(57)【要約】【課題】心筋梗塞発症後の予後に関連する遺伝子並びに遺伝子多型（心筋梗塞の予後を規定する遺伝的素因マーカー）を提供し、さらにこの情報をもとにして個々の被験者について心筋梗塞発症後に再罹患して死に至る潜在的危険度（予後リスク）を判定するための方法を提供する。また当該方法を簡便に実施するために有用な試薬および試薬キットを提供する。さらに、上記予後リスクの高い患者に対して予後改善に有効な方法を提供する。  【解決手段】被験者の生体試料を対象として、リンホトキシンα遺伝子（LTA遺伝子）の252番目の遺伝子型を検出して、Ｇアレル型である場合に予後リスクが高く、HMG-CoA還元酵素阻害薬がその改善に有効であると判定する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の工程を含む、心筋梗塞発症後の予後リスクを判定する方法：
（a）心筋梗塞患者の生体試料を対象として、Lymphotoxine-α（LTA）遺伝子の252位の遺伝子型を検出する工程、
（b）上記ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ａアレル型であるか、またはＧアレル型であるかを識別する工程。
【請求項２】
さらに下記の工程(c)を含む、請求項１記載の心筋梗塞発症後の予後リスクを判定する方法：
（c）ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ａアレル型の場合に心筋梗塞発症後の予後リスクが低いと判定し、またＧアレル型の場合に心筋梗塞発症後の予後リスクが高いと判定する工程。
【請求項３】
下記(1)に記載するプライマーまたは(2)に記載するプローブのいずれかを含む、心筋梗塞発症後の予後リスクを判定するための試薬：
(1)ヒト第６染色体（6p21.3）のLymphotoxine-α（LTA）遺伝子を含む塩基配列において、ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチドにハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる15〜35塩基長のオリゴヌクレオチドまたはその標識物からなるプライマー、
(2)ヒト第６染色体（6p21.3）のLymphotoxine-α（LTA）遺伝子を含む塩基配列において、ＬＴＡ遣伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16〜500塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチドにハイブリダイズする16〜500塩基長のオリゴ若しくはポリヌクレオチドまたはその標識物からなる固相に固定されていてもよいプローブ。
【請求項４】
少なくとも請求項３に記載する(1)プライマーと(2)プローブとを、別個の包装形態で含む、心筋梗塞発症後の予後リスクを判定するため試薬キット。
【請求項５】
下記の工程を有する、HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群の選別方法：
（a’）心筋梗塞患者の生体試料を対象として、Lymphotoxine-α（LTA）遺伝子の252位の遺伝子型を検出する工程、
（b’）上記ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ｇアレル型であるか、またはＡアレル型であるかを識別する工程。
【請求項６】
さらに下記の工程（c’）を有する、請求項５に記載するHMG-CoA還元酵素阻害薬有効群の選別方法：
（c’） ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ｇアレル型の場合に当該患者をHMG-CoA還元酵素阻害薬有効者と して判定する工程。
【請求項７】
下記(1)に記載するプライマーまたは(2)に記載するプローブのいずれかを含む、心筋梗塞患者についてHMG-CoA還元酵素阻害薬有効者を選別するための試薬：
(1)ヒト第６染色体（6p21.3）のLymphotoxine-α（LTA）遺伝子を含む塩基配列において、ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチドにハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる15〜35塩基長のオリゴヌクレオチドまたはその標識物からなるプライマー、
(2)ヒト第６染色体（6p21.3）のLymphotoxine-α（LTA）遺伝子を含む塩基配列において、ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16〜500塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチドにハイブリダイズする16〜500塩基長のオリゴ若しくはボリヌクレオチドまたはその標識物からなる固相に固定されていてもよいプローブ。
【請求項８】
少なくとも請求項７に記載する(1)プライマーと(2)プローブとを、別個の包装形態で含む、心筋梗塞患者についてHMG-CoA還元酵素阻害薬有効者を選別するための試薬キット。
【請求項９】
請求項１または２の方法により、心筋梗塞発症後の予後リスクが高いと判定された心筋梗塞患者に対して、予後改善のための治療指針としてHMG-CoA還元酵素阻害薬の投与を選択し、HMG-CoA還元酵素阻害薬を処方する、心筋梗塞発症後の予後リスク低減方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、患者固有の遺伝情報に基づいて、心筋梗塞を発症した患者の予後リスクを判定し評価するための方法およびその実施に使用する材料に関する。また本発明は、コレステロール低下薬として知られるHMG-CoA還元酵素阻害薬の、心筋梗塞を発症した患者の予後リスク低減（予後改善）に対する有効性を検査するための方法およびその実施に使用する材料に関する。
【０００２】
本発明の方法は、心筋梗塞を発症した患者の予後を改善する（予後リスクを低減する）ための有効且つ的確な治療指針を与えるものであり、個々の患者に応じて適切な治療方法が選択できる結果、治療が不要な患者に対して無効な治療をすることを避けると共に、必要な患者に対しては有効且つ的確な治療を施すことができる点で有用なものである。
【背景技術】
【０００３】
心筋梗塞は欧米諸国において最も死亡率の高い疾患であり、また我が国でも心筋梗塞を含む循環器系の疾患患者にかかる医療費は、一般診療医療費の２０％以上を占めている。心筋梗塞は、たとえ致死的ではないにしても、心不全や狭心症・難治性不整脈を合併するため発症後の患者の生活の質を著しく低下させ、また再発や上記の合併症などの発症によって、１年後の生存率が低い（予後リスクが高い）という事情から、発症を予防することは勿論のこと、予後を改善するための方法を確立することも急務とされている。
【０００４】
心筋梗塞の予防や予後改善に、コレステロール低下薬であるHMG-CoA還元酵素阻害薬が有効であることが海外のいくつもの大規模臨床試験で明らかになっている。HMG-CoA還元酵素阻害薬は、コレステロールの生合成に必要なHMG-CoA還元酵素を阻害する作用（HMG-CoA還元酵素阻害作用）に基づいて、コレステロールの生合成を抑えて、コレステロールを低下させる効果を有する薬物である。この薬物でコレステロールを十分に低下させると心筋梗塞の原因となるプラークが安定して破綻しにくくなり、心筋梗塞の発症を予防する他、心筋梗塞をすでに起こしたことのある人に対しては再梗塞を予防する効果があると言われている。しかしながら、一方で、かかるHMG-CoA還元酵素阻害薬の効果は、患者の投与前のコレステロール値に依存しないことも知られている。
【０００５】
スウェーデンのStenestrandらは、急性心筋梗塞後の退院時あるいはそれ以前からの早期HMG-CoA還元酵素阻害薬治療が１年後の生命予後にどのような効果をもたらすかを検討し、１年死亡率がHMG-CoA還元酵素阻害薬非投与群で9.3％であるのに対し、HMG-CoA還元酵素阻害薬投与群では4.0％と低く、重回帰分析で関連因子を補正した場合の早期HMG-CoA還元酵素阻害薬治療による１年死亡率の低減効果は25％であると報告している。しかも、この低減効果は、年齢や性別、ベースラインの背景因子、既往歴、および治療歴などに関わらず、認められると報告している（非特許文献１）。
【０００６】
このように、HMG-CoA還元酵素阻害薬の投与が、心筋梗塞発症後の患者の生命予後を全体として改善することは明らかになっているものの、具体的にどのような患者群に対して有効であるのか未だ明らかになっていない。特に、近年は、Evidence Based Medicine (EBM)という理念のもと、医師の専門知識、経験および技術に加えて、科学的方法で確かめられた最新、最良の医療技術に関するエビデンス（証拠）をもとに、個々の患者に対して最も効果的で且つ安全な医療を施すことが求められるようになっているため、HMG-CoA還元酵素阻害薬の投与に対して有効な患者群を科学的根拠に基づいて明らかにすることは重要なことであると考えられる。また、そうすることが、医療費の効率的運用にもつながる。
【０００７】
ところで、最近、心筋梗塞の発症には、生活習慣等の非遺伝的因子のみならずいくつかの遺伝的因子が関わっていることが報告されている（非特許文献２及び３）。心筋梗塞の発症率は一般に高血圧、糖尿病、高脂血症などの危険因子の数に比例して高くなるものの（非特許文献３）、これらの危険因子を全く持たなくても心筋梗塞を発症する例があることは、心筋梗塞が遺伝的因子と関連する疾患であることを強く示唆するものである。
【０００８】
心筋梗塞と関連する遺伝子（心筋梗塞関連遺伝子）として、従来、アンギオテンシン変換酵素（非特許文献４）、血小板糖タンパクIIIa（非特許文献５）、第７血液凝固因子、コレステロールエステル移送タンパク（非特許文献６）、リンホトキシンα遺伝子（LTA遺伝子）、NFKBIL１遺伝子およびBAT１遺伝子（以上、非特許文献７）、ヒトプロスタサイクリン合成酵素遺伝子（特許文献１）、コネキシン３７遺伝子、腫瘍壊死因子α因子遺伝子、NADH/NADPHオキシダーゼp22フォックス遺伝子、アポリポプロテインＥ遺伝子、アポリポプロテインC-III遺伝子、血小板活性因子アセチルヒドラーゼ遺伝子、トロンボスポンジン４遺伝子、及びインターロイキン10遺伝子（以上、特許文献２）が同定され、その遺伝子多型〔例えば、SNPs(single nucleotide polymorphisms;単一塩基多型)〕と心筋梗塞との関連が報告されている。
