(57)【要約】【課題】β−１，３−グルカンの効果的な除去を目的とするセルロース系濾過膜を充填した濾過器の使用前処理方法を提供する。【解決手段】医薬品または原薬の製造工程に用いられるセルロース系濾過膜を充填した濾過器の前処理方法であって、濾過膜を透過するように界面活性剤含有液を濾過器に流すことを特徴とする濾過器の前処理方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬品または原薬の製造工程に用いられるセルロース系濾過膜を充填した濾過器の前処理方法であって、濾過膜を透過するように界面活性剤含有液を濾過器に流すことを特徴とする濾過器の前処理方法。
【請求項２】
前記セルロース系濾過膜が再生セルロースからなる中空糸膜であることを特徴とする請求項１記載の濾過器の前処理方法。
【請求項３】
前記セルロース系濾過膜がウイルス除去膜であることを特徴とする請求項１または請求項２記載の濾過器の前処理方法。
【請求項４】
前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤であることを特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれかに記載の濾過器の前処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品または原薬の製造に用いられるセルロース系濾過膜を充填した濾過器（以下、「セルロース系濾過器」と記す）の前処理方法に関するものである。更に詳しくは、界面活性剤を用いてセルロース系濾過器の前処理を実施することにより、セルロース系濾過器の性能を損なうことなく残存するβ−１，３−グルカン量を効果的に除去する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医薬品の製造において濾過を用いる工程は非常に多い。例えばウイルス除去工程、除菌工程、固体濾取工程、濃縮工程などが該当し、広義には医薬品の製造に用いる水（例えば注射用水など）の製造も含まれる。セルロース系濾過器は素材が親水性の天然素材ゆえ医薬品の吸着が少なく幅広い工程で用いられている。
【０００３】
医薬品の製造において、発熱性物質の管理が義務付けられており、現在ではリムルステスト（LAL試験）が一般的に用いられている。しかしながら、セルロース系濾過器を用いて製造された医薬品において本質的に発熱性物質が含まれていなくともLAL試験にて陽性となる場合がある。LAL試験と反応する非発熱性物質（以下、「擬陽性物質」と記す。）としてβ−１，３−グルカンが既に知られており、特許文献１に記載されているようにセルロース系濾過器には微量のβ−１，３−グルカンが含まれている。β−１，３−グルカンはＤ−グルコース残基がβ１→３結合で連なった多糖であり、因みにセルロースはβ−１，４−グルカンである。
【０００４】
従って、セルロース系濾過器を医薬品の製造に用いた際にβ−１，３−グルカンが極微量混入することがあり、結果としてLAL試験において擬陽性の結果を与えることがある。よって、セルロース系濾過器の使用によるβ−１，３−グルカンの混入は、医薬品製造において品質管理を困難にする要因となり、場合によってはβ−１，３−グルカンの除去を目的とした製造工程を別途行う必要も発生する。
【０００５】
そこで、セルロース系濾過器に残存するβ−１，３−グルカンの除去を目的とする使用前処理方法が望まれている。セルロース系濾過器における報告例はないが、濾過器に残存するβ−１，３−グルカンの除去例については特許文献２に記載されている。本方法はアルカリもしくは熱水を用いた洗浄方法であるが、セルロースはアルカリまたは熱水によって加水分解されやすいことは既に知られている。よって、こうした方法は膜の性能を損なう可能性があるのでセルロース系濾過器の前処理方法としては不適である。
【特許文献１】特公平６−６７４６１号公報
【特許文献２】特開平７−１０８２７０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、β−１，３−グルカン含有量を低減させるセルロース系濾過膜を充填した濾過器の前処理方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は上記課題を解決するために鋭意研究した結果、セルロース系濾過膜を充填した濾過器に濾過膜を透過させるように界面活性剤含有液を流すことにより、セルロース系濾過器に残存するβ−１，３−グルカン量を効果的に除去できることを見出し、更には微妙な構造保持が要求される膜に損傷を与えないことを確認し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち本発明は、以下を含む。
（１）医薬品または原薬の製造工程に用いられるセルロース系濾過膜を充填した濾過器の前処理方法であって、濾過膜を透過するように界面活性剤含有液を濾過器に流すことを特徴とする濾過器の前処理方法。
