(57)【要約】【課題】  スループット時間を短縮すると共に、簡易な装置構成とする。【解決手段】  入力された化合物に対応する参照データＮを補正用データベースＨから読み出し、測定領域Ｅ１から得られた全反射減衰データＧを参照データＮで補正して、結合状態データを生成する。【選択図】          図１０
2007093299.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生理活性物質を固定化するための固定化膜と検討対象となる予め定められた２種類以上の化合物との吸着状態を含む参照データを、前記化合物毎に記憶する記憶手段と、
前記固定化膜に固定された生理活性物質へ前記化合物を供給して、前記生理活性物質及び前記生理活性物質の固定された前記固定化膜と前記化合物との間の相互作用を測定する測定手段と、
前記測定手段による測定により得られた測定データを、前記化合物に対応する前記参照データで補正して前記生理活性物質と前記化合物との間の相互作用に関する相互作用データを算出する算出手段と、
前記算出手段により算出された相互作用データを出力する出力手段と、
を備えた測定装置。
【請求項２】
前記固定化膜は金属膜上に形成され、
前記測定手段は、前記金属膜の前記固定化膜の形成されていない側へ光ビームを入射させることにより発生する全反射減衰を利用して、前記生理活性物質及び前記生理活性物質の固定された前記固定化膜と前記化合物との間の相互作用を測定すること、
を特徴とする請求項１に記載の測定装置。
【請求項３】
生理活性物質を固定化するための固定化膜と検討対象となる予め定められた２種類以上の化合物との吸着状態を含む参照データを、前記化合物毎に対応づけて記憶するステップと、
前記固定化膜に固定された生理活性物質へ前記化合物を供給して、前記生理活性物質及び前記生理活性物質の固定された前記固定化膜と前記化合物との間の相互作用を測定するステップと、
前記測定により得られた測定データを、前記化合物に対応する前記参照データで補正して前記生理活性物質と前記化合物との間の相互作用に関する相互作用データを算出するステップと、
前記算出された相互作用データを出力するステップと、
をコンピュータに実行させる測定プログラム。
【請求項４】
前記測定は、片面に前記固定化膜の形成された金属膜の前記固定化膜の形成されていない側へ光ビームを入射させることにより発生する全反射減衰を利用して、前記生理活性物質及び前記生理活性物質の固定された前記固定化膜と前記化合物との間の相互作用を測定するものであること、
を特徴とする請求項３に記載の測定プログラム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、測定装置、及び、測定プログラムに関し、詳しくは、生理活性物質と所定の化合物との相互作用を測定する測定装置、及び、測定プログラムに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生理活性物質と所定の化合物との相互作用を測定する装置として、様々なバイオセンサーが提案されている。そのうち、エバネッセント波を利用した測定装置の１つとして、表面プラズモンセンサーが知られている（特許文献１参照）。一般的に、表面プラズモンセンサーは、プリズムと、このプリズムの一面に配置され生理活性物質が固定される金属膜と、光ビームを発生させる光源と、光ビームをプリズムに対して、プリズムと金属膜との界面で全反射条件が得られるように種々の角度で入射させる光学系と、界面で全反射した光ビームの強度を検出する光検出手段と、を備え、光検出手段の検出結果に基づいて、生理活性物質についての測定を行なうものである。
【０００３】
この表面プラズモンセンサーによる測定では、金属膜の上に固定化された生理活性物質に対して化合物溶液を供給すると共に、金属膜の化合物溶液が供給されている側と逆側の面へ光ビームを入射し、その反射光から得られる屈折率の情報に基づいて、生理活性物質と化合物溶液中の化合物との、相互作用が測定される。
