(57)【要約】【課題】肥満者の生理機構に対し直接的に作用して、血液中の糖分量、体脂肪量などの肥満原因に関係なく肥満を抑制し得る肥満抑制剤を提供する。【解決手段】葛花乾燥物の抽出エキスからなるレプチン作用向上性肥満抑制剤であって、（１）葛花乾燥物を水と低級アルコールのいずれか一方又はその両方からなる溶剤で抽出する工程、（２）得られた抽出液から固体不純分を除去する工程、（３）固体不純分を除去した抽出液を吸着カラムに通す工程、（４）カラムから吸着物を分画溶離する工程、及び（５）目的物を含む画分を回収し、濃縮乾操する工程により製造する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
葛花乾燥物の抽出エキスからなるレプチン作用向上性肥満抑制剤。
【請求項２】
葛花乾燥物が、プエラリア・ロバータ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ）又はプエラリア・トムソニイ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｏｍｓｏｎｉｉ）に由来する葛花乾燥物である請求項１記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤。
【請求項３】
抽出エキスが水及び低級アルコールの中から選ばれた少なくとも１種からなる溶剤による抽出エキスである請求項１又は２記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤。
【請求項４】
低級アルコールがメタノール、エタノール、プロパノール及びブタノールの中から選ばれる請求項３記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤。
【請求項５】
イソフラボノイド、トリテルペノイドサポニン及びそれらの配糖体の中から選ばれた少なくとも１種を含有する請求項１ないし４のいずれかに記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤。
【請求項６】
イソフラボノイドがイリソリドン、グリシテイン、ゲニステイン、テクトリゲニン、バイオカインＡ又はそれらの配糖体である請求項５記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤。
【請求項７】
トリテルペノイドサポニンがソヤサポゲノールＢ、ソファラジオール又はそれらの配糖体である請求項５記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤。
【請求項８】
（１）葛花乾燥物を水と低級アルコールのいずれか一方又はその両方からなる溶剤で抽出する工程、
（２）得られた抽出液から固体不純分を除去する工程、
（３）固体不純分を除去した抽出液を吸着カラムに通す工程、
（４）カラムから吸着物を分画溶離する工程、及び
（５）目的物を含む画分を回収し、濃縮乾操する工程
からなるレプチン作用向上性肥満抑制剤の製造方法。
【請求項９】
（１）工程における抽出を溶質の１０〜５０倍量の溶剤を用いて、温度６０〜９５℃で行う請求項８記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤の製造方法。
【請求項１０】
（３）工程の吸着カラムとしてポリスチレン系樹脂カラムを用い、（４）工程の分画溶離を７０％以上の濃度のエタノールを用いて行う請求項８又は９記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤の製造方法。
【請求項１１】
（５）工程の乾燥を噴霧乾燥又は凍結乾燥で行う請求項８、９又は１０記載のレプチン作用向上性肥満抑制剤の製造方法。
【請求項１２】
総イソフラボノイド含量５質量％以上、総サポニン含量４質量％以上に相当する量の葛花乾燥物の抽出エキス及び経口用賦形剤からなるレプチン作用向上性肥満抑制用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、葛花抽出エキスのレプチン作用向上効果に着目した肥満抑制剤、特に糖尿病に起因する肥満抑制剤とその製造方法及びそれを有効成分として含有する肥満抑制用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、わが国では食生活様式の欧米化に伴い動脈硬化、糖尿病、心疾患、肥満等の生活習慣病が急増し、健全な日常生活を送るためには食生活の改善が重要な手段であり、その対策については多くの研究がなされている。
【０００３】
生活習慣病の予防のためには体脂肪を貯めないことの重要性が多くの研究報告で指摘されており、健康との関わりについては肥満を抑制することが重要な要因と考えられる。
