(57)【要約】  【課題】  エッジイフェクトと気泡発生が実質的になく、かつ、使用試料量を大幅に削減することができるマイクロタイタープレートを提供すること。  【解決手段】  この発明のマイクロタイタープレートは、材料が、その材料に対して約０．１％〜５％の油性成分を含んでいる有機ポリマーからなるとともに、底部と側壁部とからなる凹状部分と、底部に整列して配置されている所定数のウエルからなるウエル部分とから構成されていて、各ウエル筒状部の高さが約２ｍｍ〜６ｍｍ、各ウエル内部体積が約８０μｌ〜２００μｌである。この構成により、この発明のマイクロタイタープレートは、エッジイフェクトと気泡発生が実質的になく、かつ、使用試料量を大幅に削減することができる。  【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
材料が、その材料に対して約０．１％〜５％の油性成分を含んでいる有機ポリマーからなるマイクロタイタープレートであって、かつ、底部と側壁部とからなる凹状部分と、底部に整列して配置されている所定数のウエルからなるウエル部分とから構成されているとともに、各ウエル筒状部の高さが約２ｍｍ〜６ｍｍ、各ウエル内部体積が約８０μｌ〜２００μｌであることを特徴とするマイクロタイタープレート。
【請求項２】
請求項１に記載のマイクロタイタープレートにおいて、前記有機ポリマーが、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレングリコールテレフタレート、ポリ酢酸ビニル、ポリメチルペンテン、ポリビニルピロリジン、ポリアクリロニトリル、ポリメチルメタクリレートおよび塩化ビニルから選ばれる少なくとも１種の熱可塑性プラスチックスであることを特徴とするマイクロタイタープレート。
【請求項３】
請求項１または２に記載のマイクロタイタープレートを用いて、該凹状部分に生物試料を添加し、各ウエルに該試料を注入して、または、各ウエルに直接該試料を注入して、該試料中に含まれる検出対象のタンパク質などの成分を測定することを特徴とする生物試料成分測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、改良型マイクロタイタープレートに関し、更に詳細には、エッジイフェクト、気泡の付着が実質的にない改良型マイクロタイタープレートに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、酵素免疫学的方法が発達し、研究や臨床診断の現場で生体溶液中の極少量のたんぱく質の存在を特定し、その濃度を測るためにＥＬＩＳＡ（Enzyme Linked Immunosorbent Assay）などの免疫方法が実施されている。これらの測定にあたってはマイクロタータープレートが用いられている。マイクロタイタープレートは通常９６穴および３８４穴のものが知られている。これらマイクロタイタープレートの弱点として最外周部のウエルを使って測った測定値が内側の測定値に比べて５から１０％低い数値を示すことが報告され、いわゆる「エッジイフェクト」として問題視されている。これまで、多くの研究者によって、このエッジイフェクトを無くす努力がなされてきた（特許文献１、２）。これらはいずれもウェルの構造を工夫して、エッジイフェクトを減少させる試みであるが、かかる多くの努力にもかかわらず、これまでエッジイフェクトを解決できていないと言わざるを得ない。
【０００３】
あわせて、各マイクロタイタープレートの穴部には気泡が付着して反応を妨害することが知られている。これら気泡も付着しにくくできたなら酵素免疫測定における測定誤差減少に役立つものである。しかしながら、これまで多くの種類のマイクロタイタープレートが開発されたが、エッジイフェクト、気泡の付着が実質的にないプレートはこれまでに知られていない。加えて、マイクロタイタープレートの各ウエルに入れる被験試料の容量を少なくすることができれば、試料の経済性にもつながるものと期待される。
【特許文献１】特開２００１−５４６７８０号公報
