(57)【要約】【目的】  血液凝固障害が、血小板を含む血液凝固因子欠損または異常による出血症状、傷害による出血症状、例えば血液凝固因子異常（欠損も含む）特に血液凝固因子に対するインヒビター（抗体）を有することにより止血障害を呈する患者の止血管理に使用され得る医薬組成物を提供する。【構成】  主たる成分としてＦＸまたはＦＸに微量のＦＶＩＩaを組み合わせてなる医薬組成物。【効果】  止血管理が可能な従来にない医薬組成物を提供できる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液凝固第Ｘ因子（以下、ＦＸと称することがある）を主たる有効成分とする血液凝固障害に伴う出血症状の予防・治療用医薬組成物。
【請求項２】
前記血液凝固障害が、血小板を含む血液凝固因子欠損または異常による出血症状、傷害による出血症状、その中でも特に血液凝固因子に対するインヒビター（抗体）を有することにより止血障害を呈する血液凝固障害である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
１０μｇ／ｍｌ以上の濃度のＦＸを有効成分とする請求項１または請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
１６０μｇ／体重（ｋｇ）以上のＦＸを止血に必要な投与量としてなる請求項１から請求項３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
請求項１記載の組成物に選択的に活性化血液凝固第ＶＩＩ因子（以下、ＦＶＩＩaと称することがある）を組み合わせて主たる有効成分とする血液凝固障害に伴う出血症状の予防・治療用医薬組成物。
【請求項６】
前記血液凝固障害が、血小板を含む血液凝固因子欠損または異常による出血症状、傷害による出血症状、その中でも特に血液凝固因子に対するインヒビター（抗体）を有することにより止血障害を呈する血液凝固障害である請求項５記載の医薬組成物。
【請求項７】
１０μｇ／ｍｌ以上の濃度のＦＸ, ０．３１２５μｇ／ｍｌ以下の濃度のＦＶＩＩａを有効成分とする請求項５または請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
１６０μｇ／体重（ｋｇ）以上のＦＸ、５μｇ／体重（ｋｇ）以下のＦＶＩＩaを止血に必要な投与量としてなる請求項６から請求項７のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明は、医療用医薬品の分野に属し血液に由来する成分を主たる有効成分とする医薬品に関する。詳細には、血液凝固障害が、血小板を含む血液凝固因子欠損または異常による出血症状、傷害による出血症状、その中でも特に血液凝固因子に対するインヒビター（抗体）を有することにより止血障害を呈する血液凝固障害を伴う患者の止血管理に用いられる医薬品に関する。より詳細には、血液凝固第Ｘ因子（以下、ＦＸと称することがある）単独もしくはこれに活性化血液凝固第ＶＩＩ因子（以下、ＦＶＩＩａと称することがある）を組み合わせてなる組成物を主たる有効成分とする、血液凝固障害に伴う出血症状の予防・治療用医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
止血反応は、極めて重要な生体の防御機構の一つあり、一般的に、血管損傷部位への血小板の粘着・凝集による一次止血と、可溶性のフィブリノーゲンが不溶性のフィブリンへ転換されて血管損傷部位をふさぐ二次止血に大別される。二次止血の過程は各種の血液凝固因子及び補助因子による血液凝固カスケードとして知られる一連の連続的な反応に基づいており、内因系凝固と外因系凝固の二つの経路からなる（図１参照のこと）。従って、この血液凝固カスケード中の因子が欠損または正常に機能しないと、血液凝固が妨げられ、出血症状を呈することがある。その多くは遺伝的素因に基づく場合が多く、先天性凝固因子障害によって引き起こされる代表的な疾患として、血液凝固第ＶＩＩＩ因子（以下、第ＶＩＩＩ因子と称することがある）が欠損した血友病Ａ、血液凝固第ＩＸ因子（以下、第ＩＸ因子と称することがある）が欠損した血友病Ｂがよく知られている。
【０００３】
