(57)【要約】【課題】本発明は、このような点に鑑みなされたもので、ストレス軽減剤、特に新生児のストレスを軽減するための薬剤を提供することを目的とする。【解決手段】上記課題は、母乳または母乳由来成分に、上記ストレスを軽減する作用を有することを見出したことによって解決した。従って、母子分離状態の新生児のストレスを軽減すべく、母乳の匂いを暴露する方法が提供される。従って、本発明は、母乳または母乳由来成分を含む、ストレス軽減剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
母乳または母乳由来成分を含む、ストレス軽減剤。
【請求項２】
前記母乳または母乳由来成分は、凍結工程を経た成分を含む、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項３】
前記母乳または母乳由来成分は、３７℃で暴露されることを特徴とする、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項４】
前記母乳または母乳由来成分は、凍結工程を経た成分を含み、３７℃で暴露されることを特徴とする、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項５】
前記ストレスは、痛みストレス、不安ストレス、恐怖ストレス、不適応ストレス、喪失ストレス、健康喪失ストレスおよび自尊心喪失ストレスからなる群より選択される、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項６】
前記母乳または母乳由来成分は、前記ストレス軽減が対象とされる被験体と同系の動物種に由来する、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項７】
前記動物種は、長脚目、アフリカトガリネズミ目、管歯目、近蹄類、岩狸目、長鼻目、海牛目、異節目、ボレオユーテリア類、真主獣大目、登木目、皮翼目、霊長目、グリレス大目、重歯目、齧歯目、食虫目、翼手目、偶蹄鯨目、奇蹄目、有鱗目および食肉目からなる群より選択される目の種である、請求項６に記載のストレス軽減剤。
【請求項８】
前記動物種は、霊長目の種である、請求項７に記載のストレス軽減剤。
【請求項９】
前記動物種は、ヒトである、請求項８に記載のストレス軽減剤。
【請求項１０】
前記ストレス軽減剤は、３歳以下のヒトが対象である、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項１１】
前記ストレス軽減剤は、新生児または未熟児が対象である、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項１２】
前記ストレスは、採血時の痛みによるアクチグラムでの６０秒の体動測定によって判定される、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項１３】
前記母乳は、出産直後の褥婦から採取されたものである、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項１４】
前記母乳は、出産後７日以内の褥婦から採取されたものである、請求項１３に記載のストレス軽減剤。
【請求項１５】
凍結乾燥物または噴霧乾燥物である、請求項１に記載のストレス軽減剤。
【請求項１６】
請求項１に記載のストレス軽減剤を含む、飼料、食品または医薬。
【請求項１７】
被験体ストレスを軽減する方法であって、該被験体と同種の動物種の母乳または母乳由来成分を該被験体に暴露させる工程を包含する、方法。
【請求項１８】
前記暴露は、４２℃以下で行われる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記母乳または母乳由来成分は、凍結工程を経た成分を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記母乳または母乳由来成分を予め採取する工程、および採取された該母乳または母乳由来成分を凍結する工程をさらに包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記母乳または母乳由来成分を予め採取する工程、および採取された該母乳または母乳由来成分を凍結する工程をさらに包含し、前記暴露が４２℃以下で行われる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記ストレスは、痛みストレス、不安ストレス、恐怖ストレス、不適応ストレス、喪失ストレス、健康喪失ストレスおよび自尊心喪失ストレスからなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記母乳または母乳由来成分は、前記ストレス軽減が対象とされる被験体と同系の動物種に由来する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記動物種は、長脚目、アフリカトガリネズミ目、管歯目、近蹄類、岩狸目、長鼻目、海牛目、異節目、ボレオユーテリア類、真主獣大目、登木目、皮翼目、霊長目、グリレス大目、重歯目、齧歯目、食虫目、翼手目、偶蹄鯨目、奇蹄目、有鱗目および食肉目からなる群より選択される目の種である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記動物種は、霊長類である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記動物種は、ヒトである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記方法は、３歳以下のヒトが対象である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
前記方法は、新生児または未熟児が対象である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２９】
前記母乳を出産直後の褥婦から採取する工程をさらに包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項３０】
前記母乳を出産後７日以内の褥婦から採取する工程をさらに包含する、請求項１７に記載のストレス軽減剤。
【請求項３１】
前記母乳または母乳由来成分を凍結乾燥物または噴霧乾燥物として保存する工程をさらに包含する、請求項１７に記載の方法。
【請求項３２】
前記母乳または母乳由来成分が、飼料、食品または医薬として提供される方法。
【請求項３３】
ストレス軽減のための装置であって、
Ａ）母乳または母乳由来成分を収容する本体またはリザーバと、
