(57)【要約】【課題】シリコン微粒子に蛋白質が固定化され、耐酸化性、分散安定性に優れ、特定の抗原タンパク質を吸着した場合にも凝集することがなく、紫外線を照射すると容易に発色するためにバイオマーカー、イムノクロマト発色試薬等として好適に使用可能なタンパク質固定化シリコン微粒子分散液を提供する。【解決手段】平均粒子径が１〜２００ｎｍの範囲にあるシリコン微粒子にタンパク質が固定されてなるタンパク質固定化シリコン微粒子が分散してなることを特徴とするタンパク質固定化シリコン微粒子分散液。  前記タンパク質固定化シリコン微粒子の平均粒子径が１〜２５０ｎｍの範囲にある。前記タンパク質の固定化量がシリコン微粒子１重量部に対して０．２５〜０．７５重量部の範囲にある。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
平均粒子径が１〜２００ｎｍの範囲にあるシリコン微粒子にタンパク質が固定されてなるタンパク質固定化シリコン微粒子が分散してなることを特徴とするタンパク質固定化シリコン微粒子分散液。
【請求項２】
前記タンパク質固定化シリコン微粒子の平均粒子径が１〜２５０ｎｍの範囲にあることを特徴とする請求項１に記載のタンパク質固定化シリコン微粒子分散液。
【請求項３】
前記タンパク質の固定化量がシリコン微粒子１重量部に対して０．２５〜０．７５重量部の範囲にあることを特徴とする請求項１または２に記載のタンパク質固定化シリコン微粒子分散液。
【請求項４】
さらに、カチオン性成分および／またはアニオン性成分を含んでなり、カチオン性成分のモル数（ＭC）とシリコンのモル数（ＭS）とのモル比（ＭC／ＭS）が８〜１７の範囲にあり、アニオン性成分のモル数（ＭA）とシリコンのモル数（ＭS）とのモル比（ＭA／ＭS）が３〜１０の範囲にあることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のタンパク質固定化用金属微粒子分散液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シリコン微粒子に蛋白質が固定化されており、耐酸化性、分散安定性に優れ、特定の抗原タンパク質を吸着した場合にも凝集することがなく、紫外線を照射すると容易に発色するためにバイオマーカー、イムノクロマト発色試薬等として好適に用いることのできるタンパク質固定化シリコン微粒子分散液に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、タンパク質の染色（バイオマーカー）、イムノクロマト等には金属微粒子に抗体用タンパク質を固定化したＡu、Ａg、Ｐd、Ｐt、Ｒh、Ｒu、Ｃu等からなる金属微粒子が
用いられる。
【０００３】
しかしながら、従来の金属微粒子は、タンパク質を固定化する際、あるいは抗体用タンパク質を固定化した金属微粒子による検査の際、金属微粒子あるいは抗体用タンパク質を固定化した金属微粒子が凝集し、常法によって可視光を照射しても発色が不鮮明となり検査の精度が低下する等の問題があった。
【０００４】
また、タンパク質固定化金属微粒子分散液を長期にわたって保存した場合、特にタンパク質の固定化量を増大させるために粒子径の小さい金属微粒子を用いると、粒子が凝集したり、沈降したりすることがあり、さらに、金属微粒子が酸化されるためか性能が劣化するなどの問題があった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このため、タンパク質の固定化量を多くできるのみならず、微粒子が凝集したり沈降したりすることもなく、さらには金属微粒子が酸化されることもなく、鮮明に発色可能なタンパク質固定化シリコン微粒子の分散液の出現が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
このような情況のもと、本発明者等は上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、シリコン微粒子を使用し、これに抗体用タンパク質を固定化すれば、シリコン微粒子を凝集させることなく蛋白質を高率で固定化することができるとともに、蛋白質等を固定化した後も凝集することなく安定であることを見出して、本発明を完成するに至った。
