(57)【要約】【課題】ＳＨＲＳＰラットと同程度の血圧を有する、ＳＨＲＳＰを基にしたコンジェニックラットであって脳卒中を発症しにくいコンジェニックラットを提供すること。また、脳卒中の研究ないし新薬開発に資するラットを提供することを目的とする。【解決手段】  ＳＨＲＳＰラットの第１８染色体中のＤ１８Ｍｉｔ２とＤ１８Ｍｉｔ４との間のいずれかの部位からＤ１８Ｍｇｈ３までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラット。ＳＨＲＳＰラットの第１染色体中のＤ１Ｒａｔ１８６とＤ１Ｒａｔ９３との間のいずれかの部位から、Ｄ１Ｒａｔ２６９とＤ１Ｒａｔ１３９との間のいずれかの部位までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラット。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＨＲＳＰラットの第１８染色体中のＤ１８Ｍｉｔ２とＤ１８Ｍｉｔ４との間のいずれかの部位からＤ１８Ｍｇｈ３と第１８染色体遠位端との間のいずれかの部位までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラット。
【請求項２】
ＳＨＲＳＰラットの第１８染色体中の少なくともＤ１８Ｍｉｔ４からＤ１８Ｍｇｈ３までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラット。
【請求項３】
ＳＨＲＳＰラットの第１染色体中のＤ１Ｒａｔ１８６とＤ１Ｒａｔ９３との間のいずれかの部位から、Ｄ１Ｒａｔ２６９とＤ１Ｒａｔ１３９との間のいずれかの部位までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラット。
【請求項４】
ＳＨＲＳＰラットの第１染色体中の少なくともＤ１Ｍｇｈ５からＤ１Ｒａｔ２６９までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳卒中を発症しにくいＳＨＲＳＰ系ラットに関し、特に、ＳＨＲＳＰラットと同程度の血圧を有するＳＨＲＳＰを基にしたコンジェニックラットに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、脳卒中を引き起こすメカニズムの解明ないし脳卒中に関する医薬の開発にラットが用いられている。脳卒中を引き起こすラットとしてはいくつかの種類ないし系統があるが、ＳＨＲＳＰラット（Stroke-Prone Spontaneously Hypertensive Rat：脳卒中易発症高血圧自然発症ラット）がよく用いられる。
【０００３】
ＳＨＲＳＰラットは、ＳＨＲラット（Spontaneously Hypertensive Rat：高血圧自然発症ラット）の形質固定をする過程で分離された脳卒中を発症するラットである。通常のラットは血圧が１２０〜１４０ｍｍＨｇであるが、ＳＨＲラットの血圧は約１９０ｍｍＨｇ、ＳＨＲＳＰラットの血圧は約２４０ｍｍＨｇである。また、ＳＨＲラットは、高血圧であるものの脳卒中を発症する確率は通常のラットと同程度であり極めて小さい（略０である）。
【０００４】
一方、ＳＨＲＳＰラットは、標準餌を与えても、ほとんどが６ヶ月以内で脳卒中を発症して死に、脳卒中で死ぬ確率は約８０％である（観察期間中他の原因で死亡することがある）。なお、実験においては、通常、与える水を塩水に変えて１ヶ月程度で脳卒中を発症させるようにしているが、この条件下では脳卒中発症率は１００％である。
【０００５】
従って、脳卒中の研究ないし新薬開発においては、ＳＨＲラットとＳＨＲＳＰラットを用いて比較がなされる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、従来の技術では以下の問題点があった。
従来から、高血圧と脳卒中の因果関係は古くから指摘されているところである。ここで、ＳＨＲラットよりＳＨＲＳＰラットの血圧が５０ｍｍＨｇ高いことを考えると、ＳＨＲＳＰラットの脳卒中の発症原因がより高い血圧にあるのか、それとも発症を引き起こす遺伝子にあるのかなど、より詳細な実験ないし研究をおこなう場合には、ＳＨＲＳＰラットの血圧にできるだけ近いラットでありＳＨＲＳＰラットもしくはＳＨＲラットと遺伝的に大きく異ならないラットが不可欠である。またこの様なラットを用いることにより、より正確な脳卒中の研究ないし新薬開発が期待できる。
