(57)【要約】【課題】公知の方法よりも高感度の検出が可能な、被検物質の測定方法及びそれに用いられる標識の測定方法を提供すること。【解決手段】近接して位置する２個以上の微粒子の検出方法は、複数個の微粒子を含む被検試料に、直線偏光を照射し、被検試料からの散乱光中に含まれる、２個以上の微粒子が近接して位置することに起因して生じる偏光成分を測定することを含む。被検物質の検出方法は、被検物質に選択的に結合する、微粒子で標識した１種又は２種以上の選択結合物質を前記被検物質と接触させ、前記被検物質と前記選択結合物質との結合により近接した２個以上の微粒子を上記方法により検出することを含む。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数個の微粒子を含む被検試料に、直線偏光を照射し、被検試料からの散乱光中に含まれる、２個以上の微粒子が近接して位置することに起因して生じる偏光成分を測定することを含む、近接して位置する２個以上の微粒子の検出方法。
【請求項２】
前記微粒子が金属微粒子である請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記金属微粒子が金微粒子である請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記被検試料に第１の直線偏光を照射し、被検試料からの散乱光の偏光を測定し、次いで、前記第１の直線偏光とは偏光面の角度が異なる第２の直線偏光を前記被検試料に照射し、被検試料からの散乱光の偏光を測定することを含む請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記被検試料に照射する前記直線偏光の偏光面を連続的に回転させ、前記散乱光の偏光を連続的に測定することを含む請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記散乱光の偏光をバランス検出法により検出する請求項１ないし３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
被検物質に選択的に結合する、微粒子で標識した１種又は２種以上の選択結合物質を前記被検物質と接触させ、前記被検物質と前記選択結合物質との結合により近接した２個以上の微粒子を請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法により検出することを含む、被検物質の検出方法。
【請求項８】
前記被検物質の単一の分子に、前記選択結合物質の分子が２個以上結合する請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記被検物質が、一本鎖核酸、抗原若しくは抗体、又はレセプター若しくはリガンドである請求項７又は８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、近接した複数の微粒子の検出方法及びそれを用いる被検物質の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、抗原抗体反応が可能な抗原又は抗体を高感度に測定する方法として、免疫測定法が広く用いられている。従来の免疫測定法では、被検物質（抗原又は抗体）と免疫反応する抗体又は抗原を標識し、免疫反応により被検物質と結合した抗体又は抗原に結合されている標識を測定することが広く行われている。標識としては、金微粒子（金コロイド）、蛍光色素、酵素、ビオチン、放射性物質等が用いられている。一方、被検物質が核酸である場合、該被検核酸と相補的な塩基配列を有する標識プローブを被検核酸と接触させ、被検核酸とハイブリダイズしたプローブの標識を測定することが広く行われている。
【０００３】
【特許文献１】特開平９−５３２６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従来の免疫測定法や、プローブを用いた被検核酸の測定方法では、標識がある程度の量存在しないと標識を検出することができない。従来の測定方法よりもより少量の標識が検出できれば、検出の感度を向上させることができ、有利である。
【０００５】
