(57)【要約】【課題】抗菌洗浄効果に優れ、安全性が高い動物用耳穴洗浄剤を提供することを目的とする。【解決手段】グレープフルーツ種子抽出物を含有する動物用耳穴洗浄剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グレープフルーツ種子抽出物を含有する動物用耳穴洗浄剤。
【請求項２】
さらに、ブロメラインを含有する請求項１記載の動物用耳穴洗浄剤。
【請求項３】
合成抗菌剤、サリチル酸及びエタノールを含有しない請求項１又は２記載の動物用耳穴洗浄剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌洗浄効果に優れる動物用耳穴洗浄剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
犬や猫等の愛玩動物は人間と違い耳の構造が特異であり、耳垢や分泌物が集まる内耳から分泌物の排出が難しいため、他の部位と比べ耳の清潔を維持することが非常に難しい。動物の耳穴を洗浄する方法として、洗浄成分としてサリチル酸、抗菌剤としてエタノール、保湿剤としてグリセリン等を配合する方法が提案されている。
【０００３】
しかしながら、軟弱で敏感な内耳の皮膚に対し、サリチル酸やエタノールは刺激があることから、刺激が少なく、安全性が高い動物用耳穴洗浄剤が望まれていた。なお、本発明に関連する先行技術文献としては下記が挙げられる。
【０００４】
【特許文献１】特開２００１−３３５４５９号公報
【特許文献２】特開２００４−２４０６４号公報
【特許文献３】特開平１０−１０９９２８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、抗菌洗浄効果に優れ、安全性が高い動物用耳穴洗浄剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、グレープフルーツ種子抽出物が、動物用耳穴内で優れた抗菌効果を有すること、さらに、ブロメラインを併用することにより、より優れた抗菌洗浄効果を示すことを知見し、本発明をなすに至ったものである。
【０００７】
従って、本発明は、
[１]．グレープフルーツ種子抽出物を含有する動物用耳穴洗浄剤、
[２]．さらに、ブロメラインを含有する[１]記載の動物用耳穴洗浄剤、
[３]．合成抗菌剤、サリチル酸及びエタノールを含有しない[１]又は[２]記載の動物用耳穴洗浄剤を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、優れた抗菌洗浄効果を有する動物用耳穴洗浄剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の動物用耳穴洗浄剤は、有効成分としてグレープフルーツ種子抽出物を含有する。グレープフルーツ種子抽出物は、グレープフルーツ種子を抽出原料とし、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法により得ることができる。グレープフルーツ種子は、果物のグレープフルーツの種子部分であり、グレープフルーツの種類等に限定されない。抽出方法としては、グレープフルーツ種子を生のまま又は乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。抽出に用いる溶媒としては、水又は親水性有機溶媒あるいはこれらの混合液を室温〜溶媒の沸点程度の温度で用いることが好ましい。
【００１０】
この場合、親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５のアルコール、アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、イソプロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒等を用いることができる。なお、水と親水性有機溶媒との混合系溶媒を使用する場合には、水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましい。
【００１１】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、撹拌可溶性成分を溶出する。その後、濾過して抽出残査を除き、得られた抽出液を濃縮、乾燥することにより、抽出物を得ることができる。抽出条件としては、例えば、室温〜溶媒の沸点程度の温度で１時間〜１週間程度が挙げられるが、これに限定されず、適宜温度・時間を調整することができる。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであればそのままグレープフルーツ種子抽出物として用いることができる。
【００１２】
また、得られる抽出液を脱色、脱臭、活性向上等を目的として精製することもできる。精製手段としては、特に制限されず、活性炭処理、樹脂吸着処理、イオン交換樹脂処理、樹脂吸着精製法等を採用することができる。なお、樹脂に吸着された有効成分は水、エタノール等で溶出させることができる。
【００１３】
