(57)【要約】【課題】  少ない部品点数で効率よく温調可能な光学定盤、及び、この光学定盤を備えたバイオセンサーを提供する。【解決手段】  光学定盤８０は、第１傾斜面８２Ａ及び第２傾斜面８２Ｂにより山型が形成される定盤本体８０Ａを備えている。定盤本体８０Ａは、１つの金属ブロックで構成されている。定盤本体８０Ａの底部は、蓋部材８４が切欠き凹部８０Ｂに嵌合されて構成されている。定盤本体８０Ａの切欠き凹部８０Ｂには、温調用流路８６を構成する凹溝Ｕが形成されている。凹溝Ｕは、平坦面８２Ｃの長手方向に沿って直線状とされ、端部内側で逆方向に折り返す形状とされている。この凹溝Ｕの開放側（下側）が蓋部材８４に覆われて、温調用流路８６が構成されている。【選択図】  図９
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
光を出射する光学部材を配置する光学部材配置部と、前記光学部材から出射された光を受光する受光部材を配置する受光部材配置部と、が形成された定盤本体と、
前記定盤本体自体で構成され、液体の供給口及び排出口と連通された温調用流路と、
を備えた光学定盤。
【請求項２】
前記温調用流路は、前記定盤本体に形成された凹溝と、前記凹溝の開放面を覆う蓋部材と、で構成されていることを特徴とする請求項１に記載の光学定盤。
【請求項３】
前記温調用流路は、前記定盤本体に穿孔された複数本の貫通路と、前記定盤本体の外側に取り付けられ前記貫通路の隣り合う開口同士を連通させる連通流路の構成されたリターン部材と、で構成されていることを特徴とする請求項１に記載の光学定盤。
【請求項４】
前記定盤本体は、一の傾斜面を前記光学部材配置部とし、他の傾斜面を前記受光部材配置部とする山型形状とされていること、を特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載の光学定盤。
【請求項５】
前記温調用流路は、前記山形形状とされた定盤本体の底部に形成されていること、を特徴とする請求項４に記載の光学定盤。
【請求項６】
前記温調用流路は、前記山形形状とされた定盤本体の頂部から底部方向に並ぶように形成されていること、を特徴とする請求項４に記載の光学定盤。
【請求項７】
光の全反射減衰を利用して試料の反応状態を測定するバイオセンサーであって、
平坦な金属膜上にリガンドが固定されたセンサーチップと、
前記センサーチップが保持される測定部と、
前記測定部に保持された前記センサーチップの前記金属膜へ向かって光を出射する光学部材と、
前記金属膜で反射された前記光を受光する受光部材と、
請求項１乃至請求項６のいずれか１項の光学定盤と、
を備え、
前記光学部材が前記光学部材配置部に配置され、前記受光部材が前記受光部材配置部に配置されていること、を特徴とするバイオセンサー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学部材を配置するための光学定盤、及び、この光学定盤を備えたバイオセンサーに関する。
【背景技術】
【０００２】
一般的に、光学定盤には、光を所定の場所へ照射するための光学部材が配置されており、熱により光学定盤が変形を起こすことが考えられる。光学定盤が変形すると、光の照射位置がズレるなどの悪影響が生じるため、温調水を給排して光学定盤の温度上昇を抑制することが考えられる。例えば、特許文献１には、光学定盤の下側に中空のフレームを取り付けて流路を構成し、この流路に冷却水を流すことにより、光学定盤を冷却している。
【０００３】
しかしながら、特許文献１では、フレームを介して光学定盤を冷却しているので、冷却効率は低い。また、フレームと光学定盤とは別部材であるため、部品点数も増加してしまう。
【特許文献１】特開２０００−５３３６１号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は上記事実を考慮してなされたものであり、少ない部品点数で効率よく温調可能な光学定盤、及び、この光学定盤を備えたバイオセンサーを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題を解決するために、本発明の第１の態様の光学定盤は、光を出射する光学部材を配置する光学部材配置部と、前記光学部材から出射された光を受光する受光部材を配置する受光部材配置部と、が形成された定盤本体と、前記定盤本体自体で構成され、液体の供給口及び排出口と連通された温調用流路と、を備えている。
