(57)【要約】      （修正有）【課題】哺乳動物の線維症の治療方法の提供。【解決手段】式ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ〔式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから成る群から選択される〕を有するペプチドを抗線維形成有効量で哺乳動物に投与する。線維症は、肺線維症、アテローム性動脈硬化症、硬変、糸球体硬化症、慢性膵炎、冠動脈疾患（例えばＣｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのような細菌感染），外傷または外科的処置によって生じる病理学的変化に起因する。線維症を引き起こす外科的処置の例は、脊髄外科手術後の硬膜または神経根の術後神経周囲線維症、損傷または修復されて癒着した腱の腱組織崩壊、損傷または修復されて癒着した末梢神経の神経組織崩壊、婦人科及び腹部の外科手術後の術後癒着、男性または女性の不妊を取消す精管もしくは卵管の修復手術後の術後癒着、尿道、腸もしくは食道のような別の管状構造の外科的修復後の術後癒着である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗線維形成有効量および抗炎症有効量の式ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ〔式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから成る群から選択される〕で表されるペプチドを含んで成る哺乳動物投与用の薬用形態を含む、哺乳動物における線維症治療のための医薬組成物。
【請求項２】
線維症が、アテローム性動脈硬化症、硬変、糸球体硬化症、慢性膵炎及び冠動脈疾患から成る群から選択された状態によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
線維症がアテローム性動脈硬化症によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
線維症が硬変によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
線維症が糸球体硬化症によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
線維症が慢性膵炎によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
線維症が冠動脈疾患によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
線維症が外傷及び外科的処置から成る群から選択された状態によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
線維症が外傷によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
線維症が外科的処置によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
線維症が、脊髄外科手術後の硬膜または神経根の術後神経周囲線維症、損傷または修復されて癒着した腱の腱組織崩壊（ｔｅｎｏｌｙｓｉｓ）、損傷または修復されて癒着した末梢神経の神経組織崩壊（ｎｅｕｒｏｌｙｓｉｓ）、婦人科及び腹部の外科手術後の術後癒着、男性または女性の不妊を取消す精管もしくは卵管の修復手術後の術後癒着、尿道、腸もしくは食道のような別の管状構造の外科的修復後の術後癒着、から成る群から選択された状態によって生じる病理学的変化に起因することを特徴とする請求項９に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗線維形成活性を発揮する低分子量ペプチドによる哺乳動物の治療方法、及び、これによって哺乳動物の線維症を阻害、予防、より効果的には軽減する方法に関する。より特定的にはこのような治療は、動脈または気道の内腔に線維性病変を示す哺乳動物に対して、線維症の軽減によって示される内腔の再生（remodeling）効果を与える。
【背景技術】
【０００２】
傷害によって生じる内皮機能不全は代償応答を誘発し、内皮の正常ホメオスタシス的特性を変化させる。即ち、種々の形態の傷害は白血球または血小板に対する内皮の接着性及び透過性を強化する。傷害はまた、内皮に凝固阻止性の代わりに凝固促進性を獲得させ、血管作用分子、サイトカイン及び増殖因子を形成させる。
【０００３】
炎症応答が攻撃物質を効果的に中和または除去しないとき、炎症応答は無期限に持続する。このような持続によって炎症応答は平滑筋細胞の遊走及び増殖を促進し、平滑筋細胞を炎症領域に混入させて中間病変を形成する。これらの応答がその勢力を弱めることなく持続すると、動脈壁が肥厚したり、気管支の気道狭窄または炎症を生じたその他の内腔の狭窄が生じたりする。
【０００４】
アテローム性動脈硬化症では典型的に、内腔が緩やかな膨張によって調整され、従ってある一点までは内腔の変質が生じない。炎症細胞に関しては、じゅく腫形成のどの時期でも顆粒球はめったに存在しない。疾患のすべての時期で、応答に介在するのはむしろ、単球由来マクロファージ及びＴリンパ球の特定サブタイプである。
【０００５】
炎症持続の結果としてマクロファージ及びリンパ球の数が増加する。これらは双方とも血液から遊出して病変内部で増殖する。これらの細胞が活性化されると、加水分解酵素、サイトカイン、ケモカイン及び増殖因子の放出が誘発され、これらが更に損傷を誘発し、最終的に病巣の壊死に導く。即ち、単核細胞の蓄積、平滑筋細胞の遊走及び増殖、線維組織の形成などのサイクルによって病変が更に拡大されて病変の再構成が誘発され、その結果として病変は脂質及び壊死組織のコアを包囲する線維性キャップで被覆され、いわゆる進行した合併病巣となる。ある点に達すると、動脈がもはや膨張によって調整されることができない。次いで、病変が内腔に侵入し、血流を変化させる。
【０００６】
じゅく腫形成中の細胞相互作用は、硬変、リューマチ様関節炎、糸球体硬化症、肺線維症及び慢性膵炎のような慢性の炎症性−線維増殖性疾患の細胞相互作用と基本的には違っていない。特定の組織または器官の各々の応答は、その固有の細胞及び構造、その血液及びリンパ液の供給、攻撃物質名に左右される。従って、動脈（アテローム性動脈硬化症）、肝臓（硬変）、関節（リューマチ様関節炎）、腎臓（糸球体硬化症）、肺（肺線維症）及び膵臓（膵炎）における細胞応答は同様の応答であるが組織または器官の各々に固有の特徴を示す。