【０００７】
本発明は上記に鑑みてなされたものであって、ＳＨＲＳＰラットと同程度の血圧を有する、ＳＨＲＳＰを基にしたコンジェニックラットであって脳卒中を発症しにくいコンジェニックラットを提供することを目的とする。
【０００８】
また、脳卒中の研究ないし新薬開発に資するラットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明（請求項１）は、ＳＨＲＳＰラットの第１８染色体中のＤ１８Ｍｉｔ２とＤ１８Ｍｉｔ４との間のいずれかの部位からＤ１８Ｍｇｈ３と第１８染色体遠位端との間のいずれかの部位までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラットである。
【００１０】
また、本発明（請求項２）は、ＳＨＲＳＰラットの第１８染色体中の少なくともＤ１８Ｍｉｔ４からＤ１８Ｍｇｈ３までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラットである。
【００１１】
また、本発明（請求項３）は、ＳＨＲＳＰラットの第１染色体中のＤ１Ｒａｔ１８６とＤ１Ｒａｔ９３との間のいずれかの部位から、Ｄ１Ｒａｔ２６９とＤ１Ｒａｔ１３９との間のいずれかの部位までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラットである。
【００１２】
また、本発明（請求項４）は、ＳＨＲＳＰラットの第１染色体中の少なくともＤ１Ｍｇｈ５からＤ１Ｒａｔ２６９までの染色体領域をＳＨＲラットの同領域と置換したコンジェニックラットである。
【００１３】
なお、上記Ｄ１８Ｍｉｔ２、Ｄ１８Ｍｉｔ４、Ｄ１８Ｍｇｈ３、Ｄ１Ｒａｔ１８６、Ｄ１Ｒａｔ９３、Ｄ１Ｒａｔ１３９、Ｄ１Ｍｇｈ５、または、Ｄ１Ｒａｔ２６９はマーカ名である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明（請求項１，２）によれば、ＳＨＲＳＰラットと同程度の血圧を有するＳＨＲＳＰを基にしたコンジェニックラットであって脳卒中を発症しにくいコンジェニックラットを提供することが可能となる。
【００１５】
また、本発明（請求項３，４）によれば、脳卒中の研究ないし新薬開発に資するラットを提供することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
以下、本発明を図面を参照しながら詳細に説明する。なお以下の実験では、ＳＨＲＳＰ／Ｉｚｍ、ＳＨＲ／Ｉｚｍ（日本エスエルシー委託生産）を出発個体としてコンジェニックラットを作成した。
【００１７】
具体的には、ＳＨＲＳＰ／ＩｚｍとＳＨＲ／Ｉｚｍ間で作成したＦ２を用い、食塩付与後から脳卒中を発症するまでの期間（stroke latency）を表現型に用いて連鎖解析をおこなった。図１は、第１染色体に関する染色体領域とＬＯＤスコアの関係を示した図である。また、図２は、第１８染色体に関する染色体領域とＬＯＤスコアの関係を示した図である。いずれも横軸にはマーカ名が印してある。図示したように、第１染色体と第１８染色体には、脳卒中に関するＱＴＬ（Quantitative trait locus：量的形質座位）が同定できた。なお、図中、ｐｒｅ  ＢＰとは食塩負荷前の血圧を意味する。
【００１８】
続いて、最も高いＬＯＤスコアから２小さい（脳卒中遺伝子存在確率最大値の１／１００となる）スコアとなる領域をターゲットとして、スピードコンジェニック法により、相補的なコンジェニックラットを作成した。具体的には、ＳＨＲＳＰラットとＳＨＲラットを交配したＦ１を更にＳＨＲＳＰと戻し交配し、ＢＣ５（戻し交配五世代目）を兄妹交配してコンジェニックラット（ターゲット領域以外はＳＨＲＳＰラットの遺伝子を備えたラット）を作成した。この間、全ゲノム上に散在する遺伝マーカーのモニターを行い、ターゲット領域がヘテロ接合体になっていることとその他の領域がＳＨＲＳＰホモ接合体になっていることの確認を行った。なお、同様に、Ｆ１を、更にＳＨＲを用いて戻し交配し、ＢＣ５を兄妹交配してコンジェニックラットを作成した（ターゲット領域以外はＳＨＲラットの遺伝子を備えたラット）。いずれもターゲットとした領域は全ゲノムの１．５ないし２％の長さである。
【００１９】
