(57)【要約】【課題】紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を有効に抑制するインターロイキン６産生抑制剤、及びこれを有効成分とする皮膚肥厚抑制剤を提供する。【解決手段】紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を抑制するためのインターロイキン６産生抑制剤であって、カテキン類を有効成分とすることを特徴とするインターロイキン６産生抑制剤である。このカテキン類は、エピガロカテキンガレート、（＋）カテキン、エピカテキン及びエピガロカテキンから選ばれた一種又は二種以上が好ましい。更に、このインターロイキン６産生抑制剤を有効成分とする皮膚肥厚抑制剤である。このインターロイキン６産生抑制剤は、紫外線照射によって生ずる表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生の抑制を目的とする化粧品や医薬品等に利用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を抑制するために用いるインターロイキン６産生抑制剤であって、カテキン類を有効成分とすることを特徴とするインターロイキン６産生抑制剤。
【請求項２】
カテキン類が、エピガロカテキンガレート、（＋）カテキン、エピカテキン及びエピガロカテキンから選ばれた一種又は二種以上である請求項１記載のインターロイキン６産生抑制剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載のインターロイキン６産生抑制剤を有効成分とする皮膚肥厚抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を抑制するインターロイキン６産生抑制剤に関する。また、このインターロイキン６産生抑制剤を有効成分とする皮膚肥厚抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
サイトカインは、線維芽細胞、ケラチノサイト（表皮角化細胞）などの細胞から産出される糖蛋白質であって、免疫応答、免疫反応などの生体の防御や恒常性の維持に関与する細胞の増殖・分化・走行性を制御することが知られている。このサイトカインには、インタ−ロイキン、増血因子、増殖因子などが含まれている。そして、サイトカインは、紫外線(太陽光)の長期間に亙る連続的な曝露や、細胞内部或は細胞外部からの連続的な刺激により、ケラチノサイトから過剰に産生される。このサイトカインの過剰な産生に伴い、サイトカインに含まれるインタ−ロイキンの一種であるインターロイキン６も過剰に産生される。インターロイキン６は、ケラチノサイトの増殖、線維芽細胞からのコラーゲン、プロテオグリカンの産生及びコラーゲナーゼ分泌促進等に深く関与し、インターロイキン６の過剰産生は、皮膚の炎症、皮膚肥厚等の皮膚障害が生じるものと考えられている（非特許文献１、２、３、４、５、６参照）。
【０００３】
上述のインターロイキン６の過剰産生を抑制すること、特に表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰産生を抑制することは、皮膚炎症や皮膚肥厚等の皮膚障害の治療及び予防に有効であることが期待される。そのため、これらの皮膚障害に係わるインターロイキン６の過剰な産生を抑制するために活性型ビタミンＤ、グルココルチコイド等が使用されている（非特許文献７、８参照）。しかしながら、これらの成分の連続投与は安全性上、問題があり、長期間使用することはできない。
【０００４】
【非特許文献１】Oxholm A et al. “ Keratinocyte-expression of interleukin-6 but not of tumour necrosis factor-alpha is increased in the allergic and the irritant patch test reaction",Acta Derm Venereol. 1991年,Vol.71,P.93-98
【非特許文献２】Nishimura N et al. “Defective immune response and severe skin damage following UVB irradiation in interleukin-6-deficience mice",Immunology,1999年，Vol.97,P77-83
【非特許文献３】Shinichi S et al. “Serum levels of interleukin-6 and interleukin-10 correlate with total skin thickness score in patients with systemic sclerosis",J. of Dermtol. Sci. 2001年，Vol.27,P.140-146
【非特許文献４】Matthew R et al. “Stimulation of collagen and glycosaminoglycan production in cultured human adult dermal fibroblasts by recombinant human Interleukin 6",The J. Invest. Dermatol. 1991年,Vol.97,P.686-692
【非特許文献５】Rachel M.Grossaman et al. “Interleukin 6 is expressed in high levels in psoriatic skin and stimulates proliferation of cultured human keratinocytes",Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1989年，Vol.86,P.6367-6371
