(57)【要約】【課題】対象において免疫応答を増強するため、および／または腫瘍、細菌、真菌もしくはウイルス感染、または自己免疫疾患を処置するために有用な化合物の提供。【解決手段】単離された光学的に活性な立体異性体の形態か、またはその混合物の形態かのいずれかである、新規なピログルタミン酸誘導体（Ｉ）［式中、Ｒ１は−ＯＨ、−ＯＲａであり、ここで、Ｒａはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アリール、アラルキルまたはヘテロシクリルであり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立にＨ、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドであり、Ｘは医薬上許容される陰イオンであり、かつ、ＹはＮ含有基である］を用いる。2007291050.tif 000091【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式Ｉで示される化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物の合成方法であって：
【化１】
2007291050.tif 000053
［式中、
Ｒ１は−ＯＨまたは−ＯＲａから選択され、ここで、Ｒａは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキル、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルから選択され、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドから独立に選択され、
Ｘは医薬上許容される陰イオンであり、かつ
Ｙは
（ｉ）式VIａ
【化２】
2007291050.tif 000054
（式中、
点線は、窒素原子と一緒になって置換または非置換ヘテロアリールを形成し、かつ
Ｘは前記で定義されたものである）
のＮ含有基、あるいは
（ii）式VIｂ
【化３】
2007291050.tif 000055
（式中、
Ｘは前記で定義されたものであり、かつ
ＲａおよびＲｂは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキル、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルから独立に選択されるか、または
ＲａおよびＲｂは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換または非置換複素環を形成する）
のＮ含有基から選択される有機残基である］
該方法は、ａ）式IV
【化４】
2007291050.tif 000056
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記で定義されたものである）
の鏡像異性体的に純粋な化合物またはその混合物と、式Ｖ
【化５】
2007291050.tif 000057
（式中、Ｒ４は前記で定義されたものである）
の化合物とを反応させて、式III
【化６】
2007291050.tif 000058
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得て、
ｂ）前記式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を、式II
【化７】
2007291050.tif 000059
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものであり、
Ｒ５は負電荷またはＲ３から選択され、ここで、Ｒ３は前記で定義されたものであり、かつ
Ｙは
（ｉ）Ｒ５が負電荷であるとき、Ｙが式ＶIIａ
【化８】
2007291050.tif 000060
（式中、点線は窒素原子と一緒になって、置換または非置換ヘテロアリールを形成する）
のＮ含有有機残基である場合、または
（ii）Ｒ５がＲ３であるとき、Ｙが
（ii.ａ）式ＶIIｂ
【化９】
2007291050.tif 000061
（式中、ＲａおよびＲｂは前記で定義されたものである）
のＮ含有基であるか、または
（ii.ｂ）式VIIｃ
【化１０】
2007291050.tif 000062
（式中、
点線は窒素原子と一緒になって、置換または非置換ヘテロアリールを形成し、かつ
Ｚは医薬上許容される陰イオンである）
のＮ含有有機残基である場合
から選択されるＮ含有有機残基である場合
から選択されるＮ含有有機残基である］
の化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物に変換し、そして
ｃ）前記式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式ＨＸ（式中、Ｘは上記のように定義される）の酸を含んでなる酸性媒体とを接触させて、前記式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得ること
を含んでなる、方法。
【請求項２】
式IVの化合物が、Ｓ異性体およびＲ異性体から選択される、鏡像異性体として純粋な化合物の形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
式IVの化合物が、５Ｒ−４−メチレン−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔブチルエステル２−エチルエステル、または５Ｓ−４−メチレン−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔブチルエステル２−エチルエステルである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
式Ｖの化合物がＮ−トシルイミノベンジルヨージナンである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
鏡像異性体的に純粋な式IVの化合物またはその混合物と式Ｖの化合物との反応が、触媒、好ましくは銅系触媒、好ましくはＣｕ（ｆｔ）２（ここで、「ｆｔ」はフタロシアニンである）およびＣｕ（ａｃａｃ）２（ここで、「ａｃａｃ」はアセトアセテートである）より形成される基から選択される触媒の存在下で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物が、該式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIａ
【化１１】
2007291050.tif 000063
（式中、点線は窒素原子と一緒になって、置換または非置換ヘテロアリールを形成する）
の窒素含有求核分子とを反応させることにより、Ｒ５が負電荷であって、Ｙが式VIIａのＮ含有有機残基である式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体に変換される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物が、該式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIｂ
【化１２】
2007291050.tif 000064
（式中、ＲａおよびＲｂは前記で定義されたものである）
の窒素含有求核分子とを反応させること、および所望により、得られた混合物を式Ｘ
Ｒ３Ｚ            （Ｘ）
（式中、Ｒ３およびＺは前記で定義されたものである）
の化合物でクエンチすることにより、Ｒ５がＲ３であって、Ｙが式IIIｂのＮ含有有機残基である、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体に変換される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物が、該式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIａ
【化１３】
2007291050.tif 000065
（式中、点線は窒素原子と一緒になって、置換または非置換ヘテロアリールを形成する）
の窒素含有求核分子と、さらに式Ｘ
Ｒ３Ｚ            （Ｘ）
（式中、Ｒ３およびＺは前記で定義されたものである）
の化合物とを反応させることにより、Ｒ５がＲ３であって、Ｙが式IIｃのＮ含有有機残基である、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体に変換される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記式IIIの化合物が実質的に純粋な立体異性体（３Ｒ，５Ｒ）、（３Ｓ，５Ｓ）、（３Ｒ，５Ｓ）、または（３Ｓ，５Ｒ）の形態である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記式VIIIａの窒素含有求核分子が式IX
【化１４】
2007291050.tif 000066
（式中、
ｎは０、１、２、３、４または５であり、かつ
Ｒ６は置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロシクリル、置換もしくは非置換アルコキシ、置換もしくは非置換アリールオキシ、ハロゲン、置換もしくは非置換カルボキシエステル、置換もしくは非置換アミノから選択される）
のピリジンであるか、および／またはこのピリジンが１以上の置換もしくは非置換縮合環を形成する、請求項６または８に記載の方法。
【請求項１１】
式IIIの化合物の式IIの化合物への変換が加熱下、好ましくはマイクロ波を用いて行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
式ＨＸの酸が無機酸、好ましくはＨＣｌまたはＨＢｒである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
式Ｉの化合物であって、ａ）式Ｉａ
【化１５】
2007291050.tif 000067
［式中、
Ｒ１は−ＯＨ、−ＯＲａから選択され、ここで、Ｒａは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルから選択され、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドから独立に選択され、
Ｘは医薬上許容される陰イオンであり、かつ
Ｙは
（ｉ）式VIａ
【化１６】
2007291050.tif 000068
（式中、
点線は、窒素原子と一緒になって置換または非置換ヘテロアリールを形成し、かつ
Ｘは前記で定義されたものである）
のＮ含有基、あるいは
（ii）式VIｂ
【化１７】
2007291050.tif 000069
（式中、
Ｘは前記で定義されたものであり、かつ
ＲａおよびＲｂは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキル、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルから独立に選択されるか、または
ＲａおよびＲｂは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換または非置換複素環を形成する）
のＮ含有基から選択される有機残基である］
の実質的に純粋な化合物、
ｂ）式Ｉｂ
【化１８】
2007291050.tif 000070
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物、
ｃ）式Ｉｃ
【化１９】
2007291050.tif 000071
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物、
ｄ）式Ｉｄ
【化２０】
2007291050.tif 000072
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物、および
ｅ）前述の、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃおよび／またはＩｄの実質的に純粋な化合物の、任意のモル比の混合物（ただし、該混合物は次の化合物：
（ｉ）１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド、または
（ii）１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない）
からなる群から選択される、式Ｉの化合物。
【請求項１４】
Ｒ１がＯＨまたはＯＲａ、好ましくはＯＨであり、Ｒ２が水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミド、好ましくは水素であり、Ｒ３またはＲ４が独立に水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドであり、好ましくは、Ｒ３またはＲ４が同時に水素であり、および／またはＸが医薬上許容される陰イオン、好ましくは臭素イオンまたは塩素イオンである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｙが
【化２１】
2007291050.tif 000073
から選択される有機残基または
【化２２】
2007291050.tif 000074
から選択される有機残基
である、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１６】
式Ｉ’ａ
【化２３】
2007291050.tif 000075
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびｎは前記で定義されたものである）
の化合物、
式Ｉ’ｂ
【化２４】
2007291050.tif 000076
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびｎは前記で定義されたものである）
の化合物、
式Ｉ’ｃ
【化２５】
2007291050.tif 000077
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびｎは前記で定義されたものである）
の化合物、
式Ｉ’ｄ
【化２６】
2007291050.tif 000078
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびｎは前記で定義されたものである）
の化合物、および
その混合物
からなる群から選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１７】
３Ｓ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド、
３Ｒ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド、
３Ｒ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド、および
３Ｓ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド
からなる群から選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１８】
請求項１３に記載の、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄの化合物およびその混合物（ただし、該混合物は次の化合物：
（ｉ）１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド、または
（ii）１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない）からなる群から選択される化合物を任意のモル比で含んでなる組成物。
【請求項１９】
請求項１３〜１７のいずれかで定義したような化合物、または請求項１８に記載の組成物と、医薬上許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項２０】
ａ）式IIａ
【化２７】
2007291050.tif 000079
［式中、
Ｒ１は−ＯＨ、−ＯＲａから選択され、ここで、Ｒａは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルから選択され、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドから独立に選択され、かつ
Ｙは
（ｉ）式VIａ
【化２８】
2007291050.tif 000080
（式中、
点線は、窒素原子と一緒になって置換または非置換ヘテロアリールを形成し、かつ
Ｘは医薬上許容される陰イオンである）
のＮ含有基、あるいは
（ii）式VIｂ
【化２９】
2007291050.tif 000081
（式中、
Ｘは前記で定義されたものであり、かつ
ＲａおよびＲｂは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキル、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルから独立に選択されるか、または
ＲａおよびＲｂは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換または非置換複素環を形成する）
のＮ含有基から選択される有機残基である］
の実質的に純粋な化合物、
ｂ）式IIｂ
【化３０】
2007291050.tif 000082
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物、
ｃ）式IIｃ
【化３１】
2007291050.tif 000083
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物、
ｄ）式IIｄ
【化３２】
2007291050.tif 000084
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物、および
ｅ）前述の、式IIａ、IIｂ、IIｃおよび／またはIIｄの実質的に純粋な化合物の、任意のモル比の混合物（ただし、該混合物は次の化合物：
１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート、
１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート、
１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート、または
１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない）
からなる群から選択される、式IIの化合物。
【請求項２１】
