(57)【要約】【課題】農薬を使用しないで微生物又は当該微生物の細胞壁成分を作用させて、植物の病害に対する抵抗性を発現させ、作物の病害を防除する方法を提供する。【解決手段】作物に抵抗性誘導を引き起こす微生物又は当該微生物の細胞壁成分を抱埋させた特殊支持体を植物体内に埋め込み、病害に対する抵抗性を長期にわたり誘導させ、病害の発生を抑制する。【選択図】図１
2007169229.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
作物に抵抗性誘導を引き起こす微生物又は当該微生物の細胞壁成分を抱埋させた特殊支持体を植物体内に埋め込み、病害に対する抵抗性を長期にわたり誘導させ、病害の発生を抑制することを特徴とする作物病害の防除方法。
【請求項２】
前記の特殊支持体に抱埋し抵抗性を誘導させる微生物は、病害の種類毎に親和性を重視した分化型の異なる病原菌又は非病原性菌を使用することを特徴とする請求項１の作物病害の防除方法。
【請求項３】
前記の特殊支持体に抱埋し抵抗性を誘導させる微生物の細胞壁成分は、病害の種類毎に親和性を重視した分化型の異なる病原菌又は非病原性菌の細胞壁であって、好ましくはキチン、グルカン、セルロース及びヒドロキシプロリンから選ばれるものであることを特徴とする請求項１又は２の作物病害の防除方法。
【請求項４】
前記の親和性を重視した分化型の異なる病原菌若しくは非病原性菌である微生物、又はこれらの細胞壁成分を保持させる抱埋用特殊支持体は多孔質であり、該支持体の中に栄養源を担持させ同時に培養することにより、植物体内で微生物又は細胞壁成分を増加させ保持することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の作物病害の防除方法。
【請求項５】
前記の親和性を重視した分化型の異なる病原菌又は非病原性菌である微生物の細胞壁成分は、細胞壁成分をホモジナイズした液中に多孔質の抱埋用特殊支持体を入れて攪拌状態で内部の空気を吸引することにより、当該多孔質中に細胞壁成分を強制的に担持させることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の作物病害の防除方法。
【請求項６】
前記の親和性を重視した分化型の異なる病原菌若しくは非病原性菌である微生物、又はこれらの細胞壁成分を保持させる抱埋用特殊支持体の植物体内への埋め込みは、スプレーガンでスプレーする又は注射器で植物体内へ強制的に注入することにより行うことを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の作物病害の防除方法。
【請求項７】
前記の特殊支持体は、金属酸化物や炭素を原料とした粒子径２mm以下の個体であって、粒子の持つ気孔径は５００μm以下、気孔率は３０％以上の小孔を有し、その中に栄養源と微生物又はその細胞壁を保持すること可能とすることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の作物病害の防除方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、農作物に発生する病害の予防に関するものであって、化学殺菌剤を用いることなく、微生物の前感染によって発現する抵抗性の誘導作用を用いて作物病害を予防する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、農作物の病気の防除には殺菌剤が大量に使用されている。殺菌剤としては化学殺菌剤及び微生物殺菌剤が主に用いられている。化学殺菌剤には、多数の剤が開発され、一般に作物に散布処理、土壌への混和処理などが行われている。
また、野菜類を同一圃場で続けて栽培する方法、すなわち連作によって引き起こされる土壌病害は、クロルピクリンやダゾメット剤などの土壌燻蒸処理剤が広く使用されている（例えば、特許文献１及び２参照）。
しかし、作物病害の防除において、日本は１０アール当たりの化学農薬の使用量が１．５ｋｇと世界で最も多く、その削減なくして明日の日本農業はないとさえいわれている。また、農薬が野外で散布されると環境、生態への影響が大きく、その負荷を軽減するため使用量の削減が地球的な課題ともなっている。
【０００３】
一方、化学殺菌剤を用いない方法として、窒素肥料の減量、珪酸の施用、抵抗性品種の利用等が行われている（例えば、特許文献３及び４参照）。
