(57)【要約】【課題】乳酸菌単体を用いる場合に比べて高い免疫調整作用を有する発酵物、その製造法及びその食品及び飲料等としての利用を提供する。【解決手段】アスパラガスから得られる組成物、好ましくは、アスパラガスを粉砕しろ過したろ液を含有する培地に、乳酸菌、好ましくは、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）  ＵＡＳ−４株（ＦＥＲＭ−Ｐ２０７１０）を接種し、培養して得られる発酵物からなることを特徴とする免疫調整作用、具体的には抗アレルギー作用又は抗腫瘍作用を有する組成物。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アスパラガスから得られる組成物を含有する培地に、乳酸菌を接種し、培養して得られる発酵物からなることを特徴とする免疫調整作用を有する組成物。
【請求項２】
乳酸菌が、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌である請求項１記載の免疫調整作用を有する組成物。
【請求項３】
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌が、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）  ＵＡＳ−４株（ＦＥＲＭ−Ｐ２０７１０）である請求項２記載の免疫調整作用を有する組成物。
【請求項４】
免疫調整作用が、抗アレルギー作用又は抗腫瘍作用である請求項１〜３のいずれかに記載の免疫調整作用を有する組成物。
【請求項５】
アスパラガスから得られる組成物を含有する培地に、乳酸菌を接種し、培養して得られる発酵物から免疫調整作用を有する組成物を得ることを特徴とする免疫調整作用を有する組成物の製造方法。
【請求項６】
請求項１〜４記載のいずれかに記載した免疫調整作用を有する組成物を含有することを特徴とする免疫調整剤。
【請求項７】
請求項１〜４記載のいずれかに記載した免疫調整作用を有する組成物を含有することを特徴とする免疫調整作用を有する飲食品。
【請求項８】
請求項１〜４記載のいずれかに記載した免疫調整作用を有する組成物を含有することを特徴とする免疫調整作用を有する飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸菌単体を用いる場合に比べて高い免疫調整作用を有する組成物及びその製造方法並びに該組成物を含有する免疫調整剤、飲食品及び飼料に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
乳酸菌は有益な免疫調整作用を有することが知られている。このような有益な生理活性を有する乳酸菌の多くは醗酵乳製品や腸管から分離された乳酸菌であるが、近年、植物性乳酸菌においても免疫調整作用を有する菌株が見出されており、例えば漬物から単離されたラクトバチルス・ブレビスLabre株が挙げられる（非特許文献１参照）。
【０００３】
乳酸菌の免疫調整作用としては、抗腫瘍作用や抗アレルギー作用が見出されている。いくつかの食品成分は免疫細胞からのインターフェロン−ガンマ（以下、ＩＦＮ−γという。）誘導能やインターロイキン−１２（以下、ＩＬ−１２という。）誘導能を有している。ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２の誘導によりＮＫ細胞などを含む細胞性免疫が活性化され、ガンの発生に対する抵抗力が増すことが明らかとなっている（特許文献１参照）。
【０００４】
一方、積極的なＩＦＮ−γ産生誘導がアレルギーの原因となるＩｇＥの産生を抑制することもすでに明らかになっている（特許文献２参照）。したがって、強力なＩＦＮ−γ誘導能をもつ食品成分は、抗腫瘍作用および抗アレルギー作用を有しているといえる。
【非特許文献１】岸惇子、小久保あおい、赤谷薫、扇谷えり子、藤田晢也、岸田綱太郎：有用乳酸菌選定のためのスクリーニング１）ヒト末梢血における植物性乳酸菌のin vitro免疫賦活効果、Pasken Journal 15. 21-26, 2002
【特許文献１】特開２００２−８０３６４号公報
【特許文献２】特開２００５−１３９１６０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
