(57)【要約】      （修正有）【課題】生体試料を培養して観察する場合に、その生体試料の観察・解析結果の信頼性を確保することが可能な生体試料培養観察装置、生体試料培養観察方法、および生体試料培養観察用プログラムを提供する。【解決手段】生体試料培養観察装置本体２は、経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養し、前記培養されている前記生体試料を経時的に観察し、制御・解析装置３は、前記生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析し、当該解析の結果である解析結果情報を生成し、前記培養環境の監視結果である培養環境情報と、前記解析条件の情報と、および前記解析結果情報とを関連づけて記憶する。【選択図】図１
2007020422.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養する培養手段と、
前記培養されている前記生体試料を経時的に観察する観察手段と、
前記生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析し、当該解析の結果である解析結果情報を生成する解析手段と、
前記培養環境の監視結果である培養環境情報と、前記解析条件の情報と、および前記解析結果情報とを関連づけて記憶する記憶手段と、
を備えたことを特徴とする生体試料培養観察装置。
【請求項２】
前記培養環境情報は、前記培養環境における温度、湿度、および培養ガスの濃度のうちの少なくとも１つに関する情報が含まれることを特徴とする請求項１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項３】
前記培養環境情報には、前記生体試料を培養する培養液の交換タイミング、前記培養液の種類、前記培養液の交換量、前記培養液のｐＨ、前記培養液の塩濃度、前記培養液の吸光度、前記培養液の自家蛍光、前記培養液の溶存酸素濃度、試薬の投与タイミング、前記試薬の種類、および前記試薬の量のうちの少なくとも１つに関する情報が含まれることを特徴とする請求項１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項４】
前記培養環境情報には、前記培養手段で前記生体試料を培養する際に前記生体試料を保持する保持手段の種類に関する情報が含まれることを特徴とする請求項２または請求項３に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項５】
前記保持手段の種類を判別する判別手段を備えたことを特徴とする請求項４に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項６】
前記判別手段は、得られた前記保持手段の画像のデータに基づいて、前記保持手段の種類を判別することを特徴とする請求項５に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項７】
前記保持手段の画像を撮影する撮像手段を更に備えることを特徴とする請求項６に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項８】
前記判別手段は、予め保持された複数種の保持手段のパターンデータに基づいて、前記を保持手段の種類を判別することを特徴とする請求項５に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項９】
前記解析条件には、少なくとも時間に関する情報が含まれることを特徴とする請求項１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１０】
前記記憶手段は、前記生体試料に関する経時的な前記解析結果情報と、当該解析結果情報に時間的に対応する前記培養環境情報とを記憶することを特徴とする請求項９に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１１】
前記解析手段は、前記観察手段が観察した前記生体試料個々についての前記解析結果情報を生成し、
前記記憶手段は、前記培養環境情報と、個々の前記生体試料に関する前記解析結果情報とを、個々の前記生体試料毎に関連づけて記憶することを特徴とする請求項１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１２】
前記記憶手段は、少なくとも個々の前記生体試料の配置に関する情報を含む前記解析結果情報を、個々の前記生体試料に関連づけて記憶することを特徴とする請求項１１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１３】
前記記憶手段は、少なくとも個々の前記生体試料の輝度に関する情報を含む前記解析結果情報を、個々の前記生体試料に関連づけて記憶することを特徴とする請求項１１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１４】
前記解析に用いられる解析条件に係るパラメータを前記解析手段に対して設定するパラメータ設定手段を備えたことを特徴とする請求項１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１５】
情報を表示するための表示手段と、
前記記憶手段に記憶されている、前記設定された解析条件に係るパラメータと、当該パラメータに対応する前記解析結果情報と、および前記解析結果情報に対応する前記培養環境情報とに基づいた解析の結果を所定の表示形式で前記表示手段に表示させる出力手段と、
を備えたことを特徴とする請求項１４に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１６】
前記所定の表示形式は、グラフ形式、図形式、表形式、記号形式および数値形式等であることを特徴とする請求項１４に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１７】
前記培養されている前記生体試料のうち、前記観察手段による観察の対象とする観察対象領域を設定する観察対象領域設定手段を備えたことを特徴とする請求項１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１８】
前記生体試料には、生細胞が含まれることを特徴とする請求項１に記載の生体試料培養観察装置。
【請求項１９】
経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養する培養工程と、
前記培養されている前記生体試料を経時的に観察する観察工程と、
前記生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析し、当該解析の結果である解析結果情報を生成する解析工程と、
前記培養環境の監視結果である培養環境情報と、前記解析条件の情報と、および前記解析結果情報とを関連づけて記憶する記憶工程と、
を含むことを特徴とする生体試料培養観察方法。
【請求項２０】
コンピュータに、
経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養する培養工程と、
前記培養されている前記生体試料を経時的に観察する観察工程と、
前記生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析し、当該解析の結果である解析結果情報を生成する解析工程と、
前記培養環境の監視結果である培養環境情報と、前記解析条件の情報と、および前記解析結果情報とを関連づけて記憶する記憶工程と、
を実行させることを特徴とする生体試料培養観察用プログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体試料培養観察装置、生体試料培養観察方法、および生体試料培養観察用プログラムに関し、詳細には、生体試料を経時的に監視された培養環境下で培養し、当該生体試料を経時的に観察する生体試料培養観察装置、生体試料培養観察方法、および生体試料培養観察用プログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の遺伝子解析技術の進歩に伴って、人を含む多くの生物における遺伝子配列が明らかになると共に解析されたタンパク質等の遺伝子産物と疾病との因果関係も少しずつ解明され始めている。また、今後さらに、各種タンパク質や遺伝子等を網羅的且つ統計的に解析するため、細胞を用いた様々な検査方法や装置が考えられ始めている。
【０００３】
これまで、培養を行っている細胞の状態の変化、あるいは細胞の薬物等に対する応答を観察するのに、細胞集団の値の平均値を代表的特性として扱ってきた。しかるに、実際には細胞の集団の中で細胞周期が同調しているものは極少ないため、細胞周期を一定にするための操作が必要であった。また、この操作を行っても一致するのはせいぜい１〜２サイクル程度で長期間の解析はできなかった。
【０００４】
すなわち、細胞は同種の細胞で同じ環境で培養されていても遺伝子的には異なっており、必ずしも同じ反応をするとは限らない。例えば、特許文献１では、特定の一細胞を長期間観察するために、基板状に設けた穴からなる細胞培養部と、細胞培養部の上面を覆う半透膜と、半透膜上部に設けた培養液交換部を有する細胞培養容器とを備え、細胞培養容器への細胞培養液の供給手段と、細胞培養部内の細胞を長期観察することのできる顕微光学光学手段とを具備した一細胞長期培養顕微観察装置を提案している。
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−１５３２６０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１では、特定の一細胞を長期間観察してその遺伝子、発現ｍＲＮＡ等の解析、または生化学的測定を行うものであるが、その特定の一細胞を長期間観察する場合に、その間における培養環境のデータを逐次管理しているということに関する記載はない。細胞等の生体試料を長期間培養し長期間観察する場合、観察により得られた数値データを解析する必要がある。特に、僅かな環境変化によって活性や性質が異なってしまうような生体試料の場合、観察により得られたデータが適した環境の下で得られたものか否かを判断することが重要である。しかし、観察が長期に及ぶ場合、観察により得られたデータが膨大な量に及ぶことから、このデータが信頼に足るものか否かを判断するのに非常に時間及び手間が掛かる。更に、このデータの信頼性の確認は、単に観察により得られた数値データからだけで行うことは非常に困難である。例えば、得られたデータの確認を一つ一つ手動で行う場合、データを取得する際に要する倍以上の時間を要することになってしまう。このため、観察により膨大なデータを取得し、このデータを解析したものの、この取得したデータの信頼性が低くなってしまうという問題が起こりうる。