【０００７】
喘息の特徴は、気道好酸球増加、浮腫、粘液分泌過多、気管支上皮傷害及び反応性亢進を含む複合炎症応答である。アレルギー性喘息患者の吸入アレルゲン攻撃は即時型気道過敏応答、数時間後の遅延型気道反応を頻繁に伴う早期気道応答（ＥＡＲ）、後期気道応答（ＬＡＲ）を誘発する。
【０００８】
喘息における慢性炎症のメカニズムは動物モデルのＬＡＲの研究から明らかになった。マウス、ラット、モルモット及びヒト以外の霊長類を含む多くの種の多数の動物モデルがＬＡＲの典型的な特徴を生じることが判明した。
【０００９】
Ｂａｌｂ／Ｃマウスは、反復攻撃後のオボアルブミン（ＯＶＡ）による免疫感作に応答して気腔／間質性好酸球増加、粘液分泌、浮腫及び気道狭窄を含むヒトのアレルギー性肺疾患に酷似したアレルギー性肺疾患を生じると報告されている。ヒト肺の生検材料及び剖検材料では慢性喘息の肺組織の構造及び機能の変化が報告された。持続性炎症、線維形成性コラーゲンの間質沈着及び気道狭窄がこれらの構造変化の特徴である。慢性喘息に関連した機能変化の特徴は肺能力の低下である。Ｂａｌｂ／ＣマウスをＯＶＡによって３カ月以上免疫感作すると、線維症、気道狭窄及び持続的な炎症性浸潤を伴うヒト慢性喘息の病理学的異常と同様の病理学的異常を生じる。
【００１０】
アテローム性動脈硬化症、特に硬変、糸球体硬化症及び慢性膵炎では顆粒球はめったに存在しない。顆粒球が存在するのはリューマチ様関節炎及び肺線維症の場合だけである。関節炎の場合には、初期応答は顆粒球から始まるが、顆粒球は主として関節腔に見出される。マクロファージ及びリンパ球は滑膜に多く存在し、軟骨及び骨が侵食され、線維症組織（パンヌス）に置き換えられる。肺線維症の場合には、顆粒球が最初に肺胞に出現する。しかしながら、線維症が最後に生じる肺実質はマクロファージ及びリンパ球によって浸潤される。従って、これらの炎症性疾患には類似性が存在する。異なるＴ細胞サイトカイン（インターフェロン−７、インターロイキン−２、インターロイキン−４及びインターロイキン−１０）によって各々が調節される少なくとも３種類の異なるマクロファージが同定されている。
【００１１】
慢性炎症応答はしばしば、特定種類の傷害性物質または肉芽腫誘発物質に関連している。１種または複数の傷害性物質が炎症応答によって除去または無効化されないで炎症が進行するとき、応答は防御応答から傷害応答に変化する。定常的または反復的なこの傷害は各組織を刺激し、線維増殖性応答によって損傷を修復または防御する。線維増殖性応答は、過剰になると組織または器官の機能的能力を低下させ疾患進行に加担することになる。
【００１２】
線維症は慢性の炎症をもつ組織の顕著な特徴である。線維症は、線維芽細胞（間質コラーゲンの合成を担当する主要な間充織細胞）の増殖が亢進した結果として細胞外マトリックスコラーゲンの蓄積が進行し過剰蓄積が生じることを特徴とする。線維形成性肺疾患の患者の肺組織の特徴は、マスト細胞の数が増加しており、該マスト細胞の多くが増殖性線維芽細胞の極めて近傍に存在し部分的な脱顆粒状態にあることである。
【００１３】
主要な間質コラーゲンを表すＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｖ及びＸＩ型コラーゲンは、１−３本のα鎖から構成されており、各々が９５−１００ｋＤの分子量をもつこれらのα鎖が結合して単一の三重らせん構造を形成している。Ｉ型コラーゲンは２：１の化学量論的割合のα１鎖とα２鎖とから成る非対称ヘテロ三量体構造を有しており、鎖組成（α１〔Ｉ〕２，α２〔Ｉ〕）で表されるが、ＩＩＩ型コラーゲンは３本のα１鎖のホモ三量体であり、〔α１（Ｉ）〕３で表される。Ｉ型コラーゲンのα１鎖及びα２鎖は還元性条件下で多少異なる速度で移動する。トリプターゼ処理によって刺激されたコラーゲンはα鎖組成に基づいて及びＩ型コラーゲンに特異的な抗体を用いたイムノブロッティングによってＩ型と同定された。
【００１４】
コラーゲンは細胞外マトリックスと一体的な部分を形成し、肺に沈着するコラーゲンの量は、生合成と分解との厳密なバランスを確保するように厳密に調節される。このバランスの調節が適正でないとき、コラーゲンの沈着が増進され、線維症に帰着する。現在では、急性呼吸障害症候群、突発性線維形成性肺胞炎、類肉腫症に報告されているようなコラーゲンの量の変化、または、実際にコラーゲンの型の変化が肺の細胞異常の原因となると理解されている。
【００１５】
正常なヒト肺は６５％のＩ型コラーゲンと３０％のＩＩＩ型コラーゲンとを含む。突発性慢性肺線維症、アテローム性動脈硬化症に伴う線維症及び肝硬変ではＩ型コラーゲンの量の特異的な増加及びこれに付随するＩＩＩ型コラーゲンの減少が報告されている。一般に、コンプライアントな（応諾性の）組織ではＩ型コラーゲンとＩＩＩ型コラーゲンとの比が小さい。肺線維症に見られる組織のようなより低度にコンプライアントな組織では上記の比が大きい。
【００１６】
動脈の媒体及び病変に存在する平滑筋細胞は多様な種類の結合組織によって包囲されている。動脈媒体中のマトリックスは主としてＩ型及びＩＩＩ型の線維性コラーゲンから構成されるが、アテローム性動脈硬化症の病変では、マトリックスが、まばらに散乱したコラーゲンフィブリルと混合したプロテオグリカンから主として構成される。
【００１７】
種々の疾病状態、外傷または外科的処置によって生じる炎症を原因とする線維症の新規な治療方法は常に要望されている。
【００１８】
（発明の概要）
抗線維形成活性を有する低分子量ペプチドを適当な薬理学的担体中に含有する医薬組成物を哺乳動物に投与することによって哺乳動物の線維症を治療できることが知見された。このような治療は線維症を阻害し得る。本発明の好ましい実施態様では、線維症を軽減または後退させ、これによって内腔の通路の狭窄及び該通路内の流体流の制流が殆ど生じないようにすることができる。
【００１９】
従って本発明は、抗線維形成活性をもつＮ−ホルミル−メチオニル−ロイシル（“ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ”）ペプチドを抗線維形成有効量で適当な薬理学的担体中に含有する医薬組成物を使用して哺乳動物の線維症を治療する方法を提供する。特に有効なペプチドは式ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘを有しており、式中のＸがＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから成る群から選択されるペプチドである。
