(57)【要約】【課題】  作業を自動化し、環境試料中の夾雑物を除去して検出対象物を効率的に調整することができるようにした環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法を提供する。【解決手段】  検出対象物２を認識し、該検出対象物２に特異的に結合する認識物３を結合させた担体４に、環境試料を接触させるステップと、上記環境試料中の上記検出対象物２と夾雑物５とを分離するステップと、上記担体４に結合した上記検出対象物２を脱離し回収するステップと、回収した検出対象物２と、該検出対象物２を標識する標識物とを互いに結合させるのに適するように調整するステップと、上記検出対象物２と上記標識物とを結合させるステップとを含むこととした。【選択図】  図1
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
検出対象物を認識し、該検出対象物に特異的に結合する認識物を結合させた担体に、環境試料を接触させるステップと、
上記環境試料中の上記検出対象物と夾雑物とを分離するステップと、
上記担体に結合した上記検出対象物を脱離し回収するステップと、
回収した検出対象物と、該検出対象物を標識する標識物とを互いに結合させるのに適するように調整するステップと、
上記検出対象物と上記標識物とを結合させるステップと
を含む、環境試料中の検出対象物の調整方法。
【請求項２】
上記検出対象物がクリプトスポリジウムであることを特徴とする請求項１に記載の調整方法。
【請求項３】
上記認識物が抗クリプトスポリジウム抗体であることを特徴とする請求項１又は２に記載の調整方法。
【請求項４】
上記標識物が蛍光標識抗体であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の調整方法。
【請求項５】
上記担体はアミノ基が導入されたポリスチレンであることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の調整方法。
【請求項６】
請求項1〜５のいずれかに記載の環境試料中の検出対象物の調整方法によって環境試料を調整し、次いで上記蛍光標識抗体の蛍光強度から検出対象物を検出するステップを実施することを特徴とする環境試料中の検出対象物の検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法に関する。特に、作業が自動化され、さらに、溶液中の検出対象物を効率的に精製し、溶液中の検出対象物と、該検出対象物を標識する標識物との結合力を適切に調節する調整方法及び検出装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
水道原水となる河川や湖沼等の環境試料は、多種多様な化学物質が環境中に存在しているため、様々な化学物質によって汚染されていると考えられる。また、環境試料は、例えば、クリプトスポリジウム等の原虫類、腸管出血性大腸菌Ｏ１５７、レジオネラ菌等の細菌、ウイルス等の微生物によっても汚染されている。これら汚染された環境試料に因る公害や水系感染症は、大きな問題となっている。
【０００３】
ここで、環境試料中に含まれている有害な化学物質や微生物を検出することが行われている。一般的に、高感度な分析装置である、ガスクロマトグラフ−質量分析計（ＧＣ／ＭＳ：Ｇａｓ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）や液体クロマトグラフ−質量分析計（ＬＣ／ＭＳ：Ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ／Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）等を用いて、化学物質や微生物の検出が行われている。
例えば、ガスクロマトグラフ−質量分析計では、まず、揮発性の誘導体を作製するためにトリメチルシリル化やプロピル化を環境試料に行い、ガスクロマトグラフにより混合物を分離して質量分析計により質量ごとに分離することによって高感度な検出を行っている。
【０００４】