そして、このように肥満を抑制することにより動脈硬化、糖尿病ひいては心疾患の発症をかなり予防できると考えられる。
【０００４】
これまで、肥満防止剤又は肥満抑制剤としては、ヘチマやアマチャヅルから抽出単離されたサポニン物質を有効成分とするもの（特許文献１参照）、米醸造酢モロミの乾燥粉末と粗糖の着色成分と小豆サポニンとタンニン成分とを配合した食品（特許文献２参照）、アズキサポニンを必須成分とする抗肥満食品（特許文献３参照）、大豆サポニン成分と粗黒糖から抽出された色素成分とを含有した食品（特許文献４参照）などが提案されている。
【０００５】
しかしながら、これらの肥満防止剤や肥満抑制剤は、摂取した食品中の糖分や脂肪分の吸収を抑制して減量する間接的なものであり、生理的機構に作用して直接的に肥満を抑制するものではないため、効果が発揮される範囲が制限されるのを免れない。
【０００６】
他方、葛花抽出物中にはイソフラボノイドとトリテルペノイドサポニンが含まれており、イソフラボノイド中のプエラリン、ゲニステイン、テクトリゲニンやトリテルペノイドサポニン中のカイカサポニンＩＩＩを単独で投与することにより血清中の糖や脂質の上昇を抑制し、糖尿病の治療に役立つことも知られている。（特許文献５、非特許文献１〜４参照）
【０００７】
しかしながら、これらの成分は、単に血清中の糖や脂質の上昇を抑制する作用により糖尿病の治療に役立つものであるため、血清中の糖や脂質の上昇に起因しない肥満を抑制し、或いは防止することはできないという欠点がある。
【０００８】
【特許文献１】特開昭６０−９４５４号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献２】特開昭６０−９８９６２号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献３】特開昭６０−１８８０４４号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献４】特開平６−３１１８６７号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献５】特開平１０−８７４８６号公報（特許請求の範囲その他）
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・ナチュラル・プロダクツ（Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．）、２００３年、第６６巻、第６号、ｐ．７８８−７９２
【非特許文献２】アーチブス・オブ・ファーマカル・リサーチ（Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．）、２０００年、第２３巻、第５号、ｐ．４６１−４６６
【非特許文献３】ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）、１９９２年、第２３７巻、第６号、ｐ．３９４６−３９５１
【非特許文献４】ジャーナル・オブ・メディシナル・フード（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｆｏｏｄ）、２００４年、第７巻、第１号、ｐ．３１−３７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、肥満者の生理機構に対し直接的に作用して、血液中の糖分量、体脂肪量などの肥満原因に関係なく肥満を抑制し得る肥満抑制剤を提供することを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、葛花の抽出エキスの生理的作用について種々研究を重ねた結果、この中にレプチンの量の上昇を抑制し、血液中の糖や脂質のような肥満原因物質の種類には関係なく体重の増加を抑制する成分が含まれていることを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【００１１】
レプチンは、脂肪組織、胃、胎盤で合成されるホルモンで、エネルギー貯蔵が増加すると肥大した脂肪細胞より分泌され、エネルギーの消費を促進するとともに、脳の視床下部の摂食中枢を刺激し食欲を抑制する作用を有することが知られている。
そして、過食により肥満が発症したヒトや動物では、正常状態よりもレプチン受容体の感受性が低下し、レプチンの作用が十分に発揮されないため、レプチンの分泌量は次第に増加し、過剰分泌状態となる。
【００１２】
すなわち、多くの肥満者においては、食欲コントロール機構が異常をきたしているため、レプチンの作用が低下し、これを補うためレプチンの分泌量が増大し、高レプチン血症が誘発されている。
したがって、このような場合に肥満を抑制するには、レプチンの作用を向上させ、効率よく摂食中枢へ伝達し、食欲を調節するのが効果的な手段となる。
【００１３】
