(57)【要約】【課題】ジアシルオキサゾロン並びにβ−ケトアミノ酸誘導体を、短工程かつ強塩基や低温反応を必要としない温和な条件で製造する工業的方法を提供すること。【解決手段】下記一般式（１）2007091731.tif 000050（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるジアシルオキサゾロン。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）
【化１】
2007091731.tif 000033
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるジアシルオキサゾロン。
【請求項２】
下記一般式（２）
【化２】
2007091731.tif 000034
（式中、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるグリシン誘導体と下記一般式（Ａ）
【化３】
2007091731.tif 000035
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｘは脱離基を示す。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする、下記一般式（１）
【化４】
2007091731.tif 000036
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義である。）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法。
【請求項３】
下記一般式（１）
【化５】
2007091731.tif 000037
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるジアシルオキサゾロンとアルコールを反応させることを特徴とする下記一般式（３）
【化６】
2007091731.tif 000038
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義であり、Ｒ3はアルコール残基を示す。）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法。
【請求項４】
下記一般式（４）
【化７】
2007091731.tif 000039
（式中、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるオキサゾロン類と下記一般式（Ａ）
【化８】
2007091731.tif 000040
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｘは脱離基を示す。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする下記一般式（１）
【化９】
2007091731.tif 000041
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義である。）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法。
【請求項５】
下記一般式（５）
【化１０】
2007091731.tif 000042
（式中、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、Ｒ4は環状又は分岐状アルキル基を示す。）で表されるオキサゾール類。
【請求項６】
下記一般式（５）
【化１１】
2007091731.tif 000043
（式中、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、Ｒ4は環状又は分岐状アルキル基を示す。）で表されるオキサゾール類を下記一般式（Ａ）
【化１２】
2007091731.tif 000044
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｘは脱離基を示す。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする下記一般式（１）
【化１３】
2007091731.tif 000045
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義である。）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法。
【請求項７】
請求項２、４又は６のいずれかに記載の方法で得られたジアシルオキサゾロンとアルコールを反応させることを特徴とする下記一般式（３）
【化１４】
2007091731.tif 000046
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、Ｒ3はアルコール残基を示す。）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法。
【請求項８】
（ｉ）請求項７に記載の方法により一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造する工程、及び
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られた一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体に微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させて下記一般式（９）
【化１５】
2007091731.tif 000047
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、Ｒ3はアルコール残基を示す。）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体を得る工程を含む、光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体を製造する方法。
【請求項９】
（ｉ）請求項８に記載の方法により一般式（９）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体を製造する工程、
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られた光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体に酸又は塩基を作用させて加水分解を行い、下記一般式（１０）
【化１６】
2007091731.tif 000048
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示す。）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸を得る工程；及び
（ｉｉｉ）上記工程（ｉｉ）で得られた光学活性β−ヒドロキシアミノ酸にｔ−ブトキシカルボニル化剤を作用させて下記一般式（８）
【化１７】
2007091731.tif 000049
（式中、Ｒ1は前記と同義である。）で表される化合物を製造する工程、を含む光学活性Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジアシルオキサゾロン及びその製造方法、並びにβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法に関する。本発明の方法で得られるジアシルオキサゾロン、並びにβ−ケトアミノ酸誘導体は、光学活性β−ヒドロキシアミノ酸を経由して、抗ＨＩＶウィルス薬として有用なことが知られている薬剤の中間体であるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン等に誘導可能であることから、医農薬中間体として有用な化合物である。
【背景技術】
【０００２】
本発明のジアシルオキサゾロンは新規化合物であり、これまで有効な合成法は知られていなかった。また、ジアシルオキサゾロン類縁体であるアシルオキサゾロンの合成法としては、馬尿酸から単段階で合成する方法（例えば、非特許文献１参照）、及び２−フェニル−５−オキサゾロンから合成する方法（例えば、非特許文献２参照）等が知られているが、回収困難なピコリンを溶媒として大過剰に用いる必要があるという問題がある上、いずれもα位に置換基を持たない酸クロリドを用いて実施しており、本発明者らが検討した結果、α位に置換基を持つ酸クロリドでは低収率であった。また、α位に置換基を持つアシル化剤を用いた例も報告されているが（例えば、非特許文献３、特許文献１参照）、いずれも３０％程度と低収率であった。
【０００３】
β−ケトアミノ酸誘導体の合成法としては、β−ケトエステルから誘導する方法が知られているが（例えば、非特許文献４参照）、β−ケトエステルから更に３工程が必要であり、効率のよい製造方法とは言えない。また、β−ケトアミノ酸誘導体を製造する他の方法としては、アルキルイソシアノアセテートを原料とする方法が知られている（例えば、非特許文献５参照）。しかし、この方法は原料が非常に高価であることから、工業化には不適切である。
【０００４】
更にβ−ケトアミノ酸誘導体の別の合成方法としては、グリシン誘導体を原料とする方法が知られている。グリシンエステルのアミン部をイミンに変換後、アシル化剤と反応させて合成する手法（例えば、非特許文献６参照）では、強塩基の存在下、極低温で反応を行う必要があり、必ずしも工業的に簡便であるとは言えない。また、強塩基に替えてルイス酸を用いる手法（例えば、非特許文献７参照）も知られているが、低温で反応を行う必要があるという問題点があった。
【０００５】
【特許文献１】特開平１−３０５０７１号公報
【非特許文献１】Ｂｕｌｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＳＲ  Ｄｉｖ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１９８２，３１，２２２３．
【非特許文献２】Ｂｕｌｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＳＲ  Ｄｉｖ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，１９８４，３３，３８４．
【非特許文献３】Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６０，９６８．
【非特許文献４】Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９８９，３２，２１１６．
【非特許文献５】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ａｓｙｍ．，２００１，１２，１７４７．
【非特許文献６】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９３，３４，２１１．
【非特許文献７】Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００５，１２７，２８５４．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ジアシルオキサゾロン並びにβ−ケトアミノ酸誘導体を、短工程かつ強塩基や低温反応を必要としない温和な条件で製造する工業的方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らが上記課題を解決するために鋭意検討した結果、グリシン誘導体、オキサゾロン類又はオキサゾール類をアシル化剤と処理することでジアシルオキサゾロンを合成でき、更にアルコールと反応させることで、β−ケトアミノ酸誘導体を温和な条件、短工程で効率的に合成できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１）  下記一般式（１）
【化１】
2007091731.tif 000002
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるジアシルオキサゾロン。
【０００９】
（２）  下記一般式（２）
【化２】
2007091731.tif 000003
（式中、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるグリシン誘導体と下記一般式（Ａ）
【化３】
2007091731.tif 000004
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｘは脱離基を示す。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする、下記一般式（１）
【化４】
2007091731.tif 000005
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義である。）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法。
【００１０】
（３）  下記一般式（１）
【化５】
2007091731.tif 000006
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるジアシルオキサゾロンとアルコールを反応させることを特徴とする下記一般式（３）
【化６】
2007091731.tif 000007
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義であり、Ｒ3はアルコール残基を示す。）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法、
【００１１】
（４）  下記一般式（４）
【化７】
2007091731.tif 000008
（式中、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるオキサゾロン類と下記一般式（Ａ）
【化８】
2007091731.tif 000009
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｘは脱離基を示す。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする下記一般式（１）
【化９】
2007091731.tif 000010
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義である。）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法。
【００１２】
（５）  下記一般式（５）
【化１０】
2007091731.tif 000011
（式中、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、Ｒ4は環状又は分岐状アルキル基を示す。）で表されるオキサゾール類。
【００１３】
（６）  下記一般式（５）
【化１１】
2007091731.tif 000012
（式中、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、Ｒ4は環状又は分岐状アルキル基を示す。）で表されるオキサゾール類を下記一般式（Ａ）
【化１２】
2007091731.tif 000013
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｘは脱離基を示す。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする下記一般式（１）
【化１３】
2007091731.tif 000014