【０００４】
ところで、表面プラズモンセンサーによる測定では、生理活性物質が固定されている測定部とは別に、生理活性物質が固定されていない参照部を設け、参照部から得られる屈折率の情報で測定部の屈折率の情報を補正することが行われる。ここでの補正は、種類やその他の条件が異なることによる化合物と固定化膜との間の信号変化をキャンセルして、生理活性物質と化合物との間の特異的結合による信号変化のみを測定することが主な目的である。
【０００５】
しかしながら、測定部の他に参照部を設け、参照部についても屈折率情報を得なければならないとなると、参照部の測定のための時間が必要とされ、スループット時間が長くなってしまう。また、測定部と参照部との測定を同時に行うとなると、装置の構成が複雑になってしまう。
【特許文献１】特許第３２９４６０５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は上記事実を考慮してなされたものであり、スループット時間を短縮すると共に、簡易な装置構成の測定装置、及び、スループット時間の短縮を抑制可能な測定プログラムを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために、本発明の測定装置は、生理活性物質を固定化するための固定化膜と検討対象となる予め定められた２種類以上の化合物との吸着状態を含む参照データを、前記化合物毎に対応づけて記憶する記憶手段と、前記固定化膜に固定された生理活性物質へ前記化合物を供給して、前記生理活性物質及び前記生理活性物質の固定された前記固定化膜と前記化合物との間の相互作用を測定する測定手段と、前記測定手段による測定により得られた測定データを、前記化合物に対応する前記参照データで補正して前記生理活性物質と前記化合物との間の相互作用に関する相互作用データを算出する算出手段と、前記算出手段により算出された相互作用データを出力する出力手段と、を含んで構成されている。
【０００８】
また、本発明の測定プログラムは、生理活性物質を固定化するための固定化膜と検討対象となる予め定められた２種類以上の化合物との吸着状態を含む参照データを、前記化合物毎に対応づけて記憶するステップと、前記固定化膜に固定された生理活性物質へ前記化合物を供給して、前記生理活性物質及び前記生理活性物質の固定された前記固定化膜と前記化合物との間の相互作用を測定するステップと、前記測定により得られた測定データを、前記化合物に対応する前記参照データで補正して前記生理活性物質と前記化合物との間の相互作用に関する相互作用データを算出するステップと、前記算出された相互作用データを出力するステップと、をコンピュータに実行させるものである。
【０００９】
ここで、前記生理活性物質とは、日本工業規格（ＪＩＳ）Ｋ３６１１中に「天然高分子」（記号１１００１〜１１０２５）として記載されている各物質、生物学データ大百科事典（朝倉書店）中の「１．生体物質概論」に記載されている糖，アミノ酸、ヌクレオチド、脂質、ヘム、キノン、タンパク質、ＲＮＡ，ＤＮＡ、リン脂質、多糖、バイオサイエンス辞典（朝倉書店）中の「II.生物物質と代謝」に記載されているタンパク質、アミノ酸、核酸、脂質、糖質、酵素のうちのいずれか１つ以上を含むものを意味する。
【００１０】
前記相互作用とは、物理的、化学的、もしくは生化学的な反応における、結合反応の速さ、結合量、または解離反応の速さ、あるいは、上記結合反応の速さ、結合量、および解離反応の速さのうちの２つ以上を組み合わせたものを意味するものである。
【００１１】
