(57)【要約】【課題】飲食品分野でも使用できる溶媒のみを用いてプラズマローゲン含有脂質を抽出する。【解決手段】凍結乾燥した水産動物を粉砕し、アセトンを加えて撹拌した後、残渣を回収する。次に、回収した残渣にｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒（ｎ−ヘキサンが２４〜４６容量％、水が４０容量％以下）を加えて撹拌し、濾液を回収する。抽出温度は２０〜３５℃が好ましい。この抽出操作を繰り返すことで、プラズマローゲン含有脂質の収率を上げることができる。続いて、回収した濾液にｎ−ヘキサン／水の混合溶媒（水が３０〜５５容量％）を加えて撹拌し、静置して上層を回収する。続いて、回収した上層を乾固させ、得られた粗脂質にアセトンを加えて撹拌した後、残渣であるプラズマローゲン含有脂質を回収する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
水産動物の乾燥物にｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒を加えて撹拌し、濾液を回収する抽出工程と、
上記抽出工程にて回収された濾液にｎ−ヘキサン／水の混合溶媒を加えて撹拌し、静置して上層を回収する液液分離工程と、
上記液液分離工程にて回収された上層の溶媒を除去し、脂質を回収する溶媒除去工程と
を有することを特徴とするプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項２】
上記水産動物の乾燥物にアセトンを加えて撹拌し、残渣を回収する第１の洗浄工程をさらに有し、
上記抽出工程では、上記第１の洗浄工程にて回収された残渣に上記ｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒を加える
ことを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項３】
上記溶媒除去工程にて回収された脂質にアセトンを加えて撹拌し、残渣を回収する第２の洗浄工程をさらに有することを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項４】
上記抽出工程では、濾液を回収した後の残渣に上記ｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒をさらに加えて撹拌し、濾液を回収することを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項５】
上記抽出工程における温度は、２０〜３５℃であることを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項６】
上記ｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒におけるｎ−ヘキサン及び水の割合は、それぞれ２４〜４６容量％及び４０容量％以下であることを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項７】
上記ｎ−ヘキサン／水の混合溶媒における水の割合は、３０〜５５容量％であることを特徴とする請求項１記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法。
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれか１項記載のプラズマローゲン含有脂質の抽出方法によって抽出されたことを特徴とするプラズマローゲン含有脂質。
【請求項９】
請求項８記載のプラズマローゲン含有脂質を含有することを特徴とする機能性飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホヤ、ヒトデ等の水産動物からプラズマローゲン含有脂質を抽出する方法、及びその抽出方法により抽出されたプラズマローゲン含有脂質、並びにそのプラズマローゲン含有脂質を含有する機能性飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
プラズマローゲンは、脳神経細胞に特徴的に多く含まれるリン脂質である。その化学構造は、エタノールアミン型のものが多く、グリセロール骨格のｓｎ−１位にビニルエーテル結合を持ち、ｓｎ−２位にドコサヘキサエン酸やアラキドン酸等の高度不飽和脂肪酸を有する。この特徴的な構造から、プラズマローゲンは、脳のシグナル伝達への関与や、脳内における抗酸化物質としての機能が予想されてきた。
【０００３】
近年になり、このプラズマローゲンの抗酸化作用について数多くの報告がなされている（非特許文献１等を参照）。また、アルツハイマー病疾患の脳は健常者の脳に比べてプラズマローゲン量が３０％近く減少していることも報告されている（非特許文献２を参照）。そこで、最近では、このプラズマローゲンを飲食品や医薬品に含有させることにより、アルツハイマー病等の疾患を改善・予防することも提案されている（特許文献１，２を参照）。
【０００４】
【非特許文献１】T. Brosche et al.,“The biological significance of plasmalogens in defence against oxidative damage.”, Exp. Gerontol., 1998; 33(5): p.363-369
【非特許文献２】L. Ginsberg et al.,“Disease and anatomic specificity of ethanolamine plasmanogen deficiency in Alzheimer's disease brain.”, Brain Res., 1995; 698: p.223-226
【特許文献１】特開２００３−３１９０号公報
