(57)【要約】【課題】迅速で信頼性の高い高感度分析を可能とする核酸検査用マイクロリアクタおよび検査装置を提供すること。【解決手段】本発明の核酸検査装置は、試薬類・送液系用のエレメントを搭載した、検体ごとのチップコンポーネントと、検査装置本体として、制御・検出コンポーネントとを別個にするシステム構成である。よって微量分析、増幅反応に対し、クロス・コンタミネーション、キャリーオーバー・コンタミネーション、不充分な増幅または誤増幅が生じにくい。本発明のマイクロリアクタの構成によれば、核酸増幅の反応が行なわれる核酸増幅部位において、その流路内部に核酸非吸着性ビーズが保持されており、核酸を増幅する際に、該ビーズをその流路内部で移動させて増幅効率を高めることにより、短時間で信頼性の高い高感度分析を可能とする。【選択図】図７
2007135504.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸非吸着性ビーズを流路内部に保持する核酸増幅部位を有しており、核酸を増幅する際に、該ビーズをその核酸増幅部位の流路内で往復させることを特徴とする核酸検査用マイクロリアクタ。
【請求項２】
前記核酸非吸着性ビーズが疎水性のビーズである、請求項１に記載の核酸検査用マイクロリアクタ。
【請求項３】
前記ビーズが、ジルコニア、窒化ケイ素、ポリスチレンまたはセラミックスから形成されていることを特徴とする請求項１または２に記載の核酸検査用マイクロリアクタ。
【請求項４】
前記核酸増幅部位へ送液するマイクロポンプの送液方向の変更により、前記流路内で液体が繰り返し前後動して前記ビーズを往復させることを特徴とする、請求項１に記載の核酸検査用マイクロリアクタ。
【請求項５】
前記ビーズがさらに帯磁性であり、外部から付加された磁場により前記流路内を往復することを特徴とする、請求項１または２に記載の核酸検査用マイクロリアクタ。
【請求項６】
前記マイクロポンプにより、検体と核酸増幅用の反応試薬とを含む少なくとも２種類の液体を送液して合流させる合流部と、
その合流部から先に設けられ、該反応試薬との反応が行われる前記核酸増幅部位内の前記ビーズを保持する広幅流路と、
該合流部から該流路内に送液された合流液の送液方向を逆方向に切り替えて、その合流液を該流路内で繰り返し前後動させるように前記マイクロポンプを制御する制御手段と、を備えることを特徴とする、請求項４に記載のマイクロリアクタ。
【請求項７】
少なくとも検体受容部、試薬収容部、廃液貯留部、マイクロポンプ接続部および微細流路を有し、各部を微細流路で連通させており、
該検体受容部にある検体と該試薬収容部にある試薬とを、該マイクロポンプ接続部に接続させる別途のマイクロポンプの作用により微細流路を通してその下流に設けられた核酸増幅部位、次いで検出部位へ流して、核酸を測定するとともに、
核酸の測定の結果、生じる廃液を該廃液貯留部へ移して閉じ込めることを特徴する、請求項１〜６のいずれかに記載の核酸検査用マイクロリアクタ。
【請求項８】
前記マイクロポンプは、
流路抵抗が差圧に応じて変化する第一流路と、
差圧の変化に対する流路抵抗の変化の割合が該第一流路よりも小さい第二流路と、
該第一流路および該第二流路に接続された加圧室と、
該加圧室の内部の圧力を変化させるためのアクチュエータと
を備えたピエゾポンプであることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の核酸検査用マイクロリアクタ。
【請求項９】
送液分割手段として、
分岐した微細流路と、
正方向への送液圧力が予め設定された圧に達するまで液体の通過を遮断し、予め設定された圧以上の送液圧力を加えることにより液体の通過を許容する、前記マイクロポンプのポンプ圧により液体の通過を制御可能な送液制御部と、
流路内の液体の逆流を防止する逆流防止部と、
から構成され、分岐した流路内における液体の送液およびその送液量を制御することを特
徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の核酸検査用マイクロリアクタ。
【請求項１０】
核酸の検出を光学的に行う検出装置とともにマイクロポンプおよび温度の制御装置が一体化された装置本体と、この装置本体に装着可能な核酸検査用マイクロリアクタとからなり、装置本体に該マイクロリアクタを装着することにより、核酸の測定を自動的に行うことを特徴とする核酸検査装置。
【請求項１１】
核酸増幅部位の広幅流路内部に核酸非吸着性ビーズが保持されており、核酸を増幅する際に、核酸増幅部位へ送液するマイクロポンプの送液方向の変更により、該流路内で液体が繰り返し前後動して該ビーズをその流路内部で往復または移動させることにより増幅効率を高めることを特徴とする核酸増幅の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、増幅部位の流路内に核酸非吸着性ビーズを保持する核酸検査用マイクロリアクタおよびこのマイクロリアクタを含む核酸検査装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、マイクロマシン技術および超微細加工技術を駆使することにより、従来の試料調製、化学分析、化学合成などを行うための装置、手段(例えばポンプ、バルブ、流路、セ
ンサーなど)を微細化して１チップ上に集積化したシステムが開発されている。これは、
μ−ＴＡＳ（Micro total Analysis System）、バイオリアクタ、ラブ・オン・チップ（Lab-on-chips）、バイオチップとも呼ばれ、医療検査・診断分野、環境測定分野、農産製
造分野でその応用が期待されている。煩雑な工程、熟練した手技、機器類の操作が必要とされる場合には、自動化、高速化および簡便化されたミクロ化分析システムは、コスト、必要試料量、所要時間のみならず、時間および場所を選ばない分析を可能とする。
【０００３】
臨床検査を始めとする各種検査を行う現場では、場所を選ばず迅速に結果を出すこれらの分析用チップにおける測定においても、その定量性、解析の精度などが重要視される。分析チップではそのサイズ、形態の点から厳しい制約があるため、シンプルな構成で、高い信頼性の送液システムを確立することが課題となる。そのため精度が高く、信頼性に優れるマイクロ流体制御素子が求められている。これに好適なマイクロポンプシステムを本発明者らはすでに提案している（特許文献１および２）。
