(57)【要約】【課題】本発明は、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療において効果的であり、かつ安全性の高い医薬を提供することを課題とする。【解決手段】ミゾリビン又はその水和物を有効成分として含有する、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤を提供する。 【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミゾリビン又はその水和物を有効成分として含有する、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤。
【請求項２】
糖尿病が２型糖尿病である、請求項１に記載の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤。
【請求項３】
ミゾリビン又はその水和物を有効成分として含有する、糖尿病性腎症治療剤。
【請求項４】
糖尿病が２型糖尿病である、請求項３に記載の糖尿病性腎症治療剤。
【請求項５】
腎症前期及び／又は早期腎症の患者用の、請求項３又は４に記載の糖尿病性腎症治療剤。
【請求項６】
早期腎症から中期腎症移行期の腎症患者用の、請求項３又は４に記載の糖尿病性腎症治療剤。
【請求項７】
有効成分であるミゾリビン又はその水和物の１日あたりの投与量が０．５ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇであることを特徴とする、請求項１又は２に記載の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤。
【請求項８】
有効成分であるミゾリビン又はその水和物の１日あたりの投与量が０．５ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇであることを特徴とする、請求項３〜６のいずれかに記載の糖尿病性腎症治療剤。
【請求項９】
糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤の製造のためのミゾリビン又はその水和物の使用。
【請求項１０】
糖尿病が２型糖尿病である、請求項９に記載のミゾリビン又はその水和物の使用。
【請求項１１】
腎症前期及び／又は早期腎症の患者用であって、糖尿病が２型糖尿病である糖尿病性腎症の治療剤の製造のためのミゾリビン又はその水和物の使用。
【請求項１２】
ミゾリビン又はその水和物を投与することを特徴とする、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療方法。
【請求項１３】
糖尿病が２型糖尿病である、請求項１２に記載の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療方法。
【請求項１４】
腎症前期及び／又は早期腎症の患者に、ミゾリビン又はその水和物を投与することを特徴とする治療方法であって、糖尿病が２型糖尿病である糖尿病性腎症の治療方法。
【請求項１５】
糖尿病性腎症の予防及び／又は治療が、糸球体の硬化症の抑制、間質繊維化の抑制、尿中アルブミン排泄量の抑制、又は腎臓における活性化マクロファージ数の抑制のいずれかあるいはこれらの組み合わせである、請求項１、２、又は７に記載の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤。
【請求項１６】
糖尿病性腎症の治療が、糸球体の硬化症の抑制、間質繊維化の抑制、尿中アルブミン排泄量の抑制、又は腎臓における活性化マクロファージ数の抑制のいずれかあるいはこれらの組み合わせである、請求項３〜６、又は８に記載の糖尿病性腎症の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療において効果的な医薬に関する。具体的には、本発明は、有効成分としてミゾリビンを含有する糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤に関する。さらには、有効成分としてミゾリビンを含有するインスリン非依存性（２型）糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
腎臓は、尿を作って代謝産物として生じる不要な老廃物を除去し、体液の量や組成を一定に保つ臓器である。また、腎臓は各種のホルモンを産生して血圧の調整や造血作用に関係し、骨の成長やカルシウム、リンの調節に関連の深いビタミンＤの代謝にも関係している重要な臓器であり、その機能が低下または喪失した状態、すなわち腎不全では、生命活動の根源が脅かされることになる。