（２）前記セルロース系濾過膜が再生セルロースからなる中空糸膜であることを特徴とする（１）記載の濾過器の前処理方法。
（３）前記セルロース系濾過膜がウイルス除去膜であることを特徴とする（１）または（２）記載の濾過器の前処理方法。
（４）前記界面活性剤が非イオン性界面活性剤であることを特徴とする（１）乃至（３）のいずれかに記載の濾過器の前処理方法。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の方法を用いることにより、膜の表面に付着しているβ−１，３−グルカンを膜に損傷を与えることなく除去することが可能になる。本発明によりβ−１，３−グルカンのより少ない医薬品を提供することが可能になり、医薬品製造における品質管理が容易になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明に係る濾過器の前処理方法について具体的に説明する。
本発明でいう医薬品とは、薬事法第２条１項１号〜３号に定義されている医薬品である。即ち、本発明でいう医薬品とは次に掲げる１〜３のいずれかに該当するものである。
１．日本薬局方に収められている物、
２．人又は動物の疾病の診断、治療又は予防に使用されることが目的とされている物であって、機械器具、歯科材料、医療用品及び衛生用品（以下「機械器具等」という。）でないもの（医薬部外品を除く。）、
３．人又は動物の身体の構造又は機能に影響を及ぼすことが目的とされている物であって、機械器具等でないもの（医薬部外品及び化粧品を除く。）
【００１１】
本発明に係る医薬品は特に限定されないが、例示すると蛋白、脂質、糖質、核酸等がその典型例である。蛋白としてはグロブリン、アルブミン等の血漿由来蛋白、酵素、抗体、血液凝固因子、インターロイキン、エリスロポエチン等のサイトカイン等を挙げることが出来る。また、脂質としては、長鎖脂肪酸やリン脂質が挙げることが出来る。また、核酸としてはDNA、RNAを例示することが出来る。更に本発明でいう原薬とは、目的とする薬効を有している医薬品に含まれる成分を表す。
【００１２】
本発明でいう医薬品の製造工程は特に制限されないが、膜の微妙な構造保持が要求されるウイルス除去工程がその典型例である。
【００１３】
本発明でいうセルロース系濾過膜とは、セルロースを原料として製造された濾過膜であり、セルロースの種類は特に制限はされない。例えば、再生セルロース、酢酸セルロース、硝酸セルロースなどが挙げられ、再生セルロースがその典型例である。再生セルロースとは、化学的に処理した天然セルロースから再生したセルロースのことをいう。
【００１４】
本発明でいう濾過器とは、医薬品の製造に用いられるセルロース系濾過膜を充填した濾過器全般を意味し、充填されている膜の形状に特に制限されないが、より多くの処理方法を選択できるセルロース系中空糸膜が充填されている濾過器がその典型例である。
【００１５】
本発明でいう中空糸膜とは、芯が中空になっている糸状の膜であり、広い膜面積をコンパクトにまとめることが出来るので分離用の膜として広く用いられており、多数の中空糸を束ねて中空糸型濾過器とし、医薬品の製造に広く利用されている。
【００１６】
本発明でいうウイルス除去膜とはウイルスを濾過によって除去する濾過膜のことであり、医薬品もしくは原薬の製造工程において混入したウイルスを除去する目的で使用される。ウイルス除去膜は一般的に細孔が多数存在する多孔質構造をとっており、ウイルス除去膜の孔径は、医薬品もしくは原薬中に含まれる蛋白質の種類、除去対象ウイルスによって異なるが、通常１ｎｍ〜１００ｎｍである。
【００１７】
本発明でいう「濾過膜を透過するように界面活性剤含有液を濾過器に流す」とは界面活性剤含有液を濾過膜で濾過することであるが、液を流す方向によって順に濾過する方法、逆に濾過する方法などがある。順に濾過する方法とは医薬、あるいは生体成分の濾過と同じ方向に界面活性剤含有液を濾過する方法であり、逆に濾過する方法は医薬、あるいは生体成分の濾過と逆の方向に界面活性剤含有液を濾過する方法である。また、濾過された界面活性剤含有液を再循環させて濾過する処理方法も含まれる。更に濾過膜を透過するように界面活性剤含有液を流す方法として、該界面活性剤含有液で濾過膜を浸漬もしくは濾過器の内部を該界面活性剤含有液で満たす方法も含まれる。そして、これらの方法を複数選択して組み合わせた方法も含まれる。上記前処理方法の終了後、必要に応じて膜内に残存する界面活性剤含有液を水で洗い流した後に実際の使用を行う。
【００１８】
