(57)【要約】【課題】嫌気的バイオレメディエーションの状況を、効率的かつ正確に把握する方法を提供すること。【解決手段】揮発性有機塩素化合物を除去することを目的とする嫌気的バイオレメディエーションを行っている領域の地下水を検出対象物として、当該対象物中の脱塩素化酵素をコードする遺伝子の種類と量を検出することを特徴とする、バイオレメディエーションの状態のモニタリング方法を提供することにより、上記の課題を解決し得ることを見出した。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
揮発性有機塩素化合物を除去することを目的とする嫌気的バイオレメディエーションを行っている領域の地下水を検出対象物として、当該対象物中の脱塩素化酵素をコードする遺伝子の種類と量を検出することを特徴とする、バイオレメディエーションの状態のモニタリング方法。
【請求項２】
脱塩素化酵素をコードする遺伝子が、テトラクロロエチレン脱塩素化酵素及び／又はトリクロロエチレン脱塩素化酵素であり、分解対象となる揮発性有機塩素化合物が、テトラクロロエチレン及び／又はトリクロロエチレンであることを特徴とする、請求項１記載の地下水のモニタリング方法。
【請求項３】
検出対象物中のテトラクロロエチレン脱塩素化酵素及び／又はトリクロロエチレン脱塩素化酵素をコードする遺伝子の量の増大を、検出対象物中のテトラクロロエチレン及び／又はトリクロロエチレンの分解促進の指標とし、当該増大の後のテトラクロロエチレン脱塩素化酵素及び／又はトリクロロエチレン脱塩素化酵素の量の減少を、検出対象物における当該揮発性有機塩素化合物の実質的減少の指標とすることを特徴とする、請求項２記載の地下水のモニタリング方法。
【請求項４】
脱塩素化酵素をコードする遺伝子が塩化ビニル脱塩素化酵素であり、分解対象となる揮発性有機塩素化合物が塩化ビニルであることを特徴とする、請求項１記載の地下水のモニタリング方法。
【請求項５】
検出対象物中の塩化ビニル脱塩素化酵素をコードする遺伝子の量の増大を、検出対象物中の塩化ビニルの分解促進の指標とすることを特徴とする、請求項４記載の地下水のモニタリング方法。
【請求項６】
嫌気的バイオレメディエーションが、地下水の流れの上流において水素供与体を注入する形態のバイオレメディエーションであり、かつ、検出対象物となる地下水を、前記注入箇所の下流から採取することを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の地下水のモニタリング方法。
【請求項７】
水素供与体がＨＲＣ（登録商標）であることを特徴とする、請求項６記載の地下水のモニタリング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、嫌気的バイオレメディエーションが行われている場所における汚染物質の浄化状況及び浄化能力のモニタリング方法に関する発明である。
【背景技術】
【０００２】
テトラクロロエチレン（ＰＣＥ）・トリクロロエチレン（ＴＣＥ）等の揮発性有機塩素化合物は、土壌・地下水汚染を引き起こしている主要な環境汚染物質である。これらの物質で汚染された土壌を浄化する有効な技術は限られている。その中で、最近、水素徐放材を用いた嫌気的バイオレメディエーションが注目されている。
【０００３】
これは、嫌気的条件において、Dehalococcoides（Dhc.）属に属する微生物等が、電子受容体として有機塩素化合物を利用する反応を活用したものであり、テトラクロロエチレン（ＰＣＥ）の塩素が段階的に水素に置換されて、トリクロロエチレン（ＴＣＥ）、ジクロロエチレン（ＤＣＥ）異性体、塩化ビニル（ＶＣ）を経て、最終的にエチレンに変換されることを目的とする技術である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
この嫌気的バイオレメディエーションの成否は、脱塩素化に関与する微生物の有無に依存している。また、微生物の種類によっては、毒性の強いＶＣまでしか脱塩素化しない場合もある。そこで、嫌気的バイオレメディエーションを効率的かつ安全に進めるためには、微生物の存在や量、種類をモニタリングすることが不可欠である。この微生物のモニタリングを行う最も単純な方法として、対象となる地下水の中の特定の微生物の菌体数をモニタリングすることが考えられるが、対象となる微生物はDehalococcoides（Dhc.）属に属する微生物が主体であり、各々の微生物の種類を、その具体的な形態や、保存性の高い１６ＳｒＲＮＡの塩基配列から判別することは困難である。