すなわち、本発明は、葛花乾燥物の抽出エキスからなるレプチン作用向上性肥満抑制剤、
（１）葛花乾燥物を水と低級アルコールのいずれか一方又はその両方からなる溶剤で抽出する工程、
（２）得られた抽出液から固体不純分を除去する工程、
（３）固体不純分を除去した抽出液を吸着カラムに通す工程、
（４）カラムから吸着物を分画溶離する工程、及び
（５）目的物を含む画分を回収し、濃縮乾燥する工程
からなるレプチン作用向上性肥満抑制剤の製造方法、及び総イソフラボノイド含量５質量％以上、総サポニン含量４質量％以上に相当する量の葛花乾燥物の抽出エキス及び経口用賦形剤からなるレプチン作用向上性肥満抑制用組成物を提供するものである。
【００１４】
次に、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明の肥満抑制剤は、葛花すなわちクズの花や蕾を乾燥したものを原料として用いて得られるが、このクズは、マメ科の大形蔓性の多年草であって、東アジアや東南アジアを中心にして広く分布している。
【００１５】
本発明の原料としては、クズの中のどのような種のものを用いてもよく、制限はないが、特にプエラリア・ロバータ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ）又はプエラリア・トムソニイ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｏｍｓｏｎｉｉ）が好適である。
【００１６】
本発明の肥満抑制剤は、このクズの花又は蕾を乾操したのち、これを抽出した抽出エキスからなっている。この抽出の際に用いる溶剤としては水のみでもよいが、薬理作用の大きい抽出エキスを得るには低級アルコール例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールの単独又はこれと水との混合物、特に濃度７０％以上のエタノール水溶液を用いるのがよい。
【００１７】
この抽出エキスは、所望ならばその溶液状のものをそのまま用いることができるが、抽出エキスを濃縮、乾操して白色粉末状にしたものが、製剤しやすい点で好ましい。
【００１８】
このようにして得られる葛花には、イリソリドン、グリシテイン、ゲニステイン、テクトリゲニン、バイオカインＡ又はそれらの配糖体のようなイソフラボノイドやソヤサポゲノールＢ、ソファラジオール又はそれらの配糖体例えばカッカサポニンＩ、カイカサポニンＩＩＩ、ソヤサポニンＩのようなトリテルペノイドサポニンなどの活性物質が含まれている。
【００１９】
本発明のレプチン作用向上性肥満抑制剤は、原料の葛花乾燥物から、以下に示す（１）ないし（５）の工程を経て製造することができる。
（１）葛花乾燥物を水と低級アルコールのいずれか一方又はその両方からなる溶剤で抽出する工程、
（２）得られた抽出液から固体不純分を除去する工程、
（３）固体不純分を除去した抽出液を吸着カラムに通す工程、
（４）カラムから吸着物を分画溶離する工程、及び
（５）目的物を含む画分を回収し、濃縮乾操する工程。
【００２０】
上記の（１）工程における溶剤としては、水又は低級アルコール例えばメタノール、エタノール、プロパノール又はブタノールが用いられる。これらの溶剤は単独で用いてもよいし、２種以上混合して用いてもよい。
【００２１】
好ましい溶剤は、水単独又はエタノール濃度３０％以下の水とエタノールとの混合物である。この（１）工程は、葛花乾燥物の質量に対して１０〜５０倍量の溶剤を加え、温度６０〜９５℃に加熱しながら１〜２時間抽出処理することによって行われる。
このようにして、褐色の抽出液が得られる。
【００２２】
このようにして得た抽出液を、次いで（２）工程において３００メッシュ又はそれよりも細かい篩目の金網を通して固体不純分を除去する。この（２）工程においては、所望に応じ、ろ液を濃縮乾燥後、再度溶剤に溶解し、ろ過して固体不純分を除去する操作を行うこともできる。
【００２３】
このようにして固体不純分を除去した抽出液を、次に（３）工程において吸着剤を充填したカラムに通し、その中に含まれている活性成分を吸着剤に吸着させる。この際の吸着剤としては通常、吸着分離用の吸着剤として用いられているもの、例えば全多孔性アルミナ、全多孔性シリカゲル保持体、表面多孔性シリカゲル保持体などの吸着用又は逆相分離用充てん剤、イオン交換体も用いることができるが、特に分取クロマトグラフィー用充てん剤として調製された吸着用、逆相用又は分配用充てん剤が好適である。
【００２４】
