(57)【要約】【課題】  乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３の免疫機能に関する新規の作用機序及びそれを利用した医薬用途を見出し、種々の免疫疾患の予防剤または治療剤として有効な医薬並びにそれを配合した飲食品及び飼料を提供することを課題とする。【解決手段】  乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を有効成分とする免疫機能調節剤。ガングリオシドＧＭ３は、乳由来であることが好ましい。前記免疫機能調節剤を飲食品または飼料に配合する。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を有効成分とする免疫機能調節剤。
【請求項２】
ガングリオシドＧＭ３が乳由来であることを特徴とする請求項１または２記載の免疫機能調節剤。
【請求項３】
請求項１または２記載の免疫機能調節剤を配合した飲食品。
【請求項４】
請求項１または２記載の免疫機能調節剤を配合した飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を有効成分とする免疫機能調節剤、並びにそれを配合した飲食品及び飼料に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳脂肪球皮膜は、バター製造過程で生じるバターミルク中に多く含まれており、食品素材として使用される例がわずかにあるものの、ほとんど利用されていない。しかし、脂肪球皮膜中には多くのタンパク質、脂質が含まれており、その中にはムチンなどのように、生体防御に関与する可能性が指摘されているものも存在しており、乳脂肪球皮膜の利用は今後期待される。
【０００３】
特許文献１には、酵素処理した乳由来の脂肪球皮膜成分を有効成分とする抗アレルギー栄養組成物が開示されている。同文献において、乳由来の脂肪球皮膜成分は、乳化剤として使用されている。すなわち、脂肪球皮膜成分を酵素処理して乳化能を向上させることにより、抗アレルギー栄養組成物中のその他の成分の乳化剤として利用するというものである。
【０００４】
一方、ガングリオシドＧＭ３は、Ｎ−アセチルノイラミン酸を含むスフィンゴ糖脂質であり、あらゆる細胞膜上に存在する。その生理作用としては、細胞毒素の中和活性、インターフェロンやホルモン等の受容体活性等が知られている。ガングリオシドは、乳にも含まれる成分で、乳に含まれるガングリオシドは、主にＧＭ３とＧＤ３の２種類あり、ＧＭ３は、骨髄性白血病細胞株ＨＬ−６０や単球性白血病細胞株Ｕ９３７の分化誘導作用を有することが知られている（非特許文献１）。特許文献２において、ＧＭ３は乳児の腸間粘膜細胞を成熟化させることが開示されており、成熟化により、アレルゲン物質が粘膜上皮細胞の間隙からアレルゲンが通過するのを防止したり、粘膜上でアレルゲンと結合して、その侵入を防止するＩｇＡの産生を増加させることができることが開示されている。しかしながら、消化管が未成熟故にアレルゲン物質が容易に体内に侵入しやすい乳児とは異なり、消化管が十分に成熟している人に対して有効な手段は見出されていない。
【特許文献１】特開平８−２１４８３６号公報
【特許文献２】特開平８−１０９１３３号公報
【非特許文献１】野尻ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６３，７４４３，（１９８８）
【０００５】
サイトカインは、主として免疫系の細胞から産生されるタンパク質性因子であり、免疫系細胞だけでなく多くの細胞に対して多彩な生理作用を及ぼすことが知られている。サイトカインの中でも、ＴＮＦ−αは、生体防御、炎症反応などにおいて中心的な役割を果たす炎症性サイトカインの代表である。ＴＮＦ−αの産生能に影響する因子は、生体防御能や炎症反応を調節する作用を有することが期待されている。
