(57)【要約】【課題】  十分量の生体物質を強固に固定することができる生体物質固定用担体、該生体物質固定用担体を利用して製造された生体物質アレイ、及び該生体物質固定用担体を利用した核酸アレイの製造方法を提供する。【解決手段】  生体物質を固定するための樹脂層を表面に有する生体物質固定用担体において、前記樹脂層に、前記樹脂層の１６〜５０質量％のシリカ粒子を分散した状態で保持させる。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体物質を固定するための樹脂層を表面に有する生体物質固定用担体であって、
前記樹脂層に、前記樹脂層の１６〜５０質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されていることを特徴とする生体物質固定用担体。
【請求項２】
前記シリカ粒子の平均二次粒子径が０．１〜２０μｍであることを特徴とする請求項１記載の生体物質固定用担体。
【請求項３】
請求項１又は２記載の生体物質固定用担体と、前記生体物質固定用担体の樹脂層に保持されたシリカ粒子に固定された生体物質とを有することを特徴とする生体物質アレイ。
【請求項４】
請求項１又は２記載の生体物質固定用担体の樹脂層に核酸含有液をスポットし、紫外線照射により前記樹脂層に保持されたシリカ粒子に核酸を固定することを特徴とする核酸アレイの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体物質固定用担体、該生体物質固定用担体を利用して製造された生体物質アレイ、及び該生体物質固定用担体を利用した核酸アレイの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
プローブ核酸を担体に固定した核酸アレイの製造にあたり、担体として、ポリリジンでコーティングされたスライドガラスが使用されている（特許文献１）。この担体を使用すれば、ポリリジンとプローブ核酸との静電的相互作用を介してプローブ核酸を担体に固定することができる。
【０００３】
しかしながら、ポリリジンとプローブ核酸との静電的相互作用では、プローブ核酸を担体に強固に固定することができず、担体に一旦固定されたプローブ核酸が剥がれ落ちてしまうため、十分量のプローブ核酸を担体に効率よく固定することが困難であった。また、十分量のプローブ核酸を強固に固定できないため、核酸アレイを使用した各種解析（例えば、標的核酸の検出、塩基配列決定、遺伝子発現モニタリング等）を精度よく行うことが困難であった。
【０００４】
このような状況の下、核酸等の生物材料を担体に効率的に固定するために、核酸等の生物材料に結合できる特定の官能基を有する樹脂でコーティングされた樹脂基材からなる生物材料固定用樹脂板が開発されている（特許文献２）。
【０００５】
また、特許文献２には、核酸等の生物材料に結合できる特定の官能基を有する樹脂のコーティングによって形成されたコーティング膜の強度、硬度等を高めたい場合に、コーティング膜にシリカを含有させることができることが開示されている。特許文献２には、コーティング膜に含有されるシリカの量について明示されていないが、核酸等の生物材料に結合できる特定の官能基をコーティング膜の表面に露出させる必要があるため、コーティング膜に含有されるシリカの量を、コーティング膜の４．８質量％より多くすることができないと考えられる。コーティング膜に含有されるシリカの量が、コーティング膜の４．８質量％を超えると、コーティング膜の表面に露出するシリカ粒子の量が増加するため、その分、コーティング膜の表面に露出する特定の官能基の量が減少し、生物材料をコーティング膜の表面に効率的に固定することができなくなるからである。
【特許文献１】国際公開ＷＯ９５／５３５５０５号パンフレット（特表平１０−５０３８４１号公報）
【特許文献２】特開２００２−６０６７１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、十分量の生体物質を強固に固定することができる生体物質固定用担体、該生体物質固定用担体を利用して製造された生体物質アレイ、及び該生体物質固定用担体を利用した核酸アレイの製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために、本発明の生体物質固定用担体は、生体物質を固定するための樹脂層を表面に有する生体物質固定用担体であって、前記樹脂層に、前記樹脂層の１６〜５０質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されていることを特徴とする。
