(57)【要約】【課題】培地調製の手間を省き、保存性の良い、省スペースで省廃棄量の水系細菌用培地を提供する。【解決手段】以下の（１）〜（４）の成分がフィルム状の基板上に塗布または散布されたフィルム状培地。（１）酵母エキス、ペプトン、肉エキスおよびカザミノ酸から選ばれる少なくとも１種を１．５ｇ／ｍ２以下含有し、その合計が０．１〜３ｇ／ｍ２である栄養成分。（２）リン酸カリウム塩、リン酸ナトリウム塩、炭酸ナトリウム塩、炭酸カリウム塩および炭酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種を含有し、それらの合計が０．０２〜１ｇ／ｍ２である塩成分。（３）発色または蛍光酵素基質。（４）水溶性高分子またはゲル化剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の（１）〜（４）の成分がフィルム状の基板上に塗布または散布されたフィルム状培地。
（１）酵母エキス、ペプトン、肉エキスおよびカザミノ酸から選ばれる少なくとも１種を１．５ｇ／ｍ２以下含有し、その合計が０．１〜３ｇ／ｍ２である栄養成分。
（２）リン酸カリウム塩、リン酸ナトリウム塩、炭酸ナトリウム塩、炭酸カリウム塩および炭酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種を含有し、それらの合計が０．０２〜１ｇ／ｍ２である塩成分。
（３）発色または蛍光酵素基質。
（４）水溶性高分子またはゲル化剤。
【請求項２】
上記成分（１）〜（４）に加えて１．５ｇ／ｍ２以下のグルコースを含有する請求項１に記載のフィルム状培地。
【請求項３】
上記成分（４）が層を形成している請求項１または２に記載のフィルム状培地。
【請求項４】
上記成分（４）の層の上に多孔質マトリックスを有する請求項３に記載のフィルム状培地。
【請求項５】
上記成分（３）がテトラゾリウム塩、オキシインドールの酸エステル、ハロゲン置換オキシインドールの酸エステル、オキシインドールのグルコシド、およびハロゲン置換オキシインドールのグルコシドから選ばれる少なくとも１種である請求項１〜４のいずれか１項に記載のフィルム状培地。
【請求項６】
上記成分（３）のオキシインドールの酸エステルまたはハロゲン置換オキシインドールの酸エステルが、リン酸エステル、脂肪酸エステルまたは硫酸エステルである請求項５に記載のフィルム状培地。
【請求項７】
上記成分（３）のオキシインドールの脂肪酸エステルまたはハロゲン置換オキシインドールの脂肪酸エステルが、酢酸エステル、吉草酸エステルまたは酪酸エステルである請求項６に記載のフィルム状培地。
【請求項８】
透明カバーフィルムを有する請求項１〜７のいずれか１項に記載のフィルム状培地。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は微生物を培養するためのフィルム状培地に関する。さらに詳しくは水系環境中の微生物を検出するためのフィルム状培地に関する。このフィルム状培地に、水を加えることにより微生物の生育しうる培地となる。
【背景技術】
【０００２】
水系に存在する細菌の中には細菌培養に一般的に使用されている普通寒天培地、標準寒天培地、ＳＣＤ寒天培地などでは生育しないか、生育しても観察できるまでのコロニーを形成しない細菌がある。上記のような高栄養培地に生育しない細菌を検出する培地として、Ｒ２Ａ培地など低栄養の培地が推奨されている（例えば非特許文献１参照）。また、Ｒ２Ａ培地は調合された粉末培地または生培地として市販されているが、粉末培地は培地を溶解、オートクレーブ滅菌した後一定量を滅菌ペトリ皿に分注して培地を作製する必要がある。細菌の検査をより、簡便、迅速に行うためには、このような、手間と時間のかかる培地の調製が省けることが好ましい。生培地は培地調製の手間は省けるが、保存性が悪い欠点がある。通常、粉末培地、生培地はプラスチック製ペトリ皿を使用するために培養のために場所をとり、また培養後、多量のプラスチック廃棄物も発生する。粉末培地や生培地の問題点を解決するために例えば特許文献１に記載されているような簡易培地が提案されているが、これは一般生菌等の検出を対象としたもので、上記の細菌を検出することはできなかった。あるいは、このような簡易培地における上記の細菌を検出するための適切な栄養成分の組成は判っていなかった。