【００２０】
本発明の方法は、例えば、肺線維症、アテローム性動脈硬化症、硬変、糸球体硬化症、慢性膵炎及び冠動脈疾患（例えばＣｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｉｎｉａｅのような細菌感染が原因）などの哺乳動物の種々の線維形成性疾患の治療に有効である。外傷が原因の過剰線維症、あるいは、脊髄外科手術後の硬膜または神経根の術後神経周囲線維症、損傷または修復されて癒着した腱の腱組織崩壊、損傷または修復されて癒着した末梢神経の神経組織崩壊、婦人科及び腹部の外科手術後の術後癒着、男性または女性の不妊を取消すｖａｓ  ｄｅｆｅｒｅｎｓもしくは卵管の修復手術後の術後癒着、尿道、腸もしくは食道のような別の管状構造の外科的修復後の術後癒着、などの外科的処置が原因の過剰線維症も本発明方法で治療できる。
【００２１】
気道膜を治療するための好ましい投与モードは吸入である。表面病変を治療するための好ましい投与モードは適当な薬理学的担体を使用する表在性投与である。全身性治療には皮下注射または錠剤を使用し得る。
【００２２】
本発明の幾つかの好ましい実施態様は、本発明のペプチドを第二の有効成分と組合せて投与し得るという利点を患者に与えることができる。本発明によるこのような組合せに特に有用な別の有効成分は例えば、抗ロイコトリエン、ベータ２アゴニスト、コルチコステロイドなどである。
【００２３】
（図面の簡単な説明）
図１は、慢性喘息を誘発する免疫感作及び本発明方法によるその後の治療を示す日程表である。
【００２４】
図２Ａ及び２Ｂは、本発明による治療後（Ａ）及び無治療（Ｂ）の慢性喘息マウスの肺組織の病理学的特徴の比較を示す写真である。
【００２５】
図３Ａ−３Ｃは、本発明による治療後（Ａ）、無治療（Ｃ）及び対称（Ｂ）の線維形成性コラーゲンの蓄積を示すマウスの肺組織の比較を示す写真である。
【００２６】
図４Ａ−４Ｃは、本発明による治療後（Ｂ）、無治療（Ｃ）及び対称（Ａ）の線維形成性コラーゲンの蓄積を示すマウスの肺組織比較を示す写真である。
【００２７】
図５は、慢性喘息を誘発したマウスの気道粘液プラグ及び炎症細胞蓄積に対する本発明による治療の効果を示すグラフである。
【００２８】
図６は、慢性喘息を誘発したマウスの気道の肺粘液細胞数に対する本発明による治療の効果を示すグラフである。
【００２９】
図７は、慢性喘息を誘発したマウスの気道の好酸球及び好中球の数に対する本発明による治療の効果を示すグラフである。
【００３０】
図８は、慢性喘息を誘発したマウスの肺の肉芽腫に対する本発明による治療の効果を示すグラフである。
【００３１】
図９Ａ−９Ｃは、慢性喘息を誘発したマウス体内で本発明の治療によって肝毒性が全く誘発されないことを示す本発明による治療後（Ａ）、無治療（Ｃ）及び対照（Ｂ）の写真である。
【００３２】
図１０は慢性喘息を誘発するための免疫感作、その後に順次行う本発明方法による治療、追加の鼻孔内抗原投与の日程表を示す。
【００３３】
図１１Ａ−１１Ｃは、慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による治療後（Ａ）、無治療（Ｃ）及び対照（Ｂ）の肺組織の比較を示す写真である。
【００３４】
図１２Ａ−１２Ｃは、慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による治療後（Ａ）、無治療（Ｃ）及び対照（Ｂ）の肺組織中のコラーゲンの比較を示す写真である。
【００３５】
図１３Ａ−１３Ｃは、慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による治療後（Ａ）、無治療（Ｃ）及び対照（Ｂ）の肺組織中の粘液細胞の比較を示す写真である。
【００３６】
図１４は、慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの気道中の好酸球及び好中球の数に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【００３７】
図１５は、慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの気道粘液プラグ及び炎症細胞蓄積に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【００３８】
図１６は、慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの気道における粘液プラグ形成に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【００３９】
図１７は、慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの気道内の肺粘液細胞数に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【００４０】
図１８は、慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの肺の肉芽腫に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【００４１】
（詳細な説明）
本発明によれば、式ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ〔式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから成る群から選択される〕を有するある種の低分子量ペプチドが線維症を阻害し、好ましい実施態様では線維性病変を縮小し内腔を再生する驚異的な活性を有していることが知見された。本発明に関連した“再生（remodeling）”なる用語は、内腔、例えば気道通路または動脈などが病理学的変化以前の初期状態に再構成されるという意味で使用されている。極めて好ましい実施態様によれば、内腔が疾患以前の初期状態を回復する。
【００４２】
