(57)【要約】【課題】動物由来の乳酸菌に比べて免疫調節作用や抗アレルギー作用が十分な免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物、並びにこれらが含まれた食品を提供することである。【解決手段】植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする免疫機能調節剤。
【請求項２】
前記乳酸菌が生体のＴｈ１型免疫反応を増強することを特徴とする請求項１記載の免疫機能調節剤。
【請求項３】
前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌及びラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌の少なくとも１以上であることを特徴とする請求項１又は２記載の免疫機能調節剤。
【請求項４】
植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする免疫機能調節組成物。
【請求項５】
植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする抗アレルギー剤。
【請求項６】
前記乳酸菌がＩｇＥ抗体産生抑制作用を有することを特徴とする請求項５記載の抗アレルギー剤。
【請求項７】
前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌及びラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌の少なくとも１以上であることを特徴とする請求項５又は６記載の抗アレルギー剤。
【請求項８】
植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする抗アレルギー用組成物。
【請求項９】
請求項１乃至３いずれか記載の免疫機能調節剤、請求項４記載の免疫機能調節用組成物、請求項５乃至７いずれか記載の抗アレルギー剤、又は請求項８記載の抗アレルギー用組成物を含むことを特徴とする食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物由来の乳酸菌を有効成分とする免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物、並びにこれらが含まれた食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活や生活習慣の変化に伴いアレルギー性鼻炎やアトピー性皮膚炎、花粉症、食物アレルギー等に悩んでいる人が増えている。特に花粉症については、日本人の成人の２０％が発症しており、深刻な社会現象と化している。
【０００３】
アレルギー発症のメカニズムは、次のような機構が考えられている。原因物質であるアレルゲン（抗原）が口腔、鼻腔又は腸管などから侵入すると、樹状細胞やマクロファージなどの抗原提示細胞が貪食し、Ｔ細胞、Ｂ細胞にその抗原を提示する。Ｂ細胞はヘルパーＴ細胞（特にＩＩ型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２））の助けを受けてＩｇＥ産生細胞に成熟し、ＩｇＥ抗体を産生する。ＩｇＥ抗体はマスト細胞表面に結合し、さらに抗原が結合すると、その刺激がマスト細胞内に伝達し、ヒスタミンやロイコトリエンなどの炎症性化学物質が放出され、アレルギー症状が惹き起こされる。
【０００４】
ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）には、Ｉ型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）とＩＩ型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２）がある。Ｔｈ２はインターロイキン（ＩＬ）−４やＩＬ−５を産生しＩｇＥ産生を促進する。Ｔｈ１細胞は抗原提示細胞が産生するＩＬ−１２により活性化されＩＦＮ−γを産生し、ＩｇＥ産生を抑制する。アレルゲンの侵入により、人はＴｈ２型になりＩｇＥ産生が促進されるが、Ｔｈ１を活性化することにより、ＩｇＥ産生は抑制される。
【０００５】
ところで、乳酸菌の免疫調節機能については、近年、人腸内の乳酸菌や発酵乳由来のいわゆる動物性乳酸菌について、様々な研究が行われている。例えば、乳製品由来のLactobacillus paracaseiの抗アレルギー作用（特許文献１）やラクトコッカス・ラクティスの抗アレルギー作用（特許文献２）、エンテロコッカス・フェカリス及びラクトバチルス・ロイテリーの抗アレルギー作用（特許文献３）、ラクトバチルス・アシドフィルスの免疫機能調節効果（特許文献４）、ラクトバリルス・ラムノサスの免疫増強作用（特許文献５）等が知られている。
【０００６】
【特許文献１】特開２００５−１３９１６０号公報
【特許文献２】特開２００４−１８４６９号公報
【特許文献３】特開２０００−９５６９７号公報
【特許文献４】特開２００４−２７７３８１号公報
【特許文献５】特表２００１−５１３９９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、動物由来の乳酸菌は、生物活性が十分でないという問題がある。一方、植物由来の乳酸菌の分離や生理機能についての研究は、ほとんどされていない。
【０００８】