【０００８】
樹脂層に含有されるシリカ粒子の量が、樹脂層の１６〜５０質量％であると、樹脂層の表面に露出するシリカ粒子に十分量の生体物質を強固に固定することができる。また、樹脂層の耐水性が良好なものとなり、樹脂層への生体物質の固定を効率的に行うことができる。さらに、樹脂層を形成するための塗工液（シリカ粒子を含有する）を基材上にコーティングし、乾燥させた際の塗膜面状態が良好なものとなり、樹脂層の形成を効率的に行うことができる。
【０００９】
本発明の生体物質固定用担体において、前記シリカ粒子の平均二次粒子径が０．１〜２０μｍであることが好ましい。シリカ粒子の平均二次粒子径が０．１μｍよりも小さいと、樹脂層の表面にシリカ粒子を露出させるために、樹脂に対するシリカ粒子の配合比を大きくすることが必要となり、樹脂層を形成するための塗工液の調製が困難となる一方、シリカ粒子の平均粒子径が２０μｍを超えると、樹脂層を形成するための塗工液中におけるシリカ粒子の分散性が悪くなり、塗工液を基材上にコーティングし、乾燥させた際に均一な樹脂層の形成が困難となる。
【００１０】
本発明の生体物質アレイは、本発明の生体物質固定用担体と、前記生体物質固定用担体の樹脂層に保持されたシリカ粒子に固定された生体物質とを有することを特徴とする。
【００１１】
本発明の生体物質アレイにおいて、生体物質は樹脂層の表面に露出するシリカ粒子に強固に固定しているので、生体物質アレイを使用した各種解析（例えば、標的核酸の検出、塩基配列決定、遺伝子発現モニタリング等）を精度よく行うことができる。
【００１２】
本発明の核酸アレイの製造方法は、本発明の生体物質固定用担体の樹脂層に核酸含有液をスポットし、紫外線照射により前記樹脂層に保持されたシリカ粒子に核酸を固定することを特徴とする。
【００１３】
本発明の核酸アレイの製造方法によれば、十分量の核酸が樹脂層の表面に露出するシリカ粒子に強固に固定された核酸アレイを製造することができる。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、十分量の生体物質を強固に固定することができる生体物質固定用担体、該生体物質固定用担体を利用して製造された生体物質アレイ、及び該生体物質固定用担体を利用した核酸アレイの製造方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本実施形態に係る生体物質固定用担体１は、図１に示すように、基材２と、基材２の表面に形成された樹脂層３とを有する。なお、生体物質固定用担体１の構成は、樹脂層３が表面に位置する範囲において変更可能であり、例えば、生物物質固定用担体１は樹脂層３のみから構成されていてもよいし、基材２と樹脂層３との間に１又は２以上の中間層が存在していてもよい。
【００１６】
基材２の形状は、図１に示すように平板状であるが、基材２の形状は平板状に限定されるものではなく、適宜変更が可能である。
【００１７】
基材２の材質は、樹脂層３への生体物質の固定、樹脂層３に固定された生体物質を利用した解析等において使用される各種液体に不溶性である限り特に限定されるものではなく、例えば、樹脂、金属、天然高分子、セラミック、ガラス、シリコン、これらの複合材料等が挙げられる。
【００１８】
樹脂の具体例としては、ポリエチレン、ポリエチレン共重合体（例えば、エチレン−アクリル酸エチル共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体）等のポリエチレン系樹脂；ポリプロピレン；ポリスチレン、ポリスチレン共重合体（例えばアクリロニトリル−スチレン共重合体、アクリロニトリル−スチレン−ブタジエン共重合体）等のポリスチレン系樹脂；塩化ビニル樹脂；塩化ビニリデン樹脂；ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素樹脂；ポリメタクリル酸メチル、ポリアクリロニトリル等のアクリル樹脂；ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート、ポリブチレンテレフタレート等のポリエステル；ポリカーボネート等の熱可塑性樹脂が挙げられる。
【００１９】
金属の具体例としては、金、白金、アルミニウム等が挙げられる。
天然高分子の具体例としては、セルロース又はセルロース誘導体、キチン、キトサン、アルギン酸又はアルギン酸塩等が挙げられる。