これまで利用されてきた免疫調整作用をもつ乳酸菌の中には、通常、積極的に経口摂取しないような腸管内から単離された菌株もあり、安全性に不安が残っていた。一方、免疫調整作用をもつ食品由来の乳酸菌も利用されているが、活性成分は乳酸菌体に限られ、その効果は十分とは言えなかった。一部の漬物やヨーグルトなど乳酸菌により醗酵された食品は一般に市販されているが、免疫調整作用については不明な点が多く、例えばサプリメントのような形態で手軽に摂取することも出来ない。
【０００６】
本発明は、免疫調整作用が高く、かつ安全性が高い免疫調整作用を有する組成物およびその組成物を短時間に容易に製造することができる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意検討した結果、食品から分離した乳酸菌を用いて特定の野菜抽出物を含有する培地で培養することにより、乳酸菌単体に比べて相乗的に高い免疫調整作用を有する組成物が生産できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００８】
すなわち、本発明の第一は、アスパラガスから得られる組成物を含有する培地に、乳酸菌を接種し、培養して得られる発酵物からなることを特徴とする免疫調整作用を有する組成物を要旨とするものであり、好ましくは、乳酸菌が、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌である前記の免疫調整作用を有する組成物であり、さらに好ましくは、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する乳酸菌が、ラクトバチルス  ブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）  ＵＡＳ−４株（ＦＥＲＭ−Ｐ２０７１０）である前記の免疫調整作用を有する組成物であり、また好ましくは、免疫調整作用が、抗アレルギー作用又は抗腫瘍作用である前記の免疫調整作用を有する組成物である。
【０００９】
本発明の第二は、アスパラガスから得られる組成物を含有する培地に、乳酸菌を接種し、培養して得られる発酵物から免疫調整作用を有する組成物を得ることを特徴とする免疫調整作用を有する組成物の製造方法を要旨とするものである。
【００１０】
本発明の第三は、本発明の第一の免疫調整作用を有する組成物を含有することを特徴とする免疫調整剤、飲食品又は飼料を要旨とするものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、本発明の免疫調整作用を有する組成物を経口摂取することにより、免疫細胞からのＩＦＮ−γ誘導能が高まり、ＮＫ細胞を活性化することにより抗腫瘍作用を発揮することができる。また、ＩＦＮ−γはＴｈ１細胞を活性化し、Ｔｈ２細胞を不活性化することでＩｇＥの産生を抑制し、結果としてＩｇＥの関与するアレルギー症状を緩和することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。まず、本発明の第一及び第二について説明する。
【００１３】
本発明におけるアスパラガスから得られる組成物とは、アスパラガスを粉砕、破砕、磨砕、細断、抽出、圧搾、濃縮、固液分離、加熱滅菌、濾過滅菌、酵素処理、乾燥等公知の技術を単独或いは２つ以上組み合せて処理することで得られるものである。
【００１４】
本発明で用いられるアスパラガスは、本発明の効果を損なうものでない限りいかなるものでもよい。アスパラガスには日光に当てて栽培するグリーンアスパラガス、土などで遮光しながら栽培するホワイトアスパラガス、細く短いうちに刈り取りを行うミニアスパラガスなどがあるが、これらの中ではコストが安く、アミノ酸などの栄養成分に富むグリーンアスパラガスが好ましい。産地は特に限定されず、国産でも海外からの輸入品でもよい。使用する部位も特に限定されず、茎部分でも先端部分でもよいが、茎部分を用いることが好ましい。中でも、商品となるアスパラガスの長さを揃える時にカットされた最下位は、安価で入手できることから最も好ましい。
【００１５】
粉砕、破砕、磨砕、細断とは物理的に植物体を粉々に砕く方法であり、粉砕、破砕は衝撃により、磨砕は摩擦により、細断は切断によって砕く。粉砕、破砕、磨砕、細断はハンマーや乳鉢、包丁、カッターナイフ、ハサミなどを用いて手作業で行っても良いが、大量の植物体を短時間で処理しようとする場合には装置を使用する。そのような装置としては、例えば、ミル、ハンマー式粉砕機、石臼式粉砕機、ミキサー、ブレンダー、超音波破砕機などが挙げられ、また野菜用の細断機を用いてもよい。粉砕、破砕、磨砕、細断された植物体の大きさは特に限定されないが、２ｃｍ以下が好ましく、５ｍｍ以下がより好ましい。
