(57)【要約】【課題】ゲンチアナファレリの抽出物を含有する抗酸化剤及び抗老化剤、並びに皮膚化粧料及び美容用飲食品の提供。【解決手段】ゲンチアナファレリの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを有する態様が好ましい。ゲンチアナファレリの抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。ＩＶ型コラーゲン産生促進作用及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを有する態様が好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゲンチアナファレリの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを有する請求項１に記載の抗酸化剤。
【請求項３】
ゲンチアナファレリの抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤。
【請求項４】
ＩＶ型コラーゲン産生促進作用及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを有する請求項３に記載の抗老化剤。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載のゲンチアナファレリの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項６】
請求項１から４のいずれかに記載のゲンチアナファレリの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美容用飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ゲンチアナファレリの抽出物を含有する抗酸化剤及び抗老化剤、並びにこれらを含む皮膚化粧料及び美容用飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、生体成分を酸化させる要因として、活性酸素が注目されており、その生体への悪影響が問題となっている。
活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、スーパーオキサイド〔即ち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）等〕がある。これら活性酸素は食細胞の殺菌機構にとって必須なものであり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な働きを果たしているが、活性酸素の過剰な生成は生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃し、各種疾患を誘発する。即ち、活性酸素は、コラーゲン等の生体組織を分解、変性あるいは架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成する。このような活性酸素によって引き起こされる障害が、皮膚のしわ形成や皮膚の弾力性低下等の老化の原因の一つになるものと考えられている。
したがって、活性酸素や生体ラジカルの発生を阻害又は抑制することにより、皮膚の老化を防止及び改善を図ることができると考えられる。
そこで、活性酸素消去物質やラジカル消去物質を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされており、例えばトゲナシの果汁（特許文献１参照）、メリッサ、エンメイソウ、シラカバ、南天実、キナ、又はエイジツ（特許文献２参照）、ウラジロカシ又はシラカシ（特許文献３参照）、アスチルビン、タキシフォリン等のフラボノイド（特許文献４参照）、藤茶（特許文献５参照）などについて有効性が確認されている。
【０００３】
また、皮膚は角層、表皮、基底膜及び真皮から構成されており、基底膜は表皮と真皮との境界部にあって、表皮と真皮とを繋ぎ止めるだけでなく、皮膚機能の維持に重要な役割を果たしていることが知られている（非特許文献１参照）。このような基底膜の主要骨格はＩＶ型コラーゲンからなる網目構造をしている。また、基底膜と表皮の境界に存在し、基底膜と表皮とを繋ぎとめているのがラミニン５を主成分とする各種糖蛋白質である。
若い皮膚においては、基底膜の働きにより表皮と真皮との相互作用が恒常性を保つことで水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等のある種の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、基底膜の主要構成成分であるＩＶ型コラーゲン及びラミニン５は分解や変質を起こし、基底膜構造が破壊されてしまう（非特許文献２参照）。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質は異常剥離を始め、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このような皮膚の老化に伴う変化、即ち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、基底膜成分の減少、基底膜の構造変化が関与している。
したがってＩＶ型コラーゲン及びラミニン５の産生を亢進することによって基底膜構造の再構築を誘導し、皮膚機能を改善する物質の提供が望まれている。
ＩＶ型コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、例えば加水分解カゼイン、プレエキス、ブナの芽エキス、エリスリナエキス、可溶性卵殻膜、カッコンエキス、又は西洋キズタエキス（特許文献６参照）、サポニン又はサポゲノール（特許文献７参照）等が報告されている。
一方、ラミニン５産生促進作用を有するものとしては、例えばカッコン抽出物、カンゾウ抽出物又はそのフラボノイド画分、ヒオウギ抽出物、ジタノキ抽出物、イボツヅラフジ抽出物、コロハ抽出物、又は乳清抽出物（特許文献８参照）、オノニス抽出物、メリロート抽出物、モヤシ抽出物、又はアズキ抽出物（特許文献９参照）、大豆抽出物（特許文献１０参照）等が報告されている。
【０００４】