また、ＩＬ−１２は、細胞性免疫を制御するサイトカインの代表であり、Ｔｈ０タイプのＴ細胞のＴｈ１型への分化を促進することが知られている。また、ＩＬ−１２は、ｐ４０とｐ３５の２種のサブユニットからなるホモおよびヘテロダイマーがある。ｐ４０とｐ３５からなるヘテロダイマーは、ｐ７０として活性型のＩＬ−１２として作用する。また、ｐ４０のホモダイマーであるｐ８０は、前記ｐ７０の活性を阻害するインヒビターとして作用することが知られているが、ｐ４０は、恒常的に産生されているため、ＩＬ−１２の活性調節はｐ３５の産生量を変化させることによって行なわれると考えられている。
また、ＩＬ−４は、体液性免疫を制御するサイトカインの代表であり、Ｔｈ２細胞の増殖を促進することが考えられている。
したがって、免疫系の組織において、ＩＬ−１２とＩＬ−４の産生能の変化を解析することによって、存在するＴ細胞がＴｈ１型優位、すなわち細胞性免疫が優位な状況にあるか、Ｔｈ２型優位、すなわち体液型免疫が優位な状況にあるかを推測することが可能である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３の免疫機能に関する新規の作用機序及びそれを利用した医薬用途を見出し、種々の免疫疾患の予防剤または治療剤として有効な医薬並びにそれを配合した飲食品及び飼料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、課題を解決するために、乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３のサイトカインに対する機能を種々検討したところ、これらの物質がＴＮＦ−αの産生量を低下させ、活性型ＩＬ−１２の産生を促進または抑制すること、さらに、これらの物質を用いて免疫機能を調節し得ることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成させた。
【０００８】
すなわち、本発明は、乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を有効成分とする免疫機能調節剤である。
本発明はまた、ガングリオシドＧＭ３が乳由来であることを特徴とする前記免疫機能調節剤である。
本発明はまた、前記免疫機能調節剤を配合する飲食品及び飼料である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の免疫機能調節剤を用いることにより、乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を用いてＴＮＦ−αの産生量を低下させ、活性型ＩＬ−１２の産生を促進あるいは抑制することにより、免疫機能を調節することができる。本発明の免疫機能調節剤は、食品アレルギーやアトピー性皮膚炎等の免疫機能に関与する疾患の予防、治療等に有効に利用することができる。特に、乳脂肪球皮膜を用いた場合には、免疫機能に関する疾患の治療に有効であり、ガングリオシドＧＭ３を用いた場合には、同疾患の予防に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明において有効成分として使用される乳脂肪球皮膜は、乳の脂肪球を被覆する膜であり、主にタンパク質、リン脂質及び糖脂質からなる。乳脂肪球皮膜は、界面活性作用によって、疎水性の高い脂肪球と周囲の水相との乳化状態を維持する役割を果している。
本発明において使用される乳脂肪球皮膜は、いかなる方法により得られるものでもよいが、原料となる乳としては、牛乳、ヤギ乳、ヒツジ乳、人乳が例示され、特に牛乳が好ましい。
本発明において、乳脂肪球皮膜として、バターもしくは乳クリームからバターオイルを製造する際に副生するバターセーラム、または、特開平５−２９２８８０号公報に記載されているようなバターミルクを、ｐＨ４．４〜４．６に調整し、等電点沈澱を行ってタンパク質の沈澱を除き、得られた上澄液を限外濾過または精密濾過し、乾燥することによって得られる複合脂質含有粉末を用いてもよい。
【００１１】
