(57)【要約】【課題】関節炎および滑膜に関係する他の疾患の病原を阻害する能力を有する化合物によって慢性炎症性症状を治療することが依然として必要とされており、本発明は、慢性炎症性疾患症状の治療薬の製造におけるアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬の使用に関する。【解決手段】アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬を含む、滑膜に存在するアンギオテンシンIIレセプターへのアンギオテンシンIIの結合を阻害するための医薬組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬を含む、滑膜に存在するアンギオテンシンIIレセプターへのアンギオテンシンIIの結合を阻害するための医薬組成物。
【請求項２】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)−メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸またはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
医薬的に許容される塩がメタンスルホン酸塩である請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシナフタ−１−イル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸またはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項５】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が２−ｎ−ブチル−４−クロロ−１−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]−５−(ヒドロキシメチル)イミダゾールまたはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項６】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が２−ｎ−プロピル−４−ペンタフルオロエチル−１−[２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]イミダゾール−５−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が５,７−ジメチル−２−エチル−３−(２'−(テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジンまたはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項８】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が２−エチル−４−｛(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メトキシ]キノリンまたはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項９】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が｛[３−ブロモ−２−[２−テトラゾール−５−イル)フェニル]−５−ベンゾフラニル]メチル｝−２−ブチル−４−クロロ−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１０】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が２−ｎ−ブチル−４−スピロシクロペンチル−１−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]−２−イミダゾリン−５−オンまたはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１１】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が(Ｓ)−Ｎ−(１−カルボキシ−２−メチル−プロパ−１−イル)−Ｎ−ペンタノイル−Ｎ−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]アミンまたはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１２】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が４'−[(２−ｎ−ブチル−６−シクロヘキシルアミノカルボニル)アミノ−ベンゾイミダゾール−１−イル)メチル]ビフェニル−２−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬が１−(シクロヘキシルオキシカルボニルオキシ)エチル−２−エトキシ−１−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]−ベンゾイミダゾール−７−カルボキシラートまたはその医薬的に許容される塩である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１４】
アンギオテンシンIIレセプター拮抗薬がＡＴ1サブタイプレセプター拮抗薬である請求項１記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、関節の炎症性症状の治療において有用なアンギオテンシンII（ＡII）レセプター拮抗薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
アンギオテンシンII（以下、ＡIIと記す）は、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によるアンギオテンシンＩの酵素的切断によって生産されるオクトペプチドである。末梢組織において、ＡIIは、有効な血管収縮薬であり、内皮損傷後の血管内膜過形成および狭窄に関係していた［非特許文献１および非特許文献２］。さらに、ＡIIは、いくつかの動物モデルにおいて脈管形成を刺激し［非特許文献３、非特許文献４］；血管平滑筋による成長因子の発現を誘発し［非特許文献５］、いくつかの細胞タイプの増殖を自身で調節することもできる［非特許文献６]。
慢性関節リウマチは、滑膜低灌流（synovial hypoperfusion）を示す慢性滑膜低酸素症（synovial hypoxia）によって［非特許文献７、非特許文献８］、および滑膜増殖によって特徴付けられてきた。
【非特許文献１】ラポルテ・アンド・エッシャー（Ｌaporte ＆ Ｅscher)、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂiochem.Ｂiophys.Ｒes.Ｃommun.)、第１８７巻、第１５１０−１５１６頁（１９９２)
【非特許文献２】アズマ（Ａzuma）ら、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｂr.Ｊ.Ｐharmacol.)、第１０６巻、第６６５−６７１頁（１９９２）
【非特許文献３】フェルナンデス（Ｆernandez）ら、ジャーナル・オブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディシン（Ｊ.Ｌab.Ｃlin.Ｍed.)、第１０５巻、第１４１−１４５頁（１９８５)
【非特許文献４】ルノーブル（Ｌe Ｎoble）ら、Ｅur.Ｈ.Ｐharmacol.、第１９５巻、第３０５−３０６頁（１９９１）
【非特許文献５】ナフチラン（Ｎaftilan）ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ.Ｃlin.Ｉnvest.)、第８３巻、第１４１９−１４２４頁（１９８９）
【非特許文献６】アラキ（Ａraki）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、第１６８巻、第３５０−３５７頁（１９９０）
【非特許文献７】レヴィック・ジェイ・アール（Ｌevick Ｊ.Ｒ.)、Ｊ.Ｒheumatol.、第１７巻、第５７９−５８２頁（１９９０)
【非特許文献８】スティーヴンズ（Ｓtevens）ら、Ａrthritis Ｒheum.、第３４巻、第１５０８−１５１３頁（１９９１）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
関節炎および滑膜に関係する他の疾患の病原を阻害する能力を有する化合物によって慢性炎症性症状を治療することが依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、慢性炎症性症状の治療を必要とする患者にアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬の有効な非毒性量を投与することを特徴とする、該哺乳動物、特にヒトにおける関節炎などの慢性炎症性症状の新規治療方法を提供するものである。
【０００５】
本発明は、また、哺乳動物、特にヒトにおける関節炎などの慢性炎症性症状の治療薬の製造におけるアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬の使用を提供するものでもある。
【０００６】
（図面の簡単な説明）
図１は、変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜への増加する濃度の[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)アンギオテンシンIIの特異的平衡結合。最大結合は、管壁細胞（lining cell）に対してよりも血管に対しての方が大きく（○)（ｐ＜０.００１)、支質（stroma）に対してよりも管壁細胞に対しての方が大きかった（△)（ｐ＜０.０１)。データは、６つのケースの平均値（±Ｓ.Ｅ.Ｍ.）である。
図２は、非標識(Ｓar1,Ｉle8)アンギオテンシンII（Ｏ)、アンギオテンシンII；ＡＴ1特異的拮抗薬(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸（Ｄ）およびＡＴ2特異的拮抗薬ＰＤ１２３３１９（Ｏ）による変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜における血管への[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)アンギオテンシンIIの特異的結合の阻害。データは、６つのケースの平均値（±Ｓ.Ｅ.Ｍ.）である。
【０００７】
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける慢性炎症性症状の治療方法である。本発明は、局所的に生じたＡIIがヒト滑膜中に存在し、したがって、ＡIIレセプター拮抗薬の使用が慢性炎症性症状の治療に寄与するであろうということを見いだした。好ましくは、ＡIIレセプター拮抗薬は、ＡＴ1レセプター拮抗薬サブタイプのものである。
【０００８】
滑膜細胞上のアンギオテンシンIIレセプターの存在の観察により、損傷に応答して反応し増殖するこの組織が、組織損傷、増殖および分化（differentiation）の調節におけるアンギオテンシンについての幅広い役割を反映するという考えが生じる。これ自体は、腫瘍増殖、例えば、腫瘍トランスフォーメーションおよび増殖／転移、骨髄成熟および分化、皮膚成熟および分化、ならびに肝細胞成熟および分化などの障害の治療を含む。慢性炎症性疾患としては、炎症性自己免疫疾患（好ましくは、乾癬および他の局所的皮膚疾患以外のもの、またはかかる疾患に加えて)、全身性紅斑性狼瘡、慢性関節リウマチおよび糖尿病などの増殖性リンパ球反応が挙げられる。また、慢性炎症性疾患としては、シェーグレン病、多発性硬化症、スクロデルマ（scloderma）などの結合組織病、ならびに、腎臓、甲状腺および唾液腺などの複数の臓器を含む混合結合組織病も挙げられる。また、慢性炎症性疾患としては、炎症を起こしている関節、慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、および痛風性関節炎などの疾患、ならびに変形性関節炎および膝蓋骨軟骨軟化症（chondromalacia patellae）などの種々の関節炎症状も挙げられる。軟骨軟化症または軟骨の破壊は、関節の炎症症状に存在する特徴である。また、変形性関節症は、それ自体、炎症症状とは考えられないが、ここでの目的のために関節炎症状として含まれると認識される。