【特許文献１】ＰＣＴ公報ＷＯ９７／２４４３２
【非特許文献１】"A new medium for the enumeration and subculture of bacteria from potable water", Reasoner D J; Geldreich E E, Applied and environmental microbiology (1985 Jan), 49(1), 1-7.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、培地調製の手間を省き、保存性の良い、省スペースで省廃棄量の水系細菌用培地を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は以下の構成を有する。
１．以下の（１）〜（４）の成分がフィルム状の基板上に塗布または散布されたフィルム状培地。
（１）酵母エキス、ペプトン、肉エキスおよびカザミノ酸から選ばれる少なくとも１種を１．５ｇ／ｍ２以下含有し、その合計が０．１〜３ｇ／ｍ２である栄養成分。
（２）リン酸カリウム塩、リン酸ナトリウム塩、炭酸ナトリウム塩、炭酸カリウム塩および炭酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種を含有し、それらの合計が０．０２〜１ｇ／ｍ２である塩成分。
（３）発色または蛍光酵素基質。
（４）水溶性高分子またはゲル化剤。
２．上記成分（１）〜（４）に加えて１．５ｇ／ｍ２以下のグルコースを含有する上記１項に記載のフィルム状培地。
３．上記成分（４）が層を形成している上記１または２項に記載のフィルム状培地。
４．上記成分（４）の層の上に多孔質マトリックスを有する上記３項に記載のフィルム状培地。
５．上記成分（３）がテトラゾリウム塩、オキシインドールの酸エステル、ハロゲン置換オキシインドールの酸エステル、オキシインドールのグルコシド、およびハロゲン置換オキシインドールのグルコシドから選ばれる少なくとも１種である上記１〜４項のいずれか１項に記載のフィルム状培地。
６．上記成分（３）のオキシインドールの酸エステルまたはハロゲン置換オキシインドールの酸エステルが、リン酸エステル、脂肪酸エステルまたは硫酸エステルである上記５項に記載のフィルム状培地。
７．上記成分（３）のオキシインドールの脂肪酸エステルまたはハロゲン置換オキシインドールの脂肪酸エステルが、酢酸エステル、吉草酸エステルまたは酪酸エステルである上記６項に記載のフィルム状培地。
８．透明カバーフィルムを有する上記１〜７項のいずれか１項に記載のフィルム状培地。
【発明の効果】
【０００５】
本発明により水系環境や水試料の微生物汚染検査が簡便に行うことができるようになる。本発明のフィルム状培地は、保存性が良く、薄いため培養に場所をとらず、廃棄物も通常の微生物検査に比べ大幅に減少する。水系環境や水試料の微生物汚染指標検査が簡単容易に行えるようになる。
【０００６】
本発明のフィルム状培地とは、水等を加えることによって微生物の生育しうる培地となるものである。
【０００７】
本発明のフィルム状培地およびその作製方法について以下に説明する。
【０００８】
本発明に使用するフィルム状の基板（基体といわれることもある）とは、ポリエステル等のフィルム（シートともいう）のことを指し、その上に水溶性高分子化合物またはゲル化剤（４）を塗布または散布して使用することができ、検査対象の水分が透過したり浸透したりせず安定な形状を保っているフィルム（シート）であれば特に制限はない。
