(57)【要約】  【課題】  微生物の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を、非対称ケトン化合物と接触させることにより、トロンボポイエチン受容体アゴニストの重要中間体である光学活性なアルコール化合物の製造方法を提供する。  【解決手段】キャンディダ・クルセイ、キャンディダ・トロピカリス、キャンディダ・アルビカンス、キャンディダ・グラブラータ、キャンディダ・パラクルセイ、キャンディダ・ユティリス、キャンディダ・プシュードトロピカリス、キャンディダ・ルゴサ、ロードトルーラ・グルチニス・ヴァー・ダイレネンシス、ロードトルーラ・ルブラ、及びサッカロマイセス・セレビシアエからなる群より選ばれる菌株の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を、非対称ケトン化合物と接触させることを特徴とする、光学活性なアルコール化合物の製造方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キャンディダ・クレセイの培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を非対称ケトン化合物と接触させることを特徴とする光学活性なアルコール化合物の製造方法。
【請求項２】
菌体を接触させる請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
キャンディダ・クルセイが、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−０８４１、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１１６２、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１６６４、及び受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ  ＲＦ−７８５８からなる群より選ばれる請求項１又は２記載の製造方法。
【請求項４】
受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ  ＲＦ−７８５８。
【請求項５】
非対称ケトン化合物が式（Ｉ）：
【化１】
2007275058.tif 000014
（式中、Ｒ１はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ２はハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、ヒドロキシ、置換されていてもよいアルキルオキシ、置換されていてもよいアルケニルオキシ、置換されていてもよいアルキニルオキシ、置換されていてもよいアルキルチオ、置換されていてもよいアルケニルチオ、置換されていてもよいアルキニルチオ、置換されていてもよいアミノ、ニトロ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアリールオキシ、置換されていてもよいヘテロアリールオキシ、又は置換されていてもよい非芳香複素環式基；ｎは０〜５の整数）
で示される化合物であり、光学活性なアルコール化合物が式（ＩＩ）：
【化２】
2007275058.tif 000015
（式中、Ｒ１、Ｒ２、及びｎは上記と同意義；＊は不斉炭素を表わす）
で示される化合物である請求項１〜３いずれかに記載の製造方法。
【請求項６】
非対称ケトン化合物が式（ＩＩＩ）：
【化３】
2007275058.tif 000016
（式中、Ｒ１はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ３はハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシ；Ｒ４はハロゲン原子）
で示される化合物であり、光学活性なアルコール化合物が式（ＩＶ）：
【化４】
2007275058.tif 000017
（式中、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４は上記と同意義；＊は不斉炭素を表わす）
で示される化合物である請求項１〜３いずれかに記載の製造方法の製造方法。
【請求項７】
Ｒ１がメチルである請求項５又は６記載の製造方法。
【請求項８】
Ｒ３がメチルオキシである請求項６記載の製造方法。
【請求項９】
キャンディダ・トロピカリス、キャンディダ・アルビカンス、キャンディダ・グラブラータ、キャンディダ・パラクルセイ、キャンディダ・ユティリス、キャンディダ・プシュードトロピカリス、キャンディダ・ルゴサ、ロードトルーラ・グルチニス・ヴァー・ダイレネンシス、ロードトルーラ・ルブラ、及びサッカロマイセス・セレビシアエからなる群より選ばれる菌株の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を、式（Ｖ）：
【化５】
2007275058.tif 000018
（式中、Ｒ５はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は、それぞれ独立してハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、ヒドロキシ、置換されていてもよいアルキルオキシ、置換されていてもよいアルケニルオキシ、置換されていてもよいアルキニルオキシ、置換されていてもよいアルキルチオ、置換されていてもよいアルケニルチオ、置換されていてもよいアルキニルチオ、置換されていてもよいアミノ、ニトロ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアリールオキシ、置換されていてもよいヘテロアリールオキシ、又は置換されていてもよい非芳香複素環式基）
で示される非対称ケトン化合物と反応させることを特徴とする、式（ＶＩ）：
【化６】
2007275058.tif 000019
（式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は上記と同意義；＊は不斉炭素を表わす）
で示される光学活性なアルコール化合物の製造方法。
【請求項１０】
菌株が、キャンディダ・トロピカリス  ＡＴＣＣ−２０３３６、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０５８９、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０００６、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０６１８、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０５８７、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−１４００、キャンディダ・アルビカンス  ＡＴＣＣ−３６２３２、キャンディダ・アルビカンス  ＩＦＯ−１３８８、キャンディダ・グラブラータ  ＩＦＯ−０００５、キャンディダ・グラブラータ  ＩＦＯ−０６２２、キャンディダ・パラクルセイ  ＩＦＯ−１０６８、キャンディダ・ユティリス  ＩＦＯ−１０８６、キャンディダ・プシュードトロピカリス  ＩＦＯ−１０６５、キャンディダ・ルゴサ  ＡＴＣＣ−１０５７１、キャンディダ・ルゴサ  ＡＴＣＣ−１４８３０、ロードトルーラ・クルチニス・ヴァー・ダイレネンシス  ＩＦＯ−０４１５、ロードトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０１、ロードトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０２、サッカロマイセス・セレビシアエ  ＡＴＣＣ−１６０４３、又はサッカロマイセス・セレビシアエ  ＡＴＣＣ−４６７８６である請求項９記載の製造方法。