また、施設栽培では病害の発生し難い環境への改善とその保持を行うことにより、病害の発生を予防している。環境の改善方法として、施設内の湿度を低く保ち、太陽光を通り易くし、又は風を通り易くして、病原菌を繁殖し難くするものが挙げられ、これらの方法により、病原菌が感染し難くして、病害の発生を抑制する。
しかしながら、閉ざされた施設栽培においては環境の改善は比較的容易であるが、野外における作物の栽培では環境改善技術は未だ十分ではない。
【０００４】
病害に対する抵抗性を誘導し作物の病害を防除する方法については、非病原性の微生物や生物農薬を処理して、作物を病害に罹り難くさせるという研究が多くなされている（例えば、特許文献３及び４参照）。これらの技術は、非病原性微生物を植物の根や種子に直接浸漬して処理し、免疫能を持たせ保持させ、病原菌の感染を抑制しようとするものであった。
しかし、植物への微生物や生物農薬の処理は、移植時にのみ可能であることから、移植用のポットの土に混ぜたり、植穴に混和処理したりする方法では多大な労力とコストを要する。また、これまでの処理法では免疫能の持続期間も１００日以下で短かった。
上記のように、農薬を用いない作物病害の防除法が多数開発されているが、いずれの方法も、複雑且つ高度な技術を要求され、さらにコストも高いものが多い。このため効果が予測されても実施されないことが多く、依然として、作業的に簡易で低コストの抵抗性誘導による防除方法の開発が求められていた。
【０００５】
【特許文献１】特開２００３−００２８０４号公報
【特許文献２】特開２００５−０８９３７３号公報
【特許文献３】特開２００３−０３４６０７号公報
【特許文献４】特開平０９−０６７２１８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の病害防除法は、このように複雑であった従来技術をより簡便にした方法であって、化学農薬に頼らず、微生物の前接種による病害への抵抗性の誘導という点に着目してなされたものである。
本発明で提案する防除法の目的とするところは、微生物として、従来の非病原性菌はもとより、病原菌の中でも寄生性の分化型を異にする微生物を用いることにより植物への親和性を高め、抵抗性の発現を著しく高める画期的な方法を提供することにある。
また、従来技術では利用されていなかった微生物の細胞壁成分を病害の抵抗性誘導に利用するためには、微生物溶液の作成及び操作を簡素化する必要がある。
さらに、抵抗性を発現させるための微生物は、植物によって異なるので、本発明の病害防除方法は、植物固有の微生物、すなわち分化型菌糸の前接種により、後に感染する病原菌に対して非親和反応を引き起こし病原菌の感染から植物を保護しようとするものである。例えば、トマトでは、萎凋病を防除するために、無関係の土壌から採取した非病原性フザリウム菌のみでなく、分化型を異にするホウレンソウの萎凋病菌であるフザリウム菌を用いることができる。また、ホウレンソウの萎凋病では逆にトマトの萎凋病菌や根腐萎凋病菌を用いることができる。
本発明の病害防除法における微生物の接種方法については、従来の根部前接種という複雑な方法とは異なる方法を採用する。すなわち、本発明の方法では、特殊支持体に微生物を保持させ、簡潔に植物体内の局所に埋設させ非親和性反応の持続期間を著しく長期化させた方法を提供することを目的とする。さらに、その処理方法は、スプレーガンまたは注射器などを用いて行うなど、作業を著しく単純化させようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、農薬を用いない作物病害の防除法であって、従来技術において要求されていた複雑且つ高度な技術を使用することなく、抵抗性を誘導する微生物を利用した簡便な作物病害の防除方法を提供するものである。本発明の方法は、作業的に簡便であり、低コストで、微生物の抵抗性誘導を利用した病害防除方法を提供することができる。  
【０００８】
本発明の作物病害の防除法は、生育中の植物に発生する病害の防除のために、植物に抵抗性誘導を引き起こす微生物又は微生物成分を抱埋させた特殊支持体を該植物体内に埋め込み、病害に対する抵抗性を長期にわたり誘導させ、病害の発生を抑制することを特徴とする。微生物成分としては、微生物の細胞壁成分を使用することができる。
【０００９】
