(57)【要約】      （修正有）【課題】肝疾患の予防及び治療に有効な薬草組成物の提供。【解決手段】カワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケの薬草からなり、更に加えてアシタバ薬草、タクシャ、コウボク、甘草、ジンガー、ブクリョウ及びアガリカス茸からなる一群から選ばれた少なくとも一つの薬草を含む併合薬草組成、及び肝臓保護薬としての上記生薬組成及び薬剤組成の使用方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝疾患の予防と治療に有効な量、活性成分として、薬剤的に容認される担体と一緒にして、カワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケからなる併合薬草抽出物から成る薬剤組成。
【請求項２】
この薬剤組成がカワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケを各薬草の乾燥重量ベースの混合比（ｗ／ｗ％）が１−１０：１−１０：０．１−５：０．５−５：０．５−５の範囲である請求項１の薬剤組成。
【請求項３】
この薬草が肝疾患の予防と治療用に請求項１で示した併合薬草以外に、アシタバ薬草、タクシャ、コウボク、甘草、ジンガー、ブクリョウ及びアガリカス茸からなる一群から選択された少なくとも一つの薬草を含む請求項１の薬剤組成。
【請求項４】
この薬剤組成がアシタバ薬草、タクシャ、コウボク、甘草、ジンガー、ブクリョウ及びアガリカス茸からなる一群から選択の少なくとも一つの薬草を各薬草の乾燥重量ベースの混合比（ｗ／ｗ％）が０．１−５：１−１０：０．１―５：０．１−５：０．１−５：０．１−５：１−１０の範囲である請求項３の薬剤組成。
【請求項５】
生薬組成がその粉末形状、抽出形状又は乾燥抽出物形状で用いる請求項１−４のいずれか一つの薬剤組成、
【請求項６】
この抽出溶剤が蒸留水、低級アルコール及びその混合物からなる一群から選んだ請求項１又は３の薬剤組成。
【請求項７】
この生薬組成がその組成の全重量ベースの約０．０１乃至９５ｗ／ｗ％である請求項１又は３の薬剤組成。
【請求項８】
この肝疾患が急性又は慢性の肝炎、肝腫大、肝腫瘍、肝硬変又は肝癌である請求項１乃至４のいずれか一つの薬剤組成。
【請求項９】
この薬剤組成が容認される担体で粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、懸濁物、乳化物、シロップ、エアロゾル、局所薬、座薬又は減菌注入で供与される請求項１乃至４のいずれか一つの薬剤組成。
【請求項１０】
請求項１乃至４のいずれか一つの薬剤組成の調合プロセスで、薬草を洗浄、乾燥及び適切比（ｗ／ｗ）で混合するか、別に追加薬草を生薬組成作成段階で混合し、その薬草を粉砕し、粉砕組成を５倍量の蒸留水、メタノール、エタノールなどのようなアルコール又はその混合物と混合し、温度ゼロ乃至室温範囲で１２時間乃至４８時間範囲の間アンフラージュするか、又は温度８０乃至１００℃で１乃至２４時間範囲の間で２乃至５回加熱し、抽出物を濾過し減圧下で８０乃至９０℃で濃縮し、体積１０乃至６０倍の水と１乃至５回共沸蒸留し、凍結乾燥又は真空乾燥で乾燥して乾燥抽出形状の生薬組成を得るプロセス。
【請求項１１】
肝疾患の予防及び改善に有効な量、活性成分として、食品として容認される添加物と共に肝細胞を保護することで肝疾患の予防又は改善にカワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケからなる併合薬草抽出物から成る健康機能食品。
【請求項１２】
この薬草が請求項１１に示した併合薬草以外に、アシタバ薬草、タクシャ、コウボク、甘草、ジンガー、ブクリョウ及びアガリカス茸からなる一群から選んだ少なくとも一つの薬草を含む請求項１１の健康機能食品。
【請求項１３】
生薬組成がその粉末形状、抽出形状又は乾燥抽出物形状で用いる請求項１１又は１２の健康機能食品。
【請求項１４】
この健康機能食品が粉末、顆粒、カプセル剤又は飲料の形で供与される請求項１１又は１２の健康機能食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝疾患の予防及び治療への要請にしたがって、カワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケ薬草抽出物を含む生薬組成と肝臓保護薬としてのこの生薬組成及び薬剤組成の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝疾患は、現在種々の好ましくない環境、例えば汚染物質、飲み過ぎ、タバコなどのような有害物質、そしてまた、休息により回復できるけれども、免疫系疾患のような他の病気を起こし易い生理的ストレスに曝されたヒトで最もよく起こる病気の一つである。四塩化炭素、Ｄ−ガラクトサミンなどのような有害物質は、細胞膜損傷に起因して肝臓及び腎臓に有害となることが報告されている。（ブルーカー、ジェイブイ、ファンダメンタルアンドアプライドトキシコロジー（Fund. Appl. Toxicology）、６巻、１６−３４頁、１９８６年）。
【０００３】
遊離基再生禁止作用を持つ天然物資源から導かれた幾つかの薬剤が今まで報告されている。例えばキク科に属するミルクシッスル（マリアアザミ）の果実から単離のシリマリン（ＳＬＤ）、チョウセンゴミシなどから単離された五味子の合成類似体のＢＢＤ（ビフェニルジメチルジカルボン酸エステル）がある。（カラジー、エイビー(Caragy A.B.)、フードテクノロジー（Food Technolgy）、４６巻、６５−６８頁、１９９２年；リアンジュン、ワイ等（Liang  jun, Y. et al.）、バイオケイミストリーアンドバイオフィジック リサーチコミュニケーション（Biochem. And Biophsy. Res. Comm.）、２１２巻、３６０―３６６頁、１９９５年）。
【０００４】
しかしながら、これまで肝疾患の治療と予防或いは肝機能改善に有効且つ安全な薬剤開発が要請されてきた。
【０００５】
キク科に属するカワラヨモギの薬草であるカワラヨモギ薬草、ハマヨモギなどは、スコパロン、クロロゲン酸、コーヒー酸、ピネン、カピリン、カピレン、カプラリン、ステアリン酸、パルミチン酸などを含み、黄疸や皮膚炎などの治療が報告されている。最近この植物のエタノール可溶抽出物が肝損傷及び肝細胞の脂質過酸化を抑制することが報告された。（木村等（Kimura, Y. et al）、ケミカルファルマスーティカルブレティン（Chem. Pharm. Bull.）、３３巻（５号）、２０２８−２０３４頁、１９８５年）。
【０００６】
キク科に属するオオバナオケラ根茎のソウジュツなどは、アトラクチロン、アトラクチロールなどを含むことが報告され、関節リュウマチ、下痢、食欲不振などの治療に使用されている。昔から中国では気付け薬として用いられてきた。（チェン、ゼットエル等（Chen, Z. L. et al.）プランタメディカ（Planta Med ）、５３巻、４９３頁、１９８７年；チェン、ゼットエル等（Chen, Z. L. et al.）、フィトケミストリー（Phytochemistry）、４５巻（４号）、７６５頁、１９９７年）。
【０００７】
ツメレンゲ薬草であるオロスタキス薬草、アオノイワレンゲなどは、ベンケイソウ科に属し、喀血、マラリアなどの治療に用いられた。
【０００８】
サルノコシカケ科に属するキノコのカワラタケは、エルゴステロール、コリオラン、クレスチン−Ｄ−グルカン、テレホール酸などを含むことが報告されている。最近このキノコが間接的に免疫機構を活性化してガン細胞の成長を抑制することが報告された。（キム、ビーケイ等（Kim, B.K. et al.）シンガポールアーカイブファルマシューティカルリサーチ（Sing. Arch. Pharm. Res.）、２巻、１５３頁、１９７９年）。
【０００９】
サルノコシカケ科に属するキノコのチョレイマイタケは、エルゴステロール、エルゴスタ−４、６、８（１４）、２２−テトラエンー３−オン、２−ヒドロキシテトラコサン酸、ビチオンなどを含有することが報告されている。最近このキノコが抗ガン活性、抗菌活性及び肝機能の改善効果を示すことが報告された。（ハ、ワイディー等（Ha, Y.D. et al.）、コリアンジャーナルオブポストハーベストサイエンスアンドテクノロジー（Korean J. Postharvest Sci. Technol.）、８巻（４号）、４８１頁、２００１年）。
アンゲリカ属に属するアシタバの栽培薬草であるアシタバ薬草はビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、カルシウム、鉄、リンなどを含むことが報告され、糖尿病、倦怠感、高血圧などの防止での使用されている。
オモダカ科に属するサジオモダカ根茎のタクシャなどはアリソールＡ，Ｂ、エピアリソールＡ，アルカロイドなどを含むことが報告され、下痢、嘔吐などの治療での使用されている。
【００１０】
モクレン科に属するカラホオ樹皮のコウボク、ホオノキなどは、マグノロール、ホオノキオール、マグノフロリン、アノナイン、精油などを含むことが報告され、咳、胃ガン、嘔吐などの治療での使用されている。
マメ科に属するウラルカンゾウの根である甘草などは、グリシルリジンのようなトリテルペノイドサポニン、リキリチン、ネオリキリチン、ネオイソリキリチンなどのような幾つかのフラボノイドを含むことが報告され、咳、胃潰瘍、高血圧などの治療での使用されている。
