(57)【要約】【課題】  本発明は、新たな知見に基づき、アレルギー性皮膚炎に対して効果が高く、副作用の少ない予防ないし治療剤の提供を目的とする。【解決手段】  チオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチドを有効成分とするアレルギー性皮膚炎の予防ないし治療剤とする。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
チオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチドを有効成分とするアレルギー性皮膚炎の予防ないし治療剤。
【請求項２】
接触過敏反応を抑制することを特徴とする請求項１に記載のアレルギー性皮膚炎の予防ないし治療剤。
【請求項３】
前記アレルギー性皮膚炎が、アトピー性皮膚炎、食餌性アレルギー性皮膚炎、吸引性皮膚炎、接触皮膚炎からなる群より選択される、いずれか一つである請求項１又は２に記載の予防ないし治療剤。
【請求項４】
チオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチドがヒトチオレドキシンである請求項１乃至３いずれか記載の予防ないし治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアレルギー性皮膚炎の予防ないし治療剤に関し、詳しくはチオレドキシンスーパーファミリーに属するポリペプチド類（以下、「ＴＲＸｓ」と略記する）を有効成分とするアレルギー性皮膚炎の予防ないし治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、アレルギー性皮膚炎に悩む人が増加しており、その中でもアトピー性皮膚炎に悩む人は急激な増加を示している。従来、アトピー性皮膚炎患者のほとんどは乳幼児期に発症し、思春期にかけて完治する人が多く、一部の患者は２０歳を超えても軽快しない成人型の難治性アトピー性皮膚炎として残ると言われてきたが、最近では成人してから初めて発症する患者も増え続けており、累積の患者数は飛躍的に引き上げている。
又、アトピー性皮膚炎に至らないまでも皮膚感受性の高くなっている人々が増加しており、接触性皮膚炎のようなアレルギー性皮膚炎患者の増加要因の一つにもなっているとも考えられている。
【０００３】
このような患者数の急激な増加の理由として、「住環境やオフィス環境の変化に伴う気密性の大幅な向上、それに伴う長時間の乾燥やアレルゲン物質への曝露」「大気汚染（酸化窒素、酸化硫黄、煤塵）の悪化に伴う免疫系への負担の増加」「外食や加工食品の利用の増加などといった食生活の乱れから生じる摂取栄養素の偏りや各種化学物質の長期間の摂取」など種々挙げられているが、アレルギー性皮膚炎、特にアトピー性皮膚炎の発症の原因や病態の解明が進んでおらず、未だに不明な点が多い為、医学的には根本的な治療を行なう事が出来ない状況にある。
【０００４】
このようなアレルギー性皮膚炎に対する薬物療法として、１）炎症を抑える「ステロイド剤」、２）炎症を起こすヒスタミンを抑制する「抗ヒスタミン剤」、３）ヒスタミンに作用する「抗アレルギー剤」、４）タクロリムスという免疫抑制剤の水和物（以下「タクロリムス水和物」と略記）などが報告されているが、何れも後述する副作用等の問題がある。
【０００５】
１）炎症を抑えるステロイド剤については、誤使用により、感染炎・内出血・満月様顔貌・骨粗鬆症・糖尿病・高血圧の誘発・消化性潰瘍・子供の成長停止等の副作用が報告されている。
特に、アトピー性皮膚炎に有効な治療薬として、ステロイド外用薬が用いられているが、ステロイド外用薬は、その薬効の強弱や、塗布部位及び時期などを厳密に選択する必要があり、これを間違うと症状が殆ど改善されず、返って悪化することもあった。
２）炎症を起こすヒスタミンを抑制する抗ヒスタミン剤については、眠気・頭痛・全身倦怠感等の副作用の他、緑内障・前立腺肥大症・気管支喘息発作中には使用不可であるという問題があった。
３）ヒスタミンに作用する抗アレルギー剤については、長期服用により、使用薬によっては、食欲減退・出血性膀胱炎・肝機能障害等の副作用を招くという問題があった。
４）タクロリムス水和物の問題点としては、ほてり感やヒリヒリ感など特有の刺激感があることの他、皮膚の免疫機能を抑制する薬なので、（毛嚢炎、カポジ水痘様発疹症、単純疱疹等の）感染症にかかり易くなることが挙げられる。
