(57)【要約】【課題】  優れた育毛効果を有する新規の育毛料組成物の提供。【解決手段】  本発明は、バーシカンの発現を亢進させることのできる生薬インドトチノキエキスを育毛活性成分として含んで成る、育毛料組成物を提供する。【選択図】      図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
バーシカンの発現を亢進させる生薬インドトチノキエキスを育毛活性成分として含んで成る、育毛料組成物。
【請求項２】
インドトチノキエキスを０．５〜２．０質量％の量で含む、請求項１に記載の育毛料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はバーシカンの発現を亢進させる生薬インドトチノキエキス（Aesculus Indica)を育毛活性成分として含有する育毛料組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化社会、ストレス社会といわれる現代社会では、頭部毛髪が様々な原因により、脱毛の危機にさらされる機会がますます多くなってきている。これに対応して、より優れた「育毛剤」を提供すべく、様々な試みがなされている。
【０００３】
毛包は皮膚の付属器官の一つで一定の周期をもって常に生え変わり、自己再生を繰り返す能力をもつ器官として特徴付けられる。毛包は皮膚外部に露出したいわゆる毛髪と、皮膚真皮に埋没した毛幹を生み出す元になる毛根鞘や毛母細胞、毛乳頭細胞などから形成されている。発生学的には表皮−真皮の相互作用により毛包原基が形成され、下部方向に表皮が伸長することで毛包は形成される。発生の最終段階として毛幹の伸長は一定期間継続するが、やがて停止し、アポトーシスによって毛根鞘、毛母細胞の部分が退縮に向かう（退行期）。この一連の過程で、真皮奥深くまで伸長していた毛包は表皮近くまで短くなり、毛乳頭のサイズも小さくなる。やがて休止期を経て、再び毛母細胞は活性化され新しい周期の成長期へと向かう。この周期がほぼ一生を通じて繰り返される（毛周期）。
【０００４】
毛包最底部に位置する毛乳頭細胞は毛包の自己再生のために毛包上皮幹細胞に活性化シグナルを送るいわば司令塔の役割を担い、毛包再生に必須とされる。毛周期において休止期から成長期に移行する際、毛乳頭細胞はコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの一種であるバーシカンを特異的に発現することで知られている（Kishimoto et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1999), pp. 7336-7341；非特許文献１）。バーシカンの発現は、例えばバーシカンプロモーターの下流に適当なレポーター遺伝子（例えばＬａｃＺ遺伝子）を繋いだ発現ベクターを導入したトランスジェニックマウスモデルを利用して調べることができる。
【０００５】
【非特許文献１】Kishimoto et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1999), pp. 7336-7341
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、毛周期において休止期から成長期に移行する際、毛乳頭細胞がバーシカンを特異的に発現することに着目し、バーシカントランスジェニックマウスを利用して育毛効果の薬剤をスクリーニングして育毛効果を有する薬剤を見出すことにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、生薬インドトチノキエキスがバーシカンの発現を亢進させ、育毛効果を有することを見出した。インドトチノキエキスが育毛活性を有することは従来技術において全く知られていない、驚くべき事実である。
【０００８】
従って、本発明は、バーシカンの発現を亢進させることのできる生薬インドトチノキエキスを育毛活性成分として含んで成る、育毛料組成物を提供する。好ましくは、この育毛料組成物は頭皮に塗布して使用する皮膚外用剤である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は優れた育毛効果を発揮することのできる新規な育毛料組成物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の育毛料組成物は育毛活性成分として、バーシカンの発現を亢進する活性を有する生薬を含んで成る。バーシカンの発現の亢進は、例えばバーシカンプロモーターの下流にレポーター遺伝子、例えばＬａｃＺ遺伝子を繋いだ発現ベクターを導入したトランスジェニックマウスモデル（Kishimoto et al., 前掲）の背部皮膚細胞を用いて調べることができる。簡単には、バーシカン-LacZ トランスジェニックマウスの背部皮膚を採取、裁断し、適当な酵素消化液で処理して細胞懸濁液を調整し、増殖培養を行う。翌日、その培養培地を各種生薬を添加した分化培地に交換し、培養を続ける。コントロールとして生薬を溶解させる溶媒、陽性コントロールとして既に育毛効果が知られている薬剤、例えばサイクロスポリンをそれぞれ分化培地に添加したものを培養することができる。数日後、細胞を回収してバーシカン発現量を、バーシカンと共に発現しているLacZ活性をレポーターとして用いる例えば化学発光レポーターLacZフローサイトメトリー法により評価することができる。