また、環境試料中に含まれている化学物質や微生物の濃度は非常に低い（ｎｇ／Ｌ〜μｇ／Ｌ（ｐｐｂ〜ｐｐｔ））ため、上記装置を用いて検出を行う場合、環境試料を数千倍に濃縮する必要がある。さらに、再現性よく検出するために、分析結果に影響を及ぼす夾雑物や妨害物質を試料から取り除く必要もある。そのため、例えば、ヘキサン、ジクロロメタン、アセトン等の有機溶媒を用いて溶媒抽出や固相抽出を行っている。さらに、試料の精製や濃縮が必要な場合は、続けてシリカゲルカラム等を用いてクロマトグラフィーを行っている。
【０００５】
特に、新興の水系感染症の原因となっているクリプトスポリジウムやジアルジア等の原虫に対しては、検査方法（例えば、「クリプトスポリジウム暫定対策指針」、厚生労働省、１９９８年）が公表されている。
この検査方法は、大きく分けて、試料採取ステップと、ろ過濃縮ステップと、剥離懸濁ステップと、分離精製ステップと、免疫蛍光染色ステップと、顕微鏡観察ステップとからなる。
試料採取ステップでは、河川水や水道原水では１０Ｌを、浄水や水道水では４０Ｌを、ポリエチレン容器に試料として採取する。
ろ過濃縮ステップでは、所定のディスクフィルターを、加圧又は吸引式のフィルターホルダーに取付けたろ過装置を用いて、試料をろ過する。上記ディスクフィルターは、直径が４７ｍｍ又は９０ｍｍ、ポアサイズが５μｍである親水性ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ：Ｐｏｌｙ Ｔｅｔｒａ Ｆｌｕｏｒｏ Ｅｔｙｌｅｎｅ）によって構成されている。
剥離懸濁ステップでは、濁質を捕捉したディスクフィルターを５０ｍＬの遠心管に入れ、誘出液を添加して激しく攪拌することによってクリプトスポリジウムを含む濁質をディスクフィルターから剥離させる。上記誘出液は、０．０２％ピロリン酸ナトリウム、０．０３％ＥＤＴＡ−３Ｎａ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０を含む。
分離精製ステップでは、免疫磁気ビーズにより懸濁液からクリプトスポリジウムを回収する。この免疫磁気ビーズには、クリプトスポリジウムを認識する抗体が結合している。
免疫蛍光染色ステップでは、蛍光標識した抗クリプトスポリジウム抗体によってクリプトスポリジウムを染色し、蛍光顕微鏡を用いて観察する。
ここで、蛍光顕微鏡での観察作業は高度の熟練を要することや、長時間観察をしなければならないという身体的な負担が大きいため、蛍光標識したクリプトスポリジウムの自動計測に、フローサイトメータを用いることが提案されている。フローサイトメータでは、まず、微粒子をシース液とともに１個ずつ流す。次に、この微粒子にレーザー光や紫外光を集光し、それによる散乱光や蛍光等の光学的情報を検出する。これにより、粒子の大きさや形態、性質等を調べることができる。さらに、フローサイトメータでは、粒子の粒径に対応する前方散乱光強度と、標識抗体に結合する蛍光物質の蛍光強度と、環境試料中に含まれる主要な夾雑物である藻類の蛍光強度とを同時に測定することができる。したがって、これらの光学的情報を処理し、クリプトスポリジウムが存在する存在領域と夾雑物が存在する領域とに分画して標識されたクリプトスポリジウムを検出することができる。
【０００６】
上記のクリプトスポリジウム検査方法ではクリプトスポリジウムの存在が確認できる。  しかし、クリプトスポリジウムが生存しているか、ヒトに対しての感染能力を有しているか等を判定することはできない。そこで、より詳細な検査結果を得るために、上記のクリプトスポリジウム検査のほかに生育活性試験や感染性試験が行われることがある。クリプトスポリジウムの生育活性試験では、クリプトスポリジウムのオーシスト（嚢）からのスポロゾイト（生命体）の放出の有無から生死を判定する脱嚢試験、ＤＡＰＩ（４，６−ジアミノ−２−フェニルインドール）とＰＩ（プロピジウムインドール）の２重染色から生死を判定する生体染色試験等がある。一方、クリプトスポリジウムの感染性試験では、マウス等の実験動物に対する感染、又はヒト小腸由来の培養細胞に対する感染によって感染性を評価する方法等がある。
【０００７】
また、高感度な分析装置として酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）が開発されている。ＥＬＩＳＡ法は、試料中の検出対象物に特異的に結合する抗体を用いて抗原抗体反応によって高感度で検出対象物を検出する方法である。