【０００９】
しかしながら、これらの心筋梗塞関連遺伝子の遺伝子多型が、心筋梗塞を発症した患者の生命予後の指標になること、並びにHMG-CoA還元酵素阻害薬の有効群の選別指標になることについては知られておらず、心筋梗塞発症者の生命予後を改善するという目的で、これらの遺伝子多型を指標としてHMG-CoA還元酵素阻害薬有効群を抽出し、個別医療を行うという発想はまだない。
【非特許文献１】Stenestrand,U., et al., Journal of the American Medical Association 2001; 285;430-436
【非特許文献２】Marenberg ME, et al., N Engl J Med 1994, 330, 1041-1046
【非特許文献３】Nara JJ, et al., Circulation, 1980, 61,503-508
【非特許文献４】Cambien F, et al., Nature 1992, 359, 641-644
【非特許文献５】Weiss EJ, et al.,  N Engl J Med 1996, 334, 1090-1094
【非特許文献６】Kuiven hoven JA, et al., N Engl J Med 1998, 338, 86-93
【非特許文献７】Ozaki,K., et al: Nature Genet 32, 650-654 (2002)
【特許文献１】特開2002-136291号公報
【特許文献２】特開2004-24036号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
前述するように、近年、ゲノム全領域からＳＮＰを対象として、心筋梗塞患者と一般集団とのＳＮＰのアレル頻度の違い（ＳＮＰタイピング）が検討され、有意差のある候補ＳＮＰが複数同定されている（例えば、非特許文献７等）。しかしながら、心筋梗塞を発症した患者の予後改善に対するHMG-CoA還元酵素阻害薬の有効性を判定する因子として遺伝子多型を用いるという方法は知られていない。
【００１１】
本発明の目的は、心筋梗塞発症後の生命予後に関連する遺伝子（心筋梗塞予後規定遺伝子）、並びに心筋梗塞発症後の生命予後の判定指標となる遺伝子多型を提供し、さらにこの情報をもとにして心筋梗塞発症患者について予後リスクを判定する方法を提供することである。さらに本発明の目的は、当該方法を簡便に実施するために有用な試薬および試薬キットを提供することである。
【００１２】
また本発明は、心筋梗塞発症患者に対するHMG-CoA還元酵素阻害薬の有効性に関わる遺伝子（HMG-CoA還元酵素感受性遺伝子）、並びに心筋梗塞発症後の予後改善に対する有効性の判定指標となる遺伝子多型を提供し、さらにこの情報をもとにして、心筋梗塞発症後の予後改善にHMG-CoA還元酵素阻害薬が有効に作用する心筋梗塞発症患者（HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群）を選別する方法を提供することを目的とする。さらに本発明の目的は、当該方法を簡便に実施するために有用な試薬および試薬キットを提供することである。
【００１３】
さらに本発明は、潜在的に予後が不良である心筋梗塞発症患者を予め選択し、予後リスクを低減する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討を進めていたところ、心筋梗塞関連遺伝子の一つとして知られているリンホトキシンα（LTA）遺伝子（非特許文献７）が、同時に心筋梗塞発症後の生命予後を規定する遺伝子であり、そのプロモーター領域（イントロン１）に位置する252位に、Ｇ（グアニン）をヘテロ接合体（A/GまたはG/A）またはホモ接合体（G/G）として有する被験者（以下、これを「ＬＴＡ遺伝子の252位がＧアレル型である被験者」または単に「Ｇアレル保有者」ともいう）は、心筋梗塞発症後の予後が悪く（予後リスクが高く）、一方、当該252位にＡ（アデニン）をホモ接合体（A/A）として有する被験者（以下、これを「ＬＴＡ遺伝子の252位がＡアレル型である被験者」または単に「Ｇアレル非保有者」ともいう）は、心筋梗塞発症後の予後が良好である（予後リスクが低い）ことを見いだした。
【００１５】
さらに本発明者らは、リンホトキシンα（LTA）遺伝子の252位にＧ（グアニン）をヘテロ接合体（A/GまたはG/A）またはホモ接合体（G/G）として有する被験者（Ｇアレル保有者）は、前述するように心筋梗塞発症後の予後は悪いものの（予後リスクは高いものの）、HMG-CoA還元酵素阻害薬による予後改善効果が顕著であり、HMG-CoA還元酵素阻害薬投与によってその予後が著しく改善すること、一方、252位にＡ（アデニン）をホモ接合体（A/A）として有する被験者（Ｇアレル非保有者）は、前述するように心筋梗塞発症後の予後は良好であるものの（予後リスクは低いものの）、HMG-CoA還元酵素阻害薬による予後改善効果は低く、HMG-CoA還元酵素阻害薬を投与してもそれ以上の予後の改善が認められないことを見いだした。すなわち、ＬＴＡ遺伝子の252位がＧアレル型である被験者は、「心筋梗塞発症後の予後不良群」であると同時に「HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群」として分類することができ、一方、ＬＴＡ遺伝子の252位がＡアレル型である被験者は、「心筋梗塞発症後の予後良好群」であると同時に「HMG-CoA還元酵素阻害薬非有効群」として分類することができる。
【００１６】
以上の知見から、本発明者らは、心筋梗塞を発症した患者についてＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を検出することにより、心筋梗塞の再発やそれに関連する疾患を発症して死に至り得る潜在的な危険度を、高い確率で予測し判定することができることを確信して、本発明を完成するにいたった。さらに、本発明者らは、心筋梗塞を発症した患者についてＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を検出することにより、当該患者について、心筋梗塞の再発やそれに関連する疾患を発症して死に至り得る潜在的な危険度を低減する療法として、HMG-CoA還元酵素阻害薬投与が有効な群（HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群）とHMG-CoA還元酵素阻害薬投与が有効でない群（HMG-CoA還元酵素阻害薬非有効群）に高い精度をもって分類することができること、そして、選別されたHMG-CoA還元酵素阻害薬有効群に対して選択的にHMG-CoA還元酵素阻害薬を投与することによって、心筋梗塞発症後の予後が不良な患者（予後リスクが高い患者）に対して有効且つ的確な治療が可能になることを確信して、本発明を完成するにいたった。
【００１７】
すなわち、本発明は、下記の態様を有するものである。
（１）第一の態様において、本発明は心筋梗塞を発症した患者の予後リスクを判定するための方法に関する。この方法は、心筋梗塞患者について、Lymphotoxine-α（LTA）遺伝子の252位の遺伝子型を検出し同定することを含む。上記252位の遺伝子型が、Ａアレル型（AA）であるか、それともＧアレル型（AG/GA若しくはGG）であるかを判別することによって、心筋梗塞を発症した患者の予後を判定することができる。
【００１８】
当該方法は、具体的には、下記の工程（a）及び(b)を含むことを特徴とする：
（a）心筋梗塞患者の生体試料を対象として、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を検出する工程、
（b）上記ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ａアレル型であるか、またはＧアレル型であるかを識別する工程。
【００１９】
さらに当該方法は下記の工程(c)を含むことができる：
（c）ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ａアレル型の場合に心筋梗塞発症後の予後リスクが低いと判定し、またＧアレル型の場合に心筋梗塞発症後の予後リスクが高いと判定する工程。
（２）第二の態様において、本発明は心筋梗塞を発症した患者の予後リスクを判定するための試薬または試薬キットに関する。当該試薬は、下記(1)に記載するプライマー、または下記(2)に記載するプローブのいずれかを含むものである。また試薬キットは、下記の(1)プライマーと(2)プローブとを別個に包装された形で含むものである：
(1)ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列において、ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチドにハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる15〜35塩基長のオリゴヌクレオチドまたはその標識物からなるプライマー、
(2)ヒト第６染色体上（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列において、ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16〜500塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチドにハイブリダイズする16〜500塩基長のオリゴ若しくはポリヌクレオチドまたはその標識物からなる固相に固定されていてもよいプローブ。
【００２０】
（３）第三の態様において、本発明は心筋梗塞を発症した患者について、心筋梗塞発症後の予後の改善に対してHMG-CoA還元酵素阻害薬の投与が有効であるか（HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群であるか）否かを判定し、HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群を選別するための方法に関する。この方法は、心筋梗塞を発症した患者について、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を検出し同定することを含む。その結果、Ｇアレル型（AG/GA若しくはGG）である場合をHMG-CoA還元酵素阻害薬有効群として選別することができる。（一方、上記252位の遺伝子型がＡアレル型（AA）である場合はHMG-CoA還元酵素阻害薬非有効群として判定される）
