(57)【要約】【課題】  高測定精度又は高検出精度で微粒子を計測することを可能とする微粒子の計測方法及び微粒子の計測装置を提供する。【解決手段】  測定対象の微粒子を蛍光色素により標識し、蛍光微粒子計測部３で散乱光を計測することによって微粒子を計測し、かつ標識した微粒子を含む測定試料を循環させ、繰り返し測定するようにした。【選択図】        図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
水中の微粒子を計測するための微粒子の計測方法であって、測定対象の微粒子を蛍光色素により標識し、蛍光微粒子計測部で微粒子を計測し、かつ標識した微粒子を含む測定試料を循環させ、繰り返し測定することを特徴とする微粒子の計測方法。
【請求項２】
請求項１に記載の微粒子の計測方法において、上記蛍光微粒子計測部を通過した試料を分取し、該分取した試料を再度、上記蛍光計測部に送って計測することを特徴とする微粒子の計測方法。
【請求項３】
水中の微粒子を計測するための微粒子の計測装置であって、蛍光色素により標識した測定対象の微粒子を計測するための蛍光微粒子計測部と、標識した微粒子を含む測定試料を循環させるための循環手段とを備え、上記微粒子を繰り返し測定することができるようにしたことを特徴とする微粒子の計測装置。
【請求項４】
請求項１に記載の微粒子の計測装置において、上記蛍光微粒子計測部を通過した試料の分取・保存装置を備え、該分取した試料を再度、上記蛍光計測部に送って計測することができるようにしたことを特徴とする微粒子の計測装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水中の微粒子を計数、検出する微粒子の計測方法及び微粒子の計測装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、クリプトスポリジウム等の原虫類、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７やレジオネラ菌等の細菌、ウイルス等による水系感染症の発生が大きな社会問題となっている。
【０００３】
これらの水系感染症の集団発生を防ぐためには水処理プロセスにおける原因微生物を高頻度にモニタリングすることが必要不可欠である。
例えば、クリプトスポリジウムは、耐塩素性病原虫であり、従来、上水プロセスでの監視は、オンラインの微粒子カウンタにより行われている。しかしながら、クリプトスポリジウムそのものの測定が技術的に難しく確立された段階になく、しかもオンラインでの計測は難しいことから、ろ過水の濁度を代替指標として、微粒子計側装置で測定し、これによって上水の水質管理を行っている［「水道におけるクリプトスポリジウム暫定対策指針」厚生労働省（２００３）］。
【０００４】
ここで、上水分野で用いられている微粒子計側装置で、微粒子の個数濃度の計測下限は１個／１００ｍＬである。
検出対象とするクリプトスポリジウムを、蛍光色素で標識したモノクローナル抗体と結合させ、蛍光散乱光を測定すれば、原理的には、クリプトスポリジウムの検出は可能である（例えば、特許文献１）。
【０００５】
しかし、測定試料水中の個数濃度が１個／１００ｍＬ以下と低い場合が多く、微粒子の個数濃度の計測下限を下回ってしまい、測定精度又は検出精度が満足できるものではなく、その向上が要請されていた。
このように、クリプトスポリジウム等の微生物を高測定精度又は高検出精度で検出することができるようにする改良が望まれていた。
【特許文献１】特開平１０−４０３９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記事情に対して、本発明は、高測定精度又は高検出精度で微粒子を計測することを可能とする微粒子の計測方法及び微粒子の計測装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するため、本発明は、水中の微粒子を計測するための微粒子の計測方法であって、測定対象の微粒子を蛍光色素により標識し、蛍光微粒子計測部で微粒子を計測し、かつ標識した微粒子を含む測定試料を循環させ、繰り返し測定することを特徴とする。
蛍光微粒子計測部で微粒子を計測する場合、例えば散乱光を用いる方法がある。
本発明に係る微粒子の計測方法は、別の実施の形態において、上記蛍光微粒子計測部を通過した試料を分取し、該分取した試料を再度、上記蛍光計測部に送って計測することができるようにしている。
【０００８】
本発明は、別の側面で、水中の微粒子を計測するための微粒子の計測装置であって、蛍光色素により標識した測定対象の微粒子を計測するための蛍光微粒子計測部と、標識した微粒子を含む測定試料を循環させるための循環手段とを備え、上記微粒子を繰り返し測定することができるようにしたことを特徴とする。
本発明に係る微粒子の計測方法は、別の実施の形態において、上記蛍光微粒子計測部を通過した試料の分取・保存装置を備え、該分取した試料を再度、上記蛍光計測部に送って計測することができるようにしている。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、検出対象粒子の個数濃度の低い試料でも検出精度の向上を図ることができるようにした微粒子の計測方法及び微粒子の計測装置が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下に、本発明に係る微粒子の計測方法及び微粒子の計測装置について、その実施の形態を参照しながらさらに詳細に説明する。