このようなものとしては、例えば関東化学社試薬事業本部から商品名「ＬｉＣｈｒｏｐｒｅｐ  Ｓｉ４０」として市販されている全多孔性シリカゲル、商品名「Ｌｉ  Ｃｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ−８」として市販されている逆相用全多孔性化学結合型シリカゲル、商品名「Ｌｉ  Ｃｈｒｏｐｒｅｐ  Ｄ１０Ｌ」として市販されている分配用全多孔性化学結合型シリカゲル、日本ウォーターズリミテッド社から商品名「ＰＲＥＰ−ＰＡＫＳｉｌｉｃａ」として市販されている吸着用全多孔性シリカゲル、ローム・アンド・ハース社から商品名「アンバーライトＸ  ＡＤ１６ＨＰ」として市販されている吸着分離体、三菱化学社より商品名「ダイヤイオンＨＰ２０」として市販されている吸着分離体、和光純薬社から商品名「Ｗａｋｏｇｅｌ  １００Ｃ１８」として市販されているオクタデシルシリル化シリカゲルのようなシリル化シリカゲル系逆相分離剤やスチレン−ジビニルベンゼン共重合体系吸着剤、ポリスチレン系イオン交換体、トリフェニルメチルメタクリレート系吸着剤などが好適である。
この（３）工程においては、前工程で得た抽出液をそのまま処理してもよいが、多量の抽出溶剤を用いた場合は、所望により１／２〜１／１０の量になるまで濃縮したのち処理することもできる。
【００２５】
次に、このようにして、（３）工程において吸着カラムに抽出液の活性成分を吸着剤に吸着させたのち、（４）工程においてカラムから吸着された活性成分を分画溶離する。この分画溶離は、カラム上部より溶剤を流して、展開し、画分を順次溶出させる。この際の展開及び溶出に用いる溶剤としては、エタノール単独又は濃度７０％以上のエタノール水溶液が好ましい。
このようにして、カラムから溶出してくる液を、例えばフラクションコレクターを用いて分取し、所要の画分を得る。
【００２６】
次いで、（５）工程において、このようにして得た画分について、減量効果の試験を行い、効果を示す画分を回収する。
【００２７】
この回収は、活性を示す画分から、必要に応じろ過又は遠心分離して不溶分を除去したのち、減圧下で濃縮し、その濃縮液を噴霧乾燥することにより行われる。この際の濃縮は、噴霧乾燥を容易にするために行うのであるから、場合によっては省略することもできる。また、噴霧乾燥の代りに凍結乾燥を用いることもできる。
このようにして、所望のレプチン作用向上性肥満抑制剤が褐色粉末として得られる。
【００２８】
本発明のレプチン作用向上性肥満抑制剤は、体重１ｋｇ当り１０〜５００ｍｇ又は０．４〜２％の濃度のものを１日２〜３回に分けて投与するが、この投与量は症状の軽重に応じて適宜増減することが必要である。
【００２９】
本発明のレプチン作用向上性肥満抑制剤は、これに経口用賦形剤を配合し、常法に従って調製することにより、レプチン作用向上性肥満抑制用組成物とすることができる。この組成物は、液剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、丸剤などに製剤して投与される。
【００３０】
この際に用いる賦形剤としては、例えばヨウ化ナトリウム、酸化マグネシウム、ケイ酸アルミニウム、炭酸水素ナトリウム、タルク、ホウ酸などの無機系賦形剤、ブドウ糖、乳糖、デンプン、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、塩化ベンザルコニウム、シロップ、レモン油、ユーカリ油、エタノールなどの有機系賦形剤を挙げることができる。
この製剤用組成物には、総イソフラボノイド含量５質量％以上、総サポニン含量４質量％以上に相当する量の葛花乾燥物の抽出エキスを用いるのが好ましい。
【発明の効果】
【００３１】
本発明によると、血液中の糖成分や脂肪成分とは関係なしに、肥満症状にある患者の肥満を抑制し得る肥満抑制剤を提供することができるので、適用範囲を拡大することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
次に、実施例により、本発明を実施するための最良の形態を説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
【実施例１】
【００３３】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ  Ｏｈｗｉ）３ｋｇに水６０リットルを加え、９０℃で１時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、さらに高速遠心分離して抽出液を調製した。予めエタノール、次いで水を用いてステンレス鋼管に充てんした吸着樹脂（ローム・アンド・ハース社製、商品名「アンバーライトＸＡＤ１６ＨＰ」）に負荷させて目的物質を吸着させ、水洗後、エタノールで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍの間隔でろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮、当該濃縮液を噴霧乾燥することにより、レプチン作用向上性肥満抑制剤９６ｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇに水２５ｍｌを加え溶解し、さらにメタノールを加え５０ｍｌとした溶液をろ過しその１０μｌを高速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣと略す）で定量したところ、カッカライド４３．３％含有することが確認された。
