(57)【要約】【課題】運動後、労働後の肉体疲労のほか、精神的ストレスによる疲労など各種疲労の予防、回復を効果的に行うことができる薬剤または飲食品を提供する。【解決手段】アスパラガスをブレンダーで細断し水を加えオートクレーブで１００℃、１時間熱処理を行った後、室温まで冷却後、酵素（プロテアーゼ）を混合し、振とう式インキュベーターを用いて３７℃で６時間振とう処理を行い、得られた処理液を濾過し薄茶色の抽出液を得、減圧濃縮して得られる、アスパラガスから得られる組成物を有効成分とすることを特徴とする抗疲労剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスパラガスから得られる組成物を有効成分とすることを特徴とする抗疲労剤。
【請求項２】
アスパラガスから得られる組成物が、アスパラガスにγ−アミノ酪酸の含有量を高めるための富化処理を施したものである請求項１記載の抗疲労剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載の抗疲労剤を含有することを特徴とする飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗疲労剤またはそれを含有する飲食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
疲労とは、一般に疲労感、倦怠感を主症状とするが、その他精神的ストレスによる睡眠障害や意欲低下など多彩な症状を伴う疾患である。疲労感や倦怠感は体の異常を知らせる重要なアラーム信号の一つであり、健常時でも激しい運動、長時間の労働を行った場合や過度のストレス状況におかれた場合などに、自覚するようになる。このような生理学的な疲労は通常、体を休めることにより元の正常な状態に回復し、長く続くことはない。しかしながら、現代人は、長時間の労働や過度のストレス状況に置かれることが多く、また十分な休息を取るのが難しいため、疲労感や倦怠感の回復が困難になることもしばしばある。厚生省疲労研究班が疲労の実態調査を行ったところ、国民の６０％が現在疲労を感じており、６か月以上続く疲労感は３７％にも昇る（非特許文献１）。そのうちの約６割が原因不明とされているが、日常的に生じる疲労の回復や改善を補助する抗疲労剤の開発が強く望まれている。
【０００３】
従来疲労回復に有用とされてきたものとして、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、ビタミンＣ、ニコチン酸、パンテトン酸、γ−オリザノール、タウリンやアミノ酸類が挙げられる。しかしながら、これらの従来品は、効果の点で、あるいは価格の点で必ずしも満足いくものではなかった。このような状況から、日々摂取することで疲労の回復や改善を補助できる薬剤または飲食品の開発が望まれていた。
【０００４】
一方、アスパラガスは、新陳代謝を促進し、蛋白質代謝を促進する作用を持つアスパラギン酸を多く含むことから疲労回復効果が期待できる野菜とされている。しかし、アスパラガス中にγ―アミノ酪酸（以下、ＧＡＢＡと略称する。）が含まれていることは知られておらず、また、ＧＡＢＡ含量を富化する処理により、疲労回復効果が高まることも知られていなかった。なお、アスパラガスにＧＡＢＡが豊富に含まれていることは本発明者らが初めて見出したことである（特願２００４−３０１５５７号）。
【０００５】
また、ＧＡＢＡは、哺乳類の脳や脊髄に存在する抑制性の神経伝達物質であり、経口摂取することで血圧を降下させることが多くの哺乳類で確認されている。この血圧降下作用は高血圧症を発症している者に対してのみ効果があり、健常者に対しては血圧を降下させず、低血圧症を引き起こすことがない。また、ＧＡＢＡは哺乳類の脳や脊髄以外にも、発芽玄米や茶葉等の植物、キムチやたくあん等の発酵食品中にも含有され食経験が豊富であり、また、医薬品としてグラム単位の静脈注射等が行われているが、ＧＡＢＡ摂取による副作用の報告は無い。
