(57)【要約】【課題】  安全な食品素材由来である急性相反応タンパク質転写抑制剤、及び、急性相反応タンパク質の発現によって引き起こされる疾患の予防及び／又は改善・処置用組成物を提供する。【解決手段】  本発明により、甘草疎水性抽出物を有効成分とする急性相反応タンパク質転写抑制剤が得られ、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患の予防及び／又は改善・処置用組成物が提供される。本発明の上記の組成物は、安全であり、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患の予防、及び／又は改善・処置に有効である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
甘草疎水性抽出物を有効成分として含有することを特徴とする組織損傷惹起性急性相反応タンパク質転写抑制剤。
【請求項２】
甘草疎水性抽出物が、甘草を濃度９０容量％以上のエタノール水溶液で抽出して得られる抽出物であることを特徴とする請求項１記載の組織損傷惹起性急性相反応タンパク質転写抑制剤。
【請求項３】
甘草疎水性抽出物が、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン、及びヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物、またはその塩、またはそのエステル、もしくはその配糖体を有効成分として含有することを特徴とする請求項１又は２記載の組織損傷惹起性急性相反応タンパク質転写抑制剤。
【請求項４】
急性相反応タンパク質が、血清アミロイドＡ１及び／又は血清アミロイドＡ２であることを特徴とする請求項１〜３記載の組織損傷惹起性急性相反応タンパク質転写抑制剤。
【請求項５】
急性相反応タンパク質が、Ｃ反応性タンパク質であることを特徴とする請求項１〜３記載の組織損傷惹起性急性相反応タンパク質転写抑制剤。
【請求項６】
急性相反応タンパク質が、ハプトグロビン、フィブリノーゲン及びセルロプラスミンからなる群より選ばれた１種以上のタンパク質であることを特徴とする請求項１〜３記載の組織損傷惹起性急性相反応タンパク質転写抑制剤。
【請求項７】
請求項１〜６記載の組織損傷惹起性急性相反応タンパク質転写抑制剤を含有する油脂組成物。
【請求項８】
油脂が中鎖脂肪酸トリグリセライド及び／または部分グリセライドを含むグリセリン脂肪酸エステルである請求項７項記載の油脂組成物。
【請求項９】
急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷に関連する疾患の予防又は改善に用いられることを特徴とする請求項７又は８記載の油脂組成物。
【請求項１０】
組織損傷に関連する疾患が、疎血再還流障害、血管狭窄、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ、糖尿病性腎症、全身性炎症応答症候群及び感染症からなる群より選ばれる１つ以上の疾患である請求項９記載の油脂組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、甘草疎水性抽出物を有効成分とする急性相反応タンパク質転写抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
急性相反応タンパク質は、急性期タンパク質とも呼ばれ、炎症の急性期に血中に増加するタンパク質の総称である。疎血再還流障害、血管狭窄、潰瘍性大腸炎、クローン病、リウマチ、糖尿病性腎症、全身性炎症応答症候群、感染症などの炎症性疾患では血液中に急性相反応タンパク質が増加してくることが知られている。また、その症状の悪化にも関与していることが知られている。
【０００３】
代表的な急性相反応タンパク質として、Ｃ反応性タンパク質（Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：ＣＲＰ）、血清アミロイドＡ（Ｓｅｒｕｍ  Ａｍｙｌｏｉｄ  Ａ：ＳＡＡ）、ハプトグロビン、フィブリノーゲン、セルロプラスミンなどが挙げられる。
【０００４】
ＣＲＰは、分子量約１０５ｋＤａでＩｇＭのように５つのサブユニットが環状に結合した構造をとっている。補体と協調して損傷を受けた細胞や組織に結合し、好中球や単球を活性化し損傷を広げることが確認されている（非特許文献１）。また、急性相反応タンパク質は感染症や炎症の診断にも指標として使われている。その上、ＣＲＰは冠動脈疾患の予知因子としても利用されている。
【０００５】