【０００７】
本発明に係るタンパク質固定化シリコン微粒子分散液の構成要件は以下の通りである。[1]平均粒子径が１〜２００ｎｍの範囲にあるシリコン微粒子に、タンパク質が固定され
てなるタンパク質固定化シリコン微粒子が分散してなるタンパク質固定化シリコン微粒子分散液。
【０００８】
[2]前記タンパク質固定化シリコン微粒子の平均粒子径が１〜２５０ｎｍの範囲にある[1]のタンパク質固定化シリコン微粒子分散液。
[3]前記タンパク質の固定化量がシリコン微粒子１重量部に対して０．２５〜０．７５重
量部の範囲にある[1]または[2]のタンパク質固定化シリコン微粒子分散液。
[4]さらに、カチオン性成分および／またはアニオン性成分を含んでなり、カチオン性成
分のモル数（ＭC）とシリコンのモル数（ＭS）とのモル比（ＭC／ＭS）が８〜１７の範囲にあり、アニオン性成分のモル数（ＭA）とシリコンのモル数（ＭS）とのモル比（ＭA／
ＭS）が３〜１０の範囲にある[1]〜[3]のタンパク質固定化用金属微粒子分散液。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、従来の金等の金属微粒子に代わりシリコン微粒子を使用し、該微粒子にタンパク質が固定化されているので抗体タンパク質を固定化した後も凝集することなく安定に分散状態を維持することができ、さらに、抗原タンパク質と接触させても凝集することがなく、紫外線の照射によって鮮明に発色し、このため、イムノクロマト用等に好適に用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下に、本発明に係るタンパク質固定化シリコン微粒子分散液について説明する。
本発明に係るタンパク質固定化シリコン微粒子分散液はタンパク質が固定されてなるシリコン微粒子を含む。
シリコン微粒子
シリコン微粒子は平均粒子径が１〜２００ｎｍ、さらには１．５〜１００ｎｍの範囲にあるものが好適に用いられる。
【００１１】
この範囲にあるものは、タンパク質の吸着効率が高く、また分散液の安定性も高い。
シリコン微粒子の平均粒子径が小さいものは、抗体蛋白質の吸着により凝集することがあり、分散液の安定性も不充分となることがある。シリコン微粒子の平均粒子径が大きすぎると、シリコン微粒子が沈降し易く、安定性が不充分となることがあり、さらにタンパク質が吸着できる表面積が低下するため、抗体蛋白質を吸着させて抗原抗体反応に用いた場合に発色性が不充分となることがある。
【００１２】
このようなシリコン微粒子の粒子径の測定方法は、粒子径によって異なり、１０ｎｍ以下では透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いて測定し、１０ｎｍを超えると走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）、ＢＥＴ法、光散乱法等順次粒子径に応じて適宜選択して測定することができる。
【００１３】
本発明に用いるシリコン微粒子は金属シリコン微粒子であってもよく、また表面に酸素が吸着していたり、表面がSiO2層となっていてもよい。
表面のSiO2層が多くなると、イオン性が強くなるためにバンドギャップが広がり抗原抗体反応に用いた場合に発色性が劣る場合があり好ましくない。
【００１４】
さらに、シリコン微粒子はＸ線的に結晶質であることが好ましい。シリコン微粒子がＸ線的に結晶質であると、抗原抗体反応に用いた場合に発色性に優れている。
このようなシリコン微粒子は、例えば、佐藤、和泉（光の話題：Ｎｏ、１３９−２、２００４年３月）の方法によって得ることができる。
【００１５】
具体的には、(1)スパッタ法によりＳiとＳiＯ2の混合ターゲットによりＳiウエハー上
に成膜したＳi-ＳiＯ2混合膜を熱処理して結晶シリコン粒子を析出させた後、結晶シリコン粒子をＨＦ溶液にて抽出する方法、(2)Ｓi結晶基板(シリコンウエハー)をメノウ乳鉢、ボールミルなどで１０〜１０００μｍ程度に粉砕してシリコン粒子とし、ＨＦ-ＨＮＯ3-
ＣＨ3ＣＯＯＨ混合水溶液でＳi粒子表面をエッチングして所望する粒子径として抽出する方法等がある。
【００１６】
タンパク質
本発明では、上記シリコン微粒子にタンパク質が固定されている。
