(57)【要約】【課題】  天然抽出物を含有したヒアルロニダーゼ活性阻害剤を提供する。【解決手段】  ワイルドタイム、ホップを水、親水性有機溶媒またはそれらの混合物で抽出処理して得られる抽出物がヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有することを利用する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ワイルドタイム及びホップの抽出物を有効成分として少なくとも１種以上含有することを特徴とするヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症性の疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱症、その他肌荒れに伴うか各種皮膚疾患等の原因や発祥機構は多種多様であるが、その原因としてヒアルロニダーゼによるものが知られている。
【０００３】
前記ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸を加水分解する酵素であるが、ヒアルロン酸は間充組織に見られるムコ多糖であって微生物や毒物の侵入及び伝播の防止に役立っているものであるから、ヒアルロニダーゼの作用が活発化するとヒアルロン酸による防御作用が減退することによる障害が起こりやすくなる。また、ヒアルロニダーゼはI型アレルギー反応にも関係し、肥満細胞からの脱顆粒反応を支配する酵素であると考えられている。従って、ヒアルロン酸の安定化を図り、肥満細胞からの種々ケミカルメディエーターの放出を防ぐことによって、保湿の強化又は抗炎症作用が期待できる。
【０００４】
そこで、このようなヒアルロニダーゼ阻害活性作用を有する物質を天然物から抽出することが試みられており、例えば、オスベッキア属植物の抽出物（特許文献１参照）、藤茶抽出物（特許文献２参照）、ローズマリー、タイム及びメリッサ抽出物（特許文献３参照）などが報告されている。
【０００５】
【特許文献１】特開２００３−５５２４２号公報
【特許文献２】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献３】特開平８−３３３２６７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、 天然物の中からヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有するものを見出し、それを有効成分とするヒアルロニダーゼ活性阻害剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記課題を解決するために本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、ワイルドタイム、ホップ抽出物がヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有し、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤として有効であることを知見した。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤が提供される。本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤は皮膚の炎症を予防及び／又は改善するのに有用である。
【０００９】
また、本発明により、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有する安全性に優れた皮膚化粧料及び飲食品が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明において、ワイルドタイム（学名：Ｔｈｙｍｕｓ  ｓｅｒｐｙｌｌｕｍ）とは、シソ科に属し、ヨーロッパ、北西アジアを原産とし、その他の地域にも導入され、帰化しており、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として用いるワイルドタイムの構成部位は特に限定されるものではないが、中でも地上部を抽出原料として用いることが好ましい。
【００１１】
ホップ（学名：Ｈｕｍｕｌｕｓ  ｌｕｐｕｌｕｓ）とは、クワ科植物に属し、アジア西部からヨーロッパ原産で、これらの地域から容易に入手可能である。抽出原料として用いるホップの構成部位は特に限定されるものではないが、中でも雌花穂を抽出原料として用いることが好ましい。
【００１２】
抽出原料として使用する前記の植物は、乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。各抽出原料は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、抽出原料の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶媒を使用するのが好ましい。抽出原料に含まれるヒアルロニダーゼ活性阻害作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。
【００１３】
好適な抽出溶媒の具体例としては、水、低級脂肪族アルコール、含水の低級脂肪族アルコール等を例示でき、これらを単独で、又はこれら２種以上の混合物として使用することができる。好適な低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等を例示することができる。
【００１４】
抽出溶媒として使用し得る水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１５】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比を９：１〜１：９（質量比）とすることができる。
【００１６】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
【００１７】
例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を溶出させる。この際、抽出条件は抽出原料等に応じて適宜調整し得るが、抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）で、抽出時間は通常１〜３時間、抽出温度は通常、常温〜９５℃である。
【００１８】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過して抽出残渣を除くことによって、抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００１９】
得られた抽出液はそのままでもヒアルロニダーゼ活性阻害剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。また、抽出原料となる植物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００２０】
