(57)【要約】【課題】    リン酸自動測定装置において、自動性を妨げることなく試薬を供給する方法及びこの方法を実現できるリン酸自動測定装置を提供すること。【解決手段】  被検試料中のリン酸の測定方法は、リン酸測定用酵素センサーが被検試料を導入する被検試料導入流路の一部に配置されているリン酸自動測定装置により被検試料中のリン酸を測定する方法であって、被検試料液をセンサー部に導入する前に、前記酵素センサーによるリン酸の測定に必要な試薬を前記酵素センサーに導入するか又は試薬と被検試料との混合物を前記酵素センサーに導入する。【選択図】  図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸測定用酵素センサーが被検試料を導入する被検試料導入流路の一部に配置されているリン酸自動測定装置により被検試料中のリン酸を測定する方法であって、被検試料液をセンサー部に導入する前に、前記酵素センサーによるリン酸の測定に必要な試薬を前記酵素センサーに導入するか又は該試薬と被検試料との混合物を前記酵素センサーに導入する、被検試料中のリン酸の測定方法。
【請求項２】
前記試薬を、被検試料液をセンサー部に導入する前に、前記酵素センサーに導入する請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記試薬を、前記酵素センサー近傍に配置された、開口を有する容器内に、該容器に連通する通路を介して導入する請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記容器は、混合手段を具備する請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記試薬を、前記被検試料を導入する前に、前記被検試料導入流路に導入する請求項２記載の方法。
【請求項６】
前記被検試料液をセンサー部に導入する前に、前記試薬を前記被検試料と混合し、該混合物を前記酵素センサーに導入する請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記被検試料を採取する採取容器内に前記試薬を予め入れておき、該採取容器に採取した被検試料を前記酵素センサーに導入する請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記試薬は、前記採取容器の内壁にコーティングされている請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記被検試料導入路中の、前記酵素センサーよりも上流の位置において、前記試薬と前記被検試料とを所定の割合で混合する請求項６記載の方法。
【請求項１０】
前記酵素センサーが、ピルビン酸オキシダーゼ酵素を用いた酵素センサーであり、前記試薬が、FAD、チアミンピロリン酸及びマグネシウム塩である請求項１ないし９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記被検試料が全血又は尿である請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
リン酸測定用酵素センサーと、該酵素センサーに被検試料を導入する被検試料導入路と、前記酵素センサーからの信号を検出する検出手段と、前記酵素センサー近傍に配置された、開口を有する容器と、該容器に連通する試薬導入路とを具備する、請求項３記載の方法を行なうためのリン酸自動測定装置。
【請求項１３】
前記容器は、混合手段を具備する請求項１２記載の装置。
【請求項１４】
リン酸測定用酵素センサーと、該酵素センサーに被検試料を導入する被検試料導入路と、前記酵素センサーからの信号を検出する検出手段と、前記被検試料導入路中の、前記酵素センサーよりも上流の位置において、前記試薬と前記被検試料とを所定の割合で混合する手段とを具備する、請求項９記載の方法を行なうための装置。
【請求項１５】
前記酵素センサーが、ピルビン酸オキシダーゼ酵素を用いた酵素センサーであり、前記試薬が、FAD、チアミンピロリン酸及びマグネシウム塩である請求項１２ないし１４のいずれか１項に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リン酸の測定方法及び装置に関し、特に、リン酸センサーが被検試料を導入する被検試料導入流路の一部に配置されているリン酸自動測定装置により被検試料中のリン酸を測定する方法及びそれに用いられるリン酸自動測定装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