ＳＡＡは、主に肝臓で産生される分子量１２ｋＤａの急性相反応タンパク質であり、慢性炎症性疾患に続いて発生するＡＡアミロイドーシスで組織に沈着するアミロイドＡタンパク質の血中前駆体として発見された。ＳＡＡには４種のアイソタイプ（ＳＡＡ１、ＳＡＡ２、ＳＡＡ３、ＳＡＡ４）が存在している（ヒトではＳＡＡ３は発現しない。）。ＳＡＡ１およびＳＡＡ２はＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦαなどの炎症性サイトカインに応答する急性相反応タンパク質であり、そのレベルは損傷、感染、炎症に応じて１０００倍までにも増大しうる。また、クローン病の悪化と相関があることが知られている（非特許文献２）。
【０００６】
ハプトグロビンは血液中のヘモグロビンと特異的に結合し複合体を形成する糖蛋白質である。形成した複合体はクッパー細胞などに速やかに取り込まれ、分解処理されることが知られている。また、急性の炎症性病変により血中で増加する急性相反応タンパク質である。フィブリノーゲンは、分子量約３４０ｋＤａの糖蛋白で、生体内半減期は３〜４日である。約８０％は血漿中に、残りが組織に分布している。フィブリノーゲンは血液凝固第Ｉ因子と呼ばれ、血液凝固の最終段階でトロンビンの作用によってフィブリンとなるフィブリノーゲンはゲル化してフィブリンとなることで、血栓生成を引き起こす。また加齢や炎症にともなって増加する傾向があることが知られている。セルロプラスミンも肝臓で合成される分子量約１３２ｋＤａのα2-グロブリンに属する急性相反応タンパク質である。血清中の銅の90〜95％はこのタンパク質中に含まれている。
【０００７】
以上のように、急性相反応タンパク質は炎症性疾患の悪化に関与しており、また、好中球や単球を活性化することにより発生する組織損傷等に関連する疾患を引き起こす。これらの疾患を処置するために、急性相反応タンパク質を除去する炎症性疾患治療用カラムが知られている（特許文献１）。しかし、体外循環治療であるため身体への負担が大きい。このため、日常的に摂取でき、かつ、副作用のない急性相反応タンパク質の量を減弱することのできる組成物が望まれている。
【０００８】
上記に鑑み、急性相反応タンパク質転写抑制剤は、ＣＲＰやＳＡＡなどの急性相反応タンパク質の発現を抑制することによって、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患を予防及び緩和することが期待される。
【０００９】
甘草はマメ科カンゾウ属（Glycyrrhiza属）の植物であり、食用や医薬用（生薬）として利用されており、主な品種としてグリキルリーザ・グラブラ（Glycyrrhiza glabra）、Ｇ．ウラレンシス（G. uralensis）、Ｇ．インフラータ(G. inflate)などが挙げられる。いずれの品種にも親水性成分であるグリチルリチン（グリチルリチン酸）は含まれているが、疎水性成分のフラボノイドは品種によって特異的な化合物が含まれている。
【００１０】
甘草から得られる抽出物のうち、甘草フラボノイドを多く含み、グリチルリチン含有が極微量である甘草疎水性抽出物は、マルチプル・リスク・ファクター症候群の予防及び／又は改善に有用であることが見いだされている（特許文献２）。さらに最新の研究において、この甘草疎水性抽出物がＰＰＡＲγリガンド活性を有し、その活性成分はフラボノイドであることが見いだされている（特許文献３）。その中でも、Ｇ．グラブラ由来の抽出物に含有される特徴的なフラボノイドであるグラブレン、グラブリジン、グラブロール、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジン、４'−Ｏ−メチルグラブリジン及びヒスパグラブリジンＢが高いＰＰＡＲγリガンド活性を有していることが見いだされている（特許文献３）。
【００１１】
一方、甘草疎水性フラボノイドを中鎖脂肪酸トリグリセライドに溶解し、その甘草疎水性フラボノイド製剤を酸化防止剤、抗菌剤、酵素阻害剤、抗腫瘍剤、抗アレルギー剤、抗ウイルス剤として利用している（特許文献４）。
【特許文献１】特開２００２−３５１１７
【特許文献２】ＷＯ０２／４７６９９
【特許文献３】特願２００２−２２６４８６
【特許文献４】特許２７９４４３３号
【非特許文献１】J. Leukocyte Biol.，１９９２年，５２巻，４４９〜４５５頁
【非特許文献２】Hepatogastroenterology，１９９７年，４４巻，９０〜１０７頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、天然物由来の急性相反応タンパク質転写抑制剤に関するものであり、ＣＲＰやＳＡＡなどの急性相反応タンパク質の発現を抑制することによって、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患を予防及び緩和することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記実情に鑑み鋭意研究を行った結果、甘草疎水性抽出物、とりわけ甘草疎水性抽出物を含有する油脂に、急性相反応タンパク質転写抑制効果があることを見いだした。さらに該甘草疎水性抽出物が、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患の予防及び緩和効果を有することを見いだし、これらの知見に基づいて、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、甘草疎水性抽出物を有効成分とする急性相反応タンパク質転写抑制剤および該急性相反応タンパク質転写抑制剤を含有する組成物に関する。