セラミックスの具体例としては、アパタイト、アルミナ、シリカ、炭化ケイ素、窒化ケイ素、炭化ホウ素等が挙げられる。
【００２０】
樹脂層３を構成する樹脂は、層を形成できる限り特に限定されるものではなく、例えば、熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂、活性エネルギー線硬化性樹脂、ゴム、エラストマー等が挙げられる。
【００２１】
熱可塑性樹脂の具体例としては、上記と同様の具体例が挙げられる。
熱硬化性樹脂の具体例としては、エポキシ樹脂、フェノール樹脂、ユリア樹脂、メラミン樹脂、不飽和ポリエステル樹脂、レゾルシノール樹脂、フラン樹脂、ポリウレタン樹脂、シリコーン樹脂等が挙げられる。
【００２２】
活性エネルギー線の具体例としては、紫外線、電子線、放射線等が挙げられ、活性エネルギー線硬化性樹脂の具体例としては、活性エネルギーの照射により重合する性質を有するプレポリマー及び／又はモノマーに、必要に応じて、他の単官能性又は多官能性モノマー、各種ポリマー、光重合開始剤、増感剤、帯電防止剤等を配合した樹脂組成物等が挙げられる。活性エネルギーの照射により重合する性質を有するプレポリマーの具体例としては、ポリエステルポリ（メタ）アクリレート、ウレタンポリ（メタ）アクリレート、エポキシポリ（メタ）アクリレート、ポリオールポリ（メタ）アクリレート等の多価（メタ）アクリレートが挙げられ、活性エネルギーの照射により重合する性質を有するモノマーの具体例としては、モノアルコールのモノ（メタ）アクリル酸エステル、ポリオールのモノ（メタ）アクリル酸エステル等のモノ（メタ）アクリレートが挙げられる。光開始剤の具体例としては、アセトフェノン類、ベンゾフェノン類、ミヒラーケトン、ベンジル、ベンゾイン、ベンゾインエーテル、ベンジルケタール類、チオキサントン類等が挙げられ、増感剤の具体例としては、アミン類、ジエチルアミノエチルメタクリレート等が挙げられる。
【００２３】
ゴムの具体例としては、合成ゴム、天然ゴム等が挙げられる。
エラストマーの具体例としては、ポリオレフィン系、塩化ビニル系、スチレン系等の熱可塑性エラストマーが挙げられる。
【００２４】
樹脂層３の厚みは特に限定されるものではないが、通常０．５〜５００μｍ、好ましくは５〜３００μｍ、さらに好ましくは１０〜２００μｍである。樹脂層３の厚みが０．５μｍよりも小さいと、均一な樹脂層３の形成が困難となる一方、樹脂層３の厚みが５００μｍを超えると、樹脂層３を形成するための塗工液をコーティングした後、塗工液に含まれる溶剤を揮発させるための乾燥工程が長時間必要となり、生産性が低下する。
【００２５】
樹脂層３には、図１に示すように、複数のシリカ粒子４が分散した状態で保持されている。
シリカ粒子４は、合成非晶質シリカからなり、ナノメーター（ｎｍ）サイズの一次粒子が凝集してマイクロメーター（μｍ）サイズの二次粒子を形成している。
【００２６】
シリカ粒子４の平均二次粒子径は、シリカ粒子４が樹脂層３に分散した状態で保持される限り特に限定されるものではないが、通常０．１〜２０μｍ、好ましくは０．５〜１０μｍである。シリカ粒子４の平均二次粒子径が０．１μｍよりも小さいと、樹脂層３の表面にシリカ粒子４を露出させるために、樹脂に対するシリカ粒子４の配合比を大きくすることが必要となり、樹脂層３を形成するための塗工液の調製が困難となる一方、シリカ粒子４の平均二次粒子径が２０μｍを超えると、樹脂層３を形成するための塗工液中におけるシリカ粒子４の分散性が悪くなり、塗工液を基材上にコーティングし、乾燥させた際に均一な樹脂層３の形成が困難となる。なお、上記平均二次粒子径はコールターカウンター法で測定した場合のものである。
【００２７】
シリカ粒子４のＢＥＴ比表面積、細孔容積、平均細孔直径等は特に限定されるものではないが、シリカ粒子４に効率よく生体物質を固定する点から、ＢＥＴ比表面積は１００〜１０００ｍ２／ｇであることが好ましく、２００〜６００ｍ２／ｇであることがさらに好ましい。また、シリカ粒子４の細孔容積は０．５〜５ｍＬ／ｇであることが好ましく、１〜３ｍＬ／ｇであることがさらに好ましい。また、シリカ粒子４の平均細孔直径は３０〜５００Åであることが好ましく、５０〜３００Åであることがさらに好ましい。上記ＢＥＴ比表面積、細孔容積及び平均細孔直径は、窒素吸着法で測定した場合のものである。
【００２８】