精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２１】
ワイルドタイム、ホップからの抽出物は、そのままでもヒアルロニダーゼ活性阻害剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して提供することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。
【００２２】
本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤は皮膚の炎症を予防及び／又は改善することができると共に、皮膚に適用した場合の安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。皮膚化粧料には、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤のみを配合してもよいし、その他の有効素材を組み合わせて配合してもよい。
【００２３】
本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤を配合し得る皮膚化粧料は特に限定されないが、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤等を例示することができる。
【００２４】
本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤の配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は標準的な抽出物に換算して約０．０１〜１０質量％である。
【００２５】
本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤を配合する皮膚化粧料にはヒアルロニダーゼ活性阻害作用の妨げにならない限り、皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を配合することができ、皮膚の老化防止・改善に関し、本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤のみが主剤となるものに限られるわけではない。
【００２６】
本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤は皮膚の炎症を予防及び／又は改善することができると共に、安全性に優れているため、飲食品に配合するのに好適である。その場合の配合量は、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して成人１日当たりの抽出物摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが適当である。
【００２７】
本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、 清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物などが挙げられる。
【００２８】
以上説明した本発明のヒアルロニダーゼ活性阻害剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００２９】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明の範囲はこれらの実施例等に限定されるものではない。
【００３０】
［製造例１］
ワイルドタイム、ホップの粗粉砕物それぞれ１００ｇを抽出溶媒として水、５０％エタノール又はエタノールを１０００ｍｌ加え、還流抽出器で８０℃にて２時間抽出し、濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮を行い、乾燥して該抽出物を得た。各抽出物の収率は表１に示す。
【００３１】
［表１］ 抽出物の収率（％）
原料       水（％） ５０％エタノール（％） エタノール（％）
ワイルドタイム      ８．６              ５．５                  ３．２
ホップ            ４０．３            ３４．８                ２８．６
【００３２】
［試験例１］ヒアルロニダーゼ阻害活性
ヒアルロニダーゼ溶液（４００ユニット／ｍＬ，ｐＨ３．５酢酸緩衝液）０．１ｍＬと試料溶液０．２ｍＬを混合し、３７℃で２０分間インキュベーションしたのち、活性化剤溶液（２．５ｍＭ−ＣａＣｌ２）０．２ｍＬを加え、３７℃で２０分間インキュベーションして酵素を活性化した。ヒアルロン酸カリウム緩衝液０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間インキュベーションした後、０．４Ｎ水酸化ナトリウム０．２ｍｌを加えると共に氷冷して反応を停止させた。次いで０．８Ｍホウ酸溶液（ｐＨ９．１）０．２ｍＬを加え、沸騰浴中で３分間加熱後、直ちに２０分間氷冷した。ｐ−ＤＡＢＡ試薬（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎ塩酸１２．５ｍＬと酢酸８７．５ｍＬの混合液に溶解し、酢酸で１０倍に希釈したもの）６．０ｍＬを加えて３７℃で２０分間インキュベーションしたことにより、上記酵素反応で遊離したＮ−アセチルグルコサミンを発色させ、波長５８５ｎｍの吸光度を測定した。同様の操作と吸光度測定を、酵素を添加せずに行った。さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行い、次式によりヒアルロニダーゼの阻害率を求めた。
阻害率（％）＝｛１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
Ａ：酵素添加, 試料溶液添加時の吸光度
Ｂ：酵素無添加, 試料溶液添加時の吸光度
Ｃ：酵素添加, 試料溶液無添加時の吸光度
Ｄ：酵素無添加, 試料溶液無添加時の吸光度
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、阻害率が５０％になる試料濃度（ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
【００３３】
［表２］ヒアルロニダーゼ活性阻害作用
被験試料                 ＩＣ５０（ｐｐｍ） 
ワイルドタイム・水抽出物                      ５４２．２
ワイルドタイム・５０％エタノール抽出物        ２５８．４
ワイルドタイム・エタノール抽出物              ４４３．２
ホップ・水抽出物                              ５７８．１
ホップ・５０％エタノール抽出物                ３９０．０
ホップ・エタノール抽出物                      ５５１．６
表２に示すように、ワイルドタイム及びホップからの抽出物は濃度依存的にヒアルロニダーゼ活性阻害作用を示すことが確認された。