その用途に応じて、後述するような総肉厚となるように積層し、使用時の最適な大きさ（例えば、使用するハウジングにセットするために適した大きさ）に打ち抜くという方法を挙げることができる。
【００５７】
また、フィルター基材は、ゼータ電位が６〜３０ｍＶであるのが好ましい。その理由は、ゼータ電位がこの範囲であれば、ブラジキニンの産生能を抑制することができるからである。
【００５８】
このゼータ電位は、流動電位法に基づくものである。具体的には、流動電位測定装置（円筒形状のポリテトラフルオロエチレン製セル：直径１３ｍｍ、長さ５ｍｍ）を用いて、圧力範囲０〜５０ＫＰａ、流動液として０．００１ＭのＫＣｌ溶液（温度：２５℃）を用いて測定した値である。
【００５９】
また、フィルター基材は、平均孔径、総肉厚は、特に限定されず、用途に応じて選択すればよい。
例えば、血液処理フィルターを白血球捕捉フィルターとして用いる場合であれば、総肉厚は３〜９ｍｍ程度、好ましくは５〜７ｍｍ程度である。
また、例えば、血液処理フィルターを凝集塊捕捉フィルターとして用いる場合であれば、総肉厚は０．３〜６ｍｍ程度、好ましくは０．６〜４．８ｍｍ程度、さらに好ましくは０．８〜３．６ｍｍ程度である。
【００６０】
上述したように、本発明の血液処理フィルターは、白血球捕捉フィルターまたは凝集塊捕捉フィルターとして用いることができる。白血球捕捉フィルターには、血小板捕捉タイプと血小板通過タイプがあるが、特に、血小板捕捉タイプの白血球捕捉フィルターとして好適に用いることができる。
【００６１】
以下、図１を用いて、本発明の実施形態に係るアニオン性電荷定量化方法について詳細に説明する。なお、図１は、本発明の実施形態に係る血液処理フィルター装置の斜視断面図である。
図示したように、血液処理フィルター装置１は、流入口３と流出口４とを有するハウジング２と、フィルター基材５とを有する。
【００６２】
このフィルター基材５は、アニオン性不織布（アニオン性電荷を有する不織布）を用意して、上述した方法により、フィルター基材を作製する。
そして、フィルター基材の表面には、上述した方法により、カチオン化物質を保持されている。
【００６３】
このようなフィルター基材５を直径２５ｍｍの円形に打ち抜いて、ハウジング２，２の間に設置する。なお、このハウジング２の有効直径は２２ｍｍである。
【００６４】
ここで、本発明の実施形態に係るアニオン性電荷定量化方法は、血液処理フィルター装置１に用いるフィルター基材５の表面に存在するアニオン性電荷量を定量化する方法であり、フィルター基材５の表面を、カチオン性電荷を有する色素からなる染色剤を用いて染色し、前記フィルター基材５の表面の反射吸光度を測定するものである。
【００６５】
すなわち、フィルター基材５の表面におけるアニオン性電荷が存在する部分を染色剤により染色し、染色されたフィルター基材５の表面部分の反射吸光度を測定することにより、フィルター基材５の表面におけるアニオン性電荷を定量化する方法である。換言すれば、フィルター基材５の表面の反射吸光度を直接的に測定することによって、間接的にフィルター基材５の表面に存在するアニオン性電荷量を測定する方法である。
そこで、本発明のアニオン性電荷定量化方法において、フィルター基材の反射吸光度を測定する方法について説明する。
【００６６】
まず、ハウジング２，２の間に設置されたフィルター基材５の表面を染色剤としてカチオン性電荷を有する色素を用いて染色する、染色処理工程（染色処理操作）を行う。染色処理工程の際に、染色助剤を用いてフィルター基材５の表面に染色剤を吸着させる。
【００６７】
具体的には、染色剤としてサフラニンＯ、染色助剤としてＮａＣｌを用いて、１０ｍＬの０．０１％サフラニンＯ／１．００％ＮａＣｌ水溶液を準備し、この水溶液（染色剤と染色助剤の混合液）を流入口３からハウジング２，２内に流入して、フィルター基材５を通過させ、フィルター基材５の表面にアニオン性電荷に染色剤を吸着させる。