【請求項１１】
菌株が、キャンディダ・トロピカリスＡＴＣＣ−２０３３６、ロドトルーラ・クルチニス  バラエティ  ダイレネンシス  ＩＦＯ−０４１５、ロドトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０１、又はロドトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０２である請求項９記載の製造方法。
【請求項１２】
Ｒ５がアルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ６がハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシであり、Ｒ７がハロゲン原子であり、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０が水素原子である請求項９〜１１のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１３】
Ｒ５がメチル又はｎ−ヘキシルである請求項９〜１１のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１４】
菌体を用いる請求項９〜１３のいずれかに記載の製造方法。
【請求項１５】
式（ＶＩＩ）：
【化７】
2007275058.tif 000020
（式中、Ｒ１１はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ１２はアルキル又はアルキルオキシ；Ｒ１３はハロゲン原子；＊は不斉炭素を表わす）
で示される光学活性なアルコール化合物。
【請求項１６】
Ｒ１２がアルキルオキシである請求項１５記載の光学活性なアルコール化合物。
【請求項１７】
Ｒ１２がＣ１−Ｃ６アルキルオキシである請求項１５記載の光学活性なアルコール化合物。
【請求項１８】
請求項６又は９記載の製造方法により得た式（ＩＶ）：
【化８】
2007275058.tif 000021
（式中、Ｒ１はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ３はハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシ；Ｒ４はハロゲン原子；＊は不斉炭素を表わす）
で示される光学活性なアルコール化合物を用いることを特徴とする、式（ＶＩＩＩ）：
【化９】
2007275058.tif 000022
（式中、Ｒ１及びＲ３は上記と同意義；Ｒ１４はアルキル；Ｒ１５又はＲ１６はそれぞれ独立してハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシ；Ｒ１７はハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシ；＊は不斉中心を表わす）で示される化合物の製造方法。
【請求項１９】
Ｒ１はアルキルであり、Ｒ３はアルキルオキシであり、Ｒ１５又はＲ１６はそれぞれ独立してハロゲン原子であり、Ｒ１７はアルキルである請求項１８記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を用いた、非対称ケトン誘導体から光学活性アルコール誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
微生物の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を用いた、非対称ケトン誘導体から光学活性アルコール誘導体の製造方法は既に知られており、例えば、特許文献１には３−オキソペンタンニトリルから光学活性３−ヒドロキシペンタンニトリルの製造方法、特許文献２、特許文献３および特許文献４には、アルキルアリールケトン誘導体から光学活性アルコール誘導体が開示されている。
しかしながら、キャンディダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ）株を用いた、非対称ケトン化合物から光学活性アルコール化合物の製造方法について、ならびにキャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、キャンディダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、キャンディダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、キャンディダ・パラクルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｋｒｕｓｅｉ）、キャンディダ・ユティリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ）、キャンディダ・プシュードトロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、キャンディダ・ルゴサ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）、ロードトルーラ・グルチニス・ヴァー・ダイレネンシス（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｑｌｕｔｉｎｉｓ  ｖａｒ  ｄａｉｒｅｎｅｓｉｓ）、ロードトルーラ・ルブラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ  ｒｕｂｒａ）、及びサッカロマイセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）株を用いたアルキルアリールケトン誘導体から光学活性アルコール誘導体については開示されていなかった。
【特許文献１】国際公開第２００３／０３１６３６号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００４／０２７０５５号パンフレット
【特許文献３】特開２０００−２５３８９０号公報
【特許文献４】特開平１１−２９００９２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、微生物の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を用いた、非対称ケトン誘導体から光学活性アルコール誘導体の製造方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは以下に示す微生物の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を用いた、非対称ケトン誘導体から光学活性アルコール誘導体の製造方法が有効であることを見出した。
すなわち、本発明は、１）キャンディダ・クルセイの培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を非対称ケトン化合物と接触させることを特徴とする光学活性なアルコール化合物の製造方法、
２）菌体を接触させる１）記載の製造方法、
３）キャンディダ・クルセイが、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−０８４１、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１１６２、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１６６４、及び受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ  ＲＦ−７８５８からなる群より選ばれる１）又は２）記載の製造方法、
４）受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ  ＲＦ−７８５８、
５）非対称ケトン化合物が式（Ｉ）：
【化１】