Ｂ）該本体またはリザーバを封入する外部カバーと、
Ｃ）該母乳または母乳由来成分を暴露する手段と
を備える、装置。
【請求項３４】
ストレス軽減成分をスクリーニングするための方法であって、
Ａ）母乳を提供する工程；
Ｂ）該母乳を精製する工程；
Ｃ）精製された画分についてストレス軽減作用があるかどうかを決定する工程；
を包含する、方法。
【請求項３５】
請求項３４に記載の方法によって決定されたストレス軽減成分。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ストレス軽減方法および薬剤に関する。より本発明は、母子分離状態の新生児などに発生ストレスを軽減すべく、母親の母乳の匂いを暴露する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
母乳は乳児に必須な栄養素を含み、それゆえ従来は母乳中の栄養成分を模倣した人工乳の開発に視点が置かれてきた。一方、最近では兎において新生児を惹きつけるフェロモンが母乳中に存在することが明らかにされた。しかし、ヒト母乳の匂いに関しては、乳児の嗜好性を調べているのみで、具体的な生理学的作用については報告されていない。
【０００３】
哺乳動物の乳汁に含まれている種々の微量なタンパク質成分について、生理学的抗酸化作用が、次第に明らかにされている。例えば、乳清タンパク質の一つであり、従来種々の生理活性が知られているラクトフェリンについて、鉄依存性の過酸化脂質生成を抑制する作用があることが知られている［非特許文献１＝Biochemical Journal,１９９，p２５９，１９８１］。しかしながら、乳タンパク質の主成分であるカゼインおよび乳清タンパク質を除去した残余の低分子成分については、上記のような報告は皆無であり、それらの生理学的作用については、いまだ充分検討されていない状況にある。
【非特許文献１】Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ，１９９，ｐ２５９，１９８１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、このような点に鑑みなされたもので、ストレス軽減剤、特に新生児のストレスを軽減するための薬剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題は、母乳または母乳由来成分に、上記ストレスを軽減する作用を有することを見出したことによって解決した。従って、母子分離状態の新生児のストレスを軽減すべく、母乳の匂いを暴露する方法が提供される。
【０００６】
本発明は、以下を提供する。
（１）母乳または母乳由来成分を含む、ストレス軽減剤。
（２）上記母乳または母乳由来成分は、凍結工程を経た成分を含む、項目１に記載のストレス軽減剤。
（３）上記母乳または母乳由来成分は、３７℃で暴露されることを特徴とする、項目１に記載のストレス軽減剤。
（４）上記母乳または母乳由来成分は、凍結工程を経た成分を含み、３７℃で暴露されることを特徴とする、項目１に記載のストレス軽減剤。
（５）上記ストレスは、痛みストレス、不安ストレス、恐怖ストレス、不適応ストレス、喪失ストレス、健康喪失ストレスおよび自尊心喪失ストレスからなる群より選択される、項目１に記載のストレス軽減剤。
（６）上記母乳または母乳由来成分は、上記ストレス軽減が対象とされる被験体と同系の動物種に由来する、項目１に記載のストレス軽減剤。
（７）上記動物種は、長脚目、アフリカトガリネズミ目、管歯目、近蹄類、岩狸目、長鼻目、海牛目、異節目、ボレオユーテリア類、真主獣大目、登木目、皮翼目、霊長目、グリレス大目、重歯目、齧歯目、食虫目、翼手目、偶蹄鯨目、奇蹄目、有鱗目および食肉目からなる群より選択される目の種である、項目６に記載のストレス軽減剤。
（８）上記動物種は、霊長目の種である、項目７に記載のストレス軽減剤。
（９）上記動物種は、ヒトである、項目８に記載のストレス軽減剤。
（１０）上記ストレス軽減剤は、３歳以下のヒトが対象である、項目１に記載のストレス軽減剤。
（１１）上記ストレス軽減剤は、新生児または未熟児が対象である、項目１に記載のストレス軽減剤。
（１２）上記ストレスは、採血時の痛みによるアクチグラムでの６０秒の体動測定によって判定される、項目１に記載のストレス軽減剤。
（１３）上記母乳は、出産直後の褥婦から採取されたものである、項目１に記載のストレス軽減剤。
（１４）上記母乳は、出産後７日以内の褥婦から採取されたものである、項目１３に記載のストレス軽減剤。
（１５）凍結乾燥物または噴霧乾燥物である、項目１に記載のストレス軽減剤。
（１６）項目１に記載のストレス軽減剤を含む、飼料、食品または医薬。
（１７）被験体ストレスを軽減する方法であって、上記被験体と同種の動物種の母乳または母乳由来成分を上記被験体に暴露させる工程を包含する、方法。
（１８）上記暴露は、４２℃以下で行われる、項目１７に記載の方法。
（１９）上記母乳または母乳由来成分は、凍結工程を経た成分を含む、項目１７に記載の方法。
（２０）上記母乳または母乳由来成分を予め採取する工程、および採取された上記母乳または母乳由来成分を凍結する工程をさらに包含する、項目１７に記載の方法。
（２１）上記母乳または母乳由来成分を予め採取する工程、および採取された上記母乳または母乳由来成分を凍結する工程をさらに包含し、上記暴露が４２℃以下で行われる、項目１７に記載の方法。
（２２）上記ストレスは、痛みストレス、不安ストレス、恐怖ストレス、不適応ストレス、喪失ストレス、健康喪失ストレスおよび自尊心喪失ストレスからなる群より選択される、項目１７に記載の方法。
（２３）上記母乳または母乳由来成分は、上記ストレス軽減が対象とされる被験体と同系の動物種に由来する、項目１７に記載の方法。
（２４）上記動物種は、長脚目、アフリカトガリネズミ目、管歯目、近蹄類、岩狸目、長鼻目、海牛目、異節目、ボレオユーテリア類、真主獣大目、登木目、皮翼目、霊長目、グリレス大目、重歯目、齧歯目、食虫目、翼手目、偶蹄鯨目、奇蹄目、有鱗目および食肉目からなる群より選択される目の種である、項目２３に記載の方法。
（２５）上記動物種は、霊長類である、項目２４に記載の方法。
（２６）上記動物種は、ヒトである、項目２５に記載の方法。
（２７）上記方法は、３歳以下のヒトが対象である、項目１７に記載の方法。
（２８）上記方法は、新生児または未熟児が対象である、項目１７に記載の方法。
（２９）上記母乳を出産直後の褥婦から採取する工程をさらに包含する、項目１７に記載の方法。
（３０）上記母乳を出産後７日以内の褥婦から採取する工程をさらに包含する、項目１７に記載のストレス軽減剤。
（３１）上記母乳または母乳由来成分を凍結乾燥物または噴霧乾燥物として保存する工程をさらに包含する、項目１７に記載の方法。
（３２）上記母乳または母乳由来成分が、飼料、食品または医薬として提供される方法。