１つの生理活性物質について複数種類の化合物を供給し、相互作用を測定する場合、化合物の種類によって得られる信号が大きく変化する。そこで、本発明では、生理活性物質を固定化するための固定化膜と検討対象となる予め定められた２種類以上の化合物との吸着状態を含む参照データを記憶する。そして、この参照データで測定データを補正する。これにより、化合物毎に異なる信号変化分の補正を行うことができ、測定毎に参照データを求める必要がなく、スループット時間の短縮を行うことができる。また、測定装置においては、参照データを取得するための構成が不要となるので、装置の構造を簡単にすることができる。
【００１２】
なお、本発明の測定装置は、前記固定化膜が金属膜上に形成され、前記測定手段が、前記金属膜の前記固定化膜の形成されていない側へ光ビームを入射させることにより発生する全反射減衰を利用して、前記生理活性物質及び前記生理活性物質の固定された前記固定化膜と前記化合物との間の相互作用を測定すること、を特徴とすることができる。
【００１３】
また、本発明の測定プログラムは、前記測定が、片面に前記固定化膜の形成された金属膜の前記固定化膜の形成されていない側へ光ビームを入射させることにより発生する全反射減衰を利用して、前記生理活性物質及び前記生理活性物質の固定された前記固定化膜と前記化合物との間の相互作用を測定するものであること、を特徴とすることができる。
【発明の効果】
【００１４】
上記構成によれば、参照データ用の測定を行う必要がなく、スループットの低下を抑制することができる。また、測定装置においては、参照データを取得するための構成が不要となるので、装置の構造を簡単にすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、図面を参照しながら本発明の実施形態について説明する。
【００１６】
本実施形態の測定装置としてのバイオセンサー１０は、金属膜の表面に発生する表面プラズモンを利用して、生理活性物質Ｄと化合物との相互作用路を測定する、いわゆる表面プラズモンセンサーである。
【００１７】
図１に示すように、バイオセンサー１０は、トレイ保持部1２、搬送部1４、容器載置台１６、液体吸排部２０、押さえ部２６、光学測定部５４、及び、制御部６０を備えている。
【００１８】
トレイ保持部1２は、載置台1２Ａ、及び、ベルト1２Ｂを含んで構成されている。載置台1２Ａは、矢印Ｙ方向に架け渡されたベルト１２Ｂに取り付けられており、ベルト１２Ｂの回転により矢印Ｙ方向に移動可能とされている。載置台１２Ａ上には、トレイＴが２枚、位置決めして載置される。トレイＴには、センサースティック４０が８本収納されている。センサースティック４０は、リガンドＤの固定されるチップであり、詳細については後述する。載置台１２Ａの下には、センサースティック４０を後述するスティック保持部材１４Ｃの位置まで押し上げる、押上機構１２Ｄが配置されている。
【００１９】
センサースティック４０は、図２及び図３に示すように、誘電体ブロック４２、流路部材４４、保持部材４６、接着部材４８、及び、蒸発防止部材４９、で構成されている。
【００２０】
誘電体ブロック４２は、光ビームに対して透明な透明樹脂等で構成されており、断面が台形の棒状とされたプリズム部４２Ａ、及び、プリズム部４２Ａの両端部にプリズム部４２Ａと一体的に形成された被保持部４２Ｂを備えている。プリズム部４２Ａの互いに平行な２面の内の広い側の上面には、図４にも示すように金属膜５０が形成されている。この金属膜５０上に、バイオセンサー１０で解析する生理活性物質Ｄが固定される。誘電体ブロック４２は、いわゆるプリズムとして機能し、バイオセンサー１０での測定の際には、プリズム部４２Ａの対向する互いに平行でない２つの側面の内の一方から光ビームが入射され、他方から金属膜５０との界面で全反射された光ビームが出射される。
【００２１】
金属膜５０の表面には、図４に示すように、固定化膜５０Ａが形成されている。固定化膜５０Ａは、生理活性物質Ｄを金属膜５０上に固定化するための固定化層である。固定化膜５０Ａは、固定する生理活性物質Ｄに応じて選択される。固定化膜５０Ａとしては、例えばアガロース、デキストラン、カラゲナン、アルギン酸、デンプン、セルロースなどのヒドロゲル、又はこれらの誘導体、例えばカルボキシメチル誘導体、又は水膨潤性有機ポリマー、例えばポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコールなどを使用することができる。特に、ポリエチレングリコール誘導体、デキストラン誘導体は、生理活性維持の観点から好ましく用いられる。
