(57)【要約】  【課題】育毛に直接的に効果のある成分を見出し、有効な育毛剤の開発を課題とする。  【解決手段】シアドピティシン(Sciadopitysin)、ギンクゲチン(Ginkgetin)、イソギンクゲチン(Isoginkgetin)、セキオイアフラボン(Sequoiaflavone)及びビロベチン(Bilobetin) 等のビフラボン類が育毛活性を有することを見出した。  【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビフラボン類を有効成分とする育毛剤。
【請求項２】
ビフラボン類がシアドピティシン(Sciadopitysin)、ギンクゲチン(Ginkgetin)、イソギンクゲチン(Isoginkgetin)、セキオイアフラボン(Sequoiaflavone)及びビロベチン(Bilobetin)のいずれか１又はそれらの混合物であることを特徴とする請求項１記載の育毛剤。
【請求項３】
ギンクゲチンとイソギンクゲチンとの混合物又はシアドピティシンを有効成分とする育毛剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビフラボン類を有効成分とする育毛剤の開発に関する。
【背景技術】
【０００２】
イチョウ葉より抽出したエキスは、血管拡張、血流増大、血管系の老化防止、特に脳の末梢血流の改善、神経障害等の治療を目的とした医薬品として用いられている。そして、皮膚外用剤(特開平４−３２１６１６号公報(特許文献１))や化粧料(特開平１−１１７８１６号公報(技術文献２))としても用途が拓かれている。
【０００３】
また従来よりイチョウ葉エキス、センブリ、カミツレ等生薬成分が育毛剤としても広く用いられている。特にイチョウ葉エキスはその成分であるテルペン類、フラボン類の血行促進作用により育毛を促すことが知られており、たとえば、特許第２６１２０１２号公報(特許文献３)には「イチョウの葉を水溶性有機溶剤または含水水溶性有機溶剤で抽出したイチョウエキスを含有することを特徴とする育毛・養毛料。」が記載されている。
【０００４】
また、「総フラボノイド含量が１５〜４０重量％、総テルペノイド含量が２〜１５重量％であるイチョウ抽出物を養毛成分として配合したことを特徴とする毛髪用化粧料。」(特開平１０−２８７５３１号公報(技術文献４))についても開示されている。
【０００５】
更には、特開平９−５９１６６号公報(特許文献５)には、マロニルイソフラボン配糖体が育毛剤として有効との記載がある。
【０００６】
以上のようにいずれの育毛剤も、イチョウ葉エキス中のテルペン類あるいはフラボン類の血行促進作用による育毛効果であり、直接的に育毛作用を有しているものではない。
【０００７】
近年ストレスや急激なダイエット等で若い女性の間でも脱毛や薄毛に悩む人が増えつつあり、育毛に直接的に効果のある物質の開発が待たれている。
【特許文献１】特開平４−３２１６１６号公報
【特許文献２】特開平１−１１７８１６号公報
【特許文献３】特許第２６１２０１２号公報
【特許文献４】特開平１０−２８７５３１号公報
【特許文献５】特開平９−５９１６６号公報
【特許文献６】特開２００５−１０４９２１号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
育毛に直接的に効果のある成分を見出し、有効な育毛剤の開発を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、上記課題を解決すべく鋭意努力した結果、ビフラボン類が育毛活性を有することを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は
(１)ビフラボン類を有効成分とする育毛剤、
(２)ビフラボン類がシアドピティシン(Sciadopitysin)、ギンクゲチン(Ginkgetin)、イソギンクゲチン(Isoginkgetin)、セキオイアフラボン(Sequoiaflavone)及びビロベチン(Bilobetin)のいずれか１又はそれらの混合物であることを特徴とする(１)記載の育毛剤、
(３)ギンクゲチンとイソギンクゲチンとの混合物又はシアドピティシンを有効成分とする育毛剤
に関する。
【００１０】
本発明者等は、既に皮膚との接触において有害なサリチル酸誘導体を含まず、従来のイチョウ葉エキスの有効成分に加えて、有効成分の二重フラボン類や有機酸類等を含むイチョウ葉エキスを開発し出願している(特開２００５−１０４９２１号(特許文献６))。
【００１１】
本発明者等は更に数多くの実験をした結果、イチョウ葉エキス中のビフラボン類とその混合物は、毛包上皮細胞類縁細胞であるところの、ヒト表皮角化細胞(HEKｓ)に対する顕著な増殖活性を有するとともに、C3Hマウス休止期毛の成長期への移行促進効果を有することを見出した。
【００１２】
毛髪には成長期、退行期、休止期を循環する、いわゆる毛周期(ヘアーサイクル)が存在する。正常な毛髪では成長期が５〜７年続き、数ヶ月間の退行期と休止期の後、脱毛し、また毛根が形成して毛髪が成長期に移行する。
【００１３】
一方、多くの脱毛症患者の毛髪では、成長期が２年未満に短縮し、休止期が極端に延長して、成長期に移行しないことが知られている。
【００１４】
