(57)【要約】【課題】超音波処理による養殖魚の病気を予防し、感染を防止する方法を提供する。【解決手段】養殖している魚類の病気を予防し、感染を防止する方法であって、魚類に対して、高濃度溶存酸素水中で、超音波処理を為すことからなる方法であって、好ましくは、前記超音波処理において、浸漬ワクチン処理が同時に施用されるか又は浸漬ワクチン処理が施用されない方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
養殖している魚類の病気を予防し、感染を防止する方法であって、魚類に対して、高濃度溶存酸素水中で、超音波処理を為すことからなる方法。
【請求項２】
前記超音波処理において、浸漬ワクチン処理が同時に施用される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記超音波処理において、浸漬ワクチン処理が施用されない請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、養殖している魚類の病気を予防し、感染を防止する方法に関するものであり、詳細には、魚類に対して、高濃度溶存酸素水中で、超音波処理を為すことからなる方法であり、好ましくは、前記超音波処理において、浸漬ワクチン処理が同時に施用されるか又は浸漬ワクチン処理が施用されない方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
養殖魚の病気の予防及び治療を目的として、抗生物質が使用されてきたが、魚類の体内への残留、過剰な使用による耐性菌の発現及び環境に対する影響が大きい等多くの問題を有している。
一方、養殖魚の病気の予防を目的としてワクチンを使用することも行われている。養殖魚の病気の予防へのワクチンの使用は、病気に対する免疫が一度成立すると長期間にわたって予防効果が発揮されること、使用量が少ないことから環境への影響が殆どないこと、及び、魚類の体内に残留することは殆どないこと、更には抗生物質では効果がないウイルスに対しても効果を有するということより大変優れた方法であるといえる。
【０００３】
現在、魚類に適用されているワクチンの投与方法としては以下の３種の方法がある。
１．注射ワクチン
２．経口ワクチン
３．浸漬ワクチン
１．の注射ワクチンとは対象魚の腹腔内や筋肉内にワクチン液を注射して投与する方法であり、例えば、ブリの養殖場では、麻酔をかけたブリに一匹づつ注射器でワクチンが接種されている。該注射ワクチンは投与量も正確で他の投与法よりも高い効果が得られる反面、魚に対するストレスが大きく、また、大量処理が難しという問題を有しており、また、小型の魚や数多くの放流魚にワクチン処理を施す場合には不向きな方法でもある。注射ワクチンとしては、イリドウイルス感染症ワクチンがマダイやブリなどにおいて実用化されている。
２．の経口ワクチンは、対象魚にワクチンの入った餌を数日間食べさせて投与する方法である。経口ワクチンは大量処理に適しているものの、投与量があまり正確ではなく、ワクチンが胃などの消化作用を受けて変性するため、効果の点でも一般的には注射ワクチン、浸漬ワクチンに劣るものである。経口ワクチンとしては、レンサ球菌症ワクチンがブリなどにおいて実用化されている。
３．の浸漬ワクチンは、ワクチン液に魚を短時間漬けてワクチンを投与する方法である。浸漬ワクチンは注射ワクチンには劣るものの、一般的に経口ワクチンより高い効果を示し、また稚魚に用いれば、比較的一度に大量の魚を処理することが可能という利点を有しているため注目されている。浸漬ワクチンは、例えば、アユビブリオ病において高い効果を示し、既に実用化されている。
