(57)【要約】【解決手段】２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンからなる口臭の消臭及び／又は歯周組織の炎症抑制剤、及び、２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンを有効成分として含有することを特徴とする口腔用組成物。【効果】本発明の口臭の消臭及び／又は歯周組織の炎症抑制剤は、口臭原因物質であるメチルメルカプタンに対する消臭効果に優れ、かつ歯周病原因菌ＬＰＳの不活性化により歯周組織の炎症を効果的に抑制し得るものであり、本発明の口腔用組成物は、歯周病に伴う口臭を効果的に抑制し、かつ歯周組織の炎症抑制効果に優れるもので、歯周病の予防又は治療に有効である。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンからなる口臭の消臭及び／又は歯周組織の炎症抑制剤。
【請求項２】
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンを有効成分として含有することを特徴とする口腔用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンからなる口臭の消臭及び／又は歯周組織の炎症抑制剤、及びこれを有効成分として含有する、歯周病の予防又は治療に有効な口腔用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロデキストリンは、グルコース残基がα−１，４グルコシド結合により環状に結合したオリゴ糖で、６，７，８個のグルコースが結合しているα、β、γ−シクロデキストリンが知られている。これらシクロデキストリンの最も重要な特性は、環状分子構造の空洞部に種々の物質を取り込む性質を持つことであり、その特性を利用し様々な製品に利用されている。
【０００３】
シクロデキストリンの用途は広く、食品分野では香辛料、香料等の安定化剤として、化粧品分野では香りの保持や持続性、水への溶解性を高めるために使用している。医薬品分野では、シクロデキストリン分子構造の空洞部に様々な薬物を取り込んだ薬物担体を調製し、薬物の溶解性・安定性を高める、あるいは生体内への吸収性をコントロールするなどの目的に利用している（特許文献１参照）。
【０００４】
また、口腔製品分野では、α、β、γ−シクロデキストリンを多糖類の分解抑制（特許文献２参照）、口腔製品配合有効成分の安定化（特許文献３参照）を目的として利用しているが、これら技術では、口臭の主な原因物質となっている、歯周病原因菌が食物残渣等を分解して産生されたメチルメルカプタンに対する消臭効果については不十分であった。
【０００５】
一方、α、β、γ−シクロデキストリンには物性や機能性に限界があり、その用途にも制限があるため、新しいシクロデキストリンの誘導体が開発され、メチル化シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル化シクロデキストリン、マルトシル化シクロデキストリンといった誘導体が合成されている（特許文献４〜６参照）。
【０００６】
しかしながら、これまでのシクロデキストリン誘導体は、メチルメルカプタンに対する消臭効果を有するものはあるものの、その効果は十分とは言い難いものであり、また、シクロデキストリン誘導体については、歯周組織に炎症を引き起こす有力な要因となっている、歯周病原因菌の菌体表面を構成しているリポ多糖（以下、ＬＰＳ）に作用し、不活性化効果を持つことは、これまでに提案されていない。
【０００７】
【特許文献１】特開２００５−９７２６４号公報
【特許文献２】特開昭５３−１５４６７号公報
【特許文献３】特公昭５５−５４８４号公報
【特許文献４】特開平５−３４５８０４号公報
【特許文献５】特許第２５６２８０９号公報
【特許文献６】特表２００２−５１７５２１号公報
【特許文献７】特開平８−２８３３０７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は上記事情に鑑みなされたもので、歯周病原因菌が原因となる口臭の消臭効果に優れ、かつ、歯周病原因菌ＬＰＳの不活性化作用を持ち、歯周組織の炎症抑制効果に優れた口臭の消臭及び／又は歯周組織の炎症抑制剤、及び、歯周病の予防又は治療に有効な口腔用組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は上記目的を達成するため鋭意検討を重ねた結果、シクロデキストリン誘導体のうちの２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンに、意外にも歯周病原因菌由来の口臭に対する優れた消臭効果があり、更に、歯周病原因菌ＬＰＳを不活性化する効果をも併せ持つこと、よって、２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンを有効成分として配合することにより、消臭及び歯周組織の炎症の予防・阻止に有効な口腔用組成物が得られることを見出し、本発明をなすに至った。
【００１０】
なお、シクロデキストリン誘導体については、アシル化シクロデキストリン誘導体が油分、アルコールへの溶解性、各種油性成分の包接能に優れることが特許文献７に提案されているが、アセチル化シクロデキストリン誘導体である２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンが、口臭の原因物質であるメチルメルカプタンに対する優れた消臭効果を有すると共に、歯周病原因菌の菌体表面を構成しているＬＰＳに作用して不活性化効果を発揮し、歯周組織の炎症を効果的に抑制することは、本発明者が新たに見出したものである。
【００１１】
従って、本発明は、
（ｉ）  ２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンからなる口臭の消臭及び／又は歯周組織の炎症抑制剤
（ｉｉ）２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンを有効成分として含有することを特徴とする口腔用組成物