【００１１】
生姜科に属する生姜の根茎であるジンガーなどは、ジンジベーロール、ジンギベレン、フェランドレン、カンフェン、シトラール、リナロール、メチルヘプテノン、ジンジェロールなどを含むことが報告され、咳、胃潰瘍、高血圧などの治療での使用されている。
サルノコシカケ科に属するマツホドの白部であるブクリョウは、パキマン、ブクリョウ酸、エルゴステロール、ヒスチジンなどを含み、細菌感染、不安感、嘔吐などの治療での使用が報告されている。
【００１２】
ハラタケ科に属するヒメマツタケ全体のアガリカス茸はセレビステロール、エルゴステロール、リノール酸、オレイン酸、ステアリン酸、キチングルカン、グルコマンナンなどを含むことが報告され、癌、高血圧、高コレステロール血症、糖尿病などの治療での使用されている。
【００１３】
しかしながら、肝疾患に対する上記薬草抽出物の併合治療効果について、上に引用したいずれの文献にも報告も開示もされていない。上述引用文献は、ここに参照することによって本願に含める。
【００１４】
それ故本発明者達は、肝臓保護効果を増強するのに有効な薬草処方を見出すため、上記の併合薬草抽出物の薬剤効果の研究を試み、ついに本発明者達は上記併合生薬が肝臓保護薬として肝疾患の治療と予防に有効であることを見出した。
【発明の開示】
【００１５】
一様態では、本発明は肝疾患の予防及び治療用のカワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケの併合薬草抽出物を含む薬剤組成を提供する。
【００１６】
本発明は又、薬剤的に容認される担体を一緒にして、活性成分として肝疾患の予防と治療に有効な量の上記抽出物を含む薬剤組成を提供する。
本発明は又上記抽出物の有効量を薬剤的に容認される担体と一緒に哺乳類に投与して、哺乳類の肝細胞を保護する事によって肝疾患を治療する方法を提供する。
本発明は又、ヒト又は哺乳類の肝疾患の治療又は予防に用いる薬物調合及び製造に上記抽出物の使用を提供する。
【００１７】
本発明は又、食品的に容認される添加物と一緒にして、肝疾患の予防と改善に有効な量、活性成分として肝細胞を保護し肝疾患の保護と改善用の上記抽出物を含む健康機能食品を提供する。
【発明の詳細な説明】
【００１８】
従って、本発明の目的は、薬剤的に容認される担体と一緒にして、活性成分として肝疾患予防及び治療用に有効量のカワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケの併合薬草抽出物を含む薬剤組成を提供することである。
本発明は又、肝疾患の予防と治療用の上記併合薬草に以外に、アシタバ薬草、タクシャ、コウボク、甘草、ジンガー、ブクリョウ及びアガリカス茸からなる一群から選択された少なくとも一つの薬草を加えた併合薬草抽出物から成る薬剤組成を提供する。
本発明の他の目的は、ヒト又は哺乳類での肝疾患の治療又は予防に用いる薬物製造に上記抽出物の使用を提供することである。
【００１９】
本発明の他の目的は、薬剤的に容認される担体と一緒にして、有効量の上記抽出物を哺乳類に投与して哺乳類の肝細胞を保護する肝疾患の治療方法を提供することである。
ここに開示の抽出物は、肝疾患治療又は予防において、併合薬物抽出物、即ちカワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケからなり、各薬草の乾燥重量ベースの混合比（ｗ／ｗ％）が、好ましくは１−１０：１−１０：０．１−５：０．５−５：０．５−１０、より好ましくは１−５：１−５：０．５−３：０．５−３：０．５−６である。
【００２０】
更に、ここに開示の抽出物は、肝疾患治療又は予防において、併合薬物抽出物、即ちカワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケからなり、且つアシタバ薬草、タクシャ、コウボク、甘草、ジンガー、ブクリョウ及びアガリカス茸からなる一群から選択された少なくとも一つの薬草が加えられた薬草抽出物を含み、各薬草の乾燥重量ベースの混合比（ｗ／ｗ％）が好ましくは０．１−５：１−１０：０．１−５：０．１−５：０．１−５：０．１−５：１−１０、更に好ましくは０．５−３：１−５：０．５−３：０．５−３：０．５−３：０．５−３：０．５−３、０．５−３：０．５−３：０．５―３：０．５−３：１−５である。
【００２１】
本発明の一形態によると食品的に容認される添加物と一緒にして、肝疾患の予防と改善に有効な量の活性成分として肝細胞を保護して肝疾患の保護と改善用の上記抽出物を含む健康機能生食品を提供する。
【００２２】
ここに開示の肝疾患は、急性及び慢性の肝炎、肝腫大、肝腫瘍、肝硬変及び肝癌であり、好ましくは肝硬変及び肝炎である。
【００２３】
本発明に用いることのできる薬草は、技術の当業者には明白であり、同一又は類似の目的に使用されてきた、肝疾患の予防と治療用に置き換えることのできる同一属の植物から成る。
【００２４】
本発明の新規組成は、その粉砕された形、それからの抽出された形、或いはそれからの乾燥抽出された形で使用される。
【００２５】
上記抽出形状の生薬組成は、蒸留水、メタノール、エタノールなどのような低級アルコール又はその混合物、好ましくは水で抽出して得る。
肝疾患治療用の薬剤組成は、その組成全重量ベースの本発明の上記薬草組成を０．０１乃至９５ｗ／ｗ％、好ましくは０．５乃至８０ｗ／ｗ％含有できる。
新規薬草組成は、以下の好ましい実施形態によって作成できる。
本発明で、上記生薬組成は以下の方法で作成される。薬草、即ちカワラヨモギ薬草、ビャクジュツ、オロスタキス薬草、カワラタケ及びチョレイマイタケ、もし必要ならアシタバ薬草、タクシャ、コウボク、甘草、ジンガー、ブクリョウ及びアガリカス茸で、これらを洗浄、乾燥して、適当比（ｗ／ｗ）で混合する。上記混合物を粉砕して粉末型の生薬組成を得る。
【００２６】
上記粉砕生薬組成を体積５乃至２０倍、好ましくは１０乃至１５倍の蒸留水、メタノール、エタノールなどのようなアルコール又はその混合物、好ましくは水かエタノールと水との混合物と混合し、温度ゼロ乃至室温、好ましくは４乃至６℃で１２時間から４８時間、好ましくは２０乃至２４時間の間アンフルラージュするか、又は温度８０乃至１２０℃、好ましくは１０５℃で、１乃至２４時間、好ましくは２乃至５時間の間、２乃至５回加熱して環流抽出するか、又は超音波処理、環流又は在来抽出法により抽出して水溶性抽出型の生薬組成を得る。
【００２７】
更に、薬草抽出物を濾過し減圧下８０乃至９０℃で濃縮する。抽出物を体積１０乃至６０倍の水で１乃至５回共沸蒸留により濃縮し、次いで凍結乾燥か真空乾燥して乾燥抽出形状の生薬組成を得る。
【００２８】
本発明の他の目的は、肝疾患の治療や予防に有効な組成調合用に上述の本発明抽出物の調合工程を提供することである。
【００２９】
本発明の更なる他の目的は、肝疾患の予防と治療用活性成分として上記工程で得た粉砕型、抽出型又は乾燥抽出型の上記生薬抽出物を含む薬剤組成を提供することである。
【００３０】
上記工程で調合された本発明の新規組成によりラット実験モデルのグルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）とグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）レベルを大幅に減少し肝線維症を抑制する。この抽出物の経口急性毒性試験で、この抽出物は死亡数、臨床的兆候、体重変化及び死体解剖での総括所見で明白な影響はなかった。
【００３１】
肝疾患治療用薬剤組成は、その組成の全重量ベースでの本発明の上記生薬組成を約０．０１乃至９５ｗ／ｗ％、好ましくは０．５乃至８０ｗ／ｗ％含有できるであろう。
【００３２】
本発明は更には、肝疾患予防と治療に、活性成分として有効な量の上記抽出物含有肝臓保護薬を提供する。
【００３３】
本発明は更には、肝疾患の予防と治療に、肝臓保護薬のような薬物調合用新規抽出物の使用を提供する。
【００３４】
本発明は更に有効量の生薬組成とその薬剤的に容認される担体を哺乳類に投与することからなる哺乳類の肝疾患治療方法を提供する。
【００３５】
新規組成は更に、使用法に従い在来の担体、補助剤又は希釈剤を含有できる。この担体は好ましくはその使用利用法にしたがって適正物が使用されるが、限定されない。適切希釈剤はレミントンの薬剤科学（Remington's Pharmaceutical Science）（マック出版社(Mack Publishing Co.)、イーストン（Easton）、ペンシルバニア州（PA）の本文に載っている。
【００３６】
以下、次の調合法と賦形済は単に模範的なもので、本発明を決して限定する物ではない。
本発明による生薬組成は、薬剤的に容認される担体、賦形剤又は希釈剤、例えば乳酸、ブドウ糖、蔗糖、ソルビトール、マニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、安息香酸メチルヒドロキシエステル、安息香酸プロピルヒドロキシエステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱油含有の薬剤組成を提供できる。その処方は更に充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香味料、乳化剤、防腐剤などを含有できる。本発明の組成は、技術的に周知のいずれかの方法を用いて患者に投与後、活性成分が迅速または持続又は遅くれて放除できるように処方する。
【００３７】
