(57)【要約】      （修正有）【課題】  歯周病菌に対する高い抗菌効果を有し、歯周病の予防や治療をすることができる抗歯周病剤の提供、並びにかかる抗歯周病剤を適用した飲食物や口腔衛生剤の提供。【解決手段】  式〔１〕のω−アルケニルイソチオシアナート化合物、式〔２〕のω−アルキルチオアルキルイソチオシアナート化合物、及び式〔３〕のω−フェニルアルキルイソチオシアナート化合物からなる群より選ばれた１種又は２種以上のイソチオシアナート化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含む抗歯周病剤、当該抗歯周病剤を含有する飲食物、口腔衛生剤。    式〔１〕：ＣＨ2＝ＣＨ−(ＣＨ2)m−ＮＣＳ              （式中、ｍは１〜１０の整数を表す）    式〔２〕：Ｒ−Ｓ−(ＣＨ2)n−ＮＣＳ              （式中、ｎは１〜１０の整数を表し、Ｒは炭素数が１〜４の直鎖又は分岐のアルキル基を表す）    式〔３〕：Ｐｈ−(ＣＨ2)p−ＮＣＳ              （式中、Ｐｈはフェニル基を表し、ｐは１〜１０の整数を表す）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式〔１〕で表されるω−アルケニルイソチオシアナート化合物、下記式〔２〕で表されるω−アルキルチオアルキルイソチオシアナート化合物、及び下記式〔３〕で表されるω−フェニルアルキルイソチオシアナート化合物からなる群より選ばれた１種又は２種以上のイソチオシアナート化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含むことを特徴とする抗歯周病剤。
式〔１〕：ＣＨ2＝ＣＨ−(ＣＨ2)m−ＮＣＳ
（式中、ｍは１〜１０の整数を表す）
式〔２〕：Ｒ−Ｓ−(ＣＨ2)n−ＮＣＳ
（式中、ｎは１〜１０の整数を表し、Ｒは炭素数が１〜４の直鎖又は分岐のアルキル基を表す）
式〔３〕：Ｐｈ−(ＣＨ2)p−ＮＣＳ
（式中、Ｐｈはフェニル基を表し、ｐは１〜１０の整数を表す）
【請求項２】
アリルイソチオシアナート、３−ブテニルイソチオシアナート、４−ペンテニルイソチオシアナート、５−ヘキセニルイソチオシアナート、６−ヘプテニルイソチオシアナート、メチルチオメチルイソチオシアナート、エチルチオメチルイソチオシアナート、ｎ−プロピルチオメチルイソチオシアナート、イソプロピルチオメチルイソチオシアナート、ｎ−ブチルチオメチルイソチオシアナート、イソブチルチオメチルイソチオシアナート、sec−ブチルチオメチルイソチオシアナート、２−メチルチオエチルイソチオシアナート、２−エチルチオエチルイソチオシアナート、２−ｎ−プロピルチオエチルイソチオシアナート、３−メチルチオプロピルイソチオシアナート、４−メチルチオブチルイソチオシアナート、５−メチルチオペンチルイソチオシアナート、６−メチルチオヘキシルイソチオシアナート、７−メチルチオヘプチルイソチオシアナート、８−メチルチオオクチルイソチオシアナート、９−メチルチオノニルイソチオシアナート、ベンジルイソチオシアナート及びフェネチルイソチオシアナートからなる群より選ばれた１種又は２種以上の化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含むことを特徴とする抗歯周病剤。
【請求項３】
５−メチルチオペンチルイソチオシアナート、アリルイソチオシアナート及びベンジルイソチオシアナートからなる群より選ばれた１種又は２種以上の化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含むことを特徴とする抗歯周病剤。
【請求項４】
ミント精油またはミント精油成分が、ペパーミント精油、スペアミント精油中に含まれるメントール、メントン、カルボン、メンチルアセテート、１,８−シネオール、リモネン、β−カリオフィレンからなる群より選ばれる少なくとも１つまたは２つ以上の成分の混合物である請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗歯周病剤。
【請求項５】
イソチオシアナート化合物１００重量部に対して、ミント精油またはミント精油成分を０.０１〜１００００重量部配合してなる請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗歯周病剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗歯周病剤を含有することを特徴とする飲食物又は口腔衛生剤。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗歯周病剤を０.００１〜１質量％の濃度で含有することを特徴とする飲食物又は口腔衛生剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ω−アルケニルイソチオシアナート化合物、ω−アルキルチオアルキルイソチオシアナート化合物およびω−フェニルアルキルイソチオシアナート化合物からなる群より選ばれた１種又は２種以上のイソチオシアナート化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含む抗歯周病剤、および当該抗歯周病剤を含有する飲食物又は口腔衛生剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周病はポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）を代表とする嫌気性グラム陰性菌の感染により発症する。わが国における罹患率は年齢に伴い増加傾向である（浜田茂幸ら、「口腔微生物学・免疫」、医歯薬出版(株)  ｐ.２９１、２０００年）ことから、高齢化社会を迎えるわが国にとって深刻な疾患である。
その症状は初期では歯肉の腫れ、出血などの歯肉炎が生じ、さらには炎症が歯槽骨、歯根骨にまで波及し、歯の動揺、歯肉の減退、口臭、歯の着色などがあらわれる歯周炎へ進行し、ついには歯を喪失することとなる。
【０００３】