2007275058.tif 000002
（式中、Ｒ１はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ２はハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、ヒドロキシ、置換されていてもよいアルキルオキシ、置換されていてもよいアルケニルオキシ、置換されていてもよいアルキニルオキシ、置換されていてもよいアルキルチオ、置換されていてもよいアルケニルチオ、置換されていてもよいアルキニルチオ、置換されていてもよいアミノ、ニトロ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアリールオキシ、置換されていてもよいヘテロアリールオキシ、又は置換されていてもよい非芳香複素環式基；ｎは０〜５の整数）
で示される化合物であり、光学活性なアルコール化合物が式（ＩＩ）：
【化２】
2007275058.tif 000003
（式中、Ｒ１、Ｒ２、及びｎは上記と同意義；＊は不斉炭素を表わす）
で示される化合物である１）〜３）いずれかに記載の製造方法、
６）非対称ケトン化合物が式（ＩＩＩ）：
【化３】
2007275058.tif 000004
（式中、Ｒ１はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ３はハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシ；Ｒ４はハロゲン原子）
で示される化合物であり、光学活性なアルコール化合物が式（ＩＶ）：
【化４】
2007275058.tif 000005
（式中、Ｒ１、Ｒ３、及びＲ４は上記と同意義；＊は不斉炭素を表わす）
で示される化合物である１）〜３）いずれかに記載の製造方法の製造方法、
７）Ｒ１がメチルである５）又は６）記載の製造方法、
８）Ｒ３がメチルオキシである６）又は７）記載の製造方法、
９）キャンディダ・トロピカリス、キャンディダ・アルビカンス、キャンディダ・グラブラータ、キャンディダ・パラクルセイ、キャンディダ・ユティリス、キャンディダ・プシュードトロピカリス、キャンディダ・ルゴサ、ロードトルーラ・グルチニス・ヴァー・ダイレネンシス、ロードトルーラ・ルブラ、及びサッカロマイセス・セレビシアエからなる群より選ばれる菌株の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を、式（Ｖ）：
【化５】
2007275058.tif 000006
（式中、Ｒ５はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は、それぞれ独立してハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、置換されていてもよいアルケニル、置換されていてもよいアルキニル、ヒドロキシ、置換されていてもよいアルキルオキシ、置換されていてもよいアルケニルオキシ、置換されていてもよいアルキニルオキシ、置換されていてもよいアルキルチオ、置換されていてもよいアルケニルチオ、置換されていてもよいアルキニルチオ、置換されていてもよいアミノ、ニトロ、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアリールオキシ、置換されていてもよいヘテロアリールオキシ、又は置換されていてもよい非芳香複素環式基）
で示される非対称ケトン化合物と反応させることを特徴とする、式（ＶＩ）：
【化６】
2007275058.tif 000007
（式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０は上記と同意義；＊は不斉炭素を表わす）
で示される光学活性なアルコール化合物の製造方法、
１０）菌株が、キャンディダ・トロピカリス  ＡＴＣＣ−２０３３６、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０５８９、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０００６、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０６１８、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０５８７、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−１４００、キャンディダ・アルビカンス  ＡＴＣＣ−３６２３２、キャンディダ・アルビカンス  ＩＦＯ−１３８８、キャンディダ・グラブラータ  ＩＦＯ−０００５、キャンディダ・グラブラータ  ＩＦＯ−０６２２、キャンディダ・パラクルセイ  ＩＦＯ−１０６８、キャンディダ・ユティリス  ＩＦＯ−１０８６、キャンディダ・プシュードトロピカリス  ＩＦＯ−１０６５、キャンディダ・ルゴサ  ＡＴＣＣ−１０５７１、キャンディダ・ルゴサ  ＡＴＣＣ−１４８３０、ロードトルーラ・クルチニス・ヴァー・ダイレネンシス  ＩＦＯ−０４１５、ロードトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０１、ロードトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０２、サッカロマイセス・セレビシアエ  ＡＴＣＣ−１６０４３、又はサッカロマイセス・セレビシアエ  ＡＴＣＣ−４６７８６である９）記載の製造方法、
１１）菌株が、キャンディダ・トロピカリスＡＴＣＣ−２０３３６、ロドトルーラ・クルチニス  バラエティ  ダイレネンシス  ＩＦＯ−０４１５、ロドトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０１、又はロドトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０２である９）記載の製造方法。
１２）Ｒ５がアルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ６がハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシであり、Ｒ７がハロゲン原子であり、Ｒ８、Ｒ９、及びＲ１０が水素原子である９）〜１１）のいずれかに記載の製造方法、
１３）Ｒ５がメチル又はｎ−ヘキシルである９）〜１１）のいずれかに記載の製造方法、
１４）菌体を用いる９）〜１３）のいずれかに記載の製造方法、
１５）式（ＶＩＩ）：
【化７】
2007275058.tif 000008
（式中、Ｒ１１はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ１２はアルキル又はアルキルオキシ；Ｒ１３はハロゲン原子；＊は不斉炭素を表わす）
で示される光学活性なアルコール化合物、
１６）Ｒ１２がアルキルオキシである１５）記載の光学活性なアルコール化合物、
１７）Ｒ１２がＣ１−Ｃ６アルキルオキシである１５）記載の光学活性なアルコール化合物、
１８）６）又は９）記載の製造方法により得た式（ＩＶ）：
【化８】
2007275058.tif 000009
（式中、Ｒ１はアルキル又はシクロアルキル；Ｒ３はハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシ；Ｒ４はハロゲン原子；＊は不斉炭素を表わす）
で示される光学活性なアルコール化合物を用いることを特徴とする、式（ＶＩＩＩ）：
【化９】
2007275058.tif 000010
（式中、Ｒ１及びＲ３は上記と同意義；Ｒ１４はアルキル；Ｒ１５又はＲ１６はそれぞれ独立してハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシ；Ｒ１７はハロゲン原子、アルキル、又はアルキルオキシ；＊は不斉中心を表わす）で示される化合物の製造方法、