本発明の病害防除法では、特殊支持体に抱埋し抵抗性を誘導させる微生物として、病害の種類毎に親和性を重視した寄生性の異なる分化型の病原菌又は非病原性菌を使用することを特徴とする。
一の種類の病原菌の植物体内への侵入と定着は、当該菌の寄生性の分化により大きく変化しており、病原菌の植物に対する寄生性が分化すると、その侵入及び定着性、所謂、親和性は大きく変わらず、特定の植物にのみ病原性を示し、他の植物には病原性を示さない形態及び性質を同一にした分化した菌（特定の植物には病原菌となるが他の植物には非病原性菌となる菌）が発達してくる。本発明において、「親和性を重視した」とは、このような植物への侵入及び定着性、すなわち親和性を第一義に考えることをいう。また、「寄生性の異なる分化型」とは、上記のように同一の形態性質の菌でありながら、寄生する植物が異なる病原菌又は非病原性菌をいう。
特殊支持体に抱埋し抵抗性を誘導させる微生物の細胞壁成分は、病害の種類毎に親和性を重視した分化型の異なる病原菌又は非病原性菌の細胞壁を使用することができる。細胞壁成分は、好ましくはキチン、グルカン、セルロース及びヒドロキシプロリンから選ばれるものであることを特徴とする。
【００１０】
本発明の防除法において、前記の親和性を重視した分化型の異なる病原菌若しくは非病原性菌微生物、又はこれらの細胞壁成分を保持させる抱埋用特殊支持体は、多孔質であることができる。特殊支持体を多孔質とすることで、この中に栄養源を担持させ、同時に培養することができ、抱埋した植物体内で、微生物又はその細胞壁成分を増加させ保持させることができる。
【００１１】
また、前記の親和性を重視した分化型の異なる病原菌又は非病原性菌微生物の細胞壁成分は、細胞壁成分をホモジナイズした液中に多孔質の抱埋用特殊支持体を入れ、攪拌状態で内部の空気を吸引することにより、多孔質中に細胞壁成分を強制的に担持させることができる。
【００１２】
本発明の防除法によれば、前記の親和性を重視した分化型の異なる病原菌若しくは非病原性菌微生物、又はこれらの細胞壁成分を保持させる抱埋用特殊支持体の植物体内への埋め込みは、スプレーガン、注射器等により、強制的に挿入することができる。
【００１３】
本発明の防除法で使用する、上記の特殊支持体の材質や構造は、本発明の目的を達成するものであれば、特に制限されない。好ましくは、その構造は、金属酸化物、あるいは炭素を原料とした粒子径２mm以下の個体で、粒子の持つ気孔径は５００μm以下、気孔率は３０％以上の小孔を有し、その中に栄養分と微生物を保持することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、次のような効果を発揮することができる。
本発明の病害防除法によれば、化学農薬を用いることなく、微生物及びその細胞壁成分を用いて、病原菌の作物への侵入を抑制し、病気による作物の被害を抑制するという効果を発揮する。
本発明の防除法では、非病原性菌の微生物のみならず、作物毎に寄生性の分化型菌系を特殊支持体に担持させ、植物体に埋め込むことにより、病害に対する抵抗性を長期にわたり誘導させ、他の病原菌の侵入を効率的に難くし、病害の予防効果を向上させるものである。
また、本発明の防除法によれば、前記の特殊支持体に抱埋し抵抗性誘導をさせる微生物は、病害の種類毎に親和性を重視した分化型の異なる病原菌又は非病原性菌に加え、それらの細胞壁成分を使用することができる。かかる細胞壁成分として、キチン、グルカン、セルロース、又はヒドロキシプロリン等から選ばれる成分を例示することができ、これらの使用により抵抗性誘導物質を獲得しやすくするものである。
【００１５】
本発明の防除法で使用する微生物を保持させる特殊支持体は、多孔質とすることができ、この多孔質中に栄養源を担持させ、同時に培養することにより植物体内で微生物を増加保持させ、長期にわたって抵抗性を維持することができる。前記の親和性を重視した分化型の異なる病原菌又は非病原性菌微生物の細胞壁成分は、細胞壁成分をホモジナイズした溶液中に抱埋用特殊支持体を入れて容器内の空気を吸引し、多孔質中に強制的に担持させることにより、簡易な作成を可能にする。
【００１６】
本発明の防除法によれば、微生物を保持させる特殊支持体を多孔質とし、スプレーガンあるいは注射器により処理することにより、作業を著しく簡潔、省力にすることができる。また、効果がとぎれたときには、再接種が容易であり、本発明による方法は、著しく作業性に優れる方法である。