【００２２】
固定化膜５０Ａ上には、生理活性物質Ｄが固定され化合物Ａと生理活性物質Ｄとの反応を測定する測定領域Ｅ１が形成される。測定領域Ｅ１には、図５に示すように、光ビームＬ１が入射される。
【００２３】
プリズム部４２Ａの両側面には、上側の端辺に沿って保持部材５２と係合される係合凸部４２Ｃが、下側の端辺に沿ってプリズム部４２Ａの上面と垂直な仮想面の延長上に構成される垂直凸部４２Ｄが、各々７箇所に形成されている。また、誘電体ブロック４２の下面の長手方向に沿った中央部には、係合溝４２Ｅが形成されている。
【００２４】
流路部材４４は、誘電体ブロック４２よりもわずかに狭幅の直方体状とされ、図３に示すように、誘電体ブロック４２の金属膜５０上に６個並べて配置されている。各々の流路部材４４の下面には流路溝４４Ａが形成されており、上面に形成された供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂと連通されて、金属膜５０との間に、液体流路４５が構成される。したがって、１本のセンサースティック４０には、独立した６個の液体流路４５が構成される。流路部材４４の側壁には、保持部材４６の内側の図示しない凹部に圧入されて保持部材４６との密着性を確保するための凸部４４Ｂが形成されている。
【００２５】
なお、液体流路４５には、蛋白質を含む液体が供給されることが想定されるので、流路部材４４への蛋白質の固着を防止するため、流路部材４４の材料としては、蛋白質に対する非特異吸着性を有しないことが好ましい。
【００２６】
保持部材４６は、長尺とされ、上面板４６Ａ及び２枚の側面板４６Ｂで構成されている。側面板４６Ｂには、誘電体ブロック４２の係合凸部４２Ｃと係合される係合孔４６Ｃが形成されている。保持部材４６は、６個の流路部材４４を間に挟んで係合孔４６Ｃと係合凸部４２Ｃとが係合されて、誘電体ブロック４２に取り付けられる。これにより、流路部材４４は、誘電体ブロック４２に取り付けられる。上面板４６Ａには、流路部材４４の供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂと対向する位置に、流路部材４４に向けて狭くなるテーパー状のピペット挿入孔４６Ｄが形成されている。また、隣り合うピペット挿入孔４６Ｄとピペット挿入孔４６Ｄとの間には、位置決め用のボス４６Ｅが形成されている。
【００２７】
保持部材４６の上面には、蒸発防止部材４９が接着部材４８を介して接着されている。接着部材４８のピペット挿入孔４６Ｄと対向する位置にはピペット挿入用の孔４８Ｄが形成され、ボス４６Ｅと対向する位置には位置決め用の孔４８Ｅが形成されている。また、蒸発防止部材４９のピペット挿入孔４６Ｄと対向する位置には十字状の切り込みであるスリット４９Ｄが形成され、ボス４６Ｅと対向する位置には位置決め用の孔４９Ｅが形成されている。ボス４６Ｅを孔４８Ｅ及び４９Ｅに挿通させて、蒸発防止部材４９を保持部材５２の上面に接着することにより、蒸発防止部材４９のスリット４９Ｄと流路部材４４の供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂとが対向するように構成される。ピペットチップＣＰの非挿入時には、スリット４９Ｄ部分が供給口４５Ｂを覆い、液体流路４５に供給されている液体の蒸発が防止される。
【００２８】
