(57)【要約】【課題】  製剤に含まれるソウジュツ中に含まれるβ−オイデスモール含有量を、製剤中に配合されている添加物によって妨害されることなく測定する方法の提供。  【解決手段】  （ａ）ソウジュツ又はその抽出物、並びに（ｂ）メチルメチオニンスルホニウムクロライド、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、モノステアリン酸グリセリン、硬化油、タルク、ポリビニルアルコール、結晶セルロースから選ばれる１種以上の添加物を含有する製剤と、水及びヘキサンとを混合し、次いで該混合液のヘキサン層を分取し、ヘキサン層を液体クロマトグラフ法で測定することを特徴とする当該製剤に含まれるβ−オイデスモールの定量方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）ソウジュツ又はその抽出物、並びに（ｂ）メチルメチオニンスルホニウムクロライド、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、モノステアリン酸グリセリン、硬化油、タルク、ポリビニルアルコール、結晶セルロースから選ばれる１種以上の添加物を含有する製剤と、水及びヘキサンとを混合し、次いで該混合液のヘキサン層を分取し、ヘキサン層を液体クロマトグラフ法で測定することを特徴とする当該製剤に含まれるβ−オイデスモールの定量方法。
【請求項２】
前記製剤を、先ず水と混合処理し、次いでヘキサンと混合処理する請求項１記載のβ−オイデスモールの定量方法。
【請求項３】
分取したヘキサン層のヘキサンを留去した後、アセトニトリルを加えて液体クロマトグラフ法で測定する請求項１又は２記載のβ−オイデスモールの定量方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤に含まれるβ−オイデスモールを定量する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ソウジュツ（蒼朮：Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｅｓ  ｌａｎｃｅａ  Ｄｅ  Ｃａｎｄｏｌｌｅ）は、健胃作用、鎮静作用、降下作用、強壮作用、利尿作用、発汗作用等を有する活性成分を含有するキク科の植物である。ソウジュツ及びその抽出物は、医薬品としては健胃薬として、また漢方処方用薬としては消化健胃、止瀉整腸、利尿、鎮暈、保健強壮、鎮痛を目的とした処方に配合され製剤として市販されている。
【０００３】
ソウジュツ中の活性成分は多種多様であって、ヒネソール、β−オイデスモール及びアトラクチロディン等が挙げられる。そのため、ソウジュツ又はその抽出物中の活性成分含有量は、例えばβ−オイデスモールを指標にしてガスクロマトグラフ法で定量する方法（非特許文献１）が知られている。しかし、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤のガスクロマトグラフ法での定量は、メインピーク以外にも製剤中に配合されている添加物による妨害ピークが発生し、定量分析が極めて困難で、ソウジュツ中の正確な活性成分量を測定することは困難であった。
【非特許文献１】吉岡一郎ら，薬学雑誌，96（10）1229-1235（1976）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤中に含まれるβ−オイデスモールの含有量を、メチルメチオニンスルホニウムクロライド、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、モノステアリン酸グリセリン、硬化油、タルク、ポリビニルアルコール又は結晶セルロース等の製剤中に配合されている添加物によって妨害されることなく定量する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤中のβ−オイデスモールを迅速に、高感度に、正確に検出できる方法を鋭意検討したところ、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤を水及びヘキサンで処理した後、そのヘキサン層を液体クロマトグラフ法で測定すると、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤に含まれるβ−オイデスモールが、製剤中に配合されているメチルメチオニンスルホニウムクロライド、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、モノステアリン酸グリセリン、硬化油、タルク、ポリビニルアルコール又は結晶セルロース等の添加物による妨害を受けずに迅速に、高感度に、正確に定量できることを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は、（ａ）ソウジュツ又はその抽出物、並びに（ｂ）メチルメチオニンスルホニウムクロライド、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、モノステアリン酸グリセリン、硬化油、タルク、ポリビニルアルコール、結晶セルロースから選ばれる１種以上の添加物を含有する製剤と、水及びヘキサンとを混合し、次いで該混合液のヘキサン層を分取し、ヘキサン層を液体クロマトグラフ法で測定することを特徴とする当該製剤に含まれるβ−オイデスモールの定量方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤に含まれるβ−オイデスモールを、共存するメチルメチオニンスルホニウムクロライド、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、モノステアリン酸グリセリン、硬化油、タルク、ポリビニルアルコール又は結晶セルロース等の添加物の影響を受けて妨害されることなく、迅速に、高感度に、正確に定量することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明方法に用いられる製剤は、（ａ）ソウジュツ又はその抽出物、並びに（ｂ）メチルメチオニンスルホニウムクロライド、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、モノステアリン酸グリセリン、硬化油、タルク、ポリビニルアルコール、結晶セルロースから選ばれる１種以上の添加物を含有する製剤である。
ここで、ソウジュツは、その根茎等にβ−オイデスモール等の活性成分を有する。本発明の定量方法が適用される製剤としては、ソウジュツを粉砕又は粉末として含有する製剤、又はソウジュツの抽出物として含有する製剤がある。本発明の定量方法は、ソウジュツの抽出物を含有する製剤に適用するのが、定量精度の点でよく好ましい。
ソウジュツの抽出物は、ソウジュツの根茎等の粉砕物又はその粉末化物を溶媒で抽出したものである。ソウジュツの抽出物を含有する製剤には、該溶媒抽出物から溶媒を除去したソウジュツ乾燥エキスが好適に用いられている。
【０００９】
ソウジュツの抽出物の製造に使用する溶媒としては、水が好ましい。
【００１０】
本発明に用いられる製剤中へのソウジュツ又はその抽出物の配合量は、ソウジュツ乾燥エキス換算で１〜２質量％が好ましい。
【００１１】
このようにして得られたソウジュツの抽出物は、通常、溶媒を除去したソウジュツ乾燥エキスとして使用される。ソウジュツ乾燥エキスを調製する場合、凍結乾燥、減圧蒸留等の通常の溶媒除去方法が使用される。
【００１２】
ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤には、更にメチルメチオニンスルホニウムクロライド、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースカルシウム、トウモロコシデンプン、ステアリン酸マグネシウム、モノステアリン酸グリセリン、硬化油、タルク、ポリビニルアルコール、結晶セルロースから選ばれる１種以上の添加物が配合されている。これらは、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤中のβ−オイデスモールのガスクロマトグラフ法での測定において、妨害ピークとなり、正確な定量の妨げとなっている成分である。ここで、メチルメチオニンスルホニウムクロライドは製剤中に１〜１０質量％、特に２〜５質量％含有する場合が好ましい。ヒドロキシプロピルセルロースは製剤中に０．１〜３質量％、特に０．３〜１質量％含有する場合が好ましい。カルメロースカルシウムは製剤中に２〜１０質量％、特に４〜８質量％含有する場合が好ましい。トウモロコシデンプンは製剤中に０．１〜１質量％、特に０．３〜０．６質量％含有する場合が好ましい。ステアリン酸マグネシウムは製剤中に０．２〜２質量％、特に０．５〜１質量％含有する場合が好ましい。モノステアリン酸グリセリンは製剤中に０．１〜１質量％、特に０．２〜０．４質量％含有する場合が好ましい。硬化油は製剤中に２〜１０質量％、特に４〜８質量％含有する場合が好ましい。タルクは製剤中に０．１〜３質量％、特に０．３〜１質量％含有する場合が好ましい。ポリビニルアルコールは製剤中に１〜１０質量％、特に２〜５質量％含有する場合が好ましい。結晶セルロースは製剤中に５〜３０質量％、特に８〜１６質量％含有する場合が好ましい。