このような症状は感染した原因菌の菌体構造物および菌体成分などが歯周組織細胞を刺激し、炎症性サイトカインの産生を促し、産生されたサイトカインの多種多様な生物学的作用を介して歯肉の炎症や歯槽骨の吸収という病態を成立させるものと考えられている。さらに歯周病には様々な病型が含まれ、歯肉炎では慢性歯肉炎、思春期性歯肉炎、妊娠性歯肉炎および急性壊死性潰瘍性歯肉炎、歯周炎では成人性歯周炎、早期発症型歯周炎、急速進行性歯周炎および難治性歯周炎などがあり、特定の病型と特定の細菌との関連が提唱されている。
【０００４】
そのためポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis、以下「Ｐ.ｇ菌」と略する）が歯周病に関わる代表的な嫌気性グラム陰性菌であると言われているが、他にも病型により深い関連が示唆される細菌が存在し、それら細菌はＰ.ｇ菌と生態の異なるものであることから、Ｐ.ｇ菌を含め他の細菌についても網羅した包括的な治療法および予防法を考えなければなければならない。
【０００５】
Ｐ.ｇ菌の他に歯周病との関連が示唆されている細菌には、アクチノバシラス・アクチノミセテムコミタンス（Actinobacillus actinomycetemcomitans）、フソバクテリウム・ヌクレアタム亜種ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum subsp, nucleatum、以下「Ｆ.ｎ菌」と略する）、プレボテラ・ニグレセンス（Prevotella nigrescens、以下「Ｐ.ｎ菌」と略する）およびプレボテラ・インターメディア（Prevotella intermedia、以下「Ｐ.ｉ菌」と略する）などがあげられる。これら細菌のうちＦ.ｎ菌は再発頻度の高い難治性部位で検出され、慢性歯肉炎、成人性歯周炎においてもみられ、Ｐ.ｉ菌およびＰ.ｎ菌は思春期性および妊娠性歯肉炎、急性壊死性潰瘍性歯肉炎の病巣局所に圧倒的に多く、Ｐ.ｇ菌とともに成人性歯周病の活動部位でも高頻度で検出される（梅本俊夫ら、「図説口腔微生物学」、(株)学建書院  ｐ.３５４−３５７、１９８２年）などの特徴がある。このような細菌の増殖を抑制し、殺菌することは包括的な歯周病の予防や治療に有効であるといえる。
【０００６】
また、歯周病罹患者にはこれら歯周に関する病態だけでなく、脳梗塞や動脈硬化などが多いことが報告され（奥田克爾著、「デンタルプラーク細菌  第二版」、医歯薬出版(株)  ｐ.１６１−１６３、１９９３年）、近年では全身の疾患との関わりが注目されている。そのため、歯周病原因菌の増殖を抑制し、殺菌することは歯周病の予防や治療、さらには全身疾患につながる病因を減滅することに有効であるといえる。
【０００７】
歯周病の予防や改善に有効とされているのは合成抗菌剤であり、なかでも塩酸クロルヘキシジンなどの医薬品が多用されている。合成抗菌剤は微生物全般に対する活性が高いため、効果的に歯周病菌の増殖を抑制することができるが、口腔内の常在菌層のバランスを崩してしまう危険性がある。とりわけ繰り返しの使用や、長期間服用する場合は十分注意する必要があり、合成抗菌剤に代わる天然由来で安全性の高い抗歯周病剤が求められている。
【０００８】
こうした状況の下、植物の精油成分は多くの生理活性を有していることが近年の研究から明らかにされつつあり、精油成分の多くが抗菌効果を有していることに着目して、食品として摂取可能な植物中の成分に前記歯周病菌（Ｐ.ｇ菌、Ｆ.ｎ菌、Ｐ.ｎ菌およびＰ.ｉ菌）に対する抗菌性を示す物質を見出す試みがなされている（特許文献１〜３）。こうした植物成分は、人体に安全であるが、マイルドな抗菌作用である分、口腔で効果のある濃度域が高すぎる。そのため、効果的な量を保持しようとすると大量に投与する必要があり、添加後の食品や口腔衛生剤の香味や色に大きく影響してしまう問題があった。
【０００９】
また、香辛料のワサビに含まれるイソチオシアナート化合物がもたらす抗菌作用に着目し、同化合物を用いてストレプトコッカス・ミュータンスによる歯垢形成を抑制して間接的に歯周病を予防する方法（特許文献４）も提案されている。すなわち、特許文献４では、歯垢形成の抑制によって歯垢中に繁殖するグラム陰性菌の繁殖を防止でき、これにより歯周病の予防が可能であると記載されている。しかし、当該イソチオシアナート化合物の前記歯周病菌に対する抗菌効果については述べられていない。
イソチオシアナート化合物はワサビ香味に特徴的な成分であり、香りの閾値が低く、強いワサビ様の刺激を有しており、前記特許文献１〜３の植物由来の抗菌成分と同様に実用面で有効性を充分に期待できるものでもなかった。
【特許文献１】特許第２５８２７３６号公報
【特許文献２】特公平７−２５６７０号公報
【特許文献３】特開２００４−１８４７０公報
【特許文献４】特許第３７４９６０４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、従来技術における上記のような問題点を解決し、古くから食用に供されて安全性に問題がない植物中の成分に由来し、しかも独特の香辛料様の香味がなく、その一方で、歯周病原因菌に対する高い抗菌効果を有し、歯周病の予防や治療をすることができる抗歯周病剤を提供すること、並びにかかる抗歯周病剤を適用した飲食物や口腔衛生剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、ω−アルケニルイソチオシアナート化合物、ω−アルキルチオアルキルイソチオシアナートおよびω−フェニルアルキルイソチオシアナート化合物からなる群より選ばれる１種又は２種以上のイソチオシアナート化合物と、ミント精油またはミント精油成分との混合物を歯周病原因菌に暴露したときに、抗歯周病剤として使用可能な抗菌活性効果を持つことを見出し、長い食経験の裏付けも考え合わせ、安全で効果的に歯周病を予防もしくは治療する抗歯周病剤として応用できることを見出して本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、下記式〔１〕で表されるω−アルケニルイソチオシアナート化合物、下記式〔２〕で表されるω−アルキルチオアルキルイソチオシアナート化合物、及び下記式〔３〕で表されるω−フェニルアルキルイソチオシアナート化合物からなる群より選ばれた１種又は２種以上のイソチオシアナート化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含むことを特徴とする抗歯周病剤である。