タンパク質としては特に制限されるものではないが、本発明では、イムノクロマト等抗原抗体反応に用いられる従来公知の抗体タンパク質を用いることができる。
【００１７】
具体的には、アルブミン、ヘモグロビン、デオキシリボ核酸、リボ核酸、リパーゼ、ア
ミラーゼ、グロブリン等が挙げられる。なかでも、アルブミン、グロブリンは好適に用いることができる。
【００１８】
タンパク質の固定化量は、シリコン微粒子１重量部当たり０．２５〜０．７５重量部、さらには０．３〜０．６重量部の範囲にあることが好ましい。この範囲にあると、たとえば抗原抗体反応に使用する場合に、効率が高く、また発色も明確であり、シリコン微粒子が凝集することもない。
【００１９】
タンパク質の固定化量が少ないと、抗原タンパク質が少ないために抗原抗体反応の効率が低下する場合がある。タンパク質の固定化量が多すぎても、シリコン微粒子が凝集することがあり、抗原抗体反応が阻害される場合がある。
【００２０】
本発明に係る分散液は、上記したシリコン微粒子が分散媒中に分散してなる。
分散媒
分散媒としては、水の他、アルコール、グリコール等の従来公知の有機分散媒およびこれらの混合分散媒を用いることができる。
【００２１】
具体的には、水以外の分散媒としては、メタノール、エタノール、n-プロパノール、4-ヒドロキシ-4-メチル-2-ペンタノン、エチレングリコール等が挙げられる。
分散液中のシリコン微粒子の濃度は、微粒子が安定に分散することができれば特に制限はないが、通常、シリコン微粒子の固形分（固定化されたタンパク質を含む）として５ｐｐｍ〜５重量％の範囲にあることが望ましい。
【００２２】
また、タンパク質固定化シリコン微粒子分散液の濃度は、検査等の使用に際して適宜、希釈あるいは濃縮されてもよい。
カチオン性成分および／またはアニオン性成分
なお、分散液には、さらに必要に応じて、カチオン性成分および／またはアニオン性成分を含んでいてもよい。カチオン性成分およびカチオン性成分のモル数（ＭC）とシリコ
ンのモル数（ＭS）とのモル比（ＭC／ＭS）が８〜１７、さらには９〜１５の範囲にあり
、アニオン性成分のモル数（ＭA）とシリコンのモル数（ＭS）とのモル比（ＭA／ＭS）が３〜１０、さらには３〜７の範囲にあることが好ましい。
【００２３】
カチオン性成分としては、Ｎａ+、Ｋ+等のアルカリ金属カチオン、ＮＨ4+等が挙げられる。
アニオン性成分としては、Ｃｌ-、ＳＯ42-、ＮＯ3-、ＰＯ42-、酒石酸、リンゴ酸、コ
ハク酸、グルコン酸、L-グルタミン酸、マレイン酸、フタル酸、アルギン酸、シュウ酸、L-アスコルビン酸、クエン酸の有機酸アニオン等が挙げられる。
【００２４】
通常これらは、塩やアルカリ塩、酸、有機酸、有機酸塩として添加され、たとえば塩としては、NaOH、KOH、NH4OH、NaCl、KNO3、HCl、H2SO4、HNO3などが用いられる。
このようなアニオン、カチオン性成分を含んでいると、タンパク質を有効的にシリコン微粒子上に固定できる。特にモル比（ＭC／ＭS）、（ＭA／ＭS）が前記範囲にあれば、負電荷と正電荷とのバランスに優れ、タンパク質の固定化効果も高い。
【００２５】
（ＭC／ＭS）、（ＭA／ＭS）が前記範囲の下限未満だと、電荷が少なすぎて、タンパク質の固定化が困難となり、また（ＭC／ＭS）、（ＭA／ＭS）が前記範囲を越えると静電反発により、タンパク質の固定化が困難となることがある。
【００２６】
タンパク質固定化シリコン微粒子分散液の製造方法
上記分散液は、たとえば以下の製造方法で調製することができる。
まず、前記したシリコン微粒子の分散液を調製する。分散液中のシリコン微粒子の濃度はシリコンとして５ｐｐｍ〜５重量％、さらには１０ｐｐｍ〜１重量％の範囲にあることが好ましい。この濃度範囲にあれば、得られた分散液をそのまま基材に塗布できる。なお濃度を高くしても、タンパク質を固定化する際に、シリコン微粒子が凝集し易く粗大粒子を生成したり沈降することがある。
【００２７】
このとき、必要に応じて、カチオン性成分および／またはアニオン性成分を添加してもよい。カチオン性成分および／またはアニオン性成分の種類、およびその添加量は、前記した通りであり、最終的に分散液中に含まれる量が前記範囲となるように添加される。
【００２８】