【０００９】
水溶性高分子化合物またはゲル化剤（４）として水溶性高分子化合物を使用する場合は、試料液を加えたとき溶解して１０ｃｐｓ以上の粘度を示し、微生物の生育を阻害しないものなら良い。たとえば、ポリビニルアルコール、セルロース誘導体、ポリアクリル酸誘導体、でんぷん誘導体、蛋白質、蛋白質誘導体、多糖類などが使用できる。これらの中ではポリビニルアルコールが好ましく、鹸化度７５〜９０％、分子量２５０００〜２５００００のポリビニルアルコールが特に好ましい。
【００１０】
水溶性高分子化合物またはゲル化剤（４）としてゲル化剤を使用する場合は、室温の水を加えたときにゲル化するものが好ましく、グアーガム、キサンタンガムなどの多糖類、セルロース誘導体、ポリアクリル酸誘導体などが使用できる。
【００１１】
まず、水溶性高分子化合物またはゲル化剤（４）をフィルム状の基板の上に塗布して層を形成させる場合について説明する。この場合、（１）〜（４）の各成分を含む水溶液をポリエステルなどのフィルム（基板）上に塗布して乾燥し、層を形成させることが好ましい。層を形成させる方法としては、（１）〜（４）の成分すべてを含む水溶液を塗布して層を形成させても良いし、（１）〜（３）の各成分を別々に含む水溶性高分子化合物またはゲル化剤（４）の水溶液を逐次塗布し重層しても良い。例えば、ポリエステルなどのフィルム（基板）上に栄養成分（１）、塩成分（２）および、発色または蛍光酵素基質（３）を含む水溶性高分子化合物またはゲル化剤（以下、単に「成分（４）」という）の水溶液を塗布し、乾燥フィルム化する。
【００１２】
また別の態様としては、ポリエステルなどのフィルム（基板）上に成分（４）の水溶液を重層し、乾燥フィルム化する。このフィルム上に栄養成分（１）、塩成分（２）および、発色または蛍光酵素基質（３）を含む成分（４）の水溶液を重層し、乾燥フィルム化する。
【００１３】
さらに別の態様としては、ポリエステルなどのフィルム（基板）上に成分（４）の水溶液を重層し、乾燥フィルム化した後、このフィルム上に栄養成分（１）および塩成分（２）を含む成分（４）の水溶液を重層し、乾燥フィルム化する。さらにこのフィルム上に発色または蛍光酵素基質（３）を含む成分（４）の水溶液（この水溶液にはさらに栄養成分（１）および塩成分（２）を含んでいても良い）を重層し乾燥フィルム化する。
【００１４】
これらのようなフィルム層の上に、さらに多孔質マトリックスを重層して乾燥すると試料液が拡散しやすく使いやすくなる。多孔質マトリックスを重層する場合、一番上の層が乾燥する前に多孔質マトリックスを重層してから乾燥させると良い。多孔質マトリックスを使用するときには、（１）〜（３）の各成分のすべてまたは一部を、グラビアロールなどを用いて多孔質マトリックスに塗布しておいても良い。
【００１５】
このようにして作製した乾燥フィルム状の培地層をポリエステルなどのフィルム（基板）から剥がし、もしくは剥がさずに適当な大きさに切断して、培地積層物を作製する。フィルムを剥がさないときは培地積層物のフィルム側を、フィルムを剥がしたときは培地積層物の基板から剥がした側を、切断した培地積層物より大きな別のフィルム状の基板（例えば粘着シート）に接着し本発明のフィルム状培地とする。本発明のフィルム状培地は、エチレンオキサイドガス滅菌などの滅菌を施して密封バッグ等に入れ、保存することができる。
【００１６】