【非特許文献６】Meinhard Wlaschek et al. “UVA-induced autocrine stimulation of fibroblast-derived-collagenase by IL-6:A possible mechanism in dermal photodamage?",J. Invest. Dermatol. 1993年，Vol.101,P.164-168
【非特許文献７】C.Feliciani P et al. “IL-1α,IL-6 and TNF-α in cutaneus lesions of lupus erythematosus are inhibited by topical application of calcipotriol",Int. J. of Immunopathol. Pharmacol. 1995年，Vol.8,P.199〜207
【非特許文献８】Lange K et al. “Cutaneous inflammation and proliferation in vitro:differential effects and mode of action of topical glucocorticoids",Skin Pharmacol Appl Skin Physiol. 2000年，Vol.13,P.93-103
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記の事情に鑑みなされたもので、上記の活性型ビタミンＤ、グルココルチコイド等に代わる、人体に対して安全性が高く、インターロイキン６の産生を有効に抑制する、特に紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を有効に抑制するインターロイキン６産生抑制剤、及びこのインターロイキン６産生抑制剤を有効成分とする皮膚肥厚抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成するために、すでに安全性が確認されている医薬品、化粧品原料及び民間薬等で使用されている植物抽出物に着目し、研究を重ねた結果、カテキン類が紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生及び皮膚肥厚を有効に抑制することを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を抑制するために用いるインターロイキン６産生抑制剤であって、カテキン類を有効成分とすることを特徴とするインターロイキン６産生抑制剤である。換言すると、本発明は、カテキン類を有効成分とする、紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を抑制するためのインターロイキン６産生抑制剤である。このカテキン類は、エピガロカテキンガレート、（＋）カテキン、エピカテキン及びエピガロカテキンから選ばれた一種又は二種以上が好ましい。また、本発明は、上記のインターロイキン６産生抑制剤を有効成分とする皮膚肥厚抑制剤である。
【発明の効果】
【０００８】
本発明に係わるインターロイキン６産生抑制剤は、安全性が高く、インターロイキン６の産生を有効に抑制でき、紫外線照射例えば紫外線(太陽光)の長期間に亙る連続的な曝露に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を抑止できる。また、このインターロイキン６産生抑制剤は皮膚肥厚抑制作用がある。したがって、本発明のインターロイキン６産生抑制剤は、紫外線照射によって生ずる表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生の抑制に用いられ、化粧品や医薬品等に有利に利用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明のインターロイキン６産生抑制剤は、カテキン類を有効成分とするものである。このカテキン類は、特に制限はないが、エピガロカテキンガレート、（＋）カテキン、エピカテキン、エピガロカテキンが好ましい。これらのカテキン類は、茶、カカオ種子、ブドウ葉などの植物から抽出したものを用いてもよく、また、合成したものを用いてもよい。
【００１０】
本発明のインターロイキン６産生抑制剤及び皮膚肥厚抑制剤の有効な利用法は、インターロイキン６産生抑制剤を含有する外用剤を調製し、この外用剤を皮膚に塗布して紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰な産生を抑制し、もって皮膚の炎症及び／又は皮膚肥厚を抑制又は改善する方法である。外用剤としては化粧品、医薬部外品、医薬品等が挙げらる。また、外用剤の剤型は、水性剤型、油性剤型、乳化剤型、粉末剤型、固形剤型などいずれの剤型であってもよい。化粧料としては、例えば、化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック、バスソルト、軟膏、ゲル剤、ファンデーション、パウダー、リップクリーム、口紅、日焼け止め製品等が挙げられる。
【００１１】
カテキン類の外用剤への含有量は、外用剤中、０．０００１〜１０質量％（以下、単に「％」と記す）が好ましく、より好ましくは０．００５〜１％である。この範囲の含有量であれば、これを皮膚に塗布したとき、紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の過剰の産生を抑制し、皮膚のホメオスタシス（恒常性維持機能）を正常に維持又は改善し、もって紫外線照射によるインターロイキン６の過剰の産生に起因すると考えられる皮膚炎症及び皮膚肥厚の抑制又は改善に優れた効果が得られ、また経時安定性の面からも良好である。
