(57)【要約】【目的】  食用担子菌類子実体もしくは菌糸体から安全性の高い、新規なメタボリックシンドローム治療剤または、新規な中性脂肪低下食品として有用なβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法を提供する。【構成】  エノキダケの子実体もしくは菌糸体から得られる水性溶媒に可溶なβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
食用担子菌類の子実体もしくは菌糸体から水性溶媒によって抽出されるβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法。
【請求項２】
食用担子菌類がエノキダケ、マッシュルーム、シイタケ、マイタケであることを特徴とするβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法。
【請求項３】
抽出に用いる水性溶媒が、希薄な有機酸もしくは無機酸水溶液、純水および鉱水、希薄なアルカリ性水溶液であることを特徴とするβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は新規なメタボリックシンドローム治療剤であるβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】  近年、担子菌類の様々な生理活性が注目され、メタボリックシンドローム予防または治療作用、中性脂肪低下作用などが指摘されている。その他、抗がん作用、免疫賦活作用、コレステロール低下作用、抗血栓、血圧降下、血糖降下など多岐にわたる有効な成分が証明されつつあり、新しい医薬品の開発や機能性食品の素材として注目されている。【０００３】  このような各種生理活性の中でも、担子菌類の持つ植物性キトサンの血中コレステロール低下作用については研究報告の数が極めて少なく、これまでにエノキダケの抽出物から得られた成人病予防作用をもつ植物性キトサンおよびその製造方法（特許文献１）などの特許出願があるだけである。またエノキダケのもつ植物性キトサンのコレステロール低下作用（非特許文献１）が学会等で報告されている。【０００４】  近年になってメタボリックシンドロームが注目されるようになって、血中コレステロールの低下作用や中性脂肪の低下作用がますます重要になってきた。メタボリックシンドロームは、次のような症状をあらわす。高血糖症、高血圧、肥満、ＨＤＬコレステロール低下、トリグリセリドの上昇。関連する病気は、脂肪肝、多嚢胞性卵巣症候群、ヘモクロマトーシス、黒色表皮腫、非アルコール性脂肪肝などである。
メタボリックシンドロームの診断基準
日本高血圧学会、日本肥満学会などが「メタボリックシンドローム」という新たな概念を使った「診断基準」を作成、日本内科学会で発表した。診断基準は、目安としてウエストサイズ（男性で８５センチ、女性で９０センチ以上）を第一条件とした上で、（１）最高血圧が１３０以上か最低血圧が８５以上（２）空腹時の血糖値が１１０以上（３）中性脂肪が１５０以上か善玉コレステロールが４０未満の三項目のうち二つ以上が該当すれば、メタボリックシンドロームと判断する。このメタボリックシンドロームに該当する人は、日本国内で１千万人以上と推定されている。
ここには、米国の基準ではなくて、札幌医大の島本和明教授らが提唱する日本人の基準数値を上げておく。
１．ウエストが８５ｃｍ以上；女性の場合は９０ｃｍ以上
２．トリグリセリドの上昇；１５０ｍｇ／ｄｌ以上
３．ＨＤＬコレステロールの低下４０ｍｇ／ｄｌ以下：女性の場合は５０ｍｇ／ｄｌ引以下。
４．血圧が１３０／８５以上。
５．グルコースレベルが１１０ｍｇ／ｄｌ以上である。【０００５】メタボリックシンドロームの病理学
メタボリックシンドロームの原因は極めて複雑である。大抵の患者は老人で太っていて、インシュリン抵抗性に問題がある。肥満やインシュリン抵抗性がメタボリックシンドロームの原因であるのか結果なのか議論があるところである。炎症に関するマーカーがしばしば増加している。例えばＣＲＰ、フィブリノーゲン、インターロイキン６、ＴＮＦαなどである。通常の連鎖は、内臓脂肪の増大であるように思われる。このときＴＮＦαの血中レベルが上がっている。ＴＮＦαは炎症性サイトカインの生産に関与するだけでなくインシュリン抵抗性をもたらすＴＮＦα受容体とつながっている。食事の量を１／３に減らしたラットの実験では蔗糖がメタボリックシンドロームの発生のモデルになっている。蔗糖はまず血中のトリグリセリドを上昇させ、内臓脂肪を増やし、ついにはインシュリン抵抗性を引き起こしたのである。
また、肥満で巨大化した脂肪細胞から出る「飽和脂肪酸」が免疫細胞の働きを活性化し、さらに今度は免疫細胞が脂肪細胞を活性化し、脂肪細胞から炎症性タンパク質が出ることや、内臓脂肪が溜まると脂肪細胞から出るアディポネクチンが減少することなどが動脈硬化をひきおこす原因であるという研究がある。【０００６】治療法：
主な治療法はライフスタイルである。すなわちカロリー制限と運動である。しかしながら医薬品による治療も平行して行われる。高血圧にはＡＣＥインヒビター、コレステロール薬は、ＬＤＬコレステロールを下げる。インシュリンの抵抗性を下げるためにメトフォルミンやチアゾリディンディオンなどが投与される。
【特許文献１】特願２００４−５４２８５０
【非特許文献１】岡崎英雄：キトグルカンの脂質吸収抑制の影響について、Ｆｏｏｄ  Ｓｔｙｌｅ２１，９（２），２８−３０（２００５）