（３３）ストレス軽減のための装置であって、
Ａ）母乳または母乳由来成分を収容する本体またはリザーバと、
Ｂ）上記本体またはリザーバを封入する外部カバーと、
Ｃ）上記母乳または母乳由来成分を暴露する手段と
を備える、装置。
（３４）ストレス軽減成分をスクリーニングするための方法であって、
Ａ）母乳を提供する工程；
Ｂ）上記母乳を精製する工程；
Ｃ）精製された画分についてストレス軽減作用があるかどうかを決定する工程；
を包含する、方法。
（３５）項目３４に記載の方法によって決定されたストレス軽減成分。
【０００７】
以下に、本発明の好ましい実施形態を示すが、当業者は本発明の説明および当該分野における周知慣用技術からその実施形態などを適宜実施することができ、本発明が奏する作用および効果を容易に理解することが認識されるべきである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によって、出産直後の褥婦から採取した母乳を至適条件（３７℃）にて暴露を行えば、新生児の採血時の痛みストレスを軽減する。また、母乳は凍結によって効果が減じないので、凍結保存を行うことが可能であり、長期保存も可能である。これにより、入院中の未熟児は母子分離状態にあっても母乳の匂いの暴露を受けることでストレスが軽減されることで出生後早期の母子間コミュニケーション支援が可能になるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下に本発明を、必要に応じて、添付の図面を参照して例示の実施例により記載する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。
【００１０】
（定義）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
【００１１】
本明細書において、「母乳」とは、当該分野において使用されるのと同じ意味を有し、動物（通常哺乳動物）が子を育てるために母の乳房から分泌する白色不透明な液体を言う。本発明において用いられる母乳は、初乳であっても、常乳または末期乳であってもよい。本明細書において、初乳とは、分娩後数日間に、乳腺から分泌する水様透明の液をいい、蛋白質・塩類に富み、抗体を含む。
【００１２】
本明細書において「母乳由来成分」とは、母乳から直接または間接的に得られる任意の成分をいう。そのような成分を得る方法は、当該分野において任意の方法が想定され、例えば、抽出、分離、精製、合成等を挙げることができる。
【００１３】
本明細書において「凍結工程」とは、当該分野において使用されるのと同じ意味を有し、通常０℃以下、好ましくは、−１８℃以下、より好ましくは−３０℃以下、さらに好ましくは−８０℃に温度を下げて行うことができる。
【００１４】
本明細書において「ストレス」とは、種々の外部刺激が負担として働くとき、心身に生ずる機能変化をいい、通常、外界あるいは内界からの要因によって生体の内部環境の恒常性にゆがみができるような状態を指す。ストレスの原因となる要素（ストレッサー）は寒暑・騒音・化学物質など物理化学的なもの、飢餓・感染・過労・睡眠不足など生物学的なもの、精神緊張・不安・恐怖・興奮など社会的なものなど多様であり、それらの原因に応じて分類されることもある。本明細書では、ストレスは、「痛みストレス」、「不安ストレス」、「恐怖ストレス」、「不適応ストレス」、「喪失ストレス」、「健康喪失ストレス」および「自尊心喪失ストレス」などに分類され得る。ストレスは、採血時の痛みによるアクチグラムでの６０秒の体動測定によって、または一定時間（例えば、一分間）の間に泣き声を挙げた割合、またはしかめ面をした割合によって判定され得る。なお、アクチグラムと、しかめ面、泣き声は相互に相関していることが証明されている。不適応ストレスとは、新しい状況への不適応により生じるストレスをいい、結婚、妊娠、分娩、弟妹の誕生、転居、入学、入園、就職、退職、転職などによるストレスを挙げることができる。喪失ストレスとは、支えとなるものの喪失により生じるストレスをいい、離婚、家族との別離、肉親や親しい人の死別等によるストレスを挙げることができる。健康喪失ストレスとは、身体的健康の喪失により生じるストレスをいい、ケガ、手術による臓器の摘出、長期の入院等を挙げることができる。自尊心喪失ストレスとは、自尊心の喪失により生じるストレスをいい、失業、解雇、左遷、破産、有罪判決等を挙げることができる。
【００１５】
本明細書において「マタニティーブルース」とは、排卵後受胎に起こる女性における病状をいう。女性は、排卵後受胎すると、血中プロジェステロンの値は急速かつ大量に増大する。妊娠中の血中プロジェステロン量は、妊娠していない女性の数十倍にもなる。ほぼ９ヶ月にわたり高値を示した血中プロジェステロンレベルは、分娩後数時間以内に急激に減少し７日目には測定不能なまでに低下する。この時期に約８０％の女性でマタニティーブルースが起こる。マタニティーブルースの症状は、不眠、イライラ、涙もろい、抑うつ、不安、集中力低下といったもので、通常、出産後３〜５日目から始まり２週間以内に消失する。以上のことからマタニティーブルースはプロジェステロンが減少するという特徴を持つ時期である、出産後に出現することがわかる。しかしながら、これまで重篤な場合はホルモン補充療法による治療が行われていたが、軽症の場合は授乳中ということから、医療の対象から除外され、女性はがまんを強いられていた。という状態をさす。
【００１６】
本明細書においてストレスを「軽減」するとは、ストレスを、採血時の痛みによるアクチグラムでの６０秒の体動測定によって判定したとき、体動測定が減少することをいう。
【００１７】
本明細書において「同種」とは、動物について言及するとき、種が同じことをいう。同種には、同種異系および同系が含まれる。
【００１８】
本明細書において「同系」とは、遺伝的に同質な（例えば、家族、血族）生物個体の間の関係をいう。「同系」は、「自家」とも称される。
【００１９】
本明細書において言及される「動物種」は、Group I: アフリカ獣上目（長脚目、アフリカトガリネズミ目、管歯目、近蹄類、岩狸目、長鼻目、海牛目）、Group II: 異節上目（異節目、ボレオユーテリア類）、GroupIII: 真主齧上目（正主齧歯類上目） （真主獣大目、登木目、皮翼目、霊長目、グリレス大目、重歯目、齧歯目）、Group IV: ローラシア獣上目（食虫目、翼手目、偶蹄鯨目、奇蹄目、有鱗目および食肉目）からなる群より選択される目の種である等を挙げることができる。好ましくは、動物種は霊長類に属する種であり、より好ましくは、動物種はヒトであり得る。
【００２０】