さらに好ましくは、透明カバーフィルムを培地積層物の周りの粘着シートに接着して被せる。このとき、またはこの後、透明カバーフィルムと粘着シートの一端をずらし、粘着シートと透明カバーフィルム間の粘着力より強い粘着力の粘着テープを接着する、または、透明カバーフィルムと粘着シートの一端を粘着シートと透明カバーフィルム間の粘着力より強い粘着力の両面テープで接着する、または、透明カバーフィルムまたは粘着シートまたは両者の一端に残りの部分より強い接着力の粘着剤を塗布するなどの方法により、粘着シートと透明カバーフィルムの一端を残りの部分の粘着シートと透明カバーフィルム間の粘着力より強くして、エチレンオキサイドガス滅菌などの滅菌を施し、シート状培地を作製する。
【００１７】
（１）〜（４）の各成分をフィルム状の基板上に散布する場合は、接着剤を塗布したフィルム状の基板上に粉体の（１）〜（４）の各成分を散布し、接着する。この場合、成分（４）は栄養成分（１）、塩成分（２）および発色または蛍光酵素基質（３）との混合物として散布しても良く、成分（４）を散布した上からさらに（１）〜（３）の各成分を散布しても良い。また、成分（４）を散布する場合でも前記の塗布して層を形成させる場合と同様に多孔質マトリックスを重層することができる。このようにして得られた各成分が散布されたフィルム状の基板を適当な大きさに切断し、透明カバーフィルムを被せる。シートまたはフィルムと透明カバーフィルムの一端は接着しておくと使いやすい。また、成分（１）〜（４）の全部または一部を透明カバーフィルム側に散布接着しておいても良い。さらに、エチレンオキサイドガス滅菌などの滅菌を施し、本発明のフィルム状培地を作製する。
【００１８】
栄養成分（１）および塩成分（２）の他、細菌の生育を阻害するヒドロキシラジカルの除去に効果のある溶性デンプン、マンニトールなどの糖アルコール、シトルリンから選ばれる1種以上、生育促進に効果があるといわれているピルビン酸塩、無機栄養素である硫酸マグネシウムをさらに含むことはより好ましい。
【００１９】
本発明のフィルム状培地は、次のような方法で使用することができる。フィルム状培地の透明カバーフィルムを開け、ＲＯ水（精製水）、透析溶液、輸液など水系試料を培地部分に加え、透明カバーフィルムを再び被せて、２５℃で培養することによって水系微生物を生育させる。または、フィルム状培地の透明カバーフィルムを開け、滅菌水を培地積層物に加えておき、ＲＯ水（精製水）、透析溶液、輸液など水系試料をろ過したフィルターを培地積層物上に乗せ、再び透明カバーフィルムを被せて、２５℃で培養することによって水系微生物を生育させる。
【００２０】
培地には微生物の生育を確認するための発色または蛍光酵素基質（３）を加えておく必要がある。発色または蛍光酵素基質（３）としては、テトラゾリウム塩など酸化還元によって発色する試薬、微生物が普遍的に持っている酵素、例えば、フォスファターゼ、エステラーゼ、リパーゼ、スルファターゼ、グルコシダーゼなどの発色または蛍光酵素基質、発色または蛍光酵素基質系でも良い。フォスファターゼ、エステラーゼ、リパーゼ、スルファターゼ、グルコシダーゼの発色または蛍光酵素基質にはオキシインドールの誘導体またはハロゲン置換オキシインドールの誘導体が好ましく使われる。発色または蛍光酵素基質（３）の添加量は０．０１〜１ｇ／ｍ２が好ましい。０．０２ｇ／ｍ２以下では微生物の生育を確認できるまでの時間が長くなり実用的ではない。１ｇ／ｍ２以上としてもフォスファターゼ、エステラーゼ、リパーゼ、スルファターゼ、グルコシダーゼなどの発色または蛍光酵素基質では問題はないが、増加した効果は低い。テトラゾリウム塩では０．１５ｇ／ｍ２以上とすると微生物によっては生育が阻害されることがある。オキシインドールまたはハロゲン置換オキシインドールの誘導体とテトラゾリウム塩を併用すると発色が速くなり、検出時間の短縮に効果がある。上記オキシインドールの誘導体としては、酸エステルまたはグルコシドが挙げられ、ハロゲン置換オキシインドールの誘導体としては、酸エステルまたはグルコシドが挙げられる。上記オキシインドールの酸エステルとしては、リン酸エステル、脂肪酸エステルまたは硫酸エステルが挙げられ、脂肪酸エステルとしては酢酸エステル、吉草酸エステルまたは酪酸エステルが挙げられる。上記ハロゲン置換オキシインドールの酸エステルとしては、リン酸エステル、脂肪酸エステルまたは硫酸エステルが挙げられ、脂肪酸エステルとしては酢酸エステル、吉草酸エステルまたは酪酸エステルが挙げられる。なお、ここに挙げた上記オキシインドールまたはハロゲン置換オキシインドールの誘導体の例は、本発明を限定するためのものではない。