１９９８年以降、末期腎不全に進行し透析導入が必要となる患者の原疾患の第一位を糖尿病性腎症が占めるようになり、その治療対策が重要な課題となっている。腎症の発症・進展を遅延させることを目標に、食事・運動療法、血糖コントロール、又は降圧療法等が行われているが、臨床上この目標を十分に達成することは容易ではなく、その治療薬の探索・開発が待ち望まれている。
ここで、４−カルバモイル−１−β−Ｄ−リボフラノシル−イミダゾリウム−５−オレイト（以下、ミゾリビン）は、オイペニシリウム属に属するオイペニシリウム・ブレフェルディアナム（Eupenicillium  brefeldianum）Ｍ−２１６６株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１１０４）の培養液より発見された核酸関連物質で、水に易溶で、２００℃付近で褐色発泡分解する弱酸性物質であって、その製造方法としては、上記の菌株を用いる醗酵法や化学合成法等の種々の方法が知られている（特許文献１〜４）。
ミゾリビンは、すでに市販されている免疫抑制剤であって、例えば腎移植における拒否反応の抑制に有用性が認められ、通常体重１ｋｇ当たり、初期量としてミゾリビン２〜３ｍｇ相当量、維持量として１〜２ｍｇ相当量を１日量として経口投与するブレディニン（登録商標名：旭化成ファーマ株式会社製）錠として無水系結晶体が使用されている。
【特許文献１】特開昭４８−５６８９４号公報
【特許文献２】特開昭５０−１２１２７５号公報
【特許文献３】特開昭５０−１２１２７６号公報
【特許文献４】特開昭５１−１６９３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療において効果的であり、かつ安全性の高い医薬を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者は、糖尿病を患う腎症患者の腎症の進展を抑制すること、中でも益々増加しつつある糖尿病患者が腎症を発症するのを防ぐこと、また、増加しつつある糖尿病患者における腎症前期及び／又は早期腎症の進展を抑制することこそが重要であるという新規な課題を見出した。そしてこの課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、ミゾリビンを用いた予防及び／又は治療がその目的に適合しうることを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。現在、糖尿病性腎症の治療としてはこれらの対処療法の他、血圧効果剤の利用が知られており、また、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）が１型糖尿病動物モデルにおいて腎症に効果があったということが報告されているにすぎない（Kidney International, Vol.63(2003), pp.209-216）。従って、より効果が強く、安全性の高い糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤が求められている。
すなわち、本発明は、以下の構成に関する。
（１）ミゾリビン又はその水和物を有効成分として含有する、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤。
（２）糖尿病が２型糖尿病である、上記（１）に記載の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤。
（３）ミゾリビン又はその水和物を有効成分として含有する、糖尿病性腎症治療剤。
（４）糖尿病が２型糖尿病である、上記（３）に記載の糖尿病性腎症治療剤。
（５）腎症前期及び／又は早期腎症の患者用の、上記（３）又は（４）に記載の糖尿病性腎症治療剤。
（６）早期腎症から中期腎症移行期の腎症患者用の、上記（３）又は（４）に記載の糖尿病性腎症治療剤。
（７）有効成分であるミゾリビン又はその水和物の１日あたりの投与量が０．５ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇであることを特徴とする、上記（１）又は（２）に記載の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤。
（８）有効成分であるミゾリビン又はその水和物の１日あたりの投与量が０．５ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇであることを特徴とする、上記（３）〜（６）のいずれかに記載の糖尿病性腎症治療剤。
（９）糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤の製造のためのミゾリビン又はその水和物の使用。
（１０）糖尿病が２型糖尿病である、上記９に記載のミゾリビン又はその水和物の使用。
（１１）腎症前期及び／又は早期腎症の患者用であって、糖尿病が２型糖尿病である糖尿病性腎症の治療剤の製造のためのミゾリビン又はその水和物の使用。