また、このメタノール抽出液を薄層クロマトグラフィー（以下ＴＬＣと略す）で分析したところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された。
【００３４】
参考例
正常マウス体重に対する本発明のレプチン作用向上性肥満抑制剤の影響について、以下のようにして試験した。
すなわち、ｄｄＹ系５週令雄性マウスを使用し、実施例１で得たレプチン作用向上性肥満抑制剤を０．９３３質量％の割合で添加した固型飼料を与え、自由摂取させた。４０日間週２回、一般症状と体重を測定し、このマウス群の体重増加（破線）を正常固型飼料を自由摂取させた対照マウス群の体重（実線）と比較した。この結果を図１に示す。
この図から分るように、本発明のレプチン作用向上性肥満抑制剤は、正常マウス群の体重に対してはほとんど影響を与えない。
【実施例２】
【００３５】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ  Ｏｈｗｉ）３ｋｇに２０％エタノール６０リットルを加え、８５℃で１時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、さらに高速遠心分離して抽出液を調製した。予めアルコール、次いで水でステンレス鋼管に充てんした吸着樹脂（三菱化学社製、商品名「ダイヤイオンＨＰ２０」）に負荷させて目的物質を吸着させ、水洗後、エタノールで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍの間隔でろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮、当該濃縮液を噴霧乾燥することにより、レプチン作用向上性肥満抑制剤約１７０ｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇにメタノール５ｍｌを加え溶解し、さらにメタノールを加え５０ｍｌとした溶液をろ過しその１０μｌをＨＰＬＣで定量するとカッカライド４３．１％含有することが確認された。
また、このメタノール抽出液をＴＬＣで分析したところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された。
【実施例３】
【００３６】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ  Ｏｈｗｉ）２ｋｇに１０％エタノール４０リットルを加え、９０℃で１時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、さらに高速遠心分離して抽出液を調製した。次に、この抽出液を予めエタノール、次いで１０％エタノールでステンレス鋼管に充てんしたオクタデシルシリル化シリカゲルに負荷させて目的物質を吸着させ、８０％エタノールで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍの間隔でろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮したのち、当該濃縮液を噴霧乾燥することにより、レプチン作用向上性肥満抑制剤約６１ｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇに水２５ｍｌを加え溶解し、さらにメタノールを加え５０ｍｌとした溶液をろ過し、その１０μｌをＨＰＬＣで定量したところ、カッカライド４６．２％含有することが確認された。
また、このメタノール抽出液をＴＬＣで分析したところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された。
【実施例４】
【００３７】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｏｍｓｏｎｉｉ）２ｋｇに１０％エタノール４０リットルを加え、９０℃で２時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、さらに高速遠心分離して抽出液を調製した。この抽出液を予めエタノール、次いで水でステンレス鋼管に充てんした実施例１で用いたのと同じ吸着樹脂に負荷させて目的物質を吸着させ、エタノールで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍの間隔でろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮し、この濃縮液を噴霧乾燥することにより、レプチン作用向上性肥満抑制剤約１０１ｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇに水２５ｍｌを加え溶解し、さらにメタノールを加え５０ｍｌとした溶液をろ過し、その１０μｌをＨＰＬＣで定量したところ、テクトリジン１３．１％、テクトリゲニン７‐Ｏ‐キシロシルグルコサイド１４．８％を含有することが確認された。
