(57)【要約】【課題】光学純度よく光学活性ニペコチン酸化合物を製造する方法を提供すること。【解決手段】式（１）2007117034.tif 000016（式中、Ｒ１は水素原子、アルキル基またはアミノ基の保護基を表わし、Ｒ２はアルキル基、アルケニル基、アリール基またはアラルキル基を表わす。）で示されるニペコチン酸エステル化合物のエステル部位を不斉的に加水分解する能力を有し、微生物を起源とする酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物を、式（１）で示されるニペコチン酸エステル化合物に接触させることを特徴とする式（２）2007117034.tif 000017（式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同一の意味を表わし、＊は光学活性な炭素原子であることを表わす。）で示される光学活性ニペコチン酸化合物および式（３）2007117034.tif 000018（式中、Ｒ１および＊は前記と同一の意味を表わす。）で示される光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
2007117034.tif 000013
（式中、Ｒ１は水素原子、アルキル基またはアミノ基の保護基を表わし、Ｒ２はアルキル基、アルケニル基、アリール基またはアラルキル基を表わす。）
で示されるニペコチン酸エステル化合物のエステル部位を不斉的に加水分解する能力を有し、微生物を起源とする酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物を、式（１）で示されるニペコチン酸エステル化合物に接触させることを特徴とする式（２）
2007117034.tif 000014
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同一の意味を表わし、＊は光学活性な炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性ニペコチン酸化合物および式（３）
2007117034.tif 000015
（式中、Ｒ１および＊は前記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法。
【請求項２】
酵素が、キャンディダ(Candida)属、バシラス(Bacillus)属、ムコー(Mucor)属またはアスペルギルス(Aspergillus)属に属する微生物を起源とする酵素である請求項１に記載の光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法。
【請求項３】
酵素が、キャンディダ・アンタークティカ(Candida Antarctica)、キャンディダ・ルゴサ(Candida rugosa)、キャンディダ・シリンドラセア(Candida cylindracea)、バシラス・サティリス(Bacillus subtilis)、ムコー・ミーエイ(Mucor miehei)またはアスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)を起源とする酵素である請求項１に記載の光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法。
【請求項４】
水中または水と有機溶媒との混合溶媒中で、前記酵素または該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物を、式（１）で示されるニペコチン酸エステル化合物に接触させる請求項１に記載の光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
式（２）
2007117034.tif 000002
（式中、Ｒ１は水素原子、アルキル基またはアミノ基の保護基を表わし、Ｒ２はアルキル基、アルケニル基、アリール基またはアラルキル基を表わす。＊は光学活性な炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性ニペコチン酸化合物および式（３）
2007117034.tif 000003
（式中、Ｒ１および＊は前記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性ニペコチン酸化合物は、医薬や農薬等の合成原料または中間体として有用である（例えば特許文献１〜３参照。）。
【０００３】
かかる光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法としては、酵素としてブタ肝臓エステラーゼを用い、Ｎ−アセチルニペコチン酸メチルのエステル部位を不斉的に加水分解する方法が知られている（例えば、非特許文献１参照。）。しかしながら、得られる光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸メチルおよびＮ−アセチルニペコチン酸の光学純度は、２０％ｅ．ｅ．程度であった。
【０００４】
【特許文献１】特表２０００−５００５０２号公報
【特許文献２】特開２００１−２７８８７２号公報
【特許文献３】国際公開第００／７１５１９号パンフレット
【非特許文献１】Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．，６５，２７２２（１９８７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
このような状況のもと、本発明者らは、光学純度よく光学活性ニペコチン酸エステル化合物を製造する方法を開発すべく検討し、式（１）
2007117034.tif 000004
（式中、Ｒ１およびＲ２は上記と同一の意味を表わす。）
で示されるニペコチン酸エステル化合物のエステル部位を不斉的に加水分解する能力を有し、微生物を起源とする酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物を、式（１）で示されるニペコチン酸エステル化合物に接触させることにより、光学純度よく式（２）で示される光学活性ニペコチン酸エステル化合物および式（３）で示される光学活性ニペコチン酸エステル化合物を製造することができることを見出し、本発明に至った。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
すなわち、本発明は、式（１）
2007117034.tif 000005
（式中、Ｒ１は水素原子、アルキル基またはアミノ基の保護基を表わし、Ｒ２はアルキル基、アルケニル基、アリール基またはアラルキル基を表わす。）
で示されるニペコチン酸エステル化合物のエステル部位を不斉的に加水分解する能力を有し、微生物を起源とする酵素、または該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物を、式（１）で示されるニペコチン酸エステル化合物に接触させることを特徴とする式（２）
