(57)【要約】【課題】リン酸カルシウムから構成されるシェル（殻）内に種々のコア化合物を内包させる技術を提供する。【解決手段】リン酸カルシウム材料から構成される殻（シェル）にコア化合物を内包したリン酸カルシウム複合材料；リン酸イオンもしくはカルシウムイオンとコア化合物を含む第１水相粒子を油相中に分散してなるＷ／Ｏエマルジョンにカルシウムイオンもしくはリン酸イオンを含む水溶液を作用させることを特徴とする、コア化合物をリン酸カルシウム材料から構成される殻に内包してなるリン酸カルシウム複合材料の製造方法。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸カルシウム材料から構成される殻（シェル）にコア化合物を内包したリン酸カルシウム複合材料。
【請求項２】
前記コア化合物が生理活性物質である請求項１に記載の複合材料。
【請求項３】
前記複合材料がマイクロカプセルである、請求項１又は２に記載の複合材料。
【請求項４】
リン酸イオンもしくはカルシウムイオンとコア化合物を含む第１水相粒子を油相中に分散してなるＷ／Ｏエマルジョンにカルシウムイオンもしくはリン酸イオンを含む水溶液を作用させることを特徴とする、コア化合物をリン酸カルシウム材料から構成される殻に内包してなるリン酸カルシウム複合材料の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リン酸カルシウム複合材料およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ハイドロキシアパタイト等のリン酸カルシウム類は、人体の歯や骨の主成分であり、生体適合性も高い、最も重要な生体無機材料である。生物の骨類は、このリン酸カルシウムと蛋白質等の複合体であるが、そのような材料を人工的に合成すリン酸カルシウム複合材料およびその製造方法ることは、歯科、整形外科、再生医療等の医学・薬学分野において、特に重要である。近年活発になされている化合物との複合化の研究では、蛋白質等とのミクロなレベルでの複合化が重要であるとされている。また、リン酸カルシウムは生体適合性が高いため、種々の材料の表面上に析出させて、材料の生体適合性を向上させる事も試みられている。
【０００３】
リン酸カルシウム類と他の化合物との複合体の合成には、様々な方法がある。最も簡便な方法は、化合物を取り込める空間を持つハイドロキシアパタイト類をあらかじめ独自に製造し、この出来上がったハイドロキシアパタイト類にタンパク質等の化合物を添加や担持する方法がある。例えば、特許文献１は、多孔性ハイドロキシアパタイト微粒子に薬物を充填している。また、特許文献２は水蒸気処理で針状結晶のハイドロキシアパタイトを合成して、その空孔にタンパク質を充填する方法を報告している。核酸をできあがった多孔性のハイドロキシアパタイトに担持させる方法（特許文献３、特許文献４）も報告されている。ハイドロキシアパタイトのａ面を特に成長させた板状ハイドロキシアパタイトを合成しての混合例もある（特許文献５）。また、特許文献６〜１１も、一度多孔性のハイドロキシアパタイトを合成しておき、それにタンパク質等の化合物を充填・混練させる方法である。その他の混合方法としては、微細なハイドロゲルと蛋白質を混合して固化させる方法（特許文献１２）や、特許文献１３〜１５に報告される方法もある。
【０００４】
ハイドロキシアパタイト類を溶液から形成させて、複合体を製造する代表的方法としては、複合させる材料を疑似体液（ＳＢＦ：Simulated Body Fluid）に浸漬させ、その表面に疑似体液中のイオンからハイドロキシアパタイト等の相を析出させる方法がある。代表的例として、非特許文献１、非特許文献２、特許文献１６をあげることができる。通常この方法では、材料を疑似体液（ＳＢＦ）に浸漬させる時間は、数週間以上になる。また、疑似体液（ＳＢＦ）の調製はさほど難しくはないが、共存イオン量を微妙に調整しなくてはならず、溶液の長期保存もできない。すなわち、煩雑な原料調製と長期の合成時間を必要とする。一方、特許文献１７や非特許文献３、非特許文献４等に報告されているのが、表面が親水化された材料をカルシウムイオンの溶液とリン酸溶液とに交互に浸漬させて、材料表面にハイドロキシアパタイトを生成させて固定させる方法である。この方法では、疑似体液（ＳＢＦ）を用いる場合と比べ合成時間は１日程度とかなり短縮されている。しかしながら、材料を取り出してのカルシウムイオン溶液およびリン酸溶液への浸漬という煩雑な操作が必要となる。さらに、球状の生体内分解性高分子や高分子ビーズの表面上にリン酸カルシウムを被覆させるという方法もあるが（特許文献１８、特許文献１９）、溶液中で球状化した分解性ポリマー上に相対的に少量のリン酸カルシウムを析出させるというものであり、リン酸カルシウムは主成分ではない。核酸を含んだリン酸カルシウムに関しては、核酸を含んだ溶液中からリン酸カルシウムの沈殿を生成させる方法が良く知られており、これを用いてのトランスフェクションの例もある（特許文献２０、特許文献２１）が、リン酸カルシウム中に導入できる核酸の量には限界がある。
【０００５】
一方、リン酸カルシウムの過飽和溶液を用いて、これにタンパク質等の化合物を加えて