【非特許文献１】医学のあゆみ（２００３）、２０４（５）、３８１〜３８６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、安価な材料から得られ、日々摂取することで疲労回復効果に優れる抗疲労剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは上記した課題について鋭意検討した結果、アスパラガスから得られた抽出液が、抽出液に含まれるアスパラギン酸と同量のアスパラギン酸単独よりも疲労回復効果に優れるということ、さらに加熱処理を施すことにより効果が高まることを見出し、本発明に到達した。
【０００８】
すなわち、本発明の第一は、アスパラガスから得られる組成物を有効成分とすることを特徴とする抗疲労剤を要旨とするものであり、好ましくは、アスパラガスから得られる組成物が、アスパラガスにＧＡＢＡの含有量を高めるための富化処理を施したものである。
【０００９】
また、本発明の第二は、前記の抗疲労剤を含有することを特徴とする飲食品を要旨とするものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、運動後、労働後の肉体疲労のほか、精神的ストレスによる疲労など各種疲労の予防、回復を効果的に行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明で用いられるアスパラガスは、本発明の効果を損なうものでない限りいかなるものでもよい。アスパラガスには日光に当てて栽培するグリーンアスパラガス、土などで遮光しながら栽培するホワイトアスパラガス、細く短いうちに刈り取りを行うミニアスパラガス、グリーンアスパラガスとは別種で紫色を呈するムラサキアスパラガスなどがあるが、これらの中ではアミノ酸やルチン等の栄養成分に富むグリーンアスパラガス、ムラサキアスパラガスが好ましく、コストが安いグリーンアスパラガスがさらに好ましい。
【００１２】
アスパラガスの産地は特に限定されず、国産でも海外からの輸入品でもよい。使用する部位も特に限定されず、若茎、地上茎、貯蔵根が使用できるがこれらの中で若茎が好ましい。若茎は根元部分でも先端部分でもよいが、商品となるアスパラガスの長さを揃える時にカットされた根元部分は安価で入手できることから最も好ましい。アスパラガスはそのまま使用してもよいし、破砕、切断、凍結乾燥、脱水などの処理を行った後に使用してもよい。
【００１３】
本発明におけるアスパラガスから得られる組成物とは、アスパラガスから得られるＧＡＢＡを含有する組成物をいい、例えば、アスパラガスを直接、粉砕・細断・脱水・凍結乾燥・真空乾燥・噴霧乾燥等の公知技術のいずれか１つあるいは２つ以上を組み合わせて処理することにより得ることができる。
【００１４】
粉砕・細断は物理的にアスパラガスを細かく破砕する方法であり、粉砕は衝撃により、細断は切断によって破砕する。粉砕・細断は乳鉢や包丁、カッターナイフ、ハサミなどを用いて手作業で行っても良いが、大量のアスパラガスを短時間で処理しようとする場合には装置を使用する。そのような装置としては、例えば、ミル、ハンマー式粉砕機、ミキサー、ブレンダーなどが挙げられ、また野菜用の細断機を用いてもよい。粉砕・細断されたアスパラガスの大きさは特に限定されないが、２ｃｍ以下が好ましく、５ｍｍ以下がより好ましい。
【００１５】
脱水は、アスパラガス中の水分を除く操作であり、圧搾、濾過、静置による沈殿の分離、遠心分離、加熱蒸発、凍結乾燥、真空乾燥、噴霧乾燥等が挙げられる。このうち、成分の損失、分解、変質の可能性が少ないという点で、凍結乾燥が好ましい。
【００１６】
凍結乾燥、真空乾燥は、気圧を低下させて沸点を低下させ、水分を気化させる方法である。噴霧乾燥は、溶液を微粒化して熱風と接触させる事で短時間での乾燥を可能にする操作である。
【００１７】
