(57)【要約】      （修正有）【課題】アルツハイマー病の原因として知られているベータアミロイドの凝集を抑制し、ベータアミロイドに起因した細胞毒性を阻害するなどの認知機能障害改善効果を有することにより、認知機能障害の予防及び治療用に有用な、薬学組成物及び健康機能食品を提供する。【解決手段】ナフトキノン系化合物を含有する組成物であり、天然に存在するジュグロン、５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン、及び１，２−ナフトキノンから選択されたナフトキノン系化合物を有効成分として含む薬学的組成物。【選択図】図１
2007145840.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジュグロン（Ｊｕｇｌｏｎｅ）、５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン（５，８−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，４−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）、及び１，２−ナフトキノン（１，２−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）から選択されたナフトキノン系化合物を有効成分として含む認知機能障害関連疾患の予防又は治療用の薬学組成物。
【請求項２】
前記認知機能障害関連疾患は、アルツハイマー型痴呆症、脳血管性痴呆症、ピック（ｐｉｃｋ）病、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−ｊａｋｏｂ）病、頭部損傷による痴呆、又はパーキンソン（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ）病であることを特徴とする請求項１記載の薬学組成物。
【請求項３】
認知機能障害関連疾患の予防及び治療の効果を示すジュグロン（Ｊｕｇｌｏｎｅ）、８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン（５，８−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，４−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）、及び１，２−ナフトキノン（１，２−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）から選択されたナフトキノン系化合物を有効成分とする健康機能食品。
【請求項４】
粉末、顆粒、錠剤、カプセル、又は飲料である請求項３記載の健康機能食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然の植物体に存在するナフトキノン系化合物を含む認知機能障害の予防及び治療用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脳（ｂｒａｉｎ）と脊髄（ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ）から構成された中枢神経系は、生命現象を運営する中心センターであって、感覚及び（不）随意運動から、思考、記憶、感情、言語などに至るまで、人体のあらゆる機能を総括する極めて不可欠な器官である。従って、脳卒中や外傷などで生じた急激な神経細胞の死滅や、アルツハイマー病に代表される老人性痴呆やパーキンソン疾患などの中枢神経系の退行性疾患を誘発するゆっくりとした神経細胞の死滅などのあらゆる場合において、直ちに神経回路網の不可逆的な機能障害を招来し、最終的に、その人体機能の永久的な損失を招来することになる。アルツハイマー病に代表される老人性痴呆は、人間の平均寿命の延長及び医療福祉施設の近代化と呼応し、比例して増加する特性を有している。保険社会研究院の統計調査によれば、我が国の老人人口は、２０００年に７％を超過して高齢化社会に突入して以来、２００３年には、３９７万人となって老人人口の比率が８．３％に到達し、２０１９年には、１４．４％に達して完全な高齢化社会に突入するものと予想されている。６５歳以上の老人人口中において一種類以上の慢性疾患を有する老人は、に達しており、特に６５歳以上の老人の痴呆有病率も８．２％と推定されている。西欧社会においては、６５歳以上の人口の約１０％、８０歳以上の人口の約４０〜５０％にアルツハイマー病が発生しており、既に米国においては、患者が５００万人以上であり、これに起因した医療費の支出が年間１０００億ドルと推定されている。又、我が国においては、約２０万人以上が痴呆患者であることが判明している。米国の場合には、２０３０年までに現在の２倍の規模に増加し、２０５０年までには、３５０％以上増加して、１，４００万人に達するものと推定されている。
【０００３】
認知機能障害から始まるアルツハイマー型老人性痴呆は、「ベータアミロイド」という不正常な蛋白質が脳神経細胞に蓄積され、アセチルコリンという脳神経伝達物質が不足して発生するものとされており、まだ正確な発生原因と治療対策が明らかになっていない。ベータアミロイドは、プラーク（ｐｌａｑｕｅ）の主要構成成分であり、プラークが脳に蓄積する現象は、アルツハイマー病の代表的な特徴の１つである。従って、アルツハイマー病の発病の初期にベータアミロイドの生成を減少させれば、この疾病の進行の遅延に大きな効果を有することになる。
【０００４】