特に皮膚の免疫を抑えるので、皮膚癌発生のリスクが高くなるという問題があった（２００５年３月に、米食品医薬品局（ＦＤＡ）から、タクロリムス水和物は発癌と関連している恐れがあるとして患者及び医師に注意を呼びかけている）。
以上より、副作用のない有効なアレルギー性皮膚炎の予防乃至治療剤の開発が強く望まれている状況にあった。
【０００６】
一方、チオレドキシン（Thioredoxin；ＴＲＸ）は、その活性部位配列：−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−：の２つのシステイン残基間でのジスルフィド／ジチオール交換反応による酸化還元（レドックス）活性を有する１２ｋＤａの多機能ペプチドである（非特許文献１）。チオレドキシンは、リボヌクレオチドリダクターゼに対する水素イオン供与体、デオキシリボヌクレオチドの合成に重要な酵素として大腸菌から単離されて以来、多くの原核生物、真核生物から単離同定されてきた。
成人Ｔ細胞白血病誘導因子（ＡＤＦ）は、本発明者らがＨＴＬＶ−１に感染したＴリンパ球によって産生されるＩＬ−２受容体誘導因子として最初に同定したもので、ヒトチオレドキシンである。細胞内チオレドキシンはラジカル消去や、activator protein−1や、nuclear factor−κＢなどのレドックスに関する転写因子の制御に重要な役割を果たしている（非特許文献２）。
ヒトチオレドキシンは、p38 mitogen activating protein kinase（ＭＡＰＫ）やapoptosis signal regulating kinase−1（ＡＳＫ−１）のシグナル伝達を制御する。
チオレドキシンが細胞外に放出され、サイトカインまたはケモカイン作用を示すこと（非特許文献３）、更には細胞外ＴＲＸが細胞内へ移行すること（非特許文献４）が本発明者らによって報告されてきた。
【０００７】
又、特許文献１には、ＴＲＸｓを含有するアレルギー予防食品、脂質改善作用を有する化粧料組成物、アレルギー予防乃至治療用医薬組成物及び腸粘膜、口腔・上部消化管粘膜又は気道上皮障害保護剤が開示されている。
しかしながら、アトピー性皮膚炎の予防乃至治療用の医薬組成物として好ましく使用できる旨の記載はあるが、科学的にＴＲＸｓがアトピー性皮膚炎をはじめとするアレルギー性皮膚炎に有効であることは、（各実施例等の記載を考慮した）明細書中の記載をもとに当業者が認知することができない。特にＴＲＸｓがアレルギー性皮膚炎における接触過敏反応を抑制する効果については記載も示唆もされていない。
即ち、アレルギー性皮膚炎に対して効果が高く、副作用の少ない予防ないし治療剤として、ＴＲＸｓが有用であることについては、現在に至る迄、報告されていない。
【０００８】
【非特許文献１】Redox regulation of cellular activation Ann.Rev.Immunol.1997;15:351-369
【非特許文献２】AP-1 transcriptional activity is regulated by a direct association between thioredoxin and Ref-1 PNAS.1997;94:3633-3638
【非特許文献３】Circulating thioredoxin suppresses lipopolysaccharide-induced neutrophil chemotaxis PNAS.2001; 98: 15143-15148
【非特許文献４】Redox-sensing release of thioredoxin from T lymphocytes with negative feedback loops J.Immunol.2004;172:442-448
【特許文献１】特開２０００−１０３７４３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、新たな知見に基づき、アレルギー性皮膚炎に対して効果が高く、副作用の少ない予防ないし治療剤の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らはＴＲＸｓの新たな作用、即ち、アレルギー性皮膚炎における接触過敏反応を抑制する効果を解明し、ＴＲＸｓがアレルギー性皮膚炎の予防ないし治療剤として有効であるとの結論に達し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
