(57)【要約】【課題】眼精疲労の予防または回復のために用いられる眼精疲労改善組成物を提供すること。【解決手段】式  【化１】2007215465.tif 000009で表されるクロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩とビタミン類、アントシアニン類、カロテノイド類（クロセチン、ビタミンＡを除く）、イチョウ葉エキス、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸から選ばれる少なくとも一種類を含有することを特徴とする眼精疲労改善組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2007215465.tif 000008
で表されるクロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩とビタミン類、アントシアニン類、カロテノイド類（クロセチン、ビタミンＡを除く）、イチョウ葉エキス、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸から選ばれる少なくとも一種類を含有することを特徴とする眼精疲労改善組成物。
【請求項２】
飲食品である請求項１に記載の眼精疲労改善組成物。
【請求項３】
眼精疲労の予防または回復を目的とする健康食品または特定保健用食品である、請求項２に記載の眼精疲労改善組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩を含む眼精疲労改善組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
眼精疲労とは、目が疲れる、目が痛い、物が見えにくい、めまいがする、頭が痛いなどの種々の自覚症状が、休息によっても解消しない状態を指している。眼精疲労を起こす原因として、読書、注視作業、観察作業などによる目の酷使や精神的緊張が挙げられるが、近年ＶＤＴ（Ｖｉｓｕａｌ  Ｄｉｓｐｌａｙ  Ｔｅｒｍｉｎａｌ）作業に伴うものが非常に多くなっている。眼精疲労の発生機序については未だ不明な点が多いが、多くは調節異常などに起因する調節性眼精疲労であり、長時間の注視作業などにより毛様体筋が過度の緊張状態に陥り、目の調節機能が低下することが要因となって起こることが指摘されている。
【０００３】
従来、このような眼精疲労に対しては、ビタミンＢ1、ビタミンＢ6、ビタミンＢ12などを含有した点眼剤が汎用されている。また、日常手軽に摂取でき、目の疲れに効果的な機能性飲食品としては、例えば桑実より抽出したアントシアニンを有効成分とする眼精疲労回復剤（特許文献１参照）、野菊花に含まれる新規化合物、それを含む野菊花抽出エキスを含む眼精疲労改善機能性食品（特許文献２参照）、カシスアントシアニンを含有する機能性飲食品（特許文献３参照）、アスタキサンチン及び／又はそのエステルからなる眼の調節機能障害に対する改善作用を有する飲食品（特許文献４参照）などが提案されている。
【０００４】
一方、クロセチンについては、ウサギの網膜の血流を増加させ、網膜の機能回復を手助けすること（非特許文献１参照）やＰＧＥ２により誘発されたウサギの目の炎症を濃度依存的に抑制すること（非特許文献２参照）などが報告されている。しかし、クロセチンの眼精疲労改善効果については明らかとなっていなかった。
【０００５】
【特許文献１】特開２００１−１７８４０８号公報、請求項３
【特許文献２】特開平１１−２４６４５５号公報、請求項７および９
【特許文献３】国際公開第０１／００１７９８号明細書
【特許文献４】国際公開第０２／０９４２５３号明細書
【非特許文献１】Ｘｕａｎ  Ｂ，外４名，「Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｒｏｃｉｎ      ａｎａｌｏｇｓ  ｏｎ  ｏｃｕｌａｒ  ｂｌｏｏｄ  ｆｌｏｗ  ａｎｄ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ」,Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｐｈａｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１９９９，ｖｏｌ．１５，ｐ．１４３−１５２
