(57)【要約】【課題】本発明は、抗ガン効果、特に乳ガンに対する抗ガン効果をもたらすハーブ組成物を提供する。【解決手段】本発明のハーブ医薬組成物は、五倍子(wubeizi)、スイカズラ(Lonicera japonica)、タイツリオウギ(Astragalus membranaceus)、地黄(Rehmanniae Radix)、甘草(Glycyrrhizae radix)、及びオタネニンジン(Panax schinseng)から選択されるものの組み合わせ物を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
五倍子（Wubeizi）、スイカズラ（Lonicera japonica）、タイツリオウギ（Astragalus membranaceus）、地黄（Rehmanniae Radix）、甘草（Glycyrrhizae Radix）、及びオタネニンジン（Panax shinseng）を含むハーブ組成物。
【請求項２】
前記五倍子（Wubeizi）が、ヌルデ（Rhus chinensis Mill）、青麩楊（Rhus potaninii Maxim）、及び紅麩楊（Rhus punjabensis Stew. var. sinica (Diels) Rehd. Et Wils）からなる群から選択される植物の葉又は茎上の、寄生性アブラムシであるメラフィス  キネンシス（ベル）ベーカー（Melaphis chinensis (Bell) Baker）によって生じるこぶである、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記スイカズラ（Lonicera japonica）が、スイカズラ（Lonicera japonica）及びロニセラ  コンフューズ（Lonicera confuse）からなる群から選択される植物の花芽から調製される、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記タイツリオウギ（Astragalus membranaceus）が、アストラガラス  メンブラナセウス（フィッシュ）ビーゲ（（Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge）及びアストラガラス  メンブラナセウス  ビーゲ  バル  モンゴリクス（ビーゲ）サイオ（（Astragalus membranaceus Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsaio）からなる群から選択される植物の根から調製される、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記地黄（Rehmanniae Radix）が、レーマニア  グルチノサ  リボシュ（Rehmannia glutinosa Libosch）の根から調製される、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
前記甘草（Glycyrrhizae radix）が、グリシリザ  ウラレンシス  フィッシュ（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）, グリシリザ  グラブラ  エル（Glycyrrhiza glabra L.）, グリシリザ  カンスエンシス  チャン  エ  ペン（Glycyrrhiza kansuensis Chang et Peng） 及びグリシリザ  インフラータ  バタル（Glycyrrhiza inflate Batal）からなる群から選択される植物の全草から調製される、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記オタネニンジン（Panax schinseng）が、オタネニンジン（Panax schinseng）及びパナクス  シュードジンセン（Panax pseudoginseng）からなる群から選択される植物の根から調製される、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
任意のいずれか２種の成分の重量比が１：１０〜１０：１の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
任意のいずれか２種の成分の重量比が１：５〜５：１の範囲である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
任意のいずれか２種の成分の重量比が１：３〜３：１の範囲である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
任意のいずれか２種の成分の重量比が１：１である、請求項１０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はガン、特に乳ガン、を治療するためのハーブ組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
補助医薬又は代替医薬として使用されている伝統的な薬草（ハーブ）医薬の人気は、近年急速に高まっている。薬草由来の免疫増強性多糖類の分子学的機構についての現在の理解は、中国漢方薬の抗ガン効果への重要なヒントを提供してきている［Shao BM, et al., Biochem Biophys Res Commun. 2004 Aug 6; 320(4): 1130-11］。また、抗ガン剤といくつかのハーブ抽出物との組み合わせが、ガン化学療法の臨床転帰の向上に貢献することが発見された［Takara K, et al., Biol Pharm Bull. 2005 Jan; 28 (1): 138-42］。中国漢方薬はガン治療にための有効な道具として浮上している。