アルツハイマー病は、人間の本性が破壊される長期間にわたって進行する退行性疾患であるため、患者を収容するという受動的な方法によっては、到底社会経済的な負担に耐え切れず、予防及び原因治療剤を開発するという積極的な試みを実行しなければならない。しかしながら、現在まで、アルツハイマー疾患の根本的な発病原因を治療可能な治療剤は開発されておらず、一般的な治療剤として使用可能なものとしては、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤であるファイザー社のアリセプト（Ａｒｉｃｅｐｔ）、ノバルティス社のエクセロン（Ｅｘｅｌｏｎ）、及びヤンセン社のレミニル（Ｒｅｍｉｎｙｌ）と、最近米国ＦＤＡから許可を受けたＮＭＤＡ受容体の拮抗剤メカニズムのルンドベック社のエビクサ（Ｅｂｉｘａ；  Ｍｅｍａｎｔｉｎｅ）がある。しかしながら、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の場合には、減退した認知能力を改善してやるのみであり、アルツハイマー疾患の根本的な発病原因を治療することはできない。又、一部の患者の場合（約４０〜５０％）にのみ、一時的な増勢の緩和効果を示し、その薬効が長期間持続不可能であることから、根本的な治療剤と呼ぶことが難しい。又、疾患の特性上、長期の服用を要することになり、上記の医薬品の場合には、肝毒性、嘔吐、食欲減退をはじめとした様々な副作用を伴っていることも問題点として判明している。従って、疾患の進行過程を阻むことができる治療剤の開発が至急の課題となっている。このため、多数の多国籍製薬会社がこの分野に対する研究開発に莫大な投資を行っており、特に、アルツハイマー疾患の根本的な発病原因と推定されている４０余個のアミノ酸から構成されたベータアミロイドの生成量を減少させるベータ又はガンマセクレターゼ阻害剤の開発がその主な種類をなしている。国内の場合、アルツハイマー疾患に対する基礎研究は、ある程度実現されているが、痴呆治療剤の開発それ自体については、ほとんど絶無であるのが実情であると思量される。ガンマセクレターゼ阻害剤の場合には、動物実験モデルにおいてのみならず、最近の臨床実験の結果においても、相当な毒性を伴っていることから、その展望が不透明である。研究開発期間は相対的に短いが、ベータセクレターゼの場合には、遺伝子欠乏形質転換動物モデルの結果にも現れているように、もう少し安全且つ効率的な痴呆治療剤開発のためのターゲットとして有望であるといえる。又、ベータアミロイドの凝集に関与する因子をターゲットとしたものも比較的安全に効果を挙げるものと考えられている。最近、ベータアミロイドをターゲットとする新薬開発において、米国のエンソニックス社が、フェンセリン（Ｐｈｅｎｓｅｒｉｎｅ）という薬物について臨床２相を行ったことが確認されており、この薬物は２重の機能を有し、コリンエステラーゼ（ｃｈｏｌｉｎｅｅｓｔｅｒａｓｅ）阻害効果も共に有するものと報道されている（Ｇｒｅｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ４４，  ｐｐ．４０６２〜４０７１，  ２００２；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｎｅｗｓ  Ｔｏｄａｙの２００４年９月４日付けの記事；ｗｗｗ．ｍｅｄｉｃａｌｎｅｗｓｔｏｄａｙ．ｃｏｍ；米国アルツハイマー協会のホームページ（ｗｗｗ．ａｌｚｆｏｒｕｍ．ｏｒｇ／ｄｒｇ��ｄｒｃ））。
【０００５】
可能性を有する別の方法としては、ベータアミロイドを利用したワクチン（Ｖａｃｃｉｎｅ）の開発である。エラン（Ｅｌａｎ）社を中心として行われた一連の研究及び臨床の結果により、ベータアミロイドペプチドをワクチンとして利用可能であるという結果が報告されているが、臨床２相において少数の患者に脳炎症反応が生じ、中断された状態にある。現在、多様なベータアミロイド構造を利用したワクチンの開発が行われている。動物実験の結果から、ベータアミロイドワクチンは、脳内に形成された老人斑の数を減らし、モデル動物の認知能を向上させることが判明している。又、脳細胞の活性を増進し、損傷を負った脳神経細胞の活性を増進させて認知機能を向上させることにより、アルツハイマーを緩和することも可能である
【０００６】
ナフトキノン（Ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）は、ナフタレン環の骨格を有するキノンであって、１，２−（α−）と１，４−（α−）及び２，６−（ａｍｐｈｉ−）という３種類の異性質体が存在している。１，４−ナフトキノン誘導体は、動物色素として天然に分布しており、２，６−ナフトキノンは、不安定であって、溶液内において即時に分解する。すべての皮膚に対して刺激性があり、キノン特有の色を有する結晶として存在している。１，２−ナフトキノンは、試薬及び中間体として使用されており、１，４−ナフトキノンは、染料及び医薬品の原料、並びに、殺菌剤として利用される以外に、ゴム及びポリエステル樹脂に対する重合調節剤としても使用されている。キノン（Ｑｕｉｎｏｎｅ）類は、生薬成分中においても非常に大きなグループの１つであって、動物、植物、微生物にわたって広く分布している。アントラキノン（Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ；代表的な化合物としては、エモジン（ｅｍｏｄｉｎ）がある）が最も多く、ナフトキノン（ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）、ベンゾキノン（ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ）の順である。これらは、生理活性を有する成分が多いが、生体内電子伝達系において重要な役割を果たすユビキノン（ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ）、血液凝固作用を示すビタミンＫ、抗癌作用を示すマイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、瀉下作用を示すセノサイド（ｓｅｎｎｏｓｉｄｅ）などのように医薬品として重要なものも多い。又、アルカニン（ａｌｋａｎｎｉｎ）、アリザリン（ａｌｉｚａｒｉｎ）、シコニン（ｓｈｉｋｏｎｉｎｅ）のように染料としても重要なものが多い（機能性食品素材としての生物活性天然物の国内研究動向、ファン・クムヒ、キム・ヒョング、食品科学と産業、２８（３）、１９９５；生薬学、生薬学教材出版委員会、ドンミョン社）。