本明細書において対象となる動物種の年齢好ましい範囲は、その動物の加齢の加速度によって変動し得る。ヒトの場合は、本発明のストレス軽減剤は、好ましくは、３歳以下のヒトに特に効果があり、特に好ましくは、新生児または未熟児に効果がある。ヒトにおいて、新生児とは、通常使用される意味を有し、分娩後１ヶ月以内の個体を意味する。未熟児は、通常使用される意味と同じ意味で用いられ、出生時の体重が2.5ｋｇ以下の新生児をいう。
【００２１】
本明細書において「出産直後」とは、通常使用される意味を有し、通常は、産後１週間以内、好ましくは３日以内をいう。
【００２２】
本明細書において「凍結乾燥」とは、低温下真空中で水分を昇華乾燥する操作をいう。本明細書では、当該分野において知られる任意の方法を用いて凍結乾燥させることができる。水溶液を凍結させ，冷凍室をそなえた真空装置で凍結状態のまま水分を直接昇華させて乾燥させる。冷凍乾燥ともいう。真空乾燥の特殊な場合である。熱に対し不安定で水溶液として放置しておくと変化しやすい物質、または常法では泡立ちなどのため減圧濃縮しにくい物質や動植物組織の乾燥に用いられる。本発明の有効成分が凍結乾燥に抵抗性があったことは予想外のことであった。
【００２３】
本明細書において「噴霧」とは、通常使用される意味と同じで用いられ、流体物（例えば、液体）を霧状にする処理をいう。
【００２４】
本明細書において、飼料、食品および医薬は、通常使用される意味と同じ意味で用いられる。
【００２５】
本明細書において「暴露」とは、本発明の成分と、作用させる対象とが相互作用するに十分な状態の行為をいう。暴露は、タンパク質が変性しないような温度であれば、どのような温度でもよく、通常４２℃以下で行うことができ、また、噴霧に影響のない温度、例えば、０℃以上で行うことができる。そのような温度範囲としては、例えば、３０℃〜４２℃が挙げられ、より好ましくは、暴露は、３７℃にて行われる。暴露は、例えば、当該分野において通常使用される噴霧器などによって達成することができる。
【００２６】
本明細書において「本体」または「リザーバ」とは、互換可能に使用され、本発明のストレス軽減成分を収容するに十分な形状を有する任意の容器をいう。
【００２７】
本明細書において「外部カバー」とは、本体またはリザーバを収容し、本発明のストレス軽減成分が実質的に揮発などにより損失しない任意の容器をいう。
【００２８】
本明細書において「スクリーニング」とは、目的とするある特定の性質をもつ生物または物質などの標的を、特定の操作／評価方法で多数を含む集団の中から選抜することをいう。
【００２９】
（本発明の有効成分の抽出）
本発明の有効成分は、そのまま用いることもできるが、抽出などによって単離された成分を用いても良い。
【００３０】
本明細書において「単離された」とは、通常の環境において天然に付随する物質が少なくとも低減されていること、好ましくは実質的に含まないことをいう。本明細書において成分（低分子、核酸またはポリペプチド）についていう場合、「単離された」とは、たとえば、組換えＤＮＡ技術により作製された場合には物質または培養培地を実質的に含まず、化学合成された場合には前駆体化学物質またはその他の化学物質を実質的に含まない、低分子、核酸またはポリペプチドを指す。
【００３１】
回収した分画を、公知の凍結乾燥方法に準じて凍結乾燥し、粉末状の乳分画を得ることができる。
【００３２】
本発明の有効成分は、抽出したものを利用することができる。
【００３３】
抽出に用いる水系溶剤は、水単独もしくは水とメタノール、エタノール等低級アルコール、アセトン等の１種または２種の極性溶媒との任意の混合液のいずれでもよい。 しかし、極性溶媒だけでは本発明の有効成分を効率よく抽出できないので、必ず水との混合液とし、かつ、その混合率は溶媒が９０％以下であることが望まし い。これらの溶剤のうちでは、抽出物が最終的に食品等に配合されることを考慮すると、安全性の点で、水、エタノール、またはこれらの混合物を用いるのが好まし い。抽出に用いる溶剤としては水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラ ヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ピリジン類；大豆油、なたね油、 スクワラン、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸等の油脂類；超臨界二酸化炭素などが挙げられ、これらを単独または混合物として用いることができる。
【００３４】
抽出に際しての母乳または母乳由来成分と溶剤との比率も特に限定されるものではないが、母乳または母乳由来成分１に対して溶剤２−１０００重量倍、特に抽出操作、効率の点で５−１００重量倍が好ましい。抽出温度は室温−常圧下での溶剤の沸点の範囲とするのが便利であり、抽出時間は１０分から２４時間の範囲とするのが好ましい。
【００３５】
このようにして得られた母乳由来成分水系溶剤抽出物そのままのもの、これを濃縮したもの、溶出物から溶剤を除去した乾燥物等、いかなる状態のものでも使用することが出来るが、保存性、有機溶媒の安全性の点で乾燥物の状態にするのが好ましい。
【００３６】
本発明の医薬は、母乳または母乳由来成分抽出物をそのまま若しくはこれを公知の医薬用担体と共に製剤化することにより調製される。本発明の医薬は、錠剤、顆粒剤、粉剤、シロップ剤等の経口剤；坐剤、外用剤等の非経口剤のほか、飲料、牛乳、乳清飲料および乳酸菌飲料等の食品（特に、離乳食など）に添加する剤形のものとすることができる。
【００３７】
本発明の医薬の調製に用いることのできる医薬用担体としては、特に制限はなく、通常用いられているものを使用することができるが、その例としては、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等の固形担体；蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール等のアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の液体担体；各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィン、ロウ類等の油性担体等が挙げられる。
【００３８】
また、本発明の医薬を用いて、食品、飼料、医薬等を製造するには、その製品の種類に応じて通常用いられる適宜な成分を配合すること ができる。 例えば、食品を調製する場合には、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリ セリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビア  ガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色  素、香料、保存剤等、通常の食品原料として使用されているものを適宜配合して製造することが出来る。