【０００３】
これまでの刊行物中には、いくつかのハーブの化合物もしくは複合体が、乳ガン治療のための候補薬であることが示されている。例えば、甘草（Glycyrrhizae radix）抽出物は、マウスのＥ２関連子宮内膜発ガンに対する阻害効果を示すことが示唆された［Niwa K. et al., Jpn J Cancer Res. 1999 Jul; 90 (7): 726-32］。茯苓、当帰(Angelicae radix)、オウゴン(Scutellariae radix)及び甘草(Glycyrrhizae radix)からなる薬草複合剤は、ケモエンドクリン耐性ガンを抑制する［Lian Z, et al., Eur J Gynaecol Oncol. 2001; 22(5): 347-9］。茯苓、当帰(Angelicae radix)、オウゴン(Scutellariae radix)及び甘草(Glycyrrhizae radix)からなるさらに別の薬草複合剤が、エンドクリン耐性婦人科ガンを治療するための可能性ある候補であることが示されている［Lian Z, et al., Cancer Detect Prev. 2003; 27 (2): 147-54］。さらに、葛根(Puerariae radix)及び紅参(Ginseng radix Rubra)抽出物が効果的なエストロゲン作用をもち、エストロゲン活性補助剤として開発される可能性がある［Kim OS, et al., Arch Pharm Res., 2004 Sep; 27 (9): 906-11］。さらに、人参及び紅花(Carthamus tinctorius)を含有するZhu-xiangという名称の複合体もまた、MDA-MB-231乳ガン細胞の増殖を抑制する能力を示している［Loo WT, et al., Life Sci. 2004 Nov 26; 76 (2): 191-200］。これらの漢方薬は乳ガンの治療にいくらか光を当てている。
【非特許文献１】Shao BM, et al., Biochem Biophys Res Commun. 2004 Aug 6; 320(4): 1130-11
【非特許文献２】Takara K, et al., Biol Pharm Bull. 2005 Jan; 28 (1): 138-42
【非特許文献３】Niwa K. et al., Jpn J Cancer Res. 1999 Jul; 90 (7): 726-32
【非特許文献４】Lian Z, et al., Eur J Gynaecol Oncol. 2001; 22(5): 347-9
【非特許文献５】Lian Z, et al., Cancer Detect Prev. 2003; 27 (2): 147-54
【非特許文献６】Kim OS, et al., Arch Pharm Res., 2004 Sep; 27 (9): 906-11
【非特許文献７】Loo WT, et al., Life Sci. 2004 Nov 26; 76 (2): 191-200
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
〔本発明のまとめ〕
本発明は、五倍子(wubeizi)、スイカズラ(Lonicera japonica)、タイツリオウギ(Astragalus membranaceus)、地黄(Rehmanniae Radix)、甘草(Glycyrrhizae Radix)、及びオタネニンジン(Panax schinseng)を含む、ハーブ組成物に関する。任意の２種の成分の重量比は、１：１０〜１０：１の範囲である。
【０００５】
〔発明の詳細な説明〕
本発明は、特に乳ガンに対する抗ガン効果をもたらすハーブ組成物に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
［ハーブ組成物］
本発明は、五倍子(Wubeizi)、スイカズラ(Lonicera japonica)、タイツリオウギ(Astragalus membranaceus)、地黄(Rehmanniae Radix)、甘草(Glycyrrhizae Radix)、及びオタネニンジン(Panax schinseng)を含むハーブ医薬組成物に関する。
【０００７】
五倍子(Wubeizi)は、ヌルデ(Rhus chinensis Mill)、青麩楊(Rhus potaninii Maxim)、及び紅麩楊(Rhus punjabensis Stew. var. sinica (Diels) Rehd. Et Wils)からなる群から選択される植物の葉又は茎上の、寄生性アブラムシであるメラフィス  キネンシス（ベル）ベーカー（Melaphis chinensis (Bell) Baker）によって生じるこぶである。
【０００８】
スイカズラ(Lonicera japonica)は、スイカズラ（Lonicera japonica）及びロニセラ コンフューズ（Lonicera confuse）からなる群から選択される植物の花芽から調製される。
【０００９】
タイツリオウギ(Astragalus membranaceus)は、アストラガラス  メンブラナセウス（フィッシュ）ビーゲ（Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge）及びアストラガラス  メンブラナセウス  ビーゲ  バル  モンゴリクス（ビーゲ）サイオ（Astragalus membranaceus Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsaio）からなる群から選択される植物の根から調製される。