【００１４】
また、本発明は、上記の急性相反応タンパク質転写抑制剤を有効成分とする、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患を予防・緩和・処置する作用を有する組成物に関する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、天然物由来の急性相反応タンパク質転写抑制剤、及びそれを有効成分として含有する組成物が提供される。本発明の組成物は、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患を予防・緩和・処置する上で有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下に、本発明の実施の形態を詳しく説明する。
【００１７】
本発明でいう急性相反応タンパク質転写抑制剤とは、急性相反応タンパク質の遺伝子の発現を抑制する活性を有している化合物を含む物質である。本発明の急性相反応タンパク質転写抑制剤は、急性相反応タンパク質の発現を低下させることで、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患を予防・緩和・処置することができる。即ち、本発明の急性相反応タンパク質転写抑制剤は、急性相反応に関わる各種遺伝子を抑制することができる。
【００１８】
前記各種遺伝子とは、例えば、ＣＲＰ、ＳＡＡ、ハプトグロビン、フィブリノーゲン、セルロプラスミンなどの遺伝子が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１９】
急性相反応タンパク質転写抑制活性は、例えばＤＮＡマイクロアレイ、ノーザンブロット、ＲＴ−ＰＣＲなどによって測定することができる。これらの測定系において、サンプルの活性はコントロール食摂食個体のｍＲＮＡと比較し、低い発現量を示すものを急性相反応タンパク質転写抑制活性ありと評価する。
【００２０】
本発明の急性相反応タンパク質転写抑制剤は、甘草疎水性抽出物を有効成分としており、急性相反応タンパク質転写抑制活性を発揮できる範囲の有効量を含んでいればよい。
【００２１】
甘草から本発明の疎水性抽出物を得る方法は、例えば、甘草を有機溶媒によって抽出による方法が挙げられる。さらに、当該抽出物は、飲食品や医薬品として不適当な不純物を含有しない限り、抽出液のまま、又は粗抽出物あるいは半精製抽出物として本発明に使用できる。抽出に用いる溶媒は、食品、食品添加物、医薬品などの製造、加工に使用できる安全なものが好ましく、例えば、炭素数１〜４のアルコールおよびそれらの水溶液、アセトン、グリセリン、酢酸エチル、プロピレングリコールなどが挙げられ、また、これらのうち２種以上を混合して用いてもよい。これらのうち、抽出後の溶媒除去が容易な点からメタノール、エタノール、プロパノール、アセトン、酢酸エチルなどの有機溶媒が好ましく、残留溶媒の安全性の観点からエタノールがより好ましい。さらに、急性相反応タンパク質転写抑制活性の強さの点から、濃度２０容量％以上のエタノールなど炭素数１〜４のアルコール水溶液が好ましく、濃度９０容量％以上のエタノールなど炭素数１〜４のアルコール水溶液がさらに好ましい。また、２種以上の混合溶媒として水を用いる場合には、水は２０％以下の使用が好ましい。
【００２２】
溶媒抽出する場合、甘草を、１〜２０倍量の上記溶媒に浸し、攪拌又は放置し、静置分離、濾過又は遠心分離などにより抽出液を得ることができる。次いで、得られた抽出液から溶媒を除去してもよい。抽出する際の甘草は、生のまま、または乾燥させたものでもよいが、保存の点から乾燥させたものが好ましい。また、上記甘草の形態は、原型、粉砕したもの、切断したもの又は粉末のいずれを用いてもよい。抽出温度は、一般に−２０〜１００℃、普通１〜９０℃、好ましくは２０〜８０℃で好適に実施できる。抽出時間は、普通０．１時間〜１ヶ月、好ましくは０．５時間〜７日間で好適に実施できる。
【００２３】
本発明において、甘草の疎水性抽出物を得るために用いる植物部位は、特に限定されず、甘草の全草、葉、茎、根、花、種子等のいずれを用いてもよい。
【００２４】
本発明において、甘草疎水性抽出物は抽出物のまま使用してもよいが、さらにカラム処理、脱臭処理、脱色処理などにより粗精製又は精製したものを使用してもよい。
【００２５】