当該方法は、具体的には、下記の工程（a’）および(b’)を含むことを特徴とする：
（a’）心筋梗塞患者の生体試料を対象として、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を検出する工程、
（b’） ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ｇアレル型であるか、またはＡアレル型であるかを識別する工程。
【００２１】
さらに当該方法は下記の工程（c’）を含むことができる：
（c’） ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ｇアレル型の場合に当該患者をHMG-CoA還元酵素阻害薬有効者として判定する工程。
【００２２】
（４）第四の態様において、本発明は心筋梗塞を発症した患者についてHMG-CoA還元酵素阻害薬有効者であるか否かを選別するための試薬または試薬キットに関する。当該試薬は、下記(1’)に記載するプライマー、または下記(2’)に記載するプローブのいずれかを含むものである。また試薬キットは、下記の(1’)プライマーと(2’)プローブとを別個に包装された形で含むものである：
(1’)ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列において、ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16塩基長以上の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチドにハイブリダイズし、当該オリゴ若しくはポリヌクレオチドを特異的に増幅するために用いられる15〜35塩基長のオリゴヌクレオチドまたはその標識物からなるプライマー、
(2’)ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列において、ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16〜500塩基長の連続したオリゴ若しくはポリヌクレオチドにハイブリダイズする16〜500塩基長のオリゴ若しくはポリヌクレオチドまたはその標識物からなる固相に固定されていてもよいプローブ。
【００２３】
（５）第五の態様において、本発明は心筋梗塞を発症した患者に対して、個別に治療方針を選択し決定して、心筋梗塞発症後の予後リスクを低減する方法に関する。当該方法は、具体的には、上記（１）に記載する方法（心筋梗塞患者の予後リスク判定方法）により、心筋梗塞発症後の予後リスクが高いと判定された心筋梗塞患者に対して、予後改善のための治療指針としてHMG-CoA還元酵素阻害薬の投与を選択し、HMG-CoA還元酵素阻害薬を処方することによって実施することができる。      
【発明の効果】
【００２４】
本発明によれば、心筋梗塞を発症した患者について、心筋梗塞関連遺伝子であるリンホカインα（LTA）遺伝子を対象として、その252位に位置する遺伝子型を測定することにより、Ａアレル型かＧアレル型かで、当該患者の心筋梗塞発症後の予後リスクの高低（予後が不良か否か）を判定することができ、予後リスクが高い患者（Ｇアレル型の患者）に対して選択的に有効且つ適切な治療を施すことができる。具体的には、本発明によれば、心筋梗塞を発症した患者について、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を測定することによって、心筋梗塞の再発または心筋梗塞に関連する疾患の発症によって死に至り得る危険度を予測することができ、次いでリスクが高いと判断された患者（Ｇアレル型の患者）については、その有効薬であるHNG-CoA還元酵素阻害薬を投与するという選択を行うことができる。
【００２５】
これは逆に、本発明を利用してＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を測定し、Ａアレル型であるかＧアレル型であるかを指標として、予後リスクが低い患者（Ａアレル型）を選択することができる。当該患者は、同時に、予後改善にHNG-CoA還元酵素阻害薬の投与が有効ではないことから、積極的な治療を施さないか、HNG-CoA還元酵素阻害薬投与以外の治療を施すという選択肢を与えることができる。このことは、不必要（無効）な治療を行うことによって生じる治療の費用（保健）の負担増を低減するとともに、HNG-CoA還元酵素阻害薬の投与によって生じ得る副作用を低減するという両面において有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
１．本発明で使用する用語の定義
本明細書における塩基配列（ヌクレオチド配列）、核酸などの略号による表示は、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢの規定〔IUPAc-IUB communication on Biological Nomenclature, Eur. J. Biochem., 138; 9 (1984)〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作製のためのガイドライン」（特許庁編）及び当該分野における慣用記号に従うものとする。
【００２７】
本明細書中において「遺伝子」は、特に言及しない限り、ヒトゲノムＤＮＡを含む２本鎖ＤＮＡ、及び１本鎖ＤＮＡ（センス鎖）、並びに当該センス鎖と相補的な配列を有する１本鎖ＤＮＡ（アンチセンス鎖）、及びそれらの断片のいずれもが含まれる、また、本明細書で「遺伝子」とは、特に言及しない限り、調節領域、コード領域、エクソン、及びイントロンを区別することなく示すものとする。
【００２８】
なお、本明細書に記載するリンホトキシンα（Lymphotoxin-α）やその遺伝子（リンホトキシンα遺伝子、または単に「LTA遺伝子」という）の配列や位置情報は、いずれも米国のＮＣＢＩ（the National Center for Biotechnology Information）のデータベースに基づくものである。
【００２９】
また、本明細書中において、「ヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」は、核酸と同義であって、ＤＮＡおよびＲＮＡの両方を含むものとする。また、これらは２本鎖であっても１本鎖であってもよく、ある配列を有する「ヌクレオチド」（または「オリゴヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド」）といった場合、特に言及しない限り、これに相補的な配列を有する「ヌクレオチド」（または「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」）も包括的に意味するものとする。さらに、「ヌクレオチド」（または「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」）がＲＮＡである場合、配列表に示される塩基記号「Ｔ」は「Ｕ」と読み替えられるものとする。
【００３０】
本明細書において「遺伝子多型」とは、２つ以上の遺伝的に決定された対立遺伝子がある場合にそれらの対立遺伝子を指す。具体的には、ヒトの集団において、ある一個体のゲノム配列を基準として、他の１または複数の個体ゲノム中の特定部位に、１又は複数のヌクレオチドの置換、欠失、挿入、転移、逆位などの変異が存在するとき、その変異が当該１または複数の個体に生じた突然変異でないことが統計学的に確実か、または当該個体内特異変異でなく、１％以上の頻度で集団内に存在することが家系的に証明される場合、その変異を「遺伝子多型」とする。本明細書で用いる「遺伝子多型」の意味には、単一のヌクレオチドの変化によって引き起こされる多型であるいわゆる１塩基多型〔Single Nucleotide Polymorphism：ＳＮＰ（又はＳＮＰｓ）〕が含まれる。「一塩基多型」とは、単一の核酸の変化によって引き起こされる多型である。多型は選択された集団の１％より大きな頻度、好ましくは１０％以上の頻度で存在する。
【００３１】
本発明において、２５２Ｇ→Ａのような表記は、当該塩基番号位置の多型が矢印の前又
は後の塩基である二つの遺伝子型からなることを意味する。
【００３２】
本発明において「遺伝子型を検出する」または「遺伝子型を判定する」とは、解析対象の被験者のリンホトキシンα遺伝子（LTA遺伝子）が、その塩基番号252位においてどのような遺伝子型を有するかを調べることを意味する。具体的には、被験者の生体試料から得られるＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型がA/GまたはG/A（252位塩基がＡのアレルとＧのアレルとのヘテロ接合体）、G/G（252位塩基が両アレルともにＧのホモ接合体）〔本発明においてこれらの場合をまとめて「Ｇアレル型」という〕、またはA/A（252位の塩基が両アレルともにＡのホモ接合体）（本発明において「Ａアレル型」という）のいずれであるかを調べることを意味する。
【００３３】
本明細書において「心筋梗塞関連遺伝子」とは、心筋梗塞または動脈硬化に罹りやすい体質を決める遺伝子のことをいう。動脈硬化に関連する要因としては、酸化ストレス、炎症、糖および脂質代謝、血小板凝集を挙げることができる。
【００３４】
また、本明細書において「遺伝子頻度」とは、一つの遺伝子の座位について、集団中に存在する全遺伝子数のうち、その対立遺伝子が占める割合をいう。
【００３５】
本発明において「心筋梗塞患者」または「心筋梗塞発症患者」とは、1)30分以上持続する胸痛、2)心電図におけるST部分の変化、3)心筋逸脱酵素の上昇のうち少なくとも２つを満たし、心筋梗塞と診断された患者を意味する。
【００３６】
本発明において「予後リスク」とは、心筋梗塞を発症した患者が、生存退院した後、心筋梗塞を再発するか、または心筋梗塞に関連する疾患（例えば狭心症、鬱血性心不全、致死性不整脈などの心血管疾患、脳卒中などの脳血管疾患、その他の臓器不全など）を発症することに基づいて、死に至る確率を意味する。本発明において「予後が不良」または「予後リスクが高い」とは、心筋梗塞生存退院から１年以内に、上記原因によって死亡する確率が２％以上であることを意味し、逆に「予後が良好」または「予後リスクが低い」とは、心筋梗塞生存退院から１年以内に、上記原因によって死亡する確率が２％未満であることを意味する。
