(57)【要約】【課題】シロリムス誘導体又はパクリタキセルの変質・劣化を防止してこれらを安定化し、これらの薬物並びにこれらの薬物を配合した医薬品等の有効期間を延長すること及び徐放性製剤や薬物放出型体内埋植構造物にあってはこれらの薬物が溶出し終わるまでの間も薬物を安定に保ちその有効性を向上する。【解決手段】エダラボンをシロリムス誘導体又はパクリタキセル並びに必要に応じて加えられる他の添加物と共にエタノールやテトラヒドロフランなどの溶媒に溶解して溶液とし又は懸濁してスラリーとした後、必要に応じて溶媒を溜去・乾燥してエダラボン添加シロリムス誘導体又はエダラボン添加パクリタキセルとする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
エダラボンをシロリムス誘導体又はパクリタキセルと共存させることによって、シロリムス誘導体又はパクリタキセルの変質・劣化を防止することを特徴とするシロリムス誘導体又はパクリタキセルの安定化法。
【請求項２】
請求項１のシロリムス誘導体がシロリムス、ビオリムス、エベロリムス、タクロリムスである請求項１のシロリムス誘導体又はパクリタキセルの安定化法。
【請求項３】
請求項１のシロリムス誘導体がラパマイシン環を化学的に修飾した化合物である請求項１のシロリムス誘導体又はパクリタキセルの安定化法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はシロリムス誘導体又はパクリタキセルの安定化法に関するものである。シロリムス誘導体又はパクリタキセルは主として薬物放出型体内埋植構造物の有効成分として使用されている。以下、薬物放出型体内埋植構造物をステントとして記述するが本発明はステントに限定されるものではなく薬物送達システムなどを包含するものである。
【背景技術】
【０００２】
シロリムス、ビオリムス、エベロリムス、タクロリムスなどのシロリムス誘導体又はパクリタキセルは経皮的冠動脈治療用の薬物放出型ステントに含まれる再狭窄防止剤の有効成分として用いられているが、化学的に不安定であり大気中では短期間のうちに変質・劣化して保管や取扱いが難しかった。また、これらの化合物は薬物放出型ステントに配合された場合でも変質・劣化速度は大きく、薬物放出型ステントの有効成分含量の急速な低下は避けられなかった。
【０００３】
このため、シロリムス誘導体又はパクリタキセル含有薬物放出型ステントの有効期間は短く、酸素を遮断した密封容器中に貯蔵しても変質・劣化を防ぐことはできず、低温で貯蔵してもその効果は限られたものであった。
【０００４】
また、薬物放出型ステント中のシロリムス誘導体又はパクリタキセルの変質・劣化は人体へのステント留置術実施後も継続するので、体内で６箇月もの長期間にわたってシロリムス誘導体又はパクリタキセルが溶出し有効性を発揮するよう設計された薬物放出型ステントでは薬理作用の減弱は不可避であり、このような徐放性製剤においては極めて重大な問題であった。
【０００５】
このようにシロリムス誘導体又はパクリタキセルを安定化する技術が必要とされ、多くの安定化剤が提案されていたが有効な安定化法が実用化されていなかったため、例えばシロリムス含有薬物放出型ステントは室温・５箇月でシロリムス含量が１５％程度低下し、その有効期間は室温で３箇月と限定された。すなわち、既存の技術を駆使して製造されたシロリムス含有薬物放出型ステントでも製造後３箇月で使用できなくなり廃棄せざるを得なかった。
【特許文献１】特開２００５−２９６６６５
【非特許文献１】審査報告書  衛研発第２３７２号  平成１６年２月１８日  Ｐ．７  ハ．安定性に関する資料
【非特許文献２】審査報告書  衛研発第２３７２号  平成１６年２月１８日  Ｐ．２０  承認条件  ５．
【０００６】