Ｒ１が−ＯＲａ（ここで、好ましくは、Ｒａはアルキル基である）であり、Ｒ２が−（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−Ｒａ、好ましくはＢＯＣ基であり、および／またはＲ４が−（Ｏ＝）Ｓ（＝Ｏ）−Ｒａ、好ましくはトシルである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が独立に水素である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ５が負電荷である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２４】
請求項２０に記載の、式IIａ、IIｂ、IIｃ、IIｄの化合物およびその混合物（ただし、該混合物は次の化合物：
１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート、
１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート、
１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート、または
１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない）からなる群から選択される化合物を任意のモル比で含んでなる組成物。
【請求項２５】
ａ）式IIIａ
【化３３】
2007291050.tif 000085
（式中、
Ｒ１は−ＯＨ、−ＯＲａから選択され、ここで、Ｒａは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルから選択され、
Ｒ２およびＲ４は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドから独立に選択される）
の実質的に純粋な化合物、
ｂ）式IIIｂ
【化３４】
2007291050.tif 000086
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物、
ｃ）式IIIｃ
【化３５】
2007291050.tif 000087
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物、
ｄ）式IIIｄ
【化３６】
2007291050.tif 000088
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物、および
ｅ）その混合物
からなる群から選択される、式IIIの化合物。
【請求項２６】
Ｒ１が−ＯＲａ（ここで、好ましくは、Ｒａはアルキル基である）であり、Ｒ２が−（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−Ｒａ、好ましくはＢＯＣ基であり、および／またはＲ４が−（Ｏ＝）Ｓ（＝Ｏ）−Ｒａ、好ましくはトシルである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が独立に水素である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
請求項２０で定義した式IIの化合物を、式ＨＸ（ここで、Ｘは医薬上許容される陰イオンである）の酸を含んでなる酸性媒体と接触させることを含む、請求項１３で定義した式Ｉの化合物の合成方法。
【請求項２９】
式IV
【化３７】
2007291050.tif 000089
（式中、
Ｒ１は−ＯＨ、−ＯＲａから選択され、ここで、Ｒａは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルから選択され、
Ｒ２は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドである）から独立に選択される）
の鏡像異性体的に純粋な化合物実質的に純粋な化合物またはその混合物と、式Ｖ
【化３８】
2007291050.tif 000090
（式中、Ｒ４は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドである）
の化合物とを反応させて、請求項２５で定義した式IIIの化合物を得ることを含んでなる方法。
【請求項３０】
対象における免疫応答の増強を目的とした医薬組成物の製造のため、または抗腫瘍医薬組成物の製造のため、または細菌、真菌またはウイルス起源の処置を目的とした医薬組成物の製造のため、または自己免疫疾患の処置を目的とした医薬組成物の製造のための、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、ピログルタミン酸誘導体、それらの単離された光学的に活性な立体異性体およびその混合物の新規な合成、およびそれらの用途、ならびにそれらの合成への新規な中間体に関する。本発明はまた、該ピログルタミン酸誘導体、それらの光学的に活性な立体異性体およびその混合物の治療用途に関する。
【発明の背景】
【０００２】
欧州特許ＥＰ０７６８３０８Ｂ１には、免疫生体応答を刺激する、下記一般式
【化１】
2007291050.tif 000002
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は水素または−Ｃ（＝Ｏ）Ｍｅであり、ＡはＣｌ−、ＣＨ３ＣＯＯ−またはＨＯ−である）
を有するピログルタミン酸誘導体の立体異性体混合物が開示されている。ここに開示されている当該化合物の合成方法は、加熱下でＬ−セリンを１モル過剰の無水酢酸とピリジンとを反応させることを含んでなる。従って、この公報に開示されているように、種々の立体異性体は単離されることなく、開示されているin vivoおよびin vitroアッセイは、存在し得る４種類の光学的に活性な立体異性体が全て一緒になった混合物を用いて行われている。純粋な個々の立体異性体または個々の異性体が富化された混合物に関する示唆は開示されていない。さらに、開示されている混合物からの種々の光学的に活性な立体異性体の単離に関しても示唆はない。
【０００３】
化合物の、光学的に活性な異なる立体異性体は異なる作用を持つ可能性があり、反対の作用を持つ場合さえあることは、当業者に知られている。例えば、ある化合物が治療作用を持つとしても、その鏡像異性体は有毒である場合がある。このような状況の例は当業者には周知のものである。デキストロメトルファンは鬱血除去薬であるが、レボメトルファンは強力な麻薬である。
【化２】
2007291050.tif 000003
【０００４】
また、ペルヘキシリンの鏡像異性体のin vivo挙動が異なることも知られている。
【化３】
2007291050.tif 000004
【０００５】
これらは双方とも心律動の調整薬であるが、一方の鏡像異性体は代謝が遅く、体内に蓄積され、８０年代に多数の死をもたらした。
おそらく最も悲劇的でよく知られている例がサリドマイドであり、これは死に至る病を処置するために妊婦にラセミ混合物として投与されたものである。
【化４】
2007291050.tif 000005
【０００６】
Ｒ−サリドマイドは効果的であるが、Ｓ−サリドマイドの催奇形性作用が後に発見された。
従って、有益な治療作用を有する新規な化合物を探索する上で、通常、最も活性の高いな鏡像異性体を選択し、かつ／または結果として有毒なものを排除する試みにおいて鏡像異性体的に純粋な立体異性体を用いたアッセイを行う必要がある。よって、ピログルタミン酸誘導体の単離された立体異性体を提供する必要がある。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、ピログルタミン酸誘導体、それらの光学的に活性な立体異性体およびその混合物を得る方法を提供する。この方法では、容易に分離され、その後に変換可能なピログルタミン酸前駆体の光学的に活性な立体異性体を、所望の光学的に活性な立体異性体を得るために用いることを含んでなる。
【０００８】
特に、本発明者らは、（所望であるならば望む立体化学を有する）種々の中間体を単離できる合成を考案した。これらの中間生成物は、さらに変換することができそれによって所望のピログルタミン酸誘導体を実質的に純粋な所望の立体異性体の形態か、または立体異性体混合物の形態かのいずれかで得る。本発明者らは鏡像異性体的に純粋な式IVの化合物から出発し、次にジアステレオマー中間体、そして容易に分離および精製可能な最終生成物を作製した。所望の立体化学を有する式IVの化合物を用いることにより、実質的に純粋な立体異性体の形態または立体異性体混合物の形態で中間体を得ることができる。このような式IVの化合物は、鏡像異性体的に純粋なグルタミン酸を用いて合成することができる。
【０００９】
よって、一つの態様によれば、本発明は、式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得る方法であって、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得るために、式IVの化合物と式Ｖの化合物とを反応させ、該式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物に変換し、そして最後に該式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と式ＨＸの化合物とを反応させて所望の式Ｉのピログルタミン酸誘導体を実質的に純粋な立体異性体またはその混合物として得ることを含んでなる方法である。
【００１０】
本発明のさらなる態様は、式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体（すなわち、Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃまたはＩｄ）に関する。式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃおよび／またはＩｄの化合物の実質的に純粋な立体異性体の混合物を含んでなるいくつかの組成物は、本発明のさらなる態様をなし、例えば、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃおよび／またはＩｄの立体異性体を含んでなる組成物が挙げられるが、ただし、該組成物は次の化合物：
（ｉ）１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド、または
（ii）１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない。
【００１１】
本発明のさらなる態様は、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物に関する。この化合物を得る方法は、本発明のさらなる態様をなす。
本発明の別の態様は、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体、または前記式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体を得る方法に関する。式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体（すなわち、IIａ、IIｂ、IIｃまたはIIｄ）は、本発明のさらなる態様をなす。式IIａ、IIｂ、IIｃおよび／またはIIｄの実質的に純粋な立体異性体の混合物を含んでなるいくつかの組成物もまた、本発明のさらなる態様をなす。
【００１２】
本発明の別の態様は、式IIａ、IIｂ、IIｃ、IIｄの化合物およびその混合物からなる群から選択される化合物と、医薬上許容される賦形剤とを含んでなるいくつかの医薬組成物に関する。
【００１３】
本発明のさらなる態様は、腫瘍の予防または治療のための組成物の製造における、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄの化合物およびそのいくつかの混合物からなる群から選択される化合物の使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【００１４】
定義
本発明の理解を助けるため、以下、本明細書で用いるいくつかの用語および表現の意味を示す。
「アルキル」とは、炭素原子と水素原子からなり、不飽和を含まず、１〜１２個、好ましくは１〜８個の炭素原子を有し、かつ、一重結合によってその分子の残りの部分に結合されている直鎖または分枝型の炭化水素鎖基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどがある。アルキル基はハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、Ｏ−プロピル、Ｏ−ベンジル、Ｏ−ベンゾエート、カルボキシ、シアノ、カルボニル、アシル、アルコキシカルボニル、アミノ、イミノ、ニトロ、メルカプトおよびアルキルチオのような１以上の置換基により場合によって置換されていてもよい。
【００１５】
「アルケニル」とは、炭素原子と水素原子からなり、少なくとも１つの不飽和を含み、１〜１２個、好ましくは１〜８個の炭素原子を有し、一重結合によってその分子の残りの部分に結合されている直鎖または分枝型の炭化水素鎖基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどがある。アルキル基はハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、Ｏ−プロピル、Ｏ−ベンジル、Ｏ−ベンゾエート、カルボキシ、シアノ、カルボニル、アシル、アルコキシカルボニル、アミノ、イミノ、ニトロ、メルカプトおよびアルキルチオのような１以上の置換基により場合によって置換されていてもよい。
【００１６】
「アルコキシ」とは、式−Ｏ−アルキルの基を意味し、ここで、アルキルは前記で定義され、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなどがある。
「アリール」とは、フェニル、ナフチルまたはアントラシルのような芳香族炭化水素基を意味する。アリール基は、本明細書で定義したように、ヒドロキシ、メルカプト、ハロ、アルキル、フェニル、アルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ジアルキルアミノ、アミノアルキル、アシルおよびアルコキシカルボニルのような１以上の置換基により場合によって換されていてもよい。
【００１７】
「アリールオキシ」とは、式−Ｏ−アリールの基を意味し、ここで、アリールは前記で定義したものである。アラルオキシ化合物の例をいくつか挙げると、−Ｏ−フェニル、−Ｏ−ｐ−トリル、−Ｏ−ｍ−トリル、−Ｏ−ｏ−トリルまたは−Ｏ−ナフチルである。
【００１８】
「アミノ」とは、式−ＮＨ２、−ＮＨＲａ、−ＮＲａＲｂの基を意味し、ここで、ＲａおよびＲｂは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルから独立に選択されるか；またはＲａおよびＲｂは一緒になって置換もしくは非置換複素環、置換もしくは非置換シクロアルキルまたは置換もしくは非置換シクロアルケニルを形成する。
【００１９】
「アラルキル」とは、ベンジルおよびフェネチルのようなアルキル基と連結したアリール基を意味する。
「カルボキシエステル」とは、−ＣＯ２Ｒａを意味し、ここで、Ｒａは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルから選択される。
【００２０】
「シクロアルキル」とは、３〜８個の炭素原子を有する飽和炭素環式を意味する。
「シクロアルケニル」とは、３〜８個の炭素原子と少なくとも１つの不飽和を有する炭素環式環を意味する。
【００２１】
「ヘテロシクリル」とは、炭素原子と、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択される１〜５個のヘテロ原子とからなる安定な３〜１５員環、好ましくは１以上のヘテロ原子を有する４〜８員環、より好ましくは１以上のヘテロ原子を有する５または６員環を意味する。本発明の目的では、複素環は単環式環系であっても二環式環系であっても三環式環系であってもよく、縮合環系を含んでもよく；そして、このヘテロシクリル基の窒素、炭素または硫黄原子は場合によって酸化されていてもよく；窒素原子は場合によって第四級化されていてもよく；このヘテロシクリル基は部分的に飽和していてもよいし、完全に飽和していてもよく、あるいは芳香族であってもよい。このような複素環の例としては、限定されるものではないが、アゼピン、ベンズイミダゾール、ベンゾチアゾール、フラン、イソチアゾール、イミダゾール、インドール、ピペリジン、ピペラジン、プリン、キノリン、チアジアゾール、テトラヒドロフランが挙げられる。
【００２２】
「ヘテロアリール」とは、環の少なくとも１つが芳香環である複素環式基を意味する。
「保護基」とは、有機官能基を遮断し、制御された条件下で除去できる基を意味する。保護基、それらの相対的反応性およびそれらが不活性を維持する条件は当業者に公知である。Greene and Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons,   Inc., New York, 1999参照。
【００２３】
本明細書において、本発明の化合物における置換された基という場合には、例えば、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードのようなハロゲン；シアノ；ヒドロキシル；ニトロ；アジド；Ｃ１−Ｃ６アルカノイル（アシルなど）などのようなアルカノイル；カルボキサミド；１〜約１２個の炭素原子または１〜約６個の炭素原子、より好ましくは１〜３個の炭素原子を有する基をはじめとするアルキル基；１以上の不飽和結合と２〜約１２個の炭素、または２〜約６個の炭素原子とを有する基をはじめとするアルケニル基およびアルキニル基；１以上の酸素結合と１〜約１２個の炭素原子または１〜約６個の炭素原子とを有するアルコキシ基；フェノキシのようなアリールオキシ；１以上のチオエーテル結合と１〜約１２個の炭素原子または１〜約６個の炭素原子を有する部分を含むアルキルチオ基；１以上のスルフィニル結合と１〜約１２個の炭素原子または１〜約６個の炭素原子とを有する部分をはじめとするアルキルスルフィニル基；１以上のスルホニル結合と１〜約１２個の炭素原子または１〜約６個の炭素原子とを有する部分をはじめとするアルキルスルホニル基；１以上のＮ原子と１〜約１２個の炭素原子または１〜約６個の炭素原子とを有する基のようなアミノアルキル基；６個以上の炭素を有する炭素環式アリール、特に、フェニルまたはナフチルおよびアラルキル（ベンジルなど）の１以上の好適な基により、利用可能な１以上の位置で置換されていてもよい特定の部分を意味する。特に断りのない限り、場合によって置換された基はその基の置換可能などの位置に置換基を有してもよく、各置換は他のものとは独立である。
【００２４】