【０００４】
簡便かつ迅速な検査手段を提供するマイクロリアクタには、実際問題として解決すべき具体的な問題、要望が提起され、その解決が望まれている。例えばチップ上で検査などを行うために、試料の量を極少とし、必要な試薬量も少なくて済む分析の微量化を図ることは、マイクロリアクタに求められる最大課題である。ところが試料によっては、検出対象である遺伝子または核酸の濃度が極めて希薄であることがある。チップに導入できる検体量も限られていることから、そうした検体量では濃縮しない限り測定の範囲内に入らない。マイクロチップ上で生物試料から核酸を抽出・分離する物理的な方法として、流路上に充填したビーズに吸着させ、次いで溶離して、分離、濃縮する方法（特許文献３）を本発明者らは開示した。遺伝子、核酸の検出では、ＰＣＲ（polymerase chain reaction）法
による増幅反応を利用するのが通例である。その場合、増幅効率の観点から所望する増幅が、短時間で充分に進行するように核酸増幅反応を適切に制御することが望ましい。そこでビーズ上でＰＣＲ反応を行なう方法が報告された（特許文献４）。
【特許文献１】特開2001-322099号公報
【特許文献２】特開2004-108285号公報
【特許文献３】特願2004-312314号
【特許文献４】特開2004-65199号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記の実状に鑑みてなされた本発明は、核酸の増幅反応が行なわれる核酸増幅部位において、その内部に核酸非吸着性ビーズが保持されており、核酸を増幅する際に、該ビーズをその部位内部で往復をさせて増幅効率を高めることにより、核酸増幅工程を改善した核酸検査用マイクロリアクタを提案する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の核酸検査用マイクロリアクタは、核酸非吸着性ビーズを流路内部に保持する核
酸増幅部位を有しており、核酸を増幅する際に、該ビーズをその核酸増幅部位の流路内で往復させることを特徴としている。
【０００７】
前記核酸非吸着性ビーズが疎水性のビーズであることが好ましい。さらに、前記ビーズが、好ましくはジルコニア、窒化ケイ素、ポリスチレンまたはセラミックスから形成されている。
【０００８】
前記核酸増幅部位へ送液するマイクロポンプの送液方向の変更により、前記流路内で液体が繰り返し前後動して前記ビーズを往復させるようにすることが望ましい。
前記ビーズがさらに帯磁性であり、外部から付加された磁場により前記流路内を往復させてもよい。
【０００９】
本発明のマイクロリアクタは、前記マイクロポンプにより、検体と核酸増幅用の反応試薬とを含む少なくとも２種類の液体を送液して合流させる合流部と、
その合流部から先に設けられ、該反応試薬との反応が行われる前記核酸増幅部位内の前記ビーズを保持する広幅流路と、
該合流部から該流路内に送液された合流液の送液方向を逆方向に切り替えて、その合流液を該流路内で繰り返し前後動させるように前記マイクロポンプを制御する制御手段と、を備えることを特徴としている。
【００１０】
前記マイクロリアクタは、少なくとも検体受容部、試薬収容部、廃液貯留部、マイクロポンプ接続部および微細流路を有し、各部を微細流路で連通させており、
該検体受容部にある検体と該試薬収容部にある試薬とを、該マイクロポンプ接続部に接続させる別途のマイクロポンプの作用により微細流路を通してその下流に設けられた核酸増幅部位、次いで検出部位へ流して、核酸を測定するとともに、
核酸の測定の結果、生じる廃液を該廃液貯留部へ移して閉じ込めることを特徴している。
【００１１】
前記マイクロポンプは、
流路抵抗が差圧に応じて変化する第一流路と、
差圧の変化に対する流路抵抗の変化の割合が該第一流路よりも小さい第二流路と、
該第一流路および該第二流路に接続された加圧室と、
該加圧室の内部の圧力を変化させるためのアクチュエータと
を備えたピエゾポンプであることが望ましい。
【００１２】
送液分割手段として、
分岐した微細流路と、
正方向への送液圧力が予め設定された圧に達するまで液体の通過を遮断し、予め設定された圧以上の送液圧力を加えることにより液体の通過を許容する、前記マイクロポンプのポンプ圧により液体の通過を制御可能な送液制御部と、
流路内の液体の逆流を防止する逆流防止部と、
から構成され、分岐した流路内における液体の送液およびその送液量を制御することを特徴としている。
【００１３】
核酸の検出を光学的に行う検出装置とともにマイクロポンプおよび温度の制御装置が一体化された装置本体と、この装置本体に装着可能な核酸検査用マイクロリアクタとからなり、装置本体に該マイクロリアクタを装着することにより、核酸の測定を自動的に行うことを特徴としている核酸検査装置も本発明に含まれる。
【００１４】
さらに核酸増幅部位の広幅流路内部に核酸非吸着性ビーズが保持されており、核酸を増
幅する際に、核酸増幅部位へ送液するマイクロポンプの送液方向の変更により、該流路内で液体が繰り返し前後動して該ビーズをその流路内部で往復または移動させることにより増幅効率を高めることを特徴とする核酸増幅の方法も本発明に含まれる。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の核酸検査装置は、検体および試薬の送液および増幅反応に必要なエレメントを搭載した、検体ごとのマイクロリアクタなるチップ・コンポーネント、装置本体である制御・検出コンポーネントとを別個にするシステム構成である。よって増幅工程において、誤まった増幅または不充分な増幅、クロス・コンタミネーション、キャリーオーバー・コンタミネーションの問題が回避される。
【００１６】
本発明のマイクロリアクタの構成によれば、核酸増幅の反応が行なわれる核酸増幅部位において、その内部の流路に核酸非吸着性ビーズが保持されており、核酸を増幅する際に、該ビーズをその流路内で往復をさせて増幅効率を高めることにより、短時間の核酸増幅を可能とする。
【００１７】
[発明の詳細な説明]