2007117034.tif 000006
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同一の意味を表わし、＊は光学活性な炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性ニペコチン酸化合物および式（３）
2007117034.tif 000007
（式中、Ｒ１および＊は前記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性ニペコチン酸化合物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、光学活性ニペコチン酸化合物を、光学純度よく製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
式（１）
2007117034.tif 000008
で示されるニペコチン酸エステル化合物（以下、ニペコチン酸エステル化合物（１）と略記する。）において、Ｒ１は水素原子、アルキル基またはアミノ基の保護基を表わす。
【０００９】
アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等の直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数１〜４のアルキル基が挙げられる。かかるアルキル基は、置換基を有していてもよく、置換基としては、例えばフッ素原子、塩素原子、臭素原子等のハロゲン原子、例えばトリメチルシリル基、メチルジフェニルシリル基、ジメチルフェニルシリル基、トリエチルシリル基等のシリル基、ニトロ基、シアノ基等が挙げられる。
【００１０】
アミノ基の保護基としては、例えばProtective Groups In Organic Synthesis, 3rd Edition（T.W.Green & P.G.M.Wuts著、John Wiley＆Sons,Inc.発行）に記載されているアミノ基の保護基が挙げられる。かかるアミノ基の保護基の具体例としては、アルコキシアルキル基、アルケニル基、アリール基、アラルキル基、アシル基、アルコキシカルボニル基、アルケニルオキシカルボニル基、アラルキルオキシカルボニル基等が挙げられる。
【００１１】
アルコキシアルキル基としては、炭素数１〜４のアルキル基の少なくとも一つの水素原子が、例えばメトキシ基、エトキシ基等の炭素数１〜４のアルコキシ基で置換されたものが挙げられ、具体的には、メトキシメチル基、エトキシメチル基、ジエトキシメチル基、１−エトキシエチル基、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル基等が例示される。アルケニル基としては、アリル基、クロチル基等の炭素数３〜５のアルケニル基が例示される。
【００１２】
アリール基としては、例えばフェニル基、ナフチル基、２−メチルフェニル基、４−メチルフェニル基等の炭素数６〜１０のアリール基が挙げられる。かかるアリール基は、置換基を有していてもよく、置換基としては、前記ハロゲン原子、前記アルコキシ基等が挙げられる。かかる置換基を有するアリール基の具体例としては、２−メトキシフェニル基、４−メトキシフェニル基、２−クロロフェニル基、３−クロロフェニル基、４−クロロフェニル基等が挙げられる。
【００１３】
アラルキル基としては、例えばベンジル基、２−フェニルエチル基、２−メチルベンジル基、４−メチルベンジル基等の炭素数７〜１２のアラルキル基が挙げられ、ベンジル基が好ましい。かかるアラルキル基は、置換基を有していてもよく、かかる置換基としては、前記ハロゲン原子、前記アルコキシ基等が挙げられる。かかる置換基を有するアラルキル基の具体例としては、２−メトキシベンジル基、４−メトキシベンジル基、２−クロロベンジル基、３−クロロベンジル基、４−クロロベンジル基等が挙げられる。
【００１４】
アシル基としては、例えばアセチル基、プロピオニル基、ベンゾイル基等の炭素数２〜１０の脂肪族もしくは芳香族アシル基が挙げられる。アルコキシカルボニル基としては、例えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基等の炭素数２〜５のアルコキシカルボニル基が挙げられる。アルケニルオキシカルボニル基としては、例えばアリルオキシカルボニル基等の炭素数３〜７のアルケニルオキシカルボニル基が挙げられる。アラルキルオキシカルボニル基としては、例えばベンジルオキシカルボニル基、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基等の炭素数７〜１５のアラルキルオキシカルボニル基が挙げられる。
【００１５】
また、Ｒ２はアルキル基、アルケニル基、アリール基またはアラルキル基を表わす。アルキル基としては、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基等の直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数１〜４のアルキル基が挙げられる。アルケニル基としては、例えばビニル基、アリル基、イソプロペニル基、１−シクロペンテニル基、１−シクロヘキセニル基等の炭素数２〜６のアルケニル基が挙げられる。アリール基としては、例えばフェニル基等の炭素数６〜１０のアリール基が挙げられる。アラルキル基としては、例えばベンジル基等の炭素数７〜１２のアラルキル基が挙げられる。かかるアルキル基、アルケニル基、アリール基およびアラルキル基は、置換基を有していてもよく、かかる置換基としては、例えば前記ハロゲン原子、前記アルコキシ基等が挙げられる。
【００１６】
かかるニペコチン酸エステル化合物（１）としては、ニペコチン酸メチル、ニペコチン酸エチル、ニペコチン酸ｎ−プロピル、ニペコチン酸イソプロピル、ニペコチン酸ｎ−ブチル、ニペコチン酸ビニル、ニペコチン酸イソプロペニル、ニペコチン酸１−シクロペンテニル、ニペコチン酸１−シクロヘキセニル、ニペコチン酸アリル、ニペコチン酸フェニル、ニペコチン酸ベンジル、Ｎ−メチルニペコチン酸メチル、Ｎ−メチルニペコチン酸エチル、Ｎ−メチルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−メチルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−メチルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−メチルニペコチン酸ビニル、Ｎ−メチルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−メチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−メチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−メチルニペコチン酸アリル、Ｎ−メチルニペコチン酸フェニル、Ｎ−メチルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−エチルニペコチン酸メチル、Ｎ−エチルニペコチン酸エチル、Ｎ−エチルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−エチルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−エチルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−エチルニペコチン酸ビニル、Ｎ−エチルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−エチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−エチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−エチルニペコチン酸アリル、Ｎ−エチルニペコチン酸フェニル、Ｎ−エチルニペコチン酸ベンジル、