一方、フィルター基材５を通過した余分な水溶液は、流出口４からハウジング２，２外に排出される。
【００６８】
染色処理工程の後に、フィルター基材５の表面を媒染剤に接触させて、フィルター基材５の表面に染色剤を固定させる、媒染処理工程（媒染処理操作）を行う。
具体的には、媒染剤としてクエン酸ナトリウム用いて、１０ｍＬの１．００％クエン酸ナトリウム水溶液を準備し、この水溶液を流入口３からハウジング２，２内に流入して、フィルター基材５を通過させ、フィルター基材５の表面の染色剤を固定する。
一方、フィルター基材５を通過した余分な水溶液は、流出口４からハウジング２，２外に排出される。
【００６９】
媒染処理工程の後に、フィルター基材５の表面を洗浄液を用いて洗浄する、洗浄工程（洗浄操作）を行う。
具体的には、洗浄液として１００ｍＬのＲＯ水を用いて、流入口３からハウジング２，２内に流入して、フィルター基材５を通過させ、フィルター基材５の表面（固定）に吸着されなかった染色剤、染色助剤、染色剤を洗浄する。
なお、洗浄に供されたＲＯ水は、流出口４からハウジング２，２外に排出される。
洗浄工程の後に、染色剤（カチオン性電荷を有する色素）が表面に吸着したフィルター基材５をハウジング２，２から取り出して乾燥する。
【００７０】
以上のような染色処理工程、媒染処理工程および洗浄工程により、反射吸光度の測定用試料となる、表面に染色剤が吸着したフィルター基材５が得られる。
【００７１】
次に、吸光度計（商品名：二波長クロマトスキャナーＣＳ−９３０、株式会社島津製作所製）を用いて反射吸光度を測定する。
染色剤として用いたサフラニンＯに合わせて、反射吸光度を測定する波長は、５３５ｎｍとする。本実施形態では、この反射吸光度を残留アニオン量ともいう。
【００７２】
本発明の血液処理フィルターは、このような方法で求められた反射吸光度（残留アニオン量）が０．２６以下、好ましくは０．１５〜０．２３程度である。
反射吸光度は、低い方がよいが、フィルター基材５の孔径、総肉厚によっては、血液処理フィルターとしての性能を損なうおそれがある。例えば、本発明の血液処理フィルターを白血球除去フィルターとして用いる場合には、白血球や血小板だけでなく、赤血球も捕捉してしまうおそれが生じる。一方、反射吸光度がこの範囲を超えると、十分にブラジキニンの産生能を低減させることができなくなる。
【００７３】
このような範囲の反射吸光度を有する血液処理フィルターは、血液の濾過によるブラジキニン産生能が低いので、その処理後の血液を利用した患者に悪影響を及ぼすことがない。
【００７４】
以上、本発明の実施形態に係るアニオン性電荷定量化方法および血液処理フィルターについて説明したが、本発明はこれに限定されるものではない。
具体的には、本実施形態では、フィルター基材５は、アニオン性電荷を有する不織布にカチオン性電荷を有する物質（カチオン化物質）を保持させたものであるが、本発明はこれに限られるものではない。
例えば、フィルター基材は、不織布がアニオン性電荷を有するものでなくてもよく、また、カチオン化物質を保持させたものでなくてもよい。また、フィルター基材は、不織布でなくてもよい。
【００７５】
さらに、フィルター基材は、カチオン化物質のみならず、例えば、親水化処理剤、等の他の表面処理剤が固定されたものであってもよい。
また、本実施形態では、アニオン性電荷量を測定する際に、染色処理工程、媒染処理工程および洗浄工程において、ハウジング２，２の間にフィルター基材５を設置して行うが、本発明はこれに限られるものではない。
例えば、フィルター基材５をハウジング２，２の間に設置する前に、すなわち、フィルター基材５をハウジング２，２の間に設置せずに、全ての工程（操作）を行ってもよい。