以下、本発明の核酸検査用マイクロリアクタおよびこのマイクロリアクタとマイクロポンプ、各種制御装置、検出装置とからなる核酸検査装置について説明する。なお本明細書において、「検体」とは、測定対象の核酸を含有する流体である。「遺伝子」とは、何らかの機能を発現する遺伝情報を担うＤＮＡまたはＲＮＡをいうが、単に化学的実体であるＤＮＡ、ＲＮＡの形でいうこともある。これらとポリヌクレオチドを総称して「核酸」という。「エレメント」とは、マイクロリアクタに設置される機能部品をいう。「微細流路」は、本発明のマイクロリアクタに形成された流路のことである。
【００１８】
マイクロリアクタおよび核酸検査装置の概要
図１は、装置本体に脱着可能な核酸検査用マイクロリアクタと装置本体とからなる核酸検査装置のシステム概要図、図２は、前記検査装置における一実施形態の概略図である。本発明は、種々の実施の形態において、本発明の趣旨に沿って任意の変形、変更が可能であり、それらは本発明に含まれる。すなわち、本発明のマイクロリアクタ（検査チップ）および検査装置の全体または一部について、構造、構成、配置、形状形態、寸法、材質、方式、方法などを本発明の趣旨に合致する限り、種々のものにすることができる。
【００１９】
図１および２に示された検査チップ２、すなわち核酸検査用マイクロリアクタは、プラスチック樹脂、ガラス、シリコン、セラミックスなどの１以上の部材を適宜組み合わせて作製される一枚のチップである。その縦横のサイズは、通常、数十ｍｍぐらい、高さが数ｍｍ程度である。好ましくは、マイクロリアクタの微細流路および躯体は、加工成型が容易で安価であり、焼却廃棄が容易なプラスチック樹脂で形成される。なかでもポリプロピレンなどのポリオレフィンやポリスチレンの樹脂は成型性に優れ、後述するようにストレプトアビジンなどを吸着する傾向が強く、微細流路上に検出部位を容易に形成することができるために望ましい。微細流路は、微細加工技術によりその幅および高さが、約１０μｍ〜数百μｍのサイズ、例えば幅１００μｍ、深さ１００μｍ程度に形成される。また、そうしたマイクロリアクタにおいて、蛍光物質または発色物質などを生成させ、光学的に検出することも行なうようにする場合には、マイクロリアクタ表面のうち少なくとも微細流路の検出部位を覆うその検出部分は透明である部材、好ましくは透明なプラスチックとなっていることが好ましい。また、成型に使用する樹脂中には蛍光のバックグラウンドを下げる観点から、酸化防止剤などの添加物ができるだけ含有されないことが好ましい。図３は、本発明の核酸検査用マイクロリアクタの典型的な流路構成の一例を示すものである。
【００２０】
本発明の核酸検査装置は、マイクロポンプ、マイクロポンプを制御する制御装置、温度を制御する温度制御装置および検出装置などが一体化された装置本体１と、この装置本体に装着可能なマイクロリアクタ２とからなる。予め試薬が封入されたマイクロリアクタ２の検体受容部に検体液を注入して、そのマイクロリアクタを核酸検査装置の本体１に装着すると、送液ポンプを作動させるための機構的連結、必要であれば制御用の電気的接続もなされる。本体とこの上記マイクロリアクタとを接合させると、マイクロリアクタの流路も作動状態となる。したがって好ましい態様の一例では、分析が開始されると検体および試薬類の送液、混合に基づく核酸の増幅、核酸とプローブとの結合などの反応、反応物の検出および光学的測定が、一連の連続的工程として自動的に実施され、測定データが、必要な条件、記録事項とともにファイル内に格納され、核酸の測定が自動的に行われる。
【００２１】
前記検出装置とは、流路上の検出部位に対して、例えばＬＥＤなどから測定光を照射し、フォトダイオード、光電子増倍管などの光学的検出の手段で透過光もしくは反射光を検出する装置である。光学的検出の手段として、原理を異にする各種の光学装置があるが、紫外・可視分光光度計が望ましい。上記検査装置に組み込んだ装置であってもよく、あるいは別途の装置として、使用時に連結する態様であってもよい。好ましくは、本発明の核酸検査装置は、検体に含有されている核酸の検出を光学的に行う検出装置が、上記マイクロポンプを含む送液手段および温度制御装置とともに組み込まれ、一体化した構成となっている。
【００２２】
送液、温度、反応の各制御に関わる制御系、光学的検出、データの収集および処理を受け持つユニットは、マイクロポンプおよび光学装置とともに本発明の核酸検査装置の本体１を構成する。この装置本体１は、これに上記チップ２を装着することによりサンプルに対して共通で使用される。上記の増幅などの反応および検出は、送液順序、容量、タイミングなどについて予め設定された条件として、マイクロポンプおよび温度の制御、光学的検出のデータ処理とともにプログラムとして核酸検査装置に搭載されたソフトウェアに組みこまれている。従来の分析チップでは、異なる分析または合成などを行う場合には、変更される内容に対応するマイクロ流体デバイスをその都度構成する必要があった。これとは異なり、本発明では脱着可能な上記チップのみ交換すればよい。各エレメントの制御変更も必要となる場合には、装置本体に格納された制御プログラムを適宜改変すればよい。
【００２３】
本発明の核酸検査装置は、いずれのコンポーネントも小型化され、持ち運びに便利な形態としているために、使用する場所および時間に制約されず、作業性、操作性が良好である。送液に使用する多数のマイクロポンプユニットが装置本体側に組み込まれているので、チップはディスポーサブルタイプとして使用できる。
【００２４】
本発明のマイクロリアクタおよび核酸検査装置は、特に遺伝子または核酸（ＤＮＡ）の検査に好適に用いることができる。その場合、核酸増幅のための機構がマイクロリアクタ上に搭載される。しかし、遺伝子以外の核酸についても基本的な構成は、ほぼ同一になるといえる。例えばＲＮＡ用には逆転写酵素収容部を設置してもよい。あるいは本発明のマイクロリアクタおよび核酸検査装置における別の態様として、マイクロリアクタ上で行なう工程を少なくしたシンプルな構成のマイクロリアクタであってもよい。例えばＤＮＡ増幅に特化したマイクロリアクタでは、検体、試薬を所定部位に注入すると、それらが流路中に流入して増幅反応が行なわれ、増幅産物を回収できるチップである。いずれの場合でも、通常は、試薬収容部、検体前処理部、試薬類、プローブ類などを適宜変更するか省略すればよく、送液エレメントの配置、数などは変化するであろう。
【００２５】
核酸検査用マイクロリアクタ
