(57)【要約】【課題】日常的な食習慣のある材料に由来する物質であって、長期間安全に摂取でき、生体内でアルドースレダクターゼ阻害、ジカルボニル化合物生成阻害を示し、ＡＧＥの生成を阻害しうる、かつ体内への吸収性に優れたグリケーション阻害剤及びその製造方法を提供することを目的とする。また、本発明者らは、そのようなグリケーション阻害剤を含む、糖尿病及びその合併症を予防又は改善しうる飲食品又はその素材、医薬品又はその素材等を提供する。【解決手段】Ａ）ヤマブドウ（Vitis coignetiae）植物の果皮、種子、及び果実の搾りかす、Ｂ）カリン（Pseudocydonia sinensis）植物の果実、果皮、種子、及び果実の搾りかす、及びＣ）前記いずれかの加工物から選択される１種以上の材料を、７０℃以上の温度で水又は水性液体で抽出することを特徴とする、グリケーション抑制能を有する植物抽出物の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ）ヤマブドウ（Vitis coignetiae）植物の果皮、種子、及び果実の搾りかす、
Ｂ）カリン（Pseudocydonia sinensis）植物の果実、果皮、種子、及び果実の搾りかす、及び
Ｃ）前記いずれかの加工物
から選択される１種以上の材料を、７０℃以上の温度で水又は水性液体で抽出することを特徴とする、グリケーション抑制能を有する植物抽出物の製造方法。
【請求項２】
前記温度が７０℃以上１２０℃以下の範囲内である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
請求項１又は２記載の方法によって製造された、グリケーション抑制能を有する植物抽出物。
【請求項４】
請求項３記載の植物抽出物からなるグリケーション抑制剤。
【請求項５】
請求項３記載の植物抽出物を含む飲食品、医薬品又は飼料用素材組成物。
【請求項６】
請求項３記載の植物抽出物又は請求項５記載の素材組成物を原料として含む飲食品組成物。
【請求項７】
請求項３記載の植物抽出物又は請求項５記載の素材組成物を原料として含む医薬品組成物。
【請求項８】
請求項３記載の植物抽出物又は請求項５記載の素材組成物を原料として含む飼料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリケーション後期段階生成物（アドバンスド・グリケーション・エンドプロダクツともいう；以下「ＡＧＥ」ということがある）の生成阻害能力を有する、ヤマブドウ（Vitis coignetiae）の果実を搾汁して残る搾りかすなどの植物材料の抽出物及びその製造方法、及びこの抽出物を含有又は使用する組成物等に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、特に腎障害や白内障などの合併症が社会生活をおくる上で大きな問題となる生活習慣病である。糖尿病の患者数の増大により、その治療にかかる費用は１兆円を超すと云われており、糖尿病合併症を抑制できれば、患者の健康な社会生活の維持だけではなく、医療費の削減などの社会的経済的効果も大きい。
【０００３】
糖尿病合併症は、いずれも、高血糖に伴う腎臓、水晶体、神経タンパク質の非酵素的糖化反応（グリケーション）が原因であることが示されている（非特許文献１）。
【０００４】
グリケーションは、アミノカルボニル反応として古くから知られていた褐変反応であり、前記段階と後期段階との二段階からなる。前記段階においては、タンパク質のアミノ基と還元糖のアルデヒド基やケトン基とが非酵素的に反応し、シッフ塩基を経てアマドリ転移生成物が生成される。この反応は可逆的である。後期段階においては、活性酸素の発生を含む複雑な反応を経て、ＡＧＥが生成される。この反応は不可逆的である。
【０００５】
これらの反応は生体内でも起こっており、加齢によって生体内にＡＧＥが蓄積され、様々な組織障害を引き起こすことが示唆されている。さらに、生体内では、高血糖状態で活性化されたポリオール経路などで、ＡＧＥの前駆物質となるジカルボニル化合物が産生されることも知られている（非特許文献２）。
【０００６】