本試験品には休止期毛を成長期に移行させる効果が認められるため、脱毛症治療薬や予防薬として有効である。
【００１５】
すなわち、従来の育毛剤が間接的効果であるのに対して、本発明の育毛剤は直接的に育毛に効果があり、効率的な育毛を可能とする。
本発明におけるビフラボン類とは、一般式
【００１６】
【化１】
2007008900.tif 000002
で表される化合物群で、Ｒ１は任意に水素(Ｈ)、メチル(ＣＨ３)、アルキル、単糖類、多糖類を示し、Ｒ２は水素(Ｈ)、ヒドロキシル(ＯＨ)、メトキシ(ＯＣＨ３)、ＯＧｌｃ(Ｇｌｃ：単糖または多糖)を示す。またこれらを含むエキス、分画物も含まれる。
【００１７】
主なビフラボン類としては、シアドピティシン(Sciadopitysin)、ギンクゲチン(Ginkgetin)、イソギンクゲチン(Isoginkgetin)、セコイアフラボン(Sequoiaflavone)、ビロベチン(Bilobetin)及びアメントフラボン(Amentoflavone)があるが、それらの化学式は以下の通りである。
【００１８】
【化２】
2007008900.tif 000003
シアドピティシン(Sciadopitysin)
【００１９】
【化３】
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ギンクゲチン(Ginkgetin)
【００２０】
【化４】
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イソギンクゲチン(Isoginkgetin)
【００２１】
【化５】
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セコイアフラボン(Sequoiaflavone)
【００２２】
【化６】
2007008900.tif 000007
ビロベチン(Bilobetin)
【００２３】
【化７】
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アメントフラボン(Amentoflavone)
【００２４】
ビフラボンは、主としてイチョウ葉に含まれているが、他にはビャクシン属植物、イチイ属植物、イワヒバ属植物、マキ属植物等にも含まれている。
【００２５】
本発明のビフラボン類を育毛剤として用いるには、常法に従い、たとえば乳液、クリーム、ローション、ジェル、エアゾール等通常毛髪用化粧料として知られる種々の形態の基材に配合して、ヘアトニック、ヘアリキッド、ヘアローション、ヘアクリーム等とすることができる。
【００２６】
本発明の育毛剤にはワセリン、オリーブ油等の油分、メントール等の清涼剤、抗菌剤、保湿剤、色素、香料等の公知の添加剤を配合することができるのは言うまでもない。
適用量は、大人の場合１〜２％程度の製剤を約５ｃｃ程度毎日１塗布することが好ましい。
【００２７】
また、本発明において育毛剤とは、発毛・育毛促進効果及び抜け毛や、ふけ・かゆみを防止する効果を有するものである。
【発明の効果】
【００２８】
本発明の育毛剤は直接的に育毛に効果があり、効率的な育毛を可能とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
[実施例１]  イチョウ葉エキスからビフラボン類の精製
イチョウ葉エキス(イチョウ葉産業株式会社製)１０．０ｇをメタノール６００ｍｌに混合した後、分液ロートに移し、その混液をヘキサンで洗浄した(初回４００ｍｌ、２回目以降は２００ｍｌ×３回)。
【００３０】
メタノール層から吸引ろ過により不溶物を取り除いた後、ろ液を濃縮し、残渣８．７３ｇを得た。この残渣をクロロフォルム：メタノール=９：１の溶媒２００ｍｌと水１００ｍｌで分画した。
【００３１】
水層はクロロフォルム：メタノール=９：１の溶媒で抽出し(５０ｍｌ×４回)、得られた有機層を全て合わせた。硫酸ナトリウムを加えて脱水し、ろ過した後濃縮して抽出エキス０．３９ｇを得た。
【００３２】
上記の方法により得られた抽出エキス０．３９ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル：ヘキサン＝１：１)に供し、ギンコール酸などの脂質成分を除いたビフラボン混合物を０．２８ｇを得た。これはシアドピティシン(Sciadopitysin)、ギンクゲチン(Ginkgetin)、イソギンクゲチン(Isoginkgetin)、ビロベチン(Bilobetin)及びアメントフラボン(Amentoflavone)の各ビフラボン類の混合物であることが、高速液体クロマトグラフィーの分析により明らかとなった(図１)。
【００３３】
このビフラボン混合物をシリカゲル薄層クロマトグラム(酢酸エチル：ヘキサン＝１：１)により分画し、各種ビフラボン類を主成分とする５個のフラクション(Fr．１：５５ｍｇ、Fr．２：１０２ｍｇ、Fr．３：３４ｍｇ、Fr．４：２０ｍｇ、Fr．５：３５ｍｇ)を得た。
【００３４】
高速液体クロマトグラフィーの分析の結果、Fr．１にはシアドピティシン(Sciadopitysin)が含まれ、Fr．２にはギンクゲチン(Ginkgetin)とイソギンクゲチン(Isoginkgetin)が約１：２の割合で含まれ、Fr．３にはギンクゲチン(Ginkgetin)とイソギンクゲチン(Isoginkgetin)が約１：７の割合で含まれ、Fr．４にはビロベチン(Bilobetin)が主に含まれることがわかった。アメントフラボン(Amentoflavone)は少量しか含まれず、分離できなかったので、市販のものを購入した(Fluka Chemical Co.Milwaukee,WI,USA)。