本発明においては上記の処理に加えて、グルタチオンを除くために、加熱操作を組み込むことが好ましい。ここでの加熱操作は、温度は７０℃〜１００℃が好ましく、８０℃〜９０℃がより好ましい。温度が７０℃より下であれば、グルタチオンの分解が不十分となり、１００℃より高ければ他の有効成分が分解する恐れがある。また、加熱時間は５分〜３０分が好ましく、より好ましくは１０〜１５分である。加熱時間が５分より短ければ、グルタチオンの分解が不十分となり、３０分より長ければ他の有効成分が分解する恐れがある。また、この加熱操作は殺菌を兼ねることにもなる。
【００１８】
上記した処理の組み合わせの好ましい例としては、アスパラガスを加熱処理し、凍結乾燥した後、ミル等で粉砕したものが好ましい。
【００１９】
また、本発明におけるアスパラガスから得られる組成物は、上記の処理のほか、アスパラガスから水抽出、溶媒抽出、圧搾、酵素分解、超臨界抽出、濃縮、希釈、固液分離、精製等の公知の技術を単独あるいは組み合わせて得られるものであってもよい。以下、これらの操作について説明する。なお、この場合にも、上記した加熱操作を施していないときには、上記と同様な加熱操作を組み込むことが好ましい。
【００２０】
水抽出は、水を加えてそこに成分を溶出させる方法である。加える水の量は特に限定されないが、アスパラガスに対して０．０１〜１００倍量が好ましく、０．５〜５倍量がより好ましい。水の量が０．０１倍より少ないと抽出効率が落ち、１００倍より多いと薄い抽出液しか得られず後に濃縮操作が必要になる場合がある。また、使用する水の温度は０℃〜１００℃が好ましく、１０℃〜８０℃がより好ましい。水の温度が０℃より低い場合には抽出効率が低下する傾向があり、抽出温度が１００℃より高い場合にはＧＡＢＡ以外の有効成分が分解してしまうおそれが生じる。
【００２１】
溶媒抽出は、アルコール類、炭化水素類、脂質類等の有機溶媒を用いて抽出する方法であり、使用する有機溶媒は本発明の効果を損なわない限り特に限定されず、単独で用いてもよいし、他の溶媒と混合して使用してもよいし、水と混合して使用してもよい。好ましい有機溶媒の例としては、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノール、ヘキサン、アセトン、グリセリン、プロピレングリコール、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、エチルエーテル、メチルエチルケトン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）が挙げられ、さらに好ましくは、エタノール、ヘキサン、アセトン、ＤＭＳＯ、グリセリンが挙げられる。加える有機溶媒の量は有機溶媒の種類にもより特に限定されないが、アスパラガスに対して０．０１〜１００倍量が好ましく、０．５倍〜５倍がより好ましい。有機溶媒の量が０．０１倍より少ないと抽出効率が落ち、１００倍より多いと薄い抽出液しか得られず後に濃縮操作が必要になる場合がある。また、使用する有機溶媒の温度は−２０℃〜２００℃が好ましく、０℃〜１２０℃がより好ましい。有機溶媒の温度が−２０℃より低い場合には抽出効率が低下する傾向があり、抽出温度が２００℃より高い場合には有効成分が分解してしまうおそれが生じる。
【００２２】
圧搾とは、アスパラガスに物理的な圧力をかけて、液を搾り出し、ＧＡＢＡを搾汁に移行せしめる方法である。圧力は一方向のみにかけてもよいし、二以上の方向からかけてもよく、せん断力を伴わせることもできる。圧搾の操作は市販の圧搾機を用いれば容易であるが、手搾り、足踏み搾りなど機械を用いない方法で行ってもよい。このとき、アスパラガスに水や湯を加えて圧搾してもよい。
【００２３】