【０００７】
ナフトキノンの誘導体であるビタミンＫは、主に血液の凝固を促進し、作用物質としては、ビタミンＫ（ピロキノン）・ビタミンＫ（メナキノン）・ビタミンＫ（メナジオン）などの多数の同族体が単離又は合成している。ビタミンＫは、血液凝固因子であるプロトロンビンなどの生成を促進し、血液凝固機能を正常に維持する作用を果たし、抗出血性ビタミンとも呼ばれている。又、抗癌効果も報告されており、５−ヒドロキシ−２−メトキシ−１，４−ナフトキノンが固形癌に効果を有することが判明している（韓国特許公報第１８０７９１号、コンイル製薬、６−置換−５，８−ジオキシ−１，４−ナフトキノン誘導体；米国特許第５，６９６，２７６号  ５，８−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）。
【０００８】
ナフトキノンのこのような効能が判明するにつれて、多様な疾病に対する適用が試みされているが、脳疾患関連の研究に関する文献が開示されたり、公開されたことはない。
【０００９】
本発明においては、既に確立されているスクリーニング法によって認知機能障害の治療及び予防効果を有する物質を分離するという目的で、天然物ライブラリをスクリーングした。その結果、ナフトキノン系化合物のベータアミロイドの凝集に対する卓越した阻害活性を観察し、凝集したベータアミロイドによる細胞毒性に対する有意な抑制活性を確認すると同時に、それ自体の細胞毒性が低い安全な薬物であるこを確認し、本発明を完成させた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、フナフトキノン系化合物を有効成分とする認知機能障害の予防及び治療用の組成物を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記の目的を達成するべく、本発明は、ナフトキノン系化合物を有効成分として含む認知機能障害の予防又は治療のための薬学組成物を提供する。
【００１２】
具体的には、下記化学式１〜３によって表記されるジュグロン（Ｊｕｇｌｏｎｅ）、５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン（５，８−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，４−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）、及び１，２−ナフトキノン（１，２−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）から選択されたナフトキノン系化合物を有効成分として含む認知機能障害の予防及び治療用薬学組成物を提供する。
【００１３】
上記の認知機能障害は、アルツハイマー型痴呆症、脳血管性痴呆症、ピック（ｐｉｃｋ）病、クロイツフェルト−ヤコブ（Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−ｊａｃｏｂ）病、頭部損傷による痴呆、又はパーキンソン（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ）病を含み、望ましくは、アルツハイマー型痴呆症を含んでいる。
【００１４】
（化１）ジュグロン
2007145840.tif 000003
【００１５】
（化２）５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン
2007145840.tif 000004
【００１６】
（化３）１，２−ナフトキノン
2007145840.tif 000005
【００１７】
又、本発明は、上記の化学式１〜３によって表記されるジュグロン（Ｊｕｇｌｏｎｅ）、５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン（５，８−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，４−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）、及び１，２−ナフトキノン（１，２−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）から選択されたナフトキノン系化合物を有効成分として含む認知機能障害予防及び改善用健康機能食品を提供する。
【００１８】
上記の本発明の化合物が認知機能障害改善効果に及ぼす影響を調査した結果、アルツハイマー病の原因として知られているベータアミロイドの凝集を抑制し、ベータアミロイドに起因した細胞毒性を阻害するなどの認知機能回復効果を有することにより、認知機能障害の予防及び治療用組成物として有用に利用可能であることを確認することができた。
【００１９】
本発明の認知機能障害関連疾患の予防及び治療用の薬学組成物は、組成物の総重量に対して上記の化合物を０．０２〜５０重量％だけ含んでいる。
【００２０】
本発明の化合物を含む薬学組成物は、薬学組成物の製造に通常使用される適切な担体、賦形剤、及び希釈剤を更に包含可能である。
【００２１】