を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の口臭の消臭及び／又は歯周組織の炎症抑制剤は、口臭原因物質であるメチルメルカプタンに対する消臭効果に優れ、かつ歯周病原因菌ＬＰＳの不活性化により歯周組織の炎症を効果的に抑制し得るものであり、本発明の口腔用組成物は、歯周病に伴う口臭を効果的に抑制し、かつ歯周組織の炎症抑制効果に優れるもので、歯周病の予防又は治療に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明につき更に詳細に説明すると、本発明にかかわる２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンは、下記構造式で示されるものである。
【００１４】
【化１】
2007169228.tif 000002
【００１５】
上記２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンは、例えば２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキストリンをアセチル化することにより得ることができ、具体的には、下記製法により得ることができる。
即ち、無水ピリジンに２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキストリンを溶解し、４−ジメチルアミノピリジンと無水酢酸を添加して加温することにより３位の水酸基をアセチル化させる。合成された２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンは、クロロホルムで抽出し、カラムを用いて分離、精製後、さらに再結晶させて白色の粉末状結晶として得られる。
得られた結晶とアセチル化する前の２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキストリンについて各々の1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを測定して比較し、アセチル化前には認められなかった２ｐｐｍ付近のアセチル基のメチルプロトン由来ピークが検出されることにより、２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンであることを確認できる。
【００１６】
なお、原料として用いる２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキストリンは、市販品を使用することができ、例えば和光純薬工業社、島田化学研究所、Ｓｉｇｍａ社、Ｆｌｕｋａ社などの製品を使用することができる。
【００１７】
口臭の主な原因物質は、歯周病原因菌が食物残渣等を分解して産生したメチルメルカプタンであり（日歯周誌  １８，１−１２，１９７６参照）、口腔内のメチルメルカプタンを消臭することは口臭の予防に必要である。
また、歯周病原因菌ＬＰＳは、血清中のＬＰＳ結合タンパク（以下、ＬＢＰ）と結合し、更にマクロファージなどの細胞表面タンパク  ＣＤ１４と結合することで炎症性物質が産生され、歯周組織の炎症を惹起・亢進させて歯周病を誘発する（Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３，４３７−４５７，１９９５）。従って、歯周病原因菌ＬＰＳの作用を抑えるためには、ＬＰＳとＬＢＰとの結合を阻止することが有効である。
【００１８】
本発明にかかわる２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンは、後述する実験例の結果から明らかなように、口腔内で口臭原因物質であるメチルメルカプタンを捕捉し、かつＬＰＳとＬＢＰの結合を阻止する効果に優れ、よって、このシクロデキストリン誘導体は、口臭の消臭及び／又は歯周組織の炎症抑制剤として有効である。また、この２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンを有効成分として配合することにより、優れた口臭の消臭効果と歯周組織の炎症の抑制効果を発揮する口腔用組成物を得ることができる。
【００１９】
本発明の口腔用組成物において、このように口腔内でメチルメルカプタンを捕捉し、かつＬＰＳとＬＢＰの結合を阻止するためには、２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンの配合量を、口腔用組成物中０．１〜１０質量％、好ましくは０．３〜８質量％、より好ましくは１〜５質量％とすることがよい。配合量が０．１質量％未満では、満足な配合効果が得られない場合があり、１０質量％を超えると製剤の性状や形態、また使用感に支障が生じ、好ましくないことがある。上記配合量は、唾液による希釈等を考え、用途に応じて上記範囲内で任意に設定することが好ましい。
【００２０】
本発明の口腔用組成物は、例えば、練歯磨剤、液状歯磨剤、潤製歯磨剤、粉歯磨剤等の歯磨剤類、あるいは洗口剤、口中清涼剤、チューインガム等として好適に調製されるものであり、必須配合成分である２，６−ジメチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンに加えて、その剤型に応じて他の任意成分を本発明の効果を損なわない範囲で配合できる
【００２１】
即ち、歯磨剤として調製される場合には、研磨剤として、ピロリン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、第３リン酸マグネシウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、不溶性メタリン酸カリウム、酸化チタン、無水ケイ酸、含水ケイ酸、ケイ酸チタニウム、ケイ酸ジルコニウム、合成樹脂系研磨剤等が配合できる。研磨剤は、通常、組成物全体の５〜９０質量％、練歯磨の場合には１０〜６０質量％を配合し得る。
【００２２】
また、清掃助剤として、重曹、炭酸ナトリウム等のアルカリ剤、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、アスコルビン酸、乳酸、酢酸等の有機酸及びその塩も、通常、組成物全体の０．１〜１０質量％を配合し得る。
【００２３】
粘結剤としては、カラギーナン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、酢酸セルロース、ヒドロキシエチルセルロースナトリウム、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、トラガントガム、カラヤガム、アラビヤガム、ローカストビーンガム、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルピロリドン、カーボポール、ビーガム、増粘性シリカ等が挙げられ、通常、組成物全体の０．１〜１０質量％を配合し得る。
