(57)【要約】【課題】生体のホメオスタシス維持及び皮膚の新陳代謝促進において重要なアポトーシスを誘導する新規かつ安全なアポトーシスを誘導剤、及びこれを配合してなる皮膚外用剤を提供することを目的とする。【解決手段】[Ｉ]Ｌｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7（配列番号１）、[２]Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ｘａａ18（配列番号３）、及び[３]Ｘａａ19−Ｇｌｎ−Ｘａａ20−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｘａａ21−Ｇｌｎ−Ａｓｐ（配列番号９）（但し、Ｘａａ1〜Ｘａａ21はそれぞれ独立にＰｒｏを除くアミノ酸である。）から選ばれるアミノ酸配列を含むペプチドからなるアポトーシス誘導剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
[Ｉ]Ｌｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7（配列番号１）及び
Ｌｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（配列番号２）、
[２]Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ｘａａ18（配列番号３）、
Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号４）、
Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ｘａａ18（配列番号５）、
Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号６）、
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号７）及び
Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ（配列番号８）、ならびに
[３]Ｘａａ19−Ｇｌｎ−Ｘａａ20−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｘａａ21−Ｇｌｎ−Ａｓｐ（配列番号９）（但し、Ｘａａ1〜Ｘａａ21はそれぞれ独立にＰｒｏを除くアミノ酸である。）から選ばれるアミノ酸配列を含むペプチドからなるアポトーシス誘導剤。
【請求項２】
Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（配列番号１０）、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（配列番号１１）、Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（配列番号１２）、Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ（配列番号１３）、Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号１４）、Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ（配列番号１５）、Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号１６）、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号１７）、Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ（配列番号１８）、Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号１９）、Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ（配列番号２０）、及びＡｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ（配列番号２１）から選ばれるアミノ酸配列を含むペプチドからなるアポトーシス誘導剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載のアポトーシス誘導剤を配合してなる皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規かつ有効なアポトーシス誘導剤及びアポトーシス誘導剤を配合してなる皮膚外用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アポトーシスは個体発生の過程、生体の防御、新陳代謝等に深く関与し、生命の維持において重要な役割を担う。アポトーシスとはプログラム化された個体の細胞変化の一態様であり、細胞壊死（ネクローシス）と対照的な細胞死の様式である。具体的には、細胞が収縮し核が凝縮して断片化し、最終的に細胞の内容物を取り込んだまま個体から脱落していく現象である。このアポトーシスは複雑に制御されており、ある一定の分化段階に達すると自らアポトーシス反応を引き起こして、細胞死に至ると考えられている。このような、特定の細胞が特定の時期に死に至る過程により、生体内の細胞環境のホメオスタシスが維持されるのである。このアポトーシスがなんらかの異常を来たした場合、具体的にはアポトーシスが過剰に誘発されたり強度に抑制されたりすると、癌や自己免疫疾患等の重篤な疾患が発症する。
【０００３】