「医薬上許容される陰イオン」とは、適当な対陽イオンの存在下で医薬上許容される塩を形成し得る任意の陰イオンを意味する。医薬上許容される陰イオンの例としては、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−、Ｆ−、ＳＯ４２−、酢酸イオン、マレイン酸イオン、フマル酸イオン、クエン酸イオン、シュウ酸イオン、コハク酸イオン、酒石酸イオン、リンゴ酸イオン、マンデル酸イオン、メタンスルホン酸イオン、ｐ−トルエンスルホン酸イオンなどが挙げられる。医薬上許容される陰イオンの他の例は当業者には明らかである。
【００２５】
「医薬上許容される塩」とは、受容者に投与した際に本明細書に記載のような化合物を（直接的にまたは間接的に）もたらし得る任意の医薬上許容される塩を意味する。しかしながら、医薬上許容されない塩も、医薬上許容される塩の作製に有用な場合があるので、本発明の範囲内にあると考えられる。塩の作製は当業者で公知の方法により行うことができる。
【００２６】
例えば、本明細書で提供される化合物の医薬上許容される塩は酸付加塩、塩基付加塩または金属付加塩であってもよく、それらは従来の化学法により、塩基性部分または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、例えば、水中、または有機溶媒中、またはその２種類の混合物中で、遊離酸または遊離塩基の形態のこれら化合物と化学量論的な量の適当な塩基または酸とを反応させることにより作製される。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。酸付加塩の例としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩のような無機酸付加塩、ならびに例えば酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩およびｐ−トルエンスルホン酸塩のような有機酸付加塩が挙げられる。アルカリ付加塩の例としては、例えばアンモニウムのような無機塩、および例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ジアルキレンエタノールアミン、トリエタノールアミン、グルカミンのような有機アルカリ塩、および基本アミノ酸塩が挙げられる。金属塩の例としては、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウムおよびリチウム塩が挙げられる。
【００２７】
鏡像異性体混合物に用いられる「鏡像異性体的に富化された」とは、そのうちの１つの鏡像異性体が他のものよりも多量に存在する鏡像異性体混合物を意味する。従って、鏡像異性体的に富化された混合物は、その鏡像異性体の１つに関して０％を超える、好ましくは２０％を超える、好ましくは４０％を超える、好ましくは７０％を超える、より好ましくは８０％を超える、より好ましくは９０％を超える、より好ましくは９５％を超える鏡像異性体過剰を有する。
【００２８】
「鏡像異性体的に純粋な」化合物は、９５％を超える、好ましくは９８％を超える、より好ましくは９９％を超える、より好ましくは９９．５％を超える鏡像異性体過剰を有する２つの鏡像異性体の混合物と考えることができる。
【００２９】
本特許出願において「実質的に純粋な」化合物とは、９５％を超える、好ましくは９８％を超える、より好ましくは９９％を超える、より好ましくは９９．５％を超える純度を有する化合物についていうものである。
【００３０】
本特許出願において「立体異性体」とは、同じ一連の結合によって結合している同じ原子をからなるが、交換不能な異なる三次元構造を有する化合物をいう。
「窒素含有求核分子」とは、少なくとも１対の遊離電子を有する窒素を少なくとも１つ含む分子を意味し、この電子対は別の分子の求電子（（電子不足）部分と、または同じ分子内で結合を形成し得る。窒素含有求核分子の例としては、第一級、第二級または第三級アミンがあり、ある条件下では、複素環の非置換窒素原子形成部分、アミド部分の窒素原子であっても求核分子として働く。
【００３１】
ＥＰ０７６８３０８Ｂ１では、ピログルタミン酸誘導体の立体異性体混合物が得られる。
ＥＰ０７６８３０８Ｂ１に開示されている立体異性体の混合物をその実質的に純粋な化合物へと分離する試みは全て失敗している。上記で挙げた欧州特許では、この発明者らの実験によれば、ＢＬＡＳ−２３６（Ｃｌ）（１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド）
【化５】
2007291050.tif 000006
であるとして確認された５％の化合物が、存在し得る４種類全ての立体異性体の混合物として得られた。
【００３２】
また、その直接の前駆体ＢＬＡＳ−３２０（Ａｃ）（１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート）
【化６】
2007291050.tif 000007
は異なる手順を用いて合成されたものである。式ＢＬＡＳ−３２０（Ａｃ）の化合物は、主として溶解度の問題のため（化合物ＢＬＡＳ−３２０（Ａｃ）は水およびメタノールにしか溶けない）、精製不能な立体異性体の混合物として得られた。
【００３３】
さらに、式ＢＬＡＳ−３２０（Ａｃ）の化合物において酢酸対イオンを他の陰イオンで置き換えることも試みたが、失敗に終わった。さらに、式ＢＬＡＳ−３２０（Ａｃ）の化合物からそのエステル誘導体への変換（または直接合成）とさらなる精製も試みられた。得られた黒い粗混合物はどうやっても精製できなかった。
【００３４】
上記の点から、ＥＰ０７６８３０８Ｂ１の開示は、その中で言及されている目的の、ピログルタミン酸誘導体の実質的に純粋な立体異性体を得るには十分でないものと思われた。よって、全く異なるアプローチを開発した。
【００３５】
式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体およびその混合物の合成
一つの態様において、本発明は、式Ｉ
【化７】
2007291050.tif 000008
［式中、
Ｒ１は−ＯＨまたは−ＯＲａから選択され、ここで、Ｒａは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロシクリルから選択され、
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドから独立に選択され、
Ｘは医薬上許容される陰イオンであり、かつ
Ｙは
（ｉ）式VIａ
【化８】
2007291050.tif 000009
（式中、
点線は、窒素原子と一緒になって置換または非置換ヘテロアリールを形成し、かつ
Ｘは前記で定義されたものである）
のＮ含有基、あるいは
（ii）式VIｂ
【化９】
2007291050.tif 000010
（式中、
Ｘは前記で定義されたものであり、かつ
ＲａおよびＲｂは置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アラルキル、または置換もしくは非置換ヘテロシクリルから独立に選択されるか、または
ＲａおよびＲｂは、それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換または非置換複素環を形成する）
のＮ含有基から選択される有機残基である］
で示される化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物の合成方法（以下、本発明の方法と呼ぶ）であって、
ａ）式IV
【化１０】
2007291050.tif 000011
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記で定義されたものである）
の鏡像異性体的に純粋な化合物またはその混合物と、式Ｖ
【化１１】
2007291050.tif 000012
（式中、Ｒ４は前記で定義されたものである）
の化合物とを反応させて、式III
【化１２】
2007291050.tif 000013
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得て、
ｂ）前記式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を、式II
【化１３】
2007291050.tif 000014
［式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものであり、
Ｒ５は負電荷またはＲ３から選択され、ここで、Ｒ３は前記で定義されたものであり、かつ
Ｙは
（ｉ）Ｒ５が負電荷であるとき、Ｙが式ＶIIａ
【化１４】
2007291050.tif 000015
（式中、点線は窒素原子と一緒になって、置換または非置換ヘテロアリールを形成する）
のＮ含有有機残基である場合、または
（ii）Ｒ５がＲ３であるとき、Ｙが
（ii.ａ）式ＶIIｂ
【化１５】
2007291050.tif 000016
（式中、ＲａおよびＲｂは前記で定義されたものである）
のＮ含有基である場合、または
（ii.ｂ）式VIIｃ
【化１６】
2007291050.tif 000017
（式中、
点線は窒素原子と一緒になって、置換または非置換ヘテロアリールを形成し、かつ
Ｚは医薬上許容される陰イオンである）
のＮ含有有機残基である場合
から選択されるＮ含有有機残基である場合
から選択されるＮ含有有機残基である］
の化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物に変換し、そして
ｃ）前記式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式ＨＸ（式中、Ｘは上記のように定義される）の酸を含んでなる酸性媒体とを接触させて、前記式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得ること
を含んでなる方法に関する。
【００３６】
酸性条件下で加水分解する窒素保護基（Ｒ２、Ｒ３および／またはＲ４）の役割は、工程ｃ）（式IIの化合物と式ＨＸの化合物とを反応させることにより、式IIの化合物を式Ｉの化合物に変換する）まで窒素官能基を保護することである。工程ｃ）まで窒素原子を保護できる窒素保護基が本発明にあっては好適である。酸性条件下で加水分解する好ましい窒素保護基は、工程ｃ）中に加水分解し得ると同時に、塩または二塩が形成されて式Ｉの化合物が得られるものである。この場合、工程ｃ）中に、１つの合成工程で、その分子の窒素原子が脱保護されて、塩または二塩が形成される。しかしながら、本発明によれば、窒素原子が脱保護されると同時に塩または二塩が形成される必要は必ずしもない。よって、本発明の実施形態によれば、塩または二塩の形成と窒素原子の脱保護は二工程以上を必要とする場合もある。
【００３７】
好ましい実施形態によれば、酸性条件下で加水分解する窒素保護基は、式−（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−Ｒａ（ここで、Ｒａは上記と同義であり、好ましくは、Ｒａはベンジル、Ｃ（ＣＨ３）３または−ＣＨ２ＣＨ３；のカルバミン酸基；または式−（Ｏ＝）Ｓ（＝Ｏ）−Ｒａ（ここで、Ｒａは上記と同義であり、好ましくは、Ｒａは−ＣＨ３またはトシル酸基である）のスルホン酸基から選択される。
【００３８】
酸性条件下で加水分解する他の保護基は当業者に公知である。Greene and Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1999などの参考書籍を参照。
【００３９】
Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つがフタルアミドである場合には、塩または二塩の形成前（工程ｃの前）に、還元またはヒドラジンとの反応を含む追加工程を行う必要がある（フタルアミドの除去方法についてさらに詳しくは、Greene and Wuts “Protective Groups in Organic Synthesis”, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1999参照）。
【００４０】
本発明の方法の式IVの出発化合物は、鏡像異性体的に純粋な化合物（すなわち、ＲまたはＳ）の形態であっても、あるいは鏡像異性体（ＲとＳ）の混合物の形態で、所望によりそれらの一方を富化したものであってもよい。本明細書において、「鏡像異性体の混合物」とは、当モル比であってもなくても、２種類の鏡像異性体のいずれの混合物も含み、それ自体、その２種類の鏡像異性体のラセミ混合物だけでなく、その鏡像異性体のいずれかを富化した混合物も含む。
【００４１】
式IVの化合物が鏡像異性体的に純粋な化合物の形態である場合、上述の反応で、β面からの反応に相当するものと、α面からの反応に相当するものとの２種類の生成物（立体異性体）が得られる。この場合、反応の立体選択性は低く、式IVの化合物の各鏡像異性体からは可能性のある２種類の化合物（立体異性体）の混合物が得られる。
【００４２】
よって、特定の実施形態によれば、式IVの化合物は、鏡像異性体的に純粋な化合物の形態である。式IVの化合物のＳ異性体を出発材料として用いるならば、その反応からは一般に、式IIIａ
【化１７】
2007291050.tif 000018
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物と式IIIｂ
【化１８】
2007291050.tif 000019
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物の混合物が得られる。
【００４３】
従って、用いる式IVの化合物の異性体がＳ立体異性体である場合、結果として得られる式IIIの化合物は一般に、式IIIａと式IIIｂの立体異性体の混合物の形態である。所望により、この立体異性体混合物の形態の式IIIの化合物は、当モル比であってもなくても、IIIａとIIIｂの混合物を得るために、常法（例えば、シリカ、再結晶など）によって単離することができる。あるいは、所望により、式IIIａとIIIｂの各立体異性体を分離するため、また、それらの立体異性体を鏡像異性体的に純粋な化合物として得るためには、式IIIａとIIIｂの立体異性体の混合物を常法（例えば、再結晶、クロマトグラフィーなど）によって処理すればよい。
【００４４】
また、式IVの化合物のＲ異性体を出発材料として用いるならば、その反応からは一般に式IIIｃ
【化１９】
2007291050.tif 000020
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物と、式IIIｄ
【化２０】
2007291050.tif 000021
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４は前記で定義されたものである）
の化合物の混合物が得られる。
【００４５】
従って、用いる式IVの化合物の異性体がＲ立体異性体である場合、結果として得られる式IIIの化合物は一般に、式IIIｃと式IIIｄの立体異性体の混合物の形態である。上述のように、所望により、この立体異性体混合物の形態の式IIIの化合物は、当モル比であってもなくても、IIIｃとIIIｄの混合物を得るために、常法によって単離することができ、あるいは、所望により、式IIIｃとIIIｄの各立体異性体を分離するため、また、それらの立体異性体を鏡像異性体的に純粋な化合物として得るためには、これら立体異性体の混合物を常法によって処理すればよい。
【００４６】
これは不利なことのように見えるかもしれないが、発明者らは式IVの化合物と式Ｖの化合物との反応から最終的に得られた混合物が、式IIIの化合物の対応する実質的に純粋な立体異性体、すなわち、IIIａ、IIIｂ、IIIｃまたはIIIｄへと容易に分離できることを見出した。これにより、本発明の一つの態様である式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体の合成が可能となる。
【００４７】
別の特定の実施形態によれば、式IVの化合物は、存在し得る二種類の鏡像異性体（ＲまたはＳ）の混合物の形態で、所望により該鏡像異性体の一方に関して鏡像異性体的に富化されたものである。このような場合、得られる式IIIの化合物は、IIIａ、IIIｂ、IIIｃおよびIIIｄの混合物（当モル比であってもなくてもよい）；IIIａとIIIｃの混合物（当モル比であってもなくてもよい）；またはIIIｂとIIIｄの混合物（当モル比であってもなくてもよい）から選択される。
【００４８】
式IVの化合物は当技術分野で公知の方法によって得ることができる。例えば、本発明者らが用いる合成アプローチの１つをスキーム１に記載する。グルタミン酸１（この場合、Ｄ−グルタミン酸）は、Silverman, R.B.; Levy, M.A., J. Org. Chem. 1980, 45, 815に記載のように、式２の化合物へと変換可能である。第二の工程は式３の化合物を得るための、公知の方法(Flyn, D.L., et al., J. Org. Chem., 1983, 48, 2424)を用いたアミド窒素の保護である。次に、２つの次工程として、第一に、２−ピロリドンの３位をジメチルアミノメチル基で置換して４［この方法では３位のキラル中心が制御されないので、実際には２つのジアステレオマーの混合物である］を得、ＭｅＩで第四級化し、除去すると、すでにPanday, S. K.; Griffart-Brunel, D.; Langlois, N.; Tetrahedron Lett., 1994, 35, 6673に記載されている式５の化合物（Ｒ１が−ＯＥｔであって、Ｒ２がＢＯＣである式IVの化合物）が得られる。この場合、得られる式IVの化合物はＲ配置である。Ｓ配置を望む場合には、出発材料としてＬ−グルタミン酸が用いられた（一般論として、５は出発グルタミン酸と同じ立体配置を有する）。
スキーム１
【化２１】
2007291050.tif 000022
【００４９】
アジリジン環の形成を達成するためには、当業者に公知の多くの試薬がある。しかしながら、炭素−炭素二重結合からスピロ−アジリジンを合成するための試薬の選択は容易ではない。例えば、ＨＢｒ／Ｈ２Ｏ２の存在下でクロラミン−Ｔを用いても(L.J. Suman; B.S. Sharma; S. Bir. Tetrahedron Letters 2004, 45, 8731)目的のアジリジンは得られず、下記一般式
【化２２】
2007291050.tif 000023
の塩素が付加された誘導体が得られた。
【００５０】
幾度の実験を行った後、この反応に最も好適な試薬は式Ｖのベンジルヨージナンであることが判明した。特定の実施形態によれば、Ｒ４は−（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−Ｃ（ＣＨ３）３、−（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ３、（Ｏ＝）Ｓ（＝Ｏ）−トシルまたはフタルアミドから選択される。好ましい実施形態では、式Ｖの化合物はＮ−トシルイミノベンジルヨージナン(Baron E.; O’Brien P.; Towers T.D. Tetrahedron Lett., 2002, 43, 723)であり、これはGillepia, K., Synthetic Comunn. 2001, 123に記載の方法に従って合成することができる。