そこで、本発明は、動物由来の乳酸菌に比べて免疫調節作用や抗アレルギー作用が十分な免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物、並びにこれらが含まれた食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
以上の目的を達成するため、本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物が、動物由来の動物性乳酸菌に比べて十分な免疫機能調節作用や抗アレルギー作用を有することを見出した。すなわち、本発明は、植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌、植物由来のロイコノストック属に属する乳酸菌、及び植物由来のペディオコッカス属に属する乳酸菌のうち少なくとも１以上の乳酸菌の生菌、死菌又はその菌体処理物を有効成分とする免疫機能調節剤及び抗アレルギー剤、又は免疫調節機能調節用組成物及び抗アレルギー用組成物である。
【発明の効果】
【００１０】
以上のように本発明によれば、動物由来の乳酸菌に比べて免疫調節作用や抗アレルギー作用が十分な免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物、並びにこれらが含まれた食品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
植物由来の植物性乳酸菌は、動物性乳酸菌に比べ貧栄養状態での生育が可能で、生育温度やｐＨ等の環境要因もより過酷な条件で増殖できる。また、動物性乳酸菌が乳や畜肉のみを発酵するのに対し、植物性乳酸菌は、野菜、果実類、穀物、豆類、海藻類等幅広い食物を発酵させることが可能である。
【００１２】
本発明に係る免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物に含まれる植物性乳酸菌は、すんき漬から分離されていることが好ましい。すんき漬とは、長野県の木曽地方で生産・食されている漬物のことをいい、その製造においては、塩を一切使用せず、乳酸発酵によってのみ味付けを行い、日持ちを向上させるという特徴を有する。すんき漬から植物性乳酸菌は、既知の方法により分離することができる。例えば、漬け汁中に遊離している乳酸菌を乳酸菌分離用培地で分離する方法、または、漬け汁を集積培養後に乳酸菌分離用培地で分離する方法、漬物を集積培養し乳酸菌分離用培地で分離する方法、漬物に付着した乳酸菌を攪拌やホモジナイズ、超音波等で処理後、乳酸菌分離用培地で分離する方法、すんき漬の漬け種から分離する方法等である。
【００１３】
本発明に係る免疫機能調節剤及び免疫調節用組成物において、免疫調節作用とは、例えば、Ｔｈ１型サイトカイン産生を増強する作用をいい、本発明に係る免疫機能調節剤は、動物性乳酸菌に比べてＴｈ１型サイトカイン産生能は数倍高い。本発明に係る抗アレルギー剤及び抗アレルギー用組成物において、抗アレルギー作用とは、例えば、ＩｇＥ産生を抑制する作用をいい、本発明に係る抗アレルギー剤は、動物性乳酸菌に比べてＩｇＥ産生抑制作用が１０倍高い。
【００１４】
本発明に係る免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物において、植物性乳酸菌の生菌とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌を培養した培養液、その集菌物、凍結乾燥やスプレードライ等により乾燥させた植物性乳酸菌の粉末、顆粒、タブレット状の物で、乳酸菌増殖用の培地に接種した時、増殖する能力を有する物をいい、死菌とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌を培養した培養液を加熱、抗菌剤等の薬剤処理、電子線、紫外線、放射線等の物理的処理で殺菌したものをいい、菌体処理物とは、単独或いは数種類の植物性乳酸菌の菌体を、酵素処理やホモジナイズ、超音波処理等の方法で破壊した破砕物、または免疫機能調節活性や抗アレルギー活性のある細胞壁画分を分取したものをいう。
【００１５】
本発明に係る免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物において、前記植物由来のラクトバチルス属に属する乳酸菌がラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌及びラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌の少なくとも１以上であることが好ましく、ラクトバチルス・デルブルッキーに属する乳酸菌及びラクトバチルス・プランタラムに属する乳酸菌は、組み合わせても用いても良い。
【００１６】
本発明に係る免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物の形態としては、すんき漬などの植物からの分離物を液体状、粉末状、顆粒状及びタブレット状などに加工されたものの他、すんき漬などの植物から分離せずに、その植物そのものを加工したものであっても良い。特に、すんき漬の発酵条件により多くの免疫機能調節機能や抗アレルギー機能を得ることができる。植物そのものを加工したものとして、例えば乾燥させて切断されたものや、粉末化されたものがある。
【００１７】