しかしながら、安全性及び生産性に優れ、日常的に使用可能であり、かつ安価でありながら、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、過酸化水素消去作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、及びラミニン５産生促進作用を有する天然系の各種製剤に対する需要者の要望は極めて強く、未だ十分満足し得るものが提供されていないのが現状である。
【０００５】
【特許文献１】特開平３−８３５４８号公報
【特許文献２】特開平３−１５７３３４号公報
【特許文献３】特開平５−３１６９６３号公報
【特許文献４】特開平６−６５０７４号公報
【特許文献５】特開２００１−９７８７３号公報
【特許文献６】特開２００４−１８４７１号公報
【特許文献７】特表２００２−５１６８３７号公報
【特許文献８】特開２００３−１３７７６７号公報
【特許文献９】特開２００３−１３７７６８号公報
【特許文献１０】特開２００４−２１７６１８号公報
【非特許文献１】Ｍａｒｉｎｋｏｖｉｃｈ  ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９９２  １９９：６９５−７０３
【非特許文献２】Ｌａｖｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  １９７９  ７３：  ５９−６６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、スーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかに基づく優れた活性酸素消去作用を有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗酸化剤、及び該抗酸化剤を配合した皮膚化粧料、並びに美容用飲食品を提供することを目的とする。
また、本発明は、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用、及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを有し、安全性が高く、原料の入手が容易な天然系抗老化剤、及び該抗老化剤を配合した皮膚化粧料並びに美容用飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記課題を解決するため本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、ゲンチアナファレリの抽出物が、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを有し、皮膚の老化を予防及び改善し得る抗酸化剤として有用であること、また、優れたＩＶ型コラーゲン産生促進作用、及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを有する抗老化剤としても有用であることを、それぞれ知見した。
【０００８】
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  ゲンチアナファレリの抽出物を含有することを特徴とする抗酸化剤である。
＜２＞  ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを有する前記＜１＞に記載の抗酸化剤である。
＜３＞  ゲンチアナファレリの抽出物を含有することを特徴とする抗老化剤である。
＜４＞  ＩＶ型コラーゲン産生促進作用及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを有する前記＜３＞に記載の抗老化剤である。
＜５＞  前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載のゲンチアナファレリの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする皮膚化粧料である。
＜６＞  前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載のゲンチアナファレリの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美容用飲食品である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の抗酸化剤によると、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを通じて活性酸素や生体ラジカルの発生を阻害することにより皮膚の老化を防止又は改善することができる。
本発明の抗老化剤によると、優れたＩＶ型コラーゲン産生促進作用及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚のシワや弾力の低下の防止及び改善することができる。
また、本発明の抗酸化剤、及び抗老化剤は、使用感と安全性に優れているので皮膚化粧料に配合したり、美容用飲食品に添加して用いるのに好適なものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
（抗酸化剤及び抗老化剤）
本発明の抗酸化剤及び抗老化剤は、ゲンチアナファレリの抽出物を含有してなり、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。
前記抗酸化剤は、抗酸化作用として、ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを有している。
前記抗老化剤は、抗老化作用として、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを有している。
【００１１】
前記ゲンチアナファレリ（学名：Ｇｅｎｔｉａｎａ  ｆａｒｒｅｒｉ  Ｂａｌｇ．ｆ．）はリンドウ科のほふく性多年草であって、茎は先端部で分枝して立ち、長さ１０〜１５ｃｍ、葉は線状披針形で、長さ３〜４ｃｍ、対生葉は基部で合着する。花は基部から放射状に出た茎の頂端に単生し、花冠は狭鐘形で長さ６ｃｍ程度である。花色は鮮青色で下部は白色、緑青色の条斑が入る。開花期は７〜９月である。ゲンチアナファレリは中国西北部、チベット原産の植物であり、これらの場所から容易に入手可能である。