尚、本発明の防除法において使用される特殊支持体として例示される金属酸化物や炭素などの無機化合物は、植物体との親和性が良く、２mm程度の粒子径であるので、植物体の生育を阻害する原因とはならない。また、栄養源を担持させ微生物を保持・培養する為には、粒子の持つ細孔径（気孔径）は５００μm以下が適当である。粒子の持つ気孔率は、微生物の繁殖・培養のため３０％以上が望ましい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明の実施形態につき、図面を用いて説明する。
本発明の防除法で使用する特殊支持体の表面図及び断面図の一例を図１に示す。図１に示すように、特殊支持体１１は、表面及びその内部に孔隙１２があけられており、作物に抵抗性誘導を引き起こす微生物又は当該微生物の細胞壁成分を抱埋させることができる。特殊支持体は、粒径２mm以下で、気孔径５００μm以下、気孔率３０％以上であるものが望ましい。また、特殊支持体の材料は特に限定されないが、金属酸化物や炭素などの無機化合物からなる材料を使用することができる。
【００１８】
次に、微生物又は当該微生物の細胞壁成分を特殊支持体に抱埋させる方法を図２に例示する。特殊支持体に分化型菌及び非病原性菌を担持させる場合、図２に示すように、培養器１４の中で菌を培養し、その培養器１４の中に特殊支持体１１を入れて同時に培養することで、特殊支持体へ担持を行うことができる。すなわち、菌と特殊支持体を一緒にして培養を行うことにより、特殊支持体の多孔質中に、菌を抱埋させることができる。
また、細胞壁成分を抱埋させるためには、細胞壁成分をホモジナイズした液中に特殊支持体を入れて攪拌し、溶液中の空気を吸引することで、特殊支持体の多孔質中に細胞壁成分を強制的に担持させることができる。
【００１９】
微生物又は当該微生物の細胞壁成分を抱埋させた特殊支持体の植物体内への埋め込みは、スプレーガンや注射器を使用して行うことができる。
例えば、ホウレンソウや小松菜のような葉菜に対しては、図３に示すように、圧力があるスプレーガンを用いて、初生葉１６又は第一葉１７にスプレーし接種することができる。
あるいは、トマトやメロンのような茎が堅く太いものでは、図４に示すように、茎１９に注射器２１を用いて微生物又はその細胞壁成分を担持した特殊支持体１１を打ち込む方法により接種することができる。
微生物又は当該微生物の細胞壁成分を抱埋させた特殊支持体の接種は、幼苗期及び生育期いずれに置いても実施できる。これらの接種により、一定期間を経て、各病害に対する抵抗性が発現されることとなる。
【実施例】
【００２０】
（試験例１）
ホウレンソウ萎凋病菌(Fusarium oxysporum f. sp. spinaciae)、又は非病原性Fusarium oxysporum（非病原性菌）を抱埋させた特殊支持体を作成した。また、トマト萎凋病菌（Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici）、又は非病原性Fusarium oxysporum（非病原性菌）を抱埋させた特殊支持体を作成した。
土耕栽培の４葉期のトマト株に、上記のホウレンソウ萎凋病菌（Fusarium oxysporum f. sp. spinaciae）又は非病原性Fusarium oxysporumを抱埋させた特殊支持体を注射器により接種（注射法）し、その後、当該トマト株にトマト萎凋病菌を灌注により接種した（表１、特殊支持体抱埋処理の２及び３）。また、ホウレンソウに、上記のトマト萎凋病菌（Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici）又は非病原性Fusarium oxysporum（非病原性菌）を抱埋させた特殊支持体をスプレーで接種（スプレー法）し、その後、当該ホウレンソウにホウレンソウ萎凋病菌を灌注接種した（表１、特殊支持体抱埋処理の５及び７）。
【００２１】
比較のため、特殊支持体を使用せず、各菌を直接そのままスプレー法又は注射法により接種した後に、同様に当該トマト株にトマト萎凋病菌を、当該ホウレンソウにホウレンソウ萎凋病菌を灌注により接種した（表１、直接接種の２及び３並びに５及び７）。
