(57)【要約】【課題】本発明は、細胞分化を誘発させる方法に関する。とりわけ、本発明は、細胞が、膵臓系統に、または、膵ホルモン産生細胞に、または、β細胞系統に分化するのを誘発する方法に関する。本発明はさらに、糖尿病の治療においてそのような細胞を利用するための方法と組成物とを提供する。【解決手段】細胞におけるＰｄｘ−１の発現を増大させる方法であって、前記細胞を提供する過程と、前記細胞内においてＰｄｘ−１の発現を増大させる少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤に前記細胞を接触させる過程とを含む、方法。【選択図】図１
2007061096.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞におけるＰｄｘ−１の発現を増大させる方法において、
ａ．前記細胞を提供する過程と、
ｂ．前記細胞内においてＰｄｘ−１の発現を増大させる少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤に前記細胞を接触させる過程と、
を含む、方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、
前記細胞は、未分化細胞、部分的に分化した細胞、完全に分化した細胞、幹細胞および前駆細胞から成る群から選ぶ、方法。
【請求項３】
請求項１記載の方法において、
前記細胞は、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理される前、Ｐｄｘ−１を発現していない、方法。
【請求項４】
請求項１記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、Ｐｄｘ−１の発現を回復する、方法。
【請求項５】
請求項１記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤は、ヒストン・デアセチラーゼ活性の阻害剤である、方法。
【請求項６】
請求項５記載の方法において、
前記阻害剤は、ブチレート、ヒドロキサム酸、環状ペプチドおよびベンズアミドから成る群から選ぶ、方法。
【請求項７】
請求項５記載の方法において、
前記阻害剤は、バルプロ酸、４−フェニルブチレート、酪酸ナトリウム、トリコスタチンＡ(trichostatin A)、スベロイルアニリドヒドロキサム酸(suberoyl anilide hydroxamic acid)（ＳＡＨＡ）、オキサムフラチン(oxamflatin)、トラポキシンＢ(trapoxin B)、ＦＲ901228、アピシジン(apicidin)、クラミドシン(chlamydocin)、デプエシン(depuecin)、スクリプタイド(scriptaid)、デプシペプチド(depsipeptide)およびＮ−アセチルジナリン(N-acetyldinaline)から成る群から選ぶ、方法。
【請求項８】
膵前駆細胞の中に細胞が分化するのを促進する方法において、
ａ．Ｐｄｘ−１を発現しない細胞を提供する過程と、
ｂ．前記のＰｄｘ−１の発現を増大させる少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤に前記細胞を接触させる過程と、
を含む、方法。
【請求項９】
請求項８記載の方法において、
前記細胞を前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、ＨＮＦ−３β遺伝子またはＳｏｘ−１７遺伝子の少なくとも１種の発現を増大させる、方法。
【請求項１０】
請求項８記載の方法において、
前記細胞は、未分化細胞、部分的に分化した細胞、完全に分化した細胞、幹細胞および前駆細胞から成る群から選ぶ、方法。
【請求項１１】
請求項８記載の方法において、
前記細胞は、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理される前、Ｐｄｘ−１を発現していない、方法。
【請求項１２】
請求項８記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、Ｐｄｘ−１の発現を回復する、方法。
【請求項１３】
請求項８記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤は、ヒストン・デアセチラーゼ活性の阻害剤である、方法。
【請求項１４】
請求項１３記載の方法において、
前記阻害剤は、ブチレート、ヒドロキサム酸、環状ペプチドおよびベンズアミドから成る群から選ぶ、方法。
【請求項１５】
請求項１３記載の方法において、
前記阻害剤は、バルプロ酸、４−フェニルブチレート、酪酸ナトリウム、トリコスタチンＡ、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、オキサムフラチン、トラポキシンＢ、ＦＲ901228、アピシジン、クラミドシン、デプエシン、スクリプタイド、デプシペプチドおよびＮ−アセチルジナリンから成る群から選ぶ、方法。
【請求項１６】
膵ホルモン分泌細胞の中に細胞が分化するのを促進する方法において、
ａ．Ｐｄｘ−１を発現しない細胞を提供する過程と、
ｂ．前記のＰｄｘ−１の発現を増大させる少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤に前記細胞を接触させる過程と、
を含む、方法。
【請求項１７】
請求項１６記載の方法において、
前記細胞を前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、ＨＮＦ−３β遺伝子、Ｓｏｘ−１７遺伝子、インスリン、グルカゴン(glucagon)またはソマトスタチン(somatostatin)の少なくとも１種の発現を増大させる、方法。
【請求項１８】
請求項１６記載の方法において、
前記細胞は、未分化細胞、部分的に分化した細胞、完全に分化した細胞、幹細胞および前駆細胞から成る群から選ぶ、方法。
【請求項１９】
請求項１６記載の方法において、
前記細胞は、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理される前、Ｐｄｘ−１を発現していない、方法。
【請求項２０】
請求項１６記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、Ｐｄｘ−１の発現を回復する、方法。
【請求項２１】
請求項１６記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤は、ヒストン・デアセチラーゼ活性の阻害剤である、方法。
【請求項２２】
請求項２１記載の方法において、
前記阻害剤は、ブチレート、ヒドロキサム酸、環状ペプチドおよびベンズアミドから成る群から選ぶ、方法。
【請求項２３】
請求項２１記載の方法において、
前記阻害剤は、バルプロ酸、４−フェニルブチレート、酪酸ナトリウム、トリコスタチンＡ、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、オキサムフラチン、トラポキシンＢ、ＦＲ901228、アピシジン、クラミドシン、デプエシン、スクリプタイド、デプシペプチドおよびＮ−アセチルジナリンから成る群から選ぶ、方法。
【発明の詳細な説明】
【開示の内容】
【０００１】
〔発明の分野〕
本発明は、細胞分化を誘発する方法に関する。本発明は、とりわけ、細胞が、膵系統、膵ホルモン−産生細胞、またはβ細胞系統に分化するのを誘発する方法に関する。本発明は、糖尿病の治療上の処置にそのような細胞を利用するための方法と組成物とを更に提供する。
【０００２】
〔背景〕
臓器機能の喪失は、先天的欠陥、損傷または疾患によって生じることがある。臓器機能の喪失を引き起こす疾患の一つの例は、真性糖尿病または糖尿病である。糖尿病症例の大部分は、２つの臨床型、若年性糖尿病またはインシュリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）としても知られている１型と、成人発症型糖尿病としても知られている２型とに分類される。１型糖尿病を処置する一般的方法には、インスリンの外来投与が包含され、典型的には、注射器またはポンプを用いた注入によるインスリンの外来投与が包含される。この方法は、血糖値を完全に正常化する訳ではなく、しばしば、低血糖症の危険性が増大することに関係する。膵機能が、移植または細胞ベース療法によって回復するか、または活気を取り戻すことができれば、更に有効な血糖制御を達成することができる。
【０００３】
現在、糖尿病を処置するために多くの移植療法が使用されている。そういう療法の一つには、分離されたランゲルハンス島(islets of Langerhans)を糖尿病患者に移植することが包含される。ヒト島移植に対する一つの難関は、多数の糖尿病患者を処置するのに十分な数の島が欠乏していることであった。
【０００４】
移植のための、代わりの細胞材料源には、例えば、他の組織（例えば、絨毛膜絨毛、羊水または骨髄）に由来する細胞が包含される。これらの他の組織は、胎児組織または胚組織である場合がある。加えて、β細胞を包含する、ランゲルハンス島の内分泌細胞は、アポトーシスおよび新たな膵島細胞の増殖（新生(neogenesis)）の過程によって、絶えず変化している。したがって、膵臓は、膵ホルモン産生細胞に分化することのできる未分化細胞の源であると考えられている。
【０００５】
しかし、これらの細胞的アプローチ(cellular approaches)の一つの難関は、β細胞系統または膵ホルモン分泌細胞に分化する、これらの細胞の能力であった。そのような分化には、遺伝子発現(gene expression)の変化が包含される。
【０００６】
細胞分化の機構(Mechanism for cellular differentiation)：  遺伝子発現は、遺伝子のｍＲＮＡへの転写と、そのｍＲＮＡのプロセシング(processing)と、（タンパク質コード遺伝子を得るために）それをタンパク質に翻訳することとの組み合わせプロセスである。消化酵素およびホルモンを分泌する膵臓由来細胞の遺伝子発現パターンと、肝臓由来細胞の遺伝子発現パターンとを比較すると、脂質輸送とエネルギー変換との部位は、高度に発現する遺伝子が著しく相違することが明らかとなる。この相違は、これらの組織の生理学的役割と一致している。例えば、哺乳動物におけるインスリン遺伝子発現は、ＭａｆＡおよびＮｅｕｒｏＤを包含する特異的転写因子(transcription factors)によってある程度介在される制御機構により、膵β細胞に限定される。体の他の細胞において、インスリン等の膵ホルモンだけでなく、他の特異的ペプチダーゼ遺伝子もまた、転写的にサイレント(transcriptionally silent)である。
【０００７】
ＤＮＡは、動物または植物の細胞核における裸分子(naked molecule)としては決して見出だされない。ＤＮＡは常に、クロマチン(chromatin：染色質)の中に包まれており、タンパク質および他の諸分子と関連して見出だされる。それらの分子には、例えば、（酸性溶液に可溶性の）ヒストンタンパク質、（中性の生理食塩水に可溶性の）ＨＭＧタンパク質、（濃縮尿素溶液に可溶性の）残余タンパク質、（塩基溶液に可溶性の）リンタンパク質、（フェノール水溶液に可溶性の）ＲＮＡ種、および（クロロホルム−メタノール溶液に可溶性の）脂質種が包含される。クロマチンは、動物または植物の核の全ＤＮＡを含有する、細胞核のその部分である。
【０００８】
ヒストンの共有結合修飾(covalent modification)は、遺伝子発現の調節に密接に結び付けられてきた。ヒストンタンパク質の可逆的アセチル化は、ＤＮＡのメチル化と他の修飾とを組み合わせて、改造されたクロマチンの構造と機能との後成的コード(epigenetic code)を創り出す。ヒストンに対する共有結合修飾には、アセチル化、メチル化、リン酸化反応、ユビキチン化(ubiquitinylation)およびユビキチン様タンパク質による修飾(sumolylation)が包含されることがある。
【０００９】
ヒストンおよび他のタンパク質のアセチル化状態は、アセチルトランスフェラーゼ(acetyltransferases)およびデアセチラーゼ(deacetylases)の競合作用によって動的に調節される(dynamically regulated)。低アセチル化(hypoacetylated)ヒストンは、クロマチンの濃縮を促進し、また、転写的にサイレントである遺伝子座(loci)と関連し、転写因子または転写装置へのＤＮＡのアクセス(access)が制限される。クロマチンに対するそのようなリモデリングは、個々の細胞型の内部に発現される遺伝子の補体(complement)を決定することによって、組織分化における発生の(seminal)役割を果たすことができる。
【００１０】
シトシン残基でのＤＮＡのメチル化は、遺伝子サイレンシング(gene silencing)に関連する。この二次的ＤＮＡ修飾(secondary DNA modification)を改変して、脱メチル化部位を創り出す作用物質を用いた処理は、活性遺伝子の転写および発現と関連がある。シチジンに代えて、薬剤、５−アザシチジン(5-azacytidine)を、ＤＮＡの中に組み入れることができる。結果として、５'位置がブロックされ、結果として脱メチル化ＤＮＡ配列が創り出され、永続化することになる。５'−アザシチジンにより処理された後の、細胞分化の状態の変化が、報告されてきた。例えば、筋細胞は、非筋細胞前駆体(non-muscle cell precursors)から成長するように誘発されてきた。サイレントＸ染色体上の遺伝子を活性化するための薬剤も、発表されてきた。
【００１１】
膵臓の成長を制御する諸因子
ホメオドメインタンパク質(homeodomain protein)Ｐｄｘ−１［ＩＤＸ−１、ＩＰＦ−１、ＳＴＦ−１またはＩＵＦ−１としても知られている、膵臓および十二指腸のホメオボックス遺伝子−１(Homeobox gene-1)］は、膵島の成長および機能を調節する中心的役割を果たす。Ｐｄｘ−１は、インスリン、グルコキナーゼ、島アミロイド・ポリペプチド(islet amyloid polypeptide)、および２型グルコース輸送体（ＧＬＵＴ２）を包含する、β細胞の独自性(identity)に関連するこれらの遺伝子の転写を調節する。
【００１２】
ＵＳ20050090465号明細書には、肝臓および皮膚のＰｄｘ−１の異所性発現(ectopic expression)は、肝臓および皮膚の細胞の中に膵島細胞表現型を誘発し、結果として、膵ホルモンの発現と産生とプロセシングとが生じることが記述されている。
【００１３】
ＵＳ20040002447号明細書には、細胞にインスリン遺伝子発現を誘発するための方法が提供されている。幾つかの具体例において、それらの方法は、(i) Ｐｄｘ−１ポリヌクレオチドを発現する細胞を提供する過程と、(ii) 該細胞をヒストンデアセチラーゼ阻害剤(histone deacetylase inhibitor)に接触させ、そうすることによって、該細胞中にインスリン遺伝子発現を誘発する過程とを含む。
【００１４】
ＵＳ20050090465号およびＵＳ20040002447号の明細書に開示される方法は、細胞中にインスリン遺伝子発現を誘発するためには、Ｐｄｘ−１の異所性発現を必要とする。このように、Ｐｄｘ−１の異所性発現を必要としない豊富な細胞源から膵ホルモン分泌細胞を作り出す方法を開発するための重大な必要性は、残されている。
【００１５】
〔概要〕
本発明には、細胞内における遺伝子発現を改変することによって、細胞分化を促進する方法が含まれる。一つの具体例において、遺伝子は、所望の細胞型を分化させるために必要とされることがある。あるいは、遺伝子は、所望の細胞型の機能と関連していることがある。一つの具体例において、所望の細胞型の分化と機能とを得るために必要とされる遺伝子の発現は、改変することができる。
【００１６】
分化される細胞はそれら自体、異なる細胞系統もしくは細胞型の完全に分化した細胞であってもよいし、または、分化される細胞は、部分的に分化した前駆細胞(progenitor cell)であってもよいし、または、分化される細胞は、未分化の前駆細胞であってもよい。
【００１７】
本発明は、一つの具体例において、Ｐｄｘ−１を正常には発現しない細胞を、膵臓系統の細胞に、または、膵ホルモン産生細胞に、または、β細胞系統の細胞に分化させる方法に向けられている。
【００１８】
本発明は、一つの具体例において、Ｐｄｘ−１の発現を喪失した細胞を、膵臓系統の細胞に、または、膵ホルモン産生細胞に、または、β細胞系統の細胞に分化させる方法に向けられている。
【００１９】
一つの具体例において、細胞の分化は、該細胞を、少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤に接触させることによって促進させることができる。細胞は、少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤の単一の処理によって接触させることができる。別の具体例において、細胞は、少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤の複数の処理によって接触させることができる。複数の処理は、同一の作用物質または異なる作用物質を用いる場合がある。
【００２０】
一つの具体例において、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤は、ヒストン・デアセチラーゼ活性の阻害剤である場合がある。ヒストン・デアセチラーゼ活性の阻害剤は、ブチレート(butyrates)、ヒドロキサム酸、環状ペプチドおよびベンズアミドから成る群から選ぶことができる。幾つかの具体例において、ヒストン・デアセチラーゼ活性の阻害剤は、４−フェニルブチレート、酪酸ナトリウム、トリコスタチンＡ(trichostatin A)、スベロイルアニリドヒドロキサム酸(suberoyl anilide hydroxamic acid)（ＳＡＨＡ）、オキサムフラチン(oxamflatin)、トラポキシンＢ(trapoxin B)、ＦＲ901228、アピシジン(apicidin)、クラミドシン(chlamydocin)、デプエシン(depuecin)、スクリプタイド(scriptaid)、デプシペプチド(depsipeptide)およびＮ−アセチルジナリン(N-acetyldinaline)から成る群から選ぶことができる。
【００２１】
本発明は、一つの具体例において、細胞が、膵臓系統の細胞に、または、膵ホルモン産生細胞に、または、β細胞系統の細胞に分化するのを促進する方法に向けられている。
【００２２】
一つの具体例において、分化は、少なくとも１種の分化関連遺伝子の発現を増大させることによって促進させることができる。一つの具体例において、少なくとも１種の分化関連遺伝子は、Ｐｄｘ−１である場合がある。別の具体例において、少なくとも１種の分化関連遺伝子は、Ｓｏｘ−１７である場合がある。別の具体例において、少なくとも１種の分化関連遺伝子は、ＨＮＦ−３βである場合がある。
【００２３】
一つの具体例において、前記細胞は、ホメオドメインタンパク質(homeodomain protein)Ｐｄｘ−１を通常は発現せず、また、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤による処理は、Ｐｄｘ−１の発現を刺激する。もう一つの具体例において、Ｐｄｘ−１の発現は、生体外で(in vitro)培養されている間、Ｐｄｘ−１の発現を喪失した細胞の中に取り戻すことができる。
【００２４】
一つの具体例において、細胞は、少なくとも１種のクロマチンリモデリングリモデリング剤の複数回の処理によって接触することができる。複数回の処理は、Ｐｄｘ−１の発現を刺激するかまたは増大させることができる。別の具体例において、少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤による最初の処理は、Ｐｄｘ−１の発現を刺激するかまたは増大させ、後続の処理は、膵ホルモンの発現を刺激することができる。複数の処理は、同一の作用物質または異なる作用物質を用いる場合がある。
【００２５】
別の具体例において、少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤による最初の処理は、Ｐｄｘ−１の発現を刺激するかまたは増大させ、また、少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤による後続の処理は、少なくとも１種の他の分化関連遺伝子の発現を刺激することができる。
【００２６】
〔発明の詳細な記述〕
本発明の詳細な記述は、開示内容を明瞭にするために、また、限定目的ではなく、本発明の幾つかの特徴、具体例もしくは用途を記述するかまたは例示する、次の小区分に分割されている。
【００２７】
本発明において有用な細胞
本発明の方法で使用するのに適した細胞は、当該技術分野において周知の方法を用いて、例えば、骨髄、臍帯血、羊膜嚢、羊水、胎盤、皮膚、脂肪、筋肉、脈管系、肝臓、膵臓または末梢血液のような組織から得ることができる。該細胞は、完全に分化している場合があるか、または、該細胞は、部分的に分化している細胞もしくは未分化細胞である場合がある。該細胞は、幹細胞または前駆細胞である場合がある。
【００２８】
分化(differentiation)は、特殊化していない（拘束されていない(uncommitted)）細胞またはあまり特殊化していない細胞が、例えば、神経細胞または筋肉細胞のような特殊化細胞の特徴を獲得する過程である。分化細胞は、細胞系統(lineage of a cell)の内部のいっそう特殊化された（拘束された(committed)）位置に着いた細胞である。用語「拘束された」は、それが分化過程に用いられる場合、正常な環境の下、特定の細胞型または細胞型の下位集合(subset)に分化し続け、しかも、正常な環境の下、異なる細胞型に分化することができないか、またはあまり分化しない細胞型に戻ることのできない地点まで分化経路が進行してしまった該細胞をいう。脱分化(dedifferentiation)は、細胞が、細胞系統内部の、あまり特殊化されていない（あまり拘束されていない）位置まで戻る過程を言う。本明細書で用いる「細胞系統」は、該細胞の遺伝体質(heredity)を、即ち、該細胞が由来したいずれかの諸細胞、および、細胞が生じさせることのできる全ての細胞を定義する。細胞系統は、該細胞を、成長および分化の遺伝体系(hereditary scheme)内に位置付ける。
【００２９】
前駆細胞は、それ自体よりもいっそう分化している子孫(progeny)を作り出す能力を有し、しかも、祖先(progenitors)のプール(pool)を再び満たす能力を保持している細胞である。その定義によると、幹細胞それら自体も前駆細胞であり、最終的にに分化した細胞にいっそう近い前駆体である。
【００３０】
細胞集団の分離は、それら細胞の表面に発現した、モノクロナール抗体の特異タンパク質を用いて達成することができる。モノクロナール抗体は、基質(substrate)に付着して、結合細胞(bound cells)同士の分離を容易にする。当業者は、本発明で用いるのに適した細胞を分離するのに使用することのできる方法を選定することができる。そのような方法の例は、ＵＳ6087113号、ＵＳ6261549号、ＵＳ5914262号、ＵＳ5908782号およびＵＳ20040058412号明細書に教示されている。
【００３１】
細胞は、例えば、成長特性（例えば、集団倍化能力、倍化時間、老化への継代）、核型分析（例えば、正常核型；母方もしくは新生児の血統）、流動細胞分析法（例えば、ＦＡＣＳ分析）、（例えば、エピトープ(epitopes)を検出するための）免疫組織化学および／もしくは免疫細胞化学、遺伝子発現プロファイリング［例えば、遺伝子チップ配列；ポリメラーゼ鎖反応（例えば、逆転写酵素ＰＣＲ、リアルタイムＰＣＲ、および通常ＰＣＲ）］、タンパク質配列、タンパク質分泌［例えば、調整培地の血漿凝固の検査もしくは分析、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）］、［例えば、ＰＢＭＣｓ（末梢血単核球）の刺激の測定のような］混合リンパ球反応、ならびに／または、当該技術分野で知られている他の方法、によって特徴付けることができる。
【００３２】
本発明の方法で用いるのに適した細胞には、市販の供給源、例えば、ＰＯＩＥＴＩＣＳ（登録商標）（カタログ. No.PT-2501，キャンブレックス(Cambrex)）なる商品名で販売されているヒト間葉幹細胞から得られる細胞も包含することがある。これらの間葉幹細胞は、次のマーカー：ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ１０５およびＣＤ１６６の発現に対しては陽性である。これらの細胞は、マーカー：ＣＤ１４、ＣＤ３４およびＣＤ４５の発現に対しては陰性である。
【００３３】
本発明の一つの態様において、前記細胞は、膵臓由来間質細胞である場合がある。これらの細胞は、実施例１に記述される多段法(multi-stage method)によって分離することができる。それらの細胞は代替的に、当業者に知られているいずれかの適切な方法によって分離することができる。適切な分離方法の例は、ＵＳ2003/0082155号、ＵＳ5,834,308号、ＵＳ6,001,647号、ＵＳ6,703,017号、ＵＳ6,815,203号、国際公開番号ＷＯ2004/011621号明細書に教示されている。
【００３４】
本発明の一つの態様において、前記細胞は、羊水由来細胞である場合がある。これらの細胞は、実施例２に詳細に記述されている多段法によって分離することができる。それらの細胞は代替的に、当業者に知られているいずれかの適切な方法によって分離することができる。適切な分離方法の例は、国際公開番号ＷＯ2003/042405号、ＵＳ2005/0054093号明細書、イント・アンケル(in't Anker)等：血液（Blood），１０２，第１５４８頁〜１５４９頁（２００３）、ツァイ(Tsai)等：ヒト再生（Human Reproduction），１９，第１４５０頁〜１４５６頁（２００４）に教示されている。
【００３５】
分離された細胞、または、細胞が得られる組織は、細胞培養を開始するためか、または接種するために用いることができる。分離された細胞を、無菌の組織培養容器に移して、被覆しないか、または、ラミニン、（天然の、変性された、もしくは架橋された）コラーゲン、ゼラチン、フィブロネクチン、および他の細胞外マトリックスタンパク質のような細胞外マトリックスまたはリガンド(ligands)で被覆することができる。細胞は、それらの細胞の成長を維持することのできるいずれの培地、例えば、（高グルコースまたは低グルコースの）ＤＭＥＭ、アドバンストＤＭＥＭ(advanced DMEM)、ＤＭＥＭ／ＭＣＤＢ２０１、イーグル基本培地(Eagle's basal medium)、ハムＦ１０培地(Ham's F10 medium)（Ｆ１０）、ハムＦ−１２培地(Ham's F-12 medium)（Ｆ１２）、イスコフ改変ダルベッコ−１７培地 (Iscove's modified Dulbecco's-17 medium)、間葉系幹細胞用成長培地(Mesenchymal Stem Cell Growth Medium)（ＭＳＣＧＭ）、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、ＲＰＭＩ１６４０、およびＣＥＬＬ−ＧＲＯ−ＦＲＥＥの中で培養することができる。前記培地には、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）；ウマ血清（ＥＳ）；ヒト血清（ＨＳ）；βメルカプトエタノール（ＢＭＥまたは２−ＭＥ）；１種以上の成長因子、例えば、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、白血球抑制因子（ＬＩＦ）およびエリスロポエチン(erythropoietin)；Ｌ−バリンを包含するアミノ酸；ならびに、微生物汚染を制御するための１種以上の抗生物質および／または抗真菌薬（例えば、ペニシリンＧ．硫酸ストレプトマイシン、アムホテリシンＢ．ゲンタマイシン、およびニスタチン）；を包含する１種以上の成分を、単独でまたは組み合わせて、補足することができる。前記細胞は、細胞成長が可能となる密度で培養容器に接種することができる。
【００３６】
最も適切な培地、培地の調製、および細胞培養技術を選定する方法は、当該技術分野では周知であり、ドイル(Doyle)等（編集）、細胞と組織培養：実験操作(CELL & TISSUE CULTURE:LABORATORY PROCEDURES)，ジョーン・ウィリー・アンド・サンズ(Johon Wily & Sons)，チチェスター(Chichester)（１９９５）；ならびに、ホー(Ho)およびワング(Wang)（編集）、１９９１，動物細胞バイオリアクター(ANIMAL CELL BIOREACTORS)，バターワース・ハイネマン(Butterworth-Heinemann)，ボストン（１９９１）を包含する様々な情報源に記述されている。
【００３７】
本発明で用いるのに適した細胞は、該細胞の増殖を刺激する少なくとも１種の因子を含有する規定の成長培地の中で培養することによって増殖することができる。その少なくとも１種の因子には、例えば、ニコチンアミド(nicotinamide)、（ＴＧＦ−β１、２および３を包含する）ＴＧＦ−βファミリーのメンバー、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ−２、−４、−６、−７、−１１、−１２および−１３）、血清アルブミン、線維芽細胞成長因子ファミリー、血小板由来成長因子−ＡＡおよび−ＢＢ、富血小板血漿、インスリン成長因子（ＩＧＦ−Ｉ、II）、成長分化因子（ＧＤＦ−５、−６、−８、−１０、−１１）、グルカゴン様ペプチド−ＩおよびII（ＧＬＰ−ＩおよびII）、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２のミメト体(mimetobody)、エキセンディン−４(Exendin-4)、レチノイン酸、副甲状腺ホルモン、インスリン、プロゲステロン(progesterone)、アプロチニン(aprotinin)、ヒドロコルチゾン(hydrocortisone)、エタノールアミン、βメルカプトエタノール、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ガストリンＩおよびII、銅キレート化剤（例えば、トリエチレンペンタミン(triethylene pentamine)）、ＴＧＦ−β、ホルスコリン(forskolin)、酪酸ナトリウム、アクティビン(activin)、βセルリン(betacellulin)、ノギン(noggin)、神経成長因子、ノーダル(nodal)、インスリン／転移／セレン(insulin/transferring/selenium)（ＩＴＳ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、ケラチン生成細胞成長因子（ＫＧＦ）、ウシ下垂体抽出物、膵島新生関連タンパク質(islet neogenesis-associated protein)（ＩＮＧＡＰ）、プロテアソーム阻害物質、ノッチ・パスウェイ阻害物質(notch pathway inhibitors)、ソニックヘッジホッグ阻害物質(sonic hedgehog inhibitors)、またはそれらの組合せが包含されることがある。代替的に、本発明で用いるのに適した細胞は、調整培地(conditioned media)で培養することによって増殖することができる。「調整培地」は、細胞の個体群が、規定された基礎細胞培地(basic defined cell culture medium)で成長して、該培地に可溶性因子を与えることを意味する。そういうものの一つの使用方法において、細胞は培地から取り除かれるが、該細胞が産生する可溶性因子は停まる。次いで、この培地は、細胞の他の個体群に栄養分を与えるために用いられる。
【００３８】
本発明の細胞の特徴付け
培養された細胞または分離された細胞の中のタンパク質または核酸の濃度によって、遺伝子の発現を評価する方法は、当該技術分野では標準的である。これらの方法には、リアルタイムのポリメラーゼ鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）が包含される。例えば、実施例３に記述される諸方法、ノーザンブロット法(Northern blots)、インサイチュー・ハイブリダイゼイション法(in situ hybridization)［例えば、分子生物学における現行プロトコル(Current Protocols in Molecular Biology)（オースベル(Ausubel)等編集，２００１年補遺）を参照されたい］、ウェスタンブロッティング(Western blotting)、および、無傷細胞に接近可能なマーカーに関する、フローサイトメトリー分析法(flow cytometry analysis)（ＦＡＣＳ）［ハーロー(Harlow)およびレイン(Lane)，抗体使用：実験マニュアル(Using Antibodies: A Laboratory Manual)，ニューヨーク，コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス(Cold Spring Harbor Laboratory Press)（１９９８）と、実施例４に記述される諸方法とを参照されたい］、ならびに、切断材料の免疫組織化学法のような免疫学的検定法［例えば、実施例５に記述される諸方法を参照されたい］を参照されたい。
【００３９】
幾つかのタンパク質マーカーを検出するのに有用な諸抗体の例を、表Ｉ−Ａおよび表Ｉ−Ｂに記載する。表Ｉ−Ａおよび表Ｉ−Ｂに記載される諸抗体によって認識される同一マーカーに向けられる他の諸抗体は、入手することができるか、または容易に開発させることができることに注目すべきである。そのような他の抗体もまた、本発明に基づいて分離された細胞におけるマーカーの発現を評価するために用いることができる。
【００４０】
β細胞系統の細胞の特徴は、当業者に周知であり、β細胞系統の更なる特徴は、依然として同定されている。これらの特徴は、本発明に基づいて分離された羊水由来細胞が分化して、β細胞系統の特徴的特性を獲得したことを確認するために用いることができる。β細胞系統の特異的特徴には、１種以上の転写因子［例えば、とりわけ、ＰＤＸ−１（膵臓および十二指腸のホメオボックス遺伝子−１）、ＮＧＮ−３（ニューロジェニン−３(neurogenin-3)）、Ｈｌｘｂ９、Ｎｋｘ６、Ｉｓｌ１、Ｐａｘ６、ＮｅｕｒｏＤ、Ｈｎｆｌａ、Ｈｎｆ６、Ｈｎｆ３βおよびＭａｆａ］の発現が包含される。これらの転写因子は、内分泌細胞の同定を行うために、当該技術分野では十分に確立されている。例えば、エドランド(Edlund)［ネイチャー・レビュー・ジェネテックス(Nature Review Genetics)３：第５２４頁〜６３２頁（２００２）］を参照されたい。
【００４１】
クロマチンリモデリング(chromatin-remodeling)による細胞分化
本発明において有用な細胞の分化は、該細胞内の遺伝子の発現を変えることによって達成することができる。このことは、活性なまたは潜在的に活性な遺伝子を含有するＤＮＡ領域がいっそう緩く包まれ、あまり濃縮されず、かつ、転写のためにアクセスされることができるような具合に、それら細胞内のクロマチン構造をリモデリングする少なくとも１種の試薬で該細胞を処理することによって達成することができる。細胞内のクロマチン構造をリモデリングする少なくとも１種の試薬によって該細胞が処理された結果として、理想的には、該細胞にとって有毒とならないように、かつ、細胞死のような有害反応を引き起こすことなく、遺伝発現が改変されることが望ましい。当業者は、そのような有毒または有害な事象を容易に決定し、かつ、そのような事象が最小限に抑えられている細胞の内部のクロマチン構造をリモデリングする試薬を選定することができる。
【００４２】
一つの具体例において、前記細胞は、生体外細胞培養細胞(in vitro cell culture)の一部である。一般に、幹細胞または培養されている前駆細胞のような細胞は、該細胞内での遺伝子発現を改変するのに有効な量の少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬と接触させることができる。
【００４３】
クロマチンリモデリング試薬で処理された細胞は、いずれの単一遺伝子にも遺伝子ファミリーにも限定されない、遺伝子発現の広範な変化(global changes)を呈することがある。その結果、ある遺伝子は発現量が減少し(down-regulate)、別の遺伝子は発現量が増加する(up-regulate)場合があり、また、更に別の遺伝子は、細胞型、該細胞型の分化段階、ならびに、前記処理のプロトコルおよび環境または他の刺激の信号（例えば、細胞分裂）との両方に対する長時間の間の応答のよって決まるが、変化しないままである場合がある。
【００４４】
クロマチンリモデリング試薬が、遺伝子（例えば、転写因子遺伝子(transcription factor genes)）であってそれら自体、他の下流の(downstream)遺伝子を調節する該遺伝子の発現を改変する場合、更なる複雑さが生じることがある。最終的に、クロマチンリモデリング剤は、同等のやり方で、遺伝子の調節領域(gene regulatory domains)の全体には影響を及ぼさないであろう。したがって、該試薬は、十分に分化した細胞を有する、完全な遺伝子発現のコミゼレイト(commiserate)を産生しないであろう。例えば、クロマチンリモデリング剤は、プロモーター領域(promoter regions)からの可変距離(variable distances)において二方向に作動する、同一の遺伝子エンハンサー領域(gene enhancer regions)を改変せず、結果として、遺伝子は、十分な発現を達成することなく翻訳されるであろう。
【００４５】
所望の細胞型の分化を行うためには、遺伝子の発現レベルがクロマチンリモデリング剤を用いた処理によって改変される該遺伝子を必要とすることがある。本明細書では、該遺伝子を「分化関連(differentiation-related)」遺伝子と呼ぶ。代替的に、該遺伝子は、所望の細胞型の機能と関連する場合がある。その機能には、例えば、β細胞の場合のインスリンの分泌が包含されることがある。クロマチンリモデリング剤は、分化関連遺伝子と所望の細胞型の機能に関連する遺伝子との発現に、同時に影響を及ぼすことがある。
【００４６】
クロマチンリモデリングは、ヒストン(histones)の直接的な共有結合修飾(covalent modification)によって達成することができる。該共有結合修飾は、アセチル化、メチル化、リン酸化反応、ユビキチン化(ubiquitinylation)およびユビキチン様タンパク質による修飾(sumolylation)によって生じることがある。該共有結合修飾は、これらの修飾の一つまたは全てを刺激する少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬を添加することによって達成することができる。代替的に、その少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬は、これらの修飾の一つ以上を抑制することができる。
【００４７】
本発明の方法は、一つの具体例において、
−  細胞の個体群を分離する過程と、
−  前記の細胞の個体群を、少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬に接触させる過程と、
−  前記の細胞の個体群の遺伝子発現の変化(changes)を決定する過程と、
−  前記の処理された細胞の個体群を生体外で(in vitro)培養する過程と、
を本質的に含む。
【００４８】
本発明の方法は、一つの具体例において、
−  生体外で培養を行う間、ＰＤＸ−１を発現しないか、または、ＰＤＸ−１の発現を喪失してしまった細胞の個体群を分離する過程と、
−  前記の細胞の個体群を、少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬に接触させる過程と、
−  前記の細胞の個体群の遺伝子発現のその後の変化を決定する過程と、
−  前記の処理された細胞の個体群を生体外で培養する過程と、
を本質的に含む。
【００４９】
遺伝子発現の変化は、発現量の増加(up-regulation)であってもよいし、または発現量の減少(down-regulation)であってもよいし、または組合せ(combination)であってもよい。前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬は、１種の遺伝子または複数種の遺伝子の発現レベルに、同一程度にもしくは異なる程度に影響を与えることがある。前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬は、１種の遺伝子または複数種の遺伝子の発現レベルに影響を与えて、他の遺伝子の発現レベルに影響を与えないことがある。
【００５０】
前記細胞は、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬による１回以上の処理を必要とすることがある。２回以上の処理は、同一のクロマチンリモデリング試薬を用いることもあるし、または、異なるクロマチンリモデリング試薬を用いることもある。
【００５１】
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング試薬の濃度は、使用される細胞、１種以上のクロマチンリモデリング剤の選定、発現レベルが改変される予定である１種以上の遺伝子、培養条件、等によって変わることがある。その少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤は、約７２時間以下の間、または約４８時間以下の間、または約２４時間以下の間、または約１２時間以下の間、または約６時間以下の間、または約４時間以下の間、または約２時間以下の間、または約１時間以下の間、前記細胞と接触させることができる。
【００５２】