酵素分解は、アスパラガスに酵素を作用させた後、固液分離してＧＡＢＡをろ液に移行せしめる方法である。ここで酵素としては、本発明の効果を損なわない限り、特に限定されないが、食品用途として使用することを考慮すれば、食品用に使用できる酵素が好ましい。酵素の種類としては、特に限定されないが、アスパラガスの繊維質、ペクチン、多糖類などを分解し、効率良くＧＡＢＡを取り出せるために、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ、キシラナーゼ、アラビナーゼ、アラバナーゼ、アミラーゼ、グルカナーゼ、デキストラナーゼなどが、蛋白質を分解し、遊離アミノ酸を多く回収するために、プロテアーゼ、ペプチダーゼなどが、グルタミン酸をＧＡＢＡに変換するために、グルタミン酸デカルボキシラーゼなどが、グルタミンをグルタミン酸に変換するために、グルタミナーゼなどが使用できる。本発明における酵素分解においては、上記した酵素を一種類だけ用いてもよいし、二種以上を同時に又は連続して用いてもよい。
【００２４】
超臨界抽出とは、二酸化炭素や水を気液臨界点以上の圧力、温度にし、分子運動の盛んな超臨界流体とせしめ、これを抽出溶媒として使用するものである。本発明においては、超臨界流体は二酸化炭素が好ましい。超臨界抽出を行う際の温度は、３１℃〜１５０℃が好ましく、３１℃〜１００℃がより好ましい。温度がこの範囲より高い場合、有用成分が分解する可能性があり、この範囲より低い場合、抽出効率が低下する問題がある。また、超臨界抽出を行う際の圧力は、７ＭＰａ〜５０ＭＰａが好ましく、７ＭＰａ〜３０ＭＰａがより好ましい。圧力がこの範囲より高い場合、有用成分の分解やコスト高、安全性に問題があり、圧力がこの範囲より低い場合には抽出効率が低下する傾向がある。
【００２５】
濃縮は、他の成分を減少させること無く水分量を減らす操作であり、減圧濃縮、加熱濃縮、濾過膜を用いた濃縮などいかなる方法で行ってもよいが、２０℃〜６０℃の範囲での減圧濃縮を行うことが好ましい。
【００２６】
固液分離とは、溶媒およびそこに溶解している成分と、不溶性の固形分を分離する方法であり、分離方法としては、例えばフィルターろ過、圧搾ろ過、遠心分離、デカンテーションなどあらゆる方法が使用できる。清澄なＧＡＢＡ含有組成物を得る場合には、珪藻土などのろ過助剤を使用したフィルターろ過を行うことが好ましい。また、さらに清澄な液を得る場合や微生物の除去を行う場合には、これをさらに１μｍ未満の孔径のメンブランフィルターろ過を行うことが好ましい。
【００２７】
精製とは、目的の成分を他の成分と分離する操作であり、方法としては、電気泳動分離、密度勾配遠心分離、逆浸透・限外濾過・透析等の膜分離、ゲル濾過・イオン交換・アフィニティー等のクロマトグラフィーが挙げられる。これら精製方法は本発明の効果を損なわない限りいかなるものでもよいが、ＧＡＢＡ含量を高めるための精製には、強酸性陽イオン交換樹脂を用いたクロマトグラフィーが収率の高さ、簡便性といった点から最も望ましい。
【００２８】
以上のような処理により得られる、本発明におけるアスパラガスから得られる組成物の形態としては、水溶液、クリーム、懸濁液、ゲル、粉末、錠剤、カプセルなどが挙げられる。例としては、アスパラガスの茎最下部に水を１〜２倍量加え、７０〜９０℃で３０〜６０分間抽出を行った後、珪藻土などの濾過助剤を使用したフィルター濾過を行って得られた清澄濾液、あるいはこれを乾燥した粉末が好ましい。
【００２９】
本発明におけるアスパラガスから得られる組成物には、ＧＡＢＡをはじめ、その他のアミノ酸、多糖類、オリゴ糖類、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−ガラクトース等の単糖類、タンパク質、ペプチド類、サポニン類、ポリフェノール類等が含有される。アミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸、ロイシン、イソロイシン、リジン、アラニン、セリン、プロリンなどが比較的多く含まれる。
【００３０】