【０００６】
本発明の光学定盤では、温調用流路が定盤本体そのものに構成されているので、定盤本体の外側に形成されている場合や、パイプを埋め込んで構成されている場合と比較して、定盤本体と温調水との間で直接熱の授受が行われ、効率よく光学定盤を温調することができる。また、一部材で温調用流路を構成することができるので、別部材と定盤本体との間の界面がなく、温度抵抗を小さくして温度ムラを抑制することができる。
【０００７】
なお、上記光学定盤の温調用流路は、定盤本体に温調用流路に沿った凹溝を形成し、この凹溝の開放面を覆うように蓋部材を配置することにより構成することができる。
【０００８】
また、上記光学定盤の温調用流路は、定盤本体に複数本の貫通路を穿孔し、隣り合う貫通路同士を連通させる連通流路の構成されたリターン部材を定盤本体の外側に取り付けることにより構成することができる。リターン部材により、１の貫通路を通過した液体が他の貫通路へ折り返される。
【０００９】
また、上記光学定盤の定盤本体は、一の傾斜面を前記光学部材配置部とし、他の傾斜面を前記受光部材配置部とする山型形状とされていること、を特徴とすることができる。
【００１０】
このように、光学定盤の構成を山形形状とすることにより、光学部材と受光部材とを安定した配置とすることができる。
【００１１】
なお、前記温調用流路は、山形形状とされた定盤本体の底部に形成されていること、を特徴とすることができる。底部であれば容易に温調用流路を形成することができる。
【００１２】
また、前記温調用流路は、山形形状とされた定盤本体の頂部から底部方向に並ぶように形成されていること、を特徴とすることができる。このように温調用流路が配置されることにより、上下の熱分布を均一にすることができる。
【００１３】
本発明の第２の態様のバイオセンサーは、光の全反射減衰を利用して試料の反応状態を測定するバイオセンサーであって、平坦な金属膜上にリガンドが固定されたセンサーチップと、前記センサーチップが保持される測定部と、前記測定部に保持された前記センサーチップの前記金属膜へ向かって光を出射する光学部材と、前記金属膜で反射された前記光を受光する受光部材と、請求項１乃至請求項６のいずれか１項の光学定盤と、を備え、前記光学部材が前記光学部材配置部に配置され、前記受光部材が前記受光部材配置部に配置されていること、を特徴としている。
【００１４】
上記構成のバイオセンサーによれば、効率よく温調される光学定盤上に光学部材と受光部材とが配置されているので、より正確な測定を行うことができる。
【発明の効果】
【００１５】
本発明は上記構成としたので、少ない部品点数で効率よく光学定盤の温調を行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、図面を参照しながら本発明の実施形態について説明する。
【００１７】
本発明に係るバイオセンサー１０は、金属膜の表面に発生する表面プラズモン共鳴を利用して、リガンドＤとアナライトＡとの相互作用を測定する、いわゆる表面プラズモンセンサーである。
【００１８】
図１に示すように、バイオセンサー１０は、トレイ保持部1２、搬送部1４、容器載置台１６、液体吸排部２０、光学測定部５４、及び、制御部６０を備えている。
【００１９】
トレイ保持部1２は、載置台1２Ａ、及び、ベルト1２Ｂを含んで構成されている。載置台1２Ａは、矢印Ｙ方向に架け渡されたベルト１２Ｂに取り付けられており、ベルト１２Ｂの回転により矢印Ｙ方向に移動可能とされている。載置台１２Ａ上には、トレイＴが載置される。トレイＴには、センサースティック４０が収納されている。センサースティック４０は、リガンドＤの固定されるチップであり、詳細については後述する。載置台１２Ａの下には、センサースティック４０を後述するスティック保持部材１４Ｃの位置まで押し上げる、押上機構１２Ｄが配置されている。
【００２０】