グリケーションを阻害する薬剤としては、アミノグアニジンが知られている。アミノグアニジンは、糖尿病合併症に有効であることが実験動物により証明されている（非特許文献１）が、同時に、強い副作用を有することもわかっている。また、ポリオール経路の律速酵素であるアルドースレダクターゼを阻害する薬剤も開発されている（非特許文献２）が、このような薬剤のＡＧＥ生成阻害又は蓄積阻害に関する有効性についてはよくわかっていない。
【０００７】
より副作用が少なく、グリケーションを阻害し、糖尿病又はその合併症を予防しうる物質は、広く自然界に存在する植物素材から見出されている（特許文献１〜４）。たとえば、ソバなどに含まれ、日常的に食習慣のあるフラボノイドの１つであるルチンを、糖尿病モデルラットに経口投与することにより、ＡＧＥ生成の前期段階や複雑な後期段階が阻害されることも示唆されている（非特許文献３）。
【０００８】
最近、ヤマブドウ抽出物にも抗グリケーション活性があり、経口摂取によりＡＧＥ生成を抑制することがわかってきた（非特許文献４、５）。ヤマブドウは、一般にブドウの４〜５倍以上の豊富なポリフェノールを含有し、特に低分子ポリフェノール成分が多いことが知られている。
また、カリンについては抗グリケーション活性を有する旨の報告はない。
【０００９】
【特許文献１】特開平１１−１３０６７１
【特許文献２】特開２００４−２５０４４５
【特許文献３】特開２００４−２１７５４４
【特許文献４】特開２００４−２１７５４５
【非特許文献１】Singh, R., Barden, A., Mori, T., and Beilin, L. (2001) Diabetologia 44: 129-146
【非特許文献２】Dunlop,M. (2000) Kidney Int. 58 suppl77: S3-S12
【非特許文献３】Nagasawa, T., Tabata, N., Ito, Y., Aiba, Y., Nishizawa, N. and Kitts, D. D.(2003) Mol. Cell. Biochem.  252: 141-147
【非特許文献４】第５７回  日本栄養・食糧学会大会講演要旨集（平成１５年５月１７〜１９日）、２３６頁、３Ｄ−０８ａ
【非特許文献５】日本食品科学工学会  第５１回大会講演集（2004年９月２〜４日）、５１頁、２Ｃａ１２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明者らは、日常的な食習慣のある材料に由来する物質であって、長期間安全に摂取でき、生体内でアルドースレダクターゼ阻害、ジカルボニル化合物生成阻害を示し、ＡＧＥの生成を阻害しうる、かつ体内への吸収性に優れたグリケーション阻害剤及びその製造方法を提供することを目的とする。また、本発明者らは、そのようなグリケーション阻害剤を含む、糖尿病及びその合併症を予防又は改善しうる飲食品又はその素材、医薬品又はその素材等を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、日常的な食習慣がありフラボノイド類が豊富な果実、野菜類に着目し、鋭意検討を行った結果、フラボノイドを多く含むカリン植物の果実類、及び特に果汁について生体内で強いグリケーション抑制作用を有することが知られているヤマブドウ植物の果実の搾りかす等から、グリケーション阻害物質を豊富に含み、その体内への吸収性が高い抽出物及びそれを効率的に製造する方法を開発し、本発明を完成した。
【００１２】
即ち、本発明によれば、
〔１〕  Ａ）ヤマブドウ（Vitis coignetiae）植物の果皮、種子、及び果実の搾りかす、Ｂ）カリン（Pseudocydonia sinensis）の植物の果実、果皮、種子、及び果実の搾りかす、及びＣ）前記いずれかの加工物、から選択される１種以上の材料を、７０℃以上の温度で水又は水性液体で抽出することを特徴とする、グリケーション抑制能を有する植物抽出物の製造方法；
〔２〕前記温度が７０℃以上１２０℃以下の範囲内である、前記〔１〕記載の方法；
〔３〕前記〔１〕又は〔２〕記載の方法によって製造された、グリケーション抑制能を有する植物抽出物；
〔４〕前記〔３〕記載の植物抽出物からなるグリケーション抑制剤；
〔５〕前記〔３〕記載の植物抽出物を含む飲食品、医薬品又は飼料用素材組成物；
〔６〕前記〔３〕記載の植物抽出物又は前記〔５〕記載の素材組成物を原料として含む飲食品組成物；
〔７〕前記〔３〕記載の植物抽出物又は前記〔５〕記載の素材組成物を原料として含む医薬品組成物；
