(57)【要約】【課題】アミノ酸発酵し得るコリネバクテリウム属細菌の細胞表層に蛋白質を提示し、有用性をより高めること。【解決手段】細胞表層に蛋白質を提示するように組換えられた、アミノ酸発酵能を有するコリネバクテリウム属細菌が提供される。蛋白質として糖質分解酵素を用いると、バイオマスを炭素源として培養でき、アミノ酸が効率的に製造される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞表層に蛋白質を提示するように組換えられた、アミノ酸発酵能を有するコリネバクテリウム属細菌。
【請求項２】
前記蛋白質が糖質分解酵素である、請求項１に記載のコリネバクテリウム属細菌。
【請求項３】
前記糖質分解酵素がα−アミラーゼである、請求項２に記載のコリネバクテリウム属細菌。
【請求項４】
コリネバクテリウム・グルタミカムである、請求項１から３のいずれかの項に記載のコリネバクテリウム属細菌。
【請求項５】
前記アミノ酸がリジンである、請求項１から４に記載のコリネバクテリウム属細菌。
【請求項６】
細胞表層に蛋白質を提示するように組換えられた、アミノ酸発酵能を有するコリネバクテリウム属細菌を、バイオマスに由来する多糖類を主成分とする糖質材料を炭素源として培養する工程を含む、アミノ酸の製造方法。
【請求項７】
前記蛋白質が糖質分解酵素である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記糖質分解酵素がα−アミラーゼである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
コリネバクテリウム・グルタミカムである、請求項６から８のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１０】
前記アミノ酸がリジンである、請求項６から９のいずれかの項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞表層に蛋白質を発現するコリネバクテリウム属の微生物、およびこの微生物を用いてバイオマスに由来する糖質から直接アミノ酸発酵を行う方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞表層は細胞の構造や形態を保持し、細胞を外界から隔離する隔壁だけではなく、物質の認識やシグナルの変換・伝達・酵素反応の場として重要な役割を果たしている。近年、酵母や細菌の細胞表層に有用なタンパク質を発現させる、細胞表層ディスプレイ技術が注目されている。例えば、酵母細胞表層には、細胞表層局在タンパク質のGPIアンカーを利用して、リパーゼ、アミラーゼ類、セルラーゼ類などの種々の酵素が提示されている（例えば、特許文献１参照）。また酵母においては、糖鎖結合タンパク質ドメインを利用した、細胞表層ディスプレイ技術も開発されている（例えば、特許文献２参照）。細胞の表層への発現については、グラム陽性菌である乳酸菌やグラム陰性菌である大腸菌の表層に種々のタンパク質を提示することが知られている（例えば、特許文献３および４）。また、コリネバクテリウム属細菌は結晶性表層（S-layer）タンパク質であるＰＳ２などを提示することが知られている（非特許文献１）。
【０００３】
一方、アミノ酸発酵などの分野においては、コリネバクテリウムなどの細菌が用いられている。１９５６年に協和発酵により単離されたコリネバクテリウム・グルタミカム（Corynebacterium glutamicum）は、必須アミノ酸であるアミノ酸であるＬ−リジンの生産に産業的に利用されているバクテリアである。Ｌ−リジンは、年間６０万トン以上生産されており、これはアミノ酸の中でグルタミン酸につぐ生産量である。Ｌ−リジンは、年間７−１０％の市場の成長が見込まれている。
【０００４】
これらのコリネバクテリウム属微生物を遺伝子工学的に改変し、種々の蛋白質を分泌する研究が行われている。例えば、コリネバクテリウム・アンモニアゲネスの細胞表層をコードする蛋白質をコードするＤＮＡが記載され（特許文献５）、コリネバクテリウム・アンモニアゲネスまたはコリネバクテリウム・グルタミカムの細胞表層をコードする蛋白質のシグナルペプチドを用い、トランスグルタミナーゼなどの異種蛋白質の細胞外分泌を促す方法（特許文献６〜８）が記載されている。