センサースティック４０は、図２及び図３に示すように、誘電体ブロック４２、流路部材４４、保持部材４６、接着部材４８、及び、蒸発防止部材４９、で構成されている。
【００２１】
誘電体ブロック４２は、光ビームに対して透明な透明樹脂等で構成されており、断面が台形の棒状とされたプリズム部４２Ａ、及び、プリズム部４２Ａの両端部にプリズム部４２Ａと一体的に形成された被保持部４２Ｂを備えている。プリズム部４２Ａの互いに平行な２面の内の広い側の上面には、図４にも示すように金属膜５０が形成されている。この金属膜５０上に、リガンドＤが固定される。誘電体ブロック４２は、いわゆるプリズムとして機能し、バイオセンサー１０での測定の際には、プリズム部４２Ａの対向する互いに平行でない２つの側面の内の一方から光ビームが入射され、他方から金属膜５０との界面で全反射された光ビームが出射される。
【００２２】
金属膜５０の表面には、図４に示すように、リンカー層５０Ａが形成されている。リンカー層５０Ａは、リガンドＤを金属膜５０上に固定化するための層である。リンカー層５０Ａ上には、リガンドＤが固定されアナライトＡとリガンドＤとの反応が生じる測定領域（Ｅ１）と、リガンドＤが固定されず、前記測定領域Ｅ１の信号測定に際しての参照信号を得るための参照領域（Ｅ２）とが形成される。この参照領域Ｅ２は、上述したリンカー層５０Ａを製膜する際に形成される。形成方法としては、例えば、リンカー層５０Ａに対して表面処理を施して、リガンドＤと結合する結合基を失活させる。これにより、リンカー層５０Ａの半分が測定領域Ｅ１となり、残りの半分が参照領域Ｅ２となる。このように、結合基を失活させるためには、上記、ブロッキングに用いたエタノールアミン−ヒドロクロライドを用いることができる。参照領域Ｅ２の別の構成方法としては、参照領域Ｅ２にカルボキシルメチルデキストランの代わりに、例えば、アルキルチオールを配するようにすれば、アルキル基を表面に配することが出来、アルキル基は、アミノカップリング法でリガンド結合させることは出来ないので、参照領域Ｅ２として使うことができる。
【００２３】
図５にも示すように、液体流路４５に露出されたリンカー層５０Ａの、参照領域Ｅ２以外の部分には、リガンドＤが固定されている。参照領域Ｅ２にはリガンドＤは固定されていない。参照領域Ｅ２、及び、参照領域Ｅ２よりも上流側に位置する測定領域Ｅ１には、各々光ビームＬ２、Ｌ１が入射される。
【００２４】
プリズム部４２Ａの両側面には、上側の端辺に沿って保持部材５２と係合される係合凸部４２Ｃが、下側の端辺に沿ってプリズム部４２Ａの上面と垂直な仮想面の延長上に構成される垂直凸部４２Ｄが、各々７箇所に形成されている。また、誘電体ブロック４２の下面の長手方向に沿った中央部には、係合溝４２Ｅが形成されている。
【００２５】
流路部材４４は、誘電体ブロック４２よりもわずかに狭幅の直方体状とされ、図３に示すように、誘電体ブロック４２の金属膜５０上に６個並べて配置されている。各々の流路部材４４の下面には流路溝４４Ａが形成されており、上面に形成された供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂと連通されて、金属膜５０との間に、液体流路４５が構成される。したがって、１本のセンサースティック４０には、独立した６個の液体流路４５が構成される。流路部材４４の側壁には、保持部材４６の内側の図示しない凹部に圧入されて保持部材４６との密着性を確保するための凸部４４Ｂが形成されている。
【００２６】
なお、液体流路４５には、蛋白質を含む液体が供給されることが想定されるので、流路部材４４への蛋白質の固着を防止するため、流路部材４４の材料としては、蛋白質に対する非特異吸着性を有しないことが好ましい。
【００２７】
保持部材４６は、長尺とされ、上面板４６Ａ及び２枚の側面板４６Ｂで構成されている。側面板４６Ｂには、誘電体ブロック４２の係合凸部４２Ｃと係合される係合孔４６Ｃが形成されている。保持部材４６は、６個の流路部材４４を間に挟んで係合孔４６Ｃと係合凸部４２Ｃとが係合されて、誘電体ブロック４２に取り付けられる。これにより、流路部材４４は、誘電体ブロック４２に取り付けられる。上面板４６Ａには、流路部材４４の供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂと対向する位置に、流路部材４４に向けて狭くなるテーパー状のピペット挿入孔４６Ｄが形成されている。また、隣り合うピペット挿入孔４６Ｄとピペット挿入孔４６Ｄとの間には、位置決め用のボス４６Ｅが形成されている。