１９）Ｒ１はアルキルであり、Ｒ３はアルキルオキシであり、Ｒ１５又はＲ１６はそれぞれ独立してハロゲン原子であり、Ｒ１７はアルキルである１８）記載の製造方法、に関する。
【０００５】
以下に各用語の意味を説明する。各用語は本明細書中、統一した意味で使用し、単独で用いられる場合も、又は他の用語と組み合わされて用いられる場合も、同一の意味で用いられる。
本明細書中、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子を意味する。
本明細書中、「アルキル」とは、炭素原子数１〜１２の直鎖または分枝鎖のアルキルを包含する。例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎｅｏ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシル等が挙げられる。好ましくは、Ｃ１−Ｃ８アルキルが挙げられる。
本明細書中、「アルケニル」とは、炭素原子数が２〜１２個であり、１個もしくは２個以上の二重結合を有する、直鎖または分枝鎖のアルケニルを包含する。例えば、ビニル、アリル、１−プロペニル、２−ブテニル、２−ペンテニル、２−ヘキセニル、２−ヘプテニル、２−オクテニル等が挙げられる。好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルケニルが挙げられる。
本明細書中、「アルキニル」とは、炭素原子数が２〜１２個であり、１個もしくは２個以上の三重結合を有する、直鎖または分枝鎖のアルキニルを包含する。例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、２−ブチニル、２−ペンチニル、２−ヘキシニル、２−ヘプチニル、２−オクチニル等が挙げられる。好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルキニルが挙げられる。
本明細書中、「シクロアルキル」とは、炭素原子数が３〜８個であるシクロアルキルを包含する。例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルが挙げられる。好ましくはＣ３−Ｃ６シクロアルキルが挙げられる。
本明細書中、「アルキルオキシ」としては、炭素原子数が１〜１２個であるアルキルオキシを包含する。例えば、メチルオキシ、エチルオキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、イソブチルオキシ、ｓｅｃ−ブチルオキシ、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、２−ペンチルオキシ、３−ペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ、２−ヘキシルオキシ、３−ヘキシルオキシ、ｎ−ヘプチルオキシ、ｎ−オクチルオキシ等が挙げられる。好ましくは、Ｃ１−Ｃ８アルキルオキシが挙げられる。
本明細書中、「アルケニルオキシ」としては、炭素原子数が２〜１２個であるアルケニルオキシを包含する。例えば、ビニルオキシ、アリルオキシ、１−プロペニルオキシ、２−ブテニルオキシ、２−ペンテニルオキシ、２−ヘキセニルオキシ、２−ヘプテニルオキシ、２−オクテニルオキシ等が挙げられる。好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルケニルオキシが挙げられる。
本明細書中、「アルキニルオキシ」としては、炭素原子数が２〜１２個であるアルキニルオキシを包含する。例えば、エチニルオキシ、１−プロピニルオキシ、２−プロピニルオキシ、２−ブチニルオキシ、２−ペンチニルオキシ、２−ヘキシニルオキシ、２−ヘプチニルオキシ、２−オクチニルオキシ等が挙げられる。好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルキニルオキシが挙げられる。
本明細書中、「アルキルチオ」としては、炭素原子数が１〜１２個であるアルキルチオを包含する。例えば、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ｎ−ペンチルチオ、イソペンチルチオ、２−ペンチルチオ、３−ペンチルチオ、ｎ−ヘキシルチオ、イソヘキシルチオ、２−ヘキシルチオ、３−ヘキシルチオ、ｎ−ヘプチルチオ、ｎ−オクチルチオ等が挙げられる。好ましくは、Ｃ１−Ｃ８アルキルチオが挙げられる。
本明細書中、「アルケニルチオ」としては、炭素原子数が２〜１２個であるアルケニルチオを包含する。例えば、ビニルチオ、アリルチオ、１−プロペニルチオ、２−ブテニルチオ、２−ペンテニルチオ、２−ヘキセニルチオ、２−ヘプテニルチオ、２−オクテニルチオ等が挙げられる。好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルケニルチオが挙げられる。
本明細書中、「アルキニルチオ」としては、炭素原子数が２〜１２個であるアルキニルチオを包含する。例えば、エチニルチオ、１−プロピニルチオ、２−プロピニルチオ、２−ブチニルチオ、２−ペンチニルチオ、２−ヘキシニルチオ、２−ヘプチニルチオ、２−オクチニルチオ等が挙げられる。好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルキニルチオが挙げられる。
本明細書中、「置換されていてもよいアミノ」とは、前記「アルキル」、後記「アリール」、後記「ヘテロアリール」、後記「アシル」、後記「アルキルオキシカルボニル」および／または後記「アルキルスルホニル」で１または２個所置換されていもよいアミノを包含する。例えば、アミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、エチルメチルアミノ、ベンジルアミノ、アセチルアミノ、ベンゾイルアミノ、メチルオキシカルボニルアミノ、メタンスルホニルアミノ等が挙げられる。好ましくはアミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルメチルアミノ、ジエチルアミノ、アセチルアミノ、メタンスルホニルアミノ等が挙げられる。
本明細書中、「アシル」とは、アルキル部分が前記「アルキル」であるアルキルカルボニルまたはアリール部分が後記「アリール」であるアリールカルボニルを包含する。「アルキル」および「アリール」はそれぞれ後述の「置換されていてもよいアルキル」および「置換されていてもよいアリール」において例示された置換基によって置換されていてもよい。例えば、アセチル、プロピオニル、ブチロイル、ベンゾイル等が挙げられる。
本明細書中、「アルキルオキシカルボニル」としては、メチルオキシカルボニル、エチルオキシカルボニル、ｎ−プロピルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、ｎ−ブチルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、ｎ−ペンチルオキシカルボニル等が挙げられる。
本明細書中、「アルキルスルホニル」としては、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ｎ−ブチルスルホニル、イソブチルスルホニル、ｓｅｃ−ブチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルニル、ｎ−ペンチルスルホニル、イソペンチルスルホニル、２−ペンチルスルホニル、３−ペンチルスルホニル、ｎ−ヘキシルスルホニル、イソヘキシルスルホニル、２−ヘキシルスルホニル、３−ヘキシルスルホニル、ｎ−ヘプチルスルホニル、ｎ−オクチルスルホニル等が挙げられる。
