(57)【要約】 【課題】新規なグリセロ糖脂質、およびこの新規グリセロ糖脂質を含有するメラニン生成抑制剤、化粧料、食品を提供する。【解決手段】次の化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされる新規グリセロ糖脂質及びメラニン生成抑制剤、化粧料、食品。  【化１】2007137863.tif 000013【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされる新規グリセロ糖脂質。
【化１】
2007137863.tif 000012
【請求項２】
請求項１に記載された新規グリセロ糖脂質を含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤。
【請求項３】
請求項１に記載された新規グリセロ糖脂質を含有することを特徴とする化粧料。
【請求項４】
請求項１に記載された新規グリセロ糖脂質を含有することを特徴とする食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なグリセロ糖脂質と、それを利用したメラニン生成抑制剤、化粧料、食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
大気汚染やオゾン層の破壊などに起因して、人の表皮に届く紫外線量は年々増加する傾向にあり、それに伴い、紫外線による肌のシミ、ソバカス、色黒などの肌悩みが大きな問題となっている。紫外線が照射されることにより、皮膚内に存在するチロシンがチロシナーゼ酵素の働きにより酸化されてメラニン色素が産生され、これが過剰に産生されると、シミ、ソバカス、色黒などの肌悩みとなって表れる。このメラニン色素の産生を抑制し、シミ、ソバカス、色黒を予防する方法として、従来より、皮膚の美白を目的として、皮膚化粧料にL-アスコルビン酸及びその誘導体であるL-アスコルビン酸グルコース配糖体を配合することが行なわれており（例えば、特許文献１参照）、さらにL-アスコルビン酸グルコース配糖体とアミノ酸又はその誘導体を組み合わせて配合した皮膚外用剤（例えば、特許文献２参照）など、多数提案されている。しかしながら、これらの美白剤は美白効果が必ずしも十分に認められないものであったり、美白効果を示す成分を、美白効果を認める濃度で配合すると安全性や安定性に問題を生じることがあった。
一方、本発明者は、このような皮膚の美白を目的としてメラニン生成抑制剤の探索を行っていたが、アブラナ科の野菜であるケールまたはその抽出物が紫外線によるメラニン生成抑制作用を有することを見出し、既に特許出願を行った（特許文献３参照）。
【０００３】
【特許文献１】特開平４−１８２４１２号公報
【特許文献２】特開平４−１８２４１３号公報
【特許文献３】特開２００４−９１３９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、新規なグリセロ糖脂質、およびこの新規グリセロ糖脂質を含有するメラニン生成抑制剤、化粧料、食品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の主な構成は次のとおりである。
（１）次の化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされる新規グリセロ糖脂質。
【０００６】
【化２】
2007137863.tif 000002
（２）（１）に記載された新規グリセロ糖脂質を含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤。
（３）（１）に記載された新規グリセロ糖脂質を含有することを特徴とする化粧料。
（４）（１）に記載された新規グリセロ糖脂質を含有することを特徴とする食品。
【発明の効果】
【０００７】
本発明で用いる化学式（Ｉ）のグリセロ糖脂質は新規物質であり、メラニン産生抑制作用があり、美白効果を奏する。このグリセロ糖脂質を含有した美白化粧料を提供できる。このグリセロ糖脂質を含有する食品を提供できる。また、ケール由来のグリセロ糖脂質が有効であることが確認できた。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明の新規なグリセロ糖脂質、これを含有するメラニン生成抑制剤、化粧料、食品について説明する。
まず、本発明のグリセロ糖脂質は、前記化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされる新規な化合物であり、糖類基としてガラクトース、アシル基として不飽和結合を含む炭素数１６及び１８のアシル基を有するグリセロ糖脂質である。
【０００９】
具体的には、本発明の新規なグリセロ糖脂質は、ＩＵＰＡＣ名によって以下のように表記できる化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされる新規な化合物である。
【００１０】
【化３】
2007137863.tif 000003
【００１１】
前記化学式（Ｉ）のグリセロ糖脂質のＩＵＰＡＣ名
(9Z,12Z,15Z)-１-((7Z,10Z)-hexadeca-7,10-dienoyloxy)-3-((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6- (hydroxymethyl)-tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy) propan-2-yl-octadeca-9,12,15-trienoate
