(57)【要約】【課題】  ｃ−ｋｉｔ遺伝子の発現を抑制し、より効果が高いと期待される新規な美白剤を提供する。【解決手段】  ガジュツ、カシ、サンリョウ、アマチャのいずれかの植物若しくはそれらの抽出物をｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤として用いる。これらの植物や抽出物は、メラノサイトや肥満細胞、消化管間質腫瘍細胞等の表面に出現するｃ−ｋｉｔの発現を抑えるため、ＳＣＦを介在する刺激から防御し、メラニンの産生を抑制して美白作用を発揮したり、肥満細胞からの増殖分化などを抑制して抗アレルギー作用を発揮したり、あるいは消化管間質腫瘍の抑制したりすることが期待される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガジュツ、サンリョウ、アマチャ、カシのいずれかの植物又はそれらの抽出物のいずれかを含むことを特徴とするｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤。
【請求項２】
請求項１に記載のｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤を含むことを特徴とする美白用組成物。
【請求項３】
前記ｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤は、ガジュツであることを特徴とする請求項２に記載の美白用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ｃ−ｋｉｔは、ＳＣＦ（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ｆａｃｔｏｒ）の受容体として造血細胞の表面に発現し、造血細胞の増殖や分化の促進に重要な機能を果たす他、肥満細胞の表面にも発現し、ＳＣＦがｃ−ｋｉｔに結合することによって、肥満細胞の遊走、分化・増殖を促進し、これにより喘息等のアレルギーを引き起こすことも報告されている（Nicholas W. Lukacs et al. J. Immunol 156(10), 3945-3951 1996）。また、メラノサイトにも発現して、ＳＣＦの結合によりチロシナーゼの産生を促し、メラニンの生成に関与しているとも言われている。さらには、ｃ−ｋｉｔを介在した刺激が、ヒトの肺大細胞癌（Sekido Y, et al. Cancer Res 51(9):2416-2419, 1991.）や急性白血病（Ikeda H, et al. Blood 78(11):2962-2968, 1991.）、乳癌（Hines SJ, et al. Cell Growth Differ 6:769-779, 1995.）、生殖細胞腫瘍（Strohmeyer T, et al. Cancer Res 51(7):1811-1816, 1991.）、消化管間質腫瘍（DiMatteo G, et al. Hepatogastroenterology 49(46):1013-1016, 2002.）などに関与していることが認められ、これらの癌細胞においてもｃ−ｋｉｔの発現が認められている。
【０００３】
このようにｃ−ｋｉｔは、種々の場面で重要な機能を果たしており、ｃ−ｋｉｔを介在した刺激伝達を抑制することによって、アレルギーの抑制や肌の美白化、腫瘍の抑制などに寄与することが考えられる。
【０００４】
ｃ−ｋｉｔを介在した刺激伝達を抑制するものとして、これまでに、例えば特開２００２−３０２４５１号公報（特許文献１）には、アレルギー疾患の改善を試みるべく、カンゾウやウコン等の植物抽出物からなるＳＣＦ結合阻害剤が開示されている。また、特開２００４−３５４４２号公報（特許文献２）や特開２００４−８３５５１号（特許文献３）にも、各種の植物抽出物からなるｃ−ｋｉｔ発現抑制剤が開示されている。
【０００５】
ところが、特許文献１〜３のいずれにおいても、ｃ−ｋｉｔへのＣＦＳの結合量を測定したものであって、直接ｃ−ｋｉｔの発現量（ｃ−ｋｉｔｍＲＮＡの存在量）を測定しているものではない。そして、これまでのところ、これらの特許文献を含めて、ｃ−ｋｉｔの発現そのものを抑えるというアプローチはなされておらず、ｃ−ｋｉｔ遺伝子の発現を抑制する物質については言及された文献は見あたらない。
【０００６】
【特許文献１】特開２００２−３０２４５１号公報
【特許文献２】特開２００４−３５４４２号公報
【特許文献３】特開２００４−８３５５１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は上記背景技術に鑑みてなされたものであって、ＳＣＦの受容体の発現そのものを遺伝子レベルで抑制することによって、ｃ−ｋｉｔが関与すると考えられる各種の疾病の予防や改善、色素沈着、シミ・ソバカスの予防や改善（いわゆる美白作用）を期待できる物質を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明のｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤は、ガジュツ、カシ、サンリョウ、アマチャのいずれかの植物若しくはそれらの抽出物からなるものであって、さらに、本発明はそれを含む美白用組成物に係るものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤は、メラノサイトへの刺激伝達物質であるＳＣＦの受容体であるｃ−ｋｉｔの発現を抑制する。この結果、メラノサイトへの刺激伝達が抑制され、チロシナーゼの生成ひいてはメラニンの産生が抑制される。従って、これらを化粧料とすることによって、新規な美白用組成物が提供される。