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義である。）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法。
【００１４】
（７）  （２）、（４）又は（６）のいずれかに記載の方法で得られたジアシルオキサゾロンとアルコールを反応させることを特徴とする下記一般式（３）
【化１４】
2007091731.tif 000015
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、Ｒ3はアルコール残基を示す。）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法。
【００１５】
（８）  （ｉ）（７）に記載の方法により一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を製造する工程、及び
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られた一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体に微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させて下記一般式（９）
【化１５】
2007091731.tif 000016
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、Ｒ3はアルコール残基を示す。）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体を得る工程を含む、光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体を製造する方法。
【００１６】
（９）  （ｉ）（８）に記載の方法により一般式（９）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体を製造する工程、
（ｉｉ）上記工程（ｉ）で得られた光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体に酸又は塩基を作用させて加水分解を行い、下記一般式（１０）
【化１６】
2007091731.tif 000017
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示す。）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸を得る工程；及び
（ｉｉｉ）上記工程（ｉｉ）で得られた光学活性β−ヒドロキシアミノ酸にｔ−ブトキシカルボニル化剤を作用させて下記一般式（８）
【化１７】
2007091731.tif 000018
（式中、Ｒ1は前記と同義である。）で表される化合物を製造する工程、を含む光学活性Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸の製造方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明により、新規なジアシルオキサゾロンとその工業的に好ましい効率的製造法を見出した。更にジアシルオキサゾロンからβ−ケトアミノ酸誘導体への変換法を確立し、医農薬中間体として有用な化合物であるβ−ケトアミノ酸誘導体を安価かつ温和な条件で製造することが可能となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、本発明を詳細に説明する。
＜ジアシルオキサゾロンの製造方法＞
本発明は、下記一般式（１）
【化１８】
2007091731.tif 000019
（式中、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は置換していてもよい炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示す。）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法に係るものである。
【００１９】
上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンは、５−オキサゾロンの４位に一つのアシル基が結合し、そのケトン部位がエノール化したところに更にもう一つのアシル基が結合した化合物である。なお、上記一般式（１）は新規化合物である。
【００２０】
上記一般式（１）において、Ｒ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、アルキル基は直鎖状、環状又は分岐状のいずれでもよい。アルキル基の具体例は以下に挙げられ、これらに限定されるものではないが、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、デシル基等の直鎖状アルキル基；シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等の環状アルキル基；イソプロピル基、１−メチルプロピル基、ｔ−ブチル基、１−メチルブチル基、１−メチルペンチル基、１−エチルブチル基、１−メチルヘキシル基、１−メチルヘプチル基等の分岐状アルキル基が挙げられる。これらの中で好ましくはメチル基、エチル基、デシル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基であり、更に好ましくは抗ＨＩＶウィルス薬として有用な薬剤の中間体であるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンに誘導可能なシクロヘキシル基である。
【００２１】
Ｒ2は炭素数１〜１０のアルキル基又はアリール基を示し、置換していてもよく、アルキル基は直鎖状、環状又は分岐状のいずれでもよい。アルキル基又はアリール基の具体例は以下に挙げられ、これらに限定されるものではないが、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の直鎖状アルキル基；シクロペンチル基、シクロヘキシル基等の環状アルキル基；イソプロピル基、１−メチルプロピル基、ｔ−ブチル基等の分岐状アルキル基；フェニル基、ピリジル基等のアリール基が挙げられる。これらの中で好ましくはメチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、フェニル基であり、更に好ましくは工業的に安価なＮ−アセチルグリシン、Ｎ−ピバロイルグリシン及び馬尿酸より誘導できるメチル基、ｔ−ブチル基及びフェニル基であり、特に好ましくはフェニル基である。これらは本発明の反応に影響を与えない範囲において任意に置換されていてもよい。
【００２２】
置換基の種類は特に限定されないが、その具体例としては、フッ素、塩素、臭素等のハロゲン原子；メチル基、エチル基、シクロヘキシル基、イソプロピル基等の直鎖状、環状又は分岐状のアルキル基；フェニル基、ピリジル基、ピペロニル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、フェノキシ基、イソプロポキシ基等のアルコキシ基；ジメチルアセタール、エチレンアセタール等のアセタール基；シアノ基；ニトロ基である。置換基を有するＲ2の好ましい具体例としては、ベンジル基、トリフルオロメチル基、４−メチルフェニル基、３−クロロフェニル基が挙げられる。
【００２３】
上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンの具体例としては、４−（１−アセトキシエチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン、２−フェニル−４−（１−プロピオニルオキシプロピリデン）−５−オキサゾロン、４−（１−ウンデカノイル−１−ウンデシリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン、４−（１−シクロペンチルカルボニルオキシ−１−シクロペンチルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン、４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン、４−［１−（２−メチルプロピオニルオキシ）−２−メチルプロピリデン］−２−フェニル−５−オキサゾロン、４−［１−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−２，２−ジメチルプロピリデン］−２−フェニル−５−オキサゾロン、４−（１−アセトキシエチリデン）−２−メチル−５−オキサゾロン、４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−メチル−５−オキサゾロン、４−（１−アセトキシエチリデン）−２−（１，１−ジメチルエチル）−５−オキサゾロン、４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−（１，１−ジメチルエチル）−５−オキサゾロン、４−（１−アセトキシエチリデン）−２−（４−クロロフェニル）−５−オキサゾロン、４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−（４−クロロフェニル）−５−オキサゾロンが挙げられる。
【００２４】
上記一般式（１）において、Ｒ1とＲ2の好ましい組み合わせは、Ｒ1が炭素数１〜１０の環状又は分岐状のアルキル基かつＲ2がアリール基であり、更に好ましくはＲ1が抗ＨＩＶウィルス薬として有用な薬剤の中間体であるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンに誘導可能なシクロヘキシル基かつＲ2が安価な馬尿酸より誘導可能なフェニル基である。
【００２５】
上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンの好ましい具体例としては、４−（１−シクロペンチルカルボニルオキシ−１−シクロプロピルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン、４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン、４−［１−（２−メチルプロピオニルオキシ）−２−メチルプロピリデン］−２−フェニル−５−オキサゾロン、４−［１−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−２，２−ジメチルプロピリデン］−２−フェニル−５−オキサゾロンが挙げられ、更に好ましくは４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロンである。
【００２６】
上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンは、５−オキサゾロンの４位に一つのアシル基が結合し、そのケトン部位がエノール化したところに更にもう一つのアシル基が結合した化合物である。
【００２７】
上記一般式（１）においてオレフィンの幾何異性体が存在するが、Ｅ体、Ｚ体のいずれでもよく、また、その任意の割合の混合物でもよい。
【００２８】
上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンは、以下に示す本発明の（I）〜（III）の製造方法のうち、いずれかの方法で製造することができる。
【００２９】
【化１９】
2007091731.tif 000020
【００３０】
（Ｉ）本発明は、下記一般式（２）
【化２０】
2007091731.tif 000021
（式中、Ｒ2は前記と同義である。）で表されるグリシン誘導体と下記一般式（Ａ）
【化２１】
2007091731.tif 000022
（式中、Ｒ1は前記と同義である。Ｘは脱離基を示す。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法である。
【００３１】
上記一般式（２）で表されるグリシン誘導体は、グリシンのアミノ基がアシル基で保護された化合物であり、多くが化学品又は試薬として購入可能で、また、グリシンをアシル化することにより、公知の方法で任意に合成することができる。グリシン誘導体は塩であってもよい。グリシン又はその塩をアシル化剤と処理し、上記一般式（２）で表されるグリシン誘導体とした後、そのまま精製せずに反応に用いることもできる。
【００３２】
上記一般式（２）で表されるグリシン誘導体は、本発明に影響を与えない範囲において特に限定されないが、その具体例としては、Ｎ−アセチルグリシン、Ｎ−プロピオニルグリシン、Ｎ−ピバロイルグリシン、馬尿酸、Ｎ−トリフルオロアセチルグリシン、馬尿酸ナトリウム、馬尿酸カリウム、馬尿酸リチウム、馬尿酸テトラブチルアンモニウム等が挙げられる。
【００３３】
上記一般式（Ａ）で表されるアシル化剤において、Ｘは脱離基を示し、塩素、臭素、ヨウ素等のハロゲン原子；酸無水物を形成するＲ1ＣＯ2からなるアシルオキシ基；ピバロイルオキシ基、ベンゾイルオキシ基等の非対称アシルオキシ基；メタンスルホニルオキシ基、トルエンスルホニルオキシ基等のスルホニルオキシ基；メトキシカルボニルオキシ基、ｔ−ブトキシカルボニルオキシ基等のアルコキシカルボニルオキシ基が挙げられる。これらの中で好ましくはハロゲン原子、Ｒ1ＣＯ2からなるアシルオキシ基であり、更に好ましくは塩素原子である。
【００３４】
上記反応の中間体として、上記一般式（４）で表されるオキサゾロン類が確認されている。また、上記一般式（５）で表されるオキサゾール類、下記一般式（６）
【化２２】
2007091731.tif 000023
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同義である。）で表されるアシルオキサゾロンを経由していると考えられる。
【００３５】
上記一般式（Ａ）で表されるアシル化剤としては、特に限定はなく公知のものを使用できるが、好ましくはカルボン酸クロリド、カルボン酸ブロミド、カルボン酸ヨージド、カルボン酸無水物であり、更に好ましくはカルボン酸クロリド又はカルボン酸無水物、特に好ましくは工業的に安価に購入でき、或いはカルボン酸から容易に調製可能であるカルボン酸クロリドである。また、アシル化剤の使用量はグリシン誘導体に対して２〜１０当量、上記一般式（４）で表されるオキサゾロン類を経由する反応機構上、３当量以上のアシル化剤が必要とされるため、好ましくは３〜５当量である。
【００３６】
上記反応において、使用するアシル化剤とは異なる活性化剤を用いることで、アシル化剤の使用量を削減することができる。用いられる活性化剤としては、ベンソイルクロリド、ピバル酸クロリド、クロロ蟻酸エチル、塩化チオニル、トリホスゲン、ジホスゲン、ホスゲン、塩化オギザリル、オキシ塩化リン、五塩化リン等が挙げられ、好ましくは塩化チオニル、トリホスゲン、塩化オギザリル、オキシ塩化リンである。また、活性化剤の使用量は、用いる活性化剤により必要とされる量が異なるが、グリシン誘導体に対して０．１〜２当量、好ましくは０．３〜２当量であり、活性化剤を使用した場合のアシル化剤の使用量は、グリシン誘導体に対して１〜１０当量、好ましくは２〜３当量である。
【００３７】
上記反応において、必要に応じてアシル化触媒を共存させてもよい。アシル化触媒としては特に限定はなく、公知のものを使用すればよいが、ピリジン、２−ピコリン、３−ピコリン、４−ピコリン、２，４−ルチジン、４−ジメチルアミノピリジン等のピリジン類；イミダゾール、１−メチルイミダゾール等のイミダゾール類が挙げられ、好ましくは４−ジメチルアミノピリジンである。また、アシル化触媒の使用量は、グリシン誘導体に対して０．０１〜２当量であり、試剤のコストを抑える観点から好ましくは０．０１〜０．２当量である。