図１に示すように、バイオセンサー１０の搬送部１４は、上部ガイドレール１４Ａ、下部ガイドレール１４Ｂ、及び、スティック保持部材１４Ｃ、を含んで構成されている。上部ガイドレール１４Ａ及び下部ガイドレール１４Ｂは、トレイ保持部１２及び光学測定部５４の上部で、矢印Ｙ方向と直交する矢印Ｘ方向に水平に配置されている。上部ガイドレール１４Ａには、スティック保持部材１４Ｃが取り付けられている。スティック保持部材１４Ｃは、センサースティック４０の両端部の被保持部４２Ｂを保持可能とされていると共に、上部ガイドレール１４Ａに沿って移動可能とされている。スティック保持部材１４Ｃに保持されたセンサースティック４０の係合溝４２Ｅと下部ガイドレール１４Ｂとが係合され、スティック保持部材１４Ｃが矢印Ｘ方向に移動することにより、センサースティック４０が光学測定部５４上の測定部５６に搬送される。また、測定部５６には、測定時にセンサースティック４０を押さえる押さえ部材５８が備えられている。押さえ部材５８は、図示しない駆動機構によりＺ方向に移動可能とされ、測定部５６に配置されたセンサースティック４０を上側から押圧する。
【００２９】
容器載置台１６には、化合物溶液プレート１７、バッファー液ストック容器１８、廃棄液容器１９が載置されている。化合物溶液プレート１７は、９６に区画されており、各種の化合物溶液をストック可能とされている。バッファー液ストック容器１８は、容器１８Ａ〜１８Ｅで構成されており、容器１８Ａ〜１８Ｅには、後述するピペットチップＣＰを挿入可能な開口Ｋが形成されている。廃棄液容器１９は、複数の容器１９Ａ〜１９Ｅで構成されており、容器１８Ａ〜１８Ｅと同様にピペットチップＣＰを挿入可能な開口Ｋが形成されている。
【００３０】
液体吸排部２０は、上部ガイドレール１４Ａ、及び、ガイドレール１６Ｂよりも上方で、矢印Ｙ方向に架け渡された横断レール２２、及び、ヘッド２４を含んで構成されている。横断レール２２は、図示しない駆動機構により、矢印Ｘ方向移動可能とされている。また、ヘッド２４は、横断レール２２に取り付けられ、矢印Ｙ方向に移動可能とされている。また、ヘッド２４は、図示しない駆動機構により、鉛直方向（矢印Ｚ方向）にも移動可能とされている。ヘッド２４は、図６に示すように、２本のピペット部２４Ａ、２４Ｂを備えている。ピペット部２４Ａ、２４Ｂには、先端部にピペットチップＣＰが取り付けられ、個々にＺ方向の長さを調整可能とされている。ピペットチップＣＰは、図示しないピペットチップストッカーに多数ストックされており、必要に応じて交換可能とされている。
【００３１】
なお、本実施形態においてはセンサースティック４０への液体供給はピペットチップＣＰにより行われるが、ピペットチップの代わりに、一端が上記各溶液プレートに接続され、他端がセンサースティック４０に接続可能とされたインジェクションチューブを設け、送液ポンプにより液体の供給を行ってもよい。
【００３２】
光学測定部５４は、図７に示すように、光源５４Ａ、第１光学系５４Ｂ、第２光学系５４Ｃ、受光部５４Ｄ、信号処理部５４Ｅ、を含んで構成されている。光源５４Ａからは、発散状態の光ビームＬが出射される。光ビームＬは、第１光学系５４Ｂを介して、測定部５６に配置された誘電体ブロック４２の測定領域Ｅ１に入射される。測定領域Ｅ１において、光ビームＬ１は、金属膜５０と誘電体ブロック４２との界面に対して種々の入射角成分を含み、かつ全反射角以上の角度で入射される。光ビームＬ１は、誘電体ブロック４２と金属膜５０との界面で全反射される。全反射された光ビームＬ１も、種々の反射角成分をもって反射される。この全反射された光ビームＬ１は、第２光学系５４Ｃを経て受光部５４Ｄで受光されて、各々光電変換され、光検出信号が信号処理部５４Ｅへ出力される。信号処理部５４Ｅでは、入力された光検出信号に基づいて所定の処理が行なわれ、測定領域Ｅ１の全反射減衰角のデータ（以下「全反射減衰角データＧ」という）が求められる。この全反射減衰角データＧが制御部６０へ出力される。
【００３３】