【００１７】
Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸メチル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸エチル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸ビニル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸アリル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸フェニル、Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸メチル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸エチル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸ビニル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸アリル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸フェニル、Ｎ−イソプロピルニペコチン酸ベンジル、
【００１８】
Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸メチル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸エチル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸ビニル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸アリル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸フェニル、Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸メチル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸エチル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸ビニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸アリル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸フェニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸ベンジル、
【００１９】
Ｎ−アリルニペコチン酸メチル、Ｎ−アリルニペコチン酸エチル、Ｎ−アリルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−アリルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−アリルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−アリルニペコチン酸ビニル、Ｎ−アリルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−アリルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−アリルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−アリルニペコチン酸アリル、Ｎ−アリルニペコチン酸フェニル、Ｎ−アリルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−フェニルニペコチン酸メチル、Ｎ−フェニルニペコチン酸エチル、Ｎ−フェニルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−フェニルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−フェニルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−フェニルニペコチン酸ビニル、Ｎ−フェニルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−フェニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−フェニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−フェニルニペコチン酸アリル、Ｎ−フェニルニペコチン酸フェニル、Ｎ−フェニルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸メチル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸ビニル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸アリル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸フェニル、Ｎ−ベンジルニペコチン酸ベンジル、
【００２０】
Ｎ−アセチルニペコチン酸メチル、Ｎ−アセチルニペコチン酸エチル、Ｎ−アセチルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−アセチルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−アセチルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−アセチルニペコチン酸ビニル、Ｎ−アセチルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−アセチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−アセチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−アセチルニペコチン酸アリル、Ｎ−アセチルニペコチン酸フェニル、Ｎ−アセチルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸メチル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸エチル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸ビニル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸アリル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸フェニル、Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸ベンジル、
【００２１】
Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸メチル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸エチル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−メトキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸ビニル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸アリル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸フェニル、Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸メチル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸エチル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−エトキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸ビニル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸アリル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸フェニル、Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、
【００２２】
Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸メチル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸エチル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸ビニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸アリル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸フェニル、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸メチル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸エチル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−アリルオキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸ビニル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸アリル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸フェニル、Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、
【００２３】
Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸メチル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸エチル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸ビニル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸アリル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸フェニル、Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸メチル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸エチル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸イソプロピル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸ビニル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸イソプロペニル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸アリル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸フェニル、Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸ベンジル等が挙げられる。
【００２４】
かかるニペコチン酸エステル化合物（１）のうち、Ｒ１が水素原子である化合物は、例えばニペコチン酸を、公知の方法でエステル化することにより製造することができ、Ｒ１がアルキル基またはアミノ基の保護基である化合物は、公知の方法でニペコチン酸をエステル化し、次いで、Ｎ−アルキル化、Ｎ−保護化等の公知の方法により、窒素原子上にアルキル基または保護基を導入することにより製造することができる。
【００２５】