【０００５】
さらに、地下水の揮発性有機塩素化合物の濃度をモニタリングすることも考えられるが、揮発性有機塩素化合物の濃度は、地下水流の方向や流量により著しく変化するため、これらの濃度を測定するだけでは、測定時点における浄化の進捗状況や分解能力を正しくモニタリングしているとは限らないという問題が認められる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで、本発明者は、嫌気的脱塩素化を行うDhc.種の検出・同定法の開発を目標とし、脱塩素化に関与する還元的脱塩素化酵素(Reductive dehalogenaze:RDase)の遺伝子をターゲットとした微生物の探索・定量を行い、脱塩素化との関連を解析した。その結果、本発明者は、バイオレメディエーションのモニタリングの指標として、検出対象となる地下水の中の特定の微生物の脱塩素化酵素をコードする遺伝子の種類と量を用いることに想到して本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、揮発性有機塩素化合物を除去することを目的とする嫌気的バイオレメディエーションを行っている領域の地下水を検出対象物として、当該対象物中の脱塩素化酵素をコードする遺伝子の種類と量を検出することを特徴とする、バイオレメディエーションの状態のモニタリング方法（以下、本モニタリング方法ともいう）を提供する発明である。
【０００８】
ここで「バイオレメディエーションの状態のモニタリング」とは、嫌気的バイオレメディエーションが行われている場所における、汚染物質の浄化状況のモニタリングや汚染物質に対する浄化能力のモニタリングを意味する。すなわち、対象物中の脱塩素化酵素をコードする遺伝子の種類を特定することにより、測定時点において分解対象となっている揮発性有機塩素化合物の種類［テトラクロロエチレン（ＰＣＥ）、トリクロロエチレン（ＴＣＥ）、ジクロロエチレン（ＤＣＥｓ）、塩化ビニル（ＶＣ）］を特定することにより、バイオレメディエーションの進捗状況を把握することが可能であり（上述したように、通常は、バイオレメディエーションの浄化対象は、ＰＣＥ→ＴＣＥ→ＤＣＥｓ→ＶＣへと変化してゆく）、さらに、当該遺伝子量を特定することにより、測定時点における揮発性有機塩素化合物に対する浄化能力を特定することができる（遺伝子量が多ければ、その遺伝子がコードする揮発性有機塩素化合物分解酵素に起因する浄化能力が大きいということを意味する）。この揮発性有機塩素化合物をコードする遺伝子の種類と量は、バイオレメディエーションが進行するに従って、通常は一定のパターンで変化するものである。仮に、地下水のモニタリングを、本モニタリング方法により経時的に行い、その結果が当該一定パターンに当てはまっていれば、その嫌気的バイオレメディエーションは順調に進んでいることを意味することになる。これに対して、モニタリング値が当該一定パターンから外れる場合には、当該バイオレメディエーションの浄化状況において何らかの問題が認められる可能性が高くなる。このような問題が認められた場合には、その原因を、本モニタリング方法による結果を基に検討し、適切な措置（例えば、特定の微生物の追加注入、栄養分の追加注入、適切なガスの注入等）を選択して行うことができる。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、嫌気的バイオレメディエーションが行われている場所における、汚染物質の浄化状況や汚染物質に対する浄化能力をモニタリング方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
＜嫌気的バイオレメディエーション＞