本発明の核酸検査用マイクロリアクタについて、好ましい態様の一例について以下、記載する。その態様のマイクロリアクタは、少なくとも検体受容部、試薬収容部、廃液貯留
部、マイクロポンプ接続部および微細流路を有し、各部を微細流路で連通させている。
検体液を、検体受容部下流に設けられた核酸増幅部位を構成する流路、次いで検出部位を構成する流路へ流して核酸を測定するとともに、核酸の測定の結果、生じる廃液を該廃液貯留部へ移して閉じ込めることを特徴とするマイクロリアクタである。
【００２６】
さらに各収容部、流路、ポンプ接続部に加えて、送液制御部、逆流防止部、試薬定量部、混合部などの各エレメントが、機能的に適当な位置に微細加工技術により設置されている。
【００２７】
なお、本発明のマイクロリアクタおよび核酸検査装置の構成要素には、オプションとして含まれる性格のものもあり、系を簡素化する場合にはそうした要素は適宜省略することができる。例えば試薬収容部、廃液貯留部などは、場合によっては設置しなくてもよい。
【００２８】
検体受容部
本発明のマイクロリアクタの検体受容部２０は、次のような構成を有する（図３）。検体受容部２０は、検体注入部に連通して検体（核酸を含有する）の一時収容および混合部への検体供給を行う。検体受容部２０に注入された検体は、マイクロポンプ１１およびポンプ接続部１２と接続しており、これらの作用により下流の増幅部位直前の混合部へ送液される。
【００２９】
また検体受容部の上面で検体を注入する部分（検体注入部）は、外部への漏失、感染および汚染を防ぎ、密封性を確保するために、ゴム状材質などの弾性体からなる栓が形成されているか、あるいはポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）などの樹脂、強化フィルムで覆われていることが望ましい。
【００３０】
・検体
本発明の測定対象となる検体として、生体由来の試料自体にも特に制限はないが、例えば全血、血漿、血清、バフィーコート、尿、糞便、唾液、喀痰など生体由来のほとんどの試料が該当する。遺伝子検査の場合、増幅反応の鋳型となる核酸として遺伝子、ＤＮＡまたはＲＮＡが分析の対象となる。検体は、このような核酸を含む可能性のある試料から調製または単離したものであってよい。したがって、上記の試料の他に、細胞培養物；ウィルス、細菌、カビ、酵母、植物、動物などの核酸含有試料；微生物などが混入または含有する可能性のある試料、その他核酸が含有されている可能性のあるあらゆる試料などが対象となる。
【００３１】
本発明のマイクロリアクタは、従来の装置を使用して行う手作業の場合に比べて、必要とされる検体量は極めて少ない。例えば、縦横の長さが数ｃｍのチップに２〜３μL程度
の血液検体を注入するだけである。例えば、遺伝子の場合、ＤＮＡとして0.001〜100ｎｇである。
【００３２】
試薬収容部
本発明の核酸検査用マイクロリアクタでは、必要に応じて試薬収容部を設けてもよい。好ましい態様として、必要な試薬類（洗浄液なども含む）があらかじめ所定の量、マイクロリアクタ内の試薬収容部１８に封入されている（図３）。また複数の試薬に対応して複数の試薬収容部が設けられるとさらに望ましい。そうした試薬収容部があれば、本発明のマイクロリアクタは使用時にその都度、試薬を必要量充填する必要はなく、即使用可能の状態になっているため、場所や時間を問わず迅速に検査ができる。検体中の核酸を分析する場合、測定に必要な試薬類は、通常それぞれ公知である。遺伝子検査用の試薬類には、核酸増幅に用いられる各種試薬、検出に使用されるプローブ類、発色試薬などが挙げられる。
【００３３】
チップ内に内蔵される試薬類などは、蒸発、漏失、気泡の混入、汚染、変性などを防止するため、その試薬部の表面が密封処理され、封止材（封止液）により封入されていることが好ましい。これらの封止材（図５では封止液収容部２５に収容される）は、使用前、マイクロリアクタ・チップが保管される冷蔵条件下では、固化もしくはゲル化しており、使用時、室温にすると融解し流動状態となるものである。このような封止材としては、水に対して難溶性の可塑性物質を使用することができ、好ましくは、水に対する溶解度が１％以下であり且つ融点が８℃〜室温（２５℃）である油脂、およびゼラチンの水溶液が挙げられる。
【００３４】
試薬収容部および試薬を混合する混合部の各部（さらに必要であれば検体受容部も）は、ペルチェ素子によって冷却されるようになっている。ペルチェ素子３は、これらの各部のチップ上面に、あるいは上下両面に設けてもよい。試薬収容部などを冷却することにより、加温による試薬の変質を防止できる。特に、ＰＣＲ増幅では３つの温度間で昇降させる温度管理が必要になる。また遺伝子増幅にICAN（Isothermal chimera primer initiated nucleic acid amplification ）法を適用する構成とした場合でも、増幅反応部を５０
〜６５℃とする必要があるため、あらかじめ反応部を昇温しておくとすぐに増幅を開始できて検査時間を短縮できるが、反応部の昇温過程、試薬混合時等に試薬が加温されて変質し易くなる。これを防止するために上記のようにペルチェ素子を設けて冷却することが望ましい。通常は、4℃以下程度に保てば試薬の変質を充分に防止できる。
【００３５】
マイクロポンプおよびポンプ接続部
本実施形態では、検体受容部２０、試薬収容部１８、さらに必要に応じてコントロール収容部のそれぞれについて、これらの収容部の内容液を送液するマイクロポンプ１１が設けられている。マイクロポンプ１１は試薬収容部１８の上流側に接続され、マイクロポンプ１１により駆動液を試薬収容部側へ供給することによって、試薬を流路へ押し出して送液している。マイクロポンプユニットは、マイクロリアクタとは別途の装置本体（核酸検査装置）に組み込まれており、マイクロリアクタを装置本体に装着することによって、ポンプ接続部１２からマイクロリアクタに接続されるようになっている（図５）。
【００３６】
本実施形態では、マイクロポンプとしてピエゾポンプを用いている。すなわち、
流路抵抗が差圧に応じて変化する第一流路と、
差圧の変化に対する流路抵抗の変化の割合が該第一流路よりも小さい第二流路と、
該第一流路および該第二流路に接続された加圧室と、
該加圧室の内部の圧力を変化させるためのアクチュエータと