（１２）ミゾリビン又はその水和物を投与することを特徴とする、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療方法。
（１３）糖尿病が２型糖尿病である、上記（１２）に記載の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療方法。
（１４）腎症前期及び／又は早期腎症の患者に、ミゾリビン又はその水和物を投与することを特徴とする治療方法であって、糖尿病が２型糖尿病である糖尿病性腎症の治療方法。
（１５）糖尿病性腎症の予防及び／又は治療が、糸球体の硬化症の抑制、間質繊維化の抑制、尿中アルブミン排泄量の抑制、又は腎臓における活性化マクロファージ数の抑制のいずれかあるいはこれらの組み合わせである、上記（１）、（２）、又は（７）に記載の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤。
（１６）糖尿病性腎症の治療が、糸球体の硬化症の抑制、間質繊維化の抑制、尿中アルブミン排泄量の抑制、又は腎臓における活性化マクロファージ数の抑制のいずれかあるいはこれらの組み合わせである、上記（３）〜（６）、又は（８）に記載の糖尿病性腎症の治療剤。
【発明の効果】
【０００５】
本発明のミゾリビンを有効成分として含む薬剤によれば、効果的かつ安全性の高い糖尿病性腎症の予防及び／又は治療を行うことができる。すなわち、糖尿病を患う腎症患者の腎症の進展を抑制すること、増加しつつある糖尿病患者における腎症前期及び／又は早期腎症の進展を抑制することができる。その結果として、糖尿病性腎症患者の末期腎不全の進行をも妨げることが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、本願発明について具体的に説明する。
本発明で用いることができるミゾリビンの化学名は、４−カルバモイル−１−β−D−リボフラノシル−イミダゾリウム−５−オレイトである。ミゾリビンは、オイペニシリウム属に属するオイペニシリウム・ブレフェルディアナム（Eupenicillium  brefeldianum）Ｍ−２１６６株（ＦＥＲＭ Ｐ−１１０４）の培養液より発見された核酸関連物質で、水に易溶で、２００℃付近で褐色発泡分解する弱酸性物質であって、その製造方法としては、上記の菌株を用いる醗酵法や化学合成法等の種々の方法が知られている（特開昭４８−５６８９４号公報、特開昭５０−１２１２７５号公報、特開昭５０−２１２７６号公報、特開昭５１−１６９３号公報、又はＬａｉら：Symposium to the 9th Biennlal Scientific Meeting Asian Pacific Association for the Study of the Liver(1994)等を参照）。
【０００７】
ミゾリビンの水和物としては特に限定されないが、一水和物であってもよく、特に、無水物であることが好ましい。無水物としては、特公平６−１５５５６号公報にて報告されているとおり、Ａ型無水物とＢ型無水物が知られているが、いずれであってもよく、特に好ましくは、Ｂ型無水物が例示される。また、上記文献の他、「日本薬局方外医薬品規格１９９７」復刻版にも、ミゾリビンの無水物が記載されている。
【０００８】
ミゾリビンは、すでに市販されている免疫抑制剤であって、例えば腎移植における拒否反応の抑制に有用性が認められ、通常体重１ｋｇ当たり、初期量としてミゾリビン２〜３ｍｇ相当量、維持量として１〜２ｍｇ相当量を１日量として経口投与するブレディニン（登録商標名：旭化成ファーマ株式会社製）錠として無水系結晶体が使用されている。
【０００９】
本発明の薬剤は、単独で糖尿病患者における糖尿病性腎症の発症を阻止するための予防剤として用いることができ、食事療法や運動療法と共に用いることも好ましい。糖尿病患者としては特に限定されることはないが、２型糖尿病患者であることが好ましい。また、１型糖尿病患者が好ましい別の態様もある。また、糖尿病性腎症の徴候または症状を示す患者に、食事療法や運動療法と共にミゾリビン又はその水和物単独で用いることにより、症状が進展するのを抑制するための治療剤として用いることができる。さらにはミゾリビンの作用に悪影響を及ぼさない薬剤とミゾリビンとを併用することができる。このような併用用の薬剤としては、ミゾリビンと以下のＡ）−Ｇ）から選択される薬剤との組み合わせが例示される。Ａ）−Ｇ）の薬剤は１つであっても２つ以上であってもよいが、１つ又は２つであることが好ましく、１つであることがより好ましい。また、２つであることが好ましい別の態様もある。
【００１０】
Ａ）α-グルコシダーゼ阻害薬（アカルボース、ボグリボースなど）
Ｂ）インスリン抵抗性改善薬（ピオグリタゾン、ロシグリタゾンなど）
Ｃ）経口血糖降下薬（スルホニル尿素薬、ビグアナイド剤など）
Ｄ）インスリン注射などの糖尿病薬及び／又は抗血小板薬（塩酸ジラゼプ、ジピリダモールなど）