【０００７】
本発明は、上記に鑑みてなされたものであり、生体試料を培養して観察する場合に、たとえ長期間の培養、観察を行う場合であっても、その生体試料の観察・解析結果の信頼性を確保することが可能な生体試料培養観察装置、生体試料培養観察方法、および生体試料培養観察用プログラムを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記した課題を解決して、本発明の目的を達成するために、本発明の装置は、経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養する培養手段と、前記培養されている前記生体試料を経時的に観察する観察手段と、前記生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析し、当該解析の結果である解析結果情報を生成する解析手段と、前記培養環境の監視結果である培養環境情報と、前記解析条件の情報と、および前記解析結果情報とを関連づけて記憶する記憶手段と、を備えたことを特徴とする。
【０００９】
これにより、生体試料の観察と培養環境の監視とを同時に行って、観察・解析結果と培養環境の状態とを関連付けて蓄積することができ、培養している生体試料の観察・解析結果の情報について、その培養に不可欠な培養環境がどのような条件の下で得られた情報なのかを常に明確にすることができ、生体試料の観察・解析結果の信頼性を確保することができる。また、観察・解析結果を観察者が容易に理解できるようになる。
【００１０】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記培養環境情報は、前記培養環境における温度、湿度、および培養ガスの濃度のうちの少なくとも１つに関する情報が含まれることが望ましい。これにより、培養を行う際に最低限確認が必要な事項を確実に監視することができる。
【００１１】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記培養環境情報には、前記生体試料を培養する培養液の交換タイミング、前記培養液の種類、前記培養液の交換量、前記培養液のｐＨ、前記培養液の塩濃度、前記培養液の吸光度、前記培養液の自家蛍光、前記培養液の溶存酸素濃度、試薬の投与タイミング、前記試薬の種類、および前記試薬の量のうちの少なくとも１つに関する情報が含まれることが望ましい。これにより、培養時に生体試料の状態を確認する場合に必要となる他の事項を確実に監視することができる。
【００１２】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記培養環境情報には、前記生体試料を培養する際に前記生体試料を保持する保持手段の種類に関する情報が含まれることが望ましい。
これにより、生体試料を培養する容器等の種類を、培養環境に関する情報として役立てることができる。
【００１３】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記保持手段の種類を判別する判別手段を備えたことが望ましい。これにより、容器の種類を自動で判別することができる。
【００１４】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記判別手段は、得られた前記保持手段の画像のデータに基づいて、前記保持手段の種類を判別することが望ましい。これにより、得られた画像に基づいて簡単な方法で容器の種類を判別することができる。
【００１５】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記保持手段の画像を撮影する撮像手段を更に備えることが望ましい。これにより、容器の種類の判別に用いるための画像を、この判別手段を備える生体試料観察装置自体で持っているカメラ等の撮像手段で取得することができる。
【００１６】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記判別手段は、予め保持された複数種の保持手段のパターンデータに基づいて、前記を保持手段の種類を判別することが望ましい。これにより、簡単な方法で容器の種類を判別することができる。
【００１７】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記解析条件には、少なくとも時間に関する情報が含まれることが望ましい。これにより、時間的な情報に対応した解析結果を記憶できる。
【００１８】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記記憶手段は、前記生体試料に関する経時的な前記解析結果情報と、当該解析結果情報に時間的に対応する前記培養環境情報とを記憶することが望ましい。これにより、解析結果を時系列的に記憶することができる。
【００１９】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記解析手段は、前記観察手段が観察した前記生体試料個々についての前記解析結果情報を生成し、前記記憶手段は、前記培養環境情報と、個々の前記生体試料に関する前記解析結果情報とを、個々の前記生体試料毎にそれぞれ対応付けて記憶することが望ましい。これにより、培養している生体試料を例えば群としてだけではなく、個々の生体試料単位で観察および解析することができる。
【００２０】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記記憶手段は、少なくとも個々の前記生体試料の配置に関する情報を含む前記解析結果情報を、個々の前記生体試料に関連づけて記憶することが望ましい。これにより、一般的な観察である個々の生体試料の動きの追跡を行うことができる。
【００２１】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記記憶手段は、少なくとも個々の前記生体試料の輝度に関する情報を含む前記解析結果情報を、個々の前記生体試料に関連づけて記憶することが望ましい。これにより、個々の生体試料の輝度の推移を追跡することができる。
【００２２】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記解析に用いられる解析条件に係るパラメータを前記解析手段に対して設定するパラメータ設定手段を備えたことが望ましい。これにより、必要な解析条件のみの下で解析を行ったり、解析結果のうち必要な条件の下で行った解析結果のみ出力したりすることができる。
【００２３】
また、本発明の好ましい態様によれば、情報を表示するための表示手段と、前記記憶手段に記憶されている、前記設定された解析条件に係るパラメータと、当該パラメータに対応する前記解析結果情報と、および前記解析結果情報に対応する前記培養環境情報とに基づいた解析の結果を所定の表示形式で前記表示手段に表示させる出力手段と、を備えたことが望ましい。これにより、表示手段で各解析結果を視覚的に表示させ、操作者が結果を確認できる。
【００２４】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記所定の表示形式は、グラフ形式、図形式、表形式、記号形式、および数値形式等であることが望ましい。これにより、解析結果情報、解析条件のパラメータ、培養環境情報を、グラフや図等種々の表示形式で表示できる。
【００２５】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記培養されている前記生体試料のうち、前記観察手段による観察の対象とする観察対象領域を設定する観察対象領域設定手段を備えたことが望ましい。これにより、コンピュータ等で、培養手段の内部において特に観察を行う1つまたは複数の領域等を必要に応じて選択できる。
【００２６】
また、本発明の好ましい態様によれば、前記生体試料には、生細胞が含まれることが望ましい。これにより、生細胞の観察を行うことができる。
【００２７】
上記した課題を解決して、本発明の目的を達成するために、本発明の方法は、経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養する培養工程と、前記培養されている前記生体試料を経時的に観察する観察工程と、前記生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析し、当該解析の結果である解析結果情報を生成する解析工程と、前記培養環境の監視結果である培養環境情報と、前記解析条件の情報と、および前記解析結果情報とを関連づけて記憶する記憶工程と、を含むことを特徴とする。
【００２８】
上記した課題を解決して、本発明の目的を達成するために、本発明のプログラムは、コンピュータに、経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養する培養工程と、前記培養されている前記生体試料を経時的に観察する観察工程と、前記生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析し、当該解析の結果である解析結果情報を生成する解析工程と、前記培養環境の監視結果である培養環境情報と、前記解析条件の情報と、および前記解析結果情報とを関連づけて記憶する記憶工程と、を実行させることを特徴とする。
【発明の効果】
【００２９】
本発明によれば、培養手段は経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養し、観察手段は培養されている生体試料を経時的に観察し、解析手段は記生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析し、当該解析の結果である解析結果情報を生成し、記憶手段は培養環境の監視結果である培養環境情報と、解析条件の情報と、および解析結果情報とを関連づけて記憶することとしたので、生体試料を培養して観察する場合に、その生体試料の観察・解析結果の信頼性を確保することが可能な生体試料培養観察装置を提供することが可能になるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