また、造血細胞、肥満細胞その他上記癌細胞の表面にｃ−ｋｉｔが発現するのを抑制し、ｃ−ｋｉｔを介在していると考えられる各種疾病の予防や治療に貢献できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明のｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤は、ショウガ科の植物であるガジュツ（Curcuma zedoaria Roscoe）、シクンシ科の植物であるカシ（Terminalia chebula Retz）、ミクリ科の植物であるサンリョウ（Sparganium simplex Hudson）、ユキノシタ科の植物であるアマチャ（Hydrangea macrophilla var. thunbergiiやHydrangea macrophylia(Thnb.) Ser. Subsp. Serrata(Thunmb.) Makino、Hydrangea Sering var. thunbergill Sugimoto）のいずれかの植物又はそれらの植物抽出物のいずれかを含むものである。また、これらの植物には、それらの近縁植物も含まれる。ここで、ｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤とは、ｃ−ｋｉｔをコードする遺伝子の発現を直接抑制する物質であり、例えば配列番号１に示される塩基配列を有するプライマー（sense側）及び配列番号２に示される塩基配列を有するプライマー（anti-sense側）を用いたＲＴ−ＰＣＲ法により検出される。すなわち、配列番号１の塩基配列及び／又は配列番号２の塩基配列からなるプライマー（セット）を用いてＲＴ−ＰＣＲを行った場合に、発現しているｍＲＮＡ量（測定される塩基量）の減少を伴う。これらのプライマーは、ｃ−ｋｉｔをコードするｍ−ＲＮＡの塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋによる）から作成されたものである。
【００１１】
上記の植物は、花、茎、葉、根などのいずれの部位を用いてもよく、あるいはその全草を用いることとしてもよい。また、その抽出物とは前記いずれかの部位あるいはその全草を溶媒で抽出したものを言う。また、抽出液そのものだけでなく、それらをさらに濃縮してエキス状にしたものや、さらにドライスプレーなどにより粉末状にしたものでもよい。用いられる抽出溶媒には、ｎ−ヘキサン、ベンゼン等の炭化水素、ジエチルエーテル等のエーテル、ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン、酢酸エチル等のアルキルエステル、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン、エタノール、メタノール等の低級１価アルコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコール、水など各種の親油性溶媒、親水性溶媒あるいはそれら混合物が例示され、特に限定されるものではない。これらの中でもエタノール、水あるいはエタノールと水との混合溶媒が特に好ましい。抽出方法も特に限定されるものではなく、室温若しくは加温した状態で適宜公知の方法が採用される。また、それらの溶媒を２種以上用い、活性炭やその他の吸着剤等を用いて粗精製したものであっても差し支えない。
【００１２】
本発明のｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤はそのままであるいは適当な担持体とともに、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、散剤、顆粒剤等の内服用の医薬組成物として、あるいは、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ゲル、注射剤などの各種外用の組成物（医薬用、化粧用を問わず）としてヒトに適用される。また、食品としての形態であってもよい。担持体としては、例えば、乳糖、デンプン、リン酸カルシウム、結晶セルロース、マンニット、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリオキシエチレンアルキルエステル、ミツロウ、ステアリルアルコール、スクワラン、水、エタノールが例示される。もっとも、その製剤化に必要であれば、医薬品、医薬部外品、化粧品等に用いられる各種成分を用いることができるのは言うまでもなく、本発明の抽出物のほか、ビタミン類のような各種主薬、佐薬、保湿剤などの各種補助成分をさらに加えてもよい。
【００１３】
その投与量は、剤型やその投与経路によっても異なるが、成人１日量として、植物の場合、０．１ｇ〜１０ｇ、抽出物の場合０．００１ｍｇ〜１０ｇが好ましい。
【実施例１】
【００１４】
〔ｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制試験〕
ガジュツ、カシ、サンリョウ、アマチャ、ウコンの各根茎乾燥物を５０ｖ／ｖ％エタノール水溶液で、常温にて７２時間抽出した。そして、溶媒を留去した残留物をそれぞれ５ｗ／ｖ％濃度となるように５０ｖ／ｖ％エタノール水溶液に溶解した。その後、ポアサイズ０．２μｍのメンブランフィルターにて濾過して、試料溶液とした。また、ウワウルシについては、市販品（商品名「ＭＥＬＦＡＤＥ−Ｊ」、Pentapharm Ltd.社製）を用い、細胞系での最終濃度がエキスとして１％となるように用いた。
【００１５】