本発明の製造方法において用いられる酵素または該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物は、ニペコチン酸エステル化合物（１）のエステル部位を不斉的に加水分解する能力を有し、且つ微生物を起源とする酵素または該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物であればよく、かかる酵素としては、例えばキャンディダ(Candida)属に属する微生物を起源とする酵素、バシラス(Bacillus)属の属する微生物を起源とする酵素、ムコー(Mucor)属に属する微生物を起源とする酵素、アスペルギルス(Aspergillus)属に属する微生物を起源とする酵素またはこれら酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物等が挙げられる。
【００２６】
好ましくは、キャンディダ・アンタークティカ(Candida Antarctica)、キャンディダ・ルゴサ(Candida rugosa)、キャンディダ・シリンドラセア(candida cylindracea)、バシラス・サティリス(Bacillus subtilis)、ムコー・ミーエイ(Mucor miehei)またはアスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)を起源とする酵素が挙げられる。
【００２７】
具体的には、キャンディダ・アンタークティカ(candida antarctica)由来のコンポーネントＢ（キラザイムＬ２；ロシュ  ダイアグノスティック社製）、キャンディダ・ルゴサ(candida rugosa)由来のリパーゼＡＹＳ（天野エンザイム社製）、キャンディダ・シリンドラセア(candida cylindracea)由来のリパーゼＭＹ（名糖産業製）およびリパーゼＯＦ（名糖産業製）、バシラス・サティリス(Bacillus subtilis)由来のプロレザーＦＧ（天野エンザイム社製）、ムコー・ミーエイ(Mucor miehei)由来のキラザイムＬ９（ロシュ  ダイアグノスティック社製）、アスペルギルス・オリザエ(Aspergillus oryzae)由来のスミチームＦＰ（新日本化学工業製）等が挙げられ、好ましくはキャンディダ・アンタ−クティカ(candida antarctica)由来のコンポーネントＢ（キラザイムＬ２；ロシュ  ダイアグノスティック社製）およびキャンディダ・ルゴサ(candida rugosa)由来のリパーゼＡＹＳ（天野エンザイム社製）等が挙げられる。
【００２８】
また、かかる本酵素として、例えばこれら微生物に突然変異剤を作用せしめ、もしくは紫外線照射等の処理を行い誘導される突然変異体由来の酵素、これら微生物が有する本酵素をコードする遺伝子が導入され形質転換された組換え微生物により産生される酵素、遺伝子工学的手法により前記本酵素のアミノ酸配列中の特定のアミノ酸が１個ないしは数個欠失、付加もしくは置換されてなる変異型酵素等であって、ニペコチン酸エステル化合物（１）のエステル部位を不斉的に加水分解する能力を有する酵素を用いることもできる。
【００２９】
前記本酵素をコードする遺伝子が導入され形質転換された組換え微生物を作製する方法としては、例えばＪ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｅ．Ｆ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｔ．Ｍａｎｉａｔｉｓ著，モレキュラー  クローニング  第２版（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ），コールド  スプリング  ハーバー  ラボラトリー（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）発行，１９８９年等に記載の通常の遺伝子工学的手法に準じた方法が挙げられる。
【００３０】
また、遺伝子工学的手法により変異型酵素を作製する方法としては、例えばＯｌｆｅｒｔ  Ｌａｎｄｔら（Ｇｅｎｅ  ９６  １２５−１２８  １９９０）の方法が挙げられる。
【００３１】
次に、かかる微生物の調製方法について説明する。
かかる微生物は、炭素源、窒素源、有機塩、無機塩等を適宜含有する各種の微生物を培養するための培地を用いて培養すればよい。
【００３２】
当該培地に含まれる炭素源としては、例えば、グルコース、スクロース、グリセロール、でんぷん、有機酸又は廃糖蜜が挙げられ、窒素源としては、例えば、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、カザミノ酸、麦芽エキス、大豆粉、コーンスティプリカー（corn steep liquor）、綿実粉、乾燥酵母、硫安又は硝酸ナトリウムが挙げられ、有機塩及び無機塩としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、炭酸ナトリウム、リン酸１カリウム、リン酸２カリウム、炭酸カルシウム、酢酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、硫酸亜鉛、硫酸第１鉄又は塩化コバルトが挙げられる。
【００３３】
培養方法としては、例えば、固体培養、液体培養（例えば、試験管培養、フラスコ培養、ジャーファーメンター培養等）が挙げられる。培養温度及び培養液のｐＨは、本微生物が生育する範囲であれば特に限定されるものではないが、例えば、培養温度としては約１５〜４５℃の範囲、培養液のｐＨとしては約４〜８の範囲を挙げることができる。培養時間は、培養条件により適宜選択することができるが、通常、約１〜７日間である。
【００３４】
かかる微生物の菌体は、そのまま本発明の製造方法に用いることができる。かかる微生物の菌体をそのまま用いる方法としては、（１）培養液をそのまま用いる方法、（２）培養液の遠心分離等により菌体を集め、集められた菌体（必要に応じて、緩衝液又は水で洗浄した後の湿菌体）を用いる方法等を挙げることができる。
【００３５】
また、かかる微生物の菌体処理物を本発明の製造方法に用いることもできる。当該菌体処理物としては、例えば、培養して得られた菌体を有機溶媒（アセトン、エタノール等）処理したもの、凍結乾燥処理したもの若しくはアルカリ処理したもの、又は、菌体を物理的若しくは酵素的に破砕したもの、又は、これらのものから分離・抽出された粗酵素等を挙げることができる。さらに、菌体処理物には、前記処理を施した後、公知の方法により固定化処理したものも含まれる。固定化物を得る方法としては、例えば、担体結合法（シリカゲルやセラミック等の無機担体、セルロース、イオン交換樹脂等に本発明タンパク質等を吸着させる方法）及び包括法（ポリアクリルアミド、含硫多糖ゲル（例えばカラギーナンゲル）、アルギン酸ゲル、寒天ゲル等の高分子の網目構造の中に本発明タンパク質等を閉じ込める方法）が挙げられる。
【００３６】
このような酵素または該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいはその処理物を、ニペコチン酸エステル化合物（１）に接触させることにより、ニペコチン酸エステル化合物（１）のエステル部位が不斉的に加水分解され、式（２）
2007117034.tif 000009