少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理された細胞は、該細胞が特異的な細胞型に分化するのを促進する少なくとも１種の他の因子で処理することができる。因子には、例えば、ニコチンアミド、（ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３を包含する）ＴＧＦ−βファミリーのメンバー、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ−２、−４、−６、−７、−１１、−１２および−１３）、血清アルブミン、線維芽細胞成長因子ファミリーのメンバー、血小板由来成長因子−ＡＡおよび−ＢＢ、富血小板血漿、インスリン成長因子（ＩＧＦ−Ｉ、II）、成長分化因子（ＧＤＦ−５、−６、−８、−１０、−１１）、グルカゴン様ペプチド−ＩおよびII（ＧＬＰ−ＩおよびII）、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２のミメト体(mimetobody)、エキセンディン−４(Exendin-4)、レチノイン酸、副甲状腺ホルモン、インスリン、プロゲステロン(progesterone)、アプロチニン(aprotinin)、ヒドロコルチゾン(hydrocortisone)、エタノールアミン、βメルカプトエタノール、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ガストリンＩおよびII、銅キレート化剤（例えば、トリエチレンペンタミン）、ホルスコリン(forskolin)、酪酸ナトリウム、アクティビン(activin)、βセルリン(betacellulin)、ＩＴＳ（インスリン／転移／セレン）、ノギン(noggin)、神経突起成長因子、ノーダル(nodal)、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、ケラチン生成細胞成長因子（ＫＧＦ）、ウシ下垂体抽出物、膵島新生関連タンパク質(islet neogenesis-associated protein)（ＩＮＧＡＰ）、プロテアソーム阻害物質、ノッチ・パスウェイ阻害物質(notch pathway inhibitors)、ソニックヘッジホッグ阻害物質(sonic hedgehog inhibitors)、またはそれらの組合せが包含されることがある。
【００５３】
諸成長因子の組合せおよび濃度と、培養期間と、他の培養条件とは、当業者によって最適化されて、例えば、所望の系統の特徴を持つ細胞に分化した細胞の割合を監視することによって、有効な分化が達成され得る。前記の１種以上の成長因子は、本発明に係る細胞が、約１〜４週間に渡ってβ細胞系統のマーカーを有する細胞に分化するのを誘発するのに十分な量で添加することができる。
【００５４】
クロマチンリモデリング剤
本発明の一つの態様において、前記クロマチンリモデリング剤は、ヒストンデアセチラーゼ活性(histone deacetylase activity)のモジュレーター(modulator)である。「ヒストンデアセチラーゼ」とは、ヒストンからアセチル基を除去する酵素をいう。ヒストンデアセチラーゼ活性のモジュレーターは、ヒストンデアセチラーゼ酵素の活性を高めることができるか、または、該モジュレーターは、ヒストンデアセチラーゼ酵素の活性を抑制することができる。
【００５５】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤(inhibitor)は、一般式：
【化１】
2007061096.tif 000003
｛式中、Ｘは、酸素、イオウおよびＮ（Ｒ）から成る群から選ばれ；
Ｙは、イオウ、Ｎ（Ｒ）およびＣＨ2から成る群から選ばれ（式中、ＲはＨまたはＣＨ3である）；
Ｒ1およびＲ2は、同一であるかまたは相違しており、かつ、一般式：
【化２】
2007061096.tif 000004
［式中、Ｒ3およびＲ4は、同一であるかまたは相違しており、かつ、（ＣＨ＝ＣＨ）、（Ｃ≡Ｃ）、イオウおよび酸素から成る群から選ばれており；Ｚは、水素、および、一般式ＣnＨ2n-1（式中、ｎは３以上である）を有する置換もしくは非置換のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、および、アルコキシ基から成る群から選ばれておりであり；しかも、ｏ，ｐ，ｑ，ｒおよびｓは、同一であるかまたは相違しており、それぞれ、０〜１０の間である］を有する｝を有するδ−ジカルボニル化合物（例えば、欧州特許出願ＥＰ1216986号明細書に開示される化合物）である場合がある。
【００５６】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化３】
2007061096.tif 000005
［式中、Ｒ1は、Ｈ、ハロゲン、または直鎖Ｃ1〜Ｃ6アルキル基であり；
Ｒ2は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキルアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基、−（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｒ6、−（ＣＨ2）nＯＣ（Ｏ）Ｒ6、アミノアシル基、ＨＯＮ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ１）−アリール−アルキル基、および−（ＣＨ2）nＲ7から選ばれ；
Ｒ3およびＲ4は、同一であるか、もしくは相違しており、独立して、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、アシル基もしくはアシルアミノ基であり、または、Ｒ3およびＲ4と、Ｒ3およびＲ4が結合されている炭素とは、Ｃ＝Ｑ、Ｃ＝Ｓ、もしくはＣ＝ＮＣ8を表わし、または、Ｒ2およびＲ2が結合されている窒素ならびに、Ｒ3およびＲ3が結合されている炭素は、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、ポリヘテロアリール基、非芳香族多複素環式基(non-aromatic polyheterocycle)、もしくは、アリールと非アリールとの混合された多複素環式基(polyheterocycle ring)を形成することができ；
Ｒ5は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、アシル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基、芳香族多環式基（aromatic polycycle）、非芳香族多環式基、アリールと非アリールとの混合された多環式基、ポリへテロアリール基、非芳香族多複素環式基（non-aromatic polyheterocycle）、および、アリールと非アリールとの混合された多複素環式基から選ばれ；
ｎ、ｎ1、ｎ2およびｎ3は、同一であるかまたは相違しており、かつ、独立して０〜６から選ばれ、ｎ1が１〜６であるとき、各々の炭素原子は、任意的かつ独立してＲ3および／またはＲ4で置換することができ；
ＸおよびＹは、同一であるかまたは相違しており、かつ、独立してＨ、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ4アルキル基、ＮＯ2、Ｃ（Ｏ）Ｒ1、ＯＲ9、ＳＲ9、ＣＮおよびＮ１Ｒ10Ｒ11から選ばれ；Ｒ6は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基、ＯＲ12およびＮＲ13Ｒ14から選ばれ；Ｒ7は、ＯＲ15、ＳＲ15、Ｓ（Ｏ）Ｒ16、ＳＯ2Ｒ17、ＮＲ13Ｒ14およびＮＲ12ＳＯ2Ｒ6から選ばれ；Ｒ8は、Ｈ、ＯＲ15、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル基およびヘテロアリールアルキル基から選ばれ；Ｒ9は、Ｃ1〜Ｃ4アルキル基およびＣ（Ｏ）−アルキル基から選ばれ；Ｒ10およびＲ11は、同一であるかまたは相違しており、かつ、独立してＨ、Ｃ1〜Ｃ4アルキル基、−Ｃ（Ｏ）−アルキル基から選ばれ；Ｒ12は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキルアルキル基、アリール基、アリールと非アリールとの混合された多環式基(polycycle)、ヘテロアリール基、アリールアルキル基およびヘテロアリールアルキル基から選ばれ；Ｒ13およびＲ14は、同一であるかまたは相違しており、かつ、独立してＨ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基、アミノアシル基から選ばれるか、または、Ｒ13およびＲ14と、Ｒ13およびＲ14が結合されている窒素とは、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、ポリヘテロアリール基、非芳香族多複素環式基、もしくは、アリールと非アリールとの混合された多複素環式基であり；Ｒ15は、Ｈ、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基および（ＣＨ2）mＺ１Ｒ12から選ばれ；Ｒ16は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、ポリヘテロアリール基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基および（ＣＨ2）mＺ１Ｒ12から選ばれ；Ｒ17は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ4〜Ｃ9シクロアルキル基、Ｃ4〜Ｃ9ヘテロシクロアルキル基、アリール基、芳香族多環式基、ヘテロアリール基、アリールアルキル基、ヘテロアリールアルキル基、ポリヘテロアリール基およびＮＲ13Ｒ14から選ばれ；ｍは、０〜６から選ばれた整数であり；更に、Ｚは、Ｏ、ＮＲ１３、ＳおよびＳ（Ｏ）から選ばれている］を有するヒドロキサマート化合物(hydroxamate compound)［例えば、国際公開番号ＷＯ0222577号明細書に開示されている諸化合物］、または、医薬品として容認できる、それら化合物の塩である場合がある。
【００５７】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化４】
2007061096.tif 000006
（式中、Ｒ1はメチル基であり、Ｗはメチル基またはエチル基であり、Ｗは水素またはメチル基であり、また、Ｗは、Ｗが水素である場合、Ｗはエチル基であるという条件で、任意的にヒドロキシ保護基を有するヒドロキシ基である）を有する環状テトラペプチド化合物（例えば、国際公開番号ＷＯ0021979号明細書に開示されている諸化合物）である場合がある。
【００５８】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、該化合物がＦＲ901228号明細書に開示される化合物ではないという条件で、一般式：
【化５】
2007061096.tif 000007
（式中、ｍは、１、２、３または４であり；
ｎは、０、１、２または３であり；
ｐおよびｑは、独立して１または２であり；
Ｘは、Ｏ、ＮＨまたはＮＲであり；
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、同一であるかまたは相違しており、かつ、独立して、アミノ酸側鎖部分、またはアミノ酸側鎖誘導体であり；また、Ｒは、低級鎖のアルキル、アリールまたはアリールアルキル部分である）を有するデプシペプチド化合物(depsipeptide compound)（例えば、国際公開番号ＷＯ0142282号明細書に開示されている諸化合物）である場合がある。
【００５９】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、国際公開番号ＷＯ0149290号明細書に開示されているような、「スクリプタイド(scriptaid)」と称される、６−（１，３−ジオキソ−１Ｈ，３Ｈ−ベンゾ［デ］イソキノリン−２−イル）ヘキサン酸ヒドロキシアミド[6-(1,3-Dioxo-1H,3H-benzo[de]isoquinolin-2-yl)-hexanoic acid hydroxyamide]であってもよい。
【００６０】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化６】
2007061096.tif 000008
（式中、Ｒ1およびＲ2は、同一であるかもしくは相違しており、しかも、それぞれ、疎水性部分であり；
Ｒ3は、ヒドロキサム酸基、ヒドロキシルアミノ基、ヒドロキシル基、アミノ基、アルキルアミノ基もしくはアルキルオキシ基であり；
ｎは、３〜１０の整数である）を有する諸化合物、または、医薬品として容認できるそれら化合物の塩（例えば、国際公開番号ＷＯ0118171号明細書に開示されている諸化合物）である場合がある。
【００６１】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化７】
2007061096.tif 000009
｛式中、Ａは、−ＣＨ2−Ｏ−基、−ＣＨ2−Ｓ−基、−ＣＨ2−ＣＨ2−、または−ＮＨ−ＣＯ−基の結合を示し；
Ｘは、−ＮＲ3−基、＝ＣＯ基、または−ＣＨ（ＯＨ）−基を示し；
Ｙは、酸素原子、イオウ原子、または−ＮＲ4−基を示し；
Ｚは、４、５、６、７もしくは８個の炭素原子を含む直鎖アルキレン基［該直鎖アルキレン基において、１個のＣＨ2基は、１個の酸素原子もしくは１個のイオウ原子で置換されている場合があり、または、２個の炭素原子は、Ｃ＝Ｃ二重結合を形成しており、該Ｃ＝Ｃ結合は、置換されていないか、もしくは、（1~4Ｃ）アルキル基もしくはハロゲン原子から選ばれた１個もしくは２個の置換基によって置換されている］を示し；
Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素原子、ハロゲン原子、（1~4Ｃ）アルキル基、トリフルオロメチル基、ヒドロキシ基、（1~4Ｃ）アルコキシ基、ベンジルオキシ基、（1~3Ｃ）アルキレンジオキシ基、ニトロ基、アミノ基、（1~4Ｃ）アルキルアミノ基、ジ［（1~4Ｃ）アルキル］−アミノ基または（1~4Ｃ）アルカノイルアミノ基から選ばれた置換基を示し；Ｒ3およびＲ4は、独立して、水素原子または（1~4Ｃ）アルキル基を示す｝を有する三環式アルキルヒドロキサマート化合物(tricyclic alkylhydroxamate compound)（例えば、国際公開番号ＷＯ2002085883号明細書に開示されている諸化合物）、それら化合物の鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ化合物、ならびにそれらの混合物である場合がある。
【００６２】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化８】
2007061096.tif 000010
は、シクロヘキセニル基、または、１個以上の置換基であって独立してハロゲン原子、ニトロ基、アミノ基、（1~4Ｃ）アルキルアミノ基、ジ［（1~4Ｃ）アルキル］−アミノ基もしくは（1~4Ｃ）アルカノイルアミノ基から選ばれた該置換基によって置換されている、もしくは置換されていないフェニル基を示し；
Ｘは、カルボニル基またはスルホニル基であり；
Ｙは、５、６または７個の炭素原子を有する直鎖アルキレン基［該直鎖アルキレン基において、１個のＣＨ2基は、１個の酸素原子もしくは１個のイオウ原子で置換されている場合があり、または、２個の炭素原子は、Ｃ＝Ｃ二重結合を形成しており、該Ｃ＝Ｃ結合は、置換されていないか、もしくは、（1~4Ｃ）アルキル基およびハロゲン原子から選ばれた１個もしくは２個の置換基によって置換されている］である｝を有する、三環式ラクタムまたはスルタム(sultam)の誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2002062773号明細書に開示されている諸化合物）、それら化合物の鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ化合物、それらの混合物、ならびに、医薬品として容認できる塩である場合がある。
【００６３】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化９】
2007061096.tif 000011
は、（ａ）フェニル基であって、置換されていないか、または、ハロゲン原子、（1~4Ｃ）アルキル基、トリフルオロメチル基、ヒドロキシ基、（1~4Ｃ）アルコキシ基、ベンジルオキシ基、（1~3Ｃ）アルキレンジオキシ基、ニトロ基、アミノ基、（1~4Ｃ）アルキルアミノ基、ジ［（1~4Ｃ）アルキル］−アミノ基、（1~4Ｃ）アルカノイル−アミノ基から独立して選ばれた１、２もしくは３個の置換基で置換されている場合がある該フェニル基を示すか、または、フェニル基であって、置換されていないか、または、塩素原子、（1~4Ｃ）アルキル基、トリフルオロメチル基、ヒドロキシ基、（1~4Ｃ）アルコキシ基、（1~3Ｃ）アルキレンジオキシ基、ニトロ基、アミノ基、（1~4Ｃ）アルキルアミノ基、ジ［（1~4Ｃ）アルキル］−アミノ基および（1~4Ｃ）アルカノイル−アミノ基から独立して選ばれた１、２もしくは３個の置換基で置換されている場合がある該フェニル基を示すか、または、（ｂ）インドリル基であって、置換されていないか、または、ハロゲン原子、（1~4Ｃ）アルキル基、トリフルオロメチル基、ヒドロキシ基、（1~4Ｃ）アルコキシ基、ベンジルオキシ基、（1~3Ｃ）アルキレンジオキシ基、ニトロ基、アミノ基、（1~4Ｃ）アルキルアミノ基、ジ［（1~4Ｃ）アルキル］−アミノ基、もしくは（1~4Ｃ）アルカノイル−アミノ基から独立して選ばれた１、２もしくは３個の置換基で置換されている場合がある該インドリル基を示し；
Ｒ1およびＲ2は、同一であるかまたは互いに相違しており、しかも、水素原子、（1~4Ｃ）アルキル基、トリフルオロメチル基もしくはアリール基であり；
Ｘは、５、６または７個の炭素原子を有する直鎖アルキレン基であって、その中の１個のＣＨ2基が、１個の酸素原子もしくは１個のイオウ原子で置換されている場合があるか、または、その中の２個の炭素原子が、Ｃ＝Ｃ二重結合であって、置換されていないか、または、（1~4Ｃ）アルキル基およびハロゲン原子から選ばれた１個もしくは２個の置換基によって置換されている該二重結合を形成している、該直鎖アルキレン基である｝を有する、テトラヒドロピリジン誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2002051842号明細書に開示されている諸化合物）、それら化合物の鏡像異性体、ジアステレオ異性体、ラセミ化合物、それらの混合物、ならびに、医薬品として容認できる塩である場合がある。
【００６４】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化１０】
2007061096.tif 000012
［式中、Ａは、アリール基であり；
Ｑ1は、少なくとも２個の炭素原子の主鎖を有するアリールリーダー基(aryl leader group)であり；
Ｊは、
【化１１】
2007061096.tif 000013
（式中、Ｒ1は、アミド置換基である）から選ばれたアミド結合であり；
Ｑ2は、酸リーダー基(acid leader group)であり；しかも、
Ａは、Ｃ5~20アリール基であり、任意的に置換されており；前記アリールリーダー基はＣ1~7アルキレン基であり、任意的に置換されており；前記アミド置換基Ｒ1は、水素、Ｃ1~7アルキル基、Ｃ3~20ヘテロシクリル（heterocyclyl）基またはＣ5~20アリール基であり；前記酸リーダー基Ｑ2は、Ｃ1~7アルキレン基、Ｃ5~20アリーレン基、Ｃ5~20アリーレン−Ｃ1~7アルキレン基、Ｃ1~7アルキレン−Ｃ5~20アリーレン基であり、任意的に置換されており；更に、前記酸リーダー基Ｑ2は、少なくとも３個の炭素原子の主鎖を有している］を有するカルバミン酸化合物（例えば、国際公開番号ＷＯ2002026696号明細書に開示されている諸化合物）、ならびに、それらの、医薬品として容認できる塩、溶媒和化合物、アミド、エステル、エーテル、化学的に保護された形態のもの、ならびに、プロドラッグ(prodrugs)である場合がある。
【００６５】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化１２】
2007061096.tif 000014
｛式中、Ｒ1は、水素、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分、−（脂肪族）アリール部分、−（脂肪族）ヘテロアリール部分、−（ヘテロ脂肪族）アリール部分または−（ヘテロ脂肪族）ヘテロアリール部分であり；ｎは、１〜５であり；
Ｒ2は、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分、−（脂肪族）アリール部分、−（脂肪族）ヘテロアリール部分、−（ヘテロ脂肪族）アリール部分または−（ヘテロ脂肪族）ヘテロアリール部分であり；
Ｘは、−Ｏ−、−Ｃ（Ｒ2A）2−、−Ｓ−または−ＮＲ2A−であり［式中、Ｒ2Aは、水素、保護基、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分、−（脂肪族）アリール部分、−（脂肪族）ヘテロアリール部分、（ヘテロ脂肪族）アリール部分もしくは−（ヘテロ脂肪族）ヘテロアリール部分であるか、または、Ｒ2とＲ2Aとが一緒になって２個以上出現することによって、環式脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アリール部分もしくはヘテロアリール部分が形成される］；
Ｒ3は、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分、−（脂肪族）アリール部分、−（脂肪族）ヘテロアリール部分、−（ヘテロ脂肪族）アリール部分または−（ヘテロ脂肪族）ヘテロアリール部分であり；および、
Ｙは、水素、脂肪族部分、ヘテロ脂肪族部分、アリール部分、ヘテロアリール部分、−（脂肪族）アリール部分、（脂肪族）ヘテロアリール部分、−（ヘテロ脂肪族）アリール部分または−（ヘテロ脂肪族）ヘテロアリール部分であり、そうであることによって、前記の脂肪族基およびヘテロ脂肪族基の各々は、独立して、置換されているかまたは置換されておらず、環式となっているかまたは非環式となっており、直鎖となっているかまたは枝分かれとなっており、しかも、前記のアリール基およびヘテロアリール基の各々は、置換されているかまたは置換されていない｝を有するジオキサン酸化合物（例えば、国際公開番号ＷＯ2002089782号明細書に開示されている諸化合物）である場合がある。
【００６６】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化１３】
2007061096.tif 000015
｛式中、
Ｒ3およびＲ4は、独立して、水素、Ｌ1、Ｃｙ1および−Ｌ1−Ｃｙ1から成る群から選ばれている［式中、Ｌ1は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ2〜Ｃ6ヘテロアルキル基もしくはＣ3〜Ｃ6アルケニル基であり；また、Ｃｙ1は、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基もしくはヘテロシクリル（heterocyclyl）基であり、それらの基の各々は、任意的に置換されており、しかも、それらの基の各々は任意的に、１個もしくは２個のアリール環、または、１個もしくは２個のヘテロアリール環、または、１個もしくは２個の飽和しているかもしくは部分的に不飽和のシクロアルキル環、または、１個もしくは２個の飽和しているかもしくは部分的に不飽和の複素環と一体になっており、それらの環の各々は、任意的に置換されている］か；または、Ｒ3およびＲ4は、隣接する窒素原子と一緒になって５員環、６員環もしくは７員環を形成しており、しかも、それら環原子は、独立して、Ｃ、Ｏ、ＳおよびＮから成る群から独立して選ばれており、しかも、該環は任意的に飽和されており、かつ、任意的に、二環系の一部を形成しており、または、１個もしくは２個のアリール環、または、１個もしくは２個のヘテロアリール環、または、１個もしくは２個の飽和しているかもしくは部分的に不飽和のシクロアルキル環、または、１個もしくは２個の飽和しているかもしくは部分的に不飽和の複素環と一体になっており、それらの環および環系の各々は、任意的に置換されており；
Ｙ1は、−Ｎ（Ｒ1）（Ｒ2）、−ＣＨ2−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ1）（Ｒ2）、ハロゲンおよび水素から成る群から選ばれており、しかも、Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素、Ｌ1、Ｃｙ1および−Ｌ1−Ｃｙ1から成る群から選ばれている［式中、Ｌ1は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル基、Ｃ2〜Ｃ6ヘテロアルキル基もしくはＣ3〜Ｃ6アルケニル基であり；また、Ｃｙ1は、シクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基もしくはヘテロシクリル基であり、それらの基の各々は、任意的に置換されており、しかも、それらの基の各々は任意的に、１個もしくは２個のアリール環、または、１個もしくは２個のヘテロアリール環、または、１個もしくは２個の飽和しているかもしくは部分的に不飽和のシクロアルキル環、または、１個もしくは２個の飽和しているかもしくは部分的に不飽和の複素環と一体になっており、それらの環の各々は、任意的に置換されている］か；または、Ｒ1およびＲ2は、隣接する窒素原子と一緒になって５員環、６員環もしくは７員環を形成しており、しかも、それら環原子は、独立して、Ｃ、Ｏ、ＳおよびＮから成る群から選ばれており、しかも、該環は任意的に飽和されており、かつ、任意的に、二環系の一部を形成しており、または、１個もしくは２個のアリール環、または、１個もしくは２個のヘテロアリール環、または、１個もしくは２個の飽和しているかもしくは部分的に不飽和のシクロアルキル環、または、１個もしくは２個の飽和しているかもしくは部分的に不飽和の複素環と任意的に一体になっており、それらの環および環系の各々は、任意的に置換されており；
Ｙ2は、化学結合またはＮ（Ｒ0）（式中、Ｒ0は、水素、アルキル基、アリール基、アラルキル基およびアシル基から成る群から選ばれている）であり；
Ａｋ1は、Ｃ1〜Ｃ6アルキレン基、Ｃ1〜Ｃ6ヘテロアルキレン基（その中の１個のＣＨ2−は、好ましくは−ＮＨ−で、より好ましくは−ＮＨ−ＣＨ2−で置換されている）、Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン基またはＣ2〜Ｃ6アルキニレン基であり；
Ａｒ1は、アリーレンまたはへテロアリーレンであり、それらのいずれも任意的に置換されており；また、
Ｚ1は、
【化１４】
2007061096.tif 000016
（式中、Ａｙ1は、アリール基またはへテロアリール基であり、それらの各々は任意的に置換されている）から成る群から選ばれている｝を有する化合物である場合がある。そのような化合物は、国際公開番号ＷＯ2003024448号明細書に開示されている。
【００６７】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化１５】
2007061096.tif 000017
｛式中、Ａは、アリール基であり；
Ｑ1は、共有結合またはアリールリーダー基であり；
Ｊは、
【化１６】
2007061096.tif 000018
（式中、Ｒ1は、スルホンアミド置換基であり；また、Ｑ2は、酸リーダー基である）から選ばれたスルホンアミド結合である；ただし、
Ｊが
【化１７】
2007061096.tif 000019
である場合、Ｑ1は、アリールリーダー基であり；しかも、Ａは、Ｃ5~20アリール基であり、任意的に置換されており、前記アリールリーダー基は、存在する場合、Ｃ1~7アルキレン基であり、任意的に置換されており；スルホンアミド置換基Ｒ1は、水素、Ｃ1~7アルキル基、Ｃ3~20ヘテロシクリル基またはＣ5~20アリール基であり；前記酸リーダー基Ｑ2は、Ｃ1~7アルキレン基、Ｃ5~20アリーレン基、Ｃ5~20アリーレン−Ｃ1~7アルキレン基、Ｃ1~7アルキレン−Ｃ5~20アリーレン基、またはエーテル結合であり、任意的に置換されている｝を有するカルバミン酸化合物（例えば、国際公開番号ＷＯ2002030879号明細書に開示されている諸化合物）、ならびに、それらの、医薬品として容認できる塩、溶媒和化合物、アミド、エステル、エーテル、化学的に保護された形態のもの、ならびに、プロドラッグである場合がある。
【００６８】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化１８】
2007061096.tif 000020
［式中、Ｃｙは、独立して、シクリル（cyclyl）基であり；
Ｑ1は、独立して、共有結合またはシクリルリーダー基であり；ピペラジン−１，４−ジイル（piperazin-1,4-diyl）基は、任意的に置換されており；
Ｊ1は、独立して、共有結合または−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｊ2は、独立して、−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｓ（＝Ｏ）2−であり；
Ｑ2は、独立して、酸リーダー基であり；しかも、Ｃｙは、独立して、Ｃ3~20カルボシクリル基(carbocyclyl)、Ｃ3~20ヘテロシクリル基またはＣ5~20アリール基であり、任意的に置換されており；Ｑ1は、独立して、共有結合、Ｃ1~7アルキレン基、Ｃ1~7アルキレン−Ｘ−Ｃ1~7アルキレン基、−Ｘ−Ｃ1~7アルキレン基、またはＣ1~7アルキレン−Ｘ−基であり（式中、Ｘは、−Ｏ−または−Ｓ−である）、任意的に置換されており；Ｑ2は、独立して、Ｃ4~8アルキレン基であり、任意的に置換されており、しかも、少なくとも４個の原子の主鎖長を有しており；または、Ｑ2は、独立して、Ｃ5~20アリーレン基、Ｃ5~20アリーレン−Ｃ1~7アルキレン基、Ｃ1~7アルキレン−Ｃ5~20アリーレン基、またはＣ1~7アルキレン−Ｃ5~20アリーレン−Ｃ1~7アルキレン基であり、任意的に置換されており、しかも、少なくとも４個の原子の主鎖長を有している］を有するカルバミン酸化合物（例えば、国際公開番号ＷＯ2003082288号明細書に開示されている諸化合物）、または、それらの、医薬品として容認できる塩、溶媒和化合物、アミド、エステル、エーテル、化学的に保護された形態のもの、ならびに、プロドラッグである場合がある。
【００６９】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化１９】
2007061096.tif 000021
｛式中、ｔは、０、１、２、３または４であり、ｔが０の場合、直接結合(direct bond)が意図されており；
【化２０】
2007061096.tif 000022
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ4、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）Ｒ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｃ＝Ｎ（ＯＨ）Ｒ7、または別のＺｎ−キレート基(Zn-chelating-group)であり［式中、Ｒ3およびＲ4は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ基、Ｃ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、アミノＣ1~6アルキル基、またはアミノアリール基から選ばれており；Ｒ7は、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルカルボニル基、アリールＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピラジニル（alkylpyrazinyl）基、ピリジノン、ピロリジノン、またはメチルイミダゾリル基であり；Ｒ8は、水素またはＣ1~6アルキル基である］；
Ｒ2は、水素、ヒドロキシ基、アミノ基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシカルボニル基、アミノＣ1~6アルキル基、アミノカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基、またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基であり；
−Ｌ−は、−ＮＲ9Ｃ（Ｏ）−、ＮＲ9ＳＯ2−または−ＮＲ9ＣＨ2−から選ばれている２価の基であり［式中、Ｒ9は、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ3~10シクロアルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキル基、またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基である］；
【化２１−１】
2007061096.tif 000023
【化２１−２】
2007061096.tif 000024
【化２１−３】
2007061096.tif 000025
［式中、各々のｓは、独立して、０、１、２、３、４または５であり；Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ基；アミノ基；ニトロ基；トリハロＣ1~6アルキル基；トリハロＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキル基；アリール基およびＣ3~10シクロアルキル基で置換されているＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルカルボニル基；Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基；Ｃ1~6アルキルスルホニル基；シアノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシ基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノ基；アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノカルボニル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノ基；（アリール）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；アリールスルホニル基；アリールスルホニルアミノ基；アリールオキシ基；アリールオキシＣ1~6アルキル基；アリールＣ2~6アルケンジイル（alkenediyl）基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；シアノ基；チオフェニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基、モルホリニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基で置換されているチオフェニル基；フラニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基で置換されているフラニル基；ベンゾフラニル基；イミダゾリル基；オキサゾリル基、アリール基およびＣ1~6アルキル基で置換されているオキサゾリル基；Ｃ1~6アルキルトリアゾリル基；テトラゾリル基；ピロリジニル基；ピロリル基；ピペリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニル基；Ｃ1~6アルキルモルホリニル基；モルホリニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニルＣ1~6アルキル基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノ基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピペラジニルＣ1~6��ルキル基；ナフタレニルスルホニルピペラジニル基；ナフタレニルスルホニルピペリジニル基；ナフタレニルスルホニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノ基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルスルホニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；アミノスルホニルピペラジニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノ基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピラゾリル基；チオピラゾリル基；Ｃ1~6アルキル基またはトリハロＣ1~6アルキル基から選ばれた２個の置換基で置換されているピラゾリル基；ピリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールオキシ基またはアリール基で置換されているビリジニル基；ピリミジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；キノリニル基；インドール基；フェニル基；１、２または３個の置換基であって、独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメチルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルスルホニル基、Ｃ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノカルボニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アル��ル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、シアノ基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、アミノスルホニルピペラジニル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、フラニル基、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で置換されているフラニル基、ピロリジニルＣ1~4アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニル基、モルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニルＣ1~4アルキル基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノ基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノ基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~6アルキル基、ピリミジニルピペラジニル基、ピリミジニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノ基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノ基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、アミノチアジアゾリル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ
1~4アルキルオキシ基もしくはチオフェニルＣ1~4アルキルアミノ基から選ばれる上記の１、２または３個の置換基で置換されているフェニル基；から選ばれており；Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、窒素の上に水素に代えて配置されることがあり；上記におけるアリール基は、フェニル基、または、１個以上の置換基であって、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、シアノ基もしくはヒドロキシカルボニル基から選ばれた該置換基で置換されているフェニル基である］から選ばれた基である｝を有するピペラジニル誘導体、ピペリジニル誘導体ならびにモルホリニル誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2003076438号明細書に開示されている諸化合物）、それらのＮ−酸化物形態のもの、医薬品として容認できる更なる塩、ならびに立体化学的異性体である場合がある。
【００７０】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化２２】
2007061096.tif 000026
｛式中、
ｎは、０、１、２または３であり、ｎが０の場合、直接結合が意図されており；
ｍは、０、１、２または３であり、ｍが０の場合、直接結合が意図されており；
ｔは、０１であり、ｔが０の場合、直接結合が意図されており；
【化２３】
2007061096.tif 000027
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ4、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）Ｒ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｃ＝Ｎ（ＯＨ）Ｒ7、または別のＺｎ−キレート基であり［式中、Ｒ3およびＲ4は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ基、Ｃ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、アミノＣ1~6アルキル基、またはアミノアリール基から選ばれており；Ｒ7は、独立して、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルカルボニル基、アリールＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピラジニル基、ピリジノン、ピロリジノン、またはメチルイミダゾリル基から選ばれており；Ｒ8は、独立して、水素またはＣ1~6アルキル基から選ばれている］；
Ｒ2は、水素、ヒドロキシ基、アミノ基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシカルボニル基、アミノＣ1~6アルキル基、アミノカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基、またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基であり；
−Ｌ−は、Ｃ1~6アルカンジイル基、カルボニル基、スルホニル基、または、フェニル基で置換されているＣ1~6アルカンジイル基から選ばれている２価の基であり； 
【化２４−１】
2007061096.tif 000028
【化２４−２】
2007061096.tif 000029
【化２４−３】
2007061096.tif 000030
