(57)【要約】【課題】慢性心臓疾患の処置を含む、殺菌性／透過性増大（ＢＰＩ）タンパク質産物についての新しい治療的用途を提供すること。【解決手段】本発明は、慢性心臓疾患（慢性うっ血性心不全、心筋症、先天性心臓欠損症など）を処置するためにＢＰＩタンパク質産物を投与する方法、ＢＰＩタンパク質と利尿剤、血管拡張剤、およびβ遮断剤からなる群より選択される第２の治療剤とを同時に投与する方法、ならびにそれを処置するための医薬の製造のためのＢＰＩタンパク質産物の使用を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
慢性心臓疾患を有するヒトを処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、１９９９年１月２２日に出願された米国仮出願第６０／１１６，７３６号（この開示は、本明細書中で参考として援用される）の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、一般的に慢性状態（例えば、うっ血性心不全および心筋症）を含むが、これに限定されない慢性心臓疾患の処置を含む、ＢＰＩタンパク質産物の新規の治療用途に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
慢性心臓疾患は、先進地域における死亡率および罹病率の主な原因である。慢性心臓疾患の１つの型は心筋症であり、これは、実際に、心臓疾患の通常の原因（例えば、冠状動脈アテローム性硬化症、弁機能不全および高血圧）に関連しない、心筋機能障害を特徴とする疾患の種々の群である。心筋症は、血流力学的に、拡張型心筋症、肥大性心筋症、拘束型心筋症および閉塞性心筋症に分類され、そして公知または特発性病因の心筋症であり得る。拡張型心筋症の病因としては、妊娠、薬物および毒物（例えば、アルコール、コカインおよび化学治療剤（ドキソルビジンおよびダウノルビシン、ダクチノマイシン、ダカルバジン、シクロホスファミド、マイトマイシンならびにアントラサイクリンを含む））、ならびに感染過程および自己免疫過程がある。肥大性心筋症は、原因の５０％より多くが、遺伝性であり、そして心室中隔の非対称な肥厚化（非対称性中隔肥大とも言われる）のパターンとともに通常、心筋性肥大（筋肉の肥厚化）の独特のパターンを有する。拘束性心筋症は通常、心筋層の浸潤性疾患（例えば、アミロイドーシス、ヘモクロマトーシスまたはグリコーゲン蓄積症）の産物であり、そしてまた特定の糖尿病患者において見られ得る。閉塞性心筋症は、心内膜心筋線維症および好酸球増多症候群に起因し得る。全ての心筋症の共通の合併症は、進行性うっ血性心不全である。
【０００４】
うっ血性心不全はしばしば、心臓が通常のフィリング圧（ｆｉｌｌｉｎｇ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）で末梢組織の代謝要求性を満たすのに十分な酸素付加された血液の供給を送達することが不能であることとして定義される。慢性うっ血性心不全は、冠状動脈疾患、心筋症、心筋炎、大動脈狭窄症、高血圧、特発性非対称性中隔肥大、大動脈の縮窄、大動脈弁逆流、僧帽弁逆流、左右短絡、筋肉肥大（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｅｄ  ｍｕｓｃｌｅ）、心膜タンポナーデ、梗塞性心外膜炎、僧帽弁狭窄症、左心房粘膜腫、左心房血栓、三房心および多くのその他の状態の結果として生じ得る。うっ血性心不全は、一般的に、不十分な酸素送達の他の原因（例えば、出血からの循環虚脱または重篤な容量損失の他の原因）から区別され、うっ血は、甲状腺中毒症、動静脈瘻、パジェット病および貧血のような状態において起る増加された末梢要求量に起因する流体過負荷および高心拍出量性心不全に起因する。うっ血性心不全のための治療は、代表的に、流体過負荷および心不全の根本の病因および症状を処置することに集中する。可逆的な原因の矯正後に持続する慢性うっ血性心不全は、利尿剤（チアジド（例えば、クロロチアジドおよびヒドロクロロチアジド）、ループ利尿剤（例えば、エタクリン酸、フロセミド、トルセミド（ｔｏｒｓｅｍｉｄｅ）およびブメタニド）、カリウム保持性剤（例えば、スピロノラクトン、トリアムテレンおよびアミロライド）および他の利尿剤（例えば、メトラゾンおよび他のキナゾリンスルホンアミド））、血管拡張剤（ニトログリセリン、イソソルビドジニトレート、ヒドララジン、ニトロプルシドナトリウム、プロスタサイクリン、カプトプリル、エナラプリル、リジノプリル、キナプリル（ｑｕｉｎａｐｒｉｌ）およびロサルタンを含む）、陽性強心剤（例えば、ジギタリスまたはジゴキシン）、時々β遮断剤、またはこれらの処置の組み合わせを用いて処置される。
【０００５】
最近の研究は、プロ炎症性サイトカインの増加が、種々の心臓疾患（うっ血性心不全、心筋症、および心筋炎を含む）において見られることを示す（Ｈｅｇｅｗｉｓｃｈ  Ｓら、Ｌａｎｃｅｔ  １９９０；２：２９４−２９５；Ｌｅｖｉｎｅ  Ｂら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９０；３２３（４）：２３６−２４１；Ｍａｎｎ  ＤＬ、ら、Ｃｈｅｓｔ  １９９４；１０５：８９７−９０４；およびＧｉｖｅｒｔｚ  ＭＭ、ら、Ｌａｎｃｅｔ  １９９８；３５２：３４−３８）。例えば、サイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ）は、ヒト心筋細胞により合成され、そしてＴＮＦ発現のレベルは、患者における心臓機能不全の程度に相関する（Ｔｏｒｒｅ−Ａｍｉｏｎｅ  Ｇら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９６；２７：１２０１−１２０６；Ｔｏｒｒｅ−Ａｍｉｏｎｅ  Ｇ，ＲＤ、ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９５；９２：１４８７−１４９３；およびＴｏｒｒｅ−Ａｍｉｏｎｅ  Ｇら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９６；９３：７０４−７１１）。動物において、心臓によるＴＮＦの合成は、心筋症および致死の心不全を引き起こすのにそれ自体で十分である（Ｂｒｙａｎｔ  Ｄ、ら、Ｃｉｒｃ．１９９８；９７：１７５−１８３およびＫｕｂｏｔａ  Ｔ、ら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９７；３４６Ａ（要約））。さらに、早期のヒト治験により、ＴＮＦの拮抗が、ＮＹＨＡクラスＩＩＩ心不全または特発性拡張型心筋症を有するヒトにおいて心不全を改善することが実証されている（Ｄｅｓｗａｌら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９６：Ｉ−３２３（１９９７）；およびＳｌｉｗａら、Ｌａｎｃｅｔ  ３５１：１０９１−１０９３（１９９８））。しかし、サイトカイン分泌のための主要な刺激は、未知のままである。
【０００６】