ＥＬＩＳＡ法では、まず、検出対象物を認識し特異的に結合する固定化された抗体に、検出対象物と酵素標識抗原とを競合的に反応させる。次に、固定化された抗体に捕捉された酵素標識抗原に酵素基質を添加して、該酵素標識抗原を発色させる。ここで、抗原と結合する酵素標識抗原の量は、検出対象物の濃度が高いほど減少する。したがって、酵素標識抗原による吸光度と予め測定した標準物質の吸光度とを比較することによって、試料中の検出対象物の濃度を算出することができる。また、この他に、検出対象物を認識し特異的に結合する固定化された抗体と、検出対象物の複合体を認識する酵素標識抗体、あるいは固定化された抗体が認識する検出対象物の部位と異なる部位を認識する酵素標識抗体を用いるＥＬＩＳＡ法もある。
【０００８】
環境試料中に含まれる有害化学物質の簡易測定やスクリーニングに使用されているＥＬＩＳＡ法でも、環境中に含まれる夾雑物が、固定化された抗体あるいは酵素標識された２次抗体に非特異的に吸着して検出結果に悪影響を及ぼす場合がある。また、より低濃度の有害化学物質を測定するためには、機器分析と同様に夾雑物や妨害物質を除去し、濃縮するための前処理が必要となる。このため、有害な化学物質の測定は簡単にできるが、一連の分析操作では高度な熟練と時間を要するという問題があり、測定の自動化・省力化が困難であった。
また、環境試料中に含まれる病原微生物の検出でも、環境試料中に多く含まれる藻類が、標識抗体に非特的に結合して粒子を擬陽性として検出したり、藻類由来の蛍光が検出を妨害したりする可能性が大きく、より高精度で検出することが望まれている。
【０００９】
また、水系感染症による集団発生を防ぐため、水処理プロセスにおいて原因微生物を高頻度にモニタリングする必要もある。しかし、試料中から微生物を効率よく分離し濃縮する技術は確立されていないため、環境試料中にわずかだけしか含まれていない病原微生物を分離し濃縮することは、高度な熟練と時間を要する。
【特許文献１】特開２００５−０７７３０１号公報
【特許文献１】特開２００５−１９５４７３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、上述の問題点に鑑み、作業を自動化し、環境試料中の夾雑物を除去して検出対象物を効率的に調整し、検出対象物を高精度で検出する環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記目的を達成するために、本発明は、環境試料中の検出対象物の調整方法であって、検出対象物を認識し、該検出対象物に特異的に結合する認識物を結合させた担体に、環境試料を接触させるステップと、上記環境試料中の上記検出対象物と夾雑物とを分離するステップと、上記担体に結合した上記検出対象物を脱離し回収するステップと、回収した検出対象物と、該検出対象物を標識する標識物とを互いに結合させるのに適するように調整するステップと、上記検出対象物と上記標識物とを結合させるステップとを含む。
上記検出対象物としては、クリプトスポリジウムを挙げることができる。上記認識物は、好適には、抗クリプトスポリジウム抗体を用いる。また、上記標識物としては、好適には蛍光標識抗体を用いる。上記担体は、好適にはアミノ基が導入されたポリスチレンを用いる。
【００１２】
本発明は、別の側面で、環境試料中の検出対象物の検出方法であり、該検出方法では、本発明に係る調整方法によって環境試料を調整し、次いで上記蛍光標識抗体の蛍光強度から検出対象物を検出するステップを実施する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明に係る環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法によれば、作業を自動化し、環境試料中の夾雑物を除去して検出対象物を効率的に精製することができる。また、検出対象物と、該検出対象物を標識する標識物との結合力を適切に調整することができるため、検出対象物を高精度で検出することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下に、本発明に係る環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法の実施の形態を、添付図面を参照しながら説明する。
【００１５】
最初に、本発明に係る環境試料中の検出対象物の調整方法について、その一実施の形態を図１を参照し、概括的に説明する。
まず、分離カラム１に、検出対象物２に特異的に結合する認識物３を有した担体４を充填する［図１（ａ）］。