【０００９】
特に好ましくは、炎症を起こしている関節、慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、および痛風性関節炎などの関節における損傷に対する滑膜増殖および応答に関連する疾患ならびに変形性関節炎および膝蓋骨軟骨軟化症などの種々の他の関節炎症状である。
【００１０】
以下の方法のセクションで記載する場合、[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの特異的結合およびＡＣＥ様免疫反応性は、各々、滑膜小動脈の中膜および内皮において観察され、これらの血管が局所的に生じるＡIIに作用されることを示唆する。
【００１１】
ＡＴ1様結合部位は、従前に、ヒトにおける大きなサイズおよび中位のサイズの動脈の中膜において［ウラタ（Ｕrata）ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・エンドクリノロジー・アンド・メタボリズム（Ｊ. Ｃlin. Ｅndocrinol. Ｍetabl.)、第６９巻、第５４−６６頁（１９８９)］および培養された血管平滑筋細胞上で［ホワイトブレッド（Ｗhitebread）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂiochem. Ｂiophys. Ｒes. Ｃommun.)、第１６３巻、第２６４−２９１頁（１９８９)］示されており、血管収縮［チュウ（Ｃhiu）ら、ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・イクスペリメンタル・セラピューティクス（Ｊ. Ｐharmacol. Ｅxp. Ｔherapeut.)、第２５２巻、第７１１−７１８頁（１９９０)］および平滑筋肥大［ミレット（Ｍillet）ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Ｅur. Ｊ. Ｂiochem.)、第２０６巻、第３６７−３７２頁（１９９２)］（共に、組織灌流を低下させる）を媒介すると思われる。滑膜低灌流は、ヒト関節炎の病因［レヴィック,ジェイ・アール（Ｌevick, Ｊ. Ｒ.)、Ｊ. Ｒheumatol.、第１７巻、第５７９−５８２頁（１９９０)］およびＡＴ1拮抗薬の組織灌流増強能［アズマ（Ａzuma）ら、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｂr. Ｊ. Ｐharmacol.)、第１０６巻、第６６５−６７１頁（１９９２）］に寄与する。
【００１２】
炎症性関節炎におけるＡＣＥ阻害の開放系の非制御研究は、ＡＣＥ阻害薬カプトプリル（Ｃaptopril）が治療利益を有するというある証拠を提供するという結論に達していないが［マーチン（Ｍartin）ら、ランセット（Ｌancet)、ｉ、第１３２５−１３２８頁（１９８４)］、かかる有益な効果は、ＡＣＥの阻害に起因することが必ずしも必要なわけではない［バード（Ｂird）ら、Ｊ. Ｒheumatol.、第１７巻、第６０３−６０８頁（１９９０)］。さらにまた、アンギオテンシノゲンは、ＡＣＥに対する唯一の基質というわけではなく、ブラジキニンおよびサブスタンスＰ（共に、関節炎に関係する）などの炎症前ペプチド（proinflammatory peptide）をも不活性化する［ミアノ（Ｍiano）ら、ニューロサイエンス（Ｎeuroscience)、第５１巻、第６４９−６５５頁（１９９２)、ワルシュ（Ｗalsh）ら、アナルズ・ルーマティク・ディジージズ（Ａnn. Ｒheum. Ｄis.)、第５１巻、第３１３−３１７頁（１９９２)、カスプリッツ（Ｃaspritz）ら、アルツナイミーテルフォルシュンク（Ａrzneimittelforschung)、第３６巻、第１６０５−１６０８頁（１９８６)］。したがって、ＡＣＥの阻害は、ＡII発生を減少させる有益な効果を遮蔽するかもしれない多くの作用を有する。
【００１３】
本発明は、アンギオテンシンレセプター拮抗薬と称される化合物群、好ましくは、ＡＴ1サブタイプレセプターを阻害し、ＡＴ1レセプター拮抗薬と称される化合物群の使用による、特に、関節の慢性炎症性症状の治療に対する新規アプローチを提供するものである。好ましくは、本明細書での使用について、ＡＴ1レセプター拮抗薬は、ロサルタン（losartan）および(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸である。
【００１４】
ＡIIは、特異的細胞表面レセプターを介して作用し、その２つのサブタイプは、薬理学的に定義されている。ヒトＡＴ1サブタイプは、最近、クローン化され［フルタ（Ｆuruta）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂiochem. Ｂiophys. Ｒes. Ｃommun.)、第１８３巻、第８−１３頁（１９９２)、タカヤナギ（Ｔakayanagi）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、第１８３巻、第９１０−９１６頁（１９９２)、バーグスマ（Ｂergsma）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、第１８３巻、第９８９−９９５頁（１９９２)］、Ｇタンパク結合膜内外レセプターのスーパーファミリーの一員である。ロサルタン［ホワイトブレッドら、前記文献］および(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸［ヴァインストック（Ｗeinstock）ら、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ. Ｍed. Ｃhem.)、第３４巻、第１５１４−１５１７頁（１９９１)］などのＡＴ1は、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）［ホワイトブレッドら、前記文献］などの還元剤およびグアニンヌクレオチド［ボッタリー（Ｂottari）ら、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・ファーマコロジー（Ｅur. Ｊ. Ｐharmacol.)、第２０７巻、第１５７−１６３頁（１９９１)］に対して敏感である。対照的に、ＡＴ2レセプターは、ＤＴＴによって阻害されず、明らかにＧタンパク結合されず、ＰＤ１２３３１９などの特異的ＡＴ2レセプター拮抗薬に対して敏感である［ダッドリィ（Ｄudley）ら、モレキュラー・ファーマコロジー（Ｍol. Ｐharmacol.)、第４０巻、第３６０−３６７頁（１９９１)]。
【００１５】
本発明の１つの態様は、従前に製造され、有効なＡIIレセプター拮抗薬と評価された拮抗薬群の利用化である。好適なアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬の例としては、限定されないが、以下のものが挙げられる：
【００１６】
フィンケルシュタイン（Ｆinkelstein）らの１９９３年２月９日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ５,１８５,３５１に開示されている２−ヘテロアリール−２−プロペン酸基によって５位で置換されているイミダゾール類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００１７】
この特許の範囲内に含まれる好ましい化合物は、
(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸、
(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシナフタ−１−イル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸、
(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛２−クロロ−４−カルボキシフェニル)−メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸；および
(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシ−２,３−ジクロロフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸；または
それらの医薬的に許容される塩である。
【００１８】
特に好ましい化合物は、(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛(４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸および(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシナフタ−１−イル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸；またはその医薬的に許容される塩である。
【００１９】
この発明の最も好ましい化合物は、(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛(４−カルボキシフェニル)メチル]−１Ｈ−イミダゾリル−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸・メタンスルホン酸塩である。
【００２０】
フィンケルシュタイン（Ｆinkelstein）らの１９９０年１２月１９日に公開された欧州公開番号ＥＰ ０ ４０３ １５８に開示されている置換(イミダゾリル)アルケン酸類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００２１】
ＡIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲内に含まれる好ましい化合物は、
(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛(２−クロロフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(３,４−メチレンジオキシフェニル)メチル−２−プロペン酸、
(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛(４−カルボキシフェニル)メチル]−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−ｎ−ブチル−２−プロペン酸、および
(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛(４−カルボキシフェニル)メチル]−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−ｎ−ベンジル−２−プロペン酸；または
それらの医薬的に許容される塩である。
【００２２】
キーナン（Ｋeenan）らの１９９３年１月５日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ５,１７７,０９１に開示されている置換５−[(テトラゾリル)アルケニル]イミダゾール類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００２３】
ＡIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲に含まれる好ましい化合物は、