制御部６０は、バイオセンサー１０の全体を制御する機能を有し、図７に示すように、光源５４Ａ、信号処理部５４Ｅ、及び、バイオセンサー１０の図示しない駆動系と接続されている。制御部６０は、図８示すように、バスＢを介して互いに接続される、ＣＰＵ６０Ａ、ＲＯＭ６０Ｂ、ＲＡＭ６０Ｃ、メモリ６０Ｄ、及び、インターフェースＩ／Ｆ６０Ｅ、を有し、各種の情報を表示する表示部６２、各種の指示、情報を入力するための入力部６４、と接続されている。
【００３４】
メモリ６０Ｄには、バイオセンサー１０を制御するための各種プログラムや、各種データ、補正用データベースＨが記憶されている。
【００３５】
図９に示すように、補正用データベースＨは、２種類以上の固定化膜５０Ａの種類Ｋ１、Ｋ２、Ｋ３…毎に、各固定化膜５０Ａに対応する化合物Ａの参照データＮを記憶するものである。参照データＮは、固定化膜５０Ａへの化合物Ａの非特異吸着量を含んでおり、生理活性物質Ｄが固定化されていない固定化膜５０Ａ上にランニングバッファーを供給した際に求められる基準点と、化合物Ａを供給した際に求められる信号との変化量で示されている。例えば、補正用データベースＨでは、固定化膜５０Ａの種類がＫ１、化合物Ａの種類がＡ１、の場合の参照データＮは、○○ＲＵとされている。参照データＮによって、前述の全反射減衰角データＧが補正される。
【００３６】
次に、バイオセンサー１０での、測定について説明する。
【００３７】
センサースティック４０が測定部５６へ搬送され、入力部６４から測定開始の指示が測定対象とされる化合物及び使用されている固定化膜の種類と共に入力されると、制御部６０では、図１０に示す測定処理が実行される。
【００３８】
まず、ステップＳ１０で、入力された化合物に対応する参照データＮを補正用データベースＨから読み出す。次に、ステップＳ１２で、光源５４Ａへ光ビームＬの出射指示信号を出力する。これにより、光源５４Ａから光ビームＬが出射される。出射された光ビームＬは、第１光学系５４Ｂを介して光ビームＬ１となり、液体流路４５の測定領域Ｅ１へ入射される。また、ステップＳ１４で、受光部５４Ｄ及び信号処理部５４Ｅへ、作動指示信号を出力する。これにより、測定領域Ｅ１で全反射され第２光学系５４Ｃを経た光ビームＬ１は、受光部５４Ｄで受光され、受光された光は、光電変換されて光検出信号が信号処理部５４Ｅへ出力される。信号処理部５４Ｅでは、光検出信号に所定の処理が加えられ、全反射減衰角データＧが生成され、制御部６０へ出力される。
【００３９】
制御部６０では、ステップＳ１６で、所定時間経過したかどうかを判断し、所定時間の経過後、ステップＳ１８で、入力された全反射減衰角データＧをメモリ６０Ｄへ記憶する。そして、ステップＳ２０で、測定領域Ｅ１からの光検出信号により得られる全反射減衰角データＧを、読み出した参照データＮで補正して、生理活性物質Ｄと化合物溶液中の化合物Ａとの結合状態を示す結合状態データを生成する。そして、ステップＳ２２で、結合状態データを表示部６２へ出力する。これにより、化合物溶液供給前の所定時間毎の結合状態データが基準ラインとしてメモリ６０Ｄへ記憶されると共に、表示部６２へ表示される。
【００４０】
次に、ステップＳ２４で、化合物溶液供給がすでに行われているかどうかを判断し、未だ行われていない場合には、ステップＳ２５で、基準ライン取得のための所定時間が経過したかどうかを判断する。判断が肯定された場合には、ステップＳ２６へ進む。判断が否定された場合には、基準ラインのためのデータを取得すべく、ステップＳ１６へ戻る。
【００４１】
ステップＳ２６では、化合物溶液の供給が指示される。これにより、ヘッド２４のピペットチップＣＰＡにより液体流路４５へ化合物溶液が供給されると共に、液体流路４５に充填されていた保存液がピペットチップＣＰＢにより排出される。
【００４２】
ステップＳ２６での化合物溶液の供給後は、ステップＳ１６へ戻って、上記の処理を繰り返す。これにより、化合物溶液供給後の所定時間毎の結合状態データが基準ラインとしてメモリ６０Ｄへ記憶されると共に、表示部６２へ表示される。
了する。上記測定処理は、測定処理終了信号を受けるまで継続される。
【００４３】