細菌性内毒素、またはリポ多糖類（ＬＰＳ）は、敗血症中のＴＮＦ産生の主要な誘導物質である。心臓疾患に関して、内毒素の役割は、心肺バイパスとの関連において主に試験され、内毒素が、体外回路中に存在し得るか、または非拍動性の低流量灌流の後に腸を越えて転移され得るという仮説によって導かれた（非特許文献１および非特許文献２）。これらの研究は、大部分の患者において心肺バイパス中の一過性の低レベルの内毒素血症は、心肺バイパスの完成後に迅速に消炎されることを実証した（Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｌ，Ｊ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｓｕｒｇ  １９９０；１００：７７７−７８０；Ｃａｓｅｙ  ＷＦ，Ｃｉｒｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１９９２；２０（８）：１０９０−１０９６；Ｋｈａｂａｒ  ＫＳら、Ｃｌｉｎ
Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  １９９７；８５：９７−１０３；Ｊａｎｓｅｎ  ＮＪ，Ａｎｎ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｕｒｇ  １９９２；５４：７４４−７４７）。Ｂｅｎｎｅｔｔ−Ｇｕｅｒｒｅｒｏ  Ｅら、ＪＡＭＡ  １９９７；２７７：６４６−６５０は、手術前の低いレベルの抗内毒素抗体が、手術後の合併症のリスクの増大に関係することを報告し、そしてこの違いが、内毒素に対する免疫が乏しいことに起因すると仮説した。
【０００７】
研究者は、これまで、心臓疾患を有する大部分の患者における持続性の内毒素血症を実証できなかったか、または実証することを試みなかった（非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６）。ＬＢＰまたは抗内毒素抗体（長期間の内毒素の曝露の指示物質）のレベルの上昇と関連しない水腫状性の慢性うっ血性心不全を有する成体における血漿内毒素レベルの上昇を報告した、Ｎｉｅｂａｕｅｒ  Ｊ，Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１９９８；１９：１７４もまた参照のこと。
【０００８】
ＢＰＩは、侵襲性微生物に対する防御において必須な血球である哺乳動物多形核白血球（ＰＭＮまたは好中球）の顆粒から単離されたタンパク質である。ヒトＢＰＩタンパク質は、イオン交換クロマトグラフィー［Ｅｌｓｂａｃｈ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５４：１１０００（１９７９）］か、またはＥ．ｃｏｌｉアフィニティークロマトグラフィー［Ｗｅｉｓｓ、ら、Ｂｌｏｏｄ，６９：６５２（１９８７）］のいずれかと組み合わせた酸抽出によりＰＭＮから単離された。このような様式において得られたＢＰＩは、本明細書中で天然ＢＰＩとわれ、そしてグラム陰性細菌の広域スペクトルに対して殺菌性の効力を有することが示されている。ヒトＢＰＩの分子量は、約５５，０００ダルトン（５５ｋＤ）である。このヒトＢＰＩタンパク質全体のアミノ酸配列およびこのタンパク質をコードするＤＮＡの核酸配列は、本明細書中で参考として援用されるＧｒａｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６４：９５０５（１９８９）の図１に報告されている。このＧｒａｙらのアミ酸配列は、本明細書中で配列番号１に記載される。米国特許第５，１９８，５４１号は、ＢＰＩタンパク質（ＢＰＩホロタンパク質およびＢＰＩのフラグメントを含む）をコードする組換え遺伝子およびＢＰＩタンパク質の発現のための方法を開示する。
【０００９】
ＢＰＩは、強力なカチオンタンパク質である。ＢＰＩのＮ末端側半分は、高い正味の正電荷からなり；この分子のＣ末端側半分は、−３の正味の電荷を有する［ＥｌｓｂａｃｈおよびＷｅｉｓｓ（１９８１）、（前出）］。約２５ｋＤの分子量を有するＢＰＩのタンパク質分解のＮ末端フラグメントは、天然由来の５５ｋＤヒトＢＰＩホロタンパク質の本質的に全ての抗菌効果を有する［Ｏｏｉら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．，２６２：１４８９１−１４８９４（１９８７）］。Ｎ末端部分とは対照的に、単離されたヒトＢＰＩタンパク質のＣ末端領域は、グラム陰性生物に対してわずかに検出可能な抗菌活性のみを示す［Ｏｏｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７４：６４９（１９９１）］。約２３ｋＤのＮ末端ＢＰＩフラグメント（「ｒＢＰＩ23」といわれる）は、組換え手段により産生され、そしてまた、グラム陰性生物に対して抗菌活性を保持する［Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０：４７５４−４７６１（１９９２）］。ＢＰＩのＮ末端アナログｒＢＰＩ21は、Ｈｏｒｗｉｔｚら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，８：２８−４０（１９９６）において記載されるように産生された。
【００１０】
ＢＰＩの殺菌性効果は、当初は、グラム陰性種に対して高度に特異的であると報告された（例えば、ＥｌｓｂａｃｈおよびＷｅｉｓｓ，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ，Ｇａｌｌｉｎら（編）、第３０章、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｔｄ．（１９９２））。ＢＰＩがグラム陰性細菌を殺す正確な機構は、まだ完全に解明されていないが、ＢＰＩが、まずカチオンＢＰＩタンパク質とＬＰＳの負に荷電した部位との間の静電相互作用および疎水性相互作用を通して細菌の表面に結合するはずであると考えられる。感受性のグラム陰性細菌において、ＢＰＩ結合が、ＬＰＳ構造を崩壊し、リン脂質およびペプチドグリカンを分解する細菌の酵素の活性化を導き、細胞の外膜の透過性を変化し、そして最終的に細胞死を導く事象を開始すると考えられる［ＥｌｓｂａｃｈおよびＷｅｉｓｓ（１９９２）、（前出）］。ＬＰＳが刺激する強力な炎症性応答（すなわち、最終的に不可逆な内毒素ショックを生じ得る、宿主炎症性細胞による媒介物質の放出）に起因して、ＬＰＳは、「内毒素」といわれてきた。ＢＰＩは、ＬＰＳの最も毒性でかつ最も生物学的に活性な成分であると報告されるリピドＡに結合する。
【００１１】