本発明において有効成分として使用されるガングリオシドＧＭ３は、いかなる方法により得られるものであってもよい。すなわち、従来法により畜獣の脳等から分離精製されたものを用いてもよく、また、牛乳から効率よく回収する方法（特開昭６３−２６９９９２号公報）を利用して得られたものを用いてもよい。同公報に記載の方法によれば、工業規模で大量に生産することも可能である。なお、同公報に記載の乳からガングリオシドを分離抽出する方法を、参考までに示すと下記の通りである。すなわち、牛乳、バターミルク、ホエー、脱脂乳等の乳原料に、塩酸や乳酸等の酸、またはトリプシン、ペプシン等のタンパク質分解酵素を作用させて、タンパク質を分解し、得られたタンパク質分解溶液を、限外濾過法、ゲル濾過法または透析法により処理し、ガングリオシドを濃縮して調製する。このようにして調製されたガングリオシドは、ＧＭ３とＧＤ３から構成されるが、本発明においては、ＧＭ３を有効成分とする。
【００１２】
本発明の免疫機能調節剤は、乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を有効成分とするものであるが、種々の剤型を有する製剤として用いることができ、剤型は特に限定されない。したがって、有効成分である乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を、種々の賦形剤や担体等とともに用いて、錠剤、カプセル剤、粉剤、液剤等種々の剤型の製剤に配合することができる。また、本発明の免疫機能調節剤は、免疫機能を調節する作用を有するほかの医薬を含むものであってもよい。
また、本発明の飲食品の種類も特に限定されず、牛乳、加工乳、乳飲料、ヨーグルト、清涼飲料水、コーヒー飲料、ジュース、ゼリー、ウエハース、ビスケット、パン、麺、ソーセージ等の飲食品や栄養食、さらには、栄養補給用組成物に配合することができる。また、本発明の飼料の種類も特に限定されるものではない。
なお、本発明の免疫機能調節剤、飲食品及び飼料は、乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を含有すること以外は、常法により製造することができる。
【００１３】
本発明において、免疫機能調節効果を発揮させるためには、乳脂肪球皮膜を有効成分とする場合は、乳脂肪球皮膜として１日当たり一般的に１０〜５００ｍｇ程度摂取できるように、医薬、飲食品や飼料への配合量等を調整すればよい。また、ガングリオシドＧＭ３を有効成分とする場合は、ガングリオシドＧＭ３として1日当たり一般的に１０〜５００ｍｇ程度摂取できるように医薬、飲食品や飼料への配合量等を調整すればよい。
なお、乳脂肪球皮膜を有効成分とする場合もガングリオシドＧＭ３を有効成分とする場合も、投与対象は限定されないが、ガングリオシドＧＭ３を有効成分とする場合は、消化管が十分に成熟した人に用いるとより効果的である。
【００１４】
（試験例）
以下、試験例を示し、本発明をさらに詳しく説明する。試験例における「％」は特に断らない限り、「重量％」を意味するものとする。
また、試験例においては、すべてＢａｌｂ／Ｃ雄マウスを用いた。
投与した乳脂肪球皮膜（以下、「ＭＦＧＭ」という）は、１ｍｇ／ｍｌまたは２ｍｇ／ｍｌの濃度で、水に溶解し、３０分間超音波処理することによりミセル形成させたものを使用した。対照としては、ホエータンパク質分離物（ＷＰＩ）を同濃度で溶解したものを使用した。
また、ガングリオシドＧＭ３は、１０μｇ／ｍｌの濃度で、１０％の牛胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０培地に溶解し、３０分間超音波処理することによりミセル形成させたものを使用した。
【００１５】
（試験例１：ＭＦＧＭの腹腔内及び脾臓マクロファージによるＴＮＦ−α産生能への影響）