また、対照区として、傷を付けたトマト株を作成して、トマト萎凋病菌を灌注接種したもの（表１、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の１）、及び傷を付けたホウレンソウを作成して、ホウレンソウ萎凋病菌を灌注接種したものをそれぞれ設けた（表１、直接接種及び特殊支持体抱埋処理区の６）。
【００２２】
発病日数と発病程度を表１に示す。表１の通り、トマト株について、特殊支持体接種区では、トマト萎凋病は１００日間以上に亘って発病が抑制された（表１、特殊支持体抱埋処理の２及び３）。これに対して、ホウレンソウ萎凋病菌又は非病原性菌を直接接種により処理した区では、わずか４５日間及び６５日間でトマト萎凋病の発病が確認された（表１、直接接種の２及び３）。一方、対照区ではすべての株が１０日間以内に発病した(表１、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の１)。
このような傾向はホウレンソウについても同様であった。特殊支持体接種区では、ホウレンソウ萎凋病は４０日間に亘って発病が抑制されたが（表１、特殊支持体抱埋処理の５及び７）、直接接種により処理した区では、３５日間及び３０日間でホウレンソウ萎凋病の発病が確認された（表１、直接接種の５及び７）。一方、対照区ではすべての株が５日間以内に発病した(表１、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の６)。
これらの結果から、特殊支持体に抱埋させた微生物を植物体内に埋め込むことにより、長期にわたって病気に対する抵抗性を誘導させることができることがわかった。
【００２３】
同様に、トマトに他の病原菌として、半身萎凋病菌（Verticillium dahliae）、又は根腐病菌を灌注接種した場合の発病率を調べた（表１、右欄）。
何ら前処置を施さなかったトマト株の発病率を１００とした（表１、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の４）。ホウレンソウ萎凋病菌又は非病原性菌を直接接種したトマト株の発病率が１〜５であったのに対し（表１、直接接種の２及び３）、特殊支持体によりホウレンソウ萎凋病菌又は非病原性菌を接種したトマト株では、実に、発病率０に抑制することができた（表１、特殊支持体抱埋処理の２及び３）。
また、同様に、ホウレンソウに他の病原菌として、根腐病菌（Pythium aphanidermatum）を予め土壌に混和接種した場合の発病率を調べた（表１、右欄）。
何ら前処置を施さなかったホウレンソウの発病率を１００とした（表１、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の８）。トマト萎凋病菌又は非病原性菌を直接接種したホウレンソウ株の発病率がそれぞれ３５及び２５であったのに対し（表１、直接接種の５及び７）、特殊支持体によりトマト萎凋病菌又は非病原性菌を接種したホウレンソウでは、発病率は各々１５に抑制することができた（表１、特殊支持体抱埋処理の５及び７）。
この結果は、異なるFusariumの分化型菌や非病原性菌を接種すると、複数の他の病害に対し抵抗性誘導が生じることを示すものである。
尚、水耕栽培におけるトマトでも同様に実験した結果、土耕栽培と同じ結果が得られた。
【表１】
2007169229.tif 000003
【００２４】
（試験例２）
メロンつる割病菌（Fusarium oxysporum melonis）、又は非病原性Fusarium oxysporum（非病原性菌）を抱埋させた特殊支持体を作成した。また、サラダナ根腐病菌（Fusarium oxysporum lactucae）、又は非病原性Fusarium oxysporum（非病原性菌）を抱埋させた特殊支持体を作成した。
３葉期のサラダナ株に、上記のメロンつる割病菌（Fusarium oxysporum melonis）又は非病原性Fusarium oxysporumを抱埋させた特殊支持体をスプレーで接種（スプレー法）し、その後、当該サラダナ株にサラダナ根腐病菌(Fusarium oxysporum lactucae)をスプレー法で接種した（表２、特殊支持体抱埋処理の２及び３）。また、４葉期のメロンに、上記のサラダナ根腐病菌（Fusarium oxysporum lactucae）又は非病原性Fusarium oxysporumを抱埋させた特殊支持体を注射器で接種（注射法）し、その後、当該メロンにメロンつる割病菌(Fusarium oxysporum melonis)を注射法で接種した（表２、特殊支持体抱埋処理の５及び７）。