【００１６】
抽出とは、溶媒を加え植物体の成分をそこに移行せしめる操作である。加える溶媒としては水が最も好ましいが、有機溶媒を併用してもよい。有機溶媒は、抽出時に水と併用してもよいし、抽出は有機溶媒単独で行い、その後水と混合してもよい。また、抽出は有機溶媒単独で行い、その後濃縮乾固等の操作により有機溶媒を除去した後、水を加えてもよい。有機溶媒の種類は特に限定されないが、食品に使用可能な点でエタノールが好ましい。抽出する際の溶媒の温度は、水の場合は０℃〜１００℃が好ましく、１０℃〜８０℃がより好ましく、また、有機溶媒の場合は−２０℃〜２００℃が好ましく、０℃〜１２０℃がより好ましい。
【００１７】
圧搾とは、植物体に物理的な圧力をかけて液を搾り出し、成分を搾汁に移行せしめる方法である。圧力は一方向のみにかけてもよいし、二以上の方向からかけてもよく、せん断力を伴わせることもできる。圧搾の操作は市販の圧搾機を用いれば容易であるが、手搾り、足踏み搾りなど機械を用いない方法で行ってもよい。このとき、植物体に水や湯を加えて圧搾してもよい。
【００１８】
濃縮とは、他の成分を減少させること無く水分量、溶媒量を減らす操作であり、減圧濃縮、加熱濃縮、濾過膜を用いた濃縮などいかなる方法で行ってもよいが、２０℃〜６０℃の範囲での減圧濃縮を行うことが好ましい。
【００１９】
固液分離とは、溶媒およびそこに溶解している成分と、不溶性の固形分を分離する方法であり、分離方法としては、例えばフィルター濾過、圧搾濾過、遠心分離、デカンテーションなどあらゆる方法が使用できる。清澄な植物抽出液を得る場合には、珪藻土などの濾過助剤を使用したフィルター濾過を行うことが好ましい。
【００２０】
加熱滅菌とは、熱を加えて殺菌することであり、温度は６０℃〜１２１℃が好ましく、７０℃〜１１０℃がさらに好ましい。この温度範囲より低ければ、滅菌の効果が不十分になる問題があり、この温度範囲より高ければ有効成分が分解する問題がある。
【００２１】
濾過滅菌とは、微生物が通過できないサイズの膜を、加圧或いは減圧して通過させることで除菌する操作である。膜の孔径としては０．１〜１．０μｍが好ましく、より好ましくは０．２〜０．４５μｍである。
【００２２】
酵素処理とは、植物体の構成成分の分解を促進する生体触媒で処理することであり、酵素の種類としては特に限定されないが、セルラーゼ、ペクチナーゼ、アラバナーゼ、プロテアーゼ、グルタミナーゼ等が好ましく例示される。酵素処理の条件は、各酵素に適した温度、ｐＨ、添加量で行えばよい。酵素処理後の反応物は、そのまま以後の発酵に用いてもよいが、失活させるのが好ましい。失活方法は、特に限定されないが、加熱処理が好ましい。
【００２３】
乾燥とは、試料中の水分等の溶媒を除去することであり、自然蒸発、加熱乾燥、真空乾燥、噴霧乾燥、凍結乾燥等公知のいかなる技術を用いても良い。
【００２４】
これらの技術の組み合せで好ましく例示されるのは、アスパラガスを細断し水で抽出した後加熱殺菌して濾別し、濾液を濃縮した後濾過滅菌したものである。
【００２５】
本発明においては、以上のようにして得られた組成物を用いて培地を作製する。アスパラガス由来の組成物は、それ単独で乳酸菌の培養に用いてもよく、また、公知の乳酸菌用培地と混合して使用することも可能である。かかる培地としては、ＧＹＰ培地（Ｄ−グルコース１％、ペプトン０．５％、酵母エキス１％、酢酸ナトリウム３水和物０．２％、ツイン８０  ０．０５％、硫酸マグネシウム７水和物０．０２％、硫酸マンガン４水和物１０ｐｐｍ、硫酸鉄７水和物１０ｐｐｍ、塩化ナトリウム１０ｐｐｍ）、市販のＧＡＭ培地（日水製薬）、ＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）等が挙げられる。これらの培地はその全成分を添加してもよいし、任意の１または複数の成分のみを添加してもよい。特に、酵母エキスを混合した場合に乳酸菌のＧＡＢＡ産生能が最も高くなる。アスパラガス由来の組成物以外の培地成分を混合する場合には、それらが培地全体に占める割合としては、固形分として、０〜９０質量％が好ましく、０〜５０質量％がさらに好ましく、０〜３０質量％が最も好ましい。
【００２６】