【００５１】
式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得るための、式IVの鏡像異性体的に純粋な化合物またはその混合物と式Ｖの化合物との反応は、所望により触媒、好ましくは銅系触媒、より好ましくはＣｕ（ｆｔ）２またはＣｕ（ａｃａｃ）２（ここで、「ｆｔ」はフタロシアニンであり、「ａｃａｃ」はアセトアセテートである）から選択される触媒の存在下で行うことができる。触媒および条件に関してさらに詳しくは、Baron, E.; O’Brien, P.; Towers, T. D. Tetrahedron Lett., 2002, 43, 723およびS. L. Jain, B. Sain, Journal of molecular catalysis A: Chemical 2003, 195, 283参照。この反応は一般に、適当な温度、好ましくは０〜１００℃の間の温度にて、適当な有機溶媒中で行う。該反応では、実施上、いずれの好適な有機溶媒を用いてもよいが（例えば、アセトニトリル、ジメチルホルムアミドなど）、特定の実施形態では、式IVの化合物が４−メチレン−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔブチルエステル２−エチルエステルであって、式Ｖの化合物がＮ−トシルイミノベンジルヨージナン（ＰｈＩ＝ＮＴｓ）である場合［実施例３．１および４．１］には、有機溶媒はアセトニトリルであり、反応は０℃〜室温（約１８℃〜２４℃）の間の温度で行う。
【００５２】
さらに、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を経て、式Ｉのピログルタミン酸誘導体の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得るためにも使用できる。
【００５３】
よって、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ５とＹの特性によって異なる方法論、すなわち、
（Ａ）Ｒ５が負電荷であって、Ｙが式VIIａのＮ含有有機残基である式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を調製するためには、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIａ
【化２３】
2007291050.tif 000024
（式中、点線は窒素原子と一緒になって、置換または非置換ヘテロアリールを形成する）
の窒素含有求核分子とを反応させる；または
（Ｂ）Ｒ５がＲ３であって、Ｙが式VIIｂのＮ含有有機残基である式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を調製するためには、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIｂ
【化２４】
2007291050.tif 000025
（式中、ＲａおよびＲｂは前記で定義されたものである）
の窒素含有求核分子とを反応させ、所望により、得られた混合物を式Ｘ
Ｒ３Ｚ            （Ｘ）
（式中、Ｒ３およびＺは前記で定義されたものである）
の化合物でクエンチする；または
（Ｃ）Ｒ５がＲ３であって、Ｙが式VIIｃのＮ含有有機残基である式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を調製するためには、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIｂの窒素含有求核分子とを反応させ、得られた混合物を前記の式Ｘの化合物でクエンチすることによって、さらに式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物へと変換される。
【００５４】
要するに、上記のように、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物の合成は、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と
式VIIIａの化合物とを、またはその代わりに
式VIIIｂの化合物、および所望により式Ｘの化合物とを、またはその代わりに
式VIIIａの化合物、および所望により式Ｘの化合物とを
反応させることを含む。
【００５５】
式IIIの出発化合物は、実質的に純粋な立体異性体［すなわち、（３Ｒ，５Ｒ）、（３Ｓ，５Ｓ）、（３Ｒ，５Ｓ）、または（３Ｓ，５Ｒ）］の形態であっても、または同じもしくは異なる割合の該実質的に純粋な立体異性体の混合物の形態（例えばジアステレオマー混合物などとして）であってもよい。本明細書において、「立体異性体の混合物」とは、等モル比であってもなくても、化合物の２種類以上の立体異性体のいずれの混合物も含む。一般に、出発材料（式IIIの化合物）の立体化学は得られる生成物（式IIの化合物）においても維持される。
【００５６】
よって、特定の実施形態によれば、式IIIの化合物はその実質的に純粋な立体異性体の形態であり［すなわち、（３Ｒ，５Ｒ）、（３Ｓ，５Ｓ）、（３Ｒ，５Ｓ）、または（３Ｓ，５Ｒ）］、この場合には、式IIIの出発化合物の立体化学を維持する式IIの実質的に純粋な化合物が得られる。
【００５７】
別の特定の実施形態によれば、式IIIの化合物は、等モル比であってもなくても、該立体異性体の混合物（すなわち、式IIIａ、IIIｂ、IIIｃおよびIIIｄの化合物から選択される２種類以上の立体異性体の混合物）の形態である。この場合、式IIIの出発立体異性体の立体化学を維持する式IIの化合物の立体異性体の混合物が得られる。式IIの立体異性体の混合物は、シリカゲルクロマトグラフィーまたは再結晶のような常法に従って、その対応する実質的に純粋な立体異性体へと分離することができる。
【００５８】
一つの実施形態では、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIａの化合物とを反応させて、Ｒ５が負電荷であって、Ｙが式VIIａのＮ含有有機残基である式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得る［選択肢（Ａ）］。
【００５９】
この場合、一つの実施形態では、窒素含有求核分子VIIIａは式IX
【化２５】
2007291050.tif 000026
（式中、
ｎは０、１、２、３、４または５であり、かつ
Ｒ６は置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロシクリル、置換もしくは非置換アルコキシ、置換もしくは非置換アリールオキシ、ハロゲン、置換もしくは非置換カルボキシエステル、置換もしくは非置換アミノから選択される）
のピリジンであり、かつ／またはこのピリジンは１以上の置換もしくは非置換縮合環を形成する。
さらに、特定の実施形態によれば、該式IXのピリジンは、ピリジンおよび次の化合物
【化２６】
2007291050.tif 000027
の１つから選択される。
別の特定の実施形態によれば、窒素含有求核分子VIIIａは式
【化２７】
2007291050.tif 000028
の化合物である。
【００６０】
一般に、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と式VIIIａの化合物との反応は加熱下で行う。実際に当業者ならば、式IIIの化合物から式IIの化合物への変換、すなわち、求核分子の存在下でのアジリジン環の開環のような反応には通常、熱が必要であることを知っている。所望により、マイクロ波を使用できる。特定の実施形態では、加熱は、目的温度に到達させ、その温度で所望の時間維持するのが容易なマイクロ波を反応混合物に照射することにより達成される。一実施形態によれば、この反応は多孔質酸性触媒であるモンモリロナイトのような触媒の存在下で行う（例えば、実施例３．２．１、３．２．２、４．２．１および４．２．２）。
【００６１】
他の実施形態では、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIｂの化合物、および所望により式Ｘの化合物とを反応させて、Ｒ５がＲ３であって、Ｙが式VIIｂのＮ含有有機残基である式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得る［選択肢（Ｂ）］。
【００６２】
この場合、一つの実施形態では、窒素含有求核分子VIIIｂは次の化合物
【化２８】
2007291050.tif 000029
から選択される化合物である。
【００６３】
選択肢（Ｂ）では、アジリジン環に向かう反応性種によって実質的に可能性のある２種類の条件が存在する。一方においては、式VIIIｂの化合物と強塩基（すなわち、ブチルリチウムなど）とを接触させることにより式VIIIｂの化合物の陰イオンを作り出すことができる。式VIIIｂの化合物の陰イオンが形成されてしまえば、式IIIの化合物を添加すればよく、そのアジリジン環は式VIIIｂの化合物の陰イオンによって反応を受ける。この反応は、式Ｘの化合物、例えば、ヨウ化メチル（Ｒ３＝アルキル）などのようなアルキル化化合物の添加によってさらに続けてもよい。式VIIIｂの化合物の陰イオンの形成に必要な条件は当業者に公知である。このような種のいくつかは市販もされている。あるいは、得られる式IIの化合物においてＲ３が水素であれば、式Ｘの化合物の添加前に反応をクエンチすることができる。他方においては、直接VIIIｂの化合物を用いることができる。これらの条件には通常、加熱またはマイクロ波が必要であり、Ｒ３が水素である式IIの化合物が得られる。
【００６４】
さらに別の実施形態では、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と、式VIIIａの化合物および式Ｘの化合物とを反応させて、Ｒ５がＲ３であって、Ｙが式VIIｃのＮ含有有機残基である式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得る［選択肢（Ｃ）］。式VIIIａおよびＸの化合物は前記で定義されている。
【００６５】
当業者ならば、式IIIの化合物から式IIの化合物への変換、すなわち、求核分子の存在下でのアジリジン環の開環のような反応には通常、熱が必要であることは判るであろう。所望により、マイクロ波を使用できる。
【００６６】
式IIの化合物は２つのキラル中心を持っているので、実質的に純粋な立体異性体またはその混合物のいずれの形態でもあり得る。特定の実施形態では、式IIの化合物は
ａ）式IIａ
【化２９】
2007291050.tif 000030
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物；
ｂ）式IIｂ
【化３０】
2007291050.tif 000031
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物；
ｃ）式IIｃ
【化３１】
2007291050.tif 000032
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物；
ｄ）式IIｄ
【化３２】
2007291050.tif 000033
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｒ５およびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物；および
ｅ）前述の、式IIａ、IIｂ、IIｃおよび／またはIIｄの化合物の混合物（等モル比であってもなくてもよい）からなる群から選択される。
好ましい式IIの化合物は、それらの実質的に純粋な立体異性体を含め、対応する見出しで後述する。
【００６７】
得られる式IIの化合物は単離してもよいし、あるいはさらに精製せずにそのまま次の工程に用いてもよい。
式IIの化合物の立体異性体混合物が得られる場合、当業者に公知の常法により所望の立体異性体を単離することができる。
【００６８】
よって、本発明によれば、所望の立体化学を有する、式Ｉのピログルタミン酸誘導体の実質的に純粋な立体異性体の直接の前駆体である式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、得られた式IIIの化合物の立体異性体混合物を精製した後に、その単離された立体異性体と対応する試薬とを反応させるか、あるいは、式IIIの化合物と式VIIIａまたはVIIIｂおよびＸの求核分子との反応から得られた混合物を精製することによるかのいずれかによって得ることができる。
【００６９】
よって、本発明の方法の工程ｃ）によれば、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物が、該式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と式  ＨＸ（ここで、Ｘは上記のように定義される）の酸を含んでなる酸性媒体とを接触させることにより、式Ｉのピログルタミン酸誘導体の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物へと変換される。
【００７０】
当業者ならば、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物との反応を行うのに好適な式ＨＸの有機酸または無機酸は判るであろう。特定の実施形態では、この酸ＨＸはＨＣｌ、ＨＢｒなどのような無機酸である。好ましい実施形態によれば、ＨＸはＨＢｒである。
【００７１】
式ＩおよびIIの化合物の性質によって、反応は１当量または２当量のＨＸを必要とする。当業者ならば、塩を形成させるのに必要な条件は判るであろう。本発明の実施形態によれば、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を過剰量の式ＨＸ（ここで、Ｘは上記のように定義される）の酸と接触するように置く。さらなる実施形態によれば、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物はＨＢｒ水溶液に溶かし、加熱する。
【００７２】
上記によれば、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物から段階的に式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得ることができる。しかしながら、ワンポット法によって式IIIの化合物から式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得ることもできる。よって、それは本発明のさらなる態様である、式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体または混合物の合成のためのワンポット法であり、その方法は、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と式VIIIａまたはVIIIｂの窒素含有求核分子とを反応させた後、前工程から得られた化合物と式ＨＸの酸とを反応させることを含む。
【００７３】
式Ｉの化合物は２つのキラル中心を持っているので、それはその任意の実質的に純粋な立体異性体の形態またはその混合物の形態でもあり得る。式Ｉの好ましい化合物は、それらの実質的に純粋な立体異性体を含め、対応する見出しで後述する。
【００７４】
式Ｉの化合物
式Ｉの化合物は２つのキラル中心を持っているので、それらはその任意の実質的に純粋な立体異性体の形態またはその混合物の形態でもあり得る。特定の実施形態では、式Ｉの化合物は、
ａ）式Ｉａ
【化３３】
2007291050.tif 000034
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な立体異性体化合物、
ｂ）式Ｉｂ
【化３４】
2007291050.tif 000035
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な立体異性体化合物、
ｃ）式Ｉｃ
【化３５】
2007291050.tif 000036
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な立体異性体化合物、
ｄ）式Ｉｄ
【化３６】
2007291050.tif 000037
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な立体異性体化合物、および
ｅ）前述の、式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃおよび／またはＩｄの実質的に純粋な化合物の混合物（ただし、該混合物は次の化合物：
（ｉ）１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド、または
（ii）１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない）
からなる群から選択される。
【００７５】
式Ｉのいくつかの化合物、すなわち、（ｉ）１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド、および（ii）１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリドは、存在し得る４種類のその立体異性体全ての混合物として記載されているが、それらの実質的に純粋な立体異性体の合成はこれまでに達成されていない。
【００７６】
特定の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１は−ＯＨまたは−ＯＲａ（ここで、Ｒａは前記で定義されたものである）であり、好ましくは−ＯＨである。
他の特定の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ２は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドであり、好ましくは水素である。
【００７７】
他の特定の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ３またはＲ４は独立に水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドであり、好ましくは、その両者が同時に水素である。
【００７８】
他の特定の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｘは医薬上許容される陰イオン、好ましくは臭素イオンまたは塩素イオンである。