【００３７】
本発明において「予後改善」とは、心筋梗塞を発症した患者が、生存退院した後に、心筋梗塞を再発するか、または心筋梗塞に関連する疾患を発症する確率（危険度）が低減することを意味する。
【００３８】
２．心筋梗塞予後規定遺伝子、HMG-CoA還元酵素阻害薬感受性遺伝子
リンホトキシンα（LTA）（「腫瘍壊死因子（TNF）β」ともいう）は、リンパ球の産生するサイトカインであり腫瘍壊死因子ファミリーの一種である。リンホトキシンα（LTA）遺伝子（LTA遺伝子）は、従来より血管の炎症に関わっていることが知られているが、最近、網羅的なSNPs解析によって、心筋梗塞関連遺伝子であることが示された（Kouichi Ozaki, et al., nature genetics, volume 32, december 2002, p.650-654）。具体的には、1133名の心筋梗塞の患者サンプルと1879名の一般集団を対象とした研究で、リンホトキシンαの遺伝子（LTA遺伝子）には、エクソン１に10Ｇ→Ａ、イントロン１に252Ａ→Ｇ、およびエクソン３に804Ｃ→Ａの３つの遺伝子多型（SNPs）が存在していること、中でもイントロン１の252Ａ→Ｇの塩基の変化が、この遺伝子の発現に影響を与え、心筋梗塞の発症危険度を約１.８倍高めることが報告された（上記文献）。
【００３９】
当該252位における遺伝子多型（SNP252）は、ヒト第６染色体の遺伝子座6p21.3に存在するLTA遺伝子（Genbank Accession No. NC_000006の31648072〜31650077領域に位置する2006bpの遺伝子）のイントロン１（2006bp中「132..418」の領域に位置する287bp）の領域に位置している。
【００４０】
今回、本発明者らは、心筋梗塞を発症した患者を、予後が良好な群（発症して生存退院した後１年以内の死亡率２％未満の群）と、予後が不良な群（発症して生存退院した後１  年以内の死亡率２％以上の群）の２群に分けた場合に、前者（予後が良好な群）は、ＬＴＡ遺伝子について知られているＳＮＰsのうち「252Ａ→Ｇ」が、非常に高い頻度でＡアレル型〔ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型がA/Aであるタイプ（252位塩基が両アレルともにＡのホモ接合体であるタイプ）〕であり、一方、後者（予後が不良な群）は、非常に高い頻度でＧアレル型〔ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型がA/GまたはG/Aであるタイプ（252位塩基がＡのアレルとＧのアレルとのヘテロ接合体であるタイプ）と、G/Gであるタイプ（252位塩基が両アレルともにＧのホモ接合体であるタイプ）〕であり、両者を分子遺伝的観点から、明確に分類することができることを見いだした。
【００４１】
さらに、本発明者らは、上記のＧアレル型の患者（すなわち、予後が不良な患者）は、コレステロール低下薬であるHMG-CoA還元酵素阻害薬の生命予後改善または心血管イベント抑制効果が大きく、発症後、HMG-CoA還元酵素阻害薬を投与することによって予後が良好に改善すること（予後リスクが低減すること）、それに対して、Ａアレル型の患者（すなわち、予後が良好な患者）はHMG-CoA還元酵素阻害薬の生命予後改善または心血管イベント抑制効果が小さく、発症後、HMG-CoA還元酵素阻害薬を投与しても予後に影響しない（現状以上の改善効果が認められない）ことを確認し、上記ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が血管の炎症関連物質と密接に関連し、HMG-CoA還元酵素阻害薬の有効性と関係していることを確信した。
【００４２】
以上のことから、本発明者らは、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を指標とすることによって、心筋梗塞発症後の予後リスクを予測し判定することができること（予後リスクの判定）、さらに心筋梗塞を発症した個々の患者に対して、心筋梗塞発症後の予後を改善（予後リスク低減）するために、HMG-CoA還元酵素阻害薬の投与が有効であるか否かを、判断することができることを確信した。
【００４３】
斯くして得られた知見に基づいて、本発明は心筋梗塞予後規定遺伝子として、またHMG-CoA還元酵素阻害薬感受性遺伝子として、ＬＴＡ遺伝子（2006bp）を提供する。なお、ＬＴＡ遺伝子（gene）の塩基配列を配列番号１に示す。当該ＬＴＡ遺伝子は、前述するようにヒト第６染色体上の6p21.3遺伝子座の、31648072〜31650077の領域に位置する〔ヒト第６染色体（Genbank Accession No. NC_000006）の31648072位から31650077位に位置する〕。
【００４４】
３．心筋梗塞の予後判定マーカー
本発明は、心筋梗塞発症後の患者（被験者）の予後を決定する遺伝的素因マーカーを含む遺伝子（またはオリゴもしくはポリヌクレオチド）を、心筋梗塞発症後の予後を判定するためのマーカー（予後判定マーカー）として提供する。
【００４５】
被験者について、心筋梗塞発症後の予後を規定する遺伝的素因マーカーを含む遺伝子（またはオリゴもしくはポリヌクレオチド）（予後判定マーカー）を検出することにより、当該被験者について心筋梗塞発症後の予後（再発や心筋梗塞に関連する疾患の発症によって死にいたる潜在的可能性）を検出（検査・診断）することができる。
【００４６】
かかる予後判定マーカーとして、具体的には、ヒト第６染色体（6p21.3）上のＬＴＡ遺伝子（Genbank Sequence Accession IDs: NC_000006の31648072位から31650077位、全長2006bp）の塩基配列（配列番号１参照）において、ハプロタイプブロックに存在する遺伝子多型（LTA遺伝子、1..2006の252位、以下、これを「SNP252」ともいう）（塩基ＡまたはＧ）を含むオリゴまたはポリヌクレオチドが例示される。これらのオリゴまたはポリヌクレオチドの長さ（塩基長）は、ヒトゲノム上で特異的に認識される長さであればよく、その限りにおいて特に制限されない。通常10塩基長以上、好ましくは20塩基長以上である。
【００４７】
具体的には、ヒト第６染色体（6p21.3）の塩基配列において、ＬＴＡ遺伝子（NC_000006の31648072位から31650077位）の遺伝子多型部位「SNP252」（LTA遺伝子の252位）（心筋梗塞予後規定SNP）を中心として塩基長51〜601のオリゴまたはポリヌクレオチドを挙げることができる〔例えば、51塩基（SNP252 の5’側及び3’側に各25塩基を有する：配列番号２）、201塩基（SNP252 の5’側及び3’側に各100塩基を有する：配列番号３）、または401塩基（SNP252の5’側及び3’側に各200塩基を有する：配列番号４〕。
【００４８】
また、上記のような心筋梗塞発症後の予後を決定する遺伝的素因マーカー（SNP252）を含む遺伝子（またはオリゴもしくはポリヌクレオチド）そのものでなく、遺伝的素因を反映した遺伝子産物（例えば、mRNAまたはその派生物（cDNA）、蛋白質）も、心筋梗塞発症後の予後の判定するマーカーとして利用することができる。
【００４９】
かかる診断マーカーの一例として、ＬＴＡ遺伝子の発現産物であるリンホトキシンα（蛋白質）、またはこれらをコードするオリゴまたはポリヌクレオチド（mRNAまたはcDNA）を挙げることができる。リンホトキシンαのアミノ酸配列（205アミノ酸）をコードするcDNA配列（1386bp）を配列番号５に記載する。
【００５０】
４．心筋梗塞発症後の予後リスクの判定方法
本発明は、心筋梗塞を発症した患者について、心筋梗塞の再発や心筋梗塞に関連する疾患の発症によって死に至る潜在的危険度（予後リスク）を判定する方法を提供する。
【００５１】
当該方法は、心筋梗塞患者の生体試料を対象として、ＬＴＡ遺伝子の252位（SNP252）の遺伝子型を検出することによって実施することができる。本発明で行う検出は、具体的には、心筋梗塞患者のＬＴＡ遺伝子の252位（SNP252）の遺伝子型がＡアレル型〔A/A（252位の塩基が両アレルともにＡのホモ接合体）〕であるか、Ｇアレル型〔A/GまたはG/A（252位塩基がＡのアレルとＧのアレルとのヘテロ接合体）、G/G（252位塩基が両アレルともにＧのホモ接合体）〕であるかである。
【００５２】
ＬＴＡ遺伝子の252位（SNP252）の遺伝子型がＡアレル型である場合は、当該患者は心筋梗塞発症後の予後リスクが低いと判定することができ、一方、ＬＴＡ遺伝子の252位（SNP252）の遺伝子型がＧアレル型である場合は、当該患者は心筋梗塞発症後の予後リスクが高いと判定することができる。
【００５３】
かかる遺伝子型の検出は、具体的には、(1)被験者のゲノムＤＮＡを対象として、ＬＴＡ遺伝子の252位（SNP252）を含む領域でPCRを行い、SSCP法で検出する方法、(2) 被験者のゲノムＤＮＡを対象として、ＬＴＡ遺伝子のSNP252を含む領域でPCRを行い、PCR産物に対する制限酵素の切断様式から検出する方法、(3)同PCR産物を直接シーケンシングして、配列を決定する方法、(4) 被験者のゲノムＤＮＡを対象として、ＬＴＡ遺伝子のSNP252を有する領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプローブとして使用し、個体のDNAとハイブリダイズさせるASO（allele specific oligonucleotide）法、(5) 被験者のゲノムＤＮＡを対象として、ＬＴＡ遺伝子のSNP252を有する領域にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプローブとして使用して、質量分析装置等で検出する方法など、公知の方法を用いることにより行うことができる。
【００５４】
より具体的な検出方法として、ＬＴＡ遺伝子の252位（ANP252）の遺伝子型（A/A、A/GまたはG/G）を識別する方法を例示することができる。当該検出方法は、以下の工程(a)及び(b)を行うことによって実施することができる：
（a）心筋梗塞患者の生体試料を対象として、Lymphotoxine-α（LTA）遺伝子の252位の遺伝子型を検出する工程、
（b）上記ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型が、Ａアレル型であるか、またはＧアレル型であるかを識別する工程。
【００５５】