［式中、各々のｓは、独立して、０、１、２、３、４または５であり；Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ基；アミノ基；ニトロ基；トリハロＣ1~6アルキル基；トリハロＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキル基；アリール基およびＣ3~10シクロアルキル基で置換されているＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルカルボニル基；Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基；Ｃ1~6アルキルスルホニル基；シアノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシ基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノ基；アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノカルボニル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノ基；（アリール）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；アリールスルホニル基；アリールスルホニルアミノ基；アリールオキシ基；アリールオキシＣ1~6アルキル基；アリールＣ2~6アルケンジイル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；シアノ基；チオフェニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基、モルホリニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基で置換されているチオフェニル基；フラニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基で置換されているフラニル基；ベンゾフラニル基；イミダゾリル基；オキサゾリル基；アリール基およびＣ1~6アルキル基で置換されているオキサゾリル基；Ｃ1~6アルキルトリアゾリル基；テトラゾリル基；ピロリジニル基；ピロリル基；ピペリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニル基；Ｃ1~6アルキルモルホリニル基；モルホリニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニルＣ1~6アルキル基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノ基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピペラジニルＣ1~6アルキル基；ナフタレニルスルホニルピペラジニル基；ナフタレニルスルホニルピペリジニル基；ナフタレニルスルホニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノ基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルスルホニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；アミノスルホニルピペラジニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノ基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピラゾリル基；チオピラゾリル基；Ｃ1~6アルキル基またはトリハロＣ1~6アルキル基から選ばれた２個の置換基で置換されているピラゾリル基；ピリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールオキシ基またはアリール基で置換されているピリジニル基；ピリミジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；キノリニル基；インドール基；フェニル基；１、２または３個の置換基であって、独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメチルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルスルホニル基、Ｃ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノカルボニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、シアノ基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、アミノスルホニルピペラジニル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノ基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、フラニル基、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で置換されているフラニル基、ピロリジニルＣ1~4アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニル基、モルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニルＣ1~4アルキル基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノ基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノ基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~6アルキル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノ基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、アミノチアジアゾリル基、アミノスルホニルピペラジ
ニルＣ1~4アルキルオキシ基もしくはチオフェニルＣ1~4アルキルアミノ基から選ばれる上記１、２または３個の置換基で置換されているフェニル基；から選ばれており；Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、窒素の上に水素に代えて配置されることがあり；上記におけるアリール基は、フェニル基、または、１個以上の置換基であって、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、シアノ基もしくはヒドロキシカルボニル基から選ばれた上記１個以上の置換基で置換されているフェニル基である］から選ばれた基である｝を有する化合物、それらのＮ−酸化物形態のもの、医薬品として容認できる更なる塩、ならびに立体化学的異性体である場合がある。例えば、国際公開番号ＷＯ2003076430号明細書に開示されている諸化合物を参照されたい。
【００７１】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化２５】
2007061096.tif 000031
［式中、環Ａは、ヘテロシクリル基であり、該ヘテロシクリル基が−ＮＨ−部分を有する場合、その窒素は、Ｇから選ばれる基によって任意的に置換されている場合があり；
Ｒ1は、炭素上の置換基であり、しかも、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基、アリール基、アリールオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、複素環式基、（複素環式基）Ｃ1~6アルキル基、または（Ｄ−Ｅ−）基から選ばれており、しかも、（Ｄ−Ｅ−）基を有するＲ1は、炭素上で、１個以上のＶによって任意的に置換されている場合があり；また、前記複素環基が−ＮＨ−部分を有する場合、その窒素は、Ｊから選ばれた１個の基によって任意的に置換されている場合があり；Ｖは、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基、または（Ｄ'−Ｅ'−）基から選ばれており、しかも、（Ｄ'−Ｅ'−）基を有するＶは、炭素上で、１個以上のＷによって任意的に置換されている場合があり；ＷおよびＺは、独立して、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、またはＮ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基から選ばれており；Ｇ、ＪおよびＫは、独立して、Ｃ1~8アルキル基、Ｃ2~8アルケニル基、Ｃ2~8アルキニル基、Ｃ1~8アルカノイル基、Ｃ1~6アルキルスルホニル基、Ｃ1~8アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、Ｎ−（Ｃ1~8アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~8アルキル）カルバモイル基、ベンジルオキシカルボニル基、ベンゾイル基およびフェニルスルホニ��基、アリール基、アリールＣ1~6アルキル基、または（複素環基）Ｃ1~6アルキル基から選ばれており、しかも、Ｇ、ＪおよびＫは、炭素上で、１個以上のＱによって任意的に置換されている場合があり、しかも、前記複素環基が−ＮＨ−部分を有する場合、その窒素は、水素またはＣ1~6アルキル基から選ばれた１個の基によって任意的に置換されている場合があり；Ｑは、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、オキソ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基、アリール基、アリールオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アリールＣ1~6アルコキシ基、複素環式基、（複素環式基）Ｃ1~6アルキル基、（複素環式基）Ｃ1~6アルコキシ基、または（Ｄ”−Ｅ”−）基から選ばれており、しかも、（Ｄ”−Ｅ”−）基を有するＱは、炭素上で、１個以上のＺによって任意的に置換されている場合があり；Ｄ、Ｄ’およびＤ”は、独立して、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ3~8シクロアルキル基、Ｃ3~8シクロアルキルＣ1~6アルキル基、アリール基、アリールＣ1~6アルキル基、複素環式基、（複素環式基）Ｃ1~6アルキル基から選ばれており、しかも、Ｄ、Ｄ'およびＤ”は、炭素上で、１個以上のＦ'によって任意的に置換されている場合があり、しかも、前記複素環基が−ＮＨ−部分を有する場合、その窒素は、Ｋから選ばれた１個の基によって任意的に置換されている場合があり；Ｅ、Ｅ’およびＥ”は、独立して、−Ｎ（Ｒa）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒa）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒa）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒb）−、−Ｎ（Ｒa）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒa）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒa）−、−Ｓ（Ｏ）r、−ＳＯ2Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）ＳＯ2−から選ばれており（式中、ＲaおよびＲbは、独立して、水素、または、１個以上のＦによって任意的に置換されたＣ1~6アルキル基から選ばれており、かつ、ｒは、０〜２である）；ＦおよびＦ”は、独立して、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、およびＮ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基から選ばれており；
ｍは、０、１、２、３または４であり；しかも、Ｒ1の価数は、同一であるかまたは相違している場合があり；
環Ｂは、
【化２６】
2007061096.tif 000032
（式中、Ｘ1およびＸ2は、ＣＨまたはＮから選ばれており；Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3およびＹ4は、Ｙ1、Ｙ2、Ｙ3およびＹ4の少なくとも一つがＮであるという条件で、ＣＨまたはＮから選ばれている）から選ばれている環であり；
Ｒ2はハロゲンであり；
ｎは、０、１または２であり；しかも、Ｒ2の価数は、同一であるかまたは相違している場合があり；
Ｒ3は、アミノ基またはヒドロキシ基であり；
Ｒ4は、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~3アルキル基、Ｃ2~3アルケニル基、Ｃ2~3アルキニル基、Ｃ1~3アルコキシ基、Ｃ1~3アルカノイル基、Ｃ1~3アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）2アミノ基、Ｃ1~3アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~3アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~3アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）スルファモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）2スルファモイル基であり；しかも、
ｐは、０、１または２であり；しかも、Ｒ4の価数は、同一であるかまたは相違している場合がある］の化合物、または、それらの、医薬品として容認できる塩、もしくは、生体内で(in vivo)加水分解し得るエステルもしくはアミドである場合がある。例えば、国際公開番号ＷＯ2003092686号明細書に開示されている諸化合物を参照されたい。
【００７２】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化２７】
2007061096.tif 000033
［式中、Ａは、Ｃ3~14シクロアルキル基、３〜１４の員数の複素環式アルキル基（heterocycloalkyl）、Ｃ4~14シクロアルケニル基、３〜８の員数の複素環式アルケニル基、アリール基およびヘテロアリール基から選ばれている環状部分であり、該環状部分は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニルアミノ基、アミノスルホニル基、もしくはアルキルスルホニル基で任意的に置換されており；または、Ａは、飽和された枝分かれＣ3~12炭化水素鎖、または、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒa）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒa）ＳＯ2−、−ＳＯ2Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒb）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＳＯ2−、−ＳＯ2−Ｏ−、または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって任意的に割り込まれている不飽和のＣ3~12炭化水素鎖であり、しかも、ＲaおよびＲbはそれぞれ、独立して、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基であり；前記の飽和または不飽和の枝分かれ炭化水素鎖の各々は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニルアミノ基、アミノスルホニル基、もしくはアルキルスルホニル基で任意的に置換されており；
Ｙ1およびＹ2の各々は、独立して、−ＣＨ2−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒc）−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒc）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒc）−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒd）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（ＮＲc）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、または一つの結合であり；ＲcおよびＲdの各々は、独立して、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基であり；
Ｌは、少なくとも１個の二重結合を、少なくとも１個の三重結合を、または、少なくとも１個の二重結合および１個の三重結合を任意的に含有する直鎖Ｃ4~12炭化水素鎖であり、該炭化水素鎖は、Ｃ1~4アルキル基、Ｃ2~4アルケニル基、Ｃ2~4アルキニル基、Ｃ1~4アルコキシ基、ヒドロキシル基、ハロゲン、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ3~5シクロアルキル基、３〜５の員数の複素環式アルキル基、単環式アリール基、５〜６の員数のヘテロアリール基、Ｃ1~4アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~4アルキルカルボニル基、またはホルミル基で任意的に置換されており、更に、任意的に、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒf）−、または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって割り込まれており；ＲeおよびＲfの各々は、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基であり；
Ｘ1は、ＯまたはＳであり；
Ｒg、ＲhおよびＲiの各々は、独立して、水素またはＣ1~6アルキル基である；
ただし、Ｙ1およびＹ2の各々が、独立して、一つの結合またはＣＨ2である場合、Ａは不飽和フェニル基またはヘテロシクリル基であり、ＬはＣ4~7であり、Ｌは、少なくとも１個の二重結合または少なくとも１個の三重結合を有しており、また、Ｙ1およびＹ2の各々が、一つの結合である場合、Ａは不飽和フェニル基であり、また、ＬはＣ4であり、Ｌはジエンではない］を有するα−ケトエポキシド(ketoepoxide)化合物（例えば、国際公開番号ＷＯ2003099272号明細書に開示されている諸化合物）、または、それらの塩である場合がある。
【００７３】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化２８】
2007061096.tif 000034
［式中、環Ａは、ヘテロシクリル基であり、該ヘテロシクリル基が−ＮＨ−部分を有する場合、その窒素は、Ｋから選ばれる基によって任意的に置換されている場合があり；
Ｒ1は、炭素上の置換基であり、しかも、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基、アリール基、アリールオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、複素環式基、（複素環式基）Ｃ1~6アルキル基、または（Ｂ−Ｅ−）基から選ばれており、しかも、（Ｂ−Ｅ−）基を有するＲ1は、炭素上で、１個以上のＷによって任意的に置換されている場合があり；また、前記複素環基が−ＮＨ−部分を有する場合、その窒素は、Ｊによって任意的に置換されている場合があり；Ｗは、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基、または（Ｂ'−Ｅ'−）基から選ばれており、しかも、（Ｂ'−Ｅ'−）基を有するＷは、炭素上で、１個以上のＹによって任意的に置換されている場合があり；ＹおよびＺは、独立して、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、またはＮ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基から選ばれており；Ｇ、ＪおよびＫは、独立して、Ｃ1~8アルキル基、Ｃ2~8アルケニル基、Ｃ1~8アルカノイル基、Ｃ1~8アルキルスルホニル基、Ｃ1~8アルコキシカルボニル基、カルバモイル基、Ｎ−（Ｃ1~8アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~8アルキル）カルバモイル基、ベンジルオキシカルボニル基、ベンゾイル基、フェニルスルホニル基、アリール基、アリールＣ1~6アルキル基、または（複素環基）Ｃ1~6アルキル��から選ばれており、しかも、Ｇ、ＪおよびＫは、炭素上で、１個以上のＱによって任意的に置換されている場合があり、しかも、前記複素環基が−ＮＨ−部分を有する場合、その窒素は、水素またはＣ1~6アルキル基によって任意的に置換されている場合があり；Ｑは、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｃ1~6アルコキシカルボニルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基、アリール基、アリールオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アリールＣ1~6アルコキシ基、複素環式基、（複素環式基）Ｃ1~6アルキル基、（複素環式基）Ｃ1~6アルコキシ基、または（Ｂ”−Ｅ”−）基であり、しかも、（Ｂ”−Ｅ”−）基を有するＱは、炭素上で、１個以上のＺによって任意的に置換されている場合があり；Ｂ、Ｂ'およびＢ”は、独立して、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ3~8シクロアルキル基、Ｃ3~8シクロアルキルＣ1~6アルキル基、アリール基、アリールＣ1~6アルキル基、複素環式基、（複素環式基）Ｃ1~6アルキル基、フェニル基、またはフェニルＣ1~6アルキル基から選ばれており、しかも、Ｂ、Ｂ'およびＢ”は、炭素上で、１個以上のＤによって任意的に置換されている場合があり、しかも、前記複素環基が−ＮＨ−部分を有する場合、その窒素は、Ｇから選ばれた１個の基によって任意的に置換されている場合があり；Ｅ、Ｅ'およびＥ”は、独立して、−Ｎ（Ｒa）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒa）Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒa）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒb）−、−Ｎ（Ｒa）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒa）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒa）−、−Ｓ（Ｏ）r−、−ＳＯ2Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）ＳＯ2−から選ばれており（式中、ＲaおよびＲbは、独立して、水素、または、１個以上のＦによって任意的に置換されたＣ1~6アルキル基から選ばれており、かつ、ｒは、０〜２である）；ＤおよびＦは、独立して、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ2~6アルケニル基、Ｃ2~6アルキニル基、Ｃ1~6アルコキシ基、Ｃ1~6アルカノイル基、Ｃ1~6アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2アミノ基、Ｃ1~6アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~6アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~6アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）スルファモイル基、またはＮ,Ｎ−（Ｃ1~6アルキル）2スルファモイル基から選ばれており；
ｍは、０、１、２、３または４であり；しかも、Ｒ1の価数は、同一であるかまたは相違している場合があり；
Ｒ2はハロゲンであり；
ｎは、０、１または２であり；しかも、Ｒ2の価数は、同一であるかまたは相違している場合があり；
Ｒ3は、アミノ基またはヒドロキシ基であり；
Ｒ4は、ハロゲン、ニトロ基、シアノ基、ヒドロキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、カルボキシ基、カルバモイル基、メルカプト基、スルファモイル基、Ｃ1~3アルキル基、Ｃ2~3アルケニル基、Ｃ2~3アルキニル基、Ｃ1~3アルコキシ基、Ｃ1~3アルカノイル基、Ｃ1~3アルカノイルオキシ基、Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）アミノ基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）2アミノ基、Ｃ1~3アルカノイルアミノ基、Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）カルバモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）2カルバモイル基、Ｃ1~3アルキルＳ（Ｏ）ａ（式中、ａは、０〜２である）、Ｃ1~3アルコキシカルボニル基、Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）スルファモイル基、Ｎ,Ｎ−（Ｃ1~3アルキル）2スルファモイル基であり；
ｐは、０、１または２であり；しかも、Ｒ4の価数は、同一であるかまたは相違している場合がある］を有するベンズアミド誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2003087057号明細書に開示されている諸化合物）、または、それらの、医薬品として容認できる塩、または、生体内で加水分解可能なエステルもしくはアミドである場合があるが、ただし、前記化合物は、Ｎ−（２−アミノ−６−ヒドロキシフェニル）−４−１−メチルホモピペラジン−４−イル）ベンズアミドでも、Ｎ−（２−アミノ−６−メチルフェニル）−４−（１−メチルホモピペラジン−４−イル）ベンズアミドでも、Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−（１−ｔ−ブトキシカルボニルホモピペラジン−４−イル）ベンズアミドでも、Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−（１−メチルホモピペラジン−４−イル）ベンズアミドでもない。
【００７４】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化２９】
2007061096.tif 000035
［式中、Ａは、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、１〜４個の炭素を有するアルキル基、１〜４個の炭素を有するアルコキシ基、１〜４個の炭素を有するアミノアルキル基、１〜４個の炭素を有するアルキルアミノ基、１〜４個の炭素を有するアシル基、１〜４個の炭素を有するアシルアミノ基、１〜４個の炭素を有するアルキルチオ基、１〜４個の炭素を有するペルフルオロアルキル基、１〜４個の炭素を有するペルフルオロアルコキシ基、カルボキシル基、１〜４個の炭素を有するアルコキシカルボニル基、フェニル基、芳香族複素環基、１〜４個の炭素を有するアルキル基で任意的に置換されている複素環基、ベンジル基またはピリジルメチル基から成る群から選ばれた１〜４個の置換基を有する、任意的に置換されたフェニル基または芳香族複素環基であり；
ｍは、０〜４の整数であり；
ｎは、１〜４の整数であり；
Ｘは、式：
【化３０】
2007061096.tif 000036
（式中、Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素、または、１〜４個の炭素を有する任意的に置換されているアルキル基である）に示される構造から選ばれた一つの構造を有する部分である］を有するヒドロキサム酸誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2003087066号明細書に開示されている諸化合物）、または、それらの、医薬品として容認できる塩である場合がある。
【００７５】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化３１】
2007061096.tif 000037
｛式中、ｎは、０、１、２または３であり、ｎが０である場合、直接結合が意図されており；
ｔは、０、１、２、３または４であり、ｔが０である場合、直接結合が意図されており；
【化３２】
2007061096.tif 000038
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ7Ｒ8、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ9、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）Ｒ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｃ＝Ｎ（ＯＨ）Ｒ9、または別のＺｎキレート基であり（式中、Ｒ7およびＲ8は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ基、Ｃ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、アミノＣ1~6アルキル基またはアミノアリール基から選ばれており；Ｒ9は、独立して、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルカルボニル基、アリールＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピラジニル基、ピリジノン、ピロリジノン、またはメチルイミダゾリル基から選ばれており；Ｒ10は、独立して、水素またはＣ1~6アルキル基から選ばれている）；
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、ヒドロキシアミノ基またはナフタレニルスルホニルピラジニル基であり；
−Ｌ−は、直接結合、または、Ｃ1~6アルカンジイル基、アミノ基、カルボニル基またはアミノカルボニル基から選ばれた２価の基であり；
各々のＲ3は、水素原子を表わし、しかも、１個の水素原子は、アリール基で置換されている場合があり；
Ｒ4は、水素、ヒドロキシ基、アミノ基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシカルボニル基、アミノＣ1~6アルキル基、アミノカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基であり；
【化３３−１】
2007061096.tif 000039
【化３３−２】
2007061096.tif 000040
【化３３−３】
2007061096.tif 000041
【化３３−４】
2007061096.tif 000042
［式中、各々のｓは、独立して、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ基；アミノ基；ニトロ基；トリハロＣ1~6アルキル基；トリハロＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキル基；アリール基およびＣ3~10シクロアルキル基で置換されているＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルカルボニル基；Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基；Ｃ1~6アルキルスルホニル基；シアノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシ基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノ基；アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノカルボニル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノ基；（アリール）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；アリールスルホニル基；アリールスルホニルアミノ基；アリールオキシ基；アリールオキシＣ1~6アルキル基；アリールＣ2~6アルケンジイル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；シアノ基；チオフェニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基、モルホリニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基で置換されているチオフェニル基；フラニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基で置換されているフラニル基；ベンゾフラニル基；イミダゾリル基；オキサゾリル基；アリール基およびＣ1~6アルキル基で置換されているオキサゾリル基；Ｃ1~6アルキルトリアゾリル基；テトラゾリル基；ピロリジニル基；ピロリル基；ピペリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニル基；Ｃ1~6アルキルモルホリニル基；モルホリニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニルＣ1~6アルキル基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノ基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピペラジニルＣ1~6アルキル基；ナフタレニルスルホニルピペラジニル基；ナフタレニルスルホニルピペリジニル基；ナフタレニルスルホニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノ基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルスルホニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；アミノスルホニルピペラジニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノ基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピラゾリル基；チオピラゾリル基；Ｃ1~6アルキル基またはトリハロＣ1~6アルキル基から選ばれた２個の置換基で置換されているピラゾリル基；ピリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールオキシ基またはアリール基で置換されているビリジニル基；ピリミジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；キノリニル基；インドリル基；フェニル基；１、２または３個の置換基であって、独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメチルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルスルホニル基、Ｃ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノカルボニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、シアノ基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、アミノスルホニルピペラジニル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノ基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、フラニル基、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で置換されているフラニル基、ピロリジニルＣ1~4アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニル基、モルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニルＣ1~4アルキル基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノ基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノ基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~6アルキル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノ基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、アミノチアジアゾリル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基もしくはチオフェニルＣ
1~4アルキルアミノ基から選ばれる上記１、２または３個の置換基で置換されているフェニル基；から選ばれている］から選ばれた基であり；
中央にある
2007061096.tif 000043
部分は、メチレン、エチレンまたはプロピレンの架橋で架橋されている（即ち、二環式部分を形成している）場合があり；Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、その窒素上で、その水素に代えて配置されている場合があり；上記のアリール基は、フェニル基、または、１個以上の置換基であって、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、シアノ基もしくはヒドロキシカルボニル基から選ばれている該置換基で置換されているフェニル基である｝を有するスルホニル誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2003076422号明細書に開示されている諸化合物）、それらの、Ｎ−酸化物形態のもの、医薬品として容認できる更なる塩、および立体化学的異性体である場合がある。
【００７６】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化３４】
2007061096.tif 000044
［式中、Ａは、Ｃ3~14シクロアルキル基、３〜１４の員数の複素環式アルキル基、Ｃ4~14シクロアルケニル基、３〜８の員数の複素環式アルケニル基、アリール基およびヘテロアリール基からなる群から選ばれている環状部分であって、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニルアミノ基、アミノスルホニル基、もしくはアルキルスルホニル基で任意的に置換されている該環状部分であり；または、Ａは、飽和された枝分かれＣ3~12炭化水素鎖、または、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒa）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒa）ＳＯ2−、−ＳＯ2Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒb）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＳＯ2−、−ＳＯ2−Ｏ−、または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって任意的に割り込まれている不飽和の枝分かれＣ3~12炭化水素鎖であり（式中、ＲaおよびＲbはそれぞれ、独立して、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基であり；前記の飽和または不飽和の枝分かれ炭化水素鎖の各々は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニルアミノ基、アミノスルホニル基、もしくはアルキルスルホニル基で任意的に置換されている）；
Ｙ1およびＹ2の各々は、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒc）−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒc）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒc）−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒd）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、または一つの結合であり（式中、ＲcおよびＲdの各々は、独立して、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基である）；
Ｌは、少なくとも１個の二重結合を、少なくとも１個の三重結合を、または、少なくとも１個の二重結合および１個の三重結合を任意的に含有する直鎖Ｃ3~12炭化水素鎖であって、Ｃ1~4アルキル基、Ｃ2~4アルケニル基、Ｃ2~4アルキニル基、Ｃ1~4アルコキシ基、ヒドロキシル基、ハロゲン、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ3~5シクロアルキル基、３〜５の員数の複素環式アルキル基、単環式アリール基、５〜６の員数のヘテロアリール基、Ｃ1~4アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~4アルキルカルボニル基、またはホルミル基で任意的に置換されている該炭化水素鎖であり、更に、任意的に、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒf）−、または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって割り込まれており（式中、ＲeおよびＲfの各々は、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基である）；
Ｘ1は、ＯまたはＳであり；
Ｘ2は、ハロゲンである；