式〔１〕：ＣＨ2＝ＣＨ−(ＣＨ2)m−ＮＣＳ
（式中、ｍは１〜１０の整数を表す）
式〔２〕：Ｒ−Ｓ−(ＣＨ2)n−ＮＣＳ
（式中、ｎは１〜１０の整数を表し、Ｒは炭素数が１〜４の直鎖又は分岐のアルキル基を表す）
式〔３〕：Ｐｈ−(ＣＨ2)p−ＮＣＳ
（式中、Ｐｈはフェニル基を表し、ｐは１〜１０の整数を表す）
【００１３】
また、本発明は、アリルイソチオシアナート、３−ブテニルイソチオシアナート、４−ペンテニルイソチオシアナート、５−ヘキセニルイソチオシアナート、６−ヘプテニルイソチオシアナート、メチルチオメチルイソチオシアナート、エチルチオメチルイソチオシアナート、ｎ−プロピルチオメチルイソチオシアナート、イソプロピルチオメチルイソチオシアナート、ｎ−ブチルチオメチルイソチオシアナート、イソブチルチオメチルイソチオシアナート、sec−ブチルチオメチルイソチオシアナート、２−メチルチオエチルイソチオシアナート、２−エチルチオエチルイソチオシアナート、２−ｎ−プロピルチオエチルイソチオシアナート、３−メチルチオプロピルイソチオシアナート、４−メチルチオブチルイソチオシアナート、５−メチルチオペンチルイソチオシアナート、６−メチルチオヘキシルイソチオシアナート、７−メチルチオヘプチルイソチオシアナート、８−メチルチオオクチルイソチオシアナート、９−メチルチオノニルイソチオシアナート、ベンジルイソチオシアナート及びフェネチルイソチオシアナートからなる群より選ばれた１種又は２種以上の化合物からなる抗歯周病剤であり、また、５−メチルチオペンチルイソチオシアナート、６−メチルチオヘキシルイソチオシアナート及びベンジルイソチオシアナートからなる群より選ばれた１種又は２種以上の化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含むことを特徴とする抗歯周病剤である。
【００１４】
また、本発明は、５−メチルチオペンチルイソチオシアナート、アリルイソチオシアナート及びベンジルイソチオシアナートからなる群より選ばれた１種又は２種以上の化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含むことを特徴とする抗歯周病剤である。
【００１５】
また、上記の抗歯周病剤において、ミント精油またはミント精油成分が、ペパーミント精油、スペアミント精油中に含まれるメントール、メントン、カルボン、メンチルアセテート、１,８−シネオール、リモネン、β−カリオフィレンからなる群より選ばれる少なくとも１つまたは２つ以上の成分の混合物であること；イソチオシアナート化合物１００重量部に対して、ミント精油またはミント精油成分を０.０１〜１００００重量部配合してなることをそれぞれ特徴とする。
さらに、本発明は、上記抗歯周病剤を含有する飲食物又は口腔衛生剤であり、また、上記抗歯周病剤を０.００１〜１質量％含有する飲食物又は口腔衛生剤である。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の抗歯周病剤は、前記各種の歯周病原因菌に対して、高濃度では殺菌作用を示し、また低濃度であっても歯周病原因菌の増殖を抑制し、歯周病原因菌の増殖に伴う歯肉の炎症や悪臭の発生を予防、改善することから抗歯周病剤として有効である。
また、本発明の抗歯周病剤の成分は、古くから食に供されているわさびの香味成分に含まれている天然物のイソチオシアナート化合物およびミント精油成分であるので安全性が高い。
さらに、イソチオシアナート化合物やミント精油またはミント精油成分は、それぞれ独特の香味を有するが、それらを組み合わせることにより顕著な抗菌効果がもたらされることから本発明の抗歯周病剤の有効濃度が低濃度でも十分であるため、最終製品に対してそれらの香味を大きく損なうことはない。従って、菓子類、ジュースのような飲食物あるいは歯磨き、口中洗浄剤のような口腔衛生剤に配合して使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明について詳細に説明する。
＜Ａ＞抗歯周病剤
本発明は、下記に詳述するイソチオシアナート化合物と、ミント精油またはミント精油成分とを含む抗歯周病剤である。
【００１８】
（１）イソチオシアナート化合物
本発明に使用するイソチオシアナート化合物は、ω−アルケニルイソチオシアナート化合物、ω−アルキルチオアルキルイソチオシアナート化合物、及びω−フェニルアルキルイソチオシアナート化合物からなる群より選ばれた１種又は２種以上のイソチオシアナート化合物である。
【００１９】
（ａ）ω−アルケニルイソチオシアナート化合物は、下記式〔１〕で表される。
式〔１〕：ＣＨ2＝ＣＨ−(ＣＨ2)m−ＮＣＳ
上記式中、ｍは１〜１０の整数を表すが、２〜８が好ましく、２〜４が特に好ましい。
式〔１〕の構造を有する化合物の具体例としては、アリルイソチオシアナート、３−ブテニルイソチオシアナート、４−ペンテニルイソチオシアナート、５−ヘキセニルイソチオシアナート、６−ヘプテニルイソチオシアナートなどが挙げられる。これらの中でも、刺激臭が比較的弱く、残香性が比較的低いといった点から５−ヘキセニルイソチオシアナートが好ましい。
【００２０】
式〔１〕において、ｍが５以下である化合物は、ワサビやホースラディッシュなどの香気成分の中に含まれていることが知られているが、それらの量は極めて微量であるので工業的に得るには合成によるのが適切である。
当該化合物の合成方法は、例えば特開平２−２２１２５５号公報に開示されているが、その概略は、不活性溶媒中、
ＣＨ2＝ＣＨ−(ＣＨ2)m−Ｘ  
（式中、ｍは前述したものと同一の意味を有し、Ｘは臭素、塩素、ヨウ素のようなハロゲン原子を表す）