例えば本発明組成は、注射するのによく使われる油、プロピレングリコール又は他溶剤に溶解できる。担体の適切例としては、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物油、ミリスチン酸イソプロピルエステルなどがあるが、これらに限定はされない。局所投与では本発明化合物は軟膏及びクリームの形で処方できる。
【００３８】
生薬組成含有薬剤処方は経口投薬型（粉末、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、水溶薬、シロップ剤、エリキシル錠剤、粉末、小袋、顆粒）又は局所調合（クリーム、軟膏、水薬、ゲル、芳香性軟膏、パッチ、ペースト、噴霧溶液、エアロゾルなど）、座薬又は減菌注入可能調合（溶液、懸濁物、乳化物）のようないずれの形でも調合できる。
【００３９】
本発明の生薬組成の薬剤投薬形態は薬剤的に容認される塩の形で使用できるばかりでなく、単独又は適切な関連物と同様に他薬剤活性化合物と一緒に使用できる。
【００４０】
新規組成の望ましい用量は、被験者の状態と体重、薬剤形態、投与経路と期間に依存して変わり、技術の熟知者が選択できる。しかし望ましい効果を得るには通常本発明の新規組成を一日当たり重量で０．０１−１０ｇ／ｋｇ、好ましくは１乃至５ｇ／ｋｇの範囲量での投与が推奨される。用量は一日に１回又は複数回投与できる。組成に関しては生薬組成は組成全重量ベースの重量で０．０１乃至８０％の間、好ましくは重量で０．５乃至５０％を含む。
【００４１】
本発明の薬剤組成は、哺乳類（ラット、マウス、家畜又はヒト）のような被験動物に種々の手段で投与できる。あらゆる投与形態が考えられる。例えば経口、直腸、静脈、筋肉内、皮下、皮内、髄膜内、硬膜外又は脳室内注入によって投与できる。
【００４２】
本発明の一様態に従うと肝疾患の予防と改善に有効量の活性成分で肝細胞を保護し、食品的に容認される添加物と一緒にして、肝疾患の保護と改善用の上記抽出物を含む健康機能食品が提供される。
【００４３】
新規健康機能食品の生薬組成は、その粉末形状、抽出形状或いは乾燥抽出物形状で使用される。
【００４４】
胃腸機能障害症の予防と改善用の健康機能食品の組成は、全組成重量ベースで上記生薬組成を約０．０１乃至９５ｗ／ｗ％、好ましくは０．５乃至８０ｗ／ｗ％含有できる。
【００４５】
上記生薬組成は、胃腸機能障害症の予防と改善用の食品、添加物又は飲料に添加できる。胃腸機能障害症の予防と改善目的には、食品又は飲料中の上記生薬組成量は健康食品組成用の全食品重量の約０．１乃至１５ｗ／ｗ％、好ましくは１乃至１０ｗ／ｗ％の範囲であり、健康飲料組成１００ｍｌの比率当たり１乃至３０ｇ、好ましくは３乃至１０ｇの範囲である。
【００４６】
本発明の健康飲料組成が指示比率で上記生薬組成を不可欠成分として含有する限り、他成分が在来飲料のように種々の脱臭剤又は天然炭水化物である他液体成分についての特別な制限はない。前述の天然炭水化物例は、ブドウ糖、果糖などのような単糖類、麦芽糖、蔗糖などのような二糖類、デキストリン、シクロデキストリンのような在来糖、キシリトールのような糖アルコール及びエリスリトールなどである。前述のもの以外の除臭剤としてはタウマチンのような天然の除臭剤、レバウジオシドＡ、グリシルリジンなどのようなステビア抽出物及びサッカリン、アスパルテームなどのような合成除臭剤が好んで用いられる。上述天然炭水化物の量は一般に、本飲料組成１００ｍｌの比率に付き約１乃至２０ｇ、好ましくは５乃至１２ｇの範囲である。
【００４７】
前述組成以外の成分は、種々の栄養剤、ビタミン、ミネラル又は電解質、合成香味料、着色剤及びチョコレートやチーズなどの場合の改良剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド接着剤、ｐＨ制御剤、安定剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料で用いる炭酸化剤などである。上述のもの以外の成分は天然果汁作成用果汁、果汁飲料及び野菜飲料であり、その成分は独立又は組み合わして使用できる。成分比率はそれほど重要ではないが、通常本成分１００ｗ／ｗ％当たり約０乃至２０ｗ／ｗ％範囲である。
【００４８】
ここでの前述生薬組成含有の追加可能食品例は、種々の食品、飲料、ガム、複合ビタミン剤、健康改善食品などがある。
技術の熟知者には、本発明の精神と範囲を逸脱することなく、本発明の組成、使用及び調合で、種々の修正と変形が可能なことは明白である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
以下の実施例と実験実施例は、範囲を制限すること無しに本発明を更に説明する意図である。
【実施例１】
【００５０】
併合処方（ＭＣ）の調合
ソウルのキョンドン市場で購入されたカワラヨモギ薬草２ｇ、ビャクジュツ１．７ｇ、オロスタキス薬草１ｇ、カワラタケ０．７ｇ及びチョレイマイタケ１ｇを洗浄し、この薬草重量ベースで１０倍量の水を加えた。溶液を１２時間そのまま放置し、真空下１０５℃で２時間第一回目の環流抽出を行った。第一回目で得た抽出物を濾過し、生成残留物を真空下で第二回目の環流抽出に付した。抽出物を濾過篩い（モデル番号１４０、１０６μｍ）で濾過し、各濾過抽出物を集めた。収集濾液を抽出物の最終体積が約１リッターに達し、抽出物の比重が約１．２乃至１．３（ブリックス、６０以上）になるまで８０−９０℃で環流濾過に付した。抽出物を６０℃で、熱風ドライヤーで水分量が５％以下になるまで乾燥し、乾燥固体を砕き、濾過材（番号５０、３００μｍ）で濾過して新規粉末抽出物（以後ＭＣと呼ぶ）を得た。
【実施例２】
【００５１】
複合処方（ＡＣ）の調合
ソウルのキョンドン市場で購入したカワラヨモギ薬草２ｇ、ビャクジュツ１．７ｇ、オロスタキス薬草１ｇ、カワラタケ０．７ｇ、チョレイマイタケ１ｇ、アシタバ薬草０．７ｇ、タクシャ１．７ｇ、コウボク０．７ｇ、甘草０．５ｇ、ジンガー０．３ｇ、ブクリョウ０．７ｇ及びアガリカス茸１．３ｇを洗浄し、実施例１と同様の環流抽出を行って新規粉末抽出物（以後ＡＣと呼ぶ）を得た。
【実験実施例１】
【００５２】
ラットモデルでの四塩化炭素誘導による慢性肝臓損傷に対する効果
実施例で得た新規抽出物の肝臓損傷に対する抑制効果を調べるため、以下の実験を以下の方法で実施した。
【００５３】
１−１試薬と実験動物
四塩化炭素（シグマ社（Sigma Co.））、オリーブ油（シグマ社（Sigma Co.））、アラニンアミノ基転位酵素（ＡＬＴ、ＧＰＴ、スタンバイオ社（Stanbio Co.））及びアスパラギン酸アミノ基転位酵素（ＡＳＴ、ＧＯＴ、スタンバイオ社（Stanbio Co.））を実験で用いるため営利会社から購入した。
体重約２００ｇのオスのスプラーグ・ドーレーラットを実験で使用し、餌（ハーランテクラッド社（Harlan Teklad）、米国）と水へのアクセスを許した。全動物を使用前少なくとも１週間、温度２１―２４℃、湿度６０−８０％、明暗周期１２時間の制御環境に維持した。
【００５４】
１−２  四塩化炭素慢性肝臓損傷に対する効果
肝臓損傷に対する効果を評価するためオリーブ油と四塩化炭素（１：１）の混合溶液を三日間用量１．０ｍｇ／ｋｇで各実験ラットに腹腔内投与して急性肝細胞毒を誘導した。一時間後、１％ＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）に懸濁の種々濃度の抽出物、即ち６ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ及び６０ｍｇ／ｋｇを試験群として四日間ラットに経口投与し、同量の生理食塩水のみを負の対照として処理した。試験最終日に麻酔実験動物から血液１．５ｍｌを貯蔵し、再灌流で固定した。血液試料を３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、各試料の各ＧＯＴ及びＧＰＴレベルをＣＨ１００＋装置（セアック社（SEAC Co.））を用いて決定した。試験群と試験行程を以下の表１に示す。
表１
2007126410.tif 000002
【００５５】
図１a及び１ｂに見られるように、実施例１（ＨＡ――ＭＣ群）で得られた新規抽出物での処置例は特に投与量３０ｍｇ／ｋｇと６０ｍｇ／ｋｇで用量依存的に肝臓損傷ラットモデルのＧＯＴ及びＧＰＴレベルを著しく抑制した（Ｐ＜０．０５＊、Ｐ＜０．０１＊＊）。更に図２a及び２ｂに見られるように、実施例２（ＨＡ―ＡＣ群）で得られた新規抽出物での処置例は特に投与量範囲全てで、即ち１２ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇと１２０ｍｇ／ｋｇで用量依存的に肝臓損傷ラットモデルのＧＯＴ及びＧＰＴレベルを著しく抑制した（Ｐ＜０．０５＊、Ｐ＜０．０１＊＊）。
従って本発明の新規抽出物は肝機能の緩和に有効であることが確認された。
【実験実施例２】
【００５６】
ラットモデルでのコラーゲン分布とＧＯＴ及びＧＰＴレベルの抑制に対する効果
実施例で得られた新規抽出物の肝硬変改善効果を調べるため、以下の実験を以下の方法で実施した。
【００５７】
２−１試薬と実験動物    
ＤＭＮ（ジメチルニトロサミン、シグマ社（Sigma Co.））、アラニンアミノ基転位酵素（ＡＬＴ、ＧＰＴ、スタンバイオ社（Stanbio Co.））及びアスパラギン酸アミノ基転位酵素（ＡＳＴ、ＧＯＴ、スタンバイオ社（Stanbio Co.））を実験で用いるため営利会社から購入した。
【００５８】