ただし、Ｙ1およびＹ2はそれぞれ、一つの結合であり、Ｌは、Ｃ＝Ｘ1からのＣ6~12炭化水素鎖のＣ１、Ｃ２、Ｃ３もしくはＣ５に少なくとも１個の二重結合を、少なくとも１個の三重結合を、または、少なくとも１個の二重結合および１個の三重結合を有するＣ6~12炭化水素鎖であって、Ｃ1~4アルキル基、Ｃ2~4アルケニル基、Ｃ2~4アルキニル基、Ｃ1~4アルコキシ基、ヒドロキシル基、ハロゲン、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ3~5シクロアルキル基、３〜５の員数の複素環式アルキル基、単環式で特徴付けられるアリール基、５〜６の員数のヘテロアリール基、Ｃ1~4アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~4アルキルカルボニル基またはホルミル基で任意的に置換されているＣ6~12炭化水素鎖であり、Ｌは更に、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒf）−または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって任意的に割り込まれている（式中、ＲeおよびＲfの各々は、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基もしくはハロアルキル基である）］を有するトリハロメチルカルボニル化合物（例えば、国際公開番号ＷＯ2003099760号明細書に開示されている諸化合物）、または、それらの塩である場合がある。
【００７７】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化３５】
2007061096.tif 000045
［式中、Ａは、Ｃ3~14シクロアルキル基、３〜１４の員数の複素環式アルキル基、Ｃ4~14シクロアルケニル基、３〜８の員数の複素環式アルケニル基、アリール基およびヘテロアリール基からなる群から選ばれている環状部分であって、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニルアミノ基、アミノスルホニル基、もしくはアルキルスルホニル基で任意的に置換されている該環状部分であり；または、Ａは、飽和された枝分かれＣ3~12炭化水素鎖、または、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒa）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒa）−ＳＯ2−、−ＳＯ2−Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒb）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＳＯ2−、−ＳＯ2−Ｏ−、または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって任意的に割り込まれている不飽和の枝分かれＣ3~12炭化水素鎖であり（式中、ＲaおよびＲbはそれぞれ、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基であり；しかも、前記の飽和または不飽和の枝分かれ炭化水素鎖の各々は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニルアミノ基、アミノスルホニル基、もしくはアルキルスルホニル基で任意的に置換されている）；
Ｙ1およびＹ2の各々は、独立して、−ＣＨ2−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒc）−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒc）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒc）−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒd）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、または一つの結合であり（式中、ＲcおよびＲdの各々は、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基である）；
Ｌは、少なくとも１個の二重結合を、少なくとも１個の三重結合を、または、少なくとも１個の二重結合および１個の三重結合を任意的に含有する直鎖Ｃ3~12炭化水素鎖であって、Ｃ1~4アルキル基、Ｃ2~4アルケニル基、Ｃ2~4アルキニル基、Ｃ1~4アルコキシ基、ヒドロキシル基、ハロゲン、アミノ基、チオ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アラルキルチオ基、アシルチオ基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ3~5シクロアルキル基、３〜５の員数の複素環式アルキル基、単環式アリール基、５〜６の員数のヘテロアリール基、Ｃ1~4アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~4アルキルカルボニル基、またはホルミル基で任意的に置換されている該炭化水素鎖であり、更に、任意的に、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒf）−、または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって割り込まれており（式中、ＲeおよびＲfの各々は、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基である）；
Ｘ1は、ＯまたはＳであり；
Ｘ2は、−ＯＲ、−ＳＲ1または−ＳｅＲ1である（式中、Ｒは、水素、アルキル基、アシル基、アリール基またはアラルキル基である）；
ただし、Ｙ1は一つの結合であり、Ｌは、飽和されており、Ｙ1に隣接する炭素は、Ｃ1~4アルコキシ基でもヒドロキシル基でも置換されていない］を有するα-カルコゲンメチルカルボニル化合物（例えば、国際公開番号ＷＯ2003099789号明細書に開示されている諸化合物）、または、それらの塩である場合がある。
【００７８】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化３６】
2007061096.tif 000046
｛式中、Ｒ1は、水素またはアルキル基であり；
Ｒ2は、水素であり；
Ａｒ1は、フェニレン基、または、１個または２個の窒素環原子(nitrogen ring atoms)を有する、６員のヘテロアリーレン環であり、それらの環原子の残部は炭素であり；しかも、前記Ａｒ1基は、１個または２個の基であって、独立して、アルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ハロアルコキシ基またはハロアルキル基から選ばれた基で任意的に置換されており；
Ａｒ2は、アリール基、ベンズイミダゾル−２−イル基、シクロアルキル基または複素環式アルキル基であり；
Ｒ3は、水素、アルキル基、ハロゲン、ヒドロキシ基またはアルコキシ基であり；また、
Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素、アルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシ基、カルボキシアルキル基、アルコキシカルボニル基、任意的に置換されているフェニル基、任意的に置換されているヘテロアリール基、任意的に置換されている複素環式アルキル基、シクロアルキル基、複素環式アミノアルキル基、−Ｘ−Ｒ6、もしくは−（Ｃ1~6アルキレン）−Ｙ−Ｒ7である［式中、ＸおよびＹは、独立して、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−ＮＲｓ−、−ＣＯ−、−ＮＲ9ＣＯ−、−ＣＯＮＲ10−、−ＮＲ11ＳＯ2−、−ＳＯ2ＮＲ12−、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＲ13ＣＯＮＲ14−もしくは−ＮＲ15ＳＯ2ＮＲ16−であり、Ｒ6およびＲ7は、独立して、水素、アルキル基、ヒドロキシアルキル基、任意的に置換されているフェニル基、任意的に置換されているヘテロアリール基、任意的に置換されている複素環式アルキル基、シクロアルキル基、任意的に置換されているフェニルアルキル基、任意的に置換されているフェノキシアルキル基、任意的に置換されているフェニルアルケニル基、任意的に置換されているフェニルアミノアルキル基、任意的に置換されているヘテロアラルキル基、任意的に置換されているヘテロアリールオキシアルキル基、任意的に置換されている複素環式アルキルアルキル基、もしくはシクロアルキルアルキル基であり、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ11、Ｒ13およびＲ15は、独立して、水素、アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシアルキル基、もしくは、任意的に置換されているフェニルアルキル基であり、Ｒ10、Ｒ12、Ｒ14およびＲ16は、独立して、水素、アルキル基、任意的に置換されているフェニルアルキル基、アルコキシ基、ヒドロキシアルキル基、ハロアルキル基、アルコキシアルキル基、カルボキシアルキル基、シアノアルキル基、アミノアルキル基、アミノカルボニルアルキル基、アルキルアミノカルボニルアルキル基、ジアルキルアミノカルボニルアルキル基もしくはアシル基であり；または、Ｒ4およびＲ5は、一緒にメチレンジオキシ基を形成している］｝を有する二環式ヒドロキサマート誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2003066579号明細書に開示されている諸化合物）、ならびに、それらの、個々の異性体、異性体の混合物、または、医薬品として容認できる塩である場合がある。ただし、(i) Ｒ3、Ｒ4およびＲ5の少なくとも一方は、水素ではなく；(ii) Ａｒ2が、シクロアルキル基である場合、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5の少なくとも２個は、水素ではなく；(iii) Ｒ1およびＲ3が水素であり、Ａｒ1がフェニレン基であり、Ａｒ2がフェニル基であり、かつ、Ｒ4およびＲ5の一方がメトキシ基である場合、Ｒ4およびＲ5の他方は、−ＯＲ6ではなく（式中、Ｒ6は、シクロペンチル基またはフェニルペンチル基である）；(iv) Ａｒ1がフェニレン基であり、かつ、Ａｒ2がフェニル基である場合、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5の少なくとも一方は、アルキル基ではなく；(v) Ａｒ1がフェニレン基であり、Ａｒ2が、アリール基であり、かつ、そのフェニレン環の３−位置には配置されている場合、Ａｒ2は、任意的に置換されているフェニル基で置換されておらず；(vi) Ａｒ1がフェニレン基であり、Ａｒ2がフェニル基であり、かつ、Ｒ4またはＲ5が、−ＣＯＮＲ10Ｒ6、または−（Ｃ1~6アルキレン）−ＣＯＮＲ10Ｒ7である場合、前記のＲ4またはＲ5は、そのフェニル環の４−位置には配置されておらず；更に、(vii) Ａｒ1がフェニレン基であり、Ａｒ2がフェニル基であり、かつ、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5の２個が、水素である場合、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5の残部はニトロ基ではない。
【００７９】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化３７】
2007061096.tif 000047
｛式中、ｎは、０、１、２または３であり、ｎが０である場合、直接結合が意図されており；
ｔは、０、１、２、３または４であり、ｔが０である場合、直接結合が意図されており；
【化３８】
2007061096.tif 000048
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ7、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）Ｒ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ7、−ＮＲ8Ｃ（Ｏ）Ｃ＝Ｎ（ＯＨ）Ｒ7、または別のＺｎキレート基であり；
（式中、Ｒ5およびＲ6は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ基、Ｃ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、アミノＣ1~6アルキル基またはアミノアリール基から選ばれており；Ｒ７は、独立して、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルカルボニル基、アリールＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピラジニル基、ピリジノン、ピロリジノン、またはメチルイミダゾリル基から選ばれており；Ｒ8は、独立して、水素またはＣ1~6アルキル基から選ばれている）；
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、ヒドロキシアミノ基またはナフタレニルスルホニルピラジニル基であり；
Ｒ3は、水素、Ｃ1~6アルキル基、アリールＣ2~6アルケンジイル基、フラニルカルボニル基、ナフタレニルカルボニル基、−Ｃ（Ｏ）フェニルＲ9、Ｃ1~6アルキルアミノカルボニル基、アミノスルホニル基、アリールアミノスルホニル基、アミノスルホニルアミノ基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ基、アリールアミノスルホニルアミノ基、アミノスルホニルアミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノＣ1~6アルキル基、アリールアミノスルホニルアミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、Ｃ1~12アルキルスルホニル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニル基、トリハロＣ1~6アルキルスルホニル基、ジ（アリール）Ｃ1~6アルキルカルボニル基、チオフェニルＣ1~6アルキルカルボニル基、ピリジニルカルボニル基、またはアリールＣ1~6アルキルカルボニル基であり［式中、各々のＲ9は、独立して、フェニル基；１個、２個または３個の置換基であって、独立して、ハロゲン、アミノ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシ基、アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基もしくはモルホリニルＣ1~4アルキル基から選ばれている前記の１個、２個または３個の置換基で置換されているフェニル基；チオフェニル基；または、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基もしくはモルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基で置換されているチオフェニル基から選択される］；
Ｒ4は、水素、ヒドロキシ基、アミノ基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシカルボニル基、アミノＣ1~6アルキル基、アミノカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基、またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基であり；Ｒ3およびＲ4が、同一炭素原子の上に存在する場合、Ｒ3およびＲ4は一緒になって、式−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−ＮＲ10−の２価の基を形成していることがあり（式中、Ｒ10は水素またはアリール基である）；Ｒ3およびＲ4が、隣接する炭素原子の上に存在する場合、Ｒ3およびＲ4は一緒になって、式＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝の２価の基を形成していることがあり；上記のアリール基は、フェニル基、または、１個以上の置換基であって、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、シアノ基もしくはヒドロキシカルボニル基から選ばれている前記の１個以上の置換基で置換されているフェニル基である｝を有する化合物、それらの、Ｎ−酸化物形態のもの、医薬品として容認できる更なる塩、ならびに立体化学的異性体である場合がある。例えば、国際公開番号ＷＯ2003075929号明細書に開示されている諸化合物を参照されたい。
【００８０】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化３９】
2007061096.tif 000049
｛式中、ｎは、０、１、２または３であり、ｎが０である場合、直接結合が意図されており；
ｍは、０または１であり、ｍが０である場合、直接結合が意図されており；
ｔは、０、１、２、３または４であり、ｔが０である場合、直接結合が意図されており；
【化４０】
2007061096.tif 000050
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ10、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ10、−ＮＲ11Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）Ｒ10、−ＮＲ11Ｃ（Ｏ）Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ10、−ＮＲ11Ｃ（Ｏ）Ｃ＝Ｎ（ＯＨ）Ｒ10、または別のＺｎキレート基であり（式中、Ｒ8およびＲ9は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ基、Ｃ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、アミノＣ1~6アルキル基またはアミノアリール基から選ばれており；Ｒ10は、独立して、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルカルボニル基、アリールＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピラジニル基、ピリジノン、ピロリジノン、またはメチルイミダゾリル基であり；Ｒ11は、水素またはＣ1~6アルキル基である）；
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、ヒドロキシアミノ基またはナフタレニルスルホニルピラジニル基であり；
−Ｌ−は、直接結合、または、Ｃ1~6アルカンジイル基、Ｃ1~6アルカンジイルオキシ基、アミノ基、カルボニル基もしくはアミノカルボニル基から選ばれた２価の基であり；
各々のＲ3は、独立して、水素原子を表わし、しかも、１個の水素原子は、アリール基から選ばれた１個の置換基によって置換されている場合があり；
Ｒ4は、水素、ヒドロキシ基、アミノ基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシカルボニル基、アミノＣ1~6アルキル基、アミノカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基であり；
Ｒ5は、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ3~10シクロアルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基Ｃ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはアリール基であり；
【化４１−１】
2007061096.tif 000051
【化４１−２】
2007061096.tif 000052
【化４１−３】
2007061096.tif 000053
【化４１−４】
2007061096.tif 000054
［式中、各々のｓは、独立して、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ6およびＲ7はそれぞれ、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ基；アミノ基；ニトロ基；トリハロＣ1~6アルキル基；トリハロＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキル基；アリール基およびＣ3~10シクロアルキル基で置換されているＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルカルボニル基；Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基；Ｃ1~6アルキルスルホニル基；シアノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシ基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノ基；アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノカルボニル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノ基；（アリール）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；アリールスルホニル基；アリールスルホニルアミノ基；アリールオキシ基；アリールオキシＣ1~6アルキル基；アリールＣ2~6アルケンジイル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；シアノ基；チオフェニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基、モルホリニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基で置換されているチオフェニル基；フラニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基で置換されているフラニル基；ベンゾフラニル基；イミダゾリル基；オキサゾリル基；アリール基およびＣ1~6アルキル基で置換されているオキサゾリル基；Ｃ1~6アルキルトリアゾリル基；テトラゾリル基；ピロリジニル基；ピロリル基；ピペリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニル基；Ｃ1~6アルキルモルホリニル基；モルホリニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニルＣ1~6アルキル基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノ基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピペラジニルＣ1~6アルキル基；ナフタレニルスルホニルピペラジニル基；ナフタレニルスルホニルピペリジニル基；ナフタレニルスルホニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノ基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルスルホニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；アミノスルホニルピペラジニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノ基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピラゾリル基；チオピラゾリル基；Ｃ1~6アルキル基またはトリハロＣ1~6アルキル基から選ばれた２個の置換基で置換されているピラゾリル基；ピリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールオキシ基またはアリール基で置換されているビリジニル基；ピリミジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；キノリニル基；インドール基；フェニル基；１、２または３個の置換基であって、独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメチルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルスルホニル基、Ｃ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノカルボニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、シアノ基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、アミノスルホニルピペラジニル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノ基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、フラニル基、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で置換されているフラニル基、ピロリジニルＣ1~4アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニル基、モルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニルＣ1~4アルキル基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノ基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノ基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~6アルキル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノ基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、アミノチアジアゾリル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基もしくはチオフェニルＣ
1~4アルキルアミノ基から選ばれる上記１、２または３個の置換基で置換されているフェニル基；から選ばれており；Ｒ6およびＲ7はそれぞれ、その窒素上で、その水素に代えて配置されている場合があり；上記のアリール基は、フェニル基、または、１個以上の置換基であって、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、シアノ基もしくはヒドロキシカルボニル基から選ばれている上記１個以上の置換基で置換されているフェニル基である］から選ばれた基である｝を有するカルボニルアミノ誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2003076395号明細書に開示されている諸化合物）、それらの、Ｎ−酸化物形態のもの、医薬品として容認できる更なる塩、ならびに立体化学的異性体(stereo chemically isomeric forms)である場合がある。
【００８１】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化４２】
2007061096.tif 000055
｛式中、ｎは、０、１、２または３であり、ｎが０である場合、直接結合が意図されており；
ｔは、０、１、２、３または４であり、ｔが０である場合、直接結合が意図されており；
【化４３】
2007061096.tif 000056
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ8Ｒ9、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ10、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ10、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）Ｒ10、−ＮＲ11Ｃ（Ｏ）Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ10、−ＮＲ11Ｃ（Ｏ）Ｃ＝Ｎ（ＯＨ）Ｒ10、または別のＺｎキレート基であり（式中、Ｒ8およびＲ9は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ基、Ｃ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、アミノＣ1~6アルキル基またはアミノアリール基から選ばれており；Ｒ10は、独立して、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルカルボニル基、アリールＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピラジニル基、ピリジノン、ピロリジノン、またはメチルイミダゾリル基から選ばれており；Ｒ11は、独立して、水素またはＣ1~6アルキル基から選ばれている）；
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、ヒドロキシアミノ基またはナフタレニルスルホニルピラジニル基であり；
各々のＲ3は、独立して、水素原子を表わし、しかも、１個の水素原子は、アリール基から選ばれた１個の置換基によって置換されている場合があり；
Ｒ4は、水素、ヒドロキシ基、アミノ基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシカルボニル基、アミノＣ1~6アルキル基、アミノカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基であり；
Ｒ5は、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ3~10シクロアルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基Ｃ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはアリール基であり；
【化４４−１】
2007061096.tif 000057
【化４４−２】
2007061096.tif 000058
【化４４−３】
2007061096.tif 000059
［式中、各々のｓは、独立して、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ6およびＲ7はそれぞれ、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ基；アミノ基；ニトロ基；トリハロＣ1~6アルキル基；トリハロＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキル基；アリール基およびＣ3~10シクロアルキル基で置換されているＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルカルボニル基；Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基；Ｃ1~6アルキルスルホニル基；シアノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシ基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノ基；アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノカルボニル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノ基；（アリール）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；アリールスルホニル基；アリールスルホニルアミノ基；アリールオキシ基；アリールオキシＣ1~6アルキル基；アリールＣ2~6アルケンジイル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；シアノ基；チオフェニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基、モルホリニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基で置換されているチオフェニル基；フラニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基で置換されているフラニル基；ベンゾフラニル基；イミダゾリル基；オキサゾリル基；アリール基およびＣ1~6アルキル基で置換されているオキサゾリル基；Ｃ1~6アルキルトリアゾリル基；テトラゾリル基；ピロリジニル基；ピロリル基；ピペリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニル基；Ｃ1~6アルキルモルホリニル基；モルホリニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニルＣ1~6アルキル基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノ基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピペラジニルＣ1~6アルキル基；ナフタレニルスルホニルピペラジニル基；ナフタレニルスルホニルピペリジニル基；ナフタレニルスルホニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノ基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルスルホニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；アミノスルホニルピペラジニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノ基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピラゾリル基；チオピラゾリル基；Ｃ1~6アルキル基またはトリハロＣ1~6アルキル基から選ばれた２個の置換基で置換されているピラゾリル基；ピリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールオキシ基またはアリール基で置換されているビリジニル基；ピリミジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；キノリニル基；インドール基；フェニル基；１、２または３個の置換基であって、独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメチルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルスルホニル基、Ｃ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノカルボニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、シアノ基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、アミノスルホニルピペラジニル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノ基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、フラニル基、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で置換されているフラニル基、ピロリジニルＣ1~4アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニル基、モルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニルＣ1~4アルキル基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノ基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノ基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~6アルキル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノ基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、アミノチアジアゾリル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基もしくはチオフェニルＣ
1~4アルキルアミノ基から選ばれる上記１、２または３個の置換基で置換されているフェニル基；から選ばれており；Ｒ6およびＲ7はそれぞれ、その窒素上で、その水素に代えて配置されている場合があり；上記のアリール基は、フェニル基、または、１個以上の置換基であって、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、シアノ基もしくはヒドロキシカルボニル基から選ばれている上記１個以上の置換基で置換されているフェニル基である］から選ばれた基である｝を有するスルホニルアミノ誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2003076401号明細書に開示されている諸化合物）、それらの、Ｎ−酸化物形態のもの、医薬品として容認できる更なる塩、ならびに立体化学的異性体である場合がある。
【００８２】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化４５】
2007061096.tif 000060
｛式中、ｎは、０、１、２または３であり、ｎが０である場合、直接結合が意図されており；
ｔは、０、１、２、３または４であり、ｔが０である場合、直接結合が意図されており；
【化４６】
2007061096.tif 000061
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ7Ｒ8、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ9、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）Ｒ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｃ＝Ｎ（ＯＨ）Ｒ9、または別のＺｎキレート基であり（式中、Ｒ7およびＲ8は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ基、Ｃ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、アミノＣ1~6アルキル基またはアミノアリール基から選ばれており；Ｒ9は、独立して、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルカルボニル基、アリールＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピラジニル基、ピリジノン、ピロリジノン、またはメチルイミダゾリル基から選ばれており；Ｒ10は、独立して、水素またはＣ1~6アルキル基から選ばれている）；
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、ヒドロキシアミノ基またはナフタレニルスルホニルピラジニル基であり；
−Ｌ−は、直接結合、または、Ｃ1~6アルカンジイル基、Ｃ1~6アルカンジイルオキシ基、アミノ基、カルボニル基もしくはアミノカルボニル基から選ばれた２価の基であり；
各々のＲ3は、独立して、水素原子を表わし、しかも、１個の水素原子は、アリール基から選ばれた１個の置換基によって置換されている場合があり；
Ｒ4は、水素、ヒドロキシ基、アミノ基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシカルボニル基、アミノＣ1~6アルキル基、アミノカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基であり；
【化４７−１】
2007061096.tif 000062
【化４７−２】
2007061096.tif 000063
【化４７−３】
2007061096.tif 000064