上記測定処理によれば、補正用データベースＨに記憶されている参照データＮを用いて、全反射減衰データＧを補正するので、測定領域Ｅ１とは別に参照領域を用いて補正用のデータを取得する必要がなく、測定のスループット時間の短縮を行うことができる。また、参照領域測定のための構成が不要となるので、バイオセンサー１０の構成を簡単にすることができる。
【００４４】
なお、本実施形態では、２種類以上の固定化膜の各々に対して、２種類以上の化合物の参照データＮを記憶させておいたが、他に、バッファー液、化合物濃度の情報毎に細分化した参照データを記憶しておき、測定時における条件がより合致した参照データを補正用に用いることもできる。
【００４５】
また、本実施形態では、バイオセンサーとして、表面プラズモンセンサーを一例として説明したが、バイオセンサーとしては、表面プラズモンセンサーに限定されるものではない。その他の例えば、水晶発振子マイクロバランス（ＱＣＭ）測定技術、金のコロイド粒子から超微粒子までの機能化表面を使用した光学的測定技術など、あらゆるバイオセンサーを用いた場合における、参照領域で得られる参照データを予めデータベース化して記憶しておき、記憶された参照データにより、測定された測定データを補正するようにすることもできる。
【００４６】
また、全反射減衰を利用する他のバイオセンサーとしては、漏洩モード検出器をあげることができる。漏洩モードセンサは、誘電体と、この上に順に層設されたクラッド層と光導波層とによって構成された薄膜とからなり、この薄膜の一方の面がセンサ面となり、他方の面が光入射面となる。光入射面に全反射条件を満たすように光を入射させると、その一部が前記クラッド層を透過して前記光導波層に取り込まれる。そして、この光導波層において、導波モードが励起されると、前記光入射面における反射光が大きく減衰する。導波モードが励起される入射角は、表面プラズモン共鳴角と同様に、センサ面上の媒質の屈折率に応じて変化する。この反射光の減衰を検出することにより、前記センサ面上の反応を測定することができる。
【実施例】
【００４７】
次に、上記実施形態で説明した誘電体ブロック上への固定化膜の作成、及び、作成された固定化膜に対する化合物の非特異吸着量の測定について説明する。なお、固定化膜の作成、非特異吸着量の測定については、市販の表面プラズモンセンサーで行った。
【００４８】
（１）固定化膜の作成
（固定化膜１の作成）
金属膜を製膜した誘電体ブロック上に、以下の方法でヒドロゲル膜で構成される固定化膜１を作成した。
【００４９】
誘電体ブロックをＭｏｄｅｌ−２０８ＵＶ−オゾンクリーニングシステム（ＴＥＣＨＮＯＶＩＳＩＯＮ  ＩＮＣ．）で３０分間処理した後、エタノール／水（８０／２０）で溶解した１１−ヒドロキシ−１−ウンデカンチオール（Ａｌｄｒｉｃｈ社製）の５．０ｍＭ溶液を金属膜に接触するように添加し、４０℃で３０分、さらに２５℃で１６時間表面処理を行った。その後、エタノールで５回、エタノール／水混合溶媒で１回、水で５回洗浄を行った。
【００５０】
次に、１１−ヒドロキシ−１−ウンデカンチオールで被覆した表面に１０重量％のエピクロロヒドリン溶液（溶媒：０．４Ｍ水酸化ナトリウム及びジエチレングリコールジメチルエーテルの１：１混合溶液）を接触させ、２５℃の振盪インキュベーター中で４時間反応を進行させた。
【００５１】
その後表面をエタノールで２回、水で５回洗浄した。次に、２５重量％のデキストラン（Ｔ５００，Ｐｈａｒｍａｃｉａ）水溶液４０．５ｍｌに４．５ｍｌの１Ｍ水酸化ナトリウムを添加し、その溶液をエピクロロヒドリン処理表面上に接触させた。次に振盪インキュベーター中で２５℃で２０時間インキュベートした。表面を５０℃の水で１０回洗浄した。続いて、ブロモ酢酸３．５ｇを２７ｇの２Ｍ水酸化ナトリウム溶液に溶解した混合物を上記デキストラン処理表面に接触させて、２８℃の振盪インキュベーターで１６時間インキュベートした。表面を水で洗浄し、その後上述の手順を１回繰り返した。このサンプルを固定化膜１とした。