本発明の目的は、公知の方法よりも高感度の検出が可能な、被検物質の測定方法及びそれに用いられる標識の測定方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、２個以上の微粒子が近接して位置すると、これに直線偏光を照射した場合、近接して位置する２個以上の微粒子に起因して偏光成分が生じることを利用して、近接する２個以上の微粒子を検出できることを見出した。そして、この近接する２個以上の微粒子の検出方法を利用して、被検試料中の被検物質を極めて高感度に検出できることに想到し、かつ、実験的に確認して本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、複数個の微粒子を含む被検試料に、直線偏光を照射し、被検試料からの散乱光中に含まれる、２個以上の微粒子が近接して位置することに起因して生じる偏光成分を測定することを含む、近接して位置する２個以上の微粒子の検出方法を提供する。また、本発明は、被検物質に選択的に結合する、微粒子で標識した１種又は２種以上の選択結合物質を前記被検物質と接触させ、前記被検物質と前記選択結合物質との結合により近接した２個以上の微粒子を上記本発明の方法により検出することを含む、被検物質の検出方法を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、近接する微粒子を極めて高感度に、すなわち、下記実施例に具体的に記載するように、わずか２個の微粒子を検出することが可能な方法が提供された。そして、この方法を利用して、核酸、抗原若しくは抗体、又はレセプター若しくはリガンドのような被検物質を極めて高感度に検出することが可能な方法が提供された。本発明の方法によれば、わずか１分子の被検物質を検出することが可能であり、公知の方法に比べて遥かに高感度に被検物質を検出することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の方法に用いる微粒子としては、金、白金、銀、銅、鉛、スズ、ニッケル、鉄、亜鉛、アルミニウム等の金属；ケイ素、ゲルマニウム等の半導体；ガリウム、インジウム、カドミウム、ケイ素、亜鉛等を含む化合物半導体；ポリスチレンやラテックス等のポリマー等の光学的に不透明な材料から成る微粒子を用いることができる。これらのうち、近接する微粒子に起因する偏光成分が大きくなることから金属微粒子が好ましい。金属微粒子の中でも、金微粒子は、容易にチオール(-SH)を結合することができ、さらに、このチオール基を利用して所望のタンパク質や核酸等の生体分子に結合することができ、また化学的に安定であるので好ましい。また、金微粒子は、免疫測定の分野では金コロイドとして広く用いられており種々の粒径の金微粒子がチオール基を結合した形態で市販されているので、種々の市販品を利用することができ、この点でも有利である。
【００１０】
本発明の方法に用いる微粒子の大きさは、特に限定されないが、直径（球状以外の場合には長径）が10nm〜400nm程度（ただし測定波長よりも小さい)の微粒子が好ましく、さらには、直径20nm〜200nm程度のものが好ましい。微粒子の形状は好ましくは球状である。上記したサイズの球状の金微粒子は、上記の通り、「金コロイド」と呼ばれ、免疫測定法において標識として汎用されており、種々のものが市販されている。本発明において、このような市販の金コロイドを微粒子として用いることができる。
【００１１】
上記の通り、本願発明者らは、被検試料中に２個以上の微粒子が近接して位置すると、被検試料に直線偏光を照射した場合、近接して位置する２個以上の微粒子（以下、便宜的に「近接微粒子」と呼ぶ）に起因して、散乱光中に偏光成分が生じる現象を利用して、近接微粒子を、単独で存在する微粒子と区別して検出することが可能であることに想到した。本発明は、この原理を利用した、近接微粒子の検出方法を提供する。すなわち、微粒子が単独で存在する場合、これに直線偏光を照射すると散乱光は常に照射偏光と同じ偏光を持つのに対し、２個の微粒子が近接して位置していると微粒子ペアからの散乱光は、照射偏光に関係なく、常に微粒子ペアの配置（並んだ向き）に平行な偏光を持っている。本発明の方法では、この微粒子ペアに起因して生じる偏光を測定する。微粒子が３個以上近接して位置する場合も、２個の微粒子の組合せと考えられるので、３個以上の近接微粒子に起因して照射偏光の偏光面とは異なる角度の偏光面を有する偏光が生じるのでこれを測定する。
【００１２】
近接微粒子に起因する偏光は、照射偏光と、測定側で検出する散乱光の偏光の角度関係について、２つ以上の違った角度の条件で観察を行なって比較することにより検出することができる。例えば、照射偏光と偏光面の角度がずれていない偏光を測定し、照射偏光の偏光面を回転させて、測定側はそのまま検光子（偏光板）を固定して測定することにより測定することができる。あるいは、逆に、照射偏光の偏光面を固定して、検出する散乱光の偏光を回転させても、被検試料の偏光特性を得ることは可能である。
【００１３】