６週齢のＢａｌｂ／Ｃ雄マウスを１週間予備飼育した後、体重が等しくなるように２群に分け、１群にはＭＦＧＭを１匹当たり１ｍｇ／ｍｌの溶液を１ｍｌずつ連続４日間経口投与した。もう一群には、対照としてＷＰＩを同量経口投与した。４日目の経口投与４時間後に屠殺し、腹腔内マクロファージを分離するとともに、脾臓を採取した。腹腔内マクロファージは、マウス腹腔をＲＰＭＩ１６４０培地で洗うことにより分離し、脾臓細胞は、脾臓を培養皿内で細切し、注射筒で細かく押しつぶし、メッシュを通すことにより、それぞれ分離した。両者とも、ＲＰＭＩ１６４０培地に１０％となるよう牛胎児血清を添加した培地（１０％ＦＣＳ／ＲＰＭＩ１６４０）で２時間培養した後、同培地で２回洗うことにより、接着したマクロファージを単離した。
【００１６】
単離したマクロファージは、ＬＰＳを１μｇ／ｍｌとなるように添加した１０％ＦＣＳ／ＲＰＭＩ１６４０培地、またはＬＰＳを添加しない同培地で、さらに３時間培養した。培養終了後、培地を採取するとともに、細胞を０．１％ＳＤＳ溶液で可溶化した。採取した培地中のＴＮＦ−α濃度は、Ｌ９２９マウス線維芽細胞を用いたバイオアッセイ法により測定した。可溶化した細胞内のＤＮＡ量をＤＡＰＩによる蛍光光度法で測定し、ＤＮＡ量当たりのＴＮＦ−α分泌を求めた。腹腔内マクロファージの結果を図１のＡに、脾臓マクロファージの結果を図１のＢに示す。
図１のＡ及びＢに示される結果から、ＭＦＧＭ投与群では、ＬＰＳ非存在下及び存在下のどちらの条件下においても、対照群であるＷＰＩ投与群に比べて、ＴＮＦ−α産生能が低下する傾向が見られた。ＴＮＦ−α産生能低下効果は、腹腔内マクロファージ（Ａ）より、脾臓マクロファージ（Ｂ）において、より顕著であった。
ＭＦＧＭを経口投与することによりＴＮＦ−α産生能が抑制されたことは、ＭＦＧＭが、経口摂取されることにより抗炎症的に作用することを示唆するものである。
本試験例において、ＭＦＧＭはミセル化した状態で経口投与したが、小腸からカイロミクロンとしてリンパ管経由で吸収され、吸収後、まず腸間膜リンパ節に達し、その後肝臓、脾臓と血流により運搬されていくものと予想される。脾臓マクロファージに対する作用が腹腔内マクロファージに対する作用より顕著であったのは、腹腔内より脾臓のほうがＭＦＧＭの到達する量が多かったためではないかと推定される。
なお、腸間膜リンパ節におけるＴＮＦ−α産生能の測定も行ったが、ＬＰＳ刺激及びマイトジェン刺激のいずれによっても測定可能なレベルのＴＮＦ−α分泌は見られなかった。このことから、腸間膜リンパ節においては、Ｔ細胞、Ｂ細胞がメインであり、マクロファージや単球系の細胞はあまり多く存在していないと推定される。
【００１７】
（試験例２：ＭＦＧＭの脾臓細胞及び腸間膜リンパ節細胞によるＩＬ−４、ＩＬ−１２産生能への影響）
動物飼育及びサンプルの経口投与は、試験例１と同様に行った。ただし、この実験では、サンプル濃度を２ｍｇ／ｍｌとし、１匹当たり０．５ｍｌずつ経口投与した。４日目の経口投与４時間後にマウスを屠殺し、脾臓及び腸間膜リンパ節を採取した。採取した脾臓及び腸間膜リンパ節は、試験例１と同様に細切後、強く押しつぶしてバラバラにした後、メッシュを通すことでそれぞれの細胞を分離した。細胞は、１０％ＦＣＳ／ＲＰＭＩ１６４０培地中に播種した。本試験例においては、脾臓細胞全体で培養するため、２時間後の洗浄操作は行わなかった。培養開始２日目にマイトジェンであるConcanavallinＡを５μｇ／ｍｌの濃度となるように添加し、さらに４日間培養した。培養終了後、培地を回収するとともに、細胞を溶解した。培地中のＩＬ−４、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０濃度は、それぞれサンドイッチＥＬＩＳＡ法により測定した。細胞中のＤＮＡ濃度を測定し、ＤＮＡ量当たりのサイトカイン分泌量を求めた。脾臓細胞における結果を図２に、腸間膜リンパ節細胞における結果を図３に示す。
【００１８】
図２に示されるように、脾臓細胞においては、ＩＬ−４産生能には差が見られなかったが、活性型であるＩＬ−１２ｐ７０の産生能が対照群に比べて有意に増加した。また、ＩＬ−１２ｐ４０分泌能は有意に低下した。
さらに、図３に示されるように、腸間膜リンパ節細胞においては、ＩＬ−４産生能が有意に低下し、ＩＬ−１２ｐ７０産生能が有意に増加した。