即ち、請求項１にかかる発明は、チオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチドを有効成分とするアレルギー性皮膚炎の予防ないし治療剤に関する。
請求項２にかかる発明は、接触過敏反応を抑制することを特徴とする請求項１に記載のアレルギー性皮膚炎の予防ないし治療剤に関する。
請求項３にかかる発明は、前記アレルギー性皮膚炎が、アトピー性皮膚炎、食餌性アレルギー性皮膚炎、吸引性皮膚炎、接触皮膚炎からなる群より選択される、いずれか一つである請求項１又は２に記載の予防ないし治療剤に関する。
請求項４にかかる発明は、チオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチドがヒトチオレドキシンである請求項１乃至３いずれか記載の予防ないし治療剤に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係るチオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチドを有効成分とする予防ないし治療剤は、接触過敏反応を強く抑制することから、アレルギー性皮膚炎（特に接触性皮膚炎）に対し有効である。
本発明によれば体内でも発現する内因性のチオールタンパクであるチオレドキシンを有効成分とする為、副作用の心配がない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明者らは鋭意研究の結果、チオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチド（ＴＲＸｓ）が、接触過敏反応を強く抑制することから、アレルギー性皮膚炎（特に接触皮膚炎）に対する予防乃至治療剤として有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
即ち、本発明に係るチオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチドを有効成分とする予防乃至治療剤は、種々のアレルギー性皮膚炎、例えば、アトピー性皮膚炎、食餌性アレルギー性皮膚炎、吸引性皮膚炎、接触皮膚炎の予防乃至治療剤として用いることができる。中でも、接触皮膚炎の予防乃至治療剤として好ましく使用できる。
以下にこれらの効果を発揮することができる本発明の実施形態について詳説する。
【００１５】
本明細書において、ヒトチオレドキシン（ｈＴＲＸ）とは、配列番号１に示される１０５個のアミノ酸からなるポリペプチドを指す。
本明細書においては、「ポリペプチド」には、チオレドキシン活性を有するものであれば、オリゴペプチドからタンパク質まで広く含まれる。
【００１６】
本発明のＴＲＸｓはヒトチオレドキシン以外に「チオレドキシンスーパーファミリー」に属するものであればよく、その活性中心に−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−を有するポリペプチド類を有するものが例示される。
これらの中でも活性中心に配列−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−を有するチオレドキシン又はチオレドキシン２（ミトコンドリア特異的チオレドキシン）が好ましい。
【００１７】
本発明のチオレドキシン誘導体は配列番号１のヒトチオレドキシンをもとにして公知の遺伝子工学的手法により誘導体を製造することができる。
該誘導体は配列番号１の３２位と３５位以外、好ましくは３２位〜３５位以外のアミノ酸の１又は複数個、好ましくは１又は数個が置換、欠失、付加、挿入され、且つ、眼疾患の炎症抑制活性を有するものである。
尚、配列番号２は、配列番号１の核酸配列を表す。
【００１８】
本発明者らは、実験動物としてマウスを使用し、ＤＮＦＢ（ジニトロフルオロベンゼン）を塗布し感作を行なうことで、接触過敏反応（contact hypersensitivity）を誘発させた。該マウスは「アレルギー性皮膚炎モデル」、中でも「接触皮膚炎」の好適な動物モデルと考えられる。
前記アレルギー性皮膚炎モデルは、通常、
腹部に０．５％ＤＮＦＢを塗布し感作を行ない、５日後に耳介皮膚に０．１％或いは０．２％ＤＮＦＢを塗布することによって得られるが、耳介皮膚への（ＤＮＦＢの）塗布後２４時間における耳介腫脹〔Ear Swelling(mm)〕を確認することで、アレルギー性皮膚炎における接触過敏反応抑制効果の判定を行なう。
【００１９】
