(57)【要約】【課題】本発明は、効率的な養殖真珠の生産方法を提供することを目的とする。【解決手段】本発明は、サイトカインの存在下で挿核手術を行なう工程、より好ましくはサイトカインで処理された真珠核及び／又は外套膜片を用いて挿核手術を行なう工程を含む養殖真珠の生産方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
サイトカインの存在下で挿核手術を行なう工程を含む養殖真珠の生産方法。
【請求項２】
サイトカインで処理された真珠核及び／又は外套膜片を用いて挿核手術を行なう工程を含む請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記サイトカインがインターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−９、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、インターロイキン−１３、インターロイキン−１４、インターロイキン−１５、カルジオトロフィン、毛様体神経栄養因子、エリスロポエチン、成長ホルモン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージ刺激因子、白血病阻止因子、オンコスタチンＭ、及びプロラクチンからなる群から選択される少なくとも１種である請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
前記サイトカインがインターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ，インターフェロン−κ，インターフェロン−ω，インターフェロン−τ，インターロイキン−１０、インターロイキン−２０、インターロイキン−２２，インターロイキン−２８Ａ，インターロイキン−２８Ｂ及びインターロイキン−２９からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１又は２記載の方法。
【請求項５】
前記サイトカインがインターロイキン−６、及びインターロイキン−１２からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１又は２記載の方法。
【請求項６】
前記サイトカインがインターロイキン−１０、インターロイキン−１９、インターロイキン−２０、インターロイキン−２２、及びインターロイキン−２４からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１又は２記載の方法。
【請求項７】
前記サイトカインがインターロイキン−６、及びインターロイキン−１０からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１又は２記載の方法。
【請求項８】
前記サイトカインがヒト由来サイトカインである請求項１〜７のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アコヤガイの斃死を抑制するとともに真珠の品質を向上することができる養殖真珠の生産方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
真珠を生産するアコヤガイ等の真珠母貝に赤変病が発生すると、真珠母貝が大量に斃死してしまう。赤変病はウイルスによる感染症と考えられ、平成８年頃から西日本を中心に発生して養殖真珠製造産業に大きな打撃を与えている。
【０００３】
また、軽度の感染で経過した母貝も、挿核手術（真珠の核となる物質を入れる作業）によるストレスによって病気を発症して急激に斃死するか、真珠を作らないまま経過するか、或いは真珠ができたとしても品質が著しく悪いため、結果的に養殖真珠の生産性が著しく低下する。
【０００４】
なお本発明に関連する技術文献情報として下記の文献が挙げられるが、これらは以下に詳述する本発明の構成を示唆するものではない。
【０００５】
【特許文献１】特開平９−２８５２９１号公報
【特許文献２】特開２０００−２４５４５２号公報
【特許文献３】特許第３１５１０６８号公報
【非特許文献１】Miyazaki T., Taniguchi T., Hirayama J., Nozawa N.: Receptors for recombinant feline interferon-omega in hemocytes of the Japanese pearl oyster Pinctada fucata martensii. Dis Aquat Organ., 2002, 29; 51(2): 135-8
【非特許文献２】Miyazaki T., Nozawa N., Kobayashi T.: Clinical trial results on the use of a recombinant feline interferon-omega to protect Japanese pearl oysters Pinctada fucata martensii from akoya-virus ingection. Dis Aquat Organ., 2000, 25; 43(1): 15-26
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、効率的な養殖真珠の生産方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は以下の発明を包含する。