前記化学式（Ｉ）の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基が入れ替わったグリセロ糖脂質のＩＵＰＡＣ名
(7Z,10Z) -１-((9Z,12Z,15Z)- octadeca-9,12,15-trienoyloxy)-3-((2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6- (hydroxymethyl)-tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy) propan-2-yl- hexadeca-7,10-dienoate
【００１２】
本発明の前記化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされるグリセロ糖脂質は、例えば、アブラナ科植物の野菜であるケールのエタノール抽出物から分離して入手することができる。このケールは、南ヨーロッパ原産のアブラナ科植物の野菜で、キャベツの原種と言われており、その学名は、Brassicca Oleracea L．var．acephala DC.である。このケールには、キッチンケール、マローケール、ブッシュケール、ツリーケール、コラード、緑藻カンランなどの種類があり、これらのいずれでも本発明の新規なグリセロ糖脂質を製造するために使用することができる。本発明の新規なグリセロ糖脂質を得るためのケールの使用部位としては、葉など通常食用に供されているもののほか、ケールの茎、花、根なども使用することができ、特に制限されるものではなく、その栽培方法や栽培地も特に限定されるものではない。
【００１３】
本発明の前記化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされるグリセロ糖脂質は、上述のようなケールの葉、茎、花、根などを濃度５０〜１００質量％、好ましくは７０〜１００質量％のエタノールで抽出して得られた抽出物の脂溶性画分に多く含まれている。
具体的には、例えば、ケールの葉、茎、花や根などの乾燥物に濃度５０〜１００質量％、好ましくは７０〜１００質量％エタノールを加え、室温で数時間ないし数十時間の間浸漬・攪拌することによりその抽出液を得て、この抽出液を加熱蒸発等によって濃縮する。ここで得られた抽出物は、さらにその濃度が７０質量％のエタノール水溶液とジクロロメタンを用いて再度抽出を行い、分液ロートによって２層に分離することができる。得られたジクロロメタン画分を加熱蒸発等によって濃縮し、さらにノルマルヘキサンとメタノールで再度抽出を行い、分液ロートによって２層に分離することができる。得られたノルマルヘキサン層を加熱蒸発等によって濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相ＨＰＬＣによって分画精製することにより、前記化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされるグリセロ糖脂質を得ることができる。
【００１４】
次に、本発明のメラニン生成抑制剤は、このようにして得られたグリセロ糖脂質をそのままその有効成分として使用してもよいし、或いは、前記化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされるグリセロ糖脂質を含有するケール抽出物をそのまま有効成分として使用してもよい。本発明の新規グリセロ糖脂質を含有するメラニン生成抑制剤には、本発明の効果を損なわず、悪影響を及ぼさない任意の種々の成分をその助剤、媒体または担体として使用することができる。
【００１５】
本発明の新規なグリセロ糖脂質は皮膚のメラニン生成抑制作用を有している。紫外線により、皮膚内に存在するチロシンがチロシナーゼ酵素の働きにより酸化されてメラニン色素が産生されるが、これが過剰に産生されると、シミ、ソバカス、色黒などの肌悩みとなる。本発明の新規グリセロ糖脂質を用いることにより、紫外線が照射されたときの皮膚のメラニンの生成が抑制され、このような肌悩みを改善のために有効である。
本発明の新規グリセロ糖脂質を配合した化粧料又は皮膚外用剤を製造することができる。このような化粧料には、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤、乾燥剤などを含有させることができる。さらに、ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、常在菌コントロール剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、抗癌剤、美白剤、殺菌剤等のほかの薬効成分、生理活性成分を含有させることもできる。
化粧料の種類としては、化粧水、乳液、クリーム、パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップクリーム、乳液状又はクリーム状、あるいは軟膏型のファンデーション、口紅、アイカラー、チークカラーといったメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料、および入浴剤、口腔化粧料、毛髪化粧料等とすることができる。本発明の新規グリセロ糖脂質を含有せしめた化粧料としては、その機能面からは、例えば乳液、化粧液、フェイスクリーム、ハンドクリーム、ローション、エッセンスなどが好ましい。