しかし、浸漬ワクチン法では、例えばアユの冷水病やヤマメのせっそう病など、殆ど効果が得られない病気があった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従って本発明は、従来の養殖魚の病気の予防及び感染の防止方法では十分な予防効果が得られなかった病気においても優れた効果が得られる、操作が容易で大量処理が可能な新規な病気の予防及び感染の防止方法の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、魚類に対して、高濃度溶存酸素水中で、超音波処理を行い、該超音波処理を行う際に、浸漬ワクチン処理を同時に施用すると従来の浸漬ワクチン法では十分な病気の予防及び感染の防止効果が得られなかった病気においても、優れた効果（有効率）が得られることを見出し、更に、魚類及び病気の種類によっては、前記超音波処理において、浸漬ワクチン処理を施用しなくても病気の予防及び感染の防止効果が得られることを見出し本発明を完成させた。
【０００６】
即ち、本発明は、
１．養殖している魚類の病気を予防し、感染を防止する方法であって、魚類に対して、高濃度溶存酸素水中で、超音波処理を為すことからなる方法、
２．前記超音波処理において、浸漬ワクチン処理が同時に施用される前記１．記載の方法、
３．前記超音波処理において、浸漬ワクチン処理が施用されない前記１．記載の方法、
に関するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の超音波処理による養殖魚の病気を予防し、感染を防止する方法により、大量処理が可能な簡単な操作で、従来の浸漬ワクチンの処理方法では殆ど効果が得られなかったアユの冷水病やヤマメのせっそう病などにおいても高い効果（有効率）を得ることができた。
【０００８】
本発明の超音波処理による養殖魚の病気を予防し、感染を防止する方法における超音波処理は、浸漬ワクチンを同時に処理する場合、魚類に対してワクチンの浸漬を向上させる働きをしていると考えられるものの、一方では魚類の体に傷害を起こしえるものでもある。
これに対し、上記超音波処理の際、高濃度溶存酸素水を使用することにより、超音波処理による悪条件下においても魚類の活力を保つことができ、これにより、魚類の活力を維持したままワクチンの浸漬を向上させることができ、結果として高い効果（有効率）を得ることができたものと考えられる。
また、ヤマメのせっそう病においては、浸漬ワクチンを使用しなくても、高濃度溶存酸素水と、超音波処理を併用することにより、効果が得られた。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は、養殖している魚類の病気を予防し、感染を防止する方法であって、魚類に対して、高濃度溶存酸素水中で、超音波処理を為すことからなる方法であり、好ましくは、前記超音波処理において、浸漬ワクチン処理が同時に施用されるか又は浸漬ワクチン処理が施用されない方法に関するものである。
本発明の対象となる魚類の病気としては、例えば、ビブリオ病、腸球菌症、イリドウイルス病、レッドマウス病、せっそう病、冷水性ビブリオ病、伝染性膵臓壊死症、類結節症、α溶血性連鎖球菌症、冷水病、細菌性出血性腹水病、エドワジェラ症、伝染性造血器壊死症、リンホシスチス病、ウイルス性腹水症及びウイルス性神経壊死症等が挙げられ、好ましくは冷水病及びせっそう病が挙げられる。
上記の魚類の病気の浸漬ワクチンとしては、上記の病気のためのワクチンとし知られているものであれば特に限定はしないが、例えば、上記の病気の原因となる細菌やウイルスの病原体を懸濁した水溶液を、加熱、紫外線照射等の物理的処理、ホルマリン、クロロホルム、フェノール、ベータプロピオンラクトン、チメロサール等の化学的処理を施して不活化させたものを用いることができる。
好ましい浸漬ワクチンとしては、せっそう病菌及び冷水病菌の不活化されたワクチンが挙げられ、また、ホルマリンで不活化されたせっそう病菌及び冷水病菌のワクチンが好ましい。
【００１０】
本発明のワクチンを投与する魚類としては、養殖されている魚類であれば特に限定されるものではないが、例えば、サケ科魚類、アユ、ブリ、マダイ、クロダイ、スズキ、ヒラメ、マアジ、シマアジ、マハタ、トラフグ、ウナギ、フナ、イトウ、カレイ、ホンモロコ、ナマズ、カジカ、カンパチ、イシダイ、ヒラマサ、ドジョウ及びチョウザメ等が挙げられ、好ましくは、サケ科魚類及びアユが挙げられる。