本発明の組成物に包含可能な担体、賦形剤、及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、ザイリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、カルシウムフォスフェイト、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート、及び鉱物油を挙げることができる。
【００２２】
本発明の化合物の薬学的投与形態は、これらの薬学的に許容可能な塩の形態においても使用可能であり、且つ、単独で又はその他の薬学的活性化合物との結合のみならず、適当な集合として使用することも可能である。
【００２３】
本発明による化合物を含む薬学組成物は、それぞれ、通常の方法に従って、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口型の剤型、外用剤、座剤、及び滅菌注射溶液の形態で剤型化して使用可能であり、化合物を含む組成物に包含可能な担体、賦形剤、及び希釈剤は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、ザイリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルジネート、ゼラチン、カルシウムフォスフェイト、カルシウムシリケート、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート、及び鉱物油を挙げることができる。製剤化する場合には、通常使用されている充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を使用して製造される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、上記の抽出物に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、カルシウムカーボネート（ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）、又はラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混ぜて製造される。又、単純な賦形剤以外に、マグネシウムスチレートタルクなどの潤滑剤も使用される。経口用の液状製剤としては、懸濁剤、内用液剤、油剤、シロップ剤などが該当するが、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィン以外に、様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などを包含可能である。非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、油剤、凍結乾燥製剤、座剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレングリコール、オリーブオリルなどの植物性油、エチルオレートなどの注射可能なエステルなどを使用可能である。座剤の基剤としては、ウィテプソル（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トゥウィーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどを使用可能である。
【００２４】
本発明の化合物の望ましい投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物の形態、投与経路、及び期間に応じて異なるが、当業者によって適切に選択可能である。但し、望ましい効果のために、本発明の化合物は、１日に０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、望ましくは、０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇだけ投与するのがよい。投与は、一日に一回投与することも可能であり、数回に分けて投与することもできる。上記の投与量は、どのような面においても、本発明の範囲を限定するものではない。
【００２５】
本発明の化合物は、ねずみ、ハツカネズミ、家畜、人間などの哺乳動物に多様な経路で投与可能である。投与のあらゆる方式を予想可能であり、例えば、経口、直腸又は静脈、筋肉、皮下、子宮内硬膜、又は脳血管内（ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）注射によって投与可能である。
【００２６】
本発明は、認知機能障害関連疾患の予防効果を示す図１の化学式（１）〜化学式（３）の化合物及び食品学的に許容可能な食品補助添加剤を含む健康機能食品を提供する。本発明の化合物を添加可能な食品としては、例えば、各種食品類、飲料、ガム、茶、ビタミン複合剤、健康機能性食品類などがある。
【００２７】
又、認知機能障害関連疾患の予防効果を目的として食品又は飲料に添加することも可能である。このときには、食品又は飲料中の上記化合物の量は、一般的に、本発明の健康機能食品組成物が全体食品重量の０．０１〜５０重量％、望ましくは、０．０１〜１５重量％だけ添加可能であり、健康飲料組成物の場合には、１００ｍｌを基準として、０．０２〜５ｇ、望ましくは、０．３〜１ｇの比率で添加可能である。
【００２８】
本発明の健康機能食品は、錠剤、カプセル剤、丸剤、液剤などの形態を含んでいる。
【００２９】