樹脂層３に含有されるシリカ粒子４の量は、樹脂層３の通常１６〜５０質量％、好ましくは２３〜４８質量％、さらに好ましくは３３〜４２質量％である。樹脂層３に含有されるシリカ粒子４の量が上記範囲にあると、樹脂層３の表面に露出するシリカ粒子に十分量の生体物質を強固に固定することができる。また、樹脂層３の耐水性が良好なものとなり、樹脂層３への生体物質の固定を効率的に行うことができる。さらに、樹脂層３を形成するための塗工液（シリカ粒子を含有する）の塗工性が良好なものとなり、樹脂層３の形成を効率的に行うことができる。これに対して、樹脂層３に含有されるシリカ粒子４の量が樹脂層３の１６質量％よりも少ないと、樹脂層３の表面に露出するシリカ粒子４の量が少なくなり、十分量の生体物質を樹脂層３に固定することができない一方、樹脂層３に含有されるシリカ粒子４の量が樹脂層３の５０質量％よりも多いと、樹脂層３を形成するための塗工液（シリカ粒子を含有する）を基材上にコーティングし、乾燥させた際の塗膜面状態が悪化し、均一な樹脂層３の形成が困難となる。
【００２９】
シリカ粒子４としては、乾式法（燃焼法、アーク法等）、湿式法（沈降法、ゲル法）等の常法に従って製造したシリカ粒子を使用することができる。また、シリカ粒子４としては、市販のシリカ粒子を使用することができる。
【００３０】
生体物質固定用担体１は、樹脂層３を構成する樹脂と、シリカ粒子４と、所望によりさらに溶剤（酢酸エチル、トルエン、イソプロピルアルコール、水等）とを含有する塗工液を調製し、この塗工液を、ディップコート法、スピンコート法、フローコート法、スプレーコート法、バーコート法等の常法に従って基材２の表面に塗布して乾燥させることにより製造することができる。
【００３１】
生体物質固定用担体１において、樹脂層３は生体物質を固定するための層であり、樹脂層３の表面に露出したシリカ粒子４に十分量の生体物質を強固に固定することができる。
固定対象となる生体物質は特に限定されるものではないが、例えば、核酸、タンパク質、ペプチド、酵素、ホルモン、抗原、抗体、ハプテン等が挙げられる。なお、核酸には、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びこれらの類似体又は誘導体（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ホスホロチオエートＤＮＡ等）が含まれる。また、生体物質は、生体から取得した物質であってもよいし、人工的に合成した物質であってもよい。
【００３２】
生体物質が核酸である場合、例えば、樹脂層３に核酸含有液をスポットした後、２５４ｎｍの紫外線を６０〜６０００ｍＪ／ｃｍ２照射することにより、樹脂層３の表面に露出したシリカ粒子４に核酸を強固に固定することができる。シリカ粒子４に固定されなかった核酸は、洗浄液を用いて樹脂層３を洗浄することにより除去することができる。樹脂層３の表面に露出したシリカ粒子４への生体物質の固定は、物理的吸着等によっても可能である。
【００３３】
樹脂層３に核酸含有液をスポットし、樹脂層３の表面に露出したシリカ粒子４に核酸を固定することにより、核酸アレイを製造することができる。この際、樹脂層３に固定される核酸の種類と位置とが対応付けられるように、樹脂層３に各種核酸含有液をスポットすることが好ましい。
【００３４】
こうして製造された核酸アレイは、例えば、標的核酸の検出に利用することができる。核酸アレイを利用した標的核酸の検出は、以下のようにして行うことができる。
【００３５】
第１工程：標識物質が結合した標的核酸を含有する液体試料と、樹脂層３とを接触させる。標識物質としては、例えば、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン等の蛍光物質、；アルカリホスファターゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ等の酵素；ルミノール、ルシゲニン、アクリジウムエステルの化学発光物質；ルシフェラーゼ、ルシフェリン等の生物発光物質等が挙げられる。
【００３６】
第２工程：洗浄液を用いて樹脂層３を洗浄し、樹脂層３に固定された核酸と反応した標的核酸以外の物質を除去する。
【００３７】
第３工程：標的核酸に結合している標識物質を検出する。
標識物質が蛍光物質である場合、樹脂層３に励起光を照射し、樹脂層３から発せられる蛍光を蛍光検出器で検出することによって、標的核酸を検出することができる。標識物質が酵素である場合には酵素呈色反応により標的核酸を検出することができる。
【実施例】
【００３８】
〔実施例１〕
