(57)【要約】【課題】か皮（かさぶた）形成を抑制し、肉芽形成を促進すると共に、アレルギー及び免疫細胞に影響を与えない、創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤を提供する。【解決手段】ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡの酵素分解処理又は加水分解処理して得られた分解生成物、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド又はモノヌクレオチド、或いは、前記分解生成物又は化合物から選択された少なくとも２種の混合物を有効成分として含有することを特徴とする創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、又は、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド又はオリゴペプチド、或いは、
ＲＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、又は、該分解生成物から分離したオリゴヌクレオチド又はモノヌクレオチド、或いは、
前記ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ分解生成物、前記ＲＮＡ分解生成物、デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド及びモノヌクレオチドから選択された少なくとも２種の混合物
を有効成分として含有することを特徴とする創傷の治療剤。
【請求項２】
ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、又は、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド又はオリゴペプチド、或いは、
ＲＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、又は、該分解生成物から分離したオリゴヌクレオチド又はモノヌクレオチド、或いは、
前記ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ分解生成物、前記ＲＮＡ分解生成物、デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド及びモノヌクレオチドから選択された少なくとも２種の混合物
を有効成分として含有することを特徴とする褥瘡の治療剤又は予防剤。
【請求項３】
ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、又は、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド又はオリゴペプチド、或いは、
ＲＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、又は、該分解生成物から分離したオリゴヌクレオチド又はモノヌクレオチド、或いは、
前記ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ分解生成物、前記ＲＮＡ分解生成物、デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド及びモノヌクレオチドから選択された少なくとも２種の混合物
を有効成分として含有することを特徴とする熱傷の治療剤。
【請求項４】
外用剤である請求項１に記載の創傷の治療剤、請求項２に記載の褥瘡の治療剤又は予防剤或いは請求項３に記載の熱傷の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤に関するものである。
詳細には、か皮（かさぶた）形成を抑制し、肉芽形成を促進すると共に、アレルギー及び免疫細胞に影響を与えない、ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡの酵素分解生成物又は加水分解生成物、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、モノヌクレオチド、或いは前記分解生成物又は前記化合物から選択された少なくとも２種の混合物を有効成分として含有する創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
創傷とは、外的、内的要因によって起こる体表組織の物理的な損傷を意味し、その形状及び受傷機転により、切創、裂創、刺創、咬創、銃創、挫創、挫傷等が挙げられる。
かつて、創傷は、傷が化膿しないように消毒し、ガーゼをあて、傷を濡らさないようにして治療するのが正しいとされ、か皮（かさぶた）は傷が治るときにできるものであり、か皮（かさぶた）ができたら傷が治ると考えられてきた。
しかし、最近、上記の治療法は間違っており、上記の通りに治療すると、かえって創の治癒が遅れるため好ましくないと考えられるに至っている。
創傷の治療に関して正しいと考えられるようになったことを以下に示す。
１．消毒は免疫細胞の機能や繊維芽細胞増殖能を減弱させ傷の治癒を遅らせるため行わない
２．傷にガーゼをあてるのは創治療を遅らせるため行わない。
３．傷は洗ったほうがよい。
４．か皮（かさぶた）は傷がなおらないときにできるものであり、創治癒の大敵である。
以上のことより、か皮（かさぶた）形成を抑制し、肉芽形成を促進することができれば創傷治療において大変有効であることが示唆される。
【０００３】