本発明の健康飲料組成物は、指示された比率で必須成分として上記の化合物を含有するということ以外には、更なる成分に関する特別な制限点が存在しておらず、通常の飲料のように様々な香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有可能である。上述の天然炭水化物の例は、モノサッカライド、例えば、ブドウ糖、果糖などのジサッカライド、例えば、マルトース、シュクロースなどのポリサッカライド、例えば、デキストリン、シクロデキストリンなどの通常の糖、及びザイリトール、ソルビトール、エリトリトールなどの糖アルコールである。上述のもの以外の香味剤としては、天然香味剤（タウマチン、ステビア抽出物（例えば、レバウジオシドＡ、グリシルリジンなど）及び合成香味剤（サッカリン、アスファルタムなど）を有利に使用可能である。上記の天然炭水化物の比率は、本発明の組成物１００ｍｌ当たりに、一般的に、約１〜２０ｇ、望ましくは、約５〜１２ｇである。
【００３０】
上記以外に本発明の化合物は、様々な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤、及び天然風味剤などの風味剤、着色剤、及び充填剤（チーズ、チョコレートなど）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤などを含有可能である。これ以外に、本発明の化合物は、天然果物ジュース及び果物ジュース飲料、並びに野菜飲料の製造のための果肉を含有可能である。このような成分は、独立的に、又は組み合わせて使用可能である。このような添加剤の比率は、あまり重要ではないが、本発明の組成物１００重量部当たりに、０〜約２０重量部の範囲において選択されるのが一般的である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
以下、下記の実験例により、本発明について詳細に説明する。
【００３２】
但し、下記の実験例は、本発明を例示するものに過ぎず、本発明の内容は、下記参考例および実験例によって限定されるものではない。
【００３３】
（実施例１．化合物の準備）
ジュグロン（Ｊｕｇｌｏｎｅ）、５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン（５，８−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，４−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）、及び１，２−ナフトキノン（１，２−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）は、シグマ社（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，：  ＳＴ．  Ｌｕｉｓ，  ＭＯ，  ＵＳＡ）から購入して使用し、その他の試薬は、市中で購入可能な最上級品を使用した。
【００３４】
（実験例１．ベータアミロイド凝集の抑制実験）
ベータアミロイドは、プラーク（Ｐｌａｑｕｅ）の主要構成成分であり、プラークが脳に蓄積する現象は、アルツハイマー病の代表的な特徴の１つである。市中で購入可能なベータアミロイド１−４２（ＢＡＣＨＥＭ）を利用して本発明のナフトキノン系化合物の凝集抑制実験を実施した。ＤＭＳＯに２５０μＭで完全に溶かしたベータアミロイドを蛍光ブラックプレートにＰＢＳで１／１０に希釈して凝集を誘導する。そして、各ナフトキノン系化合物のベータアミロイド凝集阻害能を比較し、１０μｇ／ｍｌにおいて５０％の阻害効果以上を示すものを選んで試料として使用して添加した後に、１時間にわたって室温で反応させた。５０ｍＭのグリシン緩衝液にＴｈＴ（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ  Ｔ）を希釈して１つのウェル当たりに１５０μｌずつ入れ、マイクロプレートリーダー（ＳＡＦＩＲＥ、  ＴＥＣＡＮ）において、励起波長４５０ｎｍ／放出波長４８０ｎｍにおいて吸光度を測定した。
【００３５】
ジュグロンのベータアミロイド凝集抑制能を１０μｇ／ｍｌの濃度において測定し、８９．９％の阻害効果を確認した。５０％以上の阻害を示す場合には、濃度別の実験を通じてＩＣ５０値を求めることにより、０．０５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌなどの多様な濃度によって凝集抑制能を確認した。ジュグロンの濃度別の凝集抑制の程度を図２に示しており、ＩＣ５０値は、２．５μｇ／ｍｌであることを確認した。
【００３６】
５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン（５，８−ｈｙｄｒｏｘｙ−１，４−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｅ）のベータアミロイド凝集抑制能を１０μｇ／ｍｌの濃度において測定し、６１．３％の阻害効果を確認した。濃度別の実験を通じてＩＣ５０値を求めることにより、０．０５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌなどの多様な濃度において凝集抑制能を確認した。５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンの濃度別の凝集抑制の程度を図３に示しており、ＩＣ５０値は、３．５６μｇ／ｍｌであることを確認した。
【００３７】
１，２−ナフトキノンのベータアミロイド凝集抑制能を１０μｇ／ｍｌの濃度において測定し、９１．３％の阻害効果を確認した。５０％以上の阻害を示す場合には、濃度別の実験を通じてＩＣ５０値を求めることにより、０．０５μｇ／ｍｌ、０．５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌなどの多様な濃度において凝集抑制能を確認した。１，２−ナフトキノンの濃度別の凝集抑制の程度を図４に示しており、ＩＣ５０値は、１．２６μｇ／ｍｌであることを確認した。
【００３８】
（実験例２．ベータアミロイドの毒性阻害効果実験）
（２−１．細胞の準備）