サケ科魚類としてはサケ属（サクラマス、ヤマメ、サツキマス、アマゴ、カラフトマス、サケ（白サケ）、ギンザケ、マスノスケ、サーモントラウト、ニジマス、ベニザケ、ヒメマス、ビワマス）、イワナ属（アメマス、イワナ、レイクトラウト）、タイセイヨウサケ属（タイセイヨウサケ、ブラウントラウト）及びその他のサケ属（シナノユキマス）の魚が挙げられ、好ましくはサケ属（サクラマス、ヤマメ、サツキマス、アマゴ、カラフトマス、サケ（白サケ）、ギンザケ、マスノスケ、サーモントラウト、ニジマス、ベニザケ、ヒメマス、ビワマス）の魚が挙げられ、また、ヤマメが挙げられる。
【００１１】
一般的な淡水中における飽和溶存酸素量は、大気中（２５℃）においては８．１１ｍｇ／Ｌである。
これに対し、本発明に使用する高濃度溶存酸素水としては、通常、溶存酸素量が２０ｍｇ／Ｌないし４０ｍｇ／Ｌの範囲であり、好ましくは２５ないし３５ｍｇ／Ｌの範囲である。
また、高濃度溶存酸素水を使用する際は、常圧下でも加圧下でも行うことができるが、通常、常圧下で行うのが好ましい。
高濃度溶存酸素水は、例えば、通常の飼育水中に酸素ガスを吹き込むことにより調製することができる。
【００１２】
本発明に使用する超音波の強度は、必要以上に高い出力で行うと、魚に対する傷害が大きくなり好ましくない。
そのため、使用する魚の種類や体重により適用される範囲が異なることとなり、そのため一概には決定できないが、例えば、平均体重が２．３ｇの魚類、好ましくは稚アユを用いる場合は、通常２００ｍＷ／ｃｍ2ないし４００ｍＷ／ｃｍ2の範囲、好ましくは２５０ｍＷ／ｃｍ2ないし３５０ｍＷ／ｃｍ2の範囲と考えられ、平均体重が３．８ｇの魚類、好ましくは稚アユを用いる場合は、通常４００ｍＷ／ｃｍ2ないし６００ｍＷ／ｃｍ2の範囲、好ましくは４５０ｍＷ／ｃｍ2ないし５５０ｍＷ／ｃｍ2の範囲と考えられ、平均体重が２５ｇの魚類、好ましくはサケ科魚類、特にヤマメを用いる場合は、通常７００ｍＷ／ｃｍ2ないし９００ｍＷ／ｃｍ2の範囲、好ましくは７５０ｍＷ／ｃｍ2ないし８５０ｍＷ／
ｃｍ2の範囲と考えられる。
【００１３】
本発明の超音波処理による養殖魚の病気を予防し、感染を防止する方法において、浸漬ワクチン処理を同時に施用した場合、特に従来の浸漬ワクチンの処理方法では殆ど効果が得られなかった、アユの冷水病やヤマメのせっそう病などにおいても高い効果を得ることができ、これにより、病原体の感染を防ぎ、病気の発生を未然に防止することが可能となる。
冷水病とは、アユやサケ科魚類がかかる細菌性の病気であり、体表に穴が開いて出血することにより死亡率が高いものであり、近年、全国の河川のアユに蔓延し、被害が広がっている。
せっそう病とは、サケ科魚類の養殖場で発生する細菌性の疾病であり、体表に血膿を含む膨隆患部を示すことが特徴である。何年か前までは３０年間ワクチンの研究がされていたが、注射ワクチンの生存率は、良い時で５０％、浸漬ワクチンの場合２５％である。
【００１４】
本発明はまた、浸漬ワクチンを適用することなく、高濃度溶存酸素水中で、超音波処理を行なうことによる魚類の病気を予防し、感染を防止する方法にも関する。
魚類の病気としては、サケ科魚類のせっそう病、また、ヤマメのせっそう病が好ましい。
尚、高濃度溶存酸素水及び超音波処理の条件に関しては上述の浸漬ワクチンを使用する場合と同様の条件で行うことができる。
【００１５】
本発明の超音波処理による養殖魚の病気を予防し、感染を防止する方法を具体的な実施態様を示して説明する。
図１に本発明の方法に使用する装置の１例を示した。
容器４１内の底面に発振器１１から配線１３にて接続された振動子１２が設置される。魚類３２は高濃度溶存酸素水（ワクチンを含む）３１に投入される。高濃度溶存酸素水（ワクチンを含む）３１は、酸素ボンベ２１からレギュレーター２３及び配管２４を介して接続されている散気装置２２から微細な酸素の気泡を供給することにより調製される。酸素圧はレギュレーター２３により適正に調節される。超音波の出力は魚の種類や大きさに応じて適正な強度を採用し、該超音波の出力は連続運転又は間欠運転で行われる。
尚、浸漬ワクチンを用いない場合は、高濃度溶存酸素水（ワクチンを含む）３１の代わりに浸漬ワクチンを含まない高濃度溶存酸素水を使用する。
【実施例】
【００１６】
