(57)【要約】【課題】本発明は、ポリガンマグルタミン酸を有効性分として含有するヒアルロニダーゼ阻害剤、ポリガンマグルタミン酸を有効性分として含有する皮膚弾力維持用化粧料の組成物及びアレルギー改善用の組成物に関する。【解決手段】本発明に係るポリガンマグルタミン酸含有の組成物は、皮膚真皮に存在するヒアルロン酸を分解する酵素であるヒアルロニダーゼの活性を効果的に阻害して、皮膚保湿及び皮膚弾力の維持に効果的であり、かつ炎症系細胞の透過性を亢進させることによりアレルギー症状を緩和させうる。【選択図】図１
2007112785.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリガンマグルタミン酸を有効性分として含有するヒアルロニダーゼの阻害剤。
【請求項２】
前記ポリガンマグルタミン酸の分子量は１ｋＤａ〜１０，０００ｋＤａである請求項１に記載の阻害剤。
【請求項３】
ポリガンマグルタミン酸を有効性分として含有する皮膚弾力維持用の機能性化粧料の組成物。
【請求項４】
前記ポリガンマグルタミン酸の分子量は１ｋＤａ〜１０，０００ｋＤａである請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記化粧料の組成物は化粧水、乳液、エッセンス及び洗眼剤から構成された群から選択された何れか一つである請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
ポリガンマグルタミン酸を有効性分として含有するアレルギー改善用の組成物。
【請求項７】
前記ポリガンマグルタミン酸の分子量は１ｋＤａ〜１０，０００ｋＤａである請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記アレルギー改善用の組成物は化粧水、乳液、エッセンス、洗眼剤、ヘアーシャンプー、ボディシャンプー及び入浴剤から構成された群から選択された何れか一つである請求項６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリガンマグルタミン酸（ｐｏｌｙ−ｇａｍｍａ−ｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ：以下、ＰＧＡ）を有効性分として含有するヒアルロニダーゼ阻害剤、ＰＧＡを有効性分として含有する皮膚弾力維持用化粧料の組成物及びアレルギー改善用の組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸を加水分解する酵素の総称であって、炭水化物のグリコシド結合を切断する炭水化物分解酵素の一つであって、ムチナーゼまたは拡散因子とも呼ばれる。ヒアルロニダーゼの種類としては、エンドヘキソサミニダーゼ型、エンドグルクロニダーゼ型、エンドヘキソサミン開裂型及びエンドグルコサミン開裂型があり、これらのヒアルロニダーゼは、高等動物の精巣や精子、肝のリソソームや、へび毒、肺炎菌、連鎖球菌等に存在する。一方、皮膚の結合組織は、コラーゲン、ヒアルロン酸多糖体等から構成されている。ヒアルロニダーゼは、このようなヒアルロン酸を分解する酵素であって、ヒアルロニダーゼが活性化されると、皮膚結合組織のヒアルロン酸が分解されて皮膚の結合組織が緩くなって、皮膚弾力の低下及びシワを誘発させる。
【０００３】
皮膚結合組織が緩くなることを防止するための従来技術には、ビタミンＡ、Ｃ及びＥなどを処理してコラーゲンの合成を促進させ、酸化を防止する方法があるが、これらのビタミンは、高価であり、外部環境で分解され易く、かつ長期間保管が難しいという短所があった。また、コラーゲンを皮膚に直接適用するか、または飲む方法があるが、その効能について訝しい実情である。また、ヒアルロニダーゼの阻害効果を有する檳榔子、牧丹皮などの植物抽出物を処理する方法があるが、この方法は、植物を裁培し、裁培した植物から活性成分を抽出せねばならないため、経済性に劣るという短所がある。
【０００４】
一方、ＰＧＡは、Ｄ，Ｌ−グルタミン酸がγ−グルタミルと結合された重合体であって、微生物により生産される粘液性の物質である。ＰＧＡは、稲わらを利用した韓国の伝統的な豆発酵食品である清麹醤、日本の伝統的な豆発酵食品である納豆、ネパールの伝統的な豆発酵食品であるキネマ等から分離されたバチルス菌株から生産される。バチルス菌株から生産されるＰＧＡは、食用、水溶性、マイナスイオン性及び生分解性の高分子物質であって、吸湿剤、保湿剤及び化粧品の原料物質への利用が可能である。最近、ＰＧＡを利用した難分解性重合体の代替商品素材や、エステル化反応による耐熱性プラスチックの開発と水溶性繊維及び膜生産等に関する研究が先進国を中心に活発に進んでいる。
