(57)【要約】  【課題】  液体試料と標識物とが混じると粘性が高くなる場合であっても良好な検出結果を得ることができる検出装置を提供する。  【解決手段】  検出物質を含有する可能性がある液体試料が添加される試料添加片１と、試料添加片に部分的に重ね合わせて連設され、検出物質に免疫学的親和性を有する反応成分を標識した標識試薬を保持する標識保持片２と、標識保持片に部分的に重ね合わせて連設され、検出物質に関する判定結果を示す判定ラインを有するメンブレン３と、試料添加片を標識保持片へ押しつける押さえ部材７とを備え、押さえ部材７は、試料添加片１からメンブレン３へ至る液体試料の流れ方向に沿って試料添加片１から離れる傾斜面７ａを有する。傾斜面７ａと試料添加片１とのなす角θは、５°以上１５°以下とし、傾斜面７ａは、標識保持片２のメンブレン側端部まで至る。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
検出物質を含有する可能性がある液体試料が添加される試料添加片と、
前記試料添加片に部分的に重ね合わせて連設され、検出物質に免疫学的親和性を有する反応成分を標識した標識試薬を保持する標識保持片と、
前記標識保持片に部分的に重ね合わせて連設され、検出物質に関する判定結果を示す判定ラインを有するメンブレンと、
前記試料添加片を前記標識保持片へ押しつける押さえ部材とを備え、
前記押さえ部材は、前記試料添加片から前記メンブレンへ至る液体試料の流れ方向に沿って前記試料添加片から離れる傾斜面を有する、検出装置。
【請求項２】
前記傾斜面と前記試料添加片とのなす角は、５°以上１５°以下である、請求項１記載の検出装置。
【請求項３】
前記傾斜面は、前記標識保持片の前記メンブレン側端部まで至る、請求項１から２のいずれか記載の検出装置。
【請求項４】
前記流れ方向に沿って前記押さえ部材が前記試料添加片に接する長さは、前記標識保持片の前記流れ方向の長さの０％以上９０％未満である、請求項１から３のいずれか記載の検出装置。
【請求項５】
前記押さえ部材は、液体試料を前記試料添加片へ案内する試料受けと一体的に形成される、請求項１から４のいずれか記載の検出装置。
【請求項６】
液体試料は梅毒陽性血清であり、標識試薬は病原性トレポネーマパリダム菌体成分結合金コロイドである、請求項１から５のいずれか記載の検出装置。
【請求項７】
液体試料はＨＢｓ抗原陽性血清であり、標識試薬は抗ＨＢｓＡｇモノクローナル抗体結合金コロイドである、請求項１から５のいずれか記載の検出装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体試料（尿や血液など）内における検出物質（生体成分など）の存否を検出する検出装置に関し、特に、液体試料と標識物とが混じると高い粘性となる場合に好適な検出装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生体成分などからなる検出物質の検出手法として、抗原又は抗体を用いた免疫学的検出方法がある。この方法は、高感度であり、特異性、簡便性に優れ、広く臨床検査領域で使用されている。
【０００３】
これらの免疫学的検出方法の１つに、イムノクロマトグラフィー法がある。この方法によれば、特殊な技術や訓練を経なくとも検出を行え、しかも、その操作性及び判定性は優れており、短時間で検出結果が得られる。
【０００４】
この方法を利用した商品が、妊娠診断薬などとして、既に、多数一般大衆向けに販売されている。また、この方法は、病院内で緊急用あるいは一次スクリーニング用として、ＴＰ（トレポネーマパリダム）、ＨＢｓ−Ａｇ（Ｂ型肝炎ウィルス表面抗原）、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウィルス）等に関する検査にも、利用されている。
【０００５】
さて、従来の検出装置では、標識保持片とメンブレンとが接する箇所において、標識保持片がめくれあがってこの箇所の接触が悪くなるのを防止するために、この箇所において標識保持片をメンブレンに押しつける押さえ部材が用いられている。
【０００６】
また例えば、
組み合わせ１：液体試料は梅毒陽性血清であり、標識試薬は病原性トレポネーマパリダム菌体成分結合金コロイドである、
組み合わせ２：液体試料はＨＢｓ抗原陽性血清であり、標識試薬は抗ＨＢｓＡｇモノクローナル抗体結合金コロイドである
のような場合、液体試料と標識試薬とが混じり合うと、粘性が高くなる。このような場合、従来の検出装置によると、
（問題点１）メンブレンを流動する速度が遅くなり展開時間が長くなる、
（問題点２）バックグラウンドが不良になる、
（問題点３）パッド粒子残留（標識保持片内の標識物は、本来すべて液体試料と共に流れきってしまわなければならないにもかかわらず、その一部が標識保持片内に残留してしまうこと）が発生する
等の問題点がある。
【特許文献１】特開２００５−３７３８４号公報