【非特許文献２】中村泰子，大岡淑恵ら：成人女性の体重および体脂肪に及ぼすキノコキトサンの影響、Ｆｏｏｄ  Ｓｔｙｌｅ２１，１０（３），２９−３３（２００６）
【非特許文献３】岡崎英雄：キノコキトサンのダイエット効果の検討、Ｆｏｏｄ  Ｓｔｙｌｅ２１，１０（６），８５−９０（２００６）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】  ライフスタイルの変更もしくは改善がメタボリックシンドロームの最有力な治療法であるが、これを実現するのは実際には極めて困難であることがしばしば指摘されている。すなわち好物の食べものを止めるか半分以下に減らし、慣れない運動に精を出す、例えば一駅手前で電車などを降りて歩くとか、夕食後に１時間歩くとか、食習慣や生活習慣を変えるのは人生を根本から覆すほどの出来事なのである。生活習慣を変えることなくメタボリックシンドロームを治療できないものだろうか。本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、食用キノコを有効利用し、副作用の極めて少ない、新規なメタボリックシンドロームの予防または治療に有用なβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】  本発明はエノキタケ、シイタケ、マッシュルーム、マイタケの子実体または菌糸から得られる新規なメタボリックシンドローム治療または予防に有用なβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法に関する。
【発明の効果】
【０００９】  本発明者等は、かかる問題を解決するべく担子菌類由来で副作用の少ない新規なメタボリックシンドローム治療剤を鋭意検索した結果、食用担子菌のうち、エノキダケ、シイタケ、マッシュルーム、マイタケの子実体または菌糸体抽出液から新規なメタボリックシンドローム治療剤が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１０】  本発明者等は、すでに担子菌類から得られる植物性キトサンが、生活習慣病の改善に有用であることを見出し、その製造法を特許出願している。しかしながら従前の方法は、高濃度の苛性ソーダを用いるなど簡単に家庭などで実施できるような製造法ではなかった。また、工業的に製造するにしても高濃度の熱苛性ソーダの使用などかなりの危険な作業工程があり、簡便な方法とはいい難い。本発明においては、さらにその製造法に工夫・改善を重ね、より安全で副作用の少ない天然の成分を食用の担子菌類から抽出することに成功した。
表１、表２および表３の結果から明らかなように、食用担子菌類であるエノキダケ、シイタケ、マッシュルーム、マイタケの子実体および菌糸体の水性溶媒抽出液から、新規なメタボリックシンドロームの予防または治療効果を持つβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンが得られた。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】  βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンを用いた医薬品又は食品
本発明のβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンは、ウエスト、体重、血圧、血糖値、ＨｂＡ１ｃ、ＨＤＬコレステロール値、中性脂肪値等の低下作用を有する。従って、本発明のβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンは、高血圧症や糖尿病などの生活習慣病、成人病の検査数値改善に大いに効果があり、医薬品又は食品の形態で使用するのに好適である。
本発明のβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンを液剤の形態で使用するには、βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンに、安息香酸ナトリウム、ｐ−オキシ安息香酸メチル、デヒドロ酢酸ナトリウムなどの保存剤、リンゴ酸、アスコルビン酸、クエン酸、酢酸などの溶解補助剤、さらに着色剤、香料、風味剤、グルコース、マンニトールなどの甘味剤などを必要に応じて配合し、さらに蒸留水、生理食塩水などの希釈剤を必要に応じて加えて医薬品又は食品を調製する。
βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンを有効成分とする医薬品は、通常、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、座剤等の固形製剤の形態に調製する。その際、これらの医薬製剤は、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤などの稀釈剤又は賦形剤を用いて調製される。
錠剤の形態に形成するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、マンニトール、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロースなどの賦形剤、蒸留水、生理食塩水、単シロップ、ブドウ糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖などの崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤、酢酸、アスコルビン酸、リンゴ酸などの溶解吸収促進剤、グリセリン、澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状硅酸などの吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などがあげられる。さらに錠剤は、必要に応じて糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。