本発明において、甘草疎水性抽出物は、その有効成分として、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン、およびヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物またその塩、エステルもしくは配糖体を含有していることが好ましい。該化合物の中でも、グラブリジンを含有し、かつグラブレン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン、およびヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を含有することが好ましい。さらに、グラブリジン及びグラブレンを含有し、かつグラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン、およびヒスパグラブリジンＢからなる群より選ばれた少なくとも１つの化合物を含有することが好ましい。とりわけ、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３’−ヒドロキシ−４’−Ｏ−メチルグラブリジン、４’−Ｏ−メチルグラブリジン、およびヒスパグラブリジンＢをすべて含有していることが最も好ましい。
【００２６】
本発明で使用されるグラブリジン（glabridin）、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジン（3'-hydroxyl-4'-O-methylglabridin）、４'−Ｏ−メチルグラブリジン（4'-O-methylglabridin）、ヒスパグラブリジンＢ（hyspaglabridin B）はイソフラバン（isoflavan）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（1）にて表される化合物である。
【００２７】
【化１】
2007063161.tif 000002
〔グラブリジンはＲ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＨ、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジンはＲ１＝ＯＨ、Ｒ２＝ＯＣＨ3、４'−Ｏ−メチルグラブリジンはＲ１＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＣＨ3、ヒスパグラブリジンＢはＲ１〜Ｒ２が−ＣＨ＝ＣＨ−Ｃ（ＣＨ3）2−Ｏ−で六員環を構成する。〕
本発明で使用されるグラブレン（glabrene）は、イソフラブ−３−エン（isoflav-3-ene）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（２）で表される化合物である。
【００２８】
【化２】
2007063161.tif 000003
本発明で使用されるグラブロール（glabrol）は、フラバノン（flavanone）に分類されるフラボノイドであり、下記一般式（３）で表される化合物である。
【００２９】
【化３】
2007063161.tif 000004
グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジン、４'−Ｏ−メチルグラブリジン、ヒスパグラブリジンＢは、甘草の中でもグリキリーザ・グラブラ（Glycyrrhiza glabra）に特異的に含まれる成分であり、他品種にはほとんど含まれていない。ただし、Ｇ．グラブラと他品種との雑種においては含まれる場合もある。該化合物は、ＯＤＳなどの逆相カラムを用いたＨＰＬＣ分析により、他のフラボノイド成分と分離して検出、定量することができる。上記化合物の脂肪酸エステルなどのエステルもまた、本発明で好適に使用しうる。該エステルは、任意の有機または無機酸とで形成することができる。本発明のために好適には、飲食用、医薬用または美容用に好適な酸を使用しうる。好ましくは脂肪酸を使用しうる。該脂肪酸は限定しないが、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸などの長鎖脂肪酸、および酢酸、酪酸などの短または中鎖脂肪酸が含まれる。
【００３０】
上記化合物の塩もまた、本発明で好適に使用しうる。上記化合物の溶液を、公的な飲食用、医薬用または美容用に許容される酸、例えば塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、またはそのリン酸の溶液と混合することによって形成しうる。さらに、上記成分が酸性部分を有する場合、好適な飲食用、医薬用または美容用に許容されるその塩は、アルカリ金属塩、例えばナトリウム、カリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩；および好適な有機配意子、例えば第四級アンモニウム塩とで形成される塩を含む。