【００３９】
本発明の母乳または母乳由来成分抽出物を用いて乳児用医療用品等を調製する場合には、他の抗炎症・抗アレルギー性化粧品原料、例えば、甘草抽出成分（例えば、グリチルリチン酸）、塩酸ジフェンヒドラミン、アズレン、ｄｌ−α−トコフェロールおよびその誘導体、ビタミンＢ２およびＢ６などと用いることにより、その効果を高めることができる。
【００４０】
本発明の組成物は、生物への移入に適した形態であれば、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。投与経路としては経口投与、非経口投与、患部への直接投与などが挙げられる。
【００４１】
本明細書において「指示書」は、本発明の医薬などを投与する方法を医師、患者など投与を行う人に対する説明を記載したものである。この指示書は、本発明の医薬などを投与することを指示する文言が記載されている。また、指示書には、暴露方法（例えば、３７℃での暴露、凍結保存の方法）ことを指示する文言が記載されていてもよい。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（ＦＤＡ）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（ｐａｃｋａｇｅ  ｉｎｓｅｒｔ）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ、電子メール）のような形態でも提供され得る。
【００４２】
本明細書において「被験体」とは、本発明の処置が適用される生物をいい、「患者」ともいわれる。患者または被験体は好ましくは、ヒトであり得る。
【００４３】
本発明は、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。投与方法は、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、粘膜投与、直腸内投与、膣内投与、患部への局所投与、皮膚投与など）、患部への直接投与などが挙げられる。そのような投与のための処方物は、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。本発明の組成物および医薬は、全身投与されるとき、発熱物質を含ない、経口的に受容可能な水溶液の形態であり得る。そのような薬学的に受容可能なタンパク質溶液の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などに相当な注意を払うことを条件として、当業者の技術範囲内である。
【００４４】
本発明は、医薬または医薬組成物として処方される場合、必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）と、所望の程度の純度を有する選択された組成物とを混合することによって、凍結乾燥されたケーキまたは水溶液の形態で、保存のために調製され得る。本発明の製剤の処方手順は、当該分野において公知であり、例えば、日本薬局方、米国薬局方、他の国の薬局方などに記載されている。本発明の方法において使用される組成物、医薬などの量は、使用目的、対象物の齢、サイズ、性別、既往歴、組成物、医薬などの形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。
【００４５】
本発明の組成物を対象物に対して与える頻度もまた、使用目的、対象物の齢、サイズ、性別、既往歴、および処置経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。頻度としては、例えば、一日に１回〜数回、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）の投与が挙げられる。１週間−１ヶ月に１回の投与を、経過を見ながら施すことが好ましい。
【００４６】
（スクリーニング）
スクリーニングのために、任意の選抜方法を使用することができる。スクリーニングは、インビトロ、インビボなど実在物質を用いた系を使用してもよく、インシリコ（コンピュータを用いた系）の系を用いて生成されたライブラリーを用いてもよい。本発明の因子の実体は、母乳に存在することが分かっているので、活性を元に、任意の精製方法を用いれば、同定することが可能であり、同定された物質を元に、本発明では、種々のスクリーニングを行って同様の活性を有する物質を同定することができる。本発明では、このように所望の活性（すなわち、ストレス軽減作用）を有するスクリーニングによって得られた化合物もまた、本発明の範囲内に包含されることが理解される。また本発明では、本発明の開示をもとに、コンピュータモデリングによる薬物が提供されることも企図される。
【００４７】
１実施形態において、本発明は、本発明の有効成分と同等の成分をスクリーニングするためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコンビナトリアルライブラリー法における多数のアプローチの任意のものを使用して得られ得、これには、以下が挙げられる：生物学的ライブラリー；空間的にアクセス可能な平行固相もしくは溶液相ライブラリー；逆重畳を要する合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用する合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーアプローチはペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマーもしくは化合物の低分子ライブラリーに適用可能である。
【００４８】
（暴露装置の設計）
本発明は、小児科、産婦人科に入院中の未熟児に対し、母乳匂い成分を専用の匂い暴露装置を用いて、未熟児に暴露することで母子分離状態の新生児のストレスを軽減する形態として用いることができる。家庭においても、母親不在時、夜泣き、の際に使用できる。乳児院などに入院している被虐待児のストレス軽減にも応用可能である。
【００４９】
装置に用いられる材料としては、本願発明の有効成分の暴露が可能である任意の成分を挙げることができ、好ましくは、生体適合性材料であり得る。好ましくは、使用されるカートリッジは合成樹脂で内分泌攪乱物質等が溶出されないものが有利である。超音波による暴露を行う場合は、超音波を発する部分は、金属を用いることが好ましい。金属は、例えば、ステンレス等腐食しないものが望ましい。また、これら材料は７０％アルコール等で殺菌処理を行ったものとすることが好ましい。超音波による暴露に関する技術としては、例えば、特開平１０−８５３１４号公報、特開２００３−２４４２７号公報、特開２００２−８６０３５号公報、特開２０００−２７１５１７号公報、特開２００４−２１６２２１号公報、特開２００４−１５９８７５号公報、および特開２００５−１７７２３０号公報に記載されている技術を挙げることができる。
【００５０】
本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。
【００５１】
以上、本発明を、理解の容易のために好ましい実施形態を示して説明してきた。以下に、実施例に基づいて本発明を説明するが、上述の説明および以下の実施例は、例示の目的のみに提供され、本発明を限定する目的で提供したのではない。従って、本発明の範囲は、本明細書に具体的に記載された実施形態にも実施例にも限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例】
【００５２】
（実施例１）
産婦人科に受診した健常な女性から、母乳を得た。これを、新生児などの被験体に対するストレス軽減作用を確認した。
【００５３】
（実験方法）
（説明と同意）
本実験は長崎大学医学部倫理委員会（承認番号16021295（母乳の研究））の承認を受け、被験者には、実験内容についての医師による十分な説明を行い、書面による同意を得た。実験当日は特に何もせずに参加してもらった。
【００５４】
（母乳の採取および処理方法）
母乳は以下のように採取および処理した。
【００５５】
母乳の採取は、手で搾乳したか、もしくは搾乳器を用いた。搾乳後、必要に応じて凍結処理を行った。
【００５６】
母乳の採取時期（初乳、母乳）として、初乳は、分娩直後のものを使用した。他の例として、分娩３日後、７日後、１４日後、２８日後、２ヵ月後、６ヵ月後、１年後などの母乳を用いる。
【００５７】
（母乳の保存方法）
母乳の保存方法（凍結保存）は次の通りである：
通常の冷凍庫内に搾乳した母乳を保存して凍結させた。
【００５８】
−３０℃以下（好ましくは−８０℃）に温度を下げて行った。
【００５９】
（母乳の暴露方法）
母乳の匂いの暴露方法の至適温度としては３７℃を採用した。
【００６０】
空気による暴露または超音波装置による霧化を行った。
【００６１】
（ストレス軽減作用の効果測定）
ビデオ撮影により６０秒間のうちの泣いている時間の割合を測定した。アクチグラム（体動計）により６０秒毎の体動の量を測定した。アクチグラムを測定するための用具としてアクティグラフ（米国Ａ．Ｍ．Ｉ社）を用いた。アクティグラフとは、米国Ａ．Ｍ．Ｉ社が米国国立衛生研究所（Ｎ．Ｉ．Ｈ）の技術サポートを受けて開発した腕時計型小型高感度加速度センサー＆ロガーであり、２〜３Ｈｚで０．０１Ｇ／Ｒａｄ／ｓｅｃ以上の動きを確実に検出できる特殊構造をしている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓａｎｉｔａ．ｃｏ．ｊｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）。体動の量は、提供される用具における単位で表現した。別法として、泣き声のカウントを１分間計数したものおよびしかめ面のカウントを１分間計数したものを利用した。
【００６２】
（結果）
母乳の匂いが新生児の採血時の痛みストレスを軽減する作用を、体動（アクティビティ）、泣き声およびしかめ面を指標したものをまとめたものを図１に示す。
【００６３】
ビデオ撮影により６０秒間のうちの泣いている時間の割合を測定した。アクチグラム（体動計）により６０秒毎の体動の量を測定した。粉ミルクの匂いでは新生児の採血時の痛みストレスを軽減する作用はないことが分かる（図１）。体動の量は、泣き声およびしかめ面の指標と連動していることが明らかになった。
【００６４】
（泣き声カウント）
ストレスの指標として、泣き声のカウントを１分間計数したものをまとめた。その結果を図２として示す。図２上は、一分ごとのまとめを示し、図２下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方とも泣いている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。コントロール乳（ｎ＝１２）、実母の乳（ｎ＝１２）、他人の母の乳（ｎ＝１５）および人工乳（ｎ＝９）を示す。以下により詳細なデータを示す。
【００６５】
（アクティビティ）
次に、アクチグラムで測定したアクティビティの結果を図３に示す。その結果を図３として示す。図３上は、一分ごとのまとめを示し、図３下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともアクティビティを示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。コントロール乳（ｎ＝９）、実母の乳（ｎ＝９）、他人の母の乳（ｎ＝１４）および人工乳（ｎ＝９）を示す。
【００６６】
（しかめ面カウント）
ストレスの指標として、しかめ面のカウントを１分間計数したものをまとめた。その結果を図４として示す。図４上は、一分ごとのまとめを示し、図４下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方とも泣いている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。コントロール乳（ｎ＝１２）、実母の乳（ｎ＝１２）、他人の母の乳（ｎ＝１５）および人工乳（ｎ＝９）を示す。
【００６７】
以上のように、実母の乳が最も効果があり、ついで他人の母の乳にも効果が認められた。人工乳では効果がなかった。
【００６８】
（実施例２：保存方法）
次に、本発明の有効成分が、凍結保存によっても効果を失わないことを確認した。
【００６９】
凍結保存方法は、実施例１に記載の方法のほか、保存なし、ドライアイスにて急速冷凍（−３０℃以下）という保存方法での効果を確認した。
【００７０】
対比実験として、母乳を凍結させず、冷蔵保存する場合（４℃）、常温放置する場合（ＲＴ）での実験を行った。
【００７１】
結果を図５に示す。図５では、体動（アクティビティ）、泣き顔およびしかめ面の１分間での変動が示されている。本発明の有効成分のストレス軽減効果は、凍結によっても変動しなかった。２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後などで効果が失われる、もしくは特に常温放置では母乳そのものが変性するかと思われる。
【００７２】
次に、泣き声実験における凍結母乳と凍結させていない母乳との効果の対比を行った。その結果を図６に示す。図６上は、一分ごとのまとめを示し、図６下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方とも泣いている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した母乳（ｎ＝４）および凍結していない母乳（ｎ＝８）を示す。