【００５２】
（固定化膜２の作成）
ブロモ酢酸処理を２８℃で１回のみ行うこと以外は、固定化膜１の方法でヒドロゲル膜を作成した。このサンプルを固定化膜２とした。固定化膜２は、固定化膜１と比較して、ＣＯＯＨ基の導入率がほぼ１／３である。
【００５３】
（固定化膜３の作成）
デキストランの濃度を１０重量％にすること以外は、固定化膜１の方法でヒドロゲル膜を作成した。このサンプルを固定化膜３とした。固定化膜３は、固定化膜１と比較して、デキストランの結合量がほぼ１／３である。
【００５４】
（２）非特異吸着量の測定
上記のように作成した固定化膜１、２、３を有する測定チップについて、以下の方法で、化合物Ａ〜Ｃの非特異吸着性を評価した。
【００５５】
下記の化合物Ａ、化合物Ｂを０．０１ｍＭになるようにＰＢＳバッファー（１０ｍＭ  リン酸ナトリウム，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，Ｔｗｅｅｎ２０  ０．００５％、ｐＨ７．４）／ＤＭＳＯ  ５％溶液に溶解する。ＳＰＲ装置に、ランニングバッファーとしてＰＢＳバッファー／ＤＭＳＯ  ５％溶液を流し、基準点をとる。次に、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ溶液を３分間流し、その後、ＰＢＳバッファー／ＤＭＳＯ  ５％溶液を３分間流す。基準点からのＳＰＲ信号の増加分（ＲＵ）を非特異吸着量とする。測定結果を表１に示す。
【００５６】
【化１】
2007093299.tif 000003
【００５７】
【化２】
2007093299.tif 000004
【００５８】
【化３】
2007093299.tif 000005
【００５９】
【表１】
2007093299.tif 000006
【００６０】
上記より、固定化膜、及び化合物の構成により、低分子化合物の非特異吸着量が変化する。また、吸着しやすさの序列も変化が見られる。したがって、固定化膜の種類毎に、低分子化合物の非特異吸着のデータベースが必要である。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】本実施形態のバイオセンサーの全体斜視図である。
【図２】本実施形態のセンサースティックの斜視図である。
【図３】本実施形態のセンサースティックの分解斜視図である。
【図４】本実施形態のセンサースティックの１の液体流路部分の断面図である。
【図５】本実施形態のセンサースティックの測定領域へ光ビームが入射している状態を示す図である。
【図６】本実施形態の液体供給部を構成するピペット部の側面図である。
【図７】本実施形態のバイオセンサーの光学測定部付近の概略図である。
【図８】本実施形態の制御部とその周辺の概略ブロック図である。
【図９】本実施形態の補正用データベースを示す図である。
【図１０】本実施形態の測定処理のフローチャートである。
【符号の説明】
【００６２】
１０   バイオセンサー
４０   センサースティック
５０Ａ  固定化膜
５０   金属膜
５４   光学測定部
６０Ｄ  メモリ
６０   制御部
６２   表示部
６４   入力部
Ｅ１   測定領域
Ｇ     全反射減衰データ
Ｈ     補正用データベース
Ｎ     参照データ
【図１】
2007093299.tif 000007
【図２】
2007093299.tif 000008
【図３】
2007093299.tif 000009
【図４】
2007093299.tif 000010
【図５】
2007093299.tif 000011
【図６】
2007093299.tif 000012
【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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