【０００５】
その他、ＰＧＡに関する研究としては、ＰＧＡの生産に及ぼすマンガンイオンの影響、超音波分解による水溶性重合体への利用についての研究、及びエステル誘導体の合成による低水溶性プラスチックの開発に関する研究（非特許文献１）などが報告されており、ＰＧＡの利用に関する先行特許には、バチルス・サブチルスによるＰＧＡの生産及びカルシウム溶解剤としての骨多孔症の治療効果を有する健康食品への活用（特許文献１）、水系の燐の含量を減少させて水質汚染を減少させる効果（特許文献２）、放射線の照射による高ゲル化性、吸水性を有する生分解性の吸着性樹脂を製造して、おむつなどの衛生用品、食品、園芸産業への応用及び活用（特許文献３、特許文献４及び特許文献５）等がある。また、ＰＧＡの溶解、沈殿及び乾燥による固形化生分解性の繊維やフィルム及びフィルム成形体としての利用（特許文献６、特許文献７）、薬物担体用のポリマー（特許文献８、特許文献９）等に関する特許もある。
【０００６】
本発明者らは、高分子量のＰＧＡを生産する耐塩性の菌株バチルス・サブチルスチョンククチャン菌株を使用してＰＧＡを生産する方法に関する特許（韓国特許第５００，７９６号）を獲得し、その他にＰＧＡを含有する抗癌組成物、免疫補強剤及び免疫増強剤に対して特許（韓国特許第４９６，６０６号、韓国特許第５１７，１１４号、韓国特許第４７５，４０６号）を獲得した。その他にＰＧＡの用途についての研究を進めている。
【０００７】
それにより、本発明者らは、このような多様な用途を有するＰＧＡについての他の機能を究明するために鋭意努力した結果、ＰＧＡが皮膚結合組織の構成成分であるヒアルロン酸を分解するヒアルロニダーゼを阻害するということが確認できたと共に、それによって皮膚の弾力を維持できるだけでなく、優れた吸湿性、保湿性及び皮膚適合性を有するということを確認して本発明を完成させるに至った。
【０００８】
【特許文献１】特開平６−３２７４２号公報
【特許文献２】欧州特許第８３８１６０号明細書
【特許文献３】特開平１０−２５１４０２号公報
【特許文献４】特開平７−３００５２２号公報
【特許文献５】特開平６−３２２３５８号公報
【特許文献６】特開平７−１３８３６４号公報
【特許文献７】特開平５−１１７３８８号公報
【特許文献８】特開平６−９２８７０号公報
【特許文献９】特開平６−２５６２２０号公報
【非特許文献１】「バイオサイエンス・バイオテクノロジー・アンド・バイオケミストリー（Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（日本）１９９６年、第６０巻、ｐ．１２３９−
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
結局、本発明の主な目的は、ＰＧＡを有効性分として含有するヒアルロニダーゼの阻害剤を提供することにある。
【００１０】
本発明の他の目的は、ＰＧＡを有効性分として含有する皮膚弾力維持用の機能性化粧料の組成物を提供することにある。
【００１１】
本発明のさらに他の目的は、ＰＧＡを有効性分として含有するアレルギー改善用の組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
前記目的を達成するために、本発明は、ＰＧＡを有効性分として含有するヒアルロニダーゼの阻害剤を提供する。
【００１３】
本発明のＰＧＡは、ヒアルロニダーゼの酵素を阻害して、皮膚結合組織が緩くなることを防止することにより皮膚の弾力を維持し、高度な皮膚適合性、保湿性及び吸湿性を維持させうる。
【００１４】
また、本発明は、前記ＰＧＡを有効性分として含有する皮膚弾力維持用の機能性化粧料の組成物を提供する。
【００１５】
本発明に係る前記化粧料の組成物は、化粧水、乳液、エッセンス及び洗眼剤から構成された群から選択された何れか一つであることを特徴とすることができる。
【００１６】
本発明に係るＰＧＡは、皮膚炎症の発生時に活性化されて、皮膚組織の構造を破壊し、炎症系細胞の透過性を亢進させる酵素であるヒアルロニダーゼの活性を阻害することによりアレルギー症状を緩和させることができる。
【００１７】
また、本発明は、ＰＧＡを有効性分として含有するアレルギー改善用の組成物を提供する。
【００１８】
本発明に係るアレルギー改善用の組成物は、化粧水、乳液、エッセンス、洗眼剤、ヘアーシャンプー、ボディシャンプー及び入浴剤から構成された群から選択された何れか一つであることを特徴とすることができる。
【００１９】