より具体的には、上記本発明の方法は、例えば、前記被検試料に第１の直線偏光を照射し、被検試料からの散乱光の偏光を測定し、次いで、前記第１の直線偏光とは偏光面の角度が異なる第２の直線偏光を前記被検試料に照射し、被検試料からの散乱光中の偏光を測定することにより行なうことができる。これは、例えば、次のようにして行なうことができる。先ず、He-Neレーザのような、直線偏光を発する光源を用い、被検試料に直線偏光を全反射条件で照射（エバネッセント照射）し、その散乱光を倒立顕微鏡でCCDカメラを用いて撮影する。次に、前記第１の直線偏光とは偏光面の角度が異なる第２の直線偏光を前記被検試料に照射し、被検試料からの散乱光中の偏光を測定する。この場合、光源と被検試料の間に、1/2波長板を配置し、1/2波長板を通過した偏光を照射することにより、偏光面の角度を任意に変更することができる。なお、第１の直線偏光と第２の直線偏光の偏光面の角度の差は、特に限定されないが、鋭角側の角度で１０度〜９０度が好ましく、さらに３０度〜９０度が好ましい。
【００１４】
上記の方法は、例えば、倒立顕微鏡を用いた、図１に示す光学測定系を用いて行なうことができる。図１中、１０は光源であるHe-Neレーザ、１２は1/2波長板、１４は集光レンズ、１６はダブプリズム、１８は被検試料、２０は対物レンズ、２２は検光子（偏光板）、２４は集光レンズ、２６はＣＣＤカメラである。He-Neレーザからの直線偏光を、２枚のミラーで反射させて1/2波長板１２に導き、さらに集光レンズを介してダブプリズム１６の側面に導く。ダブプリズム１６の下面に被検試料１８を置き、ダブプリズム１６を介して全反射条件で直線偏光を被検試料１８に照射する。被検試料１８からの散乱光を倒立顕微鏡の対物レンズ２０に導き、検光子（偏光板）２２を介して、ミラーで反射させた後集光レンズ２４に導き、像をＣＣＤカメラで撮影する。なお、図１中、破線で囲んだ部分が倒立顕微鏡である。次に、1/2波長板１２の角度を変えることにより直線偏光の偏光面の角度を変化させ、上記と同様にして被検試料１８に照射し、その散乱光中の偏光を測定する。なお、「偏光を測定」することには、ＣＣＤカメラによる撮像、ＣＣＤカメラによる像の観察、ＣＣＤカメラを用いずに偏光検出器で偏光を測定すること、ＣＣＤカメラを用いずに光強度を測定すること、ＣＣＤカメラを用いずに直接肉眼で観察すること等が包含される。
【００１５】
上記方法で撮像すると、微粒子が単独で存在する場合、第１の直線偏光照射時と第２の直線偏光照射時で同じ像が得られる。一方、近接微粒子の場合には、近接微粒子により偏光成分が生じるので、第１の直線偏光照射時と第２の直線偏光照射時で像が異なる。例えば、第１の直線偏光照射時には像が見えるが、第２の直線偏光照射時には像が見えない場合や、その逆のことが起きる。従って、第１の直線偏光照射時と第２の直線偏光照射時で像が異なる、すなわち、見えたり見えなくなったり、あるいは、濃く見えたり薄く見えたりする場合には、その粒子は近接微粒子である。ある粒子の像の観察は、上記方法において、ＣＣＤカメラ２６による像を観察しながら、1/2波長板１２の向きを連続的に変化させることにより、被検試料１８に照射される偏光の偏光面の連続的に回転することによっても行なうことができ、この場合には、像の見え方の変化を連続的に観察できるのでより容易に近接微粒子を特定することができる。
【００１６】
近接微粒子に起因する偏光成分は、上記散乱光中の偏光をバランス型の偏光検出器により検出することによっても検出することができる。ここで、「バランス検出法」とは、信号光を２つの互いに直交する直線偏光成分に分けて測定し、基準となる信号光において２つの偏光成分の光強度が同じになるように信号光発生後に波長板等で偏光面の角度を調節しておき、被検試料の観察点によって変化する信号光の偏光の変化だけを測定する方法である。この方法によれば、信号光の偏光の変化だけを高い精度で検出することができるので好ましい。なお、バランス検出法自体は光学分野において周知である。
【００１７】
バランス検出法は、例えば図２に示す光学測定系を用いて行なうことができる。図２中、図１と同じ構成要素には同じ参照番号を付してある。参照番号１０はHe-Neレーザ、２８はビームエキスパンダ、１２は1/2波長板、２９はビームスプリッタ、２０は対物レンズ、１８は被検試料、３０はステージスキャナ、２４は集光レンズ、２６はＣＣＤカメラ、３２は第２の1/2波長板、３４はアナライザー、３６はバランス検出器である。なお、図２に示す光学測定系では、図１に示す光学測定系と同様な、ＣＣＤカメラによる撮像が可能なようにＣＣＤカメラ２６及び集光レンズ２４も配置されているが、バランス検出法のためにはこれらは不要である。