Ｅ）アンギオテンシン変換酵素阻害薬（カプトプリル、塩酸テモカプリル、リシノプリル、マレイン酸エナラプリル、塩酸ベナゼプリルなど）
Ｆ）降圧薬（塩酸ベニジピン、ニフェジピン、塩酸バルニジピン、塩酸マニジピン、塩酸エホニジピン、塩酸テラゾシン、フマル酸ビソプロロールなど）
Ｇ）高脂血症改善薬（プラバスタチン、シンバスタチン、プロブコール、イコサペント酸エチルなど）
【００１１】
上記併用用の薬剤は、糖尿病性腎症の症状をなくすか、又は症状の進展を抑制するのに十分な量でそれぞれ投与すればよく、各併用用の薬剤はミゾリビンとは独立して適宜投与量を選択することができる。例えば、臨床上用いられている投与量で用いる方法が挙げられる。
【００１２】
糖尿病性腎症を治療するに際し、本発明におけるミゾリビン又はその水和物と上記Ａ）−Ｇ）から選択される薬剤とを併用することも本発明の範囲内である。併用するに際しては、ミゾリビン又はその水和物と上記Ａ）−Ｇ）から選択される薬剤が、別々の製剤となったものを投与する他に、配合剤として、一度に投与することもできる。
【００１３】
本発明の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤において、ミゾリビン又はその水和物の１日あたりの投与量は、有効成分としてのミゾリビンに換算して下限としては、０．５ｍｇ／ｋｇ以上が好ましく、１ｍｇ／ｋｇ以上がより好ましく、１．５ｍｇ／ｋｇがさらに好ましく、２ｍｇ／ｋｇ以上が大変好ましく、３ｍｇ／ｋｇ以上が最も好ましい。また、上限としては、３０ｍｇ／ｋｇ以下が好ましく、２０ｍｇ／ｋｇ以下がより好ましく、１５ｍｇ／ｋｇがさらに好ましく、１０ｍｇ／ｋｇが特に好ましく、６ｍｇ／ｋｇ以下が最も好ましい。
【００１４】
投与回数としては、ミゾリビン又はその水和物を単独投与の場合これを１日１〜３回に分割投与すればよい。また、上記Ａ）−Ｇ）の薬剤と併用する場合においても１日１〜３回に分割して投与することができる。
【００１５】
糖尿病性腎症は尿蛋白正常の時期すなわち腎症前期（第１期）、微量アルブミン尿が検出される時期すなわち早期腎症期（第２期）、持続性蛋白尿を示す時期、すなわち中期腎症にあたる顕性腎症期（第３期）、さらに腎機能が著明に低下し透析導入が検討される時期、いわゆる末期腎不全の状態（第４期）というように進行する。そして最後に、透析療法を必要とする時期（第５期）となる。糖尿病性腎症の病態治療においては、第２期から第３期に移行しないように治療することが重要である。本発明の薬剤は腎症前期、早期腎症、又は早期から中期腎症移行期の腎症の患者に使用することが好ましく、早期腎症又は早期腎症から中期腎症移行期の腎症の患者に使用することがより好ましい。また腎症前期の患者に使用することが好ましい別の態様もある。さらに、早期腎症の患者に使用することが好ましい態様もあり、早期腎症から中期腎症移行期の腎症の患者に使用することもより好ましい。そして本発明の薬剤は顕性腎症期、腎不全期、又は透析療法期の患者にも用いることもできる。中でも本発明の薬剤は、糖尿病性腎症の病期を第２期から第３期、すなわち早期腎症から中期腎症へ移行させないための治療に特に有効である。
【００１６】
糖尿病で高血糖状態が続くと、糸球体を構成している細かい血管が動脈硬化を起こして固くなり、糸球体の組織の目が粗くなって、ろ過機能が低下することにより糖尿病性腎症が起こる。本発明の薬剤を用いることにより、糸球体と間質への白血球浸潤が阻害され、かつ糸球体硬化又は間質線維化を改善することができる。さらには本発明の薬剤は、高脂血症、高血圧症、又は肥満を合併した糖尿病患者の腎症にも有効である。
【００１７】
ミゾリビンの剤形としては、経口投与用製剤あるいは非経口投与用製剤が挙げられるが、好ましい例としては経口投与用製剤が挙げられる。例えば、体重５０〜６０ｋｇの患者成人に対してミゾリビン経口投与用製剤２５ｍｇ又は５０ｍｇ錠を用いて１回１５０〜２５０ｍｇ量のミゾリビンを１日２回投与する方法が挙げられる。ミゾリビンの１日あたりの投与回数は適宜調節可能であるが、好ましい投与回数は１日３回以下、より好ましくは１日２回以下、最も好ましくは１日１回である。
【００１８】
ミゾリビンは、経口投与製剤（登録商標名：ブレディニン錠）として使用することが簡便であり、常法により適宜カプセル剤又は顆粒剤等の経口投与製剤にすることもできる。具体的には、例えば、賦形剤として無水乳糖、結晶セルロース、デキストラン、又はスターチなど、結合剤としてカルボキシルメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、又はエチルセルロースなど、崩壊剤としてカルボキシメチルセルロース、炭酸カルシウム、又はメチルセルロースなど、あるいは滑沢剤としてステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、又はタルクなどを適宜選択して組み合わせ、常法により錠剤、又はカプセル剤などの経口投与製剤とすることができる。
【００１９】