、共沈させる方法（特許文献２２〜２４）も知られている。この方法においても、リン酸カルシウムの過飽和溶液という正確な調製条件の伴う溶液を用いなくてはならない。一般にリン酸カルシウムはリン酸を含む溶液をカルシウムイオンを含む溶液に混合することにより得られるが、例えばハイドロキシアパタイトの場合は、水酸化カルシウムとリン酸（あるいは塩）をリンとカルシウムとの比を調整して反応させることで容易に得られる。この際、リン酸の溶液にコラーゲン等のタンパク質を共存させておいてハイドロキシアパタイトを沈殿させれば、コラーゲン等もハイドロキシアパタイト内に包含されると考えられるが、溶液の混合条件、反応温度やｐＨ等を最適化しなければ、ハイドロキシアパタイト内にコラーゲンが包含されないことが報告されている（非特許文献５）。このように、リン酸カルシウム、特にハイドロキシアパタイトと他の化合物との複合体を、簡便な方法で短時間に製造できる、内包させる化合物の特性にさほど影響されない一般性・汎用性の高い方法は知られていなかった。
【特許文献１】特開2004-075662
【特許文献２】特開2004-073401
【特許文献３】特開2004-154431
【特許文献４】特開2004-123610
【特許文献５】特開平10-45405
【特許文献６】特開2001-133459
【特許文献７】特開平11-347112
【特許文献８】特開2004-154431
【特許文献９】特開2004-123610
【特許文献１０】特開2004-330113
【特許文献１１】特開平06-298621
【特許文献１２】特開2004-141359
【特許文献１３】特開平04-244014
【特許文献１４】特開平04-244013
【特許文献１５】特開平02-041171
【特許文献１６】特開平06-335520
【特許文献１７】特開2000-327314
【特許文献１８】特開2002-241312
【特許文献１９】特開2000-336174
【特許文献２０】特表2002-533131
【特許文献２１】特表平10-508462
【特許文献２２】特開2004-168739
【特許文献２３】特開2004-173795
【特許文献２４】特開2005-021208
【非特許文献１】K. Onuma et al., Chem. Mater. vol-10, p-3346 (1998)
【非特許文献２】K. Onuma et al., J. Phys. Chem. B, vol-102, p-7833 (1998)
【非特許文献３】T. Taguchi et al., Biomaterials, vol-22, p-53 (2001)
【非特許文献４】T. Serizawa et al., J. Biomater. Sci. Polym. Edn. Vol-12, p-1293 (2001)
【非特許文献５】M. Kikuchi et al., Composites Science and Technology, 64, 819 (2004)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、リン酸カルシウムから構成されるシェル（殻）内に種々のコア化合物（即ちコア部分に内包される化合物）を内包させる技術、およびそのようにして合成された材料に関する技術を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、種々のコア化合物のリン酸カルシウム粒子内への直接内包化について検討した結果、リン酸（あるいはリン酸塩）を含む内水相（水相１）に溶解ないし分散可能な化合物をエマルジョンを安定化させる界面活性剤を含んだ油相に加えＷ／Ｏエマルジョンを形成させ、これをカルシウム化合物が存在する水相２に適切な撹拌条件の下加えることで、化合物を直接内包化させたリン酸カルシウム粒子を合成することに成功し、本発明に至った（概念図を図１に示す）。
【０００８】
本発明は、以下のマイクロカプセル及びその製造方法に関する。
１．  リン酸カルシウム材料から構成される殻（シェル）にコア化合物を内包したリン酸カルシウム複合材料。
２．  前記コア化合物が生理活性物質である項１に記載の複合材料。
３．  前記複合材料がマイクロカプセルである、項１又は２に記載の複合材料。
４．  リン酸イオンもしくはカルシウムイオンとコア化合物を含む第１水相粒子を油相中に分散してなるＷ／Ｏエマルジョンにカルシウムイオンもしくはリン酸イオンを含む水溶液を作用させることを特徴とする、コア化合物をリン酸カルシウム材料から構成される殻に内包してなるリン酸カルシウム複合材料の製造方法。
【０００９】
なお、図１では、水相１がリン酸化合物（リン酸、リン酸塩などの水溶液中でリン酸イオンを供給できる化合物）、水相２がカルシウム化合物（カルシウム塩などの水溶液中でカルシウムイオンを供給できる化合物）の例が示されているが、水相２がリン酸化合物、水相１がカルシウム化合物であっても同様にリン酸カルシウム複合材料を得ることができる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、種々の化合物を簡便な方法でリン酸カルシウム粒子内に内包化させる方法で、種々のコア化合物とリン酸カルシウム材料との複合化により、歯科治療、整形外科治療、再生医療、ドラッグデリバリーシステム、ジーンデリバリー、化粧品、食品添加物の利用等に寄与できる材料を提供できる。リン酸カルシウム類、特にハイドロキシアパタイトは生体適合性の高い、毒性の無い材料として知られており、実用化への可能性は特に高いと考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本明細書において、「リン酸カルシウム材料」とは、カルシウムとリンが主成分である化合物の総称である。また、「コア化合物」とは、コア部分（リン酸カルシウム材料から構成される殻（シェル）に囲まれる部分）に内包される化合物を意味する。
