(57)【要約】【課題】  天然物の中から一重項酸素消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分として含有する一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤を提供する。【解決手段】  一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤に、ウラン及び／又はカンランのからの抽出物を含有せしめる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウラン及び／又はカンランからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする一重項酸素消去剤。
【請求項２】
ウラン及び／又はカンランからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
【請求項３】
ウラン及び／又はカンランからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物抽出物を有効成分として含有する一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、特に生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド（すなわち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−））、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）等がある。これら活性酸素は、食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしているが、過剰に生成された活性酸素は、生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。
【０００３】
例えば、活性酸素は、コラーゲン等の生体組織を分解、変性又は架橋したり、油脂類を酸化して、細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされるこれらの障害が、皮膚のしわ形成・弾力性低下等の皮膚の老化症状の原因になるものと考えられている（非特許文献１参照）。
【０００４】
したがって、このような活性酸素を消去することにより、皮膚の老化症状を予防、治療又は改善することができると考えられる。活性酸素消去作用を有するものとしては、オウギ抽出物（特許文献１参照）、藤茶抽出物（特許文献２参照）、菜の花抽出物（特許文献３参照）等が知られている。
【０００５】
炎症性の疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天庖瘡、その他肌荒れを伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、ヒアルロニダーゼの活性化、ヒスタミンの遊離等が知られている。ヒアルロニダーゼの活性化によって、マストセルからのヒスタミンの脱顆粒が促進され、その結果炎症が引き起こされる。したがって、ヒアルロニダーゼの活性化を阻害することにより、上記疾患を予防、治療又は改善することができると考えられる。ヒアルロニダーゼ阻害作用を有するものとしては、イロハモミジ抽出物（特許文献４参照）等が知られている。
【０００６】
また、ヒスタミンは、マストセル内に存在し、脱顆粒反応により放出されたものが起炎物質として作用する。細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼの遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価することができる。したがって、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することにより、同時にヒスタミンの遊離も抑制でき、これにより炎症性疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するものとしては、藤茶抽出物（特許文献５参照）等が知られている。
【特許文献１】特開平６−６５０７４号公報
【特許文献２】特開２００１−９７８７３号公報
【特許文献３】特開２００３−８１８４８号公報
【特許文献４】特開２００３−１１３０６８号公報
【特許文献５】特開２００３−１２５３２号公報
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル臨時増刊」，1995年，No.14，p.156
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、天然物の中から一重項酸素消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分として含有する一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、ウラン及び／又はカンランからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、優れた一重項酸素消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有するウラン及び／又はカンランからの抽出物を有効成分として含有する一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明について説明する。
本発明の一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、ウラン及び／又はカンランからの抽出物を有効成分として含有する。
【００１１】
ここで、本発明において「抽出物」とは、ウラン又はカンランを抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１２】
本発明において使用する抽出原料は、ウラン（学名：Canarium pimela）及びカンラン（学名：Canarium album）である。ウラン（Canarium pimela）及びカンラン（Canarium album）は、カンラン科に属する常緑高木であって、中国南部、台湾など広く熱帯地方に栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として使用する上記植物の構成部位は、特に限定されるものではなく、例えば、花蕾部、葉部、枝部、種子部、樹皮部、根部等が挙げられ、これらのうち、特に葉部を抽出原料として使用することが好ましい。葉部には、完全葉の他、葉の一部（例えば、葉身、葉柄、托葉等）が含まれる。
