(57)【要約】【課題】  ＭＵ以外のクマリン系化合物の新規医薬用途としてのヒアルロン酸合成阻害剤を提供すること。【解決手段】  下記の一般式で表されるクマリン系化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴とする。    【化１】2007063193.tif 000012（式中、Ｒ1とＲ2は同一または異なって水素またはアルキル基を示すが、少なくとも一つはアルキル基である。Ｒ3とＲ4とＲ5とＲ6は同一または異なって水素または水酸基を示すが、少なくとも一つは水酸基である。但し、Ｒ1が水素，Ｒ2がメチル基，Ｒ3が水素，Ｒ4が水素，Ｒ5が水酸基，Ｒ6が水素の場合を除く）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式で表されるクマリン系化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴とするヒアルロン酸合成阻害剤。
【化１】
2007063193.tif 000010
（式中、Ｒ1とＲ2は同一または異なって水素またはアルキル基を示すが、少なくとも一つはアルキル基である。Ｒ3とＲ4とＲ5とＲ6は同一または異なって水素または水酸基を示すが、少なくとも一つは水酸基である。但し、Ｒ1が水素，Ｒ2がメチル基，Ｒ3が水素，Ｒ4が水素，Ｒ5が水酸基，Ｒ6が水素の場合を除く）
【請求項２】
クマリン系化合物がＲ3とＲ4とＲ5とＲ6の少なくとも二つが水酸基であることを特徴とする請求項１記載のヒアルロン酸合成阻害剤。
【請求項３】
クマリン系化合物が５，７−ジヒドロキシ−４−アルキルクマリンまたは６，７−ジヒドロキシ−４−アルキルクマリンであることを特徴とする請求項２記載のヒアルロン酸合成阻害剤。
【請求項４】
クマリン系化合物が５，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリンまたは６，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリンであることを特徴とする請求項３記載のヒアルロン酸合成阻害剤。
【請求項５】
下記の一般式で表されるクマリン系化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とするヒアルロン酸合成阻害組成物。
【化２】
2007063193.tif 000011
（式中、Ｒ1とＲ2は同一または異なって水素またはアルキル基を示すが、少なくとも一つはアルキル基である。Ｒ3とＲ4とＲ5とＲ6は同一または異なって水素または水酸基を示すが、少なくとも一つは水酸基である。但し、Ｒ1が水素，Ｒ2がメチル基，Ｒ3が水素，Ｒ4が水素，Ｒ5が水酸基，Ｒ6が水素の場合を除く）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロン酸合成阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
下記の化学構造式で表されるクマリン系化合物の一つである４−メチルウンベリフェロン（４−Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ：ＭＵ）は、古くから利胆剤としての医薬用途が知られている他、最近では、ヒアルロン酸に対して合成阻害効果を有することが報告されている（非特許文献１）。
【０００３】
【化３】
2007063193.tif 000002
【０００４】
ヒアルロン酸は、グルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンの二糖単位の繰り返し構造からなる直鎖状の高分子多糖で、細胞外マトリックスの主要な構成成分の一つとして生体内に広く分布している。近年、このヒアルロン酸が、組織の構築材料としてばかりでなく、細胞の挙動に大きな影響を与えていることが知られてきた。その一例として挙げられるのが、癌細胞とヒアルロン酸との関係である。癌組織は、ヒアルロン酸リッチな環境を形成していることが知られており、癌細胞の増殖や浸潤とヒアルロン酸との間に関連性があることが示唆されている。事実、培養系においても、癌細胞と線維芽細胞を混合培養すると、線維芽細胞のヒアルロン酸合成が顕著に増加することが知られている。前述の通り、ＭＵにはヒアルロン酸合成阻害効果があることが知られているが、ＭＵ以外のクマリン系化合物のヒアルロン酸合成に対する作用についてはこれまで報告された例がない。
【非特許文献１】Nakamura, T., Takagaki, K., Shibata, S., Tanaka, K., Higuchi, T., and Endo, M. (1995) Biochem. Biophys. Res. Commun., 208, 470-475
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
そこで本発明は、ＭＵ以外のクマリン系化合物の新規医薬用途としてのヒアルロン酸合成阻害剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らが上記の点に鑑みて鋭意研究を重ねた結果なしえた本発明のヒアルロン酸合成阻害剤は、請求項１記載の通り、下記の一般式で表されるクマリン系化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴とする。
【０００７】
【化４】
2007063193.tif 000003
【０００８】
（式中、Ｒ1とＲ2は同一または異なって水素またはアルキル基を示すが、少なくとも一つはアルキル基である。Ｒ3とＲ4とＲ5とＲ6は同一または異なって水素または水酸基を示すが、少なくとも一つは水酸基である。但し、Ｒ1が水素，Ｒ2がメチル基，Ｒ3が水素，Ｒ4が水素，Ｒ5が水酸基，Ｒ6が水素の場合を除く）
また、請求項２記載のヒアルロン酸合成阻害剤は、請求項１記載のヒアルロン酸合成阻害剤において、クマリン系化合物がＲ3とＲ4とＲ5とＲ6の少なくとも二つが水酸基であることを特徴とする。