(Ｅ)−１−[２−ｎ−ブチル−１−｛(４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−３−(２−チエニル)−１−プロペンおよび
(Ｅ)−１−[２−ｎ−ブチル−１−｛(４−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)フェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)−３−(２−チエニル)−１−プロペン；または
それらの医薬的に許容される塩である。
【００２４】
ギラルド（Ｇirard）らの１９９１年５月１５日に公開された欧州公開番号ＥＰ ０ ４２７ ４６３に開示されている置換Ｎ−(イミダゾリル)アルキルアラニン誘導体類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００２５】
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、
Ｎ−[｛１−(４−カルボキシフェニル)メチル]−２−ｎ−ブチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝メチル]−β−(２−チエニル)アラニンおよび
Ｎ−[｛１−(２−クロロフェニル)メチル]−２−ｎ−ブチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝メチル]−β−(２−チエニル)アラニン；または
それらの医薬的に許容される塩である。
【００２６】
フィンケルシュタイン（Ｆinkelstein）らの１９９３年８月１０日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ５,２３４,９１７に開示されている置換５−(アルキル)カルボキシアミドイミダゾール類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００２７】
ＡIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲内に含まれる好ましい化合物は、Ｎ−[｛２−ｎ−ブチル−１−(２−クロロフェニル)メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝メチル−カルボニル]−Ｌ−フェニルアラニンおよびＮ−[｛２−ｎ−ブチル−１−(２−クロロフェニル)メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル｝メチルカルボニル]−Ｌ−(２−チエニル)アラニン；またはそれらの医薬的に許容される塩である。
【００２８】
グリーソン（Ｇleason）らの１９９２年１月９日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ ９２／０００６８に開示されている置換ヒスチジン類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００２９】
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、３−[(２−クロロフェニル)メチル]−２−プロピルチオ−Ｎ−ブチリルヒスチジンおよび３−[(２−クロロフェニル)−メチル]−２−ｎ−ブチル−Ｎ−ブチリルヒスチジン；またはそれらの医薬的に許容される塩である。
【００３０】
ギラルド（Ｇirard）らの１９９２年２月２０日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ ９２／０２５１０に開示されている置換[１Ｈ−イミダゾール−５−イル]アルカン酸類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００３１】
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、３−[２−ｎ−ブチル−１−｛(２−クロロフェニル)−メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−ベンジルプロパン酸またはその医薬的に許容される塩である。
【００３２】
キーナン（Ｋeenan）らの１９９２年６月１１日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ ９２／０９２７８に開示されている置換５−アリールイミダゾール類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００３３】
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、３−[２−ｎ−ブチル−１−｛(２−クロロフェニル)−メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]安息香酸またはその医薬的に許容される塩である。
【００３４】
フランツ（Ｆranz）らの１９９１年１０月３１日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ ９１／１６３１３に開示されている置換ベンズイミダゾール類（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００３５】
この出願の範囲内に含まれる好ましい化合物は、２−ｎ−ブチル−１−(４−カルボキシフェニル)メチル−５−クロロ−１Ｈ−ベンズイミダゾール−７−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である。
【００３６】
以下のアンギオテンシンIIレセプター拮抗薬も、本発明の範囲内に含まれる。ＡIIレセプター拮抗薬は、本明細書に記載した新規利用能を有すると思われるので、以下のリストは、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３７】
【表１−１】
2007084569.tif 000002
【００３８】
【表１−２】
2007084569.tif 000003
【００３９】
【表１−３】
2007084569.tif 000004
【００４０】
本発明において有用なＡIIレセプター拮抗薬の他の群は、以下の文献に開示されている（出典明示により本明細書の一部とする)。
【００４１】
シポス（Ｓipos）らの１９７３年８月７日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,７５１,４０４。ＡIIレセプター拮抗薬のこの群における特に好ましい化合物は、Ｓar−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｖal−Ｈis−Ｐro−β−Ａla−ＯＨであり、サララシン（Ｓaralasin）とも称される。
【００４２】
レゴリ（Ｒegoli）らの１９７５年９月２３日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,９０７,７６２。この群の範囲内の好適な化合物の例は、Ａsp−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｖal−ＯＨおよびＡsp−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−α−アミノ−ｎ−酪酸である。
【００４３】
ニエキ（Ｎyeki）らの１９８３年６月１４日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,３８８,３０４。この特許に開示されている化合物としては、Ｓar−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｉle−メチルエステルおよびヒドロキシアセチル−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｔhr−メチルエステルが挙げられる。同一または同様の化合物は、欧州特許第３４,２５９号にも開示されている。
【００４４】
シポスらの１９７５年５月２７日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,８８６,１３４。この群の化合物の例は、Ｓar−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｖal−Ｈis−Ｐro−Ａla−ＯＨ、Ｓer−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｖal−Ｈis−Ｐro−Ａla−ＯＨ、およびＡsn−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｖal−Ｈis−Ｐro−Ｄ−Ｌeu−ＯＨである。
【００４５】
キスファルディ（Ｋisfaludy）らの１９７９年１２月１８日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,１７９,４３３。化合物のこの群の例としては、アミノオキシアセチル−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｌeu−ＯＨおよびＤ−α−アミノオキシプロピオニル−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｌeu−ＯＨが挙げられる。
【００４６】
ハリナン（Ｈallinan）らの１９８０年５月２７日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,２０４,９９１。西ドイツ公開第２８４６２００号［ケミカル・アブストラクツ（Ｃhemical Ａbstracts)、第９１巻、アブストラクトＮo.７４９８９ｄ］も参照。
【００４７】
キスファルディらの１９８０年６月２４日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,２０９,４４２。例としては、ヒドロキシアセチル−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｌeu−ＯＨ、ヒドロキシアセチル−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ａla−ＯＨ、およびα−ヒドロキシプロピオニル−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｉle−ＯＨが挙げられる。
【００４８】
ニエキらの１９８２年５月１８日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,３３０,５３２。この群の化合物の例は、Ｓar−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｌac、Ｓar−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−Ｌac(ＯＣ2Ｈ5)、およびＳar−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｉle−Ｈis−Ｐro−２−ヒドロキシ−３−メチル吉草酸である。
【００４９】
フルカワ（Ｆurukawa）らの１９８２年６月２０日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,３４０,５９８。例としては、１−ベンジル−４−クロロ−２−フェニルイミダゾール−５−アセトアミド、１−ベンジル−２−ｎ−ブチル−４−クロロイミダゾール−５−アセトアミド、および１−ベンジル−２−ｎ−ブチル−５−クロロイミダゾール−４−酢酸が挙げられる。
【００５０】
フルカワらの１９８２年１０月１９日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ４,３５５,０４０。例としては、１−(２−クロロベンジル)−２−ｎ−ブチル−４−クロロイミダゾール−５−酢酸および１−ベンジル−４−クロロ−２−(４−クロロ−３,５−ジニトロフェニル)イミダゾール−５−酢酸が挙げられる。
【００５１】
