(57)【要約】【課題】  高収率で目標生成物を生成し、原料から抽出物を完全に抽出し、環境への抽出剤の放出をなくすことができる方法を提供する。【解決手段】アルグラビンを、再結晶化、アミノ化およびハイドロクロライド化してアミノアルグラビンハイドロクロライドを生成し、これをさらに再結晶化、乾燥、凍結乾燥および高定性同定するに際し、前記アミノ化が、結晶性アルグラビンをアルコールに溶解することによって行われ、該溶液のｐＨが１２.３〜１２.４に達するまでジメチルアミンを溶液に添加しながらなされるものであり、アミノアルグラビン含有アミノアルグラビンハイドロクロライドを抽出する前の段階において、クロロホルムを充填し、残った水を除去し、前記溶液を濾過し、クロロホルムを蒸発させてアルコールを加え、次いで、この溶液のｐＨが５.０〜５.５に達するまで前記溶液を塩素によって液内通気し、前記アルコールを蒸発させて酢酸エチルを添加する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
初期生成物からの樹脂を抽出することと、これを価値のない物質から精製することと、カラムクロマトグラフィの方法によって前記樹脂を別々の成分に分離して技術的なアルグラビンを生成し、この技術的なアルグラビンをさらに、再結晶化、アミノ化およびハイドロクロライド化してアミノアルグラビンハイドロクロライドを生成し、これをさらに再結晶化、乾燥、凍結乾燥および高定性同定することを含む、地域特有の植物であるＡｒｔｅｍｓｉａ  ｇｌａｂｅｌｌａ  Ｋａｒ．  ｅｔ  Ｋｉｒ.から得られる凍結乾燥ハイドロクロライド−１β，１０β−エポキシ−１３−ジメチルアミノ−グアヤ−３（４）−エン−６，１２−オリドの生成方法であって、
前記アミノ化が、結晶性アルグラビンをアルコールに溶解することによって行われ、該溶液のｐＨが１２.３〜１２.４に達するまでジメチルアミンを前記溶液に添加しながらなされるものであり、アミノアルグラビン含有アミノアルグラビンハイドロクロライドを抽出する前の段階において、アルコールを蒸留してクロロホルムを充填し、残った水を除去し、前記溶液を濾過し、前記クロロホルムを蒸発させてアルコールを加え、次いでこの溶液のｐＨが５.０〜５.５に達するまで前記溶液を塩素によって液内通気し、前記アルコールを蒸発させて酢酸エチルを添加することを特徴とする、生成方法。
【請求項２】
凍結乾燥アルグラビンの高品質同定をＩＲ分光法によって行うことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は製薬産業すなわちセスキテルペンラクトンに関し、特に、以下の式
【化１】
2007137890.tif 000002
で表され、抗腫瘍活性を有し、悪性腫瘍に対する化学治療用の新規な製剤の開発に用いることが可能な凍結乾燥ハイドロクロライド−１β，１０β−エポキシ−１３−ジメチルアミノ−グアヤ−３（４）−エン−６，１２−オリドの生成方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗腫瘍活性を有する凍結乾燥アルグラビン（ａｒｇｌａｂｉｎ）を、天然材料すなわち、地域特有の植物であるＡｒｔｅｍｉｓｉａ  ｇｌａｂｅｌｌａ  Ｋａｒ．  ｅｔ  Ｋｉｒ.の花粉かごおよび葉から生成する方法が、カザフスタン共和国の仮特許第５２７７号、国際分類Ｃ０７Ｄ  ３０７／９３、Ａ６１Ｋ  ３１／３６５（１９９７）に記載されていた。
【０００３】
この方法によれば、まず乾式粉砕した天然材料を抽出器にて溶剤で処理し、次いでこの抽出した物質（樹脂）を、エチルアルコールの６０％水溶液によって処理することで価値のない生成物から精製する。精製段階において生成される樹脂を、シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィの方法によって別々の成分に分ける。前記カラムをベンゼンで溶出し、アルグラビンを含有する画分を分離する。ベンゼンを蒸留し、技術的なアルグラビンを生成する。これをさらに結晶化し、アミノ化し、ハイドロクロライド化する。この方法では、アミノ化はジメチルアミンによって行われ、このときアルグラビン含有溶液が生成される。次いでアミノアルグラビンのアルコール溶液を塩素水素化物によって液内通気し、目標生成物であるアミノアルグラビンハイドロクロライドを生成する。アミノ化反応およびハイドロクロライド化反応は、薄層クロマトグラフィの方法によって制御される。結晶化によってアミノアルグラビンの技術的なハイドロクロライドを精製し、続いて乾燥させて凍結乾燥させる。