なお、(a)の工程は、具体的には心筋梗塞患者の生体試料から抽出したゲノムＤＮＡを対象として行うことができる。ここで252位の遺伝子型の検出は、実際は抽出したゲノムＤＮＡ上においてＬＴＡ遺伝子を特定して対象とする必要はなく、抽出したゲノムＤＮＡそのものを対象として、その塩基配列に存在する、例えば配列番号６記載の塩基配列と配列番号７記載の塩基配列により挟まれた塩基を識別することによって行うことができる。
【００５６】
ここで、配列番号６で示される塩基配列は、ヒト第６染色体（6p21.3）の塩基配列において、前述する心筋梗塞予後規定遺伝子（LTA遺伝子）の252番目の塩基（SNP252）（Genbank Sequence Accession IDs: NC_000006の31648072.. 31650077領域に位置する252番目の塩基）（心筋梗塞予後規定遺伝子多型）の5’側（上流側）に位置する200塩基長の塩基配列に該当し、配列番号７で示される塩基配列は、ヒト第６染色体（6p21.3）の塩基配列において、上記心筋梗塞予後規定遺伝子の252番目の塩基（SNP252）の3’側（下流側）に位置する200塩基長の塩基配列に該当する。ここで検出する対象の塩基は、配列番号６及び配列番号７で示される各塩基配列に挟まれた、心筋梗塞予後規定ＳＮＰに相当するSNP252（Genbank Sequence Accession IDs: NC_000006の31648072.. 31650077領域に位置する252番目の塩基）である。
【００５７】
当該検出によって、SNP252の塩基がＡ（アデニン）とＧ（グアニン）のヘテロ接合体（A/GまたはG/A）であるか、またはＧ（グアニン）のホモ接合体（G/G）である場合（すなわち、Ｇアレル型である場合）、当該ゲノムＤＮＡ試料を提供した心筋梗塞患者は心筋梗塞を発症して生存退院した後、再度心筋梗塞を発症するか心筋梗塞に関連する疾患を発症して死に至り得る潜在的可能性（予後リスク）が相対的に高いと判断することができる。逆に、SNP252の塩基がＡ（アデニン）のホモ接合体（A/A）である場合（すなわち、Ａアレル型である場合）、当該ゲノムＤＮＡ試料を提供した心筋梗塞患者は、心筋梗塞を発症して生存退院した後、再度心筋梗塞を発症したり、また心筋梗塞に関連する疾患を発症して死に至り得る潜在的可能性（予後リスク）が相対的に低いと判断することができる。
【００５８】
上記本発明の方法は、さらに下記の工程(c)を有することが好ましい：
(c)上記(b)の結果に基づいて、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型（すなわち、配列番号６記載の塩基配列と配列番号７記載の塩基配列により挟まれた塩基の遺伝子型）が、Ｇのホモ接合体（G/G）またはＡとＧのヘテロ接合体（A/GまたはG/A）である場合（Ｇアレル型である場合）に予後リスクが高いと判断し、またはＡのホモ接合体（A/A）である場合（Ａアレル型である場合）に予後リスクが低いと判断する工程。
【００５９】
当該方法によれば、心筋梗塞を発症して生存退院した後における心筋梗塞に関連する疾患イベントの危険度、およびこれらを原因として死亡する危険度（生命予後リスク）を判定することができる。これらの判定は、SNP252がＡアレル型であるか、それともＧアレル型であるかを判断基準（判断指標）とすることにより、医師等の専門知識を有する者の判断を要することなく、自動的／機械的に行なうことができる。このため、本発明の方法は、心筋梗塞発症後における予後リスク（心筋梗塞の再発や心筋梗塞に関連する疾患の発症によって死に至るリスク）の検出方法と言うこともできる。
【００６０】
なお、上記工程(a)と工程(b)は、公知の方法〔例えば、Bruce, et al., Geneme Analysis/A laboratory Manual (vol.4), Cold Spring Harbor Laboratory, NY., (1999)〕を用いて行うことができる。
【００６１】
工程(a)で対象とする生体試料としては、前述するように具体的にはゲノムＤＮＡを挙げることができる。かかるゲノムＤＮＡは、心筋梗塞患者および臨床検体等から単離されたあらゆる細胞（培養細胞を含む。但し生殖細胞は除く）、組織（例えば、肝臓等。培養組織を含む）、または体液（例えば、血液、唾液、リンパ液、気道粘膜、精液、汗、尿等）などの生体試料を材料として調製することができる。該材料としては末梢血から分離した白血球または単核球が好ましく、特に白血球が最も好適である。これらの材料は、臨床検査において通常用いられる方法に従って単離することができる。
【００６２】
例えば白血球を材料とする場合、まず心筋梗塞患者より単離した末梢血から常法に従って白血球を分離する。次いで、得られた白血球にプロティナーゼＫとドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を加えてタンパク質を分解、変性させた後、フェノール／クロロホルム抽出を行うことによりゲノムＤＮＡ（ＲＮＡを含む）を得る。ＲＮＡは、必要に応じてＲＮaseにより除去することができる。なお、ゲノムＤＮＡの抽出は、上記の方法に限定されず、当該技術分野で周知の方法（例えば、Sambrook J. et. al., “Molecular Cloning: A Laboratry Manual (2nd Ed.)”Cold Spring Harbor Laboratory, NY）や、市販のＤＮＡ抽出キット等を利用して行なうことができる。さらに必要に応じて、ヒト第６染色体上のＬＴＡ遺伝子またはそのイントロン１を含むＤＮＡを単離してもよい。当該ＤＮＡの単離は、ＬＴＡ遺伝子またはそのイントロン１にハイブリダイズするプライマーを用いて、ゲノムＤＮＡを鋳型としたＰＣＲ等によって行うことができる。
【００６３】
工程(ｂ)において、上記のようにして得られたヒトゲノムＤＮＡを含む抽出物から、心筋梗塞予後規定ＳＮＰ（SNP252）、すなわちＬＴＡ遺伝子の252位に位置するSNP252の塩基を識別する。なお、当該塩基の識別は、ヒトゲノムＤＮＡを含む試料からさらに単離したヒト第６染色体上のＬＴＡ遺伝子、好ましくはそのイントロン１の塩基配列を直接決定し、当該ＬＴＡ遺伝子の252番目（Genbank Sequence Accession IDs: NC_00006の31648072..31650077領域の252番目）に位置する塩基の種類（ＡまたはＧ）を調べる方法によってもよい。
【００６４】
例えば目的の塩基を識別する方法としては、上記のように該当領域の遺伝子配列を直接決定する方法の他に、多型配列が制限酵素認識部位である場合は、制限酵素切断パターンの相違を利用して、遺伝子型を決定する方法（以下、ＲＦＬＰという）、多型特異的なプローブを用いハイブリダイゼーションを基本とする方法（例えば、チップやガラススライド、ナイロン膜上に特定なプローブを張り付け、それらのプローブに対するハイブリダイゼーション強度の差を検出することによって、多型の種類を決定する、または、特異的なプローブのハイブリダイゼーションの効率を、鋳型２本鎖増幅時にポリメレースが分解するプローブの量を検出することにより遺伝子型を特定する方法、ある種の２本鎖特異的な蛍光色素が発する蛍光を、温度変化を追うことにより２本鎖融解の温度差を検出し、これにより多型を特定する方法、多型部位特異的なオリゴプローブの両端に相補的な配列を付け、温度によって該当プローブが自己分子内で２次構造をつくるか、ターゲット領域にハイブリダイズするかの差を利用して遺伝子型を特定する方法など）がある。また、さらに鋳型特異的なプライマーからポリメレースによって塩基伸長反応を行わせ、その際に多型部位に取り込まれる塩基を特定する方法（ダイデオキシヌクレオタイドを用い、それぞれを蛍光標識し、それぞれの蛍光を検出する方法、取り込まれたダイデオキシヌクレオタイドをマススペクトロメトリーにより検出する方法）、さらに鋳型特異的なプライマーに続いて変異部位に相補的な塩基対または非相補的な塩基対の有無を酵素によって認識させる方法などがある。
【００６５】
以下、従来公知の代表的な遺伝子多型の検出方法を列記するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。
【００６６】
(a)ＲＦＬＰ（制限酵素切断断片長多型）法、（b）ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（一本鎖ＤＮＡ高次構造多型解析）〔Biotechniques, 16, 296-297 (1994)、及びBiotechniques, 21, 510-514 (1996)〕、（c）ＡＳＯ（Allele Specific Oligonucleotide）ハイブリダイゼーション法〔Clin. Chim. Acta, 189, 153-157 (1990)〕、（d）ダイレクトシークエンス法〔Biotechniques, 11, 246-249 (1991)〕、（e）ＡＲＭＳ（Amplification Refracting Mutation System）法〔Nuc. Acids. Res., 19, 3561-3567 (1991)；Nuc. Acids. Res., 20, 4831-4837 (1992)〕、（f）変性剤濃度勾配ゲル電気泳動（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis；ＤＧＧＥ）法〔Biotechniques, 27, 1016-1018 (1999)〕、（g）ＲＮaseＡ切断法〔DNA Cell. Biol., 14, 87-94 (1995)〕、（h）化学切断法〔Biotechniques, 21, 216-218 (1996)〕、（i）ＤＯＬ（Dye-labeled Oligonucleotide Ligation）法〔Genome Res., 8, 549-556 (1998)〕、（j）ＴａｑＭａｎ−ＰＣＲ法〔Genet. Anal., 14, 143-149 (1999)；J. Clin. Microbiol., 34, 2933-2936 (1996)〕、（k）インベーダー法〔Science, 5109, 778-783 (1993)；J.Biol.Chem., 30,21387-21394 (1999)；Nat. Biotechnol., 17, 292-296 (1999)〕、（l）ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ法（Matrix Assisted Laser Desorption-time of Flight/Mass Spectrometry）法〔Genome Res., 7, 378-388 (1997)；Eur.J.Clin.Chem.Clin.Biochem., 35, 545-548 (1997)〕、（m）ＴＤＩ（Template-directed Dye-terminator Incorporation）法〔Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94, 10756-10761 (1997)〕、（n）モレキュラー・ビーコン（Molecular Beacons）法〔Nat. Biotechnol., 1, p49-53 (1998)；遺伝子医学、4, p46-48 (2000)〕、（o）ダイナミック・アレル−スペシフィック・ハイブリダイゼーション（Dynamic Allele-Specific Hybridization；ＤＡＳＨ）法〔Nat.Biotechnol.,1.p.87-88 (1999)；遺伝子医学,4, 47-48 (2000)〕、（p）パドロック・プローブ（Padlock Probe）法〔Nat. Genet.,3,p225-232 (1998) ；遺伝子医学,4, p50-51 (2000)〕、（q）ＵＣＡＮ法〔タカラ酒造株式会社ホームぺージ（http://www.takara.co.jp ）参照〕、（r）ＤＮＡチップまたはＤＮＡマイクロアレイ（「ＳＮＰ遺伝子多型の戦略」松原謙一・榊佳之、中山書店、p128-135）、（s）ＥＣＡ法〔Anal. Chem., 72, 1334-1341, (2000)〕。