【００１２】
上記の外用剤には、化粧品、医薬部外品、外用医薬品等に通常使用される各種の成分、即ち、水、アルコール、油剤、界面活性剤、増粘剤、粉体、キレート剤、ｐＨ調整剤、美白剤、抗炎症剤、抗酸化剤、保湿剤、殺菌剤、血行促進剤等の各種薬効剤、動植物・微生物由来の抽出物、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、香料等を、本発明の効果を損なわない範囲で目的に応じて適宜加えることができる。
次に、実施例及び参考例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
【実施例１】
【００１３】
この実施例は、カテキン類について、紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の産生を抑制する効果を確認する試験例である。試験には、ヒト由来正常ケラチノサイト培養細胞を使用した。すなわち、ケラチノサイト基本培地(Humedia ＫＧ−２、クラボ)を３．５ｍｍペトリ培養皿に適量とり、１×１０4細胞を播種し、３７℃、二酸化炭素濃度５％中にて培養した。一昼夜後、細胞をハンクス液にて洗浄し、ＫＧＭ２培地に交換し、さらに３７℃で２４時間培養した。その後、この培地に、カテキン類を添加しないもの、並びにカテキン類、すなわちエピガロカテキンガレート、（＋）カテキン、エピカテキン及びエピガロカテキン（いずれも、フナコシ株式会社から販売されている試薬を用いた。以下の実施例でも同じである。）のそれぞれを１００μＭづつ添加したものを調製した。この培地を３時間放置後、紫外線ランプ(キセンノンランプ；ワコム)を用い、１００ｍＪ／ｃｍ2の照射量になるように紫外線を細胞に照射した。その後、ＫＧＭ２培地に交換して２４時間培養し、培養後の培養上清液を試料とし、ヒトＥＬＩＳＡバイオトラックシステム（アマシャム）を用いそれぞれの試料のインターロイキン６産生量を測定した。カテキン類無添加のときの測定値に対する比で、カテキン類のそれぞれのインターロイキン６産生抑制率（％）を求めた。表１はその結果を示したものである。
【００１４】
【表１】
2007063154.tif 000002
【００１５】
表１から分かるように、カテキン類の添加により、カテキン類無添加と比較し、インターロイキン６産生が顕著に抑制された。
【実施例２】
【００１６】
この実施例は、カテキン類の皮膚抗炎症効果、皮膚肥厚抑制効果を試験した試験例である。この実施例では、下記の試料調製法、試料塗布法、紫外線照射法及び評価方法によって試験した。
（Ａ）試料（皮膚障害抑制剤）の調製法
カテキン類として、（＋）カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン及びエピガロカテキンガレートを用いた。これらのそれぞれを基剤（ポリエチレングリコール１０００：エチルアルコール（容量比）＝１：１）に１％になるように溶解し、各試料を調製した。
（Ｂ）試料塗布法と紫外線照射法
１群８匹とし、紫外線照射９０分前に上述のそれぞれの試料をヘアレスマウス（１０週齢）背中に０．１ｇ塗布し、一定量の紫外線（東芝ＢＬＢランプ）を１日２時間（５回／週）１５週間照射した（総照射量：７００Ｊ／ｃｍ2）。なお、試料の紫外線吸収スペクトルを測定し、評価試験に影響を与えないことを確認した。
（Ｃ）評価法
（ｉ）皮膚抗炎症効果
紫外線照射１５週後の背部皮膚を観察し、皮膚に浸潤、又は発赤を発症したマウスの発現率（８匹中）で評価した。
（ii）皮膚肥厚抑制効果
紫外線照射前と紫外線照射１５週後の皮膚の厚みをダイアル厚みゲージ(ＯＺＡＫ．ＭＦＧ．ＣＯ．ＬＴＤ．)を用い測定した。結果は、８匹の皮膚厚みの平均値、及びその１５週間後の増加率で評価した。
（Ｄ）試験結果
試験結果を表２に示す。
【００１７】
【表２】
2007063154.tif 000003
【００１８】
表２から明らかなように、カテキン類は、いずれも、皮膚炎症及び皮膚肥厚を抑制する効果に優れたものであった。
【００１９】
〔参考例１〕  クリームの例
（成分）                                                    （％）
（１）ポリオキシエチレンモノステアリン酸（４０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
（２）自己乳化型モノステアリン酸グリセリン                  ５．０
（３）ステアリン酸                                          ５．０
（４）ベヘニルアルコール                                    １．０
（５）流動パラフィン                                      １０．０
（６）トリオクタン酸グリセリル                            １０．０
（７）エピカテキン                                          ０．１
（８）エピガロカテキンガレート                              １．０
（９）グリセリン                                            ５．０
（１０）防腐剤                                              適量
（１１）香料                                                適量
（１２）精製水                                              残量