本明細書中、「アリール」とは、単環状もしくは縮合環状芳香族炭化水素を包含する。これは前記「シクロアルキル」、後記「非芳香族複素環基」と可能な全ての位置で縮合していてもよい。アリールが単環および縮合環のいずれである場合も、すべての可能な位置で結合しうる。例えば、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、アントリル、テトラヒドロナフチル、１，３−ベンゾヂオキソリル、１，４−ベンゾジオキサニル等が挙げられる。好ましくは、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルが挙げられる。さらに好ましくは、フェニルが挙げられる。
本明細書中、「非芳香族複素環基」とは、任意に選ばれる、酸素原子、硫黄原子または窒素原子を環内に１個以上含む非芳香族の５〜７員環またはそれらが２個以上縮合した環を包含する。例えば、ピロリジニル（例えば、１−ピロリジニル、２−ピロリジニル）、ピロリニル（例えば、３−ピロリニル）、イミダゾリジニル（例えば、２−イミダゾリジニル）、イミダゾリニル（例えば、イミダゾリニル）、ピラゾリジニル（例えば、１−ピラゾリジニル、２−ピラゾリジニル）、ピラゾリニル（例えば、ピラゾリニル）、ピペリジル（例えば、ピペリジノ、２−ピペリジル）、ピペラジニル（例えば、１−ピペラジニル）、モルホリニル（例えば、モルホリノ、３−モルホリニル）等が挙げられる。
本明細書中、「ヘテロアリール」とは、任意に選ばれる、酸素原子、硫黄原子または窒素原子を環内に１個以上含む５〜６員の芳香環を包含する。これは前記「シクロアルキル」、前記「アリール」、前記「非芳香族複素環基」、もしくは他のヘテロアリールと可能な全ての位置で縮合していてもよい。ヘテロアリールが単環および縮合環のいずれである場合も、すべての可能な位置で結合しうる。例えば、ピロリル（例えば、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル）、フリル（例えば、２−フリル、３−フリル）、チエニル（例えば、２−チエニル、３−チエニル）、イミダゾリル（例えば、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル）、ピラゾリル（例えば、１−ピラゾリル、３−ピラゾリル）、イソチアゾリル（例えば、３−イソチアゾリル）、イソキサゾリル（例えば、３−イソキサゾリル）、オキサゾリル（例えば、２−オキサゾリル）、チアゾリル（例えば、２−チアゾリル）、ピリジル（例えば、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル）、ピラジニル（例えば、２−ピラジニル）、ピリミジニル（例えば、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル）、ピリダジニル（例えば、３−ピリダジニル）、テトラゾリル（例えば、１Ｈ−テトラゾリル）、オキサジアゾリル（例えば、１，３，４−オキサジアゾリル）、チアジアゾリル（例えば、１，３，４−チアジアゾリル）等が挙げられる。
本明細書中、「アリールオキシ」としては、フェニルオキシ、ナフチルオキシ等が挙げられる。
本明細書中、「ヘテロアリールオキシ」としては、ピロリルオキシ、フリルオキシ、チエニルオキシ、イミダゾリルオキシ、ピラゾリルオキシ、イソチアゾリルオキシ、イソキサゾリルオキシ、オキサゾリルオキシ、チアゾリルオキシ、ピリジルオキシ、ピラジニルオキシ、ピリミジニルオキシ、ピリダジニルオキシ、テトラゾリルオキシ、オキサジアゾリルオキシ、チアジアゾリルオキシ等が挙げられる。好ましくは、フリルオキシ、チエニルオキシ、イミダゾリルオキシ、ピラゾリルオキシ、イソチアゾリルオキシ、イソキサゾリルオキシ、オキサゾリルオキシ、チアゾリルオキシ、ピリジルオキシ、ピラジニルオキシ、ピリミジニルオキシ、ピリダジニルオキシ等が挙げられる。
本明細書中、「非対称ケトン」とは、カルボニル基の炭素原子に結合している二つの置換基がそれぞれ異なる基であるケトン化合物を包含する。例えば、（置換されていてもよいアルキル）（置換されていてもよいアリール）ケトン化合物等が挙げられる。
本明細書中、「光学活性なアルコール」とは、上記「非対称ケトン」のカルボニル基部分が水酸基に還元された光学活性なアルコー化合物を包含する。例えば、（置換されていてもよいアルキル）（置換されていてもよいアリール）メチルアルコール化合物等が挙げられる。
本明細書中、「培養物」とは、菌株を培地（例えば、グルコース40 g、酵母エキス粉末(Difco社製)3 g、リン酸水素二アンモニウム13 g、リン酸二水素カリウム7 g、硫酸亜鉛・七水和物70 mg、硫酸マグネシウム・七水和物0.8 g、硫酸マンガン・四水和物10 mg、硫酸鉄・七水和物90 mg、硫酸銅・五水和物5 mg、および食塩0.1 gからなる液体培地）で培養した全培養物を意味する。
本明細書中、「菌体」とは、上記「培養物」を遠心分離して得られる沈殿物を意味する。
本明細書中、「酵素」とは、上記「非対称ケトン」を上記「光学活性なアルコール」に還元する能力を有する酵素を意味する。
【０００６】
本明細書中、「置換されていてもよいアルキル」、「置換されていてもよいアルキルオキシ」、および「置換されていてもよいアルキルチオ」における置換基としては、シクロアルキル、ヒドロキシ、アルキルオキシ、メルカプト、アルキルチオ、ハロゲン原子、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルキルオキシカルボニル、置換されていてもよいアミノ、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル）、非芳香族複素環基（例えば、モルホリニル、ピロリジニル、ピペラジニル）、アリールオキシ（例えば、フェニルオキシ）、アルキルスルホニル等が挙げられる。これらは、全ての可能な位置で１〜３個置換しうる。
本明細書中、「置換されていてもよいアルケニル」、「置換されていてもよいアルキニル」、「置換されていてもよいアルケニルオキシ」、「置換されていてもよいアルキニルオキシ」、「置換されていてもよいアルケニルチオ」、および「置換されていてもよいアルキニルチオ」における置換基としては、アルキル、シクロアルキル、ヒドロキシ、アルキルオキシ、メルカプト、アルキルチオ、ハロゲン原子、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルキルオキシカルボニル、置換されていてもよいアミノ、アリール（例えば、フェニル）、ヘテロアリール（例えば、ピリジル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル）、非芳香族複素環基（例えば、モルホリニル、ピロリジニル、ピペラジニル）、アリールオキシ（例えば、フェニルオキシ）、アルキルスルホニル等が挙げられる。これらは、全ての可能な位置で１個以上置換しうる。
本明細書中、「置換されていてもよいアリール」、「置換されていてもよいアリールオキシ」、「置換されていてもよいヘテロアリール」、「置換されていてもよいヘテロアリールオキシ」、および「置換されていてもよい非芳香族複素環基」における置換基としては、アルキル、トリフルオロメチル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アルキルオキシ、アリールオキシ（例えば、フェノキシ）、メルカプト、アルキルチオ、ハロゲン原子、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルキルオキシカルボニル、アルキルスルホニル、置換されていてもよいアミノ、アリール（例えば、フェニル）、置換基群Ｃにより１〜３箇所置換されていてもよいヘテロアリール（例えば、ピリジル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル）、非芳香族複素環基（例えば、モルホリニル、ピロリジニル、ピペラジニル）等が挙げられる。これらは、全ての可能な位置で１個以上置換しうる。
【０００７】
式（Ｉ）または式（ＩＩ）で示される化合物のＲ１、Ｒ２、およびｎの好ましい置換基群を（Ｉａ）〜（Ｉｆ）で示す。それらの可能な組合せの化合物が好ましい。
Ｒ１は、（Ｉａ）アルキル又はシクロアルキルが好ましく、さらに、（Ｉｂ）Ｃ１−Ｃ８アルキルが好ましい。