皮膚細胞においても同様に、アポトーシスは不要となった細胞や、癌細胞、ウイルスに感染した有害な細胞を排除する重要な役割を担っている。皮膚は生体の最外層に位置し、外界からの刺激に対するバリア機能により生体内のホメオスタシスを維持しており、皮膚そのもののホメオスタシスを維持することは、即ち生体内部にとっても重要である。例えば、角化層の形成とその過程で生じる細胞死や、接触性皮膚炎等の過剰な炎症反応を終結する機構として、免疫系や神経系の細胞死も生体のホメオスタシスを維持する意味において重要な過程である（例えば非特許文献１参照）。また、老廃物や色素沈着等、皮膚がターンオーバーを正常に繰り返して排除するべきものが、老化や紫外線、その他の要因により皮膚に蓄積され、肌の乾燥やくすみといったトラブルを引き起こす原因となっている。この場合にも、皮膚の表皮細胞がアポトーシスを起こし排除されることで新陳代謝を促し、肌を正常な状態へと導くことができると考えられる。
【０００４】
一方、インターロイキン−６（ＩＬ−６）は免疫系細胞の分化、増殖をはじめ、様々な細胞の機能制御を行なうサイトカインであるが、ＩＬ−６と細胞死の関連についてはいくつかの報告がある。例えば、ＩＬ−６が受容体に結合した後に活性化される転写因子ＳＴＡＴ３が細胞増殖を促進することが知られているが、そのＳＴＡＴ３のシグナル伝達を阻害することによりアポトーシスを促進する方法（特許文献１参照）や、ＩＬ−６のシグナル伝達により誘発される免疫細胞の活性化の結果引き起こされる実質細胞の細胞死を抑制する目的で、ＩＬ−６誘導性細胞死を抑制する方法（特許文献２参照）等が挙げられる。このようにＩＬ−６の機能は多岐に渡り、免疫系細胞の介在によりアポトーシスとの関連性も様々である。即ち、アポトーシス誘導剤としてＩＬ−６そのものを用いるには、その機能の多面性から不適切であった。
【０００５】
【特許文献１】特表２００３−５２５８６２号公報
【特許文献２】特開２００２−２４９４３９号公報
【非特許文献１】藤田恵理子外３名、「ホメオスターシスの維持とアポトーシス−角化細胞、免疫細胞と神経細胞の細胞死−」、「フレグランスジャーナル」、平成１０年６月１５日、第２６巻、第６号、ｐ．３５−４２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、生体のホメオスタシス維持及び皮膚の新陳代謝促進において重要なアポトーシスを誘導する新規かつ安全なアポトーシスを誘導剤、及びこれを配合してなる皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、ＩＬ−６の断片であるペプチド及びそれらを一部アミノ酸置換したペプチドが、表皮角化細胞のアポトーシスを誘導する作用を有することを見出し、本発明をなすに至ったものである。
【０００８】
従って、本発明は
[１]Ｌｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7（配列番号１）及び
Ｌｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（配列番号２）、
[２]Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ｘａａ18（配列番号３）、
Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号４）、
Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ｘａａ18（配列番号５）、
Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号６）、
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号７）及び
Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ（配列番号８）、ならびに
[３]Ｘａａ19−Ｇｌｎ−Ｘａａ20−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｘａａ21−Ｇｌｎ−Ａｓｐ（配列番号９）（但し、Ｘａａ1〜Ｘａａ21はそれぞれ独立にＰｒｏを除くアミノ酸である。）から選ばれるアミノ酸配列を含むペプチドからなるアポトーシス誘導剤、及びこれを配合してなる皮膚外用剤を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のペプチドは、細胞のアポトーシスを誘導し、有効で安全なアポトーシス誘導剤であり、皮膚外用剤の有効成分として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明のアポトーシス誘導剤は、［１］Ｌｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7（配列番号１）及び
Ｌｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（配列番号２）、
[２]Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ｘａａ18（配列番号３）、
Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号４）、
Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ｘａａ18（配列番号５）、
Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号６）、
Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ａｒｇ−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号７）及び
Ａｒｇ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｉｌｅ（配列番号８）、ならびに
[３]Ｘａａ19−Ｇｌｎ−Ｘａａ20−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｘａａ21−Ｇｌｎ−Ａｓｐ（配列番号９）（但し、Ｘａａ1〜Ｘａａ21はそれぞれ独立にＰｒｏを除くアミノ酸である。）から選ばれるアミノ酸配列を含むペプチドである。
【００１１】
