(57)【要約】【課題】  腺疫菌〔ストレプトコッカス・エクイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｅｑｕｉ）〕感染抗体に特異的に反応するペプチド、腺疫菌抗体の検出方法、さらに腺疫菌感染馬の摘出方法、腺疫菌感染馬の診断薬を提供する。【解決手段】  ペプチドは、プロリン−グルタミン酸−プロリン−リジン（ＰＥＰＫ）でなるアミノ酸配列が複数回繰り返されたＰＥＰＫ繰返し配列を含んでなる。腺疫菌抗体の検出方法は、このようなペプチドを用いて免疫学的方法により腺疫菌感染馬の血中に存在する腺疫菌感染抗体を検出する。また、腺疫菌感染馬の摘出方法は、上記腺疫菌抗体の検出方法を用い、腺疫菌感染馬の診断薬は、上記ペプチドを腺疫菌感染抗体に対する抗原として含んでなる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロリン−グルタミン酸−プロリン−リジン（ＰＥＰＫ）でなるアミノ酸配列が複数回繰り返されたＰＥＰＫ繰返し配列を含んでなることを特徴とするペプチド。
【請求項２】
前記ＰＥＰＫ繰返し配列は、ＰＥＰＫでなるアミノ酸配列が３〜７回繰り返されたものであることを特徴とする請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
前記ＰＥＰＫ繰返し配列は、ＰＥＰＫでなるアミノ酸配列が５回繰り返されたものであることを特徴とする請求項１又は２に記載のペプチド。
【請求項４】
前記ＰＥＰＫ繰返し配列のみからなることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載のペプチド。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかに記載のペプチドを用いて免疫学的方法により腺疫菌〔ストレプトコッカス・エクイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｅｑｕｉ）〕感染馬の血中に存在する腺疫菌感染抗体を検出することを特徴とする腺疫菌抗体の検出方法。
【請求項６】
前記ペプチドを酵素免疫測定法の抗原として用いることを特徴とする請求項５に記載の腺疫菌抗体の検出方法。
【請求項７】
前記ペプチドを免疫クロマトグラフ法の抗原として用いることを特徴とする請求項５に記載の腺疫菌抗体の検出方法。
【請求項８】
請求項５乃至７のいずれかに記載の腺疫菌抗体の検出方法を用いることを特徴とする腺疫菌感染馬の摘出方法。
【請求項９】
請求項１乃至４のいずれかに記載のペプチドを腺疫菌感染抗体に対する抗原として含んでなることを特徴とする腺疫菌感染馬の診断薬。
【請求項１０】
前記ペプチドを酵素免疫測定法の抗原として含んでなることを特徴とする請求項９に記載の腺疫菌感染馬の診断薬。
【請求項１１】
前記ペプチドを免疫クロマトグラフ法の抗原として含んでなることを特徴とする請求項９に記載の腺疫菌感染馬の診断薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチド、腺疫菌（ストレプトコッカス・エクイ：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｅｑｕｉ）感染抗体の検出方法、腺疫菌感染馬の摘出方法（スクリーニング法或いは診断方法）、腺疫菌感染馬の診断薬に係り、特に腺疫菌感染馬の血中に存在する腺疫菌感染抗体に特異的に反応するペプチド、これを用いての腺疫菌感染抗体の検出方法、腺疫菌感染馬の摘出方法、腺疫菌感染馬の診断薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
腺疫は、Ｃ群連鎖球菌の一種である腺疫菌の感染による馬科動物に特有の伝染病である。腺疫菌は、主に馬の上部気道粘膜から体内に侵入し、膿性鼻汁の排泄、発熱などの臨床症状を起こし、続いて頭部から頚部にかけてのリンパ節に大きな腫瘍を形成する特徴がある。若齢馬ほど感染し易く、自然治癒することが多いが、ときには致死的経過をたどることがある。日本では、かつて多発したことがあったが戦後は急速に減少し、一時は清浄化されたと考えられる程であった。しかし、１９９２年に北海道の馬群に、米国からの輸入馬に原因したことみられる腺疫の集団発生があり、それ以降全国に発生が認められている。近年は競馬の国際交流が活発になったことから、腺疫菌疾患も国際的な拡がりをみせている。
【０００３】
腺疫を予防するには、感染した馬が確認され次第消毒などの衛生的な措置が講じられ、また予防的なワクチンが接種される。腺疫のワクチンとしては、新しいワクチンの提案〔例えば、特許文献１参照〕もあるが、一般に保護力があまりなく多数回注射して初めて十分な免疫反応が得られる程度であり、有害反応のあるものもある。さらに、これらのワクチンによって得られる免疫維持期間は比較的短く、少なくとも年に１回は追加免疫のためのワクチン接種を行う必要性がいわれている。従って、感染した馬を早期に確認して健康馬から隔離することが重要であり、国内および国外に移動する馬に対して迅速かつ正確な検査を実施することが必要である。
【０００４】
腺疫の診断は、腫瘍や膿性鼻汁から腺疫菌を分離、同定することにより行われるが、一般に腺疫菌感染馬から腺疫菌が分離されるようになるのは、臨床症状が認められてからしばらく後であり、腺疫菌感染馬の隔離時期として遅れが生じてしまうことがある。また、腺疫菌は、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）など近似する他のＣ群連鎖球菌と明確に区別されないことがある。因みに、ストレプトコッカス・ズーエピデミカスは、馬の扁桃に常在する細菌で、腺疫菌とは同一種に分類され極めて近縁であり、日和見感染によって馬の呼吸器疾患や化膿性炎を引き起こすことがしばしばある。そこで、ストレプトコッカス・ズーエピデミカスなど他の菌に影響されずに、腺疫菌感染馬を早期に特異的に検出することができる方法が検討され、例えば、腺疫菌と他のβ溶血性Ｃ群連鎖球菌とを糖分解試験により鑑別する方法〔非特許文献１参照〕、吸収ＥＬＩＳＡ法による血清抗体価の測定による方法〔非特許文献２参照〕などの提案がある。しかし、これらの方法は、操作が煩雑で多数の検体を処理するには不適当である。
【０００５】
【特許文献１】特開平０９−２１５４９２号公報
【非特許文献１】桑本康、安斉了、和田隆一；馬の科学、２００１年、３８巻３号、２２４〜２２７頁
【非特許文献２】片山雅一、深山美和子、古谷聡子、桑本康、帆保誠二、安斉了；日本獣医会雑誌、２００３年、５６巻３号、１３９〜１４３頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
かかる観点から、本発明の目的は、腺疫菌感染抗体に特異的に反応することができるペプチド、腺疫菌抗体の検出方法、さらに腺疫菌感染馬の摘出方法、腺疫菌感染馬の診断薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するため本発明のペプチドは、プロリン−グルタミン酸−プロリン−リジン（ＰＥＰＫ：配列番号１）でなるアミノ酸配列が複数回繰り返されたＰＥＰＫ繰返し配列を含んでなることを特徴とする。このようなペプチドにおいて、ＰＥＰＫ繰返し配列は、ＰＥＰＫでなるアミノ酸配列が３〜７回繰り返されたものであることが好ましく、また、ＰＥＰＫ繰返し配列は、ＰＥＰＫでなるアミノ酸配列が５回繰り返されたものであることが好適であり、さらに、ＰＥＰＫ繰返し配列のみからなることが良い。
【０００８】
本発明による腺疫菌抗体の検出方法は、上述のようなペプチドを用いて免疫学的方法により腺疫菌〔ストレプトコッカス・エクイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｅｑｕｉ）〕感染馬の血中に存在する腺疫菌感染抗体を検出することを特徴とする。この腺疫菌抗体の検出方法において、前記ペプチドを酵素免疫測定法の抗原として用いることが良く、また、前記ペプチドを免疫クロマトグラフ法の抗原として用いることもできる。そして、腺疫菌感染馬の摘出方法（確定診断も可能なスクリーニング方法）は、上述のような腺疫菌抗体の検出方法を用いることを特徴とする。
【０００９】
また、上記目的を達成するため本発明による腺疫菌感染馬の診断薬（体外診断薬）は、上述のようなペプチドを腺疫菌感染抗体に対する抗原として含んでなることを特徴とする。この腺疫菌感染馬の診断薬において、前記ペプチドを酵素免疫測定法の抗原として含んでなることが好ましく、また、前記ペプチドを免疫クロマトグラフ法の抗原として含んでなることも良い。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、ストレプトコッカス・ズーエピデミカスなど他のＣ群連鎖球菌に影響されずに腺疫菌感染馬を早期に特異的に検出するに有用なペプチド、腺疫菌抗体の検出方法、腺疫菌感染馬の摘出方法、腺疫菌感染馬の診断薬が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明のペプチド及びこのペプチドを用いた腺疫菌抗体の検出方法、腺疫菌感染馬の摘出方法、腺疫菌感染馬の診断薬を実施するための最良の形態について、図面を参照して詳細に説明する。なお、本明細書においては、アミノ酸残基数２〜１００のオリゴペプチド及びポリペプチドを総称してペプチドと呼び、アミノ酸残基数１００を超えるものは蛋白質と呼ぶこととする。また、アミノ酸、ペプチド、蛋白質は、特記しない限りＬ体を示す。