を備えたピエゾポンプである（図６）。その詳細は、上記特許文献1および2に記載されている。
【００３７】
核酸増幅部位
測定対象である核酸を含む検体の液体と、試薬（または試薬の混合液）とを合流させる合流部の上流側の各流路に、前記検体が収容される検体受容部と、前記試薬液体が収容される試薬収容部とが設けられるとともに、これらの各収容部の上流側にポンプ接続部が設けられ、これらのポンプ接続部に前記マイクロポンプを接続し、各マイクロポンプから駆動液を供給することにより前記各収容部内の前記検体液および前記試薬を押し出してこれらを合流させることによって、核酸増幅分析に必要な反応を開始するように構成されている（図４、７、８）。試薬と試薬との混合、および検体と試薬との混合は、単一の混合部で所望の比率で混合してもよく、あるいは何れかもしくは両方を分割して複数の合流部を設け、最終的に所望の混合比率となるように混合しても構わない。そうした反応部位の態様は特に限定されるものではなく、様々な形態および様式が考えられる。核酸増幅部位の反応部は、基本的には広幅の液溜め状の流路であることが望ましいが（図４）、反応のた
めに充分に長くした微細流路であってもよい。その核酸増幅部位内の広幅流路に核酸非吸着性ビーズが充填され保持されている。したがって本発明のマイクロリアクタ・チップの好ましい態様は、
試薬および検体を含む少なくとも２種類の液体を、微細流路からマイクロポンプにより送液して合流させる合流部と、
前記合流部から先に設けられた核酸増幅部位内に該微細流路よりも広幅の流路と、
を有し、核酸を増幅する際にその広幅流路に保持されている核酸非吸着性ビーズを該流路内で往復または移動させることにより合流液を拡散混合して増幅反応を行うことを特徴としている（図７）。
【００３８】
ビーズはその表面が核酸を実質的に吸着しない性質であれば、どのような不溶性または固体物質から調製されていてもよい。具体的には、ナイロン、磁性ビーズ、Dynabeads、
金属表面(例えば、鋼鉄、金、銀、アルミニウム、シリコンおよび銅)、プラスチック材料(例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、置換ポリアルケン、ポリアミド、ポリエステ
ル、ポリビニリデンジフルオライド(PVDF)) 、セライト、セラミックスなどの材料が挙げられる。上記以外の材料で作られたビーズが核酸を吸着する性質のビーズであっても、さらにフッ素などにより表面加工を施して核酸非吸着性となっていてもよい。好ましくは前記ビーズが、ジルコニア、窒化ケイ素（ＳｉN）、ポリスチレンまたはセラミックスから
形成されている。「核酸非吸着性」とは、核酸が実質的に付着しないことをいい、例えば、10μＭの核酸溶液中に入れたときに核酸の濃度変化が１％以下であるようなビーズと定義される。
【００３９】
ビーズが粒子状の場合には、通常、粒子の少なくとも一方向の寸法は10μｍ〜2mmの範
囲にある。ただし、核酸増幅部位の広幅流路内に保持され、その中に常に止まるためには、当該部位直前の微細流路、ならびに下流の微細流路の流路幅より大きいサイズでなければならない。同じ程度のサイズもそうした微細流路に挟まって詰まらせ、液体の円滑な流れを妨げるおそれがあるため、避ける方がよい。
【００４０】
本明細書で「ビーズ」と呼ぶそのような粒子は、必ずしもそうではないが、球形であることが多い。しかし、そうしたビーズについては、マトリックスの形状を制約するものではなく、ランダムな形、ニードル、ファイバーおよび細長いものをはじめ、どのような形であってもよい。増幅部位の流路に充填されるビーズの個数などは任意であり、特に制限はないが、流路の幅、長さ、液体の速度などを勘案して設定することが望ましい。
一例としては、粒子径100〜1000μｍのジルコニアビーズが0.05〜1.3ｇ/ｍｌの密度で
微細流路内に充填される。
【００４１】
・核酸増幅部位反応部での液体の運動
増幅部位の広幅流路内で活発に往復または移動するビーズにより、その流路内の液体の流れが変化してその撹拌作用により試薬液と検体液との混合が促進される（図７）。従って、増幅鋳型のポリヌクレオチドと、プライマー、酵素を含む増幅試薬とが出会う機会の数が増大するために、反応が起きる確率が上昇して増幅過程がより円滑に進行し、結果として増幅の効率を高めることとなる。ビーズを収容しなければ検体と試薬との混合液は、微細流路を層流の形態で流れる。したがって拡散による混合を充分にして増幅反応を充分に進行させるためには、より長い流路で構成される必要が生じる。これに対して広幅の液溜め状の流路であっても、ビーズの往復により有効に混合液の撹拌が行なわれるために増幅部位内の流路は短くて済む。
【００４２】
上記ビーズを広幅流路内で往復または移動させることは、合流液をマイクロポンプの送液方向を変更することにより容易に実現することができる。具体的には、
マイクロポンプにより、検体液体と核酸増幅用の反応試薬とを含む少なくとも２種類の
液体を送液して合流させる合流部と、
その合流部から先に設けられ、該反応試薬との反応が行われる核酸増幅部位内の前記ビーズを保持する広幅流路と、
該合流部から該流路内に送液された合流液の送液方向を切り替えて、該合流液を該流路内で繰り返し前後動させるためのマイクロポンプを制御する制御手段と、
を備えている（図８）。
【００４３】
好ましくは、増幅部位に送液された検体と反応試薬との混合液は、図７および８の矢印で示したようにその送液方向が前後に切り替えられ、液体が増幅部位の広幅流路内で流路方向へ繰り返し前後動するようにマイクロポンプ１１を駆動する。送液方向を前後に切り替えるためには、マイクロポンプの駆動方向を周期的に逆転させればよい。これにより、検体中の核酸と反応試薬とが出会う確率が高められ、核酸を短時間で増幅して効率の向上を図ることができる。場合によるが、例えば、振幅５ｍｍ、周期５秒程度の往復動をさせればよい。
【００４４】
図８は、増幅反応部位内の広幅流路においてビーズを含む液体を前後動させる送液用のマイクロポンプ１１の制御系統を示した図である。図示したように、送液用マイクロポンプ１１は増幅器３２、Ｄ／Ａ変換器３３を介してマイクロコンピュータ３４に接続されている。なお、マイクロポンプ１１を制御する３２〜３５系統は、チップ内にあってもよいが、マイクロリアクタ装置本体に組み込んで、チップ２を装置本体に装着することにより、チップ２のポンプ接続部を装置本体のマイクロポンプに接続するようにして、作動制御させることも可能である。