このように、ＭＦＧＭがＩＬ−１２ｐ７０産生能を増加させたことは、ＭＦＧＭがアレルギーを抑制する作用を有することを示しており、ＭＦＧＭがアレルギー等の免疫疾患の治療に有効であることが明らかである。
なお、ＩＬ−１２ｐ４０の産生能が低下しているが、この低下は統計的に有意ではない。上記したように、ＩＬ−１２ｐ４０は恒常的に合成分泌されており、ＩＬ−１２ｐ３５産生能の変化によって活性型のＩＬ−１２ｐ７０の量が変化することが知られている。実際、腸間膜リンパ節細胞におけるＩＬ−１２ｐ７０量は、ＩＬ−１２ｐ４０量の数％に過ぎず、ＩＬ−１２ｐ４０量が多少変化したとしても、ＩＬ−１２ｐ７０の産生能に影響を与えるものではない。すなわち、脾臓や腸間膜リンパ節においてＩＬ−１２ｐ４０産生能変化の生理的意義は大きくないと考えられる。
以上、図２及び図３に示されるこれらの結果は、ＭＦＧＭ経口投与により、脾臓内及び腸間膜リンパ節内においてＴｈ１型優位な状態が誘導されていることを示唆している。
【００１９】
試験例２においてＴｈ１誘導作用が脾臓よりも腸間膜リンパ節においてより顕著であったことは、試験例１のＭＦＧＭの吸収過程の予想とも一致する結果である。
体内のＴｈ１／Ｔｈ２バランスをみると、食品アレルギーやアトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患においては、Ｔｈ２優位な状態になるといわれている。従ってＴｈ１優位な状態に誘導すれば症状を抑えることができる、すなわち、アレルギー疾患の治療に有効であると考えられる。
本試験例において、ＭＦＧＭが、経口投与によりＴｈ１型誘導作用を示したことは、ＭＦＧＭを日常的に摂取することによって生体の免疫系がＴｈ１型、すなわち細胞性免疫が優位な状態に誘導される可能性を強く示唆しており、ＭＦＧＭが抗アレルギー作用を有する食品素材として利用できる可能性を示している。
【００２０】
（試験例３：ガングリオシドＧＭ３の腹腔内マクロファージのＴＮＦ−α産生能への影響）
１０週齢のＢａｌｂ／Ｃ雄マウスの腹腔をＲＰＭＩ１６４０培地で洗うことにより、腹腔内マクロファージを分離した。次いで、ＲＰＭＩ１６４０培地に１０％となるよう牛胎児血清を添加した培地（１０％ＦＣＳ／ＲＰＭＩ１６４０）で２時間培養した後、同培地で２回洗うことにより、接着したマクロファージを単離した。
単離した腹腔内マクロファージにガングリオシドＧＭ３を１０μｇ／ｍｌとなるように添加した１０％ＦＣＳ／ＲＰＭＩ１６４０培地、または何も添加していないＲＰＭＩ１６４０培地（対照）を加え、２時間培養した。その後ＬＰＳを１μｇ／ｍｌとなるように添加し、さらに３時間培養した。培養終了後、培地を採取するとともに、細胞を０．１％ＳＤＳ溶液で可溶化した。採取した培地中のＴＮＦ−α濃度は、Ｌ９２９マウス線維芽細胞を用いたバイオアッセイ法により測定した。可溶化した細胞内のＤＮＡ量をＤＡＰＩによる蛍光光度法で測定し、ＤＮＡ量当たりのＴＮＦ−α分泌を求めた。対照群のＴＮＦ−α分泌活性を１００％とし、ガングリオシドＧＭ３添加群の活性とともに図４に示す。
図４に示される結果より、ガングリオシドＧＭ３添加群では、対照群に比べて、ＴＮＦ−α産生能が非常に低下していた。
ガングリオシドＧＭ３を培地に直接添加することによりＴＮＦ−α産生能が抑制されたことは、ガングリオシドが抗炎症的に作用することを示唆するものである。
【００２１】
（試験例４：ガングリオシドＧＭ３の腸間膜リンパ節細胞によるＩＬ−４及びＩＬ−１２産生能への影響）
細胞の分離は試験例２と同様に行った。すなわち採取した腸間膜リンパ節は、試験例２と同様に細切後、強く押しつぶしてバラバラにした後、メッシュを通すことで細胞を分離した。細胞は、１０％ＦＣＳ／ＲＰＭＩ１６４０培地もしくはＧＭ３を１０μｇ／ｍｌとなるように添加した１０％ＦＣＳ／ＲＰＭＩ１６４０培地に播種した。培養開始２日目にマイトジェンであるConcanavallinＡを５μｇ／ｍｌの濃度となるように添加し、さらに３日間培養した。培養終了後、培地を回収するとともに、細胞を溶解した。培地中のＩＬ−４、ＩＬ−１２ｐ４０、ＩＬ−１２ｐ７０濃度は、それぞれサンドイッチＥＬＩＳＡ法により測定した。細胞中のＤＮＡ濃度を測定し、ＤＮＡ量当たりのサイトカイン分泌量を求めた。結果を図５に示す。