【００１８】
図２に示す光学測定系を用いる場合、He-Neレーザ１０からの直線偏光をビームエキスパンダ２８でビームの直径を広げ（そのままではビーム系が細いので対物レンズの開口数を十分生かせない場合があるため）、広げた照射光を1/2波長板１２及びビームスプリッタ２９と通してから倒立顕微鏡内に入れ、対物レンズ２０を通して被検試料１８表面に集光する。被検試料１８からの散乱光は、照射と同じ対物レンズ２０を使って集光し、ビームスプリッタ２９で偏光検出系へ取り出す。バランス型の偏光検出系では、アナライザー３４直前の1/2波長板３２で信号光の偏光を約４５度ずらして、アナライザー３４で縦偏光と横偏光の２つに分け、それぞれの光強度を測定し、最後に測定した２つの光強度信号の差を記録する。始めに、ある信号光において縦偏光と横偏光の光強度差が０になるように1/2波長板３２を調整しておく。このようにすれば、その後は信号光の偏光の変化だけを高い精度で検出することができる。なお、照射光を対物レンズ２０で絞って被検試料１８に照射する、図２に示す配置では、一度に照射できる領域は被検試料１８面上の１点のみである。そこで、ピエゾを内蔵したステージスキャナ３０等を用いて被検試料１８を走査することが可能なように構成することが好ましい。このようなステージスキャナ３０により、数十〜数百μｍ四方の広い領域が観察可能になる。
【００１９】
なお、本発明の方法により、検出可能な２個以上の微粒子は、粒子間の空間の距離（最短距離）が10nm以下又は微粒子の半径以下程度であり、互いに接触して位置する場合（粒子間の空間の距離は０）も検出可能である。従って、本発明の方法において、「近接して位置する」とは粒子間の空間の距離（最短距離）が10nm以下又は微粒子の半径以下程度のいずれか大きい方以下の場合を意味し、接触して位置する場合も包含される。
【００２０】
後述する実施例において具体的に記載するように、本発明の方法によれば、近接するわずか２個の微粒子を検出することが可能であり、当然ながら、３個以上の微粒子が近接している場合も検出可能である。近接微粒子の数の上限は特にないが、２個から１０個程度の近接微粒子を測定する場合に、極めて高感度な本発明の検出方法の威力が発揮される。
【００２１】
上記した本発明の近接微粒子の検出方法を利用して、所望の被検物質を極めて高感度に検出することが可能になる。すなわち、本発明は、上記の通り、被検物質に選択的に結合する、微粒子で標識した１種又は２種以上の選択結合物質を前記被検物質と接触させ、前記被検物質と前記選択結合物質との結合により近接した２個以上の微粒子を上記本発明の方法により検出することを含む、被検物質の検出方法をも提供する。
【００２２】
ここで、被検物質は、これと選択的に結合する物質が存在する物質であり、一本鎖核酸、抗原及び抗体、並びにレセプター及びリガンド等である。すなわち、被検物質が一本鎖核酸の場合、該一本鎖核酸の少なくとも一部領域、好ましくは１０塩基程度以上のサイズの領域に相補的な又はほぼ相補的な塩基配列を有する一本鎖核酸が選択結合物質に該当する。被検物質が抗原の場合、該抗原と抗原抗体反応する抗体又はその抗原結合性断片(Fab断片、F(ab')2断片等)が選択結合物質に該当する。被検物質が抗体の場合、該抗体と抗原抗体反応する抗原が選択結合物質に該当する。被検物質がレセプターの場合、該レセプターに特異的に結合するリガンドが選択結合物質に該当し、逆に、リガンドが被検物質の場合、該リガンドと特異的に結合するレセプターが選択結合物質に該当する。なお、被検物質と選択結合物質の組合せはこれらに限定されるものではなく、選択的に結合するいかなる物質のペアであってもよい。
【００２３】
上記したように本発明の近接微粒子の検出方法によれば、わずか２個の近接微粒子を検出することが可能である。このため、被検物質の単一の分子に、選択結合物質の分子が２個以上結合する場合、単一の分子に結合した２個以上の選択結合物質を検出することが可能であり、ひいては被検物質の単一の分子を検出することが可能であり、極めて高感度な被検物質の検出が可能になる。もっとも、被検物質の複数の分子が近接して存在する場合には、被検物質の単一の分子に結合できる選択結合物質の分子数が１つであっても、標識微粒子同士が近接して位置することになるので、上記した本発明の方法により近接微粒子、ひいては被検物質を測定することが可能である。
【００２４】