【００２５】
比較のため、特殊支持体を使用せず、各菌を直接そのままスプレー法又は注射法により接種した後に、同様に当該サラダナ株にサラダナ根腐病菌を、当該メロンにメロンつる割病菌をスプレー法又は注射法により接種した（表２、直接接種の２及び３並びに５及び７）。
また、対照区として、傷を付けたサラダナ株を作成して、サラダナ根腐病菌をスプレー法により接種したもの（表２、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の１）、及び傷を付けたメロンを作成して、メロンつる割病菌(Fusarium oxysporum melonis)を注射法で接種したものをそれぞれ設けた（表２、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の６）。
【００２６】
発病日数と発病程度を表２に示す。表２の通り、サラダナ株について、特殊支持体接種区では、サラダナ根腐病は３０日間以上に亘って発病が抑制された（表２、特殊支持体抱埋処理の２及び３）。これに対して、メロンつる割病菌又は非病原性菌を直接接種により処理した区では、わずか１８日間及び２０日間でサラダナ根腐病の発病が確認された（表２、直接接種の２及び３）。一方、対照区ではすべての株が１０日間以内に発病した(表２、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の１)。
メロンについては、対照区では、２５日又は１５日で全株が発病した（表２、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の６）。これに対して、サラダナ根腐病菌及び非病原性菌を特殊支持体抱埋処理により接種した区では１００日以上にわたりメロンつる割病が抑制された（表２、特殊支持体抱埋処理の５及び７）。一方、サラダナ根腐病菌及び非病原性菌を直接接種した区では、各々６０日及び５５日間にわたりメロンつる割病が抑制された（表２、直接接種の５及び７）。
これらの結果から、特殊支持体に抱埋させた微生物を植物体内に埋め込むことにより、直接接種によるよりも、長期にわたって病害に対する抵抗性を誘導させることができることがわかった。
【００２７】
また、他の病原菌として、メロン黒点根腐病菌（Monosporuscus cannonballus）、又は根腐病菌をスプレー法又は注射法によりサラダナ株、又はメロンに接種した場合の発病率を調べた（表２、右欄）。
何ら前処置を施さなかったサラダナ株の発病率を１００（表２、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の４）とした。メロンつる割病菌又は非病原性菌を直接接種したサラダナ株の発病率がそれぞれ２５であったのに対し（表２、直接接種の２及び３）、特殊支持体によりメロンつる割病菌又は非病原性菌を接種したサラダナ株では、実に、発病率０に抑制することができた（表２、特殊支持体抱埋処理の２及び３）。
同様に、何ら前処置を施さなかったメロンの発病率を１００（表２、直接接種及び特殊支持体抱埋処理の８）とした。サラダナ根腐病菌又は非病原性菌を直接接種したメロンの発病率がそれぞれ２５及び５５であったのに対し（表２、直接接種の５及び７）、特殊支持体によりサラダナ根腐病菌又は非病原性菌を接種したメロンでは、実に、発病率０に抑制することができた（表２、特殊支持体抱埋処理の５及び７）。このように、特殊支持体抱埋処理により前処置を施したものは、発病率を著しく低く抑制することができた。
この結果は、異なるFusariumの分化型菌や非病原性菌非病原性Fusarium oxysporumを接種すると、サラダナあるいはメロンでも、複数の病害に対し抵抗性が誘導されることを示すものである。
【表２】
2007169229.tif 000004
【００２８】
ここでは、試験例として、導管病であるFusarium病のみを挙げたが、柔組織病（例えばリゾクトニアやピシウムによる立枯病、根腐病など）についても同様の結果が認められている。
【００２９】
