(57)【要約】【課題】耐性菌の増加と、治療薬剤の副作用とが少ない天然物を用い、抗ピロリ菌作用を有する組成物を得ること。【解決手段】退色したカロテノイドを有効成分として含有する組成物であれば、抗ピロリ菌作用を有すると共に、副作用を少なくできるようになる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
退色したカロテノイドを有効成分として含有していること
を特徴とする抗ピロリ菌組成物。
【請求項２】
前記カロテノイドは、
緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻のうち黄橙色の藻体の抽出物から得られること
を特徴とする請求項１に記載の抗ピロリ菌組成物。
【請求項３】
緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻のうち黄橙色の藻体を低酸素乃至無酸素状態の環境下にて保存して前記藻体内に含まれるカロテノイドの黄橙色を退色させ、
該退色した藻体に抽出用の溶液を添加してその抽出物を得ること
を特徴とする抗ピロリ菌組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば、胃潰瘍や、胃がん等の原因の一つとなるピロリ菌（ヘリコバクター・ピロリ）の増殖を抑制すると共に減菌・除菌することができる、ピロリ菌感染に対する治療・症状改善を目的とする抗ピロリ菌組成物と、その製造方法とに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
現在の臨床におけるピロリ菌治療としては、抗生物質２剤と、胃酸分泌抑制剤１剤との合計３剤を併用する療法が主流である。
【０００３】
しかし、前記抗生物質を用いる療法では、その抗生物質に対して薬剤耐性能を持つピロリ菌が増加してしまうことがあり、この耐性菌の増加と、治療薬剤の副作用とにより、ピロリ菌の除菌が不成功になる例が増加しており、問題となっているのが現状である。
【０００４】
そこで、抗生物質を用いないでピロリ菌感染の治療・症状改善を行う方法として、植物等の天然物を用いる方法が注目され、研究・開発されている。
【０００５】
このような天然物を用いる方法としては、例えば、天然物由来の抗菌活性剤等を用いる方法があるが、この天然由来の抗菌活性剤を用いる方法においては、これまで耐性菌を作り出したという報告はほとんどなく、また、天然物由来のため副作用も少ないという利点がある。
【０００６】
そのため、天然物由来の抗ピロリ菌活性剤を求める傾向は増加の一途をたどり、耐性菌を作らず、副作用が少なく、かつ効果の優れた抗ピロリ菌剤が求められている。
【０００７】
このような天然物由来の抗ピロリ菌剤としては、例えば、月見草の溶媒抽出物を含有する抗ピロリ菌組成物がある（特許文献１参照）。
【０００８】
この特許文献１の公知技術においては、水またはアルコール等の溶媒を用いて月見草からその抽出物を抽出するものであり、月見草の溶媒抽出物に含まれる成分であるポリフェノールにより、ピロリ菌に対する抗菌作用を見出したものである。
【０００９】
【特許文献１】特開２００４−３５２６４４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
ところで、抗ピロリ菌作用を有する成分は、前記特許文献１の公知技術に開示されたポリフェノールに限定されるものではないと考えられるが、他の成分により抗ピロリ菌作用が示される事例は少ないものである。
【００１１】
従って、耐性菌の増加と、治療薬剤の副作用とが少ない天然物を用い、抗ピロリ菌作用を有するポリフェノールとは異なる成分を有効成分として含む組成物を得るということに解決しなければならない課題を有している。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者等は、上記の課題を解決し、所期の目的を達成するために種々の成分について鋭意検討を行なった結果、退色したカロテノイドを有効成分として含有する組成物、特に、緑藻網（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）オオヒゲマワリ目（Ｖｏｌｖｏｃａｌｅｓ）のデュナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）に属する微細藻のうち黄橙色の藻体から抽出された抽出物から得られるカロテノイドが優れた抗ピロリ菌活性を有している事を見出して本発明を完成するに至った。
【００１３】