用いる選択結合物質は、１種でも２種以上でもよい。被検物質の単一分子に２個以上の選択結合物質を結合させる場合、被検物質の分子中の異なる領域にそれぞれ選択的に結合する２種以上の選択結合物質を用いることが通常好ましい。例えば、被検物質が一本鎖核酸である場合、被検物質分子中の第１の領域と相補的な塩基配列を有する第１の微粒子標識一本鎖核酸と、被検物質分子中の第２の領域と相補的な塩基配列を有する第２の微粒子標識一本鎖核酸とを被検一本鎖核酸と結合させ、第１及び第２の微粒子標識一本鎖核酸の微粒子を検出することにより、１分子の被検一本鎖核酸を検出することができる。同様に、被検物質が、露出した複数のエピトープを有する抗原タンパク質分子である場合、被検抗原タンパク質分子上の第１のエピトープに特異的に結合する第１の微粒子標識モノクローナル抗体と、被検抗原タンパク質分子上の第２のエピトープに特異的に結合する第２の微粒子標識モノクローナル抗体とを被検抗原タンパク質と結合させ、第１及び第２の微粒子標識モノクローナル抗体の微粒子を検出することにより、１分子の被検抗原タンパク質を検出することができる。なお、１分子の被検物質に複数の選択結合物質分子が結合する場合、選択結合物質の分子は上記の通り２種以上の分子である場合が多いが、例えば、被検物質が、同一のサブユニットが複数結合して構成されているような場合には、１種類の複数個の選択結合物質分子が、被検物質の単一の分子に結合することも可能である。
【００２５】
金微粒子による被検物質の標識は、免疫測定法の分野において常用されている周知の方法により行なうことができ、例えば、自己組織化単分子膜（SAM：Self-Assembled Monolayer）と呼ばれる、金に対してチオール基（-SH）を持つ分子が単分子膜を作る方法により行なうことができる。
【００２６】
被検物質と選択結合物質との結合反応自体は、常法により行なうことができる。すなわち、例えば、被検物質が一本鎖核酸の場合、被検物質と選択結合物質との結合反応自体は、例えば、サザンブロット法やDNAアレイを用いた遺伝子の検出等のような、標識核酸プローブによる一本鎖核酸の周知の検出方法と同様に行なうことができる。また、被検物質と選択結合物質とが免疫反応する場合には、被検物質と選択結合物質との結合反応自体は、通常の免疫測定法と同様にして行なうことができる。
【００２７】
結合反応後、上記した本発明の方法により近接微粒子を検出することにより、被検物質を検出することができる。本発明の方法によれば、上記の通り、２個の近接微粒子を検出することができるので、換言すれば、１分子の被検物質を検出することができ、極めて高感度な検出が可能である。
【００２８】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２９】
近接金微粒子の検出（その１）
市販の、平均粒径(直径)100nmの金微粒子を水に約59億個/mLの濃度で懸濁した金微粒子懸濁液を、カバーガラス上のスピンコートし、乾燥させたものを被検試料として用いた。
【００３０】
図１に示す、上記した光学測定系を用いて測定を行った。カバーガラス１８の裏面から、ダブプリズム１６を介して全反射照明し、散乱光を対物レンズ２０で集光してＣＣＤカメラ２６で観察した。
【００３１】
偏光面の角度が３０度異なる直線偏光を照射した場合の結果を図３の(a)及び(b)にそれぞれに示す。図３中の(a)と(b)で見え方の異なる輝点を電子顕微鏡で観察した結果を図４の(a)に示す。図４(a)に示すように、偏光面の角度が異なる直線偏光を照射した場合に見え方の異なる輝点は、２個の金微粒子が接触しているものであることがわかった。一方、図３の(a)と(b)で同様に見える輝点は、電子顕微鏡観察すると、図４の(b)に示すように単一の金微粒子から成っていることがわかった。従って、上記方法により、偏光面の角度が異なる直線偏光を照射した場合に見え方の異なる輝点を検出することにより、近接金微粒子を検出できることが明らかになった。
【実施例２】
【００３２】
近接金微粒子の検出（その２)
実施例１で作製した被検試料を、図２に示す、上記した光学測定系を用いてバランス検出法により測定を行った。照射偏光としては、偏光面の角度が９０度異なる２種類の直線偏光を用いた。
【００３３】
結果を図５の(a)及び(b)に示す。図５の(a)及び(b)中、丸印で囲んだ輝点のように、見え方が顕著に違うものが観察され、金微粒子ペアだけが高いコントラストで判別できることが示された。
【実施例３】
【００３４】
被検DNAの検出
１．金微粒子標識オリゴヌクレオチドプローブの作製