【００１２】
前記ゲンチアナファレリの抽出物における抗酸化作用及び抗老化作用を有する物質の詳細については不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。なお、前記ゲンチアナファレリの抽出物には、ゲンチアナファレリの抽出液、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１３】
前記ゲンチアナファレリの抽出原料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ゲンチアナファレリの葉部、茎部、花部、種子、又はこれらを含む地上部、根部を用いることができるが、最も好適なものは地上部（葉部、茎部花部、種子、又はこれらの混合部位）である。
【００１４】
前記抽出原料であるゲンチアナファレリは、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。なお、前記ゲンチアナファレリは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。なお、脱脂等の前処理を行うことにより、ゲンチアナファレリの極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１５】
前記抽出に用いる溶媒としては、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒を室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
前記抽出溶媒として使用し得る水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、前記抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１６】
前記親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。
なお、前記水と親水性有機溶媒との混合溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部添加することが好ましい。多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましい。
【００１７】
本発明において、抽出原料であるゲンチアナファレリから抗酸化作用及び抗老化作用の少なくともいずれかを有する物質を抽出するにあたって特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の抽出装置を用いて抽出することができる。
【００１８】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽内に、抽出原料としてのゲンチアナファレリの地上部を投入し、更に必要に応じて時々攪拌しながら、３０分間〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）である。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃にて１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃にて３０分間〜４時間程度である。なお、溶媒で抽出することにより得られる抽出液は、抽出溶媒が安全性の高いものであれば、そのまま本発明の抗酸化剤及び抗老化剤として用いることができる。
【００１９】
得られるゲンチアナファレリの抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２０】
なお、得られたゲンチアナファレリの抽出液はそのままでも抗酸化剤及び抗老化剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。また、前記ゲンチアナファレリは特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。なお、精製は、具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２１】
本発明の抗酸化剤は、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、及び過酸化水素消去作用の少なくともいずれかを通じて活性酸素や生体ラジカルの発生を阻害することにより皮膚の老化を防止又は改善することができると共に、高い安全性を有している。
本発明の抗老化剤は、優れたＩＶ型コラーゲン産生促進作用及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを通じて、皮膚のシワや弾力の低下の防止及び改善に有用であると共に、高い安全性を有している。
したがって、本発明の抗酸化剤、及び抗老化剤は、上述した抗酸化作用、及び抗老化作用の少なくともいずれかを有し、使用感と安全性に優れているので、特に以下の本発明の皮膚化粧料及び美容用飲食品に配合するのに好適なものである。
【００２２】
（皮膚化粧料）
本発明の皮膚化粧料は、本発明の抗酸化剤及び抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
【００２３】
ここで、前記皮膚化粧料の用途としては、特に制限はなく、各種用途から適宜選択することができ、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼント、などが挙げられる。
【００２４】
前記抗酸化剤又は前記抗老化剤の前記皮膚化粧料全体に対する配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、前記ゲンチアナファレリの抽出物に換算して０．０００１〜１０質量％が好ましく、０．００１〜１質量％がより好ましい。
【００２５】
前記皮膚化粧料は、更に必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、その皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他の成分を添加することができる。