以下に示す実施例及び比較例において、本発明を具体的且つ更に詳細に説明する。下記実施例は本発明の説明のためのみのものであり、これらの実施例により本発明の技術的範囲が限定されるものではない。
尚、本実施例中及び明細書中で使用する有効率とは以下の式を用いて計算された数値を意味する。
有効率＝｛１−（ワクチン接種試験群の死亡率／無処理対照群の死亡率）｝×１００（％）
【００１７】
１．菌株の培養
１）冷水病の菌株（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌｕｍ  ＰＨ−０４２４株）の培養
冷水病の菌株としては、２００４年に広島県内の養殖場で冷水病のアユから分離された菌株（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌｕｍ  ＰＨ−０４２４株）を用いた。
該菌株を改変サイトファーガ培地を用い、１５℃で４８時間振盪培養（１１０ｒｐｍ）することによりＰＨ−０４２４株培養液を調製した。
得られたＰＨ−０４２４株培養液を以下の実験（感染実験）に用いた。
２）せっそう病の菌株（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ  ＯＨ−０１０４株）の培養
せっそう病の菌株としては、２００１年に広島県内の養殖場でせっそう病のアマゴから分離された菌株（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ  ＯＨ−０１０４株）を用いた。
該菌株をＴＳＢ培地を用い、１８℃で４８時間振盪培養（１１０ｒｐｍ）することによりＯＨ−０１０４株培養液を調製した。
得られたＯＨ−０１０４株培養液を以下の実験（感染実験）に用いた。
【００１８】
２．ワクチンの作成
実験に用いたワクチンは全て広島県立水産海洋技術センターで作成したものを用いた。１）冷水病ワクチンの作成
冷水病の菌株としては、２００４年に広島県内の養殖場で冷水病のアユから分離された菌株（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌｕｍ  ＰＨ−０４２４株）を用いた。
該菌株を改変サイトファーガ培地を用い、１５℃で４８時間振盪培養（１１０ｒｐｍ）したＰＨ−０４２４株培養液に、０．３％量のホルマリンを入れて不活化したものを冷水病ワクチン液とし、以下の実験に使用した。
２）せっそう病ワクチンの作成
せっそう病の菌株としては、２００１年に広島県内の養殖場でせっそう病のアマゴから分離された菌株（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ  ＯＨ−０１０４株）を用いた。
該菌株をＴＳＢ培地を用い、１８℃で４８時間振盪培養（１１０ｒｐｍ）したＯＨ−０１０４株培養液に、０．６％量のホルマリンを入れて不活化したものをせっそう病ワクチン液とし、以下の実験に使用した。
【００１９】
実施例１：アユにおける冷水病ワクチンの効果（Ｉ）
アユは平均体重２．３ｇの人工生産アユを用いた。またワクチン処理時の水温は１５．５℃であった。
試験区として、以下の５試験区を設定した。
・対照区：２９ｍｇ／Ｌの高濃度溶存酸素水（高ＤＯ水）１０Ｌにアユ６０尾を入れ１０分間処理した。
・対照ワクチン区：高ＤＯ水（２９ｍｇ／Ｌ）で１０倍に希釈した１０Ｌのワクチン液にアユ６０尾を入れ１０分間処理した。
・超音波ワクチン同時処理区：高ＤＯ水（２９ｍｇ／Ｌ）で１０倍に希釈した１０Ｌのワクチン液にアユ６０尾を入れ、２８０ｍＷ／ｃｍ2  １０秒出力、２０秒休止を３回繰り
返した。超音波出力前に３０秒間、出力後に８分間のワクチン液のみでの静置を行った。・超音波ワクチン１時間後処理区：上記と同様の超音波処理を飼育水のみで行い、１時間後に高ＤＯ水で１０倍に希釈した１０Ｌのワクチン液にアユ６０尾を入れ１０分間処理した。
・超音波ワクチン１８時間後処理区：上記と同様の超音波処理を飼育水のみで行い、１８時間後に高ＤＯ水で１０倍に希釈した１０Ｌのワクチン液にアユ６０尾を入れ１０分間処理した。
ワクチン処理１７日後にそれぞれの試験区のアユをＰＨ−０４２４株培養液（１０8ｃ