他の特定の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｒ１はＯＨまたはＯＲａであり、好ましくはＯＨであり；Ｒ２は水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドであり、好ましくは水素であり；Ｒ３またはＲ４は独立に水素、酸性条件下で加水分解する窒素保護基またはフタルアミドであり、好ましくは、Ｒ３またはＲ４は同時に水素であり；かつ／またはＸは医薬上許容される陰イオン、好ましくは臭素イオンまたは塩素イオンである。
【００７９】
他の特定の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｙは
【化３７】
2007291050.tif 000038
から選択される有機残基である。
【００８０】
他の特定の実施形態では、式Ｉの化合物において、Ｙは
【化３８】
2007291050.tif 000039
から選択される有機残基である。
特定の実施形態によれば、式Ｉの化合物は、式Ｉ’ａ
【化３９】
2007291050.tif 000040
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびｎは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物である。
本発明の特定の実施形態によれば、該式Ｉの化合物は式Ｉ’ｂ
【化４０】
2007291050.tif 000041
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびｎは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物である。
本発明の特定の実施形態によれば、該式Ｉの化合物は、式Ｉ’ｃ
【化４１】
2007291050.tif 000042
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびｎは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物である。
本発明の特定の実施形態によれば、該式Ｉの化合物は、式Ｉ’ｄ
【化４２】
2007291050.tif 000043
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６およびｎは前記で定義されたものである）
の実質的に純粋な化合物である。
【００８１】
本発明の特定の実施形態によれば、当モル比であってもなくても、式Ｉ’ａ、Ｉ’ｂ、Ｉ’ｃおよび／またはＩ’ｄの２以上の化合物を含んでなる混合物が提供され、例えば、式Ｉ’ａとＩ’ｂの化合物を含んでなる混合物、式Ｉ’ａとＩ’ｃの化合物を含んでなる混合物、または式Ｉ’ａとＩ’ｄの化合物を含んでなる混合物、または式Ｉ’ｂとＩ’ｃの化合物を含んでなる混合物、または式Ｉ’ｂとＩ’ｄの化合物を含んでなる混合物、または式Ｉ’ｃとＩ’ｄの化合物を含んでなる混合物、または式Ｉ’ａとＩ’ｂとＩ’ｃの化合物を含んでなる混合物、または式Ｉ’ａとＩ’ｂとＩ’ｄの化合物を含んでなる混合物、または式Ｉ’ｂとＩ’ｃとＩ’ｄの化合物を含んでなる混合物、または式Ｉ’ａとＩ’ｂとＩ’ｃとＩ’ｄの化合物を含んでなる混合物がある。
【００８２】
本発明の特定の実施形態によれば、式Ｉの化合物は
３Ｓ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド；
３Ｒ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド；
３Ｒ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド；および
３Ｓ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド
からなる群から選択される。
【００８３】
本発明はさらに、当モル比であってもなくても、該式Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃおよび／またはＩｄの化合物の混合物を含んでなる組成物を提供する｛ただし、該混合物は次の化合物：
（ｉ）１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド、または
（ii）１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない｝。
【００８４】
式IIの化合物
式IIのいくつかの化合物、すなわち、１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート、１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート、１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテートまたは１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムヒドロクロリドは、存在し得る４種類のその立体異性体全ての混合物として記載されているが、それらの実質的に純粋な立体異性体の合成はこれまでに達成されていない。
【００８５】
よって、別の態様においては、本発明は式IIの実質的に純粋な化合物またはその混合物に関する。
特定の実施形態では、本発明は、式IIａ、IIｂ、IIｃおよびIIｄの実質的に純粋な化合物に関する。
【００８６】
特定の実施形態では、本発明は、前述の式IIａ、IIｂ、IIｃおよび／またはIIｄの化合物の、任意のモル比の混合物に関する｛ただし、該混合物は次の化合物：
１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート；
１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート；
１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート；または
１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない｝。
【００８７】
別の特定の実施形態では、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ１が−ＯＲａであり、好ましくは、ここでＲａがアルキル基である化合物である。
別の特定の実施形態では、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ２が−（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−Ｒａ、好ましくはＢＯＣ基である化合物である。
【００８８】
別の特定の実施形態では、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ４が−（Ｏ）Ｓ（＝Ｏ）−Ｒａ、好ましくはトシルである化合物である。
別の特定の実施形態では、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ１が−ＯＲａであり、好ましくは、ここで、Ｒａがアルキル基であり；Ｒ２が−（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−Ｒａ、好ましくはＢＯＣ基であり；かつ、Ｒ４が−（Ｏ＝）Ｓ（＝Ｏ）−Ｒａ、好ましくはトシルである化合物である。
【００８９】
本発明の別の実施形態によれば、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が独立に水素である化合物である。
本発明の別の実施形態によれば、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ１が−ＯＨである化合物である。
本発明の別の実施形態によれば、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ５が負電荷である化合物である。
【００９０】
本発明はまた、前述の式IIａ、IIｂ、IIｃおよびIIｄの化合物ならびにその混合物からなる群から選択される化合物を任意のモル比で含んでなる組成物に関する｛ただし、該混合物は次の化合物：
１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート；
１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート；
１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムアセテート；または
１−（１−アセチル−３−アセチルアミノ−５−カルボキシ−２−オキソ−ピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムヒドロクロリド
の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない｝。
【００９１】
式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、前述のように、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物と
式VIIIａの化合物とを、またはその代わりに
式VIIIｂの化合物、および所望により式Ｘの化合物とを、またはその代わりに
式VIIIａの化合物、および所望により式Ｘの化合物とを
反応させることを含む方法によって得ることができる。
【００９２】
該方法は本発明のさらなる態様をなし、式IIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物の合成を可能とする。
【００９３】
式IIIの化合物
別の態様では、本発明は、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物に関する。該式IIIの化合物は２つのキラル中心を持っているので、いずれの実質的に純粋な立体異性体でもその混合物でもあり得る。  
【００９４】
特定の実施形態では、式IIIの化合物は式IIIａ、IIIｂ、IIIｃおよびIIIｄの化合物およびその任意の混合物から選択される。
別の特定の実施形態では、本発明は、式IIIａ、IIIｂ、IIIｃおよびIIIｄの２以上の化合物を含んでなる混合物に関する。該混合物の限定されない例としては、それら化合物のうち２つの混合物（例えば、IIIａとIIIｂ、IIIａとIIIｃ、IIIａとIIIｄ、IIIｂとIIIｃ、IIIｂとIIIｄ、またはIIIｃとIIIｄの混合物）、または該化合物のうち３つの混合物（例えば、IIIａとIIIｂとIIIｃ、IIIａとIIIｂとIIIｄ、またはIIIｂとIIIｃとIIIｄの混合物）、または該４つの化合物の混合物（例えば、IIIａとIIIｂとIIIｃとIIIｄの混合物）が挙げられる。各特定の化合物（IIIａ〜IIIｄ）は該混合物中にいずれの割合または比率で存在してよく、例えば、当モルの割合または比率であっても、該化合物のうち１以上が他のものに対して過剰となる種々の割合または比率であってもよい。
【００９５】
別の特定の実施形態では、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ１が−ＯＲａであり、好ましくは、ここで、Ｒａがアルキル基である化合物である。
別の特定の実施形態によれば、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ２が（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−Ｒａ、好ましくはＢＯＣ基である化合物である。
【００９６】
別の特定の実施形態によれば、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ４が（Ｏ＝）Ｓ（＝Ｏ）−Ｒａ、好ましくはトシルである化合物である。
別の特定の実施形態によれば、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ１が−ＯＲａ、好ましくは、ここで、Ｒａがアルキル基であり；Ｒ２が−（Ｏ＝）Ｃ−Ｏ−Ｒａ、好ましくはＢＯＣ基であり；かつ、Ｒ４が−（Ｏ＝）Ｓ（＝Ｏ）−Ｒａ、好ましくはトシルである化合物である。
【００９７】
別の特定の実施形態によれば、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５が独立に水素である化合物である。
式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体または混合物は、前述のように、鏡像異性体的に純粋な形態であっても鏡像異性体混合物の形態であってもよい式IVの化合物と式Ｖの化合物とを反応させることによって得ることができる。該方法は本発明のさらなる態様をなす。該方法により、式IIIの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物を得ることもまた可能能である。
【００９８】
式Ｉの化合物および医薬組成物の使用
式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物は、対象においていくつかの症状、例えば、腫瘍、免疫不全、感染などの処置および／または予防のための薬剤の有効成分として使用できる。
【００９９】
式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体またはその混合物での処置に感受性のある症状の非限定的な例としては、
Ａ）癌または腫瘍関連症状：実際には、急性リンパ芽球性白血病、成人急性リンパ芽球性白血病、小児急性骨髄性白血病、成人急性骨髄性白血病、副腎皮質癌腫、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）関連癌、肛門癌、星状細胞腫、小児小脳性星状細胞腫、基底細胞癌腫、胆管癌、肝外胆嚢癌(Extrahepatic Bladder Cancer)、膀胱癌、骨癌、骨肉腫／悪性繊維性組織球腫、脳幹膠腫、脳腫瘍、悪性神経膠腫、上衣細胞腫、髄芽細胞腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍(Supratentorial Primitiva Neuroectodermal Tumors)、視覚経路・視床下部神経膠腫、乳癌、Ｍａｔｅ気管支腺腫／カルチノイド、小児バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、未知の原発性中枢神経系リンパ腫の胃腸管癌腫、原発性小脳性星状細胞腫、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、子宮頸癌、小児癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮内膜癌、食道癌、小児ユーイング系腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、眼内黒色腫眼癌、網膜芽細胞腫、胆嚢癌、胃癌、胃腸管カルチノイド腫瘍、胚細胞腫瘍、卵巣妊娠絨毛腫瘍神経膠腫、成人神経膠腫、脳幹膠腫、大脳星状細胞腫神経膠腫、ヘアリー細胞性白血病、頭頸部癌、肝細胞（肝臓）癌、成人（原発性）肝細胞（肝臓）癌、小児（原発性）ホジキンリンパ腫、成人ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内黒色腫、膵島細胞癌腫（内分泌膵臓）、カポジ肉腫、腎臓（腎細胞）癌、腎臓癌、喉頭癌、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ヘアリー細胞、口唇および口腔癌、小児（原発性）肺癌、非小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞ホジキン成人リンパ腫、ホジキン小児リンパ腫、非ホジキン成人リンパ腫、非ホジキン小児リンパ腫、原発性中枢神経系、マクログロブリン血症、骨肉腫のワルデンストローム悪性繊維性組織球腫、髄芽細胞腫、黒色腫、眼内（眼）メルケル細胞癌腫、中皮腫、成人悪性中皮腫、潜伏原発性多発性内分泌腺腫症候群を伴う小児転移性扁平上皮頸部、小児多発性骨髄腫／血漿細胞新生物菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成症候群／骨髄増殖性疾患、骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性骨髄腫，多発性骨髄増殖性疾患、慢性鼻腔・副鼻腔癌、鼻咽腔癌、鼻咽頭癌、小児神経芽腫、口腔癌、小児口腔癌、口唇・口咽頭癌、骨卵巣癌の骨肉腫／悪性繊維性組織球腫、小児卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性潜伏腫瘍、膵臓癌、小児膵臓癌、膵島細胞副鼻腔・鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、クロム親和性細胞腫、松果体芽腫およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児下垂体腫瘍、血漿細胞新生物／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、原発性中枢神経系リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞（腎臓）癌、腎細胞（腎臓）癌、小児腎盂および尿管、移行上皮癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、小児唾液腺癌、唾液腺癌、小児肉腫、ユーイング系腫瘍、肉腫、カポジ肉腫、軟組織、成人肉腫、軟組織、小児肉腫、子宮セザリー症候群、皮膚癌（非黒色腫）、小児皮膚癌（黒色腫）、皮膚癌腫、メルケル細胞小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉腫、成人軟組織肉腫、小児扁平上皮細胞癌腫、潜伏原発転移性胃癌を伴う扁平上皮細胞頸部癌、小児テント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺腫、小児胸腺腫および胸腺癌腫甲状腺癌、甲状腺癌、小児の腎盂移行上皮癌および尿管栄養芽細胞腫瘍、妊娠性の不明の原発部位、移行上皮細胞癌、尿道癌、子宮癌、子宮内膜子宮肉腫、膣癌、視覚経路・視床下部神経膠腫、小児陰門癌、ワルデンストロームマクログロブリン血症、ビルムス腫瘍などをはじめとするあらゆる癌および腫瘍を含む；
【０１００】
Ｂ）感染：実際には、細菌、真菌およびウイルス起源の感染など、あらゆる種類の感染を含む；または
Ｃ）自己免疫疾患：実際には、多発性硬化症（ＭＳ）、クローン病、関節リウマチ、１型真性糖尿病、乾癬、狼瘡、潰瘍性大腸炎、白斑、セリアック病、脈管炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、甲状腺炎（橋本、グレーブス）、重症筋無力症、ギラン−バレー症候群、ブドウ膜炎、扁平苔癬、側頭動脈炎、サルコイドーシス、ドライ症候群（シェーグレン）、気管支喘息、天疱瘡、強直性脊椎炎、硬皮症、繊維筋痛症、リウマチ熱などをはじめとする、"American Autoimmune Related Diseases Association”のウェブサイト[http://www.aarda.org]に挙げられているあらゆる自己免疫疾患を含む；