嫌気的バイオレメディエーションとは、嫌気性微生物がもつ化学物質の分解能力を利用して、嫌気的環境中に放出された有害化学物質を分解する汚染修復技術である。嫌気的バイオレメディエーションにて分解する有害化学物質の中で、本発明の対象となるものは揮発性有機塩素化合物であり、具体的には、テトラクロロエチレン（ＰＣＥ）、トリクロロエチレン（ＴＣＥ）、ジクロロエチレン（ＤＣＥｓ）及び塩化ビニル（ＶＣ）である。このような揮発性有機塩素化合物は、発ガン性を有する恐れのある化合物を多く含んでおり、これらによる地下水汚染は深刻な問題となっている。本発明にて行う嫌気的バイオレメディエーションにおいては、揮発性有機塩素化合物を電子受容体として利用してエネルギーを獲得するハロゲン呼吸を行う微生物による浄化を行う。
【００１１】
本発明の対象となる嫌気的バイオレメディエーションの種類は、「嫌気的」であれば特に限定されないが、原位置処理法（In Site Bioremediation）が代表的な方法として挙げられる。原位置処理法とは、有害化学物質（本発明では揮発性有機塩素化合物）で汚染された通気層、帯水層を掘削することなく、井戸や散水溝を用いて地中へ栄養源、必要に応じて微生物を注入して、有害化学物質の微生物分解を行う処理方法である。本発明を適用するのに好適な態様として、例えば、嫌気的脱塩素化を促進する薬剤として、ポリ乳酸エステルを主成分とするＨＲＣ（登録商標）（水素供与化合物：Hydrogen Released Compound：米国Regenesis社）を用いる例を挙げることができる。具体的には、浄化領域の地下水の上流側に設けた注入井戸からＨＲＣを地下水に向けて注入することにより、当該ＨＲＣから乳酸の水和反応で徐々に水素が放出され酢酸へと変化していくと同時に、放出水素により微生物による脱塩素化プロセスに関与し、揮発性有機塩素化合物の塩素が水素へと置換されて、最終的には無毒なエチレンまで完全脱塩素化するシステムである。注入井戸から地下水の下流側に設けられた観察井戸から地下水を採取して、その内容を検討することにより、かかる嫌気的バイオレメディエーションの効果を確認することができる。
【００１２】
＜脱塩素化酵素＞
上述したように、脱塩素化酵素（Reductive Dehalogenase：ＲＤase）は、揮発性有機塩素化合物の脱塩素能を有する嫌気性菌が、当該脱塩素を行う際に作用する脱ハロゲン化酵素である。一般的に、当該脱塩素化酵素は、Dehalococcoides（Dhc.）属に属する微生物において認められ、補助タンパク質を介し細胞膜に局在し、補因子としてcorrinoidを含み、電子伝達に関与するFe/Sクラスターを有していることが知られている。また、脱塩素化酵素をコードする遺伝子（Ａ遺伝子）に関連して、当該Ａ遺伝子の下流に、細胞膜にアンカリングする上記補助タンパク質をコードする遺伝子（Ｂ遺伝子）を有し、脱塩素化酵素の発現の際には、これらの２つの遺伝子が共転写されることが知られている。
【００１３】
Dhc.属に属する微生物としては、Dhc.ethenogenes 195(Appl Environ Microbiol. Jul;65(7):3108-13., 1999等)、Dhc.sp.strain FL2(Appl. Environ. Microbiol. 63:2870-2875, 1997)、Dhc.sp.strain BAV1(Nature 424:62-65,2003)、 Dhc.sp.strain VS(Appl Environ Microbiol. 2003 Feb;69(2):953-9.)等が知られている。また、脱塩素化酵素を提供し得る微生物として、例えば、Desulfutobacterium Y51（Biosci Biotechnol Biochem. 2001 Jul;65(7):1474-81.）、Desulfuromonas chloroethenica（Appl Environ Microbiol. 1996 Nov;62(11):4108-13.）等が知られている。  これらの微生物から提供される脱塩素化酵素は、各々の微生物により、少しずつその活性が異なっていることが知られている。
【００１４】