【００３１】
上記化合物の１または２以上の水酸基を介して糖部分に結合されたその配糖体も、本発明で好適に使用しうる。該配糖体の糖成分は、任意の糖であり得る。該糖部分は限定されないが、単糖類、二糖類、三糖類、オリゴ糖類および多糖類を含みうる。
【００３２】
上記化合物は、少なくとも１つの不斉中心を有する場合、それらはエナンチオマーとして存在し得る。上記化合物が少なくとも２以上の不斉中心を有する場合、それらは、ジアステレオ異性体として存在し得る。そのような異性体およびその任意の割合の混合物は、本発明の範囲内に包含される。上記化合物は必要に応じて置換されていても良い。
【００３３】
本発明において、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジン、４'−Ｏ−メチルグラブリジン、ヒスパグラブリジンＢを得る方法は、特に限定されないが、Ｇ．グラブラ種の甘草より得ることができる。該化合物を甘草から得る場合、その方法は特に限定されないが、エタノール、酢酸エチル、アセトンなどの有機溶媒による抽出で得られる甘草疎水性抽出物に該化合物は含まれる。得られた甘草疎水性抽出物をそのまま用いてもよいし、該化合物の含有量を高めるためにさらに精製を行ってもよい。
【００３４】
また、該化合物は、その他植物等の天然由来、化学合成あるいは培養細胞などにより生合成した化合物のいずれも甘草疎水性抽出物に準じて本発明において使用することができる。また、該化合物は、精製したものを使用することができるが、飲食品、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして不適当な不純物を含有しない限り粗精製したものを使用することもできる。
【００３５】
本発明において、上記甘草疎水性抽出物はそのまま使用することも出来るが、好ましくは油脂に溶解した油脂組成物として用いられる。
【００３６】
本発明で使用される油脂は、好ましくは、中鎖脂肪酸トリグリセライドを含むグリセリン脂肪酸エステルであって、より好ましくは中鎖脂肪酸トリグリセライドを５０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステル、さらに好ましくは中鎖脂肪酸トリグリセライドを７０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステルである。ここでの中鎖脂肪酸トリグリセライドは、炭素原子数６〜１２の脂肪酸を構成脂肪酸とし、その脂肪酸の構成比率は特に限定されないが、炭素原子数８〜１０の脂肪酸の構成比率は５０重量％以上が好ましく、７０重量％以上がより好ましい。とりわけ、２０℃での比重が０．９４〜０．９６、２０℃での粘度が２３〜２８ｃＰの中鎖脂肪酸トリグリセライドがさらに好ましい。また、中鎖脂肪酸トリグリセライドは、天然由来のものやエステル交換などにより調製したものなど、いずれも使用することができる。
【００３７】
また、本発明で使用される油脂は、好ましくは部分グリセライドを含むグリセリン脂肪酸エステルであって、より好ましくは部分グリセライドを５０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステル、さらに好ましくは部分グリセライドを７０重量％以上含むグリセリン脂肪酸エステルである。ここでの部分グリセライドとは、ジグリセライド（１，２−ジアシルグリセロール、１，３−ジアシルグリセロール）又はモノグリセライド（１−モノアシルグリセロール、２−モノアシルグリセロール）であり、いずれを用いても良いし、両者が混合されたものを用いても良いが、加工性の観点からジグリセライドが好ましい。また、部分グリセライドは、天然由来のものやエステル交換などにより調製したものなど、いずれも使用することができる。
【００３８】
さらに、本発明で使用される油脂は、上記の中鎖脂肪酸トリグリセライドと部分グリセライドが混合されたものを用いても良いし、中鎖脂肪酸の部分グリセライドを用いることもできる。
【００３９】
本発明において、甘草疎水性抽出物を油脂に溶解する方法は、特に限定されず、通常の撹拌又は混合などの操作により実施できる。甘草疎水性抽出物中の不純物の種類やその含有量によっては、撹拌又は混合などの操作により該化合物を油脂に溶解した後に、濾過又は遠心分離などの操作により油脂に不溶な不純物を除去することが望ましい。また、甘草疎水性抽出物を用いる場合、予めエタノールなどの有機溶媒に溶解し、その溶液と油脂を混合した後に、有機溶媒を留去することもできる。甘草疎水性抽出物として、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジン、４'−Ｏ−メチルグラブリジン、ヒスパグラブリジンＢなどが高純度に含まれるものを用いる場合や、該化合物の精製品を用いる場合、容易に均一な溶液を得ることができる。