〔８〕前記〔３〕記載の植物抽出物又は前記〔５〕記載の素材組成物を原料として含む飼料組成物、
が提供される。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、生体内でアルドースレダクターゼ抑制作用、ジカルボニル生成阻害作用を示し、強いグリケーション抑制能を有するポリフェノール類、特にカテキン類及びアントシアニジン類などのフラボノイド類を豊富に含有する抽出物を、ヤマブドウ果実の搾りかす等又はカリンの果実等から簡便な工程で効率よく抽出することができる。本発明の抽出物は、生体における有効成分の吸収効率が優れており、糖尿病や糖尿病合併症などに有効であり、かつ安全な飲食品、医薬品の原料として使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の抽出物を製造するための原料としては、Ａ）ヤマブドウ（Vitis coignetiae）植物の果皮、種子、及び果実の搾りかす；Ｂ）カリン（Pseudocydonia sinensis）植物の果実、果皮、種子、及び果実の搾りかす；及びＣ）前記いずれかの加工物から選択される１種以上を使用することができる。果実の搾りかすは、圧搾などにより果汁を搾った後のかすであって、一般に種子、果皮などが含まれるが、果汁分は少ない。
【００１５】
原料は、好ましくは果実の搾りかすである。搾りかすを原料として用いることにより、果汁由来抽出物と比較してさらに優れた生理作用を有する抽出物を得ることができる上、この抽出物は体内への吸収性においても優れている。さらに、搾りかすを原料とすることは、生産性及び植物の有効利用（廃物利用）の観点からも果汁を用いる場合よりも優れている。
【００１６】
加工物としては、前記植物材料の乾燥物、凍結乾燥粉末などが挙げられるが、これらに限らない。
【００１７】
抽出工程は、植物原料に水又は水性液体を用いて７０℃以上で行う。抽出温度は、好ましくは７０℃以上１２０℃以下である。７０℃より低い温度では有効成分の抽出効率が劣っており、また、１２０℃を超える温度ではそれ以上の抽出効率を期待し難い。抽出効率、操作性、経済性などのバランスから、最も好ましくは８０℃以上１００℃以下である。
【００１８】
抽出に使用する液体としては水が望ましいが、水に、低級アルコール類（メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール）、ケトン類（アセトン等）、エステル類（ジエチルエーテル、酢酸エチル類）などを適宜添加又は混合して水性液体として使用しても良い。飲食品又は医薬品などに用いる場合など、これらの溶媒の残留が懸念される場合は、水、エタノール、又はこれらの混合溶媒を用いることが好ましい。
【００１９】
抽出は、通常は常圧下で行うが、加圧又は減圧条件下で実施してもよい。抽出時間は、通常約１０分〜一晩（１８時間）、好ましくは１０分〜３時間、最も好ましくは３０分〜１時間程度である。
なお、水又は水性液体は、抽出温度又は圧力条件によっては、液体ではなく、蒸気又は気体の形態であってもよい。
【００２０】
このようにして得られた液状の抽出物は、そのままグリケーション抑制剤又は飲食品、医薬品、飼料などの素材として利用することができる。抽出物を、吸着クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー等の手法を用いて濃縮及び／又は精製してもよい。また、噴霧乾燥、凍結乾燥、膜ろ過等による乾燥、濃縮などによって、粉末状、ペースト状などの形態として利用してもよい。
【００２１】
本発明の抽出物を飲食品とする場合は、単独で又は他の果実ジュースなどと混合して液状組成物としたり、パンやクッキーなどに混入して固体組成物としたり、又はヨーグルトやジャムなどに混入してクリーム状の組成物としたりすることができる。
また、抽出物を原料として、発酵させて酒類や酢等とすることができる。
【００２２】
本発明の抽出物は、医薬品や医薬部外品などに使用することもできる。たとえば、医薬組成物とする場合、抽出物をそのまま、あるいは常用される無機又は有機の担体又は医薬賦形剤を加えて、固形、半固形、又は液状で経口投与剤や、経腸剤、外用剤などの非経口投与剤とすることができる。