【００１３】
ウラン抽出物及びカンラン抽出物に含有される一重項酸素消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、ウラン又はカンランから一重項酸素消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有する抽出物を得ることができる。
【００１４】
例えば、ウラン又はカンランを乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、一重項酸素消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１５】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００１６】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１７】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００１８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましい。
【００１９】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を溶出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２０】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでも一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００２１】
ウラン抽出物及びカンラン抽出物は、特有の匂いと味とを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００２２】
以上のようにして得られるウラン抽出物及びカンラン抽出物は、一重項酸素消去作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有しているため、それらの作用を利用して一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤の有効成分として使用することができる。
【００２３】
本発明の一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、ウラン抽出物又はカンラン抽出物を含むものであってもよいし、ウラン抽出物とカンラン抽出物とを混合して含むものであってもよい。ウラン抽出物とカンラン抽出物とを混合して含む場合、その混合比は、適宜調整すればよい。また、本発明の一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤又はヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、ウラン抽出物及び／又はカンラン抽出物のみからなるものであってもよいし、ウラン抽出物及び／又はカンラン抽出物を製剤化したものであってもよい。
【００２４】
ウラン抽出物及び／又はカンラン抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を使用することができる。また、ウラン抽出物及び／又はカンラン抽出物は、他の組成物（例えば、皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００２５】
なお、本発明の一重項酸素消去剤は、必要に応じて、一重項酸素消去作用を有する他の天然抽出物を配合して有効成分として使用することができる。また、本発明のヒアルロニダーゼ阻害剤は、必要に応じて、ヒアルロニダーゼ阻害作用を有する他の天然抽出物を有効成分として使用することができる。さらに、本発明のヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、必要に応じて、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有する他の天然抽出物を有効成分として使用することができる。
【００２６】
本発明の一重項酸素消去剤は、ウラン抽出物及び／又はカンラン抽出物が有する一重項酸素消去作用を通じて、生体内にて生じた一重項酸素を消去することができ、一重項酸素の過剰な生成を抑制することができる。これにより、しわ形成・弾力性低下等の皮膚の老化症状、肌の色素沈着等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の一重項酸素消去剤は、これらの用途以外にも一重項酸素消去作用を発揮することに意義のあるすべての用途に使用することができる。
【００２７】
本発明のヒアルロニダーゼ阻害剤は、ウラン抽出物及び／又はカンラン抽出物が有するヒアルロニダーゼ阻害作用を通じて、ヒアルロニダーゼの活性を阻害することができ、これにより、炎症性の疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のヒアルロニダーゼ阻害剤は、これらの用途以外にもヒアルロニダーゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に使用することができる。
【００２８】
本発明のヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、ウラン抽出物及び／又はカンラン抽出物が有するヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を通じて、ヘキソサミニダーゼの遊離を抑制することができ、これにより、各種炎症性の疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、これらの用途以外にもヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に使用することができる。
【００２９】
なお、本発明の一重項酸素消去剤、ヒアルロニダーゼ阻害剤及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３０】
以下、製造例、試験例及び配合例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は、下記の各例に何ら限定されるものではない。
【００３１】
〔製造例１〕ウラン抽出物の製造
