(57)【要約】【課題】  天然抽出物を含有したホスホリパーゼＡ２阻害剤を提供する。【解決手段】  アルニカ、ゲンチアナを水、親水性有機溶媒またはそれらの混合物で抽出処理して得られる抽出物がホスホリパーゼＡ２阻害作用を有することを利用する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルニカ及びゲンチアナの抽出物を有効成分として少なくとも１種以上含有することを特徴とするホスホリパーゼＡ２阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホリパーゼＡ２阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症性の疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その原因の一つとしてホスホリパーゼＡ２ の活性化が知られている。
【０００３】
ホスホリパーゼＡ２ は、アラキドン酸の代謝経路であるアラキドン酸カスケードの重要酵素であって、ホスホリパーゼＡ２ が過剰に活性化するとアラキドン酸の代謝に異常が起こり、炎症、アレルギー、喘息、虚血、心筋梗塞等を引き起こす。このため、ホスホリパーゼＡ２ の作用を阻害する物質により上記疾患に対処する試みがなされており、ホスホリパーゼＡ２ 阻害物質として、メパクリン、パラブロモフェナシルブロミド、デキサメタゾン等が使用されてきたが、これらの物質はいずれも合成品であり、副作用が問題となっていた。
【０００４】
そこで、ホスホリパーゼＡ２ を阻害する物質を天然物から抽出して、アレルギー疾患性疾患や炎症性疾患を予防・治療することが試みられている。例えば、ケイタンカ抽出物（特許文献１）、コウサンフウ抽出物（特許文献２）等が報告されている。
しかしながら、安全性、及び生産性に優れ、かつ安価でありながら、高いホスホリパーゼＡ２ 阻害作用を有する天然系の抗炎症剤に対する需要者の要望は極めて強く、未だ十分満足し得るものが提供されていないのが現状である。
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−９７１５１号公報
【特許文献２】特開２００２−５３４７７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、 天然物の中からホスホリパーゼＡ２ 阻害作用を有するものを見出し、それを有効成分とするホスホリパーゼＡ２ 阻害剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記課題を解決するために本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、アルニカ及びゲンチアナからの抽出物がホスホリパーゼＡ２阻害作用を有し、ホスホリパーゼＡ２阻害剤として有効であることを知見した。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、ホスホリパーゼＡ２阻害剤が提供される。本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤は皮膚の炎症を予防及び／又は改善するのに有用である。また、本発明により、ホスホリパーゼＡ２阻害作用を有する安全性に優れた皮膚化粧料及び飲食品が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
抽出原料として用いるアルニカ（学名：Ａｒｎｉｃａ  ｍｏｎｔａｎａ）は、キク科に属する多年草であって、ヨーロッパから南ロシアまでの山岳地方の酸性土壌の牧草地に生育しており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として用いるアルニカの構成部位は特に限定されるものではなく、例えば花蕾部、葉部、枝部、種子、樹皮、根部等の構成部位を抽出原料として用いることができる。これらの構成部位のうち、特に花を抽出原料として用いることが好ましい。
【００１０】
また、抽出原料として用いるゲンチアナ（学名：Ｇｅｎｔｉａｎａ  ｌｕｔｅａ）は、ヨーロッパ山地に育つ多年草植物でこれらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として用いるゲンチアナの構成部位は特開に限定されるものではなく、例えば花蕾部、葉部、枝部、種子、樹皮、根部等の構成部位を抽出原料として用いることができる。これらの構成部位のうち、特に根を抽出原料として用いることが好ましい。
【００１１】
抽出原料として使用する前記の植物は、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。各抽出原料は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１２】
抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶媒を使用するのが好ましい。抽出原料に含まれるホスホリパーゼＡ２阻害作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。
【００１３】
好適な抽出溶媒の具体例としては、水、低級脂肪族アルコール、含水の低級脂肪族アルコール等を例示でき、これらを単独で、又はこれら２種以上の混合物として使用することができる。好適な低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等を例示することができる。
【００１４】
抽出溶媒として使用し得る水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１５】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比を９：１〜１：９（質量比）とすることができる。
【００１６】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を溶出させる。この際、抽出条件は抽出原料等に応じて適宜調整し得るが、抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）で、抽出時間は通常１〜３時間、抽出温度は通常、常温〜９５℃である。
【００１７】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過して抽出残渣を除くことによって、抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００１８】
得られた抽出液はそのままでもホスホリパーゼＡ２阻害剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。また、抽出原料となる植物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００１９】