本発明においては、以上のようにして作製した培地の糖濃度（ブリックス（Ｂｒｉｘ）換算）が０．１〜４０％であるのが好ましく、０．１〜２０％であるのがより好ましく、０．５〜１０％であるのがもっとも好ましい。糖濃度（Ｂｒｉｘ換算）がこの範囲を外れると、乳酸菌の増殖が極めて悪くなる。糖濃度（ブリックス（Ｂｒｉｘ）換算）が０．１％に満たない場合には、濃縮して大きくすることができる。糖濃度（ブリックス（Ｂｒｉｘ）換算）が４０％を超える場合には、加水して少なくすればよい。
【００２７】
本発明においては、上記のようにして作製された培地に、さらに、グルタミン酸又は／及びその塩又は／及びそれらの含有物を添加することもできる。これらのうち、グルタミン酸塩としてはいかなるものも使えるが、食品添加物となっており、水への溶解性に優れるグルタミン酸ナトリウムが好ましい。また、グルタミン酸及び／又はその塩の含有物としてはいかなる物も使えるが、食品に添加可能な酵母エキス等のような調味料が好ましい。これらの内、水への溶解性に優れるグルタミン酸ナトリウムと、培養に伴うｐＨの上昇を抑えられるという点でグルタミン酸が望ましく、さらに好ましくはそれらの併用である。グルタミン酸又は／及びその塩又は／及びそれらの含有物の添加量としては、培地中のグルタミン酸の終濃度として０．１〜４０質量％となる量が好ましく、０．２〜２５質量％がより好ましく、０．５〜２０％が最も好ましい。また、グルタミン酸及び／又はその塩及び／又はそれらの含有物を添加する場合は培養前に１回で所定量を添加してもよいし、あるいは培養中に複数回に分けて添加し前記した濃度としてもよい。培養中に添加する場合、添加時期は特に限定されない。作業性の面では１回で全量添加することが好ましいが、急激なｐＨの変動を引き起こすため、少量ずつ添加することが好ましく、培養開始時は溶解性に優れたグルタミン酸ナトリウムを、培養後期にはグルタミン酸を複数回添加するのが好ましい。
【００２８】
本発明において、上記のようにして作製された培地に、乳酸菌を接種するが、ここで用いられる乳酸菌としては、Ｌａｃｔｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ、Ｌ．ｈｉｌｇａｒｄｉｉ、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒａｍ、Ｌ．ｃａｓｅｉ、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ、Ｌ．ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌ．ｓｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｓ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｃａｓｓｅｌｉｆｌａｖｕｓ等に属する乳酸菌が挙げられる。これらのうち、以下の方法によってスクリーニングされたＩＦＮ−γ誘導能に優れた菌が好ましい。
【００２９】
すなわち、Balb/cマウス雌性６週齢（日本チャールスリバー）に２０μｇのＯＶＡと２ｍｇの水酸化アルミニウムゲルを含む生理食塩水溶液２００μｌを腹腔内投与し、１０日目に脾臓を回収し、脾臓細胞を２０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０培養液に懸濁し、１００μｇ／ｍｌのＯＶＡ共存下で被験乳酸菌を１０μｇ／ｍｌとなるように添加して共培養し、７日後、培養上清を回収し、ＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡ法で定量する方法である。
【００３０】
以上のスクリーニングにより、特に、アスパラガスから単離した乳酸菌に強力なＩＦＮ−γ誘導活性が見出された。なお、この菌株は１６ＳｒＲＮＡや生理生態による同定の結果ラクトバチルス  ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）と判別されたため、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ  ＵＡＳ−４株とした。また、特許生物寄託センターへの寄託を行っており、その受託番号はＦＥＲＭ  ＡＰ−２０７１０である。
【００３１】
本発明においては、アスパラガスから得られる組成物を含有する培地に、乳酸菌を接種し、培養を行うが、その条件について述べる。
【００３２】