【０００４】
上述した方法の欠点は、アミノ化反応およびハイドロクロライド化反応における目標生成物の収率が低めであることである。
【０００５】
例えば、抽出ゾーンにジャケットのある抽出器と、蒸発器と、凝縮器と、加熱器とを備える装置などの別の装置を抽出に使用する（本願発明者による旧ソビエト社会主義共和国連邦特許証第１１１７０７１号、国際分類Ｂ０１Ｄ  １１／０２（１９８４））。
【０００６】
本願発明者による旧ソビエト社会主義共和国連邦特許証第６７０３１０号、国際分類Ｂ０１Ｄ  １１／０２（１９７９）には、蒸発器と、凝縮器と、抽出器とを備える気−液抽出装置が記載されている。この装置では、蒸発器からの抽出剤（ｅｘｔｒａｇｅｎｔ）蒸気の凝縮時に生成される熱によって、抽出された混合物を加熱する。前記熱は抽出器の壁を介して伝達される。
【０００７】
これらの装置はいずれも、高い生産性を達成できない稼働周期性に問題がある。また、これらの装置では廃棄材料から抽出剤を抽出しておらず、抽出剤の大幅な損失につながっている。本願発明者による旧ソビエト社会主義共和国連邦特許証第１１１７０７１号では、さらに電力を供給することによって反応用混合物を加熱しており、抽出生成工程における消費電力が増している。
【０００８】
本願発明者による旧ソビエト社会主義共和国連邦特許証第１４２６６１１、国際分類Ｂ０１Ｄ  １１／００（１９８８）には、抽出の最終段階において温かい不活性ガスによって固体相から抽出剤を蒸留することができ、本体と、交換可能な容器のある抽出チャンバと、蒸発器と、凝縮器とを備える固−液系において抽出を行うための装置が記載されている。この装置でも連続稼働は行われず、それぞれ生産性は低い。その上、凝縮器を水冷しながら温かい気体で揮発性の抽出剤を蒸留すると、抽出剤が全て凝縮器にて凝縮されないまま気体と一緒に取り除かれてしまう可能性がある。例えば、我々の計算によれば、初期温度７０℃の気体を用いてクロロホルムを蒸留し、これを凝縮器内で２０℃まで冷却するためには、クロロホルム１ｋｇを気化してこれを凝縮するのに５ｍ3の気体が必要であり、気体中のクロロホルムの分圧は気体１ｍ3中にクロロホルムが１ｋｇ含まれる換算となる ２０℃での飽和分圧以上でなければならない。したがって、上記の例における気体中のクロロホルムの分圧は、凝縮に必要な分圧の５分の１という低さである。すなわち、凝縮器での凝縮は不可能であり、クロロホルムは全て気体と一緒に凝縮器から排出されてしまう。
【０００９】
例えば、廃棄材料を熱保持剤と接触させる機能と、抽出剤と熱保持剤とを分離するための分離器と、抽出剤蒸気用の凝縮器とを備える、固体物質からの溶剤の除去方法および装置など、廃棄材料から溶剤を除去するための特別な装置もある（欧州特許出願公開第０３５６３３８号明細書、国際分類Ｂ０１Ｄ  １１／００（１９９０））。
【００１０】
このような装置は複雑かつエネルギー消費量が多い上、廃棄材料を抽出装置から他の装置に再装填する場合、抽出剤の損失を防止することが不可能であるか、あるいは再装填用の複雑な密閉装置を使用する必要がある。
【００１１】
本願請求の範囲に記載の装置に最も近い装置は、開口を有する隔壁によって３つ以上のセクションに仕切られた円筒形本体と、分離室及び湿度室と、本体と同軸に装着されたシャフトとからなり、再装填用取鍋、混合用ブレードおよびローダーが前記シャフトに取り付けられている連続稼働式の乾燥天然材料用セクションブレード（ｂｌａｄｅ）抽出器である（本願発明者による旧ソビエト社会主義共和国連邦特許証第１６２７２０８号、国際分類Ｂ０１Ｄ  １１／０２（１９９１））。