本発明者らは、チオレドキシントランスジェニックマウス及び野生型マウスのそれぞれについてＤＮＦＢによる接触過敏反応を誘発させ、接触過敏反応の程度を確認した結果、チオレドキシントランスジェニックマウスでは野生型マウスに比べ、接触過敏反応が極めて軽度であることを見出した。即ち、チオレドキシンがアレルギー性皮膚炎における接触過敏反応を抑制することを見出した。
このことから、本発明に係るチオレドキシンスーパーファミリーのポリペプチド（ＴＲＸｓ）を有効成分とする予防乃至治療剤は、アレルギー性皮膚炎、特に接触皮膚炎、より詳しくはアレルギー性接触皮膚炎に有効であると考えられる。
その他、ＴＲＸｓはアトピー性皮膚炎、食餌性アレルギー性皮膚炎、吸引性皮膚炎等のアレルギー性皮膚炎にも有効であると考えられる。
更にＴＲＸｓは、アレルギー性皮膚炎以外の皮膚炎、例えば、（一次）刺激性接触皮膚炎にも有効であるものと考えられる。
【００２０】
本発明に係る予防ないし治療剤の投与経路としては、経口および非経口のいずれでも投与することができ、臨床医によって適宜選択される。
有効成分であるＴＲＸｓを単独又は通常使用される担体と共に投与することができる。
【００２１】
本発明の予防ないし治療剤を経口投与する場合は、薬剤の形態として、錠剤、丸剤、散剤、被覆錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の固形製剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等の液状製剤、エアゾール剤、アトマイザー、ネブライザー等の吸入剤、およびリポソーム封入剤等があげられる。
【００２２】
本発明に係る予防ないし治療剤は、上記の有効成分と共に薬学的に許容される製剤担体を用いて、医薬製剤の形態として実用される。
該製剤担体としては、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、吸収促進剤、保湿剤、吸着剤、滑沢剤、充填剤、増量剤、付湿剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節する塩、緩衝剤等の希釈剤又は賦形剤を例示でき、これらは得られる製剤の投与単位形態に応じて適宜選択使用される。
【００２３】
錠剤の形態に成形するに際しては、上記製剤担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、リン酸カリウム等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム等の崩壊剤、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド等の界面活性剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。
【００２４】
さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠とすることができる。
この剤皮の層の数によって二重錠、多層錠とすることができる。
丸剤の形態に成形するに際しては、製剤担体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
【００２５】
本発明の予防ないし治療剤を非経口投与する場合は、薬剤の形態として静脈注射、皮下注射、皮内注射、筋肉注射および腹腔内注射などに使用される注射剤（液剤、乳剤、懸濁剤等）、液剤（例えば、点眼剤、点鼻薬等）、懸濁剤、乳剤、点滴剤、軟膏剤等のクリーム状の製剤、硬膏剤等の固形製剤、ローション剤等の液状製剤、エアゾール剤、含嗽剤等があげられる。
これらは、当該形態において通常用いられている方法により調製することができる。
【００２６】
本発明薬剤が液剤、乳剤、懸濁剤等の注射剤として調製される場合、これらは殺菌され且つ血液と等張であるのが好ましく、これらの形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用できる。
尚、この場合、等張性の溶液を調整するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを本発明薬剤中に含有させてもよい。
又、通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。
【００２７】
本発明の予防ないし治療剤が液状製剤である場合は、凍結保存または凍結乾燥等により水分を除去して保存してもよい。
凍結乾燥製剤は、使用時に注射用蒸留水等を加え、再度溶解して使用される。