具体的には、上記のDhc.ethenogenes 195由来のＴＣＥ-ＲＤaseは、ＰＣＥ→ＴＣＥ→ＤＣＥｓ→ＶＣ→エチレンまで完全に脱塩素化することが可能である。ただし、基質として利用するのは、ＰＣＥ〜ＤＣＥｓであり、ＶＣは共代謝で脱塩素化し、この共代謝の脱塩素化の効率は若干低下する。また、Dhc.sp.strain FL2、Desulfutobacterium Y51、及び、Desulfuromonas chloroethenica由来のＴＣＥ-ＲＤaseは、上記のＰＣＥ〜ＤＣＥｓまでの脱塩素化が可能であるが、ＶＣの脱塩素化はできない。Dhc.sp.strain BAV1は、上記のＤＣＥｓ以降をエチレンまで脱塩素化することが可能であり、Dhc.sp.strain VSは、ＶＣをエチレンに脱塩素化することが可能である。
【００１５】
本モニタリング方法においては、検出対象物である地下水における上記の脱塩素化酵素をコードする遺伝子（以下、脱塩素化酵素遺伝子ともいう）の種類と量を検出することを必須とする。検出対象となる脱塩素化酵素遺伝子の種類の選定方法は特に限定されないが、例えば、以下のような基準に従うことが好適である。すなわち、（１）汚染領域は、様々な有機塩素化合物が混在するため、基質の範囲が広い脱塩素化酵素遺伝子を選択し、（２）特に、分解の最終段階に該当するＶＣの蓄積が問題となる故、汚染領域の完全脱塩素化を確認するには、ＶＣを分解可能な脱塩素化酵素遺伝子を選択することが好適である。
【００１６】
上記（１）の観点からは、一般的にＰＣＥ又はＴＣＥからＶＣまでの脱塩素活性を有する（基質は、ＰＣＥ、ＴＣＥ及びＤＣＥｓ）ＴＣＥ脱塩素化酵素の遺伝子を選択することが好ましい。さらに具体的には、上述したDhc.ethenogenes 195由来のＴＣＥ-ＲＤase、又は、Dhc.sp.strain FL2、Desulfutobacterium Y51、若しくは、Desulfuromonas chloroethenica由来のＴＣＥ-ＲＤaseを選択することが好適であり、特に、Dhc.ethenogenes 195由来のＴＣＥ-ＲＤaseを選択することが好適である。
【００１７】
上記（２）の観点からは、ＶＣに対する積極的な分解活性を有するＶＣ脱塩素化酵素の遺伝子を選択することが好ましい。さらに具体的には、上述したDhc.sp.strain BAV1又はDhc.sp.strain VS由来のＶＣ脱塩素化酵素の遺伝子を選択することが好適である。
【００１８】
＜モニタリングの態様＞
上述したように、本モニタリング方法の検出対象物は、揮発性有機塩素化合物を除去することを目的とするバイオレメディエーションを行っている領域の地下水である。この地下水の採取形態は特に限定されないが、好適には、前記領域の地下水の下流域であることが好適である。地下水の下流域は、汚染領域の全体的においてバイオレメディエーションの効果が認められるか否かを判断するのにより好適である場合が多い。地下水の採取は、目的領域の帯水層まで届く深さの井戸（観察井戸）を設けて、当該井戸から目的とする地下水を採取することができる。
【００１９】
次いで、採取した地下水の中における、本モニタリング方法における指標となるべき脱塩素化酵素遺伝子の種類と量を検出する。この検出は、経時的に行うことが好適である。
【００２０】
この脱塩素化酵素の検出は、予め、検出する脱塩素化酵素遺伝子の種類を１種類以上設定して、バイオレメディエーションの開始から、いかなる種類の脱塩素化酵素の遺伝子がいかなる量存在するかを検出することにより行うことができる。この検出すべき脱塩素化酵素遺伝子の種類は、上記（１）及び（２）の基準にて選択することが好適である。
【００２１】
すなわち、上記（１）の基準に則り、検出対象物である地下水中のＴＣＥ脱塩素化酵素（例えば、Dhc.ethenogenes 195由来のＴＣＥ-ＲＤase、又は、Dhc.sp.strain FL2、Desulfutobacterium Y51、若しくは、Desulfuromonas chloroethenica由来のＴＣＥ-ＲＤase）をコードする遺伝子の量の増大を、地下水中のＰＣＥ、ＴＣＥ及び／又はＤＣＥｓの分解促進の指標とし、当該増大の後のＴＣＥ脱塩素化酵素の量の減少を、地下水における当該揮発性有機塩素化合物の実質的減少の指標とすることができる。
【００２２】
また、上記（２）の基準に則り、地下水中のＶＣ脱塩素化酵素（例えば、Dhc.sp.strain BAV1又はDhc.sp.strain VS由来のＶＣ脱塩素化酵素）をコードする遺伝子の量の増大を、地下水中のＶＣの分解促進の指標とすることができる。また、当該ＶＣ脱塩素化酵素の量の減少は、検出対象物における塩化ビニルの実質的減少の指標とすることができると考えられる。