褥瘡とは、身体の一部が長時間にわたり圧迫を受け、皮膚組織の循環障害が起こり、発赤、腫脹、びらん、潰瘍の形成を経て、ついには壊死に陥る疾患であり、その発生の要因としては、１）局所的な要因で、加齢による皮膚機能の低下、寝たきりによる摩擦やずれなどや、２）全身的な要因で、脳神経系の疾患、栄養状態の悪化、運動能力や知覚の低下などが挙げられる。
薬剤を用いる褥瘡の治療は、効果が十分でなかったり、高価であったり、また使い方によっては逆に治癒を妨げることがあるため必ずしも主ではなく、褥瘡に至った原因の除去と、患者の自然治癒力に依存した治療法が有効とされ主に行われている。
しかし、褥瘡の患者の多くは、既に自然治癒力が低下した、高齢者及び／又は栄養状態に問題がある患者であるため、上記の治療法だけでは必ずしも十分な治療効果が得られなかったり、治療のために長期の期間を必要とする等の問題があった。
【０００４】
ところで、近年、健康に対する世間一般の関心の高まりを反映して、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）又は核タンパク質を原料又は有効成分として用いた健康食品が提供されている。高分子量の核タンパク質を水可溶性及び易消化性とするために、低分子化することも提案されている（特許文献１）。
デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）又は核タンパク質は老化防止効果を有することは知られているが、創傷の治療効果、褥瘡の治療効果又は予防効果或いは熱傷の治療効果については未だ言及されていない。
【特許文献１】特開２００４−１６１４３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、か皮（かさぶた）形成を抑制し、肉芽形成を促進すると共に、アレルギー及び免疫細胞に影響を与えない、優れた創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤の提供を課題とする。
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して得られた、デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド又はオリゴペプチドを含有する分解物、或いは、ＲＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して得られた、オリゴヌクレオチド又はモノヌクレオチドを含有する分解物、或いは、それらの混合物が、か皮（かさぶた）形成を抑制し、肉芽形成を促進すると共に、アレルギー及び免疫細胞に影響を与えないという優れた効果を有すること、及び、これにより創傷に対する優れた治療剤、褥瘡に対する優れた治療剤又は予防剤或いは熱傷に対する優れた治療剤となりうることを見い出し、本発明を完成させた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
即ち、本発明は、
ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、又は、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド又はオリゴペプチド、或いは、
ＲＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、又は、該分解生成物から分離したオリゴヌクレオチド又はモノヌクレオチド、或いは、
前記ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ分解生成物、前記ＲＮＡ分解生成物、デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド及びモノヌクレオチドから選択された少なくとも２種の混合物
を有効成分として含有することを特徴とする創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤に関するものであり、また、それらの外用剤に関するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の、ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡの酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化して得られた分子量１０００乃至３０００の画分を２０乃至５０％含有する分解生成物、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、モノヌクレオチド、或いは前記分解生成物又は前記化合物から選択された少なくとも２種の混合物を有効成分として含有する創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤は、か皮（かさぶた）形成を抑制し、肉芽形成を促進すると共に、アレルギー及び免疫細胞に影響を与えないという優れた効果を有する。
【０００９】
デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）等の核酸は、細胞の核及び原形質に存在し、生物の成長と遺伝に欠かせないものであり、核酸の補給が不十分になると、これにより細胞の新陳代謝が遅くなって、組織や器官の老化が促進されやすくなるといわれている。
核酸は、肝臓でアミノ酸などから体内で合成する、いわゆるデノボ合成と食物等から摂取された核酸を各細胞で再利用する、いわゆるサルベージ合成で補われているが、表皮細胞等の局所における核酸の生合成は、デノボ合成よりもサルベージ合成が優先されることが明らかとされている。