また、染色処理工程のみ、もしくは染色処理工程および媒染処理工程をハウジング２，２の間にフィルター基材５を設置して行い、その後の工程をハウジング２，２からフィルター基材５を取り出して行ってもよい。
【００７６】
また、本実施形態は、アニオン性不織布にカチオン化物質を保持させてカチオン化不織布を得た後に、カチオン化不織布を濾材の形態にすることによって、フィルター基材を得るものであるが、これに限られるものではない。
例えば、アニオン性不織布を濾材の形態にした後に、濾材（アニオン性不織布）の表面にカチオン化物質を保持させてカチオン化不織布にすることによって、フィルター基材を得るものであってもよい。
【実施例】
【００７７】
以下に、本発明の実施例に係る血液処理フィルターを示す。なお、本発明は、この実施例に限定されるものではない。
【００７８】
（実施例１）
実施例１では、平均繊維径が２μｍ、肉厚０．１あたりの目付け量が４０ｇ／ｍ２であるポリエチレンテレフタレート製不織布を用いた。
この不織布の表面にカチオン化物質であるポリアクリル酸―ポリ２−（アクリロイルオキシ）ジメチルメチルアンモニウムメチルスルファートを導入した。
【００７９】
具体的には、カチオン化物質を蒸留水に溶解し１０質量％水溶液とし、この水溶液の１０００ｍＬに３０ｇの不織布をステンレストレーで浸漬させた。浸漬時間は２分間とした。
そして、浸漬時間経過後、三角フラスコから取り出し、直ぐに蒸留水を用いたシャワー洗浄をおこなった。シャワー洗浄の流量は４Ｌ／ｍｉｎであり、シャワー洗浄時間は３時間とした。
さらに、洗浄時間経過後、乾燥機（品番：ＷＴＯ−１０００ＳＤ，ＥＹＥＬＡ社製）を用いて、７０℃、１時間乾燥した。
【００８０】
このようにして、アニオン性不織布の表面にカチオン化物質を保持させたカチオン化不織布を得た後に、濾材の形態にすることによってフィルター基材を得た。このフィルター基材ａ１と記す。
そして、フィルター基材ａ１の反射吸光度、ブラジキニン産生量、ゼータ電位、白血球除去率および血小板除去率を後述する方法で測定した。なお、反射吸光度については、３つの測定条件によって測定した。その結果を表１，２に示す。
【００８１】
（実施例２）
上記の実施例１で用いたカチオン化物質の水溶液濃度を、５質量％としたものを用いて、その他の条件を全て同じにした試験を行った。測定項目も実施例１と同様である。その結果を表１，２に示す。なお、この実施例２で各測定に供したフィルター基材をフィルター基材ａ２と記す。
【００８２】
（実施例３）
上記の実施例１で用いたカチオン化物質の水溶液濃度を、１質量％としたものを用いて、その他の条件を全て同じにした試験を行った。測定項目も実施例１と同様である。その結果を表１，２に示す。なお、この実施例２で各測定に供したフィルター基材をフィルター基材ａ３と記す。
【００８３】
（比較例１）
上記の実施例１で用いたカチオン化物質の水溶液濃度を、０．００５質量％としたものを用いて、その他の条件を全て同じにした試験を行った。測定項目も実施例１と同様である。その結果を表１，２に示す。なお、この比較例１で各測定に供したフィルター基材をフィルター基材ａ４と記す。
【００８４】
（比較例２）
上記の実施例１で得たフィルター基材ａ１について、後述する方法により吸光度で測定した。その結果を表３に示す。
【００８５】
（比較例３）
上記の実施例２で得たフィルター基材ａ２について、後述する方法により吸光度で測定した。その結果を表３に示す。
【００８６】
（比較例４）
上記の実施例３で得たフィルター基材ａ３について、後述する方法により吸光度で測定した。その結果を表３に示す。
【００８７】
（実施例４）
上記の実施例１で用いた不織布ａの代わりに、平均繊維径が１１μｍ、肉厚０．３ｍｍあたりの目付け量が５０ｇ／ｍ２であるポリエチレンテレフタレート製不織布を用いた。以下、これを不織布ｂと記す。