【００２４】
粘稠剤としては、グリセリン、ソルビトール、エチレングリコール、プロピレングリコール、重量平均分子量が１００〜１０，０００の範囲であるポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、マルチトール、ラクトール等が挙げられ、通常、組成物全体の１０〜７０質量％配合し得る。
【００２５】
界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、両性界面活性剤が配合可能であり、アニオン性界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ミリスチル硫酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルザルコシン酸ナトリウム、Ｎ−ミリストイルザルコシン酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグリセリドモノ硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、Ｎ−パルミトイルグルタルミン酸ナトリウム等のＮ−アシルグルタメート、Ｎ−メチル−Ｎ−アシルタウリンナトリウム等のＮ−アシルタウレート等が挙げられる。また、非イオン性界面活性剤として、ショ糖脂肪酸エステル、マルトース脂肪酸エステル等のショ糖脂肪酸エステル、マルチトール脂肪酸エステル、ラクトール脂肪酸エステル等の糖アルコール脂肪酸エステル、アルキロールアマイド、ＥＯ付加モル数が１〜３０の範囲であるポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ＥＯ付加モル数が１〜３０の範囲であるポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等のポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ラウリル酸モノ又はジエタノールアミド等の脂肪酸ジエタノールアミド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン共重合体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、プルロニック等が挙げられる。また、カチオン性界面活性剤として、アルキルトリメチルアンモニウム塩等が挙げられる。また、両性界面活性剤として、Ｎ−ラウリルジアミノエチルグリシン、Ｎ−ミリスチルジアミノエチルグリシン等のＮ−アルキルジアミノエチルグリシン等が挙げられる。界面活性剤の配合量は、通常、組成物全体の０．１〜１０質量％とすることができる。
【００２６】
香料としては、ローズマリー油、ウインターグリーン油、ハッカ油、コレアンダー油、マンダリン油、ライム油、ラベンダー油、ローレル油、カモミール油、マジョラム油、ベイ油、レモングラス油、オリガナム油、パインニードル油、ローズ油、ジャスミン油、イリスコンクリート、アブソリュートペパーミント、アブソリュートローズ、オレンジフラワー等の天然香料、及びこれら天然香料を前溜部カット、後溜部カット、分留、液液抽出、エッセンス化、粉末香料化等の加工処理した香料、及び、メントール、カルボン、サリチル酸メチル、シンナミックアルデヒド、３−ｌ−メントキシプロパン−１，２−ジオール、チモール、リナロール、リナリールアセテート、リモネン、メントン、メンチルアセテート、Ｎ−置換−パラメンタン−３−カルボキサミド、ビネン、オクチルアルデヒド、シトラール、プレゴン、カルビールアセテート、アニスアルデヒド、エチルアセテート、エチルブチレート、アリルシクロヘキサンプロピオネート、メチルアンスラニレート、エチルメチルフェニルグリシデート、バニリン、ウンデカラクトン、ヘキサナール、エチルアルコール、プロピルアルコール、ブタノール、イソアミルアルコール、ヘキセノール、ジメチルサルファイド、シクロテン、フルフラール、トリメチルピラジン、エチルラクテート、エチルチオアセテート等の単品香料、更に、ストロベリーフレーバー、アップルフレーバー、バナナフレーバー、パイナップルフレーバー、グレープフレーバー、マンゴーフレーバー、バターフレーバー、ミルクフレーバー、フルーツフレーバー、トロピカルフレーバー等の調合香料等、口腔用組成物に用いられる公知の香料素材を使用することができ、１種又は数種類の香料を組み合わせて使用することができる。
【００２７】
配合量は特に限定されないが、上記の香料素材は、製剤組成中に０．０００００１〜１質量％使用するのが好ましい。また、上記香料素材を併用した賦香用香料としては、製剤組成中に０．１〜２．０質量％使用するのが好ましい。
【００２８】
甘味剤としては、サッカリンナトリウム、ステビオサイド、ステビアエキス、パラメトキシシンナミックアルデヒド、ネオヘスペリジルヒドロカルコン、ペルラルチン、グリチルリチン、ソーマチン、アスパラチルフェニルアラニンメチルエステル等があり、通常、組成物全体の０．０１〜１．０質量％を配合し得る。
【００２９】
防腐剤としては、各種パラベンのほか安息香酸ナトリウム、トリクロサン等の非イオン性抗菌剤、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム等のカチオン性抗菌剤、精油成分等が配合可能であり、通常、組成物全体の０．００１〜１質量％を配合し得る。
【００３０】
有効成分としては、上記２，６−ジメチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンに加えて、他の有効成分を配合することができる。具体的には、デキストラナーゼ、アミラーゼ、プロテナーゼ、ムタナーゼ等の酵素、トラネキサム酸、イプシロンアミノカプロン酸、アルミニウムクロルヒドロキシアラントイン、アズレン、グリチルリチン酸塩、グリチルレチン酸、塩化ナトリウム、ビタミンＣ、Ｅ等の抗炎症剤、銅クロロフィル、グルコン酸銅、セチルピリジウムクロライド、塩化ベンザルコニウム、トリクロサン、ヒノキチオール、塩化リゾチーム等の殺菌剤、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン等のタバコヤニ除去剤、乳酸アルミニウム、硝酸カリウム等の知覚過敏予防剤も配合できる。なお、有効成分の配合量は、本発明の効果を妨げない範囲で有効量とすることができる。
【実施例】
【００３１】