【００１０】
ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡの酵素分解生成物又は加水分解生成物、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、モノヌクレオチド、或いは前記分解生成物又は前記化合物から選択された少なくとも２種の混合物が創傷に対して優れた治療効果を示すのは、酵素分解や加水分解処理により分子量が比較的小さくなるため、容易に経皮吸収され、そして吸収されされたものがサルベージ合成に使用されて細胞の新陳代謝を活性化することにより、肉芽形成を促進し、且つか皮（かさぶた）形成を抑制するという優れた効果を示したものと推察される。
【００１１】
上記のように局所投与でも十分に効果が得られることは、ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡの経口投与では、血管に何らかの障害がある又は血管に圧力がかかって血流が滞る等の場合には、ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡが標的組織に到達せずにこれらの効果が十分に機能しない等の問題が発生することと比較して、有利である。
【００１２】
上記のように、局所投与において、肉芽形成を促進し、且つか皮（かさぶた）形成を抑制するという優れた効果を示すことにより、創傷の治療だけでなく褥瘡における治療又は予防或いは熱傷における治療にも有効だと考えられる。
特に褥瘡では、部分的に組織が壊死しているケースが多く、そのため患部における血流が十分に確保されにくい状態であり、また、栄養状態が悪い及び／又は高齢のため経口からの投与ではヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡの十分な吸収を得ることが困難なケースも考えられるため、外用剤で十分な効果が得られることは特に有利である。
【００１３】
一方、ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡの酵素分解生成物又は加水分解生成物、該分解生成物から分離したデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド、モノヌクレオチド、或いは前記分解生成物又は前記化合物から選択された少なくとも２種の混合物は、核酸由来の物質であるため、免疫系に作用して、アレルギーを引き起こす可能性が考えられる。
そのため、フローサイトメーターを用いてマウスリンパ球細胞での免疫活性化能を測定したところ、アレルギー反応を起こす活性化は認められず、これにより、アレルギー及び免疫細胞に影響を与えない、安全性の高い創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤となりうることが確認された。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤の有効成分として、精製品としても使用されるデオキシオリゴヌクレオチド又はデオキシモノヌクレオチドはＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して、オリゴヌクレオチド又はモノヌクレオチドはＲＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して、またオリゴペプチドは、ヌクレオプロテインを酵素分解処理又は加水分解処理して、それぞれ得ることができる。
ＤＮＡ及びヌクレオプロテインは、例えば、魚類の白子から抽出し、精製することにより得ることができる。前記魚類は、例えば、鮭、鱒、鰊及び鱈であり、とりわけ、鮭が好ましい。
【００１５】
以下、ＤＮＡについて更に詳しく説明する。
本発明の創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤の製造原料であるＤＮＡは種々の態様のものでよく、例えば、二本鎖、一本鎖又は環状のＤＮＡであってよい。ＤＮＡの供給源は、動物、植物、微生物等の様々な生物である。水産加工上の廃棄物である、魚類特に鮭、鱒、鰊及び鱈の精巣（白子）は、とりわけＤＮＡを多く含むが、従来、資源として有効に利用されず、多くが廃棄されていた。それ故、廃棄物の資源化とい
う観点から、これらの精巣由来のＤＮＡを利用することは望ましい。また、哺乳動物や鳥類、例えばウシ、ブタ、ニワトリ等の胸腺から得られるＤＮＡを使用することができる。更に、合成ＤＮＡもまた使用することができる。
【００１６】
ＲＮＡは、例えば、酵母から得られ、好ましくはビール酵母、トルラ酵母、乳酵母及びパン酵母からなる群から選択される酵母から抽出し、精製することにより得ることができる。
ＤＮＡ及びＲＮＡを処理する酵素は、例えば、ヌクレアーゼであり、とりわけ、アオカビ由来のヌクレアーゼが好ましい。
【００１７】
オリゴペプチドは、魚類の白子などに含まれるヌクレオプロテイン（核タンパク質）をプロテアーゼ及びヌクレアーゼで加水分解して得られる。
【００１８】
前記プロテアーゼはトリプシンを主体とするものである。トリプシンは高い特異性を有するセリンプロテアーゼであり、アルギニン及びリジンのカルボキシル側でペプチド結合を選択的に加水分解するので、アルギニンを多く含むプロタミンの加水分解に適している。また前記プロテアーゼは、トリプシンに加えて、他のプロテアーゼ、例えばキモトリプシン等を含むこともできる。良好なプロテアーゼとしては、ノボザイムズジャパン株式会社（旧ノボノルディスクバイオインダストリー株式会社）製のプロテアーゼを挙げることができる。