Ｘａａ1〜Ｘａａ21はそれぞれ独立にＰｒｏを除くアミノ酸である。Ｘａａ1はＭｅｔ、Ｘａａ2はＡｌａ、Ｘａａ3はＧｌｙ、Ｘａａ4はＣｙｓ、Ｘａａ5はＰｈｅ、Ｘａａ6はＧｌｎ又はＴｙｒ、Ｘａａ7はＳｅｒ又はＬｙｓ、Ｘａａ8はＳｅｒ、Ｘａａ9はＰｈｅ、Ｘａａ10はＰｈｅ、Ｘａａ11はＬｅｕ、Ｘａａ12はＧｌｎ又はＩｌｅ、Ｘａａ13はＳｅｒ又はＡｒｇ、Ｘａａ14はＳｅｒ、Ｘａａ15はＬｅｕ、Ｘａａ16はＡｌａ、Ｘａａ17はＬｅｕ、Ｘａａ18はＧｌｎ又はＡｌａ、Ｘａａ19はＡｌａ、Ｘａａ20はＡｓｎ、Ｘａａ21はＬｅｕが好ましい。
【００１２】
特に、[Ｉ]では、
Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−ＬｙｓＭｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（配列番号１０）、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（配列番号１１）、Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（配列番号１２）、[ＩＩ]では、Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ（配列番号１３）、Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号１４）、Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ（配列番号１５）、Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号１６）、Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ（配列番号１７）、Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ（配列番号１８）、[ＩＩＩ]では、Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ（配列番号１９）、Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−（配列番号２０）、及びＡｌａ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ（配列番号２１）が好ましい。この中でも配列番号１４、１５、１６及び１９のアミノ酸配列を含むペプチドが好ましい。
【００１３】
本発明のペプチドは、上記配列のいずれかを含むペプチドであって、通常８〜２０、好ましくは８〜１６のアミノ酸残基を有するものであり、上記配列のみからなるペプチドであってもよい。また、塩を形成していてもよく、上記ペプチドを２種以上組み合わせてもよい。
【００１４】
本発明のペプチドは、ＩＬ−６を断片化もしくは、このペプチドを一部アミノ酸置換することによって得ることができる。ＩＬ-６はヒト由来のもので、断片化の方法としては、遺伝子組み換え等によりＩＬ−６を得て、通常の方法により分離した後、各種プロテアーゼを単独又は組み合わせて反応させる方法が挙げられる。また、任意の配列をアミノ酸単体から化学的に合成する方法も挙げられ、どちらも好適である。
【００１５】
本発明のペプチドは優れたアポトーシス誘導効果を有するため、これを有効成分として配合してなる皮膚外用剤とすることができる。アポトーシスは皮膚においてホメオスタシスの維持や新陳代謝の促進等に重要であるため、この皮膚外用剤の適用により、ホメオスタシスの維持や新陳代謝の促進等を正常な状態に維持し、肌の乾燥や色素沈着等の肌トラブルの改善に有用であると考えられる。
【００１６】
本発明のペプチドは１種単独で又は２種以上を併用してもよく、その配合量は、皮膚外用剤の用途、剤型等に応じて適宜選定されるが、皮膚外用剤中１ｐｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬ配合するのが好ましく、より好ましくは１ｎｇ／ｍＬ〜１μｇ／ｍＬである。配合量が多すぎると皮膚外用剤の使用感が悪くなる場合がある。
【００１７】
皮膚外用剤としては、化粧料、医薬品、医薬部外品等の製剤が挙げられる。例えば、クリーム、ペースト、ローション、パウダー、スプレー、スティック、ワックス、シート等の剤型にでき、具体的には貼付剤、ボディーソープ、化粧水、クリーム、乳液、シャンプー、リンス、ヘアーウォーター、トニック、育毛剤、抑汗剤等として調製することができる。適用部位は限定されず、皮膚、頭皮いずれも適用することができる。
【００１８】
皮膚外用剤は、皮膚外用剤の種類、剤形等に応じた公知の配合成分を用いて常法により調製できる。例えば、配合成分としては、界面活性剤、油分、アルコール類、保湿剤、増粘剤、防腐剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、香料、色素、紫外線吸収・散乱剤、ビタミン類、水等を必要に応じて適宜配合することができる。さらに、上記有効成分に加えて、一般に用いられている消臭剤、保存剤、酸化防止剤等を１種単独で又は２種以上を適宜組み合わせて配合することができる。
【実施例】
【００１９】
以下、実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。
【００２０】
［調製例］
表１に示す配列のペプチドをペプチドシンセサイザーにより合成し、ＨＰＬＣで単一ピークであることを確認し、[Ｉ]−１〜３、[ＩＩ]−１〜６、[ＩＩＩ]−１〜３を得た。得られたペプチドをシークエンサーでアミノ酸配列を解析したところ、表１に記載の配列であった。比較例はヒト由来のＩＬ−６を用いた。
【００２１】
【表１】
2007137835.tif 000002
【００２２】
なお、各種アミノ酸残基を次の３文字又は１文字略号で記述する。