本発明に係る食品として、菌株又はそれを含む発酵物を種菌として食物を発酵させたものがある。これら発酵食品として、例えばヨーグルトや漬物、発酵飲料などがある。また、本発明に係る食品としては、これらの他に錠剤状又はカプセル状の健康食品、アメやガムなどの菓子類、飲料、パン又は麺など多くの用途に用いることができる。
【実施例】
【００１８】
次に、本発明に係る免疫機能調節剤、抗アレルギー剤、免疫調節用組成物及び抗アレルギー用組成物の実施例について、説明する。すんき漬の一部を乳酸菌用集積培地で集積培養後、滅菌生理食塩水で任意に希釈し、薬剤を添加した乳酸菌分離用寒天培地（ＧＹＰ白亜寒天培地）で培養して乳酸菌の分離を行った。乳酸菌分離用寒天培地上に検出されたコロニーを個々に純培養し、常法によりグラム染色や顕微鏡による形態観察を行った後、細菌同定検査キット（アピ５０ＣＨＬ（日本ビオメリュー（株））で乳酸菌の確認を行った。さらに、１６ＳｒＲＮＡをコードするＳＳＵ ｒＤＮＡのＰＣＲ産物のシークエンスを行い、その塩基配列より乳酸菌の同定を行った。以上の方法ですんき漬より分離、同定した乳酸菌３７菌株を表１に示す。また、分離した乳酸菌をＭＲＳ培地（ＯＸＩＯＩＤ）でそれぞれ純培養し、集菌、洗浄、殺菌後凍結乾燥により実施例１乃至３７に係る乳酸菌粉末を作製した。
【００１９】
【表１】
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【００２０】
実験例１
次に、１１〜２５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの解剖を行い、脾臓細胞を単離・調整した。調整したマウス脾臓細胞に、実施例１乃至３７に係る乳酸菌粉末をそれぞれ添加し、ＲＰＭＩ１６４０培地で培養を行った。培養３日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、Ｔｈ１型サイトカインであるＩＬ−１２とＩＦＮ−γの産生量をＥＬＩＳＡ法によって測定した。さらに、培養７日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＭの抗体産生量をＥＬＩＳＡ法によって測定した。比較例として、乳酸菌無添加のものを比較例１とし、乳酸菌の替わりにＬＰＳ（グラム陰性菌細胞壁のリポ多糖）を添加したものを比較例２とし、ＣｏｎＡ（ナタ豆レクチン、コンカナバリンＡ）を添加したものを比較例３とした。
【００２１】
ＩＬ−１２の産生量を表２に示し、ＩＦＮ−γの産生量を表３に示し、ＩｇＡの産生量を表４に示し、ＩｇＧの産生量を表５に示し、ＩｇＭの産生量を表６に示す。
【００２２】
【表２】
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【００２３】
【表３】
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【００２４】
【表４】
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【００２５】
【表５】
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【００２６】
【表６】
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【００２７】
表２に示されるように、実施例１及び２、実施例４乃至１５、実施例１８、１９、実施例２１乃至２３、実施例２５乃至２９、実施例３１乃至３７に係る乳酸菌はＩＬ−１２の産生を促進した。表３に示されるように、実施例２乃至１０、実施例１２、実施例１５乃至１９、実施例２１乃至２４、実施例２６乃至３７に係る乳酸菌はＩＦＮ−γの産生を促進した。表４に示されるように、実施例２及び３、実施例５乃至２５、実施例２８、実施例３１乃至３７に係る乳酸菌はＩｇＡの産生を促進した。表５に示されるように、実施例２乃至３７に係る乳酸菌はＩｇＧの産生を促進した。表６に示されるように、実施例１乃至３７に係る乳酸菌はＩｇＭの産生を促進した。
【００２８】
実験例１において特にサイトカイン誘導能や抗体誘導能が高かった実施例２、５乃至７、１０及び１２に係る乳酸菌をＭＲＳ培地（ＯＸＩＯＩＤ）でそれぞれ純培養し、集菌、洗浄及び殺菌後凍結乾燥により、実施例２、実施例５乃至７、実施例１０及び実施例１２に係る乳酸菌粉末を作製した。
【００２９】
１１〜２５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに卵白アルブミン（ＯＶＡ）とアジュバントを解剖２１日前と解剖７日前に腹腔注射し、解剖を行い、脾臓細胞を単離・調整した。
【００３０】
調整したマウス脾臓細胞に、ＯＶＡ２０μｇ／ｗｅｌｌと実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２に係る乳酸菌粉末２０μｇ／ｗｅｌｌをそれぞれ添加し、ＲＰＭＩ１６４０培地で培養を行った。培養３日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、Ｔｈ１型サイトカインであるＩＬ−１２とＩＦＮ−γの産生量をＥＬＩＳＡ法にて測定した。さらに、培養１４日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、ＩｇＥの抗体産生量をＥＬＩＳＡ法にて測定した。比較例として、乳酸菌無添加でＯＶＡのみ添加のものを比較例２、比較例５乃至７、比較例１０及び比較例１２とした。