【００２０】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）及び（１０）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｂ．成分（９）及び（１２）を混合し、加熱して７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加えて乳化する。
Ｄ．Ｃを冷却後、成分（７）、（８）、（１１）を加え、均一に混合してクリームを得た。
【００２１】
得られたクリームは、着色・変臭等もなく安定性が高く、皮膚に適用すると、滑らかでコクのある伸び広がりがあり、皮膚の炎症や、皮膚の肥厚も見られず皮膚を滑らかにするものであり、また、連日使用しても皮膚刺激もなく安全性に優れるものであった。
【００２２】
〔参考例２〕  化粧水の例
（成分）                                                    （％）
（１）グリセリン                                          １０．０
（２）１，３−ブチレングリコール                            ６．０
（３）クエン酸                                              ０．１
（４）クエン酸ナトリウム                                    ０．３
（５）（＋）カテキン                                        ０．１
（６）エピガロカテキン                                      ０．０５
（７）精製水                                                残量
（８）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）        ０．５
（９）エチルアルコール                                      ８．０
（１０）防腐剤                                              適量
（１１）香料                                                適量
【００２３】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を混合溶解する。
Ｂ．成分（７）〜（１１）を混合溶解する。
Ｃ．ＡとＢを混合して、均一にし、化粧水を得た。
【００２４】
得られた化粧水は、着色・変臭、沈殿もなく安定性が高く、皮膚に適用すると、みずみずしい伸び広がりがあり、皮膚の炎症や、皮膚の肥厚も見られず皮膚を柔軟にするものであり、また、連日使用しても皮膚刺激もなく安全性に優れるものであった。
【００２５】
〔参考例３〕  乳液の例
（成分）                                                    （％）
（１）モノステアリン酸ソルビタン                            ０．３
（２）モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン
（２０Ｅ．Ｏ．）                                      ０．１
（３）親油型モノステアリン酸グリセリル                      ０．２
（４）ステアリン酸                                          ０．５
（５）セタノール                                            ０．５
（６）スクワラン                                            ３．０
（７）流動パラフィン                                        ４．０
（８）トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル                    ２．０
（９）ジメチルポリシロキサン                                １．０
（１０）水素添加大豆リン脂質                                ０．１
（１１）防腐剤                                              適量
（１２）エピガロカテキンガレート                            １．０
（１３）カルボキシビニルポリマー水溶液（１．０％）        １０．０
（１４）水酸化ナトリウム                                    ０．０５
（１５）グリセリン                                          ５．０
（１６）１，３−ブチレングリコール                          ７．０
（１７）精製水                                              残量
（１８）エチルアルコール                                    ５．０
（１９）香料                                                適量
【００２６】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（１１）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｂ．成分（１３）〜（１７）を加熱混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを加えて混合し、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃを冷却後（１２）、（１８）、（１９）を加え、均一に混合して乳液を得た。