本発明でいう界面活性剤とは、水に対して強い表面活性を示し、溶液内において臨界ミセル濃度以上でミセルのような会合体を形成する物質を意味する。本発明に係る界面活性剤は、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤のいずれでも使用することができる。陰イオン界面活性剤とはカルボキシル基、スルホ基、硫酸基など水中で解離して陰イオンとなる官能基を有する界面活性剤であり、α−スルホ脂肪酸エステル塩、アルキル硫酸塩、アルキルエーテル硫酸エステル塩、アルキル硫酸トリエタノールアミン、アルキルエーテル硫酸トリエタノールアミンなどを例示することができる。陽イオン界面活性剤とは第４アンモニウム基のように水中で解離して陽イオンとなる官能基を有する界面活性剤であり、アルキルアンモニウム塩、アルキルピリジニウムクロリド、アミドアミン等が挙げられる。両性イオン性界面活性剤は同一分子中に陽イオンとなる官能基を陰イオンとなる官能基を併せ持つ界面活性剤であり、酢酸ベダイン型、アミノ酸型、イミダゾリン型等を例示できる。非イオン性界面活性剤は水酸基のような非イオン性の官能基を有する界面活性剤であり、脂肪酸ジエタノールアミド、ポリオキシアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルを例示できる。これらの中でも特に好ましいのは、医薬品の製造に用いられる非イオン性の界面活性剤であり、例えばポリエチレングリコール、ポリ（オキシエチレン）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（１０）オクチルエチルエーテルなどが挙げられる。
【００１９】
本発明で使用する界面活性剤の濃度は、表面張力を低下させて洗浄効果を高める事が出来る濃度であれば特に限定されるものではないが、例えば０．０１ｗｔ％〜１０ｗｔ％になるように設定することが出来る。好ましくは０．１ｗｔ％〜６ｗｔ％、更に好ましくは０．３ｗｔ％〜３ｗｔ％での洗浄が有効である。なぜなら、高濃度で使用する場合、粘度が高くなるので処理時間が長くなり、また処理後膜内に残存する界面活性剤を除去することが困難になることがあるからである。
【００２０】
本発明に係る方法で使用する界面活性剤含有液の濾過圧力は、セルロース膜の構造に影響を与えない圧力であれば特に問題ないが、濾過器製造会社推奨の圧力で使用するのが好ましい。
【００２１】
本発明に係る方法で使用する界面活性剤含有液の使用量は特に限定されないが、処理を効果的にするためには膜全体に界面活性剤含有液が確実に行き渡る必要があり、また、環境的側面から濾過器処理後の界面活性剤処理の負荷は軽減されるのが望ましい。よって、好ましくは膜面積１ｍ2あたり１Ｌから１２Ｌであり、更に好ましくは３Ｌから６Ｌである。
【００２２】
本発明に係る前洗浄効果の指標として、処理後生体成分の濾過を実施し、濾過液に含まれるβ−１，３−グルカン量を用いた。
【００２３】
本発明に係る濾過器の前処理方法の、処理前後の濾過器性能保持の指標として、透水量、金コロイド除去率を用いることが出来る。透水量とは１分間、濾過器を構成する膜面積１ｍ２あたりに濾過される注射用水の量（ｍｌ／分／ｍ２）のことである。金コロイド除去率は、ウイルスと同程度の粒径である金コロイド粒子（Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｂａｓｉｃ  ＆  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ａｓｐｅｃｔ、Ｖｏｌ．４、１５（１９９２）参照）含有検査液を濾過器で濾過し、濾過前の検査液に存在する金コロイド量と濾過液に存在する金コロイド量から下式１に従って求めることが出来る。
金コロイド対数除去率＝−Ｌｏｇ10（Ｃｏ／Ｃｆ）            (式1)
Ｃｏ：検査液の吸光度  Ｃｆ：濾過液の吸光度
【００２４】
［実施例］
本発明を次に実施例および比較例によって説明するが、これらに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２５】
平均孔径３５ｎｍ、水中での定孔率８０％の再生セルロース中空糸膜を用いて、膜面積０．０１ｍ２の濾過器Aに成形した。ここでいう定孔率とは膜内に閉める空間体積の割合を
表す。
濾過器Aの前処理を以下の方法にて実施した。セルロース系濾過器Aの中空糸内側から３０ｍｌの注射用水（大塚化学製）を濾過した後に界面活性剤含有液を３０ｍｌ濾過し、更に１００ｍｌの注射用水を濾過した。処理後、５ｗｔ％牛血清アルブミン（和光純薬製）を２００ｍｌ濾過した。なお、濾過圧力はすべて２９．４ｋＰａにて実施した。本実施例において用いた界面活性剤含有液は以下の通りである。
【００２６】
ＰＥＧ（ポリエチレングリコール（分子量２００００：和光純薬製））、ＰＥＧ（分子量４０００：三洋化成製）、Ｔｗｅｅｎ２０（ポリ（オキシエチレン）ソルビタンモノラウレート：和光純薬製）、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリ（オキシエチレン）ソルビタンモノオレエート：ナカライテスク製）、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００（ポリオキシエチレン（１０）オクチルフェニルエーテル：和光純薬製）、ＳＤＳ（ラウリル硫酸ナトリウム：ナカライテスク製）、Ｓａｒｋｏｓｙｌ（Ｎ−ドデシルサルコシン酸ナトリウム：シグマ製）。