【００１２】
この設計では上述した装置類と比べると生産性が高まるが、この程度の増加では不十分である。この設計の欠点は、廃棄材料から抽出剤を抽出することができず、抽出剤の損失につながるという、抽出剤の消費量が多いことにもある。他の周知の装置を使用して廃棄材料から抽出剤を抽出すると、設置費用が大幅にかさむ上、抽出剤を環境中に放出することなく含水廃棄原料の再装填および移動を行う装置を追加する必要がある。
【特許文献１】欧州特許出願公開第０３５６３３８号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の目的は、高収率で目標生成物を生成し、原料から抽出物を完全に抽出し、抽出装置の生産性を高め、電力を抑え、抽出剤の損失を最小限にし、環境への抽出剤の放出をなくし、よって環境的に安全な生産を保証することができる方法および装置を開発することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明によれば、上記の課題は請求の範囲における請求項１によって解決される。本発明の好ましい実施例については、従属請求項において挙げてある。
【００１５】
地域特有の植物であるＡｒｔｅｍｉｓｉａ  ｇｌａｂｅｌｌａ  Ｋａｒ．  ｅｔ  Ｋｉｒ.から凍結乾燥させた凍結乾燥ハイドロクロライド−１β，１０β−エポキシ−１３−ジメチルアミノ−グアヤ−３（４）−エン−６，１２−オリド、すなわち抗腫瘍製剤アルグラビンの生成方法は、原料から樹脂を抽出することと、これを価値のない副生成物から精製することと、カラムクロマトグラフィによって前記樹脂を別々の成分に分離して技術的なアルグラビンを生成することとを含み、この技術的なアルグラビンをさらに、再結晶化、アミノ化およびハイドロクロライド化してアミノアルグラビンハイドロクロライドを生成し、これをさらに再結晶化、乾燥、凍結乾燥および高品質同定する。ここで、好ましいアミノ化は、結晶性アルグラビンのアルコール溶液を用いて、前記アルコール溶液にそのｐＨが  １２.３〜１２.４に達するまでジメチルアミンを添加することによって行われ、アミノアルグラビンを含有している前記溶液からアミノアルグラビンハイドロクロライドを抽出するためには、アルコールを蒸留してクロロホルムを充填し、残った水を除去し、前記溶液を濾過し、前記クロロホルムを蒸発させてアルコールを加え、次いでこの溶液を塩素水素化物でｐＨ５.０〜５.５の溶液に液内通気し、アルコールを蒸発させて酢酸エチルを添加する。
【００１６】
ＩＲ分光法によってアルグラビンの高品質同定を実施すると好ましい。
【００１７】
請求の範囲に記載の方法において、特定のｐＨ−溶液動作パラメータ下でのアミノ化段階およびハイドロクロライド化段階によって、高い収率の１３−ジメチルアミノアルグラビンおよび１３−ジメチルアミノアルグラビンハイドロクロライド反応物が得られる。したがって、目標生成物が高生成量で得られる。
【００１８】
また、本発明は、この方法を実施するための装置も含む。本発明の技術的な成果は、開口を有する隔壁によって３つ以上のセクションに仕切られた円筒形本体と、分離室および湿度室と、本体と同軸に装着されたシャフトとを有し、このシャフトに、再装填用取鍋、ブレードミキサおよびローダーが取り付けられた水平抽出器を備える、天然の原料から凍結乾燥アルグラビンを抽出するための装置によって達成される。前記抽出器がさらに、抽出物を廃棄材料から除去するための被加熱壁を有するセクションと、乾燥廃棄材料収集器とを有し、接触セクションの壁が水冷され、前記セクションの壁の蒸気−気体媒体と接触した状態にある上側部分の冷却用ジャケットのキャビティと、この壁の抽出混合物と接触した状態にある下側部分の冷却用ジャケットのキャビティとが、互いに接続されておらず、気体循環系が抽出器のキャビティに接続され、前記系が、乾燥廃棄材料収集器に接続された気体供給用の分岐管と、抽出器の接触セクションのキャビティに接続された気体除去用の分岐管と、低温凝縮器と、換気装置とを有し、分離室内に配置された親ねじが抽出器の前記シャフトに接続され、分離室と湿度室との間の隔壁の上部にさらに開口が設けられている。
