(57)【要約】【課題】グラム陽性細菌に効果がある抗菌剤、特に食品などに添加しても安全な天然物由来の抗菌剤および抗菌方法を提供する。【解決手段】非水溶性ローズマリー抽出物を有効成分とする抗菌剤を使用する。スタフィロコッカス属、ラクトバシルス属、リステリア属、アリシクロバシルス属、及び、バシルス属などのグラム陽性細菌に対して抗菌活性を示す。試料中に含まれる非水溶性ローズマリー抽出物の濃度が０．１ｐｐｍ以上になるように添加する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非水溶性ローズマリー抽出物を有効成分とする抗菌剤。
【請求項２】
グラム陽性菌に属する細菌対して抗菌活性を示す請求項１に記載の抗菌剤。
【請求項３】
グラム陽性菌に属する細菌が、スタフィロコッカス（Staphyrococcus）属、ラクトバシルス（Lactobacillus）属、リステリア（Listeria）属、アリシクロバシルス（Alicyclobacillus）属、及び、バシルス（Bacillus）属から成る群より選ばれる何れかの属に属する細菌である請求項２に記載の抗菌剤。
【請求項４】
グラム陽性菌に属する細菌が、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphyrococcus aureusu）、ラクトバシルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、リステリア・モノシトジェネス（Listeria monocytogenes）、アリシクロバシルス・アシドテレストリス（Alicyclobacillus acidoterrestris）、及び、バシルス・サブチルス（Bacillus subtilis）から成る群より選ばれる種に属する細菌である請求項３に記載の抗菌剤。
【請求項５】
請求項１〜４の何れかに記載の抗菌剤を試料中に添加する試料の抗菌方法において、試料中に含まれる非水溶性ローズマリー抽出物の濃度が０．１ｐｐｍ以上になるように添加することを特徴とする抗菌方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌剤および抗菌方法に関し、詳しくは、非水溶性ローズマリー抽出物を有効成分とする抗菌剤およびそれを利用する抗菌方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近の研究から、リステリア種（Listeria）、特にリステリア・モノシトジェネス（Listeria monocytogenes）によって起こされるヒトでのリステリア症は、様々な種類の食品、特にソフトチーズ及びパテ並びにハム及び他のプレパッケージ食用獣肉および鳥肉製品の摂取に関連することが明らかにされている（例えば、PHLS食品チェーンの１６の公衆衛生研究所での調査（非特許文献１）参照）。
【０００３】
食品病原菌であるリステリア・モノシトジェネスは年間約７０例の死亡の原因となっており、これは他の食品病原菌の場合の数字の２倍を超えている。また、リステリアの主たる汚染源は食品製造者であると一般に考えられている。一方、ホップ酸およびそれらの関連酸は以前から細菌阻害剤として認識されている（特許文献１参照）。
【０００４】
【特許文献１】特表平８−５０２８８７号公報
【非特許文献１】「Listeria Monocytogenes inPrepacked Ready-To-Eat Sliced Meat」S．VelaniおよびR．J．Gilbert，PHLS Microbiology Digest，７巻（１９７７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、一般的に抗菌剤（特に天然物由来の抗菌剤）は、微生物の種類によりその抗菌活性が異なることが知られており、従来の抗菌剤は、サルモネラ菌、病原性大腸菌などに対して抗菌活性は有するものの、リステリア属の細菌などのグラム陽性細菌に効果がある抗菌剤、特に食品などに添加しても安全な天然物由来の抗菌剤は余り知られていない。また、ホップ酸においてもそのリステリア菌に対する抗菌活性の効果は不十分である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討した結果、非水溶性ローズマリー抽出物を使用することにより、スタフィロコッカス属、ラクトバシルス属、リステリア属、アリシクロバシルス属、及び、バシルス属などのグラム陽性細菌に対して抗菌活性を持つ抗菌剤を取得できることを見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