そこで、本発明の第１の発明に係る抗ピロリ菌組成物においては、上記した従来例の課題を解決する具体的手段として、退色したカロテノイドを有効成分として含有していることを最も主要な特徴とするものであり、更に、前記カロテノイドは、緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻のうち黄橙色の藻体の抽出物から得られることを付加的な要件として含むものである。
【００１４】
また、本発明の第２の発明に係る抗ピロリ菌組成物の製造方法は、緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻のうち黄橙色の藻体を低酸素乃至無酸素状態の環境下にて保存して前記藻体内に含まれるカロテノイドの黄橙色を退色させ、該退色した藻体に抽出用の溶液を添加してその抽出物を得ることを最も主要な特徴とするものである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の第１の発明に係る抗ピロリ菌組成物においては、退色したカロテノイドを有効成分として含有していることにより、抗生物質を用いることなく、耐性菌の増加と、治療薬剤の副作用とが少ない天然物を用いて抗ピロリ菌作用が得られ、ピロリ菌を減菌・除菌させる事によりピロリ菌感染の治療・症状改善を行うことができ、更に、ピロリ菌が関与する生活習慣病を含む種々の疾患（胃・十二指腸潰瘍や、胃がん、自己免疫疾患等）についても、治療・症状改善の作用を期待することができるという優れた効果を奏する。
【００１６】
更に、緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻のうち黄橙色の藻体の抽出物を抗ピロリ菌組成物に用いる前記退色したカロテノイドとして使用した場合には、前記退色したカロテノイドによる抗ピロリ菌作用ばかりでなく、デュナリエラの藻体の抽出物に含まれる他の成分も関与してこれらの相乗効果を期待でき、より優れた抗ピロリ菌作用を得ることができる。
【００１７】
また、本発明の第２の発明に係る抗ピロリ菌組成物の製造方法においては、緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻のうち黄橙色の藻体を低酸素乃至無酸素状態の環境下にて保存して前記藻体内に含まれるカロテノイドの黄橙色を退色させ、該退色した藻体に抽出用の溶液を添加してその抽出物を得ることができるため、培養により容易に増殖させることができる微細藻を用いて抗ピロリ菌組成物を製造することができるため、安定的に供給できると共に、その品質を保持することも容易にできるようになるという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
次に、本発明を具体的な実施の形態に基づいて詳しく説明する。
本発明に係る抗ピロリ菌組成物は、退色したカロテノイド（主にβ−カロテン）を有効成分として含有する組成物であり、該カロテノイドとしては、例えば、植物等の天然物であれば、いずれのものから得られたものであっても良いが、特に、緑藻網（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）オオヒゲマワリ目（Ｖｏｌｖｏｃａｌｅｓ）のデュナリエラ属（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）に属する微細藻のうち黄橙色の藻体から抽出された抽出物から得られるカロテノイドを用いることが好ましく、更には、退色したカロテノイドを含んだデュナリエラの藻体の抽出物自体を含有した組成物を抗ピロリ菌組成物として用いることが好ましいものである。
【００１９】
このデュナリエラ属に属する微細藻としては、例えば、Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ  ｓａｌｉｎａ（Ｄ．ｓａｌｉｎａ）またはＤ．ｂａｒｄａｗｉｌ等を例示することができる。なお、この明細書において、デュナリエラの微細藻または藻体と記載した場合には、特に言及をしない限りは、緑藻網オオヒゲマワリ目のデュナリエラ属に属する微細藻のうち黄橙色の藻体（微細藻）を示すものである。
【００２０】
また、本発明において、退色したカロテノイドとは、本来黄橙色の表面色であるカロテノイドが、例えば、低酸素乃至無酸素状態の環境下等に保存されることによって、稍薄い黄橙色乃至白色に変化（退色）したカロテノイドのことをいう。このようにカロテノイドを低酸素乃至無酸素状態の環境下等に保存することでその表面色が退色する原理としては、その詳細は未だ不明であり確認中であるが、カロテノイドが極めて低濃度乃至無酸素の環境下で保存された際、カロテノイド（特にβ−カロテン）の組織が開裂等により化学修飾されてその誘導体が生成される、または、カロテノイド中のβ−カロテンが水溶性のカロテノイド（キサントフィル等）に変化するためであると推察される。