ステントは病変部の大きさにより最適な寸法のものが選択・使用されるので長さ及び径の異なる多種類のステントを取り揃えておく必要がある。そのため、有効期間が３箇月と非常に短いと廃棄されるステントの数が多くなり、その経済的損失は非常に大きかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題はシロリムス誘導体又はパクリタキセルの変質・劣化を防止してこれらを安定化し、これらの薬物並びにこれらの薬物を配合した医薬品等の有効期間を延長すること及び徐放性製剤や薬物放出型体内埋植構造物にあってはこれらの薬物が溶出し終わるまでの間も薬物を安定に保ちその有効性を向上することである。
【０００８】
本発明者はシロリムス誘導体又はパクリタキセルの変質・劣化について研究し、シロリムス誘導体のラパマイシン環又はパクリタキセルの二重結合部分などが酸化されて他の化合物に変化すること、活性酸素がその直接の原因物質であること、活性酸素の発生に鉄イオンが関与していること、変質・劣化反応は残留溶媒が存在すると容易に進むことなどシロリムス誘導体又はパクリタキセルの変質・劣化機構を解明した。
【０００９】
さらに、酸素は活性酸素のもとになるが本来はラジカル禁止剤であり活性酸素の生成を抑制するので、酸素を除去した密封容器中に薬物放出型ステントを貯蔵すると逆にシロリムス誘導体又はパクリタキセルの変質・劣化が加速される場合もあり、酸素の除去は必ずしもシロリムス誘導体又はパクリタキセルの安定化に有効ではないことを見いだした。
【００１０】
これらの知見を基に、活性酸素に対してはラジカル捕捉剤を、また、鉄イオンに対してはイオン捕捉作用のあるキレート化剤を、さらに残留溶媒に対しては乾燥促進作用のある界面活性化剤を配合すべく種々の化合物を探索したところエダラボンがこれら複数の作用をあわせ持ち、加えて血栓症を予防する作用を持っていることを見いだした。
【特許文献２】特開２００４−２０３８２０  鉄キレート剤
【特許文献３】特開２００４−１１５５０５  動脈壁障害の予防及び／又は治療のための医薬
【００１１】
エダラボンのシロリムス誘導体又はパクリタキセルに対する安定化効果を検討した結果、エダラボンをシロリムス誘導体又はパクリタキセルと十分混和した状態で共存させることによって液体中におけると同様に固体中に分散しているシロリムス誘導体又はパクリタキセルに対しても優れた安定化効果を示し、その安定化効果を示す用量においては人体に対する安全性が十分確保されることを確認して本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、エダラボンをエタノールやテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）などの溶媒に溶解しシロリムス誘導体又はパクリタキセルに添加して均一な混合液又はスラリーとした後、乾燥して溶媒を除去しエダラボン添加シロリムス誘導体又はエダラボン添加パクリタキセルとする方法により変質・劣化を防止するシロリムス誘導体又はパクリタキセルの安定化法である。
【発明の効果】
【００１３】
本発明を実施することにより室温下で有効期間の長い（１）シロリムス誘導体又はパクリタキセル（２）これらの薬物を含む薬物放出型体内埋植構造物が得られる。特にシロリムス誘導体又はパクリタキセル含有薬物放出型ステントにおいてはその有効期間を室温３箇月から１年以上に延長することができる。
【００１４】
また、シロリムス誘導体又はパクリタキセル含有薬物放出型ステントが体内病変部位に挿入留置された後シロリムス誘導体又はパクリタキセルが溶出し終わるまでの間、変質・劣化することなく安定に保たれるため、病変部位で治療に要する十分な薬物濃度が得られ、薬物放出型ステントの有効性を著しく向上させることが可能となる。
【００１５】