【非特許文献２】Ｎａｇａｋｉ  Ｙ，外５名，「Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｇａｒｄｅｎｉａｅ  Ｆｒｕｃｔｕｓ  ｅｘｔｒａｃｔ  ａｎｄ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｒｏｃｅｔｉｎ  ｏｎ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｆｌａｒｅ  ｉｎ  ｐｉｇｍｅｎｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔｓ」，Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００３，ｖｏｌ．３１，ｐ．７２９−７３８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、眼精疲労の予防または回復のために用いられる眼精疲労改善組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、カロテノイド色素の一種であるクロセチンとビタミン類、アントシアニン類、カロテノイド類（クロセチン、ビタミンＡを除く）、イチョウ葉エキス、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸から選ばれる少なくとも一種類とを組み合わせることにより、優れた眼精疲労改善効果を有する組成物が得られることを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
即ち、本発明は、
（１）式
【化１】
2007215465.tif 000002
で表されるクロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩とビタミン類、アントシアニン類、カロテノイド類（クロセチン、ビタミンＡを除く）、イチョウ葉エキス、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸から選ばれる少なくとも一種類を含有することを特徴とする眼精疲労改善組成物、
（２）飲食品である前記１に記載の眼精疲労改善組成物、
（３）眼精疲労の予防または回復を目的とする健康食品または特定保健用食品である、前記２に記載の眼精疲労改善組成物、
からなっている。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の眼精疲労改善組成物は眼精疲労の諸症状の軽減に優れた効果がある。この効果はクロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩とビタミン類、アントシアニン類、カロテノイド類（クロセチン、ビタミンＡを除く）、イチョウ葉エキス、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸から選ばれる少なくとも一種類とを組み合わせることにより得られるものである。
本発明の飲食品を、眼精疲労を誘発する原因となる作業の前、作業中または作業後に摂取することにより、眼精疲労を予防しまたは回復することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明で用いられるクロセチンは、式
【化２】
2007215465.tif 000003
で表される化合物である。このクロセチンは、通常、カロテノイド系の黄色色素であるクロシン（クロセチンのジゲンチオビオースエステル）を加水分解することにより得られる。クロシンは、アカネ科クチナシ（Ｇａｒｄｅｎｉａ  ａｕｇｕｓｔａ  ＭＥＲＲＩＬ  ｖａｒ．  ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒａ  ＨＯＲＴ．，Ｇａｒｄｅｎｉａ  ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ  ＥＬＬＩＳ）の果実、サフランの柱頭の乾燥物などに含まれるが、クロシンを得るための工業的原料としてはクチナシの果実が好ましく用いられる。
【００１０】
本発明において、上記植物基原からクロシンを抽出する方法に制限はなく、例えば、粉砕されたクチナシの乾燥果実から水またはアルコール（例えば、メタノール、エタノールなど） 、あるいはそれらの混合液を用いて抽出するなどの公知の方法が用いられる。抽出条件は、例えば水・アルコール混合液を用いた場合、室温（約０〜３０℃）〜５０℃で約１〜１８時間が好ましく、約３０〜４０℃で約２〜４時間がより好ましい。抽出操作は通常複数回繰り返される。
【００１１】
クロシンの加水分解は、定法に従って行われてよく、通常、酸、アルカリまたは適当な加水分解酵素の作用で行われる。ここで酸としては、例えば塩酸、硫酸およびリン酸などが挙げられ、アルカリとしては例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウムなどが挙げられる。また加水分解酵素としては、β−グルコシダーゼなどが挙げられる。