（式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同一の意味を表わし、＊は光学活性な炭素原子であることを表わす。）
で示される光学活性ニペコチン酸化合物（以下、光学活性ニペコチン酸化合物（２）と略記する。）および式（３）
2007117034.tif 000010
（式中、Ｒ１および＊は前記と同一の意味を表わす。）
で示される光学活性ニペコチン酸化合物（以下、光学活性ニペコチン酸化合物（３）と略記する。）が生成する。
【００３７】
かかる反応における酵素の使用量は、ニペコチン酸エステル化合物（１）に対して、通常０．００１〜１重量倍、好ましくは０．００２〜０．５重量倍である。
【００３８】
反応は、通常水中または水と有機溶媒との混合溶媒中で行われる。水の使用量は、ニペコチン酸エステル化合物（１）に対して、通常０．３〜３００重量倍、好ましくは２〜１００重量倍である。また、水は緩衝液の形態であってもよく、この場合に用いられる緩衝剤としては、例えばリン酸ナトリウム、リン酸カリウム等のアルカリ金属リン酸塩、例えば酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等のアルカリ金属酢酸塩等が挙げられる。かかる緩衝剤の使用量は、用いた緩衝剤が有効に機能する量であれば特に限定されない。また、有機溶媒としては、例えば、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル溶媒、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、イソオクタン、デカン等の炭化水素溶媒、ｔｅｒｔ−ブタノール、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール等のアルコール溶媒、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド溶媒、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン溶媒、アセトニトリル、プロピオニトリル等のニトリル溶媒等の親水性もしくは疎水性の有機溶媒が挙げられる。かかる有機溶媒は二種以上を混合して用いてもよい。かかる有機溶媒のなかでも、親水性の有機溶媒が好ましく、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、メタノール、エタノール、アセトニトリル、アセトンが好ましい。かかる有機溶媒の使用量は、ニペコチン酸エステル化合物（１）に対して、通常、１００重量倍以下、好ましくは７０重量倍以下である。
【００３９】
反応温度は、酵素の安定性や反応速度の観点から、通常０〜７０℃、好ましくは１０〜５０℃である。また、反応系内のｐＨは、通常ｐＨ４〜１１の範囲、好ましくはｐＨ５〜９の範囲である。反応の進行に伴い、反応系内のｐＨが変化する場合には、例えば塩基を加え、反応系内のｐＨを適宜選択された範囲内に調整しながら反応を実施してもよい。かかる塩基としては、例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等のアルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸カルシウム等のアルカリ土類金属炭酸塩、例えばリン酸２水素ナトリウム、リン酸水素２ナトリウム、リン酸２水素カリウム、リン酸水素２カリウム等のアルカリ金属リン酸塩等が挙げられる。
【００４０】
反応は、通常ニペコチン酸エステル化合物（１）と酵素とを水中で混合することにより実施され、その混合順序は特に制限されない。また、ニペコチン酸エステル化合物（１）を反応系内に連続的もしくは逐次的に加えて反応を行ってもよい。
【００４１】
反応終了後、必要に応じて水に不溶の有機溶剤を加え、分液処理することにより、光学活性ニペコチン酸化合物（３）を含む水層と、光学活性ニペコチン酸エステル化合物（２）を含む有機層とを得ることができる。水に不溶の有機溶媒としては、例えばトルエン、ヘキサン、ヘプタン等の炭化水素溶媒、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル等のエーテル溶媒、酢酸エチル等のエステル溶媒等が挙げられ、その使用量は特に制限されない。なお、反応終了時のｐＨによっては、生成した光学活性ニペコチン酸化合物（３）は、例えばナトリウム塩、カリウム塩等の塩の形態で前記水層中に含まれることがある。
【００４２】
例えば、得られた光学活性ニペコチン酸化合物（２）を含む有機層から溶媒を留去することにより、光学活性ニペコチン酸化合物（２）を取り出すことができる。また、例えば得られた光学活性ニペコチン酸化合物（３）を含む水層から水を留去することにより、光学活性ニペコチン酸化合物（３）を取り出すことができる。
【００４３】
光学活性ニペコチン酸化合物（２）の具体例としては、光学活性ニペコチン酸メチル、光学活性ニペコチン酸エチル、光学活性ニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性ニペコチン酸イソプロピル、光学活性ニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性ニペコチン酸ビニル、光学活性ニペコチン酸イソプロペニル、光学活性ニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性ニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性ニペコチン酸アリル、光学活性ニペコチン酸フェニル、光学活性ニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸ベンジル、
【００４４】
光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−プロピルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸ベンジル、
【００４５】
光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニペコチン酸ベンジル、
【００４６】
光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸ベンジル、
【００４７】
光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸ベンジル、
【００４８】
光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、
【００４９】
光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、
【００５０】