【００１９】
前記ヌクレアーゼは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）の３，５’−ホスホジエステル結合を加水分解し、オリゴ体重合の５’−ヌクレオチドを生成する。該ヌクレアーゼの性質について特に制限はないが、ある程度の熱安定性を備えることが好ましい。このようなヌクレアーゼは、例えば天野エンザイム株式会社（旧天野製薬株式会社）、シグマ社等から市販品を入手可能である。
【００２０】
前記ヌクレアーゼを用いたＤＮＡ、ＲＮＡ及びヌクレオプロテインの加水分解処理において重要なのは、反応を行う温度である。反応温度は６０〜７５℃の範囲内でなければならず、７０℃が最も好ましい。該温度範囲より低い温度で反応を行うと、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びヌクレオプロテインの低分子化が十分に進行せず、分解物が水溶性とならない。一方、該温度範囲より高い温度で行うと、低分子化が過度に進行し、核タンパク質（ヌクレオプロテイン）の優れた効果を失う惧れがある。
【００２１】
以上のようにＤＮＡ、ＲＮＡ及びヌクレオプロテインをヌクレアーゼを用い６０〜７５℃で行う加水分解によって処理することにより、分子量が１０００乃至３０００である画分を２０乃至５０％含有し、そして分子量が１０００以下である画分を、通常、分子量１０００乃至３０００の画分の量よりも多い量、例えば３０乃至５０％含有する程度まで低分子化することができ、これにより、水可溶性及び経皮吸収性を兼ね備えたＤＮＡ、ＲＮＡ及びヌクレオプロテイン分解生成物を製造できる。
以上の処理により得られたヌクレオプロテイン分解生成物及びＤＮＡ分解生成物には、低分子化されたデオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド及びオリゴペプチドが主要な部分もしくは大部分として含まれ、そして低分子化が不十分なデオキシヌクレオチド等がごく少量の部分として含有されている。
また同様の処理により得られたＲＮＡ分解生成物にはオリゴヌクレオチド及びモノヌクレオチドが主要な部分もしくは大部分として含まれ、そして低分子化が不十分なヌクレオチド等がごく少量の部分として含有されている。
従って、これら分解生成物に含まれるヌクレオチド類（デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、モノヌクレオチド）は、そのほぼ全て乃至その大部分が、本来らせん鎖を取らないモノ体、完全な一本鎖のオリゴ体、並びに、
二重らせん構造を一部にしか有しないオリゴ体で構成される。言い換えると、上述の低分子化が十分に進行しなかったような場合を想定したとしても、上記の分解生成物に含まれるヌクレオチド類の二重らせん率が２０％を超えることはない。
なお、ヌクレオプロテインを加水分解処理してオリゴペプチドを得るにはプロテアーゼ処理及びオリゴヌクレオチドを得るにはヌクレアーゼ処理が為されることとなるが、好ましくは、始めにプロテアーゼで処理し、続いてヌクレアーゼ処理することが、作業上の都合及び得られる最終生成物の品質の観点より望ましい。
【００２２】
本発明の創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤の有効成分として、ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して得られた分解生成物、或いは、ＲＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理して得られた分解生成物を、そのまま（精製することなく）使用することができる。前記分解生成物中に、例えば、アミノ酸などが含まれていてもよい。
また、本発明の創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤の有効成分として、ヌクレオプロテイン及び／又はＤＮＡ又はＲＮＡ分解生成物から慣用の分離手段及び／又は精製手段を用いて分離・精製された以下の化合物：デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド、オリゴペプチド、オリゴヌクレオチド及びモノヌクレオチド、を使用することができる。
このとき、ヌクレオプロテイン、ＤＮＡ及びＲＮＡの分解生成物に含まれるか、又は、該分解生成物から慣用の分離手段及び／又は精製手段を用いて分離・精製されたデオキシオリゴヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドの鎖長は２乃至１２のものであることが好ましい。
前記分解生成物及び前記化合物は、それぞれ単独で使用してもよいし、又は、これらの少なくとも２種類を混合して使用してもよい。
前記分解生成物や前記化合物を混合して使用する場合は、その混合比率は適宜選択し得る。
このとき、前記分解生成物及び前記化合物として、鎖長が２乃至１２の前記デオキシオリゴヌクレオチド又は前記オリゴヌクレオチドのうち少なくとも何れか一方を含み、並びに鎖長が２乃至１２の前記デオキシオリゴヌクレオチド及び前記オリゴヌクレオチドの含有量の合計が、前記分解生成物および前記化合物の全合計量に対して２０％以上であることが特に好ましい。
また、前記分解生成物や前記化合物に更に、キトサン及び／又はコラーゲン等を加えることもできる。
【００２３】