Ｒ２はそれぞれ独立して、（Ｉｃ）ハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルキルオキシが好ましく、さらに、（Ｉｄ）ハロゲン原子又はアルキルオキシが好ましい。
ｎは、（Ｉｅ）２〜４が好ましく、さらに（Ｉｆ）２が好ましい。
【０００８】
式（ＩＩＩ）または式（ＩＶ）で示される化合物のＲ１、Ｒ３、およびＲ４の好ましい置換基群を（Ｉａ）〜（Ｉｄ）または（Ｉｇ）〜（Ｉｉ）で示す。それらの可能な組合せの化合物が好ましい。
Ｒ１は、（Ｉａ）アルキル又はシクロアルキルが好ましく、さらに、（Ｉｂ）Ｃ１−Ｃ８アルキルが好ましい。
Ｒ３は、（Ｉｃ）ハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルキルオキシが好ましく、さらに、（Ｉｄ）ハロゲン原子又はアルキルオキシが好ましく、（Ｉｇ）アルキルオキシが最も好ましい。
Ｒ４は、（Ｉｈ）ハロゲン原子が好ましく、さらに、（Ｉｉ）塩素原子または臭素原子がましい。
【０００９】
式（Ｖ）または式（ＶＩ）で示される化合物のＲ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０の好ましい置換基群を（Ｉａ）〜（Ｉｄ）または（Ｉｇ）〜（Ｉｏ）で示す。それらの可能な組合せの化合物が好ましい。
Ｒ５は、（Ｉａ）アルキル又はシクロアルキルが好ましく、さらに、（Ｉｂ）Ｃ１−Ｃ８アルキルが好ましい。
Ｒ６は、（Ｉｃ）ハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルキルオキシが好ましく、さらに、（Ｉｄ）ハロゲン原子又はアルキルオキシが好ましく、（Ｉｇ）アルキルオキシが最も好ましい。
Ｒ７は、（Ｉｈ）ハロゲン原子が好ましく、さらに、（Ｉｉ）塩素原子または臭素原子がましい。
Ｒ８は、（Ｉｊ）水素原子又はアルキルが好ましく、さらに、（Ｉｋ）水素原子が好ましい。
Ｒ９は、（Ｉｌ）水素原子又はアルキルが好ましく、さらに、（Ｉｍ）水素原子が好ましい。
Ｒ１０は、（Ｉｎ）水素原子又はアルキルが好ましく、さらに、（Ｉｏ）水素原子が好ましい。
【００１０】
式（ＶＩＩ）で示される化合物のＲ１１、Ｒ１２、およびＲ１３の好ましい置換基群を（Ｉａ）〜（Ｉｄ）または（Ｉｇ）〜（Ｉｉ）で示す。それらの可能な組合せの化合物が好ましい。
Ｒ１１は、（Ｉａ）アルキル又はシクロアルキルが好ましく、さらに、（Ｉｂ）Ｃ１−Ｃ８アルキルが好ましい。
Ｒ１２は、（Ｉｃ）ハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルキルオキシが好ましく、さらに、（Ｉｄ）ハロゲン原子又はアルキルオキシが好ましく、（Ｉｇ）アルキルオキシが最も好ましい。
Ｒ１３は、（Ｉｈ）ハロゲン原子が好ましく、さらに、（Ｉｉ）塩素原子または臭素原子がましい。
【００１１】
式（ＶＩＩＩ）で示される化合物のＲ１、Ｒ３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、およびＲ１７の好ましい置換基群を（Ｉａ）〜（Ｉｄ）または（Ｉｇ）〜（Ｉｉ）で示す。それらの可能な組合せの化合物が好ましい。
Ｒ１は、（Ｉａ）アルキル又はシクロアルキルが好ましく、さらに、（Ｉｂ）Ｃ１−Ｃ８アルキルが好ましい。
Ｒ３は、（Ｉｃ）ハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル、又は置換されていてもよいアルキルオキシが好ましく、さらに、（Ｉｄ）ハロゲン原子又はアルキルオキシが好ましく、（Ｉｇ）アルキルオキシが最も好ましい。
Ｒ１４は、（Ｉｐ）アルキル好ましく、さらに、（Ｉｑ）Ｃ１−Ｃ８アルキルが好ましい。
Ｒ１５は、（Ｉｒ）ハロゲン原子又はアルキル好ましく、さらに、（Ｉｓ）ハロゲン原子が好ましい。
Ｒ１６は、（Ｉｔ）ハロゲン原子又はアルキル好ましく、さらに、（Ｉｕ）ハロゲン原子が好ましい。
Ｒ１７は、（Ｉｖ）ハロゲン原子又はアルキル好ましく、さらに、（Ｉｗ）アルキルが好ましい。
【発明の効果】
【００１２】
本発明製造方法は、光学活性なトロンボポイエチン受容体アゴニストおよび重要な中間体の製造法として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明に係る化合物は、以下の工程で製造することができる。出発物質の式（Ｉ）で示される化合物は、市販品または式（ＩＸ）で示される化合物のＨａｌをアシルに変換することにより製造することができる。
【化１０】
2007275058.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、およびｎは上記と同意義；Ｈａｌはハロゲン原子）  
工程１は式（ＩＸ）で表される化合物をグリニャール試薬とし、アルキルカルボニルクロリドと反応することにより、式（Ｉ）で表される化合物を製造する工程である。
グリニャール試薬は、テトラヒドロフラン中、反応温度０℃〜溶媒還流温度で、反応時間は５分〜４８時間で製造することができる。マグネシウムは式（ＩＸ）で表される化合物に対して０．５〜４当量用いることができる。
グリニャール試薬とアルキルカルボニルクロリドの反応は、反応温度０℃〜溶媒還流温度で、反応時間は５分〜４８時間で製造することができる。アルキルカルボニルクロリドは式（ＩＸ）で表される化合物に対して０．５〜４当量用いることができる。
必要であれば、カラムクロマトグラフィー、蒸留、再結晶等により精製することができる。
工程２は式（Ｉ）で表される化合物を微生物由来の還元酵素を用いて不斉還元し、式（ＩＩ）で表される化合物を製造する工程である。
還元酵素を含む菌体は、菌株を適当な液体培地で培養し得ることができる。
菌株としては、キャンディダ・クルセイ、キャンディダ・トロピカリス、キャンディダ・アルビカンス、キャンディダ・グラブラータ、キャンディダ・パラクルセイ、キャンディダ・ユティリス、キャンディダ・プシュードトロピカリス、キャンディダ・ルゴサ、ロードトルーラ・グルチニス・ヴァー・ダイレネンシス、ロードトルーラ・ルブラ、及びサッカロマイセス・セレビシアエを単独または混合して用いることができる。好ましくは、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−０８４１、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１１６２、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１６６４、受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ  ＲＦ−７８５８、キャンディダ・トロピカリス  ＡＴＣＣ−２０３３６、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０５８９、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０００６、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０６１８、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−０５８７、キャンディダ・トロピカリス  ＩＦＯ−１４００、キャンディダ・アルビカンス  ＡＴＣＣ−３６２３２、キャンディダ・アルビカンス  ＩＦＯ−１３８８、キャンディダ・グラブラータ  ＩＦＯ−０００５、キャンディダ・グラブラータ  ＩＦＯ−０６２２、キャンディダ・パラクルセイ  ＩＦＯ−１０６８、キャンディダ・ユティリス  ＩＦＯ−１０８６、キャンディダ・プシュードトロピカリス  ＩＦＯ−１０６５、キャンディダ・ルゴサ  ＡＴＣＣ−１０５７１、キャンディダ・ルゴサ  ＡＴＣＣ−１４８３０、ロードトルーラ・クルチニス・ヴァー・ダイレネンシス  