(57)【要約】【課題】杉の葉からルチン等のポリフェノール類を選択的に抽出した、安全性が高く、経口摂取が容易で、優れた抗アレルギー作用を有する杉の葉抽出物、及び該杉の葉抽出物を含み、喘息及び花粉症等のアレルギー症状、特に、アレルギー疾患による炎症等の治療又は予防に好適な飲食物を提供する。【解決手段】杉（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｄ．Ｄｏｎ）の葉の水抽出物に対して第一の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第一の有機溶媒に溶解可能な成分を抽出除去した後、該杉の葉の水抽出物に対して第二の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第二の有機溶媒に溶解可能な成分を少なくとも２回抽出して得られることを特徴とする杉の葉抽出物である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
杉（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｄ．Ｄｏｎ）の葉の水抽出物に対して第一の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第一の有機溶媒に溶解可能な成分を抽出除去した後、該杉の葉の水抽出物に対して第二の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第二の有機溶媒に溶解可能な成分を少なくとも２回抽出して得られることを特徴とする杉の葉抽出物。
【請求項２】
第二の有機溶媒を含む抽出剤を用いて行われる２回目以降の抽出が、カラムクロマトグラフィーによる分画処理である請求項１に記載の杉の葉抽出物。
【請求項３】
第二の有機溶媒が、酢酸エチル、クロロホルムとメタノールとの混合液（モル比２：１）、及びメタノールの少なくともいずれかである請求項１から２のいずれかに記載の杉の葉抽出物。
【請求項４】
２回目以降の抽出に用いられる、第二の有機溶媒を含む抽出剤における該第二の有機溶媒の含有量が、６０質量％以上である請求項１から３のいずれかに記載の杉の葉抽出物。
【請求項５】
セスキテルペンの含有量が、５質量％以下である請求項１から４のいずれかに記載の杉の葉抽出物。
【請求項６】
第一の有機溶媒が、セスキテルペンを溶解可能な溶媒である請求項５に記載の杉の葉抽出物。
【請求項７】
第一の有機溶媒が、ｎ−ヘキサン、ｎ−ペンタン、石油エーテル、及びエーテルの少なくともいずれかである請求項６に記載の杉の葉抽出物。
【請求項８】
ルチン、（−）−エピガロカテキン、及び（−）−エピガロカテキンガレートの少なくともいずれかを含有する請求項１から７のいずれかに記載の杉の葉抽出物。
【請求項９】
請求項１から８のいずれかに記載の杉の葉抽出物を含むことを特徴とする飲食物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、杉の葉からルチン等のポリフェノール類を選択的に抽出した杉の葉抽出物、及び該杉の葉抽出物を含む飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
喘息、花粉症、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎等のアレルギー疾患は、Ｉ型アレルギー（アナフィラキシー型）に分類される疾患であり、該疾患の発症までのアレルギー反応において、ＩｇＥ抗体、マスト細胞、及びＦｃＲ陽性細胞が関与することが知られており、アレルギー疾患の患者の血清中又は組織におけるＩｇＥ抗体濃度は、健常人よりも高いことが知られている。
【０００３】
Ｉ型アレルギー疾患の発症は、抗原（アレルゲン）の侵入により、該抗原（アレルゲン）特異的なＩｇＥ抗体の産生が開始される段階と、再度の抗原（アレルゲン）の侵入により抗原抗体反応が惹起され、ケミカルメディエータ、並びにＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、及びＩＬ−１３等のＴｈ２型サイトカインが放出され、好酸球浸潤等を誘導して標的組織に炎症を惹き起こす段階とからなる。
【０００４】
従来、Ｉ型アレルギー症状の抑制剤としては、ケミカルメディエータであるヒスタミンの拮抗剤、遊離抑制剤、及び合成阻害剤、自律神経作用薬、並びにステロイド剤等が知られているが、これらは抗コリン作用や眠気等の副作用を生じるという問題があり、また、Ｉ型アレルギーの治療法としては、アレルゲンを主成分とする注射剤を定期的に投与する減感作療法等が知られているが、該治療法は２〜３年の長期間の通院が必要となり、負担が大きいという問題がある。
【０００５】