非経口投与用製剤としては、坐剤、エアゾール吸入法による製剤、経皮吸収性製剤、又は注射剤として常法の製剤化技術にて製剤化することができる。
具体的には、ミゾリビンを水性溶媒に溶解させることによってエアゾール用液剤や注射剤を製造することができる。例えば、ミゾリビンの液剤中における濃度は水性溶媒に対して、好ましくは０．１〜１０ Ｗ／Ｖ ％、より好ましくは１〜１０ Ｗ／Ｖ ％程度になるよう調製し、特に注射剤については調製後滅菌または除菌処理して製剤とすればよい。この水性溶媒としては、例えば、注射用蒸留水又は滅菌精製水等が例示される。さらに、通常液剤に適宜選択して用いられる添加剤、例えば、ｐＨ調整用の緩衝剤（例えば、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酒石酸緩衝液、又は酢酸緩衝液等）、等張化剤（例えば、ソルビトール、グリセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グルコース、又は塩化ナトリウム等）、安定化剤（例えば、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、又はメタ重亜硫酸塩等）、防腐殺菌剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、パラクロルメタキシノール、クロルクレゾール、フェネチルアルコール、ソルビン酸またはその塩、チメロサール、又はクロロブタノール等）、キレート剤（例えば、エデト酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、又は縮合リン酸ナトリウム等）、粘稠剤（例えば、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、又はポリアクリル酸ナトリウム等）等を通常使用される添加量で配合添加することができる。
【００２０】
本発明により、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤の製造のためのミゾリビン又はその水和物の使用方法が提供される。糖尿病は特に限定されないが、２型糖尿病であることが好ましい。また、腎症前期及び／又は早期腎症の患者用の糖尿病性腎症治療剤の製造のためのミゾリビン又はその水和物の使用方法も本発明の範囲に含まれる。さらには本発明により、早期から中期（第２期から第３期）への移行期の腎症患者用としての糖尿病性腎症治療剤の製造のためのミゾリビン又はその水和物の使用方法が提供される。
【００２１】
本発明により、ミゾリビン又はその水和物を投与することを特徴とする、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療方法が提供される。また、腎症前期及び／又は早期腎症の患者にミゾリビン又はその水和物を投与することを特徴とする糖尿病性腎症の治療方法も本発明の範囲に含まれる。さらには本発明により、早期から中期（第２期から第３期）への移行期の腎症患者にミゾリビン又はその水和物を投与することを特徴とする糖尿病性腎症の治療方法が提供される。糖尿病は特に限定されないが、２型糖尿病であることが好ましい。ミゾリビン又はその水和物の投与量は、下限としては、０．５ｍｇ／ｋｇ以上が好ましく、１ｍｇ／ｋｇ以上がより好ましく、１．５ｍｇ／ｋｇがさらに好ましく、２ｍｇ／ｋｇ以上が大変好ましく、３ｍｇ／ｋｇ以上が最も好ましい。また、上限としては、３０ｍｇ／ｋｇ以下が好ましく、２０ｍｇ／ｋｇ以下がより好ましく、１５ｍｇ／ｋｇがさらに好ましく、１０ｍｇ／ｋｇが特に好ましく、６ｍｇ／ｋｇ以下が最も好ましい。
【００２２】
本発明のミゾリビン又はその水和物を投与することによる糖尿病性腎症の予防とは、糖尿病性腎症を発症させないことを意味し、また、糖尿病性腎症の様々な時期の症状の進行を止めること又はその進行を抑制することを意味することもある。また、糖尿病性腎症の治療とは、糖尿病性腎症の様々な症状を緩和すること、症状の進行を止めること、又はその進行を抑制することをいう。
具体的には、尿中のアルブミン量の増加、糸球体の硬化、間質繊維化等の観察・測定によりその予防・治療効果を知ることができる。
次に、本発明の糖尿病性腎症の予防及び／又は治療剤の実施例を示すが、本発明は以下の実施例に限定されない。
【実施例１】
【００２３】
本発明を実施例に基づいて説明する。本発明は以下の実施例になんら限定されないが、以下の実施例により本発明の効果は十分に説明される。
〔試験方法〕
自然発症の２型糖尿病モデル動物としてOtsuka Long-Evans Tokushima Fatty （ＯＬＥＴＦ）ラットを、非糖尿病対照動物としてLong-Evans Tokushima Otsuka （ＬＥＴＯ）ラットを、ともに腎症が早期から中期（第２期から第３期）への移行期にあたる３５週齢で用いた。１群７匹のＯＬＥＴＦラットにミゾリビン（旭化成ファーマ株式会社製）５ｍｇ／ｋｇ（表１中OLETF+MZR-5と示す）または１０ｍｇ／ｋｇ（表１中OLETF+MZR-10と示す）を１日１回８週間腹腔内投与した。また、陽性対照としてＯＬＥＴＦラット（表１中OLETF controlと示す）に、非糖尿病の陰性対照としてＬＥＴＯラット（表１中LETOと示す）に、同様のスケジュールで生理食塩水を腹腔内投与した。