Ｇｌｙ（Ｇ）：グリシン残基、Ａｌａ（Ａ）：アラニン残基、Ｖａｌ（Ｖ）：バリン残基、Ｌｅｕ（Ｌ）：ロイシン残基、Ｉｌｅ（Ｉ）：イソロイシン残基、Ｓｅｒ（Ｓ）：セリン残基、Ｔｈｒ（Ｔ）：トレオニン残基、Ｃｙｓ（Ｃ）：システイン残基、Ｍｅｔ（Ｍ）：メチオニン残基、Ａｓｎ（Ｎ）：アスパラギン残基、Ｇｌｎ（Ｑ）：グルタミン残基、Ｐｒｏ（Ｐ）：プロリン残基、Ｐｈｅ（Ｆ）：フェニルアラニン残基、Ｔｙｒ（Ｙ）：チロシン残基、Ｔｒｐ（Ｗ）：トリプトファン残基、Ａｓｐ（Ｄ）：アスパラギン酸残基、Ｇｌｕ（Ｅ）：グルタミン酸残基、Ｌｙｓ（Ｋ）：リジン残基、Ａｒｇ（Ｒ）：アルギニン残基、Ｈｉｓ（Ｈ）：ヒスチジン残基
【００２３】
［試験例１：アポトーシス誘導試験１］
正常ヒト表皮角化細胞（クラボウ（倉敷紡績（株））製）を２４穴マルチウェルプレート（スミロン社製）に５０００ｃｅｌｌｓ／ウェル播種し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で１日培養した。培地はＨｕ−ｍｅｄｉａ  ＫＧ２（クラボウ製）を用いた。培養上清を吸引除去し、無添加（コントロール）及び１０ｎｇ／ｍＬの表１に示すペプチドを各々含有した培地を各ウェルに加え、さらに５日間培養した。その後トリプシンにて細胞を剥離、回収し、血球計算盤にて細胞数を計測した。コントロールを１００とした時の各ペプチド添加群の細胞生存率を算出した結果を表２に示す。
【００２４】
【表２】
2007137835.tif 000003
【００２５】
上記表に示した結果のように、配列番号［１］−１〜［３］−３の全てのペプチドを添加した場合に細胞死が誘導され、細胞生存率が減少することが明らかとなった。中でもでも［２］−２、［２］−４、［３］−１の３種については、細胞生存率１０％以下の低い細胞生存率を示した。一方、ペプチドの基本配列であるＩＬ−６そのものを添加した場合にはコントロールと同等レベルの細胞の生存が確認され、細胞死誘導作用は認められなかった。
【００２６】
［試験例２：アポトーシス誘導試験２］
試験例１にて剥離、回収後計数した細胞を用いて、アポトーシス発症の指標であるｐ５３タンパク質の発現量をＥＬＩＳＡ法（Ｂｅｎｄｅｒ  Ｍｅｄｓｙｓｔｅｍｓ社製）にて測定した。コントロールを１００とした時の各ペプチド添加群のｐ５３発現率を算出した結果を表３に示す。
【００２７】
【表３】
2007137835.tif 000004
【００２８】
上記表に示した結果のように、配列番号［１］−１から［３］−３の全てのペプチドを添加した場合にｐ５３発現量が増加し、アポトーシスが誘導されることが明らかとなった。中でも細胞生存率が低かった配列番号［２］−２、［２］−３、［２］−４、［３］−１の４種については、ｐ５３発現量もコントロール比４００％以上の高い値を示し、ｐ５３発現が誘導され、その後アポトーシスが発症し、細胞死へと至る過程が示唆された。一方、ペプチドの基本配列であるＩＬ−６そのものを添加した場合には、コントロールと同等レベルのｐ５３発現が確認され、アポトーシス誘導作用は認められなかった。
【００２９】
［処方例１〜２６］
本発明のペプチドを配合した処方例を示す。各処方例は常法に基づいて得られたものである。下記の例は、いずれも皮膚の新陳代謝改善、ホメオスタシス維持に優れており、安全性も良好なものであった。
組成物中に記した香料は、特開２００３−３００８１１号公報に記した香料に、ジブチルヒドロキシトルエンを０．００１質量％添加したものである。以下、下記の例において特に明記のない場合は、組成の「％」は質量％を示す。
【００３０】
【表４】
2007137835.tif 000005
【００３１】
【表５】
2007137835.tif 000006
＊１  信越化学工業（株）製、メトロース  ６５ＳＨ−１５００
＊２  ライオン化学（株）製、ＸＭ−５０３ＬＮもしくはレオガードＧＰ、又はユニオン・カーバイド社製  ポリマーＪＲ４００
【００３２】
【表６】
2007137835.tif 000007
【００３３】
【表７】
2007137835.tif 000008
【００３４】
【表８】
2007137835.tif 000009
シャンプーのｐＨは３〜７．５
＊３  ＰＯＥ（３）ラウリルエーテル硫酸ナトリウム
＊４  メタクリロイルオキシエチルジメチルアンモニウム・メチルカルボキシベタイン・メタクリル酸アルキルエステル共重合体
【００３５】
【表９】
2007137835.tif 000010
＊５  ライオン化学（株）製、ＸＭ−５０３ＬＮもしくはレオガードＧＰ、又はユニオン・カーバイド社製  ポリマーＪＲ４００
＊６  三菱油化（株）（現三菱化学（株）製）、ユカフォーマーＡＭ７５２０１
【００３６】
【表１０】
2007137835.tif 000011
＊７  ＫＦ６０１２（信越化学工業（株）製）
【００３７】
【表１１】
2007137835.tif 000012
【００３８】
【表１２】
2007137835.tif 000013
＊８  東レダウコーニング（株）製  ＳＨ２００Ｃ  ３０ｃｓ
【００３９】
【表１３】
2007137835.tif 000014
【配列表フリーテキスト】
【００４０】
配列番号１：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
配列番号２：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
配列番号３：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
配列番号４：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
配列番号５：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
配列番号６：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
配列番号７：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
配列番号８：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
配列番号９：ＸａａはＰｒｏ以外のアミノ酸である。
【配列表】
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