（１）サイトカインの存在下で挿核手術を行なう工程を含む養殖真珠の生産方法。
（２）サイトカインで処理された真珠核及び／又は外套膜片を用いて挿核手術を行なう工程を含む（１）記載の方法。
（３）前記サイトカインがインターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−９、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、インターロイキン−１３、インターロイキン−１４、インターロイキン−１５、カルジオトロフィン、毛様体神経栄養因子、エリスロポエチン、成長ホルモン、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージ刺激因子、白血病阻止因子、オンコスタチンＭ、及びプロラクチンからなる群から選択される少なくとも１種である（１）又は（２）記載の方法。
（４）前記サイトカインがインターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ，インターフェロン−κ，インターフェロン−ω，インターフェロン−τ，インターロイキン−１０、インターロイキン−２０、インターロイキン−２２，インターロイキン−２８Ａ，インターロイキン−２８Ｂ及びインターロイキン−２９からなる群から選択される少なくとも１種である（１）又は（２）記載の方法。
（５）前記サイトカインがインターロイキン−６、及びインターロイキン−１２からなる群から選択される少なくとも１種である（１）又は（２）記載の方法。
（６）前記サイトカインがインターロイキン−１０、インターロイキン−１９、インターロイキン−２０、インターロイキン−２２、及びインターロイキン−２４からなる群から選択される少なくとも１種である（１）又は（２）記載の方法。
（７）前記サイトカインがインターロイキン−６、及びインターロイキン−１０からなる群から選択される少なくとも１種である（１）又は（２）記載の方法。
（８）前記サイトカインがヒト由来サイトカインである（１）〜（７）のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により養殖真珠の生産における真珠母貝の斃死が抑制される。
また、本発明により優れた品質を有する真珠を効率よく製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
一般に、養殖真珠を生産する場合は、例えばアコヤガイ等の真珠母貝の生殖腺内に真珠核及び外套膜片（「ピース」と呼ばれることがある）を挿入する作業（本明細書において「挿核手術」と称する）を行った後、その母貝を海に戻す。その結果、母貝の生殖腺内に挿入された外套膜片が成長して真珠核を包み、表面から真珠物質を分泌することによって養殖真珠が作られる。
【００１０】
本発明に係る養殖真珠の生産方法は、この挿核手術をサイトカインの存在下で行なうことを特徴とする。本方法としてはより具体的には（１）サイトカイン溶液中で真珠母貝を開いて真珠核及び／又は外套膜片を挿入する方法、（２）真珠母貝を開き、開口部にサイトカイン溶液を注入し、次いで真珠核及び／又は外套膜片を挿入する方法、（３）サイトカイン溶液に浸漬した真珠核及び／又は外套膜片を真珠母貝に挿入する方法、（４）サイトカイン溶液を塗布した真珠核及び／又は外套膜片を真珠母貝に挿入する方法、（５）真珠母貝に真珠核及び／又は外套膜片を挿入するのと同時に、或いは挿入するのに続いて、サイトカイン溶液を真珠母貝に注入する方法、或いはこれらの方法の二種以上を組合せた方法等が挙げられる。上記（１）〜（５）において用いられるサイトカイン溶液としては、サイトカインを溶解した海水、海産無脊椎動物用の生理的食塩水、又は真珠母貝に生理的に許容される緩衝液が好ましい。本明細書において上記（３）又は（４）記載の工程（上記（３）又は（４）記載の工程を組合せた工程を含む）を「サイトカインで処理された真珠核及び／又は外套膜片を用いて挿核手術を行なう工程」と表現する場合がある。本明細書において「真珠核及び／又は外套膜片」という表現は、真珠核又は外套膜片の少なくとも何れか一方、好ましくは両方を用いて所定の操作を行なうことを意味する。
【００１１】
本発明に用いられるサイトカインとしては、インターロイキン−６もしくはインターロイキン−１０、或いはこれらとレセプターが共通するサイトカインもしくは構造上類似するサイトカインが好ましく、インターロイキン−６又はインターロイキン−１０が特に好ましい。
【００１２】
インターロイキン−６とレセプターが共通するサイトカインとしてはクラスＩサイトカイングループと称される一群のサイトカインが挙げられ、具体的には、インターロイキン−２、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−５、インターロイキン−６、インターロイキン−７、インターロイキン−９、インターロイキン−１１、インターロイキン−１２、インターロイキン−１３、インターロイキン−１４、インターロイキン−１５、カルジオトロフィン、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、エリスロポエチン、成長ホルモン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージ刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、白血病阻止因子（ＬＩＦ）、オンコスタチンＭ、及びプロラクチンからなる群から選択される少なくとも１種が挙げられる。