【００３１】
ＩＬ−１２の産生量を表７に示し、ＩＦＮ−γの産生量を表８に示し、ＩｇＥの産生量を表９に示す。
【００３２】
【表７】
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【００３３】
【表８】
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【００３４】
【表９】
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【００３５】
表７に示されるように、実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２に係る乳酸菌はＩＬ−１２の産生を促進した。表８に示されるように、実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２に係る乳酸菌はＩＦＮ−γの産生を促進した。表９に示されるように、実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２に係る乳酸菌はＩｇＥの産生を抑制した。
【００３６】
実験例３
次に、実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２に係る乳酸菌と、動物性乳酸菌で、Ｔｈ１型サイトカインの産生能が高く、ＩｇＥ産生抑制効果のあるラクトバチルスラムノーサスＧＧ菌株（ＬＧＧ菌）とのＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ及びＩｇＥ産生能の比較を行った。
【００３７】
実験例２と同様に、各乳酸菌を、ＭＲＳ培地（ＯＸＩＯＩＤ）でそれぞれ純培養をし、集菌、洗浄、殺菌後凍結乾燥により実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２、実施例２０及びＬＧＧ菌株の比較例に係る乳酸菌粉末を作製した。
【００３８】
１１〜２５週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスに卵白アルブミン（ＯＶＡ）とアジュバントを解剖２１日前と７日前に腹腔注射し、解剖を行い、脾臓細胞を単離・調整した。
【００３９】
調整したマウス脾臓細胞に、ＯＶＡ２０μｇ／ｗｅｌｌと、実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２に係る乳酸菌粉末を各０ｍｇ／ｍｌ、０．００１ｍｇ／ｍｌ、０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ濃度でそれぞれ添加し、ＲＰＭＩ１６４０培地で培養を行った。培養３日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、Ｔｈ１型サイトカインであるＩＬ−１２とＩＦＮ−γの産生量をＥＬＩＳＡ法にて測定した。さらに、培養１４日目にそれぞれの培養上清をサンプリングし、ＩｇＥの抗体産生量をＥＬＩＳＡ法にて測定した。
【００４０】
ＩＬ−１２の産生量を表１０に示し、ＩＦＮ−γの産生量を表１１に示し、ＩｇＥの産生量を表１２に示す。
【００４１】
【表１０】
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【００４２】
【表１１】
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【００４３】
【表１２】
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【００４４】
表１０に示されるように実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２に係る乳酸菌はＩＬ−１２の産生を促進し、比較例に係るＬＧＧ菌よりＩＬ−１２の産生能が高いことが判明した。表１１に示されるように実施例２、実施例５乃至７、実施例１２に係る乳酸菌はＩＦＮ−γの産生を促進し、比較例に係るＬＧＧ菌よりＩＦＮ−γの産生能が高いことが判明した。表１２に示されるように実施例２、実施例５乃至７、実施例１０、実施例１２に係る乳酸菌はＩｇＥの産生を抑制し、比較例に係るＬＧＧ菌よりＩｇＥの産生抑制効果が高いことが判明した。
【００４５】
次に、本発明に係る免疫機能調節剤及び抗アレルギー剤が含まれた食品として豆乳ヨーグルトを作製した。先ず、原材料となる豆乳１００部、脱脂大豆粉末２０部及び水５０部を均一に混合・溶解し、１００℃、３０秒の加熱殺菌を行い、４５℃まで冷却後、実施例２に係るラクトバチルス・デルブルッキーと実施例２５に係るロイコノストック・シトレイムの混合スタータを２０部添加し、容器に充填した後、３７℃で発酵させた。約１６時間後に発酵を終了させ、１０℃に冷却した。発酵終了時のｐＨは４．２であり、大豆タンパクのゲル化によるカード（ヨーグルト）を形成していた。
【００４６】
次に、本発明に係る免疫機能調節剤及び抗アレルギー剤が含まれた食品としてカプセル状健康食品を作製した。先ず、実施例７に係るラクトバチルス・プランタラムの凍結乾燥菌体粉末１００部にデキストリン５０部を混合し、均質化した後、ゼラチンとグリセリンを主成分とするハードカプセルに充填し、封入した健康食品を得た。１カプセル当たりの乳酸菌数は１×１０10個であった。