アレルギー症状を抑制する、より効率的な方法としては、最初の段階で起こるＩｇＥ抗体産生を抑制する方法が考えられる。これまでに、多くのＩｇＥ抗体産生抑制剤が提案されており、合成薬剤のみならず、安全性の高い天然の植物由来の抽出物からなるＩｇＥ抗体産生抑制剤が提案されている（特許文献１及び２参照）。
【０００６】
一方、杉（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｄ．Ｄｏｎ）の葉抽出物は、花粉症予防等に有効であることが知られており（特許文献３及び４参照）、該花粉症予防の民間療法として、杉の葉茶等が用いられている。
【０００７】
前記杉の葉中には、各種のテルペノイド類、フラボノイド類等が含まれており、これらの中でも、特に、該テルペノイドの１種であるセスキテルペンは、抗アレルギー作用を有することが確認されている。
しかしながら、前記セスキテルペン等のテルペノイド類は、水に難溶であり、食品として加工しにくいという問題がある。
【０００８】
また、杉の葉を熱水で抽出する従来からの杉の葉抽出物の製造方法では、杉の葉に含まれる有効成分に加えて、薬理作用の低い成分も抽出されるため、得られた抽出物を精製工程なしで健康食品等に配合されると、製品価値が損なわれたり、生理活性が低かったりするという問題がある。
したがって、杉の葉抽出物における有効成分を効率よく摂取するために、有効成分を多量に含有し、優れた抗アレルギー作用を有する杉の葉抽出物の開発が望まれていた。
【０００９】
【特許文献１】特開２００３−２８１１号公報
【特許文献２】特開２００４−４３３５９号公報
【特許文献３】特開平９−２０６７１号公報
【特許文献４】特開２００１−１４１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、前記従来における問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、杉の葉からルチン等のポリフェノール類を選択的に抽出した、安全性が高く、経口摂取が容易で、優れた抗アレルギー作用を有する杉の葉抽出物、及び該杉の葉抽出物を含み、喘息及び花粉症等のアレルギー症状、特に、アレルギー疾患による炎症等の治療又は予防に好適な飲食物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
前記課題を解決するため、本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、杉の葉の水抽出物の中でも、セスキテルペンを略含まず、かつ、優れたＩｇＥ抗体産生抑制作用を有する画分を見出した。
前記杉の葉の成分の中でも、従来より該杉の葉の有する抗アレルギー作用の活性本体とされてきたセスキテルペン以外の成分が、ＩｇＥ抗体産生を特異的に抑制することについては全く知られておらず、このことは本発明者らの新たな知見である。
【００１２】
本発明は、本発明者による前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  杉（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  Ｄ．Ｄｏｎ）の葉の水抽出物に対して第一の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第一の有機溶媒に溶解可能な成分を抽出除去した後、該杉の葉の水抽出物に対して第二の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第二の有機溶媒に溶解可能な成分を少なくとも２回抽出して得られることを特徴とする杉の葉抽出物である。
＜２＞  第二の有機溶媒を含む抽出剤を用いて行われる２回目以降の抽出が、カラムクロマトグラフィーによる分画処理である前記＜１＞に記載の杉の葉抽出物である。
＜３＞  第二の有機溶媒が、酢酸エチル、クロロホルムとメタノールとの混合液（モル比２：１）、及びメタノールの少なくともいずれかである前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の杉の葉抽出物である。
＜４＞  ２回目以降の抽出に用いられる、第二の有機溶媒を含む抽出剤における該第二の有機溶媒の含有量が、６０質量％以上である前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の杉の葉抽出物である。
＜５＞  セスキテルペンの含有量が、５質量％以下である前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載の杉の葉抽出物である。
＜６＞  第一の有機溶媒が、セスキテルペンを溶解可能な溶媒である前記＜５＞に記載の杉の葉抽出物。