【００４０】
本発明の油脂組成物中における甘草疎水性抽出物の割合は特に限定されないが、その有効成分として、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジン、４'−Ｏ−メチルグラブリジン、ヒスパグラブリジンＢを含む場合には、該化合物が総量として約０．０１〜３０重量％含有されていることが好ましく、さらに約０．１〜３０重量％含有されていることがより好ましく、とりわけ約１〜１０重量％含有されていることが特に好ましい。約３０重量％以上では該化合物を油脂に溶解できない場合がある。また、約０．０１重量％以下では本発明の効果が充分に発揮されない場合がある。
【００４１】
本発明の急性相反応タンパク質転写抑制活性を有する組成物は、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患を予防するために有用であるが、これらの疾患を改善・処置することも可能である。
【００４２】
本発明の急性相反応タンパク質転写抑制剤及び該急性相反応タンパク質転写抑制剤を含有する組成物は、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患の予防・処置用組成物であり、飲食用及び医薬用として利用することができ、その形態は限定されず、例えば、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）、機能性食品、栄養補助食品などの飲食品、あるいはOTCなど容易に入手可能な医薬品又は医薬部外品などとして利用できる。
【００４３】
本発明の組成物における前記急性相反応タンパク質転写抑制剤の含有量は、特に限定されないが、抽出された固形分重量として、組成物重量基準で好ましくは0.001〜99.999重量％、より好ましくは0.01〜99.9重量％である。
【００４４】
本発明の急性相反応タンパク質転写抑制剤および、これを有効成分とする急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患の予防及び／又は改善・処置用組成物は、そのまま直接摂取することもできるし、また、公知の担体や助剤などの添加剤を使用して、カプセル剤、錠剤、顆粒剤など服用しやすい形態に成型して摂取することもできる。また、栄養強化を目的として、ビタミンA、C、D、Eなどの各種ビタミン類を添加、併用して用いることもできる。これらの成型剤における本発明の急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患の予防作用を有する組成物の含有量は、好ましくは０．１〜１００重量％、より好ましくは１０〜９０重量％である。さらに、飲食物材料に混合して、チューインガム、チョコレート、キャンディー、ゼリー、ビスケット、クラッカーなどの菓子類；アイスクリーム、氷菓などの冷菓類；茶、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンクなどの飲料；うどん、中華麺、スパゲティー、即席麺などの麺類；蒲鉾、竹輪、はんぺんなどの練り製品；ドレッシング、マヨネーズ、ソースなどの調味料；マーガリン、バター、サラダ油などの油脂類；パン、ハム、スープ、レトルト食品、冷凍食品など、すべての飲食物に使用することができる。これら飲食用の、炎症応答から生じる病的様態の予防作用を有する組成物を摂取する場合、その摂取量は当該抽出物として成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００mg／kg体重、より好ましくは１〜３００mg／kg体重である。
【００４５】
医薬品として用いる場合は、その剤形は特に限定されず、例えば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、注射剤、座薬、貼付剤などが挙げられる。製剤化においては、薬剤学的に許容される他の製剤素材、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などを適宜添加して調製することができる。これら製剤の投与量としては、当該抽出物換算で成人一人一日当たり、好ましくは０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重を１回ないし数回に分けて投与する。
【００４６】
医薬部外品として用いる場合は、必要に応じて他の添加剤などを添加して、例えば、軟膏、リニメント剤、エアゾール剤、クリーム、石鹸、洗顔料、全身洗浄料、化粧水、ローション、入浴剤などに使用することができ、局所的に用いることができる。
【実施例】
【００４７】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４８】