［式中、各々のｓは、独立して、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ基；アミノ基；ニトロ基；トリハロＣ1~6アルキル基；トリハロＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキル基；アリール基およびＣ3~10シクロアルキル基で置換されているＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルカルボニル基；Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基；Ｃ1~6アルキルスルホニル基；シアノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシ基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノ基；アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノカルボニル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノ基；（アリール）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；アリールスルホニル基；アリールスルホニルアミノ基；アリールオキシ基；アリールオキシＣ1~6アルキル基；アリールＣ2~6アルケンジイル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；シアノ基；チオフェニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基、モルホリニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基で置換されているチオフェニル基；フラニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基で置換されているフラニル基；ベンゾフラニル基；イミダゾリル基；オキサゾリル基；アリール基およびＣ1~6アルキル基で置換されているオキサゾリル基；Ｃ1~6アルキルトリアゾリル基；テトラゾリル基；ピロリジニル基；ピロリル基；ピペリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニル基；Ｃ1~6アルキルモルホリニル基；モルホリニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニルＣ1~6アルキル基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノ基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピペラジニルＣ1~6アルキル基；ナフタレニルスルホニルピペラジニル基；ナフタレニルスルホニルピペリジニル基；ナフタレニルスルホニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノ基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルスルホニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；アミノスルホニルピペラジニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノ基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピラゾリル基；チオピラゾリル基；Ｃ1~6アルキル基またはトリハロＣ1~6アルキル基から選ばれた２個の置換基で置換されているピラゾリル基；ピリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールオキシ基またはアリール基で置換されているピリジニル基；ピリミジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；キノリニル基；インドール基；フェニル基；１、２または３個の置換基であって、独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメチルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルスルホニル基、Ｃ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノカルボニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、シアノ基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、アミノスルホニルピペラジニル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノ基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、フラニル基、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で置換されているフラニル基、ピロリジニルＣ1~4アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニル基、モルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニルＣ1~4アルキル基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノ基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノ基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~6アルキル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノ基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、アミノチアジアゾリル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基もしくはチオフェニルＣ
1~4アルキルアミノ基から選ばれる上記１、２または３個の置換基で置換されているフェニル基；から選ばれており；Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、その窒素上で、その水素に代えて配置されている場合があり；上記のアリール基は、フェニル基、または、１個以上の置換基であって、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、シアノ基もしくはヒドロキシカルボニル基から選ばれている上記１個以上の置換基で置換されているフェニル基である］から選ばれた基である｝を有する化合物、それらの、Ｎ−酸化物形態のもの、医薬品として容認できる更なる塩、ならびに立体化学的異性体である場合がある。例えば、国際公開番号ＷＯ2003076400号明細書に開示されている諸化合物を参照されたい。
【００８３】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化４８】
2007061096.tif 000065
｛式中、ｎは、０、１、２、または３であり、ｎが０である場合、直接結合が意図されており；
【化４９】
2007061096.tif 000066
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ7Ｒ8、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）Ｒ9、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＨ）Ｒ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｃ1~6アルカンジイルＳＲ9、−ＮＲ10Ｃ（Ｏ）Ｃ＝Ｎ（ＯＨ）Ｒ9、または別のＺｎキレート基であり（式中、Ｒ7およびＲ8は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシ基、Ｃ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、アミノＣ1~6アルキル基またはアミノアリール基から選ばれており；Ｒ9は、独立して、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルカルボニル基、アリールＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピラジニル基、ピリジノン、ピロリジノン、またはメチルイミダゾリル基から選ばれており；Ｒ10は、独立して、水素またはＣ1~6アルキル基から選ばれている）；
Ｒ2は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基、ヒドロキシアミノ基またはナフタレニルスルホニルピラジニル基であり；
Ｒ3は、水素、ヒドロキシ基、アミノ基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールＣ1~6アルキル基、アミノカルボニル基、ヒドロキシカルボニル基、アミノＣ1~6アルキル基、アミノカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシカルボニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシアミノカルボニル基、Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基またはジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基であり；
Ｚが窒素に等しい場合、−Ｌ−は直接結合であり；Ｚが、
2007061096.tif 000067
に等しい場合、−Ｌ−は、−ＮＨ−、または２価の−Ｃ1~6アルカンジイルＮＨ−であり；
Ｒ4は、水素、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ3~10シクロアルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはアリール基であり；
【化５０−１】
2007061096.tif 000068
【化５０−２】
2007061096.tif 000069
【化５０−３】
2007061096.tif 000070
［式中、各々のｓは、独立して、０、１、２、３、４または５であり；
Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、独立して、水素；ハロゲン；ヒドロキシ基；アミノ基；ニトロ基；トリハロＣ1~6アルキル基；トリハロＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキル基；アリール基およびＣ3~10シクロアルキル基で置換されているＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルオキシ基；Ｃ1~6アルキルカルボニル基；Ｃ1~6アルキルオキシカルボニル基；Ｃ1~6アルキルスルホニル基；シアノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシ基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノ基；アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノカルボニル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノ基；（アリール）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルオキシ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；アリールスルホニル基；アリールスルホニルアミノ基；アリールオキシ基；アリールオキシＣ1~6アルキル基；アリールＣ2~6アルケンジイル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；シアノ基；チオフェニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基、ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基、モルホリニルＣ1~6アルキル基、ヒドロキシＣ1~6アルキル（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基またはジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基で置換されているチオフェニル基；フラニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキル基で置換されているフラニル基；ベンゾフラニル基；イミダゾリル基；オキサゾリル基；アリール基およびＣ1~6アルキル基で置換されているオキサゾリル基；Ｃ1~6アルキルトリアゾリル基；テトラゾリル基；ピロリジニル基；ピロリル基；ピペリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニル基；Ｃ1~6アルキルモルホリニル基；モルホリニルＣ1~6アルキルオキシ基；モルホリニルＣ1~6アルキル基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノ基；モルホリニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピペラジニルＣ1~6アルキル基；ナフタレニルスルホニルピペラジニル基；ナフタレニルスルホニルピペリジニル基；ナフタレニルスルホニル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノ基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルピペラジニルスルホニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキルオキシ基；アミノスルホニルピペラジニル基；アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基；ジ（Ｃ1~6アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシピペリジニルＣ1~6アルキル基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノ基；ピペリジニルアミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノ基；（Ｃ1~6アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルオキシＣ1~6アルキルピペラジニルＣ1~6アルキル基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノ基；（ヒドロキシＣ1~6アルキル）（Ｃ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ヒドロキシＣ1~6アルキルアミノＣ1~6アルキル基；ジ（ヒドロキシＣ1~6アルキル）アミノＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキル基；ピロリジニルＣ1~6アルキルオキシ基；ピラゾリル基；チオピラゾリル基；Ｃ1~6アルキル基またはトリハロＣ1~6アルキル基から選ばれた２個の置換基で置換されているピラゾリル基；ピリジニル基；Ｃ1~6アルキルオキシ基、アリールオキシ基またはアリール基で置換されているピリジニル基；ピリミジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基；テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~6アルキル基；キノリニル基；インドリル基；フェニル基；１、２または３個の置換基であって、独立して、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキル基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメチルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルスルホニル基、Ｃ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルオキシ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノカルボニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルアミノ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~6アルキル基、シアノ基、ピペリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、アミノスルホニルピペラジニル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニル基、Ｃ1~4アルキルオキシピペリジニルＣ1~4アルキル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニル基、ヒドロキシＣ1~4アルキルオキシＣ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノ基、（ヒドロキシＣ1~4アルキル）（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノ基、ジ（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキル基、フラニル基、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ＝ＣＨ−で置換されているフラニル基、ピロリジニルＣ1~4アルキル基、ピロリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニル基、モルホリニルＣ1~4アルキルオキシ基、モルホリニルＣ1~4アルキル基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノ基、モルホリニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキル基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノ基、Ｃ1~4アルキルピペラジニルＣ1~4アルキルアミノＣ1~6アルキル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニル基、テトラヒドロピリミジニルピペラジニルＣ1~4アルキル基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノ基、ピペリジニルアミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、（Ｃ1~4アルキルピペリジニル）（ヒドロキシＣ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ピリジニルＣ1~4アルキルオキシ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノ基、ヒドロキシＣ1~4アルキルアミノＣ1~4アルキル基、ジ（Ｃ1~4アルキル）アミノＣ1~4アルキルアミノ基、アミノチアジアゾリル基、アミノスルホニルピペラジニルＣ1~4アルキルオキシ基もしくはチオフェニルＣ
1~4アルキルアミノ基から選ばれる上記１、２または３個の置換基で置換されているフェニル基；から選ばれており；Ｒ5およびＲ6はそれぞれ、その窒素上で、その水素に代えて配置されている場合があり；上記のアリール基は、フェニル基、または、１個以上の置換基であって、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1~6アルキル基、Ｃ1~6アルキルオキシ基、トリフルオロメチル基、シアノ基もしくはヒドロキシカルボニル基から選ばれている上記１個以上の置換基で置換されているフェニル基である］から選ばれた基である｝を有するアミノカルボニル誘導体（例えば、国際公開番号ＷＯ2003076421号明細書に開示されている諸化合物）、それらの、Ｎ−酸化物形態のもの、医薬品として容認できる更なる塩、ならびに立体化学的異性体である場合がある。
【００８４】
一つの態様において、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤は、一般式：
【化５１】
2007061096.tif 000071
［式中、Ａは、Ｃ3~14シクロアルキル基、３〜１４の員数の複素環式アルキル基、Ｃ4~14シクロアルケニル基、３〜８の員数の複素環式アルケニル基、アリール基またはヘテロアリール基からなる群から選ばれている環状部分であって、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、アミノ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニルアミノ基、アミノスルホニル基もしくはアルキルスルホニル基で任意的に置換されている該環状部分であり；または、Ａは、飽和された枝分かれＣ3~12炭化水素鎖、または、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒa）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒa）ＳＯ2−、−ＳＯ2Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒa）−、−Ｎ（Ｒa）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒb）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−ＳＯ2−、−ＳＯ2−Ｏ−もしくは−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって任意的に割り込まれている不飽和の枝分かれＣ3~12炭化水素鎖であり（式中、ＲaおよびＲbはそれぞれ、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基であり；しかも、前記の飽和または不飽和の枝分かれ炭化水素鎖の各々は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロゲン、ハロアルキル基、アミノ基、アルキルカルボニルオキシ基、アルキルオキシカルボニル基、アルキルカルボニル基、アルキルスルホニルアミノ基、アミノスルホニル基もしくはアルキルスルホニル基で任意的に置換されている）；
Ｙ1およびＹ2の各々は、独立して、−ＣＨ2−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒc）−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒc）−、−Ｎ（Ｒc）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒd）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、または一つの結合であり（式中、ＲcおよびＲdの各々は、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基である）；
Ｌは、少なくとも１個の二重結合を、少なくとも１個の三重結合を、または、少なくとも１個の二重結合および１個の三重結合を任意的に含有する直鎖Ｃ2~12炭化水素鎖であって、Ｃ1~4アルキル基、Ｃ2~4アルケニル基、Ｃ2~4アルキニル基、Ｃ1~4アルコキシ基、ヒドロキシル基、ハロゲン、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ3~5シクロアルキル基、３〜５の員数の複素環式アルキル基、単環式アリール基、５〜６の員数のヘテロアリール基、Ｃ1~4アルキルカルボニルオキシ基、Ｃ1~4アルキルオキシカルボニル基、Ｃ1~4アルキルカルボニル基、またはホルミル基で任意的に置換されている該炭化水素鎖であり、更に、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒe）−、−Ｎ（Ｒe）−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒf）−、または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−によって任意的に割り込まれており（式中、ＲeおよびＲfの各々は、独立して、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基またはハロアルキル基である）；
Ｘ1は、ＯまたはＳであり；
Ｘ2は、−ＯＲ1、−ＳＲ1、−ＮＲ1−ＯＲ1−、−ＮＲ−ＳＲ1、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ1−、−ＣＨＲ4−ＯＲ1、−Ｎ＝Ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｒ3）2、または−Ｏ−ＣＨＲ4−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ5である（式中、Ｒ1およびＲ2は、それぞれ独立して、水素、アルキル基、ヒドロキシルアルキル基、ハロアルキル基、または、ヒドロキシル基保護基であり；Ｒ3は、水素、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アルコキシ基、ヒドロキシルアルキル基、ヒドロキシル基、ハロアルキル基、または、アミノ基保護基であり；Ｒ4は、水素、アルキル基、ヒドロキシルアルキル基またはハロアルキル基であり；Ｒ5は、アルキル基、ヒドロキシルアルキル基またはハロアルキル基である）；
ただし、Ｌが、二重結合を有していないＣ2~3炭化水素であり、かつ、Ｘ2が−ＯＲ1である場合、Ｙ1は結合ではなく、かつ、Ｙ2は結合ではない］を有する化合物、または、それらの塩である場合がある。
【００８５】
本発明に係る細胞の治療的使用
本発明は、一つの態様において、１型糖尿病を患っている患者、または、１型糖尿病にかかる危険性のある患者を処置するための方法を提供する。この方法は、幹細胞または前駆細胞を分離して培養する過程と、前記の分離された細胞の個体群を増殖させる過程と、前記培養細胞を生体外で(in vitro)、膵臓系統、膵ホルモン産生細胞、またはβ細胞系統に分化させる過程と、前記分化細胞を、直接に、または薬剤キャリヤを用いて、前記患者に移植する過程とを含む。適切である場合、前記患者を、前記移植細胞の生存と機能とを助長する薬剤または生物活性物質(bioactives)で更に処置することができる。これらの薬剤には、例えば、とりわけ、インスリン、（ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３を包含する）ＴＧＦ−βファミリーのメンバー、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ−２、−３、−４、−５、−６、−７、−１１、−１２および−１３）、線維芽細胞成長因子−１および−２、血小板由来成長因子−ＡＡおよび−ＢＢ、富血小板血漿(plate rich plasma)、インスリン成長因子（ＩＧＦ−Ｉ、II）、成長分化因子（ＧＤＦ−５、−６、−８、−１０および−１５）、血管内皮細胞由来成長因子（ＶＥＧＦ）、プレイオトロフィン(pleiotrophin)、エンドセリン(endothelin)が包含される。他の薬剤化合物には、例えば、米国公開出願第2004/0209901号および米国公開出願第2004/0132729号明細書に開示されている諸化合物のような、例えば、ニコチンアミド、グルカゴン様ペプチド−Ｉ（ＧＬＰ−１）およびII、ＧＬＰ−１および２ミメティボディ(mimetibody)、エキセンディン−４(Exendin-4)、レチノイン酸、副甲状腺ホルモン、ＭＡＰＫ阻害剤が包含されることがある。
【００８６】
本発明は、更にもう一つの態様において、２型糖尿病を患っている患者、または、２型糖尿病にかかる危険性のある患者を処置するための方法を提供する。この方法は、幹細胞または前駆細胞を分離して培養する過程と、前記の分離された細胞の個体群を増殖させる過程と、前記培養細胞を生体外で、膵臓系統、膵ホルモン産生細胞、またはβ細胞系統に分化させる過程と、前記分化細胞を、直接に、または薬剤キャリヤを用いて、前記患者に移植する過程とを含む。
【００８７】
本発明に係る細胞は、遺伝学的に修飾することができる。例えば、それらの細胞は、β細胞系統［例えば、ＮＧＮ−３（ニューロジェニン３(neurogenin-3)）、Ｈｌｘｂ９、Ｎｋｘ６、Ｉｓｌｌ、Ｐａｘ６、ＮｅｕｒｏＤ、Ｈｎｆｌａ、Ｈｎｆ６、Ｈｎｆ３βおよびＭａｆａ］の細胞またはインスリンのマーカー特性(markers characteristic)を過剰発現するように操作することができる。それらの細胞は、関心あるいずれかの適切な遺伝子と過剰発現するように操作できる。本発明に係る羊水由来細胞を遺伝学的に修飾するための有用な技術は、例えば、生物細胞学に関する標準的教科書および概説に見出だすことができる。分子遺伝学および遺伝子工学における方法は、例えば、分子クローニング(Molecular Cloning)：実験マニュアル(A Laboratory Manual)，第２版［サンブロック(Sambrook)等（１９８９）］；オリゴヌクレオチドの合成(Oligonucleotide Synthesis)［Ｍ．Ｊ．ゲイト(Gait)編集，１９８４］；動物細胞の培養(Animal Cell Culture)［Ｒ．Ｉ．フレッシュニー(Freshney)編集，１９８７］；シリーズ酵素学による方法(the series Methods in Enzymology)［アカデミック・プレス社(Academic Press, Inc.)］；哺乳動物細胞のための遺伝子導入ベクター(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)［Ｉ．Ｍ．ミラー(Miller)およびＭ．Ｐ．カロス(Calos)編集，１９８７］；分子生物学における現行プロトコルと分子生物学における短期間プロトコル(Current Protocols in Molecular Biology and Short Protocols in Molecular Biology)，第３版［Ｆ．Ｍ．オースベル(Ausubel)等編集，１９８７および１９９５］；ならびに、組換えＤＮＡ方法論II(Recombinant DNA Methodology II)［Ｒ．ウー(Wu)編集，アカデミック・プレス社，１９９５］；に記述されている。
【００８８】
核酸分子は、関心ある遺伝子を符号化するが(encoding)、細胞のゲノムの中に安定的に組み込まれている場合があり、または、核酸分子は、ベクターもしくはプラスミドのような染色体外分子として存在する場合がある。そのような染色体外分子は、自己複製している場合がある。本明細書で用いる用語「トランスフェクション(transfection)」とは、宿主細胞の中に異種核酸を導入するための方法をいう。
【００８９】
前記細胞は、未分化であるにせよそうでないにせよ、分散細胞(dispersed cells)として用いることができるか、または、肝門脈の中に注入することのできるクラスター(clusters)に形成することができる。代替的に、それらの細胞は、生物学的適合性の分解可能な高分子担体(polymer supports)、多孔性の非分解性デバイスの中に供給するか、または、カプセルに包んで、宿主免疫反応(host immune response)から保護することができる。それらの細胞は、受容体(recipient)中の適切な部位に移植することができる。移植部位には、例えば、肝臓、未処置膵臓、腎被膜下空間(renal subcapsular space)、網、腹膜、漿膜下空間(subserosal space)または皮下ポケット(subcutaneous pocket)が包含される。
【００９０】
移植細胞の更なる分化、生存または活性を助長するために、該細胞を投与する前、投与と同時に、または投与した後、成長因子のような追加的因子、抗酸化剤もしくは抗炎症剤を投与することができる。幾つかの具体例において、投与された細胞を生体内で(in vivo)分化させるために諸成長因子を利用する。これらの因子は、内因性細胞によって分泌されることがあり、また、投与された羊水由来細胞にその場で(in situ)作用させることができる。移植細胞は、当該技術分野で知られている、内因性および外来投与された成長因子のいずれかの組合せによって分化するように誘発することができる。
【００９１】
移植に用いられる細胞の量は、治療に対する患者の状態と反応とを包含する多数の因子によって決まり、当業者によって決定することができる。
【００９２】
本発明は、一つの態様において、糖尿病を患っている患者、または、糖尿病にかかる危険性のある患者を処置するための方法を提供する。その方法は、幹細胞または前駆細胞を分離して培養する過程と、前記の分離された細胞の個体群を増殖させる過程と、前記培養細胞を生体外で、膵臓系統、膵ホルモン産生細胞、またはβ細胞系統に分化させる過程と、それらの細胞を、三次元担体(three-dimensional support)の中に組み入れる過程とを含む。それらの細胞は、該患者に移植される前、この担体上で生体外において保持することができる。代替的に、それらの細胞が入っている該担体は、生体外で更に培養することなく、該患者に直接移植することができる。該担体は任意的に、移植細胞の生存と機能とを助長する少なくとも１種の薬剤と一緒に組み入れることができる。
【００９３】
本発明の目的のために使用するのに適した担体材料には、組織を修復するのに有用な、組織のテンプレート(templates)、導管(conduits)、障壁(barriers)および容器(reservoirs)が包含される。とりわけ、発泡体構造、スポンジ、ゲル構造、ヒドロゲル構造、編物構造および不織布構造の形態の合成材料ならびに天然材料であって、生体組織の再構成または再生利用を行うためだけでなく、組織の成長を誘導するための細胞遊走剤(chemotactic agents)を配送するために、生体外および生体内で用いられてきたそれら材料は、本発明の方法の実施において使用するのに適している。例えば、米国特許第5,770,417号、同第6,022,743号、同第5,567,612号、同第5,759,830号、同第6,626,950号、同第6,534,084号、同第6,306,424号、同第6,365,149号、同第6,599,323号、同第6,656,488号および同第6,333,029号明細書に開示されている諸材料を参照されたい。本発明で使用するのに適した典型的なポリマーは、米国公開出願第2004/0062753A1号および米国特許第4,557,264号明細書に開示されている。
【００９４】
薬剤が組み入れられた担体を形成するために、該薬剤は、該担体を形成する前、前記のポリマー溶液と混合することができる。代替的に、薬剤は、加工された担体の上に被覆することができ、好ましくは、薬剤キャリヤの存在下で被覆することができるであろう。該薬剤は、液体として、微粉固体として、または、他の適切ないずれかの物理的形態として存在し得る。代替的には、該担体に賦形剤を添加して、該薬剤の放出速度を変えることができる。代わりの具体例において、該担体は、抗炎症性化合物である少なくとも１種の薬剤化合物（例えば、米国特許第6,509,369号明細書に開示されている諸化合物）と混合することができる。
【００９５】
一つの具体例において、前記担体は、抗アポトーシス化合物(anti-apoptotic compound)である少なくとも１種の薬剤化合物（例えば、米国特許第6,793,945号明細書に開示されている諸化合物）と混合される。
【００９６】
もう一つの具体例において、前記担体は、線維形成阻害剤(inhibitor of fibrosis)である少なくとも１種の薬剤化合物（例えば、米国特許第6,331,298号明細書に開示されている諸化合物）と混合される。
【００９７】
更なる具体例において、前記担体は、脈管形成を改善することのできる少なくとも１種の薬剤化合物（例えば、米国公開出願第2004/0220393号および米国公開出願第2004/0209901号明細書に開示されている諸化合物）と混合される。
【００９８】
更にもう一つの具体例において、前記担体は、免疫抑制化合物である少なくとも１種の薬剤化合物（例えば、米国公開出願第2004/0171623号明細書に開示されている諸化合物）と混合される。
【００９９】
更なる具体例において、前記担体は、成長因子である少なくとも１種の薬剤化合物［例えば、とりわけ、（ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２およびＴＧＦ−β３を包含する）ＴＧＦ−βファミリーのメンバー、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ−２、−３、−４、−５、−６、−７、−１１、−１２および−１３）、線維芽細胞成長因子−１および−２、血小板由来成長因子−ＡＡおよび−ＢＢ、富血小板血漿(plate rich plasma)、インスリン成長因子（ＩＧＦ−Ｉ、II）、成長分化因子（ＧＤＦ−５、−６、−８、−１０および−１５）、血管内皮細胞由来成長因子（ＶＥＧＦ）、プレイオトロフィン(pleiotrophin)、エンドセリン(endothelin)］と混合される。他の薬剤化合物には、例えば、米国公開出願第2004/0209901号および米国公開出願第2004/0132729号明細書に開示されている諸化合物のような、例えば、ニコチンアミド、低酸素誘導性転写因子(hypoxia inducible factor)１−α、グルカゴン様ペプチド−Ｉ（ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１および２ミメティボディ(mimetibody)、グルカゴン様ペプチド−II、エキセンディン−４(Exendin-4)、ノーダル(nodal)、ノギン(noggin)、ＮＧＦ、レチノイン酸、副甲状腺ホルモン、テネイシン(tenascin)−Ｃ、トロポエラスチン(tropoelastin)、トロンビン由来ペプチド、カテリシジン(cathelicidins)、ディフェンシン(defensins)、ラミニン(laminin)、接着性細胞外マトリックスタンパク質の細胞結合ドメインおよびヘパリン結合ドメインを含有する生体ペプチド(biological peptides)（例えば、フィブロネクチンおよびビトロネクチン）、ＭＡＰＫ阻害剤が包含されることがある。
【０１００】
本発明に係る前記細胞を足場(scaffold：スキャフォルド)の中に組み入れる過程は、該足場の上に細胞を単純に堆積させることによって達成することができる。細胞は、単純拡散によって、足場の中に入ることができる［Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．２３（１Ｐｔ２），第３頁〜９頁（１９８８）］。細胞接種の効率を高めるために、他の幾つかのアプローチが開発されてきた。例えば、ポリグリコール酸足場の上に軟骨細胞を接種するために、スピナーフラスコ(spinner flasks)が使用されてきた［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．１４（２），第１９３頁〜２０２頁（１９９８）］。細胞を接種するためのもう一つのアプローチは、遠心分離法の使用であり、それによって、接種された細胞に最小限の応力が生じて、接種効率が高められる。例えば、ヤング(Yang)等は、遠心分離による細胞固定化(Centrifugational Cell Immobilization)（ＣＣＩ）と呼ばれる細胞接種法を開発した［Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，５５（３），第３７９頁〜３８６頁（２００１）］。
【０１０１】
本発明は、次の諸実施例によって更に説明されるが、それらによって限定される訳ではない。
【０１０２】
〔実施例１〕
ヒト膵細胞系統の樹立
膵臓の調整(Pancreas Preparation)  −  国立疾病研究互助組織(The National Disease Research Interchange)（ペンシルベニア州フィラデルフィア）から、臨床移植に適していないヒト膵臓を入手し、研究用途のための適切な承諾を受けた。該膵臓は、臓器保存溶液と共に、氷の上に置いたステンレス鋼製パン(pan：皿状の器物)に移して、全ての異質組織を取り除いた。膵管(pancreatic duct)に１８ゲージカテーテルを挿入し、次いで、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(Dulbecco's Phosphate Buffered Saline)（ＤＰＢＳ）に溶解したＬＩＢＥＲＡＳＥ  ＨＩ（登録商標）酵素［ロッシュ(Roche)０．５ｍｇ／ｍＬ、ロッシュ］およびＤＮａｓｅ  Ｉ（０．２ｍｇ／ｍＬ）を含有する酵素溶液を膵臓に注入した。
【０１０３】
迅速な機械的分離および後続の酵素消化  −  酵素が注入された前記膵臓は、ティッシュプロセッサー(tissue processor)を用い３〜５秒／パルスで、３〜５回パルスを出して、均質にし、次いで、分離された組織は、電磁撹拌棒の入っている２本のトリプシン処理用５００ｍＬフラスコ［ベルコ社(Bellco)］に移した。その後、各々のフラスコに酵素溶液５０〜１００ｍＬを添加した。それらのフラスコは、水中用スタープレート(submersible stir plates)上の３７℃水浴に置き、次いで、１０分間の中間撹拌速度で培養した。撹拌を停止し、微細に消化した組織は、該フラスコから除去し、４℃のＤＰＢＳ、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）５％およびＤＮａｓｅ  Ｉ（ＤＰＢＳ＋）０．１ｍｇ／ｍＬの入っている２５０ｍＬ管の中に移して、該消化プロセスを急冷した。それらフラスコに、前記酵素溶液５０〜１００ｍＬを補充して前記水浴に戻し、次いで、更に１０分間、撹拌を再開した。それらフラスコは、再度、除去を行い、微細な消化産物(digest)は、回収して、氷上の前記２５０ｍＬ管に移した。このプロセスは、前記膵臓が完全に消化されるまで、更に３〜５回繰り返した。
【０１０４】
漸進的な機械的分離および同時の酵素消化  −  酵素が注入された前記膵臓は、糖尿病(Diabetes)，３７，第４１３頁〜４２０頁（１９８８）に記述される方法に基づいて、処理した。手短に言えば、該膵臓は、異質組織が取り除かれ、次いで、上記のように酵素溶液が注入された。次いで、該膵臓は、ビーズ(beads)を有するリコルディ室(Ricordi Chamber)の中に置き、次いで、メッシュサイズ４００〜６００μｍのメッシュサイズを有するスクリーンで覆って、組織のより大きいクラスター(clusters)を保持した。該室を覆い、該室に酵素溶液を約３７℃で循環させ、次いで、該室を振盪して、酵素消化が行われる間、ビーズが膵組織を引き裂くようにした。ひとたび十分な分離と消化とが達成されると、消化を停止して、該組織を回収した。
【０１０５】
組織の分離  −  前記の回収された組織は、１５０ｘｇで５分間、４℃で遠心分離機にかけた。上澄み液は吸引し、次いで、組織は更に２回、ＤＰＢＳ＋で洗浄した。最終の洗浄の後、該組織は不連続勾配(discontinuous gradient)を使用して精製した。消化された組織は、ポリスクロース(polysucrose)［バージニア州メディアテック社(Mediatech)］に、１．１０８ｇ／ｍＬの密度で、ポリスクロース溶液１０ｍＬ当り組織ペレット１〜２ｍＬの割合で懸濁させた。次いで、組織懸濁液を、複数のポリカーボネート製丸底遠心管に移し、次いで、１．０９６および１．０３７の密度を有するポリスクロース溶液を、それら管に慎重に注いだ。ＤＭＥＭの最終層によって、不連続精製勾配(discontinuous purification gradient)が完成した。それらの勾配管(gradient tubes)は、２０００ｒｐｍで２０分間、４℃で遠心分離機にかけ、ブレーキはかけなかった。遠心分離を行った後、（合計３つのインターフェースの）各々のインターフェースから組織を回収し、次いで、上記のようにＤＰＢＳ＋で数回洗浄し、次いで、５０ｍＬ試験管に回収した。