即ち、本発明の第１の要旨は非水溶性ローズマリー抽出物を有効成分とする抗菌剤に存し、第２の要旨は、上記の抗菌剤を試料中に添加する試料の抗菌方法において、試料中に含まれる非水溶性ローズマリー抽出物の濃度が０．１ｐｐｍ以上になるように添加することを特徴とする抗菌方法に存する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明の抗菌剤を使用することにより、試料に対して非常に少ない添加量で、スタフィロコッカス属、ラクトバシルス属、リステリア属、アリシクロバシルス属、及び、バシルス属などのグラム陽性細菌に対して十分な抗菌効果が発揮される。本発明の抗菌剤は、例えば、食品、飲料、医療、医薬品、環境安全の分野において広く使用することが出来るが、特に食品保存剤として有用であり、本発明の抗菌方法は、特に食品の保存方法として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の抗菌剤は、非水溶性ローズマリー抽出物を有効成分とする抗菌剤である。
本発明の抗菌剤で使用する非水溶性ローズマリー抽出物は、２５℃での水１００ｇに対する溶解度が０．１ｇ未満である非水溶性のローズマリー抽出物である。水に対する溶解度は、好ましくは０．０５ｇ以下、更に好ましくは０．０１ｇ以下である。
【００１０】
非水溶性ローズマリー抽出物は、例えば以下に示すような方法により製造することが出来る。
【００１１】
ローズマリーの葉、茎を乾燥し、ヘキサン、酢酸エチル、エタノール、エーテル、アルカリ水、中性の水、酸性水、または、これらの混合液を使用して抽出する。または、臨界二酸化炭素を使用して抽出する。好ましい抽出方法は、ヘキサン、ヘキサン／エタノール、エタノール、エタノール／水を使用する抽出方法である。通常、ローズマリー１ｋｇに対し、１０倍量の上記の溶媒を使用し、５〜６０℃で攪拌抽出し、濾過して濾液を得る。更に、残渣を同様の溶媒で数回洗浄し濾液を得る。これらの濾液を合わせ、濾液と等量の水で沈殿物を析出させ、濾液の１／１０量の活性炭を添加し、１時間攪拌し、一昼夜冷所保存し、沈殿物を濾過する。この操作を数回繰り返し、得られた濾液を合わせて減圧濃縮し、非水溶性ローズマリー抽出物を得る。
【００１２】
本発明の抗菌剤には、必要に応じ、乳化剤、増量剤などを添加することが出来る。また、本発明の抗菌剤は、粉末、造粒物などの固体としても使用できるが、使用上の便を考慮し、水、エタノール等の溶液として使用することも出来る。
【００１３】
上記の乳化剤として、例えば、ポリグリセリンラウリン酸エステル、ポリグリセリンミリスチン酸エステル、ポリグリセリンパルミチン酸エステル、ポリグリセリンステアリン酸エステル、ポリグリセリンラオレイン酸エステル等のポリグリセリン脂肪酸酸エステル、ショ糖ラウリン酸エステル、ショ糖ミリスチン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖オレイン酸エステル等のショ糖脂肪酸酸エステルが挙げられ、これらは２種以上を併用してもよい。乳化剤の含有量は、通常０．０１〜９０重量％、好ましくは０．１〜５０重量％、更に好ましくは１〜２０重量％である。
【００１４】
上記の増量剤としては、例えば、デキストリン、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、化工でんぷんの他、ショ糖、乳糖などの糖類、オリゴトース、トレハロース、キシリトール、エリスリトール等の糖アルコールが挙げられ、これらは２種以上を併用してもよい。増量剤の含有量は、通常０．１〜９０重量％、好ましくは０．５〜５０重量％、更に好ましくは１〜２０重量％である。
【００１５】
本発明においては、ビタミンＣ、トコフェロール、ビタミンＰ、クロロゲン酸、コーヒー豆抽出物、ひまわり抽出物、ぶどう種子物、α−Ｇルチン、カテキン、緑茶抽出物などの他の酸化防止剤を併用してもよい。これらは２種以上を併用してもよく、その含有量は、通常０．１〜５０重量％、好ましくは０．５〜３０重量％、更に好ましくは１〜２０重量％である。
【００１６】
本発明の抗菌剤は、微生物に対して効果的な抗菌活性を示すが、特にグラム陽性細菌、例えば、スタフィロコッカス（Staphyrococcus）属、ラクトバシルス（Lactobacillus）属、リステリア（Listeria）属、アリシクロバシルス（Alicyclobacillus）属、及び、バシルス（Bacillus）属から成る群より選ばれる何れかの属に属する細菌に対して使用することが好ましい。
【００１７】
特に、本発明の抗菌剤は、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphyrococcus aureusu）、ラクトバシルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）、リステリア・モノシトジェネス（Listeria monocytogenes）、アリシクロバシルス・アシドテレストリス（Alicyclobacillus acidoterrestris）、及び、バシルス・サブチルス（Bacillus subtilis）から成る群より選ばれる種に属する細菌に対して顕著な効果を発揮する。
【００１８】