以下に添付図面を参照して、この発明にかかる生体試料培養観察装置、生体試料培養観察方法、および生体試料培養観察用プログラムの最良な実施の形態を詳細に説明する。なお、この発明の実施の形態によりこの発明が限定されるものではなく、また、実施の形態の中で説明されている特徴の組み合わせのすべてが発明の解決手段に必要であるとは限らない。また、下記実施の実施例における構成要素には、当業者が容易に想定できるものまたは実質的に同一のものが含まれる。
【００３１】
（生体試料培養観察装置の構成）
図１は、本実施の形態に係る生体試料培養観察装置１の構成例を示す図である。図２は、電動ステージの構成を示す平面図である。図３はインキュベータボックスの詳細な構成を示す平面図である。図４は制御・解析装置のブロック構成例を示す図である。
【００３２】
生体試料培養観察装置１は、図１に示すように、インキュベータボックス内で培養される生体試料の経時的変化を連続的に観察する装置である。以下では、生体試料として生細胞を例示して説明する。また、生体試料を保持する保持手段としてウェルプレートを使用した場合について説明する。
【００３３】
生体試料培養観察装置１は、図１に示すように、大別すると、経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養し、かつ、培養されている生体試料を経時的に観察する生体試料培養観察装置本体２と、生体試料培養観察装置本体２を制御するとともに、生体試料培養観察装置２で生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析する制御・解析装置３とを備えている。
【００３４】
生体試料培養観察装置本体２は、培養ユニット１００と、インキュベータボックス２００と、検出ユニット３００と、撮像手段としてのカメラ３５１と、透過光学系３５２と、透過ランプ３５３と、を有している。
【００３５】
インキュベータボックス２００の上方には、カメラ３５１と、透過ランプ３５３と、透過光学系３５２とが配置されている。カメラ３５１は、電動ステージ３１０のＸＹ平面の原点位置に取り付けられており、インキュベータボックス２００内のウェルプレート２０１の全体または一部を撮像して、その撮像画像を制御・解析装置３に出力する。透過ランプ３５３の照明光は透過光学系３５２を介してインキュベータボックス２００を照明する。カメラ３５１は、例えばウェルプレートが納まる程度の視野を有することが望ましい。
【００３６】
検出ユニット３００は、インキュベータボックス２００を保持する電動ステージ３１０と、ＡＦ機能、ＡＥ機能、ズーム機能等を有し、インキュベータボックス２００内のウェルプレート２０１の観察対象領域を撮像してその撮像画像を出力する撮像機構とを有する顕微鏡に準じた構成となっている。
【００３７】
電動ステージ３１０は、インキュベータボックス２００を保持している。電動ステージ３１０の下方には、インキュベータボックス２００内に収納されているウェルプレート２０１上の細胞を観察するために、対物レンズ３２１、レボルバ３２２、ＡＦユニット３２３、ハーフミラー３２４等の光学系ユニット、形態観察ポート３２５，波長選択子群３２６、第１の撮像部（例えばＣＣＤ）３２７，レンズ３２８，第２の撮像部（例えばＣＣＤやフォトマルチプレイヤ）３２９、投光管３３１、ファン３３２，およびランプ３３４等が配置されている。ファン３３２は、検出ユニット３００内での温度上昇を防止するために用いられる。
【００３８】
対物レンズ３２１は、複数の倍率の異なるレンズを有しており、レボルバ３２２を回転して変更することにより、所望の倍率のレンズを選択することが可能である。尚、対物レンズ３２１に用いられるレンズは、できるだけＮＡ（開口数）が大きいものが望ましい。
【００３９】
形態観察ポート３２５は、対物レンズ３２１、レボルバ３２２、ＡＦユニット３２３、ハーフミラー３２４を介して入力される被写体像を第１の撮像部３２７に結像する。第１の撮像部３２７は被写体像を電気信号に変換して得られる撮像画像（形態画像）を図示しないインターフェイスを介して上記制御・解析装置３に出力する。
【００４０】
波長選択子群３２６は、波長の異なるフィルタが配置された波長選択用ターレットが配置されており、波長選択用ターレットを回転して変更することにより、所望する波長特性のフィルタを選択することが可能である。波長選択子群３２６には、ランプ３３４および投光管３３１を介して投影光が入射する。波長選択子群３２６は、対物レンズ３２１、レボルバ３２２、ＡＦユニット３２３、ハーフミラー３２４を介して入力される被写体像が、波長選択子群３２６のフィルタを介してレンズ３２８で第２の撮像部３２９に結像される。第２の撮像部３２９は被写体像を電気信号に変換して得られる撮像画像（蛍光画像）を図示しないインターフェイスを介して上記制御・解析装置３に出力する。
【００４１】
培養ユニット１００は、培養液瓶１０１，１０２，１０３と、廃液瓶１０４と、温水瓶１０５と、培養液ポンプ１１１と、培養液供給チューブ１１２と、培養液排出チューブ１１４と、温水ポンプ１１５と、温水供給チューブ１１６等を備えている。培養液瓶１０１，１０２，１０３の培養液温度は、不図示の培養液温度制御部を介して制御・解析装置３で制御されている。また、培養液瓶１０１，１０２，１０３は、培養液ポンプ１１１に接続されている。この培養液ポンプ１１１を駆動することで培養液瓶１０１，１０２，１０３から温度制御された培養液が培養液供給チューブ１１２を介してインキュベータボックス２００に供給されるようになっている。この培養液ポンプ１１１は、例えば、ベリスタポンプ等の循環ポンプであり、不図示の培養液ポンプ制御部を介して制御・解析装置３により、その動作タイミング（間欠または連続）および流量等が制御されている。また、培養液瓶１０１，１０２，１０３内に収納されている培養液の培養ガス（例えば二酸化炭素を含む）の濃度は、不図示の培養ガス濃度制御部を介して制御・解析装置３により、所定のｐＨ値が維持されるように培養ガスの流量および供給タイミング等が制御されている。培養液供給チューブ１１２から供給された培養液は、インキュベータボックス２００の内部を満たした後、培養液排出チューブ１１４を介して廃液瓶１０４へ排出されるようになっている。
【００４２】
温水瓶１０５の温水温度は、不図示の温水温度制御部を介して制御・解析装置３で制御されている。また、温水瓶１０５は、温水ポンプ１１５に接続されている。この温水ポンプ１１５を駆動することで、温水瓶１０５から温度制御された温水が温水供給チューブ１１６を介してインキュベータボックス２００に供給されるようになっている。温水ポンプ１１５は、例えば、ベリスタポンプ等の循環ポンプであり、不図示の温水ポンプ制御部を介して制御・解析装置３により、その動作タイミングおよび流量等が制御されている。
【００４３】
上述した培養液ポンプ制御部（不図示）、培養ガス濃度制御部（不図示）、および温水ポンプ制御部（不図示）は、制御・解析装置３に接続され、操作者が設定された培養環境になるように総合的に制御されるようになっている。また、細胞への滅菌性を確立するため、インキュベータボックス２００の内部や培養液瓶１０１，１０２，１０３、培養液ポンプ１１１、培養液供給チューブ１１２および培養液排出チューブ１１６等の培養液の流路に関係する個所は、滅菌処理可能に構成されている。
【００４４】
上記電動ステージ３１０は、図１および図２に示すように、図示しないモータによって駆動され、ＸＹ方向（水平方向）に移動可能に構成されている。上記電動ステージ３１０は、Ｘ軸動作ステージ３１２をＸ軸方向に移動可能に支持し、その開口部に対物レンズが取り付けられているベース３１１と、ベース３１１に対してＸ軸方向に移動可能に支持されたＸ軸動作ステージ３１２と、Ｘ軸動作ステージ３１２にＹ軸方向に移動可能に支持され、インキュベータボックス２００を保持するＹ軸動作ステージ３１３とを備えている。
【００４５】
Ｘ軸動作ステージ３１２およびＹ軸動作ステージ３１３は、ウェルプレート２０１を検出ユニット３００で下方から撮像するために、開口部３１２ａおよび３１３ａが形成されている。
【００４６】
Ｘ軸動作ステージ３１２およびＹ軸動作ステージ３１３は、図示しないモータによって独立に駆動される。電動ステージ３１０を介してインキュベータボックス２００をＸＹ方向に移動させてその観察対象領域（撮像視野）を変更することができる。
【００４７】
インキュベータボックス２００は、図１および図３に示すように、ウェルプレート２０１を収納可能な貫通孔を有すると共に熱伝導に優れた材質、例えば、ステンレスやアルミで形成された筐体２０２と、該筐体２０２の貫通孔を上下から塞ぐ光学的に平滑な一対のガラス板（不図示）とを備えている。筐体２０２内部には、培養液供給チューブ１１２から培養液が供給され、また、不要となった培養液は培養液排出チューブ１１４から排出される。
【００４８】
また、インキュベータボックス２００には、加温部２０３が取り付けられている。加温部２０３は、内部に温水を流通させるリング状の水槽２０３ａを有しており、温水供給チューブ１１６を介して水槽２０３ａに温水を供給する。これにより、水槽２０３ａ内に温水を循環させることができ、温水の熱を筐体２０２を介して培養液に伝達することが可能である。このように、インキュベータボックス２００は、ウォーターバスの如く加温されて、急激な温度変化を生じることなく培養液の温度を一定に維持することが可能である。また、筐体２０２内部には、温度センサ２０４や図示しないＣＯ2センサ等の環境条件検出手段が設けられており、この検出結果（監視結果）は培養環境情報として制御・解析装置３に出力される。
【００４９】
図１に示す制御・解析装置３は、通常のパーソナルコンピュータやワークステーション等のコンピュータで構成することができる。図１では、制御・解析装置３を機能構成図で示している。制御・解析装置３は、図１に示すように、本体制御手段４０１と、培養環境・観察対象領域・解析条件設定手段４０２と、解析手段４０３と、記憶手段４０４と、解析結果出力手段４０５と、表示手段４０６とを備えている。尚、制御・解析装置３は例えば１台のコンピュータ等からなるものとは限らず、複数のコンピュータを用いてなる構成であってもよい。例えば、観察、制御、解析、情報管理等の各動作を別々のコンピュータを用いて、同時又は別々のタイミングで行うことが考えられる。また、制御・解析装置３は、例えば別室等から生体試料培養観察装置本体２を遠隔操作ができるように構成してもよい。