ＩＦＯ−０４１５、ロードトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０１、ロードトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０２、サッカロマイセス・セレビシアエ  ＡＴＣＣ−１６０４３、又はサッカロマイセス・セレビシアエ  ＡＴＣＣ−４６７８６であり、さらに好ましくは、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−０８４１、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１１６２、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１６６４、及び受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ  ＲＦ−７８５８、キャンディダ・トロピカリスＡＴＣＣ−２０３３６、ロドトルーラ・クルチニス  バラエティ  ダイレネンシス  ＩＦＯ−０４１５、ロドトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０１、又はロドトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０２である。
式（Ｉ）で表される化合物が１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノンの場合は、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−０８４１、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１１６２、キャンディダ・クルセイ  ＩＦＯ−１６６４、受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ  ＲＦ−７８５８、ロドトルーラ・クルチニス  バラエティ  ダイレネンシス  ＩＦＯ−０４１５、ロドトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０２、又はサッカロマイセス・セレビシアエ  ＡＴＣＣ−４６７８６が好ましい。
式（Ｉ）で表される化合物が１−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘキサン−１−オンの場合は、ロドトルーラ・ルブラ  ＩＦＯ−０９０２が好ましい。
液体培地として、例えば、グルコース40 g、酵母エキス粉末(Difco社製)3 g、リン酸水素二アンモニウム13 g、リン酸二水素カリウム7 g、硫酸亜鉛・七水和物70 mg、硫酸マグネシウム・七水和物0.8 g、硫酸マンガン・四水和物10 mg、硫酸鉄・七水和物90 mg、硫酸銅・五水和物5 mg、および食塩0.1 gからなる液体培地(1 L、pH 7.0)を用いることができる。
培養方法として、例えば、この液体培地をメンブランフィルターにより濾過滅菌した後に、あらかじめ１８０℃、９０分間乾熱滅菌した試験管にそれぞれ5 mLずつ無菌的に分注し、それらに菌株を各１白金耳ずつ無菌的に植菌し、３０℃で２４時間振とう培養する方法を用いることができる。
菌体は、培養後に遠心分離して集めることができる。
この菌体を用いて、式（Ｉ）で示される化合物を不斉還元することができる。例えば、集めた菌体を100 mMリン酸緩衝液(pH 7.0)各2 mLに縣濁後、50%グルコース溶液(80μL)と式（Ｉ）で示される化合物(1 mg)を加え、この反応液を３０℃で２０時間振とうすることにより式（ＩＩ）で示される化合物を得ることができる。なお、変換率(%)および光学異性体過剰率(%ee)はHPLC分析により、標準品とのピーク面積の比較から求めることができる。
必要であれば、カラムクロマトグラフィー、蒸留、再結晶等により精製することができる。
なお、式（ＩＩ）で示される化合物の＊を付した不斉炭素の絶対配置は、式（ＩＩ）で示される化合物またはその誘導体のＸ線結晶解析による一般的な方法を用いて決定することができる。
例えば、（−）−１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノールの場合は、ｐ
−ブロモ安息香酸エステル誘導体に変換し、Ｘ線結晶解析より（Ｓ）−（−）−１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノールと決定した。
工程３は式（ＩＩ）で表される化合物をアルキル化し、式（Ｘ）で表される化合物を製造する工程である。
溶媒中、塩基存在下、反応温度０℃〜８０℃で、反応時間は５分〜４８時間、ハロアルキルを式（ＩＩ）で表される化合物に対して０．５〜５当量用いて反応することができる。
塩基は式（ＩＩ）で表される化合物に対して０．５〜５当量用いることができる。塩基としては、水素化ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、水酸化ナトリウムなどが好ましい。
溶媒としては、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどが好ましく、これらを単独あるいは混合溶媒として用いることができる。
必要であれば、カラムクロマトグラフィー、蒸留、再結晶等により精製することができる。
工程４は式（Ｘ）で表される化合物をグリニャール試薬とし、塩化クロロアセチルと反応することにより、式（ＸＩ）で表される化合物を製造する工程である。
グリニャール試薬は、テトラヒドロフラン中、反応温度０℃〜溶媒還流温度で、反応時間は５分〜４８時間で製造することができる。マグネシウムは式（Ｘ）で表される化合物に対して０．５〜４当量用いることができる。
グリニャール試薬と塩化クロロアセチルの反応は、反応温度０℃〜溶媒還流温度で、反応時間は５分〜４８時間で製造することができる。塩化クロロアセチルは式（Ｘ）で表される化合物に対して０．５〜４当量用いることができる。
必要であれば、カラムクロマトグラフィー、蒸留、再結晶等により精製することができる。
なお、工程５〜工程７はＷＯ  ０１／５３２６７記載の方法と同様な方法で行うことができる。
【００１４】
本明細書中に記載の菌株は、「受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ）  ＲＦ−７８５８」以外は市販品である。市販品は、財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ、ただし平成１４年６月３０日に製品評価技術基盤機構バイオテクノロジー本部・生物遺伝資源部門（ＮＢＲＣ）に移管している）またはＴｈｅ  ｇｌｏｂａｌ  ｂｉｏｒｅｓｏｕｃｅ  ｃｅｎｔｅｒにあるＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手した。「受託番号がＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９のキャンディダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ）  ＲＦ−７８５８」は、“ヨーグルトきのこ”から分離され、“ＭＹ寒天上で、クリーム状のコロニーを形成し、栄養細胞は卵型〜ソーセージ型（３．０〜５．０ｘ５．０〜１２．０）を呈する。またグリセロールを酸化する。Ｂｉｇｇｙ寒天培地で褐色、扁平でしわのあるコロニーを形成”という科学的性質を有する。その菌株「Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ  ＲＦ−７８５８」は、平成１８年２月１５日に、独立行政法人  産業技術総合研究所内  特許生物寄託センター（茨城県つくば市東１−１−１  中央第６）に、「Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ  ＲＦ−７８５８」（受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２０７９９）なる表示で寄託されている。