【００１２】
〔第１実施形態〕：（ペプチド及び合成）
本第１実施形態によるペプチドは、プロリン−グルタミン酸−プロリン−リジン（Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ：ＰＥＰＫ：配列番号１）でなるアミノ酸配列が複数回（連続的に）繰り返されたＰＥＰＫ繰返し配列を含んでなるものである。このようなペプチドによれば、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ；以降、Ｓｅｚ菌と略称することがある）感染馬の体液中に存在するＳｅｚ菌感染抗体との交差反応性が低く、腺疫菌感染馬（腺疫罹患馬）の血液中に存在する腺疫菌感染抗体と強く反応することから、腺疫菌感染抗体を特異的に検出できる。そして、このようなペプチドにおいて、腺疫菌感染抗体との反応性がより向上し、また、Ｓｅｚ菌感染抗体との交差反応性がより低下することがある点で、ＰＥＰＫ繰返し配列は、ＰＥＰＫでなるアミノ酸配列が３〜７回繰り返されたものであることが好ましく、ＰＥＰＫでなるアミノ酸配列が４〜６回繰り返されたものであることがより好ましく、ＰＥＰＫでなるアミノ酸配列が５回繰り返されたものであることが最も好ましい。なお、上記した腺疫菌感染抗体としては、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥなど如何なるクラスの免疫グロブリンであっても、本実施形態のペプチドによる検出対象となり得るが、腺疫菌感染馬の血中に最も多量に存在する点ではＩｇＧ抗体がより好適な検出対象である。
【００１３】
本実施形態のペプチドとしては、ＰＥＰＫ繰返し配列以外のアミノ酸を、Ｎ末端及び／又はＣ末端及び／又は複数のＰＥＰＫ繰返し配列に挟まれた領域に含むことができるが、Ｓｅｚ菌感染抗体との交差反応性がより低く、また、腺疫菌感染抗体の検出感度がより高い場合がある点では、ＰＥＰＫ繰返し配列のみからなることが好ましい。ＰＥＰＫ繰返し配列以外のアミノ酸を含む場合、本実施形態のペプチドとしては、如何なるアミノ酸、また、如何なるアミノ酸配列でなる複数のアミノ酸を含んでも良い。具体的には、例えば、後述する配列番号９、１０、１９、２０、３０〜３２、４１〜４４、４６、４８、５０、５１、５６、５７、６０、６１、６６、７１、７３、７４、７８、８１、８２、８６、１００、１０４、１１３〜１１６、１２０、１２５、１３１、１３３、１３４、１３９、１４１、１５３、１６０、１７２、１７３、１７６、１８１、１８３、１９１のような、腺疫菌感染抗体（腺疫菌感染馬血清）及び、Ｓｅｚ菌感染抗体（Ｓｅｚ菌感染馬血清）に対して共に殆ど反応しないアミノ酸配列又はこれらのアミノ酸配列の部分配列を、ＰＥＰＫ繰返し配列のＮ末端側及び／又はＣ末端側に有するペプチドを挙げることができる。また、より好ましい具体例として、例えば、後述する配列番号１９９（ＳｚＰＳｅ＃６５）のような、ＰＥＰＫのうちプロリンの一つを他のアミノ酸に置換したアミノ酸配列や、後述する配列番号２００〜２０８（ＳｚＰＳｅ＃６６〜７４）における「Ｋ」や「ＰＥＰ」の他、「ＰＥ」「ＰＫ」、「ＥＰＫ」などのようなＰＥＰＫの部分配列を、ＰＥＰＫ繰返し配列のＮ末端側及び／又はＣ末端側に有するペプチドを挙げることができる。
【００１４】
上述のような本実施形態のペプチドの合成方法としては、化学合成法、生合成法、或いは化学合成法と生合成法を組み合わせた半化学合成法など、如何なる合成方法であっても使用することができ、特に限定されない。より簡便で大量に合成することができる場合がある点では、液相法、固相法又は液相法と固相法とを組み合わせた化学合成法が好適に使用できる。このようなペプチド合成法における、アミノ保護基、カルボキシル保護基、アミノ酸側鎖官能基の保護基、酸アミド形成反応条件、脱保護法、溶媒や固相の選定又は調製等の詳細な合成条件、分離精製条件、合成装置等の使用機器などについては、例えば、〔泉屋信夫ら、１９７５年丸善株式会社発行、「合成化学シリーズ；ペプチド合成」〕、〔日本生化学会編、１９８７年株式会社東京化学同人発行、「続生化学実験講座２；タンパク質の化学・下」、ｐｐ６４１〜６９４〕、〔日本生化学会編、１９９２年株式会社東京化学同人発行、「新生化学実験講座１；タンパク質ＩＶ（合成および発現）」〕、〔矢島治明監修、１９９１年株式会社廣川書店発行、「続医薬品の開発１４巻；ペプチド合成」〕、〔Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．、Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．  ｅｄｓ．：Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１（１９７９），Ｖｏｌ．２（１９８０），Ｖｏｌ．３（１９８１），Ｖｏｌ．４（１９８２），Ｖｏｌ．５（１９８３），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ〕、〔Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄ，Ｓ．、Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．  ｅｄｓ．：Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６（１９８４），Ｖｏｌ．７（１９８５），Ｖｏｌ．８（１９８６），Ｖｏｌ．９（１９８７），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ〕などに準じて適宜決定し、実施することができる。このようなペプチドの純度としては、７０重量％以上とすることが好ましく、９０重量％以上がより好ましく、９５重量％以上がさらに好ましい。ペプチド純度検定の方法としては、各ペプチドの合成条件や分離精製法の条件などに応じて適宜決定し、実施することができる。例えば、日本薬局方一般試験法（第１２改正〜１４改正、及び追補）、液体クロマトグラフ法（ピーク面積比）や、電気的滴定法、電量滴定法（非水滴定）などに準じて試験することが可能である。
【００１５】
〔第２実施形態〕（腺疫菌感染抗体の検出方法、摘出方法及び腺疫菌感染馬の診断薬）
本第２実施形態による腺疫菌抗体の検出方法は、第１実施形態において説明したようなペプチドを用いて免疫学的試験方法により腺疫菌感染馬の血液中に存在する腺疫菌感染抗体を検出するものであり、また、本実施形態による腺疫菌感染馬の摘出方法は、このような腺疫菌感染抗体の検出方法を用いる。本実施形態による腺疫菌感染馬の診断薬は、第１実施形態におけるいずれかのペプチドを腺疫菌感染抗体に対する抗原として備える他、以下に説明するような腺疫菌抗体の検出方法において使用する各種薬剤、材料を含み構成することができる。腺疫菌感染抗体の検出方法としては、Ｓｅｚ菌感染抗体との交差反応性が低く、腺疫菌感染抗体と特異的に反応する抗原として第１の実施形態のペプチドを用いることから、免疫反応を利用する方法であれば如何なる検出方法であっても良く、特に限定されない。例えば、沈降反応（ｐｒｅｃｉｐｉｔｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）、免疫拡散（Ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）、重層法、赤血球やラテックスを用いる直接又は間接凝集反応（ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ）、免疫電気泳動、免疫クロマトグラフ法、エライザ（ＥＬＩＳＡ）を含む酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、ビオチン−アビジン法、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、蛍光酵素免疫測定法（ＦＥＩＡ）、生物発光免疫測定法（ＢＬＩＡ）、生物発光酵素免疫測定法（ＢＬＥＩＡ）、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）などを挙げることができる。
【００１６】