【００１２】
工業的には、クロシンの加水分解がアルカリによる加水分解であるのが好ましい。
また、上記加水分解は、攪拌および／または加熱下で行われてもよい。好ましくは攪拌下、約２０〜７０℃、好ましくは約４０〜６０℃に加熱し、約１〜２４時間、好ましくは約３〜５時間行われる。このようにして、加水分解することにより、その分解が促進され得る。
【００１３】
クロシンの加水分解がアルカリによる加水分解である場合、通常、加水分解終了後、反応液に塩酸、硫酸またはリン酸などの無機酸、もしくはクエン酸などの有機酸の水溶液を適量加え、液性をｐＨ約４．０以下、好ましくはｐＨ約１．０〜３．０にするか、または反応液を塩酸、硫酸またはリン酸などの無機酸、もしくはクエン酸などの有機酸の水溶液に加え、液性をｐＨ約４．０以下、好ましくはｐＨ約１．０〜３．０にすることで、クロセチンを析出させる。その後、クロセチンを析出させた混合液を、遠心分離するかあるいはろ紙もしくはろ布に通してろ過することにより、クロセチンをペースト状の固形物として回収できる。
【００１４】
また、クロシンの加水分解が酸による加水分解である場合、通常、加水分解と同時にクロセチンが析出するため、反応液は懸濁液として得られる。反応終了後、得られた懸濁液を、遠心分離するかあるいはろ紙もしくはろ布に通してろ過することにより、クロセチンをペースト状の固形物として回収できる。
【００１５】
上記のようにして得られたクロセチン（ペースト状の固形物）には、通常、酸、中和塩および原料由来の不純物が固形物表面に付着しているため、該不純物を除去する目的で、洗浄処理が行われる。該処理は、例えば、上記ペースト状の固形物を十分量の水を用いて水洗するなど、公知の方法を用いて行ってよい。次に、例えば棚式の通風乾燥機または真空乾燥機などを用いて、好ましくは窒素ガスの雰囲気下約５０℃を越えない温度で、例えば水洗した固形物を乾燥し、固形物に残留する水を除去する。
【００１６】
しかしながら、このようにして得られたクロセチンでさえも、クロセチン以外の物質、例えば脂質およびその分解物、クロロゲン酸などのポリフェノール類、および加水分解により生成し、洗浄で完全に除去されなかったグルコース、ゲンチオビオースなどの糖類を含んでいることがあるため、該クロセチンを更に精製するのが好ましい。ここで、該クロセチンを精製する方法に制限は無く、例えばカラムクロマトグラフィー、再結晶などの公知の方法が用いられる。
【００１７】
本発明で用いられるクロセチンは、純度約７０質量％以上のクロセチンであるのが好ましく、純度約９０質量％以上のクロセチンであるのがより好ましく、純度約９５質量％以上のものであるのが最も好ましい。尚、ここでクロセチンの純度は、純品のクロセチンの色価を基準として算出される。色価は、後記実施例に記載の［色価測定方法］で測定される値である。
【００１８】
本発明において、クロセチンの薬理学的に許容しうる塩としては、例えば、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属塩、ピリジン、ジメチルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミンなどの医薬的に許容される有機アミノ化合物の塩などが挙げられる。
【００１９】
本発明の組成物および飲食品１００質量％中に配合されるクロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩の量は、純度１００質量％のクロセチンに換算して、通常約０．０００１〜５０質量％、好ましくは約０．００１〜２０質量％、より好ましくは約０．０１〜１０質量％であり、クロセチンの１日当たりの摂取量などを考慮して適宜決定されるのが好ましい。クロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩の成人１日当たりの摂取量は、純度１００質量％のクロセチンに換算して、約０．１〜５００ｍｇ、好ましくは約１〜２００ｍｇ、さらに好ましくは約２〜５０ｍｇの範囲である。
【００２０】