【００１０】
地黄(Rehmanniae Radix)は、レーマニア  グルチノサ  リボシュ（Rehmannia glutinosa Libosch）の根から調製される。
【００１１】
甘草(Glycyrrhizae Radix)は、グリシリザ  ウラレンシス  フィッシュ（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）, グリシリザ  グラブラ  エル（Glycyrrhiza glabra L.）, グリシリザ  カンスエンシス  チャン  エ  ペン（Glycyrrhiza kansuensis Chang et Peng）及びグリシリザ  インフラータ  バタル（Glycyrrhiza inflate Batal）からなる群から選択される植物の全草から調製される。
【００１２】
オタネニンジン(Panax schinseng)は、オタネニンジン（Panax schinseng）及びパナクス  シュードジンセン（Panax pseudoginseng）からなる群から選択される植物の根から調製される。
【００１３】
本発明の組成物における任意の２種の成分の重量比は１：１０〜１０：１の範囲である。好ましい態様では、任意の２種の成分の重量比は１：７〜７：１である。より好ましい態様では、任意の２種の成分の重量比は１：５〜５：１である。さらに好ましい態様では、任意の２種の成分の重量比は１：３〜３：１である。最も好ましい態様においては、五倍子（wubeize）、スイカズラ（Lonicera japonica）、タイツリオウギ（Astragalus membranaceus）、地黄（Rehmanniae Radix）、甘草（Glycyrrhizae Radix）、及びオタネニンジン（Panax schinseng）の重量比は、１：１：１：１：１：１である。
【００１４】
［抗ガン効果］
本組成物は、本発明によればガン細胞のアポトーシスを誘導することができる。ガン細胞には、リンパ腫、白血病、プラズマ細胞疾患、多発性骨髄腫、肝細胞ガンとしても知られるアミロイドーシス、結腸直腸ガン、腎臓ガン、乳ガン、前立腺ガン、胃ガン、肺ガン、咽頭鼻部ガン、卵巣ガン、骨肉種、消化管ガン、膵臓ガン、及び黒色腫が含まれる。好ましい態様においては、本組成物は、肝細胞ガン、結腸直腸ガン、腎臓ガン、乳ガン、前立腺ガン、胃ガン、肺ガン、及び咽頭鼻部ガンのガン細胞のアポトーシスを誘導することができる。最も好ましい態様においては、本発明の組成物は、乳ガン細胞のアポトーシスを誘導する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
〔実施例〕
以下の実施例は非制限的なものであり、本発明のいくつかの側面及び特徴の代表例にすぎない。
【００１６】
［実施例１］単一ハーブ漢方薬の調製
薬草の全ハーブを入手し、冷水で洗浄し、乾燥した。次に植物材料から沸騰水で抽出を行った。植物材料と水の重量比は約１：５〜１：１０であった。用いた水の量は、抽出容器中の植物材料を少なくとも覆う量である。所望する成分の有効な抽出を可能にするために、試料は０．５〜１時間沸騰させたが、沸騰は３時間以下だった。次に、ろ過によって植物残渣から水溶液を分離した。その後、この水溶液をスプレードライするか、凍結乾燥するか、又はデンプン粉末材料によって吸収させた。単一ハーブ漢方薬を粉末形態で調製した。
【００１７】
［実施例２］本発明の組成物の調製
６種の単一ハーブ漢方薬である、五倍子（wubeizi）、スイカズラ（Lonicera japonica）、タイツリオウギ（Astragalus membranaceus）、地黄（Rehmanniae Radix）、甘草（Glycyrrizae Radix）、及びオタネニンジン（Panax schinseng）を、１：１：１：１：１：１の重量比で混合することによってハーブ混合物を調製した。得られた混合物は、本発明の組成物である。
【００１８】
［実施例３］上記ハーブ混合物の抗ガン性試験
（細胞株）
本組成物ＳＦ−０１のガン／腫瘍細胞の阻害への効果を試験するために、様々なヒトの細胞株を用い、これには１種の正常細胞株と８種のガン／腫瘍細胞株が含まれている：
１．ＲＰＴＥＣ（Ｃａｍｂｒｅｘ）：正常な腎近位尿細管上皮細胞、ヒト
２．Ａ−４９８（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−４４）：腎臓ガン、ヒト
３．ＨＣＴ１１６（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２４７）：結腸直腸ガン、ヒト
４．Ｈｅｐ  ３Ｂ（ＡＴＣＣ  ＨＢ−８０６４）：肝細胞ガン、ヒト
５．ＬＮＣａｐクローンＦＧＣ（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１７４０）：前立腺ガン、ヒト
６．ＭＣＦ−７（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−２２）：乳腺ガン、ヒト
７．ＭＫＮ４５（ＦＤＳＣ  ＪＣＲＢ０２４５）：胃ガン、ヒト
８．ＮＣＩ−Ｈ２２６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−５８２６）：肺ガン、ヒト
９．ＮＰＣ−ＴＷ０１（スクール・オブ・メディスン、ＮＴＵ）：咽頭鼻部ガン、ヒト