ここでは、比較的検出感度が高く一般的に汎用される酵素免疫測定法を中心に説明する。酵素免疫測定法は、競合法と非競合法に大別され、それぞれ、抗原・抗体反応結合体（Ｂ：Ｂｏｕｎｄ  Ｆｏｒｍ）と非結合未反応体（Ｆ：Ｆｒｅｅ  Ｆｏｒｍ）とをＢＦ分離するヘテロジニアス法（不均一法）と、ＢＦ分離しないホモジニアス法（均一法）に区分される。ヘテロジニアス法においては、抗原・抗体反応を液相で行う液相法、固相と液相間にて行う固相法がある。血液（血清又は血漿）を検体とし、腺疫菌感染抗体を直接測定する場合においては、ホモジニアス法を用いることは実質的に困難であり、各種電気泳動法、クロマトグラフ法などを用いた分離方法により、腺疫菌感染抗体と他の血中成分（特に非特異的免疫グロブリン）を分離した腺疫菌感染抗体を含む画分を検体として用いることが望ましい。競合法及び非競合法のいずれも使用可能であり限定されないが、検出感度が優れる点では、非競合法を用いることが好ましく、また、液相法より固相法を適用することが好ましい。本実施形態においては、ヘテロジニアス−固相法が好適に使用できる。固相としては、例えば、チューブ、マイクロプレート、ビーズ、ストリップ、マイクロチップなど如何なる形態のものであっても良く、また、その材質についても、例えばポリスチレン、ガラス、ラテックス、セルロース、セファロース、磁性体、濾紙など酵素免疫測定用の抗原又は抗体が物理吸着、共有結合などによって不溶化され担持可能であれば、如何なる材質の固相も使用できる。
【００１７】
酵素免疫測定法の発色標識剤〔酵素（標識）剤と発色基質剤を組み合わせたものを含む〕としては、発色基質剤又は酵素（標識）剤が、第１実施形態のペプチド、又はサンドイッチ法による場合の第２抗体などの酵素免疫測定法用抗体に結合、又は物理的に付着又は吸着し、このような状態で発色させることにより検出可能とするものであれば如何なる発色標識剤であっても使用できる。また、酵素（標識）剤、発色基質剤の他、発色補助剤、発色増強剤、ｐＨ緩衝剤などを組み合わせた発色標識剤も使用可能である。発色基質剤としては、酵素剤や発色補助剤により発色するものであれば如何なる発色基質剤であっても使用可能であり、例えば、オルトフェニレンジアミン、５−アミノサリチル酸、パラニトロフェノールリン酸、フェノールリン酸、フェノール、４−アミノアンチピリン、オルトジアニシジン、オルトニトロフェノール−β−Ｄ−ガラクシド、３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン：ＴＭＢ、２，２′−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）：ＡＢＴＳなどを挙げることができる。酵素（標識）剤としては、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼなどを挙げることができる。それぞれ適切な発色基質剤と酵素剤を組み合わせれば良く、例えば、ペルオキシダーゼとオルトフェニレンジアミン、ペルオキシダーゼと５−アミノサリチル酸、ペルオキシダーゼとＡＢＴＳ、アルカリフォスファターゼとパラニトロフェノールリン酸、アルカリフォスファターゼとフェノールリン酸、アルカリフォスファターゼとフェノール及び４−アミノアンチピリン、β−Ｄ−ガラクトシダーゼとオルトニトロフェノール−β−Ｄ−ガラクシド、などを挙げることができ、これらに過酸化水素などの酸化剤や各反応の至適ｐＨとするｐＨ緩衝剤を加えても良い。さらに、ビオチンとアビジンを組み合わせた発色標識剤も使用できる。また、第１実施形態のペプチド、又は酵素免疫測定用の抗体に標識する場合における酵素剤の標識方法としては、例えば、過ヨウ素酸法、カルボジイミド法、グルタルアルデヒド法、マレイミド法、ピリジルジスルフィド法など公知の如何なる標識方法によっても標識することが可能である。このような発色標識剤を用いる際の各詳細な条件、標識方法の詳細条件などについては、例えば、〔日本生化学会編、１９７５年東京化学同人発行、「生化学実験講座５；酵素研究法」〕、〔石川英治ら、１９８７年医学書院発行、「酵素免疫測定法」〕、〔日本生化学会編、、１９９１年東京化学同人発行、「新生化学実験講座１；タンパク質Ｖ」〕、〔日本生化学会編、１９９２年東京化学同人発行、「新生化学実験講座１２；分子免疫学ＩＩＩ」〕、〔Ａｖｒａｍｅａｓ，Ｓ．  ｅｔ  ａｌ「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｅｌｓｅｖｉｒ  Ｖｏｌ．１８、（１９８３）〕、〔Ｂｕｔｔ，Ｗ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ，「Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ（１９８４）〕などに準じて適宜決定し、実施することができる。
【００１８】
なお、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）により腺疫菌感染馬の血液中に存在する腺疫菌感染抗体を検出する場合には、酵素免疫測定法における酵素（標識）剤、発色基質剤に替えて、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３Ｈ、１４Ｃなどの放射性同位元素標識剤を使用すれば良い。また、例えば、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）や蛍光酵素免疫測定法（ＦＥＩＡ）により腺疫菌感染抗体を検出する場合には、酵素免疫測定法における酵素（標識）剤、発色基質剤に加えて、或いは替えて、例えば、フルオレセイン、アクリジン、キノリン、クマリンなどの芳香族複素環化合物や、ナフタレン、アントラセン、ペリレン、ピレンなどの多環芳香族化合物の外、アントラニル酸、ニトロベンゾフラン、スチルベンなどの発蛍光団となる化合物、また、これら発蛍光団化合物の各種誘導体化化合物などのような蛍光基質剤を含む蛍光標識剤を用いることができる。蛍光標識剤には、反応補助剤として酸化剤や補酵素を含む酵素剤、また、各反応の至適ｐＨに調整するｐＨ緩衝剤を加えて使用することができ、また、例えば、ペルオキシダーゼとパラヒドロキシフェニル酢酸又はパラヒドロキシフェニルプロピオン酸又はフルオレセインイソチオシアネート又はチラミン、β−Ｄガラクトシダーゼと４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄガラクトシド、アルカリフォスファターゼと４−メチルウンベリフェリルリン酸など、発色基質剤と酵素（標識）剤との組み合わせ使用も可能である。蛍光免疫測定法や蛍光酵素免疫測定法の詳細測定条件については、酵素免疫測定法についての参考文献に加えて、例えば、〔Ｆｒｅｉ，Ｒ．Ｗ．  ｅｔ  ａｌ；「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」  Ｖｏｌ．Ｉ，ＩＩ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（１９８１，８２）〕に準じて適宜決定し、実施することができる。また、生物発光免疫測定法（ＢＬＩＡ）、生物発光酵素免疫測定法（ＢＬＥＩＡ）などにより、腺疫菌感染抗体を検出する場合には、酵素免疫測定法における酵素（標識）剤、発色基質剤に加えて、或いは替えて、例えば、生物発光基質、酵素（標識）剤の外に、他の酵素剤、反応補助剤、ｐＨ緩衝剤などの組み合わせを含む生物発光標識剤を用いることができる。例えば、ホタル、ウミホタル、発光ミミズ、ラチア、ホタルイカ、バクテリアなどのような発光生物由来のルシフェリン、オワンクラゲ由来のエクオリンなどの生物発光基質、それぞれ対応する生物由来のルシフェラーゼ、ＡＭＰ、ＡＴＰ、マグネシウム塩やカルシウム塩のような金属塩、脂肪族アルデヒドなどを適宜組み合わせて使用可能である。
【００１９】
また、化学発光免疫測定法（ＣＬＩＡ）、化学発光酵素免疫測定法（ＣＬＥＩＡ）により、腺疫菌感染抗体を検出する場合には、酵素免疫測定法における酵素（標識）剤、発色基質剤に加えて、或いは替えて、例えば、ベンゾペリレン−１，２−ジカルボン酸ヒドラジドやイソルミノールのＮ−アルキル誘導体のようなルミノール誘導体、アクリジニウム塩やルシゲニンのようなアクリジン系化合物、３−（２′−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３″−ホスホリルオキシ）フェニル−１，２−ジオキセタンのようなアダマンチル−１，２−ジオキセタン誘導体、２，４，５−トリフェニルイミダゾール、３−メチルインドール、テトラキスエチレンなどの化学発光化剤の他、過酸化水素、過マンガン酸塩、次亜塩素酸のような酸化剤や、鉄、コバルト、銅、マンガンのような金属の化学発光増強剤、ｐＨ緩衝剤などを組み合わせて使用することができる。このような、化学発光免疫測定法、化学発光酵素免疫測定法や上述の生物発光免疫測定法、生物発光酵素免疫測定法による詳細な測定条件は、例えば、〔後藤俊夫著、「生物発光」共立出版（１９７５）〕、〔Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，Ｈ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  Ｖｏｌ．５７、ｐ４２４（１９７８）〕、〔ＶａｎＤｙｋｅ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ；「Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓｅ  Ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ」  Ｖｏｌ．