ＢＰＩタンパク質産物は、広範な種々の有益な活性を有する。ＢＰＩタンパク質産物は、米国特許第５，１９８，５４１号および同第５，５２３，２８８号（この両方は、本明細書中で参考として援用される）において記載されるようにグラム陰性細菌に対して殺菌性である。国際公開番号ＷＯ９４／２０１３０（本明細書中で参考として援用される）は、グラム陰性細菌属Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ由来の種による感染（例えば、胃腸の感染）に罹患している被験体をＢＰＩタンパク質産物を用いて処置するための方法を提案する。ＢＰＩタンパク質産物はまた、米国特許第５，５２３，２８８号および国際公開番号ＷＯ９５／０８３４４（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１１２５５）（本明細書中で参考として援用される）に記載されるように、グラム陰性細菌感染における抗体療法の有効性を強化する。ＢＰＩタンパク質産物はまた、グラム陽性細菌およびマイコプラズマに対して殺菌性であり、そして米国特許第５，５７８，５７２号および同第５，７８３，５６１号ならびに国際公開番号ＷＯ９５／１９１８０（ＰＣＴ／ＵＳ９５／００６５６）（本明細書中で参考として援用される）において記載されたように、グラム陽性細菌の感染における抗生物質の有効性を強化する。ＢＰＩタンパク質産物は、米国特許第５，６２７，１５３号および国際公開番号ＷＯ９５／１９１７９（ＰＣＴ／ＵＳ９５／００４９８）において記載されるように、そしてさらに米国特許第５，８５８，９７４号（これは、１９９４年７月２０日に出願された米国出願第０８／５０４，８４１号、ならびに対応する国際公開番号ＷＯ９６／０８５０９（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０９２６２）および同ＷＯ９７／０４００８（ＰＣＴ／ＵＳ９６／０３８４５）の一部継続出願である）において抗真菌ペプチドについて記載されるように、抗真菌活性を示し、そして他の抗真菌剤の活性を強化する（これらは全て、本明細書中に参考として援用される）。ＢＰＩタンパク質産物は、米国特許第５，６４６，１１４号および国際公開番号ＷＯ９６／０１６４７（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０８６２４）（本明細書中で参考として援用される）に記載されるように、抗原生生物活性を示す。ＢＰＩタンパク質産物は、１９９６年８月９日に出願された共有に係る同時係属中の米国出願第０８／６９４，８４３号およびＷＯ  ９８／０６４１５（ＰＣＴ／ＵＳ９７／１３８１０）（本明細書中で参考として援用される）において記載されるように、抗クラミジア活性を示す。最後に、ＢＰＩタンパク質産物は、１９９６年４月１日に出願された共有に係る同時係属中の米国出願第０８／６２６，６４６号（これは、１９９４年８月１４日に出願された米国出願第０８／２８５，８０３号の一部継続出願であり、これは、１９９３年３月１２日に出願された米国出願第０８／０３１，１４５号および対応の国際出願  ＷＯ９４／２０１２９（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０２４６３）の一部継続出願である）（これら全ては、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように抗マイコバクテリア活性を示す。
【００１２】
ＴＮＦ、ＩＬ−６および内毒素に対する効果を含む循環中の内毒素を有するヒトにおけるＢＰＩタンパク質産物の効果は、米国特許第５，６４３，８７５号（これは、本明細書中で参考として援用される）に記載される。
【００１３】
ＢＰＩタンパク質産物はまた、特定の疾患状態（例えば、ヒトにおける髄膜炎菌血症（１９９６年５月１０日に出願された共有に係る同時係属中の米国出願第０８／６４４，２８７号、ならびに１９９７年９月１０日に出願された継続米国出願第０８／９２７，４３７号および国際公開番号ＷＯ９７／４２９６６（ＰＣＴ／ＵＳ９７／０８０１６）（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように）、ヒトにおける出血性外傷（米国特許第５，７５６，４６４号、１９９７年５月２３日に出願された米国出願第０８／８６２，７８５号および対応する国際公開番号ＷＯ９７／４４０５６（ＰＣＴ／ＵＳ９７／０８９４１）（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように）、火傷（米国特許第５，４９４，８９６号（これは、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように）、虚血／再灌流障害（米国特許第５，５７８，５６８号（本明細書中に参考として援用される）に記載されるように）および肝臓切除（１９９６年１月３日に出願された共有に係る同時係属中である米国出願第０８／５８２，２３０号（これは、１９９４年１０月５日に出願された米国出願第０８／３１８，３５７号の継続出願であり、これは、１９９３年１０月５日に出願された米国出願第０８／１３２，５１０号および対応する国際公開番号ＷＯ９５／１０２９７（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１１４０４）の一部係属出願である）（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように）の処置に対して有用である。
【００１４】
ＢＰＩタンパク質産物はまた、米国特許第５，３４８，９４２号（本明細書中で参考として援用される）に記載されるように、外因性ヘパリンの抗凝固活性を中和して、そして米国特許第５，６３９，７２７号、同第５，８０７，８１８号および同第５，８３７，６７８号および国際公開番号ＷＯ９４／２０１２８（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０２４０１）（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように、慢性炎症疾患（例えば、慢性関節リウマチおよび反応性関節炎）を処置するため、ならびに新脈管形成を阻害するため、ならびに新脈管形成関連障害（悪性腫瘍、眼網膜症および子宮内膜症を含む）を処置するために有用である。
【００１５】
ＢＰＩタンパク質産物はまた、米国特許第５，７４１，７７９号ならびに１９９８年４月２０日に出願された米国出願第０９／０６３，４６５号および対応する国際公開番号ＷＯ９７／４２９６７（ＰＣＴ／ＵＳ７／０８０１７）（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）に記載されるように、アンチトロンビン法において有用である。
【非特許文献１】Ｒｉｄｄｉｎｇｔｏｎ  ＤＷ、ら、ＪＡＭＡ  １９９６；２７５：１００７−１０１２
【非特許文献２】Ｗａｎ  Ｓ、ら、Ｃｈｅｓｔ  １９９７；１１２：６７６−６９２
【非特許文献３】Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｌ，Ｊ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｓｕｒｇ  １９９０；１００：７７７−７８０
【非特許文献４】Ｃａｓｅｙ  ＷＦ，Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１９９２；２０（８）：１０９０−１０９６
【非特許文献５】Ｋｈａｂａｒ  ＫＳ，ら、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ  １９９７；８５：９７−１０３
【非特許文献６】Ｊａｎｓｅｎ  ＮＪ，Ａｎｎ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｕｒｇ  １９９２；５４：７４４−７４７
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