ｆｕ／ｍＬ）に３０分間収容し、その後３週間飼育を行い冷水病による死亡を観察し、その死亡数、死亡率（％）及び有効率（％）を表１に示し、累積死亡率（％）の経時変化を図２に示した。
【表１】
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【００２０】
実施例２：アユにおける冷水病ワクチンの効果（ＩＩ）
アユは平均体重３．８ｇの人工生産アユを用いた。またワクチン処理時の水温は１７．０℃であった。
試験区として、以下の４試験区を設定した。
・対照区：３０ｍｇ／Ｌの高濃度溶存酸素水（高ＤＯ水）１０Ｌにアユ４３尾を入れ１０分間処理した。
・対照ワクチン区：高ＤＯ水（３０ｍｇ／Ｌ）で１０倍に希釈した１０Ｌのワクチン液にアユ４３尾を入れ１０分間処理した。
・超音波ワクチン（２８０ｍＷ／ｃｍ2）処理区：高ＤＯ水（３０ｍｇ／Ｌ）で１０倍に
希釈した１０Ｌのワクチン液にアユ４３尾を入れ、２８０ｍＷ／ｃｍ2  １０秒出力、２
０秒休止を３回繰り返した。超音波出力前に３０秒間、出力後に８分間のワクチン液のみでの静置を行った。
・超音波ワクチン（５００ｍＷ／ｃｍ2）処理区：高ＤＯ水（３０ｍｇ／Ｌ）で１０倍に
希釈した１０Ｌのワクチン液にアユ４３尾を入れ、５００ｍＷ／ｃｍ2  １０秒出力を一
回行った。超音波出力前に３０秒間、出力後に９分２０秒間のワクチン液のみでの静置を行った。
ワクチン処理２０日後にそれぞれの試験区のアユをＰＨ−０４２４株培養液（１０8ｃ
ｆｕ／ｍＬ）に６０分間収容し、その後１８日間飼育を行い冷水病による死亡を観察し、その死亡数、死亡率（％）及び有効率（％）を表２に示し、累積死亡率（％）の経時変化を図３に示した。
【表２】
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【００２１】
実施例３：ヤマメにおけるせっそう病ワクチンの効果
試験には平均体重２５ｇのヤマメを用いた。
実験は以下の３条件で行った。
・通常のワクチン処理を行なう試験区
・高濃度溶存酸素水のみを用いたワクチン処理を行う試験区
・高濃度溶存酸素水と超音波処理を組み合わせたワクチン処理を行う試験区
超音波処理の条件は、２８ｋＨｚ、８００ｍＷ／ｃｍ2の６分間パルス（３０秒出力、
３０秒休み）で、処理時には３０ｍｇ／Ｌの高濃度溶存酸素水を用いた。
ワクチンは１０倍に希釈して用いたが、その際の水温は１４℃であった。
各試験区における試験内容の詳細を表３に示した。
尚、表中、高ＤＯ水は、溶存酸素量３０ｍｇ／Ｌの高濃度溶存酸素水を意味し、また、飼育水における溶存酸素量は８．５ｍｇ／Ｌであった。
【表３】
2007215475.tif 000005
ワクチン処理後の魚は１７日間の給餌飼育を行った後、培養したＯＨ−０１０４株を含む飼育水（１０4.4ｃｆｕ／ｍＬ）に１時間収容した。その後、２７日間飼育を行い、せ
っそう病による死亡を観察し、その死亡数、死亡率（％）及び有効率（％）を表４に示し、累積死亡率（％）の経時変化を図４に示した。
【表４】
2007215475.tif 000006
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本発明の方法に使用する装置の１例を示した図である。
【図２】実施例１で行ったアユにおける冷水病ワクチンの効果を試験した際の、各試験区における累積死亡率（％）の経時変化を示したグラフである。
【図３】実施例２で行ったアユにおける冷水病ワクチンの効果を試験した際の、各試験区における累積死亡率（％）の経時変化を示したグラフである。
【図４】実施例３で行ったヤマメにおけるせっそう病ワクチンの効果を試験した際の、各試験区における累積死亡率（％）の経時変化を示したグラフである。
【符号の説明】
【００２３】
１１  発振器
１２  振動子
１３  配線
２１  酸素ボンベ
２２  散気装置
２３  レギュレーター
２４  配管
３１  高濃度溶存酸素水（ワクチン含む）
３２  魚類
４１  容器
４２  容器蓋
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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