本発明で用いられるビタミン類としては、例えば動植物から抽出、精製して得られたもの、発酵法あるいは合成法で得られたものなどが挙げられ、いずれも好ましく用いることができる。本発明で用いられるビタミン類の具体例としては、例えばビタミンＡ、ビタミンＢ1類（塩酸チアミン、硝酸チアミン、硝酸ビスチアミン、塩酸ジセチアミン、塩酸フルスルチアミン、ベンフォチアミンなど）、ビタミンＢ2類（リボフラビン、リン酸リボフラビンナトリウム、酪酸リボフラビンなど）、ビタミンＢ6類（塩酸ピリドキシン、リン酸ピリドキサールなど）、ビタミンＢ12類（シアノコバラミンなど）、ナイアシン、パントテン酸類（パンテノール、パントテン酸カルシウム、パントテン酸ナトリウムなど）、ビオチン、葉酸、ニコチン酸アミド、ビタミンＣ類（Ｌ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸カルシウムなど）、ビタミンＥ類（トコフェロール、コハク酸トコフェロール、コハク酸トコフェロールカルシウムなど）などが挙げられる。上記ビタミン類は、一種類で用いても良いし、二種類以上を任意に組み合わせて用いても良い。
本発明の組成物または飲食品１００質量％中に配合されるビタミン類の量は、通常０．０００１〜６０質量％、好ましくは０．００１〜３０質量％の範囲である。また、ビタミン類の成人１日当たりの摂取量はそれぞれ許容上限摂取量が定められており、ビタミンの種類によって異なるが、少なくても約０．８μｇ、多くても約８００ｍｇの範囲である。
【００２１】
アントシアニンはポリフェノールの一種で、アントシアニジンをアグリコンとする配糖体であり、植物の花、果実、種子、葉、茎、根などに含まれ、赤〜紫〜青色を呈する色素として植物界に広く存在する。本発明で用いられるアントシアニン類の具体例としては、例えば赤キャベツ、赤米、アカダイコン、アズキ、黒大豆種皮、シソ、ハイビスカス、ブラックキャロット、ムラサキイモ、ムラサキトウモロコシ、ムラサキヤマイモなどを基原とする抽出物、エルダーベリー、イチゴ、イチジク、カウベリー、カシス、グースベリー、クランベリー、サーモンベリー、スィムブルーベリー、ストロベリー、ダークスィートチェリー、チェリー、ハルクベリー、ビルベリー、ブドウ、ブラックカーラント、ブラックベリー、ブルーベリー、プラム、ホワートルベリー、ボイセンベリー、マルベリー、ラズベリー、レッドカーラント、ローガンベリーなどを基原とする濃縮果汁または抽出物などが挙げられる。本発明で用いられるアントシアニン類としては、上記植物由来のアントシアニンを含む粗製品、精製品、またこれらを含有する製剤などが挙げられ、いずれも好ましく用いることができる。
本発明の組成物または飲食品１００質量％中に配合されるアントシアニン類の量は、通常０．００１〜６０質量％、好ましくは０．１〜４０質量％の範囲である。また、アントシアニン類の成人１日当たりの摂取量は、通常１〜５００ｍｇ、好ましくは１０〜３００ｍｇの範囲である。
【００２２】
本発明で用いられるカロテノイド類としては、例えば動植物から抽出、精製して得られたもの、発酵法あるいは合成法で得られたものなどが挙げられ、いずれも好ましく用いることができる。本発明で用いられるカロテノイド類の具体例としては、例えばβ−カロテン、α−カロテン、γ−カロテン、β−アポ−８′−カロテナール、β−アポ−１０′−カロテナール、β−アポ−８′−カロテン酸、シトラナキサンチン、リコピン、ゼアキサンチン、クリプトキサンチン、エキネノン、３−ヒドロキシ−β−カロテン、フコキサンチン、ルテイン、アスタキサンチン、カンタキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、ビキシン、並びにこれらの群の水酸基またはカルボキシル基含有化合物のエステル類などが挙げられる。また天然カロテノイドとしては、例えばアナトー色素、イモカロテン、クチナシ黄色素、エビ色素、オキアミ色素、オレンジ色素、カニ色素、デュナリエラカロテン、トウガラシ色素（別名：パプリカ色素）、トウモロコシ色素、トマト色素、ニンジンカロテン、パーム油カロテン、ファフィア色素、ベニノキ末色素、ヘマトコッカス藻色素、マリーゴールド色素などを挙げることができる。但し、クロセチン、ビタミンＡは除かれる。上記カロテノイド類は、一種類で用いても良いし、二種類以上を任意に組み合わせて用いても良い。
本発明の組成物または飲食品１００質量％中に配合されるカロテノイド類の量は、通常０．０００１〜５０質量％、好ましくは０．００１〜２０質量％の範囲である。また、カロテノイド類の成人１日当たりの摂取量は、通常０．１〜１００ｍｇ、好ましくは１〜５０ｍｇの範囲である。
【００２３】
イチョウ葉エキスは、中国を原産地とするイチョウ科の植物であるイチョウ（Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ）の葉の抽出物であり、その主要成分はケルセチンなどのフラボノイドである。本発明で用いられるイチョウ葉エキスとしては、上記成分を含む粗製品、精製品、またこれらを含有する製剤などが挙げられ、いずれも好ましく用いることができる。本発明で用いられるイチョウ葉エキスの好ましい態様としては、例えば上記植物の葉の乾燥粉末の水および／またはアルコール抽出液、該抽出液の濃縮液および濃縮乾固物、該濃縮液または濃縮乾固物を賦形剤（例えば、澱粉分解物、乳糖、アラビアガムなど）と共に水溶液とし、該水溶液を常法により噴霧乾燥して得られる粉末などが挙げられる。