以上のようにして得られたアスパラガスから得られる組成物中に含まれるＧＡＢＡの重量％は、０．０１重量％〜９９．５重量％が好ましく、より好ましくは０．１重量％〜９５重量％、更に好ましくは１重量％〜９０重量％が好ましい。ＧＡＢＡ重量％が０．０１重量％を下回ると、効果を発揮するためには多量に摂取する必要があり、また、９９．５％を上回ると、ＧＡＢＡに相乗相加効果をもたらす物質の含有量が低くなり、好ましくない。
【００３１】
また、アスパラガスから得られる組成物は、ＧＡＢＡの含有量を高めるため、アスパラガスに富化処理を施したものであるのが好ましい。この富化処理としては、公知の精製技術を利用する方法、市販のＧＡＢＡ純品（例えば、協和発酵社「ＧＡＢＡ協和」）やＧＡＢＡ含有組成物（例えば、オリザ油化社「オリザギャバエキスＨＣ−９０」、ファーマフーズ研究所「ファーマギャバ」）を添加する方法、ＧＡＢＡ生産菌を利用する方法、アスパラガスの内在酵素を利用する方法等が挙げられる。このうち、ＧＡＢＡと相乗・相加効果を発揮する成分が除かれる事が無い、コストが低い、といった点で、アスパラガス内在酵素を利用する方法が最も好ましい。
【００３２】
アスパラガス内在酵素を利用する方法とは、アスパラガス及び／又はアスパラガス抽出液を１０℃〜５０℃の環境下で処理する方法、アスパラガス及び／又はアスパラガス抽出液にグルタミン酸、グルタミン酸塩、ピリドキサルリン酸塩、塩酸ピリドキシンから選ばれる少なくとも１種類を添加し、１０℃〜５０℃の環境下で処理する方法等が挙げられる。
【００３３】
このような富化処理を施すことにより、組成物中は、前記成分のうちＧＡＢＡの占める割合が増えることになり、また、添加した成分も含まれることになる。
【００３４】
本発明の抗疲労剤は、上記のようにして得られた組成物をそのまま、あるいは他の成分とともに含むものである。本発明の抗疲労剤中に、アスパラガスから得られる組成物はそのＧＡＢＡ含有量にもよるが、０．１重量％〜１００重量％、より好ましくは１重量％〜９５重量％、更に好ましくは１０重量％〜９０重量％含有するのがよい。アスパラガスから得られる組成物の含有量が０．１重量％を下回ると、効果を発揮するためには多量に摂取する必要があり、好ましくない。
【００３５】
本発明の抗疲労剤に含めることができる他の成分としては、各種ビタミンやミネラル、その他の抗疲労作用を有する活性成分が挙げられ、具体例として、ビタミンＢ１又はその誘導体又はそれらの塩、ビタミンＣ又はその誘導体又はそれらの塩、ビオチン、タウリン、カルニチン類（アセチルＬ−カルニチン等）、カフェイン、γ−オリザノール等が挙げられる。
【００３６】
本発明の抗疲労剤に含まれるＧＡＢＡと、ＧＡＢＡ以外のアスパラガスから得られる組成物の共存重量比率は、（ＧＡＢＡ）：（ＧＡＢＡ以外のアスパラガスから得られる組成物）が１：０．００５〜１：１００が好ましく、より好ましくは１：０．０５〜１：４０、さらに好ましくは、１：０．１〜１：１０である。ＧＡＢＡ以外のアスパラガスから得られる組成物のＧＡＢＡに対する比率が０．００５を下回れば、相加相乗効果はほとんど得られず、１００を上回れば、ＧＡＢＡの効果を発揮するためには多量に摂取する必要が生じてしまう。
【００３７】
また、本発明の抗疲労剤に含まれるＧＡＢＡと、アスパラギン酸の共存重量比率は、（ＧＡＢＡ）：（アスパラギン酸）が１：０．００１〜１：１００が好ましく、より好ましくは１：０．０５〜１：２０、さらに好ましくは、１：０．１〜１：１０である。この範囲を下回っても上回っても、十分な疲労回復効果は得られなくなる。
【００３８】
本発明の抗疲労剤は、その効果を損なわない限り、薬学的に許容される担体と共に、種々の剤形に製剤化できる。
【００３９】
剤形としては、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、丸剤等の経口用固形製剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの経口液体製剤が挙げられる。
【００４０】