さらに、本発明に係る予防ないし治療剤中には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有させて調製することもできる。
【００２８】
ＴＲＸファミリーに属するポリペプチドの有効量は、当業者が従来の技術を参考に容易に決定することができるが、例えば、体重１ｋｇあたり０．１ｍｇ−１０ｇ程度、好ましくは１−１０ｍｇ程度、より好ましくは１−５００ｍｇ程度である。
これを１日あたり１回又は数回に分けて投与することができるが、各種製剤の形態、患者の性別、年齢、疾患の程度に合わせて適宜調節することが好ましい。
例えば、軟膏剤等のクリーム状製剤として使用する場合、その使用量は（アレルギー性皮膚炎の）病態の程度等により適宜選択されるが、通常、ＴＲＸファミリーに属するポリペプチドの量が１日、皮膚５ｃｍ×５ｃｍ当たり約０．０００１〜３００ｍｇ程度、好ましくは０．０１〜６０ｍｇ程度とするのがよい。クリーム状製剤の場合は１日に１回又は数回に分けて使用することができ、薬用化粧品若しくは医薬部外品等としても使用することができる。
【００２９】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら制限されるものではない。
【実施例】
【００３０】
〔アレルギー性皮膚炎における接触過敏反応（contact hypersensitivity）〕
実験動物として、Ｃ５７ＢＬ／６マウスおよびＴＲＸトランスジェニックマウス（味の素株式会社）を使用し、ＤＮＦＢ（ジニトロフルオロベンゼン）を塗布し感作を行なうことで、接触過敏反応（contact hypersensitivity）を誘発し、「アレルギー性皮膚炎モデル」を作製した。
具体的には、下記の１）〜５）に示される実験動物群により、アレルギー性皮膚炎における接触過敏反応の検討を行った。
【００３１】
１）０．２％ＤＮＦＢ  ｗｔ
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの
腹部に０．５％ＤＮＦＢを塗布し感作を行ない、５日後に耳介皮膚に０．２％のＤＮＦＢを塗布し、２４時間後の耳介腫脹〔Ear Swelling(mm)〕を確認した。
２）０．１％ＤＮＦＢ  ｗｔ
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの
腹部に０．５％ＤＮＦＢを塗布し感作を行ない、５日後に耳介皮膚に０．１％のＤＮＦＢを塗布し、２４時間後の耳介腫脹〔Ear Swelling(mm)〕を確認した。
３）０．２％ＤＮＦＢ  ｖｅｈｉｃｌｅ  Ｔｒｘ  Ｔｇ
ＴＲＸトランスジェニックマウスの
腹部に０．５％ＤＮＦＢを塗布し感作を行ない、５日後に耳介皮膚に０．２％のＤＮＦＢを塗布し、２４時間後の耳介腫脹〔Ear Swelling(mm)〕を確認した。
４）０．１％ＤＮＦＢ  ｖｅｈｉｃｌｅ  Ｔｒｘ  Ｔｇ
ＴＲＸトランスジェニックマウスの
腹部に０．５％ＤＮＦＢを塗布し感作を行ない、５日後に耳介皮膚に０．１％のＤＮＦＢを塗布し、２４時間後の耳介腫脹〔Ear Swelling(mm)〕を確認した。
５）ｖｅｈｉｃｌｅ  Ｔｒｘ  Ｔｇ
ＤＮＦＢ塗布による感作を行なわなかったＴＲＸトランスジェニックマウスの耳介腫脹〔Ear Swelling(mm)〕を確認した。
６）ｖｅｈｉｃｌｅ  ｗｔ
ＤＮＦＢ塗布による感作を行なわなかったＣ５７ＢＬ／６マウスの耳介腫脹〔Ear Swelling(mm)〕を確認した。
【００３２】
〔結果〕
０．１％のＤＮＦＢによる惹起においても、０、２％ＤＮＦＢによる惹起においても、ともにＴＲＸトランスジェニックマウスでは野生型マウスに比べ、顕著な接触過敏反応の抑制効果を確認することができた（図１）。
この結果から、ＴＲＸは、アレルギー性皮膚炎（特に接触皮膚炎）における接触過敏反応を抑制することが示されると同時に、ＴＲＸを有効成分とする予防乃至治療剤はアレルギー性皮膚炎に対し有効であることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】接触過敏反応の程度を、チオレドキシントランスジェニックマウスと野生型マウスとで比較した図である。
【図１】
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【配列表】
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