本発明は、例えば以下の手段を提供する。
（項目１）  慢性心臓疾患を有するヒトを処置する方法であって、治療的有効量の殺菌性／透過性増大（ＢＰＩ）タンパク質産物をそのヒトに投与する工程を包含する、方法。
（項目２）  上記ＢＰＩタンパク質産物がｒＢＰＩ21である、項目１に記載の方法。
（項目３）  上記慢性心臓疾患が慢性うっ血性心不全である、項目１に記載の方法。
（項目４）  上記慢性心臓疾患が心筋症である、項目１に記載の方法。
（項目５）  上記慢性心臓疾患が先天性心臓欠損症である、項目１に記載の方法。
（項目６）  上記ヒトが、循環中のＬＰＳのレベルの上昇を示す、項目１に記載の方法。
（項目７）  上記ヒトが、循環中のＬＢＰのレベルの上昇を示す、項目１に記載の方法。
（項目８）  上記ヒトが、循環中のＬＰＳおよび循環中のＬＢＰのレベルの上昇を示す、項目１に記載の方法。
（項目９）  上記慢性心臓疾患状態を処置するために第２の治療剤を、同時に投与する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
（項目１０）  上記慢性心臓疾患状態が、慢性うっ血性心不全であり、そして上記第２の治療剤が、利尿剤、陽性強心剤、血管拡張剤、およびβ遮断剤からなる群より選択される、項目９に記載の方法。
（項目１１）  慢性心臓疾患状態の処置のための医薬の製造のための、ＢＰＩタンパク質産物の使用。
（項目１２）  上記慢性心臓疾患が慢性うっ血性心不全である、項目１１に記載の使用。
（項目１３）  上記慢性心臓疾患が心筋症である、項目１１に記載の使用。
（項目１４）  上記慢性心臓疾患が先天性心臓欠損症である、項目１１に記載の使用。
（項目１５）  ヒトが循環中のＬＰＳおよび循環中のＬＢＰのレベルの上昇を示す、項目１１に記載の使用。
（項目１６）  慢性心臓疾患状態に罹患するヒトを処置するための医薬の調製のためのＢＰＩタンパク質産物の使用であって、そのヒトが循環中のＬＰＳのレベルの上昇を示す、使用。
（項目１７）  慢性心臓疾患状態に罹患するヒトを処置するために医薬の調製のためのＢＰＩタンパク質産物の使用であって、そのヒトが循環中のＬＢＰのレベルの上昇を示す、使用。
（項目１８）  慢性心臓疾患状態に罹患するヒトを処置するために医薬の調製のためのＢＰＩタンパク質産物の使用であって、そのヒトが循環中のＬＰＳおよび循環中のＬＢＰのレベルの上昇を示す、使用。
（項目１９）  慢性心臓疾患状態を処置するために別の治療剤とともに同時に投与するための医薬の調製のための、ＢＰＩタンパク質産物の使用。
【００１７】
本発明は、慢性心臓疾患を有する被験体の処置を含むＢＰＩタンパク質産物についての新規の治療用途を提供する。本発明に従うＢＰＩタンパク質産物の使用は、ヒトにおける慢性心臓疾患の状態または状況、特に（血漿または血清において）循環中のＬＰＳおよび循環中のＬＢＰのレベルの上昇を示す慢性心臓疾患を有するヒトの予防処置または治療処置のために特に考慮される。慢性心臓疾患の状態または状況としては、心筋症、慢性うっ血性心不全、および先天性心臓疾患が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
本明細書中で使用される場合、慢性うっ血性心不全は、長期間のうっ血性心不全（すなわち、２週間より長く、または３週間より長く、または１ヶ月より長く、または２ヶ月より長く、または３ヶ月より長く持続するうっ血性心不全）、可逆性の原因の矯正後に持続するうっ血性心不全、および急性心筋梗塞または急性の感染プロセスに直接関連しないうっ血性心不全が挙げられる。
【００１９】
うっ血性心不全またはチアノーゼ性心臓疾患を生じ得る先天性心臓疾患としては、肺動脈弁閉鎖症、総異常肺静脈還流（ｔｏｔａｌ  ａｎｏｍａｌｏｕｓ  ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｖｅｎｏｕｓ  ｒｅｔｕｒｎ）、心室中隔欠損症、左心室発育不全症候群、両大血管右室起始症、右肺動脈狭窄、断続性大動脈弓（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｅｄ  ａｏｒｔｉｃ  ａｒｃｈ）、エブスタイン奇形、ファロー四徴症、房室管、大動脈および総動脈幹の転位症が挙げられる。
【００２０】
ＢＰＩタンパク質産物の投与は、慢性心臓疾患状態を処置するための他の公知の治療剤の同時投与を伴ない得ることが考慮される。例えば、うっ血性心不全を処置するための当該分野において公知である薬剤としては、利尿剤（チアジド（例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジドおよびメトラゾン）、ループ利尿剤（例えば、エタクリン酸、フロセミド、トルセミドおよびブメタニド）、ならびにそれらの同属種）、カリウム保持性剤（例えば、スピノロラクトン、カンレノン（ｃａｎｒｅｎｏｎｅ）、トリアムテレンおよびアミロライド）ならびに他の利尿剤（例えば、メトラゾンおよび他のキナゾリンスルホンアミド）を含む）、血管拡張剤（ニトロ血管拡張剤（例えば、ニトログリセリン、イソソルビドジニトレート、およびニトロプルシドナトリウム）、ヒドララジン、プロスタサイクリン、ＡＣＥインヒビター（例えば、カプトプリル、エナラプリル、リジノプリル、キナプリルおよびラミプリル（ｒａｍｉｐｒｉｌ））およびアンギオテンシンＩＩアンタゴニスト（例えば、ロオサルタン）を含む）、陽性強心剤（例えば、強心配糖体（ジギタリスまたはジゴキシンを含む）、ホスホジエステラーゼインヒビター（例えば、短期間の支持のために主に有用である、アムリノンおよびミルリノン）、時々βアドレナリン作用性レセプターアンタゴニスト（β遮断剤（例えば、プロパノロール、メトプロロール、アテノロール、ピンドロール、アセブトロール、ラベタロール、カルベディロールおよびセリプロロール））またはこれらの処置の組み合わせが挙げられる（例えば、本明細書中で参考として援用されるＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎ，第３４章、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９６）を参照のこと）。
【００２１】
本発明はまた、慢性心臓疾患状態の予防処置または治療処置のための医薬の調製におけるＢＰＩタンパク質産物の使用を考慮する。
【００２２】
多くのさらなる局面および本発明の利点は、本発明の現在の好ましい実施形態を記載する、以下の本発明の詳細な説明の考慮して当業者に明らかとなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
（発明の詳細な説明）
本発明は、慢性心臓疾患の処置を含むＢＰＩタンパク質産物、特にＢＰＩ由来ペプチドに関する新規の治療用途を提供する。本明細書中で用いられる場合、「処置」は、予防処置および治療処置の両方を包含する。本発明は、慢性心臓疾患に罹患する被験体の処置のための方法を考慮し、この方法は、内毒素血症のネガティブな生理学的効果を緩和するために、これらの患者への治療的有効量の殺菌性／透過性増大（ＢＰＩ）タンパク質のタンパク質産物の投与を包含する。
【００２４】