【００２１】
前記カロテノイドを前記デュナリエラの微細藻から得る場合、このデュナリエラの微細藻としては、天然由来のものまたは培養によるもののいずれを用いても良いが、安定供給と品質保持の観点から、培養により増殖させて使用することが望ましい。また、前記微細藻は、生の藻体、乾燥した藻体または乾燥した粉体等のいずれであっても良い。
【００２２】
微細藻は光合成を行なって自らのエネルギーとしているため、培養は光照射下に藻類培養用の培地を用い、通常の培養方法により行なうことができる。具体的な培養条件を述べれば下記のとおりである。
【００２３】
Ｄ．ｓａｌｉｎａを培養する方法としては、培地は一般的な好塩性緑藻類を培養する際に用いられるものであれば格別な制限はなく、例えば、Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ  ｓａｌｉｎａ  ｇｒｏｗｔｈ  ｍｅｄｉｕｍ等の培地を用いることができる。
【００２４】
即ち、新鮮なろ過海水９９９ｍｌに対してＮａＣｌ  ８７ｇ、ＫＮＯ３  ７６ｍｇ、Ｋ２ＨＰＯ４  ８．７ｍｇ及びＮａＨＣＯ３  ４．２ｇを添加した溶液に、ＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ  ２００ｍｇ／ｌ、Ｚｎ  Ｃｌ２  １００ｍｇ／ｌ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ  ２００ｍｇ／ｌ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ  ６００ｍｇ／ｌ、ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ  ４００ｍｇ／ｌ、（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏ  １．２ｇ／ｌ及びＥＤＴＡ２Ｎａ・２Ｈ２Ｏ  ２．２ｇ／ｌからなる微量元素混合溶液１ｍｌを添加することにより培地を調製した。
【００２５】
培養は、Ｄ．ｓａｌｉｎａの細胞数が１−２×１０３  ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるように培地に接種し、２リットル容のガラス扁平フラスコを用いて行なった。培養期間は７−１４日間が適当であり、培養は空気を適当な通気手段により導入する好気的条件下（炭酸ガス供給は０％−１０％）にかつ蛍光灯や太陽光を光源として照度を３０００ｌｕｘ−１５００００ｌｕｘに設定し、連続光照射（２４時間明）から８時間明／１６時間暗にて行なうのが望ましい。培養温度は１５−４０℃であり、３０℃付近が望ましい。その他、カロテノイド（主なカロテノイドはβ−カロテン）を効率よく生合成させることが知られている一般的な培養条件を選択することが望ましい。
【００２６】
培養した微細藻（藻体）を常法により収集した後、乾燥し、得られた微細藻を、機密・密封性のある容器に入れ、該容器内の気体を、例えば、窒素置換等の方法によって極めて少量で低濃度の酸素−酸素フリーの状態、即ち低酸素乃至無酸素状態にし、この低酸素乃至無酸素状態の環境下等にて保存することで、前記藻体の外観上の色が退色される、即ち、該藻体内に含まれるカロテノイドの黄橙色を退色させることができる。保存中は光が当たっていても良いが、遮光することが好ましい。また、保存温度は、約０℃−４０℃程度の範囲であるが、２５℃付近が好ましい。なお、退色したカロテノイドとしては、前記低酸素乃至無酸素状態の環境下にて保存する方法によって得られたものに限定するものではなく、他の方法によって得られたものであっても良く、また、前記微細藻以外の天然物から得られたものであっても良い。
【００２７】
前記退色させた微細藻から抽出物（カロテノイドを含む）を抽出する方法としては、例えば、下記の手法により抽出できる。即ち、藻体濃度が１重量％−７０重量％となるように水またはアルコールなど極性の高い溶剤（抽出用の溶液）を添加し、氷冷−９５℃の範囲の溶液温度で約１０分−２時間程度、抽出処理して抽出液（抽出物を含む）を得る。その際、必要に応じて、攪拌や超音波にて抽出処理を行っても良い。
【００２８】
次いで、前記抽出液から微細藻の抽出物を得る方法としては、常法に従って水溶性の抽出物を得ることができるが、例えば、前記抽出液を遠心分離後、その上澄み液をとり、該上澄み液をフィルターを用いて濾過することによりデュナリエラの藻体と抽出液とを分離した後、これを凍結乾燥して前記抽出液からデュナリエラの水溶性の抽出物を得るものである。
【００２９】