経口用固形製剤を調整する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、着色剤等常法で用いられているものを用いればよく、そのような担体の例としては、賦形剤としては乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット、デキストリン、デンプン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、プルラン、無水ケイ酸、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等を、結合剤としては結晶セルロース、白糖、マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、デキストラン、プルラン、水、エタノール等を、崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストリン、結晶セルロース等を、滑沢剤としてはステアリン酸およびその金属塩、タルク、ホウ酸、脂肪酸ナトリウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、無水ケイ酸等を、矯味矯臭剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等を例示できる。
【００４１】
経口用液体製剤を調整する際には、緩衝剤、安定化剤、矯味矯臭剤等常法で用いられているものを用いればよく、緩衝剤としてはクエン酸塩、コハク酸塩等を、安定化剤としてはレシチン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロースを、矯味矯臭剤としては上記したものを例示できる。
【００４２】
本発明の抗疲労剤を使用する場合は、そこに含まれるＧＡＢＡの量が５０ｍｇ〜２０００ｍｇ／日／人、特に好ましくは３００ｍｇ〜１０００ｍｇ／日／人となるように、調節すればよい。この範囲内にあれば、疲労回復効果が十分に得ることができる。
【００４３】
本発明の第二の飲食品は、上記した本発明の第一の抗疲労剤を含有するものであり、抗疲労剤それ自体あるいは既存の飲料又は食品に含ませることにより得られることができる。
【００４４】
本発明の抗疲労剤それ自体を飲食品とする場合は、例えば、上記した担体等を添加した後、常法により、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ゲル状、ペースト状、乳状、懸濁状、液状、飲料等の食用に適した形態に成形すればよい。また、味質の改善のために、本発明の効果を損なわない範囲で糖類、糖アルコール類、塩類、油脂類、アミノ酸類、有機酸類、果汁、野菜汁、香料、アルコール類、グリセリン等を添加することができる。
【００４５】
本発明の抗疲労剤を既存の飲料又は食品に含ませる場合は、ベースとなる飲料又は食品としては特に限定されないが、例えば、うどんやパスタ等の加工麺、ハム・ソーセージ等の食肉加工食品、かまぼこ・ちくわ等の水産加工食品、バター・粉乳・醗酵乳等の乳加工品、ゼリー・アイスクリーム等のデザート類、パン類、菓子類、調味料類等の加工食品、および、清涼飲料水、アルコール類、果汁飲料、野菜汁飲料、乳飲料、炭酸飲料、コーヒー飲料、アルコール類等の飲料が好ましい。
【００４６】
本発明の飲食品におけるアスパラガスから得られる抗疲労剤の含有量は、特に限定されないが、ＧＡＢＡに換算して、５０ｍｇ〜２０００ｍｇ／日／人、特に好ましくは３００ｍｇ〜１０００ｍｇ／日／人となるように、調節すればよい。この範囲内にあれば、疲労回復効果が十分に得ることができ、かつ、経済性においても優れている。
【００４７】
本発明の飲食品に含ませるアスパラガスから得られる抗疲労剤の形態は特に限定されず、飲料、グミ、キャンデーなどにおいては液体状の物を、錠剤、顆粒、カプセルなどにおいては粉末状の物を使用するなどすればよい。