【００２４】
〔尿排泄アルブミン量の評価〕
投与終了後、各群のラットにおいて尿排泄アルブミン量を評価した（表１）。尿排泄アルブミン量は尿中クレアニチン１ｍｇあたりの含量を示している。表１に示す通り、ＯＬＥＴＦラットの陽性対照（ｃｏｎｔｒｏｌ）とＬＥＴＯラットの比較により有意に尿排泄アルブミン量の増加が認められ、ＯＬＥＴＦラット間の比較によりｃｏｎｔｒｏｌよりミゾリビン５ｍｇ投与、１０ｍｇ投与したラットの方が尿排泄アルブミン量が少なく、ミゾリビンの投与によりその増加が有意に抑制されたことが確認できた。
【００２５】
〔腎糸球体硬化の評価〕
各ラットの片方の腎について、１０％ホルマリンで固定してパラフィン包埋した。全てのホルマリン固定腎切片は過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）及びマッソントリクロームにより染色した。ＰＡＳ染色切片上で、強拡大視野（×４００）の下に各標本について５０個の糸球体を観察し、各糸球体の硬化症の程度を半定量的にスコア化した（０＝硬化なし、１＝２５％未満の硬化、２＝２５〜５０％の硬化）。結果を図１に示す。
【００２６】
〔間質の線維化の評価〕
前記腎糸球体硬化の評価で用いた各切片について２０箇所の領域をマッソントクリーム染色像上で分析し（×２００）、この各領域で繊維化の程度を半定量的にスコア化した（０＝繊維化なし、１＝１０％未満の繊維化、２＝１０〜２５％の繊維化、３＝２５〜５０％の繊維化、４＝５０％を超えた繊維化）。結果を図２に示す。
【００２７】
〔活性化マクロファージ（ＥＤ−１陽性細胞）数の評価〕
前記腎糸球体硬化の評価で用いたパラフィン包埋した腎の連続切片（３μｍ厚）を用いてＥＤ１を検出した。脱パラフィン化した切片を３％過酸化水素水とともに１０分間培養し、内因性のペルオキシダーゼ活性を阻害した。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）内で、７％ウシ血清アルブミンを用いて阻害した後に、各切片をＥＤ１に対する一次抗体とともに３７℃で４５〜６０分間培養した（５μｇ／ｍｌ）。ＥＤ１に対する染色手技の際には、抗原を最適条件で回収するため、プロテイナーゼＫによる処理を７分間行った。その後、これらの切片をＤａｋｏ社のＬＳＡＢシステムリンク抗体とともに１０分間培養した後に、ペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジンとともに室温で１０分間培養した。切片をＰＢＳで洗浄し、３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）溶液で染色してから、ヘマトキシリンで対比染色した。各切片から得た５０個以上の糸球体と２０箇所以上の重なり合っていない間質領域を強拡大倍率（×４００）下に評価すると共に、それぞれの糸球体と間質領域におけるＥＤ１陽性細胞の数を各群につき数えて平均を算出した。糸球体についての結果を図３に、間質についての結果を図４に示す。
【００２８】
このように、糸球体硬化と間質の線維化および腎臓における活性化マクロファージ（ＥＤ−１陽性細胞）数もミゾリビン投与により有意に抑制されたことが確認できた。
以上の結果より、自然発症２型糖尿病モデルにおける糖尿病性腎症の進展がミゾリビンの投与により有意に抑制されたことが確認できた。
【００２９】
【表１】
2007106710.tif 000002
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本発明のミゾリビンを有効成分として含む薬剤は、糖尿病性腎症の予防及び／又は治療において、効果が強く、安全性の高い薬剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】実施例１の腎糸球体硬化に対するミゾリビンの効果を示す図である。
【図２】実施例１の腎間質線維化に対するミゾリビンの効果を示す図である。
【図３】実施例１の腎糸球体における活性化マクロファージ（ＥＤ−１陽性細胞）数に対するミゾリビンの効果を示す図である。
【図４】実施例１の腎間質における活性化マクロファージ（ＥＤ−１陽性細胞）数に対するミゾリビンの効果を示す図である。
【図１】
2007106710.tif 000003
【図２】
2007106710.tif 000004
【図３】
2007106710.tif 000005
【図４】
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