＜７＞  第一の有機溶媒が、ｎ−ヘキサン、ｎ−ペンタン、石油エーテル、及びエーテルの少なくともいずれかである前記＜６＞に記載の杉の葉抽出物である。
＜８＞  ルチン、（−）−エピガロカテキン、及び（−）−エピガロカテキンガレートの少なくともいずれかを含有する前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の杉の葉抽出物である。
＜９＞  前記＜１＞から＜８＞のいずれかに記載の杉の葉抽出物を含むことを特徴とする飲食物である。
＜１０＞  前記＜１＞から＜８＞のいずれかに記載の杉の葉抽出物を含むことを特徴とする抗炎症剤である。
＜１１＞  前記＜１＞から＜８＞のいずれかに記載の杉の葉抽出物を含むことを特徴とする抗アレルギー剤である。
＜１２＞  喘息の治療及び予防のいずれかに使用される前記＜１１＞に記載の抗アレルギー剤である。
＜１３＞  花粉症の治療及び予防のいずれかに使用される前記＜１１＞に記載の抗アレルギー剤である。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によると、杉の葉からルチン等のポリフェノール類を選択的に抽出した、安全性が高く、経口摂取が容易で、優れた抗アレルギー作用を有する杉の葉抽出物、及び該杉の葉抽出物を含み、喘息及び花粉症等のアレルギー症状、特に、アレルギー疾患による炎症等の治療又は予防に好適な飲食物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（杉の葉抽出物）
本発明の杉の葉抽出物は、杉の葉の水抽出物に対して第一の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第一の有機溶媒に溶解可能な成分を抽出除去した後、該杉の葉の水抽出物に対して第二の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第二の有機溶媒に溶解可能な成分を少なくとも２回抽出して得ることができる。
なお、前記杉の葉抽出物には、抽出液、該抽出液の希釈液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１５】
前記杉の葉抽出物の原料となる杉の葉としては、杉から伐採された葉部であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、９月から１２月の間に杉から伐採された葉部が好適に挙げられる。
【００１６】
ここで、前記杉としては、例えば、スギ（オモテスギ）（Cryptomeria  japonica (L.fil)  D.  Don）、アヤスギ、イカリスギ（Cryptomeria  japonica  D.  Don  f.  lycopodioides  Hort.）、エンコウスギ（Cryptomeria  japonica  D.  Don  var.  araucarioides  Henk.  Et  Hochst）、オオゴンスギ（Cryptomeria  japonica  D.  Don  var.  aurea  Hort.）オキナスギ、ジンダイスギ（Cryptomeria  japonica  D.  Don  var.  Zindai  Hort.）、タイショウタマスギ、マンキチスギ（Cryptomeria  japonica  D.  Don  f.  Mankitiana  Hort.）、ミドリスギ（Cryptomeria  japonica  D.  Don  f.  viridis  Hort.）、メジロスギ（Cryptomeria  japonica  D.  Don  f.  albo-spicata  Hort.）、及びヨレスギ（Cryptomeria  japonica  D.  Don  f.  torta  Makino）等が挙げられる。
【００１７】
抽出原料である前記杉の葉は、前記杉の葉の切断物、粉砕物、乾燥物、及び乾燥粉砕物のいずれも用いることができるが、採取後直ちに乾燥し、粉砕したものが好適である。
前記杉の葉を乾燥する方法としては、例えば、伐採後に天日干しにより乾燥する方法、乾燥機を用いて加熱乾燥する方法等が挙げられ、これらを１種単独で、又は２種以上組合せて行うことができる。これらの中でも、天日干しを行った後、乾燥機を用いて乾燥する方法が好ましく、例えば、４８〜７２時間天日干しを行った後、乾燥機を用いて１００〜１２０℃の温度条件下で２０〜３０分間乾燥する方法等が好ましい。
【００１８】
前記杉の葉抽出物を得るための前記杉の葉の水抽出物とは、前記杉の葉を、水で抽出して得られる抽出物のことであり、好ましくは、熱水抽出物である。
前記水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれ、これらの中でも熱水が好ましい。
【００１９】