フルカワらの１９８４年３月２８日に発行された欧州特許公開第１０３ ６４７号。ＡIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲内に含まれる好ましい化合物は、４−クロロ−１−(４−ヒドロキシ−３−メチルベンジル)−２−フェニルイミダゾール−５−酢酸またはその医薬的に許容される塩である。
【００５２】
カリニらの１９８８年１月２０日に公開された欧州特許公開第２５３ ３１０号。ＡIIレセプター拮抗薬のこの群内に含まれる好ましい化合物は、２−ｎ−ブチル−４−クロロ−１−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]−５−(ヒドロキシメチル)−イミダゾールおよび２−ｎ−ブチル−４−クロロ−１−[(２'−(カルボキシビフェニル−４−イル)メチル]−５−(ヒドロキシメチル)−イミダゾール（本明細書中、ロサルタン(Ｌosartan）とも称される)；またはそれらの医薬的に許容される塩である。  
【００５３】
ブランクリィ（Ｂlankley）らの１９８７年１１月１９日に公開された欧州特許公開第２４５ ６３７号。ＡIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲内に含まれる好ましい化合物は、１−(２−フェニルエチル)−５−フェニルアセチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン−６−カルボン酸および１−(４−アミノ−３−メチルフェニル)メチル−５−ジフェニルアセチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ[４,５−ｃ]ピリジン−６−カルボン酸；またはそれらの医薬的に許容される塩である。
【００５４】
カリニらの１９８９年７月１２日に公開された欧州特許公開第３２３ ８４１号。ＡIIレセプター拮抗薬のこの群に含まれる好ましい化合物は、５−ｎ−プロピル−１−[(２'−カルボキシビフェニル−４−イル)メチル]ピロール−２−カルボン酸、３−メトキシメチル−５−ｎ−プロピル−４−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]−１,２,４−テトラゾール、および３−メトキシメチル−５−ｎ−ブチル−１−[２'−カルボキシビフェニル−４−イル)メチル]ピラゾール；またはそれらの医薬的に許容される塩である。
【００５５】
カリニらの１９８９年１１月１４日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,８８０,８０４。ＡIIレセプター拮抗薬のこの群の範囲に含まれる好ましい化合物は、２−ｎ−ブチル−１−[(２'−カルボキシビフェニル−４−イル)メチル]−５−ヒドロキシメチルベンゾ−イミダゾールおよび２−ｎ−ブチル−１−[(２'−カルボキシビフェニル−４−イル)メチル]−６−ヒドロキシメチルベンゾイミダゾール；またはそれらの医薬的に許容される塩である。
【００５６】
カリニらの１９９０年４月１０日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,９１６,１２９。ＡIIレセプター拮抗薬のこの群内に含まれる好ましい化合物は、５−[４−(３−(Ｎ−イソ−プロピルアミノ)ヒドロキシプロポキシ)インドール−２−カルボキシアミドメチル]−２−ｎ−ブチル−１−[(２'−カルボキシビフェニル−４−イル)メチル]−４−クロロイミダゾールまたはその医薬的に許容される塩である。
【００５７】
ローゼンバーグ（Ｒosenberg）らの１９８９年８月１５日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,８５７,５０７。例としては、(４Ｓ)−３−オキソ−４−アミノ−２,２−ジフルオロ−１−イソプロピル−メルカプト−５−シクロヘキシルペンタンのＢoc−Ｐhe−Ｌeuアミドおよび(３Ｒ,４Ｓ,ＥＺ)−３−ヒドロキシ−４−アミノ−２−フルオロ−１−イソプロピル−スルホニル−５−シクロヘキシル−１−ペンテンのＢoc−Ｐhe−Ｌeuアミド；またはそれらの医薬的に許容される塩が挙げられる。
【００５８】
ウィスマン（Ｗissmann）らの１９７７年３月２２日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ４,０１３,７９１。かかる化合物の例は、スクシナモイル−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｖal−Ｈis−Ｐro−Ｐhegly−ＯＨである［ここで、Ｐhegly−ＯＨは、Ｌ−Ｃ−フェニルグリシン残基である]。
【００５９】
バンパス（Ｂumpus）らの１９７５年１２月２日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,９２３,７６９。
バンパスらの１９７５年１２月２日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,９２３,７７０。
バンパスらの１９７５年１２月２日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,９２３,７７１。
バンパスらの１９７５年１２月９日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,９２５,３４５。
バンパスらの１９７６年８月２４日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,９７６,７７０。
【００６０】
ウィル（Ｗille）の１９７５年１０月２８日に発行されたＵ.Ｓ.Ｐ ３,９１５,９４８。この文献に含まれるＡIIレセプター拮抗薬の例は、Ｓar−Ａrg−Ｖal−Ｔyr−Ｖal−Ｈis−Ｐro−ＯＨである。
【００６１】
リファー（Ｌifer）らの１９９１年７月３１日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４３８ ８６９。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、α−ヘキシル−４−[(２−カルボキシ−３−ヒドロキシベンゾイル)アミノ]−１Ｈ−イミダゾール−１−酢酸エチルエステルまたはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物である。
【００６２】
チャクラバーティ（Ｃhakravarty）らの１９９０年１２月５日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４０１ ０３０。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、２−ｎ−ブチル−３−(２'−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル−６,７−ジヒドロイミダゾ[４,５−ｅ][１,４]ジアゼピン−８(３Ｈ)−オンまたはその医薬的に許容される塩である。
【００６３】
チャクラバーティらの１９９０年１２月５日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４００ ９７４。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの範囲内に含まれる例は、５,７−ジメチル−２−エチル−３−(２'−(テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジンまたはその医薬的に許容される塩である。
【００６４】
チャクラバーティらの１９９０年１２月５日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４００ ８３５。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、４,６−ジメチル−２−エチル−１−[２−(テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル]メチルベンゾイミダゾールまたはその医薬的に許容される塩である。
【００６５】
アシュトン（Ａshton）らの１９９１年１月２３日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４０９ ３３２。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、３−ｎ−ブチル−４−[４−(２−カルボキシ−ベンズアミド)ベニル]−５−(２−メチルベンジルチオ)−４−１,２,４−トリアゾールまたはその医薬的に許容される塩である。
【００６６】
グリーンリー（Ｇreenlee）らの１９９１年１月９日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４０７ １０２。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、２−ｎ−ブチル−１,５−ジヒドロ−４,５−ジメチル−１−[(２'−｛１Ｈ−テトラゾール−５−イル｝｛１,１−ビフェニル｝−４−イル)メチル]−ピロロ[３,４−ｄ]イミダゾールまたはその医薬的に許容される塩である。
【００６７】
カリニらの１９８９年７月１９日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ３２４ ３７７。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、２−ｎ−プロピル−４−ペンタフルオロエチル−１−[２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]イミダゾール−５−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である。
【００６８】
オク（Ｏku）らの１９９１年５月８日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ３４２６０２１。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、２−ｎ−ブチル−７−メチル−３−[(２−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル]メチル]−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]ピリジンまたはその医薬的に許容される塩である。
【００６９】
ロバーツ（Ｒoberts）らの１９９１年２月１３日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４１２ ８４８。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、２−エチル−４−(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メトキシ]キノリンまたはその医薬的に許容される塩である。
【００７０】
ロバーツらの１９９１年５月３０日に公開された国際出願公開ＷＯ ９１／０７４０４。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、２−エチル−４−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メトキシ−１,５−ナフチリジンまたはその医薬的に許容される塩である。
【００７１】
ロバーツらの１９９０年１１月２８日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ３９９ ７３２。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、４−[(２−ｎ−ブチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−１−イル)メチル−Ｎ−フェニルスルホニルベンズアミドまたはその医薬的に許容される塩である。
【００７２】