環境試料を調整するにあたり、夾雑物５が分離カラム１を詰まらせてしまうことがある。そこで、夾雑物の粒径が数十〜数百μｍであることを考慮し、粒径が１００μｍ〜１０ｍｍ程度である担体４を用いることが好適である。そのような担体４としては、樹脂で構成したボールが好適である。樹脂としては、アミノ基が導入されたポリスチレンを好適なものとして挙げることができる。
【００１６】
認識物３としては、例えば、免疫抗体、遺伝子組換えを用いて作製した単鎖抗体、ペプチド抗体、受容体、又はモレキュラーインプリンティングを用いて作製した鋳型分子等を挙げることができる。
【００１７】
次に、検出対象物２及び夾雑物５を含む環境試料を分離カラム１に注入する［図１（ｂ）］。
分離カラム１は、恒温層内にあり、検出対象物２と認識物３とは、例えば、検出対象物２をクリプトスポリジウムとし、認識物３を抗体とした組み合わせでは、３７℃で結合する。また、この間に、振とう機で分離カラム１を振とうする。なお、ここで、振とう手段は、振とう機に限らず、攪拌機を用いてもよい。
【００１８】
次いで、洗浄溶液を分離カラム１に流し、分離カラム１中の担体４に結合している検出対象物２を環境試料から分離する［図１（ｃ）］。
【００１９】
さらに、塩酸溶液等を分離カラム１に流し、検出対象物２を担体４から分離（脱離）して検出対象物２を反応容器６に抽出する［図１（ｄ）］。
分離・抽出するためには、塩酸溶液を用いる他に、塩化ナトリウム等の高濃度溶液によるイオン強度変化やエチレングリコール等による極性変化等を用いて検出対象物と認識物とを分離することもでき、検出対象物と用いる担体、認識物の属性に従って好適なものを選択する。
以上の一連の操作によって、検出対象物が分離される。すなわち、環境試料中の検出対象物が精製される。
【００２０】
本発明に係る検出対象物の調整方法では、図１の一連の操作によって精製された環境試料中の検出対象物に標識物をさらに結合させる。
結合させるにあたっては、まず、回収した検出対象物２と、該検出対象物２を標識する標識物とを、互いに結合するのに適するように調整する。
すなわち、反応容器６に抽出された溶液は酸性であるため、検出対象物２と標識物とが結合することができなかったり、標識物の蛍光強度が低下したりする。そこで、反応溶液６中の反応溶液にアルカリを加え、ｐＨを中性付近にする。また、イオン強度変化や極性変化によって検出対象物２と認識物３とを分離した場合には、フィルターによるろ過や限外ろ過、または透析膜による透析等を用いて試料を調節する。
なお、標識物は、特定の励起波長の光照射により特定の蛍光を発する蛍光物質、基質の添加により色素を生成し発色する酵素、又は基質の添加により化学発光する酵素等を用いる。例えば、蛍光物質では、フルオレッセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリスリン（ＰＥ）等、基質の添加により色素を生成し発色する酵素ではペルオキシダーゼ等、基質の添加により化学発光する酵素ではルシフェラーゼ等である。
本発明に係る検出対象物の検出方法では、以上のようにして、環境試料を調整した後、上記蛍光標識抗体の蛍光強度から検出対象物を検出する。
【００２１】
次に、本発明に係る環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法を実施するためのシステムについて、その一実施の形態１００を、図２について概説する。
このシステム１００の主たる構成要素として、参照番号に即し、環境試料１０１、洗浄溶液１０２、塩酸溶液１０３、分離カラム１０８、水酸化ナトリウム溶液１１３、認識物溶液１１４、洗浄溶液１１５、反応容器１２０、及び検出部１２５を、図２に示している。
ここで、これらの構成要素の相互の関連・機能は、本実施の形態に係るシステムの作用としても後述するが、以下に図２に示す他の構成要素について説明を加える。
まず、恒温層１２２は、分離カラム１０８と、振とう機１１１と、反応容器バルブ１１２と、反応容器１２０と、振とう機１２１とを含むように構成している。なお、担体１０９はネット１１０により分離カラム１０８に保持されている。
また、環境試料１０１と洗浄溶液１０２と塩酸溶液１０３とは、それぞれバルブ１０４〜１０６に接続されている。さらに、ポンプ１０７がこれらのバルブ１０４〜１０６に接続されている。これによって、分離カラム１０８に環境試料１０１、洗浄溶液１０２、又は塩酸溶液１０３を送ることができるように構成している。