本発明の組成物または飲食品１００質量％中に配合されるイチョウ葉エキスの量は、通常０．０１〜６０質量％、好ましくは０．１〜３０質量％の範囲である。また、イチョウ葉エキスの１日当たりの摂取量は、通常０．１〜５００ｍｇ、好ましくは１〜３００ｍｇの範囲である。
【００２４】
ｎ−３系多価不飽和脂肪酸は、炭素原子間の結合に二重結合を２つ以上含む脂肪酸であって、末端メチル基の炭素原子をｎ、２番目の炭素原子をｎ−１とするとき、最初の二重結合がｎ−２とｎ−３の炭素原子間に存在する脂肪酸である。本発明で用いられるｎ−３系多価不飽和脂肪酸としては、例えばα−リノレン酸、（エ）イコサペンタエン酸、イワシ酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。本発明で用いられるｎ−３系多価不飽和脂肪酸の好ましい態様としては、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸そのまま、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸を構成脂肪酸とするトリグリセライド（例えばシソ油、魚油など）、または該トリグリセライドを賦形剤（例えば、澱粉分解物、乳糖、アラビアガムなど）を含む水溶液中に加えて乳化し、該乳化液を常法により噴霧乾燥して得られる粉末油脂などが挙げられる。
本発明の組成物または飲食品１００質量％中に配合されるｎ−３系多価不飽和脂肪酸の量は、通常１〜９０質量％、好ましくは１０〜９０質量％の範囲である。また、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸の１日当たりの摂取量は、通常１〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇの範囲である。
【００２５】
本発明の眼精疲労改善組成物および飲食品において、ビタミン類、アントシアニン類、カロテノイド類（クロセチン、ビタミンＡを除く）、イチョウ葉エキス、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸は一種類で用いても良いし、二種類以上を任意に組み合わせて用いても良い。
【００２６】
本発明の眼精疲労改善組成物の剤形としては、例えば散剤、顆粒剤、錠剤、ソフトカプセル、ハードカプセルなどが挙げられる。また、飲食品としては、固形食品、クリーム状またはジャム状の半流動食品、ゲル状食品、飲料などあらゆる食品形態にすることが可能であり、例えば、清涼飲料、コーヒー、紅茶、乳飲料、乳酸菌飲料、ドロップ、キャンディー、チューインガム、チョコレート、グミ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、水羊羹、ゼリー菓子、クッキーなどとすることができる。これら各種組成物および飲食品は、眼精疲労の蓄積および付随して発生する諸症状を予防しまたは回復することを目的とする健康食品または特定保健用食品として有用である。
【００２７】
また、上記組成物および飲食品には、本発明の効果を阻害しない限りにおいて、賦形剤（乳糖、デキストリン、コーンスターチ、結晶セルロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステルなど）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロースカルシウム、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、アラビアガム液など）、溶解補助剤（アラビアガム、ポリソルベート８０など）、乳化剤（グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルなど）、酸化防止剤（ＢＨＴ、ＢＨＡ、アスコルビン酸、トコフェロールなど）、保存料（ソルビン酸、パラオキシ安息香酸メチル、亜硫酸ナトリウムなど）、増粘安定剤（アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウムなど）、甘味料（砂糖、果糖、ブドウ糖液糖、ハチミツ、アスパルテームなど）、酸味料（クエン酸、乳糖、ＤＬ−リンゴ酸など）、調味料（ＤＬ−アラニン、５´−イノシン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン酸ナトリウムなど）、着色料（β−カロテン、食用タール色素、リボフラビンなど）、香料（ハッカ、ストロベリー香料など）、ミネラル類、アミノ酸類などを使用することができる。