さらに、エダラボンは活性酸素による培養血管内皮細胞障害を抑制することから、血管内皮の損傷による血栓の形成を防止する作用が認められるので、ステント血栓症を予防し薬物放出型ステントの安全性を向上することが期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
エダラボンをエタノール又はＴＨＦ溶液とし、シロリムス誘導体又はパクリタキセル及び必要に応じて加えられる他の添加物に添加して均一な混合液又はスラリーとする。これを乾燥して溶媒を除去しエダラボン添加シロリムス誘導体又はパクリタキセルとする。薬物放出型ステントの場合は、混合液又はスラリーをステントに塗布した後、乾燥して溶媒を除去しエダラボン添加シロリムス誘導体又はパクリタキセル含有皮膜を形成する。
【００１７】
エダラボンの使用量の上限は化学的には設ける必要はなく、人体に対する安全性の面から制限される。例えば薬物放出型ステントの場合は１回のステント留置術で使用されるステントの総数につき６０ｍｇである。この量はエダラボンの血管内単回投与毒性試験結果から導かれた量であり、ステントの１回の使用数が３本の場合はステント１本あたり２０ｍｇとなる。しかし薬物放出型ステントの表面にエダラボンを含まない被膜を施すなどの方法によってステントの体内留置後に現れるエダラボンの最高血中濃度を抑制した場合はさらに増加することができる。
【００１８】
シロリムス誘導体又はパクリタキセルを安定化するためには共存するエダラボンの量は多い方が好ましいが、逆にエダラボンの人体への影響を小さくするためには少なくする必要がある。このような場合の添加量の下限は、シロリムス誘導体又はパクリタキセルに対して０．００３％程度であるが、他の安定化剤例えばジブチルヒドロキシトルエンやビタミンＥなどと組み合わせて使用する場合はさらに少なくすることができる。
【実施例１】
【００１９】
次に実施例をもって本発明を詳細に説明する。実施例に先立ち、各実施例で使用したシロリムス誘導体又はパクリタキセルの定量法を説明する。
【００２０】
製剤中のシロリムス誘導体又はパクリタキセルの定量法：試料０．５ｇをとり，その質量を精密に量り粉末とする．シロリムス誘導体又はパクリタキセルとして０．０３ｇに対応する量を精密に量りＴＨＦ５０ｍLを正確に加え，１時間振り混ぜた後遠心分離する．上澄液５ｍLを正確に量り，内標準溶液５ｍLを正確に加え試料溶液とする．別にシロリムス誘導体又はパクリタキセル標準液５ｍLを正確に量り，内標準溶液５ｍLを正確に加え標準溶液とする．試料溶液及び標準溶液１０μLにつき次の条件でＨＰＬＣ法により試験を行い，内標準物質のピーク面積に対するシロリムス誘導体又はパクリタキセルのピーク面積の比ＡＴ及びＡＳを求める．シロリムス誘導体又はパクリタキセルの量（ｍｇ）＝シロリムス誘導体又はパクリタキセル標準品の量（ｍｇ）×ＡＴ／ＡＳ×１／２
【００２１】
シロリムス誘導体又はパクリタキセル標準液：シロリムス誘導体又はパクリタキセル標準品（あらかじめ水分を測定しておく）約０．２５ｇを精密に量り，ＴＨＦに溶かし，正確に１００ｍLとする．内標準溶液：パラオキシ安息香酸ブチルのアセトニトリル溶液（１→８００００）．ＨＰＬＣ検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２２０ｎｍ）．カラム：内径約４ｍｍ、長さ約２５ｃｍのステンレス管に粒径５μｍの液体クロマトグラフ用オクタデシルシリル化シリカゲルを充てんする．カラム温度：２５℃付近の一定温度．移動相：アセトニトリル．流量：シロリムス誘導体又はパクリタキセルの保持時間が約７分になるよう調整する．カラムの選定：標準溶液１０μLにつき、上記の条件で操作するときシロリムス誘導体又はパクリタキセルとパラオキシ安息香酸ブチルの分離度が３以上のものを用いる．