（実施例１）
アフガン産甘草（Ｇ．グラブラ）９．８５ｋｇからエタノール抽出（濃度９９．５％容量のエタノール４９．２５Ｌ使用、４５℃、２時間、２回抽出）、次いで濃縮により濃縮液４．４Ｌを得た。そのうち３Ｌをさらに濃縮して、活性炭処理、濃縮により甘草疎水性抽出物を含有したエタノール溶液８１１．２ｇを得た。濃縮液の残り１．４Ｌは比較例１に使用した。
【００４９】
上記のエタノール溶液６２９．２ｇ（甘草疎水性抽出物１２５．８ｇを含有する）と中鎖脂肪酸トリグリセライド（ＭＣＴ）であるアクターＭ−２（理研ビタミン（株）：脂肪酸組成はＣ８：Ｃ１０＝９９：１）１８７．６ｇを混合し、約８０℃に保温しながら約１時間撹拌した後、減圧濃縮によりエタノールを除去した。吸引ろ過により不溶分を分離し、ろ別後のろ液にＭＣＴ４５．７ｇを更に添加して、ＭＣＴ溶液を２９７．０ｇ得た。
【００５０】
得られたＭＣＴ溶液１ｇをＨＰＬＣ用メタノールに溶解し、全量を１００ｍｌとした。この溶液を試料として下記の条件にてＨＰＬＣ分析を行った結果、ＭＣＴ溶液１ｇあたりにグラブレン、グラブリジン、グラブロール、４'−Ｏ−メチルグラブリジンがそれぞれ６．６ｍｇ、３０．８ｍｇ、１２．６ｍｇ、３．７ｍｇ含まれていた。
【００５１】
ＨＰＬＣ分析条件
分析カラムは、Ｊ’ｓｐｈｅｒｅ  ＯＤＳ−Ｈ８０，４．６×２５０ｍｍ（ワイエムシィ）をカラム温度４０℃にて使用した。移動相は、２０ｍＭリン酸水溶液に対してアセトニトリルの比率を分析開始から２０ｍｉｎまで３５％で一定とし、２０ｍｉｎ以降７５ｍｉｎ後に７０％となるように一定の比率で上昇させ、７５ｍｉｎから８０ｍｉｎまで８０％で一定とするグラジエント条件で、流速１ｍｌ／ｍｉｎとした。注入量は２０μｌとし、検出波長は２５４ｎｍとした。各化合物の保持時間は、グラブレンが４０．０ｍｉｎ、グラブリジンが５０．２ｍｉｎ、グラブロールが５８．３ｍｉｎ、４'−Ｏ−メチルグラブリジンが６６．８ｍｉｎであった。
【００５２】
（比較例1）
実施例１にて使用した濃縮液を乾固・粉砕して得られた甘草疎水性抽出物１００ｍｇをＨＰＬＣ用メタノールに溶解し、全量を１００ｍｌとした。この溶液を試料としてＨＰＬＣ分析を行った結果、甘草疎水性抽出物１ｇ当たりグラブレン、グラブリジン、グラブロール、４'−Ｏ−メチルグラブリジンはそれぞれ１６．５ｍｇ、９０．４ｍｇ、３４．１ｍｇ、９．３ｍｇ含まれていた。
【００５３】
（比較例２）
実施例１にて使用したエタノール溶液１００ｍｇをＨＰＬＣ用メタノールに溶解し、全量を２０ｍｌとした。この溶液を試料としてＨＰＬＣ分析を行った結果、エタノール溶液１ｇあたりグラブレン、グラブリジン、グラブロール、４'−Ｏ−メチルグラブリジンはそれぞれ３．４ｍｇ、１８．７ｍｇ、７．１ｍｇ、１．９ｍｇ含まれていた。
【００５４】
（実施例２）
動物試験
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雌、８週齢）に脂肪分を３０％含む餌（高脂肪・高糖分食）を自由摂取にて８週間与えた。なお餌には、カゼイン２５重量％、コーンスターチ１４．８６９重量％、シュークロース２０重量％、大豆油２重量％、ラード１４重量％、牛脂１４重量％、セルロースパウダー５重量％、ＡＩＮ−９３ミネラル混合３．５重量％、ＡＩＮ−９３ビタミン混合１重量％、重酒石酸コリン０．２５重量％、第三ブチルヒドロキノン０．００６重量％、Ｌ−シスチン０．３７５重量％、の組成である半固形化精製試料（オリエンタル酵母（株））を用いた。
【００５５】
その後、マウスを２群（各群１０匹）に分け、１群（サンプル投与群）には実施例１のＭＣＴ溶液を添加した粉末高脂肪食・高糖分食（成分は上記と同様）を試料として、他の群（コントロール群）にはＭＣＴのみを添加した粉末高脂肪食・高糖分食（成分は上記と同様）を試料として、それぞれ自由摂取にて８週間与えた。
【００５６】
サンプル投与後、約１６時間絶食した後エーテル麻酔下で全採血した。その後解剖し、肝臓の一部をＲＮＡｌａｔｅｒ（Ａｍｂｉｏｎ社）中に浸し−80℃にて保管した。サンプル投与群とコントロール群から任意の３個体の肝臓から以下の方法によりトータルＲＮＡを得た。
【００５７】
トータルＲＮＡの調製
凍結したＲＮＡｌａｔｅｒ中の組織片を氷中で解凍後、半量をＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）の入った１．５ｍｌチューブに移してホモジナイズを行った。沈殿物を除去した後、クロロホルムを添加して、ＲＮＡが溶解している水層を分離した。次にイソプロパノールによりＲＮＡを析出させ、そのペレットを７５％エタノールで洗浄した。その後、ペレットをＲＮａｓｅ  Ｆｒｅｅ  Ｗａｔｅｒで溶解した。抽出したトータルＲＮＡのうち、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）を用いて精製した。それぞれ３個体のトータルＲＮＡを等量混合し、コントロール群とサンプル投与群の遺伝子発現量の差異をＭｏｕｓｅ  Ｏｌｉｇｏ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いた競合ハイブリダイゼーションで解析した。