アクリル系樹脂溶液（日本カーバイド工業社製ＫＰ−２３７４，固形分（アクリル系樹脂含有量）３３．０％）１００質量部、シリカ粒子（日本シリカ工業株式会社製ニップジェルＢＹ−６００，固形分１００％）２０質量部及び酢酸エチル５７質量部を混合して塗工液を調製し、塗工液を易接着性ポリエステルフィルム（東洋紡績社製コスモシャインＡ４３００，厚み５０μｍ）上にアプリケーターによってコーティングし、１００℃で乾燥させ、厚み２０μｍの樹脂層を形成させた。なお、シリカ粒子（日本シリカ工業株式会社製ニップジェルＢＹ−６００）の平均二次粒径（測定方法：コールターカウンター法）は６μｍであり、ＢＥＴ比表面積（測定方法：窒素吸着法）は４５０ｍ２／ｇであり、細孔容積（測定方法：窒素吸着法）は１．３ｍＬ／ｇであり、平均細孔直径（測定方法：窒素吸着法）は１００Åである。
【００３９】
こうして、ポリエステルフィルムと、ポリエステルフィルム上に形成された樹脂層とを有する核酸固定用基板を製造した。なお、樹脂層には、樹脂層の約３８質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されている。
【００４０】
核酸固定用基板を２ｃｍ×５ｃｍにカットし、以下の試験に使用した。
Ｃｙ−３標識化オリゴヌクレオチド含有液（オリゴヌクレオチドの種類：２００〜５００ｍｅｒのポリ（ｄＡ），オリゴヌクレオチドの濃度：１００μＭ，溶媒：０．２×ＳＳＣ）１μＬを樹脂層にスポットして室温で乾燥させた後、ＵＶクロスリンカーで２５４ｎｍの紫外線を６００ｍＪ／ｃｍ２照射し、オリゴヌクレオチドが樹脂層に固定させた。次いで、樹脂層を滅菌水５０ｍＬで２０分間洗浄して未反応のオリゴヌクレオチドを除去し、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めた。また、樹脂層の耐水性、及び塗工液をコーティングし乾燥させた際の塗膜面状態について評価した。
【００４１】
結果を表１に示す。樹脂層に固定されたオリゴヌクレオチド量は十分なものであり、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態はともに良好であった。
【００４２】
なお、オリゴヌクレオチドの固定率（％）は、共焦点蛍光スキャナー（Ｇｅｎｅｆｏｃｕｓ社製 ＤＮＡｓｃｏｐｅＩＩ）を用い、Ｃｙ−３標識オリゴヌクレオチドのスポット位置における蛍光強度（滅菌水による洗浄（５０ｍＬ，２０分）の前後）を測定し、下記式に基づき算出した。
固定率％＝（洗浄後の蛍光強度／洗浄前の蛍光強度）×１００
【００４３】
樹脂層の耐水性は、滅菌水による洗浄（５０ｍＬ，２０分）後、ポリエステルフィルム上から浮き剥がれた樹脂層の割合で評価した。評価基準は以下の通りである。
○：浮き剥がれなし
△：１０％未満の浮き剥がれ（実用上問題ない）
×：１０％以上の浮き剥がれ
【００４４】
塗膜面状態は、調製した塗工液をアプリケーターでコーティングし、乾燥させた際の塗膜面状態を目視で評価した。評価基準は以下の通りである。
○：均一な塗膜面
△：やや均一な塗膜面（実用上問題はない）
×：不均一な塗膜面
【００４５】
〔実施例２〕
シリカ粒子の混合量を１０質量部に変更した点を除き、実施例１と同様にして核酸固定用基板を製造した。なお、こうして製造された核酸固定用基板の樹脂層には、樹脂層の約２３質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されている。
【００４６】
実施例１と同様にして、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めるとともに、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態について評価した。
【００４７】
結果を表１に示す。シリカ粒子の混合量を２０質量部から１０質量部に減少させると、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率は実施例１よりも減少したが、樹脂層に固定されたオリゴヌクレオチド量は十分なものであった。樹脂層の耐水性及び塗膜面状態は実施例１と同様に良好であった。
【００４８】
〔実施例３〕
シリカ粒子の混合量を３０質量部に変更した点を除き、実施例１と同様にして核酸固定用基板を製造した。なお、こうして製造された核酸固定用基板の樹脂層には、樹脂層の約４８質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されている。