その結果としてこのようなペプチドは、例えば肺線維症、アテローム性動脈硬化症、硬変、糸球体硬化症、慢性膵炎及び冠動脈疾患によって生じた線維性病変を示す哺乳動物の治療に有効である。例えば、外傷が原因の過剰線維症、あるいは、脊髄外科手術後の硬膜または神経根の術後神経周囲線維症、損傷または修復された癒着のある腱の腱組織崩壊、損傷または修復された癒着のある末梢神経の神経組織崩壊、婦人科及び腹部の外科手術後の術後癒着、男性または女性の不妊を取消す精管もしくは卵管の修復手術後の術後癒着、尿道、腸もしくは食道のような別の管状構造の外科的修復後の術後癒着、などの外科的処置が原因の過剰線維症も本発明方法で治療できる。
【００４３】
本発明のペプチドは慣用の低分子量ペプチド化学技術によって製造できる。投与に使用されるときにはペプチドが、医薬として許容される担体または希釈剤と共に無菌条件下で製造される。
【００４４】
医薬組成物の用量は、患者次第及び使用される特定の投与経路次第で変更されるであろう。薬用量は１日あたり０．１〜１００，０００μｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜１０，０００μｇ／ｋｇの範囲にできる。
【００４５】
より好ましい薬用量は、体重１ｋｇあたり約１〜１００μｇ／ｋｇ、より好ましくは約１〜１０μｇ／ｋｇ、最も好ましくは１．０〜２．０μｇ／ｋｇの範囲である。このような用量が典型的には、疾患の重篤度に従って１日１回から４〜６時間毎に投与される。急性疾患の場合には、ペプチドを４−６時間毎に投与するのが好ましい。維持治療に使用する場合には、１日１回だけまたは２回の投与が好ましい。投与経路及び疾患の重篤度に従って、１日あたり約０．１８〜約１６ｍｇのペプチドを投与するのが好ましい。特定組成物の多数回投与の望ましい時間間隔は平均的な当業者が常套的実験法を使用して決定できる。
【００４６】
投与経路には経口、非経口、直腸内、膣内、外用、鼻孔内、眼内、直接注入、などがある。好ましい実施態様では、本発明のペプチドを抗炎症有効量でまたはマスト細胞の脱顆粒を阻害する薬用量で患者に投与する。代表的な医薬組成物は、抗炎症効果を与えるかまたはマスト細胞の脱顆粒を阻害する治療有効量の本発明のペプチドを、典型的には医薬として許容される担体中に含有する。
【００４７】
本文中で使用されより詳細に後述される“医薬として許容される担体”なる用語は、ヒトまたはその他の動物に投与するために適当な１種または複数の固体状または液体状の相溶性充填剤、希釈剤またカプセル形成物質を包含する。従って本発明の“担体”なる用語は、本発明分子を使用し易くするために本発明分子に組合せられる有機または無機の天然または合成の成分を意味する。“治療有効量”なる用語は、治療される特定の疾患に対して所望の結果を生じるかまたは所望の影響を与える本発明の医薬組成物の量を意味する。同一成分を含有する組成物を製造するとき、治療される患者の年齢、疾患の重篤度、治療の持続期間及び投与方式などの違いに対応して種々の濃度を使用し得る。
【００４８】
担体はまた相溶性でなければならない。本文中で使用された“相溶性”なる用語は、医薬組成物の諸成分が所望の薬効を実質的に低下させない方法で本発明の低分子量ペプチドと混合しかつこれらの諸成分が互いに混合することを意味する。
【００４９】
本発明の低分子量ペプチドは典型的にはそれ自体で（そのままで（neat））投与される。しかしながら、医薬として許容される塩の形態で投与されてもよい。医薬として許容されるこのような塩の非限定例は、以下の酸から製造される塩である：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸及びベンゼンスルホン酸。医薬として許容される塩はまた、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩のようなアルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩として調製され得る。従って本発明は、本発明のペプチドを１種または複数の医薬として許容される担体及び任意に他の任意の治療用成分と共に含む医療用薬剤組成物を提供する。
【００５０】
組成物は、経口、直腸内、膣内、外用、鼻孔内、眼内または非経口投与に適した組成物を包含する。これらのすべての投与経路が本発明材料の投与経路として使用できる。本発明のペプチドを含有する医薬組成物はまた、１種または複数の医薬として許容される担体を含有でき、これらの担体は、安定剤（長期保存の促進）、乳化剤、結合剤、増粘剤、塩、保存剤、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤及び殺真菌剤、等張剤、吸収遅延剤、などのような賦形剤を包含する。医薬活性物質にこのような媒体及び薬剤を使用することは当業者に公知である。慣用の任意の媒体または薬剤は、本発明のペプチドに不相溶性でない限り、本発明の医薬調製物に使用できると考えてよい。また、本発明の組成物に追加の有効成分を含有させてもよい。
【００５１】
経口投与に適した組成物は喘息治療に好ましい。典型的には、このような組成物は吸入用エアロゾル、噴霧剤、シロップ剤または錠剤として調製される。関節炎の治療には経口組成物も便利であるが外用投与に適した組成物が好ましい。典型的にはこのような外用組成物はクリーム、軟膏また溶液として調製される。このような組成物中の有効成分となるペプチドの濃度は典型的には５０μｇ／ｍｌ未満、より好ましくは３０μｇ／ｍｌ未満、最も好ましくは約５〜１０μｇ／ｍｌである。
【００５２】
組成物は単位量剤形で提供されるのが便利であり、このような剤形は製薬業界で公知の任意の方法で製造し得る。方法は典型的には、本発明の有効成分を１種または複数の補助成分を構成する担体に会合させる段階を含む。
【００５３】
吸入投与に適した本発明の組成物は例えばエアロゾルまた吸入溶液剤の形態で提供され得る。典型的なエアロゾル組成物の一例は、トリクロロモノフルオロメタンとジクロロジフルオロメタンとオレイン酸との混合物に懸濁した所望量の微晶質ペプチドから成る。典型的な溶液の一例は、滅菌生理食塩水（溶解の場合には任意に約５％ｖ／ｖのジメチルスルホキシド〔“ＤＭＳＯ”〕）、ベンズアルコニウムクロリド及び硫酸（ｐＨ調整用）に溶解または懸濁した所望量のペプチドから成る。
【００５４】