本発明で、５０ｋＤａ、２０００ｋＤａ及び４０００ｋＤａのＰＧＡが何れも高いヒアルロニダーゼの阻害活性を表し、濃度別阻害パターンも類似しており、ＰＧＡは、分子量５０ｋＤａ〜４０００ｋＤａの間では分子量に関係なく高い阻害活性を有することと確認された。したがって、前記ＰＧＡの分子量は、１ｋＤａ〜１０，０００ｋＤａであることを特徴とすることができる。
【００２０】
本発明において、ＰＧＡは、化学合成または微生物の発酵によって生産されたものを使用でき、好ましくは、微生物の発酵によって生産されたものを使用でき、さらに好ましくは、バチルス・サブチルスチョンククチャン菌の発酵によって生産されたものを使用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。それらの実施例は、単に本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がそれらの実施例により制限されるものと解釈されないということは、当業者には明らかであろう。
【００２２】
製造例：ＰＧＡの生産
ＰＧＡ生産用の基本培地（５％のＬ−グルタミン酸が添加されたＧＳ培地：グルコース  ５％、（ＮＨ４）２ＳＯ４  １％、ＫＨ２ＰＯ４  ０．２７％、Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ  ０．４２％、ＮａＣｌ  ０．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  ０．３％、ビタミン溶液１ｍＬ／Ｌ、ｐＨ６．８）３Ｌにバチルス・サブチルスチョンククチャン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ  ｖａｒ  ｃｈｕｎｇｋｏｏｋｊａｎｇ，ＫＣＴＣ  ０６９７ＢＰ）菌株の培養液を１％接種した後、攪拌速度１５０ｒｐｍ、空気注入速度１ｖｖｍで３７℃で７２時間培養した後、２Ｎの硫酸溶液を加えて、ｐＨが３．０になるように調節してＰＧＡ含有試料液を収得した。
【００２３】
前記ＰＧＡ含有試料液を４℃で１０時間定置させて、発酵液内の多糖類を除去した後、これにエタノールを発酵液の２倍の体積となるように加えて十分に混合した。混合液を４℃で１０時間定置させた後、遠心分離してＰＧＡ沈殿物を収得した。収得された沈殿物に蒸溜水を加えて溶解させ、蛋白質分解酵素を１００μｇ／ｍＬになるように加えて、３７℃の恒温器で６時間定置反応させて、ＰＧＡ試料に存在する細胞外の蛋白質を分解した。これを十分な量の蒸溜水で透析して、遊離されたグルタミン酸を除去した後、濃縮して純粋なＰＧＡを収得した。前記収得したＰＧＡをＧＰＣ（Ｇｅｌ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ｃｏｌｕｍｎ）を利用して分子量を測定し、分子量別に分離してそれぞれ５万、２００万及び４００万Ｄａの平均分子量を有するＰＧＡを収得し、前記分子量別にＰＧＡを利用してヒアルロニダーゼの阻害効果を確認した。
【００２４】
薬理試験例１：ＰＧＡのヒアルロニダーゼの阻害活性
製造例で収得された５０ｋＤａ、２０００ｋＤａ及び４０００ｋＤａ分子量のＰＧＡをそれぞれ１％の濃度に溶解させた。４００ｕｎｉｔ／ｍＬのヒアルロニダーゼに、ＰＧＡ濃度がそれぞれ０．００２％、０．００３％、０．００４％、０．００６％及び０．００８％濃度になるようにＰＧＡ溶液を添加した後、３７℃で２０分間反応させた。ＰＧＡと反応させた前記ヒアルロニダーゼの溶液に、活性化剤として０．１ｍｇ／ｍＬの化合物４８／８０と、２．５ｍＭのＣａＣｌ２及び０．１５ＭのＮａＣｌを混合した後、３７℃で２０分間反応させた。この反応溶液に０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸を混ぜた後、３７℃で２０分間反応させ、０．４ＮのＮａＯＨを添加して反応を中止させた。前記反応溶液に１％の濃度のｐ−ＤＡＢＡ（ｐ−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅ）を３ｍＬ添加し、３７℃で２０分間反応させた後、５８５ｎｍで吸光度を測定するＭｏｒｇａｎ−Ｅｌｓｏｎ法で酵素活性を測定した。ＰＧＡによるヒアルロニダーゼの活性阻害率は、ＰＧＡと反応させていないヒアルロニダーゼ溶液の酵素活性値に対する、ＰＧＡと反応させたヒアルロニダーゼ溶液の酵素活性値に対する割合で計算した（Ｎａｏｋｉ  ｆｕｊｉｔａｎｉ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｈｙｃｏｌｏｇｙ，１３：４８９，２００１）。
【００２５】
阻害率（％）＝｛１−（ＰＧＡ反応ヒアルロニダーゼ溶液の吸光度−ＰＧＡ反応ヒアルロニダーゼ溶液のブランク吸光度）／（ＰＧＡと反応させていないヒアルロニダーゼ溶液の吸光度−ＰＧＡと反応させていないヒアルロニダーゼ溶液のブランク吸光度）｝×１００