以下、実験例、実施例及び比較例、配合例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明は下記実施例に制限されるものではない。なお、下記の例で配合量の％はいずれも質量％を示す。
【００３２】
〔実験例１〕
〈２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンの合成〉
市販の２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキストリンを用いて、以下の方法により２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンを得た。
【００３３】
即ち、特表２００２−５１７５２１号公報の〔実施例１  ＤＭＡ−β−ＣｙＤの合成〕の方法を参照し、２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキストリン（和光純薬工業（株））１２ｇを無水ピリジン（和光純薬工業（株））６０ｍＬで溶解させ、４−ジメチルアミノピリジン（和光純薬工業（株））２５ｍｇを加え、更に、無水酢酸（和光純薬工業（株））１２ｍＬを滴下し、８０℃で２４時間反応させた。反応終了後、氷水  約５０ｍＬを添加して過剰の無水酢酸を分解させ、クロロホルム（和光純薬工業（株））：メタノール（和光純薬工業（株））＝１：１  約５００ｍＬで３回に分けて抽出し、クロロホルム層を回収した。回収したクロロホルム層の全量に２ｍｍｏｌ／Ｌ炭酸ナトリウム（和光純薬工業（株））水溶液を添加してｐＨ７．０に調整後、シリカゲルカラム（Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０，０．０４０〜０．０６３ｍｍ〔２３０〜４００ｍｅｓｈ〕，メルク（株））で分離、精製した。分離、精製後、クロロホルムをエバポレータで減圧除去した。得られた粉末は４℃の冷水５０ｍＬに溶解し、７０℃に加温して再結晶させた。結晶はろ紙（アドバンテック東洋（株））上に回収し、減圧乾燥機を用いて２４時間乾燥させた。
【００３４】
得られた結晶１０ｍｇを１ｍＬのクロロホルム−ｄ（０．０５ｖｏｌ％  テトラメチルシラン含有，ＮＭＲ用，和光純薬工業（株））に溶解した。外径５ｍｍの測定専用ガラス管に０．６ｍＬの測定用試料を入れ、測定は磁場強度３００．４ＭＨｚ、観測幅６００９．６Ｈｚ、パルス角４５度、繰返し時間７秒、積算回数１６回の条件でＮＭＲ測定装置（Ｌａｍｂｄａ  ３００，日本電子（株）製）を用いて1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定した。また、アセチル化する前の、２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキストリンも同様に調製し、1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定した。両者のスペクトルを比較し、アセチル化前には認められなかった、２ｐｐｍ付近のアセチル基のメチルプロトン由来ピークが検出され、下記式で示される２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンであることが確認された。
【００３５】
【化２】
2007169228.tif 000003
【００３６】
なお、比較例は、市販のβ−シクロデキストリン（グルコースが７個環状に結合したもの、和光純薬工業（株））、その誘導体である２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキストリン（和光純薬工業（株））、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（Ｓｉｇｍａ社）、マルトシル−β−シクロデキストリン（和光純薬工業（株））を用いた。また市販のα−シクロデキストリン（グルコースが６個環状に結合したもの、和光純薬工業（株））、その誘導体である２，６−ジメチル−α−シクロデキストリン（和光純薬工業（株））、２−ヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリン（Ｓｉｇｍａ社）、マルトシル−α−シクロデキストリン（和光純薬工業（株））、及びγ−シクロデキストリン（グルコースが８個環状に結合したもの）の誘導体である２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン（Ｓｉｇｍａ社）を用いた。
【００３７】
〈メチルメルカプタンに対する消臭効果〉
下記試験サンプルを用い、下記方法でメチルメルカプタンに対する消臭効果を評価した。
試験サンプル；
実施例１：上記方法で得られた２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン
比較例１：β−シクロデキストリン
比較例２：３位のアセチル基がない２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキスト
リン
比較例３：２位にヒドロキシプロピル基のみ結合した２−ヒドロキシプロピル−β−シ
クロデキストリン
比較例４：６位にマルトースが付いたマルトシル−β−シクロデキストリン
比較例５：α−シクロデキストリン
比較例６：２，６−ジメチル−α−シクロデキストリン
比較例７：２−ヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリン
比較例８：マルトシル−α−シクロデキストリン
比較例９：２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン
【００３８】
メチルメルカプタンに対する消臭効果の評価方法；
試験方法は日農芸誌  ５８（６），５８５−５８９，１９８４を参照した。即ち、メチルメルカプタン標準液（１μｇ／μＬ、和光純薬工業（株））２ｍＬをエタノール（和光純薬工業（株））１９８ｍＬに溶かし、消臭力測定開始直前に蒸留水で１０倍に希釈して１μｇ／ｍＬとし、氷冷しながら試験に供した。内容量２３ｍＬの試験管に０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）１．５ｍＬ、試験サンプルの１％水溶液１ｍＬを混合し、メチルメルカプタン１μｇ／ｍＬを０．５ｍＬ加えて、直ちにシリコン栓をして５秒間撹拌した後、３７℃の恒温水槽で保温した。６分後、ガスタイトシリンジで試験管に空気５ｍＬを注入し、５秒間撹拌し、ヘッドスペース５ｍＬを抜き取り、ガスクロマトグラフィーでメチルメルカプタンのピーク面積を測定した。メチルメルカプタンの消臭率は下記の式より求めた。