経口投与に適した本発明の組成物はまた、カプセル剤、カシェ剤、錠剤またはドロップ剤のような各々が所定量の本発明のペプチドを含有する個別単位の形態であってもよく、リポソーム中に含まれていてもよく、または、シロップ剤、エリキシル剤のような水性液体もしくは非水性液体の懸濁液の形態であってもよく、または、エマルジョンであってもよい。錠剤の配合基剤の一例は、トウモロコシデンプン、ラクトース及びステアリン酸マグネシウムを不活性成分として含む。シロップ剤の配合基剤の一例は、クエン酸、着色剤、香味剤、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、サッカリン、安息香酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム及び純水を含む。
【００５５】
非経口投与に適した組成物は、好ましくはレシピエントの血液と等張性の本発明分子の無菌水性調製物から成るのが便利である。この水性調製物は適当な分散剤または湿潤剤と懸濁化剤とを使用する公知の方法で製剤化され得る。無菌の注射用調製物はまた、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のような非経口的に許容される無毒の希釈剤または溶媒中の無菌の溶液注射剤または懸濁液注射剤でもよい。使用し得る適格なビヒクル及び溶媒は、水、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム溶液である。ある種のペプチドでは溶解度を維持するために水溶液中に約１０％ｖ／ｖ以下のＤＭＳＯまたはＴｒａｐｐｓｏｌを使用し得る。また、溶媒または懸濁媒体として無菌の不揮発性油も便利に使用し得る。この目的では、合成のモノ−またはジグリセリドを含む多くの不揮発性油を使用し得る。更に、注射剤の調製に脂肪酸（例えば、オレイン酸または中性脂肪酸）を使用し得る。数週または数カ月の期間にわたって３７℃で固体形態から徐放されるコンパウンド注射剤を調製するために４℃で脂質にプルロニックブロックコポリマーを配合してもよい。
【００５６】
外用投与に適した組成物は、ＴｒａｐｐｓｏｌもしくはＤＭＳＯ中のペプチドの溶液の形態でもよく、または、クリーム、軟膏もしくはローションの形態でもよい。
【００５７】
典型的には約０．１〜約２．５％の有効成分を基剤または担体に混入する。クリームの配合基剤の一例は、純水、ワセリン、ベンジルアルコール、ステアリルアルコール、プロピレングリコール、イソプロピルミリステート、ポリオキシル４０ステアレート、ｃａｒｂｏｍｅｒ  ９３４、ラウリル硫酸ナトリウム、酢酸二ナトリウム、水酸化ナトリウム及び任意にＤＭＳＯを含む。軟膏の配合基剤の一例は、白色ワセリン及び任意に鉱油、ソルビタンセスキオレエート及びＤＭＳＯを含む。ローションの配合基剤の一例は、ｃａｒｂｏｍｅｒ  ９４０、プロピレングリコール、ポリソルベート４０、プロピレングリコールステアレート、コレステロール及び近縁のステロール類、イソプロピルミリステート、ソルビタンパルミテート、アセチルアルコール、トリエタノールアミン、アスコルビン酸、シメチコーン及び純水を含む。
【００５８】
ＯＶＡ誘発気管支喘息マウスモデル
持続性喘息に対するｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（ＨＫ−Ｘ）の効果を試験するために慢性喘息マウスモデルを使用した。このマウス系は、気道基底板の外側境界に集まった炎症細胞の著しい浸潤が存在する慢性喘息のモデルである。５カ月間の免疫感作期間中の最初の１カ月間でマウスを初期免疫感作し、次いで週１回ずつＯＶＡで鼻孔内抗原投与を行って、マウスの持続性喘息状態を成立させた。免疫マウスでは血管及び気道の周囲のコラーゲンの蓄積量が増加しており、これは線維形成性疾患の指標である。免疫マウスをＨＫ−Ｘによって１６日間で８回（即ち、１日おき）治療した。
【実施例１】
【００５９】
材料及び方法
試薬：結晶質ＯＶＡはＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から入手し、硫酸アルミニウムカリウム（明礬）はＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手し、発熱物質非含有の蒸留水はＢａｘｔｅｒ，Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）から入手した。ＯＶＡ（５００μｇ／ｍｌ）を等容量の明礬の１０％（ｗｔ／ｖｏｌ）蒸留水溶液と混合した。混合物（１０ＮのＮａＯＨを使用してｐＨ６．５に調整）を室温で６０分間インキュベーション後、７５０ｇで５分間遠心した。ペレットを蒸留水に再懸濁させて初期容量に戻し、１時間以内に使用した。
【００６０】
雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（購入時点で６〜８週齢；Ｄ  ａｎｄ  Ｋ，Ｓｅａｔｔｌｅ  ＷＡ）は慣用の試験条件下で飼育した。
【００６１】
慢性喘息を誘発するためのアレルゲン免疫感作／抗原投与プロトコル：
マウスに対して、１日目に明礬中の０．２ｍｌ（１００μｇ）のＯＶＡを腹腔内注射（“ｉ．ｐ．”）で投与し、１４日目にｉ．ｐ．注射（明礬中の１００μｇのＯＶＡ）と鼻孔内投与（生理食塩水中の１００μｇＯＶＡ）とを組合せて行った。更に２５、２６及び２７日目に、マウスにＯＶＡ（生理食塩水中に１００μｇ）の鼻孔内抗原投与を行った。次いで、ＯＶＡ（生理食塩水中に１００μｇ）による週一回の鼻孔内抗原投与を更に５カ月間行った。図１参照。
【００６２】
慢性喘息の治療
図１に示すように、５０μｇのＨＫ−Ｘを１６日間で合計８回鼻孔内（“ＩＮ”）投与した。最終ＨＫ−Ｘ投与の１日後に動物を殺した。
【００６３】
投与するＨＫ−Ｘの調製
５０μｇのＨＫ−Ｘ（２．５％未満のＤＭＳＯを含有する５０μｌの生理食塩水中）。ＤＭＳＯは、化合物を溶解させるに十分であるが２．５容量％以下となる量で使用する。レシピエントに麻酔をかけ、麻酔がきいているうちに溶液を鼻から肺に注入した。
【００６４】
対照ビヒクルとしては、動物に麻酔をかけ、麻酔がきいているうちに同量の生理食塩水を鼻から（鼻孔内）投与した。
【００６５】
組織学
最終ＨＫ−Ｘ治療または最終ＯＶＡ抗原投与の後、麻酔薬を注射して動物を殺した。肺を摘出し、１０％ホルマリンで固定した。免疫細胞化学検査のために１個の肺葉をＣａｒｎｏｙの固定剤で固定した。２４時間の固定後、肺を脱水し、パラフィンブロックとした。ブラインド分析のために全部のパラフィンブロックに実験番号を付けてコード番号とした。
【００６６】