本発明の抗菌剤を添加する試料としては、微生物の生育し易い食品が好適であり、その具体例としては、水産、畜肉、油脂加工品が挙げられる。特に、劣化し易い水産、畜肉、油脂加工品および長期間保存する水産、畜肉、油脂加工品に好ましく使用できる。その具体例としては、鮮魚、干物、一夜干し、みりん干し、貝類、赤魚、甲殻類の色素維持剤、すり身、水産練り製品、珍味、魚肉ソーセージ、塩蔵品、ノリ、海藻食品、鶏肉、豚肉、牛肉、羊肉、ソーセージ、ハム、それを加工した製品などがある。
【００１９】
本発明の抗菌剤の試料への添加濃度は、非水溶性ローズマリー抽出物として、通常０．１〜５００ｐｐｍ、好ましくは０．２〜１００ｐｐｍ、更に好ましくは０．５〜５０ｐｐｍである。また、本発明の抗菌剤は、他の抗菌剤と組み合わせて使用することにより、より効率的に抗菌活性を示すことが出来る。
【実施例】
【００２０】
製造例１（非水溶ローズマリー性抽出物の製造）：
ローズマリー１ｋｇに５０重量％含水エタノール１０Ｌを加えて３時間加熱還流し、温時に濾過して濾液を得た。残渣を５０重量％含水エタノール６Ｌで同様に抽出する操作を更に２回繰り返して濾液を得た。これらの濾液を合わせ、水５Ｌを加えて沈殿物を析出させた。これに活性炭１００ｇを加え、１時間撹拌し、一夜冷所で保存した後に濾過して沈殿と活性炭の混合物を得た。この混合物にエタノール４Ｌを加え、３時間加熱還流し、温時に濾過して濾液を得た。残渣をエタノール２．４Ｌで同様に抽出する操作を更に２回繰り返して濾液を得た。これらの濾液を合わせ、減圧濃縮してエタノールを留去し、粉末状のローズマリー非水溶性抽出物（カルノソール及びカルノジック酸の含有量：２４．９重量%）を得た。本ローズマリー非水溶性抽出物を抗菌剤として使用した。
【００２１】
実施例１（リステリア・モノシトジェネスに対する抗菌活性）：
増殖培地として、ブレインハートインヒュージョンブイヨン（ＢＨＩ）「ニッスイ」、試験培地として、ニュートリエントブロス（ＮＢ）「ニッスイ」を使用した（何れも日水製薬社製）。
【００２２】
先ず、ＢＨＩ培地中で３０℃、一晩増殖培養させたリステリア・モノシトジェネス（L．monocytogenes）(ＡＴＣＣ４９５９４）の菌液を滅菌リン酸緩衝液で希釈し、１．６×１０４個／ｍｌの試験菌液を調製した。一方、製造例１で調製した非水溶性ローズマリー抽出物１ｇをエタノール１０ｍＬに懸濁させ、１０重量％ローズマリー非水溶生物エタノール懸濁液を作成し、滅菌水で希釈して５、１０、５０、１００、２００ｐｐｍの非水溶性物ローズマリー抽出物の水溶液（ＲＭ水溶液）を調製した。
【００２３】
次いで、ＮＢ培地４．５ｍｌの入った滅菌済み試験管に、各濃度のＲＭ水溶液を０．５ｍｌ添加した。これらに調整した菌液０．１ｍｌを添加し、溶液が均一になるように攪拌した。吸光度測定時の対照として、菌液の替わりに滅菌精製水０．１ｍｌ添加した物を各濃度ごとに１本ずつ作成した。
【００２４】
３０℃、２４時間培養後に試験液の濁度（O．D．＝６６０ｎｍ）を測定し、下記式により、増殖阻害率（％）を求めた。その結果を表１に記す。
【００２５】
【数１】
2007070317.tif 000002
【００２６】
【表１】
2007070317.tif 000003
【００２７】
以上から明らかなように、試料に対して非水溶性ローズマリー抽出物を０．５ｐｐｍ以上のレベルで添加することにより、リステリア属細菌に対してに有効な静菌作用を有する。
【００２８】
実施例２：
実施例１と同様にして、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphyrococcus aureusu）（ＡＴＣＣ６５３８）に対する非水溶性ローズマリー抽出物の抗菌活性を調べた。その結果を表２に記する。
【００２９】
【表２】
2007070317.tif 000004
【００３０】
実施例３：
実施例１と同様にして、ラクトバシルス・プランタルム（Lactobacillus plantarum）（ＩＡＭ１０４１）に対する非水溶性ローズマリー抽出物の抗菌活性を調べた。その結果を表３に記する。
【００３１】
【表３】
2007070317.tif 000005
【００３２】
実施例４：
実施例１と同様に操作したが試験培地には硫酸でｐＨを３．８に調整したＢＨＩを使用し、培養の温度と時間は４０℃、５日間に条件を変更し、アリシクロバシルス・アシドテレストリス（Alicyclobacillus acidoterrestris）（ＡＴＣＣ４９０２５）に対する非水溶性ローズマリー抽出物の抗菌活性を調べた。その結果を表４に記する。
【００３３】
【表４】
2007070317.tif 000006
【００３４】
実施例５：
実施例１と同様にして、バシルス・サブチルス（Bacillus subtilis）（ＡＴＣＣ６６３３）に対する非水溶性ローズマリー抽出物の抗菌活性を調べた。その結果を表５に記する。
【００３５】
【表５】
2007070317.tif 000007