【００１９】
本発明のある請求項によれば、抽出器の円筒形本体は傾斜した状態で装着されている。
【００２０】
本発明の他の請求項は、抽出器の分離室から抽出物を除去するための分岐管が、蒸発器および凝縮器と直列に接続された濾過用遠心分離器に接続されていることである。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の利点は、周知の装置と比較すると、本設計では、抽出器内で抽出剤蒸気を凝縮し、この凝縮による熱を抽出した混合物の加熱に利用するため、抽出した混合物が加熱され、その温度が所望のレベルに維持されることである。これによって、抽出剤の消費量および電力を抑えて抽出生産性を高めることができる。
【００２２】
この装置は、抽出剤を廃棄材料から除去するように設計された被加熱壁を有する、好ましい別のセクションを含んでいる。これによって抽出剤の損失量を抑えることができる。
【００２３】
この装置には気体循環用の系が設けられている。この系は、原料の孔に含まれて抽出器に流入する空気を除去し、よって抽出剤蒸気が大気に放出されるのを防止して抽出剤の損失をなくす他、乾燥廃棄材料を排出する前に、その孔に含まれた抽出剤蒸気との入れ替え用に供給される空気または他の気体を除去する。これも抽出剤の損失を抑えることになる。
【００２４】
この装置は、抽出物の精製後、これを抽出器から取り出す前に沈殿した粒子のみならず浮遊粒子も分離室から連続除去する。
【００２５】
好ましい技術では、抽出剤を環境中に放出したり大気への放出前に抽出器から濃い気体を沈殿（ｄｅｅｐ  ｇａｓｅｓ  ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）させたりすることなく、環境的に安全な状態で装置を稼働させる。
【００２６】
本抽出器では、最適な抽出温度で、原料および抽出剤を向流させて抽出混合物を連続攪拌しながら、液体抽出剤によって最終生成物を多段抽出する連続プロセスが行われる。これによって、最終生成物を原料から最も完全に抽出し、抽出剤の損失なく生産性を最大限にすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
以下、本発明の実施例について本発明を詳細に説明する。
【００２８】
図１は抽出器の長手方向断面図を示している。図２は、原料から凍結乾燥アルグラビンを抽出するための装置のスキームを示している。
【００２９】
この抽出器は、垂直隔壁２および３によって複数のセクションに区切られた円筒形の傾斜した本体１を備えている。隔壁４は、第１のセクションを分離室５と湿度室６とに分割している。本体の軸に沿って回転軸７が装着されており、これに再装填用取鍋８とブレードミキサ９とが取り付けられている。分離室５（沈降装置）に、本体との間にわずかに隙間を設けて環状親ねじを配置する。抽出器の上側の先端にある親ねじの内側エッジは液体中に浸されている。隔壁４の上側部分には開口１１が形成されている。この開口の下側エッジは液面と同じ高さに位置している。また、隔壁４の下側部分にも開口１２が形成されている。原料用のフィーダーおよびビンを有する装填装置１３が、抽出器の第１のセクションにおいて湿度室６の上に配置されている。隔壁２には２個の開口７が設けられている。上側の開口１４は原料を次のセクションに再装填するためのものであり、メッシュで閉じられた下側の開口１５は抽出剤の移動用に設計されているものである。
【００３０】
抽出器には１つまたは複数の接触セクション１６を設けることができる。原料の動きに対して最後に位置するセクションすなわち接触セクション１７では、隔壁３に開口が設けられておらず、前記隔壁３は抽出混合物の高さよりも低い位置にある部分で密封されている。
【００３１】