【００２７】
本実施例および比較例において得られた濾過後の牛血清アルブミンに含まれるβ−１，３−グルカン量を、ファンギテックGテストMK主反応試薬セット（生化学工業製）を用い、添付文書に従って測定した。界面活性剤の濃度を３ｗｔ％に固定した際の結果を図1に、濃度を変更した際の結果を表１に示す。この結果、界面活性剤の種類によらずβ−１，３−グルカンの除去効果が確認された。また、ある濃度域において除去効果が一定であることも確認できた。
【００２８】
【表１】
2007307513.tif 000002
【００２９】
［比較例１］
濾過器Aの使用前処理を以下の方法にて実施した。セルロース系濾過器Aの中空糸内側から１６０ｍｌの注射用水（大塚化学製）を濾過した。処理後、５ｗｔ％牛血清アルブミン水溶液を２００ｍｌ濾過した。なお、濾過圧力はすべて２９．４ｋＰａにて実施した。
実施例１と同様に濾過後の牛血清アルブミンに含まれるβ−１，３−グルカン量を測定した。結果を図１に示す。界面活性剤含有液で洗浄しない場合の濾過後の牛血清アルブミンに含まれるβ−１，３−グルカン量は、界面活性剤含有液による処理を施した場合の３倍から１０倍以上であった。
【００３０】
［参考例１］
界面活性剤による使用前処理前後の濾過器性能保持の指標として、透水量、金コロイド除去率の測定を行った。
濾過器の透水量測定は以下に述べる方法によって実施した。実施例１に従って、濾過器Aを用いて３０ｍｌの注射用水（大塚化学製）を濾過した後に１分間に濾過される水の量を測定した（処理前）。次いで、界面活性剤（ＰＥＧ４０００  ６ｗｔ％  三洋化成製）を３０ｍｌ濾過し、更に１００ｍｌの注射用水を濾過した後に１分間に濾過される水の量を測定した（処理後）。なお、濾過圧力はすべて２９．４ｋＰａにて実施した。本試験においてセルロース系濾過器Aを３本用いた。透水量の平均値および標準偏差を表２に示す。界面活性剤含有液による前処理前後で、セルロース系濾過器の透水性能は変化しないことが確認された。
【００３１】
【表２】
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【００３２】
また、本参考例に従って界面活性剤による使用前処理を施した濾過器Ａ（サンプル１）、および比較例１に従って注射用水による使用前処理を施した濾過器Ａ（サンプル２）における金コロイド除去率の測定を実施した。
金コロイド液の調製は以下の通りに行った。６．０ｍＭの塩化金酸水溶液８０ｇと注射用水３２０ｇ、４％のクエン酸ナトリウム水溶液１３．１ｇを混合し、７８℃±２℃で６０分間攪拌した。攪拌後、水浴で１５分間冷却し、３０％のポリビニルピロリドンＫ−１５（東京化成製）水溶液３９．８ｇを添加した。その混合液を十分に攪拌した後、５．４％のドデシル酸ナトリウム（和光純薬製）水溶液２４．０ｇを添加した。溶液のｐＨを４．７〜５．３に調整し、赤紫色の金コロイド水溶液を得た。この金コロイド水溶液１０ｍｌと０．２７１％のドデシル酸ナトリウム水溶液９０ｍｌを混合し、検査液を得た。
得られた検査液を２６．７ｋＰａの圧力で濾過した。５ｍｌを濾過して濾過器に充填されていた水を置換し、次の５ｍｌを採取した。その濾液の５３５ｎｍの吸光度を測定し、検査液の５３５ｎｍにおける吸光度より金コロイド対数除去率を算出した。
本試験において濾過器Aを２本用いた。金コロイド対数除去率の平均値を表３に示す。
【００３３】
【表３】
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【００３４】
この結果、界面活性剤含有液による前処理前後で金コロイド除去率は変化しないことが確認され、透水量の結果と併せて界面活性剤含有液の前処理前後においてセルロース系濾過膜を充填した濾過器の性能に変化が無いことが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明によって、セルロース系濾過膜を充填した濾過器の性能を損なうことなく濾過器に残存するβ−１，３−グルカン量を効果的に除去することが可能になる。その結果、セルロース系濾過器を用いた医薬品の製造において、β−１，３−グルカンのより少ない医薬品を提供することが可能になり、医薬品製造における品質管理を容易にすることが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】濾過後の蛋白液（牛血清アルブミン）中のグルカン量を示すグラフ
【図１】
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