【特許文献２】特開２００５−３７３８５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者は、問題点１〜３の原因を知るべく鋭意研究を行い、その原因が押さえ部材の形状にあることを突き止めた。さらに、本発明者は、問題点１〜３が発生しない押さえ部材の構成を比較検討し、本発明を完成するに至ったものである。即ち本発明は、液体試料と標識物とが混じると粘性が高くなる場合であっても良好な検出結果を得ることができる検出装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の発明に係る検出装置では、検出物質を含有する可能性がある液体試料が添加される試料添加片と、試料添加片に部分的に重ね合わせて連設され、検出物質に免疫学的親和性を有する反応成分を標識した標識試薬を保持する標識保持片と、標識保持片に部分的に重ね合わせて連設され、検出物質に関する判定結果を示す判定ラインを有するメンブレンと、試料添加片を標識保持片へ押しつける押さえ部材とを備え、押さえ部材は、試料添加片からメンブレンへ至る液体試料の流れ方向に沿って試料添加片から離れる傾斜面を有する。
【０００９】
この構成における傾斜面を設けることにより、展開時間が速く、バックグラウンドが良好で、パッド粒子残留が少ない、検出結果を得ることができる。
【００１０】
第２の発明に係る検出装置では、傾斜面と試料添加片とのなす角は、５°以上１５°以下である。
【００１１】
第３の発明に係る検出装置では、傾斜面は、標識保持片のメンブレン側端部まで至る。
【００１２】
第４の発明に係る検出装置では、流れ方向に沿って押さえ部材が試料添加片に接する長さは、標識保持片の流れ方向の長さの０％以上９０％未満である。
【００１３】
後述する各例により明らかなように、これらの構成を使用することにより、良好な検出結果を得ることができる。
【００１４】
第５の発明に係る検出装置では、押さえ部材は、液体試料を試料添加片へ案内する試料受けと一体的に形成される。
【００１５】
この構成により、試料受けと押さえ部材とを歩留まり良く、製造できる。
【００１６】
第６の発明に係る検出装置では、液体試料は梅毒陽性血清であり、標識試薬は病原性トレポネーマパリダム菌体成分結合金コロイドである。
【００１７】
第７の発明に係る検出装置では、液体試料はＨＢｓ抗原陽性血清であり、標識試薬は抗ＨＢｓＡｇモノクローナル抗体結合金コロイドである。
【００１８】
これらの場合には、液体試料と標識物とが混じり合うと、高い粘性となるが、そのような場合でも、良好な検出結果が得られる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、展開時間が速く、バックグラウンドが良好で、パッド粒子残留が少ない、検出結果を得ることができる。液体試料と標識物とが混じり合うと高い粘性となる場合に、実益が大きい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、図面を参照しながら、本発明の実施の形態を説明する。
【００２１】
図１は、本発明の一実施の形態における試験片の平面図であり、図２は、同試験片、試料受け及び押さえ部材の部分断面図である。
【００２２】
図１、図２に示すように、本形態の検出装置に用いられる試験片は、裏打ちされており、次の要素を備える。試料添加片１には、検出物質を含有する可能性がある液体試料が添加される。
【００２３】
標識保持片２は、試料添加片１に部分的に重ね合わせて連設され、検出物質に免疫学的親和性を有する反応成分を標識した標識試薬を保持する。標識物としては、金コロイド等が好適である。
【００２４】
メンブレン３は、標識保持片２に部分的に重ね合わせて連設され、検出物質に関する判定結果を示す判定ライン４を有する。メンブレン３は、多孔質性の素材、たとえば、ニトロセルロースからなる。判定ライン４には、特異反応成分が固定（固相化）される。
【００２５】
図２に示すように、押さえ部材７は、試料添加片１を標識保持片へ押しつけるとともに、試料添加片１からメンブレン３へ至る液体試料の流れ方向に沿って試料添加片１から離れる傾斜面７ａを有する。
【００２６】
後述する各例から明らかなように、傾斜面７ａと試料添加片１とのなす角θは、５°以上１５°以下が好ましい。図２は、切断面を示すが、試験片の幅方向において、いずれかの切断面（流れ方向と平行）において、図２に示す状態になっていれば足りることを本発明者は確認している。即ち、押さえ部材７の下部が、均一な傾斜面である場合はもとより良好な結果となるが、こればかりでなく、傾斜面の一部（例えば中央付近）がまわりの傾斜面から、さらに凹む形状をなしていても、差し支えないことがわかっている。したがって、このように凹む形状を持つ傾斜面を採用しても、本発明に包含される。
【００２７】
傾斜面７ａは、標識保持片２のメンブレン側端部（点Ｃ）まで至るのが好ましい。
【００２８】
さらに、流れ方向に沿って押さえ部材７が試料添加片１に接する長さＯＡは、標識保持片の流れ方向の長さＬの０％以上９０％未満であることが望ましい。ここで、点Ｏは、標識保持片２の試料添加片１側端部の真上の点であり、押さえ部材７が試料添加片１と接触を開始する点である。点Ａは、傾斜面７ａが試料添加片１に接する点である。
【００２９】
図２において、標識保持片の長さＬに対する押さえ部材７が試料添加片１に接触する長さＯＡの割合Ｐ（％）を次のように定義する。
【００３０】