前記その他の成分としては、抗酸化作用、及び抗老化作用の妨げにならない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択した成分が挙げられ、例えば、収斂剤、殺菌剤、抗菌剤、紫外線吸収剤、細胞賦活剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料、などが挙げられる。これらの成分は、前記ゲンチアナファレリ抽出物と共に併用した場合、相乗的に作用して、通常期待される以上の優れた作用効果をもたらすことがある。
【００２６】
本発明の皮膚化粧料は、皮膚に使用した場合に高い安全性を有し、優れたスーパーオキサイド消去作用、ラジカル消去作用、一重項酸素消去作用、過酸化水素消去作用、ＩＶ型コラーゲン産生促進作用及びラミニン５産生促進作用の少なくともいずれかを効果的に発揮して、皮膚のシワや弾力の低下の防止及び改善、乾燥による肌荒れ防止などに有用である。
【００２７】
（美容用飲食品）
本発明の美容用飲食品は、本発明の前記抗酸化剤及び抗老化剤の少なくともいずれかを有効成分として含有してなり、更に必要に応じて適宜選択したその他の成分を含有してなる。
ここで、前記美容用飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品、などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
【００２８】
前記美容用飲食品としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の健康食品や栄養補助食品；錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。
【００２９】
前記その他の成分としては、前記美容用飲食品を製造するに当たって通常用いられる補助的原料又は添加物、などが挙げられる。
前記原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選定することができるが、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤、などが挙げられる。
【００３０】
前記美容用飲食品における本発明の前記抗酸化剤又は前記抗老化剤の添加量は、対象となる美容用飲食品の種類に応じて異なり一概には規定することができないが、美容用飲食品本来の味を損なわない範囲で添加すればよく、各種対象美容用飲食品に対し、通常０．００１〜５０質量％が好ましく、０．０１〜２０質量％がより好ましい。また、顆粒、錠剤又はカプセル形態の美容用飲食品の場合には、通常０．０１〜１００質量％が好ましく、５〜１００質量％がより好ましい。なお、ゲンチアナファレリの抽出物の摂取量は、成人１日当たり約１〜１０００ｍｇが適当である。
【００３１】
本発明の美容用飲食品は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分であるゲンチアナファレリの抽出物の働きによって、抗酸化作用及び抗老化作用の少なくともいずれかを極めて効果的に発揮させることができる。
【００３２】
なお、本発明の抗酸化剤、抗老化剤、皮膚化粧料、及び美容用飲食品は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３３】
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。
【００３４】
（製造例１）
−ゲンチアナファレリの水抽出物の製造−
抽出原料としてゲンチアナファレリの地上部の粉砕物２００ｇを、水２０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、８０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３５】
（製造例２）
−ゲンチアナファレリの５０質量％エタノール抽出物の製造−
抽出原料としてゲンチアナファレリの地上部の粉砕物２００ｇを、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）２０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、８０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３６】
（製造例３）
−ゲンチアナファレリのエタノール抽出物の製造−
抽出原料としてゲンチアナファレリの地上部の粉砕物２００ｇを、エタノール２０００ｍＬに投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、８０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下に濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥して抽出物（粉末状）を得た。得られた抽出物の収率を表１に示す。
【００３７】
【表１】
2007210962.tif 000002
【００３８】
（実施例１）
−スーパーオキサイド消去試験（ＮＢＴ法）−
被験試料として、製造例１〜３で得られた各抽出物について、下記の試験法によりスーパーオキサイド消去作用を試験した。
３ｍＭキサンチン、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．５ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ溶液、０．７５ｍＭのニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）各０．１ｍＬと０．０５Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍｌを試験管にとり、これに各試料溶液０．１ｍＬを添加し、２５℃で１０分間放置した。次いでキサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く攪拌し、２５℃で２０分間静置した。その後、６ｍＭ塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。以下、この吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」という。