【００２２】
図５に示されるように、腸間膜リンパ節細胞において、ＩＬ−４産生能が増加する傾向を示し、ＩＬ−１２ｐ７０産生能が著しく低下した。
なお、ＩＬ−１２ｐ４０の産生能も増加しているが、この低下は統計的に有意ではない。上記したように、ＩＬ−１２ｐ４０は恒常的に合成分泌されており、ＩＬ−１２ｐ３５産生能の変化によって活性型のＩＬ−１２ｐ７０の量が変化することが知られている。実際、腸間膜リンパ節細胞におけるＩＬ−１２ｐ７０量は、ＩＬ−１２ｐ４０量の数％に過ぎず、ＩＬ−１２ｐ４０量が多少変化したとしても、ＩＬ−１２ｐ７０の産生能に影響を与えるものではない。すなわち、ＩＬ−１２ｐ４０産生能変化の生理的意義は大きくないと考えられる。
これらの結果は、ガングリオシドＧＭ３の添加により、腸間膜リンパ節内においてＴｈ１抑制が誘導されていることを示唆している。
【００２３】
体内のＴｈ１／Ｔｈ２バランスをみると、食品アレルギーやアトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患の初期段階においてはＴｈ１優位な状態になるといわれている。従ってＴｈ１を抑制することでアレルギー疾患の進行を抑えることができる、すなわちアレルギー疾患の予防に有効であると考えられる。
本試験例において、ガングリオシドＧＭ３が、Ｔｈ１型抑制作用を示したことは、ガングリオシドＧＭ３を日常的に摂取することによって生体の免疫系においてＴｈ１型、すなわち細胞性免疫が抑制方向に誘導される可能性を示唆しており、ガングリオシドＧＭ３がアレルギー発症の初期段階を抑制することによりアレルギー予防作用を有する食品素材として利用できる可能性を示している。
【実施例】
【００２４】
以下、本発明を参考例、実施例によりさらに詳しく説明する。実施例において、「％」は特に断らない限り、「重量％」を意味するものとする。
【００２５】
（実施例１：乳脂肪球皮膜の調製）
バター１０kgを７５℃において溶解し、同温度の温水２kgを添加して、充分攪拌した後、連続遠心分離機で遠心分離（５,０００×ｇ）して、バターオイルとバターセーラムに分画した。バターセーラムとして回収した画分２kgを凍結乾燥し、乳脂肪球皮膜１４０ｇを得た。このようにして得られた乳脂肪球皮膜は、そのまま本発明の免疫機能調節剤として利用可能である。
【００２６】
（実施例２：乳脂肪球皮膜を用いた粉乳の調製）
実施例１で調製した乳脂肪球皮膜２００ｇを、カゼイン６．８ｋｇ、ホエー粉７０．０ｋｇ、ビタミン及びミネラル成分１ｋｇと共に、水７００ｋｇに溶解した。さらに、植物油脂２３．９ｋｇを混合して、均質化した後、殺菌・濃縮・乾燥工程を経て、本発明の免疫機能調節剤を配合した粉乳１００ｋｇを得た。得られた粉乳１００ｇ中の乳脂肪球皮膜含量は、２００ｍｇであった。
【００２７】
（実施例３：乳脂肪球皮膜を用いたドリンク剤の調製）
実施例１で調製した乳脂肪球皮膜を用い、下記の配合により本発明の免疫機能調節剤であるドリンク剤を調製した。
乳脂肪球皮膜            ２０ｇ
クエン酸ナトリウム    ２．８ｇ
ショ糖                ３６０ｇ
全粉乳                  ４０ｇ
脱脂粉乳                ５０ｇ
焙煎コーヒー粉末      １３０ｇ
食塩                      ２ｇ
重曹                  ２．５ｇ
シュガーエステル      ２．５ｇ
香料                      ６ｇ
上記成分を、水に溶解して５Ｌとした。この溶液を、圧力１６０ｋｇ／ｃｍ２で均質化した後、プレート式殺菌機により、１２０℃で３秒間保持して殺菌し、次いで５℃に冷却した。得られたドリンク剤を２００ｍｌ入り紙容器に充填した。このドリンク剤は、１００ｍｌ当り４００ｍｇの乳脂肪球皮膜を含有していた。