【００５０】
本体制御手段４０１は、培養環境・観察対象領域・解析条件設定手段４０２で設定された培養環境および生体細胞の観察対象領域となるように、生体試料培養観察装置本体２を制御する。培養環境・観察対象領域・解析条件設定手段４０２は、生体試料培養観察装置本体２の培養環境を設定する。ここで、培養環境としては、例えば、生体試料を培養する温度、湿度、培養ガスの濃度、培養液の交換タイミング、培養液の交換量、培養液のｐＨ、培養液の塩濃度、培養液の吸光度、培養液の自家蛍光、培養液の溶存酸素濃度、試薬の投与タイミング、試薬の種類、試薬の量、生体試料を保持する保持手段（容器）の種類等を使用することができる。これら培養環境情報のうち、生体試料を培養する温度、湿度、培養ガスの濃度、培養液のｐＨ、培養液の塩濃度、培養液の吸光度、および培養液の残存酸素濃度等の情報は、その値が生体試料培養観察装置本体２の培養環境検出手段から解析手段４０３に出力される一方、培養液の交換タイミング、培養液の交換量、培養液の自家蛍光試薬の投与タイミング、生体試料を保持するウェルプレートの種類等の設定情報は、培養環境・観察対象領域・解析条件設定手段４０２から解析手段４０３に出力される。
【００５１】
また、培養環境・観察対象領域・解析条件設定手段４０２は、表示手段４０６上に表示される操作画面でウェルプレート２０１上の細胞の観察対象領域（以下、「撮像範囲」とも称する）を設定する。ここで、細胞の観察対象領域として、複数細胞からなる細胞群／個々の細胞を設定することができる。また、培養環境・観察対象領域・解析条件設定手段４０２は、表示手段４０６上に表示される操作画面で生体試料を観察した結果（生体試料の画像）を解析する場合の解析条件のパラメータを設定する。
【００５２】
ここで、解析条件のパラメータとしては、例えば、時間（日付、時刻、開始からの経過時間等）、撮像時間、倍率、励起波長、照明光や検出された光のスペクトル、撮像位置、撮像位置の培養情報（試薬など）、形態画像、蛍光・発光・発色画像、細胞の大きさ（面積）、細胞の面積比、細胞の形状、細胞の形状の比、細胞の周囲長、細胞の輝度（例えば蛍光強度、発光強度）・発色強度（合計、平均、最大、最小、標準偏差、不均質度、凝集度）、各種微分・積分光学濃度、蛍光・発光・発色細胞数、細胞数、細胞位置変化量、細胞の配置（例えば位置、傾き）、細胞内外の分布（面積、偏り、形状、濃度勾配、凝集度）、小器官位置変化量、小器官位置、小器官の凝集度、小器官の偏り、小器官の存在する面積、小器官の存在する濃度勾配、複数の小器官の凝集度比、樹状突起数、樹状突起の輝度、樹状突起の形状、複数の指標の比等を使用することができる。
【００５３】
解析手段４０３は、生体試料培養観察装置本体２から培養環境の監視結果（実測値）である培養環境情報および生体試料を観察した結果（例えば撮像画像）が入力される。解析手段４０３は、生体試料を観察した結果を培養環境・観察対象領域・解析条件設定手段４０２で設定された解析条件に従って、幾何学的特徴量（例えば細胞群毎および／または個々の細胞の面積や重心位置等）および／または光学的特徴量（例えば細胞群毎および／または個々の細胞の輝度等）を解析してその解析結果情報を生成し、経時的に、細胞群毎または個々の細胞毎に、培養環境情報、解析条件の情報、および解析結果情報とを関連づけて記憶手段４０４に記憶する。ここで細胞群とは、１つの観察対象領域（測定視野）内に存在する全ての細胞、１つの観察対象領域内の一部の細胞、複数の観察対象領域に跨る複数の細胞をいう。解析手段４０３は、細胞の解析を細胞群単位および個々の細胞単位で行うことができる。すなわち、視野全体の情報の中で１細胞のもつ特性を比較するようなこともできる。また、個々の細胞毎に位置を記憶しておき、個々の細胞の追跡等を行うことができる。
【００５４】
解析結果出力手段４０５は、記憶手段４０４に格納されている、培養環境情報、解析条件の情報、および解析結果情報に基づいて、所定の表示形式で観察・解析結果を表示手段４０６に表示させる。この場合、解析結果出力手段４０５は、解析条件のパラメータを自由に組み合わせて、例えばグラフ形式、図形式、表形式、および数値形式といった各種表示形式で表示することができる。
【００５５】
上述の制御・解析装置３のハードウェア構成は、例えば図４に示すように、内部のバスに、外部インターフェイス５０１，ＣＰＵ５０２、ＲＯＭ５０３、ＲＡＭ５０４、入力装置５０５、表示装置５０６、ドライブ装置５０７、記憶装置５０８等を接続させ、アドレス信号、データ、制御信号等を伝送させて各種の機能を実現する構成である。
【００５６】
外部インターフェイス５０１は、生体試料培養観察装置本体２とケーブルを介して接続されており、生体試料培養観察装置本体２とデータ通信を行うためのものである。外部インターフェイス５０１は、制御信号を生体試料培養観察装置本体２に送出し、また、生体試料培養観察装置本体２から培養環境の監視結果（実測値）である培養環境情報および生体試料を観察した結果（生体試料の撮像画像）を受信する機能を有している。
【００５７】
ＣＰＵ５０２は、装置全体をＲＯＭ５０３のオペレーションソフトに従って制御するとともに、記憶装置５０８に格納される生体試料培養観察用プログラムに従って、生体試料培養観察処理を実行する機能を有している。ＲＯＭ５０３は、装置全体を制御するオペレーションソフトを格納しておりＲＡＭ５０４は、各種のプログラム実行時のワークエリアとして機能する。
【００５８】
入力装置５０５は、キーボード、マウス等のように、データ、コマンド等を入力する機能を有している。表示装置５０６は、液晶、ＣＲＴ等の表示ユニットであり、生体試料培養観察用プログラムに従って必要な情報を表示する。ドライブ装置５０７は、ＦＤ，ＣＤ，ＤＶＤ等の記録媒体との間でデータを交換する機能を有している。
【００５９】
記憶装置５０８は、例えばハードディスク等で構成されており、生体試料培養観察用プログラム等の各種プログラムを格納しており、各種のプログラム実行時のデータを退避させる。記憶装置５０８は、経時的に、観察対象領域内の細胞群毎および／または個々の細胞毎に、培養環境情報、撮像画像、解析条件の情報、および解析結果情報とを対応付けて保存する機能を有している。
【００６０】
（生体試料培養観察装置の全体動作）
上記構成の生体試料培養観察装置１において、細胞培養を観察する場合について、図１，図２、および図５を参照して説明する。図５−１は、生体試料培養観察装置１による生体試料培養観察の全体動作の概略を示すフローチャート、図５−２は、図５−１のフローチャートの変形例である。図５−２において、図５−１と同等の処理を行うステップは同一のステップ番号を付してある。
【００６１】
図５−１において、まず、操作者が制御・解析装置３で細胞の培養環境を設定する（ステップＳ１）。次に、操作者が制御・解析装置３で解析条件パラメータを設定する（ステップＳ２）。そして、設定された培養環境で培養を開始する（ステップＳ３）。具体的には、制御・解析装置３は、例えば、培養液の温度や培養ガスの濃度が所定値になるように設定すると共に、培養液ポンプ制御部、培養ガス濃度制御部、および温水ポンプ制御部等を作動させて、インキュベータボックス２００内に培養液を供給する。
【００６２】
そして、操作者は、制御・解析装置３でインキュベータボックス２００内の細胞の観察対象領域を１または複数設定する（ステップＳ４）。観察対象領域の設定方法の詳細は後述する（図６−１〜図９−５参照）。
【００６３】
この後、生体試料培養観察装置本体２では、設定された観察対象領域で細胞の観察を行う（ステップＳ５）。具体的には、検出ユニット３００は、シャッタを開状態にした後、ウェルプレート２０１の観察対象領域を撮像して、撮像画像を制御・解析装置３に出力する。制御・解析装置３は、入力される撮像画像をＲＡＭ５０４に一時的に保存する（ステップＳ６）。また、この場合、制御・解析装置３は、生体試料培養観察装置本体２の培養環境検出手段の検出結果である培養環境情報を取り込んでＲＡＭ５０４に一時的に保存する。制御・解析装置３は、ＲＡＭ５０４に保存された撮像画像を解析条件に基づいて解析する（ステップＳ７）。制御・解析装置３は、経時的に、観察対象領域内の細胞群毎または個々の細胞毎に、培養環境情報、解析条件の情報、および解析結果情報とを関連づけて記憶装置５０８に保存する（ステップＳ８）。そして、観察が完了するまで細胞の観察を継続する（ステップＳ９）。記憶装置５０８に保存されている、観察対象領域内の細胞群毎または個々の細胞毎の培養環境情報、解析条件のパラメータ、および解析結果情報は、操作者により選択される各種表示形式で観察・解析結果として表示装置５０６に表示することができる。観察・解析結果の表示例の詳細は後述する（図１０参照）。
【００６４】
尚、上記のステップＳ２に記載したような解析条件パラメータの設定は、必ずしも培養の開始前に行うものとは限らず、図５−２に示すように、ステップＳ７の撮像画像を解析する手順前のどこかの段階で、例えば、観察対象領域の一部またはすべてを撮像した後（ステップＳ１００）に行ってもよい。
【００６５】
つぎに、上記ステップＳ４の観察対象領域の設定例１〜３を説明する。
【００６６】
（観察対象領域の設定例１）
観察対象領域の設定例１を図６を参照して説明する。図６−１は、観察対象領域の設定例１の手順を示す図、図６−２は、制御・解析装置３の表示装置５０６に表示される観察対象領域設定画面の一例を示す図である。観察対象領域の設定例１では、カメラ３５１を使用しないで、検出ユニット３００の低倍の対物レンズ３２１を使用して観察対象領域を設定する方法を説明する。
【００６７】
図６−２に示す観察対象領域設定画面には、撮像された画像が連続的に表示されるモニタ画像表示領域６０１と、観察対象領域を設定するための操作部６０２と、電動ステージ３１０をＸＹ方向に微少量づつ移動させるためのステージ操作部６０３が表示される。操作部６０２は、観察対象領域の設定を終了するための終了ボタン６１１、前の撮像画像を表示するための戻るボタン６１２、連続撮像を一時停止させるための一時停止ボタン６１３、次の撮像画像を表示するための進むボタン６１４、撮像画像を連続的に表示するための再生ボタン６１５、観察対象領域を確定するためのエリア確定ボタン６１６を備えている。操作者は、操作部６０２を操作することで、所望の観察対象領域を設定することができる。