【００１２】
リン酸化合物とは、リン酸イオンを供給できる化合物を意味し、例えばリン酸、リン酸塩が挙げられる。
コア化合物を内包したリン酸カルシウム複合材料は、既存のマイクロカプセル合成の方法を改良することで製造することができる。先述のシリカ等の粒子の場合は、中空の球状粒子を合成することができるが、リン酸カルシウムの場合は、先行技術の方法では球状粒子を得ることはできず、粒子径がミクロンサイズの不定形の粉体粒子のリン酸カルシウムが得られる。リン酸カルシウム材料としては、ハイドロキシアパタイト、リン酸水素カルシウム（ダイカルシウムホスフェート・ダイハイドレート、ＤＣＰＤ）、リン酸三カルシウム（トリカルシウムホスフェート）、リン酸二水素カルシウム、オクタカルシウムホスフェート、テトラカルシウムホスフェート等がある。このリン酸カルシウムの作り分けは、原料のリンとカルシウムの比により制御することができる。また、ナトリウム、カリウム、フッ素等の他のイオンも、リン酸カルシウム材料の特性に悪影響を及ぼさない範囲で混入していても良い。
図１の水相１または２に用いられるリン酸イオンの原料（水溶液中でリン酸イオンを供給できる化合物）としては、リン酸、リン酸塩（リン酸二水素アンモニウム、リン酸水素二アンモニウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム等）をあげることができる。図１の水相２または１に用いられるカルシウムイオンの原料（水溶液中でカルシウムイオンを供給できる化合物）としては、水酸化カルシウム、酸化カルシウム、炭酸カルシウム、ハロゲン化カルシウム、硝酸カルシウム、硫酸カルシウム等をあげることができる。
【００１３】
この際のリン酸類の溶解した溶液の濃度・容量、カルシウム類の混入した溶液の濃度・容量、界面活性剤の溶解した有機溶液の濃度・体積は特に限定されないが、リン酸あるいはリン酸塩の水溶液の濃度は0.5〜20Ｍがよく、1〜5Ｍが特によい。界面活性剤は、エマ
ルションが安定である限り特に使用する必要はないが、例えば界面活性剤の総重量の濃度は5〜50g/Lが好ましく使用され、特に10〜30g/Lが良い。カルシウム化合物の濃度は、溶
解あるいは懸濁の場合ともに、0.1〜5Ｍがよく、0.2〜2Ｍが特によい。用いる水溶液（水相１、２）と油相との体積比は、油相／水相１の体積比で、0.3〜20が良く、特に0.5〜10が良い。また水相２／水相１の体積比では、1〜20が良く、特に3〜12が良い。
リン酸カルシウム材料から構成される殻に内包化できる化合物としては、無機粉体、有機ポリマー、生体分子、核酸、薬物等の生理活性物質がある。無機粉体としては、種々の金属酸化物、種々の金属炭酸塩、リン酸塩、金属粉ないし非金属粉等がある。金属酸化物としては、アルミナ、チタニア、ジルコニア、酸化銅、酸化鉄、酸化亜鉛等をあげることができる。金属炭酸塩としては、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸コバルト、炭酸ストロンチウム、炭酸鉄、炭酸銅等をあげることができる。リン酸塩としては、リン酸カルシウム、リン酸鉄、リン酸アルミニウム等をあげることができる。金属粉ないし非金属粉としては、炭素、鉄粉、銅粉等をあげることができる。有機ポリマーとしては、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリメタクリル酸ナトリウム等の水に可溶、あるいは水に不溶であっても親水性のポリマーをあげることができる。内包できる生体分子、核酸、薬物等の生理活性物質の具体例としては、タンパク質、ＤＮＡ、ホルモン類、糖質、各種医薬品等をあげることができる。これら生体分子は特に限定されないが、上述のリン酸あるいはリン酸塩溶液中に比較的安定に存在できるものが好ましい。内包させる生理活性物質をリン酸あるいはリン酸塩水溶液中に混入させておく最低の時間は、水相と油相とのエマルジョンを形成させる時間であり、数分程度と見込まれる。核酸も特に限定されないが、酸性水溶液中での安定性のため、デオキシリボ核酸・ＤＮＡが良いと考えられる。このＤＮＡに関しては、塩基配列や分子量に関して特に限定はされない。この際、用いるリン酸の水溶液を適切に選択する必要がある。内包させる化合物のリン酸カルシウムに対する相対量は、溶解あるいは十分に分散できる範囲であれば特に限定されない。用いるリン酸の溶液はｐＨ値が１程度の強酸であり、リン酸二水素アンモニウムの溶液はｐＨ値が４程度、リン酸水素二アンモニウムの溶液はｐＨ値が８程度であり、共存させる化合物と反応しない溶液を適宜選択する必要がある。
【００１４】
内包化させる化合物を含有したリン酸あるいはリン酸塩が溶解した水相１を、エマルジョンを安定化させる非イオン系界面活性剤を含んだ油相に加え、乳化させる。この際に用いる非イオン系界面活性剤は、乳化エマルジョンを安定化できるものならば特に限定されないが、例えば、Tween80やSpan80などのようなTween類やSpan類をあげることができる。油相としては、n-ヘキサン、n-ペンタン、n-ヘプタン、シクロヘキサンなどの炭化水素類、ベンゼン、トルエンなどの芳香族炭化水素類、クロロホルム、塩化メチレン、四塩化炭素などのハロゲン化炭化水素類、酢酸エチルなどのエステル類、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテルなどのエーテル類等の水への溶解度の低い溶媒が挙げられ、好ましい油相は、ｎ−ヘキサン、ベンゼンなどから構成される。