このようなグリケーション阻害作用を有する本発明の医薬品組成物の有効な投与量は、投与対象の年齢、体重、一般的な身体状態などに応じて適宜変化させることができるが、たとえば成人１日当たり総ポリフェノール含量に換算して０．０１〜１０ｇ、一般的には０．０５〜５ｇ、さらに一般的には０．１〜０．５ｇを、経口投与することができる。
【００２３】
以下に本発明を実施例によってさらに説明するが、本発明は何らこれらに限定されることはない。
【実施例】
【００２４】
実施例１：ヤマブドウ果実搾りかすの抽出物の製造及びそのグリケーション抑制能の試験
ヤマブドウ果実を７０℃で１０分加熱し、圧搾して果汁を調製した。この圧搾後に得られた搾りかす（１０ｇ）に同量の水（１０ml）を加えて、１００℃で１時間抽出し、本発明の抽出物を得た。この抽出物及び先に調製した果汁をそれぞれ凍結乾燥し、粉末化した。
【００２５】
これらの粉末のグリケーション抑制能を調べるため、ＢＳＡ（２０mg／ml）、D-Fructose（５００mM）を含む２００mMリン酸カリウム緩衝液（pH７．４）に、上記の各粉末（最終濃度０．１mg／ml、０．５mg／ml、又は１mg／ml）又はアミノグアニジン（最終濃度１０μM、５０μM、１００μM）を溶解した試料を用意し、３７℃で５日間インキュベーションした。その後、ウェスタンブロット法を用いて各試料に含まれるＡＧＥ構造体であるＮε−（カルボキシメチル）リジン（Nε-(carboxymethyl)lysine；ＣＭＬと略す）を検出した。検出されたＣＭＬの量を、搾りかす等の粉末を加えずに反応させたもの（コントロール）で生成するＡＧＥ量を１００％（即ち阻害率０％）として表した（相対値±標準誤差（ｎ＝４））。
【００２６】
結果を図１に示す。本発明のヤマブドウ搾りかす抽出物は、１００μMのアミノグアニジンでも阻害を示さない条件下においてＡＧＥ生成を濃度依存的に強力に阻害し、さらに、その阻害活性はヤマブドウ果汁抽出物による阻害活性をも有意に上回るものであった。
【００２７】
実施例２：カリンを用いた抽出物の製造及びそのグリケーション抑制能の試験
カリンの生果実をそのまま凍結乾燥して得た粉末各１ｇに、１０mlの水を加え、１００℃で１時間、抽出を行い、本発明の抽出物を得た。また、抗グリケーション活性を有することが知られているアロニア及びカシスの生果実を用いて同様に抽出物を調製した。
ＢＳＡ（２０mg／ml）及びD-Fructose（５００mM）を含む２００mMリン酸カリウム緩衝液（pH７.４）に、得られた抽出液の各々を１％（V/V）の量で添加し、３７℃で３日間インキュベーションした。比較のため、抽出物の代わりにルチンを添加した試料についても同様に処理した。その後、グリケーション抑制能を、ＣＭＬをエピトープとする抗ＡＧＥモノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡ法により測定した。
【００２８】
その結果、ルチン１０mMを添加した場合の値を１００としたときの相対的なグリケーション阻害率は、アロニアが９０、カシスが２４１であったのに対し、カリンは２８４であった。したがって、本発明のカリン抽出物は、アロニア、カシス抽出物よりグリケーション抑制能が高く、１％（V/V）の濃度で、１０mMのルチンの約３倍近くに相当するグリケーション阻害作用を有していた。
【００２９】
実施例３：ヤマブドウ搾りかすの抽出温度の検討
実施例１と同様にして得たヤマブドウ搾りかす５０ｇに１０倍量（５００ml）の水を加え、室温、４５℃、７０℃、１００℃、又は１２０℃でそれぞれ１時間抽出を行った。なお、１２０℃についてはオートクレーブを使用して処理を行った。
得られた抽出液を凍結乾燥し、乾燥重量、Folin-Denis法による総ポリフェノール量、Vanilin-HCl法による総フラバノール量を測定した。
【００３０】
また、ＢＳＡ（２０mg／ml）、D-Fructose（５００mM）を含む２００mMリン酸カリウム緩衝液（pH７.４）に、得られた粉末を最終濃度０．５mg／mlとなるように添加し、３７℃で３日間インキュベーションした後、ＣＭＬをエピトープとする抗ＡＧＥモノクローナル抗体を用いたＥＬＩＳＡ法によりグリケーション抑制能を測定し、抽出液を加えない場合に生成するＡＧＥ量を１００（即ち阻害率０％）とした場合の阻害率で示した。
【００３１】