【００６８】
図６−１および図６−２において、制御・解析装置３は、再生ボタン６１５が操作されたか否かを判断する（ステップＳ１０）。制御・解析装置３は、再生ボタン６１５が操作された場合には（ステップＳ１０の「Ｙｅｓ」）、検出ユニット３００に、低倍の対物レンズ３２１を用いて電動ステージ３１０を移動させながらウェルプレート２０１を走査させて画像を連続的に撮像させてその撮像画像を取り込み、ＲＡＭ５０４に観察対象候補として保存するととともに、モニタ画像表示領域６０１に連続的に表示する（ステップＳ１１）。
【００６９】
また、制御・解析装置３は、一時停止ボタン６１３が操作されたか否かを判断し（ステップＳ１２）、一時停止ボタン６１３が操作された場合には（ステップＳ１２の「Ｙｅｓ」）、連続撮像を一時停止して、画像の更新を停止する（ステップＳ１３）。そして、検出ユニット３００では高倍率の対物レンズ３２１を用いて撮像し、撮像画像を拡大表示する（ステップＳ１４）。なお、一時停止ボタン３２１を押した後、画像を拡大しなくてもよく、はじめから大きなサイズの画像を表示して、一連の操作をその画像を元に行うことにしてもよい。
【００７０】
制御・解析装置３は、戻るボタン６１２が操作されたか否かを判断し（ステップＳ１５）、戻るボタン６１２が操作された場合には（ステップＳ１５の「Ｙｅｓ」）、ＲＡＭ５０４に格納されている前の撮像画像を表示する（ステップＳ１６）。制御・解析装置３は、進むボタン６１４が操作されたか否かを判断し（ステップＳ１７）、進むボタン６１４が操作された場合には（ステップＳ１７の「Ｙｅｓ」）、ＲＡＭ５０４に格納されている次の撮像画像を表示する（ステップＳ１８）。
【００７１】
つづいて、制御・解析装置３は、ステージ操作部６０３が操作されたか否かを判断し（ステップＳ１９）、ステージ操作部６０３が操作された場合には（ステップＳ１９の「Ｙｅｓ」）、電動ステージ３１０を移動させた後の撮像画像を表示する（ステップＳ２０）。この場合は、ＲＡＭ５０４に初期の位置を記憶しておき、再生ボタン６１５が操作されて連続走査を再開する場合には、ＲＡＭ５０４に記憶された位置に戻してから再度走査を開始する。
【００７２】
制御・解析装置３は、エリア確定ボタン６１６が押下されたか否かを判断し（ステップＳ２１）、操作ボタンの撮像エリア指定ボタンが押下された場合には（ステップＳ２１の「Ｙｅｓ」）、モニタ画像表示領域６０１に表示されている範囲を観察対象領域として設定する（ステップＳ２２）
【００７３】
さらに、制御・解析装置３は、終了ボタン６１１が操作されたか否かを判断し（ステップＳ２３）、終了ボタン６１１が操作されるまで同じ処理を繰り返し、１または複数の観察対象領域を設定する。  尚、上記のステップＳ１１に記載したような、取り込んだ撮像画像の連続的な表示は、必ずしもＲＡＭ５０４に撮像画像を保存すると同時に行うものとは限らず、取り込んだ撮像画像の表示を保存した後に、別の工程において行ってもよい。
【００７４】
なお、複数のウェルプレートのパターンデータを予めテーブルに記憶しておき、これらの処理の前に、当該テーブルから所望のウェルプレートを読み出してそのパターンを表示し、その表示されたパターン上で走査範囲を設定し、設定された走査範囲でウェルプレートを走査することにしてもよい。この場合、テーブルは記憶装置５０８に記憶されており、ウェルプレートのパターンデータは、ウェルプレートのパターンを表示するための情報であり、画像情報や寸法情報等である。これにより、ウェルプレートの全面を走査する必要がある場合は全面を走査し、一部の範囲でよい場合には、その一部の範囲を走査することができ、観察対象領域を設定する時間を短縮することが可能となる。なお、ウェルプレートの走査としては、光走査であってもよく、また、ウェルプレート毎に予め異なる走査範囲を設定しておくことにしてもよい。
【００７５】
観察対象領域の設定例１によれば、カメラ３５１を使用しないで、検出ユニット３００の低倍率の対物レンズ３２１を使用して観察対象領域を設定することとしたので、カメラ３５１を設けることが不要となり、装置構成を小型化、簡素化、及び低価格化することができる。
【００７６】
（観察対象領域の設定例２）
観察対象領域の設定例２を図７を参照して説明する。図７−１は、観察対象領域の設定例２の手順を示す図、図７−２〜図７−１４は、観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。観察対象領域の設定例２では、蛍光強度に基づいて観察対象領域を設定する方法を説明する。
【００７７】
以下に示す例では、蛍光強度に基づいて観察対象領域を設定する方法について説明するが、吸光度や自家蛍光、発光強度を用いて観察対象領域を決定することにしてもよい。観察対象領域の設定例２においても、設定例１と同様に、カメラ３５１を使用しないで、検出ユニット３００の低倍率の対物レンズ３２１を使用して観察対象領域を設定する。
【００７８】
なお、記憶装置５０８には、複数のウェルプレートのパターンデータが格納されたテーブルが予め記憶されているものとする。設定例２では、テーブルから読み出して表示したウェルプレートのパターンと、ウェルプレート２０１の撮像画像とを重ね合わせて観察対象領域を設定する。
【００７９】
図７−２において、まず、制御・解析装置３では、表示装置５０６の不図示の操作画面において、操作者の操作によりテーブルから使用しているウェルプレートを選択する（ステップＳ３０）。検出ユニット３００は、低倍の対物レンズ３２１を用いて、電動ステージ３１０を移動させながらウェルプレート２０１を走査して画像を撮像し（ステップＳ３１）、制御・解析装置３は、その撮像画像を並べて表示装置５０６に表示する（ステップＳ３２）。ここで、撮像画像を表示する場合は、図７−２に示すように、視野が接するように走査して第１の撮像画像７０１と第２の撮像画像７０２とが概略接するように並べる例が考えられる。また、図７−３に示すように、例えば第１の撮像画像７０１乃至第４の撮像画像７０４に、それぞれ重ね合わせられる領域を持たせて撮像し、制御・解析装置３により位置を合わせ込むようにしても良い。
【００８０】
つぎに、制御・解析装置３は、ウェルプレート２０１の位置の認識を行う（ステップＳ３３）。具体的には、テーブルから選択されたウェルプレートのパターンデータを読み出してそのパターン７０５（図７−４にその一例を参照）を表示装置５０６等に表示させ、撮像画像７０６（図７−５にその一例を参照）とを重ね合わせて表示装置５０６等に表示する（図７−６にその一例を参照）。制御・解析装置３は、パターン７０５と撮像画像７０６とを重ね合わせた結果から、表示装置５０６の画面上におけるパターン７０５の位置等に基づいて、画面上におけるウェルプレート２０１の位置を特定する。そして、制御・解析装置３は、ウェルプレート２０１の分割エリア（例えばウェル７０７）を認識し、この分割エリア（例えばウェル７０７）に対応する位置を特定してＲＡＭ５０４に保存する（ステップＳ３４）。この場合、例えば、パターンと撮像画像との相対位置関係から撮像画像中の分割エリアの位置を特定したり、撮像画像をパターン認識して分割エリアの位置を特定したりすることが考えられる。図７−７は、撮像画像で分割エリア（例えばウェル７０７）を特定した場合の表示例を示している。尚、パターンデータのパターンは表示装置５０６の画面上に実際に表示させずに、制御・解析装置３内でパターン７０５と撮像画像７０６とを重ね合わせた結果だけを表示するようにしてもよい。図７−８は、生体試料を保持する保持手段としてウェルプレートの代わりに専用容器７０９を使用した場合において、各エリア７０９の分割例を示している。
【００８１】
つぎに、制御・解析装置３は、撮像画像の分割エリア（例えばウェル７０７）毎に、平均の蛍光強度を測定する（ステップＳ３５）。制御・解析装置３は、測定した平均の蛍光強度のデータを表示装置５０６に表示する（ステップＳ３６）。図７−９〜図７〜１３は、蛍光強度のデータの表示例を示す図である。
【００８２】
図７−９は、制御・解析装置３によりウェルプレート２０１の画像の分割エリア７１５毎に輝度データ７１０を表示させた場合を示す図である。輝度データ７１０の表示形式としては、数値、文字や図形などの記号等が考えられる。図７−１０は、ウェルプレートの分割エリア７１５毎に明るい順または暗い順に番号７１１を付した例を示す図である。番号の記載方法は桁数やフォント等種々の変更が行える。また、順序が明らかであれば、図７−１０のようにアラビア数字に限らず、順序が規則的な他の文字や記号等を用いてもよい。
【００８３】
図７−１１は、制御・解析装置３によりウェルプレート２０１の画像の分割エリア７１５を輝度レンジ別にカラーリングして表示させた場合を示す図である。同図では、輝度と色の対応を示す輝度レベルバー７１２が表示されている。図７−１２は、図７−１１の輝度と色の対応を示す輝度レベルバー７１２にカーソル７１３を表示させた場合を示す図である。同図において、輝度と色の対応を示す輝度レベルバー７１２にあるカーソル７１３を動かすことでそのレンジに存在する分割エリア７１５を強調して示すことができる。図７−１３は、図７−１１の輝度レベルバー７１２に分割エリア７１５を示す認識番号（ウェル名）を表示させた場合を示す図である。同図において、分割エリア７１５や、輝度レベルバー７１２に表示されたマーカ７１４をマウスでクリックする等の指定が行われると、双方向的に分割エリア７１５およびマーカ７１４が強調表示される。また、輝度レベルバー７１２を拡大表示・ズーム表示することも可能になっており、任意の輝度レベルの範囲を詳細に確認することができる。図７−１４は輝度レベルバー７１２をズーム表示した場合の表示例を示す図である。なお、ここでは、ウェルプレート２０１の画像を表示することとしたが、輝度レベルバー７１２のみを表示することにしてもよい。
【００８４】
つづいて、制御・解析装置３は、観察対象領域の設定を行う（ステップＳ３７）。具体的には、例えば、図７−９〜図７−１３において、例えば、画面上に表示されるウェルプレート２０１の画像において、使用者が、観察したい分割エリア７１４に対し、カーソルを合わせてマウスでクリックするといった指示を制御・解析装置３に与えると、この指示を受けた制御・解析装置３は、指定された分割エリア７１５を観察対象領域として設定する。また、輝度レベルバー７１２が表示されている場合には、一対の撮像輝度範囲設定カーソルで輝度レベル範囲を指定し、撮像輝度範囲設定カーソル７１６に挟まれた範囲の輝度レベルを有する分割エリア７１５を観察対象領域として設定することにしてもよい（図７−１４参照）。
