(57)【要約】      （修正有）【課題】  食経験の豊富な卵白に含有される蛋白質より、血清コレステロールを低減下させる効果を有するペプチドを特定し、このコレステロール低減化ペプチドを含有する血清コレステロール低下剤およびこれを含有する食品組成物を提供する。【解決手段】  血清コレステロール低下剤は次のアミノ酸配列で示される、Gly-Leu-Trp-Glu-lys。血清コレステロール低下作用を有する食品組成物は該血清コレステロール低下剤を含有する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記のアミノ酸配列で示されるコレステロール低減化ペプチド。
Gly-Leu-Trp-Glu-lys
【請求項２】
請求項１に記載のコレステロール低減化ペプチドを含有する血清コレステロール低下材。
【請求項３】
請求項２に記載の血清コレステロール低下材を含む食品組成物。
【請求項４】
請求項３において、
「血清コレステロールが低下する」旨が表示に付された、血清コレステロール低下作用を有する食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コレステロール低減化ペプチドGly-Leu-Trp-Glu-lys、およびこれを含有する血清コレステロール低下材、ならびに血清コレステロール低下作用を有する食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活等の生活習慣やストレス等に起因する血清コレステロールの上昇が、動脈硬化や虚血性心疾患等の重篤な循環器疾患の引き金となることが明らかになっており、大きな社会問題となっている。
【０００３】
そこで、摂取する脂質の低減や、オメガ３／オメガ６バランスが改善された食事療法や、食餌性コレステロールが制限された食事療法が推奨されている。また動植物性蛋白質を限定的に低分子化することにより、血清コレステロール低下作用を有するペプチド製剤またはこれを添加した食品等が開示されている。例えば、特許文献１には乳蛋白質由来の血清コレステロール低減化ペプチドであるIle-Ile-Ala-Glu-Lysが示されている。また、特許文献２には分子量２００〜１５００の大豆蛋白質由来のオリゴペプチドに血清コレステロール低減化作用を有することが開示されている。しかし卵白蛋白質にも優れた血清コレステロール低減化作用を有することが知られているが、特定のアミノ酸配列を有するペプチドに有効な生理活性を見出した例は未だない。
【特許文献１】特開２００３−２３８５９０号公報
【特許文献２】特開昭６０−１１４２５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、食経験の豊富な卵白に含有される蛋白質より、血清コレステロールを低減下させる効果を有するペプチドを特定し、このコレステロール低減化ペプチドを含有する血清コレステロール低下材を提供することである。
【０００５】
また、本発明の目的は、前記血清コレステロール低下材を含む、血清コレステロール低下作用を有する食品組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者等は、上記目的を達成すべく、卵白蛋白質分解物の生理機能について鋭意研究を重ねた結果、特定のアミノ酸配列を有するペプチドに、体内コレステロールを胆汁酸に異化、排出を促進する酵素であるＣＹＰ７Ａ１の遺伝子発現を高めることを発見し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち本発明は、
（１）下記のアミノ酸配列で示されるコレステロール低減化ペプチド。
Gly-Leu-Trp-Glu-lys
（２）（１）に記載のコレステロール低減化ペプチドを含有する血清コレステロール低下材。
（３）（２）に記載の血清コレステロール低下材を含む食品組成物。
（４）（３）において、「血清コレステロールが低下する」旨が表示に付された、血清コレステロール低下作用を有する食品組成物。
【０００８】
ここで、上記本発明のコレステロール低減化ペプチドは、鶏卵の卵白蛋白質の一部を構成するものであり、卵白蛋白質を限定的分解することにより、分画採取することができる。また、アミノ酸より自動合成機によって合成し、得られる。
【０００９】
本発明の血清コレステロール低下材はコレステロール低減化ペプチドを主成分として配合して成る。該コレステロール低減化ペプチドに加え、血清コレステロール低下作用等生理機能を有さない、デキストリン、乳糖等の賦形材を配合することができる。また、血清コレステロール低下作用を有する物質、例えば他のコレステロール低減化ペプチドや植物ステロール類等を配合し、相加あるいは相乗効果を期待することもできる。また、他の血清脂質改善効果を有する物質、例えば機能性ペプチド、蛋白質、食物繊維等を含有することもできる。
【００１０】