また、この物質１ｇをメタノールを加えて溶かした液をろ過し、そのろ液をメタノールで一晩浸潤させたセファデックスＬＨ−２０  １００ｇを充填したカラムに負荷させる。全量を負荷完了した時点で溶出部受器を改めると共に、メタノールでの溶出を開始する。初溶出部から溶出液を２５ｍｌずつ分取して１７画分までを取得し、これらを試料溶液とする。別に薄層クロマトグラフ用葛花サポニン１０ｍｇを量り、メタノール１０ｍｌを加えて溶かし、標準溶液とする。これらの液につきＴＬＣ分析を行ったところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された試料溶液から成るサポニン画分は約５０℃で減圧濃縮後、デシケーター（減圧：０．６７ＫＰａ以下、シリカゲル）で２４時間乾燥した後、その質量を量り２４．１４％含有することが確認された。
【実施例５】
【００３８】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｏｍｓｏｎｉｉ）１５０ｋｇに２０倍量の熱湯を加え、９５℃で２時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、抽出液を濃縮し、その濃縮物を噴霧乾燥することにより、約４０ｋｇの乾燥エキスを得た。次いで、このエキス末４０ｋｇを７倍量の温湯で再溶解し、不溶部を高速遠心分離で除き、先ずエタノール、次いで水でステンレス鋼管に充てんした実施例２で用いたのと同じ吸着樹脂に負荷させて目的物質を吸着させ、水洗後、薄めたエタノール約６００リットルで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍでろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮し、この濃縮液を噴霧乾燥することにより、レプチン作用向上性肥満抑制剤約６．１ｋｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇに水２５ｍｌを加えて溶解し、さらにメタノールを加えて、全量５０ｍｌとしたのち、ろ過して不溶分を除去した。このろ液の１０μｌをＨＰＬＣで定量したところ、テクトリジン１１．６％、テクトリゲニン‐Ｏ‐キシロシルグリコシド１２．５％を含有することが確認された。
また、この物質１ｇをメタノールを加えて溶かした液をろ過し、このろ液をメタノールで一晩浸潤させたセファデックスＬＨ−２０  １００ｇを充填したカラムに負荷させる。全量を負荷完了した時点で溶出部受器を改めると共に、メタノールでの溶出を開始する。初溶出部から溶出液を２５ｍｌずつ分取して１７画分までを取得し、これらを試料溶液とする。別に薄層クロマトグラフ用葛花サポニン１０ｍｇを量り、メタノール１０ｍｌを加えて溶かし、標準溶液とする。これらの液につきＴＬＣ分析を行ったところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された試料溶液から成るサポニン画分は約５０℃で減圧濃縮後、デシケーター（減圧：０．６７ＫＰａ以下、シリカゲル）で２４時間乾燥した後、その質量を量り２１．３５％含有することが確認された。
【実施例６】
【００３９】
肥満型糖尿病モデルであるＪａｃｓｏｎ系ｄｂ／ｄｂ雄性マウス４週令すなわち対照マウス群及び糖尿病を有しない正常マウスを実験に使用した。
実験開始後、各マウスヘ１週間に５回、５週間にわたり連続的に実施例１で得たレプチン作用向上性肥満抑制剤５００ｍｇ／ｋｇを経口投与するとともに、１週間ごとに体重を観察した。５週間目、実験終了後マウスを屠殺し採血を行った。採血した血液は遠心分離（３０００ｒ．ｐ．ｍ×１０分）を行い、血清を分離し血清中のレプチンを定量した。この結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
2007137861.tif 000002
【００４１】
この表から分るように、血清レプチン濃度についてはｄｂ／ｄｂマウスすなわち対照マウス群では正常マウス群に比べて有意な上昇が認められる。一方レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群では対照マウス群に比べて有意な低下が認められる。
次に血清グルコースを定量した結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