【００５８】
競合ハイブリダイゼーション
上記の方法によって得たトータルＲＮＡ（１０μｇ）を、ａｍｉｎｏａｌｌｙｌ−ｄＵＴＰ存在下で逆転写酵素反応を行い、ａｍｉｎｏａｌｌｙｌ−ｄＵＴＰが導入されたｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡとＣｙ−ｄｙｅとのカップリング反応にてｃＤＮＡを蛍光標識した。なお、コントロール群由来のｃＤＮＡをＣｙ３にて、サンプル投与群由来のｃＤＮＡをＣｙ５にて標識した。Ｃｙ３またはＣｙ５で標識したｃＤＮＡを等量ずつ、６０℃で１７時間ＤＮＡマイクロアレイ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｍｏｕｓｅ  Ｏｌｉｇｏ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｇ４１２１Ａ）に結合させ、ＤＮＡ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ｓｃａｎｎｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）にてスキャニングを行った。
【００５９】
遺伝子発現解析
スキャニングにて得られた画像データから数値データへの変換は専用ソフトＦｅａｔｕｒｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（Ａｇｉｌｅｎｔ社）を用いて行った。ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌの蛍光値をバックグラウンドとし各スポットの蛍光値から差し引いた。有効スポットの判定基準としては、Ａｇｉｌｅｎｔ社の基準に従い、シグナル値がバックグラウンドの標準偏差の２．６倍以上であり、かつスポットの蛍光強度が十分均一であるスポットを有意と判定した。コントロール群とサンプル投与群のノーマリゼーションは、全体のスポットを用いて正規化する方法（グローバルノーマリゼーション）を用いた。
【００６０】
サンプル投与によって発現量が変動した急性相反応関連遺伝子の発現比を求めた。その結果を表１に示す。
【００６１】
【表１】
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表１より明らかなように、グラブレン、グラブリジン、グラブロール、３'−ヒドロキシ−４'−Ｏ−メチルグラブリジン、４'−Ｏ−メチルグラブリジン、ヒスパグラブリジンＢを含むＭＣＴ溶液摂取により急性相反応タンパク質（ＣＲＰ・ＳＡＡ・ハプトグロビン・フィブリノーゲン・セルロプラスミン）の発現が抑制された。
【００６２】
（実施例３）  ソフトカプセル剤の製造（１）
実施例１のＭＣＴ溶液を、ロータリー式ソフトカプセル製造装置を用いてゼラチン皮膜に圧入し、内容量３５０ｍｇのソフトカプセル剤を得た。このカプセル当たりグラブレン、グラブリジン、グラブロール、４'−Ｏ−メチルグラブリジンはそれぞれ２．３ｍｇ、１０．８ｍｇ、４．４ｍｇ、１．３ｍｇ含まれていた（総量１８．８ｍｇ、含有量５．４重量％）。
【００６３】
（実施例４）  ソフトカプセル剤の製造（２）
ＭＣＴ（アクターＭ−２、理研ビタミン）５７重量部にジグリセリンモノオレイン酸エステル（ＤＯ−１００Ｖ、理研ビタミン）３重量部を溶解し、これに実施例１のＭＣＴ溶液４０重量部を撹拌しながら添加して溶液を調製した。
【００６４】
この溶液を、ロータリー式ソフトカプセル製造装置を用いてゼラチン皮膜に圧入し、内容量３５０ｍｇのソフトカプセル剤を得た。このカプセル当たりグラブレン、グラブリジン、グラブロール、４'−Ｏ−メチルグラブリジンはそれぞれ０．９ｍｇ、４．３ｍｇ、１．８ｍｇ、０．５ｍｇ含まれていた（総量７．５ｍｇ、含有量２．１重量％）。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明によれば、健康食品や保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品）などの飲食品、又は、医薬品、医薬部外品、化粧品などに利用することができる急性相反応タンパク質転写抑制剤および該急性相反応タンパク質転写抑制剤を含有する組成物を得ることができる。
【００６６】
本発明の急性相反応タンパク質転写抑制剤は、優れた急性相反応タンパク質転写抑制活性を有しており、急性相反応タンパク質によって引き起こされる組織損傷等に関連する疾患の予防及び／又は改善・処置に有効である。