【００２１】
上記テトラゾリウム塩としては、以下のようなテトラゾリウム塩（［  ］内はＣＡＳ登録番号）が挙げられるが、これらの例は本発明を限定するためのものではない。
・ネオテトラゾリウムブルー［２９８−９５−３］、化学名：３，３’−（１，１’−ビフェニル−４，４’−ジイル）−ビス（塩化２，５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウム）
・ＩＮＴ［１４６−６８−９］、化学名：塩化２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウム
・テトラゾリウムブルー［１８７１−２２−３］、化学名：３，３’−［３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−４，４’−ジイル］−ビス（塩化２，５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウム）
・ニトロブルーテトラゾリウム［２９８−８３−９］、化学名：３，３’−［３，３’−ジメトキシ−（１，１’−ビフェニル）−４，４’−ジイル］−ビス［塩化２−（４−ニトロフェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウム］
・テトラニトロテトラゾリウムブルー［１１８４−４３−６］、化学名：３，３’−（３，３’−ジメトキシ−４，４’−ビフェニレン）−ビス［塩化２，５−ビス（ｐ−ニトロフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム］
・ネオテトラゾリウムブルー［２９８−９５−３］
化学名：３，３’−（１，１’−ビフェニル−４，４’−ジイル）−ビス（塩化２，５−ジフェニル−２Ｈテトラゾリウム）
・ＴＴＣ［２９８−９６−４］
２，３，５−トリフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロライド
【００２２】
栄養成分（１）は酵母エキス、ペプトン、肉エキスまたはカザミノ酸から選ばれる１種以上を１．５ｇ／ｍ２以下含有し、その合計が０．１〜３ｇ／ｍ２であることが好ましく、この濃度を下回ると微生物の生育が遅く実用的でない。栄養成分（１）の濃度の上限は、本発明で検出することを目的とする水系細菌に対して過栄養にならない濃度範囲の目安を規定したものである。上記栄養成分（１）に加えて、さらに１．５ｇ／ｍ２以下のグルコースを含有させても好ましい。
【００２３】
塩成分（２）はｐＨ調整用として加えられ、これらの塩成分により、ｐＨを中性付近に調整する。これらの塩成分（２）の合計は０．０２〜１ｇ／ｍ２であることが好ましい。これらの塩成分（２）の内、リン酸カリウム塩はリン酸二カリウムまたはリン酸二カリウムとリン酸一カリウムの混合物を、リン酸ナトリウム塩はリン酸二ナトリウムまたはリン酸二ナトリウムとリン酸一ナトリウムの混合物を、炭酸ナトリウム塩は炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウムまたは炭酸ナトリウムと炭酸水素ナトリウムの混合物を、炭酸カリウム塩は炭酸カリウムまたは炭酸水素カリウムまたは炭酸カリウムと炭酸水素カリウムの混合物を示す。これらの塩を組み合わせて用いることもできる。
【００２４】