2007137861.tif 000003
【００４３】
この表から分るように、血清グルコース濃度は正常マウス群に比べてｄｂ／ｄｂマウスすなわち対照マウス群では有意に上昇したが、レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群では対照マウス群に比べてほとんど変化は認められない。すなわち、明確な減量効果は認められるが、血清グルコースの上昇を抑制する効果は認められない。
また、血清Ｔ−Ｃｈ及びＴＧについての定量を行い、その結果を表３に示す。
【００４４】
【表３】
2007137861.tif 000004
【００４５】
この表から分るように、ｄｂ／ｄｂマウスすなわち対照マウス群は正常マウス群に比べて血清Ｔ−Ｃｈ，ＴＧともに有意な上昇が認められたが、レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群では対照群マウス群と比べてほとんど変化はみられない。すなわち、明確な減量効果は認められても血清脂質の上昇を抑制する作用は認められない。
【００４６】
以上の試験においてレプチン作用向上性肥満抑制剤は、１％ＣＭＣ−Ｎａに懸濁し体重１０ｇ当り０．１ｍｌの割合で投与し、また対照マウス群及び正常マウス群は溶媒のみを投与し、グルコース（和光純薬、グルコーステストワコー）、Ｔ−Ｃｈ（和光純薬、コレステロールＥテストワコー）、ＴＧ（和光純薬、トリグリセライドＥテストワコー）はそれぞれのキットで定量した。
【００４７】
次に、各マウス群ごとの体重の変化を測定し、その結果を図２に示す。
図２から分るように、本発明のレプチン作用向上性肥満抑制剤を投与した場合、糖尿病処理をしない正常マウス群（◆印）はほとんど変化が認められないが、対照のｄｂ／ｄｂマウス群（□印）は実験開始よりすでに正常マウス群に比べて体重の有意な増加が認められる。そして、これにレプチン作用向上性肥満抑制剤を投与したマウス群（■印）の体重は、５、６及び７週目において対照のｄｂ／ｄｂマウス群に比べて有意な減少が認められる。このように、糖尿病性肥満のマウス群においては減量効果が認められる。
【００４８】
以上の結果より、糖尿病性肥満のマウスでは体重の上昇を抑制することが示唆された。また同時に血清中の糖、脂質濃度にはほとんど変化はみられないのに対して血清レプチンの上昇を有意に抑制すること、すなわち、レプチン作用向上性肥満抑制剤が摂食をコントロールすることにより減量効果が発現し、血清中のレプチンの濃度が低下したことが推察される。
【実施例７】
【００４９】
ＩＣＲ系７週令雌性マウスを普通食マウス群、高脂肪食マウス群、レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群の３群に振り分け、普通食マウス群は普通飼料、高脂肪食マウス群は高脂肪食（４０％牛脂・９％グラニュー糖添加普通食）飼料、レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群は高脂肪食マウス群で使用した高脂肪食飼料へ実施例２で得たレプチン作用向上性肥満抑制剤を０．４、１．０及び２．０質量％（ａ、ｂ及びｃとする）の割合で添加した飼料を水道水とともに１０週にわたりマウスヘ自由摂取させた。なお、上記肥満抑制剤添加飼料は実験開始から３週目までが０．４％添加飼料、３週目から７週目までが１％添加飼料、７週目から１０週目までが２％添加飼料と段階的に増加させた。実験開始後経時的に体重、試料摂取量を観察し、１０週目に動物を屠殺し、採血及び腹部脂肪の摘出を行った。採血した血液は遠心分離（３０００ｒ．ｐ．ｍ×１０分）後血清を分離し、血清中の総コレステロール（Ｔ−Ｃｈ）、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃｈ）、トリグリセライド（ＴＧ）、レプチンを測定し高脂肪食マウス群と比較した。また、摘出した腹部脂肪は質量を測定した。Ｔ−Ｃｈ、ＨＤＬ−Ｃｈ、ＴＧは（和光純薬、コレステロールＥテストワコー）、（和光純薬、ＨＤＬ−コレステロールテストワコー）及び（トリグリセライドＥ−テストワコー）による酵素法で、レプチンは（森永生化学研究所、モリナガマウスレプチン測定キット）によるＥＬＩＳＡ法でそれぞれ定量した。その結果を図３に示す。
【００５０】
この図３から分るように、高脂肪食マウス群（□印）のマウスの体重は経時的に増加しはじめ、４週目以降では普通食マウス群（◆群）と比べて有意な増加が認められる。レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群（▲群）では６週目以降より高脂肪食マウス群と比べて体重増加の有意な抑制が認められる。また、この際の各群ごとの飼料摂取量を表４に示す。
【００５１】
【表４】
