(57)【要約】【課題】ＣＯＸ阻害活性を有する、好ましくはシクロオキシゲナーゼ１型に比べてシクロオキシゲナーゼ２型を選択的に強く阻害するシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有する安全性の高いエキス、該エキスを含有するシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、およびこれらを含有する組成物を提供することを目的とする。。【解決手段】モモ葉の有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつシクロオキシゲナーゼ阻害活性を含有することを特徴とするエキス、該エキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、ならびに前記エキスまたは前記シクロオキシゲナーゼ阻害剤を含有することを特徴とする組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
モモ葉の有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつシクロオキシゲナーゼ阻害活性を含有することを特徴とするエキス。
【請求項２】
シクロオキシゲナーゼ１型に比べ、シクロオキシゲナーゼ２型をより強く阻害することを特徴とする請求項１記載のエキス。
【請求項３】
請求項１または２記載のエキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤。
【請求項４】
請求項１もしくは２記載のエキスまたは請求項３記載のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤を含有することを特徴とする組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物であるモモ葉から得られるシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有するエキス、シクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、およびこれらを含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
シクロオキシゲナーゼ（Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ，以下ＣＯＸと称す）は、アラキドン酸からプロスタグランジンやトロンボキサン等のケミカルメディエーターを産生するアラキドン酸カスケードの律速酵素である。生体内には、２つのＣＯＸアイソザイムが存在し、それぞれシクロオキシゲナーゼ１型（ＣＯＸ−１）及びシクロオキシゲナーゼ２型（ＣＯＸ−２）と呼ばれている。ＣＯＸ−１は、血小板や胃、血管内皮細胞など多くの細胞に恒常的に発現しており、血小板凝集、胃酸分泌抑制作用、胃粘膜保護などの作用を有し、生体の保護に関わる。ＣＯＸ−２は炎症性刺激やホルモン刺激によってその産生が誘導される誘導型酵素であり、発熱、発痛、浮腫などの炎症といった反応を担っているプロスタグランジン類を産生すると考えられている。
【０００３】
アスピリンやインドメタシンなどのこれまでに知られる非ステロイド系抗炎症剤はＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２ともによく阻害する。これにより、プロスタグランジン類の生合成を抑制する為、プロスタグランジン類が関与する疾病に有効である。しかし一方で、ＣＯＸ−２だけでなく、ＣＯＸ−１も阻害することから、消化性潰瘍、めまいなどの副作用が生じることが知られている。これらのことから、より副作用が少ない、つまりＣＯＸ−２に対する選択性の高いＣＯＸ活性阻害剤で、安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤の開発が望まれている（例えば、特許文献1、非特許文献１参照）。
【特許文献１】特開２００６−７６９１０号公報
【非特許文献１】ＦｉｔｚＧｅｒａｌｄ  ＧＡ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２：８７９−８９０，２００３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、ＣＯＸ阻害活性を有する、好ましくはＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２を選択的に強く阻害するシクロオキシゲナーゼ阻害活性を有する安全性の高いエキス、該エキスを含有するシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、およびこれらを含有する組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、安全性の観点から、食用素材の抽出物について、イン・ビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）での系を用いてＣＯＸ阻害物質の検索を行った。その結果、モモ葉に高いＣＯＸ阻害活性があることを見出し、本発明の完成に至った。
すなわち、本発明の要旨は、
〔１〕  モモ葉の有機溶媒又は有機溶媒水溶液により抽出して得られ、かつＣＯＸ阻害活性を含有することを特徴とするエキス（以下、ＣＯＸ阻害活性エキスともいう）
〔２〕  シクロオキシゲナーゼ１型に比べ、シクロオキシゲナーゼ２型をより強く阻害することを特徴とする前記〔１〕記載のエキス、
〔３〕  前記〔１〕または〔２〕記載のエキスを含有してなるシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤、
〔４〕  前記〔１〕もしくは〔２〕記載のエキスまたは前記〔３〕記載のシクロオキシゲナーゼ活性阻害剤を含有することを特徴とする組成物、に関する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明のＣＯＸ阻害活性エキスは、食品由来のため、安全性の高いものである。