の構造を有するω−アルケニルハライドをチオシアン酸塩と反応させ、得られたω−アルケニルチオシアナートを極性非プロトン性溶媒中で異性化することにより得られる。
【００２１】
（ｂ）ω−アルキルチオアルキルイソチオシアナート化合物は、下記式〔２〕で表される。
式〔２〕：Ｒ−Ｓ−(ＣＨ2)n−ＮＣＳ
上記式中、ｎは１〜１０の整数を表すが、３〜８が好ましく、４〜７が特に好ましい。また、Ｒは炭素数が１〜４の直鎖又は分岐アルキル基を表すが、好ましい例として、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチルなどが挙げられ、香味にくせがなく、残香性が比較的低いといった点からメチル基が好ましい。
【００２２】
式〔２〕の構造を有する化合物の例としては、メチルチオメチルイソチオシアナート、エチルチオメチルイソチオシアナート、ｎ−プロピルチオメチルイソチオシアナート、イソプロピルチオメチルイソチオシアナート、ｎ−ブチルチオメチルイソチオシアナート、イソブチルチオメチルイソチオシアナート、sec−ブチルチオメチルイソチオシアナート、２−メチルチオエチルイソチオシアナート、２−エチルチオエチルイソチオシアナート、２−ｎ−プロピルチオエチルイソチオシアナート、３−メチルチオプロピルイソチオシアナート、４−メチルチオブチルイソチオシアナート、５−メチルチオペンチルイソチオシアナート、６−メチルチオヘキシルイソチオシアナート、７−メチルチオヘプチルイソチオシアナート、８−メチルチオオクチルイソチオシアナート、９−メチルチオノニルイソチオシアナートなどが挙げられる。
これらの中でも、香味にくせがなく、残香性が比較的低いといった点から６−メチルチオヘキシルイソチオシアナート、５−メチルチオペンチルイソチオシアナートが好ましい。
【００２３】
式〔２〕において、ｎが８以下である化合物は、ワサビやホースラディッシュなどの香気成分の中に含まれていることが知られているが、それらの量は極めて微量であるので工業的に得るには合成によるのが適切である。
当該化合物の合成方法は、例えば特開平７−２１５９３１号公報に開示されているが、その概略は、不活性溶媒中、
ＣＨ2＝ＣＨ−(ＣＨ2)n-2−ＮＣＳ  
（式中、ｎは３〜１０の整数を表す）
の構造を有するω−アルケニルイソチオシアナートを、  
Ｒ−ＳＨ  
（式中、Ｒは前述したものと同一の意味を有する）
を有するアルキルメルカプタンと反応させることにより得られる。
【００２４】
（ｃ）ω−フェニルアルキルイソチオシアナート化合物は、下記式〔３〕で表される。
式〔３〕：Ｐｈ−(ＣＨ2)p−ＮＣＳ  
（Ｐｈはフェニル基である）
上記式中、ｐは１〜１０の整数を表すが、好ましくは１〜８、特に１または２が好ましい。
式〔３〕の構造を有する化合物の例としては、ベンジルイソチオシアナート、フェネチルイソチオシアナートなどが挙げられるが、刺激臭が比較的弱く、残香性が比較的低いといった点からベンジルイソチオシアナートが好ましい。
式〔３〕において、ｐが２以下である化合物は、ワサビやホースラディッシュなどの香気成分の中に含まれていることが知られているが、それらの量は極めて微量であるので工業的に得るには合成によるのが適切である。
【００２５】
当該化合物の合成方法は、例えば特開平２−２２１２５５号公報に開示されているが、その概略は、不活性溶媒中、
Ｐｈ−(ＣＨ2)p−Ｘ  
（式中、ｐは前述したものと同一の意味を有し、Ｘは臭素、塩素、ヨウ素のようなハロゲン原子を示す）
を有するω−フェニルアルキルハライドをチオシアン酸塩と反応させ、得られたω−フェニルアルキルチオシアナートを極性非プロトン溶媒中で異性化することにより得られる。
【００２６】
（２）ミント精油またはミント精油成分
本発明に使用するミント精油またはミント精油成分は、ペパーミント精油、スペアミント精油中に含まれるメントール、メントン、カルボン、メンチルアセテート、１,８−シネオール、リモネン、β−カリオフィレンからなる群より選ばれる少なくとも１つまたは２つ以上の成分の混合物である。
【００２７】
本発明の抗歯周病剤においてはイソチオシアナート化合物１００重量部に対して、ミント精油またはミント精油成分を０.０１〜１００００重量部配合することが両成分の相乗効果を得るために好ましい。
【００２８】
（３）その他の成分
抗歯周病剤には、本発明の効果を損なわない範囲で、保存料、安定剤、賦形剤、添加剤、色素、香料、酸化防止剤、エタノール、湿潤剤、界面活性剤、研磨剤等を適宜配合することができる。
【００２９】
＜Ｂ＞抗歯周病剤を含有する飲食物、口腔衛生剤
本発明の抗歯周病剤は、飲食物又は口腔衛生剤に添加して適用することができる。添加する口腔衛生剤の剤型は液剤、固形剤、半固形剤のいずれであっても良く、歯磨き剤、トローチ剤、液状又は粉末状うがい薬、塗布液、チューインガムなどに適用可能である。
また、本発明の抗歯周病剤組成物を配合する飲食物としてはジュースなどの清涼飲料、キャンデー、チューインガムなどの菓子類が適当である。
【００３０】
本発明の抗歯周病剤は、上記最終製品に対し、好ましくは０.００１〜２質量％の濃度で、特に好ましくは０.００２〜０.１質量％程度の濃度になるように添加して使用される。添加量が下限質量未満では歯周病抑制効果が発揮されず、一方、添加量が上限質量を超えると、わさび様やミント刺激臭が強く感じられるため、抗歯周病剤として飲食物や口腔衛生剤等に配合するには適さないこともある。
【実施例】
【００３１】
次に、実施例を示して本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
＜Ａ＞抗歯周病剤の調製例
抗歯周病剤を構成するイソチオシアナート化合物を、下記参考例１〜４のとおり合成した。
【００３２】
〔参考例１〕５−ヘキセニルイソチオシアナートの合成
臭化５−ヘキセニル３５ｇを１,３−ジメチル−２−イミダゾリジノン４０ｇに溶解し、チオシアン酸カリウム２４ｇと炭酸カルシウム５.５ｇを加え、混合液を７５℃で１時間加熱攪拌した。
次いで、内温１５５℃まで加温上昇させて６時間、加熱攪拌した。不溶物を除去後、塩化メチレンで抽出し、粗油を得た。粗油を減圧蒸留し、５−ヘキセニルイソチオシアナート９.４ｇを得た。収率３１％、沸点７４℃／３.５ｍｍＨｇであった。