本発明の創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤における有効成分（前記分解生成物及び／又は前記化合物）の濃度は適宜選択し得る。
【００２４】
本発明の創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤は、経口剤として投与することもできるが、外用剤として創傷、褥瘡又は熱傷の患部に局所投与するのが好ましい。
また、褥瘡の予防薬として、褥瘡になる可能性のある箇所に局所投与することにより、褥瘡にならない又はなりにくくすることもできる。
外用剤としては、通常、外用剤として用いるものであれば特に限定がないが、例えば、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、リニメント剤、パップ剤、プラスター剤、パッチ剤、硬膏剤、ゲル剤、液剤、テープ剤等が挙げられる。
【００２５】
前記剤型が軟膏剤又はクリーム剤である場合には、基剤として、油脂性基剤又は乳剤性基剤を用いることができる。
前記油脂性基剤としては、例えば、炭化水素、高級アルコール、高級脂肪酸、高級脂肪酸エステル、グリコール類、植物油、動物油等が挙げられる。前記油脂性基剤は、通常、
単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００２６】
前記炭化水素としては、例えば、炭素数１２〜３２の炭化水素、種々の炭化水素の混合物である流動パラフィン、分枝状パラフィン、固形パラフィン、白色ワセリン、黄色ワセリン、スクワレン、スクワラン、プラスチベース等が挙げられる。これらの中では、特に白色ワセリンが好適なものとして挙げられる。前記炭化水素は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００２７】
前記高級アルコールとしては、例えば、炭素数１２〜３０の脂肪族１価アルコール等が挙げられる。かかる脂肪族１価アルコールの具体例としては、例えば、ラウリルアルコール、トリデシルアルコール、ミリスチルアルコール、ペンタデシルアルコール、セチルアルコール（セタノール）、ヘキサデシルアルコール、ヘプタデシルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ノナデシルアルコール、エイコシルアルコール、セリルアルコール、メリシルアルコール、セトステアリルアルコール等が挙げられる。これらの中では、ラウリルアルコール、セチルアルコール及びステアリルアルコールが好ましく、特にセチルアルコール及びステアリルアルコールが好ましい。前記高級アルコールは、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００２８】
前記高級脂肪酸としては、例えば、炭素数６〜３２の飽和又は不飽和脂肪酸が挙げられる。具体的には、例えば、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸、ウンデシル酸、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、ヘプタデシル酸、ステアリン酸、オレイン酸、ノナデカン酸、アラキン酸、アラキドン酸、リノール酸、リノレン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、ヘプタコサン酸、モンタン酸、メリシン酸、ラクセル酸、エライジン酸、ブラシジン酸等が挙げられる。これらの中では、特に、パルミチン酸及びステアリン酸が好ましい。前記高級脂肪酸は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００２９】
前記高級脂肪酸エステルとしては、例えば、パルミチン酸ミリスチル、ステアリン酸ステアリル、ミリスチン酸ミリスチル、リグノセリン酸セリル、セロチン酸ラクセリル、ラクセル酸ラクセリル等の脂肪酸エステル；ラノリン、ミツロウ、クジラロウ、セラックロウ等の動物由来の天然ロウ、カルナウバロウ、カンデリラロウ等の植物由来の天然ロウ等の炭素数１０〜３２の脂肪酸と炭素数１４〜３２の脂肪族１価アルコールとのエステル；グリセリルモノラウリレート、グリセリルモノミリスチレート、グリセリルモノオレート、グリセリルモノステアレート、グリセリルジラウリレート、グリセリルジミリスチレート、グリセリルジステアレート、グリセリルトリラウリレート、グリセリルトリミリスチレート、グリセリルトリステアレート等の炭素数１０〜２２の飽和又は不飽和脂肪酸とグリセリンとのエステル又はそれらの水素添加物等が挙げられる。前記高級脂肪酸エステルは、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００３０】
前記グリコール類としては、例えば、エチレングリコール、ジエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブタンジオール、ポリエチレングリコール等が挙げられる。これらは単独で又は２種以上を混合して用いられる。なお、本発明においては、これらの中では、例えば、低重合度のポリエチレングリコールと高重合度のポリエチレングリコールとを混合して用いることが好ましい。前記グリコール類は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
【００３１】
前記植物油としては、例えば、ツバキ油、ヒマシ油、オリーブ油、カカオ油、ヤシ油、パーム油、マカデミアナッツ油、大豆油、茶実油、ゴマ油、ヘントウ油、サフラワー油、綿実油、テレピン油、これら植物油に水素添加した植物油脂類等が挙げられる。前記植物油は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