乳酸菌の添加方法は、上記のように調製されたアスパラガスから得られる組成物またはそれを含有する培地に直接少量の菌体を接種することで増殖させることができるが、短期間で菌体濃度を上昇させる為には、前培養した菌液を接種することが好ましい。前培養液としては、本培養と同じアスパラガスから得られる組成物またはそれを含有する培地でもよいし、前記した公知のあらゆる培地を使用することもできる。前培養した菌液を接種する量としては、本培養の培地量の１０００００分の１〜２分の１であり、１０００分の１〜１０分の１が好ましく、２００分の１〜３０分の１がさらに好ましい。この範囲より接種量が少なければ、菌体濃度の増加に時間がかかる問題があり、この範囲より多ければもはや前培養の時点で大きなスケールになっており、本培養を行う必要性がないということである。
【００３３】
培養温度は用いる菌株にもよるが、５℃〜４５℃であり、好ましくは１５℃〜４０℃であり、さらに好ましくは２０℃〜３５℃である。培養温度がこの温度範囲より高くても低くても著しく増殖速度が劣る問題がある。
【００３４】
培養中の培養液のｐＨは用いる菌株にもよるが、３．０〜９．０に調整することが好ましく、４．５〜７．５に調整することがより好ましい。ｐＨがこの範囲を外れると、増殖速度が劣る問題がある。ｐＨ調整に用いる薬品はいかなる物も使用でき、例えば塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、酢酸、酪酸、乳酸、蟻酸、コハク酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、クエン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア水等が挙げられる。
【００３５】
培養時間は特に限定されないが、２時間〜１０日間が好ましく、５時間〜５日間がより好ましく、８時間から〜３日間が最も好ましい。培養時間がこの範囲を下回ると乳酸菌の増殖が不十分になり、この範囲を上回っても、更なる効果は望めず、雑菌の混入や増殖の可能性も高くなる。
【００３６】
以上のようにして培養を行うことによって得られる発酵物が、そのままで、あるいは必要に応じて以下の処理を行うことで本発明の第一の免疫調整作用を有する組成物を得ることができる。処理としては、殺菌、乾燥等の操作を行い、懸濁液や粉末の形態にすることも可能である。また、適当な担体を添加した後常法により顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ゲル状、ペースト状、乳状、懸濁状、液状、飲料等の食用に適した形態に成形してもよい。
【００３７】
固形状に調製する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、着色剤等常法で用いられているものを用いればよく、そのような担体の例としては、賦形剤としては乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット、デキストリン、デンプン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、プルラン、無水ケイ酸、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等を、結合剤としては結晶セルロース、白糖、マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、デキストラン、プルラン、水、エタノール等を、崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストリン、結晶セルロース等を、滑沢剤としてはステアリン酸およびその金属塩、タルク、ホウ酸、脂肪酸ナトリウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、無水ケイ酸等を、矯味矯臭剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等を例示できる。
【００３８】
液体状に調製する際には、乳化剤、可溶化剤、分散剤、懸濁化剤、粘調剤、緩衝剤、安定化剤、矯味矯臭剤等常法で用いられているものを用いればよく、乳化剤および可溶化剤としてはレシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム等を、分散剤および懸濁化剤としては、レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、メチルセルロース、アラビアゴム、ゼラチン等を、粘調剤としてはメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム、ゼラチン等を、緩衝剤としてはクエン酸塩、コハク酸塩等を、安定化剤としてはレシチン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロースを、矯味矯臭剤としては上記したものを例示できる。
