(57)【要約】【課題】本発明は、活性を分からないナットウキナーゼの標準活性値を測定することができるナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法を提供することを目的とする。【解決手段】標準活性値に対応する曲線を準備するステップと、活性値を知らないナットウキナーゼを採って、それを複数のサンプルに希釈し、それぞれ標準測定法によって測定してから、それぞれ活性値を獲得することができ、従ってサンプル曲線を制作するステップと、サンプル曲線と標準活性値に対応する曲線を重ねることにより、交点を生むステップと、該交点に対応する活性値は、前記ナットウキナーゼの標準活性値だと判断するステップとを備える。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
標準活性値に対応する曲線を準備するステップと、
活性値を知らないナットウキナーゼを採って、それを複数のサンプルに希釈し、それぞれ標準測定法によって測定してから、それぞれ活性値を獲得することができ、従ってサンプル曲線を制作するステップと、
前記サンプル曲線と標準活性値に対応する曲線を重ねることにより、交点を生むステップと、
前記交点に対応する活性値は、前記ナットウキナーゼの標準活性値だと判断するステップと、
を備えたことを特徴とするナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法。
【請求項２】
前記標準測定法は、
ナットウキナーゼのサンプルを採ってから、空白サンプルと比較するステップと、
公式ＦＵ／ｇ=（Ａτ-ＡＢ）／０．０１×１/６０×１/０．１×Ｄを利用して、前記ナットウキナーゼの標準活性値を計算されており、その中、Ａτは該ナットウキナーゼのサンプルがＯＤ275に対した吸光値であって、ＡＢは空白サンプルがＯＤ275に対した吸光値であって、Ｄは該ナットウキナーゼのサンプルの希釈倍数であって、毎グラム（ｇ）、毎分にＯＤ275に対した吸光値が０．０１に増加させる酵素量を獲得するステップと、
を備えたことを特徴とする請求項１に記載のナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法。
【請求項３】
前記標準活性値に対応する曲線は、複数のそれぞれ標準活性値を持つナットウキナーゼを利用して、前記標準測定法に基づいて実験してから獲得することを特徴とする請求項１に記載のナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法。
【請求項４】
前記活性値を分からないナットウキナーゼを複数のサンプルに希釈する希釈度の間隔値は１００倍を超えないことを特徴とする請求項１に記載のナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法に係り、特に活性を知らないナットウキナーゼに対して、その標準活性値を正確に獲得することができるナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ここ数年来、ナットウキナーゼ（Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ）は、血栓を抵抗したり、人々の脳溢血の発生確率を下げたりすることができると実証されたため、ナットウキナーゼの需要量は急に上がった。多くのメーカーもナットウキナーゼを生産する等、研究開発する流れに積極的に参加し、生産されたナットウキナーゼの品質の善し悪しは重要な課題なっている。つまり、ナットウキナーゼの活性値は、品質基準を判断することができる根拠になる。
【０００３】
ナットウキナーゼの活性値というものは、毎単位体積を代表するナットウキナーゼ・サンプルの中のナットウキナーゼの濃度であって、それは相対値の概念であって、絶対値の概念ではない。日本納豆協会は、坊間のナットウキナーゼの活性値を規範するために、かつて、ナットウキナーゼの標準活性値を測定することができる方法（以下は、標準測定法と称する）を公布したことがる。その方法は、主に測定しようとするナットウキナーゼのサンプルを採って、空白サンプルと比較してから、最後に公式ＦＵ／ｇ=（Ａτ-ＡＢ）／０．０１×１/６０×１/０．１×Ｄを利用して、ナットウキナーゼの標準活性値を計算するものである。Ａτは測定しようとするナットウキナーゼのサンプルがＯＤ275に対した吸光値、ＡＢは空白サンプルがＯＤ275に対した吸光値、Ｄはサンプルの希釈倍数、且つ１単位活性（ＦＵ）は、毎グラム（ｇ）、毎分にＯＤ275に対した吸光値が０．０１に増加させる酵素量だと定義する。  
【０００４】