【００６７】
以上は代表的な遺伝子多型検出方法であるが、本発明の心筋梗塞予後リスクの判定には、これらに限定されず、他の公知または将来開発される遺伝子多型検出方法を広く用いることができる。また、本発明の遺伝子多型検出に際して、これらの遺伝子多型検出方法を単独で使用してもよいし、また２以上を組み合わせて使用することもできる。
【００６８】
本発明の方法によって、心筋梗塞発症後に、心筋梗塞を再発するか、心筋梗塞に関連する疾患の発症によって死にいたる潜在的な危険度（予後リスク）が相対的に高いことが判明した心筋梗塞患者に対しては、その旨を告知し、心筋梗塞や関連疾患の発症（再罹患）を防ぎ、死に至ることを回避するための的確な対策を講じることができる。従って、本発明は、心筋梗塞患者に対して、心筋梗塞の再発や関連疾患の発症（再罹患）を予防するための検査方法として、さらには再罹患を予防して生存率を高めるための検査方法として極めて有用である。なお、予後リスクが高いことが判明した心筋梗塞患者に対する有効且つ適切な対策としては、後述するようにHMG-CoA還元酵素阻害薬の投与を好適に挙げることができる。
【００６９】
なお、本発明の方法は、ＬＴＡ遺伝子の252番目（SNP252）の遺伝子型の別を直接検出する方法に限らず、ＬＴＡ遺伝子の発現産物であるＬＴＡ遺伝子のｍＲＮＡやリンホトキシンαの発現量を検出する方法であってもよい。かかる方法としては、リンホトキシンαに対する抗体を用いたウエスタンブロッティング法、ドットブロッティング法、免疫沈降法、酵素結合免疫測定法（ELISA）、及び免疫蛍光法、またはリンホトキシンαが固有に有する活性を測定する方法を例示することができる。
【００７０】
５．HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群の選別方法
上記の４で詳述した心筋梗塞発症後の予後リスク判定方法は、心筋梗塞を発症した患者に対して、HMG-CoA還元酵素阻害薬の投与が、心筋梗塞の再発や関連疾患の発症によって死にいたる予後リスクの低減に有効であるか、有効でないかを判定するためにも有効に利用することができる。心筋梗塞を発症した患者のうち、先天的に（遺伝的に）ＬＴＡ遺伝子の252位がＧアレル型である患者は、前述するように予後リスクが高くて予後が不良であると同時に、HMG-CoA還元酵素阻害薬に対する感受性が高く、HMG-CoA還元酵素阻害薬の投与が予後改善（予後リスクの低減）に有効に作用する。一方、心筋梗塞を発症した患者のうち、先天的に（遺伝的に）ＬＴＡ遺伝子の252位がＡアレル型である患者は、前述するように予後リスクが低くて予後良好であると同時に、HMG-CoA還元酵素阻害薬に対する感受性が低く、HMG-CoA還元酵素阻害薬の投与が現状以上の予後改善（予後リスクの現状以上の低減）にさほど有効には作用しない。
【００７１】
心筋梗塞患者が、HMG-CoA還元酵素阻害薬有効者であるか（HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群に属するか）、それとも非有効群であるかを検出する方法としては、心筋梗塞患者の生体試料を対象として、上記と同様に、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型を検出する方法を挙げることができる。ＬＴＡ遺伝子の252位（SNP252）の遺伝子型を測定し、それがＧアレル型〔ＡＧのアレル接合体（A/GまたはG/A）またはＧのホモ接合体（G/G）〕である場合をHMG-CoA還元酵素阻害薬有効者、Ａアレル型〔Ａのホモ接合体（A/A）〕である場合をHMG-CoA還元酵素阻害薬投与系薬物非有効者と判断することができる。
【００７２】
心筋梗塞患者について、HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群と判断された場合は、心筋梗塞発症後に早期からHMG-CoA還元酵素阻害薬を投与することによって、心筋梗塞の再発や関連疾患の発症による予後の悪化を改善し、生存率を高めることができる。
【００７３】
HMG-CoA還元酵素阻害薬は、HMG-CoA還元酵素阻害作用（コレステロールの生合成の過程で必要なHMG-CoAという酵素を阻害してコレステロールの生合成を抑制する作用）を有する薬物であり、具体的にはプラバスタチン（商品名：メバロチン）、シンバスタチン（商品名：リポバス）、フルバスタチン（商品名：ローコール）、アトルバスタチン（商品名：リピトール）、及びロスバスタチン（商品名：クレストール）、及びピタバスタチンカルシウム（商品名：リバロ）を挙げることができる。
【００７４】
なお、以下に説明する、心筋梗塞発症後の予後リスクを判定するのための試薬（プローブ、プライマー、及びその標識物）及びこれを含むキットは、心筋梗塞患者について、HMG-CoA還元酵素阻害薬有効群であるか、それともHMG-CoA還元酵素阻害薬非有効群であるかを選別するための試薬（プローブ、プライマー、及びその標識物）及びこれを含むキットとして、同時に使用することができる。
【００７５】
６．心筋梗塞発症後の予後リスクを判定するのための試薬、これを含むキット
（１）プローブ
目的とする遺伝子多型（心筋梗塞予後規定ＳＮＰ、SNP252）並びに当該塩基を含むオリゴまたはポリヌクレオチドの検出には、ヒト第６染色体（6p21.3）の塩基配列において、心筋梗塞予後規定遺伝子（LTA遺伝子）の252番目に位置する心筋梗塞予後規定ＳＮＰ（SNP252）を含むオリゴまたはポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズし、当該ＳＮＰ（SNP252）を検出することができるオリゴまたはポリヌクレオチドが用いられる。かかるオリゴまたはポリヌクレオチドは、ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列において、上記SNP252を含む16〜500塩基長、好ましくは20〜200塩基長、より好ましくは20〜50塩基長の連続した遺伝子領域と特異的にハイブリダイズするように、上記塩基長を有するオリゴまたはポリヌクレオチドとして設計される。
【００７６】
ここで「特異的にハイブリダイズする」とは、通常のハイブリダイゼーション条件下、好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下（例えば、サムブルックら、Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Laboratory Press, New York, USA, 第２版、1989に記載の条件）において、他のＤＮＡとクロスハイブリダイゼーションを有意に生じないことを意味する。好適には当該オリゴまたはポリヌクレオチドは、上記検出するＳＮＰ（SNP252）を含む遺伝子領域の塩基配列に対して相補的な塩基配列を有することが望ましいが、かかる特異的なハイブリダイゼーションが可能であれば、完全に相補的である必要はない。
【００７７】
かかるオリゴまたはポリヌクレオチドとして、ヒト第６染色体（6p21.3）の心筋梗塞予後規定遺伝子（LTA遺伝子）を含む塩基配列において、当該ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置する心筋梗塞予後規定ＳＮＰ（SNP252）を含むオリゴまたはポリヌクレオチドに特異的にハイブリダイズし、当該ＳＮＰを検出することができるオリゴまたはポリヌクレオチドを挙げることができる。具体的には、ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列において、当該ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16〜500塩基長の連続したオリゴまたはポリヌクレオチドにハイブリダイズする16〜500塩基長のオリゴまたはポリヌクレオチドを挙げることができる。
【００７８】
当該オリゴまたはポリヌクレオチドは、心筋梗塞を発症して生存退院した患者について、心筋梗塞の再発や関連疾患の発症によって死に至り得る潜在的危険性（予後リスク）を判定するための「プローブ」として設計される。なお、これらのオリゴまたはポリヌクレオチドは、ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列に基づいて、例えば市販のヌクレオチド合成機によって常法に従って作成することができる。
【００７９】
さらに好ましくは、当該プローブは、SNP252を含むオリゴヌクレオチドが検出できるように、放射性物質、蛍光物質、化学発光物質、または酵素等で標識される（後述）。
【００８０】
上記プローブ（オリゴまたはポリヌクレオチド）は任意の固相に固定化して用いることもできる。このため本発明はまた、上記プローブ（オリゴまたはポリヌクレオチド）を固定化プローブ（例えばプローブを固定化した遺伝子チップ、ｃＤＮＡマイクロアレイ、オリゴＤＮＡアレイ、メンブレンフィルター等）として提供するものである。当該プローブは、好適には心筋梗塞発症後の予後リスク判定用のＤＮＡチップとして利用することができる。