また、同様の操作と吸光度の測定を、酵素溶液を添加せずに行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」という。
また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度」という。
また、酵素溶液を添加せず、更に試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。このとき測定した吸光度を「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」という。
そして、測定された各吸光度より、下記数式１によりスーパーオキサイド消去率を求めた。
＜数式１＞
スーパーオキサイド消去率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
ただし、前記数式１中、「Ａ」は「試料溶液添加、酵素溶液添加時の吸光度」、「Ｂ」は「試料溶液添加、酵素溶液無添加時の吸光度」、「Ｃ」は「試料溶液無添加、酵素溶液添加時の吸光度」、「Ｄ」は「試料溶液無添加、酵素溶液無添加時の吸光度」を表す。
【００３９】
次いで、試料濃度を段階的に減少させて上記消去率の測定を行い、スーパーオキサイドの消去率が５０％になる試料濃度（ｐｐｍ；μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表２に示す。
【表２】
2007210962.tif 000003
表２の結果から、製造例１〜３のゲンチアナファレリの抽出物がスーパーオキサイド消去作用を有することが確認できた。
【００４０】
（実施例２）
−ＤＰＰＨに対するラジカル消去試験−
被験試料として、製造例１〜３の各抽出物について、下記の試験法により非常に安定なラジカルである1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl  radical（ＤＰＰＨ）を使用してラジカル消去作用を試験した。
１．５×１０−４Ｍ  ＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに各試料溶液３ｍＬを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置した。その後、波長５２０ｎｍの吸光を測定した。
コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液を溶解した溶媒を用いて同様に操作し、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えたのち直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。測定された各吸光度より、下記数式２によりラジカル消去率（％）を算出した。
＜数式２＞
ラジカル消去率（％）＝｛1−（Ｂ−Ｃ）／Ａ｝×１００
ただし、前記数式２中、「Ａ」は「コントロールの吸光度」、「Ｂ」は「試料溶液を添加した場合の吸光度」、「Ｃ」は「ブランクの吸光度」を表す。
【００４１】
次いで、試料濃度を段階的に減少させて上記消去率の測定を行い、ＤＰＰＨラジカルの消去率が５０％になる試料濃度（ｐｐｍ；μｇ/ｍｌ）を内挿法により求めた。結果を表３に示す。
【表３】
2007210962.tif 000004
表３の結果から、製造例１〜３のゲンチアナファレリの抽出物がＤＰＰＨに対するラジカル消去作用を有することが確認できた。
【００４２】
（実施例３）
−一重項酸素消去試験−
被験試料として、製造例１〜３で得られた各抽出物について、下記の試験法により一重項酸素消去作用を試験した。
透明ガラス瓶（１０ｍＬ容）中で２質量％赤血球懸濁液５ｍＬ、各試料を所定濃度で含むｐＨ７．４の等張リン酸緩衝液５ｍＬ、及び光増感剤（１０ｍＭヘマトポルフイリン−２０ｍＭ水酸化ナトリウム溶液）０．０１ｍＬを混合した。得られた溶液をメリーゴーランド上、７．５Ｗハロゲンランプで３５分間均一に照射して一重項酸素（１Ｏ２）を発生させ、赤血球の溶血を生じさせた。この反応溶液１ｍＬを採取し、等張リン酸緩衝液２ｍＬを加えて混合後、４℃、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離を行った。次いで、上清を採取し、波長５４０ｎｍの吸光度を測定した。別に、赤血球を一部溶血させた上記反応溶液１ｍＬをとり、これに蒸留水２ｍＬを加えて完全に溶血させたものをコントロールとし、同様に吸光度測定を行った。
そして、測定された吸光度から、下記数式３により一重項酸素消去率を求めた。
＜数式３＞
一重項酸素消去率（％）＝（1−Ｂ／Ａ）×１００
ただし、前記数式３中、「Ａ」は「コントロールの吸光度」、「Ｂ」は「反応溶液上清の吸光度」を表す。
【００４３】
次いで、試料濃度を段階的に減少させて上記消去率の測定を行い、一重項酸素の消去率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表４に示す。
【表４】
2007210962.tif 000005
表４の結果から、製造例１〜３のゲンチアナファレリの抽出物が一重項酸素消去作用を有することが確認できた。
【００４４】
（実施例４）
−過酸化水素消去試験−
被験試料として、製造例１〜３で得られた各抽出物について、下記の試験法により過酸化水素消去作用を試験した。
過酸化水素の標準溶液（濃度１．５ｍＭ）１０μＬに、各試料溶液１０μＬを加え、３７℃で２０分間インキュベーションした後、発色試薬〔ＤＡ−６４（和光純薬株式会社製）を１０ｍＭ、トライトンＸ−１００を０．５質量％含む０．１Ｍ  ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）にペルオキシダーゼ溶液（１００ｕｎｉｔ／ｍＬ、和光純薬株式会社製）１ｍＬを加え、全量を１００ｍＬに調整したもの〕２．９８ｍＬを添加し、３７℃で５分間インキュベーションした後、波長７２７ｎｍにおける吸光度を測定した。
同様の操作と吸光度測定を、過酸化水素の標準溶液を添加せずに行った。また、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行い、下記数式４により過酸化水素の消去率を求めた。
＜数式４＞