抽出器の本体１の接触セクション１６および１７に近い位置の上には、ウォータージャケット１８および１９が形成されている。ウォータージャケット１８は、抽出器内の抽出された混合物の高さよりも高い位置に配置されており、ウォータージャケット１９はその高さよりも下に配置されている。これら２つのジャケットのキャビティは互いに連通しておらず、冷却水の供給および排水用に別々の分岐管を有している。
【００３２】
原料の動きに沿って最後の接触セクション１７に続いて、廃棄原料から抽出剤を除去するように設計された別のセクション２０（乾燥機）が設けられている。下側部分が廃棄材料と接触した状態にあることの多いセクション２０の本体の表面には、例えば電気加熱器などの加熱器２１が載置されている。セクション２０内には乾燥廃棄材料の収集器２２が設置され、この収集器にヒンジによって外側に可屈の格子付ウィンドウ２３が設けられている。収集器２２の排出ポートは、容易に取り除かれる蓋材２４によって閉じられている。導管２５は、空気または不活性ガスを供給し、これを収集器２２内の廃棄材料に通すように設計されている。例えば加熱器２１または特別な気体加熱器によって気体を加熱する。本体１の接触セクション１６に近い上端には、抽出器から気体を除去するための分岐管２６が設けられている。前記分岐管は、冷蔵庫から供給される冷却液によって冷却される低温凝縮器２７と接続されている。換気装置２８は気体を抜き出すように設計されている。
【００３３】
抽出器は以下のように動作する。
【００３４】
乾式粉砕した天然の原料（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｇｌａｂｅｌｌａ  Ｋａｒ．  ｅｔ  Ｋｉｒ．の花粉かごおよび葉）をフィーダー１６経由で湿度室６に供給し、ここでミキサ９によって抽出剤と混合する。抽出剤を含浸させた原料を、隔壁２に設けられたポート１４経由で再装填用取鍋８によって接触セクション１６に再装填し、ここでミキサ９によって連続的に抽出剤と混合し、次のセクションに移動させる。さらに、この原料を再装填用取鍋８によってセクション１７に送り、ここに新たに生成した抽出剤を反対側から供給する。セクション１７では、新たに生成した溶剤で原料を洗浄し、目標生成物の残渣から放出し、再装填用取鍋によってセクション２０に供給し、ここで高温の壁と接触させつつ廃棄材料から抽出剤を蒸発させる。ミキサ９を用いて廃棄材料を混合し、かつ均一な乾燥を達成してこれを廃棄材料収集器２２に送り、ここで格子２３の下から供給される加熱空気または不活性ガスによって抽出剤蒸気を廃棄材料の孔から移動させる。収集器２２が充満状態になった時点で、空気または不活性ガスを通した乾燥廃棄材料を排出する。これを行うために、格子２３を下げて蓋材２１を開放する。抽出剤蒸気は、隔壁４に設けられた上側の開口を介して乾燥セクション２０からセクション１７へと流動し、ここで上側のウォータージャケット１８を介して流れる水で水冷した表面ならびにこれを加熱している抽出された混合物の表面にて前記蒸気の大半を凝縮する。凝縮された抽出剤は抽出された抽出剤混合物に向かって流動する。抽出剤蒸気の残渣は、空気と一緒に隔壁に設けられた上側の開口を介して接触セクション１６に流入し、ここで抽出器から取り出された蒸気−気体混合物の温度に対応する部分飽和圧力まで凝縮される。下側のウォータージャケット１９に供給される冷却水を用いて、抽出された混合物の温度を調節する。少量の抽出剤蒸気を含有する抽出器からの気体が、分岐管２６を介して、冷凍機からの冷却液によって冷却された低温凝縮器２７に送られる。前記凝縮器では、抽出剤蒸気はほぼ完全に気体から凝縮される。凝縮器２７からの凝縮物を抽出器に戻す。抽出剤蒸気から清浄した気体を、排出換気装置２８経由で大気に放出する。原料の孔に含まれて一緒に抽出器に流入する空気を同様にして分岐管２６経由で抜き出す。
【００３５】