体重約２７０ｇのウイスターラットを実験で使用し、餌（ハーランテクラッド社（Harlan Teklad）、米国）と水へのアクセスを許した。全動物を使用前少なくとも１週間温度２１―２４℃、湿度６０−８０％、明暗周期１２時間の制御環境に維持した。
【００５９】
コラーゲン分布への効果とＧＯＴ及びＧＰＴへの抑制効果
肝硬変に対する効果を評価するため１％ＤＭＮを三日間用量１０μｇ／ｋｇ／dayで各実験ラットに腹腔内投与して肝硬変を誘導した。抽出物ＭＣを３０ｍｇ／ｋｇ／dayとＡＣ抽出物６０ｍｇ／ｋｇ／dayを試験群ラットに４週間経口投与し、同量の生理食塩水のみを負の対照として処理した。試験最終日に麻酔実験動物から血液１．５ｍｌを貯蔵し再灌流で固定した。血液試料を３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、図３a及び３ｂに示すように各試料の各ＧＯＴ及びＧＰＴレベルをＣＨ１００＋装置（セアック社（SEAC Co.）を用いて決定した。
【００６０】
肝臓組織でのコラーゲン分布を調べるためコラーゲン部のみを染色するマッソン三重染色法を用い、単離肝臓組織を自動組織分析器（シタデル（Citadel）２０００、シャンドン社（Shandon Co.））で包埋し、組織マイクロトーム（ライカ社（LEICA  ＲＭ２１４５））で４μｍ幅片にスライスした。各組織について５つの病変を選び病変の線維素比を画像解析システムで決定した。この比の平均値を計算しコラーゲン量に変換した。（図４参照）。
図４に見られるように実施例１（ＨＡ−ＭＣ群）で得られた新規抽出物、そして同様に実施例２（ＨＡ−ＡＣ群）で得た新規抽出物による処置群では肝臓損傷ラットモデルのＧＯＴとＧＰＴレベルが用量依存的に顕著に抑制された。更に実施例１及び２で得た新規抽出物の処遇群のコラーゲン量はそれぞれ１．２１及び１．０５を示したが、対照群と正常群はそれぞれ２．９３及び０．５３を示した。
【００６１】
従って、本発明の新規抽出物は、肝硬変の進行抑制に顕著に有効であることが確認された。
【実験実施例３】
【００６２】
急性毒性の評価
新規抽出物の毒性を調べるため、ラットの急性毒性試験を実施した。
１５匹のオス及びメスＳＤラットを三群に分け、新規抽出物を三つの用量、即ち１ｇ／ｋｇ、２ｇ／ｋｇ及び５ｇ／ｋｇで各５匹のラットに１４日間投与し、対照群は水で処理した。体重変化、血液分析及び組織試験のような毒性兆候を４週間観察した。
実験の結果、新規抽出物投与のラットでの死亡例はなく、重量増加、組織試験などでの顕著な異常もなかった。この結果により新規抽出物、即ちＨＡ―ＭＣ及びＨＡ−ＡＣは安全であることが確認された。
【００６３】
以下、賦形剤の配合法と種類を説明するが、本発明はこれらに限定されない。代表的調合例を以下に記載する。
注入調合
ＨＡ−ＭＣ                １００ｍｇ
メタ重亜硫酸ナトリウム    ３．０ｍｇ
メチルパラベン            ０．８ｍｇ
プロピルパラベン          ０．１ｍｇ
注射用蒸留水              適量
注射調合は活性成分をｐＨ７．５に制御しながら溶解し、全成分を２ｍｌのアンプルに満たし、在来の注射調合法で減菌して調合した。
粉末調合
ＨＡ−ＭＣ                ５００ｍｇ
コーンスターチ            １００ｍｇ
乳糖                      １００ｍｇ
タルク                    １０ｍｇ
粉末調合は上記成分を混合し密封包装に入れて調合した。
錠剤調合
ＨＡ−ＡＣ                ２００ｍｇ
コーンスターチ            １００ｍｇ
乳糖                      １００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  適量
錠剤調合は上記成分を混合し錠剤化して調合した。
カプセル剤調合
ＨＡ−ＭＣ                １００ｍｇ
乳糖                      ５０ｍｇ
コーンスターチ            ５０ｍｇ
タルク                    ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  適量
錠剤調合は上記成分を混合し在来ゼラチン調合法によりゼラチンカプセルに満たして調合した。
液体調合
ＨＡ−ＡＣ                １０００ｍｇ
砂糖                      ２０ｇ
多糖類                    ２０ｇ
レモン香味料              ２０ｇ
液体調合は活性成分を溶解し、全成分を１０００ｍｌアンプルに満たし在来液体調合法で減菌して調合した。
健康食品の調合
ＨＡ−ＭＣ                １０００ｍｇ
ビタミン混合物            適量
ビタミンＡ酢酸塩        ７０μｇ
ビタミンＥ              １．０ｍｇ
ビタミンＢ１            ０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２            ０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６            ０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２          ０．２μｇ
ビタミンＣ              １０ｍｇ
ビオチン                １０μｇ
ニコチン酸アミド        １．７ｍｇ
葉酸                    ５０μｇ
パントテン酸カルシウム  ０．５ｍｇ
ミネラル混合物            適量
硫酸第一鉄              １．７５ｍｇ
酸化亜鉛                ０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム        ２５．３ｍｇ
一カリウムリン酸塩      １５ｍｇ
二カルシウムリン酸塩      ５５ｍｇ
クエン酸カリ              ９０ｍｇ
炭酸カルシウム            １００ｍｇ
塩化マグネシウム          ２４．８ｍｇ
上述のビタミンとミネラル混合物は多様に変えられる。そのような変更は本発明の精神と範囲から逸脱しているとは見なされない。
健康飲料の調合
ＨＡ−ＡＣ                １０００ｍｇ
クエン酸                  １０００ｍｇ
オリゴ糖                  １００ｇ
アプリコット濃縮物        ２ｇ
タウリン                  １ｇ
蒸留水                    ９００ｍｌ
健康飲料の調合は上記成分を溶解し、混合し、８５℃で１時間攪拌し、濾過し、次に全成分を１０００ｍｌのアンプルに満たし、在来健康飲料調合法で減菌して調合した。
本発明は記載のようにこの物を多様に変形できることは明白である。そのような変更は本発明の精神と範囲から逸脱しているとは見なされず、その変更の全ては技術の熟知者には明白で、以下の請求項の範囲内に含むことが意図される。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明で記載されたように、本併合薬草組成は肝臓機能に強力な保護活性を示し、ＧＯＴとＧＰＴレベルの増加を抑制すると共に肝硬変を予防する。
本発明の新規組成は肝疾患の予防と治療に有用で、安全且つ有効な肝臓保護薬として使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
本発明の上述及びその他の対象や特徴や他の利点が、付随図面と関連して、以下の詳細記述からより明白に理解される。
【図１】実施例１の生成抽出物による四塩化炭素誘導ラットでの血清ＧＯＴ結果（１a）及びＧＰＴ結果（１ｂ）への用量依存効果を示す。
【図２】実施例２の生成抽出物による四塩化炭素誘導ラットでの血清ＧＯＴ結果（２a）及びＧＰＴ結果（２ｂ）への用量依存効果を示す。
【図３】実施例の生成抽出物による肝硬変誘導ラットでの血清ＧＯＴ結果（３a）及びＧＰＴ結果（３ｂ）への抑制効果を示す。
【図４】実施例の生成抽出物による肝組織のコラーゲン分布への効果を表す。
【図１】
2007126410.tif 000003
【図２】
2007126410.tif 000004
【図３】
2007126410.tif 000005
【図４】
2007126410.tif 000006
【外国語明細書】
CRUDE DRUG COMPOSITION FOR PREVENTING AND TREATING LIVER DISEASE
TECHNICAL FIELD
The present invention is related to a crude drug composition comprising herb extract of Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, and Polyporus umbellatus Pers. according to the need for the prevention and treatment of liver diseases and methods of using the above crude drug composition and pharmaceutical composition as a hepato-protective agent.