【００４５】
図８には、送液用のマイクロポンプ１１および弁５７の制御系統が示され、弁５７を開閉するためのエアシリンダ３６が、Ｄ／Ａ変換器３３を介してマイクロコンピュータ３４に接続されている。マイクロコンピュータ３４はタイマー３５を搭載しており、予めプログラムされたタイミングで送液用マイクロポンプ１１の送液および弁５７の開閉を制御する。検体受容部20にもマイクロポンプ１１を接続し、検体受容部20からの検体送液と、試薬収容部18からの増幅反応試薬の送液とを別制御としてもよい。この場合、例えば検体受容部20側の微細流路に逆止弁などの弁５７を設け、核酸増幅部位の反応部内に導入された核酸および試薬とを含む混合液を前後動させる際には、弁５７を閉止して反応部位に接続されたマイクロポンプ１１により送液の切り替えを行う。
【００４６】
前記ビーズがさらに帯磁性であれば、上記のマイクロポンプの作用によるのではなく、外部から付加された磁場により往復させてもよい。すなわち、チップとは別途の外部磁石をビーズが存在する増幅部位の直上で流路に沿って往復させることによりそうしたビーズの運動が実現される。
【００４７】
・核酸増幅法
本発明のマイクロリアクタを使用する遺伝子検査では、核酸の増幅方法は限定されない。例えばＤＮＡ増幅技術は、多方面で盛んに利用されているＰＣＲ増幅法を使用することができる。その増幅技術を実施するための諸条件が詳細に検討され、改良点も含めて各種文献などに記載されている。ＰＣＲ増幅においては、３つの温度間で昇降させる温度管理が必要になるが、マイクロチップに好適な温度制御を可能とする流路デバイスが、すでに本発明者らにより提案されている（特開2004−108285号）。このデバイスシステムを本発明のチップの増幅用流路に適用すればよい。これにより、熱サイクルが高速に切り替えられ、微細流路を熱容量の小さいマイクロ反応セルとしているため、ＤＮＡ増幅は、手作業で行う従来の方式よりはるかに短時間で行うことができる。
【００４８】
ＰＣＲの改良として最近開発されたＩＣＡＮ（登録商標）法は、５０〜６５℃における
任意の一定温度の下にＤＮＡ増幅を短時間で実施できる特徴を有する（特許第3433929号
）。したがって、ＩＣＡＮ法は、本発明のマイクロリアクタでは、簡便な温度管理で済むために好適な増幅技術である。手作業では、１時間かかる本法は、本発明のバイオリアクタにおいては、10〜20分、好ましくは、15分で解析まで終わる。
【００４９】
ＤＮＡ増幅反応は、その他のＰＣＲ変法であってもよく、本発明のマイクロリアクタは、流路の設計変更などによりいずれにも対応できる柔軟性がある。いずれのＤＮＡ増幅反応を使用する場合にも、その技術の詳細は開示されており、当業者は容易に導入することができる。
【００５０】
本発明の増幅方法は、核酸増幅部位の広幅流路内部に核酸非吸着性ビーズが保持されており、核酸増幅部位へ送液するマイクロポンプの送液方向の変更により、流路内で液体が繰り返し前後動して該ビーズをその部位の流路内部で往復または移動させることにより増幅効率を高めることを特徴とする方法である。
【００５１】
本発明の核酸増幅方法について具体的に説明する。図７は、検体と試薬との混合および反応を行う流路構成の一例を示した図である。図示したように、検体送液側流路５４からマイクロポンプ（図示せず）により送液される検体液と、試薬貯留部７からマイクロポンプ１１により送液される試薬は、Ｙ字流路の合流部５８で合流され、後続する核酸増幅部９内の、前記ビーズを保持する広幅流路９ａに送液される。
【００５２】
この広幅流路９ａ内で、増幅反応、例えばＩＣＡＮ反応が行われる。検体液と試薬とを広幅流路９ａ内に充填した後、試薬を送液するマイクロポンプ１１を、送液方向を繰り返し、順方向と逆方向に交互に切り替えるように駆動し、広幅流路９ａ内の合流液を流路９ａ内で前後動させ、ＩＣＡＮ反応を行う。例えば広幅流路９ａの幅が０．２ｍｍ、深さが０．２ｍｍ、液量が２５μｌである場合、振幅２５ｍｍ、周期５秒程度の往復動をさせればよい。この前後動により、ビーズが移動して広幅流路９ａ内の試薬と検体とが活発に拡散混合されるとともに、流路の中心部分と壁面近傍との液体の流速勾配によって、核酸と試薬とが出会う確率が高くなり、反応速度が向上する。したがって、短時間で増幅が進行し、増幅効率を高めることができる。
【００５３】
また、検体送液側の流路５４に逆止弁、能動弁などの弁５７を設けて、混合時にはそれを閉止するとともに、試薬を送液するマイクロポンプ１１によって流路９ａ内の合流液を前後動させると、混合用の別途のマイクロポンプを流路に配置する必要がない。このマイクロポンプ１１には、図６に示したようなピエゾポンプが好適である。図７では一方のマイクロポンプ１１だけで合流液を往復動させているが、弁５７を設けずに、検体送液側のマイクロポンプ（図示せず）と試薬貯留部７側のマイクロポンプ１１とを駆動することにより広幅流路９ａ内の合流液を往復動させるようにしてもよい。
【００５４】
・反応部の作製
マイクロリアクタの核酸増幅部位９は、ポリスチレン基板に反応部内の流路として、例えば幅が０．２ｍｍ、深さが０．２ｍｍのサイズで溝を切削し、形成された広幅の流路に上記ビーズを広幅液溜めの容積を考慮して適切な個数、例えば10〜50個程度充填し、チップ上面となる基板を張り合わせることにより形成される。
【００５５】
・定量送液機構
試薬収容部、核酸増幅部位および検出部の間の流路における適宜の位置に、逆止弁が設けられている。それ以外にも上記のようにクロス・コンタミネーションといった汚染を防止するための適切な位置にも逆止弁を設けることが好ましい。
【００５６】
本マイクロリアクタの流路に使用される逆止弁として、微小球を弁体として、基板に形成した開口をこの微小球の移動により開閉させることで液体の通過を許容および遮断している逆止弁が好ましい。あるいは基板上に積層されその端部が開口の上側に延び出した可撓性基板が、液圧によりその開口の上側を上下動することにより該開口を開閉する方式の逆止弁であってもよい。
【００５７】