前記動物油としては、例えば、ミンク油、卵黄油、スクワラン、スクワレン、ラノリン、前記動物油の誘導体等が挙げられる。前記動物油は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
前記高級アルコールの一部は、吸収促進剤としても使用することができるものであり、かかる高級アルコールを基剤として使用する場合には、吸収促進剤を特に添加する必要がない。
【００３２】
前記乳剤性基剤としては、例えば、水中油型基剤、油中水型基剤、懸濁型基剤等が挙げられる。
前記水中油型基剤としては、界面活性剤の存在下又は非存在下で、前記ラノリン、プロピレングリコール、ステアリルアルコール、ワセリン、シリコン油、流動パラフィン、グリセリルモノステアレート、ポリエチレングリコール等の成分を水相中に乳化、分散せしめた基剤等が挙げられる。該基剤は、クリーム等を調製する際に好適に使用し得るものである。
前記油中水型基剤としては、ワセリン、高級脂肪族アルコール、流動パラフィン等の成分に、非イオン性界面活性剤の存在下で、水を加え、乳化、分散せしめた基剤等が挙げられる。
前記水中油型基剤及び油中水型基剤は、水を含む剤型、例えば、水を含有する液剤、ローション剤、パップ剤、軟膏剤等に使用することが好ましい。
前記懸濁性基剤としては、水にデンプン、グリセリン、高粘度カルボキシメチルセルロース、カルボキシビニルポリマーなどの懸濁化剤を加えてゲル状にした水性基剤等が挙げられる。
【００３３】
本発明の創傷の治療剤、褥瘡の治療剤又は予防剤或いは熱傷の治療剤の外用剤は、一般に採用されている外用剤の調製方法によって製造することができる。例えば、前記軟膏剤又はクリーム剤は、それぞれの剤型に応じて基剤の原料を混練、乳化又は懸濁せしめて基剤を調製した後、有効成分及び各種添加剤を加えて混合することにより製造することができる。混合に際しては、スクリューミキサー、ホモミキサー、ニーダー、ロールミル等の一般に用いられている混合機を用いることができる。
【００３４】
前記剤型がローション剤である場合には、懸濁型、乳剤型及び溶液型のいずれのタイプであってもよい。
前記懸濁型ローションの基剤としては、アラビアゴム、トラガントゴム等のゴム類、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルデンプン等のセルロース類、ベントナイト、ビーガムＨＶ等の粘土類の懸濁剤と水の混合物等が挙げられる。前記懸濁型ローションの基剤は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
前記乳剤型ローションの基剤としては、水とステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸等の脂肪酸、ステアリルアルコール、セタノール、ベヘニルアルコール等の高級アルコール等の油性物質を乳化させた基剤等が挙げられる。前記乳剤型ローションの基剤は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
前記溶液型ローションの基剤としては水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール等のアルコール等が挙げられる。前記溶液型ローションの基剤は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
前記ローション剤は、例えば、精製水に種々の基剤成分を添加して混合、攪拌した後、有効成分及び添加剤を加えて混合し、所望に応じて濾過を行なうことにより、製造することができる。
【００３５】
剤型が前記リニメント剤の場合には、その基剤としては、例えば、オリーブ油、ゴマ油、ヘントウ油、綿実油、テレピン油等の植物油類、エタノール、プロパノール、イソプロ
パノール等のアルコール類、それらと水との混合物等が挙げられる。前記リニメント剤の基剤は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
前記リニメント剤は、基剤に有効成分を溶解し、更に所望の成分を加えて混合することにより、製造することができる。
【００３６】
剤型が前記パップ剤の場合には、その基剤として、例えば、ポリアクリル酸及びその塩、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等の水溶性高分子化合物、該水溶性高分子化合物をミョウバンなどの多価金属塩によって架橋せしめた基剤、該水溶性高分子化合物に放射線照射のような物理的処理を施し架橋せしめた基剤等の架橋体等が挙げられる。前記パップ剤の基剤は、通常、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。
前記パップ剤は、有効成分、基剤及び所望の添加物を混合し、加熱後冷却することにより、製造することができる。
【００３７】
前記プラスター剤、パッチ剤及び硬膏剤の場合には、不織布等の支持体、天然ゴム、スチレン−ブタジエンゴム（ＳＢＲ）、ブチルゴム、ポリイソブチレン、ポリビニルアルキルエーテル、ポリウレタン、ジメチルポリシロキサン、スチレン−イソプレン−スチレンゴム、イソプレンゴム等の弾性体、亜鉛華、酸化チタン、シリカ等の充填剤、弾性体との相溶性がよい、テルペン樹脂、ロジン又はそのエステル、フェノール樹脂等の粘着付与剤、酢酸ビニル、シリコーン樹脂、ポリ塩化ビニル等の剥離処理剤、流動パラフィン、プロセスオイル等の軟化剤、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）等の老化防止剤等が挙げられる。これらの成分は単独で又は２種以上を混合して使用することができる。