そして、水酸化ナトリウム溶液１１３と認識物溶液１１４とは、それぞれバルブ１１６、１１７に接続されている。また、ポンプ１１８がこれらのバルブ１１６、１１７に接続されており、反応容器１２０に水酸化ナトリウム溶液１１３又は認識物溶液１１４を送ることができるように構成している。
また、洗浄溶液１１５は、ポンプ１１９によって、反応容器１２０に送ることができるように構成している。
さらに、検出部１２５は、バルブ１２３を介して、ポンプ１２４に接続されており、反応容器１２０から検出部１２５に溶液を送ることができるように構成している。
【００２２】
次に、以上の構成要素を含む図２のシステム１００を作用させ、本発明に係る環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法の実施する形態を説明する。
まず、ポンプ１０７を作動させ、バルブ１０４を開き、試料溶液１０１を分離カラム１０８に注入する。
続いて、振とう機１１１を用いて分離カラム１０８を振とうし、所定温度で検出対象物と認識物とを結合させる。なお、ここで、検出対象物と、認識物は、前述した図１に説明した通りのものである。
ここでは、認識物と結合しない検出対象物以外の夾雑物を排液として処分し、さらにバルブ１０４を閉じてバルブ１０５を開き、洗浄溶液１０２を分離カラム１０８に注入して分離カラム１０８から夾雑物を取り除く。
【００２３】
次に、バルブ１０５を閉じてバルブ１０６及び反応容器バルブ１１２を開き、塩酸溶液１０３を分離カラム１０８に注入する。ここでは、塩酸溶液１０３を用いて、分離カラム１０８における溶液を適切なｐＨに調節し、検出対象物と認識物とを分離させる。続いて、検出対象物を含む溶液を反応溶液１２０に抽出する。なお、ここで、塩酸溶液１０３以外のものを用いることができるのは、図１について前述した通りである。
【００２４】
さらに、バルブ１０６及び反応容器バルブ１１２を閉じて再びバルブ１０５を開き、分離カラム１０８を洗浄する。このとき、塩酸溶液を洗い流すとともに、残留した夾雑物も洗い流すことができ、次の試料の処理に備えることができる。
抽出された検出対象物と標識物との結合を促進するために、ポンプ１０７を停止してポンプ１１８を作動させ、バルブ１０５を閉じてバルブ１１６を開き、水酸化ナトリウム溶液１１３を反応容器１２０に注入する。続いて、バルブ１１６を閉じてバルブ１１７を開き、標識物溶液１１４を反応容器１２０に注入する。  
そして、振とう機１２１によって反応容器１２０を振とうし、検出対象物と標識物とを所定温度で結合させる。
なお、ここでは、振とう機１２１を用いたが、攪拌機によって反応容器１２０を攪拌し、検出対象物と標識物とを結合させてもよい。
【００２５】
次に、ポンプ１１８を停止してポンプ１２４を動作させ、バルブ１１７を閉じてバルブ１２３を開き、検出対象物を含む溶液を検出部１２５に注入する。検出部１２５では、検出対象物に結合した標識物が発する信号を分析して環境試料中の検出対象物を検出する。
さらに、バルブ１２３を閉じてポンプ１１９を作動させ、反応容器１２０を複数回洗浄する。これによって、次の環境試料の処理に備えることができる。
【実施例】
【００２６】
次に、本発明に係る環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法を実施した実施例について、以下に説明する。
本実施例では、環境試料中においてクリプトスポリジウムを検出することを目的とした。分離カラムに充填した担体には、アミノ基を導入したポリスチレン製ボール（直径６．３ｍｍ、住友ベークライト）を使用した。また、担体に結合させた免疫抗体（認識物）は、マウス抗クリプトスポリジウムモノクローナル抗体（ＩｇＧ−３κ、バイオジェネシス）を使用した。なお、担体と免疫抗体は、グルタルアルデヒドを用いて共有結合させた。
【００２７】
試料溶液（仮想の環境試料）は、夾雑物の個数濃度が１０4オーダ（試料Ａ）のものと、分離カラムを用いて夾雑物の個数濃度が１０3オーダ（試料Ｂ）としたものとを用意した。それぞれの試料に所定量のクリプトスポリジウムを添加した。
次に、これらの試料に蛍光物質ＦＩＴＣ（ＥａｓｙＳｔａｉｎ、和光純薬）を有する標識物を添加し、抗原抗体反応を３７℃で３０分間行った。
【００２８】