これら血友病患者の治療には、欠損因子の補充を目的として第ＶＩＩＩ因子あるいは第ＩＸ因子を含む濃縮製剤が開発され、止血管理に使用されており、これを補充療法という。通常、血友病患者の血漿中の第ＶＩＩＩ因子活性、第ＩＸ因子活性を５〜２０％のレベルになるように補充する。しかし、その結果、第ＶＩＩＩ因子あるいは第ＩＸ因子に対する抗体（これは、通常インヒビターと呼ばれる）が患者の約２〜２４％に発生することが知られており（非特許文献１参照, 非特許文献２参照, 非特許文献３参照, 非特許文献４参照）、これは補充療法における最も深刻な副作用の一つである。インヒビターが発生すると、従来の補充療法は効果がなくなり、患者の止血管理は困難をきわめる。また、血友病のような遺伝的な素因がない場合でも、自然発生的または自己免疫疾患的にインヒビターが発現することが多数報告されている（非特許文献５参照）。
【０００４】
現在インヒビターを有する患者の治療には主に以下の方法が用いられている。
（ａ）中和療法：インヒビターを凌駕するような高投与量の濃縮製剤を投与することでインヒビターを中和し、さらに止血に必要な因子の補充を行なう。
（ｂ）バイパス療法：第ＶＩＩＩ因子や第ＩＸ因子は共に内因系凝固に関与する因子であるので、内因系を介さない、即ちバイパスする外因系凝固により止血する。外因系凝固能を高めるため、ＡＰＣＣと呼ばれる活性化プロトロンビン複合体濃縮製剤やＦＶＩＩａ製剤の投与が行なわれている。
（ｃ）免疫寛容療法：大量の濃縮製剤を連日投与することにより、インヒビター産生能を免疫学的に疲弊させて、抗体の消失を図る。
【０００５】
しかしながら、前記方法は各々幾つかの欠点をかかえている。即ち、（ａ）中和療法はインヒビター価の低い患者に対しては有効であるが、ハイリスポンダーと呼ばれる高いインヒビター価を有する患者に対しては無効である。（ｂ）バイパス療法におけるＡＰＣＣは心筋梗塞（非特許文献６参照やＤＩＣ（非特許文献７参照）の副作用が報告されており安全性に問題がある。一方、その安全性の高さからインヒビター患者の止血管理で最も汎用されているＦＶＩＩａ製剤は、ＦＶＩＩａの生体半減期が短いため頻回投与が必要であり（非特許文献８参照、経済的な面も含め患者に多大な負担を負わせることになっている。また、その有効性も充分とは言えない。（ｃ）免疫寛容療法は限られた患者においてのみ有効であり、且つ患者の経済的負担が大きい。このように、現状ではインヒビター患者に対する種々の止血管理方法は充分なものとはいえず、より安全で、効果が高く、止血管理が容易な製剤が切望されている。
【０００６】
なお、従来技術として、特開平７−１４５０７２〜１４５０７５（特許文献１〜４参照）により開示されている「血液凝固因子阻害因子処理のための水性組成物」は従来のＡＰＣＣ製剤における活性化の程度を規定しているだけであり、その本質を極めていない。また、特開平９−１１０７１５（特許文献５参照）により示されている「血液凝固疾患を治療するための医薬組成物とその製造法」も、従来のＡＰＣＣ中のＦＶＩＩａ含量を増加させることにより治療効果を期待している点に特徴を有するが、単独で治療効果が確認されているＦＶＩＩａをＡＰＣＣに加えただけであり、同様になお課題を残すものである。また、平成１１年特許願第３６８１２２号（特許文献６参照）により示されている「血液凝固異常に基づく疾患の治療・予防用医薬組成物」は、ＦＸとＦＶＩＩaの混合製剤が上記の血液凝固異常に基づく疾患の治療・予防に有効とする点に特徴を有するが、ＦＸを主成分とするＦＸ単独製剤に言及したものではない。
【０００７】
【特許文献１】特開平７−１４５０７２号公報
【特許文献２】特開平７−１４５０７３号公報
【特許文献３】特開平７−１４５０７４号公報
【特許文献４】特開平７−１４５０７５号公報
【特許文献５】特開平９−１１０７１５号公報
【特許文献６】特開２００１−１８１２０４号公報
【特許文献７】特開平３−１５５７９７号公報
【特許文献８】特開平１０−０５９８６６号公報
【特許文献９】特開平１０−０５９８６７号公報
【非特許文献１】Sultan Y, Thromb Haemost 67:600-602（1992）
【非特許文献２】Kamiya T, Takahashi I, Saito H, Int J Hematol 62:175-181（1995）