【００３８】
前記プラスター剤、パッチ剤、硬膏剤等は、溶液法や熱圧法などの常法により製造することができる。具体的には、例えば、熱圧式によるときは、有効成分及び各成分をロール機などで均一に混練し、熱及び圧力を加えたカレンダーを使用して離型紙上に均一の厚さとなるよう塗布して薬物含有層を形成し、これを支持体表面へ積層し、密着させて製造することができる。
【００３９】
前記ゲル剤、液剤、テープ剤等の場合にも、その基剤は、通常の外用剤に使用されているものであればよく、特に限定されない。
【実施例】
【００４０】
以下に示す実施例及び比較例において、本発明を具体的且つ更に詳細に説明する。下記実施例は本発明の説明のためのみのものであり、これらの実施例により本発明の技術的範囲が限定されるものではない。
以下の実施例及び比較例における配合量は、全体量に対する質量％である。また実施例で用いた試作品１（ＤＮＡを酵素分解処理して得られた分解生成物を含有するもの）の量は固形分量として示す。
【００４１】
１．（デオキシ）オリゴヌクレオチドの製造
鮭白子由来のＤＮＡに対して、食品添加物として認可されているヌクレアーゼ［例えば、酵素製剤ヌクレアーゼ「アマノ」（天野エンザイム（旧天野製薬）社製）］を用いて限定分解を行った。産生したデオキシモノヌクレオチドとデオキシオリゴヌクレオチドを電気泳動装置で分析して最適条件を決定した。
具体的には、６５℃前後に調整した温水に原料として粉末状ＤＮＡ−Ｎａ塩を投入し、撹拌後、更に７０℃に加温し、原料に対してヌクレアーゼを０．０５乃至０．２５％の範囲で適量を加えて３時間反応させた。次に、８５℃で１０分間加熱してヌクレアーゼを失活させた後、遠心分離し、上澄み液にスプレードライ法を適用して、デオキシオリゴヌクレオチドを含む乾燥粉末（分解生成物）を得た。
【００４２】
２．（デオキシ）オリゴヌクレオチドの分析
６５℃前後に調整した温水に原料として鮭白子由来の粉末状ＤＮＡ−Ｎａ塩を投入し、撹拌後、更に７０℃に加温し、原料に対して酵素製剤ヌクレアーゼ「アマノ」（天野製薬社製）を０．０５％加えて３時間反応させて分解生成物を得た。次に、８５℃で１０分間加熱してヌクレアーゼを失活させた後、分解生成物をＨＰＬＣで分析した。
図１に、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）による、分解生成物のデオキシオリゴヌクレオチドの分析例を示す。図１において、ピーク２６以後がデオキシオリゴヌクレオチドの吸収であり、本例では分解生成物全体に対して、３１％がデオキシオリゴヌクレオチドの分画であった。
有効成分として、上記製造方法にて得たデオキシオリゴヌクレオチドを含む分解生成物を試作品１とした。
【００４３】
３．ＤＮＡ及びヌクレオプロテイン分解生成物（試作品２）又はＲＮＡ分解生成物（試作品３）の製造及び分析
有効成分として、日生バイオ（株）製造のＤＮＡ及びヌクレオプロテインを酵素分解処理して得られた分解生成物を含有するものを試作品２（デオキシオリゴヌクレオチド、デオキシモノヌクレオチド及びオリゴペプチドを含有するもの）とし、また、有効成分として、日生バイオ（株）製造のＲＮＡを酵素分解処理して得られた分解生成物を含有するものを試作品３（オリゴヌクレオチド及びモノヌクレオチドを含有するもの）とした。
試作品２及び試作品３の製造方法及び分析結果は以下のとおりである。
【００４４】
３−１．試作品２（ＤＮＡ及びヌクレオプロテイン分解生成物）の製造方法及び分析
試作品２は、試作品１の場合と同様の製造方法により、ＤＮＡを酵素分解処理により低分子化して得られた分解生成物と、ヌクレオプロテインを酵素分解処理により低分子化して得られた分解生成物を等量混合したものである。各分解生成物の製造方法の詳細は以下の通りである。
＜ＤＮＡ分解生成物＞
［製造方法］
前出の「１．（デオキシ）オリゴヌクレオチドの製造」と同様の方法により製造を行い、ＤＮＡ分解生成物を得た。
［構造及び組成］
前出の「２．（デオキシ）オリゴヌクレオチドの分析」と同様の方法により分析を行い、分解生成物全体に対して、３１％のデオキシオリゴヌクレオチド（分子量１０００〜３０００）の分画が含まれていることがわかった。
＜ヌクレオプロテイン分解生成物＞
［製造方法］
水に原料として鮭白子由来のヌクレオプロテイン（日生バイオ（株）製）を投入し、５０℃で加熱、撹拌後、原料に対して酵素製剤プロテアーゼ「ＰＴＮ」（ノボザイムズジャパン（株）製）を０．０６５％加えて４時間反応させ、更に７０℃で加熱、撹拌する。続いて、酵素製剤ヌクレアーゼ「アマノ」（天野エンザイム社製）を０．１％加えて３時間反応させた。次に、８５℃で１０分間加熱してヌクレアーゼを失活させた後、遠心分離し、スプレードライ法を適用して、デオキシオリゴヌクレオチドを含む乾燥粉末（分解生成物）を得た。
［構造及び組成］
得られた上述の分解生成物をＨＰＬＣで分析した。
図２にＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）による、分解生成物のデオキシオリゴヌクレオチドの分析例を示す。図２において、保持時間１９分から２４分以内のピーク（ピーク１〜ピーク４）をオリゴヌクレオチドの吸収とみなすことができる。このため、ピーク１乃至４のピーク強度から算出した結果、本例では分解生成物全体に対して、３３．４％のデオキシオリゴヌクレオチド（分子量１０００〜３０００）の分画が含まれている