本発明は、慢性心臓疾患に罹患する被験体の実質的な割合が、手術の前の慢性心臓疾患に関連する内毒素血症の証拠を示すという発見、およびこの内毒素血症が、これらの被験体に対するより思わしくない予後に相関があるという発見に基づく。従って、本発明の１つの基礎は、内毒素血症が、慢性心臓疾患の単なる副作用ではなく、慢性心臓疾患の病理に有意に寄与する因子であるという予測である。
【００２５】
ＢＰＩタンパク質産物の治療的用途は、心筋梗塞、出血からの循環虚脱などのような急性心臓疾患状態とは区別されるような慢性心臓疾患に罹患するヒトを含む哺乳動物の処置を特に考慮する。
【００２６】
本発明の別の局面は、心肺バイパス中および心肺バイパス後の内毒素血症の重篤性が、外科手術後のより思わしくない結果と相関することに基づく、心肺バイパスを受ける患者の処置である。従って、ＢＰＩタンパク質産物での処置は、外科手術後の結果を改善することが推測される。
【００２７】
本明細書中で用いる場合「ＢＰＩタンパク質産物」としては、天然に、および組換え的に産生されたＢＰＩタンパク質；ＢＰＩタンパク質の、天然の、合成の、および組換えの生物学的に活性であるポリペプチドフラグメント；ハイブリッド融合タンパク質およびダイマーを含む、ＢＰＩタンパク質またはそのフラグメントの生物学的に活性なポリペプチド改変体；システイン置換アナログを含む、ＢＰＩタンパク質またはそのフラグメントもしくは改変体の生物学的に活性なポリペプチドアナログ；ならびにＢＰＩ由来ペプチドが挙げられる。本発明に従う投与されるＢＰＩタンパク質産物は、当該分野において公知の任意の手段により生成および／または単離され得る。米国特許第５，１９８，５４１号（その開示は、本明細書中で参考として援用される）は、組換えＢＰＩホロタンパク質（ｒＢＰＩといわれる）およびＢＰＩの組換えフラグメントを含むＢＰＩタンパク質をコードする組換え遺伝子およびそれらの発現方法を開示する。米国特許第５，４３９，８０７号および対応する国際公開番号ＷＯ９３／２３５４０（ＰＣＴ／ＵＳ９３／０４７５２）（全て本明細書中で参考として援用される）は、培養物中で遺伝的に形質転換された哺乳動物宿主細胞内で発現され、そしてこれらの細胞から分泌された組換えＢＰＩタンパク質産物の精製のための新規の方法を開示し、そして安定で均一な薬学的調製物に組み込むために適切な大量の組換えＢＰＩ産物を産生し得る方法を開示する。
【００２８】
ＢＰＩの生物学的に活性なフラグメント（ＢＰＩフラグメント）は、ホロタンパク質のアミノ末端アミノ酸、内部アミノ酸、および／またはカルボキシ末端アミノ酸を欠失するフラグメント分子を除いて、天然ヒトＢＰＩホロタンパク質と同一かまたは同類のアミノ酸配列を有する生物学的に活性な分子を含む。このようなフラグメントの非限定的な例としては、Ｏｏｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７４：６４９（１９９１）に記載される、約２５ｋＤの天然ヒトＢＰＩのＮ末端フラグメントおよびＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０：４７５４−４７６１（１９９２）に記載される天然ヒトＢＰＩのＮ末端アミノ酸１〜ほぼ１９３から１９９をコードするＤＮＡの組換え発現産物（ｒＢＰＩ23といわれる）が挙げられる。この刊行物において、発現ベクターは、１５１位のバリンがＧＴＣではなくＧＴＧにより特定され、そして残基１８５がリシン（ＡＡＧにより特定される）ではなくグルタミン酸（ＧＡＧにより特定される）であることを除いて、Ｇｒａｙら（前出）の図１に記載されたような、成熟ヒトＢＰＩのＮ末端の３１残基シグナル配列および最初の１９９アミノ酸を有する組換え発現産物（ｒＢＰＩ23）をコードするＤＮＡの供給源として用いられた。ｒＢＰＩ23について記載された例外および残基４１７が、バリン（ＧＴＴにより特定される）ではなくアラニン（ＧＣＴにより特定される）であるという例外を有する、Ｇｒａｙら（前出）の図１に記載された配列（配列番号１および２）を有する、組換えホロタンパク質（ｒＢＰＩ）もまた産生された。ＢＰＩの残基１０〜１９３からなるフラグメントは、１９９８年６月１９日に出願された共有に係る同時係属中の米国出願第０９／０９９，７２５号（本明細書中で参考として援用される）に記載されている。他の例としては、米国特許第５，４４７，９１３号および対応する国際公開番号ＷＯ９５／２４２０９（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０３１２５）（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）に記載されるような、ＢＰＩフラグメントの二量体形態が挙げられる。
【００２９】
ＢＰＩの生物学的に活性な改変体（ＢＰＩ改変体）としては、組換えハイブリッド融合タンパク質（ＢＰＩホロタンパク質またはその生物学的に活性なフラグメント、および少なくとも１つの他のポリペプチドの少なくとも一部分を含有する）ならびにＢＰＩ改変体の二量体形態が挙げられるがこれらに限定されない。このようなハイブリッド融合タンパク質および二量体形態の例は、米国特許第５，６４３，５７０号および対応する国際公開番号ＷＯ９３／２３４３４（ＰＣＴ／ＵＳ９３／０４７５４）（これらは全て、本明細書中で参考として援用される）に記載され、そして、アミノ末端にＢＰＩタンパク質またはその生物学的に活性なフラグメントを含有し、かつカルボキシ末端に免疫グロブリン重鎖またはその対立遺伝子改変体の少なくとも１つの定常ドメインを含有する、ハイブリッド融合タンパク質を含む。
【００３０】
ＢＰＩの生物学的に活性なアナログ（ＢＰＩアナログ）としては、１つ以上のアミノ酸残基が異なるアミノ酸で置換されたＢＰＩタンパク質産物が挙げられるがこれに限定されない。例えば、米国特許第５，４２０，０１９号および対応する国際公開番号ＷＯ９４／１８３２３（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３５）（これらは全て、本明細書中で参考として援用される）は、システイン残基が異なるアミノ酸で置換された、ＢＰＩのポリペプチドアナログおよびＢＰＩフラグメントを開示する。本出願によって記載される安定なＢＰＩタンパク質産物は、ＢＰＩホロタンパク質のＮ末端アミノ酸のアミノ酸１からほぼ１９３または１９９までをコードするＤＮＡの発現産物であるが、ここで残基番号１３２のシステインがアラニンで置換されており、そしてｒＢＰＩ21ΔｃｙｓまたはｒＢＰＩ21と称される。ＢＰＩのこのＮ末端アナログ（ｒＢＰＩ21）の産生は、Ｈｏｒｗｉｔｚら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，８：２８〜４０（１９９６）に記載された。同様に、１３２位のシステインがアラニンで置換された、ＢＰＩの残基１０〜１９３からなるフラグメント（「ｒＢＰＩ（１０〜１９３）Ｃ１３２Ａ」または「ｒＢＰＩ（１０〜１９３）ａｌａ132」と称される）が、１９９８年６月１９日に出願された、共有に係る、同時係属中の米国出願第０９／０９９，７２５号に記載された。他の例としては、ＢＰＩアナログの二量体形態；例えば、米国特許第５，４４７，９１３号および対応する国際出願番号ＷＯ９５／２４２０９（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０３１２５）（これらの全ては、本明細書中で参考として援用される）が挙げられる。