Ｉ，ＩＩ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  Ｆｌｏｒｉｄａ（１９８５）〕、〔今井一洋編、「生物発光と化学発光」広川書店（１９８９）〕、〔稲場文男ら、「最新ルミネッセンスの測定と応用」ＮＴＳ出版（１９９０）〕などに準じて、適宜決定し実施することができる。また、例えば、免疫クロマトグラフ法により、腺疫菌感染抗体を検出する場合には、酵素免疫測定法におけるマイクロプレートやビーズ、試験管などの固相に替えて、クロマトグラフ担体として機能し得る濾紙、多孔質のＰＶＤＦやニトロセルロースのような膜を短冊状、帯状などに形成したストリップやシートを用いることが可能であり、例えば、金、白金、銀、セレニウムのような金属コロイド、着色ラテックスなどの色素含有物で標識したペプチド抗原をストリップ上で、検体中の腺疫菌感染抗体と免疫複合体を形成可能に固定することができる。このような、免疫クロマトグラフ法の詳細な測定条件、金属コロイドによる標識方法などについては、例えば、特開昭６１−１４２４６３号公報、特開昭６１−１４５４５９号公報、特開昭５５−１５１００号公報などの記載に準じて実施することができる。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明によるペプチド及びこのペプチドを用いた腺疫菌抗体の検出方法、腺疫菌感染馬の摘出方法、腺疫菌感染馬の診断薬について、試験例、実施例を示して具体的に説明するが、これによって本発明を限定するものではない。
【００２１】
〔実施例１〕
〔Ｅｘ．１−１〕（ペプチド及び合成）
腺疫菌の主要な表層蛋白質であり、病原性要素でもある菌表層抗貪食性（Ａｎｔｉｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ）のＭ様蛋白質：ＳｅＭ、ＳｚＰＳｅのアミノ酸配列については、夫々の塩基配列から推定されているが〔Ｔｉｍｏｎｅｙ，Ｊ．Ｆ．，  ｅｔ．  ａｌ．；Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  Ｍ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＳｅＭ  ａｎｄ  ＳｚＰＳｅ．，（１９９７）Ｖｏｌ．６５，Ｎｏ．９：Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｐｐ３６００〜３６０５〕、その後、本発明者らにより一部異なる塩基配列が確認され、この塩基配列に基づき決定した腺疫菌ＣＦ３２株のＳｅＭアミノ酸配列（配列番号２）及びＳｚＰＳｅアミノ酸配列（配列番号３）は、以下に示すとおりである。
【００２２】
配列番号２；ＣＦ３２  ＳｅＭ  アミノ酸配列：ＭＦＬＲＮＮＫＱＫＦＳＩＲＫＬＳＡＧＡＡＳＶＬＶＡＴＳＶＬＧＧＴＴＶＫＡＮＳＥＶＳＲＴＡＴＰＲＬＳＲＤＬＫＮＲＬＳＤＩＡＩＳＧＤＡＳＳＡＱＫＶＲＮＬＬＫＧＡＳＶＧＤＬＱＡＬＬＲＧＬＤＳＡＲＡＡＹＧＲＤＤＹＹＮＬＬＭＨＬＳＳＭＬＮＤＫＰＤＧＤＲＲＱＬＳＬＡＳＬＬＶＤＥＩＥＫＲＩＡＤＧＤＲＹＡＫＬＬＥＡＫＬＡＡＩＫＳＱＱＥＭＬＲＥＲＤＳＱＬＲＮＬＥＫＥＫＥＱＥＬＱＫＡＫＤＥＲＱＡＬＴＥＳＦＮＫＴＬＳＲＳＴＫＥＹＮＫＬＫＴＥＬＡＫＥＫＥＫＡＡＫＭＴＫＥＬＡＤＫＬＳＮＡＥＡＳＲＤＫＡＦＡＶＳＫＤＬＡＤＫＬＳＳＡＥＡＳＲＤＫＡＦＡＶＳＫＤＬＡＤＫＬＡＡＫＴＡＥＡＥＫＬＭＥＮＶＧＳＬＤＲＬＶＥＳＡＫＲＥＭＡＱＫＬＡＥＩＤＱＬＴＡＤＫＡＫＡＤＡＥＬＡＡＡＮＤＴＩＡＳＬＱＴＥＬＥＫＡＫＴＥＬＡＶＳＥＲＬＩＥＳＧＫＲＥＩＡＥＬＱＫＱＫＤＡＳＤＫＡＬＶＥＳＱＡＮＶＡＥＬＥＫＱＫＡＡＳＤＡＫＶＡＥＬＥＫＥＶＥＡＡＫＡＥＶＡＤＬＫＡＱＬＡＫＫＥＥＥＬＥＡＶＫＫＥＫＥＡＬＥＡＫＩＥＥＬＫＫＡＨＡＥＥＬＳＫＬＫＥＭＬＥＫＫＤＨＡＮＡＤＬＱＡＥＩＮＲＬＫＱＥＬＡＤＲＩＫＳＬＳＱＧＧＲＡＳＱＴＮＰＧＴＴＴＡＫＡＧＱＬＰＳＴＧＥＳＡＮＰＦＦＴＩＡＡＬＴＶＩＡＧＡＧＭＡＶＶＳＰＫＲＫＥＮ（５３４ＡＡ）
【００２３】
配列番号３；ＣＦ３２  ＳｚＰＳｅ  アミノ酸配列：ＭＡＫＫＥＭＫＦＹＬＲＫＳＡＦＧＬＡＳＶＳＡＡＬＬＶＧＡＡＡＶＳＡＤＳＶＥＳＡＧＰＶＡＶＡＶＴＤＳＬＤＳＥＡＡＡＴＫＡＥＡＤＬＶＡＡＫＡＤＬＡＡＡＥＶＡＩＴＡＡＫＡＥＦＤＴＡＱＡＤＬＡＴＡＥＡＴＩＡＥＬＥＱＫＩＰＥＬＥＫＫＩＱＥＡＱＥＫＬＮＹＥＮＲＰＳＰＫＲＶＧＳＤＤＥＤＤＴＶＡＲＫＬＭＳＥＫＥＡＬＫＡＥＬＱＫＴＫＥＡＬＤＴＡＫＲＡＹＡＧＩＥＥＲＫＱＶＡＡＴＫＬＤＡＡＮＫＡＦＡＧＶＥＥＫＨＡＱＡＭＡＡＦＧＡＡＦＡＡＹＫＥＡＶＫＡＥＬＫＡＡＧＡＳＤＦＹＴＫＫＩＤＳＡＤＴＶＤＧＶＫＴＬＲＥＭＩＬＤＳＩＡＫＰＥＶＥＰＥＡＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＫＰＱＰＫＰＡＰＡＰＫＰＥＡＫＫＥＥＫＫＡＡＰＫＱＤＴＮＫＬＰＳＴＧＥＡＴＮＰＦＦＴＡＡＡＬＡＶＭＡＧＡＧＶＡＡＶＳＴＲＲＫＥＮ（３７４ＡＡ）
【００２４】
配列番号２及び３のアミノ酸配列に基づき、第１実施形態のペプチド合成法に準じて、Ｆｍｏｃ固相法により１４〜１６残基のペプチドを合成した（純度：７０重量％以上）。なお、本実施例では、ダイマーの生成とラセミ化の防止が可能なＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド  ジネオペンチルアセタールを用いるペプチド合成方法〔Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ  Ｆ，  Ｂａｒａｎｙ  Ｇ．、（１９８４）；Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ  ｄｉｎｅｏｐｅｎｔｙｌ  ａｃｅｔａｌ  ｆｏｒ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｎｃｈｏｒｉｎｇ  ｏｆ  Ｎ  ａｌｐｈａ−９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ａｓ  ｐ−ａｌｋｏｘｙｂｅｎｚｙｌ  ｅｓｔｅｒｓ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．：Ｖｏｌ．２３（４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．ｐｐ３４２〜３４９〕に準じた。本実施例において合成した総計２２２種ペプチドのアミノ酸配列は以下に示すとおりである。
【００２５】
ＳｅＭのアミノ酸配列（配列番号２）に基づき合成した１３１種（ＳｅＭ＃１〜ＳｅＭ＃１３１）のペプチド。なお、（  ）内の数字は、各ペプチドの配列に相当するＳｅＭにおけるアミノ酸残基番号の範囲を示す。
配列番号４：ＳｅＭ＃１；ＭＦＬＲＮＮＫＱＫＦＳＩＲＫＬＳ（１〜１６）、配列番号５：ＳｅＭ＃２；ＮＮＫＱＫＦＳＩＲＫＬＳＡＧＡＡ（５〜２０）、配列番号６：ＳｅＭ＃３；ＫＦＳＩＲＫＬＳＡＧＡＡＳＶＬＶ（９〜２４）、配列番号７：ＳｅＭ＃４；ＲＫＬＳＡＧＡＡＳＶＬＶＡＴＳＶ（１３〜２８）、配列番号８：ＳｅＭ＃５；ＡＧＡＡＳＶＬＶＡＴＳＶＬＧＧＴ（１７〜３２）、配列番号９：ＳｅＭ＃６；ＳＶＬＶＡＴＳＶＬＧＧＴＴＶＫＡ（２１〜３６）、配列番号１０：ＳｅＭ＃７；ＡＴＳＶＬＧＧＴＴＶＫＡＮＳＥＶ（２５〜４０）、配列番号１１：ＳｅＭ＃８；ＬＧＧＴＴＶＫＡＮＳＥＶＳＲＴＡ（２９〜４４）、配列番号１２：ＳｅＭ＃９；ＴＶＫＡＮＳＥＶＳＲＴＡＴＰＲＬ（３３〜４８）、配列番号１３：ＳｅＭ＃１０；ＮＳＥＶＳＲＴＡＴＰＲＬＳＲＤＬ（３７〜５２）、配列番号１４：ＳｅＭ＃１１；ＳＲＴＡＴＰＲＬＳＲＤＬＫＮＲＬ（４１〜５６）、配列番号１５：ＳｅＭ＃１２；ＴＰＲＬＳＲＤＬＫＮＲＬＳＤＩＡ（４５〜６０）、配列番号１６：ＳｅＭ＃１３；ＳＲＤＬＫＮＲＬＳＤＩＡＩＳＧＤ（４９〜６４）、配列番号１７：ＳｅＭ＃１４；ＫＮＲＬＳＤＩＡＩＳＧＤＡＳＳＡ（５３〜６８）、配列番号１８：ＳｅＭ＃１５；ＳＤＩＡＩＳＧＤＡＳＳＡＱＫＶＲ（５７〜７２）、配列番号１９：ＳｅＭ＃１６；ＩＳＧＤＡＳＳＡＱＫＶＲＮＬＬＫ（６１〜７６）、配列番号２０：ＳｅＭ＃１７；ＡＳＳＡＱＫＶＲＮＬＬＫＧＡＳＶ（６５〜８０）、配列番号２１：ＳｅＭ＃１８；ＱＫＶＲＮＬＬＫＧＡＳＶＧＤＬＱ（６９〜８４）、配列番号２２：ＳｅＭ＃１９；ＮＬＬＫＧＡＳＶＧＤＬＱＡＬＬＲ（７３〜８８）、配列番号２３：ＳｅＭ＃２０；ＧＡＳＶＧＤＬＱＡＬＬＲＧＬＤＳ（７７〜９２）、配列番号２４：ＳｅＭ＃２１；ＧＤＬＱＡＬＬＲＧＬＤＳＡＲＡＡ（８１〜９６）、配列番号２５：ＳｅＭ＃２２；ＡＬＬＲＧＬＤＳＡＲＡＡＹＧＲＤ（８５〜１００）、配列番号２６：ＳｅＭ＃２３；ＧＬＤＳＡＲＡＡＹＧＲＤＤＹＹＮ（８９〜１０４）、配列番号２７：ＳｅＭ＃２４；ＡＲＡＡＹＧＲＤＤＹＹＮＬＬＭＨ（９３〜１０８）、配列番号２８：ＳｅＭ＃２５；ＹＧＲＤＤＹＹＮＬＬＭＨＬＳＳＭ（９７〜１１２）、配列番号２９：ＳｅＭ＃２６；ＤＹＹＮＬＬＭＨＬＳＳＭＬＮＤＫ（１０１〜１１６）、配列番号３０：ＳｅＭ＃２７；ＬＬＭＨＬＳＳＭＬＮＤＫＰＤＧＤ（１０５〜１２０）、配列番号３１：ＳｅＭ＃２８；ＬＳＳＭＬＮＤＫＰＤＧＤＲＲＱＬ（１０９〜１２４）、配列番号３２：ＳｅＭ＃２９；ＬＮＤＫＰＤＧＤＲＲＱＬＳＬＡＳ（１１３〜１２