2007137861.tif 000005
【００５２】
表４から分るように、実験開始から３週目までは高脂肪食マウス群は普通食マウス群に比べて飼料摂取量にほとんど違いは認められないが、４週目から６週目まではわずかに飼料摂取量の低下が認められ、また７、８週目は増加し、９週目以降は低下する。レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群もほぼ同様なパターンであったが、高脂肪食マウス群とはほとんど有意差は認められない。
しかしながら、添加濃度を２質量％に上昇させた７週目以降より高脂肪食マウス群と比べてわずかに飼料摂取量の低下の傾向が認められる。この摂取量低下の現象は、本発明のレプチン作用向上性肥満抑制剤の摂食調節作用によるものと考えられる。
次に、この例における各群ごとの血清コレステロール、トリグリセリド及び血清レプチンを定量し表５及び表６に示す。
【００５３】
【表５】
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【００５４】
この表から分るように、高脂肪食マウス群ではＴ−Ｃｈ、ＨＤＬ−Ｃｈともに普通食マウス群と比べて有意な増加が認められたが、レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群のＴ−Ｃｈについては高脂肪食マウス群に比べてほとんど変化はみられない。一方、レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群のＨＤＬ−Ｃｈについては高脂肪食マウス群に比べて有意な増加が認められる。また、血清ＴＧについては普通食マウス群に比べて高脂肪食マウス群ではほとんど変化は認められないが、レプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群では高脂肪食マウス群に比べて有意に低下する。すなわち、レプチン作用向上性肥満抑制剤の摂取により総コレステロールについてはほとんど影響を示さないが、善玉コレステロールといわれるＨＤＬ−コレステロールやトリグリセライドの低下を招くことにより、減量効果もさることながら、高脂肪摂取によって誘発される生活習慣病の危険因子も低下させることが示唆される。
【００５５】
【表６】
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【００５６】
この表から分るように、高脂肪食マウス群における血清レプチン濃度は普通食マウス群に比べて有意に増加した。このように増加した高脂肪食マウス群に比べてレプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群では血清レプチンを低下させる傾向を示すが、有意差は認められない。この現象は、レプチン作用向上性肥満抑制剤が飼料摂取量をわずかに低下させることにより波及された結果であると推察され、その摂食調節作用を裏付けるものと考えられる。
次に、腹部脂肪質量を測定し、その結果を表７に示す。
【００５７】
【表７】
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【００５８】
高脂肪食マウス群では普通食マウス群に比べて腹部脂肪質量の有意な増加が認められる。このような腹部脂肪が増加した高脂肪食マウス群に比べてレプチン作用向上性肥満抑制剤投与マウス群では腹部脂肪質量はやや低下する傾向を示すが、有意差は認められない。この腹部脂肪質量及び血清レプチン濃度の低下する傾向は、本発明の肥満抑制剤が体重増加を抑制した結果を裏付けていると考えられる。
【００５９】
以上のごとく、高脂肪食負荷により誘発される肥満マウスに対して、本発明の肥満抑制剤を併用して摂取することにより、摂食をコントロールし極端な体重増加を軽減させ、糖尿病性肥満マウスの場合と同様に減量効果が期待できるものである。さらにこの減量効果は、血清レプチン濃度と腹部脂肪を低下させる傾向へと波及させるものである。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
肥満防止剤、特に糖尿病に起因する肥満防止剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】正常マウスに対するレプチン作用向上性肥満抑制剤の影響を示すグラフ。
【図２】正常マウス及び糖尿病性肥満マウスに対するレプチン作用向上性肥満抑制剤の影響を示すグラフ。
【図３】普通食マウス、高脂肪食マウス及び高脂肪食にレプチン作用向上性肥満抑制剤を添加した食事を与えたマウスの体重変化を示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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