【００３３】
〔参考例２〕５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの合成
４−ペンテニルイソチオシアナート３８ｇおよびメチルメルカプタンのメタノール溶液（３０％）１４４ｇの混合物にアゾビスイソブチロニトリル０.９ｇを加え、室温で９時間攪拌した。酢酸エチルを加え、水洗後、蒸留し５−メチルチオペンチルイソチオシアナート３３ｇが得られた。収率６３％、沸点１０１〜１０３℃／１ｍｍＨｇであった。
【００３４】
〔参考例３〕６−メチルチオヘキシルイソチオシアナートの合成
５−ヘキセニルイソチオシアナート２８ｇおよびメチルメルカプタンのメタノール溶液（３０％）５０ｇの混合物にｔ−ブチルヒドロペルオキシド（ＴＢＨＰ）０.４ｇを加え、室温で２時間攪拌した。酢酸エチルを加え、水洗後、蒸留し６−メチルチオヘキシルイソチオシアナート３２ｇが得られた。収率８２％、沸点１１９℃／０.５ｍｍＨｇであった。
【００３５】
〔参考例４〕ベンジルイソチオシアナートの合成
臭化ベンジル１７ｇを１,３−ジメチル−２−イミダゾリジノン４０ｇに溶解し、チオシアン酸カリウム１０ｇと炭酸カルシウム３.５ｇを加え、混合液を７５℃で１時間加熱攪拌した。次いで、内温１５５℃まで加温上昇させて６時間加熱攪拌した。不溶物を除去後、塩化メチレンで抽出し、粗油を得た。粗油を減圧蒸留し、ベンジルイソチオシアナート９.６ｇを得た。収率６５％、沸点１１０℃／１０ｍｍＨｇ。
【００３６】
上記イソチオシアネートに混合するミント精油成分はペパーミント精油およびスペアミント精油から分離精製されるものであって、メントール、メントン、カルボン、メンチルアセテート、１,８−シネオール、リモネン、β−カリオフィレンなどがある。これらは一般に市販されているものを用いることもできる。
【００３７】
〔試験例１〕
次に、参考例１〜４で合成した各種イソチオシアナート化合物およびアリルイソチオシアナート（シグマ・アルドリッチジャパン(株)製）、５−メチルチオペンチルイソチオシナート（小川香料(株)製）、ベンジルイソチオシアナート（シグマ・アルドリッチジャパン(株)製）およびミント精油成分であるメントール、メントン、カルボン、メンチルアセテート、１,８−シネオール、リモネン、β−カリオフィレンを用いて、本発明の抗歯周病剤が、歯周病原因菌に対して強い増殖抑制作用を持つことを、(１)薬剤の併用効果の評価に用いられるアイソボログラム（isobologram）と、(２)暴露時間における菌数の変化を測定、および(３)２剤の併用効果を評価するＦＩＣインデックスを算出することで確認した。
【００３８】
評価に用いた菌株は、予め凍結保存してあるＡＴＣＣ（American Type Culture Collection）から分譲された代表的な歯周病原因菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis）ＡＴＣＣ３３２７７株（Ｐ.ｇ菌）およびＪＣＭ（Japan Correction of Microorganisms）から分譲されたフソバクテリウム・ヌクレアタム亜種ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum subsp,nucleatum）ＪＣＭ８５３２株（Ｆ.ｎ菌）、プレボテラ・ニグレセンス（Prevotella nigrescens）ＪＣＭ６３２２株（Ｐ.ｎ菌）、プレボテラ・インターメディア（Prevotella intermedia）ＪＣＭ１２２４８株（Ｐ.ｉ菌）である。
これらの菌株を変法ＧＡＭ液体培地５ｍｌに植菌し、３７℃でＰ.ｇ菌およびＦ.ｎ菌は４４時間、Ｐ.ｉ菌およびＰ.ｎ菌は２４時間前培養した。次いで、これらを新しい変法ＧＡＭ液体培地に植え、最終生菌数が１.０×１０8ＣＦＵ／ｍｌとなるように調整した。
【００３９】
（１）アイソボログラム（isobologram）による評価
調整菌液とＤＭＦに溶解させたサンプルを用いて、マイクロプレートチェッカーボード法による抗菌活性の測定を行った。すなわち、９６穴マイクロプレート中の変法ＧＡＭ液体培地に１.０×１０8ＣＦＵ／ｍｌになるように前培養菌液を添加し、縦一列に所定の濃度に調整したイソチオシアナート化合物を加えよく混合した。
一方で横一列に所定の濃度に調整したミント精油成分をよく混合した。縦一列の始発レーンから以降のレーン（右隣り）に段階的に混合しながら移すことで２倍希釈系列を作成した。ついで横一列の始発レーンから以降のレーン（下隣り）に段階的に混合しながら移すことで２倍希釈系列を作成した。
この操作により横方向にイソチオシアナート化合物の希釈系列が、縦方向にミント精油成分の希釈系列およびその混合の希釈系列ができた。隣り合うウェルどうしのクロスコンタミネーションを防ぐため、シリコンプレートシールを使い密閉し、３７℃でＰ.ｇ菌は４４時間、Ｐ.ｉ菌は２４時間培養した。培養および各操作は全て嫌気グローブボックス内で行った。
【００４０】
試料を添加しないコントロールとして溶媒であるＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、陽性指標として塩酸クロルヘキシジンを用いてコンタミネ−ション等の確認を試験毎に行った。
菌の生育の有無の判定は各ウェルの６５５ｎｍにおける吸収を測定し、０.０５ａｂｓ
以下であるものを生育阻害効果ありとした。生育阻害効果の見られた各濃度の交差点をプロットして作成されるグラフであるアイソボログラム（isobologram）から、併用効果が相乗、相加、拮抗のいずれにあたるかを判定した。ＭＩＣ（Minimum Inhibitory Concentration、最小発育阻止濃度）どうしを結ぶ線より内側が相乗、誤差範囲内であれば相加、外側であれば拮抗作用を示す。
各イソチオシアナート化合物とミント精油成分の併用効果を図１〜６のアイソボログラム（isobologram）で示した。
【００４１】
（２）菌数変化の測定