が挙げられる。
【０１０１】
よって、さらなる態様によれば、本発明は、式Ｉの化合物、その実質的に純粋な立体異性体Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃまたはＩｄ、または当モル比であってもなくてもその混合物｛ただし、該混合物は次の化合物：（ｉ）１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド、または（ii）１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリドの４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない｝と医薬上許容される担体とを含んでなる医薬組成物（以下、本発明の医薬組成物と呼ぶ）に関する。
【０１０２】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は有効成分として、式Ｉの化合物少なくとも１つの実質的に純粋な立体異性体、すなわち、Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃもしくはＩｄ、または当モル比であってもなくてもその混合物（ただし、該混合物は前述の化合物（ｉ）または（ii）の４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない）を、治療上有効な量で含む。本明細書で用いる意味において、「治療上有効な量」という表現は、所望の作用を生じるように算出された有効成分の量を意味し、一般に、とりわけ、用いる有効成分および得られる治療作用の固有の特徴によって決定される。特定の実施形態では、前述の症状の処置および／または予防を必要とする対象に投与する有効成分の用量は１０−１０〜１０１０ｍｇ／体重ｋｇ、一般には１０−３〜１０３ｍｇ／体重ｋｇの間の範囲である。
【０１０３】
「担体」とは、有効成分が一緒に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを意味する。このような医薬担体は水のような無菌の液体、および石油、動物、植物もしくは合成起源のものを含む油（例えば、落花生油、大豆油、鉱油、胡麻油など）であり得る。特に注射溶液としては、水または生理食塩水、ならびにデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液が担体として好ましく用いられる。好適な医薬担体としては、E.W. Martinにより”Remington’s Pharmaceutical Sciences”に記載されている。さらに、「医薬上許容される」とは、生理学的に許容され、かつ、ヒトに投与しても胃の不快感、めまいなどのアレルギー反応または類似の不都合な反応を通常生じない分子存在および組成物を意味する。本明細書において好ましくは、「医薬上許容される」とは、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって認可されているか、または米国薬局方もしくは動物、さらに特にヒトにおける使用のための他の一般に認知されている薬局方に挙げられていることを意味する。
【０１０４】
処置を必要とする動物、例えばヒトなどの対象に投与する場合、本発明の医薬組成物は経口（例えば、経口、舌下など）、非経口（例えば、皮下、筋肉内、静脈内、筋肉内、など）、膣、直腸、鼻腔、局所的、眼などの適当ないずれの経路によって投与してもよい。
【０１０５】
有効成分と好適な医薬上許容される担体とを混合することによって得られる本発明の医薬組成物は、複数の医薬投与形、例えば、固体、液体などで投与することができる。本発明の医薬組成物の該医薬投与形の限定されない例としては、口腔用滴剤（溶液、懸濁液エマルションなど）、経口製剤（液体、溶液、懸濁液、エマルション、ゲル、ペースト、粉末など）、経口凍結乾燥物、口腔ガム、経口溶液または懸濁液用の粉末、顆粒、胃耐性顆粒、徐放性顆粒、放出改良顆粒、経口懸濁液用の顆粒、経口溶液または懸濁液用の粉末および溶剤、シロップ、シロップ用粉末、シロップ用顆粒、錠剤（例えば、可溶性錠剤、分散性錠剤、被覆錠剤、フィルムコート錠剤、発砲性錠剤、口腔分散錠剤、胃耐性錠剤、徐放性錠剤、放出改良錠剤、バッカル錠、チュワブル錠など）、ハーブティー、インスタント・ハーブティー、発泡性粉末または顆粒、サシェ剤、カプセル剤（例えば、硬カプセル、軟カプセル、胃耐性硬カプセルまたは軟カプセル、徐放性硬カプセルまたは軟カプセル剤、放出改良硬カプセルまたは軟カプセルなど）、丸剤、持続放出性管腔内ディバイス、パルス放出性管腔内ディバイス、舐剤(lick blok)、薬用飼料用のプレミックス、ペレット、含嗽薬、含嗽薬用濃縮物、含嗽薬（溶液用の粉末または錠剤）、口腔粘膜用溶液、懸濁液、滴剤、スプレー、ゲル、ペースト、カプセル剤など、舌下用スプレー、錠剤など、口中洗浄剤、歯肉用溶液、ゲル、ペーストなど、トローチ、打錠トローチ、香錠、歯科用ゲル、スティック、インサート、粉末、溶液、懸濁液、エマルションなど、練り歯磨き、クリーム、ゲル、軟膏、皮膚用ペースト、フォーム、スプレー、溶液、懸濁液、粉末、液体、溶液、皮膚用溶液、懸濁液、エマルション用の濃縮物、スティック、スポンジなど、硬膏、シャンプー、イオン泳動用溶液、経皮パッチ(transdermal match)、湿布、浸漬溶液、懸濁液、エマルション、浸漬溶液、懸濁液またはエマルション用濃縮物、注入溶液、懸濁液またはエマルション、滴剤溶液、滴剤懸濁液、滴剤エマルション、乳首浸漬溶液、乳首浸漬懸濁液、乳首浸漬エマルション、乳首スプレー溶液、眼用クリーム、眼用ゲル、眼用軟膏、点眼剤（溶液、懸濁液、溶液用粉末および溶剤、懸濁液用粉末および溶剤、再構成用溶剤、ローション、ローション再構成用溶剤など）、眼用インサート、耳用クリーム、耳用ゲル、耳用軟膏、点耳剤（溶液、懸濁液、エマルション、粉末など）、耳用スプレー（溶液、懸濁液など）、耳用洗浄剤（溶液、エマルションなど）、耳用タンポン、耳用スティック、鼻用クリーム、鼻用ゲル、鼻用軟膏、点鼻剤（溶液、懸濁液、エマルションなど）、鼻用粉末、鼻用スプレー（溶液、懸濁液、エマルションなど）、鼻腔洗浄剤、鼻用スティック、膣用クリーム、膣用ゲル、膣用軟膏、膣用フォーム、膣用溶液、膣用懸濁液、膣用エマルション、膣溶液用錠剤、膣用硬カプセルまたは軟カプセル、膣用錠剤、発泡性膣用錠剤、膣用送達系、直腸用クリーム、直腸用ゲル、直腸用軟膏、直腸用フォーム、直腸用溶液、直腸用懸濁液、直腸用エマルション、直腸溶液用濃縮物、直腸溶液用粉末、直腸懸濁液用粉末、直腸懸濁液用錠剤、坐剤、直腸用カプセル、直腸用タンポンネブライザー溶液、ネブライザー懸濁液、ネブライザー懸濁液用粉末、ネブライザー溶液用粉末、ネブライザーエマルション、加圧吸入剤（溶液、懸濁液、エマルションなど）、吸入粉末、吸入粉末（硬カプセル）、分散済み吸入粉末、吸入蒸気（粉末、カプセル、溶液、錠剤、軟膏、液体など）、吸入ガス、注射用ゲル、注射用溶液、注射用懸濁液、注射用エマルション、注射溶液用粉末、注射懸濁液用粉末、注射溶液用粉末および溶剤、注射懸濁液用粉末および溶媒、注射溶液用濃縮物、点滴用溶液、点滴用エマルション、点滴溶液用粉末、点滴溶液用濃縮物、点滴溶液用粉末および溶剤、移植錠剤、腹膜透析用溶液、血液濾過用溶液、血液ダイアフィルトレーション用溶液、血液透析用溶液、血液透析溶液用濃縮物、膀胱腔内用溶液、膀胱洗浄液、膀胱洗浄液用粉末、尿道用ゲル、尿道用スティック、気管肺内点滴注入剤（溶液）、気管肺内点滴注入剤（懸濁液(uspension)）、気管肺内点滴注入剤（溶液用粉末および溶剤）、子宮頸管内膜用ゲル、子宮頸管内膜ゲル用粉末および溶剤、乳房内溶液、乳房内懸濁液、乳房内エマルション、乳房内軟膏、乳首用スティック、子宮内送達系、など
が挙げられる。
【０１０６】
本発明の医薬組成物の所望の医薬投与形を作製するのに必要な担体および補助物質は、とりわけ、選択された医薬投与形によって異なる。このような医薬組成物の医薬投与形は当業者に公知の常法に従って作製される。種々の有効成分に関しての投与法、用いる賦形剤およびそれらの作製方法は、"Tratado de Farmacia Galenica”, C. Fauli i Trillo, Luzan 5, S.A. de Ediciones, 1993に見出せる。
【０１０７】
別の態様において、本発明は、対象における免疫応答を増強とした医薬組成物の製造のため、または抗腫瘍医薬組成物の製造のため、または細菌、真菌またはウイルス起源の感染の処置を目的とした医薬組成物の製造のため、または自己免疫疾患の処置を目的とした医薬組成物の製造のための、式Ｉの化合物の実質的に純粋な立体異性体、すなわち、Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃまたはＩｄ、または等モル比であってもなくてもその混合物｛ただし、該混合物は次の化合物：（ｉ）１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリド、または（ii）１−（１−アセチル−３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムクロリドヒドロクロリドの４種類の立体異性体を全て同時に含むことはない｝の使用に関する。
【０１０８】
本発明によって提供される医薬組成物での処理に感受性のある症状の非限定的な例としては、前記されたものが挙げられる。
以下、本発明を説明するために実施例を用い得るが、これらはその範囲の限定と考えるべきではない。
【実施例】
【０１０９】
一般法 
融点は総て毛細管で測定し、補正は行わなかった。ＩＲスペクトルはＮｉｃｏｌｅｔ  Ｉｍｐａｃｔ分光光度計を用い、ＫＢｒディスクで測定した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、ＶＡＲＩＡＮ  ＵＮＩＴＹおよびＵＮＩＴＹＰＬＵＳ装置にて３００〜５００ＭＨｚで得られたものである。化学シフト（δ）は、内部標準としてＴＭＳを用いて測定し、各シグナルの多重度（ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｄｄ，二重の二重線；ｔ，三重線；ｑ，四重線；ｍ，多重線）を示す。ＨＰＬＣ−ＭＳ分析はＡｇｉｌｅｎｔ  １１００装置で行った。クロマトグラフィーカラムＬｕｎａ  Ｃ１８（１５０×４．６ｍｍ）５μｍ  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘを、４％ギ酸水溶液（Ａ）、水（Ｂ）およびアセトニトリル（Ｃ）の三成分勾配からなる移動相とともに用いた。勾配はＡ（２．５％）、Ｂ（９３％）およびＣ（４．５％）で始め、３０分でＡ（２．５％）、Ｂ（４．５％）および（９３％）とした。質量検出器では、フラグメンターを７０ｅＶで作動させた。元素分析はＬＥＣＯ  ＣＨＮＳ−９３２装置で行った。収量は総て、単離された純粋な化合物に相当するものである。
【０１１０】
実施例１は、本発明の方法の出発材料（式IVの化合物）である（２Ｒ−４−メチレン−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔブチルエステル２−エチルエステル）の合成に関するものである。
【０１１１】
実施例２は、本発明の方法の出発材料である式Ｖの化合物の合成に関するものである。
実施例３および４は、ワンポット法を用い、式Ｉの化合物である（３Ｒ，５Ｒ）、（３Ｓ，５Ｓ）、（３Ｒ，５Ｓ）および（３Ｓ，５Ｒ）−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミドの合成に関するものである。
【０１１２】
実施例５は、段階的合成に従って、３Ｓ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミドのワンポット合成に関するものである。
実施例６は、腫瘍増殖に対する式Ｉの化合物の種々の異性体の作用を分析するものである（アッセイ腫瘍：ＲＥＮＣＡ）。
【０１１３】
実施例１
式IVの化合物：（Ｒ）−５（２Ｒ−４−メチレン−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔブチルエステル２−エチルエステル）の合成
標題化合物の合成はスキーム１に示した通りである。
【０１１４】
１．１  化合物２：２Ｓ−５−オキソピロリジン−２−カルボン酸エチルエステルの合成
１０Ｌの反応器に、−１０℃に冷却した無水エタノール（５．０Ｌ）中のＤ−グルタミン酸１（１ｋｇ，６．８０ｍｏｌ）を仕込み、滴下漏斗を通して塩化チオニル（２．０ｋｇ，１４．９ｍｏｌ）を２時間かけてゆっくり加えた。添加が完了した後、混合物を室温で１時間攪拌した後、さらに１時間８０℃に加熱した。得られた溶液を濃縮乾固した（ＣＡＲＥ：ＨＣｌおよびＳＯ２蒸気の放出）。残渣をエタノール（２．５Ｌ）で希釈し、エタノール中水酸化カリウム溶液（１０重量％，約２．０Ｌ）を添加してｐＨ＝７に中和した。生じた固体を濾去し、溶液を濃縮し、１のジエチルエステルを蝋状の固体として得た。
【０１１５】
次に、残渣を２時間真空蒸留し（９０℃，３．１ミリバール）、残留物をさらに１５０℃、５．２ミリバールで２時間加熱した。この残渣は室温で固化した。ＭＴＢＥ／ヘキサン（２：１）から再結晶させ、目的生成物２を褐色がかった固体として得た（９６０ｇ，９０％）。融点４９〜５１℃。
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): 6.82 (bs, 1H); 4.29-4.23 (m, 1H); 4.21 (q, 2H, J=7.3Hz); 2.48-2.17 (m, 4H); 1.28 (t, 3H, J=7.3Hz) ppm.
【０１１６】
１．２  ３：２Ｒ−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔブチルエステル２−エチルエステルの合成
反応器内で、ジクロロメタン（８．０Ｌ）中、ピログルタミン酸エチル２（９００ｇ，５．７３ｍｏｌ）の攪拌溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．５ｋｇ，１１．５ｍｏｌ）、トリエチルアミン（８００ｍＬ，５．７３ｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（７００ｇ，５．７３ｍｏｌ）を加え、反応物を２時間攪拌した。この赤褐色の溶液を濃縮乾固し、酢酸エチル（１０．０Ｌ）に希釈し、ＨＣｌ  ３Ｎ水溶液（４×２．５Ｌ）で洗浄した。合わせた有機層を水（６×２．５Ｌ）およびブライン（１．０Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。この反応混合物濃縮乾固し、氷中で冷却し、ＭＴＢＥおよびヘキサン（１：１）でトリチュレートし、褐色固体（３９０ｇ）を得た。母液を濃縮して油状物（６００ｇ）を得、クロマトグラフィー（ＳｉＯ２，ヘキサン／酢酸エチル３：１）の後、無色の固体（３８６ｇ）３を得た。全収量（７７６ｇ，５４％）。融点４８〜４９℃。
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): 4.57 (dd, 1H, J=9.5Hz, J=3.3Hz); 4.20 (q, 2H, J=7.3Hz); 2.72-1.77 (m, 4H); 1.46 (s, 9H); 1.26 (t, 3H, J=7.3Hz) ppm.
【０１１７】
１．３  ４：シス−およびトランス−２Ｒ−４−ジメチルアミノ−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔブチルエステル２−エチルエステルの混合物の合成
−７８℃にて、ＴＨＦ（１Ｍ，０．２４Ｌ，０．２４ｍｏｌ）中、ＬｉＨＭＤＳの攪拌溶液に、乾燥ＴＨＦ（１．０Ｌ）中、３（３０ｇ，０．１２ｍｏｌ）の溶液をゆっくり加えた。４０分間−７８℃で攪拌した後、エッシェンモーザー(Eschenmoser)の塩（４５．５ｇ，０．２４ｍｏｌ）を加え、さらに２０分間攪拌を続けた。この反応混合物を室温まで温め、さらに１６時間攪拌した。この混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル（３００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）とで分液した。水層を再び酢酸エチル（２×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出液をＨＣｌ  １Ｍ水溶液（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。酸性層をすぐに重炭酸ナトリウムで中和し、酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出した。有機相を水（３００ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮乾固し、目的生成物４を淡褐色の油状物として得（２６．９ｇ，７２％）、これをそのまま次の工程で用いた。
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): 4.62 (dd, 1H, J=9.4Hz, J=3.3Hz);4.21 (q, 2H,
J=7.3Hz); 4.18-4.07 (m, 1H); 2.57-2.20 (m, 3H); 2.22 (s, 3H); 2.17 (s, 3H); 1.47 (s, 9H); 1.24 (t, 3H, J=7.3Hz) ppm.
【０１１８】
１．４  （Ｒ）−５：２Ｒ−４−メチレン−５−オキソピロリジン−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔブチルエステル２−エチルエステルの合成
オートクレーブ（４Ｌ）に、ＭｅＯＨ（２．５Ｌ）中、４（２４４．９ｇ，０．７４ｍｏｌ）の溶液およびヨードメタン（１３８．２ｍＬ，２．２２ｍｏｌ）を仕込んだ。この反応混合物を室温で４８時間攪拌した。溶媒を除去し、残渣を酢酸エチル（２Ｌ）と１０％ＮａＨＣＯ３（１Ｌ）とで分液した。水相を再び酢酸エチル（３×５００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル４：１→酢酸エチル）により精製し、（Ｒ）−５を無色の油状物として得た（５５．１ｇ，２７％）。
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): 6.23 (t, 1H, J=2.7Hz); 5.51 (t, 1H, J=2.2Hz); 4.61 (dd, 1H, J=10.3Hz, J=3.3Hz); 4.22 (q, 2H, J=7.1Hz); 3.17-3.05 (m, 1H); 2.75-2.64 (m, 1H); 1.47 (s, 9H); 1.23 (t, 3H, J=7.1Hz) ppm.