【００２６】
その結果、図１に示すように、ＰＧＡは、分子量に関係なく５０〜４０００ｋＤａの分子量で何れも同様にヒアルロニダーゼの活性を阻害した。ＩＣ５０値は、約０．００２５％と表され、０．００８％のＰＧＡ溶液でほとんど１００％の阻害活性を表した。
【００２７】
以下、本発明の製型例として化粧水（スキン）、乳液（ローション）、ヘアーシャンプーを例示しているが、本発明の化粧料の組成物を含む製型は、必ずしもこれに限定されるものではない。
【００２８】
実施例１：ＰＧＡを含有した化粧水の製造
９５％のエタノール８ｇにポリピロリドン０．０５ｇ、オレイルアルコール０．１ｇ、ポリオキシエチレンモノオレエート０．２ｇ、香料０．２ｇ、パラオキシ安息香酸メチルエステル０．１ｇ、酸化防止剤を少量混合して溶解し、精製水８５．３３ｇに５０ｋＤａのＰＧＡ０．４ｇ、グリセリン５ｇを溶解した溶液と混合攪拌して、皮膚弾力改善効果のある化粧水を製造した。
【００２９】
実施例２：ＰＧＡを含有した乳液（ローション）の製造
エチルアルコール１．２ｇ、スクワラン１０ｇ、ワセリン２ｇ、パラオキシ安息香酸エチルエステル０．２ｇ、グリセリンモノステアレート１ｇ、ポリオキシエチレン（２０Ｍ）モノオレエート１ｇ及び香料０．１ｇを７０℃で加熱混合して溶解し、２０００ｋＤａのＰＧＡ０．４ｇ、ジプロピレングリコール５ｇ、ポリエチレングリコール−１５００の２ｇ、トリエタノールアミン０．２ｇ、精製水７６．２ｇを７５℃で加熱して溶解させる。両者を混合して油化させた後、冷却して水中油（Ｏ／Ｗ）型の皮膚弾力改善効果のある乳液を製造した。
【００３０】
実施例３：ＰＧＡを含有したシャンプーの製造
ラウリル硫酸ナトリウム１５ｇ、ラウレス硫酸ナトリウム１０ｇ、コカミドプロピルベタイン５ｇ、エチレンジアミンテトラ酢酸ジナトリウム０．１ｇ及びベタイン３ｇを混合して、精製水６６．５ｇに４０００ｋＤａのＰＧＡ０．４ｇを溶解させた溶液を添加して、アレルギー改善効果のあるシャンプーを製造した。
【００３１】
薬理試験例２：ＰＧＡ含有の化粧料及びアレルギー改善用組成物の官能検査
（１）皮膚弾力の向上
１．試験方法
ｏ試験対象：満３０才〜５０才の女性５０名（対照群１、実施例１及び実施例２、使用群、各２５名ずつ）
ｏ使用した組成物：実施例１及び実施例２の化粧水及び乳液を使用し、対照群としては、実施例１及び実施例２の組成でＰＧＡを添加していない化粧水及び乳液を使用した。
ｏ試験期間：２ケ月（２００５年５月〜２００５年６月）
ｏ結果：ＰＧＡ含有の化粧料を使用した２５名中、２２名の試験者が皮膚状態が改善されたと答えた。
【００３２】
【表１】
2007112785.tif 000003
【００３３】
（２）アレルギーの改善
１．試験方法
ｏ試験対象：満１３才未満のアトピー性皮膚疾患を病んでいる子供３０名（対照群１及び実施例３、使用群、各１５名ずつ）
ｏ使用した組成物：実施例３のシャンプーを使用し、対照群としては実施例３の組成でＰＧＡを添加していないシャンプーを使用した。
ｏ試験期間：２ケ月（２００５年５月〜２００５年６月）
ｏ結果：ＰＧＡ含有のシャンプーを使用した１５名の試験者中、８人がかゆみなどの症状が緩和されたと答えた。
【００３４】
【表２】
2007112785.tif 000004
【００３５】
以上、本発明の内容の特定部分を詳細に記述したところ、当業者にとって、このような具体的な技術は単に好ましい実施様態であり、これによって本発明の範囲が制限されないということは明らかであろう。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項及びそれらの等価物によって定義されると言えるだろう。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明は、ポリガンマグルタミン酸を有効性分として含有するヒアルロニダーゼ阻害剤と、ポリガンマグルタミン酸を有効性分として含有する皮膚弾力維持用の機能性化粧料の組成物及びアレルギー改善用の組成物を提供する効果がある。本発明に係るポリガンマグルタミン酸含有の組成物は、皮膚真皮に存在するヒアルロン酸を分解する酵素であるヒアルロニダーゼの活性を効果的に阻害して、皮膚保湿及び皮膚弾力の維持に効果的であり、かつ炎症系細胞の透過性を亢進させることにより、アレルギー症状を緩和させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】ＰＧＡのヒアルロニダーゼの阻害活性を示すグラフである。
【図１】
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