【００２７】
得られた乳液は、着色・変臭、分離などがなく安定性が高く、皮膚に適用すると軽やかで滑らかな伸び広がりがあり、皮膚の炎症や、皮膚の肥厚も見られず皮膚をみずみずしく滑らかにするものであり、また、連日使用しても皮膚刺激もなく安全性に優れるものであった。
【００２８】
〔参考例４〕  パックの例
（成分）                                                    （％）
（１）ポリビニルアルコール                                １５．０
（２）無水ケイ酸                                            ０．５
（３）ポリエチレングリコール                                ０．５
（４）ポリオキシプロピレンメチルグルコシド                  ５．０
（５）グリセリン                                            ５．０
（６）精製水                                                残量
（７）エチルアルコール                                    １０．０
（８）防腐剤                                                適量
（９）エピガロカテキンガレート                              ０．５
（１０）香料                                                適量
【００２９】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（６）を混合し、７０℃に加熱して溶解する。
Ｂ．溶解を確認後、Ａを冷却する。
Ｃ．成分（７）、（８）、（１０）を均一に溶解する。
Ｄ．Ｂに、Ｃ及び成分（９）を加え、均一に混合してパックを得た。
【００３０】
得られたパックは、着色・変臭、分離などがなく安定性が高く、皮膚に適用すると適度な緊張感があり、パックを剥がしたあとの皮膚は潤い感、はり感が感じられ、また、皮膚刺激もなく安全性に優れたものであった。
【００３１】
〔参考例５〕  ファンデーションの例
（成分）                                                    （％）
（１）ジペンタエリトリットテトラ１２ヒドロキシステアリン酸
セスキステアリン酸ヘミロジンエステル                  ２．０
（２）流動パラフィン                                        ５．０
（３）ステアリン酸                                          ２．０
（４）セタノール                                            １．０
（５）自己乳化型モノステアリン酸グリセリル                  １．０
（６）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル              ８．０
（７）防腐剤                                                適量
（８）（＋）カテキン                                        ０．１
（９）グリセリン                                            ５．０
（１０）トリエタノールアミン                                １．０
（１１）カルボキシメチルセルロース                          ０．２
（１２）ベントナイト                                        ０．５
（１３）精製水                                              残量
（１４）酸化チタン                                          ６．０
（１５）微粒子酸化チタン                                    ２．０
（１６）微粒子酸化亜鉛                                      ５．０
（１７）マイカ                                              ２．０
（１８）タルク                                              ４．０
（１９）着色顔料                                            ４．０
（２０）香料                                                適量
【００３２】
（製法）
Ａ．成分（１）〜（７）を加熱し混合溶解する。
Ｂ．Ａに成分（１４）〜（１９）を加え、均一に混合し、７０℃に保つ。
Ｃ．成分（９）〜（１３）を均一に溶解し、７０℃に保つ。
Ｄ．ＣにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｅ．Ｄを冷却後、成分（８）、（２０）を添加し、均一に混合してファンデーションを得た。
【００３３】
得られたファンデーションは、変臭や分離、ブツの発生などがなく安定性が高く、皮膚に適用すると、滑らかな伸び広がりがあり、美しいメイク仕上がりとなり、皮膚の炎症や皮膚の肥厚も見られず、また、連日使用しても皮膚刺激がなく安全性に優れたものであった。