【００３８】
上記反応では、溶媒を用いることでジアシルオキサゾロンが優先的に生成しており、選択性向上の観点から溶媒の使用が好ましい。また、反応中多量の塩が生成するため、効率的な撹拌を行う上でも溶媒の使用が好ましい。
【００３９】
用いられる溶媒としては、反応に悪影響を与えない限り特に限定されないが、具体的にはヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素系溶媒；エチルエーテル、プロピルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン系溶媒；ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド系溶媒；炭酸ジメチル、炭酸ジエチル等の炭酸エステル系溶媒；アセトニトリル等のニトリル系溶媒等が挙げられる。これらから選ばれる複数の溶媒を任意の割合に混合して用いてもよい。好ましい溶媒としては、非プロトン性中性溶媒であり、汎用性の高いテトラヒドロフラン、ジクロロメタン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリルが挙げられ、更に好ましい溶媒として、生成物の溶解度が低く反応中に析出するため、反応の選択性も高く、精製も容易なアセトン、アセトニトリルが挙げられる。また、溶媒の使用量としては、任意の量の溶媒を用いることができるが、通常はグリシン誘導体に対して２〜５０倍体積量、好ましくは３〜１５倍体積量である。
【００４０】
上記反応において、塩基を存在させることが好ましい。用いられる塩基としては、ピリジン、２−ピコリン、３−ピコリン、４−ピコリン、２，４−ルチジン、４−ジメチルアミノピリジン等のピリジン類；トリエチルアミン、Ｎ−メチルピペリジン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン等の飽和有機塩基；１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン等の有機強塩基が挙げられ、これらから選ばれる複数の塩基を任意の割合に混合して用いてもよい。これらの中で好ましくはピリジン類の単独使用又は他の塩基との混合使用であり、更に好ましくはアシル基を活性化し、上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンへと高選択的に変換できる４−ピコリンの単独使用又は他の塩基との混合使用である。また、用いる塩基の当量は、溶媒として大過剰に用いることもできるが、通常副生する酸を中和するために必要な量であり、グリシン誘導体に対して２〜１０当量、大量に使用すると生成した目的物の取得操作が煩雑になり、コストも高くなるため、好ましくは４〜７当量である。
【００４１】
反応温度は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定はなく、用いるアシル化剤により最適点は異なるが、通常、−２０〜１２０℃である。特に好ましいアシル化剤であるカルボン酸クロリドの場合、好ましくは０〜７０℃であり、更に好ましくは２０〜５０℃である。
【００４２】
上記反応の反応時間は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定はないが、１０分〜２４時間の範囲で行うことが製造コストを抑える観点からも好ましく、更に好ましくは１〜１０時間である。
【００４３】
上記反応で得られる一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンは、精製することなく次工程に使用することが、操作を簡略化し、塩基等の使用量を削減できるため好ましいが、抽出及び／又は晶析等の方法で精製することもできる。
【００４４】
抽出及び／又は晶析に用いる溶媒は特に限定されないが、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素系溶媒；エチルエーテル、プロピルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン系溶媒；炭酸ジメチル、炭酸ジエチル等の炭酸エステル系溶媒；アセトニトリル等のニトリル系溶媒；水等が挙げられる。これらから選ばれる複数の溶媒を任意の割合に混合して用いてもよい。反応溶媒をそのまま、又は別の溶媒を追加して抽出及び／又は晶析を行うことが、操作短縮と溶媒使用量削減の観点から好ましい。更に好ましい晶析溶媒としては、ヘキサン、ヘプタン、トルエン、酢酸エチル、アセトン、メチルエチルケトン、アセトニトリル、水又はこれらの混合溶媒が挙げられ、特に好ましくは一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンの溶解度が一般に低いアセトン、アセトニトリル、水又はこれらの混合溶媒が挙げられる。
【００４５】
（II）本発明は、下記一般式（４）
【化２３】
2007091731.tif 000024
（式中、Ｒ2は前記と同義である）で表されるオキサゾロン類と下記一般式（Ａ）
【化２４】
2007091731.tif 000025
（式中、Ｒ1及びＸは前記と同義である。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法である。
【００４６】
上記一般式（４）で表されるオキサゾロン類は、アセチルグリシンや馬尿酸等のグリシン誘導体の縮合反応により、公知の方法で任意に合成することができる。
【００４７】
上記一般式（４）で表されるオキサゾロン類は、本発明に影響を与えない範囲において特に限定されないが、その具体例としては、２−メチル−５−オキサゾロン、２−エチル−５−オキサゾロン、２−ｔ−ブチル−５−オキサゾロン、２−フェニル−５−オキサゾロン、２−トリフルオロメチル−５−オキサゾロン等が挙げられる。
【００４８】
上記一般式（Ａ）で表されるアシル化剤としては、特に限定はなく公知のものを使用できるが、好ましくはカルボン酸クロリド、カルボン酸ブロミド、カルボン酸ヨージド、カルボン酸無水物であり、更に好ましくはカルボン酸クロリド又はカルボン酸無水物、特に好ましくは工業的に安価に購入でき、或いはカルボン酸から容易に調製可能であるカルボン酸クロリドである。また、アシル化剤の使用量はオキサゾロン類に対して１〜１０当量、好ましくは２〜３当量である。
【００４９】
上記反応には必要に応じてアシル化触媒を共存させてもよい。アシル化触媒としては特に限定はなく、公知のものを使用すればよいが、ピリジン、２−ピコリン、３−ピコリン、４−ピコリン、２，４−ルチジン、４−ジメチルアミノピリジン等のピリジン類；イミダゾール、１−メチルイミダゾール等のイミダゾール類が挙げられ、好ましくは４−ジメチルアミノピリジンである。また、アシル化触媒の使用量は、オキサゾロン類に対して０．０１〜２当量であり、試剤のコストを抑える観点から好ましくは０．０１〜０．２当量である。
【００５０】
上記反応では多量の塩が生成するため、効率的な撹拌を行う上でも溶媒の使用が好ましい。
【００５１】
用いられる溶媒としては、本発明のジアシルオキサゾロン製造法（I）に用いたものと同じものが使用でき、好ましい溶媒としては、トルエン、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、アセトニトリルが挙げられ、更に好ましい溶媒として、安価で回収も容易なトルエン、ジクロロメタン、酢酸エチルが挙げられる。また、溶媒の使用量としては、任意の量の溶媒を用いることができるが、通常はオキサゾロン類に対して２〜５０倍体積量、好ましくは３〜１０倍体積量である。
【００５２】
上記反応において、塩基を存在させることが好ましい。用いられる塩基としては、本発明のジアシルオキサゾロン製造法（I）に用いたものと同じものが使用でき、好ましくはピリジン類及び飽和有機塩基であり、更に好ましくはピリジン、４−ピコリン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルピペリジンである。用いる塩基の当量は、通常副生する酸を中和するために必要な量であるが、塩基を溶媒として用いてもよい。通常、オキサゾロン類に対して１〜１０当量、大量に使用すると生成した目的物の取得操作が煩雑になり、コストも高くなるため、好ましくは２〜４当量である。
【００５３】
上記反応の反応温度は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定はなく、用いるアシル化剤により最適点は異なるが、通常、−２０〜１２０℃である。特に好ましいアシル化剤であるカルボン酸クロリドの場合、好ましくは０〜２０℃である。
【００５４】
上記反応の反応時間は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定はないが、１０分〜２４時間の範囲で行うことが製造コストを抑える観点からも好ましく、更に好ましくは１０分〜６時間である。
【００５５】
上記反応で得られる一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンは、精製することなく次工程に使用することもできるが、抽出及び／又は晶析等の方法で精製することが好ましい。
【００５６】
抽出及び／又は晶析に用いる溶媒は本発明のジアシルオキサゾロン製造法（I）で用いたものと同じものを使用することができ、上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンの溶解度が一般に低いアセトン、アセトニトリル、水又はこれらの混合溶媒が特に好ましい。
【００５７】
（III）本発明は、下記一般式（５）
【化２５】
2007091731.tif 000026
（式中、Ｒ2は前記と同義であり、Ｒ4は環状又は分岐状アルキル基を示す。）で表されるオキサゾール類と下記一般式（Ａ）
【化２６】
2007091731.tif 000027
（式中、Ｒ1は前記と同義である。Ｘは脱離基を示す。）で表されるアシル化剤を反応させることを特徴とする上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンの製造方法である。
【００５８】
上記一般式（５）で表されるオキサゾール類は、２−置換オキサゾールの５位にアシルオキシ基が結合した化合物である。なお、上記一般式（５）で表されるオキサゾール類は新規化合物である。
【００５９】
上記一般式（５）において、Ｒ4は環状又は分岐状のアルキル基を示し、置換基を有していてもよい。アルキル基の具体例は以下に挙げられ、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等の環状アルキル基；イソプロピル基、１−メチルプロピル基、ｔ−ブチル基、１−メチルブチル基、１−メチルペンチル基、１−エチルブチル基、１−メチルヘキシル基、１−メチルヘプチル基等の分岐状アルキル基が挙げられる。これらの中で好ましくはシクロペンチル基、シクロヘキシル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基であり、更に好ましくはシクロヘキシル基である。
【００６０】
上記一般式（５）において、Ｒ2とＲ4の好ましい組み合わせは、Ｒ2がアリール基かつＲ4が環状又は分岐状のアルキル基であり、更に好ましくはＲ2が安価な馬尿酸より誘導可能なフェニル基かつＲ4が抗ＨＩＶウィルス薬として有用な薬剤の中間体であるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリンに誘導可能なシクロヘキシル基である。
【００６１】
上記一般式（５）で表されるオキサゾール類の好ましい具体例としては、５−シクロペンチルカルボニルオキシ−２−フェニルオキサゾール、５−シクロヘキシルカルボニルオキシ−２−フェニルオキサゾール、５−（２−メチルプロピオニルオキシ）−２−フェニルオキサゾール、５−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−２−フェニルオキサゾールが挙げられ、更に好ましくは５−シクロヘキシルカルボニルオキシ−２−フェニルオキサゾールである。
【００６２】
上記一般式（５）で表されるオキサゾール類は、上記一般式（４）で表されるオキサゾロン類のＯ−アシル化により得ることができる。
【００６３】
上記一般式（４）で表されるオキサゾロン類のＯ−アシル化反応において、アシル化剤としては、特に限定はなく公知のものを使用できるが、好ましくはカルボン酸クロリド、カルボン酸ブロミド、カルボン酸ヨージド、カルボン酸無水物であり、更に好ましくはカルボン酸クロリド又はカルボン酸無水物、より好ましくは工業的に安価に購入でき、或いはカルボン酸から容易に調製可能であるカルボン酸クロリドである。上記反応において使用されるアシル化剤の量はオキサゾロン類に対して１〜１０当量、好ましくは１〜２当量である。
【００６４】
用いられる溶媒としては、本発明のジアシルオキサゾロン製造法（II）に用いたものと同じものが使用でき、溶媒の使用量としては、任意の量の溶媒を用いることができるが、通常はオキサゾロン類に対して２〜５０倍体積量、好ましくは３〜１０倍体積量である。
【００６５】
上記反応において、塩基を存在させることが好ましい。用いられる塩基としては、本発明のジアシルオキサゾロン製造法（II）に用いたものと同じものが使用でき、用いる塩基の当量は、通常副生する酸を中和するために必要な量であるが、塩基を溶媒として用いてもよい。通常、オキサゾロン類に対して１〜１０当量であり、大量に使用すると生成した目的物の取得操作が煩雑になり、コストも高くなるため、好ましくは２〜４当量である。
【００６６】
上記反応の反応温度は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定はなく、用いるアシル化剤により最適点は異なるが、通常、−２０〜１２０℃である。特に好ましいアシル化剤であるカルボン酸クロリドの場合、好ましくは０〜２０℃である。
【００６７】
上記反応の反応時間は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定はないが、１０分〜２４時間の範囲で行うことが製造コストを抑える観点からも好ましく、更に好ましくは１０分〜６時間である。
【００６８】
上記一般式（５）で表されるオキサゾール類から上記一般式（１）のジアシルオキサゾロンを得る反応において、上記一般式（Ａ）で表されるアシル化剤を使用する。用いられるアシル化剤としては、特に限定はなく公知のものを使用できるが、好ましくはカルボン酸クロリド、カルボン酸ブロミド、カルボン酸ヨージド、カルボン酸無水物であり、更に好ましくはカルボン酸クロリド又はカルボン酸無水物、より好ましくは工業的に安価に購入でき、或いはカルボン酸から容易に調製可能であるカルボン酸クロリドである。上記反応において使用されるアシル化剤の量はオキサゾロン類に対して１〜１０当量、好ましくは１〜２当量である。
【００６９】
上記反応にはアシル化触媒を共存させてもよい。アシル化触媒としては、特に限定はなく公知のものを使用すればよいが、ピリジン、２−ピコリン、３−ピコリン、４−ピコリン、２，４−ルチジン、４−ジメチルアミノピリジン等のピリジン類；塩化アルミニウム（III）、塩化スズ（IV）、塩化鉄（III）、塩化亜鉛（II）、塩化ニッケル（II）、三フッ化ホウ素エーテル錯体等のルイス酸が挙げられる。好ましくは４−ジメチルアミノピリジン、塩化スズ（IV）、塩化鉄（III）、塩化ニッケル（II）、塩化アルミニウム（III）である。アシル化触媒の使用量は、オキサゾロン類に対して０．０１〜１０当量であり、試剤のコストを抑える観点から好ましくは０．０１〜１当量、更に好ましくは０．０１〜０．１当量である。
【００７０】
上記反応では多量の塩が生成するため、効率的な撹拌を行う上でも溶媒の使用が好ましい。用いられる溶媒としては、本発明のジアシルオキサゾロン製造法（II）に用いたものと同じものが使用でき、通常はオキサゾロン類に対して２〜５０倍体積量、好ましくは３〜１０倍体積量である。