パラフィンブロックを切開し、１ｍｍの間隔を隔てる各肺の２つのレベルを選択し、各レベルから８個のスライドを作製した。細胞及び組織の全体構造を可視化するためにスライドをヘマトキシリン及びエオシンで染色した。粘液含有細胞の同定及び気道に放出された粘液の同定にはアルシアン（Ａｌｃｉａｎ）ブルーを使用し、線維症中のコラーゲン沈着にはメーソン（Ｍａｓｏｎ）トリクロム染色を使用し、肺組織中の好酸球の同定にはメチレンブルーを使用した。
【００６７】
形態計測分析：アレルギー性慢性肺疾患の以下のパラメーターを分析した。
１．気道プラグスコア：＋から＋＋＋＋までの評価方式を使用し、中サイズ及び大サイズの気道内への粘液分泌の程度を既発表の報告に従って測定した（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．１〜８４，ｐｐ．１４８３〜９４，Ｏｃｔ．１９９６）。
２．粘液性顆粒を含有する上皮細胞の割合：中−大（直径６００μｍ〜１，０００μｍ）の気道内で１００個の上皮細胞のうちで粘液含有上皮細胞の数を無作為にカウントすることによって評価した。種々の肺葉の合計１０個のフィールドをカウントし、平均スコアの表を作成した。
３．浸潤細胞の細胞密度：＋から＋＋＋＋までの評価方式を使用し、蓄積炎症細胞（好中球、好酸球、単球及びリンパ球）の細胞密度を気道に集まった細胞及び末梢血管区画に存在している細胞について評価した。評価＋は５個未満例えば３個の細胞から成る炎症細胞層を表し、評価＋＋は５〜１０個の炎症細胞密度を表し、評価＋＋＋は１０〜２０個の炎症細胞密度を表し、評価＋＋＋＋は２０〜４０個の炎症細胞密度を表す。
４．種々の細胞型の数：気道に集まった好酸球及び好中球の数を２，２００ｕ２の面積の高倍率（４０×）フィールドあたりの数をカウントすることによって定量した。
５．肉芽腫スコア：肉芽腫様構造を低倍率（５×）でカウントした。気道または血管に集まった細胞凝集を肉芽腫としてカウントした。
【００６８】
組織形態計測データの統計分析：ＳｉｇｍａＳｔａｔバージョン２．０を使用して実験グループと対照グループとを統計比較した。ＡＮＯＶＡによって差の有意性（ｐ＜０．０５）を分析した。ＳｉｇｍａＰｌｏｔバージョン４．０またはＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを使用してデータを表すグラフを作成した。
【００６９】
結果：
マウスをＯＶＡで免疫感作し次いでＨＫ−Ｘで治療している期間中は副作用または病気の徴候は全く観察されなかった。全実験期間中、マウスは活動的であった。
【００７０】
しかしながら、動物を殺した後、肺組織の組織学的検査を行うと、ＯＶＡ単独で免疫した動物はヒトで観察された慢性喘息に一致する肺の重篤な病理学的変化を有していた。従ってこのマウス系は、気道基底板の外側境界に集まった炎症細胞が大量に浸潤している慢性喘息のモデルである（図２Ｂ参照）。
【００７１】
動物を１６日間にわたる８回のＨＫ−Ｘ投与で治療すると、気道及び血管の周囲の炎症細胞の数は明らかに減少した（図２Ａ参照）。
【００７２】
図３に示すように、ＯＶＡ免疫マウスは血管及び気道の周囲のコラーゲンの蓄積量（青色）が増加していた（図３Ｃ参照）。しかしながらＨＫ−Ｘで治療した肺はコラーゲン沈着レベルの低下を示した（図３Ａ参照）。対照マウス（生理食塩水中のＨＫ−Ｘ投与）では、肺組織に炎症細胞及び線維形成性コラーゲンの沈着物は全く存在しなかった（図３Ｂ参照）。
【００７３】
ｐＨ２．３のアルシアンブルーで粘液含有細胞を可視化したときにも同様の結果が観察された。ＯＶＡ免疫マウスでは極めて高い割合の上皮細胞が粘液顆粒を含んでいた（図４Ｃ参照）。対照的に、ＨＫ−Ｘによる治療は気道の粘液含有細胞の数を劇的に減少させた（図４Ｂ参照）。実際、出現度数はＨＫ−Ｘ含有生理食塩水だけを与えた対照即ち非免疫動物の出現度数と差はなかった（図４Ａ参照）。
【００７４】
これらの６月齢の慢性喘息マウスの５０〜６０％の気道は粘液で閉塞されていた（図５参照）。１６日間にわたってＨＫ−Ｘを８回鼻孔内投与したとき、気道の粘液蓄積及び粘液細胞は著しく減少した（図６）。また、単位面積あたりの好酸球及び好中球を含む浸潤性炎症細胞の数も減少した（図７）。ＯＶＡ免疫動物及びＨＫ−Ｘ治療動物の組織病理学的観察は、生理食塩水またはＨＫ−Ｘだけを含有する生理食塩水で処置した動物の組織病理学的観察に類似していた。
【００７５】
マウスモデルの慢性喘息の重要な特徴の１つは肺に肉芽腫性構造が出現することである。ＨＫ−Ｘで治療された動物の肺ではこれらの構造の数が減少し大きさが縮小している（図８）。
【００７６】
ＨＫ−Ｘで治療した慢性喘息マウス及び普通の生理食塩水で処置した動物の双方を比較すると、肝臓の組織病理学に明らかな違いはない（図９）。従って、マウスにＨＫ−Ｘの鼻孔内投与を頻繁に行っても肝毒性は全く生じないと判断できる。
【００７７】
これらの試験は、ＨＫ−Ｘの投与がアレルゲンで慢性喘息を誘発させたマウスモデルの体内で気道の炎症及び粘液細胞の超活性を低下させるか否かを判断できるように設計した。このモデルでは、マウスをＯＶＡに感作させ、ＯＶＡの鼻孔内投与を週一回の割合で５カ月間継続し、ＨＫ−Ｘを１６日間にわたって８回鼻孔内投与した。このアレルゲン免疫感作と抗原投与の計画によって、好酸球及びその他の種類の炎症細胞の慢性気道浸潤、気道内の粘液蓄積、粘液分泌細胞の過形成が生じた。
【００７８】
気道の分泌過多、粘液細胞の過形成、好酸球及び好中球の漸増はＨＫ−Ｘの投与によって減少した。これらの結果は、アレルゲンで誘発したこの慢性喘息モデルで生じる気道の粘液分泌過多及び後期炎症を軽減するためにＨＫ−Ｘが重要な役割を果たすことを示す。ＨＫ−Ｘによる肺炎症の軽減並びに粘液分泌及び粘液細胞分化の減少が観察された。
【００７９】
更に重要な利点は、ＨＫ−Ｘが１６日間の治療期間にわたって有効性を継続したことである。これは、このモデルにタキフィラキシー（過耐性）が生じなかったことを示す。更にＨＫ−Ｘの鼻孔内投与の場合、体重１Ｋｇあたり１ｍｇの用量をより長期間にわたってマウスに投与しても検出可能な肝毒性を全く生じなかった。
【実施例２】
【００８０】
慢性喘息のマウスモデルでは、病理学的変化がヒト疾患に酷似している。上記の実施例１は、本発明による治療が線維症を含む慢性喘息によって生じる病理学的変化を減少させることを示す。線維症、気道周囲の炎症細胞数、気道内の粘液細胞数及び粘液放出の顕著な減少が観察された。