ついで、前記シリコン微粒子分散液を撹拌しながら前記した固定化用タンパク質をシリコン微粒子１重量部当たり０．２５〜０．７５重量部、好ましくは０．３〜０．６重量部の範囲となるように添加する。
【００２９】
添加されたタンパク質の全量が固定化することも可能であるが、一部がシリコン微粒子上に固定化され、他は分散液中に存在していてもよい。上に固定化され、他は分散液中に存在していてもよい。安定化剤、カチオン性成分、アニオン性成分の含有量によっても異なるものの、通常、固定化率は、３５〜９５重量％である。
【００３０】
固定化率を高めるためには、タンパク質が過剰とならないようにすることが重要であるが、さらに、安定化剤、カチオン性成分、アニオン性成分などの調整によって粒子凝集が起こらないようにすることが重要である。
【００３１】
固定化用タンパク質を添加したのち、暫く放置してもよい。このとき攪拌はしていてもいなくともよい。
なお、タンパク質固定化シリコン微粒子分散液の濃度は、必要に応じて、濃縮したり、希釈してもよい。
［実施例］
以下、実施例により説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
［実施例１］
タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-1)分散液の調製
シリコンウェハー(住友スチックス社製：FZ基板)を、ボールミルを用いて粒子径が約５〜１００μｍになるまで粉砕し、沈降分離法により分級して平均粒子径１０μｍ（ＣＶ値：３％以下）のシリコン粒子を採取した。ついで、かかるシリコン粒子をＨＦ：ＨＮＯ3
：ＣＨ3ＣＯＯＨ：Ｈ2Ｏ混合水溶液（ＨＦ：０．００５ｍｏｌ/Ｌ、ＨＮＯ3：０．０１ｍｏｌ/Ｌ、ＣＨ3ＣＯＯＨ：０．０３ｍｏｌ/Ｌ）のエッチング液に１８０分間浸漬し、平
均粒子径２．５ｎｍのシリコン微粒子を得た。
【００３２】
ついで、直ちに限外濾過法により洗浄し、濃縮してＳｉとしての濃度が５０ｐｐｍのシリコン微粒子分散液(1)を得た。ついで、シリコン微粒子(1)に対するNa、Clのモル比がそれぞれ９、５になるように水酸化ナトリウム、塩酸を加えてタンパク質固定化用シリコン微粒子(P-1)分散液を得た。その分散液は自然光下では無色透明で、紫外線照射（波長245nm）下では赤色透明であった。
タンパク質固定化シリコン微粒子(M-1)分散液の調製
タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-1)分散液８０ｇにウシ血清アルブミン（BSA）２ｍｇを添加し、室温にて１０分間放置してタンパク質固定化金属微粒子(M-1)分散液を調
製した。
【００３３】
タンパク質固定化シリコン微粒子(M-1)分散液について、以下のようにしてタンパク質
の固定化率および固定化量を求めた。
タンパク質固定化シリコン微粒子(P-1)分散液４０ｇを遠心分離して固定化金属粒子を
沈降させ、上澄み液を採取した。採取した上澄み液１ｇとBCA試薬２０ｇとを混合して６
０℃にて３０分攪拌したのち、冷却した溶液の吸収スペクトルを測定した。一方、超純水８０ｇとウシ血清アルブミン（BSA）２ｍｇとを混合、遠心分離して得られた上澄み液1ｇとBCA試薬２０ｇとを混合して６０℃にて３０分攪拌したのち冷却した溶液を参照溶液と
して準備する。
【００３４】
吸収スペクトルの５６２nmの吸光度から固定化効率を算出する。固定化効率の算出式は下式のとおり。
固定化率(%)＝[１−(固定化後上澄み液の吸光度)/(参照溶液の吸光度)]×100
結果を表１に示す。
【００３５】
安定性評価
タンパク質固定化シリコン微粒子(M-1)分散液について、以下のようにして安定性を評
価し、結果を表１に示す。
【００３６】
タンパク質固定化シリコン微粒子(M-1)分散液４０gにウシ血清アルブミン（BSA）１mg
を添加し室温にて放置後、任意の時間における沈降物発生を目視観察して安定性を評価した。
【００３７】
24Hr後に沈降物なし                ：○
8Hr後に沈降物あり                ：△
1Hr後に沈降物あり                ：×
［実施例２］
タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-2)の調製