８）、配列番号３３：ＳｅＭ＃３０；ＰＤＧＤＲＲＱＬＳＬＡＳＬＬＶＤ（１１７〜１３２）、配列番号３４：ＳｅＭ＃３１；ＲＲＱＬＳＬＡＳＬＬＶＤＥＩＥＫ（１２１〜１３６）、配列番号３５：ＳｅＭ＃３２；ＳＬＡＳＬＬＶＤＥＩＥＫＲＩＡＤ（１２５〜１４０）、配列番号３６：ＳｅＭ＃３３；ＬＬＶＤＥＩＥＫＲＩＡＤＧＤＲＹ（１２９〜１４４）、配列番号３７：ＳｅＭ＃３４；ＥＩＥＫＲＩＡＤＧＤＲＹＡＫＬＬ（１３３〜１４８）、配列番号３８：ＳｅＭ＃３５；ＲＩＡＤＧＤＲＹＡＫＬＬＥＡＫＬ（１３７〜１５２）、配列番号３９：ＳｅＭ＃３６；ＧＤＲＹＡＫＬＬＥＡＫＬＡＡＩＫ（１４１〜１５６）、配列番号４０：ＳｅＭ＃３７；ＡＫＬＬＥＡＫＬＡＡＩＫＳＱＱＥ（１４５〜１６０）、配列番号４１：ＳｅＭ＃３８；ＥＡＫＬＡＡＩＫＳＱＱＥＭＬＲＥ（１４９〜１６４）、配列番号４２：ＳｅＭ＃３９；ＡＡＩＫＳＱＱＥＭＬＲＥＲＤＳＱ（１５３〜１６８）、配列番号４３：ＳｅＭ＃４０；ＳＱＱＥＭＬＲＥＲＤＳＱＬＲＮＬ（１５７〜１７２）、配列番号４４：ＳｅＭ＃４１；ＭＬＲＥＲＤＳＱＬＲＮＬＥＫＥＫ（１６１〜１７６）、配列番号４５：ＳｅＭ＃４２；ＲＤＳＱＬＲＮＬＥＫＥＫＥＱＥＬ（１６５〜１８０）、配列番号４６：ＳｅＭ＃４３；ＬＲＮＬＥＫＥＫＥＱＥＬＱＫＡＫ（１６９〜１８４）、配列番号４７：ＳｅＭ＃４４；ＥＫＥＫＥＱＥＬＱＫＡＫＤＥＲＱ（１７３〜１８８）、配列番号４８：ＳｅＭ＃４５；ＥＱＥＬＱＫＡＫＤＥＲＱＡＬＴＥ（１７７〜１９２）、配列番号４９：ＳｅＭ＃４６；ＱＫＡＫＤＥＲＱＡＬＴＥＳＦＮＫ（１８１〜１９６）、配列番号５０：ＳｅＭ＃４７；ＤＥＲＱＡＬＴＥＳＦＮＫＴＬＳＲ（１８５〜２００）、配列番号５１：ＳｅＭ＃４８；ＡＬＴＥＳＦＮＫＴＬＳＲＳＴＫＥ（１８９〜２０４）、配列番号５２：ＳｅＭ＃４９；ＳＦＮＫＴＬＳＲＳＴＫＥＹＮＫＬ（１９３〜２０８）、配列番号５３：ＳｅＭ＃５０；ＴＬＳＲＳＴＫＥＹＮＫＬＫＴＥＬ（１９７〜２１２）、配列番号５４：ＳｅＭ＃５１；ＳＴＫＥＹＮＫＬＫＴＥＬＡＫＥＫ（２０１〜２１６）、配列番号５５：ＳｅＭ＃５２；ＹＮＫＬＫＴＥＬＡＫＥＫＥＫＡＡ（２０５〜２２０）、配列番号５６：ＳｅＭ＃５３；ＫＴＥＬＡＫＥＫＥＫＡＡＫＭＴＫ（２０９〜２２４）、配列番号５７：ＳｅＭ＃５４；ＡＫＥＫＥＫＡＡＫＭＴＫＥＬＡＤ（２１３〜２２８）、配列番号５８：ＳｅＭ＃５５；ＥＫＡＡＫＭＴＫＥＬＡＤＫＬＳＮ（２１７〜２３２）、配列番号５９：ＳｅＭ＃５６；ＫＭＴＫＥＬＡＤＫＬＳＮＡＥＡＳ（２２１〜２３６）、配列番号６０：ＳｅＭ＃５７；ＥＬＡＤＫＬＳＮＡＥＡＳＲＤＫＡ（２２５〜２４０）、配列番号６１：ＳｅＭ＃５８；ＫＬＳＮＡＥＡＳＲＤＫＡＦＡＶＳ（２２９〜２４４）、配列番号６２：ＳｅＭ＃５９；ＡＥＡＳＲＤＫＡＦＡＶＳＫＤＬＡ（２３３〜２４８）、配列番号６３：ＳｅＭ＃６０；ＲＤＫＡＦＡＶＳＫＤＬＡＤＫＬＳ（２３７〜２５２）、配列番号６４：ＳｅＭ＃６１；ＦＡＶＳＫＤＬＡＤＫＬＳＳＡＥＡ（２４１〜２５６）、配列番号６５：ＳｅＭ＃６２；ＫＤＬＡＤＫＬＳＳＡＥＡＳＲＤＫ（２４５〜２６０）、配列番号６６：ＳｅＭ＃６３；ＤＫＬＳＳＡＥＡＳＲＤＫＡＦＡＶ（２４９〜２６４）、配列番号６７：ＳｅＭ＃６４；ＳＡＥＡＳＲＤＫＡＦＡＶＳＫＤＬ（２５３〜２６８）、配列番号６８：ＳｅＭ＃６５；ＳＲＤＫＡＦＡＶＳＫＤＬＡＤＫＬ（２５７〜２７２）、配列番号６９：ＳｅＭ＃６６；ＡＦＡＶＳＫＤＬＡＤＫＬＡＡＫＴ（２６１〜２７６）、配列番号７０：ＳｅＭ＃６７；ＳＫＤＬＡＤＫＬＡＡＫＴＡＥＡＥ（２６５〜２８０）、配列番号７１：ＳｅＭ＃６８；ＡＤＫＬＡＡＫＴＡＥＡＥＫＬＭＥ（２６９〜２８４）、配列番号７２：ＳｅＭ＃６９；ＡＡＫＴＡＥＡＥＫＬＭＥＮＶＧＳ（２７３〜２８８）、配列番号７３：ＳｅＭ＃７０；ＡＥＡＥＫＬＭＥＮＶＧＳＬＤＲＬ（２７７〜２９２）、配列番号７４：ＳｅＭ＃７１；ＫＬＭＥＮＶＧＳＬＤＲＬＶＥＳＡ（２８１〜２９６）、配列番号７５：ＳｅＭ＃７２；ＮＶＧＳＬＤＲＬＶＥＳＡＫＲＥＭ（２８５〜３００）、配列番号７６：ＳｅＭ＃７３；ＬＤＲＬＶＥＳＡＫＲＥＭＡＱＫＬ（２８９〜３０４）、配列番号７７：ＳｅＭ＃７４；ＶＥＳＡＫＲＥＭＡＱＫＬＡＥＩＤ（２９３〜３０８）、配列番号７８：ＳｅＭ＃７５；ＫＲＥＭＡＱＫＬＡＥＩＤＱＬＴＡ（２９７〜３１２）、配列番号７９：ＳｅＭ＃７６；ＡＱＫＬＡＥＩＤＱＬＴＡＤＫＡＫ（３０１〜３１６）、配列番号８０：ＳｅＭ＃７７；ＡＥＩＤＱＬＴＡＤＫＡＫＡＤＡＥ（３０５〜３２０）、配列番号８１：ＳｅＭ＃７８；ＱＬＴＡＤＫＡＫＡＤＡＥＬＡＡＡ（３０９〜３２４）、配列番号８２：ＳｅＭ＃７９；ＤＫＡＫＡＤＡＥＬＡＡＡＮＤＴＩ（３１３〜３２８）、配列番号８３：ＳｅＭ＃８０；ＡＤＡＥＬＡＡＡＮＤＴＩＡＳＬＱ（３１７〜３３２）、配列番号８４：ＳｅＭ＃８１；ＬＡＡＡＮＤＴＩＡＳＬＱＴＥＬＥ（３２１〜３３６）、配列番号８５：ＳｅＭ＃８２；ＮＤＴＩＡＳＬＱＴＥＬＥＫＡＫＴ（３２５〜３４０）、配列番号８６：ＳｅＭ＃８３；ＡＳＬＱＴＥＬＥＫＡＫＴＥＬＡＶ（３２９〜３４４）、配列番号８７：ＳｅＭ＃８４；ＴＥＬＥＫＡＫＴＥＬＡＶＳＥＲＬ（３３３〜３４８）、配列番号８８：ＳｅＭ＃８５；ＫＡＫＴＥＬＡＶＳＥＲＬＩＥＳＧ（３３７〜３５２）、配列番号８９：ＳｅＭ＃８６；ＥＬＡＶＳＥＲＬＩＥＳＧＫＲＥＩ（３４１〜３５６）、配列番号９０：ＳｅＭ＃８７；ＳＥＲＬＩＥＳＧＫＲＥＩＡＥＬＱ（３４５〜３６０）、配列番号９１：ＳｅＭ＃８８；ＩＥＳＧＫＲＥＩＡＥＬＱＫＱＫＤ（３４９〜３６４）、配列番号９２：ＳｅＭ＃８９；ＫＲＥＩＡＥＬＱＫＱＫＤＡＳＤＫ（３５３〜３６８）、配列番号９３：ＳｅＭ＃９０；ＡＥＬＱＫＱＫＤＡＳＤＫＡＬＶＥ（３５７〜３７２）、配列番号９４：ＳｅＭ＃９１；ＫＱＫＤＡＳＤＫＡＬＶＥＳＱＡＮ（３６１〜３７６）、配列番号９５：ＳｅＭ＃９２；ＡＳＤＫＡＬＶＥＳＱＡＮＶＡＥＬ（３６５〜３８０）、配列番号９６：ＳｅＭ＃９３；ＡＬＶＥＳＱＡＮＶＡＥＬＥＫＱＫ（３６９〜３８４）、配列番号９７：ＳｅＭ＃９４；ＳＱＡＮＶＡＥＬＥＫＱＫＡＡＳＤ（３７３〜３８８）、配列番号９８：ＳｅＭ＃９５；ＶＡＥＬＥＫＱＫＡＡＳＤＡＫＶＡ（３７７〜３９２）、配列番号９９：ＳｅＭ＃９６；ＥＫＱＫＡＡＳＤＡＫＶＡＥＬＥＫ（３８１〜３９６）、配列番号１００：ＳｅＭ＃９７；ＡＡＳＤＡＫＶＡＥＬＥＫＥＶＥＡ（３８５〜４００）、配列番号１０１：ＳｅＭ＃９８；ＡＫＶＡＥＬＥＫＥＶＥＡＡＫＡＥ（３８９〜４０４）、配列番号１０２：ＳｅＭ＃９９；ＥＬＥＫＥＶＥＡＡＫＡＥＶＡＤＬ（３９３〜４０８）、配列番号１０３：ＳｅＭ＃１００；ＥＶＥＡＡＫＡＥＶＡＤＬＫＡＱＬ（３９７〜４１２）
【００２６】
配列番号１０４：ＳｅＭ＃１０１；ＡＫＡＥＶＡＤＬＫＡＱＬＡＫＫＥ（４０１〜４１６）、配列番号１０５：ＳｅＭ＃１０２；ＶＡＤＬＫＡＱＬＡＫＫＥＥＥＬＥ（４０５〜４２０）、配列番号１０６：ＳｅＭ＃１０３；ＫＡＱＬＡＫＫＥＥＥＬＥＡＶＫＫ（４０９〜４２４）、配列番号１０７：ＳｅＭ＃１０４；ＡＫＫＥＥＥＬＥＡＶＫＫＥＫＥＡ（４１３〜４２８）、配列番号１０８：ＳｅＭ＃１０５；ＥＥＬＥＡＶＫＫＥＫＥＡＬＥＡＫ（４１７〜４３２）、配列番号１０９：ＳｅＭ＃１０６；ＡＶＫＫＥＫＥＡＬＥＡＫＩＥＥＬ（４２１〜４３６）、配列番号１１０：ＳｅＭ＃１０７；ＥＫＥＡＬＥＡＫＩＥＥＬＫＫＡＨ（４２５〜４４０）、配列番号１１１：ＳｅＭ＃１０８；ＬＥＡＫＩＥＥＬＫＫＡＨＡＥＥＬ（４２９〜４４４）、配列番号１１２：ＳｅＭ＃１０９；ＩＥＥＬＫＫＡＨＡＥＥＬＳＫＬＫ（４３３〜４４８）、配列番号１１３：ＳｅＭ＃１１０；ＫＫＡＨＡＥＥＬＳＫＬＫＥＭＬＥ（４３７〜４５２）、配列番号１１４：ＳｅＭ＃１１１；ＡＥＥＬＳＫＬＫＥＭＬＥＫＫＤＨ（４４１〜４５６）、配列番号１１５：ＳｅＭ＃１１２；ＳＫＬＫＥＭＬＥＫＫＤＨＡＮＡＤ（４４５〜４６０）、配列番号１１６：ＳｅＭ＃１１３；ＥＭＬＥＫＫＤＨＡＮＡＤＬＱＡＥ（４４９〜４６４）、配列番号１１７：ＳｅＭ＃１１４；ＫＫＤＨＡＮＡＤＬＱＡＥＩＮＲＬ（４５３〜４６８）、配列番号１１８：ＳｅＭ＃１１５；ＡＮＡＤＬＱＡＥＩＮＲＬＫＱＥＬ（４５７〜４７２）、配列番号１１９：ＳｅＭ＃１１６；ＬＱＡＥＩＮＲＬＫＱＥＬＡＤＲＩ（４６１〜４７６）、配列番号１２０：ＳｅＭ＃１１７；ＩＮＲＬＫＱＥＬＡＤＲＩＫＳＬＳ（４６５〜４８０）、配列番号１２１：ＳｅＭ＃１１８；ＫＱＥＬＡＤＲＩＫＳＬＳＱＧＧＲ（４６９〜４８４）、配列番号１２２：ＳｅＭ＃１１９；ＡＤＲＩＫＳＬＳＱＧＧＲＡＳＱＴ（４７３〜４８８）、配列番号１２３：ＳｅＭ＃１２０；ＫＳＬＳＱＧＧＲＡＳＱＴＮＰＧＴ（４７７〜４９２）、配列番号１２４：ＳｅＭ＃１２１；ＱＧＧＲＡＳＱＴＮＰＧＴＴＴＡＫ（４８１〜４９６）、配列番号１２５：ＳｅＭ＃１２２；ＡＳＱＴＮＰＧＴＴＴＡＫＡＧＱＬ（４８５〜５００）、配列番号１２６：ＳｅＭ＃１２３；ＮＰＧＴＴＴＡＫＡＧＱＬＰＳＴＧ（４８９〜５０４）、配列番号１２７：ＳｅＭ＃１２４；ＴＴＡＫＡＧＱＬＰＳＴＧＥＳＡＮ（４９３〜５０８）、配列番号１２８：ＳｅＭ＃１２５；ＡＧＱＬＰＳＴＧＥＳＡＮＰＦＦＴ（４９７〜５１２）、配列番号１２９：ＳｅＭ＃１２６；ＰＳＴＧＥＳＡＮＰＦＦＴＩＡＡＬ（５０１〜５１６）、配列番号１３０：ＳｅＭ＃１２７；ＥＳＡＮＰＦＦＴＩＡＡＬＴＶＩＡ（５０５〜５２０）、配列番号１３１：ＳｅＭ＃１２８；ＰＦＦＴＩＡＡＬＴＶＩＡＧＡＧＭ（５０９〜５２４）、配列番号１３２：ＳｅＭ＃１２９；ＩＡＡＬＴＶＩＡＧＡＧＭＡＶＶＳ（５１３〜５２８）、配列番号１３３：ＳｅＭ＃１３０；ＴＶＩＡＧＡＧＭＡＶＶＳＰＫＲＫ（５１７〜５３２）、配列番号１３４：ＳｅＭ＃１３１；ＧＡＧＭＡＶＶＳＰＫＲＫＥＮ（５２１〜５３４）