調整した菌液のうち４.９ｍｌを滅菌した試験管に分注し、所定の濃度に調整した各サンプル（対照としてＤＭＦ、イソチオシアナート類およびミント精油成分）を５０μｌずつ添加した。濃度調整おいて溶媒であるＤＭＦの影響が菌体に及ばないよう、ＤＭＦの最終濃度を０.２５％以下になるようにした。各サンプルを添加後よく混合し、０分、３分後、６分後に試験管から取り出した菌液を予備還元済みの変法ＧＡＭ寒天平板に塗末した。菌液は必要に応じて希釈をし、寒天平板に塗末した。塗末した平板を嫌気培養し、生じたコロニー数をカウントして被検菌液の菌数を算出した。植菌から培養までの全ての操作は嫌気的に行った。
各イソチオシアナート化合物とミント精油成分の併用効果は図７〜１０の菌数変化プロットで表した。
【００４２】
（３）ＦＩＣインデックスによる評価
Ｐ.ｇ菌を用いて、本発明の２剤配合の併用効果の指標としてＦＩＣ（Fractional Inhibitory Concentration）インデックスという概念を用いた（化学療法ハンドブック改訂第３版、上田  泰、清水喜八郎  編、永井書店、ｐ.９７、１９８６年）。ＦＩＣインデックス値が低いほど相乗効果が高いとされる。
サンプルＡおよびサンプルＢの併用における系ではＦＩＣインデックスは以下の式で表される。
ＡのＦＩＣインデックス ＝ 併用時のＡのＭＩＣ／単独使用時のＡのＭＩＣ
ＢのＦＩＣインデックス ＝ 併用時のＢのＭＩＣ／単独使用時のＢのＭＩＣ
本発明における実験では試験数を３回設け、その誤差範囲を含めた値が１未満であれば相乗作用、１ならば相加作用、１を超えれば拮抗作用とした。
【００４３】
イソチオシアナート化合物のうちアリルイソチオシアナート、５−メチルチオペンチルイソチオシアナートおよびベンジルイソチオシアナートと、ミント精油成分とを併用したもののＰ.ｇ菌に対するＦＩＣインデックスを表１に示す。表１の結果より、各イソチオシアナート化合物とミント精油成分との混合物においてＰ.ｇ菌に対する単純和以上の抗菌効果が見られた。
【００４４】
【表１】
2007308378.tif 000002
【００４５】
＜Ｂ＞抗歯周病剤の適用例
〔実施例１〕
下記の処方により５−メチルチオペンチルイソチオシアナートおよびｌ−リモネンを配合した歯磨き１を得た。
【００４６】
【表２】
2007308378.tif 000003
【００４７】
〔実施例２〕
実施例１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりにアリルイソチオシアナートを配合して歯磨き２を得た。
【００４８】
〔実施例３〕
実施例１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりに６−メチルチオヘキシルイソチオシアナートを配合して配合して歯磨き３を得た。
【００４９】
〔実施例４〕
実施例１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりにベンジルイソチオシアナートを配合して歯磨き４を得た。
【００５０】
〔試験例２〕
実施例１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりに水を配合して作成した歯磨きの香味をコントロールとして、歯磨き１〜４の香味風味評価を専門パネル１０人で行った。結果は下記の表３のとおりである。
【００５１】
〔実施例５〕
実施例１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メントールを配合して歯磨き５を得た。
【００５２】
〔実施例６〕
実施例１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メントンを配合して配合して歯磨き６を得た。
【００５３】
〔実施例７〕
実施例１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−１,８−シネオールを配合して歯磨き７を得た。
【００５４】
〔実施例８〕
実施例１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−カルボンを配合して歯磨き８を得た。
【００５５】
〔実施例９〕
実施例１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メンチルアセテートを配合して歯磨き９を得た。
【００５６】
〔実施例１０〕
実施例１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−β−カリオフィレンを配合して歯磨き１０を得た。
【００５７】
〔試験例３〕
実施例１の処方中のｌ−リモネンの代わりに水を配合して作成した歯磨きの香味をコントロールとして、歯磨き５〜１０の香味風味評価を専門パネル１０人で行った。結果は下記の表３のとおりである。
【００５８】
【表３】
2007308378.tif 000004
【００５９】
〔実施例１１〕
下記の表４の処方により本発明の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンを配合したチューインガム１を得た。
【００６０】
【表４】
2007308378.tif 000005
【００６１】
〔実施例１２〕
実施例１１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりにアリルイソチオシアナートを配合してチューインガム２を得た。
【００６２】
〔実施例１３〕
実施例１１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりに６−メチルチオヘキシルイソチオシアナートを配合して配合してチューインガム３を得た。
【００６３】
〔実施例１４〕
実施例１１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりにベンジルイソチオシアナートを配合してチューインガム４を得た。
【００６４】
〔試験例４〕
実施例１１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりに水を配合して作成したチューインガムの香味をコントロールとして、チューインガム１〜４の香味風味評価を専門パネル１０人で行った。結果を下記の表５に示す。