【００２３】
特定の種類の脱塩素化酵素遺伝子の実質的存否の確認と定量は、例えば、当該特定の脱塩素化酵素を発現すると考えられる微生物の脱塩素化酵素と相同性があると考えられる配列を有するヌクレオチドプライマーを増幅用プライマーとして、ＰＣＲ法等の遺伝子増幅法により得られる遺伝子増幅産物を定量することにより行うことができる。最も好適な遺伝子の定量法の一つとして、リアルタイムＰＣＲ法を挙げることができる。リアルタイムＰＣＲ法の具体的な態様として、例えば、インターカレーター法、TaqManプローブ法、サイクリングプローブ法、モレキュラービーコンプローブ法等が挙げられるが、いずれの方法をも用いることができる。なお、当該遺伝子増幅産物を得るための鋳型遺伝子が微量の場合には、遺伝子の非特異的増幅法を予め行って、当該非特異的増幅産物を鋳型遺伝子とすることも好適な態様の一つである。
【００２４】
このようにして、検出対象物である地下水中の特定の脱塩素化酵素遺伝子の検出を行い、その結果から、地下水中の揮発性有機塩素化合物の分解度合いをモニタリングすることができる。
【００２５】
本発明では、本モニタリング方法を行うための、モニタリング用キットを提供する。このモニタリング用キットには、地下水中の脱塩素化酵素遺伝子を検出する際に用いる遺伝子増幅用プライマーと遺伝子検出用プローブを含む、遺伝子の増幅を行うための試薬や器具等を含めることができる。また、測定された地下水中の脱塩素化酵素遺伝子の種類と量に対して、当該地下水における嫌気的バイオレメディエーションの状態を示す説明書や、与えられた当該遺伝子のデータを基に嫌気的バイオレメディエーションの状態を導き出すためのアルゴリズムを含むソフトウエアを格納した電子媒体等も含めることができる。
【実施例】
【００２６】
以下、実施例を記載し、本発明をさらに具体的に説明する。
【００２７】
［実施例１］Dehalococcoides（Dhc.）属に属する微生物のモニタリング
（１）脱塩素化酵素遺伝子の相同性の検討
嫌気的脱ハロゲン化を促進するポリ乳酸を主体とする水素供与体であるHRC（登録商標）の注入（地下水の上流側に設置した注入井戸から注入した）によりバイオレメディエーションを行っている土地（機械工場の敷地）の地下水を採取し（地下水の下流側約５mに設置した観察井戸から採取した）、バイオレメディエーション開始時（０ヶ月）、開始後２ヶ月目、３ヶ月目及び６ヶ月目の地下水中の微生物の全ゲノムＤＮＡを、常法に従い抽出した。Dhc. ethenogenes 由来TCE脱塩素化酵素遺伝子（Dhc195 TCEase遺伝子）、Dhc.BAV1由来VC脱塩素化酵素遺伝子（BAV1 VCRDase遺伝子）、Dhc.VS由来VC脱塩素化酵素遺伝子（VS VCRDase遺伝子）の塩基配列を基に設計した下記のプライマー：
＜Dhc195 TCEase遺伝子＞
1st PCRプライマー
Deth-TceAFw：５’−AGAGATTAGGTTTGGCAGGA−３’（配列番号１）
Deth-TceARv：５’−CATAGTGAAGAAGGGGCAGA−３’（配列番号２）
2nd PCRプライマー
Deth-TceAD2Fw：５’−GTGGGAGGGTACGCCTGAAG−３’（配列番号３）
Deth-TceAD4Rv：５’−TAGGGAACCCTTGGTGTTG−３’（配列番号４）
＜BAV1 VCRDase遺伝子＞
1st PCRプライマー
RRF2：５’−SHMGBMGWGATTTYATGAARR−３’（配列番号５）
B1R：５’−CHADHAGCCAYTCRTACCA−３’（配列番号６）
2nd PCRプライマー
bvcAF：５’−TGCCTCAAGTACAGGTGGT−３’（配列番号７）
bvcAR：５’−ATTGTGGAGGACCTACCT−３’（配列番号８）
＜VS VCRDase遺伝子＞
1st PCRプライマー
VSVCRDase1Fw：５’−GCTCAAGAAGCCGGGAA−３’（配列番号９）
VSVCRDase1Rv1：５’−GGCGCCCAATAAGACCA−３’（配列番号１０）
2nd PCRプライマー
VSVCRDase2Fw：５’−GAATGGCTCTAGGGAAA−３’（配列番号１１）