液体の逆流を防止して正確に所定の送液を行うために逆止弁を配設することが望ましいが、逆止弁を利用した好適な機構として、図９に示した定量送液機構を挙げることができる。この機構では、逆止弁１６と、疎水性バルブ１３ａとの間の流路（試薬充填流路１５Ａ）には、所定量の試薬が充填される。この試薬充填流路１５Ａから分岐し、駆動液を送液するマイクロポンプ１１に連通する分岐流路１５Ｂが設けられている。
【００５８】
試薬の定量送液は、次のように行われる。図９において最初に逆止弁１６側から、疎水性バルブ１３ａから先へ試薬液６０が通過しない送液圧力で試薬充填流路１５Ａに試薬液６０を供給することにより試薬液６０を充填する。次いで、疎水性バルブ１３ａから先へ試薬液６０が通過することを許容する送液圧力で、マイクロポンプ１１により分岐流路１５Ｂから試薬充填流路１５Ａに向かう方向へ駆動液７０を送液することにより、試薬充填流路１５Ａ内に充填された試薬液６０を送液制御部１５Ａから先へ押し出し、これにより試薬液６０を定量的に送液する。なお、試薬充填流路１５Ａに、大容積の貯留部７を設けることによって、定量のバラツキが小さくなる。なおこの定量送液機構を、試薬の定量混合および検体の定量送液にも使用している。
【００５９】
検出部位
本発明のマイクロリアクタでは、核酸増幅部位よりも下流上に、増幅された核酸を検出するための検出部位が設けられている。微細流路上の検出部位に吸着されたビオチン親和性タンパク質（アビジン、ストレプトアビジン）は、プローブ物質に標識されたビオチン、または遺伝子増幅反応に使用されるプライマーの５'末端に標識されたビオチンと特異
的に結合する。これによりビオチンで標識されたプローブまたは増幅された核酸が本検出部位でトラップされる。
【００６０】
分離された増幅核酸を検出する方法は特に限定されないが、好ましい態様として基本的には以下の工程で行なわれる。すなわち上記マイクロリアクタを用い、
（１）検体であるＤＮＡまたは検体から抽出したＤＮＡ、あるいは検体もしくは検体から抽出したＲＮＡから逆転写反応により合成したｃＤＮＡと、５'位置でビオチン修飾した
プライマーとを、これらの収容部から下流の微細流路へ送液する。核酸増幅部位内の流路で、核酸を増幅する工程、微細流路内で増幅核酸を含む増幅反応液と変性液とを混合し、増幅されたＤＮＡを一本鎖に変性処理する工程、増幅されたＤＮＡを一本鎖に変性処理した処理液を、ビオチン親和性タンパク質を吸着させた微細流路内の検出部位に送液し、前記増幅遺伝子をトラップする工程を経て、増幅核酸をトラップした微細流路内の検出部位に、末端をＦＩＴＣ（fluorescein isothiocyanate）で蛍光標識したプローブＤＮＡを流し、これを固定化した遺伝子にハイブリダイズさせる。（予め増幅遺伝子と蛍光標識したプローブＤＮＡとをハイブリダイズさせたものを検出部位でトラップしてもよい。）
（２）上記微細流路内にＦＩＴＣに特異的に結合する抗ＦＩＴＣ抗体で表面を修飾した金コロイド液を流し、これによりＤＮＡにハイブリダイズしたＦＩＴＣ修飾プローブに、その金コロイドを吸着させる。
（３）上記微細流路の金コロイドの濃度を光学的に測定する。
【００６１】
ポリスチレン基板に形成された微細流路内にストレプトアビジンを固定化する際、特別な化学的処置を行うことは必要としない。単にビオチン親和性タンパク質を増幅反応部位よりも下流の微細流路上に適用して該流路上にビオチン親和性タンパク質を吸着させるだ
けでよい。遺伝子検査用のプローブＤＮＡとして、蛍光標識されたオリゴデオキシヌクレオチドが好ましく用いられる。そのＤＮＡ塩基配列は、検出目的の遺伝子塩基配列の一部分と相補的である配列が選択される。プローブＤＮＡの塩基配列を適切に選択することにより、目的の遺伝子に特異的に結合し、共存するＤＮＡ、バックグラウンドに影響されることなく高感度の検出が可能となる。
【００６２】
プローブを標識する蛍光色素として、公知のＦＩＴＣ、ＲＩＴＣ、ＮＢＤ、Ｃｙ３、Ｃｙ５などの蛍光物質などを用いることができる。特にＦＩＴＣが、抗ＦＩＴＣ抗体、例えば金コロイド抗ＦＩＴＣ抗マウスＩｇＧを入手できることから望ましい。
【００６３】
蛍光色素ＦＩＴＣの蛍光を測定することも可能であるが、蛍光色素の光褪色、バックグラウンドノイズなどを考慮する必要がある。最終的に可視光により、高感度で測定できる方式が好ましい。蛍光測光よりも機器が汎用的であり、妨害因子が少なくデータ処理も容易であるためである。抗ＦＩＴＣ抗マウスＩｇＧを用いた金コロイドの光学検出を利用するかわりに、上記蛍光色素の代わりに上記プローブを西洋わさびパーオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識してもよい。検出にはこの酵素が触媒する発色反応を利用することもできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６４】
本発明の核酸検査用マイクロリアクタについて、最良の態様の一例について以下、記載する。本発明は、この例に限定されず、発明の趣旨を損なわない範囲内で、改変、省略、変更、付加などが可能である。
【００６５】
本発明の核酸検査用マイクロリアクタとして好ましい態様は、
一つのチップ内において、少なくとも
核酸を含有する検体が注入される検体受容部と、
プローブ結合反応、検出反応（遺伝子増幅反応も含む）などに用いる試薬が収容される試薬収容部と、
ポジティブコントロールが収容されるポジティブコントロール収容部と、
ネガティブコントロールが収容されるネガティブコントロール収容部と、
プローブ（例えば、遺伝子増幅反応により増幅された検出対象の遺伝子にハイブリダイズさせるプローブ）が収容されるプローブ収容部と、
これらの各収容部に連通する微細流路と、
前記各収容部および流路内の液体を送液する別途のマイクロポンプに接続可能なポンプ接続部と、
廃液貯留部とが設けられ、
前記チップにポンプ接続部を介してマイクロポンプを接続し、検体受容部に収容された検体と試薬収容部に収容された試薬とを微細流路へ送液し、核酸増幅部位の直前にある合流部で合流させ、核酸増幅部位で生成した反応液とプローブ収容部に収容されたプローブとをその下流側流路にある検出部へ送液し、流路内で混合してプローブと結合（またはハイブリダイゼーション）させ、この反応生成物に基づいて核酸の検出を行い、
ポジティブコントロール収容部に収容されたポジティブコントロールおよびネガティブコントロール収容部に収容されたネガティブコントロールについても同様に上記反応および検出を行うとともに、