しかし、日本納豆協会は会員業者から料金を受け取って、ナットウキナーゼの標準活性値を測定する業務を行っている。その検出報告において、ナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法（即ち標準測定法）を大体的に紹介しているが、その方法の詳細は説明されていない。そのため、業者は、活性を知らないナットウキナーゼの活性値を測定する場合、日本納豆協会が提供する標準測定法に基づいて測定しても、ナットウキナーゼの正しい標準活性値を獲得することができなく、その主要な原因はナットウキナーゼの活性を測定する過程中の希釈ステップであって、異なる希釈度はナットウキナーゼの活性値の測定結果に影響する。例えば、図１に示すように、既に日本納豆協会によって測定され、４０００単位活性（ＦＵ）と標示されたナットウキナーゼを実験対象として、異なる希釈度に基づいて、複数の測定対象サンプルを作って、日本納豆協会から提供する標準測定法を利用して実験を行うことにより、複数の単位活性（ＦＵ）値を獲得することができる。それに従って図１に示す曲線を制作し、前記曲線から以下の現象を発見することができる。即ち、前記ナットウキナーゼの希釈度が約７０倍である時、自ら測定した活性値と日本納豆協会によって測定した標準活性値は同じだった。上述の実験と同じように、ほかの日本納豆協会によって測定された、８０００単位活性（ＦＵ）と標示されたナットウキナーゼを実験対象として、それから異なる希釈度に基づいて、複数の測定対象サンプルを作って、日本納豆協会が提供する標準測定法を利用して実験を行うことにより、複数の単位活性（ＦＵ）値を獲得することができる。それに従って図２に示す曲線を制作し、前記曲線から以下の現象を発見することができる。即ち、前記ナットウキナーゼの希釈度が約１６０倍である時、自ら測定した活性値と日本納豆協会によって測定した標準活性値は同じだった。
【０００５】
上述の実施形態のとおりに、ただ日本納豆協会から提供する標準測定法を利用して獲得した活性値は、異なるナットウキナーゼの希釈度によって、依然として差別が有るが、活性値を知らないナットウキナーゼにとっては、その標準活性値及び希釈度を同時に掌握することができないため、前記方法を使っては、測定しようとするナットウキナーゼの本当の標準活性値を獲得することができない。毎度ナットウキナーゼの標準活性値を測定しようとする時には、そのサンプルを日本納豆協会に送って測定してもらわなければ、その正しい標準活性値を分かることができず、それはナットウキナーゼ業者がコストを下げることができない要因だった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、前記課題を解決し、活性が分からないナットウキナーゼに対して、その標準活性値を測定することができる方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記目的を達成するため、本発明に係るナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法は、標準活性値に対応する曲線を準備するステップと、活性値を知らないナットウキナーゼを採って、それを複数のサンプルに希釈し、それぞれ標準測定法によって測定してから、それぞれ活性値を獲得し、それに従ってサンプル曲線を制作するステップと、サンプル曲線と標準活性値に対応する曲線を重ねることにより、交点を生むステップと、該交点に対応する活性値は、前記ナットウキナーゼの標準活性値だと判断するステップとを備える。
【０００８】
前記目的を達成するため、前記標準測定法は、ナットウキナーゼのサンプルを採ってから、空白サンプルと比較するステップと、公式ＦＵ／ｇ=（Ａτ-ＡＢ）／０．０１×１/６０×１/０．１×Ｄを利用して、前記ナットウキナーゼの標準活性値を計算する。Ａτは該ナットウキナーゼのサンプルがＯＤ275に対した吸光値、ＡＢは空白サンプルがＯＤ275に対した吸光値、Ｄは該ナットウキナーゼのサンプルの希釈倍数であって、毎グラム（ｇ）、毎分ＯＤ275に対した吸光値が０．０１に増加させる酵素量を獲得するステップとを備える。
【０００９】
前記目的を達成するため、前記標準活性値に対応する曲線は、複数のそれぞれ標準活性値を持つナットウキナーゼを利用して、前記標準測定法に基づいて実験してから獲得する。
【００１０】
前記目的を達成するため、前記活性値が分からないナットウキナーゼを複数のサンプルに希釈する希釈度の間隔値は１００倍を超えない。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法は、活性を分からないナットウキナーゼの標準活性値を測定することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