精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２０】
アルニカ及びゲンチアナからの抽出物は、そのままでもホスホリパーゼＡ２阻害剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して提供することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。
【００２１】
本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤は皮膚の炎症を予防及び／又は改善することができると共に、皮膚に適用した場合の安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。皮膚化粧料には、ホスホリパーゼＡ２阻害剤のみを配合してもよいし、その他の有効素材を組み合わせて配合してもよい。
【００２２】
本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤を配合し得る皮膚化粧料は特に限定されないが、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤等を例示することができる。
【００２３】
本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤の配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は標準的な抽出物に換算して約０．０１〜１０質量％である。
【００２４】
本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤を配合する皮膚化粧料には、ホスホリパーゼＡ２阻害作用の妨げにならない限り、皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を配合することができ、皮膚の老化防止・改善に関し、本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤のみが主剤となるものに限られるわけではない。
【００２５】
本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤は皮膚の炎症を予防及び／又は改善することができると共に、安全性に優れているため、飲食品に配合するのに好適である。その場合の配合量は、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して成人１日当たりの抽出物摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが適当である。
【００２６】
本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、 清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物などが挙げられる。
【００２７】
以上説明した本発明のホスホリパーゼＡ２阻害剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００２８】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明の範囲はこれらの実施例等に限定されるものではない。
【００２９】
［製造例１］
アルニカ及びゲンチアナの粗粉砕物それぞれ１００ｇに抽出溶媒として水、５０％エタノール又はエタノールを１０００ｍｌ加え、還流抽出器で８０℃にて２時間抽出し、濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮を行い、乾燥して該抽出物を得た。各抽出物の収率は表１に示す。
【００３０】
［表１］抽出物の収率
原料       水（％） ５０％エタノール（％） エタノール（％）
アルニカ        ８．４            ６．０                  ４．２
ゲンチアナ      ５．８            ３．７                  ２．２
【００３１】
［試験例１］ホスホリパーゼＡ２阻害試験
ラット白血病細胞のＲＢＬ−２Ｈ３細胞を７５ｃｍ２のフラスコで１５ｖ／ｖ％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地にて３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの下で培養し、常法により細胞を集めた。得られた細胞を１５ｖ／ｖ％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地にて５×１０５個／ｍＬになるよう調製し、さらに〔３Ｈ〕アラキドン酸（５０μＣｉ／５００μＬ）を、３μＬ／１０ｍＬの割合で加えた。得られた調製液を２４穴プレートに１ｍＬ播種し、３７℃、５％ＣＯ２９５％ａｉｒの下で一晩培養した。各ウェル中の培地を捨て、ＰＢＳ（−）で洗浄後、無血清ＭＥＭ培地を加え、３７℃で３０分間、インキュベーションした。次いで、試料を溶解した溶液を各穴に加え、同様に１０分間インキュベーションした。さらに、１ｍｍｏｌ／Ｌ Ａ２３１８７ １０μＬを加え、３７℃で５分間インキュベーションした。反応後、水冷下に上清５００μＬを取り、シンチレーションカクテル６ｍＬを加えて液体シンチレーションカウンターで放射活性を測定した。同様にして、空試験（Ａ２３１８７刺激なし）およびコントロール（試料溶液の溶媒）について測定し、次式によりホスホリパーゼＡ２活性阻害率を求めた。  
阻害率（％）＝〔（Ｂ−Ａ）／（Ｂ−Ｃ）〕×１００
Ａ：試料添加時の放射活性
Ｂ：コントロールの放射活性
Ｃ：空試験の放射活性
試料濃度を段階的に減少させて上記測定を行い、阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
【００３２】
［表２］ホスホリパーゼＡ２阻害作用
被験試料               ＩＣ５０（ｐｐｍ） 
アルニカ・水抽出物                                ７６．５
アルニカ・５０％エタノール抽出物                  ２７．６
アルニカ・エタノール抽出物                        ６８．６
ゲンチアナ・水抽出物                            １９８．３
ゲンチアナ・５０％エタノール抽出物              １８５．１
ゲンチアナ・エタノール抽出物                    １９２．４
表２に示すように、アルニカ及びゲンチアナからの抽出物は濃度依存的にホスホリパーゼＡ２阻害作用を示すことが確認された。