【００８１】
この実施例は、慢性喘息を誘発し本発明に従って治療したマウスに対して引き続いて更にＯＶＡによる鼻孔内（“ＩＮ”）抗原投与を行った試験結果を報告する。材料は実施例１と同じである。
【００８２】
方法：
Ｂａｌｂ／ｃマウスを実施例１と同様に６カ月間にわたってＯＶＡで繰り返し免疫感作した。その後、実施例１と同様に毎回５０μｇのＨＫ−Ｘを１６日間にわたって８回鼻孔内投与した。次に、追加の投与計画に従ってＯＶＡによる鼻孔内抗原投与を行う１５〜３０分前に５０μｇのＨＫ−Ｘを投与した。この投与計画を合計３日間繰り返した。最終処置の翌日にマウスを殺した。図１０参照。
ＨＫ−Ｘは実施例１と同じ手順で調製した。
【００８３】
ＨＫ−Ｘの投与：
ＨＫ−Ｘ／ＯＶＡ動物グループに、体重１Ｋｇあたり０．４ｍｇの用量（１日あたり体重２０ｇｍあたり５０μｇ）でＨＫ−Ｘを投与し、生理食塩水グループにはＯＶＡ非投与で同じ用量のＨＫ−Ｘを投与した。予め行った薬物動態試験は、マウス体内のＨＫ−Ｘの血漿Ｔ１／２（半減期）が３０分未満であることを示した。従って、アレルゲンで抗原投与を行う間の血漿レベルを維持するために、これらのマウスにはＯＶＡ抗原投与の直前に追加用量のＨＫ−Ｘを投与した。
【００８４】
肺組織学：
気管及び左肺（上葉及び下葉）を採集し、１０％のホルマリンに入れて２０℃で１５時間固定した。パラフィンに封入後、組織を５μｍの切片に切断した。肺組織中の好酸球を改質Ｄｉｓｃｏｍｂｅ溶液で染色した。気道単位面積（２，０００μｍ２）あたりの好酸球の数を、従来技術に記載されている形態計測分析によって測定した（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．１〜８４，ｐｐ．１４８３〜９４，Ｏｃｔ．１９９６，Ｓｕら，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｖｏｌ．１４７，ｐｐ．４４８−５６，１９９３）。気道粘液及び粘液細胞を以下の染色試験で同定した：メチレンブルー、ムシカルミン、トルイジンブルー及びアルシアンブルー。
【００８５】
粘液による気道径の閉塞を０から５＋までの半定量的段階で評価した。各マウスに対して、プロトコルデザインにブラインドな個人が左肺全体に無作為に分布した１０個の気道切片について粘液による閉塞を形態計測分析によって評価した。各気道切片について粘液による気道径の閉塞を以下の判定基準に基づいて評価した：０，粘液無し；１＋，−１０％閉塞；２＋，−３０％閉塞；３＋，−５０％閉塞；４＋，−８０％閉塞；及び５＋，−９０−１００％閉塞。
【００８６】
結果：
アレルギー抗原を投与したマウスから採取した肺組織の光学顕微鏡写真：
ＯＶＡで６カ月間免疫感作し次いでＯＶＡで繰り返し抗原投与した動物はヒトに観察された慢性喘息に一致する肺の重篤な構造変化を有していた。気道基底板の外側境界に集まった炎症細胞の著しい浸潤が観察された（図１１Ｃ）。動物を１６日間にわたる８回のＨＫ−Ｘ投与及びアレルギー抗原投与の３０分前のＨＫ−Ｘ投与で治療すると、気道及び血管の周囲の炎症細胞の数が明らかに減少し（図１１Ａ参照）、生理食塩水で処置したマウスと同様のパターンが観察された（図１１Ｂ参照）。
【００８７】
ＯＶＡ免疫マウスでは血管及び気道の周囲でコラーゲンの蓄積量（青色）が増加していた（図１２Ｃ参照）。しかしながら、ＨＫ−Ｘで治療した肺は、コラーゲン沈着レベルの低下を示した（図１２Ａ参照）。生理食塩水中のＨＫ−Ｘを投与した対照マウスでは、肺組織に炎症細胞及び線維形成性コラーゲン沈着物が存在しなかった（図１２Ｂ参照）。
【００８８】
ｐＨ２．３のアルシアンブルーで粘液含有細胞を可視化したときも同様の結果が観察された。ＯＶＡ免疫マウスでは極めて高い割合の上皮細胞が粘液顆粒を含んでいた（図１３Ｃ参照）。対照的に、ＨＫ−Ｘによる治療は気道の粘液含有細胞の数を劇的に減少させた（図１３Ａ参照）。実際、出現度数はＨＫ−Ｘ含有生理食塩水だけを与えた対照即ち非免疫動物の出現度数と差はなかった（図１３Ｂ参照）。
【００８９】
肺の好酸球及び好中球の漸増に対するＨＫ−Ｘの効果：
肺の好酸球及び好中球の漸増に対するＨＫ−Ｘ治療の効果を図１４に示す。ＨＫ−Ｘによる前処置は、ＯＶＡ免疫マウス及び抗原投与マウスのそれぞれの肺組織の浸潤性好酸球の数を７０％減少させ、浸潤性好中球の数を３０％減少させた。生理食塩水で処置した肺で観察された好酸球の平均数は２，２００μｍ２あたり０．３±０．１細胞であった。生理食塩水中のＨＫ−Ｘ単独による治療後の肺組織中の好酸球の数は多少増加し、２，２００μｍ２あたり０．７５±０．１８細胞であった。対照的に気道及び血管に関してはＨＫ−Ｘ治療は浸潤した炎症細胞の総数を有意に減少させた（図１５）。
【００９０】
ＨＫ−Ｘ治療によって減少した肺の粘液蓄積：
アレルゲンによる鼻孔内抗原投与を３日間継続した後、気道粘液プラグスコア及び気道粘液細胞数を測定した。方法の項で前述したように気道粘液プラグスコアを０〜５の段階で評価した。実施例１に記載した手順で粘液細胞数を半定量的に測定した。生理食塩水で処置したグループでは、気道粘液蓄積の平均スコアは０．１±０．０５であった（図１６参照）。ＯＶＡで抗原投与したグループでは、気道プラグスコアが２３．３倍になり、２．３３±０．１７のスコアになった（生理食塩水グループ対ＯＶＡグループ，ｐ＜０．００１；マン・ホイットニーの順位和検定（Ｍａｎｎ  Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｒａｎｋ  Ｓｕｍ  Ｔｅｓｔ））。気道粘液プラグスコア即ち気道閉塞はＯＶＡ抗原投与の１５〜３０分前のＨＫ−Ｘ治療によって７８％減少した（ｐ＜０．００１；マン・ホイットニーの順位和検定）。同様に、気道の粘液細胞の数も減少した（図１７参照）。より特定的に、ＯＶＡ抗原投与しＨＫ−Ｘ治療しなかった肺では上皮細胞の３４．６６±６．４５％が分化して粘液分泌したが、ＨＫ−Ｘ治療した肺では粘液を含む細胞は１１．２４±４．７３％にすぎなかった（ｐ＜０．００１；マン・ホイットニー順位和検定）。
【００９１】
慢性喘息肺の肉芽腫様構造の形成レベル：
ＯＶＡで６カ月間免疫感作した動物の肺をＯＶＡとＨＫ−Ｘとの双方またはＯＶＡ単独で繰り返し抗原投与し、肺の肉芽腫形成を測定した。図１８に見られるように、ＨＫ−Ｘで治療した肺では肉芽腫形成が１／３に減少していた（ｐ＜０．００１；マン・ホイットニー順位和検定）。
【００９２】