BACKGROUND ART
Liver disorders are one of the most frequently occurring diseases in present human being exposed by various unfavorable environments for example, polluting substance, toxic substance such as overdrinking, smoke etc as well as psychological stress, which could be recovered by rest however it could be severed to give rise to other disease such as the disorder of immune system. There have been reported that toxic substance such as carbon tetrachloride, D-galactosamne etc. cause to toxic in liver and kidney resulting from the injury of cellular membrane (Brucker, J. V., Fund. Appl. Toxicology, 6, pp16-34 1986)
Several drugs derived from natural product resource acting with the inhibition of free radical reproduction have been reported till now, for example, silymarin (SLM) isolated from the fruit of Silybum marianum (Carduus marianus) belong to Compositae, BDD (Biphenyl Dimethyl Dicarboxylate), a synthetic analog of schizandrin isolated from Schisandra chinensis etc. (Caragy A. B., Food Technology, 46 pp65-68, 1992; Liang jun, Y., et al., Biochem. And Biophy. Res. Comm., 212  pp360-366, 1995).
However, there has been a need for the development of effective and safe drugs to treat and prevent liver diseases or improving liver function till now.
Artemisia Capillaris Herba, a herb of Artemisia Capillaris, Artemisia scoparia and and the like belongs to Compositae has been reported to comprise scoparone, chlorogenic acid, caffeic acid, pinene, capipillin, capillene, capillarin, stearic acid, palmitic acid etc and to treat jaundice, dermatitis etc. Recently, the ethanol soluble extract of the plant has been reported to inhibit liver injury and lipid peroxidation in liver cell  (Kimura, Y. et al.., Chem. Pharm. Bull., 33(5), pp2028-2034, 1985).
Atractylodes Rhizoma Alba, a rhizoma of Atractylodes macrocephala K and the like belongs to Compositae has been reported to comprise atractylone, atractylol etc, which has been used to treat rheumatoidal arthritidis, diarrhea, anorexa etc. It has been used in China as restoratives long years ago (Chen, Z. L., et al Planta Med., 53, p493, 1987; Chen, Z. L., et al Phytochemistry, 45(4), p765, 1997).
Orostachydis Herba, a herb of Orostachys japonicus A, Orostachys malacophllyus F and the like belongs to Crassulaceae, which has been used to treat hemoptysis, malaria etc.
Coriolus versicolor, a mushroom belongs to polyporaceae has been reported to comprise ergosterol, coriolan, krestin-D-glucan, thelphoric acid etc. Recently, the mushroom has been reported to inhibit the growth of cancer cell by activating immune mechanism indirectly (Kim, B. K., et al, Sing. Arch. Pharm. Res., 2, p153, 1979).
Polyporus umbellatus Pers., a mushroom belongs to polyporaceae has been reported to comprise ergosterol, ergosta-4, 6, 8 (14), 22-tetraen-3-one, 2-hydroxytetracosanic acid, bithion etc. Recently, the mushroom has been reported to show anti-cancer activity, anti-bacterial activity and improving effect on kidney function (Ha, Y. D., et al, Korean J. Postharvest Sci.. Technol., 8(4), p481, 2001). 
Angelica keiskei Herba, a cultivated herb of Angelica keiskei Koidz belongs to Angelicaceae has been reported to comprise vitamin B1, B2, B6, B12, Ca, Fe, P etc, which has been used to prevent diabetes, fatigue, hypertension etc. 
Alisma Rhizoma, a rhizoma of Alisma plantago-aquatica L, and the like belongs to Alismataceae has been reported to comprise alisol A, B, epialisol A, alkaloid etc, which has been used to treat diarrhea, vomiting, etc. 
Magnolia cortex, a cortex of Magnolia officinalis, Magnolia obovata and the like belongs to Magnoliaceae has been reported to comprise magnolol, honokiol, magnoflorine, anonaine, essential oil etc, which has been used to treat cough, gastric cancer, vomiting, etc. 
Licorice root, a root of Glycyrrhiza uralensis FISCH, Glycyrrhiza glabra L. and the like belongs to Leguminosae has been reported to comprise triterpene saponin such as glycyrrhizin, several flavonids such as liquiritin, neoliquiritin, neoisoliquiritin etc, which has been used to treat cough, gastric ulcer, hypertension, etc.
Zinger, a rhizoma of Zinger officinale, and the like belongs to Zingiberaceae has been reported to comprise zingiberol, zingiberene, phellandrene, camphene, citral, citral, linalool, methylheptenone, gingerol etc, which has been used to treat cough, gastric ulcer, hypertension, etc.
Hoelen alba, a white part of Poria cocos WOLF belongs to Polyporaceae has been reported to comprise pachyman, pachymic acid, ergosterol, histidine etc, which has been used to treat bacterial infection, anxiety, vomiting etc. 
Agaricus mushroom, a whole body of Agaricus blazei belongs to Agaricaceae has been reported to comprise cerevisterol, ergosterol, linoloeic acid, oleic acid, stearic acid, chitin glucan, glucomannan etc, which has been used to treat cancer, hypertension, hypercholesteremia, diabetes etc. 
However, there has been not reported or disclosed about combined therapeutic effect of herb extract described above on liver disease in any of above cited literatures, the disclosures of which are incorporated herein by reference.
Therefore, the present inventors have endeavored to find the effective herbal formulation for enhancing hepato-protective efficacy and to study the pharmacological effect of the above mentioned combined herbal extract and finally, the present inventors have found that the combined crude drug described above is effective in treating and preventing liver diseases as a hepatoprotective agent.
SUMMARY OF THE INVENTION
According to one aspect, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising the extract of combined herbs with Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, and Polyporus umbellatus Pers. for preventing and treating liver diseases.
The present invention also provides pharmaceutical compositions comprising the above-mentioned extract as an active ingredient in an amount effective to preventing and treating liver diseases, together with a pharmaceutically acceptable carrier.
The present invention also provides a method for treating liver diseases by protecting hepatic cell in a mammal comprising administering to said mammal an effective amount of above-mentioned extract, together with a pharmaceutically acceptable carrier thereof.
The present invention also provides a use of above described extract for the preparation of for manufacture of medicament employed for treating or preventing liver disease in human or mammal. 
The present invention also provides a health functional food comprising above extract for the prevention or improvement of liver disease by protecting hepatic cell as an active ingredient in an amount effective to preventing and improving liver disease, together with a sitologically acceptable additive.
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Accordingly, it is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition comprising an extract of combined herbs consisting of Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, and Polyporus umbellatus Pers. as an active ingredient in an amount effective to preventing and treating liver diseases, together with a pharmaceutically acceptable carrier.
The present invention also provides a pharmaceutical composition comprising an extract of combined herbs additionally comprising at least one herb selected from the group consisting of Angelica keiskei Herba, Alisma Rhizoma, Magnolia cortex, Licorice root, Zinger, Hoelen alba and Agaricus mushroom, besides above-mentioned combined herbs for preventing and treating liver diseases.
It is another object of the present invention to provide a use of above described extract for manufacture of medicament employed for treating or preventing liver disease in human or mammal. 
It is the other object of the present invention to provide a method for treating liver diseases by protecting hepatic cell in a mammal comprising administering to said mammal an effective amount of above-mentioned extract, together with a pharmaceutically acceptable carrier thereof.