【００２８】
保持部材４６の上面には、蒸発防止部材４９が接着部材４８を介して接着されている。接着部材４８のピペット挿入孔４６Ｄと対向する位置にはピペット挿入用の孔４８Ｄが形成され、ボス４６Ｅと対向する位置には位置決め用の孔４８Ｅが形成されている。また、蒸発防止部材４９のピペット挿入孔４６Ｄと対向する位置には十字状の切り込みであるスリット４９Ｄが形成され、ボス４６Ｅと対向する位置には位置決め用の孔４９Ｅが形成されている。ボス４６Ｅを孔４８Ｅ及び４９Ｅに挿通させて、蒸発防止部材４９を保持部材５２の上面に接着することにより、蒸発防止部材４９のスリット４９Ｄと流路部材４４の供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂとが対向するように構成される。ピペットチップＣＰの非挿入時には、スリット４９Ｄ部分が供給口４５Ｂを覆い、液体流路４５に供給されている液体の蒸発が防止される。
【００２９】
図１に示すように、バイオセンサー１０の搬送部１４は、上部ガイドレール１４Ａ、下部ガイドレール１４Ｂ、及び、スティック保持部材１４Ｃ、を含んで構成されている。上部ガイドレール１４Ａ及び下部ガイドレール１４Ｂは、矢印Ｙ方向と直交する矢印Ｘ方向に水平に配置されている。上部ガイドレール１４Ａには、スティック保持部材１４Ｃが取り付けられている。スティック保持部材１４Ｃは、センサースティック４０の両端部の被保持部４２Ｂを保持可能とされていると共に、上部ガイドレール１４Ａに沿って移動可能とされている。スティック保持部材１４Ｃに保持されたセンサースティック４０の係合溝４２Ｅと下部ガイドレール１４Ｂとが係合され、スティック保持部材１４Ｃが矢印Ｘ方向に移動することにより、センサースティック４０が光学測定部５４上の後述する光学定盤８０上に搬送される。
【００３０】
容器載置台１６には、アナライト溶液プレート１７、回収液ストック容器１８、解離液ストック容器１９が載置されている。アナライト溶液プレート１７は、マトリクス状に区画されており、各種のアナライト溶液をストック可能とされている。回収液ストック容器１８は、回収容器１８Ａ〜１８Ｅで構成されており、回収容器１８Ａ〜１８Ｅには、後述するピペットチップＣＰを挿入可能な開口Ｋが形成されている。解離液ストック容器１９は、複数のストック容器１９Ａ〜１９Ｅで構成されており、回収容器と同様にピペットチップＣＰを挿入可能な開口Ｋが形成されている。
【００３１】
液体吸排部２０は、上部ガイドレール１４Ａ、及び、ガイドレール１６Ｂよりも上方で、矢印Ｙ方向に架け渡された横断レール２２、及び、ヘッド２４を含んで構成されている。横断レール２２は、図示しない駆動機構により、矢印Ｘ方向移動可能とされている。また、ヘッド２４は、横断レール２２に取り付けられ、矢印Ｙ方向に移動可能とされている。また、ヘッド２４は、図示しない駆動機構により、鉛直方向（矢印Ｚ方向）にも移動可能とされている。ヘッド２４は、図６に示すように、２本のピペット部２４Ａ、２４Ｂを備えている。ピペット部２４Ａ、２４Ｂには、先端部にピペットチップＣＰが取り付けられ、個々にＺ方向の長さを調整可能とされている。ピペットチップＣＰは、図示しないピペットチップストッカーに多数ストックされており、必要に応じて交換可能とされている。
【００３２】
なお、本実施形態においてはセンサースティック４０への液体供給はピペットチップＣＰにより行われるが、ピペットチップの代わりに、一端が上記各溶液プレートに接続され、他端がセンサースティック４０に接続可能とされたインジェクションチューブを設け、送液ポンプにより液体の供給を行ってもよい。
【００３３】
光学測定部５４は、図７に示すように、光学定盤８０、光源５４Ａ、第１光学系５４Ｂ、第２光学系５４Ｃ、受光部５４Ｄ、信号処理部５４Ｅ、を含んで構成されている。