【００７１】
上記反応において、塩基を存在させることが好ましい。用いられる塩基としては、本発明のジアシルオキサゾロン製造法（II）に用いたものと同じものが使用でき、用いる塩基の当量は、通常副生する酸を中和するために必要な量であり、オキサゾロン類に対して１〜１０当量、大量に使用すると生成した目的物の取得操作が煩雑になり、コストも高くなるため、好ましくは２〜４当量である。
【００７２】
上記反応の反応温度は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定はなく、用いるアシル化剤により最適点は異なるが、通常、−２０〜１２０℃である。特に好ましいアシル化剤であるカルボン酸クロライドの場合、好ましくは０〜２０℃である。
【００７３】
上記反応の反応時間は、反応に悪影響を与えない範囲であれば特に限定はないが、１０分〜２４時間の範囲で行うことが製造コストを抑える観点からも好ましく、更に好ましくは１０分〜６時間である。
【００７４】
上記反応で得られる一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンは、精製することなく次工程に使用することもできるが、抽出及び／又は晶析等の方法で精製することが好ましい。
【００７５】
抽出及び／又は晶析に用いる溶媒は、本発明のジアシルオキサゾロン製造法（I）で用いたものと同じものを使用することができ、上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンの溶解度が一般に低いアセトン、アセトニトリル、水又はこれらの混合溶媒が特に好ましい。
【００７６】
＜β−ケトアミノ酸誘導体の製造方法＞
本発明は、上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンとアルコールを反応させることを特徴とする下記一般式（３）
【化２７】
2007091731.tif 000028
で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体の製造方法である。
【００７７】
上記一般式（３）において、Ｒ1及びＲ2は前記と同義であり、Ｒ3はアルコール残基を示す。アルコール残基としては、置換基を有してもよい直鎖状、環状若しくは分岐状のアルキル基、又は置換基を有してもよいアリール基を示す。アルコール残基の具体例は以下に挙げられ、これらに限定されるものではないが、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の直鎖状アルキル基；シクロペンチル基、シクロヘキシル基等の環状アルキル基；イソプロピル基、１−メチルプロピル基、ｔ−ブチル基等の分岐状アルキル基；フェニル基、ピリジル基等のアリール基が挙げられる。これらの中で好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、フェニル基であり、更に好ましくはメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基である。
【００７８】
置換基を有していてもよいアルキル基又はアリール基の置換基としては、本発明の反応に悪影響を与えない基であれば特に限定されないが、好ましくはフッ素、塩素、臭素等のハロゲン原子；メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロヘキシル基等の直鎖状、分岐状、環状アルキル基；フェニル基、ピリジル基等のアリール基；メトキシ基、エトキシ基、フェノキシ基等のアルコキシ基、シアノ基、ニトロ基である。置換基を有するＲ3の好ましい具体例としては、ベンジル基、トリフルオロメチル基、４−メチルフェニル基、４−クロロフェニル基が挙げられ、更に好ましくはベンジル基である。
【００７９】
上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体は、β−ケトアミノ酸のアミノ基がアシル基で、カルボキシル基がエステルとして保護された化合物である。上記一般式（３）の具体例としては、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソブタン酸メチル、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソブタン酸エチル、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソブタン酸イソプロピル、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソペンタン酸メチル、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソペンタン酸エチル、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソペンタン酸イソプロピル、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソトリデカン酸メチル、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソトリデカン酸エチル、２−ベンゾイルアミノ−３−オキソトリデカン酸イソプロピル、２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸メチル、２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸エチル、２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピル、２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸メチル、２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸エチル、２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸イソプロピル、２−ベンゾイルアミノ−４，４−ジメチル−３−オキソペンタン酸メチル、２−ベンゾイルアミノ−４，４−ジメチル−３−オキソペンタン酸エチル、２−ベンゾイルアミノ−４，４−ジメチル−３−オキソペンタン酸イソプロピル、２−アセチルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピル、３−シクロヘキシル−３−オキソ−２−ピバロイルアミノプロピオン酸イソプロピル、３−シクロヘキシル−３−オキソ−２−トリフルオロアセチルアミノプロピオン酸イソプロピル、３−シクロヘキシル−２−（４−メチルベンゾイルアミノ）−３−オキソプロピオン酸イソプロピル、２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸ベンジル、２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸フェニル、２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸ベンジル、２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸フェニル等が挙げられ、好ましい具体例としては２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピルである。
【００８０】
上記反応は、上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロンとアルコールを反応させ、アルコールによるオキサゾロン環の開環反応、並びにアシル化したエノールのアルコールによる脱アシル化反応により、上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体へ変換する方法である。
【００８１】
上記反応の中間体として、下記一般式（７）
【化２８】
2007091731.tif 000029
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は前記と同義である。）で表されるα−（アシルオキシアルキリデン）グリシン誘導体が確認されている。
【００８２】
上記反応に用いるアルコールは特に限定されないが、具体例としてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の直鎖状アルコール；シクロペンタノール、シクロヘキサノール等の環状アルコール；２−プロパノール、２−ブタノール、ｔ−ブチルアルコール等の分岐状アルコール；フェノール、ヒドロキシピリジン等のアリールアルコール；ベンジルアルコール、トリフルオロメタノール等の置換基を有するアルキルアルコール；４−メチルフェノール、４−クロロフェノール等の置換基を有するアリールアルコールが挙げられる。これらの中で好ましくは工業的に汎用性の高いメタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、ｔ−ブチルアルコール、フェノール、ベンジルアルコールであり、更に好ましくはメタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、ベンジルアルコールである。また、アルコールの使用量としては特に限定されないが、通常、原料であるジアシルオキサゾロンに対して１当量以上、好ましくは５当量以上である。
【００８３】
上記反応では、反応を加速する目的で、アルコールとともに塩基又は酸を共存させてもよい。
【００８４】
塩基の種類としては、特に限定はされないが、ピリジン、２−ピコリン、３−ピコリン、４−ピコリン、２，４−ルチジン、４−ジメチルアミノピリジン等のピリジン類；トリエチルアミン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン等の飽和有機塩基；１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン等の有機強塩基；ナトリウムエトキシド、リチウムイソプロポキシド等の金属アルコキシド；水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩基であり、これらから選ばれる複数の塩基を任意の割合に混合して用いてもよい。これらの中で好ましくはピリジン類であり、更に好ましくは、上記一般式（１）で表されるジアシルオキサゾロン化合物から上記一般式（７）で表されるアミノ酸誘導体への変換を加速する効果がありかつコスト的に安価なピリジン、２−ピコリン、３−ピコリン、４−ピコリン等のピリジン類と、上記一般式（７）で表されるアミノ酸誘導体から上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体への変換を加速する効果がある４−ジメチルアミノピリジンの混合使用である。
【００８５】
また、酸の種類としては特に限定はされないが、ｐ−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート、酢酸等の有機酸；塩酸、硫酸等の無機酸があり、これらから選ばれる複数の酸を任意の割合に混合して用いてもよい。これらの中で好ましくはｐ−トルエンスルホン酸、ピリジニウムｐ−トルエンスルホネート、硫酸である。
【００８６】
酸又は塩基の用いる量としては、特に限定されないが通常は原料に対して０．０１〜５当量であり、コスト的観点から好ましくは０．０１〜１当量である。
【００８７】
アルコールを溶媒量用いない場合は、撹拌しやすくするため、他の溶媒を用いてもよい。用いる溶媒としては反応に悪影響を与えないものであれば特に限定はされないが、ヘキサン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素系溶媒；エチルエーテル、プロピルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン系溶媒；アセトニトリル等のニトリル系溶媒、ニトロベンゼン、ニトロメタン等のニトロ系溶媒；等が挙げられる。これらから選ばれる複数の溶媒を任意の割合に混合して用いてもよい。溶媒のうち、好ましくは炭化水素系溶媒、エステル系溶媒、ケトン系溶媒であり、更に好ましくはトルエン、酢酸エチル、アセトンである。
【００８８】
溶媒の使用量としては、任意の量の溶媒を用いることができるが、通常は原料基質に対して２〜５０倍体積量、好ましくは３〜１０倍体積量である。
【００８９】
反応の温度としては、特に限定はなく、用いるジアシルオキサゾロン化合物や使用するアルコールの沸点により適切に選択すればよいが、通常、２０〜１２０℃であり、更に好ましくは反応が速やかに完結する５０〜１００℃である。
【００９０】
反応時間は、特に限定はないが、１０分〜４８時間の範囲で行うことが、製造コストを抑える観点からも好ましく、更に好ましくは１０分〜６時間である。
【００９１】
上記反応で得られる一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体は、抽出及び／又は晶析等の方法で精製することが好ましい。
【００９２】
抽出及び／又は晶析に用いる溶媒は特に限定されないが、ヘキサン、ヘプタン、ベンゼン、トルエン等の炭化水素系溶媒；エチルエーテル、プロピルエーテル、シクロペンチルメチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル系溶媒；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、クロロベンゼン等のハロゲン系溶媒；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル系溶媒；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン系溶媒；炭酸ジメチル、炭酸ジエチル等の炭酸エステル系溶媒；メタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール系溶媒；アセトニトリル等のニトリル系溶媒；水等が挙げられる。これらから選ばれる複数の溶媒を任意の割合に混合して用いてもよい。反応溶媒をそのまま、又は別の溶媒を追加して抽出及び／又は晶析を行うことが、操作短縮と溶媒使用量削減の観点から好ましい。更に好ましい晶析溶媒としては、ヘキサン、ヘプタン、トルエン、ｔ−ブチルメチルエーテル、酢酸エチル、アセトン、メタノール、２−プロパノール、アセトニトリル、水又はこれらの混合溶媒が挙げられる。特に好ましくは、上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体の溶解度が一般に低いヘキサン、ヘプタンの単独使用又は他の溶媒との混合使用である。
【００９３】
＜β−ケトアミノ酸誘導体の用途＞
本発明で製造される上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体は、それ自体或いは各種の誘導体が、種々の医薬品や農薬の中間体として有用である。特に下記一般式（８）
【化２９】
2007091731.tif 000030
（式中、Ｒ1は前記と同義である。）で表される光学活性Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸のうち、Ｒ1がシクロヘキシルであるものは抗ＨＩＶ活性を持つ薬剤（国際公開第０１／４０２２７号パンフレット）の中間体として工業的に有用である。この上記一般式（８）やその類縁体への変換は、上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を下記一般式（９）
【化３０】
2007091731.tif 000031