【実施例】
【００４８】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例中、ＧＡＢＡ及びアミノ酸の含有量は、以下の方法により求められた値である。すなわち、高速液体クロマトグラフィー法（ＨＰＬＣ法）により以下の条件で測定し、蛍光検出器を用いて検出した。
ＨＰＬＣ：島津製作所（株）製ＬＣ−９Ａ
カラム：Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ  ＩＳＣ−０７／Ｓ１５０４
移動相：０．２規定クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．２）
流速：０．３ｍｌ／分
温度：５５℃
反応液：オルト−フタルアルデヒド
検出波長：励起波長３４８ｎｍ、蛍光波長４５０ｎｍ
【００４９】
製造例１
アスパラガス（秋田産）１ｋｇを５ｍｍ以下にブレンダーで細断し、水２Lを導入して、オートクレーブで１００℃、１時間熱処理を行った。室温まで冷却後、新日本化学（株）製スミチームＬＰＬ（プロテアーゼ活性５０万単位／ｇ）を１ｇ混合し、振とう式インキュベーターを用いて３７℃で６時間振とう処理を行った。得られた処理液は濾過助剤に珪藻土を用い、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ東洋製Ｎｏ．５Ｃ）を用いて吸引濾過を行い、薄茶色の抽出液を得た。これを沸騰水中で１０分間加熱して酵素を失活させ、再度珪藻土を用いて吸引濾過を行った。得られた濾液を卓上エバポレーター（ＥＹＥＬＡ社製）により１０倍に減圧濃縮した。この操作により、２８０ｍｌのＧＡＢＡ含有組成物が得られた。アミノ酸及びＧＡＢＡの含有量は表１に示したとおりであった。
【００５０】
製造例２
アスパラガス若茎（秋田産）１ｋｇをミキサーで破砕し、水２Ｌを導入した。そこにグルタミン酸ナトリウム５０ｇを添加してよく攪拌して溶解した。これを振とう式インキュベーターを用いて２５℃、２４時間振とうしＧＡＢＡ富化処理を行った。さらに、新日本化学（株）製スミチームＬＰＬ（プロテアーゼ活性５０万単位／ｇ）を１ｇ混合し、振とう式インキュベーターを用いて３７℃で６時間振とう処理を行った。得られた処理液は濾過助剤に珪藻土を用い、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ東洋製Ｎｏ．５Ｃ）を用いて吸引濾過を行い、得られた濾液を卓上エバポレーター（ＥＹＥＬＡ社製）により１０倍に減圧濃縮した。この操作により黄緑色のＧＡＢＡ含有組成物２７０ｍｌを得た。ＧＡＢＡ及びアミノ酸の含有量は表１に示したとおりであった。
【００５１】
【表１】
2007045750.tif 000002
実施例１〔強制水泳実験における評価〕
実験動物：ＳＤラット（雄）（日本エスエルシー社、約３１０ｇ）、９週齢、４０匹
通常試料：ラボＭＲストック（日本農産工業）
【００５２】
【表２】
2007045750.tif 000003
【００５３】
方法：ラットは、室温２５℃±１℃、湿度６０％±５％、１２時間明期１２時間暗期（明期７時〜１９時）の条件下で飼育した。試料投与前に１週間通常飼料を与え、また、生理食塩水を１日１回５ｍｌ／ｋｇで胃ゾンデで投与し、馴化を行った。１００Ｌ容のポリバケツ（底面直径４０ｃｍ、上面直径５０ｃｍ、高さ６０ｃｍ）に高さ２５ｃｍまで水温２５℃±１℃の水を入れ、その後、８匹５群に分けたラットを入れて３０分間強制水泳させた（前負荷）。直後に、表２にあるＡ〜Ｅの試料を５ｍｌ／ｋｇ胃ゾンデで投与した。試料投与１時間後に１匹ずつ、水温２５℃±１℃の水を高さ２５ｃｍまで入れた円筒形塩化ビニル容器（直径３０ｃｍ、高さ４５ｃｍ）に入れ、５分間隔で１５分まで、不動時間（秒）を測定した。不動時間（秒）は、ラットが疲労により遊泳を断念し、動かなくなっている状態の時間を測定したものであり、不動時間が短いほど疲労が蓄積していない事を意味している。なお、有意差はＤｕｎｎｅｔｔの多重検定により、有意水準５％で検定した。結果を表３に示す。なお、結果は平均値±標準偏差で示した。