【特許文献２】特開２００３−３０２４０７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、この発明は、エッジイフェクト、気泡の付着が実質的にない改良型マイクロタイタープレートを提供することを目的とする。
【０００５】
この発明はまた、エッジイフェクト、気泡の付着が実質的にない上に、被験試料の容量を少なくすることができる構造を有する上記改良型マイクロタイタープレートを提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、この発明は、その１つの態様として、マイクロタイタープレートを構成する支持構造体の材質が有機ポリマーから構成されるとともに、その油性成分が従来品よりも少ない材質からなっている改良型マイクロタイタープレートを提供する。
【０００７】
この発明は、その別の態様として、全体として凹形状のマイクロタイタープレートであって、底部と、その底部の縁の周囲全体を取り囲む側壁部と、その底部に格子状に整列して配置されている所定数の筒状のウエルと、から構成されているとともに、そのウエルの深さを従来品よりも短くした構造を有するマイクロタイタープレートを提供する。
【発明の効果】
【０００８】
この発明の改良型マイクロタイタープレートは、その材質を従来品よりも油性成分が少ない有機ポリマーを使用して作製することにより、または従来の材質の表面を油性成分もしくは油性成分を含むコーテイング剤で表面処理をすることによって、エッジイフェクトおよび/または気泡の付着が実質的になくすことができるという効果を奏することができる。
つまり、この発明は、内部オイルおよび外部離形オイルが極めて少ない材料を選択することにより、成形後の製品表面上の残油量を少なくすることができ、これによってタンパク質・抗体等の付着性を向上させるとともに、気泡の発生量を減少させることができるという大きな効果がある。
【０００９】
また、この発明に係るマイクロタイタープレートは、ＥＬＩＳＡ法による免疫学的測定を行った場合、最外周部のウエル列が内側のウエル列より測定値が低いという、いわゆるエッジイフェクトは実質的には認められず、プレートを構成するウエル全体が同じ実験条件なら同じ数値を示すことができるという大きな効果を奏することができる。
【００１０】
さらに、この発明の改良型マイクロタイタープレートは、全体として凹形状にするとともに、底部に配置する筒状のウエルの深さを短くした構造にしたことにより、被験試料を各ウエルにそれぞれ注入することも、プール状の凹形状部に被験試料を注入することもできるとともに、使用する被験試料の量を大幅に節約することができるという効果も奏することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
この発明に係る改良型マイクロタイタープレートは、従来慣用されている有機ポリマーなどの材質であればいずれの構造材質を使用して作製することができる。かかる有機ポリマーとしては、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレングリコールテレフタレート、ポリ酢酸ビニル、ポリメチルペンテン、ポリビニルピロリジン、ポリアクリロニトリル、ポリメチルメタクリレート、塩化ビニルなどが挙げられ、好ましくは、ポリスチレン、ポリカーボネートなどが挙げられる。
【００１２】
この発明の改良型マイクロタイタープレートの形状にしても、特に限定されるものではなく、この発明の目的を達成することができるものであれば、いずれの形状でもよい。
【００１３】
この発明の改良型マイクロタイタープレートは、上記構造材料を使用して常法に従って所定形状に加工成形することによって作製することができる。この発明においては、主成分としての有機ポリマーなどの構造材料に油性成分、例えばワックスなどが含有されているものを使用することができる。この場合、油性成分は、例えば、主成分の構造材料に対して、約０．１％〜５％程度、好ましくは約０．２％〜２％程度、さらに好ましくは約０．５％〜１％程度含まれているのがよい。
【００１４】