ハツカネズミの神経細胞株であるＨＴ２２をＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ，  Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）培地に１０％のＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ，  Ｈｙｃｌｏｎｅ）と１％のペニシリン／ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ社）が添加された培地を使用し、３７℃、５％のＣＯ２条件の培養器（Ｆｏｒｍａ）において培養した。実験に入る前に、ＨＴ２２細胞を９６ウェルプレートに５ｘ１０３細胞／ウェルの密度で平板培養した後に、試料を処理する前に、血清が除去されたＤＭＥＭ培地において１時間にわたって培養した。
【００３９】
（２−２．細胞壊死抑制程度測定）
試料を１０μｇ／ｍｌの濃度で添加して１時間にわたって培養し、凝集したベータアミロイド２５−３５（ＵＳペプチド）を２５μＭの濃度で処理した後に、１８時間にわたって培養して細胞の壊死を誘導した後に、５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ（３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリン）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロマイド）溶液を１つのウェル当たりに１５μｌずつ入れ、４時間の培養の後に、溶解化緩衝液（１０％のＳＤＳ、５０％のジメチルホルムアミド、ｐＨ４．７）を１００μｌずつ添加して一昼夜にわたって反応させた。１８時間後にマイクロプレートリーダー（Ｓｕｎｒｉｓｅ、  ＴＥＣＡＮ）を利用して５７０ｎｍ／６３０ｎｍにおいて吸光度を測定し、ベータアミロイドの毒性に対する抑制効果を確認し（ｉｌｌａｒｄｏｎ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ７０６（１），ｐｐ１６９〜１７２，  １９９６）、図５に示した。
【００４０】
実験の結果、５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンがベータアミロイド毒性から細胞を最も効果的に保護することが確認された。
【００４１】
（実験例３．細胞毒性測定）
ナフトキノン系化合物自体の細胞毒性を測定し、今後生じ得る試料自体の毒性による副作用を調査するべく、上記の実験例２−１の神経細胞株ＨＴ２２を利用して細胞毒性実験を実施した。
【００４２】
１０μｇ／ｍｌの濃度で各試料を処理してそれ自体の毒性を測定し、図６に示した。５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンは、細胞毒性を有していないが、ジュグロンと１，２−ナフトキノンは、若干の細胞毒性を示した。ジュグロンの場合には、ベータアミロイド毒性抑制効果と細胞毒性の間に互いに相補的な効果を示した。
【００４３】
実験の結果として、ナフトキノン中において、５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンは、ベータアミロイド凝集抑制能と、ベータアミロイドによる脳神経細胞の壊死から神経細胞を保護するという２種類の機能を遂行すると同時に、細胞毒性を有していない安全な物質であることを確認できた。
【００４４】
本発明の化合物を含む薬学組成物の製剤例について説明するが、本発明は、これを限定しようとするものではなく、具体的に説明しようとするものに過ぎない。
【００４５】
（製剤例１．散剤の製造）
ジュグロン                                  ２０ｍｇ
乳糖                                      １００ｍｇ
タルク                                    １０ｍｇ
上記の成分を混合し、気密性の包みに充填して散剤を製造する。
【００４６】
（製剤例２．錠剤の製造）
５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン  １０ｍｇ
とうもろこし澱粉                          １００ｍｇ
乳糖                                      １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                  ２ｍｇ
上記の成分を混合した後に、通常の錠剤の製造法に従って打錠して錠剤を製造する。
【００４７】
（製剤例３．カプセル剤の製造）
１，２−ナフトキノン                      １０ｍｇ
結晶性セルロース                          ３ｍｇ
ラクトース                                １４．８ｍｇ
マグネシウムステアレート                  ０．２ｍｇ
通常のカプセル剤の製造法に従って上記の成分を混合し、ゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造する。
【００４８】
（製剤例４．注射剤の製造）
ジュグロン                                  １０ｍｇ
マンニトール                              １８０ｎｇ
注射用滅菌蒸留水                          ２９７４ｍｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４．１２Ｈ２Ｏ                  ２６ｍｇ