また、ここで、上記本発明の食品組成物、あるいは「血清コレステロールが低下する」旨が表示に付された、血清コレステロール低下作用を有する食品組成物とは米飯、パン、シリアル等の主食、レトルト食品、乾燥食品、冷凍食品等の加工食品、マヨネーズ、ドレッシング等の調味料、バター、マーガリン等の油脂加工食品、飲料、デザート、アイスクリーム等の嗜好品、また錠剤やカプセルタイプのサプリメントといった全ての食品形態が可能であり、特に限定するものではない。血清コレステロール値が高い人のための食品とし許認可された特定保健用食品をも含む。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のコレステロール低減化ペプチドは、ＣＹＰ７Ａ１の遺伝子発現を高めることにより、体内コレステロールを胆汁酸に異化し、排出を促進する。また、該コレステロール低減化ペプチドを主成分として配合することにより、血清コレステロール低下材を得ることができる。
【００１２】
また、上記コレステロール低減化ペプチドは古くから食経験の豊富な鶏卵の卵白蛋白質の一部を構成するペプチドであるため安全性に優れ、該コレステロール低減化ペプチドそのもの、またはこれを主成分とする血清コレステロール低下材を様々な食品に配合することができる。これにより血清コレステロール低下作用を有する食品組成物を安全かつ容易に得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明について説明する。なお、本発明において、「％」は「質量％」を意味する。
【００１４】
これらのペプチドは、ペプチド合成の常法にしたがって合成することができ、例えば、樹脂を用い、保護基で保護したアミノ酸をＣ−末端側から付加して合成する固相法その他常法が適宜利用される。また自動合成機を利用して、本ペプチドを合成することも可能であるし、鶏卵卵白から分離、分画することも可能である。後述する実施例、試験例においてはペプチド採取の容易性また純度の点より、自動合成機を用いて試料を得た。
【００１５】
本発明におけるコレステロール低減化ペプチドとは、Gly-Leu-Trp-Glu-lysの配列で示される５個のアミノ酸より構成される。該ペプチドは鶏卵卵白の蛋白質の主要構成蛋白質である、オボアルブミンに存在することが知られている。該ペプチドはＮ末端が疎水性であり、Ｃ末端は親水性のアミノ酸であるGlu-Lysとなっている両親媒性ペプチドである。
【００１６】
試験例で後述する通り、コレステロール代謝を担う肝臓由来のHepG2細胞をもって、該ペプチドを培養液に添加することにより、CYP7A1酵素を作る遺伝子の発現を高めることを発見した。CYP7A1酵素は、体内コレステロールを胆汁酸に異化し、排出することにより、結果的に血清コレステロールを低下させる。すなわち該ペプチドはCYP7A1酵素の活性化を介してコレステロール代謝改善作用を発揮するペプチドである。
【００１７】
該コレステロール低減化ペプチドを摂取する際、そのまま摂取することも可能であるが、摂取を容易にするため、賦形材を添加する、または食品に添加することも可能である。
【００１８】
生理活性のない、もしくは乏しい賦形材に混合する、もしくは水や飲料に溶解、分散させることができる。そうすることにより該コレステロール低減化ペプチドを主成分とする血清コレステロール低下材として、人体への摂取、もしくは食品組成物への配合が容易となる。
【００１９】
上記血清コレステロール低下材を上述したように様々な食品に配合することにより、さらに摂取を容易にすることができる。食品の形態は特に限定されず、食品原料に加えて、酸味料や調味料等の食品添加物を添加することもできる。またレトルト処理等の加熱工程、熱風乾燥等乾燥工程、急速凍結等の冷凍工程といった、様々な食品加工工程を付すことができる。これにより様々な食品形態に対応することができる。
【実施例】
【００２０】
〔実施例１〕
自動合成機を用いてコレステロール低減化ペプチドとは、Gly-Leu-Trp-Glu-lysを合成し、凍結乾燥を行った。得られたペプチドの純度は、逆相ＨＰＬＣで９７％であることが確認できた。
【００２１】
〔実施例２〕
鶏卵から採取した生卵白をトリプシン等のプロテアーゼで酵素分解処理した後、ＯＤＳカラムを用いたＨＰＬＣで分画採取し、凍結乾燥を行った。得られたペプチドの純度は９７％であることが確認できた。
【００２２】
〔試験例〕
１．  試験方法
１.１.細胞の培養
HepG2細胞と10％FBS含有MEM培地を混合し、細胞を６well plateに播種した後、CO2インキュベーター(37℃、5％CO2)にて24時間培養した。その後、培地を吸引除去し、10％FBS添加培地に交換した後、さらに24時間培養した。それぞれのwellを血清フリー培地で洗浄し、下記のサンプル溶液を加え、24時間培養後、Total RNAを回収した。
１.２.サンプルの調製
A.対照(無添加)
FBSフリーMEM培地をそのまま使用した。
B.カゼイントリプシン加水分解物(CTH)
CTHを1mg/mLとなるようにFBSフリーMEM培地に溶解させ、滅菌ろ過して使用した。
C.ペプチド（実施例１で得られたペプチド）
Gly-Leu-Trp-Glu-LysペプチドをFBSフリーMEM培地に1mg/mLとなるよう溶解させ、滅菌ろ過して使用した。
１.３.コレステロール代謝関連遺伝子の解析