【００４９】
実施例１と同様にして、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めるとともに、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態について評価した。
【００５０】
結果を表１に示す。シリカ粒子の混合量を２０質量部から３０質量部に増加させると、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率は実施例１よりも増加した。樹脂層の耐水性は実施例１よりも低下したが、樹脂層への核酸の固定にあたり特に支障はなかった。塗膜面状態は実施例１よりも低下したが、樹脂層の形成にあたり特に支障はなかった。
【００５１】
〔実施例４〕
シリカ粒子として、日本シリカ工業株式会社製ニップジェルＢＹ−６００（固形分１００％）の代わりに、日本シリカ工業株式会社製ニップジェルＢＹ−２００（固形分１００％）を使用した点を除き、実施例３と同様にして核酸固定用基板を製造した。こうして製造された核酸固定用基板の樹脂層には、樹脂層の約４８質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されている。なお、シリカ粒子（日本シリカ工業株式会社製ニップジェルＢＹ−２００）の平均二次粒径（測定方法：コールターカウンター法）は１．７μｍであり、ＢＥＴ比表面積（測定方法：窒素吸着法）は４５０ｍ２／ｇであり、細孔容積（測定方法：窒素吸着法）は１．３ｍＬ／ｇであり、平均細孔直径（測定方法：窒素吸着法）は１００Åである。
【００５２】
実施例３と同様にして、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めるとともに、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態について評価した。
【００５３】
結果を表１に示す。シリカ粒子の種類をニップジェルＢＹ−６００からニップジェルＢＹ−２００に変更すると、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率は実施例３よりも減少したが、樹脂層に固定されたオリゴヌクレオチド量は十分なものであった。樹脂層の耐水性及び塗膜面状態は実施例３よりも良好であった。
【００５４】
〔実施例５〕
シリカ粒子として、日本シリカ工業株式会社製ニップジェルＢＹ−６００（固形分１００％）の代わりに、日本シリカ工業株式会社製ニップジェルＡＺ−２００（固形分１００％）を使用した点を除き、実施例３と同様にして核酸固定用基板を製造した。こうして製造された核酸固定用基板の樹脂層には、樹脂層の約４８質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されている。なお、シリカ粒子（日本シリカ工業株式会社製ニップジェルＡＺ−２００）の平均二次粒径（測定方法：コールターカウンター法）は１．９μｍであり、ＢＥＴ比表面積（測定方法：窒素吸着法）は３００ｍ２／ｇであり、細孔容積（測定方法：窒素吸着法）は２．０ｍＬ／ｇであり、平均細孔直径（測定方法：窒素吸着法）は２２０Åである。
【００５５】
実施例３と同様にして、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めるとともに、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態について評価した。
【００５６】
結果を表１に示す。シリカ粒子の種類をニップジェルＢＹ−６００からニップジェルＡＺ−２００に変更すると、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率は増加した。樹脂層の耐水性は実施例３と同程度であり、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定にあたり特に支障はなかった。塗膜面状態は実施例３よりも向上した。
【００５７】
〔実施例６〕