【０００５】
ところで、コリネバクテリウム・グルタミカムによるアミノ酸発酵は、グルコース、スクロース、フルクトースおよびこれらの混合物が用いられている。グルコースは、例えば、トウモロコシ、イモ、コメなどに由来するデンプン分解物から得られる。スクロースとしては、サトウキビ、テンサイなどの廃糖蜜から得られる。グルコース及びフルクトースの混合物は、廃糖蜜からのスクロースを分解して得られる。このように、このようなデンプン、糖蜜などからの分解物を得るためには、イモなどの穀物、廃糖蜜などを蒸煮処理、酵素処理などの糖化工程を要する。近年のエネルギー問題や環境問題の深刻化に伴い、アミノ酸生産のために使われる炭素源およびエネルギーは無視できないものであり、また酵素の使い捨ては製造コスト的に不利である。
【特許文献１】特開平１１−２９００７８号公報
【特許文献２】ＷＯ２００２／０８５９３５号公報
【特許文献３】特開２００２−１７３５７号公報
【特許文献４】特開２００４−２９８０３３号公報
【特許文献５】特開平１０−１０８６７５号公報
【特許文献６】ＷＯ０１／０２３５９１号公報
【特許文献７】ＷＯ２００２／０８１６９４号公報
【特許文献８】特開２００２−２９１４７６号公報
【非特許文献１】NicoleHansmeierら、Journal of Biotechnology 112 (2004) 177-193
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、細胞表層に所望の蛋白質を細胞表層に提示する組換えコリネバクテリウム属細菌を提供し、そしてコリネバクテリウム属細菌を用い、バイオマスに由来する多糖類を主成分とする糖質材料から直接アミノ酸発酵を可能とすることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、細胞表層に蛋白質を提示するように組換えられた、アミノ酸発酵能を有するコリネバクテリウム属細菌を提供する。
【０００８】
一つの実施態様では、前記蛋白質が糖質分解酵素である。
【０００９】
別の実施態様では、前記糖質分解酵素がα−アミラーゼである。
【００１０】
また、異なる実施態様では、細菌がコリネバクテリウム・グルタミカムである。
【００１１】
さらに別の実施態様では、前記アミノ酸がリジンである。
【００１２】
別の本発明は、細胞表層に蛋白質を提示するように組換えられた、アミノ酸発酵能を有するコリネバクテリウム属細菌を、バイオマスに由来する多糖類を主成分とする糖質材料を炭素源として培養する工程を含む、アミノ酸の製造方法を提供する。
【００１３】
一つの実施態様では、前記蛋白質が糖質分解酵素である。
【００１４】
別の実施態様では、前記糖質分解酵素がα−アミラーゼである。
【００１５】
また、異なる実施態様では、細菌がコリネバクテリウム・グルタミカムである。
【００１６】
さらに異なる実施態様では、前記アミノ酸がリジンである。
【発明の効果】
【００１７】
本発明により、デンプン、糖蜜などのバイオマスに由来する多糖類を主成分とする、通常、コリネバクテリウム属の細菌が利用できない糖質材料を炭素源として、直接、アミノ酸発酵できる。そのため、コリネバクテリウム属細菌の培養に用いる炭素源を調製するための、穀物、廃糖蜜などの蒸煮処理、酵素処理などの糖化工程が必要なくなるため、アミノ酸発酵におけるエネルギーが削減され、そのアミノ酸発酵量も、グルコースなどの炭素源を用いる場合とほとんど変わりがなく、実用性も高い。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明には、リジン、グルタミン酸などのアミノ酸発酵を行い得るコリネバクテリウム属細菌が用いられる。細胞表層に蛋白質、好ましくは糖質分解酵素を発現するように遺伝子を組換えることにより、バイオマスから直接アミノ酸発酵ができる。このような細菌としては、例えば、コリネバクテリウム・グルタミカム、コリネバクテリウム・アンモニアゲネスなどの細菌が用いられる。コリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２株は、リジンを発酵することができるので、本発明に使用される菌株の一つである。