また、請求項３記載のヒアルロン酸合成阻害剤は、請求項２記載のヒアルロン酸合成阻害剤において、クマリン系化合物が５，７−ジヒドロキシ−４−アルキルクマリンまたは６，７−ジヒドロキシ−４−アルキルクマリンであることを特徴とする。
また、請求項４記載のヒアルロン酸合成阻害剤は、請求項３記載のヒアルロン酸合成阻害剤において、クマリン系化合物が５，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリンまたは６，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリンであることを特徴とする。
また、本発明のヒアルロン酸合成阻害組成物は、請求項５記載の通り、下記の一般式で表されるクマリン系化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００９】
【化５】
2007063193.tif 000004
【００１０】
（式中、Ｒ1とＲ2は同一または異なって水素またはアルキル基を示すが、少なくとも一つはアルキル基である。Ｒ3とＲ4とＲ5とＲ6は同一または異なって水素または水酸基を示すが、少なくとも一つは水酸基である。但し、Ｒ1が水素，Ｒ2がメチル基，Ｒ3が水素，Ｒ4が水素，Ｒ5が水酸基，Ｒ6が水素の場合を除く）
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、ＭＵ以外のクマリン系化合物の新規医薬用途としてのヒアルロン酸合成阻害剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明のヒアルロン酸合成阻害剤は、下記の一般式で表されるクマリン系化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴とするものである。本発明のヒアルロン酸合成阻害剤は、癌細胞のヒアルロン酸合成を阻害することで、癌細胞の増殖・浸潤・転移を阻害する効果を持つことから、癌の予防・治療に有用である。また、本発明のヒアルロン酸合成阻害剤は、ヒアルロン酸の過剰産生に起因する各種の線維化疾患、例えば、慢性肝炎をはじめとする、肝、肺、腎などの各種臓器における慢性炎症性疾患に伴う線維化、胸膜中皮腫などの予防・治療にも有用である。
【００１３】
【化６】
2007063193.tif 000005
【００１４】
（式中、Ｒ1とＲ2は同一または異なって水素またはアルキル基を示すが、少なくとも一つはアルキル基である。Ｒ3とＲ4とＲ5とＲ6は同一または異なって水素または水酸基を示すが、少なくとも一つは水酸基である。但し、Ｒ1が水素，Ｒ2がメチル基，Ｒ3が水素，Ｒ4が水素，Ｒ5が水酸基，Ｒ6が水素の場合を除く）
【００１５】
上記の一般式において、アルキル基は、好ましくは炭素数が１〜６の直鎖状または分岐鎖状のものである。具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｎ−ヘキシル基などが例示される。
【００１６】
上記の一般式で表されるクマリン系化合物の薬学的に許容される塩としては、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩などが例示される。
【００１７】
上記の一般式で表されるクマリン系化合物のうち、Ｒ3とＲ4とＲ5とＲ6の少なくとも二つが水酸基であるクマリン系化合物は、ＭＵに比較してヒアルロン酸合成阻害効果と水溶性に優れるため、本発明のヒアルロン酸合成阻害剤の有効成分として好適である。このような化合物の具体例としては、５，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリンに代表される５，７−ジヒドロキシ−４−アルキルクマリンや、６，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリンに代表される６，７−ジヒドロキシ−４−アルキルクマリンなどが挙げられる。なお、上記の一般式で表されるクマリン系化合物は、例えば、Ｋａｗａｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  ｖｉｖｏ  １７：５０９−５１２（２００３）に記載の方法に従って合成することができ、そのうちのいくつかは市販もされている。
【００１８】
本発明のヒアルロン酸合成阻害剤は、経口投与または非経口投与（例えば、静脈注射、皮下投与、直腸投与など）することができる。投与に際してはそれぞれの投与方法に適した剤型に製剤化すればよい。製剤形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、丸剤、トローチ剤、舌下錠、坐剤、軟膏、注射剤、乳剤、懸濁剤、シロップなどが挙げられ、これら製剤の調製は、無毒性の賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、防腐剤、等張化剤、安定化剤、分散剤、酸化防止剤、着色剤、矯味剤、緩衝剤などの添加剤を使用して自体公知の方法にて行うことができる。無毒性の添加剤としては、例えば、でんぷん、ゼラチン、ブドウ糖、乳糖、果糖、マルトース、炭酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ペトロラタム、グリセリン、エタノール、シロップ、塩化ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、クエン酸、ポリビニルピロリドン、水などが挙げられる。なお、製剤中には、本発明の有用性を補強したり増強したりするために、他の薬剤を含有させてもよい。
【００１９】
製剤中における有効成分の含有量は、その剤型に応じて異なるが、一般に０．１〜１００重量％の濃度であることが望ましい。製剤の投与量は、投与対象者の性別や年齢や体重の他、症状の軽重、医師の診断などにより広範に調整することができるが、一般に１日当り０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇとすることができる。上記の投与量は、１日１回または数回に分けて投与すればよい。