【００５４】
【表３】
2007045750.tif 000004
表３から明らかな通り、アスパラガス抽出物には不動時間を短くする、すなわち抗疲労効果があった。また、アスパラガス抽出物は、抽出物中に含まれるＧＡＢＡを除くアミノ酸と同量のアミノ酸と比較して、高い抗疲労効果を持つことが分かった。
【００５５】
実施例２〔ＧＡＢＡ富化処理の影響〕
実験動物、通常試料、方法は実施例１に従った。ただし、前負荷後の投与試料は表４の通り。
【００５６】
【表４】
2007045750.tif 000005
結果：結果は表５の通りである。なお、結果は平均値±標準偏差で示した。
【００５７】
【表５】
2007045750.tif 000006
表５から明らかな通り、ＧＡＢＡ富化処理によりアスパラガス抽出物の抗疲労効果は増加した。
【００５８】
実施例３〔過労状態における効果〕
実験動物：ＳＤラット（雄）（日本エスエルシー社、約３１０ｇ）、９週齢、３０匹
通常試料：ラボＭＲストック（日本農産工業）
【００５９】
【表６】
2007045750.tif 000007
方法：ラットは、室温２５℃±１℃、湿度６０％±５％、１２時間明期１２時間暗期（明期７時〜１９時）の条件下で飼育した。試料投与前に１週間通常飼料を与え、また、生理食塩水を１日１回５ｍｌ／ｋｇで胃ゾンデで投与し、馴化を行った。次に、ケージを水深１．５ｃｍ（水温２５℃±１℃）の水槽内に移し、ラットが十分な休息を得られない環境下に置いた。水浸飼育開始時から、１群１０匹、３群に分け、表６の試料を１日１回５ｍｌ／ｋｇで胃ゾンデで投与した。水浸飼育開始５日目に、体重の８％のおもりを負荷させた状態で１匹ずつ、水温２５℃±１℃の水を高さ２５ｃｍまで入れた円筒形塩化ビニル容器（直径３０ｃｍ、高さ４５ｃｍ）に入れ、１０秒以上鼻が水没してしまうまでの時間を測定した。なお、このモデルでは２日以上水浸飼育した場合、おもりに抗った遊泳が十分にできなくなり、より短時間で遊泳を断念する。また、通常急性ストレスがかかった場合、脳内のセロトニン神経系が活性化され疲労感を感じることに、ドーパミン神経系が活性化され疲労下での身体的活力を保つことに関与するようになる。ところが、２日以上水浸飼育した場合セロトニン神経系もドーパミン神経系も活性化されておらず、脳内の神経バランスに異常をきたしており、精神的なストレスが負荷されていると考えられる。試験結果は、Ａ群の遊泳時間を１００（％）とした時の各群の遊泳時間の割合を求め、抗疲労効果として示した。
結果：結果を表７に示す。なお、結果は平均値±標準偏差で示した。
【００６０】
【表７】
2007045750.tif 000008
表７から明らかな通り、ＧＡＢＡ富化処理アスパラガス抽出物には、過労状態を軽減する効果があることが確認された。
【００６１】
実施例４
製造例２で製造したＧＡＢＡ富化アスパラガス抽出物を凍結乾燥した後粉砕した。得られた粉末を用いて、以下の配合割合でよく混合、造粒した後、１粒５００ｍｇで打錠し、錠剤を製造した。なお、％は、質量％を示す。
【００６２】
原料          ＧＡＢＡ富化アスパラガス抽出物      ５０％
結晶セルロース                      １５％
還元麦芽糖                          ３０％
ショ糖脂肪酸エステル                  ５％
【００６３】
実施例５
製造例２と製造したＧＡＢＡ富化アスパラガス抽出物を凍結乾燥した後粉砕した。得られた粉末１００ｇを日本粉末薬品（株）製「ウーロン茶エキスパウダー」９００ｇと混合し、ＧＡＢＡ含有肝機能障害予防・改善ウーロン茶粉末を製造した。このＧＡＢＡ含有ウーロン茶粉末５ｇを水５００ｍｌに溶解し、ＧＡＢＡ含有抗疲労ウーロン茶を製造した。