過酸化水素消去率（％）＝{１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）}×１００
ただし、前記数式４中、Ａは過酸化水素標準溶液添加，試料溶液添加時の吸光度、Ｂは過酸化水素標準溶液無添加，試料溶液添加時の吸光度、Ｃは過酸化水素標準溶液添加，試料溶液無添加時の吸光度、Ｄは過酸化水素標準溶液無添加，試料溶液無添加時の吸光度を表す。
【００４５】
次いで、試料濃度を段階的に減少させて上記過酸化水素消去率の測定を行い、過酸化水素消去率が５０％になる試料濃度（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。結果を表５に示す。
【表５】
2007210962.tif 000006
表５の結果から、製造例１〜３のゲンチアナファレリの抽出物が過酸化水素消去作用を有することが確認できた。
【００４６】
（実施例５）
−ＩＶ型コラーゲン産生促進作用試験−
被験試料として、製造例１〜３の各抽出物について、以下のようにしてＩＶ型コラーゲン産生促進作用を試験した。
ヒトの線維芽細胞を９６穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下にて、各試料添加培地（試料濃度：４００μｇ／ｍｌ）で７２時間培養した後、上清１００μｌをエライザプレートに移し換え一晩４℃、でプレートに吸着させたのち、溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１質量％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトコラーゲンタイプＩＶ抗体（ウサギＩｇＧ、ノボテック社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識抗ウサギＩｇＧ抗体と反応させたのち、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
ＩＶ型コラーゲン産生促進率は、標準品を用いて上記測定を行い、検量線を作成し、試料無添加時のＩＶ型コラーゲン産生量を１００％として算出した。各試料のＩＶ型コラーゲン産生促進率（％）を表６に示す。
【００４７】
【表６】
2007210962.tif 000007
表６の結果から、製造例１〜３のゲンチアナファレリの抽出物がヒトの線維芽細胞のＩＶ型コラーゲン産生を促進する作用を有することが確認できた。
【００４８】
（実施例６）
−ラミニン５産生促進作用試験−
被験試料として、製造例１〜３の各抽出物について、以下のようにしてラミニン５産生促進作用を試験した。
ヒトの角化細胞を２４穴プレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下にて、各試料添加培地（試料濃度：５０μｇ／ｍＬ）で２４時間培養した後、上清１００μＬをエライザプレートに移し換え一晩４℃でプレートに吸着させたのち、溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行った。その後、１質量％ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理緩衝液で、ブロッキング操作を行った。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、抗ヒトラミニン５抗体（マウスＩｇＧ、ケミコン社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、ビオチン標識抗体マウスＩｇＧ（アマシャムバイオサイエンス社製）を反応させた。溶液を捨て、０．０５質量％トゥイーン−２０を含むリン酸生理緩衝液（ＰＢＳ−Ｔ）にて、洗浄を行い、アビジン−ビオチン化ペルオキシダーゼ複合体と反応させたのち、同様の洗浄操作を行い、発色反応を行った。
ラミニン５産生促進率は、試料無添加時における吸光度を１００％として算出した。各試料のラミニン５産生促進率（％）を表７に示す。
【００４９】
【表７】
2007210962.tif 000008
表７の結果から、製造例１〜３のゲンチアナファレリの抽出物が角化細胞のラミニン５産生を促進する作用を有することが確認できた。
【００５０】
（配合実施例１）
下記組成の乳液を常法により製造した。
・ゲンチアナファレリの水抽出物（製造例１）・・・０．０１ｇ
・ホホバオイル・・・４．０ｇ
・プラセンタエキス・・・０．１ｇ
・オリーブオイル・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．５ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・２．０ｇ
・グリチルレチン酸ステアリル・・・０．１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・ヒノキチオール・・・０．１５ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００５１】
（配合実施例２）
下記組成のクリームを常法により製造した。
・ゲンチアナファレリの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０５ｇ
・アロエエキス・・・０．１ｇ
・流動パラフィン・・・５．０ｇ
・サラシミツロウ・・・４．０ｇ
・スクワラン・・・１０．０ｇ
・セタノール・・・３．０ｇ
・ラノリン・・・２．０ｇ
・ステアリン酸・・・１．０ｇ
・オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ）・・・１．５ｇ
・モノステアリン酸グリセリル・・・３．０ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・６．０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・１．５ｇ
・香料・・・０．１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００５２】
（配合実施例３）
下記組成のクリームを常法により製造した。
・ゲンチアナファレリの水抽出物（製造例１）・・・０．０５ｇ
・エイジツエキス・・・０．１ｇ
・モノステアリン酸ポリエチレングリコール・・・２．０ｇ
・自己乳化型モノステアリン酸グリセリン・・・５．０ｇ