【００７３】
さらに、泣き声実験における凍結した他人の母乳と凍結させていない他人の母乳との効果の対比を行った。その結果を図７に示す。図７上は、一分ごとのまとめを示し、図７下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方とも泣いている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した他人の母乳（ｎ＝５）および凍結していない他人の母乳（ｎ＝１０）を示す。
【００７４】
次に、アクチグラムで測定したアクティビティの母乳の凍結効果を試験した結果を図８に示す。図８上は、一分ごとのまとめを示し、図８下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともアクティビティを示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した母乳（ｎ＝４）および凍結していない母乳（ｎ＝５）を示す。
【００７５】
次に、アクチグラムで測定したアクティビティの他人の母乳の凍結効果を試験した結果を図９に示す。図９上は、一分ごとのまとめを示し、図９下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともアクティビティを示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した他人の母乳（ｎ＝５）および凍結していない他人の母乳（ｎ＝１０）を示す。
【００７６】
次に、しかめ面実験における凍結母乳と凍結させていない母乳との効果の対比を行った。その結果を図１０に示す。図１０上は、一分ごとのまとめを示し、図１０下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともしかめ面をしている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した母乳（ｎ＝４）および凍結していない母乳（ｎ＝８）を示す。
【００７７】
さらに、しかめ面実験における凍結した他人の母乳と凍結させていない他人の母乳との効果の対比を行った。その結果を図１１に示す。図１１上は、一分ごとのまとめを示し、図１１下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともしかめ面をしている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した他人の母乳（ｎ＝５）および凍結していない他人の母乳（ｎ＝１０）を示す。
【００７８】
（実施例３：母乳暴露方法）
次に、本発明の有効成分の暴露方法による効果の相違を確認する。
【００７９】
暴露方法は、実施例１に記載の方法のほか、０℃〜５０℃までの環境、他の因子（湿度、他の匂い分子の存在など）を考慮に入れた。空気を使った匂いの暴露ではよく活性炭し空気自体をきれいにしておく等の方法を用いた。
【００８０】
このような暴露方法による変動を検討した結果、３７℃程度の温度を用いることが効果を発揮することが分かる。
【００８１】
（実施例４：被験体の種類）
次に、被験体の種類を新生児のみならず、産婦人科に入院中の未熟児、生後３ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年など、および男女の性別について本発明の効果において相違があるかどうかを確認する。
【００８２】
何らかのストレスや痛みを何かの検診の時に与えている場面を利用して行う類のものなので、乳幼児が嫌がる検診時などの機会の最中、もしくは直前に匂いの暴露を行い、もしくはコントロール暴露を行うことで、実験をする。
【００８３】
（実施例５：環境変化時における対応）
次に、被験体の状態変化における効果確認を行う。母親不在時、夜泣き等の環境、乳児院などに入院している被虐待児のストレス軽減における効果を確認した。
【００８４】
（母親不在時）
母親不在時における行動を母乳の匂いをさせている群、させていない群において調べる。匂いの暴露は鼻の下に塗る、もしくは暴露装置を近くにおくなどする。乳幼児の行動は、心理研究の行動解析等を参考にし、不安行動などを指標にすることで解析を行う。
【００８５】
（夜泣きなどの環境）
夜寝る前（時間を決めて）等に、乳幼児の鼻の下に母乳を塗っておく、もしくは暴露装置にて枕元に匂いが暴露されるよう噴霧しておき、コントロール被験者との差を調べる。
【００８６】
（乳児院などに入院している被虐待児の場合）
母親不在時の実験と同様な方法で行う。
【００８７】
（実施例６：体動、泣き声およびしかめ面の相関関係）
次に、指標としての体動（アクティビティ）、泣き声およびしかめ面が相互に相関しており、いずれをストレスの指標としても使用することができることを実証した。
【００８８】
泣き声、しかめ面はストレスの指標であることは直接的に理解可能であるが、アクティビティは単に動きをつけるものであることからストレスの指標として使用できるかどうか不明であり得ることから、その指標としての的確性を確認した。
【００８９】
これを上記実施例における実験を行い、その結果からパラメトリックナ統計としてピアソンの相関係数を求めた。
【００９０】
アクティビティと泣き声の割合、アクティビティとしかめ面の割合およびしかめ面の割合と泣き声の割合との相関係数（パラメトリックな統計として、ピアソンの相関係数）を求めた結果をそれぞれ図１２〜１４に示す。図１２〜１４には、上（Ａ）に３分間での相関係数、および下（Ｂ）に１分間での相関係数を示す。その結果、３つのパラメータが有意に相関するという結果が判明した。
【００９１】
（実施例７：有効成分の分離）
次に、本発明のストレス軽減剤の成分の分離を行う。
【００９２】
具体的には、本発明の成分の分離は、ガスクロマトグラフィーを用いて行うことができる。例えば、B Schaal et al., Nature vol.424 3 july 2003 p68-72に準じたプロトコールを用いて実施することができる。ガスクロマトグラフィーは700度までの沸点をもつ揮発性物質（気体・液体）の分離・同定に適する分離分析法であり、本発明の成分を分離同定するために使用することができる。
【００９３】
例えば、ガスクロマトグラフィーとしては、島津製作所のガスクロマトグラフィーであるＧＣ−２０１０を製造業者のマニュアルに従って用いて分画を行い、分画された成分について、上記実施例において実施したような実験を行って活性を確認する。それによって、活性成分を分離することができる。
【００９４】
（実施例７：製剤化）