結果を表１に示す。
【００３９】
【数１】
2007169228.tif 000004
＊コントロール：サンプルの代わりに蒸留水を添加
【００４０】
【表１】
2007169228.tif 000005
【００４１】
〔実験例２〕
下記試験サンプルを用い、下記方法で結合阻害試験を行った。
試験サンプル；
実施例２：実験例１と同様の方法で得られた２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチ
ル−β−シクロデキストリン
比較例１０：３位のアセチル基がない２，６−ジ−オルト−メチル−β−シクロデキス
トリン
比較例１１：２位にヒドロキシプロピル基のみ結合した２−ヒドロキシプロピル−β−
シクロデキストリン
比較例１２：６位にマルトースが付いたマルトシル−β−シクロデキストリン
比較例１３：２，６−ジメチル−α−シクロデキストリン
比較例１４：２−ヒドロキシプロピル−α−シクロデキストリン
比較例１５：マルトシル−α−シクロデキストリン
比較例１６：２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン
【００４２】
Ａ．ａ．ＬＰＳ−ヒトＬＢＰ間の結合阻害試験；
歯周病原因菌Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｍｃｏｍｉｔａｎｓ（アクチノバシラス  アクチノミセテムコミタンス）ＡＴＣＣ４３７１８（以下、Ａ．ａ．と略す。）からのＬＰＳ調製は、Ｊ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔ  Ｒｅｓ  ２１，５２１−５３０，１９８６を参照した。即ち、歯周病原因菌Ａ．ａ．はＴｏｄｄ  Ｈｅｗｉｔｔ  Ｂｒｏｔｈ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社）中で培養し、集菌した。集めた菌を凍結乾燥後、９０％フェノール溶液に懸濁し、５６℃に加温してＬＰＳを抽出する熱フェノール法を用いて調製した。歯周病原因菌Ａ．ａ．より得たＬＰＳをＡ．ａ．ＬＰＳとし、以下の試験に用いた。
【００４３】
Ａ．ａ．ＬＰＳとＬＢＰとの結合を阻害したかどうかを評価するためには、Ａ．ａ．ＬＰＳのＬＢＰへの結合量を測定する必要がある。そこで、Ａ．ａ．ＬＰＳをビオチンでラベルし、ビオチンを発色させ吸光度測定によりＬＢＰと結合したＡ．ａ．ＬＰＳの量を測定することとした。即ち、Ａ．ａ．ＬＰＳ  １ｍｇをビオチンラベル試薬ＥＺ−Ｌｉｎｋ  ＰＦＰ−ｂｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ社）３ｍｇ／ジメチルスルホキシド（和光純薬工業（株））０．３ｍＬ中に溶解し、注射用水０．０５ｍＬを加え、４℃で１６時間反応させた。メタノール（和光純薬工業（株））１ｍＬを加えた後、透析チューブ（Ｓｐｅｋｔｒａ／Ｐｏｒ７、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．）に移し、メタノール中で一晩、透析した。透析内液を回収・減圧乾燥し、ビオチンラベル化したＡ．ａ．ＬＰＳを得た（以下、ビオチンラベル化Ａ．ａ．ＬＰＳと略す。）。
【００４４】
試験方法は、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４，５４９−５５３，２０００を参照した。即ち、ＬＢＰを酵素免疫測定法専用マイクロプレート（ｃｏｓｔａｒ社）に固定するために、抗ヒトＬＢＰモノクローナル抗体（Ｈｙｃｕｌｔ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）１０μｇ／ｍＬを１００μＬずつウエルに入れ４℃で一晩インキュベートし、抗体をプレート上に固定させた。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０  ４００μＬで２回洗浄して余分な抗体を除き、抗体が付着しなかった部分を牛血清アルブミンで被覆するために１％牛血清アルブミン／リン酸緩衝液３００μＬを添加して１時間室温で放置した。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０  ４００μＬで２回洗浄して余分な牛血清アルブミンを除き、リコンビナント  ヒトＬＢＰ（Ｇｅｎｚｙｍｅ−ｔｅｃｈｎｅ社）５０μｇ／ｍＬを１００μＬずつ入れて室温で１．５時間放置し、プレートに固定させた。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０  ４００μＬで２回洗浄して余分なリコンビナント  ヒトＬＢＰを除いた。
【００４５】
塩化ナトリウム・塩化カリウム含有リン酸緩衝液（タカラバイオ（株））でビオチンラベル化Ａ．ａ．ＬＰＳ  ２μｇ／ｍＬと実施例２、あるいは比較例１０〜１６の２０ｍｍｏｌ／Ｌ溶液を調製し、同量混合して３７℃で３０分間、プレインキュベーションした。プレインキュベーション後、１００μＬずつリコンビナント  ヒトＬＢＰを固定したプレートに添加して１時間、室温で放置し、ビオチンラベル化Ａ．ａ．ＬＰＳとプレートに固定したリコンビナント  ヒトＬＢＰを結合させた。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０  ４００μＬで２回洗浄して余分なビオチンラベル化Ａ．ａ．ＬＰＳを除き、ＬＢＰと結合したビオチンラベル化Ａ．ａ．ＬＰＳを検出するために、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（Ｚｙｍｅｄ社）を１００μＬに添加し、１時間室温で放置した。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０  ４００μＬで２回洗浄して余分なストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼを除き、ビオチンと結合したストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼを、ペルオキシダーゼ発色キット（ＳＵＭＩＬＯＮ社）を用いて発色させ、４５０ｎｍの吸光度を測定した。
ビオチンラベル化Ａ．ａ．ＬＰＳとリコンビナント  ヒトＬＢＰ間の結合阻害率は下記の式より求めた。結果を表２に示す。
【００４６】
【数２】
2007169228.tif 000006