VSVCRDase2Rv1：５’−CAACGGTACTACAGCTAA−３’（配列番号１２）
を用いて２段階ＰＣＲ（1組のプライマーだけでは特異的な増幅が難しい場合に行う方法であり、1組のプライマーで増幅したあと、その増幅産物を鋳型として最初のプライマーよりも内側のプライマーを使って2回目のPCRを行う方法）を行い（ＰＣＲは、Applied Biosystems: GeneAmp PCR System 9700にて行った）、Dhc195 TCEase遺伝子とBAV1 VCRDase遺伝子とVS VCRDase遺伝子を含む遺伝子増幅産物を得た。
【００２８】
その増幅産物に対して、遺伝子の相同性の検討用電子化ツールであるBLASTを用いて、Bacterium YK-TCE1（NCBI(National Center for BIotechnology)又はDDBJ(DNA Data Bank of Japan）)由来TCE脱塩素化遺伝子、Dhc.BAV1由来VC脱塩素化遺伝子、Dhc.VS由来VC脱塩素化遺伝子との相同性を確認した。その結果、これらの遺伝子との相同性を示す遺伝子の一部を得た（電気泳動図：図１）。
【００２９】
（２）リアルタイムＰＣＲ法によるモニタリング
上記の相同性の結果を踏まえて、地下水の脱塩素化遺伝子のモニタリングを行うための手段であるリアルタイムＰＣＲ法に用いる増幅用プライマーを設計して作成した。
＜Dhc195 TCEase遺伝子＞
TCERDaseRTRv：５’−CCCAACTTAATCGCCTTGCA−３’（配列番号１３）
TCERDaseRTFw：５’−GCGGGCCTCTTCGTATTAC−３’（配列番号１４）
（増幅長：65bp）
＜BAV1 VCRDase遺伝子＞
BAV1RTFw：５’−GGAACGGGAAATGTGCAGTT−３’（配列番号１５）
BAV1RTRv：５’−CGACTTCCTCCCAGACTATTGG−３’（配列番号１６）
（増幅長：73bp）
＜VS VCRDase遺伝子＞
vsRTPCRFw：５’−CGGTCAAAAAGTGGGTAAAGCA−３’（配列番号１７）
vsRTPCRRv：５’−ATCTAGGTATCACCGCTTTATATTTGG−３’（配列番号１８）
（増幅長：70bp）
【００３０】
上記の観察井戸の地下水から得られるＤＮＡが微量であるため、GenomiPhi DNA Amplification Kit（アマシャムバイオサイエンス株式会社）を用いて非特異的に増幅したＤＮＡを定量し、リアルタイムＰＣＲ法における鋳型として用いた。上記の増幅用プライマーを用いたリアルタイムＰＣＲ法は、Applied Biosystems  ABI PRISM（登録商標）  7000 Sequence Detection Systemを用いて行い、上記バイオレメディエーション開始時（０ヶ月）、開始後２ヶ月、３ヶ月及び６ヶ月に、それぞれ行った。  その結果、BAV1由来のVCRDaseは、６ヶ月後に採取した地下水に最も多く存在したが、VS由来のVCRDaseは、どの月においても検出されなかった。また、TCE-RDaseは２ヶ月後に最も多く存在するのが確認された（図２）。また、地下水中の有機塩素化合物の経時変化では、ＰＣＥ含有量は処理開始後２ヶ月で著しく減少し、それに伴ってＶＣの蓄積が認められた（図３）。
【００３１】
以上のことから、地下水中に混在する有機塩素化合物の脱塩素化に伴って、微生物の種類が、ＴＣＥ分解型からＶＣ分解型へと変化し、RDase遺伝子が嫌気的バイオレメディエーションにおけるモニタリングの際に有効な指標となり得ることが認められた。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】既知の脱塩素化遺伝子と試験対象となった地下水における脱塩素化遺伝子の相同性を示す図面である。
【図２】ＴＣＥ含有量とＴＣＥＲＤase遺伝子の経時変化を示した図面である。
【図３】塩化ビニル、エチレン含有量とＶＣＲＤase遺伝子の経時変化を示した図面である。
【図１】
2007089560.tif 000002
【図２】
2007089560.tif 000003
【図３】
2007089560.tif 000004
【配列表】
2007089560000001.app