【００１３】
本発明の液体クロマトグラフ法による定量法では、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤は、先ず水及びヘキサンと混合し処理することを要する。この場合、（１）先ず水と混合処理し、次いでヘキサンを加えて混合処理する方法、（２）先ずヘキサンと混合処理し、次いで水を加えて混合処理する方法、（３）水及びヘキサンを同時に加えて混合処理する方法の何れでもよい。混合処理としては、ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤に含まれるβ−オイデスモールを水で処理抽出し、次いでヘキサン層に移行させる（１）の方法が好ましい。
【００１４】
ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤と水の混合比率は、質量比でソウジュツ又はその抽出物（ソウジュツ乾燥エキス換算）：水が１：１０〜１：５０００、更に１：５０〜１：１０００、特に１：１００〜１：５００であるのが好ましい。また、ヘキサンとの混合比率は、質量比でソウジュツ又はその抽出物（ソウジュツ乾燥エキス換算）：ヘキサンが１：１０〜１：５０００、更に１：５０〜１：１０００、特に１：１００〜１：５００であるのが好ましい。
【００１５】
使用する水とヘキサンの容量比は、水：ヘキサンが５：１〜１：５、更に２：１〜１：２が好ましく、特に１：１であるのが好ましい。
【００１６】
ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤と水及びヘキサンとの混合処理は、その混合物を撹拌、振盪、超音波等で処理する方法で行われる。混合処理時間は、２〜１２０分、更に５〜６０分、特に１０〜３０分が好ましい。混合処理温度は、０〜６０℃、更に１０〜４０℃、特に２０〜３０℃が好ましい。
【００１７】
次いで、混合処理した液は、必要により遠心分離等で固形物を分離処理した後、上層のヘキサン層を分取する。ヘキサン層のヘキサンを留去した後、アセトニトリルを加えて振り混ぜ、ろ過し、そのろ液を液体クロマトグラフ法の検体に供する。
【００１８】
このようにしてソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤を処理した後、常法に従って液体クロマトグラフ法、特に好ましくは高速液体クロマトグラフ法で、その活性成分であるβ−オイデスモール含有量を定量する。
【００１９】
好ましい液体クロマトグラフ定量条件としては、検出器は、紫外可視分光検出器又は多波長検出器が好ましく、その測定波長は１９５〜２１０ｎｍが好ましい。また、紫外吸収スペクトルの測定波長範囲は１９０〜２５０ｎｍが好ましい。
カラムは、内径約３〜５ｍｍで、長さ約５〜２５ｃｍのステンレス管に平均粒子径３〜７μｍの液体クロマトグラフ用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填したものが好ましく、カラム温度は、２５〜６０℃付近の一定温度が好ましく、更に３０〜５０℃付近の一定温度が好ましく、特に３５〜４５℃が好ましい。
移動相は、アセトニトリル、メタノール、水又はその混液が用いられ，特にアセトニトリルと水の混液が好ましい。
【００２０】
また、本発明のβ−オイデスモールの定量方法を適用するソウジュツ又はソウジュツ抽出物を含有する製剤には、前記成分の他、通常これらの製剤に使用される成分を適宜その使用目的により配合されていてもよい。例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、着色剤、矯味剤等を例示することができる。賦形剤としては、乳糖、デンプン類、蔗糖、マンニトール、軽質無水ケイ酸、リン酸水素カルシウム等が挙げられる。結合剤としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ゼラチン、アルファー化デンプン、ポリビニルピロリドン、プルラン等が挙げられる。崩壊剤としては、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、カルボキシメチルスターチナトリウム等が挙げられる。着色剤としては、タール色素、三二酸化鉄等が挙げられる。矯味剤としてはステビア、アスパルテーム、クエン酸、香料等が挙げられる。