【００２７】
ＳｚＰＳｅのアミノ酸配列（配列番号３）に基づき合成した９１種（ＳｚＰＳｅ＃１〜＃９１）のペプチド。なお、（  ）内の数字は、各ペプチドの配列に相当するＳｚＰＳｅにおけるアミノ酸残基番号の範囲を示す。
配列番号１３５：ＳｚＰＳｅ＃１；ＭＡＫＫＥＭＫＦＹＬＲＫＳＡＦＧ（１〜１６）、配列番号１３６：ＳｚＰＳｅ＃２；ＥＭＫＦＹＬＲＫＳＡＦＧＬＡＳＶ（５〜２０）、配列番号１３７：ＳｚＰＳｅ＃３；ＹＬＲＫＳＡＦＧＬＡＳＶＳＡＡＬ（９〜２４）、配列番号１３８：ＳｚＰＳｅ＃４；ＳＡＦＧＬＡＳＶＳＡＡＬＬＶＧＡ（１３〜２８）、配列番号１３９：ＳｚＰＳｅ＃５；ＬＡＳＶＳＡＡＬＬＶＧＡＡＡＶＳ（１７〜３２）、配列番号１４０：ＳｚＰＳｅ＃６；ＳＡＡＬＬＶＧＡＡＡＶＳＡＤＳＶ（２１〜３６）、配列番号１４１：ＳｚＰＳｅ＃７；ＬＶＧＡＡＡＶＳＡＤＳＶＥＳＡＧ（２５〜４０）、配列番号１４２：ＳｚＰＳｅ＃８；ＡＡＶＳＡＤＳＶＥＳＡＧＰＶＡＶ（２９〜４４）、配列番号１４３：ＳｚＰＳｅ＃９；ＡＤＳＶＥＳＡＧＰＶＡＶＡＶＴＤ（３３〜４８）、配列番号１４４：ＳｚＰＳｅ＃１０；ＥＳＡＧＰＶＡＶＡＶＴＤＳＬＤＳ（３７〜５２）、配列番号１４５：ＳｚＰＳｅ＃１１；ＰＶＡＶＡＶＴＤＳＬＤＳＥＡＡＡ（４１〜５６）、配列番号１４６：ＳｚＰＳｅ＃１２；ＡＶＴＤＳＬＤＳＥＡＡＡＴＫＡＥ（４５〜６０）、配列番号１４７：ＳｚＰＳｅ＃１３；ＳＬＤＳＥＡＡＡＴＫＡＥＡＤＬＶ（４９〜６４）、配列番号１４８：ＳｚＰＳｅ＃１４；ＥＡＡＡＴＫＡＥＡＤＬＶＡＡＫＡ（５３〜６８）、配列番号１４９：ＳｚＰＳｅ＃１５；ＴＫＡＥＡＤＬＶＡＡＫＡＤＬＡＡ（５７〜７２）、配列番号１５０：ＳｚＰＳｅ＃１６；ＡＤＬＶＡＡＫＡＤＬＡＡＡＥＶＡ（６１〜７６）、配列番号１５１：ＳｚＰＳｅ＃１７；ＡＡＫＡＤＬＡＡＡＥＶＡＩＴＡＡ（６５〜８０）、配列番号１５２：ＳｚＰＳｅ＃１８；ＤＬＡＡＡＥＶＡＩＴＡＡＫＡＥＦ（６９〜８４）、配列番号１５３：ＳｚＰＳｅ＃１９；ＡＥＶＡＩＴＡＡＫＡＥＦＤＴＡＱ（７３〜８８）、配列番号１５４：ＳｚＰＳｅ＃２０；ＩＴＡＡＫＡＥＦＤＴＡＱＡＤＬＡ（７７〜９２）、配列番号１５５：ＳｚＰＳｅ＃２１；ＫＡＥＦＤＴＡＱＡＤＬＡＴＡＥＡ（８１〜９６）、配列番号１５６：ＳｚＰＳｅ＃２２；ＤＴＡＱＡＤＬＡＴＡＥＡＴＩＡＥ（８５〜１００）、配列番号１５７：ＳｚＰＳｅ＃２３；ＡＤＬＡＴＡＥＡＴＩＡＥＬＥＱＫ（８９〜１０４）、配列番号１５８：ＳｚＰＳｅ＃２４；ＴＡＥＡＴＩＡＥＬＥＱＫＩＰＥＬ（９３〜１０８）、配列番号１５９：ＳｚＰＳｅ＃２５；ＴＩＡＥＬＥＱＫＩＰＥＬＥＫＫＩ（９７〜１１２）、配列番号１６０：ＳｚＰＳｅ＃２６；ＬＥＱＫＩＰＥＬＥＫＫＩＱＥＡＱ（１０１〜１１６）、配列番号１６１：ＳｚＰＳｅ＃２７；ＩＰＥＬＥＫＫＩＱＥＡＱＥＫＬＮ（１０５〜１２０）、配列番号１６２：ＳｚＰＳｅ＃２８；ＥＫＫＩＱＥＡＱＥＫＬＮＹＥＮＲ（１０９〜１２４）、配列番号１６３：ＳｚＰＳｅ＃２９；ＱＥＡＱＥＫＬＮＹＥＮＲＰＳＰＫ（１１３〜１２８）、配列番号１６４：ＳｚＰＳｅ＃３０；ＥＫＬＮＹＥＮＲＰＳＰＫＲＶＧＳ（１１７〜１３２）、配列番号１６５：ＳｚＰＳｅ＃３１；ＹＥＮＲＰＳＰＫＲＶＧＳＤＤＥＤ（１２１〜１３６）、配列番号１６６：ＳｚＰＳｅ＃３２；ＰＳＰＫＲＶＧＳＤＤＥＤＤＴＶＡ（１２５〜１４０）、配列番号１６７：ＳｚＰＳｅ＃３３；ＲＶＧＳＤＤＥＤＤＴＶＡＲＫＬＭ（１２９〜１４４）、配列番号１６８：ＳｚＰＳｅ＃３４；ＤＤＥＤＤＴＶＡＲＫＬＭＳＥＫＥ（１３３〜１４８）、配列番号１６９：ＳｚＰＳｅ＃３５；ＤＴＶＡＲＫＬＭＳＥＫＥＡＬＫＡ（１３７〜１５２）、配列番号１７０：ＳｚＰＳｅ＃３６；ＲＫＬＭＳＥＫＥＡＬＫＡＥＬＱＫ（１４１〜１５６）、配列番号１７１：ＳｚＰＳｅ＃３７；ＳＥＫＥＡＬＫＡＥＬＱＫＴＫＥＡ（１４５〜１６０）、配列番号１７２：ＳｚＰＳｅ＃３８；ＡＬＫＡＥＬＱＫＴＫＥＡＬＤＴＡ（１４９〜１６４）、配列番号１７３：ＳｚＰＳｅ＃３９；ＥＬＱＫＴＫＥＡＬＤＴＡＫＲＡＹ（１５３〜１６８）、配列番号１７４：ＳｚＰＳｅ＃４０；ＴＫＥＡＬＤＴＡＫＲＡＹＡＧＩＥ（１５７〜１７２）、配列番号１７５：ＳｚＰＳｅ＃４１；ＬＤＴＡＫＲＡＹＡＧＩＥＥＲＫＱ（１６１〜１７６）、配列番号１７６：ＳｚＰＳｅ＃４２；ＫＲＡＹＡＧＩＥＥＲＫＱＶＡＡＴ（１６５〜１８０）、配列番号１７７：ＳｚＰＳｅ＃４３；ＡＧＩＥＥＲＫＱＶＡＡＴＫＬＤＡ（１６９〜１８４）、配列番号１７８：ＳｚＰＳｅ＃４４；ＥＲＫＱＶＡＡＴＫＬＤＡＡＮＫＡ（１７３〜１８８）、配列番号１７９：ＳｚＰＳｅ＃４５；ＶＡＡＴＫＬＤＡＡＮＫＡＦＡＧＶ（１７７〜１９２）、配列番号１８０：ＳｚＰＳｅ＃４６；ＫＬＤＡＡＮＫＡＦＡＧＶＥＥＫＨ（１８１〜１９６）、配列番号１８１：ＳｚＰＳｅ＃４７；ＡＮＫＡＦＡＧＶＥＥＫＨＡＱＡＭ（１８５〜２００）、配列番号１８２：ＳｚＰＳｅ＃４８；ＦＡＧＶＥＥＫＨＡＱＡＭＡＡＦＧ（１８９〜２０４）、配列番号１８３：ＳｚＰＳｅ＃４９；ＥＥＫＨＡＱＡＭＡＡＦＧＡＡＦＡ（１９３〜２０８）、配列番号１８４：ＳｚＰＳｅ＃５０；ＡＱＡＭＡＡＦＧＡＡＦＡＡＹＫＥ（１９７〜２１２）、配列番号１８５：ＳｚＰＳｅ＃５１；ＡＡＦＧＡＡＦＡＡＹＫＥＡＶＫＡ（２０１〜２１６）、配列番号１８６：ＳｚＰＳｅ＃５２；ＡＡＦＡＡＹＫＥＡＶＫＡＥＬＫＡ（２０５〜２２０）、配列番号１８７：ＳｚＰＳｅ＃５３；ＡＹＫＥＡＶＫＡＥＬＫＡＡＧＡＳ（２０９〜２２４）、配列番号１８８：ＳｚＰＳｅ＃５４；ＡＶＫＡＥＬＫＡＡＧＡＳＤＦＹＴ（２１３〜２２８）、配列番号１８９：ＳｚＰＳｅ＃５５；ＥＬＫＡＡＧＡＳＤＦＹＴＫＫＩＤ（２１７〜２３２）、配列番号１９０：ＳｚＰＳｅ＃５６；ＡＧＡＳＤＦＹＴＫＫＩＤＳＡＤＴ（２２１〜２３６）、配列番号１９１：ＳｚＰＳｅ＃５７；ＤＦＹＴＫＫＩＤＳＡＤＴＶＤＧＶ（２２５〜２４０）、配列番号１９２：ＳｚＰＳｅ＃５８；ＫＫＩＤＳＡＤＴＶＤＧＶＫＴＬＲ（２２９〜２４４）、配列番号１９３：ＳｚＰＳｅ＃５９；ＳＡＤＴＶＤＧＶＫＴＬＲＥＭＩＬ（２３３〜２４８）、配列番号１９４：ＳｚＰＳｅ＃６０；ＶＤＧＶＫＴＬＲＥＭＩＬＤＳＩＡ（２３７〜２５２）、配列番号１９５：ＳｚＰＳｅ＃６１；ＫＴＬＲＥＭＩＬＤＳＩＡＫＰＥＶ（２４１〜２５６）、配列番号１９６：ＳｚＰＳｅ＃６２；ＥＭＩＬＤＳＩＡＫＰＥＶＥＰＥＡ（２４５〜２６０）、配列番号１９７：ＳｚＰＳｅ＃６３；ＤＳＩＡＫＰＥＶＥＰＥＡＫＰＥＰ（２４９〜２６４）、配列番号１９８：ＳｚＰＳｅ＃６４；ＫＰＥＶＥＰＥＡＫＰＥＰＫＰＥＰ（２５３〜２６８）、配列番号１９９：ＳｚＰＳｅ＃６５；ＥＰＥＡＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２５７〜２７２）、配列番号２００：ＳｚＰＳｅ＃６６；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２６１〜２７６）、配列番号２０１：ＳｚＰＳｅ＃６７；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２６５〜２８０）、配列番号２０２：ＳｚＰＳｅ＃６８；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２６９〜２８４）、配列番号２０３：ＳｚＰＳｅ＃６９；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２７３〜２８８）、配列番号２０４：ＳｚＰＳｅ＃７０；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２７７〜２９２）、配列番号２０５：ＳｚＰＳｅ＃７１；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２８１〜２９６）、配列番号２０６：ＳｚＰＳｅ＃７２；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２８５〜３００）、配列番号２０７：ＳｚＰＳｅ＃７３；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２８９〜３０４）、配列番号２０８：ＳｚＰＳｅ＃７４；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰ（２９３〜３０８）、配列番号２０９：ＳｚＰＳｅ＃７５；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＫＰ（２９７〜３１２）、配列番号２１０：ＳｚＰＳｅ＃７６；ＫＰＥＰＫＰＥＰＫＰＫＰＱＰＫＰ（３０１〜３１６）、配列番号２１１：ＳｚＰＳｅ＃７７；ＫＰＥＰＫＰＫＰＱＰＫＰＡＰＡＰ（３０５〜３２０）、配列番号２１２：ＳｚＰＳｅ＃７８；ＫＰＫＰＱＰＫＰＡＰＡＰＫＰＥＡ（３０９〜３２４）、配列番号２１３：ＳｚＰＳｅ＃７９；ＱＰＫＰＡＰＡＰＫＰＥＡＫＫＥＥ（３１３〜３２８）、配列番号２１４：ＳｚＰＳｅ＃８０；ＡＰＡＰＫＰＥＡＫＫＥＥＫＫＡＡ（３１７〜３３２）、配列番号２１５：ＳｚＰＳｅ＃８１；ＫＰＥＡＫＫＥＥＫＫＡＡＰＫＱＤ（３２１〜３３６）、配列番号２１６：ＳｚＰＳｅ＃８２；ＫＫＥＥＫＫＡＡＰＫＱＤＴＮＫＬ（３２５〜３４０）、配列番号２１７：ＳｚＰＳｅ＃８３；ＫＫＡＡＰＫＱＤＴＮＫＬＰＳＴＧ（３２９〜３４４）、配列番号２１８：ＳｚＰＳｅ＃８４；ＰＫＱＤＴＮＫＬＰＳＴＧＥＡＴＮ（３３３〜３４８）、配列番号２１９：ＳｚＰＳｅ＃８５；ＴＮＫＬＰＳＴＧＥＡＴＮＰＦＦＴ（３３７〜３５２）、配列番号２２０：ＳｚＰＳｅ＃８６；ＰＳＴＧＥＡＴＮＰＦＦＴＡＡＡＬ（３４１〜３５６）、配列番号２２１：ＳｚＰＳｅ＃８７；ＥＡＴＮＰＦＦＴＡＡＡＬＡＶＭＡ（３４５〜３６０）、配列番号２２２：ＳｚＰＳｅ＃８８；ＰＦＦＴＡＡＡＬＡＶＭＡＧＡＧＶ（３４９〜３６４）、配列番号２２３：ＳｚＰＳｅ＃８９；ＡＡＡＬＡＶＭＡＧＡＧＶＡＡＶＳ（３５３〜３６８）、配列番号２２４：ＳｚＰＳｅ＃９０；ＡＶＭＡＧＡＧＶＡＡＶＳＴＲＲＫ（３５７〜３７２）、配列番号２２５：ＳｚＰＳｅ＃９１；ＧＡＧＶＡＡＶＳＴＲＲＫＥＮ（３６１〜３７４）