【００３９】
以上のようにして得られる組成物は、免疫調整作用を有するものであり、ここで、免疫調整作用とは、抗腫瘍作用及び抗アレルギー作用を含む概念である。抗腫瘍作用は、上記のようにして得られる組成物を経口摂取することにより免疫細胞からＩＦＮ−γが誘導され、このＩＦＮ−γがＮＫ細胞を活性化することにより発揮されるものである。また、抗アレルギー作用は、誘導されたＩＦＮ−γがＴｈ１細胞を活性化し、Ｔｈ２細胞を不活性化することでＩｇＥの産生が抑制され、結果としてＩｇＥの関与するアレルギー症状が緩和されることによるものである。
【００４０】
次に本発明の第三の免疫調整剤、飲食品及び飼料について説明する。本発明の免疫調整剤、飲食品及び飼料は、上述のようにして得られた免疫調整作用を有する組成物を含有することを特徴とするものである。
【００４１】
本発明の免疫調整剤は、その効果を損なわない限り、薬学的に許容される担体と共に、種々の剤形に製剤化できる。剤形としては、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、丸剤等の経口用固形製剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤などの経口液体製剤が挙げられる。
【００４２】
経口用固形製剤を調整する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、着色剤等常法で用いられているものを用いればよく、そのような担体の例としては、賦形剤としては乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット、デキストリン、デンプン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストラン、プルラン、無水ケイ酸、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等を、結合剤としては結晶セルロース、白糖、マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、デキストラン、プルラン、水、エタノール等を、崩壊剤としてはデンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デキストリン、結晶セルロース等を、滑沢剤としてはステアリン酸およびその金属塩、タルク、ホウ酸、脂肪酸ナトリウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、無水ケイ酸等を、矯味矯臭剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等を例示できる。
【００４３】
経口用液体製剤を調整する際には、緩衝剤、安定化剤、矯味矯臭剤等常法で用いられているものを用いればよく、緩衝剤としてはクエン酸塩、コハク酸塩等を、安定化剤としてはレシチン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロースを、矯味矯臭剤としては上記したものを例示できる。
【００４４】
本発明の免疫調整剤、飲食品及び飼料中に含まれる免疫調整作用を有する組成物の含有量は、特に限定されず該組成物それ自身を免疫調整剤、飲食品又は飼料とすることも可能であるが、概ね１日摂取量が醗酵液の固形分として２０〜１，０００ｍｇとなるように配合することが好ましい。この範囲より少ない場合は効果が望めない可能性があり、この範囲より多い場合はもはや効果の増大は見込めない可能性がある。
【００４５】
免疫調整作用を有する組成物を既存の飲食品及び飼料に含ませる場合は、ベースとなる飲食品及び飼料としては特に限定されないが、例えば、うどんやパスタ等の加工麺、ハム・ソーセージ等の食肉加工食品、かまぼこ・ちくわ等の水産加工食品、バター・粉乳・醗酵乳等の乳加工品、ゼリー・アイスクリーム等のデザート類、パン類、菓子類、調味料類等の加工食品、清涼飲料水、アルコール類、果汁飲料、野菜汁飲料、乳飲料、炭酸飲料、コーヒー飲料、アルコール類等の飲料が好ましい。