The extract disclosed herein comprise the extract of combined herb i.e., Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, and Polyporus umbellatus Pers. with the mixed ratio based on the dried weight of each herb (w/w%) ranging from 1-10: 1-10: 0.1-5: 0.5-5: 0.5-10, preferably, 1-5: 1-5: 0.5-3: 0.5-3:0.5-6, more preferably in the present invention to treat or prevent liver disease.
Additionally, the extract disclosed herein comprise the extract of combined herb i.e., Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, Polyporus umbellatus Pers. and further comprise the extract of at least one herb selected from the group consisting of Angelica keiskei Herba, Alisma Rhizoma, Magnolia cortex, Licorice root, Zinger, Hoelen alba and Agaricus mushroom, with the mixed ratio based on the dried weight of each herb (w/w%) ranging from 0.1-5: 1-10: 0.1-5: 0.1-5: 0.1-5:0.1-5:1-10, preferably, 0.5-3: 1-5: 0.5-3: 0.5-3: 0.5-3:0.5-3:0.5-3,0.5-3: 0.5-3: 0.5-3: 0.5-3:1-5, more preferably in the present invention to treat or prevent liver disease.
In accordance with one aspect of the present invention, there provided a health functional food comprising above extract for the prevention or improvement of liver disease by protecting hepatic cell as an active ingredient in an amount effective to preventing and improving liver disease, together with a sitologically acceptable additive.
The liver disease disclosed herein comprises acute or chronic hepatitis, hepatomegaly, hepatophyma, hepatocirrhosis and liver cancer, preferably, hepatocirrhosis and hepatitis.
The herbs, which can be used in the present invention, include the same genus plants which would be apparent to those skilled in the art and have be used for identical or similar purpose and can be substituted for the prevention and treatment of liver diseases. 
Inventive composition of the present invention is used in the form of pulverized form thereof, extracted form therefrom or dried extract form thereof.
Above extracted form of crude drug composition can be obtained by extracting with distilled water, lower alcohols such as methanol, ethanol and the like, or the mixtures thereof, preferably water.
The pharmaceutical composition for treating liver diseases could contain about 0.01 to 95 w/w%, preferably 0.5 to 80 w/w% of the above herb composition of present invention based on the total weight of the composition.
An inventive herb composition may be prepared in accordance with the following preferred embodiment.
For the present invention, above crude drug composition can be prepared by following procedure; the herbs, i.e., Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolor, and Polyporus umbellatus Pers. if necessary, Angelica keiskei Herba, Alisma Rhizoma, Magnolia cortex, Licorice root, Zinger, Hoelen alba and Agaricus mushroom, are washed, dried, mixed with appropriate ratio (w/w).  Above mixture thereof is pulverized to obtain the pulverized form of crude drug composition.
Above pulverized crude drug composition is mixed with 5 to 20-fold, preferably, 10 to 15-fold volume of distilled water, alcohols such as methanol, ethanol and the like, or the mixtures thereof, preferably, distilled water or the mixture of ethanol and water; and is enfleuraged at the temperature ranging from 0 to room temperature, preferably from 4 to 6℃, for the period ranging from 12 hours to 48 hours, preferably 20 to 24 hours or heated with reflux extraction at the temperature ranging from 80 to 120℃, preferably above 105℃, for the period ranging from 1 to 24 hours, preferably 2 to 5 hours with 2 to 5 times, or extracted by sonication, reflux or conventional extraction to obtain an aqueous extract form of crude drug composition. 
Additionally, the herbal extract is filtered and concentrated at 80 to 90℃ under reduced pressure. The extract is concentrated by azeotropic distillation with volume of 10 to 60-fold water, 1 to 5 times and then dried by freeze drying or vacuum drying to obtain a dried extract form of crude drug composition.
It is another object of the present invention to provide a process for preparing the extract of the present invention as described above for the preparation of composition effective in treating or preventing liver diseases.
It is still another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition comprising the pulverized form, extracted form or dried extract form of above crude drug extract obtained by above described process as an active ingredient for preventing and treating liver diseases.
The inventive composition of the present invention prepared by above-described process significantly decreases GOT and GPT level and also inhibits liver fibrosis in rat experimental model.  When the oral acute toxicity of the extract was tested, the extract had no apparent effect on mortality, clinical signs, body weight changes, and gross findings at necropsy. 
The pharmaceutical composition for treating liver diseases could contain about 0.01 to 95 w/w%, preferably 0.5 to 80 w/w% of the above crude drug composition of present invention based on the total weight of the composition.
It is another of the present invention to provide a hepatoprotective agent comprising the above extract as an active ingredient in an amount effective to preventing and treating liver diseases.
It is another of the present invention to provide a use of the inventive extract for the preparation of a medicament such as a hepatoprotective agent for preventing or treating liver diseases
It is another of the present invention to provide a method of treating of liver diseases in a mammal comprising administering to said mammal an effective amount of crude drug composition and pharmaceutically acceptable carrier thereof.
The inventive composition may additionally comprise conventional carrier, adjuvants or diluents in accordance with a using method. It is preferable that said carrier is used as appropriate substance according to the usage and application method, but it is not limited. Appropriate diluents are listed in the written text of Remington's Pharmaceutical Science (Mack Publishing co, Easton PA).
Hereinafter, the following formulation methods and excipients are merely exemplary and in no way limit the invention.  
The crude drug composition according to the present invention can be provided as a pharmaceutical composition containing pharmaceutically acceptable carriers, adjuvants or diluents, e.g., lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starches, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxy benzoate, propylhydroxy benzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. The formulations may additionally include fillers, anti-agglutinating agents, lubricating agents, wetting agents, flavoring agents, emulsifiers, preservatives and the like.  The compositions of the invention may be formulated so as to provide quick, sustained or delayed release of the active ingredient after their administration to a patient by employing any of the procedures well known in the art.
For example, the compositions of the present invention can be dissolved in oils, propylene glycol or other solvents which are commonly used to produce an injection. Suitable examples of the carriers include physiological saline, polyethylene glycol, ethanol, vegetable oils, isopropyl myristate, etc., but are not limited to them. For topical administration, the compounds of the present invention can be formulated in the form of ointments and creams.
Pharmaceutical formulations containing crude drug composition may be prepared in any form, such as oral dosage form (powder, tablet, capsule, soft capsule, aqueous medicine, syrup, elixirs pill, powder, sachet, granule), or topical preparation (cream, ointment, lotion, gel, balm, patch, paste, spray solution, aerosol and the like), suppository, or sterile injectable preparation (solution, suspension, emulsion). 
The crude drug composition of the present invention in pharmaceutical dosage forms may be used in the form of their pharmaceutically acceptable salts, and also may be used alone or in appropriate association, as well as in combination with other pharmaceutically active compounds.
The desirable dose of the inventive composition varies depending on the condition and the weight of the subject, severity, drug form, route and period of administration, and may be chosen by those skilled in the art. However, in order to obtain desirable effects, it is generally recommended to administer at the amount ranging 0.01-10g/kg, preferably, 1 to 5g/kg by weight/day of the inventive composition of the present invention. The dose may be administered in a single or multiple doses per day. In terms of composition, the crude drug composition should be present between 0.01 to 80% by weight, preferably 0.5 to 50% by weight based on the total weight of the composition.
The pharmaceutical composition of present invention can be administered to a subject animal such as mammals (rat, mouse, domestic animals or human) via various routes. All modes of administration are contemplated, for example, administration can be made orally, rectally or by intravenous, intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, intrathecal, epidural or intracerebroventricular injection.
In accordance with one aspect of the present invention, there provided a health functional food comprising above extract for the prevention or improvement of liver disease by protecting hepatic cell as an active ingredient in an amount effective to preventing and improving liver disease, together with a sitologically acceptable additive.
The crude drug composition of inventive health functional food is used in the form of pulverized form thereof, extracted form therefrom or dried extract form thereof.
The health functional food composition for preventing and improving gastrointestinal dyskinetic diseases could contain about 0.01 to 95 w/w%, preferably 0.5 to 80 w/w% of the above crude drug composition of present invention based on the total weight of the composition.
Above described the crude drug composition therein can be added to food, additive or beverage for prevention and improvement of gastrointestinal dyskinetic diseases. For the purpose of preventing and improving gastrointestinal dyskinetic diseases, wherein, the amount of above described crude drug composition in food or beverage may generally range from about 0.1 to 15 w/w %, preferably 1 to 10 w/w % of total weight of food for the health food composition and 1 to 30 g, preferably 3 to 10 g on the ratio of 100ml of the health beverage composition.