実施例１と同様にしてシリコン微粒子分散液(1)を調製して、シリコン微粒子に対するNa、Clのモル比がそれぞれ１５、５になるように水酸化ナトリウム、塩酸を加えて調整し
、シリコンとしての濃度２５ｐｐｍのタンパク質固定化用シリコン微粒子分散液(P-2)を
得た。その分散液は自然光下では無色透明で、紫外線照射（波長245nm）下では赤色透明
であった。
タンパク質固定化シリコン微粒子(M-2)分散液の調製
実施例１において、タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-2)分散液を用いた以外は同
様にしてタンパク質固定化シリコン微粒子(M-2)分散液を調製した。
【００３８】
得られたタンパク質固定化シリコン微粒子(M-2)分散液について、タンパク質の固定化
率、固定化量を求め、また安定性を評価した。
結果を表１に示す。
［実施例３］
タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-3)の調製
実施例１において、エッチング液に１８５分間浸漬した以外は同様にして平均粒子径１．０ｎｍのシリコン微粒子(2)を調製した。
【００３９】
ついで、シリコン微粒子(2)に対するNa、Clのモル比がそれぞれ９、５になるように水
酸化ナトリウム、塩酸を加えてタンパク質固定化用シリコン微粒子分散液(P-3)を得た。
その分散液は自然光下では無色透明で、紫外線照射（波長245nm）下では青紫色透明であ
った。
タンパク質固定化シリコン微粒子(M-3)分散液の調製
実施例１において、タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-3)分散液を用いた以外は同
様にしてタンパク質固定化シリコン微粒子(M-3)分散液を調製した。
【００４０】
得られたタンパク質固定化シリコン微粒子(M-3)分散液について、タンパク質の固定化
率、固定化量を求め、また安定性を評価した。
結果を表１に示した。
［実施例４］
タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-4)の調製
実施例１において、シリコン微粒子に対するNa、Clのモル比がそれぞれ３、２になるように水酸化ナトリウム、塩酸を加えて調整した以外は同様にして、シリコンとしての濃度０．００２５重量％のタンパク質固定化用シリコン微粒子分散液(P-4)を得た。その分散
液は自然光下では無色透明で、紫外線照射（波長245nm）下では赤色透明であった。
タンパク質固定化シリコン微粒子(M-4)分散液の調製
実施例１において、タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-4)分散液を用いた以外は同
様にしてタンパク質固定化シリコン微粒子(M-4)分散液を調製した。
得られたタンパク質固定化シリコン微粒子(M-4)分散液について、タンパク質の固定化率
、固定化量を求め、また安定性を評価した。
【００４１】
結果を表１に示す。
［実施例５］
タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-5)の調製
実施例１において、シリコン微粒子に対するNa、Clのモル比がそれぞれ２０、１３になるように水酸化ナトリウム、塩酸を加えて調整した以外は同様にして、シリコンとしての濃度０．００２５重量％のタンパク質固定化用シリコン微粒子分散液(P-5)を得た。その
分散液は自然光下では無色透明で、紫外線照射（波長245nm）下では赤色透明であった。
タンパク質固定化シリコン微粒子(M-5)分散液の調製
実施例１において、タンパク質固定化用シリコン微粒子(P-5)分散液を用いた以外は同
様にしてタンパク質固定化シリコン微粒子(M-5)分散液を調製した。
得られたタンパク質固定化シリコン微粒子(M-5)分散液について、タンパク質の固定化率
、固定化量を求め、また安定性を評価した。結果を表１に示す。
［比較例１］
タンパク質固定化用シリコン微粒子(RP-1)の調製
実施例１において、エッチング液に１１０分間浸漬した以外は同様にして平均粒子径３００ｎｍのシリコン微粒子(3)を調製した。