上記の病害以外にも、トマト青枯病、半身萎凋病、ナス半身萎凋病、半枯病、ピーマン萎凋病、イチゴ萎黄病、うどんこ病、キュウリ蔓割病など、多数の作物と病害で同様の効果が発現することは、上記の試験例１及び２の結果から明らかである。
【００３０】
（試験例３）
特殊支持体の構造が与える影響を調べるために、異なる大きさの支持体を使用して効果試験を行った。使用した特殊支持体は、金属酸化物又は炭素製の有孔粒体で、有孔粒体の粒径を０．５mm、１．０mm、２．０mm及び３．０mmとし、粒体には気孔径５００μm以下で気孔率が３０％以上となるように孔隙を創出した。
この粒体を栄養液内に浸漬して気孔内に養分を満たした後乾燥させ、分化型菌培養曹内に投入して４日間静置した。これを取り出し、トマトとメロンには地際茎に注射器により打ち込んだ。また、ホウレンソウではスプレーガンにより、初生葉と第一葉に付傷してスプレー接種した。対照としては、トマト、ホウレンソウ及びメロンの無処理のものを使用した。
尚、粒体数は株当たり各々５〜１０個体とし、ホウレンソウでは粒径０．１mmの粒体を数十個体とした。また、粒体は球形とした。
【００３１】
表３に各作物における病害の発病日数及びその発病程度を示す。
【表３】
2007169229.tif 000005
表３の結果では、特殊支持体としての有孔粒体の粒径は２mm以下が好ましく、３mmではやや発病が認められた。発病がやや低下した粒径３mmの特殊支持体を打ち込んだトマト株を観察すると、打ち込んだ部分の治癒が遅いため、負傷による感染の促進が認められた。このため打ち込み後早期に負傷部が癒合する程度の粒径が望ましいことが判明した。
尚、この試験で使用した粒体は球形であったが、大きさを制御すれば形態は問わない。
【００３２】
（試験例４）
ホウレンソウ萎凋病菌（Fusarium oxsporum f. spinaciae）、又は非病原性Fusarium oxysporum から細胞壁を取り出し、特殊支持体に抱埋させたものを作成した。トマトにはホウレンソウ萎凋病菌（Fusarium oxsporum f. spinaciae）を、ナスとピーマンには非病原性Fusarium oxysporum を、作成した特殊支持体を使用して埋め込み、その後に接種した病原菌による病害の発病数を調べた。
【００３３】
まず、上記のそれぞれの菌を、２５℃で７日間液体培養後、培養液を破棄して殺菌蒸留水をいれ、１００mlのビーカー内で３０分間ホモジナイズした。この胞子と菌糸の破砕懸濁液内に特殊支持体１００個体を入れて、真空ポンプで吸引し、特殊支持体の孔隙内に菌糸と破砕片を担持させた。
次に、この支持体を無菌的に取り出して、トマトにはホウレンソウ萎凋病菌を担時させた支持体を、ナスとピーマンにはその非病原性菌を担時させた支持体を、それぞれの苗の茎の基部に挿入した（表４中の「処理」）。処理７日後に、トマトは萎凋病菌（Fusarium oxsporum f. sp. Lycopersici）、ナスは半枯病菌（Fusarium oxsporum）、ピーマンは萎凋病菌（Fusarium oxsporum）を、それぞれの根部に接種した。
なお、対照区として、特殊支持体を接種しないで病原菌のみを接種した区（表４中の「無処理」）、及び病原菌を接種しなかった区（表４にはデータは示していない）を設置した。
病原菌を接種した１０日、２０日、３０日、４０日、５０日及び６０日後に各発病数を調べた。表４の各数値は、発病数の割合（％）を示す。
【表４】
2007169229.tif 000006
【００３４】
表４に示す通り、トマトでは６０日間以上も萎凋病の発生はなく、ナスでは６０日後に２０％に半枯病の症状が認められた。ピーマンでは４０日後に５％が萎凋病を発病し枯死したが、その後の発病は認められなかった。すなわち、特殊支持体を使用した処理を行った区（処理）は、特殊支持体を接種しないで病原菌のみを接種した区（無処理）に比較して、著しく病害の発生が抑制されたことが示された。なお、病原菌を接種しなかった区（表４にはデータは示していない）では、いずれも発病は認められなかった。これらの結果から、培養した胞子及び菌糸体でなく、培養後に菌糸と胞子を粉砕し磨細した細胞壁を用いても同様に抵抗性が誘導され発病を抑制できることが判明し、また、特殊支持体を用いることで長期間にわたり抵抗性が誘導されることが示された。