【００２２】
蒸留して過酸化物等を除去したＴＨＦ５００ｍＬに（Ａ）シロリムス、（Ｂ）ビオリムス、（Ｃ）エベロリムス、（Ｄ）タクロリムス、（Ｅ）パクリタキセル各５．４ｍｇを溶解して有効成分溶液（Ａ）〜（Ｅ）とした。
【００２３】
別に、蒸留して過酸化物等を除去したＴＨＦ５００ｍＬにポリエチレンビニルアセテート（ＰＥＶＡ）５．４ｍｇ及びポリブチルメタアクリレート（ＰＢＭＡ）５．４ｍｇを溶解しエダラボンを含まないポリマー溶液（Ｘ）とした。
【００２４】
ポリマー溶液（Ｘ）５００ｍＬにエダラボンを１ｍｇ又は６００ｍｇを加えて溶解し、エダラボン１ｍｇを含むポリマー溶液（Ｙ）、エダラボン６００ｍｇを含むポリマー溶液（Ｚ）とした。
【００２５】
有効成分溶液（Ａ）〜（Ｅ）各５００ｍＬに、エダラボンを含まないポリマー溶液（Ｘ）又はエダラボン１ｍｇを含むポリマー溶液（Ｙ）又はエダラボン６００ｍｇを含むポリマー溶液（Ｚ）５００ｍＬをそれぞれ加えて混合し、比較用有効成分ポリマー溶液（ＡＸ）〜（ＥＸ）、試験用有効成分ポリマー溶液（ＡＹ）〜（ＥＹ）、試験用有効成分ポリマー溶液（ＡＺ）〜（ＥＺ）とした。
【００２６】
比較用有効成分ポリマー溶液（ＡＸ）〜（ＥＸ）、試験用有効成分ポリマー溶液（ＡＹ）〜（ＥＹ）、試験用有効成分ポリマー溶液（ＡＺ）〜（ＥＺ）を３ｃｍ×５ｃｍの３１６Ｌステンレス鋼片の片側に均一に噴霧・塗布した後、室温で通気乾燥し比較用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＡＸ）〜（ＥＸ）試験用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＡＹ）〜（ＥＹ）、試験用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＡＺ）〜（ＥＺ）各６枚を作成した。このうち各３枚を直ちに試験に供し、被膜を採取してＨＰＬＣ法によりシロリムス誘導体又はパクリタキセルの含量を測定した。
【００２７】
残りの比較用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＡＸ）〜（ＥＸ）、試験用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＡＹ）〜（ＥＹ）、試験用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＡＺ）〜（ＥＺ）各３枚を４０℃±２℃／７５％ＲＨ±５％ＲＨの恒温・恒湿槽内に１箇月間保存した後、被膜を採取してＨＰＬＣ法によりシロリムス誘導体又はパクリタキセルの含量を測定し経時変化を見た。
【００２８】
その結果、１箇月後のシロリムス誘導体又はパクリタキセルの残存量の割合は、初期値に対して平均（ＡＸ）８４．７％、（ＢＸ）８３．２％、（ＣＸ）８２．４％、（ＤＸ）８２．７％、（ＥＸ）８３．８％、（ＡＹ）９２．６％、（ＢＹ）９０．９％、（ＣＹ）９０．１％、（ＤＹ）９０．４％、（ＥＹ）９１．６％、（ＡＺ）９８．０％、（ＢＺ）９６．３％、（ＣＺ）９５．３％、（ＤＺ）９５．７％、（ＥＺ）９６．９％で、エダラボンを共存させたものはいずれも９０％以上残存していた。
【実施例２】
【００２９】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）５００ｍＬに（Ｆ）シロリムス、（Ｇ）ビオリムス、（Ｈ）エベロリムス、（Ｉ）タクロリムス、（Ｊ）パクリタキセル各５．４ｍｇを溶解して有効成分溶液（Ｆ）〜（Ｊ）とした。別にＤＭＦ５００ｍＬにポリＬ−乳酸（ＰＬＬＡ）１０．８ｍｇの割合で溶解しエダラボンを含まないポリマー溶液（Ｖ）とした。ポリマー溶液（Ｖ）５００ｍＬにエダラボン０．１０ｍｇを加えて溶解しポリマー溶液（W）とした。