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は前記と同義である。）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体に立体選択的に変換した後、保護基の変更等、公知の方法を任意に選択して達成できる。
上記一般式（９）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体は、β位に水酸基を持つアミノ酸のアミノ基がアシル基で、カルボキシル基がエステルとして保護された化合物である。上記一般式（９）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体は、（２Ｒ，３Ｒ）及び（２Ｓ，３Ｓ）アミノ酸の２種類であり、好ましくは（２Ｒ，３Ｒ）の立体を持つ化合物である。
【００９４】
上記一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体を上記一般式（９）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体に変換する手法としては、微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法、或いは非特許文献（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ａｓｙｍ．，２００１，１２，１７５７）に記載のロジウム等の金属触媒を用いた不斉水素化反応が利用可能であり、好ましくは重金属の残存がなく、高い立体選択性が期待できる微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法である。即ち、反応条件下で容易にラセミ化する一般式（３）で表されるβ−ケトアミノ酸誘導体のうち、一方の光学異性体のみのβ位カルボニル基を立体特異的に還元する能力を有する微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させて、生成する可能性のある４種の異性体のうち、一般式（９）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体を製造することができる。
【００９５】
微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を作用させる方法としては、特に限定はないが、アグロバクテリウム属、又はエクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を使用するか、又は不斉還元反応を触媒するタンパク質をコードする遺伝子を導入した形質転換細胞を作製し、該細胞、該細胞の調製物、又は該細胞を培養して得られた培養液を原料と作用させても構わない。
【００９６】
この上記一般式（９）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体を下記一般式（１０）
【化３１】
2007091731.tif 000032
（式中、Ｒ1は前記と同義である。）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸或いはその塩に変換する。この変換の手法としては、酸又は塩基存在下で加水分解するか、或いは加水分解酵素にて加水分解する手法が挙げられる。
【００９７】
この上記一般式（１０）で表される光学活性β−ヒドロキシアミノ酸を塩基条件中、ｔ−ブトキシカルボニル化を行うことで、上記一般式（８）で表される光学活性Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸へと変換可能である。
【実施例】
【００９８】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
【００９９】
［実施例１］
４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロンの製造＜ジアシルオキサゾロン（１）＞
５００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン２０．０ｇ（１１２ｍｍｏｌ）、４−ピコリン６５ｍＬ（６７０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル３００ｍＬを仕込み、氷冷下、シクロヘキサンカルボン酸クロリド６１ｍＬ（４５０ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下した。氷冷下５時間反応させた後、１Ｎ塩酸１００ｍＬを添加し、結晶を濾取した。結晶を乾燥し、白色結晶として４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン３７．９ｇ（少量の不純物を含む２種の幾何異性体混合物、約８５：１５、収率８９％）を得た。
ｍａｊｏｒ−ｉｓｏｍｅｒ：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．１５−１．５０（８Ｈ，ｍ），１．６２−１．９３（１０Ｈ，ｍ），２．１０−２．１６（２Ｈ，ｍ），２．６６（１Ｈ，ｔｔ，Ｊ＝１１．１，３．８Ｈｚ），３．５８−３．６３（１Ｈ，ｍ），７．４６−７．５０（２Ｈ，ｍ），７．５４−７．５６（１Ｈ，ｍ），７．９７−７．９９（２Ｈ，ｍ）．
ｍｉｎｏｒ−ｉｓｏｍｅｒ：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２０−１．４７（８Ｈ，ｍ），１．５９−１．８５（１０Ｈ，ｍ），２．１１−２．１５（２Ｈ，ｍ），２．６５（１Ｈ，ｔｔ，Ｊ＝１１．４，３．７Ｈｚ），３．２６−３．３１（１Ｈ，ｍ），７．４６−７．５０（２Ｈ，ｍ），７．５４−７．５６（１Ｈ，ｍ），８．０４−８．０７（２Ｈ，ｍ）．
【０１００】
［実施例２］
４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロンの製造＜ジアシルオキサゾロン（１）＞
２００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン５．００ｇ（２７．９ｍｍｏｌ）、４−ピコリン１６ｍＬ（１７０ｍｍｏｌ）、アセトン５０ｍＬを仕込み、氷冷下、塩化チオニル２．０ｍＬ（２８ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下した。１時間撹拌後、シクロヘキサンカルボン酸クロリド８．５ｍＬ（１２６ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下し、氷冷下１時間、室温にて１７時間反応させた後、氷冷下水２５ｍＬを添加し、結晶を濾取した。結晶を乾燥し、淡褐色結晶として４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン４．８ｇ（少量の不純物を含む２種の幾何異性体混合物、約９２：８、収率４５％）を得た。
【０１０１】
［実施例３］
２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
１００ｍＬフラスコに実施例１で得られた４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン１０．０ｇ（２６．２ｍｍｏｌ）、４−ピコリン２．５４ｍＬ（２６．２ｍｍｏｌ）、２−プロパノール５０ｍＬを仕込み、１時間加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン０．６４ｇ（５．２ｍｍｏｌ）を添加して、更に４時間加熱還流させた。反応終了後、反応液を濃縮し、得られた濃縮液を酢酸エチル１００ｍＬにて抽出し、２Ｎ塩酸２０ｍＬ及び飽和食塩水２０ｍＬにて洗浄後、有機層を濃縮した。残渣をｎ−ヘプタン１００ｍＬにて晶析し、白色結晶として２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピル６．０３ｇ（化学純度９０％、収率６２％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１．３３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１．２０−１．５５（５Ｈ，ｍ），１．６８−１．８４（４Ｈ，ｍ），２．０６−２．１０（１Ｈ，ｍ），２．８６−２．９３（１Ｈ，ｍ），５．１４（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），５．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．４３−７．４８（２Ｈ，ｍ），７．５２−７．５６（１Ｈ，ｍ），７．８３−７．８６（２Ｈ，ｍ）．
【０１０２】
［実施例４］
２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
２００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン５．００ｇ（２７．９ｍｍｏｌ）、４−ピコリン１６ｍＬ（１７０ｍｍｏｌ）、アセトン５０ｍＬを仕込み、氷冷下、シクロヘキサンカルボン酸クロリド１５.２ｍＬ（１１２ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下し、氷冷下３０分、室温にて２０時間反応させた。反応液にイソプロパノール２５ｍＬを添加し、１時間加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン０．６８ｇ（５．６ｍｍｏｌ）を２−プロパノール２．５ｍＬに溶解して添加し、更に７時間加熱還流させた。反応終了後、反応液を濃縮し、得られた濃縮液をトルエン１００ｍＬにて抽出し、２Ｎ塩酸４０ｍＬで洗浄後、有機層を濃縮した。残渣を酢酸エチル５ｍＬ、ヘプタン９０ｍＬにて晶析し、白色結晶として２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピル６．１６ｇ（化学純度９８％、収率６７％）を得た。
【０１０３】
［実施例５］
４−［１−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−２，２−ジメチルプロピリデン］−２−フェニル−５−オキサゾロンの製造＜ジアシルオキサゾロン（１）＞
１００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン２．０１ｇ（１１ｍｍｏｌ）、アセトニトリル３０ｍＬ、４−ピコリン６．１９ｇ（６７ｍｍｏｌ）を仕込み、氷冷下、ピバリン酸クロリド５．２９ｇ（４４ｍｍｏｌ）を３０分で滴下した。氷冷下５時間半、室温で１時間半、還流を９時間それぞれ行った後、放冷し１Ｎ塩酸１０ｍＬと水２０ｍＬを添加した。酢酸エチル１９０ｍＬで抽出し０．５Ｎ塩酸３０ｍＬで３回および飽和食塩水３０ｍＬで１回洗浄後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、淡黄色固体として４−［１−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−２，２−ジメチルプロピリデン］−２−フェニル−５−オキサゾロン１．６６ｇ（不純物を含む）を得、更に精製することなく次工程に使用した。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．３９（９Ｈ，ｓ），１．４３（９Ｈ，ｓ），７．４４−７．５０（２Ｈ，ｍ），７．５３−７．５９（１Ｈ，ｍ），８．０３−８．０６（２Ｈ，ｍ）．
【０１０４】
［実施例６］
２−ベンゾイルアミノ−４，４−ジメチル−３−オキソペンタン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
１００ｍＬフラスコに実施例５で得られた４−［１−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−２，２−ジメチルプロピリデン］−２−フェニル−５−オキサゾロン１．１１ｇ、４−ピコリン０．３７ｇ（３．９ｍｍｏｌ）、２−プロパノール５ｍＬを仕込み、１時間半加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン８４ｍｇ（０．６８ｍｍｏｌ）を添加して、更に１２時間加熱還流させた。反応終了後、反応液を酢酸エチル８０ｍＬにて希釈し、２Ｎ塩酸１０ｍＬおよび飽和食塩水１０ｍＬにて洗浄後、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、淡黄色油状物質として２−ベンゾイルアミノ−４，４−ジメチル−３−オキソペンタン酸イソプロピル０．３６ｇを得た（不純物を含む、二工程一貫収率約１０％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１．３１（９Ｈ，ｓ），５．０９（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），５．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．４３−７．４７（２Ｈ，ｍ），７．５１−７．８２（１Ｈ，ｍ），７．８３−７．８４（２Ｈ，ｍ）．
【０１０５】
［実施例７］
２−ベンゾイルアミノ−４，４−ジメチル−３−オキソペンタン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
３００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン２．０１ｇ（１１．０ｍｍｏｌ）、４−ピコリン６．２８ｇ（６７．４ｍｍｏｌ）、アセトン２０ｍＬを仕込み、氷冷下、ピバリン酸クロリド５.１７ｇ（４２．３ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下し、氷冷下３０分、室温にて６時間、加熱還流して１４時間、さらにアセトニトリル３０ｍＬ加えて４時間加熱還流した。反応液にイソプロパノール１７ｍＬを添加し、１時間加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン０．２８ｇ（２．３ｍｍｏｌ）を２−プロパノール１．７ｍＬに溶解して添加し更に１時間、２−プロパノール１７ｍＬを追加して９時間半加熱還流させた。反応液を濃縮し、トルエン７５ｍＬで希釈後、２Ｎ塩酸３０ｍＬで洗浄し、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、橙褐色固体として２−ベンゾイルアミノ−４，４−ジメチル−３−オキソペンタン酸イソプロピル０．３６ｇを得た（少量の不純物を含む、収率約１０％）。
【０１０６】
［実施例８］
２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