丸剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えばブドウ糖、乳糖、マンニトール、澱粉、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤、アラビアゴム末、ゼラチンなどの崩壊剤などが挙げられる。座剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知のものを広く使用でき、例えばカカオ脂、高級アルコールのエステル類、ゼラチンなどが挙げられる。
有効成分として使用するβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの含有量は特に限定されず広範囲に選択されるが、通常製剤中に１〜９０質量％、好ましくは１０〜７０％質量で含有させるのがよい。
投与量は特に限定されないが、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度などの条件に応じて適宜選択すればよく、体重１ｋｇに対してβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンが０．１〜１０ｍｇ、好ましくは０．５〜５ｍｇとなる量を一日１〜４回に分けて経口投与する。βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの含有量が多いと、これが鉄分やビタミンを吸収、包接するために鉄分やビタミンの欠乏症になることがあるが、上記範囲の投与量であればβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの含有量が比較的低いので、鉄分やビタミンを補う必要はない。
本発明のβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンを含有する食品は特に限定されないが、例えば、スープ、味噌汁、ドリンク、ゼリー、グミ等が挙げられる。これら食品中のβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの含有量は、好ましくは０．０１〜５．０質量％、さらに好ましくは０．０２〜１．０質量％、最も好ましくは０．０５〜０．５質量％である。
【実施例】以下に実施例を示し、本発明をより具体的に説明するが、もちろんこれらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００１２】  エノキダケ２５０ｇに２５０ｍｌまたは５００ｍｌの純水を加えて、圧力なべで加熱する。自然冷却をして、キノコから抽出液をろ別する。濾液中の植物性キトサンを定量して表１の結果を得た。植物性キトサンの含有量は、１３６ｍｇまたは１２５ｍｇであった。また水性溶媒に可溶なβグルカンおよび複合糖質含有キノコキトサンの含有量は、エノキダケ２５０ｇあたり７．７０ｇまたは９．３４ｇであった。
【表１】
2007332336.tif 000002
抽出溶媒は、弱い有機酸、弱いアルカリ溶液および純水で行われる。βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの回収は、比較的容易である。さらに回収されたβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンが、純植物性キトサンを含んでいることも証明された。
純植物性キトサンの定量法
βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサン中の純植物性キトサンの含有量は、以下の方法により行う。
βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサン粉末０．５ｇを正確に秤量し、これを５容量％酢酸に溶かして正確に１００ｇとする。この溶液１ｇを２００ｍｌ容の三角フラスコに正確にはかりとり、脱イオン水３０ｍｌを加え、充分攪拌混合する。指示薬として０．１％トルイジンブルー溶液２〜３滴を加え、Ｎ／４００ポリビニル硫酸カリウム溶液［（Ｃ２Ｈ３ＯＳＫ）ｎ、ｎ＝１５００以上］で滴定する。脱アセチル化度（すなわちキトサン含有量＝グルコサミン含有量）は下記の式に従って求める。
脱アセチル化度＝（Ｘ／１６１）／［（Ｘ／１６１）＋（Ｙ／２０３）］×１００（％）
ここに、Ｘ＝（１／４００）×（１／１０００）×ｆ×１６１×ｖ
Ｙ＝０．５×（１／１００）−Ｘ
ｖ＝Ｎ／４００ポリビニル硫酸カリウム溶液滴定値（ｍｌ）
ｆ＝Ｎ／４００ポリビニル硫酸カリウム溶液のファクター
ファクターｆは１．００５である。
式を書き直すと
脱アセチル化度＝［２０３Ｘ／（２０３Ｘ＋１６１Ｙ）］×１００（％）
Ｘ＝１．００５×１６１×ν（滴定値；ｍｌ）
Ｙ＝５−Ｘ
ここで標準として、純植物性キトサンを用いると、試料中の純植物性キトサン含量を、植物性キトサン当量として、計算で求めることができる。