【非特許文献３】Ehrenforth S, Kreuz W, Scharrer I, Linde R, Funk M, Gungor T, Krackhardt B, Kornhuber B, Lancet 339（8793）:594-598（1992）
【非特許文献４】Bray GL, Gomperts ED, Courter S, Gruppo R, Gordon EM, Manco-Johnson M, Shapiro A, Scheibel E, White G 3rd, Lee M, Blood 83:2428-2435（1994）
【非特許文献５】Allain JP, Gaillandre A, Frommel D, Thromb Haemost 45:285-289（1981）
【非特許文献６】Chavin SI, Siegel DM, Rocco TA Jr, Olson JP, Am J Med 85:245-249（1988）
【非特許文献７】Rodeghiero F, Castronovo S, Dini E, Thromb Haemost 48:339-340（1982）
【非特許文献８】Hedner U, Glazer S, Falch J, Transfus Med Rev 7:78-83（1993）
【非特許文献９】Girolami A, Molaro G, De Marco L, Acta Haematol 52:223-231（1974）
【非特許文献１０】Jpn J Thromb Hemost 5（3）:158-172（1994）
【非特許文献１１】Thromb Res 56:603-609（1989）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記問題点を鑑み、本願発明者らは血液凝固障害に伴う出血症状に対する予防・治療剤を開発するべく鋭意研究した結果、驚くべきことに、ＦＸを主成分とする医薬組成物が血液凝固障害を原因とする止血障害の予防・治療剤として非常に有効であることを初めて見出し、さらにＦＸを主成分とする本願発明の医薬組成物に微量のＦＶＩＩaを添加した医薬組成物は、ＦＸを主成分とする医薬組成物の効果を増幅することを見出し、この知見に基づいて本願発明を完成するに至った。本願発明は従来の公知技術とは異なる新しい技術と新規な知見に基づくものである。
【０００９】
特に、本願発明によってもたらされる組成物の優れた点として、（１）ＡＰＣＣ製剤の副作用を引き起こしている原因物質としての可能性の高いＦＩＩ、ＦＩＩａ、ＦＩＸ、ＦＩＸａ及びリン脂質等を実質的に含まないため安全性が極めて高い。また、（２）ＦＸの生体内半減期が３０時間と報告されており（非特許文献９参照）、ＦＶＩＩａ製剤の欠点であった頻回投与の必要がなくなり、止血効果の持続性が高いことが予想される。即ち、安全で、効果が高く、止血管理が容易な、待ち望まれていた医薬組成物と言うことができる。また、ＦＩＩ及びＦＩＸ等をほとんど含まないという点で従来のＡＰＣＣ製剤と異なり、ＦＸを含む点でＦＶＩＩａ製剤とも異なる。本願発明は、ＦＸをＦＶＩＩaと混合せずに単独投与することを発明の骨子としているが、ＦＸに極微量のＦＶＩＩaを含むことも本願発明に含まれる。特許文献６により示されている「血液凝固異常に基づく疾患の治療・予防用医薬組成物」に記載されている、ＦＸとＦＶＩＩaの混合製剤はＦＸ単独製剤を意味しておらず、本願発明とはその技術思想を異にする製剤である。
【発明の効果】
【００１０】
血液凝固障害を原因とする止血障害に対する予防と止血に用いられているＦＶＩＩａ製剤は、その短い生体内半減期（2.7時間）のため、頻回投与を前提として使用されているが、本願発明のＦＸ単独製剤を用いればＦＸの生体内半減期が３０時間と長いため、極めて少ない投与回数で止血が完了できることが予想される。また、このＦＸに極微量のＦＶＩＩａを加えれば投与時には一過性により強い止血効果が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本願発明の医薬組成物の主たる成分の前駆体であるＦＸは４４８残基のアミノ酸からなる分子量約５９,０００のビタミンＫ依存性凝固因子であり、血漿中には５〜１０μｇ／ｍｌ含まれる。ＦＸは、カルシウムイオン存在下でＦＶＩＩａ／組織因子複合体により活性化されるか（外因系凝固経路）、あるいは、活性化血液凝固第ＶＩＩＩ因子、カルシウムイオン及びリン脂質存在下で活性化血液凝固第ＩＸ因子により活性化されて（内因系凝固経路）、活性化血液凝固第Ｘ因子（以下、ＦＸａと称することがある）となり、酵素活性を発揮するようになる。ＦＸａは活性化血液凝固第Ｖ因子、カルシウムイオン及びリン脂質存在下で、プロトロンビンをトロンビンに活性化し、その結果フィブリン形成を引き起こす。