ミヤケ（Ｍiyake）らの１９９１年３月３日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４２０ ２３７。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、７−メチル−２−ｎ−プロピル−３−[(２'(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]−３Ｈ−イミダゾ[４,５−ｂ]またはその医薬的に許容される塩である。
【００７３】
ナール（Ｎarr）らの１９９０年１１月１７日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ３９２ ３１７。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、４'−[(６−ｎ−ブタノイルアミノ−２−ｎ−ブチル−ベンゾイミダゾール−１−イル)メチル]ビフェニル−２−カルボン酸および４'−[(２−ｎ−ブチル−６−シクロヘキシルアミノカルボニル)アミノ−ベンゾイミダゾール−１−イル)メチル]ビフェニル−２−カルボン酸；またはそれらの医薬的に許容される塩である。
【００７４】
ロス（Ｒoss）らの１９９１年６月２６日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４３４ ２４９。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、１−｛[３−ブロモ−２−[２−テトラゾール−５−イル)フェニル]−５−ベンゾフラニル]メチル｝−２−ブチル−４−クロロ−１Ｈ−イミダゾール−５−カルボン酸またはその医薬的に許容される塩である。
【００７５】
バーンハート（Ｂernhart）らの１９９１年１０月３日に公開されたＰＣＴ特許公開ＷＯ ９１／１４６７９。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、２−ｎ−ブチル−４−スピロシクロペンチル−１−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]−２−イミダゾリン−５−オンまたはその医薬的に許容される塩である。
【００７６】
ブュールメイヤー（Ｂuehlmayer）ら、１９９１年８月２８日に公開された欧州特許公開ＥＰ ０ ４４３ ９８３。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、(Ｓ)−Ｎ−(１−カルボキシ−２−メチル−プロパ−１−イル)−Ｎ−ペンタノイル−Ｎ−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)メチル]アミンまたはその医薬的に許容される塩である。
【００７７】
ナカ（Ｎaka）らの１９９１年１２月４日に公開された欧州公開第０ ４５９ １３６号。ＡIIレセプター拮抗薬のこのクラスの好ましい化合物は、１−(シクロヘキシルオキシカルボニルオキシ)−エチル−２−エトキシ−１−[(２'−(１Ｈ−テトラゾール−５−イル)ビフェニル−４−イル)−メチル]ベンゾイミダゾール−７−カルボキシラートまたはその医薬的に許容される塩である。
【００７８】
本発明で使用するためのＡII拮抗薬のクラスの前記説明は、継続中の公開された特許出願、特許、刊行物および／またはそれらのアブストラクトから採用した。かかるクラスおよびかかるクラス内の特定の化合物の充分な説明についてかかる特許および公開を参照する（かかる特許および刊行物の全内容は、出典明示により本明細書の一部とする)。
【００７９】
多くのＡII拮抗薬は、当該技術分野で知られており、公知の方法によって、または、それらの変形法によって製造される。本発明で用いられるある種のＡII拮抗薬は、異性体形で存在してもよい。本発明は、純粋な形およびラセミ混合物を含む混合物およびそれらの医薬的に許容される塩の形の全てのかかる異性体を含む。
【００８０】
局所的に生じたＡIIの作用の有効な部位を評価し、特異的なアンギオテンシンレセプター拮抗薬がヒト滑膜におけるアンギオテンシンレセプターと相互に作用することができるかを評価するために、定量的なイン・ビトロレセプターオージオグラフィーを用いて、ヒト滑膜におけるアンギオテンシンについてのレセプターを位置確認し、特徴付ける。本明細書における方法セクションは、かかる位置確認のために使用されるプロセスを説明する。
【００８１】
本発明は、局所的に生じたＡIIがヒト滑膜中に存在すること、および、異なる滑膜構造物が別のレセプターサブタイプよりもむしろＡＴ1レセプターの異なる密度を有することを見いだした。さらに、本発明は、かかる滑膜におけるＡＴ2レセプターの欠乏を見いだした。したがって、ＡＴ1サブタイプＡIIレセプター拮抗薬の使用は、本明細書で使用するのに好ましい。
【００８２】
方法セクション
Ａ）アンギオテンシンII拮抗活性
アンギオテンシンII拮抗活性は、イン・ビトロ法によって評価される。イン・ビトロ拮抗活性は、当該化合物の、血管アンギオテンシンIIレセプターへの結合について125Ｉ−アンギオテンシンIIと競争する能力によって、および、それらの、単離したウサギ大動脈におけるアンギオテンシンIIに対する収縮応答を拮抗する能力によって測定される。本発明の目的のために、好ましいＡII拮抗薬は、１mＭ以下の濃度で少なくとも５０％ＡIIの作用を阻害する能力を有する化合物であり、特に好ましいＡII拮抗薬は、以下の標準的な方法によって試験した場合、２５nＭ以下の濃度で少なくとも５０％ＡIIの作用を阻害する能力を有する化合物である。
【００８３】
結合
放射性リガンド結合アッセイは、従前に詳細に開示された方法［ガンサー（Ｇunther）ら、サーキュレイション・リサーチ（Ｃirc.Ｒes.)、４７：２７８、１９８０］の変形法である。ラット腸間膜動脈からの特定のフラクションを、２５℃で１時間、アンギオテンシンII拮抗薬と一緒または該拮抗薬なしで、８０pＭの125Ｉ−アンギオテンシンIIと一緒にトリス緩衝液中でインキュベートする。迅速な濾過により該インキュベーションを停止し、フィルター上にトラップされたレセプター結合125Ｉ−アンギオテンシンIIをガンマーカウンターで定量化する。アンギオテンシンII拮抗薬の効力は、全ての特異的に結合したアンギオテンシンIIの５０％を置換するのに必要な拮抗薬の濃度であるＩＣ50として表す。(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸についてのＩＣ50は、約１.０nＭである。
【００８４】
大動脈
化合物のアンギオテンシンII誘発性血管収縮拮抗能は、ウサギ大動脈において試験される。ウサギ胸部大動脈から環状切片を切り出し、生理食塩水を含有する臓器浴中に吊り下げる。該環状切片を金属支持体上に置き、レコーダーに接続されている力変換器（force displacement transducer）に取り付ける。アンギオテンシンIIに対する累積濃度応答曲線は、拮抗薬の不在下、または、拮抗薬と３０分間インキュベートした後に行われる。拮抗薬解離定数（ＫB）は、平均有効濃度を用いる用量比法によって算出される。(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシナフタ−１−イル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸についてのＫBは、約０.１５nＭである。
【００８５】
Ｂ）レセプター・オートラジオグラフィー
ヒト組織
全膝置換を受ける変形性関節炎または慢性関節リウマチに罹っている患者および関節軟骨の炭素繊維リサーフェイシング（resurfacing）を受ける膝蓋骨軟骨軟化症に罹っている患者から手術でヒト膝滑膜を回収した。臨床的な詳細は、第１表に示す。組織試料をＴissue−Ｔek［アメリカ合衆国インディアナ州エルカートのミルズ・インコーポレイテッド（Ｍiles Ｉnc.)］中に包埋し、前固定せずに溶融イソペンタン中でコルクマウントに冷凍した。使用まで標本を−４０℃で貯蔵した。クリオスタット中で１０μＭの厚い切片を切り出し、ＶectabondTM[イギリス国ピーターバラのベクター・ラボラトリーズ（Ｖector Ｌaboratories)］処理したスライド上に解凍設置し、風乾し、すぐに使用したか、または、使用まで、５日間まで、シリカゲルと一緒に−２０℃で貯蔵した。
【００８６】
リガンド結合
ラット膝の切片を、５mＭ ＭgＣl2、５mＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）および０.００４％バシトラシンを含有する１０mＭリン酸緩衝生理食塩水（pＨ７.４)（緩衝液Ａ）中で１０分間プレインキュベートした。過剰の緩衝液を除去し、切片を、緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ＋１％ウシ血清アルブミン）中でリガンドと一緒に９０分間インキュベートした。リガンドは、単独の、または、各々、過剰（１μＭ）の非標識(Ｓar1,Ｉle8)ＡIIまたはＡIIと一緒の０.２５nＭ[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIまたは０.２５nＭ[125Ｉ]ＡIIからなる（非特異的結合)。リガンドとして[125Ｉ]ＡIIを使用する実験、および、ＡIIによる[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合の阻害に対するグアノシン５'−Ｏ−(３−チオトリホスファート)（ＧＴＰγＳ）の効果を研究する実験では、緩衝液ＡおよびＢの両方からＥＤＴＡを削除した。インキュベーション後、切片を緩衝液Ａ中で４℃で５分間２回洗浄し、蒸留水中で洗浄した後、冷たい空気流下で迅速に乾燥させた。放置する場合以外は、インキュベーションは、２２℃で行った。
【００８７】
定量化
標識切片を放射性フィルム［Ｈyperfilm−3Ｈ、イギリス国のアマーシャム（Ａmersham)］の近くに置き、４℃で４日間（[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII）または１７日間（[125Ｉ]ＡII）曝露した。フィルムを、１５℃で３分間、Ｋodak Ｄ９中で現像した。ＩＢＡＳ ３８６イメージ・プロセッシング・システムを用いてオートラジオグフィー画像を分析した。滑膜構造物は、必要な場合、フィルムを、ヘマトキシリンおよびエオシンで対比染色した組織片と比較することによって同定した。組織構造物（血管、管壁細胞および特異的結合を表示する内膜下支質の領域（regions of subintimal stroma displaying specific binding）は、各々、詳細に描写された。結合は、最も密集した特異的結合を有する各切片において２０個の血管について定量化した。結合密度は、各フィルムで共曝露された125Ｉ標準試薬［イギリス国のアマーシャム（Ａmersham)］との比較によってグレーバリューから誘導され、リガンドの活性データについて修正した。
【００８８】
ミクロオートラジオグラフィー
[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIで新しく標識された組織切片を風乾し、次いで、シリカゲルデシカント（dessicant）を用いて９０℃で３０分間、乾燥パラホルムアルデヒド蒸気中で固定化した。次いで、切片を、４２℃で、放射線感受性エマルジョン（Ｉlford Ｋ５）中に浸漬し、冷たい空気流下で迅速に乾燥させた。４℃で３週間曝露した後、エマルジョン浸漬スライドガラスをフィルムオートラジオグラムについてと同様に現像し、次いで、ヘマトキシリンおよびエオシンで対比染色し、脱水し、ビブチル−フタレートポリスチレンキシレン［ＤＰＸ、イギリス国ロンドンのレイモンド・ラム（Ｒaymond Ｌamb)］中に置いた。予備実験により、６０分間のブーイン（Ｂouin）固定剤における「湿」固定化技術は、浸漬の間に特異的結合の解離を防止しなかったことが判明した。３０分間のパラホルムアルデヒド蒸気における「乾燥」固定化は、より短い固定化時間は、リガンドの解離を防止せず、一方、より長い固定化時間は、ヘマトキシリンおよびエオシン反応性のほぼ全体的な損失を生じたので、最適であると思われた。
【００８９】
結合部位の特徴付け