２００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン２．５ｇ（１３．７ｍｍｏｌ）、４−ピコリン７．６６ｇ（８０．６ｍｍｏｌ）、アセトニトリル２５ｍＬを仕込み、氷冷下、イソ酪酸クロリド６．０７ｇ（１１２ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下し、氷冷下５時間、室温にて２時間反応させた。反応液にイソプロパノール１２．５ｍＬを添加し、２時間半加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン０．３４ｇ（２．８ｍｍｏｌ）を２−プロパノール１．２５ｍＬに溶解して添加し、更に４時間加熱還流させた。反応終了後、反応液を濃縮し、得られた濃縮液をトルエン１００ｍＬにて抽出し、２Ｎ塩酸４０ｍＬで洗浄後、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、淡黄色固体として２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸イソプロピル２．６３ｇ（収率６６％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．１６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．２６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．２７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．３２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．１６（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），５．１３（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），５．５６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．４４−７．４７（２Ｈ，ｍ），７．５２−７．５５（１Ｈ，ｍ），７．８４−７．８５（２Ｈ，ｍ）．
【０１０７】
［実施例９］
４−（１−ウンデカノイル−１−ウンデシリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロンの製造＜ジアシルオキサゾロン（１）＞
１００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン２．０１ｇ（１１ｍｍｏｌ）、アセトニトリル２０ｍＬ、４−ピコリン６．３２ｇ（６７ｍｍｏｌ）を仕込み、氷冷下、ウンデカノイルクロリド８．９９ｇ（４４ｍｍｏｌ）を３０分で滴下した。氷冷下４５分、室温で９時間攪拌を行った後、氷冷し１Ｎ塩酸１０ｍＬを添加した。酢酸エチル１９０ｍＬで抽出し飽和食塩水３０ｍＬで２回洗浄後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥した。有機層を濃縮後、残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、褐色油状物質として４−（１−ウンデカノイル−１−ウンデシリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン３．３４ｇを得た。（不純物を含む２種の幾何異性体混合物、約３６：６４）
ｍａｊｏｒ−ｉｓｏｍｅｒ：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ０．８４−０．９３（６Ｈ，ｍ），１．１７−１．４５（２８Ｈ，ｍ），１．５３−１．８４（４Ｈ，ｍ），２．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．８４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．４３−７．５２（２Ｈ，ｍ），７．５３−７．５９（１Ｈ，ｍ），７．９８−８．０８（２Ｈ，ｍ）．
ｍｉｎｏｒ−ｉｓｏｍｅｒ：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ０．８４−０．９３（６Ｈ，ｍ），１．１７−１．５３（３０Ｈ，ｍ），１．７５−１．８５（２Ｈ，ｍ），２．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），２．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．４３−７．６０（３Ｈ，ｍ），８．００−８．０５（２Ｈ，ｍ）．
【０１０８】
［実施例１０］
２−ベンゾイルアミノ−３−オキソトリデカン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
１００ｍＬフラスコに実施例９で得られた４−（１−ウンデカノイル−１−ウンデシリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン３．３４ｇ、４−ピコリン０．３９ｇ（４．１ｍｍｏｌ）、２−プロパノール１６ｍＬを仕込み、１２時間加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン８８ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）を添加して、更に７時間加熱還流させた。反応終了後、反応液を濃縮し残渣に酢酸エチル４５ｍＬを加えて、２Ｎ塩酸１５ｍＬおよび飽和食塩水１５ｍＬにて洗浄後、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、微黄橙色固体として２−ベンゾイルアミノ−３−オキソトリデカン酸イソプロピル１．９８ｇを得た（不純物を含む、二工程一貫収率約２４％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．２６−１．３０（１４Ｈ，ｍ），１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１．３３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１．６２−１．６７（２Ｈ，ｍ），２．７８（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１７．４，７．５Ｈｚ），５．１４（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），５．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），７．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），７．４３−７．４７（２Ｈ，ｍ），７．５１−７．５５（１Ｈ，ｍ），７．８２−７．８５（２Ｈ，ｍ）．
【０１０９】
［実施例１１］
２−ベンゾイルアミノ−３−オキソトリデカン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
１００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン２．００ｇ（１０．９ｍｍｏｌ）、４−ピコリン６．５ｍＬ（６７．０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル２０ｍＬを仕込み、氷冷下、ウンデカノイルクロリド８．９９ｇ（４２．６ｍｍｏｌ）を２５分かけて滴下し、氷冷下４５分、室温にて２時間攪拌を行った。反応液にイソプロパノール１０ｍＬを添加し、２時間加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン０．２７ｇ（２．２ｍｍｏｌ）を添加し更に３時間、加熱還流を続けた。反応液を濃縮し、酢酸エチル４５ｍＬで希釈後、２Ｎ塩酸１５ｍＬおよび飽和食塩水１５ｍＬで洗浄し、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、得られた油状物質をクロロホルム１２０ｍＬに溶かし飽和炭酸水素ナトリウム水溶液３０ｍＬで洗浄した。有機層を濃縮し白色固体として２−ベンゾイルアミノ−３−オキソトリデカン酸イソプロピル２．３８ｇ（少量の不純物を含む、収率約４５％）を得た。更に得られた固体をヘキサン懸濁洗浄により精製し、白色固体として２−ベンゾイルアミノ−３−オキソトリデカン酸イソプロピル０．５９ｇ（収率１４％）を得た。
【０１１０】
［実施例１２］
４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−（１，１−ジメチルエチル）−５−オキサゾロンの製造＜ジアシルオキサゾロン（１）＞
２００ｍＬナスフラスコにＮ−ピバロイルグリシン４．８ｇ（３０ｍｍｏｌ）、４−ピコリン１７．３ｇ（１８２ｍｍｏｌ）、アセトニトリル７２ｍＬを仕込み、氷冷下、シクロヘキサンカルボン酸クロリド１７．５ｇ（１１６ｍｍｏｌ）を３５分かけて滴下した。氷冷下５時間半反応させた後５０℃で４時間半、８０℃で９時間半、還流下２時間半加熱した。１Ｎ塩酸２８ｍＬを添加し濃縮を行った。得られた濃縮液を酢酸エチル１４０ｍＬにて２回抽出し、０．５Ｎ塩酸５０ｍＬで３回、飽和食塩水４０ｍＬで１回それぞれ洗浄後、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、黄色油状物質として４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−（１，１−ジメチルエチル）−５−オキサゾロン３．４７ｇ（不純物を含む２種の幾何異性体混合物、約５５：４５）を得、更に精製することなく次工程に使用した。
ｍａｊｏｒ−ｉｓｏｍｅｒ：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２４（９Ｈ，ｓ），１．０９−１．８５（１８Ｈ，ｍ），１．９０−２．１２（２Ｈ，ｍ），２．３９−２．６４（１Ｈ，ｍ），３．４８−３．５３（１Ｈ，ｍ）．
ｍｉｎｏｒ−ｉｓｏｍｅｒ：1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２９（９Ｈ，ｓ），１．０９−１．８５（１８Ｈ，ｍ），１．９０−２．１２（２Ｈ，ｍ），２．３９−２．６４（１Ｈ，ｍ），３．１２−３．１５（１Ｈ，ｍ）．
【０１１１】
［実施例１３］
３−シクロヘキシル−３−オキソ−２−ピバロイルアミノプロピオン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
２００ｍＬナスフラスコに実施例１２で得られた４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−（１，１−ジメチルエチル）−５−オキサゾロン１．４８ｇ、４−ピコリン０．４０ｇ（４．２ｍｍｏｌ）、２−プロパノール７．５ｍＬを仕込み、２時間加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン０．１０ｇ（０．８ｍｍｏｌ）を添加して、更に９時間加熱還流させた。反応終了後、反応液を酢酸エチル９０ｍＬにて希釈し、２Ｎ塩酸１０ｍＬ及び飽和食塩水１０ｍＬにて洗浄後、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、淡黄色油状物質として３−シクロヘキシル−３−オキソ−２−ピバロイルアミノプロピオン酸イソプロピル０．１７ｇを得た（少量のシクロヘキサンカルボン酸を含む、二工程一貫収率約４％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．１７−１．３６（４Ｈ，ｍ），１．２３（９Ｈ，ｓ），１．２５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１．３８−１．５１（１Ｈ，ｍ），１．６７−１．８３（４Ｈ，ｍ），１．９９−２．１１（１Ｈ，ｍ），２．７８−２．８８（１Ｈ，ｍ），５．０９（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），６．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）．
【０１１２】
［実施例１４］
３−シクロヘキシル−３−オキソ−２−ピバロイルアミノプロピオン酸イソプロピルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
１００ｍＬフラスコにＮ−ピバロイルグリシン１．０５ｇ（４．１５ｍｍｏｌ）、４−ピコリン３．６３ｇ（３８ｍｍｏｌ）、アセトニトリル１０ｍＬを仕込み、氷冷下、シクロヘキサンカルボン酸クロリド３．８ｇ（２５ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下し、氷冷下２時間半、還流にて４時間反応させた。反応液にイソプロパノール５ｍＬを添加し、２時間加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン０．１７ｇ（１．３５ｍｍｏｌ）を２−プロパノール０．５ｍＬに溶解して添加し、更に１１時間加熱還流させた。反応終了後、反応液を濃縮し、得られた濃縮液を酢酸エチル９０ｍＬにて希釈し、２Ｎ塩酸１０ｍＬおよび飽和食塩水１０ｍＬで洗浄後、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、淡黄色油状物質として３−シクロヘキシル−３−オキソ−２−ピバロイルアミノプロピオン酸イソプロピル０．６１ｇを得た（シクロヘキサンカルボン酸を含む、収率３６％）。
【０１１３】
［実施例１５］
２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸メチルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
３０ｍＬフラスコに実施例１の方法で得られた４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン０．９９ｇ（２６．０ｍｍｏｌ）、４−ピコリン０．２５ｍＬ（２．６ｍｍｏｌ）、メタノール５ｍＬを仕込み、１時間加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン６８ｍｇ（０．５６ｍｍｏｌ）を添加して、更に４時間加熱還流させた。反応終了後、反応液を濃縮し、得られた濃縮液を酢酸エチル１０ｍＬにて抽出し、２Ｎ塩酸２ｍＬ及び飽和食塩水２ｍＬにて洗浄後、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、白色固体として２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸メチル０．５８ｇ（少量の不純物を含む、収率約６０％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．１８−１．５５（５Ｈ，ｍ），１．６５−１．８７（４Ｈ，ｍ），２．０４−２．１１（１Ｈ，ｍ），２．８３−２．９１（１Ｈ，ｍ），３．８３（３Ｈ，ｓ），５．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），７．４３−７．４９（２Ｈ，ｍ），７．５１−７．５６（１Ｈ，ｍ），７．８２−７．８７（２Ｈ，ｍ）．
【０１１４】
［実施例１６］
２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸フェニルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
５０ｍＬフラスコに実施例１の方法で得られた４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン２．００ｇ（５．１４ｍｍｏｌ）、４−ピコリン０．５４ｇ（５．７２ｍｍｏｌ）、フェノール１０ｍＬおよびアセトニトリル１０ｍＬを仕込み、４５℃で６時間加熱後、４−ジメチルアミノピリジン０．１３ｇ（１．０ｍｍｏｌ）を添加し同じ温度で１２時間、５５℃で６時間半加熱した。反応終了後、反応液を酢酸エチル１１０ｍＬにて希釈し２Ｎ塩酸１０ｍＬで２回、飽和食塩水２０ｍＬにて１回洗浄後、有機層の乾燥および濃縮をした。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸フェニル２．７ｇを得た（フェノールを含む、収率４７％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２０−１．５０（４Ｈ，ｍ），１．５０−１．６３（１Ｈ，ｍ），１．６８−１．７６（１Ｈ，ｍ），１．８０−１．９５（３Ｈ，ｍ），２．１１−２．１９（１Ｈ，ｍ），２．９７−３．０６（１Ｈ，ｍ），５．７９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．１１−７．２５（２Ｈ，ｍ），７．２６−７．２９（１Ｈ，ｍ），７．３７−７．４２（３Ｈ，ｍ），７．４４−７．４８（２Ｈ，ｍ），７．５２−７．５６（１Ｈ，ｍ），７．８６−７．８９（２Ｈ，ｍ）．