・ステアリン酸・・・２．０ｇ
・セタノール・・・２．０ｇ
・スクワラン・・・１２．０ｇ
・マカダミアナッツ油・・・３．０ｇ
・メチルポリシロキサン・・・０．２ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・油溶性甘草エキス・・・０．１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・７．０ｇ
・キサンタンガム・・・０．２ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００５３】
（配合例４）
下記組成の美容液を常法により製造した。
・ゲンチアナファレリの水抽出物（製造例１）・・・０．０１ｇ
・カミツレエキス・・・０．１ｇ
・キサンタンガム・・・０．３ｇ
・ヒドロキシエチルセルロース・・・０．１ｇ
・カルボキシビニルポリマー・・・０．１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・グリセリン・・・２．０ｇ
・水酸化カリウム・・・０．２５ｇ
・香料・・・０．０１ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・エタノール・・・２．０ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００５４】
（配合実施例５）
下記組成の美容液を常法により製造した。
・ゲンチアナファレリのエタノール抽出物（製造例３）・・・０．０５ｇ
・クワエキス・・・０．１ｇ
・カルボキシビニルポリマー・・・０．２ｇ
・キサンタンガム・・・０．２ｇ
・ヒアルロン酸ナトリウム・・・０．１ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３．０ｇ
・グリセリン・・・６．０ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・３．０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・Ｌ−アルギニン・・・０．１５ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００５５】
（配合実施例６）
下記組成のパックを常法により製造した。
・ゲンチアナファレリのエタノール抽出物（製造例３）・・・０．０５ｇ
・ヨクイニンエキス・・・０．１ｇ
・ポリビニルアルコール・・・１５ｇ
・ポリエチレングリコール・・・３ｇ
・プロピレングリコール・・・７ｇ
・エタノール・・・１０ｇ
・パラオキシ安息香酸メチル・・・０．０５ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・香料・・・０．０５ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００５６】
（配合実施例７）
下記組成の洗浄用化粧水を常法により製造した。
・ゲンチアナファレリのエタノール抽出物（製造例３）・・・０．０５ｇ
・ラベンダーエキス・・・０．１ｇ
・１，３−ブチレングリコール・・・４．０ｇ
・グリセリン・・・４．０ｇ
・ジプロピレングリコール・・・２．０ｇ
・ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンデシルテトラデシルエーテル・・・０．７ｇ
・エタノール・・・３．０ｇ
・グリチルリチン酸ジカリウム・・・０．１ｇ
・香料・・・０．００１ｇ
・防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル）・・・０．１５ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００５７】
（配合実施例８）
下記組成の乳液を常法により製造した。
・ゲンチアナファレリの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・０．０５ｇ
・ローズマリーエキス・・・０．１ｇ
・モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン・・・１．０ｇ
・テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット・・・１．５ｇ
・親油型モノステアリン酸グリセリン・・・１．０ｇ
・ステアリン酸・・・０．５ｇ
・ベヘニルアルコール・・・１．５ｇ
・パルミチン酸セチル・・・０．５ｇ
・スクワラン・・・１０．０ｇ
・メチルポリシロキサン・・・０．５ｇ
・香料・・・適量
・１，３−ブチレングリコール・・・７．０ｇ
・グリチルレチン酸ステアリル・・・０．１ｇ
・キサンタンガム・・・０．１ｇ
・精製水・・・残部（全量を１００ｇとする）
【００５８】
（配合実施例９）
下記の混合物を打錠して,錠剤状栄養補助食品を製造した。
・ゲンチアナファレリの水抽出物（製造例１）・・・５０ｇ
・粉糖（ショ糖）・・・１７８ｇ
・ソルビット・・・１０ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
【００５９】
（配合実施例１０）
下記の混合物を顆粒状に形成して栄養補助食品を製造した。
・ゲンチアナファレリの５０質量％エタノール抽出物（製造例２）・・・３４ｇ
・ビートオリゴ糖・・・１０００ｇ
・ビタミンＣ・・・１６７ｇ
・グリセリン脂肪酸エステル・・・１２ｇ
・ステビア抽出物・・・１０ｇ
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明の抗酸化剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを配合した皮膚化粧料は、皮膚のシワや弾力の低下の防止及び改善、肌荒れの予防、肌荒れの防止に有であり、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー、リップクリーム、口紅、入浴剤、アストリンゼントなどに幅広く用いられる。
また、本発明の抗酸化剤、及び抗老化剤の少なくともいずれかを添加した美容用飲食品は、経口摂取によっても優れた抗酸化作用及び抗老化作用を有し、安全性にも優れているので、例えば、健康食品、栄養補助食品などの各種美容用飲食品に幅広く用いられる。