【００１９】
コリネバクテリウム属細菌の細胞表層に蛋白質（一つの形態では糖質分解酵素）を提示するために、コリネバクテリウム属細菌の細胞表層蛋白質のアンカー部分の遺伝子配列を用いることができる。コリネバクテリウム属細菌の細胞表層蛋白質としては、結晶性表層（S-layer）タンパク質であるＰＳ２などが挙げられる（非特許文献１参照）。コリネバクテリウム属細菌以外の細菌由来の細胞表層蛋白質をコードする配列またはそのアンカー部分を用いることもできる。例えば、バシラス属の微生物の細胞表層に提示される酵素であるポリ-γ-グルタミン酸生合成酵素の一つであるｐｇｓＡ遺伝子（配列番号１）などを用いことができる。
【００２０】
細胞表層に提示される蛋白質は、Ｎ末端部分で細胞表層蛋白質のアンカー部分と結合し、Ｃ末端がフリーな形態で発現する場合（Ｃ末端細胞表層提示型）、および、Ｃ末端部分で細胞表層蛋白質のアンカー部分と結合し、Ｎ末端がフリーな形態で発現する場合（Ｎ末端細胞表層提示型）の場合がある。
【００２１】
Ｃ末端細胞表層提示型のコリネバクテリウム属細菌は、例えば、上記ｐｇｓＡ遺伝子（配列番号１）を用いて、調製することができる。このｐｇｓＡ遺伝子の少なくともアンカー部分（５’末端から第１番目〜１５０番目）を含む遺伝子の断片の３’末端に、細胞表層に発現させる所望の蛋白質（例えば、酵素）をコードする遺伝子を融合した遺伝子断片を調製し、これを適切なプラスミドに導入して、コリネバクテリウム属細菌を形質転換することにより、Ｃ末端細胞表層提示型のコリネバクテリウム属細菌が得られる。
【００２２】
Ｎ末端細胞表層提示型のコリネバクテリウム属細菌は、例えば、コリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１４０２０株の細胞表層に提示される結晶性表層タンパク質（ＰＳ２）の遺伝子（非特許文献１）を用いことができる。この場合、目的の酵素の遺伝子の３’末端に、ＰＳ２遺伝子の少なくともアンカー部分（５’末端から第１４２０番目〜１５２４番目）を含む断片を組み込んだ遺伝子断片を調製し、これを適切なプラスミドに導入して、コリネバクテリウム属細菌を形質転換することにより、Ｎ末端細胞表層提示型のコリネバクテリウム属細菌が得られる。
【００２３】
Ｃ末端またはＮ末端細胞表層提示型のコリネバクテリウム属細菌を調製するためのプラスミドは、コリネバクテリウム属細菌で複製することができれば、特に制限はない。好ましくは、さらに選択マーカーおよび大腸菌で複製できる遺伝子を有することが、プラスミドの調製および形質転換体の検出の観点から好ましい。このようなプラスミドは、コリネバクテリウムで発現する適切なプロモーター（例えば、ＨＣＥ（high - level constitutive expression）プロモーター、カナマイシンプロモーターなど）を有し、必要に応じて分泌シグナル配列を有することが好ましい。このようなプラスミドとしては、大腸菌で複製し、コリネバクテリウム属細菌において用いることのできる選択マーカーを持つｐＨＳＧ２９８やｐＨＳＧ３９８などが用いられる。これらのプラスミドのプロモーターの下流に上記遺伝子断片を連結する。
【００２４】
Ｃ末端細胞表層提示型のコリネバクテリウム属細菌を調製する場合は、アンカー部分を含む配列−目的の酵素をコードする遺伝子となるように遺伝子断片を、プロモーターの下流に連結すればよい。
【００２５】
Ｎ末端細胞表層提示型のコリネバクテリウム属細菌を調製する場合は、目的の酵素をコードする遺伝子−アンカー部分を含む配列となるように遺伝子断片をプロモーターの下流に連結すればよい。
【００２６】
細胞表層に提示される蛋白質としては、特に限定されないが、本来コリネバクテリウム属の細胞表層に局在しない蛋白質が用いられる。例えば、配列既知の分泌性タンパク質、抗体などがコリネバクテリウムの細胞表層に提供される。配列が未知の場合、当業者が通常用いる方法で遺伝子配列を決定して用いればよい。
【００２７】
分泌性タンパク質としては、リパーゼ、糖質分解酵素、蛍光タンパク質、プロテインＡおよびその誘導体などが挙げられる。
【００２８】