通常の注射剤の製造法に従って１つのアンプル当たり（２ｍｌ）上記の成分含有量で製造する。
【００４９】
（製剤例５．液剤の製造）
５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン  ２０ｍｇ
異性化糖                                  １０ｇ
マンニトール                              ５ｇ
精製水                                    適量
通常の液剤の製造法に従って精製水にそれぞれの成分を加えて溶解させ、レモンの香りを適量加えた後に、上記の成分を混合し、次いで、精製水を加えて全体を１００ｍｇに調節した後に、褐色のビンに充填して滅菌し、液剤を製造する。
【００５０】
（製剤例６．健康食品の製造）
１，２−ナフトキノン              １０００ｍｇ
ビタミン混合物                    適量
ビタミンＡアセテート            ７０μｇ
ビタミンＥ                      １．０ｍｇ
ビタミンＢ１                    ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２                    ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６                    ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２                  ０．２μｇ
ビタミンＣ                      １０ｍｇ
ビオチン                        １０μｇ
ニコチン酸アミド                １．７ｍｇ
葉酸                            ５０μｇ
パントテン酸カルシウム          ０．５ｍｇ
無機質混合物                      適量
硫酸第１鉄                      １．７５ｍｇ
酸化亜鉛                        ０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム                ２５．３ｍｇ
第１燐酸カリウム                １５ｍｇ
第２燐酸カルシウム              ５５ｍｇ
クエン酸カリウム                ９０ｍｇ
炭酸カルシウム                  １００ｍｇ
塩化マグネシウム                ２４．８ｍｇ
上記のビタミン及びミネラル混合物の組成比は、比較的健康食品に適合した成分を望ましい実施例として混合組成しているが、この配合比を任意に変形実施しても問題はなく、通常の健康食品の製造法に従って上記の成分を混合した後に、顆粒を製造し、通常の方法に従って健康食品組成物の製造に使用可能である。
【００５１】
（製剤例７．健康飲料の製造）
５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノン  １００ｍｇ
ビタミンＣ                                １５ｇ
ビタミンＥ（粉末）                        １００ｇ
乳酸鉄                                    １９．７５ｇ
酸化亜鉛                                  ３．５ｇ
ニコチン酸アミド                          ３．５ｇ
ビタミンＡ                                ０．２ｇ
ビタミンＢ１                              ０．２５ｇ
ビタミンＢ２                              ０．３ｇ
水                                        適量
通常の健康飲料の製造法に従って上記の成分を混合した後に、約１時間にわたって８５℃において攪拌加熱し、次いで、製造された溶液を濾過して、滅菌された２ｌの容器に取得し、密封滅菌した後に冷蔵保管し、その後、本発明の健康飲料組成物の製造に使用する。
【００５２】
上記の組成比は、比較的嗜好飲料に適合した成分を望ましい実施例として混合組成しているが、需要階層や、需要国、使用用途など、地域的、民族的な嗜好度に応じて、この配合比を任意に変形実施しても問題ない。
【００５３】
上述のように、本発明のナフトキノン系化合物は、アルツハイマー病の原因として知られているベータアミロイドの凝集を抑制し、ベータアミロイドに起因した細胞毒性を阻害するなどの認知機能回復効果を確認することにより、認知機能障害の予防及び治療用の薬学組成物及び健康機能食品として有用に利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】ジュグロンによるベータアミロイド凝集の抑制活性を示す図である。
【図２】５，８−ヒドロキシ−１，４−ナフトキノンによるベータアミロイド凝集の抑制活性を示す図である。
【図３】１，２−ナフトキノンによるベータアミロイド凝集の抑制活性を示す図である。
【図４】ベータアミロイドの毒性に対するナフトキノン系化合物の抑制効果を示す図である。
【図５】ナフトキノン系化合物の細胞毒性を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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