【００６５】
〔実施例１５〕
実施例１１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メントールを配合してチューインガム５を得た。
【００６６】
〔実施例１６〕
実施例１１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メントンを配合して配合してチューインガム６を得た。
【００６７】
〔実施例１７〕
実施例１１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−１,８−シネオールを配合してチューインガム７を得た。
【００６８】
〔実施例１８〕
実施例１１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−カルボンを配合してチューインガム８を得た。
【００６９】
〔実施例１９〕
実施例１１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メンチルアセテートを配合してチューインガム９を得た。
【００７０】
〔実施例２０〕
実施例１１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−β−カリオフィレンを配合してチューインガム１０を得た。
【００７１】
〔試験例５〕
実施例１１の処方中のｌ−リモネンの代わりに水を配合して作成したチューインガムの香味をコントロールとして、チューインガム５〜１０の香味風味評価を専門パネル１０人で行った。結果を下記の表５に示す。
【００７２】
【表５】
2007308378.tif 000006
【００７３】
〔実施例２１〕
下記の表６の処方により本発明の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンを配合した口中洗浄剤１を得た。
【００７４】
【表６】
2007308378.tif 000007
【００７５】
〔実施例２２〕
実施例２１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりにアリルイソチオシアナートを配合して口中洗浄剤２を得た。
【００７６】
〔実施例２３〕
実施例２１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりに６−メチルチオヘキシルイソチオシアナートを配合して配合して口中洗浄剤３を得た。
【００７７】
〔実施例２４〕
実施例２１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりにベンジルイソチオシアナートを配合して口中洗浄剤４を得た。
【００７８】
〔試験例６〕
実施例２１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりに水を配合して作成した口中洗浄剤の香味をコントロールとして、口中洗浄剤１〜４の香味風味評価を専門パネル１０人で行った。結果を下記の表７に示す。
【００７９】
〔実施例２５〕
実施例２１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メントールを配合して口中洗浄剤５を得た。
【００８０】
〔実施例２６〕
実施例２１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メントンを配合して配合して口中洗浄剤６を得た。
【００８１】
〔実施例２７〕
実施例２１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−１,８−シネオールを配合して口中洗浄剤７を得た。
【００８２】
〔実施例２８〕
実施例２１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−カルボンを配合して口中洗浄剤８を得た。
【００８３】
〔実施例２９〕
実施例２１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メンチルアセテートを配合して口中洗浄剤９を得た。
【００８４】
〔実施例３０〕
実施例２１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−β−カリオフィレンを配合して口中洗浄剤１０を得た。
【００８５】
〔試験例７〕
実施例２１の処方中のｌ−リモネンの代わりに水を配合して作成した歯磨きの香味をコントロールとして、口中洗浄剤５〜１０の香味風味評価を専門パネル１０人で行った。結果を下記の表７に示す。
【００８６】
【表７】
2007308378.tif 000008
【００８７】
〔実施例３１〕
ハードキャンデー
下記の表８の処方により本発明の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンを配合したハードキャンデー１を得た。
【００８８】
【表８】
2007308378.tif 000009
【００８９】
〔実施例３２〕
実施例３１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりにアリルイソチオシアナートを配合してハードキャンデー２を得た。
【００９０】
〔実施例３３〕
実施例３１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりに６−メチルチオヘキシルイソチオシアナートを配合して配合してハードキャンデー３を得た。
【００９１】
〔実施例３４〕
実施例３１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりにベンジルイソチオシアナートを配合してハードキャンデー４を得た。
【００９２】
〔試験例８〕
実施例３１の処方中の５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの代わりに水を配合して作成したハードキャンデーの香味をコントロールとして、ハードキャンデー１〜４の香味風味評価を専門パネル１０人で行った。結果を下記の表９に示す。