リン酸は、生体内で各種のリン酸エステルとして糖質代謝に、また高エネルギーリン酸化合物としてエネルギー代謝に必須の物質である。また、核酸、リン脂質、タンパク質、ヌクレオチドなどの構成分として重要であり、生体にとって必要不可欠な構成要素の一種である。血清中のリン酸は腸管から吸収、骨からの動員、細胞内外の移行、腎からの排泄などの機序によって変動し、臨床診断上有用な測定対象物質である。特に、腎機能に障害のある場合には定期的にモニター、管理の必要な測定項目である。
【０００３】
体液中のリン酸の測定方法としては、被検試料にモリブデン酸塩を加えてモリブデン酸を生成させ、これを還元剤で還元してモリブデン青とし、この青色を光学的に定量する、いわゆる「モリブデン青法」や、リン酸を消費する反応を触媒する、スクロースホスホリラーゼやヌクレオシドホスホリラーゼのようなホスホリラーゼ類やピルビン酸オシキダーゼを用いて、被検試料中のリン酸を消費する酵素反応を行ない、反応生成物を光学的に定量する、酵素法と総称される方法が用いられている。しかしながら、リン酸測定用酵素センサーが被検試料を導入する被検試料導入流路の一部に構成されているリン酸自動測定装置は知られていない。
【０００４】
【特許文献１】特開2002-17354号公報
【特許文献２】特開2003-339384号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本願発明者らは、固定化酵素膜を利用したリン酸測定用酵素センサーを別途発明した。このような酵素センサーを用いて被検試料中のリン酸を自動的に測定する装置としては、被検試料を導入する被検試料導入流路の一部にリン酸測定用酵素センサーを配置し、被検試料を該導入流路に流通させて酵素センサーと接触させることが考えられる。しかしながら、酵素センサーを機能させるためには、酵素の基質や必要な補酵素等の試薬を共存させる必要がある。
【０００６】
本発明の目的は、このような自動測定装置において、自動性を妨げることなく試薬を供給する方法及び該方法を実現できるリン酸自動測定装置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本願発明者は、鋭意研究の結果、被検試料液をセンサー部に導入する前に、前記酵素センサーによるリン酸の測定に必要な試薬を前記酵素センサーに導入するか又は該試薬と被検試料との混合物を前記酵素センサーに導入することにより、測定の自動性を妨げることなく試薬を供給できることに想到し本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、リン酸測定用酵素センサーが被検試料を導入する被検試料導入流路の一部に配置されているリン酸自動測定装置により被検試料中のリン酸を測定する方法であって、被検試料液をセンサー部に導入する前に、前記酵素センサーによるリン酸の測定に必要な試薬を前記酵素センサーに導入するか又は該試薬と被検試料との混合物を前記酵素センサーに導入する、被検試料中のリン酸の測定方法を提供する。また、本発明は、リン酸測定用酵素センサーと、該酵素センサーに被検試料を導入する被検試料導入路と、前記酵素センサーからの信号を検出する検出手段と、前記酵素センサー近傍に配置された、開口を有する容器と、該容器に連通する試薬導入路とを具備する、上記本発明の方法を行なうためのリン酸自動測定装置を提供する。リン酸測定用酵素センサーと、該酵素センサーに被検試料を導入する被検試料導入路と、前記酵素センサーからの信号を検出する検出手段と、前記被検試料導入路中の、前記酵素センサーよりも上流の位置において、前記試薬と前記被検試料とを所定の割合で混合する手段とを具備する、上記本発明の方法を行なうための装置を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、リン酸測定用酵素センサーを用いたリン酸の自動測定装置において、自動性を妨げることなく試薬を供給する方法及び該方法を実現できるリン酸自動測定装置が初めて提供された。本発明の方法によれば、自動性を妨げることなく、酵素センサーを用いる測定に必要な試薬を、反応が起きる場所に共存させることができるので、リン酸の自動測定が可能になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