【００４７】
【表２】
2007169228.tif 000007
【００４８】
以上の結果より、メチルメルカプタンの消臭効果は、比較例１〜９に比べて実施例１が最も高く、また、歯周病原因菌Ａ．ａ．ＬＰＳとＬＢＰとの結合阻害効果は、比較例１０〜１６では結合阻害ではなく逆に結合促進が認められたが、実施例２には明らかな結合阻害効果が確認され、本発明にかかわる２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリンが、メチルメルカプタンに対する消臭効果に優れ、かつ歯周病原因菌ＬＰＳの不活性化効果にも優れることがわかった。
【００４９】
下記配合例１〜１１の口腔用組成物を常法により調製した。得られた口腔用組成物について、上記実験例と同様にして消臭効果及び歯周病原因菌Ａ．ａ．ＬＰＳとＬＢＰとの結合阻害効果を評価したところ、いずれも良好であった。
【００５０】
〔配合例１〕  練歯磨
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ５．００％
第２リン酸カルシウム・２水和物                                      ５０．００
グリセリン                                                          ２０．００
カルボキシメチルセルロース                                            ２．００
ラウリル硫酸ナトリウム                                                ２．００
香料                                                                  １．００
サッカリンナトリウム                                                  １．００
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５１】
〔配合例２〕  練歯磨
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ３．００％
無水ケイ酸                                                          ２０．００
ソルビット                                                          ４０．００
グリセリン                                                          ２０．００
プロピレングリコール                                                  ２．００
カルボキシメチルセルロース                                            １．５０
サッカリンナトリウム                                                  １．００
パラオキシ安息香酸メチル                                              ０．１０
トリクロサン                                                          ０．０２
塩化アンモニウム                                                      ０．５０
ラウリル硫酸ナトリウム                                                １．００
香料                                                                  １．００
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５２】
〔配合例３〕  練歯磨
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリ        ４．００％
重質炭酸カルシウム                                                  ３５．００
軟質炭酸カルシウム                                                  １０．００
グリセリン                                                          ２０．００
ポリエチレングリコール４００                                          ３．００
ポリエチレングリコール６０００                                        ０．３０
キサンタンガム                                                        １．００
サッカリンナトリウム                                                  １．００
パラオキシ安息香酸メチル                                              ０．１０
塩化セチルピリジニウム                                                ０．０５
β−グリチルレチン酸                                                  ０．０５
塩化アンモニウム                                                      ０．５０
ラウリル硫酸ナトリウム                                                １．００
香料                                                                  １．００
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５３】
〔配合例４〕  練歯磨
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ２．５０％
水酸化アルミニウム                                                  ４５．００