【００１５】
乳化の方法は特に限定されないが、ホモジュナイザー等を用い十分にエマルジョンを形
成させればよい。内包させる化合物をエマルジョン形成時に混入させることもできる。この乳化液を、上述のカルシウム化合物が溶解あるいは懸濁した水相２（図１における水相２）に加え、リン酸カルシウム粒子を得る。この際、水相１に内包させる化合物を共存させなければ、内包物のないリン酸カルシウム粒子を合成することができる。こうして得られたリン酸カルシウム粒子は、粉末Ｘ線回折により分析、同定することができる。また化合物の内包化は、赤外線スペクトル、紫外線スペクトル等により確認することができる。混合された化合物が実際に、リン酸カルシウム内に内包されていることに関しては、以下の方法で確認した。水溶性の化合物に関しては、高い水溶性を持つアルブミンに関して、合成されたアルブミン内包ハイドロキシアパタイトを十分量の水で洗浄の後も、ほとんどアルブミンは脱離していないことを確認した（実施例７参照）。また、水に不溶な化合物に関しては、酸化鉄あるいは酸化銅内包ハイドロキシアパタイト、および酸化鉄あるいは酸化銅内包ＤＣＰＣの透過光による光学顕微鏡像より、粉末がハイドロキシアパタイトおよびＤＣＰＤの粒子内に埋め込まれていることを確認した（実施例１０〜１３参照）。
【実施例】
【００１６】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
実施例１：界面反応法によるハイドロキシアパタイトの合成−１
リン酸（8.28ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液（図１の水相１）に、Tween80（1.01ｇ：モル数は混合物につき不明）とSpan80（0.50ｇ：モル数は混合物
につき不明）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液（図１の油相）と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を1分行った
のち、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ
全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成した沈殿を得た（12.25ｇ）。
【００１７】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図２に示す。ハイドロキシアパタイトが生成し
ていることが確認された。
実施例２：界面反応法によるハイドロキシアパタイトの合成−２
リン酸二水素アンモニウム（9.72ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液に、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌと
した溶液と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を1分行ったのち、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成した沈殿を得た（10.22ｇ）。得られた粉体の粉末X線回折パターンを図３に示す。ハイドロキシアパタイトが生成していることが確認された。
実施例３：界面反応法によるハイドロキシアパタイトの合成−３
リン酸水素二アンモニウム（11.16ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした
溶液に、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌ
とした溶液と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を1分行ったのち、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成した沈殿を得た（9.52ｇ）。得られた粉体の粉末X線回折パター
ンを図４に示す。ハイドロキシアパタイトが生成していることが確認された。
実施例４：界面反応法によるＤＣＰＤ（ダイカルシウムホスフェート・ダイハイドレート）の合成
リン酸（16.56ｇ、169.0mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液（図１の水相１）に、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌと
した溶液（図１の油相）と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を1分行ったのち、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.2
6ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。
２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成した沈殿を得た（10.26ｇ）。
【００１８】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図５に示す。ＤＣＰＤ（ダイカルシウムホスフ