培養液としてクラボウ（株）製ＨＭＧＳ−２を加えたＭｅｄｉｕｍ−２５４培地を用い、クラボウ（株）製ＮＨＥＭ正常ヒト新生児包皮表皮メラノサイトを内径１０ｃｍのシャーレに４×１０３個／ｃｍ２の植え付け量で植え付けた。植え付けの４日後、植物乾燥物濃度にして１０ｐｐｍ若しくは１ｐｐｍ濃度となるように試料溶液をシャーレに添加した。
【００１６】
試料添加４時間後にＵＶ（２０ｍＪ／ｃｍ２）を照射し、１６時間後にＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）でｍＲＮＡを抽出し、Ｔａｋａｒａ  Ｏｎｅ  Ｓｔｅｐ  ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（ＡＭＶ）（ＴａｋａｒａＢｉｏ社製）でＲＴ−ＰＣＲを行い、下記の計算式に基づき、ｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制率を求めた。その結果を表１に示す。なお、ブランクにはＰＢＳ（−）を用い、ｃ−ｋｉｔレセプターのリガンドであるＳＣＦを培地に添加して試験を行った。また、ｃ−ｋｉｔのｍＲＮＡ産生度は、単位ＧＡＤＰＨのｍＲＮＡ量あたりのｃ−ｋｉｔのｍＲＮＡ量の割合で計算し、さらにブランク区に対するその割合を計算した。
【００１７】
【数１】
2007269705.tif 000002
【００１８】
【表１】
2007269705.tif 000003
【００１９】
以上の結果から、ガジュツ、カシ、サンリョウ、アマチャの抽出物はｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制効果を有することが理解された。また、ガジュツと同じクルクマ属の植物であるウコンにはｃ−ｋｉｔ抑制作用はなかった。
【実施例２】
【００２０】
〔メラニン産生抑制試験〕
培養液としてクラボウ（株）製ＨＭＧＳ−２を加えたＭｅｄｉｕｍ−２５４培地を用い、クラボウ（株）製ＮＨＥＭ正常ヒト新生児包皮表皮メラノサイトを内径１０ｃｍのシャーレに４×１０３個／ｃｍ２の植え付け量で植え付けた。植え付けの翌日、実施例１と同様にして得られた試料溶液を植物乾燥物濃度にして１０ｐｐｍ若しくは１ｐｐｍ濃度となるようにシャーレに添加した。なお、ウワウルシについては、ｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制試験と同様に、細胞系での最終濃度が市販品エキスとして１％となるように用いた。
【００２１】
試料添加３日経過後に、細胞を２Ｎ-ＮａＯＨに溶解し４００ｎｍの吸光度を測定した。また、細胞増殖度は２Ｎ-ＮａＯＨに溶解した細胞溶解液の一部をＢｉｏ−Ｒａｄ社製のプロテインアッセイキットにより６００ｎｍの吸光度で測定し、タンパク量に換算した。メラニン産生度は、単位タンパク量あたりのメラニン量の割合で計算し、対照を１００として次式により産生割合を求めた。なお、ブランクとしてＰＢＳ（−）を用い、ｃ−ｋｉｔのリガンドであるＳＣＦを培地に添加して試験を行った。また、ｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制作用のないアルブチンを比較対照とした。その結果を表２に示す。
【００２２】
【数２】
2007269705.tif 000004
【００２３】
【表２】
2007269705.tif 000005
【００２４】
以上の結果から、ガジュツの抽出物はメラニンの産生をも抑制し、その効果は美白作用の優れたアルブチンよりもさらに優れたものであった。また、ガジュツと同じ属に属するウコンは、ｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制作用もなく、メラニン産生抑制作用もなかった。ウワウルシは、遺伝子レベルにおいてｃ−ｋｉｔの発現を抑制することが確認されるとともに、メラニンの産生を抑制することも確認された。
【実施例３】
【００２５】
ガジュツ、カシ、サンリョウ、アマチャの各植物乾燥物１ｋｇに対して、水、５０ｖ／ｖ％エタノール及びエタノールを各１０Ｌ加え、約８０℃で８時間還流抽出した。冷却後濾過して、溶媒を減圧留去して、エキス状のｃ−ｋｉｔ遺伝子発現抑制剤を得た。
【実施例４】
【００２６】
次に、実施例３による抑制剤を用いた美白用組成物としての処方例を示すが、本発明は下記の組成物に限定されるものではない。
（１）化粧用クリーム（重量％）
ａ）ミツロウ                                              ２．０
ｂ）ステアリルアルコール                                  ５．０
ｃ）ステアリン酸                                          ８．０
ｄ）スクワラン                                          １０．０
ｅ）自己乳化型グリセリルモノステアレート                  ３．０
ｆ）ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O.）            １．０
ｇ）ガジュツ水抽出物                                      １．０
ｈ）１，３−ブチレングリコール                            ５．０
ｉ）水酸化カリウム                                        ０．３
ｊ）防腐剤・酸化防止剤                                    適  量
ｋ）精製水                                                残  部
〔製法〕