先ず、本願発明者が別途発明したリン酸測定用酵素センサーの好ましい例を説明する。このリン酸測定用酵素センサーは、過酸化水素電極の電極構造体に特徴がある。この電極構造体は、過酸化水素電極と、該過酸化水素電極を被覆し、リン酸を消費して過酸化水素を生成する反応を触媒する酵素を固定化した酵素固定化膜と、該酵素固定化膜の外側に配置され、該酵素固定化膜を被覆する多孔膜とを具備する。この構造の１例を図１に模式的に示す。
【００１１】
図１に模式的に示す電極構造体１０は、ガラス管１２の底部を利用して構成されたものであり、ガラス管１２の底部を貫通して、例えば白金から成る過酸化水素電極１４が配置されている。電極１４の先端部１４ａは、ガラス管１２の底部から露出しており、この部分が過酸化水素電極として機能する。過酸化水素電極１４の下部は、溶融後、固化したガラス１６により固着されている。リン酸を消費して過酸化水素を生成する反応を触媒する酵素を固定化した酵素固定化膜１８が過酸化水素電極の先端部１４ａを被覆している。さらに、多孔膜２０が酵素固定化膜１８の外側に配置され、該酵素固定化膜１８を被覆している。酵素固定化膜１８及び多孔膜２０は、Ｏリング２２によりガラス管１２の底部に固着される。なお、図１は、単純な１例を模式的に示すものであり、要は、過酸化水素電極が、酵素固定化膜及び多孔膜によってこの順序で被覆されていればよい。また、図１は模式図であるので、各部材のサイズの比率も正確に記載しているものではない。
【００１２】
過酸化水素電極自体は周知であり、白金がよく用いられているが、他の金属を採用することも可能である。
【００１３】
酵素固定化膜に固定化する酵素は、リン酸を消費して過酸化水素を生成する反応を触媒する酵素であれば特に限定されるものではなく、ピルビン酸オキシダーゼを好ましい例として挙げることができる。酵素固定化膜は、液体を通すが固定化される酵素のような高分子は通さない、多孔性の半透膜であることが好ましい。このような半透膜は、多孔性の高分子膜から構成することができ、高分子膜を構成する高分子の例としては、酢酸セルロース等のセルロース類、塩化ビニル樹脂、ポリビニルアルコール、ポリカーボネート樹脂、ナイロン、ポリプロピレン、ポリエチレン、テフロン（登録商標）等を挙げることができる。これらの多孔性膜に酵素を固定化する方法自体は周知であり、周知の方法により容易に酵素を半透膜に固定化することができる。下記実施例にも好ましい方法が具体的に記載されている。酵素固定化膜の厚さは、特に限定されないが、通常、１μm〜３０μm程度である。なお、酵素固定化膜は、必ずしも自己支持性の膜である必要はなく、後述する多孔膜を支持体として、その上に樹脂バインダーと酵素の混合物を塗布することなどにより酵素固定化膜を作製してもよい。このような非自己支持性の酵素固定化層も「酵素固定化膜」に包含される。なお、酵素固定化層を形成する樹脂バインダーとしては、この目的に用いられている種々の公知の樹脂バインダーを採用することができ、例えば、スチルバゾリウム化ポリビニルアルコール（PVA-SbQ）、ポリビニルブチラール(PVB)、ポリアリルアミン、ゼラチン、Azide-unit Pendant Water-soluble Photopolymer (AWP)等を挙げることができる。
【００１４】
前記酵素固定化膜の外側に配置され、該酵素固定化膜を被覆する多孔膜を構成する材料としては、多孔性の膜を形成することができ、必要な機械的強度を有する材料であれば特に限定されず、ポリカーボネート、セルロース混合エステル、ポリテトラフルオロエチレン、ガラス繊維等を例示することができる。多孔膜の孔径は、血球による目詰まりが起きないように、血球のサイズよりも小さいことが好ましく、また、測定の信頼性向上や測定範囲域の拡大の観点から、孔径（直径）は、0.01μｍないし１μｍが好ましく、さらに0.1μｍないし0.6μｍが好ましい。「多孔性」は、スポンジ状のものであってもよいが、測定の信頼性や再現性をより高くする観点から、平膜に円筒状の貫通孔が多数開口したものが好ましい。この場合、貫通孔の密度は、測定の信頼性や再現性をより高くする観点から、107〜109個/cm2程度が好ましく、さらには108〜109個/cm2程度が好ましい。また、多孔膜の厚さは、特に限定されないが、通常、３μｍないし５０μｍ程度、好ましくは、５μｍないし１５μｍ程度である。なお、ポリカーボネートフィルムに、上記の範囲の孔径を有する円筒状の貫通孔が上記の密度に形成された膜が米国Sterlitech社から「Nuclepore」（登録商標）という商品名で市販されており、本発明における多孔膜としては、この市販のNuclepore（登録商標）を１枚から５枚積層して利用することができる。