ェート・ダイハイドレート）が生成していることが確認された。
実施例５：界面反応法によるアルブミン内包ハイドロキシアパタイトの合成
リン酸（8.28ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液にアルブミン（CALZYME Laboratories社製、Bovine Serum）1ｇを素早く溶解させ（図1の水相１）、溶解後すぐにTween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌと
した溶液（図１の油相）と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を1分行ったのち、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。
２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成した沈殿を得た（13.48ｇ）。
【００１９】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図６に示す。ハイドロキシアパタイトが生成し
ていることが確認された。また、固体の紫外線スペクトル（図７）よりアルブミンに帰属される２８０nmの吸収が観測され、アルブミンが内包されていることが確認された。
実施例６：界面反応法によるポリアクリルアミド内包ハイドロキシアパタイトの合成
リン酸（8.28ｇ、84.5mmol）を水に溶かし、ポリアクリルアミドの水溶液をポリアクリルアミドの含量が２ｇになるように加えて全体積を36ｍｌとした溶液に、Tween80（1.01
ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液（図１の油相）と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を1分行ったのち、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：
約400回転）の後、ろ別により生成した沈殿を得た（13.08ｇ）。
【００２０】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図８に示す。ハイドロキシアパタイトが生成し
ていることが確認された。
実施例７：界面反応法によるアルブミン内包ハイドロキシアパタイトの合成
リン酸（8.28ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液を、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液と混合し、
ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を２０秒行った後、アルブミン1ｇの粉末を素早く加え、さらにホモジュナイザーで1分間乳化の後、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ
別により生成した沈殿を得た（13.50ｇ）。
【００２１】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図９に示す。ハイドロキシアパタイトが生成し
ていることが確認された。また、固体の紫外線スペクトル（図１０）よりアルブミンに帰属される２８０nmの吸収が観測され、アルブミンが内包されていることが確認された。また、このアルブミンを内包したハイドロキシアパタイト１ｇを、１．５リットルの水で洗浄した前後の固体の紫外線スペクトル（図１１）を比較することにより、ハイドロキシアパタイトに内包されたアルブミンは中性の水ではほとんど放出されないことより、アルブミンはハイドロキシアパタイトの固体内に包含されていることを確認した。
実施例８：界面反応法によるジルコニア内包ハイドロキシアパタイトの合成
リン酸（8.28ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液を、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液と混合し、
ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を２０秒行った後、ジルコニア1ｇの粉末を素早く加え、さらにホモジュナイザーで1分間乳化の後、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250
ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ
別により生成した沈殿を得た（12.99ｇ）。
【００２２】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図１２に示す。ハイドロキシアパタイトが生成
していることが確認された。また、固体の紫外線スペクトル（図１３）よりジルコニアに帰属される２３０nmの吸収が観測され、ジルコニアが内包されていることが確認された。実施例９：界面反応法によるアルミナ内包ＤＣＰＤの合成
リン酸（8.28ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液を、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液と混合し、
ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を２０秒行った後、アルミナ1ｇの粉末を素早く加え、さらにホモジュナイザーで1分間乳化の後、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別
により生成した沈殿を得た（13.70ｇ）。
【００２３】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図１４に示す。ＤＣＰＤが生成していることが
確認された。
実施例１０：界面反応法による酸化鉄内包ＤＣＰＤの合成
リン酸（8.28ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液を、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液と混合し、
ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を２０秒行った後、酸化鉄1ｇの粉末を素早く加え、さらにホモジュナイザーで1分間乳化の後、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別に
より生成した沈殿を得た（14.20ｇ）。
【００２４】
得られた粉体の酸化鉄内包ＤＣＰＤの粉末X線回折パターンを図１５に示し、透過光に
よる光学顕微鏡像を図１６に示す。酸化鉄粉末（黒い部分）がＤＣＰＤの固体内に埋め込まれていることが確認された。
実施例１１：界面反応法による酸化銅内包ＤＣＰＤの合成
リン酸（8.28ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液を、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液と混合し、
ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を２０秒行った後、酸化銅1ｇの粉末を素早く加え、さらにホモジュナイザーで1分間乳化の後、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別に
より生成した沈殿を得た（13.90ｇ）。
【００２５】
得られた粉体の酸化銅内包ＤＣＰＤの粉末X線回折パターンを図１７に示し、透過光に
よる光学顕微鏡像を図１８に示す。酸化銅粉末（黒い部分）がＤＣＰＤの固体内に埋め込まれていることが確認された。
実施例１２：界面反応法によるＤＮＡ内包ハイドロキシアパタイトの合成−１
リン酸二水素アンモニウム（9.72ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液にＤＮＡ（鮭の精巣由来のデオキシリボ核酸ナトリウム塩；和光純薬製）0.1ｇを溶解
させ（図1の水相１）、溶解後すぐにTween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液（図１の油相）と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を1分行ったのち、99.9％純度の水酸化
カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成し
た沈殿を得た（10.58ｇ）。
【００２６】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図１９に示す。ハイドロキシアパタイトが生成
していることが確認された。また、固体の紫外線スペクトル（図２０）よりＤＮＡに帰属される２７０nmの吸収が観測され、ＤＮＡが内包されていることが確認された。
実施例１３：界面反応法によるＤＮＡ内包ハイドロキシアパタイトの合成−２
リン酸水素二アンモニウム（11.16ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした
溶液にＤＮＡ（鮭の精巣由来のデオキシリボ核酸ナトリウム塩；和光純薬製）0.1ｇを溶
解させ（図1の水相１）、溶解後すぐにTween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌとした溶液（図１の油相）と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を1分行ったのち、99.9％純度の水酸
化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成
した沈殿を得た（11.75ｇ）。
【００２７】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図２１に示す。ハイドロキシアパタイトが生成
していることが確認された。また、固体の紫外線スペクトル（図２２）よりＤＮＡに帰属される２７０nmの吸収が観測され、ＤＮＡが内包されていることが確認された。
実施例１４：界面反応法によるコラーゲン内包ハイドロキシアパタイトの合成
リン酸二水素アンモニウム（9.72ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした溶液を、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌと
した溶液と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を２０秒行った後、コラーゲン0.2ｇ（シグマ製；タイプI）の粉末を素早く加え、さらにホモジュナイザーで1分間乳化の後、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた
。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成した沈殿を得た（8.88ｇ）。
【００２８】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図２３に示す。ハイドロキシアパタイトが生成
していることが確認された。
実施例１５：界面反応法によるコラーゲン内包ハイドロキシアパタイトの合成
リン酸水素二アンモニウム（11.16ｇ、84.5mmol）を水に溶かし全体積を36ｍｌとした
溶液を、Tween80（1.01ｇ）とSpan80（0.50ｇ）をｎ−ヘキサンに溶かし全体積を72ｍｌ
とした溶液と混合し、ホモジュナイザーを用いて回転数約8300回転で乳化させた。この乳化処理を２０秒行った後、コラーゲン0.2ｇ（シグマ製、タイプI）の粉末を素早く加え、さらにホモジュナイザーで1分間乳化の後、99.9％純度の水酸化カルシウム（和光純薬製
；9.26ｇ、125mmol）を水に懸濁させ全体積を250ｍｌとした溶液（図１の水相２）に加えた。２時間撹拌（回転数：約400回転）の後、ろ別により生成した沈殿を得た（8.50ｇ）
。
【００２９】
得られた粉体の粉末X線回折パターンを図２４に示す。ハイドロキシアパタイトが生成
していることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本特許で新しく調製され、見いだされた材料の応用は、種々想定されるが、例えば以下のような応用が考えられる。
【００３１】
タンパク質や核酸等の生体分子等がリン酸カルシウム内に内包されることより、これら生体分子の徐放技術に応用することが期待される。タンパク質は生体内で多くの役割を果たしているため、それらを利用したドラッグデリバリーシステム、核酸は遺伝子治療等に用いることができるためジーンデリバリーシステムへの応用が特に有望である。また、歯や骨の成分であるリン酸カルシウムと他の化合物の複合体は、歯科、整形外科、再生医療
、化粧品、食品添加物等への応用も期待される。さらに、細胞培養の培地やバイオマーカー用の基板素材への展開も想定される。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】化合物内包化リン酸カルシウムの合成方法の概念図。
【図２】界面反応法によるハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図３】界面反応法によるハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図４】界面反応法によるハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図５】界面反応法によるＤＣＰＤ（ダイカルシウムホスフェート・ダイハイドレート）の粉。
【図６】アルブミン内包ハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図７】アルブミン内包ハイドロキシアパタイトの拡散反射紫外線スペクトル。
【図８】ポリアクリルアミド内包ハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図９】アルブミン内包ハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図１０】アルブミン内包ハイドロキシアパタイトの拡散反射紫外線スペクトル。
【図１１】アルブミン内包ハイドロキシアパタイトの水洗浄によるアルブミンの脱離挙動。
【図１２】ジルコニア内包ハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図１３】ジルコニア内包ハイドロキシアパタイトの拡散反射紫外線スペクトル。
【図１４】アルミナ内包ＤＣＰＤの粉末X線回折パターン。
【図１５】酸化鉄内包ＤＣＰＤの粉末X線回折パターン。
【図１６】酸化鉄内包ＤＣＰＤの光学顕微鏡像（５００倍）
【図１７】酸化銅内包ＤＣＰＤの粉末X線回折パターン。
【図１８】酸化銅内包ＤＣＰＤの光学顕微鏡像（５００倍）。
【図１９】ＤＮＡ内包ハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図２０】ＤＮＡ内包ハイドロキシアパタイトの拡散反射紫外線スペクトル。
【図２１】ＤＮＡ内包ハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図２２】ＤＮＡ内包ハイドロキシアパタイトの拡散反射紫外線スペクトル。
【図２３】コラーゲン内包ハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図２４】コラーゲン内包ハイドロキシアパタイトの粉末X線回折パターン。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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