特異的結合は、全体−非特異的結合と定義された。特異的結合の特徴付けは、変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜の試料について行われた。５〜３００分のシンキュベーション時間を用いて、０.２５nＭ [125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの特異的結合部位に対する会合割合を評価した。解離は、０.２５nＭ [125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIと一緒に９０分間インキュベートし、添加されたリガンドなしで、５〜１２０分間、過剰（４００ml）の緩衝液Ａに切片を移した後に特異的結合の減少として測定した。
【００９０】
結合の飽和性Ｋd値およびＢmax値は、２５〜７００pＭ [125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIを用いて「ホット」飽和実験によって測定した。
【００９１】
結合の特異性は、１００pＭ〜１０μＭの濃度で非標識リガンドと一緒に０.２５nＭ [125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIを用いて結合阻害実験によって測定した。阻害リガンドは、作動薬ＡII、二重ＡＴ1／ＡＴ2拮抗薬(Ｓar1,Ｉle8)ＡII、感受性ＡＴ1拮抗薬ロサルタン（losartan）および(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸および感受性ＡＴ2拮抗薬ＰＤ１２３３１９を含んだ。ジチオトレイトール（ＤＴＴ）への特異的結合の感受性は、１０mＭ ＤＴＴと一緒に０.２５nＭ [125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIを用いてインキュベートすることによって評価した。慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜におけるレセプターサブタイプと、変形性関節炎に罹っている患者からのものとの比較のために、切片を０.２５nＭ [125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII単独（全結合)、１μＭ非標識(Ｓar1,Ｉle8)ＡIIと一緒に（非特異的結合)、１０μＭ ＰＤ１２３３１９（ＡＴ1レセプターは、非遮断のままである）または１０μＭロサルタン（ＡＴ2レセプターは、非遮断のままである）を用いてインキュベートした。ＡII結合のグアニンヌクレオチド感受性は、切片を、０.２５nＭ [125Ｉ]ＡIIおよび１μＭグアノシン５'−Ｏ−(３−チオトリホスファート（ＧＴＰγＳ）を用いてコインキュベートすることによって、および、１μＭ ＧＴＰγＳの存在下および不在下、非標識ＡIIによる０.２５nＭ [125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの結合の阻害を測定することによって評価した。
【００９２】
統計学的分析
速度および平衡定数は、ＧraphＰＡＤ Ｉnplot４（サンディエゴ）を用いて単一部位のモデルを仮定する反復非線形回帰によって特異的結合から誘導された。平衡結合密度（Ｂeq）は、２２℃で９０分間インキュベートした０.２５nＭ [125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIを用いて得た。結合阻害定数（Ｋi）およびＨＩll係数（ｎHill）についての値は、Ｓ字曲線に適合させることによって誘導される。ＧＴＰγＳの存在下および不在下でのＡIIによる[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)結合の阻害からのデータは、１および２の部位モデルに適合させ、ＧraphＰＡＤ Ｉnplot４を用いてＦ試験によって適合の良好さを比較した。記述データは、平均として表し（９５％信頼区間)、グループ間の比較は、幾何学的データについてボンフェローニ（Ｂomferroni）修正を伴う一方向または反復測定ＡＮＯＶＡおよびスチューデントｔ試験を用いて行った。
【００９３】
免疫組織化学
特異的[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合の細胞局在化をさらに研究するために、および、特異的結合部位の局在化をアンギオテンシン転換酵素のものと比較するために、エマルジョン浸漬組織標本のために使用するものに対する連続切片を、内皮、平滑筋、マクロファージ、線維芽細胞およびＴ細胞マーカーに対する一次抗体を用いて免疫染色した（第２表)。クリオスタット切片（１０μＭ厚）を、シュ（Ｈsu）ら（１９８１）のアビジン−ビオチン複合物（ＡＢＣ）法によって染色した。すなわち、４℃で５分間、切片をアセトン中で固定化し、一次抗体と一緒に室温で２時間、または、ビオチニル化ウマ抗マウスＩgＧまたはビオチニル化ヤギ抗ウサギＩgＧと一緒に１時間、アビジン−ビオチン複合物と一緒に３０分間インキュベートし、ジアミノベンジジン中で現像し、脱水し、ＤＰＸ中に置いた。
【００９４】
物質
[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIおよび[125Ｉ]ＡII（特異的活性、各２０００ci／ミリモル)、125Ｉ標準試薬、およびＨyperfilm−3Ｈは、イギリス国アマーシャムのアマーシャム・インターナショナル・パブリック・リミテッド・カンパニー（Ａmersham Ｉnternational plc）から入手した。ロサルタン（losartan）は、アメリカ合衆国デラウエア州ウィルミントンのデュポン・メルク（ＤuＰont Ｍｅrck）によって、(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−(４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸は、アメリカ合衆国ペンシルベニア州キング・オブ・プルシアのスミスクライン・ビーチャムによって、ＰＤ１２３３１９は、アメリカ合衆国ミズーリ州アナーバーのパーク−デイヴィス（Ｐarke−Ｄavis）によって好意的に提供された。他の非標識ペプチド、グアニンヌクレオチド、ＤＴＴ、バシトラシンおよび無ウシ血清アルブミン酵素は、イギリス国プールのシグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓigma Ｃhemical Ｃo.）から入手した。ビオチニル化ウマ抗マウスＩgＧおよびビオチニル化ヤギ抗ウサギ親和性精製ＩgＧおよびアビジン−ビオチン複合物は、アメリカ合衆国バーリンガムのベクター・ラボラトリーズ（Ｖector Ｌaboratories）からのものである。
【００９５】
結果
局在化
[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIは、全ての場合、微小血管、管壁細胞および支質細胞に対して特異的で高親和性をもって結合した。結合の分布は、慢性関節リウマチにおけると同様に膝蓋骨軟骨軟化症においてである。[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)アンギオテンシンIIで観察された結合の分布は、[125Ｉ]アンギオテンシンIIを用いて連続切片上で見られたものと同一であるか、まはた、それよりも低密度である。変形性関節炎滑膜の連続における非特異的結合は、細動脈の中膜への特異的結合を示した。慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜の連続切片は、[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)アンギオテンシンIIの血管結合を示した。微小血管（直径＜１００μＭ）への結合は、隣接した細動脈中膜に対してよりも密であった。
【００９６】
[125Ｉ]ＡIIの特異的結合は、連続切片で示したように[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの分布と同一の分布を有したが、各構造物への特異的[125Ｉ]ＡII結合は、（第３表）の対応する結合と同様な密度１５〜２２％だけであった。全ての疾患グループからの滑膜において、[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの最も密な結合は、滑膜微小血管について、管壁細胞があまり密ではない特異的結合を表し、支質細胞への結合でさえあまり密ではないことが観察された（第４表)。エマルジョン浸漬組織標本において、[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの血管結合は、細動脈中膜（外径＞１００μＭ）および微小血管（外径＜１００μＭ）への結合からなることが判明した。微小血管への結合は、細動脈中膜への結合よりも密であると思われた。
【００９７】
エマルジョン浸漬組織標本における[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合の局在化を、連続切片の免疫染色における異なるタイプの細胞の分布と比較した。内皮マーカーＣＤ３１および血管平滑筋のマーカー、α−平滑筋アクチンについての免疫染色した切片との比較により、[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIが滑膜細動脈および微小血管に特異的に結合したことを確認した。ＣＤ３１免疫反応性内皮細胞によって同定された最小の微小血管でさえα−平滑筋アクチン免疫反応性を表し、微小血管内皮が血管平滑筋のものに加えて特異的[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合を有するを解決することはできなかった。アンギオテンシン転換酵素についての免疫染色は、ウォルシュ（Ｗalsh）ら、１９９３、アメリカン・ジャーナル・オブ・パソロジー（Ａm.Ｊ.Ｐathol.)、１４２、第１６１０−１６２１頁（１９９３）の開示に従って（出典明示により本明細書の一部とする)、滑膜血管内皮上のＡＣＥの不均一な分布を示した。強い内皮ＡＣＥ様免疫反応性を有する大動脈および微小血管もまた、特異的[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合を示した。
【００９８】
マクロファージマーカーＣＤ１４（第４図）および線維芽細胞マーカー５Ｂ５についての免疫染色は、特異的[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合を有する滑膜管壁層および支質の領域がマクロファージ誘発細胞および線維芽細胞誘発細胞の両方を含有することを確認した。これらの細胞タイプの両方または一方だけが特異的結合を示すかを解決することはできなかった。リウマチ様滑膜の４つの試料は、Ｔ細胞マーカーＯＫＴ１１についての免疫反応性によって示されるように、リンパ球の小胞蓄積を含有した。これらのリンパ小節における特異的[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合は、Ｔ細胞自体よりも、ＣＤ３１−およびα−平滑筋アクチン−ポジティブ血管ならびに毛包周囲結合組織に制限される。特異的[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合の局在化の差異は、疾患グループ間で見られず、各滑膜構造物への平衡結合密度は、膝蓋骨軟骨軟化症に罹っている患者からの滑膜と慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜との間で、また、別の実験では、変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜と慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜との間で、有意には異ならなかった（第４表)。  
【００９９】
特徴付け
滑膜構造物への[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの特異的結合は、時間依存性であり、可逆的であった（第５表)。滑膜血管について最大であり、滑膜支質について最小である最大結合密度を有する結合は、飽和できた（第５表、第１図)。各構造物への結合は、高親和性を有しており、会合および解離速度において、ならびに、Ｋd値において、構造物間で有意な差異は見られなかった（第５表)。