【０１１５】
［実施例１７］
２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸ベンジルの製造＜β−ケトアミノ酸誘導体（３）＞
１００ｍＬフラスコにＮ−ベンゾイルグリシン２．０３ｇ（１１．１ｍｍｏｌ）、４−ピコリン６．３７ｇ（６７．０ｍｍｏｌ）、アセトニトリル２０ｍＬを仕込み、氷冷下、イソ酪酸クロリド４．７４ｇ（４３．６ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴下し、氷冷下５時間攪拌した。反応液にベンジルアルコール１．５５ｇを添加し、１時間半加熱還流後、４−ジメチルアミノピリジン０．２７ｇ（２．２ｍｍｏｌ）を添加し更に４時間半加熱した。ベンジルアルコール３．５ｍＬを追加して１０時間反応を続けた後、反応液を濃縮し、酢酸エチル４５ｍＬで希釈した。２Ｎ塩酸１５ｍＬおよび飽和食塩水１５ｍＬで洗浄し、有機層を濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製し、橙色油状物質として２−ベンゾイルアミノ−４−メチル−３−オキソペンタン酸ベンジル１．７７ｇを得た。（ベンジルアルコール等の不純物を含む、収率約１０％）
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．０２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．２０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．０３（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ），５．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ），５．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．２６−７．３３（６Ｈ，ｍ），７．４２−７．４８（２Ｈ，ｍ），７．５１−７．５７（１Ｈ，ｍ），７．８１−７．８６（２Ｈ，ｍ）．
【０１１６】
［参考例１］
２−フェニル−５−オキサゾロンの製造＜オキサゾロン類（４）＞
５００ｍＬのフラスコにジクロロメタン１４０ｍＬ、Ｎ−ベンゾイルグリシン１３．８１ｇ（７７．１ｍｍｏｌ）を仕込み、Ｎ−メチルピペリジン７．６４ｇ（７７．１ｍｍｏｌ）を添加した後に、クロロ蟻酸エチル７．９３ｇ（７３．２ｍｍｏｌ）を５分間かけて添加した。３０分後、１０％クエン酸水溶液３０ｍＬ及びジクロロメタン５０ｍＬを添加し、有機層を分離した後、１０％クエン酸水溶液３０ｍＬ、飽和重曹水３０ｍＬにて洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムにて乾燥、溶媒を留去後、橙色固体として２−フェニル−５−オキサゾロン１１．４ｇ（定量的）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ４．４２（２Ｈ，ｓ），７．４７−７．５１（２Ｈ，ｍ），７．５７−７．６１（１Ｈ，ｍ），７．９８−８．００（２Ｈ，ｍ）．
【０１１７】
［実施例１８］
４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロンの製造＜ジアシルオキサゾロン（１）＞
１００ｍＬフラスコに参考例１で合成した２−フェニル−５−オキサゾロン５００ｍｇ（３．１０ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン５．０ｍＬを仕込み、トリエチルアミン８６０μＬ（６．２０ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン３８ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）を順次添加し、シクロヘキサンカルボン酸クロリド８２９μＬ（６．２０ｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。４時間撹拌した後、減圧濃縮し、トルエンにて残渣を洗浄しながら濾過し、得られた濾液を濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル５０ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１〜８：１）にて精製し、白色固体として４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン０．７３ｇ（２種の幾何異性体混合物、約１５：８５、収率６２％）及び５−シクロヘキシルカルボニルオキシ−２−フェニルオキサゾール（収率１８％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２１−１．３５（３Ｈ，ｍ），１．４８−１．６５（３Ｈ，ｍ），１．７５−１．７９（２Ｈ，ｍ），１．９９−２．０３（２Ｈ，ｍ），２．５２−２．５９（１Ｈ，ｍ），６．７９（１Ｈ，ｓ），７．３６−７．４１（３Ｈ，ｍ），７．８８−７．８９（２Ｈ，ｍ）．
【０１１８】
［参考例２］
５−シクロヘキシルカルボニルオキシ−２−フェニルオキサゾールの製造＜オキサゾール類（５）＞
１００ｍＬフラスコに参考例１で合成した２−フェニル−５−オキサゾロン２．６０ｇ（１６．１ｍｍｏｌ）及びトルエン２６ｍＬを仕込み、トリエチルアミン４．７ｍＬ（３３．８ｍｍｏｌ）を添加し、シクロヘキサンカルボン酸クロリド２．３７ｍＬ（１７．７ｍｍｍｏｌ）をゆっくり滴下した。４時間撹拌した後、減圧濃縮し、トルエンにて残渣を洗浄しながら濾過し、得られた濾液を濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル５０ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１〜８：１）にて精製し、白色固体として５−シクロヘキシルカルボニルオキシ−２−フェニルオキサゾール３．５５ｇ（収率８１％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ１．２１−１．３５（３Ｈ，ｍ），１．４８−１．６５（３Ｈ，ｍ），１．７５−１．７９（２Ｈ，ｍ），１．９９−２．０３（２Ｈ，ｍ），２．５２−２．５９（１Ｈ，ｍ），６．７９（１Ｈ，ｓ），７．３６−７．４１（３Ｈ，ｍ），７．８８−７．８９（２Ｈ，ｍ）．
【０１１９】
［実施例１９］
４−（１−シクロヘキシルカルボニルオキシ−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロンの製造＜ジアシルオキサゾロン（１）＞
５０ｍＬフラスコに参考例２で得られた５−シクロヘキシルカルボニルオキシ−２−フェニルオキサゾール６００ｍｇ（２．２１ｍｍｏｌ）及びジクロロメタン６．０ｍＬを仕込み、４−ジメチルアミノピリジン２７ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）を添加した。４時間撹拌した後、減圧濃縮し、トルエンにて残渣を洗浄しながら濾過し、得られた濾液を濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル３ｇ，ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１〜５：１）にて精製し、白色固体として４−（１−シクロヘキサノイル−１−シクロヘキシルメチリデン）−２−フェニル−５−オキサゾロン３９０ｍｇ（２種の幾何異性体混合物、収率４６％）を得た。
【０１２０】
［実施例２０］
（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸イソプロピルの製造＜光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体（９）＞
＜１＞エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２由来のカルボニルレダクターゼ遺伝子で形質転換された形質転換細胞の作製
エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２由来由来のカルボニルレダクターゼ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．３０１６３３０Ａ、配列番号２）をコードするＤＮＡ配列（ｇｅｎｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ｇｐ：ＡＢ１５４４０９、配列番号１）をもとに配列番号３及び４に記載のプライマーを合成した。
【０１２１】
配列番号１：
atgaaatata cggtgattac tggagcaagt tcaggaattg gatatgagac ggcaaaacta   60
ctcgcaggaa aaggaaaatc actcgttctc gtcgcgcgac ggacgtctga gctcgaaaaa  120
cttcgggatg aagtcaaaca aatctcacca gatagtgatg tcatcctcaa gtcggtcgat  180
ctcgcagata accaaaatgt ccatgattta tatgagggat taaaggaact cgacatcgaa  240
acgtggatca acaatgctgg attcggcgat tttgatctcg tccaggacat tgagctcggg  300
aaaatcgaga aaatgcttcg cttgaacatc gaggcgctaa cgattctatc gagtctgttc  360
gtccgcgatc atcatgacat cgaaggaacg acgctcgtca atatctcgtc agcaggtggc  420
taccggatcg tgccgaacgc ggtcacgtat tgcgcgacga agttctatgt cagtgcttat  480
acagaagggc tcgcgcaaga actgcaaaaa ggtggggcaa aacttcgggc gaaagtactg  540
gcaccagctg cgactgagac agagtttgcg gatcgttcgc gcggcgaagc aggtttcgac  600
tacagcaaga acgtcaaaaa gtaccatacg gcggctgaaa tggcaggctt cctgcatcag  660
ttgattgaaa gcgacgcgat cgtcggcatc gtcgacggtg agacgtatga gttcgaattg  720
cgtggtccat tgttcaacta cgcaggataa                                   750
【０１２２】
配列番号２：
Met Lys Tyr Thr Val Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Tyr Glu 
Thr Ala Lys Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys Ser Leu Val Leu Val Ala 
Arg Arg Thr Ser Glu Leu Glu Lys Leu Arg Asp Glu Val Lys Gln Ile 
Ser Pro Asp Ser Asp Val Ile Leu Lys Ser Val Asp Leu Ala Asp Asn 
Gln Asn Val His Asp Leu Tyr Glu Gly Leu Lys Glu Leu Asp Ile Glu 
Thr Trp Ile Asn Asn Ala Gly Phe Gly Asp Phe Asp Leu Val Gln Asp 
Ile Glu Leu Gly Lys Ile Glu Lys Met Leu Arg Leu Asn Ile Glu Ala 
Leu Thr Ile Leu Ser Ser Leu Phe Val Arg Asp His His Asp Ile Glu 
Gly Thr Thr Leu Val Asn Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Val 
Pro Asn Ala Val Thr Tyr Cys Ala Thr Lys Phe Tyr Val Ser Ala Tyr 
Thr Glu Gly Leu Ala Gln Glu Leu Gln Lys Gly Gly Ala Lys Leu Arg 
Ala Lys Val Leu Ala Pro Ala Ala Thr Glu Thr Glu Phe Ala Asp Arg 
Ser Arg Gly Glu Ala Gly Phe Asp Tyr Ser Lys Asn Val Lys Lys Tyr 
His Thr Ala Ala Glu Met Ala Gly Phe Leu His Gln Leu Ile Glu Ser 
Asp Ala Ile Val Gly Ile Val Asp Gly Glu Thr Tyr Glu Phe Glu Leu 
Arg Gly Pro Leu Phe Asn Tyr Ala Gly 
【０１２３】
配列番号３：ggaggcgaat tcatgaaata tacggtgatt
配列番号４：taatcactgc agttatcctg cgtagttgaa
【０１２４】
これらのプライマーを各１５ｐｍｏｌ、ｄＮＴＰ各１０ｎｍｏｌ、エクシグオバクテリウム（Ｅｘｉｇｕｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．ＭＣＩ４３２２のゲノムＤＮＡ  ２５ｎｇ、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ−用１０×緩衝液（東洋紡績社製）５μＬ、ＫＯＤ−ｐｌｕｓ−１ユニット（東洋紡績社製）を含む５０μＬの反応液を用い、変性（９４℃、１５秒）、アニール（５７℃、３０秒）、伸長（６８℃、２分）を３０サイクルで、ＰＴＣ−２００（ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ社製）を用いてＰＣＲ反応を行った。なお、エクシグオバクテリウム  ｓｐ（Exiguobacterium  sp）MCI4322株は、FERM-P-19239として独立行政法人産業総合研究所特許生物寄託センターから入手可能である。ＰＣＲ反応液の一部をアガロースゲル電気泳動により解析した結果、特異的と思われるバンドが検出できた。
【０１２５】
上記反応液をＭｉｎＥｌｕｔｅ  ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）にて精製した。精製したＤＮＡ断片を制限酵素ＥｃｏＲＩとＰｓｔＩで消化し、アガロースゲル電気泳動を行い、目的とするバンドの部分を切り出し、Ｑｉａｇｅｎ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）により精製後回収した。得られたＤＮＡ断片を、ＥｃｏＲＩ及びＰｓｔＩで消化したｐＫＫ２２３−３とＴａｋａｒａ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｋｉｔを用いて、ライゲーションし、大腸菌ＪＭ１０９株を形質転換した。
【０１２６】