前記杉の葉の水抽出物を得るための抽出温度としては、１０〜１１０℃が好ましく、１００〜１１０℃がより好ましい。また、加熱しながら抽出を行うことが好ましい。
また、前記杉の葉抽出物の抽出時間としては、１０分以上が好ましく、４０〜６０分がより好ましい。
【００２０】
前記杉の葉抽出物を得るために用いる第一の有機溶媒としては、疎水性で、かつ、セスキテルペンを溶解可能な溶媒であれば特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、ｎ−ヘキサン、ｎ−ペンタン、石油エーテル、及びエーテル等が好ましく、ｎ−ヘキサンがより好ましい。これらは、１種単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００２１】
前記第一の有機溶媒を含む抽出剤の使用量としては、前記第一の有機溶媒を含む抽出剤と前記杉の葉の水抽出物との混合物中、前記杉の葉の水抽出物の含有量が、３０〜９０質量％になるように調整することが好ましく、４０〜６０質量％になるように調整することがより好ましい。
前記第一の有機溶媒を含む抽出剤と前記杉の葉の水抽出物との混合物は、例えば、混合後一定時間静置することにより、該第一の有機溶媒に溶解可能な成分を該第一の有機溶媒を含む抽出剤に抽出することができる。
前記第一の有機溶媒に溶解可能な成分を抽出するための抽出温度としては、１５〜３０℃が好ましく、２０〜２５℃がより好ましい。
また、前記第一の有機溶媒に溶解可能な成分の抽出時間としては、１０分以上が好ましく、１０〜２０分がより好ましい。
なお、前記抽出時間を短縮するために、必要に応じて前記混合物の攪拌及び加熱の少なくともいずれかを行ってもよい。
前記抽出後の前記第一の有機溶媒を含む抽出剤は、公知の方法で水層から分離することができる。
【００２２】
前記杉の葉抽出物を得るために用いる第二の有機溶媒としては、疎水性であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、酢酸エチル、クロロホルムとメタノールとの混合液（モル比２：１）、及びメタノール等が好ましく、酢酸エチルがより好ましい。これらは、１種単独で用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００２３】
前記第二の有機溶媒を含む抽出剤の使用量としては、前記第二の有機溶媒を含む抽出剤と前記杉の葉の水抽出物との混合物中、前記杉の葉の水抽出物の含有量が、３０〜９０質量％になるように調整することが好ましく、４０〜６０質量％になるように調整することが好ましい。
前記第二の有機溶媒を含む抽出剤と前記杉の葉の水抽出物との混合物は、例えば、混合後一定時間静置することにより、該第一の有機溶媒に溶解可能な成分を該第一の有機溶媒を含む抽出剤に抽出することができる。
前記第二の有機溶媒を含む抽出剤を用いて該第二の有機溶媒に溶解可能な成分を抽出するための抽出温度としては、１５〜３０℃が好ましく、２０〜２５℃がより好ましい。
また、前記第二の有機溶媒に溶解可能な成分の抽出時間としては、１０分以上が好ましく、１０〜２０分がより好ましい。
なお、前記抽出時間を短縮するために、必要に応じて前記混合物の攪拌及び加熱の少なくともいずれかを行ってもよい。
前記抽出後の前記第二の有機溶媒を含む抽出剤は、公知の方法で水層から分離することができる。
【００２４】
第二の有機溶媒を含む抽出剤を用いて行われる抽出としては少なくとも２回行われることが好ましく、２回目以降としては、例えば、カラムクロマトグラフィーによる分画処理が好ましい。具体的には、シリカゲル等の吸着剤に前記杉の葉の水抽出物を吸着させ、第一の有機溶媒又は高含量の第一の有機溶媒を含む溶液を用いてセスキテルペン等の不要分を除き、次いで、第二の有機溶媒又は高含量の第二の有機溶媒を含む溶液を用いて溶出し、精製物を得ることができる。前記精製物を溶出するための溶媒としては、第二の有機溶媒を６０質量％以上含有する溶液が好ましい。
【００２５】
以上のようにして得られる杉の葉抽出物（杉の葉抽出液）は、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施し、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出物の乾燥物、これらの粗精製物及び精製物としてもよい。該抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーを添加してもよい。また、前記杉の葉抽出物は保存や取り扱いを容易にするために、前記キャリアーその他任意の助剤と混合して粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形に製剤化することもできる。
【００２６】