Providing that the health beverage composition of present invention contains above described crude drug composition as an essential component in the indicated ratio, there is no particular limitation on the other liquid component, wherein the other component can be various deodorant or natural carbohydrate etc such as conventional beverage.  Examples of aforementioned natural carbohydrate are monosaccharide such as glucose, fructose etc; disaccharide such as maltose, sucrose etc; conventional sugar such as dextrin, cyclodextrin; and sugar alcohol such as xylitol, and erythritol etc. As the other deodorant than aforementioned ones, natural deodorant such as taumatin, stevia extract such as levaudioside A, glycyrrhizin et al., and synthetic deodorant such as saccharin, aspartam et al., may be useful favorably.  The amount of above described natural carbohydrate is generally ranges from about 1 to 20 g, preferably 5 to 12 g in the ratio of 100ml of present beverage composition.
The other components than aforementioned composition are various nutrients, a vitamin, a mineral or an electrolyte, synthetic flavoring agent, a coloring agent and improving agent in case of cheese chocolate et al., pectic acid and the salt thereof, alginic acid and the salt thereof, organic acid, protective colloidal adhesive, pH controlling agent, stabilizer, a preservative, glycerin, alcohol, carbonizing agent used in carbonate beverage et al.  The other component than aforementioned ones may be fruit juice for preparing natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage, wherein the component can be used independently or in combination.  The ratio of the components is not so important but is generally range from about 0 to 20 w/w % per 100 w/w % present composition.
Examples of addable food comprising aforementioned crude drug composition therein are various food, beverage, gum, vitamin complex, health improving food and the like.
It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the compositions, use and preparations of the present invention without departing from the spirit or scope of the invention.
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
The above and other objects, features and other advantages of the present invention will more clearly understood from the following detailed description taken in conjunction with the accompanying drawings, in which;
Fig. 1 shows the dose-dependent effects of the extract prepared from Example 1 on the serum GOT result (1a) and GPT (1b) result in CCL4-induced rats;
Fig. 2 shows the dose-dependent effects of the extract prepared from Example 2 on the serum GOT result (2a) and GPT (2b) result in CCL4-induced rats;
Fig. 3 shows the inhibiting effects of the extract prepared from Examples on the serum GOT result (3a) and GPT (3b) result in liver cirrhosisinduced rats;
Fig. 4 represents the effect of the extract prepared from Examples on collagen distribution in liver tissue.
BEST MODE FOR CARRING OUT THE INVENTION 
The following Examples and Experimental Examples are intended to further illustrate the present invention without limiting its scope.
Example 1. Preparation of combined formulation (MC)
2g of Artemisia capillaries Herba, 1.7g of Atractylodis Rhizoma Alba, 1g of Orostachydis Herba, 0.7g of Coriolus versicolo, and 1g of Polyporus umbellatus Pers. purchased from Kyung-dong market located in Seoul were washed and 10 times weight of distilled water based on the herb weight was added thereto. The solution was left alone for 12 hours and extracted with reflux extraction in vaccuo for 2 hours at 105℃ at the 1st step. The extract obtained at 1st step was filtered and the resulting residue was subjected to reflux extraction in vaccuo at 2nd step. The extract was filtered with filter sieve (Model No. 140, 106um) and each filtered extract was colleted. The collected filtrate was subjected to reflux filtration at 80-90℃ until the final volume of extract is reached to about 1L and the specific gravity of extract is about 1.2 to 1.3 (Brix: more than 60). The extract was dried with hot wind drier 60℃ to the extent that the water amount is reached at less than 5% and the dried solid was crushed, filtered with filter (No. 50, 300um) to obtain the inventive powder extract (designated as MC hereinafter).
Example 2. Preparation of combined formulation (AC)
2g of Artemisia capillaries Herba, 1.7g of Atractylodis Rhizoma Alba, 1g of Orostachydis Herba, 0.7g of Coriolus versicolo, 1g of Polyporus umbellatus Pers. 0.7g of Angelica keiskei Herba, 1.7g of Alisma Rhizoma, 0.7g of Magnolia cortex, 0.5g of Licorice root, 0.3g of Zinger, 0.7g of Hoelen alba and 1.3g of Agaricus mushroom purchased from Kyung-dong market located in Seoul were washed and subjected to reflux extraction similar to those in Example 1 to obtain the inventive powder extract (designated as AC hereinafter).
Experimental Example 1. Effect on CCl4 induced chronic liver injury in rat model
In order to investigate the inhibitory effect of the inventive extract obtained in Examples on liver injury, following experiment was performed in the procedure.
Reagent and experimental animals
CCl4 (Sigma Co.), Olive oil (Sigma Co.), Alanine Amino Transferase (ALT, GPT, Stanbio Co.) and aspartate amino transferase (AST, GOT, Stanbio Co.) was purchased from commercial company to use in experimental.
Male Sprague-Dawley rats weighing about 200g were used in the experiment and were allowed to access to feed (Harlan, teklan, USA) and drinking water.  All animals were maintained in a controlled environment with temperatures at 21℃ - 24℃ and humidity at 60%-80% with 12 hours of light and dark cycles for at least one week prior to use. 
The effect on CCl4 induced chronic liver injury 
For the estimation of the effect on liver injury, the mixed solution with olive oil and CCl4 (1:1) was administrated into each experimental rat with a dosage of 1.0mg/kg for three days intra-peritoneally to induce acute hepatotoxicity. One hour after, various concentrations of extract suspended with 1% CMC (Carboxy Methylene Cellulose), i.e., 6mg/kg, 30 mg/kg and 60mg/kg were orally administrated into the rats for four days as a test group MC and the equivalent amount of saline solution was only treated thereto as a negative control.  At the final test day, 1.5ml of blood from the anesthetized experimental animals was pooled and fixed with reperfusion. The blood sample was centrifuged for 20 mins at 3000rpm, and each GOT and GPT level of each sample was determined using by CH100+ apparatus (SEAC Co.). The test groups and the test schedule were shown in following Table 1.
[Table 1]
2007126410.tif 000007
As can be seen in Fig.1a and 1b, the groups treated with inventive extract obtained in Example 1 (HA-MC group) significantly inhibited GOT and GPT level of liver injury rat model in a dose dependent manner especially at the dose of 30mg/kg and 60mg/kg (P<0.05*, P<0.01**). Furthermore, as can be seen in Fig.2a and 2b, the groups treated with inventive extract obtained in Example 2 (HA-AC group) significantly inhibited GOT and GPT level of liver injury rat model in a dose dependent manner at all the dosage ranges, i.e., 12mg/kg, 60mg/kg and 120mg/kg (P<0.05*, P<0.01**). 
Accordingly, it is confirmed that the inventive extract of the present invention is effective in alleviating liver function.
Experimental Example 2. Effect on Collagen distribution and inhibition of GOT and GPT level in rat model
In order to investigate the improving effect of the inventive extract obtained in Examples on liver cirrhosis, following experiment was performed in the procedure.
Reagent and experimental animals
DMN (Dimethylnitrosoamine, Sigma Co.), Alanine Amino Transferase (ALT, GPT, Stanbio Co.) and aspartate amino transferase (AST, GOT, Stanbio Co.) was purchased from commercial company to use in experimental.
Wister rats weighing about 270g were used in the experiment and were allowed to access to feed (Harlan, teklan, USA) and drinking water.  All animals were maintained in a controlled environment with temperatures at 21℃ - 24℃ and humidity at 60%-80% with 12 hours of light and dark cycles for at least one week prior to use. 
The effect on collagen distribution and inhibitory effect on GOT and GPT
For the estimation of the effect on liver cirrhosis, 1% DMN was administrated into each experimental rat with a dosage of 10ug/kg/day for three days intra-peritoneally to induce liver cirrhosis. 30mg/kg/day of extract MC and 60mg/kg/day of extract AC were orally administrated into the rats for four weeks as test groups and the equivalent amount of saline solution was only treated thereto as a negative control.  At the final test day, 1.5ml of blood from the anesthetized experimental animals was pooled and fixed with reperfusion. The blood sample was centrifuged for 20 mins at 3000rpm, and each GOT and GPT level of each sample was determined using by CH100+ apparatus (SEAC Co.) as shown in Fig. 3a and 3b.
To examine the collagen distribution in liver tissue, Masson trichrome staining method which stains only collagen part and the isolated liver tissue was embedded with automatic tissue analyzer (Citadel 2000, Shandon Co.) and sliced into pieces at the width of 4um using by tissue microtome (LEICA RM2145). Each 5 lesion for each tissue was selected and fibrinous ratio of the lesion was determined by image analysis system. The mean values of the ratio was calculated and transformed into the collagen amount (See Fig. 4).
As can be seen in Fig.4, the groups treated with inventive extract obtained in Example 1 (HA-MC group) as well as inventive extract obtained in Example 2 (HA-AC group) significantly inhibited GOT and GPT level of liver injury rat model in a dose dependent manner. Furthermore, the collagen amount of the groups treated with inventive extract obtained in Example 1 and 2 showed 1.21 and 1.05 respectively while those of control group and normal groups showed 2.93 and 0.53 respectively.
Accordingly, it is confirmed that the inventive extract of the present invention is effective in inhibiting the progress of liver fibrosis significantly.