【００３４】
〔参考例６〕  日焼け止め乳液の例
（成分）                                                    （％）
（１）ポリオキシアルキレン変性オルガノポリシロキサン        １．０
（２）ジメチルポリシロキサン                                ５．０
（３）オクタメチルシクロテトラシロキサン                  ２０．０
（４）イソノナン酸イソトリデシル                            ５．０
（５）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル              ５．０
（６）トリメチルシロキシケイ酸                              ０．５
（７）防腐剤                                                適量
（８）微粒子酸化チタン                                    １０．０
（９）微粒子酸化亜鉛                                      １０．０
（１０）酸化ジルコニウム                                    ５．０
（１１）ポリスチレン末                                      ３．０
（１２）エピガロカテキンガレート                            ０．２
（１３）ジプロピレングリコール                              ３．０
（１４）エチルアルコール                                  １０．０
（１５）精製水                                              残量
（１６）食塩                                                ０．２
（１７）香料                                                適量
【００３５】
(製法)
Ａ．成分（１）〜（１１）を混合分散する。
Ｂ．成分（１２）〜（１６）を混合溶解する。
Ｃ．ＡにＢを添加して、均一に乳化する。
Ｄ．Ｃに成分（１７）を添加して日焼け止め乳液を得た。
【００３６】
得られた日焼け止め乳液は、変臭や分離、ブツの発生などがなく安定性が高く、皮膚に適用すると、滑らかな伸び広がりがあり、均一な塗布膜を形成し紫外線を防ぎ、日焼けやシミ・ソバカス等有効に防ぎ、また、皮膚の炎症や皮膚の肥厚も見られなかった。更に、連日使用しても皮膚刺激がなく安全性に優れたものであった。
【手続補正書】
【提出日】平成18年6月16日(2006.6.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
この実施例は、カテキン類について、紫外線照射に起因する表皮細胞由来のインターロイキン６の産生を抑制する効果を確認する試験例である。試験には、ヒト由来正常ケラチノサイト培養細胞を使用した。すなわち、ケラチノサイト基本培地(Humedia ＫＧ−２、クラボ)を３．５ｍｍペトリ培養皿に適量とり、１×１０４細胞を播種し、３７℃、二酸化炭素濃度５％中にて培養した。一昼夜後、細胞をハンクス液にて洗浄し、ＫＧＭ２培地に交換し、さらに３７℃で２４時間培養した。その後、この培地に、カテキン類を添加しないもの、並びにカテキン類、すなわちエピガロカテキンガレート、（＋）カテキン、エピカテキン及びエピガロカテキン（いずれも、フナコシ株式会社から販売されている試薬を用いた。以下の実施例でも同じである。）のそれぞれを１００μＭづつ添加したものを調製した。この培地を３時間放置後、紫外線ランプ(キセノンランプ；ワコム)を用い、１００ｍＪ／ｃｍ２の照射量になるように紫外線を細胞に照射した。その後、ＫＧＭ２培地に交換して２４時間培養し、培養後の培養上清液を試料とし、ヒトＥＬＩＳＡバイオトラックシステム（アマシャム）を用いそれぞれの試料のインターロイキン６産生量を測定した。カテキン類無添加のときの測定値に対する比で、カテキン類のそれぞれのインターロイキン６産生抑制率（％）を求めた。表１はその結果を示したものである。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
この実施例は、カテキン類の皮膚抗炎症効果、皮膚肥厚抑制効果を試験した試験例である。この実施例では、下記の試料調製法、試料塗布法、紫外線照射法及び評価方法によって試験した。
（Ａ）試料（皮膚障害抑制剤）の調製法
カテキン類として、（＋）カテキン、エピカテキン、エピガロカテキン及びエピガロカテキンガレートを用いた。これらのそれぞれを基剤（ポリエチレングリコール１０００：エチルアルコール（容量比）＝１：１）に１％になるように溶解し、各試料を調製した。
（Ｂ）試料塗布法と紫外線照射法
１群８匹とし、紫外線照射９０分前に上述のそれぞれの試料をヘアレスマウス（１０週齢）背中に０．１ｇ塗布し、一定量の紫外線（東芝ＢＬＢランプ）を１日２時間（５回／週）１５週間照射した（総照射量：７００Ｊ／ｃｍ２）。なお、試料の紫外線吸収スペクトルを測定し、評価試験に影響を与えないことを確認した。
（Ｃ）評価法
（ｉ）皮膚抗炎症効果
紫外線照射１５週後の背部皮膚を観察し、皮膚に浸潤、又は発赤を発症したマウスの発現率（８匹中）で評価した。
（ii）皮膚肥厚抑制効果
紫外線照射前と紫外線照射１５週後の皮膚の厚みをダイアル厚みゲージ(ＯＺＡＫ．ＭＦＧ．ＣＯ．ＬＴＤ．)を用い測定した。結果は、８匹の皮膚厚みの平均値、及びその１５週間後の増加率で評価した。
（Ｄ）試験結果
試験結果を表２に示す。