【特許文献２】特開２００３−１２５２０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、特許文献１，２に記載されているようなプラズマローゲン含有脂質の抽出方法では、クロロホルムやメタノール等の溶媒を用いるため、抽出されたプラズマローゲン含有脂質を飲食品や医薬品に含有させて摂取するには安全性に問題があった。
【０００６】
本発明は、このような従来の実情に鑑みて提案されたものであり、飲食品分野でも使用できる溶媒のみを用いてプラズマローゲン含有脂質を抽出する方法、及びその抽出方法により抽出されたプラズマローゲン含有脂質、並びにそのプラズマローゲン含有脂質を含有する機能性飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上述した目的を達成するために、本発明に係るプラズマローゲン含有脂質の抽出方法は、水産動物の乾燥物にｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒を加えて撹拌し、濾液を回収する抽出工程と、上記抽出工程にて回収された濾液にｎ−ヘキサン／水の混合溶媒を加えて撹拌し、静置して上層を回収する液液分離工程と、上記液液分離工程にて回収された上層を乾固させ、脂質を回収する乾固工程とを有することを特徴とする。
【０００８】
ここで、上記抽出工程では、濾液を回収した後の残渣に上記ｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒をさらに加えて撹拌し、濾液を回収することが好ましい。
【０００９】
また、上記抽出工程における温度は、２０〜３５℃であることが好ましく、上記ｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒におけるｎ−ヘキサン及び水の割合は、それぞれ２４〜４６容量％及び４０容量％以下であることが好ましい。
【００１０】
また、上記ｎ−ヘキサン／水の混合溶媒における水の割合は、３０〜５５容量％であることが好ましい。
【００１１】
また、本発明に係るプラズマローゲン含有脂質は、上述した抽出方法によって抽出されたことを特徴とし、本発明に係る機能性飲食品は、上述したプラズマローゲン含有脂質を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、飲食品分野でも使用できる溶媒のみを用いて、水産動物からプラズマローゲン含有脂質を抽出し、例えば機能性飲食品に含有させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明を適用した具体的な実施の形態について、図面を参照しながら詳細に説明する。この実施の形態は、飲食品分野でも使用できる溶媒のみを用いて、水産動物（内臓等の廃棄物となる部分を含む）からプラズマローゲン含有脂質を抽出する方法について説明するものである。
【００１４】
プラズマローゲンは、通常、下記式（１）で表される。
【００１５】
【化１】
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【００１６】
この式（１）において、Ｒ１は好ましくは炭素数１〜２０のアルキル基であり、具体的にはドデシル基、テトラデシル基、ヘキサデシル基、オクタデシル基、イコサニル基等が挙げられる。また、Ｒ２は高度不飽和脂肪酸残基であり、具体的にはオクタデカジエノイル基、オクタデカトリエノイル基、イコサテトラエノイル基、イコサペンタエノイル基、ドコサテトラエノイル基、ドコサペンタエノイル基、ドコサヘキサエノイル基等が挙げられる。また、Ｘはエタノールアミン、コリン、セリン、イノシトール、グリセロールから選ばれる極性基である。
【００１７】
本実施の形態では、このような構造式で表されるプラズマローゲンのうち、式中Ｘがエタノールアミンであるエタノールアミン型プラズマローゲンを含有するリン脂質を抽出する。以下では、エタノールアミン型プラズマローゲンのことを単にプラズマローゲンと記す。
【００１８】
抽出に用いる水産動物は、特に制限されないが、水産無脊椎動物としては、例えばマボヤ（Halocynthia roretzi）、キヒトデ（Asterias amurensis）、イトマキヒトデ（Asterias pectinifera）、キタムラサキウニ（Strongylocentrotus nudus）、バフンウニ（Hemicentrotus pulcherrimus）、マナマコ（Stichopus japonicus）、ミドリイソギンチャク（Anthopleura midori）、ヨロイイソギンチャク（Anthopleura japonica）、ヒザラガイ（Acantbopleura japonica）、レイシガイ（Thais bronni）、チヂミボラ（Nucella heyseana）、クボガイ（Chlorostoma argyrostoma）、サルアワビ（Tugali gigas）、ムラサキイガイ（Mytilus galloprovincialis）、ムラサキインコガイ（Septifer virgatus）、マガキ（Crassostera gaigas）等を用いることができる。
【００１９】
特に、上記水産無脊椎動物のうち、キヒトデ、イトマキヒトデ、キタムラサキウニ、ミドリイソギンチャク、ヨロイイソギンチャク、レイシガイ、ムラサキイガイ、マガキは、ホスファチジルエタノールアミン（以下、ＰＥと記す場合もある。）画分のうち９０％以上がアルケニルアシル型、すなわちプラズマローゲンであることが本件発明者らによって確認されている。他の水産無脊椎動物も、ホスファチジルエタノールアミン画分のうち８０％以上がプラズマローゲンである。
【００２０】
また、水産脊椎動物としては、例えばクロマグロ（Thunnus thynnus）、サケ（Oncorhynchus keta）、サンマ（Cololabis saira）、カツオ（Katsuwonus pelamis）等を用いることができる。
【００２１】
これらの水産動物は、可食部分を用いても内臓等の廃棄物となる部分を用いても構わないが、何れの場合であっても、プラズマローゲン含有脂質の抽出に先立って凍結乾燥等によって乾燥させておくことが好ましい。