形質転換細胞をアンピシリン（５０μｇ／ｍＬ）を含むＬＢ寒天培地上で生育させ、コロニーダイレクトＰＣＲを行い、挿入断片のサイズを確認した。目的とするＤＮＡ断片が挿入されていると考えられる形質転換細胞を５０μｇ／ｍＬのアンピシリンを含むＬＢ培地で培養し、ＱＩＡＰｒｅｐＳｐｉｎ  Ｍｉｎｉ  Ｐｒｅｐ  ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いてプラスミドを精製し、ｐＥｘＳＤＲ１とした。プラスミドに挿入したＤＮＡの塩基配列をダイターミネーター法により解析したところ、挿入されたＤＮＡ断片は、配列番号１の塩基配列と一致した。
【０１２７】
＜２＞カルボニルレダクターゼをコードするＤＮＡで形質転換した大腸菌を用いた（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸イソプロピルの製造＜光学活性β−ヒドロキシアミノ酸誘導体（９）＞
上記＜１＞で得られた形質転換体をアンピシリン（５０μｇ／ｍＬ）を含むＣｉｒｃｌｅＧｒｏｗ培地（国産化学社製）で３０℃、１．７時間生育させ、０．１ｍＭになるようにイソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）を添加し、更に３０℃で２０時間培養した。得られた菌体ブロス１ｍＬを遠心分離により集菌し、１００μＬの緩衝液（１０％硫酸ナトリウム、１０％グルコースを含む１００ｍＭトリス（最終ｐＨ９．９））を加えよく混合した。これに３０μＬの１０ｇ／Ｌ  ＮＡＤＰ＋（オリエンタル酵母社製）、３０μＬのグルコースデヒドロゲナーゼ（天野製薬社製、１ｕｎｉｔ／ｍＬ）、実施例３で得られた２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピルのＤＭＳＯ溶液（１０ｇ／Ｌ）２０μＬを添加後、４０℃で１８時間振とう反応させた。反応終了後の反応液を酢酸エチル抽出、濃縮し、２００μＬの２−プロピルアルコールで溶かし、（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸イソプロピルエステルを定量した。定量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定した。ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
【０１２８】
カラム：ＯＤＳカラムＡｃｅｎｔｉｓ  Ａｍｉｄｅ（Ｓｐｅｌｃｏ社製、４．６ｍｍＩＤｘ１０ｃｍ）、４０℃
溶離液：１０ｍＭ酢酸アンモニウム／アセトニトリル＝５５／４５
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
【０１２９】
この結果、（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸イソプロピルの収量は１４．１μｇであった。ジアステレオ選択性は９０％ｄ．ｅ．であった。
【０１３０】
また、該遺伝子を含まないプラスミドｐＫＫ２２３−３を持つ大腸菌を上記と同様の方法で培養し、反応させてみたが上記生成物は認められなかった。
【０１３１】
次に光学純度の測定をＨＰＬＣを用いて実施した。ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
カラム：ＯＤ−ＲＨ（ダイセル社製、４．６ｍｍＩＤｘ１５ｃｍ）、３０℃
溶離液：４０％アセトニトリル
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
光学純度は１００％ｅ．ｅ．であった。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ０．９６−１．２８（５Ｈ，ｍ），１．３１（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），１．４０−１．５１（１Ｈ，ｍ），１．６２−１．８７（４Ｈ，ｍ），２．０２−２．１０（１Ｈ，ｍ），３．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．８Ｈｚ），４．９０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．１，３．０Ｈｚ），５．１３（１Ｈ，ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），７．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．４２−７．４８（２Ｈ，ｍ），７．５０−７．５５（１Ｈ，ｍ），７．８１−７．８５（２Ｈ，ｍ）．
【０１３２】
［実施例２１］
（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸の製造＜光学活性β−ヒドロキシアミノ酸（１０）＞
５００ｍＬナスフラスコに、実施例２０で得られた（２Ｒ，３Ｒ）−２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸イソプロピルエステル１２．４ｇ（３７．０ｍｍｏｌ）を仕込み、６Ｎ塩酸水溶液を添加して１１０℃に加温しながら６．５時間反応させた。室温に冷却後、トルエン５０ｍＬにて２回洗浄し、水層部を更に１１０℃に昇温し、５時間反応させた。室温に戻し、トルエン５０ｍＬにて２回洗浄し、得られた水層に２５ｗｔ％の水酸化ナトリウム水溶液をｐＨ５．６８になるまで添加した。析出した固体を濾過し、減圧乾燥後に純度９０％程度の白色固体として（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸を８．４０ｇ取得した。この化合物を塩酸塩に変換し、下記のスペクトルを取得した。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ０．８０−１．２７（５Ｈ，ｍ），１．５８−１．７９（５Ｈ，ｍ），１．９６−１．９９（１Ｈ，ｍ），３．４２−３．４５（１Ｈ，ｍ），４．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）．
【０１３３】
［実施例２２］
（２Ｒ，３Ｒ）−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸の製造＜光学活性Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−β−ヒドロキシアミノ酸（８）＞
実施例２１で得られた（２Ｒ，３Ｒ）−２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸８．４０ｇを１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３５ｍＬ及びテトラヒドロフラン３５ｍＬに溶解させ、ジ−ｔ−ブチルジカルボナート８．８９ｇ（４０．７ｍｍｏｌ）を添加し、室温下で６時間反応後、反応液を減圧下でテトラヒドロフランを留去した。トルエン２０ｍＬを添加し、有機層と水層を分離し、更に有機層を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液５ｍＬで３回抽出した。水層を併せ、１Ｎ塩酸６０ｍＬにて酸性に調整し、酢酸エチル７０ｍＬ、３０ｍＬでそれぞれ抽出した。得られた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥・濾過し、得られた液を濃縮し、（２Ｒ，３Ｒ）−２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−シクロヘキシル−３−ヒドロキシプロピオン酸７．０９ｇ（純度９６％、２−ベンゾイルアミノ−３−シクロヘキシル−３−オキソプロピオン酸イソプロピルエステルからの換算収率６７％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）：δ０．８８−１．２４（５Ｈ，ｍ），１．３４（９Ｈ，ｓ），１．６２−１．６８（５Ｈ，ｍ），１．７９−１．８３（１Ｈ，ｍ），３．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），４．０７−４．１８（１Ｈ，ｍ）．
【産業上の利用可能性】
【０１３４】
本発明の方法で得られるジアシルオキサゾロン、並びにβ−ケトアミノ酸誘導体は、光学活性β−ヒドロキシアミノ酸を経由して、抗ＨＩＶウィルス薬として有用なことが知られている薬剤の中間体であるＤ−エリスロ−３−シクロヘキシルセリン等に誘導可能であることから、医農薬中間体として有用な化合物である。
【配列表フリーテキスト】
【０１３５】
［配列表］
SEQUENCE LISTING
<110>  API Corporation
<120>  A diacyloxazolone and a method of production thereof, and a method of producing beta-keto amino acid derivative
<130>  A61609A
<160>  4
<210>  1
<211>  750
<212>  DNA
<213>  Exiguobacterium sp.
<400>  1
atgaaatata cggtgattac tggagcaagt tcaggaattg gatatgagac ggcaaaacta   60
ctcgcaggaa aaggaaaatc actcgttctc gtcgcgcgac ggacgtctga gctcgaaaaa  120
cttcgggatg aagtcaaaca aatctcacca gatagtgatg tcatcctcaa gtcggtcgat  180
ctcgcagata accaaaatgt ccatgattta tatgagggat taaaggaact cgacatcgaa  240
acgtggatca acaatgctgg attcggcgat tttgatctcg tccaggacat tgagctcggg  300
aaaatcgaga aaatgcttcg cttgaacatc gaggcgctaa cgattctatc gagtctgttc  360
gtccgcgatc atcatgacat cgaaggaacg acgctcgtca atatctcgtc agcaggtggc  420
taccggatcg tgccgaacgc ggtcacgtat tgcgcgacga agttctatgt cagtgcttat  480
acagaagggc tcgcgcaaga actgcaaaaa ggtggggcaa aacttcgggc gaaagtactg  540
gcaccagctg cgactgagac agagtttgcg gatcgttcgc gcggcgaagc aggtttcgac  600
tacagcaaga acgtcaaaaa gtaccatacg gcggctgaaa tggcaggctt cctgcatcag  660
ttgattgaaa gcgacgcgat cgtcggcatc gtcgacggtg agacgtatga gttcgaattg  720
cgtggtccat tgttcaacta cgcaggataa                                   750
<210>  2
<211>  249
<212>  PRT
<213>  Exiguobacterium sp.
<400>  2
Met Lys Tyr Thr Val Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Tyr Glu 
1               5                   10                  15
Thr Ala Lys Leu Leu Ala Gly Lys Gly Lys Ser Leu Val Leu Val Ala 
20                  25                  30
Arg Arg Thr Ser Glu Leu Glu Lys Leu Arg Asp Glu Val Lys Gln Ile 
35                  40                  45
Ser Pro Asp Ser Asp Val Ile Leu Lys Ser Val Asp Leu Ala Asp Asn 
50                  55                  60
Gln Asn Val His Asp Leu Tyr Glu Gly Leu Lys Glu Leu Asp Ile Glu 
65                  70                  75                  80
Thr Trp Ile Asn Asn Ala Gly Phe Gly Asp Phe Asp Leu Val Gln Asp 
85                  90                  95
Ile Glu Leu Gly Lys Ile Glu Lys Met Leu Arg Leu Asn Ile Glu Ala 
100                 105                 110 
Leu Thr Ile Leu Ser Ser Leu Phe Val Arg Asp His His Asp Ile Glu 
115                 120                 125 
Gly Thr Thr Leu Val Asn Ile Ser Ser Ala Gly Gly Tyr Arg Ile Val 
130                 135                 140 
Pro Asn Ala Val Thr Tyr Cys Ala Thr Lys Phe Tyr Val Ser Ala Tyr 
145                 150                 155                 160 
Thr Glu Gly Leu Ala Gln Glu Leu Gln Lys Gly Gly Ala Lys Leu Arg 
165                 170                 175 
Ala Lys Val Leu Ala Pro Ala Ala Thr Glu Thr Glu Phe Ala Asp Arg 
180                 185                 190 
Ser Arg Gly Glu Ala Gly Phe Asp Tyr Ser Lys Asn Val Lys Lys Tyr 
195                 200                 205 
His Thr Ala Ala Glu Met Ala Gly Phe Leu His Gln Leu Ile Glu Ser 
210                 215                 220 
Asp Ala Ile Val Gly Ile Val Asp Gly Glu Thr Tyr Glu Phe Glu Leu 
225                 230                 235                 240 
Arg Gly Pro Leu Phe Asn Tyr Ala Gly 
245 
<210>  3
<211>  30
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  PCR primer
<400>  3
ggaggcgaat tcatgaaata tacggtgatt                               30
<210>  4
<211>  30
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<220>
<223>  PCR primer
<400>  4
taatcactgc agttatcctg cgtagttgaa                              30