また、トマトに半身萎凋病菌(Verticillium dahliae)、植物生育促進菌類（PGPF）である非病原性２核Rhizoctonia 菌を用いて前接種しても、同様の抵抗性誘導による発病抑制が認められた。このように細胞壁を特殊支持体に担持させ、植物体内に埋め込むことによる病害防除方法の有効性が確認できた。生育促進菌類とは、植物体が生育する場面において、当該菌が存在することにより、生育が存在なしの場合より著しく促進する糸状菌をいう。また、これが細菌である場合は生育促進細菌（PGPB）という。
【００３５】
ここで、上記のホウレンソウ萎凋病菌（Fusarium oxsporim. f. spinaciae）及び非病原性Fusarium oxysporumを２５℃で７日間液体培養後、培養液を破棄して殺菌蒸留水をいれ、１００mlのビーカー内で３０分間ホモジナイズしたものを、さらに水洗して細胞壁のみとして取出し質量分析を行った。
【００３６】
分析の結果、ホウレンソウ萎凋病菌の細胞壁成分は主にキチン及びβ−グルカンであることがわかった。また、非病原性Fusarium oxysporumも同様で、その含有量には大差がなかった。
また、半身萎凋病菌Verticillium dahliae及び非病原性２核Rhizoctonia 菌についても、同様に細胞壁のみを取り出し分析したところ、主成分はキチン及びβ−グルカンであった。従来から、糸状菌の細胞壁はキチン・グルカン型の細胞壁であることが知られている。上記の試験でも同様の結果となった。
本試験例の結果から、これらの細胞壁の成分は、他の植物体に接種すると細胞内で抵抗性誘導物質として働き、糸状菌の植物体内での増加を抑制することが判明した。また、抵抗性誘導は、他の病原菌の侵入に対して抑制的に働くことが判明した。この作用が本発明における発病抑制にも有効に働いているものと考えられる。なお、キチンとグルカンを個々に作物に接種しても、抵抗性を誘導することができた。これらの結果は、上記微生物を培養し一定量の菌濃度とし、栄養体を水洗し、菌体、すなわち細胞壁を特殊支持体に担持させることが可能であることを示すものである。
【００３７】
同様に、液体培養したトマト疫病菌（Phytophthora infestans）、イチゴ根腐病菌（Pythium helicoides）、及びハクサイ根くびれ病菌（Aphanomyces raphani）をＶ８ジュース液体培地で２０℃、３日間培養後、培養液を破棄して殺菌蒸留水で水洗し、１００mlのビーカー内で５分間ホモジナイズした。これをさらに水洗して細胞壁のみとして取出し質量分析した。
【００３８】
トマト疫病菌（Phytophthora infestans）、イチゴ根腐病菌（Pythium helicoides）、及びハクサイ根くびれ病菌（Aphanomyces raphani）の細胞壁成分は、ともにキチン、グルカン、セルロース、ヘミセルロース及びヒドロキシプロリンで、成分量には大差がなかった。従来から、クロミスタ界卵菌門の細胞壁はキチン、グルカン、セルロース及びヒドロキシプリン等からなることが知られているが、本試験の結果も同様であった。これらの成分は、他の植物体に接種すると細胞内で抵抗性誘導物質として働いた。これらを同時に植物体内に接種すると、病害の発生を抑制し、また、他の病原菌の侵入に対して抑制的に働くことが判明した。この作用が本発明における発病抑制に有効に働いているものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】特殊支持体の構造と形状を示す、表面図及び断面図である。
【図２】特殊支持体に分化型菌または非病原性菌を保持させる方法を示す図である。
【図３】スプレーによるホウレンソウ等の葉菜への接種方法（スプレー法）を示す図である。
【図４】注射器によるメロン又はトマト等への接種方法（注射法）を示す図である。
【符号の説明】
【００４０】
１１  特殊支持体
１２  孔隙
１３  分化型菌又は非病原性菌の培養状態
１４  培養器
１５  スプレー
１６  初生葉
１７  第一葉
１８  土壌
１９  茎（トマト又はメロンなど）
２０  葉
２１  注射器
２２  ポットまたは土壌
【図１】
2007169229.tif 000007
【図２】
2007169229.tif 000008
【図３】
2007169229.tif 000009
【図４】
2007169229.tif 000010