次に、本発明のストレス軽減剤の製剤化を行う。
【００９５】
本発明のストレス軽減剤は、有効成分を、食品（粉ミルク等のフレーバー）、粉を溶媒に溶かして用いる、石けん、入浴剤、沐浴剤、枕、寝具、布団、タオル、シャンプー、整髪料、ハンドソープ等に含有することによって、製剤または製品とすることができる。
【００９６】
例えば、医薬が想定される場合は、日本薬局方第１４版およびその増補版に記載されるような方法に準拠して、例えば、錠剤、散剤、液剤などとして提供することができる。
【００９７】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【００９８】
本発明は、特に、新生児のストレス軽減剤として有効である成分を提供する。このような成分は、母乳であれば、系に関係なく、同種異系の母乳からであっても、効果を奏することが本発明において明らかになった。従って、本発明は、抗ストレス製剤を製造する産業などにおいて有用である。
【図面の簡単な説明】
【００９９】
【図１】図１は、母乳の匂いが新生児の採血時の痛みストレスを軽減する作用を示す。上は、夜泣き結果を示し、真ん中がしかめ面試験の結果を示し、下が活動状態を示す。
【図２】図２は、ストレスの指標として、泣き声のカウントを計数したものを示す。図２上は、一分ごとのまとめを示し、図２下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方とも泣いている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。コントロール乳（ｎ＝１２）、実母の乳（ｎ＝１２）、他人の母の乳（ｎ＝１５）および人工乳（ｎ＝９）を示す。
【図３】図３は、アクチグラムで測定したアクティビティの結果を示す。図３上は、一分ごとのまとめを示し、図３下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともアクティビティを示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。コントロール乳（ｎ＝９）、実母の乳（ｎ＝９）、他人の母の乳（ｎ＝１４）および人工乳（ｎ＝９）を示す。
【図４】図４は、ストレスの指標として、しかめ面のカウントを計数したものを示す。図４上は、一分ごとのまとめを示し、図４下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方とも泣いている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。コントロール乳（ｎ＝１２）、実母の乳（ｎ＝１２）、他人の母の乳（ｎ＝１５）および人工乳（ｎ＝９）を示す。
【図５】図５は、本発明の有効成分の凍結によるストレス軽減効果の変動を示す。凍結によっても本発明のストレス軽減効果は、顕著には変動しなかった。上は、夜泣き結果を示し、真ん中はしかめ面の結果を示し、下は活動状態を示す。
【図６】図６は、泣き声実験における凍結母乳と凍結させていない母乳との効果の対比を示す。図６上は、一分ごとのまとめを示し、図６下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方とも泣いている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した母乳（ｎ＝４）および凍結していない母乳（ｎ＝８）を示す。
【図７】図７は、泣き声実験における凍結した他人の母乳と凍結させていない他人の母乳との効果の対比を示す。図７上は、一分ごとのまとめを示し、図５下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方とも泣いている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した他人の母乳（ｎ＝５）および凍結していない他人の母乳（ｎ＝１０）を示す。
【図８】図８は、アクチグラムで測定したアクティビティの母乳の凍結効果を試験した結果を示す。図８上は、一分ごとのまとめを示し、図８下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともアクティビティを示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した母乳（ｎ＝４）および凍結していない母乳（ｎ＝５）を示す。
【図９】図９は、アクチグラムで測定したアクティビティの他人の母乳の凍結効果を試験した結果を示す。図９上は、一分ごとのまとめを示し、図９下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともアクティビティを示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した他人の母乳（ｎ＝５）および凍結していない他人の母乳（ｎ＝１０）を示す。
【図１０】図１０は、しかめ面実験における凍結母乳と凍結させていない母乳との効果の対比を示す。図１０上は、一分ごとのまとめを示し、図１０下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともしかめ面をしている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した母乳（ｎ＝４）および凍結していない母乳（ｎ＝８）を示す。
【図１１】図１１は、しかめ面実験における凍結した他人の母乳と凍結させていない他人の母乳との効果の対比を示す。図１１上は、一分ごとのまとめを示し、図５下は３分ごとのまとめを示す。ｙ軸は双方ともしかめ面をしている時間の割合を示し、ｘ軸は時間（刺激後の時間（分（ｍｉｎ）））を示す。凍結した他人の母乳（ｎ＝５）および凍結していない他人の母乳（ｎ＝１０）を示す。
【図１２】図１２は、アクティビティと泣き声の割合との相関係数（パラメトリックな統計として、ピアソンの相関係数）を求めた結果を示す。上（Ａ）に３分間での相関係数、および下（Ｂ）に１分間での相関係数を示す。
【図１３】図１３は、アクティビティとしかめ面の割合との相関係数（パラメトリックな統計として、ピアソンの相関係数）を求めた結果を示す。上（Ａ）に３分間での相関係数、および下（Ｂ）に１分間での相関係数を示す。
【図１４】図１４は、しかめ面の割合と泣き声の割合との相関係数（パラメトリックな統計として、ピアソンの相関係数）を求めた結果を示す。上（Ａ）に３分間での相関係数、および下（Ｂ）に１分間での相関係数を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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