【０１０６】
細胞クラスターの更なる分離  −  任意的に、上記のプロトコルを用いて得られた大きい細胞クラスターは、更に分離して、より小さいクラスターまたは単一細胞の懸濁液にすることができる。最終の洗浄を行った後、各々の画分からの組織は、ＤＮａｓｅ  Ｉ  ２００Ｕ／ｍＬを含有する１Ｘトリプシン／ＥＤＴＡ溶液  １０ｍＬに懸濁させた。それらの管は、水浴中に置き、重複吸引し、ほぼ単一の細胞の懸濁液が達成されるまで、５〜６分間、１０ｍＬ血清ピペットで排出した。消化は、４℃のＤＰＢＳ＋を加えて急冷し、次いで、それらの管は、８００ｒｐｍで５分間、遠心分離機にかけた。それら細胞懸濁液は、ＤＰＢＳ＋で洗浄し、次いで、下記のように培養した。
【０１０７】
膵細胞の培養  −  最終の洗浄を行った後、各々のインターフェースからの前記細胞は、ＤＭＥＭ、ＦＢＳ２％、１００Ｕ／μｇペニシリン／ストレプトマイシン、ＩＴＳ、Ｌ−グルタミン２ｍＭ（本明細書において、Ｍはｍｏｌ／Ｌを示す）、ＺｎＳＯ4（シグマ社（Ｓｉｇｍａ））０．０１６５ｍＭ、および２−メルカプトエタノール０．３８μＭ［カリフォルニア州インビトロジェン社(Invitrogen)］（以下、「選択培地(the selection medium)」）の中に再び懸濁させた。該細胞懸濁液の６ｍＬを、Ｔ−２５組織培養フラスコに接種し、該細胞懸濁液の１２ｍＬを、Ｔ−７５フラスコに接種した。それらのフラスコは、ＣＯ2 ５％を有する３７℃の培養器の中に置いた。２〜４週間の培養を行った後、完全な培地交換を行って、付着細胞(adherent cells)は、ＦＢＳ５％［ユタ州ハイクローン社(Hyclone)］、Ｐ／Ｓ１％、ＺｎＳＯ4 ０．０１６５ｍＭを含有するＤＭＥＭ（２７５０ｍｇ／Ｌ  Ｄ-グルコース、８６２ｍｇ／Ｌ  グルタミン）［カリフォルニア州ギブコ社(Gibco)］（以下、「成長培地(the growth medium)」）の中で培養するために戻し、次いで、集密状態(confluence)［この段階は、「継代(passage)０」または「Ｐ０」と呼ばれる］にほぼ到達するようにした。それらの細胞は集密状態の時点で継代させた。前記成長培地でのそれら細胞のその後の培養細胞は、細胞５０００個／ｃｍ2のままであった。培養細胞は、７〜１０日毎に約７０〜９０％の集密度(confluency)で継代させた。
【０１０８】
〔実施例２〕
ヒト羊水由来細胞系統の樹立
本発明に係る細胞を分離するために用いられた羊水は、胎児の染色体分析を行うために１７〜２２週の妊娠期間で実施された通常の羊水穿刺(amniocentesis)によって得られた試料［ドレクセル大学(Drexel University)］から取り寄せた。その羊水は、４００ｘｇで７分間、遠心分離機で分離し、次いで、上澄み液は取り除いた。結果として得られた細胞ペレットは、成長培地に再度懸濁させた。それらの細胞は、コラーゲンIV型（１ｍｇ／１００ｍｍプレート）またはフィブロネクチン（１０μｇ／ｍＬ）で被覆されたプレートの上で培養した。羊水試料からの細胞収量は、変動が大きく（８０００〜３０００００細胞／試料）、かなりの程度の赤血球汚染物質(red blood cell contamination)を含有する試料もあった。それら培養細胞は、低酸素条件（Ｏ2 ３％）の下で少なくとも５〜１０日間、不撹乱状態のままにした。その後、培養細胞に、同一の成長培地を供給し、次いで、それら培養細胞が集密度７０〜８０％に到達するまで培養した。この段階での細胞は、「Ｐ０」と呼んだ。幾つかの培養において、細胞のコロニーは、クローニングリング(cloning ring)を用いて分離し、次いで、別個の培養プレートの中で二次培養を行った。細胞は、ＴｒｙｐＬＥ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（登録商標）［インビトロジェン社(Invitrogen)］を用いることによって、Ｐ０培養から解放し、次いで、フィブロネクチンまたはコラーゲンIV型で被覆されたフラスコ／皿(dishes)／プレート(plates)の中に、様々な密度（５０〜１０,０００細胞／ｃｍ2）で接種した。Ｐ０細胞の幾つかは、シリアル希釈クローニング(serial dilution cloning)のために用いた。最も速い成長をした細胞の集団倍加時間は、初期継代(early passages)で約２４時間以下であった。細胞は典型的には、集密度６０％で分割し、１００〜１００００細胞／ｃｍ2で再び接種した。
【０１０９】
〔実施例３〕
細胞のＰＣＲ分析
前記成長培地で培養した細胞から、ＲＮＡを抽出した。ヒト膵臓［アンビオン社(Ambion, INC)］由来の全ＲＮＡを、正の対照(positive control)として含めた。
【０１１０】
ＲＮＡの抽出、精製、およびｃＤＮＡの合成  −  ＲＮＡ試料は、エタノール含有の高塩緩衝液(high-salt buffer)の存在下、シリカゲル膜［カリフォルニア州キアゲン社(Qiagen)、Rneasy Mini キット］に結合させることによって精製しながら、汚染物質を洗浄除去した。次いで、高品質ＲＮＡを水に溶出させた。収量および純度は、分光光度計のＡ２６０およびＡ２８０示度によって評価した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット［カリフォルニア州バイオラッド社(BioRad)］を用いて、精製ＲＮＡからｃＤＮＡの複製を作った。
【０１１１】
リアルタイムＰＣＲ増幅および定量分析  −  特に明記しない限り、薬剤は全て、アプライド・バイオシステムズ(Applied Biosystems)から購入した。ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７５００配列検出装置を使用して、リアルタイムＰＣＲ反応を行った。全反応容量２０μＬに逆転写ＲＮＡ２０ｎｇを有するＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ＦＡＳＴ  ＵＮＩＶＥＲＳＡＬ  ＰＣＲ  ＭＡＳＴＥＲ  ＭＩＸ（登録商標）［カリフォルニア州エイ・ビ・アイ社(ABI)］を使用した。各々のｃＤＮＡ試料は、重複を行って、ピペット誤差の補正を可能にした。プライマー(primers)およびＦＡＭ−標識のＴＡＱＭＡＮ（登録商標）プローブ(probes)は、２００ｎＭの濃度で使用した。各々の標的遺伝子のための発現レベルは、予め作り出された、アプライド・バイオシステムの(Applied Biosystem's)ヒト・グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）内因性調節キット(endogenous control kit)を用いて正規化した(normalized)。プライマーおよびプローブは、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）ソフトウェア、または予め作り出された、ＡＢＩ遺伝子分析キットを用いて設計した。各々の遺伝子のために、プライマーおよびプローブの一つは、エクソン境界スパニング(exon-boundary spanning)となるように設計した。このことによって、存在するあらゆるゲノムＤＮＡにプライマー／プローブが結合される可能性が排除された。プライマーとプローブとのセットは、次のように記載される：Ｐｄｘ−１（Ｈｓ００４２６２１６）、インスリン（Ｈｓ００３５５７７３）、グルカゴン（Ｈｓ００１７４９６７）、およびＦｏｘＡ２（ＨＮＦ３−β）（Ｈｓ００２３２７６４）。残存プライマー(remaining primers)は、ＰＲＩＭＥＲＳプログラム［カリフォルニア州ABI社］を用いて設計した。９５℃で２０秒間、初期培養を行った後、複数の試料を２つの過程、即ち、９５℃で３秒間の変性過程(denaturation step)、後続の、６０℃で３０秒間のアニーリング／伸張過程、で４０回循環させた。
【０１１２】
各々のプライマー／プローブのセットのための、サイクル回数の値は、ＰＣＲ反応の蛍光強度が指数関数的増幅領域の中央の固有値(specific value)に到達したサイクル数として決定した。遺伝子発現の増大量は、蛍光強度がこの値に到達するのに必要とされるサイクル数の減少量に対応した。
【０１１３】
〔実施例４〕
蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）分析
付着細胞は、ＴＲＹＰＬＥ（登録商標）発現溶液［カリフォルニア州ギブコ社(Gibco)］を用いて５分間培養することによって、培養プレートから取り外した。切り離された細胞は、ＦＢＳ１０％が補われたＤＭＥＭに再び懸濁させ、遠心分離法によって回復し、次いで、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）の、ＢＳＡ２％、アジ化ナトリウム０．０５％を含有する染色緩衝液(staining buffer)［ミズーリ州シグマ社(Sigma)］で、それらの細胞を洗浄し、再び懸濁させた。適切である場合、それらの細胞は、１５分間、０．１％γ−グロブリン（シグマ社）溶液を用いて、Ｆｃ受容体(Fc-receptor)をブロックした。表Ｉに示されるような、フィコエリトリン（ＰＥ）もしくはアロフィコシアニン（ＡＰＣ）と結合したモノクローナル抗体を用いて、または、結合していない一次抗体(unconjugated primary antibody)（１０6個あたり５μＬの抗体）を用いて、アリコート（約１０5個の細胞）を培養した。対照(controls)は、適切な、アイソトープがマッチした抗体(isotype matched antibodies)、未染色の細胞、および、結合された二次抗体(secondary conjugated antibody)でのみ染色された細胞を含んだ。抗体を用いた培養は全て、４℃で３０分間行い、その後、それらの細胞は、前記染色緩衝液で洗浄した。結合していない一次抗体で染色された複数の試料は、結合したＰＥ標識二次抗体またはＡＰＣ標識二次抗体と一緒に、４℃で更に３０分間、培養した。使用された二次抗体の一覧表として表IIを参照されたい。洗浄された細胞は、ペレット化して、前記染色緩衝液に再び懸濁させ、次いで、細胞表面の分子は、少なくとも１０,０００事象を収集することにより、ＦＡＣＳアレイ(Array)［ＢＤバイオサイエンス社(Biosciences)］を使用することによって同定した。
【０１１４】
細胞内染色を行うために、細胞は、先ず、４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定し、次いで、前記染色緩衝液で２回洗浄し、細胞を遠心分離機で分離し、次いで、それらの細胞を、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）の、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ（シグマ社）０．５％を含有する易透化緩衝液(permeabilization buffer)に、室温（ＲＴ）で５分間、再び懸濁させた。易透化された(permeabilized)それら細胞は、洗浄緩衝液で２回洗浄し、遠心分離機で分離して、前記染色緩衝液に再び懸濁させ、次いで、適切な結合抗体（細胞１０6個当り抗体５μＬ）と一緒に、４℃で３０分間培養した。結合していない一次抗体で染色された試料は、結合したＰＥ標識二次抗体またはＡＰＣ標識二次抗体（表II）と一緒に、４℃で更に３０分間、培養した。洗浄された細胞は、ペレット化して、前記染色緩衝液に再び懸濁させ、次いで、その内部タンパク質は、少なくとも１０,０００事象を収集することにより、ＦＡＣＳアレイ［ＢＤバイオサイエンス社］を使用することによって同定した。
【０１１５】
〔実施例５〕
細胞の免疫染色
細胞１０，０００個／ｃｍ2の細胞を、成長培地のガラスボトム３５ｍｍマイクロウェル皿(microwell dishes)［マサチューセッツ州マテック社(Matek Corp)］の中に接種した。培養３日後、それらの細胞は、４％パラホルムアルデヒドで１０分間固定し、次いで、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で２回洗浄し、次いで、室温（ＲＴ）で５分間、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ（シグマ社）０．５％を含有する易透化緩衝液を添加し、次いで、ＰＢＳで更に３回洗浄した。固定されて易透化されたそれら細胞は、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）または二次抗体が増大した種（ヤギ、ロバまたはウサギ）由来の４％血清でブロックした。複数の対照試料は、一次抗体が省略された反応、または、一次抗体が該一次抗体と同一濃度の対応する免疫グロブリンで置き換えられた反応を含んだ。染色された試料は、ジアミジノ−２−フェニルインドール二塩酸塩（ＤＡＰＩ）を含有するＰＲＯＬＯＮＧ（登録商標）消色防止試薬(antifade reagent)［カリフォルニア州インビトロジェン社(Invitrogen)］で洗浄して、細胞核を対比染色した(counter-stain)。ニコン・コンフォーカル・エクリプス(Nikon Confocal Eclipse)Ｃ−１倒立顕微鏡［日本、ニコン社(Nikon)］と６０Ｘ対物レンズとを用いて、画像を得た。
【０１１６】
〔実施例６〕
Ｐａｎｃ−１細胞および新生児線維芽細胞における遺伝子発現に及ぼすトリコスタチンＡの影響
Ｈｓ２７とも呼ばれる新生児線維芽細胞は、ヒト包皮から抽出されるが、アメリカンタイプカルチャーコレクション(the American Type Culture Collection)（ＡＴＣＣ）から入手した。Ｐａｎｃ−１細胞は、腺管起源の膵上皮性悪性腫瘍(pancreatic epitheloid carcinoma)由来の形質転換細胞系統(transformed cell line)であるが、これも、ＡＴＣＣから入手した。
【０１１７】
線維芽細胞およびＰａｎｃ−１細胞は、細胞５０,０００個／ｃｍ2の密度で６ウェル組織培養プレートに接種した。両方の細胞型は、標準的な細胞培養条件（３７℃、５％ＣＯ2）の下、ＦＢＳ１０％およびＤＭＥＭを含有する培地で培養した。集密状態(confluence)に到達した後（２〜３日後）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および培地で希釈されたトリコスタチンＡ(trichostatin A)を、２．５μＭまたは５μＭでそれら培養細胞に添加した。並列培養細胞(parallel cultures)を、媒体対照(vehicle control)として同等濃度のＤＭＳＯで処理した。
【０１１８】
トリコスタチンＡまたはＤＭＳＯを添加して４８時間後に、処理されたそれら細胞から、ＲＮＡ試料を得た。前記培地を取り除き、それら細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液(RLT Lysis buffer)（キアゲン社(Qiagen)）を添加した。それらの試料は、キアシュレッダー・カラム(Qiashredder columns)（キアゲン社）を用いて均一化し、次いで、ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製した。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定し、また、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社(BioRad)）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１１９】
Ｓｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびグルカゴンの発現レベルは、実施例３に記述されるように、リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によって測定した。各々の反応において、ｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を使用した。リアルタイムＰＣＲは、アプライド・バイオシステムズ７５００(Applied Biosystems 7500)で実施し、データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。ヒト膵臓のｃＤＮＡは、正の対照(positive control)として含まれた。結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比較して正規化した。
【０１２０】
Ｓｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１およびグルカゴンの発現の基底レベルは、未処理のＰａｎｃ−１細胞で検出した。しかし、これらの遺伝子の発現は、未処理の新生児線維芽細胞では検出することができなかった（表III）。ＨＤＡＣ阻害剤、トリコスタチンＡを用いた、新生児線維芽細胞およびＰａｎｃ−１細胞の処理によって、Ｓｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１およびグルカゴンの発現が増大した（図１のパネルａ〜パネルｄ、および表III）。インスリンの発現は、試験条件下、いずれの細胞型の試料における未処理対照と比べて変化しなかった。
【０１２１】
未処理のＰａｎｃ−１細胞におけるＳｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１およびグルカゴンの基底発現レベルは、新生児線維芽細胞と比べていっそう高かった。評価された、代表的な内分泌腺および膵臓の遺伝子として測定されたように、トリコスタチンＡによる処理によって、線維芽細胞の場合と比べて、Ｐａｎｃ−１細胞における膵臓遺伝子の発現のより活発な増大(up-regulation)が誘起された。これらの遺伝子の増大された発現はまた、処理の間に使用されたトリコスタチンＡの濃度と、更に、関心あるこれらの遺伝子に対してＰａｎｃ−１細胞において示されるより活発な効果と、投与量依存的に相関関係があった。トリコスタチンＡ５．０μＭ対２．５μＭで４８時間処理されたＰａｎｃ−１細胞は、Ｓｏｘ−１７の発現を６０倍に、Ｐｄｘ−１の発現を１１倍に、また、グルカゴンの発現を５倍に増大させた。線維芽細胞について、類似の投与量反応効果が示されたが、その増大量は全体的に見れば、あまり顕著ではなかった（図１、パネルａ〜ｄ、および表III）。
【０１２２】
これらのデータは、Ｓｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１およびグルカゴンの発現を増大させることに関連し、ＨＤＡＣ阻害剤、トリコスタチンＡの効果は、新生児線維芽細胞における場合に比べて、Ｐａｎｃ−１細胞においていっそう大きいことを示唆している。このことは更に、任意のプロトコルによる系統特異的遺伝子発現が、それの同一系統の経路に沿って以前に分化した（または、部分的に分化した）細胞において、より高度に増大し得ることを示唆するかもしれない。しかし、処理の効果は、その経路の分化した（または、部分的に分化した）細胞に限定されるのではなく、他の系統経路由来の細胞を包含するであろう。
【０１２３】
〔実施例７〕
羊水由来細胞における遺伝子発現に及ぼすトリコスタチンＡの影響
羊水由来細胞を、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的な細胞培養条件の下、ＡＭＮＩＯＭＡＸ培地（インビトロジェン社）で、集密状態になるまで培養した。細胞は、実施例２に記述される方法に基づいて得た。集密状態に到達した後、ＤＭＳＯおよび培地で希釈された１．２５μＭトリコスタチンＡを、試料ウェルに添加し、他方、未処理対照としての対照ウェルに、同等濃度のＤＭＳＯを添加した。
【０１２４】
トリコスタチンＡまたはＤＭＳＯを添加して、３０分、１．５時間、３時間、６時間、１２時間および２４時間の後、処理された培養細胞からＲＮＡ試料を得た。培養培地は取り除き、細胞はＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を添加した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製した。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１２５】
Ｓｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびグルカゴンの発現レベルは、リアルタイムＰＣＲによって測定した。実施例３に記述される方法に基づいてアプライド・バイオシステムズ７５００で実施した各々の反応では、ｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を使用した。データの分析は、付随のソフトウェアを用いて解析した。ヒト膵臓のｃＤＮＡは、正の対照として含められ、結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比較して正規化した。
【０１２６】
インスリンおよびＳｏｘ−１７の基底発現(basal expression)は、一貫して、未処理細胞で検出したのに対し、ＨＮＦ−３βの低いレベルでの発現は、未処理細胞において、様々な時点で断続的に検出した。グルカゴンおよびＰｄｘ−１の遺伝子発現は、未処理細胞では検出することはできなかった（表IV−Ａ）。
【０１２７】
羊水由来細胞のトリコスタチンＡによる処理は、インスリンの遺伝子発現を減少させ、Ｓｏｘ−１７の発現に対しては相対的にほとんどまたは全く影響を及ぼさなかったものの、時間が経過すれば、グルカゴン、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子発現の増大を誘発した（図２パネルａ〜ｄ、および表IV−Ｂ）。羊水由来細胞におけるＨＮＦ−３β遺伝子の発現は、ＲＴ（リアルタイム）−ＰＣＲによって、トリコスタチンＡを添加した後３０分間で、３５を超えるサイクル（>35 cycles）で検出可能となり、時間が経てば増大し、２４時間で３５未満のサイクル（<35 cycles）で検出可能となった。Ｐｄｘ−１の遺伝子発現は、トリコスタチンＡを添加した後３０分間では検出不可能であり、６時間でＲＴ−ＰＣＲによって、３５を超えるサイクル（>35 cycles）で初めて検出可能となり、２４時間で３５未満のサイクル（<35 cycles）、または、ヒト膵臓の発現レベルの約０．１％に増大した。グルカゴンの発現は、トリコスタチンＡを添加した後３０分間では検出不可能であり、１２時間でＲＴ−ＰＣＲによって、３５を超えるサイクル（>35 cycles）で初めて検出可能となり、２４時間で２４未満のサイクル（<24 cycles）で検出可能となるように増大した（図２パネルｃ〜ｄ）。
【０１２８】
これらの結果は、実施例６におけるＰａｎｃ−１細胞からの結果と関連して、遺伝子制御のパターンが、特定細胞系統の分化プログラムに固有のものとなっていることを示唆する。クロマチンリモデリング剤で処理された分化細胞は、ＨＤＡＣ阻害剤と、環境信号または刺激信号との両方の存在に反応して、幾つかの遺伝子を減少させ、他の遺伝子を増大させることができる。
【０１２９】
〔実施例８〕
後期継代(late passage)（Ｐ１４）の膵臓由来間質細胞における遺伝子発現に及ぼすトリコスタチンＡの影響
ヒト膵臓由来の間質細胞を、実施例１に記述される方法に基づいて得た。細胞は、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、ウシ胎仔血清１０％を含有するＤＭＥＭで集密状態になるまで培養した。該細胞が集密度に到達した後、ＤＭＳＯおよび培地で希釈されたトリコスタチンＡ  ２．５μＭを該ウェルに添加した。並列培養細胞は、媒体対照としての同等濃度のＤＭＳＯで処理した。
【０１３０】
トリコスタチンＡまたはＤＭＳＯを添加して、３０分、１．５時間、３時間、６時間、１２時間および２４時間の後、処理された培養細胞からＲＮＡ試料を得た。培養培地は取り除き、細胞はＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を添加した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製した。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１３１】
Ｓｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびグルカゴンの発現レベルは、リアルタイムＰＣＲによって測定した。実施例３に記述される方法に基づいてアプライド・バイオシステムズ７５００で実施した各々の反応では、ｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を使用した。データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。ヒト膵臓のｃＤＮＡは、正の対照として含められ、結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比較して正規化した。
【０１３２】
インスリン、Ｐｄｘ−１、グルカゴンまたはＨＮＦ−３βの遺伝子の発現は、未処理の後期継代の膵臓由来間質細胞では検出されなかった。しかし、Ｓｏｘ−１７は、未処理細胞において、実験の 過程(course)の間、様々な時点で断続的に低いレベルで検出された（表Ｖ−Ａ）。後期継代の膵臓由来間質細胞をトリコスタチンＡ  ２．５μＭで処理することによって、時間が経過すれば、Ｓｏｘ−１７、グルカゴン、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現は増大した。しかし、インスリン遺伝子の発現の変化は、観察されなかった（図３パネルａ〜ｃ、および表Ｖ−Ｂ）。
【０１３３】
後期継代の膵臓由来間質細胞におけるＳｏｘ−１７遺伝子の発現は一貫して、トリコスタチンＡを添加した後３時間で、ＲＴ−ＰＣＲによって３５を超えるサイクル（>35 cycles）で検出可能となり、、２４時間で３５未満のサイクル（<35 cycles）、または、ヒト膵臓の発現レベルの約３％で検出可能となるよう、時間と共に増大した（図３パネルａ）。ＨＮＦ−３βの遺伝子発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって、トリコスタチンＡを添加した後６時間で、３５を超えるサイクル（>35 cycles）で検出可能となり、２４時間で３５未満のサイクル（<35 cycles）、または、ヒト膵臓の発現レベルの約０．０７５％に増大した（図３パネルｂ）。Ｐｄｘ−１の遺伝子発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって、トリコスタチンＡを添加した後１２時間で３５を超えるサイクル（>35 cycles）で検出可能となり、２４時間で３５未満のサイクル（<35 cycles）、または、ヒト膵臓の発現レベルの約０．２％に増大した。グルカゴンの発現は、トリコスタチンＡを添加した後２４時間までは検出不可能であり、その時点で、ＲＴ−ＰＣＲによって、３５〜４０サイクル（35-40 cycles）で検出レベルに到達した（図３パネルｄ）。総合すれば、これらのデータは、ＨＤＡＣ阻害剤、トリコスタチンＡによる処理によって、低い基底発現レベルを有する細胞、または、培養において時間が経って以前の発現パターンを喪失した細胞における膵内分泌遺伝子(endocrine pancreatic genes)の発現が誘発されうるか、または高められうることを示す。
【０１３４】
〔実施例９〕
羊水由来細胞における遺伝子の発現に及ぼす長期トリコスタチンＡ処理の影響
実施例２に記述した方法に基づき、羊水由来細胞を得た。細胞は、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的な細胞培養条件の下、ＡＭＮＩＯＭＡＸ（インビトロジェン社）で、集密状態になるまで培養した。それら細胞が集密状態に到達した後、試料ウェルは、ＤＭＳＯおよび培地で希釈された、５００ｎＭまたは１．０μＭのトリコスタチンＡで処理し、他方、対照ウェルは、同等濃度のＤＭＳＯで処理した。３日間の培養期間に渡り、２４時間間隔で、培養細胞に完全な培地交換を行い、トリコスタチンＡまたはＤＭＳＯの新たな希釈物を適切に添加した。
【０１３５】
トリコスタチンＡまたはＤＭＳＯを最初に添加して２４時間の後、前記の処理された培養細胞からＲＮＡ試料を得た。培養培地は取り除き、細胞はＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を添加した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製した。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１３６】
Ｓｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびグルカゴンの発現レベルは、ＲＴ−ＰＣＲによって測定した。実施例３に記述される方法に基づいてアプライド・バイオシステムズ７５００で実施した各々の反応では、ｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を使用した。データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。ヒト膵臓のｃＤＮＡは、正の対照として含められた。結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比較して正規化した。
【０１３７】
インスリンおよびＳｏｘ−１７遺伝子の基底発現は、未処理の羊水由来細胞において検出することができた。しかし、グルカゴンおよびＰｄｘ−１の遺伝子発現は、未処理細胞では、４０サイクル以下のＲＴ−ＰＣＲによって検出することはできなかった。ＨＮＦ−３βは、培養２４時間の未処理細胞では、検出されなかったものの、培養時間４８時間および７２時間でかすかに発現した。
【０１３８】
羊水由来細胞は、トリコスタチンＡで処理された後、グルカゴン、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１を、基底レベルを超えて発現した（図４パネルａ〜ｅ、表VI）。グルカゴンおよびＰｄｘ−１の遺伝子発現は、トリコスタチンＡによる処理の後の、投与量および時間に依存して増大し、最終の７２時間の時点で最大の発現が見られ、投与量１μＭでの処理によってより高い発現が見られた（図４パネルａおよびパネルｄ）。同様に、この実施例におけるＨＮＦ−３βの遺伝子発現も、時間に依存して増大し、最終の７２時間の時点で最大の発現が観察された。しかし、ＨＮＦ−３βの発現は、トリコスタチンＡの投与量１μＭでの処理と５００ｎＭでの処理とは、両方とも本質的に同等であった（図４パネルｂ）。対照的に、インスリンの遺伝子発現は、処理の後、減少し、全ての時点で、検出不可能なレベルとなった。Ｓｏｘ−１７の発現は、トリコスタチンＡの両方の投与量での処理では、当初の基底発現レベルと比べて有意な程度に影響を受けなかった。このことは、ＨＤＡＣ阻害剤による処理に反応して誘発される遺伝子発現の程度が変動し得ることを示唆している。
【０１３９】
〔実施例１０〕
後期継代の膵臓由来間質細胞における遺伝子の発現に及ぼす長期トリコスタチンＡ処理の影響
ヒト膵臓由来の間質細胞を、実施例１に記述される方法に基づいて得た。細胞は、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、ＦＢＳ１０％を含有するＤＭＥＭで集密状態になるまで培養した。それら細胞が集密度に到達した後、ＤＭＳＯおよび培地で希釈されたトリコスタチンＡ  １．２５μＭまたは２．５μＭで試料ウェルを処理した。他方、対照ウェルには、ＤＭＳＯを同等の濃度を与えた。３日間の培養期間に渡り、２４時間間隔で、培養細胞に完全な培地交換を行い、次いで、トリコスタチンＡまたはＤＭＳＯの新たな希釈物を適切に添加した。トリコスタチンＡまたはＤＭＳＯを最初に添加した後、毎日、処理された培養細胞からＲＮＡ試料を得た。培養培地は取り除き、細胞はＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を添加した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製し、ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１４０】
Ｓｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびグルカゴンの発現レベルは、ＲＴ−ＰＣＲによって測定した。実施例３に記述される方法に基づいてアプライド・バイオシステムズ７５００で実施した各々の反応では、ｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を使用した。データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。ヒト膵臓のｃＤＮＡは、正の対照として含められた。結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比較して正規化した。
【０１４１】
グルカゴン、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１およびＳｏｘ−１７の遺伝子の発現は、未処理の後期継代の膵臓由来間質細胞では、ＲＴ−ＰＣＲによって検出されなかった。遺伝子の発現は、トリコスタチンＡを添加した後、前述の遺伝子の全てで検出可能であった。インスリンの遺伝子発現は、処理を行なう前は検出不可能であり、トリコスタチンＡで処理した後、増大しなかった。グルカゴン、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、およびＳｏｘ−１７の遺伝子の発現レベルは全て、時間に依存して増大し、７２時間で、３種の遺伝子全てについて最大の発現が観察された。それらの細胞に、より高い濃度のトリコスタチンＡを添加したとき、場合によっては、発現レベルに相違が見られるようである（図５パネルａ〜ｄ、および表VII）。トリコスタチンＡ  １．２５μＭおよび２．５μＭというこれらの２つの処理濃度に関し、遺伝子発現の増大は同等であった。各々の遺伝子についての各々の時点での相違は、最小であり、有意差があるとは思えなかった。そのデータは、任意の遺伝子について、ＨＤＡＣ阻害剤によって処理される最大の閾値(threshold level)が存在し、任意の時点での遺伝子発現に影響を及ぼすであろうということ、および、ＨＤＡＣ阻害剤の濃度が高くなっても更なる利点は得られないということを意味している。そのデータはさらに、処理プロトコルの間、トリコスタチンＡを連続的に補充添加することは、時間の経過による遺伝子発現の増大が段階的に拡大するのを維持するために必要であるだろうということを示唆する。
【０１４２】
〔実施例１１〕
羊水由来細胞および膵臓由来間質細胞における遺伝子の発現に及ぼす長期トリコスタチンＡ処理の影響
別個の羊水試料（実施例２を参照されたい）と膵臓のドナー（実施例１を参照されたい）とから得られた幾つかの細胞系統について試験を行い、類似の結果を得た。類似の継代数であるが、別個の羊水試料から得られた２つの系統を、本実施例のための表VIII−Ａおよび表VIII−Ｂに示す。これらの細胞系統の一方は、上記の実施例２および実施例４においても使用した。加えて、本実施例は、初期継代数および後期継代数まで成長した単一膵臓由来の間質細胞系統のための表VIII−Ｃおよび表VIII−Ｄに比較データを含む。
【０１４３】
羊水由来細胞または膵臓由来間質細胞を、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、それぞれ、ＡＭＮＩＯＭＡＸ（インビトロジェン社）、またはＦＢＳ１０％を含有するＤＭＥＭで、集密状態になるまで培養した。それらの細胞が集密状態に到達した後、羊水由来細胞は、一旦、０時間の時間で、トリコスタチンＡ  ５００ｎＭで処理した。膵臓由来間質細胞は、一旦、０時間の時間で、トリコスタチンＡ  １．２５μＭで処理した。ＲＴ−ＰＣＲのための試料は、０日から６日まで毎日、表VIII−Ａ〜表VIII−Ｄに示される時間で採取した。
【０１４４】
当初、トリコスタチンＡまたはＤＭＳＯを添加して、１４４時間以下で処理された培養細胞からＲＮＡ試料を得た。培養培地は取り除き、細胞はＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を添加した。培養の間、培地は交換せず、新たに調製したトリコスタチンＡの添加も行わなかった。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製し、また、ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１４５】
各々の反応にｃＤＮＡ  ２０ｎｇの試料を用いて、羊水由来細胞における次の諸遺伝子：Ｇａｔａ−１、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびＳｏｘ−１７、の発現レベルを測定した。同様に、各々の反応にｃＤＮＡ  ２０ｎｇの試料を用いて、膵臓由来間質細胞における次の諸遺伝子：グルカゴン、ＨＮＦ−３β、インスリンおよびＰｄｘ−１、の発現レベルを測定した。アプライド・バイオシステムズ７５００でリアルタイムＰＣＲを実施し、データは、実施例３に記述される方法に基づいて付随のソフトウェアを用いて解析した。
【０１４６】
上記の実施例２及び実施例４で使用した、未処理の羊水由来細胞系統から得た試料の分析により、これらの細胞は、ＨＮＦ−３βもＧａｔａ−１も発現しないが、Ｓｏｘ−１７を発現し、また、インスリンおよびＰｄｘ−１を非常に低いレベルで発現することが分かった（表VIII−Ａ）。トリコスタチンＡを添加した後、ＨＮＦ−３βの発現は増大したものの、当初の処理を行った後最初の４８時間の間のみ増大した。Ｐｄｘ−１は、処理の後、２４時間連続して発現したものの、その時点の後、発現は検出不可能であった。インスリン遺伝子は、当初の処理の後、４８時間の間発現しなかったものの、４８時間の後、検出可能となった。Ｓｏｘ−１７の発現の変化もＧａｔａ−１の発現の変化も観察されなかった（表VIII−Ａ）。これらのデータは、トリコスタチンＡが、培養の当初の２４〜４８時間以内でこれらの細胞におけるインスリン遺伝子の発現を阻害するが、同一の時間内でＰｄｘ−１およびＨＮＦ−３βの発現の増大に関係し、次いで、４８時間の後は、検出不可能な発現または非常に弱い発現に戻ることを示唆する。トリコスタチンＡは、培養の間、分解することがあり、２４〜４８時間の後の後期の時点では、遺伝子発現に対して大きな持続的影響を及ぼさないことがある。したがって、トリコスタチンＡの１回の初期投与量を長期間に渡って使用する純影響(net effect)は、この試薬の可逆的特質(reversible nature)を反映することがある。
【０１４７】
未処理の、添加の羊水由来細胞系統から得られた試料の分析によって、これらの細胞は、ＨＮＦ−３βの基底レベルも、Ｐｄｘ−１の基底レベルも、Ｇａｔａ−１の基底レベルも発現しないものの、インスリンおよびＳｏｘ−１７を発現することが分かった。トリコスタチンＡによる処理の後、４８時間でＨＮＦ−３βの発現が検出されたものの、第１の羊水誘導細胞系統において見られたように、ＨＮＦ−３βは、４８時間の後、非常に弱い発現レベルまで減少した（表VIII−Ｂ）。Ｐｄｘ−１の遺伝子発現は、トリコスタチンＡによる処理の後、２４時間でのみ検出され、実験の他の時間では検出不可能なレベルに戻った。インスリンの遺伝子発現は、トリコスタチンＡ  ５００ｎＭを添加した後、検出不可能なレベルまで減少し、次いで、トリコスタチンＡを添加した後、７２時間から検出可能なレベルに戻った（表VIII−Ｂ）。Ｓｏｘ−１７およびＧａｔａ−１の発現は、トリコスタチンＡを添加することによって変化しなかった。これらのデータは、トリコスタチンＡが、細胞の培養試料に添加されて２４〜４８時間以内では代謝させられることがあること、ならびに、トリコスタチンＡが、これらの細胞におけるインスリン遺伝子の発現を阻害するものの、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１を包含する他の遺伝子に対しては可逆的刺激効果を有すること、を示唆する（表VIII−Ｂ）。
【０１４８】
処理を行なう前、初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞はＰｄｘ−１を発現したが、グルカゴン、ＨＮＦ−３βおよびインスリンの遺伝子は検出可能でなかった。トリコスタチンＡ  ２．５μＭによる処理の後２４時間で、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１およびグルカゴンの遺伝子は全て、発現が増大することが実証されたが、その効果は持続せず、当初の処理の後４８時間ではグルカゴンの遺伝子のみが、依然として検出可能であったが、しかし、２４時間で観察されたレベルより低いレベルまで減少した。インスリンの遺伝子発現は、実験の過程全体を通して、検出不可能であり、変化しなかった（表VIII−Ｃ）。これらのデータは、トリコスタチンＡによる処理の後、幾つかの遺伝子（例えば、転写因子）の発現は短命である場合があり、対応するｍＲＮＡの固有不安定性(inherent instability)、および／または、ｍＲＮＡの安定性に及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の第２の影響、および／または、これらの細胞において作用する付加的な負の制御経路(negative regulatory pathways)によって決まることを示唆する。同様の時間に渡る他の遺伝子のより長い持続的発現は、より大きいメッセージ安定性(message stability)、および／または、付加的な正の制御作用(positive regulatory effects)を反映するのであろう。
【０１４９】
未処理の後期継代（Ｐ１４）の膵臓由来間質細胞は、関心ある遺伝子のいずれも発現しなかった。このことは、膵内分泌マーカー(endocrine pancreatic markers)の発現が、生体外で培養が維持されている間、経時的に減少することを示唆している。トリコスタチンＡによる処理の後、インスリン遺伝子の発現は、実験の過程全体に渡って検出不可能であり、変化しないままであった（表VIII−Ｄ）。グルカゴン、Ｐｄｘ−１およびＨＮＦ−３βの遺伝子発現は、２４時間でＲＴ−ＰＣＲによって検出された（表VIII−Ｄ）。しかし、グルカゴンの発現のみは、当初の処理の後４８時間で依然として検出可能であったが、２４時間で観察された発現レベルよりも低いレベルであり、その後、検出不可能なレベルまで減少した。グルカゴン遺伝子は、これらの後期継代の細胞では、初期継代の膵臓由来間質細胞と比べて、より短い時間の間発現した。このことは、ＨＤＡＣ阻害剤の影響に対する反応のより短い形成段階(less plastic stage)を反映しているのであろう。