【００３４】
光学定盤８０は、図８に示すように、第１傾斜面８２Ａ及び第２傾斜面８２Ｂにより山型が形成される定盤本体８０Ａを備えている。定盤本体８０Ａは、１つの金属ブロックで構成されている。定盤本体８０Ａの山型の頂部には、平坦面８２Ｃが構成されている。平坦面８２Ｃは、下部ガイドレール１４Ｂに沿って配置され、平坦面８２Ｃ上をセンサースティック４０が搬送される。
【００３５】
定盤本体８０Ａの底部は、図９にも示すように、蓋部材８４が切欠き凹部８０Ｂに嵌合されて構成されている。定盤本体８０Ａの切欠き凹部８０Ｂには、温調用流路８６を構成する凹溝Ｕが形成されている。凹溝Ｕは、平坦面８２Ｃの長手方向に沿って直線状とされ、端部内側で逆方向に折り返す形状とされている。この凹溝Ｕの開放側（下側）が蓋部材８４に覆われて、温調用流路８６が構成されている。温調用流路８６は、温調水の供給口８６Ａ及び排出口８６Ｂと連通されている。
【００３６】
供給口８６Ａ及び排出口８６Ｂからは、図１に示すように、温調部８８と接続される配管Ｐが配設されている。温調部８８には、温調水を循環させるためのポンプ及び温調水の温度を適温に調整する温調素子（いずれも図示省略）が設けられている。温調水は供給口８６Ａから供給され、光学定盤８０内の温調用流路８６を通過して、排出口８６Ｂから排出される。
【００３７】
第１傾斜面８２Ａには、光源５４Ａ及び第１光学系５４Ｂ（以下これらをあわせて「光学部材５５Ａ」という）が配置されている。また、第２傾斜面８２Ｂには、第２光学系５４Ｃ及び受光部５４Ｄ（以下これらをあわせて「受光部材５５Ｂ」という）が配置されている。
【００３８】
光源５４Ａからは、発散状態の光ビームＬが出射される。光ビームＬは、第１光学系５４Ｂを介して、２本の光ビームＬ１、Ｌ２となり、光学定盤８０上に配置された誘電体ブロック４２の測定領域Ｅ１と参照領域Ｅ２に入射される。測定領域Ｅ１及び参照領域Ｅ２において、光ビームＬ１、Ｌ２は、金属膜５０と誘電体ブロック４２との界面に対して種々の入射角成分を含み、かつ全反射角以上の角度で入射される。光ビームＬ１、Ｌ２は、誘電体ブロック４２と金属膜５０との界面で全反射される。全反射された光ビームＬ１、Ｌ２も、種々の反射角成分をもって反射される。この全反射された光ビームＬ１、Ｌ２は、第２光学系５４Ｃを経て受光部５４Ｄで受光されて、各々光電変換され、光検出信号が信号処理部５４Ｅへ出力される。信号処理部５４Ｅでは、入力された光検出信号に基づいて所定の処理が行なわれ、測定領域Ｅ１及び参照領域Ｅ２の全反射減衰角のデータ（以下「全反射減衰角データ」という）が求められる。この全反射減衰角データが、制御部６０へ出力され、リガンドＤとアナライトＡとの反応が測定される。
【００３９】
本実施形態では、光学部材５５Ａ及び受光部材５５Ｂの載置される光学定盤８０の定盤本体８０Ａに温調用流路８６が形成されているので、定盤本体８０Ａの外側に形成されている場合や、光学定盤８０の内部にパイプを埋め込んだりして形成されている場合と比較して、効率よく光学定盤８０を温調することができる。また、定盤本体８０Ａが一部材で構成されているので、複数部材で構成されている場合と比較して、部材間の接合面における温度抵抗を小さくすることができ、温度ムラを抑制することができる。
【００４０】
また、光学定盤８０が同一部材で構成されているので、光学部材５５Ａと受光部材５５Ｂとの光軸を容易に合わせることができる。
【００４１】
また、光学定盤８０の構成を山形形状とすることにより、光学部材５５Ａと受光部材５５Ｂとを安定して配置することができる。
【００４２】
なお、本実施形態での温調用流路８６は、光学定盤８０の底部に沿って形成したが、図１０に示すように、定盤本体８０Ａの頂部から底部方向に並ぶように配置することもできる。この場合の温調用流路９０は、図１１にも示すように、平坦面８２Ｃの長尺方向に沿って貫通路９０Ａを穿孔し（図１１では６本）、隣り合う貫通路９０Ａをリターン部材９０Ｂで接続する。リターン部材９０Ｂは、図１１に示すように、空間Ｒの形成されたキャップであり、空間Ｒが隣り合う２つの貫通路９０Ａの開口を覆うように、定盤本体８０Ａの外側に取り付けられる。図１２に示すように、１の貫通路９０Ａからの温調水は空間Ｒに入って他の貫通路９０Ａへ折り返される。