グレープフルーツ種子抽出物は、耳の内部で棲息する病原菌を抗菌する効果に優れる。耳の内部で棲息する病原菌としては、外耳道炎の病原菌として、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・インターメディウス(Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ)、緑膿菌等が挙げられる。
【００１４】
グレープフルーツ種子抽出物の配合量は、抗菌洗浄効果の点から、動物用耳穴洗浄剤全量に対して０．０２〜０．１質量％が好ましく、より好ましくは０．０３〜０．０５質量％である。
【００１５】
本発明の動物用耳穴洗浄剤には、ブロメラインを併用することが好ましい。ブロメラインを併用することにより、耳の内部にある耳垢や分泌物の分解を促進し、優れた抗菌洗浄作用を有する。ブロメラインはパイナップル由来のタンパク分解酵素である。ブロメラインは市販されているものを用いることができ、抽出部位や力価の違うものを組み合わせて用いてもよい。
【００１６】
ブロメラインの配合量は、抗菌洗浄効果の点から、動物用耳穴洗浄剤全量に対して０．００２〜０．０８質量％が好ましく、より好ましくは０．００６〜０．０４質量％であり、動物用耳穴洗浄剤中７．５〜３００Ｕ／ｍＬ、好ましくは２５〜１５０Ｕ／ｍＬになるように配合するとよい。
【００１７】
ブロメラインの酵素活性は以下に示す「Ｋｕｎｉｔｓ」の方法で測定する。
Ｈａｍｍａｒｓｔｅｎ（ハンマーステン）ガゼインを０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．０、５ｍＭシステイン、２ｍＭ  ＥＤＴＡ）に１質量％となるように溶解し、９０℃・１５分で熱処理し、溶解して冷却させて基質溶液を得る。使用する際に３７℃のウォーターバスで加熱する。
試験管中の１質量％のカゼイン基質溶液１ｍＬに、試料２ｍＬを添加し、４０℃で２０分間反応させる。その後、５質量％のＴＣＡ（トリクロロ酢酸）液３ｍＬを添加して、常温で３０分間放置して沈殿させ、分解されていないカゼインをホワットマンＮｏ．４０ろ過紙でろ過させた後、ろ液の２８０ｎｍの吸光度を測定する。タンパク質の定量は、ローリー法により、５４０ｎｍで吸光度を測定し、ウシ血清アルブミンを標準タンパク質に使用し、タンパク質量を測定する。酵素活性単位は１分間で１μＭ／ｍＬのチロシンを生成する酵素の量を１Ｕ（ｕｎｉｔ）とする。
【００１８】
本発明の動物用耳穴洗浄剤には、本発明の効果を損なわない範囲で適量の任意成分を１種単独で又は２種以上を適宜組み合わせて配合することができる。任意成分としては、水、ヒアルロン酸及びその塩、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、１,３−ブチレングリコール、グリセリン等の保湿剤、グレープフルーツ種子抽出物以外の植物抽出物、ブロメライン以外のパパイン等のプロテアーゼ、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルレチン酸ステアリル、イプシロナミノカプロン酸等の抗炎症剤、グレープフルーツ種子抽出物以外の抗菌剤、香料、ｐＨ調製剤、増粘剤、防腐剤、酸化防止剤、ビタミン類、アミノ酸類、生薬等が挙げられる。
【００１９】
本発明の動物用耳穴洗浄剤は、天然成分のみで優れた抗菌洗浄効果を有するため、合成抗菌剤及びエタノール等の抗菌成分、サリチル酸等の洗浄成分を含有しない組成にすることができる。このような組成にすることで、軟弱で敏感な内耳の皮膚に対しても刺激、毒性がなく、高い安全性を有する動物用耳穴洗浄剤となる。合成抗菌剤としては、具体的にイオウ、イソプロピルメチルフェノール、トリクロサン、塩化ベンザルコニウム、イセパマイシン、硫酸ゲンタマイシン、硫酸ネチルマイシン、硫酸フラジオマイシン、エノキサシン、塩酸シブロフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、オフロキサシン、ノルフロキサシン、オルビフロキサシン等が挙げられる。
【００２０】
本発明の動物用耳穴洗浄剤の剤型は特に限定されず、液体、固体、ゲル状、泡状等の剤型にすることができる。この中でも、使用のしやすさの点から、液体にすることが好ましい。動物用耳穴洗浄剤は、上記必須成分、任意成分及び水を混合し、必要によりｐＨを調整することにより得ることができる。使用方法としては、動物用耳穴洗浄剤を耳穴に添加又は挿入する。耳穴洗浄剤は、液体の場合、動物が首を振る等して自発的に耳穴洗浄剤を耳穴外に排出してもよく、固体等の場合は、飼い主が耳穴洗浄剤を取り出してもよい。本発明の動物用耳穴洗浄剤は、イヌ、ネコ等の愛玩動物、特にイヌに好適である。
【実施例】
【００２１】
以下、試験例、実施例及び比較例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に制限されるものではない。
【００２２】
［試験例１］