【０１１９】
実施例２
式Ｖの化合物：Ｎ−トシルイミノベンジルヨージナンの合成
標題化合物の合成をスキーム２に示す。
スキーム２
【化４３】
2007291050.tif 000044
【０１２０】
ｐ−トルエンスルホンアミド（５．１３ｇ）、水酸化カリウム（４．２０ｇ）およびメタノール（１２０ｍＬ）を、その反応混合物を１０℃以下に保ちながら、氷浴中、三角フラスコ内で攪拌した。この攪拌混合物に二酢酸ヨードベンゼン（９．６０ｇ）を加え、得られた黄色の溶液を室温で３．５時間攪拌した。この反応混合物を大過剰の氷水に注ぎ、１時間攪拌した。一晩放置すると、黄色の固体が沈殿した。この淡黄色固体を濾過により単離し、ブフナー漏斗で気流を用いて乾燥させた。この生成物が不溶のエーテルを用い、存在しているヨードベンゼンを数回洗い流した。この黄色固体をできる限り最少量の沸騰メタノールに溶解した。この溶液を一晩冷凍庫に入れ、灰白色の固体を濾過により回収した（５．１ｇ，４６％）。
【０１２１】
実施例３
（３Ｒ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド）９ｃおよび（３Ｓ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド）９ｄの合成
標題化合物（９ｃおよび９ｄ）の合成をスキーム３に示す。
スキーム３
【化４４】
2007291050.tif 000045
【０１２２】
３．１  ３Ｒ，６Ｒ−４−オキソ−１−（４−トルエンスルホニル）−１，５−ジアザスピロ［２，４］ヘプタン−５，６−ジカルボン酸５−ｔｅｒｔブチルエステル６−エチルエステル７ｃおよび３Ｓ，６Ｒ−４−オキソ−１−（４−トルエンスルホニル）−１，５−ジアザスピロ［２，４］ヘプタン−５，６−ジカルボン酸５−ｔｅｒｔブチルエステル６−エチルエステル７ｄの合成
乾燥アセトニトリル（１２ｍＬ）中、（Ｒ）−５（３．０２ｇ，１１．２１ｍｍｏｌ）の冷溶液（０℃，氷水浴）に、ＰｈＩ＝ＮＴｓ（実施例２参照）（６．２７ｇ，１６．８ｍｍｏｌ）を一度に加えた後、Ｃｕ（ａｃａｃ）２（２９３ｍｇ，１．１２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた不均質な混合物を０℃で１５分間攪拌し、室温まで温め、一晩攪拌した。得られた混合物に１Ｍ  ＮａＯＨ（５０ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出した。次に、有機層をブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固した。この粗油状物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：２／１）により精製し、アジリジン７ｃ（７３０ｍｇ）および７ｄ（２８７ｍｇ）を白色固体として得た（合わせた収率：２３％）。
7c:
融点: 94-95℃
[α]D25℃= +42°(0.032, CHCl3)
IR(KBr,cm-1): 2977, 2928, 1808, 1746, 1352, 1298, 1251, 1192, 1161, 988, 690.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) (7c): 7.82 (d, 2H, J=7.3Hz); 7.31 (d, 2H, J=7.7Hz); 4.74 (dd, 1H, J=9.7Hz, J=2.02Hz); 4.25-4.22 (m, 2H); 3.28 (dd, 1H, J=14.4Hz, J=9.7Hz); 2.78 (s, 1H); 2.57 (s, 1H); 2.53 (dd, 1H, J=14.4Hz, J=2.02Hz);
2.42 (s, 3H); 1.49 (s, 9H); 1.29 (t, 3H, J=7.0Hz) ppm.
13C (CDCl3, 125 MHz) (7c): 170.5, 166.9, 148.7, 145.1, 135.2, 129.6, 127.9, 84.5, 62.0, 55.5, 47.1, 38.3, 27.7, 25.3, 21.5, 14.0ppm
MS (ESI+): m/z: 339 (M+1-Boc)
7d:
融点: 55-56℃
[α]D25℃= +11°(0.036, CHCl3)
IR (KBr, cm-1): 2981, 2936, 1799, 1749, 1371, 1330, 1253, 1203, 1156, 1094, 989, 687.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) (7d): 7.79 (d, 2H, J=8.0Hz); 7.30 (d, 2H, J=7.7Hz); 4.70 (dd, 1H, J=9.4Hz, J=4.3Hz); 4.30-4.22 (m, 2H); 3.06 (dd, 1H, J=15.1Hz, J=4.3Hz)., 2.92 (dd, 1H, J=15.4Hz, J=9.4Hz); 2.82 (s, 1H)., 2.63 (s, 1H); 2.41 (s, 3H); 1.49 (s, 9H); 1.28 (t, 3H, J=7.0Hz) ppm.
13C (CDCl3, 125 MHz) (7d): 169.5, 167.1, 148.9, 145.0, 135.7, 129.6, 127.9, 84.5, 62.1, 56.1, 47.0, 37.1, 27.8, 24.5, 21.6, 14.0 ppm.
MS (ESI+): m/z: 339 (M+1-Boc)
【０１２３】
３．２．１  ３Ｒ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド９ｃのワンポット合成
アジリジン７ｃ（２００ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）、モンモリロナイトＭＫ１０（２０重量％，４０ｍｇ）およびピリジン（３７μＬ，０．４６ｍｍｏｌ）の混合物に１００℃で１０分間マイクロ波（３００Ｗ）を照射した。この粗混合物を酢酸エチル［ＥｔＯＡｃ］（１０ｍＬ）で希釈し、濾過し、ＨＰＬＣ分析によりピリジンの残留が見られなくなるまで真空蒸発させた。このベタイン８ｃをさらに精製することなく次の工程に用いた（ＨＰＬＣにより純度９３％）。この粗褐色油状物を４８％ＨＢｒ水溶液（２０ｍＬ）に溶解し、１８時間還流下で加熱した。この混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で洗浄し、水相を蒸発乾固した。この粗油状物を、固定相としてセルロース粉末：ＳｉＯ２：セルロース粉末：活性炭（１ｃｍ：０．５ｃｍ：０．５ｃｍ：２ｃｍ）を用いたクロマトグラフィーにより精製し、９ｃを固体として得た（５１ｍｇ，２８％）。融点：＞２００℃。
[α]D25℃= +40°(0.041, CH3OH)
IR (KBr, cm-1): 3434, 3051, 1725, 1633, 1488) 1420, 1384, 1280, 1188, 1145, 1083, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8.82 (d, 2H, J=5.3Hz); 8.59 (t, 1H, J=7.8Hz); 8.09 (t, 2H, J=6.8Hz); 5.21 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.93 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.24 (t, 1H, J=9.2Hz); 3.01 (dd, 1H, J=13.9Hz, J=9.3Hz); 2.11 (t, 1H, J=7.8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz): 173.2, 173.1, 147.1, 145.6, 128.6, 64.4, 64.2, 49.3, 33.0
ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+1-2Br).
【０１２４】
３．２．２  ３Ｓ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド９ｄのワンポット合成
アジリジン７ｄ（２００ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）、モンモリロナイトＭＫ１０（２０重量％，４０ｍｇ）およびピリジン（３７μＬ，０．４６ｍｍｏｌ）の混合物に１００℃で１０分間マイクロ波（３００Ｗ）を照射した。この粗混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過し、ＨＰＬＣ分析によりピリジンの残留が見られなくなるまで真空蒸発させた。このベタイン８ｄさらに精製することなく次の工程に用いた（ＨＰＬＣにより純度９３％）。この粗褐色油状物を４８％ＨＢｒ水溶液（２０ｍＬ）に溶解し、１８時間還流下で加熱した。この混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で洗浄し、水相を蒸発乾固した。この粗油状物を、固定相としてセルロース粉末：ＳｉＯ２：セルロース粉末：活性炭（１ｃｍ：０．５ｃｍ：０．５ｃｍ：２ｃｍ）を用いたクロマトグラフィーにより精製し、９ｄ固体として得た（５２ｇ，２８％）。融点：＞２００℃。
[α]D25℃= +40°(0.038, CH3OH)
IR (KBr, cm-1): 3435, 3051, 1721, 1631, 1509, 1475, 1422, 1384, 1280, 1190, 1144, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8.76 (d, 2H, J=5.3Hz); 8.59 (t, 1H, J=7.8Hz); 8.07 (t, 2H, J=6.8Hz); 5.19 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.78 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.33 (t, 1H, J=9.2Hz); 2.90 (dd, 1H, J=13.9Hz, J=9.3Hz); 2.46 (t, 1H, J=7.8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz): 173.3, 172.4, 147.0, 145.1, 128.5, 65.6, 64.7, 49.3, 33.9 ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+1-2Br).
【０１２５】
実施例４
（３Ｓ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド）９ａおよび（３Ｒ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド）９ｂの合成
標題化合物（９ａおよび９ｂ）の合成をスキーム４に示す。
スキーム４
【化４５】
2007291050.tif 000046
【０１２６】
４．１  ３Ｓ，６Ｓ−４−オキソ−１−（４−トルエンスルホニル）−１，５−ジアザスピロ［２，４］ヘプタン−５，６−ジカルボン酸５−ｔｅｒｔブチルエステル６−エチルエステル７ａおよび３Ｒ，６Ｓ−４−オキソ−１−（４−トルエンスルホニル）−１，５−ジアザスピロ［２，４］ヘプタン−５，６−ジカルボン酸５−ｔｅｒｔブチルエステル６−エチルエステル７ｂの合成
乾燥アセトニトリル（７ｍＬ）中、（Ｓ）−５（１．８４ｇ，６．８２ｍｍｏｌ）の冷溶液（０℃，氷水浴）に、ＰｈＩ−ＮＴｓ（実施例２参照）（３．８２ｇ，１０．２ｍｍｏｌ）を一度に加えた後、Ｃｕ（ａｃａｃ）２（１７８ｍｇ，０．６８２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた不均質な混合物を０℃で１５分間攪拌し、室温まで温め、一晩攪拌した。得られた混合物に、１Ｍ  ＮａＯＨ（２０ｍＬ）を加え、この混合物をＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出した。次に、有機層をブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固した。この粗油状物をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２，ヘキサン／ＥｔＯＡｃ：２／１）により精製し、アジリジン７ａ（６４１ｍｇ）および７ｂ（４７８ｍｇ）を白色固体として得た（合わせた収率：３７％）。
7a:
融点: 95-96℃
[α]D25℃= -57°(0.029, CHCl3)
IR(KBr, cm-1): 2977, 2928, 1808, 1746, 1352, 1298, 1251, 1192, 1161, 988, 690.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) (7a): 7.77 (d, 2H, J=7.3Hz); 7.27 (d, 2H, J=7.7Hz); 4.70 (dd, 1H, J=9.7Hz, J=2.02Hz); 4.21-4.17 (m, 2H); 3.22 (dd, 1H, J=14.4Hz, J=9.7Hz); 2.75 (s, 1H); 2.51 (s, 1H); 2.49 (dd, 1H, J=14.4Hz, J=2.02Hz); 2.37 (s, 3H); 1.45 (s, 9H); 1.27 (t, 3H, J=7.0Hz) ppm.
13C (CDCl3, 125 MHz) (7a): 170.5, 166.9, 1487, 145.1, 135.2, 129.6, 127.9, 84.5, 62.0, 55.5, 47.1, 38.3, 27.7, 25.3, 21.5, 14.0 ppm
MS (ESI+): m/z: 339 (M+1-Boc)
7b:
融点: 57-58℃
[α]D25℃= -13°(0.068, CHCl3)
IR (KBr, cm-1): 2982, 2936, 1799, 1749, 1371, 1330, 1252, 1203, 1154) 1093, 989, 687.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) (7b): 7.78 (d, 2H, J=8.0Hz); 7.29 (d, 2H, J=7.7Hz); 4.70 (dd, 1H, J=9.4Hz, J=4.3Hz); 4.29-4.20 (m, 2H); 3.04 (dd, 1H, J=15.1Hz, J=4.3Hz); 2.91 (dd, 1H, J=15.4Hz, J=9.4Hz); 2.82 (s, 1H); 2.63 (s, 1H); 2.40 (s, 3H); 1.48 (s, 9H); 1.29 (t, 3H, J=7.0Hz) ppm.
13C (CDCl3, 125 MHz) (7b): 169.5, 167.1, 148.9, 145.0, 135.7, 129.6, 127.9, 84.5, 62.1, 56.1, 47.0, 37.1, 27.8, 24.5, 21.6, 14.0 ppm.
MS (ESI+): m/z: 339 (M+1-Boc)
【０１２７】
４．２．１  ３Ｓ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド９ａのワンポット合成
アジリジン７ａ（３１１ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）、モンモリロナイトＭＫ１０（２０重量％，６０ｍｇ）およびピリジン（５８μＬ，０．７１ｍｍｏｌ）の混合物に１００℃で１０分間マイクロ波（３００Ｗ）を照射した。この粗混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過し、ＨＰＬＣ分析によりピリジンの残留が見られなくなくなるまで真空蒸発させた。このベタイン８ａをさらに精製することなく次の工程に用いた（ＨＰＬＣにより純度９３％）。
【０１２８】
この粗褐色油状物を４８％ＨＢｒ水溶液（３０ｍＬ）に溶解し、１８時間還流下で加熱した。この混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で洗浄し、水相を蒸発乾固した。この粗油状物を、固定相としてセルロース粉末：ＳｉＯ２：セルロース粉末：活性炭（１ｃｍ：０．５ｃｍ：０．５ｃｍ：２ｃｍ）を用いたクロマトグラフィーにより精製し、９ａを固体として得た（１１０ｍｇ，４０％）。
融点：>2℃。
[α]D25℃= -49°(0.069, CH3OH)
IR (KBr, cm-1); 3433, 3051, 1724, 1633, 1488, 1420, 1384, 1281, 1188, 1144, 1083, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8.82 (d, 2H, J=5.3Hz); 8.59 (t, 1H, J=7.8Hz); 8.08 (t, 2H, J=6.8Hz); 5.23 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.97 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.28 (t, 1H, J=9.2Hz); 3.06 (dd, 1H, J=13.9Hz, J=9.3Hz); 2.13 (t, 1H, J=7.8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz): 173.1, 172.6, 147.2, 145.6, 128.6, 63.9, 63.7, 49.2, 32.7 ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+1-2Br)
【０１２９】
４．２．２  ３Ｒ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド９ｂのワンポット合成
アジリジン７ｂ（２００ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）、モンモリロナイトＭＫ１０（２０重量％，４０ｍｇ）およびピリジン（３７μＬ，０．４６ｍｍｏｌ）の混合物に１００℃で１０分間マイクロ波（３００Ｗ）を照射した。この粗混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過し、ＨＰＬＣ分析によりピリジンの残留が見られなくなくなるまで真空蒸発させた。このベタイン８ｂをさらに精製することなく次の工程に用いた（ＨＰＬＣにより純度９３％）。この粗褐色油状物を４８％ＨＢｒ水溶液（２０ｍＬ）に溶解し、１８時間還流下で加熱した。この混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、水相を蒸発乾固した。この粗油状物を、固定相としてセルロース粉末：ＳｉＯ２：セルロース粉末：活性炭（１ｃｍ：０．５ｃｍ：０．５ｃｍ：２ｃｍ）を用いたクロマトグラフィーにより精製し、９ｂを固体として得た（４４ｍｇ，２４％）。融点：＞２００℃。
[α]D25℃= -09°(0.12, CH3OH)
IR (KBr, cm-1): 3435, 3049, 1724, 1631, 1513, 1475, 1420, 1384, 1280, 1190, 1144, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8.82 (d, 2H, J=5.3Hz); 8.59 (t, 1H, J=7.8Hz); 8.08 (t, 2H, J=6.8Hz.); 5.23 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.97 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.28 (t, 1H, J=9.2Hz); 3.06 (dd, 1H, J=13.9Hz, J=9.3Hz); 2.13 (t, 1H, J=7.8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz): 173.4, 172.4, 147.0, 145.0, 128.5, 65.7, 64.8, 49.3, 33.9 ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+1-2Br)
【０１３０】
実施例５
３Ｓ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミドの段階的合成
５．１  ベタイン８ａの合成
実施例４と同様の方法に従い、アジリジン７ａ（３１１ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）、モンモリロナイトＭＫ１０（２０重量％，６０ｍｇ）およびピリジン（５８μＬ，０．７１ｍｍｏｌ）に１００℃で１０分間マイクロ波（３００Ｗ）を照射した。この粗混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過し、ＨＰＬＣ分析によりピリジンの残留が見られなくなくなるまで真空蒸発させた。このベタイン８ａをジエチルエーテルで処理することにより精製し、生成物を白色固体として単離した。
融点：127〜128℃。
IR (KBr, cm-1): 3434, 2980, 1786, 1746, 1489, 1370, 1311, 1287, 1199, 1153, 1121, 555.