回収したHepG2細胞のTotal RNAを用いてRT反応を行った後、RT産物(cDNA)を希釈し、Cholesterol7α-hydroxylase(CYP7A1)などの各遺伝子について、Real-time定量PCR法(ABI PRISM 7000)で測定した。なお、使用したForwardprimer、Reverse primer、TaqManprobeはAppliedBiosystemsで合成した。18S rRNAで補正を行い各サンプルの目的mRNAを定量した。
２．結果
Real-time定量PCRによるCYP7A1遺伝子mRNAの定量結果を表１に示した。CYP7A1遺伝子のQuantityを18s rRNAのQuantityで割算し、対照群のmRNA発現を100とした相対比を算出し、グラフ化したものが表１である。CYP7A1 mRNAレベルは対照群やCTH群と比較して該ペプチド群（実施例１）では有意に増加した。
【００２３】
【表１】
2007126369.tif 000002
【００２４】
このようにGly-Leu-Trp-Glu-Lysペプチドは、CYP7A1 mRNAレベルを増加させることにより、コレステロール分解系を促進し、コレステロールを低下させる機能を有することがわかる。
【００２５】
〔応用例１〕（血清コレルテロール低下材の例）
ペプチド（実施例１）              ２０％
結晶セルロース（可溶タイプ）      ３０％
デキストリン（DE２５）            ５０％
合        計                    １００％  
上記配合により、粉体混合することにより、粉末状の血清コレステロール低下材を得た。
【００２６】
〔応用例２〕（カプセル剤状のサプリメントの例）
応用例１のペプチドを実施例２に変え、粉末状の血清コレステロール低下材１２ｇを調製した。これを豚ゼラチン製のハードカプセルに各１００ｍｇとなるよう充填し、カプセル剤状のサプリメント１００錠を得た。カプセル５錠当り１００ｍｇのコレステロール低減化ペプチドを含有する。
【００２７】
〔応用例３〕（粉末コーンスープの例）
スイートコーンパウダー            ２５％
コーンスターチ                    ２５％
砂糖                              １２％
乳糖                              １０％
全粉乳                            １０％
チキンブイヨン                      ８％
食塩                                ４％
グルタミン酸ナトリウム              ３％
コーンスープ香料                ０．５％
応用例1で得られた
血清コレルテロール低下材        ２．５％
合            計            １００％
応用例１で得られた粉末状の血清コレステロール低下材を用い、上記配合の通り粉末コーンスープ２００ｇを調製した。各２０ｇをアルミ蒸着のパウチ袋１０袋に分包し、飲用時に１８０ｍＬの熱湯に溶解し摂取した。１食当り血清コレステロール低下材５００ｍｇ、コレステロール低減化ペプチドとして１００ｍｇを含有する。
【００２８】
〔応用例３〕（清涼飲料の例）
ブドウ糖・果糖液糖                １２％
酸味料                          ０．２％
甘味料                          ０．１％
アスコルビン酸                  ０．１％
グレープフルーツ香料            ０．１％
応用例1で得られた
血清コレルテロール低下材      ０．５％
清水                              ８７％
合              計            １００％
応用例１で得られた粉末状の血清コレステロール低下材を用い、上記配合の通り清涼飲料１２００ｇを調製した。これを９８℃に加熱し１０分間保持した後、１００ｍＬ容褐色瓶に充填し、スクリューキャップを施し密封後常温に冷却した。ペプチドを主成分とする血清コレステロール低下材を一瓶当たり５００ｍｇ、コレステロール低減化ペプチドとして１００ｍｇを含有する清涼飲料１０本を得た。
【００２９】
〔応用例４〕（焼き菓子の例）
全卵                          ４０ｇ
砂糖                        １００ｇ
馬鈴薯澱粉                  １００ｇ
応用例1で得られた
血清コレルテロール低下材      ４ｇ
合            計          ２４４ｇ
全卵４０ｇを軽くほぐし、砂糖１００ｇを加え混合し、さらに馬鈴薯澱粉１００ｇと応用例1で得られた血清コレルテロール低下材４ｇを加え練り合わせボーロの生地を得た。これを延展しサイの目状に切断し、丸めることにより球状の生地を得た。これをオーブンにて１８０℃で焼成し、得られたボーロ５０個を樹脂製の袋に充填した。一袋５０粒当り約５００ｍｇの血清コレステロール低下材、コレステロール低減化ペプチドとして１００ｍｇを含有するボーロ８袋を得た。