このような本発明の新規グリセロ糖脂質を含有する化粧料は、常法に従って製造することができる。化粧料における本発明の新規グリセロ糖脂質の添加量は、特に限定されるものではないが、一例としてあげると、化粧料全重量の０．００１〜２０質量％、好ましくは０．０１〜１０質量％が適当である。
【００１６】
食品組成物としては、本発明の新規グリセロ糖脂質をそのまま、又は種々の栄養成分を加えて、若しくは飲食品中に含有せしめて、保健用食品又は食品素材として使用できる。例えば、澱粉、乳糖、麦芽糖、植物油脂粉末、カカオ脂末、ステアリン酸などの適当な助剤を添加することができる。
食品組成物としては、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵乳製品に添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用してもよい。
食品組成物への本発明の新規グリセロ糖脂質の配合量は、当該食品組成物の種類や状態等により適宜設定される。
【実施例１】
【００１７】
次に、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。以下の製造例、実施例、処方例は本発明の好ましい例を示すものであり、これに限定されるものではない。また、各例中の「％」は質量基準である。
【００１８】
新規グリセロ糖脂質の製造
次に、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。以下の製造例、実施例、処方例は本発明の好ましい例を示すものであり、これに限定されるものではない。また、各例中の「％」は質量基準である。
【００１９】
１）ケール脂溶性画分の抽出
乾燥させたケールの葉を粉砕し、ケール粉砕物500gに100%エタノール3Lを加え、加熱しながら1時間抽出し、この抽出液をエバポレーターを用いて1Lまで濃縮した。さらにエタノール濃度が70%になるように精製水を加えた後、ジクロロメタンを加え、分液ロートにより分離した。さらにジクロロメタン溶出画分を濃縮乾固し、n-ヘキサンで溶解後、メタノールを加え、分液ロートで分離した。得られたn-ヘキサン層を濃縮乾固させてケールエタノール抽出物の「脂溶性画分Ａ」として１２．４ｇを得た。分画フローを図１に示す。
【００２０】
２）脂溶性画分Ａのシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離
得られた脂溶性画分Ａ（１２．４ｇ）を用いて、以下の方法と条件によって分離精製した。
・分取カラム：Wako  シリカゲル60  0.040〜0.063mm
内径６ｃｍ、長さ６０ｃｍ
・溶離液：ジクロロメタン、メタノールの溶離液組成をジクロロメタン：メタノール＝１００：０→１００：１→１００：２→１００：１０→５：１→３：１→０：１００の濃度で順次、カラムに流した。
・分取物  
溶離液組成がジクロロメタン：メタノール＝５：１から成分が溶出し、Ｂ〜Ｅの４画分に分画した。そのうち、ジクロロメタン：メタノール＝５：１で溶出させた、最初の分画Ｂを用いた。分画Ｂは５．８ｇ得られた。
【００２１】
３）分画Ｂのシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる分離
得られた分画Ｂ（５．８ｇ）を用いて、以下の方法と条件によって分離精製した。
・分取カラム：Wako  シリカゲル60  0.040〜0.063mm
内径６ｃｍ、長さ６０ｃｍ
・溶離液：n-ヘキサン、酢酸エチル、メタノールの溶離液組成をn-ヘキサン：酢酸エチル：メタノール＝１０：１：０→５：１：０→２：１：０→１：１：０→１：１：０．１→１：１：０．２→１：２：０．２→１：２：０．５→０：１：１→０：０：１の濃度で順次、カラムに流した。
・分取物  
溶離液がn-ヘキサン：酢酸エチル：メタノール＝２：１：０から成分が溶出し、最初の画分Ｆとした。画分Ｆから画分Ｍまでの８画分に分画した。n-ヘキサン：酢酸エチル：メタノール＝１：２：０．２→１：２：０．５で溶出した分画Ｋを用いた。分画Ｋは２．０ｇ得られた。
【００２２】
４）分画Ｋの高速液体クロマトグラフィーによる分離
分画Ｋの一部（１６０ｍｇ）を用いて、以下の方法と条件によって分離精製した。
・機器構成：
分取カラム：SHISEIDO  CAPCELL PAK C18 UG-120  10.0×250mm
検出器：島津  SPD-M10AVP UV215nm
・溶離液：
流  速：4.7ｍＬ／ｍｉｎ
溶離液： 水：アセトニトリル＝１０：９０
・分取物
保持時間２６分から２７分の画分から分画Ｗ（９ｍｇ）を得た。この分画Ｗを「サンプル（ａ）」とする。
図１にケールのエタノール抽出物からサンプル（ａ）を分画するフロー図を示す。
【００２３】
５）グリセロ糖脂質の構造決定
上記の４）で分取したサンプル(ａ)について、ＬＣ／ＭＳ分析装置及びＮＭＲ分析装置を用いて化合物の構造決定を行なった。
ＬＣ／ＭＳ分析装置並びに条件
・機器構成：
ＨＰＬＣシステム：ＰＥ  Ｓｅｒｉｅｓ  ２００
ＭＳシステム：ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ  １５０（+/(-)-ＥＳＩ、Ｆａｓｔ-Ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ-Ｍｏｄｅ）