【０１００】
[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの特異的結合は、(Ｓar1,Ｉle8)ＡII＞ＡII＞ロサルタン＝(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸＞ＰＤ１２３３１９のポテンシーのランク順を有する関連化合物によって阻害された（第５表、第２図)。Ｋiにおける有意な差異は、構造物間では見られなかった。変形性関節炎に罹っている患者からの滑膜および慢性関節リウマチに罹っている患者からの滑膜において、各構造物への特異的[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合は、ＡＴ1拮抗薬ロサルタン（１０μＭ）によって完全に阻害されるが、特異的ＡＴ2拮抗薬ＰＤ１２３３１９（１０μＭ）によっては有意に阻害されなかった（第６表)。各構造物への特異的結合は、１０mＭ ＤＴＴによって完全に阻害された（第７表)。
【０１０１】
各構造物への作動薬（[125Ｉ]ＡII）の結合は、加水分解不可能なＧＴＰ類似物、ＧＴＰγＳ（１μＭ）によって、非特異的結合は有意には異ならないレベルに阻害された（データは、示さない)。ＧＴＰγＳ（１μＭ）は、[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合を阻害しなかった。各構造物について、ＥＤＴＡおよびＧＴＰγＳの不在下での作動薬ＡIIによる[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合の阻害は、単一部位モデルによるよりも二部位モデルによる方がより良く説明され（第８表)、部位の１５〜２６％が高親和性であり（ＩＣ50値＜０.４nＭ)、残り７４〜８５％が低親和性である（ＩＣ50値７.０nＭ)。１μＭ ＧＴＰγＳの存在下、阻害曲線は、ＧＴＰγＳによる高親和性状態のアボリション（abolition）を示す低親和性状態に対応する一部位モデルによって説明された。
【０１０２】
ヒト滑膜における[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIおよび[125Ｉ]ＡIIについての特異的結合部位は、前記方法によって示された。結合の同一分布およびどちらかのリガンドを使用する作動薬結合に対するＧＴＰγＳの阻害効果および非標識ＡIIによる[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡII結合の阻害は、両方のリガンドがアンギオテンシンレセプターの同一個体群を標識することを示す。特異的結合の阻害についてのポテンシーのランク順は、(Ｓar1,Ｉle8)ＡII＞ＡII＞ロサルタン＝(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸＞ＰＤ１２３３１９である。ＤＴＴによる結合の阻害およびＧＴＰγＳによる作動薬結合の阻害は、アンギオテンシンレセプターのＡＴ1サブクラスの特徴である［ホワイトブレッド（Ｗhitebread）ら、バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂiochem.Ｂiophys.Ｒes.Ｃommun.)、第１６３巻、第２６４−２９１頁（１９８９)；ワインストック（Ｗeinstock）ら、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊ.Ｍｅd.Ｃhem.)、第３４巻、第１５１４−１５１７頁（１９９１）]。ロサルタンまたはＰＤ１２３３１９の存在下で行った結合研究は、これらの疾患グループのいずれかからの滑膜におけるＡＴ2レセプターの存在についての証拠を提供しない。データは、異なる滑膜構造物が異なるレセプターサブタイプよりもＡＴ1レセプターの異なる密度を有することを示す。
【０１０３】
ヒト滑膜における[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの最も密な結合は、滑膜微小血管（直径＜１００μＭ）に見られた。これらの微小血管は、内皮ＡＣＥ様免疫反応性をも示した。[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIが、平滑筋細胞への結合に加えて、微小血管内皮に結合したかを決定することは可能ではなかったが、[125Ｉ]ＡIIの特異的結合は、培養物においてこれらの細胞タイプの各々について従前に示されていた［ホワイトブレッドら、１９８９前記文献、パテル（Ｐatel）ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー（Ａm.Ｊ.Ｐhysiol.)、第２５６巻、Ｃ９８７−Ｃ９９３（１９８９）]。アンギオテンシンの結合は、脳［プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エイ（Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.ＵＳＡ）１９８５：８３；６３４０−３]、網膜［ファラリ−ディレオ（Ｆarrari−Ｄileo）ら、インベスティゲイティブ・オフタルモロジー・アンド・ビジュアル・サイエンス（Ｉnvest.Ｏpthalmol.Ｖis.Ｓci.)、第３２巻、第２１−２６頁（１９９１)］および腎臓［セチ（Ｓechi）ら、アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー、第２６２巻、Ｆ２３６−Ｆ２４０（１９９２)］における微小血管について従前に示されていた。血管のトーン（tone）および平滑筋増殖に対する効果に加えて、微小血管アンギオテンシンレセプターは、内皮透過性［モーレル（Ｍorel）ら、インフラメイション（Ｉnflammation)、第１４巻、第５７１−５８３頁（１９９０)］および血管新生［フェルナンデス（Ｆernandez）ら、ジャーナルメオブ・ラボラトリー・アンド・クリニカル・メディスン（Ｊ.Ｌab.Ｃlin.Ｍｅd.)、第１０５巻、第１４１−１４５頁（１９８５)；ル・ノーブル（Ｌe Ｎoble）ら、Ｅur.Ｈ.Ｐharmacol.、第１９５巻、第３０５−３０６頁（１９９１)］を調節する。
【０１０４】
特に、ここで示した結果は、ＡＴ1レセプター拮抗薬ロサルタンおよび(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸が、有効かつ完全に、[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの、炎症を起こしているヒト滑膜における微小血管、管壁細胞および支質への結合を阻害したことを示す。
【０１０５】
ヒト滑膜における管壁細胞および支質への(Ｓar1,Ｉle8)および[125Ｉ]についての特異的結合部位がマクロファージおよび線維芽細胞の分布に対応することも示す。マクロファージ［トーマス（Ｔhomas）およびホフマン（Ｈoffman)、１９８４］および線維芽細胞［ミラン（Ｍillan）ら、サイエンス（Ｓcience）第２４４巻、第１３４０−１３４２頁（１９８９)］は、培養において、アンギオテンシンレセプターを発現することが従前に示されていた。イン・ビトロで、アンギオテンシンは、マクロファージ移動を阻害し［ワインストック・アンド・ブラム（Ｗeinstock ＆ Ｂlum)、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ.Ｉmmunol.)、第１３１巻、第２５２９−２５３２頁（１９８３）]、ファゴサイトーシスを増加させるが［ワインストック・アント・カッサブ（Ｗeinstock ＆ Ｋassab)、セルーラー・イムノロジー（Ｃell.Ｉmmunol.)、第４６−５４頁（１９８４）]、イン・ビボにおけるマクロファージ機能についてのこれらの観察の関連は、不確定のままである。
【０１０６】
[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの成人の滑膜支質および管壁細胞への特異的結合は、ＡＴ1様部位について排他的であり、炎症を起こしている組織および炎症を起こしていない組織の両方において見られた。したがって、慢性滑膜炎症は、ＡＴ1様レセプターからＡＴ2様レセプターへの切り替えに関連しない。ここで示されるように、ロサルタンおよび(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸は、共に、有効かつ完全に、[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの、炎症を起こしているヒト滑膜における微小血管、管壁細胞および支質への結合を阻害した、これにより、関節の炎症性関節炎症状の治療におけるそれらの使用についての支持を与える。
【０１０７】
医薬製剤
関節炎のような炎症性関節疾患の治療のための治療用途において、本発明のＡIIレセプター拮抗性化合物は、標準的な医薬組成物に取り込まれる。それらは、経口、非経口、直腸内、局所または経皮投与することができる。
【０１０８】
本発明の化合物および経口投与される場合に活性であるそれらの医薬的に許容される塩は、液剤、例えば、シロップ剤、懸濁液剤または乳剤、錠剤、カプセル剤、およびロゼンジ剤として製剤化することができる。
【０１０９】
液体製剤は、一般に、懸濁化剤、保存剤、フレーバリング剤または着色剤と一緒に、好適な液体担体、例えば、エタノール、グリセリン、非水性溶媒、例えば、ポリエチレングリコール、油、または水中の、当該化合物または医薬的に許容される塩の懸濁液または溶液からなるであろう。
【０１１０】
錠剤の形態の組成物は、固体製剤を調製するために慣用的に使用される好適な医薬担体を使用して調製することができる。かかる担体の例としては、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、ラクトース、シュークロースおよびセルロースが挙げられる。
【０１１１】
カプセルの形態の組成物は、慣用の被包方法を使用して調製することができる。例えば、標準的な担体を使用して活性成分を含有するペレットを調製し、次いで、ゼラチン硬カプセル中に充填することができる；別法として、好適な医薬担体、例えば、水性ガム、セルロース、シリケートまたは油を使用して分散物または懸濁液を調製し、次いで、該分散物または懸濁液をゼラチン軟カプセル中に充填することができる。
【０１１２】
本発明の化合物および非経口投与（輸液の注射による）される場合に活性であるそれらの医薬的に許容される塩は、溶液剤または懸濁液剤として製剤化することができる。
【０１１３】
非経口投与用組成物は、一般に、無菌水性担体または非経口用油、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油またはゴマ油中の活性成分の溶液または懸濁液からなる。別法として、該溶液を凍結乾燥させ、次いで、投与直前に好適な溶媒で再構成することができる。
【０１１４】
典型的な坐剤組成物は、結合剤および／または滑沢剤、例えば、グリコール重合体、ゼラチンまたはココアバターまたは他の低融点植物性もしくは合成ワックスまたは脂肪と一緒に、本発明化合物まはたこの方法で投与される場合に活性であるそれらの医薬的に許容される塩からなる。
【０１１５】
典型的な経皮用製剤は、慣用の水性または非水性賦形剤からなる、例えば、クリーム、軟膏、ローションまたはペーストであるか、または医用硬膏剤、パッチ剤または膜剤の形態である。
【０１１６】
局所的投与については、適している医薬組成物としては、溶液剤、懸濁液剤、軟膏および固体挿入物が挙げられる。典型的な医薬的に許容される担体は、例えば、水、水と低級アルカノールまたは植物性油などの水混和性溶媒との混合物、および水溶性の眼科的に許容される非毒性ポリマー、例えば、メチルセルロースなどのセルロース誘導体である。医薬調製物は、非毒性補助剤、例えば、乳化剤、保存剤、湿潤剤および増粘剤、例えば、ポリエチレングリコール；抗菌成分、例えば、４級アンモニウム化合物；緩衝成分、例えば、アルカリ金属の塩化物；抗酸化剤、例えば、メタ亜硫酸水素ナトリウム；および他の慣用成分、例えば、モノラウリン酸ソルビタンを含有していてもよい。