新たに生成された抽出剤は、廃棄材料の排出装置付近でセクション１７に入る。乾燥セクション２０からの凝縮された抽出剤も同じ場所まで流動する。反応器内の抽出剤は、隔壁に形成された下側の開口１５経由でセクション間を原料流と逆方向に移動する。これらの開口を覆う格子によって、原料が逆に移動するのを防止する。湿度室６から、抽出剤が隔壁４に形成された下側の開口を介して分離室５に流入し、ここで精製される。重量のある粒子は下に沈み、軽い粒子は浮き上がり、環状の親ねじによって分離室から湿度室へ除去される。浮遊粒子は上側の開口１１を介して除去され、沈殿した粒子は下側の開口１２を介して除去される。図２に示すように、精製された抽出物（抽出した物質で飽和した抽出剤）を、抽出器の軸に近い領域から移動させ、さらに処理できるようにする。
【００３６】
図２に示すスキームによれば、抽出装置は、共通の駆動部３を持つ、廃棄材料から抽出剤を除去するための被加熱壁を有する別のセクション２を含む連続稼働式向流セクション抽出器１を備えている。ローダーは、中間バンカー４と、駆動部６を有するフィーダー５とを備えており、抽出器に導管７が装着されている。原料を含む被変更機能８が中間バンカー４の上に配置されている。被変更機能としては、標準的なクラフト袋を用いている。ポンプ９は、抽出器１から抽出器上に位置する濾過用遠心分離器１０に抽出剤を供給するためのものであり、この遠心分離器にて抽出物から浮遊粒子が除去される。遠心分離器にて抽出物から沈降した粒子は、遠心分離器から最終段階の抽出器に排出される。次いで、抽出物はフィルムタイプの蒸発器１１に供給され、この蒸発器は、凝縮用にビルトイン式の蒸気発生装置を備えている。凝縮された抽出物は周期的に凝縮器１１から可変機能１２に注出される。蒸発器１１は水冷凝縮器１３に接続され、この凝縮器から蒸留された抽出剤がバッファタンク１９に送出される。純粋な抽出剤がタンク１９から抽出器の最終段階に送出され、抽出剤から目標物質を抽出しながら原料流とは逆方向に第１段まで移動される。タンク１９には、液面計と、流量計と、抽出剤および流れの調節装置とが取り付けられている。
【００３７】
抽出器１には、水冷された凝縮器１４と、フレオン冷凍機用の蒸発器としての役割も果たし、その機能には家庭用冷蔵庫のフリーザーを用いているフリーザー１５と、換気装置１７とを含む、気体除去用の系が取り付けられている。抽出器からの気体は凝縮器に送られ、ここで過剰の抽出剤蒸気、すなわち抽出器の壁で凝縮されなかった蒸気を凝縮する。さらに、この気体はフリーザー１５に流入し、フリーザーの壁の温度は、冷凍機１６によって−１５〜２０℃に維持されて、気体中に残留していた抽出剤蒸気はこの壁面で凝縮される。次に、実用的にみて完全に抽出剤蒸気を取り除いた気体を、換気装置１７によって建物内の通常の換気システムに排出する。
【００３８】
このようにして処理した乾燥原料は、容易に取り外し可能な可変機能１８（標準的なクラフト袋）に回収される。
【００３９】
方向決め、制御、調節、信号発生および機器保護のための装置が、制御パネル２０上に載置されている。装置の各ユニットはすべて低圧下で動作するため、蒸気が敷地内に滲出することはない。
【００４０】
この装置は自己のフレームに装着されており、特別な土台構造を必要としない。その操作は特別に訓練を行ったオペレータ１〜２名によってなされる。
【００４１】
装置をこのように設計することで、装置を分解せず、かつ抽出剤が環境中に放出されて失われることなく、装置から抽出剤を完全に除去することができ、装置を修理または原料あるいは抽出剤の交換可能なようにしておけば原料からほぼ完全に（９５〜９８％）抽出剤を除去することができる。
【００４２】
装置をこのように設計することで、原料または抽出剤を取り出さずに、抽出剤を環境に放出することもなく、装置の動作を監視して再調整することができる。
【００４３】
作業日の間に、乾燥原料に対して７％に相当する樹脂０．５３９ｋｇ（抽出した物質の全量）を生成する。生成した樹脂をさらに第II段階に送り、ここで副物質を除去して精製する。
【００４４】