アクリル系樹脂溶液（日本カーバイド工業社製ＫＰ−２３７４，固形分（アクリル系樹脂含有量）３３．０％）１００質量部の代わりに、ポリエステル系樹脂溶液（東洋紡社製バイロナールＭＤ−１２４５，固形分（ポリエステル系樹脂含有量）３０．０％）８０質量部及びブロックイソシアネート樹脂（第一工業製薬社製エラストロンＨ−３ 固形分（ブロックイソシアネート樹脂含有量）２０．０％）２０質量部を混合した点を除き、実施例１と同様にして核酸固定用基板を製造した。なお、こうして製造された核酸固定用基板の樹脂層には、樹脂層の約４２質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されている。
【００５８】
実施例１と同様にして、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めるとともに、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態について評価した。
【００５９】
結果を表１に示す。樹脂層の樹脂組成を変化させても、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率は実施例１と同程度であり、樹脂層に固定されたオリゴヌクレオチド量は十分なものであった。樹脂層の耐水性及び塗膜面状態は実施例１と同様に良好であった。
【００６０】
〔比較例１〕
シリカ粒子の混合量を４０質量部に変更した点を除き、実施例１と同様にして核酸固定用基板を製造した。なお、こうして製造された核酸固定用基板の樹脂層には、樹脂層の約５５質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されている。
【００６１】
実施例１と同様にして、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めるとともに、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態について評価した。
【００６２】
結果を表１に示す。シリカ粒子の混合量を２０質量部から４０質量部に増加させると、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率は実施例１よりも向上した。樹脂層の耐水性は実施例１よりも低下したが、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定にあたり特に支障はなかった。塗膜面状態は実施例１よりも大幅に低下し、樹脂層の形成が困難となった。したがって、本例では樹脂層の形成が難しく製造上問題がある。
【００６３】
〔比較例２〕
シリカ粒子の混合量を５質量部に変更した点を除き、実施例１と同様にして核酸固定用基板を製造した。なお、こうして製造された核酸固定用基板の樹脂層には、樹脂層の約１３質量％のシリカ粒子が分散した状態で保持されている。
【００６４】
実施例１と同様にして、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めるとともに、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態について評価した。
【００６５】
結果を表１に示す。シリカ粒子の混合量を２０質量部から５質量部に減少させると、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率は実施例１よりも大幅に減少し、樹脂層に固定されたオリゴヌクレオチド量が不十分なものとなった。樹脂層の耐水性及び塗膜面状態は実施例１と同様に良好であった。
【００６６】
〔比較例３〕
シリカ粒子の混合量を０質量部に変更した点を除き、実施例１と同様にして核酸固定用基板を製造した。
【００６７】
実施例１と同様にして、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率を求めるとともに、樹脂層の耐水性及び塗膜面状態について評価した。
【００６８】
結果を表１に示す。シリカ粒子の混合量を２０質量部から０質量部に減少させると、樹脂層へのオリゴヌクレオチドの固定率は実施例１よりも大幅に減少し、樹脂層に固定されたオリゴヌクレオチド量が不十分なものとなった。樹脂層の耐水性及び塗膜面状態は実施例１と同様に良好であった。
【００６９】
【表１】
2007064963.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】本発明の生体物質固定用担体の一実施形態を模式的に示す一部断面図である。
【符号の説明】
【００７１】
１・・・生体物質固定用担体
２・・・基材
３・・・樹脂層
４・・・シリカ粒子
【図１】
2007064963.tif 000004