本発明に使用される多孔質マトリックス層を形成するための材料としては、合成繊維（例えば、ナイロン、ポリアクリロニトリル、ポリエステル（特に親水化処理したもの）、ポリオレフィン（特に親水化処理したもの）ポリウレタン等）、半合成繊維（例えば、レーヨン等）、天然繊維（例えば、羊毛(獣毛)、絹、綿、セルロース、パルプ等）、無機繊維（例えば、ガラス繊維等）等で形成された編織布、繊維ウェブ、不織布、上記繊維の構成素材で作られた多孔質フィルム、スポンジ、多孔質セラミックス等があげられる。多孔質マトリックスは必ずしも親水性である必要はないが、親水性の多孔質マトリックスまたは親水化処理した多孔質マトリックスを用いれば吸水速度が速くなり、作業の能率が上がる。親水性または親水化処理した多孔質マトリックスであっても、表面に水溶性物質を塗布しておくと微生物の分散性が向上し、より好ましい。多孔質マトリックスのなかでは繊維ウェブや不織布が好ましい。繊維ウェブや不織布を構成する繊維としてはナイロン、コットン、セルロース、レーヨンが好ましく、ナイロンからなる繊維ウェブまたは不織布が特に好ましい。ナイロン不織布ではメルトブローン製法で作製した不織布が好ましい。
【実施例】
【００２５】
次に実施例をあげて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。なお、実施例中に使用したチッソ（株）製シート状（フィルム状）培地「サニ太くん」（商品名）一般生菌用は、以下のような構成のシート状（フィルム状）培地である。
【００２６】
「サニ太くん」一般生菌用
水２５０ｍｌに鹸化度８９％、分子量８３０００のポリビニルアルコール３０ｇを加え加熱溶解後、得られた水溶液を厚さ２０μｍでサイズ０．５ｍ×１ｍのポリエステルフィルム上に塗布し、１２０℃で５分間乾燥して最初の水溶性高分子化合物層を形成させた。前記のポリビニルアルコール１５ｇ、ペプトン２．３ｇ、肉エキス１．０ｇ、酵母エキス０．６ｇ、炭酸ナトリウム０．０７５ｇおよびグルコース０．４ｇを水２５０ｍｌに溶解し、得られた水溶液を最初の層の上に塗布して１１０℃で７分間乾燥し、第２の水溶性高分子化合物層を形成させた。この層の上に、前記のポリビニルアルコール５ｇ、ペプトン０．８ｇ、肉エキス０．３ｇ、酵母エキス０．２ｇ、炭酸ナトリウム０．０２５ｇおよび塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリム２０ｍｇを水１００ｍｌに溶解して得た水溶液を塗布し、その上に目付６５ｇ／ｍ2、通気度１１０Ｌ／（ｍ2・ｓｅｃ）のナイロンメルトブロー不織布を張り合わせ１００℃で３０秒間乾燥した。ペプトン１５ｇおよびリン酸二ナトリウム４０ｇを水１Ｌに溶解し、６０メッシュ四角錐グラビアロールを用いて不織布上に塗布し、１００℃で２０秒間乾燥した。得られた培地積層物を４５ｍｍ×４５ｍｍの正方形に切断し、８０ｍｍ×８５ｍｍに切断したアクリル系微粘着タイプ粘着剤塗布１００μｍ厚白色ポリエステル粘着シートの中央部に接着した後、厚さ０．０６ｍｍ、サイズ８０ｍｍ×８５ｍｍのポリプロピレンフィルムを９０ｍｍ方向が５ｍｍずれるように粘着シートに接着し、９ｍｍ巾のバックシーリングテープをずらした部分を覆うように接着して、エチレンオキサイドガス滅菌を行い、一般生菌検出用フィルム状培地を作製した。
【００２７】
実施例１（水溶性高分子を使用した本発明のフィルム状培地の作製）