図３は、導入した染色体領域を示した説明図である。図３（ａ）は、ＳＨＲラットの第１染色体のうち、ターゲット領域を含み少なくともＤ１Ｒａｔ９３からＤ１Ｒａｔ２６９まではＳＨＲＳＰラットの同領域の染色体に置換した様子（なお、Ｄ１Ｒａｔ１８６より短腕遠位側、および、Ｄ１Ｒａｔ１３９より長腕遠位側は置換していない）と、ＳＨＲＳＰラットの第１染色体のうち、ターゲット領域を含み少なくともＤ１Ｒａｔ９３からＤ１Ｒａｔ２６９まではＳＨＲラットの同領域の染色体に置換した様子（なお、Ｄ１Ｒａｔ１８６より短腕遠位側、および、Ｄ１Ｒａｔ１３９より長腕遠位側は置換していない）を示している。なお、前者をＳＨＲｐｃｈ１、後者をＳＰｒｃｈ１として示している。
【００２０】
同様に、図３（ｂ）は、ＳＨＲラットの第１８染色体のうち、ターゲット領域を含み少なくともＤ１８Ｍｉｔ４からＤ１８Ｍｇｈ３まではＳＨＲＳＰラットの同領域の染色体に置換した様子（なお、Ｄ１８Ｍｉｔ２より近位側は置換していない。Ｄ１８Ｍｇｈ３より遠位については第１８染色体遠位端まで置換している可能性がある）と、ＳＨＲＳＰラットの第１８染色体のうち、ターゲット領域を含み少なくともＤ１８Ｍｉｔ４からＤ１８Ｍｇｈ３まではＳＨＲラットの同領域の染色体に置換した様子（なお、Ｄ１８Ｍｉｔ２より近位側は置換していない。Ｄ１８Ｍｇｈ３より遠位については第１８染色体遠位端まで置換している可能性がある）を示している。なお、前者をＳＨＲｐｃｈ１８、後者をＳＰｒｃｈ１８として示している。以降では、以上のＳＨＲｐｃｈ１、ＳＰｒｃｈ１、ＳＨＲｐｃｈ１８、ＳＰｒｃｈ１８の表記をそのままコンジェニックラットの名前として表記する。
【００２１】
得られた４系統のコンジェニックラットの血圧を測定した。また、あわせてＤｕｎｎｅｔ法による統計処理により有意な差があるか否かも検討した。図４は、得られた４系統のコンジェニックラットの血圧を測定した図である。図から明らかなように、ＳＰｒｃｈ１８ラットは、ＳＨＲＳＰラットと血圧に有意な差がないことが確認できた。反対にＳＰｒｃｈ１ラットは、ＳＨＲＳＰラットと血圧に有意な差が認められた。なお、図中、ＳＰｗｃｈ８と示しているのは、ＳＨＲＳＰにおいて、高血圧や脳卒中に関与しない第８染色体の一部をＷＫＹ（正常血圧ラット）の同領域に置換したコンジェニックラットであり、対照群として、コンジェニックラット作成過程そのものは血圧に影響しないこと示す意図で比較したものである。
【００２２】
続いて、コンジェニックラットの脳卒中発症率を、食塩負荷開始後の日数を横軸として評価した。図５は、コンジェニックラットの脳卒中発症率を示した図である。縦軸は脳卒中に罹患していないラットが実験開始時の何％残っているかを示している。なお、各系統とも評価個体数は２０匹以上である。図から明らかなように、ＳＰｒｃｈ１ラットおよびＳＰｒｃｈ１８ラットはターゲット領域以外はＳＨＲＳＰラットであるにもかかわらず、脳卒中を起こす確率が低くなり、生存率が著しく高まっている。具体的には、脳卒中発症率が５０％を越える日数を見ると、ＳＨＲＳＰラットは６日程度であるのに対し、ＳＰｒｃｈ１ラットおよびＳＰｒｃｈ１８ラットは、少なくとも３２日以上となっている。
【００２３】
特に、ＳＰｒｃｈ１８ラットは血圧がＳＲＨＳＰラットと同程度であるものの脳卒中の発症確率が著しく低減している。したがって、高血圧と独立した脳卒中発症要因特に遺伝因子の研究、ないし降圧剤とは別の作用機序により脳卒中を予防、治療するための創薬に用いることができる。他方、ＳＰｒｃｈ１ラットは、血圧がＳＨＲＳＰラットより低いものの、脳卒中はＳＰｒｃｈ１８ラットと同程度に起こる。したがって、脳卒中と高血圧双方の発症に寄与する遺伝子の研究に役立てることができる。
【産業上の利用可能性】
【００２４】
本発明によれば、少なくとも第１染色体と第１８染色体に高血圧と脳卒中に関する遺伝子が存在することが示されたので、遺伝子の部位を特定する研究に資する。また、降圧薬とは異なる作用機序を持つ脳卒中予防薬の研究開発に資する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】第１染色体に関する染色体領域とＬＯＤスコアの関係を示した図である。
【図２】第１８染色体に関する染色体領域とＬＯＤスコアの関係を示した図である。
【図３】導入した染色体領域を示した説明図である。
【図４】得られた４系統のコンジェニックラットの血圧を測定した図である。
【図５】コンジェニックラットの脳卒中発症率を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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