【００１１】
本発明者は生薬インドトチノキエキスがバーシカンの発現を亢進させ、育毛効果を有することを見出した。インドトチノキとは、原産地をネパールとするトチノキ科、トチノキ属に属する植物である。
【００１２】
インドトチノキエキスは常法により得ることができ、例えばインドトチノキを抽出溶媒とともに浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮して得ることができる。抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等の有機溶媒等を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。上記溶媒で抽出して得られたエキスをそのまま、あるいは濃縮したエキスを吸着法、例えばイオン交換樹脂を用いて不純物を除去したものや、ポーラスポリマー（例えばアンバーライトＸＡＤ−２）のカラムにて吸着させた後、メタノールまたはエタノールで溶出し、濃縮したものも使用することができる。また分配法、例えば水／酢酸エチルで抽出したエキス等も用いられる。
【００１３】
生薬インドトチノキエキスの本発明の育毛料組成物における配合量は、組成物全体に対して、好ましくは０．５〜２０質量％、より好ましくは１．０〜１０質量％、更に好ましくは１．５〜５．０質量％である。
【００１４】
本発明の育毛料組成物が採り得る剤型は、好ましくは外皮に適用可能な外用剤の剤型、例えば、液状、乳液状、クリーム状、エアゾール状等の剤型を選択することができる。また、本発明の育毛料組成物の形態も任意であり、例えば、トニック、ヘアークリーム、ムース、シャンプー、リンス、乳液、化粧水、パック、エアゾール剤等の形態を採ることができる。本発明の育毛料組成物は外皮に塗布して使用するのが特に好ましい。塗布方法は特に限定されるものではないが、例えば頭皮に１日１回以上、例えば１日１から３回、塗布する皮膚面積に応じて適量、例えば１〜５ｍｌ塗布するのが好ましい。
【００１５】
本発明の育毛料組成物においては、必須成分である上記生薬に加えて、必要に応じて、かつ本発明の所期の効果を損なわない限り、化粧品、医薬部外品、医薬品等において一般的に用いられる、各種の油性又は水性成分、保湿剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、香料、色剤、各種の薬剤等を配合することができる。
【００１６】
例えば、高級脂肪酸、固形パラフィン、流動パラフィン、シリコーン油、スクワラン、モノオレイン酸グリセリル、オリーブ油、イソプロピルミリステート、高級アルコール等の油分；グリセリン、ヒアルロン酸、プロピレングリコール、マルチトール、アテロコラーゲン、乳酸ナトリウム等の保湿剤；マルメロ粘質物、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム等の増粘剤；ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル、ビタミンＥアセテート、センブリ抽出物、塩化カルプロニウム、アセチルコリン誘導体等の血管拡張剤；セリン、メチオニン、アルギニン等のアミノ酸類；ビタミンＢ６、ビタミンＥ類、ビオチン、パントテン酸類等のビタミン類；ニコチン酸、ニコチン酸メチル、ニコチン酸トコフェロール等のニコチン酸エステル類；セファランチン等の皮膚機能亢進剤；エストラジオール等の女性ホルモン剤；グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、アズレン等の消炎剤；ヒノキチオール等の抗菌剤；メントール等の清涼剤；サリチル酸、亜鉛類、乳酸類等；クエン酸等の有機酸類を配合することができる。
【００１７】
また、生薬インドトチノキエキス以外の育毛作用が認められている、既知の育毛成分、例えばミノキシジル、サイクロスポリンを加えることにより、さらに効果的な育毛効果が本発明の育毛料組成物において期待され得る。
【００１８】