【０１１７】
好ましくは、当該組成物は、単位投与形態である。医薬的投与単位の本発明の化合物の投与量は、活性成分０.０１−２００mg／kg、好ましくは、０.１−１００mg／kgの範囲から選択される有効な非毒性量であろう。選択された投与量は、経口的に、直腸内に、局所注射により、１日１〜６回、または輸液により連続的に、アンギオテンシンIIによって誘発される関節炎の治療を必要とするヒト患者に投与される。ヒト投与のための経口投与単位は、好ましくは、活性化合物１０〜５００mgを含有する。非経口投与のためには、一般に、より低い投与量が使用される。患者のために安全で有効かつ好都合である場合、経口投与を使用する。  許容されない有毒な効果は、本発明化合物を本発明に従って投与する場合には全く予想されない。
【０１１８】
以下の実施例は、限定しないが、本発明を説明するものである。
【０１１９】
【表２】
2007084569.tif 000005
【０１２０】
第１表の脚注
a 唯一ゆっくりと作用する抗リウマチ薬、非ステロイド系抗炎症薬、およびアンギオテンシン転換酵素阻害薬がリストされている。手術の前月には、患者は、グルココルチコステロイドを投与されなかった。
略語；ＡＺＡ；アザチオプリン、ＣＣ；軟骨石灰化症、ＥＮＡ；エナラプリル、ＭＴＸ；メトトレキセート、ＯＡ；変形性関節炎、ＲＡ；慢性関節リウマチ、ＳＺ；スルファサラジン。
【０１２１】
【表３】
2007084569.tif 000006
【０１２２】
略語；
ＡＪＫ；エイ・ジェイ・ケニー（ＡＪ Ｋenny）博士、エムアールシー・メンブレイン・ペプタデイズ・グループ（ＭＲＣ Ｍｅmbrane Ｐeptidase Ｇroup)、リーズ（Ｌeeds)、
ＰＥＣＡＭ；血小板−内皮細胞付着分子。
【０１２３】
【表４】
2007084569.tif 000007
【０１２４】
(Ｓar1,Ｉle8)ＡII − (Ｓar1,Ｉle8)アンギオテンシンII。割合＝[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)アンギオテンシンIIの平衡結合に対する[125Ｉ]アンギオテンシンIIの平衡結合の割合。値は、相乗平均（９５％ＣＩ）としてamol mm-2で与えられる。比較は、幾何学的データについてのスチューデント対ｔ試験によって行った。
【０１２５】
【表５】
2007084569.tif 000008
【０１２６】
実験ＩおよびIIは、別々に行った。変形性関節炎の患者の全膝交換による滑膜においてを慢性関節リウマチについての患者の全膝交換による滑膜においてと比較して（実験Ｉ)、膝蓋軟骨軟化症（ＣＭＰ）について炭素繊維リサーフェーシングを受けている患者からの滑膜においてを慢性関節リウマチについての全膝交換を受けている患者からの滑膜においてと比較して（実験II)、特異的結合密度の有意な差は、見られなかった（ボンフェローニ修正したｐ値は、全て＞０.０５)。各疾患において、血管への特異的結合は、管壁細胞への特異的結合よりも密であり（ｐ値＜０.００１、対ｔ試験)、管壁細胞への特異的結合は、支質への特異的結合よりも密であった（ｐ値＜０.０１、対ｔ試験)。値は、相乗平均としてamol mm-2で与えられる（９５％信頼区間)。
【０１２７】
【表６】
2007084569.tif 000009
【０１２８】
第５表の脚注：
a管壁細胞および支質へよりも血管への方が有意に大きい（各々、ｐ＜０.００１)、および、b支質へよりも管壁細胞への方が有意に大きい（ｐ＜０.０１、対ｔ試験）最大結合能（Ｂmax)。他のパラメーターについては構造物間で有意な差は見られなかった。各構造物について、c(Ｓar1,Ｉle8)ＡIIは、ＡIIよりも有意に有効であり（各々、ｐ＜０.０５)、dＡIIは、管壁細胞におけるロサルタンよりも有意に有効であり（ｐ＜０.０５)、全ての構造物における(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル]−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸よりも有意に有効であった（各ｐ＜０.０５)。eロサルタンと(Ｅ)−３−[２−ｎ−ブチル−１−｛４−カルボキシフェニル)メチル｝−１Ｈ−イミダゾール−５−イル−２−(２−チエニル)メチル−２−プロペン酸との間のＫi値において有意な差は見られなかった。
値は、相乗平均または相加平均（ｎHill）として表し（９５％信頼区間)、ｐ値は、多くの比較について修正した。
【０１２９】
【表７】
2007084569.tif 000010
【０１３０】
aロサルタン（１０μＭ）は、変形性関節炎（ＯＡ）または慢性関節リウマチ（ＲＡ）に罹っている患者からの滑膜における各構造物への結合を有意に阻害する（各ｐ＜０.０１)。１μＭ非標識(Ｓar1,Ｉle8)アンギオテンシンIIの存在下では、非特異的結合と有意には異ならない値への結合の低下が見られた（各ｐ＞０.０５)。
bＰＤ １２３３１９は、ＯＡまたはＲＡ滑膜におけるいずれの構造物への結合も有意には阻害しなかった（各ｐ＞０.０５)。値は、相乗平均としてamol mm-2で与えた（９５％ＣＩ)。
【０１３１】
【表８】
2007084569.tif 000011
【０１３２】
aＤＴＴの存在下での[125Ｉ](Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの結合は、ＤＴＴの不在下でよりも有意に低く（各ｐ＜０.０２)、１μＭ非標識(Ｓar1,Ｉle8)ＡIIの存在下で観察された非特異的結合とは有意には異ならなかった。値は、相乗平均としてamol mm-2で与えられ、対ｔ試験から誘導されたｐ値は、多くの比較について修正される。
【０１３３】
【表９】
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【０１３４】
変形性関節炎の６つのケースの滑膜からの平均データを表す最良の適合曲線は、これが単一部位モデルよりも有意に良好な適合性を与える場合、２部位モデルに従って生じた。低い親和性状態（部位１）における部位のＩＣ50値およびパーセントの推定値（９５％ＣＩ）は、最良の適合曲線について与えられる。ＧＴＰγＳの不在下（−ＧＴＰγＳ)、各構造物についてのデータは、２部位モデルに最良に適合する。１μＭ ＧＴＰγＳの存在下、単一の部位モデルは、ＧＴＰγＳの不在下で観察された低い親和性部位に対応する推定ＩＣ50値を有するデータを示す。
【０１３５】
利用能実施例
Ｉ．方法
イン・ビトロ実験のために、１.０％以下の最終濃度を有するエタノールまたはＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中に適切な濃度で化合物を溶解させ、次いで、本明細書で指示する緩衝液を用いてそれらの相対濃度に希釈した。
【０１３６】
特記しない限り、マウスを使用する本実験では、それらは、チャールズ・リバー・ブリージング・ラボラトリーズ（Ｃharles Ｒiver Ｂreeding Ｌaboratories）から入手したＢalb／cマウスであり、単一実験内では、該マウスは、年齢適合させた。それらの体重範囲は、２１〜３０gである。試験グループは、一般に、３〜６匹の動物を収容する。
【０１３７】
Ａ）ラットにおけるアジュバント誘発性関節炎
ルイス（Ｌewis）ラットの尾の底に軽パラフィン油中のマイコバクテリウム・ブチリカム（Ｍycobacterium butyricum）０.７５mgを単回皮内注射することによってアジュバント誘発性関節炎（ＡＡ）を生じさせる。アジュバント関節炎は、約１０日の遅延後に生じ、後ろ足の炎症によって特徴付けられる。予防学的研究では、アジュバント注射後、６日目に開始して、５日間、毎日、化合物を投与する。１４、１７および２０日目に、プレスチモグラフで後ろ足の体積を測定した。
【数１】
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アジュバント誘発性関節炎、免疫学的媒介炎症の複合モデル、骨リモデリング、および関節軟骨損傷における活性は、関節炎および炎症性疾患の幅広いスペクトルにおいてこれらの化合物の利用能についての支持を与える。
【０１３８】
Ｂ）ＴＰＡ誘発性マウス耳水腫
マウスの耳への１２−０−テトラデカノイルホボルアセタート（ＴＰＡ）の投与は、リポキシゲナーゼ（ＬＯ）およびシクロオキシゲナーゼ（ＣＯ）の両方の産生に寄与する炎症を引き起こすことを示した。
【０１３９】
ＴＰＡ誘発性炎症
アセトン中のＴＰＡ（１２−０−テトラデカノイルホボルアセタート）［シグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓigma Ｃhemical Ｃo.)］（４μg／２０μl）をＢＡＬＢ／ｃ雄性マウスの左耳の内面および外面に適用する。次いで、処置後、２４時間目またはそれを超えて、ダイアルミクロメーター［ミツトヨ（Ｍitutoyo)、日本］を用いて、両方の耳の厚さを測定し、データは、処置した耳と未処置の耳との間の厚さの変化として表した（１０-3cm)。アセトンの適用は、水腫性反応を生じなかった；したがって、耳の厚さの差異は、ＴＰＡに対する反応を表した。水腫を測定した後、炎症を起こした左耳を取り出し、それらをＭＰＯ（ミエロペルオキシダーゼ）活性についてアッセイするまで、−７０℃で貯蔵した。２時間目または４時間目などのように早い時点での動物の試験は、これが急性の変化を示すだけであり、これらの化合物の使用に関連する慢性または増殖性の変化を示さないので、示されない。
【０１４０】
試験化合物は、ＴＰＡの適用の１５分前に経口投与される。結果は、マウス８匹／グループについての測定からの平均＋／−標準偏差である。
【０１４１】
炎症を起こした耳組織におけるミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）のアッセイ
該アッセイの当日、部分解凍した耳組織を細かく切り刻み、次いで、０.５％ＨＴＡＢを含有する５０mＭホスファージ緩衝液（pＨ６）中でＴissumizer homogenizer［テクマー・カンパニー（Ｔekmar Ｃo.)］を用いてホモジナイズする（１０％ｗ／ｖ)。該組織ホモジネートに冷凍−解凍の３サイクルを行い、次いで、短時間の超音波処理をした（１０秒)。
【０１４２】
ブラッドリー（Ｂradely）ら、Ｊ.Ｉnvest.Ｄerm.、７８：２０６、１９８２の方法は、本明細書に記載した変形法を一緒に用いている。ｏ−ジアニスジン（０.１６７mg／ml；シグマ・ケミカル・カンパニー（Ｓigma Ｃhemical Ｃo.)）および過酸化水素（０.０００５％；シグマ・ケミカル・カンパニー）のＭＰＯ依存性反応から有色生成物の出現は、４６０nmで分光測光的に測定した。上清ＭＰＯ活性は、ベックマン（Ｂeckman） ＤＵ−７分光光度計およびカイネティクス・アナリシス（Ｋinetics Ａnalysis）パッケージ［ベックマン・インストゥルメンツ,インコーポレイテッド（Ｂeckman Ｉnstruments,Ｉnc.)］を用いて、速度的に（１５秒間隔で試料採取し、３分間かけて測定した吸光度の変化）定量化される。ＭＰＯ活性の一単位は、２５℃で１分間当たり過酸化物１ミクロモルを分解することと定義される。
【０１４３】
Ｃ）コラーゲン誘発性関節炎
雄性のＤＢＡ／１ ＬａｃＪ種マウスにおいてII型コラーゲン関節炎を誘発させ、ウシII型コラーゲンを２mg／mlの濃度で０.０１Ｎ酢酸に溶解させ、等量のフロイント完全アジュバント（ＦＣＡ）で乳化させる。グリスウォルド（Ｇriswold）ら、アースライティス・アンド・ルーマティズム（Ａrthritis and Ｒheumatism)、第３１巻、第１１号、第１４０６−１４１２頁（１９８８）（出典明示により本明細書の一部とする）に開示されている説明およびアッセイに従って、エマルジョンを投与する。
【０１４４】
前記説明は、好ましい具体例を含む本発明を充分に記載している。本明細書に詳細に記載された具体例の変更および改良は、特許請求の範囲の範囲内である。さらに説明せずとも、当業者は、前記説明を用いて、本発明をその最も完全な程度に利用できると思われる。したがって、本明細書の実施例は、単なる説明であり、如何なる場合も本発明の範囲を限定するものではない。排他的な所有権または特典が請求される発明の具体例は、特許請求の範囲に定義される。