ａ）〜ｆ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｇ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、混合溶解したａ）〜ｆ）に加えて乳化し、４０℃まで撹拌しながら冷却する。
【００２７】
（２）乳液（重量％）
ａ）ミツロウ                                              ０．５
ｂ）ワセリン                                              ２．０
ｃ）スクワラン                                            ８．０
ｄ）ソルビタンセスキオレエート                            ０．８
ｅ）ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)            １．２
ｆ）ガジュツ５０％エタノール抽出物                        ０．２
ｇ）１，３−ブチレングリコール                            ７．０
ｈ）カルボキシビニルポリマー                              ０．２
ｉ）水酸化カリウム                                        ０．１
ｊ）精製水                                                残  部
ｋ）防腐剤・酸化防止剤                                    適  量
ｌ）エタノール                                            ７．０
〔製法〕
ａ）〜ｅ）までを加熱溶解し、８０℃に保つ。ｆ）〜ｋ）までを加熱溶解し、８０℃に保ち、混合溶解したａ）〜ｅ）に加えて乳化し、５０℃まで撹拌しながら冷却する。５０℃でｌ）を添加し、４０℃まで攪拌、冷却する。
【００２８】
（３）化粧水（重量％）
ａ）ガジュツ５０％エタノール抽出物                      ２０．０
ｂ）グリセリン                                            ５．０
ｃ）ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.)    １．０
ｄ）エタノール                                            ６．０
ｅ）香料                                                  適  量
ｆ）防腐剤・酸化防止剤                                    適  量
ｇ）精製水                                                残  部
〔製法〕
ａ）ｂ）ｇ）を均一に混合する。ｃ）〜ｆ）を均一に混合し、ａ）ｂ）ｇ）の混合物に加える。
【００２９】
（４）洗顔剤（重量％）
ａ）ガジュツエタノール抽出物                              ０．２
ｂ）タルク                                                残  部
ｃ）セルロース                                          ２０．０
ｄ）ミリスチン酸カリウム                                ３０．０
ｅ）ラウリルリン酸ナトリウム                            １０．０
ｆ）ブドウ種子油                                        ０．０１
ｇ）香料                                                  適  量
〔製法〕
ａ）〜ｇ）までを混合し、よく撹拌、分散させ均一にする。
【実施例５】
【００３０】
実施例３による抑制剤を用いた医薬組成物の処方例について示す。
（錠剤）
ａ）カシ水抽出物                                          １０ｇ
ｂ）ヒドロキシプロピルセルロース                            ２ｇ
ｃ）トウモロコシデンプン                                  １０ｇ
ｄ）乳糖                                                  ９５ｇ
ｅ）ステアリン酸マグネシウム                                ３ｇ
ｆ）タルク                                                  ３ｇ
〔製法〕
ａ）〜ｆ）を均一になるまで攪拌混合し、打錠して錠剤１０００錠とする。
【００３１】
（カプセル剤）
ａ）サンリョウ５０％エタノール抽出物                      １０ｇ
ｂ）乳糖                                                ９５０ｇ
ｃ）ステアリン酸マグネシウム                              ４０ｇ
〔製法〕
ａ）〜ｃ）を均一に混合し、その混合末をハードゼラチンカプセルに２００ｍｇずつ充填してカプセル剤とする。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明によれば、ｃ−ｋｉｔの発現を遺伝子レベルで抑制することができ、新たな美白剤を始めとして、ｃ−ｋｉｔを介在した種々の疾病の治療薬としての利用が期待される。
【配列表】
2007269705000001.app