【００３１】
本発明の方法に従って有用な他のＢＰＩタンパク質産物は、以下に記載されるような合成手段または組換え手段によって産生された、ＢＰＩ由来かまたはＢＰＩに基づいたペプチド（ＢＰＩ誘導ペプチド）である：１９９６年３月２１日に出願された米国出願第０８／６２１，２５９号に対応する国際公開番号ＷＯ９７／０４００８（ＰＣＴ／ＵＳ９６／０３８４５）、および米国特許第５，８５８，９７４号に対応する国際公開番号ＷＯ９６／０８５０９（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０９２６２）、および米国特許第５，６５２，３３２号に対応する国際公開番号ＷＯ９５／１９３７２（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１０４２７）、および米国特許第５，７３３，８７２号（１９９４年１月１４日に出願された米国出願第０８／１８３，２２２号の一部継続出願であり、これはまた１９９３年７月１５日に出願された米国出願第０８／０９３，２０２号（国際公開番号ＷＯ９４／２０１２８（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０２４０１）に対応する）の一部継続出願であり、これはまた米国特許第５，３４８，９４２号の一部継続出願である）の継続出願である、米国特許第５，７６３，５６７号に対応する国際公開番号ＷＯ９４／２０５３２（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０２４６５）、ならびに米国特許第５，８５１，８０２号に対応する国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９７／０５２８７（これら全ての開示は、本明細書中で参考として援用される）。
【００３２】
現在、好ましいＢＰＩタンパク質産物としては、組換えによって産生される、ＢＰＩのＮ末端アナログおよびフラグメント、特に約２０から２５ｋＤの分子量を有するもの（例えば、ｒＢＰＩ21またはｒＢＰＩ23、ｒＢＰＩ（１０〜１９３）Ｃ１３２Ａ（ｒＢＰＩ（１０〜１９３）ａｌａ132））、これらＮ末端タンパク質の二量体形態（例えば、ＢＰＩ42二量体）、およびＢＰＩ誘導タンパク質が挙げられる。
【００３３】
ＢＰＩタンパク質産物の投与は、好ましくは、ＢＰＩタンパク質産物および薬学的に受容可能な、希釈剤、アジュバンド、またはキャリアを含有する薬学的組成物を用いて達成される。このＢＰＩタンパク質産物は、公知の界面活性剤または他の治療剤を、伴わずにかまたはそれらと組み合わせて、投与され得る。ＢＰＩタンパク質産物（例えば、ｒＢＰＩ23）を含む安定な薬学的組成物は、そのＢＰＩタンパク質産物を、０．１重量％のポロキサマー１８８（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ
Ｆ−６８、ＢＡＳＦ  Ｗｙａｎｄｏｔｔｅ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）および０．００２重量％のポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０、ＩＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａｓ  Ｉｎｃ．、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）を含有するクエン酸緩衝化生理食塩水（５ｍＭまたは２０ｍＭ  クエン酸、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ５．０）中に、１ｍｇ／ｍｌの濃度で含有する。ＢＰＩタンパク質産物（例えば、ｒＢＰＩ21）を含む別の安定な薬学的組成物は、そのＢＰＩタンパク質産物を、５ｍＭ  クエン酸塩、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．２％  ポロキサマー１８８、および０．００２％ポリソルベート８０中に２ｍｇ／ｍｌの濃度で含有する。このような好ましい組み合わせは、米国特許第５，４８８，０３４号および同第５，６９６，０９０号、ならびに対応する国際公開番号ＷＯ９４／１７８１９（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３９）に記載され、これら全ての開示は、本明細書中で参考として援用される。１９９６年１月１２日に出願された米国出願第０８／５８６，１３３号（１９９５年９月１９日に出願された米国出願第０８／５３０，５９９号の一部継続出願であり、これはまた、１９９５年１月１３日に出願された米国出願第０８／３７２，１０４号の一部継続出願である）、および対応する国際公開番号ＷＯ９６／２１４３６（ＰＣＴ／ＵＳ９６／０１０９５）に記載されるように（これらの全ては、本明細書中において参考として援用される）、増加した活性を有するＢＰＩタンパク質産物の他のポロキサマー処方物が利用され得る。
【００３４】
ＢＰＩタンパク質産物を含有する治療組成物は、全身にかまたは局所に投与され得る。全身の投与の経路としては、経口、静脈内、筋肉内、または皮下注射（長期放出のための蓄積注射を含む）、眼内および眼球後、鞘内、腹腔内（例えば、腹腔内洗浄による）、肺内（粉末薬剤、あるいはエーロゾル適用されたかまたは霧状にされた薬物溶液を用いて）あるいは経皮の経路が挙げられる。
【００３５】
非経口で与えられる場合、ＢＰＩタンパク質産物組成物は、一般に１日当たり１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で、好ましくは１日当たり０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ／日〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で、そして最も好ましくは２〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の用量で注入される。この処置は、１日当たり同じかまたは増減された用量での、例えば１〜３日間、そして術者によって決定されるようにさらに、継続的な注入あるいは断続的な注射または注入によって、継続し得る。静脈内に投与される場合、ＢＰＩタンパク質産物は、好ましくは、最初の手短な注入に続く継続的な注入によって投与される。好ましい静脈内の処方計画は、１〜２０ｍｇ／ｋｇのＢＰＩタンパク質産物の手短な静脈内注入に続く１〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の用量での継続的な静脈内注入（１週間までの間、継続する）である。特に好ましい静脈内の投薬上レジメンは、１〜４ｍｇ／ｋｇの最初の手短な静脈内注入に続く１〜４ｍｇ／ｋｇ／日の用量での継続的な静脈内注入（７２時間までの間、継続する）である。
【００３６】
当業者は、優れた医療行為および個々の患者の臨床症状によって決定されるような、ＢＰＩタンパク質産物を含有する治療組成物についての有効な投薬量および投与レジメンを、容易に最適化し得る。