また、本発明のＣＯＸ活性阻害剤は、ＣＯＸ−１の阻害活性が緩和でありながら、ＣＯＸ−２には強い阻害活性を有しているというＣＯＸ−２に対して選択的な阻害活性を示すことから、副作用が少ないと期待される。
【０００７】
更に、本発明は食品組成物をはじめ、外用剤組成物、医薬品組成物並びに医薬部外品組成物への応用が可能であり、ＣＯＸ活性阻害作用に基づき、炎症を伴う様々な疾患、機能低下の予防及び改善効果が期待される。ここでいうＣＯＸ−２に対する選択性とは、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２のＩＣ５０値の比率（ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２）が１．５以上の数を示す。なお、ＩＣ５０値は、後述の実施例に記載の方法で測定された値である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明で使用するモモとしては、中国西北部原産とされ、日本全土で栽培されているバラ科サクラ属の落葉高木である、学名プルナス・ペルシカ（Ｐｒｕｎｕｓ  ｐｅｒｓｉｃａ）が挙げられる。エキスの抽出試料として用いられるモモ葉は、葉をミキサーなどで粉砕したものを用いることが出来る。モモ葉は古くから浴用材や茶材として使用されてきた。
【０００９】
本発明に使用される抽出試料には、モモの葉の他に、枝や花も含み得る。これらはミキサーなどで粉砕したものが用いられる。また、粉砕するには試料は乾燥していることが好ましいが、乾燥状態は限定されない。
【００１０】
なお、本発明に用いられるモモの葉には、微量ではあるが、青酸配糖体であるアミグダリンが含まれている。アミグダリン自体に毒性は無いが、動物の胃酸などによって分解されると、シアン化水素が発生するため、モモ葉をアミグダリンの分解温度である９３℃以上で、１０−１５分ほど熱し、アミグダリンを分解する処理を施したモモの葉を使用することが好ましい（例えば、メルクインデックス（第１３版）、１００頁、６０１項）。また、換気には十分に気をつける必要性がある。
【００１１】
抽出溶媒としては、有機溶媒又は有機溶媒水溶液が用いられる。有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどの低級アルコールや酢酸エチルなどのエステル類が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、これらの有機溶媒は単独又は2種類以上を混合して用いても良く、また有機溶媒と水の混合溶媒である有機溶媒水溶液として用いても良い。なお、安全性の点からは、エタノール又はエタノール水溶液で抽出することが好ましい。また、有機溶媒どうしまたは有機溶媒と水とを混合する場合の、各溶媒の比率としては特に限定はない。
【００１２】
抽出方法としては、例えば、前記モモ葉試料と前記抽出溶媒とを混合し、室温で１−５時間撹拌又は抽出溶媒の煮沸温度で１−５時間還流して抽出を行った後、ろ過や遠心分離などにより抽出液から試料残渣を取り除き、減圧又は限外ろ過により抽出物を濃縮する方法が挙げられる。更に、必要に応じて抽出溶媒を完全に除去して乾固、凍結乾燥などにより乾燥しても良い。
【００１３】
前記のようにして得られるＣＯＸ阻害活性エキスは、ＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２を選択的に強く阻害するＣＯＸ阻害活性を有する。ここで、ＣＯＸ阻害活性は、後述の実施例に記載の方法で測定される。
【００１４】
なお、前記ＣＯＸ阻害活性エキスを、極性の低い有機溶媒で分配した油層（例えば、酢酸エチル層や１−ブタノール層）由来のエキスにＣＯＸ阻害活性が認められ、極性の高い溶媒層（例えば、水層）由来のエキスにはＣＯＸ阻害活性は認められなかった。前記酢酸エチル層や１−ブタノール層で分配することにより、より精製されたＣＯＸ阻害活性エキスを得ることができる。
【００１５】
本発明のＣＯＸ阻害活性エキスは、ＣＯＸ活性阻害剤として使用することが出来る。従って、本発明は、前記ＣＯＸ阻害活性エキスを含有してなるＣＯＸ活性阻害剤に関する。
【００１６】
前記ＣＯＸ活性阻害剤は、有効成分として前記ＣＯＸ阻害活性エキスを含有しているため、ＣＯＸ−１に比べ、ＣＯＸ−２をより強く阻害することを特徴とするものである。前記ＣＯＸ活性阻害剤は、ＣＯＸ阻害活性を損なわなければ、ＣＯＸ阻害活性エキス以外の他の成分を混合しても良い。他の成分としては、特に限定はない。
【００１７】
前記ＣＯＸ阻害活性エキスまたは前記ＣＯＸ活性阻害剤は、各種基材に配合して組成物としても良い。配合量や基材の種類は特に限定されるものではなく、適時設定すれば良い。基材としては、食品、医薬品、医薬部外品などに用いられる物であれば特に限定は無く、例えば経口投与基材としては、錠剤、カプセル、飴、グミ或いは飲料などが挙げられる。これらの各種基材への配合方法としては、食品、医薬品、医薬部外品などの分野の公知の技術を用いて、製造することが出来る。
【実施例】
【００１８】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。
【００１９】
（実施例１）
モモ葉粉末１０．０ｇに対して１００ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。その結果、１０．０ｇの試料から０．８２ｇの抽出物を得た。抽出物はジメチルスルホキシドに溶解し、後述のような濃度に調整したモモ葉エキスとして以下の実験に用いた。
【００２０】
（試験例１）ＣＯＸ活性阻害試験
カイマン・ケミカル（Ｃａｙｍａｎ  ｃｈｅｍｉｃａｌ）社のコックス・インヒビター・スクリーニング・アッセイ（ＣＯＸ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｓｓａｙ、カタログ番号Ｎｏ．５６０１３１）を用いて試験を行った。
【００２１】
（試料溶液）