ウランの葉部の粗粉砕物１０ｇを抽出溶媒１００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら８０℃の温度条件下にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた濾液を４０℃の温度条件下で減圧下にて濃縮し、さらに減圧乾燥機で乾燥させて、ウラン抽出物を得た。抽出溶媒として水、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比＝１：１）、エタノールを用いたときの各抽出物の収率を表１に示す。
【００３２】
〔製造例２〕カンラン抽出物の製造
カンランの葉部の粗粉砕物１０ｇを抽出溶媒１００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら８０℃の温度条件下にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた濾液を４０℃の温度条件下で減圧下にて濃縮し、さらに減圧乾燥機で乾燥させて、カンラン抽出物を得た。抽出溶媒として水、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比＝１：１）、エタノールを用いたときの各抽出物の収率を表１に示す。
【００３３】
［表１］
試  料   抽出原料       抽出溶媒       抽出物収率（％）
１       ウラン            水              ２２．１
２       ウラン     ５０％エタノール       ２７．０
３       ウラン        エタノール          １０．２
４      カンラン           水              ２９．４
５      カンラン    ５０％エタノール       ３５．６
６      カンラン       エタノール          １０．３
【００３４】
〔試験例１〕一重項酸素消去作用試験
製造例１で得られたウラン抽出物（試料１〜３）及び製造例２で得られたカンラン抽出物（試料４〜６）について、以下のようにして一重項酸素消去作用を試験した。
【００３５】
透明ガラス瓶（１０ｍＬ容）中で２％赤血球懸濁液５ｍＬ、試料（試料１〜６）を所定濃度で含むｐＨ７．４の等張リン酸緩衝液５ｍＬ、及び光増感剤（１０ｍＭヘマトポルフィリン−２０ｍＭ水酸化ナトリウム溶液）０．０１ｍＬを混合した。得られた溶液をメリーゴーランド上、７．５Ｗハロゲンランプで３５分間均一に照射して一重項酸素（１Ｏ2）を発生させ、赤血球の溶血を生じさせた。この反応溶液１ｍＬを採取し、等張リン酸緩衝液２ｍＬを加えて混合した後、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行った。
【００３６】
次いで、上清を採取し、波長５４０ｎｍの吸光度を測定した。別に、赤血球を一部溶血させた上記反応溶液１ｍＬを採り、これに蒸留水２ｍＬを加えて完全に溶血させたものをコントロールとし、同様に吸光度測定を行った。測定された吸光度から、下記式により一重項酸素消去率（％）を算出した。
【００３７】
一重項酸素消去率(％)＝(１−Ｂ／Ａ)×１００
式中、Ａは「コントロールの吸光度」を表し、Ｂは「反応溶液上清の吸光度」を表す。
【００３８】
各試料（試料１〜６）について、試料濃度を段階的に減少させて上記一重項酸素消去率（％）を算出し、一重項酸素消去率（％）が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
結果を表２に示す。
【００３９】
［表２］
試  料   ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１          ２４０．４
２          １６５．９
３          ２８４．６
４          １７３．６
５          １０９．６
６          ２２８．４
【００４０】
表２に示すように、ウラン抽出物及びカンラン抽出物は、優れた一重項酸素消去作用を有することが確認された。また、ウラン抽出物及びカンラン抽出物の一重項酸素消去作用の程度は、抽出物の濃度によって調整できることが確認された。
【００４１】
〔試験例２〕ヒアルロニダーゼ阻害作用試験
製造例１で得られたウラン抽出物（試料１〜３）及び製造例２で得られたカンラン抽出物（試料４〜６）について、以下のようにしてヒアルロニダーゼ阻害作用を試験した。
【００４２】
試料を溶解した０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）０．２ｍＬにヒアルロニダーゼ溶液（Type IV-S(from bovine testis，SIGMA社製，４００Ｕ／ｍＬ)）０．１ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で２０分間反応させた。さらに、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で２０分間反応させた。これに０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸カリウム溶液（from rooster comb）０．５ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で４０分間反応させた。
【００４３】
その後、０．４ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム０．２ｍＬを加えて反応を止め冷却した後、各反応溶液に０．８ｍｏｌ／Ｌのホウ酸溶液（ｐＨ９．１）０．２ｍＬを加え、３分間煮沸した。２０分間の氷冷後、ｐ−ＤＡＢＡ試薬（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎ塩酸１２．５ｍＬと酢酸８７．５ｍＬの混合液に溶解し、酢酸で１０倍に希釈したもの）６．０ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で２０分間反応させた。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。酵素溶液を添加しない場合についても同様の操作と吸光度の測定を行い、さらに、試料溶液を添加しない場合についても同様の操作と吸光度の測定を行った。得られた結果から、下記式によりヒアルロニダーゼ阻害率（％）を算出した。
【００４４】
ヒアルロニダーゼ阻害率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