【００２８】
〔Ｅｘ．１−２〕（腺疫菌実験感染馬の血清採取）
分離場所及び血液寒天培地上での集落の特徴が異なる腺疫菌３株（株名：ＣＦ３２、ＮＣＴＣ９６８２、Ｈｉｄａｋａ／９５／２）を８頭の健常馬に（ＣＦ３２；４頭、ＮＣＴＣ９６８２；２頭、Ｈｉｄａｋａ／９５／２；２頭）接種し、腺疫を実験的に発症させた。十分な抗体価の上昇が推定される発症４週間後に各腺疫菌実験感染馬の頸静脈から採取した血液を３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離して腺疫菌実験感染馬血清を得た。腺疫菌の接種は、既報〔Ａｎｚａｉ，Ｔ．，Ｔｉｍｏｎｅｙ，Ｊ．Ｆ．，Ｋｕｗａｍｏｔｏ，Ｙ．，Ｆｕｊｉｔａ，Ｙ．，Ｗａｄａ，Ｒ．，Ｉｎｏｕｅ，Ｔ．；Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ  ｓｔｒａｉｎｓ  ｗｉｔｈ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｃａｐｓｕｌｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．：Ｖｅｔ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，（１９９９）Ｖｏｌ．６７，ｐｐ２７７〜２８６〕に準じて、馬の鼻腔内に腺疫菌（１×１０８  ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔｓ  （ＣＦＵ））を噴霧することにより行った。
【００２９】
〔Ｅｘ．１−３〕（ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清の採取）
ストレプトコッカス・ズーエピデミカス（Ｓｅｚ菌）の主要な表層タンパク質であるＭ様蛋白質ＳｚＰのＰＥＰＫ繰り返し回数が異なる４株を（株名：Ｗ６０、７、６７２９、２９３９４）を９頭の健常馬（Ｗ６０；３頭、７；２頭、６７２９；２頭、２９３９４；２頭）に接種し、ストレプトコッカス・ズーエピデミカスによる肺炎を実験的に発症させた。十分な抗体価の上昇が推定される発症４週間後に各ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬の頸静脈から採取した血液を３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離してストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清を得た。ストレプトコッカス・ズーエピデミカスの接種は、馬に塩酸メデトミジン（ドミトール、明治製菓、東京）を投与することにより鎮静化させた後、馬の気管支粘膜を２％塩酸リドカインにより表面麻酔しながら、馬用気管支鏡を馬の肺葉まで進め、馬用気管支鏡の鉗子孔からストレプトコッカス・ズーエピデミカス（１×１０９  ＣＦＵ）を注入することにより行った。
【００３０】
〔Ｅｘ．１−４〕（免疫学的試験法によるエピトープマッピング）
上述の〔Ｅｘ．１−１〕により合成した配列番号４（ＳｅＭ＃１）〜配列番号２２５（ＳｚＰＳＥ＃９１）の各アミノ酸配列を有する２２２種のペプチドを抗原として用い、第２実施形態による腺疫菌感染抗体の検出方法（免疫学的試験法）に準じて、〔Ｅｘ．１−２〕により得た各腺疫菌実験感染馬血清及び〔Ｅｘ．１−３〕により得た各ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清を検体として試験を行った。本実施例における免疫学的試験法としては、非競合のヘテロジニアス−固相法による酵素免疫測定法を採用し、具体的な免疫学的試験法の条件は次のとおりとした。
すなわち、合成したペプチドをリン酸緩衝液（Ｌａｒｇｅ  Ｖｏｌｕｍｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ  （×２５），ＬＡＢ  ＶＩＳＩＯＮ  Ｃｏｒｐ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）により１０μｇ／ｍＬに調整し、酵素免疫測定用プレート（９６ウェルマイクロプレート：ＮＵＮＣ−ＩＭＭＵＮＯ  ＰＬＡＴＥ；  Ｃ９６  ＭＡＸＩＳＯＲＰ（商品名），  ＲＯＳＫＩＬＤＥ，  ＤＥＮＭＡＲＫ）に添加し、酵素免疫測定用プレートを３７℃で６０分間保温することにより合成したペプチドを固相化（５０μＬ／ｗｅｌｌ、５００ｎｇ／ｗｅｌｌ）する。次に、添加したペプチド溶液を吸引除去した後、ブロッキング緩衝液（ブロックエース（商品名）、大日本製薬、大阪）により酵素免疫測定用プレートをブロッキングする。ブロッキング緩衝液を吸引除去した後、ブロッキング緩衝液で１００倍に希釈した検体〔腺疫感染馬血清あるいはストレプトコッカス・ズーエピデミカス感染馬血清（５０μＬ／ｗｅｌｌ〕を３７℃で６０分間反応させる。続いて、０．０５％のポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）を添加したリン酸緩衝液で酵素免疫測定用プレートを３回洗浄後、２次抗体として西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識プロテインＧ（５０００倍希釈液、５０μＬ／ｗｅｌｌ）（Ｇｏａｔ  Ａｎｔｉ−Ｈｏｒｓｅ  ＩｇＧ  （Ｈ＋Ｌ）−ＨＲＰ，  Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，  ＡＬ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）と３７℃で６０分間反応させる。次に、０．０５％のポリソルベート２０を添加したリン酸緩衝液で酵素免疫測定用プレートを５回洗浄後、発色試薬：ＡＢＴＳ  （Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｋｉｔ，  ＢＩＯ−ＲＡＤ，ＣＡ，Ｕ．Ｓ．Ａ．）により発色させ、分光光度計により４１５ｎｍにおける吸光度を測定する。
【００３１】
実施例１の結果は、各検体の吸光度が、ブランク（検体希釈液：ブロッキング緩衝液）の吸光度の２倍未満の場合を殆ど反応しないものと判定し（空欄：無印）、２倍以上１０倍未満の場合を反応有りと判定し（○印）、１０倍以上の場合を強く反応と判定し（●印）、表１〜表１５に示した（表１〜９：ＳｅＭ、表１０〜１５：ＳｚＰＳｅ）。腺疫菌実験感染馬血清とは強く反応し、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清とは殆ど反応しないペプチドは、プロリン−グルタミン酸−プロリン−リジン（ＰＥＰＫ）でなるアミノ酸配列が３回繰り返されたＰＥＰＫ繰返し配列を有するペプチド１種類（Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ；配列番号２０２：ＳｚＰＳｅ＃６８（２６９〜２８４）、配列番号２０３：ＳｚＰＳｅ＃６９（２７３〜２８８）、配列番号２０４：ＳｚＰＳｅ＃７０（２７７−２９２）、配列番号２０５：ＳｚＰＳｅ＃７１（２８１〜２９６）、配列番号２０６：ＳｚＰＳｅ＃７２（２８５〜３００）、配列番号２０７：ＳｚＰＳｅ＃７３（２８９〜３０４）、配列番号２０８：ＳｚＰＳｅ＃７４（２９３〜３０８）：いずれも配列は同じ）であった。このことから、ＰＥＰＫ繰返し配列を有するペプチドが、腺疫菌感染馬血清と特異的に反応する抗原であることが明らかとなった。
【００３２】
【表１】
2007055920.tif 000002
【００３３】
【表２】
2007055920.tif 000003
【００３４】
【表３】
2007055920.tif 000004
【００３５】
【表４】
2007055920.tif 000005
【００３６】
【表５】
2007055920.tif 000006
【００３７】
【表６】
2007055920.tif 000007
【００３８】
【表７】
2007055920.tif 000008
【００３９】
【表８】
2007055920.tif 000009
【００４０】
【表９】
2007055920.tif 000010