水０．２５Ｌに鹸化度８９％重合度１７００のポリビニルアルコール３０ｇを加え加熱溶解後、２０μｍ厚０．５×１ｍポリエステルフィルム上に塗布し、１２０℃、5分間乾燥フィルム化した。このフィルム上に、鹸化度８９％重合度１７００のポリビニルアルコール１６ｇ、ペプトン０．１２５ｇ、酵母エキス０．１２５ｇ、カザミノ酸０．１２５ｇ、グルコース０．１２５ｇ、炭酸ナトリウム０．０５ｇ、リン酸二カリウム０．０７５ｇ、溶性デンプン０．１２５ｇおよび硫酸マグネシウム０．０１２５ｇを水０．２５Ｌに溶解して、１１０℃、７分間乾燥した。このフィルム上に、ポリビニルアルコール５ｇと５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルフォスフェート０．１５ｇを水０．１Ｌに溶解して重層し、目付６５ｇ／ｍ２、通気度１１０Ｌ/ｍ２ｓｅｃのナイロンメルトブローン不織布を張り合わせ１００℃３０秒間乾燥した。ペプトン１ｇとリン酸二ナトリウム４ｇを水１Ｌに溶解し、６０メッシュ四角錐グラビアロールを用いて、不織布上に塗布し、１００℃２０秒間、乾燥した。４５×４５ｍｍに切断し、８０×８５ｍｍに切断した（株）共和製アクリル系微粘着タイプ粘着剤塗布１００μｍ厚白色ポリエステル粘着シートの中央部に接着した後、０．０６ｍｍ厚８０×８５ｍｍポリプロピレンフィルムを８５ｍｍ方向が５ｍｍずれるように粘着シートに接着し、（株）共和製９ｍｍ巾バックシーリングテープをずらした部分を覆うように接着して、エチレンオキサイドガス滅菌を行い、フィルム（シート）状培地を作製した。
【００２８】
実施例２（水溶性高分子を使用した本発明のフィルム状培地の試験）
ＲＯ水より分離した３０菌株のそれぞれ１菌株ずつをペプトン０．５ｇ、酵母エキス０．５ｇ、カザミノ酸０．５ｇ、グルコース０．５ｇ、溶性デンプン０．３ｇ、リン酸二カリウム０．３ｇ、および硫酸マグネシウム・７水和物０．０５ｇを水１Ｌに溶解し、９ｍＬずつに分注後オートクレーブ滅菌した培地で培養後、滅菌水で５０〜１００ｃｆｕ／ｍＬになるように希釈し、試料とした。これら３０菌株の試料１ｍＬずつを実施例１で作製した培地（本発明）に加え、２５℃で７日間培養を行った。比較試験としてチッソ（株）製サニ太くん一般生菌用、作製後表面を良く乾燥したＲ２Ａ寒天培地および標準寒天培地のそれぞれに上記試料を１ｍＬずつ加え、Ｒ２Ａ寒天培地および標準寒天培地に試料液が染みこんだ後、２５℃で７日間培養した。その結果、実施例１の培地ではＲ２Ａ寒天培地と同様に３０菌株についてすべてを生育させることができ、コロニーが認められたので、実施例１の培地はＲ２Ａ培地に代わる簡易培地として使用できることが確かめられた。しかし、サニ太くん一般生菌用および標準寒天培地では２０株についてはコロニーが観察されたが、１０株はコロニーが観察されなかった。
【００２９】
実施例３
実施例１の５−ブロモー４−クロロ−３−インドリルフォスフェートの代わりに０．１５ｇの５−ブロモインドキシルアセテート、０．０１５ｇのＴＴＣ、０．０１５ｇのネオテトラゾリウムブルー、および０．０１５ｇのニトロブルーテトラゾリウムのそれぞれを使用した以外は実施例１と同様の構成により４種類の培地を作製し、実施例２と同様に比較試験を行い、同様の結果を得た。
【００３０】
実施例４（ゲル化剤を使用した本発明のフィルム状培地）
ペプトン０．１２５ｇ、酵母エキス０．１２５ｇ、カザミノ酸０．１２５ｇ、グルコース０．１２５ｇ、ピルビン酸ナトリウム０．０７５ｇ、炭酸ナトリウム０．０５ｇ、リン酸二カリウム０．０７５ｇ、溶性デンプン０.１２５ｇ、硫酸マグネシウム０．０１２５ｇ、およびキサンタンガム２０ｇを良く混合後、２．６ｇを２５０×２５０ｍｍアクリル系粘着剤塗布白色ポリエステルフィルム上に散布し、へらで均一となるようにならした後、６０μｍ厚ポリプロピレンフィルムを被せ圧着した。８０×８０ｍｍに切断後、一端を（株）共和製９ｍｍ巾バックシーリングテープを折り曲げて接着した。実施例２と同様に比較試験を行い、同様の結果を得た。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明のフィルム状培地は、高栄養培地に生育しない水系の細菌を簡便に検出する培地として、水質検査、環境検査、衛生検査、医療検査等に使用することができる。特に、従来使用されていたＲ２Ａ培地を必要とする細菌検査には、Ｒ２Ａ培地に代わる培地として使用することができる。