【００８１】
固定化に使用される固相は、オリゴまたはポリヌクレオチドを固定化できるものであれば特に制限されることなく、例えばガラス板、ナイロンメンブレン、マイクロビーズ、シリコンチップ、キャピラリーまたはその他の基板等を挙げることができる。固相へのオリゴまたはポリヌクレオチドの固定は、予め合成したオリゴまたはポリヌクレオチドを固相上に載せる方法であっても、また目的とするオリゴまたはポリヌクレオチドを固相上で合成する方法であってもよい。固定方法は、例えばＤＮＡマイクロアレイであれば、市販のスポッター（Amersham社製など）を利用するなど、固定化プローブの種類に応じて当該技術分野で周知である〔例えば、photolithographic技術(Affymetrix社)、インクジェット技術(Rosetta Inpharmatics社)によるオリゴヌクレオチドのin situ合成等〕。
【００８２】
例えば、ＡＳＯ法の一例であるTaqMan PCR法〔Livak KJ. Gene Anal 14, 143 (1999), Morris T et al., J Clin Microbiol 34, 2933 (1996)〕の場合、心筋梗塞予後規定ＳＮＰ（SNP252）を含む領域に相補的な20塩基長程度のオリゴヌクレオチドがプローブとして設計される。当該プローブは、5’末端を蛍光色素、3’末端を消光物質により標識され、検体ＤＮＡと特異的にハイブリダイズするが、そのままでは発光せず、別に加えられたＰＣＲプライマーの上流からの伸長反応により5’側の蛍光色素結合が切断され、遊離した蛍光色素により検出される。
【００８３】
ＡＳＯ法の別の１例であるInvade法〔Lyamichev V. et al., Nat Biotechnol 17, 292 (1999)〕では、多型部位に隣接する配列（3’側と5’側の２種）に相補的なオリゴヌクレオチドがプローブとして設計される。検出は、これら２種のプローブと検体とは無関係な第３のプローブによって達成される。 
【００８４】
（２）プライマー
本発明は、またヒト第６染色体（6p21.3）の心筋梗塞予後規定遺伝子（LTA遺伝子）を含む塩基配列において、当該ＬＴＡ遺伝子の心筋梗塞予後規定ＳＮＰ（LTA遺伝子の252番目に位置するSNP252）を含む配列領域を特異的に増幅するためのプライマーとして用いられるオリゴヌクレオチドを提供する。このようなプライマー（オリゴヌクレオチド）は、心筋梗塞予後決定遺伝子において、心筋梗塞予後規定ＳＮＰ（SNP252）部位のヌクレオチドを含む連続したオリゴまたはポリヌクレオチドの１部に特異的にハイブリダイズし、当該オリゴまたはポリヌクレオチドを特異的に増幅するための15〜35塩基長、好ましくは18〜30塩基長程度のオリゴヌクレオチドとして設計される。増幅するオリゴまたはポリヌクレオチドの長さは、用いられる検出方法に応じて適宜設定されるが、一般的には15〜1000塩基長、好ましくは20〜500塩基長、より好ましくは20〜200塩基長である。
【００８５】
かかるプライマーとして、ヒト第６染色体（6p21.3）の心筋梗塞予後規定遺伝子（LTA遺伝子）を含む塩基配列において、当該ＬＴＡ遺伝子の252番目（SNP252）のヌクレオチドを含む連続したオリゴまたはポリヌクレオチドの１部に特異的にハイブリダイズし、当該オリゴまたはポリヌクレオチドを特異的に増幅するための15〜35塩基長、好ましくは18〜30塩基長程度のオリゴヌクレオチドを例示することができる。具体的には、ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列において、当該ＬＴＡ遺伝子の252番目に位置するヌクレオチドを含む16塩基長以上の連続したオリゴまたはポリヌクレオチドにハイブリダイズし、当該オリゴまたはポリヌクレオチドを特異的に増幅するための15〜35塩基長、好ましくは18〜30塩基長程度のオリゴヌクレオチドを例示することができる。
なお、これらのオリゴヌクレオチドは、ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子を含む塩基配列に基づいて、例えば市販のヌクレオチド合成機によって常法に従って作成することができる。
【００８６】
Ｍａｓｓ Ａｒｒａｙ法にＭＡＬＤＩ-ＴＯＦ／ＭＳ（Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry）を応用した方法〔Haff LA et al. Genome Res 7, 378 (1997), Little DP et al., Nature Medicine vol.3, No.12, 1413-1416, (1997)〕を例にとって、プライマーの具体的な利用方法を説明する。この場合、シリコンチップ上に固定した検体ＤＮＡに前記プライマーをハイブリダイズさせ、ｄｄＮＴＰを添加して一塩基だけを伸長させる。次いで、一塩基伸長産物を分離し、質量分析法により多型を検出する。この方法では、プライマーは通常15塩基長以上で可能な限り短く設計することが望ましい。
【００８７】
（３）標識物
上記本発明のプローブまたはプライマーには、遺伝子多型（SNP252）検出のための適当な標識物、例えば蛍光色素、酵素、タンパク質、放射性同位体、化学発光物質、ビオチン等が付加されたものが含まれる。
【００８８】
なお、本発明において用いられる蛍光色素としては、一般にヌクレオチドを標識して、核酸の検出や定量に用いられるものが好適に使用でき、例えば、ＨＥＸ（4,7,2’,4’,5’,7’-hexachloro-6-carboxylfluorescein、緑色蛍光色素）、フルオレセイン（fluorescein）、ＮＥＤ（商品名、アプライドバイオシステムズ社製、黄色蛍光色素）、あるいは、６−ＦＡＭ（商品名、アプライドバイオシステムズ社製、黄緑色蛍光色素）、ローダミン（rhodamin）またはその誘導体〔例えば、テトラメチルローダミン（TMR）〕を挙げることができるが、これらに限定されない。蛍光色素でヌクレオチドを標識する方法は、公知の標識法のうち適当なものを使用することができる〔Nature Biotechnology, 14, 303-308 (1996)参照〕。また、市販の蛍光標識キットを使用することもできる（例えば、アマシャム・ファルマシア社製、オリゴヌクレオチドＥＣＬ  ３’−オリゴラベリングシステム等）。
【００８９】
また、本発明のプライマーには、その末端に多型検出のためのリンカー配列が付加されたものも含まれる。このようなリンカー配列としては、例えば、前述したインベーダー法で用いられるオリゴヌクレオチド５’末端に付加される、フラップ（多型近傍の配列とは全く無関係な配列）等が挙げられる。
【００９０】
本発明の１つの実施形態である、遺伝子多型検出法としてＴａｑＭａｎ−ＰＣＲ法を用いる場合、ヒト第６染色体（6p21.3）のＬＴＡ遺伝子上の、心筋梗塞予後規定ＳＮＰ（SNP252）を含む塩基配列を検出するためのフォワードプライマー（順方向のプライマー）としては、好適には配列番号８または９に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの他、配列番号４に示す塩基配列において1〜300番の領域に位置する塩基配列にハイブリダイズする15塩基長以上（好ましくは15〜35塩基長）の連続した塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを例示することができる。また、リバースプライマー（逆方向のプライマー）としては、好適には配列番号１０に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの他、配列番号４に示す塩基配列において302〜601番の領域に位置する塩基配列にハイブリダイズする15塩基長以上（好ましくは15〜35塩基長）の連続した塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを例示することができる。
【００９１】
以上の、プローブ（標識されていてもよい）またはプライマー（標識されていてもよい）は、心筋梗塞発症後の予後リスクを判定するための試薬として利用することができる。
【００９２】
さらにまた、上記のプローブ（標識されていてもよい）またはプライマー（標識されていてもよい）は、心筋梗塞を発症した患者を対象として、予後の改善または生存率のアップ（予後リスクの低減）にHMG-CoA還元酵素阻害薬が有効であるか否かを判定するための試薬、言い換えると、心筋梗塞患者をHMG-CoA還元酵素阻害薬投与の有効群と非有効群とに選別するための試薬として利用することができる。すなわち、上記のプローブ（標識されていてもよい）またはプライマー（標識されていてもよい）は、別の角度から、心筋梗塞患者について、HMG-CoA還元酵素阻害薬有効者であるか、または非有効者であるかを選別するための試薬として規定することができる。
【００９３】
（４）心筋梗塞発症後の予後リスク判定用の試薬キット
本発明はまた、上記する心筋梗塞発症後の予後リスクを判定するための試薬を、キットとして提供するものである。当該キットは、上記プローブまたはプライマーとして用いられるオリゴまたはポリヌクレオチド（なお、これらは標識されていても、また固相に固定化されていてもよい）を少なくとも１つ含むものである。本発明のキットは上記プローブまたはプライマーの他、必要に応じてハイブリダイゼーション用の試薬、プローブの標識、ラベル体の検出剤、緩衝液など、本発明の方法の実施に必要な他の試薬、器具などを適宜含んでいてもよい。さらに本発明の試薬キットには、プライマーやプローブなどの試薬の使用方法や、それを用いた心筋梗塞発症後の予後リスクの判定方法（判定基準）について説明する書面が含まれていても良い。
【００９４】
７．心筋梗塞発症患者について予後リスクを低減する方法
上記に説明するように、本発明により、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型（Ｇアレル型か、Ａアレル型か）が、心筋梗塞発症後の予後（生命予後）に深く関わっており、Ｇアレル型である場合は予後（生命予後）が不良であり（予後リスクが高い）、Ａアレル型である場合は予後（生命予後）が良好である（予後リスクが低い）ことが判明した。さらに加えて、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型（Ｇアレル型か、Ａアレル型か）が、HGM-CoA還元酵素阻害薬による治療の有効性に深く関わっており、当該遺伝子型（SNP252）がＧアレル型であって予後不良群に分別される患者は、HGM-CoA還元酵素阻害薬に感受性でありHGM-CoA還元酵素阻害薬による治療が有効に作用し、一方、当該遺伝子型（SNP252）がＡアレル型であって予後良好群に分別される患者は、HGM-CoA還元酵素阻害薬に非感受性（抵抗性）でありHGM-CoA還元酵素阻害薬による治療の有効性が認められない（現状以上に改善しない）ことが判明した。
【００９５】
このことから、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子型（SNP252）がＧアレル型であって予後不良群に分別される患者に対しては、早期からHGM-CoA還元酵素阻害薬を投与することによって、心筋梗塞の再発や関連疾患の発症を抑制することによって、これらの疾患発症によって死に至る危険度（予後リスク）を低減することができる。
【００９６】
こうした考えのもとで、本発明は心筋梗塞発症後の予後リスクの高い患者に対して心筋梗塞発症後の予後リスクを低減する方法、並びに当該心筋梗塞発症後の予後リスクの低減に有効な材料を提供するものでもある。なお、心筋梗塞発症後の予後リスク低減方法は、心筋梗塞発症後の予後リスクが高く予後が不良な患者に対して、心筋梗塞発症後の予後不良を改善する方法として規定することもできる。
【００９７】
心筋梗塞発症後の予後リスクの低減に有効な材料となるHGM-CoA還元酵素阻害薬としては、HMG-CoA還元酵素阻害作用（コレステロールの生合成の過程で必要なHMG-CoAという酵素を阻害してコレステロールの生合成を抑制する作用）を有する薬物、具体的にはプラバスタチン（商品名：メバロチン）、シンバスタチン（商品名：リポバス）、フルバスタチン（商品名：ローコール）、アトルバスタチン（商品名：リピトール）、ロスバスタチン（商品名：クレストール）、及びピタバスタチンカルシウム（商品名：リバロ）を挙げることができる。
【実施例】
【００９８】
以下、本発明を実施例により更に具体的に説明する。但し、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【００９９】
実施例１
LTA遺伝子の252位の遺伝子型が心筋梗塞発症後の生命予後に及ぼす影響
（1）被験者
急性心筋梗塞を発症し、大阪地区の心臓救急病院25施設に入院した3788例中、遺伝子を含む調査研究に同意が得られた生存退院1586例を対象とした。平均年齢は64±11歳、男性77.2%、糖尿病35.1%、高血圧52.5%、高脂血症47.0%、喫煙歴66.3%、心筋梗塞の既往は11.5%であった。また、梗塞重症度の指標であるKillip分類でII型以上に分類される中等度以上の重症度は12.5%であり、前壁梗塞の割合は48.3%であった。さらに、24時間以内に再灌流治療を施行された割合は87.4%であった。
【０１００】
（2）被験試料およびDNAの調整
被験者の末梢静脈より凝固剤(EDTA50nmol/L)入りの採血管に採血し、市販のDNA精製キットを用いて、定法に従ってゲノムDNAを調整した。調整したゲノムDNAを鋳型としてFluorescence-based allele-specific DNA primer probe assay法を用いてLTA 252位の塩基を同定した。
【０１０１】
具体的には、まずDNA (20ng)、各プライマー(5pmol)、XTP(0.2nmol/L)、塩化マグネシウム(1-4mmol/L)、DNAポリメラーゼ(1U)を含む反応液25μlを調整し、PCR法（annealing temperature 55℃、denaturation temperature 95℃）を用いて遺伝子を増幅した。順方向（アレル別）プライマーおよび逆方向プライマーとして以下の塩基配列を用いた（尚、下記配列中xは任意の塩基を意味する。）：
252Aアレル用順方向プライマー：5’-CAC ATT CTC TGT TTC TGC CAT xAT-3’（配列番号８） 、
252Gアレル用順方向プライマー：5’-CAC ATT CTC TGT TTC TGC CAT xGT-3’（配列番号９）、
逆方向プライマー：5’-ACA CCT TCA GCT GCC CAG AC-3’（配列番号１０）。
【０１０２】
次いで、Fluorescence-based allele-specific DNA primer probe assay法を用いて増幅された遺伝子の遺伝子型を同定した。具体的には、252Aアレルに結合したTexas Red、および252Gアレルに結合したfluorescein isothiosyanateにそれぞれ対応する蛍光（485/538nmおよび584/612nm）を測定し、各塩基を直接同定した。
【０１０３】
（3）統計学的解析
各遺伝子群の累積生存曲線をKapran-Meier法により作成し、その差異をLog-rank testにより検討した。各群間の背景因子(年齢, 性別 , Body Mass Index, 糖尿病, 高血圧, 高脂血症, 喫煙, 心筋梗塞の既往, 前壁梗塞, Killip II型以上, 再潅流治療)の差異を補正するため、Cox比例ハザードモデルを用いてＧアレル保持者のA/Aゲノタイプに対するハザード比および95%信頼区間を算出した。
【０１０４】
被験者（全1586例）について調べたＬＴＡ遺伝子252位の遺伝子型を表１に示す。
【０１０５】
【表１】
2007236279.tif 000002
【０１０６】
これらの心筋梗塞既往者1586例（Ｇアレル保持者996名、Ｇアレル非保持者590例）について、心筋梗塞発症後1200日間の累積生存率を経時的に評価した結果を図１に示す。図１において「AA」は、ＬＴＡ遺伝子の252位がA/A型、すなわちＧアレル非保持者の心筋梗塞既往者590例について発症後1200日間の全死亡率（逆にいえば生存率）を示したグラフであり、図１中「AG＋GG」はＬＴＡ遺伝子の252位がA/GまたはG/G型、すなわちＧアレル保持者の心筋梗塞既往者996例について発症後1200日間の全死亡率（逆にいえば生存率）を示したグラフである。Cox比例ハザードモデルを用い、各群間の背景因子(年齢, 性別 , Body Mass Index, 糖尿病, 高血圧, 高脂血症, 喫煙, 心筋梗塞の既往, 前壁梗塞, Killip II型以上, 再潅流治療)を補正した結果、Ｇアレル保持者の非保持者に対する相対危険度（ハザード比）は2.46（95%信頼区間1.24-4.86）であった。
【０１０７】
これから明らかなように、ＬＴＡ遺伝子の252位にＧアレルを有する患者の生存率は、ＬＴＡ遺伝子の252位にＧアレルを有しない患者の生存率に比して有意に高く、Ｇアレル保持者の心筋梗塞既往者の予後は不良であることが判明した。このことから、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子多型にＧアレルを有するか有さないかを判定することによって、心筋梗塞発症後の予後リスクを予測し判定することができることがわかる。
【０１０８】
実施例２    ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子多型により修飾されるHMG-CoA還元酵素阻害薬（スタチン）投与が有する心筋梗塞発症後の生命予後リスク改善効果
実施例１で対象とした被験者〔心筋梗塞既往者1586例（Ｇアレル保持者996名、Ｇアレル非保持者590名）〕を同様に対象として、HMG-CoA還元酵素阻害薬（スタチン）の投与による心筋梗塞発症後の生命予後リスク改善効果を調べた。
Ｇアレル保持者（996名）とＧアレル非保持者（590名）を、それぞれHMG-CoA還元酵素阻害薬投与群と非投与群の２群に分け、累積生存曲線をKapran-Meier法により作成し、その差異をLog-rank testにより検討して、252位遺伝子多型の違いによる予後リスクに対するHMG-CoA還元酵素阻害薬投与の影響について検討した。
【０１０９】
Ｇアレル保持者（図中、「GA＋GG genotype」と記載）とＧアレル非保持者（図中、「AA genotype」と記載）について、心筋梗塞発症後1200日間の累積生存率を経時的に評価した結果を図２に示す。ＬＴＡ遺伝子の252位にＧアレルを有しない群（Ｇアレル非保持者）において、HMG-CoA還元酵素阻害薬投与群の生命予後は非投与群に比し有意差を認めず、HMG-CoA還元酵素阻害薬投与の有無にかかわらず良好な生命予後を示した（図２Ａ）。一方、ＬＴＡ遺伝子の252位におけるＧアレルを有する群（Ｇアレル保持者）において、HMG-CoA還元酵素阻害薬投与群は非投与群に比し有意に良好な生命予後を呈した。
【０１１０】
実施例１において、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子多型にＧアレルを有する心筋梗塞既往者の生存率は低く、予後が不良であることを示したが、上記の実施例２の結果は、かかるＧアレル保有者に対してHMG-CoA還元酵素阻害薬の投与が有効であり、予後を改善することができることを示している。一方、ＬＴＡ遺伝子の252位の遺伝子多型にＧアレルを有さない群（Ｇアレル非保有者）は本来予後が良好で生存率が高く、かつHMG-CoA還元酵素阻害薬の投与をおこなってもこれ以上の改善（生存率の増加）が認められないことが示された。
【図面の簡単な説明】
【０１１１】
【図１】Lymphotoxine-α（LTA）遺伝子の252位の遺伝子多型にＧアレルを有する心筋梗塞患者（A/G若しくはG/Aのヘテロ接合体またはG/Gのホモ接合体；Ｇアレル保有者、図中、AG＋GGとして示す）、並びにＧアレルを有さない心筋梗塞患者（A/Aホモ接合体：Ｇアレル非保有者、図中、AAとして示す）について、心筋梗塞発症後1200日生存率を示した図である（被験者数1586名）。
【図２】被験者〔心筋梗塞既往者1586例（Ｇアレル非保有者590名[AA genotype]（図Ａ）、Ｇアレル保有者996名[GA＋GC genotype]（図Ｂ））〕を対象として、HMG-CoA還元酵素阻害薬（スタチン）の投与による心筋梗塞発症後の生命予後リスク改善効果を比較した結果を示す。各図において、(1)のグラフはHMG-CoA還元酵素阻害薬（スタチン）投与群、(2)のグラフはHMG-CoA還元酵素阻害薬（スタチン）非投与群の結果を示す。
【図１】
2007236279.tif 000003
【図２】
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【配列表】
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