【００１１】
実施の形態（その１）
図１に本発明に係る微粒子の計測方法を実施する微粒子の計測装置について、その一実施の形態（その１）を概念的に示す。
実施の形態（その１）に係る微粒子の計測装置は、送液ポンプ１、電磁弁２，５，６、蛍光微粒子計測部３、調整槽４、及び循環ポンプ７を含む。これらの構成要素を含む本実施の形態（その１）に係る微粒子の計測装置を使用して、本発明に係る微粒子の計測方法を実施する手順について以下に説明する。
【００１２】
まず、本発明に係る微粒子の計測方法では、測定対象の微粒子を蛍光色素により標識したものを計測対象としている。一般的には、蛍光色素で標識した抗体と結合反応させた微粒子をその計測対象としている。
抗体自体は、当業者にとって公知の手法によって得ることができる。抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体などその種類を問わず、計数目定の特定微生物に特異性を有するものであれば用いることができるが、一般にモノクローナル抗体は特異性に優れているので好ましい。
【００１３】
また、抗体の蛍光標識に用いられる色素としては、蛍光を示す公知のものを使用することができる。
微粒子は、計測対象となる細菌等の微生物由来のものである。例えば、クリプトスポリジウムオーシストである。
なお、本明細書中で「計測」の語は、特に制限のない限り、「検出」も含む概念として用いられている。
【００１４】
図１に戻って、例えば、蛍光色素で標識したモノクローナル抗体と結合反応させたクリプトスポリジウムオーシストを含む試料水をポンプ１にて、電磁弁２を経由して蛍光微粒子計測部３に送る。
蛍光微粒子計測部３では、試料水（測定試料）は、吸引されてフローセルに導入され、一定時間又は一定量の試料水をフローさせ、その間に流れた粒子数を計数する。蛍光微粒子の測定は、前方散乱蛍光、側方散乱蛍光のいずれを測定する方法でもよい。もっとも、光源からの光ビームの強度分布を均一化してあることが好ましい。
【００１５】
測定を行った後、電磁弁５を閉じて、調整槽４に一時、試料水を貯留する。
調整槽４は、蛍光微粒子計測部へ再度循環ポンプを用いて試料水を安定に送液するため数ｍL程度の試料液量を保持するために用いる。
次に電磁弁６を開き、電磁弁２（２方切替３方弁）を切替える。これによって、調整槽４、電磁弁６、循環ポンプ７、電磁弁２を経て蛍光微粒子計測部３から調整槽４に戻る閉ループを形成する。
この閉ループ内で、循環ポンプ７により試料水を循環させて測定を行う。これによって、個数濃度の低い蛍光微粒子の計測（検出）確率を向上させ、計測（検出）精度を向上させることができる。
【００１６】
実施の形態（その２）
次に、図２に本発明に係る微粒子の計測方法を実施する微粒子の計測装置について、他の実施の形態（その２）を概念的に示す。
実施の形態（その２）に係る微粒子の計測装置は、送液ポンプ１、電磁弁２，９，６、蛍光微粒子計測部３、試料分取・保存装置、及び循環ポンプ７を含む。これらの構成要素を含む本実施の形態（その２）に係る微粒子の計測装置を使用して、本発明に係る微粒子の計測方法を実施する手順について以下に説明する。
【００１７】
まず、本実施の形態（その２）では、測定対象の微粒子を蛍光色素により標識したものを計測対象としている点では、図１の実施の形態（その１）と、同様である。また、図１の実施の形態（その１）と同一参照番号で示した構成要素は、本実施の形態（その２）でも同様の構成を採用することができ、その作用・機能も実質的に変わるところはない。
【００１８】
例えば、蛍光色素で標識したモノクローナル抗体と結合反応させたクリプトスポリジウムオーシストを含む試料水をポンプ１にて蛍光微粒子計測部３に送る。
そして、測定を行った後、試料分取・保存装置８に所定量毎に分取・保存する。
試料分取・保存装置８は、矢印Ａの方向に回転可能なデイスク上に複数の保存容器１０を備えた構成を持つ。各々の保存容器１０に分取した後、例えば、任意の保存容器１０からの試料のみ取り出し、循環ポンプ７で吸引させる。
【００１９】
ここで、電磁弁（２方切替３方弁）９を切り替え、循環ポンプ７、電磁弁２、蛍光微粒子計測部３から、電磁弁９に戻るループを形成することができる。このようにして、実施の形態（その１）と同様に、試料水を循環ポンプ７により循環させて測定を行うことにより、個数濃度の低い蛍光微粒子の計測（検出）確率を向上させ、計測（検出）精度を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本発明に係る微粒子の計測方法を実施する微粒子の計測装置について、その一実施の形態（その１）を示す概念図である。
【図２】本発明に係る微粒子の計測方法を実施する微粒子の計測装置について、他の実施の形態（その２）を示す概念図である。
【符号の説明】
【００２１】
１      送液ポンプ
２      ２方切替３方弁
３      蛍光微粒子計測部
４      調整槽
５，６  電磁弁
７      循環ポンプ
８      試料分取・保存装置
９      ２方切替３方弁
【図１】
2007033354.tif 000003
【図２】
2007033354.tif 000004