【実施例】
【００２０】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は、以下の記載に何ら限定して解釈されるものではない。
【００２１】
実施例１：ヒト膵癌細胞のヒアルロン酸合成に対する阻害作用の評価
（実験方法）
１．培養細胞
１０％ウシ胎仔血清（Ｂｉｏｆｌｕｉｄ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を含むＲＰＭＩ−１６４０にて５％ＣＯ2−９５％ａｉｒ中、３７℃で培養したヒト膵癌細胞ＫＰ−１ＮＬを用いた。
【００２２】
２．評価サンプル
以下の化合物を評価サンプルとした。
・  化合物１（比較例）：クマリン
・  化合物２（比較例）：７−ヒドロキシクマリン
・  化合物３（比較例）：７−メトキシ−４−メチルクマリン
・  化合物４（比較例）：６，７−ジヒドロキシクマリン
・  化合物５（実施例）：６−ヒドロキシ−４−メチルクマリン
・  化合物６（実施例）：７−ヒドロキシ−３−メチルクマリン
・  化合物７（実施例）：７−ヒドロキシ−３，４−ジメチルクマリン
・  化合物８（実施例）：５，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリン
・  化合物９（実施例）：６，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリン
・  化合物１０（参考例）：４−メチルウンベリフェロン（ＭＵ）
なお、化合物１，２，１０はＷａｋｏ純薬工業から購入した。化合物３，５，９は東京化成工業から購入した。化合物４はＡｌｆａ  Ａｅｓａｒから購入した。化合物６と７はＫａｗａｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  ｖｉｖｏ  １７：５０９−５１２（２００３）に記載の方法に従って合成した。化合物８はＳＳＸから購入した。
【００２３】
３．培地中のヒアルロン酸の定量
１０ｃｍ培養皿にＫＰ−１ＮＬを２．０×１０4個蒔き、２４時間インキュベートした。２４時間後、培地中にジメチルスルフォキシドに溶解させた評価サンプルをその濃度が１．０×１０-2ｍＭになるように添加した。７２時間後に培地と細胞を回収し、ヒアルロン酸測定キット（生化学工業）を用いて培地に分泌された１０6細胞数あたりのヒアルロン酸を定量した。
【００２４】
（実験結果）
結果を表１に示す（培地中のヒアルロン酸量はｎが６の平均値）。
【００２５】
【化７】
2007063193.tif 000006
【００２６】
【表１】
2007063193.tif 000007
【００２７】
表１から明らかなように、化合物５〜９は、評価サンプルを添加しないコントロールに比較して癌細胞のヒアルロン酸合成を効果的に阻害した。中でも化合物８と９は、ＭＵよりも優れた阻害作用を示し、また、ＭＵよりも高い水溶性を有することから（別途の実験による）、本発明のヒアルロン酸合成阻害剤の有効成分として好適であることがわかった。なお、いずれの評価サンプルも、１．０×１０-2ｍＭの濃度で細胞の増殖活性に影響を与えなかった（別途の実験による）。
【００２８】
実施例２：ヒト大腸癌細胞のヒアルロン酸合成に対する阻害作用の評価
ヒト膵癌細胞ＫＰ−１ＮＬのかわりにヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１を用いたこと以外は実施例１と同様にして行った。結果を表２に示す（培地中のヒアルロン酸量はｎが６の平均値）。
【００２９】
【化８】
2007063193.tif 000008
【００３０】
【表２】
2007063193.tif 000009
【００３１】
表２から明らかなように、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１を用いた場合でも、ヒト膵癌細胞ＫＰ−１ＮＬを用いた場合と同様の結果を得ることができた。
【００３２】
製剤例１：錠剤
１錠当たり５ｍｇの５，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリンを含む以下の成分組成からなる２００ｍｇ錠剤を、各成分をよく混合してから打錠することで製造した。
５，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリン      ５ｍｇ
乳糖                                      １３７〃
でんぷん                                    ４５〃
カルボキシメチルセルロース                  １０〃
タルク                                        ２〃
ステアリン酸マグネシウム                      １〃
合計２００ｍｇ／錠
【００３３】
製剤例２：カプセル剤
１カプセル当たり２０ｍｇの６，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリンを含む以下の成分組成からなる１００ｍｇカプセル剤を、各成分をよく混合してからカプセルに充填することで製造した。
６，７−ジヒドロキシ−４−メチルクマリン    ２０ｍｇ
乳糖                                        ５３〃
でんぷん                                    ２５〃
ステアリン酸マグネシウム                      ２〃
合計１００ｍｇ／カプセル
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明は、ＭＵ以外のクマリン系化合物の新規医薬用途としてのヒアルロン酸合成阻害剤を提供することができる点において、産業上の利用可能性を有する。