【００４３】
このように、温調用流路９０を配置することにより、光学定盤８０の上部と下部の熱分布を均一にすることができる。
【００４４】
また、本実施形態では、定盤本体８０Ａの形成後、凹溝Ｕを形成したり、貫通路９０Ａを穿孔したりして、温調用流路を構成したが、定盤本体８０Ａを金型で形成する際に、後工程で除去可能な物質を温水用流路を構成する部分に配置して、定盤本体８０Ａの形成後に、温水用流路部分に配置された物質を熔解などにより除去して製造してもよい。
【００４５】
また、本実施形態では、バイオセンサーとして、表面プラズモンセンサーを一例として説明したが、バイオセンサーとしては、表面プラズモンセンサーに限定されるものではない。その他の例えば、水晶発振子マイクロバランス（ＱＣＭ）測定技術、金のコロイド粒子から超微粒子までの機能化表面を使用した光学的測定技術など、あらゆるバイオセンサーを用いてのアナライトの回収に本発明は適用することができる。
【００４６】
また、全反射減衰を利用する他のバイオセンサーとしては、漏洩モード検出器をあげることができる。漏洩モードセンサは、誘電体と、この上に順に層設されたクラッド層と光導波層とによって構成された薄膜とからなり、この薄膜の一方の面がセンサ面となり、他方の面が光入射面となる。光入射面に全反射条件を満たすように光を入射させると、その一部が前記クラッド層を透過して前記光導波層に取り込まれる。そして、この光導波層において、導波モードが励起されると、前記光入射面における反射光が大きく減衰する。導波モードが励起される入射角は、表面プラズモン共鳴角と同様に、センサ面上の媒質の屈折率に応じて変化する。この反射光の減衰を検出することにより、前記センサ面上の反応を測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】本実施形態のバイオセンサーの全体斜視図である。
【図２】本実施形態のセンサースティックの斜視図である。
【図３】本実施形態のセンサースティックの分解斜視図である。
【図４】本実施形態のセンサースティックの１の液体流路部分の断面図である。
【図５】本実施形態のセンサースティックの測定領域及び参照領域へ光ビームが入射している状態を示す図である。
【図６】本実施形態の液体供給部を構成するピペット部の側面図である。
【図７】本実施形態のバイオセンサーの光学測定部付近の概略図である。
【図８】本実施形態の光学定盤の斜視図である。
【図９】本実施形態の光学定盤の分解斜視図である。
【図１０】本実施形態の光学定盤の変形例の斜視図である。
【図１１】本実施形態の光学定盤の変形例の分解斜視図である。
【図１２】本実施形態の光学定盤の温調用流路部分の断面図である。
【符号の説明】
【００４８】
１０  バイオセンサー
４０  センサースティック
５４  光学測定部
５５Ａ  光学部材
５５Ｂ  受光部材
５６  測定部
６０  制御部
８０  光学定盤
８０Ａ  定盤本体
８２Ａ  第１傾斜面
８２Ｂ  第２傾斜面
８４  蓋部材
８６  温調用流路
９０Ｂ  リターン部材
９０  温調用流路
９０Ａ  貫通路
【図１】
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【図２】
2007071543.tif 000004
【図３】
2007071543.tif 000005
【図４】
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【図５】
2007071543.tif 000007
【図６】
2007071543.tif 000008
【図７】
2007071543.tif 000009
【図８】
2007071543.tif 000010
【図９】
2007071543.tif 000011
【図１０】
2007071543.tif 000012
【図１１】
2007071543.tif 000013
【図１２】
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