【００１５】
なお、酵素固定化膜を多孔膜で被覆することにより全血等の体液中のリン酸が、過酸化水素電極により測定可能になる理由は必ずしも明らかではないが、多孔膜によって、基質溶液が保持されると同時に検体中のリン酸の拡散が制限され、酵素には低減された量のリン酸が接触せず、また、血球をはじめとする妨害物質の酵素膜への接触も多孔膜によって防止されるか又はその拡散が制限される結果、全血中のリン酸であっても過酸化水素電極により測定可能になるのではないかと推測される。
【００１６】
なお、過酸化水素電極構造体に用いられる酵素固定化膜は、ピルビン酸オキシダーゼに限定されるものではなく、例えば、酵素固定化膜として、キサンチンオキシダーゼ固定化膜とプリンヌクレオシドホスホリラーゼ固定化膜を積層したもの（キサンチンオキシダーゼ固定化膜を電極側に配置）等も用いることができる。
【００１７】
上記リン酸測定用酵素センサーは、上記した過酸化水素電極構造体を具備する点を特徴としており、他の構成は、公知のリン酸センサーと同様でよい。すなわち、リン酸測定用酵素センサーは、上記本発明の電極構造体と、参照電極と、前記過酸化水素電極と前記参照電極の間に電圧を印加する手段と、前記電極構造体及び前記参照電極を収容するセンサー本体と、該センター本体内に収容される、電解質液とを含む。この構造の１例を図２に模式的に示す。
【００１８】
図２中、１０は上記した本発明の電極構造体であり、２４は参照電極である。センサー本体２６内に電極構造体１０及び参照電極２４が収容されている。センサー本体２６内には、電解質液２８が収容されており（液面が破線で示されている）、過酸化水素電極１４及び参照電極２４は電解質液２８中に浸漬されている。また、電池３０により、過酸化水素電極１４には、参照電極２４に対して正の電圧が印加されている。なお、参照電極としては、Ag/AgCl電極がよく用いられている。また、電解質液としては、食塩を含む緩衝液等を用いることができる。
【００１９】
本発明の方法に用いられるリン酸自動測定装置では、上記したような酵素センサーが、被検試料を導入する被検試料導入流路（図２中の参照番号３１）の一部に配置されている。
【００２０】
使用時には、電極構造体１０の多孔膜を被検試料と接触させる。被検試料は、図２に示す被検試料導入路３１内を矢印で示す方向に流れている。被検試料の一部は、電極構造体の多孔膜を介して酵素固定化膜に至る。酵素固定化膜に接して基質及び必要な補酵素が共存すれば、酵素の触媒作用により、ここで酵素反応が起きる。酵素反応により、被検試料中のリン酸が消費され、過酸化水素が生成する。例えば、酵素がピルビン酸オキシダーゼである場合には、次の反応が起きる。
ピルビン酸＋H2O + O2 + リン酸→アセチルリン酸 + CO2 + H2O2
このように、被検試料中のリン酸が消費されて、それと等モルの過酸化水素が生成する。従って、この時の過酸化水素の生成量は、被検試料中のリン酸濃度に依存して変化し、被検試料中のリン酸濃度が高くなるほど過酸化水素の生成量が増大する。このため、生じた過酸化水素を過酸化水素電極を用いて定量することにより、被検試料中のリン酸濃度を電気的な数値として測定することができる。なお、生成した過酸化水素は、過酸化水素電極上で、次のように分解されて、この際に電流を生じる。
H2O2  →  2H+ + O2 + 2e-
過酸化水素の定量は、過酸化水素電極を流れるこの電流を測定することにより行うことができる。、これは例えば、過酸化水素が酸化する電位を作用極である過酸化水素電極に参照電極の電位に対して印加して、過酸化水素濃度に応じた電流量を作用極である過酸化水素電極と参照極に接続した電流計で計測することにより行うことができる。予め既知濃度のリン酸を含む標準試料を複数用いて検量線を作成しておくと、測定された電流値から未知被検試料中のリン酸濃度を知ることができる。
【００２１】
上記リン酸センサーを組み込んだ、自動測定装置のフローチャートの１例を図３に示す。図３中、酵素センサーは３２である。３４は三方バルブ、３６は定量シリンジ、３８は送液ポンプ、４０は試薬液、４２は被検試料、４４は電流−電圧転換器、４６はA/Dコンバーター、４８はコンピューター、５０はプリンター、５２は廃液ポンプ、５４は廃液タンクである。