本発明の杉の葉抽出物は、有効成分として、下記構造式（１）で表されるルチン、下記構造式（２）で表される（−）−エピガロカテキン、及び下記構造式（３）で表される（−）−エピガロカテキンガレートの少なくともいずれかを含んでなり、実質的にセスキテルペンを含まない。該セスキテルペンの含有量としては、本発明の杉の葉抽出物の全質量に対して、５質量％以下であるのが好ましい。
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【００２７】
以上のようにして得られる本発明の杉の葉抽出物は、ＩｇＥ抗体抑制作用及び炎症部位における好酸球の浸潤を抑制する作用の少なくともいずれかを有しており、これらの作用を利用して、抗炎症剤又は抗アレルギー剤の有効成分として使用することができる。
【００２８】
前記杉の葉抽出物の使用方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、健康食品、医薬品、及び医薬部外品などとして使用することができる。
また、一般食品や一般飲料に含有させることにより、後述する飲食物の成分として好適に使用することができる。
【００２９】
（飲食物）
本発明の飲食物は、本発明の杉の葉抽出物を含有してなる飲食物である。
ここで、前記飲食物とは、人の健康に危害を加える恐れが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品等の区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものを意味する。
【００３０】
本発明の飲食物は、本発明の杉の葉抽出物を、その活性を妨げないような任意の飲食物に配合したものであってもよいし、杉の葉抽出物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。
【００３１】
本発明の前記飲食物を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等の任意の助剤を添加して任意の剤形に製剤化することができる。
【００３２】
前記杉の葉抽出物を含有し得る前記飲食物としては、特に制限は無く、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、清涼飲料（発泡性飲料、果実飲料、着香飲料、着香シロップ、乳酸飲料、コーヒー飲料、茶系飲料、豆乳類、等）、栄養飲料、アルコール飲料等の飲料；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；ソース、たれ、スパイス等の調味料；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；種々の形態の飲料及び食品、並びに健康・栄養補助食品などが挙げられる。
【００３３】
前記飲食物における本発明の杉の葉抽出物の添加量は、対象となる飲食物の種類に応じて異なり一概には規定することができないが、飲食物本来の味を損なわない範囲で添加すればよい。
【００３４】
本発明の飲食物は、日常的に経口摂取することが可能であり、摂取することにより、添加した前記杉の葉抽出物の作用により、喘息及び花粉症等のアレルギー症状、特に、アレルギー疾患による炎症等を容易に改善することができる。
【００３５】
なお、本発明の杉の葉抽出物及び飲食物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００３６】
以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこの実施例に何ら限定されるものではない。
【００３７】
（製造例１）
−杉の葉茶抽出物の製造−
杉の葉茶（株式会社金子園製）６００ｇを熱水中で加熱しながら４０分間抽出して熱水抽出液２Ｌを得た。図１に示すように、得られた該熱水抽出液にｎ−ヘキサン２Ｌを加え混和し、２層分配を行い、水層とｎ−ヘキサン層を得た。ｎ−へキサン抽出は、計３回行った。得られた該水層に酢酸エチル２ｍＬを加え、同様に計３回抽出を行い、得られた酢酸エチル層から酢酸エチルを減圧下留去して、杉の葉の酢酸エチル抽出物１０．３ｇを得た。
次いで、得られた酢酸エチル抽出物を少量の酢酸エチルに溶解し、シリカゲルクロマトグラフィーで、１０％酢酸エチル／ｎ−へキサン画分（Ｆｒ．１）、２０％酢酸エチル／ｎ−へキサン画分(Ｆｒ．２)、５０％酢酸エチル／ｎ−へキサン画分(Ｆｒ．３)、７０％酢酸エチル／ｎ−へキサン画分（Ｆｒ．４)、及び１００％酢酸エチル画分(Ｆｒ．５)の５つのフラクションに分画した。
薄層クロマトグラフィーによる比較の結果、図２に示すように、Ｆｒ．１〜Ｆｒ．５の５つのフラクションの中でも、特に、酢酸エチル抽出物に対して１２質量％得られたＦｒ．４及び３９質量％得られたＦｒ．５には、テルペノイド類が略含まれていないことがわかった。
【００３８】