式中、Ｓｔは「酵素溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｓｂは「酵素溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を表し、Ｃｔは「酵素溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を表し、Ｃｂは「酵素溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を表す。
【００４５】
各試料（試料１〜６）について、試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記ヒアルロニダーゼ阻害率（％）を算出し、ヒアルロニダーゼ阻害率（％）が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
結果を表３に示す。
【００４６】
［表３］
試  料   ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１          ８８６．２
２          ８０４．４
３          ９７４．４
４          ２３８．２
５          ２２１．６
６          ３６８．０
【００４７】
表３に示すように、ウラン抽出物（試料１〜３）及びカンラン抽出物（試料４〜６）は、ヒアルロニダーゼ阻害作用を有することが確認された。特に、カンラン抽出物は、優れたヒアルロニダーゼ阻害作用を有することが確認された。また、ウラン抽出物及びカンラン抽出物が有するヒアルロニダーゼ阻害作用の程度は、抽出物の濃度よって調整できることが確認された。
【００４８】
〔試験例３〕ヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用試験
製造例１で得られたウラン抽出物（試料１〜３）及び製造例２で得られたカンラン抽出物（試料４〜６）について、以下のようにしてヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を試験した。
【００４９】
１５％ＦＢＳ含有Ｓ−ＭＥＭ培地に、ラット好塩基球白血病細胞（ＲＢＬ−２Ｈ３）１．０×１０６個を播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で、４日間培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように希釈し、マウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（DNP-specific IgE）の終濃度が０．５μｇ／ｍＬとなるようにDNP-specific IgEを添加した後、９６ウェルプレートに１ウェルあたり１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。培養終了後、培地を抜き、シラガニアン緩衝液５００μＬにて洗浄を２回行った。
【００５０】
次に、シラガニアン緩衝液３０μＬ及び同緩衝液に試料（試料１〜６）を溶解した試料溶液１０μＬを加え、３７℃の温度条件下にて１０分間静置した。その後、１００ｎｇ／ｍＬのジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）溶液１０μＬを加え、３７℃の温度条件下にて１５分間静置し、ヘキソサミニダーゼを遊離させた。その後、９６ウェルプレートを氷上に静置することによりヘキソサミニダーゼの遊離を停止させた。各ウェルの細胞上清１０μＬ及び１ｍｍｏｌ／Ｌのｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニド（ｐ−ＮＡＧ）溶液１０μＬを、新たな９６ウェルプレートに添加し、３７℃の温度条件下で１時間反応させた。
【００５１】
反応終了後、０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液２５０μＬを加え、マイクロプレートリーダーにて６５０ｎｍを対照に４１５ｎｍにおける吸光度測定を行った（このとき測定した吸光度をＡとする）。また、試料溶液の代りにシラガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度測定を行った（このとき測定した吸光度をＢとする）。また、細胞上清と０．１ｍｏｌ／ＬのＮａ２ＣＯ３−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液を同様の処理で反応させたものについても吸光度測定を行った（このとき測定した吸光度をＣとする）。また、同様の処理と吸光度測定をＤＮＰ−ＢＳＡのかわりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても行った（このとき測定した吸光度をＤとする）。
【００５２】
得られた結果から、下記式によりへキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を算出した。
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率(％)＝{１−(Ａ−Ｃ−Ｄ)／(Ｂ−Ｄ)}×１００
【００５３】
各試料（試料１〜６）について、試料溶液の濃度を段階的に減少させて、上記ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を算出し、ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）の値を内挿法により算出した。
結果を表４に示す。
【００５４】
［表４］
試  料   ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１          ５１５．２
２          ４６２．４
３          ５５０．６
４          ４０１．０
５          ３５６．６
６          ４５６．４
【００５５】
表４に示すように、ウラン抽出物（試料１〜３）及びカンラン抽出物（試料４〜６）は、優れたヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用を有することが確認された。また、ウラン抽出物及びカンラン抽出物が有するヘキソサミニダーゼ遊離抑制作用の程度は、抽出物の濃度によって調整できることが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明の一重項酸素消去剤は、しわ形成・弾力性低下等の皮膚の老化症状、肌の色素沈着等の予防、治療又は改善に有用であり、本発明のヒアルロニダーゼ阻害剤及びヘキソサミニダーゼ遊離抑制剤は、各種炎症性疾患の予防、治療又は改善に有用である。