【００２２】
酵素がピルビン酸オキシダーゼである場合、酵素反応が起きるためには、基質であるピルビン酸、補酵素であるFAD及びチアミンピロリン酸(TPP)並びにマグネシウムイオンが必要である。本発明の方法では、酵素センサーによるリン酸の測定に必要な、基質、補酵素、金属イオン等（本明細書において「試薬」と呼ぶ）を前記酵素センサーに導入するか又は該試薬と被検試料との混合物を前記酵素センサーに導入する。
【００２３】
本発明の第１の方法では、被検試料液を酵素センサーのセンサー部（被検試料導入路３１に露出している前記多孔膜２０の部分）に導入する前に、試薬を酵素センサーに導入する。これは、例えば、図４に示すように、リン酸センサー近傍に配置された、開口を有する容器５６（図示の例では容器５６の上部が開口）に、容器５６に連通する通路５８を介して導入する。この場合、容器５６は混合手段を具備していることが好ましく、図示の例では容器５６内にマグネット撹拌子６０が収容され、これを回転させるスターラー６２が被検試料導入路３１の下部に設けられている。あるいは、マグネット撹拌子及びスターラーに代えて、弾性表面波(SAW)撹拌装置を配置して撹拌を行うこともできる。
【００２４】
あるいは、試薬は、単に、被検試料を導入する前に、被検試料導入路３１に試薬液を流して供給することも可能である。この場合には、被検試料が被検試料導入路３１を流れている時には試薬は供給されないが、先に試薬が供給された際に、電極と酵素固定化膜との間の空間や、酵素固定化膜の孔等に試薬が侵入するので、被検試料が導入された際に、先に侵入していた試薬が共存している状態が実現され、酵素反応が進行する。
【００２５】
本発明の第２の方法では、被検試料液をセンサー部に導入する前に、試薬を被検試料と混合し、該混合物を酵素センサーに導入する。これは、例えば、被検試料を採取する採取容器内に前記試薬を予め入れておき、該採取容器に採取した被検試料を前記酵素センサーに導入することにより行うことができる。例えば、被検試料が全血の場合には、採血管に予め試薬を入れておく。試薬は液状状態で採取容器に入れておいてもよいが、乾燥状態で採取容器の内壁にコーティングしておくのが取扱いが簡便で好ましい。
【００２６】
あるいは、被検試料導入路３１中の、前記酵素センサーよりも上流の位置において、試薬と被検試料とを所定の割合で混合するようにしてもよい。これは、例えば図３の装置において、送液ポンプ３８を定量シリンジに変えたり、送液ポンプ３８と三方バルブ３４の間に定量バルブを挿入したりすることにより行うことができる。
【００２７】
なお、反応の場において必要な基質や補酵素等の好ましい濃度範囲は公知である。例えば、酵素がピルビン酸オキシダーゼである場合、基質であるピルビン酸は、１mM〜１０mM、補酵素であるFADは０．１μM〜１００μM、びチアミンピロリン酸(TPP) は０．１μM〜２μM、マグネシウムイオンは１μM〜１０００μM程度が好ましく、上記各方法においては、反応の場における各試薬の濃度がこの範囲になるように試薬液の濃度や混合量等を適宜調節することができる。
【００２８】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２９】
１．  電極構造体の作製
図１に示す構造を有する過酸化水素電極構造体を次のようにして作製した。すなわち、  ガラス管の底部をバーナーで加熱溶融し、直径０．３mmの白金棒を貫通させた。室温に冷却すると、ガラス管の底部から白金棒の先端が露出し、かつ、白金棒が、溶融、固化したガラス（図１中の１６）で固着された基本構造が得られた。次に、酵素固定化膜（製法は後述）及び多孔性ポリカーボネート膜（米国Sterlitech社製「Nuclepore」（登録商標）、孔径0.2μｍ、孔密度3 x 108個／cm2、厚さ10μm）を重ねたものを、酵素固定化膜が白金電極と接する側にくるように上記ガラス管の側部にＯリングで固着し、電極構造体を得た。
【００３０】
用いた酵素固定化膜は次のようにして作製した。先ず、2%酢酸セルロース水溶液を調製した。該溶液の500μLを採取し、基板上の7 x 10cmの範囲に展開した。展開後、１０秒以内に基板をヘキサン槽に浸漬して酢酸セルロース膜を得た。ビルビン酸オキシダーゼの１６０U/１５０μL MES緩衝液 + ２%  GA(グルタルアルデヒド) 30μLを、上記酢酸セルロース膜上(5cm x ８cm)に広げ、４℃で１時間放置し、酵素固定化膜を得た。なお、得られた酵素固定化膜は、MES緩衝液で繰返し洗浄した後、上記Nuclepore（登録商標）膜を１枚載せ、４℃にて一夜乾燥後、上記のように電極構造体の作製に供した。