アルギン酸ナトリウム                                                  ０．５０
グリセリン                                                          ２０．００
ソルビット                                                          １０．００
ポリオキシエチレン（２０）硬化ヒマシ油                                ０．８０
サッカリンナトリウム                                                  ０．２０
モノフルオロリン酸ナトリウム                                          ０．７０
ピロリン酸カリウム                                                    ２．００
安息香酸ナトリウム                                                    ０．５０
ラウリル硫酸ナトリウム                                                １．００
香料                                                                  １．００
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５４】
〔配合例５〕  練歯磨
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ３．５０％
研磨性シリカ                                                        １８．００
増粘性シリカ                                                          ０．５０
酸化チタン                                                            １．５０
ラウリル硫酸ナトリウム                                                ０．５０
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油                                ０．５０
トラネキサム酸                                                        ０．０５
ポリエチレングリコール６００                                        ３５．００
ポリエチレングリコール１０００                                        ０．３０
サッカリンナトリウム                                                  ０．１５
ラウリル硫酸ナトリウム                                                １．００
香料                                                                  １．００
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５５】
〔配合例６〕  洗口剤
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      １．００％
エタノール                                                            ８．００
グリセリン                                                          １０．００
クエン酸                                                              ０．１０
クエン酸三ナトリウム                                                  ０．３０
サッカリンナトリウム                                                  ０．０１
パラオキシ安息香酸メチル                                              ０．１０
香料                                                                  ０．２０
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５６】
〔配合例７〕  洗口剤
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ０．５０％
プロピレングリコール                                                  ４．００
グリセリン                                                            ５．００
リン酸一水素二ナトリウム                                              ０．１０
リン酸二水素一ナトリウム                                              ０．３０
キシリトール                                                          ２．００
安息香酸ナトリウム                                                    ０．１０
香料                                                                  ０．２０
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５７】
〔配合例８〕  洗口剤
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ０．３０％