【００３５】
[実施例２]  ビフラボン類のヒト表皮角化細胞(HEKｓ)に対する増殖促進活性
Fr．１からFr．４及びアメントフラボン(Amentoflavone)のヒト表皮角化細胞(HEKｓ)に対する増殖促進活性を調べた。ヒト表皮角化細胞(HEKｓ)は、予備培養後、各検体の存在下、120時間培養した。細胞数をWST1を用いた比色法により求め検定した。ヒト表皮角化細胞(HEKｓ)は、毛包上皮細胞類縁細胞であり、この細胞の増殖を促進する物質は、育毛活性を導き出せる。
【００３６】
検体の濃度はFr．１が、シアドピティシン(分子量：５８０)、Fr．２が、ギンクゲチン(分子量：５６６)：イソギンクゲチン(分子量：５６６)＝１：２、Fr．３がギンクゲチン：イソギンクゲチン＝１：７、Fr．４がビロベチン(分子量：５５３)として計算した。結果を図２に示す。
【００３７】
シアドピティシンを主成分とするFr．１は０．１μMから５０μMの範囲で用量依存的に細胞増殖を増加させた。５０μMにおいて最も高い活性１７０％を示した。ギンクゲチン、イソギンクゲチンを主成分とするFr．２とFr．３も０．１μMから５０μMの範囲で細胞増殖活性を示した。Fr．２は０．１μMで最も高い活性１３８％を示した。０．１μMから５０μMの範囲ではFr．１よりも低い活性であった。ビロベチンを主成分とするFr．４もFr．２、３と同様か、やや下回る活性を示した。一方、アメントフラボンはいずれの濃度でも細胞増殖効果を示さなかった。高濃度(１００μM)においては、Fr．１〜４のいずれも細胞毒性を示した。
【００３８】
以上の結果からビフラボン中のメトキシル基の数が多いものほど増殖促進活性が高くなることが示唆された。すなわち、育毛作用に最も好ましいビフラボンは、シアドピティシンであり、次いでギンクゲチン及びイソギンクゲチンの混合物であることが分かった。
なお、図２の増殖促進活性率を表１に数値で示す。
【００３９】
【表１】
2007008900.tif 000009
【００４０】
表１は、対照の細胞増殖率を１００％としたときの、検体の細胞増殖率を示す。表皮角化細胞(HEK)は、各濃度の検体を含む培地中で１２０時間培養した。対照には検体を含まない培地を用いた。細胞増殖率は平均値±S.E.M(ｎ=６)で示した。
【００４１】
[実施例３]  マウス発毛試験
１％ビフラボン混合物(シアドピティシン、ギンクゲチン、イソギンクゲチン、ビロベチン、アメントフラボン)を試験品とし、対照として１％エタノール、また標準品(ポジティブな対照)として１％ミノキシジルを用いた。なお、ミノキシジルは医薬品として、厚生労働省から許可された有効性の高い発毛剤である。本試験品である１％ビフラボン混合物はエタノールに溶解させた。
【００４２】
C3Hのマウスの背部毛は、時間的同調サイクルがあることが知られており、１８−２１日令と４７−９５日令から背部毛は休止期に入る。そこで、これら試験品、対照品、標準品を、ヘアーサイクルが休止期にある７週令のC3H/HeSlc雄マウス(ジャパンSLC、静岡・日本)の背部の毛を剃った個所にそれぞれ２００μLを１日１回塗布した。試験開始後４０日目にマウスの背部の皮膚を観察した結果が図３に示されている。
【００４３】
図３−ａは対照品による発毛状況の写真であり、図３−ｂは本試験品による発毛状況の写真であり、図３−ｃは標準品による発毛状況の写真である。
【００４４】
ポジティブな標準品であるミノキシジルの塗布では背部皮膚の９９％が毛で覆われていた。一方、エタノールを塗布した対照品ではわずか２３％のみ毛で覆われているにすぎなかった。しかし、本試験品が塗布された群では、標準品とほぼ同等の９５％が毛で覆われていた。
【００４５】
これらの結果はビフラボン混合物が毛の成長を誘発する著しい発毛活性を有していることを示している。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】イチョウ葉から抽出されたエキスを高速液体クロマトグラフィーで分析した結果を示す図。
【図２】ビフラボン類のヒト表皮角化細胞(HEKｓ)に対する増殖促進活性を示す図。
【図３−ａ】対照品(１％エタノールを塗布)によるマウスの背部における発毛状況を示す図。
【図３−ｂ】本試験品によるマウスの背部における発毛状況を示す図。
【図３−ｃ】標準品(１％ミノキシジルを塗布) によるマウスの背部における発毛状況を示す図。
【図１】
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【図２】
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【図３−ａ】
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【図３−ｂ】
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【図３−ｃ】
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