化学合成した、atgctcaactct（配列番号１）の塩基配列を有するオリゴヌクレオチドＡの5'末端に、イオウ(-S-)を介して実施例１で用いたのと同じ平均粒径100nmの金微粒子を結合した。この結合方法は、具体的には次のようにして行なった。5'末端にチオール（-SH）修飾されたOD計測値が0.02の濃度のオリゴヌクレオチドＡを用意し、平均粒径100nmの金微粒子を約59億個/mLの濃度で懸濁した金微粒子懸濁液と混合し、室温で16時間反応させて結合させた。同様にして、化学合成した、taggacttacgc（配列番号２）の塩基配列を有するオリゴヌクレオチドＢの5'末端に、イオウ(-S-)を介して実施例１で用いたのと同じ平均粒径100nmの金微粒子を結合した。これらの金微粒子標識オリゴヌクレオチドプローブを、それぞれ水溶液Ａ及び水溶液Ｂとした。一方、化学合成したtacgagttgagaatcctgaatgcg（配列番号３）の塩基配列を有する被検一本鎖DNAを10nmol/mLの濃度で水に溶解して水溶液Ｃを調製した。なお、オリゴヌクレオチドＡ及びオリゴヌクレオチドＢは、図６に示すように、被検一本鎖ＤＮＡの異なる領域にそれぞれ相補的な塩基配列を有しており、同時に被検一本鎖DNAにハイブリダイズすることが可能である。
【００３５】
２．  被検一本鎖DNAの検出
水溶液Ａと水溶液Ｂの等量混合物、又は水溶液Ａ、水溶液Ｂ及び水溶液Ｃの混合物（水溶液A:B:C=50:50:1(v/v))を、６０℃で５分間おいてから２時間かけて３０℃まで下げることでインキュベートした後、２枚のカバーガラスの間に満たした被検試料を実施例１と同様にして図１に示す上記した光学測定系を用いて測定した。ただし、照射光としては、偏光面の角度を連続的に変化させながら測定した。
【００３６】
結果を図７に示す。図７の(a)と(b)それぞれ、照射光の偏光を連続的に変化させて測定した時の、ある偏光におけるＣＣＤカメラによる約５０μｍ四方の領域の観察像と、その観察像の中から適当に選んだ輝点(1)（○の中に１)から(3)（○の中に３)の明るさの偏光依存性を示している。図７(a)に示すように水溶液Ａと水溶液Ｂの２液だけを混合した溶液の偏光観察では照射偏光に依存した見え方の違いは見られなかったが、図７(b)のように被検一本鎖DNAを含む水溶液Ｃをさらに加えた場合には照射偏光に依存して見え方がそれぞれ異なることが確認でき、金微粒子ペアの高感度偏光観察によって被検一本鎖ＤＮＡの検出が可能であることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】本発明の近接微粒子の測定方法を実施するための光学測定系の１例を模式的に示す図である。
【図２】本発明の近接微粒子のバランス検出方による測定方法を実施するための光学測定系の１例を模式的に示す図である。
【図３】本発明の実施例において得られた、偏光面の角度が異なる２種類の直線偏光を金微粒子試料に照射した場合に得られたＣＣＤカメラによる撮像写真である。
【図４】本発明の実施例において得られた、偏光面の角度が異なる２種類の直線偏光を金微粒子試料に照射した場合に見え方の異なる輝点の電子顕微鏡写真(a)又は見え方が同じ輝点の電子顕微鏡写真(b)である。
【図５】本発明の実施例において得られた、バランス検出法による金微粒子の観察結果を示す写真である。
【図６】本発明の実施例において用いた、被検一本鎖DNA(i)と２種類の金微粒子標識オリゴヌクレオチドプローブ(ii)及び(iii)の塩基配列並びにそれらの位置関係を示す図である。
【図７】本発明の実施例において得られた、被検一本鎖ＤＮＡの観察結果を示す写真を、散乱光強度の偏光依存性を示す図と共に示す図である。
【符号の説明】
【００３８】
１０  He-Neレーザ
１２  1/2波長板
１４  集光レンズ
１６  ダブプリズム
１８  被検試料
２０  対物レンズ
２２  検光子（偏光板）
２４  集光レンズ
２６  ＣＣＤカメラ
２８  ビームエキスパンダ
２９  ビームスプリッタ
３０  ステージスキャナ
３２  第２の1/2波長板
３４  アナライザー
３６  バランス検出器
【図１】
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【図２】
2007225348.tif 000004
【図３】
2007225348.tif 000005
【図４】
2007225348.tif 000006
【図５】
2007225348.tif 000007
【図６】
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【図７】
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【配列表】
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