【実施例】
【００４６】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４７】
実施例１
＜乳酸菌の培養＞
アスパラガス１ｋｇに水１Ｌを添加して家庭用のミキサーで粉砕した。破砕液に珪藻土を添加し、ろ紙（ＡＤＶＡＮＴＥＣ東洋製Ｎｏ．５Ｃ）を用いて吸引濾過を行い、清澄な濾液を得た。この濾液を濃縮しＢｒｉｘを２．５％に調整した後、濾液１Ｌに対し酵母エキスを１ｗ／ｗ％添加し、高圧蒸気滅菌を行った。このアスパラガス抽出物含有培地１Lにラクトバチルス  ブレビス  ＵＡＳ−４の前培養液１０ｍｌを接種した。３０℃で４８時間発酵させて得られた発酵物を８０℃で３０分間加熱殺菌し、アスパラガス抽出物含有培地の発酵液（以下、ＡＦという）を得た。比較としてＧＹＰ培地発酵液１Lにラクトバチルス  ブレビス  ＵＡＳ−４の前培養液１０ｍｌを接種し、３０℃で４８時間発酵させて得られた発酵物を同様に加熱殺菌しＧＹＰ培地発酵液を得た。次に、得られた各発酵液を凍結乾燥し、ＡＦ固形分３１．０ｇ(うち乳酸菌０．１６０g)と、ＧＹＰ培地発酵物を２６．８ｇ(うち乳酸菌０．１４９g)を得た。
【００４８】
＜免疫調整作用の測定＞
上で得られた発酵物２種をＯＶＡ感作したマウス脾臓細胞に作用させて、そのＩＦＮ−γ誘導活性を比較した。すなわち、Balb/cマウス雌性６週齢（日本チャールスリバー）に２０μｇのＯＶＡと２ｍｇの水酸化アルミニウムゲルを含む生理食塩水溶液２００μｌを腹腔内投与し、１０日目に脾臓を回収し、脾臓細胞を２０％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０培養液に懸濁し、１００μｇ／ｍｌのＯＶＡ共存下で上記発酵物２種を１０μｇ／ｍｌとなるように添加して共培養し、７日後、培養上清を回収し、ＩＦＮ−γをＥＬＩＳＡ法で定量した。なお、コントロールは水を使用した。結果を図１に示した。
【００４９】
図１の結果と、同重量中の乳酸菌体重量はＧＹＰ培地での発酵物の方がＡＦ固形分より高いということから、ＡＦはその免疫調整作用が相乗的に高くなることが分かる。
【００５０】
実施例２
＜抗アレルギー作用の検討＞
ラクトバチルス  ブレビス  ＵＡＳ−４を用いて作製したＡＦに相乗的なＩＦＮ−γ誘導活性が見出されたので、マウスアレルギーモデルを用いて血中ＩｇＥレベルが抑制されるか検討した。すなわち、Balb/cマウス雌性６週齢（日本チャールスリバー）に２ｍｇの水酸化アルミニウムゲルと２０μｇのＯＶＡを含む生理食塩水溶液１００μｌを腹腔内投与し、血中ＯＶＡ特異的ＩｇＥを誘導した。ＯＶＡの腹腔内投与は０週目、２週目、５週目、８週目に行い、コントロール餌あるいはコントロール餌にＡＦを３．３質量％混ぜて乾燥させた餌を０週目からマウスに摂取させた。１週目、３週目、６週目、９週目に採血して血清を調製し、血中ＯＶＡ特異的ＩｇＥをＥＬＩＳＡ法により定量した。コントロール餌には、ＣＲＦ−１粉末餌（日本チャールス・リバー製）を用いた。
【００５１】
測定結果を図２に示した。この結果から、ＡＦを摂取したマウスは、コントロール餌を摂取したマウスに比べて血中ＯＶＡ特異的ＩｇＥの上昇が抑制された。
【００５２】
製造例１＜錠剤＞
以下に示す方法により、ＡＦを含有する医薬品（錠剤）を製造した。
ＡＦ乾燥物６０ｇを乳糖２３０ｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｇとともに混合し、単発式打錠機にて打錠することにより、直径１２ｍｍ、重量３２０ｍｇの錠剤を製造した。
【００５３】
製造例２＜粉末＞
実施例１と同様の方法で得たＡＦ１０Lにデキストリン２ｋｇを添加攪拌し、スプレードライすることにより約３ｋｇの発酵物粉体を製造した。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】ＧＹＰ培地での発酵物とアスパラガス抽出物含有培地での発酵物のＩＦＮ−γ産生誘導活性の比較を示す図である。
【図２】マウスアレルギーモデルにおけるアスパラガス抽出物含有での発酵物摂取の影響を示す図である。
【図１】
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【図２】
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