この発明においては、主成分としての有機ポリマーなどの構造材料として、かかる油性成分が含有されていない材料も、その含有量が少ない材料も使用することができる。この場合には、かかる油性成分を、構造材料に加工成形に当たって混合させることもできる。さらには、構造材料を加工してマイクロタイタープレートに成形した後に、その表面に油性成分そのものもしくはその油性成分を含むコーテイング剤などでコーテイングなどして表面処理をすることもできる。このような場合には、ワックスなどの外部油性成分の含有量が、例えば、約１０ｐｐｍ〜１０００ｐｐｍ程度、好ましくは約３０ｐｐｍ〜５００ｐｐｍ程度、更に好ましくは５０ｐｐｍ〜３００ｐｐｍ程度であるのがよい。
なお、通常の規格品などに慣用されているポリスチレン中の油性成分の混入量は、一般的には約５％である。これに対して、この発明のプレートにおいては、その１／５〜１／１０程度であるのがよい。
【００１５】
上記のようにして加工成形されたマイクロタイタープレートに対して、紫外線照射による処理を行って、例えば、抗体などのタンパク質などのプレートへの付着性を良好にすることがよい。紫外線の照射時間は、例えば、約１０秒〜１８０秒程度、好ましくは約３０秒〜１５０秒程度、更に好ましくは約５０秒〜１００秒程度であるのがよい。
【００１６】
ここで、この発明の１形態である９６ウエル型マイクロタイタープレートの構造について図面を参照しつつ説明するが、下記説明も参照図面もいずれもこの発明を限定する意図では一切なく、この発明を具体的に説明するためだけの例示的意図でしかないことは理解すべきである。
【００１７】
図1は、この発明の１形態である９６ウエル型マイクロタイタープレートを示す平面図であり、図２は図１の線Ａ−Ａ断面図であり、また図３は図１の線Ｂ−Ｂ断面図である。
図示するように、この発明のマイクロタイタープレートは、上記構造材料を加工成形して作製した凹形状の長方形のプレートであり、底部１０と、その底部の縁に周囲を取り囲んで設けられた側壁部２０とからなる凹状部分３０と、その底部１０に整列して設けられた所定数のウエルＷｎからなるウエル部分と、を設けた構造になっている。ここで、この形態では、所定数のウエルＷｎは９６個、つまりｎ＝１〜９６であるが、ウエルＷｎの数は、使用目的、測定手段などに応じて適宜変更して作製することができ、そのウエル数は増減することができる。
【００１８】
ウエルＷｎは、プレート底部１０に格子状に縦横等間隔に整列して配置されている。例えば、この発明の１形態である９６ウエル型マイクロタイタープレートでは、そのウエルＷｎは、縦８列（Ａ〜Ｈ）、横１２列（１〜１２）からなる合計９６個のウエルが等間隔に格子状に配置されている。
【００１９】
ウエルＷｎは、その筒状部がプレート底部１０の上面から突出した形状に設けてもよく、またはその筒状部の頂上部分、つまり入口がプレート底部１０の上面と同一平面上になるように設けることもできる。この発明の９６ウエル型マイクロタイタープレートのウエルＷｎのそれぞれの筒状部の高さは、現在市販されている規格品の９６ウエル型マイクロタイタープレートのウエル筒状部の高さが１０ｍｍ程度であるのに対して、その１／２〜１／５程度であり、好ましくは１／２．５〜１／４程度、更に好ましくは１／３程度であるのがよい。つまり、例えば、９６ウエル型マイクロタイタープレートのウエル筒状部の高さは、プレートの種類などによって異なるが、一般には、約２ｍｍ〜６ｍｍ、より具体的には約２ｍｍ〜６ｍｍ程度であるのがよい。
【００２０】
このようにウエルの筒状部の高さを規格品に比べて大幅に低くすることによって、当然のことながら、この発明のプレートのウエル内部体積は、通常の規格品のウエル内部体積より格段に縮減することができる。同様の通常の規格品におけるウエル内部体積が４３０μｌであるのに対して、この発明のプレートのウエル内部体積は、一般には約８０μｌ〜２００μｌ、好ましくは約８０μｌ〜１５０μｌ、さらに好ましくは約８０μｌ〜１２０μｌ程度である。これによって、この発明においては、ウエルに注入する試料の量を大幅に削減することができることになる。生物試料の被験試料は、多くの場合、その量が非常に少ないことを勘案すると、この発明のプレートは、特に生物試料の測定・検出などに極めて有利に適用することができる。