【００９３】
〔実施例３５〕
実施例３１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メントールを配合してハードキャンデー５を得た。
【００９４】
〔実施例３６〕
実施例３１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メントンを配合して配合してハードキャンデー６を得た。
【００９５】
〔実施例３７〕
実施例３１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−１,８−シネオールを配合してハードキャンデー７を得た。
【００９６】
〔実施例３８〕
実施例３１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−カルボンを配合してハードキャンデー８を得た。
【００９７】
〔実施例３９〕
実施例３１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−メンチルアセテートを配合してハードキャンデー９を得た。
【００９８】
〔実施例４０〕
実施例３１の処方中のｌ−リモネンの代わりにｌ−β−カリオフィレンを配合してハードキャンデー１０を得た。
【００９９】
〔試験例９〕
実施例３１の処方中のｌ−リモネンの代わりに水を配合して作成したハードキャンデーの香味をコントロールとして、ハードキャンデー５〜１０の香味風味評価を専門パネル１０人で行った。
前記試験例８と試験例９の結果を表９に示す。
【０１００】
【表９】
2007308378.tif 000010
【０１０１】
以上の結果より、本発明の抗歯周病剤を用いた時、イソシアナート化合物やミント精油成分の風味は感じるものの、食品として違和感のない風味であると共に、製品への添加量も少量で十分効果があるため、製品の香味風味を大きく損なわないことが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０１０２】
本発明の抗歯周病剤は、代表的な歯周病原因菌群による口腔疾患を抑制するため、歯周病の予防剤として有効である。本発明の抗歯周病剤は、わさび香味成分に含まれている天然物であるイソチオシアナート化合物およびミント精油成分であるため安全性が高く、添加量が低いにもかかわらず抗歯周病効果が大きく、最終製品に対してそれらの味が大きく影響することはない。
従って、菓子類、ジュースのような飲食物あるいは歯磨き、口中洗浄剤のような口腔衛生剤に配合して使用するのに適している。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】アリルイソチオシアナートとｌ−リモネンをＰ.ｇ菌に添加したときの結果を示したアイソボログラムである。
【図２】５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンをＰ.ｇ菌に添加したときの結果を示したアイソボログラムである。
【図３】ベンジルイソチオシアナートとｌ−リモネンをＰ.ｇ菌に添加したときの結果を示したアイソボログラムである。
【図４】５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−メントールをＰ.ｉ菌に添加したときの結果を示したアイソボログラムである。
【図５】５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンをＰ.ｉ菌に添加したときの結果を示したアイソボログラムである。
【図６】５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−カルボンをＰ.ｉ菌に添加したときの結果を示したアイソボログラムである。
【図７】５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンをＰ.ｇ菌に添加後、菌数の経時変化を測定した結果を表したグラフである。  なお、５−メチルチオペンチルイソチオシアネートの添加量はＭＩＣと同じ６５ｐｐｍ、ｌ−リモネンの添加量はＭＩＣと同じ３５０ｐｐｍである。
【図８】５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンをＰ.ｎ菌に添加後、菌数の経時変化を測定した結果を表したグラフである。  なお、５−メチルチオペンチルイソチオシアネートの添加量はＭＩＣと同じ５０ｐｐｍ、ｌ−リモネンの添加量はＰ.ｇ菌でのＭＩＣと同じ３５０ｐｐｍである。（ｌ−リモネンのＰ.ｎ菌に対するＭＩＣは約１００００ｐｐｍと高かったため、Ｐ.ｇ菌でのＭＩＣを用いた。）
【図９】５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンをＰ.i菌に添加後、菌数の経時変化を測定した結果を表したグラフである。  なお、５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの添加量はＭＩＣと同じ５０ｐｐｍ、ｌ−リモネンの添加量はＰ.ｇ菌でのＭＩＣと同じ３５０ｐｐｍである。（ｌ−リモネンはＰ.i菌に対し活性を示さなかったため、Ｐ.ｇ菌でのＭＩＣを用いた。）
【図１０】５−メチルチオペンチルイソチオシアナートとｌ−リモネンをＦ.ｎ菌に添加後、菌数の経時変化を測定した結果を表したグラフである。  なお、５−メチルチオペンチルイソチオシアナートの添加量はＭＩＣと同じ２２０ｐｐｍ、ｌ−リモネンの添加量はＰ.ｇ菌でのＭＩＣと同じ３５０ｐｐｍである。（ｌ−リモネンはＦ.ｎ菌に対し活性を示さなかったため、Ｐ.ｇ菌でのＭＩＣを用いた。）
【図１】
2007308378.tif 000011
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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