【００８５】
観察対象領域の設定例２によれば、ウェルプレート２０１の撮像画像中の各ウェルの蛍光強度（吸光度や自家蛍光、発光強度）を表示することとしたので、操作者は蛍光強度（吸光度や自家蛍光、発光強度）に基づいて所望の観察対象領域を設定することが可能となる。
【００８６】
なお、使用しているウェルプレートの種類を使用者がテーブルから選択することとしたが、後述する設定例３と同様の方法で、撮像画像に基づいて自動認識することにしてもよい。
【００８７】
また、ウェルプレート２０１の位置を予め格納されているウェルプレートのパターンデータに基づいて認識することとしたが、ウェルプレート２０１にアライメント用のマークを設けて、電動ステージ３１０に対する位置調整を行う機構を設けるようにしてもよい。
さらに、ウェルプレートといった、初めからウェルが分割エリアとして設けられた容器を用いて培養を行う場合に限らず、ディッシュやスライドガラス、専用容器のように分割エリアが存在しない容器で培養を行う場合、制御・解析装置３は検出ユニット３００に対し、上記のような容器を複数のエリアに分割して撮像させるようにしてもよい。このエリアを分割するパターンは制御・解析装置３が自動で設定しても良く、使用者が制御・解析装置３に指示することで任意に設定するようにしてもよい。
【００８８】
（観察対象領域の設定例３）
観察対象領域の設定例３を図８および図９を参照して説明する。設定例３ではカメラ３５１を使用して、観察対象領域を設定する方法を説明する。図８−１は、ウェルプレートを使用した場合における観察対象領域の設定例３の手順を示す図、図８−２〜図８−１０は、観察対象領域の設定例３を説明するための説明図である。
【００８９】
図８−１において、まず、カメラ３５１でウェルプレート２０１全体の画像を撮像し、制御・解析装置３の表示装置５０６に表示する（ステップＳ４０）。図８−２は、ウェルプレート２０１の撮像画像の表示例を示している。なお、カメラ３５１の視野位置を固定した場合、撮像画像のウェルを矢印カーソル８０１等を用いて指定すると、そのウェルの実際の位置を特定することができる。また、制御・解析装置３により撮像画像を二値化処理して１つのウェルの大きさ（面積、中心距離等）を認識することにより、ウェルプレートの種類を認識することもできる。この場合、例えば、複数種のウェルプレートについて、制御・解析装置３はそのウェルの大きさ（面積、中心距離等）を記憶しておき、撮像画像から算出したウェルの大きさ（面積、中心距離等）が一致するウェルプレートを認識することができる。
【００９０】
つぎに、表示装置５０６に表示されたウェルプレート２０１の画像で観察対象となるウェルを選択する（ステップＳ４１）。例えば、使用者が画面上に表示されるウェルプレート２０１上で観察対象となるウェルに対して、カーソルを合わせてマウスでクリックするといった指示を制御・解析装置３に与えると、この指示を受けた制御・解析装置３は、指定されたウェルを選択することができる。そして、選択されたウェルの位置が検出ユニット３００の対物レンズ３２１の位置になるように、電動ステージ３１０を移動させる。続いて検出ユニット３００で、ウェル１つ分の画像を撮像して表示装置５０６に表示する（ステップＳ４２）。また、ウェルプレートのパターンデータに基づくウェル１つ分の画像を表示装置５０６に表示してもよい。図８−３は、ウェルの画像の表示例である。同図のように、１ウェルの画像に、ウェル８０２内での相対位置を示すカーソル８０３を表示させ、例えばこのカーソル８０３で観察対象領域８０４を設定するようにしてもよい。その場合、制御・解析装置３は、図示したように、カーソル位置に合わせて実際の視野（カーソル内の拡大画像）を表示させる。これにより、ウェル内における所定の１つまたは複数の細胞を観察対象領域８０４に表示されるように設定することができる。なお、この実施例におけるカーソル８０３は、図８−３に記載のように例えば視野サイズの矩形カーソルとしてもよい。また、制御・解析装置３は、次の視野の設定を行う際、方向の指定も同時に行うと、前に指定された視野に対して指定した方向に視野を設定できる機能を有することにしてもよい。また、新たに設定される視野は前に指定された視野に接するようにしてもよい。
【００９１】
続いて、制御・解析装置３は、観察対象とする観察対象領域を設定する（ステップＳ４３）。上記図８−３に示す例では、１つのウェル内において、カーソル８０３で観察対象領域を設定することができる。この場合、露光時間等の他の撮像条件を設定することにしてもよく、設定された観察対象領域に対し、自動露出（ＡＥ）により露光時間を決定するようにしてもよい。また、一つのウェル（培養エリア）について観察対象領域を設定した場合に、他のウェルについても相対的同位置に撮像範囲を設定することにしてもよい。これにより、観察対象領域の設定時間を短縮することができる。また、一つの観察対象領域に撮像条件を設定した場合に、他の観察対象領域についても同様な撮像条件を設定することにしてもよい。これにより、撮像条件の設定時間を短縮することができる。
【００９２】
そして、観察に必要な全ての観察対象領域の設定が終了するまで同一の処理を繰り返す（ステップＳ４４）。制御・解析装置３は、撮像範囲の設定が完了した場合、表示装置５０６で測定対象のウェル８０５を強調表示する。図８−４は、測定対象のウェルを強調表示した場合の表示例を示す図である。この場合、図８−５に示すように、設定した露出時間を識別可能（例えば、パターンや色を変更する）に表示させてもよい。
【００９３】
なお、上記ではウェル内にカーソルを表示して、そのカーソルを用いることで観察対象領域を設定する例を示したが、カーソル８０３の替わりにグリッドを使用して観察対象領域を設定してもよい。図８−６〜図８−９参照し、グリッドを使用して観察対象領域を設定する場合について説明する。図８−６に示すように、１ウェルのイメージ画像８０６に測定視野サイズのグリッド８０７を表示する。そして、図８−７〜図８−９に示すように、グリッド８０７を例えばマウスでドラッグする等を行い、視野パターンの配置を指定する。その後、各グリッドの内部をマウスでクリックする等の指定を行うと、制御・解析装置３はそのグリッドの内部を観察対象領域（測定視野）として設定することができる。
【００９４】
上記設定例３では、ウェルプレート２０１を使用した場合について説明したが、以下ではウェルプレートの替わりに専用容器（例えば、培養容器、ディッシュ、スライドガラスを含む専用容器等）を使用した場合について説明する。図９−１は、専用容器を使用した場合における観察対象領域の設定例の手順を示す図、図９−１〜図９−６は、専用容器を使用した場合における観察対象領域の設定例を説明するための説明図である。専用容器を使用した場合においてもウェルプレート２０１を使用した場合とほぼ同様な処理となるので、専用容器を使用した場合について簡単に説明する。
【００９５】
図９−１において、まず、カメラ３５１で専用容器全体の画像を撮像し、制御・解析装置３の表示装置５０６に表示する（ステップＳ５０）。このとき、専用容器の種類を判別してもよい。図９−２は、専用容器９０１全体の撮像画像の表示例を示している。同図においては、観察対象の位置を選択するためのカーソル９０２が表示されている。
【００９６】
つぎに、制御・解析装置３は、観察対象となる位置を指定する（ステップＳ５１）。例えば、図９−２に示す例では、操作者は画面上に表示される専用容器９０１の画像内で観察したい位置をカーソル９０５を合わせてマウスでクリックするといった指示を制御・解析装置３に与えると、この指示を受けた制御・解析装置３は、指定された位置が検出ユニット３００の対物レンズ３２１の位置になるように、電動ステージ３１０を移動させる。この後、検出ユニット３００は指定された位置を撮像し、制御・解析装置３はその撮像画像を表示装置５０６に表示する（ステップＳ５２）。
【００９７】
そして、制御・解析装置３は、観察対象とする観察対象領域を設定する（ステップＳ５３）。図９−３は、指定した位置の撮像画像の表示例を示す図である。同図において、相対位置を示すカーソル９０１が表示されており、このカーソル９０１で観察対象領域（撮像範囲）９０２を設定することができる。また、図示したように、カーソル９０１の位置に合わせて実際の視野（カーソル９０１内の拡大画像９０３）を表示する。ここでのカーソルは視野サイズの矩形としてもよい。また、例えばシフトを押してカーソルキーもしくはマウスを動かす等の指示を制御・解析装置３に対して行うと、その方向に第一の観察対象領域に接するように別の第二の観察対象領域を設定できる機能を有するようにしてもよい。また、ここではカーソルを表示することとしたが、ウェルプレートの場合と同様にグリッドを表示して、グリッドを選択することにより観察対象領域を選択するようにしてもよい。
【００９８】
また、観察対象領域９０２を設定する場合に、露光時間等の他の撮像条件を同時にまたは続けて設定することにしてもよい。露光時間は自動露出（ＡＥ）を行うことにより設定するようにしてもよい。また、一つの観察対象領域撮像範囲に撮像条件を設定した場合に、他の観察対象領域についても同様な撮像条件が設定されるようにしてもよい。これにより、撮像条件の設定時間を短縮することができる。
【００９９】
そして、全ての観察対象領域の設定が終了するまで同一の処理を繰り返す（ステップＳ５４）。制御・解析装置３では、観察対象領域９０２の設定が完了した場合、表示装置５０６で測定対象のエリアを強調表示する。図９−４は、観察対象領域９０２を強調表示した場合の表示例を示す図である。この場合、図９−５に示すように、各観察対象領域９０２に対して設定した露出時間を識別可能（例えば、パターンや色を変更する）に表示したり、撮像中の観察対象領域９０２を強調する等の識別表示を行うようにしてもよい。
【０１００】
観察対象領域の設定例３によれば、カメラ３５１を使用して、観察対象領域を設定することとしたので、検出ユニット３００に低倍率の対物レンズ３２１を設けなくとも、カメラ３５１を使用すれば、低コストな構成とすることができ、短時間で容器の種類に関する設定を行うことができる。
【０１０１】
つぎに、観察・解析結果の表示例１〜２を詳細に説明する。
【０１０２】
（観察・解析結果の表示例１）