このようにして得られた抽出物には、退色したカロテノイドが含まれているため、抗ピロリ菌活性を示したが、ろ過後の残渣にはその活性が認められなかった。このことから、抗ピロリ菌活性を示す物質、即ち、抗ピロリ菌組成物が水に溶解し易い（水溶性物質）物質であるものと理解できる。
【実施例１】
【００３０】
次に、具体的な実施例を用いて説明するが、本発明は以下の実施例になんら限定されるものではない。
【００３１】
［Ｄ．ｓａｌｉｎａの培養］
この実施例１において、Ｄ．ｓａｌｉｎａの培養としては、上記  Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ  ｓａｌｉｎａ  ｇｒｏｗｔｈ  ｍｅｄｉｕｍを用いて、Ｄ．ｓａｌｉｎａの細胞数が約１×１０３  ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなるように培地に接種し、２リットル容のガラス扁平フラスコを用いて行なった。２３℃で、炭酸ガス５％を含有する空気を通気し、蛍光灯（３５００ｌｕｘ）にて連続照射し、１０日間培養した。培養した藻体を遠心分離機（３０００回転１０分間）にて分離し、得られたペーストを凍結乾燥して、デュナリエラ藻体乾燥粉末を得た。
【００３２】
［実施例１の抗ピロリ菌組成物の生成］
この実施例１においては、前記デュナリエラ藻体乾燥粉末（Ｄ．ｓａｌｉｎａ乾燥藻体）１５ｇをガラス瓶に入れ、該ガラス瓶内の気体を窒素置換して低酸素乃至無酸素状態の環境にした後、２５℃で保存した。この保存は、２，４，６週間の一定期間行い、前記デュナリエラ藻体を退色させる、即ち、該藻体に含まれているカロテノイドを退色させた。
【００３３】
［抽出処理］
前記退色させたデュナリエラ藻体１５ｇに蒸留水１３５ｍｌを加え、氷冷下にて２０分間攪拌し、さらに２７分間超音波処理して前記退色させたデュナリエラ藻体からその抽出物を抽出した。この抽出物を、４７００回転、１時間遠心分離した後、その上清をさらに１５０００回転、１時間遠心分離し、その上清を０．０５ｍｍフィルター、ついでガラス繊維ろ紙と０．８ｍｍメンブランフィルターにてろ過し、ろ液（デュナリエラの抽出物；抗ピロリ菌組成物を含む）を得た。このろ液について抗ピロリ菌活性を調べるために、常法により０．４５μｍメンブランフィルターにて滅菌し、以下の試験に供した。
【００３４】
［抗ピロリ菌試験］
このようにして得られた各抽出物の抗ピロリ菌活性を常法に準じて測定した。具体的には、ブルセラ培地（ウマ血清１０％含有、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社製  ＢＢＬＴＭ  Ｂｒｕｃｅｌｌａ  Ｂｒｏｔｈ（Ｃａｔ  Ｎｏ．２１１０８８））にて十分に増殖させたピロリ菌を、同じくブルセラ培地に混和し、６００ｎｍにおいて０．５−０．７の吸光度を示す浮遊液を調製した。
【００３５】
前記デュナリエラの抽出物を５％含むブルセラ寒天培地（ウマ血清１０％、寒天１．５％含有）にピロリ菌希釈液１０μｌを塗布し、３日間微好気（ＣＯ２濃度１０％）培養後、生菌数測定を行い増殖抑制率を算出した。コントロール試験では、前記デュナリエラの抽出液（抗ピロリ菌組成物を含む）のかわりに１％  ＮａＣｌ溶液を用いた。表１に、デュナリエラの抽出液（抗ピロリ菌組成物を含む）における抗ピロリ菌活性を測定した結果を示す。
【００３６】
【表１】
2007217384.tif 000002
【００３７】
この表１から明らかなように、本発明に係る抗ピロリ菌組成物を含んだデュナリエラの抽出液は、通常のピロリ菌は勿論であるが、クラリスロマイシン（ピロリ菌除菌用抗生物質）耐性ピロリ菌（ＮＹ１とＮＹ１３）に対しても抗ピロリ菌活性を示した。このことから、本発明に係る抗ピロリ菌組成物は、ピロリ菌の増殖を抑制すると共に減菌・除菌することができて、ピロリ菌感染に対する治療・症状改善が可能であり、更に、抗生物質に対する薬剤耐性能を持つピロリ菌であっても、その効果を期待できることが理解できる。
【００３８】
また、抗ピロリ菌組成物は、その有効成分が天然物であるデュナリエラの藻体等から得られた退色したカロテノイドであるため、副作用が少ないと考えられる。更に、抗ピロリ菌組成物を服用することで、ピロリ菌を減菌・除菌して、ピロリ菌が関与する生活習慣病を含む種々の疾患（胃・十二指腸潰瘍や、胃がん、自己免疫疾患等）の治療効果も期待できるのである。
【００３９】
更に、デュナリエラの黄橙色の藻体から抽出された抽出物を本発明に係る抗ピロリ菌組成物に用いる退色したカロテノイドとして使用した場合には、前記退色したカロテノイドによる抗ピロリ菌作用は勿論であるが、この退色したカロテノイドによる作用ばかりでなく、デュナリエラの藻体の抽出物に含まれる他の成分も関与してこれらの相乗効果を期待でき、より優れた抗ピロリ菌作用を得ることができるようになるのである。