Ｐ＝（ＯＡ／Ｌ）＊１００  （％）
図２に示すように、本形態では、押さえ部材７が、液体試料６を試料添加片へ案内する開口部を備える試料受け８と一体的に形成される。こうすれば、試料受け８と押さえ部材７とを歩留まり良く、製造できるので、好適であるが、原理的には、試料受け８と押さえ部材７とは、別々に構成しても良いし、試料受けそのものを省略することもできる。
【００３１】
押さえ部材７は、液体試料６や標識物を浸透させない不透湿性の材質、たとえば、不透湿性の樹脂から構成するとよい。
【００３２】
次に、検出物質の検出について説明する。液体試料６を試料受け８の開口部に滴下する。液体試料６は、試料添加片１を経て標識保持片２に達し、標識保持片２中の標識物が溶出し、溶出した標識物と液体試料６とが混ざり合い、メンブレン３を吸収濾紙５に向けて流動（展開）する。
【００３３】
ここで、液体試料６中に検出物質が存在する場合は、液体試料６は、標識物と反応しながら、メンブレン３に達することになる。標識物と反応しながら流れてきた液体試料６は、メンブレン３に固定された特異反応成分と反応して、反応生成物を形成し、判定ライン４において、標識物によるサイン（目視またはセンシング可能な変化）を示す。
【００３４】
次に液体試料６と標識物が混じると粘性が高くなる場合の問題点をより詳しく説明する。
【００３５】
展開時間が長いと、判定ライン４へ標識物が到着するのが遅くなり、所定の判定時間における反応が不十分になる。その結果、検出感度が低下する。また、メンブレン３上において標識物の滞留着色が発生し、バックグラウンドが不良となる。その結果、判定ライン４の視認性が悪化する。
【００３６】
標識物が標識保持片２に残留すると、判定ライン４における反応が不十分になり、検出感度が低下する。
【００３７】
なお、標識物が標識保持片２に残留するパターンには、
（パターン１）展開時間が遅く、かつ残留する、
（パターン２）展開時間は遅くないが、液体試料６だけが先に展開してしまう
がある。
【００３８】
次に具体的な例を示しながら、押さえ部材７について本発明者が研究した結果を説明する。
【００３９】
本発明者は、液体試料は梅毒陽性血清であり、標識試薬は病原性トレポネーマパリダム菌体成分結合金コロイドである場合を取り上げて、図３の例１〜１６を実施した。しかしながら、液体試料はＨＢｓ抗原陽性血清であり、標識試薬は抗ＨＢｓＡｇモノクローナル抗体結合金コロイドである場合も、液体試料と標識物が混じると粘性が高くなるので、同様の結果が得られることが推定される。さらに、液体試料と標識物が混じっても粘性が高くならない、一般的な組み合わせについても、本発明は同様に適用できる。
【００４０】
図３は、例１〜例１６をまとめたものである。図３には、例の番号、上記割合Ｐ（％）、傾斜面７ａと試料添加片１とがなす角θ、展開時間（値及び評価）、陽性反応結果、バックグラウンドの良否、標識保持片２における標識物の残留の有無を記載してある。なお、展開時間の値において、例えば「０６：２８」とあるのは、６分２８秒を示す。
【００４１】
このうち、割合Ｐと角θとは、変更可能なパラメータである。また、展開時間の評価、陽性反応結果、バックグラウンドの良否、標識保持片２における標識物の残留の有無は、評価指標である。これらの評価指標がすべて良好なものを、「適」とし一つでも良好でないもの「不適」とする。
【００４２】
各評価指標は、次のとおりである。
【００４３】
展開時間の速／遅は、出願人製品による展開時間の平均値を基準とし、これより遅いものを「遅」（不良）、速いものを「速」（良）とした。
【００４４】
陽性反応は、判定ライン４における発色濃度を目視判定した。「＋＋」は良、それ以下は不良である。
【００４５】
バックグラウンドは、展開液の先端部が吸収濾紙５に到達した時点におけるメンブレン３上の着色状態を目視判定した。その結果は、「良」／「不良」により記載した。
【００４６】
パッド粒子残留は、判定終了後に標識保持片２における金コロイド残留を目視判定した。「無」が良であり、「有」は不良である。
【００４７】
以上の結果、「適」となるのは、例２〜４、７〜９、１２〜１４である。
【００４８】
そのときのパラメータは、割合Ｐが０％以上９０％未満であり、角θは５°以上１５°以下である。よって、これらのパラメータを採用すれば、結果が至当となるということが理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】本発明の一実施の形態における試験片の平面図
【図２】同試験片、試料受け及び押さえ部材の部分断面図
【図３】同検討例の一覧図
【符号の説明】
【００５０】
１  試料添加片
２  標識保持片
３  メンブレン
４  判定ライン
５  吸収濾紙
６  液体試料
７  押さえ部材
７ａ  傾斜面
８  試料受け
【図１】
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【図２】
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【図３】
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