【実施例】
【００１５】
以下に実施例および試験例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
実施例１  １−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノンの不斉還元
グルコース40 g、酵母エキス粉末(Difco社製)3 g、リン酸水素二アンモニウム13 g、リン酸二水素カリウム7 g、硫酸亜鉛・七水和物70 mg、硫酸マグネシウム・七水和物0.8 g、硫酸マンガン・四水和物10 mg、硫酸鉄・七水和物90 mg、硫酸銅・五水和物5 mg、および食塩0.1 gからなる液体培地(1 L、pH 7.0)をメンブランフィルターにより濾過滅菌した後に、あらかじめ１８０℃、９０分間乾熱滅菌した試験管にそれぞれ5 mLずつ無菌的に分注した。これらの液体培地に表１に示した菌株を各１白金耳ずつ無菌的に植菌し、３０℃で２４時間振とう培養した。培養後、遠心分離して菌体を集めた。
集めた菌体を100 mMリン酸緩衝液(pH 7.0)各2 mLに縣濁後、50%グルコース溶液(80μL)と１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノン(1 mg)を加え、この反応液を３０℃で２０時間振とうした。HPLC分析により、標準品とのピーク面積の比較から、変換率(%)および光学異性体過剰率(%ee)を求めた。それらの数値を表１に示した。
HPLC分析条件を以下に示す。
１）逆相HPLC分析条件および分析ピークの保持時間
カラム：INTACT社製  Unison  UK-18(3μm), 4.6i.d. x 50mm、検出：UV210nm、カラム恒温槽:25℃、移動相：CH3CN/H2O + 0.1%ギ酸 系グラジェント
混合比（20%-(8min)-95%-(2min)-95%-(0.5min)-20%-(2.5min)-20%）、
流速：1mL/min
１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノン：5.4分、
１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノール：4.5分
２）キラル分析条件および分析ピークの保持時間
カラム：ダイセル社製  Chiralcel  OD-H, 4.6i.d. x 150mm、検出：UV210nm、カラム恒温槽:25℃、移動相：n-ヘキサン/i-プロパノール 9:1、流速：0.5mL/min
１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノン：6.0分、
（Ｓ）−（−）−１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノール（P1）：6.9分、
（Ｒ）−（＋）−１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノール（P２）：8.0分
【表１】
2007275058.tif 000012
実施例２  １−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘプタン−１−オンの不斉還元
実施例１と同様の手法で、１−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘプタン−１−オンから（Ｓ）−（−）−１−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘプタン−１−オールを合成した。
分析条件を以下に示す。
１）逆相HPLC分析におけるピークの保持時間
１−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘプタン−１−オン：8.52分
１−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘプタン−１−オール：7.51分
２）キラル分析におけるピークの保持時間
１−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘプタン−１−オン：4.69分
（Ｓ）−（−）−１−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘプタン−１−オール（P1）：5.39分、
（Ｒ）−（＋）−１−（３−ブロモ-−２−メトキシフェニル)ヘプタン−１−オール（P2）：6.51分
【表２】
2007275058.tif 000013
【００１６】
実施例３  （Ｓ）−（−）−１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノールの合成
酵母エキス粉末(Difco社製)9 g、リン酸水素二アンモニウム39 g、リン酸二水素カリウム21 g、硫酸マグネシウム・七水和物2.4 g、硫酸マンガン・四水和物30 mg、硫酸亜鉛・七水和物0.21 g、硫酸鉄・七水和物0.27 g、硫酸銅・五水和物15 mg、および食塩0.3 gからなる液体培地(3 L、pH7.0)を100 mLずつ、500 mL容の広口コルベンに分注し、１２１℃で２０分間高圧蒸気滅菌した。炭素源としては、グルコース500 gに水を加えて1 Lにしたものを１２１℃で２０分間高圧蒸気滅菌したのち、上記培地にそれぞれ8 mLずつ加えた。
Candida krusei IFO-0841の試験管斜面培養物に上記培地(10 mL)を無菌的に加えて調整した縣濁液(1 mL)を、これらの液体培地に無菌的に植菌し、28℃で２４時間振とう培養した。培養後、遠心分離して菌体を集めた。
集めた菌体(25 g)に100 mMリン酸緩衝液(pH7)を加え全量を50 mLとした溶液と50%グルコース溶液(4 mL)を、１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノン(2.5 g)を加えた500 mLの広口コルベンに加え、この反応液を２８℃で２７時間振とうした。反応液中のグルコース濃度は、適宜グルコースを添加して4%に維持した。またpHは、6.5から7の範囲に、適宜14%アンモニア水にて調整した。実施例１の条件でHPLC分析したところ変換率：97%、光学異性体過剰率：100%eeであった。
反応液にセライト3 gおよび酢酸エチル50 mLを加え、室温で１０分攪拌後、ろ過した。ろ液を留去することにより、目的とする（Ｓ）−（−）−１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノール（P1）(2.19 g、100%ee)を得た。
旋光度：[α]D（CHCl3 , 22℃, c=1.003）-23.8±0.6°
実施例４  （Ｓ）−（−）−１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノールの効率的な抽出処理方法
実施例３の反応液の一部(30 mL)に、セライト1.8 gならびにアセトン30 mLを加え、ろ過した。ろ液の有機層を留去後、水層を酢酸エチル(30 mL)で抽出した。溶媒を留去し、（Ｓ）−（−）−１−（３−ブロモ−２−メトキシフェニル）エタノール（P1）(0.87 g、100%ee)を得た。
【産業上の利用可能性】
【００１７】
キャンディダ・クルセイ、キャンディダ・トロピカリス、キャンディダ・アルビカンス、キャンディダ・グラブラータ、キャンディダ・パラクルセイ、キャンディダ・ユティリス、キャンディダ・プシュードトロピカリス、キャンディダ・ルゴサ、ロードトルーラ・グルチニス・ヴァー・ダイレネンシス、ロードトルーラ・ルブラ、及びサッカロマイセス・セレビシアエからなる群より選ばれる菌株の培養物、菌体、又はそれらに存在する酵素を、非対称ケトン化合物と接触させることにより、光学活性なアルコール化合物の製造方法を見出した。