その結果、表１に示すように、水を用いて７０℃以上の温度で抽出を行うことにより、約６％以上のポリフェノール含量を有し、約２０％以上のＡＧＥ生成阻害率を示すグリケーション抑制能を有する抽出物が得られることが明らかとなった。また、１００℃で抽出を行うことにより、約４０％以上の高いグリケーション抑制能を有する粉末を得ることができた。一方、１２０℃での抽出については、総ポリフェノール含量は１００℃より多いものの、総フラバノール含量、ＡＧＥ生成阻害率については１００℃を有意に上回る結果を得られなかった。
【００３２】
【表１】
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【００３３】
実施例４：ヤマブドウ搾りかす抽出物の濃縮
実施例３において１００℃で抽出して得た抽出液２５０mlを、水で膨潤させたセファデックスＬＨ２０カラム（２．０×２０cm）に吸着させ、水で洗浄し、７０％（V/V）エタノール１５０ml、続いて６０％（V/V）アセトン１５０mlで溶出させた。得られた各画分を乾燥させ、それぞれから得られる乾燥粉末量とそのポリフェノール含有量を測定した。
【００３４】
その結果、１００℃抽出液２５０mlの乾燥重量は５ｇ（ポリフェノール２６０mg）であるのに対し、７０％（V/V）エタノール溶出画分１５０mlの乾燥重量は２４０mg（ポリフェノール１７７mg）、６０％（V/V）アセトン溶出画分１５０mlの乾燥重量は４０mg（ポリフェノール２０mg）であった。したがって、カラムとエタノール及びアセトンによる溶出とを用いてポリフェノールが濃縮された粉末を得ることができた。
【００３５】
また、これらの粉末をポリフェノール濃度が０.１mg／mlとなるようにＢＳＡ（２０mg／ml）、D-Fructose（５００mM）を含む２００mMリン酸カリウム緩衝液（pH７.４）に添加し、上記と同様にＥＬＩＳＡ法によりグリケーション抑制を測定した。
【００３６】
その結果、ＡＧＥ生成阻害率は、１００℃抽出物で７２％、７０％エタノール溶出物で８５％、６０％アセトン溶出物で９２％であり、セファデックスＬＨ−２０カラム分画によってグリケーション抑制能をもつ画分を濃縮することが可能であることが明らかになった。
【００３７】
実施例５：ヤマブドウ搾りかす抽出物を摂取した糖尿病ラットのグリケーション抑制
実施例３と同様にして１００℃で調製したヤマブドウ搾りかす抽出物の凍結乾燥粉末について、糖尿病ラットを用いて生体内でのグリケーション抑制を調べた。
【００３８】
Wistar系雄ラット（１３０〜１５０ｇ）を、正常カゼイン食群（ＡＩＮ９３Ｇ組成２０％（W/W）カゼイン食、ＮＣ群）、糖尿病カゼイン食群（ＡＩＮ９３Ｇ組成２０％（W/W）カゼイン食、ＤＣ群）、糖尿病２．５％（W/W）ヤマブドウ搾りかす抽出物添加食群（ＡＩＮ９３Ｇ組成２０％（W/W）カゼイン食群に２．５％（W/W）になるようにヤマブドウ搾りかす抽出物粉末を加えた食餌、ＤＶ群）の３群に分けた後、糖尿病群に対しストレプトゾトシン（５０mg／kg体重）を投与してＩ型糖尿病を誘導し、３０日間飼育した。食餌、飲水は自由摂取とした。解剖時に血液を採取し、血漿中のグルコース濃度を、市販の測定キット（「グルコース  Ｂ−テストワコー」、和光純薬工業株式会社）を用いて測定した。
【００３９】
結果を図２に示す。血漿中のグルコース濃度（平均値±標準誤差（ｎ＝５〜６））は、ＮＣ群に対してＤＣ、ＤＶ群では有意に上昇していた（Ｐ＜０．１；図２、パネルＡ）。しかし、肝臓タンパク質のＡＧＥをウェスタンブロット法で検出したところ、ＤＣ群に対し、ＤＶ群ではＮＣ群と同程度までＡＧＥ蓄積が抑制されていることが認められた（図２、パネルＢ）。
【００４０】
また、ジカルボニル化合物である３−デオキシグルコソン（３−ＤＧ）を２，３−ジアミノナフタレン誘導体化後、ＨＰＬＣで分析した。アルドースレダクターゼ活性を、グリセルアルデヒドを基質として酸化されたＮＡＤＰＨ量から測定した。
その結果、３−ＤＧ、アルドースレダクターゼ活性ともに、ＤＣ群に対し、ＤＶ群では有意に低下していた（図３、パネルＡ、Ｂ）。
【００４１】
実施例６：ヤマブドウ搾りかす抽出物のポリフェノール成分及びその吸収性
実施例４で得られた７０％（V/V）エタノール溶出画分（ＶＬ）のポリフェノール類中に含まれる成分を同定するため、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ  、ＮＭＲ、ＴＯＦ−ＭＳによる成分解析を実施した。