【００３１】
２．  酵素センサーの作製
１で作製した電極構造体を用い、図２に示す構造を有する酵素センサーを作製した。なお、参照電極としては、Ag/AgCl電極を用い、過酸化水素電極には、参照電極に対して+0.6Vを印加した。電解質液として、NaClを0.2630g/100mL、Na2HPO4を0.4216g/100mL、NaH2PO4を0.1836g/100mLの濃度で含む水溶液を調製し、これをセンサー本体内に約0.3mL充填して白金電極及び参照電極を電解質液中に浸漬した。
【００３２】
リン酸の測定
１．  測定装置
上記で作製した酵素センサーを、自動化装置に組み込んだ。自動化装置は、図５に示す構成を有するものである。図５中、酵素センサーは３２である。３４は三方バルブ、３８は送液ポンプ、４０は基質液（補酵素も含む）、４２は検体、４４は電流−電圧転換器、４６はA/Dコンバーター、４８はコンピューター、５０はプリンター、５４は廃液タンクである。
【００３３】
測定時には、送液ポンプ３８とこれに連結しているノズルで基質液４０を吸引し、それに続き検体４２を吸引し、酵素センサー３２に移送した。そして酵素センサーの信号出力を計測した。ここで発生した過酸化水素水の濃度の測定を、過酸化水素電極を流れる電流値に基づいて自動的に行なった。なお、基質液は、1mmol/Lのピルビン酸、１０μMのFAD及び２００μMのTPPを含むMOPS緩衝溶液(0.2M, pH7.0)であった。
【００３４】
２．  検量線
検体として、各種濃度のリン酸水溶液（標準試料）を用いて作成した検量線を図６に示す。図６から、リン酸の濃度が大きくなるほど電流値が大きくなっており、本発明の酵素センサーで検体中のリン酸濃度が測定できることがわかる。ここで、菱形マークは基質液を予め検体と今後した状態で酵素センサー部に導入したときの検量線を表し、丸マークおよび三角マークはそれぞれ基質溶液を導入したあと検体を導入して測定した1回目の検量線と2回目の検量線を表している。
【００３５】
３．  実際の検体を用いた測定
検体試料として血清及び全血を使用して測定した場合に得られた結果が表１に示されている。表１に示す結果は、これらの検体についての同時再現性の結果である。全血および血清のサンプル１及び２は、異なる提供者から採取した試料である。なお、表１中のnは測定回数であり、SDは標準偏差であり、CV％は変動係数である。
【００３６】
【表１】
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【００３７】
これらの結果から、本発明の酵素センサーによれば、正確に体液中のリン酸濃度を測定できることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】リン酸測定用酵素センサーの好ましい例の電極部分の断面図である。
【図２】リン酸測定用酵素センサーの一例を模式的に示す図である。
【図３】リン酸センサーを組み込んだ、自動測定装置のフローチャートの１例を示す図である。
【図４】被検試料液を酵素センサーのセンサー部に導入する前に、試薬を酵素センサーに導入する方法の１例を説明するための図である。
【図５】本発明の実施例において測定を行った自動測定装置の構成を示す図である。
【図６】本発明の実施例において作成した検量線を示す。
【符号の説明】
【００３９】
１０  電極構造体
１２  ガラス管
１４  過酸化水素電極
１６  固化したガラス
１８  酵素固定化膜
２０  多孔膜
２２  Ｏリング
２４  参照電極
２６  センサー本体
２８  電解質液
３０  電池
３２  酵素センサー
３４  三方バルブ
３６  定量シリンジ
３８  送液ポンプ
４０  試薬液
４２  被検試料
４４  電流−電圧転換器
４６  A/Dコンバーター
４８  コンピューター
５０  プリンター
５２  廃液ポンプ
５４  廃液タンク
５６  開口を有する容器
５８  通路
６０  マグネット撹拌子
６２  スターラー
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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