そして、実施例１と同じ方法で、表面にカチオン化物質を保持するカチオン化不織布を濾材の形態にすることによってフィルター基材を得た。このフィルター基材ｂ１と記す。
そして、フィルター基材ｂ１の反射吸光度、ブラジキニン産生量、ゼータ電位および凝集塊除去率を後述する方法で測定した。その結果を表４に示す。
【００８８】
（実施例５）
上記の実施例４で用いたカチオン化物質の水溶液濃度を、５質量％としたものを用いて、その他の条件を全て同じにした試験を行った。測定項目も実施例４と同様である。その結果を表４に示す。なお、この実施例５で各測定に供したフィルター基材をフィルター基材ｂ２と記す。
【００８９】
（実施例６）
上記の実施例４で用いたカチオン化物質の水溶液濃度を、１質量％としたものを用いて、その他の条件を全て同じにした試験を行った。測定項目も実施例４と同様である。その結果を表４に示す。なお、この実施例６で各測定に供したフィルター基材をフィルター基材ｂ３と記す。
【００９０】
（比較例５）
上記の実施例４で用いたカチオン化物質の水溶液濃度を、０．００５質量％としたものを用いて、その他の条件を全て同じにした試験を行った。測定項目も実施例５と同様である。その結果を表４に示す。なお、この比較例２で各測定に供したフィルター基材をフィルター基材ｂ４と記す。
【００９１】
＜反射吸光度＞
上記のフィルター基材ａ１〜ａ４およびフィルター基材ｂ１〜ｂ４を試料として、上述した本発明のアニオン性電荷定量化方法により反射吸光度を測定した。
【００９２】
ここで、フィルター基材ａ１〜ａ４については、染色剤のみを用いる（染色処理工程において染色助剤を使用しない、媒染処理工程を行わない）測定方法Ａ、染色剤および染色助剤を用いる（染色処理工程を行い、媒染処理工程を行わない）測定方法Ｂ、染色剤、染色助剤および媒染剤を用いる（染色処理工程および媒染処理工程を行う）測定方法Ｃの３つの測定方法により、反射吸光度を測定した。
【００９３】
なお、表１において、上述の測定方法Ａによる測定結果をＡ欄、上述の測定方法Ｂによる測定結果をＢ欄、上述の測定方法Ｃによる測定結果をＣ欄に示す。
また、フィルター基材ｂ１〜ｂ４については、染色剤、染色助剤および媒染剤を用いる（染色処理工程および媒染処理工程を行う）測定方法（上述の測定方法Ｃ）のみを行った。
【００９４】
＜ブラジキニン産生量＞
上記のフィルター基材ａ１〜ａ４およびフィルター基材ｂ１〜ｂ４を各１ｇ準備して、ポリプロピレン製試験管中において６ｍＬの濃厚赤血球（ＣＲＣ−ＭＡＰ）に浸漬させた。この濃厚赤血球は採血、調整後４日間、４℃で保存したものである。そして２５℃、５分間インキュベートした後、直ちにポリプロピレン製試験管中から５ｍＬの濃厚赤血球をブラジキニンサンプル用インヒビターカクテル（ＳＲＬ社製）に採取した。そして４℃、４．５４×１０３Ｇ、６分の条件で遠心分離した後、ＲＩＡ法により、ブラジキニンの測定を行った。
【００９５】
＜ゼータ電位＞
上記のフィルター基材ａ１〜ａ４およびフィルター基材ｂ１〜ｂ４の各々を直径１３ｍｍの円形に打ち抜いたものを試料とし、流動電位測定装置（ＺＰ−２０Ｈ型、株式会社島津製作所製）を用いてゼータ電位を測定した。ここで、流動液は上述したものと同じ０．００１ＭのＫＣｌ溶液を用いた。
【００９６】
＜白血球除去率、血小板除去率＞
上記のフィルター基材ａ１〜ａ４の各々を直径３０ｍｍの円形に３０枚打ち抜き、この３０枚を各々のサンプル毎に積層したもの（総厚３．０ｍｍ）を各々ハウジングにセットした。
【００９７】
ここで用いたハウジングは、図１と同様の形状であり、そのフィルター基材（血液処理フィルター）の装着部は円筒形である。断面は直径３０ｍｍの円形である。
このようにして得た血液処理フィルター装置を用いて、落差４０ｃｍ（上流側２０ｃｍ、下流側２０ｃｍ）の条件で保存日数が４日の濃厚赤血球（ＣＲＣ−ＭＡＰ）を６０ｍｌ濾過した。
【００９８】