【００２８】
本発明の組成物または飲食品を経口的に摂取する場合、クロセチンまたはその薬理学的に許容しうる塩およびこれと組み合わされる各成分のそれぞれの一日あたりの摂取量の範囲内で、１回または数回に分けて摂取すると良い。但し、実際の用量は、目的や摂取者の状況（性別、年齢、体重、ＢＭＩ等）を考慮して決められるべきである。
【実施例】
【００２９】
以下に本発明を実施例に基づいてより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３０】
［製造例１］
（１）粉砕したクチナシの乾燥果実３００ｇにメタノール・水混合液（１：１）６００ｍＬを加え、室温で３時間攪拌した後吸引ろ過した。ろ過後、抽出残にメタノール・水混合液（１：１）６００ｍＬを加え、室温で３０分間攪拌した後吸引ろ過する操作を２回繰り返し、ろ液として計約１８００ｍＬの抽出液を得た。この抽出液を、ロータリーエバポレーターを用いて約６０℃、約４ｋＰａの条件で濃縮し、クロシンを含む濃縮物（色価＝約５７３）約１００ｇを得た。
（２）得られた濃縮物と４０質量％水酸化ナトリウム水溶液３４ｇとを混合し、撹拌下５０℃で約３．５時間加水分解反応を行った。反応終了後、反応液を４質量％リン酸水溶液８４０ｍＬに加えて酸性とした後、そのまま約３時間室温で放置した。
（３）析出した沈殿を遠心分離（１０，０００×ｇ、１０分間）により回収し、更に水２００ｍＬで洗浄し、遠心分離する操作を２回繰り返し、得られたペースト状の固形物を５０℃で約８時間真空乾燥した。
（４）上記（１）〜（３）を５回繰り返して実施し、得られた結晶を集めて一つとし、粗クロセチン約１２ｇを得た。このものの色価は約１２，５００であった。
（５）（４）で得られた粗クロセチン約１０ｇにジメチルホルムアミド１８０ｍＬを加え、８０℃で溶解した。不溶物を定量ろ紙（Ｎｏ．５Ｃ，アドバンテック東洋社）でろ過し、ろ液を１０℃で３日間放置した。次に生成したクロセチンの結晶を含む母液をガラスろ過器Ｎｏ．３でろ過し、メタノール２００ｍＬで洗浄後、結晶を５０℃で真空乾燥し、クロセチン精製物（以下、精製クロセチンという。）を約１．６ｇ得た。このものの色価は３４，２００であった。
【００３１】
［精製クロセチンの純度測定］
上記精製クロセチン約０．５ｇを更にジメチルホルムアミドで再結晶を行い、得られたクロセチンの結晶（色価３５，７００）を、「純品のクロセチン」とし、以下の式にて、精製クロセチンの純度を算出した。
【数１】
2007215465.tif 000004
算出された精製クロセチンの純度は９５．８％であった。
【００３２】
尚、色価（Ｅ10%1cm）は『化学的合成品以外の食品添加物  自主規格（第二版）』、日本食品添加物協会編、「クチナシ黄色素」を参考にして、以下の方法で測定した。
［色価測定方法］
測定する吸光度が０．３〜０．７の範囲になるように、試料を精密に量り、Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（５０ｍＭ  Ｎａ2ＣＯ3−５０ｍＭ  Ｎａ2Ｂ4Ｏ7，ｐＨ１０．０）に溶かして正確に５００ｍｌとする。溶解しにくい場合は、超音波処理により溶解する。その１０ｍｌを正確に量り、Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（５０ｍＭ  Ｎａ2ＣＯ3−５０ｍＭ  Ｎａ2Ｂ4Ｏ7，ｐＨ１０．０）を加えて５０ｍｌとし、試験溶液とする。Ｋｏｌｔｈｏｆｆ氏緩衝液（５０ｍＭ  Ｎａ2ＣＯ3−５０ｍＭ  Ｎａ2Ｂ4Ｏ7，ｐＨ１０．０）を対照とし、液層の長さ１ｃｍで４２０ｎｍ付近の極大吸収部における吸光度Ａを測定し、次式により色価を求める。
【数２】
2007215465.tif 000005
【００３３】
［製造例２］
精製クロセチン１質量部、ビタミンＢ1（ＤＳＭ社製）１質量部、微結晶セルロース（商品名：アビセルＰＨ−１０１；旭化成ケミカルズ社製）５８質量部、コーンスターチ（商品名：日食コーンスターチ；日本食品化工社製）１４質量部、乳糖（商品名：フローラック；サンフコ社製）２５質量部、ショ糖脂肪酸エステル（商品名：リョートーシュガーエステルＳ−３７０Ｆ；三菱化学フーズ社製）１質量部を均一に混合し、試料とした。該試料を回転式小型打錠機（型式：ＡＰ−ＳＳ；畑鐵工所社製）を用い、１錠２５０ｍｇ、１０ｍｍφ、打錠圧１００ＭＰａで打錠し、１錠当たりクロセチン約２．４ｍｇ、ビタミンＢ1約２．５ｍｇ含む錠剤（実施品１）を得た。