このようにウエル筒状部の深さを短くすることによって、材料の充填がし易くなるとともに、ウエル内壁や底部に対する紫外線照射を均一に行うことができる。また、離型しやすいワックスなどの少ない材料を使用することにより、加工成形に当たっても、通常の突き出しピンによる食いつきがなく、離型が容易になり、変形なしに底面の平坦を確保しやすくすることができることになる。また、この発明のプレートは、加工成型時には、必要以上の射出圧力を高めることなく、平坦度も得やすいという特長も有している。
【００２１】
上記のように作製したマイクロタイタープレートは、特に血液試料などの生物試料中に含まれる抗体、抗原などのタンパク質などの生体成分を測定・検出するための測定器具として幅広く使用することができる。マイクロタイタープレートを使用するには、測定対象成分が含まれている可能性がある試料を、マイクロタイタープレートの凹状部分に添加し、各ウエルに注入されるようにしてもよいし、また各ウエルに対して試料を直接注入してもよい。いずれの場合でも、試料の測定・検出などは、当該技術分野で慣用されている手法によって行うことができる。
【実施例１】
【００２２】
ポリスチレン材料は（ＰＳジャパン製）、内部ワックスＭ．Ｏ：０．５％、ＷＡＸ：０．７％で、外部ワックスが１００ｐｐｍのものを用いて金型により図に示すような形状のマイクロタイタープレートを作製した。中央部のウエルは全て、通常のマイクロタイタープレート筒状部の高さのほぼ１／３の約５ｍｍの高さに、またウエル内部体積も、通常のウエル内部体積が４３０μｌであるのに対して、１００μｌになるように成形した。金型成形後、ウエルは、２６０ナノメーター／１８７ナノメーターのＵ字型紫外線ランプの２００Ｗ仕様を用いて、照射距離４０ｍｍで６０秒間紫外線照射をした。
【００２３】
（プレートの性能試験）
ニワトリ抗体（抗ヒトＴＮＦαＩｇＹ）を1 mg タンパク質/ml PBS（６８ｍMリン酸緩衝液ｐH６．８）に溶解し、PBS溶液で４００から８００倍に希釈して、その３５μｌ／ウエルに添加して2時間放置後、０．１％ツイーン２０を含んだＰＢＳ緩衝液１５０μｌずつで３回洗浄し、１０から２５％ブロックエース（大日本製薬製）で2時間ブロッキングを行った。ブロッキング後、０．１％ツイーン２０を含むＰＢＳ緩衝液１５０μｌずつで３回洗浄した。
ヒトＴＮＦαタンパク質の２００μｇ／ｍｌＰＢＳを用意し、０．１％ブロックエースを含む（大日本製薬）ＰＢＳで希釈して１０ｎｇ／ｍｌ溶液を作成した。その３５から３６μｌ／ｗｈｏｌｅを添加して1時間室温で放置した。その後、０．１％ツイーン２０を含むＰＢＳで３回洗浄後、1万倍希釈したストレプトアビジン溶液３５から３６μｌ／ｗｈｏｌｅに添加して、３０分間放置した後、０．１％ツイーン２０を含むＰＢＳで５回洗浄した。発色剤ＴＭＢを加えて２０から６０分間発色後、１Ｍ硫酸を添加して反応を停止して、波長４０５ｎｍでプレートリーダ−を用いて測定した。その結果、各ウエルに添加する溶液量は３５μｌ／ウエル以上で測定可能であった。
【産業上の利用可能性】
【００２４】
この発明に係る９６ウエル型マイクロタイタープレートは、特に抗体などのタンパク質などの検出や、測定などに幅広く適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】この発明の９６ウエル型マイクロタイタープレートを示す平面図。
【図２】図1の線Ａ−Ａ断面図。
【図３】図１の線Ｂ−Ｂ断面図。
【符号の説明】
【００２６】
１０  底部
２０  側壁部
３０  凹状部分
Ｗ    ウエル
【図１】
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【図２】
2007132878.tif 000004
【図３】
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