【００１２】
また、本願発明の補助的成分たるＦＶＩＩは４０６残基のアミノ酸からなる分子量約５０,０００を有するビタミンＫ依存性凝固因子であり、血漿中には約０.５μｇ／ｍｌ含まれる。ＦＶＩＩは分子内のＡｒｇ１５２−Ｉｌｅ１５３結合が加水分解されることにより酵素活性を持つ二本鎖のＦＶＩＩａとなる。ＦＶＩＩａは組織因子とともにカルシウムイオン存在下でＦＩＸ及びＦＸを活性化する。従って、外因系凝固経路において非常に重要な位置を占めている物質とみなすことができる。
【００１３】
本願発明に使用されるＦＸ及びＦＶＩＩaを製造する方法は特に限定されることなく、例えばヒト血液より分離する方法あるいは遺伝子組換え技術により作製する方法などによって製造することができる。また、遺伝子組換え技術により作製されたＦＸとＦＶＩＩaは本質的な生物活性が血漿由来ＦＸとＦＶＩＩaと同様であれば、本来のアミノ酸配列を別のアミノ酸配列に置換した改変体も本願発明に使用できる。
【００１４】
血液由来のＦＸの製法としては、例えば、新鮮凍結ヒト血漿を冷融解・遠心処理してクリオプレシピテートを除いた脱クリオ血漿から、陰イオン交換クロマトグラフィーにより粗精製後、抗ＦＸモノクローナル抗体固定化カラムを用いてのアフィニティークロマトグラフィーによってＦＸを精製する方法がある。前記と同様、得られるＦＸはその安全性を確保するために、ＦＩＩ、ＦＩＩａ、ＦＩＸ及びＦＩＸａを可能な限り伴わない方が好ましい。また、血液由来のＦＶＩＩａの製法としては、例えば、特開平３−１５５７９７（特許文献７参照）、特開平１０−０５９８６６（特許文献８参照）及び特開平１０−０５９８６７（特許文献１０参照）に示される方法がある。また、新鮮凍結ヒト血漿を冷融解・遠心処理してクリオプレシピテートを除いた脱クリオ血漿から、陰イオン交換クロマトグラフィーにより粗精製後、抗ＦＶＩＩモノクローナル抗体固定化カラムを用いてのアフィニティークロマトグラフィーによってＦＶＩＩを精製した後、他の血漿蛋白質、例えば活性化血液凝固第ＸＩＩ因子、ＦＸａなどによりＦＶＩＩａに活性化する方法がある。得られるＦＶＩＩａは、その安全性を確保するために、ＦＩＩ、ＦＩＩａ、ＦＩＸ及びＦＩＸａを可能な限り伴わない方が好ましい。
【００１５】
上述の方法で調製されたＦＸまたはＦＶＩＩａの活性を最大限に維持するために、それぞれ好適な安定化剤と共に凍結乾燥して保存することができるし、ＦＸ溶液またはＦＶＩＩａ溶液をそれぞれ凍結し保存することも可能である。さらには、ＦＸまたはＦＶＩＩａを好適な安定化剤と共に好適な濃度で混合し、凍結乾燥して保存することができるし、混合溶液を凍結し保存することも可能である。本願発明では、かかる有効成分としてＦＸを単独で含む組成物、またはＦＸとＦＶＩＩａを含む組成物と、公知の適当な賦形剤を組み合わせ、公知の方法で血液凝固障害を原因とする止血障害に対する予防・治療用製剤とすることができる。当該製剤の投与対象は、血液凝固障害によって引き起こされる止血障害のある患者であれば特に限定されることはない。
【００１６】
ＦＸの有効投与量は、例えば投与対象者の年齢、症状及び重症度などにより変動するが、１６０μｇ／体重（ｋｇ）以上の投与量であり、また、  ＦＸ  １６０μｇ／体重（ｋｇ）以上の投与量に５μｇ／体重（ｋｇ）未満の投与量のＦＶＩＩaを組み合わせることもできる。投与方法は単回投与（Ｂｏｌｕｓ）あるいは点滴の静脈内投与が最適である。本願発明の予防・治療用製剤は、ＦＸを主成分とすることを好適な実施態様とするが、ＦＸに投与量５μｇ／体重（ｋｇ）未満のＦＶＩＩaをＦＸとＦＶＩＩaの投与間隔が充分短ければ、個別に投与することも可能であり、同様に本願発明の効果を発揮する。
【００１７】