観察・解析結果の表示例１を図１０−１〜図１０−６を参照して説明する。表示例１では、各測定視野（観察対象領域）の細胞群毎に解析した場合を説明する。
【０１０３】
図１０−１は、表示装置５０６に表示される観察・解析結果の表示例１を示す図である。同図に示す例では、時間を横軸として、培養環境情報（培養細胞交換タイミング、湿度、ＣＯ2濃度、温度）および解析結果である蛍光強度のデータが線グラフで表示されている。蛍光強度の線グラフでは、各測定視野（測定視野１〜測定視野４）毎のデータが時系列で表示されている。また、蛍光強度の線グラフには、バーカーソル１０００が表示されており、各測定視野１〜４のバーカーソル１０００の位置に対応した蛍光画像１００１および形態画像１００２が表示されている。操作者は、バーカーソル１０００を移動させることで、所望の時間の蛍光画像１００１および形態画像１００２を確認することができる。なお、表示する画像は、蛍光画像１００１および形態画像１００２のいずれかでもよい。また、二種以上の画像を重ね合わせた画像を表示することにしても良い（たとえば、多重染色画像や形態＋蛍光画像）。このように、培養環境情報および解析結果情報を時系列に表示することで、様々なイベントに対する解析が容易になる。
【０１０４】
図１０−２は、図１０−１の画像１００１または１００２を表示する場合の変形例１を示す図である。画像は細胞ごとおよび細胞群いずれの場合にも同様に表示することができる。同図に示す例では、バーカーソル１０００で指示した時間に撮影された画像の前後の時間に撮影された画像を円を描くように表示した場合を示している。ここで、バーカーソル１０００の前後の画像はバーカーソル１０００の位置の画像と同じサイズでも、異なるサイズで表示してもよい。また、バーカーソル１０００の前後の画像は、コントラストや明るさを下げた状態で表示してもよい。
【０１０５】
図１０−３は、図１０−１の画像１００１または１００２を表示する場合の変形例２を示す図である。同図に示す例では、バーカーソル１０００の前後の画像がＶ字を描くように表示した場合を示している。バーカーソル１０００の前後の画像はバーカーソル１０００の位置の画像と同じサイズでも、異なるサイズで表示してもよい。また、バーカーソル１０００の前後の画像はコントラストや明るさを下げた状態で表示してもよい。
【０１０６】
図１０−４は、図１０−１の画像１００１または１００２を表示する場合の変形例３を示す図である。同図に示す例では、蛍光強度の選択された視野について画像を連続的に表示する場合を示している。選択可能な視野は一つでも良いし、複数でもよい。さらに、現在表示されているポイントにマーカを表示するようにしても良い。
【０１０７】
図１０−５は、図１０−１の画像１００１または１００２を表示する場合の変形例４を示す図である。同図に示す例では、一つ以上の選択された視野に対して、解析結果のグラフの下に全画像を表示した場合を示している。グラフの横軸を縮小・拡大可能になっており、グラフの横軸を拡大すると、図１０−６に示すように、例えば時系列に従って画像を全て表示することができるようにしてもよい。
【０１０８】
ここでは、解析結果として、横軸を時間、縦軸を蛍光強度としたグラフの表示例を示したが、本発明はこれに限られるものではなく、解析結果をグラフ化して表示する場合には、上述の解析条件のパラメータとして設定されているものを自由に組み合わせて表示することができる。
【０１０９】
（観察・解析結果の表示例２）
観察・解析結果の表示例２を図１０−７〜図１０−１３を参照して説明する。観察・解析結果の表示例２では、各視野の細胞毎に観察・解析結果を表示する場合について説明する。
【０１１０】
図１０−７は、表示装置５０６に表示される観察・解析結果の表示例２を示す図である。同図に示す例では、時間を横軸として、培養環境（培養細胞交換タイミング、湿度、ＣＯ2濃度、温度）および解析結果である蛍光強度のデータが線グラフで表示されている。尚、線グラフにおける各線１００３と、この線１００３に対応する細胞にはそれぞれ同じマーカー１００８が付される。
【０１１１】
蛍光強度の線グラフでは、各測定視野（視野１〜３）の細胞（細胞１〜細胞１０）毎のデータが表示されている。また、蛍光強度の各線グラフには、バーカーソル１００７がそれぞれ表示されており、各測定視野１〜３のバーカーソル１００７の位置に対応した蛍光画像１００１および形態画像１００２が表示されている。蛍光強度の線グラフの各線１００３とバーカーソル１００７の交点には、各細胞を示すマーカ１００８が表示されている。マーカは数字や色等でもよい。
【０１１２】
図１０−８は、細胞毎に観察・解析結果を表示する場合の他の表示例を説明するための図である。図１０−８において、蛍光強度の線グラフで例えば矢印カーソル１００９をマーカ１００８に持っていくとその細胞を中心にした等倍画像が表示される。なお、表示する画像の大きさは、等倍画像に限定されるものではなく、少なくとも細胞の様子が分かる程度の大きさに表示すればよい。また、図１０−９に示すように、数個の細胞の拡大画像を並べて表示することにしてもよい。図１０−９に記載の例のように、矢印カーソル１００９で指示された次の測定サイクルにおける結果に係る画像が、並べて表示されるようにしてもよい。
【０１１３】
図１０−１０は、細胞毎に観察・解析結果を表示する場合の他の表示例を示す図である。同図に示す例では、蛍光強度の線グラフにおいて、バーカーソル１００７を縦軸の数値を選択可能に横軸に並行に表示したものである。これにより、同じ蛍光強度の時に各細胞がどのように異なっているか等、同じパラメータでの観察において異なる細胞それぞれにおける違いを検出し易くなる。なお、蛍光強度の閾値を表示して、蛍光強度を基準に同じ蛍光強度の細胞の画像をピックアップ可能にしてもよい。また、同じもしくは異なる細胞が同じ強度のときにおける形態、輝度分布などを表示してもよい。
【０１１４】
図１０−１１および図１０−１２は、細胞毎に観察・解析結果を表示する場合の他の表示例を示す図である。図１０−１１はウェルプレートを使用した場合、図１０−１２は専用容器を使用した場合を示している。図１０−１１および図１０−１２に示す例では、蛍光強度のグラフにおいて、バーカーソル１００７をマーカ１００８に持っていくと蛍光強度や面積が表示される。さらに、対応する細胞（バーカーソル１００７上で選択したマーカ１００８と同じものが付された細胞）について強調等の識別表示を行ったり、データを表示したりすることもできる。この場合、細胞の分裂、試薬の投入、培養液の交換、環境変化等のイベントが起こったとき、グラフ中の該当する部分（例えば、時系列上上記のイベントが起こったとき）を他と異なる色で表示させたり、強調表示させたりしてもよい。
また、ウェルプレートまたは専用容器中の測定場所を識別表示するとともに、培養条件の表示も行っている。
【０１１５】
図１０−１３は、細胞毎に観察・解析結果を表示する場合の他の表示例を示す図であり、細胞が途中で分裂したり死亡した場合の解析方法について説明する。細胞が分裂した場合の解析方法として以下の（１）〜（３）の方法が考えられる。
【０１１６】
（１）細胞の分裂に関係なく、娘細胞のうち片方が元の細胞と同じと認識され、もう片方が新たな細胞として認識され、分裂が完了した時点から新たな細胞のデータの取得を始める。このとき、元の細胞に付されたマーカ１００５と異なるマーカを付け、別の細胞として扱って追跡を行う（図１０−１３の細胞１）。
【０１１７】
（２）グラフ画面等に表示させる画像における細胞１００４につけるマーカ１００５−１も同じマーカを付ける（図１０−１３の細胞２）。画像なども、細胞１００４が選択されたら両方の娘細胞のデータや画像、グラフ等を同時に両方表示する。または、どちらかを選択できるように片方ずつ表示してもよい。この場合、データは親細胞のデータと関連付けて保存する。
【０１１８】
（３）細胞の分裂を無視して、娘細胞のうちいずれか一方についてのみ追跡を続行する。
【０１１９】
次に、細胞が途中で死んだ場合の解析方法として以下の（１）〜（２）の方法が考えられる。
【０１２０】
（１）細胞死の有無に関わらず、蛍光もしくは発光色素の強度のみを表示して、そのままデータの取得を続行する。
【０１２１】
（２）細胞死を検出した細胞１００４のデータに識別マーク１００６を表示し、その後はデータの取得を打ち切ってもよく（図１０−１３の細胞３）、また、細胞が死んだことを検出していることを前提にそのままデータの取得を続行してもよい。
【０１２２】
以上説明したように、本実施の形態の生体試料培養観察装置１によれば、生体試料培養観察装置本体２では、経時的に監視された培養環境下で生体試料を培養するとともに、培養されている生体試料を経時的に観察し、また、制御・解析装置３は、生体試料を観察した結果を所定の解析条件で解析して当該解析の結果である解析結果情報を生成するとともに、細胞群毎および／または個々の細胞毎に、培養環境の監視結果である培養環境情報と、解析条件の情報と、および解析結果情報とを関連づけて記憶することとしたので、生体試料の観察と培養環境の監視とを同時に行って、観察・解析結果と培養環境の状態とを関連付けて蓄積することができ、これにより、培養している生体試料の観察・解析結果の情報について、その培養に不可欠な培養環境がどのような条件の下で得られた情報なのかを常に明確にすることができ、生体試料の観察・解析結果の信頼性を確保することが可能となる。
【０１２３】
付言すると、本実施の形態に係る生体試料培養観察装置１によれば、多量の細胞の情報をハイスループットで得て、さらに視野毎や１細胞毎に計測することにより、まったく同じタイミングの多数の細胞の状態を検出することができる。また、長期間にわたる観測が可能であるので、測定した結果は細胞の全周期を含んだものとなる。すなわち、細胞周期を合わせたり、一細胞をクローニングする必要なく、測定対象の細胞の全挙動を検出することもできる。
【０１２４】
なお、複数の生体試料培養観察装置１の各制御・解析装置３をネットワークに接続し、サーバで各生体試料培養観察装置１の培養環境や解析結果を一元管理することにしてもよい。また、生体試料として生細胞を例示したが、本発明はこれに限られるものではなく、微生物等を使用してもよい。また、生体試料を保持する容器としては、ウェルプレートに限られるものではなく、培養容器、ディッシュ、スライドガラスを含む容器等、各種の容器を使用することができる。また、生体試料を保持する容器を自動認識する方法は、上記した例に限られるものではなく、各種の画像処理方法を使用して行うことができる。