以下、実施例により、本発明をさらに具体的に説明するが、この実施例により、本発明の技術的範囲が限定的に解釈されるべきものではない。なお、以下の実施例等で、配合量を表す数値は、特に断わらない限り、配合される対象全体に対する質量％で表される。
【実施例１】
【００１９】
育毛効果を有する生薬のスクリーニング
育毛効果のある生薬をスクリーニングするにあたり、毛周期において休止期から成長期に移行する際に発現する糖タンパクの一種であるバーシカンに着目した実験を行った。この方法により育毛効果のある生薬を感度良くスクリーニングすることが可能である。
【００２０】
バーシカンの発現は以下に記載した方法によって調べた。
バーシカン-LacZ トランスジェニックマウスの背部皮膚を採取、裁断し、コラゲナーゼ/デスパーゼ酵素消化液で処理して細胞懸濁液を調製し、マイクロプレートに幡種して３７℃、５％ＣＯ2の条件下で増殖培養（Keratinocyte-SFM培地（Gibco）＋１０％FBS）を行った。バーシカン-LacZ トランスジェニックマウスはKishimoto et al(前掲）に記載のとおりにして作製することができる。２４時間後、４００種程度の生薬を最終濃度が０．０１％となるように添加した分化培地（ダルベイコ．MEM（Gibco）＋１０％FBS）に交換し、培養を続けた。
【００２１】
コントロールとして生薬を溶解させる溶媒に用いたエタノール（最終濃度０．０１％）、陽性コントロールとして既に育毛効果が知られているサイクロスポリン（最終濃度５μＭ）（Sigma C-3662）をそれぞれ分化培地に添加したものを用い、同様にして培養を行った。
【００２２】
７２時間後、細胞を回収してバーシカン発現量を測定した。バーシカン発現量はバーシカンと共に発現しているLacZ活性をレポーターとして用いる化学発光レポーターLacZフローサイトメトリー法により評価した。すなわち、トリプシン処理によりマイクロプレートから回収した細胞を増殖培地に再懸濁し、化学発光反応液を添加後、フローサイトメーター（ＸＬ−ＭＣＬ、ベックマン・コールター社製）で化学発光強度を測定し、バーシカン発現量を調べた。
【００２３】
その結果、生薬インドトチノキエキスがバーシカン発現を有意に亢進させることが見出された（結果は示さない）。従って、次に生薬インドトチノキエキスの濃度を変え６．６及び３．３μｇ／ｍｌ、バーシカン発現亢進効果に関し、この生薬の濃度依存性を検討した。コントロールとして生薬を溶解させる溶媒に用いたエタノール（最終濃度０．０１％）を分化培地に添加したものを用い、同様にして培養を行った。その結果を図１に示す。
図１から明らかなように、生薬インドトチノキエキスは濃度依存式にバーシカン発現を亢進させる効果が確認され、育毛促進効果があることを見出した。
【実施例２】
【００２４】
Ｃ３Ｈマウス塗布試験による発毛・育毛効果の確認
上記のバーシカン発現実験で効果の認められた生薬インドトチノキエキスについてＣ３Ｈマウスを用いた塗布発毛試験を実施し、発毛・育毛効果を確認した（１回塗布法）。
試験は１群３匹の８週齢の雄性Ｃ３Ｈ/ＨｅＳｌｃｊマウス（日本ＳＬＣ）を用い、背部毛を約２×４ｃｍの大きさに電気バリカンを用いて毛刈りし、エタノールに生薬を２０ｍｇ／ｍｌ（２％）の濃度となるように溶解した試験試料１００μｌを０日目に１回塗布し、１２または１３日目及び３２日目の毛刈り部位と発毛部位の面積を目視で測定し、毛刈り部位の面積に対する発毛部位の面積の％を求めた。この実験をｎ＝３で２回繰り返した。塗布部分の皮膚状態を観察し、以下の評価基準に従ってスコアをつけ、１２日目時点での観察では２点以上、３２日目時点での観察では４点以上のスコアのマウスの匹数をそれぞれ以下の表１に示した。
皮膚がピンク色を呈する    …  ０点
部分的に皮膚が黒色に変化  …  １点
全ての皮膚が黒色に変化    …  ２点
部分的な発毛が茶色に変化  …  ３点
全ての発毛が茶色に変化    …  ４点
発毛が黒色に変化          …  ５点
【００２５】
【表１】
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【００２６】
表１から明らかなように、試験したマウス６匹中３匹に発毛が認められ、インドトチノキエキスの発毛・育毛効果が確認された。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明により優れた育毛効果を有する新規の育毛料組成物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】生薬インドトチノキエキスのバーシカン発現に及ぼす効果。
【図１】
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