供試菌株をミューラーヒントン  ブロス（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈ）培地に接種し、３７℃で２４時間培養後、菌を滅菌生理食塩水で１０7ＣＦＵ／ｍＬの濃度に希釈して接種菌液を得た。この接種菌液１ｍＬを試験液（原液）９ｍＬに接種し、３７℃で反応させた。反応２０秒、４０秒、６０秒、１２０秒、１８０秒後、反応液の１ｍＬを氷水で保冷した中和剤（レクチン６ｇ、Ｔｗｅｅｎ８０  ６０ｇ、チオ硫酸ナトリウム８ｇ、Ｌ−ヒスチジン５ｇ、牛血清アルブミン７．２ｇをｐＨ７．３のＳｏｒｅｎｓｏｎ’ｓ（ソレンソン）リン酸バッファー（Ｎａ2ＨＰＯ4  ０．７１ｇとＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2０  ０．２０ｇとを脱イオン水１０００ｍＬに溶解、ｐＨ７．３）に溶解し、１０００ｍＬとしたもの）９ｍＬに接種して１５分間反応させた後、滅菌リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．０）で適当な菌数となるように１０倍段階希釈したものを、ミューラーヒントン寒天平板培地に接種し、３７℃で４８時間培養し、試験液処理後の生残菌数を計測した。なお、ネガティブコントロールとしてＰＢＳ（ｐＨ７．０）を用いた。
【００２３】
表１には、試験液としてグレープフルーツ種子抽出物（商品名「ＤＦ−１００ＬＩＱＵＩＤ（Ｑｕｉｍｉｃａ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｂｒａｓｉｌｅｉｒａ  Ｌｔｄ．，製）」（０．０５ｇ／１００ｍＬ水溶液（ｐＨ５．７）、供試菌株として表中に記載のものを使用した結果を示す。以上のように、グレープフルーツ種子抽出物はスタフィロコッカス・アウレウス及びスタフィロコッカス・インターメディウスに対して優れた抗菌作用を有した。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
［実施例１］
精製水にグレープフルーツ種子抽出物３５０ｍｇ／Ｌ（耳穴洗浄剤最終濃度）を添加して、リン酸カルシウムと酢酸でｐＨを３．８に合わせて耳穴洗浄剤Ａを得た。
【００２６】
［実施例２］
精製水にグレープフルーツ種子抽出物３５０ｍｇ／Ｌ（耳穴洗浄剤最終濃度）及びブロメライン３３０ｍｇ／Ｌ（耳穴洗浄剤最終濃度）を添加して、リン酸カルシウムと酢酸にて、ｐＨを４．０に合わせ耳穴洗浄剤Ｂを得た。
なお、グレープフルーツ種子抽出物は商品名「ＤＦ−１００ＬＩＱＵＩＤ（Ｑｕｉｍｉｃａ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｂｒａｓｉｌｅｉｒａ  Ｌｔｄ．，製）」を使用した。ブロメラインは商品名「Ｂｒｏｍｅｌａｉｎ（Ｇｒｅａｔ  Ｆｏｏｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｏ．Ｌｔｄ．，）製」を使用し、耳穴洗浄剤中の活性は７５Ｕ/ｍＬであった。
【００２７】
実施例１で得られた耳穴洗浄剤Ａ（ｐＨ３．８）と、ｐＨを水酸化ナトリウムで７．０に調整した耳穴洗浄剤Ａ（ｐＨ７．０）を試験液とし、菌株として、スタフィロコッカス・アウレウス１７９株、スタフィロコッカス・アウレウス（外耳道炎由来）、スタフィロコッカス・インターメディウス１１０６株、スタフィロコッカス・インターメディウス１３０１株（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）を使用して、上記試験例１と同様に、抗菌効果を測定した。結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】
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【００２９】
［試験例２］
体重３〜４ｋｇのイヌ１０匹と体重３．５〜４ｋｇのネコ１０匹の片耳に、実施例２で得られた耳穴洗浄剤Ｂ０．６ｍＬを１週間２回・４週間、耳に投与し、未投与の片耳と比較した。耳穴洗浄剤Ｂを投与した片耳は、投与しない片耳と比べ耳垢が著しく減少した。
【００３０】
［実施例３，４、比較例１］
精製水、酢酸及びリン酸水素二カリウムを混合し、さらに、ブロメラインを混合して溶解させた後、グレープフルーツシード抽出物及びマンゴフレーバーを混合して溶解させ、表３に示す組成の耳穴洗浄剤を得た。グレープフルーツ種子抽出物は実施例で用いたものと同じものを使用した。
【００３１】
［試験例３］
得られた耳穴洗浄剤について下記方法で、汚れと臭いについて下記方法で評価した。結果を表中に併記する。
外耳道炎に罹患した（原因がスタフィロコッカスに起因）ビーグル犬各５頭（体重１１〜１５ｋｇ）の罹患した耳に、１週間連続的（毎日朝の食事後）に耳穴洗浄剤１ｍＬを点耳した。点耳後、耳根部をやさしくもんで中まで浸透させ、ビーグル犬が自然に首をふって耳の外についた耳穴洗浄剤をふき取った。１週間後に、耳内部の汚れ状態及び匂いを官能検査（１０名の専門パネル）で、下記評価基準で評価した。表中には１０名の平均値を示す。結果は点数が低いほどよい。
<評価基準>
汚れ評価
１：非常にきれい
２：ややきれい
３：どちらともいえない
４：ややきたない
５：非常にきたない
臭い評価
１：全く臭わない
２：あまり臭う
３：どちらともいえない
４：やや臭う
５：非常に臭う
【００３２】
【表３】
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