【００３０】
有効成分溶液（Ｆ）〜（Ｊ）各５００ｍＬに、エダラボンを含まないポリマー溶液（Ｖ）又はエダラボン０．１ｍｇを含むポリマー溶液（Ｗ）５００ｍＬをそれぞれ加えて混合し、比較用有効成分ポリマー溶液（ＦＶ）〜（ＪＶ）、試験用有効成分ポリマー溶液（ＦＷ）〜（ＪＷ）とした。
【００３１】
比較用有効成分ポリマー溶液（ＦＶ）〜（ＪＶ）、試験用有効成分ポリマー溶液（ＦＷ）〜（ＪＷ）を３ｃｍ×５ｃｍの３１６Ｌステンレス鋼片の片側に均一に噴霧・塗布した後、室温で通気乾燥し比較用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＦＶ）〜（ＪＶ）、試験用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＦＷ）〜（ＪＷ）各６枚を作成した。このうち各３枚を直ちに試験に供し、被膜を採取してＨＰＬＣ法によりシロリムス誘導体又はパクリタキセルの含量を測定した。
【００３２】
残りの比較用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＦＶ）〜（ＪＶ）、試験用有効成分ポリマー被覆テストピース（ＦＷ）〜（ＪＷ）各３枚を、２５℃±２℃／６０％ＲＨ±５％ＲＨの恒温・恒湿槽内に１２箇月間保存した後、被膜を採取してＨＰＬＣ法によりシロリムス誘導体又はパクリタキセルの含量を測定し経時変化を見た。
【００３３】
その結果、１２箇月後のシロリムス誘導体又はパクリタキセルの残存量の割合は、初期値に対して平均（ＦＶ）６２．８％、（ＧＶ）５９．６％、（ＨＶ）５８．０％、（ＩＶ）５８．７％、（ＪＶ）６０．８％、（ＦＷ）８７．０％、（ＧＷ）８６．０％、（ＨＷ）８５．５％、（ＩＷ）８５．７％、（ＪＷ）８６．４％でエダラボンを共存させたものはいずれも規格値８５％以上残存しておりエダラボン共存の効果が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
化学的に不安定なシロリムス誘導体又はパクリタキセルにエダラボンを共存させて安定化する本発明の方法は、化学的に不安定な他の医薬品原薬や化学物質、例えばエーテル結合を持ち容易に酸化されて過酸化物を生成するＴＨＦなどにも適用できる。
【００３５】
また、ステント留置術実施時に発生する活性酸素が原因と考えられる急性・亜急性血栓症の発生が再狭窄と並んで大きな問題となっていた。
【非特許文献３】審査報告書  衛研発第２３７２号  平成１６年２月１８日  Ｐ．２０  承認条件４．
【００３６】
本発明のエダラボンを共存させる方法を体内埋植薬物送達システムに応用すれば、共存する他の薬物が安定化されてその有効性が向上すると同時にエダラボンの活性酸素消去作用により薬物送達システム埋植に伴う血栓症が予防されて安全性が向上する。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】エダラボンの構造式
【図１】
2007145767.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成17年12月8日(2005.12.8)
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
エダラボンをシロリムス誘導体又はパクリタキセル並びに必要に応じて加えられる他の添加物と共にエタノールやＴＨＦなどの溶媒に溶解して溶液とし又は懸濁してスラリーとした後、必要に応じて溶媒を溜去・乾燥してエダラボン添加シロリムス誘導体又はエダラボン添加パクリタキセルとする。薬物放出型ステントの場合は、混合液又はスラリーをステントに塗布した後、乾燥して溶媒を除去しエダラボン添加シロリムス誘導体又はエダラボン添加パクリタキセル含有皮膜を形成する。