試料は実施例１にて得たモモ葉抽出物を抽出物濃度が１０，１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて適宜希釈したものを用いた。対照として、いずれのエキスも含有していないジメチルスルホキシドを陰性対照として用いた。また、陽性対照として、ジメチルスルホキシドにインドメタシン（ＳＩＧＭＡ社製）、「ＮＳ−３９８」（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ社製）、イブプロフェン（和光純薬社製）を溶解したものを用いた。
【００２２】
（方法）
酵素液であるＣＯＸ液に、基質であるアラキドン酸を添加し、プロスタグランジンの生成反応を行った（以降、ＣＯＸ反応という）。この時調整した各試料溶液をキットの試験法に従い添加し、プロスタグランジンの生成量への影響を調べた。ＣＯＸ反応によって生成されたプロスタグランジンは酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）を利用して定量した。この時、対照として用いられている化合物インドメタシンは、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２両方の活性を阻害する化合物として知られている。また、ＮＳ−３９８はＣＯＸ−２を特異的に、イブプロフェンはＣＯＸ−１を特異的に阻害する化合物である（例えば、Ｔｉｍｏｔｈｙ D．Ｗａｒｎｅｒ．ｅｔ ａｌ．  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９９）；９６：７５６３−６８参照）。酵素活性阻害率は対照群に対する各試料溶液のプロスタグランジン産生量から算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値（５０％活性阻害を示す阻害剤量）を求めた。結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】
2007326827.tif 000002
【００２４】
表１より、実施例１で得られた本発明品であるモモ葉エキスにはＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２に対して阻害活性が認められた。更に詳しくは、ＮＳ−３９８と同様に、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２が顕著に大きな値を示す傾向を得た。つまり、ＣＯＸ−１に比べて、ＣＯＸ−２に顕著に強い阻害効果を認めた。よって、本発明品は炎症時などで発現されるＣＯＸ−２を特異的に抑制する傾向にあることが期待される。
【００２５】
（実施例２）
モモ葉粉末２１．０ｇに対して２１０ｍｌのエタノールを加え、室温で１時間撹拌した。抽出液をろ紙でろ過し、減圧下のロータリーエバポレーターでろ液を濃縮した。２１．０ｇの試料から１．０４ｇの抽出物を得た。
【００２６】
上記のモモ葉エキスを水と酢酸エチルを用いて分配を行った。得られた抽出物を酢酸エチル（４０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の混合溶液中で溶解し、静置した後に上層を酢酸エチル画分として回収した。この操作を計３回繰り返し、約１２０ｍｌの酢酸エチル層画分を得た。更にこの溶液画分をロータリーエバポレーターにより乾固し、０．４５ｇの酢酸エチル抽出画分を得た。水層については、更に１−ブタノールを加え、同様に分配を行い、０．４２ｇの水層抽出画分と０．１６ｇのブタノール層抽出画分を得た。更に、各抽出画分の濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるようジメチルスルホキシドに溶解した。
【００２７】
（試験例２）
試験例１と同様の方法で、実施例２で得られたモモ葉分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。ＣＯＸ−１については、酢酸エチル層（ＡｃＯＥｔ）で６７．９２％、ブタノール層（ＢｕＯＨ）では６１．４８％の阻害が認められたが、水層は陰性対照と同程度であった。同様にＣＯＸ−２についても酢酸エチル層で９９．４９％、ブタノール層で９５．５９％の阻害が認められたが、水層での阻害は認められなかった（図１参照）。
【００２８】
（試験例３）
実施例２で得られたモモ葉分画エキスを１．０，０．１，０．０１ｍｇ／ｍｌとなるよう、ジメチルスルホキシドにて調整した。対照として、インドメタシンをジメチルスルホキシドに溶解したものを用いた。
【００２９】
試験例１と同様の方法で、上記モモ葉分画エキスのＣＯＸ活性阻害率を算出した。この結果を用いて各阻害剤のＩＣ５０値を求めた。結果を表２に示す。
【００３０】
【表２】
2007326827.tif 000003
【００３１】
表２より、モモ葉エキスの酢酸エチル層画分から得られたエキスには、インドメタシンのＣＯＸ−２阻害活性と同程度又はそれ以上の酵素阻害活性が見られた。一方、モモ葉ブタノール層画分から得られたエキスには、酢酸エチル層画分に比べて約３０分の１の阻害活性が見られたが、水層画分にはほとんど活性が見られなかった。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明のＣＯＸ活性阻害エキスは、安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤、好ましくはＣＯＸ−１に比べてＣＯＸ−２をより強く阻害する安全性の高いＣＯＸ活性阻害剤として好適に使用することが出来る。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、実施例２の分配操作によるモモ葉の各抽出画分を用いて、試験例１と同様の方法でＣＯＸ活性阻害実験を行い、分析した結果を示すグラフである。縦軸は阻害物を含んでいない場合の活性を１００とし、化合物又は抽出エキスを添加した場合の活性を１００から差し引いた分を阻害率（％）として相対的に表したものである。
【図１】
2007326827.tif 000004