標準の純植物性キトサンの製造方法は、特願２００２−２９５３７９に詳細に記されているが、簡単に再掲しておく。新鮮な担子菌類の子実体１００ｇに等量の固形ＮａＯＨを加えて、１００℃に４時間以上加熱する。これを水洗し、アルカリを除いてから１０％−ＡｃＯＨを５００ｍｌ加えて酢酸酸性となし、布で濾過する。透明な濾液を４０％−ＮａＯＨで中和し、ｐＨを１０以上にすると沈澱が生じ、白濁する。遠心分離でこの沈澱を回収し、中性になるまで水洗でアルカリを除去する。必要に応じて、この操作を数回繰り返す。得られた沈澱を凍結乾燥する。この方法で精製純キトサンが得られる。収率は、２〜３ｇである。
【実施例２】
【００１３】  新鮮なエノキダケ、シイタケ、マッシュルーム、マイタケ各１００ｇおよびエノキダケ８０ｇ＋シイタケ２０ｇの熱水抽出・有機酸抽出によるβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの収量は、
【表２】
2007332336.tif 000003
熱水抽出したβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンは、室温の純水に易溶である。しかしリンゴ酸抽出で得られたものは、純水を加えると濁りがでる。βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンは、熱水に可溶で、エタノール８０％で沈澱するというクライテリアを採用した。
【実施例３】
【００１４】  新鮮なエノキダケ８０ｇ、シイタケ２０ｇを細断し、少量の純水約３０ｍｌを加えて、フードプロセッサーにかける。これをビーカーに移し，純水２００ｍｌを加えて加熱する。沸騰後、弱い火力で２０〜３０分間加熱をつづける。室温にまで冷まし、４０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離を行う。上清をβグルカンおよび複合糖質含有キノコキトサンとして回収する。このようにして製造されたβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンに含まれる純植物性キノコキトサンの分析を行ったところ、約２０ｍｇの純植物性キノコキトサンが含まれていた。またこのようにして製造されたβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンは、そのまま飲用することができるが、コンソメやブイヨンを加えるか、ミカンジュースやレモン、蜂蜜などを加えて調味して飲用に供することも可能である。
【実施例４】
【００１５】  上記のようにして得られた担子菌類抽出液を毎日１００ｍｌ、５７歳男性に経口で６ヶ月間連続経口投与した結果を次表に示す。投与は朝夕２回に分けても良い。なお、この間の食事は、通常の食習慣を維持した。また特に運動を負荷していない。
【表３】
2007332336.tif 000004
表３に見られるようにβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの長期連続経口投与により、投与前後の検査値に顕著な改善効果が観察された。被験者のライフスタイルすなわち運動量および食習慣は投与前後でほとんど変わっていないので、この改善効果は、純粋にβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンによるものと推察される。
【産業上の利用分野】
【００１６】  本発明は、食用担子菌類の子実体または菌糸体から得られ、特に新規なメタボリックシンドローム治療剤または中性脂肪低下食品として有用なβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの製造方法に関するものである。
【手続補正書】
【提出日】平成18年6月21日(2006.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】  このような各種生理活性の中でも、担子菌類の持つ植物性キトサンの血中コレステロール低下作用については研究報告の数が極めて少なく、これまでにエノキダケの抽出物から得られた成人病予防作用をもつ植物性キトサンおよびその製造方法（特許文献１）などの特許出願があるだけである。またエノキダケのもつ植物性キトサンのコレステロール低下作用（非特許文献１−３）が科学情報誌等で報告されている。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】  上記のようにして得られた担子菌類抽出液を毎日１００ｍｌ、５７歳男性に経口で６ヶ月間連続経口投与した結果を次表に示す。投与は朝夕２回に分けても良い。なお、この間の食事は、通常の食習慣を維持した。また特に運動を負荷していない。
【表３】
2007332336.tif 000005
表３に見られるようにβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンの長期連続経口投与により、投与前後の検査値に顕著な改善効果が観察された。被験者のライフスタイルすなわち運動量および食習慣は投与前後でほとんど変わっていないので、この改善効果は、純粋にβグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンによるものと推察される。またウエストの改善効果が顕著であることから、βグルカンおよび複合糖質含有植物性キトサンには脂肪の燃焼や分解を促進する成分が含まれているのではないかと推察される。