【００４２】
粉末１ｇ中のポリフェノール７４１mgのうち、確認された成分は、カテキン類ではプロシアニジンＢ１（２５mg）、（＋）−カテキン（７７mg）、プロシアニジンＢ２（３８mg）、（−）−エピカテキン（６４mg）であった。アントシアニンとしては、シアニジン−３，５−ジグルコシド、マルビジン−３，５−ジグルコシド、シアニジン−３−グルコシド、マルビジン−３−グルコシドが確認され、その量は、最も量の多かったシアニジン−３−グルコシド当量として粉末１ｇ当たり１１mgであった。
【００４３】
この粉末（ＶＬ）と、対照として市販されているブドウ種子エキス粉末（１ｇ当たりポリフェノール２４５mg）を用いて、糖尿病ラットでの吸収性を以下のようにして調べた。６週齢のＳＤ系雄ラットに、ＶＬは２００mg／ml、市販ブドウ種子エキス粉末は７５０mg／mlの濃度に溶解した水溶液を、体重２００ｇ当たり１ml、胃内に経口投与した。投与後２時間後に採血し、血漿中のカテキン類濃度を調べたところ、ＶＬでは６８μg／ml、市販ブドウ種子エキス粉末では１７μg／mlであった。したがって、ＶＬは市販のブドウ種子エキス粉末と比較してより効率的に吸収されたことが明らかであった。
【００４４】
また、６週齢のＳＤ系雄ラットを２群に分け、一方にストレプトゾトシンを４５mg／kg体重となるように投与してＩ型糖尿病を誘導し、０．２％（W/W）のＶＬを含有するＡＩＮ９３Ｇ組成の２０％（W/W）カゼイン食で２０日間飼育した。採血した血漿中のカテキン含量を測定した結果、糖尿病群で０．３９４±０．０７４（μg／ml）、健常群で０．６０９±０．３８４（μg／ml）で、有意な差はみられなかった。したがって、ＶＬは、糖尿病態においても吸収されており、糖尿病態を改善することが示唆された。
【００４５】
実施例７：ヤマブドウワイン及び搾りかす抽出液からの酢の醸造
ヤマブドウ果実を７０℃にて加熱した後、圧搾した果汁及びその搾りかすを用いた酢の醸造を次のように実施した。得られた果汁１０Ｌにワイン酵母Saccharomyces cerevisiae L-2226を接種し品温１５℃で発酵を行った。発酵途中、Ｂｒｉｘ１１°でグルコースを補糖してＢｒｉｘ２３°とし、さらに発酵させ、Ｂｒｉｘ９°の時点で発酵停止してアルコール１２％のワインとした。一方、搾りかすには２倍量（V/V）の水を加え、７０℃で３０分加熱して抽出液を得た。果汁のpH、ワインのpHともに約２．９と酢酸菌の生育には低いことから、アンモニアを添加してpH３．５とした。
搾りかす抽出液９３５mlにエタノールを５５ml添加した液９９０ml、及びワインをアルコール濃度５．５％となるように希釈した液９９０mlに、それぞれ酢酸菌（Acetobacter aceti NBRC3281）培養液を１０ml添加し、静置して３０℃、３週間培養して酢酸濃度が約５％の酢を得た。
【００４６】
【表２】
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【００４７】
表２に示すように、搾りかす抽出液から調整した酢は、色調も充分良好であり、ポリフェノール量はワインから醸造した酢より多く、ＤＰＰＨラジカル消去活性も非常に高いことがわかった。したがって、搾りかす抽出物は食品素材としても非常に有用性が高い。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、本発明のヤマブドウ搾りかす抽出物のグリケーション抑制能を示す図である。
【図２】図２は、本発明のヤマブドウ搾りかす抽出物を摂取した糖尿病ラットにおけるグリケーションの抑制を示す図である。パネル（Ａ）は血漿中グルコース濃度、パネル（Ｂ）は肝臓におけるＡＧＥ蓄積を示す図である。
【図３】図３は、本発明のヤマブドウ搾りかす抽出物を摂取した糖尿病ラットにおけるグリケーションの抑制を示す図である。パネル（Ａ）は３−ＤＧの生成量の変化、パネル（Ｂ）はアルドースレダクターゼ活性を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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