【００２２】
以下、プラズマローゲン含有脂質の抽出方法について、図１の工程図を参照しながら水産無脊椎動物を例に説明する。
【００２３】
先ず、凍結乾燥等により乾燥させた水産無脊椎動物を粉砕し、その約２〜６倍容量のアセトンを加えて１０〜６０分間撹拌する。撹拌後、吸引濾過によってアセトン可溶画分（非リン脂質）を除去し、残渣を回収する。なお、この残渣に対して再度アセトンを加え、同様の洗浄操作を繰り返すようにしても構わない。
【００２４】
次に、回収した残渣に約３〜５倍容量のｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒を加えて１０〜６０分間撹拌する。撹拌後、吸引濾過によって濾液を回収する。混合溶媒の組成は、ｎ−ヘキサンが２４〜４６容量％、水が４０容量％以下であることが好ましい。また、抽出温度は２０〜３５℃が好ましい。なお、この残渣に対して再度ｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒を加え、同様の抽出操作を繰り返すことで、プラズマローゲン含有脂質の収率を上げることができる。
【００２５】
続いて、回収した濾液に０．５〜１．５倍容量のｎ−ヘキサン／水の混合溶媒を加えて撹拌し、静置して上層を回収する。混合溶媒の組成は、水が３０〜５５容量％であることが好ましい。
【００２６】
続いて、回収した上層から溶媒を除去し、得られた粗脂質にアセトンを加えて１０〜６０分間撹拌する。撹拌後、吸引濾過によってアセトン可溶画分を除去し、残渣であるプラズマローゲン含有脂質を回収する。
【００２７】
以上のようにして抽出されたプラズマローゲン含有脂質は、ソフトカプセル、飲食品に含有させることができる。飲料としては、例えば、スポーツ飲料、果汁飲料、乳酸飲料、アルコール飲料、豆乳などを挙げることができる。また、食品としては、パン、ビスケット、キャンディー、ゼリーなどの菓子類、ヨーグルトなどの乳加工品、ハムなどの肉加工食品、マーガリン、ショートニングなどの油脂加工食品などを挙げることができる。摂取量は、特に限定されないが、通常、１５０ｍｇ／日・標準体重〜９ｇ／日・標準体重、好ましくは、５０ｍｇ／日・標準体重〜３ｇ／日・標準体重程度である。
【実施例】
【００２８】
以下、具体的に水産無脊椎動物からプラズマローゲン含有脂質を抽出した実施例について説明する。抽出には、マボヤの可食部分の凍結乾燥物を用いた。
【００２９】
抽出の各工程における溶媒量等のパラメータ、原料としての凍結乾燥物量（ｇ）、プラズマローゲン含有脂質の収量（ｇ）、プラズマローゲン含有脂質中のホスファチジルエタノールアミン濃度（％）、原料に対するホスファチジルエタノールアミン比（％）を以下の表１、表２に示す。
【００３０】
【表１】
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【００３１】
【表２】
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【００３２】
表１、表２から分かるように、表１、表２に示す抽出条件では、約１００ｇの凍結乾燥物から平均で約５．６％のホスファチジルエタノールアミンを含むプラズマローゲン含有脂質を平均で約２．６ｇ抽出することができた。
【００３３】
また、抽出操作の回数と、プラズマローゲン含有脂質中のホスファチジルエタノールアミン濃度、及び原料に対するホスファチジルエタノールアミン比との関係を図２に示す。この図２は、表１、表２に示した結果を抽出回数の違いで分類し、プラズマローゲン含有脂質中のホスファチジルエタノールアミン濃度、及び原料に対するホスファチジルエタノールアミン比を平均値と標準誤差とで示したものである。図２（Ａ）、（Ｂ）から分かるように、抽出回数が１回の場合よりも２回の場合の方が、プラズマローゲン含有脂質中のホスファチジルエタノールアミン濃度、及び原料に対するホスファチジルエタノールアミン比がともに高くなっている。
【００３４】
また、抽出操作時の温度と、プラズマローゲン含有脂質中のホスファチジルエタノールアミン濃度、及び原料に対するホスファチジルエタノールアミン比との関係を図３に示す。この図３は、表１、表２に示した結果を抽出操作時の温度の違いで分類し、プラズマローゲン含有脂質中のホスファチジルエタノールアミン濃度、及び原料に対するホスファチジルエタノールアミン比を平均値と標準誤差とで示したものである。図３（Ａ）、（Ｂ）から分かるように、５〜３５℃の温度範囲では、抽出操作時の温度が上昇するほど、ホスファチジルエタノールアミン濃度、及び原料に対するホスファチジルエタノールアミン比がともに高くなっている。
【００３５】
以上、本発明を実施するための最良の形態について説明したが、本発明は上述した実施の形態のみに限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において種々の変更が可能であることは勿論である。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】プラズマローゲン含有脂質の抽出方法を説明する工程図である。
【図２】ｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒を用いた抽出操作の回数と、プラズマローゲン含有脂質中のホスファチジルエタノールアミン濃度、及び原料に対するホスファチジルエタノールアミン比との関係を示す図である。
【図３】ｎ−ヘキサン／エタノール／水の混合溶媒を用いた抽出操作時の温度と、プラズマローゲン含有脂質中のホスファチジルエタノールアミン濃度、及び原料に対するホスファチジルエタノールアミン比との関係を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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