【００４２】
ついで、シリコン微粒子(3)に対するNa、Clのモル比がそれぞれ９、５になるように水
酸化ナトリウム、塩酸を加えてタンパク質固定化用シリコン微粒子(RP-1)分散液を得た。その分散液は自然光下では無色透明で、紫外線照射（波長245nm）下でも無色透明であっ
た。
タンパク質固定化シリコン微粒子(RM-1)分散液の調製
実施例１において、タンパク質固定化用シリコン微粒子(RP-1)分散液を用いた以外は同様にしてタンパク質固定化シリコン微粒子(RM-1)分散液を調製した。
得られたタンパク質固定化シリコン微粒子(RM-1)分散液について、タンパク質の固定化率、固定化量を求め、また安定性を評価した。結果を表１に示した。
［比較例２］
タンパク質固定化用シリコン微粒子(RP-2)の調製
実施例１において、水酸化ナトリウム、塩酸を加えなかった以外は同様にして、シリコンとしての濃度０．００２５重量％のタンパク質固定化用シリコン微粒子分散液(RP-2)を得た。その分散液は自然光下では無色透明で、紫外線照射（波長245nm）下では赤色透明
であった。
タンパク質固定化シリコン微粒子(RM-2)分散液の調製
実施例１において、タンパク質固定化用シリコン微粒子(RP-2) 分散液を用いた以外は
同様にしてタンパク質固定化シリコン微粒子(RM-2)分散液を調製した。
得られたタンパク質固定化シリコン微粒子(RM-2)分散液について、タンパク質の固定化率、固定化量を求め、また安定性を評価した。結果を表１に示す。
［参考例］
【００４３】
タンパク質固定化用金属微粒子(MP-1)分散液の調製
超純水(電気伝導度：０.６μＳ／ｃｍ、ＴＯＣ：１０ｐｐｂ)９．５Ｋｇにクエン酸３
ナトリウム(関東化学（株）製：試薬特級)２．３ｇを溶解させ、この溶液を、９０℃に調整し、窒素雰囲気下、２５０ｒｐｍで攪拌しながら、これに、別途塩化金酸(和光純薬（
株）製：試薬特級)１ｇを超純水(電気伝導度：０.６μＳ／ｃｍ、ＴＯＣ：１０ｐｐｂ)９４ｇに溶解させた溶液を添加し、ついで、９０℃で加熱熟成1時間することによってＡuとしての濃度０．００５重量％のシード用金属微粒子(M-1-1)分散液を得た。
【００４４】
このシード用金属微粒子(M-1-1)の平均粒子径は２０ｎｍであった。また、紫外可視分
光光度計(日本分光（株）製：U-vest560)で吸光スペクトルを調べたところ、吸収ピーク
が５１８ｎｍであった。
【００４５】
このシード用金属微粒子(M-1-1)分散液９８３ｇに超純水(電気伝導度：０.６μＳ／ｃ
ｍ、ＴＯＣ：１０ｐｐｂ)８５１８ｇを加え、クエン酸３ナトリウム(関東化学（株）製：試薬特級)２ｇを超純水(電気伝導度：０.６μＳ／ｃｍ、ＴＯＣ：１０ｐｐｂ)２０５ｇに溶解させた溶液を添加し、９８℃に昇温し、窒素雰囲気下、２５０ｒｐｍで攪拌しながら、これに、別途塩化金酸(和光純薬（株）製：試薬特級)０．６ｇを超純水(電気伝導度：
０.６μＳ／ｃｍ、ＴＯＣ：１０ｐｐｂ)８５ｇに溶解させた溶液を４時間で添加し、ついで、１００℃で１時間熟成し、金微粒子濃度がＡuとしての濃度０．００３重量％の金属
微粒子(MP-1-2)分散液を得た。その分散液は自然光下では赤色透明で、紫外線照射（波長245nm）下でも赤色透明であった。
【００４６】
ついで、得られた金微粒子(MP-1-2)分散液を陽イオン交換樹脂および陰イオン交換樹脂にて処理して金微粒子(MP-1)分散液を調製した。
得られたタンパク質固定化用金属微粒子(MP-1)分散液の金に対するクエン酸、Na、Clのモル比がそれぞれ０．９、３．８．１．６であった。
【００４７】
紫外可視分光光度計(日本分光（株）製：U-vest560)で吸光スペクトルを調べたところ
、吸収ピークが５２８ｎｍであった。
タンパク質固定化金属微粒子(MM-1)分散液の調製
金微粒子(MP-1)分散液８０ｇにウシ血清アルブミン（BSA）２ｍｇを添加し、室温にて
１０分間放置してタンパク質固定化金微粒子(MM-1)分散液を調製した。
【００４８】
得られたタンパク質固定化金微粒子(MM-1)分散液について、タンパク質の固定化率、固定化量を求め、また安定性を評価した。
結果を表１に示す。
【００４９】
【表１】
2007169210.tif 000002