本願発明は、  ヒト血液より分離する方法あるいは遺伝子組換え技術により作製する方法などによって製造されたＦＸとＦＶＩＩaを基に、薬剤本態として１０μｇ／ｍｌ以上のＦＸ、または同量のＦＸに０．３１２５μｇ／ｍｌ以下の濃度のＦＶＩＩａを混合した組成に好適な安定剤を添加した血液凝固異常に基づく疾患の治療・予防用薬剤である。
【００１８】
以下に実施例を挙げて本願発明を具体的に説明するが、本願発明はこれらの例に何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１９】
（本願発明組成物のＡＰＴＴ測定による評価）
活性化部分トロンボプラスチン時間（以下、ＡＰＴＴと称することがある）は、ＡＰＴＴ試薬を用いて測定される内因系スクリーニング検査法である。具体的には、被検血漿にＡＰＴＴ試薬とカルシウムイオンを添加しフィブリンが形成されるまでの内因性凝固の酵素反応を総合的に測定するもので、特に、血友病ＡまたはＢに代表される内因系凝固因子の量的ないし質的異常、または内因系凝固因子に対するインヒビターの存在などによりＡＰＴＴは延長する。正常値は３０〜４０秒であり、その延長の度合は量的ないし質的異常を示している内因系凝固因子の凝固活性に依存し、一般に重篤な臨床症状を示す血友病（インヒビターも含む）では極度に延長する。齋藤らが報告したＦＶＩＩａ製剤の臨床評価結果によると、インヒビターを有する血友病患者１２人のＡＰＴＴは１２２.０±１８.７秒（平均±ＳＤ）に延長していたが、遺伝子組換えＦＶＩＩａ投与２０分後には８２.９±２１.６秒に低下した（非特許文献１０参照）。また、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてもＦＶＩＩＩまたはＦＩＸ等の各種欠乏血漿にＦＶＩＩａを添加すると、ＡＰＴＴが有意に短縮することが報告されている（非特許文献１１参照）。
【００２０】
本実験は上記事実に基づき、血友病患者様血漿として第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）欠乏血漿または第ＩＸ因子（ＦＩＸ）欠乏血漿（いずれも、デイドベーリングマールブルグ社製）を用い、ＦＸによるＡＰＴＴの短縮効果を評価した。ＡＰＴＴ試薬としては、Ａｃｔｉｎ（商品名）（デイドベーリングマールブルグ社製）を使用した。評価したＦＸ等の濃度は、ＦＸ：終濃度０〜１６０μｇ／ｍｌ血漿（正常ヒト血漿中の濃度：約１０μｇ／ｍｌ血漿）、ＦＶＩＩａ：終濃度０〜０．１２５μｇ／ｍｌ血漿、結果を図２と図３に示す。図２と図３は、ＦＸを各々の各欠乏血漿に添加した場合のＡＰＴＴへの濃度依存的な影響を表したものである。ＦＶＩＩＩ欠乏血漿の場合、ＦＸの添加は約１００μｇ／ｍｌ血漿濃度まで濃度依存的にＡＰＴＴを短縮させた。ＦＩＸ欠乏血漿の場合、ＦＸの添加は約１６０μｇ／ｍｌ血漿濃度まで濃度依存的にＡＰＴＴを短縮させた。
【００２１】
図４と図５は、各欠乏血漿にＦＸを加え、さらにＦＶＩＩａ加えた場合のＡＰＴＴを示している。  ＦＸとＦＶＩＩａの血漿中の終濃度は、０〜１６０μｇ／ｍｌ、０〜０．１２５μｇ／ｍｌに設定した。ＦＸに少量のＦＶＩＩaを加えることによりＡＰＴＴの短縮効果は高まり、ＦＶＩＩaを０．１２５μｇ／ｍｌ加えることにより、ＦＶＩＩＩ欠乏血漿、ＦＩＸ欠乏血漿ともに各因子を１０％補充した場合のＡＰＴＴに近づいた。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】内因系凝固と外因系凝固の二つの経路の血液凝固カスケードを示す図である。
【００２３】
【図２】ＦＶＩＩＩ欠乏血漿のＡＰＴＴに対するＦＸの影響を示す図である。（実施例１）
【００２４】
【図３】ＦＩＸ欠乏血漿のＡＰＴＴに対するＦＸの影響を示す図である。（実施例１）
【００２５】
【図４】ＦＶＩＩＩ欠乏血漿のＡＰＴＴに対するＦＸとＦＶＩＩａの協同的影響を示す図である。（実施例１）
【００２６】
【図５】ＦＩＸ欠乏血漿のＡＰＴＴに対するＦＸとＦＶＩＩａの協同的影響を示す図である。（実施例１）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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