ソウジュツ又はその抽出物を含有する製剤の剤型としては、散剤、顆粒剤、錠剤、チュアブル剤、フィルムコーティング錠、糖衣錠等の各剤型が挙げられる。
【実施例】
【００２１】
以下に実施例により本発明を具体的に詳述するが、本発明はこれらに制限されるものではない。
【００２２】
実施例１
ソウジュツ乾燥エキス５０ｍｇ、メチルメチオニンスルホニウムクロライド １５０ｍｇ、ヒドロキシプロピルセルロース ２４ｍｇ、カルメロースカルシウム ２１６ｍｇ、トウモロコシデンプン １４ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム ２９ｍｇ、モノステアリン酸グリセリン １０．０８ｍｇ、硬化油２２１．３ｍｇ、タルク ２６．４ｍｇ、炭酸水素ナトリウム ９００ｍｇ、水酸化マグネシウム １００ｍｇ、沈降炭酸カルシウム  １２００ｍｇ、ポリビニルアルコール（部分けん化物）１２０ｍｇ、結晶セルロース ５３９．２２ｍｇを含有する錠剤（１錠６００ｍｇを６錠分）を粉末とし、水１５ｍＬを加えて１５分間振り混ぜた後、ヘキサン１５ｍＬを加えて１５分間振り混ぜ、次いで遠心分離を行って上層を分離した。なお、混合処理温度は室温であった。次いで該上層８ｍＬからヘキサンを減圧留去して得た残留物に、アセトニトリル１ｍＬを加えて振り混ぜた後、ろ過し、ろ液を液体クロマトグラフ法での測定検体溶液とした。
【００２３】
比較例１
実施例１で使用したと同種の錠剤に、ヘキサン１５ｍＬを加えて１５分間振り混ぜた後、遠心分離して得た上澄液８ｍＬのヘキサンを減圧留去した。次いで残留物にアセトニトリル１ｍＬを加え，液体クロマトグラフ法での測定検体溶液とした。
【００２４】
比較例２
実施例１のヘキサン１５ｍＬに代えて、酢酸エチル１５ｍＬを用いて同様にして液体クロマトグラフ法での測定検体溶液を作成した。
【００２５】
標準溶液の作成
β−オイデスモール標準品２．５ｍｇをヘキサンに溶解し２５ｍＬとした。この溶液５ｍＬをとり、ヘキサンを減圧留去した後、その残留物をアセトニトリル１ｍＬに溶解し、標準溶液とした。
【００２６】
測定検体溶液及び標準溶液のそれぞれ２０μＬを、次の条件で液体クロマトグラフ法で測定を行った。
測定条件
検出器：多波長検出器（クロマトグラム測定波長；２０３ｎｍ、吸収スペクトル測定波長範囲；１９０〜３００ｎｍ）。
カラム：内径４．６ｍｍ、長さ１５ｃｍのステンレス管に平均粒子径５μｍの液体クロマトグラフ用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填したもの。ただし、比較例２では長さ２５ｃｍの同種カラムを使用した。
カラム温度：４０℃付近の一定温度。
移動相：アセトニトリル／水（６：４）
流量：１．０ｍＬ／分
なお、標準溶液２０μＬについて、上記条件で操作したときの、β−オイデスモールのピークの理論段数及びシンメトリー係数は、それぞれ３５００段以上、０．７５〜１．５の範囲内であった。
【００２７】
測定検体溶液から得られた液体クロマトグラムのピークの一つは、標準溶液から得られたβ−オイデスモールのピークと保持時間（約１２分）が一致した（図１）。本発明の測定方法は、製剤中に配合されている添加物の影響を受けず、高精度でソウジュツ乾燥エキス中のβ−オイデスモールを検出することができた。これに対して、比較例１では、β−オイデスモールの回収率が約４８％と悪かった（図２）。比較例２で調製した測定検体溶液の液体クロマトグラフ法での測定では、添加物の妨害ピークがあって、製剤中に配合されている添加物の影響を受けた（図３）。なお、比較例２では、カラム長さが異なるため保持時間２１分である。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】実施例１の液体クロマトグラフ法での測定結果を示す図である。
【図２】比較例１の液体クロマトグラフ法での測定結果を示す図である。
【図３】比較例２の液体クロマトグラフ法での測定結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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