【産業上の利用可能性】
【０１２５】
本発明に係る生体試料培養観察装置、生体試料培養観察方法、および生体試料培養観察用プログラムは、細胞や微生物を用いたバイオテクノロジーの研究分野において広く利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【０１２６】
【図１】本実施の形態に係る生体試料培養観察装置の構成例を示す図である。
【図２】生体試料培養観察装置の電動ステージおよびインキュベータボックスの構成を示す平面図である。
【図３】インキュベータボックスの構成を示す平面図である。
【図４】制御・解析装置のブロック構成例を示す図である。
【図５−１】生体試料培養観察装置による生体試料培養観察方法の全体処理の概略を示すフローチャートである。
【図５−２】生体試料培養観察装置による生体試料培養観察方法の全体処理の概略を示すフローチャートである。
【図６−１】観察対象領域の設定例１を説明するためのフローチャートである。
【図６−２】観察対象領域の設定例１を説明するための説明図である。
【図７−１】観察対象領域の設定例２を説明するためのフローチャートである。
【図７−２】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−３】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−４】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−５】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−６】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−７】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−８】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−９】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−１０】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−１１】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−１２】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−１３】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図７−１４】観察対象領域の設定例２を説明するための説明図である。
【図８−１】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するためのフローチャートである。
【図８−２】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するための説明図である。
【図８−３】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するための説明図である。
【図８−４】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するための説明図である。
【図８−５】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するための説明図である。
【図８−６】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するための説明図である。
【図８−７】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するための説明図である。
【図８−８】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するための説明図である。
【図８−９】観察対象領域の設定例３（インキュベータボックスの場合）を説明するための説明図である。
【図９−１】観察対象領域の設定例３（専用容器の場合）を説明するためのフローチャートである。
【図９−２】観察対象領域の設定例３（専用容器の場合）を説明するための説明図である。
【図９−３】観察対象領域の設定例３（専用容器の場合）を説明するための説明図である。
【図９−４】観察対象領域の設定例３（専用容器の場合）を説明するための説明図である。
【図９−５】観察対象領域の設定例３（専用容器の場合）を説明するための説明図である。
【図１０−１】観察・解析結果の表示例１を説明するための説明図である。
【図１０−２】観察・解析結果の表示例１を説明するための説明図である。
【図１０−３】観察・解析結果の表示例１を説明するための説明図である。
【図１０−４】観察・解析結果の表示例１を説明するための説明図である。
【図１０−５】観察・解析結果の表示例１を説明するための説明図である。
【図１０−６】観察・解析結果の表示例１を説明するための説明図である。
【図１０−７】観察・解析結果の表示例２を説明するための説明図である。
【図１０−８】観察・解析結果の表示例２を説明するための説明図である。
【図１０−９】観察・解析結果の表示例２を説明するための説明図である。
【図１０−１０】観察・解析結果の表示例２を説明するための説明図である。
【図１０−１１】観察・解析結果の表示例２を説明するための説明図である。
【図１０−１２】観察・解析結果の表示例２を説明するための説明図である。
【図１０−１３】観察・解析結果の表示例２を説明するための説明図である。
【符号の説明】
【０１２７】
１  生体試料培養観察装置
２  生体試料培養観察装置本体
３  制御・解析装置
１００  培養ユニット
１０１，１０２，１０３  培養液瓶
１０４  温水瓶
１０５  廃液瓶
１１１  培養液ポンプ
１１２  培養液供給チューブ
１１４  培養液排出チューブ
１１５  温水ポンプ
１１６  温水供給チューブ
２００  インキュベータボックス
２０１  ウェルプレート
２０２  筐体
２０３  加温部
２０３ａ  水槽
２０４  温度センサ
３００  検出ユニット
３１０  電動ステージ
３１１  ベース
３１２  Ｘ軸動作ステージ
３１３  Ｙ軸動作ステージ
３２１  対物レンズ
３２２  レボルバ
３２３  ＡＦユニット
３２４  ハーフミラー
３２５  形態観察ポート
３２６  波長選択子群
３２７  第１の撮像部
３２８  レンズ
３２９  第２の撮像部
３３１  投光管
３３２  ファン
３３４  ランプ
３５１  カメラ
３５２  透過光学系
３５３  透過ランプ
４０１  本体制御手段
４０２  培養環境・観察対象領域・解析条件設定手段
４０３  解析手段
４０４  記憶手段
４０５  解析結果出力手段
４０６  表示手段
５０１  外部インターフェイス
５０２  ＣＰＵ
５０３  ＲＯＭ
５０４  ＲＡＭ
５０５  入力装置
５０６  表示装置
５０７  ドライブ装置
５０８  記憶装置
９００  専用容器
【図１】
2007020422.tif 000003
【図２】
2007020422.tif 000004
【図３】
2007020422.tif 000005
【図４】
2007020422.tif 000006
【図５−１】
2007020422.tif 000007
【図５−２】
2007020422.tif 000008
【図６−１】
2007020422.tif 000009
【図６−２】
2007020422.tif 000010
【図７−１】
2007020422.tif 000011
【図７−２】
2007020422.tif 000012
【図７−３】
2007020422.tif 000013
【図７−４】
2007020422.tif 000014
【図７−５】
2007020422.tif 000015
【図７−６】
2007020422.tif 000016
【図７−７】
2007020422.tif 000017
【図７−８】
2007020422.tif 000018
【図７−９】
2007020422.tif 000019
【図７−１０】
2007020422.tif 000020
【図７−１１】
2007020422.tif 000021
【図７−１２】
2007020422.tif 000022
【図７−１３】
2007020422.tif 000023
【図７−１４】
2007020422.tif 000024
【図８−１】
2007020422.tif 000025
【図８−２】
2007020422.tif 000026
【図８−３】
2007020422.tif 000027
【図８−４】
2007020422.tif 000028
【図８−５】
2007020422.tif 000029
【図８−６】
2007020422.tif 000030
【図８−７】
2007020422.tif 000031
【図８−８】
2007020422.tif 000032
【図８−９】
2007020422.tif 000033
【図９−１】
2007020422.tif 000034
【図９−２】
2007020422.tif 000035
【図９−３】
2007020422.tif 000036
【図９−４】
2007020422.tif 000037
【図９−５】
2007020422.tif 000038
【図１０−１】
2007020422.tif 000039
【図１０−２】
2007020422.tif 000040
【図１０−３】
2007020422.tif 000041
【図１０−４】
2007020422.tif 000042
【図１０−５】
2007020422.tif 000043
【図１０−６】
2007020422.tif 000044
【図１０−７】
2007020422.tif 000045
【図１０−８】
2007020422.tif 000046
【図１０−９】
2007020422.tif 000047
【図１０−１０】
2007020422.tif 000048
【図１０−１１】
2007020422.tif 000049
【図１０−１２】
2007020422.tif 000050
【図１０−１３】
2007020422.tif 000051