一つの実施形態では、糖質分解酵素が好ましく用いられる。本明細書で、糖質分解酵素は、バイオマスに由来する多糖類を主成分とする糖質材料を分解し、単糖、二糖類、オリゴ糖などのコリネバクテリウム属細菌が資化し得る糖類に変換する酵素をいう。バイオマスは、生物資源に由来する糖質材料をいい、例えば、トウモロコシなどの資源作物から得られるデンプン、サトウキビなどから得られる糖蜜（廃糖蜜）など、ならびにトウモロコシ、サトウキビ、木材（パルプ）などの生物材料の処理に際して生じるセルロース系の廃棄物などの多糖類を主成分とする糖質材料が挙げられる。
【００２９】
糖質分解酵素としては、例えば、アミラーゼ類（例えば、グルコアミラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼなど）、セルラーゼ類などを挙げることができる。糖質分解酵素は、その遺伝子配列が決定されているものが用いられる。配列が未知の場合、当業者が通常用いる方法で遺伝子配列を決定して用いればよい。例えば、ストレプトコッカス・ボヴァイス（Streptococcus bovis）１４８株由来のα−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＡ：配列番号２）などが用いられる。
【００３０】
このようにして、所望の蛋白質をコードする遺伝子が、アンカー配列の３’末端側に結合された配列（Ｃ末端細胞表層提示型）、あるいは５’末端側に結合された配列（Ｎ末端細胞表層提示型）を有するプラスミドが得られる。このプラスミドは、当業者が通常用いる手段、例えば、エレクトロポレーション、プロトプラスト法などの方法により、コリネバクテリウム属細菌に導入される。
【００３１】
蛋白質が糖質分解酵素である場合、形質転換体であるコリネバクテリウム属細菌の表層には糖質分解酵素が提示され、いわば固定化酵素として機能する。従って、炭素源としてバイオマスに由来する多糖類を主成分とする糖質材料を用い、アミノ酸発酵能を有するコリネバクテリウム属細菌（形質転換体）を、培養すると、バイオマスに由来する多糖類は単糖類、二糖類、オリゴ糖などに分解され、コリネバクテリウム属細菌に資化され、アミノ酸発酵が行われる。コリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２株を用いると、リジンが発酵生産される。そのリジンの生成量は、グルコースなどの単糖類を添加して培養した場合とほとんど差がない。
【００３２】
従って、通常、コリネバクテリウム属細菌が利用できない糖質材料を炭素源として、直接、アミノ酸発酵できる。そのアミノ酸発酵量も、グルコースなどの炭素源を用いる場合とほとんど変わりがなく、実用性も高い。
【００３３】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明がこれらの実施例に限定されることはない。
【実施例】
【００３４】
（１）コリネバクテリウム・グルタミカムの細胞表層へのアミラーゼ提示用相同組換え型ベクターの構築
コリネバクテリウム・グルタミカムの細胞表層にアミラーゼを提示するためのベクターを調製した。図１にベクター構築の模式図を示す。まず、プロモーターであるＨＣＥプロモーターおよびポリ−γ−グルタミン酸生合成酵素の一つであるｐｇｓＡ遺伝子、ストレプトコッカス・ボヴァイス（Streptococcus bovis）１４８株由来のα−アミラーゼ遺伝子（ａｍｙＡ）が挿入されたプラスミドｐＨＬＡαＡＦ（Appl. Microbiol. Biotechnol. 2005, Aug. 20;: 1-9）を鋳型とし、配列番号３のプライマー配列（ＮｇｏＭＩＶ−ＨＣＥ−Ｆ）および配列番号４のプライマー配列（ａｍｙＡＦ−ｓｔｏｐ−ＮｇｏＭＩＶ−Ｒ）を用いて、ＰＣＲを行った。得られた断片を制限酵素ＮｇｏＭＩＶで消化し、ＮｇｏＭＩＶ−ＮｇｏＭＩＶ断片を得た。
【００３５】