【００１９】
用いた全ての上記細胞株は、マイコプラズマ試験に対し陰性だった。これらの細胞株のうち、唯一の正常細胞株である腎近位尿細管上皮細胞（ＲＰＴＥＣ）は、製造者の推奨に従い、抗生物質の不存在下で、加湿した５％ＣＯ２／９５％空気中で３７℃においてＲＥＧＭ（登録商標）ＢｕｌｌｅｔＫｉｔ中で維持した。他方、上記８種のガン細胞株は、抗生物質の不存在下で、加湿した５％ＣＯ２／９５％空気中で３７℃において、１０％ウシ胎仔血清を加えたダルベッコ変法基礎培地（ＤＭＥＭ）中で維持した。
【００２０】
［試薬］
ウシ胎仔血清は、BioWhittaker社(Walkersville、MD)から購入し、ＭＴＳはPromega社（Madison、WI）から入手した。その他の全ての化学薬品は、Sigma Chemical社(St. Louis、MO)からのものであり、標準分析等級又はそれ以上のものである。ＳＦ−０１は、１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度で完全培地中に溶かし、ろ過滅菌した。ドキソルビシンとタキソールは、ＤＭＳＯ中２０ｍＭの濃度に調製し、ポジティブコントロールとして用いた。
【００２１】
様々なヒトガン細胞株に対するＳＦ−０１の抗ガン活性を評価し、且つ初代ヒト腎細胞株（ＲＰＴＥＣ）に対する潜在的細胞毒性を測定するために、in vitro細胞毒性分析を行った。細胞株は、化学処理の前に１６時間９６ウェルプレート中に２×１０３〜８×１０３細胞／ウェルの密度で播種した。様々な濃度のＳＦ−０１（５．０〜０．００１６ｍｇ／ｍｌ）、ドキソルビシン（１０μＭ〜３．２ｎＭ）、又はタキソール（２μＭ〜０．０２ｎＭ）に７２時間暴露した後、細胞を洗浄し、０．４ｍｇ／ＭＴＳ[3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-5-(3-カルボキシメトキシフェニル)-2-(4-スルホフェニル)-2H-テトラゾリウム]を含む培地で置換し、さらに、２時間インキュベートした。代謝的に生存可能な細胞を定量するために、ＭＴＳのホルマザンへの変換を、９６ウェルマイクロタイタープレートリーダーで、４９０ｎｍの吸光度によって測定した。細胞増殖への化学物質の影響を評価するために、模擬処理した対照を用い、且つ細胞増殖を５０％阻害する化学物質濃度（ＩＣ５０）を決定した。細胞増殖抑制の割合を下記式によって計算した。
細胞増殖抑制（％）＝［１−（Ｂ／Ａ）］×１００
（式中、Ａは未処理の対照の吸光度であり、Ｂは処理した細胞の吸光度である。）
【００２２】
細胞増殖について試験した薬剤の効果を評価するために、処理した細胞の５０％減少を引き起こす化学物質の濃度（ＩＣ５０）を各細胞株についての用量応答曲線（図１）から計算した。様々なヒトガン細胞株に対するドキソルビシンとタキソールの両者に対するＩＣ５０は、それぞれ８００〜１１ｎＭ、及び１１〜０．００３ｎＭの間であることがわかり（表１）、これは以前のデータと一致した。我々のデータは、ガン細胞株に対するＳＦ−０１の細胞毒性はガン細胞の性質に左右され、ＳＦ−０１の選択性を示している。０．５９ｍｇ／ｍｇという低濃度のＳＦ−０１が、処理した細胞の５０％減少を引き起すことができたことから、試験した全てのガン細胞株の中では、ＭＣＦ−７がＳＦ−０１に最も敏感であることがわかり、乳ガン細胞株に対するＳＦ−０１の有効な抗ガン活性を示している。一方、未処理細胞と比較して、正常細胞株ＲＰＴＥＣをＳＦ−０１と共に７２時間培養した場合、いかなる顕著な形態学的変化又は細胞毒性も認められなかった（図２）。さらに、ＲＰＴＥＣをより高濃度のＳＦ−０１中で培養した場合、細胞増殖刺激が発見された。これらの結果は、ＳＦ−０１が正常細胞に対してほとんど又は全く細胞毒性をもたず、しかもより高濃度ではその増殖を促進しうることを示した。本報告は、Department of Toxicology and Preclinical Science, Pharmaceutical R&D laboratories, Development Center for Biotechnology、No.103, Lane 169, Kang Ning St. Hsichih city, Taipei county, Taiwanにより完成された。
【００２３】
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、ヒトのガン細胞A498、HCT 116、Hep 3B、LNCaPクローンFGC、MCF-7、MKN45、NCI-H226、NPC-TW01、及びヒトの通常腎臓細胞RPTECの細胞増殖に対する、本発明の組成物、タキソール、及びドキソルビシンの阻害効果を示す。
【図２Ａ】図２Ａ及び図２Ｂは、ヒトのガン細胞A498、HCT 116、Hep 3B、LNCaPクローンFGC、MCF-7、MKN45、NCI-H226、NPC-TW01、及びヒトの通常腎臓細胞RPTECへの、本発明の組成物、タキソール、及びドキソルビシンの形態学的効果を示す。
【図２Ｂ】図２Ａ及び図２Ｂは、ヒトのガン細胞A498、HCT 116、Hep 3B、LNCaPクローンFGC、MCF-7、MKN45、NCI-H226、NPC-TW01、及びヒトの通常腎臓細胞RPTECへの、本発明の組成物、タキソール、及びドキソルビシンの形態学的効果を示す。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【外国語明細書】
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