【０１５０】
〔実施例１２〕
羊水由来細胞および膵臓由来間質細胞における遺伝子発現に及ぼすトリコスタチンＡ低濃度投与量２回逐次処理の影響
別個の羊水試料（実施例２を参照されたい）と膵臓のドナー（実施例１を参照されたい）とから得られた幾つかの細胞系統について試験を行い、類似の結果を得た。類似の継代数であるが、別個の羊水試料から得られた２つの系統を、本実施例のための表IX−Ａおよび表IX−Ｂに示す。これらの細胞系統の一方は、上記の実施例７および実施例９においても使用した。加えて、本実施例は、初期継代数および後期継代数まで成長した単一膵臓由来の間質細胞系統のための表IX−Ｃおよび表IX−Ｄの比較データを含む。
【０１５１】
羊水由来細胞または膵臓由来間質細胞を、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、それぞれ、ＡＭＮＩＯＭＡＸ（インビトロジェン社）、またはＦＢＳ１０％を含有するＤＭＥＭで、集密状態になるまで培養した。それらの細胞が集密状態に到達した後、羊水由来細胞は、０時間の時間で、トリコスタチンＡ  ５００ｎＭの投与量で処理し、また、膵臓由来間質細胞は、ＤＭＳＯおよび培地で可溶化されたトリコスタチンＡ  １．２５μＭの投与量で処理した。２４時間の時間で、細胞培養に、完全な培地交換を行って、トリコスタチンＡの痕跡を全て取り除いた。９６時間の時間で、細胞培養に、新たな培地を再び供給して、トリコスタチンＡの第２回目の投与量を、前に使用した濃度と同一の濃度で供給した。１２０時間の時間で、細胞培養において再び完全な培地交換を行い、次いで、さらに２４時間の間、すなわち、１４８時間の全培養時間の間培養した。
【０１５２】
ＲＴ−ＰＣＲのための試料は、表IX−Ａ〜表IX−Ｄに示す時間で毎日採取した。培地は取り除き、試料はＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ（キアゲン社）に回収した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製し、また、ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１５３】
各々の反応にｃＤＮＡ  ２０ｎｇの試料を用いて、羊水由来細胞における次の諸遺伝子：Ｇａｔａ−１、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびＳｏｘ−１７、の発現レベルを測定した。同様に、各々の反応にｃＤＮＡ  ２０ｎｇの試料を用いて、膵臓由来間質細胞における次の諸遺伝子：グルカゴン、ＨＮＦ−３β、インスリンおよびＰｄｘ−１、の発現レベルを測定した。アプライド・バイオシステムズ７５００でリアルタイムＰＣＲを実施し、データは、実施例３に記述される方法に基づいて付随のソフトウェアを用いて解析した。
【０１５４】
トリコスタチンＡによる処理の前、実施例７および実施例９で用いた羊水由来細胞系統は、Ｇａｔａ−１もＨＮＦ−３βも発現しなかった。しかし、インスリン、Ｐｄｘ−１およびＳｏｘ−１７の遺伝子の発現は、ＲＴ（リアルタイム）−ＰＣＲによってそれぞれ、３７サイクルおよび２７サイクルで検出された（表IX−Ａ）。トリコスタチンＡ  ０．５μＭによる処理の後、Ｓｏｘ−１７およびＧａｔａ−１の遺伝子の発現は、実験全体に渡るその後のいずれの時点でも変化しなかった。インスリンの発現は、トリコスタチンＡによる処理を行なう前、ＲＴ−ＰＣＲによって３６サイクルで検出され、トリコスタチンＡを最初に添加後２４時間で検出不可能なレベルまで減少し、４８時間で３６サイクルで検出可能なレベルで再び現われ、実験期間の間、３６サイクルで検出され続けた。ＨＮＦ−３βは、トリコスタチンＡによる最初の処理の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３３サイクルで検出され、最初の培地交換の後、検出不可能なレベルまで減少し、トリコスタチンＡによる２回目の処理の後、３７サイクルで再び現われ、実験期間の間、検出され続けた。Ｐｄｘ−１の遺伝子発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３７サイクルで検出され、トリコスタチンＡを添加後、２４時間の間このレベルが持続したものの、その時点の後、実験の残りの時点では検出不可能であった（表IX−Ａ）。
【０１５５】
トリコスタチンＡによる処理の前、実施例１１で用いた羊水由来細胞系統は、Ｇａｔａ−１もＨＮＦ−３βもＰｄｘ−１も発現しなかった。インスリンおよびＳｏｘ−１７の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによってそれぞれ、３５サイクルおよび２７サイクルで検出された（表IX−Ｂ）。ＨＮＦ−３βは、トリコスタチンＡ  ０．５μＭによる処理の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで、７２時間まで検出された。その後、実験の残りの時点の発現レベルは減少し、ＲＴ−ＰＣＲによって３７サイクルで検出された。Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、トリコスタチンＡによる処理の後、２４時間で、ＲＴ−ＰＣＲによって３９サイクルで検出されたものの、その後、減少して、実験の残りの時点では検出不可能であった。インスリン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡによる処理の後、最初の４８時間では検出不可能であったものの、７２時間および実験の残りの時点ではＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで検出され、Ｓｏｘ−１７およびＧａｔａ−１の遺伝子の発現レベルは、実験の過程全体に渡って変化しなかった（表IX−Ｂ）。
【０１５６】
初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞は、トリコスタチンＡによる処理の前、グルカゴン、ＨＮＦ−３βまたはインスリンを発現しなかった。しかし、Ｐｄｘ−１の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３８サイクルで検出された。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる処理の後、インスリンの発現は変化しなかった。Ｐｄｘ−１およびＨＮＦ−３βの遺伝子の発現は、トリコスタチンＡを添加した後、いずれの遺伝子も２４時間で、ＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで検出可能であった。発現は、その後、検出不可能なレベルまで減少し、トリコスタチンＡを２回目に添加後、初めて検出可能なレベルとなった。Ｐｄｘ−１およびＨＮＦ−３βは、トリコスタチンＡを２回目に添加した後、３３サイクルで検出された。グルカゴン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡを添加した後、最初の４８時間で、ＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで検出されたものの、その後、検出不可能なレベルまで減少し、２回目のトリコスタチンＡ処理のサイクルの後初めて検出可能なレベルとなった。２回目のトリコスタチンＡ処理の時点で、その発現レベルは増大し、ＲＴ−ＰＣＲによって３７サイクルで検出可能となった（表IX−Ｃ）。
【０１５７】
同様の結果は、後期継代（Ｐ１１）の膵臓由来間質細胞で見られた。グルカゴン、ＨＮＦ−３β、インスリンおよびＰｄｘ−１は、処理前は、検出不可能であった。トリコスタチンＡ  ２．５μＭによる処理の後、インスリン遺伝子の発現は変化しなかった。しかし、グルカゴン、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現は、３種の遺伝子全てについて、ＲＴ−ＰＣＲによって３３サイクルで検出することができた。遺伝子の発現は、その後、減少するか、または、トリコスタチンＡによる２回目の処理サイクルの後初めて検出可能となった。その場合、グルカゴン遺伝子の発現レベルはＲＴ−ＰＣＲによって３６サイクルで、また、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現レベルはＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで検出された（表IX−Ｄ）。
【０１５８】
これらのデータは、総合すれば、遺伝子発現に与えるトリコスタチンＡの影響は、培養細胞からトリコスタチンＡを除去した後、持続しないということを意味する。しかし、トリコスタチンＡを重複して施用すれば、遺伝子発現に与えるトリコスタチンＡの影響は回復しうる。トリコスタチンＡによって誘起される遺伝子発現の全体のパターンは、一部分は、使用される投薬濃度と、処理の期間と、処理期間の間の間隔とによって決まることがある。
【０１５９】
〔実施例１３〕
羊水由来細胞および膵臓由来間質細胞における遺伝子発現に及ぼすトリコスタチンＡ高濃度投与量２回逐次処理の影響
別個の羊水試料（実施例２を参照されたい）と膵臓のドナー（実施例１を参照されたい）とから得られた幾つかの細胞系統について試験を行い、類似の結果を得た。類似の継代数であるが、別個の羊水試料から得られた２つの系統を、本実施例のための表Ｘ−Ａおよび表Ｘ−Ｂに示す。これらの細胞系統の一方は、上記の実施例２および実施例４においても使用した。加えて、本実施例は、初期継代数および後期継代数まで成長した単一膵臓由来の間質細胞系統のための表Ｘ−Ｃおよび表Ｘ−Ｄの比較データを含む。
【０１６０】
羊水由来細胞または膵臓由来間質細胞を、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、それぞれ、ＡＭＮＩＯＭＡＸ（インビトロジェン社）、またはＦＢＳ１０％を含有するＤＭＥＭで、集密状態になるまで培養した。それらの細胞が集密状態に到達した後、羊水由来細胞は、０時間の時間で、トリコスタチンＡ  １．２５μＭの投与量で処理し、膵臓由来間質細胞は、ＤＭＳＯおよび培地で可溶化されたトリコスタチンＡ  ５．０μＭの投与量で処理した。２４時間の時間で、細胞培養に、完全な培地交換を行って、トリコスタチンＡの痕跡を全て取り除いた。９６時間の時間で、細胞培養に、新たな培地を再び供給して、トリコスタチンＡの第２回目の投与量を、前に使用した濃度と同一の濃度で供給した。１２０時間の時間で、細胞培養において再び完全な培地交換を行い、次いで、さらに２４時間の間、即ち、１４８時間の全培養時間の間培養した。
【０１６１】
ＲＴ−ＰＣＲのための試料は、表Ｘ−Ａ〜表Ｘ−Ｄに示す時間で毎日採取した。該培地は取り除き、試料は、ＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ（キアゲン社）に回収した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製し、また、ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１６２】
各々の反応にｃＤＮＡ  ２０ｎｇの試料を用いて、羊水由来細胞における次の諸遺伝子：Ｇａｔａ−１、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびＳｏｘ−１７、の発現レベルを測定した。同様に、各々の反応にｃＤＮＡ  ２０ｎｇの試料を用いて、膵臓由来間質細胞における次の諸遺伝子：グルカゴン、ＨＮＦ−３β、インスリンおよびＰｄｘ−１、の発現レベルを測定した。アプライド・バイオシステムズ７５００でリアルタイムＰＣＲを実施し、データは、実施例３に記述される方法に基づいて付随のソフトウェアを用いて解析した。
【０１６３】
トリコスタチンＡによる処理の前、実施例７および実施例９で用いた羊水由来細胞系統は、Ｇａｔａ−１もＨＮＦ−３βも発現しなかった。インスリン、Ｐｄｘ−１およびＳｏｘ−１７の遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによってそれぞれ、３６サイクル、３７サイクルおよび２７サイクルで検出された。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる処理によって、ＨＮＦ−３βが発現し、３２サイクルで検出された。しかし、この発現は一過性であり、ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は、トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる当初の処理の後、検出不可能なレベルまで減少した。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる２回目の処理によって、ＨＮＦ−３β遺伝子は発現し、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３２サイクルで検出された（表Ｘ−Ａ）。同様の結果は、Ｐｄｘ−１遺伝子の発現についても観察された。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる処理によって、Ｐｄｘ−１は、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３７サイクルから３２サイクルまで増大した。しかし、この増大は一過性であり、Ｐｄｘ−１遺伝子の発現レベルは、トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる当初の処理の後、検出不可能なレベルまで減少した。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる２回目の処理によって、Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３４サイクルで検出された（表Ｘ−Ａ）。Ｇａｔａ−１の発現は、唯一、トリコスタチンＡを最初に添加した後、ＲＴ−ＰＣＲによって３７サイクルで検出された。Ｓｏｘ−１７遺伝子の発現は、トリコスタチンＡの添加によって変化しなかった。インスリン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる処理の後、検出不可能であったものの、培地を交換した後、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３６サイクルで検出された（表Ｘ−Ａ）。
【０１６４】
トリコスタチンＡによる処理の前、実施例１１で用いた羊水由来細胞系統は、Ｇａｔａ−１もＨＮＦ−３βもＰｄｘ−１も発現しなかった。しかし、インスリンおよびＳｏｘ−１７の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによってそれぞれ、３５サイクルおよび２７サイクルで検出された。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる当初の処理は、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の発現を刺激した。ＨＮＦ−３βの発現は、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３５サイクルで検出されたものの、その発現レベルは、トリコスタチンＡを２回目に添加する前、３８サイクルまで減少した。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる２回目の処理の後、ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３２サイクルで検出されるまでに回復した。Ｐｄｘ−１の発現は、トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる当初の処理の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３３サイクルで検出された。この発現レベルは、トリコスタチンＡが培地から除去された後、検出不可能であったものの、トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる２回目の処理の後、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３２サイクルで検出可能なレベルまで回復した（表Ｘ−Ｂ）。Ｇａｔａ−１遺伝子の発現は、実験の過程全体に渡って変化しなかった。インスリン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡによる処理の前、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３５サイクルで検出されたものの、その発現は、処理の後、直ちに検出不可能になった。トリコスタチンＡを洗い流した後、インスリン遺伝子の発現の検出は回復し、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３６サイクルで検出可能であった。トリコスタチンＡの２回目の添加の後、インスリン遺伝子の発現は、再び検出不可能になった。Ｓｏｘ−１７遺伝子の発現は、実験期間の間、変化しなかった（表Ｘ−Ｂ）。これらのデータは、この細胞におけるＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現を増大させるためには、１．２５μＭのトリコスタチンＡは、０．５μＭのトリコスタチンＡよりも優れた使用濃度であることを示唆する。１．２５μＭトリコスタチンＡの影響は、培地交換の後、持続性の影響を与えるようであり、遺伝子の発現に与える影響は、この化合物が存在する実時間を超えて持続することを示す。さらに、トリコスタチンＡは、インスリン遺伝子の発現に対して抑制効果を有する場合があるように思われる。
【０１６５】
５．０μＭトリコスタチンＡによる処理の前の、初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞において、グルカゴン、ＨＮＦ−３βまたはインスリンの遺伝子の発現は、検出されなかった。しかし、５．０μＭトリコスタチンＡによる処理の後、ＨＮＦ−３βおよびグルカゴンの発現は、ＲＴ−ＰＣＲで測定してそれぞれ３４サイクルおよび３５サイクルで検出された。ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は、トリコスタチンＡを除去した後、検出不可能となったものの、トリコスタチンＡによる２回目の処理の後、遺伝子の発現は、回復し、ＲＴ−ＰＣＲによって３６サイクルで検出可能であった。グルカゴンの発現レベルも、トリコスタチンＡを除去した後、減少し、ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）を２回目に添加した後、検出不可能となり、実験の最後の時点になって初めて検出可能となった。その時、グルカゴンの発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３８サイクルで検出された。Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、トリコスタチンＡによる２回目の処理の後においてのみ、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３２サイクルで検出された。インスリン遺伝子の発現は、実験過程の間中、変化しなかった（表Ｘ−Ｃ）。これらのデータは、初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞において、５．０μＭトリコスタチンＡによる２４時間の処理が、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現を増大させるのに十分であったものの、インスリン遺伝子の発現を増大させるには十分ではなかったことを示唆する。
【０１６６】
後期継代（Ｐ１１）の膵臓由来間質細胞に関する結果は、初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞に関して見られるものに類似した。トリコスタチンＡによる処理の前、関心あるいずれの遺伝子も検出不可能であったものの、５．０μＭトリコスタチンＡによる処理の後、ＲＴ−ＰＣＲで測定して、グルカゴンは３３サイクルで検出され、ＨＮＦ−３βは３２サイクルで検出され、また、Ｐｄｘ−１の発現は３１サイクルで検出された。培地を交換した後、グルカゴンの発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって依然として検出可能であったものの、観察された発現レベルは、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３８サイクルまで減少し、トリコスタチンＡによる２回目の添加によって増大しなかった。ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は、トリコスタチンＡによる最初の処理の後、３２サイクルで検出可能であったものの、培地交換の後、検出不可能となった。発現は、再び検出不可能となり、トリコスタチンＡによる２回目の処理の後初めて、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３６サイクルで検出可能となった。Ｐｄｘ−１は、トリコスタチンＡによる当初の処理の後、３１サイクルで発現したものの、この発現レベルは、トリコスタチンＡが除去された後、検出不可能となった。Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、トリコスタチンＡの２回目の添加の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで検出された。トリコスタチンＡによる処理またはトリコスタチンＡの除去の後、インスリン遺伝子の発現は、変化しなかった（表Ｘ−Ｄ）。これらのデータは、５．０μＭトリコスタチンＡによる２４時間の処理は、後期継代（Ｐ１１）の膵臓由来間質細胞においてインスリン遺伝子の発現を増大させるには十分でなかったものの、５．０μＭトリコスタチンＡは、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現を増大させるのに十分であったことを示唆する。
【０１６７】
〔実施例１４〕
羊水由来細胞および膵臓由来間質細胞における遺伝子発現に及ぼすトリコスタチンＡ高濃度投与量２回処理の影響
別個の羊水試料（実施例２を参照されたい）と膵臓のドナー（実施例１を参照されたい）とから得られた幾つかの細胞系統について試験を行い、類似の結果を得た。類似の継代数であるが、別個の羊水試料から得られた２つの系統を、本実施例のための表XI−Ａおよび表XI−Ｂに示す。これらの細胞系統の一方は、上記の実施例２および実施例４においても使用した。加えて、本実施例は、初期継代数および後期継代数まで成長した単一膵臓由来の間質細胞系統のための表XI−Ｃおよび表XI−Ｄの比較データを含む。
【０１６８】
羊水由来細胞または膵臓由来間質細胞を、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、それぞれ、ＡＭＮＩＯＭＡＸ（インビトロジェン社）、またはＦＢＳ１０％を含有するＤＭＥＭで、集密状態になるまで培養した。羊水由来細胞は、集密状態に到達した後、羊水由来細胞は、０時間の時間で、トリコスタチンＡ  １．２５μＭの投与量で処理し、また、膵臓由来間質細胞は、ＤＭＳＯおよび培地で可溶化されたトリコスタチンＡ  ５．０μＭの投与量で処理した。４８時間の時間で、細胞培養に、完全な培地交換を行って、トリコスタチンＡの痕跡を全て取り除いた。９６時間の時間で、細胞培養に、新たな培地を再び供給して、トリコスタチンＡの第２回目の投与量を、前に使用した濃度と同一の濃度で供給した。１２０時間の時間で、細胞培養において再び完全な培地交換を行い、次いで、さらに２４時間の間、すなわち、１４８時間の全培養時間の間培養した。
【０１６９】
ＲＴ−ＰＣＲのための試料は、表XI−Ａ〜表XI−Ｄに示す時間で採取した。ＲＮＡ試料は、実験の出発から毎日得た。培地は取り除き、試料は、ＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ（キアゲン社）に回収した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製し、また、ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。対照として、ヒト膵臓ｃＤＮＡが含められた。結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比べて正規化した。
【０１７０】
羊水由来細胞におけるＳｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびグルカゴンの遺伝子の発現レベルを分析し、同時に、膵臓由来間質細胞におけるグルカゴン、インスリン、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の発現レベルを分析した。各々のリアルタイムＰＣＲ反応において、ｃＤＮＡ  ２０ｎｇの試料を用いた。リアルタイムＰＣＲは、実施例３に記述される方法に基づいて、アプライド・バイオシステムズ７５００で実施した。データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。
【０１７１】
トリコスタチンＡによる処理の前、実施例７および実施例９で用いた羊水由来細胞系統は、Ｇａｔａ−１もＨＮＦ−３βも発現しなかった。インスリンおよびＰｄｘ−１は、ＲＴ−ＰＣＲで検出して、それぞれ、３６サイクルおよび３７サイクルで発現し、また、Ｓｏｘ−１７の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって２７サイクルで検出された。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる処理の後、Ｇａｔａ−１遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３７サイクルで検出されたものの、実験の残りの時点では検出されなかった。ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は、トリコスタチンＡ  １．２５μＭを添加した後、ＲＴ−ＰＣＲによって３１サイクルで検出されたものの、この発現レベルは、検出不可能なレベルまで減少し、２回目のトリコスタチンＡの添加によって初めて検出可能なレベルとなった。トリコスタチンＡによる２回目の処理の後、ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は増大し、ＲＴ−ＰＣＲによって３５サイクルで検出された。インスリン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡ  １．２５μＭを当初添加した後、ＲＴ−ＰＣＲによって検出不可能であった。Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、トリコスタチンＡ  １．２５μＭの添加の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３２サイクルで検出された。この遺伝子発現は、培地交換の後、減少したものの、トリコスタチンＡによる２回目の処理の後、再び増大し、ＲＴ−ＰＣＲによって３７サイクルで検出された。Ｓｏｘ−１７遺伝子の発現レベルは、実験過程の全体に渡って、変化しなかった（表XI−Ａ）。これらのデータは、トリコスタチンＡによる連続処理によって、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現が増大すること、より高い濃度のトリコスタチンＡに、より長い期間の間さらすことによって、遺伝子発現に与えるより強い影響が測定しうること、ならびに、この細胞型におけるインスリン遺伝子の発現が、トリコスタチンＡを添加することによって阻害されうること、をさらに支持する。
【０１７２】
トリコスタチンＡによる処理の前、実施例１１で用いた羊水由来細胞系統は、Ｇａｔａ−１もＨＮＦ−３βもＰｄｘ−１も発現しなかった。Ｓｏｘ−１７およびインスリンの発現は、トリコスタチンＡによる処理の前、発現し、ＲＴ−ＰＣＲによってそれぞれ、２７サイクルおよび３５サイクルで検出された。Ｇａｔａ−１の発現は、１．２５μＭトリコスタチンＡによる処理の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３８サイクルで検出されたものの、この発現は、２４時間より長く持続しなかった。Ｇａｔａ−１の発現は、トリコスタチンＡによる２回目の処理の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３８サイクルで再び検出された。ＨＮＦ−３βの発現は、最初の７２時間の間は、ＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで検出され、９６時間で３７サイクルに減少し、また、トリコスタチンＡによる２回目の処理の後、３３サイクルに増大した。インスリンの発現は、１．２５μＭトリコスタチンＡによる処理の後、検出不可能であり、実験の期間の間、発現は変化しなかった。Ｐｄｘ−１の発現は、１．２５μＭトリコスタチンＡによる当初の処理の後４８時間でＲＴ−ＰＣＲによって３５サイクルで検出された。このレベルは、トリコスタチンＡが一旦除去されると、検出不可能となったものの、トリコスタチンＡによる２回目の処理の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで検出された。Ｓｏｘ−１７遺伝子の発現レベルは、実験の過程全体に渡って変化しなかった（表XI−Ｂ）。これらのデータは、トリコスタチンＡによる連続処理によって、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現が増大すること、より高い濃度のトリコスタチンＡに、より長い期間の間さらすことによって、遺伝子発現に与えるより強い影響が測定しうること、および、この細胞型におけるインスリン遺伝子の発現が、トリコスタチンＡを添加することによって阻害されうること、をさらに支持する。
【０１７３】
初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞は、５．０μＭトリコスタチンＡによる処理の前、ＲＴ−ＰＣＲで検出して３８サイクルでＰｄｘ−１を発現したが、グルカゴン、ＨＮＦ−３βおよびインスリンを発現しなかった。トリコスタチンＡによる処理の後、グルカゴン遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３５サイクルで検出された。この発現レベルは、４８時間でＲＴ−ＰＣＲによって検出して、３３サイクルに増大したものの、トリコスタチンＡを除去した後、３８サイクルに減少した。トリコスタチンＡを２回目に添加後、グルカゴン遺伝子の発現は、３７サイクルで検出されるまでに増大した。ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は、トリコスタチンＡによる処理の後、ＲＴ−ＰＣＲによって３４サイクルで検出可能であり、この発現レベルは、トリコスタチンＡが除去されるまで持続した。トリコスタチンＡをそれらの細胞に添加したとき、発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３３サイクルで検出された。Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、トリコスタチンＡによる当初の処理の後、検出不可能であったものの、４８時間でＲＴ−ＰＣＲによって３２サイクルで検出された。一旦、トリコスタチンＡを培地から除去すれば、遺伝子発現は、検出不可能となった（表XI−Ｃ）。Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、トリコスタチンＡを２回目に添加後、ＲＴ−ＰＣＲで測定して３２サイクルで検出された。インスリン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡが培地に残留している間は検出不可能であったものの、培地を交換した後、３３サイクルで検出された。トリコスタチンＡを培地に再び添加した後、インスリン遺伝子の発現は、検出不可能であった（表XI−Ｃ）。これらのデータは、トリコスタチンＡによる連続処理によって、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現が増大すること、より高い濃度のトリコスタチンＡに、より長い期間の間さらすことによって、遺伝子発現に与えるより強い影響が測定しうること、および、この細胞型におけるインスリン遺伝子の発現が、トリコスタチンＡを添加することによって阻害されうること、をさらに支持する。
【０１７４】
後期継代（Ｐ１１）の膵臓由来間質細胞に関する結果は、初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞に関して記載されるものに類似した。５．０μＭトリコスタチンＡによる処理の前、関心あるいずれの遺伝子も検出不可能であったものの、トリコスタチンＡを添加した後、グルカゴンは、ＲＴ−ＰＣＲによって３３サイクルで検出され、また、ＨＮＦ−３βはＲＴ−ＰＣＲによって３２サイクルで検出された。Ｐｄｘ−１は３１サイクルで検出された。インスリン遺伝子の発現は、実験の過程全体に渡って変化しなかった。グルカゴン遺伝子の発現は、５．０μＭトリコスタチンＡによる当初の処理の後、４８時間でＲＴ−ＰＣＲによって３３サイクルで検出された。このレベルのグルカゴン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡを除去した後、３７サイクルに減少し、トリコスタチンＡによる２回目の処理の前、検出不可能であった。その時点で、グルカゴン遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３５サイクルで検出された。ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現は、同一のパターンに従った。発現は、５．０μＭトリコスタチンＡを添加した後、４８時間で、それぞれ、３３サイクルおよび３２サイクルで検出されたものの、培地を交換し、トリコスタチンＡを除去した後は、ＲＴ−ＰＣＲによって検出不可能となった。トリコスタチンＡを再び添加すると、ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は３５サイクルに増大し、また、Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲで検出して、３３サイクルに増大した（表XI−Ｄ）。これらのデータは、トリコスタチンＡによる連続処理によって、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現が増大すること、より高い濃度のトリコスタチンＡに、より長い期間の間さらすことによって、遺伝子発現に与えるより強い影響が測定しうること、および、この細胞型におけるインスリン遺伝子の発現が、トリコスタチンＡを添加することによって阻害されうること、をさらに支持する。
【０１７５】
〔実施例１５〕
羊水由来細胞および膵臓由来間質細胞における遺伝子発現に及ぼす、トリコスタチンＡによる６時間処理の影響
羊水由来細胞または膵臓由来間質細胞を、５０００個／ｃｍ2の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、それぞれ、ＡＭＮＩＯＭＡＸ（インビトロジェン社）、またはＦＢＳ１０％を含有するＤＭＥＭで、集密状態に到達するまで培養した。集密状態に到達した時、羊水由来細胞は１．２５μＭトリコスタチンＡで処理し、膵臓由来間質細胞は５．０μＭトリコスタチンＡで処理した。培地は、トリコスタチンＡを添加した後、６時間で交換し、また、培養細胞は、実験の残りの時間の間、保持した。羊水（実施例２を参照されたい）と膵臓（実施例１を参照されたい）とから得られた幾つかの細胞系統について試験を行った。ＲＴ−ＰＣＲのための諸試料は、表XII−Ａ〜表XII−Ｄに示す時間で採取した。
【０１７６】
ＲＮＡ試料は、トリコスタチンＡを除去した時点と、実験の開始から２４時間とで得た。培地は取り除き、試料は、ＰＢＳで洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）に回収した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製し、また、ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。対照として、ヒト膵臓ｃＤＮＡが含められた。結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比べて正規化した。
【０１７７】
羊水由来細胞におけるＳｏｘ−１７、ＨＮＦ−３β、Ｐｄｘ−１、インスリンおよびＧａｔａ−１の発現レベルを分析し、同時に、膵臓由来間質細胞におけるグルカゴン、インスリン、Ｐｄｘ−１およびＨＮＦ−３βの発現レベルを分析した。各々のＲＴ−ＰＣＲ反応において、ｃＤＮＡ  ２０ｎｇを用いた。ＲＴ−ＰＣＲは、実施例３に記述される方法に基づいて、アプライド・バイオシステムズ７５００で実施した。データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。
【０１７８】
トリコスタチンＡによる処理の前、実施例７および実施例９で用いた羊水由来細胞系統は、Ｇａｔａ−１もＨＮＦ−３βも発現しなかった。トリコスタチンＡ  １．２５μＭによる処理の後、ＨＮＦ−３βの発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３２サイクルで検出されたものの、洗浄の後、３５サイクルに増大した。インスリン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡを添加した後、ＲＴ−ＰＣＲで測定して、３６サイクルで検出されるレベルから、検出不可能なレベルまで減少した（表XII−Ａ）。Ｐｄｘ−１の発現は、トリコスタチンＡよる処理の前、ＲＴ−ＰＣＲによって３７サイクルで検出された。この発現レベルは、トリコスタチンＡによる処理の後、３５サイクルまで減少したものの、一旦トリコスタチンＡが除去されると、検出不可能となった。Ｇａｔａ−１およびＳｏｘ−１７の発現は、トリコスタチンＡを添加しても変化しなかった（表XII−Ａ）。
【０１７９】
トリコスタチンＡによる処理の前、実施例１１で用いた羊水由来細胞系統は、Ｇａｔａ−１もＨＮＦ−３βもＰｄｘ−１も発現しなかった。インスリンおよびＳｏｘ−１７は、ＲＴ−ＰＣＲによってそれぞれ、３５サイクルおよび２７サイクルで発現した。１．２５μＭトリコスタチンＡによる６時間の処理は、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の発現を、ＲＴ−ＰＣＲで検出して、それぞれ、３１サイクルおよび３５サイクルまで増大させるのに十分であった。トリコスタチンＡを除去した後、ＨＮＦ−３βの発現はＲＴ−ＰＣＲによって３５サイクルで検出され、また、Ｐｄｘ−１は検出不可能であった。インスリン遺伝子の発現は、トリコスタチンＡを添加した後、検出不可能となった。Ｇａｔａ−１およびＳｏｘ−１７の遺伝子の発現レベルは、１．２５μＭトリコスタチンＡによる処理の後、変化しなかった（表XII−Ｂ）。これらのデータは、これらの細胞にトリコスタチンＡによる処理を行うことによって、インスリン遺伝子の発現が抑制されること、ならびに、６時間の処理が、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現が増大するのを見るのに十分であることを支持する。
【０１８０】
初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞は、５．０μＭトリコスタチンＡを添加する前、グルカゴンも、ＨＮＦ−３βも、インスリンも発現しなかった。トリコスタチンＡによる処理の後、グルカゴン遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３７サイクルで検出され、ＨＮＦ−３β遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３５サイクルで検出された。トリコスタチンＡを除去した後、グルカゴン遺伝子の発現は、同一サイクルのままであったものの、ＨＮＦ−３βは検出不可能であった。インスリン遺伝子の発現は、検出不可能のままであり、トリコスタチンＡが培地から除去されて初めて検出可能となった。その場合、インスリン遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３２サイクルで検出された。Ｐｄｘ−１遺伝子の発現は、トリコスタチンＡによる処理の前、ＲＴ−ＰＣＲによって３８サイクルで検出されたものの、処理の後、その発現レベルは、３５サイクルに増大した（表XII−Ｃ）。これらのデータは、５．０μＭトリコスタチンＡによる６時間の処理が、Ｐｄｘ−１の発現を増大させるには十分でなかったものの、前述のように、インスリン遺伝子の発現を抑制し続けるということを示唆する。
【０１８１】
後期継代（Ｐ１１）の膵臓由来間質細胞は、５．０μＭトリコスタチンＡによる処理の前、関心ある遺伝子のいずれをも発現しなかった。トリコスタチンＡによる処理の後、ＲＴ−ＰＣＲによって、グルカゴンは３７サイクルで検出され、ＨＮＦ−３βは３６サイクルで検出され、また、Ｐｄｘ−１は３７サイクルで検出された。トリコスタチンＡを添加した後、インスリン遺伝子の発現は変化しなかった。トリコスタチンＡを除去した後、グルカゴン遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲによって３５サイクルで検出され、他方、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現は、検出不可能であった（表XII−Ｄ）。これらのデータは、トリコスタチンＡが、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１の遺伝子の発現を増大させるのに必要であることを示唆する。
【０１８２】
〔実施例１６〕
細胞分化を行うためのＨＤＡＣ阻害剤スクリーニング
スクリーニング(screening)を行う目的で、小分子阻害剤のライブラリーを利用した。このライブラリーは、潜在的な酵素阻害(enzymatic inhibition)のために設計された、フォーカスセット(focused set)の化学構造を代表した。諸化合物は、ＤＭＳＯに入れて可溶化して、ＤＭＳＯ  ３０％／ＨＥＰＥＳ  ５０ｍＭ中、原料１ｍＭまで希釈し、９６ウェルフォーマット(96-well format)で平板培養し、次いで、使用の前、−８０℃で凍結乾燥した。