図３は、本発明のナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法を示すフロー・チャートである。
【００１３】
まず、標準活性値に対応する曲線を準備する必要があり、該目的を達成するために、まず、複数のそれぞれ標準活性値を持つナットウキナーゼを準備しなければならない。換言すれば、これらの複数のナットウキナーゼは、皆日本納豆協会によって測定されており、別々に標準活性値を持ち、それから標準測定法に基づいて実験してから、対応する希釈値を獲得することにより、標準活性値に対応する曲線を制作する。例えば、図４に示すように、まず、標準活性値は、それぞれ４０００ＦＵ、８０００ＦＵ、１２０００ＦＵ、１６０００ＦＵ、２００００ＦＵであるナットウキナーゼのサンプルを準備する。しかし、これに限らず、さらに多くのナットウキナーゼのサンプルを提供すれば、その正確性をさらに高めることができる。前記複数のナットウキナーゼのサンプルの標準活性値は、皆日本納豆協会によって測定されており、標準測定法に基づいて実験してから、対応する希釈値を獲得し、それに従って、標準活性値に対応する曲線２０を制作することができる。
【００１４】
次に、活性値を知らないナットウキナーゼを複数のサンプルに希釈し、且つその希釈度の間隔値は小さければ小さいほどよく、そうすれば高い精度を獲得することができる。できれば、複数のサンプルの希釈度の間隔値は１００倍を超えない。それから、それぞれ標準測定法によって、各サンプルを測定することにより、各サンプルの相対的な活性値を知ることができ、それに従って、サンプル曲線を制作する。前記標準測定法は、日本納豆協会から公布したナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法であって、例えば、図５に示すように、活性値を知らないナットウキナーゼを九つのサンプルに希釈し、且つその希釈間隔値は５０倍であって、換言すれば、前記九つのサンプルをそれぞれ１００倍、１５０倍、…、４５０倍、５００倍の希釈度で希釈されており、それから標準測定法によって、各サンプルを測定することにより、複数の活性値を獲得することができ、前記例では、その活性値は、それぞれ５４６７ＦＵ、７２００ＦＵ、１２０００ＦＵ、１５３３３ＦＵ、１５６００ＦＵ、１７２７６ＦＵ、２０８００ＦＵ、２１６００ＦＵ、２６６００ＦＵであり、それに従って図５に示すサンプル曲線３０を制作することができる。
【００１５】
最後に、サンプル曲線３０と標準活性値に対応する曲線２０を重ねて、図５に示すように、二つの曲線を重ねれば、少なくとも一つの交点Ｐを生むことができ、前記交点Ｐに対応する活性値は、前記活性値を知らないナットウキナーゼの標準活性値であって、前記例では、二つの曲線の交点Ｐに対応する活性値（約１２０００ＦＵ）は、前記活性値を知らないナットウキナーゼの標準活性値である。
【００１６】
前記方法に基づいて、いかなる実験設備を設けなくとも、且つ他の実験コストを増加しなくても、予め準備した標準活性値に対応する曲線とサンプル曲線を重ねることにより、活性値を知らないナットウキナーゼの標準活性値を測定することができ、従来の活性値を知らないナットウキナーゼの標準活性値及び希釈度を同時に掌握することができないためにその標準活性値を獲得することができないという悩みを解決する。従って、本発明は本当に産業価値を持つ方法である。
【００１７】
以上は、本発明の好ましい実施形態であって、上述の実施形態は、本発明の特許請求の範囲を限定するものでなく、本発明の特許請求の範囲を説明することに用いられ、本発明の範囲は、特許請求の範囲から決まる。即ち、本発明の特許請求の範囲に基づいて、本発明を変化させるとか、本発明を飾るのは、皆本発明の保護範囲に属する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】標準活性値は４０００ＦＵであるナットウキナーゼを複数のサンプルに希釈してから、標準測定法によって測定した実験データ図である。
【図２】標準活性値は８０００ＦＵであるナットウキナーゼを複数のサンプルに希釈してから、標準測定法によって測定した実験データ図である。
【図３】本発明のナットウキナーゼの標準活性値を測定する方法を示すフロー・チャートである。
【図４】標準活性値に対応する曲線の実験データ図である。
【図５】活性値を知らないナットウキナーゼのサンプル曲線と標準活性値に対応する曲線を重ねる実験データ図である。
【符号の説明】
【００１９】
１１，１２，１３，１４  ステップ
３０  サンプル曲線
２０  標準活性値に対応する曲線
Ｐ  交点
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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