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz)= 9.2 (d, 2H, J=5.6Hz); 8.3 (t, 1H, J=7.7Hz); 7.89 (t, 2H, J=6.9Hz); 7.69 (d, 2H, J=8.0Hz); 7.10 (d, 2H, J=8.0Hz); 5.07 (d, 1H, J=13.0Hz); 4.89 (d, 1H, J=12.6Hz); 4.27 (t, 2H, J=7.1Hz); 4.20-4.13 (m, 2H); 2.81 (dd, 1H, J=12.8Hz, J=7.1Hz); 2.31 (s, 3H); 2.04-1.98 (m, 1H); 1.38 (s, 9H); 1.25 (t, 3H, J=7.1Hz) ppm.
MS (ESI+): m/z: 518 (M+1).
【０１３１】
あるいは、このベタイン８ａは、同じ反応混合物（アジリジン７ａ（３１１ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）、モンモリロナイトＭＫ１０（２０重量％，６０ｍｇ）およびピリジン（５８μＬ，０．７１ｍｍｏｌ））を９０℃で７時間加熱することによって得られた。この粗混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、濾過し、ＨＰＬＣ分析によりピリジンの残留が見られなくなくなるまで真空蒸発させた。得られた収率はマイクロ波を用いて得られた収率と同じであった。
【０１３２】
５．２  ３Ｓ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド９ａの合成
前工程で得られた純粋なベタイン８ａを４８％ＨＢｒ水溶液（３０ｍＬ）に溶解し、１８時間還流下で加熱した。この混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で洗浄し、水相を蒸発乾固した。この粗油状物を固定相としてセルロース粉末：ＳｉＯ２：セルロース粉末：活性炭（１ｃｍ：０．５ｃｍ：０．５ｃｍ：２ｃｍ）を用いたクロマトグラフィーにより精製し、９ａを固体として得た（１１０ｍｇ，４０％）。融点：＞２００℃。
[α]D25℃= -49°(0.069, CH3OH)
IR (KBr, cm-1): 3433, 3051, 1724, 1633, 1488, 1420, 1384, 1281, 1188, 1144, 1083, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8.82 (d, 2H, J=5.3Hz); 8.59 (t, 1H, J=7.8Hz); 8.08 (t, 2H, J=6.8Hz); 5.23 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.97 (d, 1H, J=14.3Hz); 4.28 (t, 1H, J=9.2Hz); 3.06 (dd, 1H, J=13.9Hz, J=9.3Hz); 2.13 (t, 1H, J=7.8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz): 173.1, 172.6, 147.2, 145.6, 128.6, 63.9, 63.7, 49.2, 32.7 ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+1-2Br).
【０１３３】
実施例６
腫瘍増殖に対する種々の異性体（９ａ、９ｂ、９ｃおよび９ｄ）の作用
アッセイ腫瘍：Ｒｅｎｃａ
このアッセイは、Ｒｅｎｃａ細胞を接種したマウスにおけるin vivo腫瘍増殖に対する各立体異性体の作用を確認するために行った。それらの作用をプラセボと比較した。アッセイした立体異性体は
異性体１：  ３Ｒ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド（９ｂ）
異性体２：  ３Ｒ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド（９ｃ）
異性体３：  ３Ｓ，５Ｓ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド（９ａ）
異性体４：  ３Ｓ，５Ｒ−１−（３−アミノ−５−カルボキシ−２−オキソピロリジン−３−イルメチル）ピリジニウムブロミドヒドロブロミド（９ｄ）
であった。
これらの異性体は実施例３および４に開示されている方法に従って得ることができる。
【０１３４】
材料および方法
腫瘍
ＲｅｎｃａはＢａｌｂ／ｃマウス系統に起源する腎細胞癌腫であり、従って、Ｂａｌｂ／ｃの遺伝的背景を有するマウスにおいては共通遺伝子系である[Melder RJ et al., Cancer Immunol. Immunother., 2005, 54:535-547; Felluga B et al., 1969, J. Natl. Cancer Inst. 43:319 333]。Ｒｅｎｃａは免疫源性の適度な腫瘍と考えられ、免疫介入アプローチを試験するのに好適なモデルとして用いられる[Salup RR, et al., 1992, The Journal of  Urology, 147:1120-1123]。  
【０１３５】
Ｒｅｎｃａ細胞（ＣＬＳ，Ｅｐｐｅｌｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）は、３〜４日ごとの継代培養によりin vitroで維持した。培養は、ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、非必須アミノ酸、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウム、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、８０μｇ／ｍＬ  ゲンタマイシン；これらは総てＳｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡから購入した）を用い、７５ｃｍ２の培養フラスコに５×１０６細胞を播種することにより行った。４８時間培養物からトリプシン処理して回収した腫瘍細胞（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）を下記の試験のためのＲｅｎｃａ細胞の供給源として用いた。
【０１３６】
供試薬物
有効成分
異性体１（９ｂ）  無菌生理食塩水中２．８１５ｍｇ／ｍＬ
異性体２（９ｃ）  無菌生理食塩水中２．５２０ｍｇ／ｍＬ
異性体３（９ａ）  無菌生理食塩水中２．０８０ｍｇ／ｍＬ
異性体４（９ｄ）  無菌生理食塩水中３．０４０ｍｇ／ｍＬ
【０１３７】
プラセボ
生理食塩水（Ｇｒｉｆｏｌｓ，Ｂａｒｃｅｌｏｎａ，Ｓｐａｉｎ）
【０１３８】
【表１】
2007291050.tif 000047
【０１３９】
サンプルサイズ
これまでのデータによれば、有意性を満たすのに必要なサンプルサイズは各群動物２６個体であった。このサンプルサイズはＥｐｉ−ｉｎｆｏ  ｖ６．０ソフトウエア[Fleiss. Statistical Methods for rates and Proportions. 2nd Ed, Wiley, 1981: 38-45]を用いて計算し、統計検出率０．８で、腫瘍表面積の１／２の減少および対照症例比１：１に関して信頼水準０．９５として見積もったものである。
【０１４０】
装置
層流式フード、水浴、倒立顕微鏡、カウントチャンバー、ＣＯ２インキュベーター、遠心機、カリパス、天秤、調節型ピペット、窒素コンテナ、冷蔵庫／冷凍庫および免疫不全マウスラック
【０１４１】
試薬
トリパンブルー（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）
無菌ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）
生理食塩水（Ｇｒｉｆｏｌｓ，Ｂａｒｃｅｌｏｎａ，Ｓｐａｉｎ）
【０１４２】
用量、ビヒクル、投与経路および投与容量
用量
各異性体を、腫瘍接種後６日、７日および１４日目に投与量２６０ｎｇで試験した。
【０１４３】
ビヒクル
異性体を希釈したビヒクルは生理食塩水であった。
【０１４４】
投与経路および投与容量
処置は腹腔内経路によって行った。接種容量は０．２ｍＬ／個体とした。この経路は原法[Perez S, et al., 2003, Clinical Cancer Research. 9:5776-5785]に記載されていたことから選択した。
【０１４５】
試験デザイン
腫瘍は右後方腹側部に皮下接種することにより確立した。１０５の活性のあるＲｅｎｃａ細胞を含む０．２ｍＬをマウス（Ｂａｌｂ／ｃ）に接種した。皮下接種の日を試験の第０日とする。
Ｒｅｎｃａ細胞を接種したＢａｌｂ／ｃマウスを５つの試験群に分配した。
【０１４６】
【表２】
2007291050.tif 000048
【０１４７】
毎日マウスを観察し、１週間に２回腫瘍サイズを記録した。これは、カリパスで２つの垂直直径（Ｌ／Ｗ）を測定することによって行った。これらの測定値を用いて腫瘍表面積と体積の双方を得た。
腫瘍表面積＝Ｌ×Ｗ（ｍｍ２）
腫瘍体積＝Ｌ×Ｗ２×１／２（ｍｍ３）
結果は各試験群からの単一値として、および／または平均値±ＳＤまたは中央値として表した。
【０１４８】
統計学
異性体とプラセボの投与の間に差があるかどうかを調べるため、処置マウスと対照マウスで症例対照試験を行った。得られたデータ（腫瘍表面積および体積）を群内の正規分布に関して検定した（コルモゴロフ−スミノフ(Kolmogorov-Smirnov)検定（ｐ＜０．０５））。異性体が腫瘍増殖に悪影響を持っていたかどうかを対比させるため、不対サンプルのノンパラメトリック仮説検定を行った。公知のノンパラメトリック検定のよりよりものとしてマン・ホイットニー(Mann Withney)のＵ検定が選択されたが、いずれにせよ、この検定の結果は、ウィルコクソン(Wilcoxon)の順位和検定とクルスカル・ウォリス(Kruskal-Wallis)２群検定の両者と等価である。
【０１４９】
データの分散度が高いため、アウトライアー(outlayers)（２５日目に腫瘍表面積が２５パーセンタイルを超えるか、または７５パーセンタイルより大きい動物）は試験からはずした。
用いた統計ソフトウエアはＳＰＳＳｖ１２．０であった。
【０１５０】
結果
Ｒｅｎｃａ腫瘍細胞増殖に対する異性体の阻害作用
各群３０個体のマウス（プラセボ群は３１個体）を試験することを計画した。異性体２群のマウス２個体は、原因は不明であるが、腫瘍接種後２週間目に死に至ったので除外した。
【０１５１】
表１および２は、中央値として表した各試験群の結果を示す。これらの表は、スコアをとった各日における異性体マウス群とプラセボマウス群の表面積の中央値（表１）または体積の中央値（表２）をまとめたものである。
【０１５２】
【表３】
2007291050.tif 000049
【０１５３】
【表４】
2007291050.tif 000050
【０１５４】
表３および４は平均値として表した各試験群の結果を示す。これらの表は、スコアをとった各日における異性体マウス群とプラセボマウス群の表面積の平均値（表３）または体積の平均値（表４）をまとめたものである。
【０１５５】
【表５】
2007291050.tif 000051
【０１５６】
【表６】
2007291050.tif 000052
【０１５７】
プラセボに対して異性体３を受容したマウス間でＲｅｎｃａ腫瘍増殖率に差あった。これらの差は、表面積または容積のいずれかにおいて、マン・ホイットニーのＵ検定によって算出したところ、腫瘍発達１８日目および２５日目で統計学的に有意であった（ｐ＜０．０５）。
【０１５８】
プラセボに対して異性体４を受容したマウス間でＲｅｎｃａ腫瘍増殖率に差あった。これらの差は、表面積または容積のいずれかにおいて、マン・ホイットニーのＵ検定によって算出したところ、腫瘍発達１４日目以降の、スコアをとった総ての日で統計学的に有意であった（ｐ＜０．０１）。
【０１５９】
図１は腫瘍表面積の中央値のグラフを示し（群Ａ１、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４）、図２は腫瘍容積の中央値のグラフを示す（群Ａ１、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４）。これらの図で分かるように、プラセボに対して異性体３および異性体４を受容したマウス間でＲｅｎｃａ腫瘍増殖率に差あった。
【０１６０】
図３は平均腫瘍表面積のグラフを示し（群Ａ１、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４）、図４は平均腫瘍容積のグラフを示す（群Ａ１、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４）。これらの図で分かるように、プラセボに対して異性体３および異性体４を受容したマウス間でＲｅｎｃａ腫瘍増殖率に差あった。
【０１６１】
これらの結果は、異性体３および異性体４が腎細胞癌腫（Ｒｅｎｃａ）のin vivo増殖を阻害することを示し、異性体４はＲｅｎｃａ腫瘍増殖に対して最高の阻害作用を示した。
【図面の簡単な説明】
【０１６２】
【図１】プラセボ（Ｐ．Ｓ．）と比較した場合の、Ｒｅｎｃａ腫瘍細胞増殖でアッセイした異性体（１〜４）の阻害作用［実施例６］を腫瘍表面積の平均値として表したものを示すグラフである。
【図２】プラセボ（Ｐ．Ｓ．）と比較した場合の、Ｒｅｎｃａ腫瘍細胞増殖でアッセイした異性体（１〜４）の阻害作用［実施例６］を腫瘍体積の中央値として表したものを示すグラフである。
【図３】プラセボ（Ｐ．Ｓ．）と比較した場合の、Ｒｅｎｃａ腫瘍細胞増殖でアッセイした異性体（１〜４）の阻害作用［実施例６］を腫瘍表面積の平均値として表したものを示すグラフである。
【図４】プラセボ（Ｐ．Ｓ．）と比較した場合の、Ｒｅｎｃａ腫瘍細胞増殖でアッセイした異性体（１〜４）の阻害作用［実施例６］を腫瘍体積の平均値として表したものを示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【外国語明細書】
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