【００１３】
インターロイキン−６と構造上類似するものとしてはインターロイキン−６グループと称される一群のサイトカインが挙げられ、具体的にはインターロイキン−６、及びインターロイキン−１２からなる群から選択される少なくとも１種が挙げられる。
【００１４】
インターロイキン−１０とレセプターが共通するサイトカインとしてはクラスＩＩサイトカイングループと称される一群のサイトカインが挙げられ、具体的には、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−δ，インターフェロン−κ，インターフェロン−ω，インターフェロン−τ，インターロイキン−１０、インターロイキン−２０、インターロイキン−２２，インターロイキン−２８Ａ，インターロイキン−２８Ｂ及びインターロイキン−２９からなる群から選択される少なくとも１種が挙げられる。
【００１５】
インターロイキン−１０と構造上類似するものとしてはインターロイキン−１０グループと称される一群のサイトカインが挙げられ、具体的にはインターロイキン−１０、インターロイキン−１９、インターロイキン−２０、インターロイキン−２２、及びインターロイキン−２４からなる群から選択される少なくとも１種が挙げられる。
【００１６】
上記の各種サイトカインの起源となる動物は特に限定されないがヒトであることが好ましい。
【００１７】
上記の各種サイトカインとしては天然に存在するものに限定されず、変異体又は修飾体であって対応する天然型と同様の活性を有するものも包含される。例えば天然型サイトカインの化学的安定性を向上させることを目的として或いは工業的な生産性を向上させることを目的として改変されたサイトカインであって天然型サイトカインと同様の活性を有するものを好適に使用することができる。ここで「同様の活性」とは、本発明の目的に関してサイトカインとして質的に同一の活性であることを意味し、活性の強弱としては異なるものであってよいことを意味するが、活性の強弱においても同程度又は同一であることが好ましい。
【実施例】
【００１８】
ヒトインターロイキン−６（ＩＬ−６、組換え体、和光純薬株式会社製、Ｃｏｄｅ  ０９９−０４６３１）と、ヒトインターロイキン−１０（ＩＬ−１０、組換え体、和光純薬株式会社製、Ｃｏｄｅ  ０９３−０４６５１）を、表１に示す海産無脊椎動物用生理食塩水に各々溶解し、ＩＬ−６又はＩＬ−１０が１、１０、又は１００ｎｇ／ｍＬとなるように希釈した。
【００１９】
【表１】
2007000047.tif 000002
【００２０】
各希釈溶液に真珠核（淡水産二枚貝の貝殻を球状に加工したもの）及びピース（アコヤガイの外套膜の小片）とを１０分間浸漬した。
【００２１】
アコヤガイ（真珠母貝）の生殖巣付近にメスで切り込みを入れ、上記処理後の真珠核とピースを挿入器を用いて挿核した。
挿核後、海中に垂下して６ヶ月間管理した。
【００２２】
対照実験として真珠核及びピースの浸漬液としてインターロイキンを含まない上記生理的食塩水を用いた以外は同様の手順で挿核手術を行い、海中に垂下して６ヶ月間管理した。
【００２３】
表２に各試験区における６ヶ月後のアコヤガイの生存率を示す。対照区では，１０個体中２個体が生残しただけであるのに対して、１００ｎｇ／ｍｌ投与区ではＩＬ−６投与区では６個体、ＩＬ−１０投与区では５個体が生残した。１ｎｇ／ｍｌあるいは１０ｎｇ／ｍｌ投与区ではいずれも１０個体中３〜４個体が生残し、対照区より高い生残率を示した。
【００２４】
【表２】
2007000047.tif 000003
【００２５】
表３に各試験区において６ヵ月後にアコヤガイから回収された真珠の個数を示す。対照区では、挿核した真珠核２０個中５個の真珠が回収された。一方、ＩＬ−６およびＩＬ−１０投与区における回収個数は何れの処理濃度においても挿核した真珠核２０個中５〜７個であり、対照区とほとんど差は見られなかった。しかしながら、対照区で得られた真珠は質が悪く（図１）、商品として適さないものであったのに対して、ＩＬ−６およびＩＬ−１０投与区で得られた真珠は質が良い（図２）ものであった。
【００２６】
なお真珠の質は、表面のつや（照り）と色の深み（巻き）を指標として常法に従って評価した。これらの指標は当業者が真珠の評価に通常用いるものである。一般に、色に深みのあるものは挿入した核の周りの真珠層に厚みがあることを示しており「巻きが厚い」と称されることから、色の深みは真珠の品質の評価指標として重要視される。なお、色の種類は、一般にピンクが上等品とされる。しかし、これは流行にも左右されるため一時的な評価の指標にはなるが普遍的な評価指標としては適切ではないことから、今回の品質評価では指標として用いなかった。
【００２７】
【表３】
2007000047.tif 000004
【００２８】
すなわち本実験では、養殖真珠の生産においてサイトカイン類の存在下で挿核手術を行なうことにより真珠母貝の生存率を高めることができること、及び品質の優れた真珠を効率よく製造できることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】対照区から回収された真珠の写真である。
【図２】ＩＬ−１０、１００ｎｇ／ｍＬ投与区から回収された真珠の写真である。
【図１】
2007000047.tif 000005
【図２】
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