【００３７】
「即時投与」または「同時投与」は、本明細書中で使用される場合、共にもしくは組み合わせて、一緒に、または互いに前後して、薬剤を投与することを含む。このＢＰＩタンパク質産物および第２薬剤は、異なる経路により投与され得る。例えば、第２薬剤が、静脈内で、筋肉内で、皮下で、経口で、または腹腔内で投与される一方で、このＢＰＩタンパク質産物は、静脈内で投与され得る。このＢＰＩタンパク質産物および第２薬剤は、同じ静脈内ラインで連続的に与えられ得るし、または異なる静脈内ラインで与えられ得る。あるいは、第２薬剤が、例えば経口で投与される一方、このＢＰＩタンパク質産物は、胃内送達のための特別な形態で投与され得る。処方されたＢＰＩタンパク質産物および第２薬剤は、全ての薬剤が作用の部位で有効な濃度を達成することを可能にするために十分な様式でそれらが与えられる限り、同時にでもまたは連続的にでも投与され得る。
【００３８】
本発明の他の局面および利点は、以下の例示的実施例を考慮して理解される。実施例１は、複雑な慢性心臓疾患を有する３０人の小児が、心肺バイパス手術の前ならびに１、８、２４、４８および７２時間後に、内毒血症の指標について試験された研究について述べる。
【実施例】
【００３９】
（実施例１）
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ  Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＣｅｎｔｅｒのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄによって認可された実験的なプロトコルは、無目的ではない見込みのある研究であって、ここで、重篤な先天性心臓疾患を有する３０人の小児が、外科的な修復および／または緩和を待つ間、続けて登録された。左心室発育不全症候群の１人の患者は、手術中に死亡した。従って、この小児に関するデータは、手術前の分析でのデータのみ含まれる。術前感染の臨床徴候を有する患者は、本研究から除外した。
【００４０】
登録された３０人の小児は、年齢は４日〜４０２日（年齢の中央値：５９日）の範囲であり、そして体重は２．０〜９．５ｋｇ（体重の中央値：４．０ｋｇ）の範囲であった。性別、年齢、心臓の診断、および外科的修復が以下の表１に列挙される。
【００４１】
【表１】
2007126479.tif 000002
セボフルラン、亜酸化窒素、および酸素を用いて、麻酔を誘導し；静脈内ロクロニウム（ｒｏｃｕｒｏｎｉｕｍ）およびフェンタニールを用いて、挿管を容易にした。フェンタニール（３０〜５０ｍｃｇ／ｋｇ）、イソフルラン、およびパンクロニウムを用いて、麻酔を維持した。９人の患者にトラネキサム酸（５０〜１００ｍｇ／ｋｇ）を投与し、そして３人にアプロチニンを投与した（全血量に対して３５０ユニット／ｍＬを達成するように投与された）。
【００４２】
心肺バイパスは、以下のように行った。体外回路は、ローラーポンプ、膜酸素付加器、および心臓切開フィルターから構成された。心肺バイパスの設定前に、患者の血液をヘパリン（３００ユニット／ｋｇ）を用いて抗凝固化した。手術の完了のために、１３人の患者に、身体深部の低体温循環停止（ｈｙｐｏｔｈｅｒｍｉｃ  ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  ａｒｒｅｓｔ）（中心温度：１６〜１８℃）を行い、そして残りの患者は、２５〜３０℃の中心温度まで冷却した。心肺バイパスの完了前に、過剰な遊離水を除去し、そしてヘモグロビン＞１２ｇｍ／ｄＬを達成する試みで、全ての患者に対して血液濾過を行った。
【００４３】
ＬＰＳ、ＬＢＰ、およびＩＬ−６の決定のための血液サンプルを、術前ならびに心肺バイパスの完了の１、８、２４、４８および７２時間後に得た。麻酔誘導および気管内挿管の直後に、新しく配置された中心静脈カテーテルから術前サンプルを得た。内毒素レベルの決定のために、研究者は、血液サンプルを、低い内毒素含有量について選択した（ＢｉｏＷｈｉｔａｋｅｒ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）、ヘパリン化したＶａｃｕｔａｉｎｅｒTM管（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｓｏｎ、Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ  ＮＪ）に集め、即座に氷の上に置き、そして実験室まで持ち運んだ。血小板の豊富な血漿を、遠心分離（１８０ｘｇ、１０分、２〜８℃）によって得た。サンプルを、アッセイまで−７０℃で保存した。
【００４４】
ＬＰＳアッセイ、ＬＢＰアッセイ、およびＩＬ−６アッセイを盲検様式で行った。血小板の豊富な血漿におけるＬＰＳのレベルを、動的色素形式リムルス血球溶解産物アッセイ（Ｅｎｄｏｃｈｒｏｍｅ−ＫTM、Ｅｎｄｏｓａｆｅ、Ｃｈａｒｌｅｓｔｏｎ、ＳＣ）を、その製造業者取扱説明書に従って使用して決定した。ＬＰＳ濃度を、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｏ５５：Ｂ５コントロール標準内毒素に対する、１ｍｌ当たりの内毒素単位（ＥＵ）で表す。ＬＢＰレベルを、Ｍｅｓｚａｒｏｓ
Ｓら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９９５；６３：３６３〜３６５に記載されるようにＥＬＩＳＡによって決定した。ＩＬ−６を、サンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ）を使用して測定した。
【００４５】
重篤な（より重篤でない、に対する）術後の経過を、予測によって定めた。術後の心筋機能障害の重篤度を、Ｗｅｒｎｏｖｓｋｙら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ
１９９５；９２：２２２６〜２２３５によって使用される尺度の適応に従って評価した。特に、変力性支持スコアを以下のように計算した：各１．０ｍｃｇ／ｋｇ／分のドパミンまたはドブタミンおよび各０．０１ｍｃｇ／ｋｇ／分のエピネフリンが、スコア１を与えた。最初の２４時間での４０ｃｃ／ｋｇより大きい正の正味流体バランス、および１２より大きい変力性支持スコアを有するか、または手術時の死を伴う小児は、重篤な臨床経過を有すると考えた。疾患の術後の重篤度を、ＬＰＳ値、ＬＢＰ値、またはＩＬ−６値の認識の前に、スコア化した。
【００４６】
全ての統計的分析を、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＳＰＳＳ）で行った。術後、ＬＰＳ、ＬＢＰ、またはＩＬ−６における有意な上昇が生じたか否か決定するために、非パラメトリックデータについてのウィルコクソン符号付き順位検定を行った。より重篤でない臨床経過を有した患者と比較して、より重篤な臨床経過を有した患者との間で、ＬＰＳ濃度またはＬＢＰ濃度に有意な差があったか否かを決定するために、非パラメトリックデータについてのマン−ホイットニー検定を行った。
【００４７】