【００２８】
（実施例４：乳脂肪球皮膜を用いた錠剤の調製）
実施例１で調製した乳脂肪球皮膜を、常法により、ゼラチンよりなるソフトカプセル中に一錠当り１００ｍｇとなるように充填して、本発明の免疫機能調節剤（錠剤）を得た。
【００２９】
(実施例５：ガングリオシドＧＭ３の調製)
バターミルク粉２０kgを、水１８０Ｌに溶解した溶液に、０．５kgの枯草菌プロテアーゼを添加し、pH７.６、温度４０℃で１５時間反応させ、タンパク質を分解した後、９０℃で１０分間加熱殺菌し、酵素を失活させた。次いで、この溶液を、膜面積０．３６ｍ2の濾過膜を装着した限外濾過膜装置（LAB−２０型モジュール：ＤＤＳ社製）を用いて、温度４０℃、流量１５Ｌ／分、平均圧力０．６MＰａで濾過し、ガングリオシドを濃縮した。このガングリオシド濃縮液１０Ｌに、濃塩酸を加えて、pHを２．５に調整し、３７℃で８時間加温した後、水酸化ナトリウムで中和した。この溶液を凍結乾燥して、ＧＭ３を６ｇ含有するガングリオシド粉末１kgを得た。このようにして得られたガングリオシド粉末は、そのまま本発明の免疫機能調節剤として利用可能である。
【００３０】
（実施例６：ガングリオシドＧＭ３を用いた粉乳の調製）
実施例５で調製したガングリオシド粉末２００ｇを、カゼイン６．８ｋｇ、ホエー粉７０．０ｋｇ、ビタミン及びミネラル成分１ｋｇと共に、水７００ｋｇに溶解した。さらに、植物油脂２３．９ｋｇを混合して、均質化した後、殺菌・濃縮・乾燥工程を経て、本発明の免疫機能調節剤を配合した粉乳１００ｋｇを得た。得られた粉乳１００ｇ中のＧＭ３含量は、１ｍｇであった。
【００３１】
（実施例７：ガングリオシドＧＭ３を用いたドリンク剤の調製）
実施例５で調製したガングリオシド粉末を用い、下記の配合により本発明の免疫機能調節剤であるドリンク剤を調製した。
ガングリオシド粉末      ２０ｇ
クエン酸ナトリウム    ２．８ｇ
ショ糖                ３６０ｇ
全粉乳                  ４０ｇ
脱脂粉乳                ５０ｇ
焙煎コーヒー粉末      １３０ｇ
食塩                      ２ｇ
重曹                  ２．５ｇ
シュガーエステル      ２．５ｇ
香料                      ６ｇ
上記成分を、水に溶解して５Ｌとした。この溶液を、圧力１６０ｋｇ／ｃｍ２で均質化した後、プレート式殺菌機により、１２０℃で３秒間保持して殺菌し、次いで５℃に冷却した。得られたドリンク剤を２００ｍｌ入り紙容器に充填した。このドリンク剤は、１００ｍｌ当り２ｍｇのＧＭ３を含有していた。
【００３２】
（実施例８：ガングリオシドＧＭ３を用いた錠剤の調製）
参考例２で調製したガングリオシド粉末を、常法により、ゼラチンよりなるソフトカプセル中に一錠当り１００ｍｇとなるように充填して、本発明の免疫機能調節剤（錠剤）を得た。
【産業上の利用可能性】
【００３３】
本発明の乳脂肪球皮膜及び／またはガングリオシドＧＭ３を有効成分とする免疫機能調節剤またはそれを配合した飲食品もしくは飼料は、免疫機能に関与する種々の疾患の予防または治療、症状の改善等に用いることができ、非常に有用である。特に、乳脂肪球皮膜を有効成分とする免疫機能調節剤の場合は、各種免疫疾患の治療に有効である。また、ガングリオシドＧＭ３を有効成分とする場合は、各種免疫疾患の予防に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】試験例１の結果を示すグラフである。
【図２】試験例２の脾臓細胞における結果を示すグラフである。
【図３】試験例２の腸間膜リンパ節細胞における結果を示すグラフである。
【図４】試験例３の結果を示すグラフである。
【図５】試験例４の結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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