ことがわかった。
【００４５】
３−２．試作品３（ＲＮＡ分解生成物）の製造方法及び分析
試作品３は試作品１の場合と同様の製造方法により、原料ＤＮＡの代わりにＲＮＡを酵素分解処理により、低分子化して得られた分解生成物であり、詳細は以下の通りである。＜ＲＮＡ分解生成物＞
［製造方法］
７０℃前後に調整した温水に原料として酵母由来のＲＮＡ（日生バイオ（株）製）を投入し、撹拌後、更に７０℃に加温し、原料に対して酵素製剤ヌクレアーゼ「アマノ」（天野エンザイム社製）を０．０５％加えて３時間反応させた。次に、８５℃で１０分間加熱してヌクレアーゼを失活させた後、遠心分離し、スプレードライ法を適用して、オリゴヌクレオチドを含む乾燥粉末（分解生成物）を得た。
［構造及び組成］
得られた上述の分解生成物をＨＰＬＣで分析した。
図３にＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）による、分解生成物のオリゴヌクレオチドの分析例を示す。図３において、保持時間１３分から２４分以内のピーク（ピーク２〜ピーク５）をオリゴヌクレオチドの吸収とみなすことができる。このため、ピーク２乃至５のピーク強度から算出した結果、本例では分解生成物全体に対して、４１．１％のオリゴヌクレオチド（分子量１０００〜３０００）の分画が含まれていることがわかった。
【００４６】
４．ラット剥削創モデルにおける創傷の治療効果
ラットの皮膚をペンチで傷つけ表皮部分を一部取り除き、剥削創モデルを作製した。
上記剥削創モデルの傷口にコラーゲン繊維と試作品１乃至試作品３よりなるコラーゲン・ＤＮＡ複合繊維をそれぞれ塗布した。
塗布後、４日目において、試作品１乃至試作品３よりなるコラーゲン・ＤＮＡ複合繊維をそれぞれ塗布したラットは、無処置群と比較して、肉芽組織の形成促進作用及びか皮（かさぶた）の形成抑制が認められた（図４に試作品１よりなるコラーゲン・ＤＮＡ複合繊維を塗布した群と無処置群の写真を示す）。
また、塗布後８日目には完全に表皮が再生された。
【００４７】
５．フローサイトメトリー
フローサイトメーターを用いてマウスリンパ球細胞での免疫活性化能を測定した。
測定は、試作品１がリンパ球細胞の活性化マーカーであるＣＤ６９を活性化する％を調べた。得られたフローサイトメトリーは、図５に示した。陽性コントロールとして大腸菌のＬＳＰを用いた。陽性コントロールとして大腸菌のＬＳＰを用いた場合、３３％以上を活性化したのに対して、試作品１は殆ど活性化せず、コントロールと殆ど変わらない結果であった。
【００４８】
６．ヒトにおける創傷治療効果
６−１．各種分解生成物を用いた製剤の製造
上述の方法により得られた試作品１（ＤＮＡ分解生成物）、試作品２（ＤＮＡ及びヌクレオプロテイン分解生成物）及び試作品３（ＲＮＡ分解生成物）を用いて、製剤を以下のように製造した。また、対照として、試作品１乃至試作品３を含有しない比較例１の製剤を製造した。これらの製剤の組成を下記表１に示す。
［実施例１乃至実施例３］
試作品１（又は試作品２、３）及び（Ａ）成分を混合し、十分に撹拌して溶液（Ａ）を得た。（Ｂ）成分を加温して溶融し、溶液（Ｂ）を得た。得られた溶液（Ｂ）に溶液（Ａ）を加え、加温して均一となるように十分に撹拌し、軟膏状の実施例１乃至実施例３の製剤を得た。
［比較例１］
試作品１の代わりに同量のグリセリンを用い、実施例１乃至実施例３と同様の製法で比較例１の軟膏状の製剤を得た。
【表１】
2007211000.tif 000002
【００４９】
６−２．製剤の性能試験
上述の方法で調製した実施例１乃至実施例３の製剤と対照例として比較例１の製剤を、創傷を有する被験者（ボランティア）の傷口に約１ｇ／１回／１日、それぞれ塗布した。
実施例１の製剤を塗布した際の、創傷１日目及び創傷８日目の創傷部の写真（図６）でに示されるように、塗布後８日目でほぼ創傷が治癒した。また、実施例２及び実施例３の製剤においても、同様に塗布後８日目でほぼ創傷が治癒した。
また、対照例（比較例１の製剤）の塗布部位と比較して、明らかに傷の治りが早いことが確認された。また、その際、実施例１乃至実施例３の製剤を塗布した創傷部において、か皮（かさぶた）の形成は観られなかった。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】ＤＮＡのヌクレアーゼ処理品（分解生成物）の、ＨＰＬＣによるデオキシオリゴヌクレオチドの分析例を示す図である。
【図２】図２は、ヌクレオプロテインのヌクレアーゼ処理品（分解生成物）の、ＨＰＬＣによるデオキシオリゴヌクレオチドの分析例を示す図である。
【図３】図３は、ＲＮＡのヌクレアーゼ処理品（分解生成物）の、ＨＰＬＣによるオリゴヌクレオチドの分析例を示す図である。
【図４】ラット剥削創モデルに製剤を塗布して４日後の写真（左：試作品１よりなるコラーゲン・ＤＮＡ複合繊維、右：無処置）を示す図である。
【図５】陽性コントロールとして大腸菌のＬＳＰを用い、試作品１のＣＤ６９に対する影響を調べたフローサイトメトリーを示す図である。
【図６】ヒトの創傷の傷口に実施例１の製剤を塗布した際の、創傷１日目及び創傷８日目の創傷部の写真を示す図である。
【図１】
2007211000.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
2007211000.tif 000006
【図５】
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【図６】
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