これらの試験は、ＨＫ−Ｘの投与がアレルゲンで慢性喘息を誘発させたマウスモデル体内で気道の炎症及び粘液細胞の超活性を低下させるか否かを判断できるように設計した。このモデルでは、マウスをＯＶＡに感作し、次いでＯＶＡの鼻孔内投与を週一回の割合で５カ月間継続し、更にＯＶＡによる鼻孔内抗原投与を３日間継続した。このアレルゲン免疫感作と抗原投与との計画によって、好酸球及びその他の種類の炎症細胞の慢性気道浸潤、気道内の粘液蓄積、粘液分泌細胞の過形成が生じた。
【００９３】
更にこのモデルでは、気道の分泌過多、粘液細胞の過形成、好酸球及び好中球の漸増がＨＫ−Ｘの投与によって減少した。これらの結果は、アレルゲンで誘発したこの慢性喘息モデルで生じる気道の粘液分泌過多及び後期炎症を減少させるためにＨＫ−Ｘが重要な役割を果たすことを示す。ＨＫ−Ｘによる肺炎症の軽減並びに粘液分泌及び粘液細胞分化の減少は、ＨＫ−Ｘがヒトの慢性喘息の治療に有効であることを示す。
【００９４】
本発明をその好ましい実施態様について詳細に記載した。しかしながら、本明細書及び図面の詳細な考察から、特許請求の範囲に記載された本発明の要旨及び範囲を逸脱しない修正及び改良が当業者に可能であることは理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】慢性喘息を誘発する免疫感作及び本発明方法によるその後の治療を示す日程表である。
【図２Ａ】本発明による治療後の慢性喘息マウスの肺組織の病理学的特徴を示す写真である。
【図２Ｂ】本発明による無治療の慢性喘息マウスの肺組織の病理学的特徴を示す写真である。
【図３Ａ】本発明による治療後の線維形成性コラーゲンの蓄積を示すマウスの肺組織を示す写真である。
【図３Ｂ】本発明による対称の線維形成性コラーゲンの蓄積を示すマウスの肺組織を示す写真である。
【図３Ｃ】本発明による無治療の線維形成性コラーゲンの蓄積を示すマウスの肺組織を示す写真である。
【図４Ａ】本発明による対称の線維形成性コラーゲンの蓄積を示すマウスの肺組織を示す写真である。
【図４Ｂ】本発明による治療後の線維形成性コラーゲンの蓄積を示すマウスの肺組織を示す写真である。
【図４Ｃ】本発明による無治療の線維形成性コラーゲンの蓄積を示すマウスの肺組織を示す写真である。
【図５】慢性喘息を誘発したマウスの気道粘液プラグ及び炎症細胞蓄積に対する本発明による治療の効果を示すグラフである。
【図６】慢性喘息を誘発したマウスの気道の肺粘液細胞数に対する本発明による治療の効果を示すグラフである。
【図７】慢性喘息を誘発したマウスの気道の好酸球及び好中球の数に対する本発明による治療の効果を示すグラフである。
【図８】慢性喘息を誘発したマウスの肺の肉芽腫に対する本発明による治療の効果を示すグラフである。
【図９Ａ】慢性喘息を誘発したマウス体内で本発明の治療によって肝毒性が全く誘発されないことを示す本発明による治療後の写真である。
【図９Ｂ】慢性喘息を誘発したマウス体内で本発明の治療によって肝毒性が全く誘発されないことを示す本発明による対照の写真である。
【図９Ｃ】慢性喘息を誘発したマウス体内で本発明の治療によって肝毒性が全く誘発されないことを示す本発明による無治療の写真である。
【図１０】慢性喘息を誘発するための免疫感作、その後に順次行う本発明方法による治療、追加の鼻孔内抗原投与の日程表を示す。
【図１１Ａ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による治療後の肺組織を示す写真である。
【図１１Ｂ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による対照の肺組織を示す写真である。
【図１１Ｃ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による無治療の肺組織を示す写真である。
【図１２Ａ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による治療後の肺組織中のコラーゲンを示す写真である。
【図１２Ｂ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による対照の肺組織中のコラーゲンを示す写真である。
【図１２Ｃ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による無治療の肺組織中のコラーゲンを示す写真である。
【図１３Ａ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による治療後の肺組織中の粘液細胞を示す写真である。
【図１３Ｂ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による対照の肺組織中の粘液細胞を示す写真である。
【図１３Ｃ】慢性喘息を誘発しその後に追加の鼻孔内抗原投与を行ったマウスの本発明による無治療の肺組織中の粘液細胞を示す写真である。
【図１４】慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの気道中の好酸球及び好中球の数に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【図１５】慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの気道粘液プラグ及び炎症細胞蓄積に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【図１６】慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの気道における粘液プラグ形成に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【図１７】慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの気道内の肺粘液細胞数に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【図１８】慢性喘息を誘発しその後にアレルギー性抗原投与を繰り返したマウスの肺の肉芽腫に対する本発明治療の効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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