このａｍｙＡ遺伝子を含むＮｇｏＭＩＶ−ＮｇｏＭＩＶ断片を、プラスミドｐＴＭ４４に含まれるコリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２株のホモセリンデヒドロゲナーゼ（homoserine dehydrogenase）遺伝子（配列番号５）上の制限酵素ＮｇｏＭＩＶの切断部位に挿入して、Ligation-Convenience Kit（株式会社ニッポンジーン製）によって連結することにより、ＨＣＥ−ｐｇｓＡ−ａｍｙＡＦをこの順で有する、目的のアミラーゼ提示用組換え型ベクターｐＴＭ４４−ＨＣＥｐｇｓＡａｍｙＡＦを得た。なお、ＨＣＥは、Geobacillus toebiiに由来し、その配列は配列番号６に記載されている。
【００３６】
このベクターを、制限酵素ＮｇｏＭＩＶで消化し、ａｍｙＡ遺伝子の導入を確認し、ABI PRISM（登録商標）３１０  Genetic Analyzer（Applide Biosystems社製）を用いて、その塩基配列を確認した。
【００３７】
（２）α−アミラーゼを細胞表層に提示するコリネバクテリウム・グルタミカム（Ｃ末端細胞表層提示型）の作製
上記（１）で得たベクターｐＴＭ４４−ＨＣＥｐｇｓＡａｍｙＡＦを、コリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２株にエレクトロポレーション法により形質転換した。得られた形質転換体を、２０μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むＭＭＹＥ寒天培地（グルコース２０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム１０ｇ／Ｌ、尿素３ｇ／Ｌ、イーストエキストラクト１ｇ／Ｌ、リン酸水素二カリウム１ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム七水和物０．４ｇ／Ｌ、硫酸鉄七水和物０．００２ｇ／Ｌ、硫酸マンガン四水和物０．００２ｇ／Ｌ、塩化ナトリウム０．０５ｇ／Ｌ、Ｄ−ビオチン５０μｇ／Ｌ、チアミン塩酸塩２００μｇ／Ｌ、及び寒天１．５ｗ／ｖ％）上に塗布し、ＣＯ２インキュベーター中で３０℃にて２４時間培養した。コロニーを０．２５ｗ／ｖ％レマゾールブリリアントブルーデンプン（ナカライテスク社）を含むＭＭＹＥ寒天培地に爪楊枝で植えた。コロニー周辺のレマゾールブリリアントブルーデンプンが分解されて生じるハロを確認した株（以下、シングルクロスオーバー株）を選択した。
【００３８】
得られたシングルクロスオーバー株を、ＭＭＹＥ液体培地で１５時間培養した菌体を二次選択寒天培地（スクロース１０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム３ｇ／Ｌ、尿素２ｇ／Ｌ、イーストエキストラクト１ｇ／Ｌ、リン酸二水素カリウム１ｇ／Ｌ、リン酸水素二カリウム３ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム七水和物０．３ｇ／Ｌ、硫酸鉄七水和物１０ｍｇ／Ｌ、硫酸マンガン四水和物１ｍｇ／Ｌ、Ｄ−ビオチン３０μｇ／Ｌ、チアミン塩酸塩１ｍｇ／Ｌ、Ｌ−ホモセリン０．５ｇ／Ｌ、及び寒天１．５ｗ／ｖ％）に塗布した。コロニーを０．２５ｗ／ｖ％レマゾールブリリアントブルーデンプン（ナカライテスク社）を含むＭＭＹＥ寒天培地に爪楊枝で植えた。コロニー周辺のレマゾールブリリアントブルーデンプンが分解されて生じるハロを確認した株（以下、ダブルクロスオーバー株）を選択した。
【００３９】
得られた形質転換株は、宿主であるコリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２株中に存在するホモセリンデヒドロゲナーゼ遺伝子と相同組み換えをおこしたものと考えられる。
【００４０】
（３）発酵実験
（２）で選択した形質転換体を、ＭＭＹＥ−１液体培地（可溶性デンプン５０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム２５ｇ／Ｌ、尿素１ｇ／Ｌ、イーストエキストラクト５ｇ／Ｌ、リン酸二水素カリウム２．５ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム七水和物０．７５ｇ／Ｌ、硫酸鉄七水和物５０ｍｇ／Ｌ、硫酸マンガン四水和物１３ｍｇ／Ｌ、硫酸銅五水和物６．３ｍｇ／Ｌ、硫酸亜鉛七水和物１３ｍｇ／Ｌ、塩化カルシウム二水和物５０ｍｇ／Ｌ、塩化ニッケル六水和物５ｍｇ／Ｌ、塩化コバルト六水和物１．３ｍｇ／Ｌ、Ｄ−ビオチン０．５ｍｇ／Ｌ、チアミン塩酸塩７ｍｇ／Ｌ、β−アラニン２３ｍｇ／Ｌ、七モリブデン酸六アンモニウム四水和物１．３ｍｇ／Ｌ、Ｌ−ホモセリン０．５ｇ／Ｌ）で、２Ｌジャーファーメンターを用いて３０℃、ｐＨ７．０、撹拌６５０ｒｐｍ、通気２．０Ｌ−ａｉｒ／ｍｉｎにて培養し、３６時間まで経時的にサンプリングした。