上記検体前処理部および検出部位と貫通穴を介して連通しており、マイクロリアクタの底部に設けられた中空室であり、検体の測定の結果生じる廃液などを収容する密閉廃液溜りである廃液貯留部を有するように構成されていることを特徴としている。
【００６６】
ポジティブコントロール、インターナルコントロールを同時に行うことは、特にＰＣＲ法による遺伝子増幅では重要である。ＰＣＲ反応が正しく起きていることのチェックも特に必要とされるためである。例えば何らかの問題が生じた場合、それが設定条件、試薬類
、操作、分析系に由来するか、あるいは検体に由来するかの検証に最適である。ＰＣＲ法は検体中に存在する微量の遺伝子を数十万〜数百万倍以上にも増幅できることから、クロス・コンタミネーションといった汚染による影響は著しく深刻である。偽陽性および偽陰性の判定に有用なこれらのコントロールの設定は、従来の分析技術の慣行に従う。本発明のマイクロリアクタの流路構成によれば、検体とは別個の分析流路において、同一試薬、同一条件のもとで、同時進行で行うことができる。上記のように核酸増幅部位の流路内では、混合液の前後動とビーズの往復または移動によって充分な混合を実現している。したがって核酸、プライマー等の不充分な拡散に基づく増幅不調といった差異が、検体、コントロール間で生じにくい。
【００６７】
廃液貯留部は、完全にマイクロリアクタ内に密閉されており、ディスポーサブル・チップであるため使用後はそのままハザードボックス内に廃棄される。このため検査に携わる者は、臨床検体をマイクロリアクタに注入した後は、検査中、検査後の廃棄においても、一貫して検体などに接触する必要は全くなく、感染からの安全が確保される。
・送液分割手段
本発明において、１つの検体についてポジティブコントロールおよびネガティブコントロールを同時に分析する場合には、試薬類および検体を２以上に分割して、それぞれの分析流路へ送り出す必要がある。送液分割手段はそのために設置される。送液分割手段は、分岐した微細流路、送液制御部１３および逆流防止部から構成される。
【００６８】
送液制御部１３は、正方向（通常、液体をポンプで押出す方向、すなわち下流方向）への送液圧力が所定圧に達するまで液体の通過を遮断し、所定圧以上の送液圧力を加えることにより液体の通過を許容する。また流路内の液体の逆流を防止する逆流防止部は、逆流圧により弁体が流路開口部を閉止する逆止弁か、あるいは弁体変形手段により弁体を流路開口部へ押圧して該開口部を閉止する能動弁からなる。
【００６９】
本発明のマイクロリアクタの微細流路において、前記マイクロポンプ、そのポンプ圧により液体の通過を制御可能な送液制御部と、流路内の液体の逆流を防止する逆流防止部とによって、分岐した流路内における各液体の分割の制御および定量送液がなされる。かかる送液分割手段およびマイクロポンプ１１の働きにより、試薬類および検体は適当な比率で分割される。
【００７０】
以上、本発明を実施するための最良の形態について、その一例として示された図面を参照しながら、遺伝子検査を説明したが、本発明は、かかる態様および例に限定されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【００７１】
【図１】図１は、マイクロリアクタと装置本体とからなる核酸検査装置のシステム概要図である。
【図２】図２は、本発明の一実施形態における核酸検査装置の概略図である。
【図３】図３は、核酸検査用マイクロリアクタ（チップ）の概略図である。なお、マイクロポンプは、本マイクロリアクタとは別途の装置に属する。
【図４】図４は、本発明の核酸検査用マイクロリアクタの一実施形態を示す。その増幅部位に核酸非吸着性ビーズが充填され保持されている。
【図５】図５は、マイクロポンプ１１をマイクロリアクタとは別体とした場合におけるマイクロリアクタのポンプ接続部周辺の構成を示す。（ａ）は、駆動液を送液するポンプ部の構成を示した図であり、（ｂ）は試薬を送液するポンプ部の構成を示した図である。
【図６】図６は、ピエゾポンプを示し、（ａ）は、このポンプの一例を示した断面図、（ｂ）は、その上面図である。（ｃ）は、ピエゾポンプの他の例を示した断面図である。
【図７】図７は、検体と核酸増幅試薬との混合および核酸増幅反応を行う増幅部位の流路構成の一例を示した図である。
【図８】図８は、増幅反応をする増幅部位およびその周辺の流路構成、ならびにその流路内に導入された検体と試薬との合流液の送液を前後方向に繰り返し切り替える制御系統を説明する図である。
【図９】図９は、逆止弁を利用した定量送液機構を説明する図である。
【符号の説明】
【００７２】
１  装置本体
２  マイクロリアクタ（検査チップ）
３  ペルチェ
４  ヒーター
５  ホトダイオード
６  ＬＥＤ
７  試薬貯留部
９  核酸増幅部位（反応部）
９a  核酸増幅部位内流路
１０  駆動液タンク
１１  マイクロポンプ（ピエゾポンプ）
１２  ポンプ接続部
１３  送液制御部
１５  流路
１５A  試薬充填流路
１５B  分岐流路
１６  逆止弁
１８  試薬収容部
１９  検体
２０  検体受容部
２４  駆動液収容部
２５  封止液収容部
２６  空気抜き用流路
３１  試薬
３２  増幅器
３３  D／A変換器
３４  マイクロコンピュータ
３５  タイマー
３６  エアシリンダ
４１  上側基板
４２  基板
４３  振動板
４４  圧電素子
４５  加圧室
４６  第１流路
４７  第２流路
４８  第１液室
４９  第２液室
５４  検体送液側流路
５５  ビーズ
５６  核酸
５７  弁
５８  合流部
６０  試薬液
７０  駆動液
７１  シリコン基板
７２  ポート
７３  ポート
【図１】
2007135504.tif 000003
【図２】
2007135504.tif 000004
【図３】
2007135504.tif 000005
【図４】
2007135504.tif 000006
【図５】
2007135504.tif 000007
【図６】
2007135504.tif 000008
【図７】
2007135504.tif 000009
【図８】
2007135504.tif 000010
【図９】
2007135504.tif 000011