Experimental Example 3. Evaluation of acute toxicity
To examine the toxicity of the inventive extract, acute toxicity tests were performed on rats. 
The 15 male and female SD rats were divided with 3 groups and three dosages of inventive extract, i.e., 1g/kg, 2g/kg and 5g/kg were administered to each 5 rats for 14 days and water was treated to the control group. The symptom of toxicity was observed for 4 weeks such as the change of weight, the hematological analysis and histological test.
As a result of experiment, there was no death example of the rats administered with inventive extract and there was no significant abnormality in the gain of weight, and the histological test etc. In accordance with above results, it was confirmed that the inventive extract, i.e., HA-MC and HA-AC were safe. 
Hereinafter, the formulating methods and kinds of excipients will be described, but the present invention is not limited to them. The representative preparation examples were described as follows.
Preparation of injection
HA-MC                                       100mg
Sodium metabisulfite               3.0mg
Methyl paraben                                         0.8mg
Propyl paraben                                         0.1mg
Distilled water for injection                        optimum amount
Injection preparation was prepared by dissolving active component, controlling pH to about 7.5 and then filling all the components in 2ml ample and sterilizing by conventional injection preparation method. 
Preparation of powder
HA-MC                                          500mg
Corn Starch                              100mg
Lactose                                  100mg
Talc                                         10mg
Powder preparation was prepared by mixing above components and filling sealed package.
Preparation of tablet
HA-AC                                          200mg
Corn Starch                              100mg
Lactose                                  100mg
Magnesium stearate                  optimum amount
Tablet preparation was prepared by mixing above components and entabletting.
Preparation of capsule
HA-MC                                           100mg
Lactose                                  50mg
Corn starch                               50mg
Talc                                         2mg
Magnesium stearate                  optimum amount
Tablet preparation was prepared by mixing above components and filling gelatin capsule by conventional gelatin preparation method.
Preparation of liquid
HA-AC                                       1000mg
Sugar                                       20g
Polysaccharide                                         20g
Lemon flavor                             20g
Liquid preparation was prepared by dissolving active component, and then filling all the components in 1000ml ample and sterilizing by conventional liquid preparation method. 
Preparation of health food
HA-MC                                           1000mg
Vitamin mixture                                       optimum amount
Vitamin A acetate       70μg
Vitamin E                       1.0mg
Vitamin B1                     0.13mg
Vitamin B2                     0.15mg
Vitamin B6                     0.5mg
Vitamin B12                   0.2μg
Vitamin C                       10mg
Biotin                           10μg
Amide nicotinic acid                       1.7mg
Folic acid                     50μg
Calcium pantothenic acid                    0.5mg
Mineral mixture                                       optimum amount
Ferrous sulfate                         1.75mg
Zinc oxide                     0.82mg
Magnesium carbonate                 25.3mg
Monopotassium phosphate                      15mg
Dicalcium phosphate                 55mg
Potassium citrate                                   90mg
Calcium carbonate                     100mg
Magnesium chloride                   24.8mg
The above mentioned vitamin and mineral mixture may be varied in many ways. Such variations are not to be regarded as a departure from the spirit and scope of the present invention. 
Preparation of health beverage
HA-AC                                       1000mg
Citric acid                               1000mg
Oligosaccharide                                       100g
Apricot concentration                           2g
Taurine                                       1g
Distilled water                                       900ml
Health beverage preparation was prepared by dissolving active component, mixing, stirred at 85 ℃ for 1 hour, filtered and then filling all the components in 1000ml ample and sterilizing by conventional health beverage preparation method. 
The invention being thus described, it will be obvious that the same may be varied in many ways. Such variations are not to be regarded as a departure from the spirit and scope of the present invention, and all such modifications as would be obvious to one skilled in the art are intended to be included within the scope of the following claims. 
INDUSTRIAL APPLICABILITY
As described in the present invention, the combined herb composition shows potent protective activity of liver function and inhibit the increase of GOT and GPT level together with preventing from liver cirrhosis.
The inventive compositions according to the present invention are useful in the prevention and treatment of the liver diseases and can be used as safe and efficient hepato-protective agent.
CLAIMS
1. A pharmaceutical composition comprising an extract of combined herbs comprising Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, and Polyporus umbellatus Pers. as an active ingredient in an amount effective to preventing and treating liver diseases, together with a pharmaceutically acceptable carrier.
2. A pharmaceutical composition according to claim 1, wherein said pharmaceutical composition comprises Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, and Polyporus umbellatus Pers. with the mixed ratio based on the dried weight of each herb (w/w%) ranging from 1-10: 1-10: 0.1-5: 0.5-5: 0.5-5.
3. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein said herbs further comprise at least one herb selected from the group consisting of Angelica keiskei Herba, Alisma Rhizoma, Magnolia cortex, Licorice root, Zinger, Hoelen alba and Agaricus mushroom, besides combined herbs as set forth in claim 1 for preventing and treating liver diseases.
4. A pharmaceutical composition according to claim 3, wherein said pharmaceutical composition comprises at least one herb selected from the group consisting of Angelica keiskei Herba, Alisma Rhizoma, Magnolia cortex, Licorice root, Zinger, Hoelen alba and Agaricus mushroom, with the mixed ratio based on the dried weight of each herb (w/w%) ranging from 0.1-5: 1-10: 0.1-5: 0.1-5: 0.1-5:0.1-5:1-10.
5. The pharmaceutical composition of any one of claim 1 to 4, wherein the crude drug composition is used in the form of pulverized form thereof, extracted form therefrom or dried extract form thereof.
6. The pharmaceutical composition of claims 1 or 3, wherein said extract solvent is selected from the group consisting of distilled water, lower alcohol and mixture thereof.
7. The pharmaceutical composition of claim 1 or 3, wherein said crude drug composition is contained about 0.01 to 95 w/w% based on the total weight of the composition.
8. The pharmaceutical composition of any one of claim 1 to 4, wherein said liver diseases is acute or chronic hepatitis, hepatomegaly, hepatophyma, hepatocirrhosis or liver cancer.
9. The pharmaceutical composition of any one of claim 1 to 4, wherein said pharmaceutical composition is provided in an acceptable carrier as powder, granule, tablet, capsule, suspension, emulsion, syrup, aerosol, topical medicine, suppository or sterile injection.
10. A process for preparing the pharmaceutical composition of any one of claim 1 to 4, comprising the steps of: washing, drying and mixing herbs with the proper ratio (w/w), otherwise, commixing additional herbs at the stage to make crude drug composition; pulverizing the herbs; mixing the pulverized composition with 5 to 20-fold volume of distilled water, alcohols such as methanol, ethanol and the like, or the mixtures thereof, and enfleuraging at the temperature ranging from 0 to room temperature for the period ranging from 12 hours to 48 hours or heated 2 to 5 times at the temperature from 80 to 100℃, for the period ranging from 1 to 24 hours; filtering and concentrating the extract at 80 to 90℃ under reduced pressure; concentrating by azeotropic distillation with volume of 10 to 60-fold water, 1 to 5 times and then dried by freeze drying or vacuum drying to obtain a dried extract form of crude drug composition.. 
11. A health functional food comprising an extract of combined herbs comprising Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, and Polyporus umbellatus Pers. for the prevention or improvement of liver disease by protecting hepatic cell as an active ingredient in an amount effective to preventing and improving liver disease, together with a sitologically acceptable additive. 
12. A health functional food according to claim 11 said herb comprises at least one herb selected from the group consisting of Angelica keiskei Herba, Alisma Rhizoma, Magnolia cortex, Licorice root, Zinger, Hoelen alba and Agaricus mushroom, besides combined herbs as set forth in claim 11.
13. The health functional food according to claims 11 or 12, wherein the crude drug composition is used in the form of pulverized form thereof, extracted form therefrom or dried extract form thereof.
14. The health functional food according to claims 11 or 12, wherein said health functional food is provided as powder, granule, tablet, capsule or beverage type.
ABSTRACT
The present invention is related to a combined herb composition comprising herbs of Artemisia capillaries Herba, Atractylodis Rhizoma Alba, Orostachydis Herba, Coriolus versicolo, and Polyporus umbellatus Pers. and additionally comprising at least one herb selected from group consisting of Angelica keiskei Herba, Alisma Rhizoma, Magnolia cortex, Licorice root, Zinger, Hoelen alba and Agaricus mushroom according to the need for the prevention and treatment of liver disease and methods of using the above crude drug composition and pharmaceutical composition as hepato-protective agent.
DRAWINGS
【Figure 1a】
2007126410.tif 000008
【Figure 1b】
2007126410.tif 000009
【Figure 2a】
2007126410.tif 000010
【Figure 2b】
2007126410.tif 000011
【Figure 3a】
2007126410.tif 000012
【Figure 3b】
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【Figure 4】
2007126410.tif 000014