次に、フローサイトメータ（ＦＡＣＳ  Ｃａｌｂｕｒ、ベクトンディッキンソン社）を用いて、蛍光標識したクリプトスポリジウムの前方散乱光強度と、ＦＩＴＣ蛍光強度と、６５０ｎｍの蛍光強度（ＦＬ３）とを測定した。ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒを用いた場合、光照射部の光源にはアルゴンレーザ（４８８ｎｍ）を使用し、検出する信号が、ＦＳＣ（前方散乱光）と、ＳＳＣ（側方散乱光）と、ＦＬ１（５３０±１５ｎｍ）と、ＦＬ２（５８５±２１ｎｍ）と、ＦＬ３（６５０ｎｍ以上）とに分光され、対応する光検出器でそれぞれの信号を検出した。
【００２９】
ＦＬ１はＦＩＴＣに由来する蛍光を表すため、ＦＩＴＣ標識抗体が結合したクリプトスポリジウムのＦＬ１強度は大きくなる。一方、ＦＬ３は渦鞭毛藻由来の光合成器官構成物質で蛍光物質であるＰｅｒＣＰ（ぺリジニンクロオフィルプロテイン）の蛍光を表すため、藻類のクロロフィルの検出として用いることができる。
ＦＳＣは粒子の粒径に相当するため、あらかじめクリプトスポリジウムを測定することで、クリプトスポリジウムの粒径に相当するＦＳＣ強度を把握した。蛍光標識したクリプトスポリジウムのＦＳＣ、ＦＬ１、ＦＬ３との強度をフローサイトメータを用いて測定してその比較を行った。各２次元ドットプロットにおいてクリプトスポリジウムが存在する領域３２、３４を設定した。
【００３０】
今回の測定ではＦＳＣ，ＦＬ１、ＦＬ３の測定結果を用いた。
図３は試料ＡのＦＳＣとＦＬ１の２次元ドットプロットを示し、図５は試料ＢのＦＳＣとＦＬ１の２次元ドットプロットを示す。また、図４は試料ＡのＦＬ３とＦＬ１の２次元ドットプロットを示し、図６は試料ＢのＦＬ３とＦＬ１の２次元ドットプロットを示す。
これによると、分離カラムを用いて夾雑物の個数濃度を下げた場合、擬陽性をとなる粒子は、クリプトスポリジウムが存在する領域３２、３４において低減して検出精度を向上させることがわかる。したがって、本発明の環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法によれば、検出対象物の検出精度を向上させることができることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明に係る環境試料中の検出対象物の精製方法の概要を説明する概略図である。
【図２】本発明に係る環境試料中の検出対象物の調整方法及び検出方法を実施するためのシステムについて、その一実施の形態を説明する概略図である。
【図３】本発明の実施例について、試料ＡのＦＳＣとＦＬ１の２次元ドットプロットを示すグラフである。
【図４】本発明の実施例について、試料ＢのＦＳＣとＦＬ１の２次元ドットプロットを示すグラフである。
【図５】本発明の実施例について、試料ＡのＦＬ３とＦＬ１の２次元ドットプロットを示すグラフである。
【図６】本発明の実施例について、試料ＢのＦＬ３とＦＬ１の２次元ドットプロットを示すグラフである。
【符号の説明】
【００３２】
１        分離カラム
２        検出対象物
３        認識物
４        担体
５        夾雑物
６        反応溶液
１００    システム
１０１    環境試料
１０２    塩酸溶液
１０３    洗浄溶液
１０４    バルブ
１０５    バルブ
１０６    バルブ
１０７    ポンプ
１０８    分離カラム
１０９    担体
１１０    ネット
１１１    振とう機
１１２    バルブ
１１３    水酸化ナトリウム溶液
１１４    標識物
１１５    洗浄溶液
１１６    バルブ
１１７    バルブ
１１８    ポンプ
１１９    ポンプ
１２０    反応容器
１２１    振とう機
１２２    恒温槽
１２３    バルブ
１２４    ポンプ
１２５    検出部
３２      クリプトスポリジウムが存在する領域
３４      クリプトスポリジウムが存在する領域
【図１】
2007232501.tif 000003
【図２】
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【図３】
2007232501.tif 000005
【図４】
2007232501.tif 000006
【図５】
2007232501.tif 000007
【図６】
2007232501.tif 000008