【００３４】
［製造例３］
製造例２に記載されているビタミンＢ1１質量部に替えて、ビタミンＢ12（ＤＳＭ社製）１質量部を使用する以外は製造例２と同様に実施し、１錠当たりクロセチン約２．４ｍｇ、ビタミンＢ12約２．５ｍｇ含む錠剤（実施品２）を得た。
【００３５】
［製造例４］
精製クロセチン１質量部、ビタミンＥ（商品名：理研Ｅオイル８０５；理研ビタミン社製，α−トコフェロール約４１％含有）２４．４質量部、ＭＣＴ（商品名：アクターＭ−１；理研ビタミン社製）７４．６質量部を混合し、ＴＫホモミキサー（型式：ＭＡＲＫＩＩ；特殊機化工業社製）を用い、１００００ｒｐｍで１５分間均質化し、充填液を得た。該充填液２５０ｍｇを常法によりソフトカプセルに充填し、１カプセル当たりクロセチン約２．４ｍｇ、α−トコフェロール約２５ｍｇ含むソフトカプセル（実施品３）を得た。
【００３６】
［製造例５］
製造例２に記載されているビタミンＢ1１質量部、微結晶セルロース５８質量部に替えて、ブルーベリーエキス（商品名：ブルーベリーエキス末；タマ生化学社製，アントシアニジンとして約２５％含有）２０質量部、微結晶セルロース（商品名：アビセルＰＨ−１０１；旭化成ケミカルズ社製）３９質量部を使用する以外は製造例２と同様に実施し、１錠当たりクロセチン約２．４ｍｇ、アントシアニジンとして約１２．５ｍｇ含む錠剤（実施品４）を得た。
【００３７】
［製造例６］
製造例４に記載されているビタミンＥ２４．４質量部、ＭＣＴ７４．６質量部に替えて、ヘマトコッカス藻抽出物（商品名：アスタリールオイル５０Ｆ；富士化学工業社製，アスタキサンチン約５％含有）２０質量部、ＭＣＴ（商品名：アクターＭ−１；理研ビタミン社製）７９質量部を使用する以外は製造例２と同様に実施し、１カプセル当たりクロセチン約２．４ｍｇ、アスタキサンチン約２．５ｍｇ含むソフトカプセル（実施品５）を得た。
【００３８】
［製造例７］
製造例４に記載されているビタミンＥ２４．４質量部、ＭＣＴ７４．６質量部に替えて、マリーゴールド抽出物（商品名：ルテイン２０；理研ビタミン社製，ルテインとして約２０％含有）５質量部、ＭＣＴ（商品名：アクターＭ−１；理研ビタミン社製）９４質量部を使用する以外は製造例２と同様に実施し、１カプセル当たりクロセチン約２．４ｍｇ、ルテインとして約２．５ｍｇ含むソフトカプセル（実施品６）を得た。
【００３９】
［製造例８］
製造例２に記載されているビタミンＢ1１質量部、微結晶セルロース５８質量部に替えて、イチョウ葉エキス（商品名：イチョウ葉エキスパウダーＨ；日本新薬社製，フラボノイド約２４％含有）１２質量部、微結晶セルロース（商品名：アビセルＰＨ−１０１；旭化成ケミカルズ社製）４７質量部を使用する以外は製造例２と同様に実施し、１錠当たりクロセチン約２．４ｍｇ、フラボノイド約７．２ｍｇ含む錠剤（実施品７）を得た。
【００４０】
［製造例９］
製造例４に記載されているビタミンＥ２４．４質量部、ＭＣＴ７４．６質量部に替えて、微細藻油（商品名：理研藻ＤＨＡオイル３８；理研ビタミン社製，ＤＨＡ約３８％含有）７９質量部、ＭＣＴ（商品名：アクターＭ−１；理研ビタミン社製）２０質量部を使用する以外は製造例２と同様に実施し、１カプセル当たりクロセチン約２．４ｍｇ、ＤＨＡ約７５ｍｇ含むソフトカプセル（実施品８）を得た。
【００４１】
［製造例１０］
精製クロセチン１質量部、微結晶セルロース（商品名：アビセルＰＨ−１０１；旭化成ケミカルズ社製）５９質量部、コーンスターチ（商品名：日食コーンスターチ；日本食品化工社製）１４質量部、乳糖（商品名：フローラック；サンフコ社製）２５質量部、ショ糖脂肪酸エステル（商品名：リョートーシュガーエステルＳ−３７０Ｆ；三菱化学フーズ社製）１質量部を均一に混合し、試料とした。該試料を回転式小型打錠機（型式：ＡＰ−ＳＳ；畑鐵工所社製）を用い、１錠２５０ｍｇ、１０ｍｍφ、打錠圧１００ＭＰａで打錠し、１錠当たりクロセチン約２．４ｍｇ含む錠剤（比較品１）を得た。
【００４２】
［製造例１１］
製造例１０に記載されている精製クロセチン１質量部に替えて、ビタミンＢ1（ＤＳＭ社製）１質量部を使用する以外は製造例１０と同様に実施し、１錠当たりヒタミンＢ1約２．５ｍｇ含む錠剤（比較品２）を得た。
【００４３】
［製造例１２］
製造例１０に記載されている精製クロセチン１質量部に替えて、ビタミンＢ12（ＤＳＭ社製）１質量部を使用する以外は製造例１０と同様に実施し、１錠当たりビタミンＢ12約２．５ｍｇ含む錠剤（比較品３）を得た。
【００４４】
［製造例１３］