分析カラム：  Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｌｅｃｔ Ｂ  ２５０×４ｍｍ、５μｍ
・溶離液：
流  速：１ｍＬ／ｍｉｎ
溶離液：Ａ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸水溶液
Ｂ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸のアセトニトリル：メタノール＝１：１溶液
グラジエント：表１に示す。
【００２４】
【表１】
2007137863.tif 000004
【００２５】
１Ｈ−ＮＭＲの分析条件
共鳴周波数４００ＭＨｚで測定した。溶媒は重メタノールを用い、化学シフト基準に使用した（１Ｈ−ＮＭＲ３．３０ｐｐｍ）。
抽出分離した各サンプルのＬＣ／ＭＳ分析、ＮＭＲ分析の結果を以下に示す。表２において、「Gal」はガラクトース、「FA」は脂肪酸を表す。
サンプル(ａ)：
ＬＣ／ＭＳとＮＭＲのデータを以下に示す。
ＬＣ／ＭＳ
（+)−ＥＳＩ：７６６[Ｍ＋ＮＨ４]＋、５８７[Ｍ−Ｇａｌ＋Ｈ]＋
（-)−ＥＳＩ：７９３[Ｍ＋ＨＣＯＯ]−、７４７[Ｍ−Ｈ]−、２７７[Ｃ１８Ｈ29Ｏ２]−、２５１[Ｃ１６Ｈ2７Ｏ２]−
１Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルの帰属と化学シフトを表２に示す。
【００２６】
【表２】
2007137863.tif 000005
【００２７】
サンプル(ａ)は化学式（Ｉ）で表される新規なグリセロ糖脂質、あるいは化学式（Ｉ）中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基が入れ替わった新規なグリセロ糖脂質、あるいはそれらの混合物であり、上記のようなスペクトルデータを示す。ＬＣ／ＭＳ及びＮＭＲ分析によって、２種類の脂肪酸アシル基の結合位置を決定することはできなかった。
【００２８】
【化４】
2007137863.tif 000006
【実施例２】
【００２９】
メラニン生成抑制評価試験
メラニンを生成する細胞としてマウス由来の培養Ｂ１６メラノーマ細胞を用いて、ウシ胎児血清を終濃度１０％になるように添加したイーグルＭＥＭ培地で培養し、該細胞を１×１０３細胞／wellで、９６ウェルプレートに播種し、５日間ＣＯ２インキュベーター内で培養した。その後、被検試料を添加した培地に交換し、さらに３日間同条件で培養した。培養終了後、細胞を洗浄し、細胞をドデシル硫酸ナトリウム（SDS）により可溶化して４７５ｎｍ、２６０ｎｍの吸光度を測定し、これをＳ４７５、Ｓ２６０とする。メラニン抑制率は、被検試料を添加しない培地で培養した細胞の４７５ｎｍ、２６０ｎｍにおける吸光度をＣ４７５、Ｃ２６０として次式により計算した。
【００３０】
【数１】
2007137863.tif 000007
【００３１】
尚、被検試料としては、前記実施例１で得た化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされるグリセロ糖脂質であるサンプル(ａ)を用い、それぞれ培地に１２．５μｇ／ｍＬ、２５．０μｇ／ｍＬ、及び５０．０μｇ／ｍＬ添加した。陽性対照区としては美白成分として広く使用されているコウジ酸（Kojic acid）を用い、これを培地に１２．５μｇ／ｍＬ、２５．０μｇ／ｍＬ、及び５０．０μｇ／ｍＬ添加した。
これらのメラニン生成抑制評価試験の結果を図２に示す。図２に示したように、本発明の新規グリセロ糖脂質のサンプル（ａ）は陽性対照区のコウジ酸（Kojic acid）と同様にメラニン生成抑制効果を示した。
【００３２】
次に、以下に、本発明の新規グリセロ糖脂質の具体的な使用形態である化粧品としての処方例を示す。
【００３３】
処方例１：化粧水
上記の実施例１で得られた化学式（Ｉ）（但し、式中の７，１０-ヘキサデカジエン酸アシル基と９，１２，１５-オクタデカトリエン酸アシル基は入れ替わってもよい）で表わされるグリセロ糖脂質（サンプル(a)）を用いて、常法により下記の配合組成の化粧水を製造した。
【００３４】
【表３】
2007137863.tif 000008
【００３５】
処方例２：クリーム
上記の実施例１で得られた新規グリセロ糖脂質（サンプル(ａ)）を用いて、常法により下記の配合組成のクリームを製造した。
【００３６】
【表４】
2007137863.tif 000009
【００３７】
処方例３：化粧パック
上記の実施例１で得られた新規グリセロ糖脂質（サンプル(a)）を用いて、常法により下記の配合組成の化粧パックを製造した。
【００３８】
【表５】
2007137863.tif 000010
【００３９】
処方例４：メラニン生成抑制剤（錠剤）
上記の実施例１で得られた新規グリセロ糖脂質（サンプル(a)）を用いて、常法により下記の配合組成のメラニン生成抑制用組成物の錠剤を製造した。
【００４０】
【表６】
2007137863.tif 000011
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ケールのエタノール抽出物からサンプル（ａ）を分画するフロー図。
【図２】実施例１で得られたサンプル（ａ）のメラニン生成抑制の評価試験の結果を示すグラフ。
【図１】
2007137863.tif 000014
【図２】
2007137863.tif 000015