【００４１】
培養培地を遠心分離により培地と菌体に分離して、それぞれのα−アミラーゼ活性を測定とした。コントロールとして、形質転換していないコリネバクテリウム・グルタミカムＡＴＣＣ１３０３２を用いた。α−アミラーゼ活性は、α−アミラーゼ測定キット（キッコーマン株式会社製）を用いて、プロトコルに従って行った。またＯＤ及びフェノール−硫酸法により全糖濃度を測定した。
【００４２】
培養培地を遠心分離により培地と菌体に分離し、培地上清を等量のＰＣＩ（フェノール/クロロホルム）溶液を加えて遠心し、上清を回収した。次いでこの上清に等量のクロロホルムを加えて遠心し、上清を回収して蛋白質を除去した。この蛋白除去上清２５μｌに２．０ｇ／ｌの１，４−ブタンジアミン２５μｌ、０．０７５ＭのＮａＨＣＯ３４００μｌ、２，４−ジニトロフルオロベンゼン１５０μｌを添加し、３７℃で１時間反応させた。この反応液を遠心し上清を、ＨＰＬＣを用いてリジンの生産量を分析した。
【００４３】
図２に示すようにα−アミラーゼを細胞表層に有する形質転換体は、α−アミラーゼを発現し、デンプンを含む培地で生育した。一方、コントロール株はα−アミラーゼを発現することができず、デンプンを含む培地で生育することができなかった。形質転換体のα−アミラーゼ活性は、培養開始後２４時間で、最も高い活性を示したが、その活性は、３６時間目以降生菌体数が低下したにもかかわらず、ほぼ維持された。このことは、細胞表層にα−アミラーゼが維持されていることの一つの証拠と考えられる。なお、α−アミラーゼ活性の１Ｕは、１分間にＮ３−Ｇ５−β−ＣＮＰ（合成基質２−クロロ−４−ニトロフェニル６５−アジド−６５−デオキシ−β−マルトペンタオシド）から１μｍｏｌのＣＮＰ（２−クロロ−４−ニトロフェノール）を遊離する力価を表す。
【００４４】
さらに、図３に示すように、α−アミラーゼを細胞表層に発現した形質転換体においては、コントロール菌体では見られない全糖濃度の減少及びリジン生産が認められた。
【００４５】
これらのことから、α−アミラーゼを細胞表層に提示するコリネバクテリウム・グルタミカムは、デンプンを分解し、菌体を増殖させ、リジンを著量生産するが、コントロールのコリネバクテリウム・グルタミカムではα−アミラーゼが発現されないため、デンプンを利用できず、菌体の増殖が起こらず、リジンも生産されなかった。
【産業上の利用可能性】
【００４６】
デンプン、糖蜜などのバイオマスなどの通常、コリネバクテリウム属の細菌が利用できない糖質材料を炭素源として、直接、アミノ酸発酵できる。そのため、穀物、廃糖
蜜などの蒸煮処理、デンプン分解酵素による処理などの糖化工程が必要なく、かつアミノ酸生産の効率が向上する。さらに、生産されるリジンなどのアミノ酸は、工業的に使用されるナイロン６６の原料であるヘキサメチレンジアミンの代替などとして使用可能であることから、産業上の利用性が高い。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】本発明に用いる組換えベクター構築の模式図である。
【図２】細胞表層にα−アミラーゼを提示するコリネバクテリウム・グルタミカムおよびそのコントロール株を、デンプンを炭素源として培養した場合のα−アミラーゼ活性および生育の経時変化を示すグラフである。
【図３】細胞表層にα−アミラーゼを提示するコリネバクテリウム・グルタミカムおよびそのコントロール株を、デンプンを炭素源として培養した場合の全糖濃度およびリジンの発酵生産の経時変化を示すグラフである。
【図１】
2007089506.tif 000002
【図２】
2007089506.tif 000003
【図３】
2007089506.tif 000004
【配列表】
2007089506000001.app