濾過前後の血液の質量は、電子天秤を用いて測定した。また、濾過前後の血小板濃度、および濾過前の白血球濃度を多項目自動血球分析装置（ＳＹＳＭＥＸ  ＸＥ−２１００、シスメックス社製）を用いて測定した。そして、濾過後の白血球濃度については、ナジェット（Ｎａｇｅｏｔｔｅ）法を用いて測定した。さらに、以下の式を用いて白血球および血小板除去率を求めた。
【００９９】
白血球除去率（％）＝（１−（濾過後白血球濃度×濾過後血液量）／（濾過前白血球濃度×濾過前血液量））×１００
【０１００】
血小板除去率（％）＝（１−（濾過後血小板濃度×濾過後血液量）／（濾過前血小板濃度×濾過前血液量））×１００
【０１０１】
＜吸光度＞
上記のフィルター基材ａ１〜ａ４を各２ｇ準備して、ポリプロピレン製試験管中において０．００１％サフラニンＯ水溶液５ｍＬに浸漬させ、真空ポンプにより１０分間脱気して、十分にサフラニンＯ水溶液をフィルター基材に浸透させた。その後、フィルター基材をサフラニンＯ水溶液から取り出して、吸光度計（商品名：日立分光光度計U−３０１０、株式会社日立作所製）を用いて、波長５３５ｎｍにおけるサフラニンＯ水溶液の吸光度を測定した。
【０１０２】
＜凝集塊除去率＞
上記のフィルター基材ｂ１〜ｂ４の各々を直径３０ｍｍの円形に１０枚打ち抜き、この１０枚を各々のサンプルごとに積層したもの（総厚３．０ｍｍ）を各々ハウジングにセットした。
ここで用いたハウジングは図１と同じ形状であり、そのフィルター基材（血液処理フィルター）装着部は円筒形である。断面は直径３０ｍｍの円形である。
【０１０３】
このようにして得た血液処理フィルター装置を用いて、落差４０ｃｍ（上流側２０ｃｍ、下流側２０ｃｍ）の条件で保存日数が２１日の濃厚赤血球（ＣＲＣ−ＭＡＰ）を６０ｍｌ濾過した。
そして、濾過前後の血液の質量を電子天秤を用いて測定した。また、濾過前後の１５〜４５μｍの凝集塊数をコールターカウンターＺ２（ベックマンコールター社製）を用いて測定した。そして、以下の式を用いて凝集塊除去率を求めた。
【０１０４】
凝集塊除去率（％）＝（１−（濾過後凝集塊濃度×濾過後血液量）／（濾過前凝集塊濃度×濾過前血液量））×１００
【０１０５】
【表１】
2007054212.tif 000003
【０１０６】
【表２】
2007054212.tif 000004
【０１０７】
【表３】
2007054212.tif 000005
【０１０８】
ここで、表３に示す比較例２〜４のブラジキニン産生量およびゼータ電位の測定結果は、比較例２〜４では、実施例１〜３と同様のフィルター基材ａ１〜ａ３を用いているため、表１に示す実施例１〜３のブラジキニン産生量およびゼータ電位の測定結果と同じ値とした。
【０１０９】
【表４】
2007054212.tif 000006
【０１１０】
表１〜４に示された各試験結果から、実施例１〜６のフィルター基材、すなわち、本発明の実施例に係る血液処理フィルターは、ブラジキニンの上昇がほとんど認められず、ブラジキニン産生能が極めて低い。また、血液処理フィルターとして用いた場合の性能も備えていることが確認できた。
また、比較例２〜４、すなわち、水溶液の吸光度測定により間接的にフィルター基材の表面に存在するアニオン性電荷量を測定した結果では、ブラジキニン産生量との相関性が確認できなかった。これに対して、実施例１〜３、すなわち、反射吸光度測定により直接的にフィルター表面に存在するアニオン性電荷量を測定した結果では、反射吸光度の測定値とブラジキニン産生量との相関性が認められ、アニオン性電荷を定量化できることが確認できた。
【図面の簡単な説明】
【０１１１】
【図１】図１は、本発明の実施形態に係る血液処理フィルター装置の斜視断面図である。
【符号の説明】
【０１１２】
１  血液処理フィルター装置
２  ハウジング
３  流入口
４  流出口
５  フィルター基材（血液処理フィルター）
【図１】
2007054212.tif 000007