【０１８３】
羊水由来細胞を、平底の９６ウェル組織培養プレートに、細胞１５,０００個／ウェルの密度で接種し、次いで、標準的な細胞培養条件の下、完全に補われたＡＭＮＩＯＭＡＸ（インビトロジェン社）で集密状態に到達するまで培養した。細胞は、集密状態に到達した後、０時間の時間で、培地で希釈された５μＭ  ＨＤＡＣ阻害剤（ＤＭＳＯ  ０．５％、最終分析濃度）で処理した。負の対照のウェルには、希釈剤のみを供給した。正の対照のウェルには、５μＭ  トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）を供給した。２４時間で、ＲＴ−ＰＣＲのための諸試料を採取した。培地は取り除き、細胞はＰＢＳで洗浄し、次いで、溶解物(lysate)は、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ（キアゲン社）に回収した。ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製し、また、ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定した。ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。ヒト膵臓ｃＤＮＡは、対照として含まれた。結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比べて正規化した。
【０１８４】
各々のリアルタイムＰＣＲ反応にｃＤＮＡ  ２０ｎｇを用いて、Ｐｄｘ−１遺伝子の発現レベルを分析した。実施例１５に記述される方法に基づいて、アプライド・バイオシステムズ７５００でＲＴ−ＰＣＲを実施した。データ解析は、付随のソフトウェアを用いて行った。表XIII−Ａに、全ての一次スクリーニング(primary screening)の結果を示す。
【０１８５】
Ｐｄｘ−１遺伝子の発現を、ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）によって誘発されるレベルの少なくとも８０％のレベルまで増大させた化合物は、「ヒット(hits)」と見なし、次いで、上記プロトコルで再試験を行った。５７２種の化合物について試験を行い、５６種が「ヒット」（ヒット率９．８％）と見なされた。確認分析(confirmation assays)では、５６種のヒットの全てが、Ｐｄｘ−１遺伝子の発現を、ＴＳＡによって生じたレベルの少なくとも８０％のレベルまで増大させることができた（確認率１００％）。表XIII−Ｂに、確認スクリーニング(confirmation screening)の結果を示す。
【０１８６】
確認された諸化合物はさらに、ＭＴＳテトラゾリウムアッセイ(MTS tetrazolium assay)（プロメガ社(Promega)；Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  ９６ＡＱｕｅｏｕｓ）を用いて、３回重複でスクリーニングを行って、細胞傷害効果を調べた。９６ウェルプレートでの羊水由来細胞の並列培養細胞は、標準的培養条件の下、２４時間または７２時間の間、５μＭ化合物に暴露した。メーカーの取扱説明書に従って、各々のウェルにＭＴＳ試薬を添加し、次いで、３７℃で１時間の間培養し、標準的分光光度計の４９０ｎｍで読み取った。処理されたウェルからの数的読取り値は、未処理の対照ウェルと比較し、次いで、細胞代謝活性と関連のある生存率(viability index)（％）を計算するのに使用した。全ての化合物についての総合結果は、図６および図７に示し、両方の暴露時間に対する生存率測定値を比較する。
【０１８７】
Ｐｄｘ−１遺伝子の発現の最大誘発と最少毒性とに基づく、最も効果的な上位１０種の化合物を選定した。これらの化合物は、羊水由来細胞（表XIII−Ｃ、および図８）または膵臓由来細胞（表XIII−Ｄ、および図９）を用い、２倍投与量漸増試験(two-fold dose titration assay)でさらに試験を行った。Ｐｄｘ−１遺伝子の発現を分析する前、０．１５〜１０μＭの範囲に渡る化合物濃度について、２４時間の暴露時間の間試験した。ＭＴＳ細胞傷害試験(MTS cytotoxicity assay)は、両方の細胞型における各々の化合物の投与量漸増(dose titration)を３回重複した。まとめの結果は、図１０および図１１に示す。図１２は、既知のＨＤＡＣ阻害剤であるＴＳＡ（トリコスタチンＡ）に対して、選定されたヒットの投与量漸増の、酵素阻害の効力を比較する。
【０１８８】
〔実施例１７〕
成人膵臓由来細胞系統における遺伝子発現に及ぼす、ＨＤＡＣ阻害剤とＭＧ−１３２との処理の組合せの影響
膵臓由来細胞は、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）で処理した。トリコスタチンＡは、単独で、または、細胞浸透性のプロテアソーム阻害剤であるＭＧ−１３２と逐次組合せて、濃度を変化させ、また、ＭＧ−１３２も様々な濃度で添加した。手短に言えば、細胞は、平板培養を行って、ＦＣＳ１０％を含有する高グルコースＤＭＥＭを有する標準培地の６ウェル・クラスタープレート(6-well cluster plates)において集密状態の単層に成長させた。０時間の時間で、未処理細胞の試料は、基底対照(basal control)として採取した。ＤＭＳＯで可溶化したＭＧ−１３２（ＥＭＤバイオサイエンス社(EMD Biosciences)）は、新たな培地において１μＭまたは１０μＭの最終濃度に希釈し、次いで、標準的培養条件の下、２４時間の間、前記細胞を培養した。２４時間の後、培地は取り除き、最終希釈で１．２５μＭまたは２．５μＭのトリコスタチンＡを含有する新たな培地と交換し、次いで、さらに２４時間の間培養した。負の対照ウェルは、培地とＤＭＳＯとの希釈剤の同等容量を含有したが、処理用化合物は含有しなかった。
【０１８９】
ＲＮＡ試料は、処理を開始した後４８時間で、処理された培養細胞から得た。培地は取り除き、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を添加した。それらの試料は、キアシュレッダー・カラム(Qiashredder columns)（キアゲン社）を用いて均質化し、次いで、ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製した。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。
【０１９０】
Ｐｄｘ−１、ＨＮＦ−３β、インスリンおよびＮｋｘ６．１の発現レベルは、実施例３に記述されるように、各々の反応にｃＤＮＡ  ２０ｎｇの試料を用い、リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によって測定した。ＲＴ−ＰＣＲは、アプライド・バイオシステムズ７５００で実施し、データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。正の対照として、ヒト膵臓のｃＤＮＡが含められた。結果は、ＧＡＰＤＨ発現レベルと比べて正規化した。
【０１９１】
表XIV〜表XVIの結果は、ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）が、処理後２４時間で、成人膵臓由来細胞におけるＰｄｘ−１、ＨＮＦ−３βおよびＮｋｘ６．１の低レベル遺伝子発現を誘発することができるということを実証する。未処理細胞は一貫して、これらの遺伝子の基底発現レベルを何ら実証していない。プロテアソーム阻害剤であるＭＧ−１３２は、それが単独で培養細胞に添加された場合、遺伝子発現を誘発することはできず、ＴＳＡを添加する前に、ＭＧ−１３２化合物で予備処理を行っても、（低レベルのＮｋｘ６．１発現を誘発した１０μＭ  ＭＧ−１３２は例外として）遺伝子発現レベルを増大させることはできなかった。成人膵臓由来細胞においてインスリン遺伝子は発現せず、また、その発現は、試験を行った試料のいずれにおいても、未処理の対照と比べて変化がなかった。
【０１９２】
培養中の細胞にＭＧ−１３２およびＴＳＡ（トリコスタチンＡ）を添加する順序を逆にして、表XVに示される結果を得た。ＴＳＡ単独は、成人膵臓由来細胞におけるＰｄｘ−１、ＨＮＦ−３βおよびＮｋｘ６．１の低レベル遺伝子発現を誘発することができ、観察されたこの遺伝子発現は、ＭＧ−１３２化合物による細胞の前処理によっても後処理によっても増大しなかった。場合によっては、培養の最後の２４時間でＴＳＡを除去すれば、誘発された遺伝子発現は、減少した。このことは、クロマチンリモデリングに及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の影響が、洗い流し(washout)および回収(recovery)の後、時間が経てば元へ戻せることを示唆している。
【０１９３】
成人膵臓由来細胞の異なる継代における、遺伝子発現を誘発するＴＳＡ（トリコスタチンＡ）の能力について、ＴＳＡ単独でまたはＭＧ−１３２と組合せて、試験を行い、培養時間の長さが、分化刺激(differentiation stimulus)に対するそれら細胞の感受性(susceptibility)の一因子であるか否かを確認した。表XVIの結果は、ＴＳＡ単独でまたはＭＧ−１３２と組合せて処理した後の、継代１０および継代１９の細胞の遺伝子発現レベルを示す。概して、後期継代（Ｐ１９）細胞は、本実施例における初期継代（Ｐ１０）細胞と比べて、僅かに優れた遺伝子発現を実証するものの、数値結果は、個々の遺伝子または処理について、一貫性がある訳ではなく、統計的に有意である訳でもない。
【０１９４】
ＭＧ−１３２化合物で処理し、次いで、ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）を順次添加する（２４時間、１．２５μＭまたは２．５μＭ）する投与濃度と暴露時間とについて、試験を行って、成人膵臓由来細胞における遺伝子発現の誘発を改善した。結果は、表XVIIおよび表XVIIIに示す。組合せによる処理条件では、僅かな追加的効果は観察されたが、ＴＳＡ処理単独では、Ｐｄｘ−１についても、ＨＮＦ−３βについても、Ｎｋｘ６．１についても、遺伝子発現の顕著な改善は見られなかった。成人膵臓由来細胞におけるインスリン遺伝子の発現は欠如し、試験試料のいずれにおいても未処理対照と比べて変化は見られなかった。
【０１９５】
成人膵臓由来細胞はさらに、分化と系統特異的遺伝子発現とを増大させるために、ＭＧ−１３２、ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）および分化培地によって順次処理した。一つの典型的な分化培地における、化合物の投与量と暴露時間とのある範囲に対する、成人膵臓由来細胞におけるＰｄｘ−１遺伝子の発現の結果を、表XIXに示す。第２の培地は、低グルコースＤＭＥＭと、ＦＣＳ１％と、アクティビン(activin)Ａ２０ｎｇ／ｍＬと、βセルリン(betacellulin)１０ｎｇ／ｍＬと、ｂＦＧＦ  ２０ｎｇ／ｍＬと、ニコチンアミド１０ｍＭと、ＧＬＰ−１受容体作用薬５０ｎＭとを含有した。前に観察されたように（表XVII）、誘発された遺伝子発現は、ＴＳＡが培養細胞から除去された後、減少した。このことは、クロマチンリモデリングに及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の影響が、洗い流しおよび回収の後、時間が経てば元へ戻せることを示唆している。遺伝子発現は、全ての処理カテゴリーに対し、ＴＳＡ処理単独では改善されなかった。
【０１９６】
分化と、系統特異的遺伝子発現とを増大させるために、更なる分化剤を、ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）と組合せる試みを行った。ＧＳＩ−IXおよびＧＳＩ−Ｘ（ＥＭＤバイオサイエンス社(EMD Biosciences)）は、ノッチ活性化(Notch activation)およびシグナリング(signaling)をブロックし、そうすることによって、細胞分化を修飾する２つのγセクレターゼ阻害剤である。表XXは、各々のγセクレターゼ阻害剤の様々な濃度で、単独で、および、ＴＳＡと順次組合せて処理された細胞に対する遺伝子発現の結果を示す。ＧＳＩ−IXもＧＳＩ−Ｘも、それが成人膵臓由来細胞の培養細胞に単独で添加された場合、Ｐｄｘ−１、ＨＮＦ−３βおよびＮｋｘ６．１の遺伝子の発現を誘発することはできず、ＴＳＡを添加する前に、いずれかのＧＳＩ化合物で前処理を行った場合も、Ｐｄｘ−１、ＨＮＦ−３βおよびＮｋｘ６．１の遺伝子の発現レベルを増大させることはできなかった。成人膵臓由来細胞におけるインスリン遺伝子の発現は欠如し、また、試験試料のいずれにおいても、未処理の対照と比べて変化はなかった。
【０１９７】
ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）（実施例１６）と比べて遺伝子発現を誘発する有意な能力を有するような、商品名の付いた一連のＨＤＡＣ阻害剤を、細胞ベーススクリーン(cell-based screen)によって確認した。これらの化合物は、成人膵臓由来細胞において、単独で、または、プロテアソーム阻害剤ＭＧ−１３２を順次添加して、試験を行った。結果は、Ｐｄｘ−１遺伝子については表XXIに示し、インスリン遺伝子については表XXIIに示す。未処理の成人膵臓由来細胞は一貫して、Ｐｄｘ−１の基底発現レベルを実証しなかった。各々のＨＤＡＣ阻害剤は、低レベルのＰｄｘ−１遺伝子発現を誘発した。しかし、ＭＧ−１３２による前処理は、Ｐｄｘ−１遺伝子発現を、個々のＨＤＡＣ阻害剤を単独で用いて観察されたものを超えて有意には増大させなかった。成人膵臓由来細胞におけるインスリン遺伝子の発現は欠如し、また、試験試料のいずれにおいても、未処理の対照と比べて変化はなかった。
【０１９８】
〔実施例１８〕
様々な回数でのクロマチンリモデリング剤またはＤＮＡ脱メチル化剤の投与量漸増
複数の重複セット(replicate sets)を有する重複培養プレート(duplicate culture plate)で、羊水由来細胞を平板培養した。集密度に到達した後（２〜３日）、各々の重複セットに、５−アザシチジン(5-azacytidine)（５−アザ−２’−デオキシシチジン；ＥＭＤバイオサイエンス社）(5-Aza-2’-deoxycytidine；EMD Biosciences）を、０．１５６μＭ〜２．５μＭの範囲の最終濃度で添加した。同等量の溶媒を、未処理の対照培養細胞に添加した。細胞は、培地を除去した後、２４時間の間、標準的培養条件に戻し、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を、各々のウェルに添加した。試料は、キアシュレッダー・カラム(Qiashredder columns)（キアゲン社）を用いて均質化し、次いで、ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製した。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。各々の反応にｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を用いて、Ｐｄｘ−１またはＨＮＦ−３βの発現レベルを測定した。リアルタイムＰＣＲは、アプライド・バイオシステムズ７５００で実施し、データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。
【０１９９】
表XXIIIは、未処理の羊水由来細胞が、Ｐｄｘ−１の基底発現レベルも、ＨＮＦ−３βの基底発現レベルも有していないことを示す。５−アザ−２’−デオキシシチジン（５−Ａｚａ）は、クロマチンリモデリングに影響を与えることのできるＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤(DNA methyltransferase inhibitor)である。５−Ａｚａ単独による羊水由来細胞の処理では、Ｐｄｘ−１もＨＮＦ−３βも誘発されなかった。対照的に、ＨＤＡＣ阻害剤であるＴＳＡ（トリコスタチンＡ）による処理によって、Ｐｄｘ−１およびＨＮＦ−３βの遺伝子発現を誘発することができた。
【０２００】
〔実施例１９〕
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤およびＤＮＡ脱メチル化剤の同時添加による遺伝子発現の変化
羊水由来細胞を平板培養し、（２〜３日で）集密度に到達させた。この細胞に、最適の非毒性投与量漸増で２４時間の間、トリコスタチンＡと５−アザ−２’−デオキシシチジンとの両方を添加した。処理期間の終りに、培地を除去し、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を、各々のウェルに添加した。試料は、キアシュレッダー・カラム（キアゲン社）を用いて均質化し、次いで、ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製した。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成した。各々の反応にｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を用いて、Ｐｄｘ−１およびＨＮＦ−３βの発現レベルを測定した。リアルタイムＰＣＲは、アプライド・バイオシステムズ７５００で実施し、データは、付随のソフトウェアを用いて解析した。
【０２０１】
表XXIVは、未処理の羊水由来細胞が、Ｐｄｘ−１の基底発現もＨＮＦ−３βの基底発現も有していないものの、遺伝子発現は、１．２５μＭトリコスタチンＡによる２４時間の処理の後、遺伝子発現を誘発させることができることを示す。５−Ａｚａ単独による羊水由来細胞の処理では、Ｐｄｘ−１もＨＮＦ−３βも誘発されず、５−ＡｚａをＨＤＡＣ阻害剤のトリコスタチンＡと組合せて使用した場合も、５−アザ−２’−デオキシシチジンは遺伝子発現を増大させなかった。
【０２０２】
羊水由来細胞における遺伝子発現を誘発させるために、５−アザ−２’−デオキシシチジンで処理し、次いで、ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）で処理する逐次処理をも使用した。集密状態の単層を、５−アザ−２’−デオキシシチジン（５−Ａｚａ）で６時間の間、前処理を行い、その後、培養の最後の１８時間の間、ＴＳＡを、組合せて添加した。細胞の溶解、ＲＮＡの抽出、ｃＤＮＡの合成、およびＰＣＲを、上述のように実施した。表XXVに示される結果は、５−Ａｚａ単独では、Ｐｄｘ−１の遺伝子発現もＨＮＦ−３βの遺伝子発現も誘発されず、５−ＡｚａをＨＤＡＣ阻害剤のトリコスタチンＡと組合せて前処理として使用した場合も、５−Ａｚａは追加的効果を実証しなかった、ということをも示している。
【０２０３】
〔実施例２０〕
初期継代（Ｐ５）の膵臓由来間質細胞および羊水由来細胞における遺伝子発現に及ぼす、トリコスタチンＡによる処理とソニック・ヘッジホッグ経路の阻害との影響
実施例１に記述される方法に基づいて、膵臓由来間質細胞を得る。細胞は、５０００個／ｃｍ2（5000/cm2/well）の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、ＦＢＳ１０％を含有するＤＭＥＭで、集密状態になるまで培養した。実施例２に記述される方法に基づいて、ナショナル・ディズィーズ・リサーチ・インターチェンジ(National Disease Research Interchange)（ＮＤＲＩ）から入手した羊水を処理した。細胞は、５０００個／ｃｍ2（5000/cm2/well）の密度で、２４ウェル組織培養プレートに接種し、次いで、標準的細胞培養条件の下、ＡＭＮＩＯＭＡＸ（インビトロジェン社）で、集密状態になるまで培養した。それら細胞が集密度に到達した後、試料ウェルは、ＤＭＳＯおよび培地で希釈された１．２５μＭトリコスタチンＡで処理する。対照ウェルには、同等濃度のＤＭＳＯを供給する。２４時間で、試料ウェルに、１．２５μＭトリコスタチンＡのさらに１投与量を供給する。シクロパミン(Cyclopamine)（シグマ (Sigma)）の１０μＭ投与量と、１０ｍＭニコチンアミド（シグマ）とを、細胞培地に添加する。次の日、培地は取り除き、細胞は、ＰＢＳで洗浄する。ニコチンアミドとシクロパミンとを同様の投与量で含有する新たな培地を、１日おきに１回添加する。７日目に、細胞は、実施例３に記述されるように、リアルタイムＰＣＲ分析を行うために回収する。
【０２０４】
〔実施例２１〕
末梢血単核細胞における遺伝子発現に及ぼすトリコスタチンＡの影響
末梢血単核細胞を、密度勾配沈降法(density gradient sedimentation)によって分離し、次いで、０．５〜２×１０6個／ｍＬの密度で平板培養する。活性化マイトジェン(activation mitogen)（例えば、ＰＨＡ）を、最終濃度１０μｇ／ｍＬで添加する。対照には、ＰＨＡの添加を省略する。細胞は３日間培養し、その後、細胞は、回収し、洗浄し、数え上げ、再び懸濁させ、次いで、１〜２×１０6個／ｍＬの密度で再び平板培養する。トリコスタチンＡ（または代わりのヒストンデアセチラーゼ阻害剤）および／または５−アザシチジン（または代わりの脱メチル化剤）を、最適な非毒性濃度で好ましい期間の間、培養細胞に添加して、上記の実施例５〜実施例１５から測定されるような適切な遺伝子発現を誘発させる。未処理の対照ウェルには、同様の希釈率の媒体（vehicle）または希釈剤を供給する。培養期間（例えば、２４時間）の終りに、培地は取り除き、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を、各々のウェルに添加する。試料は、キアシュレッダー・カラム（キアゲン社）を用いて均質化し、次いで、ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製する。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成する。各々の反応にｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を用いて、Ｐｄｘ−１、インスリン、グルカゴン、ソマトスタチン、Ｓｏｘ−１７、Ｇａｔａ−４、グロビン、β２−マイクログロブリン（beta-2-microglobulin）の発現レベルを測定する。リアルタイムＰＣＲは、アプライド・バイオシステムズ７５００で実施し、データは、付随のソフトウェアを用いて解析する。
【０２０５】
〔実施例２２〕
細胞の、非膵細胞型への分化
羊水または膵臓の前駆細胞、または新生児線維芽細胞を平板培養し、集密度に到達させる（２〜３日間）。代替的には、末梢血単核細胞を、密度勾配沈降法によって分離し、次いで、１〜２×１０6個／ｍＬの密度で平板培養する。トリコスタチンＡ（または代わりのヒストンデアセチラーゼ阻害剤）および／または５−アザシチジン（または代わりの脱メチル化剤）を、最適な非毒性濃度で、かつ、好ましい期間の間、培養細胞に添加して、上記の実施例５〜実施例１５から測定されるような適切な遺伝子発現を誘発させる。培養期間（例えば、２４時間）の終りに、培地は取り除き、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、再び懸濁させ、次いで、上記のような接種密度で平板培養する。当業者に知られている、含脂肪細胞のための分化プロトコル（ケミコン社(Chemicon)カタログ＃ＥＣＭ９５０）を、７日間または適切な期間の間適用する。培養が終了した後、細胞は、オイルレッドＯ(Oil Red O)で染色して、分化した含脂肪細胞（adipocyte）中の脂質滴(lipid droplets)を検出する。代替的には、β−メルカプトエタノールを含有するＲＬＴ溶解緩衝液（キアゲン社）を、各々のウェルに添加する。試料は、キアシュレッダー・カラム（キアゲン社）を用いて均質化し、次いで、ＲＮＡは、ＲＮｅａｓｙミニ・キット（キアゲン社）を用いて精製する。ＲＮＡの量と質とは、分光光度計を用いて測定し、ｉＳｃｒｉｐｔ  ｃＤＮＡ合成キット（バイオラド社）を用いて、ｃＤＮＡを作成する。各々の反応にｃＤＮＡ２０ｎｇの試料を用いて、ＰＰＡＲγの発現レベルを測定する。リアルタイムＰＣＲは、アプライド・バイオシステムズ７５００で実施し、データは、付随のソフトウェアを用いて解析する。
【０２０６】
本文書の全体に渡って引用されている刊行物は、参照することによって全体を本明細書に組み入れられる。本発明の様々な面を、実施例および好ましい具体例を参照することによって説明してきたが、本発明の範囲は、以上の記述によって規定されるのではなく、特許法の原理の下、特許請求の範囲によって適切に解釈されるべきものと理解されたい。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【表２３】
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【表２４】
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【表２５】
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【表２６】
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【表２７】
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【表２８】
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【表２９】
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【表３０】
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【表３１−１】
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【表３１−２】
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【表３１−３】
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【表３１−４】
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【表３１−５】
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【表３１−６】
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【表３１−７】
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【表３１−８】
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【表３１−９】
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【表３１−１０】
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【表３１−１１】
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【表３１−１２】
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【表３１−１３】
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【表３１−１４】
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【表３１−１５】
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【表３１−１６】
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【表３２−１】
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【表３２−２】
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【表３３−１】
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【表３３−２】
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【表３４−１】
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【表３４−２】
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【表３４−３】
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【表３５−１】
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【表３５−２】
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【表３６−１】
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【表３６−２】
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【表３６−３】
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【表３６−４】
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【表３７−１】
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【表３７−２】
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【表３７−３】
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【表３８−１】
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【表３８−２】
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【表３８−３】
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【表３８−４】
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【表３９−１】
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【表３９−２】
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【表４０】
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【表４１−１】
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【表４１−２】
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【表４２−１】
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【表４２−２】
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【表４３−１】
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【表４３−２】
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【表４４】
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【表４５】
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【表４６】
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【０２０７】
〔実施の態様〕
（１）細胞におけるＰｄｘ−１の発現を増大させる方法において、
ａ．前記細胞を提供する過程と、
ｂ．前記細胞内においてＰｄｘ−１の発現を増大させる少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤に前記細胞を接触させる過程と、
を含む、方法。
（２）実施態様１記載の方法において、
前記細胞は、未分化細胞、部分的に分化した細胞、完全に分化した細胞、幹細胞および前駆細胞から成る群から選ぶ、方法。
（３）実施態様１記載の方法において、
前記細胞は、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理される前、Ｐｄｘ−１を発現していない、方法。
（４）実施態様１記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、Ｐｄｘ−１の発現を回復する、方法。
（５）実施態様１記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤は、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤である、方法。
（６）実施態様５記載の方法において、
前記阻害剤は、ブチレート、ヒドロキサム酸、環状ペプチドおよびベンズアミドから成る群から選ぶ、方法。
（７）実施態様５記載の方法において、
前記阻害剤は、バルプロ酸、４−フェニルブチレート、酪酸ナトリウム、トリコスタチンＡ(trichostatin A)、スベロイルアニリドヒドロキサム酸(suberoyl anilide hydroxamic acid)（ＳＡＨＡ）、オキサムフラチン(oxamflatin)、トラポキシンＢ(trapoxin B)、ＦＲ901228、アピシジン(apicidin)、クラミドシン(chlamydocin)、デプエシン(depuecin)、スクリプタイド(scriptaid)、デプシペプチド(depsipeptide)およびＮ−アセチルジナリン(N-acetyldinaline)から成る群から選ぶ、方法。
（８）膵前駆細胞の中に細胞が分化するのを促進する方法において、
ａ．Ｐｄｘ−１を発現しない細胞を提供する過程と、
ｂ．前記のＰｄｘ−１の発現を増大させる少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤に前記細胞を接触させる過程と、
を含む、方法。
（９）実施態様８記載の方法において、
前記細胞を前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、ＨＮＦ−３β遺伝子またはＳｏｘ−１７遺伝子の少なくとも１種の発現を増大させる、方法。
（１０）実施態様８記載の方法において、
前記細胞は、未分化細胞、部分的に分化した細胞、完全に分化した細胞、幹細胞および前駆細胞から成る群から選ぶ、方法。
（１１）実施態様８記載の方法において、
前記細胞は、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理される前、Ｐｄｘ−１を発現していない、方法。
（１２）実施態様８記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、Ｐｄｘ−１の発現を回復する、方法。
（１３）実施態様８記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤は、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤である、方法。
（１４）実施態様１３記載の方法において、
前記阻害剤は、ブチレート、ヒドロキサム酸、環状ペプチドおよびベンズアミドから成る群から選ぶ、方法。
（１５）実施態様１３記載の方法において、
前記阻害剤は、バルプロ酸、４−フェニルブチレート、酪酸ナトリウム、トリコスタチンＡ、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、オキサムフラチン、トラポキシンＢ、ＦＲ901228、アピシジン、クラミドシン、デプエシン、スクリプタイド、デプシペプチドおよびＮ−アセチルジナリンから成る群から選ぶ、方法。
（１６）膵ホルモン分泌細胞の中に細胞が分化するのを促進する方法において、
ａ．Ｐｄｘ−１を発現しない細胞を提供する過程と、
ｂ．前記のＰｄｘ−１の発現を増大させる少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤に前記細胞を接触させる過程と、
を含む、方法。
（１７）実施態様１６記載の方法において、
前記細胞を前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、ＨＮＦ−３β遺伝子、Ｓｏｘ−１７遺伝子、インスリン、グルカゴン(glucagon)またはソマトスタチン(somatostatin)の少なくとも１種の発現を増大させる、方法。
（１８）実施態様１６記載の方法において、
前記細胞は、未分化細胞、部分的に分化した細胞、完全に分化した細胞、幹細胞および前駆細胞から成る群から選ぶ、方法。
（１９）実施態様１６記載の方法において、
前記細胞は、前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理される前、Ｐｄｘ−１を発現していない、方法。
（２０）実施態様１６記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤で処理することによって、Ｐｄｘ−１の発現を回復する、方法。
（２１）実施態様１６記載の方法において、
前記の少なくとも１種のクロマチンリモデリング剤は、ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害剤である、方法。
（２２）実施態様２１記載の方法において、
前記阻害剤は、ブチレート、ヒドロキサム酸、環状ペプチドおよびベンズアミドから成る群から選ぶ、方法。
（２３）実施態様２１記載の方法において、
前記阻害剤は、バルプロ酸、４−フェニルブチレート、酪酸ナトリウム、トリコスタチンＡ、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、オキサムフラチン、トラポキシンＢ、ＦＲ901228、アピシジン、クラミドシン、デプエシン、スクリプタイド、デプシペプチドおよびＮ−アセチルジナリンから成る群から選ぶ、方法。
【図面の簡単な説明】
【０２０８】
【図１】Ｐａｎｃ−１細胞および新生児線維芽細胞における遺伝子発現に及ぼす、ヒストン・デアセチラーゼ阻害剤による処理の影響を示す。示されるデータは、グルカゴン（パネルａ）、Ｓｏｘ−１７（パネルｂ）、Ｐｄｘ−１（パネルｃ）およびＨＮＦ−３β（パネルｄ）の発現に及ぼす、２．５μＭおよび５μＭトリコスタチンＡによる処理の影響である。未処理細胞は、比較のための負の対照として示す。実験手順は、実施例６に概略を示す。
【図２】１．２５μＭトリコスタチンＡを添加した後の、時間の経過による、羊水由来細胞における遺伝子発現の変化を示す。示されるデータは、未処理対照と比較した、インスリン（パネルａ）、Ｓｏｘ−１７（パネルｂ）、Ｐｄｘ−１（パネルｃ）およびＨＮＦ−３β（パネルｄ）の相対発現量である。実験手順は、実施例７に概略を示す。
【図３】２．５μＭトリコスタチンＡを添加した後の、時間の経過による、後期継代の膵臓由来間質細胞における遺伝子発現の変化を示す。示されるデータは、未処理対照と比較した、Ｓｏｘ−１７（パネルａ）、ＨＮＦ−３βおよびＰｄｘ−１（パネルｂ）、ならびにグルカゴン（パネルｃ）の相対発現量である。実験手順は、実施例８に概略を示す。
【図４】トリコスタチンＡによる連続的な長期にわたる処理による、羊水由来細胞における遺伝子発現の変化を示す。示されるデータは、未処理対照と比較した、グルカゴン（パネルａ）、ＨＮＦ−３β（パネルｂ）、インスリン（パネルｃ）、Ｐｄｘ−１（パネルｄ）およびＳｏｘ−１７（パネルｅ）の相対発現量である。実験手順は、実施例９に概略を示す。
【図５】トリコスタチンＡによる連続的な長期にわたる処理による、後期継代の膵臓由来間質細胞における遺伝子発現の変化を示す。示されるデータは、未処理対照と比較した、グルカゴン（パネルａ）、ＨＮＦ−３β（パネルｂ）、Ｐｄｘ−１（パネルｃ）およびＳｏｘ−１７（パネルｄ）の相対発現量である。実験手順は、実施例１０に概略を示す。
【図６】羊水由来細胞系統の生存度に及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の選定の影響であって、添加後２４時間および７２時間での影響を示す。実験手順は、実施例１６に概略を示す。ｘ軸上の番号によって識別される諸化合物を、５μＭの濃度で該細胞に添加した。
【図７】羊水由来細胞系統の生存度に及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の選定の影響であって、添加後２４時間および７２時間での影響を示す。実験手順は、実施例１６に概略を示す。ｘ軸上の番号によって識別される諸化合物を、５μＭの濃度で該細胞に添加した。
【図８】羊水由来細胞系統の生存度に及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の選定の影響を示す。実験手順は、実施例１６に概略を示す。凡例で識別される諸化合物を、ｘ軸上に示される濃度で該細胞に添加した。生存度は、化合物による処理の２４時間後に測定した。
【図９】成人膵臓由来細胞系統の生存度に及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の選定の影響を示す。実験手順は、実施例１６に概略を示す。凡例で識別される諸化合物を、ｘ軸上に示される濃度で該細胞に添加した。生存度は、化合物による処理の２４時間後に測定した。
【図１０】羊水由来細胞系統の生存度に及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の選定の影響を示す。実験手順は、実施例１６に概略を示す。凡例で識別される諸化合物を、ｘ軸上に示される濃度で該細胞に添加した。生存度は、化合物による処理の７２時間後に測定した。
【図１１】成人膵臓由来細胞系統の生存度に及ぼすＨＤＡＣ阻害剤の選定の影響を示す。実験手順は、実施例１６に概略を示す。凡例で識別される諸化合物を、ｘ軸上に示される濃度で該細胞に添加した。生存度は、化合物による処理の７２時間後に測定した。
【図１２】ＨＤＡＣ酵素活性に及ぼす仮想のＨＤＡＣ阻害剤化合物の選定の影響を示す。凡例で識別される諸化合物を、示される濃度のＨＤＡＣ酵素と共にインキュベートした(incubated)。結果は、ＴＳＡ（トリコスタチンＡ）で観察された結果に対して正規化した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【外国語明細書】
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