この目的のため、６０℃に加熱したエチルアルコール１．０７８リットルで樹脂を処理し、この樹脂を前記アルコールに混合しながら溶解する。次いで加熱された蒸留水を、エチルアルコールと水との容量比２：１で注ぐ。混合物を３０分間慎重に混合した後、混合せずに室温にて２４時間保持する。副物質はこの時間に沈殿する。２４時間の期間に、ミキサによって沈降物を混合し、アルコール−水溶液を真空にて濾過する。アルコール含量６８〜７０％の水との共沸混合物としてのアルコールを、得られた濾過物質から真空下にて温度５０〜５２℃で蒸留する。樹脂の収率は２８６ｇである。
【００４５】
第III段階では、第II段階で生成した樹脂をカラムクロマトグラフィによって成分ごとに分離する。加圧下でカラムにベンゼンを供給し、アルグラビン含有ベンゼン画分を分離する。ベンゼン画分中のアルグラビンの存在は、Ｓｉｌｕｆｏｌ板上の薄層クロマトグラフィの方法によって判断する。画分からベンゼンを蒸留すると、黄色の油との混合物を含む技術的なアルグラビン３３．１ｇが残る。これは処理した樹脂の１１．７％に等しい。
【００４６】
第IV段階は、アルグラビン再結晶化プロセスである。このために、水浴にて加熱しながら生成物（ｋｇ）−溶剤（ｌ）比１：１０で技術的なアルグラビンをヘキサンに溶解し、真空下にて濾過する。室温まで冷却する間に、アルグラビンの結晶が濾液から単離されはじめる。ヘキサンを完全に除去した後、アルグラビン収率は２１ｇ（６３％）となる。
【００４７】
第Ｖ段階および第VI段階では、アルグラビンをアミノ化およびハイドロクロライド化する。アミノアルグラビンを生成するために、結晶性アルグラビンをアルコールに溶解する。次に、ｐＨが１２．３〜１２．４になるまでアルコール溶液にジメチルアミンを添加する。次いでアミノアルグラビン含有溶液からアルコールを蒸留し、クロロホルムを注ぐ。水の大部分を分液漏斗によって分離する。残った少量の水については、全透明度が達成されるまでいずれか１つの乾燥剤（ＭｇＳＯ4またはＮａ2ＳＯ4）によって除去する。処理時間は約１２〜１４時間である。溶液を濾過し、クロロホルムを蒸発させ、アルコールを加える。次に、ｐＨが５．０〜５．５になるまで前記溶液を塩素水素化物で液内通気する。アルコールを溶液から蒸発させて酢酸エチルを加える。１３−ジメチルアミノアルグラビンハイドロクロライドの結晶を沈殿させる。その収率は１０５％である。乾燥するまで溶液を蒸発させ、粉末状の技術的なアミノアルグラビンハイドロクロライドを生成する。
【００４８】
第VII段階では、分画再結晶によってアミノアルグラビンハイドロクロライド（技術的な生成物）を精製する。この生成物をクロロホルムに溶解し、次いで前記クロロホルムを回転蒸発器にて除去する。強く攪拌しながら、残りの樹脂に酢酸エチルを添加する。沈殿したアミノアルグラビンハイドロクロライド沈降物を真空−ピストンによって濾過し、アルグラビン凍結乾燥製剤の生成に使用する。アルグラビン−凍結乾燥物（目標生成物）の収率は２０ｇ（この段階で９５％）である。
【００４９】
最終のVIII段階では、生成した目標生成物を真空下で無水物（ａｎｈｉｄｒｏｎｅ）上にて乾燥させ、水１００ｍｌあたり乾燥物質２ｇの比率で無熱性蒸留水に溶解する。生成された溶液を以下の方法のうちいずれか１つを用いて凍結乾燥させる。
【００５０】
方法１  生成された水溶液を、Ｍｉｌｌｉｐｏｒフィルタを備えたタンクにて綿ガーゼタンポンに通す。この溶液を濾過用プレートでトリミングした滅菌Ｍｉｌｌｉｐｏｒによって濾過し、滅菌したガラス容器に入れる。次に、溶液を真空によってガラス容器から計量ビュレットにポンプ送出し、このビュレットから２ｍｌのボトルに注いで凍結乾燥装置ＫＳ−３０にて乾燥させる。これを行うために、ボトルをトレー上に載せておく。トレーの上がボトルで一杯になった時点でこれを滅菌シートで包み、凍結カウンタ（ｆｒｅｅｚｉｎｇ  ｃｏｕｎｔｅｒ）に載せて２４時間以上−４０℃で固める。この手順の後、乾燥を開始する。乾燥開始から２時間以内に、棚の加熱部分をオンにする。棚を徐々に＋５０±５℃まで加熱する。生成物は乾燥開始から１２〜１３時間で氷点下から０℃より高い温度になる。生成物の最終温度は＋６０℃を超えないようにする。
【００５１】