ビタミンＥ（商品名：理研Ｅオイル８０５；理研ビタミン社製，α−トコフェロール約４１％含有）２４．４質量部、ＭＣＴ（商品名：アクターＭ−１；理研ビタミン社製）７５．６質量部を混合して均一に溶解し、充填液を得た。該充填液を常法によりソフトカプセルに２５０ｍｇ充填し、１カプセル当たりα−トコフェロール約２５ｍｇ含むソフトカプセル（比較品４）を得た。
【００４５】
［製造例１４］
製造例１０に記載されている精製クロセチン１質量部、微結晶セルロース５９質量部に替えてブルーベリーエキス（商品名：ブルーベリーエキス末；タマ生化学社製，アントシアニジンとして約２５％含有）２０質量部、微結晶セルロース（商品名：アビセルＰＨ−１０１；旭化成ケミカルズ社製）４０質量部を使用する以外は製造例１０と同様に実施し、１錠当たりアントシアニジンとして約１２．５ｍｇ含む錠剤（比較品５）を得た。
【００４６】
［製造例１５］
製造例１３に記載されているビタミンＥ２４．４質量部、ＭＣＴ７５．６質量部に替えて、ヘマトコッカス藻抽出物（商品名：アスタリールオイル５０Ｆ；富士化学工業社製，アスタキサンチン約５％含有）２０質量部、ＭＣＴ（商品名：アクターＭ−１；理研ビタミン社製）８０質量部を使用する以外は製造例１３と同様に実施し、１カプセル当たりアスタキサンチン約２．５ｍｇ含むソフトカプセル（比較品６）を得た。
【００４７】
［製造例１６］
製造例１３に記載されているビタミンＥ２４．４質量部、ＭＣＴ７５．６質量部に替えて、マリーゴールド抽出物（商品名：ルテイン２０；理研ビタミン社製，ルテインとして約２０％含有）５質量部、ＭＣＴ（商品名：アクターＭ−１；理研ビタミン社製）９５質量部を使用する以外は製造例１３と同様に実施し、１カプセル当たりルテインとして約２．５ｍｇ含むソフトカプセル（比較品７）を得た。
【００４８】
［製造例１７］
製造例１０に記載されている精製クロセチン１質量部、微結晶セルロース５９質量部に替えて、イチョウ葉エキス（商品名：イチョウ葉エキスパウダーＨ；日本新薬社製，フラボノイド約２４％含有）１２質量部、微結晶セルロース（商品名：アビセルＰＨ−１０１；旭化成ケミカルズ社製）４８質量部を使用する以外は製造例１０と同様に実施し、１錠当たりフラボノイド約７．２ｍｇ含む錠剤（比較品８）を得た。
【００４９】
［製造例１８］
製造例１３に記載されているビタミンＥ２４．４質量部、ＭＣＴ７５．６質量部に替えて、微細藻油（商品名：理研藻ＤＨＡオイル３８；理研ビタミン社製，ＤＨＡ約３８％含有）７９質量部、ＭＣＴ（商品名：アクターＭ−１；理研ビタミン社製）２１質量部を使用する以外は製造例１３と同様に実施し、１カプセル当たりＤＨＡ約７５ｍｇ含むソフトカプセル（比較品９）を得た。
【００５０】
［製造例１９］
製造例１０に記載されている精製クロセチン１質量部、微結晶セルロース５９質量部に替えて、微結晶セルロース（商品名：アビセルＰＨ−１０１；旭化成ケミカルズ社製）６０質量部を使用する以外は製造例１０と同様に実施し、有効成分を含まない錠剤（プラセボ）を得た。
【００５１】
［試験例］
眼精疲労の改善に対するクロセチンと上記５種類の物質の併用効果を評価するため、クロセチンと上記５種類の物質のいずれかとを含む錠剤またはカプセル（実施品１〜８）、クロセチンまたは上記５種類の物質のいずれかを含む錠剤またはカプセル（比較品１〜９）、クロセチンおよび上記５種類の物質を含まない錠剤（プラセボ）を用いて、ＶＤＴ作業に従事しており、作業中および作業後に目の疲れなどの眼精疲労症状を自覚する健常な成人男性（３０〜４０歳）を対象にして、二重盲検試験を行った。結果を表１に示した。
【００５２】
＜試験方法＞
被験者１１０名を無作為に１群５名に群分けした。各群の被験者に３時間継続的にＶＤＴ作業させた後、被験者の眼精疲労に伴う自覚症状の程度を、１）眼が疲れている、２）眼が痛い、３）眼がかすむ、４）肩がこる、５）頭が痛い、の５項目について、ビジュアルアナログスケール法を用いて、０（感じない）から１０（極度に感じる）までを意味する１０ｃｍの線分上に線で記入させた。
次に、被験者に被検薬あるいは対照薬（プラセボ）を４錠または４カプセル服用させ、服用から１時間後に、被験者の眼精疲労に伴う自覚症状の程度を再び記入させた。
各被験者毎に、作業終了時の５項目の評価点の平均値と服用から１時間後の５項目の評価点の平均値を算出し、以下の式に基づいて症状の改善度を求めた。
【数３】
2007215465.tif 000006
【００５３】
＜結果＞
【表１】
2007215465.tif 000007
【００５４】
表１から明らかなように、プラセボ、単独投与群と比較して、クロセチンとビタミン類、アントシアニン類、カロテノイド類（クロセチン、ビタミンＡを除く）、イチョウ葉エキス、ｎ−３系多価不飽和脂肪酸から選ばれる少なくとも一種類とを組み合わせることにより、顕著な眼精疲労改善効果が確認された。