光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸ベンジル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸メチル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸エチル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸ｎ−プロピル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸イソプロピル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルルニペコチン酸ｎ−ブチル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸ビニル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸イソプロペニル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸１−シクロペンテニル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸１−シクロヘキセニル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸アリル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸フェニル、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸ベンジル等が挙げられる。
【００５１】
光学活性ニペコチン酸化合物（３）の具体例としては、光学活性ニペコチン酸、光学活性Ｎ−メチルニペコチン酸、光学活性Ｎ−エチルニペコチン酸、光学活性Ｎ−ｎ−プロピルニペコチン酸、光学活性Ｎ−イソプロピルニペコチン酸、光学活性Ｎ−ｎ−ブチルニペコチン酸、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルニペコチン酸、光学活性Ｎ−アリルニペコチン酸、光学活性Ｎ−フェニルニペコチン酸、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸、光学活性Ｎ−アセチルニペコチン酸、光学活性Ｎ−ベンゾイルニペコチン酸、光学活性Ｎ−メトキシカルボニルニペコチン酸、光学活性Ｎ−エトキシカルボニルニペコチン酸、光学活性Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルニペコチン酸、光学活性Ｎ−アリルオキシカルボニルニペコチン酸、光学活性Ｎ−ベンジルオキシカルボニルニペコチン酸、光学活性Ｎ−（９−フルオレニルメチルオキシ）カルボニルニペコチン酸等が挙げられる。
【実施例】
【００５２】
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。なお、転化率および光学純度は、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）分析により求めた。
＜分析条件＞
カラム：DAICEL CHIRALCEL OJ（４．６ｍｍφ×２５ｃｍ；ダイセル化学工業社製）
カラム温度：４０℃
検出：２１０ｎｍ
移動相：トリフルオロ酢酸／エタノール／ヘキサン＝０．１／６／９４
流量：１ｍＬ／分
【００５３】
実施例１
キラザイムＬ２（ロシュ  ダイアグノスティック製）５ｍｇを１２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７）２ｍＬに懸濁させた。該懸濁液中に、Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチル５０ｍｇを加え、２８〜３０℃で１時間攪拌、反応させた。反応終了後、反応液を濾過処理し、得られた濾液を減圧条件下で濃縮処理した。濃縮残渣をＨＰＬＣ分析した。
Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチルの転化率：５２．２％
光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチル：（Ｓ）体、光学純度：９５％ｅ．ｅ．
光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸：（Ｒ）体、光学純度：８７％ｅ．ｅ．
【００５４】
実施例２〜５
実施例１において、キラザイムＬ２に代えて下記表１に示す酵素を用いた以外は実施例１と同様に実施し、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチルおよび光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸を含む濃縮残渣を得た。濃縮残渣をＨＰＬＣ分析した結果を表１に示した。なお、表中、転化率は、Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチルの転化率を示す。
【００５５】
【表１】
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【００５６】
実施例６
キラザイムＬ２（ロシュ  ダイアグノスティック製）２．５ｍｇを、１，４−ジオキサンと１２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７）を１：１の比で混合させた溶液２ｍＬに懸濁させた。該懸濁液中に、Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチル５０ｍｇを加え、２８〜３０℃で２時間攪拌、反応させた。反応終了後、反応液を濾過処理し、得られた濾液を減圧条件下で濃縮処理した。濃縮残渣をＨＰＬＣ分析した。
Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチルの転化率：５１．２％
光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチル：（Ｓ）体、光学純度：９９％ｅ．ｅ．以上
光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸：（Ｒ）体、光学純度：９５％ｅ．ｅ．
【００５７】
実施例７〜９
実施例６の１，４−ジオキサンと１２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７）を１：１の比で混合させた溶液に代えて、下記表２に示す混合溶液（混合比はすべて１：１）を用いた以外は実施例６と同様に実施して、光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチルおよび光学活性Ｎ−ベンジルニペコチン酸を含む濃縮残渣を得た。濃縮残渣をＨＰＬＣ分析した結果を表２に示した。なお、表中、転化率は、Ｎ−ベンジルニペコチン酸エチルの転化率を示す。
【００５８】
【表２】
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