−化合物の同定−
得られた前記Ｆｒ．４及びＦｒ．５について、以下の測定条件でＨＰＬＣ分析を行い、各フラクションに含まれる成分を同定した。その結果、前記Ｆｒ．４中には、（−）−エピガロカテキンガレート３８５．９ｍｇ、及びルチン１１．８ｍｇが含まれることを確認した。また、前記Ｆｒ．５中には、（−）−エピガロカテキン１２８．９ｍｇ、（−）−エピガロカテキンガレート２１．３ｍｇが含まれることを確認した。
《測定条件》
ＨＰＬＣカラム：ＰＥＧＡＳＩＬ−Ｂ  ＯＤＳ  (ＳＥＮ−ＳＨＵ  Ｐａｋ)（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）
流速：１．０ｍＬ／分
カラム温度：４０℃
移動相溶媒：酢酸エチル／アセトニトリル／０．０６％硫酸＝２／１２／８６（ｖ／ｖ／ｖ）
【００３９】
（実施例１、比較例１）
−喘息モデルマウスの調製及び投与−
７週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス６匹に、卵白アルブミン（ＯＶＡ）０．１ｍｇと、水酸化アルミニウム１．６ｍｇとの混合物を、試験開始０日目及び７日目に皮下投与し、さらに、前記卵白アルブミン０．０１ｍｇを、１４、１５、及び１６日目に点鼻投与して喘息モデルマウスを調製した。
前記喘息モデルマウスは、試験開始０日目から被験試料を毎日０．５ｍＬずつ経口投与して飼育した。
なお、被験試料としては、実施例１として、製造例１で製造したＦｒ．４を３．９２ｇ／ｍＬの濃度で、水とメチルセルロースとの等量混合液に溶解したものを用い、比較例１として、水とメチルセルロースとの等量混合液を用いた。
【００４０】
−評価−
前記喘息モデルマウスを、１８日目に解剖し、血清および肺洗浄液を採取し、血清中のＩｇＥ抗体価、並びに、肺胞洗浄液中の全白血球数及び肺胞腔への好酸球浸潤量を以下の方法により測定した。結果を図３〜５、及び表１に示す。
【００４１】
＜血清中のＩｇＥ抗体価＞
ＩｇＥ抗体価は、ラット抗マウスＩｇＥ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ（日本ベクトンディッキンソン株式会社製）をコートした９６穴プレートに、段階希釈した血清を添加し、ｂｉｏｔｉｎ標識ＯＶＡと、ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ標識ＨＰＲＴとを用いて検出し、ＴＭＢ  Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（フナコシ株式会社製）で発色させ、２Ｎ  硫酸で反応停止後、４５０／５４０ｎｍの吸光度を測定し、得られたＯＤ値をＩｇＥ抗体価とした。なお、前記ＩｇＥ抗体価は、１０倍希釈で測定して得られたＯＤ値である。
【００４２】
＜肺胞洗浄液中の全白血球数、及び肺胞腔への好酸球浸潤量＞
肺胞洗浄液は、肺を１ｍＬの生理食塩水で洗浄し、回収して調製した。前記肺胞洗浄液中の全白血球数及び好酸球数を測定した。全白血球数はチュルク液（和光純薬工業製）で染色し、血球計算板を用いて計測し、好酸球はギムザ液（メルク株式会社製）で染色し、光学顕微鏡下で観察して細胞数を計測した。
【００４３】
【表１】
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【００４４】
表１の結果から、本発明の杉の葉抽出物を経口投与した実施例１の喘息モデルマウスは、ＩｇＥ抗体産生が抑制され、また、肺胞洗浄液中の好酸球の浸潤が抑制されていることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明の杉の葉抽出物は、安全性が高く、経口摂取が容易で、摂取することによりＩｇＥ抗体産生を抑制し、炎症やアレルギー疾患の治療又は予防に好適であり、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品及び医薬品等に幅広く適用できるものである。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１は、製造例１の杉の葉抽出物を得るための工程図である。
【図２】図２は、製造例１から得られた杉の葉抽出物の薄層クロマトグラフィーの結果を示す図である。
【図３】図３は、実施例１及び比較例１の喘息モデルマウス血清中のＩｇＥ抗体価を示すグラフである。
【図４】図４は、実施例１及び比較例１の喘息モデルマウスの肺胞洗浄液中の全白血球数を示すグラフである。
【図５】図５は、実施例１及び比較例１の喘息モデルマウスの肺胞腔への好酸球浸潤量を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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