【００４１】
【表１０】
2007055920.tif 000011
【００４２】
【表１１】
2007055920.tif 000012
【００４３】
【表１２】
2007055920.tif 000013
【００４４】
【表１３】
2007055920.tif 000014
【００４５】
【表１４】
2007055920.tif 000015
【００４６】
【表１５】
2007055920.tif 000016
【００４７】
〔実施例２〕
〔Ｅｘ．２−１〕（ペプチド及び合成）
実施例１（Ｅｘ．１−１）の場合と同様の合成法により、Ｎ末端からプロリン、グルタミン酸、プロリン及びリジン（ＰＥＰＫ）の配列を１回、２回、３回、４回、５回、６回及び７回繰り返すペプチド（それぞれ４、８、１２、１４、２０、２４、２８残基に相当：純度９５重量％以上）を合成した。
【００４８】
〔Ｅｘ．２−２〕（腺疫菌実験感染馬の血清採取）
実施例１（Ｅｘ．１−２）の場合と同様にして、腺疫菌３株を８頭の健常馬に接種し、腺疫を実験的に発症させ、腺疫菌実験感染馬の血清を採取した。ただし、腺疫菌接種前の健常馬についても、頸静脈から採血し、感染前健常馬血清を得た。
【００４９】
〔Ｅｘ．２−３〕（ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清の採取）
実施例１（Ｅｘ．１−３）の場合と同様にして、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス４株を９頭の健常馬に接種し、ストレプトコッカス・ズーエピデミカスによる肺炎を実験的に発症させ、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清を採取した。ただし、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス接種前の健常馬についても、頸静脈から採血し、感染前健常馬血清を得た。
【００５０】
〔Ｅｘ．２−４〕（免疫学的試験法による反応性）
上述の〔Ｅｘ．２−１〕により合成した７種のペプチドを抗原として用い、実施例１の免疫学的試験法（具体的な免疫学的試験法の条件）に準じて、〔Ｅｘ．２−２〕により得た各腺疫菌実験感染馬血清及び感染前健常馬血清、並びに〔Ｅｘ．２−３〕により得た各ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清及び感染前健常馬血清を検体として試験を行った。各検体について、試験の繰返し回数は、３回（３重測定）とした。
【００５１】
実施例２の結果は、各検体の吸光度を平均値±標準偏差として、腺疫菌実験感染馬血清との反応性を図１に、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清との反応性を図２に示した。Ｎ末端からプロリン、グルタミン酸、プロリン及びリジン（ＰＥＰＫ）の繰り返し配列を３回以上繰り返すペプチドが、腺疫菌実験感染馬血清とは反応するが、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清とはあまり反応しないことが明らかとなった。特に、Ｎ末端からプロリン、グルタミン酸、プロリン及びリジン（ＰＥＰＫ）の配列を５回繰り返すペプチド（２０残基）が、腺疫菌実験感染馬血清とは強く反応するが、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清とはほとんど反応しないことが明らかとなった。
【００５２】
〔実施例３〕
〔Ｅｘ．３−１〕（ペプチド及び合成）
実施例１（Ｅｘ．１−１）の場合と同様の合成法により、ＰＥＰＫでなるアミノ酸配列を５回繰り返すペプチド（繰返し回数５のＰＥＰＫ繰返し配列からなるペプチド：純度９５重量％以上）を合成した。
【００５３】
〔Ｅｘ．３−２〕（健常馬血清の採取）
臨床的に健康で、腺疫菌に罹患歴のない馬５８６頭の頸静脈から採取した血液を３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離して、各健常馬血清を得た。
【００５４】
〔Ｅｘ．３−３〕（腺疫菌自然感染馬血清の採取）
腺疫菌感染が発生した牧場の馬２８頭の頸静脈から、十分な抗体価の上昇が推定される腺疫発症４週間後に採取した血液を３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離して、腺疫菌自然感染馬血清を得た。
【００５５】
〔Ｅｘ．３−４〕（腺疫菌実験感染馬の血清採取）
実施例１（Ｅｘ．１−２）の場合と同様にして、腺疫菌３株を８頭の健常馬に接種し、腺疫を実験的に発症させ、腺疫菌実験感染馬の血清を採取した。
【００５６】
〔Ｅｘ．３−５〕（ストレプトコッカス・ズーエピデミカス自然感染馬血清の採取）
肺炎を自然発症し、その病性鑑定によりストレプトコッカス・ズーエピデミカスが単分離されたストレプトコッカス・ズーエピデミカス自然感染馬１０頭の頸静脈から、十分な抗体価の上昇が推定される肺炎発症４週間後に採取した血液を、３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離して、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス自然感染馬血清を得た。
【００５７】
〔Ｅｘ．３−６〕（ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清の採取）
実施例１（Ｅｘ．１−３）の場合と同様にして、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス４株を９頭の健常馬に接種し、ストレプトコッカス・ズーエピデミカスによる肺炎を実験的に発症させ、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清を採取した。
【００５８】
〔Ｅｘ．３−７〕（免疫学的試験法による反応性、腺疫感染診断の感度、特異性）
上述の〔Ｅｘ．３−１〕により合成したペプチドを抗原として用い、実施例１の免疫学的試験法（具体的な免疫学的試験法の条件）に準じて、〔Ｅｘ．３−２〕により得た各健常馬血清、〔Ｅｘ．３−３〕により得た各腺疫菌自然感染馬血清、〔Ｅｘ．３−４〕により得た各腺疫菌実験感染馬血清、〔Ｅｘ．３−５〕により得た各ストレプトコッカス・ズーエピデミカス自然感染馬血清、〔Ｅｘ．３−６〕により得た各ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清を検体として試験を行った。各検体について、試験の繰返し回数は、３回（３重測定）とした。
【００５９】
実施例３の結果は、健常馬５８６頭、腺疫菌感染馬（自然感染及び実験感染）３６頭、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス自然感染馬１０頭、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬９頭について、各検体における吸光度の夫々平均値±標準偏差、並びに、夫々の最高値（★印）と最低値（▲印）を図３に示した。また、吸光度による各種カットオフ値による腺疫感染診断の（臨床的）感度、特異性を求め、表１６に示した。腺疫菌感染馬血清の吸光度は、１．６４７±０．２５６（平均値±標準偏差）であり、その範囲は１．１２１〜１．９７４であった（図３）。また、健常馬血清の吸光度は、０．０９３±０．１００であり、その範囲は０．０１６〜０．６５０であった。一方、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス感染馬血清の吸光度は、０．２２７±０．２１６であり、その範囲は０．０６３〜０．９８７であった。以上のことから、腺疫菌感染馬は、吸光度０．９８７をカットオフ値とすることにより１００％の感度および特異性で特異的に摘発されることが明らかとなった（表１６）。また、カットオフ値を健常馬の吸光度平均値±２標準偏差とした場合でも、感度１００％、特異性９３．２％で腺疫菌感染馬を摘発できることが明らかとなった。
【００６０】
【表１６】
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【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】本発明のペプチドと腺疫菌実験感染馬血清との反応性を試験した１例を示すグラフである。
【図２】本発明のペプチドとストレプトコッカス・ズーエピデミカス実験感染馬血清との反応性を試験した１例を示すグラフである。
【図３】本発明のペプチドの腺疫菌感染馬血清、ストレプトコッカス・ズーエピデミカス感染馬血清との反応性を比較試験した１例を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年5月23日(2006.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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