３０人の患者のうち２９人（９６％）が、上昇したＬＰＳの検出によって直接にか、または上昇したＬＢＰ血漿レベル（健常な成人の平均値より、２標準偏差より上）の検出によってかのいずれかで、本研究期間中に内毒血症の徴候を有した。全ての患者に関するＬＰＳ、ＬＢＰ、およびＩＬ−６のレベルを図１Ａ、図２、および図３に示す。図１Ａは、本研究のプロトコルを完了した、全ての小児からのデータを示し、全ての時点で上昇したＬＰＳを明示している。術前ＬＰＳレベルと術後ＬＰＳレベルとの間の差異は、統計的に有意ではない。内毒素動力学をより良く説明するために、本発明者らは、患者を２つのグループ：心肺バイパスの前に内毒血症であったグループ、および心肺バイパス（ＣＰＢ）の前に内毒血症でなかったグループに分けた。これら２つのグループについてのレベルを、それぞれ図１Ｂおよび図１Ｃに示す。
【００４８】
ＣＰＢの前に、１２人の患者は血漿内毒素の有意な上昇を有した。これらの患者において、内毒素は、おそらく血液希釈／部分的な交換輸血に起因して、心肺バイパスの完成後に減少する傾向にあったが（図１Ｂ）；内毒素レベルは、本研究期間を通して異常に上昇したままであった。術前の内毒血症を有さない小児においては、血漿内毒素のレベルがバイパス後に有意に上昇し、バイパスの１時間後で最大値を達成し、そしてその後、有意に上昇したままであった（ｐ＜０．０００１）（図１Ｃ）。
【００４９】
心肺バイパスおよび血液濾過の完了直後に、血漿ＬＢＰに、瞬間的ではあるが有意な減少があった。術前のレベルと比較して、心肺バイパス後１時間での血漿ＬＢＰの減少は、統計的に有意であり（ｐ＜０．０００１）、そしてその後の全ての時点でのＬＢＰの増加はまた、非常に一貫性で、かつ統計的に有意であった（ｐ＜０．０００１）。このＬＢＰの上昇は、術前に内毒血症であった患者および術前に内毒血症でなかった患者について類似していた。同様に、術前のレベルと比較して、ＣＰＢ後の全ての時点で、ＩＬ−６に有意な上昇があった（ｐ＜０．０５）（図３）。
【００５０】
最後に、術前のＬＰＳレベルおよびＬＢＰレベルを比較した場合に、予測によって定められた、より重篤な臨床経過を経験した小児が、より重篤でない患者と異なり得るか否かを決定した。この比較において、より重篤に病気の小児は、より重篤でない術後経過を経験した患者と比較して、有意に高い術前の血漿ＬＢＰ（ｐ＜０．０２）を有し（図４Ａ）、そして高い術前のＬＰＳ（ｐ＜０．０５）を有する傾向があった（図４Ｂ）。さらに、手術の前に内毒血症であった１２人の患者のうち３人が死亡し（２５％）、一方、手術の前に内毒血症でなかった１８人の患者に死亡者はなかった（ｐ＝０．０５４）。
【００５１】
手術時の内毒血症の基礎となる生物学は、術前に内毒血症であったかまたは内毒血症でなかった患者を区別することによって明らかにされる。術前に内毒血症であった患者において、内毒素レベルは、心肺バイパス後、最初に低下するが、本研究期間を通して異常に上昇したままであった。この最初の減少は、乳児の小さな血量を考慮すると、心肺バイパスの希釈効果に不随したのかもしれないし、またはことによると、心肺バイパス完了前の血液濾過による内毒素の除去に起因したのかもしれない。Ｍｉｌｌａｒ  ＡＢ、Ａｎｎ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｓｕｒｇ  １９９３；５６：１４９９〜１５０２。術前に内毒血症であったこれらの患者が、術前に内毒血症でなかった患者と比較して、内毒素の除去のための機構を誘導しそして高めたかもしれない、ということもまたあり得る。Ｄｅｎｔｅｎｅｒ  ＭＡら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １９９７；１７５：１０８〜１１７、Ｄｅｎｔｅｎｅｒ  ＭＡ、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １９９５；１７１：７３９〜７４３；およびＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４；６２、Ｎｏ４：１１８５〜１１９１。
【００５２】
対照的に、術前に内毒血症でなかった患者は、心肺バイパスの１時間後および８時間後で血漿内毒素の有意な上昇を明示した。心肺バイパス中の内毒血症を説明するために、多くの要素が引き合いに出されてきた。まず、内毒素の多くの供給源があり、これには、対外回路、注入溶液、薬物、および外科材料が挙げられる。より重要なことに、成人の患者においては、心肺バイパス中に腸管の浸透性の増加が証明されており、このことは、細菌のトランスロケーションおよび内毒素の循環への放出を可能にする。バイパス前に腸管の細菌荷重を減少させるように、腸の灌流および積極的な抗生物質レジメンを改良するための、バイパス中の拍動性灌流またはより高い流量といった手段は、より低い血漿ＬＰＳレベルを生じた。Ｗａｔａｒｉｄａ  Ｓら、Ｊ  Ｔｈｏｒａｃ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｓｕｒｇ  １９９４；１０８：６２０〜６２５；およびＱｕｉｇｌｅｙ  ＲＬら、Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  １９９５；１０：２７〜３１。
【００５３】
慢性心臓疾患を有する小児の実質的な部分の、術前のＬＰＳレベルおよびＬＢＰレベルの上昇の発見は、内毒血症が慢性心臓疾患自体と関連があることを示す。結果の重篤度が、ＬＰＳレベルおよびＬＢＰレベルの上昇によって測定されるような内毒血症と関連するという発見は、内毒血症の測定を用いて、予後を予測し得ることを示す。結果として、ＢＰＩタンパク質産物を用いる内毒血症の処置は、慢性心臓疾患の徴候および症状を改善し、そしてこれらの患者の予後を改良することが期待される。
【００５４】
当業者にとって、上記した本発明に対して多くの改変および変更が生じることが予期される。従って、本発明には、添付された特許請求の範囲において現れるような制限のみが課されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１Ａ】図１Ａは、研究プロトコルを完了する全ての患者に対する血漿ＬＰＳレベルを示す（ｎ＝２９）。
【図１Ｂ】図１Ｂは、手術前に内毒素血症を有する患者からのデータを示す（ｎ＝１１）。
【図１Ｃ】図１Ｃは、手術前に内毒素血症を有さない患者からのデータを示す（ｎ＝１８）。
【図２】図２は、研究プロトコルを完了する全ての患者からの血漿ＬＢＰレベルを示す（ｎ＝２９）。
【図３】図３は、研究プロトコルを完了する全ての患者からの血漿ＩＬ−６レベルを示す（ｎ＝２９）。
【図４Ａ】図４Ａは、重篤な手術後の臨床経過を有する患者中の手術前の血漿ＬＢＰレベル（ｎ＝１５）対それほど重篤でない手術後の臨床経過を有する患者中の血漿ＬＢＰレベル（ｎ＝１５）を示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、重篤な手術後の臨床経過を有する患者中の手術前の血漿ＬＰＳレベル（ｎ＝１５）対それほど重篤でない手術後の臨床経過を有する患者中の血漿ＬＰＳレベル（ｎ＝１５）を示す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【配列表】
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