エタノール                                                            ８．００
プロピレングリコール                                                  １．００
グリセリン                                                            ５．００
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油                                ０．３０
トリクロサン                                                          ０．０２
クエン酸                                                              ０．１０
クエン酸三ナトリウム                                                  ０．３０
サッカリンナトリウム                                                  ０．０１
パラオキシ安息香酸メチル                                              ０．１０
ラウリル硫酸ナトリウム                                                ０．１０
香料                                                                  ０．２０
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５８】
〔配合例９〕  洗口剤
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ０．４０％
プロピレングリコール                                                  ４．００
グリセリン                                                            ５．００
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油                                ０．６０
リン酸一水素二ナトリウム                                              ０．１０
リン酸二水素一ナトリウム                                              ０．３０
塩化セチルピリジニウム                                                ０．０５
キシリトール                                                          ２．００
安息香酸ナトリウム                                                    ０．１０
香料                                                                  ０．２０
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００５９】
〔配合例１０〕  マウスウォッシュ
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ０．５０％
グリセリン                                                          １５．００
ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油                                １．００
サッカリンナトリウム                                                  ０．０１
安息香酸ナトリウム                                                    ０．１０
モノグリセリド硫酸ナトリウム                                          ０．３０
リン酸一水素二ナトリウム                                              ０．０５
グリセロールリン酸ナトリウム                                          １．５０
塩化セチルピリジニウム                                                ０．０５
キシリトール                                                          ２．００
精製水                                                                残        合  計                                                            １００．００％
【００６０】
〔配合例１１〕  ガム
２，６−ジ−オルト−メチル−３−アセチル−β−シクロデキストリン      ３．００％
キシリトール                                                        ３０．００
マルチトール                                                        ３０．００
３−メチル−４−イソプロピルフェノール                                ０．１０
トリクロサン                                                          ０．０２
ガムベース                                                          ３６．８８  
合  計                                                            １００．００％