乾燥時間は２４時間である。凍結乾燥後、製剤の入ったボトルに速やかにコルクの栓をし、キャップで覆って転がしておく。各ボトルには製剤０.０４ｇ（０.００００４ｋｇ）が入っている。
【００５２】
方法２  水溶液を綿ガーゼタンポンまたは８枚重ねのガーゼで濾過し、２ｍｌのボトルまたはアンプルに注ぎ、上記の条件下で凍結乾燥させる。乾燥製剤の入ったこれらのボトルに速やかにコルクの栓をし、キャップで覆って転がしておく。アンプル同士を密着させる。製剤の入ったボトルまたはアンプルを木鉢  （ｂｉｃｋｓ）または二層にした袋で梱包し、オートクレーブにて圧力１.２Ａｔｍおよび温度１２０℃で２０分間滅菌する。各ボトル（アンプル）には製剤０.４ｇ（０.００００４ｋｇ）が入っている。
【００５３】
方法３  調製した水溶液を綿ガーゼタンポンまたは８枚重ねのガーゼで濾過し、このうち２００ｍｌを容量５００ｍｌのフラスコに注ぎ、綿ガーゼタンポンで閉じて油紙を巻く。溶液の入ったフラスコをオートクレーブにて圧力１．２Ａｔｍおよび温度１２０℃で３０分間滅菌する。滅菌後の溶液を室温まで冷却し、このうち２ｍｌを容量１０ｍｌのボトルに滅菌状態で注ぎ、上述したようにして凍結乾燥装置にて乾燥させる。凍結乾燥後、各ボトルには製剤０.０４（０.００００４ｋｇ）が入っている。
【００５４】
製剤の収率は１７ｇであり、これはこの段階での８８．２％、空気−乾燥天然材料に対して０．２２％に相当する。アルグラビン凍結乾燥製剤は、麦藁白色で苦味のある化合物である。
【００５５】
本発明によれば、ＩＲ分光法によって凍結乾燥アルグラビンの高定性同定を行う。標準的なアルグラビン試料のクロロホルム溶液１％のスペクトルをＩＲ分光計によって分析する。スペクトルの特性吸収曲線は、２８００、１７７５、１６５０ ｃｍ-1である。
【００５６】
１７７５ｃｍ-1の曲線はγ−ラクトンのカルボニル基の特性であり、他のスペクトル曲線とは重ならないため、これを用いて標準的なアルグラビン試料の溶液の吸収係数を算出する。
【００５７】
吸収係数は以下の式によって算出される。
【００５８】
【数１】
2007137890.tif 000003
【００５９】
式中、Ａは光学密度であり、
ｃ1は被検化合物の試料中の割合（％）であり、
ｃ2は、分析対象となる溶液の試料濃度（％）であり、
ｂはキュベットの厚さ（ｍｍ）である。
【００６０】
標準的な試料のアルグラビン含量は１００％に等しい。分析対象となる溶液の試料濃度は１％、キュベット厚は０．４ｍｍである。
【００６１】
【数２】
2007137890.tif 000004
【００６２】
定量的な推測を行うために、濃度の分かったクロロホルム中のアルグラビン溶液のＩＲスペクトルを測定する。１７７５ｃｍ-1でのＴ％の帯域幅を光学密度に換算し、アルグラビン濃度を以下の式によって算出する。
【００６３】
【数３】
2007137890.tif 000005
【００６４】
分光光度計によってアルグラビンのパーセント濃度を求めたところ、９９.９％以上である。
【００６５】
製剤の品質の制御は、薄層クロマトグラフィの方法、製剤の硫酸溶液との相互作用の定性反応、溶融温度の判定、比回転によっても行うことができる。
【００６６】
物質の抗腫瘍活性および毒性と、ジメチルアミノアルグラビンハイドロクロライドの本製剤の薬用剤形を、常法によって判断した。
【００６７】
このように、本方法および装置によって、高い抗腫瘍活性および免疫安定活性を有し、かつ毒性が比較的低い、天然由来の凍結乾燥アルグラビンの極めて有効な抗腫瘍製剤を生成することができる。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】抽出器の長手方向断面図
【図２】原料から凍結乾燥アルグラビンを抽出するための装置のスキームを示す図
【符号の説明】
【００６９】
１  本体
２  垂直隔壁
３  垂直隔壁
４  隔壁
５  分離室
６  湿度室
７  回転軸
８  再装填用取鍋
９  ブレードミキサ
【図１】
2007137890.tif 000006
【図２】
2007137890.tif 000007